(57)【要約】      （修正有）【課題】環境に優しく且つ肉質の改善をも図ることができるニゴロブナの飼育方法を提供すること。【解決手段】飼料中に含有されるリンに関して生育に必要とするリン要求量よりも少ないリン欠乏の飼料を５０日以上継続して投与してリン欠乏状態でニゴロブナを飼育する飼育方法。この飼育方法では、飼料中に含有されるリンの欠乏度を、リン要求量の５０％以上、８０％以下（いずれの値も有効リンとして）とすることが望ましい。また、リン欠乏状態で飼育する欠乏飼育期間の後に、リン要求量よりも少なく且つ欠乏飼育期間のリン投与量よりも多い準欠乏の飼料を投与して準欠乏状態で飼育する準欠乏飼育期間を設けるのが望ましい。【選択図】図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
飼料中に含有されるリンに関して生育に必要とするリン要求量よりも少ないリン欠乏の飼料を５０日以上継続して投与し、リン欠乏状態でニゴロブナを飼育することを特徴とするニゴロブナの飼育方法。
【請求項２】
飼料中に含有されるリンのリンの欠乏度は、前記リン要求量の５０％以上、８０％以下であることを特徴とする請求項１に記載のニゴロブナの飼育方法。
【請求項３】
前記リン欠乏状態で飼育する欠乏飼育期間の後に、前記リン要求量よりも少なく且つ前記欠乏飼育期間のリン投与量よりも多い準欠乏の飼料を投与して準欠乏状態で飼育する準欠乏飼育期間を設けることを特徴とする請求項１又は２に記載のニゴロブナの飼育方法。
【請求項４】
前記準欠乏飼育期間に投与される飼料中に含有されるリンの欠乏度は、前記リン要求量の８０％以上、１００％未満であることを特徴とする請求項３に記載のニゴロブナの飼育方法。
【請求項５】
前記準欠乏飼育期間は、前記欠乏飼育期間経過後の３０日以上であることを特徴とする請求項３又は４に記載のニゴロブナの飼育方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コイ科に属するニゴロブナの飼育方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、環境保護が叫ばれる中で、環境にやさしい漁業の取組みが行われている。例えば、過密養殖や過剰な給餌は生簀周辺の有機物の負荷を増大させ、生簀周辺の水域に悪影響を与えることが知られている。即ち、漁場環境の悪化、赤潮やアオコの発生、魚病の蔓延などを引き起こし、最終的に養殖漁業そのものの生産性を損なうことになる。このような背景から、環境負荷の少ない養魚飼料の研究が行われている。
【０００３】
この研究の一例として、ブリ、マダイ、ニジマス、コイを対象魚類として、大豆油粕、コーングルテンミール及び魚粉を用い、排泄物に含まれる窒素（Ｎ）及びリン（Ｐ）の含有量を少なくするための環境負荷低減養魚飼料が提案されている（非特許文献１参照）。この取組みでは、リンの含有量が少ない植物性原料を多く配合した飼料、即ちリンの含有量が少ない飼料をつくり、この飼料を投与して養殖することによって、排泄物に含まれるリンが少なくなり、良好な環境でもって魚類（ブリ、マダイなど）を養殖することができる。また、この取組みでは、飼料中のリンは、魚の生育に必要とされるリン要求量よりも多く含まれており、それ故に、魚類（ブリ、マダイなど）の成長に悪影響を及ぼすことなく養殖することができる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】佐藤秀一、青木宙、竹内俊郎、大島敏明、キロンヴィスワナス（２００４）、「環境にやさしい養魚飼料の開発に関する基礎的研究」、科学研究費補助金データベース、研究課題番号１４３６０１２２，２００４年度研究成果報告書概要
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
