(57)【要約】【課題】  安定的で最適な効果を得られる桜皮を用いた皮膚疾患治療用の漢方・生薬製剤を提供する。【解決手段】線維芽細胞に多く存在するエストロゲン受容体β（ＥＲβ）に対する結合能を有するサクラネチン、ナリンゲニン及びゲニステインを、桜皮１ｇ中１００μｇ以上含有する桜皮を配合することを特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
桜皮１ｇ中に、サクラネチン、ナリンゲニン及びゲニステインを１００μｇ以上含有する桜皮を配合することを特徴とする皮膚疾患治療用の漢方・生薬製剤。
【請求項２】
サクラネチンが３００μｇ以上、ナリンゲニンが１００μｇ以上及びゲニステインが１００μｇ以上である請求項１記載の皮膚疾患治療用の漢方・生薬製剤。
【請求項３】
漢方・生薬製剤が十味敗毒湯である、請求項１又は２に記載の漢方製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、サクラネチン、ナリンゲニン及びゲニステインを一定以上含有する桜皮を配合した漢方・生薬製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】  桜皮（Ｐｒｕｎｉ  Ｃｏｒｔｅｘ）はヤマザクラ又はその他近縁植物を基原とする生薬で、薬用には、江戸時代ごろから樹皮を「桜皮」と称して毒消しの薬として用いられていた（非特許文献１）。民間療法として、桜皮は解毒、鎮咳、咳嗽、湿疹及び蕁麻疹などに煎剤として用いられており、また桜皮抽出物は、急性気管支炎や肺炎、肺結核に伴う咳嗽及び喀痰喀出困難に医療用の配合剤（鎮咳去痰剤）の主成分としても知られている（非特許文献２）。【０００３】  漢方薬としては、江戸時代の花岡青洲が創製した「十味敗毒湯」に唯一配合されている。この十味敗毒湯という処方は、「万病回春」に収載されている荊防敗毒湯という急性化膿性疾患の初期などに用いる処方を参考に、日本の気候や風土にあわせ、荊防敗毒湯からきょう活、前胡、薄荷葉、連翹、枳殻、金銀花を除いて桜皮を加えた、「本朝経験方」と呼ばれる日本漢方の１つである（非特許文献３）。本処方は１８００年代の中ごろ，花岡青洲が記した「瘍科方筌」に、十味敗毒湯の方名で収載されているが（非特許文献４）、浅田宗伯の「勿誤薬室方函」では、十味敗毒湯の方名で、「柴胡、独活、桔梗、川きゅう、甘草、荊芥、防風、桜皮、茯苓、生姜、右十味、今樸そくを以て桜皮に代う」と記載されており（非特許文献５）、ここで薬味の改変が行なわれている。【０００４】  本邦における漢方製剤承認基準において、十味敗毒湯の効能・効果は、「体力が中程度なものの皮膚疾患で、発赤があり、ときに化膿するものの次の諸症：化膿性皮膚疾患・急性皮膚疾患の初期、じんましん、湿疹・皮膚炎、水虫」となっており（非特許文献６）、尋常性ざ瘡のような皮膚化膿症を繰り返すものに対して体質改善の目的でよく用いられる。【０００５】  美しい花を鑑賞できるサクラ類は、東アジアに分布が集中し、少数がヒマラヤや中国にも自生しているが、園芸的にサクラとして取り扱われているものの大部分は日本に産する。サクラ類が日本を代表する花として有名になったのも、花の美しい自生品種が多いことと、これからたくさんの園芸品種が育成、保存されてきたからである（非特許文献７）。ヤマザクラは、日本の本州、九州、四国の暖帯から温帯に分布しているが、徳島、宮崎、鹿児島などの桜皮が薬用として用いられている。【０００６】  一方、十味敗毒湯の方名の構成生薬で用いられることがあるこの樸そく（Ｑｕｅｒｃｕｓ  Ｃｏｒｔｅｘ）は、クヌギ（Ｑｕｅｒｃｕｓ  ａｃｕｔｉｓｓｉｍａ  Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ）又はその他近縁植物（Ｆａｇａｃｅａｅ）の樹皮であり（非特許文献８）、中国、朝鮮半島、日本各地に産する。【０００７】  桜皮が配合される漢方処方の十味敗毒湯は、荊芥、防風及び生姜など辛温解表薬の生薬を中心に構成されており、温めて血行改善し、邪を発散治癒することが目標である。この処方の桔梗、柴胡、独活、防風及び桜皮には、抗炎症作用及び鎮痛作用があることから、皮膚疾患に非常に有用であると考えられている（非特許文献２）。そして、尋常性ざ瘡のような皮膚化膿症を繰り返すものに対して体質改善の目的でよく用いられている。【０００８】  尋常性ざ瘡とは、主に青年男女の顔や胸背部に好発する慢性炎症性疾患で、ざ瘡の中で最も代表的な疾患であり、一般��ニキビと呼称される。