(57)【要約】【課題】人体の部位の再形成のため三次元人工器官を提供することである。【解決手段】耳介、鼻、咽頭、喉頭、気管、関節、眼窩、心臓弁、乳頭、臍、内臓とそれらの部分、及び二次生殖器官からなる群から選ばれる複雑形状である人体部分の形状をとる三次元人工器官において、前記三次元人工器官は本質的に繊維質又は多孔質構造を有しており且つ少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体を含んでいる少なくとも一つの三次元基質より成っており、前記三次元基質の少なくとも二つを含む場合の前記人工器官は、該三次元基質の第一が第二及び可能なそれ以上の基質を包含する及び／又はこれに接着されており、  少なくとも前記ヒアルロン酸誘導体が、ヒアルロン酸のエステル類、架橋エステル、架橋化合物、第４級アンモニウムのような特定のヒアルロン酸誘導体である三次元人工器官。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
耳介、鼻、咽頭、喉頭、気管、関節、眼窩、心臓弁、乳頭、臍、内臓とそれらの部分、及び二次生殖器官からなる群から選ばれる複雑形状である人体部分の形状をとる三次元人工器官において、
前記三次元人工器官は本質的に繊維質又は多孔質構造を有しており且つ少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体を含んでいる少なくとも一つの三次元基質より成っており、
前記三次元基質の少なくとも二つを含む場合の前記人工器官は、該三次元基質の第一が第二及び可能なそれ以上の基質を包含する及び／又はこれに接着されており、
少なくとも前記ヒアルロン酸誘導体が、
−カルボキシ機能基の一部又は全部が、脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸のエステル類、
−カルボキシ基の一部又は全部が、同じ又は異なった多糖鎖又はその他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エステル、
−カルボキシ基の一部又は全部が、スペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸の架橋化合物、
−ヒアルロン酸の一部又は全エステルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、
−Ｏ−硫酸処理又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸誘導体の部分的又は全エステル、及び
−ヒアルロン酸又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸、Ｏ−硫酸処理したヒアルロン酸、ヒアルロン酸及び必要に応じて部分的な重金属塩と琥珀酸のヘミエステルからなる群より選ばれたヒアルロン酸誘導体の第４級アンモニウム塩、
からなる群より選ばれる、上記三次元人工器官。
【請求項２】
耳介、鼻、鼻中隔、咽頭、喉頭、気管、関節、骨格構造、眼窩、心臓弁、血管、乳頭、臍、内臓とそれらの部分、及び二次生殖器官からなる群から選ばれる人体部分の形状をとる三次元人工器官において、
前記三次元人工器官は本質的に繊維質構造を有しており且つ少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体を含んでいる少なくとも一つの三次元基質より成っており、
前記三次元基質の少なくとも二つを含む場合の前記人工器官は、該三次元基質の第一が第二及び本質的に繊維質又は多孔質構造を有する可能なそれ以上の基質を包含する及び／又はこれに接着されており、
少なくとも前記ヒアルロン酸誘導体が、
−カルボキシ機能基の一部又は全部が、脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸のエステル類、
−カルボキシ基の一部又は全部が、同じ又は異なった多糖鎖又はその他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エステル、
−カルボキシ基の一部又は全部が、スペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸の架橋化合物、
−ヒアルロン酸の一部又は全エステルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、
−Ｏ−硫酸処理又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸誘導体の部分的又は全エステル、及び
−ヒアルロン酸又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸、Ｏ−硫酸処理したヒアルロン酸、ヒアルロン酸及び必要に応じて部分的な重金属塩と琥珀酸のヘミエステルからなる群より選ばれたヒアルロン酸誘導体の第４級アンモニウム塩、
からなる群より選ばれる、上記三次元人工器官。
【請求項３】
前記三次元基質の少なくとも一つは、二次元的に孔のあいた基質を包含する及び／又は接着されており且つヒアルロン酸誘導体を含有している、請求項１又は２に記載の三次元人工器官。
【請求項４】
Ａ１．本質的に繊維質構造を有している三次元基質、
Ａ２．本質的に多孔質構造を有している三次元基質、
Ａ３．二次元的に孔のあいた基質、からなる群より選ばれた基質（Ａ）より成っており、前記基質（Ａ）が：
Ｂ．（Ａ）が（Ａ１）又は（Ａ３）である場合に本質的に多孔質構造を有している三次元基質、
Ｃ．（Ａ）が（Ａ２）又は（Ａ３）である場合に本質的に繊維質構造を有している三次元基質、
Ｄ．（Ａ）が（Ａ１）又は（Ａ２）である場合に二次元的に孔のあいた基質、
