(57)【要約】      （修正有）【課題】グルタミン酸トランスポーター阻害剤の提供。【解決手段】次の一般式（１）2011093805.tif 000006（式中、Ｒ1及びＲ2は、同一又は異って水素原子；ヒドロキシ基；ハロゲン原子；カルボキシル基；ハロゲン原子若しくはヒドロキシ基が置換していてもよいアルキル基などを示し；２個のＲ3は同一の基であって、水素原子、アルキル基又はフェニル基を示す）で表されるジフェニルブテン誘導体又はその塩を有効成分とするグルタミン酸トランスポーター阻害剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）
【化１】
2011093805.tif 000004
（式中、Ｒ1及びＲ2は、同一又は異って水素原子；ヒドロキシ基；ハロゲン原子；カルボキシル基；ハロゲン原子若しくはヒドロキシ基が置換していてもよいアルキル基；又はハロゲン原子若しくはジアルキルアミノ基が置換していてもよいアルコキシ基を示し；２個のＲ3は同一の基であって、水素原子、アルキル基又はフェニル基を示す）
で表されるジフェニルブテン誘導体又はその塩を有効成分とするグルタミン酸トランスポーター阻害剤。
【請求項２】
Ｒ1及びＲ2が水素原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ジアルキルアミノアルコキシ基、又はカルボキシル基であり、Ｒ3がアルキル基又はフェニル基である請求項１記載のグルタミン酸トランスポーター阻害剤。
【請求項３】
次の一般式（１）
【化２】
2011093805.tif 000005
（式中、Ｒ1及びＲ2は、同一又は異って水素原子；ヒドロキシ基；ハロゲン原子；カルボキシル基；ハロゲン原子若しくはヒドロキシ基が置換していてもよいアルキル基；又はハロゲン原子若しくはジアルキルアミノ基が置換していてもよいアルコキシ基を示し；２個のＲ3は同一の基であって、水素原子、アルキル基又はフェニル基を示す）
で表されるジフェニルブテン誘導体又はその塩を有効成分とするグルタミン酸トランスポーター活性の変調に起因する疾患の予防治療薬。
【請求項４】
Ｒ1及びＲ2が水素原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ジアルキルアミノアルコキシ基、又はカルボキシル基であり、Ｒ3がアルキル基又はフェニル基である請求項１記載のグルタミン酸トランスポーター活性の変調に起因する疾患の予防治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はグルタミン酸トランスポーター阻害剤及びグルタミン酸トランスポーター活性の変調に起因する疾患の予防治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルタミン酸は興奮性神経伝達物質であり、グルタミン酸トランスポーターは中枢神経においてはグルタミン酸を細胞内に隔離して細胞外の濃度を低値に保ち、神経細胞をグルタミン酸の興奮毒性から保護する役割を果たしている。グルタミン酸作動性シナプスにおいては、シナプス前部から放出されたグルタミン酸は主にグルタミン酸トランスポーターによる取り込みによりシナプス間隙から急速に消失し、シナプス伝達が終結する。グルタミン酸トランスポーターは、シナプス間隙からの急速なグルタミン酸の除去に重要な役割を持つタンパク質である。また、グルタミン酸トランスポーターは、Ｎａ+依存性であり、Ｃｌ-チャンネルとしても機能しているといわれている。
【０００３】
このようにグルタミン酸トランスポーターの機能は、様々な神経疾患（脳卒中、てんかん、アルツハイマー病、エイズ関連の痴呆、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、悪性神経膠腫、神経因性疼痛、統合失調症等）に深く関与していることが知られており、この機能を制御することはこれらの疾患の予防治療に有用であると言われている（非特許文献１）。
【０００４】
グルタミン酸トランスポーター阻害剤としては、スレオ−β−ヒドロキシ−アスパルテートが知られているが、その阻害有効濃度は数百μＭと高濃度であり、薬剤として使用できるものではない（非特許文献２）。
【０００５】
一方、ジフェニルブテン誘導体にはＢＫチャンネル（Ｃａ依存性Ｋチャンネル）を調節する作用があることは知られている（非特許文献３）が、これらの化合物のグルタミン酸トランスポーターに対する作用は知られていない。
【非特許文献１】Shigeri Y, Seal RP, Shimamoto K. Molecular pharmacology of glutamate transporters, EAATs and VGLUTs. Brain Res Brain Res Rev. 2004 Jul;45(3):250-65. Review.
