(57)【要約】      （修正有）【課題】メタボリックシンドロームの発症・予防に有効なリスクファクター及びその利用を提供する。【解決手段】検査対象個体から取得した試料につき、クレアチニン濃度、ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値及び白血球数から選択される１種又は２種以上を指標として、メタボリックシンドロームの予防・発症に関係するリスクファクターを検査する。さらに、以下の要素から選択される１種又は２種以上を指標とする検査方法。アポリポプロテインＡI遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ、アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ及びアディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰ。さらに、エストロゲンレセプター２遺伝子におけるＣ／Ｇ多型ＳＮＰと喫煙との組み合わせ、アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰと喫煙との組み合わせ。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
検査対象個体から取得した試料につき、以下の要素（１）から選択される１種又は２種以上を指標として、メタボリックシンドロームの予防・発症に関係するリスクファクターを検査する方法。
（１）クレアチニン濃度、ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値及び白血球数
【請求項２】
前記ヘモグロビン濃度は、ヘモグロビンＡ１ｃ濃度を含む、請求項１に記載の検査方法。
【請求項３】
さらに、以下の要素（２）から選択される１種又は２種以上を指標とする、請求項１又は２に記載の検査方法。
（２）アポリポプロテインＡI遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ（rs番号：rs11216158）、アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ（rs番号：rs2854117）及びアディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰ（rs番号：rs1539355）
【請求項４】
前記アポリポプロテインＡ１遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰのリスク多型は、CT型及びTT型であり、前記アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰのリスク多型は、CC型及びCT型であり、前記アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰのリスク多型は、AA型である、請求項３に記載の検査方法。
【請求項５】
さらに、以下の要素（３）から選択される１種又は２種以上を指標とする、請求項１〜４のいずれかに記載の検査方法。
（３）エストロゲンレセプター２遺伝子におけるＣ／Ｇ多型ＳＮＰと喫煙との組み合わせ、アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰと喫煙との組み合わせ
【請求項６】
検査対象個体から取得した試料につき、以下の要素（２）から選択される１種又は２種以上を指標として、メタボリックシンドロームの発症リスクを検査する方法。
（２）アポリポプロテインＡI遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ（rs番号：rs11216158）、アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ（rs番号：rs2854117）及びアディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰ（rs番号：rs1539355）
【請求項７】
前記アポリポプロテインＡ１遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰのリスク多型は、CT型及びTT型であり、前記アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰのリスク多型は、CC型及びCT型であり、前記アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰのリスク多型は、AA型である、請求項３に記載の検査方法。
【請求項８】
さらに、以下の要素（３）から選択される１種又は２種以上を指標とする、請求項６又は７に記載の検査方法。
（３）エストロゲンレセプター２遺伝子におけるC／G多型ＳＮＰと喫煙との組み合わせ、アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰと喫煙との組み合わせ
【請求項９】
検査対象個体から取得した試料につき、以下の要素（３）から選択される１種又は２種以上を指標として、メタボリックシンドロームの発症リスクを検査する方法。
（３）エストロゲンレセプター２遺伝子におけるＣ／Ｇ多型ＳＮＰと喫煙との組み合わせ、アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰと喫煙との組み合わせ
【請求項１０】
請求項１〜５のいずれかに記載の検査方法に用いる検出キットであって、少なくとも前記要素（１）から選択される１種又は２種以上を検出するための試薬を含む、キット。
【請求項１１】
請求項６〜８のいずれかに記載の検査方法に用いるＳＮＰマーカーであって、
前記ＳＮＰは、前記要素（２）から選択される１種又は２種以上のＳＮＰである、マーカー。