からなる群より選ばれた基質を包含するか又は接着されていて、前記基質（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）が少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体より成っている、請求項３に記載の三次元人工器官。
【請求項５】
更に、自己又は内生の成熟又は間葉細胞、又は間葉と成熟細胞型とは別の型との複合システムからなる群より選ばれた細胞より成っている、請求項１−４の何れか１つに記載の三次元人工器官。
【請求項６】
更に、天然、半合成及び合成重合体より成っている、請求項１−５の何れか１つに記載の三次元人工器官。
【請求項７】
天然重合体が、コラーゲン、コラーゲンとグリコサミノグリカンの共沈殿物、セルロース、キチンのようなゲル形態の多糖類、キトサン、ペクチン又はペクチン酸、寒天、アガロース、キサンタン、ゲラン、アルギン酸又はアルギン酸塩、ポリマンナン又はポリグリカン、澱粉、天然ゴムからなる群より選ばれる、請求項６に記載の三次元人工器官。
【請求項８】
半合成重合体が、アルデヒド類又は同じくそれらの前駆体のような薬剤と架橋したコラーゲン、ジカルボン酸又はそれらのハロゲン化物、ジアミン類、セルロースの誘導体、ヒアルロン酸、キチン又はキトサン、ゲラン、キサンタン、ペクチン又はペクチン酸、ポリグリカン、ポリマンナン、寒天、アガロース、天然ゴム及びグリコサミノグリカンからなる群より選ばれる、請求項６に記載の三次元人工器官。
【請求項９】
合成重合体が、ポリ乳酸、ポリグリコール酸又は同共重合体又はそれらの誘導体、ポリジオキサン、ポリホスファゼン、ポリスルホン酸樹脂、ポリウレタン、ＰＴＦＥからなる群より選ばれる、請求項６に記載の三次元人工器官。
【請求項１０】
前記基質（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）及び（Ｄ）の少なくとも一つが少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体より成っている、請求項４−９の何れか一つに記載の三次元人工器官。
【請求項１１】
前記基質Ａ１とＣが網目又は不織薄布からなる群より選ばれる、請求項４に記載の三次元人工器官。
【請求項１２】
基質（Ａ２）と（Ｂ）が凍結乾燥工程により得られる、請求項４−１１の何れか１つに記載の三次元人工器官。
【請求項１３】
前記二次元的に孔のあいた基質が連続構造を有している二次元膜を穿孔することにより得られる、請求項３に記載の三次元人工器官。
【請求項１４】
前記ヒアルロン酸エステルがベンジルエステルである、請求項１又は２に記載の三次元人工器官。
【請求項１５】
薬学的又は生物学的な活性物質と関連する請求項１−１４の何れか１つに記載の三次元人工器官。
【請求項１６】
薬学的又は生物学的な活性物質が、抗炎症剤、抗生物質、成長因子、抗有糸分裂剤、抗菌剤、抗ウイルス剤からなる群より選ばれる、請求項１５に記載の三次元人工器官。
【請求項１７】
人体又は動物体の部位の再形成のための請求項１−１６の何れか１つに記載の三次元人工器官。
【請求項１８】
前記人体の部位が耳介である、請求項１又は２に記載の三次元人工器官。
【請求項１９】
前記人体の部位が指骨関節又は顎関節である、請求項１又は２に記載の三次元人工器官。
【請求項２０】
一般、内科、耳鼻咽喉科、形成、美容、腫瘍学、整形外科、心臓血管、婦人科及び腹部外科と神経外科で使用する請求項１−１９の何れか１つに記載の三次元人工器官。
【請求項２１】
基質ＡがＡ１であって且つ前記基質が基質Ｂを包含していて、以下の段階：
−ａ）型をヒアルロン酸誘導体より成っている不織薄布で内張りする、
−ｂ）型の中の前記不織薄布にヒアルロン酸の第４級アンモニウム塩又は請求項１又は２で規定されたようなヒアルロン酸誘導体の水溶液を含浸させる、
−ｃ）それにより請求項１又は２で規定されたようなアンモニウム塩より成っている基質Ｂを包含した基質Ａ１を有している人工器官を得るのに型の中身を凍結乾燥させる、
−ｄ）段階（ｃ）から出来た人工器官に含まれるアンモニウム塩を請求項１又は２で規定されたものから選ばれたヒアルロン酸誘導体で必要に応じて変換する、
−ｅ）（ｄ）から出来た製品を凍結乾燥させる、
より成っている、請求項４に記載の三次元人工器官を調製する方法。
【請求項２２】
基質ＡがＡ２であるか又はそれが請求項２１に記載の工程の段階（ｃ）又は（ｄ）の製品であって且つ基質Ｃに接着されており、以下の段階：
−ａ’）請求項１又は２で規定されたのと同一か又は異なった凍結乾燥された第４級アンモニウム塩に請求項１で規定されたような第４級アンモニウム塩の水溶液の薄層を塗布する、
−ｂ’）段階（ａ’）から出来た混合物にヒアルロン酸誘導体より成っている不織薄布の層を接着する、
−ｃ’）それにより基質ＡがＡ２であって且つ基質Ｃを接着している請求項１又は２で規定されたようなアンモニウム塩より成る人工器官を得るのに段階（ｂ’）から出来た混合物を凍結乾燥する、
−ｄ’）段階（ｃ’）から出来た人工器官に含まれるアンモニウム塩を請求項１又は２で規定されたものから選ばれたヒアルロン酸誘導体で必要に応じて変換する、
−ｅ’）（ｄ’）から出来た製品を凍結乾燥させる、
より成っている、請求項４に記載の三次元人工器官を調製する方法。
【請求項２３】
基質ＡがＡ２であるか又はそれが請求項２１に記載の工程の段階（ｃ）又は（ｄ）の製品であって且つ基質Ｃに接着されており、以下の段階：
−ａ”）請求項１又は２で規定されたものから選ばれている前記ヒアルロン酸誘導体に、適当な水性又は有機溶媒中のヒアルロン酸誘導体の溶液の薄層を塗布する、
−ｂ”）段階（ａ”）から出来た凍結乾燥した製品にヒアルロン酸誘導体より成っている不織薄布を当てる、
−ｃ”）（ｂ”）から出来た製品を凍結乾燥させる、
より成っている、請求項４に記載の三次元人工器官を調製する方法。
【請求項２４】
ヒアルロン酸誘導体より成っている少なくとも一つの多孔質基質を含んでいて、以下の段階：
