(57)【要約】      （修正有）【課題】抗酸化活性を取り入れ且つ維持し得る形状の還元ＣｏＱ−１０を提供する方法及び組成物の提供。【解決手段】コエンザイムＱ−１０（ＣｏＱ１０）の還元型若しくはＣｏＱ１０またはこの両方と、アントシアニン抽出物、メラニンまたは少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物である抗酸化剤との組成物の提供。また、当該組成物は低レベルのＣｏＱ−１０に関連する種々の症状を、その治療が必要な個体に投与することによって処置するに有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
還元コエンザイムＱ１０とアントシアニン抽出物とを含む組成物。
【請求項２】
還元コエンザイムＱ１０、酸化コエンザイムＱ１０とアントシアニン抽出物とを含む組成物。
【請求項３】
少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物をさらに含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
少なくとも一つの−ＳＨ基をもつ前記化合物が酵母抽出物、ＤＨＬＡ、ＤＨＬＡの誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、チオール基含有タンパク質、またはその混合物である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記アントシアニン抽出物がコケモモ抽出物、クロフサスグリ抽出物、クランベリー抽出物、クロダイス抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはその二種以上の混合物である、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
アントシアニン抽出物と還元コエンザイムＱ１０とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させるための方法。
【請求項７】
アントシアニン抽出物、還元コエンザイムＱ１０と少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させるための方法。
【請求項８】
少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ前記化合物が、酵母抽出物、ＤＨＬＡ、ＤＨＬＡの誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、チオール基含有タンパク質、またはその混合物である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記アントシアニン抽出物が、コケモモ抽出物、クロフサスグリ抽出物、クランベリー抽出物、クロダイス抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはその二種以上の混合物である、請求項６〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
還元コエンザイムＱ１０とメラニンとを含む組成物であって、前記メラニンは還元ごま種子抽出物ではない、前記組成物。
【請求項１１】
還元コエンザイムＱ１０、酸化コエンザイムＱ１０及びメラニンとを含む組成物であって、前記メラニンは還元ごま種子抽出物ではない、前記組成物。
【請求項１２】
少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物をさらに含む、請求項１０または１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ前記化合物が酵母抽出物、ＤＨＬＡ、ＤＨＬＡの誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、チオール基含有タンパク質、またはその混合物である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記メラニンがごま種子外皮に由来する、請求項１０〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
メラニンと還元コエンザイムＱ１０とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させる方法。
【請求項１６】
メラニン、還元コエンザイムＱ１０と、少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させる方法。
【請求項１７】
少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ前記化合物が、酵母抽出物、ＤＨＬＡ、ＤＨＬＡの誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、チオール基含有タンパク質、またはその混合物である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記メラニンがごま種子外皮に由来する、請求項１５〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
還元コエンザイムＱ１０と、少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物とを含む組成物であって、前記−ＳＨ含有基はＤＨＬＡではない、前記組成物。
【請求項２０】
還元コエンザイムＱ１０、酸化コエンザイムＱ１０と、少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物とを含む組成物であって、前記−ＳＨ含有基はＤＨＬＡではない、前記組成物。
【請求項２１】
少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ前記化合物が酵母抽出物、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、チオール基含有タンパク質、またはその混合物である、請求項１９または２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
メラニンまたはアントシアニン抽出物をさらに含む、請求項１９〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
前記アントシアニン抽出物がコケモモ抽出物、クロフサスグリ抽出物、クランベリー抽出物、クロダイス抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはその二種以上の混合物である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記メラニンがごま種子外皮に由来する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物と還元コエンザイムＱ１０とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させる方法。
【請求項２６】
メラニン、還元コエンザイムＱ１０と少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させる方法。
【請求項２７】
アントシアニン抽出物、還元コエンザイムＱ１０と少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させる方法。
【請求項２８】
少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ前記化合物が酵母抽出物、ＤＨＬＡ、ＤＨＬＡの誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、チオール基含有タンパク質、またはその混合物である、請求項２５〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
前記メラニンがごま種子外皮に由来する、請求項２６または２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記アントシアニン抽出物がコケモモ抽出物、クロフサスグリ抽出物、クランベリー抽出物、クロダイス抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはその二種以上の混合物である、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３１】
還元コエンザイムＱ１０の割合が少なくとも９５重量％である、請求項１、１０または１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項３２】
非還元コエンザイムＱ１０の量はＨＰＬＣにより検出できない、請求項１、１０または１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項３３】
