(57)【要約】      （修正有）【課題】ある量以下の血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度を有する対象に、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）拮抗剤を投与することによって、黒色腫などの癌を治療する方法の提供。【解決手段】対象における血清ＣＲＰ濃度のレベルを決定し、その後、ＣＲＰ濃度が特定の量以下である場合にＣＴＬＡ４拮抗剤を投与することによって、黒色腫などの癌を治療する方法。該ＣＴＬＡ４拮抗剤としては、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分であることが好ましい。該抗体としては、トレメリムマブまたはイピリムマブであることが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＲＰ濃度の測定に使用するアッセイ方法によって決定される、正常上限の１．５倍以下の血清ＣＲＰ濃度を有する対象に、ＣＴＬＡ４拮抗剤を投与することを含む、黒色腫を治療する方法。
【請求項２】
ａ）対象における血清ＣＲＰ濃度を決定することと、ｂ）前記対象におけるＣＲＰ濃度が、ＣＲＰ濃度の測定に使用するアッセイ方法によって決定される、正常上限の１．５倍以下である場合に、ＣＴＬＡ４拮抗剤を対象に投与することとを含む、黒色腫を治療する方法。
【請求項３】
ａ）患者における血清ＣＲＰ濃度を測定することと、ｂ）前記血清ＣＲＰ濃度を、濃度の測定に使用するＣＲＰアッセイの正常上限と比較することとを含み、正常上限の１．５倍以下である患者における血清ＣＲＰ濃度が、患者に対する免疫療法治療の利益を示す、黒色腫患者に対する免疫療法治療の利益を予測する方法。
【請求項４】
正常上限の１．５倍以下の血清ＣＲＰ濃度を有する前記黒色腫患者に対する免疫療法からの利益が、正常上限の１．５倍より高い血清ＣＲＰ濃度を有する黒色腫患者と比較した全生存の改善である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記黒色腫が切除不能なＩＶ期の黒色腫である、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記免疫療法治療が、前記黒色腫患者にＣＴＬＡ４拮抗剤を投与することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記ＣＴＬＡ４拮抗剤が、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分である、請求項１、２、または６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記抗ＣＴＬＡ４抗体または抗原結合部分が、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、および２２に記載の重鎖および軽鎖のＣＤＲ配列を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記抗ＣＴＬＡ４抗体または抗原結合部分が、配列番号２５、２６、２７、２８、２９、および３０に記載の重鎖および軽鎖のＣＤＲ配列を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体がトレメリムマブである、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体がイピリムマブである、請求項９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、２００９年１０月１２日出願の米国仮出願第６１／２５０，７１１号の優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、ある所定のレベル以下の血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度を有する対象にＣＴＬＡ４拮抗剤を投与することによって、黒色腫などの癌を治療する方法に関する。本発明は、対象における血清ＣＲＰ濃度のレベルを決定し、その後、ＣＲＰ濃度がある所定のレベル以下である場合にＣＴＬＡ４拮抗剤を投与することによって、癌を治療する方法にさらに関する。本発明は、とりわけ、癌治療に対する対象の応答の予測因子としての血清ＣＲＰ濃度の使用にさらに関する。
【背景技術】
【０００３】
癌治療に対する一手法は、腫瘍自体を標的とする代わりに、かつ／またはそれに加えて、免疫系を標的とすることである（「免疫療法」）。１つの癌の免疫療法の手法では、活性Ｔ細胞上に発現される細胞表面受容体である、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４、ＣＤ１５２）を標的とする。ＣＴＬＡ４と、その天然リガンドであるＢ７．１（ＣＤ８０）およびＢ７．２（ＣＤ８６）との結合により、陰性の調節シグナルがＴ細胞に送達され、この陰性シグナルを遮断することで、動物モデルにおいて増強したＴ細胞の免疫機能および抗腫瘍活性がもたらされる（ＴｈｏｍｐｓｏｎおよびＡｌｌｉｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：４４５〜４５０（１９９７）、ＭｃＣｏｙおよびＬｅＧｒｏｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．＆Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ７７：１〜１０（１９９９））。いくつかの研究により、抗体を用いたＣＴＬＡ４遮断がＴ細胞媒介性の腫瘍の死滅を顕著に増強し、抗腫瘍免疫を誘発することができることが実証されている（Ｌｅａｃｈ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７１：１７３４〜１７３６（１９９６）、Ｋｗｏｎ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：８０９９〜８１０３（１９９７）、Ｋｗｏｎ他、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：１５０７４〜１５０７９（１９９９））。
【０００４】
転移癌の治療の目標は、生存を延長することである。黒色腫を有する患者において生存を改善させる、または黒色腫患者の大きな割合において腫瘍応答を誘発させることが示されている、認可されたまたは実験的な薬剤は存在しない。一部の例では、ＣＴＬＡ４遮断剤は、黒色腫を有する患者の約７〜１５％において客観的腫瘍応答を誘発することが示されているが、重篤な副作用を引き起こし得る。免疫療法レジメンの延命効果の予測的バイオマーカーの関連は確立されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国仮出願第６１／２５０，７１１号
【特許文献２】米国特許第６，６８２，７３６号
【特許文献３】米国特許第６，９８４，７２０号
【特許文献４】米国特許第５，７７０，４２９号
【特許文献５】米国特許出願公開第２００４／０１２０９４８号
【特許文献６】米国特許第５，７０３，０５７号
【特許文献７】米国特許第４，８１６，５６７号
【特許文献８】欧州特許ＥＰ  ２１６  ８４６
【特許文献９】欧州特許ＥＰ  ２５６  ０５５
【特許文献１０】欧州特許ＥＰ  ３２３  ９９７
【特許文献１１】欧州特許出願８９３０３９６４
【特許文献１２】米国特許出願公開第２００３／０２０７３３６号
【特許文献１３】米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号
【特許文献１４】国際特許公開ＷＯ  ０１／８１４０５
【特許文献１５】国際特許公開ＷＯ  ００／２４８９３
【特許文献１６】国際特許公開ＷＯ  ０３／０３１４６４
【特許文献１７】国際特許公開ＷＯ  ９８／５８９６４
【特許文献１８】国際特許公開ＷＯ  ９９／２２７６４
【特許文献１９】米国特許出願公開第２００４／００６３９１１号
【特許文献２０】米国特許出願公開第２００４／０１３２６４０号
【特許文献２１】米国特許出願公開第２００４／０１４２８５６号
【特許文献２２】米国特許出願公開第２００４／００７２２９０号
【特許文献２３】米国特許第６，６０２，６８４号
【特許文献２４】米国特許出願公開第２００３／０２０７３４６号
【特許文献２５】米国特許第４，６４０，８３５号
【特許文献２６】米国特許第４，４９６，６８９号
【特許文献２７】米国特許第４，３０１，１４４号
【特許文献２８】米国特許第４，６７０，４１７号
【特許文献２９】米国特許第４，７９１，１９２号
【特許文献３０】米国特許第４，１７９，３３７号
【特許文献３１】米国特許第４，８１６，３９７号
【特許文献３２】米国特許第５，９１６，７７１号
【特許文献３３】国際特許公開ＷＯ  ００／３７５０４
【特許文献３４】国際特許公開ＷＯ  ０１／１４４２４
【特許文献３５】国際特許公開ＷＯ  ９３／００４３１
【特許文献３６】国際特許公開ＷＯ  ００／３２２３１
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】（ＴｈｏｍｐｓｏｎおよびＡｌｌｉｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：４４５〜４５０（１９９７）
【非特許文献２】ＭｃＣｏｙおよびＬｅＧｒｏｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．＆Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ７７：１〜１０（１９９９）
【非特許文献３】（Ｌｅａｃｈ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７１：１７３４〜１７３６（１９９６）
【非特許文献４】Ｋｗｏｎ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：８０９９〜８１０３（１９９７）
【非特許文献５】Ｋｗｏｎ他、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：１５０７４〜１５０７９（１９９９）
【非特許文献６】ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（２００１）
【非特許文献７】Ａｕｓｕｂｅｌ他、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（２００２）
【非特許文献８】ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９９０）
【非特許文献９】Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版、Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂおよびＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ編、Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、Ｍａｓｓ（１９９１）