近年、琵琶湖の環境変化によってニゴロブナの漁獲量が減少し、ニゴロブナの飼育（養殖）の実現が望まれている。ニゴロブナはフナ寿司に用いられ、近江地方の特産物として知られている。ニゴロブナを用いたフナ寿司では、魚肉（ニゴロブナの肉質部分）に含まれる脂肪酸成分がある程度多く含まれているのが美味しく、栄養価も高く、また骨が柔らかいのが食し易い。
【０００６】
このようなことから、ニゴロブナの飼育においては、環境にやさしく飼育することができるとともに、ニゴロブナの肉質の改善を図って脂肪酸成分をある程度多く含むように飼育することができる飼育方法の実現が望まれていた。
【０００７】
本発明の目的は、環境に優しく且つ肉質の改善をも図ることができるニゴロブナの飼育方法を提供することである。
【０００８】
また、本発明の他目的は、改善された肉質を維持しながら成長させることができるニゴロブナの飼育方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、生育に必要とするリン要求量よりも少ないリン欠乏の飼料を用いて５０日以上飼育することによって、リンが少し不足した状態でニゴロブナが飼育されることになり、これによって、排泄物中のリンの含有量が少なくなるとともに、ニゴロブナの肉質を特定の脂肪酸成分が多くなるように改善することができることを見い出した。
【００１０】
本発明の請求項１に記載のニゴロブナの飼育方法は、飼料中に含有されるリンに関して生育に必要とするリン要求量（有効リンとして）よりも少ないリン欠乏の飼料を５０日以上継続して投与し、リン欠乏状態でニゴロブナを飼育することを特徴とする。
【００１１】
また、本発明の請求項２に記載のニゴロブナの飼育方法では、飼料中に含有されるリンの欠乏度は、前記リン要求量の５０％以上、８０％以下（いずれの値も有効リンとして）であることを特徴とする。
【００１２】
また、本発明の請求項３に記載のニゴロブナの飼育方法では、前記リン欠乏状態で飼育する欠乏飼育期間の後に、前記リン要求量よりも少なく且つ前記欠乏飼育期間のリン投与量よりも多い準欠乏の飼料を投与して準欠乏状態で飼育する準欠乏飼育期間を設けることを特徴とする。
【００１３】
また、本発明の請求項４に記載のニゴロブナの飼育方法では、前記準欠乏飼育期間に投与される飼料中に含有されるリンの欠乏度は、前記リン要求量の８０％以上、１００％未満（いずれの値も有効リンとして）であることを特徴とする。
【００１４】
更に、本発明の請求項５に記載のニゴロブナの飼育方法では、前記準欠乏飼育期間は、前記欠乏飼育期間経過後の３０日以上であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の請求項１に記載のニゴロブナの飼育方法によれば、生育に必要とするリン要求量よりも少ないリン欠乏の飼料を５０日以上継続して投与してリン欠乏状態でニゴロブナを飼育するので、排泄物に含有されるリンの量が少なくなり、環境にやさしくニゴロブナを飼育（養殖）することができる。また、リン欠乏状態で飼育するので、飼料のエネルギー（カロリー）がニゴロブナの蓄積エネルギーとして利用される。その結果、ニゴロフナの成長が抑制されるかわりに肉質改善が図られ、その肉質が脂肪酸成分の多いものとなるとともに、その骨が柔らかくなり、フナ寿司用のフナとして好適なものとして飼育することができる。リン欠乏飼料での飼育が５０日未満であると、肉質の完全のための飼育期間が短く、肉質を脂肪酸成分の多いものに充分改善することができない。尚、リン要求量とは、生育に必要な最小限のリンの量であって、このリン要求量より少なくなるとリン欠乏症状が現れるようになり、ニゴロブナの場合、このリン要求量（要求濃度）は０．６％（飼料１００ｇ当たり有効リンとして０．６ｇ）である。
【００１６】