ざ瘡発症のメカニズムは，脂線性毛包の皮脂腺の活性化であり、食事生活などの生活習慣、年齢、性別、及びホルモンなどの要因が挙げられるが、中でも男性ホルモンが最も影響を与えると云われている。男性ホルモンのアンドロゲンは、脂腺の発達や皮脂の合成、毛包漏斗上皮（角化）細胞の角化亢進を引き起こす。そのため、男性ホルモンの分泌量が増加する思春期は、男女ともにざ瘡が発症しやすい時期と云える。一方、女性ホルモンであるエストロゲンは、男性ホルモンのアンドロゲンに拮抗的に働き（非特許文献９）、アンドロゲンの皮脂分泌によるニキビの産生促進を抑制すると云われている（非特許文献１０）。【０００９】  また、ニキビ跡の改善には皮膚の真皮に存在する線維芽細胞の機能を活性化して、コラーゲン、ヒアルロン酸、エラスチン等の真皮成分を産生して皮膚の修復を行なうことが有効である。この皮膚線維芽細胞の活性化には女性ホルモンが深く関っており、女性ホルモンは、線維芽細胞に働きかけヒアルロン酸やコラーゲンの合成を活性化することが知られている。このエストロゲンの作用は線維芽細胞に多く存在するエストロゲン受容体β（ＥＲβ）を介して引き起こされるものである。【００１０】  このような女性ホルモン作用に着目して、欧米ではニキビ治療に女性ホルモンを含有する経口避妊薬ピルを用いることがある。しかし、このような女性ホルモン療法は乳癌のような重篤な副作用を引き起こす危険性があるなど安全性に問題があった。エストロゲン作用を持つ植物抽出物を用いたエストロゲン様作用剤や桜皮による線維芽細胞からの女性ホルモン促進剤が提案されている（特許文献１）。【００１１】  しかし、植物抽出物のような種々成分が含まれる薬学的調整品では、植物由来の成分が基原植物の種類や生育地によって効果が異なるため、安定的に効果が得られるように原料を選定したり、製造法を工夫したりする必要がある。特に、漢方薬のような複数の生薬を組み合わせた配合剤においては、複数の作用を安定的に保持させることが求められている。【００１２】  例えば、エストロゲン受容体α（ＥＲα）に対するエストロゲン作用を示す植物抽出物としては、ソホラ種からの抽出物でアルカロイドの総含有率が０．２％以下であり、かつ、フラボン、イソフラボン、カルコン及びプテロカルバンを含有することを特徴とする抽出物が提案されている（特許文献２）。また、高いエストロゲン活性を植物抽出物の製造法として、２％以上のキサントフモール及び０．５％以上のプレニル化フラボンを含有するホップ抽出物の製造法が提案されている（特許文献３）。【００１３】  しかしながら、漢方・生薬製剤に用いる桜皮においては、原料となるサクラ類では自生品種が多く、加えてたくさんの園芸品種があり、薬用として用いられてきたヤマザクラにおいても、含有成分と有効性と関係が明らかになっていないため、どのような桜皮が最適であるかは特定されておらず、これまで安定的で最適な効果が得られる桜皮に関した提案はされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】今井  淳．，月刊東洋医学，２８，４−６（２０００）
【非特許文献２】野村稔弘，宮下裕幸，吉満斉，松岡七重，池田剛，塚本佐知子，真鍋秀雪，村上美廣，第５６回年会日本生薬学会講演要旨集，１９１（２００９）特開２００６−２８１５５号公報
【非特許文献３】花輪寿彦，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｈｏｓｐｉｒａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔｓ，２６，１５３２−１５３３（１９９０）
【非特許文献４】大塚  敬節，矢数  道明，近世漢方医学書集成３０  華岡青洲（二），名著出版，３４５（１９８０）
【非特許文献５】大塚  敬節，矢数  道明，近世漢方医学書集成９５  浅田宗伯（一），名著出版，１８０−１８１（１９８２）
【非特許文献６】武田  正一郎，財団法人日本公定書協会  監修，改訂  一般用漢方処方の手引き，株式会社じほう，１１６−１１７（２００９）
【非特許文献７】秋庭  隆．，園芸植物大辞典，小学館，９３２−９３３（１９９４）
【非特許文献８】厚生省薬務局審査第二課  監修，日本薬局方外  生薬規格１９８９，薬事日報社，１１（１９８９）
【非特許文献９】伴野  規博，Ｆｒａｇｒ  Ｊ．，５，３６−４１（２００７）
【非特許文献１０】相澤  浩，Ｆｒａｇ  ｒ  Ｊ．，８，２８−３６（１９９９）
