(57)【要約】【課題】抗菌特性を有する新規なペプチド化合物、およびそうした化合物を調製するための新規な方法の提供。【解決手段】（ａ）アミノ基を含む少なくとも１つの側鎖を有するペプチドを、アミノ保護基試薬で処理して保護ペプチドを生成する工程であって、前記ペプチドがアシル基を含む環外ペプチド鎖と結合した環状ヘプタペプチドを含み、前記保護基が少なくとも１個の酸性置換基を含む、工程と、（ｂ）保護ペプチドを脱アシル化剤で処理して保護された脱アシル化ペプチドを生成する工程とを含む化合物の調製方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）アミノ基を含む少なくとも１つの側鎖を有するペプチドを、アミノ保護基試薬で処理して保護ペプチドを生成する工程であって、
前記ペプチドがアシル基を含む環外ペプチド鎖と結合した環状ヘプタペプチドを含み、前記保護基が少なくとも１個の酸性置換基を含む、工程と、
（ｂ）保護ペプチドを脱アシル化剤で処理して保護された脱アシル化ペプチドを生成する工程と
を含む化合物の調製方法。
【請求項２】
前記（ａ）のペプチドが、式（Ａ）：
【化１】
2011256189.tif 000053
（Ａ）
（式中、
Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ＴはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ１０はそれぞれ、イソプロピル、ベンジル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシ−１−エチルおよびヒドロキシメチルから独立に選択される）
で示される構造を有する請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ６およびＲ７がそれぞれ、イソプロピル、ベンジル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシ−１−エチルおよびヒドロキシメチルから独立に選択され、Ｒ１０がイソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシ−１−エチルおよびヒドロキシメチルから選択される請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ｙ１、Ｙ２およびＹ３がそれぞれ、２，４−ジアミノブタン酸残基、スレオニン残基およびセリン残基から独立に選択される請求項２に記載の方法。
【請求項５】
Ｔが６−メチルオクタノイル、６−メチルヘプタノイル、オクタノイル、ヘプタノイル、ノナノイルおよび３−ヒドロキシ−６−メチルオクタノイルから選択される請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記（ａ）のペプチドが、ポリミキシンＡ、ポリミキシンＢ、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ、ポリミキシンＣ、ポリミキシンＤ、コリスチン、ポリミキシンＦ、ポリミキシンＭ、ポリミキシンＰ、ポリミキシンＳ、ポリミキシンＴ、サークリンＡ、オクタペプチンＡ、オクタペプチンＢ、オクタペプチンＣおよびオクタペプチンＤから選択される請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記（ａ）のペプチドが、ポリミキシンＢ、ポリミキシンＡ、ポリミキシンＤ、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ、コリスチン、サークリンＡ、オクタペプチンＢおよびオクタペプチンＣから選択される請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記（ａ）のペプチドがポリミキシンＢである請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記（ａ）のペプチドが、ポリミキシンＡ、ポリミキシンＤ、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ、コリスチン、サークリンＡ、オクタペプチンＢおよびオクタペプチンＣから選択される請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも１個の酸性置換基がカルボキシ、カルボキシレート、スルホ、サルフェート、ホスフェート、ホスホネートおよびその塩から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記保護基が、前記少なくとも１個の酸性置換基で置換されたアリールまたはヘテロアリールを含む請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１個の酸性置換基がカルボキシ、カルボキシレート、スルホ、サルフェート、ホスフェート、ホスホネートおよびその塩から選択される請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記保護基が９−フルオレニルメトキシカルボニルのスルホン酸である請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記保護基が２−スルホ−９−フルオレニルメトキシカルボニルである請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記（ａ）のペプチドの各アミノ基が保護基で保護されている請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記脱アシル化剤が酵素である請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記酵素の供給源がアクチノプラーネス  ユタヘンシスである請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
さらに、（ｃ）以下の式：
【化２】
2011256189.tif 000054
（式中：
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
Ｐは少なくとも１個の酸性置換基を含む保護基である）
で示される保護された脱アシル化ペプチド化合物から生成する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記生成する工程が、前記保護ペプチドを、式Ａ−ＬＧ（ＬＧは脱離基である）を有する試薬で処理する工程を含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記生成する工程が、前記保護ペプチドを、イソシアネート、チオイソシアネート、ラクトン、活性化複素環、活性化ヘテロアリール、イミデート、ケテンアミン、アルデヒドおよび還元剤、ならびにケトンおよび還元剤から選択される試薬で処理する工程を含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記生成する工程が、前記保護ペプチドを、アシルハライド、アシルシアニド、エステル、ラクトンおよび無水物から選択されるアシル化試薬で処理する工程を含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記生成する工程が、前記保護ペプチドを、塩化スルホニルおよび活性化スルホンアミドから選択されるスルホン化試薬で処理する工程を含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記生成する工程が、ｘが０であり、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であるように、保護脱アシル化ペプチドをＮ−末端アミノ酸加水分解反応にかける工程を含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
前記生成する工程が、ｘおよびｙのそれぞれが独立に０であり、ｚが１であるように、保護脱アシル化ペプチドを第２のＮ−末端アミノ酸加水分解反応にかける工程を含む請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記生成する工程が、ｘ、ｙおよびｚの各々が０であるように、保護脱アシル化ペプチドを第３のＮ−末端アミノ酸加水分解反応にかける工程を含む請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
（ａ）アミノ基を含む少なくとも１つの側鎖を有するペプチドを、アミノ保護基試薬で処理して保護ペプチドを生成する工程であって、
前記ペプチドがアシル基を含む環外ペプチド鎖と結合した環状ヘプタペプチドを含み、前記保護ペプチドが水溶性である、工程と、
（ｂ）保護ペプチドを、脱アシル化剤で処理して保護された脱アシル化ペプチドを生成する工程と
を含む化合物の調製方法。
【請求項２７】
式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）：
【化３】
2011256189.tif 000055
（式中：
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
Ｐは少なくとも１個の酸性置換基を含む保護基である）
から選択される構造を有する、化合物。
【請求項２８】
Ｐが少なくとも１個の酸性置換基で置換された９−フルオレニルメトキシカルボニル基である請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｐが２−スルホ−９−フルオレニルメトキシカルボニル基である請求項２８に記載の化合物。
【請求項３０】
ｘおよびｙがそれぞれ独立に０であり、ｚが１であり、Ｘ３が
【化４】
2011256189.tif 000056
である請求項２７に記載の化合物。
【請求項３１】
ｘが０であり、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ２−Ｘ３が
【化５】
2011256189.tif 000057
である請求項２７に記載の化合物。
【請求項３２】
ｘ、ｙおよびｚがそれぞれ独立に１であり、Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３が
【化６】
2011256189.tif 000058
である請求項２７に記載の化合物。
【請求項３３】
ｘ、ｙおよびｚのそれぞれが独立に０であり、Ａが水素である請求項２７に記載の化合物。
【請求項３４】
前記化合物がプロドラッグである請求項２７に記載の化合物。
【請求項３５】
式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）：
【化７】
2011256189.tif 000059
（式中、
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
Ｐは保護基である）
から選択される構造を有する化合物であって、その式（Ｉ）−（ＶＩＩ）から選択される構造の化合物が水溶性である、化合物。
【請求項３６】
式（１）：
【化８】
2011256189.tif 000060
（１）
（式中、
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数である；
但し、
１）Ａはアミノ酸残基を１つも含まず、
２）Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ｘおよびｙのそれぞれが０および１から独立に選択され、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は、少なくとも９個の炭素原子を有する非置換アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ならびに、少なくとも１個の水素がアシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されている置換アルキルから選択される；
但し、前記置換アルキルはアルキル−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−、フェニル−ＣＨ２−、アダマンチル−ＣＨ２−、置換アリールオキシ−ＣＨ２−およびＣＨ３−ＣＨＱ−ＣＨ２−ＣＨ２−（ここで、Ｑは構造
【化９】
2011256189.tif 000061
Ｑ
である）
からは選択されず、
３）ｘ、ｙおよびｚがそれぞれ１であり、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がアリールである場合、前記アリールは３個のヒドロキシ置換基を有する６員環ではなく、
４）ｘ、ｙおよびｚのそれぞれが独立に０であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’はＣ８〜２０−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）
で示される化合物。
【請求項３７】
Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ｘおよびｙが独立に０および１から選択され、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は、Ｃ９〜２０非置換アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ならびに、少なくとも１個の水素がアシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、置換アリール、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されている置換アルキルから選択される請求項３６に記載の化合物。
【請求項３８】
式（２）：
【化１０】
2011256189.tif 000062
（２）
（式中：
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数である；
但し、
１）Ａはアミノ酸残基を１つも含まず、
２）ｘ、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は分岐Ｃ８−アルキルではない）
で示される化合物。
【請求項３９】
Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がフェニルである請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４０】
Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ９−アルキルである請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４１】
Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がＮ−（Ｃ１〜１０−アルキル）−４−アミノフェニルおよびベンゾイルオキシ基から選択された基で置換されたアルキルである請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４２】
Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’が、３−インドリル基、シクロヘキシル、非置換フェニル、ベンジル、４’−ビフェニル、ならびに４−Ｃ１０−アルキル、４’−フェニルオキシおよび４−クロロから選択される基で置換されたフェニルで置換されたｎ−Ｃ８−アルキル、Ｃ２−アルキルである請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−であり、Ｒ’がフェニルである請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４４】
Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がフェニル、４−ピリジニル、および２−ナフトキシ基で置換されたアルキルから選択される請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４５】
Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−ＳＯ２−であり、Ｒ’が４−メチルフェニルである請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４６】
ｘが０であり、ｙおよびｚはそれぞれ１であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ８−アルキルである請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４７】
ｘが０であり、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−であり、Ｒ’がフェニルである請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４８】
ｘおよびｙのそれぞれが独立に０であり、ｚが１であり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ９−アルキルである請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４９】
Ｘ１がグリシンであり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−ＳＯ２−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ１０−アルキルである請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５０】
Ｘ１がリジンであり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ９−アルキルである請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５１】
Ｘ１がフェニルアラニンであり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ９−アルキルである請求項３０、３６または３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５２】
式（３）：
【化１１】
2011256189.tif 000063
（３）
（式中、
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数である；
但し、
１）Ａはアミノ酸残基を１つも含まず、
２）ｘが０または１から選択され、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１がアミノ酸残基であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は非分岐の非置換Ｃ１〜４−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される；
但し、ａ）前記アルケニルはフラニル−ＣＨ＝ＣＨ−ではなく、
ｂ）前記アリールはナフチルおよび４−ニトロフェニルからは選択されず、
ｃ）前記ヘテロアリールは２−チオフェニルではない、
３）ｘが０または１から選択され、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１がアミノ酸残基であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＳＯ２−である場合、Ｒ’はＣ１〜７−アルキル、Ｃ９〜２０−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）
で示される化合物。
【請求項５３】
ｘが０または１から選択され、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１がアミノ酸残基であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’が非分岐の非置換Ｃ１〜４アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルから選択される請求項５２に記載の化合物。
【請求項５４】
Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ８−アルキルである請求項５２に記載の化合物。
【請求項５５】
Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−ＳＯ２−であり、Ｒ’が４−メチルフェニルである請求項５２に記載の化合物。
【請求項５６】
式（４）：
【化１２】
2011256189.tif 000064
（４）
（式中、
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数である；
但し、ｘ、ｙおよびｚがそれぞれ１であり、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は分岐Ｃ８〜９−アルキルではない）
で示される化合物。
【請求項５７】
Ａがアミノ酸残基を１つも含まない請求項５６に記載の化合物。
【請求項５８】
式（５）：
【化１３】
2011256189.tif 000065
（５）
（式中、
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数である；
但し、ｘ、ｙおよびｚがそれぞれ１であり、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は分岐Ｃ７〜８−アルキルではない）
で示される化合物。
【請求項５９】
Ａがアミノ酸残基を１つも含まない請求項５８に記載の化合物。
【請求項６０】
式（６）：
【化１４】
2011256189.tif 000066
（６）
（式中、
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数である；
但し、ｘおよびｙのそれぞれが独立に０であり、ｚが１であり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は置換アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される；
但し、前記置換アルキルは、
ａ）オキサゾリジノンで置換されていないか、または、
ｂ）式：アルキル−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−からなるものではない）
で示される化合物。
【請求項６１】
Ａがアミノ酸残基を１つも含まない請求項６０に記載の化合物。
【請求項６２】
ｘおよびｙのそれぞれが独立に０であり、ｚが１であり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は置換Ｃ１〜７−アルキル、置換Ｃ１２〜２０−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される請求項６０に記載の化合物。
【請求項６３】
式（７）：
【化１５】
2011256189.tif 000067
（７）
（式中：
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数である；
但し、ｘおよびｙがそれぞれ０であり、ｚが１であり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’はヒドロキシル置換基を有する分岐Ｃ９〜１１−アルキルではない）
で示される化合物。
【請求項６４】
Ａがアミノ酸残基を１つも含まない請求項６３に記載の化合物。
【請求項６５】
式（１）：
【化１６】
2011256189.tif 000068
（１）
（式中：
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数である；
但し、
１）Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ｘおよびｙのそれぞれが０および１から独立に選択され、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は少なくとも９個の炭素原子を有する非置換アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ならびに少なくとも１個の水素がアシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されている置換アルキルから選択される；
但し、前記置換アルキルはアルキル−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−、フェニル−ＣＨ２−、アダマンチル−ＣＨ２−、置換アリールオキシ−ＣＨ２−およびＣＨ３−ＣＨＱ−ＣＨ２−ＣＨ２−（ここで、Ｑは構造：
【化１７】
2011256189.tif 000069
Ｑ
である）
からは選択されず、
２）ｘ、ｙおよびｚがそれぞれ１であり、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がアリールである場合、アリールは３個のヒドロキシ置換基を有する６員環ではなく、
３）ｘ、ｙおよびｚのそれぞれが独立に０である場合、ＡはＣ８〜２０−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）
で示される化合物。
【請求項６６】
Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ここでＡがＮα−（ｎ−Ｃ９−アルカノイル）リジンである請求項３０または６５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６７】
式（２）：
【化１８】
2011256189.tif 000070
（２）
（式中：
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数である；
但し、ｘ、ｙおよびｚがそれぞれ１であり、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は分岐Ｃ８−アルキルではない）
で示される化合物。
【請求項６８】
式（３）：
【化１９】
2011256189.tif 000071
（３）
（式中、
ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、
Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数である；
但し、
１）ｘが０または１から選択され、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１がアミノ酸残基であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−である場合、Ｒ’はＮα−アルカノイルフェニルアラニン、Ｎα−アルケノイルフェニルアラニン、Ｎα−アリールカルボニルフェニルアラニン、Ｎα−ヘテロアリールカルボニルフェニルアラニンから選択され、
２）ｘが０または１から選択され、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１がアミノ酸残基であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は非分岐の非置換Ｃ１〜４−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される；
但し、ａ）前記アルケニルはフラニル−ＣＨ＝ＣＨ−ではなく、
ｂ）前記アリールはナフチルおよび４−ニトロフェニルからは選択されず、
ｃ）前記ヘテロアリールは２−チオフェニルではない、
３）ｘが０または１から選択され、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１がアミノ酸残基であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＳＯ２−である場合、Ｒ’はＣ１〜７−アルキル、Ｃ９〜２０−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）
で示される化合物。
【請求項６９】
Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、
ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がＮα−（ｎ−Ｃ９−アルカノイル）フェニルアラニンである請求項３０、６５、６７または６８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７０】
請求項２７から６９のいずれか一項に記載の化合物および医薬上許容される担体を含む治療有効量の医薬組成物を投与することによって、対象の感染症を治療する方法。
【請求項７１】
（ａ）ポリミキシンＢ、コリスチン、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１、サークリンおよびオクタペプチンのアミノ基を、（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシ−カルボニルまたは９−フルオレニルメトキシカルボニルの他の酸性誘導体で保護する工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）の反応からの生成物を、デアシラーゼで処理して保護ペプチド中間体を提供する工程と、
（ｃ）修飾したエドマン分解法またはペプチダーゼ酵素反応を用いて、前記保護ペプチド中間体の側鎖のアミノ酸の数を低減させることによって、他の保護中間体を得る工程と、
（ｄ）前記保護ペプチド中間体をクロマトグラフィーで精製する工程と
を含む新規なペプチド抗生物質の合成に用いるための中間体の調製方法。
【請求項７２】
臨床的に使用された抗生物質に抵抗性のある菌株を含むグラム陰性菌およびグラム陽性菌に対して活性のある抗生物質を生成するための方法であって、
（ａ）コリスチン、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１、サークリンおよびオクタペプチンからなる群から選択されるポリミキシンまたは他の関連抗生物質のアミノ基を、（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニルまたは９−フルオレニルメトキシカルボニルの他の酸性誘導体で脱保護する工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）の反応からの生成物を、デアシラーゼで処理して保護ペプチド中間体を提供する工程と、
（ｃ）修飾したエドマン分解法またはペプチダーゼ酵素反応を用いて、前記保護ペプチドの環外ペプチド側鎖のアミノ酸を１つから３つ減らしてサイズを小さくすることによって、他の保護中間体ペプチドを得る工程と、
（ｄ）前記中間体を化学的に修飾して保護抗菌性誘導体を生成する工程と、
（ｅ）前記酸性保護基を除去して抗生物質を生成する工程と
を含む方法。
【請求項７３】
ポリミキシン、［Ｉｌｅ７）］−ポリミキシンＢ１、オクタペプチン、コリスチン、サークリンまたは関連抗生物質から誘導される化学的に保護された形態のペプチドであり、以下の：
１）Ｈ−（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチド−［（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］ｎ
２）Ｈ−（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチド−［（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］ｎ
３）Ｈ−（Ｘ３）−ペプチド−［（２−スルホ）９−Ｆｍｏｃ］ｎ
４）Ｈ−ペプチド−［（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］３
またはその対応する塩からなる群から選択される中間体であって、
ここで、
ケース１）の、
Ｈ−（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチド−［（２−スルホ）Ｆｍｏｃ］ｎについて、Ｈは水素であり、Ｘ１はＬ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、Ｘ２はＬ−Ｔｈｒまたは他のアミノ酸であり、Ｘ３はＬ−ＤａｂもしくはＤ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、ｎ＝３〜６であり、
ケース２）の、
Ｈ−（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチド−［（スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］ｎについて、Ｈは水素であり、Ｘ２はＬ−Ｔｈｒまたは他のアミノ酸であり、Ｘ３はＬ−ＤａｂもしくはＤ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、ｎ＝３〜５であり、
ケース３）の、
Ｈ−（Ｘ３）−［ペプチド−［（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］ｎについて、Ｈは水素であり、Ｘ３はＬ−ＤａｂもしくはＤ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、ｎ＝３〜４であり、
ケース４）の、
Ｈ−ペプチド−［（スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］３について、Ｈは水素
である中間体。
【請求項７４】
新規なペプチド抗生物質またはそのプロドラッグを合成するために使用できる、対応する保護ポリミキシンＢから誘導された酸性保護ペプチド中間体であって、前記保護基が好ましくは（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃであり、構造：
【化２０】
2011256189.tif 000072
を有する保護ペプチド中間体。
【請求項７５】
新規なペプチド抗生物質またはそのプロドラッグを合成するために使用できる、対応する保護［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１から誘導された酸性保護ペプチド中間体であって、前記保護基が好ましくは（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃであり、構造：
【化２１】
2011256189.tif 000073
を有する酸性保護ペプチド中間体。
【請求項７６】
新規なペプチド抗生物質またはそのプロドラッグを合成するために使用できる、対応する保護コリスチンから誘導された酸性保護ペプチド中間体であって、前記保護基が好ましくは（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃであり、構造：
【化２２】
2011256189.tif 000074
を有する酸性保護ペプチド中間体。
【請求項７７】
新規なペプチド抗生物質またはそのプロドラッグを合成するために使用できる、対応する保護サークリンＡから誘導された酸性保護ペプチド中間体であって、前記保護基が好ましくは（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃであり、構造：
【化２３】
2011256189.tif 000075
を有する酸性保護ペプチド中間体。
【請求項７８】
新規なペプチド抗生物質またはそのプロドラッグを合成するために使用できる、対応する保護オクタペプチンから誘導された酸性保護ペプチド中間体であって、前記保護基が好ましくは（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃであり、構造：
【化２４】
2011256189.tif 000076
を有する酸性保護ペプチド中間体。
【請求項７９】
オクタペプチン抗生物質の他の成分が、５位でＬ−ロイシンの代わりにＬ−フェニルアラニンを含み、前記成分が類似しているが別の保護ペプチド中間体を形成する請求項８に記載の保護ペプチド中間体。
【請求項８０】
以下の構造（ここで、Ｐは保護基（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃまたは水素である）：
【化２５】
2011256189.tif 000077
を有する化学的に保護された形態のＰＢペプチド、ＣペプチドまたはＩＬペプチドから調製される抗菌性化合物または保護化合物。
【表１−１】
2011256189.tif 000078
【表１−２】
2011256189.tif 000079
【表１−３】
2011256189.tif 000080
＊  Ｄａｂ−Ｐは４−Ｎ−（ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃ）−ジアミノブチリルであり、Ｌｙｓ−Ｐは６−Ｎ−（ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃ）−リシルである
＊＊  ＰＡＰＡはｐ−アミノフェニルアセチルである
別段の指定のない限り、すべてのアミノ酸はＬ−異性体である。
【請求項８１】
ポリミキシン、オクタペプチン、コリスチン、サークリン、［Ｉｌｅ７］ポリミキシンＢ１から誘導される化学的に保護された形態のペプチドである中間体から調製される抗生物質であって、以下の：
ケース１  Ａ−（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）−環状ペプチド
ケース２  Ａ−（Ｘ２）（Ｘ３）−環状ペプチド
ケース３  Ａ−（Ｘ３）−環状ペプチド
ケース４  Ａ−環状ペプチド
またはその対応する塩からなる群から選択される抗生物質
（ここで、
ケース１）では、Ａ−（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチドについて、
