(57)【要約】【課題】 視覚および記憶の疾患のためのピペコリン酸誘導体を提供する。【解決手段】 本発明は、ＦＫＢＰ型（ＦＫＢＰ−１２）イムノフィリンについての親和性を有するピペコリン酸誘導体を使用して、視覚疾患を治療する、視覚を改善する、記憶障害を治療する、または記憶能力を増大するための医薬組成物および方法に関する。該化合物は免疫抑制性または非免疫抑制性であることができ、例えば、ＧＰＩ１０４６、Ｗａｙ−１２４,６６６、ラパマイシン、ＲＡＰ−Ｐａである。【選択図】図１
2011088934.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピペコリン酸誘導体および医薬的に許容可能なキャリアを含む、黄斑変性または糖尿病網膜症を治療するための医薬組成物であって、該ピペコリン酸誘導体が、ＧＰＩ１０４６、Ｗａｙ−１２４,６６６、ラパマイシン、ＲＡＰ−Ｐａ、およびそれらの医薬的に許容可能な塩または溶媒和物からなる群より選択される少なくとも一種である、組成物。
【請求項２】
該ピペコリン酸誘導体がラパマイシンもしくはその医薬的に許容可能な塩またはそれらの溶媒和物である、請求項１記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．発明の分野
本発明は、低分子量の小分子誘導体を使用して、視覚損失を治療する、視覚変性を防止する、および視覚再生（“ネオプシス”）を促進する医薬組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
２．関連技術の説明
視覚系は、眼、眼球付属器および視覚路から構成される。該視覚系の機能不全は、永続的または一時的な視覚障害、即ち、眼の一つまたはそれ以上の機能における正常からの逸脱に導き得る。視覚障害はそれ自身様々な方法で発現し、そして広範囲の視覚の機能不全および障害を含む。制限無しに、これらの機能不全および障害は、部分的または全体的な視覚の損失、近距離および遠距離の物体のための視力の矯正についての必要、視野の損失、複視（二重視）を伴わない障害を受けた眼の運動性、傷害を受けたまたは歪められた色覚、明所および暗所への制限された適応、減ぜられた調節、変視症の歪み、傷害を受けた両眼視、調節の不全麻痺、虹彩麻痺、内反、外反、流涙症、兎眼および傷付きを含む。Physicians' Desk Reference (PDR) for Ophthalmology, 16th Edition, 6:47 (1988)参照。視覚系は、制限無しに、遺伝性疾患；［非遺伝性疾患；］加齢に関連した疾患または変性疾患；外力から生じた眼、頭部または身体の他の部分への物理的傷害に相互関係のある疾患；環境的要因から生じた疾患；広範囲にわたる疾病から生じた疾患；および上記のあらゆる組み合わせを含む様々な眼科学的な疾患、疾病、傷害、および合併症により不利に影響を受け得る。
【０００３】
視覚系は、多数の要素から構成される複雑な系である。視覚障害は、状況の厳密な性質に依存して、全体の視覚系、いずれか一つの要素、または要素のあらゆる組み合わせに影響することができる。眼は水晶体から構成され、該水晶体はチン小帯に吊られ、そして毛様体により焦点を定められる。毛様体はまた房水を分泌し、該房水は後眼房を満たし、瞳孔を通過して前眼房中に入り、その後シュレム管を介して主に流出する。虹彩は、その中央の開口部である瞳孔の寸法を調製することにより、眼に進入する光量を調節する。視覚画像は網膜上に焦点を定められ、網膜の中心窩が最も鮮明な視力の網膜分野である。結膜は眼瞼および眼球に沿って並んでいる粘膜であり、そして角膜、即ち、虹彩に重なる結膜の縁部で不意に終わる。角膜は透明で透き通った眼の前面部分の繊維状被膜であり、光の屈折に重要で、また結膜上皮とは多くの観点で異なる上皮で覆われている。
【０００４】
網膜は最も内側の光を感受する眼の部分であり、より明るい光における色覚の原因である錐状体と、薄暗い光における視覚の原因であるが色は知覚しない杆状体である二種類の光受容体を含む。光が角膜、レンズ系および硝子体液を通過した後、内側から網膜に進入し、即ち、網膜の外側付近でかつ最も外側の色素上皮層の直ぐ内側に位置する光受容体の層に最終的に到達する前に、ガングリオン細胞および神経繊維、内側および外側の網状層、内側および外側の核層、並びに内側および外側の境界膜を通過する。色素上皮層の細胞は、眼の外側に位置する液および物質に対する解剖学的障壁として作用して、“血液−網膜”障壁を形成し、そして栄養、酸素、ビタミンＡのような機能的に有用な物質の供給源、および光受容体細胞への分解生成物の食細胞活動を与える。色素上皮層と光受容体層との間には解剖学的な接続は存在せず、いくつかの病理学的状態における層の分離を可能にする。
【０００５】
杆状体または錐状体が光により興奮させられると、信号が網膜自身の中の連続するニューロンを通して、視神経線に中に、そして結局は大脳皮質に伝達される。杆状体および錐
状体の双方は、光への暴露で分解し、その過程で眼から導かれる神経繊維を興奮させる分子を含む。杆状体中の該分子はロドプシンである。集合的にヨードプシンと呼ばれる錐状体中の三種類の感光性分子は、ロドプシンのものとは僅かにのみ異なる構成を有し、そして、それぞれ赤色光、青色光、または緑色光により最大に興奮させられる。
【０００６】
杆状体および錐状体はいずれも活動電位を生じない。むしろ、杆状体細胞または錐状体細胞の外側の感光性部位において生じる光誘発膜過分極が、それ自身の電気電圧の直接伝導である電子伝導と呼ばれる過程により、外側部位から内側部位を通してシナプス体に伝達される。シナプス体では、膜電位が未知の伝達物質分子の放出を制御する。弱い光では、杆状体および錐状体の細胞膜は分極し、そして伝達物質の放出比率は最も大きい。光誘発過分極は、伝達物質分子の放出における顕著な減少を引き起こす。
【０００７】
杆状体または錐状体の細胞により放出された伝達物質は、双極ニューロンおよび水平細胞における信号を誘発する。これら双方の細胞中の信号はまた、電子伝導によって、そして活動電位によってではなく伝達される。
【０００８】
杆状体双極ニューロンは５０個にも及ぶ杆状体細胞と接続し、一方、小双極細胞および拡散双極細胞は１個または数個の錐状体細胞と接続する。脱分極可能な双極細胞は、その接続する杆状体または錐状体が光に暴露されたときに刺激される。伝達物質分子の放出は脱分極可能な双極細胞を阻害する。従って、暗所において、杆状体または錐状体が大量の伝達物質分子を分泌するとき、脱分極可能な双極細胞は阻害される。明所において、杆状体または錐状体からの伝達物質分子の放出の減少は双極細胞の阻害を減じて、興奮されるようになることを可能にする。このようにして、正信号および負信号の双方は、異なる双極細胞を通して、杆状体または錐状体から無軸索およびガングリオンの細胞に伝達されることができる。
【０００９】
その名前が示すように、水平細胞は網膜中に水平に突出し、そこでそれらは、杆状体、錐状体、他の水平細胞、または細胞種の組み合わせとシナプスを形成する。光受容体の信号発信の収斂における幾つかの機構は仮定されているけれども、水平細胞の機能は不明である。
【００１０】
全ての種類の双極細胞はガングリオン細胞と接続し、該ガングリオン細胞は二つの主要な型からなる。Ａ−型ガングリオン細胞は主に杆状体双極細胞と接続し、一方、Ｂ−型ガングリオン細胞は主に小双極細胞および拡散双極細胞と接続する。Ａ−型ガングリオン細胞は、コントラスト、光強度、および運動の知覚に感覚を有すると思われ、一方、Ｂ−型ガングリオン細胞は、色覚および視力の鋭敏さに関連していると思われる。
【００１１】
水平細胞のように、無軸索細胞は、幾つかないし多くの他の細胞、この場合は双極細胞、ガングリオン細胞、および他の無軸索細胞と水平にシナプスを形成する。無軸索細胞の機能もまた不明である。
【００１２】
ガングリオン細胞の軸索は眼の神経繊維層中に信号を運び、ここで軸策は、視神経乳頭でさらに収斂する繊維中に収斂し、それらは視神経として眼から出て行く。ガングリオン細胞は、視神経細胞繊維を通して脳に、活動電位の形態でそれらの信号を伝達する。これらの細胞は、刺激を受けないときでさえ、約１秒当り５の平均ベースライン比率で、連続した神経インパルスを伝達する。視覚信号は、このガングリオン細胞刺激のベースライン水準に重ねられる。ベースライン比率より上に増加した数のインパルスを有する興奮信号、またはベースライン比率より下に減少した数の神経インパルスを有する阻害信号のいずれであることもできる。
【００１３】
中枢神経系の一部として、眼はある意味では脳の延長であるが、それ自身では、再生について制限された能力を有する。この制限された再生能力は、視覚を改善すること、視覚系の機能不全を解決すること、および／または眼科学的な疾患を治療または予防することからなる作業に挑むことをさらに複雑にする。網膜光性傷害、網膜虚血誘発眼性傷害、年齢関連斑状変性、遊離ラジカル誘発眼性傷害、並びに数々の他の疾患のような目の多くの疾患は、完全に治療不可能であると見なされている。他の眼科学的な疾患、例えば、永続的な視覚障害を引き起こす疾患は、変化する成功の度合いを伴い眼科的な装置および／または手術の使用によってのみ矯正されている。
【００１４】
免疫抑制剤ＦＫ５０６、ラパマイシン、およびシクロスポリンは、有力なＴ−細胞特異的免疫抑制剤として良く知られており、そして自己免疫、移植または移植片の拒絶、炎症、アレルギー性反応、他の自己免疫性または免疫介在性の疾病、および感染症に対して有効である。シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ブスピロン、スピペロン、および／またはそれらの誘導体の適用が、これらの型の幾つかの眼科学的な疾患を治療することにおいて有効であることは開示されている。幾つかの眼科学的な疾患または視覚問題は、自己免疫性または免疫介在性の活性と関連することが既知であり、それ故、免疫調節化合物が、それらの型の眼科学的な疾患または視覚問題を治療するために効力を示すことが期待される。
【００１５】
眼科学的な疾患を治療することにおけるＦＫ５０６、ラパマイシン、および関連する薬剤の効果は、幾つかの合衆国特許に開示される（ゴウレット等の米国特許第５，５３２，２４８号；モチズキ等の米国特許第５，５１４，６８６号；ジュルリー等の米国特許第５，４５７，１１１号；ルッソ等の米国特許第５，４４１，９３７号；クルカルニ等の米国特許第５，３８７，５８９号；アサクラ等の米国特許第５，３６８，８６５号；ゴウレット等の米国特許第５，２５８，３８９号；アーミステッド等の米国特許第５，１９２，７７３号；ゴウレット等の米国特許第５，１８９，０４２号；およびファー等の米国特許第５，０１１，８４４号。）。これらの特許は、ＦＫ５０６またはラパマイシンに関連した化合物を特許請求し、そしてＦＫ５０６およびラパマイシンの既知の免疫抑制効果と関連した眼科学的な疾患の治療におけるＦＫ５０６またはラパマイシンに関連した化合物の既知の使用を開示する。これらの特許において開示された化合物は比較的大きい。さらに、引用した特許は、自己免疫もしくは関連した疾病、または免疫介在性疾病であって、ＦＫ５０６およびラパマイシンの効力が良く知られている疾病を治療することに制限された免疫調節化合物に関している。
【００１６】