還元コエンザイムＱ１０の割合が２０重量％〜９９．９９重量％であり、非還元コエンザイムＱ１０の割合が８０重量％〜０．０１重量％である、請求項２、１１または２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３４】
還元コエンザイムＱ１０の割合が２０重量％〜９９．９９重量％であり、非還元コエンザイムＱ１０の割合が８０重量％〜０．０１重量％である、請求項６〜９、１５〜１８または２５〜３０のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する出願とのクロスリファレンス
本出願は、本明細書中、そのいずれもが全ての目的に関してその全体を参照として含まれる、米国仮特許出願番号第６１／０８３，９９４号、２００８年７月２８日出願（代理人整理番号ＯＭＣＡ−０２８／ＰＲＯＶ）に米国特許法１１９（ｅ）のもと恩典を請求する、２００９年７月２８日出願（代理人整理番号ＯＭＣＡ−０２８／ＵＳ）の“Ｓｅｓａｍｅ  Ｓｅｅｄ  Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｐｉｇｍｅｎｔｓ”なる題名の米国特許出願シリアル番号第１２／５１０，３９５の優先権を主張する。
発明の分野
本発明は、一般的にコエンザイムＱ−１０（ＣｏＱ１０）の還元型と、アントシアニン抽出物、メラニンまたは少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物である抗酸化剤との特徴的な組み合わせに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣｏＱ−１０（コエンザイムＱ１０）は、脂溶性キノン、ビタミンＫに構造的に似たベンゾキノンであり、通常、ユビキノンとして公知である。ＣｏＱ−１０は殆どの有機体に見いだされ、細胞エネルギーの産生に必須である。ＣｏＱ−１０（２，３ジメチル−５メチル−６−デカプレニルベンゾキノン）は、肉及び魚介類に少量見いだされる内生抗酸化剤である。ＣｏＱ−１０は全てのヒト細胞でみられるが、ＣｏＱ−１０の最高濃度は心臓、肝臓、腎臓及び膵臓で見られる。通常、これは多くの哺乳類種の臓器にみられる。
【０００３】
ＣｏＱ−１０はミトコンドリアと呼ばれる細胞小器官の膜内にあるので、重要な栄養素である。好気性（酸素）代謝プロセスを経て栄養素の分解に由来するプロトンを往復運転で運ぶことによって、細胞エネルギー、即ちＡＴＰを産生する能力のため、ミトコンドリアは細胞の「発電所」としても公知である。ＣｏＱ−１０は抗酸化剤としての二次的な役割ももつ。ＡＴＰ合成に関与しているため、ＣｏＱ−１０は体内の殆ど全ての細胞の機能に影響を及ぼすので、全てのヒト組織及び臓器の健康に必須となっている。特にＣｏＱ−１０は、最も代謝的に活性である細胞：心臓、免疫系、歯肉及び胃粘膜に影響を与える。
【０００４】
ＣｏＱ−１０は、水などの殆どの親水性溶媒には少ししか溶解しない。従って、ＣｏＱ−１０は錠剤中、または懸濁液としてなど、粉末形で投与されることが多い。しかしながら、これらの方法によるＣｏＱ−１０の送達では、個体に対する材料の生物学的利用性を制限する。
【０００５】
幾つかの臨床試験から、ＣｏＱ−１０は、血圧及びコレステロールレベルを維持するのに有効であることが知見された。さらにＣｏＱ−１０は、心臓血管の健康を促進することも知見された。ＣｏＱ−１０は、特定の種類の癌などの種々の疾患を阻止するのに必須成分として指摘された。これらの事実は、ＣｏＱ−１０を補うことが個人の福利に極めて重要であると多くの者に信じ込ませている。
【０００６】
還元ベンゾキノン類は、酸素または脂質ラジカルの有効な還元剤であることは公知である。研究によっては、還元（ｒｅｄｕｃｅｄ）ＣｏＱ−１０（ユビキノール）は有効な抗酸化剤であることが示されている。実際、還元ＣｏＱ−１０は、抗酸化活性の複雑な連鎖の一部として機能しているようにみえる。明らかに還元ＣｏＱ−１０は、これらの抗酸化剤が生理学的システムに存在する酸素またはカルボニルラジカルにより酸化される時に形成されるアルファ−トコフェロール及びアスコルビン酸塩のラジカルの還元に重要な役割を果たしている。トコフェリルラジカルまたは外部アスコルビン酸塩ラジカルの直接的還元のための公知の酵素はないが、ＣｏＱ−１０を還元し得、このようにして還元されたＣｏＱ−１０が続いてトコフェリルまたはアスコルビン酸塩ラジカルを還元してトコフェロールまたはアスコルビン酸塩を提供し得る酵素が全ての膜にある。脂質または酸素ラジカルとの相互作用により形成したセミキノンは直ちに自動酸化されて、超酸化物（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）ラジカルを形成するため、ＣｏＱ−１０を還元するための酵素の助けなくしては、還元ＣｏＱ−１０は、非常に有用な抗酸化剤ではないだろう。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、抗酸化活性を取り入れ且つ維持し得る形状の還元ＣｏＱ−１０を提供する方法及び組成物に対する需要が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、意外にも、コエンザイムＱ−１０（ＣｏＱ−１０）及び／または還元ＣｏＱ−１０と、アントシアニン抽出物、メラニン、少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物またはその混合物である抗酸化剤との組成物を提供する。
【０００９】
本発明の組成物はさらに、種々のキャリヤ及び、追加の好適な抗酸化剤及び／またはビタミン類などの添加剤を含むことができる。
【００１０】
本発明はさらに、ミトコンドリア関連疾患及び疾病、パーキンソン病、プレーター−ウィリー（Ｐｒａｔｅｒ−Ｗｉｌｌｅｙ）症候群、片頭痛または頭痛などの低レベルのＣｏＱ−１０に関連する種々の症状を、その治療が必要な個体に本明細書中に開示の組成物のいずれかの有効量を投与することによって処置するための方法を提供する。
さらに別の側面では、本発明は本明細書中に開示される包装済み栄養補助食品も提供する。
【００１１】
複数の態様について開示しているが、以下の詳細な記載から当業者には本発明のさらに他の態様も明らかになるだろう。理解されるように、本発明は、全て本発明の趣旨及び範囲を逸脱することなく、種々の明らかな側面で変形が可能である。従って、詳細な記載は、事実上説明的であって、限定的とみなすべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、実施例１の還元ＣｏＱ−１０を示す。
【図２】図２は、実施例２の還元ＣｏＱ−１０対酸化型のＣｏＱ−１０の割合を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
明細書及び特許請求の範囲において、「〜を包含する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」なる用語は無制限の用語であり、「〜を含むが、これらに限定されない」を意味するものと解釈すべきである。これらの用語は、「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」及び「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」のより制限的な用語を包含する。
【００１４】
本明細書及び特許請求の範囲で使用されるように、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」なる単数形は、状況が明確に別なものを示さない限り、複数形を包含することに留意しなければならない。同様に、「ａ」（または「ａｎ」）、「一つ以上の」及び「少なくとも一つの」なる用語は、本明細書中、交換可能に使用することができる。「〜を含む」、「〜を包含する」、「〜を特徴とする」及び「〜をもつ」なる用語は、交換可能に使用できることも留意すべきである。
【００１５】
他に定義しない限り、本明細書中で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する業界の当業者により一般的に理解されるものと同じ意味をもつ。本明細書中に特記される全ての刊行物及び特許は、本発明との関連で使用されるかもしれない刊行物に報告されている化学物質、器具、統計分析及び方法論を記載且つ開示しているものなど全ての目的に関してその全体を参照として含む。本明細書中で引用した全ての参照文献は、当業者のレベルを示すものとしてみなされるべきである。本発明が先行発明を理由として前記開示に先行しないと解釈されるべきではない。
【００１６】
本明細書中で使用するように、「患者（ｓｕｂｊｅｃｔ）」とは哺乳類及び非哺乳類を意味する。「哺乳類」とは、ヒト、非ヒト霊長類動物、たとえばチンパンジー及び他の類人猿及び猿種；家畜、たとえば牛、馬、羊、山羊及びブタ；家畜、たとえばウサギ、イヌ及び猫；齧歯類などの研究動物、たとえばラット、マウス及びモルモットなどの哺乳類種の任意の構成員を意味するが、これらに限定されない。非哺乳類の例としては、鳥などが挙げられるが、これらに限定されない。「患者」なる用語は、特定の年齢及び性別を意味しない。
【００１７】
本明細書中で使用するように、「〜を投与する」または「投与」は、体内、好ましくは体循環に本発明の組成物を導入するための任意の手段を包含する。経口、頬、舌下、肺、経皮、経粘膜的、並びに皮下、腹腔内、静脈内及び筋肉内注射が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１８】