Ａ＝Ｒ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールまたは複素であり、Ｘ１はＬ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、Ｘ２はＬ−Ｔｈｒまたは他のアミノ酸であり、Ｘ３はＬ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、
ケース２）では、Ａ−（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチドについて、
「Ａ」はケース１で説明されたものと同じであり、Ｘ２はＬ−Ｔｈｒまたは他のアミノ酸であり、Ｘ３はＬ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、
ケース３）では、Ａ−（Ｘ３）−ペプチドについて、
「Ａ」はケース１で説明されたものと同じであり、Ｘ３はＬ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、
ケース４）では、Ａ−ペプチドについて、
「Ａ」はケース１で説明されたものと同じである）。
【請求項８２】
以下の構造：
【化２６】
2011256189.tif 000081
を有し、かつグラム陰性菌およびグラム陽性菌に対して使用するための最小阻害濃度を有するペプチド抗生物質。
【表２】
2011256189.tif 000082
＊ＭＩＣ値は、Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎブロス中で成長したアッセイ生物として、大腸菌、ＡＴＣＣ  ＃２６、黄色ブドウ球菌Ｓｍｉｔｈ型、および黄色ブドウ球菌、ＡＴＣＣ２７８５３を用いて、連続式２倍ブロス希釈法によって測定した。
＊＊ＰＡＰＡ＝ｐ−アミノフェニルアセチル
【請求項８３】
水溶性の安定した固体状デアシラーゼ酵素を調製する方法であって、
（ａ）アクチノプラーネス  ユタヘンシスの菌株を発酵させて生物の細胞を得る工程と、
（ｂ）細胞を水で洗浄して不純物を除去する工程と、
（ｃ）洗浄した細胞を水性塩基でｐＨ８〜１１で抽出する工程と、
（ｄ）抽出物をｐＨ７〜８に調節し、その溶液を凍結乾燥して固体状の前記酵素を得る工程と
を含む方法。
【請求項８４】
工程（ｅ）が、その後でクロマトグラフィーを用いて前記酵素をさらに精製する工程である請求項８３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、２００４年７月１日出願の米国特許出願第１０／８８１１６０号（現在仮出願に切り替っている）の利益を請求するものであり、その内容を出典明示により本明細書の一部とする。
【０００２】
本明細書では、例えば、コリスチン、サークリンＡ、ポリミキシンＡ、ポリミキシンＢ、ポリミキシンＤ、オクタペプチンＢ、オクタペプチンＣおよび［Ｉｌｅ７］ポリミキシンＢ１を含むポリミキシンおよびオクタペプチン（ｏｃｔａｐｅｐｔｉｎ）ペプチドから誘導される新規なペプチドおよび新規な保護ペプチドを開示する。新規なペプチドおよび新規な保護ペプチドは抗菌特性を有する。新規なペプチドおよび新規な保護ペプチドを含む医薬組成物、ならびに新規なペプチドおよび新規な保護ペプチドの調製方法も開示する。
【背景技術】
【０００３】
アミノグリコシド、β−ラクタムおよびフルオロキノロン抗生物質に対して抵抗性があるグラム陰性菌はますます知られてきている。これらの細菌は、ポリミキシン、および抗菌特性（非特許文献１（参考文献１）、非特許文献２（参考文献１０）、非特許文献３（参考文献２３））を有する関連したペプチドの影響を受け易い。その結果、ヒトにおいて多剤耐性グラム陰性菌性感染症にポリミキシンを用いることに関心がもたれてきている（非特許文献３（参考文献２３））。
【０００４】
ポリミキシンＢおよび関連するコリスチン（ポリミキシンＥ）などのペプチドは抗菌剤としてヒトに投与されてきた。しかし、毒性のためこれまでその使用が制限されてきた。これらのペプチドは、環外の３個のアミノ酸鎖と結合した７つのアミノ酸の環状ペプチドを含む。ここで、環外鎖のＮ−末端アミンは「側鎖」または「尾部（ｔａｉｌ）」と結合している。尾部は最も一般的にはアシル基である。
【０００５】
推奨されているポリミキシンＢを患者に投薬すると、いくらかの腎臓毒性が観察されている。腎機能障害を有する患者において、神経毒性も観察されており、コリスチンを用いた大規模な研究で７．３％の全発生率が報告されている（非特許文献１（参考文献１））。アシル環外鎖および近接したＮ−末端２，４−ジアミノブタン酸（Ｄａｂ）残基を、ポリミキシンから酵素的に除去し、それによって対応するノナペプチドを得ることができる。ポリミキシンＢのノナペプチドのインビボでの毒性はポリミキシンＢ自体の毒性より著しく小さい（非特許文献４（参考文献１６））。細胞培養において、ノナペプチドの毒性は、ポリミキシンＢに対して約１／１００に低減される。しかし、ノナペプチドの抗菌活性もポリミキシンＢに対して約１／２〜１／６４に低減される（非特許文献５（参考文献１１））。
【０００６】
抗菌特性の改善されたペプチドを得るために、ポリミキシンおよびコリスチンを化学的に修飾する試みがなされてきた。例えば、これまで、固相ペプチド合成を組み合わせて線状構造を形成させ、続いて樹脂からそれを除去し、高い希釈度の溶液中で縮合して環状ペプチド構造を得ることによって、ポリミキシンＢと４つの類似体の全合成が実施されている（非特許文献６（参考文献７））。しかし、誘導体は、ポリミキシンＢより活性が小さい。より最近では、ポリミキシンＢと、若干の非常に近似した関連化合物の全合成が固相ペプチド合成だけでなされている（非特許文献７（参考文献１５）、非特許文献８（参考文献２６））。これらの固相全合成アプローチはどちらもポリミキシンの新規な誘導体を提供することができるが、生成する抗生物質の量が少なく、かつ大量のアミノ酸前駆体を必要とするので、これらの方法には限界があるようである。臨床研究のために、これらの方法はどれもスケールアップするのが困難であり、コストがかかることが分かっている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Evans, M.E.,  Feola, D.J.,  Rapp,  R.P.  1999.  Polymyxin B Sulfate and Colistin:  Old Antibiotics for Emerging Multiresistant Gram-Negative Bacteria.  Ann. Pharmacother.  33:960-967
【非特許文献２】Markou, N., Apostolakos, H., Koumoudiou, C.,  Anthanasiou,  M., Koutsoukou,  A.,  Alamanos, I., and Gregorakos, L.  2003. Intravenous colistin in the treatment of sepsis from multiresistant Gram- negative bacilli in critically ill patients,  Critical Care 7, R78-R83
【非特許文献３】Falagas, M. E., Kasiakou, S. K.  2005.  Colistin:  The Revival of Polymyxins for the Management of Multidrug-Resistant Gram-Negative Bacterial Infections.  Rev. Anti-Infect. Agents.  40: 1333-1341
【非特許文献４】Kimura,  Y.,  Matsunaga,  and  Vaara,  M.,  1992.  Polymyxin B Octapeptide and Polymyxin B Heptapeptide are Potent Outer Membrane Permeability-Increasing Agents.  J. Antibiot.,  45,  742-749
【非特許文献５】Duwe, A.K.,  Rupar, C.A.,  Horsman, G.B.,  and Vas, S.I.,  1986.  In Vitro Cytotoxicity and Antibiotic  Activity of Polymyxin B Nonapeptide,  Antimicrob. Agents Chemother,  30:340-341
【非特許文献６】Tsubery, H.,  Ofek, I.,  Cohen, S.,  Fridkin,  M.  2001.  N-Terminal Modifications of Polymyxin B Nonapeptide and Their Effect on Antibacterial Activity.   Peptides.  22: 1675-1681
【非特許文献７】DeVisser  Kriek,  N.M.A.J.,  van Hooft,  P.A.V.,  Van Schepdael  A.,  Fillipov,  D.V.,  van der Marel,  G.A.,  Overcleeft, H.S.,  van Boom,  J.H., and Noort, D.M.  2003. Synthesis of polymyxin B and analogues,  J. Peptide Res.  61,  298-306
【非特許文献８】Kline, T., Holub, D., Therrien, J., Leung, T.,  Ryckman, D. 2001. Synthesis and characterization of the colistin peptide polymyxin E1 and related antimicrobial peptides. J. Pept. Res., 57: 175-187
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、抗菌特性を有する新規なペプチド化合物、およびそうした化合物を調製するための新規な方法が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本明細書では、ペプチド抗生物質および／または抗菌特性を有する他のペプチドなどの新規なペプチド、ならびにそのペプチドの調製方法を開示する。本明細書で開示する化合物は、環状ペプチドの環外領域（環外アミノ酸および尾部）において構造の多様性を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
定義
本明細書で用いる「アシル」は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリール基と結合したカルボニル基を指す。アシルの例には、これらに限定されないが、（１）非置換アルキル基と結合している、カルボニル基と定義される「非置換アルカノイル」、（２）非置換アルケニル基と結合している、カルボニル基と定義される「非置換アルケノイル」、（３）１個または複数の水素原子が、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイド、およびウレイドから選択される置換基で置換されている、置換アルキル基と結合している、カルボニル基と定義される「置換アルカノイル」、ならびに（４）１個または複数の水素原子が上記の置換基で置換されている、置換アルケニル基と結合している、カルボニル基と定義される「置換アルケノイル」が含まれる。アシルの非限定的な例には、アセチル、ｎ−オクタノイル、ｎ−ノナノイル、ベンゾイルおよびイソニコチノイルなどの基が含まれる。
【００１１】
本明細書で用いる「アシルアミノ」は、アシル基と結合したアミノ基を指す。
【００１２】
本明細書で用いる「アシルオキシ」はアシル基で置換された酸素基を指す。いくつかの実施形態では、アシルオキシは、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドまたはウレイド基で置換されている。
【００１３】
本明細書で用いる「付加試薬」は、ペプチドのＮ−末端などのアミノ基と反応し、付加試薬のすべてまたはその成分をアミノ基に付加してアミノ基を化学的に修飾させることができる化合物を指す。例えば、付加試薬は、アミノ基と反応してアシルアミノ基またはスルホアミノ基をそれぞれ生成することができる、Ｒ’−（Ｃ＝Ｏ）−ＬＧなどのアシルアミノ試薬またはＲ’−ＳＯ２−ＬＧなどのスルホン化試薬（但し、ＬＧは脱離基である）である。付加試薬は、例えば、イソシアネート、イソチオシアネート、活性化エステル、酸クロリド、塩化スルホニル、活性化スルホンアミド、活性化複素環、活性化ヘテロアリール、クロロホルメート、シアノホルメート、チオアシルエステル、塩化ホスホリル、ホスホラミデート、イミデートまたはラクトンであってもよい。付加試薬は、還元条件下でアミンと反応してアルキル化アミンを生成するアルデヒドまたはケトンであってもよい。付加試薬は、活性化アミノ酸、またはアミノ酸およびペプチドカップリング試薬、例えば、ＰｙＢＯＰ（登録商標）（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＨＢｔＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＨＢｔＵ／ＨＯＢｔ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート／Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）またはＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）などであってもよい。
【００１４】
本明細書で用いる「アルケニル」は、２〜１２個、２〜１０個または２〜６個の炭素原子などの２〜２０個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１個の炭素−炭素の二重結合を含む直鎖または分岐の基を指す。１個または複数の水素原子は、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されていてもよい。不飽和炭化水素鎖の二重結合部分はシス構造またはトランス構造のどちらであってもよい。アルケニルの非限定的な例には、置換基を担持しないアルケニル基と定義される「非置換アルケニル」が含まれる。アルケニル基の他の非限定的な例には、エテニル、２−フェニル−１−エテニル、プロプ−１−エン−２−イル、プロプ−２−エン−１−イル（アリル）、プロプ−１−エン−１−イル、シクロプロプ−１−エン−１−イル；シクロプロプ−２−エン−１−イル、ブト−１−エン−１−イル、ブト−１−エン−２−イル、２−メチル−プロプ−１−エン−１−イル、ブト−２−エン−１−イル、ブト−２−エン−２−イル、ブト−１，３−ジエン−１−イル、ブト−１，３−ジエン−２−イル、シクロブト−１−エン−１−イル、シクロブト−１−エン−３−イル、シクロブト−１，３−ジエン−１−イルが含まれる。
【００１５】
本明細書で用いる「アルコキシ」は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキルまたはヘテロシクリル基で置換された酸素基を指す。非限定的な例には、メトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ベンゾイルオキシおよびシクロヘキシルオキシが含まれる。
【００１６】
本明細書で用いる「アルキル」は、別段の指定のない限り、例えば１〜２０個の炭素原子、１〜１２個、１〜１０個もしくは１〜６個の炭素原子、あるいは少なくとも６個の炭素原子、少なくとも７個の炭素原子、少なくとも８個の炭素原子、少なくとも９個の炭素原子または少なくとも１０個の炭素原子などの少なくとも１個の炭素原子を有する直鎖または分岐の飽和基を指す。「低級アルキル」は１〜４個の炭素原子を含むアルキル基と定義する。１個または複数の水素原子は、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されていてもよい。アルキル基の非限定的な例には、メチル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、トリフルオロメチル、ノニル、ウンデシル、オクチル、ドデシル、メトキシメチル、２−（２’−アミノフェナシル）、３−インドリルメチル、ベンジルおよびカルボキシメチルが含まれる。アルキルの他の例には、これらに限定されないが、（１）置換基を担持しないアルキル基と定義される「非置換アルキル」、ならびに（２）１個または複数の水素原子が、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されているアルキル基を表す「置換アルキル」が含まれる。アルキル基の例には、これらに限定されないが、メチル、エタニル（エチル）などのエチル、プロパン−１−イル（ｎ−プロピル）、プロパン−２−イル（イソ−プロピル）などのプロピル、ブタン−１−イル（ｎ−ブチル）、ブタン−２−イル（ｓ−ブチル）などのブチル、２−メチル−プロパン−１−イル（イソ−ブチル）、２−メチル−プロパン−２−イル（ｔｅｒｔ−ブチル）、トリフルオロメチル、ノニル、ウンデシル、オクチル、ドデシル、メトキシメチル、２−（２’−アミノフェナシル）、３−インドリルメチル、ベンジルおよびカルボキシメチルが含まれる。
【００１７】
本明細書で用いる「アルキニル」は、２〜１０個の炭素原子を有し、少なくとも１個の炭素−炭素の三重結合を含む直鎖および分岐の基を指す。１個または複数の水素原子は、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されていてもよい。アルキニル基の例には、これらに限定されないが、エチニル、プロパー１−イン−１−イル、プロパー２−イン−１−イル、ブト−１−イン−１−イル、ブト−１−イン−３−イルおよびブト−３−イン−１−イルが含まれる。
【００１８】
本明細書で用いる「アミノ」は、Ｒ１およびＲ２がヒドリド、アシル、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、ホルミル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノ、ニトロ、オキソ、スルフィニル、スルホニルおよびチオから選択されるＮＲ１Ｒ２基を指す。モノ置換アミノは、Ｒ１がヒドリドであり、Ｒ２がアシル、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、ホルミル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノ、ニトロ、オキソ、スルフィニル、スルホニルおよびチオから選択されるＮＲ１Ｒ２基を指す。ジ置換アミノは、Ｒ１およびＲ２がアシル、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、ホルミル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノ、ニトロ、オキソ、スルフィニル、スルホニルおよびチオからそれぞれ独立に選択されるＮＲ１Ｒ２基を指す。
【００１９】
本明細書で用いる「アミノ酸」は、カルボン酸基とアミノ基を含み、式Ｈ２Ｎ［Ｃ（Ｒ）（Ｒ’）］ｎ−Ｃ（Ｏ）ＯＨ−（ｎは１以上の整数であり、ＲおよびＲ’は水素およびアミノ酸側鎖から独立に選択される）を有する化合物を指す。例えば、ｎが１に等しい場合、式Ｈ２Ｎ［Ｃ（Ｒ）（Ｒ’）］Ｃ（Ｏ）ＯＨのアミノ酸はα−アミノ酸であり、ｎが２に等しい場合、式Ｈ２Ｎ−Ｃ（Ｒ１）（Ｒ１’）−Ｃ（Ｒ２）（Ｒ２’）−Ｃ（Ｏ）−ＯＨのアミノ酸はβ−アミノ酸である（但し、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２およびＲ２’はそれぞれアミノ酸側鎖から独立に選択される）。本明細書で用いる「アミノ酸残基」は、ペプチドまたはタンパク質の一部であり、式−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（Ｒ）（Ｒ’）−Ｃ（Ｏ）−を有するアミノ酸を指す。本明細書で用いる「アミノ酸側鎖」は天然由来かまたは合成アミノ酸からの任意の側鎖を指す。例えば、メチルは、アラニン側鎖と称され、２−アミノ−１−エチルは２，４−ジアミノブタン酸の側鎖と称される。
【００２０】
アミノ酸の例は、２０個のコードされたアミノ酸およびその誘導体、ならびに、例えば他のα−アミノ酸、β−アミノ酸、γ−アミノ酸、δ−アミノ酸およびω−アミノ酸から選択することができる。アミノ酸は任意のキラル原子でＲキラリティーまたはＳキラリティーを有することができる。アミノ酸は、例えばアラニン、β−アラニン、α−アミノアジピン酸、２−アミノブタン酸、４−アミノブタン酸、１−アミノシクロペンタンカルボン酸、６−アミノヘキサン酸、２−アミノヘプタン二酸、７−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、アミノメチルピロールカルボン酸、８−アミノ−３，６−ジオキサ−オクタン酸、アミノピペリジンカルボン酸、３−アミノ−プロピオン酸、アミノセリン、アミノテトラヒドロフラン−４−カルボン酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、アゼチジンカルボン酸、ベンゾチアゾリルアラニン、ブチルグリシン、カルニチン、４−クロロフェニルアラニン、シトルリン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルジヒドロキシ、システイン、２，４−ジアミノブタン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、ジヒドロキシフェニルアラニン、ジメチルチアゾリジンカルボン酸、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、ホモセリン、ヒドロキシプロリン、イソロイシン、イソニペコチン酸、ロイシン、リジン、メタノプロリン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、ｐ−アミノ安息香酸、ペニシラミン、フェニルアラニン、フェニルグリシン、ピペリジニルアラニン、ピペリジニルグリシン、プロリン、ピロリジニルアラニン、サルコシン、セレノシステイン、セリン、ジヒドロキシ、テトラヒドロピラングリシン、チエニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、アロ−イソロイシン、アロ−スレオニン、２，６−ジアミノ−４−ヘキサン酸、２，６−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、ジカルボキシジン（ｄｉｃａｒｂｏｘｉｄｉｎｅ）、ホモアルギニン、ホモシトルリン、ホモシステイン、ホモシスチン、ホモフェニルアラニン、ホモプロリンおよび４−ヒドラジノ安息香酸から選択することができる。
【００２１】
ＣαにおいてＬ−またはＤ−キラリティーを有するペプチド合成のためのＮ−保護のα−アミノ酸はＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（登録商標）（カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）およびＢａｃｈｅｍ（スイス国Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ）から市販されている。キラルα−アミノ酸および他のアミノ酸の合成は当業者に周知であり、例えばＡｒｎｓｔｅｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐａｒｋ  Ｐｒｅｓｓ，１９７５；Ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｂｅｔａ−Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ，Ｊｕａｒｉｓｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００５；およびＷｉｌｌｉａｍｓ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｏｐｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  α−ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９に記載されている。
【００２２】
本明細書で用いる「アミノ保護基」は、分子中のどこかで化学的変化が起こる際に、分子上のアミノ基が化学反応を受けるのを阻止するために用いることができる任意の置換基を指す。アミノ保護基は、適当な化学的条件下で除去することができる。多数のアミノ保護基は当業者に周知であり、アミノ保護基、その付加の方法およびその除去方法の例は、Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１の「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」に見ることができる。その開示を参照により本明細書に組み込む。アミノ保護基の非限定的な例には、フタルイミド、トリクロロアセチル、ＳＴＡ−ベース、ベンゾイルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、クロロベンジルオキシカルボニルおよびニトロベンジルオキシカルボニルが含まれる。アミノ保護基の他の例には、アミノ基と結合してカルバメートを生成する保護基を含むカルボニルと定義される「カルバメートアミノ保護基」が含まれる。アミノカルバメート保護基の非限定的な例には、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、カルボベンゾイルオキシ（ＣＢＺ）およびｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基が含まれる。保護基の他の例には、２−スルホ−９−フルオレニルメトキシカルボニルカルボニル、２−カルボキシメチル−９−フルオレニルメトキシカルボニルおよび４−カルボキシ−９−フルオレニルメトキシカルボニルなどの酸性置換基で置換された９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が含まれる。
【００２３】
本明細書で用いる「アミノ保護基試薬」は、ペプチドのＮ−末端などのアミノ基と反応し、それによってアミノ保護基の付加により前記アミノ基を化学的に修飾することができる付加試薬を指す。
【００２４】
本明細書で用いる「アリール」は、単一炭素環式、二炭素環式または他の多炭素環式の芳香族環系を指す。アリール基は所望により、アリール、シクロアルキルおよびヘテロシクリルから選択される１つまたは複数の環と縮合していてよい。アリールは５〜１４の環員数、例えば６から１０の環員数を有することができる。１個または複数の水素原子は、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、アジド、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、シクロアルキル、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されていてもよい。アリール基の非限定的な例には、フェニル、ナフチル、ビフェニルおよびアントラセニルが含まれる。
【００２５】
本明細書で用いる「アリールオキシ」は、アリールまたはヘテロアリール基で置換された酸素基を指す。アリールオキシの例には、これに限定されないが、フェノキシが含まれる。
【００２６】
本明細書で用いる「カルバモイル」は、式−Ｎ（Ｒｘ２）−Ｃ（Ｏ）−ＯＲｘ３（但し、Ｒｘ２はヒドリド、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択され、Ｒｘ３はアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）の窒素基を指す。
【００２７】
本明細書で用いる「カルボアルコキシ」はアルコキシまたはアリールオキシ基と結合したカルボニル基を指す。
【００２８】
本明細書で用いる「カルボキシ」はＣＯＯＨ基を指す。
【００２９】
本明細書で用いる「カルボキシアミノ」はＣＯＮＨ２基を指す。
【００３０】
本明細書で用いる「カルボキシアミド」はモノ置換アミノまたはジ置換アミノ基と結合したカルボニル基を指す。
【００３１】
本明細書で用いる「シクロアルキル」は、単一または縮合した炭素環系において、３個から７個の環員を有する環系などの３個から１２個の環員を有する飽和しているかまたは部分的に不飽和の炭素環を指す。１個または複数の水素原子は、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、シクロアルキル、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されていてもよい。シクロアルキル基の非限定的な例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルが含まれる。
【００３２】
「Ｆｍｏｃ」は９−フルオレニルメトキシカルボニル基である。
【００３３】
本明細書で用いる「ハロ」は、ブロモ、クロロ、フルオロまたはヨード基を指す。
【００３４】
本明細書で用いる「ヘテロアリール」は、６個から１０個の環員を有するヘテロアリール環系などの５個から１５個の環員を有する単一または縮合したヘテロシクリル系において、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、ＳまたはＳＯから選択される１〜４個のヘテロ原子またはヘテロ基を有する芳香族基を指す。１個または複数の水素原子は、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、シクロアルキル、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されていてもよい。ヘテロアリール基の非限定的な例には、インドリル、ピリジニル、チアゾリル、チアジアゾイル、イソキノリニル、ピラゾイル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリルおよびピロリル基が含まれる。
【００３５】
本明細書で用いる「ヘテロシクリル」または「ヘテロ環」は、３個から７個の環員を有するヘテロシクリル系などの、３個から１２個の環員数を有する単一または縮合したヘテロシクリルにおいて、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、Ｎ（アルキル、例えば低級アルキル）、Ｓ、ＳＯもしくはＳＯ２から選択される１〜４個のヘテロ原子またはヘテロ基を含む飽和しているかまたは部分的に不飽和の環を指す。１個または複数の水素原子は、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキル、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、シクロアルキル、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されていてもよい。ヘテロシクリル基の非限定的な例には、モルホリニル、ピペリジニル、ピロリジニルおよびスクシンイミジルが含まれる。
【００３６】
本明細書で用いる「ヒドロキシ」は−ＯＨを指す。
【００３７】
本明細書で用いる「イミノアミノ」は、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＲｘ２６）Ｒｘ２７（但し、Ｒｘ２６およびＲｘ２７はヒドリド、アルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）を指す。
【００３８】
本明細書で用いる「ホスホンアミノ」は、
【化１】
2011256189.tif 000002
（式中、Ｒｘ１３およびＲｘ１４はアルコキシ、アルキル、アミノ、アリール、アリールオキシ、シクロアルキル、ジ置換アミノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、モノ置換アミノおよびチオから独立に選択される）
を指す。
【００３９】
本明細書で用いる「スルフィニル」は−Ｓ（＝Ｏ）ＯＨを指す。
【００４０】
本明細書で用いる「スルホ」は−ＳＯ３Ｈを指す。
【００４１】
本明細書で用いる「スルホアミノ」は、次式のアミノ基
【化２】
2011256189.tif 000003
（式中、Ｒｘ２４のそれぞれはヒドリド、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｒｘ２５はアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）
を指す。
【００４２】
本明細書で用いる「スルホニル」は、２つのオキソ置換基と、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される第３の置換基で置換された六価のイオウ基を指す。
【００４３】
本明細書で用いる「チオ」は、メチルチオおよびフェニルチオなどの、二価のイオウ原子と結合したヒドリド、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから独立に選択される置換基を含む基を指す。
【００４４】
本明細書で用いる「チオアシル」は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリール基と結合したチオカルボニル基を指す。
【００４５】
本明細書で用いる「チオアシルアミノ」は、チオアシル基と結合したアミノ基を指す。
【００４６】
本明細書で用いる「チオアシルエステル」は、アルコキシ基と結合したチオカルボニル基を指す。
【００４７】
本明細書で用いる「チオウレイド」は、式−Ｎ（Ｒｘ５）−Ｃ（Ｓ）−Ｎ（Ｒｘ６）（Ｒｘ７）（式中、Ｒｘ５およびＲｘのそれぞれはヒドリド、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから独立に選択され、Ｒｘ７はアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）の窒素基を指す。
【００４８】
本明細書で用いる「ウレイド」は、式−Ｎ（Ｒｘ２１）−Ｃ（Ｏ）−ＮＲｘ２２Ｒｘ２３（式中、Ｒｘ２１およびＲｘ２２はヒドリド、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから独立に選択され、Ｒｘ２３はアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）の窒素基を指す。
【００４９】
本発明の化合物は、無機酸または有機酸から誘導される塩または医薬上許容される塩の形態で用いることができる。本発明は、そうしたすべての塩およびそうした塩のすべての結晶形態を含む。「医薬上許容される塩」は、健全な医学的判断の範囲内で、ヒトおよび下等動物の組織と接触して、過度の毒性、炎症およびアレルギー反応を伴わないで使用するのに適しており、かつ妥当な利益／リスクの比と整合している塩を意味する。医薬上許容される塩は当業界でよく知られている。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ等は、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７，６６：１〜１９頁に医薬上許容される塩を記載している。これらの塩はすべて、相当する本発明の化合物から、通常の手段で、例えば化合物を適当な酸または塩基で処理することによって調製することができる。
【００５０】
そうした塩または医薬上許容される塩は、本発明の化合物の最終的な単離および精製の際にその場で調製するか、あるいは、別個に、遊離の塩基官能基を適当な酸と反応させることによって調製することができる。例えば、塩基性付加塩は、カルボン酸含有基を、医薬上許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩などの適切な塩基、あるいはアンモニアまたは有機第１アミン、第２アミンもしくは第３アミンと混合することによって、本発明の化合物の最終的な単離および精製の際にその場で調製することができる。
【００５１】
有機酸の非限定的な例は、脂肪酸、環状脂肪酸、芳香族酸、アリール酸、ヘテロシクリル酸、カルボン酸およびスルホン酸の部類の有機酸から選択され、その例には、これらに限定されないが、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、マレイン酸、エンボン酸（パモン酸）、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、パントテン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルファニル酸、メシル酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、ステアリン酸、アルゲン酸、β−ヒドロキシ酪酸、マロン酸、ガラクト酸およびガラクツロン酸から選択することができる。代表的な有機酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イセチオネート）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびウンデカン酸塩の付加塩が含まれる。医薬上許容される酸付加塩を形成するのに用いることができる酸の例には、塩酸、臭化水素酸、硫酸およびリン酸などの無機酸、ならびにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸およびクエン酸などの有機酸が含まれる。
【００５２】
また、塩基性窒素含有基は、低級アルキルハライド（例えば、メチル、エチル、プロピルおよびブチルのクロリド、ブロミド、およびヨージド）；ジアルキルサルフェート（例えば、ジメチル、ジエチル、ジブチルおよびジアミルサルフェート）；長鎖ハライド（例えば、デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルのクロリド、ブロミド、およびヨージド）；またはアリールアルキルハライド（例えば、ベンジルおよびフェネチルのクロリド、ブロミド、およびヨージド）および他のものなどの薬剤で４級化することもできる。それによって、水溶性もしくは油溶性、または分散性生成物が得られる。
【００５３】
