(57)【要約】【課題】α−グルコシダーゼの阻害活性を有する新規な物質を提供する。【解決手段】カエデ属植物ハナノキ（Ａｃｅｒ  ｐｙｃｎａｎｔｈｕｍ）葉より下記式（化１）で示される新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎを単離する。この物質はα−グルコシダーゼの阻害作用を有し、糖尿病の予防または治療に有用である。【化１】
2011190233.tif 000007
【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（化１）で示される新規化合物。
【化１】
2011190233.tif 000005
【請求項２】
請求項１に記載の化合物を含有してなる抗糖尿病剤。
【請求項３】
カエデ科ハナノキ（Ａｃｅｒ  ｐｙｃｎａｎｔｈｕｍ）葉を熱水により抽出し、得られた熱水抽出物を酢酸エチルと水で分配処理し、得られた水移行部をさらにブタノールと水で分配処理し、ブタノール移行部をクロマトグラフィーにより分画処理することを特徴とする下記式（化２）で示されるα−グルコシダーゼの阻害作用を有する化合物の単離方法。
【化２】
2011190233.tif 000006
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、天然物から単離した新規化合物、及び前記の新規化合物を含有した抗糖尿病剤、並びに前記新規化合物の単離法に関する。詳細には、カエデ属に属する植物から単離した二糖類の分解酵素であるα−グルコシダーゼの阻害作用を有する新規化合物、及び前記の新規化合物を含有した抗糖尿病剤、並びに前記新規化合物の単離法に関する。
【背景技術】
【０００２】  近年、食生活の欧米化などでカロリーの高い食生活が目立ち、これに伴う生活習慣病が注目されている。高カロリーの食生活は、肥満を引き起こし、肥満はインスリン抵抗性をはじめとして高脂血症、高血圧を引き起こす引き金となる。特に肥満は糖尿病を発症する危険性が高いとされており、それに伴う合併症により著しく生活の質を落とす可能性がある。よって糖尿病を予防するために様々な試みがなされている。医療用の医薬品において、小腸管の粘膜上に存在する二糖分解酵素であるα−グルコシダーゼの阻害剤はアカルボースなどが用いられている。また食品においては、血糖値上昇を抑制する飲食品、医薬品は糖尿病、肥満の予防、治療に有用である。また、ダイエットのカロリーコントロールにも利用されている。【０００３】  現在、血糖値上昇抑制剤として食品では桑の葉の熱水抽出物、医薬品ではボグリボースなどが知られており研究が進んでいる。しかし糖尿病は現代社会には未だ蔓延しており、抗糖尿病に有効な新しい素材、食品または医薬品の創出が求められている。【０００４】  α−グルコシダーゼの阻害作用を有する物質としてカエデ属の植物、及びカエデ属植物より単離された成分が本発明者らによって報告されている（特許文献１、２）
【特許文献１】特開２００７−１８６４８６
【特許文献２】特開２００９−２６９８９６
【０００５】  しかし本発明における新規化合物とその生理作用については全く知られていなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】  本発明は、上記問題に鑑みてなされたものであり、本発明により新規α−グルコシダーゼの阻害作用を有する新規化合物を提供し、さらに前記の新規化合物を有効成分として含む抗糖尿病剤並びに前記の新規化合物の単離方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】  本発明者は、糖尿病を予防しうる成分について鋭意検討を行った結果、カエデ属植物のハナノキ熱水抽出物より単離された後述する新規化合物のα−グルコシダーゼ阻害作用を見出し本発明に至った。本化合物を新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎと称することがある。【０００８】  本発明はかかる知見に基づいて完成されたものであって、下式（化１）で示される化合物である新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎに関するものである。
【化１】
2011190233.tif 000002
【０００９】  本発明は下式（化２）で示される化合物のα−グルコシダーゼの阻害活性を利用した抗糖尿病剤に関するものである。
本発明はまた、カエデ属植物のハナノキ（Ａｃｅｒ  ｐｙｃｎａｎｔｈｕｍ）葉を熱水抽出し、得られた熱水抽出物を酢酸エチルと水で分配処理し、得られた水移行部をさらにブタノールと水で分配処理し、ブタノール移行部をクロマトグラフィーにより分画処理することを特徴とする下式（化２）で示されるα−グルコシダーゼの阻害活性を有する化合物の単離方法に関するものである。
【化２】
2011190233.tif 000003
【発明の効果】