「キャリヤ」なる用語は、本発明の組成物を投与するために使用し得る任意の材料、液体または個体を包含するものとする。これは、エマルション、懸濁液、液体及び食品を挙げることができ、本明細書中に記載される。
本発明の組成物は、薬理的に許容可能な方法により治療的有効量で投与することができる。
【００１９】
「治療的有効量」なる用語は、疾病を処置するために患者に投与する際に、かかる疾病の処置をもたらすのに十分な化合物の量を意味するものとする。「治療的有効量」は、化合物、処置する疾病の状態、重篤度または処置される疾病、患者の年齢及び相対的な健康状態、投与経路及び形態、担当の医師または獣医師の判断、並びに他の因子に依存して変動する。
【００２０】
本発明の目的に関して、「〜を処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「処置」は、疾病、症状または疾患と闘う目的に関して患者の管理及びケアについて記載する。この用語は、予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）、即ち予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）及び緩和処置のいずれをも包含する。処置は、徴候若しくは合併症の始まりの予防、徴候若しくは合併症の緩和、または疾病、症状若しくは疾患を除去するための本発明の化合物の投与を包含する。
【００２１】
化合物は治療的有効量で患者に投与する。化合物は、単独でまたは薬理的に許容可能な組成物の一部として投与することができる。さらに化合物または組成物は、たとえばボーラス注入により全てを一度に、たとえば一連の錠剤によって複数回で、またはたとえば経皮的な送達を使用することによってある期間にわたって実質的に均一に送達することができる。さらに化合物の用量（ｄｏｓｅ）は経時で変動することができる。化合物は、即効型製剤、徐放性製剤またはその組み合わせを使用して投与することができる。「徐放性（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）」なる用語は、持続放出、遅延放出及びその組み合わせを包含する。
【００２２】
「薬理学的に許容可能な」なる用語は、連邦政府若しくは州政府の監督官庁により承認されるか、または動物、特にヒトに使用するために米国薬局方若しくは他の一般的に承認された薬局方に列記されたものを意味する。
【００２３】
「キャリヤ」なる用語は、その療法が行われる希釈剤、補助剤、賦形剤、またはビヒクルを指す。そのような薬理学的キャリヤとしては、滅菌の液体、たとえば水及びオイル、たとえば石油、動物、植物若しくは合成起源のもの、たとえばピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ごま油など、ポリエチレングリコール類、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒であることができる。好適な薬理学的賦形剤としては、でんぷん、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。所望により組成物は、少量の湿潤剤若しくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤、たとえば酢酸塩、クエン酸塩若しくはリン酸塩などを含むこともできる。抗菌剤、たとえばベンジルアルコールまたはメチルパラベン類；抗酸化剤、たとえばアスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート化剤、たとえばエチレンジアミン四酢酸；及び張性を調節するための薬剤、たとえば塩化ナトリウムまたはデキストロースも考えられる。本製剤は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、ディスポーザブルシリンジまたは複数回投与用バイアルに封入することができる。
【００２４】
これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、ピル、カプセル、粉末、徐放性製剤などの形状をとることができる。本組成物は、トリグリセリド、微結晶質セルロース、トラガカントゴムまたはゼラチンなどの従来のバインダー及びキャリヤと共に、座薬として配合することができる。経口製剤は、薬理学等級のマンニトール、ラクトース、でんぷん、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準のキャリヤを含むことができる。好適な薬理学的キャリヤの例は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに記載されている。そのような組成物は、患者に適切な投与形を提供するために、好適量のキャリヤと一緒に、好ましくは純粋形で治療的有効量の治療薬を含むだろう。製剤は、投与形態に合っていなければならない。
【００２５】
特定の疾患または症状の処置で有効であろう本発明の組成物の量は、疾患または症状の性質に依存し、標準の臨床技術により決定することができる。製剤で使用すべき詳細な用量は、投与経路、及び疾病または疾患の重篤度にも依存し、医師の判断及び患者の環境に従って決定すべきである。有効な用量は、ｉｎ−ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験バイオアッセイまたはシステムから誘導した用量−応答曲線から外挿法により推定することができる。
【００２６】
上記列挙の用量の投与は繰り返すことができる。一態様において、上記列挙の用量は、１週間に１〜７回投与することができる。処置期間は、患者の臨床的向上及び治療に対する反応性に依存する。
【００２７】
本発明は、本発明の医薬組成物の一種以上の成分を充填した一種以上の容器を含む医薬パックまたはキットも提供する。場合によりそのような（単数または複数種類の）容器には、医薬品または生物学的製品の製造、使用若しくは販売を管理している政府機関により規定された形式の告示を付けることができ、この告示はヒトへの投与に関し製造、使用若しくは販売の政府機関による承認を示す。
【００２８】
「食品（ｆｏｏｄ）」または「食品生産物（ｆｏｏｄ  ｐｒｏｄｕｃｔ）」は患者により消費され得る任意の固体または液体の食用の物質を指す。そのような食品生産物としては、焼いてある食品、スナック食品（キャンディ、ガム、チョコレートバー（ｃａｎｄｙ  ｂａｒ）など）、乳製品（アイスクリーム、ヨーグルト）及び飲料（ソーダ、ミルク、コーヒー、紅茶など）並びに飲料ミックス（ｂｅｖｅｒａｇｅ  ｍｉｘ）が挙げられる。
【００２９】
本発明は意外にも、アントシアニン、メラニン、少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物またはその混合物である抗酸化剤とのコエンザイムＱ−１０（ＣｏＱ−１０）及び／または還元ＣｏＱ−１０の溶液を提供する。本発明の組成物は、上記の任意の方法で送達することができる。
【００３０】
一態様では、抗酸化剤は、ＣｏＱ−１０または還元ＣｏＱ−１０の安定化剤としてのアントシアニン抽出物などのアントシアニンである。
【００３１】
一側面において、本発明は、アントシアニン抽出物と少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ安定化化合物（ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）とを含む安定化（ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ）アントシアニン抽出組成物を提供する。安定化化合物の好適な例としては、（還元）グルタチオン、ジヒドロリポ酸、システイン、酵母抽出物及びその混合物が挙げられる。
【００３２】
本明細書中で使用する「アントシアニン」なる用語は、グリコシル化アントシアニン（アントシアノシド：ａｎｔｈｏｃｙａｎｏｓｉｄｅ）並びにアントシアノシドのアグリコン（アントシアニジン：ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）のいずれをも包含することを目的とする。本明細書を通して、アグリコンアントシニジンを指すことも多いが、他に記載しない限り、限定するものと決して理解すべきでない。いずれの用語も使用する場合には、他に記載しない限り、用語は交換可能に使用され、グリコシル化材料並びにアグリコン材料を包含することを目的とする。
アントシアニジン類、アントシアニンのアグリコン成分は、式ＩＩに示される基本構造をもつ。
【００３３】
【化１】
2011057674.tif 000002
【００３４】
【表１】
2011057674.tif 000003
式中、Ｒ１〜Ｒ７はアントシアニジンの代表例を提供する。
【００３５】
アントシアニンのグリコシル化形は、アントシアニジン類よりもより水溶性が高く、且つ安定である。アントシアノシド類は、これらが含有するグリコシル単位の数により分類される。モノグリコシド類は一個の糖部分を有し、これは主にアグリコンの３−ヒドロキシル基に結合する。ジグリコシド類は通常、３及び５ヒドロキシル位置、場所により、３及び７ヒドロキシル位置に二つの単糖類を有する。トリグリコシド類は、通常、３位置に二単位とＣ−５かＣ−７位置に一単位の結合をもつ。３’、４’及び／または５’位置におけるグリコシル化も可能である。