また、本発明の請求項２に記載のニゴロブナの飼育方法によれば、飼料中に含有されるリンの欠乏度は、リン要求量の５０％以上、８０％以下（いずれの値も有効リンとして）であるので、ニゴロブナの成長が抑制されるかわりに肉質改善が図られ、その肉質が脂肪酸成分の多く、骨が柔らかものに飼育することができる。リン欠乏度がリン要求量の５０％未満であると、飼料中に含まれるリン量が過少となり、リン欠乏による生育障害が生じるおそれがある。また、リン欠乏度がリン要求量の８０％を超えると、リン欠乏状態による飼育の効果が少なく、肉質の改善を充分に図ることができなくなる。
【００１７】
また、本発明の請求項３に記載のニゴロブナの飼育方法によれば、リン欠乏状態で飼育する欠乏飼育期間の後に、準欠乏状態で飼育する準欠乏飼育期間を設け、この準欠乏飼育期間中は、リン要求量よりも少なく且つ欠乏飼育期間のリン投与量よりも多い準欠乏の飼料を投与して飼育するので、リン欠乏状態で飼育されたニゴロブナの改善された肉質を維持しながらリン欠乏状態のときよりもその成長改善を図ることができ、大きく成長させることができる。
【００１８】
また、本発明の請求項４に記載のニゴロブナの飼育方法によれば、準欠乏飼育期間に投与される飼料中に含有されるリンの欠乏度は、リン要求量の８０％以上、１００％未満（いずれの値も有効リンとして）であるので、リン欠乏状態で飼育されたニゴロブナの改善された肉質を維持しながらリン欠乏状態のときよりもその成長を早めることができる。準欠乏飼育期間におけるリン欠乏度がリン要求量の８０％未満であると、改善された肉質の維持を図ることができるが、ニゴロブナの成長が遅くなり、また準欠乏飼育期間におけるリン欠乏度がリン要求量の１００％以上となると、ニゴロブナの成長は早くなるが、改善された肉質が元に戻るようになる。
【００１９】
更に、本発明の請求項５に記載のニゴロブナの飼育方法によれば、準欠乏飼育期間は、欠乏飼育期間経過後の３０日以上であるので、改善された肉質を維持しながらニゴロブナを充分に成長させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ニゴロブナを飼育する飼育装置の一例を簡略的に示す簡略説明図。
【図２】ニゴロブナを飼育した後の成長率を示す図。
【図３】ニゴロブナを飼育した後の脊椎骨のリン含有率を示す図。
【図４】ニゴロブナを飼育した後の魚肉中の脂肪総量を示す図。
【図５】ニゴロブナを飼育した後の魚肉中の脂肪酸の量を示す図。
【図６】ニゴロブナを飼育した後の魚肉中のＥＰＡ及びＤＨＡの含有量を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、添付図面を参照して、本発明に従うニゴロブナの飼育方法の一実施例について説明する。
【００２２】
図１において、図示の飼育装置は水槽２を備え、この水槽２に水が収容される。この実施例では、水として水道水が用いられ、このことに関連して、水道水中の塩素成分を除去するための塩素除去装置４が設けられ、塩素除去装置４にて塩素成分が除去された水が供給流路６を通して水槽２内に送給される。また、水槽２には排水口８が設けられ、所定水位Ｐを超えた水が排水口８から外部に排水されるように構成されている。
【００２３】
この水槽２に関連して、濾過装置１０が設けられ、濾過装置１０には、不純物を除去するためのフィルタ１２が設けられている。水槽２の排水口８から排水された水は濾過装置１０の第１室１４に流れ、第１室１４から第２室１６に流れる際にフィルタ１２によって不純物が除去される。そして、第２室１６の水（即ち、不純物が除去された水）が戻し流路１８を通して水槽２に戻され、この戻し流路１８には、第２室１６内の水を水槽２にもどすための水戻しポンプ２０が配設されている。
【００２４】
