(57)【要約】      （修正有）【課題】毛髪のハリ、コシの付与及び感触改善作用があるセラミド産生促進剤の提供。【解決手段】クリシン、テクトクリシン、アピゲニン、フロレチン、トリヒドロキシイソフラバノン、ヘスペリジンからなる化合物群より選ばれる少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する毛髪化粧料。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）〜式（６）で表される化合物からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物を有効成分として含有するセラミド産生促進剤。
【化１】
2011231058.tif 000019
【化２】
2011231058.tif 000020
【化３】
2011231058.tif 000021
【化４】
2011231058.tif 000022
【化５】
2011231058.tif 000023
【化６】
2011231058.tif 000024
（式中、Ｍｅはメチル基を表す。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、セラミド産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
セラミドは、スフィンゴ脂質の構成成分であり、動植物の組織中に微量ではあるが広範囲に存在する。近年、セラミドが生体内において様々な機能を担っていることが明らかになりつつある。例えば、セラミドには、毛髪のハリ、コシの付与及び感触改善作用があることが報告されている（特許文献１参照）。
セラミドの多岐にわたる機能に注目し、組織内でのセラミド量を正常に保つためにセラミドを外部から補給する方法が試みられている。しかしながら、現在のところ必ずしもその効果は十分なものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平１０−１５２４２１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、高いセラミド産生促進効果を有するセラミド産生促進剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者等は上記課題に鑑み、セラミド産生促進作用を有する新規な物質を探求すべく鋭意検討を行った。その結果、下記式（１）〜式（６）で表される化合物が高いセラミド産生促進作用を有することを見い出した。本発明はこの知見に基づいて成されたものである。
【０００６】
すなわち、本発明は、下記式（１）〜式（６）で表される化合物からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物を有効成分として含有するセラミド産生促進剤に関する。
【０００７】
【化１】
2011231058.tif 000002
【０００８】
【化２】
2011231058.tif 000003
【０００９】
【化３】
2011231058.tif 000004
【００１０】
【化４】
2011231058.tif 000005
【００１１】
【化５】
2011231058.tif 000006
【００１２】
【化６】
2011231058.tif 000007
【００１３】
式（２）及び式（６）において、Ｍｅはメチル基を表す。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、セラミド産生促進剤を提供することができる。本発明のセラミド産生促進剤は、例えば皮膚外用剤の形態とすることにより外部からセラミドを供給し、組織内のセラミド量を正常な範囲に保ったり、減少したセラミド量を補うことができる。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のセラミド産生促進剤は、下記式（１）で表されるクリシン、下記式（２）で表されるテクトクリシン、下記式（３）で表されるアピゲニン、下記式（４）で表されるフロレチン、下記式（５）で表されるトリヒドロキシイソフラバノン、及び下記式（６）で表されるヘスペリジンからなる化合物群より選ばれる少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する。後述の実施例で実証されているように、この化合物は高いセラミド産生促進作用を有する。
【００１６】
【化７】
2011231058.tif 000008
【００１７】
【化８】
2011231058.tif 000009
【００１８】
【化９】
2011231058.tif 000010
【００１９】
【化１０】
2011231058.tif 000011
【００２０】
【化１１】
2011231058.tif 000012
【００２１】
【化１２】
2011231058.tif 000013
【００２２】
前記式（２）及び式（６）において、Ｍｅはメチル基を表す。