【００１０】  本発明によれば、α−グルコシダーゼを阻害する新規物質化合物ｐｙｃｎａｌｉｎを提供することができる。この物質は抗糖尿病剤として有用であると期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】  本発明の新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎを単離するには、カエデ属植物のハナノキ（Ａｃｅｒ  ｐｙｃｎａｎｔｈｕｍ）葉の熱水抽出物が使用できる。【００１２】  本発明の新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎを単離するには、カエデ属植物のハナノキ（Ａｃｅｒ  ｐｙｃｎａｎｔｈｕｍ）葉の熱水抽出物を用いるのが好ましいが、これに限定されることなく、新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎを生産する能力を有する植物および微生物なども使用することができる。【００１３】  本発明の新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎをハナノキ（Ａｃｅｒ  ｐｙｃｎａｎｔｈｕｍ）葉の熱水抽出物より採取するには、上記熱水抽出物を水および酢酸エチル、ブタノール、ヘキサン、ジクロロメタン、メタノールなど各種有機溶媒を用いて分配処理し、さらに公知の方法、例えば吸着クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、遠心向流分配クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を適宜組み合わせ、または繰り返すことによって新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎを単離、精製することができる。【００１４】  このようにして得られた本発明の新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎについて説明する。
（１）分子式：Ｃ１３Ｈ１７Ｏ９
ＨＲＥＳＩＭＳ  （ｍ／ｚ）  （Ｍ＋Ｎａ）＋計算値  ３１７．０８７２６
実測値３１７．０８７９６
（２）分子量：３１７
ＥＳＩＭＳ  （ｍ／ｚ）  （Ｍ＋Ｈ）＋で３１７を観測
（３）紫外部吸収スペクトル：メタノール溶液中で測定した紫外部吸収スペクトルは
λｍａｘ２１７  （ε１４，０００）と２７８ｎｍ（ε６，５００）
（４）赤外部吸収スペクトル：ｖｍａｘ３，４２３、１，６９９，そして１，２３７  ｃｍ−１に特徴的な吸収極大を示す。
（５）比旋光度：［α］２１Ｄ＋２１°（ｃ  １．００、メタノール）
（６）プロトン及びカーボン磁気共鳴スペクトル：核磁気共鳴スペクトルメータで測定した水素の化学シフト（ｐｐｍ）及び炭素の化学シフト（ｐｐｍ）は下記に示すとおりである。【００１５】  δＨ  ７．１３（２Ｈ，ｓ，ｐｈｅｎｏｌｉｃ），４．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，Ｈ−６），４．３２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，Ｈ−６），３．８８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．４，２．０Ｈｚ，Ｈ−１ｅ），３．８４（１Ｈ，ｍ，Ｊ＝９．１，２．０，１．３Ｈｚ，Ｈ−２），３．７０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，Ｈ−４），３．５７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．４，１．３Ｈｚ，Ｈ−１ａｘ），３．５４（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−３），３．４０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５）
δｃ  １６７．４（Ｃ−７’），１４６．４（Ｃ−３‘，５’），１２２．２（Ｃ−１’），１１０．３（Ｃ−２‘，６’），８０．０（Ｃ−５），７５．８（Ｃ−３），７１．２（Ｃ−１），７０．６（Ｃ−２），６９．３（Ｃ−４），６５．５（Ｃ−６）
以上のように、新規化合物の各種特徴、そしてスペクトルデータを詳細に検討した結果、新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎは下式（化３）で示される化学構造であることが決定された。
【化３】
2011190233.tif 000004
【００１６】  本発明の新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎは後述の試験例に示すように、α−グルコシダーゼ阻害作用を有する。【００１７】  従って、本発明の新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎは抗糖尿病剤として使用できる。
抗糖尿病食品は、前記抗糖尿病食品素材を含有してなる。【００１８】  本発明の新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎを医薬品および食品として用いる場合には、これを有効成分として０．２〜２．０重量％となるように含有される。添加剤としては、例えば、賦形剤、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤又は可塑剤などが挙げられる。【００１９】  前記賦形剤としては、例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール或いはキシリトールなどの糖アルコール、ブドウ糖、白糖、乳糖或いは果糖などの糖類、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、リン酸水素カルシウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、β−シクロデキストリン、軽質無水ケイ酸、酸化チタン、又はメタケイ酸アルミン酸マグネシウムなどが挙げられる。【００２０】  前記ｐＨ調整剤としては、例えばクエン酸、リンゴ酸、リン酸水素ナトリウム又はリン酸二カリウムなどが挙げられる。前記清涼化剤としては、例えば１−メントール又はハッカ水などが挙げられる。