【非特許文献１０】Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．他（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ出版番号９１−３２４２
【非特許文献１１】ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１〜９１７（１９８７）
【非特許文献１２】Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）
【非特許文献１３】（Ｗａｒｄ他、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４〜５４６（１９８９）
【非特許文献１４】Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １８３：６３〜９８（１９９０）
【非特許文献１５】Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １３２：１８５〜２１９（２０００）
【非特許文献１６】Ａｌｔｓｃｈｕｌ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３〜４１０（１９９０）
【非特許文献１７】Ａｌｔｓｃｈｕｌ他、Ｎｕｃｅｌｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９〜３４０２（１９９７）
【非特許文献１８】ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標）（トシリズマブ）の添付文書、セクション１２．２
【非特許文献１９】Ｃｌａｒｋｅ，Ｓ．Ｊ．他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．  ２７：１５ｓ（２００９）（補遺、アブストラクト３０２５
【非特許文献２０】Ｐｅｐｙｓ他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．  １１１（１２）：１８０５〜１８１２（２００３）
【非特許文献２１】Ｄｅｉｃｈｍａｎｎ他、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ９１：６９９〜７０２（２００４）
【非特許文献２２】Ｆｉｎｄｅｉｓｅｎ他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．  １３：２１９９〜２２０８（２００９）
【非特許文献２３】Ｂｌａｙ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５２：３３１７〜３３２２（１９９２）
【非特許文献２４】Ｍｏｓｅｓ他、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ２１：１０９１〜１０９５（２００９）
【非特許文献２５】Ｆａｌｃｏｎｅｒ他、Ｃａｎｃｅｒ  ７５：２０７７〜２０８２（１９９５）
【非特許文献２６】Ｇｏｕｇｈ他、Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０５： ５２９〜５３６（１９９６）
【非特許文献２７】Ｅｒｌａｎｄｓｅｎ他、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ６０：３７〜４３（２０００）
【非特許文献２８】Ｌｏｎｂｅｒｇ他、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６〜８５９（１９９４）
【非特許文献２９】Ｔｏｍｉｚｕｋａ他、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：７２２（２０００）
【非特許文献３０】Ｋｕｒｏｉｗａ他、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １８：１０８６（２０００）
【非特許文献３１】ＷｉｎｔｅｒおよびＨａｒｒｉｓ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １４：４３〜４６（１９９３）
【非特許文献３２】Ｗｒｉｇｈｔ他、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２：１２５〜１６８（１９９２）
【非特許文献３３】ＭａｇｅおよびＬａｍｏｙｉ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ページ７９〜９７、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ（１９８７）
【非特許文献３４】Ｂａｒｎｅｓ他、Ｂｉｏｔｅｃｈ＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７３：２６１〜２７０（２００１）
【非特許文献３５】Ｔｈｏｔａｋｕｒａ他、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １３８：３５０（１９８７）
【非特許文献３６】Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ他、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ２５９：５２（１９８７）
【非特許文献３７】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２７および２８章、ページ４８４〜５２８（第１８版、Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．、１９９０）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本明細書で開示する本発明は、急性期反応物質（ＣＲＰなど）の血清濃度が、ＣＴＬＡ４拮抗剤で治療した患者の生存の予測的マーカーであるという知見に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
したがって、本発明の一態様は、少なくとも１つの急性期反応物質の濃度の測定に使用するアッセイ方法によって決定される、正常上限の１．５倍以下である前記急性期反応物質の血清濃度を有する対象に、ＣＴＬＡ４拮抗剤を投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。一実施形態では、少なくとも１つの急性期反応物質はＣＲＰである。さらなる実施形態では、少なくとも１つの急性期反応物質はＩＬ−６である。
【０００９】
さらなる態様では、本発明は、ａ）対象における少なくとも１つの急性期反応物質の血清濃度を決定することと、ｂ）前記対象における急性期反応物質の濃度が、急性期反応物質の濃度の測定に使用するアッセイ方法によって決定される、正常上限の１〜２倍である量以下である場合に、ＣＴＬＡ４拮抗剤を対象に投与することとを含む、癌を治療する方法を提供する。一実施形態では、そのような量は、急性期反応物質の濃度の測定に使用するアッセイ方法によって決定される、正常上限の２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、または１．０倍である。一実施形態では、少なくとも１つの急性期反応物質はＣＲＰである。さらなる実施形態では、少なくとも１つの急性期反応物質はＩＬ−６である。
【００１０】
さらなる態様では、本発明は、ａ）患者における少なくとも１つの急性期反応物質の血清濃度を測定することと、ｂ）前記血清濃度を、前記少なくとも１つの急性期反応物質の濃度の測定に使用するアッセイの正常上限と比較することとを含み、患者における急性期反応物質の血清濃度が、急性期反応物質の濃度の測定に使用するアッセイ方法によって決定される、正常上限の１〜２倍である量以下である、癌患者に対する免疫療法治療の利益を予測する方法を提供する。一実施形態では、そのような量は、急性期反応物質の濃度の測定に使用するアッセイ方法によって決定される、正常上限の２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、または１．０倍である。一実施形態では、少なくとも１つの急性期反応物質はＣＲＰである。さらなる実施形態では、少なくとも１つの急性期反応物質はＩＬ−６である。
【００１１】
さらなる態様では、本発明は、ａ）患者における少なくとも１つの急性期反応物質の血清濃度を測定することと、ｂ）前記血清濃度を、前記急性期反応物質の濃度の測定に使用するアッセイの正常上限と比較することとを含み、正常上限の２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、または１．０倍以下の患者における血清濃度が、正常上限の２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、または１．０倍を超える血清濃度を有する癌患者と比較して、免疫療法治療から利益を受ける可能性が高いことを示す、癌患者に対する免疫療法治療の利益を予測する方法を提供する。一実施形態では、少なくとも１つの急性期反応物質はＣＲＰである。さらなる実施形態では、少なくとも１つの急性期反応物質はＩＬ−６である。
【００１２】
さらなる態様では、本発明は、前記癌が黒色腫である、本明細書に記載の方法のいずれかを提供する。さらなる態様では、前記黒色腫は、０期の黒色腫（表皮内黒色腫）、Ｉ／ＩＩ期の黒色腫（侵襲性黒色腫）、ＩＩ期の黒色腫（高リスク黒色腫）、ＩＩＩ期の黒色腫（局所的転移）、およびＩＶ期の黒色腫（遠隔転移）から選択される。
【００１３】
さらなる態様では、本発明は、免疫療法治療が、癌患者にＣＴＬＡ４拮抗剤を投与することを含む、本明細書に記載の方法のいずれかを提供する。
【００１４】
さらなる態様では、本発明は、前記ＣＴＬＡ４拮抗剤が抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分である、本明細書に記載の方法のいずれかを提供する。さらなる態様では、前記抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１〜６、９〜１４、１７〜２２、および２５〜３０から選択される少なくとも１つのＣＤＲのアミノ酸配列を含む。さらなる態様では、前記抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、配列番号７、１５、２３、または３１に記載のＶＨ鎖のアミノ酸配列を含む。さらなる態様では、前記抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、配列番号８、１６、２４、または３２に記載のＶＬ鎖のアミノ酸配列を含む。さらなる態様では、前記抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２３に記載のＶＨ鎖のアミノ酸配列および配列番号２４に記載のＶＬ鎖のアミノ酸配列を含む。さらなる態様では、前記抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３１に記載のＶＨ鎖のアミノ酸配列および配列番号３２に記載のＶＬ鎖のアミノ酸配列を含む。さらなる態様では、前記抗体は、トレメリムマブまたはその抗原結合部分である。さらなる態様では、前記抗体は、イピリムマブまたはその抗原結合部分である。
