(57)【要約】【課題】近赤外蛍光造影剤の造影成分として有用な新規化合物の提供。【解決手段】下記一般式（I）で表される化合物又はその医薬上許容しうる塩：2011046662.tif 000033式中、Ｘはスルホン酸基又はホスホン酸基を示し；Ｒ1とＲ2は置換基を表し；Ｒ3〜Ｒ6は置換基を有していてもよいアルキル基を表し；Ｒ7及びＲ8は置換基を有していてもよいアルキル基を表し；Ｌ1〜Ｌ3は置換基を有していてもよいメチン基を表し、ｒは０〜３の整数を表し、rが２以上の場合に複数存在するＬ2及びＬ3は同一でも異なっていてもよく；ｍ,ｎは０〜３の整数を表し；上記置換基には一つ以上の、スルホン酸基、カルボン酸基及びホスホン酸基からなる群より選択される酸基又は該酸基を含む基が含まれ、かつ、前記酸基及びＸのうち２つ以上はカルボン酸基またはホスホン酸基である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（I）で表される化合物又はその医薬上許容しうる塩：
【化１】
2011046662.tif 000031
式中、Ｘはスルホン酸基又はホスホン酸基を示し；Ｒ1とＲ2はそれぞれ独立に置換基を表し；Ｒ3〜Ｒ6は同一又は異なって、それぞれ置換基を有していてもよいアルキル基を表し；Ｒ7及びＲ8はそれぞれ独立に置換基を有していてもよいアルキル基を表し；Ｌ1〜Ｌ3は同一又は異なって、それぞれ置換基を有していてもよいメチン基を表し、ｒは０〜３の整数を表し、rが２以上の場合に複数存在するＬ2及びＬ3は同一でも異なっていてもよく；ｍ,ｎはそれぞれ独立に０〜３の整数を表し；上記置換基には一つ以上の、スルホン酸基、カルボン酸基及びホスホン酸基からなる群より選択される酸基又は該酸基を含む基が含まれ、かつ、前記酸基及びＸのうち２つ以上はカルボン酸基またはホスホン酸基である。
【請求項２】
下記一般式（II）で表される請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩：
【化２】
2011046662.tif 000032
式中、
Ｒ10及びＲ11は同一又は異なって、カルボン酸基、スルホン酸基、又はホスホン酸基で置換されているアルキル基を表し；R9は、水素、アルキル基、アリール基、アリールアルキル基、ヘテロ環基、アシルアミノ基、アリールアミノ基、Ｎ−アリール−Ｎ−アルキルアミノ基、アリールチオ基、アリールオキシ基、又はアシルアミノアリールオキシ基を表す。
【請求項３】
Ｒ9が水素原子、メチル基、又はフェニル基である、メチル、エチル、アリールである請求項２に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項４】
Ｒ10及びＲ11が、いずれもスルホン酸基又はホスホン酸基で置換されているアルキル基である請求項２又は３に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項５】
Ｒ10及びＲ11が、いずれもホスホン酸基で置換されているアルキル基である請求項２又は３に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項６】
Ｘがスルホン酸基である請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項７】
カルボン酸基、スルホン酸基、又はホスホン酸基の１つ以上がナトリウムイオンと塩を形成している請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩を含む近赤外蛍光造影剤。
【請求項９】
腫瘍の造影に用いられる請求項８に記載の近赤外蛍光造影剤。
【請求項１０】
SPARCが高発現している癌種の造影に用いられる請求項９に記載の近赤外蛍光造影剤。
【請求項１１】
口腔、咽頭、消化器、呼吸器、骨および間接、軟組織、皮膚、乳房、生殖系、泌尿器系、眼および眼窩、脳及び中枢神経又は内分泌系に発生する腫瘍の造影に用いられる請求項９又は１０に記載の近赤外蛍光造影剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規化合物を含む近赤外蛍光造影剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
疾患の治療において、生体内の疾患によって引き起こされる形態学的および機能的変化をその疾患の早期段階で検出することは重要である。特に癌の治療のためには、腫瘍の位置や大きさ、性質を予め知ることは、将来の治療のための戦略やプロトコルを決定するために極めて重要となる。このために従来用いられている方法としては、穿刺等による生検の他、X線造影、MRI、PET、超音波造影などの画像診断が挙げられる。生検は確定診断としては有効であるが、被験者への負担が大きく、また病変の経時的な追跡には適さない。またX線造影やMRI、PETは必然的に被験者に放射線や電磁波への被曝を起こす。さらに、上述したような従来の画像診断は、測定と診断に複雑な操作と長い時間を要する。また、装置の大きさおよび形状の点から、外科手術中にこれらの方法を用いながらナビゲーション下で手術を行うことも困難である。
【０００３】
蛍光造影法はこれらの問題を解決する画像診断法の一つである。この方法は、特定の波長の励起光への暴露により蛍光を発する物質を造影剤として用いる。また、この方法は、生体外から励起光を照射し、生体内の蛍光物質から放射される蛍光を検出する工程を含む。
シアニン系化合物はこのような蛍光造影法に用いることができる代表的な化合物である。実際、インドシアニングリーン（以下、ICGと略す）は、現在、肝機能検査、眼底検査に用いられている。しかし、ICGは易溶化のためにヨウ素が添加された製剤として用いる必要があるため、ヨウ素過敏症患者には用いることができないといった問題点を有する。
この溶解性の問題を解決したシアニン系化合物として、特許文献１の請求項１に記載の化合物（以下SF-64と称する）が挙げられる。該色素は、水溶性に優れた低毒性の色素であることを特徴としており、また腫瘍描出性能を有することが該特許内に記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第３５０７０６０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、近赤外蛍光造影剤の造影成分として有用な新規化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らはSF-64を用いて、シアニン系化合物の腫瘍集積機序について鋭意検討を行った。その結果、該色素および、その誘導体が血漿中においてアルブミンと複合体を形成することを初めて明らかとした。この知見に基づいて、SF64と比較して腫瘍描出時間などにおいて実際的な造影機能が向上している新規な色素化合物群を見出した。さらにこの色素化合物群は動物種による腫瘍描出能の差が少ないことを見出し、動物実験において、ヒトに投与した場合の正確な効果の予想が容易で、ヒトでの腫瘍描出能が高い化合物を早期の段階で選別可能であることを見出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。
すなわち本発明は以下［１］〜［１１］を提供するものである。
［１］下記一般式（I）で表される化合物又はその医薬上許容しうる塩：
【０００７】
【化１】
2011046662.tif 000002
式中、Ｘはスルホン酸基又はホスホン酸基を示し；Ｒ1とＲ2はそれぞれ独立に置換基を表し；Ｒ3〜Ｒ6は同一又は異なって、それぞれ置換基を有していてもよいアルキル基を表し；Ｒ7及びＲ8はそれぞれ独立に置換基を有していてもよいアルキル基を表し；Ｌ1〜Ｌ3は同一又は異なって、それぞれ置換基を有していてもよいメチン基を表し、ｒは０〜３の整数を表し、rが２以上の場合に複数存在するＬ2及びＬ3は同一でも異なっていてもよく；ｍ,ｎはそれぞれ独立に０〜３の整数を表し；上記置換基には一つ以上の、スルホン酸基、カルボン酸基及びホスホン酸基からなる群より選択される酸基又は該酸基を含む基が含まれ、かつ、前記酸基及びＸのうち２つ以上はカルボン酸基またはホスホン酸基である。
［２］下記一般式（II）で表される［１］に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩：
【０００８】
【化２】
2011046662.tif 000003
【０００９】
式中、
Ｒ10及びＲ11は同一又は異なって、カルボン酸基、スルホン酸基、又はホスホン酸基で置換されているアルキル基を表し；R9は、水素、アルキル基、アリール基、アリールアルキル基、ヘテロ環基、アシルアミノ基、アリールアミノ基、Ｎ−アリール−Ｎ−アルキルアミノ基、アリールチオ基、アリールオキシ基、又はアシルアミノアリールオキシ基を表す。