ａ”’）再生されるべき人体部位の形状を有している型の中に請求項１又は２で規定されたような第４級アンモニウム塩の水溶液を注入する、
ｂ”’）型の中の水溶液を凍結乾燥させる、
ｃ”’）型から凍結乾燥した製品を分離して凍結乾燥したアンモニウム塩を請求項１又は２で規定したようなものから選ばれた少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体に変換する。
ｄ”’）型の中で前述の段階から出来た製品を凍結乾燥させる、
より成っている、請求項１又は２に記載の三次元人工器官を調製する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、三次元人工器官とそれらの調製方法を記述する。
【０００２】
本発明の三次元人工器官は、単独で又は薬学的又は生物学的な活性物質と共同して使用することが出来る、そしてそれ自体として使用でき又は細胞培養のための足場として作用できる。前記三次元人工器官は、人体又は動物体の部位の再形成のため、外科又は神経外科に有用である。
【背景技術】
【０００３】
移植を目的とした人工器官は、通常、合成物質又は天然の、処理された物質で作られる。
【０００４】
外傷の程度のせいで自己組織による回復が不可能な腹壁のような体壁の損傷は、例えば合成網目により治療される。
【０００５】
実際、外傷を受けた腹壁を補強又は回復させる人工器官に通常使用される物質は、タンタルガーゼ、ステンレス鋼の網目、ポリプロピレンの薄織物、微孔性ｅ−ＰＴＦＥ、ポリガラクチン９１０、ポリエステル、ポリグリコール酸、架橋された牛の心膜である。
【０００６】
然し、合成重合体又は金属から作られた心臓血管又は骨の人工器官のような代用の人工器官を移植することにより損傷した組織又は損なわれた器官の満足のゆく回復を得る日付を推定することは不可能であった。
【０００７】
事実、これらのタイプの人工器官は、宿主に炎症性反応を誘発する傾向があり、これらは希に容易に周囲の微小環境と結合するし、これらは繊維組織形成の原因となり又これらは機械的な摩滅や裂け目を受けがちであり、それで定期検診を必要とする。
【０００８】
一つの代るべき方法は、自己の組織又は器官、又はより屡々同種又は異種のそれでさえ移植することである。この解決法は、免疫性反応、感染及び提供者の死のような様々な欠点を持っている。
【０００９】
最近、組織工学として知られる新しい生体医学的診療が基盤を得てきた。この手法により、生体のそれらに類似の組織が小さな生検により細胞を取り出して、生分解性足場上でそれらを培養して増殖しそれらを拡張して得ることができる。例えば、皮膚、軟骨及び骨のような組織は、試験管内で創出されそこで患者に移植される（ＥＰ０４６２４２６，ＷＯ９７／１８８４２）。
【００１０】
再形成技術の改良研究が進行中の他の組織は、耳、鼻、乳首、唇及び胸のような人体の見える部分又は付属物のそれである。
【００１１】
大きさ、形又は位置の何れの非対称も即座に目立つ、耳の解剖学的位置と連係した難しさのせいで耳介を再形成し、日付を決めることは特に難しいことが判ってきた。その上、皮膚で覆われた不規則な形状の軟骨の複雑な形態を再生させることは困難である。
【００１２】
外傷の重症度に従って、様々な技術が耳の再形成に用いられている。
【００１３】
耳のほんの一部が切断された場合、同じ耳の一部又は周りの組織が損傷した部分を再形成するのに使用される、又は肋間軟骨の部分が患部に移植されて近辺の皮膚の細片で覆われる、そうして移植は血管を新生することが出来る。
【００１４】
耳介が殆ど完全に切断された時には、合成耳介人工器官が使用できる。然し、これらは毎日の介護の必要性、人工器官と直接接触するせいと患部でそれらを固定するのに必要とされる強力接着剤のせいの両方による周囲の皮膚の損傷のような、数多くの不利な点を有する。然し、或種の人工器官は、直接骨の中に移植される。
【００１５】
もう一つの再形成法は、増量剤により未だ利用可能な組織の量を増やすことより成る。
【００１６】
最後に、数ヶ月の治療後にだけ許容できる結果を与える、数段階に分けて別々の時に行われる非常に複雑な外科的技術が時々使用される。
【００１７】
略言すると、この技術は患者から肋間軟骨の一部を取り出してそれを外耳に似た形に形成することより成る。軟骨は、通常、最初それに血管が新生するために前腕又は背中の皮下に移植され、再調のために数回切除される。
【００１８】
移植組織が十分な成熟段階に達した時、それは耳の患部に移植されて近辺の皮膚の細片で覆われる。
【００１９】
最後に、患者は移植組織の美容性を改良するために更なる手術を受けねばならない。
【００２０】
患者にそうした多くの色々な手術を行わねばならない欠点に加えて、この技術は、そのより少ない弾性のような耳のそれとは違った特性を持つ肋間軟骨の使用を含んでいる。
【００２１】
不幸にも、これらの人工器官は屡々効果が無くて汎發性壊死及び移植不全の点まで退化する、又はより希には、軟骨が骨の組織に変換し得る（石灰化）。
【００２２】
それ故、斯かる人工器官用の理想的物質は、化学的に不活性で、非発癌性、機械的ストレスに耐えることが出来て且つ望みの形態に形成でき、滅菌可能、組織液による物理的変異を起しにくいものであり、これらは炎症性、免疫学的、アレルギー又は過敏症反応を誘発してはならない又これらは内臓の癒着を促してはならない（Ｊｅｎｋｉｎｓ Ｓ．Ｄ． ほか、Ｓｕｒｇｅｒｙ９４（２）；３９２−３９８，１９８３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】欧州特許第０４６２４２６号明細書
【特許文献２】国際公開第９７／１８８４２号パンフレット
【特許文献３】欧州特許第０２１６４５３号明細書
【特許文献４】欧州特許第０３４１７４５号明細書
【特許文献５】欧州特許第０２６５１１６号明細書
【特許文献６】国際公開第９６／３５７２０７号パンフレット