【００１５】
さらなる態様では、本発明は、正常上限の２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、または１．０倍以下の血清ＣＲＰ濃度を有する癌患者における免疫療法からの利益が、正常上限の２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、または１．０倍を超える血清ＣＲＰ濃度を有する癌患者と比較した全生存の改善である、本明細書に記載の方法のいずれかを提供する。
【００１６】
さらなる態様では、本発明は、ＣＴＬＡ４拮抗剤を含む治療に対する癌患者の応答の予測因子としてのＣＲＰ血清濃度の使用を提供する。一態様では、前記ＣＴＬＡ４拮抗剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分である。さらなる態様では、前記抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１〜６、９〜１４、１７〜２２、および２５〜３０から選択される少なくとも１つのＣＤＲのアミノ酸配列を含む。さらなる態様では、前記抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、配列番号７、１５、２３、または３１に記載のＶＨ鎖のアミノ酸配列を含む。さらなる態様では、前記抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、配列番号８、１６、２４、または３２に記載のＶＬ鎖のアミノ酸配列を含む。さらなる態様では、前記抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２３に記載のＶＨ鎖のアミノ酸配列および配列番号２４に記載のＶＬ鎖のアミノ酸配列を含む。さらなる態様では、前記抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３１に記載のＶＨ鎖のアミノ酸配列および配列番号３２に記載のＶＬ鎖のアミノ酸配列を含む。さらなる態様では、前記抗体は、トレメリムマブまたはその抗原結合部分である。さらなる態様では、前記抗体は、イピリムマブまたはその抗原結合部分である。
【００１７】
さらなる態様では、本発明は、前記ＣＴＬＡ４拮抗剤を、ＩＬ−６拮抗剤（すなわち、ＩＬ−６の遮断をもたらす薬剤）と組み合わせて投与する、本明細書に記載の方法のいずれかを提供する。一部の実施形態では、前記ＩＬ−６拮抗剤は、ＣＴＬＡ４拮抗剤の前に投与する。一部の実施形態では、ＩＬ−６拮抗剤を投与し、その後、血清ＣＲＰ濃度が、血清ＣＲＰ濃度の測定に使用するアッセイ方法によって決定される、正常上限の１〜２倍である量未満であると決定された場合に、ＣＴＬＡ４拮抗剤を投与する。一実施形態では、そのような量は、血清ＣＲＰ濃度の測定に使用するアッセイ方法によって決定される、正常上限の２．０、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、または１．０倍である。一実施形態では、前記ＩＬ−６拮抗剤は、抗ＩＬ−６抗体またはその抗原結合部分である。別の実施形態では、前記ＩＬ−６拮抗剤は、抗ＩＬ−６受容体抗体またはその抗原結合部分である。
【００１８】
さらなる態様では、本発明は、ＣＴＬＡ４拮抗剤を投与する前の７日以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内、または１日以内にＣＲＰレベルを測定し、正常上限と比較する、本明細書に記載の方法および使用のいずれかを提供する。本発明は、潜在的なＣＴＬＡ４拮抗剤治療の前の４週間以内、３週間以内、２週間以内、または１週間以内にベースラインＣＲＰレベルを決定し、正常上限と比較する、本明細書に記載の方法および使用のいずれかをさらに提供する。そのようなベースラインの決定は、潜在的なＣＴＬＡ４拮抗剤治療の前に、ベースラインの決定中の異なる時点に、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、または少なくとも５個またはそれより多くのＣＲＰレベルのサンプルを得ることによって測定することができる。一態様では、ベースラインＣＲＰレベルが決定された後、ＣＴＬＡ４拮抗剤を投与する前の７日以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内、または１日以内に、ＣＲＰレベルを測定し、正常上限と比較する。
【００１９】
前述の概要、および以下の本発明の詳細な説明は、添付の図面と併せて読んだ場合により良く理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】治療アームＡおよびＢのどちらにおいてもＣＲＰレベルがＵＬＮの１．５倍以下である、試験Ａ３６７１００９からの全生存のカプランマイヤープロットを示す図である。
【図２】治療アームＡおよびＢのどちらにおいてもＣＲＰレベルがＵＬＮの１．５倍を超える、試験Ａ３６７１００９からの全生存のカプランマイヤープロットを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明は、一般に、ＣＴＬＡ４の遮断を用いた治療から利益を受けることができる患者の生物学的マーカーの同定に関する。より詳細には、本発明は、血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）のデータを、ＣＴＬＡ４の遮断を用いた治療について患者を選択する際に使用できるという発見に関する。この発見は、腫瘍に対する有効な免疫応答の誘発には実際に腫瘍中の炎症が必要であると一般に想定する、癌の免疫療法の分野の伝統的な考えに反するため、驚くべきことである。
【００２２】
本開示がより容易に理解され得るように、特定の用語を最初に定義する。さらなる定義が詳細な説明の全体にわたって記載されている。
【００２３】
本明細書中で別段に定義しない限りは、本開示に関連して使用する科学用語および技術用語は、当業者によって一般的に理解されている意味を有する。さらに、文脈によって別段に必要とされない限りは、単数形の用語には複数形が含まれ、複数形の用語には単数形が含まれる。本明細書に記載する分析化学、合成有機化学、ならびに医学および医薬化学に関連して使用する学名、ならびにその実験手順および技術は、当技術分野で周知かつ一般的に使用されているものである。標準の技術を化学合成、化学分析、医薬品の調製、配合、および送達、ならびに患者の治療に使用する。
【００２４】
本開示の方法および技術は、別段に指定しない限りは、一般に、当技術分野で周知の方法、ならびに本明細書全体にわたって引用され論じられる、様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載の方法に従って行う。そのような参考文献には、たとえば、ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（２００１）、Ａｕｓｕｂｅｌ他、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（２００２）、ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９９０）が含まれる。酵素反応および精製技術は、当技術分野において一般的に達成される、または本明細書に記載されるように、製造者の仕様書に従って行う。
【００２５】
本明細書中で使用する以下の用語のそれぞれは、本セクションにおいてそれと関連づけられる意味を有する。
【００２６】
本明細書中で使用する冠詞「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」とは、冠詞の文法上の目的語のうちの１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）をいう。例として、「１つの要素（ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ）」とは、１つの要素または複数の要素を意味する。
【００２７】
本明細書中で使用する用語「正常上限」または「ＵＬＮ」とは、特定の特性の測定に使用する特定のアッセイ方法によって決定され、それに関連している参照値である。たとえば、対象中の特定の物質のレベルの測定に使用する所与の診断的アッセイ方法を考える。このアッセイを用いて「正常」である健康な対象の群における物質レベルを測定する場合、試験結果は、典型的にはガウス分布をもたらし、ほとんどの結果が平均（ａｖｅｒａｇｅ）（または「平均（ｍｅａｎ）」）の周囲に位置し、平均結果から離れた結果を有する対象数は減少する。典型的な健康な人の代表的な集団では、約３分の２が平均の１標準偏差以内の結果を有し、結果の９５．５％が２標準偏差以内にある。したがって、健康な個体の２．２５％が、平均より２標準偏差上の試験結果を有する。同様に、結果の２．２５％が平均より２標準偏差下である。ほとんどの実験試験について正常上限を選択する際、これは、一般に、平均より２標準偏差上のレベルに設定される。したがって、血清ＣＲＰ濃度のＵＬＮを参照すると、そのようなＵＬＮは、血清ＣＲＰ濃度の測定に使用するアッセイ方法（たとえば、アッセイを行う実験室によって決定されるもの）によって設定される濃度値となる。したがって、そのようなＵＬＮ値はアッセイ間で変動し得るが、選択されたアッセイ方法に基づいて容易に入手可能なものである。
【００２８】
本明細書中で使用する用語「血清ＣＲＰ濃度」とは、血清を採取してアッセイプロトコルに従ってアッセイを実施することによって、任意の適切なアッセイによって測定する、対象の血清中のＣＲＰの濃度をいう。一部の例では、そのような濃度はベースライン濃度となり、ＣＲＰアッセイの結果は、ＣＴＬＡ４拮抗剤の最初の用量の前の１４日以内に対象から採取した血清に対して行う。たとえば、一実施形態では、血清ＣＲＰ濃度は、治療の１日前、治療の２日前、治療の３日前、治療の４日前、治療の５日前、治療の６日前、または治療の７日前に決定する。
【００２９】
当業者には理解されるように、本明細書中で使用する用語「急性期反応物質」とは、急性期タンパク質の血漿濃度の変化に応答して肝臓によって産生される物質をいう。急性期タンパク質とは、血漿濃度が、炎症に応答して増加（陽性急性期タンパク質）または減少（陰性急性期タンパク質）する、タンパク質のクラスである。この応答は、急性期反応と呼ばれる（急性期応答としても知られる）。傷害に応答して、局所炎症細胞（好中球顆粒球およびマクロファージ）は、いくつかのサイトカイン、最も注目すべきはＩＬ−１、ＩＬ−６、およびＩＬ−８、ならびにＴＮＦ−αなどのインターロイキンを血流内に分泌する。肝臓は、多数の急性期反応物質（たとえばＣＲＰ）を産生することによって応答する。