【請求項１２】
請求項６〜８のいずれかに記載の検査方法に用いる検査キットであって、
前記要素（２）から選択される１種又は２種以上のＳＮＰを検出するためのオリゴヌクレオチド、プライマー、プローブ及びＤＮＡマイクロアレイから選択される１種又は２種以上を含む、検査キット。
【請求項１３】
請求項９に記載の検査方法に用いるＳＮＰマーカーであって、
前記ＳＮＰは、前記要素（３）から選択される１種又は２種のＳＮＰである、マーカー。
【請求項１４】
請求項９に記載の検査方法に用いる検査キットであって、
前記要素（３）から選択される１種又は２種のＳＮＰを検出するためのオリゴヌクレオチド、プライマー、プローブ及びＤＮＡマイクロアレイから選択される１種又は２種以上を含む、検査キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メタボリックシンドロームの予防・発症に関係するリスクファクターの利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
メタボリックシンドローム（以下、Metsともいう。）とは、内臓脂肪型肥満に、高血糖、高血圧及び高脂血症のいずれか２種以上を合併した病態をいう。Metsは、高齢化社会に向けて、医療費抑制及び高齢者のＱＯＬ確保等の観点から、予防及び改善すべき病態である。Metsは、生活習慣の改善によってその発症を予防することが有効であると考えられている。
【０００３】
Metsの診断指標として腹囲、中性脂肪、血糖値、血圧及びＨＤＬコレステロールが挙げられている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】http://www.mhlw.go.jp/houdou/2006/05/h0508-1.html
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、診断基準については見直しがなされるなど、Mets発症のリスクファクターとしては、有効なものが提供されていないのが現状である。
【０００６】
そこで、本明細書の開示は、Metsについてのリスクファクターの利用を提供することをその目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、あるヒト母集団について追跡的に、血液検査等を行い、既存の診断基準によるMetsと健常者とについて、Mets発症リスクファクター(要素)を見出した。また、母集団について、SNP及び検診項目につて、Mets群に有意な要素やその組み合わせを見出した。これらの知見に基づき、以下の手段が提供される。
【０００８】
［１］  検査対象個体から取得した試料につき、以下の要素（１）から選択される１種又は２種以上を指標として、メタボリックシンドロームの予防・発症に関係するリスクファクターを検査する方法。
（１）クレアチニン濃度、ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値及び白血球数
［２］  前記ヘモグロビン濃度は、ヘモグロビンＡ１ｃ濃度を含む、［１］に記載の検査方法。
［３］  さらに、以下の要素（２）から選択される１種又は２種以上を指標とする、［１］又は［２］に記載の検査方法。
（２）アポリポプロテインＡI遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ（rs番号：rs11216158）、アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ（rs番号：rs2854117）及びアディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰ（rs番号：rs1539355）
［４］  前記アポリポプロテインＡ１遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰのリスク多型は、CT型及びTT型であり、前記アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰのリスク多型は、CC型及びCT型であり、前記アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰのリスク多型は、AA型である、［３］に記載の検査方法。
［５］  さらに、以下の要素（３）から選択される１種又は２種以上を指標とする、請求項１〜４のいずれかに記載の検査方法。
（３）エストロゲンレセプター２遺伝子におけるＣ／Ｇ多型ＳＮＰと喫煙との組み合わせ、アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰと喫煙との組み合わせ
［６］  検査対象個体から取得した試料につき、以下の要素（２）から選択される１種又は２種以上を指標として、メタボリックシンドロームの予防・発症に関係するリスクファクターを検査する方法。
（２）アポリポプロテインＡI遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ（rs番号：rs11216158）、アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ（rs番号：rs2854117）及びアディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰ（rs番号：rs1539355）
［７］  前記アポリポプロテインＡ１遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰのリスク多型は、CT型及びTT型であり、前記アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰのリスク多型は、CC型及びCT型であり、前記アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰのリスク多型は、AA型である、［３］に記載の検査方法。