【００３６】
アントシアニン類の最も一般的な糖としては、単糖類グルコース、ラムノース、ガラクトース、アラビノース及びキシロースが挙げられる。アントシアニン類に最も頻繁に知見される二糖類及び三糖類は、ルチノース、ソホロース、サンブビオース及びグルコルチノースである。
【００３７】
アントシアニン類は、一つ以上のヒドロキシルによりカルボン酸でアシル化することができる。酸は単糖類の６位置に通常結合するが、単糖類の２、３及び４位置も可能である。一般的な脂肪酸としては、マロン酸、酢酸、リンゴ酸、コハク酸及びシュウ酸が挙げられる。一般的な芳香族フェノール酸及び脂肪族ジカルボン酸としては、クマリン酸（ｃｏｕｍａｒｉｃ）、コーヒー酸、シナピン酸、フェルラ酸、シュウ酸、マロン酸、リンゴ酸、コハク酸及び没食子酸が挙げられる。
【００３８】
「抽出物」なる用語は、たとえば記載の好適な植物源から日常的な単離法により植物源、たとえば葉、小枝、木の皮、根、茎、種、花、ベリー（ｂｅｒｒｙ）、果実から得られるアントシアニン材料を意味することを目的とするが、本明細書中に記載のものに限定されない。当業者に公知のアントシアニン類の種々の抽出法がある。これらの方法の幾つかについては、たとえば米国特許第５，８１７，３５４号；同第５，２００，１８６号；同第５，９１２，３６３号；同第４，２１１，５７７号；同第４，３０２，２００号（本明細書中、それぞれ参照として含まれる）に記載されている。
【００３９】
好適なアントシアニン含有植物の例としては、ヒロハカエデ（Ａｃｅｒ  ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ）、ノルウェーカエデ（Ａｃｅｒ  ｐｌａｔａｎｏｉｄｅｓ）、アセロラ、アジュガ・レプタンス（Ａｊｕｇａ  ｒｅｐｔａｎｓ）、リンゴ、アプリコット、チシマキクイチゴ（Ａｒｔｉｃｔ  ｂｒａｍｂｌｅ）、アボカド、バナナ、メギ（ｂａｒｂｅｒｒｙ）、大麦、ベゴニア・セムペリフィオレンス（Ｂｅｇｏｎｉａ  ｓｅｍｐｅｒｆｉｏｒｅｎｓ）、ヒナギク（Ｂｅｌｌｉｓ  ｐｅｒｅｎｎｉｓ）、シラン（Ｂｌｅｔｉｌｌａ  ｓｔｒｉａｔａ）、コケモモ、黒豆（ｂｌａｃｋ  ｂｅａｎｓ）、クロダイズ（ｂｌａｃｋ  ｓｏｙｂｅａｎｓ）、ブラックポテト、ブルーポテト及び紫ポテト、クロイチゴ（ｂｌａｃｋｂｅｒｒｙ）、ブルーベリー、クロマメノキ（ｂｏｇ  ｗｈｏｒｔｌｅｂｅｒｒｙ）、ボイセンベリー（ｂｏｙｓｅｎｂｅｒｒｙ）、ソバ、カカオ、カメリア・シネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、カナリアサード（ｃａｎａｒｙｇｒａｓｓ）、コーケイジャン・ブルーベリー（Ｃａｕｃａｓｉａｎ  ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ）、ロウバイ（Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ  ｐｒａｅｃｏｘ）、セロリ、セイヨウシザクラ（Ｃｅｒａｓｕｓ  ａｖｉｕｍ）、サクランボ、セイヨウバクチノキ（ｃｈｅｒｒｙ  ｌａｕｒｅｌ）、チコリ、チャイブ、サイフリボク、セイヨウサンシュ（Ｃｏｒｎｅｌｉａｎ  ｃｈｅｒｒｙ）、ヤグルマギク、シャリントウ、カウベリー、クランベリー、ガンコウラン、キク、オシャグジダケ（Ｃｙｎｏｍｏｒｉｕｍ  ｃｏｃｃｉｎｅｕｍ）、ダリア（Ｄａｈｌｉａ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）、セイヨウニワトコ（ｄａｎｅｗｏｒｔ）、ディアベリー、デンドロビウム、ゴゼンタチバナ（ｄｗａｒｆ  ｄｏｇｗｏｏｄ）、ムラサキバレンギク（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ  ｐｕｒｐｅａ）、ナス、ニワトコ、ソラマメ、ヤツデ（Ｆａｔｓｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、フェイジョア、イチジク、ニンニク、ガーベラ、薬用ニンジン、アーティチョーク（Ｇｌｏｂｅ  ａｒｔｉｃｈｏｋｅ）、グズベリー、ブドウ、グァバ、サンザシ、ハイビスカスまたはローゼル（ｒｏｓｅｌｌｅ）、ハイビスカス・サブダイファ（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ  Ｓａｂｄａｉｆｆａ）、ハイブッシュ・ブルーベリー（ｈｉｇｈｂｕｓｈ  ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ）、タチアオイ、スイカズラ、マルバアサガオ（Ｉｐｏｍｏｅａ  ｐｕｒｐｕｒｅａ）、ノハナショウブ（Ｉｒｉｓ  ｅｎｓａｔａ）、ムラサキフトモモ（Ｊａｖａ  ｐｌｕｍ）、キクイモ（Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ  ａｒｔｉｃｈｏｋｅ）、インドマンゴスチン、レリオカトレヤ（Ｌａｅｌｉｏｃａｔｔｌｅｙａ）、レンズ豆、ローガンベリー、ルピナス、レイシ、トウモロコシ、マンゴー、マンゴスチン、マキ（ｍａｑｕｉ）、ストック（Ｍａｔｔｈｉｏｌａ  ｉｎｃａｎａ）、ヒマラヤの青いケシ（ｍｅｃｏｎｏｐｓｉｓ）、メトロシデロス・エクスケルサ（Ｍｅｔｒｏｓｉｄｅｒｏｓ  ｅｘｃｅｌｓａ）、雑穀、ナナカマド（ｍｏｕｎｔａｉｎ  ａｓｈ  ｂｅｒｒｙ）、クワノキ、ギンバイカ（ｍｙｒｔｌｅ  ｂｅｒｒｙ）、オリーブ、タマネギ、オレンジ、オーナメンタル・チェリー（ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ  ｃｈｅｒｒｙ）、パッションフルーツ、エンドウ、もも、ピーナッ���、ナシ、シソ（ｐｅｒｉｌｌａ）、ペチュニア、胡蝶蘭（Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ）、ファルサ（Ｐｈａｌｓａ）、ファルビティス（Ｐｈａｒｂｉｔｉｓ）、パイナップル、ピスタチオ、プラム、ザクロ、ヨシ（Ｐｈｒａｇｍｉｔｅｓ  ａｕｓｔｒａｌｉｓ）、紫ニンジン、メルメロ、コケモモ（ｒａｂｂｉｔｅｙｅ  ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ）、ハツカダイコン、アカスグリ及びクロスグリ、レッドラズベリー及びブラックラズベリー、レッドキャベツ、コメ、ルバーブ、ローズヒップ、ライ麦、サフラン、サラセニア、シープベリー、ソフロニチス・コクシネア（Ｓｏｐｈｒｏｎｉｔｉｓ  ｃｏｃｃｉｎｅａ）、モロコシ、スパークルベリー（ｓｐａｒｋｌｅｂｅｒｒｙ）、イチゴ、フラガダ・ベスカ（Ｆｒａｇａｄａ  Ｖｅｓｃａ）、サトウキビ、ヒマワリ、セイヨウシザクラ（ｓｗｅｅｔ  ｃｈｅｒｒｙ）、サツマイモ、コダチトマト、タマリンド、タロイモ、タルトチェリー（ｔａｒｔ  ｃｈｅｒｒｙ）、チューリップ・グレイギー（Ｔｕｌｉｐ  ｇｒｅｉｇｉｉ）、カブ、睡蓮、タニウツギ（Ｗｅｉｇｅｌａ）、小麦、野生米、バーベナ・ヒブリダ（Ｖｅｒｂｅｎａ  ｈｙｂｒｉｄａ）、ヤムイモ並びにその混合物からなる群から選択される果実、野菜、花及び他の植物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４０】
文献的には数千ものアントシアニン抽出物があるが、その全ては本明細書の範囲内に含まれるものと理解すべきであり、特に重要なアントシアニン抽出物の好適例としては、コケモモ抽出物、クロフサスグリ抽出物、クランベリー抽出物、クロダイス抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物及びその二種以上の混合物が挙げられる。
【００４１】
通常、抽出物は種々の方法により濃縮して、アントシアニンが豊富な溶液を得る。たとえば、限外濾過を使用して、分画分子量により不都合な成分を除去することができる。濾過由来の保持物（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）は液体として貯蔵することができるか、またはたとえば噴霧乾燥、凍結乾燥、気流乾燥（ｆｌａｓｈ  ｄｒｙｉｎｇ）、流動床乾燥、リング乾燥（ｒｉｎｇ  ｄｒｙｉｎｇ）、トレー乾燥（ｔｒａｙ  ｄｒｙｉｎｇ）、真空乾燥、高周波乾燥（ｒａｄｉｏ  ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  ｄｒｙｉｎｇ）またはマイクロ波乾燥によりさらに粉末にして濃縮することができる。最後には、抽出物は少なくとも１０重量％のアントシアニン含有量を含むべきである。市販のアントシアニンは、たとえばＡｒｔｅｍｉｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｆｏｒｔ  Ｗａｙｎｅ、インディアナ州）などの供給先から得ることができる。市販品として得られるアントシアニン抽出物は、少なくとも１０重量％のアントシアニン含有量を含むべきである。従って、抽出物は（単数または複数種類の）アントシアニンと、他のフラビノイド（ｆｌａｖｉｎｏｉｄ）、糖などの他の植物材料を含む。
【００４２】