【特許文献７】国際公開第９５／２５７５１号パンフレット
【特許文献８】国際公開第９８／０４５３３５号パンフレット（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０１９７３）
【特許文献９】米国特許第５５２０９１６号明細書
【非特許文献】
【００２４】
【非特許文献１】Ｊｅｎｋｉｎｓ Ｓ．Ｄ．ほか、Ｓｕｒｇｅｒｙ９４（２）；３９２−３９８，１９８３
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２５】
本発明は、耳介、鼻、咽頭、喉頭、気管、関節、眼窩、心臓弁、乳頭、臍、内臓とそれらの部分、及び二次生殖器官からなる群から選ばれる複雑形状である人体部分の形状をとる三次元人工器官において、
前記三次元人工器官は本質的に繊維質又は多孔質構造を有しており且つ少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体を含んでいる少なくとも一つの三次元基質より成っており、
前記三次元基質の少なくとも二つを含む場合の前記人工器官は、該三次元基質の第一が第二及び可能なそれ以上の基質を包含する及び／又はこれに接着されており、
少なくとも前記ヒアルロン酸誘導体が、
−カルボキシ機能基の一部又は全部が、脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸のエステル類、
−カルボキシ基の一部又は全部が、同じ又は異なった多糖鎖又はその他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エステル、
−カルボキシ基の一部又は全部が、スペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸の架橋化合物、
−ヒアルロン酸の一部又は全エステルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、
−Ｏ−硫酸処理又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸誘導体の部分的又は全エステル、及び
−ヒアルロン酸又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸、Ｏ−硫酸処理したヒアルロン酸、ヒアルロン酸及び必要に応じて部分的な重金属塩と琥珀酸のヘミエステルからなる群より選ばれたヒアルロン酸誘導体の第４級アンモニウム塩、
からなる群より選ばれる、上記三次元人工器官。
【００２６】
また、本発明は、耳介、鼻、鼻中隔、咽頭、喉頭、気管、関節、骨格構造、眼窩、心臓弁、血管、乳頭、臍、内臓とそれらの部分、及び二次生殖器官からなる群から選ばれる人体部分の形状をとる三次元人工器官において、
前記三次元人工器官は本質的に繊維質構造を有しており且つ少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体を含んでいる少なくとも一つの三次元基質より成っており、
前記三次元基質の少なくとも二つを含む場合の前記人工器官は、該三次元基質の第一が第二及び本質的に繊維質又は多孔質構造を有する可能なそれ以上の基質を包含する及び／又はこれに接着されており、
少なくとも前記ヒアルロン酸誘導体が、
−カルボキシ機能基の一部又は全部が、脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸のエステル類、
−カルボキシ基の一部又は全部が、同じ又は異なった多糖鎖又はその他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エステル、
−カルボキシ基の一部又は全部が、スペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸の架橋化合物、
−ヒアルロン酸の一部又は全エステルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、
−Ｏ−硫酸処理又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸誘導体の部分的又は全エステル、及び
−ヒアルロン酸又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸、Ｏ−硫酸処理したヒアルロン酸、ヒアルロン酸及び必要に応じて部分的な重金属塩と琥珀酸のヘミエステルからなる群より選ばれたヒアルロン酸誘導体の第４級アンモニウム塩、
からなる群より選ばれる、上記三次元人工器官。
【００２７】
前記三次元人工器官は、更に、自己又は内生の成熟又は間葉細胞、又は間葉と成熟細胞型の別の型との複合システムからなる群より選ばれた細胞より成っている。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
好ましい実施例に従って、本発明の人工器官は：
Ａ１．本質的に繊維質構造を有している三次元基質、
Ａ２．本質的に多孔質構造を有している三次元基質、
Ａ３．二次元的に孔のあいた基質、からなる群より選ばれた基質（Ａ）より成っており、前記基質（Ａ）が：
Ｂ．（Ａ）が（Ａ１）又は（Ａ３）である場合に本質的に多孔質構造を有している三次元基質、
Ｃ．（Ａ）が（Ａ２）又は（Ａ３）である場合に本質的に繊維質構造を有している三次元基質、
Ｄ．（Ａ）が（Ａ１）又は（Ａ２）である場合に二次元的に孔のあいた基質、
からなる群より選ばれた基質を包含している及び／又は接着されていて、前記基質（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）は少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体より成っている。
【００２９】
本発明に従う三次元人工器官の調製に使用されるヒアルロン酸誘導体のうち、次のものは選択範囲の一つである：