［８］  さらに、以下の要素（３）から選択される１種又は２種以上を指標とする、請求項［６］又は［７］に記載の検査方法。
（３）エストロゲンレセプター２遺伝子におけるC／G多型ＳＮＰ（rs番号：rs1255998）と喫煙との組み合わせ、アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰ（rs番号：rs1539355）と喫煙との組み合わせ
［９］  検査対象個体から取得した試料につき、以下の要素（３）から選択される１種又は２種以上を指標として、メタボリックシンドロームの予防・発症に関係するリスクファクターを検査する方法。
（３）エストロゲンレセプター２遺伝子におけるC／G多型ＳＮＰと喫煙との組み合わせ、アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰと喫煙との組み合わせ
［１０］  ［１］〜［５］のいずれかに記載の検査方法に用いる検出キットであって、少なくとも前記要素（１）から選択される１種又は２種以上を検出するための試薬を含む、キット。
［１１］  ［６］〜［８］のいずれかに記載の検査方法に用いるＳＮＰマーカーであって、
前記ＳＮＰは、前記要素（２）から選択される１種又は２種以上のＳＮＰである、マーカー。
［１２］  ［６］〜［８］のいずれかに記載の検査方法に用いる検査キットであって、
前記要素（２）から選択される１種又は２種以上のＳＮＰを検出するためのオリゴヌクレオチド、プライマー、プローブ及びＤＮＡマイクロアレイから選択される１種又は２種以上を含む、検査キット。
［１３］  ［９］に記載の検査方法に用いるＳＮＰマーカーであって、
前記ＳＮＰは、前記要素（３）から選択される１種又は２種のＳＮＰである、マーカー。
［１４］  ［９］に記載の検査方法に用いる検査キットであって、
前記要素（３）から選択される１種又は２種のＳＮＰを検出するためのオリゴヌクレオチド、プライマー、プローブ及びＤＮＡマイクロアレイから選択される１種又は２種以上を含む、検査キット。
【０００９】
なお、本明細書においては、一塩基多型（SNP）をrs番号で特定し、そのアレルの表記もrs番号で特定される表記に従うが、rs番号でアレルが特定された鎖の相補鎖でタイピングした場合には、当該相補鎖における塩基で表記される。例えば、アポリポプロテインＡI遺伝子のrs番号：rs11216158で特定されるＳＮＰの多型は、Ａ／Ｇであるが、本明細書においては、C／Tと表記される。また、アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるrs番号：rs2854117で特定されるＳＮＰの多型は、Ａ／Ｇであるが、本明細書においては、C／Tと表記される。なお、これらのＳＮＰに関しては、リスク多型の表記も同様に実際にタイピングした際の表記で表される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】最近MetSを発症した76例及びcontrol76例の年齢、BMI、sBP、dBP、DM、TGの値、HDL-Cの検査結果を示す図である。
【図２】解析データ１〜３についてのクレアチニン、ヘモグロビン、ヘマトクリット、白血球数の結果を示す図である。
【図３】解析データ３についてのクレアチニン及びヘモグロビンの結果を示す図である。
【図４】解析データ３についてのヘマトクリット及び白血球数の結果を示す図である。
【図５】FNNによる多変量解析に用いる入力変数の項目を示す図である。
【図６】FNNによる多変量解析による解析データ１の結果を示す図である。
【図７】FNNによる多変量解析による解析データ２の結果を示す図である。
【図８】FNNによる多変量解析による解析データ３の結果を示す図である。
【図９】解析データ１で有意になったSNPと検査項目とを示す図である。
【図１０】解析データ２で有意になったSNPと検査項目とを示す図である。
【図１１】解析データ３で有意になったSNPを示す図である。
【図１２】解析データ２及び３に関し、Apolipoprotein A-I（rs11216158）の頻度分布を示す図である。
【図１３】解析データ２及び３に関し、Apolipoprotein C-III（rs2854117）の頻度分布を示す図である。
【図１４】解析データ２及び３に関し、Adiponectin receptor 1 （rs1539355）の頻度分布を示す図である。
【図１５】解析データ１について有意になった組み合わせ（オッズ比）を示す図である。
【図１６】解析データ１について有意になった組み合わせ(頻度)を示す図である。
【図１７】解析データ２について有意になった組み合わせ（オッズ比）を示す図である。
【図１８】解析データ２について有意になった組み合わせ(頻度)を示す図である。
【図１９】解析データ１及び２について非常に有意な組み合わせのルール表を示す図である。
【図２０】Estrogen receptor 2(rs1255998)と喫煙との組み合わせ解析結果を示すである。
【図２１】Adiponectin receptor 1 (rs1539355)と喫煙との組み合わせ解析結果を示すである。
【図２２】運動プロジェクトの内容を示す図である。
【図２３】運動前後での各検査項目を示す図である。
【図２４】運動前後での各検査項目を示す図である。
【図２５】一日平均7000歩以上歩いた者の運動前後での各検査項目を示す図である。
【図２６】一日平均7000歩未満歩いた者の運動前後での各検査項目を示す図である。
【図２７】一日平均7000歩以上歩いた者と7000歩未満の者とについて、体重変化とアディポネクチン変化率について解析した結果を示す図である。
【図２８】体重変化別に、アディポネクチン、高感度CRP及びHOMA-IRについての運動前後の結果を示す図である。