［３］Ｒ9が水素原子、メチル基、又はフェニル基である、メチル、エチル、アリールである［２］に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
［４］Ｒ10及びＲ11が、いずれもスルホン酸基又はホスホン酸基で置換されているアルキル基である［２］又は［３］に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
［５］Ｒ10及びＲ11が、いずれもホスホン酸基で置換されているアルキル基である［２］又は［３］に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【００１０】
［６］Ｘがスルホン酸基である［１］〜［５］のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
［７］カルボン酸基、スルホン酸基、又はホスホン酸基の１つ以上がナトリウムイオンと塩を形成している［１］〜［６］のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
［８］［１］〜［７］のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩を含む近赤外蛍光造影剤。
［９］ 腫瘍の造影に用いられる［８］に記載の近赤外蛍光造影剤。
［１０］SPARCが高発現している癌種の造影に用いられる［９］に記載の近赤外蛍光造影剤。
［１１］口腔、咽頭、消化器、呼吸器、骨および間接、軟組織、皮膚、乳房、生殖系、泌尿器系、眼および眼窩、脳及び中枢神経又は内分泌系に発生する腫瘍の造影に用いられる［９］又は［１０］に記載の近赤外蛍光造影剤。
【００１１】
本発明のさらに別の観点からは、蛍光造影剤の製造のための上記の化合物の使用；蛍光造影法であって、上記の化合物を、ヒトを含む哺乳類動物に投与した後に蛍光造影する工程を含む方法；腫瘍の造影方法であって、上記の化合物を、ヒトを含む哺乳類動物に投与した後に蛍光造影する工程を含む方法が提供される。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、新規なシアニン系化合物が提供される。上記シアニン系化合物は腫瘍等の疾患部位への集積性が高く、近赤外蛍光造影剤の造影成分として適している。また、上記シアニン系化合物はアルブミンに対する結合能の動物種による差異が少ないため動物実験によりヒトに投与した場合の効果の予想がしやすい。さらに、本発明の化合物を含む近赤外蛍光造影剤は、腫瘍描出時間が長いという特徴を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本明細書において、「置換基」、または「置換又は無置換の」というときの置換基としては例えば下記の置換基群から選択される置換基が挙げられる。
【００１４】
置換基群：ハロゲン原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロ環基、シアノ基、ヒドロキシル基、ニトロ基、カルボン酸基（カルボキシル基）、アルコキシ基、アリールオキシ基、シリルオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アシルオキシ基、カルバモイルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、アリールオキシカルボニルオキシ、アミノ基、アルキルアミノ基、アリールアミノ基、アシルアミノ基、アミノカルボニルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、アリールオキシカルボニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、アルキル及びアリールスルホニルアミノ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基、スルファモイル基、スルホン酸基（スルホ基）、アルキルスルフィニル基、アリールスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、アシル基、アリールオキシカルボニル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、アリールアゾ基、ヘテロ環アゾ基、イミド基、ホスホン酸基（リン酸基）、ホスフィノ基、ホスフィニル基、ホスフィニルオキシ基、ホスフィニルアミノ基、及びシリル基。
【００１５】
なお、これらの基のうち塩を形成することが可能な基、又は一個もしくは二個以上の水素イオンの脱離により塩を形成することが可能な基については、これらいずれかの基が塩を形成したものであってもよい。これらの塩における対イオンとしては、本発明の化合物中に存在し得る陽電荷又は陰電荷、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオンが挙げられる。
【００１６】
ハロゲン原子としては、例えば、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。
アルキル基としては、直鎖、分岐、もしくは環状のアルキル基、又はそれらの任意の組み合わせのいずれでもよく、炭素数１から３０の直鎖アルキル基（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、ｎ−オクチル、エイコシル、２−エチルヘキシル）、炭素数３から３０のシクロアルキル基（例えば、シクロヘキシル、シクロペンチル、４−ｎ−ドデシルシクロヘキシル）、炭素数５から３０のビシクロアルキル基（炭素数５から３０のビシクロアルカンから水素原子を一個取り去った一価の基：例えば、ビシクロ［１，２，２］ヘプタン−２−イル、ビシクロ［２，２，２］オクタン−３−イル）、及び更に環構造が多いトリシクロ構造を有するアルキル基などが挙げられる。
アルキル部分を持つ置換基のアルキル部分についても、別に説明の無い限り、上記アルキル基の説明と同様である。
【００１７】
アルケニル基としては、直鎖、分岐、環状のいずれでもよく、炭素数２から３０の直鎖アルケニル基（例えば、ビニル、アリル、プレニル、ゲラニル、オレイル）、炭素数３から３０シクロアルケニル基（炭素数３から３０のシクロアルケンの水素原子を一個取り去った一価の基：例えば２−シクロペンテン−１−イル、２−シクロヘキセン−１−イル）、及び炭素数５から３０のビシクロアルケニル基（二重結合を一個持つビシクロアルケンの水素原子を一個取り去った一価の基：例えば、ビシクロ［２，２，１］ヘプト−２−エン−１−イル、ビシクロ［２，２，２］オクト−２−エン−４−イル）などが挙げられる。アルキニル基としては、炭素数２から３０のアルキニル基（例えば、エチニル、プロパルギル）が好ましく挙げられる。アリール基としては好ましくは炭素数６から３０のアリール基であればよく、例えばフェニル、ｐ−トリル、ナフチルが挙げられる。
【００１８】
ヘテロ環基としては好ましくは５又は６員のヘテロ環基であればよく、芳香族もしくは非芳香族のヘテロ環化合物から一個の水素原子を取り除いた一価の基であればよい。より好ましくは、炭素数３から３０の５もしくは６員の芳香族のヘテロ環基であり、例えば、２−フリル、２−チエニル、２−ピリミジニル、及び２−ベンゾチアゾリルが挙げられる。
アルコキシ基としては、好ましくは、炭素数１から３０のアルコキシ基であればよく、例えば、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−オクチルオキシが挙げられる。アリールオキシ基としては、好ましくは、炭素数６から３０のアリールオキシ基であればよく、例えば、フェノキシ基が挙げられる。シリルオキシ基としては、好ましくは、炭素数３から２０のシリルオキシ基であればよく、例えば、トリメチルシリルオキシ、ｔ−ブチルジメチルシリルオキシが挙げられる。
【００１９】
