(57)【要約】【課題】さらなるＨＥＲ２−指向性癌療法を提供すること。【解決手段】本発明により、オーリスタチンペプチドが提供される。このようなオーリスタチンペプチドとしては、Ｍｅ  Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ノルエフェドリン（ＭＭＡＥ）およびＭｅ  Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ（ＭＭＡＦ）が挙げられ、これらは調製され、マレイミドカプロイル−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢを含めた、種々のリンカーを介してリガンドに結合される。本発明により得られたリガンド薬物結合体はインビトロおよびインビボで活性であった。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2011231131.tif 000334
［式中、
Ａｂは抗体であり、
Ｒ１７は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−よりなる群から選択され；およびｒは１〜１０の範囲の整数であり；
ｐは１〜約２０の範囲であり、および
ＤＦは以下の式を有する薬物部分であり：
【化２】
2011231131.tif 000335
ここで、独立して、各位置において：
Ｒ２はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルよりなる群から選択され；
Ｒ３はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルよりなる群から選択され；
Ｒ４はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルよりなる群から選択され；
Ｒ５はＨおよびメチルよりなる群から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルよりなる群から選択され；
Ｒ７はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルよりなる群から選択され；
各Ｒ８は、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）であり；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルよりなる群から選択され；
Ｒ１０はフェニルであり；
ＺはＯまたはＮＨであり；および
Ｒ１１はＣ１−Ｃ２０アルキルまたは−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；および
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルである］
を有する抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ１７がＣ１−Ｃ１０アルキレン−である、請求項１記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項３】
式：
【化３】
2011231131.tif 000336
を有する請求項１記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩もしくは溶媒和物。
【請求項４】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩もしくは溶媒和物。
【請求項５】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項３記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩もしくは溶媒和物。
【請求項６】
ＤＦが以下の構造：
【化４】
2011231131.tif 000337
を有する、請求項１記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩もしくは溶媒和物。
【請求項７】
ＤＦが以下の構造：
【化５】
2011231131.tif 000338
を有する、請求項３記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩もしくは溶媒和物。
【請求項８】
腫瘍細胞または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害するための組成物であって、該組成物は、腫瘍細胞または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害するのに効果的である、一定量の請求項１記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物を含む、組成物。
【請求項９】
癌を処置するための組成物であって、該組成物は、一定量の請求項１記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物を含み、ここで、該量は癌を処置するのに効果的である、組成物。
【請求項１０】
腫瘍細胞または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害するための組成物であって、該組成物は、腫瘍細胞または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害するのに効果的である、一定量の請求項３記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物を含む、組成物。
【請求項１１】
１以上の薬物部分に共有結合した抗体を含む抗体−薬物結合体化合物であって，該化合物が式：
【化６】
2011231131.tif 000339
［式中：
Ａｂが１以上の腫瘍−関連抗原（１）〜（３５）：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質レセプター−タイプＩＢ）；
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１，ＳＬＣ７Ａ５）；
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原）；
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５，ＭＵＣ１６）；
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ，ＭＳＬＮ，ＳＭＲ，巨核細胞増強因子，メソテリン）；
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ，ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２，溶質キャリアーファミリー３４（リン酸ナトリウム），メンバー２，タイプＩＩナトリウム−依存性リン酸トランスポーター３ｂ）；
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２，ＫＩＡＡ１４４５，Ｍｍ．４２０１５，ＳＥＭＡ５Ｂ，ＳＥＭＡＧ，セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ，ｓｅｍａドメイン，７回トロンボスポンジンリピート（タイプＩおよびタイプＩ−様），膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン，（セマフォリン）５Ｂ）；
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ，Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）；
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンタイプＢレセプター）；
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４，仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）；
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９，ＩＰＣＡ−１，ＰＣＡＮＡＰ１，ＳＴＡＭＰ１，ＳＴＥＡＰ２，ＳＴＭＰ，前立腺癌関連遺伝子１，前立腺癌関連タンパク質１，前立腺の６回膜貫通上皮抗原２，６回膜貫通前立腺タンパク質）；
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０，ＦＬＪ２００４１，ＴＲＰＭ４，ＴＲＰＭ４Ｂ，一過性レセプター潜在的カチオンチャネル，サブファミリーＭ，メンバー４）；
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ，ＣＲ１，ＣＲＧＦ，ＣＲＩＰＴＯ，ＴＤＧＦ１，テラトカルシノーマ−由来成長因子）；
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体レセプター２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルスレセプター）またはＨｓ．７３７９２）；
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＩＧｂ（免疫グロブリン−関連β），Ｂ２９）；
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４，ＩＲＴＡ４，ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ），ＳＰＡＰ１Ｂ，ＳＰＡＰ１Ｃ）；
（１７）ＨＥＲ２；
（１８）ＮＣＡ；
（１９）ＭＤＰ；
（２０）ＩＬ２０Ｒα；
（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ；
（２２）Ｅｐｈｂ２Ｒ；
（２３）ＡＳＬＧ６５９；
（２４）ＰＳＣＡ；
（２５）ＧＥＤＡ；
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ；
（２７）ＣＤ２２；
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ，ＣＤ７９α，免疫グロブリン−関連α）；
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫レセプター１）；
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合し、それらをＣＤ４＋Ｔリンパ球に提示するＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のβサブユニット）；
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性レセプターＰ２Ｘリガンド型イオンチャネル５）；
（３２）ＣＤ７２（Ｂ―細胞分化抗原ＣＤ７２，Ｌｙｂ−２）；
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのタイプＩ膜タンパク質）；
（３４）ＦＣＲＨ１（Ｆｃレセプター−様タンパク質１）；および
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスローケーション関連２）
に結合する抗体であり、
Ｒ１７は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−よりなる群から選択され；およびｒは１〜１０の範囲の整数であり；
ｐは１〜約２０の範囲であり、および
ＤＦは以下の式を有する薬物部分であり：
【化７】
2011231131.tif 000340
ここで、独立して、各位置において、
Ｒ２はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルよりなる群から選択され；
Ｒ３はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルよりなる群から選択され；
Ｒ４はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルよりなる群から選択され；
Ｒ５はＨおよびメチルよりなる群から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルよりなる群から選択され；
Ｒ７はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルよりなる群から選択され；
各Ｒ８は、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）であり；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルよりなる群から選択され；
Ｒ１０はフェニルであり；
ＺはＯまたはＮＨであり；および
Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキルまたは−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；および
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルである］
を有する化合物、またはその薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物。
【請求項１２】
Ｒ１７がＣ１−Ｃ１０アルキレン−である、請求項１１記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項１３】
式：
【化８】
2011231131.tif 000341
を有する請求項１１記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩もしくは溶媒和物。
【請求項１４】
腫瘍細胞または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害するための組成物であって、該組成物は、腫瘍細胞または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害するのに効果的である、一定量の請求項１１記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物を含む、組成物。
【請求項１５】
癌を処置するための組成物であって、該組成物は、一定量の請求項１１記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物を含み、ここで、該量は癌を処置するのに効果的である、組成物。
。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（継続性）
本願は、米国仮特許出願番号第６０／５１８，５３４号（２００３年１１月６日出願）；米国仮特許出願番号第６０／５５７，１１６号（２００４年３月２６日出願）；米国仮特許出願番号第６０／５９８，８９９号（２００４年８月４日出願）；および米国仮特許出願番号第６０／６２２，４５５号（２００４年１０月２７日出願）の優先権を主張し、これらの開示は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（１．発明の分野）
本発明は薬物化合物、より詳しくは、薬物−リンカー−リガンド結合体、薬物−リンカー化合物、および薬物−リガンド結合体、それを含む組成物、およびそれを用いて癌、自己免疫疾患、または感染病を治療する方法に指向される。また、本発明は、抗体−薬物結合体、それを含む組成物、およびそれを用いて癌、自己免疫疾患または感染病を治療する方法に指向される。また、本発明は、哺乳動物細胞、または関連病理学的状態のインビトロ、インサイチュおよびインビボ診断または治療用の抗体−薬物結合体化合物を用いる方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（２．発明の背景）
最大効率および最小毒性を達成するための薬物および他の剤の標的細胞、組織および腫瘍への送達の改善は、長年、かなりの研究の焦点であった。インビボおよびインビトロ双方において生物学的活性な分子を細胞に取り込むための効果的な方法を開発しようとする多くの試みがなされてきたが、完全に満足すべきことが判明したものはなかった。薬物の、例えば、隣接細胞への細胞間再分布を最小化しつつ、薬物とその細胞内標的との会合の最適化は、しばしば、困難であるかまたは非効率的である。
【０００４】
現在患者に非経口投与されるほとんどの剤は標的されておらず、その結果、剤は体の細胞および組織へ全身送達され、そこでは、それは不必要であり、しばしば望ましくない。この結果有害な薬物副作用をもたらしかねず、しばしば、投与することができる薬物（例えば、化学療法（抗癌）、細胞傷害性、酵素阻害剤および抗ウイルスまたは抗微生物薬物）の用量をしばしば制限する。比較すると、薬物の経口投与は便宜かつ経済的な投与態様であると考えられるが、それは、一旦薬物が全身循環に吸収されると非患部細胞に対する非特異的細胞傷害性の同一の関心を共に有する。さらに合併症は、薬物への腸のさらなる曝露および、従って、腸傷害性の危険性に導く腸での薬物の経口生物学的利用能および滞留に伴う問題を含む。従って、主な目標は、剤を細胞および組織へ特異的に標的化する方法を開発することであった。そのような治療の利点は、未感染細胞のような他の細胞および組織へのそのような剤の不適切な送達の一般的生理学的効果を回避することを含む。細胞内標的化は生物学的に活性な剤、すなわち、活性な代謝産物の細胞内での蓄積または滞留を可能とする方法、化合物および処方によって達成することができる。
【０００５】
モノクローナル抗体療法が、癌、免疫学的および脈管疾患を持つ患者の標的化治療のために確立されている。
【０００６】
細胞傷害性または細胞静止剤の局所的送達用の抗体−薬物結合体の使用、例えば癌の治療において腫瘍細胞を殺すまたは阻害する薬剤（非特許文献１；非特許文献２；特許文献１）は、理論的には、薬物部分の腫瘍への標的化送達およびその中への細胞内蓄積を可能とし、他方、これらの未結合体化薬剤の全身投与の結果、正常な細胞ならびに排除することが求められる腫瘍細胞に対する許容できないレベルの細胞傷害性がもたらされ得る（非特許文献３；非特許文献４：非特許文献５）。最小細胞傷害性での最大効率がそれにより求められる。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体双方はこれらの戦略で有用なものとして報告されている（非特許文献６）。これらの方法で用いる薬物はダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキセート、およびビンデシンを含む（非特許文献６，前掲）。抗体−トキシン結合体で用いるトキシンはジフテリアトキシンのような細菌トキシン、リシンのような植物トキシン、ゲルダナマイシンのような小分子トキシン（非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０）、メイタンシノイド（特許文献２；非特許文献１１）、およびカリケアミシン（非特許文献１２；非特許文献１３）を含む。トキシンはチューブリン結合、ＤＮＡ結合、またはトポイソメラーゼ阻害を含めた機序によってそれらの細胞傷害性および細胞静止効果に影響し得る（非特許文献１４）。いくつかの細胞傷害性薬物は、大きな抗体またはタンパク質レセプターリガンドに結合体した場合には不活性またはより低い活性となる傾向がある。
【０００７】
ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）（イブリツモマブチウキセタン，Ｂｉｏｇｅｎ／Ｉｄｅｃ）は、正常および悪性Ｂリンパ腫の表面で見出されるＣＤ２０抗原に対して向けられたネズミＩｇＧ１カッパモノクローナル抗体、およびチオ尿素リンカー−キレータによって結合された１１１Ｉｎまたは９０Ｙ放射性同位体からなる抗体−放射性同位体結合体である（非特許文献１５；非特許文献１６；非特許文献１７；非特許文献１８）。ＺＥＶＡＬＩＮはＢ−細胞非−ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対する活性を有するが、投与の結果、ほとんどの患者において、重度のかつ持続的な血球減少症をもたらす。ＭＹＬＯＴＡＲＧＴＭ（ゲムツツマブオゾガミシン，Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、カリケアミシンに連結されたｈｕ  ＣＤ３３抗体よりなる抗体薬物結合体は、注射による急性骨髄性白血病の治療用で２０００年に認可された（非特許文献１９；特許文献３；特許文献４；特許文献５；特許文献６；特許文献７；特許文献８；特許文献９；１０）。カンツヅマブメルタンシン（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．）、メイタンシノイド薬物部分ＤＭ１へジスルフィドリンカーＳＰＰを介して連結されたｈｕＣ２４２抗体よりなる抗生物質薬物結合体は、結腸、膵臓、胃その他のような、ＣａｎＡｇを発現する癌の治療用でＩＩ相試験に進んでいる。ＭＬＮ−２７０４（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．，ＢＺＬ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．）、マイタンシノイド薬物部分ＤＭ１に連結された抗−前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）モノクローナル抗体よりなる抗体薬物結合体は、前立腺腫瘍の潜在的治療のために開発中である。同一マイタンシノイド薬物部分ＤＭ１は非−ジスルフィドリンカーＳＭＣＣを介してマウスネズミモノクローナル抗体、ＴＡ．１に連結された（非特許文献２０）。この結合体は対応するジスルフィドリンカー結合体よりも２００倍能力が少ないと報告された。ＳＭＣＣリンカーはそこでは「非切断性」と考えられた。
【０００８】
数個の短いペプチド化合物が海洋軟体動物Ｄｏｌａｂｅｌｌａ  ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａから単離されており、生物学的活性を有することが見出されている。（非特許文献２１；非特許文献２２；非特許文献２３）。これらの化合物のアナログも調製されており、いくつかは生物学的活性を有することが判明している（レビューについては、非特許文献２４参照）。例えば、オーリスタチンＥ（特許文献１１）は海洋天然産物ドラスタチン１０、抗癌薬物ビンクリスチンとしてのチューブリンへの同一ドメインに結合することによってチューブリン重合を阻害する剤の合成アナログである（非特許文献２５）。ドラスタチン１０、オーリスタチンＰＥ．およびオーリスタチンＥは、そのうち３つが化合物のドラスタチンクラスに対してユニークである４つのアミノ酸、およびＣ−末端アミドを有する線状ペプチドである。
【０００９】
オーリスタチンペプチド、オーリスタチンＥ（ＡＥ）およびモノメチルオーリスタチン（ＭＭＡＥ）、ドラスタチンの合成アナログは：（ｉ）（癌腫上のＬｅｗｉｓ  Ｙに対して特異的な）キメラモノクローナル抗体ｃＢＲ９６；（ｉｉ）血液学的悪性疾患でのＣＤ３０に対して特異的なｃＡＣ１０（非特許文献２６；非特許文献２７；”Ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌｖａｌｉｎｅ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  Ｃａｐａｂｌｅ  ｏｆ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｌｉｇａｎｄｓ“；非特許文献２８；特許文献１２）；（ｉｉｉ）ＣＤ２０−発現癌および免疫疾患の治療用のＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（特許文献１３）のような抗−ＣＤ２０抗体；（ｉｖ）結直腸癌の治療用の抗−ＥｐｈＢ２抗体２Ｈ９および抗−ＩＬ−８（非特許文献２９）；（ｖ）Ｅ−セレクチン抗体（非特許文献３０）；および（ｖｉ）他の抗−ＣＤ３０抗体（特許文献１４）に結合体化された。
【００１０】
モノクローナル抗体に結合体化されたオーリスタチンＥは非特許文献３１に開示されている。
【００１１】
ドラスタチンクラスおよびそのアナログの化合物についてのインビトロデータにもかかわらず、治療効果を達成するのに必要な用量における有意な一般的毒性は臨床的実験におけるそれらの効果を危うくする。従って、有意により低い毒性を有し、なお有用な治療的効果を有するドラスタチン／オーリスタチン誘導体に対する当該分野における明確な必要性がある。これらおよび他の制限および過去の問題は本発明によって取り組まれる。
【００１２】
レセプターチロシンキナーゼのＥｒｂＢファミリーは細胞の増殖、分化および生存の重要なメディエーターである。レセプターファミリーは上皮成長因子レセプター（ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ１、ＨＥＲ１）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２またはｂ１８５ｎｅｕ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）およびＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４またはｔｙｒｏ２）を含めた４つの区別されるメンバーを含む。抗−ＥｒｂＢ２抗体のパネルは、ヒト乳房腫瘍細胞系ＳＫＢＲ３を用いて特徴付けられている（非特許文献３２）。最大阻害が、５６％だけ細胞増殖を阻害した４Ｄ５と呼ばれる抗体で得られた。パネルにおける他の抗体はこのアッセイにおいて細胞増殖を低い程度まで低下させた。抗体４Ｄ５は、さらに、ＴＮＦ−αの細胞傷害性効果に対してＥｒｂＢ２−過剰発現乳房腫瘍細胞系を感作させることが見出された（特許文献１５）。非特許文献３２に議論された抗−ＥｒｂＢ２抗体は非特許文献３３；非特許文献３４；非特許文献３５；非特許文献３６；非特許文献３７；非特許文献３８；非特許文献３９；非特許文献４０；非特許文献４１；非特許文献４２；非特許文献４３；非特許文献４４；および非特許文献４５においてさらに特徴付けられている。
【００１３】
種々の特性を持つ他の抗−ＥｒｂＢ２抗体が非特許文献４６；非特許文献４７；非特許文献４８；非特許文献４９；非特許文献５０；非特許文献５１；非特許文献５２；特許文献１６；非特許文献５３；非特許文献５４；非特許文献５５；非特許文献５６；非特許文献５７；特許文献１７；および非特許文献５８に記載されている。
【００１４】
相同スクリーニングの結果、他の２つのＥｒｂＢレセプターファミリーメンバーの同定がなされた；ＥｒｂＢ３（特許文献１８；特許文献１９；非特許文献５９）およびＥｒｂＢ４（特許文献２０；非特許文献６０；および非特許文献６１）。これらのレセプターディスプレイの双方は少なくともいくつかの乳癌細胞系での発現を増加させた。
【００１５】
ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）は、ヒト上皮成長因子レセプター２タンパク質、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）の細胞外ドメインへ、細胞−ベースアッセイにおいて高い親和性をもって（Ｋｄ＝５ｎＭ）選択的に結合する組換えＤＮＡ−由来ヒト化モノクローナル抗体である（特許文献２１；特許文献２２；特許文献２３；特許文献２４；非特許文献６２；非特許文献６３）。トラスツズマブは、ＨＥＲ２に結合するネズミ抗体（４Ｄ５）の相補性−決定領域と共にヒトフレームワーク領域を含有するＩｇＧ１カッパ抗体である。トラスツズマブはＨＥＲ２抗原に結合し、かくして、癌細胞の増殖を阻害する。トラスツズマブはヒト化抗体であるため、それは患者においていずれのＨＡＭＡ応答も最小化する。ＨＥＲ２に対するヒト化抗体は、哺乳動物細胞（チャイニーズハムスター卵巣，ＣＨＯ）浮遊培養によって生産される。ＨＥＲ２（またはｃ−ｅｒｂＢ２）プロト−オンコジーンは、上皮成長因子レセプターに構造的に関連する１８５ｋＤａの膜貫通レセプタータンパク質をコードする。ＨＥＲ２タンパク質過剰発現は原発性乳癌の２５％〜３０％で観察され、これは、固定された腫瘍ブロックの免疫組織化学ベースの評価を用いて測定することができる（非特許文献６４）。トラスツズマブは、インビトロアッセイおよび動物の双方において、ＨＥＲ２を過剰発現するヒト腫瘍細胞の増殖を阻害することが示されている（非特許文献６５；非特許文献６６；非特許文献６７）。トラスツズマブは抗体−依存性細胞傷害性、ＡＤＣＣのメディエーターである。（非特許文献６８；非特許文献６９）。インビトロでは、トラスツズマブ媒介ＡＤＣＣは、ＨＥＲ２を過剰発現しない癌細胞と比較して癌細胞を過剰発現するＨＥＲ２に優先的に作用することが示されている。単一の剤としてのＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）は、その腫瘍がＨＥＲ２タンパク質を過剰発現する転移性乳癌を持ち、かつその転移性疾患に対する１以上の化学療法レジメンを受けた患者の治療のために示されている。パクリタキセルと組み合わせたＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）は、その腫瘍がＨＥＲ２タンパク質を過剰発現させる転移性乳癌を持ち、かつその転移性疾患に対する化学療法を受けたことがない患者の治療のために示されている。ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）は、広範な抗癌療法を受けたことがあるＥｒｂＢ２−過剰発現転移性乳癌を持つ患者において臨床的に活性である（非特許文献７０）。
【００１６】
ネズミモノクローナル抗−ＨＥＲ２抗体は、２＋および３＋（細胞当たり１〜２×１０６ＨＥＲ２レセプター）レベルでＨＥＲ２を過剰発現する乳癌細胞系の増殖を阻害するが、より低いレベルのＨＥＲ２を発現する細胞に対して活性を有しない（非特許文献７１）。この観察に基づき、抗体４Ｄ５がヒト化され（ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８，  ｒｈｕＭＡｂ
ＨＥＲ２，特許文献２５；非特許文献７２）、その腫瘍がＨＥＲ２を過剰発現するが、慣用的な化学療法の後に進行した乳癌患者でテストされた（非特許文献７３）。
【００１７】
ＨＥＲＣＥＰＴＩＮは広範な先行抗癌療法を受けたＥｒｂＢ２−過剰発現乳癌を持つ患者を治療するにおいて顕著な進歩であるが、この集団における幾人かの患者はＨＥＲＣＥＰＴＩＮ治療に応答しないか、または応答しにくいに過ぎない。
【００１８】
従って、ＨＥＲ２−過剰発現腫瘍、またはＨＥＲＣＥＰＴＩＮ治療に応答しないが、または応答しにくいＨＥＲ２発現に関連する他の疾患を持つ患者に対してさらなるＨＥＲ２−指向性癌療法を開発するかなりの臨床的要望が存在する。
本出願におけるいずれの文献への引用も、本出願に対して該文献が先行技術であることを自認するものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】米国特許第４９７５２７８号明細書
【特許文献２】欧州特許第１３９１２１３号明細書
【特許文献３】米国特許第４９７０１９８号明細書
【特許文献４】米国特許第５０７９２３３号明細書
【特許文献５】米国特許第５５８５０８９号明細書
【特許文献６】米国特許第５６０６０４０号明細書
【特許文献７】米国特許第５６９３７６２号明細書
【特許文献８】米国特許第５７３９１１６号明細書
【特許文献９】米国特許第５７６７２８５号明細書
【特許文献１０】米国特許第５７７３００１号明細書
【特許文献１１】米国特許第５６３５４８３号明細書
【特許文献１２】米国特許出願公開第２００４／００１８１９４号明細書
【特許文献１３】国際公開第０４／０３２８２８号パンフレット
【特許文献１４】国際公開第０３／０４３５８３号パンフレット
【特許文献１５】米国特許第５６７７１７１号明細書
【特許文献１６】国際公開第９４／００１３６号パンフレット
【特許文献１７】米国特許第５７８３１８６号明細書
【特許文献１８】米国特許第５，１８３，８８４号明細書
【特許文献１９】米国特許第５，４８０，９６８号明細書
【特許文献２０】欧州特許第５９９２７４号明細書
【特許文献２１】米国特許第５８２１３３７号明細書
【特許文献２２】米国特許第６０５４２９７号明細書
【特許文献２３】米国特許第６４０７２１３号明細書
【特許文献２４】米国特許第６６３９０５５号明細書
【特許文献２５】米国特許第５８２１３３７号明細書
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】ＳｙｒｉｇｏｓおよびＥｐｅｎｅｔｏｓ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （１９９９年）１９：６０５−６１４
【非特許文献２】Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−ＤｕｖａｚおよびＳｐｒｉｎｇｅｒ  Ａｄｖ．Ｄｒｇ．Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．（１９９７年）  ２６：１５１−１７２
【非特許文献３】Ｂａｌｄｗｉｎら  １９８６，Ｌａｎｃｅｔ  （１９８６年３月１５日）；ｐｐ．６０３−０５
【非特許文献４】Ｔｈｏｒｐｅ，１９８５，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，”  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ‘８４年
【非特許文献５】Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ａ．Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、ｐｐ．４７５−５０６
【非特許文献６】Ｒｏｗｌａｎｄら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１９８６年，２１：１８３−８７
【非特許文献７】Ｋｅｒｒら  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１９９７年，８（６）：７８１−７８４
【非特許文献８】Ｍａｎｄｌｅｒら  Ｊｏｕｒ．ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．（２０００年）９２（１９）：１５７３−１５８１
【非特許文献９】Ｍａｎｄｌｅｒら  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  （２０００年）１０：１０２５−１０２８
【非特許文献１０】Ｍａｎｄｌｅｒら  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．（２００２年）１３：７８６−７９１
【非特許文献１１】Ｌｉｕら  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  （１９９６年）９３：８６１８−８６２３
【非特許文献１２】Ｌｏｄｅら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９８年）５８：２９２８
【非特許文献１３】Ｈｉｎｍａｎら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９３年）５３：３３３６−３３４２
【非特許文献１４】Ｍｅｙｅｒ，  Ｄ．Ｌ．および  Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．Ｄ．“Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ”  ｉｎ  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ  ３８（２００３年）  Ｃｈａｐｔｅｒ  ２３，  ２２９−２３７
【非特許文献１５】Ｗｉｓｅｍａｎら  Ｅｕｒ．Ｊｏｕｒ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．（２０００年）２７（７）：７６６−７７
【非特許文献１６】ＷｉｓｅｍａｎらＢｌｏｏｄ  （２００２年）９９（１２）：４３３６−４２
【非特許文献１７】Ｗｉｔｚｉｇら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（２００２年）２０（１０）：２４５３−６３
【非特許文献１８】Ｗｉｔｚｉｇら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（２００２年）２０（１５）：３２６２−６９
【非特許文献１９】Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ（２０００年）２５（７）：６８６
【非特許文献２０】Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （１９９２年）５２：１２７−１３１
【非特許文献２１】Ｐｅｔｔｉｔら  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  （１９９３年）４９：９１５１
【非特許文献２２】Ｎａｋａｍｕｒａら  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  （１９９５年）３６：５０５９−５０６２
【非特許文献２３】Ｓｏｎｅら  Ｊｏｕｒ．Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ．（１９９５年）６０：４４７４
【非特許文献２４】Ｐｅｔｔｉｔら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  （１９９８年）１３：２４３−２７７
【非特許文献２５】Ｇ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉｔ，  Ｐｒｏｇ．Ｃｈｅｍ．Ｏｒｇ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．（１９９７年）７０：１−７９
【非特許文献２６】ＫｌｕｓｓｍａｌらＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （２００４年），１５（４）：７６５−７７３
【非特許文献２７】Ｄｏｒｏｎｉｎａら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  （２００３年）２１（７）：７７８−７８４
【非特許文献２８】ＦｒａｎｃｉｓｃｏらＢｌｏｏｄ  （２００３年）１０２（４）：１４５８−１４６５
【非特許文献２９】Ｍａｏら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （２００４年）６４（３）：７８１−７８８
【非特許文献３０】Ｂｈａｓｋａｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００３年）６３：６３８７−６３９４
【非特許文献３１】Ｓｅｎｔｅｒら、２００４年３月２８日に発表されたＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｕｍｂｅｒ  ６２３
【非特許文献３２】Ｈｕｄｚｉａｋら  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．（１９８９年）９（３）：１１６５−１１７２
【非特許文献３３】Ｆｅｎｄｌｙら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （１９９０年）５０：１５５０−１５５８
【非特許文献３４】Ｋｏｔｔｓら  Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  （１９９０年）２６（３）：５９Ａ
【非特許文献３５】Ｓａｒｕｐら  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  （１９９１年）１：７２−８２
【非特許文献３６】Ｓｈｅｐａｒｄら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９１年）１１（３）：１１７−１２７
【非特許文献３７】Ｋｕｍａｒら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９１年）１１（２）：９７９−９８６
【非特許文献３８】Ｌｅｗｉｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（１９９３年）３７：２５５−２６３
【非特許文献３９】Ｐｉｅｔｒａｓら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  （１９９４年）９：１８２９−１８３８
【非特許文献４０】Ｖｉｔｅｔｔａら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （１９９４年）５４：５３０１−５３０９
【非特許文献４１】Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９４年）２６９（２０）：１４６６１−１４６６５
【非特許文献４２】Ｓｃｏｔｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９１年）２６６：１４３００−５
【非特許文献４３】Ｄ‘ｓｏｕｚａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９４年）９１：７２０２−７２０６
【非特許文献４４】Ｌｅｗｉｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （１９９６年）５６：１４５７−１４６５
【非特許文献４５】Ｓｃｈａｅｆｅｒら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  （１９９７年）１５：１３８５−１３９
【非特許文献４６】Ｔａｇｌｉａｂｕｅら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  （１９９１年）４７：９３３−９３７
【非特許文献４７】ＭｃＫｅｎｚｉｅら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  （１９８９年）４：５４３−５４８
【非特許文献４８】Ｍａｉｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９１年）５１：５３６１−５３６９
【非特許文献４９】Ｂａｃｕｓら  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  （１９９０年）３：３５０−３６２
【非特許文献５０】Ｓｔａｎｃｏｖｓｋｉら  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  （１９９１年）８８：８６９１−８６９５
【非特許文献５１】Ｂａｃｕｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （１９９２年）５２：２５８０−２５８９
【非特許文献５２】Ｘｕら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  （１９９３年）５３：４０１−４０８
【非特許文献５３】Ｋａｓｐｒｚｙｋら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （１９９２年）５２：２７７１−２７７６
【非特許文献５４】Ｈａｎｃｏｃｋら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９１年）５１：４５７５−４５８０
【非特許文献５５】Ｓｈａｗｖｅｒら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９４年）５４：１３６７−１３７３
【非特許文献５６】Ａｒｔｅａｇａら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９４年）５４：３７５８−３７６５
【非特許文献５７】Ｈａｒｗｅｒｔｈら  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９２年）２６７：１５１６０−１５１６７
【非特許文献５８】Ｋｌａｐｐｅｒら（１９９７年）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １４：２０９９−２１０９
【非特許文献５９】ＫｒａＵ．Ｓ．ら  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  （１９８９年）８６：９１９３−９１９７
【非特許文献６０】Ｐｌｏｗｍａｎら  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  （１９９３年）９０：１７４６−１７５０
【非特許文献６１】Ｐｌｏｗｍａｎら  Ｎａｔｕｒｅ  （１９９３年）３６６：４７３−４７５
【非特許文献６２】Ｃｏｕｓｓｅｎｓ  Ｌら  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （１９８５年）２３０：１１３２−９
【非特許文献６３】Ｓｌａｍｏｎ  ＤＪら  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （１９８９年）２４４：７０２−１２
【非特許文献６４】Ｐｒｅｓｓ  ＭＦら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  （１９９３年）５３：４９６０−７０
【非特許文献６５】Ｈｕｄｚｉａｋ  ＲＭら  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  （１９８９年）９：１１６５−７２
【非特許文献６６】Ｌｅｗｉｓ  ＧＤら（１９９３年）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ；３７：２５５−６３
【非特許文献６７】Ｂａｓｅｌｇａ  Ｊら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９８年）５８：２８２５−２８３１
【非特許文献６８】Ｈｏｔａｌｉｎｇ  ＴＥら  Ｐｒｏｃ．Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｍ  Ａｓｓｏｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（１９９６年）；３７：４７１［要約］
【非特許文献６９】Ｐｅｇｒａｍ  ＭＤら  Ｐｒｏｃ．Ａｍ  Ａｓｓｏｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（１９９７年）；３８：６０２［要約］
【非特許文献７０】Ｂａｓｅｌｇａら  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（１９９６年）１４：７３７−７４４
【非特許文献７１】Ｌｅｗｉｓら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（１９９３年）３７：２５５−２６３
【非特許文献７２】Ｃａｒｔｅｒら  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  （１９９２年）８９：４２８５―４２８９
【非特許文献７３】Ｃｏｂｌｅｉｇｈら  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（１９９９年）１７：２６３９−２６４８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２１】
１つの態様において、本発明は、式Ｉａ：
【化８２】
2011231131.tif 000002
［式中、
Ｌ−はリガンドユニットであり；
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−はリンカーユニット（ＬＵ）であり、ここで、該リンカーユニットは、以下のものを含む：
−Ａ−はストレッチャー（Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）ユニットであり、
ａは０または１であり、
各−Ｗ−は独立してアミノ酸ユニットであり、
ｗは０〜１２の範囲の整数であり、
−Ｙ−はスペーサーユニットであり、および
ｙは０、１または２であり；
ｐは１〜約２０の範囲であり；および
−Ｄは式ＤＥおよびＤＦを有する薬物ユニットであり：
【００２２】
【化８３】
2011231131.tif 000003
ここで、独立して、各位置において：
Ｒ２はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５はＨおよびメチルから選択され；
あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ―を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５および６から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；］
Ｒ７はＨ，Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリールまたはＣ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＮＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ―ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；ここで、ｎは０〜６の範囲の整数であり；
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択される］
を有する薬物−リンカー−リガンド化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。
【００２３】
もう１つの態様において、式Ｉｂ：
【００２４】
【化８４】
2011231131.tif 000004
［式中：
Ｒ２は水素および−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３は水素、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４は水素、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、ここで、Ｒ５は−Ｈおよびーメチルから選択され；あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよび−Ｃ３−Ｃ８炭素環から選択され；ｎは２、３、４、５および６から選択されかつそれらが結合した炭素分子と共に環を形成し；
Ｒ６はＨおよび−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環および−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよび−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリール基または−Ｃ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはーＯ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、または−ＮＲ１２−であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、−Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３は−Ｃ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたは−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ―ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；および
ｎは０〜６の範囲の整数である］
を有する薬物化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物が提供される。
【００２５】
式（Ｉｂ）の化合物は患者において癌、自己免疫疾患または感染症を治療するのに有用であるか、あるいは切断可能薬物ユニットを有する薬物−リンカー、薬物−リンカー−リガンド結合体、および薬物−リガンド結合体の合成用の中間体として有用である。
【００２６】
もう１つの態様において、有効量の薬物−リンカー−リガンド結合体および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む組成物が提供される。
【００２７】
なおもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー化合物および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。
【００２８】
なおもう１つの態様において、本発明は、薬物−リガンド結合体からの切断可能な薬物を有する有効量の薬物−リガンド結合体、および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む組成物を提供する。
【００２９】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を提供する。
【００３０】
もう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を提供する。
【００３１】
もう１つの態様において、本発明は、薬物−リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を提供する。
【００３２】
なおもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リガンド化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。
【００３３】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。
【００３４】
さらにもう１つの態様において、本発明は、薬物−リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。
【００３５】
なおもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞を殺し、またはその複製を阻害する方法を提供する。
【００３６】
もう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞を殺し、またはその複製を阻害する方法を提供する。
【００３７】
もう１つの態様において、本発明は、薬物−リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞を殺し、またはその複製を阻害する方法を提供する。
【００３８】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法を提供する。
【００３９】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法を提供する。
【００４０】
さらにもう１つの態様において、本発明は、薬物−リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法を提供する。
【００４１】
なおもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を治療する方法を提供する。
【００４２】
なおもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を治療する方法を提供する。
【００４３】
なおもう１つの態様において、本発明は、薬物−リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を治療する方法を提供する。
【００４４】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を予防する方法を提供する。
【００４５】
もう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を予防する方法を提供する。
【００４６】
もう１つの態様において、本発明は、薬物−リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を予防する方法を提供する。
【００４７】
なおもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を予防する方法を提供する。
【００４８】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を予防する方法を提供する。
【００４９】
さらにもう１つの態様において、本発明は、薬物−リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を予防する方法を提供する。
【００５０】
なおもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防する方法を提供する。
【００５１】
もう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防する方法を提供する。
【００５２】
もう１つの態様において、本発明は、薬物−リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防する方法を提供する。
【００５３】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を予防する方法を提供する。
【００５４】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を予防する方法を提供する。
【００５５】
さらにもう１つの態様において、本発明は、薬物−リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、自己免疫疾患を予防する方法を提供する。
【００５６】
なおもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を予防する方法を提供する。
【００５７】
なおもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を予防する方法を提供する。
【００５８】
なおもう１つの態様において、本発明は、薬物−リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を予防する方法を提供する。
【００５９】
もう１つの態様において、本発明は、薬物−リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する薬物−リンカー化合物の合成用の中間体として用いることができる薬物化合物が提供される。