例えば、本発明の化合物の適切な医薬上許容される塩基付加塩には、これらに限定されないが、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛から作製される金属塩、またはＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、リジンおよびプロカインから作製される有機塩が含まれる。医薬上許容される塩基性付加塩には、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアルミニウム塩などのアルカリ金属またはアルカリ土類金属、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、ジエチルアンモニウムおよびエチルアンモニウムを含む非毒性の４級アンモニアおよびアミンカチオンをベースとしたカチオンが含まれる。塩基付加塩の生成に有用な他の代表的な有機アミンには、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジンおよびピペラジンが含まれる。
【００５４】
本発明の化合物は、１つまたは複数の不斉炭素原子を有することができ、したがって、光学活性を示すことができる。本発明の化合物は、鏡像異性体および／またはジアステレオマーの形態、ならびにラセミ化合物またはその非ラセミ化合物の形態で存在することができる。本明細書で開示の化合物は、本発明で、単一の異性体または立体化学異性体の混合物として用いることができる。
【００５５】
ジアステレオマーは、クロマトグラフィー、蒸留、結晶化または昇華などの通常の手段で分離することができる。鏡像異性体は、通常の方法、例えば、光学的に活性な酸または塩基で処理してジアステレオマー塩を生成させ、ラセミ混合物を分割することによって得ることができる。適当な酸の非限定的な例には、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸およびカンファースルホン酸が含まれる。ジアステレオマーの混合物は、結晶化に続く、光学的に活性な塩から光学的に活性な塩基を遊離させることによって分離することができる。鏡像異性体を分離するための代替の方法には、鏡像異性体を最大限分離するように最適に選択されたキラルクロマトグラフィーカラムの使用が含まれる。他の方法は、本発明の化合物を、活性化形態のエナンチオ濃縮した酸またはエナンチオ濃縮したイソシアネートで処理することによる、共有結合ジアステレオマー分子の合成を用いる。合成したジアステレオマーは、クロマトグラフィー、蒸留、結晶化または昇華などの通常の手段で分離し、次いで加水分解して、鏡像異性体的に濃縮した化合物を得ることができる。光学的に活性な化合物は同様に、光学的に活性な出発原料を用いて得ることができる。これらの異性体は遊離酸、遊離塩基、エステルまたは塩の形態であってよい。
【００５６】
本発明の化合物では幾何異性体も存在することができる。本発明は、炭素−炭素の二重結合周りの置換基の配置または炭素環周りの置換基の配置により得られる様々な幾何異性体およびその混合物を包含する。炭素−炭素の二重結合周りの置換基を、「Ｚ」構造または「Ｅ」構造（ここで「Ｚ」および「Ｅ」という用語はＩＵＰＡＣ標準による）であると称する。あるいは、炭素−炭素の二重結合周りの置換基は、「シス」または「トランス」（但し、「シス」は二重結合の同じ側の置換基を表し、「トランス」は二重結合の反対側の置換基を表す）と呼ぶことができる。
【００５７】
炭素環周りの置換基の配置も「シス」または「トランス」と称される。「シス」という用語は環の面の同じ側の置換基を表し、「トランス」という用語は環の面の反対側の置換基を表す。置換基が、環の面の同じ側と反対側の両方に配置されている化合物の混合物を「シス／トランス」と称する。
【００５８】
単離した高純度であるかまたは精製された化合物は、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％のその化合物を含む組成物を指す。一実施形態では、医薬上許容されるその塩または本明細書で開示の化合物のいずれかを含む医薬組成物は、本明細書で述べるものなどの通常の生物学的アッセイで試験して、検出可能な（例えば、統計的に有意の）抗菌活性を示す。
【００５９】
本明細書で用いる「医薬上許容されるプロドラッグ」という用語は、ヒトおよび下等動物の組織と接触して、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、炎症およびアレルギー反応を伴わないで使用するのに適しており、かつ妥当な利益／リスクの比と整合しており、その目的とする使用に効果的である。本発明の化合物のプロドラッグ、ならびに（可能であれば）本発明の化合物の双性イオンの形態を表す。
【００６０】
本明細書で用いる「プロドラッグ」という用語は、例えば血液中における加水分解によって、インビボで迅速に本明細書で述べる式の親化合物に変換される化合物を表す。考察が、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ  およびＶ．Ｓｔｅｌｌａ，Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｖｏｌ．１４  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ、および、Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，ｅｄ．，Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｅｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７に記載されている。その両方を参照により本明細書に組み込む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６１】
本明細書では新規なペプチドおよびペプチドの調製方法を開示する。ペプチドは抗菌剤としての用途を有している。
【００６２】
一実施形態は環外ペプチド鎖および尾部と結合した環状ヘプタペプチドを含む新規なペプチドを開示する。一実施形態では、その新規なペプチドは以下の構造を有する天然由来のペプチドから誘導される。
【００６３】
【化３】
2011256189.tif 000004
【００６４】
これらの天然由来のペプチドはＮ−末端「側鎖」または「尾部」と結合した環外ペプチド鎖を有する。一実施形態では、そうしたペプチドは、ポリミキシンまたはオクタペプチンを含む天然由来のペプチドに関連する。これらのペプチドは、アミノ酸の６、７および１０（ポリミキシンの番号）が変化する上記の一般的構造を有する（Ｒ６はアミノ酸の６位での側鎖を表し、Ｒ７はアミノ酸の７位での側鎖を表し、Ｒ１０はアミノ酸の１０位での側鎖を表す）。一実施形態では、Ｒ６、Ｒ７およびＲ１０はそれぞれ、イソ−プロピル（Ｖａｌが得られる）、ベンジル（Ｐｈｅが得られる）、イソ−ブチル（Ｌｅｕが得られる）、ｓｅｃ−ブチル（Ｉｌｅが得られる）、１−ヒドロキシ−１−エチル（Ｔｈｒが得られる）およびヒドロキシメチル（Ｓｅｒが得られる）から独立に選択することができる。他の実施形態では、Ｒ６およびＲ７はそれぞれ、イソ−プロピル、ベンジル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシ−１−エチルおよびヒドロキシメチルから独立に選択され、Ｒ１０はイソ−プロピル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシ−１−エチルおよびヒドロキシメチルから選択される。環外鎖および尾部は変更形態も提供する。一実施形態では、環外鎖は１〜３個のアミノ酸残基を含む。
【００６５】
一実施形態では、環外鎖はアミノ酸残基の鎖を含む。他の実施形態では、環外鎖は−（Ｙ１）ｘ（Ｙ２）ｙ（Ｙ３）ｚ−（但し、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ、コードされていないアミノ酸残基を含むアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数である）で表される。
【００６６】
一実施形態では、尾部は「Ｔ」（但し、「尾部−環外鎖」部分は式Ｔ（Ｙ１）ｘ（Ｙ２）ｙ（Ｙ３）ｚ−を有する）を表す。一実施形態では、Ｔは、Ｒ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキルおよび水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される。
【００６７】
したがって、一実施形態は、天然由来のペプチドから誘導される新規なペプチドであって、この天然由来のペプチドが式（Ａ）の構造を有するペプチドを提供する。
【００６８】
【化４】
2011256189.tif 000005
（Ａ）
【００６９】
遊離アミノ基または保護アミノ基のいずれかを含む新規なペプチドの調製方法も開示する。一実施形態では、新規なペプチドは、例えば本明細書で説明する天然由来のペプチドと関連する。一実施形態では、新規なペプチドは式（Ｂ）の構造を有する。
【００７０】
【化５】
2011256189.tif 000006
（Ｂ）
【００７１】
一実施形態では、環外鎖は、−（Ｘ１）ｘ（Ｘ２）ｙ（Ｘ３）ｚ−（但し、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれ、本明細書で述べる任意の残基を含むアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数である）で表され、「Ａ」は、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキルおよび水素から選択される尾部を表し、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される。
【００７２】
本明細書で開示する一実施形態は、
（ａ）アミノ基を含む少なくとも１つの側鎖を有するペプチドをアミノ保護基試薬で処理して保護ペプチドを生成する工程であって、
上記ペプチドがアシル基を含む環外ペプチド鎖と結合している環状ヘプタペプチドを含み、上記保護基が少なくとも１個の酸性置換基を含む工程と、
（ｂ）保護ペプチドを脱アシル化剤で処理して保護された脱アシル化ペプチドを生成する工程と
を含む化合物の調製方法である。
【００７３】
一実施形態では、（ａ）において、保護基試薬で処理されるペプチドは、ポリミキシンおよびオクタペプチンなどの式（Ａ）の構造を有する天然由来のペプチドから選択される。代表的なポリミキシンおよびオクタペプチンには、ポリミキシンＡ（ＰＡ）、ポリミキシンＢ（ＰＢ）、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１（ＩＬ）、ポリミキシンＤ、ポリミキシンＥ、ポリミキシンＦ、ポリミキシンＭ（マタシン（ｍａｔｔａｃｉｎ））、ポリミキシンＳ、ポリミキシンＴ、サークリンＡ、ポリミキシンＤ（ＰＤ）、オクタペプチンＡ、オクタペプチンＢ（ＯＢ）、オクタペプチンＣ（ＯＣ）およびオクタペプチンＤが含まれる。ポリミキシンＥは通常コリスチンと称される。文字（例えば、ポリミキシンＡ、ポリミキシンＢ、ポリミキシンＣ等）は一般に、アミノ酸配列の変異体を有するポリミキシンを指す。下付きの数字（例えば、オクタペプチンＡ１、オクタペプチンＡ２、オクタペプチンＡ３等またはポリミキシンＢ１、ポリミキシンＢ２、ポリミキシンＢ３等）は一般に、尾部の変異体を指す。ポリミキシンおよびオクタペプチンは、ポリミキシンＢについて表１に示すように、様々な脂質尾部を有する天然資源から単離することができる。１つの例外は、コリスチン（ポリミキシンＥ）であり、コリスチンＡ（ポリミキシンＥ１）およびコリスチンＢ（ポリミキシンＥ２）では脂質尾部が異なる。
【００７４】
【表１】
2011256189.tif 000007
【００７５】
表２は、本明細書で開示する複数のペプチドのペプチド配列を示す。
【００７６】
【表２】
2011256189.tif 000008
＊Ｄ−異性体として示していない限り、すべてのアミノ酸はＬ−異性体である。Ｄａｂは２，４−ジアミノブタン酸である。
【００７７】
一実施形態では、処理されるペプチドは、ポリミキシンＡ、ポリミキシンＢ（例えば、ポリミキシンＢ１、ポリミキシンＢ２およびポリミキシンＢ３）、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１、ポリミキシンＣ、ポリミキシンＤ、ポリミキシンＥ（コリスチンとも称される）、ポリミキシンＦ、ポリミキシンＭ（マタシンとも称される）、ポリミキシンＰ、ポリミキシンＳ、ポリミキシンＴ（例えば、ポリミキシンＴ１）、コリスチン（例えば、コリスチンＡおよびコリスチンＢ）、サークリンＡ、オクタペプチンＡ（例えば、オクタペプチンＡ１、オクタペプチンＡ２およびオクタペプチンＡ３）オクタペプチンＢ（例えば、オクタペプチンＢ１、オクタペプチンＢ２およびオクタペプチンＢ３）、オクタペプチンＣ（例えば、オクタペプチンＣ１）およびオクタペプチンＤから選択される。ポリミキシンＦも知られており、この場合、アミノ酸組成は５：１：１：１：２  Ｄａｂ：Ｔｈｒ：Ｓｅｒ：Ｉｌｅ：Ｌｅｕである。
【００７８】
一実施形態では、処理されるペプチドは、ポリミキシンＢ、ポリミキシンＡ、ポリミキシンＤ、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１、コリスチン、サークリンＡ、オクタペプチンＢおよびオクタペプチンＣから選択される。
【００７９】
一実施形態では、得られる保護された脱アシル化ペプチドを、さらに修飾して新規な保護ペプチド化合物を生成させることができる。次いで、脱保護して、新規なペプチド化合物を生成することができる。
【００８０】
以下のスキームＩは、ペプチドを脱保護し、脱アシル化する方法の一実施形態を示す。例示のために、その方法をポリミキシンＢ１について示す。しかし、これは、ポリミキシンおよびオクタペプチンなどの共通する式（Ａ）のヘプタペプチド環状コア構造を有するすべてのペプチドに適用できる方法である。
【００８１】
【化６】
2011256189.tif 000009
【００８２】
スキームＩでは、「Ｐ」は少なくとも１個の酸性置換基を含む保護基を表す。スキームＩのペプチド（ポリミキシンＢ、すなわちＰＢ）は、環外鎖に３つのアミノ酸を有する。したがって「ＰＢペプチド−３」と表す。
【００８３】
スキームＩはポリミキシンＢのすべてのアミノ基の保護を表しているが、本発明は１個または複数のアミノ基の保護も包含する。当業者は、スキームＩに示した方法を、本明細書で開示するどのペプチドにも同様に適用できることを容易に理解できよう。
【００８４】
一実施形態では、保護基は、本明細書では供与可能な水素を含む置換基を指す少なくとも１個の「酸性置換基」を含む。酸性置換基の例には、スルホ、サルフェート、スルホネート、カルボキシ、カルボキシレート、ホスホネートおよびホスフェートの酸または塩の形態が含まれる。一実施形態では、保護基は酸性置換基で置換されたアリールまたはヘテロアリールを含む。
【００８５】
一実施形態では、保護基は、アミノ保護基のスルホ、サルフェート、スルホネート、カルボキシ、カルボキシレート、ホスホネートおよびホスフェート誘導体の酸または塩の形態、例えばカルバメートアミノ保護基などから選択される。カルバメートアミノ保護基の例には、これらに限定されないが、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１、３１５〜３４８頁に開示されている保護基が含まれる。その開示を参照により本明細書に組み込む。カルバメートアミノ保護基の非限定的な例には、
９−（２，７−ジブロモ）フルオレニルメチルカルバメート、２，７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０，１０−ジオキソ−１０，１０，１０，１０−テトラヒドロチオキサンチル）］メチルカルバメート（ＤＢＤ−Ｔｍｏｃ）、４−メトキシフェナシルカルバメート（ｐｈｅｎｏｃ）、２−フェニルエチルカルバメート（ｈＺ）、１−メチル−１−（４−ビフェニリル）エチルカルバメート（Ｂｐｏｃ）、１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチルカルバメート（ｔ−ｂｕｍｅｏｃ）、２−（２’−および４’−ピリジル）エチルカルバメート（ｐｙｏｃ）、８−キノリルカルバメート、ベンジルカルバメート（Ｃｂｚ−またはＺ）、ｐ−ニトロベンジルカルバメート、ｐ−ブロモベンジルカルバメート、ｐ−クロロベンジルカルバメート、２，４−ジクロロベンジルカルバメート、４−メチルスルフィニルベンジルカルバメート（Ｍｓｚ）、９−アントリルメチルカルバメート、ジフェニルメチルカルバメート、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチルカルバメート、４−メチルチオフェニルカルバメート（Ｍｔｐｃ）、２−トリフェニルホスホニオイソプロピルカルバメート（Ｐｐｏｃ）、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジルカルバメート、ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジルカルバメート（Ｄｏｂｚ）、５−ベンズイソオキサゾリルメチルカルバメート（Ｂｉｃ）、２−（トリフルオロメチル）−６−クロモニルメチルカルバメート（Ｔｃｒｏｃ）、ｍ−ニトロフェニルカルバメート、３，５−ジメトキシベンジルカルバメート、ｏ−ニトロベンジルカルバメート、３，４−ジメトキシ−６−ニトロベンジルカルバメート、フェニル（ｏ−ニトロフェニル）メチルカルバメート、フェノチアジニル−（１０）−カルボニル誘導体、Ｎ’−ｐ−トルエンスルホニルアミノカルボニル誘導体、ｔ−アミルカルバメート、ｐ−シアノベンジルカルバメート、ｐ−デシルオキシベンジルカルバメート、ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）ベンジルカルバメート、ジ（２−ピリジル）メチルカルバメート、２−フラニルメチルカルバメート、ｐ−（ｐ’−メトキシフェニルアゾ）ベンジルカルバメート、１−メチル−１−（３，５−ジメトキシフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−（ｐ−フェニルアゾフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−フェニルエチルカルバメート、１−メチル−１−（４−ピリジル）エチルカルバメート、フェニルカルバメート、ｐ−（フェニルアゾ）ベンジルカルバメート、２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルカルバメート、４−（トリメチルアンモニウム）ベンジルカルバメート、および２，４，６−トリメチルベンジルカルバメートが含まれる。
【００８６】
別の保護基の例には、酸性置換基またはその塩で置換された９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が含まれる。以下に示すものは、ポリミキシンペプチドおよび他の関連ペプチドについて、酸性置換基で置換された保護基の例である。ここで、２−（スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニルをＨＳＯ３−Ｆｍｏｃと略記し、そのナトリウム塩をＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃと略記している。
【００８７】
【化７】
2011256189.tif 000010
【００８８】
本発明のペプチドの保護にアミノ保護基試薬として適しているＦｍｏｃのカルボン酸誘導体は、参考文献８および９によって調製することができる。その開示を参照により本明細書に組み込む。Ｆｍｏｃの硫酸化誘導体は参考文献２８、２９、３２および３３によって調製することができる。その開示を参照により本明細書に組み込む。
【００８９】
一実施形態では、保護ペプチドは水溶性である。水溶性であることによって、保護ペプチド（例えば、スキームＩにおける脱アシル化前の保護ペプチドＰＢペプチド−３）が、水系で生物学的ベースのデアシラーゼ、例えば酵素と反応できるようになる。一実施形態では、保護ペプチドは、ポリアニオンであり、塩として水に可溶性であり、水溶液または部分的な水溶液中でデアシラーゼ酵素と反応することができる。
【００９０】
他の実施形態では、保護ペプチドは水溶性であり、脱アシル化以外のまたは脱アシル化に加えて酵素媒介の変換を受けることができる。
【００９１】
一実施形態では、「水溶性」は、ペプチドが実質的に完全に水溶性であることを指す。他の実施形態では、「水溶性」は、水系でペプチドを消費する任意の反応が、それまで不溶性であったペプチドの一部を水に溶解させ、それによって反応を完全に進行させることができるように、十分にペプチドが水溶性であることを指す。一実施形態では、保護基は、保護ペプチドに水溶性を付与するのに十分な数および／または種類の酸性置換基を有する。
【００９２】
一実施形態では、保護ペプチドは水溶性であり、プロドラッグとして投与することができる（下記参照）。
【００９３】
新規なペプチド化合物は、ポリミキシンＡ、ポリミキシンＢ（例えば、ポリミキシンＢ１、ポリミキシンＢ２およびポリミキシンＢ３）、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１、ポリミキシンＣ、ポリミキシンＤ、ポリミキシンＥ（コリスチンとも称される）、ポリミキシンＦ、ポリミキシンＭ（マタシンとも称される）、ポリミキシンＰ、ポリミキシンＳ、ポリミキシンＴ（例えば、ポリミキシンＴ１）、サークリンＡ、オクタペプチンＡ（例えば、オクタペプチンＡ１、オクタペプチンＡ２およびオクタペプチンＡ３）、オクタペプチンＢ（例えば、オクタペプチンＢ１、オクタペプチンＢ２およびオクタペプチンＢ３）、オクタペプチンＣ（例えば、オクタペプチンＣ１）およびオクタペプチンＤから調製することができる。
【００９４】
一実施形態では、ペプチドは天然由来のものである。共通した構造（Ａ）のヘプタペプチド環状コアを有するペプチドは、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）（例えば、バチル  スサーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルス  ポリミキサ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｏｌｙｍｙｘａ）、バチルス
コリスチナス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏｌｉｓｔｉｎｕｓ））、アエロハクター  アエロゲネス（Ａｅｒｏｈａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、ペニバチルスコ  ベンシス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｏｂｅｎｓｉｓ）Ｍ、および他の細菌種（参考文献３０〜３１）から単離することができる。例えば、ポリミキシンは、参考文献１４に記載の手順によって、バチルスポリミキサの発酵物から単離することができる。
【００９５】
他の実施形態では、ペプチドは化学的に合成することができる。ペプチドの化学合成は当業者に周知であり、例えば、Ｆｍｏｃ  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｃｈａｎ等、Ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２０００；Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｌｌｏｙｄ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ等、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，１９９７；およびＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（登録商標）（カリフォルニア州Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）のカタログに記載されている。
【００９６】
一実施形態では、脱アシル化剤は酵素的脱アシル化剤である。保護ペプチドの脱アシル化に有用な酵素の一例は、遺伝子菌株群、アクチノプラナセア（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎａｃｅａｅ）の特定の微生物によって生成される。この菌株群の既知の種および変異形のいくつかには、アクチノプラーネス  フィリピネンシス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ  ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｎｓｉｓ）、アクチノプラーネス  アルメニアカス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ  ａｒｍｅｎｉａｃｕｓ）、アクチノプラーネス  ユタヘンシス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ  ｕｔａｈｅｎｓｉｓ）、アクチノプラーネス  ミズーリエンシス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ  ｍｉｓｓｏｕｒｉｅｎｓｉｓ）、スピリロスポラ  アルビダ（Ｓｐｉｒｉｌｌｏｓｐｏｒａ  ａｌｂｉｄａ）、ストレプトスポランジウム  ロゼウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ）、  ストレプトスポランジウム  バルガレ（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、ストレプトスポランジウム  ロゼウム  バール  ホランデンシ（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ  ｖａｒ  ｈｏｌｌａｎｄｅｎｓｉ）、ストレプトスポランジウム  アルバム（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ａｌｂｕｍ）、ストレプトスポランジウム  ビリジアルバム（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｖｉｒｉｄｉａｌｂｕｍ）、アモルフォスポランジウム  オーランチカラー（Ａｍｏｒｐｈｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ａｕｒａｎｔｉｃｏｌｏｒ）、アンプラリエラ  レグラリス（Ａｍｐｕｌｌａｒｉｅｌｌａ  ｒｅｇｕｌａｒｉｓ）、アンプラリエラ  カンパヌラータ（Ａｍｐｕｌｌａｒｉｅｌｌａ  ｃａｍｐａｎｕｌａｔａ）、アンプラリエラ  ロバータ（Ａｍｐｕｌｌａｒｉｅｌｌａ  ｌｏｂａｔａ）、アンプラリエラディジタータ（Ａｍｐｕｌｌａｒｉｅｌｌａ  ｄｉｇｉｔａｔａ）、ピリメリア  テレバーサ（Ｐｉｌｉｍｅｌｉａ  ｔｅｒｅｖａｓａ）、ピリメリア  アヌラータ（Ｐｉｍｅｌｉａ  ａｎｕｌａｔａ）、プラノモノスポラ  パロントスポラ（Ｐｌａｎｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ  ｐａｒｏｎｔｏｓｐｏｒａ）、プラノモノスポラ  ベネズエレンシス（Ｐｌａｎｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ  ｖｅｎｅｚｕｅｌｅｎｓｉｓ）、プラノビスポラ  ロンギスポラ（Ｐｌａｎｏｂｉｓｐｏｒａ  ｌｏｎｇｉｓｐｏｒａ）、  プラノモノスポラ  ロゼア（Ｐｌａｎｏｂｉｓｐｏｒａ  ｒｏｓｅａ）、ダクチロスポランジウム  オーランチアクム（Ｄａｃｔｙｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ａｕｒａｎｔｉａｃｕｍ）およびダクチロスポランジウム  タイランデンデ（Ｄａｃｔｙｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｔｈａｉｌａｎｄｅｎｄｅ）が含まれる。アクチノプラナセア菌株群から得られ、酵素を生成するすべての天然および人工の変異体および突然変異体を、本発明で用いることができる。
【００９７】
酵素的脱アシル化に適した方法は、米国特許第４５２４１３５号、同４５３７７１７号、同４４８２４８７号、米国特許ＲＥ３２３１０、米国特許ＲＥ３２３１１、米国特許第５０３９７８９号および同５０２８５９０号、国際公開ＷＯ０３／０１４１４７、ＷＯ０１／４４２７２、ＷＯ０１／４４２７４およびＷＯ０１／４４２７１に見ることができる。その開示を参照により本明細書に組み込む。
【００９８】
デアシラーゼ酵素は、水溶性の凍結乾燥固体として得ることができる。一実施形態では、デアシラーゼは、アクチノプラーネス  ユタヘンシスを発酵させ、細胞を発酵媒体から分離し、細胞を水で洗浄し、細胞をｐＨ８〜１１で約２０分間塩基性緩衝液で抽出し、その抽出物をｐＨ７〜８にｐＨ調節し、凍結乾燥することによって得る。この方法で得られた酵素の粉末化した形態は、比較的安定しており、使用の際に容易に水に再溶解させることができる。さらなる精製は、ゲル濾過または他のタイプのクロマトグラフィーによって行うことができる。この酵素は、例えば、Ｎ−［（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニル）］５ポリミキシンＢを脱アシル化して、保護ポリミキシンＢデカペプチド（保護脱アシル化ＰＢペプチド−３）を生成することができる。他の実施形態では、アクチノプラーネス  ユタヘンシスからの酵素は、発酵からのホールブロスとして、または洗浄された細胞として用いることができる。
【００９９】
アクチノプラーネス  ユタヘンシスからの酵素は、水可溶化調製物としても用いることができる。水可溶化酵素調製物は、洗浄した細胞を比較的強い塩基で抽出し、続いて透明な抽出物のｐＨをｐＨ７〜８に調節することによって得ることができる。この水可溶化調製物は凍結乾燥して固体にすることができる。
【０１００】
保護ペプチドの脱アシル化によって、付加試薬と反応させて修飾できる遊離アミノ末端が提供される（スキームＩＩａ）。
【０１０１】
【化８】
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【０１０２】
スキームＩＩａは脱アシル化ＰＢペプチド−３の直接的修飾を示す。付加剤を用いた脱アシル化ＰＢペプチド−３の処理によって、保護修飾ＰＢペプチド−３化合物が生成する。本明細書で定義する、アミンの付加試薬との反応は当業者に周知である。例えば、脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３をイソシアネートで処理して、Ｒａ−ＮＨ−がウレイドである化合物が得られる。同様に、脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３を、活性化エステル、ラクトンまたは酸クロリドで処理して、Ｒａ−ＮＨ−がアシルアミノである化合物が得られる。脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３を塩化スルホニルまたは活性化スルホンアミドで処理して、Ｒａ−ＮＨ−がスルホンアミノである化合物が得られる。脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３を活性化複素環で処理して、Ｒａ−ＮＨ−がヘテロシクリルアミノである化合物が得られる。脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３を活性化ヘテロアリールで処理して、Ｒａ−ＮＨ−がヘテロアリールアミノである化合物が得られる。脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３をカルボネート、クロロホルメートまたはシアノホルメートで処理して、Ｒａ−ＮＨ−がカルバメートである化合物が得られる。脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３をチオアシルエステルで処理して、Ｒａ−ＮＨ−がチオアシルアミノである化合物が得られる。脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３を塩化ホスホリルまたはホスホラミデートで処理して、Ｒａ−ＮＨ−がホスホンアミノである化合物が得られる。脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３をイミデートまたはケテンアミン（Ｒ’’２Ｃ＝Ｃ＝ＮＨ）で処理して、Ｒａ−ＮＨ−がイミノアミノである化合物が得られる。脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３をイソシアネートで処理して、Ｒａ−ＮＨ−がウレイドである化合物が得られる。脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３をチオイソシアネートで処理して、Ｒａ−ＮＨ−がチオウレイドである化合物が得られる。脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３を還元条件下でアルデヒドまたはケトンで処理して、Ｒａ−ＮＨ−がモノ置換アミノ基またはジ置換アミノ基である化合物が得られる。還元剤の非限定的な例には、Ｈ２／Ｎｉ（触媒）、Ｚｎ／ＨＣｌ、ＮａＢＨ３ＣＮ、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、ＮａＢＨ４、ＢＨ３・ピリジンおよびギ酸が含まれる。脱アシル化された保護ＰＢペプチド−３を、
【化９】
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などのグアニジニル化剤で処理して、Ｒａ−ＮＨ−がグアニジノである化合物が得られる。
【０１０３】
当業者は、付加剤が、保護修飾ＰＢペプチドがその条件で生成される反応条件とは適合しない置換基を含む場合、反応で使用する前に前記置換基を保護することができることを理解されよう。適切な保護基およびその作製方法は、Ｇｒｅｅｎｅ（上記参照）に見ることができる。
【０１０４】
他の実施形態では、１つまたは複数のＮ−末端アミノ酸を、脱アシル化された保護ペプチドの環外鎖から除去することができる。例えば、一連のＮ−末端アミノ酸の加水分解、例えばエドマン分解、改変エドマン分解または酵素反応（例えば、アミノペプチダーゼにより触媒作用される）を用いて、他のペプチドの保護形態を得ることができ、「ペプチド−０」「ペプチド−１」または「ペプチド−２」（環外鎖に、０個、１個または２個のアミノ酸をそれぞれ含む）と表記する。
【０１０５】
エドマン分解は、当業者に知られている、十分確立された反応である（例えば、Ｐ．エドマン、１９５０，Ａｃｔａ  Ｃｈｅｍ．Ｓｃａｎ．４：２８３〜９３頁およびＰ．エドマン、１９５６，Ａｃｔａ  Ｃｈｅｍ．Ｓｃａｎ．１０：７６１〜７６８頁参照）。Ｎ−末端アミノ酸加水分解を実行するための方法の例は、Ｖｏｅｔ等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９５，１０７〜１０９頁，Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ等、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３，３１〜３５頁およびＬｏｕｄｏｎ等、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，カリフォルニア州Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，１９８８，１１５４〜１１６１頁に記載されている。その開示を参照により本明細書に組み込む。
【０１０６】
エドマン分解は様々な条件下で実施することができる。エドマン分解の第１の工程では、イソチオシアネートを、これらに限定されないが、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、ジオキサンまたはエタノールなどの溶媒中での中性から弱い塩基性（ｐＨ＜９．５）の条件下で、末端アミンと反応させてペプチドのチオ尿素誘導体を生成する。種々のイソチオシアネートを用いることができる（Ｋ．Ｋ．Ｈａｎ等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ．１９７７，５９：５５７〜５７６頁を参照されたい。）。
【０１０７】
酸または塩基で処理すると、チオ尿素ペプチドは環化反応を受け、チオヒダントインおよびアミノ酸残基が１つ少ないペプチドが生成する。続く環化反応と開裂反応は様々な条件下行うことができる。一般に、無水トリフルオロ酢酸、ヘプタフルオロ酪酸（例えば、Ｗ．Ｆ．Ｂｒａｎｄｔ等、１９７６，Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．３５７：１５０５〜１５０８頁参照）または濃塩酸（例えば、Ｇ．Ｅ．Ｔａｒｒ，１９７７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．４７：３３５〜３３７頁参照）が用いられる。トリエチルアミンまたはＮ，Ｎ−ジメチルアリルアミン／酢酸（ｐＨ約９）などの弱い塩基性条件も用いることができる（Ｇ．Ｃ．Ｂａｒｒｅｔｔ等、１９８５，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２６（３６）：４３７５〜４３７８頁参照）。この反応の総説は、Ｋ．Ｋ．Ｈａｎ，１９８５，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７（４）：４２９〜４４５頁）を参照されたい。一実施形態では、環化反応と開裂反応は塩基性条件下で実行される。
【０１０８】