他の米国特許は、眼科学的な疾病の治療において使用するための、シクロスポリン、スピペロン、ブスピロン、それらの誘導体、および他の免疫抑制化合物の使用を開示する（シャープ等の米国特許第５，７０３，０８８号；シャープ等の米国特許第５，６９３，６４５号；サリバンの米国特許第５，６８８，７６５号；サリバンの米国特許第５，６２０，９２１号；シャープ等の米国特許第５，５７４，０４１号；エベールの米国特許第５，２８４，８２６号；シャープ等の米国特許第５，２４４，９０２号；チオウ等の米国特許第５，１９８，４５４号および第５，１９４，４３４号；およびカスワンの米国特許第４，８３９，３４２号。）。これらの特許はまた、自己免疫疾病を治療するために有用な化合物にも関し、そして眼の炎症および他の免疫介在性眼科学的疾病を治療することにおけるシクロスポリン、スピペロン、ブスピロン、それらの誘導体、および他の免疫抑制化合物の既知の使用を引用している。
【００１７】
従来技術に開示される免疫抑制化合物は、定義によれば、免疫系を抑制し、そしてまた他の有毒な副作用も示す。従って、非免疫抑制性の小分子化合物であって、視覚の改善すること、視覚障害のまたは視覚系の機能不全を予防、治療、および／または回復すること、並びに眼科学的な疾患を予防、治療、および／または解決することにおいて有用な化合
物、並びにそのような化合物の使用のための組成物および方法についての必要が存在する。
【００１８】
非免疫抑制性化合物について、傷（傷害または手術による）の治療を可能にするかまたは促進する；眼内圧（しばしば、緑内障から生じる）の調節；網膜ニューロンに対する損傷または傷害、網膜ガングリオン細胞に対する損傷または傷害、および斑状変性を含む神経変性眼性疾患を制御する；神経突起成長を刺激する；遊離ラジカルにより引き起こされる酸化損傷を予防または減少する；および低血流から生じる、障害を受けた酸素および栄養の供給、並びに障害を受けた廃棄物除去を治療するための使用方法を開示する多数の特許もまた存在する。これらの非免疫抑制性物質は、二つのうちの一つの一般的な分類に入る、タンパク質、糖タンパク質、ペプチド、ホルモン、および成長因子のような自然発生分子、および合成分子に含まれる。
【００１９】
自然発生非免疫抑制分子の群の中では、幾つかのホルモン、成長因子、および信号分子が、そのような分子の天然発生量に対する補足としての使用について、並びに成熟した個体中では特別な分子が自然に発生しない場所の特定の細胞を目標とすることについて特許とされている。これらの特許は、一般に、眼性疾病の症状を軽減もしくは予防するか、または視覚損失を阻止もしくは逆転するための使用方法を特許請求している。
【００２０】
特に、ルイス等の米国特許第５，７３６，５１６号および第５，６４１，７４９号は、緑内障、または他の変性性もしくは外傷性の網膜の疾病もしくは傷害により引き起こされた、網膜ニューロン（即ち、光受容体）および網膜ガングリオン細胞の変性を停止または逆転するための、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）の使用を開示する。オブライエン等の米国特許第５，７１４，４５９号および第５，７００，９０９号は、神経突起成長を刺激するおよび髄鞘形成を促進するための、糖タンパク質、サポシン、およびその誘導体の使用を開示する。網膜ニューロンの変性を停止または逆転するために、ラバイル等の米国特許第５，６６７，９６８号は、脳由来神経栄養因子、毛様体神経栄養因子、ニューロトロフィン−３またはニューロトロフィン−４、酸性または塩基性のフィブロブラスト成長因子、インターロイキン、腫瘍壊死因子−α、インシュリン状成長因子−２および他の成長因子を含む様々な神経栄養タンパク質の使用を開示する。ワン等の米国特許第５，６３２，９８４号は、出血を減じ、そして新血管形成を制限することにより斑状変性の症状を治療するための、インターフェロン、特にインターフェロンα−２ａの使用を開示する。最後に、ウォーレス等の米国特許第５，４４１，９３７号は、毛様体ガングリオンおよび副交感神経ニューロン細胞の機能を維持するための、肺由来神経栄養因子（ＮＴＦ）の使用を開示する。
【００２１】
特定の細胞系から誘導された因子の鍵となる特徴は、特定の細胞系または組織に対するそれらの局在化であるが、これらの分子での全身性の治療は、これらの分子をコード化する遺伝子が不活性である場所の細胞系における、意図せずそして潜在的に危険な効果についての実質的な危険を受けるだろう。同様に、ホルモンおよび成長因子はしばしば、多くの細胞系で大量の遺伝子を活性化し、これらの分子の非局在化適用は、不適当でそして潜在的に危険な反応を起こさせることについての実質的な危険を受けるだろう。
【００２２】
合成分子の分類の中で、特許となっているほとんどの分子は免疫抑制性であり、そして、上記したように、炎症、自己免疫およびアレルギー性反応を治療することにおける使用を開示する。幾つかの他のものが非免疫抑制性であり、そして、ほとんどしばしばそれらの酸化防止特性に関連した細胞変性を治療する、およびある場合には細胞再生を促進する能力を特許請求する。
【００２３】
特に、フォ等の米国特許第５，５２７，５３３号は、遊離ラジカルの存在から生じる光
受容体損傷を予防または軽減するための、カロチノイド酸化防止剤であるアスタキサンシンの使用を開示する。同様に、バボコック等の米国特許第５，２５２，３１９号は、酸化損傷への耐性を増大することにより眼の疾病および傷害を治療するための、酸化防止剤アミノステロイドの使用を開示する。フリーマン等の米国特許第５，４６８，７５２号は、異常に増加した眼内圧を減ずるための、抗ウイルス性ホスホニルメトキシアルキルシトシンの使用を開示する。
【００２４】
ハミルトンおよびスタイナーは、米国特許第５，６１４，５４７号において、イムノフィリンＦＫＢＰ１２に結合しそして神経成長を刺激するが、免疫抑制効果を欠いた新規ピロリジンカルボキシレート化合物を開示する。思いもよらず、これらの非免疫抑制化合物が視覚における改善を促進し、そして眼科学的な疾患を解決することが見出された。その上、それらの新規な小分子構造および非免疫抑制特性は、従来技術において見出されたＦＫ５０６および関連する免疫抑制化合物からそれらを区別する。
【００２５】
さらに、これらの化合物は、それらの新規な小分子構造およびそれらの一般的な全身性の効果の欠如により、視覚疾患を治療するために使用される非免疫抑制性化合物から区別され得る。自然発生ホルモン、成長因子、サイトカイン、および信号分子は一般に多機能であり、そして多様な細胞系において多くの遺伝子を活性化する。本発明の化合物はそれをせず、それ故、全身性の使用の思いかけずそして潜在的に危険な副作用を回避する。同様に、本発明の化合物はまた、細胞系に特有の分子をそれらが自然に発生しない他の細胞系に導入することの潜在的な思いがけない副作用をも回避する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２６】
【特許文献１】米国特許第５，５３２，２４８号明細書
【特許文献２】米国特許第５，５１４，６８６号明細書
【特許文献３】米国特許第５，４５７，１１１号明細書
【特許文献４】米国特許第５，４４１，９３７号明細書
【特許文献５】米国特許第５，３８７，５８９号明細書
【特許文献６】米国特許第５，３６８，８６５号明細書
【特許文献７】米国特許第５，２５８，３８９号明細書
【特許文献８】米国特許第５，１９２，７７３号明細書
【特許文献９】米国特許第５，１８９，０４２号明細書
【特許文献１０】米国特許第５，０１１，８４４号明細書
【特許文献１１】米国特許第５，７０３，０８８号明細書
【特許文献１２】米国特許第５，６９３，６４５号明細書
【特許文献１３】米国特許第５，６８８，７６５号明細書
【特許文献１４】米国特許第５，６２０，９２１号明細書
【特許文献１５】米国特許第５，５７４，０４１号明細書
【特許文献１６】米国特許第５，２８４，８２６号明細書
【特許文献１７】米国特許第５，２４４，９０２号明細書
【特許文献１８】米国特許第５，１９８，４５４号明細書
【特許文献１９】米国特許第５，１９４，４３４号明細書
【特許文献２０】米国特許第４，８３９，３４２号明細書
【特許文献２１】米国特許第５，７３６，５１６号明細書
【特許文献２２】米国特許第５，６４１，７４９号明細書
【特許文献２３】米国特許第５，７１４，４５９号明細書
【特許文献２４】米国特許第５，７００，９０９号明細書
【特許文献２５】米国特許第５，６６７，９６８号明細書
【特許文献２６】米国特許第５，６３２，９８４号明細書
【特許文献２７】米国特許第５，５２７，５３３号明細書
【特許文献２８】米国特許第５，２５２，３１９号明細書
【特許文献２９】米国特許第５，４６８，７５２号明細書
【特許文献３０】米国特許第５，６１４，５４７号明細書
【非特許文献】
【００２７】
【非特許文献１】Physicians' Desk Reference (PDR) for Ophthalmology, 16th Edition, 6:47 (1988)
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２８】
本発明の要約
本発明は、動物に有効量の低分子量の小分子ピペコリン酸誘導体を投与することからなる、該動物において、視覚疾患を治療する、視覚を改善する、記憶障害を治療する、または記憶能力を増大するための方法に関する。
本発明はさらに、
（ｉ）動物において、視覚疾患を治療する、視覚を改善する、記憶障害を治療する、または記憶能力を増大するための有効量のピペコリン酸誘導体と、
（ｉｉ）医薬的に許容可能なキャリア
を含む医薬組成物に関する。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
発明の詳細な説明
定義
“眼”は、ヒトおよび他の動物において視覚に必要な解剖学的構造に関し、以下の解剖学的構造を制限することなく包含する：水晶体、硝子体、毛様体、後眼房、前眼房、瞳孔、角膜、虹彩、シュレム管、チン小帯、角膜縁、結膜、脈絡膜、網膜、網膜の中心血管、視神経、中心窩、黄斑および強膜。
【００３０】
“ＧＰＩ１０４４”は、次式
【化１】
2011088934.tif 000003
［式中、Ｂは３−フェニルプロピル基を表し、Ｄは３−フェニルプロピル基を表し、そしてＬはフェニル基を表す。］で表される化合物に関する。
“ＧＰＩ１１０２”は、化合物９８、４−フェニル−１−（３−フェニルプロピル）ブチル１−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）−２−ピペリジンカルボキシレートに関する。
“ＧＰＩ１１１６”は、化合物１０３、１−フェネチル−３−フェニルプロピル１−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）−２−ピペリジンカルボキシレートに関する。
“ＧＰＩ１２０６”は、次式
【化２】
2011088934.tif 000004
で表される化合物に関する。
【００３１】
“異性体”は、同じ分子式を有する異なる化合物に関する。“立体異性体”は、原子が空間に配置される方法のみが異なる異性体である。“エナンチオマー”は、互いに重ね合わせられない鏡像である立体異性体の一対である。“ジアステレオマー”は、互いに鏡像でない立体異性体である。“ラセミ混合物”は、個々のエナンチオマーの等しい部を含む混合物を意味する。“非ラセミ混合物”は、個々のエナンチオマーまたは立体異性体の等しくない部を含む混合物である。
【００３２】