【００６０】
もう１つの態様において、薬物−リンカー−リガンド結合体の合成用の中間体として用いることができる薬物−リンカー化合物が提供される。
【００６１】
もう１つの態様において、式Ｉａ’：
【００６２】
【化８５】
2011231131.tif 000005
［式中：
ＡｂはＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、およびＬｅｗｉｓ  Ｙ抗原に結合するものを含めた抗体を含み、
Ａはストレッチチャー（Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）ユニットであり、
ａは０または１であり、
各Ｗは独立してアミノ酸ユニットであり、
ｗは０〜１２の範囲の整数であり、
Ｙはスペーサーユニットであり、および
ｙは０、１または２であり、
ｐは１〜約２０の範囲であり、および
Ｄは式ＤＥおよびＤＦから選択される薬物ユニットであり：
【００６３】
【化８６】
2011231131.tif 000006
ここで、独立して、各位置において：
Ｒ２はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３はＨ，Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５はＨおよびメチルから選択され；
あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、ｎは、２、３、４、５および６から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリールまたはＣ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＮＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され；
ｎは０〜６の範囲の整数であり］
を有する化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物が提供される。
【００６４】
１つの実施形態において、Ａｂは、ＥｒｂＢレセプターに結合する、またはレセプター（１）〜（３５）の１以上に結合する抗体ではない：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質レセプター−タイプＩＢ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００１２０３）；
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１，ＳＬＣ７Ａ５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００３４８６）；
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１２４４９）；
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５，ＭＵＣ１６，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ３６１４８６）；
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ，ＭＳＬＮ，ＳＭＲ，巨核細胞増強因子，メソテリン、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００５８２３）；
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ，ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２，溶質キャリアーファミリー３４（リン酸ナトリウム），メンバー２，タイプＩＩナトリウム−依存性リン酸トランスポーター３ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００６４２４）；
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２，ＫＩＡＡ１４４５，Ｍｍ．４２０１５，ＳＥＭＡ５Ｂ，ＳＥＭＡＧ，セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ，ｓｅｍａドメイン，７回トロンボスポンジンリピート（タイプＩおよびタイプＩ−様）．膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン，（セマフォリン）５Ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＢ０４０８７８）；
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ，Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ３５８６２８）；
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンタイプＢレセプター，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２７５４６３）；
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４，仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１７７６３）；
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ ８６３９，ＩＰＣＡ−１，ＰＣＡＮＡＰ１，ＳＴＡＭＰ１，ＳＴＥＡＰ２，ＳＴＭＰ，前立腺癌関連遺伝子１，前立腺癌関連タンパク質１，前立腺２の６回膜貫通上皮抗原，６回膜貫通前立腺タンパク質，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ４５５１３８）；
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０，ＦＬＪ２００４１，ＴＲＰＭ４，ＴＲＰＭ４Ｂ，一過性レセプター潜在的カチオンチャネル，サブファミリーＭ，メンバー４，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１７６３６）；
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ，ＣＲ１，ＣＲＧＦ，ＣＲＩＰＴＯ，ＴＤＧＦ１，テラトカルシノーマ−由来成長因子，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００３２０３またはＮＭ ００３２１２）；
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体レセプター２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバールウイルスレセプター）またはＨｓ．７３７９２，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ２６００４）；
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＩＧｂ（免疫グロブリン−関連β），Ｂ２９，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０００６２６）；
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４，ＩＲＴＡ４，ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ），ＳＰＡＰ１Ｂ，ＳＰＡＰ１Ｃ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０３０７６４）；  （１７）ＨＥＲ２（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１１７３０）；
（１８）ＮＣＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１８７２８）；
（１９）ＭＤＰ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＢＣ０１７０２３）；
（２０）ＩＬ２０Ｒα（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１８４９７１）；
（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ２２９０５３）；
（２２）Ｅｐｈｂ２Ｒ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００４４４２）；
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＸ０９２３２８）；
（２４）ＰＳＣＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＪ２９７４２３６）；
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２６０７６３）；
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ４４３１７７．１）；
（２７）ＣＤ２２（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ−００１７６２．１）；
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ，ＣＤ７９α，免疫グロブリン−関連α，Ｉｇβ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合相互作用し、かつＩｇＭ分子とで表面上に複合体を形成し、Ｂ−細胞分化に関与するシグナルを変換するＢ細胞−特異的タンパク質，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７７４．１）；
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫レセプター１，ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ球移動および液性防御で機能し、ＨＩＶ−２感染および、恐らくは、ＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫および白血病も発生において役割を演じるＧプロテイン−結合レセプター，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７０７．１）；
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合し、それらをＣＤ４＋Ｔリンパ球に提示するＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のβサブユニット，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００２１１１．１）；
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性レセプターＰ２Ｘリガンド型イオンチャネル５，細胞外ＡＴＰによってゲートが開閉されるイオンチャネルはシナプス伝達および神経形成に関与し得、欠陥は特発性排尿筋不安定の病態生理学に寄与し得る，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００２５５２．２）；
（３２）ＣＤ７２（Ｂ―細胞分化抗原ＣＤ７２，Ｌｙｂ−２、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７７３．１）；
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのタイプＩ膜タンパク質はＢ−細胞の活性化およびアポトーシスを調節し、機能の喪失は全身エリテマトーデスに罹った患者における増大した病気活性に関連する，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００５５７３．１）；
（３４）ＦＣＲＨ１（Ｆｃレセプター−様タンパク質１、Ｃ２タイプＩｇ−様およびＩＴＡＭドメインを含有する免疫グロブリンＦｃドメインに対する推定レセプターはＢ−リンパ球分化において役割を有するであろう，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ４４３１７０．１）；または
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連２、Ｂ細胞発生およびリンパ腫形成における可能な役割を持つ推定免疫レセプター；トラスローケーションによる遺伝子の脱調節はいくつかのＢ細胞悪性疾患で起こる，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ １１２５７１．１）。
【００６５】
なおもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−抗体結合体および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。
【００６６】
なおもう１つの態様において、本発明は、薬物−抗体結合体からの切断可能な薬物ユニット（部位）を有する有効量の薬物−抗体結合体および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む組成物を提供する。
【００６７】
もう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を提供する。
【００６８】
もう１つの態様において、本発明は、薬物−抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を提供する。
【００６９】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。
【００７０】
さらにもう１つの態様において、本発明は、薬物−抗体結合体からの切断可能な薬物を有する有効量の薬物−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む癌を治療する方法を提供する。
【００７１】
もう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を提供する。
【００７２】
もう１つの態様において、本発明は、薬物−抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞を殺し、またはその複製を阻害する方法を提供する。
【００７３】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法を提供する。
【００７４】
さらにもう１つの態様において、本発明は、薬物−抗体結合体からの切断可能な薬物を有する有効量の薬物−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法を提供する。
【００７５】
なおもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を治療する方法を提供する。
【００７６】
なおもう１つの態様において、本発明は、薬物−抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を治療する方法を提供する。
【００７７】
もう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を予防する方法を提供する。
【００７８】
もう１つの態様において、本発明は、薬物−抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を予防する方法を提供する。
【００７９】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を予防する方法を提供する。
【００８０】
さらにもう１つの態様において、本発明は、薬物−抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を予防する方法を提供する。
【００８１】
もう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防する方法を提供する。
【００８２】
もう１つの態様において、本発明は、薬物−抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防する方法を提供する。
【００８３】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を予防する方法を提供する。
【００８４】
さらにもう１つの態様において、本発明は、薬物−抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を予防する方法を提供する。
【００８５】
さらにもう１つの態様において、本発明は、有効量の薬物−リンカー−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を予防する方法を提供する。
【００８６】
なおもう１つの態様において、本発明は、薬物−抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物−抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を予防する方法を提供する。
【００８７】
もう１つの態様において、薬物−抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する薬物−リンカー化合物の合成用の中間体として用いることができる薬物化合物が提供される。
【００８８】
もう１つの態様において、薬物−リンカー−抗体結合体の合成用の中間体として用いることができる薬物−リンカー化合物が提供される。
【００８９】
１つの態様において、本発明は、式Ｉｃ：
【００９０】
【化８７】
2011231131.tif 000007
［式中：
Ａｂは抗原（１）〜（３５）の１以上に結合する抗体であり：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨継体形成タンパク質レセプター−タイプＩＢ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００１２０３）；
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１，ＳＬＣ７Ａ５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００３４８６）；
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１２４４９）；
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５，ＭＵＣ１６，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ３６１４８６）；
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ，ＭＳＬＮ，ＳＭＲ，巨核細胞増強因子，メソテリン、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００５８２３）；
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ，ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２，溶質キャリアーファミリー３４（リン酸ナトリウム），メンバー２，タイプＩＩナトリウム−依存性リン酸トランスポーター３ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００６４２４）；
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２，ＫＩＡＡ１４４５，Ｍｍ．４２０１５，ＳＥＭＡ５Ｂ，ＳＥＭＡＧ，セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ，ｓｅｍａドメイン，７回トロンボスポンジンリピート（タイプＩおよびタイプＩ−様）．膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン，（セマフォリン）５Ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＢ０４０８７８）；
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ，Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ３５８６２８）；
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンタイプＢレセプター，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２７５４６３）；
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４，仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１７７６３）；
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ ８６３９，ＩＰＣＡ−１，ＰＣＡＮＡＰ１，ＳＴＡＭＰ１，ＳＴＥＡＰ２，ＳＴＭＰ，前立腺癌関連遺伝子１，前立腺癌関連タンパク質１，前立腺２の６回膜貫通上皮抗原．６回膜貫通前立腺タンパク質，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ４５５１３８）；
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０，ＦＬＪ２００４１，ＴＲＰＭ４，ＴＲＰＭ４Ｂ，一過性レセプター潜在的カチオンチャネル，サブファミリーＭ，メンバー４，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１７６３６）；
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ，ＣＲ１，ＣＲＧＦ，ＣＲＩＰＴＯ，ＴＤＧＦ１，テラトカルシノーマ−由来成長因子，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００３２０３またはＮＭ ００３２１２）；
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体レセプター２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバールウイルスレセプター）またはＨｓ．７３７９２，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ２６００４）；
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＩＧｂ（免疫グロブリン−関連β），Ｂ２９，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０００６２６）；
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４，ＩＲＴＡ４，ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ），ＳＰＡＰ１Ｂ，ＳＰＡＰ１Ｃ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０３０７６４）；
（１７）ＨＥＲ２（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１１７３０）；
（１８）ＮＣＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１８７２８）；
（１９）ＭＤＰ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＢＣ０１７０２３）；
（２０）ＩＬ２０Ｒα（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１８４９７１）；
（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ２２９０５３）；
（２２）Ｅｐｈｂ２Ｒ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００４４４２）；
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＸ０９２３２８）；
（２４）ＰＳＣＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＪ２９７４３６）；
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２６０７６３）；
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ４４３１７７．１）；
（２７）ＣＤ２２（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ−００１７６２．１）；
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ，ＣＤ７９α，免疫グロブリン−関連α，Ｉｇβ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合相互作用し、かつＩｇＭ分子とで表面上に複合体を形成し、Ｂ−細胞分化に関与するシグナルを変換するＢ細胞−特異的タンパク質，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７７４．１）；
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫レセプター１，ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ球移動および液性防御で機能し、ＨＩＶ−２感染および、恐らくは、ＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫および白血病も発生において役割を演じるＧプロテイン−結合レセプター，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７０７．１）；
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合し、それらをＣＤ４＋Ｔリンパ球に提示するＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のβサブユニット，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００２１１１．１）；
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性レセプターＰ２Ｘリガンド型イオンチャネル５，細胞外ＡＴＰによってゲートが開閉されるイオンチャネルはシナプス伝達および神経形成に関与し得、欠陥は特発性排尿筋不安定の病態生理学に寄与し得る，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００２５５２．２）；
（３２）ＣＤ７２（Ｂ―細胞分化抗原ＣＤ７２，Ｌｙｂ−２、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７７３．１）；
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのタイプＩ膜タンパク質はＢ−細胞の活性化およびアポトーシスを調節し、機能の喪失は全身エリテマトーデスに罹った患者における増大した病気活性に関連する，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００５５７３．１）；
（３４）ＦＣＲＨ１（Ｆｃレセプター−様タンパク質１、Ｃ２タイプＩｇ−様およびＩＴＡＭドメインを含有する免疫グロブリンＦｃドメインに対する推定レセプターはＢ−リンパ球分化において役割を有するであろう，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ４４３１７０．１）；または
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連２、Ｂ細胞発生およびリンパ腫形成における可能な役割を持つ推定免疫レセプター；トラスローケーションによる遺伝子の脱調節はいくつかのＢ細胞悪性疾患で起こる，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ １１２５７１．１）；
Ａはストレッチャー（Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）ユニットであり、
ａは０または１であり、
各Ｗは独立してアミノ酸ユニットであり、
ｗは０〜１２の範囲の整数であり、
Ｙはスペーサーユニットであり、および
ｙは０、１または２であり、
ｐは１〜約２０の範囲であり、および
Ｄは式ＤＥおよびＤＦから選択される薬物部分であり：
【００９１】
【化８８】
2011231131.tif 000008
ここで、ＤＥおよびＤＦの波線はＡ、ＷまたはＹへの共有結合付着部位を示し、独立して各位置において：  Ｒ２はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５はＨおよびメチルから選択され；
あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５および６から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリールまたはＣ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＮＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ―Ｒ１４，または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され；および
ｎは０〜６の範囲の整数である］
を有する（抗体−薬物結合体ともいう）薬物−リンカー−抗体結合体、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。
【００９２】
もう１つの態様において、本発明の抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）の抗体はＥｒｂＢ２遺伝子によってコードされるレセプターに特異的に結合する。
【００９３】
もう１つの態様において、抗体−薬物結合体の抗体はｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７およびｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８（トラスツズマブ）から選択されるヒト化抗体である。
【００９４】
もう１つの態様において、本発明は、本発明の抗体−薬物結合体化合物；容器；およびＥｒｂＢ２レセプターの過剰発現によって特徴付けられる癌を治療するのに当該化合物を用いることができることを示すパッケージインサートまたはラベルを含む製品を含む。
【００９５】
もう１つの態様において、本発明は、治療有効量の本発明の抗体−薬物結合体化合物を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物において癌を治療する方法を含み、ここで、該癌はＥｒｂＢ２レセプターの過剰発現によって特徴付けられ、抗−ＥｒｂＢ２抗体での治療に応答せず、または応答しにくい。
【００９６】
もう１つの態様において、薬物部分の相当量は、抗体−薬物化合物が抗体−薬物結合体の抗体に対して特異的な細胞−表面レセプターを持つ細胞に進入するまで抗体から切断されず、抗体−薬物結合体が細胞に進入する場合には、薬物部分は抗体から切断される。
【００９７】
もう１つの態様において、抗体−薬物結合体化合物の生物学的利用能または哺乳動物における該化合物の細胞内代謝産物は、抗体−薬物結合体化合物の薬物部分を含む薬物化合物と比較した場合に、または薬物部分を有しない化合物のアナログと比較した場合に改善されている。
【００９８】
もう１つの態様において、薬物部分は化合物の抗体から、または化合物の細胞内代謝産物から哺乳動物において細胞内で切断される。
【００９９】
もう１つの態様において、本発明は、有効量の本発明の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、および薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたは賦形剤を含む薬学的組成物を含む。該組成物は、さらに、治療有効量のチューブリン−形成阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、およびＤＮＡ結合剤のような化学治療剤を含むことができる。
【０１００】
もう１つの態様において、本発明は、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害するのに有効な、一定量の本発明の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物で腫瘍細胞または癌細胞を処理することを含む、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を含む。
【０１０１】
もう１つの態様において、本発明は、細胞培養基中の哺乳動物細胞を本発明の抗体薬物結合体化合物に曝露することを含む細胞増殖を阻害する方法を含み、ここで、該抗体薬物結合体化合物は細胞に進入し、薬物は抗体薬物結合体化合物の残りから切断され；それにより、細胞の増殖は阻害される。
【０１０２】
もう１つの態様において、本発明は、本発明の抗体−薬物結合体化合物、および薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたは賦形剤の処方を患者に投与することを含み、癌を治療する方法を含む。
【０１０３】
もう１つの態様において、本発明は：
（ａ）細胞を本発明の抗体−薬物結合体化合物に曝露し；次いで、
（ｂ）抗体−薬物結合体化合物の細胞への結合の度合いを測定する；
ことを含む、癌細胞を検出するアッセイを含む。
添付の図面、図およびスキームと合わせて、例示的実施形態の以下の詳細な記載を参照することによって本発明は最良に理解されるであろう。以下の議論は記述的であり、説明的かつ例示的であって、いずれかの添付の請求の範囲によって定義される範囲を限定するものと取られるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【０１０４】
【図１】図１は、皮下Ｋａｒｐａｓ−２９９  ＡＬＣＬ異種移植片におけるｃＡＣ１０−ｍｃＭＭＡＦのインビボの、単一用量の効率アッセイを示す。
【図２】図２は、皮下Ｌ５４０ｃｙにおけるｃＡＣ１０−ｍｃＭＭＡＦのインビボの、単一用量の効率アッセイを示す。この実験では、未処理群では４匹のマウス、処理群の各々では１０匹のマウスがいた。
【図３Ａ】図３ａおよび３ｂは、皮下Ｌ２９８７におけるｃＢＲ９６−ｍｃＭＭＡＦのインビボ効率を示す。図３ａにおけるファイルした三角形および図３ｂにおける矢印は療法の日数を示す。
【図３Ｂ】図３ａおよび３ｂは、皮下Ｌ２９８７におけるｃＢＲ９６−ｍｃＭＭＡＦのインビボ効率を示す。図３ａにおけるファイルした三角形および図３ｂにおける矢印は療法の日数を示す。
【図４】図４ａおよび４ｂは、ＣＤ３０＋細胞系に対するｃＡＣ１０−抗体−薬物結合体のインビトロ活性を示す。
【図５】図５ａおよび５ｂは、Ｌｅｙ＋細胞系に対するｃＢＲ９６−抗体−薬物結合体のインビトロ活性を示す。
【図６】図６ａおよび６ｂは、ＣＤ７０＋腎臓細胞癌腫細胞系に対するｃ１Ｆ６−抗体−薬物結合体のインビトロ活性を示す。
【図７】図７は、抗体薬物結合体（ＡＤＣ）で処理したＳＫ−ＢＲ−３細胞でのインビトロでの細胞増殖アッセイを示す：相対的蛍光単位（ＲＬＵ）―対−ＡＤＣμｇ／ｍＬ濃度で測定した、−黒丸−トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ，３．８ＭＭＡＦ／Ａｂ，  −白丸−トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ，４．１  ＭＭＡＦ／Ａｂ、および−白三角−トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ，４．８  ＭＭＡＦ／Ａｂ。Ｈ＝Ｈがシステイン［ｃｙｓ］を介して連結されたトラスツズマブ。
【図８】図８は、ＡＤＣで処理されたＢＴ−４７４細胞でのインビトロでの細胞増殖アッセイを示す：−黒丸−トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ，３．８ＭＭＡＦ／Ａｂ，−白丸−トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ，４．１  ＭＭＡＦ／Ａｂ、および−白三角−トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ，４．８  ＭＭＡＦ／Ａｂ。
【図９】図９は、ＡＤＣで処理されたＭＣＦ−７細胞でのインビトロでの細胞増殖アッセイを示す：−黒丸−トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ，３．８  ＭＭＡＦ／Ａｂ，−白丸−トラスツズマブ−ＭＣ−（Ｎ−Ｍｅ）ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ，３．９  ＭＭＡＦ／Ａｂ、および−白丸−トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ，４．１  ＭＭＡＦ／Ａｂ。
【図１０】図１０は、ＡＤＣで処理されたＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞でのインビトロでの細胞増殖アッセイを示す：−黒丸−トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ，４．１  ＭＭＡＥ／Ａｂ，−白丸−トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ，３．３  ＭＭＡＥ／Ａｂ、および−白丸−トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ，３．７  ＭＭＡＦ／Ａｂ。
【図１１】図１１は、Ｈ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ−ＴＥＧおよびＨ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットへの投与の後における血漿濃度クリアランス実験を示す。投与された用量はラットのｋｇ当たり２ｍｇのＡＤＣであった。全抗体およびＡＤＣの濃度は経時的に測定した（Ｈ＝トラスツズマブ）。
【図１２】図１２は、異なる用量：日１および日２１に投与された０．５、１．５、２．５および３．０ｍｇ／ｋｇにおけるＨ−ＭＣ−ｖｃ−ＭＭＡＥのマカクザルへの投与の後における血漿濃度クリアランス実験を示す。全抗体およびＡＤＣの濃度は経時的に測定した（Ｈ＝トラスツズマブ）。
【図１３】図１３は、賦形剤、トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（１２５０μｇ／ｍ２）およびトラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ（５５５μｇ／ｍ２）を日０に投与したＭＭＴＶ−ＨＥＲ２  Ｆｏ５乳癌同種異系移植片を持つ無胸腺ヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍容量を示す（Ｈ＝トラスツズマブ）。
【図１４】図１４は、１０ｍｇ／ｋｇ（６６０μｇ／ｍ２）のトラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＥおよび１２５０μｇ／ｍ２のトラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを日０に投与したＭＭＴＶ−ＨＥＲ２  Ｆｏ５乳癌同種異系片を持つ無胸腺ヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍容量を示す。
【図１５】図１５は、賦形剤および６５０μｇ／ｍ２トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦを日０に投与したＭＭＴＶ−ＨＥＲ２  Ｆｏ５乳癌同種異系片を持つ無胸腺ヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍容量を示す。
【図１６】図１６は、賦形剤および３５０μｇ／ｍ２の４つのトラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ結合体を日０に投与したＭＭＴＶ−ＨＥＲ２  Ｆｏ５乳癌同種異系片を持つ無胸腺ヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍容量を示し、ここで、ＭＭＡＦ／トラスツズマブ（Ｈ）比率は２、４、５．９および６である。
【図１７】図１７は、賦形剤、トラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＭＭＡＦ、トラスツズマブ−ＭＣ（Ｍｅ）−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦおよびトラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦの投与後の動物（ラット）体重（平均±ＳＤ）における誤差バー付の群平均変化を示す。
【図１８】図１８は、９．９４ｍｇ／ｋｇのＨ−ＭＣ−ｖｃ−ＭＭＡＦ、２４．９０ｍｇ／ｋｇのＨ−ＭＣ−ｖｃ−ＭＭＡＦ、１０．６９ｍｇ／ｋｇのＨ−ＭＣ（Ｍｅ）−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、２６．７８ｍｇ／ｋｇのＨ−ＭＣ（Ｍｅ）−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、１０．１７ｍｇ／ｋｇのＨ−ＭＣ−ＭＭＡＦ、２５．５０ｍｇ／ｋｇのＨ−ＭＣ−ＭＭＡＦ、および２１．８５ｍｇ／ｋｇのＨ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦの投与後の動物（ラット）体重（平均±ＳＤ）における群平均変化を示す。Ｈ＝トラスツズマブ。ＭＣリンカーは各結合体につきトラスツズマブのシステインを介して付着される。
【図１９】図１９は、２１０５、３１５８および４２１０μｇ／ｍ２の用量でのトラスツズマブ（Ｈ）−ＭＣ−ＭＭＡＦの投与後のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット体重（平均±ＳＤ）における誤差バー付の群平均変化を示す。ＭＣリンカーは各結合体につきトラスツズマブのシステインを介して付着される。
【発明を実施するための形態】
【０１０５】
（４．例示的な実施形態の詳細な説明）
（４．１定義および略語）
特記しない限り、本明細書中で用いる以下の用語およびフレーズは以下の意味を有することを意図する：
商品名を本明細書中で用いる場合、出願人が独立して、商品名の製品処方、ジェネリック医薬品、および商品名製品の活性な医薬成分を含めることを意図する。
【０１０６】
本明細書中における用語「抗体」は最も広い意味で用い、所望の生物学的活性を呈する限り、無傷なモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの無傷の抗体から形成された多価抗体（例えば、二重特異性抗体）および抗体フラグメントを具体的にカバーする。抗体は、特異的抗原を認識し、それに結合することができる免疫系によって生じるタンパク質である。その構造の点で記載すると、抗体は、典型的には、４つのアミノ酸鎖、２つの重鎖および２つの軽鎖よりなるＹ―形状のタンパク質を有する。各抗体は主に２つの領域：可変領域、および定常領域を有する。Ｙのアームの端部に位置した可変領域は標的抗原に結合し、それと相互作用する。この可変領域は、特定の抗原上の特異的結合部位を認識し、それに結合する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。Ｙのテイルに位置した定常領域は免疫系によって認識され、それと相互作用する（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第５版，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、一般的には、複数抗体上のＣＤＲによって認識される、エピトープとも呼ばれる多数の結合部位を有する。異なるエピトープに特異的に結合する各抗体は異なる構造を有する。かくして、１つの抗原は１を超える対応する抗体を有する。
【０１０７】
本明細書中で用いる用語「抗体」とは、全長免疫グロブリン分子または全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な、すなわち、癌細胞、限定されるものではないが、自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を生産する細胞を含めた標的のような、注目する標的の抗原またはその部分に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子もいう。本明細書中に開示された免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子のいずれかのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものであり得る。免疫グロブリンはいずれかの種に由来するものであり得るものである。しかしながら、一つの態様においては、免疫グロブリンは、ヒト、ネズミまたはウサギ起源のものである。もう一つの態様において、抗体はポリクローナル、モノクローナル、二特異的、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、一本鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって生産されたフラグメント、抗−イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ、および癌細胞抗原、ウイルス抗原または微生物抗原に免疫特異的に結合する前記のいずれかのエピドープ−結合フラグメントである。
【０１０８】
本明細書中で用いる用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体をいい、すなわち、該集団を含む個々の抗体は微量に存在し得る可能な天然に生じる突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原性部位に対して向けられる。さらに、異なる決定基（エピトーク）に対して向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一決定基に対して向けられる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが他の抗体によって汚染せずに合成できる点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体の特徴を示し、いずれかの特定の方法による抗体の生産を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用すべきモノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって作成できるか、あるいは組換えＤＮＡ方法によって作成することができる（米国特許第４８１６５６７号参照）。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ，  ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７に記載された技術を用いてファージー抗体ライブラリーから単離することもできる。
【０１０９】
本明細書中におけるモノクローナル抗体が、具体的には、重鎖および／軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、または特定の抗体に属する抗体における対応する配列と同一またはそれに相同あり、他方、鎖の残りはもう一つの種に由来するか、あるいはもう一つの抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一であるか、またはそれと相同である「キメラ」抗体、ならびにそのような抗体のフラグメントを、それらが所望の生物学的活性を呈する限り含む（米国特許第ｍｐ−４８１６５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５）。
【０１１０】
モノクローナル抗体（ＭＡｂｓ）を生産するのに種々の方法が使用されてきた。単一タイプの抗体を生産するクローン化された細胞系をいうハイブリドーマ技術はマウス（ネズミ）、ハムスター、ラットおよびヒトを含めた種々の種の細胞を用いる。ＭＡｂｓを調製するためのもう１つの方法は、組換えＤＮＡ技術を含めた遺伝子工学を用いる。これらの技術から作成されたモノクローナル抗体は、とりわけ、キメラ抗体およびヒト化抗体を含む。キメラ抗体は１を超えるタイプの種からのＤＮＡコーディング領域を組み合わせる。例えば、キメラ抗体はマウスからの可変領域およびヒトからの定常領域を誘導し得る。ヒト化抗体は、非ヒト部分を含むが、圧倒的に、ヒトに由来する。キメラ抗体のように、ヒト化抗体は完全にヒトの定常領域を含むことができる。しかしながら、キメラ抗体とは異なり、可変領域は部分的にヒトに由来し得る。ヒト化抗体の非ヒト、合成部分は、しばしば、ネズミ抗体におけるＣＤＲに由来する。いずれの場合においても、これらの領域は、抗体が特異的抗原を認識しそれに結合するのを可能とするのに非常に重要である。
【０１１１】
記載したように、ネズミ抗体を用いることができる。診断および短期間療法で有用であるが、ネズミ抗体は、有害な免疫原性の応答の危険性を増加させることなく、ヒトに長期間投与することができない。ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）と呼ばれるこの応答は、ヒト免疫系がネズミ抗体を外来性のものとして認識し、それを攻撃する場合に起こる。ＨＡＭＡ応答は毒性ショックまたは死滅さえ引き起こしかねない。
【０１１２】
キメラおよびヒト化抗体は、投与された抗体の非ヒト部分を最小化することによって、ＨＡＭＡ応答の尤度を低下させる。さらに、キメラおよびヒト化抗体は、抗体依存性細胞の細胞傷害性のような二次的ヒト免疫応答を活性化する追加の利点を有する。
【０１１３】
「抗体フラグメント」は、好ましくは、その抗原―結合または可変領域を含む無傷抗体の部分を含む。抗体フラグメントの例はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント；二重特異性抗体；線状抗体；単一鎖抗体分子；および抗体フラグメントから形成された多特異的抗体を含む。
【０１１４】
「無傷」抗体は、抗原―結合可変領域ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）および重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含むものである。定常ドメインは天然配列ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変種であり得る。
【０１１５】
無傷抗体は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列変種Ｆｃ領域）に帰すことができる生物学的活性をいう１以上の「エフェクター機能」を有することができる。抗体エフェクター機能の例はＣ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害性；Ｆｃレセプター結合；抗体―依存性細胞―媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシス；細胞表面レセプター（例えば、Ｂ細胞レセプター；ＢＣＲ）などのダウンレギュレーションを含む。
【０１１６】
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、無傷抗体は異なる「クラス」に帰属させることができる。無傷抗体の五つの主なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらのいくつかはさらに「サブクラス」（イソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＡ２に分けることができる。異なるクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、各々、α、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。サブユニットの構造および異なるクラスの免疫グロブリンの三次元立体配置はよく知られている。
【０１１７】
表現「ＥｒｂＢ２」および「ＨＥＲ２」は本明細書中においては相互交換的に使用され、例えば、Ｓｅｍｂａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２；６４９７−６５０１（１９８５）およびＹａｍａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）  Ｎａｔｕｒｅ，  ３１９：２３０−２３４（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｘ０３３６３）に記載されたヒトＨＥＲ２タンパク質をいう。用語「ＥｒｂＢ２」とはヒトＥｒｂＢ２をコードする遺伝子をいい、「ｎｅｕ」とはネズミｐ１８５ｎｅｕをコードする遺伝子をいう。好ましいＥｒｂＢ２は天然配列ヒトＥｒｂＢ２である。
【０１１８】
ＥｒｂＢレセプターに対する抗体は、例えば、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡを含めた多数の源から商業的に入手可能である。
【０１１９】
「ＥｒｂＢリガンド」は、ＥｒｂＢレセプターに結合しおよび／またはそれを活性化するポリペプチドを意味する。ＥｒｂＢリガンドは上皮成長因子（ＥＧＦ）（Ｓａｖａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４７：７６１２−７６２１）；形質転換成長因子α（ＴＧＦ−α）（Ｍａｒｑｕａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２３：１０７９−１０８２）；神経線維腫またはケラチノサイトオートクリン成長因子としても知られたアムフィレグリン（Ｓｈｏｙａｂ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４３；１０７４−１０７６；Ｋｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：２５７−２６０（１９９０）およびＣｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１：２５４７−２５５７（１９９１））；βセルリン（Ｓｈｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９：１６０４−１６０７（１９９３）およびＳａｓａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９０：１１７３（１９９３））；ヘパリン−結合上皮成長因子（ＨＢ−ＥＧＦ）（Ｈｉｇａｓｈｉｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：９３６−９３９（１９９１））；エピレグリン（Ｔｏｙｏｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  ２７０：７４９５−７５００（１９９５）；およびＫｏｍｕｒａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１５：２８４１−２８４８（１９９７））；へレグリン（後記参照）；ニューグリン−２（ＮＲＧ−２）（Ｃａｒｒａｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３８７：５１２−５１６（１９９７））；ニューレグリン−３（ＮＲＧ−３）（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９４：９５６２−９５６７（１９９７））；ニューレグリン−４（ＮＲＧ−４）（Ｈａｒａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１８：２６８１−８９（１９９９）またはクリプト（ＣＲ−１）（Ｋａｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２（６）：３３３０−３３３５（１９９７））のような天然配列ヒトＥｒｂＢリガンドであり得る。ＥＧＦＲに結合するＥｒｂＢリガンドはＥＧＦ、ＴＧＦ−α、アムフィレグリン、βセルリン、ＨＢ−ＥＧＦおよびエピレグリンを含む。ＥｒｂＢ３に結合するＥｒｂＢリガンドはヘレグリンを含む。ＥｒｂＢ４に結合することができるＲｂＢリガンドはベタセグリン、エピレグリン、ＨＢ−ＥＧＦ、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４およびヘレグリンを含む。ＥｒｂＢリガンドは合成ＥｒｂＢリガンドであってもよい。合成リガンドは特定のＥｒｂＢレセプターに特異的であり得るか、または特定のＥｒｂＢレセプター複合体を認識することができる。合成リガンドの例は、合成ヘレグリン／ＥＧＦキメラブレグリンである（例えば、ここに引用して援用するＪｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，４４７：２２７−２３１参照）。
【０１２０】
「ヘレグリン」（ＨＲＧ）は米国特許第５６４１８６９号またはＭａｒｃｈｉｏｎｎｉ
ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：３１２−３１８（１９９３）に開示されたヘレグリン遺伝子産物によってコードされたポリペプチドをいう。ヘレグリンの例はヘレグリン−α、ヘレグリン−β１、ヘレグリン−β２、およびヘレグリン−β３（Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：１２０５−１２１０（１９９２）；および米国特許第５６４１８６９号）；ｎｅｕ分化因子（ＮＤＦ）（Ｐｅｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ６９：２０５−２１６（１９９２））；アセチルコリンレセプター―誘導活性（ＡＲＩＡ）（Ｆａｌｌｓ  ｅｔ  ａ；．，（１９９３）  Ｃｅｌｌ  ７２：８０１−８１５）；神経膠成長因子（ＧＧＦ）（Ｍａｒｃｈｉｏｎｎｉ  ｅｔ  ａ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３６２；３１２−３１８（１９９３））；感覚および運動ニューロン由来因子（ＳＭＤＦ）（Ｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７０：１４５２３−１４５３２（１９９５））；γ―ヘレグリンＳｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１５：１３８５−１３９４（１９９７））を含む。該用語は、そのＥＧＦ−様ドメインフラグメント（例えば、ＨＲＧβ１１７７−２４４）のような、天然配列ＨＲＧポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントおよび／またはアミノ酸配列変種を含む。
【０１２１】
「ＥｒｂＢへテロ−オリゴマー」は、少なくとも二つの異なるＥｒｂＢレセプターを含む非共有結合的に会合したオリゴマーである。「ＥｒｂＢダイマー」は、二つの異なるＥｒｂＢレセプターを含む非共有結合的に会合したオリゴマーである。そのような複合体は、二以上のＥｒｂＢレセプターを発現する細胞がＥｒｂＢリガンドに曝露されると形成できる。ＥｒｂＢダイマーのようなＥｒｂＢオリゴマーは免疫沈澱によって単離することができ、例えば、Ｓｏｌｉｗｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９（２０），１４６６１−１４６６５（１９９４）に記載されたＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析される。そのようなＥｒｂＢへテロ−オリゴマーの例は（ＨＥＲ１／ＨＥＲ２ともいう）ＥＧＦＲ−ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ２−ＥｒｂＢ３（ＨＥＲ２／ＨＥＲ３）およびＥｒｂＢ３−ＥｒｂＢ４（ＨＥＲ３／ＨＥＲ４）複合体を含む。さらに、ＥｒｂＢへテロ−オリゴマーは、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４またはＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）のような異なるＥｒｂＢレセプターと組み合わされた２以上のＥｒｂＢ２のレセプターを含むことができる。サイトカインレセプターサブユニット（例えば、ｇｐ１３０）のような他のタンパク質をヘテロ−オリゴマーに含むことができる。
【０１２２】
「天然配列」ポリペプチドは、天然に由来する、ポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するもの、例えば腫瘍―会合抗原レセプターである。そのような天然配列ポリペプチドは天然から単離することができるか、あるいは組換えまたは合成手段によって生産することができる。かくして、天然配列ポリペプチドは天然に生じるヒトポリペプチド、ネズミポリペプチド、またはいずれかの他の哺乳動物種からのポリペプチドのアミノ酸配列を有することができる。
【０１２３】
用語「アミノ酸配列変種」とは、天然配列ポリペプチドはある程度異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドをいう。通常、アミノ酸配列変種は天然リガンドの少なくとも一つのレセプター結合ドメインと、または腫瘍―会合抗原のような天然レセプターの少なくとも一つのリガンド結合ドメインと少なくとも約７０％相同性を保有し、好ましくは、それらはそのようなレセプターまたはリガンド結合ドメインと少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％相同であろう。アミノ酸配列変種は天然アミノ酸配列のアミノ酸配列内のある位置において置換、欠失および／または挿入を保有する。
【０１２４】
「配列同一性」は、配列を整列させ、ギャップを導入して、必要であれば、最大のパーセント配列同一性を達した後に、同一であるアミノ酸配列変種における残基のパーセンテージと定義される。整列のための方法およびコンピュータプログラムは当該分野でよく知られている。一つのそのようなコンピュータプログラムは、１９９１年１２月１０日に、合衆国著作権局、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ２０５５９におけるユーザー文書提示に申請されたＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって著作された「Ａｌｉｇｎ  ２」である。
【０１２５】
「抗体―依存性細胞―媒介細胞傷害性」および「ＡＤＣＣ」とは、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上の結合した抗体を認識し、引き続いて、標的細胞の溶解を引き起こす細胞―媒介反応をいう。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、他方、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血系細胞上でのＦｃＲ発現はＲａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，９：４５７−９２の４６４頁の表３にまとめられる。注目する分子のＡＤＣＣ活性を評価するためには、米国特許第５５００３６２号または第５８２１３３７号に記載されたもののようなインビトロＡＤＣＣアッセイを行うことができる。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞は末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。別法として、加えて、注目する分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されたもののような動物モデルにおいてインビボにて評価することができる。
【０１２６】
用語「Ｆｃレセプター」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記載するために用いられる。好ましいＦｃＲは天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマレセプター）であり、これらのレセプターの対立遺伝子変種および、別法として、スプライスされた形態を含めたＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプターを含む。ＦｃγＲＩＩレセプターはその細胞質ドメインにおいて種として異なる同様なアミノ酸配列を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）を含む。活性化レセプターＦｃγＲＩＩＡはその細胞質ドメインに免疫レセプターチロシン−ベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害レセプターＦｃγＲＩＩＢはその細胞質ドメインにおける免疫レセプターチロシン−ベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（Ｄａeｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５：２０３−２３４（１９９７
）におけるｒｅｖｉｅｗ  Ｍ．参照）。ＦｃＲはＲａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５−３４（１９９４）；およびｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ，．１２６：３３０−４１（１９９５）にレビューされている。将来同定されるべきものを含めた他のＦｃＲは本明細書中においては用語「ＦｃＲ」に含まれる。また、該用語は、胎児への母性ＩｇＧの移動を担う新生児レセプターＦｃＲｎも含む（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９（１９９４））。
【０１２７】
「補体依存性細胞疾患性」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下で標的を溶解させる分子能力をいう。補体活性化経路は、同属抗原と複合体化した分子（例えば、抗体）への補体系の第一の成分（Ｃ１ｑ）の結合によって開始される。補体活性化を評価するためには、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）に記載されたＣＤＣアッセイを行うことができる。
【０１２８】
用語「可変」は、可変ドメインのある部分が抗体の中で配列においてかなり異なり、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合および特異性において用いられる。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体に均一には分布していない。それは軽鎖および重鎖可変ドメインにおける共に超可変領域と呼ばれる三つのセグメントに濃縮される。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然重鎖および軽鎖の可変ドメインは、各々、β―シート構造に結合するループを形成し、ある場合には、該構造の部分を形成する三つの超可変領域によって結合された、大いにβ―シート立体配置を採用する四つのＦＲを含む。各鎖における超可変領域はＦＲによって近接して一緒に保持され、他の鎖からの超可変領域と共に、抗体の抗原―結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ
Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ参照）。定常ドメインは抗原への抗体の結合に直接的に関与しないが、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）における抗体の参画のような種々のエフェクター機能を呈する。
【０１２９】
用語「超可変領域」は、本明細書中で用いる場合、抗原―結合を担う抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は一般には、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）および８９−９７（Ｌ３）、および重鎖可変ドメインにおける３１−３５（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）および９５−１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ、前掲）および／または「超可変ループ」からの残基（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）および９１−９６（Ｌ３）、および重鎖可変ドメインにおける２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）および９６−１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７）からのアミノ酸残基を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書中で定義された超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
【０１３０】
抗体のパパイン消化は、各々が単一抗原―結合部位を持つ「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる二つの同一の抗原―結合フラグメントおよびその名称が容易に結晶化するその能力を反映する残存「Ｆｃ）フラグメントを生じる。ペプシンショインは、二つの抗原―結合部位を有し、依然として抗原を架橋することができるＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じる。
【０１３１】
Ｆｖ”は、完全な抗原−認識および抗原−結合部位を含有する最小抗体フラグメントである。この領域は、密に非共有結合会合した１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインのダイマーよりなる。それは、各可変ドメインの３つの超可変領域が相互作用して、ＶＨ−ＶＬダイマーの表面の抗原−結合部位を規定するこの立体配置にある。集合的に、６つの超可変領域は抗体に対する抗原−結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）でさえ、抗原を認識し結合する能力を有するが、全結合部位よりも低い親和性においてである。
【０１３２】
Ｆａｂフラグメントもまた軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第一の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域からの１以上のシステインを含めた、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における少数の残基の付加によってＦａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも１つの遊離チオール基を担うＦａｂ’についての本明細書中における命名である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、元来、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として生産された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも知られている。
【０１３３】
いずれかの脊椎動物種からの抗体の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの明瞭に区別されるタイプの１つに帰属させることができる。
【０１３４】
「単一鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、ここで、これらのドメインは単一ポリペプチド鎖に存在する。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、さらに、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成するのを可能とするＶＨおよびＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーを含む。ｓｃＦｖのレビューについては、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ｖｏｌ．１１３，  Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）におけるＰｌuｃｋｔｈｕｎ参照。
【０１３５】
用語「二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）」とは、２つの抗原−結合部位を持つ小さな抗体フラグメントをいい、そのフラグメントは同一ポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）における可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）に連結された可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む。同一鎖上の２つのドメインの間の対合を可能とするにはあまりにも短いリンカーを用いることによって、ドメインはもう１つの鎖の相補的ドメインと対合し、２つの抗原−結合部位を作り出すことを強いられる。二重特異性抗体は、例えば、ＥＰ  ４０４，０９７；ＷＯ  ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８により十分に記載されている。
【０１３６】
非−ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非−ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、受容者の超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性および容量を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類のような非−ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域に由来する残基によって置き換えられたヒト免疫グロブリン（受容者抗体である）。いくつかの場合には、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は対応する非−ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は受容者抗体またはドナー抗体に見出されない残基を含むことができる。これらの修飾は抗体の性能をさらに精錬するためになされる。一般に、ヒト化抗体は少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全ては非−ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のそれである。ヒト化抗体は、所望により、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのそれを含むであろう。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）  Ｎａｔｕｒｅ，  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ，（１９９２）  Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６参照。
【０１３７】
ヒト化抗−ＥｒｂＢ２抗体は、ここに引用して明示的に援用する米国特許第５８２１３３７号の表３に記載されたｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７およびｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））；ヒト化５２０Ｃ９（ＷＯ  ９３／２１３１９）および本明細書中にて後に記載するヒト化２Ｃ４抗体を含む。
【０１３８】
「単離された」抗体は、同定され、かつその天然環境の成分から分離されおよび／または回収されたものである。その天然環境の汚染成分は抗体についての診断または治療用途に干渉する物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含むことができる。好ましい実施形態において、抗体は（１）Ｌｏｗｒｙ方法によって測定して抗体の９５重量％以上、最も好ましくは９９重要％以上、（２）スピンニングカップシクエネーターの使用によってＮ−末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルーまたは、好ましくは、銀染色を用いて還元または非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一なまで精製されるであろう。単離された抗体は、組換え細胞内のインサイチュでの抗体を含む。というのは、抗体の天然環境の少なくとも１つの成分は存在しないからである。しかしながら、通常、単離された抗体は少なくとも１つの精製工程によって調製される。
【０１３９】
注目する抗原に「結合する」抗体は、該抗体が抗原を発現する細胞を標的とするのに有用であるように、十分な親和性でもってその抗原に結合することができるものである。
【０１４０】
「アポトーシスを誘導する」抗体は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡのフラグメント化、細胞の収縮、小胞体の膨張、細胞フラグメント化、および／または（アポトーシスボディと呼ばれる）膜小胞の形成によって判断してプログラムされた細胞死を誘導するものである。細胞は腫瘍細胞、例えば、乳房細胞、卵巣細胞、胃細胞、子宮内膜細胞、唾液腺細胞、肺細胞、腎臓細胞、結腸細胞、甲状腺細胞、膵臓細胞または膀胱細胞である。アポトーシスに関連した細胞事象を評価するために種々の方法が入手可能である。例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）トランスロケーションはアネキシン結合によって測定することができ；ＤＮＡフラグメント化はＤＮＡラダリングを通じて評価することができ；およびＤＮＡフラグメント化に伴う核／クロマチン凝縮は低ジプロイド細胞のいずれかの増加によって評価することができる。
【０１４１】
「疾患」は本発明の治療から利益を受けるであろういずれもの症状である。これは、哺乳動物にとって問題とする疾患の素因となる病理学的疾患を含めた慢性および急性疾患または疾病を含む。ここに治療すべき疾患の非限定的例は良性および悪性腫瘍；白血病およびリンパ性悪性疾患、特に、乳癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌、甲状腺癌、膵臓癌、前立腺癌または膀胱癌；ニューロン、神経膠、神経膠星状細胞、視床下部および他の腺、マクロファージ、上皮、間質および胞胚腔疾患；および炎症、脈管および免疫学的疾患を含む。
【０１４２】
用語「治療有効量」とは、哺乳動物において疾病または疾患を治療するのに効果的な薬物の量をいう。癌の場合には、薬物の治療有効量は癌細胞の数を減少させ；腫瘍サイズを減少させ；末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害し（すなわち、幾分遅くし、好ましくは停止させる）；腫瘍転移を阻害し（すなわち、幾分遅くし、好ましくは停止させ）；腫瘍成長を幾分阻害し；および／または癌に関連する兆候の１以上を幾分軽減することができる。薬物が存在する癌細胞の成長を予防しおよび／またはそれを殺すことができる程度まで、それは細胞静止性および／または細胞傷害性であり得る。癌療法では、効率は、例えば、病気の進行に対する時間（ＴＴＰ）を評価しおよび／または応答速度（ＲＲ）を決定することによって測定することができる。
【０１４３】
用語「実質量」とは、収集または試料の集団の大部分、すなわち＞５０％をいう。
【０１４４】
用語「細胞内代謝産物」とは、抗体薬物結合体（ＡＤＣ）上の細胞内部の代謝プロセスまたは反応に由来する化合物をいう。代謝プロセスまたは反応はＡＤＣのペプチドリンカーのタンパク質分解切断のような酵素プロセス、またはヒドラゾン、エステルまたはアミドのような官能基の加水分解であり得る。細胞内代謝産物は、限定されるものではないが、細胞への進入、拡散、摂取または輸送後に細胞内切断を受けた抗体および遊離薬物を含む。
【０１４５】
用語「細胞内で切断された」および「細胞内切断」とは、それにより、共有結合、例えば、薬物部分（Ｄ）および抗体（Ａｂ）の間のリンカーが破壊され、その結果、抗体から解離された遊離薬物が細胞内に入る、薬物−リガンド結合体、薬物−リンカー−リガンド結合体、抗体薬物結合体（ＡＤＣ）上の細胞内の代謝プロセスまたは反応をいう。薬物−リガンド結合体、薬物−リンカー−リガンド結合体またはＡＤＣの切断された部位は、かくして、細胞内代謝産物である。
【０１４６】
用語「生物学的利用能」とは、患者に投与された薬物の与えられた量の前身利用性（すなわち、血液／血漿レベル）をいう。生物学的利用能は、投与された投与形態から一般的循環に到達する薬物の時間（速度）および合計量（程度）双方の測定を示す絶対的用語である。
【０１４７】
用語「細胞傷害性活性」とは、抗体薬物結合体化合物または抗体薬物結合体化合物の細胞内代謝産物の細胞殺傷、細胞静止または抗−増殖効果をいう。細胞傷害性活性は、細胞の半分が生き残る単位容量当たりの濃度（モラーまたは質量）であるＩＣ５０値として表すことができる。
【０１４８】
用語「癌」および「癌性」は、未調節細胞増殖によって典型的には特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態をいい、それを記載する。「腫瘍」は１以上の癌性細胞を含む。癌の例は、限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ性悪性疾患を含む。そのような癌のより特別な例は扁平細胞癌（例えば、上皮扁平細胞癌）、小細胞肺癌を含めた肺癌、非−小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）、肺の腺癌および肺の扁平癌腫、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含めた胃癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結直腸癌、子宮内膜または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌腫、肛門癌腫、陰茎癌腫ならびに頭部および頸部癌を含む。
【０１４９】
「ＥｒｂＢ２−発現癌」は、抗−ＥｒｂＢ２抗体がそれに結合することができ、癌に関して治療効果を有するように、その細胞の表面において十分なレベルのＥｒｂＢ２を生産するものである。
【０１５０】
ＥｒｂＢ２レセプターの「過剰な活性化によって特徴付けられる」癌は、癌細胞中のＥｒｂＢ２レセプター活性化の程度が同一組織タイプの非−癌性細胞におけるそのレセプターの活性化のレベルを有意に超えるものである。そのような過剰な活性化はＥｒｂＢ２レセプターの過剰発現に由来し得るか、および／または癌細胞におけるＥｒｂＢ２レセプターを活性化させるのに利用できるＥｒｂＢ２リガンドの正常なレベルよりも大であり得る。そのような過剰な活性化は癌細胞の悪性状態を引き起こしかねず、および／またはそれによって引き起こされ得る。いくつかの実施形態において、癌を診断または予後アッセイに付して、ＥｒｂＢ２レセプターの増幅および／または過剰発現が起こり、その結果、ＥｒｂＢ２レセプターのそのような過剰な活性化がもたらされるか否かを判断する。別法として、あるいは加えて、癌を診断または予後アッセイに付して、ＥｒｂＢ２リガンドの増幅および／または過剰発現が癌で起こりつつあり、それがレセプターの過剰な活性化に帰せられるか否かを判断することができる。そのような癌のサブセットにおいて、レセプターの過剰な活性化はオートクリン刺激経路に由来し得る。
【０１５１】
ＥｒｂＢ２レセプターを「過剰発現」する癌は、同一組織タイプの非癌性細胞と比較して、その細胞表面において有意に高いレベルのＥｒｂＢ２レセプターを有するものである。そのような過剰発現は遺伝子増幅によって、または増大した転写または翻訳によって引き起こされ得る。ＥｒｂＢ２レセプター過剰発現は、（例えば、免疫組織化学アッセイ；ＩＨＣを介して）細胞の表面に存在するＥｒｂＢ２タンパク質の増大したレベルを評価することによって診断または予後アッセイで決定することができる。別法として、あるいは加えて、例えば、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ；ＷＯ  ９８／４５４７９参照）、サザンブロッティング、リアルタイム定量ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）のようなポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）技術を介して細胞におけるＥｒｂＢ２−コーディング核酸のレベルを測定することができる。ＥｒｂＢ２リガンドの過剰発現は、例えば、腫瘍バイオプシにおいて、または前記したＩＨＣ、ＦＩＳＨ、サザンブロッティング、ＰＣＲまたはインビボアッセイのような種々の診断アッセイによって患者におけるリガンド（またはそれをコードする核酸）のレベルを評価することによって診断的に決定することができる。また、血清のような生物学的流体中の放出された抗原（例えば、ＥｒｂＢ２細胞外ドメイン）を測定することによってＥｒｂＢ２レセプター過剰発現を研究することができる（例えば、米国特許第４９３３２９４号；ＷＯ  ９１／０５２６４；米国特許第５４０１６３８号；およびＳｉａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１３２：７３−８０参照）。前記アッセイとは別に、種々の他のインビボアッセイが当業者に利用できる。例えば、患者の体内の細胞を、検出可能な標識、例えば、放射性同位体で所望により標識されていてもよい抗体へ曝露することができ、患者における細胞への抗体の結合は、例えば、放射能についての外部スキャンニングによって、または抗体に従前に曝露された患者から採取したバイオプシを分析することによって評価することができる。
【０１５２】
ＨＥＲ２を過剰発現する腫瘍は細胞当たりの発現されたＨＥＲ２分子のコピーの数に対応する免疫組織化学スコアによってランク付けされ、生化学的に決定することができる：０＝０〜１０，０００コピー／細胞、１＋＝少なくとも約２００，０００コピー／細胞、２＋＝少なくとも約５００，０００コピー／細胞、３＋＝約１〜２×１０６コピー／細胞。チロシンキナーゼのリガンド−独立性活性化に導く３＋レベルにおけるＨＥＲ２の過剰発現（Ｈｕｄｚｉａｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：７１５９−７１６３）は、乳癌のほぼ３０％で起こり、これらの患者においては、再発−フリー生存および総じての生存は減少する（Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：７０７−７１２；Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５：１７７−１８２）。
【０１５３】
逆に、「ＥｒｂＢ２レセプターの過剰発現によって特徴付けられない」癌は、診断アッセイにおいて、同一組織タイプの非癌性細胞と比較してＥｒｂＢ２レセプターの正常なレベルよりも高く発現しないものである。
【０１５４】
本明細書中で用いる用語「細胞傷害性剤」とは、細胞の機能を阻害し、または妨げ、および／または細胞の破壊を引き起こす物質をいう。該用語は放射性同位体（例えば、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、６０Ｃ、およびＬｕの放射性同位体）、化学療法剤、およびその合成アナログおよび誘導体を含めた、細菌、真菌、植物または動物起源の小分子とキシンまたは酵素的に活性なトキシンのようなトキシンを含むことを意図する。１つの態様において、該用語は放射性同位体を含めることを意図しない。
【０１５５】
「化学療法剤」は、癌の治療で有用な化学化合物である。化学療法剤の例はチオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミドのようなアルキル化剤；ブスルファン、イムプロスルファンおよびピポスルファンのようなアルキルスルホネート；ベンゾドパ、カルボクオメ、メツレドパ、およびウレドパのようなアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロールメラミンを含めたエチレンイミドおよびメチルアメルアミン；ＴＬＫ２８６（ＴＥＬＣＹＴＡＴＭ）；アセトゲミン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；β−ラパショール；ラパショール；コルヒチン；ブテリン酸；（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、および９−アミノカンプトテシンを含めた）カンプトテシン；ブリオスタチン；カリスタチン；（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成アナログを含めた）ＣＣ−１０６５；ホドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；（合成アナログ、ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含めた）ドゥオカルマイシン；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルポディクチイン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキサイド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン、フェネステリン、プレドミムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタードのようなナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロドトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムヌスチンのようなニトロソ尿素；クロドロネートのようなビスホスホネート；エネジイン抗生物質（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンガンマ１ＩおよびカリケアミシンオメガＩ１（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）参照）、およびアンナマイシンのようなアントラサイクリン、ＡＤ３２、アルカルビシン、ダウノルビシン、ドキシラゾキサン、ＤＸ−５２−１、エピルビシン、ＧＰＸ−１００、イダルビシン、ＫＲＮ５５００、メノガリル、ダイネミシンＡを含めたダイネミシン、エスペラミシン、ネオカルジノスタチンフロモフォアおよび関連するクロモプロテインエンジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス、ダクチノマイシン、デトルビシン、６−ジアザ−５−オクソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（モルフォリノ−ドキソルビシン、シアノモルフォリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、リポソームドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、��ソルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトミブリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、およびゾルビシンのような抗生物質；デノプテリン、プテロプテリン、およびトリメトトレキセートのような葉酸アナログ；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリンおよびチオグアニンのようなプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビンおよびフロキウリジンのようなピリミジンアナログ；カルステロン、ドロモスタノロンプロピオン酸、エピチオスタノール、メピチオスタンおよびテストラクチンのようなアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタンおよびトリロスタンのような抗−アドレナル；フォリン酸（ロイコボリン）のような葉酸補充物；アセグラトン；ＡＬＩＭＴＡ（登録商標）、ＬＹ２３１５１４プレメトレキセド、メトトレキセートのようなジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）のような抗−代謝産物、およびＵＦＴ、Ｓ−１およびカペシタビンのようなそのプロドラッグ、およびラルチトレキセド（ＴＯＭＵＤＥＸＲＭ，ＴＤＸ）のようなチミジレートシンターゼ阻害剤およびグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ阻害剤のような抗−葉酸抗−新形成剤；エニルラシルのようなジヒドロピリミジンデヒドロゲナーゼのような阻害剤；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルシン；チアジクオン；エルフォールニチン；エリプチニウム酢酸；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシンおよびアンサミトシンのようなマイタンシノイド；マイトグアゾン；マイトアントレン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾニン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２トキシン、ベルラクリンＡ、ロリジンＡおよびアンギジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；マイトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイドおよびタキセン、例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｓｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭクレモフォール−フリー、パクリタキセルのアルブミン−作成ナノ粒子処方（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕ���ｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドキセタキセル（Ｒｈoｎｅ−
Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，フランス）；クロランブシル；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））；６−チオグアニン；メルカプトプリン；白金；シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチンのような白金アナログまたは白金−ベースのアナログ；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド；マイトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；ビンカアルカロイド；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセロータ；イバンドロメート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸のようなレチノイド；前記のいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸または誘導体；並びにＣＨＯＰのような前記の２以上の組合せ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾロンの組合せ療法のための省略、およびＦＯＬＦＯＸ、５−ＦＵおよびロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）との治療レジメン用の省略を含む。
【０１５６】
また、この定義には、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタムキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストロンおよびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）、トレミフェンを含めた、抗−エストロゲン、および選択的エストロゲンレセプターモジュレーター（ＳＥＲＭ）のような腫瘍に対するホルモン作用を調節しまたはそれを阻害するように作用する抗−ホルモン剤；例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、」ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）メゲステロール酢酸、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン、フォルメスタニーム、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾール、およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾールのような副腎におけるエストロゲン産生を調節する、酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤；およびフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリンのような抗−アンドロゲン；ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、および上皮成長因子レセプター（ＥＧＦ−Ｒ）のような、アブフェラント細胞増殖に関与するシグナリング経路において遺伝子の発現を阻害するもの；遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチンおよびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチンのようなワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；および前記のいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸または誘導体が含まれる。
【０１５７】
本明細書中で用いるように、用語「ＥＧＦＲ−標的化薬物」とは、ＥＧＦＲに結合し、所望により、ＥＧＦＲ活性化を阻害する治療剤をいう。そのような剤の例はＥＧＦＲに結合する抗体および小分子を含む。ＥＧＦＲに結合する抗体の例はＭＡｂ５７９（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ  ８５０６）、ＭＡｂ  ４５５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ８５０７），ＭＡｂ  ２２５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５０８）、ＭＡｂ  ５２８（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５０９）（米国特許第４９４３５３３号、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．参照）、およびキメラ化２２５（Ｃ２２５またはセツキシマブ；ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））および再形成ヒト２２５（Ｈ２２５）のようなその変種（ＷＯ  ９６／４０２１０，Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．参照）；タイプＩＩ突然変異体ＥＧＦＲに結合する抗生物質（米国特許第５，２１２，２９０号）；米国特許第５８９１９９６号に記載された、ＥＧＦＲに結合するヒト化およびキメラ抗体；およびＡＢＸ−ＥＧＦのような、ＥＧＦＲに結合するヒト抗生物質（ＷＯ  ９８／５０４３３，Ａｂｇｅｎｉｘ参照）を含む。該抗−ＥＧＦＲ抗体は細胞傷害性剤と組み合わせることができ、かくして、免疫結合体を生じる（例えば、ＥＰ  ６５９，４３９Ａ２，Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨ参照）。ＥＧＦＲに結合する小分子の例はＺＤ１８３９またはゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡＴＭ；Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、エルロチミブＨＣｌ（ＣＰ−３５８７７４，ＴＡＲＣＥＶＡＴＭ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ）およびＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ  ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）を含む。
【０１５８】
「チロシンキナーゼ阻害剤」は、ＥｒｂＢレセプターのようなチロシンキナーゼのチロシンキナーゼ活性をある程度阻害する分子である。そのような阻害剤の例は先行するパラグラフで述べたＥＧＦＲ−標的化薬物ならびにＰＤ１５３０３５、４−（３−クロロアニリノ）キナゾリンのようなキナゾリン、ピリドピリミジン、ピリミドピリミジン、ＣＧＰ  ５９３２６、ＣＧＰ  ６０２６１およびＣＧＰ  ６２７０６のようなピロロピリミジン、およびピラゾロピリミジン、４−（フェニルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、クルコミン（ジフェルロイルメタン）、４，５−ビス（４−フルオロアニリノ）フタルイミド）、ニトロチオフェン部位を含有するチルフォスチン；ＰＤ−０１８３８０５（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ）；アンチセンス分子（例えば、ＥｒｂＢ−コーディング核酸に結合するもの）；キノキサリン（米国特許第５，８０６，３９６号）；トリフォスチン（米国特許第５８０４３９６号）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）；ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）のような汎−ＥｒｂＢ阻害剤；アフィニタック（ＩＳＩＳ  ３５２１；Ｉｓｉｓ／Ｌｉｌｌｙ）；イミアチニブメシレート（Ｇｌｅｅｖａｃ；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＰＫＩ  １６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＷ２０１６（Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈ）；セマキサニブ（Ｓｕｇｅｎ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）；ＩＮＣ−１Ｃ１１（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；または以下の特許出願のいずれかに記載されたもの：米国特許第５８０４３９６号；ＷＯ  ９９／０９０１６（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ）；ＷＯ  ９８／４３９６０（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ）；ＷＯ  ９７／３８９８３（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ  ９９／０６３７８（Ｗａｒｌｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ  ９９／０６３９６（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ  ９６／３０３４７（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ）；ＷＯ  ９６／３３９７８（Ｚｅｎｅｃａ）；ＷＯ  ９６／３３９７（Ｚｅｎｅｃａ）；およびＷＯ  ９６／３３９８０（Ｚｅｎｅｃａ）を含む。
【０１５９】
「抗−脈管剤」は、血管の発達をある程度ブロックし、またはそれに干渉する化合物をいう。抗−脈管因子は、例えば、脈管形成を促進するのに慣用する成長因子または成長因子レセプターに結合する小分子または抗体であり得る。１つの実施形態において、抗−脈管形成因子は血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）に結合する抗体である。
【０１６０】
用語「サイトカイン」は、細胞間メディエーターとしてもう１つの細胞に作用する１つの細胞集団によって放出されたタンパク質についての上位概念的用語である。そのようなサイトカインの例はリンホカイン、モノカインおよび伝統的なポリペプチドホルモンである。該サイトカインの中には、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンのような成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体ホルモン（ＬＨ）のような糖タンパク質ホルモン；肝成長因子；線維芽成長因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子−αおよび−β；ムレリアン−阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒリン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−βのような神経成長因子；血小板−成長因子；ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−βのような形質転換成長因子（ＴＧＦ）；インスリン−様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン−α、−βおよび−γのようなインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）のようなコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２のようなインターロイキン（ＩＬ）；ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βのような腫瘍壊死因子；およびＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）を含めた他のポリペプチド因子が含まれる。本明細書中で用いるように、用語サイトカインは天然源からの、または組換え細胞培養からのタンパク質、および天然配列サイトカインの生物学的な活性な同等体を含む。
【０１６１】
本出願で用いる用語「プロドラッグ」とは、親薬物と比較して腫瘍細胞に対して細胞傷害性が低く、かつより活性な親形態で酵素的にまたは加水分解的に活性化されまたは変換されることができる薬学的に活性な物質の前駆体または誘導形態をいう。例えば、Ｗｉｌｍａｎ，「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，１４、ｐｐ．３７５−３８２，６１５ｔｈ  Ｍｅａｔｉｎｇ  Ｂｅｌｆｖｓｔ（１９８６）およびＳｔｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ．（編）（ｐｐ．２４７−２６７，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）参照。本出願のプロドラッグは、限定されるものではないが、ホスフェート−含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、スルフェート−含有プロドラッグ、ペプチド−含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾プロドラッグ、グルコシル化プロドラッグ、β−ラクタム−含有プロドラッグ、所望により置換されていてもよいフェノキシアセタミド−含有プロドラッグ、または所望により置換されていてもよいフェニールアセタミド−含有プロドラッグ、５−フルオロシトシン、およびより活性な細胞傷害性遊離薬物へ変換できる他の５−フルオロウリジンオプロドラッグを含む。本発明で用いるためのプロドラッグ継体へ誘導体化することができる細胞傷害性薬物の例は、限定されるものではないが、前記した化学療法剤を含む。
【０１６２】
「リポソーム」は、（抗−ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０またはＬｅｗｉｓ  Ｙ抗体および、所望により、化学療法剤を含めた）薬物の哺乳動物への送達に有用な種々のタイプの脂質、リン脂質および／または界面活性剤から構成された小さな小胞である。リポソームの成分は生体膜の脂質配置に似た、二相形成にて通常は配置される。用語「パッケージインサート」は、そのような治療製品の使用に関連する適応症、用法、投与量、投与、禁忌および／または警告についての情報を含む治療製品の商業的パッケージに慣用的に含まれる指令書をいうように用いられる。
【０１６３】
「単離された」核酸分子は、それが通常は抗体核酸の天然源に会合する少なくとも１つの汚染核酸分子から同定され、それから分離された核酸分子である。単離された核酸分子はそれが天然で見出される形態または状況以外である。単離された核酸分子は、従って、それが天然細胞に存在する核酸分子から区別される。しかしながら、単離された核酸分子は、例えば、核酸分子が天然細胞のそれとは異なる染色体位置にある抗体を通常は発現する細胞に含まれる核酸分子を含む。
【０１６４】
表現「制御配列」とは、特定の宿主生物において操作可能に連結したコーディング配列の発現に必要なＤＮＡ配列をいう。原核生物に適した制御配列は、例えば、プロモーター、所望により、オペレーター配列、およびリボソーム結合部位を含む。真核生物細胞はプロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを利用することが知られている。
【０１６５】
核酸は、それがもう１つの核酸配列と機能的に関係となっている場合に「操作可能に連結」されている。例えば、プレ配列または分泌リーダー用のＤＮＡは、もしそれがポリペプチドの分泌に参画するプレタンパク質として発現されるならば、該ポリペプチド用のＤＮＡに操作可能に連結される；プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響するならば、コーディング配列に操作可能に連結されている；あるいはリボソーム結合部位は、もしそれが翻訳を容易とするように位置していれば、コーディング配列に操作可能に連結されている。一般には、「操作可能に連結している」は、連結されたＤＮＡ配列が隣接しており、分泌リーダーの場合には、隣接し、かつリーディング相にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは隣接している必要がない。連結は便宜な制限部位における連結によって達成することができる。もしそのような部位が存在しなければ、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを慣用的プラクティスに従って用いることができる。
【０１６６】
本明細書中で用いるように、表現「細胞」、「細胞系」、および「細胞培養」は相互交換的に使用され、全てのそのような表示は子孫を含む。かくして、単語「形質転換体」および「形質転換した細胞」は一次対象細胞および導入の数に関することなくそれに由来する培養を含む。また、全ての子孫は、慎重なまたは不注意の突然変異のため、ＤＮＡ含有量において正確には同一ではないであろうことは理解される。元来形質転換された細胞に付きスクリーニングされるのと同一の機能または生物学的活性を有する突然変異体子孫は含まれる。区別される表示該とされる場合，それは文脈から明瞭であろう。
【０１６７】
ここで、「自己免疫疾患」は、個体自体の組織またはその共−分離または発現または結果としてのそれからの状態から生起する、およびそれに向けられた疾病または疾患である。自己免疫疾患または疾病の例は、限定されるものではないが、関節炎（慢性関節リウマチ、若年性慢性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、および剛直性脊椎炎）、乾癬、アトピー性皮膚炎を含めた皮膚炎；慢性自己免疫蕁麻疹を含めた慢性特発性蕁麻疹、原発性筋炎／皮膚筋炎、毒性上皮壊死症、全身強皮症、および硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（クローン病，潰瘍性結腸炎）に関連する応答、および壊疽性膿皮症の同時分離を伴うＩＢＤ（炎症性腸疾患）、結節性紅斑、原発性硬化性胆管炎、および／または上強膜炎、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）などの呼吸窮迫症候群、髄膜炎、アナフィラキシーおよびアレルギー性鼻炎などＩｇＥが介在する疾患、ラスムッセン脳炎などの脳炎、ブドウ膜炎、顕微鏡的大腸炎および膠原性大腸炎などの大腸炎、膜性糸球体腎炎、特発性膜性糸球体腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ；１型と２型など）、および急速進行性糸球体腎炎などの糸球体腎炎（ＧＮ）、アレルギー性疾患、湿疹、喘息、Ｔ細胞浸潤および慢性炎症反応に関与する疾患、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性心筋炎、白血球接着不全症、皮膚の全身性エリテマトーデスなどの全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、腎炎、脳炎、小児期、非腎性、円板状、脱毛症などのループス、若年発症糖尿病、脊髄多発性硬化症などの多発性硬化症（ＭＳ）、アレルギー性脳脊髄炎、サイトカインおよびＴリンパ球が介在する急性過敏症および遅延型過敏症関連の免疫反応、結核、サルコイドーシス、ヴェゲナー肉芽腫症などの肉芽腫症、無顆粒球症、血管炎（大血管の血管炎（リウマチ性多発筋痛および巨細胞性（高安）動脈炎など）、中血管の血管炎（川崎病および結節性多発動脈炎など）、ＣＮＳ（中枢神経系）脈管炎、ならびにチャーグ・ストラウス血管炎すなわちチャーグ・ストラウス症候群（ＣＳＳ）などＡＮＣＡ（抗好中球細胞質抗体）が関連する血管炎など）、再生不良性貧血、クームス試験陽性貧血、ダイアモンド・ブラックファン貧血、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）などの免疫性溶血性貧血、悪性貧血、赤芽球癆（ＰＲＣＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、血友病Ａ、自己免疫性好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球の血管外遊出に関与する疾患、ＣＮＳ炎症性疾患、多臓器障害症候群、重症筋無力症、抗原抗体複合体が介在する疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、アレルギー性神経炎、ベーチェット病、キャッスルマン病、グッドパスチャー症候群、ランバート・イートン筋無力症候群、レイノー症候群、シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群、臓器移植拒絶反応（パネル反応性抗体価高値に対する前治療、組織内のＩｇＡ沈着、および腎移植、肝移植、腸管移植、心臓移植などが原因の拒絶反応など）、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、水疱性類天疱瘡、天疱瘡（尋常性、落葉状、および天疱瘡粘膜類天疱瘡など）、自己免疫性多内分泌腺症、ライター病、全身強直症候群、免疫複合体腎炎、ＩｇＭ多発ニューロパシーまたはＩｇＭ介在性ニューロパシー、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性血小板減少症などの血小板減少症（例えば、心筋梗塞患者が発症するものなど）、自己免疫性の精巣炎と卵巣炎など精巣および卵巣の自己免疫性疾患、原発性甲状腺機能低下症；自己免疫性甲状腺炎、慢性甲状腺炎（橋本病）、亜急性甲状腺炎、特発性甲状腺機能低下症、アジソン病、グレーブス病、自己免疫性多腺性症候群（または多腺性内分泌障害症候群）、インスリン依存性小児糖尿病などの１型糖尿病（インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）とも呼ぶ）、ならびにシーハン症候群などの自己免疫性内分泌疾患；自己免疫性肝炎、リンパ肺臓性間質性炎（ＨＩＶ）、ＮＳＩＰ（非特異的間質性肺炎）に対する閉塞性細気管支炎（非移植）、ギラン・バレー症候群、ベルジェ病（ＩｇＡ腎症）、原発性胆汁性肝硬変、セリアックスプルー（グルテン腸症）、同時分離した疱瘡状皮膚炎を伴う治療抵抗性スプルー、クリオグロブリン血症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ；ルー・ゲーリッグ病）、冠動脈疾患、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）自己免疫性難聴、眼球クローヌスミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、治療抵抗性多発性軟骨炎などの多発性軟骨炎、肺胞蛋白症、アミロイドーシス、巨細胞性肝炎、強膜炎、重症度不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、末梢性ニューロパシー、腫瘍随伴症候群、てんかん、片頭痛、不整脈、筋障害、ろう、盲、周期性麻痺、およびＣＮＳチャネロパシーなどのチャネロパシー；自閉症、炎症性ミオパシー、ならびに巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）。