他の実施形態では、スキームＩＩａは保護脱アシル化ＰＢペプチド−３の修飾を直接示す。例えば、付加試薬は、Ｒ’−（Ｃ＝Ｏ）−ＬＧおよびＲ’−ＳＯ２−ＬＧ（ＬＧは脱離基である。）から選択されるアシルアミノ試薬である。いくつかの実施形態では、付加試薬は、活性化アミノ酸、あるいはアミノ酸およびペプチドカップリング試薬、例えば、ＰｙＢＯＰ（登録商標）（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＨＢｔＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＨＢｔＵ／ＨＯＢｔ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート／Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）またはＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）であってよい。一実施形態では、Ｒ’およびＲ’’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される。Ｒ’−（Ｃ＝Ｏ）−ＬＧの非限定的な例には、アシルクロリド、アシルシアニドなどのアシルハライド、エステル（例えば、スクシンイミジルエステル）、アシルアジド、ラクトンおよび無水物が含まれる。Ｒ’−ＳＯ２−ＬＧの非限定的な例には、塩化スルホニルが含まれる。Ｒａがイミン、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−である場合、イミノアミノ基を含む修飾ＰＢペプチド−３は、脱アシル化ＰＢペプチド−３をケテンアミンＲ’’２Ｃ＝Ｃ＝ＮＨ（Ｒ’’はＲ’および水素から選択される）と反応させて生成させることができる。ＲａがアミドＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−またはチオアミドＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−である場合、尿素またはチオ尿素を含む修飾ＰＢペプチド３は、脱アシル化ＰＢペプチド３をイソシアネートまたはイソチオシアネートとそれぞれ反応させて生成させることができる。Ｒａが置換アルキル、Ｒ’−アルキル−である場合、置換アルキルを含む修飾ＰＢペプチド３は、脱アシル化ＰＢペプチド３をＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ’’および還元剤と反応させて生成させることができる。還元剤の非限定的な例には、Ｈ２／Ｎｉ（触媒）、Ｚｎ／ＨＣｌ、ＮａＢＨ３ＣＮ、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、ＮａＢＨ４、ＢＨ３・ピリジンおよびギ酸が含まれる。
【０１０９】
スキームＩＩｂ、ＩＩＩおよびＩＶは、どのようにしてポリミキシンＢの「ペプチド−０」型、「ペプチド−１」型または「ペプチド−２」型を調製することができるかを概略的に示す（下記参照）。スキームＩＩｂは、アミノ酸を除去して、保護脱アシル化ＰＢペプチド−３を保護脱アシル化ＰＢペプチド−２に転換することを示す。次いで、保護脱アシル化ＰＢペプチド−２を、上記Ｒａについて述べた手順で化学的に修飾してＲｂ置換基を付与することができる。
【０１１０】
【化１０】
2011256189.tif 000013
【０１１１】
スキームＩＩＩは同様に保護脱アシル化ＰＢペプチド−２の保護脱アシル化ＰＢペプチド−１への転換を示す。次いで、これを、上記のようにして付加試薬で化学的に修飾してＲｃ置換基を付与することができる。
【０１１２】
【化１１】
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【０１１３】
あるいは、脱アシル化された保護ＰＢペプチド−１を、別のＮ−末端アミノ酸加水分解反応（スキームＩＶ）にかけて、脱アシル化された保護ＰＢペプチド−０を生成することができる。これは環外ペプチド鎖を含まない。
【０１１４】
【化１２】
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【０１１５】
上記のスキームでは、ポリミキシンＢ誘導体を用いた反応を示しているが、当業者は、これらの方法が、本明細書で開示するペプチドのいずれにも同様に適用できることを理解されよう。
【０１１６】
当業者は、加水分解／化学的修飾の工程が厳密に別の反応で起こる必要がないことを理解されよう。例えば、加水分解と化学的修飾工程はほぼ同時に行ってよく、また、ワンポット反応混合液中で実施してもよい。
【０１１７】
保護脱アシル化ＰＢペプチド−２などの保護ペプチドのそれぞれは、抗菌活性を有する新規なペプチドを作製するのに用いることができる。例えば、尾部、例えばアルキルまたは芳香族酸を生成する試薬を活性化種に転換し、次いで保護ペプチドとカップリングし、続いて脱保護させて、表３の化合物１、２、６、７、１１および１２などの新規なペプチドを得ることができる。保護ペプチドは、アルキルまたは芳香族イソシアネートもしくはイソチオシアネートで直接処理して対応する尿素およびチオ尿素を生成し、生成物を脱保護して、化合物３５で示したような、別の新たなシリーズの新規なペプチドを得ることもできる。尿素は、適切なアミンのＮ−カルボニルオキシスクシンイミジル誘導体で処理して調製することもできる。後者の誘導体は、アミンとジスクシンイミジルカルボネートの反応により容易に調製される。
【０１１８】
一実施形態は、
（ａ）アミノ基を含む少なくとも１つの側鎖を有するペプチドをアミノ保護基試薬で処理して保護ペプチドを生成する工程であって、
そのペプチドがアシル基を含む環外ペプチド鎖と結合している環状ヘプタペプチドを含み、その保護基が少なくとも１個の酸性置換基を含む工程と、（ｂ）保護ペプチドを脱アシル化剤で処理して、保護された脱アシル化ペプチドを生成する工程
を含む化合物の調製方法を提供する。
【０１１９】
一実施形態では、工程（ａ）のペプチドは式（Ａ）
【化１３】
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（Ａ）
（式中、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ＴはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｒ６、Ｒ７およびＲ１０はそれぞれ、イソプロピル、ベンジル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシ−１−エチルおよびヒドロキシメチルから独立に選択される）の構造を有する。他の実施形態では、Ｒ６およびＲ７はそれぞれ、イソプロピル、ベンジル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシ−１−エチルおよびヒドロキシメチルから独立に選択され、Ｒ１０はイソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシ−１−エチルおよびヒドロキシメチルから選択される。他の実施形態では、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれ、２，４−ジアミノブタン酸残基、スレオニン残基およびセリン残基から独立に選択される。他の実施形態では、Ｔは６−メチルオクタノイル、６−メチルヘプタノイル、オクタノイル、ヘプタノイル、ノナノイルおよび３−ヒドロキシ−６−メチルオクタノイルから選択される。
【０１２０】
他の実施形態では、上記工程（ａ）のペプチドは、ポリミキシンＡ、ポリミキシンＢ、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ、ポリミキシンＣ、ポリミキシンＤ、コリスチン、ポリミキシンＦ、ポリミキシンＭ、ポリミキシンＰ、ポリミキシンＳ、ポリミキシンＴ、サークリンＡ、オクタペプチンＡ、オクタペプチンＢ、オクタペプチンＣおよびオクタペプチンＤから選択される。他の実施形態では、上記工程（ａ）のペプチドは、ポリミキシンＢ、ポリミキシンＡ、ポリミキシンＤ、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ、コリスチン、サークリンＡ、オクタペプチンＢおよびオクタペプチンＣから選択される。他の実施形態では、上記工程（ａ）のペプチドは、ポリミキシンＡ、ポリミキシンＤ、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ、コリスチン、サークリンＡ、オクタペプチンＢおよびオクタペプチンＣから選択される。他の実施形態では、上記工程（ａ）のペプチドはポリミキシンＢである。
【０１２１】
一実施形態では、少なくとも１個の酸性置換基は、カルボキシ、カルボキシレート、スルホ、サルフェート、ホスホネートおよびその塩から選択される。他の実施形態は、少なくとも１個の酸性置換基で置換されたアリールまたはヘテロアリールを含む保護基を提供する。他の実施形態では、保護基は２−スルホ−９−フルオレニルメトキシカルボニルなどの９−フルオレニルメトキシカルボニルのスルホン酸である。
【０１２２】
一実施形態では、脱アシル化剤は酵素である。他の実施形態では、酵素の供給源はアクチノプラーネス  ユタヘンシスである。
【０１２３】
一実施形態では、化合物を調製する方法は、以下の式
【化１４】
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（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、Ｐは少なくとも１個の酸性置換基を含む保護基である）を有する保護脱アシル化ペプチド化合物を生成する工程（ｃ）をさらに含む。
【０１２４】
他の実施形態では、上記生成工程は保護ペプチドを式Ａ−ＬＧ（ＬＧは脱離基である）を有する試薬で処理することを含む。他の実施形態では、上記生成工程は、保護ペプチドをイソシアネート、チオイソシアネート、ラクトン、活性化複素環、活性化ヘテロアリール、イミデート、ケテンアミン、アルデヒドおよび還元剤、ならびにケトンおよび還元剤から選択される試薬で処理することを含む。他の実施形態では、上記生成工程は、保護ペプチドをアシルハライド、アシルシアニド、エステル、ラクトンおよび無水物から選択されるアシル化試薬で処理することを含む。他の実施形態では、上記生成工程は、保護ペプチドを塩化スルホニルおよび活性化スルホンアミドから選択されるスルホン化試薬で処理することを含む。
【０１２５】
一実施形態では、上記生成工程は、ｘが０であり、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であるように、保護された脱アシル化ペプチドをＮ−末端アミノ酸加水分解反応にかけることを含む。他の実施形態では、上記生成工程は、ｘおよびｙのそれぞれが独立に０であり、ｚが１であるように、保護された脱アシル化ペプチドを第２のＮ−末端アミノ酸加水分解反応にかけることを含む。他の実施形態は、ｘ、ｙおよびｚのそれぞれが０であるように、保護された脱アシル化ペプチドを第３のＮ−末端アミノ酸加水分解反応にかけることを含む。
【０１２６】
一実施形態は、
（ａ）アミノ基を含む少なくとも１つの側鎖を有するペプチドをアミノ保護基試薬で処理して保護ペプチドを生成する工程であって、
そのペプチドがアシル基を含む環外ペプチド鎖と結合している環状ヘプタペプチドを含み、その保護ペプチドが水溶性である工程と、
（ｂ）保護ペプチドを脱アシル化剤で処理して、保護された脱アシル化ペプチドを生成する工程と
を含む化合物の調製方法を開示する。
【０１２７】
一実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）
【化１５】
2011256189.tif 000018
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、Ｐは少なくとも１個の酸性置換基を含む保護基である）から選択される構造を有する新規な保護ペプチドを提供する。他の実施形態では、Ｐは２−スルホ−９−フルオレニルメトキシカルボニル基などの少なくとも１個の酸性置換基で置換された９−フルオレニルメトキシカルボニル基である。他の実施形態は、ｘおよびｙがそれぞれ独立に０であり、ｚが１であり、Ｘ３が
【化１６】
2011256189.tif 000019
である化合物を開示する。
【０１２８】
他の実施形態は、ｘが０であり、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ２−Ｘ３が
【化１７】
2011256189.tif 000020
である化合物を含む。
【０１２９】
他の実施形態は、ｘ、ｙおよびｚがそれぞれ独立に１であり、Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３が
【化１８】
2011256189.tif 000021
である化合物を提供する。
【０１３０】
他の実施形態では、ｘ、ｙおよびｚのそれぞれは独立に０であり、Ａは水素である。他の実施形態では、化合物はプロドラッグである。
【０１３１】
一実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）
【化１９】
2011256189.tif 000022
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択されｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、Ｐは保護基である）から選択される構造を有し、かつ水溶性である化合物を開示する。
【０１３２】
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３についてのアミノ酸残基の非限定的な例には、２０個のコードされたアミノ酸ならびにその誘導体、他のα−アミノ酸、β−アミノ酸、γ−アミノ酸、δ−アミノ酸およびω−アミノ酸から誘導されるものが含まれる。Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、任意のキラル原子においてＲキラリティーまたはＳキラリティーのいずれかを有することができる。一実施形態では、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はアラニン、β−アラニン、α−アミノアジピン酸、α−アミノブタン酸、γ−アミノブタン酸、ε−アミノカプロン酸、１−アミノシクロペンタンカルボン酸、ε−アミノヘキサン酸、２−アミノヘプタン二酸、７−アミノヘプタン酸、α−アミノイソ酪酸、アミノメチルピロールカルボン酸、８−アミノ−３，６−ジオキサ−オクタン酸、アミノピペリジンカルボン酸、３−アミノ−プロピオン酸、アミノセリン、アミノテトラヒドロフラン−４−カルボン酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、アゼチジンカルボン酸、ベンゾチアゾリルアラニン、ブチルグリシン、カルニチン、４−クロロフェニルアラニン、シトルリン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルスタチン、システイン、ジアミノブタン酸、ジアミノプロピオン酸、ジヒドロキシフェニルアラニン、ジメチルチアゾリジンカルボン酸、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、ホモセリン、ヒドロキシプロリン、イソロイシン、イソニペコチン酸、ロイシン、リジン、メタノプロリン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、ｐ−アミノ安息香酸、ペニシラミン、フェニルアラニン、フェニルグリシン、ピペリジニルアラニン、ピペリジニルグリシン、プロリン、ピロリジニルアラニン、サルコシン、セレノシステイン、セリン、スタチン、テトラヒドロピラングリシン、チエニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、アロ−イソロイシン、アロ−スレオニン、２，６−ジアミノ−４−ヘキサン酸、２，６−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、ジカルボキシジン、ホモアルギニン、ホモシトルリン、ホモシステイン、ホモシスチン、ホモフェニルアラニン、ホモプロリンおよび４−ヒドラジノ安息香酸から選択される。
【０１３３】
環状ヘプタペプチドのＸ１およびＸ２、Ｘ２およびＸ３、ならびにＸ３およびＮ−末端残基はアミド結合で結合していてよい。例えば、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３がα−アミノ酸である実施形態では、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３（それぞれ側鎖Ｒ１、Ｒ２およびＲ３を有する）は以下に示すように結合していてよい。
【化２０】
2011256189.tif 000023
【０１３４】
いくつかの実施形態では、Ｘ３がセリンである以下の実施形態に示すように、Ｘ１およびＸ２ならびに／またはＸ２およびＸ３はエステル結合で結合していてよい。
【化２１】
2011256189.tif 000024
【０１３５】
Ｘ１またはＸ２が側鎖アミノ基を有する実施形態では、Ｘ２がオルニチンである以下の実施形態に示すように、Ｘ１およびＸ２ならびに／またはＸ２およびＸ３は側鎖アミドを介して結合していてよい。
【化２２】
2011256189.tif 000025
【０１３６】
一実施形態では、新規なペプチドの尾部は「ＡＢ」と表され、ここで、「尾部−環外鎖」部分は式ＡＢ（Ｘ１）ｘ（Ｘ２）ｙ（Ｘ３）ｚ−を有する。一実施形態では、ＡＢはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−アルキルおよび水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される。
【０１３７】
一実施形態では、新規な化合物は、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１に記載の方法で、保護ペプチドから保護基を除去、すなわち脱保護することによって生成させることができる。その開示を参照により本明細書に組み込む。
【０１３８】
アミノ保護基の除去は、Ｇｒｅｅｎｅ（上記参照）に記載の手順によって実施することができる。当業者は理解されるように、この方法の第１の工程で用いるアミノ保護基の選択は、前記アミノ保護基を除去するのに用いる試薬および手順に影響を及ぼすことになる。
【０１３９】
化学的修飾のための試薬が１つまたは複数の保護基を含む場合、これらの保護基も除去しなければならない。化学的修飾剤の置換基に用いる保護基の選択は、前記保護基を除去するのに用いる試薬および手順に影響を及ぼすことになる。化学的修飾剤の置換基に用いる保護基と保護ペプチドに用いる保護基とが適合している場合、保護基は単一の工程で除去することができる。しかし、その保護基同士が適合していない場合、保護基のすべてを除去するのに複数の工程が必要となる。
【０１４０】
一実施形態では、脱保護ペプチドはゲル濾過、クロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣで精製する。
【０１４１】
実施形態は式（１）：
【化２３】
2011256189.tif 000026
（１）
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
但し、
１）Ａはアミノ酸残基を１つも含まず、
２）Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ｘおよびｙのそれぞれが０および１から独立に選択され、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は少なくとも９個の炭素原子を有する非置換アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ならびに、
少なくとも１個の水素がアシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されており、
但し、上記置換アルキルは、アルキル−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−、フェニル−ＣＨ２−、アダマンチル−ＣＨ２−、置換アリールオキシ−ＣＨ２−およびＣＨ３−ＣＨＱ−ＣＨ２−ＣＨ２−（式中、Ｑは構造
【化２４】
2011256189.tif 000027
Ｑ
である。）からは選択されず、
３）ｘ、ｙおよびｚがそれぞれ１であり、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がアリールである場合、そのアリールは３個のヒドロキシ置換基を有する６員環ではなく、
４）ｘ、ｙおよびｚのそれぞれが独立に０であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’はＣ８〜２０−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）の化合物を含む。
【０１４２】
他の実施形態では、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ｘおよびｙが０および１から独立に選択され、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’はＣ９〜２０非置換アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ならびに、少なくとも１個の水素がアシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、置換アリール、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されている置換アルキルから選択される。
【０１４３】
一実施形態は式（２）
【化２５】
2011256189.tif 000028
（２）
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
但し、
１）Ａはアミノ酸残基を１つも含まず、
２）ｘ、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は分岐Ｃ８−アルキルではない）の化合物を提供する。
【０１４４】
一実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がフェニルである化合物を開示する。他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ９−アルキルである化合物を提供する。他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、ＲがＮ−（Ｃ１〜１０−アルキル）−４−アミノフェニルおよびベンゾイルオキシ基から選択される基で置換されたアルキルである化合物を提供する。他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ８−アルキル、３−インドリル基で置換されたＣ２−アルキル、シクロヘキシル、非置換フェニル、ベンジル、４’−ビフェニルならびに４−Ｃ１０−アルキル、４’−フェニルオキシおよび４−クロロから選択される基で置換されたフェニルから選択される化合物を含む。
【０１４５】
他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−であり、Ｒ’がフェニルである化合物を提供する。他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がフェニル、４−ピリジニルおよび２−ナフトキシ基で置換されたアルキルから選択される化合物を開示する。他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＳＯ２−であり、Ｒ’が４−メチルフェニルである化合物を提供する。他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、ｘが０であり、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ８−アルキルである化合物を含む。
【０１４６】
他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、ｘが０であり、ｙおよびｚがそれぞれ１であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−であり、Ｒ’がフェニルである化合物を提供する。他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、ｘおよびｙのそれぞれが独立に０であり、ｚが１であり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ９−アルキルである化合物を含む。他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、Ｘ１がグリシンであり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＳＯ２−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ１０−アルキルである化合物を開示する。他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、Ｘ１がリジンであり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ９−アルキルである化合物を提供する。他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）、（１）および（２）から選択される化合物であって、Ｘ１がフェニルアラニンであり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ９−アルキルである化合物を含む。
【０１４７】
一実施形態は、式（３）
【化２６】
2011256189.tif 000029
（３）
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
但し、
１）Ａはアミノ酸残基を１つも含まず、
２）ｘが０または１から選択され、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１がアミノ酸残基であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は非分岐の非置換Ｃ１〜４−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、但し、ａ）そのアルケニルはフラニル−ＣＨ＝ＣＨ−ではなく、ｂ）そのアリールはナフチルおよび４−ニトロフェニルからは選択されず、ｃ）そのヘテロアリールは２−チオフェニルではなく、
３）ｘが０または１から選択され、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１がアミノ酸残基であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＳＯ２−である場合、Ｒ’はＣ１〜７−アルキル、Ｃ９〜２０−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）の化合物を提供する。
【０１４８】
他の実施形態は、式（３）の化合物であって、ｘが０または１から選択され、ｙおよびｚがそれぞれ１であり、Ｘ１がアミノ酸残基であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は非分岐の非置換Ｃ１〜４アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルから選択される化合物を含む。他の実施形態は、式（３）の化合物であって、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がｎ−Ｃ８−アルキルである化合物を提供する。他の実施形態は、式（３）の化合物であって、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＳＯ２−であり、Ｒ’が４−メチルフェニルである化合物を開示する。
【０１４９】
一実施形態は、式（４）
【化２７】
2011256189.tif 000030
（４）
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
但し、ｘ、ｙおよびｚがそれぞれ１であり、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は分岐Ｃ８〜９−アルキルではない）の化合物を提供する。他の実施形態では、Ａはアミノ酸残基を１つも含まない。
【０１５０】
一実施形態は式（５）
【化２８】
2011256189.tif 000031
（５）
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
但し、ｘ、ｙおよびｚがそれぞれ１であり、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は分岐Ｃ７〜８−アルキルではない）の化合物を含む。他の実施形態では、Ａはアミノ酸残基を１つも含まない。
【０１５１】
一実施形態は式（６）
【化２９】
2011256189.tif 000032
（６）
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
但し、ｘおよびｙのそれぞれが独立に０であり、ｚが１であり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は置換アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、但し、その置換アルキルは、ａ）オキサゾリジノンで置換されていないか、または、ｂ）式、アルキル−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−からなるものではない）の化合物を提供する。他の実施形態では、Ａはアミノ酸残基を１つも含まない。
【０１５２】
一実施形態は式（６）
【化３０】
2011256189.tif 000033
（６）
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
但し、ｘおよびｙのそれぞれが独立に０であり、ｚが１であり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は置換アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、但し、その置換アルキルは、ａ）オキサゾリジノンで置換されていないか、または、ｂ）式アルキル−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−ではない）の化合物を開示する。他の実施形態では、Ａはアミノ酸残基を１つも含まない。他の実施形態では、ｘおよびｙのそれぞれが独立に０であり、ｚが１であり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は置換Ｃ１〜７−アルキル、置換Ｃ１２〜２０−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される。
【０１５３】
一実施形態は式（７）
【化３１】
2011256189.tif 000034
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚのそれぞれは０および１から独立に選択される整数であり、
但し、ｘおよびｙのそれぞれが独立に０であり、ｚが１であり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’はヒドロキシル置換基を有する分岐Ｃ９〜１１−アルキルではない）の化合物を提供する。他の実施形態では、Ａはアミノ酸残基を１つも含まない。
【０１５４】
一実施形態は式（１）
【化３２】
2011256189.tif 000035
（１）
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
但し、
１）Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ｘおよびｙのそれぞれが０および１から独立に選択され、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は少なくとも９個の炭素原子を有する非置換アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ならびに
少なくとも１個の水素がアシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、カルボキシアミノ、シアノ、ジ置換アミノ、ホルミル、グアニジノ、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、イミノアミノ、モノ置換アミノ、ニトロ、オキソ、ホスホンアミノ、スルフィニル、スルホンアミノ、スルホニル、チオ、チオアシルアミノ、チオウレイドおよびウレイドから選択される置換基で置換されている置換アルキルから選択され、
但し、その置換アルキルはアルキル−ＣＨＯＨ−ＣＨ２−、フェニル−ＣＨ２−、アダマンチル−ＣＨ２−、置換アリールオキシ−ＣＨ２−およびＣＨ３−ＣＨＱ−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｑは構造
【化３３】
2011256189.tif 000036
Ｑ
である）
からは選択されず、
２）ｘ、ｙおよびｚがそれぞれ１であり、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がアリールである場合、そのアリールは３個のヒドロキシ置換基を有する６員環ではなく、
３）ｘ、ｙおよびｚのそれぞれが独立に０である場合、ＡはＣ８〜２０−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）の化合物を開示する。
【０１５５】
他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）および（１）から選択される化合物であって、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＮα−（ｎ−Ｃ９−アルカノイル）リジンである化合物を提供する。
【０１５６】
一実施形態は式（２）
【化３４】
2011256189.tif 000037
（２）
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
但し、ｘ、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は分岐Ｃ８−アルキルではない）の化合物を開示する。
【０１５７】
一実施形態は式（３）
【化３５】
2011256189.tif 000038
（３）
（式中、ＡはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ’−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−アルキル−、Ｒ’−および水素から選択され、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
但し、
１）ｘが０または１から選択され、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１がアミノ酸残基であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−である場合、Ｒ’はＮα−アルカノイルフェニルアラニン、Ｎα−アルケノイルフェニルアラニン、Ｎα−アリールカルボニルフェニルアラニン、Ｎα−ヘテロアリールカルボニルフェニルアラニンから選択され、
２）ｘが０または１から選択され、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１がアミノ酸残基であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−である場合、Ｒ’は非分岐の非置換Ｃ１〜４−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、但し、ａ）そのアルケニルはフラニル−ＣＨ＝ＣＨ−ではなく、ｂ）そのアリールはナフチルおよび４−ニトロフェニルからは選択されず、ｃ）そのヘテロアリールは２−チオフェニルではなく、
３）ｘが０または１から選択され、ｙおよびｚのそれぞれが独立に１であり、Ｘ１がアミノ酸残基であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−ＳＯ２−である場合、Ｒ’はＣ１〜７−アルキル、Ｃ９〜２０−アルキル、シクロアルキル、アルケニル、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択される）の化合物を開示する。
【０１５８】
他の実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）および（１）〜（３）から選択される化合物であって、Ｘ１が２，４−ジアミノブタン酸であり、Ｘ２がスレオニンであり、Ｘ３が２，４−ジアミノブタン酸であり、ＡがＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ’がＮα−（ｎ−Ｃ９−アルカノイル）フェニルアラニンである化合物を含む。
【０１５９】
一実施形態は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）および（１）〜（７）から選択される化合物および医薬上許容される担体を含む医薬組成物を治療有効量で投与することによって対象の感染症を治療する方法を含む。
【０１６０】
抗菌活性
表４に、いくつかの新規な化合物抗菌活性を、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対するその最小阻害濃度（ＭＩＣ）として示す。ＭＩＣは、表４に開示した条件、ならびにＪａｒｏｌｍｅｎ，Ｈ．等、「Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｎｏｃｙｃｌｉｎｅ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｒ−Ｆａｃｔｏｒ  Ｃａｒｒｙｉｎｇ  Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ」  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｖｏｌ．１，Ｎｏ．４、３２１〜３２６頁、１９７０（その開示を参照により本明細書に組み込む）に開示されている条件によって測定することができる。