アントシアニン抽出物はさらに、当業界で公知の一つ以上の方法、たとえばクロマトグラフィー、ゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、結晶化、アフィニティークロマトグラフィー、分配クロマトグラフィーなどにより精製することができる。特定の（単数または複数種類の）アントシアニンの同定は、当業者に公知の方法により実施することができ、その例としては、１Ｈ  ＮＭＲ、化学分解、クロマトグラフィー及び分光法、特に単離したアントシアニン化合物をキャラクタリゼーションするための同種核または異種核二次元ＮＭＲ法が挙げられる。
【００４３】
「精製した」または「単離した」なる用語は、上記のアントシアニン抽出物から一種以上のアントシアニンを精製及び／または単離するために参照として使用される。当業界で公知の慣用法を使用して、アントシアニン抽出物の種々の成分を精製材料に分離することができる。本発明の一側面において、抽出物の（単数または複数種類の）アントシアニンは当業界で公知の方法により実質的に精製且つ単離される。精製化合物の純度は通常少なくとも約９０重量％であり、好ましくは少なくとも約９５重量％であり、最も好ましくは少なくとも約９９重量％であり、より好ましくは少なくとも約９９．９重量％（たとえば約１００重量％）である。
【００４４】
本発明に従って、アントシアニン抽出物は、ペオニジン、シアニジン、ペラルゴニジン、デルフィンルジン（ｄｅｌｐｈｉｎｌｄｉｎ）、ペチュニジン、マルビジン、アピゲニンジン（ａｐｉｇｅｎｉｎｄｉｎ）、アウラチニジン（ａｕｒａｔｉｎｉｄｉｎ）、カペンシニジン、エウロピニジン、ヒルスチジン、６−ヒドロキシシアニジン、ルテオリニジン、５−メチルシアニジン、プルケリジン（ｐｕｌｃｈｅｌｌｉｄｉｎ）、ロシニジン（ｒｏｓｉｎｉｄｉｎ）、トリセトニジン（ｔｒｉｃｅｔｎｉｄｉｎ）、その誘導体及び混合物からなる群から選択される一種以上のアントシアニン及び／またはアントシアニジンを含む。一態様において、アントシアニン及びアントシアニジンは、シアニジン、ペオニジン、マルビジン、ペチュニジン、デルフィニジン（ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ）、そのグルコシド誘導体及び混合物からなる群から選択される。さらに別の態様では、抽出物は少なくとも一種のシアニジンベースのアントシアニンを含む。
【００４５】
本明細書中で使用される「アントシアニン」なる用語は、単量体のアントシアニンを指すだけでなく、アントシアニンの二量体及び重合体の（即ち３〜２０個のアントシアニンモノマー残基を含む）形並びに、ロイコアントシアニジン類（フラバン−３，４−ジオール類としても公知）を指す。アントシアニンは、置換基（たとえばアルキル、アルコキシ基など）を含むことができ、特に上記のように、Ｏ−グリコシル化することができる。
【００４６】
本組成物中のアントシアニンは、単一のアントシアニンであり得るか、またはアントシアニンの混合物を含むことができる。特にアントシアニンは、マルビジン、シアニジン、デルフィニジン、パエオニジン（ｐａｅｏｎｉｄｉｎ）、ペラルゴニジン及びペチュニジン並びにそのグリコシドからなる群から選択される。典型例はマルビン（ｍａｌｖｉｎ）（マルビジンジグリコシド）クロリドであり、これは精製形で市販されている。あるいは、アントシアニンは、上記のようなブドウ、ブラックキャロット、赤キャベツ、ブラックベリー、ブラックカレント（ｂｌａｃｋｃｕｒｒｅｎｔ）、クランベリーなどのアントシアニン含有植物を抽出することによって得ることができる。
【００４７】
一側面において、安定化（ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ）化合物対アントシアニン抽出物の比は、約０．１〜約１０、特に約０．５〜約５であり、特に約１〜約１である。
さらに別の側面において、安定化アントシアニン抽出物はアントシアノシドである。
さらに別の側面において、安定化アントシアニン抽出物はアントシアニジンである。
【００４８】
本発明の他の側面において、安定化アントシアニン抽出物は、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペチュニジン、デルフィニジンのグリコシドである一種以上のアントシアノシドを包含する。
【００４９】
一態様において、メラニンは抗酸化剤として使用することができる。メラニンは、植物、動物及び原生生物に見られる種類の化合物であり、主に色素として機能する。色素の種類は、アミノ酸のチロシンの誘導体である。生物学的メラニンの最も一般的な形は、ユーメラニンであり、これは、ジヒドロキシインドール、ジヒドロキシインドールカルボン酸及びその還元型の茶−黒ポリマーである。メラニンのもう一つの一般的な形はフェオメラニン（ｐｈｅｏｍｅｌａｎｉｎ）であり、これはベンゾチアジン単位の赤−茶ポリマーである。他の一般的なメラニンとしては、セピアメラニン（ｓｅｐｉａｍｅｌａｎｉｎ）類、ニューロメラニン（ｎｅｕｒｏｍｅｌａｎｉｎ）類及びアロメラニン（ａｌｌｏｍｅｌａｎｉｎ）類が挙げられる。
【００５０】
別の側面では、ごま抽出物（メラニン）を抗酸化剤として使用することができ、これは水溶液中、０．０４ｍｇ／ｍｌ未満の濃度で５００ｎｍで約０．１〜約０．１６の吸光度のＵＶ−ＶＩＳスペクトルをもつことを特徴とする。
【００５１】
ごま抽出物は、約２６４〜約５４００ダルトン、特に約２６４〜約２０００ダルトン、さらに特に約４００〜約１６００ダルトン、特に約２６４〜約１６００ダルトン、さらに約５３２〜約１０６４ダルトンの範囲の分子量をもち、全ての範囲は約２６４〜約５４００ダルトンである。
【００５２】
ごま抽出物、還元メラニン色素は、還元メラニンの元素組成によって特徴つけることができる。還元メラニンの炭素含有量は約３５重量％〜約５７重量％であり、還元メラニンの水素含有量は約５重量％〜約１０重量％であり、窒素含有量は約５〜約１０重量％である。存在する場合には、還元メラニンの酸素含有量は約３３重量％〜約３７重量％である。
一側面において、（存在する場合には）還元メラニンの窒素含有量は約５重量％〜約１０重量％である。
別の側面では、（存在する場合には）還元メラニンの硫黄含有量は約１重量％未満である。
【００５３】
本発明で有用な黒ごま種子は、植物Ｓｅｓａｍｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ由来の種子である。一般に、還元メラニン色素は、メラニンを含有する特にごま種子由来の種子殻（ｓｅｅｄ  ｓｈｅｌｌ）または外皮（ｈｕｌｌ）から誘導される。あるいは、ごま植物の小枝、皮、枝、葉及び／または根を、メラニンを得るための出発物質に使用することができる。黒ごま種子の種子殻または外皮は、還元メラニンを提供するのに使用される所望のメラニンに最も富んでいる。
【００５４】
一側面において、還元メラニンは、３４００ｃｍ−１（フェノール−ＯＨ伸縮）、約２９５０ｃｍ−１（脂肪族伸縮）、約１６００〜約１６５０ｃｍ−１（芳香族Ｃ＝Ｃ伸縮）、約１３８０〜約１４００ｃｍ−１（フェノールＣ−ＯＨ、インドール及びフェノールＮＨ伸縮）、約１２６０ｃｍ−１（フェノールＣＯＨ）及び約１１７０ｃｍ−１（Ｃ＝Ｏ伸縮）に特有の吸収を示す赤外線スペクトルを有する。
【００５５】
ごま抽出物は以下のようにして製造することができる。本方法は、高温で塩基水溶液（ａｑｕｅｏｕｓ  ｂａｓｅ）と粉末化ごま種子とを混合し、続いて得られた混合物を室温に冷却することを包含する。得られた混合物を濾過し、水で濯いで濾液を得る。この濾液を酸水溶液（ａｑｕｅｏｕｓ  ａｃｉｄ）で処理し、ガスの発生が停止するまで還元剤を濾液に加えると、ごま抽出物が形成する。
【００５６】
塩基水溶液中の塩基の濃度は約０．５重量パーセント〜約２重量パーセントである。好適な塩基としては、アミン及び種々の金属の水酸化物、たとえば水酸化カリウム及び水酸化ナトリウムが挙げられる。通常、塩基水溶液対ごま種子の比は重量ベースで約５：１であり、通常、第一段階の高温は約４０℃〜約８０℃、たとえば６０℃である。この混合物は通常、約０．５時間〜約５時間、たとえば３時間加熱する。
【００５７】
プロセスの処理済み濾液は、還元剤を添加する前にかき混ぜる（たとえば攪拌または超音波にかける）。好適な還元剤としては、ジヒドロリポ酸、水素化ホウ素ナトリウムまたは−ＳＨ基をもつ他の還元剤が挙げられる。還元剤は、約１０℃〜約３５℃、特に約２５℃の温度で濾液に添加する。
【００５８】
本発明はまた、還元メラニン色素（ごま抽出物）を製造するための別法を提供する。本方法は、室温以下で塩基水溶液と粉末化ごま種子との混合を包含する。この混合物を濾過し、水で濯いで濾液を得る。この濾液を室温以下でｐＨ約７〜約１に酸水溶液で処理する。得られた還元メラニン色素を集める。
【００５９】
この段階での塩基水溶液中の塩基濃度は約０．５重量パーセント〜約２重量パーセント（約１０を超えるｐＨ、たとえば約１０〜約１４、たとえばｐＨ約１２）である。好適な塩基としては、アミン及び種々の金属の水酸化物、たとえば水酸化カリウム及び水酸化ナトリウムが挙げられる。通常、塩基水溶液対ごま種子の比は重量ベースで約５：１であり、通常、混合物の温度は約３５℃未満、たとえば２５℃に保持される。段階ａ）の混合物は通常、約０．５時間〜約４８時間、たとえば２４時間混合する。
【００６０】