ヘテロ環オキシ基としては、好ましくは、炭素数２から３０のヘテロ環オキシ基であればよく、テトラゾールー５−オキシ、２−テトラヒドロピラニルオキシが挙げられる。アシルオキシ基としては、ホルミルオキシ基、炭素数２から３０のアルキルカルボニルオキシ基、炭素数６から３０のアリールカルボニルオキシ基等であればよく、例えば、ホルミルオキシ、アセチルオキシ、ピバロイルオキシ、ステアロイルオキシ、ベンゾイルオキシ、フェニルカルボニルオキシが挙げられる。カルバモイルオキシ基としては、好ましくは、炭素数１から３０のカルバモイルオキシ基であればよく、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルオキシ、Ｎ，Ｎ−ジエチルカルバモイルオキシ、モルホリノカルボニルオキシ、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−オクチルアミノカルボニルオキシ、及びＮ−ｎ−オクチルカルバモイルオキシが挙げられる。アルコキシカルボニルオキシ基としては、好ましくは、炭素数２から３０のアルコキシカルボニルオキシ基であればよく、例えばメトキシカルボニルオキシ、エトキシカルボニルオキシ、ｔ−ブトキシカルボニルオキシ、及びｎ−オクチルカルボニルオキシが挙げられる。
【００２０】
アリールオキシカルボニルオキシ基としては、好ましくは、炭素数７から３０のアリールオキシカルボニルオキシ基であればよく、例えば、フェノキシカルボニルオキシが挙げられる。アルキルアミノ基としては炭素数１から３０のアルキルアミノ基であればよく、例えばメチルアミノ及びジメチルアミノが挙げられる。アリールアミノ基としては好ましくは炭素数６から３０のアリールアミノ基であればよく、例えば、アニリノ及びジフェニルアミノが挙げられる。アシルアミノ基としては好ましくは、ホルミルアミノ基、炭素数１から３０のアルキルカルボニルアミノ基又は炭素数６から３０のアリールカルボニルアミノ基であればよく、例えば、ホルミルアミノ、アセチルアミノ、ピバロイルアミノ、ラウロイルアミノ、ベンゾイルアミノ、及び３，４，５−トリ−ｎ−オクチルオキシフェニルカルボニルアミノが挙げられる。アミノカルボニルアミノ基としては、好ましくは、炭素数１から３０のアミノカルボニルアミノ基であればよく、例えば、カルバモイルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノカルボニルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノカルボニルアミノ、及びモルホリノカルボニルアミノが挙げられる。
【００２１】
アルコキシカルボニルアミノ基としては、好ましくは炭素数２から３０のアルコキシカルボニルアミノ基であればよく、例えば、メトキシカルボニルアミノ、エトキシカルボニルアミノ、ｔ−ブトキシカルボニルアミノ、及びｎ−オクタデシルオキシカルボニルアミノが挙げられる。アリールオキシカルボニルアミノ基としては、好ましくは、炭素数７から３０のアリールオキシカルボニルアミノ基であればよく、例えば、フェノキシカルボニルアミノが挙げられる。スルファモイルアミノ基としては、好ましくは、炭素数０から３０のスルファモイルアミノ基であればよく、例えば、スルファモイルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスルホニルアミノ、及びＮ−ｎ−オクチルアミノスルホニルアミノが挙げられる。アルキル及びアリールスルホニルアミノ基としては、好ましくは炭素数１から３０のアルキルスルホニルアミノ又は炭素数６から３０のアリールスルホニルアミノであればよく、例えば、メチルスルホニルアミノ、ブチルスルホニルアミノ、及びフェニルスルホニルアミノが挙げられる。アルキルチオ基としては、好ましくは、炭素数１から３０のアルキルチオ基であればよく、例えばメチルチオ、エチルチオ及びｎ−ヘキサデシルチオが挙げられる。アリールチオ基としては、好ましくは炭素数６から３０のアリールチオ基であればよく、例えば、フェニルチオが挙げられる。ヘテロ環チオ基としては、好ましくは炭素数２から３０のヘテロ環チオ基であればよく、例えば、２−ベンゾチアゾリルチオ及びテトラゾール−５−イルチオが挙げられる。
【００２２】
スルファモイル基としては、好ましくは炭素数０から３０の置換もしくは無置換のスルファモイル基であればよく、例えば、Ｎ−エチルスルファモイル、Ｎ−（３−ドデシルオキシプロピル）スルファモイル、Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル、Ｎ−アセチルスルファモイル、Ｎ−ベンゾイルスルファモイル、及びＮ−（Ｎ’−フェニルカルバモイル）スルファモイルが挙げられる。アルキルスルフィニル基及びアリールスルフィニル基としては、好ましくは、炭素数１から３０のアルキルスルフィニル基、又は６から３０のアリールスルフィニル基であればよく、例えば、メチルスルフィニル、エチルスルフィニル、及びフェニルスルフィニルが挙げられる。アルキル及びアリールスルホニル基としては、好ましくは、炭素数１から３０のアルキルスルホニル基又は６から３０のアリールスルホニル基であればよく、例えば、メチルスルホニル、エチルスルホニル、及びフェニルスルホニルが挙げられる。アシル基としては、好ましくはホルミル基、炭素数２から３０のアルキルカルボニル基、炭素数７から３０のアリールカルボニル基、又は炭素数４から３０の炭素原子でカルボニル基と結合しているヘテロ環カルボニル基であればよく、例えば、アセチル、ピバロイル、ステアロイル、ベンゾイル、２―ピリジルカルボニル、及び２―フリルカルボニルが挙げられる。アリールオキシカルボニル基としては、好ましくは、炭素数７から３０のアリールオキシカルボニル基であればよく、例えば、フェノキシカルボニルが挙げられる。
【００２３】
アルコキシカルボニル基としては、好ましくは、炭素数２から３０のアルコキシカルボニル基であればよく、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、及びｎ−オクタデシルオキシカルボニルが挙げられる。カルバモイル基としては、好ましくは、炭素数１から３０のカルバモイル基であればよく、例えば、カルバモイル、Ｎ−メチルカルバモイル、Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイル、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−オクチルカルバモイル、及びＮ−（メチルスルホニル）カルバモイル）が挙げられる。アリールアゾ基及びヘテロ環アゾ基としては、好ましくは炭素数６から３０のアリールアゾ基、炭素数３から３０のヘテロ環アゾ基であればよく、例えば、フェニルアゾ、１，３，４−チアジアゾール−２−イルアゾが挙げられる。イミド基として好ましい例としては、Ｎ−スクシンイミド及びＮ−フタルイミドが挙げられる。ホスフィノ基としては、好ましくは、炭素数２から３０のホスフィノ基であればよく、例えば、ジメチルホスフィノ、ジフェニルホスフィノ、及びメチルフェノキシホスフィノが挙げられる。ホスフィニル基としては、好ましくは、炭素数２から３０のホスフィニル基であればよく、例えば、ホスフィニル、ジオクチルオキシホスフィニル、及びジエトキシホスフィニルが挙げられる。ホスフィニルオキシ基としては、好ましくは、炭素数２から３０のホスフィニルオキシ基であればよく、例えば、ジフェノキシホスフィニルオキシ及びジオクチルオキシホスフィニルオキシが挙げられる。ホスフィニルアミノ基としては、好ましくは、炭素数２から３０のホスフィニルアミノ基であればよく、例えば、ジメトキシホスフィニルアミノ及びジメチルアミノホスフィニルアミノが挙げられる。シリル基としては、好ましくは、炭素数３から３０のシリル基であればよく、例えば、トリメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル及びフェニルジメチルシリルが挙げられる。
【００２４】
上記の置換基は更に上記の置換基で置換されていてもよい。そのような置換基の例としては、アリールアルキル基、アシルアミノアリールオキシ基、アルキルカルボニルアミノスルホニル基、アリールカルボニルアミノスルホニル基、アルキルスルホニルアミノカルボニル基、及びアリールスルホニルアミノカルボニル基が挙げられる。その例としては、メチルスルホニルアミノカルボニル、ｐ−メチルフェニルスルホニルアミノカルボニル、アセチルアミノスルホニル、及びベンゾイルアミノスルホニル基が挙げられる。
【００２５】
以下、一般式（I）で表される化合物について詳細に説明する。
一般式（I）で表される化合物は分子中にスルホン酸基、カルボン酸基、ホスホン酸基から選択される３個以上の酸基を有する。また前記の３個以上の酸基のうち２つ以上はカルボン酸基またはホスホン酸基である。また、一般式（I）の置換基Ｘは酸基であるが、カルボン酸基ではない。なお、酸基はプロトンが脱離して塩を形成している基であってもよい。
【００２６】
