(57)【要約】【課題】より容易にかつ信頼可能的に製造されて、より容易かつ再現可能的に患者へ投与されて、そして望まれない副作用を低下又は消失させるために低下した初期血漿濃度を提供するＧＬＰ−１製剤。【解決手段】グルカゴン様ペプチド−１のペプチド類似体、その医薬的に許容される塩、哺乳動物を治療するためにそのような類似体を使用する方法、並びに、その故に有用な前記類似体を含んでなる医薬組成物。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルカゴン様ペプチド−１、エキセンディン−４、及びこれらの類似体及び誘導体からの少なくとも１つの分子を含んでなり、その水溶解度が、６と８の間のｐＨと約４〜４０℃で１ｍｇ／ｍＬ未満、好ましくは０．５ｍｇ／ｍＬ未満である、医薬組成物。
【請求項２】
分子が約５〜９、好ましくは約６〜８の等電点を有し、但し分子は、ヒトＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2でもヒトＧＬＰ−１（７−３７）−ＯＨでもない、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
水をさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
非水媒体をさらに含んでなる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
分子が７未満、好ましくは５未満のｐＨの水溶液に存在する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
分子が４．５以下のｐＨの澄明溶液に存在する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
分子が７より高い、好ましくは８より高いｐＨの水溶液に存在する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
分子が１０以上のｐＨの澄明溶液に存在する、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
分子の粒子が水性懸濁液又はゲルに存在する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
分子の粒子が約４〜１０のｐＨの水性懸濁液又はゲルに存在する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
分子の粒子が非水媒体に存在する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
分子が約０．００１〜５００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約０．１〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
保存剤をさらに含んでなる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記保存剤が、ｍ−クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール、及びメチルパラベンからなる群より選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記保存剤が０．０１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
等張剤をさらに含んでなる、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記等張剤が０．０１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
二価イオンをさらに含んでなる、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記二価イオンが亜鉛であり、前記亜鉛は、０．０００５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
安定化剤をさらに含んでなる、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記安定化剤が、イミダゾール、アルギニン、及びヒスチジンからなる群より選択される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
界面活性剤をさらに含んでなる、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
キレート剤をさらに含んでなる、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
緩衝剤をさらに含んでなる、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記緩衝剤が、Ｔｒｉｓ、酢酸アンモニウム、酢酸ナトリウム、グリシン、アスパラギン酸、及びＢｉｓ−Ｔｒｉｓからなる群より選択される、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
塩基性ポリペプチドをさらに含んでなる、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記塩基性ポリペプチドが、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、プロタミン、プトレシン、スペルミン、スペルミジン、及びヒストンからなる群より選択される、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
アルコール又は単糖若しくは二糖をさらに含んでなる、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記アルコール又は単糖若しくは二糖が、メタノール、エタノール、プロパノール、グリセロール、トレハロース、マンニトール、グルコース、エリスロース、リボース、ガラクトース、フルクトース、マルトース、スクロース、及びラクトースからなる群より選択される、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
硫酸アンモニウムをさらに含んでなる、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３１】
分子が、Ｌ若しくはＤ−Ａｒｇ及びＬ若しくはＤ−ｈＡｒｇからなる群より選択される少なくとも２つの残基を有するＧＬＰ−１類似体及び誘導体からなる群より選択される、請求項１〜３０のいずれか１項の組成物。
【請求項３２】
分子が、残基２６及び３４の少なくとも１つがＬ若しくはＤ−Ａｒｇ又はＬ若しくはＤ−ｈＡｒｇであるＧＬＰ−１類似体及び誘導体からなる群より選択される、請求項３１の組成物。
【請求項３３】
前記ＧＬＰ−１類似体が式（Ｉ）：
【化１】
2011001381.tif 000017
［式中：
Ａ7は、Ｌ−Ｈｉｓであるか又は欠失され；
Ａ8は、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、β−Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｃｃ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ又はＮ−Ｍｅ−Ｇｌｙであり；
Ａ9は、Ｇｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ｇｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｓｐ又はＡｓｐであり；
Ａ10は、Ｇｌｙ、Ａｃｃ、β−Ａｌａ又はＡｉｂであり；
Ａ11は、Ｔｈｒ又はＳｅｒであり；
Ａ12は、Ｐｈｅ、Ａｃｃ、Ａｉｃ、Ａｉｂ、３Ｐａｌ、４Ｐａｌ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ、Ｃｈａ、Ｔｒｐ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ13は、Ｔｈｒ又はＳｅｒであり；
Ａ14は、Ｓｅｒ又はＡｉｂであり；
Ａ15は、Ａｓｐ又はＧｌｕであり；
Ａ16は、Ｖａｌ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｌｅ、Ｎｌｅ、Ａｂｕ、Ａｌａ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ又はＣｈａであり；
Ａ17は、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり；
Ａ18は、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり；
Ａ19は、Ｔｙｒ、Ｃｈａ、Ｐｈｅ、３Ｐａｌ、４Ｐａｌ、Ａｃｃ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ20は、Ｌｅｕ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ21は、Ｇｌｕ又はＡｓｐであり；
Ａ22は、Ｇｌｙ、Ａｃｃ、β−Ａｌａ又はＡｉｂであり；
Ａ23は、Ｇｌｎ又はＡｓｎであり；
Ａ24は、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ｔｌｅ又はＡｃｃであり；
Ａ25は、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ｔｌｅ又はＡｃｃであり；
Ａ26は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ、又はＤａｐであり；
Ａ27は、Ｇｌｕ又はＡｓｐであり；
Ａ28は、Ｐｈｅ、３Ｐａｌ、４Ｐａｌ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ、Ａｉｃ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｃｈａ、Ｔｒｐ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ29は、Ｉｌｅ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ30は、Ａｌａ、Ａｉｂ又はＡｃｃであり；
Ａ31は、Ｔｒｐ、２Ｎａｌ、３Ｐａｌ、４Ｐａｌ、Ｐｈｅ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｃｈａ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ32は、Ｌｅｕ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ、Ｐｈｅ、（Ｘ1）n−Ｐｈｅ又はＡｌａであり；
Ａ33は、Ｖａｌ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｌｅ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、Ａｌａ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ、Ｐｈｅ、Ａｂｕ、Ｌｙｓ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ34は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ又はＤａｐであり；
Ａ35は、Ｇｌｙ、β−Ａｌａ、Ｇａｂａ、Ａｖａ、ＨＮ−ＣＨ（ＣＨ2）m−Ｃ（Ｏ）、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ｄ−アミノ酸であるか又は欠失され；
Ａ36は、Ｌ若しくはＤ−Ａｒｇ、Ｄ若しくはＬ−Ｌｙｓ、Ｄ若しくはＬ−ｈＡｒｇ、Ｄ若しくはＬ−Ｏｒｎ、Ｌ若しくはＤ−Ｄａｂ、Ｌ若しくはＤ−Ｄａｐであるか又は欠失され；そして
Ａ37は、Ｇｌｙ、β−Ａｌａ、Ｇａｂａ、Ａｖａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ａｄｏ、Ａｕｎ、Ａｅｃ、Ｄ−アミノ酸であるか又は欠失され；
Ｘ1は、それぞれの出現につき、それぞれの出現につき独立して、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ＯＨ、又はハロゲンであり；
ｎは１、２、３、４又は５であり；
Ｒ1は、ＯＨ、ＮＨ2、（Ｃ1〜Ｃ30）アルコキシ、又はＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−Ｚ0である｛ここでＸ2は、（Ｃ1〜Ｃ12）炭化水素部分であり、Ｚ0は、Ｈ、ＯＨ、ＣＯ2Ｈ又はＣＯＮＨ2である｝］による化合物である、請求項１〜３２のいずれか１項の組成物。
【請求項３４】
前記化合物が：