酸水溶液は、任意の有機酸または鉱酸、たとえば酢酸、塩酸、硫酸、硝酸、またはリン酸であり得、酸が約１５容積％である。濾液の温度は、酸溶液の添加中及びその後に、約３５℃未満、たとえば２５℃に保持する。通常、ｐＨはｐＨ７未満、特にｐＨ１まで下げる。
得られた還元メラニン色素は、種々の方法、たとえば濾過または遠心分離により集めることができる。
【００６１】
還元メラニンを製造する好適な手順は、本明細書中、そのいずれもが参照として含まれる、２００９年７月２８日出願の米国特許出願第１２／５１０，３９５号及び２００８年７月２８日出願の米国仮特許出願第６１／０８３，９９４号に知見することができる。
【００６２】
さらに別の側面では、安定化化合物（抗酸化剤ともいう）の好適な例としては、酵母抽出物（たとえばビール酵母）、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の塩、たとえばアミノ酸塩、システイン、システインの誘導体、たとえばＮ−アセチルシステイン、グルタチオン、グルタチオンの塩、ＳＨ−プロテイナーゼ、たとえばパパイン、ブロメライン、フィシン、キモパパイン（ｅｈｙｍｏｐａｐａｉｎ）及びその混合物、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システイン含有ペプチド、グルタチオン含有ペプチド、発酵牡蠣抽出物（ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ  ｏｙｓｔｅｒ  ｅｘｔｒａｃｔ）、発酵豆腐、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはその混合物が挙げられる。
【００６３】
−ＳＨ保持化合物の一例としては、ジヒドロリポ酸がある。ジヒドロリポ酸（ＤＨＬＡ）は、細胞代謝の構成成分である。ＤＨＬＡは、ラジカル種の影響を受けやすい二つのチオール残基をもつので、生体分子に対して酸化防止機能を提供する。酸化還元（レドックス反応）は、供与体から受容体へ電子の移動を伴う。供与体が電子を失うと、供与体はその還元型から酸化型へ変形する。受容体が電子を得ると、受容体はその酸化型から還元型へ変化する。
【００６４】
ジヒドロリポ酸は、リポ酸（チオクト酸）の還元（電子が加わった）形である。ＤＨＬＡが酸化される（電子が除去される）と、リポ酸が生成する。ＤＨＬＡはＲ若しくはＳエナンチオマーであり得るか、ラセミであり得ると理解すべきである。同様に、リポ酸もエナンチオマー的に純粋であるか、またはラセミであり得る。
【００６５】
【化２】
2011057674.tif 000004
【００６６】
【化３】
2011057674.tif 000005
【００６７】
「コエンザイムＱ１０」または「ユビキノン」（ＣｏＱ−１０）なる用語は、ミトコンドリア製造における電子伝達、即ちチトクローム系を経るコハク酸塩または還元ニコチンアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の酸化に関与する脂質溶解性ベンゾキノン類の一群を記載するために本明細書中で使用する。化合物は、コエンザイムＱｎ（式中、ｎは１〜１２である）またはユビキノン（ｘ）（ここで、ｘは側鎖内の炭素原子の総数を示し、５の任意の倍数であり得る）として表すことができる。特性の違いは、鎖長の差による。特に、本発明に用いられるユビキノンは、ユビキノールとして公知のコエンザイムＱ１０の還元型である。従って、ＣｏＱ−１０なる用語は、ｎが１〜１２の全ての変化形を包含する。同様に、還元ＣｏＱ−１０もｎが１〜１２である全ての変化形を包含する。
【００６８】
「ユビキノール」なる用語は、本発明に従った組成物中の活性成分として使用されるコエンザイムＱｎの還元型を記載するために本明細書中で使用する。ユビキノールにおいて、コエンザイムＱｎのキノン環は、化合物の構造が以下に記載のように見えるように還元されている。一側面において、ユビキノールは、ｎは好ましくは１０であり、コエンザイムＱ１０から誘導される。本明細書中において、ＣｏＱ−１０と還元ＣｏＱ−１０を参照する場合には、ｎが上記のものである全ての可能な誘導体を指すものと理解すべきである。
【００６９】
【化４】
2011057674.tif 000006
【００７０】
【化５】
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【００７１】
特定の理論に限定されるものではないが、本明細書に記載の抗酸化剤、例えばアントシアニン類、メラニン若しくはごま種子抽出物、少なくとも一つの−ＳＨ基をもつ化合物またはその混合物の有効濃度は、実質的に全てのユビキノンをユビキノールに転換するものと考えられる。他の態様では、ＤＨＬＡの有効濃度は、ユビキノールがユビキノンに酸化されないようにするか、あるいは本発明に従った組成物の貯蔵の間にユビキノールから酸化されてしまったユビキノンを減少させるのを助ける。
【００７２】
本発明の製剤は、還元ＣｏＱ−１０及び／または追加の抗酸化剤の量を増加させることが必要な個体において、かかる還元ＣｏＱ−１０及び／または追加の抗酸化剤の量を増加させるのに有効な栄養補助食品（ｄｉｅｔａｒｙ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）と考えられる。
本発明の製剤は、化粧品でも使用することができる。
【００７３】
あるいは本発明の製剤は、栄養補給食品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）とも考えられる。「栄養補給」なる用語は、当業界で認められており、疾患を予防するかもしれない食品に知見される特殊な化学化合物を記載するために用いられる。還元ＣｏＱ−１０及び抗酸化剤はそのような化合物である。
【００７４】
本発明の製剤は、ＣｏＱ−１０の生物学的利用能を安定化させ易くするか、若しくは促進させ易くするために種々の成分をさらに含むか、または個体の日常の食事への追加の栄養素として機能することができる。好適な添加剤としては、ビタミン類及び生物学的に許容可能なミネラルを挙げることができる。ビタミン類の非限定的な例としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ類、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ及び葉酸が挙げられる。ミネラルの非限定的な例としては、鉄、カルシウム、マグネシウム、カリウム、銅、クロム、亜鉛、モリブデン、ヨウ素、ホウ素、セレン、マンガン、その誘導体またはその組み合わせが挙げられる。これらのビタミン類及びミネラルは、任意の供給源またはその組み合わせ由来であり得、これらに限定されない。非限定的なビタミンＢの例としては、チアミン、ナイアシン、ピリドキシン、リボフラビン、シアノコバラミン、ビオチン、パテント酸またはその組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７５】
存在する場合には、（単数または複数種類の）ビタミンは、約５ｍｇ〜約５００ｍｇの範囲の量で本発明の組成物中に存在する。特に（単数または複数種類の）ビタミンは、約１０ｍｇ〜約４００ｍｇの範囲の量で存在する。特に、（単数または複数種類の）ビタミンは、約２５０ｍｇ〜約４００ｍｇで存在する。最も具体的には、（単数または複数種類の）ビタミンは、約１０ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲の量で存在する。たとえば、ビタミンＢは通常約１ミリグラム〜約１０ミリグラムの範囲の量で含まれ、即ちＢ１２約３マイクログラム〜約５０マイクログラムである。葉酸は、たとえば通常、約５０〜約４００マイクログラムの範囲で含まれ、ビオチンは通常約２５〜約７００マイクログラムの範囲で含まれ、シアノコバラミンは約３マイクログラム〜約５０マイクログラムの範囲で含まれる。
【００７６】
存在する場合には、（単数または複数種類の）ミネラルは、本発明の組成物中に約２５ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲の量で存在する。特に（単数または複数種類の）ミネラルは、約２５ｍｇ〜約５００ｍｇの範囲で本組成物中に存在する。さらに特に、（単数または複数種類の）ミネラルは、約１００ｍｇ〜約６００ｍｇの範囲の量で本組成物中に存在する。
【００７７】
種々の添加剤を本組成物中に配合することができる。本組成物の追加の添加剤としては、リン脂質、Ｌ−カルニチン、でんぷん、糖、脂肪、抗酸化剤、アミノ酸、タンパク質、フレーバー剤、着色料、（単数または複数種類の）加水分解でんぷん及びその誘導体またはその組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７８】
本明細書中で使用するように、「リン脂質」なる用語は当業界で認められており、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、並びにホスファチジン酸、セラミド、セレブロシド、スフィンゴミエリン及びカルジオリピンを指す。
【００７９】