“記憶能力を増大する”は、過去の経験、知識、観念、感覚、思考または印象を登録、保持、または想起する精神的能力を改善または増加することに関する。
“記憶障害”は、過去の経験、知識、観念、感覚、思考または印象の、低下した精神登録、保持または想起に関する。記憶障害は、短期間および長期間の情報保持、空間的関係の容易さ、記憶（リハーサル）手順、および言語的な検索および提示に影響し得る。記憶障害の一般的な原因は、加齢、激しい頭部外傷、脳無酸素症または虚血、アルコール性栄養疾病、および薬物中毒症である。記憶障害の例は、制限無しに、良性の忘却症、健忘症、および記憶欠損が存在するあらゆる障害、例えばコルサコフ健忘精神病、痴呆および学習障害を含む。
【００３３】
“ネオプシス性（neopsic）因子”または“ネオプシックス(neopsics)”は、視覚損失を治療し、視覚変性を予防し、または視覚再生を促進することに有用な化合物を示す。
“ネオプシス”は、視覚損失を治療し、視覚変性を予防し、または視覚再生を促進する方法に関する。
【００３４】
“眼科学的”は、眼についてのまたは眼に関するあらゆることに制限無しに関し、そして“眼性”、“眼の”、“眼科学的”および制限の無い他の同様の用語で交換可能に使用される。
【００３５】
用語“医薬的許容可能な塩、エステル、または溶媒和物”は、望ましい薬理活性を有し、また生物学的にもその他にも望ましくなくない目的化合物の塩、エステル、または溶媒和物に関する。塩、エステル、または溶媒和物は無機酸と形成され、例えば、アセテート、アジペート、アルギネート、アスパルテート、ベンゾエート、ベンゼンスルホネート、ビスルフェート、ブチレート、シトレート、カンホレート、カンファスルホネート、シクロペンタンプロピオネート、ジグルコネート、ドデシルスルフェート、エタンスルホネート、フマレート、グルコヘプタノエート、グルコネート、グリセロホスフェート、ヘミスルフェート、ヘプタノエート、ヘキサノエート、ヒドロクロリド、ヒドロブロミド、ヒドロヨージド、２−ヒドロキシエタンスルホネート、ラクテート、マレエート、メタンスルホネート、ナフチレート、２−ナフタレンスルホネート、ニコチネート、オキサレート、スルフェート、チオシアネート、トシレートおよびウンデカノエートである。塩基性の塩
、エステル、または溶媒和物の例は、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えばナトリウムおよびカリウムの塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムおよびマグネシウム塩；有機塩基との塩、例えばジシクロヘキシルアミン塩；Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン；およびアミノ酸、例えばアルギニン、リジンとの塩等を含む。また、塩基性窒素含有基は、低級アルキルハライド、例えば、メチル、エチル、プロピル、およびブチルクロリド、ブロミド、およびヨージド；ジアルキルスルフェート、例えば、ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミルスルフェート；長鎖ハライド、例えば、デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリルクロリド、ブロミド、およびヨージド；アラルキルハライド、ベンジルおよびフェネチルブロミド等のような試薬と四級化されることができる。
【００３６】
“視覚変性を予防する”は、視覚に影響する変性性疾病を有すると新たに診断された患者、または視覚に影響する新たな変性性疾病を進行させる危険にある患者において、視覚の変性を予防する能力、並びに既に視覚に影響する変性疾病に罹るかまたは症状を有する患者のさらなる視覚の変性を予防する能力に関する。
【００３７】
“視覚再生を促進する”は、眼科学的疾患、疾病、または傷害のいずれかの存在もしくは不在において、視覚を改善または増大するように視覚系の一つまたはそれ以上の要素を改善するか、回復を促進または加速するか、または再生することに関する。
【００３８】
“治療”は、
（ｉ）  疾病および／または状態に罹りやすいが、未だそれを有するとは診断されない対象において、病気および／または状態を予防すること、
（ｉｉ）  疾病および／またはその状態を阻害すること、即ち、その進行を抑制すること、または
（ｉｉｉ）  疾病および／または状態を軽減すること、即ち、疾病および／またはその状態を退縮させること
に関する。
【００３９】
“視覚”は、像を形成するヒトおよび他の動物の能力に関し、“視力”、“見ること”、および制限の無い他の用語と交換可能に使用される。
【００４０】
“視覚疾患”は、視覚に影響するかまたは関連するあらゆる疾患に関し、制限無しに、視覚障害、眼窩の疾患、涙器の疾患、眼瞼の疾患、結膜の疾患、角膜の疾患、白内障、眼球血管膜の疾患、網膜の疾患、視神経または視覚路の疾患、遊離ラジカル誘発疾患もしくは疾病、免疫介在性の眼性疾患および疾病、眼の傷害、並びに眼の疾病、眼の疾患、または眼の損傷の症状および合併症を含む。
【００４１】
“視覚障害”は、あらゆる視覚の機能障害に関し、制限無しに、視覚（例えば、両眼の、中心の、辺縁の、暗順応の）、近くおよび遠くの物に対する視力、視野、眼球運動、色彩知覚、明暗への順応、調節、屈折、および流涙における障害および低下を含む。Physicians' Desk Reference (PDR) for Ophthalmology, 16th Edition, 6:47(1988)参照。
【００４２】
本発明の方法
本発明は、動物において、視覚疾患を治療する、視覚を改善する、記憶障害を治療する、または記憶能力を増大する方法であって、該動物に有効量の誘導体を投与することからなる方法に関する。
【００４３】
本発明の方法は、制限無しに、視覚疾患、疾病、損傷および合併症、遺伝的な疾患；加齢または変性性視覚疾病に関連する疾患；外力から生じる眼、頭、または身体の他の部分への傷害に相関する視覚疾患；環境学的因子から生じる視覚疾患；広範囲の疾病に起因す
る視覚疾患；並びに上記のいずれかの組合せを含む、様々な眼性疾患を治療するのに特に有用である。
【００４４】
特に、本発明の組成物および方法は視覚を改善するか、または視覚の（眼に関する）障害または永続的および一時的な視覚障害を制限無しに含む視覚系の機能障害を矯正、治療、または予防する。本発明はまた、眼科学的な疾病および疾患を予防および治療する、損傷および外傷を受けた眼を治療する、および視覚欠損、視覚喪失または見ることまたは像形成の減少した能力、並びにこれらに起因する症状および合併症を生じる疾病、疾患および損傷を予防および治療するために有用である。本発明の組成物および方法によって治療または予防される眼性の疾病および疾患は、前記疾病または疾患の原因に関するものに制限されない。従って、本発明の組成物および方法は、疾病または疾患が遺伝学的または環境学的因子、並びにあらゆる他の影響によって引き起こされたとしても適用可能である。本発明の組成物および方法は、制限無しに、下記に示す全てに関連する眼の問題または視覚損失または喪失のために特に有用である：加齢、細胞的もしくは生理学的変性、中枢神経系または神経学的疾患、脈管の欠陥、筋肉の欠陥および不利な環境状態または物質への曝露。
【００４５】
本発明の組成物および方法は、制限無しに、視覚障害を矯正する、治療する、または改善することに特に有用である。視覚障害は、（１）遠くおよび近くにおける物への視力；（２）視野；および（３）複視のない眼球運動を含む眼の一つまたはそれ以上の機能における正常から偏向の存在下で生じる。Physicians' Desk Reference (PDR) for Ophthalmology, 16th Edition, 6:47(1988)参照。視覚は、全ての三つの調和した機能無しには不完全である。
【００４６】
前記組成物および使用の方法はまた、制限無しに、色彩知覚、明暗への順応、調節、変視症、および両眼視覚を含む他の眼の機能を矯正、治療、または改善することにも有用である。本組成物および使用の方法は、制限無しに、調節の不全麻痺、虹彩麻痺、内反、外反、流涙病、兎眼、瘢痕、硝子体混濁、非反応性瞳孔、角膜または他の媒体の光散乱障害、および眼窩の永続的変形を含む眼性障害を矯正、治療、または改善する。
【００４７】
本組成物および使用の方法はまた、視覚を改善することおよび視覚損失を治療することにおいて非常に有用でもある。僅かな損失から完全な喪失までにわたる視覚損失は、前記組成物および使用の方法を使用して治療または予防され得る。視覚は、本発明の組成物および方法を使用して、眼の疾患、疾病および損傷を治療することにより改善され得る。しかしながら、本組成物および使用の方法を使用した視覚における改善はそれに限定されることなく、そしてあらゆるこのような疾患、疾病または損傷が無くとも生じ得る。
【００４８】
本発明の組成物および方法はまた、以下の制限の無い例示的な疾病および疾患、並びにそれらから生じる症状および合併症の治療および予防に有用でもある。
【００４９】
視覚疾患は以下のものを非限定的に含む：
低減した近くや遠くの物体に対する視力、視野および眼球運動等の視覚障害；眼窩蜂巣炎、眼窩周囲蜂巣炎、海面静脈洞血栓、眼球突出症（眼球前方転位）のような眼窩疾患；涙管閉鎖、先天性涙管閉鎖症および涙嚢炎（急性または慢性）のような涙器管の疾患；眼瞼水腫、眼瞼炎、下垂症、ベル麻痺、眼瞼痙攣、麦粒腫（ものもらい）、外麦粒腫、内麦粒腫（マイボーム腺麦粒腫）、さん粒腫、眼瞼内反（眼瞼の内転）、眼瞼外反（眼瞼の外転）、腫瘍（良性および悪性）、黄色腫、基底細胞癌腫、扁平上皮細胞癌腫、マイボーム腺癌腫、黒色腫のような眼瞼疾患；瞼裂斑、翼状片や他の部位の腫瘍、急性結膜炎、慢性結膜炎、成人淋菌性結膜炎、新生児結膜炎、トラコーマ（顆粒性結膜炎またはエジプト眼炎）、封入体結膜炎（封入体膿漏またはプール性結膜炎）、新生児封入体結膜炎、成人封