本発明において、前記式（１）〜式（６）で表される化合物には、その塩が包含される。塩としては特に限定されないが、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、トリメチルアミン、トリエチルアミン等のアルキルアミン塩及び４級アンモニウム塩、トリエタノールアミン、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン等のアルカノールアミン塩、又はリジン、ヒスチジン、アルギニン等のアミノ酸塩などが挙げられる。
【００２３】
前記式（１）〜式（６）で表される化合物は、試薬等として市販されているものから入手することができる。市販の試薬としては、例えば、和光純薬工業社製、関東化学社製、フナコシ社製、EXTRASYNTHESED社製、ALDRICH社製のもの等が挙げられる。
【００２４】
また、前記式（１）〜式（６）で表される化合物は化学合成により製造することもでき、例えば、種々の芳香環を原料として、付加反応、縮合反応、環化反応、グリコシル化反応などを経て合成することができる。具体的には、Phytochemistry,  19,  921,  1980、Australian  Journal  of  Chemistry,  40,  1705,  1987、Australian  Journal  of  Chemistry  (1987),  40(10),  1705、Tetrahedron  (2006),  62(5),  841-846などに記載された合成方法を参照して当該化合物を合成することができる。
より具体的な合成法としては、後述の実施例で示す方法を用いることができるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２５】
前記式（１）〜式（６）で表される化合物は、植物材料から抽出、単離することによって得ることもできる。前記式（１）〜式（６）で表される化合物を単離する方法としては、特に限定されないが、例えば、植物を適当な溶媒を用いて抽出し、得られた植物抽出物からクロマトグラフィー等の手法により前期式（１）〜式（６）で表される化合物を単離する方法が挙げられる。
【００２６】
前記式（１）〜式（６）で表される化合物は、後述の実施例で示すように優れたセラミド産生促進作用を有し、この化合物を含有させることでセラミド産生促進剤を得ることができる。本発明のセラミド産生促進剤は、前記式（１）〜式（６）で表される化合物のいずれか１種を含有してもよいし、２種以上を含有してもよい。前述のように、セラミドには毛髪のハリ・コシの付与及び感触改善作用があることも報告されており、本発明のセラミド産生促進剤は、毛髪にハリ・コシを付与するため、又は毛髪の感触を改善するための化粧品、医薬部外品等の素材としても有用である。
前記式（１）〜式（６）で表される化合物がセラミド産生促進作用を有することは従来全く知られておらず、本発明者等により得られた新しい知見である。
【００２７】
本発明において、前記式（１）〜式（６）で表される化合物はそのままセラミド産生促進剤として用いてもよい。又は、その効果に影響を与えない範囲で、前記式（１）〜式（６）で表される化合物に各種添加剤等を加えてもよい。例えば酸化チタン、炭酸カルシウム、蒸留水、乳糖、デンプン等の適当な液体または固体の賦形剤または増量剤を加えてセラミド産生促進剤として用いてもよい。
組成物とする場合、セラミド産生促進剤中の前記式（１）〜式（６）で表される化合物の量は特に制限されないが、前記式（１）〜式（６）で表される化合物が０．００００１〜２０質量％含まれるのが好ましく、０．０００１〜１０質量％程度含まれるのが特に好ましい。
【００２８】
本発明のセラミド産生促進剤は、化粧料、医薬部外品に適用することができる。
化粧料や医薬部外品に用いる場合、例えば皮膚外用剤の形態とすることができる。皮膚外用剤の態様で用いる場合、前記式（１）〜式（６）で表される化合物に加えて、上述した各種添加剤やその他の薬効成分を適宜加えることができ、さらには取りうる剤型に応じて皮膚外用剤に通常用いられる各種成分を配合することができる。皮膚外用剤の剤型として、具体的には、クリーム、乳液、ローション、ゲル、軟膏、ペースト、パック、シート状製品等、外用適用可能な種々の剤型が挙げられ、これらの剤型とするにあたって、例えば、各種油剤、界面活性剤、ゲル化剤、防腐剤、酸化防止剤、溶剤、アルコール、水、キレート剤、増粘剤、紫外線吸収剤、乳化安定剤、pH調整剤、色素、香料等を配合することができる。また、その他の薬効成分を配合することもできる。このような薬効成分としては、例えば、ヒアルロン酸ナトリウム等の他の保湿成分、既知のセラミド産生促進剤、擬似セラミド、天然セラミド、糖セラミド、スフィンゴミエリン、皮膚老化防止剤、美白剤などが挙げられる。
【００２９】
既知のセラミド産生促進剤としては、特に限定されるものではないが、例えば、アセチルヒドロキシプロリン、グリチルリチン酸カリウム、Ｌ-カルニチン、アスコルビン酸、アスコルビルグルコシド、アスコルビルリン酸マグネシウム、dl-α-トコフェリル-dl-アスコルビルリン酸、dl-α-トコフェリルリン酸、ニコチン酸アミド、ニコチン酸トコフェロール、L-乳酸、ビタミンＣ、アスパラガス抽出物、ブッチャーブルーム、ゲンクワニン、ローズマリー、ラベンダー、セージ、ナツメ、黒（赤）霊芝、トウキ、クジン、ヨクイニン、ベニセアンヌ抽出物、ライスパワーエキスなどが挙げられる。
