(57)【要約】      （修正有）【課題】ＩＬ−１３に特異的に結合し、かつＩＬ−１３がＩＬ−１３受容体およびシグナル伝達媒介物と相互に作用する能力を調節する結合剤（例えば抗ＩＬ１３抗体分子）、ならびにＩＬ−１３で媒介された障害の調節における該結合剤の使用を提供。【解決手段】ＫＤが１０−７Ｍ未満であるＩＬ−１３に結合する抗原結合部位を形成する重鎖免疫グロブリン可変領域配列および軽鎖免疫グロブリン可変領域配列を含む抗体分子。【選択図】図２
2011225574.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＫＤが１０−７Ｍ未満であるＩＬ−１３に結合する抗原結合部位を形成する重鎖免疫グロブリン可変領域配列および軽鎖免疫グロブリン可変領域配列を含む抗体分子であって、抗体または抗原結合断片が、下記の１つまたは複数の性質：
（ａ）重鎖免疫グロブリン可変領域配列が、ｍＡｂ  ＭＪ２−７の重鎖ＣＤＲ３とは３未満のアミノ酸置換が異なる重鎖ＣＤＲ３を含む；
（ｂ）軽鎖免疫グロブリン可変領域配列が、対応するｍＡｂ  ＭＪ２−７の軽鎖ＣＤＲとは３未満のアミノ酸置換が異なる軽鎖ＣＤＲを含む；
（ｃ）重鎖免疫グロブリン可変領域配列が、Ｖ２．１、Ｖ２．３、Ｖ２．４、Ｖ２．５、Ｖ２．６、Ｖ２．７、またはＶ２．１１の重鎖可変領域をコードする核酸の相補体と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされた配列を含む；
（ｄ）軽鎖免疫グロブリン可変領域配列が、Ｖ２．１１の軽鎖可変領域をコードする核酸の相補体と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされた配列を含む；
（ｅ）重鎖免疫グロブリン可変領域配列が、Ｖ２．１、Ｖ２．３、Ｖ２．４、Ｖ２．５、Ｖ２．６、Ｖ２．７、またはＶ２．１１の重鎖可変領域と少なくとも９０％同一である；
（ｆ）軽鎖免疫グロブリン可変領域配列が、Ｖ２．１１の軽鎖可変領域と少なくとも９０％同一である；
（ｇ）抗体分子が、ヒトＩＬ−１３との結合のためにｍＡｂ  ＭＪ２−７と競合する；
（ｈ）抗体分子が、配列番号２４または配列番号１７８の残基１１６、１１７、１１８、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、および１２８からなる群から選択されたＩＬ−１３からの１つまたは複数のアミノ酸残基と接触する；
（ｉ）重鎖可変領域配列が、超可変ループ１、２、および／または３においてｍＡｂ  ＭＪ２−７と同じカノニカル構造を有する；
（ｊ）軽鎖可変領域配列が、超可変ループ１、２、および／または３においてｍＡｂ  ＭＪ２−７と同じカノニカル構造を有する；および
（ｋ）重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列が、それぞれ生殖細胞系遺伝子ＤＰ−５４およびＤＰＫ−９によってコードされたＶＨ領域からのＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３フレームワーク領域、または生殖細胞系遺伝子ＤＰ−５４およびＤＰＫ−９によってコードされたＶＨ領域と少なくとも９５％同一の配列を有する
を有する抗体分子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、米国特許法第１１９条（３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９）に基づいて２００４年６月１７日に出願された米国特許出願第６０／５８１０７８号の優先権を主張するものであり、また、「ANTI-IL-13-ANTIBODIES AND COMPLEXES」という名称の、代理人整理番号１６１６３−０２９００１が付された２００５年６月９日出願の米国特許出願第１１／＿の優先権を主張するものである。上記出願の内容を、出典明示により本明細書の一部とする。
【０００２】
（配列表）
本願は、後日に提出される配列表もその一部とする。
【背景技術】
【０００３】
インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）は、Ｔリンパ球および肥満細胞によって分泌されるサイトカインである（McKenzie他, (1993) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 90:3735-39; Bost他, (1996) Immunology 87: 663-41）。ＩＬ−１３は、いくつかの生物活性をＩＬ−４と共有する。例えば、ＩＬ−４またはＩＬ−１３は、Ｂ細胞でＩｇＥアイソタイプスイッチングを引き起こす可能性がある（Tomkinson他, (2001) J.Immunol. 166: 5792-5800）。さらに、喘息患者の場合に高レベルの細胞表面ＣＤ２３および血清ＣＤ２３（ｓＣＤ２３）が報告されている（Sanchez-Guererro他, (1994) Allergy 49:587-92; DiLorenzo他, (1999) Allergy Asthma Proc. 20:119-25）。さらに、ＩＬ−４またはＩＬ−１３は、Ｂ細胞および単球上でのＭＨＣクラスＩＩおよび低親和性ＩｇＥ受容体（ＣＤ２３）の発現をアップレギュレートする可能性があり、その結果、抗原の提示が増大し、マクロファージの機能が制御される（Tomkinson他, 前掲）。重要なのは、ＩＬ−４またはＩＬ−１３が、内皮細胞上でＶＣＡＭ−１の発現を増加させる可能性があり、気道組織への好酸球（およびＴ細胞）の優先的漸増が促進される点である（Tomkinson他, 前掲）。ＩＬ−４またはＩＬ−１３は、気道粘液の分泌も増加させる可能性があり、気道の応答性が悪化する可能性がある（Tomkinson他, 前掲）。これらの観察内容は、ＩＬ−１３が必ずしもＴｈ２の発生を引き起こすのに必要ではなく、またはそのような発生を引き起こすことが可能であるとしても、ＩＬ−１３は、気道好酸球増加症示およびＡＨＲの発症で重要な役割を果たすことを示唆している（Tomkinson他, 前掲; Wills-Karp他, (1998) Science 282:2258-61）。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者等は、とりわけＩＬ−１３結合剤、特に抗ＩＬ−１３抗体分子が、高い親和性および特異性でヒトＩＬ−１３および／またはカニクイザルＩＬ−１３と結合することを発見した。一実施形態では、抗体分子は、少なくとも１種のＩＬ−１３関連活性、例えば炎症状態の調節を低下させる。例えば抗ＩＬ−１３抗体分子は、ＩＬ−１３に結合し、ＩＬ−１３とＩＬ−１３受容体、例えばＩＬ−１３受容体α１（「ＩＬ−１３Ｒα１」）、ＩＬ−１３受容体α２（「ＩＬ−１３Ｒα２」）、および／またはインターロイキン−４受容体α鎖（「ＩＬ−４Ｒα」）との相互作用（例えば結合）を調節すること、例えば阻害することができ、それによってシグナル伝達が低下しまたは妨げられる。
【０００５】
抗−ＩＬ−１３抗体分子などのＩＬ−１３結合剤は、少なくとも１種の生体内ＩＬ−１３関連活性を調節（例えば阻害）するのに使用することができる。ＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３関連障害を治療しまたは予防するのに、あるいはその少なくとも１種の症状を寛解させるのに使用することができる。例示的なＩＬ−１３関連障害には、炎症性障害（例えば肺の炎症）、呼吸器障害（例えば、アレルギー性および非アレルギー性喘息を含めた喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））、ならびに気道炎症、好酸球増加症、線維性障害（例えば嚢胞性線維症、肝臓線維症、および肺線維症）、強皮症、過剰な粘液生成；アトピー性障害（例えばアトピー性皮膚炎、蕁麻疹、湿疹、アレルギー性鼻炎、およびアレルギー性胃腸炎）、ＩＬ−１３関連癌（例えば白血病、グリア芽細胞腫、またはリンパ腫、例えばホジキンリンパ腫）、胃腸障害（例えば炎症性腸疾患）、肝臓障害（例えば肝硬変）、およびウイルス性感染が含まれる。
【０００６】
ＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３、特に哺乳類のＩＬ−１３、例えばヒトまたはヒト以外の霊長類のＩＬ−１３と相互作用する、例えばそれに結合しかつ／またはそれを阻害するタンパク質、例えば抗体分子、ペプチド、または骨格ドメインとすることができる。抗体分子は、単独の抗体分子とすることができる。一実施形態では、結合剤は拮抗薬であり、例えば、とりわけＣＤ２３発現の誘導；ヒトＢ細胞によるＩｇＥ産生；転写因子、例えばＳＴＡＴタンパク質（例えばＳＴＡＴ６タンパク質）のリン酸化；生体内抗原誘発性好酸球増加症；生体内抗原誘発性気管支収縮；または生体内薬物誘発性気道反応亢進を含むがこれらに限定することのない１種または複数のＩＬ−１３関連活性を中和し、低下させ、かつ／または阻害する結合剤である。例えば結合剤は、本明細書で述べる１種または複数のアッセイで、統計的に有意な効果を発揮する。抗−ＩＬ−１３抗体分子の他に、使用することができるその他のＩＬ−１３結合剤には、ＩＬ−１３受容体Ｆｃ融合体、その他の可溶形態のＩＬ−１３受容体、可溶形態のＩＬ−４Ｒα、ＩＬ−１３Ｒに結合する抗体、およびＩＬ−１３とその受容体との相互作用を阻害するその他の分子が含まれる。
【０００７】
一態様では、本発明は、例えば５×１０−７Ｍ未満、１×１０−７Ｍ、５×１０−８、１×１０−８、５×１０−９、１×１０−９Ｍ、より典型的には５×１０−１０未満、１×１０−１０、５×１０−１１Ｍ、１×１０−１１Ｍ未満、またはそれよりも良好なＫＤに対応する親和性でＩＬ−１３と結合するＩＬ−１３結合剤を特徴とする。ＩＬ−１３結合剤は、例えば、少なくともＩＬ−１３と結合する抗原結合部位を形成するのに十分な部分の免疫グロブリン可変領域を含む第１および第２の免疫グロブリン可変領域配列を含んだ抗体分子とすることができる。典型的な場合、第１および第２の免疫グロブリン可変領域配列は、重鎖および軽鎖、例えば対になりまたは別の方法で適合性を有する重鎖および軽鎖の免疫グロブリン可変領域配列に対応する。
【０００８】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、例えば単独のペプチドとして下記のペプチド、すなわち
2011225574.tif 000003
の１種または複数と結合し、またはペプチドが成熟ＩＬ−１３タンパク質の構造に折り畳まれる場合には、そのようなペプチド内のアミノ酸と結合する。
【０００９】
例えばＩＬ−１３結合剤は、ＲまたはＱが位置１３０に存在するか否かに関わらず、類似の親和性（例えば、８倍、５倍、４倍、または２倍未満異なる親和性）でペプチドにまたはＩＬ−１３に結合することができる。特に、ＩＬ−１３結合剤は、ＲまたはＱが位置１３０に存在しているか否かに関わらず、同等の親和性でペプチドまたはＩＬ−１３に結合してよい。
【００１０】
ＩＬ−１３結合剤は、例えば単独のペプチドとして下記のペプチド、すなわち
2011225574.tif 000004
の１種または複数と結合することができ、またはペプチドが成熟ＩＬ−１３タンパク質の構造に折り畳まれる場合は、そのようなペプチド内のアミノ酸と結合することができる。ＩＬ−１３結合剤は、本明細書に列挙するペプチド配列（例えば図１Ｂ）からの、あるいはアミノ酸残基が少なくとも１種であるが１、２、または３種以下の異なる対応するペプチド、例えばヒトＩＬ−１３から得た対応するペプチドからの少なくとも１種（例えば１種、２種、３種、または４種）のアミノ酸残基を含む、ＩＬ−１３上のエピトープと結合することができる。
【００１１】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、完全長ＩＬ−１３（配列番号２４または配列番号１７８）のヘリックスＤ（アミノ酸残基１１４〜１３０）中のアミノ酸残基、例えば下記のアミノ酸残基、すなわち配列番号２４または配列番号１７８の残基１１６、１１７、１１８、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、または１２８の１つまたは複数と接触する（例えばファンデルワールス接触をもたらす）。一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、ヘリックスＤ上のエピトープに結合し、またはヘリックスＤ上の少なくとも１種のアミノ酸残基（例えば少なくとも１、２、３、または４種）を含むエピトープに結合し、かつ／またはＩＬ−１３と、ＩＬ−１３Ｒα１および／またはＩＬ−１３Ｒα２の一方または両方との相互作用を阻害することができる。ヘリックスＤは、成熟し処理されたＩＬ−１３（配列番号１４または配列番号１２４）のアミノ酸残基９５〜１１に対応する。
【００１２】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３、例えば哺乳類の、例えばヒトのＩＬ−１３のエピトープ、例えば線状または立体配座エピトープに特異的に結合する。例えばＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３に、例えばヒトＩＬ−１３に結合するために、ＭＪ２−７および／またはＣ６５と競合する。ＩＬ−１３結合剤は、ＭＪ２−７および／またはＣ６５とＩＬ−１３との結合を競合的に阻害することができる。ＩＬ−１３結合剤は、ヒトＩＬ−１３とのＭＪ２−７の結合によって定義されたエピトープ、またはＩＬ−１３とのＣ６５の結合により定義されたエピトープの、少なくとも１種のアミノ酸と特異的に結合することができる。一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、ＭＪ２−７またはＣ６５のエピトープと重なるエピトープ、例えば共通して少なくとも１、２、３、または４種のアミノ酸を含むエピトープ、あるいは結合したときにＭＪ２−７またはＣ６５との相互作用を立体的に妨げるエピトープに結合することができる。
【００１３】
さらに別の実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、ヒトＩＬ−１３に結合するＩＬ−１３Ｒα１によって定義されたエピトープ内、またはヒトＩＬ−１３に結合するＩＬ−１３Ｒα２によって定義されたエピトープ内、またはそのようなエピトープに重なるエピトープ内の、少なくとも１種のアミノ酸と特異的に結合する。ＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３と、例えばヒトＩＬ−１３と結合するために、ＩＬ−１３Ｒα１および／またはＩＬ−１３Ｒα２と競合することができる。ＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３Ｒα１および／またはＩＬ−１３Ｒα２とＩＬ−１３との結合を競合的に阻害することができる。ＩＬ−１３結合剤は、結合したときにＩＬ−１３Ｒα１および／またはＩＬ−１３Ｒα２との相互作用を立体的に妨げるＩＬ−１３上のエピトープと、相互に作用することができる。
【００１４】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３Ｒα２に匹敵する機能的活性を有し、例えばＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３のＩＬ−１３Ｒα１との相互作用を低下させ、または阻害する。ＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１との複合体の形成を妨げることができ、あるいは、ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１との複合体を崩壊しまたは不安定化させることができる。一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、三重複合体の形成、例えばＩＬ  １３、ＩＬ−１３Ｒα１、およびＩＬ４−Ｒとの間の複合体の形成を阻害する。
【００１５】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、１種または複数のＩＬ−１３関連活性を阻害することができ、ＩＣ５０は約５０ｎＭから５ｐＭであり、典型的には約１００から２５０ｐＭ以下であり、例えばそれよりも良好に阻害する。ＩＬ−１３の少なくとも１種の活性を阻害する物質は、ＩＬ−１３拮抗薬と見なされる。一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、１０３から１０８Ｍ−１ｓ−１の範囲内の動態で、典型的には１０４から１０７Ｍ−１ｓ−１の範囲内の動態で、ＩＬ−１３に結合することができる。さらに別の実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、１０−２から１０−６ｓ−１、典型的には１０−２から１０−５ｓ−１の範囲内の解離動態を有する。一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３、例えばヒトＩＬ−１３に対し、モノクローナル抗体ＭＪ２−７またはＣ６５あるいはその修飾形態、例えばそのキメラ形態またはヒト化形態と同様の（例えば２０、１０、または５倍以内）、親和性および／または反応速度で結合しする。ＩＬ−１３結合剤の親和性および結合動態は、例えばバイオセンサー技術（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標））を使用して試験することができる。
【００１６】
ＩＬ−１３結合剤は、抗体分子、例えば抗体の抗原結合断片（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または単鎖Ｆｖ断片など）、またはＦｃドメインを含む抗体とすることができる。典型的な場合、抗−ＩＬ−１３抗体分子は、モノクローナルまたは単一特異的である。
【００１７】
ＩＬ−１３結合剤、特に抗−ＩＬ−１３抗体分子は、事実上のヒト、ヒト、ヒト化、ＣＤＲ−グラフト化、キメラ、変異、親和性成熟、脱免疫化、合成、またはその他の方法で生体外で発生させたタンパク質とすることができる。一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤はヒト化抗体である。一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、ヒトにおいては抗原性ではなく、またはＨＡＭＡ応答を引き起こさない。
【００１８】
一実施形態では、ＩＬ−１３抗体分子は、重鎖および軽鎖を含む。抗−ＩＬ−１３抗体分子の重鎖および軽鎖は、実質的に完全長とすることができ（例えば抗体分子は、少なくとも１つ、好ましくは２つの重鎖と、少なくとも１つ、好ましくは２つの軽鎖とを含むことができる）、または抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または単鎖Ｆｖ断片）を含むことができる。さらにその他の実施形態では、抗体分子は、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥの重鎖定常領域から選択され、特に例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４から選択され、より特別には重鎖定常領域ＩｇＧ１（例えばヒトＩｇＧ１）である、重鎖定常領域を有する。典型的な場合、重鎖定常領域は、ヒトまたは修飾形態のヒト定常領域である（例えば、実施例５で述べるように）。別の実施形態では、抗体分子が、例えばκまたはλの軽鎖定常領域から選択され、好ましくはκ（例えばヒトκ）である軽鎖定常領域を有する。一実施形態では、定常領域が変化し、例えば変異して、抗体分子の性質を修飾する（例えばＦｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞の機能、または相補的機能の１つまたは複数を増大させ、または低下させる）。例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域は、１つまたは複数の残基、例えば実施例５で述べるように、残基２３４および２３７の１つまたは複数で変異することができる。
【００１９】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤（例えば抗−ＩＬ−１３結合分子）が、例えばＭＪ２−７など、本明細書に開示される抗体の軽鎖または重鎖可変領域からの、少なくとも１つ、２つ、好ましくは３つのＣＤＲを含む。例えばタンパク質は、ＣＤＲ領域内に下記の配列の１つまたは複数、すなわち
ＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨ（配列番号１５）、
ＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧ（配列番号１６）、
ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１７）、
ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号１８）、
ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号１９）、および
ＦＱＧＳＨＩＰＹＴ（配列番号２０）の１つまたは複数を含み、あるいは、上記列挙した配列に対して１０のアミノ酸ごとに４、３、２．５、２、１．５、１、または０．５以下の変性部分（例えば置換、挿入、または欠失）があり（例えば、異なる部分の数はＣＤＲの長さに比例している）、例えばＣＤＲ１つ当たり少なくとも１つの変性部分があるが２、３、または４以下である、異なるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。
【００２０】
例えばＩＬ−１３結合剤は、軽鎖可変領域配列内で、ＣＤＲ領域内に下記の配列、すなわち
ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号１８）、
ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号１９）、および
ＦＱＧＳＨＩＰＹＴ（配列番号２０）の少なくとも１つ、２つ、または３つを含むことができ、あるいは、上記列挙した配列に対して１０のアミノ酸ごとに、４、３、２．５、２、１．５、１、または０．５以下の置換、挿入、または欠失分だけ異なるアミノ酸配列を含むことができる。
【００２１】
ＩＬ−１３結合剤は、重鎖可変領域配列内で、ＣＤＲ領域内に下記の配列、すなわち
ＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨ（配列番号１５）、
ＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧ（配列番号１６）、および
ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１７）の少なくとも１つ、２つ、または３つを含むむことができ、あるいは、上記列挙した配列に対して１０のアミノ酸ごとに、４、３、２．５、２、１．５、１、または０．５以下の置換、挿入、または欠失分だけ異なるアミノ酸配列を含むことができる。重鎖ＣＤＲ３領域は、その長さが１３未満または１２未満のアミノ酸とすることができ、例えばその長さは１１アミノ酸である（ＣｈｏｔｉａまたはＫａｂａｔ定義のどちらかを使用して）。
【００２２】
別の実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、軽鎖可変領域配列で、ＣＤＲ領域内に下記の配列、すなわち
（ｉ）（ＲＫ）−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＬＩ）−（ＫＶ）−Ｈ−Ｓ−（ＮＤ）−Ｇ−Ｎ−（ＴＮ）−Ｙ−Ｌ−（ＥＤＮＱＹＡＳ）（配列番号２５）ｏｒ（ＲＫ）−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＬＩ）−（ＫＶ）−Ｈ−Ｓ−（ＮＤ）−Ｇ−Ｎ−（ＴＮ）−Ｙ−Ｌ−Ｅ（配列番号２６）、または（ＲＫ）−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＬＩ）−（ＫＶ）−Ｈ−Ｓ−Ｎ−Ｇ−Ｎ−Ｔ−Ｙ−Ｌ−（ＥＤＮＱＹＡＳ）（配列番号２１）、
（ｉｉ）Ｋ−（ＬＶＩ）−Ｓ−（ＮＹ）−（ＲＷ）−（ＦＤ）−Ｓ（配列番号２７）、ｏｒＫ−（ＬＶ）−Ｓ−（ＮＹ）−Ｒ−Ｆ−Ｓ（配列番号２２）、および
（ｉｉｉ）Ｑ−（ＧＳＡ）−（ＳＴ）−（ＨＥＱ）−Ｉ−Ｐ（配列番号２８）、Ｆ−Ｑ−（ＧＳＡ）−（ＳＩＴ）−（ＨＥＱ）−（ＩＬ）−Ｐ（配列番号２３）、またはＱ−（ＧＳＡ）−（ＳＴ）−（ＨＥＱ）−Ｉ−Ｐ−Ｙ−Ｔ（配列番号１９３）、またはＦ−Ｑ−（ＧＳＡ）−（ＳＩＴ）−（ＨＥＱ）−（ＩＬ）−Ｐ−Ｙ−Ｔ（配列番号２９）
の少なくとも１つ、２つ、または３つを含むことができる（カッコ内のアミノ酸は、特定位置に対する代替例を表す）。
【００２３】
好ましい一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、ＭＪ２−７からの６つの全てのＣＤＲ、または密接に関連したＣＤＲを含み、例えば、全て同一でありまたは少なくとも１つのアミノ酸変性部分を有するが２つ、３つ、または４つ以下の変性部分（例えば、置換、欠失、または挿入）を有するＣＤＲを含む。ＩＬ−１３結合剤は、ＭＪ２−７の、少なくとも１、２、３、４、５、６、または７個のＩＬ−１３接触アミノ酸残基を含むことができる。
【００２４】
さらに別の実施例では、ＩＬ−１３結合剤は、同じカノニカル（canonical）構造を有する少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ領域と、対応するＭＪ２−７のＣＤＲ領域、例えばＭＪ２−７の重鎖および／または軽鎖可変領域の少なくともＣＤＲ１およびＣＤＲ２とを含む。
【００２５】
ＩＬ−１３結合剤は、下記の配列、すなわち
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣ  ＦＱＧＳＨＩＰＹＴ（配列番号３０）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣ  ＦＱＧＳＨＩＰＹＴ（配列番号３１）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣ  ＦＱＧＳＨＩＰＹＴ（配列番号３２）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣ  ＦＱＧＳＨＩＰＹＴ（配列番号３３）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣ  ＦＱＧＳＨＩＰＹＴ（配列番号３４）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣ  ＦＱＧＳＨＩＰＹＴ（配列番号３５）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ  ＦＱＧＳＨＩＰＹＴ（配列番号３６）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＹＳＤＧＮＴＹＬＮＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣ  ＦＱＧＳＨＩＰＹＴ（配列番号３７）
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣ  ＦＱＧＳＨＩＰＹＴ（配列番号３８）
の１つを含むことができ、あるいは８、７、６、５、４、３、または２つよりも少ない変性部分（例えば置換、挿入、または欠失、例えば同類置換、またはＭＪ２−７内の対応位置でのアミノ酸残基との置換）を有する配列を含むことができる。例示的な置換は、以下のＫａｂａｔ位置、すなわち２、４、６、３５、３６、３８、４４、４７、４９、６２、６４〜６９、８５、８７、９８、９９、１０１、および１０２の１つでなされる。置換は、例えばＭＪ２−７からの対応する位置のアミノ酸をヒトフレームワーク領域へと置き換えることができる。
【００２６】
ＩＬ−１３結合剤は、下記の配列、すなわち
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣ−（ＲＫ）−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＬＩ）−（ＫＶ）−Ｈ−Ｓ−（ＮＤ）−Ｇ−Ｎ−（ＴＮ）−Ｙ−Ｌ−（ＥＤＮＱＹＡＳ）ＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫ−（ＬＶＩ）−Ｓ−（ＮＹ）−（ＲＷ）−（ＦＤ）−ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣ  Ｆ−Ｑ−（ＧＳＡ）−（ＳＩＴ）−（ＨＥＱ）−（ＩＬ）−Ｐ（配列番号３９）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣ−（ＲＫ）−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＬＩ）−（ＫＶ）−Ｈ−Ｓ−（ＮＤ）−Ｇ−Ｎ−（ＴＮ）−Ｙ−Ｌ−（ＥＤＮＱＹＡＳ）ＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＫ−（ＬＶＩ）−Ｓ−（ＮＹ）−（ＲＷ）−（ＦＤ）−ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦ−Ｑ−（ＧＳＡ）−（ＳＩＴ）−（ＨＥＱ）−（ＩＬ）−Ｐ（配列番号４０）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣ−（ＲＫ）−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＬＩ）−（ＫＶ）−Ｈ−Ｓ−（ＮＤ）−Ｇ−Ｎ−（ＴＮ）−Ｙ−Ｌ−（ＥＤＮＱＹＡＳ）ＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫ−（ＬＶＩ）−Ｓ−（ＮＹ）−（ＲＷ）−（ＦＤ）−ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦ−Ｑ−（ＧＳＡ）−（ＳＩＴ）−（ＨＥＱ）−（ＩＬ）−Ｐ（配列番号４１）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣ（ＲＫ）−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＬＩ）−（ＫＶ）−Ｈ−Ｓ−（ＮＤ）−Ｇ−Ｎ−（ＴＮ）−Ｙ−Ｌ−（ＥＤＮＱＹＡＳ）ＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＫ−（ＬＶＩ）−Ｓ−（ＮＹ）−（ＲＷ）−（ＦＤ）−ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦ−Ｑ−（ＧＳＡ）−（ＳＩＴ）−（ＨＥＱ）−（ＩＬ）−Ｐ（配列番号４２）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣ（ＲＫ）−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＬＩ）−（ＫＶ）−Ｈ−Ｓ−（ＮＤ）−Ｇ−Ｎ−（ＴＮ）−Ｙ−Ｌ−（ＥＤＮＱＹＡＳ）ＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫ−（ＬＶＩ）−Ｓ−（ＮＹ）−（ＲＷ）−（ＦＤ）−ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦ−Ｑ−（ＧＳＡ）−（ＳＩＴ）−（ＨＥＱ）−（ＩＬ）−Ｐ（配列番号４３）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣ（ＲＫ）−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＬＩ）−（ＫＶ）−Ｈ−Ｓ−（ＮＤ）−Ｇ−Ｎ−（ＴＮ）−Ｙ−Ｌ−（ＥＤＮＱＹＡＳ）ＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫ−（ＬＶＩ）−Ｓ−（ＮＹ）−（ＲＷ）−（ＦＤ）−ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦ−Ｑ−（ＧＳＡ）−（ＳＩＴ）−（ＨＥＱ）−（ＩＬ）−Ｐ（配列番号４４）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＲＫ）−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＬＩ）−（ＫＶ）−Ｈ−Ｓ−（ＮＤ）−Ｇ−Ｎ−（ＴＮ）−Ｙ−Ｌ−（ＥＤＮＱＹＡＳ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫ−（ＬＶＩ）−Ｓ−（ＮＹ）−（ＲＷ）−（ＦＤ）−ＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＦ−Ｑ−（ＧＳＡ）−（ＳＩＴ）−（ＨＥＱ）−（ＩＬ）−Ｐ（配列番号４５）
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣ（ＲＫ）−Ｓ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−（ＬＩ）−（ＫＶ）−Ｈ−Ｓ−（ＮＤ）−Ｇ−Ｎ−（ＴＮ）−Ｙ−Ｌ−（ＥＤＮＱＹＡＳ）ＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫ−（ＬＶＩ）−Ｓ−（ＮＹ）−（ＲＷ）−（ＦＤ）−ＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦ−Ｑ−（ＧＳＡ）−（ＳＩＴ）−（ＨＥＱ）−（ＩＬ）−Ｐ（配列番号４６）
の１つを含んでもよく、あるいは、８、７、６、５、４、３、または２つよりも少ない変性部分（例えば置換、挿入、または欠失、例えば同類置換、またはＭＪ２−７内の対応位置でのアミノ酸残基との置換）を有する配列を、フレームワーク領域内に含んでもよい。例示的な置換は、以下のＫａｂａｔ位置、すなわち２、４、６、３５、３６、３８、４４、４７、４９、６２、６４〜６９、８５、８７、９８、９９、１０１、および１０２の１つまたは複数でなされる。置換は、例えばＭＪ２−７からの対応する位置のアミノ酸をヒトフレームワーク領域へと置き換えることができる。配列の後には、ジペプチドＴｙｒ−Ｔｈｒが続いてもよい。ＦＲ４領域は、例えば配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号４７）を含むことができる。
【００２７】
別の実施例では、ＩＬ−１３結合剤は、重鎖可変領域配列内で、下記の配列、すなわち
（ｉ）Ｇ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ（配列番号４８）、
（ｉｉ）（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号４９）、および
（ｉｉｉ）ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１７）
の少なくとも１つ、２つまたは３つをＣＤＲ領域内に含むことができる（カッコ内のアミノ酸は、特定位置に対する代替例を表す）。
【００２８】
ＩＬ−１３結合剤は、下記の配列、すなわち
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号５０）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号５１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＮＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号５２）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号５３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号５４）
ＱＭＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＴＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＡＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＲＤＲＳＭＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号５５）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号５６）
ＱＭＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＴＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＲＧＱＲＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＲＤＭＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号５７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号５８）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＤＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号５９）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号６０）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＴＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号６１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＲＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＨＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号６２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号６３）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号６４）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号６５）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号６６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＶＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＤＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号６７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号６８）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＦＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＧＳＫＳＩＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号６９）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＶＳＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＧＳＬＲＡＥＤＭＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号７０）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号７１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号７２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号７３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号７４）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号７５）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号７６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号７７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号７８）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号７９）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号８０）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＴＧＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＲＦＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号８１）
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＧＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＮＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号８２）
の１つを含むことができ、あるいは、８、７、６、５、４、３、または２つよりも少ない変性部分（例えば置換、挿入、または欠失、例えば同類置換、またはＭＪ２−７内の対応位置でのアミノ酸残基との置換）を有する配列を含むことができる。例示的な置換は、以下のＫａｂａｔ位置、すなわち２、４、６、２５、３６、３７、３９、４７、４８、９３、９４、１０３、１０４、１０６、および１０７の１つまたは複数でなされる。例示的な置換は、下記の位置（順次番号付けによる）、すなわち４８、４９、６７、６８、７２、および７９の１つまたは複数で行うこともできる。置換は、例えばＭＪ２−７からの対応する位置のアミノ酸をヒトフレームワーク領域へと置き換えることができる。一実施形態では、配列は、下記のもの、すなわち４８のＩｌｅ、４９のＧｌｙ、６７のＬｙｓ、６８のＡｌａ、７２のＡｌａ、および７９のＡｌａ、好ましくは４８のＩｌｅ、４９のＧｌｙ、７２のＡｌａ、および７９のＡｌａの、１つまたは複数を含む（順次番号付けによる）。