本明細書中で使用するように、「抗酸化剤」なる用語は当業界で認められており、化合物の酸化変質を防いだり、遅延させたりする合成または天然物質を指す。本明細書中で記載のアントシアニン類、−ＳＨ基含有分子及び／またはごま抽出物をさらに含む、典型的な抗酸化剤としては、トコフェノール類、フラボノイド、カテキン、スーパーオキシドジムスターゼ、レシチン、ガンマオリザノール；ビタミン類、たとえばビタミンＡ、Ｃ（アスコルビン酸）及びＥ並びにベータ−カロテン；天然成分、たとえばローズマリー及びサンザシ抽出物に見られるカモソール（ｃａｍｏｓｏｌ）、カルノシン酸（ｃａｒｎｏｓｉｃ  ａｃｉｄ）及びロスマノール（ｒｏｓｍａｎｏｌ）、プロアントシアニジン類、たとえばブドウ種子または松樹皮抽出部中に見られるもの、並びに緑茶抽出物が挙げられる。
【００８０】
本明細書で使用する「フラボノイド」なる用語は当業界で認められており、身体をガンから守ることを助けると考えられている多くの食品に見られるこれらの植物色素を包含することを目的とする。これらはたとえば、エピガロカテキンガレート（ｅｐｉ−ｇａｌｌｏ  ｃａｔｈｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ：ＥＧＣＧ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）及びエピカテキン（ＥＣ）が挙げられる。
【００８１】
任意の剤形及びその組み合わせが本発明で検討される。そのような剤形の例としては、チュアブル錠、エリキシル、液体、溶液、懸濁液、エマルション、カプセル、ソフトゼラチンカプセル、ハードゼラチンカプセル、カプレット（ｃａｐｌｅｔ）、ロゼンジ、チュアブルロゼンジ、座剤、クリーム、局所適用剤（ｔｏｐｉｃａｌ）、摂取可能な投薬形態（ｉｎｇｅｓｔｉｂｌｅ）、注射剤、注入剤、ヘルスバー（ｈｅａｌｔｈ  ｂａｒ）、菓子、動物飼料、シリアル、シリアルコーティング及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。上記剤形の製造は、当業者に周知である。
【００８２】
たとえばヘルスバーは、上記製剤と賦形剤（たとえばバインダー、充填剤、香料、着色料など）とを、可塑性の塊の稠度（ｐｌａｓｔｉｃ  ｍａｓｓ  ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ）となるまで混合して製造することができるが、これに限定されない。次いで塊を引き延ばすか、型に入れて、「キャンディーバー」形状に形成し、そして乾燥または固めて最終製品を形成する。
【００８３】
ＣｏＱ−１０は、種々の生化学的経路に関係し、ＣｏＱ−１０を産生する体内能力に当然影響するスタチン薬剤に関連するような、心血管疾患の処置に好適である。ＣｏＱ−１０は種々の歯周病にも関係していた。さらに、ＣｏＱ−１０は、アセチルコエンザイムＡ産生の不能、神経障害、たとえばパーキンソン病及びプラダー−ウィリー症候群（Ｐｒａｔｅｒ−Ｗｉｌｌｅｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、偏頭痛及び頭痛などのミトコンドリアに関連する疾患及び障害に関係していた。従って、本発明は、かかる疾患の状態や症状の一つ以上を処置することができる組成物を提供する。
【００８４】
以下の１〜３４まで列挙した段落は、本発明の種々の側面を提供する。一態様において、第一段落（１）において、本発明は、還元コエンザイムＱ１０とアントシアニン抽出物とを含む、還元コエンザイムＱ−１０（ＣｏＱ−１０）組成物を提供する。
２．還元コエンザイムＱ１０、酸化コエンザイムＱ１０とアントシアニン抽出物とを含む組成物。
３．少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物をさらに含む、段落１または２に記載の組成物。
４．少なくとも一つの−ＳＨ基をもつ前記化合物が酵母抽出物、ＤＨＬＡ、ＤＨＬＡの誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、チオール基含有タンパク質、またはその混合物である、段落３に記載の組成物。
５．前記アントシアニン抽出物がコケモモ抽出物、クロフサスグリ抽出物、クランベリー抽出物、クロダイス抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはその二種以上の混合物である、段落１〜４のいずれかに記載の組成物。
６．アントシアニン抽出物と還元コエンザイムＱ１０とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させるための方法。
７．アントシアニン抽出物、還元コエンザイムＱ１０と少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させるための方法。
８．少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ前記化合物が、酵母抽出物、ＤＨＬＡ、ＤＨＬＡの誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、チオール基含有タンパク質、またはその混合物である、段落７に記載の方法。
９．前記アントシアニン抽出物が、コケモモ抽出物、クロフサスグリ抽出物、クランベリー抽出物、クロダイス抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはその二種以上の混合物である、段落６〜８のいずれかに記載の方法。
１０．還元コエンザイムＱ１０とメラニンとを含む組成物であって、但し前記メラニンは還元ごま種子抽出物ではない、前記組成物。
１１．還元コエンザイムＱ１０、酸化コエンザイムＱ１０とメラニンとを含む組成物であって、但し前記メラニンは還元ごま種子抽出物ではない、前記組成物。
１２．少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物をさらに含む、段落１０または１１のいずれかに記載の組成物。
１３．少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ前記化合物が酵母抽出物、ＤＨＬＡ、ＤＨＬＡの誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、チオール基含有タンパク質、またはその混合物である、段落１２に記載の組成物。
１４．前記メラニンがごま種子外皮に由来する、段落１０〜１３のいずれかに記載の組成物。
１５．メラニンと還元コエンザイムＱ１０とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させる方法。
１６．メラニン、還元コエンザイムＱ１０と、少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させる方法。
１７．少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ前記化合物が、酵母抽出物、ＤＨＬＡ、ＤＨＬＡの誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、チオール基含有タンパク質、またはその混合物である、段落１６に記載の方法。
１８．前記メラニンがごま種子外皮に由来する、段落１５〜１７のいずれかに記載の方法。
１９．還元コエンザイムＱ１０と、少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物とを含む組成物であって、但し前記−ＳＨ含有基はＤＨＬＡではない、前記組成物。
２０．還元コエンザイムＱ１０、酸化コエンザイムＱ１０と、少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物とを含む組成物であって、但し前記−ＳＨ含有基はＤＨＬＡではない、前記組成物。
２１．少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ前記化合物が酵母抽出物、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、チオール基含有タンパク質、またはその混合物である、段落１９または２０のいずれかに記載の組成物。
２２．メラニンまたはアントシアニン抽出物をさらに含む、段落１９〜２１に記載の組成物。
２３．前記アントシアニン抽出物がコケモモ抽出物、クロフサスグリ抽出物、クランベリー抽出物、クロダイス抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはその二種以上の混合物である、段落２２に記載の組成物。
２４．前記メラニンがごま種子外皮に由来する、段落２２に記載の組成物。
２５．少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物と還元コエンザイムＱ１０とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させる方法。
２６．メラニン、還元コエンザイムＱ１０と少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させる方法。
２７．アントシアニン抽出物、還元コエンザイムＱ１０と少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ化合物とを混合する段階を含む、還元コエンザイムＱ１０を安定化させる方法。