【００３０】
言及した場合以外は用語「患者」および「対象」とは互換性があるように使用し、ヒト患者および非ヒト霊長類、ならびにウサギ、ラット、マウスなどの獣医学的対象および他の動物などの哺乳動物をいう。
【００３１】
本明細書中で使用する用語「治療する」、「治療すること」、または「治療」とは、患者が経験する疾患の症状（すなわち、腫瘍の増殖および／もしくは転移、または免疫細胞の数および／もしくは活性によって媒介される他の効果など）の頻度を減少させることを意味する。この用語には、症状、合併症、もしくは疾患（たとえば黒色腫）の生化学的兆候の発症の予防もしくは遅延、ならびに／または症状の軽減、疾患、状態、もしくは障害のさらなる発生の停止および／もしくは阻害、ならびに／または疾患を患っている対象の生存の延長のために、本明細書で開示した化合物または薬剤を投与することが含まれる。治療は、予防的（疾患の発症を予防もしくは遅延させるため、または臨床の徴候もしくはその亜臨床的症状を予防するため）、または疾患の徴候後の症状の治療的抑制もしくは軽減であり得る。
【００３２】
本明細書中で使用する用語「ＣＴＬＡ４拮抗剤」とは、ＣＴＬＡ４受容体とその天然リガンドＢ７．１およびＢ７．２との特異的相互作用に干渉することができる任意の薬剤をいう。拮抗剤は、ＣＴＬＡ４とそのリガンドとの結合の競合的阻害剤または非競合的阻害剤として作用することができる。そのような薬剤には、抗体（その抗原結合部分が含まれる）、ペプチド、および非ペプチド有機小分子、ならびにＣＴＬＡ４受容体の発現を減少させる物質（アンチセンスまたは干渉ＲＮＡ分子など）が含まれることができる。ＣＴＬＡ４とそのリガンドＢ７．１および／またはＢ７．２との結合に干渉することができる抗ＣＴＬＡ４抗体（またはその抗原結合部分）は、ＣＴＬＡ４拮抗剤の一例である。他の拮抗剤は本明細書に記載されており、かつ／または当業者に容易に明らかであろう。
【００３３】
本明細書中で使用する２０種の従来のアミノ酸およびその略記は、従来の用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版、Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂおよびＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ編、Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、Ｍａｓｓ（１９９１））を参照されたい。
【００３４】
本明細書中で言及する用語「抗体」には、全抗体および任意の抗原結合断片（すなわち「抗原結合部分」）またはその単鎖が含まれる。「抗体」とは、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分をいう。それぞれの重鎖は、１つの重鎖可変領域（本明細書中でＶＨと略記する）および１つの重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン、すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる。それぞれの軽鎖は、１つの軽鎖可変領域（本明細書中でＶＬと略記する）および１つの軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、すなわちＣＬからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存的な領域がその中に分散した、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域へとさらに細分類することができる。ＣＤＲ領域は、どちらも当業者に周知のカバットまたはコチアの番号付け系を用いて決定することができる。たとえば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．他（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ出版番号９１−３２４２、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１〜９１７（１９８７）を参照されたい。それぞれのＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配置された、３個のＣＤＲおよび４個のＦＲからなる：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本開示の全体にわたって、重鎖の３個のＣＤＲをＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、およびＨ−ＣＤＲ３と呼ぶ。同様に、軽鎖の３個のＣＤＲをＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３と呼ぶ。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫グロブリンと、免疫系の様々な細胞（たとえばエフェクター細胞）および古典的補体系の第１の構成要素（Ｃｌｑ）を含めた宿主の組織または因子との結合を媒介し得る。軽鎖および重鎖内で、可変および定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合されており、重鎖には約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域がさらに含まれる。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。
【００３５】
本明細書では、「ヒト」抗体、またはその抗原結合部分とは、キメラではなく（たとえば、「ヒト化」したものではなく）、かつ（全体的にまたは部分的に）非ヒト種に由来しないものであると定義する。ヒト抗体または抗原結合部分は、ヒトに由来していてもよく、または合成ヒト抗体であってもよい。本明細書では、「合成ヒト抗体」とは、全体的にまたは部分的に、既知のヒト抗体配列の分析に基づいた合成配列からｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで誘導した配列を有する抗体として定義する。ヒト抗体配列またはその断片のｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ設計は、たとえば、ヒト抗体または抗体断片の配列のデータベースを分析し、それから得られたデータを利用してポリペプチド配列を考案することによって達成することができる。ヒト抗体または抗原結合部分の別の例は、ヒト起源の抗体配列のライブラリ（すなわち、そのようなライブラリは、ヒト天然源から採った抗体に基づく）から単離した核酸によってコードされているものである。
【００３６】
本明細書では、「ヒト化抗体」、またはその抗原結合部分とは、（ｉ）その抗体がヒト生殖系列配列に基づく非ヒト源（たとえば、異種の免疫系を保有するトランスジェニックマウス）に由来するもの、または（ｉｉ）可変ドメインが非ヒト起源に由来し、定常ドメインがヒト起源に由来するキメラ、または（ｉｉｉ）可変ドメインのＣＤＲが非ヒト起源に由来する一方で、可変ドメインの１つもしくは複数のフレームワークがヒト起源であり、（存在する場合は）定常ドメインがヒト起源のものである、ＣＤＲ移植したものであると定義する。ＣＤＲを非ヒト起源から移植する場合、目的の標的に対する結合親和性を改善させるために、続いて前記ＣＤＲを変更することができる。
【００３７】
本明細書中で使用する用語、抗体の「抗原結合部分」（または単に「抗体部分」）とは、抗原（たとえばＣＴＬＡ４）と特異的に結合する能力を保持している、抗体の１つまたは複数の断片をいう。完全長抗体の断片によって抗体の抗原結合機能を行うことができることが示されている。抗体の用語「抗原結合部分」内に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド橋によって連結された２個のＦａｂ断片を含む二価断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）１つのＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ他、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４〜５４６（１９８９））、ならびに（ｖｉ）単離した相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によってコードされているが、これらは、組換え方法を用いて、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）として作製されることを可能にする合成リンカーによって、結合することができる。また、そのような単鎖抗体も、用語抗体の「抗原結合部分」内に包含されることを意図する。これらの抗体断片は、当業者に知られている従来技術を含めた任意の適切な技術を用いて得られる場合があり、断片は、インタクトな抗体と同じ様式で、有用性についてスクリーニングし得る。
【００３８】
また、本明細書中で使用する「免疫グロブリン」（Ｉｇ）とは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＤのクラスもしくはアイソタイプ（または任意のそのサブクラス）に属するタンパク質として定義され、すべての慣習的に知られている抗体およびその抗原結合部分が含まれる。
【００３９】
本明細書中で使用するポリペプチド配列間の「配列同一性」とは、配列間で同一であるアミノ酸のパーセンテージを示す。ポリペプチドのアミノ酸配列同一性は、Ｂｅｓｔｆｉｔ、ＦＡＳＴＡ、またはＢＬＡＳＴなどの既知のコンピュータプログラムを用いて慣習的に決定することができる（たとえば、Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １８３：６３〜９８（１９９０）、Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １３２：１８５〜２１９（２０００）、Ａｌｔｓｃｈｕｌ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３〜４１０（１９９０）、Ａｌｔｓｃｈｕｌ他、Ｎｕｃｅｌｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９〜３４０２（１９９７）を参照）。特定の配列が、たとえば参照アミノ酸配列と９５％同一であるかどうかを決定するために、Ｂｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列アラインメントプログラムを使用する場合は、同一性のパーセンテージが参照アミノ酸配列の完全長にわたって計算され、参照配列中のアミノ酸残基の合計数の５％までの相同性のギャップが許容されるように、パラメータを設定する。ポリペプチド間の同一性のパーセンテージを決定するこの前述の方法は、本明細書で開示するすべてのタンパク質、断片、またはその変異体に適用可能である。