擬似セラミドとしては、特に限定されるものではないが、例えば、市販のセラミドＲ（ユニリーバ製）、セラミドＰＣ-１０４（太平洋化学製）、セラミドＨＯ３（sederma製）、エルデュウＰＳ-２０３（味の素製）などが挙げられる。
糖セラミドとしては、特に限定されるものではないが、グルコシルセラミド、ガラクトシルセラミド等が挙げられるが、市販のものとしては、ニップンセラミド（日本製粉製）、オリザセラミド（オリザ油化製）、ニッサンセラミド、ネオリキッドセラミドN（日本油脂製）、セラミド（ユニチカ製）等が挙げられる。
化粧料等の皮膚外用剤中の前記式（１）〜式（６）で表される化合物の含有量は、０．００００１〜２０質量％とすることが好ましく、特に０．０００１〜１０質量％とすることが好ましい。
【実施例】
【００３０】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３１】
合成例  前記式（５）で表される化合物の合成
中間体１（1-(4-(benzyloxy)-2-hydroxyphenyl)ethanone）の合成
２、４−ジヒドロキシアセトフェノン１０ｇ（６５．７ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、１ｍＬナスフラスコに加え、アセトニトリル４００ｍＬにて溶解した。塩化ベンジル９．５１ｍＬ（８５．４ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム６８５ｍｇ（６．５７ｍｍｏｌ）、炭酸水素ナトリウム１２．１ｇ（１４４．５ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で４日間、攪拌した。反応溶液をセライト濾過した後、減圧下溶媒を留去した。酢酸エチル２００ｍＬ、水２００ｍＬを加え、分液操作を行ない、有機層を抽出、減圧下溶媒を留去した。ヘキサン１５０ｍＬ、酢酸エチル１５ｍＬを加え、６０℃にて溶解させ、攪拌しながら空冷した。析出した結晶をろ過し（φ＝９．０ｃｍ、ろ紙５Ｂ）、中間体１を得た。（収量１２．７ｇ、収率７８．５％）
【００３２】
【化１３】
2011231058.tif 000014
【００３３】
中間体２（2,4-dibezyloxybenzaldehyde）の合成
２、４−ジヒドロキシベンズアルデヒド１０ｇ（６５．７ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、５００ｍＬナスフラスコに加え、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアルデヒド２００ｍＬにて溶解した。塩化ベンジル２１．９ｍＬ（１９７ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム２．８５ｇ（１９．７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム４５．４ｇ（３２８ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で２時間、攪拌した。反応溶液をセライト濾過した後、減圧下溶媒を留去した。酢酸エチル２００ｍＬ、水２００ｍＬを加え、分液操作を行ない、有機層を抽出、減圧下溶媒を留去した。ヘキサン２００ｍＬ、酢酸エチル２０ｍＬを加え、６０℃にて溶解させ、攪拌しながら空冷した。析出した結晶をろ過し（φ＝９．０ｃｍ、ろ紙５Ｂ）、中間体２を得た。（収量１７．０ｇ、収率８５．２％）
【００３４】
中間体３（3-(2,4-bis(benzyloxy)phenyl)-7-(benzyloxy)-4H-chromen-4-one）の合成
中間体１  １０．７ｇ（４４．２ｍｍｏｌ）、中間体２  １５．６ｇ（４８．１ｍｍｏｌ）、エタノール４５０ｍＬを１Ｌナスフラスコに加え、８０℃に加熱、攪拌した。５０％水酸化ナトリウム水溶液５０ｍＬを徐々に滴下し、３０分間還流した。沈殿物を濾過し（φ＝９．０ｃｍ、ろ紙５Ａ）、０．１Ｍ塩酸で洗浄した。ヘキサン８０ｍＬ、酢酸エチル８０ｍＬを加え、６０℃にて溶解させ、攪拌しながら空冷した。析出した結晶をろ過し（φ＝６．０ｃｍ、ろ紙５Ａ）、減圧乾燥した。乾燥固形物８．７ｇ（１６．１ｍｍｏｌ）を２Ｌナスフラスコに加え、エタノール８７０ｍＬに溶解し、５０℃に加熱した。硝酸タリウム（III）・３水和物１０．７ｇ（２４．２ｍｍｏｌ）を加え、３時間攪拌した後、３Ｎ塩酸９ｍＬを加え、さらに１２時間攪拌した。沈殿物を濾過し（φ＝６．０ｃｍ、ろ紙５Ｂ）、ろ液に新たに生じた沈殿物をさらに濾過し（φ＝６．０ｃｍ、ろ紙５Ａ）、中間体３を得た。（収量４．３ｇ、収率４９．８％）
【００３５】
式（５）で表される化合物（トリヒドロキシイソフラバノン；2,3-dihydro-7-hydroxy-3-(2,4-dihydroxyphenyl)chromen-4-one）の合成
