(57)【要約】【課題】新生Ｂ細胞の増殖により特徴付けられる癌について、ヒト被験体を処置する方法を提供すること。【解決手段】この方法は、併用抗体治療を、この被験体に対して行う工程を包含し、ここで、有効量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントと併用して、この被験体に投与される。本発明はさらに、薬学的に受容可能なキャリア中にこれらの抗体の組み合わせを含む薬学的組成物を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書中に記載される発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、Ｂ細胞に関連する癌（特に、ＣＤ４０細胞表面抗原およびＣＤ２０細胞表面抗原を発現する、新生細胞を含む癌）のための併用抗体治療の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
白血病、リンパ腫、および骨髄腫は、米国のみで毎年１００，０００人より多い個人を襲っている。これらの病例の高い割合は、ＣＤ４０抗原およびＣＤ２０抗原を発現する新生Ｂ細胞の増殖により特徴付けられる。ＣＤ４０は、正常ヒトＢ細胞および新生ヒトＢ細胞の両方、樹状細胞、他の抗原提示細胞（ＡＰＣ）、内皮細胞、単球性の細胞ならびに上皮細胞の表面に存在する、５５ｋＤａの細胞表面抗原である。Ｂ細胞膜上のＣＤ４０へのＣＤ４０リガンドの結合は、Ｂ細胞の活性化およびＢ細胞の増殖を刺激する、陽性の同時刺激シグナルを提供し、高レベルの可溶性免疫グロブリンを分泌するプラスマ細胞へのＢ細胞の成熟を生じる。軽度のＢ細胞リンパ腫および重度のＢ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、ならびにホジキン病に罹った患者由来の形質転換細胞はＣＤ４０を発現する。ＣＤ４０の発現はまた、急性骨髄芽球性白血病の病例の３分の２、およびＡＩＤＳに関連するリンパ腫の５０％において検出されている。Ｂ細胞系統のいくつかの腫瘍由来の悪性Ｂ細胞は、高レベルのＣＤ４０を発現し、生存および増殖のためにＣＤ４０シグナル伝達に依存するようである。このことは、ＣＤ４０抗原を抗癌治療のための潜在的な標的にする。
【０００３】
ＣＤ２０は、Ｂ細胞分化の初期に発現され、Ｂ細胞の発達の間、その細胞表面に留まる。ＣＤ２０は、Ｂ細胞活性化に関連し、新生Ｂ細胞において、非常に高レベルで発現される。それゆえＣＤ２０は、臨床的に認められた治療上の標的である（例えば、非特許文献１を参照のこと）。ＣＤ２０を標的とする抗体（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））が、非ホジキンリンパ腫の処置に関して、米国食品薬品局により承認された（例えば、非特許文献２を参照のこと）。Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）は、軽度、中程度、および重度の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対する効果的な処置であることが示された（例えば、非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１を参照のこと）。
【０００４】
この作用の正確な機構は公知ではないが、証拠は、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）の抗リンパ腫効果が、ある程度、補体介在性細胞障害（ＣＭＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、細胞増殖の阻害に起因し、そして最終的にはアポトーシスの誘導を導くことを示唆する。しかしながら、何例かの患者は、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）による処置に耐性となる（非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４）。例えば、何例かの患者は、抗ＣＤ２０抗体治療後に、悪性Ｂ細胞におけるＣＤ２０の発現を失う（非特許文献１５）。その上、軽度のＮＨＬを有する患者の３０％〜５０％は、このモノクローナル抗体に対し臨床的な応答を示さない（非特許文献６；非特許文献７）。このモノクローナル抗体に対し耐性を発達させている患者のために、または、この抗体による初期治療に耐性であるＢ細胞リンパ腫を有する患者のために、治療的介入の代替形態が必要とされる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９５、５５：ｐ．２６２７
【非特許文献２】Ｂｏｙｅら、Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．、２００３、１４：ｐ．５２０
【非特許文献３】Ｍａｌｏｎｅｙら、Ｂｌｏｏｄ、１９９４、８４：ｐ．２４５７−２４６６
【非特許文献４】ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．、１９９８、１６：ｐ．２８２５−２８３３
【非特許文献５】Ｍａｌｏｎｅｙら、Ｂｌｏｏｄ、１９９７、９０：ｐ．２１８８−２１９５
【非特許文献６】Ｈａｉｎｓｗｏｒｔｈら、Ｂｌｏｏｄ、２０００、９５：ｐ．３０５２−３０５６
【非特許文献７】Ｃｏｌｏｍｂａｔら、Ｂｌｏｏｄ、２００１、９７：ｐ．１０１−１０６
【非特許文献８】Ｃｏｉｆｆｉｅｒら、Ｂｌｏｏｄ、１９９８、９２：ｐ．１９２７−１９３２
【非特許文献９】Ｆｏｒａｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．、２０００、１８：ｐ．３１７−３２４
【非特許文献１０】Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．、１９９７、２５：ｐ．７０５−７０８
【非特許文献１１】Ｖｏｓｅら、Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．、１９９９、１０：ｐ．５８ａ
【非特許文献１２】Ｗｉｔｚｉｇら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．、２００２、２０：ｐ．３２６２
【非特許文献１３】Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．、１９９８、１６：ｐ．２８２５
【非特許文献１４】Ｊａｚｉｒｅｈｉら、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．、２００３、２：ｐ．１１８３−１１９３
【非特許文献１５】Ｄａｖｉｓら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１９９９、５：ｐ．６１１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、抗体耐性を引き起こさず、そして抗体耐性が生じた場合に効果的な治療を提供し得る、Ｂ細胞に関連する癌に対する処置レジメンの必要性がある。したがって、単剤のＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）と比較して、より優れた抗腫瘍活性を有する併用抗体治療の発見は、骨髄腫、白血病、およびリンパ腫（特に、Ｂ細胞リンパ腫）を有する個体に対する癌治療の方法を大幅に改良し得る。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
新生Ｂ細胞の増殖により特徴付けられる癌について、被験体を処置する方法が提供される。この方法は、ＣＤ４０細胞表面抗原およびＣＤ２０細胞表面抗原を発現する新生Ｂ細胞に対する治療効果を有する、抗体の組み合わせを投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、相乗治療効果が生じ、これは、本発明を、単一のＢ細胞表面抗原を標的とする抗体治療に無反応性である癌を処置するのに、特に有用にする。
【０００８】
本発明の方法に従って、この方法を必要とする個体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）および抗ＣＤ２０抗体（またはその抗原結合フラグメント）の組み合わせを投与される。本発明の方法における使用に適切なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体としては、ヒト細胞の表面に発現されたヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合し得るモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが挙げられる。これらは、有意なアゴニスト活性を持たないが、ヒト細胞上のＣＤ４０抗原に結合されたとき（特に、新生ヒトＢ細胞上のＣＤ４０抗原に結合されたとき）、アンタゴニスト活性を示す。適切なモノクローナル抗ＣＤ４０抗体は、ヒト定常領域を有する；好ましくは、これらはまた、完全にヒト化されたフレームワーク領域または部分的にヒト化されたフレームワーク領域も有する；そして最も好ましくは、これらは完全なヒト抗体またはその抗原結合フラグメントである。このようなモノクローナル抗ＣＤ４０抗体の例は、組換え産生され得る、本明細書中でＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２と称される抗体；１３１．２Ｆ８．５．９（本明細書中で細胞株５．９と呼ばれる）および１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（本明細書中で細胞株１２．１２と呼ばれる）と称されるハイブリドーマ細胞株により産生されたモノクローナル抗体；配列番号６に示される配列、配列番号７に示される配列、配列番号８に示される配列、配列番号６と配列番号７とに示される両方の配列、および配列番号６と配列番号８とに示される両方の配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される両方の配列、および配列番号２と配列番号５とに示される両方の配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；配列番号１に示される配列、配列番号３に示される配列、および配列番号１と配列番号３とに示される両方の配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によりコードされるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；ならびに、ヒトＣＤ４０に特異的に結合する能力を保持するこれらのモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであり、これらは、有意なアゴニスト活性を持たないが、ヒト細胞上のＣＤ４０抗原に結合されたとき、アンタゴニスト活性を示す。このようなモノクローナル抗ＣＤ４０抗体の例としてはまた、エピトープに結合するモノクローナル抗体であり、このエピトープは、ハイブリドーマ細胞株１２．１２により産生されるモノクローナル抗体またはハイブリドーマ細胞株５．９により産生されるモノクローナル抗体に結合し得る、モノクローナル抗体；配列番号１０または配列番号１２に示されるアミノ酸配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；競合結合アッセイにおいて、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９と競合するモノクローナル抗体；ならびに、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２もしくはＣＨＩＲ−５．９の抗原結合フラグメントまたは前述のモノクローナル抗体のいずれかの抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体であり、ここで、このフラグメントはヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体が挙げられる。
【０００９】
本発明を実施するために適切な抗ＣＤ２０抗体としては、キメラモノクローナル抗体ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）またはリツキシマブ）；およびＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性を有する抗ＣＤ２０抗体（この抗ＣＤ２０抗体は、競合結合アッセイにおいてＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８抗体と競合するか、またはＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８抗体に結合し得るエピトープに結合する）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法は、ハイブリドーマ（例えば、５．９または１２．１２）により産生されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８）と併用して投与されたとき、特に効果的である。本発明はさらに、薬学的に受容可能なキャリア中のこのような抗体の組み合わせを含む薬学的組成物を含む。
【００１０】
本発明の方法は、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫（重度のリンパ腫、中程度のリンパ腫、および軽度のリンパ腫）、ホジキン病、急性リンパ芽球性白血病、骨髄腫、慢性リンパ性白血病、および骨髄芽球性白血病）を有する個体を処置するのに有用であり、そして、ＣＤ２０細胞表面抗原を標的とする単一の抗体治療による処置に無反応性である、Ｂ細胞に関連する癌の処置のために、特に有用である。例えば、本発明は以下を提供する。
（項目１）
新生Ｂ細胞増殖によって特徴付けられる癌についてヒト被験体を処置する方法であって、該方法は、該被験体に併用抗体治療を行う工程を包含し、該治療は、有効量の抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントと併用して投与する工程を包含し、該抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４０抗原に結合される場合に有意なアゴニスト活性を有さず、該抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：
ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２；
ｂ）ハイブリドーマ細胞株５．９または１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体；
ｃ）配列番号６に示される配列、配列番号７に示される配列、配列番号８に示される配列、配列番号６と配列番号７とに示される両方の配列、および配列番号６と配列番号８とに示される両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される両方の配列、および配列番号２と配列番号５とに示される両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｅ）配列番号１に示される配列、配列番号３に示される配列、および配列番号１と配列番号３とに示される両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｆ）ハイブリドーマ細胞株５．９または１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｇ）配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｈ）配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｉ）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｊ）前述の項目ａ）のモノクローナル抗体または前述の項目ｃ）〜ｉ）のいずれか１項のモノクローナル抗体であって、該抗体は組換え産生される、モノクローナル抗体；ならびに
ｋ）前述の項目ａ）〜ｊ）のいずれか１項のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体であって、該フラグメントは該ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体
からなる群より選択される、方法。
（項目２）
前記併用抗体治療が、相乗的な治療効果を提供する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記抗ＣＤ４０抗体の前記抗原結合フラグメントまたは前記抗ＣＤ２０抗体の前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメントおよび単鎖Ｆｖフラグメントからなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ヒト抗ＣＤ２０抗体、マウス抗ＣＤ２０抗体、キメラ抗ＣＤ２０抗体およびヒト化抗ＣＤ２０抗体からなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８であるか、またはＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性を有する抗ＣＤ２０抗体である、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記抗ＣＤ４０抗体が、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２である、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記癌が、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、重度のＢ細胞リンパ腫、中程度のＢ細胞リンパ腫、軽度のＢ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、ホジキン病、プラスマ細胞腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性小型切れ込みリンパ腫、濾胞性大細胞リンパ腫、濾胞性混合小型切れ込みリンパ腫、びまん性小型切れ込み細胞性リンパ腫、びまん性小リンパ球性リンパ腫、前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫、びまん性混合細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫からなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントと、前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとが、連続投与される、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントと、前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとが、同時投与される、項目１に記載の方法。
（項目１０）
新生Ｂ細胞増殖によって特徴付けられ、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントによる処置に対して無反応性である癌についてヒト被験体を処置する方法であって、該方法は、該被験体に併用抗体治療を行う工程を包含し、ここで、該治療は、有効量の抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを該抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントと併用して投与する工程を包含し、該抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４０抗原に結合される場合に有意なアゴニスト活性を有さず、該抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：
ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２；
ｂ）ハイブリドーマ細胞株５．９または１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体；
ｃ）配列番号６に示される配列、配列番号７に示される配列、配列番号８に示される配列、配列番号６と配列番号７とに示される両方の配列、および配列番号６と配列番号８とに示される両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される両方の配列、および配列番号２と配列番号５とに示される両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｅ）配列番号１に示される配列、配列番号３に示される配列、および配列番号１と配列番号３とに示される両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｆ）ハイブリドーマ細胞株５．９または１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｇ）配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｈ）配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｉ）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｊ）前述の項目ａ）のモノクローナル抗体または前述の項目ｃ）〜ｉ）のいずれか１項のモノクローナル抗体であって、該抗体は組換え産生される、モノクローナル抗体；ならびに
ｋ）前述の項目ａ）〜ｊ）のいずれか１項のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体であって、該フラグメントは該ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体
からなる群より選択される、方法。
（項目１１）
前記併用抗体治療が、相乗的な治療効果を提供する、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記抗ＣＤ４０抗体の前記抗原結合フラグメントまたは前記抗ＣＤ２０抗体の前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメントおよび単鎖Ｆｖフラグメントからなる群より選択される、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ヒト抗ＣＤ２０抗体、マウス抗ＣＤ２０抗体、キメラ抗ＣＤ２０抗体およびヒト化抗ＣＤ２０抗体からなる群より選択される、項目１０に記載の方法。
（項目１４）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８であるか、またはＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性を有する抗ＣＤ２０抗体である、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記抗ＣＤ４０抗体が、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記癌が、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、重度のＢ細胞リンパ腫、中程度のＢ細胞リンパ腫、軽度のＢ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、ホジキン病、プラスマ細胞腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性小型切れ込みリンパ腫、濾胞性大細胞リンパ腫、濾胞性混合小型切れ込みリンパ腫、びまん性小型切れ込み細胞性リンパ腫、びまん性小リンパ球性リンパ腫、前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫、びまん性混合細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫からなる群より選択される、項目１０に記載の方法。
（項目１７）
前記抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントと、前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとが、連続投与される、項目１０に記載の方法。
（項目１８）
前記抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントと、前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとが、同時投与される、項目１０に記載の方法。
（項目１９）
新生Ｂ細胞を含む腫瘍の増殖を阻害するための方法であって、該方法は、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントと併用して有効量の抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと該細胞とを接触させる工程を包含し、該抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４０抗原に結合される場合に有意なアゴニスト活性を有さず、該抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下：
ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２；
ｂ）ハイブリドーマ細胞株５．９または１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体；
ｃ）配列番号６に示される配列、配列番号７に示される配列、配列番号８に示される配列、配列番号６と配列番号７とに示される両方の配列、および配列番号６と配列番号８とに示される両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される両方の配列、および配列番号２と配列番号５とに示される両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｅ）配列番号１に示される配列、配列番号３に示される配列、および配列番号１と配列番号３とに示される両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｆ）ハイブリドーマ細胞株５．９または１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｇ）配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｈ）配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｉ）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｊ）前述の項目ａ）のモノクローナル抗体または前述の項目ｃ）〜ｉ）のいずれか１項のモノクローナル抗体であって、該抗体は組換え産生される、モノクローナル抗体；ならびに
ｋ）前述の項目ａ）〜ｊ）のいずれか１項のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体であって、該フラグメントは該ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体
からなる群より選択される、方法。
（項目２０）
前記腫瘍の増殖が、相乗的に阻害される、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記抗ＣＤ４０抗体の前記抗原結合フラグメントまたは前記抗ＣＤ２０抗体の前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメントおよび単鎖Ｆｖフラグメントからなる群より選択される、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ヒト抗ＣＤ２０抗体、マウス抗ＣＤ２０抗体、キメラ抗ＣＤ２０抗体およびヒト化抗ＣＤ２０抗体からなる群より選択される、項目１９に記載の方法。
（項目２３）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８であるか、またはＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性を有する抗ＣＤ２０抗体である、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記抗ＣＤ４０抗体が、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記腫瘍が、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、重度のＢ細胞リンパ腫、中程度のＢ細胞リンパ腫、軽度のＢ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、ホジキン病、プラスマ細胞腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性小型切れ込みリンパ腫、濾胞性大細胞リンパ腫、濾胞性混合小型切れ込みリンパ腫、びまん性小型切れ込み細胞性リンパ腫、びまん性小リンパ球性リンパ腫、前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫、びまん性混合細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫からなる群より選択される癌に関連する、項目１９に記載の方法。
（項目２６）
前記癌が、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントによる処置に対して無反応性である、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８であるか、またはＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性を有する抗ＣＤ２０抗体である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記抗ＣＤ４０抗体が、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
新生Ｂ細胞増殖によって特徴付けられる癌についてヒト被験体を処置する方法であって、該方法は、該被験体に併用抗体治療を行う工程を包含し、該治療は、有効量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントと併用して投与する工程を包含し、該アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＣＤ４０抗原のドメイン２に特異的に結合し、ヒトＣＤ４０抗原のドメイン２に結合される場合に有意なアゴニスト活性を有さない、方法。
（項目３０）
前記併用抗体治療が、相乗的な治療効果を提供する、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体がヒト抗体である、項目２９に記載の方法。
（項目３２）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が組換え産生される、項目２９に記載の方法。
（項目３３）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、ハイブリドーマ細胞株５．９によって産生される抗体、およびハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生される抗体からなる群より選択される抗体の結合特異性を有する、項目２９に記載の方法。
（項目３４）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、特許受託番号ＰＴＡ−５５４２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生される抗体、および特許受託番号ＰＴＡ−５５４３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生される抗体からなる群より選択される、項目２９に記載の方法。
（項目３５）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９の結合特異性を有する、項目２９に記載の方法。
（項目３６）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０が、配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合する、項目２９に記載の方法。
（項目３７）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下：
ａ）配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される両方の配列、および配列番号２と配列番号５とに示される両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｂ）配列番号１に示される配列、配列番号３に示される配列、および配列番号１と配列番号３とに示される両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｃ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｅ）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｆ）前述の項目ａ）〜ｅ）のいずれか１項のモノクローナル抗体であって、該抗体が組換え産生される、モノクローナル抗体；ならびに
ｇ）ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体の抗原結合フラグメントまたは前述の項目ａ）〜ｆ）のいずれか１項のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体であって、該フラグメントは該ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体
からなる群より選択される、項目２９に記載の方法。
（項目３８）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の前記抗原結合フラグメントまたは前記抗ＣＤ２０抗体の前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメントおよび単鎖Ｆｖフラグメントからなる群より選択される、項目２９に記載の方法。
（項目３９）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ヒト抗ＣＤ２０抗体、マウス抗ＣＤ２０抗体、キメラ抗ＣＤ２０抗体およびヒト化抗ＣＤ２０抗体からなる群より選択される、項目２９に記載の方法。
（項目４０）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８であるか、またはＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性を有する抗ＣＤ２０抗体である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２である、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記癌が、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、重度のＢ細胞リンパ腫、中程度のＢ細胞リンパ腫、軽度のＢ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、ホジキン病、プラスマ細胞腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性小型切れ込みリンパ腫、濾胞性大細胞リンパ腫、濾胞性混合小型切れ込みリンパ腫、びまん性小型切れ込み細胞性リンパ腫、びまん性小リンパ球性リンパ腫、前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫、びまん性混合細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫からなる群より選択される、項目２９に記載の方法。
（項目４３）
前記癌が、前記抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントによる処置に対して無反応性である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８であるか、またはＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性を有する抗ＣＤ２０抗体である、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２である、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントと、前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとが、連続投与される、項目２９に記載の方法。
（項目４７）
前記抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントと、前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントとが、同時投与される、項目２９に記載の方法。
（項目４８）
新生Ｂ細胞を含む腫瘍の増殖を阻害するための方法であって、該方法は、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントと併用して有効量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと該細胞とを接触させる工程を包含し、該アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＣＤ４０抗原のドメイン２に特異的に結合し、ヒトＣＤ４０抗原のドメイン２に結合される場合に有意なアゴニスト活性を有さない、方法。
（項目４９）
前記腫瘍の増殖が相乗的に阻害される、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体がヒト抗体である、項目４８に記載の方法。
（項目５１）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が組換え産生される、項目４８に記載の方法。
（項目５２）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、ハイブリドーマ細胞株５．９によって産生される抗体、およびハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生される抗体からなる群より選択される抗体の結合特異性を有する、項目４８に記載の方法。
（項目５３）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、特許受託番号ＰＴＡ−５５４２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生される抗体、および特許受託番号ＰＴＡ−５５４３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生される抗体からなる群より選択される、項目４８に記載の方法。
（項目５４）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９の結合特異性を有する、項目４８に記載の方法。
（項目５５）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合する、項目４８に記載の方法。
（項目５６）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下：
ａ）配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される両方の配列、および配列番号２と配列番号５とに示される両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｂ）配列番号１に示される配列、配列番号３に示される配列、および配列番号１と配列番号３とに示される両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｃ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号１０または配列番号１２に示されるヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｅ）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｆ）前述の項目ａ）〜ｅ）のいずれか１項のモノクローナル抗体であって、該抗体が組換え産生される、モノクローナル抗体；ならびに
ｇ）ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体の抗原結合フラグメントまたは前述の項目ａ）〜ｆ）のいずれか１項のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体であって、該フラグメントは該ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体
からなる群より選択される、項目４８に記載の方法。
（項目５７）
前記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の前記抗原結合フラグメントまたは前記抗ＣＤ２０抗体の前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメントおよび単鎖Ｆｖフラグメントからなる群より選択される、項目４８に記載の方法。
（項目５８）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ヒト抗ＣＤ２０抗体、マウス抗ＣＤ２０抗体、キメラ抗ＣＤ２０抗体およびヒト化抗ＣＤ２０抗体からなる群より選択される、項目４８に記載の方法。