【非特許文献２】Bender AS, Woodbury DM, White HS. Beta-DL-methylene-aspartate, an inhibitor of aspartate aminotransferase, potently inhibits L-glutamate uptake into astrocytes. Neurochem Res. 1989 Jul;14(7):641-6.
【非特許文献３】Chem. Pharm. Bull. 53(10)1372-1373(2005)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、優れたグルタミン酸トランスポーター阻害剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで本発明者らは、種々の化合物を用いてグルタミン酸トランスポーターに対する作用を検討してきたところ、下記一般式（１）で表される化合物がｐＭオーダーという極めて低濃度からグルタミン酸トランスポーターを介するアストロサイトへのグルタミン酸取り込みを阻害し、グルタミン酸トランスポーター阻害剤として有用であり、グルタミン酸トランスポーター活性の変調に起因する種々の疾患の予防治療薬として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、次の一般式（１）
【０００９】
【化１】
2011093805.tif 000002
【００１０】
（式中、Ｒ1及びＲ2は、同一又は異って水素原子；ヒドロキシ基；ハロゲン原子；カルボキシル基；ハロゲン原子若しくはヒドロキシ基が置換していてもよいアルキル基；又はハロゲン原子若しくはジアルキルアミノ基が置換していてもよいアルコキシ基を示し；２個のＲ3は同一の基であって、水素原子、アルキル基又はフェニル基を示す）
で表されるジフェニルブテン誘導体又はその塩を有効成分とするグルタミン酸トランスポーター阻害剤及びグルタミン酸トランスポーター活性の変調に起因する疾患の予防治療薬を提供するものである。
【発明の効果】
【００１１】
一般式（１）で表される化合物は、グルタミン酸トランスポーターをｐＭオーダーという極めて低い濃度から阻害し、グルタミン酸トランスポーター活性の変調に起因する種々の疾患、例えば種々の神経疾患、例えば脳卒中、てんかん、アルツハイマー病、エイズ関連の痴呆、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、悪性神経膠腫、神経因性疼痛、統合失調症等の予防治療薬として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明のグルタミン酸トランスポーター阻害剤の有効成分は、上記一般式（１）で表される化合物又はその塩である。
一般式（１）中、Ｒ1及びＲ2は、同一又は異って水素原子；ヒドロキシ基；ハロゲン原子；カルボキシル基；ハロゲン原子若しくはヒドロキシ基が置換していてもよいアルキル基；又はハロゲン原子若しくはジアルキルアミノ基が置換していてもよいアルコキシ基を示す。ここでハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子が挙げられる。アルキル基としては、炭素数１〜６のアルキル基が挙げられ、直鎖又は分岐鎖のアルキル基が含まれる。アルキル基の具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基等が挙げられる。ハロゲン原子が置換したアルキル基としては、ハロゲノＣ1-6アルキル基が挙げられ、具体例としてはトリフルオロメチル基等が挙げられる。また、ヒドロキシ基が置換したアルキル基としてはヒドロキシＣ1-6アルキル基が挙げられ、具体例としてはヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基等が挙げられる。
【００１３】
アルコキシ基としては、炭素数Ｃ1-6のアルコキシ基が挙げられ、直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基が含まれる。アルコキシ基の具体例としては、メトキシ基、エトキシ基、イソプロピルオキシ基等が挙げられる。ハロゲン原子が置換したアルコキシ基としては、ハロゲノＣ1-6アルコキシ基、例えばトリフルオロメトキシ基が挙げられる。またジアルキルアミノ基が置換したアルコキシ基としては、ジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ−Ｃ1-6アルコキシ基が挙げられる。その具体例としては、ジメチルアミノエトキシ基、ジエチルアミノエトキシ基、ジメチルアミノプロピルオキシ基、ジエチルアミノプロピルオキシ基等が挙げられる。
【００１４】
Ｒ1及びＲ2としては、同一又は異って、水素原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ジアルキルアミノアルコキシ基、又はカルボキシル基であるのが好ましい。さらに、水素原子、ヒドロキシ基、メトキシ基、ジメチルアミノエトキシ基又はカルボキシル基が特に好ましい。
【００１５】
一般式（１）中、２個のＲ1は同一であり、水素原子、アルキル基又はフェニル基を示す。ここでアルキル基としては、炭素数１〜６のアルキル基が挙げられ、直鎖又は分岐鎖のアルキル基が含まれる。アルキル基の具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基等が挙げられ、特にメチル基又はエチル基が好ましい。
【００１６】
Ｒ3としては、アルキル基又はフェニル基が好ましく、特にメチル基又はフェニル基が好ましい。
【００１７】