【００４０】
本明細書中で使用する「アイソタイプ」または「クラス」とは、重鎖定常領域の遺伝子によってコードされている抗体クラス（たとえば、ＩｇＭまたはＩｇＧ）をいう。抗体の定常ドメインは抗原との結合に関与していないが、様々なエフェクター機能を示す。重鎖定常領域のアミノ酸配列に応じて、所与のヒト抗体または免疫グロブリンは、５つの主要な免疫グロブリンクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭのうちの１つに割り当てることができる。様々な免疫グロブリンクラスの構造および三次元立体配置は周知である。様々なヒト免疫グロブリンクラスのうち、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびＩｇＭのみが、補体を活性化することが知られている。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３はヒトにおいてＡＤＣＣを媒介することが知られている。
【００４１】
本明細書中で使用する「サブクラス」とは、重鎖定常領域の遺伝子のアイソタイプ内のさらなる特定、たとえば、ＩｇＧアイソタイプ内のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスをいう。
【００４２】
本明細書中で使用する用語「干渉する」とは、受容体とそのリガンドとの特異的相互作用に対する拮抗剤の作用に関して使用した場合は、相互作用の親和性が、薬剤が存在しない場合に起こる結合のレベル未満に減少することを意味する。当業者には、受容体とそのリガンドとの会合とは、任意の特定の時点で、受容体およびリガンドの特定の割合が会合しているように、そのような分子の集団間で起こる動的な関係であることを認識されよう。したがって、受容体とそのリガンドとの特異的相互作用に干渉する薬剤は、所与の時点で起こっているそのような相互作用の相対数を減少させ、一部の例では、すべてのそのような会合を完全に阻害することができる。
【００４３】
ＰＴＸ１、ＭＧＣ８８２４４、またはＭＧＣ１４９８９５としても知られるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）とは、ペントラキシンタンパク質ファミリーのメンバーであり、炎症、感染症、組織損傷および悪性疾患のほとんどの形態に応答して肝臓中で合成される。ＣＲＰとは、身体内で起こる炎症プロセス中にそのレベルが劇的に上昇するため、急性期反応物質のクラスのメンバーである。その産生は、主に、主にマクロファージおよび脂肪細胞によって産生されるＩＬ−６によって制御される。したがって、ＩＬ−６の遮断は、ＣＲＰのレベルの減少をもたらすことが予測される。たとえば、ＩＬ−６受容体阻害剤トシリズマブを用いた治療は、ＣＲＰレベルを減少させることが見られた（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標）（トシリズマブ）の添付文書、セクション１２．２を参照）。同様の知見が、ヒト化抗ＩＬ−６抗体であるＡＬＤ５１８で観察された（Ｃｌａｒｋｅ，Ｓ．Ｊ．他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．  ２７：１５ｓ（２００９）（補遺、アブストラクト３０２５）を参照）。したがって、本発明の一態様では、ＩＬ−６拮抗剤（たとえば、ＩＬ−６またはＩＬ−６受容体阻害剤などのＩＬ−６の遮断をもたらす薬剤）を、ＣＲＰレベルを減少させる手段として最初に投与することができ、続いて、本発明によるＣＴＬＡ４拮抗剤を投与することができる。そのようなＩＬ−６拮抗剤の例には、トシリズマブなどの抗ＩＬ−６受容体抗体およびＡＬＤ５１８などの抗ＩＬ−６抗体が含まれる。本発明の範囲内で使用することができる他のＩＬ−６拮抗剤は、当業者に容易に認識されるであろう。また、ＣＲＰも、外来および損傷細胞との補体結合を支援すると考えられており、また、ＣＲＰの受容体を発現するマクロファージによる貪食を増強する（Ｐｅｐｙｓ他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．  １１１（１２）：１８０５〜１８１２（２００３））。
【００４４】
急性期刺激の後、ＣＲＰ値は、急性期刺激前のレベルと比較して１０，０００倍まで増加し得る。血漿ＣＲＰは、肝細胞によって、主にサイトカインＩＬ−６による転写制御の下で産生されるが、局所ＣＲＰ合成および場合によっては分泌の他の部位が示唆されている。Ｄｅ  ｎｏｖｏ肝臓合成は単一の刺激後に非常に迅速に開始され、血清濃度は約６時間までに５ｍｇ／Ｌを超えるまで上昇し、約４８時間にピークとなる（Ｐｅｐｙｓ他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．  １１１（１２）： １８０５〜１８１２（２００３））。
【００４５】
癌患者において、ＩＬ−６は、白血球などの宿主細胞、または癌細胞によって産生され得ることが以前に示されている。また、乏しい生存の予後因子としての上昇した血清ＣＲＰの役割が、黒色腫を有する患者（Ｄｅｉｃｈｍａｎｎ他、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ９１：６９９〜７０２（２００４）、Ｆｉｎｄｅｉｓｅｎ他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．  １３：２１９９〜２２０８（２００９））および他の種類の腫瘍を有する患者（Ｂｌａｙ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５２：３３１７〜３３２２（１９９２）、Ｍｏｓｅｓ他、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ２１：１０９１〜１０９５（２００９）、Ｆａｌｃｏｎｅｒ他、Ｃａｎｃｅｒ  ７５：２０７７〜２０８２（１９９５）、Ｇｏｕｇｈ他、Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０５： ５２９〜５３６（１９９６））で確立されている。しかし、これまで血清ＣＲＰは一度も、特定の治療から延命効果を予測することが示されていない。
【００４６】
対象におけるＣＲＰなどの急性期反応物質の血清濃度は、ＥＬＩＳＡ、免疫比濁法、迅速免疫拡散、および視覚凝集が含まれる当技術分野で周知の様々な分析アッセイ方法を用いて決定することができる。たとえば、知られているアッセイには、Ｅｒｌａｎｄｓｅｎ他、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ６０：３７〜４３（２０００）に記載のものが含まれる。それぞれにアッセイは、具体的なアッセイ方法に関連する「正常上限」（ＵＬＮ）値を有することが典型的である。そのようなＵＬＮは、典型的には、十分なサンプルサイズの正常で健康な対象から、血清ＣＲＰ濃度を測定するために特定のアッセイ方法を用いて決定する。その後、ＵＬＮは、典型的には、依然として正常範囲内にあるとみなされる（たとえば、平均から２標準偏差以内）、最も高い測定されたＣＲＰ血清濃度であると決定される。そのようなＵＬＮ値は、血清ＣＲＰ濃度を測定するために用いた特定のアッセイ方法に応じて変動するため、それぞれの具体的なアッセイは、そのアッセイ方法に関連する独自のＵＬＮ値を有する。したがって、本明細書に記載の方法は、血清ＣＲＰ濃度を測定するための任意の可能な方法を用いて実施することが意図されるため、本明細書で開示する本発明の一部として参照するＵＬＮは、血清ＣＲＰ濃度の測定に使用するいずれかのアッセイ方法に関連するＵＬＮである。
【００４７】
本明細書中に示すように、ＣＲＰ血清濃度を用いて、癌患者が化学療法と比較して免疫療法治療から利益を受ける可能性が高いかどうかを予測することができる。実施例中に詳述するように、本発明は、以前に治療していない切除不能なＩＶ期の黒色腫を有する患者を、そのＣＲＰの血清濃度について検査した試験を用いて、本明細書中で実証された。低いレベルのＣＲＰ血清濃度を有していた患者は、化学療法で治療した場合よりも、免疫療法で治療した場合に、より良好な結果を示した。高いレベルのＣＲＰ血清濃度を有していた患者は、化学療法で治療した場合よりも、免疫療法で治療した場合に、より良好な結果を示さなかった。全体応答率は、免疫療法治療で治療した患者のベースラインＣＲＰ血清濃度によって影響されると考えられる。さらに、低いＣＲＰ血清濃度を有するすべての患者について、免疫療法を受けている患者は、化学療法を受けている患者よりも高い応答率を有していた。
【００４８】
したがって、本発明の一態様は、免疫療法治療の第１の投与を受ける前または同じ日に患者のＣＲＰの血清濃度を測定するステップと、前記ＣＲＰ血清濃度を正常上限と比較するステップとを含む、癌患者に対する免疫療法治療の利益を予測する方法を提供する。患者のＣＲＰの血清濃度が特定の閾値レベル以下（たとえば、ＵＬＮに対して）である場合、患者は、化学療法治療と比較して免疫療法治療から利益を受けると予想される。また、患者のＣＲＰの血清濃度が特定の閾値レベル以下である場合、ＣＲＰ血清濃度の閾値レベルを超えるＣＲＰの血清濃度を有する癌患者の全体応答率と比較して、免疫療法治療に対する全体応答率の改善が予想される。
【００４９】
特に、本明細書に記載の方法を用いて、患者が、より低いＣＲＰの血清濃度を有する患者と比較して、免疫療法治療に関連する生存の改善を有する、または免疫療法治療に対する応答の可能性の増加を有するかどうかを予測することができる。また、本明細書中に示すように、本発明の方法は、黒色腫を有する患者にとって特に興味深いものでもある。
【００５０】
抗ＣＴＬＡ４抗体
実施例中に示すように、本発明の方法は、トレメリムマブなどの抗ＣＴＬＡ４モノクローナル抗体を用いた免疫療法治療において使用することができる。本発明において使用することができる、トレメリムマブ、およびイピリムマブなどの他の抗体、ならびにそれらを生成する方法は、米国特許第６，６８２，７３６号および米国特許第６，９８４，７２０号に記載されている。そのような抗体には、それだけには限定されないが、これらの参考文献中に指定されている抗体、たとえば、抗体３．１．１、４．１．１、４．８．１、４．１０．２、４．１３．１、４．１４．３、６．１．１、１１．２．１（トレメリムマブ、またはチシリムマブとしても知られている）、１１．６．１、１１．７．１、１２．３．１．１、および１２．９．１．１、ならびにイピリムマブ（１０Ｄ１またはＭＤＸ−０１０としても知られている）が含まれる。
【００５１】