【０１６１】
プロドラッグ
一実施形態では、開示したペプチドのプロドラッグを提供する。式（Ｂ）のヘプタペプチド構造を有し、ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃおよび／または少なくとも１個の酸性基を含む他のアミノ保護基で保護されたペプチドが抗菌性プロドラッグである。動物、例えばヒトを含む哺乳動物に導入された後、ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃ基は開裂し、生物学的に活性なペプチドを遊離する。生物学的に活性なペプチドを保護プロドラッグとして投与すると、抗菌性化合物に徐放機序がもたらされる。プロドラッグについては参考文献３２〜３３に論じられている。
【０１６２】
医薬組成物
本明細書で開示の化合物もしくはその塩を含む医薬組成物または処方剤も開示する。
【０１６３】
医薬組成物は、細菌性感染症などの疾患の治療的処置または予防的処置のために、経口、静脈内、筋肉内、皮下または非経口で投与するために処方することができる。
【０１６４】
本明細書で開示する薬剤調製物は、標準的手順によって調製することができ、感染症を軽減、予防または排除するように選択された投薬量で投与することができる（例えば、様々な抗菌剤を、ヒトの治療のために投与する方法の一般的記述をしているＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（その内容を参照により本明細書に組み込む）を参照されたい）。
【０１６５】
医薬組成物は、本明細書で開示の化合物の１つまたは複数を、１種または複数の非毒性の医薬上許容される担体および／または希釈剤および／または補助剤および／または賦形剤と一緒に含むことができる。本明細書で用いる「医薬上許容される担体」という用語は、薬剤としての投与に適合している、溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌および抗真菌薬、等張剤ならびに吸収遅延剤等のいずれをも指し、またそのすべてを指す。薬剤として活性な物質のためのそうした媒体や薬剤の使用は当業界で周知である。担体および賦形剤の非限定的な例には、とうもろこしデンプンまたはゼラチン、乳糖、スクロース、結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、第２リン酸カルシウム、塩化ナトリウムおよびアルギン酸が含まれる。組成物は、クロスカルメロースナトリウム、結晶性セルロース、とうもろこしデンプン、ナトリウムデンプングリコレートおよびアルギン酸を含むことができる。
【０１６６】
含めることができる錠剤結合剤は、アカシア、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン（Ｐｏｖｉｄｏｎｅ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクロース、デンプンおよびエチルセルロースである。
【０１６７】
使用できる滑剤には、ステアリン酸マグネシウムまたは他のステアリン酸金属塩、ステアリン酸、シリコーン溶液、タルク、ワックス、オイルおよびコロイダルシリカが含まれる。
【０１６８】
ペパーミント、冬緑油、チェリー香味料等の香味剤も使用できる。剤形の見掛けをより美的にするかまたは製品を特定するのを助けるために、着色剤を加えることも望ましい。
【０１６９】
経口または非経口投与のために、本発明の化合物を通常の薬剤用担体および賦形剤と混合して錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウェーハ等の形態で使用することができる。本発明の化合物を含む組成物は、約０．１重量％〜約９９重量％、例えば約１０重量％〜約３０重量％の活性化合物を含むことができる。
【０１７０】
経口使用のためには、錠剤やカプセル剤などの固体処方剤が有用である。持続放出調製物または腸溶性のためにコーティングした調製物も考えられる。小児や高齢者のための用途には、一実施形態は、懸濁剤、シロップ剤およびチュアブル錠剤を提供する。経口投与のためには、医薬組成物は、例えば錠剤、カプセル剤、懸濁剤または液剤の形態である。
【０１７１】
医薬組成物は、治療有効量の活性成分を含む投与単位の形態で作製することができる。そうした投与単位の例は錠剤やカプセル剤である。治療のためには、錠剤やカプセル剤は、活性成分に加えて結合剤、例えばアカシアゴム、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ソルビトールまたはトラガカント；充てん剤、例えばリン酸カルシウム、グリシン、乳糖、トウモロコシデンプン、ソルビトールまたはスクロース；滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、シリカまたはタルク；崩壊剤、例えばジャガイモデンプン、芳香剤または着色剤、あるいは許容される湿潤剤などの通常の担体を含むことができる。経口液体調製物は一般に、水性液剤もしくは油性液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤またはエリキシル剤の形態であり、本発明の調製物は、懸濁化剤、乳化剤、非水性薬剤、保存剤、着色剤および香味剤などの通常の添加剤を含むことができる。液体調製物のための添加剤の非限定的な例には、アカシア、アーモンド油、エチルアルコール、ヤシ油、ゼラチン、グルコースシロップ剤、グリセリン、水添食用脂、レシチン、メチルセルロース、メチルもしくはプロピルパラ−ヒドロキシ安息香酸、プロピレングリコール、ソルビトール、またはソルビン酸が含まれる。
【０１７２】
静脈内（ＩＶ）使用のためには、医薬組成物は、一般に使用される静脈内輸液のいずれかに溶解させるかまたは懸濁させて、注入により投与することができる。静脈内用液剤には、これらに限定されないが、生理食塩水またはリンゲル液が含まれる。静脈内投与は、これらに限定されないが、シリンジ、小型ポンプまたは静脈内系を用いて実施することができる。
【０１７３】
非経口注入のための本発明の医薬組成物は、医薬上許容される水性液剤もしくは非水性液剤、分散液剤、懸濁剤または乳剤、ならびに使用直前に無菌性注入可能な液剤または分散液剤に再び戻すための無菌性粉剤を含む。適切な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒または媒体の例には、水、エタノール、ベンジルアルコール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールなど）およびその適切な混合物、植物油（とうもろこし油またはオリーブ油など）ならびにオレイン酸エチルなどの注入可能な有機エステルが含まれる。適度の流動性は、レシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散液の場合には所要の粒子サイズの維持によって、また、界面活性剤の使用によって維持することができる。組成物は様々な緩衝液を含むことができる。
【０１７４】
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などの補助剤も含むことができる。これらは、当業者でよく知られている追跡用添加物または他の偽造防止剤も含むことができる。微生物の作用の防止は、種々の抗菌や抗真菌薬、例えば、パラベン、クロロブタノールおよびフェノールソルビン酸を含めることによって確実にすることができる。糖や塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことも望ましい。注入可能な薬剤形態の持続的吸収性は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を含めることによってもたらすことができる。
【０１７５】
注入可能なデポーの形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生物分解性ポリマーに、薬物のマイクロカプセルマトリックスを形成させて作製することができる。薬物とポリマーの比や用いる個々のポリマーの特性に応じて、薬物放出の速度を制御することができる。他の生物分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が含まれる。デポー注入可能な処方剤は、生体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルジョン中に薬物を取り込ませて調製することもできる。
【０１７６】
注入可能な処方剤は、例えば、細菌保持フィルターを通した濾過によって、あるいは、無菌水または他の無菌性の注入可能な媒体中に使用直前に溶解または分散させることができる無菌性固体組成物の形態の滅菌剤を混ぜ込むことによって殺菌することができる。
【０１７７】
経口投与のための固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉剤および顆粒剤が含まれる。そうした形態は、経口での環境で迅速に溶解するか分散する形態を含むことができる。このような固体剤形では、活性化合物を、少なくとも１種の不活性な医薬上許容される賦形剤または担体と混合することができる。適切な賦形剤には、例えば（ａ）充てん剤または増量剤、例えばデンプン、乳糖、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸、（ｂ）結合剤、例えばセルロースおよびセルロース誘導体（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースなど）、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアカシア、（ｃ）湿潤剤、例えばグリセロール、（ｄ）崩壊剤、例えばナトリウムデンプングリコレート、クロスカルメロース、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩および炭酸ナトリウム、（ｅ）溶解遅延剤、例えばパラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば４級アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えばセチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール、ソルビタンの脂肪酸エステル、ポロキサマーおよびポリエチレングリコール、（ｈ）吸収剤、例えばカオリンおよびベントナイト粘土、（ｉ）滑剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ナトリウムラウリルサルフェートおよびその混合物、ならびに（ｊ）流動促進剤、例えばタルクおよび二酸化ケイ素が含まれる。他の適切な賦形剤には、例えばクエン酸ナトリウムまたは第２リン酸カルシウムが含まれる。剤形は緩衝剤も含むことができる。
【０１７８】
錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤および顆粒剤などを含む固体剤形は、機能性腸溶剤または見掛けをよくした（ａｅｓｔｈｅｔｉｃ）腸溶剤および当製剤業界でよく知られている他のコーティング剤などのコーティング剤およびシェルを用いて調製することができる。これらは所望により乳白剤や着色剤を含むことができる。これらは制御放出または持続放出が可能な形態であってもよい。そうした目的で使用できる包埋型組成物の例には、ポリマー系物質およびワックスが含まれる。
【０１７９】
医薬組成物は、制御放出（例えば、カプセル剤）または持続放出（例えば、生体内分解性マトリックス）による送達系を用いて送達することができる。医薬組成物を投与するのに適した薬物送達のための遅延放出送達系の例は、米国特許第４４５２７７５号（Ｋｅｎｔへの発行）、同５２３９６６０号（Ｌｅｏｎａｒｄへの発行）および同３８５４４８０号（Ｚａｆｆａｒｏｎｉへの発行）に記載されている。
【０１８０】
いくつかの場合、薬物の効果を持続させるために、皮下または筋肉内への薬物注入の後、その吸収を遅延させることが望ましい。これは、水溶性の低い結晶性または非晶質材料の液体懸濁物を使用することによって実現される。非晶質材料は、必要に応じて単独でも、安定剤と一緒でも用いることができる。この薬物の吸収速度は、その溶解速度の影響を受け、したがって、結晶サイズや結晶形態の影響も受ける。
【０１８１】
あるいは、非経口投与剤形の遅延吸収は、薬物を油性媒体中に溶解させるか懸濁させることによって実現することができる。
【０１８２】
筋肉内用調製物のためには、本発明の化合物の無菌性処方剤または本発明の化合物の適切な可溶性塩の形態、例えば塩酸塩は、注射用蒸留水（ＷＦＩ）、生理食塩水または５％グルコースなどの薬剤用希釈剤中に溶解して投与することができる。化合物の適切な不溶性形態は、水性ベースまたは医薬上許容される油性ベース、例えばオレイン酸エチルなどの長鎖脂肪酸のエステル中の懸濁剤として調製し投与することができる。
【０１８３】
本発明の化合物の静脈内、筋肉内または非経口処方剤の用量は、ボーラスとして、または速度の遅い注入によって投与することができる。ボーラスは３０分未満で投与される用量である。一実施形態では、ボーラスは１５分未満または１０分未満で投与する。他の実施形態では、ボーラスは５分未満で投与する。さらに他の実施形態では、ボーラスは１分以下で投与する。注入は３０分以上の速度で投与される用量である。一実施形態では、注入は１時間以上である。他の実施形態では、注入はほぼコンスタントに行う。
【０１８４】
局所使用のためには、医薬組成物は、鼻や咽喉の皮膚または粘膜に施用するのに適切な形態で調製することもでき、クリーム剤、軟膏、液体スプレー剤もしくは吸入剤、トローチ剤または咽喉塗布剤の形態をとることができる。そうした局所処方剤はさらに、活性成分の表面浸透を容易にするためにジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの化合物を含むことができる。
【０１８５】
目や耳に施用するためには、医薬組成物は、軟膏、クリーム、ローション塗布剤または粉剤のような疎水性または親水性ベースで処方された液体または半液体の形態であってよい。
【０１８６】
経直腸投与のためには、医薬組成物は、室温で固体であるが体温で液体となり、それによって直腸または膣腔の中で溶融して活性化合物を放出するココアバター、ポリエチレングリコールまたは座剤ワックスまたは他のグリセリドなどの通常の担体と混合した座剤の形態で投与することができる。
【０１８７】
あるいは、医薬組成物は、送達の際に、適当な医薬上許容される担体中で元に戻すための粉末形態であってよい。他の実施形態では、本発明の化合物の単位剤形は、無菌性の密封したアンプルまたは無菌性シリンジの中の適切な希釈剤中の化合物またはその塩の溶液であってよい。単位投薬量での化合物の濃度は、用いる化合物、その溶解性および医師の望む用量に応じて、例えば、約１％〜約５０％で変化する。組成物が投薬単位を含む場合、各投薬単位は１〜５００ｍｇの活性物質を含むことができる。成人のヒトの治療のためには、用いる投薬量は、投与の経路や頻度に応じて１日当たり５ｍｇ〜１０ｇの範囲であってよい。
【０１８８】
本明細書で開示する医薬組成物は、医薬上許容される担体中に含めることができ、これは既知の薬物送達方法によって受容対象（例えば、ヒト）に送達される。一般に、医薬組成物をインビボで送達する方法は、当業界で認められている薬剤を送達するためのプロトコルを用いる。その手順上の実質的な改変は、当業界で認められているプロトコルの薬物を本発明の化合物で置き換えることだけである。同様に、培地中で細胞を処理して、例えば細胞培養の細菌汚染を排除するかまたはそのレベルを低減するために特許請求する組成物を用いる方法にも、抗菌剤を用いて細胞培養を処理するための当業界で認められているプロトコルを用いる。その手順上の実質的な改変は、当業界で認められているプロトコルの薬物を本発明の化合物で置き換えることだけである。
【０１８９】
使用方法
一実施形態では、本発明は、治療有効量の本発明の化合物または組成物を投与することによって対象の感染症を治療するための方法を提供する。一実施形態では、その方法は、それを必要とする対象に、本明細書で説明する化合物の少なくとも１つを含む医薬組成物を投与することを含む。一実施形態では、医薬組成物は本明細書で説明する化合物のいずれか１つを、活性化合物単独か、あるいは他の化合物、組成物または生物学的材料と一緒に含むことができる。
【０１９０】
「治療」、「治療方法」という用語およびその同族語は、治療的処置と予防／防止手段の両方を指す。治療を要する個体には、具体的な医学的疾患をすでに有する個体、ならびに疾患のリスクのある個体（すなわち、最終的に障害を受ける可能性のある個体）が含まれる。治療的方法は、症状の予防または改善あるいは所望の生物学的結果をもたらし、それは、臨床的徴候の改善、疾患の遅発性、リンパ球および／または抗体等のレベルの増減によって評価することができる。
【０１９１】
一実施形態では、その医薬品は、アミノグリコシド、β−ラクタムおよびフルオロキノロンと交差抵抗性ではないが、ヒトにおいて治療上効果的である。
【０１９２】
抗菌剤を送達するための手順の例は、米国特許第５０４１５６７号およびＰＣＴ出願番号ＥＰ９４／０２５５２（公開番号ＷＯ９５／０５３８４）に記載されている。その開示全体を参照により本明細書に組み込む。本明細書で用いる「治療上効果的な用量」および「治療有効量」という用語は、細菌性感染症の発現を防止し、その症状を軽減し、その進行を止めるか、あるいは他の所望の生物学的結果、例えば臨床的徴候の改善またはリンパ球および／または抗体のレベルの増減をもたらす本発明の化合物の量を指す。「治療する」という用語は、本発明の化合物の治療有効量を対象に投与して、感染症の発生を防止しかつ感染症を制御するかまたはそれを撲滅することと定義する。本明細書で用いる「対象」という用語は、哺乳動物、植物、下等動物または細胞培養物を指す。一実施形態では、抗菌処置を必要とする対象はヒトまたは他の動物の患者である。
【０１９３】
本発明は、本明細書で開示する化合物またはその医薬組成物を、細菌性感染症を軽減するかまたは撲滅するのに効果的な量で、それを必要とする対象に投与する方法も提供する。本発明の医薬組成物は、ヒトおよび他の動物に、経口、経直腸、非経口、嚢内、膣内、腹膜内、局所（粉剤、軟膏またはドロップ錠で）、頬側で、または経口もしくは経鼻用スプレーとして、あるいは埋め込み型リザーバ、外部ポンプまたはカテーテルを用いて投与することができる。組成物は、肺を通した吸入により投与することもできる。本明細書で用いる「非経口投与」という用語は、静脈内、筋肉内、腹膜内、嚢内、皮下および関節内注入および輸液を含む投与様式を指す。化合物または組成物は、眼科での使用またはエアロゾル化した使用のために調製することができる。
【０１９４】
一実施形態では、医薬組成物は抗菌剤、抗生物質または抗真菌薬である。
【０１９５】
一実施形態では、本発明の方法は、その感染症が任意のタイプの細菌、例えばグラム陰性菌またはグラム陽性菌によって引き起こされるか、またはその悪化がもたらされる細菌性感染症を有する対処を治療するために用いることができる。一実施形態では、細菌性感染症は、グラム陰性菌によって引き起こされるか、またはその悪化がもたらされる。これらのグラム陰性菌には、これらに限定されないが、アシネトバクター属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．）（アシネトバクター  バウマンニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）を含む）、シトロバクター属（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｓｐｐ．）（大腸菌を含む）、ヘモフィルス  インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、モルガネラ  モルガニイ（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ  ｍｏｒｇａｎｉｉ）、黄色ブドウ球菌、クレブシエラ菌属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）（肺炎クレブシエラ菌を含む）、サルモネラ菌属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、赤痢菌属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、仮性結核菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、およびすべての種のエンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、パスツレラ菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、ブルセラ菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）、ボルデテラ属（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、プロビデンシア（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ）およびエドワードシエラ属（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ）が含まれる。
【０１９６】
一実施形態では、細菌性感染症は、グラム陽性菌によって引き起こされるか、またはその悪化がもたらされる。これらの細菌には、これらに限定されないが、メチシリン感受性およびメチシリン耐性のブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）（黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、Ｓ．ヘモリチカス（ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、Ｓ．ホミニス（ｈｏｍｉｎｉｓ）、Ｓ．サプロフィチカス（ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）およびコアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ｃｏａｇｕｌａｓｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）を含む）、グリコペプチド中間感受性黄色ブドウ球菌（ＧＩＳＡ）、バンコマイシ耐性黄色ブドウ球菌（ＶＲＳＡ）、ペニシリン感受性およびペニシリン耐性の連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）（肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｓ．アガラクチアエ（ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、Ｓ．アビウム（ａｖｉｕｍ）、Ｓ．ボビス（ｂｏｖｉｓ）、Ｓ．ラクチス（ｌａｃｔｉｓ）、Ｓ．サンギウス（ｓａｎｇｉｕｓ）ならびに連鎖球菌グループＣ、連鎖球菌グループＧおよび緑色連鎖球菌（ｖｉｒｉｄａｎｓ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）を含む）、腸球菌（ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）（大便連鎖球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）およびＥ．フェシウム（ｆａｅｃｉｕｍ）などのバンコマイシ感受性およびバンコマイシ抵抗性菌株を含む）、クロストリジウム  ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、Ｃ．クロストリジイフォルメ（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｉｆｏｒｍｅ）、Ｃ．イノクウム（ｉｎｎｏｃｕｕｍ、Ｃ．ペルフリンゲンス（ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、Ｃ．ラモサム（ｒａｍｏｓｕｍ）、ヘモフィルス  インフルエンザ菌、リステリア  モノサイトジェネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、コリネバクテリウム  ジェイケウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｊｅｉｋｅｉｕｍ）、ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）、ユウバクテリウム  アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｒｎ  ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）、Ｅ．レンタム（ｌｅｎｔｕｍ）、ラクトバシルス  アシドフィルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｌ．カセイ（ｃａｓｅｉ）、Ｌ．プタンタラム（ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）、ロイコノストック属（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｓｐｐ．）、ペジオコッカス属（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）、ペプトストレプトコッカス  アネロビウス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｎａｅｒｏｂｉｕｓ）、Ｐ．アサカロリチカス（ａｓａｃｃａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ）、Ｐ．マグナス（ｍａｇｎｕｓ）、Ｐ．ミクロス（ｍｉｃｒｏｓ）、Ｐ．プレボチイ（ｐｒｅｖｏｔｉｉ）、Ｐ．プロダクタス（Ｐｒｏｄｕｃｔｕｓ）、プロピオニバクテリウム  アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ）、アクチノミセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．）およびモラキセラ属（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｓｐｐ．）（Ｍ．カタラリス（ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）を含���）が含まれる。
【０１９７】
一実施形態では、本明細書で開示の化合物の古典的に（Ｃｌａｓｓｉｃａｌｌｙ）「抵抗性」である菌株に対する抗菌活性は、インビトロでの実験で、古典的に「感受性」である菌株に対する抗菌活性に匹敵する。一実施形態では、本発明による化合物またはその医薬組成物は、本発明の方法によって、迅速に作用する抗生物質治療を必要とする患者に投与される。
【０１９８】
本発明の方法は、身体のどの器官または組織のどのような細菌性感染症にも用いることができる。一実施形態では、細菌性感染症はグラム陰性菌によって引き起こされる。これらの器官または組織には、これらに限定されないが、骨格筋、皮膚、血流、腎臓、心臓、肺および骨が含まれる。本発明の方法は、これらに限定されないが、皮膚や柔らかい組織の感染症、菌血症および尿路感染症を治療するのに用いることができる。本発明の方法は、これらに限定されないが、中耳炎、静脈洞炎、慢性気管支炎および薬物抵抗性の肺炎球菌またはインフルエンザ菌によって引き起こされる肺炎を含む市中呼吸器系感染症を治療するのに用いることができる。本発明の方法は、異なる種類のグラム陰性菌を含むか、またはグラム陽性菌とグラム陰性菌の両方を含む混合感染症を治療するのに用いることもできる。これらの種類の感染症には腹腔内感染症および産科／婦人科感染症が含まれる。本発明の方法は、これらに限定されないが、心内膜炎、腎炎、敗血症性関節炎、腹腔内敗血症、骨および間接感染症ならびに骨髄炎を含む感染症を治療するのに用いることもできる。一実施形態では、上記疾患のいずれも、本発明による化合物またはその医薬組成物を用いて治療することができる。
【０１９９】
本発明の方法は、抗菌剤（抗生物質）または抗真菌薬などの１種または複数の他の抗菌薬と同時に投与して実施することもできる。一態様では、その方法は、本発明による２つ以上の化合物を投与することによって実施することができる。他の実施形態では、その方法は、本発明の化合物を、本明細書で説明する他のペプチド化合物、または、例えば国際特許出願ＷＯ０１／４４２７２；ＷＯ０１／４４２７４およびＷＯ０１／４４２７１に記載のペプチド化合物と一緒に投与して実施することができる。
【０２００】
本発明の化合物と同時投与することができる抗菌剤およびその部類には、これらに限定されないが、ペニシリンおよび関連薬物、カルバペネム、セファロスポリンおよび関連薬物、アミノグリコシド、バシトラシン、グラミシジン、ムピロシン、クロラムフェニコール、チアンフェニコール、フシジン酸ナトリウム、リンコマイシン、クリンダマイシン、マクロリド、ボビオシン、ポリミキシン、リファマイシン、スペクチノマイシン、テトラサイクリン、バンコマイシ、テイコプラニン、ストレプトグラミン、スルホンアミド、トリメトプリムおよびその組合せを含む葉酸拮抗剤およびピリメタミン、ニトロフラン、マンデル酸メテナミンおよび馬尿酸メテナミン、ニトロイミダゾール、キノロン、フルオロキノロン、イソニアジド、エタンブトール、ピラジンアミド、パラ−アミノサリチル酸（ＰＡＳ）、シクロセリン、カプレオマイシン、エチオンアミド、プロチオンアミド、チアセタゾン、バイオマイシン、エバニノマイシン、グリコペプチド、グリシルサイクリン、ケトリド（ｋｅｔｏｌｉｄｅ）、オキサゾリジノンを含む合成抗菌剤；イミペネン（ｉｍｉｐｅｎｅｎ）、アミカシン、ネチルミシン、ホスホマイシン、ゲンタマイシン、セフトリアキソン、ＺＩＲＡＣＩＮ（登録商標）（５６−デアセチル−５７−デメチル−４５−Ｏ−デ（２−メチル−１−オキソプロピル）−１２−Ｏ−（２，３，６−トリデオキソ−３−Ｃ−メチル−４−Ｏ−メチル−３−ニトロ−α−Ｌ−アラビノ−ヘキソピラノシル）フランバマイシン（ｆｌａｍｂａｍｙｃｉｎ））、ＬＹ３３３３２８、ＣＬ３３１００２、ＨＭＲ３６４７  ＺＹＶＯＸ（登録商標）（リネゾリド（ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ））、ＳＹＮＥＲＣＩＤ（登録商標）（ダルホプリスチン−キヌプリスチン（ｄａｌｆｏｐｒｉｓｔｉｎ−ｑｕｉｎｕｐｒｉｓｔｉｎ））、アズトレオナム、メトロニダゾール、エピロプリム、ＯＣＡ−９８３、ＧＶ−１４３２５３、サンフェトリネムナトリウム（Ｓａｎｆｅｔｒｉｎｅｍ  Ｓｏｄｉｕｍ）、ＣＳ−８３４、ビアペネム、Ａ−９９０５８．１、Ａ−１６５６００、Ａ−１７９７９６、ＫＡ１５９、ダイネマイシン（Ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａ、ＤＸ８７３９、ＤＵ６６８１；セフルプレナム、ＥＲ３５７８６、セフォセリス、サンフェトリネム  セレキセチル（Ｓａｎｆｅｔｒｉｎｅｍ  ｃｅｌｅｘｅｔｉｌ）、ＨＧＰ−３１、セフピロム、ＨＭＲ−３６４７、ＲＵ−５９８６３、メルサシジン、ＫＰ７３６、リファラジル（Ｒｉｆａｌａｚｉｌ）；Ｋｏｓａｎ、ＡＭ１７３２、ＭＥＮ１０７００、レナペネム、ＢＯ２５０２Ａ、ＮＥ−１５３０、Ｋ１３０、ＯＰＣ２００００、ＯＰＣ２０４５、ベネプリム（Ｖｅｎｅｐｒｉｍ）、ＰＤ１３８３１２、ＰＤ１４０２４８、ＣＰ１１１９０５、スロペネム、リチペナム  アコキシル（ｒｉｔｉｐｅｎａｍ  ａｃｏｘｙｌ）、ＲＯ−６５−５７８８、シクロチアリジン（Ｃｙｃｌｏｔｈｉａｌｉｄｉｎｅ）、Ｓｃｈ−４０８３２、ＳＥＰ−１３２６１３、ミカコシジンＡ、ＳＢ−２７５８３３、ＳＲ−１５４０２、ＳＵＮＡ００２６、ＴＯＣ３９、カルモナム、セフォゾプラン、セフェタメットピボキシルおよびＴ３８１１が含まれる。
【０２０１】
本発明の化合物と同時投与することができる抗真菌薬には、これらに限定されないが、カスポフンゲン（Ｃａｓｐｏｆｕｎｇｅｎ）、ボリコナゾール、セルタコナゾール、ＩＢ−３６７、ＦＫ−４６３、ＬＹ−３０３３６６、Ｓｃｈ−５６５９２、シタフロキサシン、ＤＢ−２８９、アンフォテリシン、ナイスタチン、プリマリシン（Ｐｒｉｍａｒｉｃｉｎ）などのポリエン；フルコナゾール、イトラコナゾールおよびケトコナゾールなどのアゾール；ナフチフィンおよびテルビナフィンなどのアリルアミン、ならびにフルシトシンなどの代謝拮抗物質が含まれる。他の抗真菌薬には、これらに限定されないが、Ｆｏｓｔｅｌ等、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ５：２５〜３２頁（２０００）に開示されているものなどが含まれる。その開示を参照により本明細書に組み込む。Ｆｏｓｔｅｌ等は、コリネカンジン（Ｃｏｒｙｎｅｃａｎｄｉｎ）、Ｍｅｒ−ＷＦ３０１０、フサカンジン（Ｆｕｓａｃａｎｄｉｎ）、アルトリチチン（Ａｒｔｒｉｃｈｉｔｉｎ）／ＬＬ１５Ｇ２５６、ソルダリン、シスペンタシン、アゾキシバシリン（Ａｚｏｘｙｂａｃｉｌｌｉｎ）、アウレオバシジン（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｎ）およびカフレフンジンを含む抗真菌性化合物を開示している。
【０２０２】
本発明の化合物は、肺炎または他の肺関連感染症のためにエアロゾルとして投与することができる。一実施形態では、エアロゾル送達ビヒクルは無水粉末または乾燥粉末の吸入器である。化合物またはその医薬組成物は、膿瘍、心／脳室内または関節内に直接注入するかまたは投与することもできる。非経口投与には、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、脳槽内、髄腔内、肝臓内、病巣内および頭蓋内への注入または輸液が含まれる。他の実施形態では、本発明の化合物は静脈内、皮下または経口で投与する。さらに他の実施形態では、化合物または組成物は、培養液での投与などによって細胞培養に投与する。
【０２０３】
投薬
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投薬量レベルは、具体的な患者、組成物および投与の様式に対する所望の治療応答を実現するための治療有効量の活性化合物が得られるように変えることができる。効果的な量は本明細書で説明するようにして決定することができる。選択される投薬量レベルは、個々の化合物の活性、投与の経路、治療される病態の重篤度、治療を受ける患者の状態およびそれまでの病歴によって変わることになる。しかし、所望の治療効果のために必要なレベルより低いレベルで化合物の用量を開始し、所望の効果が得られるまで徐々に投薬量を増大させることも当業者の取り得る範囲内である。一実施形態では、アッセイにより得られるデータを、ヒトで使用するための投薬量範囲を処方するのに用いることができる。
【０２０４】
その方法は、効果的用量の本発明の化合物を対象に投与することも含む。効果的用量は、約０．１〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲の本発明の化合物または医薬上許容されるその塩であってよい。一実施形態では、その用量は、約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲の本発明の化合物または医薬上許容されるその塩である。他の実施形態では、用量は、約１〜２５ｍｇ／ｋｇの範囲の本発明の化合物または医薬上許容されるその塩である。細胞培養のための効果的用量は、０．１〜１０００ｐｇ／ｍＬ、例えば０．１〜２００μｇ／ｍＬの範囲であってよい。
【０２０５】
一般に、約０．１μｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの投薬量レベル、例えば１日当たり、キログラム体重当たり約５〜約２０ｍｇの範囲の活性化合物のレベルを、局所、経口または静脈内で哺乳動物の患者に投与することができる。他の投薬量レベルは、１日当たり約１μｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ〜１ｍｇ／ｋｇおよび約５００μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲である。望むなら、効果的日用量を、投与のために複数用量、例えば、１日当たり２つから４つに分けた用量に分割することができる。一実施形態では、医薬組成物は１日当たり１回投与することができる。
【０２０６】
本発明の化合物を含む組成物は、単一の日用量としてまたは１日当たり複数用量で投与することができる。治療体制は、長期にわたる期間、例えば数日間または２から４週間にわたる投与を必要とする。投与される用量当たりの量または投与される合計量は、感染症の特性および重篤度、患者の年齢および健康状態、化合物に対する患者の耐性、ならびに感染症に関与する微生物などの因子に左右されることになる。
【０２０７】
本発明の化合物は、患者または動物の食事または飼料で投与することもできる。総食事摂取の一部として投与する場合、用いる化合物の量は食事の１重量％未満、例えばぜいぜい０．５重量％未満であってよい。動物の食事は化合物をそれに添加できる通常の飼料であってよく、また化合物をプレミックスに加えることもできる。
【０２０８】
本明細書で開示する他の実施形態は、
１．新規なペプチド抗生物質の合成に用いるための中間体の調製方法であって、
（ａ）ポリミキシンＢ、コリスチン、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１、サークリンおよびオクタペプチンのアミノ基を、（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシ−カルボニルまたは９−フルオレニルメトキシカルボニルの他の酸性誘導体で脱保護する工程と、
（ｂ）上記工程（ａ）の反応からの生成物をデアシラーゼで処理して保護ペプチド中間体を提供する工程と、
（ｃ）修飾したエドマン分解法またはペプチダーゼ酵素反応を用いて、保護ペプチド中間体の側鎖において、１から３個のアミノ酸を減少させることによって別の保護中間体を得る工程と、
（ｄ）保護ペプチド中間体をクロマトグラフィーで精製する工程と
を含む方法を含む。
【０２０９】
他の実施形態は、