カルボキシ機能基の一部又は全部が脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式、複素環式系列のアルコール類（ＥＰ０２１６４５３Ｂ１参照によって完全に取込まれている）と、特にベンジルアルコールと、エステル化されたヒアルロン酸のエステル類；
カルボキシ基の一部又は全部が同じ多糖鎖又は他の鎖のアルコール機能基（ＥＰ０３４１７４５Ｂ１参照によって完全に取込まれている）とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エステル；
カルボキシ基の一部又は全部がスペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式、複素環式系列のポリアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸の架橋化合物（ＥＰ０２６５１１６Ｂ１参照によって完全に取込まれている）；
ヒアルロン酸と又はヒアルロン酸の部分的又は全エステルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩（ＷＯ９６／３５７２０７参照によって完全に取込まれている）；
Ｏ−硫酸処理した誘導体（ＷＯ９５／２５７５１参照によって完全に取込まれている）又はＮ−硫酸処理した誘導体（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０１９７３参照によって完全に取込まれている）；
ヒアルロン酸又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸、Ｏ−硫酸処理したヒアルロン酸、ヒアルロン酸及び必要に応じて部分的な重金属塩と琥珀酸のヘミエステルからなる群より選ばれたヒアルロン酸誘導体の、テトラブチルアンモニウム及びフェニルトリメチルアンモニウムとの塩のような、第４級アンモニウム塩。
【００３０】
本発明に従う人工器官に含まれる本質的に繊維質構造を有している基質（Ａ１）と（Ｃ）は、不織薄布の形態又は網目の形態であるのが好ましい。
【００３１】
ヒアルロン酸誘導体を含んでいる不織薄布は、我々がここで完全に参照に取り入れている米国特許ＵＳ５５２０９１６に記されているように調製される。
【００３２】
斯かる人工器官はどんなに複雑であっても、どんな形にも容易に作られる利点を持つ、そして更に使用されるヒアルロン酸誘導体の化学構造に従って且つエステル化の程度に従って、再形成されるべき領域の必要条件に従って調整できる引張り強度と劣化時間を所有する利点を持つ。
【００３３】
前記人工器官は、天然、半合成及び合成重合体の結合を含んでもよい。
【００３４】
使用できる天然重合体は、例えば、コラーゲン、コラーゲンとグリコサミノグリカンの共沈殿物、セルロース、キチンのようなゲル形態の多糖類、キトサン、ペクチン又はペクチン酸、寒天、アガロース、キサンタン、ゲラン、アルギン酸又はアルギン酸塩、ポリマンナン又はポリグリカン、澱粉、天然ゴムである。
【００３５】
半合成重合体は、例えば、アルデヒド類又は同じくそれらの前駆体のような薬剤と架橋したコラーゲン、ジカルボン酸又はそれらのハロゲン化物、ジアミン類、セルロースの誘導体、ヒアルロン酸、キチン、キトサン、ゲラン、キサンタン、ペクチン又はペクチン酸、ポリグリカン、ポリマンナン、寒天、アガロース、天然ゴム、グリコサミノグリカンからなる群より選ぶことが出来る。
【００３６】
最後に、使用できる合成重合体の例は、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸又は同共重合体又はそれらの誘導体、ポリジオキサン、ポリホスファゼン、ポリスルホン酸樹脂、ポリウレタン、ＰＴＦＥである。
【００３７】
本発明に従う人工器官は、ヒアルロン酸誘導体により構成されているので、それらはそれらの表面上で組織の再生と細胞の成長を刺激することが出来る。
【００３８】
実に、前記人工器官は損傷を受けた又は外傷に伴って損失した又は先天性欠陥の結果としての人体又は動物体の部位の再形成のための細胞培養用そのもの又は足場として使用できる。
【００３９】
前者の場合、内生細胞は生体内で人工器官に転移増殖する、一方後者の場合自己細胞は組織移植の前に人工器官の上で培養される。
【００４０】
それは又望まれる細胞株の中で分化させられ得る成熟又は間葉細胞を培養することも可能である；様々な細胞型の複雑システムも培養できる。
【００４１】
本発明に従う人工器官は、抗炎症剤、抗生物質、成長因子、抗有糸分裂剤、抗菌剤及び抗ウイルス剤のような、薬学的又は生物学的活性物質を含んでもよい。
【００４２】
単独で又は細胞培養を含んでいる前記製品は、一般、内科、耳鼻咽喉科、形成、美容、腫瘍学、整形外科、心臓血管、婦人科及び腹部外科と神経外科で使用できる。
【００４３】
人工器官によって再形成できる人体の部位は、例えば、耳介、鼻、鼻中隔、咽頭、喉頭、気管、指関節のような関節、顎関節、骨格構造及び、更に、眼窩、心臓弁、血管、乳頭、臍、内臓とそれらの部分及び二次生殖器官である。
【００４４】
耳介のような複雑な形態を持つ人体部位の再形成の場合には、製品は以下の必要条件に合致せねばならない：
それは再形成されるべき部分と同じ解剖学的形状であって、且つ患者用に正確なサイズであらねばならない；
それは細胞が人工器官の形態にそれら自身で適合しながら増殖できる表面を持たねばならない；
それらは生分解性であって且つ同時に足場の構造はそれが形成されるべき新組織を取得するまでの間は同じに留まることを保証せねばならない。
【００４５】
体液又は細胞培養溶液に接触した時に急速に分解しないで且つ上記必要条件に合致する、少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体により構成される複雑な形態を持つ工業的レベルの人工器官を生産するためには、ヒアルロン酸誘導体の分子間の化学物理的相互作用を確立することにより、従って人工器官が望みの形にしっかりと定着する、革新的作業工程を案出することが必要であった。