本発明化合物（１）の塩としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩等の無機酸塩；酢酸塩、乳酸塩等の有機酸塩が挙げられる。また本発明化合物（１）又はその塩は、水和物等の溶媒和物で存在していてもよい。
【００１８】
化合物（１）は、例えば次の反応式に従って製造することができる。
【００１９】
【化２】
2011093805.tif 000003
【００２０】
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は前記と同じ）
【００２１】
すなわち、ベンゾフェノン（２）とアルカノン（３）とをマクマリー縮合反応に付すことにより化合物（１）が得られる（反応条件等は以下の文献に詳しい： J. E. McMurry, Chem. Rev., 1989, 89, 1513-1524.Carbonyl-Coupling Reactions Using Low-valent Titanium）。縮合反応は、ＴｉＣｌ4や亜鉛の存在下に行なわれる。反応溶媒としては、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、テトラヒドロピラン等のようなエーテル系溶媒が用いられる。反応は、室温から溶媒の沸点までの温度で行えばよく、反応時間は３０分〜４８時間で十分である。
【００２２】
なお、Ｒ1又はＲ2がジアルキルアミノアルコキシ基である化合物（１）は、ヒドロキシベンゾフェノンとアルカノンとの縮合で得られたヒドロキシジフェニルブテン類に、ジアルキルアミノアルキルハライドをアルカリの存在下に反応させることにより製造するのが好ましい。ここでアルカリとしては炭酸カリウム等が用いられる。
【００２３】
得られたジフェニルブテン誘導体（１）又はその塩は、後記実施例に示すように、ｐＭオーダーという極めて低濃度からグルタミン酸トランスポーター阻害活性を示すことから、グルタミン酸トランスポーターが変調、例えば亢進することに起因する種々の神経疾患の予防治療薬として有用である。
【００２４】
本発明の医薬の投与量は成人一日当たり１mgから１ｇ、好ましくは１０mgから３００mgの範囲である。この一日量を一日１回、あるいは２〜４回にわけて投与することができる。
【００２５】
化合物（１）を含有する医薬組成物は投与法に応じ適当な製剤を選択し、通常用いられている各種製剤の調製法にて調製できる。化合物（１）を主剤とする医薬組成物の剤形としては例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤等の固形製剤や、液剤、シロップ剤、エリキシル剤、油性ないし水性の懸濁液等を経口用製剤として例示できる。
注射剤としては製剤中に安定剤、防腐剤、溶解補助剤を使用することもあり、これらの補助剤を含むこともある溶液を容器に収納後、凍結乾燥等によって固形製剤として用事調製の製剤としてもよい。また一回投与量を一の容器に収納してもよく、また多投与量の一の容器に収納してもよい。
また外用製剤として液剤、懸濁液、乳濁液、軟骨、ゲル、クリーム、ローション、スプレー、貼付剤等を例示できる。
固形製剤としては化合物（１）とともに薬学上許容されている添加物を含み、例えば充填剤類や増量剤類、結合剤類、崩壊剤類、溶解促進剤類、湿潤剤類、潤滑剤類等を必要に応じて選択して混合し、製剤化することができる。
液体製剤としては溶液、懸濁液、乳液剤等を挙げることができるが添加剤として懸濁化剤、乳化剤等を含むこともある。
【実施例】
【００２６】
次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は何らこれに限定されるものではない。
【００２７】
融点は融点測定器（Ｙａｎａｃｏ社製）を用いて測定し、未補正である。1Ｈ−ＮＭＲ及び13Ｃ−ＮＭＲはＴＭＳを内部標準物質としてＪＥＯＬ−４００ＮＭＲ装置で計った。ＦＡＢ−ＭＳと高分解能ＦＡＢ−ＭＳはＪＭＳ７００−ＭＳＴＡＴＩＯＮ（ＪＥＯＬ，日本電子）で測定した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ＨＦ254（Ｍｅｒｃｋ製）を用い、フラッシュクロマトグラフィーは  ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  Ｈ（Ｍｅｒｃｋ製）を用いた。
【００２８】
合成例１
４−（２−エチル−１−フェニル−ブタ−１−エニル）−フェノール（化合物０１）：
３０mLの脱水ＴＨＦに亜鉛末(０．８６g，１３．２mmol)をサスペンドし、Ａｒ置換下−５℃で、ＴｉＣｌ4（０．７２mL，６．６mmol)を滴下する。混合液を２ｈ還流する。４−ヒドロキシベンゾフェノン（３４１．１mg，１．７mmol）と３−ペンタノン（０．５０mL，５．０mmol）の５０mLの脱水ＴＨＦ溶液を一気に加え、反応液を６ｈ還流する。反応液を室温まで冷却し、１０％  Ｋ2ＣＯ3水溶液（１００mL）を加えて反応を止め、酢酸エチル（３回×８０mL）で抽出する。有機層を飽和食塩水（５０mL）で洗い、Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、エバポレーションで有機溶媒を留去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーに付して化合物０１(３８１mg，８８％)を白色固体として得た。
Mp 178.4〜178.5℃. 1H-NMR(CDCl3)δ：6.35-7.26 (m, 9H), 2.14 (q, 2H×2, J=7.2 Hz), 0.99(t, 3H×2, J=7.2Hz). FAB-MS: ([M]+, m/z) 252.2. HR-FAB-Mass: 252.1528.
