(57)【要約】【課題】本発明の目的は、血液凝固プロテアーゼであるトロンビンの阻害剤の製造に必要とされる中間体である高純度の(Ｓ)−２−(４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ)−Ｎ−(メトキシポリエトキシエチル)−スクシアミン酸−t−ブチルエステルについて工業的に有利かつ高収率で安全な製造方法及び精製方法を提供することにある。【解決手段】(Ｓ)−２−(４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ)−コハク酸―１−ｔ−ブチルエステルと特定のクロロ蟻酸エステル類を有機溶媒及び塩基存在下で反応させ、混合酸無水物とした後、特定のポリエチレングリコール-アミノエチル−メチルエーテルと反応させることにより、高価なＨＢＴＵを用いることなく式(１)で表される(Ｓ)−２−(４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ)−Ｎ−(メトキシポリエトキシエチル)−スクシアミン酸-t-ブチルエステルが得られる。2011057584.tif 000012（式中、ｎは２０〜２００の整数を表す。）【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
2011057584.tif 000007
で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸−１−ｔ−ブチルエステルと式（２）
【化２】
2011057584.tif 000008
で表されるクロロ蟻酸エステル類（式中、Ｒは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基を表す）を有機溶媒および塩基存在下で反応させ、式（３）
【化３】
2011057584.tif 000009
で表される混合酸無水物(式中、Ｒは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基を表す)とした後、式（４）
【化４】
2011057584.tif 000010
（式中ｎは２０〜２００の整数を表す。）
で表されるポリエチレングリコール−アミノエチル−メチルエーテルを反応させることを特徴とする
式（５）
【化５】
2011057584.tif 000011
（式中、ｎは２０〜２００の整数を表す。）
で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルの製造方法。
【請求項２】
クロロ蟻酸エステル類がクロロ蟻酸イソブチルである請求項1記載の製造方法。
【請求項３】
請求項１記載の製造方法で得られた反応液から有機溶媒を除去し、得られた粗生成物を脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、エーテル類、エステル類から成る群から選ばれた少なくとも１種の有機溶媒に溶解させ、不溶物をろ過した後、
得られたろ液にアルカリ金属塩の水溶液を加え、（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルを水層に抽出する工程を有することを特徴とする（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルの精製方法。
【請求項４】
請求項３記載の精製方法で得られた（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルを脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類から成る群から選ばれた少なくとも１種の有機溶媒とヒドロキシ酸を加えて処理する工程を有することを特徴とする（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルの精製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液凝固プロテアーゼであるトロンビンの阻害剤の製造に必要とされる中間体である（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルの製造方法及びその精製方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルの合成方法としては、縮合剤に２−（1Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロフォスフェート(ＨＢＴＵ)を用いて、4-メトキシ-ベンゼンスルホニル−アスパラギン酸−t−ブチルエステルとポリエチレングリコール−アミノエチル−メチルエーテルとを反応させ、ジエチルエーテルで晶析し更に２−プロパノールで再結晶することにより目的物を得る方法が公知である（特許文献１）。
【０００３】
しかし、ＨＢＴＵは非常に高価であり、かつ非常に引火性の高いジエチルエーテルを用いて晶析することは危険性の面からも工業的に望ましい方法ではないため、高純度の（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルを得られる工業的に有利かつ安全な製造方法及び精製方法の開発が望まれていた。
【特許文献１】特表２００４−５２５８８８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、血液凝固プロテアーゼであるトロンビンの阻害剤の製造に必要とされる中間体である高純度の（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルについて工業的に有利かつ高収率で安全な製造方法及び精製方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記課題を解決するために種々の合成および精製条件の検討を行った。その結果、式（１）
【化１】
2011057584.tif 000002
で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸―１−ｔ−ブチルエステルと式（２）
【化２】
2011057584.tif 000003
で表されるクロロ蟻酸エステル類（式中、Ｒは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基を表す）を有機溶媒及び塩基存在下で反応させ、式（３）
【化３】
2011057584.tif 000004
で表される混合酸無水物とした後、式（４）
【化４】
2011057584.tif 000005