【０１６８】
「アルキル」はノルマル、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有するＣ１−Ｃ１８炭化水素である。その例はメチル（Ｍｅ、−ＣＨ３），エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、−ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ―プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２―ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０１６９】
「アルケニル」は不飽和の少なくとも１つの部位、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ２二重結合をもつノルマル、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有するＣ２−Ｃ１８炭化水素である。その例は、限定されるものではないが：エチレンまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、シクロペンテニル（−Ｃ５Ｈ７）、および５−ヘキセニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）を含む。
【０１７０】
「アルキニル」は不飽和の少なくとも１つの部位、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ三重結合を持つノルマル、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有するＣ２−Ｃ１８炭化水素である。その例は、限定されるものではないが、アセチレン（−Ｃ≡ＣＨ）およびプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）を含む。
【０１７１】
「アルキレン」とは、１〜１８の炭素原子の、かつ親アルカンの同一または２つの異なる炭素原子から２つの水素原子を除くことによって誘導される２つの一価基中心を有する飽和した分岐鎖または直鎖または環状炭化水素基をいう。典型的なアルキレン基は、限定されるものではないが、メチレン（−ＣＨ２−）、１，２−エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）等を含む。
【０１７２】
「アルケニレン」とは、２〜１８の炭素原子の、かつ親アルケンの同一または２つの異なる炭素原子から２つの水素原子を除くことによって誘導された２つの一価基中心を有する不飽和の分岐鎖または直鎖または環状炭化水素基をいう。典型的なアルケニレン基は、限定されるものではないが、１，２−エチレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）を含む。
【０１７３】
「アルキニレン」とは、２〜１８の炭素原子の、かつ親アルキンの同一または２つの異なる炭素原子から２つの水素原子を除くことによって誘導された２つの一価基中心を有する不飽和の分岐鎖または直鎖または環状炭化水素基をいう。典型的なアルキニレン基は、限定されるものではないが、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）、および４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ−）を含む。
【０１７４】
「アリール」は、親芳香族環系の単一炭素原子から１つの水素原子を除くことによって誘導された６〜２０の炭素原子の一価芳香族炭化水素を意味する。いくつかのアリール基は「Ａｒ」として例示的構造で示される。典型的なアリール基は、限定されるものではないが、ベンゼン、置換されたベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニル等から誘導された基を含む。
【０１７５】
「アリールアルキル」とは、炭素原子、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子に結合した水素原子の１つがアリール基で置き換えられた非環状アルキル基をいう。典型的なアリールアルキル基は、限定されるものではないが、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンイジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イル等を含む。該アリールアルキル基は、６〜２０の炭素原子を含み、例えば、該アリールアルキル基のアルカニル、アルケニルまたはアルキニル基を含めたアルキル部位は１〜６の炭素原子であって、アリール部位は５〜１４の炭素原子である。
【０１７６】
「ヘテロアリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子に結合した水素原子の１つがヘテロアリール基で置き換えられた非環状アルキル基をいう。典型的なヘテロアリールアルキル基は、限定されるものではないが、２−ベンズイミダゾリルメチル、２−フリルエチル等を含む。該ヘテロアリールアルキル基は６〜２０の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルカニル、アルケニルまたはアルキニル基を含めたアルキル部位は１〜６の炭素原子であって、ヘテロアリール部位は５〜１４の炭素原子およびＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３のヘテロ原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部位は３〜７環員を有する単環であり得る（２〜６の炭素原子、または７〜１０の環員（４〜９の炭素原子およびＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３のヘテロ原子）を有する二環、例えば：ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系。
【０１７７】
「置換されたアルキル」、「置換されたアリール」および「置換されたアリールアルキル」は、１以上の水素原子が各々独立して置換基で置換された、各々、アルキル、アリール、およびアリールアルキルを意味する。典型的な置換基は、限定されるものではないが、
【０１７８】
【化８９】
2011231131.tif 000009
を含み、ここで、各Ｘは独立してハロゲン：Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり；および各Ｒは独立して−Ｈ、Ｃ２−Ｃ１８アルキル、Ｃ６−Ｃ２０アリール、Ｃ３−Ｃ１４複素環、保護基またはプロドラッグ部位である。前記したアルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン基もまた同様に置換されていてもよい。
【０１７９】
「ヘテロアリール」および「複素環」とは、１以上の環原子がヘテロ原子、例えば、窒素、酸素および硫黄である環系をいう。複素環基は１〜２０の炭素原子、およびＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択され他１〜３のヘテロ原子を含む。複素環は３〜７の環員（２〜６の炭素原子、およびＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３のヘテロ原子）を有する単環、または７〜１０の環員（４〜９の炭素原子、およびＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３のヘテロ原子）を有する二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］，［５，６］、または［６，６］系であってよい。
【０１８０】
複素環はＰａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ  Ａ．；「Ｐｒｉｎｃｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６８）、特に１、３、４、６、７および９章；「Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，  Ａ  Ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９５０〜現在）、特に１３、１４、１６、１９および２８章；およびＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。
【０１８１】
複素環の例は、その例として、限定されるものではないが、ピリジル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、硫黄酸化テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ビス−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４ａＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾポリアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、オキシインドリル、ベンズオキサゾリルおよびイサチノイルを含む。      
【０１８２】
例としてかつ限定されるものではないが、炭素結合複素環はピリジンの位置２、３、４、５または６、ピリダジンの位置３、４、５または６、ピリミジンの位置２、４，５または６、ピラジンの位置２、３、５または６、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロールまたはテトラヒドロピロールの位置２、３、４または５、オキサゾール、イミダゾールまたはチアゾールの位置２、４または５、イソオキサゾール、ピラゾールまたはイソチアゾールの位置３、４または５、アジリジンの位置２または３、アゼチジンの位置２、３または４、キノリンの位置２、３、４、５、６、７または８、またはイソキノリンの位置１、３、４、５、６、７または８で結合される。なおより典型的には、炭素結合複素環は２−ピイジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、または５−チアゾリルを含む。
【０１８３】
その例として、かつ限定されるものではないが、窒素結合複素環はアジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの位置１、イソインドールまたはイソインドリンの位置２、モルホリンの位置４、およびカルバゾールまたはβ−カルボリンの位置９で結合している。なおより典型的には、窒素結合複素環は１−アジリジル、１−アゼテジル、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリル、および１−ピペリジニルを含む。
【０１８４】
「炭素環」は、単環としての３〜７の炭素原子、または二環としての７〜１２の炭素原子を有する飽和または不飽和環を意味する。単環炭素原子は３〜６の環原子、なおより典型的には５または６の環原子を有する。二環炭素環は、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］または［６，６］系として配置された７〜１２の環原子、またはビシクロ［５，６］または［６，６］系として配置された９または１０の環原子を有する。単環炭素環の例はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルを含む。
【０１８５】
「リンカー」、「リンカーユニット」または「リンク」は、薬物部分へ抗体を共有結合付着させる共有結合または炭素の鎖を含む化学部位を意味する。種々の実施形態において、リンカーはＬＵとして特定される。リンカーはアルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイルのような二価基、−（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ−、アルキルオキシの反復ユニット（例えば、ポリエチレンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）およびアルキルアミノの反復ユニット（例えば、ポリエチレンアミノ、ＪｅｆｆａｍｉｎｅＴＭ）のような部位；およびスクシネート、スクシンアミド、ジグリコレート、マロネートおよびカプロアミドを含めた二酸エステルおよびアミドを含む。
【０１８６】
用語「キラル」とは、鏡像パートナーの非−重ね性の特性を有する分子をいい、他方、用語「アキラル」とは、それらの鏡像パートナー上に重ねることができる分子をいう。
【０１８７】
用語「立体異性体」とは、同一の化学構成を有するが、空間における原子または基の配置に関して異なる化合物をいう。
【０１８８】
「ジアステレオマー」はキラリティーの２以上の中心を持ち、その分子が相互の鏡像ではない立体異性体をいう。ジアステレオマーは異なる物理的特性、例えば、融解点、沸点、スペクトロ特性および反応性をいう。ジアステレオマーの混合物は電気泳動およびクロマトグラフィーのような高分解能分析手法下で分離することができる。
【０１８９】
「エナンチオマー」とは、相互に重ね合わせることのできない鏡像である化合物の２つの立体異性体をいう。
【０１９０】
本明細書中で用いる立体化学の定義および約束は、一般には、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ編，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（１９８４）  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；およびＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｇｒａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は光学的に活性な形態で存在し、すなわち、それらは面−偏光した光の面を回転させる能力を有する。光学的な活性な化合物を記載するにおいて、接頭辞ＤおよびＬ、またはＲおよびＳを用いて、そのキラル中心の周りの分子の絶対立体配置を示す。接頭辞ｄおよびｌまたは（＋）および（−）を使用して、化合物による面−偏光された光の回転の符号を示し、（−）または１は化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞を持つ化合物は右旋性である。与えられた化学構造に対しては、これらの立体異性体は、それらは相互に鏡像である以外は同一である。具体的立体異性体はエナンチオマーということもでき、そのような異性体の混合物は、しばしば、エナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０混合物はラセミ混合物またはラセミ体といい、これは、化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性がない場合に起こり得る。用語「ラセミ混合物」および「ラセミ体」は光学活性を欠く、２つのエナンチオマー種の等モル混合物をいう。
【０１９１】
「患者」の例は、限定されるものではないが、ヒト、ラット、マウス、モルモット、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、鳥類および家禽を含む。例示的な実施形態において、患者はヒトである。
【０１９２】
「アリール」とは、炭素環芳香族基をいう。アリール基の例は、限定されるものではないが、フェニル、ナフチルおよびアントラセニルを含む。炭素環芳香族基または複素環芳香族基は置換されていないか、または、限定されるものではないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮを含めた１以上の基で置換することができ；ここで、該Ｒ’は独立してＨ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびアリールから選択される。
【０１９３】
本明細書中で用いる用語「Ｃ１−Ｃ８アルキル」とは、１〜８の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の、飽和または不飽和炭化水素をいう。代表的な「Ｃ１−Ｃ８アルキル」基は、限定されるものではないが、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、−ｎ−ヘキシル、−ｎ−ヘプチル、−ｎ−オクチル、−ｎ−ノニルおよび−ｎ−デシルを含み；他方、分岐したＣ１−Ｃ８アルキルは、限定されるものではないが、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、２−メチルブチルを含み、不飽和のＣ１−Ｃ８アルキルは、限定されるものではないが、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、−アセチレニル、−プロピニル、−１−ブチニル、−２−ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニル、−３−メチル−１−ブチニル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンテニル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イソへキシル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルペンチル、２，３，４−トリメチルペンチル、３−メチルヘキシル、２，２−ジメチルヘキシル、２，４−ジメチルヘキシル、２，５−ジメチルヘキシル、３，５−ジメチルヘキシル、２，４−ジメチルペンチル、２−メチルヘプチル、３−メチルヘプチル、ｎ−ヘプチル、イソヘプチル、ｎ−オクチル、およびイソオクチルを含む。Ｃ１−Ｃ８アルキル基は置換されていないか、あるいは限定されるものではないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮを含めた１以上の基で置換することができ；ここで、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびアリールから選択される。
【０１９４】
「Ｃ３−Ｃ８炭素環」は３−、４−、５−、６−、７−または８−員の飽和または不飽和の非−芳香族炭素環である。代表的なＣ３−Ｃ８炭素環は、限定されるものではないが、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−シクロペンタジエニル、−シクロヘキシル、−シクロヘキセニル、−１，３−シクロヘキサジエニル、−１，４−シクロヘキサジエニル、−シクロヘプチル、−１，３−シクロヘプタジエニル、−１，３，５−シクロヘプタトリエニル、−シクロオクチルおよび−シクロオクタジエニルを含む。Ｃ３−Ｃ８炭素環は置換されていないか、または限定されるものではないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮを含めた１以上の基で置換することができ；ここで、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびアリールから選択される。
【０１９５】
「Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ」とは、炭素環基の水素原子の１つが結合で置き換えられた前記定義のＣ３−Ｃ８炭素環基をいう。
【０１９６】
「Ｃ１−Ｃ１０アルキレン」は式−（ＣＨ２）１−１０の直鎖の飽和炭化水素基である。Ｃ１−Ｃ１０アルキレンの例はメチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、へプチレン、オクチレン、ノニレンおよびデカレンを含む。
【０１９７】
「アリーレン」は、２つの共有結合を有し、以下の構造式に示されたオルト、メタまたはパラ立体配置であり得る：
【０１９８】
【化９０】
2011231131.tif 000010
［式中、該フェニル基は置換されていないか、または限定されるものではないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮを含めた４つまでの基で置換することができ；ここで、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびアリールから選択される。］
「Ｃ３−Ｃ８複素環」とは、環炭素原子の１〜４が独立してＯ、ＳおよびＮよりなる群から選択されるヘテロ原子で置換された芳香族または非−芳香族Ｃ３−Ｃ８炭素環をいう。Ｃ３−Ｃ８複素環の代表的な例は、限定されるものではないが、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、プラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピロリジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリルおよびテトラゾリルを含む。Ｃ３−Ｃ８複素環は、置換されていないか、または限定されるものではないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮを含めた７つまでの基で置換することができ；ここで、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびアリールから選択される。
【０１９９】
「Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ」とは、炭素環基の水素原子の１つが結合で置き換えられた前記定義のＣ３−Ｃ８複素環基をいう。Ｃ３−Ｃ８複素環は置換されていないか、あるいは限定されるものではないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮを含めた６つまでの基で置換することができ；ここで、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびアリールから選択される。
【０２００】
「例示的な化合物」は薬物化合物または薬物−リンカー化合物である。
【０２０１】
「例示的結合体」は、薬物−リガンド結合体または薬物−リンカー−リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する薬物−リガンド結合体である。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、例示的化合物および例示的結合体は単離されたまたは精製された形態におけるものである。本明細書中で用いるように、「単離された」は（ａ）植物または動物細胞または細胞培養のような天然源または（ｂ）合成有機化学反応混合物の他の成分から分離されたを意味する。本明細書中で用いるように、「精製された」は、単離された場合に、該単離体が該単離体の重量の少なくとも９５％、もう１つの態様においては、少なくとも９８％の例示的化合物または例示的結合体を含有することを意味する。
【０２０３】
「ヒドロキシル保護基」の例は、限定されるものではないが、メトキシメチルエーテル、２−メチルエトキシメチルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、ベンジルエーテル、ｐ−メトキシベンジルエーテル、トリメチルシリルエーテル、トリエチルシリルエーテル、トリイソプロピルシリルエーテル、ｔ−ブチルジメチルシリルエーテル、トリフェニルメチルシリルエーテル、アセテートエステル、置換されたアセテートエステル、ピバロレート、ベンゾエート、メタンスルホネートおよびｐ−トルエンスルホネートを含む。
【０２０４】
「脱離基」とは、もう１つの官能基によって置換することができる官能基をいう。そのような脱離基は当該分野でよく知られており、その例は、限定されるものではないが、ハライド（例えば、クロライド、ブロマイド、イオダイド）、メタンスルホニル（メチル）、ｐ−トルエンスルホニル（トシル）、トリフルオロメチルスルホニル（トリフレート）、およびトリフルオロメチルスルホネートを含む。
【０２０５】
本明細書中で用いるように、フレーズ「薬学的に受容可能な塩」とは、例示的化合物または例示的結合体の薬学的に受容可能な有機または無機塩をいう。該例示的化合物および例示的結合体は少なくとも１つのアミノ基を含有し、従って、酸付加塩はこのアミノ基とで形成することができる。例示的な塩は、限定されるものではないが、スルフェート、シトレート、アセテート、オキサレート、クロライド、ブロマイド、イオダイド、ニトレート、ビスルフェート、ホスフェート、酸ホスフェート、イソニコチネート、ラクテート、サリシレート、酸シトレート、タルトレート、オレエート、タンネート、パントテネート、ビタルトレート、アスコルベート、スクシネート、マレエート、ゲンチシネート、フマレート、グルコネート、グルクロネート、サッカレート、ホルメート、ベンゾエート、グルタメート、メタンスルホネート、エタンスルホネート、ベンゼンスルホネート、ｐ−トルエンスルホネート、およびパモエート（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））塩を含む。薬学的に受容可能な塩はアセテートイオン、スクシネートイオンまたは他の対イオンのようなもう１つの分子を含めることができる。該対イオンは親化合物上の電荷を安定化させるいずれの有機または無機部位であってもよい。さらに、薬学的に受容可能な塩はその構造において１を超える荷電した電子を有することができる。複数の荷電した電子が薬学的に受容可能な塩である場合は複数の対イオンを有することができる。よって、薬学的に受容可能な塩は１以上の荷電した電子および１以上の対イオンを有することができる。
【０２０６】
「薬学的に受容可能な溶媒和物」または「溶媒和物」とは、１以上の溶媒分子および本発明の化合物、例えば、例示的化合物または例示的結合体の会合をいう。薬学的に受容可能な溶媒和物を形成する溶媒の例は、限定されるものではないが、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸およびエタノールアミンを含む。
【０２０７】
以下の略語を本明細書中で用い、示された定義を有する：ＡＥはオーリスタチンＥであり、ＢｏｃはＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）であり、ｃｉｔはシトルリンであり、ｄａｐはドラプロインであり、ＤＣＣは１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドであり、ＤＣＭはジクロロメタンであり、ＤＥＡはジエチルアミンであり、ＤＥＡＤはジエチルアゾジカルボキシレートであり、ＤＥＰＣはジエチルホスホリルシアニデートであり、ＤＩＡＤはジイソプロピルアゾジカルボキシレートであり、ＤＩＥＡはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンであり、ｄｉｌはドライソロイシンであり、ＤＭＡＰは４−ジメチルアミノピリジンであり、ＤＭＥはエチレングリコールジメチルエーテル（または１，２−ジメトキシエタン）であり、ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであり、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドであり、ｄｏｅはドラフェニンであり、ｄｏｖはＮ，Ｎ−ジメチルバリンであり、ＤＴＮＢは５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）であり、ＤＴＰＡはジエチレントリアミンペンタ酢酸であり、ＤＴＴはジチオスレイトールであり、ＥＤＣＩは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩であり、ＥＥＤＱは２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリンであり、ＥＳ−ＭＳは電子スプレイ質量分析であり、ＥｔＯＡｃは酢酸エチルであり、ＦｍｏｃはＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）であり、ｇｌｙはグリシンであり、ＨＡＴＵはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ、Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートであり、ＨＯＢｔは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールであり、ＨＰＬＣは高圧液体クロマトグラフィーであり、ｉｌｅはイソロイシンであり、ｌｙｓはリシンであり、ＭｅＣＮ（ＣＨ３ＣＮ）はアセトニトリルであり、ＭｅＯＨはメタノールであり、Ｍｔｒは４−アニシルジフェニルメチル（または４−メトキシトリチル）であり、ｎｏｒは（１Ｓ，２Ｒ）−（＋）−ノルエフェロリンであり、ＰＡＢはｐ−アミノベンジルであり、ＰＢＳはリン酸−緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）であり、ＰＥＧはポリエチレングリコールであり、Ｐｈはフェニルであり、Ｐｎｐはｐ−ニトロフェニルであり、ＭＣは６−マレイミドカプロイルであり、ｐｈｅはＬ−フェニルアミンであり、ＰｙＢｒｏｐはブロモトリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートであり、ＳＥＣはサイズ−排除クロマトグラフィーであり、Ｓｕはスクシンイミドであり、ＴＢＴＵはＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートであり、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸であり、ＴＬＣは薄層クロマトグラフィーであり、ＵＶは紫外線であり、およびｖａｌはバリンである。
【０２０８】
以下のリンカー略語を本明細書中で用い、示された定義を有する：Ｖａｌ  Ｃｉｔはバリン−シトルリン、プロテアーゼ切断可能リンカーにおけるジペプチド部位であり；ＰＡＢはｐ−アミノベンジルカルバモイルであり；（Ｍｅ）ｖｃはＮ−メチル−バリンシトルリンであり、ここで、該リンカーペプチド結合はカテプシンＢによるその切断を妨げるように修飾されている；ＭＣ（ＰＥＧ）６−ＯＨはマレイミドカプロイル−ポリエチレングリコールであり；ＳＰＰは４−（２−ピリジルチオ）ペンタン酸Ｎ−スクシンイミジルであり；およびＳＭＣＣは４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸Ｎ−スクシンイミジルである。
【０２０９】
用語「治療する」または「治療」は、文脈により他のことが示されない限り、治療的処置および予防的または防止的手段を共にいい、ここで、目的は癌の発生または拡大のような望まない生理学的変化または疾患を妨げまたは遅らせる（少なくする）ことである。本発明の目的では、利益になるまたは望まれる臨床的結果は、限定されるものではないが、検出可能または検出不可能を問わず、兆候の軽減、病気の程度の低下、病気の安定化された（すなわち、悪くならない）状態、病気進行の遅延または遅れ、病気状態の緩和または軽減、および緩解（部分的または全体を問わない）を含む。「治療」は、また、もし治療を受けないならば予測される生存と比較して延長される生存も意味することができる。治療を必要とするものは、疾患または疾病をすでに持つもの、ならびに疾患または疾病を有する傾向があるもの、または疾患または疾病を予防すべきものを含む。
【０２１０】
癌の文脈において、用語「治療する」は：腫瘍細胞、癌細胞の増殖の予防、または腫瘍の予防；腫瘍細胞または癌細胞の複製の予防、総じての腫瘍負荷の低下、または癌性細胞の数の減少、および病気に関連する１以上の兆候の軽減のいずれかまたは全てを含む。
【０２１１】
自己免疫疾患の文脈においては、用語「治療する」は：限定されるものではないが、自己免疫抗体を生産する細胞を含めた自己免疫疾患状態に関連する細胞の複製の予防、自己免疫−抗体負荷の低下および自己免疫疾患の１以上の兆候の軽減のいずれかまたは全てを含む。
【０２１２】
感染症の文脈においては、用語「治療する」は：感染症を引き起こす病原体の成長、増殖または複製の予防、および感染症の１以上の兆候の軽減のいずれかまたは全てを含む。
【０２１３】
以下の細胞傷害性薬物の略語が本明細書中で用いられ、示された定義を有する：ＭＭＡＥはモノ−メチルオーリスタチンＥ（ＭＷ  ７１８）であり；ＭＭＡＦはＮ−メチルバリン−バリン−ドライソロイシン−ドラプロイン−フェニルアラニン（ＭＷ  ７３１．５）であり；ＭＭＡＦ−ＤＭＡＥＡはＣ−末端フェニルアラニンへのアミド結合におけるＤＭＡＥＡ（ジメチルアミノエチルアミン）を持つＭＭＡＦ（ＭＷ  ８０１．５）であり；ＭＭＡＦ−ＴＥＧはフェニルアラニンにエステル化したテトラエチレングリコールを持つＭＭＡＦであり；ＭＭＡＦ−ＮｔＢｕはＭＭＡＦのＣ−末端へアミドとして結合されたＮ−ｔ−ブチルであり；ＡＥＶＢはオーリスタチンＥバレリルベンジルヒドラゾン、ＡＥのＣ−末端を介する酸不安定リンカー（ＭＷ  ７３２）であり；およびＡＦＰはオーリスタチンＦのＣ−末端フェニルアラニン（ＭＷ  ７３２）を持つｐ−フェニレンジアミンのモノアミドである。
【０２１４】
（４．２  本発明の化合物）
（４．２．１  式（Ｉａ）の化合物）
１つの態様において、本発明は式Ｉａ：
【０２１５】
【化９１】
2011231131.tif 000011
［式中、
Ｌ−はリガンドユニットであり；
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−はリンカーユニット（ＬＵ）であり、ここで、該リンカーユニットは以下のものを含む：
−Ａ−はストレッチャー（Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）ユニットであり、
ａは０または１であり、
各−Ｗ−は独立してアミノ酸ユニットであり、
ｗは０〜１２の範囲の整数であり、
−Ｙ−はスペーサーユニットであり、および
ｙは０、１または２であり；
ｐは１〜約２０の範囲であり；および
−Ｄは式ＤＥおよびＤＦ：
【０２１６】
【化９２】
2011231131.tif 000012
を有する薬物ユニットであり、
ここで、独立して、各位置において：
Ｒ２はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５はＨおよびメチルから選択され；
あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５および６から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリールまたはＣ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＮＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり、
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され、および
ｎは０〜６の範囲の整数である］
を有する薬物−リンカー−リガンド結合体、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。
【０２１７】
もう１つの実施形態において、本発明は、式Ｉｂ：
【０２１８】
【化９３】
2011231131.tif 000013
［式中：
Ｒ２は水素および−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３は水素、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４は水素、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、ここで、Ｒ５は−Ｈおよび−メチルから選択され；あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよび−Ｃ３−Ｃ８炭素環から選択され、およびｎは２、３、４、５および６から選択され、それらが結合する炭素原子とで環を形成し；
Ｒ６はＨおよび−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され；
各Ｒ８は独立して、Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環および−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよび−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリール基または−Ｃ３−Ｃ８複素環から選択され；
Ｚは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−ＮＲ１２−であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、−Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３は−Ｃ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたは−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；および
ｎは０〜６の範囲の整数である］
を有する薬物化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。
【０２１９】
なおもう１つの実施形態において、本発明は式Ｉａ’：
【０２２０】
【化９４】
2011231131.tif 000014
（式Ｉａ’）
［式中：
Ａｂは抗体であり、
Ａはストレッチャー（Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）ユニットであり、
ａは０または１であり、
各Ｗは独立してアミノ酸ユニットであり、
ｗは０〜１２の範囲の整数であり、
Ｙはスペーサーユニットであり、および
ｙは０、１または２であり、
ｐは１〜約２０の範囲であり、および
Ｄは式ＤＥおよびＤＦ：
【０２２１】
【化９５】
2011231131.tif 000015
から選択される薬物部分であり、
ここで、独立して、各位置において：
Ｒ２はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５はＨおよびメチルから選択され；
あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５および６から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８およびＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリールまたはＣ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され；および
ｎは０〜６の範囲の整数である］
を有する薬物−リンカー−リガンド結合体、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。
【０２２２】
Ａｂは１以上の薬物ユニットに共有結合したいずれかの抗体である。ＡｂはＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ抗原に結合する抗体を含む。もう１つの実施形態において、ＡｂはＥｒｂＢレセプターに、または１以上のレセプター（１）〜（３５）に結合する抗体を含まない：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質レセプター−タイプＩＢ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００１２０３）；
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１，ＳＬＣ７Ａ５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００３４８６）；
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１２４４９）；
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５，ＭＵＣ１６，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ３６１４８６）；
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ，ＭＳＬＮ，ＳＭＲ，巨核細胞増強因子，メソテリン、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００５８２３）；
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ，ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２，溶質キャリアーファミリー３４（リン酸ナトリウム），メンバー２，タイプＩＩナトリウム−依存性リン酸トランスポーター３ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００６４２４）；
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２，ＫＩＡＡ１４４５，Ｍｍ．４２０１５，ＳＥＭＡ５Ｂ，ＳＥＭＡＧ，セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ，ｓｅｍａドメイン，７回トロンボスポンジンリピート（タイプＩおよびタイプＩ−様）．膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン，（セマフォリン）５Ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＢ０４０８７８）；
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ，Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ３５８６２８）；
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンタイプＢレセプター，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２７５４６３）；
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４，仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１７７６３）；
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ ８６３９，ＩＰＣＡ−１，ＰＣＡＮＡＰ１，ＳＴＡＭＰ１，ＳＴＥＡＰ２，ＳＴＭＰ，前立腺癌関連遺伝子１，前立腺癌関連タンパク質１，前立腺２の６回膜貫通上皮抗原，６回膜貫通前立腺タンパク質，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ４５５１３８）；
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０，ＦＬＪ２００４１，ＴＲＰＭ４，ＴＲＰＭ４Ｂ，一過性レセプター潜在的カチオンチャネル，サブファミリーＭ，メンバー４，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１７６３６）；
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ，ＣＲ１，ＣＲＧＦ，ＣＲＩＰＴＯ，ＴＤＧＦ１，テラトカルシノーマ−由来成長因子，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００３２０３またはＮＭ ００３２１２）；
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体レセプター２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバールウイルスレセプター）またはＨｓ．７３７９２，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ２６００４）；
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＩＧｂ（免疫グロブリン−関連β），Ｂ２９，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０００６２６）；
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４，ＩＲＴＡ４，ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ），ＳＰＡＰ１Ｂ，ＳＰＡＰ１Ｃ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０３０７６４）；
（１７）ＨＥＲ２（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１１７３０）；
（１８）ＮＣＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１８７２８）；
（１９）ＭＤＰ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＢＣ０１７０２３）；
（２０）ＩＬ２０Ｒα（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１８４９７１）；
（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ２２９０５３）；
（２２）Ｅｐｈｂ２Ｒ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００４４４２）；
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＸ０９２３２８）；
（２４）ＰＳＣＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＪ２９７４３６）；
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２６０７６３）；
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ４４３１７７．１）；
（２７）ＣＤ２２（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ−００１７６２．１）；
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ，ＣＤ７９α，免疫グロブリン−関連α，Ｉｇβ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合相互作用し、かつＩｇＭ分子とで表面上に複合体を形成し、Ｂ−細胞分化に関与するシグナルを変換するＢ細胞−特異的タンパク質，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７７４．１）；
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫レセプター１，ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ球移動および液性防御で機能し、ＨＩＶ−２感染および、恐らくは、ＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫および白血病も発生において役割を演じるＧプロテイン−結合レセプター，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７０７．１）；
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合し、それらをＣＤ４＋Ｔリンパ球に提示するＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のβサブユニット，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００２１１１．１）；
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性レセプターＰ２Ｘリガンド型イオンチャネル５，細胞外ＡＴＰによってゲートが開閉されるイオンチャネルはシナプス伝達および神経形成に関与し得、欠陥は特発性排尿筋不安定の病態生理学に寄与し得る，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００２５５２．２）；
（３２）ＣＤ７２（Ｂ―細胞分化抗原ＣＤ７２，Ｌｙｂ−２、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７７３．１）；
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのタイプＩ膜タンパク質はＢ−細胞の活性化およびアポトーシスを調節し、機能の喪失は全身エリテマトーデスに罹った患者における増大した病気活性に関連する，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００５５７３．１）；
（３４）ＦＣＲＨ１（Ｆｃレセプター−様タンパク質１、Ｃ２タイプＩｇ−様およびＩＴＡＭドメインを含有する免疫グロブリンＦｃドメインに対する推定レセプターはＢ−リンパ球分化において役割を有するであろう，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ４４３１７０．１）；または
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連２、Ｂ細胞発生およびリンパ腫形成における可能な役割を持つ推定免疫レセプター；トラスローケーションによる遺伝子の脱調節はいくつかのＢ細胞悪性疾患で起こる，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ １１２５７１．１）。
１つの実施形態において、−Ｗｗ−は−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−である。
【０２２３】
もう１つの実施形態において、Ｒ３、Ｒ４およびＲ７は、独立して、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであって、Ｒ５は−Ｈである。例示的実施形態において、Ｒ３およびＲ４は各々イソプロピルであり、Ｒ５は−Ｈであって、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルである。さらにもう１つの実施形態において、Ｒ２およびＲ６は各々メチルであって、Ｒ９は−Ｈである。
【０２２４】
なおもう１つの実施形態において、Ｒ８の各出現は−ＯＣＨ３である。
【０２２５】
例示的実施形態において、Ｒ３およびＲ４は各々イソプロピルであり、Ｒ２およびＲ６は各々メチルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ８の各出現は−ＯＣＨ３であって、Ｒ９は−Ｈである。
【０２２６】
１つの実施形態において、Ｚは−Ｏ−または−ＮＨ−である。
【０２２７】
１つの実施形態において、Ｒ１０はアリールである。
【０２２８】
例示的実施形態において、Ｒ１０は−フェニルである。
【０２２９】
例示的実施形態において、Ｚが−Ｏ−である場合、Ｒ１１は−Ｈ、メチルまたはｔ−ブチルである。
【０２３０】
１つの実施形態において、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで、Ｒ１５は−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であり、およびＲ１６は−Ｃ１−Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである。
【０２３１】
もう１つの実施形態において、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで、Ｒ１５は−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈである。
【０２３２】
１つの態様において、ＡｂはｃＡＣ１０、ｃＢＲ９６、ｃＳ２Ｃ６、ｃ１Ｆ６、ｃ２Ｆ２、ｈＡＣ１０、ｈＢＲ９６、ｈＳ２Ｃ６、ｈ１Ｆ６、およびｈ２Ｆ２である。
【０２３３】
式Ｉａの例示的実施形態は以下の構造を有する：
【０２３４】
【化９６】
2011231131.tif 000016
【０２３５】
【化９７】
2011231131.tif 000017
［式中、Ｌは抗体であり、Ｖａｌはバリンであって、Ｃｉｔはシトルリンである］。
【０２３６】
薬物負荷はｐ、（例えば、式Ｉａ、Ｉａ’およびＩｃの）分子中の抗体当たりの薬物分子の平均数によって表される。薬物負荷はリガンド（例えば、ＡｂまたはｍＡｂ）当たり１〜２０薬物（Ｄ）の範囲であり得る。式Ｉａおよび式Ｉａ’の組成物は１〜２０の薬物の範囲と結合体した抗体のコレクションを含む。結合体化反応の調製における抗体当たりの薬物の平均数は質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイおよびＨＰＬＣのような慣用的な手段によって特徴付けることができる。ｐの換算でリガンド−薬物−結合体の定量的分布も決定することができる。いくつかの例において、ｐが他の薬物負荷を持つリガンド−薬物−結合体からのある値である均一なリガンド−薬物−結合体の分離、精製および特徴付けは逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動のような手段によって達成することができる。
【０２３７】
（４．２．２  式（Ｉｂ）の薬物化合物）
もう１つの態様において、本発明は式（Ｉｂ）：
【０２３８】
【化９８】
2011231131.tif 000018
［式中：
Ｒ２は−水素および−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３は−水素、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４は−水素、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、ここで、Ｒ５は−Ｈおよび−メチルから選択され；あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよび−Ｃ３−Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５および６から選択され、それらが結合している炭素原子とで環を形成し；
Ｒ６は−Ｈおよび−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７は−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環および−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９は−Ｈおよび−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリール基または−Ｃ３−Ｃ８複素環から選択され；
Ｚは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−ＮＲ１２−であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１は−Ｈ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、−Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３は−Ｃ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４は−Ｈまたは−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；および
ｎは０〜６の範囲の整数である］
を有する薬物化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。