【化２】
2011001381.tif 000018
【化３】
2011001381.tif 000019
【化４】
2011001381.tif 000020
である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記化合物が：
【化５】
2011001381.tif 000021
である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３６】
前記化合物が：
【化６】
2011001381.tif 000022
である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３７】
請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩の有効量と医薬的に許容される担体又は希釈剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項３８】
ＧＬＰ−１受容体からのアゴニスト効果をその必要な被検者において誘発する方法であって、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩の有効量を前記被検者へ投与することを含む、前記方法。
【請求項３９】
Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肥満、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄、及び神経変性疾患からなる群より選択される疾患を治療の必要な被検者において治療する方法であって、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩の有効量を前記被検者へ投与することを含む、前記方法。
【請求項４０】
前記疾患がＩ型糖尿病又はＩＩ型糖尿病である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
式：
【化７】
2011001381.tif 000023
による類似体、またはこれを亜鉛と医薬的に許容される担体又は希釈剤と一緒に含んでなる医薬組成物。
【請求項４２】
前記亜鉛が０．０００５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
前記希釈剤が医薬的に許容される水溶液を含む、請求項４１又は４２に記載の組成物。
【請求項４４】
亜鉛とＧＬＰ−１又はエキセンディン−４の類似体を含んでなる、澄明溶液又はゲルの医薬組成物。
【請求項４５】
被検者への皮下投与後に沈殿を生成する、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
水をさらに含んでなる、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４７】
非水媒体をさらに含んでなる、請求項４４及び４５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４８】
分子が２．５と１０．５の間、好ましくは３．５と８の間のｐＨの水溶液に存在する、請求項４４〜４６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４９】
分子が約０．００１〜５００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約０．１〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項４４〜４７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５０】
保存剤をさらに含んでなる、請求項４４〜４８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５１】
前記保存剤が、ｍ−クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール、及びメチルパラベンからなる群より選択される、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５２】
前記保存剤が０．０１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５３】
等張剤をさらに含んでなる、請求項４４〜５１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５４】
前記等張剤が０．０１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５５】
前記亜鉛が０．０００５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項４４〜５３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５６】
安定化剤をさらに含んでなる、請求項４４〜５４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５７】
前記安定化剤が、イミダゾール、アルギニン、及びヒスチジンからなる群より選択される、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５８】
界面活性剤をさらに含んでなる、請求項４４〜５６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５９】
キレート剤をさらに含んでなる、請求項４４〜５７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６０】
緩衝剤をさらに含んでなる、請求項４４〜５８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６１】
前記緩衝剤が、Ｔｒｉｓ、酢酸アンモニウム、酢酸ナトリウム、グリシン、アスパラギン酸、及びＢｉｓ−Ｔｒｉｓからなる群より選択される、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６２】
塩基性ポリペプチドをさらに含んでなる、請求項４４〜６０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６３】
前記塩基性ポリペプチドが、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、プロタミン、プトレシン、スペルミン、スペルミジン、及びヒストンからなる群より選択される、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６４】
アルコール又は単糖若しくは二糖をさらに含んでなる、請求項４４〜６１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６５】
前記アルコール又は単糖若しくは二糖が、メタノール、エタノール、プロパノール、グリセロール、トレハロース、マンニトール、グルコース、エリスロース、リボース、ガラクトース、フルクトース、マルトース、スクロース、及びラクトースからなる群より選択される、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６６】
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2；又はその医薬的に許容される塩を含んでなる、請求項４４〜６４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６７】
式：［Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2による類似体、又はその医薬的に許容される塩から本質的になる医薬組成物。
【請求項６８】
固形ミクロ錠剤の形態である、請求項６７に記載の医薬組成物。
【請求項６９】
水をさらに含んでなり、半固体を生成する、請求項６７に記載の医薬組成物。
【請求項７０】
ほぼ２５％（重量／重量）の（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2を含有する、請求項６９に記載の半固体の医薬組成物。
【請求項７１】
式：
【化８】
2011001381.tif 000024
による類似体を亜鉛と医薬的に許容される担体又は希釈剤と一緒に含んでなる医薬組成物。
【請求項７２】
前記亜鉛が０．０００５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項７１に記載の組成物。
【請求項７３】
前記亜鉛が０．０１ｍｇ／ｍＬ〜０．５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７４】
前記希釈剤が医薬的に許容される水溶液を含む、請求項７１に記載の組成物。
【請求項７５】
前記希釈剤が滅菌水を含む、請求項７４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルカゴン様ペプチド−１のペプチド類似体、その医薬的に許容される塩、哺乳動物を治療するためにそのような類似体を使用する方法、並びに、その故に有用な前記類似体を含んでなる医薬組成物へ向けられる。
【背景技術】
【０００２】
グルカゴン様ペプチド−１（７−３６）アミド（ＧＬＰ−１）は、グルカゴン前駆体のプレプログルカゴンの組織特異的な翻訳後プロセシングにより腸のＬ細胞において合成され（Varndell, J. M., et al., J. Histochem Cytochem, 1985:33:1080-6）、食事に応答して循環中へ放出される。ＧＬＰ−１の血漿濃度は、絶食レベルのほぼ１５ピコモル／Ｌから食後ピークレベルの４０ピコモル／Ｌへ上昇する。血漿グルコース濃度におけるある一定の上昇に対し、血漿インスリンの増加は、グルコースを経口で投与するとき、静脈内と比較してほぼ３倍高いことが証明されている（Kreymann, B., et al., Lancet 1987:2, 1300-4）。インクレチン（incretin）効果として知られる、このインスリン放出の食事性の亢進は、主として体液性であり、ＧＬＰ−１は、ヒトにおいて最も強力な生理学的インクレチンであると今日考えられている。向インスリン効果に加えて、ＧＬＰ−１は、グルカゴン分泌を抑制し、胃の空洞化を遅らせ（Wettergren A., et al., Dig Dis Sci 1993:38:665-73）、末梢のグルコース処理を高める可能性がある（D'Alessio, D. A. et al., J. Clin Invest 1994:93:2293-6）。
【０００３】
１９９４年に、ＧＬＰ−１の単回皮下（ｓ／ｃ）投薬によってインスリン非依存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の患者の食後血糖値が完全に正常化され得るという観察に従って、ＧＬＰ−１の治療ポテンシャルが示唆された（Gutniak, M. K., et al., Diabetes Care 1994:17:1039-44）。この効果は、インスリン放出の増加とグルカゴン分泌の低下の両方により仲介されると考えられた。さらに、ＧＬＰ−１の静脈内注入は、ＮＩＤＤＭの患者において食後の胃空洞化を遅らせることが示された（Williams, B., et al., J. Clin Endo Metab 1996:81:327-32）。スルホニル尿素と異なり、ＧＬＰ−１の向インスリン作用は、血漿グルコース濃度に依存する（Holz, G. G. 4th, et al., Nature 1993: 361: 362-5）。従って、低い血漿グルコース濃度ではＧＬＰ−１仲介性インスリン放出がないことにより、重篤な低血糖症に抗して保護される。こういった作用の組合せは、ＮＩＤＤＭを治療するために今日使用されている他の薬剤に優る独自の潜在的な療法上の利点をＧＬＰ−１に与える。
【０００４】
数多くの研究により、健常被検者へ与えるとき、ＧＬＰ−１は、インスリン及びグルカゴンの濃度だけでなく、血糖値にも強力に影響を及ぼし（Orskov, C. Diabetologia 35:701-711, 1992；「実験薬理学要覧、グルカゴンＩＩＩ（Glucagon III, Handbook of Experimental Pharmacology）」（Lefevbre PJ 監修、ベルリン、Springer Verlag, 1996）中、Holst, J. J., et al.,「糖尿病管理におけるＧＬＰ−１の潜在可能性（Potential of GLP-1 in diabetes management）」(311-326頁))、この効果がグルコース依存性である（Kreymann, B., et al., Lancet ii: 1300-1304, 1987; Weir, G. C., et al., Diabetes 38:338-342, 1989）ことが示されている。さらに、これは、糖尿病の患者にも有効であり(Gutniak, M., N. Engl J Med 226:1316-1322, 1992; Nathan, D. M. et al., Diabetes Care 15:270-276, 1992)、２型糖尿病の被検者の血糖値を正常化し（Nauck, M. A., et al., Diagbetologia 36:741-744, 1993）、１型患者の血糖コントロールを改善し（Creutzfeldt, W. O., et al., Diabetes Care 19:580-586, 1996）、その治療薬剤としての使用の可能性を高めている。