【００４６】
特に、基質ＡがＡ１であって且つ前記基質が基質Ｂを包含する時、本発明の工程は以下の段階より成る：
−ａ）ヒアルロン酸誘導体より成っている不織薄布の層で型を内張りする、
−ｂ）前記型の中の不織薄布にヒアルロン酸又はＯ−硫酸処理したヒアルロン酸又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸のようなヒアルロン酸誘導体の第４級アンモニウム塩、琥珀酸及び必要に応じてそれらの重金属塩とヒアルロン酸とのヘミエステルの水溶液を含浸させる、
−ｃ）例えば、ヒアルロン酸のテトラブチルアンモニウム塩又はヒアルロン酸のフェニルトリメチルアンモニウム塩、又はＯ−硫酸処理したヒアルロン酸又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸のようなヒアルロン酸誘導体のアンモニウム塩、琥珀酸及び必要に応じてそれらの重金属塩とヒアルロン酸とのヘミエステルより成っている基質Ｂを包含している基質Ａ１を有している人工器官を得るために型の中身を凍結乾燥させる、
−ｄ）段階（ｃ）から出来た人工器官に含まれるアンモニウム塩を脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコール類とヒアルロン酸の部分的又は全エステル、カルボキシ基の一部又は全部が同じ又は異なる多糖鎖又は他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エステル、カルボキシ基の一部又は全部がスペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸の架橋誘導体、ヒアルロン酸の部分的又は全エステルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、Ｎ−硫酸処理された又はＯ−硫酸処理されたヒアルロン酸の部分的又は全エステルから選ばれたヒアルロン酸誘導体で必要に応じて変換する、
−ｅ）（ｄ）から出来た製品を必要に応じて凍結乾燥させる；
【００４７】
基質ＡがＡ２又は前述の工程の上に規定された段階ｃ又はｄから得られた製品であって且つ基質Ｃに接着される時、工程は以下の段階より成る：
−ａ’）ヒアルロン酸又はＯ−硫酸処理したヒアルロン酸（ＷＯ９５／２５７５１）又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０１９７３）、琥珀酸及び必要に応じてその重金属塩とヒアルロン酸のヘミエステル（ＷＯ９６／３５７２０７）から選ばれた誘導体の第４級アンモニウム塩の水溶液の薄い層を同一か又は異なる凍結乾燥した第４級アンモニウム塩に塗布する、
−ｂ’）段階（ａ’）から出来た混合物にヒアルロン酸誘導体より成っている不織薄布の層を接着する、
−ｃ’）基質ＡがＡ２であって且つ基質Ｃに接着しているヒアルロン酸又はＯ−硫酸処理したヒアルロン酸（ＷＯ９５／２５７５１）又はＮ−硫酸処理したヒアルロン酸（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０１９７３）のような未だエステル化されてないそれの誘導体、琥珀酸及び必要に応じてにその重金属塩とヒアルロン酸のヘミエステル（ＷＯ９６／３５７２０７）の第４級アンモニウム塩のようなアンモニウムから成る人工器官を得るために段階（ｂ’）から出来た混合物を凍結乾燥させる、
−ｄ’）段階（ｃ’）から出来た人工器官に含まれるアンモニウム塩を脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコール類とヒアルロン酸の部分的又は全エステル、カルボキシ基の一部又は全部が同じ又は異なる多糖鎖又は他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エステル、カルボキシ基の一部又は全部がスペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸の架橋誘導体、ヒアルロン酸の部分的又は全エステルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、Ｎ−硫酸処理された又はＯ−硫酸処理されたヒアルロン酸の部分的又は全エステルから選ばれたヒアルロン酸誘導体で必要に応じて変換する、
−ｅ’）（ｄ’）から出来た製品を必要に応じて凍結乾燥させる；
【００４８】
また、基質ＡがＡ２又は最初の工程から来ている上記に規定された段階ｃ又はｄから得られた製品であって且つ基質Ｃに接着される時、工程は以下の段階より成る：
−ａ”）適当な水又はＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）のような有機溶媒中のヒアルロン酸誘導体の溶液の薄い層を塗布する、前記ヒアルロン酸誘導体は脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコールとヒアルロン酸の部分的又は全エステル、カルボキシ基の一部又は全部が同じ又は異なる多糖鎖又は他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エステル、カルボキシ基の一部又は全部がスペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸の架橋誘導体、ヒアルロン酸の部分的又は全エステルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、Ｎ−硫酸処理された又はＯ−硫酸処理されたヒアルロン酸の部分的又は全エステルから選ばれている、