【００２９】
合成例２
｛２−［４−（２−エチル−１−フェニル−ブタ−１−エニル）−フェノキシ］エチル｝ジメチルアミン  塩酸塩（化合物０２）：
２−ジメチルアミノエチルクロリド塩酸塩（２８２．４mg，２．０mmol）とＫ2ＣＯ3 （１．５７３４ｇ，１１．４mmol）をアセトンー水混合液（１８mL／２mL）に０℃で加え攪拌し、そこに化合物０１（１３９．１mg，０．５５mmol）とＫ2ＣＯ3（４２１．１mg，３．１mmol）を加える。３０分後に還流を開始し２４時間環流する。室温に冷却後、濾過し、濾液をエバポレーションで濃縮する。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーに付して（ＥｔＯＡｃ／Ｅｔ3Ｎ  １００：１）、白色固体（８８．０mg）を得る。この固体を酢酸エチルに溶解し、ＨＣｌ・エーテル溶液を加え、沈殿物（化合物０２）を得た（９５．０mg，４８％）。エタノール／ＡｃＯＥｔ．から再結晶した。
Mp: 129.5〜130.2℃. 1H-NMR(CDCl3)δ：6.90-7.26 (m, 9H), 4.07 (t, 2H, J=6.0Hz), 2.75 (t, 2H, J=6.0Hz), 2.40 (s, 6H), 2.15(d, 4H, J=7.2Hz), 1.00(t, 6H, J=7.2Hz). FAB-MS ([M+H]+, m/z 324.3. HR-FAB-Mass：324.2321.
【００３０】
合成例３
４−［２−エチル−１−（４−ヒドロキシフェニル）−ブタ−１−エニル］−フェノール（化合物０３）
化合物０１と同様に合成した。
収率99 % Mp: 147.1-147.2℃. 1H-NMR (CDCl3)δ：6.90 (d, 2H×2, J= 8.4Hz), 6.30 (d, 2H×2, J=8.4Hz), 2.14 (q, 2H×2, J=7.4 Hz), 0.98 (t, 3H×2, J=7.4 Hz). FAB-MS m/z 268.2 [M]+. HR-FAB-Mass：268.1493. 
【００３１】
合成例４
１−［２−エチル−１−（４−メトキシフェニル）−ブタ−１−エニル］−４−メトキシシベンゼン（化合物０４）
化合物０１と同様に合成した。
収率：86 %. Mp 116.4-116.6℃. 1H-NMR (CDCl3)δ：6.99 (d, 2H×2, J= 8.4 Hz), 6.73 (d, 2H×2, J=8.4 Hz), 3.76 (s, 3H×2), 2.13 (q, 2H×2, J= 7.6Hz), 1.00(t, 3H×2, J=7.6 Hz). FAB-MS m/z 296.2 [M]+. HR-FAB-Mass：296.1823.
【００３２】
合成例５
４−（２−エチル−１−フェニル−ブタ−１−エニル）−安息香酸（化合物０５）
（１）エステル体の合成：４−（２−エチル−１−フェニル−ブタ−１−エニル）−安息香酸メチルエステル
化合物０１と同様に合成した。
収率74%, 1H-NMR(CDCl3) δ：0.99 (t, 3H, J=7.2Hz), 1.03(t, 3H, J=7.2Hz), 2.12 (q, 2H, J=7.6Hz), 2.16 (q, 2H, J=7.6Hz), 3.88 (s,3H),7.12-7.95 (m, 9H), FAB-MS m/z 295.2[M+H]+. HR-FAB-Mass：294.1613.