【０２３９】
１つの実施形態において、Ｒ３、Ｒ４およびＲ７は、独立して、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであって、Ｒ５は−Ｈである。例示的実施形態において、Ｒ３およびＲ４は各々イソプロピルであり、Ｒ５は−Ｈであって、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルである。
【０２４０】
もう１つの実施形態において、Ｒ２およびＲ６は各々メチルであって、Ｒ９は−Ｈである。
【０２４１】
なおもう１つの実施形態において、Ｒ８の各出現は−ＯＣＨ３である。
【０２４２】
例示的実施形態において、Ｒ３およびＲ４は各々イソプロピルであり、Ｒ２およびＲ６は各々メチルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ８の各出現は−ＯＣＨ３であって、Ｒ９は−Ｈである。
【０２４３】
１つの実施形態において、Ｚは−Ｏ−または−ＮＨ−である。
【０２４４】
１つの実施形態において、Ｒ１０はアリールである。
【０２４５】
例示的実施形態において、Ｒ１０は−フェニルである。
【０２４６】
例示的実施形態において、Ｚが−Ｏ−である場合、Ｒ１１は−Ｈ、メチルまたはｔ−ブチルである。
【０２４７】
１つの実施形態において、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで、Ｒ１５は−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であり、およびＲ１６は−Ｃ１−Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである。
【０２４８】
もう１つの実施形態において、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで、Ｒ１５は−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈである。
【０２４９】
その各々がＡＤＣにおける薬物部分（Ｄ）として用いることができる式（Ｉｂ）の例示的化合物は以下の構造：
【０２５０】
【化９９】
2011231131.tif 000019
【０２５１】
【化１００】
2011231131.tif 000020
【０２５２】
【化１０１】
2011231131.tif 000021
【０２５３】
【化１０２】
2011231131.tif 000022
を有する化合物、およびその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を含む。
【０２５４】
（式（Ｉｃ）の化合物）
もう１つの態様において、本発明は、１以上の薬物ユニット（部位）に共有結合した抗体を含む式Ｉｃ：
【０２５５】
【化１０３】
2011231131.tif 000023
を有する抗体−薬物結合体化合物（ＡＤＣ）を提供する。抗体−薬物結合体化合物はその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を含む。
【０２５６】
式Ｉｃ化合物は以下のように定義される：
Ａｂは１以上の腫瘍−関連抗原レセプター（１）〜（３５）に結合する抗体である：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質レセプター−タイプＩＢ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００１２０３）；
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１，ＳＬＣ７Ａ５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００３４８６）；
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１２４４９）；
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５，ＭＵＣ１６，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ３６１４８６）；
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ，ＭＳＬＮ，ＳＭＲ，巨核細胞増強因子，メソテリン、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００５８２３）；
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ，ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２，溶質キャリアーファミリー３４（リン酸ナトリウム），メンバー２，タイプＩＩナトリウム−依存性リン酸トランスポーター３ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００６４２４）；
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２，ＫＩＡＡ１４４５，Ｍｍ．４２０１５，ＳＥＭＡ５Ｂ，ＳＥＭＡＧ，セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ，ｓｅｍａドメイン，７回トロンボスポンジンリピート（タイプＩおよびタイプＩ−様）．膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン，（セマフォリン）５Ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＢ０４０８７８）；
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ，Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ３５８６２８）；
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンタイプＢレセプター，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２７５４６３）；
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４，仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１７７６３）；
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ ８６３９，ＩＰＣＡ−１，ＰＣＡＮＡＰ１，ＳＴＡＭＰ１，ＳＴＥＡＰ２，ＳＴＭＰ，前立腺癌関連遺伝子１，前立腺癌関連タンパク質１，前立腺２の６回膜貫通上皮抗原，６回膜貫通前立腺タンパク質，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ４５５１３８）；
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０，ＦＬＪ２００４１，ＴＲＰＭ４，ＴＲＰＭ４Ｂ，一過性レセプター潜在的カチオンチャネル，サブファミリーＭ，メンバー４，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１７６３６）；
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ，ＣＲ１，ＣＲＧＦ，ＣＲＩＰＴＯ，ＴＤＧＦ１，テラトカルシノーマ−由来成長因子，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００３２０３またはＮＭ ００３２１２）；
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体レセプター２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバールウイルスレセプター）またはＨｓ．７３７９２，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ２６００４）；
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ，ＣＤ７９β，ＩＧｂ（免疫グロブリン−関連β），Ｂ２９，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０００６２６）；  （１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４，ＩＲＴＡ４，ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ），ＳＰＡＰ１Ｂ，ＳＰＡＰ１Ｃ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０３０７６４）；
（１７）ＨＥＲ２（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１１７３０）；
（１８）ＮＣＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１８７２８）；
（１９）ＭＤＰ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＢＣ０１７０２３）；
（２０）ＩＬ２０Ｒα（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１８４９７１）；
（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ２２９０５３）；
（２２）Ｅｐｈｂ２Ｒ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００４４４２）；
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＸ０９２３２８）；
（２４）ＰＳＣＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＪ２９７４３６）；
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２６０７６３）；
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞−活性化因子レセプター、ＢＬｙＳレセプター３，ＢＲ３，ＮＰ ４４３１７７．１）；
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞レセプター  ＣＤ２２−Ｂイソ型，ＮＰ−００１７６２．１）；
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ，ＣＤ７９α，免疫グロブリン−関連α，Ｉｇβ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合相互作用し、かつＩｇＭ分子とで表面上に複合体を形成し、Ｂ−細胞分化に関与するシグナルを変換するＢ細胞−特異的タンパク質，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７７４．１）；
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫レセプター１，ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ球移動および液性防御で機能し、ＨＩＶ−２感染および、恐らくは、ＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫および白血病も発生において役割を演じるＧプロテイン−結合レセプター，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７０７．１）；
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合し、それらをＣＤ４＋Ｔリンパ球に提示するＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のβサブユニット，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００２１１１．１）；
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性レセプターＰ２Ｘリガンド型イオンチャネル５，細胞外ＡＴＰによってゲートが開閉されるイオンチャネルはシナプス伝達および神経形成に関与し得、欠陥は特発性排尿筋不安定の病態生理学に寄与し得る，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００２５５２．２）；
（３２）ＣＤ７２（Ｂ―細胞分化抗原ＣＤ７２，Ｌｙｂ−２、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７７３．１）；
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのタイプＩ膜タンパク質はＢ−細胞の活性化およびアポトーシスを調節し、機能の喪失は全身エリテマトーデスに罹った患者における増大した病気活性に関連する，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００５５７３．１）；
（３４）ＦＣＲＨ１（Ｆｃレセプター−様タンパク質１、Ｃ２タイプＩｇ−様およびＩＴＡＭドメインを含有する免疫グロブリンＦｃドメインに対する推定レセプターはＢ−リンパ球分化において役割を有するであろう，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ４４３１７０．１）；または
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連２、Ｂ細胞発生およびリンパ腫形成における可能な役割を持つ推定免疫レセプター；トラスローケーションによる遺伝子の脱調節はいくつかのＢ細胞悪性疾患で起こる，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ １１２５７１．１）。
【０２５７】
Ａはストレッチャー（Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）ユニットであり、
ａは０または１であり、
各Ｗは独立してアミノ酸ユニットであり、
ｗは０〜１２の範囲の整数であり、
Ｙはスペーサーユニットであり、および
ｙは０、１または２であり、
ｐは１〜約８の範囲であり、および
Ｄは式ＤＥおよびＤＦから選択される薬物部分であり；
【０２５８】
【化１０４】
2011231131.tif 000024
ここで、ＤＥおよびＤＦの波線はＡ、ＷまたはＹへの共有結合部位を示し、独立して、各一において：
Ｒ２はＨ、およびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５はＨおよびメチルから選択され；
あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環を形成し、かつ式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５および６から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリールまたはＣ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＮＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され；および
ｎは０〜６の範囲の整数である。
【０２５９】
１つの実施形態において、−Ｗｗ−は−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−である。
【０２６０】
もう１つの実施形態において、Ｒ３、Ｒ４およびＲ７は、独立して、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであって、Ｒ５は−Ｈである。例示的実施形態において、Ｒ３およびＲ４は各々イソプロピルであり、Ｒ５は−Ｈであって、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルである。
【０２６１】
さらにもう１つの実施形態において、Ｒ２およびＲ６は各々メチルであって、Ｒ９は−Ｈである。
【０２６２】
なおもう１つの実施形態においてＲ８の各出現は−ＯＣＨ３である。
【０２６３】
例示的実施形態において、Ｒ３およびＲ４は各々イソプロピルであり、Ｒ２およびＲ６は各々メチルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ８の各出現は−ＯＣＨ３であって、Ｒ９は−Ｈである。
【０２６４】
１つの実施形態において、Ｚは−Ｏ−または−ＮＨ−である。
【０２６５】
１つの実施形態において、Ｒ１０はアリールである。
【０２６６】
例示的実施形態において、Ｒ１０は−フェニルである。
【０２６７】
例示的実施形態において、Ｚが−Ｏ−である場合、Ｒ１１は−Ｈ、メチルまたはｔ−ブチルである。
【０２６８】
１つの実施形態において、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで、Ｒ１５は−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であり、およびＲ１６は−Ｃ１−Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである。
【０２６９】
もう１つの実施形態において、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで、Ｒ１５は−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈである。
【０２７０】
式Ｉｃ  ＡＤＣの例示的実施形態は以下の構造：
【０２７１】
【化１０５】
2011231131.tif 000025
［式中、Ａｂは１以上の腫瘍−関連抗原レセプター（１）〜（３５）に結合する抗体であり；Ｖａｌはバリンであり；Ｃｉｔはシトルリンである］
を有する。
【０２７２】
薬物負荷はｐ、式Ｉの分子中の抗体当たりの薬物の平均数によって表される。薬物負荷は抗体（ＡｂまたはｍＡｂ）当たり１〜２０薬物（Ｄ）の範囲であり得る。式ＩのＡＤＣの組成物は１〜２０のある範囲の薬物と結合体した抗体のコレクションを含む。結合体化反応からのＡＤＣの調製における抗体当たりの薬物の平均数は、ＵＶ／可視分光分析、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、およびＨＰＬＣのような慣用的手段によって特徴付けることができる。ｐの換算でのＡＤＣの定量的分布もまた決定することができる。いくつかの例において、ｐが他の薬物負荷でのＡＤＣからのある値である均一なＡＤＣの分離、精製および特徴付けは逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動のような手段によって達成することができる。
【０２７３】
いくつかの抗体薬物結合体では、ｐは抗体上の付着部位の数によって限定することができる。例えば、該付着がシステインチオールである場合、前記した例示的実施形態におけるように、抗体はただ１つまたは数個のシステインチオール基を有することができるか、あるいはそれを介してリンカーが結合することができるただ１つのまたは数個の十分に反応性のチオール基を有することができる。
【０２７４】
典型的には、薬物部分の理論的最大値よりも少数が結合体化反応の間に抗体に結合体化する。抗体は、例えば、薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応しない多くのリシン残基を含むことができる。最も反応性のリシン残基のみがアミン−反応性リンカー試薬と反応することができる。一般に、抗体は、もしあれば、薬物部分に連結させることができる多くの遊離かつ反応性のシステインチオール基を含有することができない。本発明の化合物の抗体中のほとんどのシステインチオール残基はジスルフィドブリッジとして存在し、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）のような還元剤で還元しなければならない。加えて、抗体は変性条件に付して、リシンまたはシステインのような反応性求核性基を明らかとしなければならない。ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比率）は：（ｉ）抗体に対するモル過剰の薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬の限定、（ｉｉ）結合体化反応時間または温度の限定、および（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分的または限定された還元条件を含めたいくつかの異なる方法で制御することができる。
【０２７５】
１を超える求核性基が薬物−リンカー中間体、リンカー試薬、続いて薬物部分試薬と反応する場合、得られる生成物は抗体に結合した１以上の薬物部分が分布したＡＤＣ化合物の混合物である。抗体当たりの薬物の平均数は、抗体に特異的であって、該薬物に特異的なデュアルＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から計算することができる。個々のＡＤＣ分子は質量分析によって混合物中で同定することができ、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって分離することができる（「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ３０  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ」，  Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ
ａｌ．，Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ：２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４；「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」，Ａｌｌｅｙ  Ｓ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．  ６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ
２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，  Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４）。かくして、単一の負荷値を持つ均一なＡＤＣは電気泳動またはクロマトグラフィーによって結合体化混合物から単離することができる。
【０２７６】
（４．３  リンカーユニット）
「リンカーユニット」（ＬＵ）は、薬物ユニットおよびリガンドユニットを連結させて薬物−リンカー−リガンド結合体を形成するのに用いることができるか、あるいは腫瘍関連抗原に対して向けられた免疫結合体の形成で有用な二官能性化合物である。そのような免疫結合体は毒性薬物の腫瘍細胞への選択的送達を可能とする。１つの実施形態において、薬物−リンカー化合物および薬物−リンカー−リガンド結合体のリンカーユニットは式：
【０２７７】
【化１０６】
2011231131.tif 000026
［式中：
−Ａ−はストレッチャー（Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）ユニットであり；
ａは０または１であり；
各−Ｗ−は独立してアミノ酸ユニットであり；
ｗは独立して０〜１２の範囲の整数であり；
−Ｙ−はスペーサーユニットであり；および
ｙは０、１または２である］
を有する。
【０２７８】
薬物−リンカー−リガンド結合体において、該リンカーは薬物部分およびリガンドユニットを連結することができる。
【０２７９】
（４．３．１  ストレッチャー（Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）ユニット）
ストレッチャーユニット（−Ａ−）は、存在する場合、リガンドユニットをアミノ酸ユニット（−Ｗ−）に連結することができる。この点において、リガンド（Ｌ）はストレッチャーの官能基とで結合を形成することができる官能基を有する。天然で、または化学的操作を介してリガンド上に存在させることができる有用な官能基は、限定されるものではないが、スルフヒドリル（−ＳＨ）、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシ、炭化水素のアノマーヒドロキシル基、およびカルボキシルを含む。１つの態様において、リガンド官能基はスルフヒドリルおよびアミノである。スルフヒドリル基はリガンドの分子内ジスルフィド結合の還元によって生じさせることができる。別法として、スルフヒドリル基は、２−イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）またはもう１つのスルフヒドリル生成試薬を用いる、リガンドのリシン部位のアミノ基の反応によって生じさせることができる。
【０２８０】
１つの実施形態において、ストレッチャーユニットはリガンドユニットの硫黄原子との結合を形成する。硫黄原子はリガンドのスルフヒドリル基から由来することができる。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは式ＩＩＩａおよびＩＩＩｂの四角ブラケット内に描かれ、ここで、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは前記定義の通りであり、Ｒ１７は−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−、および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−から選択され；およびｒは１〜１０の範囲の整数である。ＩＩＩ−ＶＩのような式Ｉａの全ての例示的実施形態から、明示的に示されていなくても、１〜２０の薬物部分がリガンドに連結される（ｐ＝１〜２０）。
【０２８１】
【化１０７】
2011231131.tif 000027
例示的なストレッチャーユニットは、Ｒ１７が−（ＣＨ２）５−である式ＩＩＩａのものである：
【０２８２】
【化１０８】
2011231131.tif 000028
もう１つの例示的ストレッチャーユニットは、Ｒ１７が−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−であって；およびｒが２である式ＩＩＩａのそれである：
【０２８３】
【化１０９】
2011231131.tif 000029
なおもう１つの例示的ストレッチャーユニットは、Ｒ１７が−（ＣＨ２）５−である式ＩＩＩｂのそれである：
【０２８４】
【化１１０】
2011231131.tif 000030
もう１つの実施形態において、ストレッチャーユニットは、リガンドユニットの硫黄原子およびストレッチャーユニットの硫黄原子の間のジスルフィド結合を介してリガンドユニットに連結される。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは式ＩＶの四角ブラケット内に描かれ、ここで、Ｒ１７、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは前記定義の通りである。
【０２８５】
【化１１１】
2011231131.tif 000031
さらにもう１つの実施形態において、ストレッチャーの反応性基はリガンドの第一級または第二級アミノ基とで結合形成できる反応性部位を含有する。これらの反応性部位の例は、限定されるものではないが、スクシンイミドエステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、アンヒドライド、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネートおよびイソチオシアネートのような活性化されたエステルを含む。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは式ＶａおよびＶｂの四角ブラケット内に描かれ、ここで、−Ｒ１７−、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは前記定義の通りである；
【０２８６】
【化１１２】
2011231131.tif 000032
さらにもう１つの態様において、ストレッチャーの反応性基は、リガンド上に存在することができる修飾された炭水化物の（−ＣＨＯ）基に対して反応性である反応性部位を含む。例えば、炭水化物は過ヨウ素酸ナトリウムのような試薬を用いて穏和に酸化することができ、酸化された炭水化物の得られた（−ＣＨＯ）ユニットは、ヒドラジド、オキシム、第一級または第二級アミン、ヒドラジン、チオセニカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびＫａｎｅｋｏ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  ２：１３３−４１によって記載されたもののようなアリールヒドラジドのような官能性を含むストレッチャーと縮合させることができる。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは式ＶＩａ、ＶＩｂおよびＶＩｃの四角ブラケット内に描かれ、ここで、−Ｒ１７−、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは前記定義の通りである。
【０２８７】
【化１１３】
2011231131.tif 000033
【０２８８】
【化１１４】
2011231131.tif 000034
（４．３．２  アミノ酸ユニット）
アミノ酸ユニット（−Ｗ−）は、存在する場合、もしスペーサーユニットが存在すればストレッチャーユニットをスペーサーユニットに連結させ、もしスペーサーユニットが不存在であれば、スペーサーユニットを薬物部分に連結させ、もしストレッチャーユニットおよびスペーサーユニットが不存在であれば、リガンドユニットを薬物にユニットに連結させる。
【０２８９】
Ｗｗ−はジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、へプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチドまたはドデカペプチドユニットである。各−Ｗ−ユニットは独立して四角ブラケット中の以下に示す式を有し、およびｗは０〜１２の範囲の整数であり：
【０２９０】
【化１１５】
2011231131.tif 000035
［式中、Ｒ１９は水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ２、２−ピリジルメチル、３−ピリジルメチル−、４−ピリジルメチル−、フェニル、シクロヘキシル、  
【０２９１】
【化１１６】
2011231131.tif 000036
である］。
【０２９２】
アミノ酸ユニットは腫瘍−関連プロテアーゼを含めた１以上の酵素によって酵素的に切断して、薬物ユニット（−Ｄ）を遊離させることができ、これは、１つの実施形態において、インビボで放出に際してプロトン化されて薬物（Ｄ）を供する。例示的なＷｗユニットは式（ＶＩＩ）−（ＩＸ）：
【０２９３】
【化１１７】
2011231131.tif 000037
［式中、Ｒ２０およびＲ２１は以下の通りである：
【０２９４】
【化１１８】
2011231131.tif 000038
【０２９５】
【化１１９】
2011231131.tif 000039
［式中、Ｒ２０、Ｒ２１およびＲ２２は以下の通りである：
【０２９６】
【化１２０】
2011231131.tif 000040
［式中、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２およびＲ２３以下の通りである：
【０２９７】
【化１２１】
2011231131.tif 000041
。
【０２９８】
例示的なアミノ酸ユニットは、限定されるものではないが、Ｒ２０がベンジルであって、Ｒ２１が−（ＣＨ２）４ＮＨ２である；Ｒ２０がイソプロピルであって、Ｒ２１が−（ＣＨ２）４ＮＨ２である；Ｒ２０がイソプロピルであって、Ｒ２１が−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２である式（ＶＩＩ）のユニットを含む。もう１つの例示的アミノ酸ユニットは、Ｒ２０がベンジルであり、Ｒ２１がベンジルであって、Ｒ２２が−（ＣＨ２）４ＮＨ２である式（ＶＩＩＩ）のユニットである。
【０２９９】
有用な−Ｗｗ−ユニットを設計することができ、特定の酵素、例えば、腫瘍−関連プロテアーゼによる酵素切断につきそれらの選択性を最適化することができる。１つの実施形態において、−Ｗｗ−ユニットは、その切断がカテプシンＢ、ＣおよびＤ、またはプラスミンプロテアーゼによって触媒されるものである。
【０３００】
１つの実施形態において、−Ｗｗ−はジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドである。
【０３０１】
Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２またはＲ２３が水素以外である場合、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２またはＲ２３が結合される炭素原子はキラルである。
【０３０２】
Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２またはＲ２３が結合する各炭素原子は、独立して、（Ｓ）または（Ｒ）立体配置におけるものである。
【０３０３】
アミノ酸ユニットの１つの態様において、アミノ酸ユニットはバリン−シトルリンである。もう１つの態様において、アミノ酸ユニットはフェニルアラニン−リシン（すなわち、ｆｋ）である。アミノ酸ユニットのさらにもう１つの態様において、アミノ酸ユニットはＮ−メチルバリン−シトルリンである。さらにもう１つの態様において、アミノ酸ユニットは５−アミノ吉草酸、ホモフェニルアラニンリシン、テトライソキノリンカルボキシレートリシン、シクロヘキシルアラニンリシン、イソネペコチン酸リシン、β−アラニンリシン、グリシンセリンバリングルタミン酸およびイソネペコチン酸である。
【０３０４】
ある実施形態において、アミノ酸ユニットは天然アミノ酸を含むことができる。他の実施形態において、アミノ酸ユニットは非−天然アミノ酸を含むことができる。
【０３０５】
（４．３．３  スペーサーユニット）
スペーサーユニット（−Ｙ−）は、存在する場合、アミノ酸ユニットが存在するときにはアミノ酸ユニットを薬物部分に連結させる。別法として、スペーサーユニットは、アミノ酸ユニットが不存在の場合には、ストレッチャーユニットを薬物ユニットに連結させる。スペーサーユニットもまた、アミノ酸ユニットおよびストレッチャーユニット双方が不存在の場合には、薬物部分をリガンドユニットに連結させる。
【０３０６】
スペーサーユニットは２つの一般的タイプ：自己−犠牲的および非自己−犠牲的のものである。非自己−犠牲的スペーサーユニットは、スペーサーユニットの一部または全てが、薬物−リンカー−リガンド結合体または薬物−リンカー化合物からのアミノ酸の、特に酵素的な切断後に薬物部分に結合したままであるものである。非自己−犠牲的スペーサーユニットの場合は、限定されるものではないが、（グリシン−グリシン）スペーサーユニットおよびグリシンスペーサーユニット（共にスキーム１に示す）（後記）を含む。グリシン−グリシンユニットまたはグリシンスペーサーユニットを含有する例示的化合物が腫瘍−細胞関連−プロテアーゼ、癌−細胞−関連プロテアーゼまたはリンパ球−関連プロテアーゼを介する酵素切断を受ける場合、グリシン−グリシン−薬物部分またはグリシン−薬物部分はＬ−Ａａ−Ｗｗ−から切断される。１つの実施形態において、独立した加水分解反応が標的細胞内で起こり、グリシン−薬物部分結合を切断し、薬物を遊離させる。
【０３０７】
もう１つの実施形態において、−Ｙｙ−は、そのフェニレン部分が、Ｑが−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであって；ｍが０〜４の範囲の整数であるＱｍで置き換えられたｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）ユニット（スキーム２および３参照）である。
【０３０８】
（スキーム１）
【０３０９】
【化１２２】
2011231131.tif 000042
１つの実施形態において、非自己−犠牲的スペーサーユニット（−Ｙ−）が−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−である。もう１つの実施形態において、非自己−犠牲的スペーサーユニット（−Ｙ−）は−Ｇｌｙ−である。
【０３１０】
１つの実施形態において、スペーサーユニットが存在しない（ｙ＝０）、薬物−リンカー化合物または薬物−リンカーリガンド結合体、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物が提供される。
【０３１１】
別法として、自己−犠牲的スペーサーユニットを含有する例示的化合物は別の加水分解工程に対する必要性無くして−Ｄを放出することができる。この実施形態において、−Ｙ−はＰＡＢ基のアミノ窒素原子を介して−Ｗｗ−に連結され、かつカルボネート、カルバメートまたは他の基を介して直接的に−Ｄに連結されたＰＡＢ基である。いずれかの特定の理論またはメカニズムに拘束されるつもりはないが、スキーム２は、Ｔｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｊ  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２によって支持されるカルバメートまたはカルボネート基を介して直接的に−Ｄに結合されたＰＡＢ基の薬物放出の可能なメカニズムを示す。
【０３１２】
（スキーム２）
【０３１３】
【化１２３】
2011231131.tif 000043
［式中、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは０〜４の範囲の整数であり；およびｐは１〜約２０の範囲である。］
いずれかの特定の理論またはメカニズムに拘束されるつもりはないが、スキーム３は、エーテルまたはアミン結合を介して直接的に−Ｄに結合したＰＡＢ基の薬物放出の可能なメカニズムを示す。
【０３１４】
（スキーム３）
【０３１５】
【化１２４】
2011231131.tif 000044
［式中、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは０〜４の範囲の整数であり；およびｐは１〜約２０の範囲である。］
自己−犠牲的スペーサーの他の例は、限定されるものではないが、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７）およびオルトまたはパラ−アミノベンジルアセタールのような、ＰＡＢ基に電子的に同様である芳香族化合物を含む。置換されたおよび置換されていない４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  １９９５，２，２２３）、適当に置換されたビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９７２，９４，５８１５）および２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９０，５５，５８６７）のような、アミド結合の加水分解に際して環化を受けるスペーサーを用いることができる。グリシンのａ−位置において置換されたアミン−含有薬物の脱離（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９８４，２７，１４４７）もまた例示的化合物で有用な自己−犠牲的スペーサーの例である。
【０３１６】
１つの実施形態において、スペーサーユニットはスキーム４に示された分岐ビス（ヒドロキシメチル）スチレン（ＢＨＭＳ）ユニットであり、これは、複数の薬物を取り込み、放出するのに用いることができる。
【０３１７】
（スキーム４）
【０３１８】
【化１２５】
2011231131.tif 000045
［式中、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは０〜４の範囲の整数であり；ｎは０または１であり；およびｐは１〜約２０の範囲である。］
もう１つの実施形態において、該−Ｄ部位は同一である。さらにもう１つの実施形態において、該−Ｄ部位は異なる。
【０３１９】
１つの態様において、スペーサーユニット（−Ｙｙ−）は式（Ｘ）〜（ＸＩＩ）：
【０３２０】
【化１２６】
2011231131.tif 000046
［式中、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；およびｍは０〜４の範囲の整数である］；
【０３２１】
【化１２７】
2011231131.tif 000047
によって表される。
【０３２２】
式Ｉａ’およびＩｃの抗体−薬物結合体化合物の例は：
【０３２３】
【化１２８】
2011231131.tif 000048
［式中、ｗおよびｙは各々０である］、
【０３２４】
【化１２９】
2011231131.tif 000049
【０３２５】
【化１３０】
2011231131.tif 000050
を含む。
【０３２６】
（４．４  薬物ユニット（部位））
抗体薬物結合体（ＡＤＣ）の薬物部分（Ｄ）は、微小管ダイナミックス、ＧＴＰ加水分解、および核および細胞分裂に干渉し（Ｗｏｙｋｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４５（１２）：３５８０−３５８４）、抗癌（米国特許第５６６３１４９号）および抗真菌活性（Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４２：２９６１−２９６５）を有することが示されているドラスタチン／オーリスタチンタイプのものである（米国特許第５６３５４８３号；第５７８０５８８号）。
【０３２７】
Ｄは、ｙ＝１または２である場合はスペーサーユニットとで、ｙ＝０である場合にはアミノ酸ユニットのＣ−末端カルボキシル基とで、ｗおよびｙ＝０の場合にはストレッチャーユニットのカルボキシル基とで、およびａ、ｗおよびｙ＝０の場合には薬物ユニットのカルボキシル基とで結合を形成することができる窒素原子を有する薬物ユニット（部位）である。用語「薬物ユニット」および「薬物部分」は同義であって、本明細書中においては相互交換的に用いることができることが理解されるべきである。
【０３２８】
１つの実施形態において、−Ｄは式ＤＥまたはＤＦいずれかである：
【０３２９】
【化１３１】
2011231131.tif 000051
［式中、独立して、各位置において：
Ｒ２はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５はＨおよびメチルから選択され；
あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環を形成し、かつ式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５および６から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリールまたはＣ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され；および
ｎは０〜６の範囲の整数である］
１つの実施形態において、Ｒ３、Ｒ４およびＲ７は、独立して、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであって、Ｒ５は−Ｈである。例示的な実施形態において、Ｒ３およびＲ４は各々イソプロピルであり、Ｒ５はＨであって、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルである。
【０３３０】
もう１つの実施形態において、Ｒ２およびＲ６は各々メチルであって、Ｒ９はＨである。
【０３３１】
なおもう１つの実施形態において、Ｒ８の各出現は−ＯＣＨ３である。
【０３３２】
例示的な実施形態において、Ｒ３およびＲ４は各々イソプロピルであり、Ｒ２およびＲ６は各々メチルであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ８の各出現は−ＯＣＨ３であって、Ｒ９はＨである。
【０３３３】
１つの実施形態において、Ｚは−Ｏ−または−ＮＨ−である。
【０３３４】
１つの実施形態において、Ｒ１０はアリールである。
【０３３５】
例示的実施形態において、Ｒ１０は−フェニルである。
【０３３６】
例示的な実施形態において、Ｚが−Ｏ−である場合、Ｒ１１はＨ、メチルまたはｔ−ブチルである。
【０３３７】
１つの実施形態において、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで、Ｒ１５は−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であって、Ｒ１６は−Ｃ１−Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである。
【０３３８】
もう１つの実施形態において、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで、Ｒ１５は−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈである。
【０３３９】
例示的な薬物ユニット（−Ｄ）は以下の構造を有する薬物ユニット：
【０３４０】
【化１３２】
2011231131.tif 000052
【０３４１】
【化１３３】
2011231131.tif 000053
【０３４２】
【化１３４】
2011231131.tif 000054
および
およびその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を含む。
【０３４３】
１つの態様において、限定されるものではないが、前記したトリエチレングリコールエステル（ＴＥＧ）のような親水性基をＲ１１において薬物ユニットに結合させることができる。理論に拘束されるつもりはないが、該親水性基は薬物ユニットの内部化および非−凝集を助ける。
【０３４４】
（４．５  リガンドユニット）
リガンドユニット（Ｌ−）は、その範囲内に、レセプター、抗原、または与えられた標的−細胞集団と会合した他の受容性部位と結合し、または反応的に会合し、またはそれと複合体化するリガンド（Ｌ）のいずれかのユニットを含む。リガンドは、治療的にまたはそうでなければ生物学的に修飾されることが求められる細胞集団の部位に結合し、または該部位と複合体化し、または反応する分子である。１つの態様において、リガンドユニットは、薬物を、リガンドユニットがそれと反応する特定の標的細胞集団へ送達するように作用する。そのようなリガンドは、限定されるものではないが、例えば、抗体、抗体フラグメント、より小さな分子量のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド、レクチン、糖タンパク質、非−ペプチド、ビタミン、（限定されるものではないが、トランスフェリンのような）栄養−輸送分子、またはいずれかの他の細胞結合分子または物質を含む。
【０３４５】
リガンドユニットは、ストレッチャーユニット、アミノ酸ユニット、スペーサーユニット、または薬物ユニットに対する結合を形成することができる。リガンドユニットは、リガンドのヘテロ原子を介してリンカーに対する結合を形成することができる。リガンドユニットに存在することができるヘテロ原子は、（１つの実施形態においては、リガンドのスルフヒドリル基からの）硫黄、（１つの実施形態においては、リガンドのカルボニル、カルボキシルまたはヒドロキシル基からの）酸素、および（１つの実施形態においては、リガンドの第一級または第二級アミノ基からの）窒素を含む。これらのヘテロ原子はリガンドの天然状態におけるリガンド、例えば、天然に生じる抗体に存在することができ、あるいは化学的修飾を介してリガンドに導入することができる。
【０３４６】
１つの実施形態において、リガンドはスルフヒドリル基を有し、該リガンドは、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してリンカーユニットに結合する。
【０３４７】
さらにもう１つの態様において、リガンドは、１以上のスルフヒドリル基を導入するように化学的に修飾することができる１以上のリシン残基を有する。リガンドユニットは、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してリンカーユニットに結合する。リシンを修飾するのに用いることができる試薬は、限定されるものではないが、Ｓ−アセチルチオ酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＡＴＡ）および２−イミノチオラン塩酸塩（Ｔｒａｕｔ試薬）を含む。
【０３４８】
もう１つの実施形態において、リガンドは、１以上のスルフヒドリル基を有するように化学的に修飾することができる１以上の炭水化物基を有することができる。リガンドユニットは、スルフヒドリル基の硫黄原子を介して、ストレッチャーユニットのようなリンカーユニットに結合することができる。
【０３４９】
さらにもう１つの実施形態において、リガンドは、アルデヒド（−ＣＨＯ）基を供するように酸化することができる１以上の炭水化物基を有することができる（例えば、Ｌａｇｕｚｚａ，ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９８９，３２（３），５４８−５５参照）。対応するアルデヒドは、ストレッチャー上の反応性部位とで結合を形成することができる。リガンド上のカルボニル基と反応することができるストレッチャー上の反応性部位は、限定されるものではないが、ヒドラジンおよびヒドロキシルアミンを含む。薬物ユニットの結合または会合のためのタンパク質の修飾用の他のプロトコルは、ここに引用して援用する、Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ｖｏｌ．２，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ
＆  Ｓｏｎｓ（２００２）に記載されている。
【０３５０】
有用な非−免疫反応性タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドリガンドは、限定されるものではないが、トランスフェリン、上皮成長因子（「ＥＧＦ」）、ボンベシン、ガストリン、ガストリン−放出ペプチド、血小板−由来成長因子、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−βのようなトランスフォーミング成長因子（「ＴＧＦ」）、ワクシニア成長因子（「ＶＧＦ」）、インスリンおよびインスリン−様成長因子ＩおよびＩＩ、レクチン、および低密度リポタンパク質からのアポプロテインを含む。
【０３５１】
有用なポリクローナル抗体は、免疫化動物の血清に由来する抗体分子の不均一な集団である。当該分野でよく知られた種々の手法を、注目する抗原に対するポリクローナル抗体の生産で用いることができる。例えば、ポリクローナル抗体の生産のために、限定されるものではないが、ウサギ、マウス、ラットおよびモルモットを含めた種々の宿主動物を、注目する抗原またはその誘導体での注射によって免疫化することができる。宿主種に応じて、限定されるものではないが、フロイントの（完全および不完全）アジュバント、水酸化アルミニウムのような鉱物ゲル、リソレシチンのような表面活性物質、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、キーホールリンペッドヘモシアニン、ジニトロフェノール、およびＢＣＧ（ｂａｃｉｌｌｅ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）およびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍのような潜在的に有用なヒトアジュバントを含めた種々のアジュバントを用いて、免疫学的応答を増加させることができる。そのようなアジュバントも当該分野でよく知られている。
【０３５２】
有用なモノクローナル抗体は、特定の抗原決定基（例えば、癌細胞抗原、ウイルス抗原、微生物抗原、タンパク質、ペプチド、炭水化物、化学物質、核酸またはそのフラグメント）に対する抗体の均一な集団である。注目する抗原に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、培養中の連続細胞系による抗体分子の生産を供する当該分野で知られたいずれかの技術を用いることによって調製することができる。これらは、限定されるものではないが、Ｋｏｅｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎによって元来記載されたハイブリドーマ技術（１９７５，  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６，４９５−４９７）、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２）、およびＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６）を含む。そのような抗体はＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡおよびＩｇＤを含めたいずれかの免疫グロブリンクラスおよびそのいずれかのサブクラスであってもよい。本発明で用いるｍＡｂを生産するハイブリドーマはインビトロまたはインビボで培養することができる。
【０３５３】
有用なモノクローナル抗体は、限定されるものではないが、ヒトモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、抗体フラグメント、またはキメラヒト−マウス（または他の種）モノクローナル抗体を含む。ヒトモノクローナル抗体は当該分野で知られた多数の技術のいずれによって作成することもできる（例えば、Ｔｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３，  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８０，７３０８−７３１２；Ｋｏｚｂｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４，７２−７９；およびＯｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８２，  Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２，３−１６）。
【０３５４】
抗体は二特異的抗体でもあり得る。二特異的抗体を作製する方法は当該分野で知られている。全長二特異的抗体の伝統的な生産は２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の共発現に基づき、そこでは、２つの鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７−５３９）。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな分類のため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、そのうち１つのみが正しい二特異的構造を有する１０の異なる抗体分子の潜在的混合物を生じる。同様な手法が国際公開番号ＷＯ  ９３／０８８２９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０３５５】
異なるアプローチに従い、所望の結合特異性を持つ抗体可変ドメイン（抗体−抗原組合せ部位）を免疫グロブリン定常ドメインの配列に融合させる。融合は、好ましくは、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２およびＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。融合の少なくとも１つに存在する、軽鎖結合に必要な部位を含有する第一の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有するのが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合をコードする配列を持つ核酸および、所望であれば、免疫グロブリン軽鎖は別々の発現ベクターに挿入され、適当な宿主生物に共−トランスフェクトされる。これは、構築で用いる３つのポリペプチド鎖の等しくない比率が最適な収率を供する場合の実施形態において、３つのポリペプチドフラグメントの相互割合を調整するにおいて大きな柔軟性を提供する。しかしながら、等しい比率の少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現の結果高い収率が得られる場合、または比率が特定の有意性のものでない場合、２つのまたは全ての３つのポリペプチド鎖についてのコーディング配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【０３５６】
このアプローチの実施形態において、二特異的抗体は、１つのアームにおける第一の結合特異性を持つハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他のアームにおける（第二の結合特異性を供する）ハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対を有する。この非対称構造は、望まない免疫グロブリン鎖組合せからの所望の二特異的化合物の分離を容易とする。というのは、二特異的分子の１つの半分のみ（ここに引用して援用する国際公開番号ＷＯ
９４／０４６９０）が分離の容易な方法を提供するからである。
【０３５７】
二特異的抗体を生じさせるためのさらなる詳細については、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１９８６，１２１：２１０；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３，Ｊ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５１：６９５４−６９６１；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，Ｊ．ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｔｈｅｒａｐｙ  ４：４６３−４７０；Ｍｅｒｃｈａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １６：６７７−６８１参照。そのような技術を用い、二特異的抗体を、本明細書中で定義した病気の治療または予防で用いるために調製することができる。