一般式（I）において、Ｒ1及びＲ2はそれぞれ独立に置換基を表す。置換基は上記置換基群から選択される置換基であればよい。Ｒ1、Ｒ2として好ましくはハロゲン原子、アルキル基（直鎖、分岐、環状アルキル基を含む）、アリール基、ヘテロ環基、シアノ基、カルボン酸基、アルコキシ基、アリールオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アミノ基（アニリノ基を含む）、アシルアミノ基、アミノカルボニルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、アリールオキシカルボニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、アルキル及びアリールスルホニルアミノ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基、スルファモイル基、スルホン酸基、アルキル及びアリールスルホニル基、アシル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、イミド基が挙げられる。より好ましくはハロゲン原子、アルキル基（直鎖、分岐、環状アルキル基を含む）、アリール基、ヘテロ環基、カルボン酸基、アルコキシ基、アミノ基（アニリノ基を含む）、アシルアミノ基、スルファモイル基、スルホン酸基、カルバモイル基、イミド基が挙げられる。さらに好ましくはハロゲン原子、炭素数１〜６の直鎖、分岐又は環状アルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数１〜１０のヘテロ環基、カルボン酸基又はスルホン酸基が挙げられる。特に好ましくは、臭素原子、ヨウ素原子、メチル基、エチル基、フェニル基、ナフチル基、チエニル基、フリル基、ピリジル基が挙げられる。
【００２７】
一般式（I）において、ｍ、ｎは０〜３の整数である。ｍ、ｎが2又は３のときは複数存在するＲ1、Ｒ2はそれぞれ異なっていても同一でもよい。ｍ、ｎは０又は１であることが好ましく、特に好ましくは０である。
【００２８】
一般式（I）において、Ｒ3〜Ｒ6は同一又は異なって、それぞれ置換又は無置換のアルキル基であるが、該アルキル基は、Ｒ1、Ｒ2におけるアルキル基と同義であり、置換基を有する場合は上記置換基群から選択される置換基であればよい。Ｒ3〜Ｒ6はそれぞれ独立に１〜20のアルキル基であることが好ましく、総炭素数１〜15のアルキル基であることがより好ましく、総炭素数１〜10のアルキル基であることがさらに好ましく、総炭素数1〜３のアルキル基であることが特に好ましい。また、R3〜R6はそれぞれ独立に無置換のアルキル基であることが好ましく、メチル基であることがもっとも好ましい。
【００２９】
一般式（I）において、Ｒ7及びＲ8は同一又は異なって、それぞれ置換又は無置換のアルキル基である。アルキル基は、直鎖アルキル基（好ましくは炭素数１から３０の直鎖アルキル基）、分岐アルキル基（好ましくは炭素数３から３０の分岐アルキル基）、又は環状のアルキル基（トリシクロ構造を有するものを含み、好ましくは炭素数３から３０のシクロアルキル基、又は炭素数５から３０のビシクロアルキル基、（炭素数５から３０のビシクロアルカンから水素原子を一個取り去った一価の基）であればよい。例としてはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、ｎ−オクチル、エイコシル、２−エチルヘキシル、シクロヘキシル、シクロペンチル、４−ｎ−ドデシルシクロヘキシル、ビシクロ［１，２，２］ヘプタン−２−イル、ビシクロ［２，２，２］オクタン−３−イルが挙げられる。
これらのうち、炭素数１から２０の直鎖アルキル基が好ましく、炭素数１から１０の直鎖アルキル基がより好ましく、炭素数１から５の直鎖アルキル基がさらに好ましい。
【００３０】
Ｒ7又はＲ8で表される置換アルキル基における置換基の種類、数、位置は特に限定されない。Ｒ7又はＲ8が置換アルキル基の場合の置換基として好ましくはハロゲン原子、カルボン酸基、スルホン酸基、ホスホン酸基、アルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基であり、より好ましくはカルボン酸基、スルホン酸基、ホスホン酸基であり、更に好ましくはカルボン酸基、ホスホン酸基、最も好ましくはホスホン酸基である。酸基においては水素原子が脱離して塩を形成した基も同様に好ましい。置換アルキル基が置換直鎖アルキル基の場合、置換位置はＲ7又はＲ8として置換直鎖アルキル基が置換している窒素原子から炭素数２個以上介した位置にあることが好ましく、より好ましくは末端の炭素であることが好ましい。置換基の数は１が好ましい。
【００３１】
Ｌ1〜Ｌ3は同一又は異なって、それぞれ置換又は無置換のメチン基を表す。但しＬ1〜Ｌ3の少なくとも一つは置換メチン基である。ｒは０〜３の整数を表す。 rが２以上の場合に複数存在するＬ2及びＬ3は同一でも異なっていてもよい。Ｌ1〜Ｌ3が置換メチン基である場合には、その置換基は上記置換基群から選択される置換基であればよい。Ｌ1〜Ｌ3のいずれか２つ以上が置換メチン基である場合には、それらの置換基同士が結合して環を形成していてもよい。
置換メチン基における置換基の具体例及び置換基同士が結合して環を形成する場合の具体例を以下に示す。なお、以下においてはr=２であって、２つのＬ2に挟まれるＬ3がエチル基以上の嵩高さの置換基を含む場合のＬ1〜Ｌ3で表されるポリメチン基部分の構造として示す。なお、＊は他の２つの部分構造それぞれとの結合部分を示す。
【００３２】
【化３】
2011046662.tif 000004
【００３３】
【化４】
2011046662.tif 000005
【００３４】
【化５】
2011046662.tif 000006
【００３５】
【化６】
2011046662.tif 000007
【００３６】
【化７】
2011046662.tif 000008
【００３７】
【化８】
2011046662.tif 000009
【００３８】
ｒは０〜３の整数を表すが、好ましくは１〜３であり、より好ましくは２又は３であり、特に好ましくは３である。Ｌ1〜Ｌ3において、好ましくは無置換メチン基がＬ1〜Ｌ3のうち一つ以上あり、より好ましくは置換メチン基が1〜3個であり残りは全て無置換メチン基であり、特に好ましくは置換メチン基が1個であり残りは全て無置換メチン基である。
【００３９】
酸基が塩を形成している基である場合、塩としては陰電荷となっているもの、アルカリ金属、又はアルカリ土類金属と塩を形成しているものが好ましい。アルカリ金属、又はアルカリ土類金属として好ましくはＮａ又はＫであり、より好ましくはＮａである。
【００４０】
なお一般式（I）で表される化合物の陽電荷は分子内あるいは分子外にある対アニオンにより中和されている。対アニオンの例としては、塩素イオン、臭素イオン、ヨウ素イオンなどのハロゲンイオン、アセテートイオン、オキサレートイオン、フマレートイオン、ベンゾエートイオンなどのカルボキシレートイオン、ｐ−トルエンスルホネート、メタンスルホネート、ブタンスルホネート、ベンゼンスルホネートなどのスルホネートイオン、硫酸イオン、過塩素酸イオン、炭酸イオン、硝酸イオン、等が挙げられる。分子内にカルボキシレート基、スルホネート基等に負電荷を有する基が存在する場合には、化合物の陽電荷とともに分子内塩を形成していてもよい。分子外対アニオンとしては、ハロゲンイオン、メタンスルホネートイオン、硫酸イオン、が好ましく、クロロイオン、ブロモイオン又はメタンスルホネートイオンが特に好ましい。
【００４１】
一般式（I）で表される化合物はより好ましくは、上記一般式（II）で表される化合物であればよい。
【００４２】
一般式（II）において、Ｒ9がアルキル基の場合、該アルキル基の総炭素数が1〜20であることが好ましく、1〜15であることがより好ましく、1〜10であることがさらに好ましい。特に好ましい具体例としては、メチル基、エチル基、n-プロピル基、2-プロピル基、シクロプロピル基が挙げられ、更に好ましくはメチル基、エチル基、n-プロピル基、2-プロピル基、シクロプロピル基である。
【００４３】
Ｒ9がアリール基の場合、該アリール基の総炭素数が5〜20であることが好ましく、5〜15であることがより好ましく、5〜10であることがさらに好ましい。特に好ましい具体例としては、フェニル基、4−メチルフェニル基、4−フェニルフェニル基、ナフチル基が挙げられる。
【００４４】
Ｒ9がアリールアルキル基の場合、該アリールアルキル基の総炭素数が7〜30であることが好ましく、7〜20であることがより好ましく、7〜10であることがさらに好ましい。特に好ましい具体例としては、ベンジル基、フェニルエチル基、フェニルプロピル基が挙げられる。
【００４５】