【００２９】
さらに、重鎖可変領域配列のフレームワークは、（ｉ）４９に対応する位置にＧｌｙ、（ｉｉ）７２に対応する位置にＡｌａ、（ｉｉｉ）４８に対応する位置にＩｌｅ、および４９に対してＧｌｙ、（ｉｖ）４８に対応する位置にＩｌｅ、４９に対してＧｌｙ、および７２に対してＡｌａ、（ｖ）６７に対応する位置にＬｙｓ、６８に対してＡｌａ、および７２に対してＡｌａ、および／または（ｖｉ）４８に対応する位置にＩｌｅ、４９に対してＧｌｙ、７２に対してＡｌａ、７９に対してＡｌａを含むことができる。
【００３０】
ＩＬ−１３結合剤は、下記の配列、すなわち
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号８３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号８４）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＴＧＱＧＬＥＷＭＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＶＴＭＴＲＮＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号８５）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号８６）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＶＴＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号８７）
ＱＭＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＴＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＱＡＬＥＷＭＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＶＴＩＴＲＤＲＳＭＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号８８）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号８９）
ＱＭＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＴＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＲＧＱＲＬＥＷＩＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＶＴＩＴＲＤＭＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号９０）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号９１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫ  ＤＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号９２）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＩＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号９３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＴ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号９４）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＲＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＨＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号９５）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号９６）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号９７）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号９８）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号９９）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＶＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫ  ＤＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１００）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１０１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＦＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＧＳＫＳＩＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１０２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＶＳ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＧＳＬＲＡＥＤＭＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１０３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１０４）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＫＡＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１０５）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１０６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１０７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＫＡＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１０８）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１０９）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１１０）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１１１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１１２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１１３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＴＧＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＲＦＴＩＳＡＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１１４）
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＧＳＧ−（ＹＦ）−（ＮＴ）−Ｉ−Ｋ−Ｄ−Ｔ−Ｙ−（ＭＩ）−Ｈ，ＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧ（ＷＲ）−Ｉ−Ｄ−Ｐ−（ＧＡ）−Ｎ−Ｄ−Ｎ−Ｉ−Ｋ−Ｙ−（ＳＤ）−（ＰＱ）−Ｋ−Ｆ−Ｑ−ＧＫＡＴＩＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬＱＬＮＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ  ＳＥＥＮＷＹＤＦＦＤＹ（配列番号１１５）
の１つを含んでもよく、あるいは、８、７、６、５、４、３、または２つよりも少ない変性部分（例えば置換、挿入、または欠失、例えば同類置換、またはＭＪ２−７内の対応位置でのアミノ酸残基との置換）を有する配列を、フレームワーク領域内に含んでもよい。例示的な置換は、以下のＫａｂａｔ位置、すなわち２、４、６、２５、３６、３７、３９、４７、４８、９３、９４、１０３、１０４、１０６、および１０７の１つまたは複数でなされる。置換は、例えばＭＪ２−７からの対応する位置のアミノ酸をヒトフレームワーク領域へと置き換えることができる。ＦＲ４領域は、例えば、配列ＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１１６）またはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１７）を含むことができる。
【００３１】
一実施形態では、重鎖可変領域配列は、Ｖ２．１、Ｖ２．２、Ｖ２．３、Ｖ２．４、Ｖ２．５、Ｖ２．６、Ｖ２．７、Ｖ．２．１１の重鎖可変領域または本明細書で述べるその他の重鎖可変領域に対して、少なくとも９０、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％同一であり、または同一である。一実施形態では、重鎖可変領域配列は、Ｖ２．１、Ｖ２．２、Ｖ２．３、Ｖ２．４、Ｖ２．５、Ｖ２．６、Ｖ２．７、Ｖ．２．１１の重鎖可変領域または本明細書で述べるその他の重鎖可変領域をコードする核酸の相補体と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされる配列を含んだ可変領域配列を含む。一実施形態では、軽鎖可変領域配列は、Ｖ２．１１の軽鎖可変領域または本明細書で述べるその他の軽鎖可変領域に対し、少なくとも９０、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％同一であり、または同一である。一実施形態では、軽鎖可変領域配列は、Ｖ２．１１の軽鎖可変領域または本明細書で述べるその他の軽鎖可変領域をコードする核酸の相補体と、高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされた配列を含む。
【００３２】
一実施形態では、重鎖フレームワーク（例えばＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３のそれぞれ、またはＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を包含した配列であるが、ＣＤＲは除外する）は、以下の生殖細胞系Ｖセグメント配列、すなわちＤＰ−２５、ＤＰ−１、ＤＰ−１２、ＤＰ−９、ＤＰ−７、ＤＰ−３１、ＤＰ−３２、ＤＰ−３３、ＤＰ−５８、またはＤＰ−５４の１つ、あるいはカノニカル構造クラス１〜３に適合する別のＶ遺伝子の、重鎖フレームワークに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上が同一のアミノ酸配列を含む（例えば、Chothia他, (1992) J.Mol.Biol. 227:799-817; Tomlinson他, (1992) J.Mol. Biol. 227:776-798参照）。カノニカル構造クラス１〜３に適合するその他のフレームワークは、Ｋａｂａｔ番号付けによる下記の残基、すなわち位置２６のＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、またはＶａｌ；位置２６のＧｌｙ；位置２７のＴｙｒ、Ｐｈｅ、またはＧｌｙ；位置２９のＰｈｅ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕ；位置３４のＭｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、またはＩｌｅ；位置９４のＡｒｇ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ；位置５４のＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、またはＡｓｐ；および位置７１のＡｒｇの１つまたは複数を有するフレームワークを含む。
【００３３】
一実施形態では、軽鎖フレームワーク（例えばＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３のそれぞれ、またはＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を包含した配列であるが、ＣＤＲは除外する）は、ＶκＩＩサブグループ生殖細胞系配列、あるいは以下の生殖細胞系Ｖセグメント配列、すなわちＡ１７、Ａ１、Ａ１８、Ａ２、Ａ１９／Ａ３、またはＡ２３の１つ、あるいはカノニカル構造クラス４〜１に適合する別のＶ遺伝子の、軽鎖フレームワークに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上が同一のアミノ酸配列を含む（例えば、Tomlinson他, (1995) EMBO J. 14:4628参照）。カノニカル構造クラス４〜１に適合するその他のフレームワークは、Ｋａｂａｔ番号付けによる下記の残基、すなわち位置２のＶａｌまたはＬｅｕまたはＩｌｅ；位置２５のＳｅｒまたはＰｒｏ；位置２９のＩｌｅまたはＬｅｕ；位置３１ｄのＧｌｙ；位置３３のＰｈｅまたはＬｅｕ；および位置７１Ｐｈｅの１つまたは複数を有するフレームワークを含む。
【００３４】
別の実施形態では、軽鎖フレームワーク（例えばＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３のそれぞれ、またはＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を包含した配列であるが、ＣＤＲは除外する）は、ＶκＩサブグループ生殖細胞系配列、例えばＤＰＫ９配列の軽鎖フレームワークに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上が同一のアミノ酸配列を含む。
【００３５】
別の実施形態では、重鎖フレームワーク（例えばＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３のそれぞれ、またはＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を包含した配列であるが、ＣＤＲは除外する）は、ＶＨ  Ｉサブグループ生殖細胞系配列、例えばＤＰ−２５配列、またはＶＨ  ＩＩＩサブグループ生殖細胞系配列、例えばＤＰ−５４配列の軽鎖フレームワークに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上が同一のアミノ酸配列を含む。
【００３６】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、本明細書で述べる抗体、例えばＣ６５の、軽鎖または重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、好ましくは３つのＣＤＲを含む。例えば、ＩＬ−１３結合剤は、下記の配列、すなわち
ＱＡＳＱＧＴＳＩＮＬＮ（配列番号１１８）、
ＧＡＳＮＬＥＤ（配列番号１１９）、および
ＬＱＨＳＹＬＰＷＴ（配列番号１２０）
ＧＦＳＬＴＧＹＧＶＮ（配列番号１２１）、
ＩＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬ（配列番号１２２）、および
ＤＫＴＦＹＹＤＧＦＹＲＧＲＭＤＹ（配列番号１２３）の１つまたは複数をＣＤＲ領域内に含み、あるいは、上記列挙した配列に対して、１０のアミノ酸ごとに４、３、２．５、２、１．５、１、または０．５以下の置換、挿入、または欠失分だけ異なる（例えば、相違部分の数は、ＣＤＲの長さに比例する）アミノ酸配列を有するＣＤＲを含み、例えば、ＣＤＲ当たり少なくとも１つの変性部分であるが２、３、または４以下である。例えばタンパク質は、軽鎖可変領域配列で、ＣＤＲ領域内に下記の配列、すなわち
ＱＡＳＱＧＴＳＩＮＬＮ（配列番号１１８）、
ＧＡＳＮＬＥＤ（配列番号１１９）、および
ＬＱＨＳＹＬＰＷＴ（配列番号１２０）の１つ、２つ、または３つを含むことができ、あるいは、上記列挙した配列に対して、１０のアミノ酸ごとに４、３、２．５、２、１．５、１、または０．５以下の置換、挿入、または欠失分だけ異なる４アミノ酸配列を含むことができる。
【００３７】
ＩＬ−１３結合剤は、重鎖可変領域配列で、ＣＤＲ領域内に下記の配列、すなわち
ＧＦＳＬＴＧＹＧＶＮ（配列番号１２１）、
ＩＩＷＧＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬ（配列番号１２２）、および
ＤＫＴＦＹＹＤＧＦＹＲＧＲＭＤＹ（配列番号１２３）の少なくとも１つ、２つ、または３つを含むことができ、あるいは、上記列挙した配列に対して、１０のアミノ酸ごとに４、３、２．５、２、１．５、１、または０．５以下の置換、挿入、または欠失分だけ異なる４アミノ酸配列を含むことができる。
【００３８】
好ましい一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、Ｃ６５からの６つのＣＤＲの全て、または密接に関係するＣＤＲを含み、これらＣＤＲは同一であり、または少なくとも１つの変性部分を有するが２、３、または４以下の変性部分（例えば、置換、欠失、または挿入）を有するものである。
【００３９】
さらに別の実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、同じカノニカル構造を有する少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ領域と、Ｃ６５の対応するＣＤＲ領域、例えばＣ６５の重鎖および／または軽鎖可変領域の少なくともＣＤＲ１およびＣＤＲ２とを含む。
【００４０】
一実施形態では、重鎖フレームワーク（例えばＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３のそれぞれ、またはＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を包含した配列であるが、ＣＤＲは除外する）は、下記の生殖細胞系Ｖセグメント配列、すなわちＤＰ−７１またはＤＰ−６７の１つ、あるいはカノニカル構造クラスのＣ６５に適合する別のＶ遺伝子の、重鎖フレームワークに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上が同一のアミノ酸配列を含む（例えば、Chothia他, (1992) J.Mol.Biol. 227:799-817; Tomlinson他, (1992) J.Mol. Biol. 227:776-798参照）。
【００４１】
一実施形態では、軽鎖フレームワーク（例えばＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３のそれぞれ、またはＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を包含した配列であるが、ＣＤＲは除外する）は、ＤＰＫ−１またはＤＰＫ−９生殖細胞系配列あるいはカノニカル構造クラスのＣ６５に適合する別のＶ遺伝子の、軽鎖フレームワークに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上が同一のアミノ酸配列を含む（例えば、Tomlinson他, (1995) EMBO J. 14:4628参照）。
【００４２】
別の実施形態では、軽鎖フレームワーク（例えばＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３のそれぞれ、またはＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を包含した配列であるが、ＣＤＲは除外する）は、Ｖκ  Ｉサブグループ生殖細胞系配列、例えばＤＰＫ−９またはＤＰＫ−１配列の軽鎖フレームワークに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上が同一のアミノ酸配列を含む。
【００４３】
別の実施形態では、重鎖フレームワーク（例えばＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３のそれぞれ、またはＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３を包含した配列であるが、ＣＤＲは除外する）は、ＶＨ  ＩＶサブグループ生殖細胞系配列、例えばＤＰ−７１またはＤＰ−６７配列の軽鎖フレームワークに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上が同一のアミノ酸配列を含む。
【００４４】
一実施形態では、軽鎖または重鎖可変フレームワーク（例えば、少なくともＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および所望によりＦＲ４を包含する領域）は、（ａ）例えばヒト成熟抗体、ヒト生殖細胞系配列、ヒトコンセンサス配列、または本明細書で述べるヒと抗体からの軽鎖または重鎖可変フレームワーク残基など、ヒト軽鎖または重鎖可変フレームワークからのアミノ酸残基の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％を含む軽鎖または重鎖可変フレームワーク；（ｂ）例えばヒト成熟抗体、ヒト生殖細胞系配列、ヒトコンセンサス配列からの軽鎖または重鎖可変フレームワーク残基など、ヒト軽鎖または重鎖可変フレームワークからのアミノ酸残基の２０％から８０％、４０％から６０％、６０％から９０％、または７０％から９５％を含む軽鎖または重鎖可変フレームワーク；（ｃ）非ヒトフレームワーク（例えば、げっ歯類フレームワーク）；または（ｄ）例えば抗原性または細胞毒性決定基を除去するように修飾され、脱免疫化され、または部分的にヒト化された、非ヒトフレームワークから選択することができる。一実施形態では、重鎖可変領域配列は、ヒト残基またはヒトコンセンサス配列残基を下記の位置の１つまたは複数に、すなわち（軽鎖の可変領域のＦＲでは）４Ｌ、３５Ｌ、３６Ｌ、３８Ｌ、４３Ｌ、４４Ｌ、５８Ｌ、４６Ｌ、６２Ｌ、６３Ｌ、６４Ｌ、６５Ｌ、６６Ｌ、６７Ｌ、６８Ｌ、６９Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、７３Ｌ、８５Ｌ、８７Ｌ、９８Ｌ、および／または（重鎖の可変領域のＦＲでは）２Ｈ、４Ｈ、２４Ｈ、３６Ｈ、３７Ｈ、３９Ｈ、４３Ｈ、４５Ｈ、４９Ｈ、５８Ｈ、６０Ｈ、６７Ｈ、６８Ｈ、６９Ｈ、７０Ｈ、７３Ｈ、７４Ｈ、７５Ｈ、７８Ｈ、９１Ｈ、９２Ｈ、９３Ｈ、および／または１０３Ｈ（Ｋａｂａｔ番号付けによる）の１つまたは複数に（少なくとも５、１０、１２、または全てであることが好ましい）含む。
【００４５】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、少なくとも１つの非ヒトＣＤＲ、例えばマウスＣＤＲ、例えばＭＪ２−７またはＣ６５からのＣＤＲ、またはそのｊ変異体と、ＭＪ２−７またはＣ６５のフレームワークとは少なくとも１つのアミノ酸、例えば少なくとも５、８、１０、１２、１５、または１８のアミノ酸だけ異なる少なくとも１つのフレームワークとを含む。例えばタンパク質は、１、２、３、４、５、または６個のそのような非ヒトＣＤＲを含み、ＨＣ  ＦＲ１、ＨＣ  ＦＲ２、ＨＣ  ＦＲ３、ＬＣ  ＦＲ１、ＬＣ  ＦＲ２、およびＬＣ  ＦＲ３の少なくとも３つで少なくとも１アミノ酸だけ異なる部分を含む。
【００４６】
一実施形態では、抗−ＩＬ−１３抗体分子の重鎖または軽鎖可変領域配列は、本明細書で述べる抗体、例えばＭＪ２−７またはＣ６５の可変領域配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上が同一であるアミノ酸配列、あるいは、本明細書で述べる抗体、例えばＭＪ２−７またはＣ６５の可変領域配列に対して少なくとも１または５個の残基であるが４０、３０、２０、または１０個未満の残基が異なっているアミノ酸配列を含む。一実施形態では、タンパク質の重鎖または軽鎖可変領域配列は、例えば低ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、高ストリンジェンシー、または非常に高いストリンジェンシーの条件下、本明細書で述べる核酸配列によって、あるいは本明細書で述べる核酸配列またはその相補体とハイブリダイズする核酸によってコードされたアミノ酸配列を含む。
【００４７】
一実施形態では、可変領域配列の一方または両方は、非ヒト抗体（例えば、ｍＡｂ１３．２などのマウス抗体）とヒト抗体または生殖細胞系配列との両方から様々に得られるフレームワーク領域に、アミノ酸位置を含む。例えば可変領域配列は、いくつかの位置、すなわち非ヒト抗体とヒト抗体（またはヒト生殖細胞系配列）の両方がその位置で同一であるために、アミノ酸残基がこれらの抗体の両方と同一になるいくつかの位置を含むことができる。非ヒトおよびヒト抗体が異なる残りのフレームワーク位置では、可変領域の位置の少なくとも５０、６０、７０、８０、または９０％が、非ヒトではなくてヒト抗体（またはヒト生殖細胞系配列）と同一であることが好ましい。例えば、そのような残りのフレームワーク位置には、ヒトではなく非ヒト抗体と同一でよい場所が、全くないかあるいは少なくとも１、２、３、または４カ所ある。例えばＨＣ  ＦＲ１では、１つまたは２つのそのような位置を、非ヒトとすることができ；ＨＣ  ＦＲ２では、１つまたは２つのそのような位置を、非ヒトとすることができ；ＦＲ３では、１、２、３、または４つのそのような位置を、非ヒトとすることができ；ＬＣ  ＦＲ１では、１、２、３、または４つのそのような位置を、非ヒトとすることができ；ＬＣ  ＦＲ２  では、１つまたは２つのそのような位置を、非ヒトとすることができ；ＬＣ  ＦＲ３では、１つまたは２つのそのような位置を、非ヒトとすることができる。フレームワークは、追加の非ヒト位置を含むことができる。
【００４８】
ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、別の機能性分子、例えば別のペプチドまたはタンパク質（例えばＦａｂ断片）に誘導体化または結合することができる。例えば結合剤は、とりわけ別の抗体分子（例えば二重特異性または多重特異性抗体分子を形成するため）や毒素、放射性同位元素、細胞毒性または細胞増殖抑制性物質のような１つまたは複数のその他の分子本体に、機能的に結合することができる（例えば化学結合、遺伝子融合、非共有結合、またはその他の方法によって）。
【００４９】
別の実施形態では、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、ＩＬ−１３と受容体ＩＬ−１３Ｒα１との相互作用を妨げる。一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３（配列番号１２４、図１３Ａ）のＰｈｅ１０７と、残基Ｌｅｕ３１９、Ｃｙｓ２５７、Ａｒｇ２５６、およびＣｙｓ３２０の側鎖によって形成されたＩＬ−１３Ｒα１（配列番号１２５、図１３Ｂ）の疎水性ポケットとの相互作用を、例えばこれら残基との直接結合によってまたは立体障害によって妨げることができる。別の実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３Ｒα１（配列番号１２５）のアミノ酸残基Ｉｌｅ２５４、Ｓｅｒ２５５、Ａｒｇ２５６、Ｌｙｓ３１８、Ｃｙｓ３２０、およびＴｙｒ３２１と、ＩＬ−１３（配列番号１２４）のアミノ酸残基Ａｒｇ１１、Ｇｌｕ１２、Ｌｅｕ１３、Ｉｌｅ１４、Ｇｌｕ１５、Ｌｙｓ１０４、Ｌｙｓ１０５、Ｌｅｕ１０６、Ｐｈｅ１０７、およびＡｒｇ１０８との間のファンデルワールス相互作用を、例えばこれら残基のとの直接結合によってまたは立体障害によって妨げることができる。
【００５０】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、"the suggested list of human tissues to be used for immunohistochemical investigations of cross-reactivity", Annex II, the DC CPMP Guideline III/5271/94 Draft 5, "Production and quality control of monoclonal antibidies"の少なくとも半分、３分の２、４分の３、９０％、または全ての組織に対して、また1997 US FDA/CBER "Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use"の表２で推奨される組織の少なくとも半分、３分の２、４分の３、９０％、または全てに対してスクリーニングしたときに、有意な交差反応性を持たない。
【００５１】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体は、ＩＬ−１３、例えば哺乳類ＩＬ−１３、例えばヒトまたはヒト以外の霊長類ＩＬ−１３に特異的に結合する。例えば結合剤は、ＩＬ−１３以外の非特異的抗原（例えばＢＳＡ、カゼイン）に結合するための親和性よりも、少なくとも２倍、１０倍、５０倍、１００倍、またはれよりも良好な（より小さいＫｄ）親和性で、あるいはＩＬ−１３以外の別のヒトインターロイキンに結合するための親和性よりも、少なくとも２倍、１０倍、５０倍、１００倍、またはそれよりも良好な（より小さいＫｄ）親和性で、ＩＬ−１３に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、実施例１で記述されるヒトＩＬ−１３の粗製サンプルに対してブロットしたときに、単一の目立つバンドを検出するだけである（「４元スクリーン」）。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１３結合剤を固定化したビーズを使用して粗製サンプルからタンパク質を引き出すことにより形成された沈殿物は、ＩＬ−１３が少なくとも５％、１０％、５０％、または８０％の純度である組成物である。
【００５２】
別の態様では、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子、またはその医薬組成物を、ＩＬ−１３関連障害を治療しまたは予防するために投与する。治療は、対象の状態を改善しまたは維持する（またはそのように試みる）ことを指す。典型的な場合、治療は、医師が認め得る程度まで対象の状態を改善し、または状態の悪化を予防する。ＩＬ−１３関連障害の例には、呼吸器障害、例えば喘息（例えばアレルギー性および非アレルギー性の喘息（例えば、幼児における呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）などによる感染が原因の喘息など））、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、および気道炎症、好酸球増加症、線維症、過剰粘液生成に関わるその他の状態、例えば嚢胞性線維症および肺線維症；例えばＩＬ−１３に対する感受性の増大から生ずるアトピー性障害（例えば、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、湿疹、アレルギー性鼻炎、およびアレルギー性胃腸炎）；炎症性および／または自己免疫状態であって、皮膚に関するもの（例えばアトピー性皮膚炎）、胃腸障害（例えば、潰瘍性大腸炎および／またはクローン病などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ））、肝臓に関するもの（例えば肝硬変、肝細胞癌）、および強皮症；白血病やグリア芽細胞腫、リンパ腫、例えばホジキンリンパ腫などの腫瘍または癌（例えば軟組織または充実性腫瘍）；ウイルス感染（例えばＨＴＬＶ−１から）；その他の器官の線維症、例えば肝臓の線維症（例えば、Ｂ型および／またはＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる線維症）；および保護１型免疫応答の発現抑制（例えばワクチン接種中）であって、例えば本明細書に記述されるものの１つまたは複数から選択された障害が含まれるが、これらに限定するものではない。
【００５３】
ＩＬ−１３結合剤（例えば、本明細書で記述されるものなどの、抗−ＩＬ−１３抗体分子）は、障害を治療しまたは予防するのに有効な量で投与することができる。予防的使用の場合（例えば、発症を予防しまたは発症を遅らせるため）、対象は、障害の１種または複数の症状を示しても示さなくてもよい。量は、障害の少なくとも１種の症状が寛解するのに効果的であるよう選択することもできる。好ましくは対象が哺乳類であり、例えば、本明細書で述べるＩＬ−１３関連障害に罹っているヒトである。呼吸器障害、例えば喘息では、ＩＬ−１３結合剤を吸入によってデリバリーすることができる。
【００５４】
一実施形態では、方法が、ＩＬ−１３に結合する抗体分子を複数用量投与する工程を含む。例えば抗体分子は、ＩＬ−１３を阻害しまたは中和する。一実施形態では、各用量を、例えば約０．５〜１０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．７〜３．３ｍｇ／ｋｇ）の量で、週当たり１回以下、例えば隔週でまたは月に１回または２回の頻度で皮下から投与する。一実施形態では、抗体は、本明細書に記述される抗体である。例えば抗体は、ＩＬ−１３Ｒα１の結合を阻害する抗体である。抗体は、例えば注射後少なくとも６週間、ヒツジモデルにおける回虫（Ａｓｃａｒｉｓ）抗原への曝露に対して注射後保護効果をもたらすことができる。
【００５５】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤を別の治療薬と組み合わせて投与する。併用療法は、本明細書に記述される１種または複数の追加の治療薬、例えば１種または複数のサイトカインおよび成長因子阻害剤、免疫要請剤、抗炎症剤（例えば全身性抗炎症薬）、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞毒性または細胞増殖抑制剤と同時に配合されかつ／または同時に投与されたＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子を含むことができる。ＩＬ−１３結合剤およびその他の治療薬は、別々に投与することもできる。
【００５６】
ＩＬ−１３結合剤と同時投与しかつ／または同時配合することができる、好ましい追加の治療薬の例には、吸入ステロイド；β−作動薬、例えば短時間作用性または長時間作用性のβ−作動薬；ロイコトリエンまたはロイコトリエン受容体の拮抗薬；ＡＤＶＡＩＲ（登録商標）などの複合薬；ＩｇＥ阻害剤、例えば抗−ＩｇＥ抗体（例えばＸＯＬＡＩＲ（登録商標））；ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えばＰＤＥ４阻害剤）；キサンチン；抗コリン作動薬；クロモリンなどの肥満細胞安定剤；ＩＬ−４阻害剤；ＩＬ−５阻害剤；エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤；および抗ヒスタミンが含まれる。そのような組合せは、喘息およびその他の呼吸器障害を治療するのに使用することができる。ＩＬ−１３結合剤と同時投与しかつ／または同時配合することができる治療薬の追加の例には、とりわけＴＮＦ拮抗薬（例えば、ｐ５５やｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば７５ｋｄ  ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（例えば７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））などの、ＴＮＦ受容体の可溶性断片）；ＴＮＦ酵素拮抗薬、例えばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン受容体拮抗薬；ＴＧＦ−β拮抗薬；インターフェロンγ；パーフェニドン；化学療法薬、例えばメトトレキセート、レフルノミド、またはシロリムス（ラパマイシン）、またはこれらの類似体、例えばＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫調節剤；ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２、およびＮＦκＢ阻害剤の１種または複数が含まれる。
【００５７】
別の態様では、本願は、組成物、例えば医薬上許容される担体と少なくとも１種のＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子とを含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、組成物、例えば医薬組成物は、２種以上のＩＬ−１３結合剤、例えば２種以上の抗−ＩＬ−１３抗体分子の組合せを含む。ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子と、薬物、例えば治療薬（例えば本明細書に記載される、１種または複数のサイトカインおよび成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤（例えば全身性抗炎症剤）、代謝抑制剤、酵素抑制剤、および／または細胞毒性または細胞増殖抑制剤）との組合せも、使用することができる。
【００５８】
本願は、本明細書に記述されるＩＬ−１３結合剤またはその成分をコードするヌクレオチド配列、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子、例えば本明細書に記述される抗体分子の重鎖および／または軽鎖可変領域配列を含む核酸も特徴とする。例えば本願は、本明細書に記述されるような、例えばＭＪ２−７またはＣ６５の１種または複数から選択された抗−ＩＬ−１３抗体の、重鎖および軽鎖可変領域配列をそれぞれコードする第１および第２の核酸を特徴とする。別の態様では、本願は、宿主細胞と、本明細書に記述される核酸を含有するベクターとを特徴とする。
【００５９】
本発明は、例えばＭＪ２−７またはＣ６５の１種または複数によって認識されるＩＬ−１３、例えばヒトＩＬ−１３のエピトープも特徴とする。例えば、エピトープを含むタンパク質およびペプチドは、エピトープ、例えば抗体や小分子などのタンパク質と相互に作用するその他の結合化合物を生成しまたはスクリーニングするのに使用することができる。例えば、エピトープを含むペプチドは、免疫原として、または発現ライブラリーをスクリーニングするための標的として使用することができる。化合物がペプチドと相互に作用できるかどうかを評価すること、あるいはマッピングまたは構造決定によって、化合物が、例えば成熟ＩＬ−１３との関連においてエピトープと相互に作用できるかどうかを評価することも可能である。
【００６０】
別の態様では、本願は、ＩＬ−１３および同族のＩＬ−１３結合タンパク質、例えばＩＬ−１３受容体複合体、例えばＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−４Ｒαを含む複合体、またはそのサブユニットとの相互作用、例えば結合を調節し、例えば妨げる（例えば阻害し、阻止し、またはその他の方法で低下させる）方法を特徴とする。調節は、生体内または生体外で行うことができる。その他の実施形態では、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、ＩＬ−１３に結合し、ＩＬ−１３と、ＩＬ−１３受容体複合体のサブユニット、例えばＩＬ−１３Ｒα１またはＩＬ−４Ｒαのそれぞれとの相互作用、例えば結合を妨げる（例えば、阻害し、阻止し、またはその他の方法で低下させる）。さらに別の実施形態では、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、ＩＬ−１３に結合し、ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１との相互作用、例えば結合を妨げる（例えば阻害し、阻止し、またはその他の方法で低下させる）。別の実施形態では、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、ＩＬ−１３に結合し、ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１との相互作用、例えば結合を妨げる（例えば阻害し、阻止し、またはその他の方法で低下させる）。典型的な場合、抗−ＩＬ−１３抗体分子は、ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１との相互作用、例えば結合を、妨げる（例えば阻害し、阻止し、またはその他の方法で低下させる）。
【００６１】
別の実施形態では、本願は、ＩＬ−１３とＩＬ−１３受容体タンパク質、例えばＩＬ−１３Ｒα１またはＩＬ−１３Ｒα２との相互作用を調節する方法を特徴とする。例えば、ＩＬ−１３結合剤、例えば本明細書に記述される薬剤は、ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１またはＩＬ−１３Ｒα２との結合を低下させまたは阻害するのに使用することができ、あるいはＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−４Ｒαを含む複合体（例えば本明細書に記述される複合体）の形成を低下させるのに使用することができる。この方法は、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３を含有する複合体を、ＩＬ−１３結合剤、例えば本明細書に記述されるタンパク質と接触させる工程を含む。
【００６２】
主題となる方法は、細胞に生体外（例えば細胞を含まない系）で、培養物中で、例えば試験管内または生体外で使用することができる。例えば、ＩＬ−１３受容体−発現細胞は、培地中、生体外で培養することができ、接触工程は、ＩＬ−１３結合剤を培地に添加することによって行うことができる。あるいはこの方法は、例えば生体外（例えば治療的または予防的）プロトコルの一部として、対象に存在する細胞に実施することができる。例えばＩＬ−１３結合剤は、局所にまたは全身にデリバリーすることができる。
【００６３】