【０３５８】
二機能性抗体もまた欧州特許出願番号ＥＰＡ  ０  １０５  ３６０に記載されている。この文献で開示されるように、ハイブリッドまたは二機能的抗体は生物学的に、すなわち、細胞融合技術によって、または特に架橋剤またはジスルフィド−ブリッジ形成試薬にて化学的に誘導することができ、それは全抗体またはそのフラグメントを含むことができる。そのようなハイブリッド抗体を得るための方法は、例えば、共にここに引用して援用する国際公開ＷＯ  ８３／０３６７９および欧州特許公開番号ＥＰＡ  ０  ２１５  ５７７に開示されている。
【０３５９】
抗体は、癌細胞抗原、ウイルス抗原、または微生物抗原に免疫特異的に結合する抗体の機能的に活性なフラグメント、誘導体またはアナログ、または腫瘍細胞またはマトリックスに結合した他の抗体であり得る。この点に関し、「機能的に活性な」は、該フラグメント、誘導体またはアナログが、該フラグメント、誘導体またはアナログがそれから誘導された抗体が認識したのと同一の抗原を認識する抗−抗−イディオタイプ抗体を誘導することができることを意味する。具体的には、例示的な実施形態において、免疫グロブリン分子のイディオタイプの抗原性は、フレームワーク、および該抗原を特異的に認識するＣＤＲ配列に対してＣ−末端側にあるＣＤＲ配列の欠失によって増強させることができる。いずれのＣＤＲ配列が抗原に結合するかを決定するために、ＣＤＲ配列を含有する合成ペプチドを、当該分野で知られたいずれかの結合アッセイ方法によって抗原との結合アッセイで用いることができる（例えば、ＢＩＡコアアッセイ）（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  第１５版，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ；Ｋａｂａｔ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｊ．  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２５（３）：９６１−９６９参照）。
【０３６０】
他の有用な抗体は、限定されるものではないが、可変領域、軽鎖定常領域を含有するＦ（ａｂ’）２フラグメントのような抗体のフラグメントを含み、重鎖のＣＨ１ドメインは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィドブリッジを減少させることによって生じさせることができる、抗体分子およびＦａｂフラグメントのペプシン消化によって生じさせることができる。他の有用な抗体は抗体の重鎖および軽鎖ダイマー、または（例えば、米国特許第４９４６７７８号；Ｂｉｒｄ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；およびＷａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４−５４に記載された）Ｆｖｓまたは単一鎖抗体（ＳＣＡ）のようなそのいずれかの最小フラグメント、または抗体と同一の特異性を持ついずれかの他の分子である。
【０３６１】
加えて、標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて作製する、ヒトおよび非−ヒト部分双方を含むキメラおよびヒト化モノクローナル抗体のような組換え抗体は有用な抗体である。キメラ抗体は、ネズミモノクローナルおよびヒト免疫グロブリン定常領域に由来する可変領域を有するもののような、異なる部分が異なる動物種に由来する分子である（例えば、ここに引用してその全体を援用するＣａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，  米国特許第４８１６５６７号；およびＢｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，  米国特許第４，８１６３９７号参照）。ヒト化抗体は、非−ヒト種からの１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する非−ヒト種からの抗体分子である（例えば、ここに引用してその全体を援用するＱｕｅｅｎ，米国特許第５，５８５，０８９号参照）。そのようなキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、その各々をここに引用してその全体を援用する、例えば、国際公開番号ＷＯ  ８７／０２６７１；欧州特許出願番号１８４，１８７；欧州特許公開番号１７１４９６；欧州特許公開番号１７３４９４；国際公開番号ＷＯ  ８６／０１５３３；米国特許第４８１６５６７号；欧州特許公開番号１２，０２３；Ｂｅｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：３４３９−３４４３；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６；Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６−４４９；およびＳｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７；Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４；米国特許第５２２５５３９；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４；およびＢｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０に記載された方法を用いて、当該分野で知られた組換えＤＮＡ技術によって生産することができる。
【０３６２】
完全なヒト抗体は特に望ましく、内因性免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現できないが、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを用いて生産することができる。トランスジェニックマウスを選択された抗原、例えば、本発明のポリペプチドの全てまたは部分で通常の様式で免疫化する。該抗原に向けられたモノクローナル抗体は慣用的なハイブリドーマ技術を用いて得ることができる。トランスジェニックマウスによって保有されたヒト免疫グロブリン導入遺伝子はＢ細胞の分化の間に再変性され、引き続いて、クラススイッチングおよび体細胞突然変異を受ける。かくして、そのような技術を用い、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体を生産することが可能である。ヒト抗体を生産するためのこの技術の概観についてはＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ（１９９５，  Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３参照）。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を生産するためのこの技術、およびそのような抗体を生産するためのプロトコルの詳細な議論については、例えば、その各々をここに引用してその全体を援用する米国特許第５６２５１２６号；第５６３３４２５号；第５５６９８２５号；第５６６１０１６号；第５５４５８０６号参照。他のヒト抗体は、例えば、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）およびＧｅｎｐｈａｒｍ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，  ＣＡ）から商業的に入手することができる。
【０３６３】
選択されたエピトープを認識する完全にヒトの抗体は、「ガイドされた選択」といわれる技術を用いて生じさせることができる。このアプローチにおいては、選択された非−ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体を用いて、同一エピトープを認識する完全にヒトの抗体の選択をガイドする（Ｊｅｓｐｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．１９９４）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２：８９９−９０３）。また、ヒト抗体はファージディスプレイライブラリーを含めた当該分野で知られた種々の技術を用いて生産することもできる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）；Ｑｕａｎ，Ｍ．Ｐ．  ａｎｄ  Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．２００２．Ｔｈｅ  ｒｉｓｅ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．  Ｉｎ  Ａｎｔｉ−ＩｇＧ  ａｎｄ  Ａｌｌｅｒｇｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｊａｒｄｉｅｕ，Ｐ．Ｍ．ａｎｄ  Ｆｉｃｋ  Ｊｒ．，Ｒ．Ｂ編，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，２０章，ｐｐ．４２７−４６９）。
【０３６４】
他の実施形態において、抗体は抗体の融合タンパク質、またはその機能的に活性なフラグメントである、例えば、そこでは、抗体は共有結合（例えば、ペプチド結合）を介して、Ｎ−末端またはＣ−末端いずれかにおいて、抗体ではないもう１つのタンパク質のアミノ配列（好ましくはタンパク質の少なくとも１０、２０または５０アミノ酸部分における、その部分）に融合される。好ましくは、抗体またはそのフラグメントは定常ドメインのＮ−末端において他のタンパク質に共有結合連結される。
【０３６５】
抗体は、共有結合が抗体がその抗原結合免疫特異性を保持するのを可能とする限り、いずれかのタイプの分子の共有結合によって修飾されるアナログおよび誘導体を含む。例えば、限定されるものではないが、抗体の誘導体およびアナログは、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペジル化、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロッキング基により誘導体化、タンパク質分解切断、細胞抗体ユニットまたは他のタンパク質への連結などによって、さらに修飾されたものを含む。限定されるものではないが、特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化、スナカマイシンの存在下での代謝的合成を含めた多数の化学的修飾のいずれかを、公知の技術によって行うことができる。加えて、アナログまたは誘導体は１以上の非天然アミノ酸を含有することができる。
【０３６６】
抗体は、Ｆｃレセプターと相互作用するアミノ酸残基における修飾（例えば、置換、欠失または負荷）を有する抗体を含む。特に、抗体は、抗−ＦｃドメインおよびＦｃＲｎレセプターの間の相互作用に関与することが同定されたアミノ酸残基における修飾を有する抗体を含む（例えば、ここに引用してその全体を援用する国際公開番号ＷＯ  ９７／３４６３１参照）。癌細胞抗原に対して免疫特異的な抗体は、例えば、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）から商業的に入手することができるか、あるいは、例えば、化学合成または組換え発現技術のような当業者に知られたいずれかの方法によって生産することができる。癌細胞抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータバンクまたはそのようなデータバンク、文献刊行物から、またはルーチン的なクローニングおよび配列決定によって得ることができる。
【０３６７】
特異的な実施形態において、癌の治療または予防用の公知の抗体を用いることができる。癌細胞抗原に対して免疫特異的な抗体は商業的に入手することができるか、あるいは例えば組換え発現技術のような当業者に知られたいずれかの方法によって生産することができる。癌細胞抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースまたはそのようなデータベース、文献刊行物から、またはルーチン的なクローニングおよび配列決定によって得ることができる。癌の治療で入手可能な抗体の例は、限定されるものではないが、ヒト化抗−ＨＥＲ２モノクローナル抗体、転移性乳癌を持つ患者の治療のためのＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；非−ホジキンリンパ腫を持つ患者の治療のためのキメラ抗−ＣＤ２０モノクローナル抗体であるＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（リツキシマブ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；卵巣癌の治療のためのネズミ抗体であるＯｖａＲｅｘ（ＡｌｔａＲｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＭＡ）；結直腸癌の治療のためのネズミＩｇＧ２ａ抗体であるＰａｎｏｒｅｘ（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ，ＮＣ）；頭部および頸部癌のような、上皮成長因子陽性癌の治療のための抗−ＥＧＦＲ  ＩｇＧキメラ抗体であるＣｅｔｕｘｉｍａｂ  Ｅｒｂｉｔｕｘ（Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，ＮＹ）；肉腫の治療のためのヒト化抗体であるＶｉｔａｘｉｎ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．ＭＤ）；慢性リンパ系白血病（ＣＬＬ）の治療のためのヒト化ＩｇＧ１抗体であるＣａｍｐａｔｈ  Ｉ／Ｈ（Ｌｅｕｋｏｓｉｔｅ，ＭＡ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療のためのヒト化抗−ＣＤ３３  ＩｇＧ抗体であるＳｍａｒｔ  ＭＩ９５（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；非−ホジキンリンパ腫の治療のためのヒト化抗−ＣＤ２２  ＩｇＧ抗体であるＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．，ＮＪ）；非−ホジキンリンパ腫の治療のためのヒト化抗−ＨＬＡ−ＤＲ抗体であるＳｍａｒｔ  ＩＤ１０（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；非−ホジキンリンパ腫の治療のための放射性標識ネズミ抗−ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体であるＯｎｃｏｌｙｍ（Ｔｅｃｈｎｉｃｌｏｎｅ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；ホジキン病または非−ホジキンリンパ腫の治療のためのヒト化抗−ＣＤ２  ｍＡｂであるＡｌｌｏｍｕｎｅ（ＢｉｏＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，ＣＡ）；肺および結直腸癌の治療のための抗−ＶＥＧＦヒト化抗体であるＡｖａｓｔｉｎ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；非−ホジキンリンパ腫の治療のための抗−ＣＤ２２抗体であるＥｐｒａｔｕｚａｍａｂ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．，ＮＪ  ａｎｄ  Ａｍｇｅｎ，ＣＡ）；および結直腸癌の治療のためのヒト化抗−ＣＥＡ抗体であるＣＥＡｃｉｄｅ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，ＮＪ）を含む。
【０３６８】
癌の治療で有用な他の抗体は、限定されるものではないが、以下の抗原に対する抗体を含む：ＣＡ１２５（卵巣）、ＣＡ１５−３（癌腫）、ＣＡ１９−９（癌腫）、Ｌ６（癌腫）、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ（癌腫）、Ｌｅｗｉｓ  Ｘ（癌腫）、αフェトプロテイン（癌腫）、ＣＡ２４２（結直腸）、胎盤アルカリ性ホスファターゼ（癌腫）、前立腺特異的抗原（前立腺）、前立腺酸ホスファターゼ（前立腺）、上皮成長因子（癌腫）、ＭＡＧＥ−１（癌腫）、ＭＡＧＥ−２（癌腫）、ＭＡＧＥ−３（癌腫）、ＭＡＧＥ−４（癌腫）、抗−トランスフェリンレセプター（癌腫）、ｐ９７（メラノーマ）、ＭＵＣ１−ＫＬＨ（乳癌）、ＣＥＡ（結直腸）、ｇｐ１００（メラノーマ）、ＭＡＲＴ１（メラノーマ）、ＰＳＡ（前立腺）、ＩＬ−２レセプター（Ｔ−細胞白血病およびリンパ腫）、ＣＤ２０（非−ホジキンリンパ腫）、ＣＤ５２（白血病）、ＣＤ３３（白血病）、ＣＤ２２（リンパ腫）、ヒト絨毛ゴナドトロピン（癌腫）、ＣＤ３８（多発性ミエローマ）、ＣＤ４０（リンパ腫）、ムチン（癌腫）、Ｐ２１（癌腫）、ＭＰＧ（メラノーマ）、およびＮｅｕ癌遺伝子産物（癌腫）。いくつかの特異的な有用な抗体は、限定されるものではないが、ＢＲ９６  ｍＡｂ（Ｔｒａｉｌ，Ｐ．Ａ．，  Ｗｉｌｌｎｅｒ，  Ｄ．，  Ｌａｓｃｈ，  Ｓ．Ｊ．，  Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ，  Ａ．Ｊ．，  Ｈｏｆｓｔｅａｄ，  Ｓ．Ｊ．，  Ｃａｓａｚｚａ，  Ａ．Ｍ．，  Ｆｉｒｅｓｔｏｎｅ，  Ｒ．Ａ．，  Ｈｅｌｌｓｔｒｏｅｍ，  Ｉ．，Ｈｅｌｌｓｔｒｏｅｍ，Ｋ．Ｅ．，「Ｃｕｒｅ  ｏｆ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ  ｂｙ  ＢＲ９６−Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９３，２６１，２１２−２１５）、ＢＲ６４（Ｔｒａｉｌ，ＰＡ，Ｗｉｌｌｎｅｒ，Ｄ，Ｋｎｉｐｅ，Ｊ．，  Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ，Ａ．Ｊ．，Ｌａｓｃｈ，Ｓ．Ｊ．，Ｚｏｅｃｋｌｅｒ，Ｍ．Ｅ．，Ｔｒａｉｌｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｄ．，Ｄｏｙｌｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｋｉｎｇ，Ｈ．Ｄ．，Ｃａｓａｚｚａ，Ａ．Ｍ．，Ｂｒａｓｌａｗｓｋｙ，Ｇ．Ｒ．，Ｂｒｏｗｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｈｏｆｓｔｅａｄ，Ｓ．Ｊ．，（Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｓ．，Ｆｉｒｅｓｔｏｎｅ，Ｒ．Ａ．，Ｍｏｓｕｒｅ，Ｋ．，Ｋａｄｏｗ，Ｄ．Ｆ．，Ｙａｎｇ，Ｍ．Ｂ．，Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｋ．Ｅ．，ａｎｄ  Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｌｉｎｋｅｒ  Ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，  Ｐｏｔｅｎｃｙ，  ａｎｄ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ＢＲ６４−Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９７，５７，１００−１０５，  Ｓ２Ｃ６  ｍＡｂのようなＣＤ４０抗原に対するｍＡｂ（Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，  Ｊ．Ａ．，Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ，Ｋ．Ｌ．，Ｃｈａｃｅ，Ｄ．Ｓｉｅｇａｌｌ，Ｃ．Ｂ．，ａｎｄ  Ｗａｈｌ，Ａ．Ｆ．「Ａｇｏｎｉｓｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ＣＤ−４０  ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＳＧＮ−１４」  Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．２０００，６０，３２２５−３２３１）、１Ｆ６  ｍＡｂおよび２Ｆ２  ｍＡｂのようなＣＤ７０抗原に対するｍＡｂ、およびＡＣ１０のようなＣＤ３０抗原に対するｍＡｂ（Ｂｏｗｅｎ，Ｍ．Ａ．，Ｏｌｓｅｎ，Ｋ．Ｊ．，Ｃｈｅｎｇ，Ｌ．，Ａｖｉｌａ，Ｄ．，ａｎｄ  Ｐｏｄａｃｋ，Ｅ．Ｒ．「Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＣＤ３０  ｏｎ  ａ  ｌａｒｇｅ  ｇｒａｎｕｌａｒ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ＹＴ」  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１，５８９６−５９０６，１９９３；Ｗａｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００２  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２（１３）：３７３６−４２）を含む。腫瘍関連抗原に結合する多くの他の内部化抗体を用いることができ、それらはレビューされている（Ｆｒａｎｋｅ，Ａ．Ｅ．，Ｓｉｅｖｅｒｓ，Ｅ．Ｌ．，ａｎｄ  Ｓｃｈｅｉｎｂｅｒｇ，  Ｄ．Ａ．，「Ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：ａ  ｒｅｖｉｅｗ」  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２０００，１５，４５９−７６；Ｍｕｒｒａｙ，Ｊ．Ｌ．，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ：ａ  ｃｏｍｉｎｇ  ｏｆ  ａｇｅ」  Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０００，２７，６４−７０；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ，Ｆ．，ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ．Ｓ．，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９８）。
【０３６９】
ある実施形態において、抗体はトラスツズマブ（全長，ヒト化抗−ＨＥＲ２（ＭＷ  １４５１６７））、ＨｅｒｃｅｐｔｉｎＦ（ａｂ’）２（酵素的に抗−ＨＥＲ２から誘導（ＭＷ  １０００００））、４Ｄ５（全長，ネズミ抗ＨＥＲ２ハイブリドーマから）、ｒｈｕ４Ｄ５（一過的に発現された全長ヒト化抗体）、ｒｈｕＦａｂ４Ｄ５（組換えヒト化Ｆａｂ（ＭＷ  ４７７３８））、４Ｄ５Ｆｃ８（全長，ネズミ抗ＨＥＲ２，突然変異したＦｃＲｎ結合ドメインを持つ）、またはＨｇ（「Ｈｉｎｇｅｌｅｓｓ」全長ヒト化４Ｄ５，セリンに突然変異した重鎖ヒンジシステインを持つ；Ｅ．ｃｏｌｉで発現（従って、非−グリコシル化））ではない。
【０３７０】
もう１つの特別な実施形態において、自己免疫疾患の治療または予防のための公知の抗体が本発明の組成物および方法に従って用いられる。自己免疫抗体を生産するのを担う細胞の抗原に対して免疫特異的な抗体はいずれかの組織（例えば、大学の科学者または会社）から得ることができるか、あるいは例えば、化学合成または組換え発現技術のような当業者に知られたいずれかの方法によって生産することができる。もう１つの実施形態において、有用な抗体は自己免疫疾患の治療で免疫特異的であり、限定されるものではないが、抗−核抗体；抗−ｄｓ  ＤＮＡ；抗−ｓｓ  ＤＮＡ、抗−カルジオリピン抗体  ＩｇＭ、ＩｇＧ；抗−リン脂質抗体ＩｇＭ、ＩｇＧ；抗−ＳＭ抗体；抗−ミトコンドリア抗体；甲状腺抗体；ミクロソーム抗体；チログロブリン抗体；抗−ＳＣＬ−７０；抗−Ｊｏ；抗−Ｕ１ＲＮＰ；抗−Ｌａ／ＳＳＢ；抗−ＳＳＡ；抗−ＳＳＢ；抗−ペリタル細胞抗体；抗−ヒストン；抗−ＲＮＰ；Ｃ−ＡＮＣＡ；Ｐ−ＡＮＣＡ；抗−動原体；抗−フィブリラリン、および抗−ＧＢＭ抗体を含む。
【０３７１】
ある実施形態において、有用な抗体は、活性化されたリンパ球で発現されるレセプターまたはレセプター複合体双方に結合することができる。該レセプターまたはレセプター複合体は免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーメンバー、ＴＮＦレセプタースーパーファミリーメンバー、インテグリン、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、主要組織適合性タンパク質、レシチン、または補体制御タンパク質を含むことができる。適当な免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーの非限定的例はＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ７９、ＣＤ９０、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１およびＩＣＯＳである。適当なＴＮＦレセプタースーパーファミリーメンバーの非限定的例はＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ９５／Ｆａｓ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＴＮＦ−Ｒ１、ＴＮＦＲ−２、ＲＡＮＫ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、オステオプロテゲリン、Ａｐｏ２／ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４およびＡＰＯ−３である。安定なインテグリンの非限定的例はＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＣＤ２９、ＣＤ４１、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ１０３およびＣＤ１０４である。適当なレクチンの非限定的例はＣ−タイプ、Ｓ−タイプおよびＩ−タイプのレクチンである。
【０３７２】
１つの実施形態において、リガンドは、自己免疫疾患に関連する活性化されたリンパ球に結合する。
【０３７３】
もう１つの特別な実施形態において、ウイルスまたは微生物抗原に対して免疫特異的な有用なリガンドはモノクローナル抗体である。抗体はキメラ、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体であり得る。本明細書中で用いるように、用語「ウイルス抗原」は、限定されるものではないが、免疫応答を誘導することができるいずれかのウイルスペプチド、ポリペプチドタンパク質（例えば、ＨＩＶ  ｇｐ１２０、ＨＩＶ  ｎｅｆ、ＲＳＶ  Ｆ糖タンパク質、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ、インフルエンザウイルスペマグルチミン、ＨＴＬＶタックス、単純疱疹ウイルス糖タンパク質（例えば、ｇＢ、ｇＣ、ｇＤおよびｇＥ）およびＢ型肝炎表面抗原）を含む。本明細書中で用いるように、用語「微生物抗原」は、限定されるものではないが、免疫応答を誘導することができるいずれかの微生物ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、糖、多糖または脂質分子（例えば、ＬＰＳおよび被膜多糖５／８を含めた細菌、真菌、病原性原生動物、または酵母ポリペプチド）を含む。
【０３７４】
ウイルスまたは微生物抗原に対して免疫特異的抗体は、例えば、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  （Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）、またはＶｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．（Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）から商業的に入手することができるか、あるいは例えば、化学合成または組換え発現技術のような当業者に知られたいずれかの方法によって生産することができる。ウイルスまたは微生物抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータバンクまたはそのようなデータバンク、文献刊行物から、またはルーチン的クローニングおよび配列決定によって得ることができる。
【０３７５】
特別な実施形態において、有用なリガンドは本明細書中で開示した方法に従ってウイルスまたは微生物感染の治療または予防で有用なものである。ウイルス感染または微生物感染の治療で有用な入手可能な抗体の例は、限定されるものではないが、ＲＳＶ感染を持つ患者の治療で有用なヒト化抗−呼吸器系シンシチウムウイルス（ＲＳＶ）モノクローナル抗体であるＳＹＮＡＧＩＳ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．，ＭＤ）；ＨＩＶ感染の治療で有用なＣＤ４融合抗体であるＰＲＯ５４２（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ）；Ｂ型肝炎ウイルスの治療で有用なヒト抗体であるＯＳＴＡＶＩＲ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の治療で有用なヒト化ＩｇＧ１抗体であるＰＲＯＴＯＶＩＲ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；および抗−ＬＰＳ抗体を含む。
【０３７６】
感染症の治療で有用な他の抗体は、限定されるものではないが、細菌の病原性株（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ，  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，  Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ，  Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ，  Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ，  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ，  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ，  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ，  Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ，  Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，  Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｏｚａｅｎａｓ，  ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｒｈｉｎｏｓｃｌｅｒｏｍｏｔｉｓ，  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ  ａｕｒｅｕｓ，  Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｏｌｅｒａｅ，  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，  Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  （Ｖｉｂｒｉｏ）  ｆｅｔｕｓ，  Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ，  Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ，  Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ  ｔａｒｄａ，  Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｌｉｔｉｃａ，  Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ，  Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，  Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ，  Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｆｌｅｘｎｅｒｉ，  Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｏｎｎｅｉ，  Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ，  Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ，  Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ，  Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｃａｒａｔｅｎｅｕｍ，  Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｖｉｎｃｅｎｔｉｉ，  Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ，  Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｉｃｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ，  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，  Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ，  Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ，  Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ，  Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ，  Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ，  Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｓｐｐ．，  Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｐｒｏｗａｚｅｋｉ，  Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｓｕｔｓｕｇｕｍｕｓｈｉ，  Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｓｐｐ．，）；病原性真菌（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ，  Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ，  Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ，  Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ，  Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ，  Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ
ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）；原生動物（Ｅｎｔｏｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ，
Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ，  Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｔｅｎａｓ，  Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｈｏｍｉｎｉｓ，  Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ，  Ｔｒｙｏａｎｏｓｏｍａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ，  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ，  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ，  Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ，  Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ，  Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ，  Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ，  Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ，  Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ，  Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａ）；または蠕虫（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ  ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ，  Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ，  Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ，  Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ，  Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ，  Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ，  Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ，  Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍおよび鉤虫）からの抗原に対する抗体を含む。
【０３７７】
ウイルス病の治療のための本発明で有用な他の抗体は、限定されるものではないが、その例として：ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、単純疱疹ウイルス１、単純疱疹ウイルス２、アデノウイルス、パポバウイルス、エンテロウイルス、ピコルナウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、レトロウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎、麻疹、呼吸器系シンチウムウイルス、風疹、アルボウイルス、ラブドウイルス、アレナウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、非−Ａ／非−Ｂ肝炎ウイルス、リノウイルス、コロナウイルス、ロトウイルス、およびヒト免疫不全ウイルスを含めた病原性ウイルスの抗原に対する抗体を含む。
【０３７８】
癌の診断および治療のための効果的な細胞標的を発見する試みにおいて、研究者は、１以上の正常な非−癌性細胞上と比較して、癌細胞の１以上の特別なタイプの表面に特異的に発現される膜貫通またはそうでなければ腫瘍−関連ポリペプチドを同定しようとした。しばしば、そのような腫瘍−関連ポリペプチドは、非−癌性細胞の表面上と比較して、癌細胞の表面により豊富に発現される。そのような腫瘍−関連細胞表面抗原ポリペプチドの同定は、抗体−ベースの療法を介して破壊のために標的癌細胞に特異的に結合する能力を生起させた。
【０３７９】
式Ｉｃ抗体薬物結合体（ＡＤＣ）におけるＡｂを含み、癌の治療で有用であり得る抗体は、限定されるものではないが、腫瘍−関連抗原（ＴＡＡ）に対する抗体を含む。そのような腫瘍−関連抗原は当該分野で知られており、当該分野でよく知られた方法および情報を用いて抗体を生じさせるのに用いるために調製することができる。ＴＡＡの例は（１）〜（３５）を含むが、以下にリストするＴＡＡ（１）〜（３５）に限定されない。便宜のために、その全てが当該分野で知られているこれらの抗原に関連する情報を以下にリストし、それは名称、別名Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号および主な文献を含む。抗体によって標的化された腫瘍−関連抗原は、リストされた対応する配列（配列番号：１〜３５）で同定された配列または引用された文献で同定された配列に対して少なくとも約７０％、８０％、８５％、９０％または９５％配列同一性を保有する全てのアミノ酸配列変種およびイソ型を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸配列変種を有するＴＡＡは、対応するリストした配列（配列番号：１〜３５）で見出された配列を有するＴＡＡと実質的に同一の生物学的特性または特徴を呈する。例えば、変種配列を有するＴＡＡは、一般には、対応するリストした配列を持つＴＡＡに特異的に結合する抗体に対して特異的に結合できる。該配列および開示は、ここに明示的に引用して特に一体化させる。
【０３８０】
（腫瘍−関連抗原（１）〜（３５））
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質レセプター−タイプＩＢ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００１２０３，ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４（５１５５）：１０１−１０４（１９９４），Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １４（１１）：１３７７−１３８２（１９９７））；ＷＯ２００４０６３３６２（クレーム２）；ＷＯ２００３０４２６６１（クレーム１２）；ＵＳ２００３１３４７９０−Ａ１（頁３８−２９）；ＷＯ２００２１０２２３５（クレーム１３；頁２９６）；ＷＯ２００３０５５４４３（頁９１−９２）；ＷＯ２００２９９１２２（実施例２；頁５２８−５３０）；ＷＯ２００３０２９４２１（クレーム６）；ＷＯ２００３０２４３９２（クレーム２；図１１２）；ＷＯ２００２９８３５８（クレーム１；頁１８３）；ＷＯ２００２５４９４０（頁１００−１０１）；ＷＯ２００２５９３７７（頁３４９−３５０）；ＷＯ２００２３０２６８（クレーム２７；頁３７６）；ＷＯ２００１４８２０４（実施例；図４）  ＮＰ ００１１９４  骨形態形成タンパク質レセプター、タイプＩＢ／ｐｉｄ＝ＮＰ
００１１９４．１−相互参照：ＭＩＭ：６０３２４８；ＮＰ ００１１９４．１；ＮＭ
００１２０３ １
５０２ａａ
【０３８１】
【化１３５】
2011231131.tif 000055
（配列番号：１）
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１，ＳＬＣ７Ａ５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００３４８６）；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５５（２），２８３−２８８（１９９９），Ｎａｔｕｒｅ  ３９５（６６９９）：２８８−２９１（１９９８），Ｇａｕｇｉｔｓｃｈ，Ｈ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（１６）：１１２６７−１１２７３）；ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）；ＷＯ２００４０３２８４２（実施例ＩＶ）；ＷＯ２００３０４２６６１（クレーム１２）；ＷＯ２００３０１６４７５（クレーム１）；ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）；ＷＯ２００２９９０７４（クレーム１９；頁１２７−１２９）；ＷＯ２００２８６４４３（クレーム２７；頁２２２，３９３）；ＷＯ２００３００３９０６（クレーム１０；頁２９３）；ＷＯ２００２６４７９８（クレーム３３；頁９３−９５）；ＷＯ２０００１４２２８（クレーム５；頁１３３−１３６）；ＵＳ２００３２２４４５４（図３）；ＷＯ２００３０２５１３８（クレーム１２；頁１５０）；ＮＰ ００３４７７溶質キャリアーファミリー７（カチオン性アミノ酸トランスポーター，ｙ＋システム），メンバー５／ｐｉｄ＝ＮＰ ００３４７７．３−Ｈｏｍｏｓａｐｉｅｎｓ
相互参照：ＭＩＭ：６００１８２；ＮＰ ００３４７７．３；ＮＭ ０１５９２３；ＮＭ
００３４８６ １
５０７ａａ
【０３８２】
【化１３６】
2011231131.tif 000056
（配列番号：２）
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１２４４９
Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１（１５），５８５７−５８６０（２００１），Ｈｕｂｅｒｔ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９６（２５）：１４５２３−１４５２８）；ＷＯ２００４０６５５７７（クレーム６）；ＷＯ２００４０２７０４９（図１Ｌ）；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；ＷＯ２００４０１６２２５（クレーム２）；ＷＯ２００３０４２６６１（クレーム１２）；ＵＳ２００３１５７０８９（実施例５）；ＵＳ２００３１８５８３０（実施例５）；ＵＳ２００３０６４３９７（図２）；ＷＯ２００２８９７４７（実施例５；頁６１８−６１９）；ＷＯ２００３０２２９９５（実施例９；図１３Ａ，実施例５３；頁１７３，実施例２；図２Ａ）；
ＮＰ ０３６５８１  前立腺の６回膜貫通上皮抗原
相互参照：ＭＩＭ：６０４４１５；ＮＰ ０３６５８１．１；ＮＭ ０１２４４９ １
３３９ａａ
【０３８３】
【化１３７】
2011231131.tif 000057
（配列番号：３）
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５，ＭＵＣ１６，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ３６１４８６
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２９）；２７３７１−２７３７５（２００１））；ＷＯ２００４０４５５５３（クレーム１４）；ＷＯ２００２９２８３６（クレーム６；図１２）；ＷＯ２００２８３８６６（クレーム１５；頁１１６−１２１）；ＵＳ２００３１２４１４０（実施例１６）；ＵＳ２００３０９１５８０（クレーム６）；ＷＯ２００２０６３１７（クレーム６；頁４００−４０８）；
相互参照：ＧＩ：３４５０１６４７；ＡＡＫ７４１２０．３；ＡＦ３６１４８６ １
６９９５ａａ
【０３８４】
【化１３８】
2011231131.tif 000058
【０３８５】
【化１３９】
2011231131.tif 000059
【０３８６】
【化１４０】
2011231131.tif 000060
【０３８７】
【化１４１】
2011231131.tif 000061
（配列番号：４）
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ，ＭＳＬＮ，ＳＭＲ，巨核細胞増強因子，メソテリン，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００５８２３
Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，  Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２），８０５−８０８（１９９４），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９６（２０）：１１５３１−１１５３６（１９９９），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９３（１）：１３６−１４０（１９９６），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（３７）：２１９８４−２１９９０（１９９５））；ＷＯ２００３１０１２８３（クレーム１４）；ＷＯ２００２１０２２３５（クレーム１３；頁２８７−２８８）；ＷＯ２００２１０１０７５（クレーム４；頁３０８−３０９）；ＷＯ２００２７１９２８（頁３２０−３２１）；ＷＯ９４１０３１２（頁５２−５７）；
相互参照ＭＩＭ：６０１０５１；ＮＰ ００５８１４．２；ＮＭ ００５８２３ １
６２２ａａ
【０３８８】
【化１４２】
2011231131.tif 000062
（配列番号：５）
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ，ＮＰＴＩＩｂ，ＳＬＣ３４Ａ２，溶質キャリアーファミリー３４（リン酸ナトリウム），メンバー２，タイプＩＩナトリウム−依存性リン酸トランスポーター３ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００６４２４
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（２２）：１９６６５−１９６７２（２００２），Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ６２（２）：２８１−２８４（１９９９），Ｆｅｉｌｄ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５８（３）：５７８−５８２）；ＷＯ２００４０２２７７８（クレーム２）；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；ＷＯ２００２１０２２３５（クレーム１３；頁３２６）；ＥＰ８７５５６９（クレーム６；頁１７−１９）；ＷＯ２００１５７１８８（クレーム２０；頁３２９）；ＷＯ２００４０３２８４２（実施例ＩＶ）；ＷＯ２００１７５１７７（クレーム２４；頁１３９−１４０）；
相互参照：ＭＩＭ：６０４２１７；ＮＰ ００６４１５．１；ＮＭ ００６４２４ １
６９０ａａ
【０３８９】
【化１４３】
2011231131.tif 000063
（配列番号：６）
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２，ＫＩＡＡ１４４５，Ｍｍ．４２０１５，ＳＥＭＡ５Ｂ，ＳＥＭＡＧ，Ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎ  ５ｂ  Ｈｌｏｇ，ｓｅｍａドメイン，７回トロンボスポンジンリピート（タイプ１およびタイプ１−様），膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン，（セマフォリン）５Ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＢ０４０８７８，
Ｎａｇａｓｅ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．（２０００）ＤＮＡ  Ｒｅｓ．７（２）：１４３−１５０）；ＷＯ２００４０００９９７（クレーム１）；ＷＯ２００３００３９８４（クレーム１）；ＷＯ２００２０６３３９（クレーム１；頁５０）；ＷＯ２００１８８１３３（クレーム１；頁４１−４３，４８−５８）；ＷＯ２００３０５４１５２（クレーム２０）；ＷＯ２００３１０１４００（クレーム１１）；受託：Ｑ９Ｐ２８３；ＥＭＢＬ；ＡＢ０４０８７８；ＢＡＡ９５９６９．１．Ｇｅｎｅｗ；ＨＧＮＣ：１０７３７；
１０９３ａａ
【０３９０】
【化１４４】
2011231131.tif 000064
【０３９１】
【化１４５】
2011231131.tif 000065
（配列番号：７）
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ，Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ３５８６２８）；
ＵＳ２００３１２９１９２（クレーム２）；ＵＳ２００４０４４１８０（クレーム１２）；ＵＳ２００４０４４１７９（クレーム１１）；ＵＳ２００３０９６９６１（クレーム１１）；ＵＳ２００３２３２０５６（実施例５）；ＷＯ２００３１０５７５８（クレーム１２）；ＵＳ２００３２０６９１８（実施例５）；ＥＰ１３４７０４６（クレーム１）；ＷＯ２００３０２５１４８（クレーム２０）；
相互参照：ＧＩ：３７１８２３７８；ＡＡＱ８８９９１．１；ＡＹ３５８６２８ １
１４１ａａ
【０３９２】
【化１４６】
2011231131.tif 000066
（配列番号：８）
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンタイプＢレセプター，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２７５４６３）；
Ｎａｋａｍｕｔａ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７，３４−３９，１９９１；Ｏｇａｗａ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，２４８−２５５，１９９１；Ａｒａｉ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊｐｎ．Ｃｉｒｃ．Ｊ．５６，１３０３−１３０７，１９９２；Ａｒａｉ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３４６３−３４７０，１９９３；Ｓａｋａｍｏｔｏ  Ａ．，Ｙａｎａｇｉｓａｗａ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，６５６−６６３，１９９１；Ｅｌｓｈｏｕｒｂａｇｙ  Ｎ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３８７３−３８７９，１９９３；Ｈａｅｎｄｌｅｒ  Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０，ｓ１−Ｓ４，１９９２；Ｔｓｕｔｓｕｍｉ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  ２２８，４３−４９，１９９９；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２；Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ  Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８２，３１１６−３１２３，１９９７；Ｏｋａｍｏｔｏ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２１５８９−２１５９６，１９９７；Ｖｅｒｈｅｉｊ  Ｊ．Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．１０８，２２３−２２５，２００２；Ｈｏｆｓｔｒａ  Ｒ．Ｍ．Ｗ．，  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．５，１８０−１８５，１９９７；Ｐｕｆｆｅｎｂｅｒｇｅｒ  Ｅ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ７９，１２５７−１２６６，１９９４；Ａｔｔｉｅ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．４，２４０７−２４０９，１９９５；Ａｕｒｉｃｃｈｉｏ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５：３５１−３５４，１９９６；Ａｍｉｅｌ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５，３５５−３５７，１９９６；Ｈｏｆｓｔｒａ  Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１２，４４５−４４７，１９９６；Ｓｖｅｎｓｓｏｎ  Ｐ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０３，１４５−１４８，１９９８；Ｆｕｃｈｓ  Ｓ．，ｅｔ
ａｌ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７，１１５−１２４，２００１；Ｐｉｎｇａｕｌｔ  Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１１１，１９８−２０６；ＷＯ２００４０４５５１６（クレーム１）；ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）；ＷＯ２００４０４００００（クレーム１５１）；ＷＯ２００３０８７７６８（クレーム１）；ＷＯ２００３０１６４７５（クレーム１）；ＷＯ２００３０１６４７５（クレーム１）；ＷＯ２００２６１０８７（図１）；ＷＯ２００３０１６４９４（図６）；ＷＯ２００３０２５１３８（クレーム１２；頁１４４）；ＷＯ２００１９８３５１（クレーム１；頁１２４−１２５）；ＥＰ５２２８６８（クレーム８；図２）；ＷＯ２００１７７１７２（クレーム１；頁２９７−２９９）；ＵＳ２００３１０９６７６；ＵＳ６５１８４０４（図３）；ＵＳ５７７３２２３（クレーム１ａ；３１−３４欄）；ＷＯ２００４００１００４；
４４２ａａ