Ｒ9がヘテロ環基の場合、該ヘテロ環基の総炭素数が1〜20であることが好ましく、1〜15であることがより好ましく、1〜10であることがさらに好ましい。特に好ましい具体例としては、4−ピリジル基、２−フリル基、２−チエニル基、2−オキソピロリジン−１−イル基が挙げられる。
【００４６】
Ｒ9がアシルアミノ基の場合、該アシルアミノ基の総炭素数が1〜20であることが好ましく、1〜15であることがより好ましく、1〜10であることがさらに好ましい。特に好ましい具体例としては、アセチルアミノ基、ベンゾイルアミノ基、ピバロイルアミノ基、4-フェニルベンゾイルアミノ基が挙げられる。
【００４７】
Ｒ9がアリールアミノ基の場合、該アリールアミノ基の総炭素数が1〜20であることが好ましく、1〜15であることがより好ましく、1〜10であることがさらに好ましい。特に好ましい具体例としては、N-フェニルアミノ基、N-トリルアミノ基、N,N-ジフェニルアミノ基が挙げられる。
【００４８】
Ｒ9がN-アリール-N-アルキルアミノ基の場合、該N-アリール-N-アルキルアミノ基の総炭素数が7〜30であることが好ましく、7〜20であることがより好ましく、7〜15であることがさらに好ましい。
特に好ましい具体例としては、N-フェニル-N-メチルアミノ基、N-トリル-N-メチルアミノ基が挙げられる。
【００４９】
Ｒ9がアリールチオ基の場合、該アリールチオ基の総炭素数が1〜20であることが好ましく、1〜15であることがより好ましく、1〜10であることがさらに好ましい。特に好ましい具体例としては、フェニルチオ基、トリルチオ基、4-フェニルフェニルチオ基、ナフチルチオ基が挙げられる。
【００５０】
Ｒ9がアリールオキシ基の場合、該アリールチオ基の総炭素数が1〜20であることが好ましく、1〜15であることがより好ましく、1〜10であることがさらに好ましい。特に好ましい具体例としては、フェニルオキシ基、4-アセチルアミノフェニルオキシ基、4-フェニルフェニルオキシ基、ナフチルオキシ基が挙げられる。
【００５１】
Ｒ9がアシルアミノアリールオキシ基の場合、該アシルアミノアリールオキシ基の総炭素数が7〜30であることが好ましく、7〜20であることがより好ましく、7〜15である
ことがさらに好ましい。特に好ましい具体例としては、ベンゾイルアミノフェニルオキシ基が挙げられる。
【００５２】
Ｒ10、Ｒ11は、それぞれ独立して、カルボン酸基、スルホン酸基、又はホスホン酸基で置換されているアルキル基を表す。Ｒ10、Ｒ11は同一又は異なって、アルキル基としては、直鎖アルキル基（好ましくは炭素数１から３０の直鎖アルキル基）、分岐アルキル基（好ましくは炭素数３から３０の分岐アルキル基）、又は環状のアルキル基（トリシクロ構造を有するものを含み、好ましくは炭素数３から３０のシクロアルキル基、又は炭素数５から３０のビシクロアルキル基、（炭素数５から３０のビシクロアルカンから水素原子を一個取り去った一価の基）であればよい。例としてはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、ｎ−オクチル、エイコシル、２−エチルヘキシル、シクロヘキシル、シクロペンチル、４−ｎ−ドデシルシクロヘキシル、ビシクロ［１，２，２］ヘプタン−２−イル、ビシクロ［２，２，２］オクタン−３−イルが挙げられる。これらのうち、炭素数１から２０の直鎖アルキル基が好ましく、炭素数１から１０の直鎖アルキル基がより好ましく、炭素数１から５の直鎖アルキル基がさらに好ましい。
【００５３】
Ｒ10、Ｒ11におけるカルボン酸基、スルホン酸基、又はホスホン酸基の数、位置は特に限定されないが、Ｒ10、Ｒ11は好ましくはカルボン酸基、スルホン酸基を有するアルキル基であり、更に好ましくはカルボン酸基、ホスホン酸基、最も好ましくはホスホン酸基である。
またＲ10、Ｒ11に上記の基が置換するとき、その置換基の位置はＲ10、Ｒ11がそれぞれ置換している窒素原子から炭素数２個以上介した位置であることが好ましく、より好ましくは末端の炭素であることが好ましい。
【００５４】
生体内で使用されることになる蛍光造影剤は特に水溶性であることが必要である。本発明の近赤外蛍光造影剤は上記化合物中にスルホン酸基、カルボン酸基、ホスホン酸基から選択される３個以上の酸基を導入することにより水溶性が顕著に改善されている。優れた水溶性を得るにはスルホン酸基、カルボン酸基、ホスホン酸基の総数は４個以上であることが好ましい。合成を容易にするには、スルホン酸基、カルボン酸基、ホスホン酸基の数は10個以下、好ましくは８個以下である。水溶性の改善は各化合物の分配係数の測定、例えば分配係数をブタノール／水の二相系で測定することにより調べることができる。より詳しく言えば、３個以上のスルホン酸基の導入によりn-ブタノール／水の分配係数log Po/wは -1.00以下となる。
【００５５】
生体における水溶性は、生理的食塩水に溶解し、３６℃において時間経過後も沈殿や析出のないことを指標として判断することができる。
【００５６】
本発明の近赤外蛍光造影剤に造影成分として含まれる物質は、一般式（I）で表される化合物又はその医薬上許容される塩である限りいかなるものでもよい。これらの化合物は「シアニン染料及び関連化合物」, F.M. Hamer, John Wiley and Sons, New York, 1964; Cytometry, 10, 3-10 (1989); Cytometry, 11, 418-430 (1990); Cytometry, 12, 723-730 (1990); Bioconjugate Chem. 4, 105-111 (1993), Anal. Biochem., 217, 197-204 (1994), Tetrahedron, 45, 4845-4866 (1989), EP-A-0591820A1, EP-A-0580145A1等に開示されているシアニン染料化合物の公知の製造方法によって合成することができる。あるいは、それらは市販のシアニン染料化合物から公知の方法によって半合成することもできる。特に、それらはジアニル化合物及びヘテロ環化合物四級塩を反応させることによって合成することができる。
【００５７】
本発明の化合物の具体例として、例えば以下の化合物があげられる。
【００５８】
【化９】
2011046662.tif 000010
【００５９】
【化１０】
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【００６０】
【化１１】
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【００６１】
【化１２】
2011046662.tif 000013
【００６２】
本発明の近赤外蛍光造影剤に含まれるべき上記化合物は700-1300 nm、特に約700-900 nmの近赤外光領域に吸収及び蛍光を示し、100,000以上のモル吸光係数を有する。
【００６３】
本発明の近赤外蛍光造影剤は一般式（I）で表される化合物及び／又はそれらの医薬上許容しうる塩を含み、分子中に３個以上、好ましくは４個以上のスルホン酸基を有する限りは特に限定されない。この化合物又はその塩は単独で又は組み合わせて当該造影剤に含まれていてもよい。
【００６４】
具体的には、該造影剤は、上記化合物もしくはその医薬上許容しうる塩、又は注射用蒸留水、生理食塩水、リンゲル液等のような溶媒中に懸濁若しくは溶解した上記化合物を含む。必要に応じて、担体、賦形剤等のような薬理上許容しうる添加物を加えてもよい。これらの添加物としては、薬理上許容しうる電解質、バッファー、洗剤のような物質及び浸透圧を調整し安定性及び溶解性を改善するための物質（例えば、シクロデキストリン、リポソーム等）が挙げられる。関連分野で一般に使用される多様な添加物が使用できる。本発明の近赤外蛍光造影剤は医薬用の場合は好ましくは滅菌処理を経て製造される。
当該造影剤は、注射、噴射又は塗布、血管内（静脈、動脈）、経口、腹膜内、経皮、皮下、膀胱内又は気管支内投与によって生体に投与することができる。好ましくは、本造影剤は血管内に水剤、乳剤又は懸濁剤の形態で投与される。
【００６５】
本発明の近赤外蛍光造影剤の用量は、その用量によって最終的に診断すべき部位の検出が可能である限りは特に限定されず、使用される近赤外蛍光を放射する化合物の種類、年齢、体重及び投与対象の標的器官などによって適当に調整される。典型的には、用量は当該化合物の量として0.01-100 mg/kg体重、好ましくは0.01-20 mg/kg体重である。本発明の造影剤はヒト以外の多様な動物に適宜使用することができる。投与の形態、経路及び用量は対象動物の体重及び状態によって適当に決定される。
【００６６】