そのような抗体のアミノおよび核酸配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第６，６８２，７３６号および米国特許第６，９８４，７２０号に記載されている。手短に述べると、本発明において使用することができる抗体には、それだけには限定されないが、抗体３．１．１、４．１．１、４．８．１、４．１０．２、４．１３．１、４．１４．３、６．１．１、１１．２．１（トレメリムマブ）、１１．６．１、１１．７．１、１２．３．１．１、１２．９．１．１、および１０Ｄ１（イピリムマブ）などの抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を有する抗体が含まれる。また、本発明には、上記引用した特許文献に記載のように、これらの抗体の重鎖および軽鎖のＣＤＲのアミノ酸配列を有する抗体、またはその抗原結合部分、ならびにＣＤＲ領域中に変化を有するものの使用も企図される。また、本発明には、これらの抗体の重鎖および軽鎖の可変領域を有する抗体の使用も企図される。別の実施形態では、抗体は、米国特許第６，６８２，７３６号および米国特許第６，９８４，７２０号に記載のように、３．１．１、４．１．１、４．８．１、４．１０．２、４．１３．１、４．１４．３、６．１．１、１１．２．１（トレメリムマブ）、１１．６．１、１１．７．１、１２．３．１．１、１２．９．１．１、および１０Ｄ１（イピリムマブ）から選択される抗体の重鎖および軽鎖の、完全長、可変領域、またはＣＤＲのアミノ酸配列を有する抗体から選択される。
【００５２】
別の実施形態では、ＶＨのアミノ酸配列は、配列番号７、１５、２３、または３１に記載のアミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態では、ＶＬは、配列番号８、１６、２４、または３２に記載のアミノ酸配列を含む。より好ましくは、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ配列番号７（ＶＨ４．１．１）および配列番号８（ＶＬ４．１．１）に記載のアミノ酸配列、それぞれ配列番号１５（ＶＨ４．１３．１）および配列番号１６（ＶＬ４．１３．１）に記載のアミノ酸配列、それぞれ配列番号２３（ＶＨ１１．２．１）および配列番号２４（ＶＬ１１．２．１）に記載のアミノ酸配列、またはそれぞれ配列番号３１（ＶＨ１０Ｄ１）および配列番号３２（ＶＬ１０Ｄ１）に記載のアミノ酸配列を含む。
【００５３】
さらに、抗体は、ＶＨ３〜３０もしくは３〜３３の遺伝子、またはその中の保存的置換もしくは体細胞突然変異に由来するヒトＣＤＲのアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列を含むことができる。また、抗体は、その軽鎖中にＡ２７またはＯ１２の遺伝子に由来するＣＤＲ領域、すなわち、５未満、または１０個未満のそのような突然変異を含むこともできる。また、抗体は、５未満、または１０個未満のアミノ酸が異なるものを含めた、これらの遺伝子からのフレームワーク領域を含むこともできる。また、元の生殖系列配列を反映するように突然変異させた、本明細書に記載のフレームワーク領域を有する抗体も含まれる。
【００５４】
本発明の他の実施形態では、抗体は、ＣＴＬＡ４とＢ７．１、Ｂ７．２、または両方との間の結合を阻害する。たとえば、抗体は、約１００ｎＭ以下、たとえば約１０ｎＭ以下、たとえば約５ｎＭ以下、たとえば約２ｎＭ以下、さらに、たとえば約１ｎＭ以下のＩＣ５０で、Ｂ７．１との結合を阻害することができる。同様に、抗体は、約１００ｎＭ以下、たとえば１０ｎＭ以下、さらに、たとえば約５ｎＭ以下、さらに、たとえば約２ｎＭ以下、または、さらに、たとえば約１ｎＭ以下のＩＣ５０で、Ｂ７．２との結合を阻害することができる。
【００５５】
さらに、別の実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、約１０−８以上の親和性、たとえば約１０−９以上の親和性、たとえば約１０−１０以上の親和性、さらに、たとえば約１０−１１以上の親和性の、ＣＴＬＡ４に対する結合親和性を有する。
【００５６】
抗ＣＴＬＡ４抗体または抗原結合部分は、抗体４．１．１、１１．２．１、４．１３．１および１０Ｄ１から選択される抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を有する抗体との結合について競合することができる。
【００５７】
別の実施形態では、抗体は、抗体４．１．１、４．１３．１、１１．２．１または１０Ｄ１の、重鎖および軽鎖の配列、可変重鎖および可変軽鎖の配列、ならびに／または重鎖および軽鎖のＣＤＲ配列を有する抗体と交差競合することができる。たとえば、抗体は、４．１．１、４．１３．１、１１．２．１、および１０Ｄ１から選択される抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列、可変配列ならびに／またはＣＤＲ配列を有する抗体が結合するエピトープと結合することができる。
【００５８】
別の実施形態では、本発明は、４．１．１、４．１３．１、１１．２．１、および１０Ｄ１から選択される抗体のＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、およびＨ−ＣＤＲ３、ならびにＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３、または、無極性残基を他の無極性残基によって置き換えること、極性荷電残基を他の極性非荷電残基によって置き換えること、極性荷電残基を他の極性荷電残基によって置き換えること、および構造的に類似の残基の置換からなる群から選択される保存的変化、極性荷電残基で極性非荷電残基を置換することおよび無極性残基で極性残基を置換することからなる群から選択される非保存的置換、付加ならびに欠失からなる群から選択される、前記ＣＤＲ配列からの変化を有する配列を含む、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはその抗原結合部分を用いて実施する。
【００５９】
本発明のさらなる実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、フレームワークまたはＣＤＲ領域中に生殖系列配列から１０、７、５、または３個未満のアミノ酸変化を含有する。別の実施形態では、抗体は、フレームワーク領域中に５個未満のアミノ酸変化およびＣＤＲ領域中に１０個未満の変化を含有する。一実施形態では、抗体は、フレームワーク領域中に３個未満のアミノ酸変化およびＣＤＲ領域中に７個未満の変化を含有する。一実施形態では、フレームワーク領域中の変化は保存的であり、ＣＤＲ領域中の変化は体細胞突然変異である。
【００６０】
別の実施形態では、抗体は、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列にわたって、４．１．１、４．１３．１、１１．２．１、および１０Ｄ１から選択される抗体のＣＤＲ配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。一実施形態では、抗体は、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の領域にわたって、抗体４．１．１、４．１３．１、１１．２．１、または１０Ｄ１の対応する配列と１００％の配列同一性を共有する。
【００６１】
さらに別の実施形態では、抗体は、重鎖および軽鎖の可変領域配列にわたって、抗体４．１．１、４．１３．１、１１．２．１、または１０Ｄ１の対応する可変領域配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％、配列同一性を有する。一実施形態では、抗体は、重鎖および軽鎖の可変領域配列にわたって、抗体４．１．１、４．１３．１、１１．２．１、または１０Ｄ１の対応する配列と１００％の配列同一性を共有する。
【００６２】
様々な抗ＣＴＬＡ４抗体および抗原結合部分を本明細書中で記載したが、当業者は、本明細書中に提供した開示に基づいて、本発明には多種の抗ＣＴＬＡ４抗体および抗原結合部分が包含され、明確に開示したものに限定されないことを理解するであろう。より具体的には、ヒト抗体について記載したが、本発明はいかなる様式でもヒト抗体に限定されず、むしろ、本発明には、起源の種にかかわらず有用な抗体が包含され、とりわけ、キメラのヒト化および／または霊長類化抗体が含まれる。また、本明細書中で例示した抗体は、トランスジェニック哺乳動物、たとえば、ヒト免疫レパートリーを含むマウスを用いて得たが、当業者は、本明細書中に提供した開示に基づいて、本発明がこの方法または任意の他の特定の方法によって生成した抗体に限定されないことを理解するであろう。そうではなく、本発明には、それだけには限定されないが、当技術分野で知られている方法（たとえばファージディスプレイライブラリのスクリーニングなど）、または抗ＣＴＬＡ４抗体を生成するために将来開発される方法を含めた、任意の方法によって生成された、抗ＣＴＬＡ４抗体または抗原結合部分が含まれる。本明細書ならびにたとえば米国特許第６，６８２，７３６号および米国特許第６，９８４，７２０号中に提供した広範囲の開示に基づいて、当業者は、本発明の範囲内で使用することができるＣＴＬＡ４拮抗剤を容易に生成および同定できるであろう。
【００６３】
本発明には、米国６，６８２，７３６に開示のＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ）、または、再編成されていないヒト重鎖（μおよびγ）ならびにκ軽鎖の免疫グロブリン配列をコードしているヒト免疫グロブリン遺伝子のミニ座位を、内在性のμおよびκ鎖座位を失活させる標的化突然変異と一緒に含有する「ＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（商標）」（Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）（Ｌｏｎｂｅｒｇ他、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６〜８５９（１９９４）、および米国特許第５，７７０，４２９号）などの、トランスジェニック非ヒト哺乳動物を用いて生成したヒト抗体が包含される。
【００６４】
しかし、本発明は、それだけには限定されないが、たとえば、Ｔｏｍｉｚｕｋａ他、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：７２２（２０００）、Ｋｕｒｏｉｗａ他、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １８：１０８６（２０００）、Ｍｉｋａｙａｍａ他の米国特許出願公開第２００４／０１２０９４８号に記載の、Ｋｉｒｉｎ  ＴＣ  Ｍｏｕｓｅ（商標）（キリンビール株式会社、日本、東京）、ならびにＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）およびＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ）、上記などの、任意のトランスジェニック哺乳動物を用いて生成したヒト抗ＣＴＬＡ４抗体または抗原結合部分の使用も企図する。したがって、本発明には、任意のトランスジェニックまたは他の非ヒト動物を用いて生成した抗ＣＴＬＡ４抗体または抗原結合部分の使用が包含される。