【図２９】一日平均7000歩以上歩いた者と7000歩未満の者とについて腹囲について解析した結果を示す図である。
【図３０】腹囲変化別に、アディポネクチン、高感度CRP及びHOMA-IRについての運動前後の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書の開示は、Metsの予防・発症に関係するリスクファクターの利用に関する。本発明者らは、メタボリックシンドローム（MetS）の発症や予防に関するリスクファクターを解析するため、NGK社員3600名の血液サンプルを同意の下で採取し、血液中のMetS関連サイトカインであるレジスチンとアディポネクチンの濃度測定や、当該社員の15年以上にわたる健診カルテデータと合わせて個人のデータベースの構築を終えた。また遺伝子解析の同意が得られた2061名について、SNP解析を目的とし、MetSに関連した対象SNP100個を選出し、タイピングに成功し、解析に着手した。以下の３つの解析対象群１〜３とした。
【００１２】
（解析群１）
2006年検診時点でMetSの人（151例）とMetSコンポーネント（腹囲、血圧、血糖、血中脂肪）がいずれも健常者範囲の人（188例）
（解析群２）
1999年時点でMetSでなく2006年の検診時にMetSと判断された人（78例）とMetSコンポーネントがいずれも健常者範囲の人（188例）
（解析群３）
1999年時点でMetSでなく2006年の検診時にMetSと判断された人（男性のみ、76例）とMetSコンポーネント（腹囲、血圧、血糖、血中脂肪）がいずれかがMetS基準内の人（76例）、という3つの解析対象群で実施した。
【００１３】
解析の結果、健診項目のみの解析では、解析群３で、1999年時点で血液生化学検査項目であるクレアチニン濃度が少なく血清トリグリセリド濃度（ＴＧ値）が高い場合は7年後（2006年）にMetSになりやすいという全く新しいリスクが得られた。この知見は、MetS患者の約3割を説明し得ることもわかった。WBC（白血球）値が高くHaematocrit値が高いとMetsとなりやすいというリスクも得られた。これらは検査当時MetSでなく、７年後にMetSになるリスクであり、MetSの予防に活用できる可能性があることがわかった。
【００１４】
また、SNPとMetS発症の関係を単回帰分析した結果、Apolipoprotein A-I（rs11216158）、Apolipoprotein C-III（rs2854117）、Adiponectin receptor 1(rs1539355) がMetSの関連因子であることが示唆された。
【００１５】
さらに、喫煙、高脂血症、高尿酸血症などの環境因子とSNPの組み合わせ解析を行った。その結果、解析群２で、オッズ比が5を超え、環境因子のみ、SNPのみよりも高いオッズ比を示す組み合わせが20以上発見できた。これらもMetS予防に有用な組み合わせである。
【００１６】
さらに、MetS患者を対象にして、運動習慣改善を指導した。インフォームドコンセントが得られた47名の方を対象に、歩数計を渡し、6ヶ月間、歩行を中心に運動していただき生活改善を促し、試験期間終了後の体重、および、血中サイトカイン等（アディポネクチン、高分子アディポネクチン、高感度CRP、レジスチン、HOMA-IR）の濃度を計測した。運動習慣改善指導の基準になる歩数が得られただけでなく、その運動介入で腹囲が減少した群では代謝関連項目であるアディポネクチンが増加し、HOMA-IRが減少するという有意な変化が認められた。
【００１７】
本明細書において、「メタボリックシンドローム」とは、内臓脂肪型肥満に加えて、高血糖、高血圧、脂質異常のうちいずれか２つ以上をあわせもった状態を、メタボリックシンドローム（内臓脂肪症候群）をいう。
【００１８】
（内臓脂肪型肥満）
腹囲：男性で85cm以上、女性で90cm以上
（これらの腹囲は、男女ともに、腹部CT検査の内臓脂肪面積が100cm2以上に相当）
【００１９】
（脂質異常）
中性脂肪：150mg/dL以上
HDLコレステロール：40mg/dL未満
のいずれか又は双方
【００２０】
（高血圧）
最高（収縮期）血圧：１３０mmHg以上
最低（拡張期）血圧：８５mmHg以上
のいずれか又は双方
【００２１】
（高血糖）
空腹時血糖値：１１０mg/dL以上
【００２２】
本明細書において、一塩基多型（ＳＮＰ）とは、一般的には、遺伝子の塩基配列が一ヶ所だけ異なる状態及びその部位をいう。また、多型とは、一般的には、母集団中１％以上の頻度で存在する２以上の対立遺伝子（アレル）をいう。本発明において、「ＳＮＰ」は、好ましくは、公共データベースに登録されたＳＮＰであって、そのリファレンス番号から特定できるＳＮＰである。前記公共データベースとしては、例えば、ＮＣＢＩ（ＮＬＭ、ＮＩＨ）のＳＮＰデータベース等が挙げられる。本発明におけるＳＮＰは、前記公共データベースのリファレンス番号であるｒｓ番号（ＮＣＢＩ ＳＮＰデータベース）により特定できる。
【００２３】
（検査方法）
本明細書に開示される、Metsの予防・発症に関係するリスクファクターを検査する方法は、検査対象個体から取得した試料につき、以下の要素（１）から選択される１種又は２種以上を指標として、メタボリックシンドロームの発症リスクを検査する方法とすることができる。ヘモグロビン濃度は、ヘモグロビンＡ１ｃ濃度を含むことが好ましい。これらの要素は、いずれも、採取した血液中の濃度による評価であることが好ましい。
（１）クレアチニン濃度、ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値及び白血球数
【００２４】
本明細書に開示されるMetsの予防・発症に関係するリスクファクターを検査する方法は、上記の要素（１）と組み合わせて、あるいは上記要素（１）とは別個に、以下の要素（２）から選択される１種又は２種以上を指標とすることもできる。