【０００５】
しかしながら、ＧＬＰ−１は、代謝的に不安定であり、in vivo では１〜２分の血漿半減期（ｔ1/2）しか有さない。外因的に投与したＧＬＰ−１も、速やかに分解される（Deacon, C. F., et al., Diabetes 44: 1126-1131, 1995）。この代謝不安定性により、ネイティブＧＬＰ−１の治療ポテンシャルは制限される。
【０００６】
ＧＬＰ−１とその類似体の治療ポテンシャルを製剤における改善を通して改善するために、いくつかの試みがなされてきた。例えば、国際特許公開公報番号ＷＯ０１／５７０８４は、結晶と医薬的に許容される担体を含んでなる、注射可能な医薬品のような医薬組成物の調製に有用であると言われるＧＬＰ−１類似体の結晶を生成する方法を記載する。ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨの不均質な微結晶性クラスターを生理食塩水溶液より成長させて、亜鉛及び／又はｍ−クレゾールでの結晶浸漬処理の後で試験した（Kim and Haren, Pharma. Res. Vol. 12 No. 11 (1995)）。針状結晶と非結晶性の沈殿を含有するＧＬＰ（７−３６）ＮＨ2の粗結晶懸濁液が亜鉛又はプロタミンを含有するリン酸溶液より調製された（Pridal, et. al., International Journal of Pharmaceutics Vol. 136, pp. 53-59 (1996))。ヨーロッパ特許公開公報番号ＥＰ０６１９３２２Ａ２は、塩類と低分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のある種の組合せを含むｐＨ７〜８．５の緩衝液において上記タンパク質の溶液を混合することによる、ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨの微結晶型の調製を記載する。米国特許第６，５６６，４９０号は、精製ペプチド生成物の生成に役立つと言われる、ＧＬＰ−１の種となる微結晶について特に記載する。米国特許第６，５５５，５２１（ＵＳ５２１）号は、改善された純度を有して、延長されたin vivo活性を明示すると言われる、正方晶系の平棒又は板状の形を有するＧＬＰ−１結晶を開示する。ＵＳ５２１号は、そのような結晶が、速やかに固まって、一緒に凝集又は密集し、シリンジ針を詰まらせ、予測不能な投薬を概して悪化させると言われた、先行の結晶性クラスターや無定形の結晶性懸濁液よりも相対的に均質であり、より長い時間の間、懸濁状態のままであることを教示する。
【０００７】
生物分解性トリブロックコポリマーのポリ［（ｄｌ−ラクチド−コグリコリド）−ｂ−エチレングリコール−ｂ−（−ラクチド−コグリコリド）］がＧＬＰ−１の制御放出製剤における使用を示唆されたことがある。しかしながら、他のポリマー系と同じように、トリブロックコポリマーの製造には、複雑なプロトコールと一貫性のない微粒子形成が伴う。
【０００８】
同様に、生物分解性ポリマー、例えば、ポリ（乳酸−コグリコール酸）（ＰＬＧＡ）も、ペプチドの持続送達製剤における使用を示唆されたことがある。しかしながら、このような生物分解性ポリマーの使用は、一般に、これらのポリマーが水において乏しい溶解度を有し、水と混和不能の有機溶媒（例えば、塩化メチレン）及び／又は製造の間の厳しい調製条件を必要とするので、当該技術分野では好まれていない。そのような有機溶媒及び／又は厳しい調製条件は、目的のペプチド又はタンパク質のコンホメーション変化を誘発するリスクを高めて、構造の完全性の減少と生物学的活性の低下をもたらすとみなされている（Choi et al., Pharm. Research, Vol. 21, No. 5, (2004)）。ポロキサマーも同様に欠点があるとされた（同上）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際特許公開公報番号ＷＯ０１／５７０８４
【特許文献２】ＥＰ０６１９３２２Ａ２
【特許文献３】ＵＳＰ６，５６６，４９０Ｂ
【特許文献４】ＵＳＰ６，５５５，５２１Ｂ
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Kim and Haren, Pharma. Res. Vol. 12 No. 11 (1995)
【非特許文献２】Pridal, et. al., International Journal of Pharmaceutics Vol. 136, pp. 53-59 (1996)
【非特許文献３】Choi et al., Pharm. Research, Vol. 21, No. 5, (2004)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
先述の参考文献に記載されたＧＬＰ−１組成物は、不純物を捕捉する傾向があり、及び／又は、他にも、再現可能的に製造して投与することが難しいので、ＧＬＰの医薬製剤を調製するのに理想的とは言えない。また、ＧＬＰ類似体は、上昇濃度で嘔吐を誘発することが知られているので、初期の血漿濃度が低下した持続的な医薬効果を提供する必要がある。従って、より容易にかつ信頼可能的に製造されて、より容易かつ再現可能的に患者へ投与されて、そして望まれない副作用を低下又は消失させるために低下した初期血漿濃度を提供するＧＬＰ−１製剤へのニーズが存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
発明の要約
本発明は、以下のパラグラフ（１）〜（６７）、並びに特許請求項において以下に要約することができる。従って：
（１）１つの側面において、本発明は、グルカゴン様ペプチド−１、エキセンディン−４、及びこれらの類似体及び誘導体からの少なくとも１つの向インスリン分子を含んでなり、その水溶解度が、６と８の間のｐＨと約４〜４０℃で１ｍｇ／ｍＬ未満、好ましくは０．５ｍｇ／ｍＬ未満である医薬組成物へ向けられる。
（２）好ましくは、前記の向インスリン分子は、約５〜９、より好ましくは約６〜８の等電点を有し、但し分子は、ヒトＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2でもヒトＧＬＰ−１（７−３７）−ＯＨでもない。
【００１３】
（３）１つの態様において、本発明は、水をさらに含んでなる、パラグラフ（１）に記載の組成物を特徴とする。
（４）非水媒体をさらに含んでなる、パラグラフ（１）〜（３）のいずれか１つに記載の組成物。
【００１４】
（５）分子が７未満、好ましくは５未満のｐＨの水溶液に存在する、パラグラフ（１）〜（４）のいずれか１つに記載の組成物。
【００１５】
（６）分子が４．５以下のｐＨの澄明溶液に存在する、パラグラフ（１）〜（５）のいずれか１つに記載の組成物。
【００１６】
（７）分子が７より高い、好ましくは８より高いｐＨの水溶液に存在する、パラグラフ（１）〜（４）のいずれか１つに記載の組成物。
【００１７】
（８）分子が１０以上のｐＨの澄明溶液に存在する、パラグラフ（７）に記載の組成物。
【００１８】
（９）分子の粒子が水性懸濁液又はゲルに存在する、パラグラフ（１）〜（４）のいずれか１つに記載の組成物。
【００１９】
（１０）分子の粒子が約４〜１０のｐＨの水性懸濁液又はゲルに存在する、パラグラフ（９）に記載の組成物。
【００２０】
（１１）分子の粒子が非水媒体に存在する、パラグラフ（１）〜（３）のいずれか１つに記載の組成物。
【００２１】
（１２）分子が約０．００１〜５００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約０．１〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、パラグラフ（１）〜（１１）のいずれか１つに記載の組成物。
【００２２】
（１３）保存剤をさらに含んでなる、パラグラフ（１）〜（１２）のいずれか１つに記載の組成物。
【００２３】
（１４）前記保存剤が、ｍ−クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール、及びメチルパラベンからなる群より選択される、パラグラフ（１３）に記載の組成物。
【００２４】
（１５）前記保存剤が０．０１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、パラグラフ（１４）に記載の組成物。
【００２５】
（１６）等張剤をさらに含んでなる、パラグラフ（１）〜（１５）のいずれか１つに記載の組成物。
【００２６】
（１７）前記等張剤が０．０１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、パラグラフ（１）〜（１６）に記載の組成物。
【００２７】
（１８）二価イオン、好ましくは亜鉛をさらに含んでなる、パラグラフ（１）〜（１７）のいずれか１つに記載の組成物。
【００２８】
（１９）前記亜鉛が０．０００５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、パラグラフ（１８）に記載の組成物。
【００２９】
（２０）安定化剤をさらに含んでなる、パラグラフ（１）〜（１９）のいずれか１つに記載の組成物。
【００３０】
（２１）前記安定化剤が、イミダゾール、アルギニン、及びヒスチジンからなる群より選択される、パラグラフ（２０）に記載の組成物。
【００３１】
（２２）界面活性剤をさらに含んでなる、パラグラフ（１）〜（２１）のいずれか１つに記載の組成物。
【００３２】
（２３）キレート剤をさらに含んでなる、パラグラフ（１）〜（２２）のいずれか１つに記載の組成物。
【００３３】
（２４）緩衝剤をさらに含んでなる、パラグラフ（１）〜（２３）のいずれか１つに記載の組成物。
【００３４】
（２５）前記緩衝剤が、Ｔｒｉｓ、酢酸アンモニウム、酢酸ナトリウム、グリシン、アスパラギン酸、及びＢｉｓ−Ｔｒｉｓからなる群より選択される、パラグラフ（２４）に記載の組成物。
【００３５】
（２６）塩基性ポリペプチドをさらに含んでなる、パラグラフ（１）〜（２５）のいずれか１つに記載の組成物。
【００３６】
（２７）前記塩基性ポリペプチドが、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、プロタミン、プトレシン、スペルミン、スペルミジン、及びヒストンからなる群より選択される、パラグラフ（２６）に記載の組成物。
【００３７】
（２８）アルコール又は単糖若しくは二糖をさらに含んでなる、パラグラフ（１）〜（２７）のいずれか１つに記載の組成物。
【００３８】
（２９）前記アルコール又は単糖若しくは二糖が、メタノール、エタノール、プロパノール、グリセロール、トレハロース、マンニトール、グルコース、エリスロース、リボース、ガラクトース、フルクトース、マルトース、スクロース、及びラクトースからなる群より選択される、パラグラフ（２８）に記載の組成物。
【００３９】
（３０）硫酸アンモニウムをさらに含んでなる、パラグラフ（１）〜（２９）のいずれか１つに記載の組成物。
【００４０】
（３１）分子が、Ｌ若しくはＤ−Ａｒｇ及びＬ若しくはＤ−ｈＡｒｇからなる群より選択される少なくとも２つの残基を有するＧＬＰ−１類似体及び誘導体からなる群より選択される、パラグラフ（１）〜（３０）のいずれか１つの組成物。
【００４１】
（３２）分子が、残基２６及び３４の少なくとも１つがＬ若しくはＤ−Ａｒｇ又はＬ若しくはＤ−ｈＡｒｇであるＧＬＰ−１類似体及び誘導体からなる群より選択される、パラグラフ（３１）の組成物。
【００４２】
（３３）前記ＧＬＰ−１類似体が、式（Ｉ）：
【００４３】
【化１】
2011001381.tif 000002
【００４４】
［式中：
Ａ7は、Ｌ−Ｈｉｓであるか又は欠失され；
Ａ8は、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、β−Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｃｃ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ又はＮ−Ｍｅ−Ｇｌｙであり；
Ａ9は、Ｇｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ｇｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｓｐ又はＡｓｐであり；
Ａ10は、Ｇｌｙ、Ａｃｃ、β−Ａｌａ又はＡｉｂであり；