【特許文献１】特開２００４−６７５９０号公報
【特許文献２】特表２００４−５０１２０１号公報
【特許文献３】特表２００４−５３７６０４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】  従来、桜皮を配合した皮膚疾患治療用の漢方・生薬製剤において、どのような桜皮が、ＥＲβを介して線維芽細胞の機能を活性化するのかは特定されておらず、皮膚疾患に対して安定的で最適な効果が得られるのかは知られていなかった。【００１６】  そこで本発明は、安定的で最適な効果を得られる桜皮を用いた皮膚疾患治療用の漢方・生薬製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】  本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を行ったところ、桜皮１ｇ中に、サクラネチン、ナリンゲニン及びゲニステインを１００μｇ以上含有する桜皮が、高いＥＲβ結合能を示し、ＥＲβを介して線維芽細胞の機能を活性化することで、皮膚疾患に対して有用であることを見出した。【００１８】  即ち、本発明は、本発明は、線維芽細胞に多く存在するエストロゲン受容体β（ＥＲβ）に対する結合能を有するサクラネチン、ナリンゲニン及びゲニステインを、桜皮１ｇ中１００μｇ以上含有する桜皮を配合したことを特徴とする皮膚疾患治療用の漢方・生薬製剤である。
【発明の効果】
【００１９】  本発明の桜皮１ｇ中にサクラネチン、ナリンゲニン及びゲニステインを１００μｇ以上含有する桜皮を配合した漢方・生薬製剤は、高いＥＲβ結合能を有していることから、線維芽細胞を活性化することにより、皮膚疾患に対して安定的で最適な効果が得ることができる。
例えば、尋常性ざ瘡、化膿性皮膚疾患、じんましん、湿疹・皮膚炎などの皮膚疾患や、肌荒れ、しみ、色素沈着、シワ、抜け毛などに好適である。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】桜皮水抽出エキスと樸そく水抽出エキスのＥＲβ結合能の比較
【図２】桜皮水抽出エキスと樸そく水抽出エキスの成分比較
【図３】桜皮成分のＥＲβ結合能
【図４】桜皮水抽出エキスのＥＲβ結合能
【発明を実施するための形態】
【００２１】  以下、本発明についてさらに詳細に説明する。
【００２２】  本発明に用いられる桜皮とは、桜皮（Ｐｒｕｎｉ  Ｃｏｒｔｅｘ）はバラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）ヤマザクラＰｒｕｎｕｓ  ｊａｍａｓａｋｕｒａ  Ｓｉｅｂｏｌｄ又はその他近縁植物の、通例、周皮を除いた樹皮を基原とする生薬である。
【００２３】  本発明に用いられる桜皮は、桜皮１ｇ中にサクラネチン、ナリンゲニン及びゲニステインを１００μｇ以上含有する桜皮であり、例えば、日本では九州産、中国では安徽省産の桜皮が選択される。
【００２４】  本発明の漢方・生薬製剤では、当該桜皮を粉砕し粉末にして単独で、又は桜皮粉末と他の生薬粉末と混合して用いることができる。
【００２５】  また、当該桜皮の刻み生薬を単独又は他の複数の刻み生薬を混合して、生薬の合計質量に対して５〜２５倍量、好ましくは５〜２０倍量の水を加えて、通常８０〜１００℃で３０分間〜２時間加熱してエキスを煎出する。次に煎出液を熱時濾過して固形成分を除去し、この抽出液を濃縮し生薬抽出液が得られる。さらに、通常の乾燥方法、例えばスプレードライ、減圧濃縮乾燥、凍結乾燥等により乾燥して用いることもできる。
【００２６】  本発明の漢方・生薬製剤とは、十味敗毒湯に代表される桜皮を有効成分として配合した製剤であり、例えば、桜皮又は樸そく１〜３．５重量部、柴胡１〜３．５重量部、桔梗１〜３．５重量部、川きゅう１〜３．５重量部、茯苓１〜４重量部、独活０．７５〜３重量部、防風０．７５〜３．５重量部、甘草０．５〜２重量部、生姜０．５〜１．５重量部及び荊芥０．５〜２重量部からなる１０種類の生薬混合物、或いは更に連翹１〜３重量部を加えた１１種類の生薬混合物に、水を加えて熱水抽出分離により得られる濃縮エキスまたは乾燥エキス粉末が挙げられる。