方法は、ＩＬ−１３とＩＬ−１３受容体複合体またはそのサブユニットとの相互作用を引き起こすことが可能な条件下で、ＩＬ−１３をＩＬ−１３受容体複合体にまたはそのサブユニットに接触させ、それによってＩＬ−１３／ＩＬ−１３受容体混合物を形成する工程を含む。一般にＩＬ−１３結合剤は、例えばＩＬ−１３／ＩＬ−１３受容体混合物の接触が、ＩＬ−１３と受容体タンパク質との相互作用、またはＩＬ−１３の少なくとも１つの機能、例えばＩＬ−１３により媒介されるシグナル伝達を調節し、例えば妨げる（例えば阻害し、阻止し、またはその他の方法で低下させる）ような有効量で提供される。
【００６４】
別の態様では、本願は、生体外でのサンプル（例えば血清や血漿、組織、生検などの生体サンプル）中のＩＬ−１３の存在を検出するための方法を提供する。主題となる方法は、障害、例えば免疫細胞関連障害を診断するのに使用することができる。この方法は、（ｉ）サンプルまたは対照サンプルをＩＬ−１３結合剤に、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子に、例えば本明細書に記述されるようなものに接触させる工程と、（ｉｉ）ＩＬ−１３結合剤とサンプルまたは対照サンプルとの複合体の形成を検出する工程とを含み、対照サンプルに比べてサンプル中の複合体形成の統計上有意な変化は、サンプル中にＩＬ−１３が存在することを示している。
【００６５】
さらに別の態様では、本願は、生体内でのＩＬ−１３の存在を検出するための方法を提供する（例えば、対象の生体内イメージング）。主題となる方法は、障害、例えばＩＬ−１３関連障害を診断するのに使用することができる。この方法は、（ｉ）結合剤とＩＬ−１３との結合が可能になる条件下で、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子、例えば本明細書に記述されるようなものを、対象または対照者に投与する工程と、（ｉｉ）結合剤とＩＬ−１３との複合体の形成を検出する工程とを含み、対照者に比べて対象におけるの複合体形成の統計上有意な変化は、ＩＬ−１３が存在することを示している。
【００６６】
例えば抗体分子は、結合または非結合抗体の検出を促進させるため、検出可能な物質で直接または間接的に標識される。適切な検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子団、蛍光物質、ルミネセンス物質、および放射性物質が含まれる。
【００６７】
薬剤、例えば治療薬または予防薬を、生体内ＩＬ−１３発現細胞にデリバリーしまたは狙いを定めるための方法も、開示される。
【００６８】
一態様では、本発明は、下記の配列、すなわち
2011225574.tif 000005
またはその機能的断片を含むポリペプチドを特徴とする。
【００６９】
ポリペプチドはさらに、
2011225574.tif 000006
を、例えばＮ末端シグナル配列として含むことができる。例えばポリペプチドは、カニクイザルからのＩＬ−１３タンパク質（ここでは、「ＮＨＰ−ＩＬ−１３」）である。このＮＨＰ−ＩＬ−１３は、成熟ＩＬ−１３タンパク質または未処理の完全長ＩＬ−１３タンパク質とすることができる。上記配列のペプチド、例えばヒトＩＬ−１３の対応するペプチドとは異なるペプチドを、例えば免疫原または標的化合物として使用することができる。
【００７０】
上記太字の位置の少なくとも１つまたは複数でヒトＩＬ−１３とは異なるが、上記太字以外の位置ではヒトＩＬ−１３と同一である関連するポリペプチドも特徴とする。例えば、太字位置の１つまたは複数をアラニンとすることができ、あるいは、カニクイザル配列（上記）中の対応する残基またはヒト配列中の対応する残基の同類置換とすることができる。本発明は、例えば、上記配列からの少なくとも５または６アミノ酸のペプチドも特徴とする。ペプチドは、異種タンパク質（例えば、ＩＬ−１３以外のタンパク質）、キメラタンパク質（例えばヒトＩＬ−１３）に含めることができ、または単独のペプチド、例えばその他の配列を含まないものとすることができる。ペプチドは、その他の化合物、例えば担体と融合しまたは結合することもできる。一実施形態では、ペプチドは、ヒトＩＬ−１３とは異なる少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。例示的なペプチドについては、以下に述べる。
【００７１】
カニクイザルＩＬ−１３配列およびその変種をコードする核酸も特徴とする。ポリペプチドは、カニクイザルＩＬ−１３および所望により別の種からのＩＬ−１３タンパク質、例えばヒトＩＬ−１３にも結合するＩＬ−１３結合剤を提供するのに使用することができる。
【００７２】
一態様では、本発明は、ヒト標的タンパク質に特異的に結合する標的結合分子を提供する方法を特徴とする。例えば、標的結合分子は抗体分子である。この方法は、ヒト標的タンパク質の対応する部分と同種である（少なくとも７０、７５、８０、８５、８７、９０、９２、９４、９５、９６、９７、または９８％同一である）が少なくとも１つのアミノ酸（例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、または９アミノ酸）が異なる非ヒトタンパク質の、少なくとも一部を含む標的タンパク質を提供する工程と；抗原に特異的に結合する結合剤を得る工程と；結合剤がヒト標的タンパク質に特異的に結合するか否かを評価し、またはヒト標的タンパク質の活性を調節する際の結合剤の効力を評価する工程とを含む。この方法はさらに、結合剤（例えば抗体分子）または誘導体（例えばヒト化抗体分子）をヒト被験体に投与する工程を含むことができる。一実施形態では、ヒト標的タンパク質はサイトカインであり、例えばインターロイキン、例えばＩＬ−１３またはＩＬ−４である。非ヒトタンパク質は、ヒト以外の霊長類、例えばアカゲザル、カニクイザル、またはブタオザルから得ることができる。
【００７３】
一実施形態では、得る工程が、タンパク質発現ライブラリー、例えばファージまたはリボソームディスプレイライブラリーを使用することを含む。例えばライブラリーは、Ｆａｂ’やｓｃＦｖなどの抗体分子を表示する。一実施形態では、得る工程が、抗原を免疫原として使用して動物を免疫化することを含む。例えば動物は、げっ歯類、例えばマウスまたはラットとすることができる。動物は、少なくとも１種のヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニック動物とすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１Ａ】それぞれ配列番号１７８および配列番号１４の、完全長ヒトおよびカニクイザルＩＬ−１３の配列を示す図である。
【図１Ｂ】カニクイザルＩＬ−１３からの例示的なペプチドのリストを示す図である（それぞれ配列番号１７９〜１８８）。
【図２】ＣＤ２３＋単球のパーセンテージ（ｙ軸）により測定したときの、様々なＩＬ−１３結合剤によるＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。ＭＪ２−７（Δ）、Ｃ６５（◆）、およびｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ（●）の濃度をｘ軸上に示す。
【図３】ＭＪ２−７（マウス；●）またはヒト化ＭＪ２−７ｖ２．１１（○）による、ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性は、抗体濃度（ｘ軸）に対するＳＴＡＴ６のリン酸化（ｙ軸）によって測定した。
【図４】ＭＪ２−７ｖ２．１１（○）またはｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ（▲）による、ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性は、拮抗薬濃度（ｘ軸）に対するＳＴＡＴ６のリン酸化（ｙ軸）によって測定した。
【図５】ＭＪ２−７（Δ）、Ｃ６５（◆）、またはｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ（●）による、ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性は、拮抗薬濃度（ｘ軸）に対するＳＴＡＴ６のリン酸化（ｙ軸）によって測定した。
【図６Ａ】天然ヒトＩＬ−１３（ｘ軸）によるテネイシン産生の誘導（ｙ軸）を示すグラフである。
【図６Ｂ】抗体濃度（ｘ軸）に対するテネイシン産生誘導の阻害（ｙ軸）によって測定したときの、ＭＪ２−７によるＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。
【図７】ＭＪ２−７または対照抗体と、ＳＰＲチップに連結されたｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃに結合されたＮＨＰ−ＩＬ−１３との結合を示すグラフである。
【図８】様々な濃度（０．０９〜６００ｎＭ）のＮＨＰ  ＩＬ−１３と、捕獲されたｈＭＪ２−７Ｖ２−１１抗体との結合を示すグラフである。
【図９】マウスＭＪ２−７（●）、あるいはヒト化変種１（○）、変種２（◆）、または変種３（Δ）抗体によるＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性は、抗体濃度（ｘ軸）に対するＳＴＡＴ６のリン酸化（ｙ軸）によって測定した。
【図１０】マウスＭＪ２−７ＶＨおよびＶＬ（●）、マウスＶＨおよびヒト化変種２ＶＬ（Δ）、または変種２ＶＨおよびＶＬ（◆）を含む抗体によるＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性は、抗体濃度（ｘ軸）に対するＳＴＡＴ６のリン酸化（ｙ軸）によって測定した。
【図１１】ＥＬＩＳＡにより測定したときの、ＭＪ２−７抗体による、ＩＬ−１３と固定化されたＩＬ−１３受容体との結合の阻害を示すグラフである。結合は、４５０ｎｍでの吸光度（ｙ軸）として示す。ＭＪ２−７抗体の濃度はｘ軸に示す。図１１Ａは、ＩＬ−１３Ｒα１との結合を示す。図１１Ｂは、ＩＬ−１３Ｒα２との結合を示す。
【図１２】ＤＰＫ１８生殖細胞系アミノ酸配列（配列番号１９３）とヒト化ＭＪ２−７変種３ＶＬ（配列番号１９０）とのアライメントを示す図である。
【図１３Ａ】成熟した処理済みのヒトＩＬ−１３のアミノ酸配列（配列番号１２４）を示す図である。
【図１３Ｂ】ヒトＩＬ−１３Ｒα１のアミノ酸配列（配列番号１２５）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００７５】
本明細書で記述される全ての資料、特許出願、特許、およびその他の参考文献は、その全体を、参照により本明細書に組み込む。
【００７６】
（定義）
【００７７】
本明細書で使用する「ＩＬ−１３結合剤」という用語は、ＩＬ−１３タンパク質、例えば哺乳類ＩＬ−１３、特にヒトまたは非ヒト霊長類ＩＬ−１３に結合する界面を含む、タンパク質（例えば多重鎖ポリペプチドやポリペプチド）やペプチドなどの任意の化合物を指す。結合剤は、一般に、５×１０−７Ｍ未満のＫｄで結合する。例示的なＩＬ−１３結合剤は、抗原結合部位を含むタンパク質、例えば抗体分子である。
【００７８】
本明細書で使用する「抗体分子」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域配列を含むタンパク質を指す。抗体分子という用語は、例えば完全長の成熟抗体、および抗体の抗原結合断片を含む。例えば抗体分子は、重（Ｈ）鎖可変領域配列（本明細書ではＶＨと省略する）および軽（Ｌ）鎖可変領域配列（本明細書ではＶＬと省略する）を含むことができる。別の例では、抗体分子は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域配列および２つの軽（Ｌ）鎖可変領域配列を含み、それによって２つの抗原結合部位が形成される。抗原結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１領域からなる１価の断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合された２つのＦａｂ断片を含む２価の断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１領域からなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体のシングルアームのＶＬおよびＶＨ領域からなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨ領域からなるｄＡｂ断片；（ｖｉ）ラクダ科動物またはラクダ化した可変領域；および（ｖｉｉ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）が含まれる。
【００７９】
ＶＨおよびＶＬ領域は、より保存的な「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれる領域共に散在している「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に、さらに細分することができる。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、いくつかの方法によって厳密に定義されている（Kabat,E.A.他, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, U.S.Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242; Chothia,C.他, (1987) J.Mol.Biol. 196:901-917; およびAbM definition used by Oxford Molecular's AbM antibody modeling software参照）。一般に、例えばProtein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. Antibody Engineering Lab Manual(Duebel,S.およびKontermann,R.編, Springer-Verlag, Heiderberg)を参照されたい。一般に、他に特に指示しない限り、以下の定義、すなわち重鎖可変領域のＣＤＲ１に関してはＡｂＭの定義、およびその他のＣＤＲに関してはＫａｂａｔの定義を使用する。さらに、ＫａｂａｔまたはＡｂＭのＣＤＲに関して記述される本発明の実施形態は、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループを使用して実施してもよい。ＶＨおよびＶＬのそれぞれは、典型的には３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを以下の順序で、すなわちＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端まで並べたものを含む。
【００８０】
本明細書で使用する「免疫グロブリン可変領域配列」は、免疫グロブリン可変領域の構造を形成することができるアミノ酸配列を指す。例えば配列は、天然に生ずる可変領域のアミノ酸配列の全てまたは一部を含むことができる。例えば配列は、１、２、またはそれ以上のＮまたはＣ末端アミノ酸を含んでも含まなくてもよく、あるいは、タンパク質構造の形成に適合するその他の変性部分を含むことができる。
【００８１】
「抗原結合部位」という用語は、ＩＬ−１３、例えば哺乳類ＩＬ−１３、例えばヒトまたは非ヒト霊長類ＩＬ−１３、またはそのエピトープに結合する界面を形成する決定基を含む、ＩＬ−１３結合剤の部分を指す。タンパク質（またはタンパク質擬似体）に関し、抗原結合部位は、典型的にはＩＬ−１３に結合する界面を形成する１つまたは複数のループ（少なくとも４つのアミノ酸またはアミノ酸模擬体）を含む。典型的な場合、抗体分子の抗原結合部位は、少なくとも１つまたは２つのＣＤＲを含み、あるいはより典型的には少なくとも３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。
【００８２】
本明細書で使用する「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、単一分子組成物の抗体分子の製剤を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対し、単一の結合特異性および親和性を示す。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術によって、またはハイブリドーマ技術を使用しない方法（例えば組換え法）によって作製することができる。
【００８３】
「事実上のヒト」タンパク質は、中和抗体応答、例えばヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を惹起しないタンパク質である。ＨＡＭＡは、例えば慢性または再発性の疾患状態を治療する際に、例えば抗体分子を繰り返し投与する場合、いくつかの環境で問題がある可能性がある。ＨＡＭＡ応答は、血清からの高度な抗体クリアランスが理由で（例えば、Saleh他, Cancer Immunol. Immunother., 32: 180-190(1990)参照）、また潜在的なアレルギー反応が理由で（例えば、LoBuglio他, Hybridoma, 5:5117-5123(1986)参照）、繰り返される抗体投与を潜在的に無効にすることができる。
【００８４】
「単独（の）」という用語は、その自然環境が実質的にない分子を指す。例えば単独のタンパク質は、細胞物質、あるいはその他のタンパク質が得られる細胞または組織源からのその他のタンパク質を、実質的に含まない。この用語は、単独のタンパク質が、治療用組成物として投与するのに十分純粋であり、または少なくとも７０％から８０％（ｗ／ｗ）の純度であり、より好ましくは少なくとも８０％〜９０％（ｗ／ｗ）の純度であり、さらにより好ましくは９０〜９５％の純度であり、最も好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％（ｗ／ｗ）の純度の製剤を指す。「分離（した）」化合物は、化合物が得られるサンプルの少なくとも１つの成分の少なくとも９０％から除去された化合物を指す。本明細書に記述される任意の化合物は、単独のまたは分離した化合物として提供することができる。
【００８５】
「エピトープ」は、結合剤によって、例えば抗体分子によって結合される標的化合物上の部位を指す。エピトープは、線状または立体配座のエピトーム、あるいはその組合せとすることができる。例えば、標的化合物がタンパク質の場合、エピトープは、結合剤によって結合されたアミノ酸を指すことができる。重複エピトープは、少なくとも１つの共通のアミノ酸残基を含む。
【００８６】
本明細書で使用する「低ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、高ストリンジェンシー、または非常に高いストリンジェンシーの条件下ハイブリダイズする」という用語は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄に関する条件を指す。ハイブリダイゼーション反応を実施するための指針は、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6に見出すことができる。水性および非水性方法がこの参考文献に記述されており、どちらも使用することができる。本明細書で示される特定のハイブリダイゼーション条件は、下記の通りである：１）低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件  約４５℃で６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）の後、少なくとも５０℃で、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで２回洗浄（洗浄温度は、低ストリンジェンシー条件の間、５５℃まで上昇させることができる）；２）中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件  約４５℃で６×ＳＳＣの後、６０℃で、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで１回または複数回洗浄；３）高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件  約４５℃で６×ＳＳＣの後、６５℃で、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで１回または複数回洗浄；および好ましくは４）非常に高いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、６５℃で０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ、その後６５℃で、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで１回または複数回洗浄。非常に高いストリンジェンシー条件（４）が好ましい条件であり、他に特に指示しない限り使用される条件である。
【００８７】
「ＩＬ−１３関連障害」は、ＩＬ−１３が、障害の病態または症状に寄与する障害である。したがって、ＩＬ−１３結合剤、例えば１種または複数のＩＬ−１３関連活性の拮抗薬であるＩＬ−１３結合剤を、障害の治療または予防に使用することができる。
【００８８】
「ＩＬ−１３」という用語は、ＩＬ−１３（種の起源とは無関係に、哺乳類、例えばヒトおよび非ヒト霊長類ＩＬ−１３を含む）として当技術分野で知られている完全長の未処理形態のサイトカイン、ならびにその成熟した処理済み形態、ならびに任意の断片（少なくとも５アミノ酸の）またはそのようなサイトカインの変種を含む。ＩＬ−１３配列内の位置は、完全長の未処理のヒトＩＬ−１３配列に関する番号付けに従って名付けることができる。例示的な完全長サルＩＬ−１３については、配列番号２４を参照されたい；成熟した処理済みのサルＩＬ−１３については、配列番号１４を参照されたい；完全長ヒトＩＬ−１３については、配列番号１７８を参照されたい；また成熟した処理済みのヒトＩＬ−１３については、配列番号１２４を参照されたい。例示的な配列を、下記の通り列挙する。
ＭＡＬＬＬＴＴＶＩＡＬＴＣＬＧＧＦＡＳＰＧＰＶＰＰＳＴＡＬＲＥＬＩＥＥＬＶＮＩＴＱＮＱＫＡＰＬＣＮＧＳＭＶＷＳＩＮＬＴＡＧＭＹＣＡＡＬＥＳＬＩＮＶＳＧＣＳＡＩＥＫＴＱＲＭＬＳＧＦＣＰＨＫＶＳＡＧＱＦＳＳＬＨＶＲＤＴＫＩＥＶＡＱＦＶＫＤＬＬＬＨＬＫＫＬＦＲＥＧＲＦＮ（配列番号１７８）
【００８９】
例えば位置１３０は、共通の多型の部位である。
【００９０】
ＩＬ−１３受容体タンパク質（例えばＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−１３Ｒα２）の例示的な配列は、例えばDonaldson他, (1998) J Immunol. 161: 2317-24; 米国特許第６２１４５５９号；米国特許第６２４８７１４号；および米国特許第６２６８４８０号に記載されている。
【００９１】
（図面の簡単な記載）
図１Ａは、それぞれ配列番号１７８および配列番号１４の、完全長ヒトおよびカニクイザルＩＬ−１３の配列である。
【００９２】
図１Ｂは、カニクイザルＩＬ−１３からの例示的なペプチドのリストである（それぞれ配列番号１７９〜１８８）。
【００９３】
図２は、ＣＤ２３＋単球のパーセンテージ（ｙ軸）により測定したときの、様々なＩＬ−１３結合剤によるＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。ＭＪ２−７（Δ）、Ｃ６５（◆）、およびｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ（●）の濃度をｘ軸上に示す。
【００９４】
図３は、ＭＪ２−７（マウス；●）またはヒト化ＭＪ２−７ｖ２．１１（○）による、ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性は、抗体濃度（ｘ軸）に対するＳＴＡＴ６のリン酸化（ｙ軸）によって測定した。
【００９５】
図４は、ＭＪ２−７ｖ２．１１（○）またはｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ（▲）による、ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性は、拮抗薬濃度（ｘ軸）に対するＳＴＡＴ６のリン酸化（ｙ軸）によって測定した。
【００９６】
図５は、ＭＪ２−７（Δ）、Ｃ６５（◆）、またはｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ（●）による、ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性は、拮抗薬濃度（ｘ軸）に対するＳＴＡＴ６のリン酸化（ｙ軸）によって測定した。
【００９７】
図６Ａは、天然ヒトＩＬ−１３（ｘ軸）によるテネイシン産生の誘導（ｙ軸）を示すグラフである。
【００９８】
図６Ｂは、抗体濃度（ｘ軸）に対するテネイシン産生誘導の阻害（ｙ軸）によって測定したときの、ＭＪ２−７によるＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。
【００９９】
図７は、ＭＪ２−７または対照抗体と、ＳＰＲチップに連結されたｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃに結合されたＮＨＰ−ＩＬ−１３との結合を示すグラフである。
【０１００】
図８は、様々な濃度（０．０９〜６００ｎＭ）のＮＨＰ  ＩＬ−１３と、捕獲されたｈＭＪ２−７Ｖ２−１１抗体との結合を示すグラフである。
【０１０１】
図９は、マウスＭＪ２−７（●）、あるいはヒト化変種１（○）、変種２（◆）、または変種３（Δ）抗体によるＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性は、抗体濃度（ｘ軸）に対するＳＴＡＴ６のリン酸化（ｙ軸）によって測定した。
【０１０２】
図１０は、マウスＭＪ２−７ＶＨおよびＶＬ（●）、マウスＶＨおよびヒト化変種２ＶＬ（Δ）、または変種２ＶＨおよびＶＬ（◆）を含む抗体によるＮＨＰ  ＩＬ−１３活性の中和を示すグラフである。ＮＨＰ  ＩＬ−１３活性は、抗体濃度（ｘ軸）に対するＳＴＡＴ６のリン酸化（ｙ軸）によって測定した。
【０１０３】
図１１Ａおよび１１Ｂは、ＥＬＩＳＡにより測定したときの、ＭＪ２−７抗体による、ＩＬ−１３と固定化されたＩＬ−１３受容体との結合の阻害を示すグラフである。結合は、４５０ｎｍでの吸光度（ｙ軸）として示す。ＭＪ２−７抗体の濃度はｘ軸に示す。図１１Ａは、ＩＬ−１３Ｒα１との結合を示す。図１１Ｂは、ＩＬ−１３Ｒα２との結合を示す。
【０１０４】
図１２は、ＤＰＫ１８生殖細胞系アミノ酸配列（配列番号１９３）とヒト化ＭＪ２−７変種３ＶＬ（配列番号１９０）とのアライメントである。
【０１０５】
図１３Ａは、成熟した処理済みのヒトＩＬ−１３のアミノ酸配列（配列番号１２４）である。
【０１０６】
図１３Ｂは、ヒトＩＬ−１３Ｒα１のアミノ酸配列（配列番号１２５）である。
【０１０７】
ＩＬ−１３に特異的に結合し、かつＩＬ−１３がＩＬ−１３受容体およびシグナル伝達媒介物と相互に作用する能力を調節する結合剤（例えば抗ＩＬ１３抗体分子）について、開示する。結合剤は、１種または複数のＩＬ−１３関連活性を調節する（例えば阻害する）のに使用することができる。例えば本明細書に記述されるようなＩＬ−１３結合剤は、例えばＩＬ−１３で媒介された障害（例えば喘息、気道炎症、アトピー性障害、アレルギー応答、好酸球増加症、線維症、およびＩＬ−１３関連癌）を治療しまたは予防するために、例えば生体内での１種または複数のＩＬ−１３関連活性を調節するのに使用することができる。
【０１０８】
（抗ＩＬ−１３抗体分子）
【０１０９】
抗体分子を得るための数多くの方法が、利用可能である。１つの例示的な方法は、タンパク質発現ライブラリー、例えばファージまたはリボソームディスプレイライブラリーをスクリーニングする工程を含む。ファージディスプレイは、例えばＬａｎｄｅｒ他の米国特許第５２２３４０９号；Smith (1985) Science 228:1315-1317；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９１／１７２７１；ＷＯ９２／２０７９１；ＷＯ９２／１５６７９；ＷＯ９３／０１２８８；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／０９６９０；およびＷＯ９０／０２８０９に記載されている。ディスプレイライブラリーの使用の他に、その他の方法を使用して抗ＩＬ−１３抗体分子を得ることができる。例えば、ＩＬ−１３タンパク質またはそのペプチドを、非ヒト動物、例えばげっ歯類、例えばマウス、ハムスター、ラットなどでの抗原として使用することができる。
【０１１０】
一実施形態では、非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子の少なくとも一部を含む。例えば、ヒトＩｇ遺伝子座の大断片で、マウス抗体産生が失われているマウス株を設計製作することが可能である。ハイブリドーマ技術を使用することにより、所望の特異性を有する遺伝子から得られた抗原特異的モノクローナル抗体を生成し、選択することができる。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）、Green他, (1994) Nature Genetics 7:13-21、ＵＳ２００３−００７０１８５、１９９６年１０月３１日公開のＷＯ９６／３４０９６、および１９９６年４月２９日出願のＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９２８を参照されたい。
【０１１１】
別の実施形態では、モノクローナル抗体を非ヒト動物から得て、修飾し、例えばヒト化しまたは脱免疫化する。Ｗｉｎｔｅｒは、本明細書に記述されるヒト化抗体の調製に使用することができる、例示的なＣＤＲ移植法について述べている（米国特許第５２２５５３９号）。特定のヒト抗体のＣＤＲ全てを、非ヒトＣＤＲの少なくとも１部に代えることができ、またはＣＤＲの一部を、非ヒトＣＤＲに代えることができる。ヒト化抗体と所定の抗原との結合に必要なＣＤＲの数を、代える必要があるだけである。
【０１１２】
ヒト化抗体は、抗原結合に直接関与していないＦｖ可変領域の配列を、ヒトＦｖ可変領域からの同等の配列に代えることによって生成することができる。ヒト化抗体分子を生成するための例示的な方法は、Morrison (1985) Science 229:1202-1207; Oi他, (1986) BioTechniques 4:214; および米国特許第５５８５０８９号；米国特許第５６９３７６１号；米国特許第５６９３７６２号；米国特許第５８５９２０５号；および米国特許第６４０７２１３号により示されている。これらの方法は、重鎖または軽鎖の少なくとも１つからの免疫グロブリンＦｖ可変領域の全てまたは一部をコードする核酸配列を、単離し、操作し、発現させる工程を含む。そのような核酸は、上述のような所定の標的に対する抗体を生成するハイブリドーマから、ならびにその他の供給源から得ることができる。次いでヒト化抗体分子をコードする組換えＤＮＡを、適切な発現ベクターにクローニングすることができる。
【０１１３】
ＩＬ−１３結合抗体分子は、ヒトＴ細胞エピトープの特異的欠失によって、またはＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００／３４３１７に開示されている方法による「脱免疫化」によって修飾してもよい。手短に言うと、抗体の重鎖および軽鎖可変領域を、ＭＨＣクラスＩＩに結合するペプチドに関して分析することができ；これらのペプチドは、潜在的なＴ細胞エプトープを提示する（ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００／３４３１７に開示されるように）。潜在的なＴ細胞エピトープを検出するために、「ペプチドスレッディング」と呼ばれるコンピュータモデリングアプローチを利用することができ、さらに、ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００／３４３１７に記載されるように、ヒトＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドのデータベースを、ＶＨおよびＶＬ配列中に存在するモチーフに関して探索することができる。これらのモチーフは、１８の主なＭＨＣクラスＩＩ  ＤＲアロタイプのいずれかと結合し、したがって潜在的なＴ細胞エピトープを構成する。検出された潜在的Ｔ細胞エピトープは、可変領域内の少数のアミノ酸残基を置換することによって、好ましくは単一アミノ酸置換によって排除することができる。典型的な場合、保存的置換が行われる。しばしば、ヒト生殖細胞系抗体配列の、ある位置に共通するアミノ酸を使用することができるが、これに限るものではない。ヒト生殖細胞系配列は、例えば、Tomlinson他, (1992) J.Mol. Biol. 227:776-798; Cook,G.P.他, (1995) Immunol. Today Vol. 16 (5): 237-242; Chothia,D.他, (1992) J.Mol. Biol. 227: 799-817; およびTomlinson他, (1995) EMBO J. 14:4628-4638に開示されている。Ｖ  ＢＡＳＥディレクトリは、ヒト免疫グロブリン可変領域配列の包括的ディレクトリ（Tomlinson,I.A.他, MRC Centre for Protein Engineering, Cambridge, UKによりコンパイルされた）を提供する。これらの配列は、例えばフレームワーク領域およびＣＤＲのために、ヒト配列の供給源として使用することができる。コンセンサスヒトフレームワーク領域も、米国特許第６３０００６４号に記載されるように使用することができる。
【０１１４】
さらに、キメラ、ヒト化、および単鎖抗体分子（例えば、ヒトおよび非ヒト部分を含むタンパク質）を、標準的な組換えＤＮＡ技法を使用して生成することができる。ヒト化抗体は、例えば、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現するが内因性マウス免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができない、トランスジェニックマウスを使用して生成してもよい。
【０１１５】
さらに、本明細書に記述される抗体分子は、ＩＬ−１３に結合し、機能的ＩＬ−１３シグナル伝達複合体の形成を妨げ、かつ重鎖の定常領域内に変異を有するものも含む。ときどき、定常領域のある断片を変異させ不活性化することが望ましい。例えば重鎖定常領域内の変異は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）および／または補体との結合が低下した抗体が生成されるように行うことができるが、そのような変異は当技術分野で周知のものである。ＩｇＧの重鎖の定常領域のアミノ配列へのそのような変異の例は、配列番号１２８で示される。ＣＬおよびＣＨサブユニット（例えばＣＨ１）のある活性断片は、互いに共役結合している。他の態様は、機能的ＩＬ−１３シグナル伝達複合体の形成に寄与するＩＬ−１３の表面に特異的な、抗原結合部位を得るための方法を提供する。
【０１１６】
例示的な抗体分子は、配列番号３０〜４６で示されるＶＬ鎖、および／または配列番号５０〜１１５で示されるＶＨ鎖の配列を含むことができるが、ＩＬ−１３結合能力を維持するこれら配列の変種も含むことができる。そのような変種は、当技術分野で周知の技法を使用して、提供された配列から得ることができる。アミノ酸の置換、欠失、または付加は、ＦＲまたはＣＤＲ中で行うことができる。フレームワーク領域内の変化は、通常は抗体分子の安定性が改善しかつ免疫原性が低下するよう設計されるのに対し、ＣＤＲ内の変化は、通常は抗体分子のその標的に対する親和性が増大するように設計される。そのような親和性増大の変化は、典型的にはＣＤＲ領域を変性させかつ抗体分子を試験することによって、経験的に決定される。そのような変性は、Antibody Engineering, 第2版 (1995), Borrebaek編, Oxford University Pressに記載される方法に従って行うことができる。
【０１１７】
本明細書に記述される重鎖可変領域配列の変種である重鎖可変領域配列を得るための例示的な方法は、本明細書に記述される重鎖可変領域配列に１つまたは複数のアミノ酸を付加し、欠失させ、置換し、または挿入する工程と、所望により重鎖可変領域配列と１つまたは複数の軽鎖可変領域配列とを組み合わせる工程と、ＩＬ−１３との特異的結合に関し、修飾された重鎖可変領域配列を含むタンパク質を試験する工程と、（好ましくは）そのような抗原結合領域が１つまたは複数のＩＬ−１３関連活性を調節できるか否かを試験する工程とを含む。本明細書に記述される軽鎖可変領域配列の１つまたは複数の配列変種を使用した、類似の方法を用いることができる。
【０１１８】
抗体分子の変種は、１種または複数の様々なＣＤＲを有するライブラリーを作成し、このライブラリーをスクリーニングして、例えば改善された親和性でＩＬ−１３に結合する要素を見出すことにより、調製することができる。例えばMarks他, (Bio/Technology (1992) 10:779-83)は、抗体可変領域のレパートリーを生成する方法について述べており、すなわち可変領域の５’末端に向けられまたは隣接するコンセンサスプライマーを、ヒトＶＨ遺伝子の第３のフレームワーク領域に対するコンセンサスプライマーと併せて使用して、ＣＤＲ３が欠けているＶＨ可変領域のレパートリーが提供されるようにしている。レパートリーは、特定の抗体のＣＤＲ３と組み合わせることができる。さらに、ＣＤＲ３由来の配列を、ＣＤＲ３に欠けているＶＨまたはＶＬ領域のレパートリーと混合し、この混合した完全ＶＨまたはＶＬ領域を、同族のＶＬまたはＶＨ領域と組み合わせて、特異的抗原結合断片を提供することができる。次いでレパートリーを、ＷＯ９２／０１０４７のファージディスプレイ系などの適切な宿主系に表示することができ、したがって適切な抗原結合断片を選択することができる。類似の混合または組合せ技法も、Stemmer (Nature (1994) 370:389-91)により開示されている。他の代替例は、全可変領域内に変異が生成されるように、１つまたは複数の選択されたＶＨおよび／またはＶＬ遺伝子のランダムな変異誘発を使用して、変性ＶＨまたはＶＬ領域を生成することである。例えば、Gram他, Proc.Nat.Acad.Sci. USA (1992) 89:3576-80を参照されたい。
【０１１９】
使用することができる別の方法は、変異誘発をＶＨまたはＶＬ遺伝子のＣＤＲ領域に向けることである。そのような技法は、例えば、Barbas他 (Proc.Nat.Acad.Sci. USA (1994) 91:3809-13)およびSchier他 (J.Mol.Biol. (1996) 263:551-67)によって開示されている。同様に、３つのＣＤＲの１つまたは複数または全てを、ＶＨまたはＶＬ領域のレパートリーに、あるいはさらに他の足場（フィブロネクチン領域など）に移植することができる。得られるタンパク質が、ＩＬ−１３に結合できるかどうかについて評価する。
【０１２０】
一実施形態では、標的に結合する結合剤を、例えば変異誘発によって修飾し、それによって、修飾された結合剤のプールが得られるようにする。次いで修飾された結合剤に関し、変性した機能的性質（例えば、改善された結合、改善された安定性、生体内での長時間にわたる安定性）を有する１つまたは複数の変性した結合剤を特定するために評価する。一実施例では、ディスプレイライブラリー技術を使用して、修飾された結合剤のプールを選択しまたはスクリーニングする。次いでより高い親和性結合剤を、例えばより高いストリンジェンシーまたはより競合的な結合および洗浄条件を使用することによって、第２のライブラリーから特定する。その他のスクリーニング技法を使用することもできる。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、変異誘発は、結合界面にあることが知られておりまたは結合界面にある可能性の高い領域を標的としている。例えば、特定された結合剤が抗体分子である場合、変異誘発は、本明細書に記述される重鎖または軽鎖のＣＤＲ領域に向けることができる。さらに、変異誘発は、ＣＤＲ付近またはＣＤＲに隣接するフレームワーク領域、例えば、特にＣＤＲ接合の１０、５、または３アミノ酸以内のフレームワーク領域に向けることができる。抗体の場合、変異誘発は、段階的な改善を行うために、ＣＤＲの１つまたは２〜３に限定することもできる。
【０１２２】
一実施形態では、抗体が１つまたは複数の生殖細胞系配列により類似するように、変異誘発を使用する。１つの例示的な生殖細胞系形成方法は、単独の抗体の配列に類似している（例えば、特定のデータベースでは大部分が類似している）１種または複数の生殖細胞系配列を特定する工程を含む。次いで変異（アミノ酸レベルで）を、漸進的にまたは組み合わせてまたはその両方により、単独の抗体で行うことができる。例えば、一部または全ての可能な生殖細胞系変異をコードする配列を含む核酸ライブラリーを、作成する。次いで変異した抗体に関し、例えば単独抗体に比べて１つまたは複数の追加の生殖細胞系残基を有する抗体あるいは依然として有用な抗体が特定されるように、評価する。一実施形態では、できる限り多くの生殖細胞系残基を、単独抗体に導入する。
【０１２３】
一実施形態では、１つまたは複数の生殖細胞系残基を置換しまたはＣＤＲ領域に挿入するために、変異誘発を使用する。例えば生殖細胞系ＣＤＲ残基は、修飾された可変領域に類似する（例えば大部分が類似する）生殖細胞系配列からのものでよい。変異誘発後、抗体の活性（例えば結合、またはその他の機能的活性）を、１つまたは複数の生物細胞系残基が耐えられるか否かを決定するために評価することができる。同様の変異誘発は、フレームワーク領域で行うことができる。
【０１２４】
生殖細胞系配列の選択は、種々の方法で行うことができる。例えば生殖細胞系配列は、選択性または類似性に関する所定の基準を満たす場合、例えば少なくともある特定の同一性パーセンテージで、例えば少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または９９．５％の同一性で選択することができる。この選択は、少なくとも２、３、５、または１０個の生殖細胞系配列を使用して行うことができる。ＣＤＲ１およびＣＤＲ２の場合、類似する生殖細胞系配列の特定は、そのような１つの配列の選択を含むことができる。ＣＤＲ３の場合、類似する生殖細胞系配列の特定は、そのような１つの配列の選択を含むことができるが、アミノ末端部分およびカルボキシ末端部分に別々に寄与する２つの生殖細胞系配列の使用を含むことができる。その他の実施例では、例えばコンセンサス配列を形成するために、複数のまたは２つの生殖細胞系配列を使用する。
【０１２５】