Ａ11は、Ｔｈｒ又はＳｅｒであり；
Ａ12は、Ｐｈｅ、Ａｃｃ、Ａｉｃ、Ａｉｂ、３Ｐａｌ、４Ｐａｌ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ、Ｃｈａ、Ｔｒｐ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ13は、Ｔｈｒ又はＳｅｒであり；
Ａ14は、Ｓｅｒ又はＡｉｂであり；
Ａ15は、Ａｓｐ又はＧｌｕであり；
Ａ16は、Ｖａｌ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｌｅ、Ｎｌｅ、Ａｂｕ、Ａｌａ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ又はＣｈａであり；
Ａ17は、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり；
Ａ18は、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり；
Ａ19は、Ｔｙｒ、Ｃｈａ、Ｐｈｅ、３Ｐａｌ、４Ｐａｌ、Ａｃｃ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ20は、Ｌｅｕ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ21は、Ｇｌｕ又はＡｓｐであり；
Ａ22は、Ｇｌｙ、Ａｃｃ、β−Ａｌａ又はＡｉｂであり；
Ａ23は、Ｇｌｎ又はＡｓｎであり；
Ａ24は、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ｔｌｅ又はＡｃｃであり；
Ａ25は、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ｔｌｅ又はＡｃｃであり；
Ａ26は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ、又はＤａｐであり；
Ａ27は、Ｇｌｕ又はＡｓｐであり；
Ａ28は、Ｐｈｅ、３Ｐａｌ、４Ｐａｌ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ、Ａｉｃ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｃｈａ、Ｔｒｐ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ29は、Ｉｌｅ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ30は、Ａｌａ、Ａｉｂ又はＡｃｃであり；
Ａ31は、Ｔｒｐ、２Ｎａｌ、３Ｐａｌ、４Ｐａｌ、Ｐｈｅ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｃｈａ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ32は、Ｌｅｕ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ、Ｐｈｅ、（Ｘ1）n−Ｐｈｅ又はＡｌａであり；
Ａ33は、Ｖａｌ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｌｅ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、Ａｌａ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ、Ｐｈｅ、Ａｂｕ、Ｌｙｓ又は（Ｘ1）n−Ｐｈｅであり；
Ａ34は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ又はＤａｐであり；
Ａ35は、Ｇｌｙ、β−Ａｌａ、Ｇａｂａ、Ａｖａ、ＨＮ−ＣＨ（ＣＨ2）m−Ｃ（Ｏ）、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ｄ−アミノ酸であるか又は欠失され；
Ａ36は、Ｌ若しくはＤ−Ａｒｇ、Ｄ若しくはＬ−Ｌｙｓ、Ｄ若しくはＬ−ｈＡｒｇ、Ｄ若しくはＬ−Ｏｒｎ、Ｌ若しくはＤ−Ｄａｂ、Ｌ若しくはＤ−Ｄａｐであるか又は欠失され；そして
Ａ37は、Ｇｌｙ、β−Ａｌａ、Ｇａｂａ、Ａｖａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ａｄｏ、Ａｕｎ、Ａｅｃ、Ｄ−アミノ酸であるか又は欠失され；
Ｘ1は、それぞれの出現につき、それぞれの出現につき独立して、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ＯＨ、又はハロゲンであり；
ｎは１、２、３、４又は５であり；
Ｒ1は、ＯＨ、ＮＨ2、（Ｃ1〜Ｃ30）アルコキシ、又はＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−Ｚ0である｛ここでＸ2は、（Ｃ1〜Ｃ12）炭化水素部分であり、Ｚ0は、Ｈ、ＯＨ、ＣＯ2Ｈ又はＣＯＮＨ2である｝］による化合物である、パラグラフ（３２）の組成物。
【００４５】
（３４）前記ＧＬＰ−１類似体が式：
【００４６】
【化２】
2011001381.tif 000003
【００４７】
【化３】
2011001381.tif 000004
【００４８】
【化４】
2011001381.tif 000005
【００４９】
による化合物である、パラグラフ（３３）に記載の組成物。
【００５０】
（３５）より好ましい態様において、本発明は、前記ＧＬＰ−１類似体が式：
【００５１】
【化５】
2011001381.tif 000006
【００５２】
による化合物である、パラグラフ（３４）に記載の組成物を特徴とする。
【００５３】
（３６）なおより好ましい態様において、本発明は、前記ＧＬＰ−１類似体が式：
【００５４】
【化６】
2011001381.tif 000007
【００５５】
による化合物である、パラグラフ（３４）に記載の組成物を特徴とする。
【００５６】
（３７）ＧＬＰ−１受容体からのアゴニスト効果をその必要な被検者において誘発する方法であって、該方法は、パラグラフ（１）又はパラグラフ（３３）に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩の有効量を前記被検者へ投与することを含む。
【００５７】
（３８）Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肥満、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄、及び神経変性疾患からなる群より選択される疾患を治療の必要な被検者において治療する方法であって、該方法は、パラグラフ（１）に記載の組成物又はその医薬的に許容される塩の有効量を前記被検者へ投与することを含む。好ましくは、前記疾患は、Ｉ型糖尿病又はＩＩ型糖尿病である。
【００５８】
（３９）本発明の製剤に使用の式（Ｉ）の別のより好ましい化合物は、本開示の「実施例」セクションにおいて下記に具体的に例示されるそれぞれの化合物、又はその医薬的に許容される塩である。
【００５９】
（４０）なお別の側面において、本発明は、ＧＬＰ−１受容体からのアゴニスト効果をその必要な被検者において誘発する方法を提供し、該方法は、上記に定義される式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩の有効量を含んでなる、本発明の製剤を前記被検者へ投与することを含む。
【００６０】
（４１）さらなる側面において、本発明は、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肥満、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄、神経変性疾患、腎不全、鬱血性心不全、ネフローゼ症候群、肝硬変、肺浮腫、高血圧、及び食物摂取の抑制が所望される障害からなる群より選択される疾患を治療の必要な被検者において治療する方法を提供し、該方法は、上記に定義される式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩の有効量を含んでなる、本発明の製剤を使用のために前記被検者へ投与することを含む。直前の方法の好ましい方法は、治療する疾患がＩ型糖尿病又はＩＩ型糖尿病である場合である。
【００６１】
（４２）なおより好ましい側面において、本発明は、パラグラフ（４０）又は（４１）による方法を特徴とし、ここで前記組成物は、［Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2の塩と亜鉛の塩から本質的になり、より好ましくは、ここで前記組成物のｐＨは７．０未満、なおより好ましくは、５．０未満、なおより好ましくは、４．０未満である。
【００６２】
（４３）より好ましい態様において、本発明は、［Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2の濃度が０．５〜８．０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約２．０〜約６．０ｍｇ／ｍｌ、なおより好ましくは約３．５〜５．５ｍｇ／ｍｌ、なおさらにより好ましくは約４．０ｍｇ／ｍｌである、パラグラフの組成物を特徴とする。
【００６３】
（４４）本発明のさらに好ましい態様を以下のパラグラフ（４５）〜（７７）に記載する：
（４５）亜鉛とＧＬＰ−１又はエキセンディン−４の類似体を含んでなる澄明溶液又はゲルの医薬組成物。
【００６４】
（４６）被検者への皮下投与後に沈殿を生成する、パラグラフ（４５）に記載の医薬組成物。
【００６５】
（４７）水をさらに含んでなる、パラグラフ（４６）に記載の組成物。
【００６６】
（４８）非水媒体をさらに含んでなる、パラグラフ（４６）及び（４７）のいずれか１つに記載の組成物。
【００６７】
（４９）分子が２．５と１０．５の間、好ましくは３．５と８の間のｐＨの水溶液に存在する、パラグラフ（４７）〜（４８）のいずれか１つに記載の組成物。
【００６８】
（５０）分子が約０．００１〜５００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約０．１〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、パラグラフ（４６）〜（４９）のいずれか１つに記載の組成物。
【００６９】
（５１）保存剤をさらに含んでなる、パラグラフ（４６）〜（５０）のいずれか１つに記載の組成物。
【００７０】
（５２）前記保存剤が、ｍ−クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール、及びメチルパラベンからなる群より選択される、パラグラフ（５１）に記載の組成物。
【００７１】
（５３）前記保存剤が０．０１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、パラグラフ（５２）に記載の組成物。
【００７２】
（５４）等張剤をさらに含んでなる、パラグラフ（４５）〜（５３）のいずれか１つに記載の組成物。
【００７３】
（５５）前記等張剤が０．０１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、パラグラフ（５４）に記載の組成物。
【００７４】
（５６）前記亜鉛が０．０００５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、パラグラフ（４６）〜（５５）のいずれか１つに記載の組成物。
【００７５】
（５７）安定化剤をさらに含んでなる、パラグラフ（４６）〜（５６）のいずれか１つに記載の組成物。
【００７６】
（５８）前記安定化剤が、イミダゾール、アルギニン、及びヒスチジンからなる群より選択される、パラグラフ（５７）に記載の組成物。
【００７７】
（５９）界面活性剤をさらに含んでなる、パラグラフ（４６）〜（５８）のいずれか１つに記載の組成物。
【００７８】
（６０）キレート剤をさらに含んでなる、パラグラフ（４６）〜（５９）のいずれか１つに記載の組成物。
【００７９】
（６１）緩衝剤をさらに含んでなる、パラグラフ（４６）〜（６０）のいずれか１つに記載の組成物。
【００８０】
（６２）前記緩衝剤が、Ｔｒｉｓ、酢酸アンモニウム、酢酸ナトリウム、グリシン、アスパラギン酸、及びＢｉｓ−Ｔｒｉｓからなる群より選択される、パラグラフ（６１）に記載の組成物。
【００８１】
（６３）塩基性ポリペプチドをさらに含んでなる、パラグラフ（４６）〜（６２）のいずれか１つに記載の組成物。
【００８２】
（６４）前記塩基性ポリペプチドが、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、プロタミン、プトレシン、スペルミン、スペルミジン、及びヒストンからなる群より選択される、パラグラフ（６３）に記載の組成物。
【００８３】
（６５）アルコール又は単糖若しくは二糖をさらに含んでなる、パラグラフ（４６）〜（６４）のいずれか１つに記載の組成物。
【００８４】