−ｂ”）段階（ａ”）から出来た凍結乾燥された製品にヒアルロン酸誘導体より成っている不織薄布を貼り付ける、
−ｃ”）段階（ｂ”）から出来た製品を凍結乾燥させる。
【００４９】
本発明に従う人工器官がヒアルロン酸誘導体より成っている少なくとも一つの多孔性基質を含む場合には、工程は以下の段階より成る：
ａ”’）再形成されるべき人体部位の形状を有している型の中にヒアルロン酸の又はＯ−硫酸処理したヒアルロン酸、Ｎ−硫酸処理したヒアルロン酸、及び琥珀酸と必要に応じてその重金属塩とヒアルロン酸のヘミエステルから選ばれた誘導体の第４級アンモニウム塩の水溶液を注入する、
ｂ”’）型の中の水溶液を凍結乾燥させる、
ｃ”’）凍結乾燥した製品を型から分離して凍結乾燥したアンモニウム塩を脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のアルコール類とヒアルロン酸の部分的又は全エステル、カルボキシ基の一部又は全部が同じ又は異なる多糖鎖又は他の鎖のアルコール機能基とエステル化されたヒアルロン酸の架橋エステル、カルボキシ基の一部又は全部がスペース鎖によって架橋を生成している脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式又は複素環式系列のポリアルコール類とエステル化されたヒアルロン酸の架橋誘導体、ヒアルロン酸の部分的又は全エステルと琥珀酸のヘミエステル又は琥珀酸のヘミエステルの重金属塩、Ｎ−硫酸処理された又はＯ−硫酸処理されたヒアルロン酸の部分的又は全エステルから選ばれた少なくとも一つのヒアルロン酸誘導体に変換する、
ｄ”’）型の中の前述の段階から出来た製品を凍結乾燥させる。
【実施例】
【００５０】
実施例１
ヒアルロン酸のフェニルトリメチルアンモニウム塩の調製法
６９グラムのヒアルロン酸ナトリウムが４ｌの水に溶解させられて予めテトラブチルアンモニウム中にドウェックス樹脂（Ｄｏｗｅｘ  Ｒｅｓｉｎ）Ｍ１５を充たしたカラムを通過させられる。これは凍結乾燥させられ、その後１００ｇのヒアルロン酸テトラブチルアンモニウム塩が得られる。
【００５１】
１５０グラムのヒアルロン酸テトラブチルアンモニウム塩（ＨＡＴＢＡ）と２２５ｇの塩化フェニルトリメチルアンモニウムが、２ｌの水と３ｌのアセトンにより構成された混合液（４０／６０混合液）に溶解させられる。
【００５２】
１５リットルのアセトンが添加され、そしてヒアルロン酸フェニルトリメチルアンモニウム塩の沈殿物が得られる。
【００５３】
沈殿物はアセトンで数回洗浄されて、約３５℃の温度で７２時間乾燥させられる（収量：１２５ｇ）。
【００５４】
実施例２
ヒアルロン酸の全ベンジルエステル（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）により構成された耳介の再形成用人工器官の調製法
中空の型が歯科医学で使用される重合体製で、耳介の形状に調製される。失われた耳の形状は、他の耳の鏡像を用いてコンピューター処理システムにより再構築される。
【００５５】
型は型の形状にぴったりとフィットしていて、不織薄布の形の登録商標ＨＹＡＦＦ１１の層で内張りされる。
【００５６】
不織薄布は、７０ｍｇ／ｍｌの濃度でフェニルトリメチルアンモニウムとのヒアルロン酸塩の水溶液１５ｍｌを含浸させられ、そしてこれは凍結乾燥させられる。
【００５７】
登録商標ＨＹＡＦＦ１１の不織薄布を含む、フェニルトリメチルアンモニウムとヒアルロン酸の塩により構成された、耳介の形の固形中間製品は型から取外されて不均質相中のエステル化反応に曝される。
【００５８】
素材は、中間製品のグラム当たりアセトン０．３リットルの中に入れられ、そこに４グラムの臭化テトラブチルアンモニウムと３ｍｌの臭化ベンジルが添加される。混合液は、１２時間沸点に保たれる。
【００５９】
製品は、１：１の比率のエタノールと水及び３％の塩化ナトリウムを含んでいる溶液で繰返し洗浄され、その後、水で洗浄される。
【００６０】
最後に、製品は型の中に戻されて凍結乾燥させられる。
【００６１】
実施例３
ヒアルロン酸の全ベンジルエステル（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）により構成された耳介の再形成用人工器官の調製法
中空の型が歯科医学で使用される重合体製で、耳介の形状に調製される。失われた耳の形状は、他の耳の鏡像を用いてコンピューター処理システムにより再構築される。
【００６２】
型は型の形状にぴったりとフィットしていて、不織薄布の形の登録商標ＨＹＡＦＦ１１の層で内張りされる。
【００６３】
不織薄布は、７０ｍｇ／ｍｌの濃度でテトラブチルアンモニウムとのヒアルロン酸塩の水溶液１５ｍｌを含浸させられ、そしてこれは凍結乾燥させられる。
【００６４】
登録商標ＨＹＡＦＦ１１の不織薄布を含む、テトラブチルアンモニウムとヒアルロン酸の塩により構成された、耳介の形の固形中間製品は型から取外されて不均質相中のエステル化反応に曝される。
【００６５】
素材は、中間製品のグラム当たりアセトン０．０６リットルの中に入れられ、そこに４．２グラムの臭化テトラブチルアンモニウムと１．４ｍｌの臭化ベンジルが添加される。
【００６６】
混合液は、１２時間沸点に保たれる。
【００６７】
製品は、１：１の比率のエタノールと水及び３％の塩化ナトリウムを含んでいる溶液で繰返し洗浄され、その後、水で洗浄される。
【００６８】
最後に、製品は型の中に戻されて凍結乾燥させられる。
【００６９】
実施例４
ヒアルロン酸の全ドデシルエステル（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）により構成された耳介の再形成用人工器官の調製法
中空の型が歯科医学で使用される重合体製で、耳介の形状に調製される。失われた耳の形状は、他の耳の鏡像を用いてコンピューター処理システムにより再構築される。
【００７０】