その他の実施形態では、変性グリコシル化パターンを有するように抗体を修飾することができる（すなわち、当初のまたは天然のグリコシル化パターンか変性させる）。この文脈で使用されるように、「変性」は、１つまたは複数の炭水化物部分が欠失し、かつ／または当初の抗体に付加された１つまたは複数のグリコシル化部位を有することを意味する。現在開示されている抗体へのグリコシル化部位の付加は、グリコシル化部位コンセンサス配列を含有するようにアミノ酸配列を変性させることによって、実現することができ；そのような技法は、当技術分野で周知である。抗体上の炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、グリコシドと抗体のアミノ酸残基との化学結合または酵素結合による。これらの方法は、例えばＷＯ８７／０５３３０、AplinおよびWriston (1981) CRC Crit.Rev.Biochem. 22:259-306に開示されている。抗体上に存在する任意の炭水化物部分の除去は、当技術分野で記述されるように、化学的にまたは酵素作用によって実現することができる（Hakimuddin他, (1987) Arch.Biochem.Biophys. 259:52; Edge他, (1981) Anal.Biochem. 118:131; およびThotakura他, (1987) Meth.Enzymol. 138:350）。例えば、サルベージ受容体結合エピトープを提供することによって生体内半減期を延ばす修飾に関しては、米国特許第５８６９０４６号を参照されたい。
【０１２６】
一実施形態では、抗体分子は、ＭＪ２−７またはＣ６５の場合とごく僅かしか異ならないＣＤＲ配列を有する。僅かな相違には、典型的にはＣＤＲ、例えばＣｈｏｔｈｉａまたはＫａｂａｔ  ＣＤＲの配列における５〜７アミノ酸のいずれかのうち１または２個の置換など、少量のアミノ酸の変化が含まれる。典型的な場合、アミノ酸は、類似の電荷、疎水性、または立体化学的特徴を有する関連あるアミノ酸によって置換される。そのような置換は、当業者の技量の範囲内である。ＣＤＲの場合とは異なって、構造フレームワーク領域（ＦＲ）のより多くの変更を、抗体の結合特性に悪影響を及ぼすことなく行うことができる。ＦＲに対する変化には、非ヒト由来のフレームワークのヒト化、あるいは抗原接触にまたは結合部位の安定化に重要なあるフレームワーク残基の設計製作が含まれ、例えば、定常領域のクラスまたはサブクラスの変化、Ｆｃ受容体結合などのエフェクター機能を変性させる可能性のある特定アミノ酸残基の変化（Lund他, (1991) J.Immunol. 147:2657-62; Morgan他, (1995) Immunology 86:319-24）、あるいは定常領域を得ることができる種の変化などが含まれるが、これらに限定するものではない。抗体は、エフェクター機能、例えばＦｃ受容体結合および補体活性化を低下させまたは変化させる変異を、重鎖のＣＦ１２領域内に有することができる。例えば抗体は、米国特許第５６２４８２１号および第５６４８２６０号に記載されるような変異を有することができる。例えばＩｇＧ１またはＩｇＧ２重鎖では、そのような変異を、配列番号１７で示されるアミノ酸配列に類似させることができる。抗体は、当技術分野で開示されるような、ＩｇＧ４のヒンジ領域内の変異など、免疫グロブリンの２つの重鎖間のジスルフィド結合を安定化させる変異を有してもよい（例えば、Angal他, (1993) Mol.Immunol. 30: 105-08）。
【０１２７】
Ｉｌ−１３結合剤は、無傷の抗体、抗体の抗原結合断片、例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ、およびｓｃＦｖ断片、その定常領域および／または可変領域で変異した無傷の抗体および断片（例えば、キメラ、一部ヒト化、または完全ヒト化抗体を生成し、ならびに所望の形質、例えば強化されたＩＬ−１３結合および／または低下したＦｃＲ結合を有する抗体を生成する変異）の形をとることができる。
【０１２８】
抗体の生成。一部の抗体分子、例えばＦａｂは、細菌細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞中で生成することができる。例えばＦａｂが、ディスプレイ部分とバクテリオファージタンパク質（またはその断片）との間の抑制性終止コドンを含むファージディスプレイベクターの配列によってコードされる場合、ベクター核酸は、終止コドンを抑制することができない細菌細胞に移動することができる。この場合、Ｆａｂは遺伝子ＩＩＩタンパク質と融合せず、周縁細胞質および／または媒質中に分泌される。
【０１２９】
抗体分子は、真核細胞中で生成することもできる。一実施形態では、抗体（例えばｓｃＦｖ）を、ピチア（Ｐｉｃｈｉａ）（例えば、Powers他, (2001) J Immunol Methods. 251:123-35）、ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｕｌａ）、またはサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）などの酵母菌中で発現させる。
【０１３０】
一実施形態では、抗体分子を哺乳類細胞中で生成する。クローン抗体またはその抗原結合断片を発現させるのに好ましい哺乳類宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えばKaufmanおよびSharp (1982) Mol.Biol. 159: 601-621に記載されるようにＤＨＦＲ選択性マーカーと共に使用され、UrlaubおよびChasin (1980) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 77:4216-4220に記載されている、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、リンパ球細胞系、例えばＮＳ０骨髄腫細胞およびＳＰ２細胞、ＣＯＳ細胞、およびトランスジェニック動物、例えばトランスジェニック哺乳類からの細胞が含まれる。例えば細胞は、哺乳類上皮細胞である。
【０１３１】
抗体分子をコードする核酸配列の他に、組換え発現ベクターは、宿主細胞中のベクター（例えば複製開始点）および選択性マーカー遺伝子の複製を調節する配列などの追加の配列を有することができる。選択性マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を促進させる（例えば、米国特許第４３９９２１６号、第４６３４６６５号、および第５１７９０１７号参照）。例えば、典型的には選択性マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞上の、Ｇ４１８やヒグロマイシン、またはメトトレキセートなどの薬物に抵抗力を与える。
【０１３２】
抗体分枝の組換え発現に関する例示的な系では、抗体重鎖と抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを、リン酸カルシウム媒介型トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入する。組換え発現ベクター内で、抗体重鎖および軽鎖遺伝子のそれぞれは、高レベルの遺伝子転写が推進されるように、エンハンサー／プロモーター調節要素（例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素、またはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素など、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどから得られる）に動作可能に結合する。組換え発現ベクターは、ＤＨＦＲも担い、そのためメトトレキセートの選択／増幅を使用してベクターによりトランスフェクトされているＣＨＯ細胞の選択が可能になる。選択された形質転換宿主細胞は、抗体重鎖および軽鎖の発現が可能になるように培養することができ、無傷の抗体を、培地から回収する。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換物を選択し、宿主細胞を培養し、抗体分子を培地から回収するために、標準的な分子生物学的技法を使用することができる。例えば一部の抗体分子は、プロテインＡまたはプロテインＧ結合マトリックスによるアフィニティクロマトグラフィによって単離することができる。
【０１３３】
Ｆｃ領域を含む抗体分子の場合、抗体生成系は、Ｆｃ領域がグリコシル化される抗体を合成することが好ましい。例えばＩｇＧ分子のＦｃ領域は、ＣＦ２領域内のアスパラギン２９７でグリコシル化される。このアスパラギンは、二分岐型オリゴ糖による修飾のための部位である。このグリコシル化は、Ｆｃγ受容体および補体Ｃ１ｑによって媒介されるエフェクター機能に必要であることが実証されている（BurtonおよびWoof (1992) Adv.Immunol. 51:1-84; Jefferis他, (1998) Immunol.Rev. 163:59-76）。一実施形態では、Ｆｃ領域は、アスパラギン２９７に対応する残基を適切にグリコシル化する哺乳類発現系内で生成される。Ｆｃ領域は、その他の真核翻訳後修飾を含むこともできる。
【０１３４】
抗体分子は、トランスジェニック動物によって生成することもできる。例えば米国特許第５８４９９９２号は、トランスジェニック動物の乳腺で抗体を発現させる方法について述べている。乳特異的プロモーター、および抗体分子をコードする核酸、および分泌用シグナル配列を含む導入遺伝子が構成される。そのようなトランスジェニック哺乳類のメスによって生成された乳は、その中に分泌された、問題の抗体を含む。抗体分子は、乳から精製することができ、またはいくつかの適用例では直接使用することができる。
【０１３５】
（特徴付け）
【０１３６】
結合剤の結合特性は、任意の方法によって、例えば下記の方法、すなわちＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ｘ線結晶解析、配列分析、および走査変異誘発によって測定することができる。タンパク質が、１つまたは複数のＩＬ−１３関連活性を中和しかつ／または阻害する能力は、下記の方法によって、すなわちＩＬ−１３依存細胞系、例えばＴＦＩの増殖を測定するためのアッセイ；ＩＬ−１３媒介型ポリペプチドの発現を測定するためのアッセイ、例えばＣＤ２３の発現の流動細胞計測分析；下流シグナル伝達分子、例えばＳＴＡＴ６の活性を評価するアッセイ；テネイシン生成を評価するアッセイ；関連する動物モデル、例えばカニクイザルでの喘息を予防するための、本明細書に記述される抗体の効率を試験するアッセイ、およびその他のアッセイによって測定することができる。ＩＬ−１３結合剤、特にＩＬ−１３抗体分子は、これらアッセイの１つまたは複数において、統計上有意な効果を発揮することができる。結合特性に関する例示的なアッセイには、下記のものが含まれる。
【０１３７】
ＩＬ−１３結合剤と標的（例えばＩＬ−１３）との結合相互作用は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して分析することができる。ＳＰＲまたは生体分子相互作用解析（ＢＩＡ）は、相互作用のいずれも標識することなく、生物特異的相互作用を実時間で検出する。ＢＩＡチップの結合表面での質量変化（結合事象を表す）は、表面付近の光の屈折率の変化をもたらす。屈折率の変化によって、検出可能なシグナルが発生し、これを生体分子間の実時間反応の表れとして測定する。ＳＰＲを使用する方法は、例えば米国特許第５６４１６４０号；Raether (1998) Surface Plasmon Springer Verlag; Sjolander and Urbaniczky (1991) Anal.Chem. 63: 2338-2345; Szabo他, (1995) Curr.Opin.Struct.Biol. 5:699-705、およびＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）により提供されるオンライン資料に記載されている。
【０１３８】
ＳＰＲからの情報は、分子を標的に結合するための、平衡解離定数（Ｋｄ）とＫｏｎおよびＫｏｆｆを含めた動力学的パラメーターとの正確で定量的な測定値を提供するのに使用することができる。そのようなデータは、種々の分子を比較するのに使用することができる。ＳＰＲからの情報は、構造活性関係（ＳＡＲ）を開発するのに使用することもできる。例えば、種々の抗体分子の動力学的および平衡結合パラメーターを評価することができる。特定の結合パラメーター、例えば高親和性および低Ｋｏｆｆに相関する、所与の位置での変種アミノ酸を特定することができる。この情報は、構造モデリングと組み合わせることができる（例えば、相同性モデリング、エネルギー最小化、あるいはｘ線結晶解析またはＮＭＲによる構造決定を使用して）。その結果、タンパク質とその標的との物理的相互作用に関する理解が形成され、その他の設計プロセスを手引きするのに使用される。
【０１３９】
（呼吸器障害）
【０１４０】
ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、喘息（例えばアレルギー性および非アレルギー性喘息（例えば幼い子供での、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）などによる感染に起因する））；気管支炎（例えば慢性気管支炎）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）（例えば肺気腫（例えばタバコにより誘発された肺気腫））；気道炎症、好酸球増加症、線維症、および過剰な粘液生成などに関する状態、例えば嚢胞性線維症およびアレルギー性鼻炎を含むがこれらに限定すされない呼吸器障害を、治療しまたは予防するのに使用することができる。例えば、ＩＬ−１３結合剤（例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子）は、障害を治療しまたは予防するのに、あるいは障害の少なくとも１つの症状を寛解するのに有効な量で投与することができる。
【０１４１】
喘息は、無数の状態によって、例えばアレルゲンの吸入によって、あるいは上気道または耳の感染の存在などによって引き起こされる可能性がある（Opperwall (2003) Nurs.Clin.North Am. 38:697-711）。アレルギー性喘息は、様々な特異的および非特異的な刺激に対する気道反応亢進（ＡＨＲ）、高血清免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）、過剰気道粘液生成、浮腫、および気管支上皮損傷（Wills-Karp, 前掲）を特徴とする。アレルギー性喘息は、アレルゲンが早期気道応答を引き起こしたときに始まり、しばしば数時間後に遅延晩期気道応答（ＬＡＲ）が続く（Henderson他, (2000) J.Immunol. 164:1086-95）。ＬＡＲ中、好酸球、リンパ球、およびマクロファージの気道壁および気管支液全体にわたる流入がある（Henderson他、前掲）。肺好酸球増加症は、アレルギー喘息の特徴であり、呼吸器上皮の損傷の多くの原因である。（Li他, (1999) J.Immunol. 162: 2477-87）。
【０１４２】
ＣＤ４＋Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞は、喘息に関連する慢性炎症に重要である（Henderson他, 前掲）。いくつかの研究は、２型Ｔヘルパー（Ｔｈ２）細胞へのＣＤ４＋細胞の関与と、その後の２型サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１３）の生成が、ＡＨＲに至るアレルギー性炎症応答に重要であることを示している（Tomkinson他, (2000) J.Immunol. 166: 5792-5800、およびそこに引用される参考文献）。第１に、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、マウスモデルでのアレルギー誘発型喘息に必要であることが示されている。第２に、２型サイトカインを生成するＣＤ４＋Ｔ細胞は、これら動物モデルにおいてだけではなくアレルギー性喘息の患者においても増殖する。第３に、２型サイトカインのレベルは、動物モデルおよび喘息患者の気道組織で増加する。第４にＴｈ２サイトカインは、アレルギー性喘息のマウスモデルにおいて、好酸球漸増に中心的役割を演ずるとして意味付けられており、養子性の転移によるＴｈ２細胞は、肺の高レベルのエオタキシン（強力な好酸球化学誘引物質）ならびに肺好酸球増加症（Wills-Karp他, 前掲；Li他, 前掲）に相関している。
【０１４３】
本明細書に記述される喘息を治療しまたは予防するための方法には、外因性喘息（アレルギー性喘息またはアトピー性喘息としても知られる）、内因性喘息（非アレルギー性専属または非アトピー性喘息としても知られる）、または混合型喘息と呼ばれている両方の組合せに対する方法が含まれる。外因性またはアレルギー性喘息は、例えば花粉や胞子、草、雑草、ペット、フケ、埃、ダニなどのアレルゲンによって引き起こされ、またはこのようなアレルゲンに関連ある事象を含む。アレルゲンおよびその他の刺激物は、１年を通して様々な時点で生ずるので、これらのタイプの事象も季節性喘息と呼ばれる。気管支喘息およびアレルギー性気管支肺アスペルギルス症も、外因性喘息のグループに含まれる。
【０１４４】
本明細書に記述される薬剤によって治療または寛解することができる障害には、ウイルスなどの感染性物質（例えば風邪およびインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、パラミクスウイルス、ライノウイルス、およびインフルエンザウイルス）によって引き起こされる呼吸器障害および喘息が含まれる。ＲＳＶ、ライノウイルス、およびインフルエンザウイルス感染は、子供に一般的であり、乳児および幼児の気道疾患の１つの主な原因である。ウイルス性細気管支炎に罹っている子供は、慢性喘鳴および喘息を発症する可能性があるが、これは本明細書に記述される方法を使用して治療することができるものである。また、運動および／または励起によって一部の喘息患者にもたらされる可能性のある喘息状態も含まれる。これらの方法は、煙への曝露（例えばタバコで誘発される煙、および工場煤煙）、ならびに煙やオゾン、有害ガス、二酸化イオウ、亜酸化窒素、イソシアネートを含むヒュームなどの産業的曝露および職業的曝露に関連する喘息であって、塗料、プラスチック、ポリウレタン、ワニスなどからのもの、木、植物、またはその他の有機塵などに関連する喘息に有用である。これらの方法は、食品添加物、保存剤、または薬物に関連する喘息性事象にも有用である。また、沈黙の喘息または咳喘息と呼ばれるタイプの喘息を治療し、阻害し、または寛解するための方法も含まれる。
【０１４５】
本明細書に記述される方法は、気管支収縮を刺激する可能性のある胃食道逆流（ＧＥＲＤ）に関連した喘息の治療および寛解にも有用である。ＧＥＲＤは、残留分泌液、抑制された咳、および心室内のアレルゲンおよび刺激物への曝露と共に、喘息状態に寄与する可能性があり、これらをまとめて夜間喘息または夜行性喘息と呼ぶ。ＧＥＲＤに関連する喘息の治療、阻害、または寛解の方法では、医薬上有効な量のＩＬ−１３結合剤を、本明細書に記述されるように、ＧＥＲＤを治療するための医薬上有効な量の薬剤と組み合わせて使用することができる。これらの薬剤には、ＰＲＯＴＯＮＩＸ（登録商標）ブランドの徐放性パントプラゾールナトリウム錠剤や、ＰＲＩＬＯＳＥＣ（登録商標）ブランドのオメプラゾール徐放性カプセル、ＡＣＩＰＨＥＸ（登録商標）ブランドのレベプラゾールナトリウム徐放性錠剤、またはＰＲＥＶＡＣＩＤ（登録商標）ブランドの徐放性ランソプラゾールカプセルなどのプロトンポンプ阻害剤が含まれるが、これらに限定するものではない。
【０１４６】
（アトピー性障害およびその症状）
【０１４７】
アトピー患者からの細胞は、ＩＬ−１３に対する感受性が高まっていることが観察されている。したがって、ＩＬ−１３結合剤（例えば、本明細書に記述される抗体分子などのＩＬ−１３結合剤）は、アトピー性障害を治療しまたは予防するのに有効な量で投与することができる。「アトピー性」は、しばしばアレルギー反応を発症するという遺伝的傾向のある疾患グループを指す。
【０１４８】
アトピー性障害の例には、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、喘息、および枯草熱が含まれる。喘息は、例えば気管支反応亢進や可逆的気流閉塞などの、断続的な呼吸器症状に関連した表現型的に不均一な障害である。喘息の免疫組織病理学的特徴には、例えば、気道上皮剥離、基底膜下でのコラーゲン堆積、浮腫、肥満細胞活性化、および炎症性細胞浸潤（例えば好中球、好酸球、およびリンパ球による）が含まれる。気道炎症はさらに、気道反応亢進、気流制限、急性気管支収縮、粘液栓形成、気道壁リモデリング、およびその他の呼吸器症状に寄与する可能性がある。ＩＬ−１３結合剤（例えば、本明細書に記述される抗体分子などのＩＬ−１３結合剤）は、これら症状の１つまたは複数を寛解させるのに有効な量で投与することができる。
【０１４９】
アレルギー性鼻炎（枯草熱）の症状には、痒み、鼻水、くしゃみ、または鼻詰まり、および目の痒みが含まれる。ＩＬ−１３結合剤は、これら症状の１つまたは複数を寛解させるために投与することができる。アトピー性皮膚炎は、皮膚に影響を及ぼす慢性（長く続く）疾患である。アトピー性皮膚炎に関する情報は、例えばＮＩＨ冊子Ｎｏ．０３−４２７２から入手可能である。アトピー性皮膚炎では、皮膚が極めて痒くなり、その結果、発赤、腫脹、ひび、透明な液の流れ、最後に痂皮の形成および剥がれに至る可能性がある。多くの場合、疾患が悪化（憎悪または発赤拡大と呼ぶ）する時期があり、その後、皮膚が改善しまたは完全にきれいになる期間（寛解と呼ぶ）が続く。アトピー性皮膚炎は、しばしば「湿疹」と呼ばれるが、これはいくつかのタイプの皮膚の炎症に一般的な用語である。アトピー性皮膚炎の例には、アレルギー性接触湿疹（皮膚炎：発赤、痒み、および湿潤性反応であり、そこではウルシツタや、クリームおよびローション中のある保存剤など、異物であることが免疫系によって認識される物質に、皮膚が接触している）；接触性湿疹（発赤、痒み、および灼熱痛を含む局所反応であり、そこでは皮膚が、アレルゲン（アレルギー誘発物質）あるいは酸や清浄剤またはその他の化学物質などの刺激物に接触している）；汗疱状湿疹（痒くて焼け付くような、透明で深い水疱を特徴とする掌および足の裏の皮膚の刺激）；神経皮膚炎（引っ掻かれたときに激しい刺激を受けるようになる、局所的な痒み（昆虫に噛まれるなど）によって引き起こされる、頭、下肢、手首、または前腕の皮膚の鱗状斑点）；貨幣状湿疹（痂皮で覆われ、剥がれ、かつ極めて痒くなる可能性のある、最も一般的には腕、背中、臀部、および下肢で刺激を受けた皮膚のコイン形斑点）；脂漏性湿疹（頭皮、顔、および時には身体のその他の部分の皮膚の、黄色く油状で鱗状の斑点）が含まれる。追加の特定の症状には、うっ血性皮膚炎、アトピー性プリーツ（Ｄｅｎｎｉｅ−Ｍｏｒｇａｎの皺）、口唇炎、掌の過剰な線（ｈｙｐｅｒｌｉｎｅａｒ  ｐａｌｍｓ）、色素沈着した眼瞼（炎症または枯草熱から色がより濃くなった眼瞼）、魚鱗癬、毛孔性角化症、苔癬化、丘疹、および蕁麻疹が含まれる。ＩＬ−１３結合剤は、これら症状の１つまたは複数を寛解させるために投与することができる。
【０１５０】
アレルギー性鼻炎またはその他のアレルギー性障害を治療するための例示的な方法は、アレルゲンに曝す前に、例えば季節ごとにアレルゲンに曝す前に、例えばアレルゲンが発生する前に、ＩＬ−１３結合剤による療法を開始する工程を含むことができる。そのような療法は、１回または複数回の用量、例えば規則的な間隔での複数回の用量を含むことができる。
【０１５１】
（癌）
【０１５２】
ＩＬ−１３およびその受容体は、少なくともいくつかのタイプの癌、例えば造血細胞から生ずる癌、あるいは脳または神経細胞から生ずる癌（例えばグリア芽細胞腫）の発症に関与する可能性がある。例えば可溶性ＩＬ−１３受容体またはＳＴＡＴ６−／−欠失マウスの使用を介した、例えばＩＬ−１３シグナル伝達経路の遮断は、それぞれホジキンリンパ腫細胞系または転移性乳癌の遅い腫瘍の発症および／または成長をもたらす（Trieu他, (2004) Cancer Res. 64: 3271-75; Ostrand-Rosenberg他, (2000) J.Immunol. 165: 6015-6019）。ＩＬ−１３Ｒ２（HusainおよびPuri (2003) J.Neurooncol. 65:37-48; Mintz他 (2003) J.Neurooncol. 64:117-23）を発現する癌は、本明細書に記述される抗−ＩＬ−１３抗体によって特異的に狙うことができる。ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、癌細胞増殖またはその他の癌細胞活性を阻害するのに役立てることができる。癌は、正常な成長制御に対する応答性が失われ、かつ典型的には対応する正常細胞と比べて調節性が低下した状態で増殖する、１つまたは複数の細胞を指す。
【０１５３】
治療のためにＩＬ−１３結合剤（例えば、本明細書に記述される抗体や抗原結合断片などのＩＬ−１３結合剤）を使用することができる癌の例には、白血病、例えばＢ細胞慢性リンパ球白血病、急性骨髄性白血病、およびヒトＴ細胞白血病ウイルス１型（ＨＴＬＶ−１）形質転換Ｔ細胞；リンパ腫、例えばＴ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫；グリア芽細胞腫；膵臓癌；腎細胞癌；卵巣癌；およびＡＩＤＳ−カポジ肉腫が含まれる。例えばＩＬ−１３結合剤（例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子）は、障害を治療しまたは予防するのに、例えば細胞増殖を低下させるのに、または障害の少なくとも１つの症状を寛解させるのに有効な量で投与することができる。
【０１５４】
（線維症）
【０１５５】
ＩＬ−１３結合剤は、炎症および線維症、例えば肝臓の線維症を治療するのに役立てることもできる。ＩＬ−１３生成は、肝硬変、おそらくは肝細胞癌に向かう肝臓炎症（例えばウイルス性肝炎）の進行と相関している（de Lalla他, (2004) J.Immunol. 173:1417-1425）。線維症は、例えば正常な組織が瘢痕組織に置き換わり、その後しばしば炎症が続いたときに生じる。Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎ウイルスは共に、肝臓内で繊維性反応を引き起こし、それが肝硬変に進行する可能性がある。肝硬変は、肝機能不全や肝細胞癌などの重症な合併症を引き起こす可能性がある。ＩＬ−１３結合剤、例えば本明細書に記載される抗−ＩＬ−１３抗体を使用したＩＬ−１３活性の阻止は、炎症および線維症、例えば肝臓疾患、特にＢ型肝炎やＣ型肝炎に関連した炎症、線維症、および肝硬変を低減させることができる。例えばＩＬ−１３結合剤（例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子）は、障害を治療しまたは予防するために、あるいは炎症および／または繊維性障害の少なくとも１つの症状を寛解させるために、有効な量で投与することができる。
【０１５６】
（炎症性腸疾患）
【０１５７】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、腸の炎症を引き起こす疾患の一般的名称である。炎症性腸疾患の２つの例は、クローン病および潰瘍性大腸炎である。ＩＬ−１３／ＳＴＡＴ６シグナル伝達は、マウス平滑筋の炎症誘発型収縮亢進、炎症性腸疾患のモデルに関与することがわかっている（Akiho他, (2002) Am.J.Physiol. Gastrointest.Liver Physiol. 282: G226-232）。例えばＩＬ−１３結合剤（例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子）は、障害を治療しまたは予防するために、あるいは炎症性腸疾患の少なくとも１つの症状を寛解させるために、有効な量で投与することができる。
【０１５８】
（追加のＩＬ−１３結合剤）
【０１５９】
ＩＬ−１３に結合する、抗体およびその断片である結合剤以外の結合剤、特に、ＭＪ２−７またはＣ６５およびＩＬ−１３に結合するための本明細書に記述されるその他の抗体と競合する結合剤も提供される。例えば結合剤は、ＩＬ−１３上のＭＪ２−７またはＶ６５と同じエピトープまたは重複エピトープに結合することができる。結合剤は、ＩＬ−１３活性を阻害しまたは中和することが好ましい。例えば結合剤は、ＩＬ−１３とＩＬ  １３Ｒα１との結合を阻害し、例えばＩＬ−１３とＩＬ−４Ｒαとの結合を妨げない。そのような結合剤は、本明細書に記述される方法で、例えば障害を治療し予防する方法で使用することができる。本明細書に記述される全ての実施形態は、ＩＬ−１３結合剤と共に使用するために適応させることができる。
【０１６０】
結合剤は、本明細書に記述される可変領域の修飾、あるいは本明細書に記述される可変領域の１つまたは複数のＣＤＲの別の足場領域への移植も含めた、いくつかの手段によって特定することができる。結合剤は、多様なライブラリーから、例えばスクリーニングによって特定することもできる。タンパク質ライブラリーをスクリーニングするための１つの方法は、ファージディスプレイを使用する。タンパク質の特定領域は様々であり、ＩＬ−１３と相互に作用するタンパク質は、例えば固体支持体上での保持によって、またはその他の物理的結合によって特定される。ＩＬ−１３上のＭＪ２−７またはＣ６５と同じエピトープまたは重複エピトープと結合する特定の結合剤を特定するために、結合剤を、ＭＪ２−７またはＣ６５（または関連する抗体）を添加することによって溶離することができ、あるいは結合剤を、ＭＪ２−７またはＣ６５（または関連する抗体）との競合実験で評価することができる。その他のエピトープと結合する薬剤のライブラリーは、ＩＬ−１３およびＭＪ２−７またはＣ６５（または関連する抗体）を含有する複合体とライブラリーとを接触させることによって使い尽くすことも可能である。次いで使い尽くされたライブラリーをＩＬ−１３と接触させて、ＩＬ−１３に結合するがＭＪ２−７またはＣ６５により結合される場合にはＩＬ−１３に結合しない結合剤を得ることができる。また、標的としてＭＪ２−７またはＣ６５エピトープを含有するＩＬ−１３からのペプチドを使用することも可能である。
【０１６１】
ファージディスプレイについては、例えば、米国特許第５２２３４０９号；Smith(1985) Science 228: 1315-1317；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９１／１７２７１；ＷＯ９２／２０７９１；ＷＯ９２／１５６７９；ＷＯ９３／０１２８８；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／０９６９０；ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９４／０５７８１；Fucsh他, (1991) Bio/Technology 9: 1370-1372；Hay他, (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85；Huse他, (1989) Science 246: 1275-1281；Griffiths他, (1993) EMBO J 12: 725-734；Hawkins他, (1992) J Mol Biol 226: 889-896；Clackson他, (1991) Nature 352: 624-628；Gram他, (1992) PNAS 89: 3576-3580；Garrard他, (1991) Bio/Technology 9: 1373-1377；Rebar他, (1996) Methods Enzymol. 267: 129-49；およびBarbas他, (1991) PNAS 88: 7978-7982に記載されている。酵母表面ディスプレイは、例えばBoderおよびWittrup (1997) Nat.Biotechnol. 15: 553-557に記載されている。別の形のディスプレイは、リボソームディスプレイである。例えば、Mattheakis他, (1994) Proc.Natl.Acad. Sci. USA 91:9022およびHanes他, (2000) Nat Biochnol. 18: 1287-92；Hanes他, (2000) Methods Enzymol. 328: 404-30およびSchaffitzel他, (1999) J Immunol Methods. 231 (1-2): 119-35を参照されたい。
【０１６２】
ＩＬ−１３に結合する結合剤は、ある骨格タンパク質、例えば折り畳み領域の構造的特徴を有することができる。例示的な骨格領域は、抗体に基づいて「ミニボディ」であり、骨格は、モノクローナル抗体の重鎖可変領域から３本のβ鎖をなくすことによって設計されている（Tramontano他, 1994, J.Mol.Recognit. 7:9; およびMartin他, 1994, EMBO J. 13:5303-5309）。この領域は６１個の残基を含み、２つの超可変ループ、例えば本明細書に記述される可変領域の１つまたは複数の超可変ループ、あるいは本明細書に記述される変種を提示するのに使用することができる。別の手法では、結合剤は、Ｖ状領域である骨格領域を含む（Coia他, ＷＯ９９／４５１１０）。Ｖ状領域は、抗体の可変重鎖（ＶＨ）または可変軽鎖（ＶＬ）領域に類似した構造的特徴を有する領域を指す。別の骨格領域は、テンダミスタチン、すなわち２つのジスルフィド結合によって一緒に保持された７４残基の６本鎖βシートサンドイッチから得られる（McConnellおよびHoess, 1995, J.Mol.Biol. 250:460）。この親タンパク質は、３つのループを含む。ループは、例えばＩＬ−１３と結合する領域が選択されるように、修飾し（例えば本明細書に記述されるＣＤＲまたは超可変ループを使用して）または変化させることができる。ＷＯ００／６００７０は、骨格領域として使用することができる、ＣＴＬＡ−４の天然に生ずる細胞外領域から得られるβ−サンドイッチ構造について述べている。
【０１６３】
ＩＬ−１３結合剤に関するさらに別の骨格は、フィブロネクチンＩＩＩ型領域または関係するフィブロネクチン様タンパク質を基にした領域である。フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）領域の全体的な折り畳みは、最小機能性抗体断片、抗体重鎖の可変領域の場合と密接に関係している。Ｆｎ３は、Ｆｎ３が９本ではなく７本のβ鎖を有すること以外、抗体ＶＨ領域の場合に類似したβ−サンドイッチである。Ｆｎ３の端部には３つのループがあり、ＢＣ、ＤＥ、およびＦＧループの位置は、抗体のＶＨ領域のＣＤＲ１、２、および３の場合にほぼ対応している。Ｆｎ３は、ジスルフィド結合を持たないので有利である。したがってＦｎ３は、抗体およびその断片とは異なって、還元条件下で安定である（ＷＯ９８／５６９１５；ＷＯ０１／６４９４２；ＷＯ００／３４７８４参照）。Ｆｎ３領域は、例えばＩＬ−１３に結合する領域が選択されるように、修飾し（例えば本明細書に記述されるＣＤＲまたは超可変ループを使用して）または変化させることができる。
【０１６４】
さらにその他の例示的な骨格領域には、Ｔ細胞受容体；ＭＨＣタンパク質；細胞外領域（例えばフィブロネクチンＩＩＩ型リピート、ＥＧＦリピート）；プロテアーゼ阻害剤（例えばＫｕｎｉｔｚ領域、エコチン、ＢＰＴＩなど）；ＴＰＲリピート；トリフォイル構造；亜鉛フィンガー領域；ＤＮＡ結合タンパク質；特にモノマー性のＤＮＡ結合タンパク質；ＲＮＡ結合タンパク質；酵素、例えばプロテアーゼ（特に不活性化プロテアーゼ）、ＲＮａｓｅ；シャペロン、例えばチオレドキシン、および熱ショックタンパク質；および細胞内シグナル伝達領域（ＳＨ２およびＳＨ３領域など）が含まれる。ＵＳ２００４０００９５３０は、いくつかの代替の骨格の例について述べている。
【０１６５】
小骨格領域の例には、Ｋｕｎｉｔｚ領域（５８アミノ酸、３つのジスルフィド結合）、Ｃｕｃｕｒｂｉｄａ  ｍａｘｉｍａトリプシン阻害剤領域（３１アミノ酸、３つのジスルフィド結合）、グアニリンに関係する領域（１４アミノ酸、２つのジスルフィド結合）、グラム陰性菌からの熱安定性エンテロトキシンＩＡに関係する領域（１８アミノ酸、３つのジスルフィド結合）、ＥＧＦ領域（５０アミノ酸、３つのジスルフィド結合）、クリングル領域（６０アミノ酸、３つのジスルフィド結合）、真菌性糖鎖結合領域（３５アミノ酸、２つのジスルフィド結合）、エンドセリン領域（１８アミノ酸、２つのジスルフィド結合）、および連鎖球菌Ｇ  ＩｇＧ結合領域（３５アミノ酸、ジスルフィド結合はない）が含まれる。小細胞内骨格領域の例には、ＳＨ２、ＳＨ３、およびＥＶＨ領域が含まれる。一般に、任意のモジュラー領域、細胞内または細胞外のものを、使用することができる。
【０１６６】
骨格領域を評価するための例示的な基準には、（１）アミノ酸配列、（２）いくつかの同種領域の配列、（３）３次元構造、および／または（４）ある範囲のｐＨ、温度、塩分、有機溶媒、酸化剤濃度全体にわたる安定性のデータを含めることができる。一実施形態では、骨格領域は、小さく安定なタンパク質領域であり、例えば１００、７０、５０、４０、または３０未満のアミノ酸のタンパク質である。領域は、１つまたは複数のジスルフィド結合を含むことができ、金属、例えば亜鉛をキレート化することができる。
【０１６７】
さらに別の結合剤は、ペプチドをベースにしており、例えばアミノ酸が３０、２５、２４、２０、１８、１５、または１２未満であるアミノ酸を有するタンパク質である。ペプチドは、より大きいタンパク質に組み込むことができるが、典型的にはＩＬ−１３に、例えば本明細書に記述されるエピトープに独立に結合する領域に組み込むことができる。ペプチドは、ファージディスプレイによって特定することができる。例えばＵＳ２００４００７１７０５を参照されたい。
【０１６８】
ＩＬ−１３結合剤は、非ペプチド結合およびその他の化学修飾を含むことができる。例えば、結合剤の一部または全ては、ペプチド模倣体、例えばペプトイドとして合成することができる（例えば、Simon他, (1992) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 89:9367-71およびHorwell (1995) Trends Biotechnol. 13: 132-4参照）。結合剤は、１つまたは複数（例えば全て）の非加水分解型結合を含むことができる。多くの非加水分解型ペプチド結合は、そのような結合を含有するペプチドを合成するための手順と一緒に、当技術分野で知られている。例示的な非加水分解型結合には、−−［ＣＨ２ＮＨ］−−還元アミドペプチド結合、−−［ＣＯＣＨ２］−−ケトメチレンペプチド結合、−−［ＣＨ（ＣＮ）ＮＨ］−−（シアノメチレン）アミノペプチド結合、−−［ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）］−−ヒドロキシエチレンペプチド結合、−−［ＣＨ２Ｏ］−−ペプチド結合、および−−［ＣＨ２Ｓ］チオメチレンペプチド結合が含まれる（例えば、米国特許第６１７２０４３号参照）。
【０１６９】
（医薬組成物）
【０１７０】
ＩＬ−１３結合剤、例えばＩＬ−１３に結合する抗体分子（本明細書に記述されるものなど）は、試験管内で、生体外で、または生体内で使用することができる。これらは、例えばＩＬ−１３結合剤と医薬上許容される担体とを組み合わせることによって、医薬組成物中に組み込むことができる。そのような組成物は、ＩＬ−１３結合剤および担体の他に、様々な希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤、および当技術分野で周知のその他の材料を含有することができる。医薬上許容される材料は、一般に、ＩＬ−１３結合剤の生物活性の有効性を妨げない無毒性の材料である。担体の特徴は、投与経路に依存することができる。
【０１７１】
本明細書に記述される医薬組成物は、以下により詳細に述べるような、その他の抗サイトカイン抗体分子やその他の抗炎症剤などであるがこれらに限定することのないその他の要素を含有してもよい。そのような追加の要素および／または薬剤は、ＩＬ−１３結合剤、例えば本明細書に記述される抗−ＩＬ−１３抗体分子によって相乗効果がもたらされるように、医薬組成物中に含めることができる。例えばアレルギー性喘息の治療では、本明細書に記述される医薬組成物は、抗−ＩＬ−４抗体分子、またはアレルギー応答を低下させることが知られている薬物を含むことができる。
【０１７２】
本明細書に記述される医薬組成物は、ＩＬ−１３結合剤、例えば本明細書に記述されるものなどの抗−ＩＬ−１３抗体分子が、その他の医薬上許容される担体に加えて水溶液中でミセルとして凝集した形で存在する脂質、不溶性単層、液晶、または層状層などの両親媒性剤と組み合わされている、リポソームの形をとることができる。リポソームの配合に適切な脂質には、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リソレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸などが含まれるが、これらに限定するものではない。そのようなリポソーム配合物を調製するための例示的な方法には、米国特許第４２３５８７１号、第４５０１７２８号、第４８３７０２８号、および第４７３７３２３号に記載されている方法が含まれる。
【０１７３】
本明細書で使用される「治療上有効な量」という用語は、医薬組成物の各活性成分の総量、あるいは意味のある患者の利益、例えばそのような状態の症状の寛解、治癒、または治癒速度の増大を示すのに十分な方法を意味する。個々の活性成分を施用した場合、すなわち単独で投与した場合、この用語は、その成分だけを指す。組み合わせて施用した場合、この用語は、組み合わせて投与したか、または逐次投与したか、または同時に投与したか否かに関わらす、治療効果をもたらす活性成分を合わせた量を指す。
【０１７４】
治療または使用の方法を実施する際、治療上有効な量のＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子、例えばＩＬ−１３に結合しかつ機能性ＩＬ−１３シグナル伝達複合体の形成を妨げる（また例えば、１つまたは複数のＩＬ−１３関連活性を中和しまたは阻害する）抗体分子を、被験体、例えば哺乳類（例えばヒト）に投与する。ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、本明細書に記述される方法に従って単独で、ならびにサイトカイン、リンホカイン、またはその他の造血因子を用いる治療や、癌療法、または抗炎症薬などの、その他の療法と組み合わせて投与することができる。１種または複数の薬剤と同時投与する場合、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、第２の薬剤と同時に、または逐次投与することができる。逐次投与する場合、医師は、ＩＬ−１３結合剤をその他の薬剤と組み合わせて投与するのに適した配列を選択することができる。