【００２７】  これら１０或いは１１種類の生薬の合計重量に対して５〜２５倍量、好ましくは８〜２０倍量の水を加えて、通常８０〜１００℃で３０分間〜２時間加熱してエキスを煎出する。次に煎出液を熱時濾過して固形成分を除去し、この抽出液を濃縮し生薬抽出液が得られる。さらに、通常の乾燥方法、例えばスプレードライ、減圧濃縮乾燥、凍結乾燥等により乾燥することもできる。このようにして得られたエキス粉末はそのままの形で使用することもできるが、通常、食品及び／又は医薬品に使用される通常の賦形剤（例えば、結晶セルロース、ショ糖脂肪酸エステル、白糖等）を加え、例えば、乾式造粒法或は湿式造粒法により造粒して製造し、このようにした造粒物をそのまま使用することもできるが、それらをさらに打錠機を用いた圧縮成形物として使用することもできる。
【００２８】  また、漢方エキスが特有のえぐみを有することから、マスキングした製剤が服用上好ましく、被覆剤で被覆したフィルムコート剤とすることもできる。また、成分の安定性の点や簡単に摂取できる形態として、粉砕したものをそのまままた上記造粒物をハードカプセルやソフトカプセルに充填し摂取してもよい。
【００２９】  或いは、各生薬をそれぞれ個別に抽出したエキスを混合して、前述した同様の方法により使用することもできる。
【００３０】  また、抽出したエキスに、通常、液状の食品などに使用される甘味料、酸味料、乳化剤、フレーバー、分散助剤などの賦形剤を加えて溶解し、液体の形状として製造することもできる。
【００３１】  以上のような、内服固形の顆粒、錠剤、散剤、液剤の形態だけではなく、半固形状の形態のもの及び、水や湯などに溶解し液状にして用いることができる粉末状の形態などに加工することもできる。
【００３２】  以下に試験例を挙げて本発明を詳細に説明する。
【００３３】（試験例１）桜皮と樸そくのＥＲβ結合能の比較
十味敗毒湯の構成生薬として出典により違いがある桜皮と樸そくに関し、エストロゲン様作用を比較する目的で、それぞれ水を用いて加熱抽出したエキス（水抽出エキス）について、レセプター／コアクチベーター・リガンドバインディングアッセイ法を用いたＥＲβ結合能の評価を行なった。この方法では、リガンド（アゴニスト）がレセプター（ＥＲβ）に結合すると、レセプターの立体構造が変化し、この複合体は固相化したコアクチベーターと結合する。試料がリガンドでない場合には、コアクチベーターとの結合はみられないため、検出されない。また、リガンドがアンタゴニストである場合も、レセプターの構造変化がアゴニストの場合と異なるため、検出されない。
【００３４】（１）試験方法
ヒトエストロゲン受容体β（ＥＲβ）結合能の評価には、ＥｎＢｉｏ社ＲＣＡＳ  ｆｏｒ  ＥＲβキットを使用した。
（ａ）桜皮又は樸そくの水抽出エキスの調製
桜皮又は樸そく刻み生薬各２００ｇに蒸留水２０００ｍｌを加え、６０分間加熱抽出した。そして、医療ガーゼを敷いた１００メッシュの篩にてろ過した後、ろ液を凍結乾燥し、桜皮水抽出エキス及び樸そく水抽出エキスを得た。
【００３５】（ｂ）試料溶液の調製
桜皮又は樸そく水抽出エキス２ｍｇを精密に量り、それぞれジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１ｍｌを加え溶かし、ＤＭＳＯで段階希釈し、試料溶液とした。
【００３６】（ｃ）測定方法
ＥＲβ結合能の評価は、コアクチベーター（ＳＲＣ１）、レセプター及びリガンドとの複合体形成を指標に、ＥＲβ結合能を測定した。ＳＲＣ１固相化プレート及びＳＲＣ１非固層化プレートに、レセプター混合液９５μｌ／ｗｅｌｌと陽性対照の１７β−エストラジオール１．４μｇ／ｍｌ又は試料溶液５μｌ／ｗｅｌｌを加え、室温で６０分間反応させた。プレートを洗浄後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識した検出抗体を１００μｌ／ｗｅｌｌ加えて、６０分間反応させた。更に、プレートを洗浄後、ＨＲＰの基質であるテトラメチルベンジジン１００μｌ／ｗｅｌｌを加えて、２０分間酵素反応させた。反応停止液を１００μｌ／ｗｅｌｌ加え、４５０ｎｍの吸光度を測定した。尚、本試験系におけるｗｅｌｌ中の各水抽出エキスの濃度は、試料溶液の２０倍希釈となるため、１７β−エストラジオール濃度を７０ｎｇ／ｍｌ、試料濃度を１００〜１μｇ／ｗｅｌｌとして表記した。
【００３７】  そして、ＥＲβに対する結合率（％）は、Ｂ／Ｂｍａｘ＝（Ｃ−Ｂ）／（Ａ−Ｂ）％より算出した。ここで、Ａは陽性対照のＳＲＣ１（＋）の吸光度−陽性対照のＳＲＣ１（−）の吸光度、Ｂは陰性対照のＳＲＣ１（＋）の吸光度−陰性対照のＳＲＣ１（−）の吸光度、Ｃは各試料溶液のＳＲＣ１（＋）の吸光度−各試料溶液のＳＲＣ１（−）の吸光度とした。