【００６５】
さらに、本発明には、当技術分野で知られている任意の方法または目的の抗原と特異的に結合する抗体もしくは抗原結合部分を生成するために将来開発される方法に従って生成した、ＣＴＬＡ４に特異的なヒトまたは任意の他の抗体を生成する、任意の方法の使用が包含される。
【００６６】
ヒト抗体は、それだけには限定されないが、ファージディスプレイ抗体ライブラリの使用が含まれる方法によって開発することができる。これらの技術を用いて、ＣＴＬＡ４を発現する細胞、ＣＴＬＡ４自体、ＣＴＬＡ４の形態、そのエピトープまたはペプチド、およびそれに対する発現ライブラリ（たとえば米国特許第５，７０３，０５７号を参照）に対する抗体を作製することができ、その後、上述の活性についてそれらをスクリーニングすることができる。
【００６７】
別の実施形態では、本発明の方法において用いる抗体または抗原結合部分は、完全にヒトではなく、「ヒト化」したものである。特に、ネズミ抗体または他の種由来の抗体を、当技術分野で周知の技術を用いて「ヒト化」または「霊長類化」することができる。たとえば、ＷｉｎｔｅｒおよびＨａｒｒｉｓ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １４：４３〜４６（１９９３）、Ｗｒｉｇｈｔ他、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２：１２５〜１６８（１９９２）、ならびに米国特許第４，８１６，５６７号、ならびにＭａｇｅおよびＬａｍｏｙｉ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ページ７９〜９７、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ（１９８７）を参照されたい。
【００６８】
本明細書中に提供した開示に基づいて理解されるように、本発明で使用するための抗体または抗原結合部分は、トランスジェニック非ヒト哺乳動物、およびそれから誘導したハイブリドーマから得ることができるが、ハイブリドーマ以外の細胞系中で発現させることもできる。
【００６９】
発現用の宿主として利用可能な哺乳動物細胞系は当技術分野で周知であり、それだけには限定されないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ（ＮＳ０とも呼ばれる）、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、およびヒト肝細胞癌細胞（たとえばＨｅｐ  Ｇ２）を含めた、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞系が含まれる。細菌、酵母、昆虫、および植物細胞を含めた、非哺乳動物の原核および真核細胞も用いることができる。
【００７０】
それだけには限定されないが、たとえば、ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（２００１）、ならびにＡｕｓｕｂｅｌ他、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（２００２）に記載のものなどの、当技術分野で周知の様々な発現系を使用することができる。これらの発現系には、数多くのもののうち、とりわけジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）に基づいた系が含まれる。グルタミン合成酵素の発現系は、全体的または部分的に欧州特許ＥＰ  ２１６  ８４６、欧州特許ＥＰ  ２５６  ０５５、および欧州特許ＥＰ  ３２３  ９９７および欧州特許出願８９３０３９６４に関連して論じられている。一実施形態では、使用する抗体は、ＮＳ０細胞中、グルタミン合成酵素系を用いて作製する（ＧＳ−ＮＳ０）。別の実施形態では、抗体は、ＣＨＯ細胞中、ＤＨＦＲ系を用いて作製する。どちらの系も当技術分野で周知であり、とりわけ、Ｂａｒｎｅｓ他、Ｂｉｏｔｅｃｈ＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７３：２６１〜２７０（２００１）、およびその中で引用される参考文献に記載されている。
【００７１】
グリコシル化を排除するための、抗体のＣＨ２ドメインの部位特異的突然変異誘発が、非ヒトのグリコシル化から生じる免疫原性、薬物動態学、および／またはエフェクター機能のいずれかの変化を防止するために、好ましい場合がある。さらに、抗体は、酵素反応（たとえば、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ他、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １３８：３５０（１９８７）を参照）および／または化学的方法（たとえば、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ他、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ２５９：５２（１９８７）を参照）によって脱グリコシル化することができる。
【００７２】
さらに、本発明には、変更されたグリコシル化パターンを含む抗ＣＴＬＡ４抗体の使用が包含される。当業者は、本明細書中に提供した開示に基づいて、抗ＣＴＬＡ４抗体を、天然に存在する抗体と比較して、追加の、より少ない、または異なるグリコシル化部位を含むように修飾できることを理解するであろう。そのような修飾は、たとえば、米国特許出願公開第２００３／０２０７３３６号および米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、ならびに国際特許公開ＷＯ  ０１／８１４０５および国際特許公開ＷＯ  ００／２４８９３に記載されている。
【００７３】
さらに、本発明は、抗体上に存在する糖型にかかわらず（存在する場合）、抗ＣＴＬＡ４抗体を使用することを含む。さらに、糖タンパク質上に存在する糖型を大幅に再モデリングする方法は当技術分野で周知であり、たとえば、国際特許公開ＷＯ  ０３／０３１４６４、国際特許公開ＷＯ  ９８／５８９６４、および国際特許公開ＷＯ  ９９／２２７６４、ならびに米国特許出願公開第２００４／００６３９１１号、米国特許出願公開第２００４／０１３２６４０号、米国特許出願公開第２００４／０１４２８５６号、米国特許出願公開第２００４／００７２２９０号、および米国特許第６，６０２，６８４号に記載のものが含まれる。
【００７４】
さらに、本発明には、それだけには限定されないが、ポリペプチドを、様々な非タンパク質ポリマーのうちの１つ、たとえば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンと、たとえば、米国特許出願公開第２００３／０２０７３４６号および米国特許出願公開第２００４／０１３２６４０号、ならびに米国特許第４，６４０，８３５号、米国特許第４，４９６，６８９号、米国特許第４，３０１，１４４号、米国特許第４，６７０，４１７号、米国特許第４，７９１，１９２号、米国特許第４，１７９，３３７号に記載の様式で連結させることを含めた、任意の当技術分野で知られている共有結合および非共有結合の修飾を有する抗ＣＴＬＡ４抗体の使用が包含される。
【００７５】
さらに、本発明には、抗ＣＴＬＡ４抗体、もしくはその抗原結合部分、たとえばヒト血清アルブミンポリペプチドを含むキメラタンパク質、またはその断片の使用が包含される。キメラタンパク質を、たとえばキメラタンパク質をコードしているキメラ核酸のクローニングを用いた組換え方法によって、または２つのペプチド部分の化学結合によって生成したかにかかわらず、当業者は、そのようなキメラタンパク質は当技術分野で周知であり、本発明の抗体に、それだけには限定されないが、安定性および血清半減期の増加などの望ましい生物学的特性を与えることができ、したがってそのような分子が本明細書中に含まれることを理解するであろう。
【００７６】
本発明において使用するために作製した抗体は、最初に特定の所望のアイソタイプを保有する必要はない。そうではなく、作製されたままの抗体は任意のアイソタイプを保有することができ、その後、従来技術を用いてアイソタイプを転換することができる。これらには、直接組換え技術（たとえば米国特許第４，８１６，３９７号を参照）、および細胞−細胞融合技術（たとえば米国特許第５，９１６，７７１号を参照）が含まれる。
【００７７】
本発明の抗体のエフェクター機能は、アイソタイプ転換によって、様々な治療的使用のためのＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、またはＩｇＭに変化させ得る。さらに、細胞死滅のための補体依存性は、たとえば、二重特異性、免疫毒素、または放射標識を使用することで回避することができる。
【００７８】
また、本発明には、数多くのもののうち、とりわけ、国際特許公開ＷＯ  ００／３７５０４（２０００年６月２９日に公開）、国際特許公開ＷＯ  ０１／１４４２４（２００１年３月１日に公開）、国際特許公開ＷＯ  ９３／００４３１（１９９３年１月７日に公開）、および国際特許公開ＷＯ  ００／３２２３１（２０００年６月８日に公開）に開示の抗体も包含される。
【００７９】
抗体４．１．１、４．１３．１および１１．２．１はＩｇＧ２抗体であり、１０Ｄ１（イピリムマブ）はＩｇＧ１抗体であり、また、そのような抗体の可変領域の配列は、本明細書中（表３を参照）、ならびに本明細書中に引用かつ組み込まれている特許出願および特許文献中に提供されているが、本明細書の別の箇所により完全に論じられているように、これらの抗体の完全長配列、ならびに配列番号１〜３２に記載の配列を含み、任意の定常領域をさらに含む任意の抗体の使用は、アイソタイプにかかわらず、本明細書中に包含されることを理解されたい。
【００８０】
したがって、当業者は、本明細書中の教示が提供された後、本明細書に記載の方法および使用には、広範な多量の抗ＣＴＬＡ４抗体および／またはその抗原結合部分の使用が含まれることを容易に理解するであろう。
【００８１】
さらに、当業者は、本明細書中に提供した開示に基づいて、本発明は単一の拮抗剤のみの投与に限定されず、むしろ、本発明には、少なくとも１つのＣＴＬＡ４拮抗剤、たとえば、４．１．１、４．１３．１、１１．２．１、およびイピリムマブなどの抗ＣＴＬＡ−４抗体を、少なくとも１つの他の治療剤と組み合わせて投与することが包含されることを理解するであろう。したがって、ＣＴＬＡ４拮抗剤の任意の組合せを少なくとも１つの治療剤と合わせることができ、本発明には、任意のそのような組合せおよびその順列が包含される。
【００８２】
治療方法