（式中ｎは２０〜２００の整数を表す。）
で表されるポリエチレングリコール-アミノエチル−メチルエーテルと反応させることにより、高価なＨＢＴＵを用いることなく
式（５）
【化５】
2011057584.tif 000006
（式中、ｎは２０〜２００の整数を表す。）で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸-t-ブチルエステルが得られることを見出した。  さらに前記反応により得られた反応液から有機溶媒を除去し、得られる粗生成物を脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、エーテル類、エステル類から成る群から選ばれた少なくとも１種の有機溶媒に溶解させ、不溶物をろ過した後、得られたろ液にアルカリ金属塩の水溶液を加え、（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸-t-ブチルエステルを水層に抽出する工程を含む精製方法および前記水層に脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類から成る群から選ばれた少なくとも１種の有機溶媒とヒドロキシ酸を加えて処理する工程を含む精製方法により、高収率で高純度の（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸-t-ブチルエステルが得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の製造方法および精製方法により、血液凝固プロテアーゼであるトロンビンの阻害剤の製造に必要とされる中間体である（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルが工業的に有利かつ安全に得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
以下、本発明について詳細に説明する。本発明はこれらの例によって何ら限定されるものではない。
【０００８】
本発明において式（５）で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルは、式（１）で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸―１−ｔ−ブチルエステルを有機溶媒に溶解し、塩基存在下に式（２）で表されるクロロ蟻酸エステル類を反応させ、式（３）で表される混合酸無水物とした後、式（４）で表されるポリエチレングリコール-アミノエチル−メチルエーテルと反応させることにより製造される。
【０００９】
本発明において式（１）で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸−１−ｔ−ブチルエステルは、例えば、特表２００４−５２５８８８号公報に記載の方法で製造することができる。
【００１０】
本発明の製造方法において用いられる有機溶媒としては（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸−１−ｔ−ブチルエステル及びクロロ蟻酸エステル類との反応で生成する混合酸無水物を溶解し、クロロ蟻酸エステル類と反応しないものであれば使用可能であり、具体的には、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアセトアミド類、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル類、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン等のケトン類、アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル類の他１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン等が挙げられる。これらのうち、エーテル類、ニトリル類が好ましく、テトラヒドロフラン、アセトニトリルがさらに好ましい。これらの有機溶媒は、単独または混合して用いることができる。用いる溶媒の量は（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸−１−ｔ−ブチルエステルに対して通常、５〜２０重量倍、好ましくは８〜１５重量倍である。
【００１１】
本発明の製造方法において用いられる塩基としては、反応に用いる有機溶媒に溶解し、（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸−１−ｔ−ブチルエステル及びクロロ蟻酸エステル類と反応しないものであればよく、具体的には、例えば、ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン等の有機塩基が挙げられ、その中でもＮ−メチルモルホリンが好ましい。これら塩基の使用量は（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸−１−ｔ−ブチルエステルに対して通常、０．５〜５．０当量、好ましくは１．０〜１．５当量である。
【００１２】
本発明の製造方法において用いられるクロロ蟻酸エステル類としては、例えば、クロロ蟻酸メチル、クロロ蟻酸エチル、クロロ蟻酸プロピル、クロロ蟻酸イソブチル、クロロ蟻酸ベンジル等が挙げられる。これらのうち、反応性の面からクロロ蟻酸イソブチルエステルが好ましい。これらクロロ蟻酸エステル類の使用量は、（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸−１−ｔ−ブチルエステルに対して、通常、０．５〜３．０当量、好ましくは１．０〜１．２当量である。
【００１３】
本発明において式（１）で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸−１−ｔ−ブチルエステルと式（２）で表されるクロロ蟻酸エステル類との反応は、通常、−７８℃〜２０℃の範囲で行われ、好ましくは−２０℃〜０℃である。
【００１４】
前記反応で得られた式（３）で表される混合酸無水物と式（４）で表されるポリエチレングリコール−アミノエチル−メチルエーテルとの反応は通常、−７８℃〜７０℃の範囲で行われ、好ましくは−２０℃〜３０℃である。
【００１５】