入体結膜炎、春季角結膜炎、乾性角結膜炎（乾性角膜炎またはドライアイ症）、上強膜炎、強膜炎、瘢痕性類天疱瘡（眼球瘢痕性類天疱瘡または良性粘膜性天疱瘡）、および結膜下出血のような結膜疾患；表在性点状角膜炎、角膜潰瘍、無痛潰瘍、再発性角膜糜爛、角膜上皮基底膜ジストロフィー、角膜内皮細胞ジストロフィー、単純ヘルペス性角膜炎（ヘルペス・シンプレックス角結膜炎）、樹状角膜炎、円板状角膜炎、眼性ヘルペス帯状疱疹、水疱性角結膜炎（水疱性または湿潤性結膜炎）、間質性角膜炎（実質性角膜炎）、辺縁部潰瘍性角膜炎（辺縁部角膜剥離または近縁部リュウマチ様潰瘍形成）、角膜軟化症（乾性角膜炎）、眼球乾燥症、円錐角膜、水疱性角膜症のような角膜の疾患；発育性または先天性白内障、若年または成人性白内障、核性白内障、後部皮膜下白内障等の白内障；ぶどう膜炎（ぶどう膜路または網膜の炎症）、前部ぶどう膜炎、中間部ぶどう膜炎、後部ぶどう膜炎、虹彩炎、毛様体炎、脈絡膜炎、強直性脊椎炎、ライター症候群、毛様体輪炎、トキソプラズマ症、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、急性網膜壊死、トキソカラ症、散弾状脈絡膜症、ヒストプラズマ症（推定眼ヒストプラズマ病症候群）、ベーチェット症候群、交感性眼炎、フォークト―小柳−原田症候群、サルコイドーシス、細網肉腫、大細胞リンパ腫、梅毒、結核、若年性関節リュウマチ、眼内炎、および脈絡膜の悪性黒色腫のような眼球血管膜の疾患；脈管性網膜症（例えば、動脈硬化性網膜症および高血圧性網膜症）、網膜中心および枝動脈閉塞、網膜中心および枝静脈閉塞、糖尿病性網膜症（例えば、増殖性網膜症および非増殖性網膜症）、老人性黄斑変性（加齢性黄斑変性または老年性黄斑変性）、血管新生黄斑変性、網膜剥離、色素性網膜炎、光性網膜損傷、網膜虚血誘発眼性損傷、緑内障（例えば一次性緑内障、慢性開放隅角緑内障、急性または慢性閉鎖隅角緑内障、先天性（乳児性）緑内障、二次性緑内障および絶対緑内障）のような網膜の疾患；乳頭水腫（鬱血乳頭）、乳頭炎（視神経炎）、眼後視神経炎、虚血性視神経障害、毒性弱視、視神経萎縮病、高次視覚路損傷、眼球運動疾患、第三脳神経麻痺、第四脳神経麻痺、第六脳神経麻痺、核間性眼筋麻痺および注視麻痺のような視神経または視覚路の疾患；遊離ラジカル誘発眼性疾患および疾病；およびグラーブス眼病、円錐角膜、角膜上皮性異栄養症、角膜白斑、眼性天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎およびサルコイドーシス等の免疫系が関与する眼の疾患および疾病（Merck Manual, Sixteenth Edition, 217:2365-2397 (1992)およびThe Eye Book, Cassel, Billig and Randall, The Johns Hopkins University Press (1998)参照）。
【００５０】
本発明の組成物および方法はまた、以下の代表的な眼性傷害、およびそれから生じる制限の無い症状および合併症の治療にも有用である：異物による結膜および角膜の損傷、角膜剥離、眼内異物による損傷、裂傷、眼瞼裂傷、挫傷、眼瞼打撲傷（眼瞼皮下出血）、眼球外傷、虹彩の裂傷、白内障、水晶体転置、緑内障、硝子体出血、眼窩床骨折、網膜出血または剥離、および眼球の裂開、眼前房出血（外傷による前房出血）、熱傷、眼瞼熱傷、化学薬品による熱傷、角膜および結膜の化学薬品による熱傷、および紫外線による熱傷（日焼け）（Merck Manual, Sixteenth Edition, 217:2364-2365 (1992)参照）。
【００５１】
本発明の組成物および方法は、眼性疾病、眼性疾患または眼性損傷の以下の制限の無い症状および合併症を治療および／または予防することにも有用である：結膜下出血、硝子体出血、網膜出血、蚊飛症、網膜剥離、羞明症、眼性疼痛、暗点（虚性および実性）、屈折異常、正常視、屈折異常症、遠視（遠視）、近視（近視）、乱視、屈折左右不同視症、不等像視症、老視、出血、再発性出血、交感神経性眼炎、炎症、腫脹、目の充血、眼過敏、角膜潰瘍形成および痕跡化、虹彩毛様体炎、眼球の穿孔、眼瞼奇形、眼球突出、眼球の運動障害、眼瞼腫脹、結膜浮腫、部分的および全盲を含む視覚喪失、視神経炎、発熱、倦怠、血栓性静脈炎、海面静脈洞血栓、汎眼球炎、髄膜および脳の感染症、乳頭浮腫、強烈な大脳関与の症状（頭痛、認識度減少および痙攣）、脳神経麻痺、流涙症（慢性または持続性流涙）、粘液または膿の過剰逆流、濾胞性結膜下過形成症、角質血管新生、結膜、角膜および眼瞼の瘢痕形成、パンヌス、前房蓄膿、兎眼、小水疱症、虹彩ルベオ−シス、両耳側半音、および周側性半盲（The Merck Manual, Sixteenth Edition, 217:2362-2363 (
1992)参照）。
【００５２】
本誘導体は視覚疾患を治療する、視覚を改善する、記憶障害を治療する、または記憶能力を増大すること等に有用な一つまたはそれ以上の有効量の因子と組み合わせて投与しても良い。
【００５３】
好ましい態様においては、誘導体と組み合わせられる因子は、自己免疫、炎症性および免疫関与の疾患の治療のための免疫抑制薬；障害または手術に由来する損傷の治療のための創傷治療薬；異常に高い眼内圧の治療のための抗緑内障薬；神経変性の治療または神経突起成長の刺激のための神経栄養因子および成長因子；黄斑変性症の治療のための出血または血管新生の制限または予防に有効な化合物；および眼組織に対する酸化損傷の治療のための抗酸化薬よりなる群から選択される。
【００５４】
本発明の医薬組成物
本発明はまた、
（ｉ）動物において、視覚疾患を治療する、視覚を改善する、記憶障害を治療する、または記憶能力を増大するための有効量の誘導体と、
（ｉｉ）医薬的に許容可能なキャリア
を含む医薬組成物にも関する。
該誘導体は、視覚疾患を治療する、視覚を改善する、記憶障害を治療する、または記憶能力を増大することに有用な有効量の一つまたはそれ以上の要素との組み合わせで該動物に投与され得る。
【００５５】
ピペコリン酸誘導体
本発明の方法および医薬組成物において使用されるピペコリン酸誘導体は、ＦＫＢＰ１２のようなＦＫＢＰ型イムノフィリンについての親和性を有する。ピペコリン酸誘導体がＦＫＢＰ型イムノフィリンに結合すると、プロリル−ペプチジルシス−トランスイソメラーゼ、またはロタマーゼ、結合タンパクの活性を阻害することが判明している。思いがけず、該化合物はまた、毛髪成長を刺激することも判明した。これらのロタマーゼ阻害化合物は、免疫抑制性または非免疫抑制性であり得る。有用な化合物の例を以下に説明する。
【００５６】
化合物１
引用により本願明細書に組み入れられるオカイン等のBiochemical and Biophysical Research Communications, Vol.192, No.3, 1993は、式Ｉによって表される例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。該化合物は、ワイス−アヤーストで、フィル フュージェス博士により、４−フェニル−１，２，４−トリアゾリン−３，５−ジオンとラパマイシンとの反応によって合成された。
【化３】
2011088934.tif 000005
【００５７】
化合物２
引用によって本願明細書に組み入れられるチャクラボルティ等のChemistry and Biology, Vol.2, pp.157-161, march 1995は、式ＩＩによって表される例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【化４】
2011088934.tif 000006
【００５８】
化合物３〜５
引用により本願明細書に組み入れられるイケダ等のJ. Am. Chem. Soc., Vol.116, pp.4143-4144, 1994は、式ＩＩＩおよび表Ｉによって表される例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【化５】
2011088934.tif 000007
【表１】
2011088934.tif 000008
【００５９】
化合物６〜９
引用により本願明細書に組み入れられるワン等のBioorganic and Medicinal Chemistry
Letters, Vol.4, No.9, pp.1161-1166, 1994は、式ＩＶおよび表ＩＩによって表される例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【化６】
2011088934.tif 000009
【表２】
2011088934.tif 000010
【００６０】
化合物１０
引用により本願明細書に組み入れられるバーケンショー等のBioorganic & Medicinal Chemistry Letters, Vol.4, No.21, pp. 2501-2506, 1994は、例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【００６１】
化合物１１〜２１
引用により本願明細書に組み入れられるホルト等のJ. Am. Chem. Soc., Vol.115, pp.9925-9938, 1993は、式ＶＩ並びに表ＩＩＩおよびＩＶによって表される例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【化７】
2011088934.tif 000011
【表３】
2011088934.tif 000012
【００６２】
【表４】
2011088934.tif 000013
【００６３】
【表５】
2011088934.tif 000014
【００６４】
化合物２２〜３０
引用により本願明細書に組み入れられるカフェリー等のBioorganic & Medicinal Chemistry Letters, Vol.4, No.21, pp.2507-2510, 1994は、式ＶＩＩ〜ＩＸおよび表Ｖ〜ＶＩＩによって表される例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【００６５】
【化８】
2011088934.tif 000015
【表６】
2011088934.tif 000016
【００６６】
【化９】
2011088934.tif 000017
【表７】
2011088934.tif 000018
【００６７】
化合物３１
引用により本願明細書に組み入れられるティーグ等のBioorganic & Medicinal Chemistry Letters, Vol.3, No.10, pp.1947-1950, 1933は、例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【００６８】
化合物３２〜３４
引用により本願明細書に組み入れられるヤマシタ等のBioorganic & Medicinal Chemistry Letters, Vol.4, No.2, pp.325-328, 1994は、式ＸＩおよび表ＶＩＩＩによって表される例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【化１０】
2011088934.tif 000019
【表８】
2011088934.tif 000020
【００６９】
化合物３５〜５５
引用により本願明細書に組み入れられるホルト等のBioorganic & Medicinal Chemistry
Letters, Vol.4, No.2, pp.315-320, 1994は、式ＸＩＩおよび表ＩＸ〜ＸＩによって表される例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【化１１】
2011088934.tif 000021
【表９】
2011088934.tif 000022
【００７０】
【表１０】
2011088934.tif 000023
【００７１】
【表１１】
2011088934.tif 000024
【００７２】
【表１２】
2011088934.tif 000025
【００７３】
化合物５６〜６８
引用により本願明細書に組み入れられるホルト等のBioorganic & Medicinal Chemistry
Letters, Vol.3, No.10, pp.1977-1980, 1993は、式ＸＩＩＩおよびＸＩＶ並びに表ＸＩＩ〜ＸＩＶによって表される例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【化１２】
2011088934.tif 000026
【表１３】
2011088934.tif 000027
【００７４】
【化１３】
2011088934.tif 000028
【表１４】
