(57)【要約】      （修正有）【課題】メラニン産生が著しい亢進及び循環器系疾患や腎疾患に関与するエンドセリン−１ｍＲＮＡの発現を抑制する天然抽出物を提供。【解決手段】バラ科植物のノイバラの成熟果実を乾燥させたエイジツの抽出物、シソ科に属するワイルドタイムの抽出物及びアブラナ科に属するオランダガラシの抽出物から選ばれる１種又は2種以上を有効成分として含有せしめるエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤および、エンドセリン−１ｍＲＮＡの発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有することを特徴とするエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
シミ、ソバカス、日焼け後の皮膚色素沈着症等は、皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）が活性化することにより、メラニンの産生が著しく亢進した結果として生じるものであり、中高年齢層における肌の悩みの一つになっている。
【０００３】
従来の美白剤開発は、メラニン生成の律速酵素であるチロシナーゼに注力して進められてきたが、近年、紫外線ＵＶ−Ｂ照射後に表皮ケラチノサイトから産生され、メラノサイトを活性化するサイトカインとして、α−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、一酸化窒素（ＮＯ）等が知られており、これらが関与する情報伝達系を遮断することによりメラニンの産生を抑制して美白効果を導く各種作用剤の開発が盛んに行われてきている。
【０００４】
また、循環器系疾患（例えば、心筋梗塞、高血圧、虚血性心疾患等）や腎疾患（例えば、急性腎不全等）の患者において、血中エンドセリン−１濃度が上昇していることが知られているため、エンドセリン−１の過剰分泌を抑制すること、すなわちエンドセリン−１ｍＲＮＡの発現上昇を抑制することによって、これらの疾患の予防・治療効果が期待できると考えられる。
【０００５】
このような考えに基づき、エンドセリン−１のメラノサイトへの作用を阻害する生薬としては、カミツレ抽出物、アルテア抽出物（非特許文献１参照）等が知られており、表皮ケラチノサイトからのエンドセリン−１産生を抑制する生薬としては、ジユ抽出物（非特許文献１参照）、β−グリチルレチン酸ステアリル（特許文献１参照）等が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００４−３０００４８号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】「フレグランスジャーナル」，2000年，Vol.28，No.9，p.65-71
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、安全性の高い天然物の中からエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題を解決するため、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とするエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明について説明する。本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上を有効成分として含有する。
【００１２】
ここで、本発明において「抽出物」には、上記植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１３】
本発明において使用する抽出原料は、エイジツ、ワイルドタイム及びオランダガラシである。２種以上の植物を抽出原料として用いる場合、上記植物を任意に組み合わせて使用することができる。
【００１４】
エイジツ（学名：Ｒｏｓａ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）は、バラ科植物のノイバラの成熟果実を乾燥させたもののことをいう。ノイバラは、北海道西南部から九州、朝鮮半島に分布する落葉の低木であって、ノイバラの成熟果実の乾燥物であるエイジツは、これらの地域から容易に入手することができる。
【００１５】
ワイルドタイム（学名：Ｔｈｙｍｕｓ  ｓｅｒｐｈｙｌｌｕｍ  別名：ヨウシュイブキジャコウソウ）は、シソ科に属する植物でヨーロッパから北西アジアを原産とし、広い地域で生育しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば、葉、茎、花、地上部又はこれらの混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部である。
【００１６】
オランダガラシ（学名：Ｎａｓｔｕｒｔｉｕｍ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）は、アブラナ科に属し、サラダ等に利用されている。オランダガラシはヨーロッパから中央アジア原産で、日本でも広く自生しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、例えば、葉、茎、花、根、地上部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは葉及び地上部である。
【００１７】
上記抽出原料からの抽出物に含有されるエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を有する物質の詳細は不明であるが、天然物の抽出に一般に使用されている抽出方法によって、上記抽出原料からこれらの作用を有する抽出物を得ることができる。
【００１８】
例えば、上記抽出原料を必要に応じて乾燥した後、そのまま又は粗砕機を使用して粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を使用して行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、上記抽出原料の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１９】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００２０】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２１】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００２２】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００２３】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００２４】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでもグルタチオン産生促進剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００２５】
エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料等に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
【００２６】
以上のようにして得られるエイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を有しているため、これらの作用を利用してエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤の有効成分として使用することができる。
【００２７】
また、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物は、そのエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を利用して、エンドセリン−１ｍＲＮＡの発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤（例えば、心筋梗塞、高血圧等の循環器系疾患の予防・治療剤等）の有効成分として用いることもできる。
【００２８】
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物のみからなるものでもよいし、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を製剤化したものでもよい。
【００２９】
エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を使用して、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を使用することができる。また、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物は、他の組成物（例えば、皮膚化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。
【００３０】
なお、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、必要に応じて、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を有する他の植物抽出物を配合して有効成分として使用することができる。
【００３１】
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤の投与方法としては、一般に経皮投与、経口投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００３２】
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物が有するエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を通じて、エンドセリン−１の産生を抑制し、シミ、ソバカス、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）等を予防・改善することができる。また、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物が有するエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を通じて、心筋梗塞、高血圧等の循環器系疾患を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、これらの用途以外にも、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００３３】