本発明における精製方法は、式（１）で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸−１−ｔ−ブチルエステルと式（２）で表されるクロロ蟻酸エステル類を有機溶媒および塩基存在下で反応させ、式（３）で表される混合酸無水物とした後、式（４）で表されるポリエチレングリコール−アミノエチル−メチルエーテルを反応させて得られた（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルを含有する反応液から有機溶媒を除去し、得られた粗生成物を脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、エーテル類、エステル類から成る群から選ばれた少なくとも１種の有機溶媒に溶解させ、不溶物をろ過した後、得られたろ液にアルカリ金属塩の水溶液を加え、（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルを水層に抽出する工程を有する（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルの精製方法であり、さらには、前記水層に脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類から成る群から選ばれた少なくとも１種の有機溶媒とヒドロキシ酸を加えて処理する工程を有する（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルの精製方法である。
【００１６】
本発明において、式（３）で表される混合酸無水物と式（４）で表されるポリエチレングリコール-アミノエチル−メチルエーテルとの反応で得られた式（５）で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルを含有する反応液の精製方法は、前記反応液から溶媒を蒸留等の方法にて除去した後、得られた粗精製物に脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、エーテル類、エステル類から成る群から選ばれた少なくとも１種の有機溶媒を加えて、通常０〜５０℃、好ましくは、１５〜３５℃で溶解し、塩類などの不溶物をろ過により除去する。  前記有機溶媒のうち、脂肪族炭化水素類としては、ヘキサン、ヘプタン等、芳香族炭化水素類としてはトルエン、キシレン等、エーテル類としては、ｔ-ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン等、エステル類としては、酢酸エチル、酢酸ブチル等がそれぞれ挙げられ、好ましくは、エステル類、さらに好ましくは、酢酸エチルである。これらの有機溶媒は２種以上を混合して使用することができる。その使用量は、式（５）で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルの粗生成物に対して、通常、３〜２０重量倍であり、好ましくは５〜１０重量倍である。
【００１７】
本発明における精製方法の一方は、本発明の製造方法で得られた反応液から有機溶媒を除去し、得られた粗生成物を脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、エーテル類、エステル類から成る群から選ばれた少なくとも１種の有機溶媒に溶解させ、不溶物をろ過した後、得られたろ液から（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルを水層に抽出する。該工程は、通常０〜５０℃好ましくは、１５〜３５℃で行なわれ、その際に用いられるアルカリ金属塩の水溶液は、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、フッ化ナトリウム、フッ化カリウム、フッ化セシウムやそれらの混合物の水溶液が挙げられ、好ましくは炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、塩化ナトリウムの水溶液である。そして、その濃度は通常、５〜３０重量％であり、好ましくは１０〜２０重量％濃度である。その使用量は通常、式（５）で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸-t-ブチルエステルの粗生成物に対して２〜５０重量倍であり、好ましくは３〜１５重量倍である。
【００１８】
本発明における精製方法のもう一方は、前記精製方法で得られた（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルに脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類から成る群から選ばれた少なくとも１種の有機溶媒とヒドロキシ酸を加えて処理する工程である。  該工程は通常０〜５０℃、好ましくは、１５〜３５℃で行なわれ、その際に用いられる有機溶媒としては、例えばヘキサン、ヘプタン等の脂肪族炭化水素類、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン、モノクロルベンゼン、ｏ−ジクロロベンゼン等のハロゲン化炭化水素類、ｔ-ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類またはそれらの混合物が挙げられ、好ましくは塩化メチレン、酢酸エチルであり、その使用量は、式（５）で表される（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルに対して、通常、５〜２０重量倍であり、好ましくは１５〜２０重量倍である。
【００１９】
該精製方法において必要に応じて用いられるヒドロキシ酸としては、脂肪族ヒドロキシ酸および芳香族ヒドロキシ酸が挙げられる。  脂肪族ヒドロキシ酸としては、例えば、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、イソクエン酸等が挙げられ、芳香族ヒドロキシ酸としては、例えば、サリチル酸、２，３−クレオソート酸、２，４−クレオソート酸、２，５−クレオソート酸等が挙げられる。
これらの内、脂肪族ヒドロキシ酸およびサリチル酸が好ましく、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、イソクエン酸が、さらに好ましい。ヒドロキシ酸の使用量は、通常、（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステルに対して０．００１〜２重量倍であり、好ましくは０．０１〜０．５重量倍である。
【００２０】
（実施例）
以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこれらに限定されるものではない。例中、収率は重量基準、純度は液体クロマトグラフによる面積百分率値である。