【００３８】（２）試験結果
陽性対照１７β−エストラジオール７０ｎｇ／ｍｌのＥＲβとの結合能を１００％として、徳島産桜皮水抽出エキスが４０及び１００μｇ／ｍｌ濃度で４０％の結合能を示し、樸そく水抽出エキスの結合能は認められなかった（図１）。
【００３９】（試験例２）桜皮水抽出エキスと樸そく水抽出エキスの成分比較
（１）試験方法
（ａ）試料溶液の調製
桜皮又は樸そく水抽出エキス各０．５ｇに水／ジエチルエーテル（２：５）溶液７ｍｌを加え、１０分間振り混ぜ、遠心分離した。ジエチルエーテル層を分取し、メンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過後、ろ液を試料溶液とした。
【００４０】（ｂ）ＧＣ−ＭＳ分析条件
装置：Ｓｈｉｍａｄｚｕ社製ＧＣ−ＭＳ−ＱＰ２０１０、カラム：Ｒｅｓｔｅｋ社製Ｒｘｉ−５ｍｓ（２０ｍ×０．１８ｍｍｉ．ｄ．、膜厚０．１８μｍ）、キャリアーガス：Ｈｅ（２５５．９ｋＰａ）、スプリット比：５０：１、注入量：１．０μｌ、注入口温度：３００℃、カラム温度：初期温度２００℃（１分保持）−昇温２０℃／分−最終温度３３０℃（２分保持）、検出器温度：３００℃、イオン化法：ＥＩ法、データ処理用ソフト：ＧＣＭＳｓｏｌｕｔｉｏｎＶｅｒ．２．５３ＳＵ３
【００４１】（２）試験結果
桜皮及び樸そくの各水抽出エキスの含有成分について，実験方法に示した条件で，ＧＣ−ＭＳ分析を行なった．図２にトータルイオンクロマトグラムを示した．クロマトグラム上に検出された８つのピークについて，保持時間とマススペクトルから解析したところ、図２に示したように、桜皮水抽出エキスの含有成分として（１）サクラネチン、（２）ナリンゲニン、（３）ゲニステイン、（４）ゲンクワニン、（５）アルクチゲニン及び（６）β−シトステロールを同定した。一方、樸そく水抽出エキスについては、成分（６）を確認したが、それ以外の成分（１）から（５）については、検出されなかった。
【００４２】（試験例３）桜皮成分の定量
ＧＣ−ＭＳでの定性分析により検出された桜皮の主要な成分であるサクラネチン、ナリンゲニン、ゲニステイン、ゲンクワニン及びアルクチゲニンについて、ＬＣ／ＭＳ測定条件の検討及び検量線を作成した。設定した測定条件及び検量線から、桜皮中の各成分含量の測定を行なった。
【００４３】（１）試験方法
（ａ）標準溶液及び試料溶液の調製
標品のサクラネチン、ナリンゲニン、ゲニステイン及びゲンクワニンは５ｎｇ／ｍｌ−５０００ｎｇ／ｍｌ、アルクチゲニンは２５０ｎｇ／ｍｌ−５０００ｎｇ／ｍｌになるよう５０％メタノールで段階希釈し標準溶液とした。桜皮刻み生薬の粉砕品約０．５ｇを精密に量り、５０％メタノール溶液を加えて溶かし、２０分間振り混ぜ、正確に５０ｍｌとした。この液をメンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過し、ろ液を試料溶液とした。
【００４４】（ｂ）測定方法
（ＬＣ／ＭＳ分析条件）
ＬＣ／ＭＳ装置：Ｓｈｉｍａｄｚｕ社製ＬＣＭＳ−２０１０Ａ、ＨＰＬＣ装置：Ｓｈｉｍａｄｚｕ社製ＬＣ１０ＡＤＶＰ、カラム：ＹＭＣ社製ＹＭＣ−ＰａｃｋＰｒｏＣ１８（１５０×２．０ｍｍｉ．ｄ．、５μｍ）、カラムオーブン：Ｓｈｉｍａｄｚｕ社製ＣＴＯ−１０ＡＣＶＰ、検出器：Ｓｈｉｍａｄｚｕ社製ＳＰＤ−Ｍ１０ＡＶＰ、移動相Ａ：０．１％ギ酸アセトニトリル溶液、移動相Ｂ：０．１％ギ酸水溶液、グラジエント条件：移動相Ａ／Ｂ２０／８０（０分）−Ａ／Ｂ７０／３０（９０分）、流速：０．２ｍｌ／分、カラム温度：２０℃、注入量：１０μｌ、検出：フォトダイオードアレイ検出器（ＰＤＡ）、及びシングル四重極質量検出器
【００４５】（質量分析条件）
イオン化：ＣＩ法、プローブ：ＥＳＩ、分析モード：ＳＩＭ（負イオンモード）、プローブ電圧：２ｋＶ、Ｑ−ａｒｒａｙＲＦ（ｒａｄｉｏ  Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ）電圧：１５０Ｖ、Ｑ−ａｒｒａｙＤＣ（ｄｉｒｅｃｔ  ｃｕｒｒｅｎｔ）電圧：−５ｖ／−２５Ｖ／−２０Ｖ、乾燥ガス流量：Ｎ２（０．１ＭＰａ）、ＣＤＬ導入電圧：５Ｖ、ネブライザーガス流量：１５００ｍｌ／分、ＣＤＬ温度：３００℃、ブロック温度：３００℃、データ処理用ソフト：ＬＣＭＳ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｖｅｒ．２．０４Ｓｕ３Ｈ３
【００４６】（２）試験結果