このように構成されているので、水槽２に送給される水は、塩素除去装置４によって塩素成分が除去され、また濾過装置１０から水槽２に戻される水は、フィルタ１２によって不純物が除去され、これによって、水槽２内の水をニゴロブナの飼育に適したきれいな状態に保つことができる。尚、上述した水槽２では、所定水位Ｐを維持するために排出口８を設けているが、このような排出口８を省略し、水槽２から溢れる水を濾過装置１０に集めてフィルタ１２により不純物を除去するようにしてもよい。
【００２５】
飼育すべきニゴロブナ２２は、このようなきれいな状態の水が収容された水槽２内で飼育される。ニゴロブナ２２を飼育するためには、次のような飼料を投与して飼育するのが重要である。即ち、飼料中に含有されるリンに関し、生育に必要とするリン要求量よりも少ないリン欠乏の飼料を投与することが重要である。ニゴロブナのリン要求量（要求濃度）は０．６％程度、即ち飼料１００ｇ当たり０．６ｇ程度のリン要求量（有効リンとして）であり、このリン要求量より少なくすることが重要であり、このようにリン要求量よりも少ないことをリン欠乏と表現する。飼料中に含有されるリンの欠乏量（欠乏度）は、リン要求量の５０％（有効リンとして）以上、８０％（有効リンとして）以下、即ち飼料１００ｇ当たり有効リンとして０．３ｇ以上、０．４８ｇ以下であるのが好ましい。
【００２６】
リン欠乏飼料の原料として小麦グルテン、乾燥卵白、大豆油粕、魚油、小麦粉などを含有させることができ、また飼料添加物として各種ビタミン混合物、各種ミネラル混合物などを含有させることができる。また、後の飼育実験から明らかなように、人間の健康に対して良い効果があるとされるイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）をリン欠乏飼料に含め、リン欠乏状態及び準欠乏状態で飼育することによって、ＥＰＡ及びＤＨＡの魚肉への蓄積を効果的に行うことができ、魚肉中の含有量を高めることができる。
【００２７】
リン欠乏飼料による飼育は、５０日以上継続して行うことが重要であり、６０日以上継続して行うのが望ましい。リン欠乏飼料を所定期間（例えば、５０日以上）継続して投与すると、ニゴロブナにリン欠乏の影響が現れ、その成長が抑制されるかわりに肉質改善が図られ、その肉質が脂肪酸成分の多いものとなるとともに、その骨が柔らかくなる。
【００２８】
上述したリン欠乏飼料を投与する欠乏飼育期間の後に、準欠乏飼育期間を設けるのが好ましく、この準欠乏飼育期間を３０日以上とするのが望ましい。この準欠乏飼育期間においては、上記リン要求量よりも少なく且つ欠乏飼育期間のリン投与量よりも多い準欠乏の飼料を投与してニゴロブナを低リン状態で飼育する。このように準欠乏状態で飼育するので、リン欠乏状態で飼育されたニゴロブナの改善された肉質（脂肪酸成分の多い肉質）を維持しながらリン欠乏状態のときよりもその成長を早めることができる。
【００２９】
この準欠乏飼育期間に用いる飼料中に含有されるリンの欠乏量（欠乏度）は、リン要求量の８０％（有効リンとして）以上、１００％（有効リンとして）未満であるのが好ましく、このような低リン状態で飼育することによって、食用に適した大きさ（例えば、フナ寿司用に適したもの）となる。
［実施例及び比較例］
【００３０】
本発明のニゴロブナの飼育方法の効果を確認するために、次の通りの飼育実験を行った。飼育装置として図１に示すものと同様の構成のものを用いた。水槽としてプラスチック製の丸形水槽（実質容量５０リットル）を用い、２つの水槽を用いて同じようにしてニゴロブナを飼育した。水槽へ供給する水は水道水を用い、水槽に送給される前に塩素除去装置でもって水道水中の塩素成分を除去し、塩素成分を除去した水を連続的に注水する半流水式とし、また、水槽から溢れた水を濾過装置に集め、濾過装置にて不純物を除去した後に水槽に戻すようにした（日間換水率２０〜５０％）。飼育期間中の水温は２７±１℃に保った。また、濾過槽にて原生動物などの寄生虫が繁殖するのを防止するために、紫外線ライト（２０Ｗ）を濾過槽後部にて常時照射した。