一般式（I）で表される化合物、特に好ましくは一般式（II）で表される化合物が腫瘍組織中に顕著に蓄積される傾向がある。この特性を利用することにより、本発明の蛍光造影剤を用いて腫瘍組織を特異的にイメージングすることができる。さらに、本発明の化合物は血清中半減期が長いことから、血管造影剤としても良好に機能することが期待される。
【００６７】
本発明の近赤外蛍光造影剤は、蛍光造影法（蛍光イメージング）に用いることができる。この方法は公知の方法に準じて実施され、励起波長及び検出すべき蛍光波長のようなそれぞれのパラメーターは投与される近赤外蛍光造影剤の種類及び投与対象により最適のイメージング及び評価が行えるように適宜決定される。本発明の近赤外蛍光造影剤の測定対象への投与から本発明の蛍光イメージング法による測定開始までにかかる時間は使用される近赤外蛍光造影剤の種類及び投与対象によって異なる。例えば、腫瘍イメージングを目的として造影剤が一般式（I）で表される化合物を含む場合、消失時間は投与後およそ4-120時間と考えられる。特に、一般式（II）で表される化合物の場合、消失時間は投与後およそ24-120時間と考えられる。消失時間が短すぎると、蛍光が強すぎて標的部位と他の部位を明確に分けることができない。長すぎると、当該造影剤が身体から排泄されてしまうことがある。
【００６８】
SF-64に基づいた本発明者らの研究の結果、シアニン系化合物は血漿中においてアルブミンと複合体を形成することにより腫瘍に集積することが初めて明らかになった。カルボン酸基及びホスホン酸基から選択される酸基を2つ以上有する一般式（I）で表される化合物はSF-64よりも高いアルブミン結合性を有する。
本発明の化合物は、高いアルブミン結合性を有することにより、SPARC、キュビリン、またはTGFβのようなアルブミン結合タンパク質と結合可能である。そのため、本発明の化合物はアルブミン結合タンパク質が主要な役割を果たすと共に、正常組織に比べて過剰発現されている疾患を対象として造影を行う際の造影剤として使用できる。アルブミン結合性タンパク質はSPARC、キュビリン、またはTGFβから選択されることが好ましい。より好ましくは、アルブミン結合性タンパク質はSPARCである。
【００６９】
すなわち、本発明の化合物およびその医薬上許容しうる塩は、SPARC発現組織の検出剤として機能し、SPARCが関与する病態全般に対する診断薬として使用することができる。具本発明の化合物を造影剤として用いることが適した病態としては、軟組織、結合組織、骨、固形臓器、血管等を含めた任意の肉体組織中での、増殖の異常形態、組織再構築、過形成、過度の創傷治癒が挙げられる。具体的には例えば、癌、糖尿病性又は他の網膜症、炎症、関節炎、血管または人工血管移植片又は、血管内装置における再狭窄等が挙げられる。
【００７０】
本発明の化合物によって検出される腫瘍型は、一般的にヒトを含む哺乳動物中に見出されるものである。該腫瘍は、実験動物などでのように、接種からも生じ得る。該腫瘍とは公知のように「新生物」としても知られており、多くの型と種類とがある。本発明の化合物が造影剤として適用される腫瘍はいかなる特定の腫瘍型又は種類にも限定されない。
本発明の化合物は、腫瘍細胞及び関連間質細胞、固形腫瘍、並びに、例えばヒトの軟組織肉腫のような軟組織に関連した腫瘍の造影に有用である。腫瘍又は癌は、口腔および咽頭、消化器系、呼吸器系、骨および関節（例えば骨転移）、軟組織、皮膚（例えばメラノーマ）、乳房、生殖系、泌尿器系、眼および眼窩、脳及び中枢神経（例えばグリオーマ）又は内分泌系（例えば甲状腺）中に位置し、必ずしも原発腫瘍又は癌に限定されない。口腔に関連した組織としては、例えば、舌および口の組織が挙げられる。癌は、例えば食道、胃、十二指腸、小腸、結腸、直腸、肛門、肝臓、胆嚢および膵臓を含む、消化器系の組織中で発生し得る。呼吸系の癌は、咽頭、肺および気管支に発生し得る。腫瘍は、男性および女性の生殖器を構成する、子宮頚部、子宮体部、卵巣外陰、膣、前立腺、精巣および陰茎、並びに、泌尿器系を構成する膀胱、腎臓、腎盂及び尿管で発生し得る。腫瘍又は癌は頭部および/又は、頚部で発生し得る。腫瘍または癌は、リンパ組織系においても発生しうるものであり、そのような例としてはホジキン病および非ホジキンリンパ腫が挙げられる。腫瘍または癌は、造血系においても発生しうるものであり、そのような例としては多発性骨髄種または白血病、例えば急性リンパ性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病などが挙げられる。腫瘍は、膀胱、肝臓、膵臓、卵巣、腎臓、食道、胃、腸、脳、皮膚または乳房に位置することが好ましい。
【００７１】
アルブミンは、SPARCに対して親和性を持つ。従って、本発明の化合物は、正常組織への集積をほとんど又は全く伴うことなく、SPARCが発現している疾患部位に蓄積する。
【００７２】
試料中のSPARCタンパク質の発現は、当該分野で公知のあらゆる好適な方法により検出および定量化することができる。タンパク質の検出および定量化の好適な方法としては、ウエスタンブロット法、酵素免疫測定法（ELISA）、銀染色法、BCAアッセイ（Smith et al., Anal.. Biochem., 150, 76-85 (1985)）に記載）、タンパク質−銅複合体に基づく比色分析法であるローリータンパク質アッセイ（例えばLowry et. al., J. Biol. Chem., 193, 265-275 (1951)に記載）および、タンパク質結合の際のクマシーブルー G-250の吸光度変化に基づくブラッドフォードタンパク質分析(例えば Bradford et. al., Anal. Biochem., 72, 248, (1976)に記載)が挙げられる。腫瘍生検は、任意の従来の方法により行うか、又は適切な可視化システム（すなわち、HRP基質およびHRP接合二次抗体）と併せて、抗SPARC抗体（モノクロナールもしくはポリクロナールのいずれか）を用いる免疫組織化学により行うことができる。
【実施例】
【００７３】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。なお、下記の実施例中の化合物番号は上記に示した化合物例の番号に対応している。尚、以下の実施例において示された化合物名は、必ずしもＩＵＰＡＣ命名法に従うものではない。
以下の実施例において、化合物の連続番号は化学構造式とともに上に列挙した化合物の番号に対応する。
【００７４】
以下の手順に従い、本発明化合物合成のための中間体を得た。
なお、５−スルホー２，３，３−トリメチルインドレインは公知の合成法に従って合成した（特開平２−２３３６５８号公報）
【００７５】
【化１３】
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【００７６】
中間体１（ヘテロ環四４級塩化合物）は特許記載の方法によって合成した（特表-2002-526458号公報）。
すなわち、２−クロロエタンスルホニルクロリドを、トリエチルアミン存在下、DMACに溶解した５−スルホー２，３，３−トリメチルインドレイン溶液へ室温にて攪拌しながら２時間かけて滴下した後、更に３時間攪拌した。メタノールを３０分かけて滴下した後に、水酸化ナトリウム水溶液を１時間かけて滴下し、更に１時間室温にて攪拌した。反応終了後、アセトニトリルを２時間かけて滴下し、室温にて一晩放置することで結晶を沈殿させた。濾過により結晶を回収後、DMAｃ/メタノール/水/アセトニトリル＝5/4/4/40溶液、続いてアセトニトリルで洗浄し、減圧下にて乾燥することで中間体１を得た。
【００７７】
【化１４】
2011046662.tif 000015
【００７８】
５−スルホー２，３，３−トリメチルインドレイン(1当量)、ブロモ酢酸(1.5当量)、およびトリエチルアミン(1当量)をo-ジクロロベンゼン中、１２０℃にて6時間攪拌した。反応終了後、デカンテーションにより上清を除いた。残渣を酢酸エチルで洗浄した。得られた粗生成物を水/メタノール/酢酸エチル系から再結晶することで淡赤白色固体として中間体２を得た。
【００７９】
【化１５】
2011046662.tif 000016
【００８０】
中間体３は、５−スルホー２，３，３−トリメチルインドレインおよび、２−ブロモプロピオンサンを用いて、中間体２と同様の方法によって合成した。
【００８１】
【化１６】
2011046662.tif 000017
【００８２】
中間体４は、５−スルホー２，３，３−トリメチルインドレインおよび、４−ブロモ―ｎ―酪酸を用いて、中間体２と同様の方法によって合成した。
【００８３】
【化１７】
2011046662.tif 000018
【００８４】