2011088934.tif 000029
【００７５】
【表１５】
2011088934.tif 000030
【００７６】
【表１６】
2011088934.tif 000031
【００７７】
化合物６９〜８３
引用により本願明細書に組み入れられるハウスケ等のJ. Med. Chem., Vol.35, pp.4284-4296, 1992は、式ＸＶ〜ＸＶＩＩＩおよび表ＸＶ〜ＸＶＩＩＩによって表される例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【化１４】
2011088934.tif 000032
【表１７】
2011088934.tif 000033
【００７８】
【化１５】
2011088934.tif 000034
【表１８】
2011088934.tif 000035
【００７９】
【表１９】
2011088934.tif 000036
【００８０】
【化１６】
2011088934.tif 000037
【表２０】
2011088934.tif 000038
【００８１】
【化１７】
2011088934.tif 000039
【表２１】
2011088934.tif 000040
【００８２】
【表２２】
2011088934.tif 000041
【００８３】
化合物８４
引用により本願明細書に組み入れられるティーギュ等のBioorganic & Med. Chem. Lett
ers, Vol.4, No.13, pp.1581-1584, 1994は、式ＸＩＸによって表される例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【化１８】
2011088934.tif 000042
【００８４】
化合物８５〜８８
引用により本願明細書に組み入れられるストックス等のBioorganic & Med. Chem. Letters, Vol.4, No.12, pp.1457-1460, 1994は、式ＸＸ並びに表ＸＩＸおよびＸＸによって表される例示的なピペコリン酸誘導体を開示する。
【００８５】
【表２３】
2011088934.tif 000043
【００８６】
化合物８９〜１１０
さらなる例示的なピペコリン酸誘導体は、式ＸＸＩ〜ＸＸＶおよび表ＸＸＩ〜ＸＸＶによって表される。
【化１９】
2011088934.tif 000044
【表２４】
2011088934.tif 000045
【００８７】
【表２５】
2011088934.tif 000046
【００８８】
【化２０】
2011088934.tif 000047
【表２６】
2011088934.tif 000048
【００８９】
【化２１】
2011088934.tif 000049
【表２７】
2011088934.tif 000050
【００９０】
【化２２】
2011088934.tif 000051
【表２８】
2011088934.tif 000052
【００９１】
【化２３】
2011088934.tif 000053
【表２９】
2011088934.tif 000054
【００９２】
上記で示した化合物のいくつかの名称を以下の表ＸＸＶＩに与える。
【表３０】
2011088934.tif 000055
【００９３】
【表３１】
2011088934.tif 000056
【００９４】
【表３２】
2011088934.tif 000057
【００９５】
【表３３】
2011088934.tif 000058
【００９６】
【表３４】
2011088934.tif 000059
【００９７】
【表３５】
2011088934.tif 000060
【００９８】
【表３６】
2011088934.tif 000061
【００９９】
【表３７】
2011088934.tif 000062
【０１００】
【表３８】
2011088934.tif 000063
【０１０１】
式Ｉ〜ＸＸＶで表される全ての化合物は不斉中心を有し、そしてそれ故、立体異性体の混合物として、または個々のＲ−およびＳ−立体異性体として生成されることができる。個々の立体異性体は、光学活性開始材料を使用することにより、合成の幾つかの適当な工程で中間体のラセミまたは非ラセミ混合物を分割することにより、または式Ｉ〜ＸＸＶで表される化合物を分割することにより得られ得る。式Ｉ〜ＸＸＶで表される化合物は、個々の立体異性体並びに立体異性体の混合物（ラセミおよび非ラセミ）を包含すると理解される。好ましくは、Ｓ−立体異性体が本発明の医薬組成物および方法において使用される。
【０１０２】
ＦＫＢＰ１２についての親和性
本発明の方法および医薬組成物において使用される化合物は、ＦＫ５０６結合タンパク、特にＦＫＢＰ１２についての親和性を有する。ＦＫＢＰのプロリルペプチジルシス−トランスイソメラーゼ活性の阻害は、この親和性の尺度として測定され得る。
【０１０３】
Ｋi試験手順
本発明の方法および医薬組成物において使用される化合物のペプチジル−プロリルイソメラーゼ（ロタマーゼ）活性の阻害は、文献（ハーディング等、Nature, 1989, 341:758-760；ホルト等、J. Am. Chem. Soc., 115:9923-9938）において記載される既知の方法により評価されることができる。これらの値は見掛けのＫi’として得られ、そして表ＸＸＶＩＩにおいて代表化合物について表される。
モデル基質、Ｎ−スクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐ−ニトロアニリド中のアラニン−プロリン結合のシス−トランス異性化は、キモトリプシン結合アッセイにおいて分光光度法により観測され、該アッセイは、基質のトランス体からパラニトロアニリドを放出する。異なる濃度の阻害剤の添加により引き起こされるこの反応の阻害が決定され、そしてデータは阻害剤濃度の関数としての一次速度定数における変化として分析されて、見掛けのＫi値を与える。
プラスチックキュベット中に、氷冷アッセイバッファ（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．８、１００ｍＭ ＮａＣｌ）９５０ｍｌ、ＦＫＢＰ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ ｐＨ７．５中で２．５ｍＭ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭジチオスレイトール）１０ｍｌ、キモトリプシン（１ｍＭ ＨＣｌ中で５０ｍｇ／ｍｌ）２５ｍｌおよびジメチルスルホキシド中の様々な濃度での試験化合物１０ｍｌを添加する。反応は、基質（スクシニル−Ａｌ
ａ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−パラ−ニトロアニリド、トリフルオロエタノール中の２．３５ｍＭ ＬｉＣｌ中で５ｍｇ／ｍｌ）５ｍｌの添加により開始される。
時間に対する３９０ｎｍでの吸光度が、分光光度計を使用して９０秒間観測され、そして速度定数が、時間データファイルに対する吸光度から決定される。
【０１０４】
【表３９】
2011088934.tif 000064
【０１０５】
【表４０】
2011088934.tif 000065
【０１０６】
投与方法
効果的に視覚損失を治療するまたは視覚再生を促進するために、本発明の方法および医薬組成物において使用される化合物は、標的範囲に容易に影響しなければならない。これらの目的のために、本化合物は好ましくは、［皮膚に局所的に］投与される。
投与量
本活性成分化合物の約０．１ｍｇないし約１０，０００ｍｇの単位での投与水準は、上記状態の治療において有用であり、好ましい水準は、約０．１ｍｇないし約１，０００ｍｇである。いずれかの特定の患者についての特別な投与水準は、用いられる特定化合物の活性；患者の年齢、体重、一般的健康状態、性別および食物；投与の時間；排泄率；薬剤の組合せ；治療される特定疾病の重症度；並びに投与の形態を含む様々な因子に依存して変化する。典型的に、インビトロ投与量−効果結果は、患者への投与のための適切な投与量についての有用な指針を与える。動物モデルにおける研究もまた有用である。適切な投与水準を決定するための考慮は、従来技術において良く知られている。
本化合物は、他の毛髪再生剤と共に投与されることができる。他の毛髪再生剤についての特定の投与水準は、前述の因子および薬剤の組合せの有効性に依存する。
【図面の簡単な説明】
【０１０７】
【図１】図１Ａ、ＢおよびＣは、ＧＰＩ１０４６が網膜虚血後の変性に対する網膜ガングリオン細胞を保護することを図示する。
【図２】図２は、ＧＰＩ１０４６が網膜虚血後の視神経軸索およびミエリンの変性を予防することを図示する。
【図３】図３は、ＧＰＩ１０４６が、視神経離断後の網膜ガングリオン細胞死亡に対する中程度の保護を与えることを図示する。
【図４】図４は、ＧＰＩ１０４６治療期間が離断後の視神経軸索の変性の過程に有意に影響することを図示する。
【図５】図５は、ＧＰＩ１０４６治療がガングリオン細胞本体よりも視神経軸索についてより大きい影響を生じることを図示する。
【図６】図６は、視神経離断後２８日間のＧＰＩ１０４６治療が近位断端におけるミエリン変性を予防することを図示する。
【図７】図７は、ＦＫＢＰ−１２免疫組織化学は、視神経繊維束の間に位置しミエリンを産生する寡突起膠細胞（繊維状突起を有する大きい暗い細胞）、およびまた幾つかの視神経軸索を標識する。
【図８】図８は、視神経離断後２８日間のＧＰＩ１０４６治療が遠位断端におけるミエリン変性を予防することを図示する。
【図９】図９は、ストレプトゾトシン誘発糖尿病の発症８週間後に始めたＧＰＩ１０４６治療での２８日間治療は、内側および外側の網膜における血管新生の程度を低下させ、そして内核層（ＩＮＬ）およびガングリオン細胞層（ＧＣＬ）中のニューロンを変性から保護することを図示する。
【実施例】
【０１０８】
実施例
以下の実施例は本発明の説明であり、そしてそれらに限定することを意図しない。他に示されない限り、全ての百分率は最終組成物の１００重量％に基づく。
【０１０９】
実施例１
３−フェニル−１−プロピル（２Ｓ）−１−（３，３−ジメチル−１，２−ジオキソペンチル）−２−ピロリジンカルボキシレートの合成（１）
メチル（２Ｓ）−１−（１，２−ジオキソ−２−メトキシエチル）−２−ピロリジンカルボキシレート
乾燥塩化メチレン中のＬ−プロリンメチルエステルヒドロクロライド（３．０８ｇ、１８．６０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、そしてトリエチルアミン（３．９２ｇ、３８．７４ｍｍｏｌ、２．１当量）で処理した。形成したスラリーを窒素雰囲気下で１５分間攪拌した後、塩化メチレン（４５ｍｌ）中のメチルオキサリルクロライド（３．２０ｇ、２６．１２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。生じた混合物を０℃で１．５時間攪拌した。濾過して固形分を除去した後、有機相を水で洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、そして濃縮した。粗残渣を、ヘキサン中の５０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルカラムで精製して、赤みを帯びた油状物として生成物３．５２ｇ（８８％）を得た。シス−トランスアミド回転異性体の混合物であり、該トランス回転異性体に対するデータを与える。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：ｄ１．９３（ｄｍ、２Ｈ）；２．１７（ｍ、２Ｈ）；３．６２（ｍ、２Ｈ）；３．７１（ｓ、３Ｈ）；３．７９、３．８４（ｓ、３Ｈ全体）；４．８６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．４、３．３）。