（６６）前記アルコール又は単糖若しくは二糖が、メタノール、エタノール、プロパノール、グリセロール、トレハロース、マンニトール、グルコース、エリスロース、リボース、ガラクトース、フルクトース、マルトース、スクロース、及びラクトースからなる群より選択される、パラグラフ（６５）に記載の組成物。
【００８５】
（６７）（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2；又はその医薬的に許容される塩を含んでなる、パラグラフ（４６）〜（６６）のいずれか１つに記載の組成物。
【００８６】
（６８）式：［Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2による類似体、又はその医薬的に許容される塩から本質的になる医薬組成物。
【００８７】
（６９）固形ミクロ錠剤の形態である、パラグラフ（６８）に記載の医薬組成物。
【００８８】
（７０）水をさらに含んでなり、半固体を生成する、パラグラフ（６８）に記載の医薬組成物。
【００８９】
（７１）ほぼ２５％（重量／重量）の（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2を含有する、パラグラフ（７０）に記載の半固体の医薬組成物。
【００９０】
（７２）式：
【００９１】
【化７】
2011001381.tif 000008
【００９２】
による類似体、またはこれを亜鉛と医薬的に許容される担体又は希釈剤と一緒に含んでなる医薬組成物。
【００９３】
（７３）前記亜鉛が０．０００５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、パラグラフ（７２）に記載の組成物。
【００９４】
（７４）前記亜鉛が０．０１ｍｇ／ｍＬ〜０．５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、パラグラフ（７３）に記載の組成物。
【００９５】
（７５）前記希釈剤が医薬的に許容される水溶液を含む、パラグラフ（７２）に記載の組成物。
【００９６】
（７６）前記希釈剤が滅菌水を含む、パラグラフ（７５）に記載の組成物。
【００９７】
（７７）Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肥満、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄、神経変性疾患、腎不全、鬱血性心不全、ネフローゼ症候群、肝硬変、肺浮腫、高血圧、及び食物摂取の抑制が所望される障害からなる群より選択される疾患を治療の必要な被検者において治療する方法であって、該方法は、パラグラフ（４３）と（４５）〜（７６）のそれぞれに記載のものを含んでなる製剤のリストより、その出現について独立的に選択される製剤を前記被検者へ投与することを含む。直前の方法の好ましい方法は、治療する疾患がＩ型糖尿病又はＩＩ型糖尿病である場合である。
【００９８】
Ｎ末端のアミノ酸を例外として、本開示におけるアミノ酸のあらゆる略字（例、Ａｌａ）は、−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ）−ＣＯ−の構造を表し、ここでＲは、アミノ酸の側鎖である（例、ＡｌａではＣＨ3）。Ｎ末端アミノ酸では、略字が（Ｒ2Ｒ3）−Ｎ−ＣＨ（Ｒ）−ＣＯ−の構造を表し、ここでＲはアミノ酸の側鎖であり、そしてＲ2とＲ3は上記に定義される通りであるが、但し、Ａ7がＵｒａ、Ｐａａ又はＰｔａであるとき、いずれの場合もＵｒａ、Ｐａａ及びＰｔａがここではｄｅｓ−アミノアミノ酸とみなされるので、Ｒ2とＲ3は存在しない。Ａｍｐ、１Ｎａｌ、２Ｎａｌ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、及びＡｉｂは、それぞれ以下のα−アミノ酸の略字である：４−アミノ−フェニルアラニン、β−（１−ナフチル）アラニン、β−（２−ナフチル）アラニン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、β−（３−ピリジニル）アラニン、β−（４−ピリジニル）アラニン、及びα−アミノイソ酪酸。他のアミノ酸の定義は、以下の通りである：Ｕｒａは、ウロカニン酸である；Ｐｔａは、（４−ピリジルチオ）酢酸である；Ｐａａは、ｔｒａｎｓ−３−（３−ピリジル）アクリル酸である；Ｔｍａ−Ｈｉｓは、Ｎ，Ｎ−テトラメチルアミジノ−ヒスチジンである；Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａは、Ｎ−メチル−アラニンである；Ｎ−Ｍｅ−Ｇｌｙは、Ｎ−メチル−グリシンである；Ｎ−Ｍｅ−Ｇｌｕは、Ｎ−メチル−グルタミン酸である；Ｔｌｅは、ｔｅｒｔ−ブチルグリシンである；Ａｂｕは、α−アミノ酪酸である；Ｔｂａは、ｔｅｒｔ−ブチルアラニンである；Ｏｒｎは、オルニチンである；Ａｉｂは、α−アミノイソ酪酸である；β−Ａｌａは、β−アラニンである；Ｇａｂａは、γ−アミノ酪酸である；Ａｖａは、５−アミノ吉草酸である；Ａｄｏは、１２−アミノドデカン酸である；Ａｉｃは、２−アミノインダン−２−カルボン酸である；Ａｕｎは、１１−アミノウンデカン酸である；そして、Ａｅｃは、構造：
【００９９】
【化８】
2011001381.tif 000009
【０１００】
により表される、４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチル−ピペラジンである。
【０１０１】
Ａｃｃが意味するのは、１−アミノ−１−シクロプロパンカルボン酸（Ａ３ｃ）；１−アミノ−１−シクロブタンカルボン酸（Ａ４ｃ）；１−アミノ−１−シクロペンタンカルボン酸（Ａ５ｃ）；１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸（Ａ６ｃ）；１−アミノ−１−シクロヘプタンカルボン酸（Ａ７ｃ）；１−アミノ−１−シクロオクタンカルボン酸（Ａ８ｃ）；及び１−アミノ−１−シクロノナンカルボン酸（Ａ９ｃ）の群より選択されるアミノ酸である。上記の式において、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシフェニルアルキル、及びヒドロキシナフチルアルキルは、１〜４のヒドロキシ置換基を含有する場合がある。ＣＯＸ5は、−Ｃ＝Ｏ・Ｘ5を表す。−Ｃ＝Ｏ・Ｘ5の例には、限定されないが、アセチル及びフェニルプロピオニルが含まれる。
【０１０２】
本明細書に使用する他の略字の完全名は、以下の通りである：Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル、ＨＦはフッ化水素、Ｆｍはホルミル、Ｘａｎはキサンチル、Ｂｚｌはベンジル、Ｔｏｓはトシル、ＤＮＰは２，４−ジニトロフェニル、ＤＭＦはジメチルホルムアミド、ＤＣＭはジクロロメタン、ＨＢＴＵは２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロリン酸塩、ＤＩＥＡはジイソプロピルエチルアミン、ＨＯＡｃは酢酸、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸、２ＣｌＺは２−クロロベンジルオキシカルボニル、２ＢｒＺは２−ブロモベンジルオキシカルボニル、ＯｃＨｅｘはＯ−シクロヘキシル、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル、ＨＯＢｔはＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、ＰＡＭ樹脂は４−ヒドロキシメチルフェニルアセトアミドメチル樹脂、ＴｒｉｓはＴｒｉｓ（ヒドロキシメチル）アミノメタン、そしてＢｉｓ−ＴｒｉｓはＢｉｓ（２−ヒドロキシエチル）アミノ−ｔｒｉｓ（ヒドロキシメチル）メタン（即ち、２−Ｂｉｓ（２−ヒドロキシエチル）アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）を表す。
【０１０３】
用語「ハロ」又は「ハロゲン」には、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードが含まれる。
用語「（Ｃ1〜Ｃ12）炭化水素部分」、「（Ｃ1〜Ｃ30）炭化水素部分」、等には、指定数の炭素を有する分岐鎖及び直鎖のアルキル、アルケニル、及びアルキニル基が含まれるが、但し、アルケニル及びアルキニルの場合は、最小で２つの炭素がある。
【０１０４】
本発明のペプチドはまた、本明細書において別の形式、例えば（Ａ５ｃ8）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2により示され、天然の配列より置換されたアミノ酸を最初の括弧のセット内に置く（例えば、ｈＧＬＰ−１のＡｌａ8に対するＡ５ｃ8）。略字のＧＬＰ−１は、グルカゴン様ペプチド−１を意味し；ｈＧＬＰ−１は、ヒトグルカゴン様ペプチド−１を意味する。括弧内の数字は、ペプチド中に存在するアミノ酸の番号を意味する（例えば、ｈＧＬＰ−１（７−３６）は、ヒトＧＬＰ−１のペプチド配列のアミノ酸７〜３６である。ｈＧＬＰ−１（７−３７）の配列は、Mojsov, S., Int. J. Peptide Protein Res., 40, 1992, pp. 333-342 に収載されている。ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2中の「ＮＨ2」の表記は、このペプチドのＣ末端がアミド化していることを示す。ｈＧＬＰ−１（７−３６）は、Ｃ末端が遊離酸であることを意味する。ｈＧＬＰ−１（７−３８）において、３７及び３８位の残基は、他に示さなければ、それぞれＧｌｙ及びＡｒｇである。
【図面の簡単な説明】
【０１０５】
【図１】図１は、本発明による組成物を実施例Ｈ．１に従って使用してラットへ投与したときのペプチドの血漿濃度の時間経過を図示する。
【図２】図２は、本発明による組成物を実施例Ｈ．２に従って使用してラットへ投与したときのペプチドの血漿濃度の時間経過を図示する。
【図３】図３は、本発明による組成物を実施例Ｈ．３に従って使用してラットへ投与したときのペプチドの血漿濃度の時間経過を図示する。
【図４】図４は、本発明による組成物を実施例Ｈ．４に従って使用してビーグル犬へ投与したときのペプチドの血漿濃度の時間経過を図示する。
【図５】図５は、本発明による組成物を実施例Ｉ．１に従って使用してラットへ投与したときのペプチドの血漿濃度の時間経過を図示する。
【図６】図６は、本発明による組成物を実施例Ｉ．２に従って使用してラットへ投与したときのペプチドの血漿濃度の時間経過を図示する。
【図７】図７は、本発明による組成物を実施例Ｉ．３に従って使用してラットへ投与したときのペプチドの血漿濃度の時間経過を図示する。
【発明を実施するための形態】
【０１０６】
発明の詳細な説明
ペプチドの合成
本発明を実施するのに有用なペプチドは、標準の固相ペプチド合成によって製造することができて、製造した。例えば、Stewart, J. M., et al.,「固相合成（Solid Phase Synthesis）」（ピアス・ケミカル社、第２版、1984年）を参照のこと。上記一般式の置換基Ｒ2及びＲ3は、当該技術分野で知られている標準法によってＮ末端アミノ酸の遊離アミンへ付加することができる。例えば、アルキル基（例、（Ｃ1〜Ｃ30）アルキル）は、還元アルキル化を使用して付加することができる。ヒドロキシアルキル基、例えば（Ｃ1〜Ｃ30）ヒドロキシアルキルも還元アルキル化を使用して付加してよく、ここでは遊離ヒドロキシ基をｔ−ブチルエステルで保護する。アシル基、例えばＣＯＥ1は、塩化メチレン中３モル当量の遊離酸及びジイソプロピルカルボジイミドと完了樹脂を１時間混合することにより、遊離酸、例えばＥ1ＣＯＯＨをＮ末端アミノ酸の遊離アミンへカップリングさせることによって付加することができる。遊離酸が遊離ヒドロキシ基を含有する（例、ｐ−ヒドロキシフェニルプロピオン酸）ならば、カップリングは、さらに３モル当量のＨＯＢＴを用いて実施すべきである。
【０１０７】
Ｒ1がＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＮＨ2（即ち、Ｚ0＝ＣＯＮＨ2）であるとき、ペプチドの合成は、ＢｏｃＨＮ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨより開始して、これをＭＢＨＡ樹脂へカップリングさせる。Ｒ1がＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨ（即ち、Ｚ0＝ＣＯＯＨ）であるならば、ペプチドの合成は、ＢｏｃＨＮ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨより開始して、これをＰＡＭ樹脂へカップリングさせる。この特別な工程では、４モル当量のＢｏｃ−ＨＮ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨ、ＨＢＴＵ及びＨＯＢｔと１０モル当量のＤＩＥＡを使用する。カップリング時間は、約８時間である。
【実施例】
【０１０８】