型は型の形状にぴったりとフィットしていて、不織薄布の形の登録商標ＨＹＡＦＦ１１の層で内張りされる。
【００７１】
不織薄布は、７０ｍｇ／ｍｌの濃度でテトラブチルアンモニウムとのヒアルロン酸塩の水溶液１５ｍｌを含浸させられ、そしてこれは凍結乾燥させられる。
【００７２】
登録商標ＨＹＡＦＦ１１の不織薄布を含む、テトラブチルアンモニウムとヒアルロン酸の塩により構成された、耳介の形の固形中間製品は型から取外されて不均質相中のエステル化反応に曝される。
【００７３】
素材は、中間製品のグラム当たりアセトン０．０６リットルの中に入れられそこに４．２グラムの臭化テトラブチルアンモニウムと１．４ｍｌの臭化ドデシルが添加される。
【００７４】
混合液は、１２時間沸点に保たれる。
【００７５】
製品は１：１の比率のエタノールと水及び３％の塩化ナトリウムを含んでいる溶液で繰返し洗浄され、その後、水で洗浄される。
【００７６】
最後に、製品は型の中に戻されて凍結乾燥させられる。
【００７７】
実施例５
不織布の形で自己架橋ヒアルロン酸に包含されたヒアルロン酸の全ベンジルエステル（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）により構成された耳介の再形成用人工器官の調製法
中空の型が歯科医学で使用される重合体製で、耳介の形状に調製される。失われた耳の形状は、他の耳の鏡像を用いてコンピューター処理システムにより再構築される。
【００７８】
型は型の形状にぴったりとフィットしていて、不織薄布の形の登録商標ＨＹＡＦＦ１１の層で内張りされる。
【００７９】
不織薄布は、７０ｍｇ／ｍｌの濃度でテトラブチルアンモニウムとのヒアルロン酸塩の水溶液１５ｍｌを含浸させられ、そしてこれは凍結乾燥させられる。
【００８０】
登録商標ＨＹＡＦＦ１１の不織薄布を含む、テトラブチルアンモニウムとヒアルロン酸の塩により構成された、耳介の形の固形中間製品は型から取外されて不均質相中のエステル化反応に曝される。
【００８１】
素材は、中間製品の１０グラム当たりアセトン１．５リットルの中に入れられ、そこに７０グラムの分子篩と１０ｇの２−クロロ−１−メチル沃化ピリジニウムが添加される。
【００８２】
混合液は、８時間沸点に保たれる。
【００８３】
製品は、最初アセトンでそれから３％の塩化ナトリウムを含んでいる水溶液で洗浄され、そして最後に水で洗浄される。
【００８４】
実施例６
その表面に接着された不織布の層（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）を持つヒアルロン酸の全ベンジルエステル（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）により構成された三次元人工器官の調製法
方法１  エステル化の前の製品に不織布の層（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）の接着
約７０ｍｇ／ｍｌの濃度でテトラブチルアンモニウムとヒアルロン酸の水溶液の薄い層が、テトラブチルアンモニウム又はフェニルトリメチルアンモニウムとヒアルロン酸により構成され凍結乾燥された製品の表面上に塗布され、そうして不織布の層（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）が当てられる。製品は型の中に戻され、−４０℃の温度に止められて凍結乾燥される。そこで製品は前述の諸例のように、エステル化反応に曝される。
【００８５】
方法１Ａ  方法１で述べたのと同じ成分で同じ方法が不織布の層を添加せずに繰返される。
【００８６】
方法２  エステル化した製品に不織布の層（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）の接着
約１８０ｍｇ／ｍｌの濃度でジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の登録商標ＨＹＡＦＦ１１の溶液の薄い層が、登録商標ＨＹＡＦＦ１１により構成された製品の表面に塗布され、その後、不織布の層（登録商標ＨＹＡＦＦ１１）が当てられる。そこで製品は、少なくとも３０分間エチルアルコールに浸される。そうしてそれはエタノールで繰返し、それから水で洗浄される。製品は、型に置かれて凍結乾燥させられる。
【００８７】
耳介人工器官上での細胞培養
鼻の軟骨の生検が標準の手順で行われる。
【００８８】
軟骨の検体は、５％の炭酸ガスと共に３７℃で１５分間培養され、０．２５％のトリプシンと０．０２％のＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）による酵素消化によって、続いて０．１％コラゲナーゼの溶液での第二期酵素消化によって分解される。
【００８９】
検体は攪拌されて約１６時間３７℃で培養される。
【００９０】
続いて、残った組織のどんなかけらも遠心分離によって分離させられて上澄み液は取除かれる。
【００９１】
酵素反応は、１０％の牛の胎児の血清（ＦＢＳ）で又は１０％ＦＢＳで強化したダルベッコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）の最小不可欠培養基（ＤＭＥＭ）で強化した培養基の添加によって中断される。
【００９２】
近似的に１×１０6／ｃｍ2の細胞が成長因子を含んでいる培養基に再懸濁され、そして直径１００ｍｍの培養皿中の生体用材料の上に播種される。
【００９３】
３７℃で３時間の培養後、成長因子を含んでいる１０ｍｌの培養基が添加される。培養は、保温されて新鮮な培養基が播種後４８時間、そしてそれから４８−７２時間毎に添加される。
【００９４】
ここまで述べてきた本発明において、これらの方法が様々な方法で修正できることは明らかである。前記修正は本発明の趣旨や目的との相異と見なされるべきではなく、本分野の専門家には明らかであろうどんな修正も本発明の請求項の範囲に収まる。