比較例１及び２の徳島県産桜皮、実施例１及び２の九州産桜皮と実施例３及び４の中国安徽省産桜皮の粉砕品について、試験方法に示したＬＣ／ＭＳ設定条件下で定量を行なった結果（表１）、桜皮の主成分はサクラネチンであり、徳島県産、九州産及び安徽省産の桜皮中の含量は、それぞれ２９７μｇ／ｇ、３３１−３９４μｇ／ｇ及び７５９−９３８μｇ／ｇで、安徽省産が日本産よりも約２倍高かった。また、ナリンゲニン含量はそれぞれ１６３−２０８μｇ／ｇ、４３１−４５１μｇ／ｇ及び１４２−１４７μｇ／ｇであり、九州産が徳島県産及び安徽省産よりも２倍以上高く、ゲニステイン含量はそれぞれ２−２４μｇ／ｇ、１７１−３０８μｇ／ｇ及び１３３−１５７μｇ／ｇであり、九州産及び安徽省産が比較的に高い値を示した。そして、ゲンクワニン含量はそれぞれ７３−５９μｇ／ｇ、１９６−２５９μｇ／ｇ及び１８６−２７６μｇ／ｇで、九州産及び安徽省産が比較的に高かった。また、アルクチゲニン含量はそれぞれ２２−２４μｇ／ｇ、３２−５１μｇ／ｇ及び０．８−１．０μｇ／ｇで、日本産の方が高い値を示した。
【００４７】
【表１】
2011225505.tif 000002
【００４８】（試験例４）桜皮水抽出エキス中の成分定量
（１）試験方法
比較例１及び２の徳島県産桜皮、実施例１及び２の九州産桜皮と実施例３及び４の中国安徽省産の桜皮の刻み生薬について、実施例で示した方法で水抽出エキスを調製した。各水抽出エキス約０．５ｇを精密に量り、５０％メタノール溶液を加えて溶かし、２０分間振り混ぜ、正確に５０ｍｌとした。この液をメンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過し、ろ液を試料溶液とした。測定方法は、試験例３と同様の条件で測定した。
【００４９】（２）試験結果
比較例１及び２の徳島県産桜皮、実施例１及び２の九州産桜皮と実施例３及び４の中国安徽省産桜皮の水抽出したエキスの収率は、７．５−９．３％であった（表２）。また、各水抽出エキスついて成分定量を行なった結果を表３に示した。徳島県産、九州産及び安徽省産の桜皮水抽出エキスは、主成分のサクラネチンをそれぞれ４．６５−６．１２ｍｇ／ｇ、５．８０−５．９７ｍｇ／ｇ及び４．４３−４．６９ｍｇ／ｇ含有し、産地による大きな差がなかった。また、ナリンゲニン含量はそれぞれ０．８１−０．９２ｍｇ／ｇ、１．８０−２．７１ｍｇ／ｇ及び０．７０−０．８２ｍｇ／ｇであり、桜皮粉砕品の定量結果と同様に、九州産が徳島県産及び安徽省産よりも２倍以上高く、ゲニステイン含量はそれぞれ０．０２−０．１５ｍｇ／ｇ、１．２４−１．７２ｍｇ／ｇ及び０．６６−０．８５ｍｇ／ｇであり、粉砕品の定量結果と同様に九州産と安徽省産が比較的に高い値を示した。そして、ゲンクワニン含量は、それぞれ０．６１−０．８１ｍｇ／ｇ、１．０８−１．２４ｍｇ／ｇ及び０．６３−０．７６ｍｇ／ｇ、アルクチゲニン含量はそれぞれ５−１１μｇ／ｇ、２１−５４μｇ／ｇ及び１３−２２μｇ／ｇであり、産地による大きな差はなかった。
【００５０】
【表２】
2011225505.tif 000003
【００５１】
【表３】
2011225505.tif 000004
【００５２】（試験例５）桜皮成分のＥＲβ結合能
（１）試験方法
サクラネチン、ナリンゲニン、ゲニステイン、ゲンクワニン及びアルクチゲニン１ｍｇを精密に量り、それぞれ２０μｇ／ｍｌとなるようにＤＭＳＯを加えて溶かし、ＤＭＳＯを用いて段階希釈し、試料溶液とした。ＥＲβに対する結合能は、試験例１と同様の方法で測定した。
【００５３】（２）試験結果
ゲニステインが１０ｎｇ／ｍｌ濃度で約６０％と結合能が最も強く、ナリンゲニンが１０００ｎｇ／ｍｌで最大６０％、サクラネチンが１０００ｎｇ／ｍｌで最大４０％の結合能が確認された。一方、ゲンクワニン及びアルクチゲニンでは結合能が認められなかった（図３）。
【００５４】（試験例６）桜皮水抽出エキスのＥＲβ結合能
（１）試験方法
比較例１及び２の徳島県産桜皮、実施例１及び２の九州産桜皮と実施例３及び４の中国安徽省産桜皮の水抽出エキス各０．５ｇに水／ジエチルエーテル（２：５）溶液７ｍｌを加え、１０分間振り混ぜ、遠心分離した。ジエチルエーテル層を分取し、メンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過後、ろ液を試料溶液とした。ＥＲβに対する結合能は、陽性対照の１７β−エストラジオール０．５４μｇ／ｍｌを５μｌ／ｗｅｌｌを加えた以外は、試験例１と同様の方法で測定した。