【００３１】
実施例では、上述した飼育条件の各水槽にニゴロブナを２８尾ずつ収容して飼育実験を行った。２００７年９月８日から２００７年１１月９日までの６２日間にわたってリン欠乏飼料を投与して飼育し、給餌は１日３回飽食するまで与えた。尚、飼育実験開始前の１週間は、一般に市販されている飼料を投与して予備飼育し、実験開始時におけるニゴロブナの平均体重は３．９２±１．４７ｇであった。リン欠乏飼料は、飼料原料及び飼料添加物からなり、これらの組成は、表１の「リン欠乏飼料」に示す通りであり、これらの飼料成分のうちリンは０．１７５％（飼料１ｋｇ当たり総リン量として１．７５ｇ）であった。また、この「リン欠乏飼料」における各脂肪酸成分の割合（総脂肪酸当たりの割合％）は、表２の「リン欠乏飼料」に示す通りであった。
【００３２】
実施例の飼育実験の終了後、飼育したニゴロブナを魚体成分分析用試料として各水槽から比較的大きく成長したものを５尾ずつサンプルとして抽出し、血抜きをした後、各個体別にビニール袋に入れて密封し、−２５℃で冷凍保存し、後述する各種分析に用いた。
【００３３】
【表１】
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【００３４】
【表２】
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また、比較例では、上述した飼育条件の各水槽にニゴロブナを２８尾ずつ収容して実施例と同様にして飼育実験を行った。２００７年９月８日から２００７年１１月９日までの６２日間にわたって高リン量（リン要求量よりも多い量）のリンを含む高リン飼料を投与して飼育し、給餌は１日３回飽食するまで与えた。尚、比較例においても、飼育実験開始前の１週間は、一般に市販されている飼料を投与して予備飼育し、実験開始時におけるニゴロブナの平均体重は３．９２±１．４７ｇであった。実施例と比較例とでは投与する飼料の組成が異なるのみであり、高リン飼料の組成は、表１の「高リン飼料」に示す通り、でリン含有量０．９７０％（飼料１ｋｇ当たり総リン量として９．７０ｇ）であった。また、この「高リン飼料」における各脂肪酸成分の割合（総脂肪酸当たりの割合％）は、表２の「高リン飼料」に示す通りであった。
【００３５】
比較例の飼育実験の終了後、実施例と同様に、飼育したニゴロブナを魚体成分分析用試料として各水槽から比較的大きく成長したものを５尾ずつサンプルとして抽出し、血抜きをした後、各個体別にビニール袋に入れて密封し、−２５℃で冷凍保存し、後述する各種分析に用いた。
【００３６】
ニゴロブナの成長率の測定
実施例及び比較例におけるニゴロブナの成長率及び飼料効率は、次のようにして算出した。成長率（α）とは、ニゴロブナの増加重量が飼育前の体重の何倍かを示すものであり、
ニゴロブナの成長率（α）＝（ｂ−ａ）×１００／ａ      ・・・（１）
ａ：飼育前の体重    ｂ：飼育後の体重
で示され、この式（１）を用いて算出される。また、飼料効率（β）とは、給餌した飼料１ｇ当たりでどれだけ体重が増えたかを示すものであり、
ニゴロブナの飼料効率（β）＝〔（ｂ−ａ）／ｃ〕×１００      ・・・（２）
ａ：飼育前の体重    ｂ：飼育後の体重    ｃ：用いた試料の重量
で示され、この（２）式を用いて算出される。
【００３７】
成長率（α）については、高リン飼料を用いた比較例（ＨＰ）のものは、表３及び図２に示すように、体重が１５．７±０．０３ｇに成長し、３８５．９％増加したのに対し、リン欠乏飼料を用いた実施例（ＬＰ）のものは、表３及び図２に示すように、体重が１１．３±０．１７ｇに成長し、２４８，５％増加し、高リン飼料を用いて飼育した場合、リン欠乏飼料を用いて飼育した場合に比して１．５７倍に成長した。この結果から、リン欠乏飼料を用いてニゴロブナを飼育した場合、リン欠乏の結果としてニゴロブナの成長が抑制されることが確認できた。