前記懸濁化剤としては、例えば、カオリン、カルメロースナトリウム、キサンタンガム、メチルセルロース又はトラガントなどが挙げられる。前記消泡剤としては、例えばジメチルポリシロキサン又はシリコン消泡剤などが挙げられる。【００２１】  前記粘稠剤としては、例えばキサンタンガム、トラガント、メチルセルロース又はデキストリンなどが挙げられる。前記溶解補助剤としては、例えばエタノール、ショ糖脂肪酸エステル又はマクロゴールなどが挙げられる。前記崩壊剤としては、例えば低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ又は部分アルファー化デンプンなどが挙げられる。前記結合剤としては、例えばメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニールピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、エチルセルロース、ポリビニルアルコール、プルラン、アルファ−化デンプン、カンテン、トラガント、アルギン酸ナトリウム又はアルギン酸プロピレングリコールエステルなどが挙げられる。【００２２】  前記滑沢剤としては、例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ポリオキシル、セタノール、タルク、硬化油、ショ糖脂肪酸エステル、ジメチルポリシロキサン、ミツロウ又はサラシミツロウなどが挙げられる。【００２３】  本発明の抗糖尿病剤には、必要に応じて、他の生理活性成分、ミネラル、ビタミン、ホルモン、栄養成分、香料などの添加物を混合することができる。【００２４】  本発明の抗糖尿病剤の形状としては、例えば、ハードカプセル、ソフトカプセルのようなカプセル、錠剤、丸剤、顆粒状などの形状に加工され得る。これにより本発明の抗糖尿病食品は、例えば健康食品として供給することができる。また医薬品としても供給が可能である。【００２５】  他の実施形態としては、本発明の新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎを食品に添加して、抗糖尿食品を製造してもよい。前記食品としては、例えば、スナック、ビスケット、クッキー、チョコレート等の菓子類、ジュース、お茶等の飲料水等が挙げられる。【００２６】  以下に本発明をより詳細に説明するために実施例を挙げるが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００２７】  新規化合物の単離方法
被験試料としてカエデ属植物であるハナノキ（Ａｃｅｒ  ｐｙｃｎａｎｔｈｕｍ）葉を用いて実験を行った。採取した葉を８０℃の温風で一昼夜乾燥させた。その後、乾燥重量の２００倍の蒸留水を用いて熱水抽出を行った。沸騰した状態を１時間保ち、その後室温で冷ました。次いでロータリーエバポレータを用いて減圧乾固させ各抽出物を得た。この熱水抽出物を用いて以下の単離方法によって新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎを単離した。分配処理によって水移行部と酢酸エチル移行部に分けた。さらに水移行部を分配処理によって水移行部とブタノール移行部に分けた。ブタノール移行部を、ＯＤＳカラムにて粗精製を行った。メタノール−水（５：９５、１５：８５、３０：７０、５０：５０、７０：３０、１００：０）の各混合溶媒を展開溶媒とするクロマトグラフィーを行い、９つの溶出画分を得た（Ｆｒ．１から９）。次いでＦｒ．３の溶出画分を高速液体クロマトグラフィーにより精製した。
ＯＤＳカラム（φ１０ｘ２５０ｍｍ）を用いてメタノール−水（１０：９０、１５：８５、３０：７０、５０：５０、７０：３０、１００：０）のグラディエントによる各混合溶媒を展開溶媒とするクロマトグラフィーを行い、新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎを単離した。【００２８】（試験例１）
本発明の新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎのα−グルコシダーゼの阻害作用について以下の方法で試験した。新規化合物メタノールに溶解し、被験試料とした。９６ウェルのプレートに０．１Ｍリン酸バッファー、基質、酵素、サンプルを添加し、生成してくるグルコースの量をグルコースＣＩＩテストワコーで測定した。基質にスクロースを２７．７ｍＭになるように添加した。酵素にはマウス小腸由来の粗酵素液を用いた。マウス粗酵素液としてマウスの回腸粘膜を用いて０．０５％牛血清アルブミンを含んだ０．１Ｍリン酸緩衝液１２．０ｍｌに懸濁し、十分撹拌した後、３，０００×ｇで５分遠心分離し、その上清を用いた。サンプル無添加時の酵素反応と比較してサンプルの酵素阻害率を求めた。【００２９】  この結果、新規化合物は、α−グルコシダーゼであるスクラーゼを阻害し、ＩＣ５０は１３８．３±１３．４であった。そして類似の構造を有し、本発明者によってハナノキより単離され、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験において血糖値上昇抑制作用とα−グルコシダーゼの阻害作用を有するギンナリンＢ（６−ｇａｌｌｏｙｌ−１−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ）のＩＣ５０は１９４．０±２．６であった。新規化合物はギンナリンＢよりも顕著なα−グルコシダーゼの阻害作用を有することが示され、新規化合物のα−グルコシダーゼ阻害作用が示された。
【産業上の利用可能性】
【００３０】  本発明の、新規化合物ｐｙｃｎａｌｉｎはα−グルコシダーゼの阻害作用を有し、食後高血糖を抑制する抗糖尿病剤として有効である。