中間体３  １．０ｇ（１．８４ｍｍｏｌ）を２００ｍＬナスフラスコに加え、アセトン７０ｍＬに溶解した。１０％パラジウム−炭素２５０ｍｇを加え、水素雰囲気下、室温にて１２時間攪拌した。反応溶液をセライトろ過し、減圧下溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー５０ｇ（トルエン：アセトン＝２：１）にて精製し、無色固体としてトリヒドロキシイソフラバノンを得た。（収量２５２ｍｇ、収率４８．２％）
【００３６】
得られた化合物は1H-NMR、13C-NMRにより構造を確認した。
1H-NMR  (acetone-d6,，600MHz)δ4.14(1H,dd，J=9.9Hz，5.2Hz)，4.54(1H，dd，J=11.3Hz，5.2Hz)，4.68(1H，dd，J=11.3Hz，9.9Hz)，6.33(1H，dd，J=8.3Hz，2.4Hz)，6.42(1H，d，J=2.4Hz)，6.44(1H，d，J=2.4Hz)，6.60(1H，dd，J=8.4Hz，2.4Hz)，6.95(1H，d，J=8.6Hz)，7.89(1H，d，J=8.6Hz)
13C-NMR  (acetone-d6，125MHz)δ47.67，71.68，103.45，103.77，107.75，111.28，114.59，115.61，130.15，131.30，157.19，158.73，164.70，165.11，191.69
【００３７】
（試験例）セラミド産生促進効果の検証
前記式（１）〜（６）で表される化合物を用いて、下記の手順によりセラミド産生促進作用を評価した。なお、前記式（５）で表される化合物は上記で合成したものを、前記式（１）〜（４）及び（６）で表される化合物は試薬を用いた。詳細を以下に示す。
前記式（１）で表される化合物（関東化学社製、クリシン）
前記式（２）で表される化合物（EXTRASYNTHESED社製、テクトクリシン）
前記式（３）で表される化合物（関東化学社製、アピゲニン）
前記式（４）で表される化合物（和光純薬工業社製、フロレチン）
前記式（６）で表される化合物（関東化学社製、ヘスペリジン）
【００３８】
また、比較用化合物として、ルテオリン（関東化学社製）、７−メトキシフラボン（ALDRICH社製）、６−メトキシフラボン（フナコシ社製）、ナリンゲニン（関東化学社製）、ヘスペレチン（関東化学社製）、バイカレン（ALDRICH社製）、ケルセチン(関東化学社製)、ゲニステイン（CALBIOCHEM）及びイソリキリチゲニン（フナコシ社製）を用いて同様の評価を行った。これらの比較用化合物の構造を以下に示す。
【００３９】
【化１４】
2011231058.tif 000015
【００４０】
培養プレートを用い、培養液（商品名：EpiLife-KG2、KURABO社製）中にて、正常ヒト表皮角化細胞（商品名：NHEK(F)、KURABO社製）を３７℃、５％ＣＯ2で培養した。
その後、培養液を上皮成長因子などの増殖因子を除いたEpiLife-KG2に換え、評価サンプル（式（１）〜（６）の化合物、比較用化合物）の濃度を５ｍＭ、２ｍＭ、１ｍＭとなるようにそれぞれ調製したもの、又はコントロール溶液（５０％エタノール）を、０．１％量添加した。
３日間培養した後、各々の細胞を１ｗｅｌｌごと回収した。
【００４１】
回収した細胞からBligh  and  Dyer法により脂質を抽出した有機相をガラス管に移し、窒素乾固した後、クロロホルム、メタノールで再溶解し、脂質サンプルとした。
また、脂質を抽出した後の細胞に０．１Ｎ  ＮａＯＨ、１％ＳＤＳ水溶液を加え、６０℃で２時間加熱することにより、タンパク質を可溶化し、室温まで冷却した後２Ｎ  ＨＣｌを加えて中和し、タンパク量をＢＣＡ法により定量した。
【００４２】
調製した脂質サンプルを薄膜クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でクロロホルム：メタノール：酢酸＝１９０：９：１で２回水平展開した。硫酸銅液をスプレーで噴霧し、ホットプレートで焼き付けセラミドを検出し、セラミド量とした。
結果を表１に示す。なお、表１に示すセラミド量は、コントロール溶液添加群を１とした場合の相対値を示している。
【００４３】
【表１】
2011231058.tif 000016
【００４４】
表１から明らかなように、前記式（１）〜式（６）で表される化合物を添加した系においては、コントロールの系に比べてセラミド産出量が上昇していることが認められた。したがって、前記式（１）〜式（６）で表される化合物を有効成分として含有する本発明のセラミド産生促進剤は、セラミド産生を促進することができることがわかる。
【００４５】
（処方例１）
下記表２の組成を有するヘアローション（No.１〜６）を、それぞれ常法により製造した。
【００４６】
【表２】
2011231058.tif 000017
【００４７】
（処方例２）
下記表３の組成を有するヘアトリートメント（No.１１〜１６）を、それぞれ常法により製造した。
【００４８】
【表３】
2011231058.tif 000018