【０１７５】
医薬組成物で使用されるＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子の投与は、経口摂取や吸入、あるいは経皮、皮下、または静脈内注射など、様々な従来方法で実施することができる。治療上有効な量のＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、静脈内、経皮、または皮下注射によって投与され、結合剤は、発熱性物質を含まない非経口的に許容される水溶液として調製することができる。そのような非経口的に許容されるタンパク質溶液の組成物は、ｐＨや等張性、安定際などの要素を考慮して、生理的状態や結合剤安定性などに合わせて組成物が最適化するように適合させることができる。静脈内、経皮、または皮下注射のための医薬組成物は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウムの注射液、乳酸加リンゲル注射液、または当技術分野で知られているその他のビヒクルなどの、等張性ビヒクルを含有することができる。医薬組成物は、安定剤、保存剤、緩衝液、酸化防止剤、またはその他の添加剤を含有してもよい。
【０１７６】
医薬組成物中のＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子の量は、治療する状態の性質および重症度と、患者が受けた以前の治療の性質とに応じて、様々に変えることができる。医薬組成物は、通常の患者または症状を示さない患者、例えば予防形態の患者に投与することができる。主治医は、個々の患者それぞれを治療するＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子の量を決定することができる。例えば主治医は、低用量の拮抗薬を投与し、患者の応答を観察することができる。より多くの用量の拮抗薬を、最適な治療効果が患者に得られるまで投与することができ、その時点で、一般に投薬量をそれ以上増やさない。例えば医薬品は、体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇから５０ｍｇの間の抗体、例えば、体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇから５ｍｇの間、または約８ｍｇから５０ｍｇの間の抗体を含有することができる。抗体を、月に２回以下の頻度で、例えば隔週または毎月の頻度で皮下からデリバリーする一実施形態では、組成物が、約０．７〜３．３、例えば１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．８〜１．２、１．２〜２．８、または２．８から３．３ｍｇ／ｋｇの量を含む。
【０１７７】
医薬組成物を使用する治療期間は、治療する疾患の重症度と、個々の患者それぞれの状態および潜在的特異体質応答とに応じて様々に変えることができる。一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、皮下経路を介して、例えば週に１度、２４、４８、９６時間ごとに１度の範囲で、またはそのような間隔よりも少ない頻度で投与することもできる。例示的な投薬量は、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内とすることができる。薬剤は、例えば静脈内注入によって、約１から５０ｍｇ／ｍ２または約５から２０ｍｇ／ｍ２の用量に達するように、２０、１０、５、または１ｍｇ／分未満の速度で投与することができる。
【０１７８】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤の患者への投与は、例えば副作用を低下させまたは最小限に抑えるために、タンパク質の投薬量を変化させる工程を含む。例えば被験体に、第１の投薬量、例えば治療上有効な量よりも少ない投薬量を投与することができる。この後に続く休止期間、例えば少なくとも６、１２、２４、または４８時間後に、患者に第２の投薬量、例えば第１の投薬量よりも少なくとも２５、５０、７５、または１００％多い投薬量を投与することができる。例えば第２および／または同等の第３、第４、および第５の投薬量は、治療上有効な量の少なくとも約７０、８０、９０、または１００％とすることができる。
【０１７９】
（吸入）
【０１８０】
ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子を含む組成物は、吸入またはその他の肺デリバリー形態に合わせて処方することができる。したがってＩＬ−１３結合剤は、吸入によって肺組織に投与することができる。本明細書で使用する「肺組織」という用語は、他に特に指示しない限り、気道の任意の組織を指しかつ上気道および下気道を含む。ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、肺疾患を治療するために、既存のモダリティーの１つまたは複数を組み合わせて投与することができる。
【０１８１】
一実施例では、ＩＬ−１３結合剤を、ネブライザー用に処方する。一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤を、凍結乾燥形態で貯蔵することができ（例えば室温で）、吸入前に溶液に溶かして元に戻すことができる。医療機器、例えば吸入器を使用した吸入に合わせて、ＩＬ−１３結合剤を処方することも可能である。例えば、米国特許第６１０２０３５号（粉末吸入器）および第６０１２４５４号（乾燥粉末吸入器）を参照されたい。吸入器は、貯蔵に適したｐＨのＩＬ−１３結合剤用の別個の区画と、中和緩衝液用の別の区画と、噴霧化直前にＩＬ−１３結合剤および中和緩衝液を一緒にするメカニズムとを含むことができる。一実施形態では、吸入器が定量吸入器である。
【０１８２】
肺空気の通路に薬物を局所的にデリバリーするのに使用される、３つの一般的なシステムには、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、定量吸入器（ＭＤＩ）、およびネブライザーが含まれる。ＭＤＩは、吸入投与の最も一般的な方法であり、薬品を可溶化形態でまたは分散液としてデリバリーするのに使用することができる。典型的な場合、ＭＤＩは、機器の起動によって、噴霧化された薬品を気道に押しやるフレオンまたはその他の比較的高い蒸気圧の噴射剤を含む。ＭＤＩとは異なり、ＤＰＩは一般に、薬品を乾燥粉末形態で肺に導入するのに、患者の吸気努力に完全に頼るものである。ネブライザーは、液体溶液にエネルギーを与えることによって、吸入すべき医薬品のエアロゾルを形成する。フルオロケミカル媒体を使用した、液体流通または肺洗浄中の薬物の直接的な肺へのデリバリーについても、調査されている。これらおよびその他の方法は、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子をデリバリーするのに使用することができる。一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、ポリマーに、例えば化合物を安定化しまたはその半減期を延ばすポリマーに結合している。
【０１８３】
例えば吸入による投与の場合、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、適切な噴射剤またはネブライザーが入っている加圧容器またはディスペンサーから、エアロゾルスプレイの形でデリバリーされる。ＩＬ−１３結合剤は、乾燥粒子または液体の形をとることができる。ＩＬ−１３結合剤を含む粒子は、例えば噴霧乾燥によって、あるいはＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子の水溶液を、電荷中和剤と共に乾燥し、次いでこの乾燥粉末から粒子を生成することによって、あるいは有機改質剤中で水溶液を乾燥し、次いでこの乾燥粉末から粒子を生成することによって、調製することができる。
【０１８４】
ＩＬ−１３結合剤は、適切な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、またはその他の適切な気体を用いて、加圧パックまたはネブライザーから、エアロゾルスプレイの呈をなす形で都合良くデリバリーすることができる。加圧エアロゾルの場合、投薬単位は、計量した量をデリバリーする弁を設けることによって決定することができる。吸入器または注入器で使用するためのカプセルおよびカートリッジは、粒子が配合粒子である場合、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子とラクトースやデンプンなどの適切な粉末ベースとの粉末ミックスを入れたものを処方することができる。配合されまたは配合されていない化合物の他に、１００％ＤＰＰＣやその他の表面活性物質などのその他の材料を、ＩＬ−１３結合剤と混合して、配合されまたは配合されていない化合物のデリバリーおよび分散を促進させることができる。乾燥粒子を調製する方法は、例えばＷＯ０２／３２４０６に記載されている。
【０１８５】
ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、これを投与したときに素早く吸収することができるように、かつ迅速な局所的または全身的治療結果をもたらすことができるように、エアロゾルデリバリー用に、例えば乾燥エアロゾル粒子として処方することができる。投与は、投与から２分、５分、１時間、または３時間以内に検出可能な活性が提供されるように、調整して行うことができる。いくつかの実施形態では、ピーク活性は、さらにより素早く、例えば半時間以内に、または１０分以内にも実現することができる。ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、例えばＩＬ−１３結合剤が肺から循環系に入り、他の器官にまたは特定の標的器官に分布されるように、他の投与形態の代替例として使用するためにより長い生物半減期を目的として処方することができる（例えば、ＰＥＧなどのポリマーとの結合によって）。
【０１８６】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、ポリペプチドの質量の少なくとも５％が下気道または深部肺にデリバリーされるような量でデリバリーされる。深部肺は、極めて密度の高い毛細血管の網状構造を有する。毛細血管の管腔と肺胞気室とを隔てる呼吸器膜は、非常に薄く（≦６μｍ）、極めて浸透性が高い。さらに、肺胞表面に裏打ちされる液層は、肺表面活性物質に富んでいる。その他の実施形態では、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子の組成物の少なくとも２％、３％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％を、下気道にまたは深部肺にデリバリーする。これら組織のいずれかまたは両方へのデリバリーの結果、ＩＬ−１３結合剤の効率的な吸収と高い生物学的利用能がもたらされる。一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤は、例えば吸入気またはネブライザーを使用して計量された用量で提供される。例えばＩＬ−１３結合剤は、少なくとも約０．０２、０．１、０．５、１、１．５、２、５、１０、２０、４０、または５０ｍｇ／パフまたはそれ以上の単位剤形でデリバリーされる。生物学的利用能％は、下記の通り計算することができる：生物学的利用能％＝（ＡＵＣ非侵襲性／ＡＵＣ静脈内または皮下）×（用量静脈内または皮下／用量非侵襲性）×１００。
【０１８７】
必ずしも必要ではないが、表面活性物質などのデリバリー増強剤を使用して、肺デリバリーをさらに強化することができる。本明細書で使用する「表面活性物質」は、２つの不混和相の界面との相互作用によって薬物の吸収を促進させる親水性および親油性の部分を有するＩＬ−１３結合剤を指す。表面活性物質は、例えば粒子凝集の低減やマクロファージ食作用の低減など、いくつかの理由で乾燥粒子に有用である。肺表面活性物質と結合した場合、ＤＰＰＣなどの表面活性物質は化合物の拡散を大幅に促進させるので、ＩＬ−１３結合剤のより効率的な吸収を実現することができる。表面活性物質は当技術分野で周知であり、ホスホグリセリド、例えばホスファチジルコリン、Ｌ−α−ホスファチジルコリンジパルミトイル（ＤＤＰＣ）、およびジホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）；ヘキサデカノイル；脂肪酸；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ポリオキシエチレン−９−；アルリルエーテル；パルミチン酸；オレイン酸；トリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ  ８５）；グリココーレート；サーファクチン；ポリオキソマー；ソルビタン脂肪酸エステル；トリオレイン酸ソルビタン；チロキサポール；およびリン脂質が含まれるが、これらに限定するものではない。
【０１８８】
（安定化）
【０１８９】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子が、その循環内、例えば血液、血清、リンパ、気管支肺洗浄、またはその他の組織での安定化および／または維持を、少なくとも１．５、２、５、１０、または５０倍改善する部分と結合する。
【０１９０】
例えばＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、ポリマー、例えばポリアルキレンオキシドやポリエチレンオキシドなどの実質的に非抗原性のポリマーと結合することができる。適切なポリマーは、その重量がかなり変化することになる。約２００から約３５０００（または約１０００から約１５０００、および２０００から約１２５００）に及ぶ数平均分子量を有するポリマーを使用することができる。
【０１９１】
例えば、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、水溶性ポリマー、例えば親水性ポリビニルポリマー、例えばポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドンと結合することができる。そのようなポリマーの非限定的なリストには、ポリアルキレンオキシドホモポリマー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）やポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化ポリオール、そのコポリマー、およびそのブロックコポリマーなどであるがブロックコポリマーの水溶性が維持されることを前提としたものが含まれる。追加の有用なポリマーには、ポリオキシエチレンやポリオキシプロピレン、ポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンとのブロックコポリマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）などのポリオキシアルキレン；ポリメタクリレート；カルボマー；ラクトースやアミロペクチン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、アミロース、硫酸デキストラン、デキストラン、デキストリン、グリコーゲン、または酸性ムコポリ多糖の多糖サブユニット、例えばヒアルロン酸などの、ホモ多糖およびヘテロ多糖を含む、糖モノマー  Ｄ−マンノース、Ｄ−およびＬ−ガラクトース、フコース、フルクトース、Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−グルクロン酸、シアル酸、Ｄ−ガラクツロン酸、Ｄ−マンヌロン酸（例えばポリマンヌロン酸、またはアルギン酸）、Ｄ−グルコサミン、Ｄ−ガラクトサミン、Ｄ−グルコース、およびノイラミン酸を含む、分枝状または非分枝状の多糖；ヘパリンまたはヘパランが含まれる。
【０１９２】
ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子とポリマーとの結合体は、例えばゲルろ過またはイオン交換クロマトグラフィ、例えばＨＰＬＣによって、未反応の出発物質から分離することができる。異種同士の結合体は、同じ手法で相互に精製することができる。異なる種（例えば１つまたは複数のＰＥＧ残基を含有する）の分解も、未反応のアミノ酸のイオン特性の相違が原因で可能である。例えば、ＷＯ９６／３４０１５を参照されたい。
【０１９３】
（１種または複数の生体内ＩＬ−１３関連活性を調節するためのＩＬ−１３結合剤の使用）
【０１９４】
さらに別の態様では、本発明は、生体内での１種または複数のＩＬ−１３関連活性を、その活性を阻害するのに十分な量の本明細書に記述されるＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子を投与することによって調節する（例えば低下させ、中和し、かつ／または阻害する）ための方法を特徴とする。ＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３媒介型炎症応答の阻害を必要とする被験体に、投与することもできる。これらの状態には、例えば、気道炎症、喘息、線維症、好酸球増加症、および粘膜生成の増加が含まれる。
【０１９５】
本明細書に記述されるＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子の効力は、例えばブタ回虫（Ａｓｃａｒｉｓ  ｓｕｕｍ）アレルゲンに曝されたカニクイザルの気道炎症を拮抗薬が調節する能力を評価することによって、評価することができる。ＩＬ−１３結合剤、特に少なくとも１種のＩＬ−１３活性を阻害する結合剤は、例えば喘息および／またはこれに関連した症状を含めたＩＬ−１３関連病態を治療しまたは予防するために、１種または複数のＩＬ−１３関連活性を中和しまたは阻害するのに使用することができ、例えば生体内でのＩＬ−１３媒介型炎症を低減させるのに使用することができる。
【０１９６】
一実施形態では、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子、例えばその医薬組成物を、療法と組み合わせて、すなわちその他の薬剤、例えばアレルギーや炎症性障害などの病的状態または障害を治療するのに有用な治療薬と組み合わせて投与する。この文脈における「組み合わせて」という用語は、薬剤を実質的に同時期に、あるいは同時にまたは逐次与えることを意味する。逐次与える場合、第２の化合物の投与時点では、これら２種の化合物の最初のものが、治療部位において依然として有効な濃度で検出可能であることが好ましい。
【０１９７】
例えば併用療法は、以下により詳細に述べるように、例えば１種または複数の追加の治療薬、例えば１種または複数のサイトカインおよび成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞毒性または細胞増殖抑制性の薬剤と共に同時処方されかつ／または同時投与される、例えばＩＬ−１３に結合しかつ機能的ＩＬ−１３シグナル伝達複合体の形成を妨げる１種または複数のＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体と、その断片を含むことができる。さらに、１種または複数のＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、本明細書に記述される治療薬の１種または複数と組み合わせることができる。そのような併用療法は、投与される治療薬をより低い用量で有利に利用でき、したがって様々な単独療法に関連した可能性ある毒性または合併症が回避される。さらに、本明細書に開示される治療薬は、ＩＬ−１３／ＩＬ−１３受容体経路とは異なる経路上で作用し、したがってＩＬ−１３結合剤の効果を高めかつ／または相乗効果をもたらすことが予想される。
【０１９８】
喘息または気道炎症の種々の誘因を妨げる治療薬、例えばアレルギー、上気道炎、または耳感染の治療で使用される治療薬は、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子と組み合わせて使用することができる。一実施形態では、１種または複数のＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体およびその断片を、その他のサイトカインまたは成長因子拮抗薬（例えば可溶性受容体、ペプチド阻害剤、小分子、付着因子）、その他の標的に結合する抗体分子（例えばその他のサイトカインまたは成長因子と結合する抗体、その受容体、またはその他の細胞表面分子）、および抗炎症サイトカインまたはその作動薬と共に、同時処方しかつ／または同時投与することができる。ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体、およびその断片と組み合わせて使用することができる薬剤の非限定的な例には、吸入ステロイド；β作動薬、例えば短時間作用性または長時間作用性のβ作動薬；ロイコトリエンまたはロイコトリエン受容体の拮抗薬；ＡＤＶＡＩＲ（登録商標）などの複合薬；ＩｇＥ阻害剤、例えば抗−ＩｇＥ抗体（例えばＸＯＬＡＩＲ（登録商標））；ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えばＰＤＥ４阻害剤）；キサンチン；抗コリン作動薬；クロモリンなどの肥満細胞安定剤；ＩＬ−４阻害剤；ＩＬ−５阻害剤；エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤；および抗ヒスタミン含まれるが、これらに限定するものではない。
【０１９９】
その他の実施形態では、１種または複数のＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子を、１種または複数の抗炎症薬、免疫抑制剤、あるいは代謝または酵素阻害剤と共に同時処方しかつ／または同時投与することができる。ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体、およびその断片と組み合わせて使用することができる薬物または阻害剤の例には、とりわけＴＮＦ拮抗薬（例えばＴＮＦ受容体、例えばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体の可溶性断片、例えば７５ｋｄ  ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標）））；ＴＮＦ酵素拮抗薬、例えばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン様受容体拮抗薬；ＴＧＦ−β拮抗薬；インターフェロンγ；ペルフェニドン；化学療法薬、例えばメトトレキセート、レフルノミド、またはシロリムス（ラパマイシン）、またはその類似体、例えばＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫調節剤；ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２、およびＮＦκＢ阻害剤の１種または複数を含む、１種または複数の抗−ＩＬ−１３抗体またはその断片と共に同時投与しかつ／または同時処方することができる治療薬の追加の例の１種または複数が含まれるが、これらに限定するものではない。
【０２００】
（ワクチン製剤）
【０２０１】
別の態様では、本発明は、免疫化に関連した免疫応答を修飾する方法を特徴とする。ＩＬ−１３結合剤（例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子）は、ＩＬ−１３活性を阻害することによって免疫化の効力を増大させるのに使用することができる。ＩＬ−１３結合剤は、免疫原のデリバリー、例えばワクチンの投与の前、間、または後に投与することができる。一実施形態では、ワクチン接種によって高められた免疫は細胞性免疫であり、例えば癌細胞またはウイルス感染細胞、例えばレトロウイルス感染細胞、例えばＨＩＶ感染細胞に対する免疫である。一実施形態では、ワクチン製剤は、１種または複数のＩＬ−１３結合剤および抗原、例えば免疫原を含有する。別の実施形態では、ＩＬ−１３結合剤および免疫原は、互いに別々に、例えば１時間、３時間、１日、または２日以内に投与される。ＩＬ−１３結合剤は、１種または複数のＩＬ−１３活性を中和しまたは阻害するものでよい。
【０２０２】
ＩＬ−１３の阻害は、例えば細胞性ワクチン、例えば癌やウイルス感染、例えばレトロウイルス感染、例えばＨＩＶ感染などの疾患に対するワクチンの効力を改善することができる。ワクチンによるＣＤ８＋細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の誘発は、おそらくサイトカインＩＬ−１３を通して、ＣＤ４＋Ｔ細胞によってダウンレギュレートされる。ＩＬ−１３の阻害は、ＣＴＬ応答のワクチン誘導を高めることが示されている（Ahlers他, (2002) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 99:13020-10325）。ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子、本明細書に記述される抗体は、ワクチンの効力を高めるために、ワクチンと併せて使用することができる。癌およびウイルス感染（レトロウイルス（例えばＨＩＶ）感染）は、細胞性ワクチン応答が有効であり得る例示的な障害である。ワクチンの効力は、ワクチン接種時に、ＩＬ−１３シグナル伝達を阻止することによって高められる（Ahlers他, (2002) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 99:13020-25）。ワクチン製剤は、医薬または治療組成物の形で被験体に投与することができる。
【０２０３】
（障害を診断し、予後診断し、モニタするための方法）
【０２０４】
ＩＬ−１３結合剤は、診断薬として、生体外および生体内で使用することができる。１つの例示的な方法は、（ｉ）ＩＬ−１３結合剤（例えばＩＬ−１３抗体分子）を被験体に投与する工程と、（ｉｉ）被験体内のＩＬ−１３結合剤を検出する工程とを含む。検出は、被験体内のＩＬ−１３結合剤の位置を決定する工程を含むことができる。別の例示的な方法は、ＩＬ−１３結合剤とサンプル、例えば被験体からのサンプルとを接触させる工程を含む。サンプル中にＩＬ−１３が存在するかしないか、またはＩＬ−１３のレベル（定性的または定量的）を、決定することができる。
【０２０５】
別の態様では、本発明は、生体外（例えば、組織や生検などの生体サンプル）または生体内（例えば、被験体内での生体内イメージング）でＩＬ−１３の存在を検出するための診断方法を提供する。
【０２０６】
この方法は、（ｉ）サンプルをＩＬ−１３結合剤と接触させる工程と、（ｉｉ）ＩＬ−１３結合剤とサンプルとの複合体形成を検出する工程とを含む。この方法は、参照サンプル（例えば対照サンプル）を結合剤と接触させる工程と、複合体の形成の程度を決定する工程とを含むこともできる。対照サンプルまたは対照者と比べたときの、複合体形成の変化、例えば統計上有意な変化は、サンプル中のＩＬ−１３の存在を表すことができる。
【０２０７】
別の方法は、（ｉ）対象にＩＬ−１３結合剤を投与する工程と、（ｉｉ）ＩＬ−１３結合剤と被験体との間での複合体の形成を検出する工程とを含む。検出は、複合体の形成の位置または時間を決定する工程を含むことができる。
【０２０８】
ＩＬ−１３結合剤は、結合しまたは結合していないタンパク質の検出を促進させるために、検出可能な物質で直接または間接的に標識することができる。適切な検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子団、蛍光物質、ルミネセンス物質、および放射性物質が含まれる。
【０２０９】
ＩＬ−１３結合剤とＩＬ−１３との間での複合体形成は、ＩＬ−１３に結合した結合剤または結合していない結合剤を測定しまたは視覚化することによって、検出することができる。従来の検出アッセイは、例えば酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、または組織免疫化学を使用することができる。ＩＬ−１３結合剤の標識の他に、ＩＬ−１３の存在は、検出可能な物質で標識された標準物質および非標識ＩＬ−１３結合剤を利用する競合免疫アッセイによって、サンプル中でアッセイすることができる。このアッセイの一実施形態では、生体サンプル、標識された標準物質、およびＩＬ−１３結合剤を一緒にし、標識された標準物質および非標識結合剤の量を決定する。サンプル中のＩＬ−１３の量は、ＩＬ−１３結合剤に結合した標識済み標準物質の量に逆比例する。
【０２１０】
（喘息を診断し、予後診断し、かつ／またはモニタするための方法）
【０２１１】
本明細書に記述される結合剤は、例えば生体サンプル中のＩＬ−１３のレベルを測定することによって喘息を診断し、予後診断し、モニタするための方法で使用することができる。さらにこの発見によって、喘息の治療にも有用な、ＩＬ−１３シグナル伝達の新たな阻害剤の特定も可能になる。
【０２１２】
アレルギーおよび非アレルギー性喘息を診断するためのそのような方法は、生体サンプル、例えば血清、血漿、気管支肺胞洗浄液、痰などでのＩＬ−１３の変化（例えば減少または増加）を検出する工程を含むことができる。「診断」または「診断する」は、病原状態が存在するか否かを特定することを意味する。診断方法では、被験体（ヒトまたはヒト以外の哺乳類）からの生体サンプル中、例えば気管支肺胞洗浄液中の試験量のＩＬ−１３ポリペプチドを検出し、その試験量を、ＩＬ−１３ポリペプチドに関する通常の量または範囲（すなわち喘息に罹っていないことがわかっている個体からの量または範囲）と比較することによって、ＩＬ−１３の存在を検出する。特定の診断方法は、喘息の最終的な診断を下すことができないが、この方法が診断を助ける肯定的な徴候をもたらすなら、それで十分である。
【０２１３】
喘息および／またはアトピー性障害を診断するための方法は、ｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルでＩＬ−１３のアップレギュレーションを検出する工程を含むことができる。「予後診断」または「予後診断する」は、可能性ある病的状態の発症および／または重症度を予測することを意味する。予後診断方法では、被験体からの生体サンプル中のＩＬ−１３の試験量を決定し、その試験量を、ＩＬ−１３の予後診断量または範囲（すなわち喘息の重症度が様々な個体からの量または範囲）と比較する。試験サンプル中のＩＬ−１３の様々な量は、ある特定の喘息の予後と一致する。特定の予後レベルでの、ＩＬ−１３の量の検出は、被験体の予後診断を提供する。
【０２１４】
本願は、ＩＬ−１３のアップレギュレーションを検出することによって喘息の過程をモニタするための方法も提供する。モニタ方法では、被験体から得られた生体サンプル中のＩＬ−１３の試験量を、第１および第２の時間で決定し、これらの量を比較する。第１と第２の時間の間でのＩＬ−１３の量の変化は、喘息および／またはアトピー性障害の過程の変化を示すことができ、その量が減少した場合は喘息の鎮静を表し、その量が増加した場合は喘息および／またはアトピー性障害の進行を表す。そのようなモニタアッセイは、ＩＬ−１３関連障害の治療をしている患者での、特定の治療介入の効力（例えば疾患の寛解および／またはぶり返し）を評価するのにも有用である。
【０２１５】
蛍光団および発色団で標識した結合剤を調製することができる。蛍光部分は、３１０ｎｍよりも長い波長で、好ましくは４００ｎｍよりも長い波長でかなりの吸収があるように選択することができる。様々な適切な蛍光体および発色団は、Stryer (1968) Science, 162:526およびBrand,L.他, (1972) Annual Review of Biochemistry, 41: 843-868に記載されている。結合剤は、米国特許第３９４０４７５号、第４２８９７４７号、および第４３７６１１０号に開示されているものなどの従来の手順により、蛍光発色団の群で標識することができる。上述のいくつかの所望の性質を有する蛍光体の１つの群は、フルオレセインおよびローダミンを含むキサンテン染料である。蛍光化合物の別の群は、ナフチルアミンである。蛍光団または発色団で標識したら、例えば蛍光顕微鏡法（共焦点またはデコンボリューション顕微鏡法）を使用してサンプル中のＩＬ−１３の存在または局在化を検出するために、この結合剤を使用することができる。
【０２１６】
組織分析。免疫組織化学を、本明細書に記述される結合剤を使用して実施することができる。例えば抗体の場合、抗体を標識（精製またはエピトープタグなど）と共に合成することができ、あるいは、例えば標識または標識結合基を結合することによって検出可能に標識することができる。例えばキレート剤を、抗体に結合することができる。次いで抗体を、組織製剤、例えば顕微鏡スライド上にある組織の固定部分に接触させる。結合のためインキュベートした後、この製剤を洗浄して、結合していない抗体を除去する。次いで製剤に抗体が結合しているか否か明らかにするために、例えば顕微鏡法を使用して製剤を分析する。抗体（あるいはその他のポリペプチドまたはペプチド）は、結合の時点では標識されていなくてよい。結合および洗浄の後、抗体を検出可能にするために標識する。
【０２１７】
タンパク質アレイ。ＩＬ−１３結合剤（例えば、ＩＬ−１３結合剤であるタンパク質）は、タンパク質アレイ上に固定化することもできる。タンパク質アレイは、例えば医療サンプル（単離した細胞や血液、血清、生検など）をスクリーニングするための、診断ツールとして使用することができる。タンパク質アレイは、その他の結合剤、例えばＩＬ−１３またはその他の標的分子に結合するものを含むこともできる。
【０２１８】
タンパク質アレイを生成する方法は、例えば、De Wildt他, (2000) Nat.Biotechnol. 18: 989-994; Lueking他, (1999) Anal.Biochem. 270: 103-111; Ge(2000) Nucleic Acids Res. 28, e3, I-VII; MacBeathおよびSchreiber (2000) Science 289: 1760-1763; ＷＯ０１／４０８０３、およびＷＯ９９／５１７７３Ａ１に記載されている。アレイ用のポリペプチドは、例えばＧｅｎｅｔｉｃ  ＭｉｃｒｏＳｙｓｔｅｍｓまたはＢｉｏＲｏｂｏｔｉｃｓから市販されているロボット装置を使用して、高速でしみを付けることができる。アレイ基板は、例えばニトロセルロース、プラスチック、ガラス、例えば表面改質ガラスとすることができる。アレイは、多孔質マトリックス、例えばアクリルアミド、アガロース、または別のポリマーを含むこともできる。例えばアレイは、De Wildt(前掲)などに記載されるように、抗体のアレイとすることができる。タンパク質を生成する細胞は、アレイ型フォーマットのフィルタ上に成長させることができる。タンパク質の生成を誘発し、発現したタンパク質を、細胞の位置でフィルタに固定化する。
【０２１９】
タンパク質アレイは、サンプル中のＩＬ−１３の程度を決定するために、サンプルに接触させることができる。サンプルが標識されていない場合、ＩＬ−１３の結合を検出するために、例えば標識プローブを使用するサンドイッチ法を使用することができる。アレイの各アドレスでの結合の程度に関する情報は、例えばコンピュータデータベースにプロファイルとして保存することができる。タンパク質アレイを複製物として生成し、例えば種々のサンプルの結合プロファイルを比較するのに使用することができる。
【０２２０】
フローサイトメトリー。ＩＬ−１３結合剤は、細胞、例えばサンプル（例えば患者のサンプル）中の細胞を標識するのに使用することができる。結合剤は、蛍光化合物に結合することができる（または結合可能である）。次いで細胞を、フローサイトメトリーによって分析し、かつ／または選別された蛍光活性化細胞を使用して（例えばＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ  ＣＡから入手可能な選別機を使用して；米国特許第５６２７０３７号、第５０３０００２号、および第５１３７８０９号も参照）選別することができる。細胞が選別機内を通過するとき、レーザ光線が蛍光化合物を励起し、それと同時に検出器が通過する細胞をカウントし、蛍光を検出することによって蛍光化合物が細胞に結合したか否かを決定する。各細胞に結合された標識の量を定量し、サンプルの特徴付けを行うよう分析することができる。選別機は、細胞の方向を逸らせて、結合剤により結合された細胞を、結合剤により結合されていない細胞から分離することもできる。分離した細胞を培養し、かつ／または特徴付けることができる。
【０２２１】
生体内イメージング。さらに別の実施形態では、本発明は、生体内で被験体内のＩＬ−１３の存在を検出するための方法を提供する。この方法は、（ｉ）被験体（例えばＩＬ−１３関連障害を有する患者）に、検出可能なマーカーに結合した抗−ＩＬ−１３抗体を投与する工程と、（ｉｉ）この被験体を、検出可能なマーカーを検出するための手段に曝露する工程とを含む。例えば被験体を、例えばＮＭＲまたはその他のＸ線断層撮影手段によってイメージングする。
【０２２２】
診断イメージングに有用な標識の例には、１３１Ｉや１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、９９ｍＴｃ、３２Ｐ、３３Ｐ、１２５Ｉ、３Ｈ、１４Ｃ、および１８８Ｒｈなどの放射能標識、フルオレセインやローダミンなどの蛍光標識、核磁気共鳴活性標識、陽電子放出断層撮影（「ＰＥＴ」）走査機により検出可能な陽電子放出同位体、ルシフェリンなどの化学発光体、ペルオキシダーゼやホスファターゼなどの酵素マーカーが含まれる。短域検出器プローブによって検出可能な同位体などの、短域放射線エミッタを使用することもできる。結合剤は、既知の技法を使用して、そのような試薬で標識することができる。例えば、抗体の放射能標識に関連した技法に関するWenselおよびMeares (1983) Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy, Elsevier, New Yorkと、Colcher他, (1986) Meth. Enzymol. 121: 802-816を参照されたい。放射能標識された結合剤は、生体外診断試験に使用することもできる。同位体標識された結合剤の特異的活性は、半減期、放射能標識の同位体の純度、および標識を抗体にどのように組み込むかに応じて様々に異なる。放射性同位体（１４Ｃや３Ｈ、３５Ｓ、１２５Ｉ、９９ｍＴｃ、３２Ｐ、３３Ｐ、および１３１Ｉなど）でポリペプチドを標識するための手順は、一般に知られている。例えば、米国特許第４３０２４３８号；Golding,J.W. (Monoclonal antibodies: principles and practice: production and application of monoclonal antibodies in cell biology, biochemistry, and immunology 第2版 London; Orlando: Academic Press, 1986. pp124-126)およびそこに引用されている参考文献；およびA.R.Bradwell他, "Developments in Antibody Imaging", Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, R.W.Baldwin他(編), pp65-85 (Academic Press 1985)を参照されたい。
【０２２３】
本明細書に記述されるＩＬ−１３結合剤は、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）造影剤に結合することができる。いくつかのＭＲＩ技法は、ＥＰ−Ａ−０５０２８１４に概説されている。一般に、種々の環境における水の陽子の緩和時間定数Ｔ１およびＴ２の相違を使用して、画像を生成する。しかしこれらの相違は、鮮明な高解像度画像を提供するのに不十分である可能性がある。これらの緩和時間定数の相違は、造影剤によって増強することができる。そのような造影剤の例には、いくつかの磁性剤、常磁性剤（おもにＴ１を変化させる）、および強磁性または超常磁性剤（おもにＴ２応答を変化させる）が含まれる。キレート（例えばＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、およびＮＴＡキレート）を、一部の常磁性物質（例えばＦｅ３＋、Ｍｎ２＋、Ｇｄ３＋）の結合（および毒性の低減）に使用することができる。その他の薬剤は、粒子の形、例えば直径１０μｍ未満から約１０ｎｍであり、強磁性、反強磁性、または超常磁性を有する粒子の形をとることができる。ＩＬ−１３結合剤は、ＩＬ−１３の分布を位置付けかつ画像形成するために、Pykett (1982) Scientific American, 246:78-88により記述されるように、ＮＭＲ活性１９Ｆ原子を含有する指示基で標識することもできる。
【０２２４】
本明細書の範囲内には、ＩＬ−１３結合剤と、診断使用のための取扱説明書、例えば生体外で、例えばサンプル中で、例えばＩＬ−１３関連障害を有する患者からの生検または細胞中で、または例えば対象をイメージングすることによって生体内でＩＬ−１３を検出するための、ＩＬ−１３結合剤（例えば抗体分子、あるいはその他のポリペプチドまたはペプチド）の使用のための取扱説明書を含むキットも含まれる。キットは、標識や追加の診断薬など、少なくとも１種の追加の試薬をさらに含むことができる。生体内での使用では、結合剤を、医薬組成物として処方することができる。
【０２２５】
（キット）
【０２２６】
ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子は、例えばキットの構成要素としてキット内に提供することができる。例えばキットは、（ａ）ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子と、所望により（ｂ）情報資料とを含む。情報資料は、記述的、指示的、市場的、または方法、例えば本明細書に記述される方法に関するものとすることができる。キットの情報資料は、その形に限定されない。一実施形態では、情報資料は、化合物の生成、化合物の分子量、濃度、有効期日、バッチ処理または生産現場の情報などに関する情報を含むことができる。一実施形態では、情報資料は、本明細書に記述される障害を治療し、予防し、診断し、予後診断し、またはモニタするために、ＩＬ−１３結合剤を使用することに関する。
【０２２７】
一実施形態では、情報資料は、例えば適切な用量、剤形、または投与形態（例えば本明細書に記述される用量、剤形、または投与形態）で、本明細書に記述される方法を実施するのに適切な手法により、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子を投与するための取扱説明書を含むことができる。別の実施形態では、情報資料は、適切な被験体に、例えばヒトに、例えばアレルギー性喘息、非アレルギー喘息、またはＩＬ−１３媒介型障害、例えばアレルギーおよび／または炎症性障害、あるいはＨＴＬＶ−１感染に罹っておりまたはそのリスクのあるヒトに、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子を投与するための取扱説明書を含むことができる。ＩＬ−１３の生成は、ＨＴＬＶ−１感染に相関していた（Chung他, (2003) Blood 102: 4130-36）。