２．臨床的に使用された抗生物質に対して抵抗性のある菌株を含むグラム陰性およびグラム陽性菌に対して活性のある抗生物質を生成するための方法であって、
（ａ）コリスチン、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１、サークリンおよびオクタペプチンからなる群から選択されるポリミキシンまたは他の関連抗生物質のアミノ基を、（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニルまたは９−フルオレニルメトキシカルボニルの他の酸性誘導体で脱保護する工程と、
（ｂ）上記工程（ａ）の反応からの生成物を、デアシラーゼで処理して保護ペプチド中間体を提供する工程と、
（ｃ）ペプチダーゼ酵素反応の改変エドマン分解法を用いて、保護ペプチドの環外ペプチド側鎖において１個から３個、アミノ酸のサイズを低減することによって、別の保護中間体ペプチドを得る工程と、
（ｄ）中間体を化学的に修飾して保護された抗菌性誘導体を生成する工程と、
（ｅ）酸性保護基を除去して抗生物質を生成する工程と
を含む方法を開示する。
【０２１０】
他の実施形態は、
３．ポリミキシン、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１、オクタペプチン、コリスチン、サークリンまたは関連抗生物質から誘導される化学的に保護された形態のペプチドであり、以下のもの、すなわち
１）Ｈ−（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチド−［（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］ｎ
２）Ｈ−（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチド−［（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］ｎ
３）Ｈ−（Ｘ３）−ペプチド−［（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］ｎ
４）Ｈ−ペプチド−［（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］３（ここで、ケース１）では、Ｈ−（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチド−［（２−スルホ）Ｆｍｏｃ］ｎについて、Ｈは水素であり、Ｘ１はＬ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、Ｘ２はＬ−Ｔｈｒまたは他のアミノ酸であり、Ｘ３はＬ−ＤａｂもしくはＤ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、ｎ＝３〜６であり、
ケース２）では、Ｈ−（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチド−［（スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］ｎについて、Ｈは水素であり、Ｘ２はＬ−Ｔｈｒまたは他のアミノ酸であり、Ｘ３はＬ−ＤａｂもしくはＤ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、ｎ＝３〜５であり、
ケース３）では、Ｈ−（Ｘ３）−［ペプチド−［（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］ｎについて、Ｈは水素であり、Ｘ３はＬ−ＤａｂもしくはＤ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、ｎ＝３〜４であり、
ケース４）では、Ｈ−ペプチド−［（スルホ）−９−Ｆｍｏｃ］ｎについて、Ｈは水素である）
またはその対応する塩からなる群から選択される中間体を開示する。
【０２１１】
他の実施形態は、
４．新規なペプチド抗生物質またはそのプロドラッグを合成するために使用できる、対応する保護ポリミキシンＢから誘導された酸性保護ペプチド中間体であって、その保護基が好ましくは（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃおよび構造
【化３６】
2011256189.tif 000039
を有する保護ペプチド中間体を開示する。
【０２１２】
他の実施形態は、
５．新規なペプチド抗生物質またはそのプロドラッグを合成するために使用できる、対応する保護［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１から誘導された酸性保護ペプチド中間体であって、その保護基が好ましくは（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃおよび構造
【化３７】
2011256189.tif 000040
を有する保護ペプチド中間体を開示する。
【０２１３】
他の実施形態は、
６．新規なペプチド抗生物質またはそのプロドラッグを合成するために使用できる、対応する保護コリスチンから誘導された酸性保護ペプチド中間体であって、その保護基が好ましくは（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃおよび構造
【化３８】
2011256189.tif 000041
を有する保護ペプチド中間体を開示する。
【０２１４】
他の実施形態は、
７．新規なペプチド抗生物質またはそのプロドラッグを合成するために使用できる、対応する保護サークリンＡから誘導された酸性保護ペプチド中間体であって、その保護基が好ましくは（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃおよび構造
【化３９】
2011256189.tif 000042
を有する保護ペプチド中間体を開示する。
【０２１５】
他の実施形態は、
８．新規なペプチド抗生物質またはそのプロドラッグを合成するために使用できる、対応する保護オクタペプチンから誘導された酸性保護ペプチド中間体であって、その保護基が好ましくは（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃおよび構造
【化４０】
2011256189.tif 000043
を有する保護ペプチド中間体を開示する。
【０２１６】
他の実施形態は、
９．対応するオクトペプチン（ｏｃｔｏｐｅｐｔｉｎ）から誘導される保護ペプチド中間体であって、オクタペプチン抗生物質の他の成分が、５位でＬ−ロイシンの代わりにＬ−フェニルアラニンを含み、その成分が、類似しているが別の保護ペプチド中間体を形成する中間体を開示する。
【０２１７】
他の実施形態は、
１０．以下の構造（式中、Ｐは保護基（２−スルホ）−９−Ｆｍｏｃまたは水素に等しい）
【表３−１】
2011256189.tif 000044
【表３−２】
2011256189.tif 000045
【表３−３】
2011256189.tif 000046
【表３−４】
2011256189.tif 000047
【０２１８】
他の実施形態は、
１１．ポリミキシン、オクタペプチン、コリスチン、［Ｉｌｅ７］ポリミキシンＢ１から誘導される化学的保護された形態のペプチドである中間体から調製される抗生物質であって、前記抗生物質が以下のもの、すなわち
ケース１  Ａ−（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチド
ケース２  Ａ−（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチド
ケース３  Ａ−（Ｘ３）−ペプチド
ケース４  Ａ−ペプチド
（ここで、ケース１）では、Ａ−（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチドについて、Ａ＝Ｒ’−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ’−ＳＯ２−、Ｒ’−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ’−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−（但し、Ｒ’はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、Ｘ１はＬ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、Ｘ２はＬ−Ｔｈｒまたは他のアミノ酸であり、Ｘ３はＬ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、
ケース２）では、Ａ−（Ｘ２）（Ｘ３）−ペプチドについて、「Ａ」はケース１で説明されたものと同じであり、Ｘ２はＬ−Ｔｈｒまたは他のアミノ酸であり、Ｘ３はＬ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、
ケース３）では、Ａ−（Ｘ３）−ペプチドについて、「Ａ」はケース１で説明されたものと同じであり、Ｘ３はＬ−Ｄａｂまたは他のアミノ酸であり、
ケース４）では、Ａ−ペプチドについて、「Ａ」はケース１で説明されたものと同じである）
または対応するその塩からなる群から選択される抗生物質を開示する。
【０２１９】
他の実施形態は、
１２．以下の構造と、
【０２２０】
【表４−１】
2011256189.tif 000048
【表４−２】
2011256189.tif 000049
【０２２１】
他の実施形態は、
水溶性の安定した固体状のデアシラーゼ酵素を調製する方法であって、
（ａ）アクチノプラーネス  ユタヘンシスの菌株を発酵させて生物の細胞を得る工程と、
（ｂ）細胞を水で洗浄して不純物を除去する工程と、
（ｃ）洗浄した細胞を水性塩基でｐＨ８〜１１で抽出する工程と、
（ｄ）抽出物をｐＨ７〜８に調節し、その溶液を凍結乾燥して固体状の酵素を得る工程と
を含む方法を開示する。
【０２２２】
他の実施形態は、
１４．工程（ｅ）、すなわち
（ｅ）その後で、クロマトグラフィーを用いて前記酵素をさらに精製する工程をさらに含む方法を開示する。
【０２２３】
一連の新規な抗生物質はスルホニル誘導体（表３、化合物８および１０）で表される。これらの化合物からの側鎖は、アシル基によってＰＢペプチドと結合していないが、その代わりスルホニル基によって結合している。尿素またはチオ尿素などの他のリンカーが作製されており、良好な細菌活性を有する化合物が得られている。表３に示すように、尿素およびチオ尿素結合を介して結合した芳香族アシル環外鎖および芳香族基（化合物４および５）についても強力な活性が示されている。
【０２２４】
本明細書で開示する本発明の明細と実際を考慮すれば、本発明の他の実施形態は当業者に明らかであろう。その明細と実施例は単に例示のためだけであるものとする。本発明の真の範囲と趣旨は上記特許請求の範囲に示されている。
【０２２５】
ポリミキシンＢ複合体からポリミキシンＢ１と［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１（表３）を単離した。ＩＬペプチド−３から誘導される新規なペプチドは、ポリミキシンＢ複合体から［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１を精製し、このペプチドを保護し、この保護生成物を脱アシル化し、新しい側鎖を戻して加え、脱保護することによって調製することができる。代替の手順では、ポリミキシンＢ複合体を保護し、脱アシル化して保護ＰＢペプチド−３とＩＬペプチド−３混合物を生成し、新な側鎖を加え脱保護し、次いで混合物を溶解させて両方のペプチドの新規な誘導体を得る。ＰＢペプチドおよびＩＬペプチドから誘導される新規なペプチドについて得られたＨＰＬＣ保持時間を表５に示す。
【０２２６】
【表５】
2011256189.tif 000050
＊ＨＰＬＣ分析は逆相Ｃ８カラムを用いて実施した。アイソクラチック溶離液は、表記アセトニトリル％が得られるように、溶離液Ｂと溶離液Ｃの比を様々に変えて調製した。
溶離液Ｂ：０．０５Ｍ  （ＮＨ４）２ＳＯ４＋０．００５Ｍ  Ｈ２ＳＯ４ｐＨ約２．４４
溶離液Ｃ：８５％アセトニトリルと１５％水
【０２２７】
少なくとも１つの（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニル基で保護されたペプチドのＨＰＬＣによる分析は、ｐＨ７．２で３５％から７５％の勾配のＭｅＣＮ／０．２Ｍ（ＮＨ４）３ＰＯ４を用いて逆相Ｃ８カラムで実施することができる。脱保護ペプチドのＨＰＬＣによる分析は、表に示す条件を用いて実施することができる。
【０２２８】
別段の指定のない限り、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド試薬は、Ｇｅｒｓｈｏｎｏｖ，Ｅ．，Ｇｏｌｄｗａｓｅｒ，Ｉ．，Ｆｒｉｄｋｉｎ，Ｍ．，Ｓｃｈｅｃｔｅｒ，Ｙ，２０００，「水溶性の長期作用性インスリンプロドラッグへの新規なアプローチ：［（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニル］３−インスリンの設計、調製および分析（Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  ａ  Ｗａｔｅｒ−Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｌｏｎｇ−Ａｃｔｉｎｇ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｐｒｏｄｒｕｇ：Ｄｅｓｉｇｎ，Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ［（２−Ｓｕｌｆｏ）−９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ］３−Ｉｎｓｕｌｉｎ）」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４３：（１３），２５３０〜２５３７頁、およびＳｃｈｅｃｈｔｅｒ，Ｙ．Ｔｓｕｄｂｅｒｙ，Ｈ．，Ｆｒｉｄｋｉｎ，Ｍ．，２００２、「Ｎ−［（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニル］３−ジェンタマイシンは長期作用性プロドラッグ誘導体である（Ｎ−［（２−  Ｓｕｌｆｏ）−９−  Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ］３−Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ  Ｉｓ  ａ  Ｌｏｎｇ−Ａｃｔｉｎｇ  Ｐｒｏｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖａｔｉｖｅ）」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４５：（１９），４２６４〜４２７０頁に開示の方法によって調製した。
【実施例１】
【０２２９】
Ｎ−［（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニル）］５−ポリミキシンＢ
２５ｍＬの飽和重炭酸塩ナトリウムの溶液、２５ｍＬの水、および２５ｍＬのテトラヒドロフランの中にポリミキシンＢサルフェート（１．０ｇ、０．８４１ミリモル）を溶解した。ポリミキシンＢサルフェートは、例えばＳｉｇｍａ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている。２５ｍＬのテトラヒドロフラン中の（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．０ｇ、４．８ミリモル）の溶液を、複数に分けて４５分間にわたって加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、５０ｍＬの水で希釈し、次いで２５ｍＬの６Ｎ塩酸で酸性化して油状の沈殿物を得た。混合物を冷却し、水層をデカントし、油状残留物を１００ｍＬのエタノール中に溶解させた。エタノールを真空下で蒸発させ（３５℃）、得られた固体を、酢酸エチルを用いて粉砕し、濾過し、乾燥して１．７４ｇの生成物を得た。逆相Ｃ８カラムを用いて勾配をかけたＨＰＬＣは、カラム溶離液を２１５ｎｍでモニターして、単一のピーク、Ｎ−［２−（スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニル）］５−ポリミキシンＢ、Ｃ１３１Ｈ１５０Ｎ１６Ｏ３８Ｓ５を示した。ＥＳＩＭＳ：Ｃ１３１Ｈ１５２Ｎ１６Ｏ３８Ｓ５についてのｍ／ｚ、計算、（Ｍ＋２Ｈ）＋２＝１３５８．４。結果：１３５８．５
【０２３０】
ポリミキシン遊離ベースおよび２（スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニルクロリドを用いて上記手順で実施して同様の結果が得られる。
【実施例２】
【０２３１】
デアシラーゼの調製
アクチノプラーネス  ユタヘンシスＮＲＲＬ１２０５２を液内好気性発酵条件下で培養することによってデアシラーゼを産生する。用いた発酵プロトコルは周知である（Ｂｏｅｃｋ，Ｌ．Ｄ．等、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ４１：（８），１０８５〜１０９２頁）。−７０℃で２０％グリセロール中に保存したＮＲＲＬ１２０５２変異体のストック培養液を、脱塩水中にスクロース２．０％、予備調理したオートミール２．０％、コーン蒸留粕（ｄｉｓｔｉｌｌｅｒ’ｓ  ｇｒａｉｎｓ  ａｎｄ  ｓｏｌｕｂｌｅｓ）０．５％、酵母抽出物０．２５％、Ｋ２ＨＰＯ４  ０．１％、ＫＣｌ  ０．０５％、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ  ０．０５％およびＦｅＳＯ４．７Ｈ２Ｏ  ０．０００２％を含む１０ｍＬの培養液を含む、ガラス棒とモートンクロージャ（Ｍｏｒｔｏｎ  ｃｌｏｓｕｒｅ）を備えた２５×１５０ｍｍ試験管中に導入した。２５０ｒｐｍで振盪する回転式振盪機上で３０℃、７２時間インキュベーションした後、得られた菌糸懸濁液を２５０ｍＬのＥｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコ中の５０ｍＬのＰＭ３培地中に移した。この培地は、水道水中にスクロース２．０％、ピーナッツミール１．０％、Ｋ２ＨＰＯ４  ０．１２％、ＫＨ２ＰＯ４  ０．０５％およびＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ  ０．０２５％を含むものである。フラスコを、３０℃の温度で６０〜９０時間インキュベートした。収穫時間は、ホールブロスによる発酵の際の異なる時間での、（２−スルホ−９−フルオレンリメトキシカルボニル）］５ポリミキシンＢの脱アシル化のＨＰＬＣ分析を用いたアッセイで判断した。
【０２３２】
培地を凍結乾燥して得られた単一コロニー単離物は、形態と酵素産生能力の両方について不均一であるので、選択は、安定した高生産性の変異体が回収されるように行った。最初に、菌株１２０５２から調製した接種材料を用いて多重発酵を実施した。最も良好な脱アシル化活性が得られたフラスコによる栄養増殖物を差次的な寒天（ＣＭ）上にプレーティングした。ＣＭ寒天は、コーンスティープリカー０．５％、バクトペプトン  ０．５％、可溶性デンプン１．０％、ＮａＣｌ  ０．０５％、ＣａＣｌ２．２Ｈ２Ｏ  ０．０５％およびバクト寒天２．０％を含んだ。次いで、さらに評価するためにコロニーを選択した。単離物Ｎｏ．１８を小コロニータイプとして選択した。これは選択したすべてのコロニーのうちでデアシラーゼを最も良好に産生するものであることが分かった。ＨＰＬＣで測定した保護ポリミキシンＢの脱アシル化保護ポリミキシンＢへの転換率を基にして比較した。この単離物を慣行的にデアシラーゼ酵素の産生に用いた。
【実施例３】
【０２３３】
細胞中における酵素による保護ポリミキシンＢの脱アシル化
沈降法：実施例２での最初の発酵による４５０ｍＬのデアシラーゼ酵素からの細胞を３×の水で洗浄し、次いで０．０２Ｍリン酸アンモニウム緩衝液で元の容量に戻してｐＨ８．０に調節した。Ｎ−［（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニル）］５−ポリミキシンＢ、８９７ｍｇを加え、混合物を１７４ｒｐｍで振盪機にかけ３０℃で保持した。５時間後、混合物を遠心分離機にかけて分離した。透明なデカント物を１Ｎ  ＨＣｌ溶液でｐＨ２．３に調節して沈澱させ室温で放置した。沈殿物を混合物から分離し、８０ｍＬの水にスラリー化し、ｐＨ６．５に調節して透明溶液を得た。これを凍結乾燥して４００ｍｇの保護ペプチド、Ｎ−［（２−スルホ）−９−フルオレンリメトキシカルボニル］５−ポリミキシンペプチド［（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３］の塩を黄褐色の粉末として得た。遠心分離後に残留した細胞をメタノール／水で抽出して追加の材料を得た。
【０２３４】
樹脂法：実施例２での最初の発酵による１リットルのデアシラーゼ酵素からの細胞を３×の水で洗浄し、０．０２Ｍリン酸アンモニウム緩衝液で元の容量に戻し、２．０ｇのＮ−（２−スルホ）−９−フルオレンリメトキシカルボニル）］５−ポリミキシンＢと一緒にした。混合物を１７５ｒｐｍで振盪機にかけ、３０℃で１７時間保持した。次いで、混合物を遠心分離機にかけて分離し、デカント物を２０ｍＬのＡｍｂｅｒｃｈｒｏｍ（登録商標）ＣＧ−１６１ｍ樹脂と一緒にした。樹脂を１５０ｍＬの水、１００ｍＬの１０％ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ（３×）および１００ｍＬの２０％ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ（２×）で洗浄した。次いで、ペプチドを２×の３０％ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏで溶出させ、蒸発させてＣＨ３ＣＮを除去し、凍結乾燥して２８３ｍｇの粉末、保護ペプチド（ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３を得た。次いで、ペプチドの第２の量を３×の１００ｍＬの５０％ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏで溶出させた。溶出液を一緒にし、蒸発させ、凍結乾燥して４６０ｍｇの保護ペプチドを粉末として得た。
【０２３５】
ペプチドの第３の量を、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ、６×１００ｍＬそれぞれを用いて、遠心分離後に残留した細胞から抽出した。抽出物を一緒にし、水で４リットルにして硫酸でｐＨ２．１に調節し、Ａｍｂｅｒｃｈｒｏｍ（登録商標）ＣＧ−１６１ｍ樹脂と一緒にした。樹脂を水で濯ぎ、次いで、ペプチドを１００ｍＬの３５％ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏで溶出させ、これを蒸発させ、凍結乾燥して９４ｍｇの高純度ペプチドを得た。残留するペプチドを５０％ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏで溶出させ、ＣＨ３ＣＮを除去し、凍結乾燥して５３９ｍｇの保護ペプチドを得た。この手順により、保護ペプチド［（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニル）］５ポリミキシンＢペプチド［（ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＢＰ−３）］を黄褐色の粉末、Ｃ１２２Ｈ１３４Ｎ１６Ｏ３７Ｓ５として単離した。樹脂法と沈降法の両方により調製した材料は、ＨＰＬＣを用いて分析し、カラム溶離液を２１５ｎｍでモニターして約７５％の純度であった。ＥＳＩＭＳ：Ｃ１２２Ｈ１３６Ｎ１６Ｏ３７Ｓ５についてのｍ／ｚ、計算：（Ｍ＋２Ｈ）＋２＝１２８８．４；結果：１２８８。
【実施例４】
【０２３６】
可溶化した酵素による保護ポリミキシンの脱アシル化
実施例２によって実施した２５０ｍＬのアクチノプラーネス  ユタヘンシス発酵からの水洗した細胞を、１２５ｍＬの０．０２Ｍリン酸アンモニウム緩衝液と一緒にし、ｐＨ１０．１に調節して３０分間撹拌した。酵素を含むこの溶液を遠心分離にかけて分離し、ｐＨ８．０に調節した。この溶液を脱アシル化に直接使用するか、または凍結乾燥して保存用の粉末形態を得た。ｐＨ８．０で可溶化酵素を含むデカント物を１００ｍｇ（ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ポリミキシンＢと一緒にし、１０ｍＬのＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ（１：１）に溶解させ、１７５ｒｐｍ、８４℃で振盪機にかけた。２時間後、完了した反応物を振盪機から取り出し、ｐＨ２．０に調節した。沈殿物を４０ｍＬのメタノールと混合し、可溶性生成物を黒っぽい沈殿物から分離した。８０ｍｇの（ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３を含む溶液を２ｍＬにまで蒸発させ、１０ｍＬのＥｔＯＡｃに加えて、（ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３を黄褐色の粉末として沈澱させた。
【実施例５】
【０２３７】
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（保護デカペプチド）の精製
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、１４３ｍｇを、実施例３の手順により調製した。保護デカペプチドを、４０ｍＬのリン酸ナトリウム中の２０％ＣＨ３ＣＮ  ０．０５ＭにｐＨ６．７で溶解させた。不溶物を遠心分離により除去した。デカント物を、スラリー充てんして２０ｍＬの２０％ＣＨ３ＣＮ−０．０５ＭｐＨ６．７緩衝液で濯いでおいたスチレン−ジビニルベンゼン樹脂カートリッジ（Ｓｕｐｅｌｃｏ  ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標）、２５×３５ｍｍ）にかけた。流速は、ＲＴで約２ｍＬ／分であった。カートリッジを、ｐＨ６．７でリン酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。集めた画分をＨＰＬＣで分析して評価した。所望の生成物を３３％と４０％のＣＨ３ＣＮ溶離液で溶出させた。生成物を含む画分をプールし、ＣＨ３ＣＮを真空下で除去した。プールした生成物を０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））で吸着させて脱塩し、次いで、これを４×１．０ｍＬ分量の蒸留水で濯いだ。生成物を１６ｍＬの６７％ＣＨ３ＣＮでカートリッジから溶出させ、溶媒を真空下で蒸発させ、得られた水溶液のｐＨを希釈ＮａＯＨで約５．８に調節し、次いで生成物を凍結乾燥した。収量：７２ｍｇの淡褐色固体、（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、Ｃ１２２Ｈ１３４Ｎ１６Ｏ３７Ｓ５。ＥＳＩＭＳ：Ｃ１２２Ｈ１３６Ｎ１６Ｏ３７Ｓ５についてのｍ／ｚ、計算：（Ｍ＋２Ｈ）＋２＝１２８８．４。結果：１２８８．２。
【実施例６】
【０２３８】
Ｎ−フェニルチオカルバミル−（ＮＨａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（化合物４Ｐ）の調製
精製した（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、３．９ｍｇを、実施例５の手順により調製した。保護ペプチドを０．２０ｍＬのｐＨ８．８ホウ酸カリウム中の７５％ＭｅＯＨ  ０．２５Ｍに溶解させ、０．００３ｍＬのフェニルイソチオシアネートを加え、室温で撹拌した。フェニルイソチオシアネートは、例えばＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている。約９０分間後、反応混合物をｐＨ７．２で４ｍＬの０．４Ｍリン酸アンモニウムで希釈した。生成物溶液を０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼン樹脂カートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））にかけた。これをｐＨ６．７で６ｍＬのリン酸ナトリウム中の２０％ＣＨ３ＣＮ  ０．１０Ｍで濯いだ。生成物をｐＨ６．７で６ｍＬのリン酸ナトリウム中の４０％ＣＨ３ＣＮ  ０．０５Ｍで溶出させた。溶媒を真空下で蒸発させ、生成物を実施例５の手順を用いて脱塩した。収量：３．５ｍｇの白色固体、Ｎ−フェニルチオカルバミル−（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、Ｃ１２９Ｈ１３７Ｎ１７Ｏ３７Ｓ６。ＥＳＩＭＳ：Ｃ１２９Ｈ１３９Ｎ１７Ｏ３７Ｓ６についてのｍ／ｚ、計算：（Ｍ＋２Ｈ）＋２＝１３５５．４。結果：１３５５．６。
【実施例７】
【０２３９】
Ｎ−フェニルチオカルバミル−ＰＢＰ−３（ＰＴＣ−ＰＢＰ−３、化合物４）の調製
Ｎ−フェニルチオカルバミル−（ＮＨａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、８．４ｍｇを、実施例６の手順により調製した。保護ペプチドを０．２０ｍＬのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解させ、０．０１０ｍＬのピペリジンを加え、ＲＴで６０分間撹拌した。反応混合物を４ｍＬの０．１０Ｍ酢酸アンモニウム−０．０５０Ｍ酢酸（ｐＨ５．０５）、０．００６ｍＬの酢酸および４ｍＬのＭｅＯＨで希釈した。透明溶液を、ｐＨ５．０で５０％ＭｅＯＨの０．０５Ｍ、酢酸アンモニウム緩衝液で調節しておいたＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラム（１０×２０ｍｍ、約２ｍＬ容量）にかけた。サンプルをロードしたカラムを４ｍＬの５０％ＭｅＯＨ−０．０５Ｍ酢酸アンモニウムｐＨ５．０で濯ぎ、次いで４ｍＬの０．０５Ｍ酢酸アンモニウムｐＨ５．０緩衝液で濯いだ。生成物をｐＨ２．３で８ｍＬの０．２７Ｍ硫酸ナトリウムで溶出させた。生成物を０．５ｇのスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））にかけてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を２０％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。プールした生成物含有画分から溶媒を真空下で除去し、次いでこれを実施例５の手順を用いて脱塩してｐＨを６．３に調節し、次いで凍結乾燥した。収量：２．７ｍｇの白色固体、ＰＴＣ−ＰＢＰ−３、Ｃ５４Ｈ８７Ｎ１７Ｏ１２Ｓ。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５４Ｈ８８Ｎ１７Ｏ１２Ｓについて、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１９８．７。結果：１１９８．５（Ｍ＋Ｈ）＋、１２２０．４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【実施例８】
【０２４０】
（ＮＨａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４−ＰＢＰ−２（保護ノナペプチド）
Ｎ−フェニルチオカルバミル−（ＮＨａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、２．９ｍｇを、実施例６の手順により調製した。保護ペプチドを０．３０ｍＬの無水トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）中に溶解させ、５０℃の水浴で１５分間加熱した。ＴＦＡを乾燥窒素の気流下で蒸発させ、残留物をｐＨ７．２の１２ｍＬの０．２０Ｍリン酸アンモニウムおよび４９ｍｇトリグリシン（アルキル化剤の捕捉剤として）を含む６ｍＬのＣＨ３ＣＮ中に溶解させた。潜在的な反応性中間体を除去するために、生成物溶液を、まず０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼン樹脂カートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））にかけ、これをｐＨ７．２で１０ｍＬのリン酸アンモニウム中の４０％ＣＨ３ＣＮ  ０．０４Ｍで溶出させた。生成物含有画分をプールし（約１８ｍＬ）、１２ｍＬの蒸留水で希釈し、次いで新鮮な０．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標）樹脂カートリッジにかけた。ここで、ｐＨ７．２でリン酸アンモニウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物含有画分をプールし（約１２ｍＬ）、８ｍＬの０．５４Ｍ硫酸ナトリウムｐＨ２．３緩衝液を加え、生成物を実施例５の手順を用いて脱塩した。溶液ｐＨを５．９に調節し、サンプルを凍結乾燥した。収量：１．８ｍｇの白色固体、（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４−ＰＢＰ−２、Ｃ１０３Ｈ１１６Ｎ１４Ｏ３１Ｓ４。ＥＳＩＭＳ：Ｃ１０３Ｈ１１８Ｎ１４Ｏ３１Ｓ４についてのｍ／ｚ、計算（Ｍ＋２Ｈ）＋２＝１０８７．３。結果：１０８７．０。
【実施例９】
【０２４１】
ｎ−デカノイル−ＰＢＰ−３（化合物１および１Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、２１．８ｍｇを、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを０．２０ｍＬのＤＭＦ、０．０２０ｍＬの蒸留水および０．０３０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３（ｐＨ約８．９）中に溶解させ、４．５ｍｇ  ｎ−デカノイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（活性化エステル）を加え、ＲＴで５５分間撹拌した（ＨＰＬＣによれば約８２％の転換率）。１．８ｍｇの追加の活性化エステルを加え、ＲＴで２０分後の化合物１Ｐへの転換率は少なくとも９５％であった。反応ミックスに０．０１０ｍＬのピペリジンを加えた。ＲＴで３５分後、反応混合物をｐＨ２．３で４ｍＬ、０．２５Ｍ硫酸アンモニウムで希釈してｐＨ３．０の非常に乳化した混合物を得た。これを４ｍＬの酢酸エチルで抽出し、生成物を含む水相を４ｍＬの蒸留水で希釈した。生成物を、最初にＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５カラム（２．５×４０ｃｍ）を用いたサイズ排除クロマトグラフィーにより、ｐＨ２．３で０．１０Ｍ硫酸アンモニウムで溶出させて単離した。生成物含有画分をプールし、０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））を用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ６．７でリン酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を２５％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。実施例５の手順を用いて生成物を脱塩し凍結乾燥した。収量：２．５ｍｇの白色固体、化合物１、Ｃ５７Ｈ１００Ｎ１６Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５７Ｈ１０１Ｎ１６Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２１７．８。結果：１２１７（Ｍ＋Ｈ）＋、１２３９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【実施例１０】
【０２４２】
Ｎ−（ｎ−デカノイル）−ｐ−アミノフェニルアセチル−ＰＢＰ−３（化合物２および２Ｐ）
（ＮＨａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、１８．５ｍｇを、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを０．２０ｍＬのＤＭＦおよび０．０３０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３（ｐＨ約８．９）中に溶解させ、５．８ｍｇＮ−（ｎ−デカノイル）−ｐ−アミノフェニルアセチル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（Ｃ１０−ＰＡＰＡ−ＯＳｕ）を加え、ＲＴで５０分間撹拌した（ＨＰＬＣによれば約６９％の転換率）。さらに２．５ｍｇのＣ１０−ＰＡＰＡ−ＯＳｕを加え、ＲＴで３０分後、化合物２Ｐへの転換率は約８７％であった。反応ミックスに０．０１０ｍＬのピペリジンを加えた。ＲＴで２５分後、反応混合物をｐＨ２．３で５ｍＬの０．２０Ｍ硫酸アンモニウムで希釈し、ｐＨ２．８の非常に乳化した混合物を得た。これを５ｍＬの酢酸エチルで抽出した。生成物を、最初にＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５カラム（２．５×４０ｃｍ）を用いたサイズ排除クロマトグラフィーにより、ｐＨ２．３で０．１０Ｍ硫酸アンモニウムで溶出させて単離した。生成物含有画分をプールし、０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））を用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸アンモニウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させ、生成物を３０％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）ＬＨ−２０カラム（２．５×４０ｃｍ）を用いてサイズ排除クロマトグラフィーにより、ＭｅＯＨ中の０．０２６Ｍ酢酸アンモニウム／０．０５３Ｍ酢酸で溶出させて、さらに精製を行った。生成物含有画分を真空下で蒸発させてほぼ乾燥させ、残留物を１０ｍＬの蒸留水に溶解させ、次いで実施例５の手順を用いて生成物を脱塩し凍結乾燥した。収量：２．５ｍｇの白色固体、化合物２、Ｃ６５Ｈ１０７Ｎ１７Ｏ１４。ＦＡＢＭＳ：Ｃ６５Ｈ１０８Ｎ１７Ｏ１４について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１３５０．８。結果：１３５１（Ｍ＋Ｈ）＋、１３７３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【実施例１１】