なお、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００３４】
以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の試験例に何ら制限
されるものではない。なお、本試験例において、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物は、エイジツ抽出液、ワイルドタイム抽出液及びオランダガラシ抽出液（全て丸善製薬社製）の凍結乾燥品を各植物の抽出物（試料）として用いた。
【００３５】
〔試験例１〕エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用試験
各植物抽出物について、以下のようにしてエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
【００３６】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（Ｎｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ，ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
【００３７】
ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試験試料（試料１，試料濃度は下記表を参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製，Ｃａｔ．ｎｏ．３１１−０２５０１）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００３８】
この総ＲＮＡを鋳型とし、エンドセリン−１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｓｍａｒｔ  Ｃｙｃｌｅｒ（Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、ＴａＫａＲａ  ＳＹＢＲ  ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ，ｃｏｄｅ  Ｎｏ．  ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。エンドセリン−１のｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制率（％）を算出した。
【００３９】
ｍＲＮＡ発現抑制率(％)＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
式中Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。結果を表１に示す。
【００４０】
〔表１〕
試料名            試料添加濃度    エンドセリン−１mRNA発現上昇抑制率
エイジツ抽出物          １μｇ／ｍＬ                ２６．１％
ワイルドタイム抽出物    １μｇ／ｍＬ                ５３．１％
１０μｇ／ｍＬ                ２６．１％
オランダガラシ抽出物    １μｇ／ｍＬ                １３．０％
１０μｇ／ｍＬ                ２５．３％              
【００４１】
表１に示すように、エイジツ抽出物、ワイルドタイム抽出物及びオランダガラシ抽出物は、優れたエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用をすることが確認された。
【００４２】
〔配合例１〕
下記組成の乳液を常法により製造した。
エイジツ抽出物                                            ０．０１ｇ
ホホバオイル                                              ４．０ｇ
プラセンタエキス                                          ０．１ｇ
オリーブオイル                                            ２．０ｇ
スクワラン                                                ２．０ｇ
セタノール                                                ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル                                ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０）            ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）      ２．０ｇ
グリチルレチン酸ステアリル                                ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール                                ３．０ｇ
ヒノキチオール                                            ０．１５ｇ
香料                                                      ０．０５ｇ
精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【００４３】
〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
ワイルドタイム抽出物                                      ２ｇ
グリセリン                                                ３ｇ
１，３−ブチレングリコール                                ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）      ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                                  ０．１５ｇ
クエン酸                                                  ０．１ｇ
クエン酸ソーダ                                            ０．１ｇ
香料                                                      ０．０５ｇ
精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【００４４】
〔配合例３〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
オランダガラシ抽出物                                      ０．０５ｇ
アロエエキス                                              ０．１ｇ
流動パラフィン                                            ５．０ｇ
サラシミツロウ                                            ４．０ｇ
スクワラン                                              １０．０ｇ
セタノール                                                ３．０ｇ
ラノリン                                                  ２．０ｇ
ステアリン酸                                              １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）      １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル                                ３．０ｇ
油溶性甘草エキス                                          ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール                                ６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                                  １．５ｇ
香料                                                      ０．１ｇ
精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【００４５】
〔配合例４〕
下記組成のパックを常法により製造した。
エイジツ抽出物                                            ０．０５ｇ
ヨクイニンエキス                                          ０．１ｇ
ポリビニルアルコール                                    １５ｇ
ポリエチレングリコール                                    ３ｇ
プロピレングリコール                                      ７ｇ
エタノール                                              １０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                                  ０．０５ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム                                ０．１ｇ
香料                                                      ０．０５ｇ
精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【産業上の利用可能性】
【００４６】
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制剤は、皮膚の老化、乾燥肌、しわ、肌
荒れ等の予防又は改善に大きく貢献できる。