【０３９３】
【化１４７】
2011231131.tif 000067
（配列番号：９）
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４，仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１７７６３）；
ＷＯ２００３１０４２７５（クレーム１）；ＷＯ２００４０４６３４２（実施例２）；ＷＯ２００３０４２６６１（クレーム１２）；ＷＯ２００３０８３０７４（クレーム１４；頁６１）；ＷＯ２００３０１８６２１（クレーム１）；ＷＯ２００３０２４３９２（クレーム２；図９３）；ＷＯ２００１６６６８９（実施例６）；
相互参照：ＬｏｃｕｓＩＤ：５４８９４；ＮＰ ０６０２３３．２；  ＮＭ ０１７７６３ １
７８３ａａ
【０３９４】
【化１４８】
2011231131.tif 000068
（配列番号：１０）
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ ８６３９，ＩＰＣＡ−１，ＰＣＡＮＡＰ１，ＳＴＡＭＰ１，ＳＴＥＡＰ２，ＳＴＭＰ，前立腺癌関連遺伝子１，前立腺癌関連タンパク質１、前立腺２の６回膜貫通上皮抗原，６回膜貫通前立腺タンパク質，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ４５５１３８，
Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．８２（１１）：１５７３−１５８２（２００２））；ＷＯ２００３０８７３０６；ＵＳ２００３０６４３９７（クレーム１；図１）；ＷＯ２００２７２５９６（クレーム１３；頁５４−５５）；ＷＯ２００１７２９６２（クレーム１；図４Ｂ）；ＷＯ２００３１０４２７０（クレーム１１）；ＷＯ２００３１０４２７０（クレーム１６）；ＵＳ２００４００５５９８（クレーム２２）；ＷＯ２００３０４２６６１（クレーム１２）；ＵＳ２００３０６０６１２（クレーム１２；図１０）；ＷＯ２００２２６８２２（クレーム２３；図２）；ＷＯ２００２１６４２９（クレーム１２；図１０）；
相互参照：ＧＩ：２２６５５４８８；ＡＡＮ０４０８０．１；ＡＦ４５５１３８ １
４９０ａａ
【０３９５】
【化１４９】
2011231131.tif 000069
（配列番号：１１）
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０，ＦＬＪ２００４１，ＴＲＰＭ４，ＴＲＰＭ４Ｂ，一過性レセプター潜在的カチオンチャネル，サブファミリーＭ，メンバー４，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０１７６３６
Ｘｕ，Ｘ．Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９８（１９）：１０６９２−１０６９７（２００１）、Ｃｅｌｌ  １０９（３）：３９７−４０７（２００２），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（３３）：３０８１３−３０８２０（２００３））；ＵＳ２００３１４３５５７（クレーム４）；ＷＯ２０００４０６１４（クレーム１４；頁１００−１０３）；ＷＯ２００２１０３８２（クレーム１；図９Ａ）；ＷＯ２００３０４２６６１（クレーム１２）；ＷＯ２００２３０２６８（クレーム２７；頁３９１）；ＵＳ２００３２１９８０６（クレーム４）；ＷＯ２００１６２７９４（クレーム１４；図１Ａ〜Ｄ）；
相互参照：ＭＩＭ：６０６９３６；ＮＰ ０６０１０６．２；ＮＭ ０１７６３６ １
１２１４ａａ
【０３９６】
【化１５０】
2011231131.tif 000070
【０３９７】
【化１５１】
2011231131.tif 000071
（配列番号：１２）
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ，ＣＲ１，ＣＲＧＦ，ＣＲＩＰＴＯ，ＴＤＧＦ１，テラトカルシノーマ−由来成長因子，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００３２０３またはＮＭ ００３２１２，
Ｃｉｃｃｏｄｉｃｏｌａ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．ＥＭＢＯ  Ｊ．８（７）：１９８７−１９９１（１９８９），Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．４９（３）：５５５−５６５（１９９１））；ＵＳ２００３２２４４１１（クレーム１）；ＷＯ２００３０８３０４１（実施例１）；ＷＯ２００３０３４９８４（クレーム１２）；ＷＯ２００２８８１７０（クレーム２；頁５２−５３）；ＷＯ２００３０２４３９２（クレーム２；図５８）；ＷＯ２００２１６４１３（クレーム１；頁９４−９５，１０５）；ＷＯ２００２２２８０８（クレーム２；図１）（ＵＳ５８５４３９９（実施例２；１７−１８欄）；ＵＳ５７９２６１６（図２）；
相互参照：ＭＩＭ：１８７３９５；ＮＰ ００３２０３．１；ＮＭ ００３２１２ １
１８８ａａ
【０３９８】
【化１５２】
2011231131.tif 000072
（配列番号：１３）
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体レセプター２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバールウイルスレセプター）またはＨｓ．７３７９２  Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ２６００４，
Ｆｕｊｉｓａｋｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（４）：２１１８−２１２５）；Ｗｅｉｓ  Ｊ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７，１０４７−１０６６，１９８８；Ｍｏｏｒｅ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．  ８４，９１９４−９１９８，１９８７；Ｂａｒｅｌ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５，１０２５−１０３１，１９９８；Ｗｅｉｓ  Ｊ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８３，５６３９−５６４３，１９８６；Ｓｉｎｈａ  Ｓ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０，５３１１−５３２０；ＷＯ２００４０４５５２０（実施例４）；ＵＳ２００４００５５３８（実施例１）；ＷＯ２００３０６２４０１（クレーム９）；ＷＯ２００４０４５５２０（実施例４）；ＷＯ９１０２５３６（図９．１〜９．９）；ＷＯ２００４０２０５９５（クレーム１）；受託：Ｐ２００２３；Ｑ１３８６６；Ｑ１４２１２；ＥＭＢＬ；Ｍ２６００４；ＡＡＡ３５７８６．１
１０３３ａａ
【０３９９】
【化１５３】
2011231131.tif 000073
（配列番号：１４）
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ，ＣＤ７９β，ＩＧｂ（免疫グロブリン−関連β）、Ｂ２９，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０００６２６または１１０３８６７４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．（２００３）  １００（７）：４１２６−４１３１、Ｂｌｏｏｄ（２００２）  １００（９）：３０６８−３０７６、Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（６）：１６２１−１６２５）；ＷＯ２００４０１６２２５（クレーム２，図１４０）；ＷＯ２００３０８７７６８，ＵＳ２００４１０１８７４（クレーム１，頁１０２）；ＷＯ２００３０６２４０１（クレーム９）；ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）；ＵＳ２００２１５０５７３（クレーム５、頁１５）；ＵＳ５６４４０３３；ＷＯ２００３０４８２０２（クレーム１，頁３０６および３０９）；ＷＯ  ９９／５５８６５８、ＵＳ６５３４４８２（クレーム１３，図１７Ａ／Ｂ）；ＷＯ２０００５５３５１（クレーム１１，１１４５−１１４６）；
相互参照：ＭＩＮ：１４７２４５；ＮＰ ０００６１７．１；ＮＭ ０００６２６ １
２２９ａａ
【０４００】
【化１５４】
2011231131.tif 000074
（配列番号：１５）
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４，ＩＲＴＡ４，ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有リン酸アンカータンパク質１ａ），ＳＰＡＰ１Ｂ，ＳＰＡＰ１Ｃ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ０３０７６４，
Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０（２００３），Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５４（２）：８７−９５（２００２），Ｂｌｏｏｄ  ９９（８）：２６６２−２６６９（２００２），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９８（１７）：９７７２−９７７７（２００１），Ｈｕ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２８０（３）：７６８−７７５；ＷＯ２００４０１６２２５（クレーム２）；ＷＯ２００３０７７８３６；ＷＯ２００１３８４９０（クレーム５；図１８Ｄ−１〜１８Ｄ−２）；ＷＯ２００３０９７８０３（クレーム１２）；ＷＯ２００３０８９６２４（クレーム２５）；
相互参照：ＭＩＭ：６０６５０９；ＮＰ １１０３９１．２；ＮＭ ０３０７６４ １
５０８ａａ
【０４０１】
【化１５５】
2011231131.tif 000075
（配列番号：１６）
（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１１７３０，Ｃｏｕｓｓｅｎｓ  Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５）  ２３０（４７３０）：１１３２−１１３９）；Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３１９，２３０−２３４，１９８６；Ｓｅｍｂａ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８２，６４９７−６５０１、１９８５；Ｓｗｉｅｒｃｚ  Ｊ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１６５，８６９−８８０，２００４；Ｋｕｈｎｓ  Ｊ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，３６４２２−３６４２７，１９９９；Ｃｈｏ  Ｈ．−Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４２１，７５６−７６０，２００３；Ｅｈｓａｎｉ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １５，４２６−４２９；ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）；ＷＯ２００４０２７０４９（図１Ｉ）；ＷＯ２００４００９６２２；ＷＯ２００３０８１２１０；ＷＯ２００３０８９９０４（クレーム９）；ＷＯ２００３０１６４７５（クレーム１）；ＵＳ２００３１１８５９２；ＷＯ２００３００８５３７（クレーム１）；ＷＯ２００３０５５４３９（クレーム２９；図１Ａ〜Ｂ）；ＷＯ２００３０２５２２８（クレーム３７；図５Ｃ）；ＷＯ２００２２２６３６（実施例１３；頁９５−１０７）；ＷＯ２００２１２３４１（クレーム６８；図７）；ＷＯ２００２１３８４７（頁７１−７４）；ＷＯ２００２１４５０３（頁１１４−１１７）；ＷＯ２００１５３４６３（クレーム２；頁４１−４６）；ＷＯ２００１４１７８７（頁１５）；ＷＯ２０００４４８９９（クレーム５２；図７）；ＷＯ２０００２０５７９（クレ−ム３；図２）ＵＳ５８６９４４５（クレーム３；３１−３８欄）；ＷＯ９６３０５１４（クレーム２；頁５６−６１）；ＥＰ１４３９３９３（クレーム７）；ＷＯ２００４０４３３６１（クレーム７）；ＷＯ２００４０２２７０９；ＷＯ２００１００２４４（実施例３；図４）；受託：Ｐ０４６２６；ＥＭＢＬ；Ｍ１１７６７；ＡＡＡ３５８０８．１．ＥＭＢＬ；Ｍ１１７６１；ＡＡＡ３５８０８．１．
１２５５ａａ
【０４０２】
【化１５６】
2011231131.tif 000076
（配列番号：１７）
（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１８７２８）；Ｂａｒｎｅｔｔ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３，５９−６６，１９８８；Ｔａｗａｒａｇｉ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５０，８９−９６，１９８８；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９９：１６８９９−１６９０３，２００２；ＷＯ２００４０６３７０９；ＥＰ１４３９３９３（クレーム７）；ＷＯ２００４０４４１７８（実施例４）；ＷＯ２００４０３１２３８；ＷＯ２００３０４２６６１（クレーム１２）；ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）；ＷＯ２００２８６４４３（クレーム２７；頁４２７）；ＷＯ２００２６０３１７（クレーム２）；
受託：Ｐ４０１９９；Ｑ１４９２０；ＥＭＢＬ；Ｍ２９５４１；ＡＡＡ５９９１５．１．ＥＭＢＬ；Ｍ１８７２８
３４４ａａ
【０４０３】
【化１５７】
2011231131.tif 000077
（配列番号：１８）
（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＢＣ０１７０２３，
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９９（２６）：１６８９９−１６９０３（２００２））；ＷＯ２００３０１６４７５（クレーム１）；ＷＯ２００２６４７９８（クレーム３３；頁８５−８７）；ＪＰ０５００３７９０（図６〜８）；ＷＯ９９４６２８４（図９）；
相互参照：ＭＩＭ：１７９７８０；ＡＡＨ１７０２３．１；ＢＣ０１７０２３＿１
４１１ａａ
【０４０４】
【化１５８】
2011231131.tif 000078
（配列番号：１９）
（２０）ＩＬ２０Ｒα（ＩＬ２０Ｒａ，ＺＣＹＴＯＲ７，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１８４９７１）；
Ｃｌａｒｋ  Ｈ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３；Ｍｕｎｇａｌｌ  Ａ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４２５，８０５−８１１，２００３；Ｂｌｕｍｂｅｒｇ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  １０４，９−１９，２００１；Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７，３５４５−３５４９，２００１；Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，４７５１７−４７５２３，２００２；Ｐｌｅｔｎｅｖ  Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４２：１２６１７−１２６２４；Ｓｈｅｉｋｈ  Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２，２００６−２０１０；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；ＵＳ２００４００５３２０（実施例５）；ＷＯ２００３０２９２６２（頁７４−７５）；ＷＯ２００３００２７１７（クレーム２；頁６３）；ＷＯ２００２２２１５３（頁４５−４７）；ＵＳ２００２０４２３６６（頁２０−２１）；ＷＯ２００１４６２６１（頁５７−５９）；ＷＯ２００１４６２３２（頁６３−６５）；ＷＯ９８３７１９３（クレーム１；頁５５−５９）；
受託：Ｑ９ＵＨＦ４；Ｑ６ＵＷＡ９；Ｑ９６ＳＨ８；ＥＭＢＬ；ＡＦ１８４９７１；ＡＡＦ０１３２０．１．
５５３ａａ
【０４０５】
【化１５９】
2011231131.tif 000079
（配列番号：２０）
（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ（ＢＣＡＮ，ＢＥＨＡＢ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ２２９０５３）
Ｇａｒｙ  Ｓ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  ２５６，１３９−１４７，２０００；Ｃｌａｒｋ  Ｈ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２；ＵＳ２００３１８６３７２（クレーム１１）；ＵＳ２００３１８６３７３（クレーム１１）；ＵＳ２００３１１９１３１（クレーム１；図５２）；ＵＳ２００３１１９１２２（クレーム１；図５２）；ＵＳ２００３１１９１２６（クレーム１）；ＵＳ２００３１１９１２１（クレーム１；図５２）；ＵＳ２００３１１９１２９（クレーム１）；ＵＳ２００３１１９１３０（クレーム１）；ＵＳ２００３１１９１２８（クレーム１；図５２）；ＵＳ２００３１１９１２５（クレーム１）；ＷＯ２００３０１６４７５（クレーム１）；ＷＯ２００２０２６３４（クレーム１）；
９１１ａａ
【０４０６】
【化１６０】
2011231131.tif 000080
（配列番号：２１）
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ，ＥＲＫ，Ｈｅｋ５，ＥＰＨＴ３，Ｔｙｒｏ５、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ ００４４４２）
Ｃｈａｎ，Ｊ．ａｎｄ  Ｗａｔｔ，Ｖ．Ｍ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ６（６）、１０５７−１０６１（１９９１）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １０（５）：８９７−９０５（１９９５）、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２１：３０９−３４５（１９９８）、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１９６：１７７−２４４（２０００））；ＷＯ２００３０４２６６１（クレーム１２）；ＷＯ２０００５３２１６（クレーム１；頁４１）；ＷＯ２００４０６５５７６（クレーム１）；ＷＯ２００４０２０５８３（クレーム９）；ＷＯ２００３００４５２９（頁１２８１３２）；ＷＯ２０００５３２１６（クレーム１；頁４２）；
相互参照：ＭＩＭ：６００９９７；ＮＰ ００４４３３．２；ＮＭ ００４４４２ １
９８７ａａ
【０４０７】
【化１６１】
2011231131.tif 000081
（配列番号：２２）
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＸ０９２３２８）
ＵＳ２００４０１０１８９９（クレーム２）；ＷＯ２００３１０４３９９（クレーム１１）；ＷＯ２００４０００２２１（図３）；ＵＳ２００３１６５５０４（クレーム１）；ＵＳ２００３１２４１４０（実施例２）；ＵＳ２００３０６５１４３（図６０）；ＷＯ２００２１０２２３５（クレーム１３；頁２９９）；ＵＳ２００３０９１５８０（実施例２）；ＷＯ２００２１０１８７（クレーム６；図１０）；ＷＯ２００１９４６４１（クレーム１２；図７ｂ）；ＷＯ２００２０２６２４（クレーム１３；図１Ａ〜１Ｂ）；ＵＳ２００２０３４７４９（クレーム５４；頁４５−４６）；ＷＯ２００２０６３１７（実施例２；頁３２０−３２１，クレーム３４；頁３２１−３２２）；ＷＯ２００２７１９２８（頁４６８−４６９）；ＷＯ２００２０２５８７（実施例１；図１）；ＷＯ２００１４０２６９（実施例３；頁１９０−１９２）；ＷＯ２０００３６１０７（実施例２；頁２０５−２０７）；ＷＯ２００４０５３０７９（クレーム１２）；ＷＯ２００３００４９８９（クレーム１）；ＷＯ２００２７１９２８（頁２３３−２３４，４５２−４５３）；ＷＯ０１１６３１８；
２８２ａａ
【０４０８】
【化１６２】
2011231131.tif 000082
（配列番号：２３）
（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＪ２９７４３６）
Ｒｅｉｔｅｒ  Ｒ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９５，１７３５−１７４０，１９９８；Ｇｕ  Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９，１２８８−１２９６，２０００；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（２０００）２７５（３）：７８３−７８８；ＷＯ２００４０２２７０９；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；ＵＳ２００４０１８５５３（クレーム１７）；ＷＯ２００３００８５３７（クレーム１）；ＷＯ２００２８１６４６（クレーム１；頁１６４）；ＷＯ２００３００３９０６（クレーム１０；頁２８８）；ＷＯ２００１４０３０９（実施例１；図１７）；ＵＳ２００１０５５７５１（実施例１；図１ｂ）；ＷＯ２０００３２７５２（クレーム１８；図１）；ＷＯ９８５１８０５（クレーム１７；頁９７）；ＷＯ９８５１８２４（クレーム１０；頁９４）；ＷＯ９８４０４０３（クレーム２；図１Ｂ）；受託：Ｏ４３６５３；ＥＭＢＬ；ＡＦ０４３４９８；ＡＡＣ３９６０７．１．
１２３ａａ
【０４０９】
【化１６３】
2011231131.tif 000083
（配列番号：２４）
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２６０７６３）；
ＡＡＰ１４９５４脂肪腫ＨＭＧＩＣ融合−パートナー−様タンパク質／ｐｉｄ＝ＡＡＰ１４９５４，１−Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ
種：Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）
ＷＯ２００３０５４１５２（クレーム２０）；ＷＯ２００３０００８４２（クレーム１）；ＷＯ２００３０２３０１３（実施例３，クレーム２０）；ＵＳ２００３１９４７０４（クレーム４５）；
相互参照：ＧＩ：３０１０２４４９；ＡＡＰ１４９５４．１；ＡＹ２６０７６３ １
２３６ａａ
【０４１０】
【化１６４】
2011231131.tif 000084
（配列番号：２５）
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞−活性化因子レセプター，ＢＬｙＳレセプター３，ＢＲ３，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ４４３１７７．１）；
ＮＰ ４４３１７７  ＢＡＦＦレセプター／ｐｉｄ＝ＮＰ ４４３１７７．１−Ｈｏｍｏ
ｓａｐｉｅｎｓ
Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９３（５５３７），２１０８−２１１１（２００１）；ＷＯ２００４０５８３０９；ＷＯ２００４０１１６１１；ＷＯ２００３０４５４２２（実施例；頁３２−３３）；ＷＯ２００３０１４２９４（クレーム３５；図６Ｂ）；ＷＯ２００３０３５８４６（クレーム７０；頁６１５−６１６）；ＷＯ２００２９４８５２（１３６−１３７欄）；ＷＯ２００２３８７６６（クレーム３；頁１３３）；ＷＯ２００２２４９０９（実施例３；図３）；
相互参照：ＭＩＭ：６０６２６９；ＮＰ ４４３１７７．１；ＮＭ ０５２９４５ １
１８４ａａ
【０４１１】
【化１６５】
2011231131.tif 000085
（配列番号：２６）
（２７）ＣＤ２２（Ｂ−細胞レセプターＣＤ２２−Ｂイソ型，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ−００１７６２．１）；
Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ，Ｉ．ａｎｄ  Ｓｅｅｄ，Ｂ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４５（６２７０）、７４−７７（１９９０）；ＵＳ２００３１５７１１３；ＵＳ２００３１１８５９２；ＷＯ２００３０６２４０１（クレーム９）；ＷＯ２００３０７２０３６（クレーム１；図１）；ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）；
相互参照：ＭＩＭ：１０７２６６；ＮＰ ００１７６２．１；ＮＭ ００１７７１ １
８４７ａａ
【０４１２】
【化１６６】
2011231131.tif 000086
【０４１３】
【化１６７】
2011231131.tif 000087
（配列番号：２７）
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ，ＣＤ７９α，免疫グロブリン−関連α，Ｉｇβ（ＣＤ７９Ｂ）に共有結合相互作用し、ＩｇＭ分子と表面で複合体を形成し、Ｂ−細胞分化に関与するシグナルを変換するＢ細胞−特異的タンパク質）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍｐｇｇｐｇｖ．．．ｄｖｑｌｅｋｐ（１．．２２６；２２６  ａａ），ｐＩ：４．８４，ＭＷ：２５０２８  ＴＭ：２［Ｐ］  Ｇｅｎｅ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：１９ｑ１３．２，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７７４．１；
ＷＯ２００３０８８８０８，ＵＳ２００３０２２８３１９；ＷＯ２００３０６２４０１（クレーム９）；ＵＳ２００２１５０５７３（クレーム４；頁１３−１４）；ＷＯ９９５８６５８（クレーム１３，図１６）；ＷＯ９２０７５７４（図１）；ＵＳ５６４４０３３；Ｈａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５２６−１５３１；Ｍｕｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：１６２１−１６２５；Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４０（４）：２８７−２９５；Ｐｒｅｕｄ’ｈｏｍｍｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０（１）：１４１−１４６；Ｙｕ
ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（２）６３３−６３７；Ｓａｋａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  ＥＭＢＯ  Ｊ．７（１１）：３４５７−３４６４；
２２６ａａ
【０４１４】
【化１６８】
2011231131.tif 000088
（配列番号：２８）
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫レセプター１，ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ細胞の移動および液性防御で機能し、ＨＩＶ−２感染および、おそらくは、ＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫、および白血病の発症で役割を演じるＧプロテイン−カップルドレセプター）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍｎｙｐｌｔｌ．．．ａｔｓｌｔｔｆ（１．．３７２；３７２ａａ），ｐＩ：８．５４  ＭＷ：４１９５９  ＴＭ：７［Ｐ］遺伝子染色体：１１ｑ２３．３，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７０７．１；
ＷＯ２００４０４００００；ＷＯ２００４０１５４２６；ＵＳ２００３１０５２９２（実施例２）；ＵＳ６５５５３３９（実施例２）；ＷＯ２００２６１０８７（図１）；ＷＯ２００１５７１８８（クレーム２０，頁２６９）；ＷＯ２００１７２８３０（頁１２−１３）；ＷＯ２０００２２１２９（実施例１，頁１５２−１５３，実施例２，頁２５４−２５６）；ＷＯ９９２８４６８（クレーム１，頁３８）；ＵＳ５４４００２１（実施例２，４９−５２欄）；ＷＯ９４２８９３１（頁５６−５８）；ＷＯ９２１７４９７（クレーム７；図５）；Ｄｏｂｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２７９５−２７９９；Ｂａｒｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０９：７７３−７７９；
３７２ａａ
【０４１５】
【化１６９】
2011231131.tif 000089
（配列番号：２９）
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合し、それらをＣＤ４＋Ｔリンパ球に提示するＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のβサブユニット）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ
Ｆｕｌｌ  ｍｇｓｇｗｖｐ．．．ｖｌｌｐｑｓｃ（１．．２７３；２７３ａａ，ｐＩ：６．５６  ＭＷ：３０８２０  ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：６ｐ２１．３、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００２１１１．１；
Ｔｏｎｎｅｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）  ＥＭＢＯ  Ｊ．４（１１）：２８３９−２８４７；Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ
２９（６）：４１１−４１３；Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２８：４３３−４４１；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９９：１６８９９−１６９０３；Ｓｅｒｖｅｎｉｕｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：８７５９−８７６６；Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５５：１−１３；Ｎａｒｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ５９：５１２−５１９；ＷＯ９９５８６５８（クレーム１３，図１５）；ＵＳ６１５３４０８（３５−３８欄）；ＵＳ５９７６５５１（１６８−１７０欄）；ＵＳ６０１１１４６（１４５−１４６欄）；Ｋａｓａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３０（１）：６６−６８；Ｌａｒｈａｍｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０（２６）：１４１１１−１４１１９；
２７３ａａ
【０４１６】
【化１７０】
2011231131.tif 000090
（配列番号：３０）
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性レセプターＰ２Ｘリガンド型イオンチャネル５，細胞内ＡＴＰによってゲートが開閉されるイオンチャネルはシナプス伝達および神経形成に関与でき、欠乏は原発性排尿筋不安定性の病理生理学に寄与し得る）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍｇｑａｇｃｋ．．．ｌｅｐｈｒｓｔ（１．．４２２；４２２ａａ），ｐＩ：７．６３，ＭＷ：４７２０６  ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１７ｐ１３．３，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００２５５２．２；
Ｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４１８（１−２）：１９５−１９９；ＷＯ２００４０４７７４９；ＷＯ２００３０７２０３５（クレーム１０）；Ｔｏｕｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１０：１６５−１７３；ＷＯ２００２２２６６０（クレーム２０）；ＷＯ２００３０９３４４４（クレーム１）；ＷＯ２００３０８７７６８（クレーム１）；ＷＯ２００３０２９２７７（頁８２）；
４２２ａａ
【０４１７】
【化１７１】
2011231131.tif 000091
（配列番号：３１）
（３２）ＣＤ７２（Ｂ−細胞分化抗原ＣＤ７２，Ｌｙｂ−２）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍａｅａｉｔｙ．．．ｔａｆｒｆｐｄ（１．．３５９；３５９ａａ），ｐＩ：８．６６，ＭＷ：４０２２５  ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：９ｐ１３．３，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００１７７３．１；
ＷＯ２００４０４２３４６（クレーム６５）；ＷＯ２００３０２６４９３（頁５１−５２，５７−５８）；ＷＯ２０００７５６５５（頁１０５−１０６）；Ｖｏｎ  Ｈｏｅｇｅｎ
ｅｔ  ａｌ．（１９９０）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４（１２）：４８７０−４８７７；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９９：１６８９９−１６９０３；
３５９ａａ  
【０４１８】
【化１７２】
2011231131.tif 000092
（配列番号：３２）
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５），ロイシンリッチのリピート（ＬＲＲ）ファミリーのタイプＩ膜タンパク質はＢ−細胞の活性化およびアポトーシスを調節し、機能の喪失は全身エリテマトーデスを持つ患者において増大した病気活性に関連する）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍａｆｄｖｓｃ．．．ｒｗｋｙｑｈｉ（１．．６６１；６６１ａａ），ｐＩ：６．２０，ＭＷ：７４１４７  ＴＭ：１「Ｐ」遺伝子染色体：５ｑ１２，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ００５５７３．１；
ＵＳ２００２１９３５６７；ＷＯ９７０７１９８（クレーム１１，頁３９−４２）；Ｍｉｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３８（３）２９９−３０４；Ｍｉｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｂｌｏｏｄ  ９２：２８１５−２８２２；ＷＯ２００３０８３０４７；ＷＯ９７４４４５２（クレーム８，頁５７−６１）；ＷＯ２０００１２１３０（頁２４−２６）；
６６１ａａ
【０４１９】
【化１７３】
2011231131.tif 000093
（配列番号：３３）
（３４）ＦＣＲＨ１（Ｆｃレセプター−様タンパク質１、Ｃ２タイプＩｇ−様およびＩＴＡＭドメインを含有する免疫グロブリンＦｃドメインに対する推定レセプターはＢ−リンパ球の分解において役割を有し得る）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍｌｐｒｌｌｌ．．．ｖｄｙｅｄａｍ（１．．４２９；４２９ａａ），ｐＩ：５．２８，ＭＷ：４６９２５  ＴＭ  １［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１−１ｑ２２，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿４４３１７０．１；
ＷＯ２００３０７７８３６；ＷＯ２００１３８４９０（クレーム６，図１８Ｅ−１〜１８−Ｅ−２）；Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（１７）：９７７２−９７７７；ＷＯ２００３０８９６２４（クレーム８）；ＥＰ１３４７０４７６（クレーム１）；ＷＯ２００３０８９６２４（クレーム７）；
４２９ａａ
【０４２０】
【化１７４】
2011231131.tif 000094
【０４２１】
【化１７５】
2011231131.tif 000095
（配列番号：３４）
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連２、Ｂ細胞の発生およびリンパ腫形成において可能な役割を持つ推定免疫レセプター；トランスロケーションによる遺伝子の脱調節はいくつかのＢ細胞悪性疾患で起こる）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍｌｌｗｖｉｌ．．．ａｓｓａｐｈｒ（１．．９７７；９７７ａａ），ｐＩ：６．８８  ＭＷ：１０６４６８  ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ １１２５７１．１；
ＷＯ２００３０２４３９２（クレーム２，図９７）；Ｎａｋａｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．２７７（１）：１２４−１２７；ＷＯ２００３０７７８３６；ＷＯ２００１３８４９０（クレーム３，図１８Ｂ−１〜１８Ｂ−２）；
９７７ａａ
【０４２２】
【化１７６】
2011231131.tif 000096
（配列番号：３５）
また：全て個々に引用してその全体を援用する、ＷＯ０４／０４５５１６（２００４年６月３日）；ＷＯ０３／０００１１３（２００３年１月３日）；ＷＯ０２／０１６４２９（２００２年２月２８日）；ＷＯ０２／１６５８１（２００２年２月２８日）；ＷＯ０３／０２４３９２（２００３年３月２７日）；ＷＯ０４／０１６２２５（２００４年２月２６日）；ＷＯ０１／４０３０９（２００１年６月７日）、および２００３年１１月１７日に出願された米国仮特許出願第６０／５２０８４２号［ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＦＯＲ  ＴＨＥ  ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ  ＯＦ  ＴＵＭＯＲ  ＯＦ  ＨＥＭＡＴＯＰＯＩＥＴＩＣ  ＯＲＩＧＩＮ］も参照されたし。
【０４２３】
実施形態において、リガンド−リンカー−薬物結合体は式ＩＩＩａを有し、ここで、該リガンドはＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ抗原のうちの少なくとも１つに結合するものを含めた抗体Ａｂであり、ｗ＝０、ｙ＝０であり、Ｄは式Ｉｂを有する。式ＩＩＩａの例示的結合体はＲ１７が−（ＣＨ２）５−である場合を含む。また、Ｄが実施例３における化合物２の構造を有する式ＩＩＩａのそのような結合体およびそのエステルも含まれる。また、約３〜約８、１つの態様においては、約３〜約５の薬物部分Ｄを含有する式ＩＩＩａのそのような結合体、すなわち、ｐが約３〜８の範囲の値、例えば、約３〜５である式Ｉａの結合体も含まれる。このパラグラフに記載した構造的特徴の組合せを含有する結合体も本発明の化合物の範囲内として考えられる。
【０４２４】
もう１つの実施形態において、リガンド−リンカー−薬物結合体は式ＩＩＩａを有し、ここで、リガンドはＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ抗原１つに結合する抗体Ａｂであり、ｗ＝１、ｙ＝０であって、Ｄは式Ｉｂを有する。Ｒ１７が−（ＣＨ２）５−である式ＩＩＩａのこのような結合体が含まれる。または、Ｗが−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−であり、および／またはＤが実施例３における化合物２の構造を有する式ＩＩＩａのそのような結合体およびそのエステルも含まれる。また、約３〜約８、好ましくは約３〜約５の薬物部分Ｄを含有する式ＩＩＩａのそのような結合体、すなわち、ｐが約３〜８、好ましくは約３〜５の範囲の値である式Ｉａの結合体も含まれる。また、このパラグラフに記載した構造的特徴の組合せを含む結合体は例示的である。
【０４２５】
実施形態において、リガンド−リンカー−薬物結合体は式ＩＩＩａを有し、ここで、該リガンドはＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ抗原の１つに結合する抗体Ａｂであり、ｗ＝１、ｙ＝１であり、およびＤは式Ｉｂを有する。Ｒ１７が−（ＣＨ２）５−である式ＩＩＩａの結合体が含まれる。また、Ｗが−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−であり；Ｙが式Ｘを有し；Ｄが実施例３における化合物２の構造およびそのエステルを有し；ｐが約３〜約８、好ましくは約３〜約５の薬物部分Ｄである式ＩＩＩａのそのような結合体も含まれる。このパラグラフに記載された構造的特徴の組合せを含む結合体もまた本発明の化合物の範囲内で考えられる。
【０４２６】
さらなる実施形態は、Ａｂが前記した腫瘍−関連抗原（１）〜（３５）（「ＴＡＡ化合物」）の１つに結合する抗体である抗体薬物結合体（ＡＤＣ、またはその薬学的に受容可能なその塩または溶媒和物である。
【０４２７】
もう１つの実施形態は単離され精製された形態であるＴＡＡ化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物である。
【０４２８】
もう１つの実施形態は、一定量のＴＡＡ化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を患者、例えば、過剰増殖疾患を持つヒトに投与することを含み、該量は腫瘍細胞または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害するのに効果的なものであることを特徴とする、腫瘍または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害する方法である。
【０４２９】
もう１つの実施形態は、単独、または有効量のさらなる抗癌剤と共に、一定量のＴＡＡ化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を患者、例えば、過剰増殖疾患を持つヒトに投与することを含み、該量は癌を治療するのに効果的であることを特徴とする、癌を治療する方法である。
【０４３０】
もう１つの実施形態は、一定量のＴＡＡ化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を患者、例えば、過剰増殖疾患を持つヒトに投与することを含み、該量は自己免疫疾患を治療するのに効果的であることを特徴とする、自己免疫疾患を治療する方法である。
【０４３１】
本発明で用いるのに適した抗体は、抗体の合成につき当該分野で知られたいずれかの方法によって、特に、化学合成によって、または組換え発現によって生産することができ、好ましくは、組換え発現技術によって生産される。
【０４３２】
（４．５．１  組換え抗体の生産）
本発明の抗体は、抗体の合成で有用であることが当該分野で知られたいずれかの方法、特に、化学合成によって、または組換え発現によって生産することができる。
【０４３３】
抗体、またはそのフラグメント、誘導体またはアナログの組換え発現は、該抗体をコードする核酸の構築を必要とする。もし抗体のヌクレオチド配列が知られていれば、抗体をコードする核酸を（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１７：２４２に記載されたように）化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てることができ、これは、抗体をコードする配列の一部を含有する重複するオリゴヌクレオチドを合成し、それらのオリゴヌクレオチドをアニールし、連結し、次いで、例えば、ＰＣＲによって連結されたオリゴヌクレオチドを増幅することを含む。          
【０４３４】
別法として、抗体をコードする核酸分子は適当な源から作成することができる。もし特定の抗体をコードする核酸を含有するクローンが入手できないが、抗体の配列が知られていれば、抗体をコードする核酸は、例えば、配列の３’および５’末端にハイブリダイズすることができる合成プライマーを用いるＰＣＲ増幅によって、または特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いるクローニングによって、適当な源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリー、または免疫グロブリンを発現するいずれかの組織または細胞から作成したｃＤＮＡライブラリー）から得ることができる。
【０４３５】
もし特定の抗原を特異的に認識する抗体が商業的に入手できないならば（またはそのような免疫グロブリンをコードする核酸をクローニングするためのｃＤＮＡライブラリー用の源）、特定の抗原に特異的な抗体は当該分野で知られたいずれかの方法によって、例えば、患者、またはウサギまたはマウスのような適当な動物モデルを免疫化して、ポリクローナル抗体を作り出すことによって、またはより好ましくは、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７）によって記載されたように、またはＫｏｚｂｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２）またはＣｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６）によって記載されているように、モノクローナル抗体を作り出すことによって作成することができる。別法として、抗体の少なくともＦａｂ部分をコードするクローンは、特異的抗原に結合するＦａｂフラグメントのクローンにつき（例えば、Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１に記載されているように）Ｆａｂ発現ライブラリーをスクリーニングすることによって、または抗体ライブラリーをスクリーニングすることによって（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４；Ｈａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：４９３７）得ることができる。
【０４３６】
一旦抗体の少なくとも可変ドメインをコードする核酸配列が得られたならば、それは、抗体の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含有するベクターに導入することができる（例えば、国際公開番号ＷＯ  ８６／０５８０７；ＷＯ  ８９／０１０３６；および米国特許第５１２２４６４号参照）。完全な抗体分子の発現を可能とする完全な軽鎖または重鎖を含有するベクターが入手できる。次いで、抗体をコードする核酸を用いて、鎖内ジスルフィド結合に参画する１以上の可変領域システイン残基をスルフヒドリル基を含有しないアミノ酸残基で置き換える（または欠失させる）のに必要なヌクレオチド置換または欠失を導入することができる。そのような修飾は、ヌクレオチド配列への特異的な突然変異または欠失の導入用に当該分野で知られたいずれかの方法、例えば、限定されるものではないが、化学的突然変異誘発およびインビトロ部位特異的突然変異誘発（Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：６５５１）によって行うことができる。
【０４３７】
加えて、適当な生物学的活性のヒト抗体分子からの遺伝子と共に適当な抗原特異性のマウス抗体分子からの遺伝子をスプライシングすることによる「キメラ抗体」（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１−８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４）の生産用に開発された技術を用いることができる。キメラ抗体は、異なる部分が、ネズミモノクローナル抗体に由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有するもの、例えば、ヒト化抗体のような異なる動物種に由来する分子である。
【０４３８】
別法として、単一鎖抗体の生産のために記載された技術（米国特許第４，６９４，７７８号；Ｂｉｒｄ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；およびＷａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４−５４）を、単一鎖抗体を生産するように適合させることができる。単一鎖抗体は、アミノ酸ブリッジを介してＦｖ領域の重鎖および軽鎖フラグメントを連結させ、その結果、単一鎖ポリペプチドを得ることによって形成される。また、Ｅ．ｃｏｌｉにおける機能的Ｆｖフラグメントの組み立てのための技術を用いることもできる（Ｓｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：１０３８−１０４１）。
【０４３９】
特異的エピトープを認識する抗体フラグメントは公知の技術によって作ることができる。例えば、そのようなフラグメントは、限定されるものではないが、抗体分子のペプシン消化によって生産することができるＦ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィドブリッジを低下させることによって作ることができるＦａｂフラグメントを含む。
【０４４０】
一旦抗体をコードする核酸配列が得られたならば、抗体の生産用のベクターを、当該分野でよく知られた技術を用いて組換えＤＮＡ技術によって生産することができる。当業者によく知られた方法を用いて、抗体コーディング配列および適当な転写および翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターを構築することができる。これらの方法は、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組換えを含む。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｏｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ＮＹ）およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（編，１９９８，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ）に記載された技術を参照されたし。
【０４４１】
抗体のヌクレオチド配列を含む発現ベクターまたは抗体のヌクレオチド配列を従来技術（例えば、エレクトロポレーション、リポソームトランスフェクション、およびリン酸カルシウム沈殿）によって宿主細胞に導入することができ、次いで、従来技術によってトランスフェクトされた細胞を培養して、抗体を得る。特別な実施形態において、抗体の発現は構成的、誘導的または組織特異的プロモーターによって調製される。
【０４４２】
組換え抗体を発現するのに用いる宿主細胞はＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉのような細菌細胞、または好ましくは特に全組換え免疫グロブリン分子の発現用の真核生物細胞いずれかであり得る。特に、ヒトサイトメガロウイルスからの主要即時型遺伝子プロモーターエレメントのようなベクターと組み合わせて、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）のような哺乳動物細胞は免疫グロブリン用の効果的な発現システムである（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８、Ｇｅｎｅ  ４５：１０１；Ｃｏｃｋｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０．ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８：２）。
【０４４３】
種々の宿主−発現ベクターシステムを利用して、免疫グロブリン抗体を発現させることができる。そのような宿主−発現システムは、それによって抗体のコーディング配列を生産し、引き続いて精製することができるビヒクルを表すが、また、適当なヌクレオチドコーディング配列で形質転換またはトランスフェクトされた場合に、インサイチュにて抗体免疫グロブリン分子を発現することができる細胞も表す。これらは、限定されるものではないが、免疫グロブリンコーディング配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のような微生物；免疫グロブリンコーディング配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  Ｐｉｃｈｉａ）；免疫グロブリンコーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）で感染させた昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（例えば、ＣａＭＶ）およびタバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））を感染させた、または免疫グロブリンコーディング配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換した植物細胞系；または哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシミアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組換え発現構築体を保有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨ、２９３、２９３Ｔ、３Ｔ３細胞）を含む。
【０４４４】
細菌系においては、発現すべき抗体に意図された使用に応じて、多数の発現ベクターを有利には選択することができる。例えば、大量のそのようなタンパク質を生産する場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を指令するベクターが望ましいであろう。そのようなベクターは、限定されるものではないが、抗体コーディング配列が、融合タンパク質が生産されるようにｌａｃＺコーディング領域とインフレームにて個々にベクターに連結できるＥ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９、ＥＭＢＯ，Ｊ．２：１７９１）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ  ＆  Ｉｎｏｕｙｅ，１９８５、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９；Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  ＆  Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５５０９）；等を含む。また、ｐＧＥＸベクターを用いて、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来性ポリペプチドを発現することができる。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であって、吸着、およびマトリックスグルタチオン−アガロースビーズへの結合、続いての、遊離グルタチオンの存在下での溶出によって容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローン化された標的遺伝子産物がＧＳＴ部位から放出できるように、トロンビンまたは第Ｘａ因子プロテアーゼ切断部位を含めるように設計される。
【０４４５】
昆虫系においては、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核ポリヘドロシスウイルス（ＡｃＮＰＶ）またはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒからの同様なウイルスを、外来性遺伝子を発現させるためのベクターとして用いる。ウイルスはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞内で成長する。抗体コーディング配列は、ウイルスの非−必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個々にクローン化することができ、かつＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置くことができる。
【０４４６】
哺乳動物宿主細胞において、多数のウイルス−ベースの発現系を利用することができる。アデノウイルスが発現ベクターとして用いられる場合、注目する抗体コーディング配列を、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーターおよび三部リーダー配列に連結させることができる。次いで、このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボ組換えによってアデノウイルスゲノムに挿入することができる。ウイルスゲノムの非−必須領域（例えば、領域Ｅ１またはＥ３）への挿入の結果、生きており、かつ感染した宿主において免疫グロブリン分子を発現することができる組換えウイルスが得られる（例えば、Ｌｏｇａｎ  ＆  Ｓｈｅｎｋ，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：３５５−３５９参照）。また、特異的な開始シグナルが挿入された抗体コーディング配列の効果的な翻訳で必要であり得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接する配列を含む。さらに、開始コドンは、全インサートの翻訳を確実とするために、所望のコーディング配列のリーディングフレームと相内になければならない。これらの外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは種々の起源、天然および合成のものであり得る。発現の効率は、適当な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネ―ターなどを含めることによって増強することができる（Ｂｉｔｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１−５４４参照）。