（２）アポリポプロテインＡI遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ（rs番号：rs11216158）、アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ（rs番号：rs2854117）及びアディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰ（rs番号：rs1539355）
【００２５】
前記アポリポプロテインＡ１遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰのリスク多型は、CT型及びTT型であり、前記アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰのリスク多型は、型CC型及びCT型であり、前記アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰのリスク多型は、AA型であることが好ましい。これらのリスク多型の存在を検出することで、容易にMetsの予防状況や発症リスクを検査できる。
【００２６】
本明細書に開示されるMetsの予防・発症に関係するリスクファクターを検査する方法は、上記の要素（１）及び／又は上記要素（２）と組み合わせて、あるいは上記要素（１）及び／又は上記要素（２）とは別個に以下の要素（３）から選択される１種又は２種を指標とすることができる。
（３）エストロゲンレセプター２遺伝子におけるＣ／Ｇ多型ＳＮＰ（rs番号：rs1255998）と喫煙との組み合わせ、アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（rs番号：rs1539355）と喫煙との組み合わせ
【００２７】
なお、検査対象個体は、ヒトであることが好ましく、より好ましくは、日本人である。また、検査対象個体から採取した試料は、要素(１)を指標とする場合には、血液であることが好ましいが、要素（２）及び要素（３）の場合には、ヒトの核酸若しくはゲノムＤＮＡを含むもの又は核酸若しくはゲノムＤＮＡであって、例えば、血液や体液等の生体試料や、そこから調製された核酸やゲノムＤＮＡ等が挙げられる。生体試料の採取方法、採取部位等は、特に制限されず、また、核酸やゲノムＤＮＡの調製方法も従来公知の方法を適用でき、特に制限されない。
【００２８】
なお、要素（１）に含まれる、クレアチニン濃度、ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット値及び白血球数の検査方法は、当業者であれば周知の方法から適宜選択できる。臨床上一般的に使用される方法を採用できる。これらの項目は、１種以上であればよいが、好ましくは２種以上であり、さらに好ましくは３種以上であり、一層このましくは４種である。
【００２９】
要素（２）及び要素（３）については、上記特定のＳＮＰを検出する。本明細書において、ＳＮＰを検出には、いわゆるＳＮＰタイピングを行う。「ＳＮＰのタイピング」とは、ゲノム上の位置が明らかとなっている前記ＳＮＰの多型部位がどの塩基であるかを同定することであって、例えば、ＡとＧとから構成されるＳＮＰを対立遺伝子で見た場合、検査対象個体から採取した試料中の検査対象個体の遺伝子型が、ＡＡ、ＡＧ、ＧＧのいずれであるかを同定することをいう。ＳＮＰのタイピング方法は、特に制限されず、従来公知の方法により行うことができる。ＳＮＰタイピング方法としては、例えば、プライマー伸張法と蛍光法とを組み合わせた方法（ＴＤＩアッセイ、ＤＯＬアッセイ、基板上で行うプライマーアレイ単一塩基伸張法、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイなど）、リアルタイムＰＣＲと蛍光法とを組み合わせた方法（例えば、ＴａｑＭａｎ（商標）ＰＣＲ法など）、ＰＣＲを用いない蛍光法（Ｉｎｖａｄｅｒ（商標）アッセイなど）、プライマー伸張法とマススペクトルとを組み合わせた方法（ＰＩＮＰＯＩＮＴ法、ＰＲＯＢＥ法、ＶＥＳＴ法、Ｓｕｒｖｉｖｏｒアッセイ、ＧＯＯＤ法など）、ＰＣＲとマススペクトルとを組み合わせた方法（ｈＭＣ反応法など）が挙げられる。ＳＮＰタイピングは、当業者であれば、配列表の配列番号１〜４の塩基配列などを参照し、上記の公知の方法により適宜ＳＮＰタイピングできる。
【００３０】
本検査方法において、検出するＳＮＰｓの数は、Metsの予防状況や発症リスクの予測性を高める観点から、要素（２）及び要素（３）からそれぞれ２種以上選択されることが好ましい。より好ましくは、要素（２）から選択される３種又は４種である。検出するＳＮＰが多ければ、Metsの予防状況や発症リスクの検査確度が向上すると考えられる。
【００３１】
本検査方法によれば、以上の各種指標を単独であるいは２種以上を組み合わせて、Metsの予防・発症に関係するリスクファクターを検査することができる。すなわち、Metsの予防程度に関する状況（効果的に予防されているかなど）やMets発症のリスクの程度を検査できる。
【００３２】
要素（１）に関しては、クレアチニン濃度が低いほど、ヘモグロビン濃度が高いほど、ヘマトクリット値が高いほど及び白血球数が多いほど、Metsリスクが高くなる。
【００３３】
また、要素（２）に関しては、アポリポプロテインＡ１遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ（rs番号：rs11216158）のリスク多型は、CT型及びTT型とすることが好ましい。また、アポリポプロテインＣIII遺伝子におけるC／T多型ＳＮＰ（rs番号：rs2854117）のリスク多型は、CC型及びCT型とすることが好ましい。さらに、アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰ（rs番号：rs1539355）のリスク多型は、AA型とすることが好ましい。検出できたリスク多型が多ければ、Metsの予防程度が低くあるいはMetsの発症リスクが高いと判定できる。