【０２４３】
ｎ−オクタノイルカルバミル−ＰＢＰ−３（化合物３および３Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、１０．２ｍｇを、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを０．２０ｍＬのＤＭＦおよび０．０２０ｍＬの蒸留水中に溶解させ、０．００３ｍＬのオクチルイソシアネートを加え、ＲＴで６０分間撹拌した（ＨＰＬＣによれば約３１％の転換率）。オクチルイソシアネートは、例えばＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている。反応混合物に０．０２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３  ｐＨ８．９を加え、ＲＴで２０分後、化合物３Ｐへの転換率は約９１％であった。ＲＴでさらに３５分後、０．０１０ｍＬのピペリジンを加えた。ＲＴで３０分後、反応混合物をＭｅＯＨ中の４ｍＬの０．０２６Ｍ酢酸アンモニウム／０．０５３Ｍ酢酸で希釈し、生成物を実施例１０と同様にしてＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）ＬＨ−２０カラムを用いてサイズ排除クロマトグラフィーにより単離した。生成物含有画分を真空下で蒸発させてほぼ乾燥させ、残留物を８ｍＬの蒸留水に溶解し、次いで実施例５の手順を用いて生成物を脱塩し凍結乾燥した。収量：２．３ｍｇの白色固体、化合物３、Ｃ５６Ｈ９９Ｎ１７Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５６Ｈ１００Ｎ１７Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２１８．８。結果：１２１９（Ｍ＋Ｈ）＋、１２４１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【実施例１２】
【０２４４】
フェニルカルバミル−ＰＢＰ−３（化合物５および５Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、１９．８ｍｇ、（約８５％純度）を、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを０．２０ｍＬのＤＭＦおよび０．０２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３  ｐＨ８．７中に溶解させ、０．００５ｍＬのフェニルイソシアネートを加え、室温で撹拌して化合物５Ｐを得た。フェニルイソシアネートは、例えばＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている。ＲＴで４５分後、０．０２０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。ＲＴで４５分後、反応混合物を４ｍＬの０．１０Ｍ酢酸アンモニウム−０．０５Ｍ酢酸、０．０１２ｍＬの酢酸および４ｍＬのＭｅＯＨで希釈し、見掛けｐＨ６．２で透明な溶液を得た。生成物を、実施例７と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラムを用いて単離した。生成物を、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮを用いて、０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））でさらに精製した。生成物を２０％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物含有画分を、実施例５の手順を用いて生成物を脱塩し凍結乾燥した。収量：４．４ｍｇの白色固体、化合物５、Ｃ５４Ｈ８７Ｎ１７Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５４Ｈ８８Ｎ１７Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１８２．７。結果：１１８３（Ｍ＋Ｈ）＋、１２０５（Ｍ＋Ｎａ）＋、１２２１（Ｍ＋Ｋ）＋。
【実施例１３】
【０２４５】
ベンゾイル−ＰＢＰ−３（化合物６および６Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、２０．４ｍｇ、（約８５％純度）を、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを０．２０ｍＬのＤＭＦおよび０．０２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３  ｐＨ８．０中に溶解させ、８．４ｍｇのベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを加え、２９℃で撹拌し化合物６Ｐを得た。６０分後、０．０２０ｍＬのピペリジンを加えた。ＲＴで２０分後、反応混合物を４ｍＬの０．１０Ｍ酢酸アンモニウム−０．０５Ｍ酢酸、０．０１３ｍＬの酢酸および４ｍＬのＭｅＯＨで希釈し、透明溶液を得た。生成物を、実施例７と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラムを用いて単離した。生成物を、Ｄｅｌｔａ−Ｐａｋ（登録商標）Ｃ１８カラム（２５×２１０ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．）を用いて分取ＨＰＬＣでさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．５で０．０５Ｍ硫酸ナトリウムで緩衝化させたイソプロパノール勾配液（１００分にわたって１８％〜２３％、線形、５ｍＬ／分で）を用いて溶出させた。生成物含有画分をプールし、溶媒を真空下で除去し、生成物を実施例５の手順を用いて脱塩し凍結乾燥した。収量：１．６ｍｇの白色固体、化合物６、Ｃ５４Ｈ８６Ｎ１６Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５４Ｈ８７Ｎ１６Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１６６．７。結果：１１６７（Ｍ＋Ｈ）＋、１１８９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【実施例１４】
【０２４６】
２−ナフトキシアセチル−ＰＢＰ−３（化合物７および７Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、１９．０ｍｇを、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを、０．４０ｍＬのｐＨ８．８ホウ酸カリウム中の７５％ＭｅＯＨ  ０．２５Ｍに溶解させ、６．３ｍｇの２−ナフトキシアセチル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを加え、室温で撹拌して化合物７Ｐを得た。３５分後、０．０２０ｍＬのピペリジンを加えた。ＲＴで３０分後、反応混合物を希釈し、実施例７と同様にして生成物をＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラムを用いて単離した。生成物を、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮを用いて、０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））でさらに精製した。生成物を２５％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物含有画分をプールし、等容量の蒸留水で希釈し、生成物を実施例５の手順を用いて脱塩し凍結乾燥した。収量：４．７ｍｇの白色固体、化合物７、Ｃ５９Ｈ９０Ｎ１６Ｏ１４。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５９Ｈ９１Ｎ１６Ｏ１４について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２４７．７。結果：１２４７（Ｍ＋Ｈ）＋、１２６９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【実施例１５】
【０２４７】
ｐ−トルエンスルホニル−ＰＢＰ−３（化合物８および８Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３、２１．７ｍｇを、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを、０．５０ｍＬのｐＨ８．８ホウ酸カリウム中の７５％ＭｅＯＨ  ０．２５Ｍに溶解させ、５．１ｍｇのｐ−トルエンスルホニルクロリドを加え、室温で撹拌して化合物８Ｐを得た。ｐ−トルエンスルホニルクロリドは、例えばＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている。６０分後、０．０２０ｍＬのピペリジンを加えた。ＲＴで３０分後、反応混合物を希釈し、生成物を実施例７と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラムを用いて単離した。生成物を、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮを用いて、０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））でさらに精製した。生成物を２０％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物含有画分をプールし、等容量の蒸留水で希釈し、生成物を実施例５の手順を用いて脱塩し凍結乾燥した。収量：４．９ｍｇの白色固体、化合物８、Ｃ５４Ｈ８８Ｎ１６Ｏ１４Ｓ。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５４Ｈ８９Ｎ１６Ｏ１４Ｓについて、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２１７．６、結果：１２１７（Ｍ＋Ｈ）＋、１２３９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【実施例１６】
【０２４８】
ｎ−オクタノイルカルバミル−ＰＢＰ−２（化合物９および９Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４−ＰＢＰ−２、１０．１ｍｇを、実施例８の手順により調製した。保護ペプチドを０．２０ｍＬのＤＭＦおよび０．０２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３  ｐＨ８．７中に溶解させ、０．００３ｍＬのオクチルイソシアネートを加え、室温で撹拌して化合物９Ｐを得た。オクチルイソシアネートは、例えばＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている。ＲＴで４５分後、０．０２０ｍＬのピペリジンを加えた。ＲＴで４０分後、反応混合物を０．０１４ｍＬのＨ２ＳＯ４を含む１０ｍＬの２０％ＣＨ３ＣＮで希釈した。生成物を、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮを用いて、０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））で単離した。生成物を２５％と３０％のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物含有画分をプールし、溶媒を真空下で除去し、２ｍＬの１．０Ｍ酢酸アンモニウムｐＨ５．０緩衝液を加え、約０．６ｍＬの１．５Ｍ  ＮＨ４ＯＨを加えてｐＨを５．０に調節し、次いで等容量のＭｅＯＨで希釈した。生成物を実施例７と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）クロマトグラフィーを用いて単離した。生成物を、上記と同様にして、０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジを用いてさらに精製した。但し、溶離液はｐＨ９．９で用いた（０．１０Ｍ  ＮＨ４ＯＨ−０．０１Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４）。生成物を３０％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物含有画分をプールし、溶媒を真空下で除去し、生成物を実施例５の手順を用いて脱塩し凍結乾燥した。収量：２．７ｍｇの白色固体、Ｃ５２Ｈ９２Ｎ１６Ｏ１１。ＦＡＢＭＳ：  Ｃ５２Ｈ９３Ｎ１６Ｏ１１について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１１８．７、結果：１１１９（Ｍ＋Ｈ）＋、１１４１（Ｍ＋Ｎａ）＋、１１５７（Ｍ＋Ｋ）＋。
【実施例１７】
【０２４９】
Ｎ−（ｎ−デシルスルホニル）グリシル−ＰＢＰ−２（化合物１０および１０Ｐ）
精製した（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４−ＰＢＰ−２、９．７ｍｇを、実施例８の手順により調製した。保護ペプチドを０．２０ｍＬのＤＭＦおよび０．０２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３  ｐＨ８．７中に溶解させ、５．２ｍｇのｎ−デシルスルホンアミドグリシル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを加え、室温で撹拌して化合物１０Ｐを得た。４５分後、０．０２０ｍＬのピペリジンを加えた。ＲＴでさらに４０分後、反応混合物を希釈し、生成物を実施例７と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラムを用いて単離した。生成物を、０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））を用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を３３％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物含有画分をプールし、溶媒を真空下で除去し、生成物を実施例５の手順を用いて脱塩し凍結乾燥した。収量：１．５ｍｇの白色固体、化合物１０、Ｃ５５Ｈ９７Ｎ１５Ｏ１４Ｓ。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５５Ｈ９８Ｎ１５Ｏ１４Ｓについて、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２２４．７。結果：１２２４．５（Ｍ＋Ｈ）＋、１２４６．５（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【実施例１８】
【０２５０】
２−Ｎ−（ｎ−デカノイル）リシル−ＰＢＰ−２（化合物１１および１１Ｐ）
精製した（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４−ＰＢＰ−２、１０．３ｍｇを、実施例８の手順により調製した。保護ペプチドを０．２０ｍＬのＤＭＦおよび０．０２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３  ｐＨ８．３中に溶解させ、８．７ｍｇの６−Ｎ−Ｆｍｏｃ−２−Ｎ−（ｎ−デカノイル）−リシル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを加え、室温で撹拌して化合物１１Ｐを得た。５０分後、０．０２０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。ＲＴで４５分後、反応混合物を希釈し、生成物を実施例７と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラムを用いて単離した。生成物を、０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））を用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を２５％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物含有画分をプールし、等容量の蒸留水で希釈し、生成物を実施例５の手順を用いて脱塩し凍結乾燥した。収量：２．０ｍｇの白色固体、化合物１１、Ｃ５９Ｈ１０４Ｎ１６Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５９Ｈ１０５Ｎ１６Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２４５．８、結果：１２４５（Ｍ＋Ｈ）＋、１２６７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【実施例１９】
【０２５１】
Ｎ−（ｎ−デカノイル）フェニルアラニル−ＰＢＰ−２（化合物１２および１２Ｐ）
約１０ｍｇの精製した（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４−ＰＢＰ−２を、実施例８の手順により調製した。保護ペプチドを、０．４０ｍＬのｐＨ８．８ホウ酸カリウム中の７５％ＭｅＯＨ  ０．２５Ｍに溶解させ、６ｍｇのＮ−（ｎ−デカノイル）−フェニルアラニル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを加え、室温で撹拌して化合物１２Ｐを得た。５０分後、０．０２０ｍＬのピペリジンを加えた。ＲＴで４５分後、反応混合物を希釈し、生成物を実施例７と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラムを用いて単離した。生成物を、０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標））を用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を３３％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物含有画分をプールし、等容量の蒸留水で希釈し、生成物を実施例５の手順を用いて脱塩し凍結乾燥した。収量：３．０ｍｇの白色固体、化合物１２、Ｃ６２Ｈ１０１Ｎ１５Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ６２Ｈ１０２Ｎ１５Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２６４．８。結果：１２６５（Ｍ＋Ｈ）＋、１２８７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【実施例２０】
【０２５２】
Ｎ−フェニルチオカルバミル−（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４ＰＢＰ−２（化合物２４Ｐ）
精製した（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４−ＰＢＰ−２、９０．２ｍｇを、実施例８の手順により調製した。実施例２３と同様にして保護ペプチドを２．０ｍＬの反応溶媒中に溶解させ、０．０５０ｍＬのフェニルイソチオシアネートを加えた。フェニルイソチオシアネートは、例えばＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている。ＲＴで８７分間撹拌した後、反応混合物をｐＨ６．７６リン酸ナトリウム緩衝液中の５０ｍＬの２０％ＣＨ３ＣＮ  ０．１Ｍで希釈した。この溶液を２．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標）カラムにかけた。ここでは、ｐＨ６．７６でリン酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を３０〜３５％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を３．１ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標）カラムを用いて脱塩し、実施例２３の手順を用いて凍結乾燥した。収量：８５ｍｇの白色固体、化合物２４Ｐ。
【実施例２１】
【０２５３】
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４ＰＢＰ−１（保護オクタペプチド）
Ｎ−フェニルチオカルバミル−（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４−ＰＢＰ−２（７０．０ｍｇ）を、実施例２０の手順により調製した。保護ペプチドを０．７０ｍＬの無水トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）中に溶解させ、５０℃水浴中で１５分間加熱した。ＴＦＡを乾燥窒素の気流下で蒸発させた。残留物をｐＨ２．３で４０ｍＬの硫酸ナトリウム中の２５％ＣＨ３ＣＮ  ０．０５Ｍに溶解させた。生成物を２．０６ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標）カラムにかけて精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を４０％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物含有画分をプールし、ＣＨ３ＣＮを真空下で３５℃で除去した。生成物を３．１ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ（登録商標）カラムを用いて吸着させて脱塩し、次いでこれを、８ｍＬ、８ｍＬおよび４ｍＬの蒸留水で濯いだ。４０ｍＬの６０％ＣＨ３ＣＮを用いてカラムから生成物をストリッピングし、溶媒を真空下で蒸発させ、水溶液を凍結乾燥した。収量：６０ｍｇの白色固体、保護オクタペプチド、Ｃ９９Ｈ１０９Ｎ１３Ｏ２９Ｓ４。ＥＳＩＭＳ：ｍ／ｚについて、計算、（Ｍ＋２Ｈ）＋２＝１０３６．８。結果：１０３６．４（Ｍ＋２Ｈ）＋２。
【実施例２２】
【０２５４】
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）３ＰＢＰ（保護ヘプタペプチド）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４−ＰＢＰ−２（０．３５ｍｇ）を、実施例８の手順により調製した。保護ペプチドを０．４０ｍＬの緩衝液（０．０２Ｍクエン酸ナトリウム、０．００６Ｍのβ−メルカプトエチルアミン、ＨＣｌでｐＨ５．５に調節した）中に溶解させた。
【０２５５】
カテプシンＣ（Ｓｉｇｍａ製品番号Ｃ８５１１、ジペプチジルアミノペプチダーゼ、ＥＣ３．４．１４．１）を、１０単位／ｍＬの濃度で同じ緩衝液中に溶解させた。次いで、カテプシンＣ溶液（０．１０ｍＬ）を０．４０ｍＬの（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４−ＰＢＰ−２溶液に加え、混合物を３７℃でインキュベートした。反応を、３．０時間（保護ヘプタペプチドへ約４３％の転換率）と２４時間（約９０％の転換率）でＨＰＬＣでモニターした。生成物ピークの相対保持時間と紫外線吸収スペクトルは、保護ヘプタペプチドが生成していることと一致した。特徴的Ｆｍｏｃ吸収スペクトルである短い保持時間ピークに見掛け上時間依存性があることは、保護ノナペプチドからのＮ−末端ジペプチドＨ２Ｎ−Ｔｈｒ−Ｄａｂ（Ｆｍｏｃ）−ＣＯ２Ｈの放出と一致している。
【実施例２３】
【０２５６】
イソニコチノイル−ＰＢＰ−３（化合物１３および１３Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（２０．５ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを、０．４０ｍＬのｐＨ８．８ホウ酸カリウム中の７５％ＭｅＯＨ  ０．２５Ｍに溶解させ、８．７ｍｇのイソニコチノイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを加えた。溶液をＲＴで６３分間撹拌して化合物１３Ｐを得た。次いで０．０３０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。ＲＴで４５分撹拌後、反応混合物を１０ｍＬのｐＨ５．０酢酸アンモニウム中の６０％ＭｅＯＨ  ０．０４Ｍおよび０．０１９ｍＬの酢酸で希釈した。透明溶液を、ｐＨ５．０酢酸アンモニウム緩衝液中の２０ｍＬの６０％ＭｅＯＨ  ０．０４Ｍで濯いで調節しておいたＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム（１０×２０ｍｍ、約２ｍＬ容量）にかけた。サンプルをロードしたカラムを１０ｍＬのｐＨ５．０酢酸アンモニウム中の６０％ＭｅＯＨ  ０．０４Ｍで濯ぎ、次いで、４ｍＬの０．０５Ｍ  ｐＨ５．０酢酸アンモニウム緩衝水溶液で濯いだ。生成物を、ｐＨ２．３で８ｍＬの０．２７Ｍ硫酸ナトリウム緩衝液で溶出させた。生成物を０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ）にかけてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を１５％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物含有画分をプールし、ＣＨ３ＣＮを３５℃で真空下で除去した。生成物溶液を、０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ）を用いて吸着させて脱塩し、次いでこれを、４×１．０ｍＬの蒸留水で濯いだ。生成物を、１２ｍＬの６７％ＣＨ３ＣＮを用いてカートリッジからストリッピングし、溶媒を真空下で蒸発させ、水溶液を凍結乾燥した。収量：９．４ｍｇの白色固体、化合物１３、Ｃ５３Ｈ８５Ｎ１７Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５３Ｈ８５Ｎ１７Ｏ１３Ｎａについて、計算：（Ｍ＋Ｎａ）＋＝１１９０．７。結果：１１９０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【実施例２４】
【０２５７】
３−インドリルエチルカルバミル−ＰＢＰ−３（化合物１４および１４Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（２２．５ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを０．３０ｍＬのコリジン／酢酸／水（４０：１：４）中に溶解させ、実施例４３の手順により調製した１８．６ｍｇの３−インドリルエチルカルバミル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを２回に分けて（ｉｎ  ｔｗｏ  ｉｎｃｒｅｍｅｎｔｓ）加えた。溶液をＲＴで１３０分間撹拌して化合物１４Ｐを得た。反応混合物をアルゴンでフラッシュし、０．０５０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去し、混合物を再度アルゴンでフラッシュした。ＲＴで２５分撹拌後、反応混合物を１０ｍＬのｐＨ５．０酢酸アンモニウム中の６０％ＭｅＯＨ  ０．０４Ｍと０．０４２ｍＬの酢酸で希釈した。生成物を、実施例２３と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて透明な反応希釈液から単離した。生成物を０．５ｇスチレン−ジビニルベンゼンカートリッジ（ＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐ）にかけてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を２０％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を実施例２３と同様にして脱塩し凍結乾燥した。収量：７．３ｍｇの白色固体、化合物１４、Ｃ５８Ｈ９２Ｎ１８Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５８Ｈ９３Ｎ１８Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２４９．７。結果：１２５０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例２５】
【０２５８】
Ｎ−アセチル−ｐ−アミノフェニルアセチル−ＰＢＰ−３（化合物１５および１５Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（２０．７ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。実施例２３と同様にして保護ペプチドを溶解し、５．８ｍｇのＮ−アセチル−ｐ−アミノフェニルアセチル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを加えた。溶液をＲＴで４８分間撹拌して化合物１５Ｐを得た。次いで０．０２０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。ＲＴで３０分撹拌後、反応混合物を１０ｍＬのｐＨ５．０酢酸アンモニウム中の５０％ＭｅＯＨ  ０．０５Ｍと０．０１３ｍＬの酢酸で希釈した。生成物を、実施例２３と同様にして、ＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて透明な反応希釈液から単離した。生成物を、０．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐカートリッジを用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を１５％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：３．２ｍｇの白色固体、化合物１５、Ｃ５７Ｈ９１Ｎ１７Ｏ１４。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５７Ｈ９２Ｎ１７Ｏ１４について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２３８．７  結果：１２３８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例２６】
【０２５９】
Ｎ−（ｎ−デカノイル）フェニルアラニル−ＰＢＰ−３（化合物１６および１６Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（２４．０ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。実施例２４と同様にして保護ペプチドを溶解し、１２．９ｍｇのＮ−（ｎ−デカノイル）フェニルアラニル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを加えた。溶液をＲＴで４８分間撹拌して化合物１６Ｐを得た。次いで０．０５０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。ＲＴで３０分撹拌後、反応混合物を希釈し、生成物を実施例２４と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて単離した。生成物を、０．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐカートリッジを用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を３０％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：７．５ｍｇの白色固体、化合物１６、Ｃ６６Ｈ１０９Ｎ１７Ｏ１４。ＦＡＢＭＳ：Ｃ６６Ｈ１１０Ｎ１７Ｏ１４について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１３６４．８。結果：１３６５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例２７】
【０２６０】
４−ｎ−デシルフェニルカルバミル−ＰＢＰ−３（化合物１７および１７Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（１２．１ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを０．４０ｍＬのコリジン／酢酸／水（２０：１：２）中に溶解させ、実施例４３の手順によって調製した９．７ｍｇの４−ｎ−デシルフェニルカルバミル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを２回に分けて、０．０３０ｍＬのジイソプロピルエチルアミンと一緒に加え、ＲＴで約２時間撹拌して化合物１７Ｐを得た。ピペリジン、０．０５５ｍＬを加えて保護基を除去した。ＲＴで４０分撹拌後、反応混合物を１０ｍＬのｐＨ５．０酢酸アンモニウム中の６０％ＭｅＯＨ  ０．０４Ｍと０．０６０ｍＬの酢酸で希釈した。生成物を、実施例２３と同様にして、ＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて反応希釈ろ液（ＰＶＤＦ膜）から単離した。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：５．０ｍｇの白色固体、化合物１７、Ｃ６４Ｈ１０５Ｎ１７Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：  Ｃ６４Ｈ１０６Ｎ１７Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１３２０．８。結果：１３２２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例２８】
【０２６１】
４−ビフェニルカルバミル−ＰＢＰ−３（化合物１８および１８Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（１１．９ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを０．３０ｍＬのコリジン／酢酸／水（２０：１：２）中に溶解させ、７．０ｍｇの４−ビフェニルイソシアネート（例えば、Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている）を２回に分けて加えた。ＲＴで約２時間撹拌後、化合物１８Ｐを得た。０．０５０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。ＲＴで３２分撹拌後、反応混合物を１０ｍＬのｐＨ５．０酢酸アンモニウム中の６０％ＭｅＯＨ  ０．０４Ｍと０．０３５ｍＬの酢酸で希釈した。生成物を、実施例２３と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて反応希釈ろ液（ＰＶＤＦ膜）から単離した。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：５．１ｍｇの白色固体、化合物１８、Ｃ６０Ｈ９１Ｎ１７Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ６０Ｈ９２Ｎ１７Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２５８．７。結果：１２５８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例２９】
【０２６２】
ベンゾイルオキシアセチル−ＰＢＰ−３（化合物１９および１９Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（２３．５ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。実施例２４と同様にして保護ペプチドを溶解し、１２．５ｍｇのベンゾイルオキシアセチル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを加え、溶液をＲＴで５６分間撹拌して化合物１９Ｐを得た。次いでピペリジン、０．０５０ｍＬを加えて保護基を除去した。ＲＴで３０分撹拌後、反応混合物を希釈し、生成物を実施例２４と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて単離した。生成物を、０．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐカートリッジを用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を１７．５％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を実施例２３と同様にして脱塩し凍結乾燥した。収量：７．７ｍｇの白色固体、化合物１９、Ｃ５６Ｈ９０Ｎ１６Ｏ１４。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５６Ｈ９１Ｎ１６Ｏ１４について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２１１．７。結果：１２１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例３０】
【０２６３】