治療方法は、治療を必要としている対象に、治療上有効な量、または「有効量」の抗体、または抗原結合部分を、本開示によって企図されるように投与することを含む。本明細書中で使用する「治療上有効な」または「有効な」量とは、疾患症状の重篤度の減少、疾患症状のない期間の頻度および持続期間の増加、生存の延長、ならびに／または疾患の罹患が原因の機能障害もしくは能力障害の予防を、単一用量としてまたは単独でもしくは他の薬剤と組み合わせた複数用量のレジメンに従って、もたらすために十分な量の、抗体またはその一部分の量をいう。当業者は、対象の大きさ、対象の症状の重篤度、および選択した具体的な組成物または投与経路などの要因に基づいて、そのような量を決定することができる。対象は、ヒトまたは非ヒト動物（たとえば、ウサギ、ラット、マウス、サルまたは他の低次の霊長類）であり得る。
【００８３】
本開示の抗体または抗原結合部分を既知の医薬品と同時投与してもよく、一部の例では、抗体自体を修飾してもよい。たとえば、有効性を潜在的にさらに増加させるために、抗体を免疫毒素または放射性同位体とコンジュゲートさせることができる。追加の治療剤との同時投与に関して、そのような薬剤には、細胞毒性剤、放射毒性剤または免疫抑制剤が含まれることができる。抗体は、薬剤に連結させることができ（免疫複合体として）、または薬剤とは別々に投与することができる。後者の場合（別々の投与）、抗体は、薬剤の前、後、もしくはそれと同時に投与することができるか、または他の既知の治療、たとえば抗癌治療、たとえば放射線と同時投与することができる。そのような治療剤には、とりわけ、それ自体では、患者に対して毒性または準毒性であるレベルでのみ有効な、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、シスプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル、およびシクロホスファミドヒドロキシウレアなどの抗新生物剤が含まれる。シスプラチンは、１００ｍｇの用量として４週間ごとに１回静脈内投与することができ、アドリアマイシンは、６０〜７５ｍｇの用量として２１日ごとに１回静脈内投与する。本開示の抗ＣＴＬＡ４抗体、またはその抗原結合部分と化学療法剤とのの同時投与により、異なる機構によって作動する２つの抗癌剤がもたらされ、これにより、ヒト腫瘍細胞に対する細胞毒性効果が得られる。そのような同時投与により、抗体に対してそれらを非反応性にさせる、薬物耐性の発生または腫瘍細胞の抗原性の変化による問題が解決される場合がある。
【００８４】
本明細書で開示した抗体および抗原結合部分は、様々な状況において治療的または診断的ツールとして使用することができる。免疫系の機能においてＣＴＬＡ４が果たす役割を考慮すると、本開示の抗体または抗原結合部分を用いた治療に特に適した障害および状態には、異常細胞成長、たとえば、中皮腫、胆管道（肝管および胆管）のもの、原発性もしくは続発性のＣＮＳ腫瘍、原発性もしくは続発性の脳腫瘍、肺癌（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部もしくは頸部の癌、皮膚もしくは眼内の黒色腫、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、胃腸管系（胃、結腸直腸、および十二指腸）、乳癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸部癌、膣癌、外陰部癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、精巣癌、慢性もしくは急性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ性のリンパ腫、膀胱癌、腎臓もしくは輸尿管の癌、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、副腎皮質癌、胆嚢癌、多発性骨髄腫、胆管癌、線維肉腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、または前述の癌のうちの１つもしくは複数の組合せが含まれる。
【００８５】
前述の障害のいずれかを治療するため、本開示に従って使用するための医薬組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容できる担体または賦形剤を用いた従来の様式で配合し得る。本開示の抗体または抗原結合部分は、治療する障害の種類に応じて変化する場合がある任意の適切な手段によって投与することができる。可能性のある投与経路には、非経口（たとえば、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下）、肺内および鼻腔内、ならびに、局所的免疫抑制治療のために所望する場合は病巣内投与が含まれる。さらに、本開示の抗体は、たとえば減少する用量の抗体を用いた、パルスインフュージョンによって投与し得る。一実施形態では、投薬は、部分的には投与が短期のものであるか慢性的なものであるかに応じて、静脈内注射または皮下注射などの注射によって与える。投与する量は、臨床症状、個体の重量、および／または他の薬物を投与するかどうかなどの様々な要因に依存する。当業者は、投与経路が治療する障害または状態に応じて変化することを理解するであろう。
【００８６】
治療上有効な量の本開示による抗体または抗原結合部分の決定は、具体的な患者の特徴、投与経路、および治療する障害の性質に大きく依存する。一般的な指針は、たとえば、医薬品規制調和国際会議（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｈａｒｍｏｎｉｚａｔｉｏｎ）の出版物およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２７および２８章、ページ４８４〜５２８（第１８版、Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．、１９９０）中に見つけることができる。より詳細には、治療上有効な量の決定は、医薬品の毒性および有効性などの要因に依存する。毒性は、当技術分野で周知の方法および前述の参考文献中に見つかる方法を用いて決定し得る。有効性は、同じ指針を以下の実施例に記載する方法と併せて利用して、決定し得る。
【００８７】
抗体または抗原結合部分の投与では、投与量は、宿主体重１ｋｇあたり約０．０００１〜１００ｍｇ、より通常には０．０１〜２０ｍｇの範囲であり得る。たとえば、投与量は、０．３ｍｇ／体重１ｋｇ、１ｍｇ／体重１ｋｇ、３ｍｇ／体重１ｋｇ、５ｍｇ／体重１ｋｇ、１０ｍｇ／体重１ｋｇ、１５ｍｇ／体重１ｋｇ、２０ｍｇ／体重１ｋｇ、または１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な治療レジメンには、１週間ごとに１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、４週間ごとに１回、１カ月ごとに１回、３カ月ごとに１回または３〜６カ月ごとに１回の投与が含まれる。本開示の抗ＣＴＬＡ抗体またはその抗原結合部分のための投与レジメンには、たとえば、１ｍｇ／体重１ｋｇ、３ｍｇ／体重１ｋｇ、５ｍｇ／体重１ｋｇ、１０ｍｇ／体重１ｋｇ、１５ｍｇ／体重１ｋｇ、または２０ｍｇ／体重１ｋｇ、静脈内投与によるものが含まれ、抗体は、以下の投薬スケジュールのうちの１つを使用して与える：（ｉ）４週間ごとに６回の投与、その後、３カ月ごと、（ｉｉ）３週間ごと、（ｉｉｉ）１〜２０ｍｇ／体重１ｋｇを１回、続いて、１〜２０ｍｇ／体重１ｋｇを３週間ごと。
【００８８】
以下の実験の実施例を参照して、本発明をさらに詳述する。これらの実施例は例示目的のみで提供し、別段に指定しない限りは、限定することを意図しない。したがって、本発明は、いかなる様式でも以下の実施例に限定されると解釈されるべきでなく、むしろ、本明細書中に提供する教示の結果として明らかとなるありとあらゆる変形が包含されると解釈されるべきである。
【実施例１】
【００８９】
トレメリムマブで治療した患者のＣＲＰの分析
ＣＴＬＡ４の遮断を用いて治療した患者の延命効果を予測する、血清Ｃ反応性タンパク質の能力は、以前に治療していない切除不能な黒色腫を有する患者における、トレメリムマブ対化学療法（ダカルバジンまたはテモゾロミド）のランダム化多施設第３相試験である臨床治験Ａ３６７１００９からのデータの分析で発見された。アームＡにランダム化された患者は、９０日ごとに１５ｍｇ／ｋｇの用量でトレメリムマブを最大で４回静脈内投与された。アームＢにランダム化された患者は、１０００ｍｇ／ｍ２のダカルバジンまたは２００ｍｇ／ｍ２のテモゾロミドのいずれかを、治験責任者の判断で投与された。治験の主要目的は、２つの治療アームにおける患者の全生存を比較することであった。客観的な腫瘍応答は副次的評価項目であった。
【００９０】
Ａ３６７１００９治験では、治療を開始する前にほとんどの患者で血清ＣＲＰを測定した。以下に記載した分析では、ベースラインＣＲＰとは、試験へのランダム化の１４日前までに患者から採取した血清で行ったＣＲＰアッセイの結果をいう。
【００９１】
表１は、中央値全生存（ＯＳ）、２つの治療アームの生存の危険率、および２つの治療アームの全生存の差異のｐ値を、ＣＲＰ分類ごとに示す。低いベースラインＣＲＰを有する患者の治療群間で臨床的に有意かつ統計的に有意な差異が存在していた（図１を参照）。１．４８の危険率は、ＣＴＬＡ４の遮断を受けた患者を支持している、全生存の４８％の改善を表す。高いベースラインＣＲＰを有する患者における治療群間では明白な差異は存在しなかった（図２を参照）。これは、治療前に低いＣＲＰを有する患者の群では、化学療法とは対照的にＣＴＬＡ４の遮断を用いた治療から顕著な利益が導かれる一方で、低いベースラインＣＲＰを有する患者の群では、化学療法と比較してＣＴＬＡ４の遮断を用いた治療からどのような延命効果も導かれないと考えられることを実証している。
【００９２】
【表１】
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【００９３】
表２は、低ＣＲＰ群中の患者のベースライン特徴を治療アームごとに示す。アームＢでは正常ＬＤＨを有する患者およびＥＣＯＧ一般状態０を有する患者がわずかに高い割合である以外は、アームは良好に一致しており、これらの要素は、どちらも予後良好に関連しており、化学療法アームを支持している。このことは、トレメリムマブを受けた患者のより良好な生存は、２つのアーム間のベースライン要素の不均衡に起因し得ないことを示している。
【００９４】
【表２】
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【００９５】
図１および２は、ＣＲＰ分類および治療アームごとの全生存のカプランマイヤープロットを示す。
【００９６】
【表３−１】
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【００９７】
【表３−２】
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【図１】
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【図２】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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