【００３４】
また、要素（３）に関しては、エストロゲンレセプター２遺伝子におけるC／G多型ＳＮＰ（rs番号：rs1255998）のリスク多型は、GG型及びGC型とすることが好ましい。また、アディポネクチンレセプター１遺伝子におけるA／G多型ＳＮＰ（rs番号：rs1539355）のリスク多型はAA型とすることが好ましい。リスク多型と検査対象個体の喫煙習慣とが検出できれば、Metsの予防程度が低くあるいはMetsの発症リスクが高いと判定できる。検査対象個体につき、エストロゲンレセプター２遺伝子におけるＣ／Ｇ多型ＳＮＰのリスク多型とアディポネクチンレセプター１遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰのリスク多型とが検出でき、かつ、喫煙習慣も検出できれば、Metsの予防程度が低くあるいはMetsの発症リスクがより高いと判定できる。
【００３５】
以上の要素（１）〜（３）のほかに、肥満（ＢＭＩ≧２５）、脂質異常、高血圧、高血糖、喫煙状況に関する履歴や現況を組み合わせて、判定してもよい。
【００３６】
Metsの予防程度、発症リスクを段階的に判定してもよい。たとえば、要素（１）の検査項目のレベル、要素（２）や要素（３）で検出したリスク多型の数、喫煙状況（喫煙頻度や量など）を組み合わせて、３〜５段階程度に設定できる。
【００３７】
（検査キット）
本明細書に開示される検査キットは、本明細書に開示される検査方法に用いる検出キットであって、少なくとも要素（１）から選択される１種又は２種以上を検出するための試薬を含むことができる。こうした試薬類は公知であり、当業者において容易に入手可能である。また、本明細書に開示される他の検査キットは、本明細書に開示される検査方法に用いる検査キットであって、要素（２）から選択される１種又は２種以上のＳＮＰを検出するためのオリゴヌクレオチド、プライマー、プローブ及びＤＮＡマイクロアレイから選択される１種又は２種以上を含むことができる。さらに他の態様の検査キットは、要素（３）から選択される１種又は２種のＳＮＰを検出するためのオリゴヌクレオチド、プライマー、プローブ及びＤＮＡマイクロアレイから選択される１種又は２種以上を含むことができる。
【００３８】
ＳＮＰを検出するためのポリヌクレオチド、プライマー、プローブ及びＤＮＡマイクロアレイとしては、上述した従来公知のＳＮＰタイピング方法に適したものが挙げられる。当業者であれば、配列番号１〜４で表される塩基配列を参照し、上記の公知の方法により適宜必要なポリヌクレオチド、プライマー、プローブ及びＤＮＡマイクロアレイの少なくとも１つを準備できる。なお、これらの検査キットは、要素（１）〜（３）のそれぞれに対応する検査キットの他に、要素（１）〜（３）の２種以上の対象を検出するためのキットとすることもできる。本明細書に開示される検査キットは、採用するＳＮＰタイピング方法に応じて、適宜、試薬等を含むことが好ましい。
【００３９】
本明細書に開示されるＳＮＰマーカーは、本明細書に開示される検査方法に用いるＳＮＰマーカーであって、ＳＮＰは、前記要素（２）から選択される１種又は２種以上のＳＮＰであってもよい。また、他の態様のＳＮＰマーカーは、前記ＳＮＰは、要素（３）から選択される１種又は２種のＳＮＰである、マーカーであってもよい。
【００４０】
なお、本発明は、その他の態様として、前記４つのＳＮＰｓの少なくとも１つからなる高血圧発症に関するＳＮＰマーカーをタイピングするためのポリヌクレオチド、プライマー、プローブ、及びＤＮＡマイクロアレイの少なくとも１つを含む高血圧発症リスク検査キットである。上述したとおり、前記４つのＳＮＰｓは、家庭血圧に基づくものであり、いずれか１つのＳＮＰであっても従来よりも予測能が高い高血圧の発症の予測に使用できる。
【００４１】
（予防・診断・治療方法）
本明細書に開示されるMetsの予防・発症に関係するリスクファクターを検査する方法検査方法は、Metsの予防程度の検査方法や診断方法のほか、Metsの発症リスクの検査方法や診断方法にも適用できる。さらに、Metsの予防又は治療方法に適用できる。本明細書に開示される検査方法における各種指標を用いることで、Metsに対するリスクを検査できるため、当該検査結果を利用して、Metsの発症予防、診断、治療を行うことができる。
【実施例１】
【００４２】
本実施例では、メタボリックシンドローム群(MetS) VS 健常者群に比較してMetsと関連ある検診項目について解析した。
（１）解析対象
（解析データ１）
解析群１：現在MetS 151例    VS  明らかに健康 188例
【００４３】
（解析データ２）
解析群２：調査開始時〜現在までにMetS 78例  VS  明らかに健康 188例
【００４４】
なお、最近MetSを発症 76例は、最近MetSを発症 78例から女性1例、糖尿病1例を除去した。また、control約76例はMetSの76例と比較して、年齢、BMI、sBP、dBP、DM、TGの値、HDL-Cの値に有意差のないものを選択した。これらの検査結果を図１に示す。
【００４５】
（解析データ３）
解析群３：調査開始時〜現在までにMetS 76例 VS 調査開始時の検診項目が類似する健常者  76例
【００４６】
（２）検診項目
解析データ１〜解析データ３について以下の検診項目をMetS群と健常者群で比較した。
＜２値化データ＞
性別、喫煙、高血圧、糖尿病、高脂血症、高尿酸血症、ウロビリノーゲン、蛋白定性、糖定性、潜血、酒
＜連続値データ＞
年齢、身長、体重、BMI、収縮期血圧、拡張期血圧、T.CHO、TG、HDL、随時血糖、BUN、クレアチニン、UA、G.GTP、ヘモグロビン、GOT、GPT、ヘマトクリット、RBC、白血球数
【００４７】
なお、解析データ１は2006年、解析データ２・３は調査開始時のデータを使用した。また、２値化データ：Fisherの正確確率検定、連続値データ：ｔ検定により検定した。