（項目５９）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８であるか、またはＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性を有する抗ＣＤ２０抗体である、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記抗ＣＤ４０抗体が、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２である、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
前記癌が、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、重度のＢ細胞リンパ腫、中程度のＢ細胞リンパ腫、軽度のＢ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、ホジキン病、プラスマ細胞腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性小型切れ込みリンパ腫、濾胞性大細胞リンパ腫、濾胞性混合小型切れ込みリンパ腫、びまん性小型切れ込み細胞性リンパ腫、びまん性小リンパ球性リンパ腫、前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫、びまん性混合細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫からなる群より選択される、項目４８に記載の方法。
（項目６２）
前記癌が、前記抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントによる処置に対して無反応性である、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
前記抗ＣＤ２０抗体が、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８であるか、またはＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性を有する抗ＣＤ２０抗体である、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記抗ＣＤ４０抗体が、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２である、項目６３に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、マウスＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）耐性腫瘍モデルにおける腫瘍容積に対する、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２およびｍＡｂ  ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の複合投与の経時的な効果を示す。
【図２Ａ】図２は、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖および重鎖についてのアミノ酸配列を示す。軽鎖のリーダー領域（配列番号２の残基１〜２０）、可変領域（配列番号２の残基２１〜１３２）および定常領域（配列番号２の残基１３３〜２３９）は図２Ａに示される。重鎖のリーダー領域（配列番号４の残基１〜１９）、可変領域（配列番号４の残基２０〜１３９）および定常領域（配列番号４の残基１４０〜４６９）は図２Ｂに示される。図２Ｂに示されるｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖についての代替定常領域は、配列番号４の位置１５３におけるアラニン残基に対するセリン残基の置換を反映する。このｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖の改変体についての完全配列は、配列番号５に示される。
【図２Ｂ】図２は、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖および重鎖についてのアミノ酸配列を示す。軽鎖のリーダー領域（配列番号２の残基１〜２０）、可変領域（配列番号２の残基２１〜１３２）および定常領域（配列番号２の残基１３３〜２３９）は図２Ａに示される。重鎖のリーダー領域（配列番号４の残基１〜１９）、可変領域（配列番号４の残基２０〜１３９）および定常領域（配列番号４の残基１４０〜４６９）は図２Ｂに示される。図２Ｂに示されるｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖についての代替定常領域は、配列番号４の位置１５３におけるアラニン残基に対するセリン残基の置換を反映する。このｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖の改変体についての完全配列は、配列番号５に示される。
【図３Ａ】図３は、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２に関する軽鎖についてのコード配列（図３Ａ；配列番号１）および重鎖についてのコード配列（図３Ｂ；配列番号３）を示す。
【図３Ｂ】図３は、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２に関する軽鎖についてのコード配列（図３Ａ；配列番号１）および重鎖についてのコード配列（図３Ｂ；配列番号３）を示す。
【図４Ａ】図４は、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の軽鎖および重鎖についてのアミノ酸配列を示す。軽鎖のリーダー領域（配列番号６の残基１〜２０）、可変領域（配列番号６の残基２１〜１３２）および定常領域（配列番号６の残基１３３〜２３９）は図４Ａに示される。重鎖のリーダー領域（配列番号７の残基１〜１９）、可変領域（配列番号７の残基２０〜１４４）および定常領域（配列番号７の残基１４５〜４７４）は図４Ｂに示される。図４Ｂに示されるｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖についての代替定常領域は、配列番号７の位置１５８におけるアラニン残基に対するセリン残基の置換を反映する。このｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖の改変体についての完全配列は、配列番号８に示される。
【図４Ｂ】図４は、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の軽鎖および重鎖についてのアミノ酸配列を示す。軽鎖のリーダー領域（配列番号６の残基１〜２０）、可変領域（配列番号６の残基２１〜１３２）および定常領域（配列番号６の残基１３３〜２３９）は図４Ａに示される。重鎖のリーダー領域（配列番号７の残基１〜１９）、可変領域（配列番号７の残基２０〜１４４）および定常領域（配列番号７の残基１４５〜４７４）は図４Ｂに示される。図４Ｂに示されるｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖についての代替定常領域は、配列番号７の位置１５８におけるアラニン残基に対するセリン残基の置換を反映する。このｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖の改変体についての完全配列は、配列番号８に示される。
【図５Ａ】図５は、ヒトＣＤ４０の短いアイソフォームについてのコード配列（図５Ａ；配列番号９）（アミノ酸配列は図５Ｂ；配列番号１０に示される）、およびヒトＣＤ４０の長いアイソフォームについてのコード配列（図５Ｃ；配列番号１１）（アミノ酸配列は図５Ｄに示される）を示す。
【図５Ｂ】図５は、ヒトＣＤ４０の短いアイソフォームについてのコード配列（図５Ａ；配列番号９）（アミノ酸配列は図５Ｂ；配列番号１０に示される）、およびヒトＣＤ４０の長いアイソフォームについてのコード配列（図５Ｃ；配列番号１１）（アミノ酸配列は図５Ｄに示される）を示す。
【図５Ｃ】図５は、ヒトＣＤ４０の短いアイソフォームについてのコード配列（図５Ａ；配列番号９）（アミノ酸配列は図５Ｂ；配列番号１０に示される）、およびヒトＣＤ４０の長いアイソフォームについてのコード配列（図５Ｃ；配列番号１１）（アミノ酸配列は図５Ｄに示される）を示す。
【図５Ｄ】図５は、ヒトＣＤ４０の短いアイソフォームについてのコード配列（図５Ａ；配列番号９）（アミノ酸配列は図５Ｂ；配列番号１０に示される）、およびヒトＣＤ４０の長いアイソフォームについてのコード配列（図５Ｃ；配列番号１１）（アミノ酸配列は図５Ｄに示される）を示す。
【図６】図６は、示差走査熱分析（ＤＳＣ）によって測定された、様々なｐＨの処方物におけるＣＨＩＲ−１２．１２の熱融点を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（発明の詳細な説明）
「腫瘍」とは、本明細書中で使用される場合、悪性であろうと良性であろうと、すべての新生物性の細胞成長および細胞増殖、ならびに前癌性および癌性の細胞および組織をいう。「新生物（性）の」とは、本明細書中で使用される場合、悪性であろうと良性であろうと、異常な組織成長を生じる無調節もしくは無秩序な細胞成長の任意の形態をいう。
【００１３】
用語「癌」および「癌性の」は、代表的に、制御されていない細胞の増殖により特徴付けられる、哺乳動物における生理状態を指すか、または記載する。癌の例としては、リンパ腫および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｂ細胞に関連する癌」により、異常に制御された細胞増殖、または制御されていない細胞増殖がＢ細胞に関連する任意の型の癌が意図される。
【００１４】
癌の文脈において、「無反応性」によって、特定の癌が特定の治療因子を用いる治療に対して耐性であるかまたは非反応性であることが意図される。癌は、特定の治療因子を用いる処置の開始から（すなわち、その治療因子への最初の曝露に対して非反応性である）か、その治療剤への耐性を発達させる結果としてのいずれかで、その治療因子を用いる第１の処置期間にわたってかまたはその治療因子を用いるその後の処置期間の間、その特定の治療因子を用いる治療に対して無反応性であり得る。
【００１５】
「抗体」および「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、同一の構造的特徴を有する糖タンパク質である。この用語は、同意語として用いられる。いくつかの事例において、免疫グロブリンの抗原特異性が公知であり得る。
【００１６】
用語「抗体」は、最も広範な意味で使用され、完全に組み立てられた抗体、抗原に結合し得る抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、抗体キメラ、ハイブリッド抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体など）および上記のものを含む組換えペプチドを包含する。
【００１７】
用語「モノクローナル抗体」および「ｍＡｂ」は、本明細書中で使用される場合、抗体の実質的に均質な集団（すなわち、その集団を構成する個々の抗体が、微量に存在し得る可能性のある天然に存在する変異を除いて同一である）から得られる抗体をいう。本明細書中で使用される場合、「抗ＣＤ４０抗体」は、  ＣＤ４０細胞表面抗原を特異的に認識する任意の抗体（ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体、およびそれらのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖおよび元の抗ＣＤ４０抗体の抗原結合機能を保持する他のフラグメント）が挙げられる）を包含する。本発明の方法を行うために特に目的となるのは、本明細書中で以下に記載されるＣＨＩＲ−５．９ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体によって示される結合特性を有する抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【００１８】
本明細書において使用される場合、「抗ＣＤ２０抗体」は、ＣＤ２０細胞表面抗原を特異的に認識する、いかなる抗体（例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体、および、もとの抗ＣＤ２０抗体の抗原結合機能を保持する、これらの抗体のフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖおよび他のフラグメント））も包含する。本明細書の下記のＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８モノクローナル抗体により示される結合特性を有する、抗ＣＤ２０抗体またはこの抗体の抗原結合フラグメントは、本発明の方法に対して特定の目的のものである。
【００１９】
「天然の抗体」および「天然の免疫グロブリン」は、通常は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と２つの同一の重（Ｈ）鎖とからなる、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質である。各々の軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に連結されるが、ジスルフィド連結の数は様々な免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で変わる。各々の重鎖および軽鎖はまた、規則的に間隔の空いた鎖内ジスルフィド架橋を有する。各々の重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、次にいくつかの定常ドメインが続く。各々の軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、その他端に定常ドメインを有する；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第一の定常ドメインと並置され、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと並置される。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可ドメインと重鎖可変ドメインとの間で界面を形成すると考えられる。
【００２０】
用語「可変」とは、可変ドメインの特定の部分が抗体間で広範囲にわたって配列が異なる事実をいう。可変領域は、抗原結合特異性を与える。しかし、その可変性は、抗体の可変ドメインの全体にわたって均一に分布しない。可変性は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方で相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中する。可変ドメインのうちより高度に保存される部分は、フレームワーク（ＦＲ）領域と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインは、各々、４つのＦＲ領域を含み、これらの領域は、大部分はβプリーツシート配置をとり、βプリーツシート構造に結合する（場合によってはβシート構造の一部分を形成する）ループを形成する３つのＣＤＲによって結合される。各々の鎖におけるＣＤＲは、他の鎖由来のＣＤＲと共にＦＲ領域によって近接して一緒に保持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら（１９９１）ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２，Ｖｏｌ．Ｉ，６４７−６６９頁を参照のこと）。
【００２１】
定常ドメインは、抗原に対する抗体の結合に直接的に関連しないが、種々のエフェクター機能（例えば、Ｆｃレセプター結合、抗体依存性の細胞の毒性における抗体の関与、補体依存性細胞毒性の惹起、および肥満細胞脱顆粒）を示す。
【００２２】
用語「超可変領域」とは、本明細書中で使用される場合、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」に由来するアミノ酸残基（すなわち、軽鎖可変ドメインにおける残基２４〜３４（Ｌ１）、残基５０〜５６（Ｌ２）および残基８９〜９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける残基３１〜３５（Ｈ１）、残基５０〜６５（Ｈ２）および残基９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ））ならびに／あるいは「超可変ループ」に由来するアミノ酸残基（すなわち、軽鎖可変ドメインにおける残基２６〜３２（Ｌ１）、残基５０〜５２（Ｌ２）および残基９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける残基２６〜３２（Ｈ１）、残基５３〜５５（Ｈ２）および残基９６〜１０１（Ｈ３）；ＣｌｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書中で判断されるように、超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
【００２３】
「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の一部、好ましくは、インタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ダイアボディ；直鎖状抗体（Ｚａｐａｔａら（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２）；単鎖抗体分子；ならびに抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化により、各々単一の抗原結合部位を有する２つの同一の抗原結合フラグメント（「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる）、および残りの「Ｆｃ」フラグメント（この名称は、容易に結晶化する能力を反映する）が生成される。ペプシン処理により、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントが得られ、これは、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原と架橋結合し得る。
【００２４】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。この領域は、固く非共有結合した１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとのダイマーからなる。この構成において、各々の可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬダイマーの表面における抗原結合部位を規定する。合わせて、６つのＣＤＲが抗体に対する抗原結合特異性を与える。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でも、抗原を認識し結合する能力を有するが、完全な結合部位よりは親和性は低い。
【００２５】
Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第一の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂフラグメントは、抗体のヒンジ領域由来の１以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端において、いくつかの残基が付加されている点でＦａｂ’フラグメントと異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書中で、定常ドメインのシステイン残基が遊離のチオール基を有するＦａｂ’についての呼称である。Ｆａｂ’フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの重鎖ジスルフィド結合を還元することによって生成される。抗体フラグメントの他の化学結合もまた公知である。
【００２６】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明らかに異なる型（カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる）の一方に割り当てられ得る。
【００２７】
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンが異なるクラスに割り当てられ得る。ヒト免疫グロブリンの５つの主要なクラスが存在する：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、そしてこれらの中にはさらにサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＡ２）に分けられるものがある。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元配置は周知である。異なるアイソタイプは異なるエフェクター機能を有する。例えば、ヒトＩｇＧ１アイソタイプおよびＩｇＧ３アイソタイプは、ＡＤＣＣ（抗体依存性の細胞媒介性細胞毒性）活性を有する。
【００２８】
語句「標識」とは、本明細書中で使用される場合、「標識された」抗体を生成するように抗体に直接的または間接的に結合される検出可能な化合物または組成物をいう。標識は、それ自体で検出可能である（例えば、放射性同位体標識もしくは蛍光標識）か、または酵素標識の場合には、検出可能な基質化合物もしくは組成物の化学的変化を触媒し得る。検出可能な標識として役立つ放射性核種としては、例えば、Ｉ−１３１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｙ−９０、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８６、Ａｔ−２１１、Ｃｕ−６７、Ｂｉ−２１２およびＰｄ−１０９が挙げられる。標識はまた、毒素のように検出不可能な実体であり得る。
【００２９】
用語「アンタゴニスト」は、最も広い意味で使用され、本明細書中に開示される天然の標的の生物学的活性またはその転写もしくは翻訳を、部分的もしくは完全にブロック、阻害、または中和する任意の分子を包含する。
【００３０】
「キャリア」は、本明細書中で使用される場合、使用される投薬量および濃度でそのキャリアに曝露される細胞または哺乳動物に対して非毒性である、薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤または安定剤を包含する。多くの場合、生理学的に受容可能なキャリアは、ｐＨ緩衝化水溶液である。生理学的に受容可能なキャリアの例としては、緩衝液（例えば、リン酸、クエン酸、コハク酸および他の有機酸）；抗酸化物質（アルコルビン酸が挙げられる）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；単糖類、二糖類および他の炭水化物（グルコース、マンノースまたはデキストリンが挙げられる）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；塩を形成する対イオン（例えば、ナトリウム）；ならびに／あるいは非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰｌｕｒｏｎｉｃｓ）が挙げられる。１以上のさらなる治療剤と「併用して」投与することは、同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ））投与および任意の順序での連続投与を包含する。
【００３１】
「宿主細胞」とは、本明細書中で使用される場合、組換えベクターまたは他の転移ポリヌクレオチドのためのレシピエントとして使用され得るかもしくは使用される単細胞性実体として培養された微生物または真核細胞もしくは細胞株をいい、トランスフェクトされた元の細胞の子孫を包含する。単一の細胞の子孫は、天然の変異、偶発的な変異または意図的な変異に起因して、形態またはゲノムもしくは全ＤＮＡ補体において元の親と必ずしも完全に同一でなくてもよいことが理解される。
【００３２】
「ヒト効果細胞」は、１以上のＦｃＲを発現し、かつエフェクター機能を果たす白血球である。好ましくは、その細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、抗原依存性の細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）のエフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、好酸球および好中球が挙げられ、ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。ＡＤＣＣ活性を有する抗体は、代表的には、抗体のＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ３アイソタイプである。ＩｇＧ１抗体およびＩｇＧ３抗体を単離することに加えて、このようなＡＤＣＣを媒介する抗体は、非ＡＤＣＣ抗体由来の可変領域またはＩｇＧ１アイソタイプもしくはＩｇＧ３アイソタイプ定常領域に対する可変領域フラグメントを操作することによって作製され得ることに注意すること。
【００３３】
用語「Ｆｃレセプター」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを表すために使用される。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するもの（γレセプター）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプター（これらのレセプターの対立遺伝子改変体および代替的スプライス形態を含む）が挙げられる。ＦｃγＲＩＩレセプターとしてはＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）が挙げられ、これらは、類似のアミノ酸配列を有し、その細胞質ドメインが主に異なる。活性化レセプターＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫レセプターチロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害レセプターＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫レセプターチロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。Ｄａｅｒｏｎ（１９９７）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４を参照のこと。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４；およびｄｅ  Ｈａａｓら（１９９５）Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−３４１で概説される。他のＦｃＲ（将来同定されるものを含む）が、本明細書中の用語「ＦｃＲ」に包含される。この用語はまた、新生児レセプターであるＦｃＲｎを包含し、これは、母性ＩｇＧの胎児への転移を担う（Ｇｕｙｅｒら（１９７６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７およびＫｉｍら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９）。
【００３４】
用語「相乗効果」は、各それぞれの活性因子の個々の効果の合計を上回る、２以上の活性因子の組み合わされた効果を記載するために用いられる。従って、その２以上の活性因子の組み合わされた効果が活性またはプロセス（例えば、腫瘍増殖）に関して「相乗的阻害」を生じる場合、その活性またはプロセスの阻害が、各それぞれの活性因子の阻害効果の合計を上回ることが意図される。用語「相乗的治療効果」とは、２以上の治療の組み合わせを用いて観察される治療効果をいい、（多数のパラメータのうちのいずれかによって測定されるように）その治療効果は、それぞれの個々の治療を用いて観察される個々の治療効果の合計を上回る。
【００３５】
用語「治療上有効な用量」、「治療上有効な量」または「有効量」は、一定量の抗ＣＤ２０抗体（またはその抗原結合フラグメント）と併用されて投与される場合、新生Ｂ細胞を含む癌についての被験体の処置に関して、おおよそ陽性の治療応答をもたらす、一定量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）を意味することが意図される。
【００３６】
（抗ＣＤ４０抗体および抗ＣＤ２０抗体による併用治療）
本発明は、新生Ｂ細胞の増殖により特徴付けられる癌を有する被験体を処置するための方法に関する。そのような新生Ｂ細胞としては、リンパ腫（軽度のＢ細胞リンパ腫、中程度のＢ細胞リンパ腫、重度のＢ細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）誘発リンパ腫、およびＡＩＤＳ関連リンパ腫、ならびにＢ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄腫、慢性リンパ性白血病、および急性骨髄芽球性白血病など）由来の新生Ｂ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
本発明の方法は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントとによる併用抗体治療を包含する。本発明の方法は、ＣＤ４０細胞表面抗原およびＣＤ２０細胞表面抗原の両方を発現する新生Ｂ細胞を含む癌（例えば、Ｂ細胞リンパ腫）の処置に、特に有用である。ＣＤ４０抗原およびＣＤ２０抗原を発現し得るリンパ腫の例としては、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、ホジキン病、びまん性小リンパ球性リンパ腫（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｓｍａｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、前リンパ球性白血病（ｐｒｏｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫症、免疫芽球性リンパ腫、およびＡＩＤＳ関連リンパ腫などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
したがって、本発明の方法は、異常な、制御不可能なＢ細胞の増殖または蓄積に関する非ホジキンリンパ腫の処置における使用を見出す。本発明の目的に関して、このようなリンパ腫は、Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ分類スキームにしたがって呼ばれ、低悪性度、中悪性度、および高悪性度として分類されるＢ細胞リンパ腫である（「Ｔｈｅ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｊｅｃｔ」Ｃａｎｃｅｒ  ４９（１９８２）：２１１２−２１３５を参照のこと）。したがって、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫としては、小リンパ球性の、濾胞性小型切れ込みリンパ腫（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｓｍａｌｌ  ｃｌｅａｖｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、および濾胞性混合小型切れ込みリンパ腫（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｍｉｘｅｄ  ｓｍａｌｌ  ｃｌｅａｖｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）と濾胞性大細胞リンパ腫との混合型リンパ腫が挙げられ；中悪性度リンパ腫としては、濾胞性大細胞リンパ腫、びまん性小型切れ込み細胞性リンパ腫（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｓｍａｌｌ  ｃｌｅａｖｅｄ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、びまん性小型切れ込み細胞性リンパ腫とびまん性大細胞リンパ腫との混合型リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫が挙げられ；そして高悪性度リンパ腫としては、バーキット型および非バーキット型の、大細胞免疫芽球性リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫および小型非切れ込み細胞性リンパ腫が挙げられる。
【００３９】
本発明の方法が、Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ａｎｄ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＲＥＡＬ）システムにしたがって分類されるＢ細胞リンパ腫の治療的処置に有用であることが、認識される。このようなＢ細胞リンパ腫としては、前駆Ｂ細胞新生物として分類されるリンパ腫（例えば、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫；末梢Ｂ細胞新生物（慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞様リンパ腫／免疫細胞腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、小胞中心リンパ腫（濾胞性）（びまん性小細胞リンパ腫、びまん性の小細胞型と大細胞型との混合型、およびびまん性大細胞型リンパ腫が挙げられる）、辺縁層Ｂ細胞リンパ腫（結節外性、結節性、および脾臓型が挙げられる）、ヘアリーセル白血病、プラスマ細胞腫／骨髄腫、原発性縦隔リンパ腫の（胸腺の）サブタイプのびまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、およびバーキット様の高悪性度Ｂ細胞リンパ腫が挙げられる）；急性白血病；急性リンパ性白血病；骨髄芽球性白血病；急性骨髄性白血病；前骨髄球性白血病；骨髄単球性白血病；単球性白血病；赤白血病；顆粒球性白血病（慢性骨髄性白血病）；慢性リンパ性白血病；真性赤血球増加症；多発性骨髄腫；ヴァルデンストレームマクログロブリン血症；Ｈ鎖病；および分類できない低悪性度Ｂ細胞リンパ腫または高悪性度Ｂ細胞リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４０】
特に、本発明の方法は、第一線の腫瘍治療上の処置に無反応性である（すなわち、耐性であるか、または耐性となった）Ｂ細胞リンパ腫（例えば、上に列挙されたもの）を処置するのに有用である。用語「腫瘍治療の」は、癌に対する治療（例えば、化学療法、手術、放射線治療、単剤の抗癌抗体治療、およびこれらの併用）を意味することを意図される。
【００４１】
「処置」は、本明細書中で、被験体に対するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体もしくはその抗原結合フラグメントの適用または投与、あるいは被験体由来の単離された組織または細胞株に対するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体もしくはその抗原結合フラグメントの適用または投与（この被験体またはこの被験体由来の単離した組織もしくは細胞株に対する抗ＣＤ２０抗体もしくはその抗原結合フラグメントの適用あるいは投与と組み合わせた）として定義され、この被験体は、疾患、疾患の症状、または疾患についての素因を有し、ここでこの目的は、その疾患、その疾患の症状、もしくはその疾患についての素因を、治癒する（ｃｕｒｅ）か、治癒する（ｈｅａｌ）か、緩和するか、軽減するか、変化させるか、治療するか、寛解させるか、改善するか、またはそれらに影響をおよぼすことである。「処置」によって、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）とＩＬ−２（またはその生物学的に活性な改変体）との組み合わせが、単一の薬学的組成物の一部としてか、あるいは代替的にこのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）または抗ＣＤ２０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）のいずれかを含有する個々の薬学的組成物の一部として、上記被験体またはこの被験体から単離した組織もしくは細胞株に対して適用されても投与されて得ることが意図され、この被験体は、疾患、疾患の症状、または疾患についての素因を有し、この目的は、その疾患、その疾患の症状、もしくはその疾患についての素因を、治癒する（ｃｕｒｅ）か、治癒する（ｈｅａｌ）か、緩和するか、軽減するか、変化させるか、治療するか、寛解させるか、改善するか、またはそれらに影響をおよぼすことである。
【００４２】
本発明の方法に使用するのに適切なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ヒト細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４０抗原に、特異的に結合し、そしてヒトＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０抗原に結合される場合に有意なアゴニスト活性を有さないがアンタゴニスト活性を示し、これらの細胞としては、正常なヒト細胞および新生物（悪性であるか良性であるかにかかわらず）のヒト細胞が挙げられる。いくつかの実施形態において、ヒト細胞の表面上に提示されるＣＤ４０に対するそれらの結合は、これらのヒト細胞の増殖および分化の阻害を生じる。したがって、本発明の方法に使用するのに適切なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体としては、細胞表面ＣＤ４０抗原を発現する、正常なヒト細胞および新生物のヒト細胞に対してアンタゴニスト活性を示し得る、これらのモノクローナル抗体が挙げられる。これらの抗ＣＤ４０抗体およびその抗原結合フラグメントは、本明細書中で、「アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体」と称される。このような抗体としては、以下に記載される完全ヒトモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９および完全ヒトモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２、ならびにモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２の結合特性を有するモノクローナル抗体が挙げられるが、これらに限定されない。組換え産生され得るこれらのモノクローナル抗体は、以下に記載され、そして発明の名称「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」である、２００３年１１月４日、２００３年１１月２６日および２００４年４月２７日に出願され、それぞれ、米国特許出願第６０／５１７，３３７号（代理人事件番号ＰＰ２０１０７．００１（０３５７８４／２５８４４２））、同第６０／５２５，５７９号（代理人事件番号ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５））、および同第６０／５６５，７１０号（代理人事件番号ＰＰ２０１０７．００３（０３５７８４／２７７２１４））と割り当てられた同時係属中の仮特許出願（その各々の内容はその全体が参考として本明細書中に援用される）で開示されている。
【００４３】
モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２に加えて、本明細書中に記載される本発明の方法の実施において有用であり得る他のＣＤ４０抗体としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（１）１３１．２Ｆ８．５．９（本明細書中で細胞株５．９と称される）および１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（本明細書中で細胞株１２．１２と称される）（それぞれ、特許受託番号ＰＴＡ−５５４２および特許受託番号ＰＴＡ−５５４３としてＡＴＣＣに寄託された）で表されるハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体；（２）配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される配列の両方、および配列番号２と配列番号５とに示される配列の両方からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；（３）配列番号６に示される配列、配列番号７に示される配列、配列番号８に示される配列、配列番号６と配列番号７とに示される配列の両方、および配列番号６と配列番号８とに示される配列の両方からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；（４）配列番号１に示されるヌクレオチド配列、配列番号３に示されるヌクレオチド配列、および配列番号１と配列番号３とに示される配列の両方からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；（５）ハイブリドーマ細胞株５．９またはハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；（６）配列番号１０または配列番号１２に示されるアミノ配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；（７）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；ならびに（８）ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体またはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体の抗原結合フラグメントまたは上述の項目（１）〜（７）のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体（ここで、このフラグメントはヒトＣＤ４０抗原に対して特異的に結合する能力を保持する）。本明細書中に開示される方法において使用するのに適切なこれらの抗体の抗体および抗原結合フラグメントとしては、当該分野において周知でありかつ本明細書中の以下に記載される方法を使用して、組換え的に産生される抗体およびその抗原結合フラグメントが挙げられ、これらとしては、例えば、組換え産生されたモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２が挙げられる。