【００３８】
また、飼料効率については、表３に示すように、高リン飼料で飼育した場合に１００．９±２．１４％であるのに対し、リン欠乏飼料で飼育した場合に８３．３±２．４４％であり、高リン飼料を用いて飼育した場合、リン欠乏を用いて飼育した場合に比して１．２１倍の飼料効率を示した。尚、この飼育実験中、リン欠乏が原因と考えられる斃死は見られなかった。
【００３９】
【表３】
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ニゴロブナの骨格中のリン濃度の測定
実施例及び比較例におけるニゴロブナの骨格中のリン濃度の測定は、モリブデンブルー法により測定した。測定操作方法は、次の通りに行った。骨格の分離は、冷凍保存されたニゴロブナの魚体をビニール袋に入れたまま自然解凍し、魚体を三枚におろして、骨格部（脊椎）及び可食部（フィレー）に分けた後、骨格部を８０〜９０℃の熱湯で約２分加熱した。加熱後、水道水で流しながら丁寧に筋肉を除去し、骨格を分離し、分離した骨格を室温で風乾させた。
【００４０】
その後、脊椎骨の一部（約２０ｍｇ）を試料ビン（２０ｍｌ容ガラスバイアル）に入れ、電気乾燥機を用いて１０５℃で３０分乾燥させた。乾燥後に、メタノール及びクロロホルムを１対１で混合した溶液で２回洗浄し、再び電気乾燥機を用いて１０５℃で２４時間乾燥させた。乾燥後、処理した脊椎を秤量し、電気炉を用いて５５０℃で１２時間加熱して灰化した。
【００４１】
灰化した骨の重量を測定した後に、ドラフト内で濃硝酸（ＨＮＯ３）０．５ｍｌ、濃塩酸（ＨＣｌ）０．５ｍｌを加えて攪拌した。そして、６時間放置した後に、全体で２０ｍｌとなるように蒸留水を加えて測定試料を準備した。
【００４２】
このようにして測定試料をつくった後、この測定試料０．０５ｍｌに１２％のトリクロロ酢酸を加えて攪拌した。攪拌後に、発色液を１ｍｌ加え、再び攪拌し、分光光度計（ＢＥＣＫＭＡＮ社製、型式：ＤＵ−６８）で吸光度を波長６６０ｎｍで測定した。
【００４３】
発色液は、蒸留水３．９１ｍｌに濃硫酸（Ｈ２ＳＯ４）１．０９ｍｌを加え、更にモリブデン酸アンモニウム四水和物（（ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４・４Ｈ２Ｏ）を０．５ｇ溶かした後に、蒸留水を３０ｍｌを加えて攪拌した。この攪拌後、更に、硫化鉄七水和物（ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ）を２．５ｇ添加し、全体量が５０ｍｌとなるように蒸留水を加えて発色液をつくった。この発色液は、使用直前（測定当日）に調整した。
【００４４】
また、飼料中のリン濃度についても、飼料約１３０ｍｇを使用し、骨格分析と同様の手順でもって分析した。
【００４５】
実施例及び比較例のニゴロブナの骨格（脊椎）のリン濃度は、表３及び図３に示す通りであり、リン欠乏飼料を用いた実施例（ＬＰ）のものでは、５．０２±０．５３％であるのに対し、高リン飼料を用いた比較例（ＨＰ）のものでは、１０．０２±０．３１％であり、骨格のリン濃度は飼料中のリン濃度を反映したものとなった。骨格灰分量についても、表３に示すように、リン欠乏飼料を用いた実施例（ＬＰ）ものでは、３９．４±１．４３％であるのに対し、高リン飼料を用いた比較例（ＨＰ）のものでは、４９．８±１．２８％であった。骨格灰分とは、骨格を焼いたときに残る灰のことであり、この灰分は骨格中の無機質（リン、カルシウムなど）のおおよその量を示すものである。この灰分量の結果は、実施例及び比較例のものの骨格中のリン濃度を反映したものとなり、リン欠乏飼料を用いた実施例のものは、高リン飼料を用いた比較例に比して少なかった。
【００４６】