【００４８】
（３）解析結果
解析データ１、２では、supercontrol群との比較のため、ほとんどの項目で有意な結果が得られた。また、本解析では、MetSとControl群の検診項目を類似させた解析データ３で４項目（クレアチニン、ヘモグロビン、ヘマトクリット、白血球数）について有意な結果が得られた。解析データ１〜３について、クレアチニン、ヘモグロビン、ヘマトクリット、白血球数の結果を、図２〜図４にそれぞれ示す。
【００４９】
図２及び図３に示すように、クレアチニンに関しては、MetS群よりControl群のほうが高い値を示した（解析データ３）。解析データ１と３の結果が逆になり、どのような意味を成すのかは不明である。また、図２〜図４に示すように、ヘモグロビン、ヘマトクリット及び白血球数については、解析データ１〜解析データ３のすべてのデータにおいてMetS群が高い値を示した。
【００５０】
（４）FNNによる多変量解析結果
次いで、FNNによる多変量解析を行った。すなわち、今回のデータは数値データとカテゴリデータが含まれているが、My FIS（FNN）を用いて、３inputsまでの変数増加法解析を５-fold CVによって実行した。入力変数の項目を図５に示す
【００５１】
（ｉ）解析データ１の結果
結果を図６に示す。図６に示すように、高脂血症で収縮期血圧が高いとMetsになりやすいことがわかった。なお、図６に示すFNNモデルの見方は以下の通りである。ルールとは、２変数の場合、４つのブロックに分かれる。（３変数は８つのブロック）この一つ一つのブロックのことをルールという。図６のルール表において、左上のルールはHL値が低くて、収縮期血圧が低いルールである。また、このルールにおいて、１/ １４４は部屋の快適性が”Mets”のグループに属する人が１人、”control”のグループに属する人が144人であることを示している。さらに、（）内の数値(-1.07)はWf 値というものを示しており、このWf 値が大きいほどMetsに近いルールであり、この値が大きいほどcontrolに近いルールであることを示している。
【００５２】
（ｉｉ）解析データ２の結果
結果を図７に示す。図７に示すように、TG量が多く、WBC（白血球）多いとMetsとなりやすいことがわかった。
【００５３】
（ｉｉｉ）解析データ３の結果
結果を図８に示す。図８に示すように、Cr（クレアチニン）量が少なく、TG量が多いとMetsとなりやすいことがわかった。また、Cr（クレアチニン）は値が大きいほどMetsの危険性が高くなるといわれているが、今回の結果はCr値が低いほどMets危険性が高くなるというものであった。そこでCr（クレアチニン）を除いた２６指標につきもう一度FNN解析を行った(second rule)。その結果、WBC（白血球）値が高くHaematocrit値が高いとMetsとなりやすい
【００５４】
＜解析データ３で関連性が示唆された４項目の生物学的特徴＞
なお、これら４項目の検診項目については、以下の通りの生物学的特徴が知られている。
（クレアチニン）
筋肉運動のエネルギー源となるアミノ酸の一種クレアチンが代謝されてできた物質である。尿酸や尿素窒素と同様に老廃物のひとつで、通常尿として体外に排泄されるが、腎不全など腎機能が障害をうけていると、正しく排泄されずに、血液中のクレアチニンが高くなる。クレアチニンの値がむしろ低い人のほうが代謝異常の影響を受けやすくMetsの危険性があると考えられる。
【００５５】
（ヘモグロビン）
高血糖状態が長期間続くと、血管内の余分なブドウ糖が、赤血球の蛋白であるヘモグロビン(Hb)と結合する。この結合したものをグリコヘモグロビンといい、中でもHbA1c（ヘモグロビン・エィワンシー）は、糖尿病やメタボにも、密接な関係を有するといわれている。ヘモグロビン濃度が高いと、高血糖状態になっており、メタボの危険性が高くなっていると考えられる。
【００５６】
（ヘマトクリット）
ヘマトクリットは赤血球の成分であり、ヘマクリット値が減少すると赤血球・ヘモグロビン濃度が減り、ヘマクリット値が増大すると    赤血球・ヘモグロビン濃度が増える。ヘマトクリット値が高いと、ヘモグロビン濃度が増えており、上で述べた理由より、メタボの危険性が高くなっていると考えられる。
【００５７】
（白血球数）
白血球は、身体の組織に侵入した細菌や異物を取り込み、消化・分解したり、免疫の働きをしている。メタボになると体内の抵抗力が低下するため、ウイルス感染などにより、白血球の活性化が起こり、白血球数が増加すると考えられる。
【００５８】
以上の結果から、Metsの予防・発症に関連するリスクファクターとしての検診項目は、クレアチニン、ヘモグロビン、ヘマトクリット及び白血球数であることがわかった。
【実施例２】
【００５９】
本実施例では、ＳＮＰと検診項目について単解析を行った。
（１）解析対象
解析データ１〜３は、実施例１と同じ解析対象群１〜３から取得した。なお、SNPは、解析データ１、２については、６６SNPsを選択した。また、解析データ３については、５８SNPsを選択した。検診項目については、解析データ１については、高血圧、糖尿病、高尿酸血症、喫煙、飲酒、アディポネクチン濃度（２００６年）とし、解析データ２、３については、アディポ除く（１９９９年）解析データ１の項目とした。
【００６０】
解析手法は、ロジスティック回帰分析（Wald検定により有意な因子を抽出）を用い、SNP遺伝子型２種類を比較した。リスクモデルは、dominant model( AA vs Aa+aa )及びrecessive model( AA+Aa vs aa )とし、additive ( AA vs Aa vs aa ) は評価しないこととした。
【００６１】
（２）解析結果
結果を図９〜図１１に示す。