【０１１０】
メチル（２Ｓ）−１−（１，２−ジオキソ−３，３−ジメチルペンチル）−２−ピロリジンカルボキシレート
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）３０ｍｌ中のメチル（２Ｓ）−１−（１，２−ジオキソ−２−メトキシエチル）−２−ピロリジンカルボキシレート（２．３５ｇ、１０．９０ｍｍｏｌ）の溶液を−７８℃に冷却し、そしてＴＨＦ中の１，１−ジメチルプロピルマグネシウムクロライドの１．０Ｍ溶液１４．２ｍｌで処理した。生じた均質混合物を−７８℃で３時間攪拌した後、該混合物を飽和塩化アンモニウム（１００ｍｌ）に注ぎ、そして酢酸エチル中に抽出した。有機相を水で洗浄し、乾燥し、そして濃縮し、そして溶媒の除去により得られた粗物質を、ヘキサン中の２５％酢酸エチルで溶出するシリカゲルカラムで精製して、無色油状物としてオキサメート２．１０ｇ（７５％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：ｄ０．８８（ｔ、３Ｈ）；１．２２、１．２６（ｓ、各々３Ｈ）；１．７５（ｄｍ、２Ｈ）；１．８７〜２．１０（ｍ、３Ｈ）；２．２３（ｍ、１Ｈ）；３．５４（ｍ、２Ｈ）；３．７６（ｓ、３Ｈ）；４．５２（ｄｍ、１Ｈ、Ｊ＝８．４，３．４）。
【０１１１】
（２Ｓ）−１−（１，２−ジオキソ−３，３−ジメチルペンチル）−２−ピロリジンカルボン酸の合成
メチル（２Ｓ）−１−（１，２−ジオキソ−３，３−ジメチルペンチル）−２−ピロリジンカルボキシレート（２．１０ｇ、８．２３ｍｍｏｌ）、１Ｎ・ＬｉＯＨ（１５ｍｌ）およびメタノール（５０ｍｌ）の混合物を、０℃で３０分間および室温で一晩攪拌した。該混合物を１Ｎ・ＨＣｌでｐＨ１に酸性化し、水で希釈し、そして塩化メチレン１００ｍｌ中に抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、そして濃縮して、さらに精製することを必要としないスノーホワイトの固形分１．７３ｇ（８７％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：ｄ０．８７（ｔ、３Ｈ）；１．２２、１．２５（ｓ、各々３Ｈ）；１．７７（ｄｍ、２Ｈ）；２．０２（ｍ、２Ｈ）；２．１７（ｍ、１Ｈ）；２．２５（ｍ、１Ｈ）；３．５３（ｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝１０．４、７．３）；４．５５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．６、４．１）。
【０１１２】
３−フェニル−１−プロピル（２Ｓ）−１−（３，３−ジメチル−１，２−ジオキソペン
チル）−２−ピロリジンカルボキシレート（１）
塩化メチレン（２０ｍｌ）中の（２Ｓ）−１−（１，２−ジオキソ−３，３−ジメチルペンチル）−２−ピロリジンカルボン酸（６００ｍｇ、２．４９ｍｍｏｌ）、３−フェニル−１−プロパノール（５０８ｍｇ、３．７３ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（８２２ｍｇ、３．９８ｍｍｏｌ）、カンファスルホン酸（１９０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（１００ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素雰囲気下で一晩攪拌した。該反応混合物をセライトを通して濾過して固形分を除去し、そして真空下で濃縮し、そして粗物質をフラッシュカラム（ヘキサン中の２５％酢酸エチル）上で精製して、無色油状物として実施例１の７２０ｍｇ（８０％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：ｄ０．８４（ｔ、３Ｈ）；１．１９（ｓ、３Ｈ）；１．２３（ｓ、２３）；１．７０（ｄｍ、２Ｈ）；１．９８（ｍ、５Ｈ）；２．２２（ｍ、１Ｈ）；２．６４（ｍ、２Ｈ）；３．４７（ｍ、２Ｈ）；４．１４（ｍ、２Ｈ）；４．５１（ｄ、１Ｈ）；７．１６（ｍ、３Ｈ）；７．２６（ｍ、２Ｈ）
【０１１３】
図１．  ＧＰＩ１０４６は、網膜虚血後の変性に対して網膜ガングリオン細胞を保護する。
網膜ガングリオン細胞は、それらの外側膝状体核中にフルオロ金（ｆｌｕｏｒｏｇｏｌｄ）を両側注射することにより、成熟したラットにおいて逆行標識した。健常ラット網膜中の標識したガングリオン細胞は、暗い背景に対して白い輪郭として示される（図１Ａ）。眼内圧が動脈の血圧を超えるまで、通常の生理食塩水溶液を各々の眼の網膜の硝子体腔に注入することにより、完全な網膜性虚血が生じた。虚血経験２８日後に、網膜ガングリオン細胞の広範囲な変性がフルオロ金標識された細胞の密度における大きな減少によって証明された（図１Ｂ）。前記虚血経験の１時間前のＧＰＩ１０４６の投与（１０ｍｇ／ｋｇ、皮下注射）、および続く４日間の１０ｍｇ／ｋｇ／日での投与は、傷つき易いガングリオン細胞母集団の大きな比率の認識可能な保護を生じた。
【０１１４】
図２．  ＧＰＩ１０４６は、網膜虚血後の視神経軸索およびミエリンの変性を予防する。
同一の網膜虚血の場合からの視神経の調査は、ＧＰＩ１０４６が虚血性変性からの視神経要素の劇的な保護を生じることを明示した。エポンに包埋された視神経の横断面のトルイジンブルー染色は、健常ラットの視神経におけるミエリン鞘（白色環）および視神経軸索（黒色中心）の詳細を明示した。１時間の網膜虚血経験２８日後に試験された賦形剤処理の場合からの視神経は、視神経軸索の減少した密度および多数の変性したミエリン像の出現（明るい白色で満たされた環）により特徴付けられる。ＧＰＩ１０４６での治療は、変性から大部分の視神経軸索を保護し、そしてまた変性したミエリン像の密度を劇的に減少した。
【０１１５】
図３．  ＧＰＩ１０４６は、視神経離断後の網膜ガングリオン細胞死に対して中程度の保護を与える。
眼球から５ｍｍの視神経の完全な離断は、網膜ガングリオン細胞の大きな変性を生じさせて、傷害９０日後に、健常ガングリオン細胞母集団の＞８７％の損失を示した（表A）。僅かに助かりフルオロ金で前標識されたガングリオン細胞（大きい白色の像）が、賦形剤処理の場合に、変性細胞の残骸を消化しそしてフルオロ金標識を取り込む多数の小さいミクログリア細胞の母集団の間に存在する（図３Ａ）。１４日間のＧＰＩ１０４６での治療は、離断後９０日に生存した網膜ガングリオン細胞の密度において、小さいが有意でない増加を生じたが（表Ａ）、しかし、離断後最初の２８日間のＧＰＩ１０４６での治療は、傷つき易いガングリオン細胞母集団の１２．６％の中程度であるが有意な保護を生じた（表Ａ、図３Ｂ）。
【０１１６】
図４．  ＧＰＩ１０４６治療期間は、離断後の視神経軸索変性の過程に有意な影響を及
ぼす。
前記同じ場合からの視神経の近位断端における視神経軸索密度の調査は、ＧＰＩ１０４６治療により得られるさらに劇的な保護を明示した。離断９０日後、ほとんどのガングリオン細胞軸索が視神経内に残らず（図４Ｂ）、健常な母集団の５．６％のみを示した。軸索の損失は、網膜ガングリオン細胞の死、および少数の生存しているガングリオン細胞母集団の〜７０％の軸索の、網膜自体への後退または“退化”の双方に反映する（表A）。視神経離断後の最初の１４日間のＧＰＩ１０４６での治療は、視神経軸索の小さいが有意な５．３％の保護を生じた（図４Ｄ、表Ａ）。しかし、２８日間のＧＰＩ１０４６の同じ投与量での治療は、助かった網膜ガングリオン細胞の大部分（８１．４％）について視神経軸索の保護を生じた（図４Ｃ、表Ａ）。
【０１１７】
図５．  ＧＰＩ１０４６治療は、ガングリオン細胞本体よりも視神経軸索により大きな効果を生じる。
このことをまとめた図は、図３のガングリオン細胞保護からのデータおよび視神経軸索保護のより高い倍率の顕微鏡写真に示される（図５Ａ＆Ｂ、上部パネル）。ＧＰＩ１０４６での２８日の治療は、大きい、そして特に中程度および小さい径の視神経軸索の密度における有意な増加を生じた（図５Ｃ＆Ｄ、下部パネル）。
【０１１８】
図６．  視神経離断後の２８日間のＧＰＩ１０４６治療は、近位断端におけるミエリン変性を阻害する。
ミエリン塩基性タンパク質免疫組織化学は、健常視神経中のミエリン化された軸索の束（より暗く標識された‘島部’）を標識する（図６Ａ、左上）。離断９０日後に、ミエリンの広範囲な変性が賦形剤治療の場合において示され、束組織の損失および多数で大きく密な変性ミエリン像の出現により特徴付けられる（図６Ｂ、右上）。視神経離断後の最初の１４日間のＧＰＩ１０４６での治療は、ミエリン変性の様子を変化させず（図６Ｃ、左下パネル）、そしてミエリン密度における有意でない１．６％の定量的回復を与えた（表Ａ）。視神経離断後の最初の２８日間を通したＧＰＩ１０４６治療期間の延長は、視神経の近位断端におけるミエリン塩基性蛋白質についての束染色パターンの劇的な保存を生じ、そして変性したミエリン像の密度を減少させ（図６Ｄ、右下パネル）、ミエリン密度の’７０％の回復を示した（表Ａ）。
【０１１９】
図７．ＫＢＰ−１２免疫組織化学は、視神経繊維束の間に位置しミエリンを産生する寡突起膠細胞（繊維状突起を有する大きい暗い細胞）、およびまた幾つかの視神経軸索を標識する。
【０１２０】
図８．  視神経離断後２８日間のＧＰＩ１０４６治療は、遠位断端におけるミエリン変性を阻害する。
視神経の完全な離断は、遠位部分（ガングリオン細胞本体から分離された軸索部分）の変性、それらのミエリン鞘の変性を導く。離断９０日後（図８Ｂ）に、ミエリン塩基性タンパク質免疫組織化学は、束組織（健常視神経中に存在する、図８Ａ）のほぼ全体の損失および多数の密な変性ミエリン像の存在を明示する。定量化は、離断された遠位断端の断面積の３１％、およびそのミエリンのほぼ１／２の損失を明示する（表Ａ）。離断後の最初の１４日間のＧＰＩ１０４６での治療は遠位断端の収縮に対して保護しなかったが、しかし、変性ミエリン像の密度は高いまま残存したけれども、ミエリンの密度を僅かに増加した（図８Ｃ、表Ａ）。最初の２８日間を通したＧＰＩ１０４６治療は、ミエリン標識の束パターンの劇的な保護を生じ、変性ミエリン像の密度を減少させ、離断された神経の遠位断端の断面収縮を予防し、そしてミエリン水準を健常レベルの〜９９％に維持した（図８Ｄ、表Ａ）。
【０１２１】
図９．ストレプトゾトシン誘発糖尿病の発症８週間後に始めたＧＰＩ１０４６治療での
２８日間治療は、内側および外側の網膜における血管新生の程度を低下させ、そして内核層（ＩＮＬ）およびガングリオン細胞層（ＧＣＬ）中のニューロンを変性から保護する。