４−フェニルオキシフェニルカルバミル−ＰＢＰ−３（化合物２０および２０Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（１６．６ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを実施例２４と同様にして溶解し、７．７ｍｇの４−フェニルオキシフェニルイソシアネートを加え、溶液をＲＴで８５分間撹拌して化合物２０Ｐを得た。４−フェニルオキシフェニルイソシアネートは、例えばＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている。ピペリジン、０．０４０ｍＬを加えて保護基を除去した。ＲＴで１５分撹拌後、反応混合物を希釈し、生成物を実施例２４と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて単離した。生成物を、０．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐカートリッジを用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を２５％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：５．１ｍｇの白色固体、化合物２０、Ｃ６０Ｈ９１Ｎ１７Ｏ１４。ＦＡＢＭＳ：Ｃ６０Ｈ９２Ｎ１７Ｏ１４について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２７４．７。結果：１２７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例３１】
【０２６４】
４−クロロフェニルカルバミル−ＰＢＰ−３（化合物２１および２１Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（１２．０ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを実施例２４と同様にして溶解し、約８．２ｍｇの４−クロロフェニルイソシアネートを２回に分けて加えた。４−クロロフェニルイソシアネートは、例えばＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている。溶液をＲＴで８０分間撹拌して化合物２１Ｐを得た。次いで０．０４０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。反応混合物をＲＴで２７分間撹拌し、実施例２３と同様にして希釈した。生成物を、実施例２３と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて希釈反応ろ液（ＰＶＤＦ膜）から単離した。生成物を、０．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐカートリッジを用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を２５％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：３．６ｍｇの白色固体、化合物２１、Ｃ５４Ｈ８６Ｎ１７Ｏ１３Ｃｌ。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５４Ｈ８７Ｎ１７Ｏ１３Ｃｌについて、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２１６．６。結果：１２１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例３２】
【０２６５】
ベンジルカルバミル−ＰＢＰ−３（化合物２２および２２Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（１２．２ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを実施例２４と同様にして溶解し、約０．００４ｍＬのベンジルイソシアネート（例えば、Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている）を加えた。溶液をＲＴで４５分間撹拌して化合物２２Ｐを得た。次いで０．０４０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。ＲＴで３５分撹拌後、実施例２３と同様にして反応混合物を希釈し、生成物を、実施例２３と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて反応希釈液から単離した。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：５．５ｍｇの白色固体、化合物２２、Ｃ５５Ｈ８９Ｎ１７Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５５Ｈ９０Ｎ１７Ｏ１３について、計算：Ｍ＋Ｈ）＋＝１１９６．７。結果：１１９６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例３３】
【０２６６】
シクロヘキシルカルバミル−ＰＢＰ−３（化合物２３および２３Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（１９．３ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを実施例２４と同様にして溶解し、０．００８ｍＬのシクロヘキシルイソシアネートを加えた。シクロヘキシルイソシアネートは、例えばＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている。溶液をＲＴで３０分間撹拌して化合物２３Ｐを得た。次いで０．０５０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。反応混合物をＲＴで３５分間撹拌し希釈した。生成物を実施例２４と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて単離し、次いで０．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐカートリッジを用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を１８％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：５．１ｍｇの白色固体、化合物２３、Ｃ５４Ｈ９３Ｎ１７Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５４Ｈ９４Ｎ１７Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１８８．７。結果：１１８９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例３４】
【０２６７】
フェニルチオカルバミル−ＰＢＰ−２（化合物２４）
精製したフェニルチオカルバミル−（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４−ＰＢＰ−２（１３．７ｍｇ、実施例２０からの化合物２４Ｐ）を０．２０ｍＬのＤＭＦおよび０．０１０ｍＬのピペリジン中に溶解させた。ＲＴで１５分撹拌後、反応混合物を８ｍＬのｐＨ５．０酢酸アンモニウム中の５０％ＭｅＯＨ  ０．０５Ｍと０．００６ｍＬの酢酸で希釈した。生成物を、実施例２３と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて反応希釈液から単離した。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：６．９ｍｇの白色固体、化合物２４、Ｃ５０Ｈ８０Ｎ１５Ｏ１１Ｓ  ＦＡＢＭＳ：Ｃ５０Ｈ８１Ｎ１５Ｏ１１Ｓについて、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０９８．６。結果：１０９９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例３５】
【０２６８】
ｎ−デカノイル−ＰＢＰ−１（化合物２５および２５Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）４−ＰＢＰ−１（１６．２ｍｇ）を、実施例２０の手順により調製した。保護ペプチドを実施例２４と同様にして溶解し、１２．６ｍｇのｎ−デカノイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを２回に分けて加えた。溶液をＲＴで約２時間撹拌して化合物２５Ｐを得た。次いで０．０５０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。ＲＴで３７分撹拌後、反応混合物を希釈し、生成物を実施例２４と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて単離した。生成物を、０．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐカートリッジを用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を２４％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：２．６ｍｇの白色固体、化合物２５、Ｃ４９Ｈ８５Ｎ１３Ｏ１０。ＦＡＢＭＳ：Ｃ４９Ｈ８６Ｎ１３Ｏ１０について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１０１６．７。結果：１０１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例３６】
【０２６９】
ｎ−オクチルカルバミル−コリスチンデカペプチド（化合物５１および５１Ｐ）
実施例４５の手順によって調製した（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−コリスチンデカペプチド（２０．２ｍｇ）を実施例２４と同様にして溶解し、０．００６ｍＬのｎ−オクチルイソシアネートを加えた。オシルイソシアネートは、例えばＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている。溶液をＲＴで４８分間撹拌して化合物５１Ｐを得た。次いで０．０５０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。ＲＴで２５分撹拌後、反応混合物を希釈し、ＰＶＤＦ−膜を通して濾過した。生成物を、実施例２４と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いてろ液から単離した。生成物を、０．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐカートリッジを用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を２２％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：３．０ｍｇの白色固体、化合物５１、Ｃ５３Ｈ１０１Ｎ１７Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５３Ｈ１０２Ｎ１７Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１８４．８。結果：１１８５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例３７】
【０２７０】
Ｎ−（ｎ−デカノイル）フェニルアラニル−コリスチンデカペプチド（化合物５２および５２Ｐ）
実施例４５の手順によって調製した（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−コリスチンデカペプチド（２０．７ｍｇ）を実施例２４と同様にして溶解し、９．５ｍｇのＮ−（ｎ−デカノイル）フェニルアラニル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを加えた。溶液をＲＴで４６分間撹拌して化合物５２Ｐを得た。次いで０．０５０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。反応混合物をＲＴで２５分間撹拌し希釈した。生成物を実施例２４と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて単離し、０．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐカートリッジを用いて、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させてさらに精製した。生成物を３０．５％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：２．５ｍｇの白色固体、化合物５２、Ｃ６３Ｈ１１１Ｎ１７Ｏ１４。ＦＡＢＭＳ：Ｃ６３Ｈ１１２Ｎ１７Ｏ１４について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１３３０．９。結果：１３３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例３８】
【０２７１】
Ｐ−トルエンスルホニル−コリスチンデカペプチド（化合物５３および５３Ｐ）
実施例４５の手順によって調製した（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−コリスチンデカペプチド（２０．８ｍｇ）を実施例２４と同様にして溶解し、６．８ｍｇのｐ−トルエンスルホニルクロリド（例えば、Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている）を加えた。反応をＲＴで５１分間撹拌して化合物５３Ｐを得た。次いで０．０５０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。ＲＴで４７分撹拌後、反応混合物を希釈し、生成物を実施例２４と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて単離した。生成物を、０．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐカートリッジを用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を２０％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：１．１ｍｇの白色固体、化合物５３、Ｃ５１Ｈ９０Ｎ１６Ｏ１４Ｓ。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５１Ｈ９１Ｎ１６Ｏ１４Ｓについて、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１８３．７。結果：１１８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例３９】
【０２７２】
［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１および［Ｌｅｕ７］−ポリミキシンＢ１の単離
市販のポリミキシンＢサルフェート（４６ｍｇ）を１０ｍＬの０．０５Ｍ硫酸ナトリウムｐＨ２．３緩衝液中に溶解させた。約９ｍＬのサンプル溶液をＷａｔｅｒｓ  Ｄｅｌｔａ−Ｐａｋ（登録商標）Ｃ−１８  Ｒａｄｉａｌ−Ｐａｋカラム（２．５×２１ｃｍ）に注入し、これを２２％〜３２％のＣＨ３ＣＮ線形勾配を用いて、室温で５．０ｍＬ／分で１２０分かけて溶出させた。ｐＨ２．３で溶離液を約０．０４Ｍ硫酸ナトリウムで緩衝化させた。溶出液のＵＶ吸収を２２５ｎｍでモニターした。［Ｉｌｅ７］変異体は約６５分で溶出し、主成分のポリミキシンＢ１（［Ｌｅｕ７］−ポリミキシンＢ１）は約７７分で溶出した。ＨＰＬＣ分析で測定して所望の生成物を含む画分を別々にプールし、ＣＨ３ＣＮを真空下、３５℃で蒸発させ、実施例２３と同様にして水溶液を脱塩し、凍結乾燥した。収量：３．８ｍｇの白色固体、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１、Ｃ５６Ｈ９８Ｎ１６Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５６Ｈ９９Ｎ１６Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２０３．８。結果：１２０４（Ｍ＋Ｈ）＋；１８ｍｇの白色固体、［Ｌｅｕ７］−ポリミキシンＢ１、Ｃ５６Ｈ９８Ｎ１６Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５６Ｈ９９Ｎ１６Ｏ１３、について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１２０３．８。結果：１２０４（Ｍ＋Ｈ）＋。それぞれ約２ｍｇの生成物を１．０ｍＬの６ＭＨＣｌに別々に溶解し、約１２０℃で２２時間加熱した。真空下、５０℃で蒸発させて溶媒を除去し、残留物を１．０ｍＬの蒸留水に溶解させた。サンプルを、ｐＨ１０．１ホウ酸ナトリウムで緩衝化したＣＨ３ＣＮ水溶液中で５０℃で５分間、Ｆｍｏｃクロリドで誘導化した。アミノ酸Ｆｍｏｃ誘導体を、分析用逆相カラム（Ｃ１８、１５ｃｍ）を用いて４０℃でＣＨ３ＣＮ勾配で溶出させてｐＨ６．７で分離した。ピーク面積を２６４ｎｍで積分し、標準Ｆｍｏｃアミノ酸の保持時間と対応させてアミノ酸を特定した。
【０２７３】
【表６】
2011256189.tif 000051
【実施例４０】
【０２７４】
シクロヘキシルカルバミル−［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンデカペプチド（化合物４８および４８Ｐ）
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（５５．８ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。実施例２４と同様にして保護ペプチドを０．６０ｍＬの反応溶媒中に溶解させ、０．０１２ｍＬのシクロヘキシルイソシアネートを加えた。シクロヘキシルイソシアネートは、例えばＡｌｄｒｉｃｈから市販されている。溶液をＲＴで５０分間撹拌して化合物４８Ｐを得た。次いで０．１０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。ＲＴで３０分撹拌後、反応混合物を希釈し、生成物を実施例２４と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて単離した。生成物含有画分をプールし（８ｍＬ）、Ｗａｔｅｒｓ  Ｄｅｌｔａ−Ｐａｋ（登録商標）Ｃ−１８  Ｒａｄｉａｌ−Ｐａｋカラム（２．５×２１ｃｍ）に注入し、これを１５％〜２５％のＣＨ３ＣＮ線形勾配を用いて、室温で５．０ｍＬ／分で１２０分かけて溶出させた。溶離液はｐＨ２．３で約０．０４Ｍ硫酸ナトリウムで緩衝化させた。溶出液のＵＶ吸収を２２５ｎｍでモニターした。シクロヘキシルカルバミル−［Ｉｌｅ７］変異体（化合物４８）は約８３分で溶出し、主成分のシクロヘキシルカルバミル−［Ｌｅｕ７］−ポリミキシンデカペプチド（化合物２３）は約９３分で溶出した。実施例３９と同様にして生成物画分をプールし、脱塩し凍結乾燥した。収量：２．６ｍｇの白色固体、化合物４８、Ｃ５４Ｈ９３Ｎ１７Ｏ１３。ＦＡＢＭＳ：Ｃ５４Ｈ９４Ｎ１７Ｏ１３について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１１８８．７。結果：１１８９（Ｍ＋Ｈ）＋；および２０．１ｍｇの白色固体、化合物２３。アミノ酸分析はどちらのサンプルも実施例３９と同様にして実施した。
【０２７５】
【表７】
2011256189.tif 000052
【実施例４１】
【０２７６】
２−Ｎ−（ｎ−デカノイル）リシル−ＰＢＰ−３（化合物５４および５４Ｐ）の調製
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−ＰＢＰ−３（２１．７ｍｇ）を、実施例３の手順により調製した。保護ペプチドを実施例２４と同様にして溶解し、１１．８ｍｇの６−Ｎ−Ｆｍｏｃ−２−Ｎ−（ｎ−デカノイル）リシル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを加えた。溶液をＲＴで４５分間撹拌して化合物５４Ｐを得た。次いで０．０５０ｍＬのピペリジンを加えて保護基を除去した。ＲＴで３０分撹拌後、反応混合物を希釈し、生成物を実施例２４と同様にしてＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いて単離した。生成物を、０．５ｇのＥｎｖｉＣｈｒｏｍ−Ｐカートリッジを用いてさらに精製した。この精製では、ｐＨ２．３で硫酸ナトリウム中に約０．０５Ｍの差分的に増大する濃度のＣＨ３ＣＮで溶出させた。生成物を２２．５％ＣＨ３ＣＮで溶出させた。実施例２３と同様にして生成物を脱塩し、凍結乾燥した。収量：７．２ｍｇの白色固体、化合物５４、Ｃ６３Ｈ１１２Ｎ１８Ｏ１４。ＦＡＢＭＳ：Ｃ６３Ｈ１１３Ｎ１８Ｏ１４について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝１３４５．９。結果：１３４６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【実施例４２】
【０２７７】
４−ｎ−デシルフェニルカルバミル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
１０ｍＬのアセトニトリル中のｐ−デシルアニリン（０．４５０４ｇ、１．９３ミリモル）、ジスクシンイミジルカルボネート（０．５８４０ｇ、２．２８ミリモル）およびトリエチルアミン（０．２６ｍＬ、１．９３ミリモル）の混合物を室温で終夜撹拌した。少量の不溶性固体を濾去し、ろ液を蒸発させて乾燥させた。残留物を酢酸エチルにとり、０．５Ｎ塩酸、水、飽和重炭酸塩ナトリウム溶液およびブラインで抽出し、硫酸マグネシウムで脱水し、蒸発させて生成物Ｃ２１Ｈ３０Ｎ２Ｏ４、ベージュ色の固体、０．３７８４ｇを得た。ＦＡＢＭＳ：Ｃ２１Ｈ３１Ｎ２Ｏ４について、計算：（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７５．２。結果：３７５（Ｍ＋Ｈ）＋。この中間体を実施例２７で化合物１７および１７Ｐを調製するのに使用した。
【実施例４３】
【０２７８】
３−インドリルエチルカルバミル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
２０ｍＬのアセトニトリル中のトリプタミン（０．１７３０ｇ、１．０８ミリモル）とジスクシンイミジルカルボネート（０．５２１３ｇ、２．０３ミリモル）の溶液を室温で終夜撹拌した。反応混合物を蒸発させて乾燥し、酢酸エチル中でスラリー化し、不溶性固体を濾過した。酢酸エチルの蒸発により、ガラス様の固体が得られ、これを、酢酸エチル：ヘキサンを用いたシリカゲルによる勾配溶離クロマトグラフィーで精製した。生成物を酢酸エチル：ヘキサン（８：２）で溶出させて０．１４０２ｇの所望の化合物、Ｃ１５Ｈ１５Ｎ３Ｏ４を得た。ＦＡＢＭＳ：Ｃ１５Ｈ１５Ｎ３Ｏ４について、計算：Ｍ＋＝３０１．１。結果：３０１（Ｍ）＋。この中間体を実施例２４で化合物１４および１４Ｐを調製するのに使用した。
【実施例４４】
【０２７９】
Ｎ−［（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニル）］５−コリスチン［（ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−コリスチン］
硫酸コリスチン（ポリミキシンＥ）（０．２４８１ｇ、０．１９５６ミリモル）を、７．０ｍＬ、飽和重炭酸塩ナトリウム、７．０ｍＬの水および７．０ｍＬのテトラヒドロフランの溶液中に溶解させた。硫酸コリスチンはＳｉｇｍａ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販されている。５ｍＬのテトラヒドロフラン中の（２−スルホ）−９−フルオレニルメトキシ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．５０１７ｇ、１．２０３ミリモル）の溶液を、数回に分けて４５分かけて加えた。反応液を室温で終夜撹拌し、次いで２０ｍＬの水で希釈し、１０ｍＬの６Ｎ塩酸で酸性化して油状の沈殿物を得た。混合物を冷却し、水層をデカントし、油状残留物を１００ｍＬのエタノール中に溶解させた。エタノールを真空下で蒸発させ（３５℃）、得られた固体、酢酸エチルで粉砕し、濾過、乾燥して０．４３１ｇの生成物を得た。これは、逆相カラムで勾配をかけたＨＰＬＣにより、単一の主ピーク、Ｎ−［２−（スルホ）−９−フルオレニルメトキシカルボニル）］５−コリスチン、［Ｃ１２８Ｈ１５２Ｎ１６０３８Ｓ５］を示した。Ｃ１２８Ｈ１５４Ｎ１６０３８Ｓ５についてのｍ／ｚ、計算（Ｍ＋２Ｈ）＋２＝１３４１．４。結果：１３４１．６
【０２８０】
２（スルホ−９−）フルオレニルメトキシカルボニルクロリドについて上記手順を用いて同様の結果を得ることができる
【実施例４５】
【０２８１】
（ＮａＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−コリスチンデカペプチド
実施例２の手順によって調製した、４００ｍＬの当初酵素発酵容量を示す可溶化したデアシラーゼ酵素９４０ｍｇを、３２０ｍＬの０．０２モルのリン酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ７．２、８０ｍＬのエタノール、２．９６ｇのＥＤＴＡジナトリウム塩、および実施例４４の手順によって調製した２００ｍｇ（ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃ）５−コリスチンと一緒にした。その混合物をｐＨ８に調節し、３０℃、１４０ｒｐｍで振盪機にかけた。脱アシル化の進行はＨＰＬＣでモニターした。３時間後、完了した反応物を振盪機から取り出し、室温で１時間放置し、続いて１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ２．０に調節した。沈殿物を５０ｍＬの水と混合し、ｐＨ６．４６に調節して溶解させ、４℃で終夜放置し、少量の保護デカペプチドの沈殿物を得た。沈殿物をメタノールと一緒にし、次いでこれを蒸発させて乾燥し、水に再溶解させ、凍結乾燥して１２．５ｍｇの淡黄褐色の粉末のＣ１２２Ｈ１３４Ｎ１６Ｏ３７Ｓ５を得た。ＥＳＩＭＳ：Ｃ１２２Ｈ１３５Ｎ１６Ｏ３７Ｓ５Ｎａについてのｍ／ｚ、計算：（Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ）＋２＝１２８２．４。結果：１２８２．２。残留するデカント物を凍結乾燥してさらに１９２ｍｇの黄褐色の粉末、保護コリスチンデカペプチドを得た。
【実施例４６】
【０２８２】
他のペプチド
他の新規なペプチドおよび新規な保護ペプチドは上記方法で調製することができる。例えば、ポリミキシンＡ、ポリミキシンＢ（例えば、ポリミキシンＢ１、ポリミキシンＢ２およびポリミキシンＢ３）、［Ｉｌｅ７］−ポリミキシンＢ１、ポリミキシンＣ、ポリミキシンＤ、ポリミキシンＥ（コリスチンとも称される）、ポリミキシンＦ、ポリミキシンＭ（マタシンとも称される）、ポリミキシンＰ、ポリミキシンＳ、ポリミキシンＴ（例えば、ポリミキシンＴ１）、コリスチン、サークリンＡ、オクタペプチンＡ（例えば、オクタペプチンＡ１、オクタペプチンＡ２およびオクタペプチンＡ３）オクタペプチンＢ（例えば、オクタペプチンＢ１、オクタペプチンＢ２およびオクタペプチンＢ３）、オクタペプチンＣ（例えば、オクタペプチンＣ１）、ならびにオクタペプチンＤを含む、ポリミキシンおよびオクタペプチンの一般的ヘプタペプチド環状コア構造を有する任意のペプチドは、実施例１と同様にしてアミノ保護することができ、実施例３および４と同様にして脱アシル化することができ、実施例５と同様にして精製することができ、実施例７および９と同様にして修飾することができ、実施例８と同様にしてエドマン分解を施すことができる。
【０２８３】
引用文献
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【手続補正書】
【提出日】平成23年8月30日(2011.8.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｂ）：
【化１】
2011256189.tif 000083
（式中、
ＡはＲ−ＳＯ２−、Ｒ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ−ＮＨ−（Ｃ＝ＮＨ）−、Ｒ−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ−Ｏ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ−Ｐ（Ｏ）ＯＨ−、Ｒ−（Ｃ＝Ｓ）−、Ｒ−アルキル−、水素、Ｒ−Ｏ−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ−ＣＯ−Ｐｈｅ−およびＲ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌｙｓ−から選択され、
Ｒはアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ１０はそれぞれベンジル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよび１−ヒドロキシ−１−エチルから独立に選択される）
で示される構造を有する化合物。
【請求項２】
Ａが
Ｒ−ＳＯ２−（ここで、Ｒはアルキルである）、
Ｒ−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−（ここで、Ｒはアリールである）、
Ｒ−Ｏ−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−（ここで、Ｒはアルキルまたはアリールである）、
Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌｙｓ−（ここで、Ｒはアルキルである）、および
Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｐｈｅ−（ここで、Ｒはアルキルである）
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘ１およびＸ３がそれぞれ２，４−ジアミノブタン酸残基であり、Ｘ２がスレオニン残基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ６がベンジルおよびイソブチルから選択され、
Ｒ７がイソブチルおよびｓｅｃ−ブチルから選択され、
Ｒ１０が１−ヒドロキシ−１−エチルである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ａが
Ｒ−ＳＯ２−（ここで、Ｒはアルキルである）、
Ｒ−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−（ここで、Ｒはアリールである）、
Ｒ−Ｏ−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−（ここで、Ｒはアルキルまたはアリールである）、
Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌｙｓ−（ここで、Ｒはアルキルである）、および
Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｐｈｅ−（ここで、Ｒはアルキルである）
から選択され；
Ｘ１およびＸ３がそれぞれ２，４−ジアミノブタン酸残基であり、Ｘ２がスレオニン残基であり；
ｘ、ｙおよびｚがそれぞれ１であり；
Ｒ６がベンジルおよびイソブチルから選択され；
Ｒ７がイソブチルおよびｓｅｃ−ブチルから選択され；
Ｒ１０が１−ヒドロキシ−１−エチルである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
下記表に示されるいずれか一つの構造を有する抗生物質または保護抗生物質：
【表１】
2011256189.tif 000084
（＊：  Ｄａｂ−Ｐは４−Ｎ−（ＨＳＯ３−Ｆｍｏｃ）−ジアミノブチリルであり、別段の指定がない限り、すべてのアミノ酸はＬ−異性体である。）
【請求項７】
下記表に示されるいずれか一つの構造を有する、グラム陰性菌に対して使用するための抗生物質：
【表２】
2011256189.tif 000085
【請求項８】
医薬上許容される液剤、分散液剤、懸濁剤、乳剤または還元用無菌性粉剤中に請求項１から７のいずれか一項に記載の１つ以上の化合物を含む、非経口投与用に処方された医薬組成物。
【請求項９】
グラム陰性菌性感染症の治療のための医薬組成物の製造における請求項１から７のいずれか一項に記載の１つ以上の化合物の使用。
【請求項１０】
（ａ）アミノ基を含む側鎖を有するポリミキシンペプチドを、アミノ保護基試薬で処理して保護ポリミキシンペプチドを生成する工程（ここで、ポリミキシンペプチドは、アシル基を含む環外ペプチド鎖と結合した環状ヘプタペプチドを含み、保護基は、少なくとも１個の酸性置換基を含む）；
（ｂ）該保護ペプチドを水溶液中にてデアシラーゼ酵素と反応させて、側鎖に遊離アミノ末端を含む保護された脱アシル化ペプチドを生成する工程；および
（ｃ）この保護された脱アシル化ペプチドの側鎖の遊離アミノ末端を付加試薬と反応させ、次いで、保護基を除去して、式（Ｂ）：
【化２】
2011256189.tif 000086
（式中：
ＡはＲ−Ｏ−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｐｈｅ−、Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌｙｓ−、Ｒ−ＳＯ２−およびＲ−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−から選択され；
Ｒはアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルから選択され；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され；
ｘ、ｙおよびｚは０および１から独立に選択される整数であり；
Ｒ６、Ｒ７およびＲ１０はそれぞれベンジル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよび１−ヒドロキシ−１−エチルから独立に選択される）
で示される構造を有するペプチド抗生物質を生成する工程
を含む、化合物の調製方法。
【請求項１１】
工程（ａ）のポリミキシンペプチドが、式（Ａ）：
【化３】
2011256189.tif 000087
（式中、
Ｙ１、Ｙ２およびＹ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され、
ｘ、ｙおよびｚはそれぞれ１であり；
ＴはＲ’−（Ｃ＝Ｏ）−であり；
Ｒ’はアルキルであり；
Ｒ６、Ｒ７およびＲ１０はそれぞれベンジル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよび１−ヒドロキシ−１−エチルから独立に選択される）
で示される構造を有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒ６が、ベンジルおよびイソブチルから選択され；
Ｒ７が、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよび１−ヒドロキシ−１−エチルから選択され；
Ｒ１０が、１−ヒドロキシ−１−エチルである、
請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
Ｙ１およびＹ３がそれぞれ２，４−ジアミノブタン酸残基であり、Ｙ２がスレオニン残基である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
Ｔが６−メチルオクタノイル、６−メチルヘプタノイル、オクタノイル、ヘプタノイル、ノナノイルおよび３−ヒドロキシ−６−メチルオクタノイルから選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
少なくとも１個の酸性置換基がカルボキシ、カルボキシレート、スルホ、サルフェート、ホスフェート、ホスホネートおよびその塩から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
保護基が９−フルオレニルメトキシカルボニルのスルホン酸である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
酵素の供給源がアクチノプラーネス  ユタヘンシスである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
保護された脱アシル化ペプチドの遊離アミノ末端を付加試薬と反応させて、式（Ｉ）：
【化４】
2011256189.tif 000088
（式中、
Ａは
Ｒ−ＮＨ−（Ｃ＝Ｓ）−（ここで、Ｒはアリールである）、および
Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌｙｓ−（ここで、Ｒはアルキルである）
から選択され；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれアミノ酸残基から独立に選択され；
ｘ、ｙおよびｚはそれぞれ０および１から独立に選択される整数であり；
Ｐは少なくとも１個の酸性置換基を含む保護基である）
で示される構造を有する式（Ｂ）で示される化合物を生成する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
調製された化合物がグラム陰性菌に対して活性のある抗生物質である、請求項１０から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
調製された化合物が、下記表に示されるいずれか一つの構造を有する、グラム陰性菌に対して使用するための化合物である、請求項１０から１７および１９のいずれか一項に記載の方法：
【表３】
2011256189.tif 000089
【外国語明細書】
2011256189.tif 000090
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