解析データ１では、５SNP、６検診項目、解析データ２では、７SNP、４検診項目、解析データ３では、５SNPでそれぞれ有意な結果が得られた。なかでも、解析データ２、３で有意な差がみられた Apolipoprotein A-I（rs11216158）、Apolipoprotein C-III（rs2854117）、解析データ２でP_value<0.01であったAdiponectin receptor 1 （rs1539355）に注目し、これらの多型につき、解析データ２，３に関し頻度分布を解析した。結果を図１２〜図１４に示す。
【００６２】
図１２〜図１４に示すように、Apolipoprotein A-I、Apolipoprotein C- III及びAdiponectin receptor 1がMetSの関連因子であることが示唆された。
【実施例３】
【００６３】
（１）解析対象
実施例２と同様とした。ただし、解析手法は、１SNPと１検診項目の組み合わせにより解析した。また、ロジスティック回帰分析（ Wald検定により、SNPと検診項目両方とも有意な組み合わせを重要な因子として抽出 ）することにおり解析した。なお、SNPは単回帰分析と同様にdominant, recessive modelを評価した。
【００６４】
（２）解析結果
解析データ１についての解析結果を図１５及び図１６に示す。図１５及び図１６に示すように、１９の有意な組み合わせが選択された。すなわち、以下の組み合わせであった。
SNP＋高脂血症（HL）・・・３組み合わせ
SNP＋高尿酸血症（HU）・・・５組み合わせ
SNP＋喫煙（SM）・・・６組み合わせ
SNP＋アディポネクチン（Adipo）・・・３組み合わせ
【００６５】
解析データ２についての解析結果を図１７及び図１８に示す。図１７及び図１８に示すように、２５の有意な組み合わせが選択された。すなわち、以下の組み合わせであった。
SNP＋高血圧（HT）・・・７組み合わせ
SNP＋高脂血症（HL）・・・４組み合わせ
SNP＋高尿酸血症（HU）・・・６組み合わせ
SNP＋喫煙（SM）・・・８組み合わせ
【００６６】
解析データ３について有意な組み合わせは見つからなかった
【００６７】
解析データ１〜２で選ばれた組み合わせのうち、図１９に示すように、非常に有意であった以下の組み合わせの検討を行った。
解析データ１についてEstrogen receptor 2(rs1255998)と喫煙の組み合わせ
解析データ２について、Adiponectin receptor 1 (rs1539355)と喫煙の組み合わせ
【００６８】
Estrogen receptor 2 SNPと喫煙の組み合わせについて、両方ともRISK、SNPのみRISK、喫煙のみRISK、NO RISKに分け、解析データ２で1999年と2006年のBMIを調査した。結果を図２０に示す。また、Adiponection receptor 1 SNP、喫煙の組み合わせについて、両方ともRISK、SNPのみRISK、喫煙のみRISK、NO RISKに分け、解析データ２で1999年と2006年のBMIを調査した。結果を図２１に示す。
【００６９】
図２０及び図２１に示すように、１９９９年と２００６年のBMIの比較より、Estrogen receptor 2と喫煙、Adiponectin receptor 1と喫煙組み合わせリスクの重要性が示唆された。
【実施例４】
【００７０】
本実施例では、運動プロジェクトを行い、被験者につき、図２２に示すような検査項目等について検診を行った。すなわち、MetS 186名の中から同意の得られた47名が登録された。6ヶ月間、歩行を中心に運動してもらい、生活改善を促した。その後、再度 特殊採血を実施した。
【００７１】
47名全体での一日の平均歩数は7941±2663.3歩であった。各データに関し、運動前後での比較を図２３及び図２４に示す。図２３に示すように、全体で体重は有意に減少しており、またアディポネクチン濃度にも有意な変化が見られた。また、CRP以外の項目で有意差が認められた。高感度CRP以外のマーカーは運動前後で有意な変化が見られた。
【００７２】
次に、一日平均7000歩以上歩いた者33名のみで解析した。一日の平均歩数は 9001±1817.3歩であった。各データの運動前後での比較を図２５に示す。図２５に示すように、全体での体重変化は平均1.5kg減少と有意であった。また、7000歩以上歩いた群ではCRP以外の項目で有意差が認められた。
【００７３】
また、一日平均7000歩未満であった14名のみで解析した。一日の平均歩数は 4056±1236歩であった。各データの運動前後での比較を図２６に示す。図２６に示すように、全体での体重変化は平均0.4kg増加したものの有意ではなかった。また、7000歩未満であった群ではレジスチンで有意差があるものの、その他では有意差は認められなかった。
【００７４】
一日平均7000歩以上歩いた者と7000歩未満の者とについて、体重変化とアディポネクチン変化率について解析した。結果を図２７に示す。図２７に示すように、一日平均7000歩以上の群と7000歩未満の群では、体重の変化では有意な差が見られたものの、アディポネクチンの変化では有意な差は見られなかった。
【００７５】
さらに、体重変化別結果を図２８に示す。図２８に示すように、体重減少群ではアディポネクチン及びHOMA-IRで有意な変化が認められた。一日平均7000歩以上歩いた者と7000歩未満の者とについて腹囲について解析した結果を図２９に示す。図２９に示すように、腹囲に有意な差は見られなかったものの、一日平均7000歩以上の群では減少する傾向が、7000歩未満の群では増加する傾向が見られた。また開始前の腹囲に有意差はないものの、7000歩未満の群で腹囲や体重が大きい傾向があり、もともと肥満者では運動量が低いことが示唆される。さらに、腹囲変化群別結果を図３０に示す。腹囲減少群ではアディポネクチン及びHOMA-IRで有意な変化が認められた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【配列表】
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