【００４４】
本発明の方法における使用に適する抗ＣＤ２０抗体は、ヒト細胞の表面に発現されるヒトＣＤ２０抗原に、特異的に結合する。本発明の実施において有用な、この抗ＣＤ２０抗体は、１つまたは多数の作用機構を有し得る。本発明の方法は、いかなる特定の作用機構によっても拘束されないが、抗ＣＤ２０抗体は、少なくとも、標的細胞における、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、増殖のダウンレギュレーション、およびアポトーシスを誘導することが示された。このような抗体としては、抗体ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ；商標名Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）のもとに市販され、リツキシマブとも呼ばれる）（マウス抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（ＩＤＥＣ−２Ｂ８（Ｒｅｆｆら（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８３：４３５−４４５；米国特許第５，７３６，１３７号もまた参照のこと））から単離されたマウス可変領域を伴うヒトＩｇＧ１定常領域およびヒトκ定常領域を含むキメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体）；Ｂｉｏｇｅｎ  ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）により製造される、放射性標識抗ＣＤ２０抗体Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）（イブリツモマブ  チウキセタン（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  ｔｉｕｘｅｔａｎ））；Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐ．（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）により製造される、Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）（トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、リツキシマブのマウス版であり、ヨウ素（Ｉ−１３１）標識されたトシツモマブと組み合わされる）；完全なヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０；Ｒ−１５９４；ＩＭＭＵ−１０６；ＴＲＵ−０１５；ＡＭＥ−１３３；および、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性を有するモノクローナル抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ここで、このＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性は、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特異性であり、ＣＤ２０を発現するＢ細胞上のＣＤ２０抗原に結合されるとき、以下の１つ以上の活性を誘導する能力である：（１）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；（２）補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、（３）Ｂ細胞の増殖のダウンレギュレーション；および（４）標的細胞におけるアポトーシス。これらの活性を誘導する抗ＣＤ２０抗体の能力を測定するためのインビトロアッセイおよびインビボアッセイは、当該分野において周知である。例えば、米国特許第５，７３６，１３７号（この全体について、本明細書において参考として援用される）において開示されたアッセイを参照のこと。本発明の方法を実施することにおいて有用な他の抗体は、放射性標識（例えば、Ｉｎ−１１１およびＹ−９０）および他の治療剤（例えば、毒素）に結合されたマウス抗ＣＤ２０抗体およびヒト抗ＣＤ２０抗体である。
【００４５】
上で言及され、そして、本明細書の以下で十分に記載されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体および抗ＣＤ２０抗体を使用することに加えて、本発明の方法は、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９、ＣＨＩＲ−１２．１２、またはＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性を有し、かつ、それら各々の抗原へのそれらの抗体の結合を競合的に妨害するか、または同一のエピトープに結合する抗体を使用して実施され得る。当業者は、標準的な方法を使用して、抗体が、ＣＨＩＲ−５．９、ＣＨＩＲ−１２．１２、またはＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合を競合的に妨害するかどうかを決定し得る。
【００４６】
抗ＣＤ２０抗体（またはその抗原結合フラグメント）およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）による併用治療は、これらの抗癌剤のいずれか単独の使用により提供される治療上の利益より大きな治療上の利益を提供する。加えて、これら２つの型の抗体は、単一の抗体治療に対する初期耐性の結果としてか、または単一の抗体による治療に関して１以上の時間経過の間に発達する耐性の結果として、この単一の抗体治療（特に、抗ＣＤ２０抗体治療）による処置に無反応性である腫瘍を処置するため、組み合わせて使用され得る。さらに他の実施形態において、これら２つの抗体による併用治療は、単一の抗体治療に対して無反応性である腫瘍、または反応性（すなわち、感受性）である腫瘍に対する相乗的な治療効果を有する。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８および抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２による併用治療を包含する。他の実施形態において、本発明の方法は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８および抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９による併用治療を包含する。さらに他の実施形態において、本発明の方法は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の抗原結合フラグメントおよび抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはＣＨＩＲ−５．９の抗原結合フラグメントによる併用治療を包含する。代替の実施形態において、本発明の方法は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８および抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはＣＨＩＲ−５．９の抗原結合フラグメントによる併用治療を包含する。他の実施形態において、本発明の方法は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の抗原結合フラグメントおよび抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはＣＨＩＲ−５．９による併用治療を包含する。本明細書に記載される併用治療は、処置プロセスにおいて、ＣＤ２０抗原およびＣＤ４０抗原の両方が標的とされる限り、他のバリエーションを包含し得る。
【００４７】
複数のパラメータは、処置効能を示し得る。パラメータとしては、この腫瘍質量の大きさにおける低減；この癌の転移侵襲性における低減；癌の増殖速度における低減；腫瘍関連性の後遺症（例えば、悪液質の産生および腹水の産生）の重症度または頻度における減少；腫瘍関連性の合併症（例えば、病的な骨の破損、自己免疫性溶血性貧血、前リンパ球性変換（ｐｒｏｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）、およびリクター症候群など）の減少および／または予防；化学療法および他の処置へのこの癌の感作；増進した患者の生存の割合；改善された予後（例えば、増加した腫瘍浸潤性のリンパ球および減少した腫瘍血管新生）の観察された臨床上の相関関係のある事物における増進などが挙げられるが、これらに限定されない。したがって、いくつかの実施形態において、これら２つの型の抗体の組み合わせの投与は、処置を受ける患者（すなわち、被験体）における１つ以上のこれらのパラメータの改善をもたらす。他の実施形態において、この患者における改善は、数個のパラメータについて相乗的であるが、他のものについては付加的である。
【００４８】
癌処置に関する「陽性の治療上の応答」により、これらの抗体もしくはそのフラグメントの抗腫瘍活性に関連する、この疾患における改善、および／または、この疾患に関連する症状における改善が意図される。すなわち、抗増殖効果、さらなる腫瘍の増殖の予防、腫瘍の大きさにおける低減、癌細胞の数における低減、および／または新生Ｂ細胞により介在される１つ以上の症状における減少が観察され得る。それゆえ、例えば、この疾患における改善は、完全な応答として特徴付けられ得る。「完全な応答」により、いかなる以前の異常な放射線写真調査（骨髄および脳脊髄液（ＣＳＦ））の正規化によっても臨床的に検出可能な疾患が存在しないことが意図される。このような応答は、本発明の方法に従った処置後、少なくとも１ヶ月持続すべきである。あるいは、この疾患における改善は、部分的な応答であるとして分類され得る。「部分的な応答」により、新たな病変が無く、かつ少なくとも１ヶ月持続する、全ての測定可能な腫瘍負荷（すなわち、この被験体において存在する腫瘍細胞の個数）における少なくとも約５０％の減少が意図される。このような応答は、測定可能な腫瘍に限り、適用可能である。
【００４９】
腫瘍応答は、スクリーニング技術（例えば、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線写真による画像化、コンピュータ断層映像（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリーまたは蛍光活性細胞分析分離（ＦＡＣＳ）分析、生物発光の画像化（例えば、ルシフェラーゼによる画像化、骨のスキャンの画像化、および骨髄穿刺（ＢＭＡ）を含む腫瘍生検の標本化）を使用して、腫瘍の形態学（すなわち、全体の腫瘍負荷、腫瘍の大きさなど）における変化について評価され得る。これらの正の治療的応答に加えて、処置を受ける被験体は、その疾患に関連した症状の改善に関する有益な効果を経験し得る。したがって、Ｂ細胞の腫瘍に関して、この被験体は、いわゆるＢ症状（すなわち、寝汗、発熱、体重減少、および／または蕁麻疹）の低下を経験し得る。
【００５０】
「治療上有効な用量」、「治療上の有効量」または「有効量」により、抗ＣＤ２０抗体（またはその抗原結合フラグメント）の量と組み合わせて投与されるとき、新生Ｂ細胞を含む癌に対する被験体の処置に関して、陽性の治療上の応答を引き起こすアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）の量が意図される。本発明のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体（またはその抗原結合フラグメント）またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）の治療上有効な用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約４０ｍｇ／ｋｇまで、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇまで、約０．１ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇまで、約１ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇまで、約３ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇまで、約３ｍｇ／ｋｇから約２５ｍｇ／ｋｇまで、約３ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇまで、約５ｍｇ／ｋｇから約１５ｍｇ／ｋｇまで、または約７ｍｇ／ｋｇから約１２ｍｇ／ｋｇまでの範囲内である。この処置法は、本発明の実施において有用な抗体の組み合わせの治療上有効な用量についての単一の投与、または、抗体の組み合わせの治療上有効な用量についての複数の投与を含み得ることが認識される。
【００５１】
臨床上の効能を予測する１つの方法は、適切なモデルにおける、これらの抗体による併用治療の効果を測定することである：例えば、マウス癌モデルにおける抗ＣＤ２０抗体およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の組み合わせの使用。これらのモデルとして、ヌードマウス異種移植腫瘍モデル（例えば、ＮａｍａｌｗａおよびＤａｕｄｉとして公知であるヒトバーキットリンパ腫細胞株を使用するもの）が挙げられる。いくつかの実施形態において、抗腫瘍活性は、米国特許出願シリアル番号６０／５２５，５７９（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５））に記載される、Ｄａｕｄｉヒトリンパ腫細胞株を使用する、段階づけられたヌードマウス異種移植腫瘍モデルにおいてアッセイされる。一般的に、段階づけられたヌードマウス異種移植腫瘍モデルは、段階づけられていないモデルに比べ、特定の抗体の治療上の効能を見分けることにおいて、より効果的である。というのは、段階づけられたモデルにおいて、抗体の投与は、この腫瘍が測定可能な大きさに達した後、初めて開始されるからである。段階づけられていないモデルにおいて、抗体の投与は、一般的に、腫瘍の接種の約１日以内に、かつ触知可能な腫瘍が存在する前に、開始される。段階づけられたモデルにおける増進した抗腫瘍活性を示す抗体の能力は、この抗体が治療上効果的であることの強力な指示である。
【００５２】
本発明の方法は、併用治療を使用する工程を包含する。用語「併用」は、その最も広い意味において使用され、被験体が少なくとも２つの治療レジメンにより処置されることを意味する。したがって「併用抗体治療」は、被験体が少なくとも２つの抗体レジメン（より特に、少なくとも１つの抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）と組み合わせた、少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体（またはその抗原結合フラグメント）、しかしこの異なる抗体レジメンの適用のタイミングは、これらの抗体の併用の有益な効果が達成される限り、変動され得る）により処置されることを意味することを意図される。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）と組み合わせた抗ＣＤ２０抗体（またはその抗原結合フラグメント）による処置は、同時的（同時発生的）、連続的（連続発生的）、またはその併用であり得る。したがって、併用抗体治療を受ける被験体は、両方の物質の併用の治療効果が治療を受けるこの被験体中でもたらされる限り、同一の時間に（すなわち、同時に）か、または異なる時間に（すなわち、連続的に、同日または異なる日にいずれかの順序で）両方の抗体を受容し得る。いくつかの実施形態において、抗体の併用は、１回の投薬のために同時に与えられる。しかし他の投薬として、同日または異なる日におけるいずれかの順序での連続的投与が挙げられる。連続的投与は、この被験体が、最初のモノクローナル抗体の投与に応答するかどうかに関わりなく、実行され得る。この２つの抗体が同時に投与される場合、これらは、それぞれ抗ＣＤ２０抗体（またはその抗原結合フラグメント）か、もしくはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）のいずれかを含む、別個の薬学的組成物として投与され得るか、または、これら両方の抗癌剤を含む単一の薬学的組成物として投与され得る。
【００５３】
その上、この処置は、変動する投薬レジメンと同様に変動する用量により完遂され得る。いくつかの実施形態において、１つのモノクローナル抗体の用量は、これらの用量の併用が、多数の治療上のパラメータのうちの任意の１つ以上を処置することにおいて効果的である限り、その他のモノクローナル抗体の投与される用量と異なる。これらの処置レジメンは、治療効果（例えば、上記のもの）を最大にする用量および投薬計画に基づく。当業者は、いかなる１つのモノクローナル抗体の用量も、個々に投与される場合、治療上効果的ではないが、その他の抗体と併用して投与される場合、治療上効果的であることを認識する。例えば、単独で投与された抗ＣＤ２０抗体は治療上効果的でなかった一方、単独で投与されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、リツキシマブ耐性ヒトリンパ腫異種移植の増殖を有意に阻害した、図１を参照のこと。これら２つの抗体が併用して投与された場合、相乗的な抗腫瘍活性が観察された。したがって、いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の併用の治療上効果的な用量は、単独で投与される場合、治療上効果的でないか、または、互いに併用して投与される場合よりも治療上効果的でない、個々の活性薬剤の用量を含み得る。
【００５４】
いくつかの実施形態において、この抗体は、等量で投与され得る。したがって、等量の投薬レジメンが意図される場合、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはＣＨＩＲ−５．９）は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇで投薬され、この抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）））もまた、それぞれ約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの等量の用量で投薬される。他の実施形態において、これらの抗体は、不等な量で投与され得る。
【００５５】
当業者は、本明細書中で開示される併用抗体治療法が、他の形態の腫瘍治療前に、他の形態の腫瘍治療後に、または、他の形態の腫瘍治療と同時に使用され得ることを認識する。このような腫瘍治療としては、化学療法レジメン（例えば、ＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）、ＩＣＥ（イホスファミド、カルボプラチン、およびエトポシド）、ミトザントロン（Ｍｉｔｏｚａｎｔｒｏｎｅ）、シタラビン、ＤＶＰ（ダウノルビシン、プレドニゾン、およびビンクリスチン）、ＡＴＲＡ（全トランス型レチノイン酸）、イダルビシン、ヘルツァー（ｈｏｅｌｚｅｒ）化学療法レジメン、ＬａＬａ化学療法レジメン、ＡＢＶＤ（アドリアマイシン、ブレオマイシン、ビンブラスチン、およびダカルバジン）、ＣＥＯＰ（シクロホスファミド、エピルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）、ＣＥＯＰ−ＢＥ（シクロホスファミド、エピルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、ブレオマイシン、およびエトポシド）、２−ＣｄＡ（２−クロロデオキシアデノシン（２−ＣＤＡ）、ＦＬＡＧ＆ＩＤＡ（フルダラビン、シタラビン、およびイダルビシン；続くＧ−ＣＳＦ処置を伴ってか、または伴わないで））、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシン、およびデキサメタゾン）、Ｍ＆Ｐ（メルファランおよびプレドニゾン）、ＣーＷｅｅｋｌｙ（シクロホスファミドおよびプレドニゾン）、ＡＢＣＭ（アドリアマイシン（ドキソルビシン）、ＢＣＮＵ、シクロホスファミド、およびメルファラン）、ＭＯＰＰ（ナイトロジェンマスタード、オンコビン、プロカルバジン、およびプレドニゾン）、およびＤＨＡＰ（デキサメタゾン、高用量のａｒａ−Ｃ、およびプラチノール（ｐｌａｔｉｎｏｌ））による処置）が挙げられ得る。代替的に、このような腫瘍治療としては、放射線治療（例えば、骨髄機能を廃絶する（ｍｙｌｅｏａｂｌａｔｉｖｅ）治療）が挙げられ得る。それゆえ、本発明の方法は、このような腫瘍治療後、インビボか、またはエクスビボのいずれかで、残余の腫瘍細胞を殺す同時処置としての使用を見出す。
【００５６】
（アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体）
モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２は、本発明の方法において使用するのに適切なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を示す。ＣＨＩＲ−５．９抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２抗体は、ハイブリドーマ細胞株１３１．２Ｆ８．５．９（本明細書中で細胞株５．９と称される）および１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（本明細書中で細胞株１２．１２と称される）から産生されるＩｇＧ１アイソタイプの完全ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である。これらの細胞株は、ヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトκ鎖遺伝子座を含む免疫異種マウス（Ａｂｇｅｎｉｘ）由来の脾細胞を用いて作製された。その脾臓細胞は、マウス骨髄腫ＳＰ２／０細胞と融合された（Ｓｉｅｒｒａ  ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ）。得られたハイブリドーマは数回サブクローニングされて、安定なモノクローナル細胞株５．９およびモノクローナル細胞株１２．１２が作製された。本発明の他の抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座についてトランスジェニックであるマウスを用いてか、または当該分野で公知および／もしくは本明細書中に記載される他の方法によって同様に調製され得る。
【００５７】
ＣＨＩＲ−１２．１２抗体の可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列、ならびにＣＨＩＲ−５．９の可変領域のアミノ酸配列は、発明の名称「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」である、２００３年１１月４日、２００３年１１月２６日および２００４年４月２７日に出願され、それぞれ、米国特許出願番号第６０／５１７，３３７号（代理人事件番号ＰＰ２０１０７．００１（０３５７８４／２５８４４２））、同第６０／５６５，７１０号（代理人事件番号ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５））、および同第６０／５２５，５７９号（代理人事件番号ＰＰ２０１０７．００３（０３５７８４／２７７２１４））と指定された同時係属中の仮特許出願に開示され、その各々の内容はその全体が参考として本明細書中に援用される。ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖ならびに重鎖についてのリーダー領域、可変領域および定常領域のアミノ酸配列は、それぞれ、本明細書中で図２Ａおよび図２Ｂに示される。また、配列番号２（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖についての完全配列）、配列番号４（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖についての完全配列）、および配列番号５（配列番号４に示されるｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖の改変体についての完全配列、ここで、この改変体は配列番号４の位置１５３においてアラニン残基に対するセリン置換を含む）を参照のこと。ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２についての軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ、本明細書中で図３Ａおよび図３Ｂに示される。また、配列番号１（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖についてのコード配列）、および配列番号３（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖についてのコード配列）を参照のこと。ＣＨＩＲ−５．９  ｍＡｂの軽鎖ならびに重鎖についてのリーダー領域、可変領域および定常領域のアミノ酸配列は、それぞれ、本明細書中で図４Ａおよび図４Ｂに示される。また、配列番号６（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の軽鎖についての完全配列）、配列番号７（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖についての完全配列）、および配列番号８（配列番号７に示されるｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖の改変体についての完全配列、ここで、配列番号７の位置１５８においてアラニン残基に対するセリン置換を含む）を参照のこと。さらに、ＣＨＩＲ−５．９抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２抗体を発現するハイブリドーマは、それぞれ、ＰＴＡ−５５４２およびＰＴＡ−５５４３の特許寄託表示でＡＴＣＣに寄託されている。
【００５８】
アンタゴニスト活性に加えて、抗ＣＤ４０抗体は、腫瘍細胞に対する作用に関して別の機構を有し得る。例えば、天然のＣＨＩＲ−５．９抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２抗体は、ＡＤＣＣ活性を有する。あるいは、ＣＨＩＲ−５．９抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２抗体の可変領域は、ＡＤＣＣ活性を有する別の抗体のアイソタイプで発現され得る。また、ＣＨＩＲ−５．９またはＣＨＩＲ−１２．１２の天然の形態、組換え形態または抗原結合フラグメントを、細胞毒、治療因子または放射性同位体に結合させることが可能である。
【００５９】
ＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体は、ＥＬＩＳＡ型アッセイにおいて可溶性ＣＤ４０に結合し、フローサイトメトリーアッセイによって決定されるように細胞表面ＣＤ４０に対するＣＤ４０リガンドの結合を妨げ、予め結合したＣＤ４０リガンドを置き換える。抗体ＣＨＩＲ−５．９および抗体ＣＨＩＲ−１２．１２は、互いにＣＤ４０に対する結合のために競合するが１５Ｂ８とは競合せず、この１５Ｂ８は、発明の名称「Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」である、２０００年１０月２日に出願された米国仮特許出願番号第６０／２３７，５５６号および発明の名称「Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」である、２００１年１０月２日に出願されたＰＣＴ国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ０１／３０８５７（代理人事件番号ＰＰ１６０９２．００３）に記載される抗ＣＤ４０モノクローナル抗体であり、これらの両方が参考としてその全体が本明細書中で援用される。健常なヒト被験体由来のＢ細胞の増殖における効果についてインビトロで試験される場合、ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体として作用する。さらに、ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２は、健常な被験体由来のヒトリンパ球の強力な増殖を誘導しない。これらの抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）によってＣＤ４０発現標的細胞を殺傷し得る。ＢｉａｃｏｒｅＴＭアッセイによって決定されるように、ヒトＣＤ４０に対するＣＨＩＲ−５．９の結合親和性は１．２×１０−８Ｍであり、ＣＨＩＲ−１２．１２の結合親和性は５×１０−１０Ｍである。
【００６０】
本発明の方法において使用するのに適切なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０細胞表面抗原に対して強力な単一部位結合親和性を示す。本発明のモノクローナル抗体は、少なくとも１０−５Ｍ、少なくとも３×１０−５Ｍ、好ましくは少なくとも１０−６Ｍ〜１０−７Ｍ、より好ましくは１０−８Ｍ〜約１０−１２ＭのＣＤ４０に対する解離平衡定数（ＫＤ）を示し、これはＢｉａｃｏｒｅＴＭのような標準的なアッセイを用いて測定される。Ｂｉａｃｏｒｅ分析は当該分野で公知であり、詳細は「ＢＩＡａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｈａｎｄｂｏｏｋ」に提供されている。ＷＯ  ０１／２７１６０に記載される方法が結合親和性を調節するために使用され得る。
【００６１】
「ＣＤ４０抗原」、「ＣＤ４０細胞表面抗原」、「ＣＤ４０レセプター」または「ＣＤ４０」によって、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レセプターファミリーに属する膜貫通糖タンパク質が意図される（例えば、米国特許第５，６７４，４９２号および同第４，７０８，８７１号；Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃら（１９８９）ＥＭＢＯ  ８：１４０３；Ｃｌａｒｋ（１９９０）Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ３６：３３；Ｂａｒｃｌａｙら（１９９７）Ｔｈｅ  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ（第２版；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）を参照のこと）。ヒトＣＤ４０の２つのアイソフォーム（この遺伝子の代替スプライス転写産物改変体によってコードされる）が同定されている。第１のアイソフォーム（「長いアイソフォーム」または「アイソフォーム１」としてもまた公知である）は、２７７個のアミノ酸の前駆ポリペプチド（配列番号１２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ４３０４５として最初に報告され、ＧｎｅＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１２４１においてアイソフォーム１として同定された）、配列番号１１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｘ６０５９２およびＮＭ＿００１２５０を参照のこと）によってコードされる）として発現され、これは最初の１９残基によって表されるシグナル配列を有する。第２のアイソフォーム（「短いアイソフォーム」または「アイソフォーム２」としてもまた公知である）は、２０３個のアミノ酸の前駆ポリペプチド（配列番号１０（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿６９０５９３）、配列番号９（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿１５２８５４）によってコードされる）として発現され、これも最初の１９残基によって表されるシグナル配列を有する。ヒトＣＤ４０のこれら２つのアイソフォームの前駆ポリペプチドは、共通してその最初の１６５残基（すなわち、配列番号１０および配列番号１２の残基１〜１６５）を共有する。短いアイソフォームの前駆ポリペプチド（配列番号１０に示される）は、コードセグメントを欠失する転写産物改変体（配列番号９）（これは、翻訳のフレームシフトをもたらす）によってコードされ、得られるＣＤ４０アイソフォームは、ＣＤ４０の長いアイソフォームに含まれるもの（配列番号１２の残基１６６〜２７７に示されるＣ末端）とは異なる、より短いＣ末端（配列番号１０の残基１６６〜２０３）を含む。本発明の目的のために、用語「ＣＤ４０抗原」、「ＣＤ４０細胞表面抗原」、「ＣＤ４０レセプター」または「ＣＤ４０」は、ＣＤ４０の短いアイソフォームおよび長いアイソフォームの両方を包含する。本発明の抗ＣＤ４０抗体は、本明細書中で以下に示されるようにヒトＣＤ４０のエピトープに結合し、このヒトＣＤ４０は、この細胞表面抗原の短いアイソフォームまたは長いアイソフォームのいずれかのうちの同じ位置に存在する。
【００６２】
ＣＤ４０抗原は、本明細書中で他の部分に記載されるように、種々の細胞型の表面に提示される。「表面に提示される」および「表面に発現される」により、ＣＤ４０抗原のうちのすべてまたは一部が、細胞の外側に曝露されることが意図される。提示または発現されたＣＤ４０抗原は、完全にまたは部分的にグリコシル化され得る。
【００６３】
「アゴニスト活性」により、その物質がアゴニストとして機能することが意図される。アゴニストは細胞上のレセプターと結合し、レセプターの天然のリガンドにより惹起されるものと類似または同じ反応もしくは活性を惹起する；例えば、細胞にシグナルを伝達する。ＣＤ４０のアゴニストは、以下の応答のうちのいずれかまたはすべてを誘導するが、これらに限定されない：Ｂ細胞増殖および分化、抗体産生、細胞内接着、Ｂ細胞記憶生成、アイソタイプ転換、ＭＨＣクラスＩＩおよびＣＤ８０／８６の細胞表面発現のアップレギュレーション、ならびにＩＬ−８、ＩＬ−１２およびＴＮＦのような前炎症性サイトカインの分泌。「アンタゴニスト活性」により、その物質がアンタゴニストとして機能することが意図される。ＣＤ４０のアンタゴニストは、ＣＤ４０レセプターのアゴニストリガンド（特に、ＣＤ４０Ｌ）に対する結合により誘導される応答のうちのいずれかの誘導を妨げるかまたは減少させる。アンタゴニストは、アゴニスト結合に対する応答のうちのいずれか１以上の誘導を、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、好ましくは４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、より好ましくは７０％、８０％、８５％、そして最も好ましくは９０％、９５％、９９％、または１００％減少させ得る。抗ＣＤ４０抗体およびＣＤ４０−リガンドの結合特異性およびアンタゴニスト活性を測定するための方法は、当業者に公知であり、標準的な競合結合アッセイ、Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌をモニタリングするためのアッセイ、Ｂ細胞増殖アッセイ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ様Ｂ細胞増殖アッセイ、抗体産生についてのＴ細胞ヘルパーアッセイ、Ｂ細胞増殖の同時刺激アッセイ、およびＢ細胞活性化マーカーのアップレギュレーションについてのアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、ＷＯ  ００／７５３４８、米国特許第６，０８７，３２９（参考として本明細書中に援用される）を参照のこと。
【００６４】
「有意な」アゴニスト活性により、Ｂ細胞応答のアッセイで測定されるように、中性物質またはネガティブコントロールによって誘導されるアゴニスト活性を少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％上回るアゴニスト活性が意図される。好ましくは、「有意な」アゴニスト活性は、Ｂ細胞応答のアッセイで測定されるように、中性物質またはネガティブコントロールにより誘導されるアゴニスト活性より少なくとも２倍もしくは少なくとも３倍上回るアゴニスト活性である。従って、例えば、目的のＢ細胞応答がＢ細胞増殖である場合、「有意な」アゴニスト活性は中性物質またはネガティブコントロールにより誘導されるＢ細胞増殖レベルよりも少なくとも２倍上回るかまたは少なくとも３倍上回るＢ細胞増殖レベルの誘導である。１つの実施形態において、ＣＤ４０に結合しない非特異的免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ１）は、ネガティブコントロールとしての役割を果たす。「有意なアゴニスト活性を有さない」物質は、Ｂ細胞応答のアッセイで測定されるように、中性物質またはネガティブコントロールにより誘導されるアゴニスト活性よりも高くて約２５％上回るアゴニスト活性、好ましくは、中性物質またはネガティブコントロールにより誘導されるアゴニスト活性よりも高くて約２０％上回る、約１５％上回る、約１０％上回る、約５％上回る、約１％上回る、約０．５％上回る、または高くて約０．１％上回るアゴニスト活性を示す。本発明の方法において有用なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ヒト細胞上のＣＤ４０抗原に結合される場合に、上記のように有意なアゴニスト活性を有さない。本発明の１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、１つのＢ細胞応答において有意なアゴニスト活性を有さない。本発明の別の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、１より多いＢ細胞応答（例えば、増殖および分化、または増殖、分化、ならびに抗体産生）のアッセイにおいて有意なアゴニスト活性を有さない。
【００６５】
ＣＤ４０に対するモノクローナル抗体は、当該分野において公知である。例えば、ＭｃＭｉｃｈａｅｌ，編（１９８７；１９８９）Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ  ａｎｄ  ＩＶ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）におけるＢ細胞抗原に充てられた節；米国特許第５，６７４，４９２号；同第５，８７４，０８２号；同第５，６７７，１６５号；同第６，０５６，９５９号；国際公開第００／６３３９５号；同第０２／２８９０５号；および同第０２／２８９０４号；Ｇｏｒｄｏｎら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：１４２５；Ｖａｌｌｅら（１９８９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：１４６３；Ｃｌａｒｋら（１９８６）ＰＮＡＳ  ８３：４４９４；Ｐａｕｌｉｅら（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：５９０；Ｇｏｒｄｏｎら（１９８７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１５３５；Ｊａｂａｒａら（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：１８６１；Ｚｈａｎｇら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１８３６；Ｇａｓｃａｎら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８；Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９１）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ３：８；およびＢａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：７０；これら全ては、本明細書において参考として援用される；を参照のこと。上記モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２の結合特性を共有する、本明細書で開示されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、本発明にとって特に目的のものである。このような抗体としては、以下のもの、（１）１３１．２Ｆ８．５．９（本明細書中で細胞株５．９と呼ばれる）および１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（本明細書中で細胞株１２．１２と呼ばれる）と称されるハイブリドーマ細胞株により産生されたモノクローナル抗体（それぞれ、特許受託番号ＰＴＡ−５５４２および特許受託番号ＰＴＡ−５５４３として、ＡＴＣＣに寄託された）；（２）配列番号２に示される配列、配列番号４に示される配列、配列番号５に示される配列、配列番号２と配列番号４とに示される両方の配列、および配列番号２と配列番号５とに示される両方の配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；（３）配列番号６に示される配列、配列番号７に示される配列、配列番号８に示される配列、配列番号６と配列番号７とに示される両方の配列、および配列番号６と配列番号８とに示される両方の配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；（４）配列番号１に示されるヌクレオチド配列、配列番号３に示されるヌクレオチド配列、および配列番号１と配列番号３とに示される両方の配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によりコードされるアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；（５）エピトープに結合するモノクローナル抗体であり、このエピトープは、ハイブリドーマ細胞株１２．１２により産生されるモノクローナル抗体またはハイブリドーマ細胞株５．９により産生されるモノクローナル抗体に結合し得る、モノクローナル抗体；（６）配列番号１０または配列番号１２に示されるアミノ���配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；（７）競合結合アッセイにおいて、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；ならびに（８）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２もしくはＣＨＩＲ−５．９の抗原結合フラグメントまたは先の（１）〜（７）における前記モノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体であり、ここで、このフラグメントはヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６６】