２８．少なくとも一つのチオール（−ＳＨ）基をもつ前記化合物が酵母抽出物、ＤＨＬＡ、ＤＨＬＡの誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、チオール基含有タンパク質、またはその混合物である、段落２５〜２７のいずれかに記載の方法。
２９．前記メラニンがごま種子外皮に由来する、段落２６または２８に記載の方法。
３０．前記アントシアニン抽出物がコケモモ抽出物、クロフサスグリ抽出物、クランベリー抽出物、クロダイス抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはその二種以上の混合物である、段落２７または２８に記載の方法。
３１．還元コエンザイムＱ１０の割合が少なくとも９５重量％である、段落１、１０または１９のいずれかに記載の組成物。
３２．非還元（ｎｏｎ−ｒｅｄｕｃｅｄ）コエンザイムＱ１０の量はＨＰＬＣにより検出できない、段落１、１０または１９のいずれかに記載の組成物。
３３．還元コエンザイムＱ１０の割合が約２０重量％〜９９．９９重量％であり、非還元コエンザイムＱ１０の割合が約８０重量％〜約０．０１重量％である、段落２、１１または２０のいずれかに記載の組成物。たとえば、例示的な範囲としては、１００％をベースとして還元コエンザイムＱ１０約２０〜９９．９９％（重量）で、残余はコエンザイムＱ１０であり、還元コエンザイムＱ１０約５０％、約６０％、約８０％、約９０％及び約９５％で、残余がコエンザイムＱ１０である。
３４．還元コエンザイムＱ１０の割合が約２０重量％〜９９．９９重量％であり、非還元コエンザイムＱ１０の割合が約８０重量％〜約０．０１重量％である、段落６〜９、１５〜１８または２５〜３０のいずれかに記載の方法。
以下の実施例は、例示的なものであり、限定的と考えるべきではない。
【実施例１】
【００８５】
還元型９０％を含むＣｏＱ１０の製造
インキュベーション：攪拌下、４１．３Ｌの無水エタノールをガラス反応器に添加し、５．５ｋｇの酸化型ＣｏＱ１０（６．２５ｍｏｌ）及び３．４４ｋｇ  のＤＨＬＡ  （１６．５ｍｏｌ）をこの反応器中で混合した。反応混合物を４５℃に加熱して、ＣｏＱ１０が完全に溶解したら、反応系を２０分間保持し、次いでごま色素（米国特許出願第１２／５１０，３９５号に従って製造したごま色素；水中、０．０５ｇ／ｍｌＮａＯＨ、ごま色素０．０５ｇ／ｍｌ含有）の０．３４４Ｌ溶液をゆっくりと添加した。色素溶液の添加が完了した後、反応器を封止し、温度変化なく１時間保持した。次いで温度を１時間以内で４０℃に下げ、４０℃で２０時間保持した。
【００８６】
冷却プロセス：４０℃でのインキュベーションが完了したら、２．０６ｋｇの純水（ｐｕｒｅ  ｗａｔｅｒ）を添加し、混合物を１時間攪拌した。この反応混合物の温度を３時間以内で２０℃に下げ、２０℃で２時間保持した。次いで反応混合物の温度を１時間以内で１５℃に下げ、１時間保持した。
【００８７】
冷却プロセス後、還元ＣｏＱ１０を溶液から分離した。１時間以内で迅速に濾過した後、フィルターケーキを４．１３Ｌの冷却９５％エタノールで洗浄した。このフィルターケーキを窒素雰囲気下、４時間乾燥し、次いで約２５℃及び１０００Ｐａで真空乾燥して、完全にエタノールを除去した。還元ＣｏＱ１０の収量は５．３ｋｇであり、ＨＰＬＣにより測定したユビキノールの純度は図１に示すように９８．６４％であった。ＨＰＬＣ条件は以下の通りであった。
器具類：Ｗａｔｅｒｓ  ６００ポンプ、７１７オートサンプラー及び２９９６ＤＡＤ付き。
移動相：エタノール：メタノール＝２５：７５。
ＵＶ−検出：２１０ｎｍ。
カラム：シンメトリーＲＰ−１Ｃ１８（ｗａｔｅｒｓ）３．９ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ。
流速：１．０ｍｌ／分。
温度：２５℃。
注入容積：０．５μｌ。
【実施例２】
【００８８】
還元型５０％を含むＱＨ１０の製造
実施例１のＱＨ１０を出発物質として採用し、次いでエタノール−水系から酸化型ＣｏＱ１０で再結晶した。還元型５０％のＱＨ１０を製造した。
【００８９】
ガラス反応器に、４１．３Ｌの無水エタノールを添加し、次いで３．０６ｋｇの還元型ＣｏＱ１０（実施例１由来）及び２．２４ｋｇの酸化型ＣｏＱ１０をこの反応器中で混合した。混合物を４５℃に加熱して、ＣｏＱ１０を完全に溶解させた。反応混合物を２０分間平衡に保持し、次いで純水２．０６ｋｇをゆっくりと攪拌下、１時間以内で添加した。この反応混合物を３時間以内で２０℃に下げ、２０℃で２時間保持し、次いで１時間以内に１５℃に下げ、１５℃で１時間保持した。ＣｏＱ１０結晶を溶液から分離した。１時間以内に濾過した後、フィルターケーキを４．１３Ｌの冷却９５％エタノールで洗浄した。このフィルターケーキを窒素雰囲気下、４時間乾燥し、次いで約２５℃及び１０００Ｐａで真空乾燥して、完全にエタノールを除去した。ＨＰＬＣにより測定し、５．１ｋｇのユビキノール５６．９％／ＣｏＱ１０  ４３．１％が図２に述べるように得られた。ＨＰＬＣ条件は実施例１で提供したものと同一であった。
【００９０】
安定性試験１
以下の実施例は、市販の還元ＣｏＱ１０と比較したときの、実施例１及び２のＱＨ１０粉末の優れた安定性を示す。
【００９１】
市販の還元ＣｏＱ１０粉末は周囲空気中で安定ではない。通常、空気に暴露すると材料が酸化して、重量ベースでＣｏＱ１０の還元型が２０％未満になってしまう。意外にも、本発明は周囲空気中でかなり安定であるＱＨ１０粉末を提供する。
【００９２】
以下に記載のように、実施例１のＱＨ１０粉末は少量のＤＨＬＡと痕跡量（０．２５重量％未満）のごま色素（メラニン）を含んでいた。以下の試験では、本発明のＱＨ１０粉末と、（ＤＨＬＡを除去することにより）ＤＨＬＡを含まないＱＨ１０とを比較した。
【００９３】
サンプル調製：
（１）実施例１のＱＨ１０粉末。ＤＨＬＡ含有量０．９％；
（２）ＤＬＨＡを含まない完全還元粉末。出発物質としての実施例１のＱＨ１０粉末、ＤＨＬＡをエタノールで再結晶により除去した。ＤＨＬＡは０．１重量％未満であった。
（３）ＤＨＬＡを含まない完全還元粉末。出発物質としての実施例２のＱＨ１０粉末、ＤＨＬＡはエタノールで再結晶により除去した。ＤＨＬＡは０．１重量％未満であった。
【００９４】
処理：
この三つのサンプルは、１５日間、周囲空気に暴露した容器内に保持し、次いでＣｏＱ１０の還元型の残存比をＨＰＬＣで測定した。ＨＰＬＣ条件は実施例１と同一であった。
【００９５】
【表２】
2011057674.tif 000008
【００９６】
安定性試験２
この実施例は、アントシアニンのＱ１０に対する優れた還元能力を示した。
【００９７】
処理：
１００ｍｇの酸化型コエンザイムＱ１０を５００ｍｇ／１０００ｍｇコケモモ抽出物（Ｏｍｙａ−Ｐｅｒａｌｔａ  ＧｍｂＨ；ロット番号：ＢＢ０８２３−１、約３６％アントシアニン含有）と混合し、次いで無水エタノール５０ｍｌを添加した。この反応混合物を約３０分間超音波処理し、次いで反応器を封止し、周囲条件で５日間貯蔵した。
還元コエンザイムＱ１０を実施例１に記載の通りＨＰＬＣ分析により測定した。
【００９８】
【表３】
2011057674.tif 000009
【００９９】
安定性試験３
この実施例は、アントシアニンによるＱＨ−１０（還元ｃｏＱ１０）の優れた安定性を示した。
【０１００】
処理：
コエンザイムＱ１０の還元型５０ｍｇ（Ｑ１０の還元型９７％純度）を５０ｍｇの保護剤と混合し、次いで５０ｍｌの無水エタノールを添加した。この反応混合物を約３０分間超音波処理し、次いで反応器を封止し、周囲条件で１６時間貯蔵した。還元コエンザイムＱ１０を実施例１に記載の通りＨＰＬＣ分析により測定した。
【０１０１】
保護剤：
コケモモ抽出物（Ｏｍｙａ−Ｐｅｒａｌｔａ  ＧｍｂＨ；ロット番号：ＢＢ０８２３−１、約３６％アントシアニン含有）。
【０１０２】
クロフサスグリ抽出物（Ｏｍｙａ−Ｐｅｒａｌｔａ  ＧｍｂＨ；ロット番号：ＢＣ６００６、約３６％アントシアニン含有）。
【０１０３】
【表４】
2011057674.tif 000010
【０１０４】
還元ごま（メラニン）の実施例
水酸化ナトリウム５ｇを５００ｍｌの脱イオン水に溶解し、次いで１００ｇの粉末化黒ごま種子に添加した。この混合物を攪拌し、６０℃に加熱した。反応混合物を６０℃に３時間保持し、次いで室温に冷却した。黒い混合物を濾過し、フィルターケーキを１００ｍｌの脱イオン水で洗浄した。濾液と濯ぎ溶液とを酸水溶液（ｐＨ約１）で処理した。溶液を２５℃の温度で１０分間超音波処理した。反応温度を２５以下に保持しながら、水素化ホウ素カリウムをゆっくりと添加した。ガスの発生が停止するまで、この混合物を約２５分間置いておいた。水素化ホウ素カリウムは、ＤＨＬＡなどの他の還元剤で置き換えることができる。水素化ホウ素カリウムは水洗により除去することができる。ＤＨＬＡは生成物をエタノールで洗浄することにより除去することができる。
【０１０５】
本発明を好ましい態様を参照して説明したが、当業者には本発明の趣旨及び範囲を逸脱することなく、形態及び細目を変えることができることは理解されよう。背景を含めた本明細書中で引用した全ての参考文献は、本明細書中、その全体が参照として含まれる。当業者には日常的実験を使用するだけで、本明細書中に具体的に記載された本発明の具体的な態様に対する多くの等価物を確かめることができるだろう。かかる等価物は以下の請求の範囲に含まれるものとする。
【図１】
2011057674.tif 000011
【図２】
2011057674.tif 000012