５−スルホー２，３，３−トリメチルインドレイン(1当量)、２−ブロモエチルホスホン酸ジエチル(1.1当量)、およびトリエチルアミン(1.5当量)をトルエン中、１３５℃にて６時間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧下において留去した粗生成物に６Ｎ塩酸を加え、２４時間還流した。反応終了後、溶媒を減圧下において留去することで赤色オイルとして中間体５を含む粗生成物を得た。
【００８５】
【化１８】
2011046662.tif 000019
【００８６】
５−スルホー２，３，３−トリメチルインドレイン(1当量)、３−ブロモプロピルホスホン酸ジエチル(1.1当量)、およびトリエチルアミン(1.5当量)をトルエン中、１３５℃にて６時間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧下において留去した粗生成物に６Ｎ塩酸を加え、２４時間還流した。反応終了後、溶媒を減圧下において留去することで赤色オイルとして中間体５を含む粗生成物を得た。
【００８７】
【化１９】
2011046662.tif 000020
【００８８】
中間体７は、非特許文献（Bioconjugate Chem. 18, 2178-2190 (2007)）に記載の方法に従い合成した。
具体的には、４−ブロモフェニルヒドラジン１塩酸塩および３−メチル−２−ブタノンをエタノールに溶解し、得られた溶液に濃硫酸を滴下後、６時間攪拌しながら還流した。反応終了後、溶液を減圧下で濃縮し、水酸化ナトリウム溶液にてｐH８とした後に酢酸エチルにて油層を抽出した。油層を飽和食塩水にて洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）によって精製し、褐色液体として中間体７を得た。MS(ESI+) 238 [M+1]+
【００８９】
【化２０】
2011046662.tif 000021
【００９０】
中間体７(1当量)、ジエチルホスホネート(1.1当量)、トリエチルアミン(1.1当量)、およびテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム(0.06当量)をトルエンに加えた溶液を窒素雰囲気下、９５℃で６時間攪拌した。反応終了後、大過剰の酢酸エチルを加えることで生じた沈殿を濾過により除去した後に溶媒を留去した。得られた中間体８をアセトニトリルに溶解した後に、トリメチルシリルブロマイド(6当量)を加え、室温で５時間攪拌した。減圧下にて余剰のトリメチルシリルブロマイドおよび溶媒を留去した後、アセトニトリル：水＝2：１溶液を加え、室温にて１２時間攪拌した。減圧下で溶媒を留去することで得られた粗生成物にメタノールを添加することで生じた不溶物を濾過により除き、濾液に酢酸エチルを加えることで分離したオイルを分液操作により回収、減圧下において乾燥することで、中間体９を得た。
中間体９：1H NMR (300MHz, MeOD) δ1.50 (s, 6H), 3.34 (s, 3H), 7.72-7.98 (m, 1H), 7.85-7.99 (m, 2H)、MS(ESI+) 240 [M+1]+
【００９１】
【化２１】
2011046662.tif 000022
【００９２】
中間体９にＤＭＡｃおよびトリエチルアミン(1当量)を加えた溶液を室温に保ちながら、２−クロロエタンスルホニルクロリド(3当量)を滴下した。室温にて４時間攪拌の後、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えた。室温にて１時間攪拌した後、溶液を大過剰のアセトンに滴下することで得られたオイルを分液操作にて回収。再度、メタノールに溶解した後に、アセトンに滴下することで沈殿してきた粉末を濾取することで、中間体１０を得た。MS(ESI+) 348 [M+1]+
【００９３】
【化２２】
2011046662.tif 000023
【００９４】
中間体９の合成と同様の方法により得た中間体１０と、２−ブロモプロピオンサンを用いて、中間体２と同様の方法によって合成した。MS(ESI+) 312 [M+1]+
【００９５】
【化２３】
2011046662.tif 000024
【００９６】
中間体９の合成と同様の方法により得た中間体１０と、４−ブロモ―ｎ―酪酸を用いて、中間体２と同様の方法によって合成した。
【００９７】
【化２４】
2011046662.tif 000025
【００９８】
３−フェニルピリジン(1当量)、２−クロロベンゾチアゾール(2当量)をDMAｃ中、100℃で3時間攪拌した。反応終了後、アセトンを加え、固体を濾取することで中間体１５を得た。
【００９９】
以下に示す、ジアニル化合物は特許文献（特表2008-526802号公報）記載の方法により入手または合成した。
【０１００】
【化２５】
2011046662.tif 000026
【０１０１】
以下に示す化合物およびその塩、上記のヘテロ４級塩化合物およびジアニル化合物またはベンゾチアゾール化合物を用いて、例えば下記に示される方法によって製造された。
公知または公知の合成法または上記の合成法により合成されるヘテロ４級塩化合物（5mmol）を、メタノール溶媒中、トリエチルアミン(25mmol)および無水酢酸(45mmol)存在下、公知または公知の合成法または上記の合成法により合成されるジアニル化合物(10mmol)またはベンゾチアゾール化合物(10mmol)と室温にて４時間攪拌する。反応混合物に酢酸ナトリウム(33mmol)を加え、室温で３０分攪拌する。生成した結晶を濾取し、メタノールで洗浄する。逆相薄相クロマトグラフィーにて目的物以外の生成物の存在を確認した場合は、展開溶媒にメタノールを用いたサイズ排除クロマトグラフィーや、展開溶媒に水・メタノール混合溶媒を用いた逆相クロマトグラフィーによる精製を行うことにより製造できる。
【０１０２】
ＨＰＬＣによる分析条件は以下のとおりである。
ＨＰＬＣ条件カラム：東ソ−TSKgel ODS-100V、150×4.6ｍｍ
カラム温度：40 ℃
流速：1.0 mL/min
溶離剤：Ａ）水／酢酸／トリエチルアミン（100／0.1／0.1）、Ｂ）アセトニトリル／酢酸／トリエチルアミン（100／0.1／0.1）
グラジエント：０−１００％Ｂ（０―30分）
検出：２５４ｎｍおよび７８０ｎｍでの吸光度
【０１０３】
化合物４：中間体2と中間体16から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O) δ1.68 (s, 12H), 4.60 (s, 4H), 6.11 (d, 2H), 6.54 (dd, 2H), 7.33 (d, 2H), 7.49 (dd, 1H), 7.74-7.92 (m,6H) 、HPLC 10.7min、λmax=744nm
化合物５：中間体2と中間体17から上記の方法に従って合成した。
化合物５：
1H NMR (400MHz, D2O) δ1.68 (s, 12H), 2.30 (s, 3H), 4.60 (s, 4H), 6.25 (d, 2H), 6.54 (dd, 2H), 7.25 (d, 2H), 7.74-7.92 (m,6H) HPLC 12.2min、λmax=759nm
化合物６：中間体4と中間体16から上記の方法に従って合成した。
化合物６：
1H NMR (400MHz, D2O) δ1.60 (s, 12H), 1.90-2.05 (m, 8H), 2.90 (s, 4H), 4.60 (s, 4H), 6.11 (d, 2H), 6.54 (dd, 2H), 7.33 (d, 2H), 7.49 (dd, 1H), 7.74-7.92 (m,6H), λmax=759nm
化合物７：中間体4と中間体17から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O) δ1.65 (s, 12H) , 1.90-2.20 (m, 8H), 2.90 (s, 4H), 4.60 (s, 4H), 6.11 (d, 2H), 6.54 (dd, 2H), 7.33 (d, 2H), 7.49 (dd, 1H), 7.74-7.92 (m,6H),λmax=752nm
化合物８： 中間体2と中間体15から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O) δ1.21 (s, 12H), 4.58 (s, 4H), 6.15 (d, 2H), 6.68 (d, 2H), 6.85-6.95 (m, 2H), 7.10 (d, 2H), 7.28 (dd, 2H), 7.46-7.56 (m, 3H), 7.65-7.72 (m, 4H)、MS(ESI+) 733 [M+1]+、HPLC 12.4min、λmax=785nm