（抗ＣＤ２０抗体）
「ＣＤ２０抗原」により、前Ｂ細胞段階からＢ細胞リンパ芽球段階へ系統委嘱された（ｌｉｎｅａｇｅ−ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ）Ｂ細胞に発現される、３３〜３７ｋＤａの糖付加されていない膜貫通タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ１２５３０；Ｂａｒｃｌａｙら（１９９７）Ｔｈｅ  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ（第２版；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ））が意図される。このＣＤ２０受容体は、本明細書のどこか他のところで記載されるように、Ｂ細胞型の表面に提示される。「この表面に提示される」および「この表面に発現される」により、このＣＤ２０抗原の全て、または、このＣＤ２０抗原の一部が、細胞外部に露出されることが意図される。
【００６７】
抗ＣＤ２０抗体は、当該分野において公知である。例えば、米国特許第５，５９５，７２１号、同第６，３９９，０６１号、および同第６，４５５，０４３号を参照のこと。ヒト抗ＣＤ２０抗体およびキメラ抗ＣＤ２０抗体は、本発明の方法の実施において、特に有用である。キメラ抗ＣＤ２０抗体の例としては、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）のもとに市販され、かつ米国特許第５，７３６，１３７号、同第５，７７６，４５６号、および同第５，８４３，４３９号に記載される）；米国特許第５，７５０，１０５号に記載されるキメラ抗体；米国特許第５，５００，３６２号、同第５，６７７，１８０号、同第５，７２１，１０８号、および同第５，８４３，６８５号に記載される抗体（これら各々の内容は、その全体について、本明細書中で参考として援用される）が挙げられるが、これらに限定されない。マウス起源の抗ＣＤ２０抗体もまた、本発明の方法における使用に適切である。このようなマウス抗ＣＤ２０抗体の例としては、Ｂ１抗体（米国特許第６，０１５，５４２号に記載される）；ＩＦ５抗体（Ｐｒｅｓｓら（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．７：１０２７を参照のこと）；ＮＫＩ−Ｂ２０抗ＣＤ２０抗体およびＢＣＡ−Ｂ２０抗ＣＤ２０抗体（Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇら（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：８４０−８４６に記載される）；およびＩＤＥＣ−２Ｂ８（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．から市販される）；２Ｈ７抗体（Ｃｌａｒｋら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１７６６−１７７０に記載される）；ならびに上記Ｃｌａｒｋら（１９８５）およびＳｔａｓｈｅｎｋｏら（１９８０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２５：１６７８−１６８５に記載される他のものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
（抗ＣＤ２０抗体および抗ＣＤ４０抗体の作製）
本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体および抗ＣＤ２０抗体は、当業者に周知の任意の方法を使用して作製され得る。ポリクローナル血清は、従来の方法によって調製され得る。一般的に、ＣＤ４０抗原またはＣＤ２０抗原を含む溶液が最初に使用されて、適切な動物（好ましくは、マウス、ラット、ウサギ、またはヤギ）を免疫化する。入手可能な血清の量、および標識された抗ウサギ抗体および抗ヤギ抗体が利用できることに起因して、ウサギまたはヤギが、ポリクローナル血清の調製に好ましい。
【００６９】
ポリクローナル血清は、トランスジェニック動物（好ましくは、ヒト免疫グロブリン座を有するマウス）において調製され得る。好ましい実施形態において、ＣＤ４０またはＣＤ２０を発現するＳｆ９細胞が、免疫原として使用される。免疫化はまた、生理的食塩水（好ましくは、フロイント完全アジュバントのようなアジュバント）中の抗原を含む溶液を混合または乳化し、そしてその混合物またはエマルジョンを非経口的（一般的には、皮下または筋肉内）に注射することによって、実施され得る。１回の注射あたり５０〜２００μｇの用量は、代表的に十分である。免疫化は、一般的に、生理的食塩水中のタンパク質の１回以上の注射によって、好ましくはフロイント不完全アジュバントを使用して、２〜６週間後にブーストされる。あるいは、本発明の目的がインビトロの免役化と等しいと考えられる場合、当該分野で公知の方法を使用したインビトロの免疫化によって、抗体が作製され得る。ポリクローナル抗血清は、免役化された動物の血液をガラスまたはプラスチックの容器に採取し、その血液を２５℃で１時間インキュベートし、次いで４℃で２〜１８時間インキュベートすることによって得られる。この血清は、遠心分離（例えば、１，０００×ｇで１０分間）によって回収される。１回の採血あたり約２０〜５０ｍｌが、ウサギから得られ得る。
【００７０】
Ｓｆ９（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞の作製は、米国特許第６，００４，５５２号によって開示され、本明細書中に参考として援用される。手短に言えば、ヒトＣＤ４０をコードする配列を、輸送ベクターを使用してバキュロウイルスに再結合（ｒｅｃｏｍｂｉｎｅ）させた。上記プラスミドを、野生型バキュロウイルスＤＮＡを用いてＳｆ９細胞に同時トランスフェクトした。バキュロウイルスに感染した組換えＳｆ９細胞を同定して、クローン的に精製した。
【００７１】
好ましくは、上記抗体は、本質的にモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は特異性が高く、単一の抗原部位（すなわち、本発明におけるＣＤ４０細胞表面抗原またはＣＤ２０細胞表面抗原）に対して指向する。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体を代表的に包含する従来の（ポリクローナル）抗体の調製とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向する。修飾語句「モノクローナル」は、実質的に同質である抗体の集団（例えば、Ｂ細胞のクローン集団によって生成される集団）から得られる場合の抗体の性質を示し、いずれかの特定の方法による抗体の作製を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって作製されても、または組換えＤＮＡ方法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）によって作製されてもよい。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７；および米国特許第５，５１４，５４８号において記載される技術を使用したファージ抗体ライブラリーから単離され得る。
【００７２】
「エピトープ」によって、抗体が作製され、そしてその抗体が結合する抗原分子の部分が意図される。エピトープは、直鎖状のアミノ酸残基（すなわち、エピトープ内の残基が、直鎖状様式で互いに連続して配置される）、非直鎖状のアミノ酸残基（本明細書において「非直鎖状エピトープ」といわれ；これらのエピトープは、連続的には配置されない）、または直鎖状アミノ酸残基と非直鎖状アミノ酸残基との両方を含み得る。
【００７３】
モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９６の方法、またはその改変を使用して調製され得る。代表的には、マウスが、抗原を含む溶液を使用して免疫化される。免疫化は、生理的食塩水（好ましくは、フロイント完全アジュバントのようなアジュバント）中の抗原を含む溶液を混合または乳化し、そしてその混合物またはエマルジョンを非経口的に注射することによって実施され得る。当該分野で公知の任意の免疫化方法は、本発明のモノクローナル抗体を得るために使用され得る。動物を免疫化した後、脾臓（そして必要に応じて、１または数個の大きなリンパ節）が除かれ、そして単一の細胞に解離される。上記脾臓細胞は、目的の抗原でコーティングされたプレートまたはウェルに細胞懸濁液を適用することによって、スクリーニングされ得る。膜に結合された上記抗原に特異的な免疫グロブリンを発現するＢ細胞は、プレートに結合し、リンスで除かれない。得られたＢ細胞、または全ての解離された脾臓細胞は、次いでミエローマ細胞との融合が誘導されてハイブリドーマを形成し、そして選択培地中で培養される。得られた細胞は、連続希釈によってプレートされ、そして目的の抗原に特異的に結合する（かつ、無関係の抗原に結合しない）抗体の産生についてアッセイされる。選択されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を分泌（ｓｅｃｒｅｔ）するハイブリドーマは、次いでインビトロ（例えば、組織培養ボトルまたは中空繊維反応器において）、またはインビボ（例えば、マウスの腹水）のいずれかで培養される。
【００７４】
本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体が、組換えＤＮＡ方法を使用して調製される場合、モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）を使用して容易に単離され、かつ配列決定される。本明細書におい記載されるハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として機能する。一旦単離されると、上記ＤＮＡは、発現ベクター中に配置され得、次いでこの発現ベクターは、別に免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞）にトランスフェクトされ、組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体の合成を得る。抗体をコードする細菌のＤＮＡにおける組換え発現に関する概説の論文としては、Ｓｋｅｒｒａら（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６およびＰｈｉｃｋｔｈｕｎ（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１が挙げられる。ハイブリドーマの使用に代わるものとして、抗体は、米国特許第５，５４５，４０３号；同第５，５４５，４０５号；および同第５，９９８，１４４号（これらは、本明細書において参考として援用される）に開示されるように、ＣＨＯ細胞株のような細胞株において産生され得る。手短に言えば、上記細胞株は、それぞれ軽鎖および重鎖を発現し得るベクターを用いてトランスフェクトされる。別個のベクター上の２つのタンパク質をトランスフェクトすることによって、キメラ抗体が産生され得る。別の利点は、上記抗体の正しいグリコシル化である。
【００７５】
いくつかの実施形態において、上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体またはＣＨＩＲ−５．９抗体）またはその抗原結合フラグメントは、グルタミン合成をマーカーとして使用するＧＳ遺伝子発現系（Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｐｏｒｔｓｍｏｕｔｈ，Ｎｅｗ  Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ）を使用してＣＨＯ細胞中で産生され得る。米国特許第５，１２２，４６４号；同第５，５９１，６３９号；同第５，６５８，７５９号；同第５，７７０，３５９号；同第５，８２７，７３９号；同第５，８７９，９３６号；同第５，８９１，６９３号；および同第５，９８１，２１６号もまた参照のこと；これらの内容は、その全体が参考として援用される。
【００７６】
本明細書で使用される用語「抗原エピトープ」は、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体または抗ＣＤ２０モノクローナル抗体との免疫反応性の能力を有する三次元分子構造（直線的か立体配座的かのいずれか）をいう。抗原エピトープは、タンパク質、タンパク質フラグメント、ペプチド、炭水化物、脂質、および他の分子を含み得るが、本発明の目的のために、抗原エピトープは、最も一般的なタンパク質、短いオリゴペプチド、オリゴペプチドの擬態（すなわち、ＣＤ４０抗原またはＣＤ２０抗原の抗体結合特性を擬態する有機化合物）、またはそれらの併用である。適切なオリゴペプチドの擬態が、特に、ＰＣＴ出願ＵＳ９１／０４２８２に記載される。
【００７７】
加えて、本明細書で使用される用語「抗体」は、キメラ抗ＣＤ４０抗体またはキメラ抗ＣＤ２０抗体を包含する。本発明の方法における使用のためのキメラ抗ＣＤ４０抗体は、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはＣＨＩＲ−５．９の結合特性を有する一方で、本発明の方法における使用のためのキメラ抗ＣＤ２０抗体は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の結合特性を有する。「キメラ」抗体により、最も好ましくは、組換えデオキシリボ核酸技術を使用して得られ、かつヒト（免疫学的に「同類の」種を含む、例えば、チンパンジー）と非ヒトの両方の構成要素を含む抗体が意図される。したがって、このキメラ抗体の定常領域は、最も好ましくは、天然のヒト抗体の定常領域と実質的に一致する；このキメラ抗体の可変領域は、最も好ましくは、非ヒトの供給源（ｓｏｕｒｃｅ）に由来し、かつＣＤ４０細胞表面抗原またはＣＤ２０細胞表面抗原への目的の抗原特異性を有する。非ヒト供給源は、ヒトＣＤ４０細胞表面抗原もしくはヒトＣＤ２０細胞表面抗原に対する抗体を生成するために使用され得る、任意の脊椎動物の供給源か、またはヒトＣＤ４０細胞表面抗原もしくはヒトＣＤ２０細胞表面抗原を含む物質であり得る。このような非ヒト供給源としては、げっ歯類（例えば、ウサギ、ラット、マウスなど；例えば、米国特許第４，８１６，５６７号（本明細書において参考として援用される）を参照のこと）および非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など；例えば、米国特許第５，７５０，１０５号および同第５，７５６，０９６号（本明細書において参考として援用される）を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、句「免疫学的に活性のある」は、キメラ抗ＣＤ４０抗体への言及において使用される場合、ヒトＣＤ４０に結合するキメラ抗体を意味するか、またはキメラ抗ＣＤ２０抗体への言及において使用される場合、ヒトＣＤ２０に結合するキメラ抗体を意味する。
【００７８】
ヒト化抗ＣＤ４０抗体およびヒト化抗ＣＤ２０抗体は、本発明の方法における使用に適する、追加の抗ＣＤ４０抗体および追加の抗ＣＤ２０抗体を表す。「ヒト化された」により、非ヒト免疫グロブリン配列由来の最小限の配列を含む、抗ＣＤ４０抗体または抗ＣＤ２０抗体の形態が意図される。大部分は、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（受け入れ側の抗体）であり、ここで、この受け入れ側の超可変領域（相補性決定領域またはＣＤＲとしても公知である）由来の残基は、目的の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（提供側の抗体）（例えば、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類）の超可変領域（相補性決定領域またはＣＤＲとしても公知である）由来の残基により取り替えられる。句「相補性決定領域」は、天然免疫グロブリンの結合部位の天然Ｆｖ領域の結合親和性および結合特異性を同時に定めるアミノ酸配列をいう。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照のこと。句「定常領域」は、エフェクター機能を与える抗体分子の一部をいう。ヒト疾患の治療における使用のための非免疫抗原性抗体を産生することに向けられた、以前の研究において、マウス定常領域が、ヒト定常領域により置換された。この対象のヒト化抗体の定常領域は、ヒト免疫グロブリン由来であった。しかしながら、これらのヒト化抗体は、ヒトにおいて、好ましくなく、かつ潜在的に危険な免疫応答を、依然として誘導し、親和性の喪失があった。本発明の方法における使用のためのヒト化抗ＣＤ４０抗体は、本明細書で記載されるＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体により示される結合特性に、類似する結合特性を有する。本発明の方法における使用のためのヒト化抗ＣＤ２０抗体は、本明細書で記載されるＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８モノクローナル抗体により示される結合特性に、類似する結合特性を有する。
【００７９】
ヒト化は、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法（Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６）に従って、げっ歯類もしくは変異体げっ歯類のＣＤＲまたはげっ歯類もしくは変異体げっ歯類のＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列と置換することによって実施され得る。米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；および同第５，８５９，２０５号もまた参照のこと；これらは、本明細書において参考として援用される。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンの１以上の可変領域のフレームワーク領域内の残基は、対応する非ヒト残基によって置換される（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；および同第６，１８０，３７０号を参照のこと）。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体においては見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体性能をさらに洗練させるため（例えば、所望の親和性を得るため）になされる。一般的に、上記ヒト化抗体は、少なくとも１つの、そして代表的には２つの可変領域の全てを実質的に含み、この抗体において、非ヒト免疫グロブリンに対応する超可変領域の全てまたは実質的に全て、ならびに上記フレームワーク領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。上記ヒト化抗体はまた、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（代表的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域）の少なくとも一部分を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ（１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６を参照のこと；これらは、本明細書において参考として援用される。従って、このような「ヒト化」抗体は、実質的に決してインタクトでないヒト可変領域が、非ヒト種からの対応する配列によって置換されている抗体を包含し得る。実際には、ヒト化抗体は、代表的に、いくつかのＣＤＲ残基およびおそらくいくつかのフレームワーク残基が、げっ歯類抗体におけるアナログ部位からの残基によって置換されるヒト抗体である。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，８５９，２０５号を参照のこと。米国特許番号６，１８０，３７０および国際公開第０１／２７１６０号もまた参照のこと。ここで、ヒト化抗体および所定の抗原に対して改善された親和性を有するヒト化抗体を作製するための技術が、開示される。
【００８０】
用語抗ＣＤ４０抗体または抗ＣＤ２０抗体によって、不活化された内因性免疫グロブリン（Ｉｇ）座によって特徴付けられる非ヒト哺乳動物宿主（より具体的には、トランスジェニックマウス）において産生される異種抗ＣＤ４０抗体もしくは抗ＣＤ２０抗体、または改変抗ＣＤ４０抗体もしくは抗ＣＤ２０抗体もまた包含される。このようなトランスジェニック動物において、宿主免疫グロブリンの軽鎖サブユニットおよび重鎖サブユニットの発現に対して免疫応答を起こし得る内因性遺伝子は、非機能的になり、アナログのヒト免疫グロブリン座で置換される。これらのトランスジェニック動物は、軽鎖または重鎖の宿主の免疫グロブリンサブユニットが実質的にない場合に、ヒト抗体を産生する。例えば、米国特許第５，８７７，３９７号および同第５，９３９，５９８号（本明細書において参考として援用される）を参照のこと。
【００８１】
好ましくは、トランスジェニックマウスを免疫化することによって、ＣＤ４０またはＣＤ２０に対する完全ヒト抗体が得られる。このようなマウスの１つは、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）技術（Ａｂｇｅｎｉｘ；Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して得られ、米国特許第６，０７５，１８１号、同第６，０９１，００１号および同第６，１１４，５９８号（これらの全ては、本明細書において参考として援用される）に開示される。本明細書において開示される抗体を作製するために、ヒトＩｇ  Ｇ１重鎖遺伝子座およびヒトκ軽鎖遺伝子座についてのトランスジェニックマウスを、ヒトＣＤ４０またはヒトＣＤ２０を発現するＳｆ９細胞で免疫化した。マウスはまた、他のアイソタイプについてのトランスジェニックであってもよい。本発明の方法において有用な完全ヒト抗体は、本明細書において開示されるＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、およびＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８モノクローナル抗体によって示される結合特性と類似の結合特性によって特徴付けられる。
【００８２】
上記抗ＣＤ４０抗体または抗ＣＤ２０抗体のフラグメントは、それらが全長抗体の所望される親和性を保持する限り、本発明の方法においての使用に適切である。従って、それぞれ、抗ＣＤ４０抗体のフラグメントは、ＣＤ４０  Ｂ細胞表面抗原に結合する能力を保持し、抗ＣＤ２０抗体のフラグメントは、ＣＤ２０  Ｂ細胞表面抗原に結合する能力を保持する。このようなフラグメントは、対応する全長抗体に類似の特性によって特徴付けられる。例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体フラグメントは、ヒト細胞の表面上に発現されたヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合し、そして有意なアゴニスト活性を有さないが、ヒトＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０抗原に結合された場合、アンタゴニスト活性を示す；一方で、抗ＣＤ２０抗体フラグメントは、Ｃｄ２０に特異的に結合する。このようなフラグメントは、本明細書において「抗原結合」フラグメントといわれる。
【００８３】
抗体の適切な抗原結合フラグメントは、全長抗体の一部分（一般的には、抗原結合領域またはその可変領域）を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメント、ならびに単鎖抗体分子が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｆａｂ」によって、軽鎖と重鎖の一部とからなる免疫グロブリンの一価の抗原結合フラグメントが意図される。Ｆ（ａｂ’）２によって、両方の軽鎖と両方の重鎖の一部を含む免疫グロブリンの二価の抗原結合フラグメントが意図される。「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体フラグメントによって、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインが一本のポリペプチド鎖中に提示されるフラグメントが意図される。例えば、米国特許第４，９４６，７７８号、同第５，２６０，２０３号、同第５，４５５，０３０号および同第５，８５６，４５６号（これらは、本明細書において参考として援用される）を参照のこと。一般的に、上記Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするためのポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓＦｖの概要については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１１３巻、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ（編）（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、ｐｐ．２６９−３１５を参照のこと。
【００８４】
抗体または抗体フラグメントは、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４（１９９０）および米国特許第５，５１４，５４８号において記載される技術を使用して作製された抗体ファージライブラリーから単離され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７は、それぞれ、ファージライブラリーを使用したマウス抗体およびヒト抗体の単離を記載する。以下の刊行物は、鎖の混合（ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）による高親和性（ｎＭ範囲）のヒト抗体の作製（Ｍａｒｋｓら（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３）、および非常に広範なファージライブラリーを構築するためのストラテジーとしての、組み合わせ感染およびインビボの再組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら（１９９３）Ｎｕｃｌｅｉｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６）を記載する。従って、これらの技術は、モノクローナル抗体を単離するための伝統的なモノクローナル抗体のハイブリドーマ技術に対する実行可能な代替案である。
【００８５】
種々の技術が、抗体フラグメントの作製のために開発されている。伝統的には、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解性消化を介して得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら（１９９２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）およびＢｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１を参照のこと）。しかし、これらのフラグメントは、現在は、組換え宿主細胞によって直接的に産生され得る。例えば、この抗体フラグメントは、上記に記載の抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され得、化学的に結合されてＦ（ａｂ’）２フラグメントを形成する（Ｃａｒｔｅｒら（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７）。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主細胞の培養物から直接単離され得る。抗体フラグメントを作製するための他の技術は、当業者には明らかである。
【００８６】
本発明の方法において有用な抗体の組み合わせとしては、抗ＣＤ２０抗体（例えば、非ＣＤＲ領域において異なるＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８）と同様に、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書で開示されるＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体）；および１つ以上のアミノ酸付加、アミノ酸欠失、またはアミノ酸置換を有する抗体が挙げられる。本発明はまた、脱免疫された（ｄｅ−ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）（ヒト化）抗ＣＤ２０抗体および脱免疫された（ヒト化）アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体も包含し、これらは、例えば、国際公開第ＷＯ９８／５２９７６号および同第ＷＯ００３４３１７号（本明細書中で参考として援用される）に記載されるように産生され得る。このように、本発明の方法の実施に有用な、この抗体中の残基は、その結合特異性およびその生物学的な活性（このような活性は、本明細書中のどこかで言及されるアッセイにより測定される）を保持する一方で、この抗体をヒトに対し非免疫抗原性にさせるか、または、より少ない免疫抗原性にさせるように、変更される。抗ＣＤ２０抗体もしくはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、またはそのフラグメントを含む融合タンパク質（当該分野において公知であるように、融合タンパク質は、対応するポリヌクレオチドベクターから合成または発現され得る）もまた、特許請求の範囲内に含まれる。このような融合タンパク質は、下に言及されるような抗体の連結を参照して記載される。
【００８７】
本発明の方法を実施するのに有用な抗体は、例えば欧州特許出願公開第０  ９８３  ３０３  Ａ１号、国際公開第００／３４３１７号および同第９８／５２９７６号（本明細書において参考として援用される）において記載される方法を使用して作製される配列のバリエーションを有し得る。例えば、ＣＤＲ内の配列は、抗体をＭＨＣクラスＩＩに結合させ、好ましくないヘルパーＴ細胞応答を誘発し得ることが示されている。保存的置換は、上記抗体の結合活性は保持させるが、好ましくないＴ細胞応答を誘発するその能力を失わせ得る。任意のこのような保存的置換または非保存的置換は、当該分野で認められた方法（例えば、本明細書中で他の部分に記載される方法）を使用して作製され得、そして生じた抗体は、本発明の範囲内である。この改変抗体は、本明細書において記載された方法を使用して、通常、アンタゴニスト活性、親和性、および特異性について試験され得る。
【００８８】
上で記載された任意の方法、または本明細書において開示されていない任意の他の方法によって産生されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、以下の生物学的活性のうちの少なくとも１つを有する場合、本発明の範囲内である：Ｔ細胞によって刺激された正常ヒト末梢Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌の阻害；ジャーカットＴ細胞によって刺激された正常ヒト末梢Ｂ細胞の増殖の阻害；ＣＤ４０Ｌ発現細胞もしくは可溶性ＣＤ４０によって刺激された正常ヒト末梢Ｂ細胞の増殖の阻害；および以下に示されるようなヒト悪性Ｂ細胞の増殖の阻害。これらのアッセイは同時継続中の仮出願、発明の名称「Ａｎｇｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」であり、それぞれ、２００３年１１月４日、２００３年１１月２６日、および２００４年４月２７日出願、割り当てられた米国特許出願番号第６０／５１７，３３７号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００１（０３５７８４／２５８４４２））、同第６０／５２５，５７９号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５））、および同第６０／５６５，７１０号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００３（０３５７８４／２７７２１４））において記載されるように実施され得る。これらの特許文献の各々の内容は、その全体が、本明細書中に参考として援用される。Ｓｃｈｕｌｔｚｅら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：８２００−８２０４；Ｄｅｎｔｏｎら（１９９８）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２：６−１５；Ｅｖａｎｓら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：６８８−６９７；Ｎｏｅｌｌｅ（１９９８）Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ．４９：１７−２２；Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３：７７−８６；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：１２；Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７９：４３９−４４４；ならびに米国特許第５，６７４，４９２号および同第５，８４７，０８２号（本明細書において参考として援用される）において記載されるアッセイもまた参照のこと。
【００８９】
本明細書において同定されるＣＤ４０抗原エピトープに特異的なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を検出するための代表的なアッセイは、「競合的結合アッセイ」である。競合的結合アッセイは、そのアッセイにおいて、未知のものが検出されて、特異的な抗体に対する標識された既知のリガンドの結合を阻害するその能力によって定量される血清学的アッセイである。これはまた、競合的阻害アッセイともいわれる。代表的な競合的結合アッセイにおいて、標識されたＣＤ４０ポリペプチドは、例えば、本発明のモノクローナル抗体の１つ以上のエピトープに対して惹起されたモノクローナル抗体と組み合わせて、サンプル中の候補抗体によって沈殿される。目的のエピトープと特異的に反応する抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０タンパク質または目的のＣＤ４０タンパク質の特定のエピトープを含むタンパク質のフラグメントに対して調製された一連の抗体をスクリーニングすることによって同定され得る。例えば、ヒトＣＤ４０について、目的のエピトープとしては、図５Ｂ（配列番号１０）に記載されたヒトＣＤ４０の短いアイソフォーム（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿６９０５９３を参照のこと）（図５Ａに記載される配列（配列番号９；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿１５２８５４もまた参照のこと）によってコードされる）、もしくは図５Ｄ（配列番号１２）に記載されたヒトＣＤ４０の長いアイソフォーム（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＣＡＡ４３０４５およびＮＰ＿００１２４１を参照のこと）（図５Ｃに記載される配列（配列番号１１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ６０５９２およびＮＭ＿００１２５０もまた参照のこと）によってコードされる）の直鎖状アミノ酸残基および／または非直鎖状アミノ酸残基を含むエピトープが挙げられる。あるいは、以前に同定された適切なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を用いた競合的結合アッセイは、以前に同定された抗体に匹敵するモノクローナル抗体を選択するために使用される。
【００９０】
上記の方法のいずれか、または本明細書で開示されていない、任意の他の方法により産生される抗ＣＤ２０抗体は、それが以下の生物学的活性を有する場合、本発明の範囲内である：ＣＤ２０を発現する細胞に対する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害の開始；ＣＤ２０を発現する細胞に対する補体介在性細胞障害の開始；ＣＤ２０を発現する細胞への細胞毒または放射性核種の送達；Ｔ細胞に刺激された正常ヒト末梢性Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌の阻害；ジャーカットＴ細胞に刺激された正常ヒト末梢性Ｂ細胞の増殖の阻害；ＣＤ４０Ｌを発現する細胞または可溶性ＣＤ４０に刺激された正常ヒト末梢性Ｂ細胞の増殖の阻害；下に言及されるヒト悪性Ｂ細胞の増殖の阻害。これらの活性を検出するためのアッセイは、当該分野において周知であり、米国特許第５，７３６，１３７号（この全体について、本明細書において参考として援用される）に開示されるものを含む。
【００９１】
任意の以前に記載されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）または抗ＣＤ２０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）は、本発明の方法において使用される前に結合体化され得る。結合体化された抗体を作製するための方法は、当該分野で公知である。従って、上記抗ＣＤ４０抗体または抗ＣＤ２０抗体は、間接的標識または間接的標識アプローチを使用して標識され得る。「間接的標識」または「間接的標識アプローチ」によって、キレート剤が抗体に共有結合され、少なくとも１つの放射性核種がそのキレート剤に挿入されることが意図される。例えば、ＳｒｉｖａｓｔａｖａおよびＭｅａｓｅ（１９９１）Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏ．１８：５８９−６０３（参考として本明細書に援用される）におけるキレート剤および放射性核種を参照のこと。適切な標識としては、発蛍光団、発色団、放射活性原子（特に、３２Ｐおよび１２５Ｉ）、高電子密度試薬、酵素、および特異的結合パートナーを有するリガンドが挙げられる。酵素は、代表的に、それらの活性によって検出される。例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼは、通常、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を青色色素に変換する能力によって検出され、分光光度計で定量可能である。「特異的結合パートナー」とは、例えば、抗原およびその特異的なモノクローナル抗体の場合のように、高い特異性でリガンド分子に結合し得るタンパク質をいう。他の特異的な結合パートナーとしては、ビオチンとアビジンまたはストレプトアビジン、ＩｇＧとタンパク質Ａ、および当該分野で公知の多くのレセプター−リガンド対が挙げられる。同じ標識は１または数種の異なる様式において機能し得るので、上記の説明は、種々の標識を別個のクラスに分類することを意味しないことが理解されるべきである。例えば、１２５Ｉは、放射活性標識としてかまたは電子密度の高い試薬として機能する。ＨＲＰは、酵素としてか、またはｍＡｂに対する抗原として機能し得る。さらに、所望の効果のために種々の標識を組み合わせることもできる。例えば、ｍＡｂおよびアビジンもまた、本発明の実施において標識を必要とする：従って、ビオチンでｍＡｂを標識し、１２５Ｉで標識したアビジンまたはＨＰＲで標識した抗ビオチンｍＡｂを用いて、その存在を検出し得る。他の交換および可能性は、当業者には容易に明らかであり、本発明の範囲内の等価物として考えられる。
【００９２】
あるいは、抗ＣＤ４０抗体または抗ＣＤ２０抗体は、「直接的標識」または「直接的標識アプローチ」を使用して標識され得、放射性核種は、抗体に対して（代表的には、アミノ酸残基を介して）直接的に共有結合される。好ましい放射性核種は、ＳｒｉｖａｓｔａｖａおよびＭｅａｓｅ（１９９１）上述に提供される。間接的標識アプローチは、特に好まれる。例えば、リンカーが抗体に対して放射活性標識を結合するために使用される、国際公開番号ＷＯ  ００／５２０３１および同ＷＯ  ００／５２４７３、；および米国特許第６，０１５，５４２号に記載される抗体の標識された形態（本明細書中に参考として援用される）も参照のこと。
【００９３】
さらに、抗体（またはそのフラグメント）は、治療的部分（例えば、細胞毒、治療因子、または放射活性金属イオンもしくは放射性同位体）に対して結合体化され得る。細胞毒または細胞毒性因子としては、細胞に有害な任意の因子が挙げられる。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトザントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにそれらのアナログまたはホモログが挙げられる。治療因子としては、代謝拮抗物質（例えば、フルダラビン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、および有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。放射性同位体としては、Ｉ−１３１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｙ−９０、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８６、Ａｔ−２１１、Ｃｕ−６７、Ｂｉ−２１２、Ｂｉ−２１３、Ｐｄ−１０９、Ｔｃ−９９、Ｉｎ−１１１などが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の結合体は、所与の生物学的反応を修飾するために使用され得；その薬物部分は、伝統的な化学的治療因子に限定されるものとして解釈されるべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。例えば、このようなタンパク質としては、毒素（例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素またはジフテリア毒素）；タンパク質（例えば、腫瘍壊死因子、インターフェロン−α、インターフェロン−β、神経発育因子、血小板由来成長因子、組織プラスミノゲン賦活剤）；または例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、もしくは他の成長因子のような生物学的反応修飾物質が挙げられる。