【００５５】（２）試験結果
陽性対照１７β−エストラジオール２７ｎｇ／ｍｌのＥＲβとの結合能を１００％として、実施例１〜４の九州産及び中国安徽省産桜皮の水抽出エキスについては、８μｇ／ｍｌ濃度で６０％の結合能を示したが、比較例１及び２の徳島県産桜皮では４０μｇ／ｍｌで５０％の結合能を示したに過ぎなかった。以上から、実施例１〜４の桜皮は比較例１及び２の徳島県産桜皮に比べて低濃度の添加量で高い結合能を示すことが確認された（図４）。
【００５６】（試験例６）
中等度以上の重症度を示す尋常性ざ瘡の女性２１名を対象とし、実施例６の十味敗毒湯細粒６ｇを１日２回にわけて食間または食前に１２週間経口服用した。ざ瘡の程度については、４段階（０：なし、１：軽度、２：中等度、３：重度）で重症度を調査しスコア化した。皮膚所見改善度は、５段階（◎：著明改善、○：改善、●：やや改善、△：不変、×：悪化）で評価した。
【００５７】（試験結果）
表４で示したとおり、皮膚所見の改善度は２１例中、著明改善１６例（７６．２％）、改善１例（４．８％）で改善以上の累積改善率は８１．０％であった。
【００５８】
【表４】
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【実施例】
【００５９】  以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。
【実施例１】
【００６０】桜皮水抽出エキス
九州産桜皮（ロット１）の刻み生薬各２００ｇに蒸留水２０００ｍｌを加え、６０分間加熱抽出した。そして、医療ガーゼを敷いた１００メッシュの篩にてろ過した後、ろ液を凍結乾燥し、桜皮水抽出エキスを得た。
【実施例２】
【００６１】  九州産桜皮（ロット２）の刻み生薬各２００ｇに蒸留水２０００ｍｌを加え、６０分間加熱抽出した。そして、医療ガーゼを敷いた１００メッシュの篩にてろ過した後、ろ液を凍結乾燥し、桜皮水抽出エキスを得た。
【実施例３】
【００６２】  中国安徽省産桜皮（ロット３）の刻み生薬各２００ｇに蒸留水２０００ｍｌを加え、６０分間加熱抽出した。そして、医療ガーゼを敷いた１００メッシュの篩にてろ過した後、ろ液を凍結乾燥し、桜皮水抽出エキスを得た。
【実施例４】
【００６３】  中国安徽省産桜皮（ロット４）の刻み生薬各２００ｇに蒸留水２０００ｍｌを加え、６０分間加熱抽出した。そして、医療ガーゼを敷いた１００メッシュの篩にてろ過した後、ろ液を凍結乾燥し、桜皮水抽出エキスを得た。
【実施例５】
【００６４】十味敗毒湯エキス顆粒剤
十味敗毒湯エキス粉末＊                              ３９００ｇ
乳糖                                                １９２０ｇ
ヒドロキシプロピルセルロース                          １８０ｇ
合  計                                              ６０００ｇ
＊十味敗毒湯エキス粉末３９００ｍｇは、柴胡２．５ｇ、桔梗２．５ｇ、川きゅう２．５ｇ、茯苓２．５ｇ、防風２．５ｇ、桜皮２．５ｇ、甘草１．５ｇ、荊芥１．５ｇ独活１．５ｇ、生姜１．０ｇの混合物から熱水で抽出し乾燥して得られる。【００６５】（製造方法）
「日局」製剤総則、顆粒剤の項に準じて顆粒剤を製する。すなわち上表に記載の、十味敗毒湯エキス粉末からヒドロキシプロピルセルロースまでの成分をとり、実施例５の顆粒剤を得た。
【実施例６】
【００６６】十味敗毒湯エキス細粒剤
十味敗毒湯エキス粉末＊                              ３９００ｇ
乳糖                                                １２４０ｇ
結晶セルロース                                        ７００ｇ
含水二酸化ケイ素                                      １００ｇ
ステアリン酸マグネシウム                                ６０ｇ
合  計                                              ６０００ｇ
＊十味敗毒湯エキス粉末３９００ｍｇは、柴胡２．５ｇ、桔梗２．５ｇ、川きゅう２．５ｇ、茯苓２．５ｇ、防風２．５ｇ、桜皮２．５ｇ、甘草１．５ｇ、荊芥１．５ｇ、独活１．５ｇ、生姜１．０ｇの混合物から熱水で抽出し乾燥して得られる。【００６７】（製造方法）