保護化アミノ酸、１−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ）−１−シクロヘキサン−カルボン酸（Ｂｏｃ−Ａ６ｃ−ＯＨ）は、以下のように合成した。１９．１ｇ（０．１３３モル）の１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸（Acros Organics, Fisher Scientific, ペンシルヴェニア州ピッツバーグ）を２００ｍｌのジオキサンと１００ｍｌの水に溶かした。これへ６７ｍｌの２Ｎ ＮａＯＨを加えた。この溶液を氷水浴に冷やした。この溶液へ３２．０ｇ（０．１４７モル）の二炭酸ジｔｅｒｔ−ブチルを加えた。この反応混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、ジオキサンを減圧で除去した。残存する水溶液へ２００ｍｌの酢酸エチルを加えた。この混合物を氷水浴に冷やした。４Ｎ ＨＣｌを加えることによって、水層のｐＨを約３へ調整した。有機層を分離した。水層を酢酸エチル（１ｘ１００ｍｌ）で抽出した。２つの有機層を合わせて水（２ｘ１５０ｍｌ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧で濃縮乾固させた。残渣を酢酸エチル／ヘキサンにおいて再結晶させた。９．２ｇの純粋な生成物を得た。収率２９％。
【０１０９】
Ｂｏｃ−Ａ５ｃ−ＯＨは、Ｂｏｃ−Ａ６ｃ−ＯＨに類似したやり方で合成した。他の保護化Ａｃｃアミノ酸は、本明細書の教示により可能であるように、類似したやり方で当業者により製造することができる。
【０１１０】
Ａ５ｃ、Ａ６ｃ、及び／又はＡｉｂを含有するペプチドの合成において、カップリング時間は、これらの残基とそれらの直後にある残基について２時間である。（Ｔｍａ−Ｈｉｓ7）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2の合成では、４ｍｌ ＤＭＦ中ＨＢＴＵ（２ミリモル）及びＤＩＥＡ（１．０ｍｌ）を使用して、最終カップリング反応においてペプチド−樹脂のＮ末端遊離アミンと反応させる；カップリング時間は、約２時間である。
【０１１１】
上記一般式の置換基Ｒ2及びＲ3は、当該技術分野で知られた標準法によってＮ末端アミノ酸の遊離アミンへ付加することができる。例えば、アルキル基（例、（Ｃ1〜Ｃ30）アルキル）は、還元アルキル化を使用して付加することができる。ヒドロキシアルキル基、例えば（Ｃ1〜Ｃ30）ヒドロキシアルキルも還元アルキル化を使用して付加してよく、ここでは遊離ヒドロキシ基をｔ−ブチルエステルで保護する。アシル基、例えばＣＯＸ1は、塩化メチレン中３モル当量の遊離酸及びジイソプロピルカルボジイミドと完了樹脂を約１時間混合することにより、遊離酸、例えばＸ1ＣＯＯＨをＮ末端アミノ酸の遊離アミンへカップリングさせることによって付加することができる。遊離酸が遊離ヒドロキシ基を含有する（例、ｐ−ヒドロキシフェニルプロピオン酸）ならば、カップリングは、さらに３モル当量のＨＯＢＴを用いて実施すべきである。
【０１１２】
以下の実施例は、本発明を有利に実施することができるペプチドを作製するのに使用し得て、使用した合成法について記載し、この合成法は、当業者によく知られている。当業者には他の方法も知られている。実施例は、例示の目的のために提供するのであって、本発明の範囲をいかなるやり方でも限定するものではない。
【０１１３】
Ｂｏｃ−βＡｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ、及びＢｏｃ−Ｄ−Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ）は、Ｎｏｖａ Ｂｉｏｃｈｅｍ（カリフォルニア州サンディエゴ）より購入した。Ｂｏｃ−Ａｕｎ−ＯＨは、Ｂａｃｈｅｍ（ペンシルヴェニア州キング・オブ・プルシア）より購入した。Ｂｏｃ−Ａｖａ−ＯＨとＢｏｃ−Ａｄｏ−ＯＨは、Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（イリノイ州ウッドデール）より購入した。Ｂｏｃ−２ＮａＩ−ＯＨは、Ｓｙｎｔｈｅｔｅｃｈ社（オレゴン州オールバニー）より購入した。
【０１１４】
実施例１
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2
表題ペプチドは、加速Ｂｏｃ化学固相ペプチド合成を行うために改良したアプライド・バイオシステムズ（カリフォルニア州フォスターシティ）モデル４３０Ａペプチド合成機で合成した。Schnolzer, et al., Int. J. Peptide Protein Res., 90:180 (1992) を参照のこと。０．９１ミリモル／ｇの置換体がある４−メチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ，カリフォルニア州ベルモント）を使用した。Ｂｏｃアミノ酸（Ｂａｃｈｅｍ，カリフォルニア州トーランス；Ｎｏｖａ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，カリフォルニア州ラホヤ）を以下の側鎖保護とともに使用した：
【０１１５】
【化９】
2011001381.tif 000010
【０１１６】
合成は、０．２０ミリモルのスケールで行った。Ｂｏｃ基は、１００％ ＴＦＡ、２ｘ１分間の処理により除去した。Ｂｏｃアミノ酸（２．５ミリモル）は、４ｍＬのＤＭＦ中のＨＢＴＵ（２．０ミリモル）及びＤＩＥＡ（１．０ｍＬ）で予め活性化して、ペプチド−樹脂ＴＦＡ塩の中和に先立つことなくカップリングさせた。カップリング時間は５分であったが、但し、Ｂｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ残基と以下の残基：Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣＩＺ）−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−ＯＨではカップリング時間が２時間であった。
【０１１７】
ペプチド鎖の組立ての最後に、樹脂を２０％メルカプトエタノール／１０％ ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で２ｘ３０分間処理して、Ｈｉｓ側鎖上のＤＮＰ基を外した。次いで、１００％ ＴＦＡ、２ｘ２分の処理によりＮ末端Ｂｏｃ基を外した。ＤＭＦ中１０％ ＤＩＥＡでのペプチド−樹脂の中和（１ｘ１分）の後で、１５％エタノールアミン／１５％水／７０％ ＤＭＦの溶液、２ｘ３０分間での処理によりＴｒｐの側鎖上のホルミル基を外した。このペプチド−樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、減圧で乾燥させた。１ｍＬのアニソール及びジチオスレイトール（２４ｍｇ）を含有する１０ｍＬのＨＦにおいてペプチド−樹脂を０℃で７５分間撹拌することによって、最終の切断を行った。窒素のフローによってＨＦを除去した。残渣をエーテル（６ｘ１０ｍＬ）で洗浄し、４Ｎ ＨＯＡｃ（６ｘ１０ｍＬ）で抽出した。
【０１１８】
水性抽出液中のペプチド混合物は、逆相ＶＹＤＡＣ（登録商標）Ｃ18カラム（Ｎｅｓｔ Ｇｒｏｕｐ，マサチューセッツ州サウスバラ）を使用する逆相分取用高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で精製した。１０ｍｌ／分の流速の線形勾配（１０５分にわたり２０％〜５０％のＢ溶液）（Ａ溶液＝０．１％ ＴＦＡ含有水；Ｂ溶液＝０．１％のＴＦＡを含有するアセトニトリル）でカラムを溶出させた。分画を採取して、分析用ＨＰＬＣで確認した。純粋な生成物を含有する分画を合わせて、凍結乾燥させた。ほぼ１８ｍｇの白い固形物を得た。純度は、分析用ＨＰＬＣ解析に基づけば９９％であった。エレクトロスプレー質量分光計（ＭＳ（ＥＳ））の解析により、３３５６．６で分子量を得た（３３５６．７７の計算分子量と一致）。
【０１１９】
実施例２〜８２の合成は、本発明を実施するのに有用な他のペプチジル化合物と同様に、所望されるペプチドに依存して適切な保護化アミノ酸を使用すること以外は、上記実施例１の（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2の合成について記載の手順と実質的に同じやり方で達成することができる。
【０１２０】
実施例２〜８２
【０１２１】
【化１０】
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【０１２２】
【化１１】
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【０１２３】
【化１２】
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【０１２４】
本明細書に例示する化合物の代表的なサンプリングについての物理データを以下の表１に示す。
【０１２５】
【表１】
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【０１２６】
実験手順
Ａ．ＧＬＰ−１受容体アフィニティーの定量
本発明を実施するのに有用な化合物は、以下の手順を使用して、ＧＬＰ−１受容体へ結合するその能力を試験することができる。
【０１２７】
細胞培養：
ＧＬＰ−１受容体を発現するＲＩＮ ５Ｆラットインスリノーマ細胞（ＡＴＣＣ番号 ＣＲＬ−２０５８，アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、バージニア州マナッサス）を、１０％胎仔ウシ血清を含有するダルベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養して、５％ ＣＯ2／９５％空気の加湿雰囲気において約３７℃で維持した。
【０１２８】
放射リガンド結合：
２０ｍｌの氷冷５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ中のＲＩＮ細胞のＢｒｉｎｋｍａｎ Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（ニューヨーク州ウェストベリ）（設定６，１５秒）でのホモジェナイゼーションにより放射リガンド結合試験用に膜を調製した。ホモジェネートを遠心分離（３９，０００ｇ／１０分）により２回洗浄し、２．５ｍＭ ＭｇＣｌ2，０．１ｍｇ／ｍｌ バシトラシン（シグマケミカル、ミズーリ州セントルイス）、及び０．１％ ＢＳＡを含有する５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌに最終ペレットを再懸濁させた。アッセイのために、アリコート（０．４ｍｌ）を、０．０５ｍｌの非標識競合試験ペプチドを含めるか含めずに、０．０５ｎＭ（125Ｉ）ＧＬＰ−１（７−３６）（〜２２００Ｃｉ／ミリモル、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ，マサチューセッツ州ボストン）とともにインキュベートした。１００分間のインキュベーション（２５℃）の後で、０．５％ポリエチレンイミンに予浸しておいたＧＦ／Ｃフィルター（Ｂｒａｎｄｅｌ，メリーランド州ゲイサースブルグ）に通す迅速濾過によって、結合した（125Ｉ）ＧＬＰ−１（７−３６）を遊離のものから分離した。次いで、このフィルターを５ｍｌアリコートの氷冷５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌで３回洗浄し、フィルターに捕捉された結合放射活性をγ−スペクトリメトリー（Ｗａｌｌａｃ ＬＫＢ，メリーランド州ゲイサースブルグ）により計数した。特異結合は、［結合した全（125Ｉ）ＧＬＰ−１（７−３６）］−［１０００ｎＭ ＧＬＰ−１（７−３６）（Ｂａｃｈｅｍ，カリフォルニア州トーレンス）の存在下に結合した（125Ｉ）ＧＬＰ−１（７−３６）］として定義した。
【０１２９】
Ｂ．ｐＨに対する溶解度の定量
有利にも、本発明に使用の化合物は、ほぼ中性又は生理学的なｐＨ値を有する水溶液において相対的に不溶性であり、酸性又は塩基性のｐＨ値を有する水溶液において相対的に可溶性である。好ましくは、本発明に使用の化合物は、ほぼ６とほぼ８の間のｐＨで、そしてほぼ４℃とほぼ４０℃の間の温度付近で、１ｍｇ／ｍＬ未満、より好ましくは０．５ｍｇ／ｍＬ未満の水溶解度を有する。
【０１３０】
Ｂ．１．緩衝化生理食塩水中のｐＨに対する化合物溶解度の定量
本発明を実施するのに有利に使用し得る化合物は、異なるｐＨ及び温度でのＰＢＳ中のその溶解度を定量するために、以下の手順を使用して試験することができて、試験した。
【０１３１】
１パケットのプレ混合粉末（ＳＩＧＭＡ，製品番号：Ｐ−３８１３）を１リットルの脱イオン水に溶かすことによってストックＰＢＳ緩衝化溶液を作製して、１３８ｍＭ ＮａＣｌ，２．７ｍＭ ＫＣｌ，及び７．４のｐＨを有する１０ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水を得た。このストック溶液のｐＨをリン酸及び／又は水酸化ナトリウムで調整することによって、異なるｐＨ値のＰＢＳ緩衝液を作製した。