リン欠乏飼料を用いた実施例のものでは、口部に奇形のあるものが見られ、更に、骨格（脊椎骨）が柔らかく感じられた。これは、成長過程でリン欠乏の結果、骨格形成が不充分であったためであると考えられる。
【００４７】
ニゴロブナの脂質量の測定
実施例及び比較例におけるニゴロブナの可食部（フィレー）中の脂質量の測定は、メタノール・クロロホルム法を用いた。分析操作は、次の通りに行った。ニゴロブナの可食部をミキサー（商品名：マルチシェフ、型番：ＭＣ−２００ＤＺ）でミンチ状にし、分析に供するまでビニール袋に入れて冷凍保存した。脂質抽出の際には、室温（約２０℃）で自然解凍し、測定すべき可食部（ミンチ状にした可食部）４ｇにメタノール（ＣＨ３ＯＨ）８ｍｌとクロロホルム（ＣＨＣｌ３）とを加え、ホモジナイザー（井内盛栄堂社製、型番：ＣＭ−２００）で３分間ホモジナイズした。その後、クロロホルム４ｍｌを加えて３分間ホモジナイズし、更に蒸留水４ｍｌを加えて３分間ホモジナイズした。
【００４８】
このようにホモジナイズした後、その全量を漏斗（Ｂｕｃｈｎｅｒ  ｆｕｎｎｅｌ）と濾紙（キムワイプで代用）で濾過し、漏斗上の残渣にクロロホルムを６ｍｌ加え、３分間ホモジナイズした後に再度濾過した。そして、漏斗上の残渣をビーカの底面で圧縮し、濾液をできるかぎり回収した。回収した濾液をよく混合し、約５℃の低温で１５分間静置し、上層と下層とを分離した（このとき、使用したガラスチューブに全量が分かるように印を付けた）。
【００４９】
分離した上層は、パスツールピペットを用いて取り除き、クロロホルム５〜６ｍｌ、メタノール１００ｍｌ及び０．１Ｍ塩化カリウム（ＫＣｌ）１００ｍｌを混合した溶液を、上述したガラスチューブに印を付けたレベルまで加え、攪拌して再度上層と下層に分離し、分離した上層を除去した後に、下層（クロロホルム層）を−２５℃で保存した。
【００５０】
このようにしてつくった測定試料（下層の一部）５ｍｌをガラスバイアルに取り、ドラフト内で乾燥し、更に電気乾燥機を用いて１０５℃で１２時間乾燥し、この乾燥後に残った脂肪量を秤量した。この測定飼料５ｍｌ中の脂肪量をもとに、下層総量を乗じて魚肉４ｇ中の総脂質量を算出した。
【００５１】
飼料中の脂質の抽出は、飼料１．５ｇに蒸留水２．５ｍｌを加えて全体重量４ｇとし、水分含量を調節してから、実施例及び比較例における可食部の脂質抽出と同様の操作手順で行った。尚、この脂質量の測定で用いたクロロホルムは、酸化防止剤としてジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）を１００ｐｐｍ添加したものを使用した。
【００５２】
実施例及び比較例のニゴロブナの魚肉中の脂質含有量は、表３及び図４に示す通りであり、リン欠乏飼料を用いた実施例（ＬＰ）のものでは、３．８６±０．３９％であるのに対し、高リン飼料を用いた比較例（ＨＰ）のものでは、２．３２±０．３５％であり、実施例のものの脂質含有量は比較例のものに比して１．６６倍と高い値であった。これは、リン欠乏飼料を用いた飼育の場合、その成長が抑制される代わりに、飼料のエネルギーが蓄積エネルギーとして使われて肉質の改善が図られ、その肉質が脂質（脂肪酸成分）の多いものになったと考えられる。
【００５３】
尚、実施例及び比較例で使用したリン欠乏飼料（ＬＰ）及び高リン飼料（ＨＰ）に含まれる脂質成分は、２１，０３％であった（表１参照）。
【００５４】
ニゴロブナの脂肪酸成分の測定
実施例及び比較例におけるニゴロブナから抽出した脂質（脂肪酸成分）について、脂肪酸分析を行った。まず、脂質量の測定において、ブライ・ダイアー（Ｂｌｉｇｈ＆Ｄｙｅｒ）法で抽出したクロロホルム層（下層）１．５ｍｌを試料ビン（５ｍｌ容ガラスバイアル）に取り、無水硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）を加えて脱水した。そして、脱水した試料を試料ビン（１５ｍｌ容スクリュートップガラスバイアル）に０．９３ｍｌ取り、メタノール１６ｍｌ、クロロホルム１２ｍｌ及び濃硫酸３ｍｌを混合した試薬（１０サンプル分）を３．１ｍｌを加えて攪拌した。この攪拌後、キャップを閉めて９５℃で１時間加熱し、脂肪酸をメチルエステル化した。加熱後に冷却し、蒸留水を１ｍｌ加え、激しく攪拌後に、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。