【００３３】
（２）エステルの加水分解
上記のエステル体（６７３．０mg，２．２８mmol）とＮａＯＨ（１．２０ｇ）を５mL  ＭｅＯＨ／３mL  Ｈ2Ｏ混合液に溶解させ、１００℃の油浴で４時間加熱還流する。冷却後、pHを３．０に調節してからエーテルで抽出する。有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水乾燥後、溶媒を留去して化合物０５（６４６．７mg，２．２８mmol）を得る。
収率100%, Mp 210.2-210.9℃. 1H-NMR (CDCl3)δ：11.6(br, 1H), 8.00-8.02 (m, 2H), 7.12-7.30 (m, 7H), 2.15(q, 2H×2, J=7.4 Hz), 1.03 (t, 3H×2, J=7.4Hz). FAB-MS m/z 280.2[M]+. HR-FAB-Mass：280.1442.
【００３４】
合成例６
｛２−［４−（２−ベンジル−１，３−ジフェニルプロパノール）−フェノキシ］−エチル｝−ジメチルアミン  塩酸塩（化合物０６）
化合物０１の合成に準じて合成した。
収率54 %, Mp 169.2℃. 1H-NMR (CDCl3)δ：6.80-7.25(m, 19H), 4.00(t, 2H, J=6.0Hz), 2.69(t, 2H, J=6.0Hz), 2.30(s, 3H×2), 3.34(s,2H), 3.38(s, 2H). FAB-MS m/z 448.3[M＋H]+. 
【００３５】
試験例１
（方法）
Ｐ３ラット脳から大脳皮質を採取し、０．２５％トリプシン及び０．０１％ＤＮａｓｅで処理し、得られた大脳皮質を１０％ＦＢＳ含有改変ＤＭＥＭ培地でコンフルエントになるまで１０〜１５日間培養した。フラスコを振とうし、培養細胞からアストロサイト以外の細胞を除去し、再度コンフルエントになるまで７日間培養した。０．１％トリプシン１mM  ＥＤＴＡを添加してアストロサイトを再播種し、さらに７日間培養した。培地を１０％ＨＳ（馬血清）含有改変ＤＭＥＭ培地に変え、７日間培養した。被検化合物を添加し、１日インキュベートし、Ｌ−グルタミン酸取り込み量を測定した。Ｌ−グルタミン酸取り込み量は、培地に100μMのＬ−グルタミン酸を添加し、一時間後の培地中グルタミン酸残存量により算出した。
【００３６】
（結果）
（１）Ｌ−グルタミン酸クリアランス（グルタミン酸トランスポーター活性）のタイムコースを図１に示す。図１の結果からアストロサイトにおけるグルタミン酸の取り込みは６０分で測定するのがよいことが判明した。
【００３７】
（２）培養アストロサイト中のグルタミン酸トランスポーターはＧＬＡＳＴが支配的であることが判明した。すなわち、ＧＬＴ１特異的阻害剤であるＤＨＫでは阻害されず、ＧＬＡＳＴ及びＧＬＴ１の阻害剤であるＴＨＡによって阻害されたことから、培養アストロサイト中のグルタミン酸トランスポーターはＧＬＡＳＴが支配的であることが判明した（図２）。
【００３８】
（３）化合物０１〜化合物０６を添加した場合、１ｐＭから１ｎＭでグルタミン酸の取り込み量が低下し、強力なグルタミン酸トランスポーター阻害活性が認められた。これらの化合物のうち、化合物０１の阻害活性を図３に、化合物０６の阻害活性を図４に示す。図３及び図４から明らかなように、化合物０１及び０６は、いずれも１ｐＭという低濃度からグルタミン酸トランスポーター阻害活性を有することがわかる。
また、化合物０１及び化合物０６についてＭＴＴ／ＬＤＨアッセイにより細胞障害性を検討したところ、１ｐＭ〜１μＭの間では細胞障害は認められなかった（図５及び図６）。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】アストロサイトにおけるＬ−グルタミン酸クリアランスのタイムコースを示す。
【図２】アストロサイトのＬ−グルタミン酸トランスポーターのサブタイプの同定を示す。
【図３】化合物０１のグルタミン酸トランスポーター阻害活性を示す。
【図４】化合物０６のグルタミン酸トランスポーター阻害活性を示す。
【図５】化合物０１のＭＴＴ／ＬＤＨアッセイ結果を示す。
【図６】化合物０６のＭＴＴ／ＬＤＨアッセイ結果を示す。
【図１】
2011093805.tif 000007
【図２】
2011093805.tif 000008
【図３】
2011093805.tif 000009
【図４】
2011093805.tif 000010
【図５】
2011093805.tif 000011
【図６】
2011093805.tif 000012