【０１３２】
実施例１の化合物の２ｍｇ試料をガラス瓶へ秤量した。各バイアルへ５０μｌアリコートのＰＢＳ緩衝液を一定のｐＨで加えた。この溶液を激しく撹拌し、必要ならば音波処理して、澄明にした。試験するそれぞれのｐＨについて、２ｍｇの化合物を溶かすのに必要とされる緩衝液の全量を記録して、溶解度を計算した。
【０１３３】
室温（２０〜２５℃）で澄明であるペプチド溶液を冷蔵庫（４℃）に一晩入れてから、ペプチドの４℃での溶解度を試験した。
【０１３４】
Ｂ．２．生理食塩水中のｐＨに対する化合物溶解度の定量
本発明を実施するのに有利に使用し得る化合物は、異なるｐＨ値及び温度での生理食塩水中のその溶解度を定量するために、以下の手順を使用して試験することができて、試験した。
【０１３５】
９グラムのＮａＣｌを１リットルの脱イオン水に溶かすことによってストック生理食塩水溶液を調製した。このストック溶液のｐＨをＨＣｌ及び／又はＮａＯＨで調整することによって、異なるｐＨ値の生理食塩水溶液を作製した。
【０１３６】
実施例１の化合物の２ｍｇ試料をガラス瓶へ秤量した。各バイアルへ５０μｌアリコートの生理食塩水溶液を一定のｐＨで加えた。このバイアルを激しく撹拌し、必要ならば音波処理して、澄明にした。試験するそれぞれのｐＨについて、２ｍｇの化合物を溶かすのに必要とされる生理食塩水の全量を記録して、溶解度を計算した。
【０１３７】
室温（２０〜２５℃）で澄明である溶液を冷蔵庫（４℃）に一晩入れてから、４℃での溶解度を試験した。
【０１３８】
Ｂ．３．生理食塩水中の化合物溶解度のｐＨ７．０での定量
本発明を実施するのに有利に使用し得る化合物は、ｐＨ＝７を有する生理食塩水中の室温でのその溶解度を定量するために、以下の手順を使用して試験することができて、試験した。
【０１３９】
９グラムのＮａＣｌを１リットルの脱イオン水に溶かすことによって生理食塩水溶液を調製した。（Ａｉｂ8，Ａｒｇ26,34，β−Ａｌａ35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（実施例６）、（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（実施例２４）、及び（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，２Ｎａｌ31）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（実施例３２）の各２ｍｇを別々のガラス瓶へそれぞれ秤量して、１ｍＬアリコートの生理食塩水を加え、激しい撹拌と音波処理をして、澄明にした。２ｍｇのペプチドを溶かすのに使用する生理食塩水の全量を記録して、室温での溶解度を計算した。
【０１４０】
Ｂ．４．生理食塩水中の化合物溶解度の様々なｐＨでの定量
本発明を実施するのに有利に使用し得る化合物は、様々なｐＨ値を有する生理食塩水中の室温でのその溶解度を定量するために、以下の手順を使用して試験することができて、試験した。
【０１４１】
９グラムのＮａＣｌを１リットルの脱イオン水に溶かすことによってストック生理食塩水溶液を調製した。このストック生理食塩水溶液のアリコートをＨＣｌ及びＮａＯＨで処理することによって、様々なｐＨ値を有する生理食塩水溶液を入手した。
【０１４２】
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（実施例２３）及び（Ａｉｂ8,35，Ｐｈｅ31，Ａｒｇ34）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（実施例３４）の２ｍｇ試料をガラス瓶へそれぞれ秤量した。５０μｌの生理食塩水緩衝液のアリコートを一定のｐＨで加えた。この溶液を激しく撹拌して音波処理して、澄明にした。２ｍｇのペプチドを溶かすのに使用する緩衝液の全量を記録して、溶解度を計算した。
【０１４３】
Ｃ．亜鉛濃度に対する化合物の水溶解度の定量
本発明を実施するのに有利に使用し得る化合物は、異なる亜鉛濃度でのｐＨ７の水中のその溶解度を定量するために、以下の手順を使用して試験することができて、試験した。
【０１４４】
ＺｎＣｌ2を脱イオン水に溶かして１００ｍｇ／ｍｌの濃度として、ＨＣｌを使用してｐＨを２．７へ調整することによって、ストック亜鉛溶液を調製した。このストック溶液の適切な希釈液を作製することによって、様々なＺｎＣｌ2濃度を有する溶液（「Ｚｎ試験溶液」）を調製した。
【０１４５】
実施例１の化合物の１ｍｇを２５０μｌの各Ｚｎ試験溶液に溶かして、４ｍｇ／ｍｌの実施例１化合物を有する溶液を得た。次いで、０．２Ｎ ＮａＯＨを使用してこの溶液のｐＨを調整すると、白い沈殿が生成することを観察した。この沈殿溶液を遠心分離して、ＨＰＬＣを使用してその母液について分析した。試験化合物ピークのＵＶ吸収面積を測定して、較正曲線への比較より、試験化合物の母液中の濃度を定量した。
【０１４６】
本発明を実施するのに使用し得る化合物の代表例として、実施例１の化合物について直前のアッセイで試験して、以下の結果を得た（生理食塩水、ｐＨ７．０、室温）：
【０１４７】
【表２】
2011001381.tif 000015
【０１４８】
Ｄ．ｐＨ＝４．０を有するペプチド／亜鉛溶液の調製
ｐＨ２．７を有するＨＣｌ溶液中１００ｍｇ／ｍｌのＺｎＣｌ２水溶液の希釈により、０．５ｍｇ／ｍｌ  ＺｎＣｌ２溶液を調製した。この溶液の２５０μｌに実施例１の化合物の１ｍｇを溶かして、４ｍｇ／ｍｌの化合物と０．５ｍｇ／ｍｌのＺｎＣｌ２をｐＨ４で有する澄明な溶液を得た。
。
【０１４９】
Ｅ．ｐＨ＝７．０を有するペプチド／亜鉛懸濁液／ゲルの調製
in vivo 薬物動態（「ＰＤ」）試験に使用の試験化合物のｐＨ７．０での粒子懸濁液又はゲルは、以下の手順を使用して作製することができる。
【０１５０】
上記の製法Ｄにおいて作製した澄明溶液（ｐＨ４、ＺｎＣｌ２  ０．５ｍｇ／ｍｌ、実
施例１の化合物  ４ｍｇ／ｍｌ）のほぼ２５０μＬを、ほぼ２５μＬの０．２Ｎ  ＮａＯ
Ｈを使用して、ｐＨ７．０へ中和する。
【０１５１】
Ｆ．ＩＥＦゲルを使用するｐＩの定量
ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＮｏｖｅｘ ＩＥＦ ｐＨ３−１０ゲルを使用して、ＧＬＰ−１ペプチドのｐＩを測定した。試験するペプチジル化合物を水に溶かして、０．５ｍｇ／ｍｌの濃度とした。それぞれのそのような化合物につき、生じる溶液の５μｌを５μｌのＮｏｖｅｘ（登録商標）Ｓａｍｐｌｅ Ｂｕｆｆｅｒ ２Ｘ（２０ｍＭ アルギニン遊離塩基、２０ｍＭ リジン遊離塩基、及び１５％グリセロールを含む）と混合して、生じる１０μｌの試料溶液を、タンパク質の標準試料と並べて、ゲル上へロードした。
【０１５２】
泳動緩衝液もＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎより入手して、ゲルは、製造業者の使用説明書に従って、全般的には以下のように操作した：１００Ｖ定圧、１時間に続いて、２００Ｖ定圧、１時間、続いて５００Ｖ定圧、３０分間。
【０１５３】
次いで、３．５％スルホサリチル酸を含有する１２％ ＴＣＡにおいてこのゲルを３０分間固定してから、Ｎｏｖｅｘ（登録商標）Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｂｌｕｅ Ｋｉｔに見出される使用説明書に従って、コロイド状クーマシーブルーで２時間染色してから、水で一晩脱色した。
【０１５４】
このゲルを走査して、プログラム：Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ １．２．により解析した。１０．７、９．５、８．３、８．０、７．８、７．４、６．９、６．０、５．３、５．２、４．５、４．２、及び３．５のｐＩ値を有する標準化合物のｐＩに対して、未知のペプチドのｐＩを計算した。
【０１５５】
本発明を実施するのに使用し得る好ましい化合物は、ほぼ６．０〜ほぼ８．５、より好ましくはほぼ６．５〜ほぼ８．０、なおより好ましくはほぼ７．０〜ほぼ７．８のｐＩ値を有する。驚くべきことに、使用に特によく適している本発明の組成物は、生理学的なｐＨに近似したｐＩを有することがわかった。
【０１５６】
Ｇ．in vivo アッセイ
本発明の組成物は、in vivo での亢進効果を促進するその能力を定量するために、以下のアッセイを使用して試験することができて、試験した。
【０１５７】
Ｇ．１． 実験手順：
実験に先立つ日、ほぼ３００〜３５０ｇの重量である成体の雄性スプリーグ・ドーリーラット（Ｔａｃｏｎｉｃ，ニューヨーク州ジェーマンタウン）に、クロロヒドレート麻酔下に右心房頚動脈カニューレを移植した。次いで、このラットを１８時間絶食させた後で、適切な試験組成物又は担体対照を０時間点で注射した。実験全体を通して、ラットは絶食させ続けた。
【０１５８】
０時間点で、ラットに（ａ）実施例１の化合物：（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2をｐＨ４．０で澄明な溶液（即ち、製法Ｄの溶液）として、又は（ｂ）実施例１の化合物をｐＨ７．０で懸濁液又はゲル（即ち、製法Ｅの懸濁液又はゲル）として皮下（ｓｃ）注射した。いずれの場合も、注射量はごく少量（４〜６μＬ）であり、被検者へ投与したＧＬＰ−１化合物の用量は７５μｇ／ｋｇであった。ｓｃ注射後の適切なときに、静脈内（ｉｖ）カニューレより５００μｌの血液試料を吸引して、ラットにｉｖグルコースチャレンジを与えて、亢進したインスリン分泌の存在を試験した。グルコースチャレンジの時間は、化合物注射後の０．２５、１、６、１２、及び２４時間であった。最初の血液試料を吸引した後で、グルコース（１ｇ／ｋｇ）をｉｖ注射して、５００μｌのヘパリン添加生理食塩水（１０Ｕ／ｍＬ）をさっと流し入れた。その後、５００μｌの血液試料をグルコース注射後２．５、５、１０、及び２０分で吸引した。これらのそれぞれの直後に５００μｌのヘパリン添加生理食塩水（１０Ｕ／ｍＬ）のカニューレからのｉｖ注射を続けた。血液試料を遠心分離し、各試料より血漿を採取して、インスリン含量をアッセイするまで、この試料を−２０℃に保存した。ラットインスリン酵素結合性免疫吸着剤アッセイ（ＥＬＩＳＡ）キット（アメリカン・ラボラトリー・プロダクツ社、ニューハンプシャー州ウィンダム）を使用して、各試料中のインスリンの量を定量した。
【０１５９】
結果：
驚くべきことに、実施例１の化合物の澄明溶液と懸濁液若しくはゲル型の両方で、グルコース注射により誘導される持続的なインスリン亢進活性が実験の全２４時間にわたり観察された。
【０１６０】
Ｇ．２．実験手順：
本アッセイは、上記の製法Ｄに従って調製した（Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2の溶液、又は担体対照を時間０でラットに皮下（ｓｃ）注射すること以外は、Ｇ．１．と同様に実施した。Ｇ．１．と同じように、注射量はごく少量（４〜６μＬ）であり、被検者へ投与するＧＬＰ−１化合物の用量は７５μｇ／ｋｇであった。
【０１６１】
結果：
グルコース注射により誘導される持続的なインスリン亢進活性が実験の全２４時間にわたり観察された。
【０１６２】
Ｇ．３．実験手順：
全般手順は、Ｇ．１．に提供するものと同じであった。この事例では、製法Ｄに従って調製した実施例１の化合物、又は担体対照を時間０で皮下（ｓｃ）注射した。グルコースチャレンジの時間点は、注射後１、６、１２、２４、４８、及び７２時間であった。ｉｖカニューレからのグルコース注射と後続の血液サンプリングは、実験Ｇ．１．と同じように実施した。絶食期間の延長のために、担体とグルコースのみの対照を各時点で含めた。
【０１６３】
結果：
グルコースにより誘導される持続的なインスリン亢進活性が、試験組成物の皮下投与後少なくとも４８時間の間、観察された。さらに、実験Ｇ．１．と同じように、グルコースへ応答した初期の高レベルのインスリン亢進は観察されなかった。
【０１６４】
Ｈ．in vivo アッセイ
本発明の組成物は、活性化合物の in vivo での延長放出を促進するその能力を定量するために、以下に記載のアッセイ：Ｈ．１．〜Ｈ．４．を使用して試験することができて、試験した。本発明を実施するのに使用し得る化合物の代表例として、実施例１の化合物：（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｐｈｅ31）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2を以下の表３に記載する様々な例示製剤へ製剤化して、アッセイ：Ｈ．１．〜Ｈ．４．へ処した。
【０１６５】
以下のアッセイに使用の組成物は、以下の一般手順に従って作製した：
ＨＣｌを使用してｐＨ２．７へすでに調整した注射用滅菌水（Ｂｒａｕｎ，ルビ、スペイン）に塩化亜鉛（メルク、Ｍｏｌｌｅｔ ｄｅｌ Ｖａｌｌｅｓ，バルセロナ、スペイン）を溶かすことによって、１００ｍｇ／ｍｌ ＺｎＣｌ2のストック溶液を作製した。このストック溶液の希釈によって、様々な濃度（例えば、０．１ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、等）で亜鉛を含有する溶液を入手した。より低い濃度（例えば、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ）で亜鉛を含有する溶液は、１ｍｇ／ｍｌ ＺｎＣｌ2を含んでなるストック溶液の希釈によって、類似したやり方で調製した。