用いた液体クロマトグラフの測定条件は以下の通りである。
装置    ：  日立製  Ｌ−２４００
カラム  ：  Inertsil  ODS−３ ５μｍ４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ
条件    ：  ２５４ｎｍ  ４０℃  １．０ｍｌ/ｍiｎ  
キャリア：  メタノール：水＝６０：４０＋０．１％燐酸 
【実施例１】
【００２１】
１０００ｍＬガラスフラスコに（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸−１−ｔ−ブチルエステル１０．７ｇ（０．０２９ｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン３．０ｇ（０．０２９ｍｏｌ）、テトラヒドロフラン１０５．９ｇを仕込み、窒素雰囲気下、内温−１０℃まで冷却した。保冷しながらクロロ蟻酸イソブチルを４．０ｇ（０．０２９ｍｏｌ）滴下し、混合酸無水物（（Ｓ）−4−イソブトキシカルボニルオキシ−２−（4-メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−４−オキソ−酪酸−t−ブチルエステル）としたのち、ポリエチレングリコール-アミノエチル−メチルエーテル（ポリエチレングリコール平均分子量２０００）５３．０ｇ（０．０２７ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液を滴下して、室温で一晩反応した。反応液から溶媒を留去し、粗生成物６７．３ｇを得た。収率：９８．１重量％（対ポリエチレングリコール-アミノエチル−メチルエーテル）、（液クロ面百値）純度：９２．１％
【実施例２】
【００２２】
実施例１で得られた粗生成物６７．３ｇに酢酸エチル６００ｇを加えて溶解し、不溶解分はろ別し、得られた酢酸エチル溶液に濃度１６重量％の塩化ナトリウム水溶液５００ｇを加えて抽出後分液し水層を回収した。
【００２３】
回収した水層に酢酸エチル９００ｇとクエン酸１．０ｇと上水６００ｇを加えて洗浄後、分液し水層を回収した。前記水層を分析したところ（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステル（ポリエトキシエチル平均分子量：２０００）の純度は９９.１％であった。この水層に酢酸エチル５００ｇ、硫酸マグネシウム２５０ｇを加え、内温を５０℃に保温しながら目的物を有機層に抽出後、分液し、有機層を回収した。
回収した有機層の溶媒を留去し、（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸-t-ブチルエステル（ポリエトキシエチル平均分子量：２０００）５７．６ｇを得た。見掛回収率：８５．６重量％（対粗生成物）、純度：９９．８％
【実施例３】
【００２４】
２００ｍＬガラスフラスコに（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸―１−ｔ−ブチルエステル３．０ｇ（０．００８４ｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン０．８６ｇ（０．００８５ｍｏｌ）、テトラヒドロフラン３０．０ｇを仕込、窒素雰囲気下内温−１０℃まで冷却した。冷却しながらクロロ蟻酸イソブチルを１．１４ｇ（０．００８４ｍｏｌ）滴下し、混合酸無水物（（Ｓ）−4−イソブトキシカルボニルオキシー２−（4-メトキシーベンゼンスルホニルアミノ）−４−オキソ−酪酸−tert-ブチルエステル）としたのち、続いてテトラヒドロフラン６７．５ｇに溶解したポリエチレングリコール-アミノエチル−メチルエーテル（ポリエチレングリコール平均分子量２０００）１５．０ｇ（０．００８５ｍｏｌ）を滴下して、室温で一晩した反応した。反応液から溶媒を留去し、粗生成物１９．１ｇを得た。収率：８３．２重量％（対ポリエチレングリコール-アミノエチル−メチルエーテル）、純度：８６．７％
【実施例４】
【００２５】
実施例３で得られたこの粗生成物１９．１ｇに酢酸エチル１５０ｇを加えて溶解し、不溶解分はろ別し、得られた酢酸エチル溶液に濃度２０重量％の塩化ナトリウム水溶液１５０ｇを加えて抽出後分液し水層を回収した。
回収した水層に塩化メチレン１００ｇを加え、目的物を有機層に抽出後、分液し有機層を回収した。
この時回収した有機層を分析したところ、（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸-t-ブチルエステル（ポリエトキシエチル平均分子量：２０００）の純度は９８．３％であった。
この有機層にクエン酸８．５ｇと上水２２３ｇを加え（洗浄）処理後分液し、有機層を回収した。
回収した有機層の溶媒を留去し、（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸-t-ブチルエステル（ポリエトキシエチル平均分子量：２０００）１６．６４ｇを得た。見掛回収率：８５．２重量％（対粗生成物）、純度：９９．９％であった。
【００２６】
（比較例１）
３００ｍＬガラスフラスコに（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸−１−ｔ−ブチルエステル１.６５ｇ（０．００４６ｍｏｌ）、アセトニトリル２４．２ｇ、ジメチルホルムアミド１１４．７ｇ、ポリエチレングリコール-アミノエチル−メチルエーテル（ポリエチレングリコール平均分子量２０００）３．１ｇ（０．００１６ｍｏｌ）を仕込み、窒素雰囲気下、内温０℃まで冷却した。保冷しながらＨＢＴＵ１．７ｇ（０．００４６ｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン１．６g（０．０１２ｍｏｌ）を添加し、０℃で一時間保温した。室温に戻し、５時間撹拌した後、溶媒を留去した。粗生成物１２．４ｇを得た。
【００２７】
この粗生成物１２．４ｇにメタノール８．５gを加えて溶解し、エーテル７５．９gを滴下し０℃で一時間保温して結晶を析出させ、ろ過した。
得られた結晶をメタノールで溶解しイソプロピルアルコールを添加し０℃で一時間保温して結晶を析出させ、ろ過し（Ｓ）−２−（４−メトキシ−ベンゼンスルホニルアミノ）−Ｎ−（メトキシポリエトキシエチル）−スクシアミン酸−t−ブチルエステル（ポリエトキシエチル平均分子量：２０００）２．７ｇを得た。収率：７４．６重量％（対（Ｓ）−２−（４−メトキシベンゼンスルホニルアミノ）−コハク酸−１−ｔ−ブチルエステル）、純度：６５．５％