【００９４】
抗体に対するこのような治療部分を結合体化するための技術は、周知である。例えば、Ａｒｎｏｎら（１９８５）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．），ｐｐ．２４３−２５６；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら（編）（１９８７），Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）（第２版；Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．），ｐｐ．６２３−６５３；Ｔｈｏｒｐｅ（１９８５）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）ｐｐ．４７５−５０６（Ｅｄｉｔｒｉｃｅ  Ｋｕｒｔｉｓ，Ｍｉｌａｎｏ，Ｉｔａｌｙ，１９８５）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎら（編）（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８５），ｐｐ．３０３−３１６；およびＴｈｏｒｐｅら（１９８２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−１５８を参照のこと。
【００９５】
あるいは、抗体は、第２の抗体に結合体化されて、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されるような抗体ヘテロ結合体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成し得る。さらに、リンカーが、上記標識と本発明の抗体との間に使用され得る（例えば、米国特許第４，８３１，１７５号を参照のこと）。抗体またはその抗原結合フラグメントは、直接的に標識されてもよいし、間接的に標識されてもよい（米国特許第５，５９５，７２１号）。処置は、同時または引き続いて投与される結合体化抗体および非結合体化抗体を用いた、処置の組み合わせからなり得る（ＷＯ  ００／５２０３１およびＷＯ  ００／５２４７３）。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、抗ＣＤ４０抗体に結合される。さらに他の実施形態において、単一の抗体はＣＤ２０およびＣＤ４０の両方に対する二重特異性を含む。そのような二重特異性抗体は当該分野で公知である。例えば、米国特許第５，９５９，０８４号を参照のこと。
【００９６】
（アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体および抗ＣＤ２０抗体の改変体）
上記アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体または抗ＣＤ２０抗体の生物学的に活性な適切な改変体が、本発明の方法において使用され得る。このような改変体は、親の抗体（すなわち、親のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体または親の抗ＣＤ２０抗体）の所望の結合特性を保持する。抗体改変体を作製するための方法は、当該分野で一般的に利用可能である。
【００９７】
例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ２０抗体（例えば、本明細書において記載されるＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８）、またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書において記載されるＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体もしくはＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体）のアミノ酸配列の改変体は、目的の抗体をコードするクローン化されたＤＮＡ配列中の変異によって調製され得る。変異誘発およびヌクレオチド配列変更についての方法は、当該分野で周知である。例えば、以下を参照のこと：ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ（編）（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；米国特許第４，８７３，１９２号；およびこれらにおいて引用される参考文献（これらは、本明細書において参考として援用される）。目的のポリペプチドの生物学的活性に影響しない適切なアミノ酸置換基に関してのガイダンスは、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）、Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）（本明細書において参考として援用される）のモデルにおいて見出され得る。１つのアミノ酸を類似の特性を有する別のアミノ酸で交換するような、保存的置換が好まれ得る。保存的置換の例としては、Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ、Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ、Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ、およびＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９８】
目的の抗ＣＤ２０抗体またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体ポリペプチドの改変体の構築において、改変は、改変体が所望の活性（すなわち、類似の結合親和性）を保有し続け、そしてそれぞれ、ヒト細胞の表面上に発現されたヒトＣＤ２０抗原またはＣＤ４０抗原に特異的に結合することができ、そして抗ＣＤ４０の場合、有意なアゴニスト活性を有さないが、ヒトＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０抗原に結合された場合に、アンタゴニスト活性を示すようになされる。明らかに、上記改変ポリペプチドをコードするＤＮＡ中に作製された任意の変異は、リーディングフレームの外の配列に位置してはならず、そして好ましくは、２次ｍＲＮＡ構造を生じ得る相補的領域を作製しない。欧州特許出願公開第７５，４４４号を参照のこと。
【００９９】
さらに、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の定常領域が変異されて、多くの方法でエフェクター機能を変更し得る。例えば、米国特許第６，７３７，０５６Ｂ１号および米国特許出願公開第２００４／０１３２１０１Ａ１号を参照のこと。これらは、Ｆｃレセプターへの抗体結合を最適化するＦｃ変異体を開示する。
【０１００】
好ましくは、参照抗ＣＤ２０抗体またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の改変体は、参照抗ＣＤ２０抗体（例えば、本明細書において記載されるＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８）についてのアミノ酸配列に対してか、参照アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体分子（例えば、本明細書において記載されるＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体またはＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体）についてのアミノ酸配列に対してか、あるいは参照抗体のより短い部分に対して、少なくとも７０％もしくは７５％の配列同一性、好ましくは少なくとも８０％もしくは８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％または９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。より好ましくは、上記分子は、少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を共有する。本発明の目的のために、アフィンギャップサーチを使用したＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサーチアルゴリズム（１２のギャップオープンペナルティおよび２のギャップ伸長ペナルティ、６２のＢＬＯＳＵＭマトリックスを使用）を使用して、配列同一性％が決定される。このＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサーチアルゴリズムは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９において教示される。改変体は、例えば、わずか１〜１５アミノ酸残基、わずか１〜１０アミノ酸残基（例えば、６〜１０）、わずか５、わずか４、３、２、またはさらに１アミノ酸残基だけ上記参照アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体または参照抗ＣＤ２０抗体と異なる。
【０１０１】
２つのアミノ酸配列の最適アラインメントに関して、上記改変アミノ酸配列の隣接するセグメントは、上記参照アミノ酸配列について、アミノ酸残基の付加またはアミノ酸残基の欠失を有し得る。上記参照アミノ酸配列を比較するために使用される隣接するセグメントは、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基を含み、そして３０個、４０個、５０個またはそれ以上のアミノ酸残基であり得る。保存的な残基置換またはギャップに関連する配列同一性に対する補正が、なされ得る（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジーサーチアルゴリズムを参照のこと）。
【０１０２】
特に、悪性Ｂ細胞上の抗原に結合された場合、ＣＤ４０を特異的に結合し、かつアンタゴニスト活性を保持し得るか、またはＣＤ２０に特異的に結合するポリペプチドの正確な化学的構造は、多くの因子に依存する。イオン化可能なアミノ基およびカルボニル基が分子中に存在する場合、特定のポリペプチドは、酸性塩もしくは塩基性塩として、または中性形態で得られ得る。適切な環境状態に配置された場合に、その生物学的活性を保持するこのような調製物の全ては、本明細書において使用されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体または抗ＣＤ２０抗体の定義の中に含まれる。さらに、上記ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖部分を使用した誘導体化（グリコシル化）または他の補助的な分子（例えば、脂質、リン酸、アセチル基など）によって増加され得る。上記ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖類との結合体化によってもまた増加され得る。このような増加の特定の局面は、産生する宿主の翻訳後の処理システムを通じて達成され；他のこのような改変も、インビトロで導入され得る。とにかく、このような改変は、上記抗ＣＤ４０抗体または抗ＣＤ２０抗体の結合特性（アンタゴニスト特性が挙げられる）が破壊されない限り、本明細書において使用される抗ＣＤ４０抗体または抗ＣＤ２０抗体の定義の中に含まれる。このような改変体は、種々のアッセイにおいて、上記ポリペプチドの活性を増強させるか、または弱めるかのいずれかによって、その活性に量的または質的に影響し得ることが予想される。さらに、上記鎖中の個々のアミノ酸残基は、酸化、還元、または他の誘導体化によって改変され得、そして上記ポリペプチドは、活性を保持するフラグメントを得るために切断され得る。アンタゴニスト活性を破壊しないこのような変更は、本明細書において使用される目的の抗ＣＤ４０抗体および抗ＣＤ２０抗体の定義から上記ポリペプチド配列を除かない。
【０１０３】
当該分野は、ポリペプチド改変体の調製および使用に関する実質的なガイダンスを提供する。抗ＣＤ４０抗体改変体の調製において、当業者は、天然のタンパク質ヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対するどの修飾が、本発明の方法において使用される薬学的組成物の治療上活性な成分として使用するために適切である改変体を生じるかを容易に決定し得る。
【０１０４】
（薬学的処方物および投与の様式）
抗ＣＤ２０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）とアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）との組み合わせは、新生Ｂ細胞増殖によって特徴付けられる癌（特に、ＣＤ４０抗原およびＣＤ２０抗原の両方を発現する新生Ｂ細胞を含む癌）を予防または処置するために治療的に有効である濃度で投与される。この目的を達成するために、抗体は、当該分野で公知の種々の利用可能な賦形剤を用いて処方され得る。代表的には、抗体は、静脈内、腹腔内または皮下のいずれかで注射によって投与される。この投与を達成するための方法は、当業者に公知である。また、局所投与もしくは経口投与される組成物、または粘膜を介して伝達され得る組成物を得ることも可能であり得る。
【０１０５】
静脈内投与は、投与される抗体に依存して、好ましくは約１〜約１０時間にわたる期間、より好ましくは約１時間〜約８時間にわたる期間、さらにより好ましくは約２時間〜７時間にわたる期間、なおより好ましくは約４時間〜６時間にわたる期間の注入によって起こる。薬学的組成物による最初の注入は、約４時間〜約６時間の期間にわたって行われ、続く注入はより迅速に送達される。続く注入は、約１時間〜約６時間（例えば、約１時間〜約４時間、約１時間〜約３時間、または約１時間〜約２時間を含む）の期間にわたって投与され得る。
【０１０６】
本発明の薬学的組成物は、意図される投与の経路と適合するように処方される。可能な投与の経路の例としては、非経口投与（例えば、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、皮内、皮下（ＳＣ）、または注入）、経口投与および肺投与（例えば、吸入）、鼻投与、経皮（局所）投与、経粘膜投与ならびに直腸投与が挙げられる。非経口適用、皮内適用、もしくは皮下適用に使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含み得る：滅菌希釈液（例えば、注射用水）、生理的食塩溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、ポリピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗菌剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）；緩衝剤（例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩、および張度調節のための薬剤（塩化ナトリウムまたはブドウ糖）。ｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）で調節され得る。この非経口調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、またはガラス製もしくはプラスチック製の複数用量バイアルの中に封じ込められ得る。
【０１０７】
上記抗体は、代表的には、標準的技術によって、薬学的に受容可能な緩衝剤（例えば、滅菌生理的食塩水、滅菌緩衝水、ポリピレングリコール、前述のものの組み合わせなど）内に提供される。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）および抗ＣＤ２０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）は、別個の薬学的組成物に処方されても、同時投与のための単一の薬学的組成物内に処方されてもよい。非経口的に投与可能な薬剤を調製するための方法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９０）（本明細書において参考として援用される）において記載される。例えば、本発明の方法において使用するために適切な安定化抗体の薬学的処方物を記載するＷＯ９８／５６４１８もまた参照のこと。
【０１０８】
投与される少なくとも１種のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体もしくはその抗原結合フラグメントと少なくとも１種の抗ＣＤ２０抗体もしくはその抗原結合フラグメントとの組み合わせの量は、当業者によって過度の実験なしに容易に決定される。投与の様式および本明細書中に開示される抗体の組み合わせのそれぞれの量に影響する因子としては、治療を受ける特定の疾患、上記疾患の重症度、上記疾患の病歴、ならびに治療を受ける個体の年齢、身長、体重、健康状態、および生理学的状態が挙げられるが、これらに限定されない。同様に、投与される本明細書中に開示される抗体の組み合わせの量は、投与の様式およびその被験体がこれらの抗腫瘍剤の一回用量または複数用量のどちらを受けるかに依存する。一般的に、本明細書中に開示される抗体の組み合わせの投薬量をより高くすることが、治療を受ける患者の体重の増加に関して好ましい。投与される抗ＣＤ２０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）の用量は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、好ましくは、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇの範囲である。従って、例えば、組み合わせのうちの任意の１種の抗体は、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇであり得る。
【０１０９】
本発明の別の実施形態において、上記方法は、複数用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）と組み合わせた抗ＣＤ２０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）の複数用量の投与を包含する。上記方法は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、３０回、３５回、４０回、もしくはそれ以上の治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）のいずれか、あるいはそれら両方を含有する薬学的組成物の投与を包含する。薬学的組成物の複数用量の投与の頻度および期間は、当業者によって過度に実験なしに容易に決定され得る。さらに、治療上有効な量の抗体の組み合わせを用いた被験体の処置は、一回の処置を包含し得るか、または好ましくは一連の処置を包含し得る。好ましい例において、被験体は、抗ＣＤ２０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）と抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）の組み合わせ（いずれも約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の間の範囲の用量で投与される）を用いて、約１〜１０週間の間、好ましくは約２〜８週間の間、よりこのましくは約３〜７週間の間、そしてさらにより好ましくは約４週間、５週間、または６週間の間に週に１回処置される。処置は、再発を防止するためか、または再発の徴候に対して、毎年行われ得る。
【０１１０】
特定の処置にわたって、処置のために使用される抗体またはその抗原結合フラグメントの有効な投与量は、増加または減少し得ることもまた、理解される。投与量における変更は、本明細書で記載される診断上のアッセイの結果に起因し得、かつ、その結果から明白になり得る。したがって、１つの実施形態において、この投薬レジメンとしては、治療上有効な用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（または、その抗原結合フラグメント）と併用しての、治療上有効な用量の抗ＣＤ２０抗体（または、その抗原結合フラグメント）の投与が挙げられ、この組み合わせは、処置期間の１日目、８日目、１５日目、および２２日目に投与される。他の実施形態において、この投薬レジメンとしては、治療上有効な用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（または、その抗原結合フラグメント）と併用しての、治療上有効な用量の抗ＣＤ２０抗体（または、その抗原結合フラグメント）の投与が挙げられ、この組み合わせは、処置期間における１週間の１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、および７日目に投与される。さらなる実施形態としては、治療上有効な用量の抗ＣＤ２０抗体（または、その抗原結合フラグメント）が、治療上有効な用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（または、その抗原結合フラグメント）と併用して投与され、この組み合わせが、処置期間における１週間の１日目、３日目、５日目、および７日目に投与される、投薬レジメン；治療上有効な用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（または、その抗原結合フラグメント）と併用しての、治療上有効な用量の抗ＣＤ２０抗体（または、その抗原結合フラグメント）の投与を含み、ここで、この抗体の組み合わせが、処置期間における１週間の１日目および３日目に投与される、投薬レジメン；ならびに、処置期間における任意の所定の週の１日目での、治療上有効な用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（または、その抗原結合フラグメント）と併用しての、治療上有効な用量の抗ＣＤ２０抗体（または、その抗原結合フラグメント）の投与を含む、好ましい投薬レジメン、が挙げられる。この処置期間は、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、または１年間を含み得る。処置期間は、引き続いていても、互いに１日、１週間、２週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、または１年間間隔が開いてもよい。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（または、その抗原結合フラグメント）と抗ＣＤ２０抗体（または、その抗原結合フラグメント）との組み合わせを使用する処置が、処置の間のいくつかの時点での、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（または、その抗原結合フラグメント）と抗ＣＤ２０抗体（または、その抗原結合フラグメント）とのこの組み合わせを含みさえすれば、この処置は一方または両方の抗体の同時投与もしくは併用投与を含み得る。この併用治療の効果はまた、この抗ＣＤ２０抗体処置および／またはこのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体処置のいずれかの実施のタイミングを変更することによっても最適化され得る。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと併用しての抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントによる処置は、同時的（同時発生的）、継続的（連続的）、またはその併用であり得る。したがって、併用抗体治療を受ける被験体は、同一の時間に（すなわち、同時に）か、または異なる時間に（すなわち、連続的に、同日または異なる日にいずれかの順序で）、抗ＣＤ２０抗体（または、その抗原結合フラグメント）およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（または、その抗原結合フラグメント）の両方を受容し得る。それゆえ、いくつかの実施形態において、この抗ＣＤ２０抗体（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））（または、その抗原結合フラグメント）は、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）（または、その抗原結合フラグメント）と同時に投与される。他の実施形態において、この抗ＣＤ２０抗体（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））（または、その抗原結合フラグメント）がまず最初に投与され、それから次にこのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）（または、その抗原結合フラグメント）が投与される。さらに他の実施形態において、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）（または、その抗原結合フラグメント）がまず最初に投与され、それから次にこの抗ＣＤ２０抗体（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））（または、その抗原結合フラグメント）が投与される。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）の組み合わせが、１回の投薬について併用的に与えられるが、他の投薬としては、同日または異なる日にいずれかの順序での連続投与が挙げられる。この抗ＣＤ２０抗体（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））および、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）が同時に投与される場合、これらは、それぞれこの抗ＣＤ２０抗体（またはその抗原結合フラグメント）か、もしくはこのアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（またはその抗原結合フラグメント）のいずれかを含む、別個の薬学的組成物として投与され得るか、または、これら両方の抗癌剤を含む単一の薬学的組成物として投与され得る。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの治療上有効な量の範囲は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、または約７ｍｇ／ｋｇ〜約１２ｍｇ／ｋｇであり得る。従って、例えば、任意の１種のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２もしくはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはその抗原結合フラグメント）の用量は、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、または約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲にある他のそのような用量である得る。同じ治療有効用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体投薬の各週を通じて、投与され得る。あるいは、異なる治療有効用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、処置期間のクールにわたって使用され得る。
【０１１２】
他の実施形態において、本明細書の他の部分で定義されるように、最初の治療有効用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、より低い用量範囲（すなわち、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）であり得、引き続く用量は、より高い用量範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）になり得る。
【０１１３】
代替的な実施形態において、本明細書の他の部分で定義されるように、最初の治療有効用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、より高い用量範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）であり得、引き続く用量は、より低い用量範囲（すなわち、０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）になり得る。従って、１つの実施形態において、上記最初の治療有効用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ（約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、および３５ｍｇ／ｋｇを含む）であり、そして引き続く治療有効用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ（約５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、および約１５ｍｇ／ｋｇを含む）である。
【０１１４】
本発明のいくつかの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法は、「負荷投与量（ｌｏａｄｉｎｇ  ｄｏｓｅ）」の抗体またはその抗原結合フラグメントを、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法を必要としている被験体に投与することによって開始される。「負荷投与量」によって、投与される抗体または抗原結合フラグメントの用量がより高い用量範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）にある、上記被験体に投与されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの最初の用量が意図される。上記「負荷投与量」は、完全な「負荷投与量」が約２４時間の期間内に投与される限り、一回投与（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントがＩＶ投与される一回注入）としてか、または複数投与（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントがＩＶ投与される複数注入）として投与され得る。「負荷投与量」の投与に続いて、次いで上記被験体は、１以上のさらなる治療有効用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを投与される。引き続く治療有効用量は、例えば、毎週の投薬スケジュールに従ってか、または２週間に一度、３週間に一度、もしくは４週間に一度、投与され得る。このような実施形態において、上記引き続く治療有効用量は、一般的により低い用量範囲（すなわち、０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）内にある。
【０１１５】
あるいは、いくつかの実施形態において、「負荷投与量」に続いて、上記引き続く治療有効用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、「維持スケジュール」に従って投与される。このスケジュールにおいて、上記治療有効用量の抗体またはその抗原結合フラグメントは、１ヶ月に１回、６週間に１回、２ヶ月に１回、１０週間に１回、３ヶ月に１回、１４週間に１回、４ヶ月に１回、１８週間に１回、５ヶ月に１回、２２週間に１回、６ヶ月に１回、７ヶ月に１回、８ヶ月に１回、９ヶ月に１回、１０ヶ月に１回、１１ヶ月に１回、または１２ヶ月に１回、投与される。このような実施形態において、上記治療有効用量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、特に引き続く用量がより頻繁な間隔（例えば、２週間に１回〜１ヶ月に１回）で投与される場合、より低い用量範囲（すなわち、０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）であるか、または特に引き続く用量がより頻繁でない間隔（例えば、引き続く用量が約１ヶ月〜約１２ヶ月離れて投与される）で投与される場合、より高い投薬範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）である。
【０１１６】
本発明の方法において有用な薬学的組成物は、抗ＣＤ２０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）のいずれか、あるいはそれら両方の生物学的に活性な改変体を包含し得る。このような改変体は、被験体に投与されたときに、改変体ポリペプチドを含有する薬学的組成物が、天然のポリペプチドを含有する薬学的組成物と同じ治療的効果を有するように、上記天然ポリペプチドの所望の生物学的活性を保持するべきである。すなわち、上記改変体の抗体は、天然のアンタゴニスト抗体（例えば、それぞれハイブリドーマ細胞株５．９またはハイブリドーマ細胞株１２．１２によって発現されるモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２、およびＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８）について観察されるものと類似した様式において、薬学的組成物中の治療上活性な成分として機能する。改変体抗体が、所望の生物学的活性を保持し、それ故、薬学的組成物中の治療的活性成分として機能するか否かを決定するための方法は、当該分野で利用可能である。抗体改変体の生物学的活性は、天然のアンタゴニスト抗体の活性を測定するために特異的に設計されたアッセイ（本発明において記載されるアッセイを含む）を使用して測定され得る。
【０１１７】
治療的に活性な成分として、本明細書中に記載される結合特性を有する抗ＣＤ２０抗体、または本明細書中に記載される結合特性を有するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含有する、あらゆる薬学的組成物が、本発明の方法において使用され得る。従って、１種以上の本発明の実施において有用な抗体を含有する液体、凍結乾燥または噴霧乾燥した組成物は、本発明の方法に従う、その後の被験体への投与のために、水系もしくは非水系の溶液または懸濁液として調製され得る。これらの組成物の各々は、治療的または予防的に活性な成分として、少なくとも１種の抗ＣＤ２０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）またはアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（もしくはその抗原結合フラグメント）を含有する。「治療的または予防的に活性な成分」により、抗体またはその抗原結合フラグメントが、組成物中に特異的に組み込まれて、薬学的組成物が被験体に投与されるときに、この被験体内の疾患もしくは状態の、処置、予防または診断に関して、所望の治療的または予防的な応答をもたらすことが意図される。好ましくは、薬学的組成物は、適切な安定化剤、充填剤、またはこれらの両方を含有し、調製および保存の間の、タンパク質の安定性および生物学的活性の喪失に伴う問題を最小限にする。
【０１１８】
処方用物質（ｆｏｒｍｕｌａｎｔ）が、本発明の実施において有用な抗体を含有する薬学的組成物に添加され得る。これらの処方用物質としては、油、ポリマー、ビタミン、炭水化物、アミン酸（ａｍｉｎｅ  ａｃｉｄ）、塩、緩衝液、アルブミン、界面活性剤、または充填剤が挙げられ得るがこれらに限定されない。好ましくは、炭水化物としては、糖または糖アルコール（例えば、単糖類、二糖類、もしくは多糖類、または水溶性グリカン）が挙げられる。糖類またはグリカンとしては、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、αおよびβシクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、ならびにカルボキシメチルセルロース、またはこれらの混合物が挙げられ得る。「糖アルコール」は、ヒドロキシル基を有するＣ４〜Ｃ８炭化水素として定義され、そして、糖アルコールとしては、ガラクチトール、イノシトール、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、グリセロールおよびアラビトールが挙げられる。これらの糖または糖アルコールは、個別または組み合わせで使用され得る。糖または糖アルコールの濃度は、１．０％ｗ／ｖと７％ｗ／ｖとの間であり、より好ましくは、２．０％ｗ／ｖと６．０％ｗ／ｖとの間である。好ましくは、アミノ酸としては、左旋（Ｌ）形態のカルニチン、アルギニンおよびベタインが挙げられる；しかし、他のアミノ酸も添加され得る。好ましいポリマーとしては、２，０００と３，０００との間の平均分子量を有するポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、または、３，０００と５，０００との間の平均分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。処方物中に添加され得る界面活性剤としては、欧州特許第２７０，７９９号および同第２６８，１１０号に示される。
【０１１９】
さらに、抗体は、例えば、その循環半減期を増加させるために、ポリマーへの共有結合によって化学修飾され得る。好ましいポリマー、およびこのポリマーをペプチドに結合させる方法は、米国特許第４，７６６，１０６号；同第４，１７９，３３７号；同第４，４９５，２８５号；および同第４，６０９，５４６号（これらは、全て、その全体が本明細書中に参考として援用される）に示される。好ましいポリマーは、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧは、室温で水溶性であり、一般式：Ｒ（Ｏ−−ＣＨ２−−ＣＨ２）ｎＯ−−Ｒを有する。この式において、Ｒは、水素、またはアルキル基もしくはアルカノール基のような保護基であり得る。好ましくは、この保護基は、１個と８個の間の炭素を有し、より好ましくは、この保護基はメチルである。記号ｎは、正の整数であり、好ましくは、１と１，０００との間、より好ましくは、２と５００との間である。ＰＥＧは、１，０００と４０，０００との間、より好ましくは、２，０００と２０，０００との間、最も好ましくは、３，０００と１２，０００との間の好ましい平均分子量を有する。好ましくは、ＰＥＧは、少なくとも１つのヒドロキシ基を有し、より好ましくは、それは、末端のヒドロキシ基である。好ましくはインヒビター上の遊離アミノ基と反応するように活性化されるのは、このヒドロキシ基である。しかし、反応基の型および量は、本発明の共有結合化ＰＥＧ／抗体を達成するために変動し得ることが理解される。
【０１２０】
水溶性のポリオキシエチル化ポリオールもまた、本発明において有用である。これらとしては、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）などが挙げられる。ＰＯＧが好ましい。１つの理由は、ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格が、例えば、動物およびヒトのモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドにおいて天然に存在するものと同じ骨格であるからである。従って、この分枝形成は、必ずしも身体において外来因子として認識されない。ＰＯＧは、ＰＥＧと同じ範囲の好ましい分子量を有する。ＰＯＧの構造は、Ｋｎａｕｆら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５０６４−１５０７０に示され、ＰＯＧ／ＩＬ−２結合体の考察については、米国特許第４，７６６，１０６号に見られ、これらは、いずれも、その全体が本明細書により参考として援用される。
【０１２１】
循環半減期を増加するための別の薬物送達系は、リポソームである。リポソーム送達系を調製する方法は、Ｇａｂｉｚｏｎら（１９８２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４２：４７３４；Ｃａｆｉｓｏ（１９８１）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ６４９：１２９；およびＳｚｏｋａ（１９８０）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｅｎｇ．９：４６７において議論されている。他の薬物送達系が当該分野で公知であり、例えば、Ｐｏｚｎａｎｓｋｙら（１９８０）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｒ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ編，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｎ．Ｙ．）ｐｐ．２５３−３１５；Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ（１９８４）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｖｓ  ３６：２７７に記載される。
【０１２２】