すなわち上表に記載の、十味敗毒湯エキス粉末からステアリン酸マグネシウムまでの成分をとり、乾式造粒法により造粒し、実施例６の細粒剤を得た。
【実施例７】
【００６８】十味敗毒湯フィルムコーティング錠
（素錠部）
十味敗毒湯エキス粉末                    １９５０ｇ
結晶セルロース                            ３８０ｇ
クロスカルメロースナトリウム              ３００ｇ
含水二酸化ケイ素                          １３０ｇ
ステアリン酸マグネシウム                    ３０ｇ
小  計                                  ２７９０ｇ
（剤皮部）
ヒプロメロース                            ８２ｇ
酸化チタン                                １４ｇ
カルナウバロウ                              微量
小  計                                      ９６ｇ
合  計                                  ２８８６ｇ【００６９】（製造方法）
「日局」製剤総則、錠剤の項に準じて錠剤を製する。すなわち上表に記載の、十味敗毒湯エキス粉末からステアリン酸マグネシウムまでの成分をとり、一錠重量３１０ｍｇの錠剤を製し、その錠剤に上表の剤皮部ヒプロメロースからカルナウバロウを用いて、コーティングを施し、実施例６のフィルムコーティング錠（一錠重量３２１ｍｇ、十味敗毒湯エキス粉末２１７ｍｇ含有）を得た。
【実施例８】
【００７０】十味敗毒湯錠
十味敗毒湯エキス粉末                      １９５０ｇ
結晶セルロース                              ３８０ｇ
クロスカルメロースナトリウム                ３００ｇ
含水二酸化ケイ素                            １３０ｇ
ステアリン酸マグネシウム                      ３０ｇ
合  計                                    ２７９０ｇ【００７１】（製造方法）
「日局」製剤総則、錠剤の項に準じて錠剤を製する。すなわち上表に記載の、十味敗毒湯エキス粉末からステアリン酸マグネシウムまでの成分をとり錠剤（一錠重量３１０ｍｇ、十味敗毒湯エキス粉末２１７ｍｇ含有）を製し、本発明の実施例７の錠剤を得た。
【実施例９】
【００７２】桜皮エキス錠
桜皮エキス粉末＊                        １２００ｇ
ヨクイニンエキス粉末＊＊                  ３９０ｇ
結晶セルロース                            ３５０ｇ
クロスカルメロースナトリウム              ３００ｇ
含水二酸化ケイ素                          １３０ｇ
ステアリン酸マグネシウム                    ３０ｇ
合  計                                  ２４００ｇ
＊桜皮エキス粉末１２００ｍｇは、桜皮１５ｇから熱水で抽出し乾燥して得られる。
＊＊ヨクイニンエキス粉末は、ヨクイニン５ｇから熱水で抽出し乾燥して得られる。【００７３】（製造方法）
「日局」製剤総則、錠剤の項に準じて錠剤を製する。すなわち上表に記載の、桜皮エキス粉末からステアリン酸マグネシウムまでの成分をとり、（一錠重量３００ｍｇ）を製し、本発明の実施例８の錠剤を得た。【００７４】（比較例１）桜皮水抽出エキス
徳島産桜皮（比較ロット１）の刻み生薬各２００ｇに蒸留水２０００ｍｌを加え、６０分間加熱抽出した。そして、医療ガーゼを敷いた１００メッシュの篩にてろ過した後、ろ液を凍結乾燥し、桜皮水抽出エキスを得た。【００７５】（比較例２）
徳島産桜皮（比較ロット２）の刻み生薬各２００ｇに蒸留水２０００ｍｌを加え、６０分間加熱抽出した。そして、医療ガーゼを敷いた１００メッシュの篩にてろ過した後、ろ液を凍結乾燥し、桜皮水抽出エキスを得た。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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