クレシルバイオレット染色された周縁網膜部分のネガ画は、三つの細胞層における核周辺を明示する（図９Ａ）。賦形剤のみを投与されたストレプトゾトシン処置動物の網膜（図９Ｂ）は、ＯＮＬおよびＩＮＬからの細胞の損失、外部網状層（ＯＮＬとＩＮＬとの間の暗い領域）の減少した厚さ、およびＩＮＬ、ＯＰＬ、ＯＮＬおよび光受容体層（ＰＲ、ＯＮＬの上の灰色の不明瞭な領域）における網膜血管（大きい黒い環状の外形）の寸法および密度における劇的な増加を示した。ＧＰＩ１０４６治療は、ＰＲ、ＯＮＬ、ＯＰＬおよびＩＮＬにおける血管新生を減少させた（即ち、血管の増殖を予防した。）。ＧＰＩ１０４６はＯＮＬにおけるニューロンの損失に対する保護を示さなかったけれども、ストレプトゾトシン／賦形剤治療した対照と比較して、ＩＮＬおよびＧＣＬの双方における神経の損失を減少させることを示した。
【０１２２】
実施例２
インビボ網膜ガングリオン細胞および視神経軸索試験
視神経に対する機械的損傷をシミュレーションするために、手術による視神経離断を利用した視力損失モデルにおいて、網膜ガングリオン細胞および視神経軸索における変性の減少または予防の程度を決定した。網膜ガングリオン細胞神経保護および視神経軸索密度についての幾つかのニューロイムノフィリンＦＫＢＰリガンドの効果を、１４日および２８日のニューロイムノフィリンＦＫＢＰリガンド治療を比較して実験的に決定した。網膜ガングリオン細胞および視神経軸索についてのニューロイムノフィリンＦＫＢＰリガンドでの治療効果は相関した。
【０１２３】
手術手順
成熟した雄のスプラギューダウレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ）ラット（３月齢、２２５〜２５０グラム）を、ケタミン（８７ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１３ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した。網膜ガングリオン細胞を、ＬＧＮｄ（４．５ミリメートル後位β、３．５ミリメートル外側、４．６ミリメートル硬膜下）の座標で、蛍光逆行移送マーカー、フルオロ−金（ＦＧ、生理食塩水中２．５％溶液０．５マイクロリットル）の両側固定注射により前標識した。４日後、ＦＧ標識したラットに、眼窩の４〜５ミリメートル後方の顕微手術による両側眼窩内視神経離断について２回目の手術を行った。
実験動物は、一群当り６匹のラット（眼球１２個）からなる六つの実験群に分けた。一つの群は、ニューロイムノフィリンＦＫＢＰリガンド（ＰＥＧ賦形剤中で１ｋｇ当たり１日当たり１０ミリグラムの皮下注射（２０％プロピレングリコール、２０％エタノールおよび６０％生理食塩水））を１４日間受けた。二つ目の群は、同様のニューロイムノフィリンＦＫＢＰリガンド投与を２８日間受けた。各々の治療した群は、賦形剤のみでの投与を相当する１４または２８日受ける、相当する擬似／手術および離断の対照群を有した。
全動物は、視神経離断後９０日に安楽死させ、ホルマリンで心膜により灌流した。全ての眼球および視神経根を除去した。視神経脈管構造が損傷を受けている場合、またはＦＧラベルが網膜上に存在しない場合は、研究から除外した。
【０１２４】
網膜ガングリオン細胞数
網膜を目から除去し、全載分析のために準備した。各々のグループについて、２０倍率の対物レンズを使用する定量分析のために、濃密で強いＦＧ標識を有する五つの眼球を選択した。デジタル像は、中心網膜の五つの領域（視神経頭部に対して３〜４ミリメートル外側）から得た。ＦＧラベルした大（＞１８μｍ）、中（１２〜１６μｍ）、および小（＜１０μｍ）のガングリオン細胞およびミクログリアを、一つの場合当り五つの４００μｍ×４００μｍの範囲において、一群当り５場合計数した。
【０１２５】
視神経の調査
近位および遠位の視神経断端を確認し、測定し、そして３０％スクロース生理食塩水に移動した。五つの神経の近位断端をブロックし、チャック（ｃｈｕｃｋ）に貼り付け、そして１０ミクロンの断面をクリオスタットで切断し、一組当り十断面のうちの一つを取っておいた。眼窩の後方１〜２ｍｍの領域を含む断面を、ＲＴ９７ニューロフィラメント免疫組織化学について反応させた。視神経軸索密度の分析は、６３倍率オイル浸漬レンズ、デイジ８１カメラ、およびシンプルイメージアナリシスプログラムを使用して行った。ＲＴ９７陽性の視神経軸策を、一つの神経当り三つの２００μｍ×２００μｍの範囲で計数した。神経の範囲はまた、各々の場合について１０倍率で決定した。
表ＡおよびＢにグラフにより示されるように、ニューロイムノフィリンＦＫＢＰリガンドでの１４日間の治療は、視神経離断２８日後に観測される網膜ガングリオン細胞の中程度の神経保護を与えた。しかしながら、離断後９０日では、ガングリオン細胞細胞母集団の５％のみが生存できる状態で残存した。
視神経離断後９０日、視神経の近位断端に生き残っている軸索の数は、賦形剤単独またはニューロイムノフィリンＦＫＢＰリガンドでの１４日間の治療を受けた動物の群で生存しているガングリオン細胞の数のおよそ２分の１であった。これらの結果は、離断したガングリオン細胞軸索の半分以上が視神経頭部を超えて退縮すること、および視神経離断後最初の１４日の間のニューロイムノフィリンＦＫＢＰリガンドでの治療は、この退縮を阻止するに充分ではないことを示す。
表ＡおよびＢにグラフにより示されるように、２８日間の治療の間により延長されたニューロイムノフィリンＦＫＢＰリガンドでの治療は、網膜ガングリオン細胞神経保護における中程度の増加を生じた。傷つき易い網膜ガングリオン細胞母集団のおよそ１２％が保護された。同様の比率（〜５０％）の視神経軸索密度の保護も観察された。これらの結果は、ニューロイムノフィリンＦＫＢＰリガンドでの治療の期間を離断後２８日まで延長することは、本質的には網膜ガングリオン細胞の全ての生存している母集団について、損傷を受けた軸策の退縮を完全に阻止するという驚くべき結果を示す。
さらなる結果を表ＣおよびＤにおいて説明する。
【０１２６】
表Ａ視神経離断９０日後の網膜ガングリオン細胞生存、視神経軸索保護およびミエリン形成についての延長されたＧＰＩ１０４６治療の効果
【表４１】
2011088934.tif 000066
*有意性Ｐ＜０．００１
1４００μｍ×４００μｍの試料グリッド領域におけるフルオロ−金標識した網膜ガングリオン細胞（ＲＧＣ）の平均密度＋ＳＥＭ
2関心のある２００μｍ×２００μｍの領域におけるＲＴ９７ニューロフィラメント抗体で標識した視神経（ＯＮ）軸索の平均密度＋ＳＥＭ
*２００μｍ×２００μｍの領域では健常ラット視神経１２００００ＲＧＣ軸索があると
推定した場合、その平均離断面積は０．６３０ｍｍ2と予測
3視神経直径に対して調製した
4軸索密度とＯＮ領域を乗することにより算出した
5視神経断面の％被覆面積の２０倍分析から決定した
【０１２７】
表Ｂ
視神経離断後の網膜ガングリオン細胞についてのＧＰＩ１０４６の神経保護の効果
【表４２】
2011088934.tif 000067
【０１２８】
表Ｃ
視神経離断および１４または２８日のＧＰＩ１０４６治療９０日後の網膜ガングリオン細胞と視神経軸索の保護との相関
【表４３】
2011088934.tif 000068
【０１２９】
表Ｄ
離断後の近位断端におけるＧＰＩ１０４６保存視神経軸索
【表４４】
2011088934.tif 000069
【０１３０】
実施例３
患者は斑状変性を患っている。上記で認識した誘導体、単独または他のネオプシス性因子の一つまたはそれ以上との組み合わせ、または同様のものを含む医薬組成物を該患者に投与し得る。視覚損失における減少、視覚変性の予防、および／または視覚再生の促進が治療に続いて生じることが期待される。
【０１３１】
実施例４
患者は緑内障を患っており、視神経円板の称状形成および神経繊維の損傷が生じている。上記で認識した誘導体、単独または他のネオプシス性因子の一つまたはそれ以上との組み合わせ、または同様のものを含む医薬組成物を該患者に投与し得る。視覚損失における減少、視覚変性の予防、および／または視覚再生の促進が治療に続いて生じることが期待される。
【０１３２】
実施例５
患者は手術を必要とする白内障を患っている。手術後、上記で認識した誘導体、単独または他のネオプシス性因子の一つまたはそれ以上との組み合わせ、または同様のものを含む医薬組成物を該患者に投与し得る。視覚損失における減少、視覚変性の予防、および／または視覚再生の促進が治療に続いて生じることが期待される。
【０１３３】
実施例６
患者は、糖尿病性網膜症、虚血性眼性神経障害、または網膜動脈もしくは静脈の閉塞に関連した網膜血行の障害または閉塞を患っている。上記で認識した誘導体、単独または他のネオプシス性因子の一つまたはそれ以上との組み合わせ、または同様のものを含む医薬
組成物を該患者に投与し得る。視覚損失における減少、視覚変性の予防、および／または視覚再生の促進が治療に続いて生じることが期待される。
【０１３４】
実施例７
患者は網膜剥離を患っている。上記で認識した誘導体、単独または他のネオプシス性因子の一つまたはそれ以上との組み合わせ、または同様のものを含む医薬組成物を該患者に投与し得る。視覚損失における減少、視覚変性の予防、および／または視覚再生の促進が治療に続いて生じることが期待される。
【０１３５】
実施例８
患者は、ブドウ膜炎または結膜炎と関連する炎症により引き起こされた組織損傷を患っている。上記で認識した誘導体、単独または他のネオプシス性因子の一つまたはそれ以上との組み合わせ、または同様のものを含む医薬組成物を該患者に投与し得る。視覚損失における減少、視覚変性の予防、および／または視覚再生の促進が治療に続いて生じることが期待される。
【０１３６】
実施例９
患者は、紫外線光への慢性または急性暴露により引き起こされた光受容体傷害を患っている。上記で認識した誘導体、単独または他のネオプシス性因子の一つまたはそれ以上との組み合わせ、または同様のものを含む医薬組成物を該患者に投与し得る。視覚損失における減少、視覚変性の予防、および／または視覚再生の促進が治療に続いて生じることが期待される。
【０１３７】
実施例１０
患者は眼性神経障害を患っている。上記で認識した誘導体、単独または他のネオプシス性因子の一つまたはそれ以上との組み合わせ、または同様のものを含む医薬組成物を該患者に投与し得る。視覚損失における減少、視覚変性の予防、および／または視覚再生の促進が治療に続いて生じることが期待される。
【０１３８】
実施例１１
患者は、“ドライアイ”疾患と関連する組織傷害を患っている。上記で認識した誘導体、単独または他のネオプシス性因子の一つまたはそれ以上との組み合わせ、または同様のものを含む医薬組成物を該患者に投与し得る。視覚損失における減少、視覚変性の予防、および／または視覚再生の促進が治療に続いて生じることが期待される。
【０１３９】
実施例１２
網膜ガングリオン細胞軸索を視神経離断後の変性から保護することにおける、異なるイムノフィリンリガンド系列からの代表的な化合物の効能を表Ｅに示す。
【０１４０】
表Ｅ
網膜ガングリオン細胞軸索を視神経離断後の変性から保護することにおける、異なるイムノフィリンリガンド系列からの代表的な化合物の効能
【表４５】
2011088934.tif 000070
【０１４１】
表Ｅ続き
【表４６】
2011088934.tif 000071
【０１４２】
表Ｅ続き
【表４７】
2011088934.tif 000072
【０１４３】
実施例１３
ＦＫＢＰニューロイムノフィリンリガンドＧＰＩ−１０４６が、網膜ガングリオン細胞の生存を増大し、そして視神経離断後の軸索退化を阻止する。
哺乳類視神経の離断は短期間の結局は実を結ばない再生を生じるが、しかし軸索形成されたニューロンの大部分は死亡し、そして多くの残存するガングリオン細胞からの軸索は視神経細胞頭部を越えて退化する。本実施例は、視神経離断後のＧＰＩ−１０４６の神経保護効果を調査することをもくろんだ。