薬学的組成物に組み込まれる処方用物質は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの安定性のために提供されるべきである。すなわち、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、その物理的および／または化学的安定性を保持し、そして、所望の生物学的活性（すなわち、本明細書において上で定義される１種以上のアンタゴニスト活性（Ｔ細胞により刺激された正常なヒト末梢Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌の阻害；Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞により刺激された正常なヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ＣＤ４０Ｌ発現細胞もしくは可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）により刺激された正常ヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ｓＣＤ４０Ｌもしくは固相ＣＤ４０Ｌにより刺激された、あらゆる細胞における「生き残った」抗アポトーシス細胞内シグナルの阻害；ｓＣＤ４０Ｌまたは固相ＣＤ４０Ｌとのライゲーションに対する任意の細胞におけるＣＤ４０シグナル伝達の阻害；ならびに、本明細書中の他の部分で言及した、ヒト悪性Ｂ細胞の増殖の阻害が挙げられるがこれらに限定されない））を有するべきである。
【０１２３】
タンパク質の安定性をモニターするための方法は、当該分野で周知である。例えば、Ｊｏｎｅｓ（１９９３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０；Ｌｅｅ編（１９９１）Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；および本明細書中、以下に開示される安定性アッセイを参照のこと。一般に、タンパク質の安定性は、特定の時間にわたって、選択された温度において測定される。好ましい実施形態において、安定な抗体の薬学的処方物は、室温（約２５℃）において、少なくとも１ヶ月、少なくとも３ヶ月、もしくは少なくとも６ヶ月保存した場合に、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの安定性を提供し、そして／あるいは、２〜８℃において、少なくとも６ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２４ヶ月、安定である。
【０１２４】
薬学的組成物中に処方される場合、抗体のようなタンパク質は、その薬学的組成物中で、沈殿、凝集および／または変性の、目に見える徴候（すなわち、変色または透明度の喪失）または（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）またはＵＶ光散乱を使用して）測定可能な徴候を示さない場合に、所定の時点において、その物理的安定性を保持すると考えられる。化学的安定性に関して、薬学的組成物中に処方される場合、抗体のようなタンパク質は、その薬学的組成物中で、化学的安定性の測定が、そのタンパク質（すなわち、抗体）が、目的の生物学的活性を保持することを暗示する場合に、所定の時点において、その化学的安定性を保持すると考えられる。化学的安定性の変化をモニターするための方法は、当該分野で周知であり、この方法としては、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣおよび／またはマトリックス支援レーザー脱離イオン化／飛行時間質量分析を使用する、タンパク質の化学的に変更された形態（例えば、クリッピングからの結果）を検出するための方法；および、例えば、イオン交換クロマトグラフィーを使用する、分子の電荷の変化に伴う分解（例えば、脱アミドに伴う分解）を検出する方法が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、本明細書中で、以下に開示される方法を参照のこと。
【０１２５】
薬学的組成物中に処方される場合、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、またはその抗原結合フラグメントは、所望の生物学的活性に適切なアッセイにおいて測定されるとき、その時点での所望の生物学的活性が、その薬学的組成物が調製された時点で示される所望の生物学的活性の約３０％以内、好ましくは、約２０％以内である場合に、所定の時点において所望の生物学的活性を保持すると考えられる。本明細書中に開示されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体およびその抗原結合フラグメントの所望の生物学的活性を測定するためのアッセイは、本明細書中の実施例に記載されるようにして実施され得る。また、Ｓｃｈｕｌｔｚｅら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：８２００−８２０４；Ｄｅｎｔｏｎら（１９９８）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２：６−１５；Ｅｖａｎｓら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：６８８−６９７；Ｎｏｅｌｌｅ（１９９８）Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ．４９：１７−２２；Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ，Ｈｅｍａｔｏｌ．３：７７−８６；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：１２；Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７９：４３９−４４４；ならびに米国特許第５，６７４，４９２号および同第５，８４７，０８２号に記載されるアッセイもまた参照のこと（これらは、本明細書中に参考として援用される）。
【０１２６】
本発明のいくつかの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメントは、液体薬学的処方物中に処方される。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、当該分野で公知の任意の方法を使用して調製され得、これらの方法としては、本明細書において上で開示された方法が挙げられる。１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメントは、ＣＨＯ細胞株において組換え的に産生される。
【０１２７】
その調製および精製の後、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書中に示される様式で液体薬学的処方物として処方され得る。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、その処方前に保存される場合、これらは、例えば、≦−２０℃において凍結され、次いで、さらなる処方のために、室温にて融解され得る。この液体薬学的処方物は、治療上有効な量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。この処方物中に存在する抗体またはその抗原結合フラグメントの量は、投与経路および所望の投薬用量を考慮に入れる。
【０１２８】
この様式において、液体薬学的組成物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体もしくはＣＨＩＲ−５．９抗体）またはその抗原結合フラグメントを、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約４０．０ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約３０．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２０．０ｍｇ／ｍｌ、または約１５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。いくつかの実施形態において、この液体薬学的組成物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約１０．０ｍｇ／ｍｌ、約１０．０ｍｇ／ｍｌ〜約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約１５．０〜約２０．０ｍｇ／ｍｌ、約２０．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌ、約２５．０ｍｇ／ｍｌ〜約３０．０ｍｇ／ｍｌ、約３０．０ｍｇ／ｍｌ〜約３５．０ｍｇ／ｍｌ、約３５．０〜約４０．０ｍｇ／ｍｌ、約４０．０〜約４５．０ｍｇ／ｍｌ、または約４５．０ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。他の実施形態において、この液体薬学的組成物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを、約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約１６．０ｍｇ／ｍｌ、約１７．０ｍｇ／ｍｌ、約１８．０ｍｇ／ｍｌ、約１９．０ｍｇ／ｍｌ、約２０．０ｍｇ／ｍｌ、約２１．０ｍｇ／ｍｌ、約２２．０ｍｇ／ｍｌ、約２３．０ｍｇ／ｍｌ、約２４．０ｍｇ／ｍｌ、または約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。この液体薬学的組成物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体もしくはＣＨＩＲ−５．９抗体）またはその抗原結合フラグメント、およびこの処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲（ｐＨ約５．０、ｐＨ約５．１、ｐＨ約５．２、ｐＨ約５．３、ｐＨ約５．４、ｐＨ約５．５、ｐＨ約５．６、ｐＨ約５．７、ｐＨ約５．８、ｐＨ約５．９、ｐＨ約６．０、ｐＨ約６．１、ｐＨ約６．２、ｐＨ約６．３、ｐＨ約６．４、ｐＨ約６．５、ｐＨ約６．６、ｐＨ約６．７、ｐＨ約６．８、ｐＨ約６．９、ｐＨ約７．０、およびｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内の他のこのような値が含まれる）に維持する緩衝液を含む。いくつかの実施形態において、緩衝液は、処方物のｐＨを、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．５、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約５．５、ｐＨ約５．５〜ｐＨ約７．０、ｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．５、またはｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．０の範囲に維持する。
【０１２９】
液体抗ＣＤ４０抗体処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲に維持する任意の適切な緩衝液は、その抗体の物理化学的安定性および所望の生物学的活性が本明細書において上に言及されたように維持される限り、処方物において使用され得る。適切な緩衝液としては、従来の酸およびその塩が挙げられるがこれらに限定されず、ここで、対イオンは、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、またはマグネシウムであり得る。薬学的な液体処方物を緩衝するために使用され得る従来の酸およびその塩の例としては、コハク酸またはコハク酸塩、クエン酸またはクエン酸塩、酢酸または酢酸塩、酒石酸または酒石酸塩、リン酸またはリン酸塩、グルコン酸またはグルコン酸塩、グルタミン酸またはグルタミン酸塩、アスパラギン酸またはアスパラギン酸塩、マレイン酸またはマレイン酸塩、およびリンゴ酸またはリンゴ酸塩の緩衝液が挙げられるがこれらに限定されない。処方物内の緩衝液の濃度は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ（約１ｍＭ、約２ｍＭ、約５ｍＭ、約８ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、または約１ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲内の他のこのような値を含む）であり得る。いくつかの実施形態において、処方物内の緩衝液の濃度は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ（約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１５ｍＭの範囲内の他のこのような値を含む）であり得る。
【０１３０】
本発明のいくつかの実施形態において、液体薬学的処方物は、治療上有効な量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（たとえば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）またはその抗原結合フラグメント、およびこの処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０、好ましくは、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．５の範囲に維持する濃度のコハク酸緩衝液またはクエン酸緩衝液を含む。「コハク酸緩衝液」または「クエン酸緩衝液」によって、それぞれ、コハク酸の塩またはクエン酸の塩を含む緩衝液が意図される。好ましい実施形態において、コハク酸またはクエン酸の対イオンは、ナトリウムカチオンであり、従って、緩衝液は、それぞれ、コハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムである。しかし、任意のカチオンが、有効であると予想される。他の可能なコハク酸カチオンまたはクエン酸カチオンとしては、カリウム、アンモニウム、カルシウム、およびマグネシウムが挙げられるがこれらに限定されない。上記のように、処方物内のコハク酸緩衝液またはクエン酸緩衝液の濃度は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ（約１ｍＭ、約２ｍＭ、約５ｍＭ、約８ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、または約１ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲内の他のこのような値を含む）であり得る。いくつかの実施形態において、処方物内の緩衝液の濃度は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ（約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、または約１５ｍＭを含む）であり得る。他の実施形態において、液体薬学的処方物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメントを、０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌ、または約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で、そして、コハク酸緩衝液またはクエン酸緩衝液（例えば、コハク酸ナトリウム緩衝液またはクエン酸ナトリウム緩衝液）を、約１ｍＭ〜約２０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、好ましくは、約１０ｍＭの濃度で含む。
【０１３１】
液体薬学的処方物が等張付近であることが望ましい場合、治療上有効な量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント、およびこの処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内に維持するための緩衝液を含む液体薬学的処方物は、さらに、この処方物を等張付近にするために十分な量の等張化剤を含み得る。「等張付近（ｎｅａｒ  ｉｓｏｔｏｎｉｃ）」により、水溶性処方物が、約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３６０ｍｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３４０ｍｍｏｌ／ｋｇ、より好ましくは約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３３０ｍｍｏｌ／ｋｇ、なおより好ましくは約２６０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３２０ｍｍｏｌ／ｋｇ、なおより好ましくは約２７０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３１０ｍｍｏｌ／ｋｇの浸透圧を有することが意図される。溶液の等張度を測定する方法は、当業者に公知である。例えば、Ｓｅｔｎｉｋａｒら（１９５９）Ｊ．Ａｍ．Ｐｈａｒｍ．Ａｓｓｏｃ．４８：６２８を参照のこと。
【０１３２】
当業者は、薬学的組成物に等張性を提供するのに有用な、種々の薬学的に受容可能な溶質に精通している。等張化剤は、本発明の液体薬学的処方物の浸透圧を、体液の浸透圧にほぼ等しい値に調節し得る任意の試薬であり得る。生理学的に受容可能な等張化剤の使用が望ましい。従って、治療上有効な量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント、およびこの処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内に維持するための緩衝液を含む液体薬学的処方物は、さらに、等張性を提供するために使用され得る成分（例えば、塩化ナトリウム；アミノ酸（例えば、アラニン、バリンおよびグリシン）；糖類および糖アルコール（ポリオール）（グルコース、デキストロース、フルクトース、スクロース、マルトース、マンニトール、トレハロース、グリセロール、ソルビトールおよびキシリトールが挙げられるがこれらに限定されない）；酢酸、他の有機酸またはその塩、および比較的少量のクエン酸またはリン酸）を含み得る。当業者は、液体処方物の最適な張度を提供するために適切なさらなる薬剤を知っている。
【０１３３】
いくつかの好ましい実施形態において、治療上有効な量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント、およびこの処方物のｐＨを、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内に維持するための緩衝液を含む液体薬学的処方物は、さらに、等張化剤として塩化ナトリウムを含む。処方物中の塩化ナトリウムの濃度は、張度に対する他の成分の寄与に依存する。いくつかの実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約７５ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約７５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１００ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１２５ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約１２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１３０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、約１３０ｍＭ〜約１６０ｍＭ、約１３５ｍＭ〜約１５５ｍＭ、約１４０ｍＭ〜約１５５ｍＭ、または約１４５ｍＭ〜約１５５ｍＭである。１つのこのような実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約１５０ｍＭである。他のこのような実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約１５０ｍＭであり、緩衝液は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭの濃度のコハク酸ナトリウム緩衝液またはクエン酸ナトリウム緩衝液であり、この液体薬学的処方物は、治療上有効な量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメントを含み、そして、この処方物は、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．０、またはｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．５のｐＨを有する。他の実施形態において、液体薬学的処方物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント、ｐＨ約５．５のｐＨにおいて、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌ、または約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント、約１５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウム、および約１０ｍＭのコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムを含む。
【０１３４】
本発明の液体薬学的処方物の処理の間の凍結融解または機械的なせん断に起因するタンパク質の分解は、溶液−空気界面における表面張力を低下させるために、処方物内に界面活性剤を組み込むことによって阻害され得る。こうして、いくつかの実施形態において、液体薬学的処方物は、治療上有効な量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）またはその抗原結合フラグメント、処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内に維持するための緩衝液を含み、そしてさらに、界面活性剤を含む。他の実施形態において、液体薬学的処方物は、治療上有効な量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント、処方物のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内に維持するための緩衝液、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭの濃度の等張化剤（例えば、塩化ナトリウム）を含み、そしてさらに、界面活性剤を含む。
【０１３５】
使用される代表的な界面活性剤は、非イオン性界面活性剤であり、これらとしては、以下が挙げられる：ポリオキシエチレンソルビトールエステル（例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０）およびポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ  ２０））；ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンエステル（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８）；ポリオキシエチレンアルコール（例えば、Ｂｒｉｊ  ３５）；シメチコン；ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）；リゾホスファチジルコリン；およびポリオキシエチレン−ｐ−ｔ−オクチルフェノール（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）。界面活性剤または乳化剤による伝統的な安定化については、例えば、Ｌｅｖｉｎｅら（１９９１）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．４５（３）：１６０−１６５（本明細書中に参考として援用される）に記載される。本発明を実施する際に使用される好ましい界面活性剤は、ポリソルベートである。界面活性剤が含まれる場合、界面活性剤は、代表的に、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約１．０％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）〜約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）、または約０．０５％（ｗ／ｖ）〜約０．２％（ｗ／ｖ）の量で添加される。
【０１３６】
こうして、いくつかの実施形態では、液体薬学的処方物は、治療上有効な量のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメントを含み、緩衝液は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、約５ｍＭ〜約２５ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１５ｍＭの濃度のコハク酸ナトリウム緩衝液またはクエン酸ナトリウム緩衝液であり；この処方物は、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．０、またはｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．５のｐＨを有し；そして、この処方物は、さらに、約０．００１〜約１．０％、または約０．００１％〜約０．５％の量の界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）を含む。このような処方物は、必要に応じて、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭまたは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度の等張化剤（例えば、塩化ナトリウム）を含み得る。他の実施形態において、液体薬学的処方物は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌ、または約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌ（約２０．０ｍｇ／ｍｌを含む）の濃度のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、もしくはＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体）、またはその抗原結合フラグメント；約５０ｍＭ〜約２００ｍＭの塩化ナトリウム（約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む）；約５ｍＭ〜約２０ｍＭのコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム（約１０ｍＭのコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムを含む）；約５０ｍＭ〜約２００ｍＭ（約１５０ｍＭを含む）の濃度の塩化ナトリウム；および必要に応じて、約０．００１％〜約１．０％（約０．００１％〜約０．５％を含む）の量の界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）；を含み、ここで、この液体薬学的処方物は、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．０、約ｐＨ５．０〜ｐＨ約５．５，ｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．５、または約ｐＨ５．５〜ｐＨ約６．０のｐＨを有する。
【０１３７】
液体薬学的処方物は、本質的に、保存料、および本明細書において上記された他のキャリア、賦形剤または安定化剤を含まなくてもよい。あるいは、この処方物は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの物理化学的安定性に悪影響を及ぼさないという条件で、１種以上の保存剤（例えば、抗細菌剤）、本明細書において上記薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤を含み得る。受容可能なキャリア、賦形剤および安定化剤の例としては、さらなる緩衝化剤、共溶媒、界面活性剤、抗酸化剤（アスコルビン酸およびメチオニンを含む）、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）、および生分解性ポリマー（例えば、ポリエステル）が挙げられるがこれらに限定されない。薬学的に受容可能なキャリア、安定化剤、および等モル化剤（ｉｓｏｍｏｌｙｔｅ）の処方および選択の詳細な議論は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９０）（本明細書中に参考として援用される）に見出され得る。
【０１３８】
本明細書中に記載される液体薬学的処方物または他の薬学的組成物が調製された後、これらは、分解を防ぐために凍結乾燥され得る。液体組成物を凍結乾燥するための方法は、当業者に公知である。使用の直前に、組成物は、さらなる成分を含み得る滅菌希釈剤（例えば、Ｒｉｎｇｅｒ溶液、蒸留水または滅菌生理食塩水）で再構成され得る。再構成の際に、組成物は、好ましくは、当業者に公知の方法を使用して、被験体に投与される。
【０１３９】
（医薬の製造におけるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の使用）
本発明はまた、被験体における自己免疫疾患および／または炎症性疾患を処置するための医薬の製造における、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここで、この医薬は、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントを用いる処置と共働する。そのような癌としては、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、重度のＢ細胞リンパ腫、中程度のＢ細胞リンパ腫、軽度のＢ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、ホジキン病、プラスマ細胞腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性小型切れ込みリンパ腫（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｓｍａｌｌ  ｃｌｅａｖｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、濾胞性大細胞リンパ腫、濾胞性混合小型切れ込みリンパ腫（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｍｉｘｅｄ  ｓｍａｌｌ  ｃｌｅａｖｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、びまん性小型切れ込み細胞性リンパ腫（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｓｍａｌｌ  ｃｌｅａｖｅｄ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、びまん性小リンパ球性リンパ腫（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｓｍａｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内リンパ腫、びまん性混合細胞リンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４０】
「共働する（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ）」により、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬が、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントを用いる被験体の処置の、前、間または後のいずれかに使用されることが意図される。１つのそのような実施形態において、本発明は被験体におけるＢ細胞に関連する癌を処置するための医薬の製造における、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはＣＨＩＲ−５．９の使用を提供し、ここで、その医薬は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）））、またはその抗原結合フラグメントを用いる処置と共働し、その医薬は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）））、またはその抗原結合フラグメントを用いる被験体の処置前、処置中または処置後のいずれかで使用されるべきである。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書で開示されるモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）またはその抗原結合フラグメントを含む薬剤は、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメント、および癌治療の少なくとも１つの他の型を使用する処置と調和される。他の癌治療の例としては、必要に応じて自己骨髄移植を併用しての、本明細書の上記のもの、すなわち、手術；放射線治療；化学療法（ここでの適切な化学療法の薬剤として、フルダラビンもしくはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン、および、これらの組み合わせ（例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、さらにプレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、さらにプレドニゾン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシン、さらにデキサメタゾン）、ＭＰ（メルファラン、さらにプレドニゾン）のようなアントラサイクリンを含むレジメン）、ならびに化学療法において使用される他の細胞毒性剤および／または他の治療剤（例えば、ミトザントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼ、および代謝拮抗物質（シタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルダカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、６−チオグアニン、６−メルカプトプリンおよびネルアラビン（ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）が挙げられるが、これらに限定されない））；他の抗癌モノクローナル抗体治療（例えば、アレムツズマブ（ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ、Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））または悪性Ｂ細胞上のＣＤ５２細胞表面糖タンパク質を標的とする、他の抗ＣＤ５２抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、ＭＴ１０３、二重特異性抗体）；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エプラツズマブ（ｅｐｒａｔｕｚｕｍａｂ）；ヒト血管内皮増殖因子を標的とするベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））または他の抗癌抗体；悪性Ｂ細胞上のＣＤ２２抗原を標的とする抗ＣＤ２２抗体（例えば、モノクローナル抗体ＢＬ−２２、αＣＤ２２毒素）；マクロファージコロニー刺激因子を標的とするα−Ｍ−ＣＳＦ抗体；多発性骨髄腫において過剰発現される、核性因子κＢ受容体活性化因子（ＲＡＮＫ）およびそのリガンド（ＲＡＮＫＬ）を標的とする抗体；悪性Ｂ細胞上のＣＤ２３抗原を標的とする抗ＣＤ２３抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１５２）；ＣＤ８０抗原を標的とする抗ＣＤ８０抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１１４）；悪性Ｂ細胞上のＣＤ３８抗原を標的とする抗ＣＤ３８抗体；悪性Ｂ細胞上に発現される主要組織適合遺伝子複合体クラスＩＩ受容体を標的とする抗体（抗ＭＨＣ抗体）；悪性Ｂ細胞上のＣＤ４０抗原を標的とする、他の抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＳＧＮ−４０）；ならびに多数の固形腫瘍および多数の造血系起源の腫瘍に発現される、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘発性リガンド受容体１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）およびＴＲＡＩＬ−Ｒ２を標的とする抗体（例えば、アゴニストヒトモノクローナル抗体ＨＧＳ−ＥＴＲ１））；低分子に基づく癌治療（微小管インヒビターおよび／またはトポイソメラーゼインヒビター（例えば、有糸分裂インヒビター  ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）およびドラスタチン類似体；チューブリン結合剤Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；およびトポイソメラーゼインヒビター  アミノカンプトテシン（ａｍｉｎｏｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、ＳＤＸ−１０５（塩酸ベンダムスチン（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ））、イザベピロン（ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）類似体、ＢＭＳ−２４７５５０とも呼ばれる））が挙げられるが、これらに限定されない）、プロテインキナーゼＣインヒビター（例えば、ミドスタウリン（ｍｉｄｏｓｔａｕｒｉｎ）（ＰＫＣ−４１２、ＣＧＰ  ４１２５１、Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピザントロン（ｐｉｘａｎｔｒｏｎｅ）、エロザチン（ｅｌｏｘａｔｉｎ、抗腫瘍性剤）、ガニート（ｇａｎｉｔｅ、硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイド免疫調節誘導体（例えば、レブリミド（ｒｅｖｌｉｍｉｄ、以前はレビミド（ｒｅｖｉｍｉｄ）））、ＡｆｆｉｎｉｔａｋＴＭ（プロテインキナーゼＣαのアンチセンスインヒビター））、ＳＤＸ−１０１（Ｒ−エトドラック（ｅｔｏｄｏｌａｃ）悪性リンパ腫のアポトーシスを誘導する）、クロファラビン（ｃｌｏｆａｒａｂｉｎｅ）のような第二世代プリンヌクレオシド類似体、癌細胞によるＢｃｌ−２タンパク質産生のインヒビター（例えば、アンチセンス剤オブリメルセン（ｏｂｌｉｍｅｒｓｅｎ）およびＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソームインヒビター（例えば、ＶｅｌｃａｄｅＴＭ（ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）））、低分子キナーゼインヒビター（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、低分子ＶＥＧＦインヒビター（例えば、ＺＤ−６４７４）、１７−ＡＡＧのような熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）９０の低分子インヒビター、サブエラニロヒドロキサム（ｓｕｂｅｒａｎｉｌｏｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ）酸（ＳＡＨＡ）およびＦＲ−９０１２２８のような、ヒストン脱アセチル化酵素の低分子インヒビター（ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）剤、およびアポトーシス性の薬剤（例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）およびＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（ガドリニウム  モテキサフィン（ｍｏｔｅｘａｆｉｎ）を含むが、これらに限定されない）；ワクチン／免疫療法に基づく癌治療（ワクチン方法（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ（ｏｎｃｏｐｈａｇｅ）、ビタレチン（ｖｉｔａｌｅｔｈｉｎｅ））、個人向け免疫療法または活性イディオタイプ免疫療法（例えば、ＭｙＶａｘ（登録商標）個人向け免疫療法、正式にはＧＴＯＰ−９９と称される）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ７９０９、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＫ９）に対する合成アゴニスト））、インターフェロン−α治療、インターロイキン−２（ＩＬ−２）治療、ＩＬ−１２治療、ＩＬ−１５治療、ならびにＩＬ−２１治療を含むが、これらに限定されない）；ステロイド治療；あるいは他の癌治療が挙げられるが、これらに限定されない。ここで、この抗ＣＤ２０抗体もしくはその抗原結合フラグメントおよびこの追加の癌治療による処置、または追加の癌治療は、本明細書で上述されたように、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む薬剤による、この被験体の処置の前にか、その間にか、またはその後に行われる。このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む薬剤が、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントおよび他の癌治療の少なくとも１つを使用する処置と調和される場合、この薬剤の使用は、この他の癌治療のいずれかか、または両方による、この被験体の処置の前か、その間か、またはその後であり得る。
【０１４２】