【０１６６】
アッセイする化合物、例えば、実施例１のペプチドの適量を秤量し、それぞれの生じる亜鉛溶液の適量に溶かして、所望される化合物の濃度（例えば、４ｍｇ／ｍｌ）を有する澄明溶液を得た。次いで、生じる溶液をミクロ濾過して、必要ならば、投与前に、遮光性バイアルに保存した。
【０１６７】
試験被検者の血漿中の試験化合物の濃度は、当該技術分野で知られたいくつかの方法によって定量することができる。１つの簡便な方法では、試験化合物に対するウサギ由来抗体を、例えば125Ｉで放射ヨウ素化した既知量の試験化合物との競合において利用するラジオイムノアッセイにより化合物（例えば、実施例１の化合物）の濃度を定量する。
【０１６８】
Ｈ．１．薬物動態試験１
本発明による組成物を使用して被検者へ投与した生物活性化合物のバイオアベイラビリティに対する亜鉛の効果を以下のように定量することができて、定量した。
【０１６９】
上記に記載の手順に従って、ｐＨ＝２．７で実施例１の化合物の４ｍｇ／ｍＬと０．０、０．１、０．５、及び２．０ｍｇ／ｍｌのＺｎＣｌ2をそれぞれ有するように、４種の水性組成物を製剤化した。表３、実施例Ｈ１ａ、Ｈ１ｂ、Ｈ１ｃ、及びＨ１ｄを参照のこと。この４種の組成物のそれぞれを１６匹のスプリーグ・ドーリーラット（チャールズ・リバー・ラボラトリーズ、マサチューセッツ州ウィルミントン、アメリカ）へ皮下投与した。ラットの平均週齢は、ほぼ８〜９週で、平均体重はほぼ２６０〜４３０ｇであった。ラットには食餌と水を自由に提供した。実施例１の化合物の注射（用量＝７５μｇ／ｋｇ，実施例１の化合物）後の血漿レベルを図１に図示する。
【０１７０】
Ｈ．２．薬物動態試験２
本発明による組成物を使用して被検者へ投与した生物活性化合物のバイオアベイラビリティに対する注射量の効果を以下のように定量することができて、定量した。
【０１７１】
上記に記載の手順に従って、ｐＨ＝２．７で実施例１の化合物の３０００、３００、及び７５μｇ／ｍＬと０．５ｍｇ／ｍｌのＺｎＣｌ２濃度をそれぞれ有するように、３種の水性組成物を製剤化した。表３、実施例Ｈ２ａ、Ｈ２ｂ、及びＨ２ｃを参照のこと。この３種の組成物のそれぞれを１６匹のスプリーグ・ドーリーラット（チャールズ・リバー・ラボラトリーズ、マサチューセッツ州ウィルミントン、アメリカ）へ皮下投与した。ラットの平均週齢は、ほぼ８〜１０週で、平均体重はほぼ３３０〜４６０ｇであった。ラットは、試験の開始に先立って一晩絶食させた。注射の容量は、実施例１の化合物の７５μｇ／ｋｇを各ラットに提供するように選択した（それぞれ、０．０２５ｍｌ／ｋｇ、０．２５ｍｌ／ｋｇ、及び１ｍｌ／ｋｇ）。実施例１の化合物の注射後の血漿レベルを図２に図示する。
【０１７２】
Ｈ．３．薬物動態試験３
本発明による組成物を使用して被検者へ投与した生物活性化合物のバイオアベイラビリティに対する亜鉛の効果を以下のように定量することができて、定量した。
【０１７３】
上記に記載の手順に従って、ｐＨ＝２．７で実施例１の化合物の４ｍｇ／ｍＬと１０、２０、及び３０μｇ／ｍｌのＺｎＣｌ２をそれぞれ有するように、３種の水性組成物を製剤化した。表３、実施例Ｈ３ａ、Ｈ３ｂ、及びＨ３ｃを参照のこと。この３種の組成物のそれぞれを１６匹の雄性白子スプリーグ・ドーリーラット（Ｓｔ．Ｆｅｌｉｕ  ｄｅ  Ｃｏｄｉｎｅｓ，バルセロナ、ＥＳ）へ皮下投与した。これらのラットは、試験の開始に先立って一晩絶食させた。実施例１の化合物の注射（用量＝７５μｇ／ｋｇ，実施例１の化合物）後の血漿レベルを図３に図示する。
【０１７４】
Ｈ．４．薬物動態試験４
本発明による組成物を使用して被検者へ投与したときの生物活性化合物のバイオアベイラビリティに対する亜鉛及び生物活性化合物の濃度の効果を以下のように定量することができて、定量した。
【０１７５】
上記に記載の手順に従って、２種の水性組成物を製剤化した。第一の溶液は、１．４５ｍｇ／ｍｌの実施例１の化合物と３０μｇ／ｍｌのＺｎＣｌ２を含み、第二の溶液は、１．４５ｍｇ／ｍｌの実施例１の化合物を含んだが、亜鉛は含まなかった。いずれの溶液もｐＨ＝２．７を有した。表３、実施例Ｈ４ａ及びＨ４ｂを参照のこと。それぞれの溶液を、ほぼ５４〜６５ヶ月の月齢とほぼ１６〜２１ｋｇの体重に及ぶ雄性ビーグル犬（Ｉｓｏｑｕｉｍｅｎ，バルセロナ、スペイン）へ皮下投与した。イヌは、試験の開始に先立って一晩絶食させた。さらに、活性化合物のみを含有する第二の溶液は、静脈内で投与した。注射剤は、いずれも２５μｇ／ｋｇの用量を提供した。実施例１の化合物の注射後の血漿レベルを図４に図示する。
【０１７６】
【表３】
2011001381.tif 000016
【０１７７】
Ｉ．in vivo アッセイ
Ｉ．１．薬物動態試験：半固体組成物
被検者への投与後さらに延長された期間の時間にわたり生物学的に有意な血漿濃度のペプチドを提供する、本発明の半固体水性組成物の能力について、以下のように定量することができて、定量した。
【０１７８】
ある量の実施例１の化合物（酢酸塩）を十分な注射用滅菌水ともにホモジェナイズすることによって実施例１の化合物の水性半固体組成物を作製して、ほぼ２５％のペプチド（例、０．２５０ｍｇ／ｍｇ）を含む半固体のペースト様組成物を提供した。この組成物を、１９／０．６（０．３５ｍｍ）ＵＮＩＭＥＤ針が装着した０．３ｍＬシリンジへロードした。ほぼ６０ｍｇの半固体組成物（ほぼ１５ｍｇのペプチドを含有する）を１０匹の雄性スプリーグ・ドーリーラット（Ｈａｒｌａｎ Ｉｂｅｒｉｃａ，バルセロナ、スペイン）のそれぞれへ投与した。ラットの平均週齢はほぼ１０週で、平均体重はほぼ２２０〜３３０ｇであった。ラットは試験の開始に先立ってほぼ１４時間絶食させたが、水は自由に与えた。試験組成物の投与後は、ラットに食餌と水を自由に与えた。実施例１の化合物の注射後の血漿レベルを図５に図示する。
【０１７９】
Ｉ．２．薬物動態試験：１ｍｇマイクロ錠剤
被検者への投与後さらに延長された期間の時間にわたり生物学的に有意な血漿濃度のペプチドを提供する、亜鉛も希釈剤も他の賦形剤も含まない、本発明の固体組成物の能力についても、以下のように定量することができて、定量した。
【０１８０】
ほぼ１ｍｇのペプチドを提供するような重量の実施例１の化合物の酢酸塩の試料を標準の打錠型へ加えて圧縮して、固体マイクロ錠剤を形成させた。このマイクロ錠剤を、１．２／１．０（０．２５ｍｍ）針が装着したＩＣＯプランジャーシリンジ（即ち、１ｍｍの内径を有する）へロードした。このマイクロ錠剤を１０匹の雄性スプリーグ・ドーリーラット（チャールズリバー・ラボラトリーズ）のそれぞれへ投与した。ラットの週齢はほぼ１０〜１２週に及び、体重はほぼ３２０〜４８０ｇに及んだ。ラットは試験の開始に先立ってほぼ１４時間絶食させたが、水は自由に与えた。試験組成物の投与後は、ラットに食餌と水を自由に与えた。実施例１の化合物の注射後の血漿レベルを図６に図示する。
【０１８１】
Ｉ．３．薬物動態試験：１５ｍｇマイクロ錠剤
実施例１の化合物の１５ｍｇを含有するようにマイクロ錠剤を製剤化すること以外は、上記に記載したのと実質的に同じ手順を試験１．３に適用した。ラットの週齢はほぼ１１〜１３週に及び、体重はほぼ３００〜４８０ｇに及んだ。実施例１の化合物の注射後の血漿レベルを図７に図示する。
【０１８２】
先述の in vivo 実験の結果を図示する図面において、プロットした点は、試験集団の平均値を表す。
【０１８３】
本発明に使用するペプチドは、有利にも、医薬的に許容される塩の形態で提供することができる。そのような塩の例には、限定されないが、有機酸（例、酢酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、又はパモ酸）、無機酸（例、塩酸、硫酸、又はリン酸）、及び高分子の酸（例、タンニン酸、カルボキシメチルセルロース、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、又はポリ乳酸−グリコール酸の共重合体）と形成されるものが含まれる。本発明のペプチドの塩を作製する典型的な方法は、当該技術分野でよく知られていて、塩交換の標準法により達成することができる。従って、本発明のペプチドのＴＦＡ塩（ＴＦＡ塩は、ＴＦＡ含有緩衝溶液で溶出させる分取用ＨＰＬＣを使用することによってペプチドの精製より生じる）は、このペプチドを少量の０．２５Ｎ酢酸水溶液に溶かすことによって、酢酸塩のような別の塩へ変換することができる。生じる溶液を半分取用ＨＰＬＣカラム（Ｚｏｒｂａｘ，３００ ＳＢ，Ｃ−８）へ適用する。このカラムを（１）０．１Ｎ酢酸アンモニウム水溶液で０．５時間、（２）０．２５Ｎ酢酸水溶液で０．５時間、そして（３）４ｍｌ／分での流速の線形勾配（３０分にわたり２０％〜１００％のＢ溶液）（Ａ溶液は０．２５Ｎ酢酸水溶液であり；Ｂ溶液はアセトニトリル／水（８０／２０）中０．２５Ｎ酢酸である）で溶出させる。ペプチドを含有する分画を採取して、凍結乾燥させる。
【０１８４】
当業者によく知られるように、ＧＬＰ−１の既知の使用と潜在的な使用は、多様で多岐にわたる（Todd, J. F., et al., Clinical Science, 1998, 95, pp. 325-329; 及び Todd, J. F. et al., European Journal of Clinical Investigation, 1997, 27, pp. 533-536 を参照のこと）。従って、アゴニスト効果を誘発させる目的で本発明の化合物を投与すると、ＧＬＰ−１そのものと同じ効果及び使用を有する場合がある。ＧＬＰ−１のこれらの多様な使用は、以下のように要約してよい：Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肥満、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄、神経変性疾患、腎不全、鬱血性心不全、ネフローゼ症候群、肝硬変、肺性浮腫、高血圧、及び、食物摂取の抑制が所望される障害の治療。アンタゴニスト効果を被検者より誘発させる本発明のＧＬＰ−１類似体は、以下を治療するために使用し得る：胃切除術又は小腸切除術に関連した低血糖症及び吸収不良症候群。
【０１８５】
故に、本発明には、式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つを有効成分として含んでなる、本明細書に定義される医薬組成物がその範囲内に含まれる。
【０１８６】
本発明の製剤中の有効成分の投与量は変動してよいが、有効成分の量は、好適な投与量が得られるようなものであることが必要である。選択される投与量は、所望される治療効果、投与の経路、そして治療の期間に依存して、通常は、担当医によって決定される。一般に、本発明の活性に有効な投与量は、１ｘ１０-7〜２００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは１ｘ１０-4〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、これは、単回用量として投与しても、頻回用量へ分割してもよい。
【０１８７】
本発明の製剤は、好ましくは、非経口的に、例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、等により投与する。
【０１８８】
本発明による非経口投与用の調製物には、所望される in vivo 放出プロフィールが達成されるならば、無菌の水性又は非水性溶液剤、懸濁液剤、ゲル剤、又は乳剤が含まれる。非水性溶媒又は担体の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油及びとうもろこし油のような植物油、ゼラチン、及び、オレイン酸エチルのような注射可能の有機エステルである。そのような剤形は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤のようなアジュバントを含有してもよい。それらは、例えば、細菌保持フィルターに通す濾過によって、滅菌剤を組成物へ取り込むことによって、組成物に照射することによって、又は組成物を加熱することによって滅菌することができる。それらは、滅菌水や他の無菌の注射可能な媒体に使用の直前に溶かすことができる無菌の固形組成物の形態で製造してもよい。
【０１８９】
他に定義しなければ、本明細書に使用するすべての技術及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により通常理解されるのと同じ意味を有する。また、本明細書で言及される公開公報、特許出願、特許、及び他の参考文献は、いずれも参照により組み込まれる。
【図１】
2011001381.tif 000025
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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