【０２２８】
例えば資料は、患者、すなわちアレルギー性喘息、非アレルギー喘息、またはＩＬ−１３媒介型障害、例えばアレルギーおよび／または炎症性障害、あるいはＨＴＬＶ−１感染に罹っておりまたはそのリスクのある患者に、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子を投与するための取扱説明書を含むことができる。
【０２２９】
キットは、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子を含有する組成物用の、１つまたは複数の容器を含むことができる。いくつかの実施形態では、キットは、組成物および情報資料のための別個の容器、仕切り、または区画を含む。例えば組成物は、瓶、バイアル、または注射器に入れることができ、情報資料は、プラスチックのスリーブまたはパケットに入れることができる。その他の実施形態では、キットの個別の要素を、単一の分割されていない容器内に入れる。例えば組成物を、ラベルの形をした情報資料がそこに付着されている瓶、バイアル、または注射器に入れる。いくつかの実施形態では、キットは、ＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子１の種または複数の単位剤形（例えば本明細書に記述されている剤形）がそれぞれ入っている複数の（例えばパック）の個々の容器を含む。例えばキットは、１つの単位用量のＩＬ−１３結合剤、例えば抗−ＩＬ−１３抗体分子、または複数の単位用量がそれぞれ入っている、複数の注射器、アンプル、ホイルパケット、アトマイザ、または吸入器を含む。
【０２３０】
キットは所望により、組成物の投与に適した機器、例えば注射器、吸入器、ピペット、鉗子、計量スプーン、滴瓶（例えば目薬用スポイト）、綿棒（例えば綿製の棒または木製の棒）、または任意のそのようなデリバリー機器を含む。好ましい実施形態では、機器は、計量済み用量の結合剤を吐出する埋込み可能な機器である。
【０２３１】
以下に示す実施例は、本発明の理解を助けるために記述するものであるが、その範囲をいかようにも限定することを意図するものではなく、かつその範囲をいかようにも限定するように解釈すべきではない。
【実施例】
【０２３２】
（実施例１）
【０２３３】
（ａ）ＮＨＰ−ＩＬ−１３のクローニングおよびヒトＩＬ−１３に対する相同性
【０２３４】
カニクイザルＩＬ−１３（ＮＨＰ  ＩＬ−１３）を、ハイブリダイゼーションプローブを使用してクローニングした。カニクイザルＩＬ−１３アミノ酸配列と、ヒトＩＬ−１３のアミノ酸配列との比較を、図１Ａに示す。２つの配列の間には、８つのアミノ酸に相違があるため、９４％のアミノ酸に同一性がある。これらの相違の１つ、Ｒ１３０Ｑは、喘息患者で優先的に発現する一般的なヒト多型性を表している（Heinzmann他, (2000) Hum.Mol.Genet. 9: 549-559）。
【０２３５】
（ｂ）ＮＨＰ−ＩＬ−１３とヒトＩＬ  １３Ｒα２との結合
【０２３６】
ヒトＩＬ−１３は、高い親和性で、α２型のＩＬ−１３受容体（ＩＬ  １３Ｒα２）に結合する。この受容体の可溶形態が、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ末端と共に発現した。ＩＬ−１３に結合し、細胞表面ＩＬ  １３Ｒα１−ＩＬ４Ｒシグナル伝達複合体からサイトカインを隔離することによって、ｓＩＬ  １３Ｒα２−Ｆｃは、ヒトＩＬ−１３生物活性の強力な阻害剤として働くことができる。ｓＩＬ  １３Ｒα２−Ｆｃは、ＣＨＯ細胞または大腸菌により生成されたＮＨＰ−ＩＬ−１３と結合することが示された。
【０２３７】
（ｃ）ヒト単球上でのＮＨＰ−ＩＬ−１３の生物活性
【０２３８】
（ｉ）ヒト単球上でのＣＤ２３発現
カニクイザルＩＬ−１３をコードするｃＤＮＡを大腸菌に発現させ、再びリフォールディングして、生物活性を維持した。カニクイザルＩＬ−１３に対するヒト細胞の反応性について、健康なドナーからの正常な抹消血単核細胞を３７℃で一晩ＩＬ−１３で処理するバイオアッセイを使用して実証した。これは、単球表面でのＣＤ２３発現のアップレギュレーションを誘発した。結果は、カニクイザルＩＬ−１３が、主要なヒト単球に対して生物活性を有することを示していた。
【０２３９】
（ｉｉ）ＨＴ−２９細胞上でのＳＴＡＴ６リン酸化
ヒトＨＴ−２９上皮細胞系は、ＩＬ−１３受容体を通したシグナル伝達の結果、ＳＴＡＴ６リン酸化を受けることによって、ＩＬ−１３に応答する。組換えＮＨＰ−ＩＬ−１３がＳＴＡＴ６リン酸化を引き起こす能力のアッセイを行うため、ＨＴ−２９細胞にＮＨＰ−ＩＬ−１３を３７℃で３０分間免疫化し、次いで固定し、浸透させ、ホスホ−ＳＴＡＴ６に対する蛍光抗体で染色した。結果は、カニクイザルＩＬ−１３が、このヒト細胞系内でＳＴＡＴ６リン酸化を効率的に誘発することを示していた。
【０２４０】
（ｄ）ＮＨＰ−ＩＬ−１３に結合する抗体の生成
【０２４１】
マウスまたはその他の適切な動物を、例えば下記の方法の１つまたは複数を使用して、カニクイザルＩＬ−１３で免疫化しかつ追加免疫を行うことができる。免疫化するための１つの方法は、追加免疫を行うために同じかまたは異なる方法と組み合わせることができる。
【０２４２】
（ｉ）大腸菌で発現させ、封入体から精製し、生物活性を保存するためにリフォールディングされた、カニクイザルＩＬ−１３タンパク質による免疫化。免疫化のため、タンパク質を完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）で乳化し、マウスを標準的なプロトコルに従って免疫化する。追加免疫では、同じタンパク質を不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）で乳化する。
【０２４３】
（ｉｉ）成熟カニクイザルＩＬ−１３の全配列に及ぶペプチドによる免疫化。各ペプチドは、カニクイザルＩＬ−１３に特有でありかつヒトタンパク質には存在しない、少なくとも１つのアミノ酸を含有する。図１Ｂを参照されたい。ペプチドが、システイン以外のＣ末端残基を有する場合、担体タンパク質との結合のためにシステインを添加する。ペプチドを、ＫＬＨなどの免疫原担体タンパク質に結合し、これを使用して、標準的なプロトコルに従ってマウスを免疫化する。免疫化では、タンパク質を完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）で乳化し、マウスを標準的なプロトコルに従って免疫化する。追加免疫では、同じタンパク質を、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）で乳化する。
【０２４４】
（ｉｉｉ）発現したＮＨＰ−ＩＬ−１３コード化ｃＤＮＡによる免疫化。リーダー配列を含んだＮＨＰ−ＩＬ−１３をコード化するｃＤＮＡを、適切なベクターにクローニングする。このＤＮＡを金ビーズ表面に被覆し、これを遺伝子銃で皮内注射する。
【０２４５】
（ｉｖ）タンパク質またはペプチドは、タンパク質ライブラリー、例えばファージまたはリボソームディスプレイライブラリーをスクリーニングするための標的として使用することができる。例えばライブラリーは、様々な免疫グロブリン分子、例えばＦａｂ、ｓｃＦｖ、またはＦｄを表示することができる。
【０２４６】
（ｅ）ＮＨＰおよび所望によりヒトＩＬ−１３、例えば未変性ヒトＩＬ−１３に対して交差反応性を示す、抗体クローンの選択。
【０２４７】
（１次スクリーン）
【０２４８】
抗体用の１次スクリーンは、ＥＬＩＳＡによる組換えＮＨＰ−ＩＬ−１３との結合のための選択であった。このＥＬＩＳＡでは、ウェルを組換えＮＨＰ  ＩＬ−１３で被覆する。免疫血清を連続希釈により添加し、室温で１時間インキュベートした。ウェルを、０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０を含有するＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）で洗浄した。結合した抗体を、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識された抗マウスＩｇＧおよびテトラメチルベンジデン（ＴＭＢ）基質を使用して検出した。吸光度を４５０ｎｍで読んだ。典型的な場合、全ての免疫化マウスは、ＮＨＰ−ＩＬ−１３に対する高い力価の抗体を生成した。
【０２４９】
（２次スクリーン）
【０２５０】
２次スクリーンは、ＥＬＩＳＡによる組換えＮＨＰ−ＩＬ−１３とｓＩＬ−１３Ｒα１−Ｆｃとの結合阻害のための選択であった。ウェルを、ＦＬＡＧタグ付きＮＨＰ−ＩＬ−１３を結合することができる可溶性ＩＬ−１３Ｒα１−Ｆｃで被覆した。この結合を、ＨＲＰに結合された抗ＦＬＡＧ抗体で検出した。ＴＭＢ基質の加水分解を、４５０ｎｍでの吸光度として読んだ。このアッセイでは、ＦＬＡＧタグ付きＮＨＰ−ＩＬ−１３を、高濃度の免疫血清と共に添加した。免疫血清が、ＮＨＰ−ＩＬ−１３に結合した抗体を含有し、ウェルを被覆するｓＩＬ  １３Ｒα１−Ｆｃとのその結合を妨げた場合、ＥＬＩＳＡシグナルは減少した。全ての免疫化マウスは、ＮＨＰ−ＩＬ−１３に結合するｓＩＬ  １３Ｒα１−Ｆｃと競合した抗体を生成したが、力価はマウスごとに異なっていた。血清が、最高希釈でＮＨＰ−ＩＬ−１３とのｓＩＬ  １３Ｒα１−Ｆｃ結合を阻害することを示す、その動物からの融合を目的として、脾臓を選択した。
【０２５１】
（３次スクリーン）
【０２５２】
３次スクリーンは、ＮＨＰ−ＩＬ−１３生物活性の阻害について試験をした。ＴＦ−１増殖アッセイ、単球ＣＤ２３発現アッセイ、およびＨＴ−２９細胞ＳＴＡＴ６リン酸化アッセイを含めたいくつかのバイオアッセイを使用することができる。免疫血清を、ＮＨＰ−ＩＬ−１３媒介型ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害に関して試験した。ＨＴ−２９ヒト上皮細胞系を、指示された濃度のマウス免疫血清の存在下および存在しない状態で、３７℃で３０分間、組換えＮＨＰ−ＩＬ−１３で免疫化した。次いで細胞を固定化し、浸透させ、ホスホ−ＳＴＡＴ６（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）に対するＡＬＥＸＡ（商標）Ｆｌｕｏｒ４８８結合ｍＡｂで染色した。ＳＴＡＴ６リン酸化を受けることによってＩＬ−１３に応答する細胞のパーセンテージを、フローサイトメトリーにより決定した。高血清希釈でＮＨＰ−ＩＬ−１３生物活性を最大阻害するとして決定された、最も強力な中和活性を有するマウスの脾臓を、ハイブリドーマの生成を目的として選択した。
【０２５３】
（４次スクリーン）
【０２５４】
ヒトＩＬ−１３を含有する粗製製剤を、ヒト臍帯血単核細胞（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ／Ｃａｍｂｒｅｘ）から生成した。細胞を、５％ＣＯ２の３７℃のインキュベーター内で、１０％熱不活性化ＦＣＳ、５０Ｕ／ｍｌペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、および２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを含有するＲＰＭＩ培地中で培養した。細胞を、マイトジェンＰＨＡ−Ｐ（Ｓｉｇｍａ）で３日間刺激し、組換えヒトＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）および抗ヒトＩＬ−１２でＴｈ２へとねじれ処理した。Ｔｈ２細胞をＩＬ−２で１週間増殖し、次いで３日間、ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）およびイオノマイシンで処理することによって、サイトカインが生成されるように活性化した。上澄みを収集し、透析して、ＰＭＡおよびイオノマイシンを除去した。ＩＬ−１３のバイオアッセイを妨げる可能性のあるＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４をなくすため、上澄みを、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ）に対するビオチニル化抗体で処理し、次いでストレプトアビジンで被覆した磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ）と共にインキュベートした。ＩＬ−１３の最終濃度をＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ）により決定し、総タンパク質に関してはＢｒａｄｆｏｒｄアッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を行った。典型的な製剤は、＜０．０００５重量％のＩＬ−１３を含有する。
【０２５５】
（ハイブリドーマクローンの選択）
【０２５６】
確立された方法を使用して、上述のように選択されたマウスの脾臓からハイブリドーマを生成し、Ｐ３Ｘ６３＿ＡＧ８．６５３骨髄腫細胞系（ＡＴＣＣ）に融合した。細胞を、限界希釈で塗布し、クローンを、上述のスクリーニング基準に従って選択した。データは、ＥＬＩＳＡによってｓＩＬ１３Ｒα１−Ｆｃに結合するＮＨＰ−ＩＬ−１３と競合する能力に基づいて、クローンの選択を目的に収集した。クローンを、ＮＨＰ−ＩＬ−１３の生物活性を中和する能力に関してさらに試験した。ハイブリドーマの上澄みを、ＨＴ−２９ヒト上皮細胞系内でＮＨＰ−ＩＬ−１３によって誘発されるＳＴＡＴ−６リン酸化の競合に関して試験した。
【０２５７】
（実施例２）
ＭＪ２−７抗体
【０２５８】
トータルＲＮＡを、ＱＩＡＧＥＮ  ＲＮＥＡＳＹ（商標）ミニキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してＭＪ２−７ハイブリドーマ細胞から調製した。ＲＮＡを、ＳＭＡＲＴ（商標）ＰＣＲ合成キット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用してｃＤＮＡに逆転写した。ＳＭＡＲＴ（商標）オリゴヌクレオチドを順方向プライマーとして使用し、マウスＩｇＧ１定常領域のＣＨ１領域のＮ末端部分をコードするＤＮＡにアニールするｍＩｇＧ１プライマーを、逆方向プライマーとして使用して、ＰＣＲによってＭＪ２−７重鎖の可変領域を外挿した。ＭＪ２−７軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ断片を、ＳＭＡＲＴ（商標）およびマウスκ特異的プライマーを使用して生成した。ＰＣＲ反応を、ＤＥＥＰ  ＶＥＮＴ（商標）ＤＮＡポリメラーゼ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）および２５ｎＭのｄＮＴＰを使用して、２４サイクル（９４℃で１分間、６０℃で１分間、７２℃で１分間）にわたり実施した。ＰＣＲ産物をｐＥＤ６ベクターにサブクローニングし、挿入物の配列を、ＤＮＡ配列決定によって特定した。精製したマウスＭＪ２−７抗体のＮ末端タンパク質配列決定を使用して、翻訳された配列が観察されたタンパク質配列に対応することを確認した。
【０２５９】
ＮＨＰ  ＩＬ−１３と相互に作用し、かつヒトＩＬ−１３と相互に作用する可能性があることを示唆する特徴を有するマウスモノクローナル抗体ＭＪ２−７の、例示的なヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、下記の通りである。
【０２６０】
重鎖可変領域をコードする例示的なヌクレオチド配列は、
ＧＡＧ  ＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣ  ＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧ  ＧＧＣＡＧＡＧＣＴＴ  ＧＴＧＡＡＧＣＣＡＧ
ＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴ  ＣＡＡＧＴＴＧＴＣＣ  ＴＧＣＡＣＡＧＧＴＴ  ＣＴＧＧＣＴＴＣＡＡ  ＣＡＴＴＡＡＡＧＡＣ
ＡＣＣＴＡＴＡＴＡＣ  ＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡ  ＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴ  ＧＡＡＣＡＧＧＧＣＣ  ＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴ
ＴＧＧＡＡＧＧＡＴＴ  ＧＡＴＣＣＴＧＣＧＡ  ＡＴＧＡＴＡＡＴＡＴ  ＴＡＡＡＴＡＴＧＡＣ  ＣＣＧＡＡＧＴＴＣＣ
ＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣ  ＣＡＣＴＡＴＡＡＣＡ  ＧＣＡＧＡＣＡＣＡＴ  ＣＣＴＣＣＡＡＣＡＣ  ＡＧＣＣＴＡＣＣＴＡ
ＣＡＧＣＴＣＡＡＣＡ  ＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣ  ＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴ  ＧＣＣＧＴＣＴＡＴＴ  ＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧ
ＡＴＣＴＧＡＧＧＡＡ  ＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧ  ＡＣＴＴＴＴＴＴＧＡ  ＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣ  ＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡ
ＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴ  ＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号１２９）
を含む。
【０２６１】
重鎖可変領域の例示的なアミノ酸配列は、
2011225574.tif 000007
を含む。
【０２６２】
ＣＤＲには下線を付している。可変領域の前には、所望によりリーダー配列が、例えばＭＫＣＳＷＶＩＦＦＬＭＡＶＶＴＧＶＮＳ（配列番号１３１）が存在する。軽鎖可変領域をコードする例示的なヌクレオチド配列は、
ＧＡＴ  ＧＴＴＴＴＧＡＴＧＡ  ＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣ  ＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧ  ＣＣＴＧＴＣＡＧＴＣ
ＴＴＧＧＡＧＡＴＣＡ  ＡＧＣＣＴＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＴＧＣＡＧＧＴ  ＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧ  ＣＡＴＴＧＴＡＣＡＴ
ＡＧＴＡＡＴＧＧＡＡ  ＡＣＡＣＣＴＡＴＴＴ  ＡＧＡＡＴＧＧＴＡＣ  ＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣ  ＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣ
ＴＣＣＡＡＡＧＣＴＣ  ＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡ  ＡＡＧＴＴＴＣＣＡＡ  ＣＣＧＡＴＴＴＴＣＴ  ＧＧＧＧＴＣＣＣＡＧ
ＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧ  ＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡ  ＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧ  ＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴ  ＣＡＡＧＡＴＴＡＧＣ
ＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧ  ＣＴＧＡＧＧＡＴＣＴ  ＧＧＧＡＧＴＴＴＡＴ  ＴＡＣＴＧＣＴＴＴＣ  ＡＡＧＧＴＴＣＡＣＡ
ＴＡＴＴＣＣＧＴＡＣ  ＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧ  ＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡ  ＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡ  ＡＡＡ（配列番号１３２）
を含む。
【０２６３】
掲載可変領域に関する例示的なアミノ酸配列は、
2011225574.tif 000008
を含む。
【０２６４】
ＣＤＲには下線を付す。アミノ酸配列の前には、所望によりリーダー配列が、例えばＭＫＬＰＶＲＬＬＶＬＭＦＷＩＰＡＳＳＳ（配列番号１３４）が存在する。「ＭＪ２−７」という用語は、本明細書では「ｍＡｂ７．１．１」という用語と同義に使用する。
【０２６５】
（実施例３）
Ｃ６５抗体
【０２６６】
ＮＨＰ  ＩＬ−１３と相互に作用し、かつヒトＩＬ−１３と相互に作用することができることを示唆する特徴を有する、マウスモノクローナル抗体Ｃ６５の例示的なヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、下記の通りである。
【０２６７】
重鎖可変領域に関する例示的核酸配列は、
１    ＡＴＧＧＣＴＧＴＣＣ  ＴＧＧＣＡＴＴＡＣＴ  ＣＴＴＣＴＧＣＣＴＧ  ＧＴＡＡＣＡＴＴＣＣ  ＣＡＡＧＣＴＧＴＡＴ
５１    ＣＣＴＴＴＣＣＣＡＧ  ＧＴＧＣＡＧＣＴＧＡ  ＡＧＧＡＧＴＣＡＧＧ  ＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧ  ＧＴＧＧＣＧＣＣＣＴ
１０１    ＣＡＣＡＧＡＧＣＣＴ  ＧＴＣＣＡＴＣＡＣＡ  ＴＧＣＡＣＣＧＴＣＴ  ＣＡＧＧＧＴＴＣＴＣ  ＡＴＴＡＡＣＣＧＧＣ
１５１    ＴＡＴＧＧＴＧＴＡＡ  ＡＣＴＧＧＧＴＴＣＧ  ＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡ  ＧＧＡＡＡＧＧＧＴＣ  ＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴ
２０１    ＧＧＧＡＡＴＡＡＴＴ  ＴＧＧＧＧＴＧＡＴＧ  ＧＡＡＧＣＡＣＡＧＡ  ＣＴＡＴＡＡＴＴＣＡ  ＧＣＴＣＴＣＡＡＡＴ
２５１    ＣＣＡＧＡＣＴＧＡＴ  ＣＡＴＣＡＡＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡ  ＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴ  ＴＴＴＣＴＴＡＡＡＡ
３０１    ＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣ  ＴＧＣＡＡＡＣＴＧＡ  ＴＧＡＣＡＣＡＧＣＣ  ＡＧＧＴＡＣＴＴＣＴ  ＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡ
３５１    ＴＡＡＧＡＣＴＴＴＴ  ＴＡＣＴＡＣＧＡＴＧ  ＧＴＴＴＣＴＡＣＡＧ  ＧＧＧＣＡＧＧＡＴＧ  ＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧ
４０１    ＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣ  ＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣ  ＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号１３５）
を含む。
【０２６８】
重鎖可変領域に関する例示的なアミノ酸配列は、
2011225574.tif 000009
を含む。ＣＤＲには下線を付けている。アミノ酸配列の前には、所望によりリーダー配列が、例えばＭＡＶＬＡＬＬＦＣＬ  ＶＴＦＰＳＣＩＬＳ（配列番号１３７）が存在する。
【０２６９】
軽鎖可変領域をコードする例示的なヌクレオチド配列は、
１    ＡＴＧＡＡＣＡＣＧＡ  ＧＧＧＣＣＣＣＴＧＣ  ＴＧＡＧＴＴＣＣＴＴ  ＧＧＧＴＴＣＣＴＧＴ  ＴＧＣＴＣＴＧＧＴＴ  
５１    ＴＴＴＡＧＧＴＧＣＣ  ＡＧＡＴＧＴＧＡＴＧ  ＴＣＣＡＧＡＴＧＡＴ  ＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡ  ＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴ  
１０１    ＣＴＧＣＡＴＣＴＴＴ  ＧＧＧＡＧＡＣＡＴＴ  ＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡ  ＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣ  ＡＡＧＴＣＡＧＧＧＣ  
１５１    ＡＣＴＡＧＣＡＴＴＡ  ＡＴＴＴＡＡＡＣＴＧ  ＧＴＴＴＣＡＧＣＡＡ  ＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡ  ＡＡＧＣＴＣＣＴＡＡ  
２０１    ＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣ  ＴＴＴＧＧＴＧＣＡＡ  ＧＣＡＡＣＴＴＧＧＡ  ＡＧＡＴＧＧＧＧＴＣ  ＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴ  
２５１    ＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧ  ＴＡＧＡＴＡＴＧＧＧ  ＡＣＡＡＡＴＴＴＣＡ  ＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴ  ＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧ  
３０１    ＧＡＧＧＡＴＧＡＡＧ  ＡＴＡＴＧＧＣＡＡＣ  ＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴ  ＣＴＡＣＡＧＣＡＴＡ  ＧＴＴＡＴＣＴＣＣＣ  
３５１    ＧＴＧＧＡＣＧＴＴＣ  ＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡ  ＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡ  ＡＡＴＣＡＡＡ（配列番号１３８）
を含む。
【０２７０】
軽鎖可変領域に関する例示的なアミノ酸配列は、
2011225574.tif 000010
を含む。ＣＤＲには下線を付す。アミノ酸配列の前には、所望によりリーダー配列が、例えばＭＮＴＲＡＰＡＥＦＬＧＦＬＬＬＷＦＬＧＡＲＣ（配列番号１４０）が存在する。
【０２７１】
（実施例４）
カニクイザルモデル
【０２７２】
生体内の１種または複数のＩＬ−１３関連活性を中和する抗体の効力は、回虫に対して生来アレルギーを有するカニクイザルの抗原誘発性気道炎症モデルを使用して、試験をすることができる。このモデルでは、アレルギーのサルに回虫抗原を投与し、その結果、炎症性細胞、特に好酸球が気道に流入する。抗体がこの細胞流入を妨げることができるかどうかを試験するために、抗体を、回虫抗原投与の２４時間前に投与することができる。抗原投与の日、基底気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）サンプルを左肺から採取することができる。次いで抗原を、気管内から右肺に１滴ずつ投与することができる。２４時間後、右肺を洗浄し、ＣＨＯ細胞から発現した１０ｍｇ／ｋｇの組換え抗体で静脈内から処理をした動物からのＢＡＬ流体と、未処理の動物からのＢＡＬ流体とを比較する。抗体が気道炎症を低下させる場合、未処理の群ではＢＡＬ好酸球％の増加が観察される可能性があるが、抗体で処理した群では観察されない。これらのアッセイを使用して、抗体が、アレルゲンの攻撃を受けたアレルギーを有する動物の気道好酸球増加症を効果的に妨げることを確認することができる。
【０２７３】
（実施例５）
Ｆｃ配列
【０２７４】
配列番号１２８の位置＃１のＳｅｒは、第１の例示的な完全長抗体番号付けスキームにおけるアミノ酸残基＃１１９を表し、Ｓｅｒの前には、重鎖可変領域の残基＃１１８が存在する。第１の例示的な完全長抗体番号付けスキームでは、変異したアミノ酸が、番号２３４および２３７にあり、これは、配列番号１２８の位置１１６および１１９に対応している。したがって下記の配列は、第１の例示的な完全長抗体番号付けスキームに従って、２つの変異、すなわちＬ２３４ＡおよびＧ２３７Ａを有するＦｃ領域を表す。
ＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＬＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１２８）
【０２７５】
下記は、別の例示的なヒトＦｃ領域配列である。
ＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４１）
【０２７６】
エフェクター機能を低下させるのに使用することができる、その他の例示的な変更例には、Ｌ２３４Ａ；Ｌ２３５Ａ）、（Ｌ２３５Ａ；Ｇ２３７Ａ）、およびＮ２９７Ａが含まれる。
【０２７７】
（実施例６）
マウスにおけるＩＬ−１３およびＩｇＥ
【０２７８】
ＩＬ−１３はＩｇＥの生成に関与し、アトピー性疾患の重要な媒介物である。ＩＬ−１３に欠けているマウスは、血清ＩｇＥおよび肥満細胞ＩｇＥの応答に一部低下があるのに対し、未変性ＩＬ−１３結合剤、ＩＬ−１３Ｒα２−／−に欠けているマウスは、高レベルのＩｇＥおよびＩｇＥエフェクター機能を有していた。
【０２７９】
ＢＡＬＢ／ｃメスマウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から得た。ＩＬ−１３Ｒα２−／−マウスは、例えばWood他, (2003) J.Exp.Med. 197:703-9に記載されている。ＩＬ−１３に欠けているマウスは、例えばMcKenzie他, (1998) Immunity 9:423-32に記載されている。全ての変異株は、ＢＡＬＢ／ｃバックグラウンド上に存在していた。
【０２８０】
血清ＩｇＥレベルを、ＥＬＩＳＡによって測定した。ＥＬＩＳＡプレート（ＭａｘｉＳｏｒｐ；Ｎｕｎｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）を、ラット抗マウスＩｇＥ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｏｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で、４℃で一晩被覆した。プレートを、ＰＢＳに溶かした０．５％のゼラチンで、室温で１時間遮断し、０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）を含有するＰＢＳで洗浄し、標準物質としての精製済みマウスＩｇＥ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と共に、または血清希釈液と共に、室温で６時間インキュベートした。結合を、マウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を遮断薬として使用して、ビオチニル化抗マウスＩｇＥ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で検出した。結合を、ペルオキシダーゼ結合ストレプトアビジン（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）およびＳＵＲＥ  ＢＬＵＥ（商標）基質（ＫＰＬ  Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）で検出した。
【０２８１】
未変性マウスの静止ＩｇＥレベルを支持するＩＬ−１３に関する要件を調査するために、血清を、野生型マウスとＩＬ−１３およびＩＬ−１３Ｒα２に遺伝的に欠けているマウスからの特異的免疫化が存在しない状態で、試験をした。ＩＬ−１３に欠けているマウスは、視覚的に検出できないレベルの血清ＩｇＥを有していた。これに対し、阻害的受容体ＩＬ−１３Ｒα２に欠けているマウスは、高レベルの血清ＩｇＥを表示していた。これらの結果は、ＩＬ−１３を遮断することが、アトピー性障害の治療または予防に役立てることができることを実証している。
【０２８２】
（実施例７）
ＩＬ−１３およびアトピー性障害
【０２８３】
ＭＪ２−７が、未変性ヒトＩＬ−１３の生物活性（１ｎｇ／ｍｌ）を阻害する能力について、ＳＴＡＴ６リン酸化に関するアッセイで評価した。ＭＪ２−７は、このアッセイにおいて、約０．２９３ｎＭのＩＣ５０で未変性ＩＬ−１３の活性を阻害した。ＭＪ２−７のマウス重鎖抗体を有する抗体およびヒト化軽鎖は、このアッセイにおいて、未変性ＩＬ−１３の活性を、約０．５５４ｎＭのＩＣ５０で阻害した。
【０２８４】
ＭＪ２−７が、非ヒト霊長類ＩＬ−１３を阻害する能力（１ｎｇ／ｍｌで）を、ＣＤ２３発現に関するアッセイで評価した。ＭＪ２−７は、このアッセイにおいて、非ヒト霊長類ＩＬ−１３の活性を約０．２４２ｎＭのＩＣ５０で阻害した。ＭＪ２−７のマウス重鎖を有する抗体とヒト化軽鎖は、このアッセイにおいて、約０．３０８ｎＭのＩＣ５０で非ヒト化霊長類ＩＬ−１３の活性を阻害した。
【０２８５】
（実施例８）
マウスＭＪ２−７抗体のヌクレオチドおよびアミノ酸配列
【０２８６】
重鎖可変領域（所望によるリーダーを有する）をコードするヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＡＴＧＡＡＡＴＧＣＡ  ＧＣＴＧＧＧＴＴＡＴ  ＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧ  ＡＴＧＧＣＡＧＴＧＧ  ＴＴＡＣＡＧＧＧＧＴ  
５１    ＣＡＡＴＴＣＡＧＡＧ  ＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣ  ＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧ  ＧＧＣＡＧＡＧＣＴＴ  ＧＴＧＡＡＧＣＣＡＧ  
１０１    ＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴ  ＣＡＡＧＴＴＧＴＣＣ  ＴＧＣＡＣＡＧＧＴＴ  ＣＴＧＧＣＴＴＣＡＡ  ＣＡＴＴＡＡＡＧＡＣ  
１５１    ＡＣＣＴＡＴＡＴＡＣ  ＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡ  ＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴ  ＧＡＡＣＡＧＧＧＣＣ  ＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴ  
２０１    ＴＧＧＡＡＧＧＡＴＴ  ＧＡＴＣＣＴＧＣＧＡ  ＡＴＧＡＴＡＡＴＡＴ  ＴＡＡＡＴＡＴＧＡＣ  ＣＣＧＡＡＧＴＴＣＣ  
２５１    ＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣ  ＣＡＣＴＡＴＡＡＣＡ  ＧＣＡＧＡＣＡＣＡＴ  ＣＣＴＣＣＡＡＣＡＣ  ＡＧＣＣＴＡＣＣＴＡ  
３０１    ＣＡＧＣＴＣＡＡＣＡ  ＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣ  ＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴ  ＧＣＣＧＴＣＴＡＴＴ  ＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧ  
３５１    ＡＴＣＴＧＡＧＧＡＡ  ＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧ  ＡＣＴＴＴＴＴＴＧＡ  ＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣ  ＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡ  
４０１    ＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴ  ＣＴＣＣＴＣＡ  （配列番号１４２）
【０２８７】
所望によるリーダー（下線を付す）を有する重鎖可変領域のアミノ酸配列は、下記の通りである。
１    ＭＫＣＳＷＶＩＦＦＬ  ＭＡＶＶＴＧＶＮＳＥ  ＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬ  ＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳ  ＣＴＧＳＧＦＮＩＫＤ  
５１    ＴＹＩＨＷＶＫＱＲＰ  ＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩ  ＤＰＡＮＤＮＩＫＹＤ  ＰＫＦＱＧＫＡＴＩＴ  ＡＤＴＳＳＮＴＡＹＬ  
１０１    ＱＬＮＳＬＴＳＥＤＴ  ＡＶＹＹＣＡＲＳＥＥ  ＮＷＹＤＦＦＤＹＷＧ  ＱＧＴＴＬＴＶＳＳ  
（配列番号１４３）
【０２８８】
軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＡＴＧＡＡＧＴＴＧＣ  ＣＴＧＴＴＡＧＧＣＴ  ＧＴＴＧＧＴＧＣＴＧ  ＡＴＧＴＴＣＴＧＧＡ  ＴＴＣＣＴＧＣＴＴＣ  
５１    ＣＡＧＣＡＧＴＧＡＴ  ＧＴＴＴＴＧＡＴＧＡ  ＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣ  ＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧ  ＣＣＴＧＴＣＡＧＴＣ  
１０１    ＴＴＧＧＡＧＡＴＣＡ  ＡＧＣＣＴＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＴＧＣＡＧＧＴ  ＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧ  ＣＡＴＴＧＴＡＣＡＴ  
１５１    ＡＧＴＡＡＴＧＧＡＡ  ＡＣＡＣＣＴＡＴＴＴ  ＡＧＡＡＴＧＧＴＡＣ  ＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣ  ＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣ  
２０１    ＴＣＣＡＡＡＧＣＴＣ  ＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡ  ＡＡＧＴＴＴＣＣＡＡ  ＣＣＧＡＴＴＴＴＣＴ  ＧＧＧＧＴＣＣＣＡＧ  
２５１    ＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧ  ＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡ  ＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧ  ＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴ  ＣＡＡＧＡＴＴＡＧＣ  
３０１    ＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧ  ＣＴＧＡＧＧＡＴＣＴ  ＧＧＧＡＧＴＴＴＡＴ  ＴＡＣＴＧＣＴＴＴＣ  ＡＡＧＧＴＴＣＡＣＡ  
３５１    ＴＡＴＴＣＣＧＴＡＣ  ＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧ  ＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡ  ＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡ  ＡＡＡ（配列番号１４４）
【０２８９】
所望によるリーダー（下線を付す）を有する軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、下記の通りである。
１    ＭＫＬＰＶＲＬＬＶＬ  ＭＦＷＩＰＡＳＳＳＤ  ＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬ  ＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩ  ＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨ  
５１    ＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹ  ＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬ  ＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳ  ＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧ  ＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳ  
１０１    ＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹ  ＹＣＦＱＧＳＨＩＰＹ  ＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩ  Ｋ（配列番号１４５）
【０２９０】
（実施例９）
ＭＪ２−７抗体の、例示的な第１のヒト化変種のヌクレオチドおよびアミノ酸配列
【０２９１】
ヒト化抗体変種１（Ｖ１）は、最も近いヒト生殖細胞系クローンをベースにしている。ｈＭＪ２−７Ｖ１重鎖可変領域（ｈＭＪ２−７ＶＨＶ１）のヌクレオチド配列（所望によるリーダー配列をコードする配列を有する）は、下記の通りである。
１    ＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡ  ＣＣＴＧＧＣＧＣＡＴ  ＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧ  ＧＴＧＧＣＣＧＣＴＧ  ＣＣＡＣＣＧＧＣＧＣ  