本発明はまた、新生Ｂ細胞の増殖に特徴付けられる癌（本明細書で上述されたＢ細胞に関連する癌を含む）に対し被験体を処置するための薬剤の製造における、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの相乗的な組み合わせも提供し、ここで、この薬剤は、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントを使用する処置と調和される。「相乗的な組み合わせ」により、本明細書の上記に発表された方法で、この薬剤が抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントを使用する処置と調和される場合、相乗的な治療効果を提供するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの量を含む薬剤が意図される。「相乗的な治療効果」は、２つ以上の治療（この場合、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体治療および抗ＣＤ２０抗体治療）の併用により観察される治療効果を言及し、ここで、この治療効果（多くのパラメータ（本明細書で上述された効能の測定を含む）のいずれかにより評価される）は、それぞれ個々の治療により観察されるそれぞれ個々の治療効果の合計よりも高い。
【０１４３】
１つのそのような実施形態において、本発明は、被験体におけるＢ細胞に関連する癌を処置するための医薬の製造における、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはＣＨＩＲ−５．９の相乗的な組み合わせの使用を提供し、ここで、この医薬は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）））またはその抗原結合フラグメントを使用する処置と共働され、ここで、この医薬は、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントを使用する被験体の処置の前、処置中、または処置後のいずれかに使用され得る。いくつかの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書中に開示されるモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２もしくはＣＨＩＲ−５．９）またはその抗原結合フラグメントの相乗的な組み合わせは、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）））またはその抗原結合フラグメントを使用する処置、および本明細書中で上に記載されるような他の型の癌治療のうちの少なくとも１種と共働される。
【０１４４】
本発明はまた、新生Ｂ細胞増殖によって特徴付けられる癌（本明細書中で上に記載されたＢ細胞に関連する癌が挙げられる）について被験体を処置するための医薬の製造における、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書中に開示されるモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここで、この医薬は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）））またはその抗原結合フラグメントで事前に処置された被験体において使用される。「事前に処置された（ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ）」または「事前の処置（ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」により、被験体が、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬を受容する前に、抗ＣＤ２０抗体治療を受けている（すなわち、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントを用いて処置されている）ことが意図される。「事前に処置された」または「事前の処置」は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書中で開示されるモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）またはその抗原結合フラグメントを含む医薬での処置の開始前、２年以内、１８ヶ月以内、１年以内、６ヶ月以内、２ヶ月以内、６週間以内、１ヶ月以内、４週間以内、３週間以内、２週間以内、１週間以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内、または、さらに１日以内に、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントあるいはその改変体を用いて処置された被験体を含む。被験体は、前の抗ＣＤ２０抗体治療、または前の抗ＣＤ２０抗体治療および他の癌治療での事前処置に対する応答者であった必要はない。従って、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬を受容する被験体は、前の抗ＣＤ２０抗体治療での事前処置に、または、事前処置が、複数の癌治療から構成され、そのうちの１つが抗ＣＤ２０抗体治療である癌治療（例えば、抗ＣＤ２０抗体治療および手術；抗ＣＤ２０抗体治療および化学療法；抗ＣＤ２０抗体治療およびＩＬ−２治療；または抗ＣＤ２０抗体治療、化学療法およびＩＬ−２治療）の前の１以上に対して、応答していても、応答し損なって（すなわち、その癌が無反応性である）いてもよい。
【０１４５】
それゆえ、いくつかの実施形態において、本発明は、新生Ｂ細胞の増殖に特徴付けられる癌（例えば、本明細書で上述されたようなＢ細胞に関連する癌）に対する処置を必要とする被験体において使用される薬剤の製造における、アンタゴニスト抗ＣＤ４０（例えば、本明細書中で開示されるモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここで、この被験体は抗ＣＤ２０抗体治療により前処置されたか、または抗ＣＤ２０抗体治療および１つ以上の以下の他の癌治療により前処置された。必要に応じて自己骨髄移植を併用しての、手術；放射線治療；化学療法（ここでの適切な化学療法の薬剤として、フルダラビンもしくはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン、および、これらの組み合わせ（例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、さらにプレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、さらにプレドニゾン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシン、さらにデキサメタゾン）、ＭＰ（メルファラン、さらにプレドニゾン）のようなアントラサイクリンを含むレジメン）、ならびに化学療法において使用される他の細胞毒性剤および／または他の治療剤（例えば、ミトザントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼ、および代謝拮抗物質（シタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルダカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、６−チオグアニン、６−メルカプトプリンおよびネルアラビン（ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）が挙げられるが、これらに限定されない））；他の抗癌モノクローナル抗体治療（例えば、アレムツズマブ（ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ、Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））または悪性Ｂ細胞上のＣＤ５２細胞表面糖タンパク質を標的とする、他の抗ＣＤ５２抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、ＭＴ１０３、二重特異性抗体）；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エプラツズマブ（ｅｐｒａｔｕｚｕｍａｂ）；ヒト血管内皮増殖因子を標的とするベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））または他の抗癌抗体；悪性Ｂ細胞上のＣＤ２２抗原を標的とする抗ＣＤ２２抗体（例えば、モノクローナル抗体ＢＬ−２２、αＣＤ２２毒素）；マクロファージコロニー刺激因子を標的とするα−Ｍ−ＣＳＦ抗体；多発性骨髄腫において過剰発現される、核性因子κＢ受容体活性化因子（ＲＡＮＫ）およびそのリガンド（ＲＡＮＫＬ）を標的とする抗体；悪性Ｂ細胞上のＣＤ２３抗原を標的とする抗ＣＤ２３抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１５２）；ＣＤ８０抗原を標的とする抗ＣＤ８０抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１１４）；悪性Ｂ細胞上のＣＤ３８抗原を標的とする抗ＣＤ３８抗体；悪性Ｂ細胞上に発現される主要組織適合遺伝子複合体クラスＩＩ受容体を標的とする抗体（抗ＭＨＣ抗体）；悪性Ｂ細胞上のＣＤ４０抗原を標的とする、他の抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＳＧＮ−４０）；ならびに多数の固形腫瘍および多数の造血系起源の腫瘍に発現される、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘発性リガンド受容体１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）およびＴＲＡＩＬ−Ｒ２を標的とする抗体（例えば、アゴニストヒトモノクローナル抗体ＨＧＳ−ＥＴＲ１））；低分子に基づく癌治療（微小管インヒビターおよび／またはトポイソメラーゼインヒビター（例えば、有糸分裂インヒビター  ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）およびドラスタチン類似体；チューブリン結合剤Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；およびトポイソメラーゼインヒビター  アミノカンプトテシン（ａｍｉｎｏｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、ＳＤＸ−１０５（塩酸ベンダムスチン（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ））、イザベピロン（ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）類似体、ＢＭＳ−２４７５５０とも呼ばれる））が挙げられるが、これらに限定されない）、プロテインキナーゼＣインヒビター（例えば、ミドスタウリン（ｍｉｄｏｓｔａｕｒｉｎ）（ＰＫＣ−４１２、ＣＧＰ  ４１２５１、Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピザントロン（ｐｉｘａｎｔｒｏｎｅ）、エロザチン（ｅｌｏｘａｔｉｎ、抗腫瘍性剤）、ガニート（ｇａｎｉｔｅ、硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイド免疫調節誘導体（例えば、レブリミド（ｒｅｖｌｉｍｉｄ、以前はレビミド（ｒｅｖｉｍｉｄ）））、ＡｆｆｉｎｉｔａｋＴＭ（プロテインキナーゼＣαのアンチセンスインヒビター））、ＳＤＸ−１０１（Ｒ−エトドラック（ｅｔｏｄｏｌａｃ）悪性リンパ腫のアポトーシスを誘導する）、クロファラビン（ｃｌｏｆａｒａｂｉｎｅ）のような第二世代プリンヌクレオシド類似体、癌細胞によるＢｃｌ−２タンパク質産生のインヒビター（例えば、アンチセンス剤オブリメルセン（ｏｂｌｉｍｅｒｓｅｎ）およびＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソームインヒビター（例えば、ＶｅｌｃａｄｅＴＭ（ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）））、低分子キナーゼインヒビター（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、低分子ＶＥＧＦインヒビター（例えば、ＺＤ−６４７４）、１７−ＡＡＧのような熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）９０の低分子インヒビター、サブエラニロヒドロキサム（ｓｕｂｅｒａｎｉｌｏｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ）酸（ＳＡＨＡ）およびＦＲ−９０１２２８のような、ヒストン脱アセチル化酵素の低分子インヒビター（ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）剤、およびアポトーシス性の薬剤（例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）およびＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（ガドリニウム  モテキサフィン（ｍｏｔｅｘａｆｉｎ）を含むが、これらに限定されない）；ワクチン／免疫療法に基づく癌治療（ワクチン方法（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ（ｏｎｃｏｐｈａｇｅ）、ビタレチン（ｖｉｔａｌｅｔｈｉｎｅ））、個人向け免疫療法または活性イディオタイプ免疫療法（例えば、ＭｙＶａｘ（登録商標）個人向け免疫療法、正式にはＧＴＯＰ−９９と称される）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ７９０９、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＫ９）に対する合成アゴニスト））、インターフェロン−α治療、インターロイキン−２（ＩＬ−２）治療、ＩＬ−１２治療、ＩＬ−１５治療、ならびにＩＬ−２１治療を含むが、これらに限定されない）；ステロイド治療；あるいは他の癌治療が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４６】
本発明はまた、新生Ｂ細胞の増殖に特徴付けられる癌（Ｂ細胞に関連する癌を含む）に対して被験体を処置するための薬剤の製造における、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントの使用も提供し、ここで、この薬剤は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０またはその抗原結合フラグメントを使用する処置と調和される。これらの実施形態において、「調和される」は、この薬剤が、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを使用しての、この被験体の処置の前にか、その間にか、またはその後のいずれかに使用されることを意味することを意図される。このような１つの実施形態として、本発明は、新生Ｂ細胞の増殖に特徴付けられる癌（例えば、Ｂ細胞に関連する癌）に対して被験体を処置するための薬剤の製造における、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）））またはその抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここで、この薬剤は、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９を使用する処置と調和され、この薬剤は、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９による、この被験体の処置の前にか、その間にか、またはその後のいずれかに使用される。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、この抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）））またはその抗原結合フラグメントを含む薬剤は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２またはモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９）またはその抗原結合フラグメント、および癌治療の少なくとも１つの他の型を使用する処置と調和される。他の癌治療の例としては、本明細書の上記のもの、すなわち、必要に応じて自己骨髄移植を併用しての、手術；放射線治療；化学療法（ここでの適切な化学療法の薬剤として、フルダラビンもしくはリン酸フルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン、および、これらの組み合わせ（例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、さらにプレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン、さらにドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシン、さらにデキサメタゾン）、ＭＰ（メルファラン、さらにプレドニゾン）のようなアントラサイクリンを含むレジメン）、ならびに化学療法において使用される他の細胞毒性剤および／または他の治療剤（例えば、ミトザントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼ、および代謝拮抗物質（シタラビン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルダカルバジン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリンおよびネルアラビンが挙げられるが、これらに限定されない））；他の抗癌モノクローナル抗体治療（例えば、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））または悪性Ｂ細胞上のＣＤ５２細胞表面糖タンパク質を標的とする、他の抗ＣＤ５２抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、ＭＴ１０３、二重特異性抗体）；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エプラツズマブ；ヒト血管内皮増殖因子を標的とするベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））または他の抗癌抗体；悪性Ｂ細胞上のＣＤ２２抗原を標的とする抗ＣＤ２２抗体（例えば、モノクローナル抗体ＢＬ−２２、αＣＤ２２毒素）；マクロファージコロニー刺激因子を標的とするα−Ｍ−ＣＳＦ抗体；多発性骨髄腫において過剰発現される、核性因子κＢ受容体活性化因子（ＲＡＮＫ）およびそのリガンド（ＲＡＮＫＬ）を標的とする抗体；悪性Ｂ細胞上のＣＤ２３抗原を標的とする抗ＣＤ２３抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１５２）；ＣＤ８０抗原を標的とする抗ＣＤ８０抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１１４）；悪性Ｂ細胞上のＣＤ３８抗原を標的とする抗ＣＤ３８抗体；悪性Ｂ細胞上に発現される主要組織適合遺伝子複合体クラスＩＩ受容体を標的とする抗体（抗ＭＨＣ抗体）；悪性Ｂ細胞上のＣＤ４０抗原を標的とする、他の抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＳＧＮ−４０）；ならびに多数の固形腫瘍および多数の造血系起源の腫瘍に発現される、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘発性リガンド受容体１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）およびＴＲＡＩＬ−Ｒ２を標的とする抗体（例えば、アゴニストヒトモノクローナル抗体ＨＧＳ−ＥＴＲ１））；低分子に基づく癌治療（微小管インヒビターおよび／またはトポイソメラーゼインヒビター（例えば、有糸分裂インヒビター  ドラスタチンおよびドラスタチン類似体；チューブリン結合剤Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；およびトポイソメラーゼインヒビター  アミノカンプトテシン、ＳＤＸ−１０５（塩酸ベンダムスチン）、イザベピロン（エポチロン類似体、ＢＭＳ−２４７５５０とも呼ばれる））が挙げられるが、これらに限定されない）、プロテインキナーゼＣインヒビター（例えば、ミドスタウリン（ＰＫＣ−４１２、ＣＧＰ  ４１２５１、Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピザントロン、エロザチン（抗腫瘍性剤）、ガニート（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイド免疫調節誘導体（例えば、レブリミド（以前はレビミド））、ＡｆｆｉｎｉｔａｋＴＭ（プロテインキナーゼＣαのアンチセンスインヒビター））、ＳＤＸ−１０１（Ｒ−エトドラック、悪性リンパ腫のアポトーシスを誘導する）、クロファラビンのような第二世代プリンヌクレオシド類似体、癌細胞によるＢｃｌ−２タンパク質産生のインヒビター（例えば、アンチセンス剤オブリメルセンおよびＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテアソームインヒビター（例えば、ＶｅｌｃａｄｅＴＭ（ボルテゾミブ））、低分子キナーゼインヒビター（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、低分子ＶＥＧＦインヒビター（例えば、ＺＤ−６４７４）、１７−ＡＡＧ熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）９０の低分子インヒビター（例えば、１７−ＡＡＧ）、サブエラニロヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）およびＦＲ−９０１２２８のような、ヒストン脱アセチル化酵素の低分子インヒビター（ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）剤、およびアポトーシス性の薬剤（例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）およびＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（ガドリニウム  モテキサフィン）を含むが、これらに限定されない）；ワクチン／免疫療法に基づく癌治療（ワクチン方法（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ビタレチン）、個人向け免疫療法または活性イディオタイプ免疫療法（例えば、ＭｙＶａｘ（登録商標）個人向け免疫療法、正式にはＧＴＯＰ−９９と称される）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ７９０９、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＫ９）に対する合成アゴニスト））、インターフェロン−α治療、インターロイキン−２（ＩＬ−２）治療、ＩＬ−１２治療、ＩＬ−１５治療、ならびにＩＬ−２１治療を含むが、これらに限定されない）；ステロイド治療；あるいは他の癌治療が挙げられるが、これらに限定されない。ここで、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントおよびこの追加の癌治療による処置、または追加の癌治療は、この抗ＣＤ２０抗体もしくはその抗原結合フラグメントを含む薬剤による、この被験体の処置の前にか、その間にか、またはその後に行われる。この抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合フラグメントを含む薬剤が、このアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントおよび他の癌治療の少なくとも１つを使用する処置と調和される場合、この薬剤の使用は、この他の癌治療のいずれかか、または両方による、この被験体の処置の前か、その間か、またはその後であり得る。
【０１４８】
本明細書に記載される医薬の、１以上の他の癌治療との共働使用の文脈において「処置」は、本明細書中で、被験体に対する医薬の適用もしくは投与または他の癌治療の適用もしくは実施、あるいは被験体由来の単離された組織もしくは細胞株に対する医薬または他の癌治療の適用または実施と定義され、ここで、この被験体は、新生Ｂ細胞増殖、そのような癌に関連する症状、またはそのような癌の発症に対する素因によって特徴付けられる癌を有し、ここで、その目的は、その癌、その癌の任意の関連する症状、またはその癌の発症に対する素因を、治癒する（ｃｕｒｅ）か、治癒する（ｈｅａｌ）か、緩和するか、軽減するか、変化させるか、治療するか、寛解させるか、改善するか、またはそれらに影響をおよぼすことである。
【０１４９】
以下の実施例は、限定する目的ではなく、例示の目的で提供される。
【実施例】
【０１５０】
（導入部）
以下の実施例で使用されるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２である。ＣＨＩＲ−５．９抗ＣＤ４０抗体およびＣＨＩＲ−１２．１２抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖座およびヒトＫ軽鎖座を有するトランスジェニックマウス（ＸｅｎｏｍＭｏｕｓｅ（登録商標）技術（Ａｂｇｅｎｉｘ；Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ））の免疫により作製されるヒトＩｇＧ１サブタイプ抗ヒトＣＤ４０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。ＣＤ４０細胞外ドメインを発現するＳＦ９昆虫細胞を、免疫原として使用した。
【０１５１】
簡単に述べると、免疫したマウスに由来する脾臓細胞を、ｄｅ  Ｂｏｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１１３：１４３により以前に記載されたとおりに、５０％ポリエチレングリコールを使用して、１０：１の比で、ＳＰ  ２／０マウス骨髄腫細胞またはＰ３  ｘ  ６３Ａｇ８．６５３マウス骨髄腫細胞と融合させた。融合した細胞を、ヒポキサンチン（０．１ｍＭ）、アミノプテリン（０．０１ｍＭ）、チミジン（０．０１６ｍＭ）および０．５ｎｇ／ｍｌのｈＩＬ−６（Ｇｅｎｚｙｍｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を補充した完全ＩＭＤＭ培地中に再懸濁した。この融合した細胞を、次いで、各ウェルが、平均して１つの増殖するハイブリドーマを含むように、９６ウェル組織培養プレートのウェル間に分配した。
【０１５２】
１０〜１４日後、ハイブリドーマ集団の上清を、特異的抗体の産生についてスクリーニングした。ハイブリドーマクローンによる特異的抗体の産生をスクリーニングするために、各ウェルからの上清を、プールし、まず、ＥＬＩＳＡによって、抗ＣＤ４０活性の特異性について試験した。次いで、陽性のものを、標準的なＦＡＣＳアッセイを用いる、ＥＢＶ−形質転換Ｂ細胞の蛍光細胞染色のために使用した。陽性のハイブリドーマ細胞を、０．５ｎｇ／ｍｌのｈＩＬ−６を含有するＩＭＤＭ／ＦＢＳ中で限界希釈することによって、２回クローン化した。
【０１５３】
合計３１匹のマウスの脾臓を、マウス骨髄腫ＳＰ２／０細胞と融合させて、ＥＬＩＳＡにおいて組換えＣＤ４０を認識する８９５の抗体を作製した。平均して、Ａｂｇｅｎｉｘ
ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）技術（Ａｂｇｅｎｉｘ；Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して産生されたハイブリドーマの約１０％が、ヒトκ鎖の代わりにマウスλ軽鎖を含み得る。これらのマウスλ軽鎖を含有する抗体を選択した。細胞表面ＣＤ４０への結合もまた示す２６０の抗体のサブセットを、さらなる分析のために選択した。一連のサブクローニング手順の間に選択された安定なハイブリドーマを、結合アッセイおよび機能アッセイにおけるさらなる特徴付けに使用した。選択プロセスのさらなる詳細については、同時継続中の仮出願（両方ともに、発明の名称「Ａｎｇｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」であり、それぞれ、２００３年１１月４日および２００３年１１月２６日出願、割り当てられた米国特許出願番号第６０／５１７，３３７号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００１（０３５７８４／２５８４４２））および同第６０／５２５，５７９号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５）））を参照のこと。これらの特許文献の両方の内容は、その全体が、本明細書中に参考として援用される。
【０１５４】
７つの他のハイブリドーマからのクローンを、アンタゴニスト活性を有するものとして同定した。その相対アンタゴニスト能およびＡＤＣＣ活性に基づいて、２つのハイブリドーマクローンを、さらなる評価のために選択した（表１、以下）。これらを、１３１．２Ｆ８．５．９（５．９）および１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（１２．１２）と名付けた。
【０１５５】
【表１】
2011105772.tif 000002
マウスハイブリドーマ株１３１．２Ｆ８．５．９（ＣＭＣＣ＃１２０４７）およびハイブリドーマ株１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（ＣＭＣＣ＃１２０５６）は、それぞれ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０−２２０９（ＵＳＡ））に、特許寄託番号ＰＴＡ−５５４２およびＰＴＡ−５５４３の下、寄託されている。
【０１５６】
候補抗体の可変領域をコードするｃＤＮＡを、ＰＣＲにより増幅し、クローン化し、そして、配列決定した。ＣＨＩＲ−１２．１２抗体の軽鎖および重鎖についてのアミノ酸配列を、それぞれ、図１Ａおよび１Ｂに示す。配列番号２（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖）および配列番号４（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖）もまた参照のこと。ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖の改変体を、図１Ｂに示す（配列番号５もまた参照のこと）。この改変体は、配列番号４の第１５３位のアラニン残基の代わりにセリン残基を有するという点で配列番号４と異なる。ＣＨＩＲ−１２．１２抗体の軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、それぞれ、図２Ａおよび２Ｂに示す。配列番号１（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖のコード配列）および配列番号３（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖のコード配列）もまた参照のこと。ＣＨＩＲ−５．９抗体の軽鎖および重鎖についてのアミノ酸配列を、それぞれ、図３Ａおよび３Ｂに示す。配列番号６（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の軽鎖）および配列番号７（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖）もまた参照のこと。ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９の重鎖の改変体を、図３Ｂに示す（配列番号８もまた参照のこと）。この改変体は、配列番号７の第１５８位のアラニン残基の代わりにセリン残基を有するという点で配列番号７と異なる。
【０１５７】
個々のハイブリドーマに由来する抗体について予測されるとおり、相補性決定領域（ＣＤＲ）内のヌクレオチド配列に実質的なバリエーションが存在する。ＶＨのＣＤＲ３領域内の多様性は、抗体特異性を最も有意に決定するものと考えられる。
【０１５８】
ＦＡＣＳ分析により示されるように、ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２は、ヒトＣＤ４０に特異的に結合し、そして、ＣＤ４０−リガンド結合を妨げ得る。両方のｍＡｂが、細胞表面のＣＤ４０に予め結合したＣＤ４０リガンドと競合し得る。ＣＨＩＲ−５．９のヒトＣＤ４０への結合親和性は、１．２×１０−８Ｍであり、ＣＨＩＲ−１２．１２のヒトＣＤ４０への結合親和性は、５×１０−１０Ｍである。
【０１５９】
ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体およびＣＨＩＲ−５．９モノクローナル抗体は、強力なアンタゴニストであり、ＮＨＬ患者およびＣＬＬ患者由来の癌細胞のインビトロでのＣＤ４０リガンド媒介性の増殖を阻害しするのと同様に、正常なＢ細胞のインビトロでのＣＤ４０リガンド媒介性の増殖を阻害する。インビトロでは、両方の抗体が、ＡＤＣＣによってＮＨＬ患者由来の初期癌細胞を殺傷する。これらの結果、およびこれらの結果を得るために使用したアッセイのより詳細な説明については、同時継続中の仮出願（両方ともに、発明の名称「Ａｎｇｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」であり、それぞれ、２００３年１１月４日および２００３年１１月２６日出願、割り当てられた米国特許出願番号第６０／５１７，３３７号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００１（０３５７８４／２５８４４２））および同第６０／５２５，５７９号（代理人事件整理番号：ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５）））を参照のこと。これらの特許文献の両方の内容は、その全体が、本明細書中に参考として援用される。
【０１６０】
（実施例１：ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２およびＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）の併用が、異種移植モデルにおける浸潤性のＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）耐性バーキットリンパ腫に対する抗腫瘍活性を示す。）
キメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）およびアンタゴニスト性抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２の併用を、マウスモデルにおいて試験した。詳しくは、１２０ｎｕ／ｎｕ、５週齢の雌マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）に少なくとも７日間の順化期間を受けさせた。腫瘍細胞の接種の１日前に、マウスに、Ａｔｏｍｉｃ  Ｅｎｅｒｇｙ  ｏｆ  Ｃａｎａｄａにより製造されたＧａｍｍａｃｅｌｌ  ４０  Ｃｅｓｉｕｍ  １３７  ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｕｎｉｔを使用して、３Ｇｙ照射を受けさせた。Ｎａｍａｌｗａ細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）（ヒトＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）耐性の浸潤性バーキットリンパ腫細胞株）を、１５％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。接種の日に、この細胞を回収し、数えた。そして５×１０７細胞／ｍＬの濃度になるよう、５０％ＨＢＳＳ＋５０％マトリゲル（ｍａｔｒｉｇｅｌ）中に再懸濁した。腫瘍細胞を、マウスあたり５×１０６細胞／１００μｌで、右側腹に皮下接種した。
【０１６１】
腫瘍接種の１日後に、マウスを無作為化し、そして、下に示すように、７日間に１度（ｑ７ｄ）、抗ＣＤ４０ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２およびＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）で腹腔内注射（ｉ．ｐ．）した。
【０１６２】
ａ．  ＩｇＧ１，１０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，ｑ７ｄ，×５用量まで
ｂ．  Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標），１０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，ｑ７ｄ，×５用量まで
ｃ．  Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標），２０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，ｑ７ｄ，×５用量まで
ｄ．  ＣＨＩＲ−１２．１２，５ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，ｑ７ｄ，×５用量まで
ｅ．  ＣＨＩＲ−１２．１２，１０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，ｑ７ｄ，×５用量まで
ｆ．  Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標），１０ｍｇ／ｋｇ＋ＩｇＧ１，５ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，ｑ７ｄ，×５用量まで
ｇ．  Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標），１０ｍｇ／ｋｇ＋ＣＨＩＲ−１２．１２，５ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，ｑ７ｄ，×５用量まで
ｈ．  Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標），１０ｍｇ／ｋｇ＋ＩｇＧ１，１０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，ｑ７ｄ，×５用量まで
ｉ．  Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標），１０ｍｇ／ｋｇ＋ＣＨＩＲ−１２．１２，１０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，ｑ７ｄ，×５用量まで
腫瘍容積を、週に２回、電動ノギスを使用して測定した。１つの群における腫瘍容積の平均値が２，０００ｍｍ３に達したとき、その群に所属するマウスを屠殺した。処置群における腫瘍が好反応を示した場合、腫瘍容積の平均値が２，０００ｍｍ３に達するまで、マウスを飼育した。
【０１６３】
全ての群の間で腫瘍容積の平均値の差を分析するために、ＡＮＯＶＡを使用した。２つの特定の群間の腫瘍容積の平均値の差を比較するために、最小２乗平均値のＴｕｃｋｅｙ多重比較を使用した。
【０１６４】
図１に示すように、初期の腫瘍増殖は、５週間までの、週に１回の５ｍｇ／ｋｇのＣＨＩＲ−１２．１２単独のｉ．ｐ．投与により有意に阻害された（６０％，Ｐ＝０．０２）。１０ｍｇ／ｋｇで単独投与されたＣＨＩＲ−１２．１２は、有意な腫瘍容積の阻害の傾向を示した（３９％，Ｐ＝０．２２）。１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇの単独のＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）は、この腫瘍の増殖を全く阻害しなかった。ＣＨＩＲ−１２．１２およびＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）の併用は、５ｍｇ／ｋｇのＣＨＩＲ−１２．１２、さらに１０ｍｇ／ｋｇのＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）ならびに１０ｍｇ／ｋｇのＣＨＩＲ−１２．１２および１０ｍｇ／ｋｇのＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）に対して、それぞれ７７％（Ｐ＝０．００１）および８３％（Ｐ＝０．００３）の腫瘍容積の阻害による相乗的かつＣＨＩＲ−１２．１２の用量依存的な腫瘍増殖の阻害をもたらした。毒性の臨床的兆候は、現行の用量およびレジメンのもとでの全ての処置した動物の間で観察されなかった。これらのデータは、単独のｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２が、浸潤性かつＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）耐性リンパ腫に対する治療剤であることを示唆する。しかしながら、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）と併用して使用した場合、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２は、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２単独か、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）単独か、または、単独で使用した、これら２つのｍＡｂの効果の合計よりも有効であった。
【０１６５】
（実施例２：ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２は、１５Ｂ８よりもＣＤ４０上の様々なエピトープに結合する）