成熟した雄スプラギューダウレイラット中の網膜ガングリオン細胞を、ＬＧＮｄにおけるフルオロ金注射により逆行標識し、そして４日後、視神経を眼球の裏５ｍｍで離断した。動物の群は、ＧＰＩ−１０４６の１０ｍｇ／ｋｇ／日の皮下注射または賦形剤のいずれかを２８日間受けた。全ての実験動物および対照は、離断の９０日後に安楽死させた。
９０日のみでは、ＦＧ標識したガングリオン細胞母集団の１０％が生存していたが、しかし、ＲＴ９７ニューロフィラメント免疫組織化学で検出される通り、これらのニューロンの半分以下が視神経頭部を過ぎて延びる軸索を維持していた。ＧＰＩ−１０４６治療は中程度の核周囲部の神経保護を生じて、ガングリオン細胞母集団の２５％を助け、そして離断された神経の近位断端における実質的に全ての保護されたニューロンの軸索は保持した。これらの結果は、ＦＫＢＰニューロイムノフィリンリガンドＧＰＩ−１０４６での治療が、ＣＮＳ路への損傷後の病理学的過程における根本的な改善作用を生じることを示した。
これらの結果はまた、小分子のＦＫＢＰニューロイムノフィリンリガンドＧＰＩ−１０４６が、組織における神経突起成長を増大し、末梢神経再生を増大し、そして部分的な求心路遮断後のＣＮＳ内の発生を促進することを示した。
【０１４４】
実施例１４
ニューロイムノフィリンリガンドが、ストレプトゾトシン誘発糖尿病に関連する末梢感覚神経障害からの回復を促進する。
末梢神経障害は、糖尿病患者のおよそ３０〜４０％における、一般に衰弱させる２型糖尿病の合併症である。神経成長因子（ＮＧＦ）のような神経栄養因子は、末梢神経系（ＰＮＳ）の発達中および成熟したニューロンの生存を促進することが既知であり、そしてまた、糖尿病性末梢神経障害のための治療として評価されている。小分子ＧＰＩ−１０４６のような、ニューロイムノフィリンＦＫＢＰ−１２の選択的なリガンドの幾つかはまた、中枢および末梢の神経系における修復および再生を促進することも表されている（Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 94, 2019-2024, 1997）。
本実施例においては、ＧＰＩ−１０４６の可能性の高い治療効果を、ストレプトゾトシン誘発糖尿病のラットにおける感覚機能を改善するその能力について評価した。手順は、ストレプトゾトシンの一回の注射（６５ｍｇ／ｋｇ、脈管内注射）を受けた雄ウイスターラットを使用することを伴う。血中グルコース濃度は、最初の３週間について毎週、および実験の最後の週について決定した。動物は、感覚神経障害の徴候について、慣用のホットプレートおよびテールフリック器具試験手順を使用して毎週評価した。６週間後、ＧＰＩ−１０４６または賦形剤での治療を開始した。
結果は、ホットプレートおよびテールフリック器具を使用した行動試験が、６週間、１０ｍｇ／ｋｇの皮下注射でのＧＰＩ−１０４６で治療した病変した動物における潜在時間の改善を示した。該結果はまた、ＧＰＩ−１０４６が糖尿病性感覚神経障害の行動後遺症を改善し、そして糖尿病性末梢神経障害を被る患者について幾らかの軽減を与えうることを表した。
【０１４５】
モリスの水迷路／老化および記憶試験手順
老齢のげっ歯類は、改良Ｔ型迷路における二者選択空間識別、円形台作業における空間識別、受動的回避、放射状迷路作業、および水プールにおける空間進行を含む様々な行動作業についての能力において顕著な個々の差異を示す。
これらの作業の全てにおいて、老齢のラットまたはマウスの一部は若齢の対照動物の大部分と同じくらい良好に実行するが、一方、他の動物は、若齢の動物に比較して記憶機能における甚だしい障害を示す。例えば、フィッシャーおよび同僚は、空間進行において有意な障害を示すラットの比率は年齢と共に増加し（フィッシャー等、１９９１ｂ）、全ての１２月齢の８％、１８月齢の４５％、２４月齢の５３％、および全ての３０月齢の９０％のラットが、若齢の対象と比較して、モリスの水迷路の空間把握における障害を示すことを表した。
特に、げっ歯類の空間の学習および記憶が加齢の間に衰えることは、ヒト老年痴呆の興味のある相関した動物モデルとして、多くの調査者により認められている。海馬におけるコリン作用性機能は、げっ歯類における空間学習の要素として多方面にわたり研究されており、また、学習および記憶の障害の進行と平行した、海馬のコリン作用性機能の衰弱が注目されている。加えて、他の神経伝達物質系が空間学習に寄与し、そしてドーパミン作用性およびノルアドレナリン作用性、セロトニン作用性、並びにグルタメート作用性の系のように、年齢と共に衰えることが表されている。
また、海馬長期間電位（ＬＴＰ）−誘発の年齢関連衰弱、シータリズム頻度における減少、海馬定置単位の経験依存可塑性の喪失、および海馬プロテインキナーゼＣにおける減少についての報告は、単一の根底にある病理学がげっ歯類における年齢関連行動障害の原因として確認されることはできないという構想と一致する。しかしながら、老齢のげっ歯類における記憶機能を改善するために取られている様々な実験的な治療方法は、コリン作用性仮説に向けて幾らか傾いている。
モリスの水迷路は、実験動物における空間記憶の形成および保持を評価するために広く使用される。該試験は、水タンク中に水没した脱出台の位置を示すための、動物の空間視覚情報を利用する能力に依存する。タンク自身は可能な限り特有の視覚特徴を欠いており、それ故、常に形状が円形で、側面は滑らかでかつ均一なくすんだ色に保たれ、そして水
は非毒性の水性着色顔料または粉乳で不透明にされる。これは、より遠方の視覚手掛かりの使用によるか、または実験者によって特別に与えられる迷路内手掛かりの使用によってのみ動物が進行することを確実にする。タンクは、動物に積極的に泳ぐことを強制する水位まで満たされている。通常のマウスおよびラットは、試験の水泳部分に対して嫌がるように反応し、脱出台に上りそしてその上に止まるので、その後、熱せられた休息ケージへと移動させる。
台が視認可能（即ち、水面より上）な場合、タンク中に置かれた動物は、台上に帰ることを素早く学習し、そして台上に攀じ登る。視認可能な台での試験はまた、実験動物が盲目で無くかつ作業を実行するに十分な動機付けおよび元気を表すことであって、老齢のげっ歯類に伴う実験において重要なこととなり得ることを促進する。台が視認不可能（即ち、水面の直下に水没する）な場合、普通の動物は、試験タンク中での方向決定のために、試験室中の遠方の視覚手掛かりを使用することを学習し、そして、タンク中に置かれたとき、台のおよその位置の方向に素早く帰り、そして、台が見付かるまで、その範囲で回っている。
動物の経路、速度、および水泳時間を、後のコンピューター分析のために天井カメラで移動して撮影した。数回の成功した試行の間にわたり、従って、空間学習は、タンク中の位置から視認不可能な台上への脱出するまでの、泳いだ距離の低下、または経過した時間として定義した。
該試験は、空間記憶の幾つかの側面を評価するために適合させることができる：ａ）手掛かり作業の把握、一つの視覚手掛かりを脱出台と直接結び付ける動物の能力は皮質の機能に依存する（即ち、玉が脱出台の上に吊るされ、そして動物が台を見出すためにこの手掛かりを辿ることを学習する。）；ｂ）空間作業の把握、遠方の視覚手掛かりの組み合わせに基づき水没した脱出台の位置を学習する動物の能力は海馬の機能に依存する（即ち、動物が、ペーパータオル引出容器をドアおよび天井ランプと視覚的に整列させることによって、タンク中での位置を三角測量することを学習する。）；ｃ）皮質の機能に依存する、十分に獲得した空間作業の保持、（即ち、動物は数週にわたって台の空間位置を覚えていなければならない。）；ｄ）動物が新しい台の位置を再把握しなければならない、海馬依存性逆転作業（即ち、台の位置が水泳試行の間に新しい位置へと移動され、そして動物が以前の捜査手法を放棄して新しいものを把握しなければならない。）。
これらの異なるモリスの水路の改良は、実験動物の同じ組に連続して適用されることができ、そしてそれらの空間記憶能力および通常の加齢によるその衰弱の完全な特徴付けを可能にする。その上、そのような一連の連続する記憶試験は、空間記憶の獲得および保持に影響する特定の脳系の機能完全性について幾らか明らかにする（例えば、海馬のコリン作用性病変を有するラットは、数週間前に獲得した台の位置を思い出し得るが、しかし、台が動かされた後も、古い台の位置に固執する。）。
【０１４６】
実施例１５
老齢のげっ歯類における空間の学習および記憶についての慢性ＧＰ−１０４６投与の効果
本実施例は、老齢のげっ歯類における空間の学習および記憶についての、全身性で利用可能なＦＫＢＰ−リガンド、ＧＰＩ−１０４６での慢性治療の効果を表す。
手順は、４試行／日、３〜４日の目視可能な台の訓練段階の間、良く知られかつ慣用のモリスの水迷路に習熟させた、３月齢（若齢）および１８〜１９月齢（老齢）のオスのＣ５７ＢＬ／６Ｎ−Ｎｉａマウスを使用することを伴った。引き続き、空間把握試験を以下のように行った：全てのマウスに、５日間、４試行／日（ブロック）を行った。最大水泳時間は９０秒とした。老齢のマウスは、把握段階のブロック４または５の間のそれらの能力が“若齢”マウスの平均より高い＞１Ｓ．Ｄ．である場合、“老齢障害を受けた”群に、またそれらの能力が“若齢”マウスの平均より高い＜０．５Ｓ．Ｄ．である場合、“老齢障害を受けない”群に取り除けた。老齢の群をその後、統計的に同様な“ＧＰＩ−１０４６”および“賦形剤”の群に分けた。
１０ｍｇ／ｋｇのＧＰＩ−１０４６での毎日の治療を把握訓練の終了３日後に開始し、
そして保持試験を通して継続した。保持試験は、投薬３週間後、把握段階と同じ方法を使用して始めた。水泳距離（ｃｍ）を、分析における要素としての群およびブロック（１〜５）、反復手段としての治療ブロックを含めて、７×５ＡＮＯＶＡにおいて分析した。
結果は、それぞれＦ1.58＝２６．７５、Ｐ＝０．０００１、およびＦ1.58＝１７．７０、Ｐ＝０．０００１であり、“若齢”と“老齢障害を受け−賦形剤およびＧＰＩ−１０４６”治療した群との間に有意な差異が存在するという計画した著しい相違が現われたことを表す。一方、Ｆ1.58＝０．６７、Ｐ＝０．４２であり、二つの“老齢障害を受けた”群の間に有意な差異は存在しなかった。しかしながら、保持試験の間、“老齢障害を受け−賦形剤”治療した動物は、それぞれＦ1.69＝８．１１，Ｐ＝０．００６、およびＦ1.69＝２５．４５、Ｐ＝０．０００１である、“老齢損傷を受け−ＧＰＩ−１０４６”、および“若齢”の動物よりも有意に乏しく実行した。Ｆ1.69＝３．０９、Ｐ＝０．０８であり、“若齢”と“老齢で障害を受け−ＧＰＩ−１０４６”治療した群との間に、もはや統計的に有意な差異は存在しなかった。まとめると、ＧＰＩ−１０４６での全身性の治療は、年齢関連空間記憶障害を有するマウスの空間記憶能力を有意に増大した。
【０１４７】
このように本発明を記載したが、それが多くの方法で変形され得ることは明らかである。そのような変法は、本発明の思想および範囲を逸脱するものと見なされず、そして全てのそのような変法は、本特許請求の範囲内に含まれるとことを意図する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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