５１    ＴＣＡＣＴＣＴＣＡＧ  ＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧ  ＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧ  ＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧ  
１０１    ＧＣＧＣＴＴＣＣＧＴ  ＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣ  ＴＧＴＡＡＧＧＣＣＴ  ＣＣＧＧＣＴＴＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣ  
１５１    ＡＣＣＴＡＣＡＴＣＣ  ＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧ  ＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣ  ＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣ  ＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴ  
２０１    ＧＧＧＣＣＧＧＡＴＣ  ＧＡＴＣＣＴＧＣＣＡ  ＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴ  ＣＡＡＧＴＡＣＧＡＣ  ＣＣＣＡＡＧＴＴＴＣ  
２５１    ＡＧＧＧＣＣＧＣＧＴ  ＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣ  ＣＧＣＧＡＴＡＣＣＴ  ＣＣＧＣＴＴＣＴＡＣ  ＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧ  
３０１    ＧＡＧＣＴＧＴＣＴＡ  ＧＣＣＴＧＣＧＧＡＧ  ＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣ  ＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴ  ＡＣＴＧＣＧＣＣＣＧ  
３５１    ＣＴＣＣＧＡＧＧＡＧ  ＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧ  ＡＣＴＴＣＴＴＣＧＡ  ＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣ  ＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣ  
４０１    ＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴ  ＧＴＣＣＴＣＴ（配列番号１４６）
【０２９２】
重鎖可変領域（ｈＭＪ２−７Ｖ１）のアミノ酸配列は、ＤＰ−２５、ＶＨ−Ｉ、１−０３に移植されたＣＤＲをベースにしている。所望によるリーダー（最初の下線が付された領域；ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲは、後続の下線が付された領域に示される）を有するアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000011
【０２９３】
ｈＭＪ２−７Ｖ１軽鎖可変領域（ｈＭＪ２−７ＶＬＶ１）（所望によるリーダー配列をコードする配列を有する）のヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＡＴＧＣＧＧＣＴＧＣ  ＣＣＧＣＴＣＡＧＣＴ  ＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧ  ＣＴＧＡＴＧＣＴＧＴ  ＧＧＧＴＧＣＣＣＧＧ  
５１    ＣＴＣＴＴＣＣＧＧＣ  ＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡ  ＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣ  ＣＣＣＴＣＴＧＴＣＴ  ＣＴＧＣＣＣＧＴＧＡ  
１０１    ＣＣＣＴＧＧＧＣＣＡ  ＧＣＣＣＧＣＴＴＣＴ  ＡＴＣＴＣＴＴＧＣＣ  ＧＧＴＣＣＴＣＣＣＡ  ＧＴＣＣＡＴＣＧＴＧ  
１５１    ＣＡＣＴＣＣＡＡＣＧ  ＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡ  ＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧ  ＴＴＴＣＡＧＣＡＧＡ  ＧＡＣＣＣＧＧＣＣＡ  
２０１    ＧＴＣＴＣＣＴＣＧＧ  ＣＧＧＣＴＧＡＴＣＴ  ＡＣＡＡＧＧＴＧＴＣ  ＣＡＡＣＣＧＣＴＴＴ  ＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣ  
２５１    ＣＣＧＡＴＣＧＧＴＴ  ＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣ  ＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡ  ＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣ  ＣＣＴＧＡＡＧＡＴＣ  
３０１    ＡＧＣＣＧＣＧＴＧＧ  ＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡ  ＴＧＴＧＧＧＣＧＴＧ  ＴＡＣＴＡＣＴＧＣＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＴＣ  
３５１    ＣＣＡＣＡＴＣＣＣＴ  ＴＡＣＡＣＣＴＴＴＧ  ＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣ  ＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧ  ＡＴＣＡＡＧ  
（配列番号１４８）
【０２９４】
この変種は、ＤＰＫ１８、ＶκＩＩへのＣＤＲ移植片をベースにしている。ｈＭＪ２−７Ｖ１軽鎖可変領域（ｈＭＪ２−７ＶＬＶ１）（最初の下線が付された領域として、所望によるリーダーを有する；ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲは、後続の下線を付した領域に示される）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000012
【０２９５】
（実施例１０）
ＭＪ２−７抗体の、例示的な第２のヒト化変種のヌクレオチドおよびアミノ酸配列
【０２９６】
下記の重鎖可変領域は、ＤＰ−５４、ＶＨ−３、３−０７に対するＣＤＲ移植片をベースにしている。ｈＭＪ２−７変種２（Ｖ２）重鎖可変領域（ｈＭＪ２−７ＶＨＶ２）（所望によるリーダー配列をコードする配列を有する）のヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧ  ＧＣＣＴＧＴＣＴＴＧ  ＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧ  ＧＴＧＧＣＴＡＴＣＣ  ＴＧＧＡＧＧＧＣＧＴ  
５１    ＧＣＡＧＴＧＣＧＡＧ  ＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧ  ＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧ  ＣＧＧＣＧＧＡＣＴＧ  ＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧ  
１０１    ＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴ  ＧＣＧＧＣＴＧＴＣＴ  ＴＧＣＧＣＣＧＣＴＴ  ＣＣＧＧＣＴＴＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣ  
１５１    ＡＣＣＴＡＣＡＴＣＣ  ＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧ  ＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣ  ＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣ  ＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴ  
２０１    ＧＧＣＣＣＧＧＡＴＣ  ＧＡＴＣＣＴＧＣＣＡ  ＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴ  ＣＡＡＧＴＡＣＧＡＣ  ＣＣＣＡＡＧＴＴＣＣ  
２５１    ＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴ  ＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴ  ＣＧＣＧＡＣＡＡＣＧ  ＣＣＡＡＧＡＡＣＴＣ  ＣＣＴＧＴＡＣＣＴＣ  
３０１    ＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴ  ＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣ  ＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣ  ＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴ  ＡＣＴＧＣＧＣＣＣＧ  
３５１    ＧＡＧＣＧＡＧＧＡＧ  ＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧ  ＡＣＴＴＣＴＴＣＧＡ  ＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣ  ＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣ  
４０１    ＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴ  ＧＴＣＣＴＣＴ  （配列番号１５０）
【０２９７】
所望によるリーダー（最初に下線が付された領域；ＡｂＭの定義を基にしたＣＤＲは、後続の下線が付された領域に示される）を有する、ｈＭＪ２−７Ｖ２重鎖可変領域（ｈＭＪ２−７ＶＨＶ２）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000013
【０２９８】
ｈＭＪ２−７Ｖ２軽鎖可変領域は、ＤＰＫ９、ＶκＩ、０２に対するＣＤＲ移植片をベースにした。ｈＭＪ２−７Ｖ２軽鎖可変領域（ｈＭＪ２−７ＶＬＶ２）（所望によるリーダー配列をコードする配列を有する）のヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＡＴＧＧＡＴＡＴＧＣ  ＧＣＧＴＧＣＣＣＧＣ  ＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧ  ＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣ  ＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴ  
５１    ＧＣＧＣＧＧＡＧＣＣ  ＣＧＣＴＧＣＧＡＴＡ  ＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣ  ＣＣＡＧＴＣＣＣＣＴ  ＴＣＴＴＣＴＣＴＧＴ  
１０１    ＣＣＧＣＣＴＣＴＧＴ  ＧＧＧＣＧＡＴＣＧＣ  ＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡ  ＣＣＴＧＴＣＧＧＴＣ  ＣＴＣＣＣＡＧＴＣＣ  
１５１    ＡＴＣＧＴＧＣＡＣＴ  ＣＣＡＡＣＧＧＣＡＡ  ＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧ  ＧＡＧＴＧＧＴＡＴＣ  ＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣ  
２０１    ＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣ  ＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣ  ＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡ  ＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣ  ＣＧＣＴＴＴＴＣＣＧ  
２５１    ＧＣＧＴＧＣＣＴＴＣ  ＴＣＧＧＴＴＣＴＣＣ  ＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴ  ＣＣＧＧＣＡＣＣＧＡ  ＴＴＴＣＡＣＣＣＴＧ  
３０１    ＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴ  ＣＣＣＴＣＣＡＧＣＣ  ＣＧＡＧＧＡＴＴＴＣ  ＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴ  ＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡ  
３５１    ＧＧＧＣＴＣＣＣＡＣ  ＡＴＣＣＣＴＴＡＣＡ  ＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧ  ＣＧＧＡＡＣＣＡＡＧ  ＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡ  
４０１    ＡＧＣＧＴ  （配列番号１５２）
【０２９９】
ｈＭＪ２−７Ｖ２軽鎖可変領域（ｈＭＪ２−７ＶＬ  Ｖ２）の軽鎖可変領域（所望によるリーダーペプチドには下線が付されており、ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲは、後続の下線が付された領域に示される）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000014
【０３００】
ＭＪ２−７Ｖ２重鎖可変領域の、追加のヒト化変種を作製した。これらの変種は、選択されたフレームワーク位置にマウスアミノ酸を有する復帰突然変異を含んでいた。
【０３０１】
復帰突然変異Ｖ４８Ｉ、Ａ２９Ｇを有する重鎖可変領域「Ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．１」またはＶ２．１をコードするヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣ  ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣ  
５１    ＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧ  ＴＣＴＴＧＣＧＣＣＧ  ＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  
１０１    ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＡＴＣＧＧＣＣＧＧ  
１５１    ＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧ  ＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＣ  ＧＡＣＣＣＣＡＡＧＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＣＧ  
２０１    ＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＣＧＣＧＡＣＡ  ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＴＣＣＣＴＧＴＡＣ  ＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡ  
２５１    ＡＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＴ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣ  ＣＣＧＧＡＧＣＧＡＧ  
３０１    ＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴ  ＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  
３５１    ＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴ  （配列番号１５４）
【０３０２】
Ｖ２．１の重鎖可変領域（ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲを、後続の下線を付した領域に示す）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000015
【０３０３】
復帰突然変異（Ｒ６７Ｋ；Ｆ６８Ａ）を有する重鎖可変領域Ｖ２．２をコードするヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣ  ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣ  
５１    ＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧ  ＴＣＴＴＧＣＧＣＣＧ  ＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  
１０１    ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＧＴＧＧＣＣＣＧＧ  
１５１    ＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧ  ＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＣ  ＧＡＣＣＣＣＡＡＧＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＡＡ  
２０１    ＧＧＣＣＡＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＣＧＣＧＡＣＡ  ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＴＣＣＣＴＧＴＡＣ  ＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡ  
２５１    ＡＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＴ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣ  ＣＣＧＧＡＧＣＧＡＧ  
３０１    ＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴ  ＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  
３５１    ＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴ  （配列番号１５６）
【０３０４】
Ｖ２．２重鎖可変領域（ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲを、後続の下線を付した領域に示す）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000016
【０３０５】
復帰突然変異（Ｒ７２Ａ）を有する重鎖可変領域Ｖ２．３をコードするヌクレオチド配列：
１    ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣ  ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣ  
５１    ＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧ  ＴＣＴＴＧＣＧＣＣＧ  ＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  
１０１    ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＧＴＧＧＣＣＣＧＧ  
１５１    ＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧ  ＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＣ  ＧＡＣＣＣＣＡＡＧＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＣＧ  
２０１    ＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＧＣＣＧＡＣＡ  ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＴＣＣＣＴＧＴＡＣ  ＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡ  
２５１    ＡＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＴ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣ  ＣＣＧＧＡＧＣＧＡＧ  
３０１    ＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴ  ＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  
３５１    ＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴ  （配列番号１５８）
【０３０６】
Ｖ２．３の重鎖可変領域（ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲを、後続の下線を付した領域に示す）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000017
【０３０７】
復帰突然変異（Ａ４９Ｇ）を有する重鎖可変領域Ｖ２．４をコードするヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣ  ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣ  
５１    ＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧ  ＴＣＴＴＧＣＧＣＣＧ  ＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  
１０１    ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＧＴＧＧＧＣＣＧＧ  
１５１    ＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧ  ＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＣ  ＧＡＣＣＣＣＡＡＧＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＣＧ  
２０１    ＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＣＧＣＧＡＣＡ  ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＴＣＣＣＴＧＴＡＣ  ＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡ  
２５１    ＡＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＴ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣ  ＣＣＧＧＡＧＣＧＡＧ  
３０１    ＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴ  ＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  
３５１    ＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴ  （配列番号１６０）
【０３０８】
Ｖ２．４の重鎖可変領域（ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲを、後続の下線を付した領域に示す）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000018
【０３０９】
復帰突然変異（Ｒ６７Ｋ；Ｆ６８Ａ；Ｒ７２Ａ）を有する重鎖可変領域Ｖ２．５をコードするヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣ  ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣ  
５１    ＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧ  ＴＣＴＴＧＣＧＣＣＧ  ＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  
１０１    ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＧＴＧＧＣＣＣＧＧ  
１５１    ＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧ  ＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＣ  ＧＡＣＣＣＣＡＡＧＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＡＡ  
２０１    ＧＧＣＣＡＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＧＣＣＧＡＣＡ  ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＴＣＣＣＴＧＴＡＣ  ＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡ  
２５１    ＡＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＴ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣ  ＣＣＧＧＡＧＣＧＡＧ  
３０１    ＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴ  ＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  
３５１    ＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴ  （配列番号１６２）
【０３１０】
Ｖ２．５の重鎖可変領域（ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲを、後続の下線を付した領域に示す）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000019
【０３１１】
復帰突然変異（Ｖ４８Ｉ；Ａ４９Ｇ；Ｒ７２Ａ）を有する重鎖可変領域Ｖ２．６をコードするヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣ  ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣ  
５１    ＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧ  ＴＣＴＴＧＣＧＣＣＧ  ＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  
１０１    ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＡＴＣＧＧＣＣＧＧ  
１５１    ＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧ  ＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＣ  ＧＡＣＣＣＣＡＡＧＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＣＧ  
２０１    ＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＧＣＣＧＡＣＡ  ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＴＣＣＣＴＧＴＡＣ  ＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡ  
２５１    ＡＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＴ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣ  ＣＣＧＧＡＧＣＧＡＧ  
３０１    ＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴ  ＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  
３５１    ＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴ  （配列番号１６４）
【０３１２】
Ｖ２．６の重鎖可変領域（ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲを、後続の下線を付した領域に示す）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000020
【０３１３】
復帰突然変異（Ａ４９Ｇ；Ｒ７２Ａ）を有する重鎖可変領域Ｖ２．７をコードするヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣ  ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣ  
５１    ＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧ  ＴＣＴＴＧＣＧＣＣＧ  ＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  
１０１    ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＧＴＧＧＧＣＣＧＧ  
１５１    ＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧ  ＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＣ  ＧＡＣＣＣＣＡＡＧＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＣＧ  
２０１    ＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＧＣＣＧＡＣＡ  ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＴＣＣＣＴＧＴＡＣ  ＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡ  
２５１    ＡＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＴ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣ  ＣＣＧＧＡＧＣＧＡＧ  
３０１    ＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴ  ＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  
３５１    ＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴ  （配列番号１６６）
【０３１４】
Ｖ２．７の重鎖可変領域（ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲを、後続の下線を付した領域に示す）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000021
【０３１５】
復帰突然変異（Ｌ７９Ａ）を有する重鎖可変領域Ｖ２．８をコードするヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣ  ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣ  
５１    ＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧ  ＴＣＴＴＧＣＧＣＣＧ  ＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  
１０１    ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＧＴＧＧＣＣＣＧＧ  
１５１    ＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧ  ＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＣ  ＧＡＣＣＣＣＡＡＧＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＣＧ  
２０１    ＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＣＧＣＧＡＣＡ  ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＴＣＣＧＣＣＴＡＣ  ＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡ  
２５１    ＡＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＴ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣ  ＣＣＧＧＡＧＣＧＡＧ  
３０１    ＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴ  ＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  
３５１    ＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴ  （配列番号１６８）
【０３１６】
Ｖ２．８の重鎖可変領域（ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲを、後続の下線を付した領域に示す）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000022
【０３１７】
復帰突然変異（Ａ４９Ｇ；Ｒ７２Ａ；Ｌ７９Ａ）を有する重鎖可変領域Ｖ２．１０をコードするヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣ  ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣ  
５１    ＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧ  ＴＣＴＴＧＣＧＣＣＧ  ＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  
１０１    ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＧＴＧＧＧＣＣＧＧ  
１５１    ＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧ  ＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＣ  ＧＡＣＣＣＣＡＡＧＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＣＧ  
２０１    ＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＧＣＣＧＡＣＡ  ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＴＣＣＧＣＣＴＡＣ  ＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡ  
２５１    ＡＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＴ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣ  ＣＣＧＧＡＧＣＧＡＧ  
３０１    ＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴ  ＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  
３５１    ＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴ  （配列番号１７０）
【０３１８】
Ｖ２．１０の重鎖可変領域（ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲを、後続の下線を付した領域に示す）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000023
【０３１９】
復帰突然変異（Ｖ４８Ｉ；Ａ４９Ｇ；Ｒ７２Ａ；Ｌ７９Ａ）を有する重鎖可変領域Ｖ２．１１をコードするヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣ  ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣ  
５１    ＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧ  ＴＣＴＴＧＣＧＣＣＧ  ＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  
１０１    ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＡＴＣＧＧＣＣＧＧ  
１５１    ＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧ  ＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＣ  ＧＡＣＣＣＣＡＡＧＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＣＧ  
２０１    ＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＧＣＣＧＡＣＡ  ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＴＣＣＧＣＣＴＡＣ  ＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡ  
２５１    ＡＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＴ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣ  ＣＣＧＧＡＧＣＧＡＧ  
３０１    ＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴ  ＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  
３５１    ＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴ  （配列番号１７２）
【０３２０】
Ｖ２．１１の重鎖可変領域（ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲを、後続の下線を付した領域に示す）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000024
【０３２１】
復帰突然変異（Ｖ４８Ｉ；Ａ４９Ｇ；Ｒ７２Ａ）を有する重鎖可変領域Ｖ２．１６をコードするヌクレオチド配列は、下記の通りである。
１    ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣ  ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡ  ＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣ  
５１    ＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧ  ＴＣＴＴＧＣＡＣＣＧ  ＧＣＴＣＣＧＧＣＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  