モノクローナル抗体候補ＣＨＩＲ−５．９およびモノクローナル抗体候補ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＣＤ４０に結合することについて、互いに競合するが、１５Ｂ８（ＩｇＧ２抗ＣＤ４０  ｍＡｂ、国際公開第ＷＯ０２／２８９０４号を参照のこと）とは競合しない。Ｂｉａｃｏｒｅを使用する抗体競合結合研究を、アミン結合により非動化されたプロテインＡ（抗ＣＤ４０か、ＣＨＩＲ−１２．１２か、または１５Ｂ８のいずれかを捕捉するために使用した）付きのＣＭ５バイオセンサーチップを使用するよう計画した。ＣＤ４０−ｈｉｓの濃度を変動させることにより、標準的な会合／解離の結合曲線を観察する（データは示していない）。競合研究のために、ＣＨＩＲ−１２．１２か、または１５Ｂ８のいずれかを、このプロテインＡの表面に捕捉した。続いて、ＣＤ４０−ｈｉｓ／ＣＨＩＲ−５．９  Ｆａｂ複合体（１００ｎＭ  ＣＤ４０：１μＭ  ＣＨＩＲ−５．９  Ｆａｂ）を、様々な濃度で、この修飾された表面を横切って流した。ＣＨＩＲ−１２．１２の場合、この複合体の会合は観察されず、ＣＨＩＲ−５．９がＣＤ４０−ｈｉｓへのＣＨＩＲ−１２．１２の結合を妨害することを示唆した。１５Ｂ８については、このＦａｂ  ＣＨＩＲ−５．９複合体の会合が観察され、ＣＨＩＲ−５．９がＣＤ４０結合部位への１５Ｂ８の結合を妨害しないことを示唆した。しかしながら、複合体の解離速度（ｏｆｆ  ｒａｔｅ）は、劇的に増進した（データは示していない）。
【０１６６】
ＣＤ４０−ｈｉｓの結合について、１５Ｂ８およびＣＨＩＲ−１２．１２が競合しないこともまた決定した。この実験は、プロテインＡバイオセンサーチップ上にＣＨＩＲ−１２．１２を捕捉すること、残余のプロテインＡ部位をコントロールのｈＩｇＧ１でブロックすること、ＣＤ４０−ｈｉｓを結合すること、そして次にこの修飾された表面一面に１５Ｂ８を流すことにより設定した。これらの条件下で、１５Ｂ８は結合せず、ＣＨＩＲ−１２．１２が１５Ｂ８のＣＤ４０へ結合することを妨害しないことを示唆した。
【０１６７】
（実施例３：ＣＨＩＲ−１２．１２  ｍＡｂおよびＣＨＩＲ−５．９  ｍＡｂの結合特性）
プロテインＡを、アミンカップリングにより、ＣＭ５バイオセンサーチップ上に固定化した。ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体（１．５μｇ／ｍｌ）を、この固定化したバイオセンサの表面に１０μｌ／ｍｌで、１．５分間捕捉した。組換え可溶性ＣＤ４０−ｈｉｓを、種々の濃度で、バイオセンサの表面上に流した。抗体および抗原を、０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０（ＨＢＳ−ＥＰ）中に希釈した。動力学定数および親和性定数を、１：１の相互作用モデル／全体的なフィットを用いて、Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して決定した。
【０１６８】
以下の表２に示すように、ＣＨＩＲ−５．９とＣＨＩＲ−１２．１２の解離する速度には１２１倍の差があり、結果として、ＣＨＩＲ−１２．１２について親和性が２４倍高かった。
【０１６９】
【表２】
2011105772.tif 000003
（実施例４：モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９についてのエピトープの特徴付け）
モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２およびモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９により認識されるＣＤ４０上のエピトープの位置を決定するために、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット分析を実施した。精製したＣＤ４０（０．５μｇ）を、還元条件および非還元条件下で、４〜１２％のＮＵＰＡＧＥゲル上で分離し、ＰＶＤＦメンブレンに移し、そして、１０μｇ／ｍｌ濃度のモノクローナル抗体でプローブした。ブロットを、アルカリホスファターゼ結合体化抗ヒトＩｇＧでプローブし、そして、アルカリホスファターゼについてのＷｅｓｔｅｒｎ  ＢｌｕｅＲ安定化基質（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて発色させた。
【０１７０】
結果は、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２が、ＣＤ４０の非還元型形態および還元型形態の両方の上にあるエピトープを認識し、ＣＤ４０の非還元型形態が、ＣＤ４０の還元型形態よりも高い強度を示すことを示す（表３；ブロットは示さず）。認識が、ＣＤ４０の両方の形態について陽性であるという事実は、この抗体が、線形配列であるエピトープのコンホメーションの一部と相互作用することを示す。モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９は、主に、ＣＤ４０の非還元型形態を認識し、この抗体が、一次コンホメーションのエピトープと相互作用することを示唆する（表３；ブロットは示さず）。
【０１７１】
【表３】
2011105772.tif 000004
ＣＤ４０上の抗原性領域をマッピングするために、ＣＤ４０の４つの細胞外ドメインをクローニングし、そして、ＧＳＴ融合タンパク質として昆虫細胞において発現させた。４つのドメインの分泌を、ＧＰ６７分泌シグナルで確認した。昆虫細胞の上清を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット分析により分析し、エピトープを含むドメインを同定した。
【０１７２】
モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２は、還元条件および非還元条件の両方の下で、ドメイン２上のエピトープを認識する（表４；ブロットは示さず）。対照的に、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−５．９は、ドメイン２に対して、非常に弱い認識を示す（表４；ブロットは示さず）。これらの抗体のいずれもが、この分析において、ドメイン１、３または４は認識しない。
【０１７３】
【表４】
2011105772.tif 000005
ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２により認識されるエピトープをより正確に規定するために、ペプチドを、ＣＤ４０の細胞外ドメイン２から合成し、これは、配列ＰＣＧＥＳＥＦＬＤＴＷＮＲＥＴＨＣＨＱＨＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤＴＩＣＴ（配列番号１０または配列番号１２に示される配列の残基６１〜１０４）に対応する。１アミノ酸が相殺された（ｏｆｆｓｅｔ）３５の１０マーペプチドを含むＳＰＯＴメンブレン（Ｓｉｇｍａ）を作製した。ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２および抗ヒトＩｇＧβ−ガラクトシダーゼを二次抗体として用いるウェスタンブロット分析を実施した。このブロットを、細片に分け、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９で再度プローブして、この抗体により認識される領域を決定した。
【０１７４】
１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ４０モノクローナル抗体ＣＨＩＲ１２．１２でプローブするＳＰＯＴ分析では、スポット１８〜２２の反応が陽性であった。これらのペプチドによりカバーされる配列領域を、表５に示す。
【０１７５】
【表５】
2011105772.tif 000006
これらの結果は、以下の線形エピトープに対応する：ＹＣＤＰＮＬ（配列番号１０または配列番号１２に示す配列の残基８２〜８７）。このエピトープは、Ｙ８２、Ｄ８４およびＮ８６を含み、これらは、ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンドの相互作用に関与すると予測されている。
【０１７６】
ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９を用いるＳＰＯＴ分析は、表６に示されるスポット２０〜２２により表されるペプチドの弱い認識を示し、これは、そのＣＤ４０への結合において、領域ＹＣＤＰＮＬＧＬ（配列番号１０または配列番号１２に示す配列の残基８２〜８９）が関与することを示唆した。ＣＨＩＲ−１２．１２およびＣＨＩＲ−５．９は、ＢＩＡＣＯＲＥ分析においてＣＤ４０への結合に関して、互いに競合することに注意すべきである。
【０１７７】
【表６】
2011105772.tif 000007
ＳＰＯＴ分析により同定した線形エピトープは、ＣＤ４０  Ｂ１モジュールの内部である。ＣＤ４０  Ｂ１モジュールの配列は、ＨＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤＴＩＣ（配列番号１０または配列番号１２の残基８０〜１０３）である。
【０１７８】
線形エピトープ内でＣＨＩＲ−１２．１２について同定されたのはＣ８３である。このシステイン残基がＣ１０３とジスルフィド結合を形成することは公知である。ＣＨＩＲ−１２．１２  ｍＡｂのエピトープは、このジスルフィド結合（Ｃ８２−Ｃ１０３）および／またはＣ１０３にコンホメーション的に近い周囲のアミノ酸を含むようである。
【０１７９】
（実施例５：ＣＨＩＲ−１２．１２は、正常ヒトＢ細胞におけるＣＤ４０Ｌが媒介するＣＤ４０の生き残りおよび細胞のシグナル伝達経路を遮断する）
可溶性ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）は、Ｂ細胞を活性化し、機能的な応答の種々の局面（生き残りおよび増殖の増強、ならびにＮＦκＢ、ＥＲＫ／ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、およびｐ３８シグナル伝達経路の活性化を含む）を誘導する。さらに、ＣＤ４０Ｌ媒介性のＣＤ４０刺激は、正常なＢ細胞における切断型ＰＡＲＰの減少および抗アポトーシスタンパク質ＸＩＡＰおよびＭｃｌ−１の誘導により、生き残りシグナルを与える。ＣＤ４０Ｌ媒介性のＣＤ４０刺激はまた、ＴＲＡＦ２およびＴＲＡＦ３を補充して、ＣＤ４０の細胞質ドメインに結合する。
【０１８０】
以下の研究は、ＣＨＩＲ−１２．１２が、正常なヒトＢ細胞へのこれらの刺激効果の全てを直接阻害したことを実証する。例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２処理により、時間依存的かつ用量依存的な様式でのカスパーゼ−９、カスパーゼ−３、およびＰＡＲＰの切断の増加、ならびに、ＸＩＡＰおよびＭｃｌ−１の減少を生じ、Ｂ細胞のアポトーシスを修復した。ＣＨＩＲ−１２．１２での処理はまた、ＣＤ４０Ｌ媒介性のＣＤ４０刺激に応答して、ＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）αおよびβのリン酸化（ＮＦκＢ経路）、ＥＲＫ、Ａｋｔおよびｐ３８も阻害した。さらに、ＣＨＩＲ−１２．１２が、最初のＣＤ４０Ｌ媒介性のＣＤ４０刺激なしではこれらのアポトーシス効果を誘発しなかったことが見出された。
【０１８１】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＰＡＲＰの切断を誘導することにより、ＣＤ４０リガンドにより媒介される生き残りを阻害した）
これらの実験において、健康なドナーからの０．６×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。次いで、ＣＨＩＲ−１２．１２（１０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧを添加した。細胞を、０分、２０分、２時間、６時間、１８時間および２６時間で回収した。切断型カスパーゼ−９、切断型カスパーゼ−３、切断型ＰＡＲＰおよびβ−アクチンコントロールを、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０１８２】
簡単に述べると、ＣＤ４０Ｌ媒介性のＣＤ４０刺激は、切断型カスパーゼ−９、切断型カスパーゼ−３、または切断型ＰＡＲＰの経時的な増加を生じなかったので、生き残りシグナルを提供したことが観察され、これらの細胞は、アポトーシスを受けなかったことを示した。しかし、ＣＨＩＲ−１２．１２での処理は、これらの切断生成物の増加をもたらし、ＣＨＩＲ−１２．１２処理が、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した正常なＢ細胞における生き残りシグナル伝達に対するＣＤ４０Ｌ結合の効果を抑止し、Ｂ細胞アポトーシスを修復したことを示した（データ示さず）。
【０１８３】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、「生き残った」抗アポトーシスタンパク質の発現を阻害した）
これらの実験において、健康なドナーからの０．６×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。次いで、ＣＨＩＲ−１２．１２（１０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧを添加した。細胞を、０分、２０分、２時間、６時間、１８時間および２６時間において回収した。Ｍｃｌ−１、ＸＩＡＰ、ＣＤ４０およびβ−アクチンコントロールを、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０１８４】
簡単に述べると、ｓＣＤ４０Ｌ刺激は、Ｍｃｌ−１およびＸＩＡＰの経時的な持続性の発現を生じた。しかし、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した細胞のＣＨＩＲ１２．１２での処理は、これらのタンパク質の発現の経時的な減少を生じた（データ示さず）。Ｍｃｌ−１およびＸＩＡＰは、アポトーシス経路を遮断し得る「生き残り」シグナルであるので、これらの結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２処理が、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した正常なＢ細胞におけるアポトーシスに対する障壁を取り除くことを示す。
【０１８５】
（ＣＨＩＲ−１２．１２での処理は、正常なＢ細胞において、ＩＫＫα（Ｓｅｒ１８０）およびＩＫＫβ（Ｓｅｒ１８１）のリン酸化を阻害した）
これらの実験において、健康なドナーからの１．０×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。次いで、ＣＨＩＲ−１２．１２（１０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧを添加した。細胞を、０分および２０分で回収した。リン酸化ＩＫＫα（Ｓｅｒ１８０）およびＩＫＫβ（Ｓｅｒ１８１）および総ＩＫＫβコントロールを、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０１８６】
簡単に述べると、ｓＣＤ４０Ｌによる刺激は、ＩＫＫα（Ｓｅｒ１８０）およびＩＫＫβ（Ｓｅｒ１８１）の経時的なリン酸化を生じた；しかし、ＣＨＩＲ−１２．１２での処理は、正常なＢ細胞におけるｓＣＤ４０Ｌ刺激に対するこの応答を抑止した（データ示さず）。
【０１８７】
（ＣＨＩＲ−１２．１２での処理は、ＣＤ４０リガンドにより媒介される生き残りを、用量依存性の様式で阻害した）
これらの実験において、健康なドナーからの０．６×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。ＣＨＩＲ−１２．１２（０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、１．０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧを次いで添加した。細胞を、２４時間で回収した。切断型ＰＡＲＰおよびβアクチンコントロールを、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０１８８】
簡単に述べると、ＣＨＩＲ−１２．１２処理は、ｓＣＤ４０Ｌ刺激した細胞において、用量依存性の様式で、ＰＡＲＰの切断の増加を生じ、それゆえ、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した正常なＢ細胞において、生き残りシグナル伝達経路を抑止した（データ示さず）。
【０１８９】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、「生き残った」抗アポトーシスタンパク質の発現を、用量依存性の様式で阻害した）
これらの実験において、健康なドナーからの０．６×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。ＣＨＩＲ−１２．１２（０．５μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、および１０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧを添加した。細胞を、２２時間で回収した。Ｍｃｌ−１、ＸＩＡＰ、切断型ＰＡＲＰおよびβアクチンコントロールを、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０１９０】
簡単に述べると、ＣＨＩＲ−１２．１２処理は、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した細胞において、用量依存性の様式で、Ｍｃｌ−１およびＸＩＡＰの発現を減少し、そして、切断型ＰＡＲＰの発現を増加し、従って、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した正常なＢ細胞におけるアポトーシス経路に対するこれらの障壁を抑止した（データ示さず）。
【０１９１】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、可溶性ＣＤ４０Ｌシグナル伝達の非存在下では、抗アポトーシスタンパク質、切断型ＰＡＲＰおよびＸＩＡＰの発現に影響を及ぼさなかった）
これらの実験において、健康なドナーからの１．０×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、ＣＨＩＲ−１２．１２（１０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧのみで処理した（すなわち、細胞は、抗体を添加する前に、ｓＣＤ４０Ｌで事前に刺激されなかった）。細胞を、０時間、４時間、１４時間および１６時間にて回収した。ＸＩＡＰ、切断型ＰＡＲＰおよびβアクチンコントロールを、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０１９２】
簡単に述べると、これらの結果は、ｓＣＤ４０Ｌ刺激なしでは、細胞は、ＩｇＧ処理コントロール細胞およびＣＨＩＲ−１２．１２細胞の両方において、増加する濃度の切断型ＰＡＲＰを発現したが、ＸＩＡＰの発現は一定のままであったことを示す（データ示さず）。これらのデータは、ＣＨＩＲ−１２．１２が、ＣＤ４０Ｌ刺激なしで、正常なヒトＢ細胞においてアポトーシスを誘導しないことを示す。
【０１９３】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、正常なＢ細胞において、ＩＫＫα（Ｓｅｒ１８０）およびＩＫＫβ（Ｓｅｒ１８１）、Ａｋｔ、ＥＲＫならびにｐ３８のリン酸化を阻害する）
これらの実験において、健康なドナーからの１．０×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１％  ＦＢＳ含有培地中で血清飢餓状態にし、そして、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。この培養物を、ＣＨＩＲ−１２．１２（１μｇ／ｍｌおよび１０μｇ／ｍｌ）およびコントロールのＩｇＧで処理した。細胞を、０分および２０分にて回収した。ホスホ−ＩＫＫα、ホスホ−ＩＫＫβ、総ＩＫＫβ、ホスホ−ＥＲＫ、総ＥＲＫ、ホスホ−Ａｋｔ、総Ａｋｔ、ホスホ−ｐ３８、および総ｐ３８を、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０１９４】
簡単に述べると、ｓＣＤ４０Ｌ刺激は、ＩＫＫα／βのリン酸化、ＥＲＫのリン酸化、Ａｋｔのリン酸化、およびｐ３８のリン酸化の増加を生じ、従って、細胞の生き残りおよびまたは増殖をもたらした。ＣＨＩＲ−１２．１２での細胞の処理は、ｓＣＤ４０Ｌ刺激の、正常なＢ細胞におけるこれらのシグナル伝達経路に対する効果を抑止した（データ示さず）。
【０１９５】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＣＤ４０シグナル伝達カスケードにおけるＰＩ３ＫおよびＭＥＫ／ＥＲＫのような複数のシグナル伝達経路を阻害する）
これらの実験において、健康なドナーからの１．０×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１％  ＦＢＳ含有培地中で血清飢餓状態にし、そして、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で刺激した。この培養物をまた、ＣＨＩＲ−１２．１２（１μｇ／ｍｌおよび１０μｇ／ｍｌ）、Ｗｏｒｔｍａｎｉｎ（一種のＰＩ３Ｋ／Ａｋｔインヒビター；１μＭおよび１０μＭ）、ＬＹ２９４００２（一種のＰＩ３Ｋ／Ａｋｔインヒビター；１０μＭおよび３０μＭ）およびＰＤ９８０９５（一種のＭＥＫインヒビター；１０μｇ／ｍｌおよび３０μｇ／ｍｌ）で処理した。細胞を、０分および２０分にて回収した。ホスホ−ＥＲＫ、ホスホ−Ａｋｔ、総Ａｋｔ、ホスホ−ＩＫＫα／β、および全体を、細胞溶解物において、ウェスタンブロットにより検出した。
【０１９６】
簡単に述べると、これらの結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２が、これらのシグナル伝達分子の全てのリン酸化を抑止したことを示す一方で、シグナル伝達インヒビターは、特定のシグナル伝達の抑止のみを示し、ＣＨＩＲ−１２．１２が、ＣＤ４０Ｌ刺激により媒介されるこれらのシグナル伝達分子の上流を阻害するようであることを示した（データ示さず）。
【０１９７】
（ＣＨＩＲ−１２．１２は、正常なＢ細胞において、シグナル伝達分子であるＴＲＡＦ２およびＴＲＡＦ３の、ＣＤ４０の細胞質ドメインへの結合を阻害する）
これらの実験において、健康なドナーからの４．０×１０６個の正常なヒトＢ細胞（８５％〜９５％の間の純度（％））を、１％  ＦＢＳ含有培地中で４時間、血清飢餓状態にし、そして、１μｇ／ｍｌのｓＣＤ４０Ｌ（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｉｎｇｈａｍ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で２０分間刺激した。細胞を、０分および２０分にて回収した。ＣＤ４０を、ポリクローナル抗ＣＤ４０（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＡ）を用いて免疫沈降させ、そして、ウェスタンブロットにおいて、抗ＴＲＡＦ２  ｍＡｂ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＡ）、抗ＴＲＡＦ３  ｍＡｂ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＡ）および抗ＣＤ４０  ｍＡｂ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＡ）を用いて、プローブした。
【０１９８】
簡単に述べると、この結果は、ＴＲＡＦ２およびＴＲＡＦ３が、ｓＣＤ４０Ｌ刺激の後に、ＣＤ４０と共沈殿したことを示す。対照的に、ＣＨＩＲ−１２．１２での処理は、ｓＣＤ４０Ｌで刺激した正常なＢ細胞において、ＣＤ４０−ＴＲＡＦ２／３シグナル伝達複合体の形成を抑止した。ＣＤ４０の発現には変化はなかった（データ示さず）。
【０１９９】
理論に束縛されないが、これらの実験の結果、および上に概説した実施例の結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体が、固有の特性の組み合わせを有する二重作用（ｄｕａｌ  ａｃｔｉｏｎ）アンタゴニスト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体であることを示している。この完全ヒトモノクローナル抗体は、Ｂ細胞の生き残りおよび増殖のためのＣＤ４０Ｌ媒介性のＣＤ４０シグナル伝達経路を遮断する；このアンタゴニスト性は、最終的に細胞死をもたらす。ＣＨＩＲ−１２．１２はまた、エフェクター細胞による認識および結合を媒介し、抗体依存性の細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を開始する。ＣＨＩＲ−１２．１２がいったんエフェクター細胞に結合すると、細胞溶解酵素が放出され、Ｂ細胞のアポトーシスおよび溶解をもたらす。ＣＨＩＲ−１２．１２は、前臨床の腫瘍モデルで比較した場合、リツキシマブよりも強力な抗腫瘍抗体である。
【０２００】
（実施例６：アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体のための液体薬学的処方物）
タンパク質の安定性は、安定化または不安定化を生じる溶液のｐＨに伴って変化するタンパク質の表面電荷として、溶液のｐＨに対して敏感であることが公知である。したがって、処方物の最適でないｐＨは、静電的相互作用を変化させ、凝集、沈殿などのようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の物理学的分解をもたらす。ｐＨ条件における変化はまた、共有結合の切断を生じ、断片化、脱アミノ化などのような化学的分解をもたらす。したがって、この研究を、凝集、断片化および脱アミノ化に起因するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の分解を最小化する、溶液の最適なｐＨを同定するために設計した。
【０２０１】
本研究の目的は、この抗体についての最適な溶液環境を選択するために、生物物理学的方法および生化学的方法の両方により、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体ＣＨＩＲ−１２．１２の安定性に対する溶液のｐＨの効果を調べることであった。示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）の結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２のコンホメーションの安定性が、ｐＨ５．５〜６．５を有する処方物において最適であることを示した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）分析、およびカチオン交換ＨＰＬＣ（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）分析の組み合わせに基づくと、ＣＨＩＲ−１２．１２の物理化学的な安定性は、ｐＨ約５．０〜５．５において最適である。これらの結果を鑑みて、この抗体を含有する１つの推奨される液体薬学的処方物は、約１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム中に処方された約２０ｍｇ／ｍｌのＣＨＩＲ−１２．１２を含有し、ｐＨ約５．５のｐＨを有する処方物である。
【０２０２】
（材料および方法）
処方物の研究において使用されるＣＨＩＲ−１２．１２抗体は、ＣＨＯ細胞培養手順により作製されたヒトモノクローナル抗体である。このＭＡｂは、１５０ｋＤａの分子量を有し、ジスルフィド結合により互いに連結された２つの軽鎖および２つの重鎖から構成される。この抗体は、種々の癌および自己免疫性／炎症性疾患の処置のために、ＣＤ４０を発現する細胞（正常および悪性のＢ細胞を含む）上のＣＤ４０細胞表面レセプターに対して標的される。
【０２０３】
この研究のために使用される抗ＣＤ４０薬物原料（ｄｒｕｇ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）は、ＣＨＯに由来する精製抗ＣＤ４０（ＣＨＩＲ−１２．１２）のバルクロットであった。この薬物原料の組成は、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、１５０ｍＭの塩化ナトリウム（ｐＨ６．５）中９．７ｍｇ／ｍｌのＣＨＩＲ−１２．１２抗体であった。この研究におけるコントロールサンプルは、一般に認められた薬物原料であり、その後、≦−６０℃にて凍結し、室温で融解し、そして、所定の時点において、安定性サンプルとともに試験した。この安定性サンプルは、異なるｐＨ溶液に対する薬物原料の透析により調製したものであり、そして、各サンプルにおけるＣＨＩＲ−１２．１２の濃度を、表７に示すように、ＵＶ２８０により測定した。
【０２０４】
【表７】
2011105772.tif 000008
種々の処方物におけるＣＨＩＲ−１２．１２抗体の物理化学的安定性を、以下のプロトコルを用いてアッセイした。
【０２０５】
（示差走査熱量測定法（ＤＳＣ））
異なる処方のサンプルのコンホメーションの安定性を、１℃／分で、１５℃から９０℃まで加熱しながら、ＭｉｃｒｏＣａｌ  ＶＰ−ＤＳＣを用いてモニターした。
【０２０６】
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）
断片化および凝集を、非還元条件および還元条件下で、４〜２０％のＴｒｉｓ−グリシンゲルを用いて評価した。タンパク質を、クマシーブルー染色により検出した。
【０２０７】
（サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ））
タンパク質の断片化および凝集をまた、０．７ｍｌ／分の流速で、１００ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）を移動相として用いて、Ｔｏｓｏｈａａｓ  ＴＳＫ−ＧＥＬ  ３０００ＳＷＸＬカラムを備えるＷａｔｅｒ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＰＬＣにより測定した。
【０２０８】
（カチオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ））
分解に関連する電荷の交換を、０．５ｍｌ／分の流速で、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）を移動相Ａとして、そして、５００ｍＭのＮａＣｌを含有する５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）を移動相Ｂとして用いて、Ｄｉｏｎｅｘ  Ｐｒｏｐａｃ  ＷＣＸ−１０カラムを備える、Ｗａｔｅｒｓ  ６００ｓ  ＨＰＬＣシステムを使用して測定した。
【０２０９】
（結果および考察）
（コンホメーション安定性研究）
ＣＨＩＲ−１２．１２の熱によるアンフォールディングは、少なくとも２つの熱遷移（ｔｈｅｒｍａｌ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）を明らかにし、おそらく、それぞれ、ＦａｂドメインおよびＦｃドメインのアンフォールディング融解を表す。高温では、タンパク質は、おそらく凝集して、ＤＳＣシグナルの喪失をもたらした。処方物のスクリーニングの目的で、最も低い熱遷移温度を、この研究において、融点Ｔｍとして規定した。図６は、処方物のｐＨの関数としての熱融点を示す。ｐＨ５．５〜６．５の処方物は、より高い熱融点により実証されるように、より高いコンホメーション安定性を有する抗ＣＤ４０を提供した。
【０２１０】
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析）
ｐＨ４．５〜９．０のＣＨＩＲ−１２．１２処方物サンプルを、４０℃にて２ヶ月間インキュベートし、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析に供した（データ示さず）。非還元条件下では、ｐＨ５．５を上回る処方物において、２３ｋＤａおよび２７ｋＤａの分子量（ＭＷ）を有する種が観察され、そして、全ての処方物において、５１ｋＤａのＭＷを有する種が観察されたが、ｐＨ５．０〜５．５においては少ないようであった。１００ｋＤａのＭＷを有する種が、ｐＨ７．５およびｐＨ９．０において見られ得た。
【０２１１】
還元条件下では、ＣＨＩＲ−１２．１２は、それぞれ、５０ｋＤａのＭＷおよび２４ｋＤａのＭＷを有する、遊離重鎖および遊離軽鎖に還元された。１００ｋＤａの種は、完全には還元性ではなく、そして、溶液のｐＨの増加に伴って増加するようであり、非ジスルフィド共有結合が、この分子において生じている可能性を示唆する。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて未知の正体を有する他の種が存在しなかったので、各処方物の安定性の比較は、残存するＣＨＩＲ−１２．１２の純度に基づく。ｐＨ５．０〜６．０の処方物は、ＣＨＩＲ−１２．１２に対して、より安定な環境を提供した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、わずかな凝集が検出された（データ示さず）。
【０２１２】
（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析）
ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析は、主ピーク種としてインタクトなＣＨＩＲ−１２．１２を、主ピーク種とは別個の前ピーク種として凝集種を、主ピーク種の後にあるショルダーピークとして大きなフラグメントの種を検出し、そして、小さなフラグメントの種を、主ピーク後の種として検出した。５℃および２５℃で３ヶ月間インキュベートした後、無視できる量（＜１．０％）のタンパク質のフラグメントおよび凝集を、上記処方物中で検出し、そして、ＣＨＩＲ−１２．１２主ピーク種は、９９％以上純粋なままであった（データ示さず）。しかし、タンパク質のフラグメントは、４０℃で保存すると、次第に進展し、表８に示すように、ｐＨ４．５およびｐＨ６．５〜９．０においては、より多くのフラグメントが形成された。ＣＨＩＲ−１２．１２処方物を４０℃にて３ヶ月間インキュベートした後、約２〜３％の凝集を、ｐＨ７．５およびｐＨ９．０において検出したが、他のｐＨの処方物においては、１％未満の凝集を検出した（データ示さず）。ＳＥＣ−ＨＰＬＣの結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２が、ｐＨ約５．０〜６．０において、より安定であることを示す。
【０２１３】
【表８】
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（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析）
ＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析は、インタクトなＣＨＩＲ−１２．１２を主ピーク種として検出し、酸性改変体は、主ピーク種よりも速く溶出し、そして、Ｃ末端リジン付加改変体は、主ピーク後の種として溶出した。表９は、残存する主ピークＣＨＩＲ−１２．１２種および酸性改変体の百分率の、溶液のｐＨに対する依存性を示す。コントロールサンプルは、すでに、高い度合の酸性種（約３３％）を含んでおり、おそらくこれは、初期段階での発酵および精製のプロセスに起因するものである。より高いｐＨ溶液に対するＣＨＩＲ−１２．１２の感受性は、２つの事実により証明される。第一に、ｐＨ９．０（ｔ＝０）の最初の処方物サンプルは、すでに、コントロールよりも１２％多い酸性種を生じていた。第２に、酸性種の百分率は、ｐＨの増加に伴って急激に増加した。電荷の変化に関連する分解は、脱アミノ化に起因するようである。上記のデータは、ＣＨＩＲ−１２．１２のこの型の分解が、ｐＨ約５．０〜５．５において最小であったことを示す。
【０２１４】
【表９】
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（結論）
ｐＨは、ＣＨＩＲ−１２．１２のコンホメーションの安定性および物理化学的な安定性に有意な効果を有する。電荷の変化に関連する分解は、ＣＨＩＲ−１２．１２についての主な分解経路であると決定され、これは、ｐＨ５．０〜５．５において最小であった。全体的な安定性のデータに基づいて、この抗体を含有する１つの推奨される液体薬学的処方物は、約１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム中に処方された約２０ｍｇ／ｍｌのＣＨＩＲ−１２．１２を含有し、ｐＨ約５．５のｐＨを有する処方物である。
【０２１５】
（実施例７：ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２による臨床研究）
（臨床上の目的）
全体の目的は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体および抗ＣＤ２０抗体の組み合わせで、Ｂ細胞腫瘍を標的にすることにより、Ｂ細胞腫瘍に対する効果的な治療を提供することである。これらの腫瘍としては、Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ性リンパ腫（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、および全身性キャッスルマン病が挙げられる。これらの疾患についてのシグナルは、ある程度の活性が第Ｉ相において取得され得るが、第ＩＩ相において決定される。最初のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体はｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２であり、最初の抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））である。後の調査は、リツキシマブの結合特性を有する他の抗ＣＤ２０抗体とｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２またはｍＡｂ  ＣＨＩＲ−５．９との併用効果を研究する。
【０２１６】
（第Ｉ相）
・安全性および薬物動態を評価する−Ｂ細胞悪性疾患を有する被験体における、これら２つの抗体の用量の増大。
・安全性、忍容性、および、それぞれの標的（すなわち、ＣＤ４０またはＣＤ２０）の血清マーカーにおける変動に基づいて、各々の抗体の用量を選択する。一般的に、併用して使用される場合、これらの抗体それぞれについてのＭＴＤが要求されるが、効能の他の兆候（ＣＤ４０＋Ｂ細胞および／またはＣＤ２０＋Ｂ細胞の減少、など）が、用量を見出すことに適し得る。
・特に異なる症状に対しての、１つより多い組み合わせの用量の考慮、例えば、ＣＬＬの併用用量は、ＮＨＬに対するものと異なり得る。したがって、いくつかの用量の見極めは、第ＩＩ相において必要であり得る。
・患者は、リアルタイム薬物動態（Ｐｋ）サンプリングを伴って週ごとに投与される。最初、４週間の周期は最大限の投薬をさせる。このＰｋは、研究される疾患（ＣＤ４０および／またはＣＤ２０の密度、など）に依存して非常に変化し易くあり得る。
・この試行は、Ｂ細胞リンパ腫、ＣＬＬ、および他の潜在的なＢ細胞悪性疾患を有する被験体に公開される。
・研究を中断すること、または研究を継続することの決断は、安全性、用量、および抗腫瘍活性（特に、実在する相乗的な）の予備的な証拠に基づく。
・応答率により決定される、併用抗体治療の活性は、第ＩＩ相において決定される。
・第ＩＩ相についての併用の用量を同定する。
【０２１７】
（第ＩＩ相）
数回の試行が、Ｂ細胞リンパ腫、ＣＬＬ、および多発性骨髄腫（ＭＭ）に集中する、前述の腫瘍型において開始される。数回の試行が、軽度のＮＨＬおよび中程度／重度のＮＨＬにおいて必要とされ得るが、それは、ＣＤ４０および／またはＣＤ２０が、リンパ腫の程度により異なる機能を有し得るからである。１つよりも多い抗体用量の組み合わせ、および１つよりも多い計画が、無作為化第ＩＩ相設定において試験され得る。
【０２１８】
それぞれの疾患において、現行の治療基準に失敗した集団を標的とする：
・ＣＬＬ：Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）および化学療法に耐性であった患者
・軽度のＮＨＬ：Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）の失敗またはＣＨＯＰ−Ｒの失敗
・中程度のＮＨＬ：ＣＨＯＰ−Ｒの失敗
・多発性骨髄腫：化学療法の失敗
＊研究を中断すること、または研究を継続することの決断は、第ＩＩ相での治療概念の証拠に基づく
＊代理マーカーを、臨床的な効能の初期兆候として使用され得るかどうかを決定する
＊第ＩＩＩ相のための用量を同定する
（第ＩＩＩ相）
第ＩＩＩ相は、第ＩＩ相においてこのシグナルが検出される場所、およびどんな競合する治療が基準であるとみなされているかに依存する。このシグナルが、治療基準の無い、疾患の病期中であるとき、その場合、単一の武器となる、良く制御された研究が、中心的な試行として役立ち得る。基準であるとみなされる競合する薬剤があるとき、その場合、正面からの研究が行われる。
【０２１９】
本明細書中に示される本発明の多くの改変および他の実施形態は、上述の明細書および添付の図面に提示される教示を利用して、本発明が属する分野の当業者に想到される。従って、本発明は、開示される特定の実施形態に限定されないこと、そして、改変および他の実施形態が、添付の特許請求の範囲および本明細書中に開示される実施形態一覧の範囲内に含まれることが意図されることが理解されるべきである。特定の用語が本明細書において使用されるが、これらは、一般的かつ説明的な意味のみで使用されているのであり、制限する目的で使用されているわけではない。
【０２２０】
明細書中で言及された全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する分野の当業者の技術水準を示している。全ての刊行物および特許出願は、あたかも各個々の刊行物または特許出願が、具体的かつ個別に参考として援用されることが示されるのと同じ程度まで、本明細書中に参考として援用される。
【０２２１】
【表１０−１】
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【０２２２】
【表１０−２】
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【０２２３】
【表１０−３】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６】
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【配列表】
2011105772000001.app
【外国語明細書】
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