【００５５】
遠心分離後に、上層をパスツールピペットで取り除き、下層を無水硫酸ナトリウムで脱水して測定試料をつくり、この測定試料〔脱水した下層（クロロホルム層）〕の一部（１μｌ）を分析に供した。
【００５６】
測定試料の脂肪酸組成は、ガスクロマトグラフ（ＧＬＣ）を用いて分析した。ガスクロマトグラフは、株式会社島津製作所製のガスクロマトグラフ（型番ＧＣ−１４Ｂ型）を用い、検出は水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）を用いた。カラムは、脂肪酸分析用キャピラリーカラム〔米国  Ｊ＆Ｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製、型式：ＤＢ２３、１５ｍ（長さ）×０，５３ｍｍ（内径）×０．５μｍ（膜厚）〕を用いた。分析条件は、昇温分析を使用した。設定温度は、初期温度１３０℃、初期温度保持時間は１分間、昇温レートは６．５℃／分、最終温度は２０５℃、最終温度保持時間は１分間、インジェクター温度は２３０℃、ディテクター温度は２４０℃、ヘリウムガス圧力は４０ｋｐａ、水素ガス圧力は６５ｋｐａであった。
【００５７】
各脂肪酸量の算出については、ブライ・ダイアー法で抽出したクロロホルム層を脱水し、この脱水したもの０．９３ｍｌに、標準物質として１２００ｐｐｍのペンタデカン酸を５０μｌ加えた。各脂肪酸量は、ガスクロマトグラフにより導き出された各脂肪酸のピーク面積の比率と、標準物質の量をもとに算出した。
【００５８】
実施例及び比較例のニゴロブナの魚肉中の脂質の脂肪酸組成は、表４及び図５に示す通りであり、表２に示す各飼料、即ちリン欠乏飼料（ＬＰ）及び高リン飼料（ＨＰ）の脂肪酸組成を反映する結果となった。
【００５９】
【表４】
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また、人間の健康に対して良い効果があるとされるイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）についても、表４、図５及び図６から明らかなように、ニゴロブナの魚体内に蓄積されるが、ＥＰＡの魚体内への蓄積については、リン欠乏飼料を用いた実施例（ＬＰ）のものでは、２２０．１９ｍｇ／魚肉１００ｇであるのに対し、高リン飼料を用いた比較例（ＨＰ）のものでは、１３４．５６ｍｇ／魚肉１００ｇであり、実施例におけるＥＰＡの魚体内への蓄積量は比較例に比して１．６４倍と高く、またＤＨＡの魚体内への蓄積については、リン欠乏飼料を用いた実施例（ＬＰ）のものでは、３７２．６３ｍｇ／魚肉１００ｇであるのに対し、高リン飼料を用いた比較例（ＨＰ）のものでは、２９０．０５ｍｇ／魚肉１００ｇであり、実施例におけるＤＨＡの魚体内への蓄積量は比較例に比して１．２８倍であった。この結果から、ＥＰＡ及びＤＨＡについては、ニゴロブナをリン欠乏状態で飼育することによって、より効果的に魚肉内に蓄積させることできることが判った。
【符号の説明】
【００６０】
２  水槽
４  塩素除去装置
１０  濾過装置
１２  フィルタ
２０  水戻しポンプ
２２  ニゴロブナ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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