１０１    ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＧＣＡＧＧＣＴ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧ  ＧＡＴＣＧＧＣＣＧＧ  
１５１    ＡＴＣＧＡＴＣＣＴＧ  ＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡ  ＣＡＴＣＡＡＧＴＡＣ  ＧＡＣＣＣＣＡＡＧＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＣＧ  
２０１    ＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣ  ＴＣＴＧＣＣＧＡＣＡ  ＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡ  ＣＴＣＣＣＴＧＴＡＣ  ＣＴＣＣＡＧＡＴＧＡ  
２５１    ＡＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＴ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣ  ＣＣＧＧＡＧＣＧＡＧ  
３０１    ＧＡＧＡＡＣＴＧＧＴ  ＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴ  ＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣ  
３５１    ＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴ  （配列番号１７４）
【０３２２】
Ｖ２．１６の重鎖可変領域（ＡｂＭの定義に基づくＣＤＲを、後続の下線を付した領域に示す）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
2011225574.tif 000025
【０３２３】
下記の配列は、変異したＣＨ２領域を有するヒト化ＭＨ２−７Ｖ２．１１  ＩｇＧ１のアミノ酸配列である。
2011225574.tif 000026
【０３２４】
可変領域は、アミノ酸１〜１２０にあり；ＣＨ１は１２１〜２１８に；ヒンジは２１９〜２３３に；ＣＨ２は２３４〜３４３に；ＣＨ３は３４４〜４５０にある。軽鎖は、１〜１３３に可変領域を有する下記の配列を含む。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＦＱＧＳＨＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ  （配列番号１７７）
【０３２５】
（実施例１１）
ＭＪ２−７の例示的な変種の機能的アッセイ
【０３２６】
本発明者等は、ＭＪ２−７抗体およびヒト化変種が、ＩＬ−１３活性のアッセイにおいてヒトＩＬ−１３を阻害できるか否か評価した。
【０３２７】
（ＳＴＡＴ６リン酸化アッセイ）
【０３２８】
ＨＴ−２９ヒト結腸上皮細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＢＳ、Ｐｅｎ−Ｓｔｒｅｐ、グルタミン、および重炭酸ナトリウムを含有するＭｃＣｏｙ  ５Ａ培地中に、付着単層として成長させた。アッセイのため、トリプシンを使用して細胞をフラスコから取り出し、新鮮な培地中に洗浄し、１２×７５ｍｍのポリスチレン試験管内に流した。組換えヒトＩＬ−１３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）を、１００〜０．０１ｎｇ／ｍｌに及ぶ濃度で添加した。抗体がＩＬ−１３応答を阻害できるか否かを試験するアッセイのため、１ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−１３を、５００〜０．４ｎｇ／ｍｌに及ぶ抗体の希釈液と共に添加した。細胞を、３７℃の水浴中で３０〜６０分間インキュベートし、次いで１％ＢＳＡを含有する氷冷ＰＢＳ中に洗浄した。細胞を、ＰＢＳに溶かした１％パラホルムアルデヒド中で、３７℃で１５分間インキュベートすることによって固定し、次いで１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ中に洗浄した。核を浸透させるため、細胞を無水メタノール中で、−２０℃で一晩インキュベートした。これらを、１％のＢＳＡを含有するＰＢＳ中に洗浄し、次いで、ＳＴＡＴ６（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に対するＡＬＥＸＡ（商標）Ｆｌｕｏｒ  ４８８標識抗体で染色した。蛍光を、ＦＡＣＳＣＡＮ（商標）およびＣＥＬＬＱＵＥＳＴ（商標）ソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。
【０３２９】
（ヒト単球上でのＣＤ２３誘導）
【０３３０】
単核細胞を、ＨＩＳＴＯＰＡＱＵＥ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ）上に層形成することによってヒト抹消血から単離した。細胞を、１０％熱不活性化ＦＣＳ、５０Ｕ／ｍｌペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを含有するＲＰＭＩ中に洗浄し、４８ウェル組織培養皿（Ｃｏｓｔａｒ／Ｃｏｒｎｉｎｇ）に蒔いた。組換えヒトＩＬ−１３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）を、１００〜０．０１ｎｇ／ｍｌに及ぶ希釈率で添加した。抗体がＩＬ−１３応答を阻害できるか否かを試験するアッセイのため、１ｎｇ／ｍｌ組換えヒトＩＬ−１３を、５００〜０．４ｎｇ／ｍｌに及ぶ希釈液と共に添加した。細胞を、５％ＣＯ２インキュベーター中で、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、非酵素性細胞解離溶液Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｓｉｇｍａ）を使用してウェルから細胞を収集し、次いで１％ＢＳＡを含有する氷冷ＰＢＳ中に洗浄した。細胞を、ヒトＣＤ２３（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に対するフィコエリトリン（ＰＥ）標識抗体およびヒト１１ｂ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に対するＣｙ−Ｃｈｒｏｍｅ標識抗体と共にインキュベートした。単球を、高い前方および側方散乱光とＣＤ１１ｂ発現に基づいて、ゲーティングした。単球上のＣＤ２３発現は、ＦＡＣＳＣＡＮ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用するフローサイトメトリーによって決定し、ＣＤ２３＋細胞のパーセンテージは、ＣＥＬＬＱＵＥＳＴ＿ソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により分析した。
【０３３１】
（ＴＦ−１細胞増殖）
【０３３２】
ＴＦ−１細胞は、その長時間にわたる成長のため、インターロイキン３（ＩＬ−３）または顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を必要とする因子依存性ヒト造血細胞系である。ＴＦ−１細胞は、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）を含めた様々なその他のサイトカインにも応答する。ＴＦ−１細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％熱不活性化ＦＣＳ、５０Ｕ／ｍｌペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、および５ｎｇ／ｍｌ組換えヒトＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有するＲＰＭＩ培地中で維持した。アッセイの前に、細胞を一晩、ＧＭ−ＣＳＦ欠如の状態にした。アッセイのため、ＴＦ−１細胞を、９６ウェル平底マイクロタイタープレート（Ｃｏｓｔａｒ／Ｃｌｏｎｉｎｇ）に５０００細胞／ウェルで蒔いて、これと同一のものを重複して作製し、１００〜０．０１ｎｇ／ｍｌに及ぶヒトＩＬ−１３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を免疫投与した。５％ＣＯ２と共に３７℃のインキュベーター内で７２時間経過した後、細胞に、１μＣｉ／ウェル  ３Ｈ−チミジン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ／Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ）でパルス標識した。これらをさらに４．５時間インキュベートし、次いで細胞を、ＴＯＭＴＥＫ（商標）収集器を使用してフィルターマット上に収集した。３Ｈ−チミジンの組込みは、液体シンチレーションカウンターにより評価した。
【０３３３】
（テネイシン生成アッセイ）
【０３３４】
ＢＥＡＳ−２Ｂヒト気管支上皮細胞（ＡＴＣＣ）を、補給物質（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）が補われたＢＥＧＭ培地で維持した。細胞を一晩、９６ウェル平底培養皿に、ウェル当たり２００００で蒔いた。指示される抗体の存在下または存在しない状態で、ＩＬ−１３を含有する新鮮な培地を添加する。一晩インキュベートした後、上澄みを収集し、ＥＬＩＳＡによって、細胞外マトリックス成分、テネイシンＣの存在に関してアッセイを行う。ＥＬＩＳＡプレートは、ＰＢＳ中のヒトテネイシン（ＩｇＧ１、ｋ；Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）に対する１ｕｇ／ｍｌのマウスモノクローナル抗体で、一晩被覆する。プレートを、０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０を含有するＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）で洗浄し、１％ＢＳＡを含有するＰＢＳで遮断する。新鮮な遮断溶液を６分ごとに添加し、合計で３回入れ替わるようにした。プレートを、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。細胞の上澄みまたはヒトテネイシン標準物質（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を添加し、３７℃で６０分間インキュベートした。プレートを、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。テネイシンを、テネイシンに対するマウスモノクローナル抗体（ＩｇＧ２ａ、ｋ；Ｂｉｏｈｉｔ）で検出した。結合を、マウスＩｇＧ２ａに対するＨＲＰ標識抗体で検出した後、ＴＭＢ基質により行った。反応を、０．０１Ｎ硫酸で停止させた。吸光度を４５０ｎｍで読み取った。
【０３３５】
ＨＴ２９ヒト上皮細胞系を使用して、ＳＴＡＴ６リン酸化のアッセイを行うことができる。ＨＴ２９細胞を、高濃度の試験抗体の存在下、１ｎｇ／ｍｌの未変性ヒトＩＬ−１３粗製製剤と共に、３７℃で３０分間インキュベートする。リン酸化ＳＴＡＴ６に対する抗体を用いた細胞溶解物のウェスタンブロット分析を使用して、ＳＴＡＴ６の用量依存性ＩＬ−１３媒介型リン酸化を検出することができる。同様に、フローサイトメトリー分析では、飽和濃度のＩＬ−１３で３０分間３７℃で処理し、固定し、浸透させ、ホスホ−ＳＴＡＴ６に対するＡＬＥＸＡ（商標）Ｆｌｕｏｒ  ４８８標識ｍＡｂで染色した、ＨＴ２９細胞中のリン酸化ＳＴＡＴ６を検出することができる。例示的な一組の結果を、表１に示す。Ｖ２．１１の阻害活性は、ｓＩＬ−１３Ｒａ２−Ｆｃの阻害活性と同等であった。
【０３３６】
表１
【表１】
2011225574.tif 000027
【０３３７】
（実施例１２）
ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１との間の結合相互作用部位
【０３３８】
ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒα１の細胞外領域（配列番号１２５の残基２７〜３４２）、およびヒトＩＬ−１３に結合する抗体の複合体を、ｘ線結晶学によって調査した。例えば、Ａｐ．１６１６３−０２９００１を参照されたい。実質的な相互作用の２点が、ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１との間に見出された。ＩＬ−１３Ｒα１のＩｇ領域とＩＬ−１３との相互作用の結果、２つの分子にまたがる広いβシートが形成される。ＩＬ−１３（配列番号１２４、成熟配列［完全長配列（配列番号１７８）］）の残基Ｔｈｒ８８［Ｔｈｒ１０７］、Ｌｙｓ８９［Ｌｙｓ１０８］、Ｉｌｅ９０［Ｉｌｅ１０９］、およびＧｌｕ９１［Ｇｌｕ１１０］は、受容体（配列番号１２５）の残基Ｌｙｓ７６、Ｌｙｓ７７、Ｉｌｅ７８、およびＡｌａ７９と相互に作用するβ鎖を形成する。さらに、ＩＬ−１３（配列番号１２４［配列番号１７８］）のＭｅｔ３３［Ｍｅｔ５２］の側鎖は、これら隣接する鎖の側鎖によって生成される疎水性ポケットにまで届く。
【０３３９】
Ｉｇ領域との相互作用の主な特徴は、受容体ＩＬ−１３Ｒα１のＩｇ領域３内の疎水性ポケットへの、ＩＬ−１３（配列番号１２４［配列番号１７８］）の疎水性残基（Ｐｈｅ１０７［Ｐｈｅ１２６］）の挿入である。ＩＬ−１３Ｒα１の疎水性ポケットは、残基Ｌｅｕ３１９、Ｃｙｓ２５７、Ａｒｇ２５６、およびＣｙｓ３２０（配列番号１２５）の側鎖によって形成される。ＩＬ−１３（配列番号１２４［配列番号１７８］）のＰｈｅ１０７［Ｐｈｅ１２６］との相互作用の結果、広範な一組のファンデルワールス相互作用が、ＩＬ−１３Ｒα１（配列番号１２５）のアミノ酸残基Ｉｌｅ２５４、Ｓｅｒ２５５、Ａｒｇ２５６、Ｌｙｓ３１８、Ｃｙｓ３２０、およびＴｙｒ３２１と、ＩＬ−１３（配列番号１２４［配列番号１７８］）のアミノ酸残基Ａｒｇ１１［Ａｒｇ３０］、Ｇｌｕ１２［Ｇｌｕ３１］、Ｌｅｕ１３［Ｌｅｕ３２］、Ｉｌｅ１４［Ｉｌｅ３３］、Ｇｌｕ１５［Ｉｌｅ３４］、Ｌｙｓ１０４［Ｌｙｓ１２３］、Ｌｙｓ１０５［Ｌｙｓ１２４］、Ｌｅｕ１０６［Ｌｅｕ１２５］、Ｐｈｅ１０７［Ｐｈｅ１２６］、およびＡｒｇ１０８［Ａｒｇ１２７］との間に生ずる。これらの結果は、ＩＬ−１３Ｒα１との相互作用に関与するＩＬ−１３領域に結合するＩＬ−１３結合剤を使用して、ＩＬ−１３シグナル伝達を阻害できることを実証している。
【０３４０】
（実施例１３）
ＣＯＳ細胞でのヒト化ＭＪ２−７抗体の発現
【０３４１】
哺乳類組換え系におけるキメラ抗ＮＨＰ  ＩＬ１３抗体の生成を評価するため、マウスＭＪ２−７抗体の可変領域を、ヒトκおよびＩｇＧ１  ｍｕｔ定常領域を含有するｐＥＤ６発現ベクターにサブクローニングした。サル腎臓ＣＯＳ−１細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎児血清、１ｍＭグルタミン、および０．１ｍｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＤＭＥ培地（Ｇｉｂｃｏ）で成長させた。ＣＯＳ細胞のトランスフェクションは、試薬供給元によって提示されたプロトコルに従って、ＴＲＡＮＳＩＴＩＴ（商標）−ＬＴ１トランスフェクション試薬（Ｍｉｒｕｓ）を使用して実施した。トランスフェクトしたＣＯＳ細胞を、１０％ＣＯ２の存在下、３７℃で２４時間インキュベートし、滅菌ＰＢＳで洗浄し、次いで血清を含まない培地Ｒ１ＣＤ１（Ｇｉｂｃｏ）で４８時間成長させて、ならし培地での抗体の分泌および蓄積を可能にした。ｃｈＭＪ２−７抗体の発現を、標準物質として精製されたＩｇＧ１／κ抗体を使用して、全ヒトＩｇＧ  ＥＬＩＳＡにより定量した。
【０３４２】
ＣＯＳ細胞でのキメラＭＪ２−７抗体の生成は、対照キメラ抗体よりも著しく少なかった（表２）。したがって、Ａｂ発現の最適化は、ＭＪ２−７ヒト化プロセスに含まれていた。ヒト化ＭＪ２−７Ｖ１は、典型的なヒト抗体応答で十分に発現し提示される、最も相同なヒト生殖細胞系クローンＤＰ２５への、マウスＭＪ２−７重鎖ＣＤＲのＣＤＲ移植によって構成した。軽鎖のＣＤＲを、ｈｕＭＪ２−７Ｖ１ＶＬを生成するために、ヒト生殖細胞系クローンＤＰＫ１８にサブクローニングした。ヒト化ＭＪ２−７Ｖ２は、ＤＰ５４ヒト生殖細胞系遺伝子フレームワークへのＭＪ２−７重鎖可変領域ＣＤＲ、およびＤＰＫ９ヒト生殖細胞系遺伝子フレームワークへのＭＪ２−７軽鎖可変領域ＣＤＲのＣＤＲ移植によって作製した。ＤＰ５４クローンは、ヒトＶＨ  ＩＩＩ生殖細胞系サブグループに属し、ＤＰＫ９は、ヒト生殖細胞系遺伝子のＶκＩサブグループからのものである。ＶＨ  ＩＩＩおよびＶκＩフレームワークを含む抗体分子は、大腸菌系内で高い発現レベルを有し、水溶液中で高い安定性および溶解性を有する（例えば、Stefan Ewert他, J.Mol.Biol. (2003), 325; 531-553, Adrian Auf他, Methods (2004) 34: 215-224参照）。本発明者等は、いくつかの組換え抗体の生成で、ＤＰ５４／ＤＰＫ９ヒトフレームワークの組合せを使用し、一過性ＣＯＳトランスフェクション実験では、抗体の高い発現（＞２０μｇ／ｍｌ）を実現した。
【０３４３】
【表２】
2011225574.tif 000028
【０３４４】
ＣＤＲ移植ＭＪ２−７Ｖ１およびＶ２  ＶＨおよびＶＬ遺伝子を、２つの哺乳類発現ベクター系（ｐＥＤ６κ／ｐＥＤ６ＩｇＧ１ｍｕｔおよびｐＳＭＥＮ２κ／ｐＳＭＥＤ２ＩｇＧ１ｍｕｔ）にサブクローニングし、ヒト化ＭＪ２−７抗体の生成を、上述の一過性ＣＯＳトランスフェクション実験で評価した。第１の組の実験では、ｈｕＭＪ２−７ＶＬおよびＶＨの様々な組合せが抗体発現に及ぼす影響について、評価した（表３）。ＭＪ２−７ＶＬフレームワーク領域からＤＫＰ９への変化は、抗体生成を８〜１０倍増加させるのに対し、ＶＬ  Ｖ１（ＣＤＲがＤＰＫ１８に移植された）は、抗体生成の緩やかな増加しか示さなかった。この効果は、ヒト化ＶＬをキメラＭＪ２−７ＶＨおよびヒト化ＭＪ２−７Ｖ１およびＶ２と組み合わせたときに観察された。ＣＤＲ移植ＭＪ２−７Ｖ２は、ＣＤＲ移植ＭＪ２−７Ｖ１よりも、同じアッセイ条件下で３倍高い発現レベルを有していた。
【０３４５】
【表３】
2011225574.tif 000029
【０３４６】
同様の実験を、重鎖可変領域に復帰突然変異を含むｈｕＭＪ２−７Ｖ２で実施した（表４）。最高の発現レベルが、マウスＭＪ２−７抗体の抗原結合および中和特性を保持するｈｕＭＪ２−７Ｖ２．１１に関して検出された。位置４８および４９（Ｖ４８ＩおよびＡ４９Ｇ）での復帰突然変異の導入により、ＣＯＳ細胞でのｈｕＭＪ２−７Ｖ２抗体の生成が増加し、それに対して位置２３、２４、６７、および６８（Ａ２３Ｔ；Ａ２４Ｇ；Ｒ６７ＫおよびＦ６８Ａ）でのアミノ酸の復帰突然変異は、抗体発現に負の影響を及ぼしていた。
【０３４７】
【表４】
2011225574.tif 000030
【０３４８】
（実施例１４）
ＮＨＰ  ＩＬ−１３  ＦＬＡＧ  ＥＬＩＳＡによるヒト化ＭＪ２−７抗体の抗原結合特性の評価
【０３４９】
完全ヒト化ＭＪ２−７ｍＡｂ（Ｖ１、Ｖ２  ｖ２）が、ＮＨＰ  ＩＬ−１３−ＦＬＡＧとの結合のためにビオチニル化マウスＭＪ２−７Ａｂと競合できるか否かを、ＥＬＩＳＡによって評価した。マイクロタイタープレート（Ｃｏｓｔａｒ）を、１μｇ／ｍｌの抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体Ｍ２（Ｓｉｇｍａ）で被覆した。１０ｎｇ／ｍｌの濃度のＦＬＡＧ  ＮＨＰ  ＩＬ−１３タンパク質を、１０ｎｇ／ｍｌのビオチン標識マウスＭＪ２−７抗体と、様々な濃度の標識していないマウスおよびヒト化ＭＪ２−７抗体と混合した。この混合物を、室温で２時間インキュベートし、次いで抗ＦＬＡＧ抗体被覆プレートに添加した。ＦＬＡＧ  ＮＨＰ−ＩＬ−１３／ｂｉｏＭＪ２−７Ａｂ複合体の結合を、ストレプトアビジン−ＨＲＰおよび３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）で検出した。ヒト化ＭＪ２−７Ｖ２は、活性を著しく失ったのに対し、ｈｕＭＪ２−７Ｖ２．１１は、抗原結合活性を完全に回復し、ＦＬＡＧ-ＮＨＰ  ＩＬ−１３との結合のためにビオチニル化ＭＪ２−７ｍＡｂと競合することが可能であった。ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析では、ＮＨＰ  ＩＬ−１３が、固定化したｈｌｕＭＪ２−７ｖ２．１１と急速に結合し、またゆっくりと解離したことも確認した。
【０３５０】
（実施例１５）
ヒト化ＭＪ２−７Ｖ２ＶＨの分子モデリング
【０３５１】
ヒト化ＭＪ２−７重鎖変種２（ＭＪ２−７Ｖ２ＶＨ）をモデリングするための構造鋳型を、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）に対するＢＬＡＳＴ相同性探索に基づいて選択した。ＢＬＡＳＴ探索出力から選択された２つの構造の他に、追加の鋳型をタンパク質構造の社内データベースから選択した。ＭＪ２−７Ｖ２ＶＨのモデルを、鋳型として３つの鋳型構造  １ＪＰＳ（ヒト化Ｆａｂ  Ｄ３ｈ４４と複合体を形成するヒト組織因子の共結晶構造）、１Ｎ８Ｚ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  Ｆａｂと複合体を形成するヒトＨｅｒ２の共結晶構造）、およびＦ１３．２（マウス抗体Ｆａｂ断片と複合体を形成するＩＬ−１３）を使用し、かつＩｎｓｉｇｈｔＩＩの相同性モジュール（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）を使用して構築した。１ＪＰＳ、１Ｎ８Ｚ、およびＦ１３．２（Ａｐ．１６１６３−０２９００１から入手可能）の構造的に保存される領域（ＳＣＲ）を、各分子ごとにＣα距離マトリックスに基づいて決定し、鋳型構造を、ＳＣＲでの対応する原子の最小ＲＭＳ偏差に基づいて重ね合わせた。標的タンパク質ＭＪ２−７Ｖ２ＶＨの配列を、重ね合わせた鋳型タンパク質の配列と位置合わせし、ＳＣＲの座標を、標的タンパク質の対応する残基に割り当てた。ＳＣＲのそれぞれにおける標的と鋳型との配列類似性の程度に基づいて、種々の鋳型からの座標を種々のＳＣＲに使用した。ＳＣＲに含まれないループおよび可変領域に関する座標は、相同性モジュールで実施されるように、Ｓｅａｒｃｈ  ＬｏｏｐまたはＧｅｎｅｒａｔｅ  Ｌｏｏｐ法によって作成した。簡単に言うと、Ｓｅａｒｃｈ  Ｌｏｏｐ法は、フランキングＳＣＲ残基のＣａ距離マトリックスと、同じ数のフランキング残基および所与の長さの介在ペプチド領域を有するタンパク質構造から得られた事前に計算されたマトリックスとを比較することにより、２つのＳＣＲ間で正しく適合するタンパク質構造を走査する。新たに原子座標を生成するＧｅｎｅｒａｔｅ  Ｌｏｏｐ法は、Ｓｅａｒｃｈ  Ｌｏｏｐが所望の結果をもたらさない場合に使用した。アミノ酸側鎖の立体構造は、アミノ酸残基が鋳型および標的と同一である場合、鋳型と同様に維持した。しかし、回転異性体の立体構造探索を行い、鋳型および標的で同一ではない残基に関してエネルギー的に最も好ましい立体構造を維持した。この後、分子機構シミュレーションを設定するＳｐｌｉｃｅ  Ｒｅｐａｉｒを行って、２つのＳＣＲ間またはＳＣＲと可変領域との間の接合部での、適正な結合の長さおよび結合角を得た。最後にこのモデルを、５ｋｃａｌ／（モルÅ）または５００サイクルの最大デリバティブまでＳｔｅｅｐｅｓｔ  Ｄｅｓｃｅｎｔｓアルゴリズムを使用し、また５ｋｃａｌ/（モルÅ）または２０００サイクルの最大デリバティブまでＣｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｇｒａｄｉｅｎｔｓアルゴリズムを使用して、エネルギー最小化に付した。モデルの品質を、ＰｒｏＳｔａｔ／Ｓｔｒｕｃｔ＿Ｃｈｅｃｋコマンドを使用して評価した。
【０３５２】
マウスＭＪ２−７ＶＨの分子モデルは、使用した鋳型を１ＱＢＬおよび１ＱＢＭ、ウマ抗シトクロムｃ抗体ＦａｂＥ８としたこと以外、結晶構造ヒト化ＭＪ２−７Ｖ２ＶＨに関して述べた手順に従って構築した。
【０３５３】
モデルによって予測される、ＣＤＲフレームワークＨ結合の潜在的な相違
ｈＭＪ２−７  Ｖ２ＶＨ：Ｇ２６−ｈＭＪ２−７  Ｖ２ＶＨ：Ａ２４
ｈＭＪ２−７  Ｖ２ＶＨ：Ｙ１０９−ｈＭＪ２−７  Ｖ２ＶＨ：Ｓ２５
ｍＭＪ２−７  ＶＨ：Ｄ６１−ｍＭＪ２−７  ＶＨ：Ｉ４８
ｍＭＪ２−７  ＶＨ：Ｋ６３−ｍＭＪ２−７  ＶＨ：Ｅ４６
ｍＭＪ２−７  ＶＨ：Ｙ１０９−ｍＭＪ２−７  ＶＨ：Ｒ９８
これらの相違は、以下の所望による復帰突然変異：Ａ２３Ｔ、Ａ２４Ｇ、およびＶ４８Ｉを示唆していた。
【０３５４】
個々のアミノ酸の有意なＲＭＳ偏差、およびこれらに隣接するアミノ酸残基の相違に基づいて示唆されるその他の所望による復帰突然変異は、Ｇ９Ａ、Ｌ１１５Ｔ、およびＲ８７Ｔである。
【０３５５】
（実施例１６）
ＭＪ２−７およびＣ６５のＩＬ−１３中和活性
【０３５６】
ＭＪ２−７およびＣ６５のＩＬ−１３中和能力を、一連のバイオアッセイで試験した。まず、これらの抗体がＮＨＰ  ＩＬ−３の生物活性を中和できるか否か、単球ＣＤ２３発現アッセイで試験した。新たに単離されたヒトＰＢＭＣを、高濃度のＭＪ２−７、Ｃ６５、またはｓＩＬ−１３Ｒα２-Ｆｃの存在下で、３ｎｇ／ｍｌのＮＨＰ  ＩＬ−１３と共に一晩インキュベートした。細胞を収集し、単球特異的マーカー、ＣＤ１１ｂに対するＣＹＣＨＲＯＭＥ（商標）標識抗体で、またＣＤ２３に対するＰＥ標識抗体で染色した。ＩＬ−１３処理に応答して、ＣＤ２３の発現は、ＣＤ１１ｂの発現に基づいてゲーティングされた単球表面でアップレギュレートされた。ＭＪ２−７、Ｃ６５、およびｓＩＬ１３Ｒα２-Ｆｃの全ては、このアッセイにおいてＮＨＰ  ＩＬ−１３の活性を中和することができた。ＭＪ２−７およびｓＩＬ１３Ｒα２-Ｆｃの効力は、同等であった。Ｃ６５は、約２０分の１の活性であった（図２）。
【０３５７】
第２のバイオアッセイでは、未変性ヒトＩＬ−１３に対するＭＪ２−７およびＣ６５の中和能力について、ＳＴＡＴ６リン酸化アッセイで試験をした。ＨＴ−２９上皮細胞系を、高濃度のＭＪ２−７、Ｃ６５、またはｓＩＬ−１３Ｒα２-Ｆｃの存在下、０．３ｎｇ／ｍｌの未変性ヒトＩＬ−１３と共に３７℃で３０分間インキュベートした。細胞を固定し、浸透させ、リン酸化ＳＴＡＴ６に対するＡＬＥＸＡ（商標）Ｆｌｕｏｒ  ４８８標識抗体で染色した。ＩＬ−１３処理は、ＳＴＡＴ６のリン酸化を刺激した。ＭＪ２−７、Ｃ６５、およびｓＩＬ１３Ｒａ２−Ｆｃは、このアッセイにおいて、未変性ヒトＩＬ−１３の活性を中和することができた（図３）。マウスＭＪ−２７抗体およびヒト化形態（Ｖ２．１１）に関するＩＣ５０は、それぞれ０．４８ｎＭおよび０．５２ｎＭであった。ＭＪ２−７およびｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃの効力は、ほぼ同等であった。ｓＩＬ−１３Ｒａ２−ＦｃのＩＣ５０は、０．３３ｎＭであった（図４）。Ｃ６５は、約２０分の１の活性であった（図５）。
【０３５８】
第３のバイオアッセイでは、ＭＪ２−７が未変性ヒトＩＬ−１３を中和することができるか否か、テネイシン生成アッセイで試験をした。ヒトＢＥＡＳ−２Ｂ肺上皮細胞系を、高濃度のＭＪ２−７の存在下、３ｎｇ／ｍｌの未変性ヒトＩＬ−１３と共に一晩インュベートした。上澄みを収集し、ＥＬＩＳＡによって、細胞外マトリックスタンパク質、テネイシンＣの生成に関して試験をした（図６Ａ）。ＭＪ２−７は、ＩＣ５０が約０．１ｎＭのときにこの応答を阻害した（図６Ｂ）。
【０３５９】
これらの結果は、ＭＪ２−７が、ＮＨＰ  ＩＬ−１３と未変性ヒトＩＬ−１３の両方に効果的な中和剤であることを実証している。ＭＪ２−７のＩＬ−１３中和能力は、ｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃの場合と同等である。ＮＪ１−６５もＩＬ−１３中和活性を有するが、ＭＪ２−７よりも約２０分の１の効力である。
【０３６０】
（実施例１７）
ＳＰＲによるＭＪ２−７抗体のエピトープマッピング
【０３６１】
ｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃを、標準的なアミンカップリングによってＣＭ５チップ上に直接被覆した。１００ｎＭ濃度のＮＨＰ−ＩＬ−１３を注入し、固定化したＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃとのその結合を、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって検出した。追加の注入分である１００ｎＭの抗ＩＬ−１３抗体をさらに添加し、結合の変化をモニタした。ＭＪ２−７抗体は、ｈｕＩＬ−１３Ｒα２と複合体を形成したときにＮＨＰ−ＩＬ−１３と結合しなかったのに対し、正の対照である抗ＩＬ−１３抗体は結合した（図７）。これらの結果は、ｈｕＩＬ−１３Ｒα２およびＭＪ２−７が、ＮＨＰ  ＩＬ−１３の同じかまたは重複エピトープに結合することを示している。
【０３６２】
（実施例１８）
ＮＨＰ−ＩＬ−１３とヒト化ＭＪ２−７Ｖ２−１１抗体との相互作用に関する動力学的速度定数の測定
【０３６３】
バイオセンサー面を調製するため、アミンカップリングを使用して、ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異的抗体を、研究グレードのカルボキシメチルデキストランチップ（ＣＭ５）に固定化した。この面を、０．１Ｍの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）および０．０５ＭのＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の混合物で活性化した。捕捉した抗体を、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）中に１０μｇ／ｍｌの濃度で注入した。残りの活性化基は、１．０Ｍのエタノールアミン（ｐＨ８．０）で遮断した。対照として、第１の流動細胞を、バルク屈折率、マトリックス効果、および非特異的結合を補正するための参照面として使用し、第２、第３、および第４の流動細胞を、捕捉分子で被覆した。
【０３６４】
動力学的分析では、１μｇ／ｍｌの溶液を４０μｌ注入することによって、モノクローナル抗体ｈＭＪ２−７Ｖ２−１１を抗ＩｇＧ抗体表面で捕捉した。ベースラインと、注入終了後約３０秒の時点との間での正味の差は、結合した標的の量を表すものと解釈した。６００、２００、６６．６、２２．２、７．４、２．５、０．８、０．２７、０．０９、および０ｎＭの濃度のＮＨＰ−ＩＬ−１３溶液を、２分間にわたり毎分１００μｌの流量で注入し、これと同じものを３重に形成し、結合した材料の量を時間の関数として記録した（図８）。解離相を、ＨＢＳ／ＥＰ緩衝液（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、および０．００５％（ｖ／ｖ）界面活性剤Ｐ２０を含有する）中で５分間、同じ流量でモニタし、その後、５μｌのグリシン、ｐＨ１．５を２回注入して、完全に活性な捕捉面を再生した。全ての動力学実験は、ＨＢＳ／ＥＰ緩衝液中で、２２．５℃で行った。ブランクおよび緩衝液の作用は、二重参照を使用して各センサーグラム（sensorgram）ごとに差し引いた。
【０３６５】
動力学的データを、１：１モデルに適用されたＢＩＡＥＶＡＬＵＡＴＩＯＮ（商標）ソフトウェア３．０．２を使用して分析した。見掛けの解離（ｋｄ）および会合（ｋａ）速度定数を、全体分析を使用してセンサーグラムの適切な領域から計算した。抗体とＮＨＰ  ＩＬ−１３との相互作用の親和性定数は、以下の式、すなわちＫｄ＝ｋｄ／ｋａによって、動力学的速度定数から計算した。これらの結果は、ｈｕＭＪ２−７Ｖ２−１１が、それぞれ２．０５×１０７Ｍ−１ｓ−１および８．８９×１０−４ｌ／ｓのオンおよびオフ速度を有し、その結果、ＮＨＰ−ＩＬ−１３に対して４３ｐＭの親和性を有する抗体が得られることを示している。
【０３６６】
（実施例１９）
バイオアッセイにおけるＭＪ２−７ヒト化中間体の阻害活性
【０３６７】
ヒト化プロセスにおける様々な中間体の阻害活性を、ＳＴＡＴ６リン酸化およびテネイシン生成バイオアッセイにより試験した。最大より下のレベルのＮＨＰ  ＩＬ−１３または未変性ヒトＩＬ−１３粗製製剤を使用して生体応答を引き出し、最大値の半分の応答阻害に必要なＭＪ２−７のヒト化変種の濃度を決定した。ヒトＩｇＧ１およびκ定常領域により発現したｈＭＪ２−７Ｖ１、ｈＭＪ２−７Ｖ２、およびｈＭＪ２−７Ｖ３の分析は、変種２が、未変性ヒトＩＬ−１３に対する中和活性を保持することを示した。未変性ヒトＩＬ−１３生物活性の最大値の半分を阻害するのに必要な、変種２ヒト化抗体のこの濃度は、マウスＭＪ２−７の場合よりも約１１０倍高かった（図９）。Ｖ１またはＶ２ＶＬをマウスＭＪ２−７ＶＨと組み合わせた半ヒト化形態の分析では、未変性ヒトＩＬ−１３中和活性の低下がヒト化ＶＬに起因するのではなく、ＶＨ配列に起因することを実証した（図１０）。ＶＬ  Ｖ１を有する半ヒト化ＭＪ２−７抗体は、中和活性をごく一部で保持するだけであるが、ヒト化ＶＬ  Ｖ２を有する変種は、親マウス抗体と同様に活性であった。したがって、一連の復帰突然変異をＶ１  ＶＨ配列に導入して、マウスＭＪ２−７の未変性ヒトＩＬ−１３中和活性を改善した。
【０３６８】
（実施例２０）
ＭＪ２−７はＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−１３Ｒα２とのＩＬ-１３相互作用を遮断する
【０３６９】
ＭＪ２−７は、未熟タンパク質（配列番号２４）のアミノ酸残基１１４〜１３２および成熟タンパク質（配列番号１４）の残基９５〜１１３に対応する、ＮＨＰ  ＩＬ−１３のＣ末端１９ｍｅｒに特異的である。ヒトＩＬ−１３では、タンパク質のＤαヘリックスの部分を形成するこの領域が、ＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−１３Ｒα２の両方に結合するのに重要な残基を含有することが報告されている。ヒトＩＬ−１３変異体の分析では、Ａ、Ｃ、およびＤヘリックスを、ＩＬ−１３Ｒα１／ＩＬ−４Ｒαシグナル伝達複合体に対して重要な接触部位を含むものであることが明らかにされた（ThompsonおよびDebinski (1999) J.Biol.Chem. 274:29944-50）。Ｄヘリックスのアラニン走査変異誘発では、残基Ｋ１２３、Ｋ１２４、およびＲ１２７（配列番号２４）が、ＩＬ−１３Ｒα２との相互作用の一因をなし、残基Ｅ１１０、Ｅ１２８、およびＬ１２２は、ＩＬ−１３Ｒα１に対して重要な接触部位であることが明らかにされた（Madhankmuar他, (2002) J.Biol.Chem. 277:43194-205）。ＮＭＲによって決定されたヒトＩＬ−１３の高分解溶液構造は、既知の構造の関連するリガンド−受容体対との類似性に基づいた、ＩＬ−１３結合相互作用を予測していた。これらのＮＭＲの研究は、ＩＬ−１３Ｒα１との重要な接触を作る際の、ＩＬ−１３  ＡおよびＤヘリックスの重要な役割を裏付けていた（Eisenmesser他, (2001) J.Mol.Biol. 310: 231-241; Moy他, (2001) J.Mol.Biol. 310:219-230）。ＭＪ２−７と、ＩＬ−１３のＣ末端Ｄヘリックスに位置付けられたこのエピトープとの結合は、ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−１３Ｒα２との相互作用を破壊すると予測した。
【０３７０】
ＭＪ２−７が、ＮＨＰ  ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−１３Ｒα２との結合を阻害できるか否かについて、ＥＬＩＳＡにより試験をした。組換え可溶性形態のヒトＩＬ−１３Ｒα１−ＦｃおよびＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃを、ＥＬＩＳＡプレート上に被覆した。ＦＬＡＧタグ付きＮＨＰ  ＩＬ−１３を、高濃度のＭＪ２−７の存在下で添加した。結果は、ＭＪ２−７が、ＮＨＰ  ＩＬ−１３との結合のために両方の可溶性受容体形態と競合することを示していた（図１１Ａおよび１１Ｂ）。これは、ＭＪ２−７によるＩＬ−１３生物活性の中和の基本を示している。
【０３７１】
（実施例２１）
ＭＪ２−７軽鎖ＣＤＲは抗原結合に寄与する
【０３７２】
３つの軽鎖ＣＤＲ領域全てがＭＪ２−７抗体とＮＨＰ  ＩＬ−１３との結合に必要か否かを評価するために、ＭＪ２−７ＶＬの２種の追加のヒト化変種をＣＤＲ移植によって構成した。ＶＬ変種３は、ヒト生殖細胞系クローンＤＰＫ１８に基づいて設計し、ヒト生殖細胞系クローンのＣＤＲ１およびＣＤＲ２とマウスＭＪ２−７抗体からのＣＤＲ３とを含んでいた（図１２）。第２の構成（ｈＭＪ２−７Ｖ４）では、ＭＪ２−７抗体のＣＤＲ１およびＣＤＲ２だけをＤＰＫ１８フレームワークに移植し、ＣＤＲ３は、無関係のマウスモノクローナル抗体から得た。
【０３７３】
ヒト化ＭＪ２−７Ｖ３およびＶ４を、ｈＭＪ２−７ＶＨＶ１とｈＭＪ２−７ＶＬＶ３およびＶ４とを組み合わせることによって、ＣＯＳ細胞内で生成した。抗体の抗原結合特性を、直接ＮＨＰ  ＩＬ−１３結合ＥＬＩＳＡによって検査した。ＭＪ２−７軽鎖ＣＤＲ３が存在しないｈＭＪ２−７は、ＮＨＰ  ＩＬ−１３に結合する能力を保持するのに対し、軽鎖内にヒト生殖細胞系ＣＤＲ１およびＣＤＲ２を含有するＶ３は、固定化されたＮＨＰ  ＩＬ−１３に結合しなかった。これらの結果は、ＭＪ２−７抗体軽鎖のＣＤＲ１およびＣＤＲ２が、この抗体の抗原結合特性に最も寄与している可能性があることを実証している。
【０３７４】
ｈＭＪ２−７  ＶＬ  Ｖ３のヌクレオチド配列
１    ＡＴＧＣＧＧＣＴＧＣ  ＣＣＧＣＴＣＡＧＣＴ  ＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧ  ＣＴＧＡＴＧＣＴＧＴ  ＧＧＧＴＧＣＣＣＧＧ  
５１    ＣＴＣＴＴＣＣＧＧＣ  ＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡ  ＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣ  ＣＣＣＴＣＴＧＴＣＴ  ＣＴＧＣＣＣＧＴＧＡ  
１０１    ＣＣＣＴＧＧＧＣＣＡ  ＧＣＣＣＧＣＴＴＣＴ  ＡＴＣＴＣＴＴＧＣＣ  ＧＧＴＣＣＴＣＣＣＡ  ＧＴＣＣＣＴＧＧＴＧ  
１５１    ＴＡＣＴＣＣＧＡＣＧ  ＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡ  ＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧ  ＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡ  ＧＡＣＣＣＧＧＣＣＡ  
２０１    ＧＴＣＴＣＣＴＣＧＧ  ＣＧＧＣＴＧＡＴＣＴ  ＡＣＡＡＧＧＴＧＴＣ  ＣＡＡＣＣＧＣＴＴＴ  ＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣ  
２５１    ＣＣＧＡＴＣＧＧＴＴ  ＣＴＣＣＧＧＣＴＣＣ  ＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡ  ＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣ  ＣＣＴＧＡＡＧＡＴＣ  
３０１    ＡＧＣＣＧＣＧＴＧＧ  ＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡ  ＴＧＴＧＧＧＣＧＴＧ  ＴＡＣＴＡＣＴＧＣＴ  ＴＣＣＡＧＧＧＣＴＣ  
３５１    ＣＣＡＣＡＴＣＣＣＴ  ＴＡＣＡＣＣＴＴＴＧ  ＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣ  ＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧ  ＡＴＣＡＡＧ  
（配列番号１８９）
【０３７５】
ｈＭＪ２−７  ＶＬ  Ｖ３のアミノ酸配列
2011225574.tif 000031
【０３７６】
ｈＭＪ２−７  ＶＬ  Ｖ４のヌクレオチド配列
ＧＡＴＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＣＣＴＧＴＣＡＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣ
ＡＴＣＴＣＴＴＧＣＡＧＡＴＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＧＴＧＣＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧ
ＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＡＣＣＧＡＴＴＴ
ＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＣＡＡＧＡＴＣ
ＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＴＴＴＣＡＡＡＧＴＴＣＡＣＡＴＧＴＴＣＣＴ
ＣＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＴＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ（配列番号１９１）
【０３７７】
ｈＭＪ２−７  ＶＬ  Ｖ４のアミノ酸配列
2011225574.tif 000032
【０３７８】
当業者なら、日常的な実験法しか使用せずに、本明細書に記述される特定の実施形態の多くの均等物を理解し、または確かめることができるであろう。その他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。
【図１Ａ】
2011225574.tif 000033
【図１Ｂ】
2011225574.tif 000034
【図２】
2011225574.tif 000035
【図３】
2011225574.tif 000036
【図４】
2011225574.tif 000037
【図５】
2011225574.tif 000038
【図６Ａ】
2011225574.tif 000039
【図６Ｂ】
2011225574.tif 000040
【図７】
2011225574.tif 000041
【図８】
2011225574.tif 000042
【図９】
2011225574.tif 000043
【図１０】
2011225574.tif 000044
【図１１】
2011225574.tif 000045
【図１２】
2011225574.tif 000046
【図１３Ａ】
2011225574.tif 000047
【図１３Ｂ】
2011225574.tif 000048
【配列表】
2011225574000001.app