化合物９： 中間体5と中間体16から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O) δ1.60 (s, 12H), 2.07 (m, 4H), 4.28-4.33 (m, 4H), 6.27 (d, 2H), 6.57 (dd, 2H), 6.33 (d, 2H), 7.45 (dd, 1H), 7.74-7.88 (m,6H)、MS(ESI+) 758 [M+1]+ 、HPLC 10.3min、λmax=773nm
化合物１０：
中間体6と中間体16から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O)δ1.23 (s, 12H), 1.7-1.9 (m, 4H), 3.2-3.4 (m, 4H), 4.0-4.2 (m, 4H) , 6.27 (d, 2H), 6.57 (dd, 2H), 6.33 (d, 2H), 7.45 (dd, 1H), 7.74-7.88 (m,6H) 、HPLC 10.5min、λmax=775nm
【０１０４】
化合物１１： 中間体5と中間体15から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O) δ1.07 (s, 12H), 1.92-2.10 (m, 4H), 4.15-4.28 (m, 4H), 6.40 (d, 2H), 6.69 (dd, 2H), 7.19 (dd, 2H), 7.45-7.57 (m, 5H), 7.58-7.69 (m, 6H) 、HPLC 13.6min、λmax=786nm
化合物１２： 中間体6と中間体15から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O) δ1.23 (s, 12H), 1.7-1.9 (m, 4H), 3.2-3.4 (m, 4H), 4.0-4.2 (m, 4H), 6.26-6.44 (m, 4H), 6.74-6.84 (m, 2H), 7.15-7.71 (m, 13H) 、HPLC 12.8min、λmax=783nm
化合物１３： 中間体11と中間体16から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O) δ1.59 (s, 12H), 2.61 (t, 4H), 4.20-4.40 (m, 4H), 6.26 (d, 2H), 6.53 (dd, 2H), 7.254 (d, 2H), 7.45 (dd, 1H), 7.55-7.95 (m, 6H) 、λmax=781nm
化合物１４： 中間体10と中間体16から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (300MHz, D2O) δ1.64 (s, 12H), 3.35 (t, 4H), 4.43 (t, 4H), 6.30 (d, 2H), 6.53-6.66 (m, 2H), 7.26-7.33 (m, 2H), 7.45-7.59 (m, 1H), 7.64-7.79 (m, 4H), 7.86-7.99 (m, 2H) 、HPLC 11.0min、λmax=776nm
化合物１５： 中間体10と中間体15から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O) δ1.33 (s, 12H), 3.15-3.22 (m, 4H), 4.38-4.45 (m, 4H), 6.48 (dd, 2H), 6.83 (d, 2H), 7.30-7.39 (m, 4H), 7.47 (dd, 2H), 7.61-7.69 (m, 3H), 7.73 (dd, 2H), 7.78-7.86 (m, 4H) 、HPLC 10.8min、λmax=788nm
化合物１６：中間体11と中間体15から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O)δ1.32 (s, 12H), 2.65-2.73 (m, 4H), 4.29-4.41 (m, 4H), 6.44 (dd, 2H), 6.79 (d, 2H), 7.26-7.37 (m, 4H), 7.47 (dd, 2H), 7.61-7.69 (m, 3H), 7.70-7.85 (m, 4H) 、λmax=792nm
化合物１７：中間体11と中間体17から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O)δ1.75 (s, 12H), 2.38 (s, 3H), 3.65 (t, 4H), 4.34 (t, 4H), 6.43 (dd, 2H), 6.64 (d, 2H), 7.33 (dd, 2H), 7.84 (dd, 4H), 8.08 (dd, 2H) 、λmax=791nm
化合物１８：中間体10と中間体17から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O)δ1.72 (s, 12H), 2.40 (s, 3H), 3.23 (t, 4H), 4.46 (t, 4H), 6.43 (dd, 2H), 6.68 (d, 2H), 7.31 (dd, 2H), 7.87 (dd, 4H), 8.10 (dd, 2H) 、λmax=789nm
化合物１９： 中間体11と中間体18から上記の方法に従って合成した。
1H NMR (400MHz, D2O)δ1.32 (s, 12H), 2.65-2.73 (m, 4H), 4.29-4.41 (m, 4H), 6.44 (dd, 2H), 6.79 (d, 2H), 7.26-7.37 (m, 4H), 7.47 (dd, 2H), 7.61-7.69 (m, 3H), 7.70-7.85 (m, 4H) 、λmax=813nm
【０１０５】
以下の化合物Ａを中間体１と中間体１６から上記の方法に従い調製し比較化合物として用いた。
また、以下の化合物Ｂ（SF-64）を中間体１と中間体１７から特許３５０７０６０号の段落「００５８」に記載されているように合成し、比較化合物として用いた。
【０１０６】
【化２６】
2011046662.tif 000027
【０１０７】
試験例１
超遠心法による血清タンパク結合率試験
被験物質をcalf serumに5μg/mLとなるように溶解し、３７℃で２０分間振とうした後、NaBrを用いた密度勾配遠心（1000000×g, 24h）を行った。遠心後、アルブミン、リポタンパク分画および残りの分画中に含まれる色素濃度をHPLCにより定量した。結果を表１に示す。
【０１０８】
【表１】
2011046662.tif 000028
【０１０９】
表１より、本発明の化合物を含む一般式（I）で表される構造を有する本発明の化合物は、血液中のタンパク成分のうち、特にアルブミンに対して高い結合率を有することが明らかである。また、ICGのように水溶性に劣る化合物は、主に血液中のタンパク成分のうちリポタンパク質に結合することも明らかである。
【０１１０】
試験例２
平衡透析法による血漿タンパク結合性試験
化合物の血漿タンパク質結合を、平衡透析法(W. Lindner et al, J.Chromatography, 1996, 677, 1-28 )により測定した。被験物質を蒸留水に対して200uMとなるように溶解した溶液をマウス、イヌ、ウサギ、サルまたは、ヒトの血漿に最終濃度が5μMとなるようにそれぞれ添加した。該溶液300uLおよび、PBS溶液500uLを平衡透析ユニットRED device(Pierce Biotechnology)の各透析セルに添加した後、37℃、100rpmの速さで振とうした。4時間後、血漿および緩衝液試料を採取し、それぞれの蛍光強度をEnVision(GE社)を用いて分析し、検量線から濃度を算出した後に血漿中の遊離濃度％を算出した。結果を表２及び表３に示す。
【０１１１】
【表２】
2011046662.tif 000029
【０１１２】
【表３】
2011046662.tif 000030
【０１１３】
表２及び３より、一般式（I）で表される本発明の化合物は、SF-64に比較して動物種間での血漿タンパク結合率に差がないことがわかる。また、表３の化合物Aと15の標準偏差値の比較より、Ｘ基をスルホン酸からホスホン酸に置換すること、及び、表３の化合物A, 4, 6, 9, 10の標準偏差値の比較より、一般式（I）で表される化合物におけるＲ7基及びＲ8基に置換される酸基をスルホン酸からカルボン酸、更にはホスホン酸へと置換することが、動物種間での血漿タンパク結合率の差を小さくする傾向があることがわかる。