【０４４７】
加えて、宿主細胞株は、挿入された配列の発現を変調するように選択することができ、あるいは所望の特異的様式で遺伝子産物を修飾し、プロセッシングする。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）およびプロセッシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能で重要であり得る。異なる宿主細胞は翻訳後プロセッシングおよびタンパク質および遺伝子産物の修飾について特徴的かつ特異的なメカニズムを有する。適当な細胞系または宿主系発現すべき外来性タンパク質の正しい修飾およびプロセッシングを確実とするように選択することができる。この目的で、遺伝子産物の一次転写体、グリコシル化およびリン酸化の適切なプロセッシングのための細胞マシーナリーを保有する真核生物宿主細胞を用いることができる。そのような哺乳動物宿主細胞は、限定されるものではないが、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、２９３Ｔ、３Ｔ３、ＷＩ３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０およびＴ４７Ｄ、ＣＲＬ７０３０およびＨｓ５７８Ｂｓｔを含む。
【０４４８】
組換えタンパク質の長期の高収率生産のためには、安定な発現が好ましい。例えば、抗体を安定に発現する細胞系を作製することができる。ウイルスの複製起点を含有する発現ベクターを用いるよりはむしろ、適当な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）、および選択マーカーによって制御されるＤＮＡで形質転換することができる。外来性ＤＮＡの導入に続いて、作製された細胞は、豊富化された培地中で１〜２日間増殖させることができ、次いで、選択培地にスイッチする。組換体プラスミド中の選択マーカーは耐性を選択に付与し、細胞がプラスミドをその染色体に組み込み、増殖して、今度は、クローン化し、細胞系へ拡大培養することができるフォーカスを形成するのを可能とする。この方法は、抗体を発現する細胞系を作製するのに有意に用いることができる。そのような作製された細胞系は、抗体と直接的にまたは間接的に相互作用する腫瘍抗原のスクリーニングおよび評価で特に有用であり得る。
【０４４９】
限定されるものではないが、単純疱疹ウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ
ａｌ．，１９７７，Ｃｅｌｌ  １１：２２３）、ヒポキサンチン−ホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ  ＆  Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ，１９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ４８：２０２）、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８０，Ｃｅｌｌ  ２２：８１７）遺伝子を、各々、ｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−、またはａｐｒｔ−細胞で使用することができる。また、抗代謝産物耐性は以下の遺伝子についての選択の基礎として用いることができる：メトトレキセートに対する耐性を付与するＤＨＦＲ（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：３５７；Ｏ’Ｈａｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：１５２７）；ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＆  Ｂｅｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：２０７２）；アミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５；Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，  １９９１，  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２；およびＭｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，６２：１９１−２１７；Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢ  ＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５）およびヒグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｇｅｎｅ  ３０：１４７）。用いることができる組換えＤＮＡ技術の当該分野で通常知られている方法はＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（編，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ；および１２および１３章，  Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（編），１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ．；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１）に記載されている。
【０４５０】
抗体の発現レベルはベクター増幅によって増大させることができる（レビューについては、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ，Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ｖｏｌ．３．（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）参照）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養に存在する阻害剤のレベルの増大は、マーカー遺伝子のコピーの数を増大させる。増幅された領域が抗体のヌクレオチド配列に関連するので、抗体の生産も増大する（Ｃｒｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７）。
【０４５１】
宿主細胞は２つの発現ベクターで共−トランスフェクトすることができ、第一のベクターは重鎖由来ポリペプチドをコードし、第二のベクターは軽鎖由来ポリペプチドをコードする。２つのベクターは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの同等な発現を可能とする同一の選択マーカーを含有することができる。別法として、単一ベクターを用いて、重鎖および軽鎖ポリペプチド双方をコードさせることができる。そのような状況において、軽鎖は重鎖の前において、過剰な毒性フリー重鎖を回避すべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：５２；Ｋｏｈｌｅｒ，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：２１９７）。重鎖および軽鎖についてのコーディング配列はｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含むことができる。
【０４５２】
一旦抗体が組換えにより発現されたならば、それは、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、特にプロテインＡ後の特異的抗原に対する親和性による、およびサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心、分別溶解性によって、またはタンパク質の精製用のいずれかの他の標準技術によって、抗体の精製のための当該分野で知られたいずれかの方法を用いて精製することができる。
【０４５３】
さらにもう１つの例示的実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。
【０４５４】
いずれの場合においても、ハイブリッド抗体は、好ましくは、選択するハプテンに対して特異的な１以上の結合部位との、または標的抗原、例えば、腫瘍、自己免疫疾患、感染性生物、または他の病気状態に関連する抗原に対して特異的な１以上の結合部位とのデュアル特異性を有する。
【０４５５】
（４．５．２  抗体の生産）
抗体の生産は抗−ＣＤ３０抗体を参照して説明するが、ＴＮＦレセプターファミリーの他のメンバーに対する抗体を生産することができ、同様に修飾することができるのは当業者に明らかであろう。抗体の生産のためのＣＤ３０の使用は例示的なものに過ぎず、限定する意図のものではない。
【０４５６】
抗体の生産で用いるべきＣＤ３０抗原は、例えば、所望のエピトープを含有する、ＣＤ３０の細胞外ドメインまたはその部分の可溶性形態であり得る。別法として、それらの細胞表面においてＣＤ３０を発現する細胞（例えば、Ｌ５４０（Ｔ細胞表現型を持つホジキンリンパ腫由来細胞系）およびＬ４２８（Ｂ細胞表現型を持つホジキンリンパ腫由来細胞））を用いて抗体を作製することができる。抗体を作製するのに有用なＣＤ３０の他の形態は当業者に明らかであろう。
【０４５７】
もう１つの例示的実施形態において、抗体の生産で用いるべきＥｒｂＢ２抗原は、例えば、所望のエピトープを含有する、ＥｒｂＢ２の細胞外ドメインまたはその部分の可溶性形態であり得る。別法として、それらの細胞表面でＥｒｂＢ２を発現する細胞（例えば、ＥｒｂＢ２を過剰発現するように形質転換されたＮＩＨ−３Ｔ３細胞；またはＳＫ−ＢＲ−３細胞のような癌腫細胞系、Ｓｔａｎｃｏｖｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：８６９１−８６９５（１９９１）参照）を用いて抗体を作製することができる。抗体を作製するのに有用なＥｒｂＢ２の他の形態は当業者に明らかであろう。
【０４５８】
（ｉ）ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連抗原およびアジュバントの複数皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射によって動物において生起させる。二機能性または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を通じての結合体化）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を通じる）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲおよびＲ１が異なるアルキル基であるＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲを用いて、関連抗原を、免疫化すべき種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペッドヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、またはダイズトリプシン阻害剤に結合体化するのが有用であろう。
【０４５９】
例えば、１００μｇまたは５μｇのタンパク質または結合体（各々、ウサギまたはマウス用）と３容量のフロイントの完全アジュバントを合わせ、該溶液を皮内に複数部位に注射することによって、動物を抗原、免疫原性結合体、または誘導体に対して免疫化する。１ヵ月後、複数部位における皮下注射によって、フロイントの完全アジュバント中のペプチドまたは結合体の元の量の１／５〜１／１０を動物にブースター注射する。７〜１４日後、動物から採血し、血清を抗体力価につきアッセイする。力価がプラトーとなるまで動物にブースター注射する。好ましくは、動物に、同一の抗原の結合体であるが、異なるタンパク質に結合体したおよび／または異なる架橋剤を通じるものをブースター注射する。また、結合体は、タンパク質融合として組換え細胞培養で作製することができる。また、ミョウバンのような凝集剤を適切には用いて、免疫系を増強する。
【０４６０】
（ｉｉ）モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は実質的に均一な抗体の集団から得られ、すなわち、集団を含む個々の抗体は、微量に存在し得る可能な天然に生じる突然変異を除いて同一である。かくして、修飾語「モノクローナル」は、区別される抗体の混合物ではない抗体の特性を示す。
【０４６１】
例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマを用いて作成することができるか、あるいは組換えＤＮＡ方法によって作製することができる（米国特許第４８１６５６７号）。
【０４６２】
ハイブリドーマ方法においては、マウス、またはハムスターのような他の適当な宿主細胞を前記したように免疫化して、免疫化で用いられるタンパク質に特異的に結合する抗体を生産する、または生産することができるリンパ球を誘導する。別法として、リンパ球はインビトロで免疫化することができる。次いで、ポリエチレングリコールのような適当な融合剤を用いてリンパ球を骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【０４６３】
かく調製されたハイブリドーマ細胞を、好ましくは、未融合の親骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１以上の物質を含有する適当な培養基に接種し、増殖させる。例えば、もし親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠くならば、ハイブリドーマのための培養基は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含み（ＨＡＴ培地）、その物質はＨＧＰＲＴ−欠乏細胞の増殖を妨げる。
【０４６４】
好ましい骨髄腫細胞は、効果的に融合し、選択された抗体−生産細胞によって抗体の安定な高レベル生産を支持し、かつＨＡＴ培地のような培地に感受性であるものである。これらのうち、好ましい骨髄腫細胞系は、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍、およびＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｒｙｌａｎｄ  ＵＳＡから入手可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞に由来するもののようなネズミ骨髄腫系である。また、ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトへテロ骨髄腫細胞系もまた、ヒトモノクローナル抗体の生産について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；およびＢｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０４６５】
ハイブリドーマ細胞が増殖する培養基は、抗原に対して向けられたモノクローナル抗体の生産につきアッセイされる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって生産されたモノクローナル抗体の結合特異性は免疫沈澱によって、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素−結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）のようなインビトロ結合アッセイによって決定される。モノクローナル抗体の結合アフィニティーは、Ｍｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のＳｃａｔｃｈａｒｄ分析によって測定することができる。
【０４６６】
所望の特異性、アフィニティーおよび／または活性の抗体を生産するハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンは限界希釈手法によってサブクローン化し、標準的な方法によって増殖させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。この目的での適当な培養基は、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地を含む。加えて、ハイブリドーマ細胞は動物において腹水液腫瘍としてインビボで増殖させることができる。
【０４６７】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーのような慣用的な抗体精製手法によって培養基、腹水液または血清から分離する。
【０４６８】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、（例えば、ネズミ抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に対して特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって）慣用的手法を用いて容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマ細胞はそのようなＤＮＡの好ましい源として供される。一旦単離されれば、ＤＮＡは発現ベクターに入れることができ、これは、次いで、そうでなければ抗体タンパク質を生産しない、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、シミアンＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞のような宿主細胞にトランスフェクトして、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を得る。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現についてのレビュー論文はＳｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６−２６２（１９９３）およびＰｌuｃｋｔｈｕ
ｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．，１３０：１５１−１８８（１９９２）を含む。
【０４６９】
さらなる実施形態において、モノクローナル抗体または抗体フラグメントはＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載された技術を用いて生じさせた抗体ファージライブラリーから単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）は、ファージライブラリーを用いる、各々、ネズミおよびヒト抗体の単離を記載する。引き続いての刊行物は、鎖シャッフリング（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２））、ならびにコンビナトーリアル感染、および非常に大きなファージライブラリーを構築するための戦略としてのインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，２１：２２６５−２２６６（１９９３））によって、高アフィニティー（ｎＭ範囲）ヒト抗体の生産を記載する。かくして、これらの技術はモノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に対する活力のある代替法である。
【０４７０】
ＤＮＡは、例えば、相同ネズミ配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインに対するコーディング配列で置き換えることによって（米国特許第４８１６５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎ，ｅｔ．ａｌ．（１９８４）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１）、または非−免疫グロブリンポリペプチドに対するコーディング配列の全てまたは一部を免疫グロブリンコーディング配列に共有結合により連結することによって修飾することもできる。
【０４７１】
典型的には、そのような非−免疫グロブリンポリペプチドを、抗体の定常ドメインに代えて置換し、あるいは抗体の１つの抗原−組合せ部位の可変ドメインに代えて置換して、抗原に対する特異性を有する１つの抗原−組合せ部位、および異なる抗原に対する特異性を有するもう１つの抗原−組合せ部位を含むキメラ二重特異性抗体を作る。
【０４７２】
（ｉｉｉ）ヒト化抗体
ヒト化抗体は、非−ヒトである源からそれに導入された１以上のアミノ酸残基を有することができる。これらの非−ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「輸入」残基と言われ、それは、典型的には、「輸入」可変ドメインから取られる。ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列に代えて超可変領域配列で置換することによって、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法に従って実質的に行うことができる（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６（１９８８））。従って、そのような「ヒト化」抗体はキメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、ここで、実質的に無傷ヒト可変ドメインよりも少ないモノが非−ヒト種からの対応する配列によって置き換えられている。現実的には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかの超可変領域残基および、恐らくは、いくつかのＦＲ残基がげっ歯類抗体における類似の部位からの残基によって置き換えられたヒト抗体である。
【０４７３】
ヒト化抗体を作成するにおいて用いるべきヒト可変ドメイン（軽鎖および重鎖双方）の選択は、抗原性を低下させるのに非常に重要である。いわゆる「ベスト−フィット方法」に従って、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列は公知のヒト可変−ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングされる。次いで、げっ歯類のそれと最も近いヒト配列はヒト化抗体についてのヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として許容される（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７））。もう１つの方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を用いる。同一のフレームワークを数個の異なるヒト化抗体で用いることができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３））。
【０４７４】
もう１つの実施形態において、抗体は抗原に対する高い親和性および他の好都合な生物学的特性の保持でヒト化することができる。ヒト化抗体は、親およびヒト化配列の三次元モデルを用いる親配列および種々の概念的ヒト化産物の分析のプロセスによって調製することができる。三次元免疫グロブリンモデルは通常入手でき、当業者が精通している。選択された候補免疫グロブリン配列の可能な三次元立体配座構造を示し、提示するコンピュータプログラムが入手できる。これらの表示の精査は、候補免疫グロブリン配列の機能化における残基のありそうな役割の分析、すなわち、その抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響する残基の分析を可能とする。このようにして、ＦＲ残基が標的抗原に対する増大した親和性のような所望の抗体特徴が達成されるように、需要者および輸入配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、超可変領域残基は抗原結合への影響に直接的にかつ最も実質的に関与する。
【０４７５】
種々の形態のヒト化抗体が考えられる。例えば、ヒト化抗体はＦａｂのような抗体フラグメントであり得る。別法として、ヒト化抗体は無傷ＩｇＧ１抗体のような無傷抗体であり得る。
【０４７６】
実施例は例示的ヒト化抗−ＥｒｂＢ２抗体の生産を記載する。ヒト化抗体は、例えば、ヒト可変重鎖ドメインに取りこまれた非ヒト超可変領域残基を含み、さらに、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載された可変ドメインナンバリング系を利用する６９Ｈ、７１Ｈおよび７３Ｈよりなる群から選択される位置におけるフレームワーク領域（ＦＲ）置換を含むことができる。１つの実施形態において、ヒト化抗体は位置６９Ｈ、７１Ｈおよび７３Ｈの２つまたは全てにおいてＦＲ置換を含む。もう１つの例は、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）処方からの精製されたトラスツズマブ抗体の調製を記載する。
【０４７７】
（ｉｖ）ヒト抗体
ヒト化に対する代替法として、ヒト抗体を作り出すことができる。例えば、今日、免疫化に際して、内因性免疫グロブリン生産の不存在下でヒト抗体の十分なレパートリーを生産することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生産することが可能である。例えば、キメラおよび生殖系列突然変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失の結果、内因性抗体の生産の完全な阻害がもたらされると記載されている。ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子のそのような生殖系列突然変異体マウスへの導入の結果、抗原調製に際して、ヒト抗体が生産される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．，７：３３（１９９３）；および米国特許第５，５９１，６６９号、第５，５８９，３６９号および第５，５４５，８０７号参照。
【０４７８】
別法として、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０））を用いて、未免疫化ドナーからの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからインビトロにてヒト抗体および抗体フラグメントを生じさせることができる。この技術に従い、抗体Ｖドメイン遺伝子をＭ１３またはｆｄのようなフィラメント状バクテリオファージの主要または従たるコートタンパク質遺伝子いずれかにイン−フレームをクローン化し、ファージ粒子の表面で機能的抗体フラグメントとして表示される。フィラメント状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するので、抗体の機能的特性に基づく選択の結果、それらの特性を呈する抗体をコードする遺伝子が選択される。かくして、ファージはＢ−細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは種々のフォーマットで行うことができる；それらのレビューについては、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４−５７１（１９９３）参照。Ｖ−遺伝子セグメントの数個の源がファージディスプレイで用いることができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫化マウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さなランダムコンビナトーリアムライブラリーから抗−オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。未免疫化ヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリーを構築し、（自己−抗原を含めた）抗原の多様なアレイに対する抗体をＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載された技術に実質的に従って単離することができる。また、米国特許第５５６５３３２号および第５５７３９０５号参照。先に議論したように、ヒト抗体はインビトロで活性化されたＢ細胞によって作り出すこともできる（米国特許第５５６７６１０号および第５２２９２７５号参照）。ヒト抗−ＣＤ３０抗体は米国特許出願第１０／３３８，３６６号に記載されている。
【０４７９】
（ｖ）抗体フラグメント
抗体フラグメントの生産のために種々の技術が開発されている。伝統的には、これらのフラグメントは無傷抗体のタンパク質分解消化を介して誘導された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）；およびＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）参照）。しかしながら、これらのフラグメントは、今日、組換え宿主細胞によって直接的に生産され得る。例えば、抗体フラグメントは先に議論した抗体ファージライブラリーから単離することができる。別法として、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントはＥ．ｃｏｌｉから直接的に回収し、化学的にカップリングさせてＦ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））。もう１つのアプローチに従うと、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは組換え宿主細胞培養から直接的に単離することができる。抗体フラグメントの生産のための他の技術は当業者にあきらかであろう。他の実施形態において、選択された抗体は一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）。ＷＯ  ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および米国特許第５，５８７，４５８号参照。抗体フラグメントは、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されたような「線状抗体」であってもよい。そのような線状抗体フラグメントは一特異的または二特異的であってもよい。
【０４８０】
（ｖｉ）二特異的抗体
二特異的抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的二特異的抗体はＣＤ３０タンパク質の２つの異なるエピトープに結合することができる。別法として抗−ＣＤ３０アームを、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）のような、ＩｇＧに対するＦｃレセプター（ＦｃγＲ）に結合するアームと組み合わせて、ＣＤ３０−発現細胞に対する細胞防御メカニズムに焦点を当てることができる。また、二特異的抗体を用いて、ＣＤ３０を発現する細胞に対して細胞傷害性剤を局所化することもできる。
【０４８１】
全長二特異的抗体の伝統的生産は２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の発現に基づき、ここで、２つの鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダム分類のため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０の異なる抗体分子の潜在的混合物を生じ、そのうち１つのみが正しい二特異的構造を有する。通常アフィニティークロマトグラフィー工程によってなされる正しい分子の精製はかなり面倒であり、生成物の収率は低い。同様な手法がＷＯ  ９３／０８８２９、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。異なるアプローチに従って、所望の結合特異性（抗体−抗原組合せ部位）を持つ抗体可変ドメインを免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合させる。該融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。融合の少なくとも１つに存在する、軽鎖結合に必要な部位を含有する第一の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有するのが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合をコードするＤＮＡおよび、所望であれば、免疫グロブリン軽鎖を別々の発現ベクターに挿入し、適当な宿主生物に共トランスフェクトする。これは、構築で用いる３つのポリペピチド鎖の等しくない比率が最適の収率を供する場合の実施形態において３つのポリペプチドフラグメントの相互の割合を調整するにおいて大きな柔軟性を提供する。しかしながら、等しい比率の少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現の結果、高い収率が得られる場合、または比率が特定の重要性のものでない場合、１つの発現ベクターに２つまたは全ての３つのポリペプチド鎖に対するコーディング配列を挿入することができる。
【０４８２】
このアプローチの１つの実施形態において、二特異的抗体は、１つのアームにおける第一の結合特異性を持つハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他のアームにおける（第二の結合特異性を供する）ハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対よりなる。この非対称構造は、望まない免疫グロブリン鎖組合せからの所望の二特異的化合物の分離を容易とすることが見出された。というのは、二特異的分子の１つの半分のみにおける免疫グロブリン軽鎖の存在は分離の容易な方法を提供するからである。このアプローチはＷＯ  ９４／０４６９０に開示されている。二特異的抗体を作り出すことのさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）参照。
【０４８３】
米国特許第５，７３１，１６８号に記載されたもう１つのアプローチによると、抗体分子の対の間の界面は、組換え細胞培養から回収されたヘテロダイマーのパーセンテージを最大化するように作成することができる。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法においては、第一の抗体分子の界面からの１以上の小さなアミノ酸側鎖はより大きな側鎖で置き換えられる（例えば、チロシンまたはトリプトファン）。大きなアミノ酸側鎖をより小さなもの（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって、大きな側鎖に対する同一または同様なサイズの保証「キャビティ」を第二の抗体分子の界面に作り出す。これは、ホモダイマーのような他の望まない最終産物よりもヘテロダイマーの収率を増加させるメカニズムを提供する。
【０４８４】
抗体フラグメントから二特異的抗体を作り出す技術もまた文献に記載されている。例えば、二特異的抗体は化学結合を用いて調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）は、無傷抗体がタンパク質分解により切断されてＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じる手法を記載する。これらのフラグメントはジチオール複合体化剤ヒ酸ナトリウムの存在下で還元されて、隣接ジチオールを安定化し、分子間ジスルフィド形成を妨げる。ついで、生じたＦａｂ’フラグメントをチオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換する。ついで、メルカプトエチルアミンでの還元によって、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つをＦａｂ’−チオールに再度変換し、等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合して、二特異的抗体を形成する。生じた二特異的抗体は、酵素の選択的固定化のための剤として用いることができる。
【０４８５】
最近の進歩は、Ｅ．ｃｏｌｉからのＦａｂ’−ＳＨフラグメントの直接的回収を容易とし、これは化学的にカップリングして二特異的抗体を形成することができる。Ｓｈａｌａｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７５：２１７−２２５（１９９２）は十分にヒト化された二特異的抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の生産を記載する。各Ｆａｂ’フラグメントはＥ．ｃｏｌｉから別々に分泌され、インビトロにて指向性化学カップリングに付され、二特異的抗体を形成した。
【０４８６】
組換え細胞培養から直接的に二特異的抗体フラグメントを作成し、それを単離する種々の技術も記載されている。例えば、二特異的抗体はロイシンジッパーを用いて生産されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドは遺伝子誘導によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結された。抗体ホモダイマーはヒンジ領域が還元されて、モノマーを形成し、次いで、再度酸化されて、抗体ヘテロダイマーを形成した。この方法が抗体ホモダイマーの生産にも利用することができる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）によって記載された「二重特異性抗体」技術は、二特異的抗体フラグメントを作成するための代替メカニズムを提唱した。フラグメントは、同一鎖上の２つのドメインの間での対合を可能とするには余りにも短いリンカーによって、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。従って、１つのフラグメントのＶＨおよびＶＬドメインは、もう１つのフラグメントの相補的ＶＬおよびＶＨドメインと強いて対合させ、それにより、２つの抗原−結合部位を形成する。単一鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーの使用によって二特異的抗体フラグメントを作成するためのもう１つの戦略も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）参照。
【０４８７】
２を超える価数を持つ抗体が考えられる。例えば、三特異的抗体を調製することができる。Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０４８８】
（ｖｉｉ）他のアミノ酸配列の修飾
本明細書中に記載された抗体のアミノ酸配列の修飾が考えられる。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改良するのが望ましいであろう。適当なヌクレオチド変化を抗体の核酸に導入することによって、またはペプチド合成によって、抗体のアミノ酸配列変種を調製する。そのような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／または該残基への挿入および／または該残基の置換を含む。欠失、挿入および置換のいずれかの組合せは最終構築体に到達されるようになされ、但し、最終構築体は所望の特徴を保有するものとする。アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数または位置の変化のような、抗体の翻訳後プロセスを改変することもできる。
【０４８９】
突然変異誘発に対して好都合な位置である抗体のある残基または領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９）によって記載された「アラニン走査突然変異誘発」と呼ばれる。ここで、標的残基の残基または基が同定され（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕのような荷電残基）、中性または負に荷電されたアミノ酸（最も好ましくはアラニンまたはポリアラニン）によって置き換えて、アミノ酸と抗原との相互作用に影響させる。次いで、置換に対する機能的感受性を示すそれらのアミノ酸位置は、さらなるまたは他の変種を置換の部位において、または該部位のためにさらなるまたは他の変種を導入することによって精錬される。かくして、アミノ酸配列変動を導入するための部位は予め決定されているが、突然変異自体の性質は予め決定する必要がない。例えば、与えられた部位における突然変異の性能の分析するためには、ａｌａ走査またはランダム突然変異誘発を標的コドンまたは領域で行い、発現された抗体変種は所望の活性につきスクリーニングされる。
【０４９０】
アミノ酸配列挿入は長さが１つの残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドの範囲のアミノ−および／またはカルボキシル−末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例はＮ−末端メチオニル残基を持つ抗体、または細胞傷害性ポリペプチドに融合した抗体を含む。抗体分子の他の挿入変種は、抗体の血清中半減期を増加させる抗体のＮ−またはＣ−末端の（例えば、ＡＤＥＰＴのための）酵素またはポリペプチドへの融合を含む。
【０４９１】
もう１つのタイプの変種はアミノ酸置換変種である。これらの変種は異なる残基によって置き換えられた抗体分子における少なくとも１つのアミノ酸残基を有する。置換突然変異誘発のための最も興味のある部位は超可変領域を含むが、ＦＲ改変も考えられる。
【０４９２】
抗体の生物学的特性における実質的修飾は、（ａ）例えば、シートまたはラセン立体配座としての、置換の領域におけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷または疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩高性を維持するに対するそれらの効果が有意に異なる置換を選択することによって達成される。天然に生じる残基は通常側鎖の特性に基づいて群に分けられる：
１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ．ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
５）鎖の向きに影響する残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および
６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
【０４９３】
非−保存的置換はもう１つのクラスに代えてのこれらのクラスの１つのメンバーを交換することを含む。
【０４９４】
特に好ましいタイプの実質的変種は、親抗体（ヒト化またはヒト抗体）の１以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる開発のために選択された得られた変種は、それからそれらが生じた親抗体に対して改良された生物学的特性を有する。そのような置換変種を生じさせるための便宜な方法は、ファージディスプレイを用いるアフィニティー突然変異を含む。簡単に述べれば、数個の超可変領域部位（例えば、６〜７部位）を、各部位における全ての可能なアミノ酸置換を生じさせるために突然変異させる。各生じた抗体変種を、各粒子内にパッケージされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩに対する融合としてのフィラメント状ファージ粒子からの一価様式で表示される。次いで、ファージ−表示変種を本明細書中に開示されたそれらの生物学的活性（例えば、結合親和性）につきスクリーニングする。修飾用の候補超可変領域部位を同定するために、アラニン走査突然変異誘発を行って、抗原結合に有意に貢献する超可変領域残基を同定することができる。別法として、あるいは加えて、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析して、抗体および抗原の間の接触点を同定するのが有意であろう。そのような接触残基および隣接残基は、ここに技巧を凝らした技術に従った置換についての候補である。一旦そのような変種が生じたならば、変種のパネルを本明細書中に記載されたスクリーニングに付し、１以上の関連アッセイにおいて優れた特性を持つ抗体をさらなる開発のために選択することができる。
【０４９５】
エファクター機能に関して本発明の抗体を修飾して、例えば、抗原−依存性細胞−媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および／または抗体の補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を増強するのが望ましいであろう。これは、抗体のＦｃ領域に１以上のアミノ酸置換を導入することによって達成することができる。別法として、または加えて、システイン残基をＦｃ領域に導入することができ、それにより、この領域における鎖間ジスルフィド結合形成を可能とする。各生じたホモダイマー抗体は改良された内部化能力および／または増大した補体−媒介細胞殺傷および抗体−依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有することができよう。Ｃａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）参照。増大した抗−腫瘍活性を持つホモダイマー抗体は、Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載されたように、ヘテロ二官能性架橋剤を用いて調製することもできる。別法として、デュアルＦｃ領域を有し、それにより、増強された補体溶解およびＡＤＣＣ能力を有することができる抗体を作成することができる。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３：２１９−２３０（１９８９）参照。
【０４９６】
抗体の血清中半減期を増加させるための、例えば、米国特許第５７３９２７７号に記載されているように、サルベージレセプター結合エピトープを抗体（特に、抗体フラグメント）に組み込むことができる。本明細書中に用いるように、用語「サルベージレセプター結合エピトープ」とは、ＩｇＧ分子のインビボ血清中半減期を増大させることを担うＩｇＧ分子のＦｃ溶液のエピトープをいう（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）。
【０４９７】
（ｖｉｉｉ）グリコシル化変種
本発明のＡＤＣにおける抗体はそれらの定常領域における保存された位置でグリコシル化することができる（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ，（１９９７）Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６５：１１１−１２８；Ｗｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，（１９９７）  ＴｉｂＴＥＣＨ  １５：２６−３２）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖はタンパク質の機能（Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８；Ｗｉｔｔｗｅ  ａｎｄ  Ｈｏｗａｒｄ，（１９９０）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：４１７５−４１８０）、および糖タンパク質の立体配座および示された三次元表面に影響し得る糖タンパク質の部分の間の分子内相互作用（Ｈｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ，前掲；Ｗｙｓｓ  ａｎｄ  Ｗａｇｎｅｒ，（１９９６）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４０９−４１６）に対して影響する。また、オリゴ糖は与えられた糖タンパク質を特異的認識構造に基づいてある種の分子に標的化するように働くこともできる。例えば、無ガラクトシル化ＩｇＧにおいては、オリゴ糖部位はＣＨ２空間間から「フリップ」アウトし、末端Ｎ−アセチルグルコサミン残基はマンノース結合タンパク質に結合するのに利用できるようになったと報告されている。（Ｍａｌｈｏｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．１：２３７−２４３）。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞で生じたＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｈ（ヒトリンパ球のＣＤｗ５２抗原を認識する組み換えヒト化ネズミモノクローナルＩｇＧ１抗体）からのオリゴ糖のグリコペプチダーゼによる除去の結果、補体媒介溶解において完全な還元（ＣＭＣＬ）が起こり（Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８）、他方、ノイラミニダーゼを用いるシアル酸残基の選択的除去の結果、ＤＭＣＬは喪失されなかった。また、抗体のグリコシル化は抗体−依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響することが報告されている。特に、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）のテトラサイクリン−調節発現、ＧｌｃＮＡｃを二等分するグリコシルトランスフェラーゼ触媒形成が伴うＣＨＯ細胞は改良されたＡＤＣＣ発生を有すると報告された（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｍａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０）。
【０４９８】
抗体のグリコシル化は典型的にはＮ−結合かＯ−結合いずれかである。Ｎ−結合とは、炭水化物部位のアスパラギン残基の側鎖への付着をいう。Ｘがプロリン以外のいずれかのアミノ酸であるポリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニンは、アスパラギン側鎖への炭水化物部位酵素付着のための認識配列である。かくして、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は可能なグリコシル化部位を生じる。Ｏ−結合グリコシル化とは、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシリソースのうちの１つのヒドロキシルアミノ酸、最も普通にはセリンまたはスレオニンへの付着をいうが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンを用いることもできる。
【０４９９】
抗体のグリコシル化変種は、抗体のグリコシル化パターンが改変された変種である。改変とは、抗体で見出される１以上の炭水化物部位の欠失、抗体への１以上の炭水化物部位の付加、グリコシル化の組成（グリコシル化パターン）の変化、グリコシル化の程度等を意味する。
【０５００】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、便宜には、それが（Ｎ−結合グリコシル化部位のための）前記ポリペプチド配列の１以上を含有するようにアミノ酸配列を改変することによって達成される。改変は、１以上のセリンまたはスレオニン残基の（Ｏ−結合グリコシル化部位のための）元の抗体への付加、または該残基による置換によってなすこともできる。同様に、グリコシル化部位の除去は、抗体の天然グリコシル化部位内でのアミノ酸改変によって達成することができる。
【０５０１】
アミノ酸配列は、通常、基礎となる核酸配列を改変することによって改変される。これらの方法は、限定されるものではないが、天然源からの単離（天然に生じるアミノ酸配列変種の場合）または先に調製された抗体の変種または非−変種バージョンのオリゴヌクレオチド−媒介（または部位特異的）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、およびカセット突然変異誘発を含む。
【０５０２】
抗体の（グリコシル化パターンを含めた）グリコシル化は、アミノ酸配列または基礎となるヌクレオチド配列を改変することなく改変することもできる。グリコシル化は抗体を発現するのに用いる宿主細胞に大いに依存する。組換え糖タンパク質、例えば、抗体の発現で用いる潜在的療法としての細胞型はまれには天然細胞であるので、抗体のグリコシル化パターンにおける有意な変動を予測することができる。例えば、Ｈｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：９０６２−９０７０参照。宿主細胞の選択に加えて、抗体の組換え生産の間にグリコシル化に影響する因子は増殖の態様、培地処方、培養密度、酸素付加、ｐＨ、精製スキーム等を含む。オリゴ糖生産に関与するある種の酵素の導入または過剰発現を含めた特定の宿主生物で達成されるグリコシル化パターンを改変するために種々の方法が提唱されてきた（米国特許第５０４７３３５号；第５５１０２６１号；第５２７８２９９号）。グリコシル化、またはある種のタイプのグリコシル化は、例えば、エンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ  Ｈ）を用いて糖タンパク質から酵素的に除去することができる。加えて、組換え宿主細胞を遺伝的に作成し、例えば、多糖のあるタイプをプロセッシングするにおいて欠陥を作り出すことができる。これらおよび同様な技術は当該分野でよく知られている。
【０５０３】
抗体のグリコシル化構造は、レクチンクロマトグラフィ、ＮＭＲ、質量分析、ＨＰＬＣ、ＧＰＣ、単糖組成分析、順次の酵素消化、および高ｐＨアニオン交換クロマトグラフィーを用いて電荷に基づいてオリゴ糖を分離するＨＰＡＥＣ−ＰＡＤを含めた、炭水化物分析の従来技術によって容易に分析することができる。分析目的でのオリゴ糖を放出する方法も知られており、限定されるものではないが、（ペプチド−Ｎ−グリコシダーゼＦ／エンド−β−ガラクトシダーゼを用いて通常行われる）酵素処理、主としてＯ−結合構造を放出するために相当なアルカリ性の環境を用いる脱離、およびＮ−およびＯ−結合オリゴ糖双方を放出するために無水ヒドラジンを用いる化学的方法を含む。
【０５０４】
（４．５．２ａ  抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）のためのスクリーニング）
トランスジェニック動物および細胞系は、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ．ＣＤ３０、ＣＤ４０およびＣＤ７０を含めたタンパク質の過剰発現に関与する病気または疾患の予防的または治療的処置として能力を有する抗体薬物結合体（ＡＤＣ）をスクリーニングするのに特に有用である。トランスジェニック動物および細胞系は、ＨＥＲ２の過剰発現に関連する病気または疾患の予防的または治療的処置としての能力を有する抗体薬物結合体（ＡＤＣ）をスクリーニングするのに特に有用である（ＵＳ６６３２９７９）。有用なＡＤＣについてのスクリーニングはトランスジェニック動物である範囲にわたっての容量の候補ＡＤＣを投与し、次いで、評価すべき病気または疾患に対するＡＤＣの効果につき種々の時点でアッセイすることを含むことができる。別法として、あるいは加えて、もし適用可能であれば、病気のインデューサーへの曝露に先立って、またはそれと同時に薬物を投与することができる。培地下で平行して、または高スループットスクリーニングフォーマットにて、候補ＡＤＣを系列的にかつ個々にスクリーニングすることができる。ＡＤＣを病気または疾患の予防的または治療的処置についての有用性につきスクリーニングすることができる速度は、データの検出／測定／分析を含めた、合成またはスクリーニング方法の速度によってのみ制限される。
【０５０５】
１つの実施形態は、（ａ）安定な腎臓細胞癌細胞からの細胞を非−ヒト動物に移植し、（ｂ）ＡＤＣ薬物候補を非−ヒト動物に投与し、次いで、（ｃ）移植された細胞系からの腫瘍の形成を阻害する候補の能力を決定することを含むスクリーニング方法である。
【０５０６】
もう１つの実施形態は、（ａ）安定なホジキン病細胞系からの細胞をＡＤＣ薬物候補と接触させ、次いで、（ｂ）ＣＤ４０のリガンド活性化をブロックするＡＤＣ候補の能力を評価することを含むスクリーニング方法である。
【０５０７】
もう１つの実施形態は、（ａ）安定なホジキン病細胞系からの細胞をＡＤＣ薬物候補と接触させ、次いで、（ｂ）細胞死滅を誘導するＡＤＣ候補の能力を評価することを含むスクリーニング方法である。１つの実施形態において、アポトーシスを誘導するＡＤＣ候補の能力が評価される。
【０５０８】
１つの実施形態は、（ａ）安定な癌細胞系からの細胞を非−ヒト動物に移植し、（ｂ）ＡＤＣ薬物候補を非−ヒト動物に投与し、次いで、（ｃ）移植された細胞系からの腫瘍の形成を阻害する候補の能力を測定することを含むスクリーニング方法である。また、本発明は、（ａ）安定な乳癌細胞系からの細胞を薬物候補と接触させ、次いで、（ｂ）安定な細胞系の増殖を阻害するＡＤＣ候補の能力を評価することを含む、ＨＥＲ２の過剰発現によって特徴付けられる病気または疾患の治療のためのＡＤＣ候補をスクリーニングする方法に関する。
【０５０９】
もう１つの実施形態は、（ａ）安定な癌細胞系からの細胞をＡＤＣ薬物候補と接触させ、次いで、（ｂ）ＨＥＲ２のリガンド活性化をブロックするＡＤＣ候補の能力を評価することを含むスクリーニング方法である。１つの実施形態において、ヘレブリン結合をブロックするＡＤＣ候補の能力が評価される。もう１つの実施形態において、リガンド−刺激チロシンリン酸化をブロックするＡＤＣ候補の能力が評価される。
【０５１０】
もう１つの実施形態は、（ａ）安定な癌細胞系からの細胞をＡＤＣ薬物候補と接触させ、次いで、（ｂ）細胞死滅を誘導するＡＤＣ候補の能力を評価することを含むスクリーニング方法である。１つの実施形態において、アポトーシスを誘導するＡＤＣ候補の能力が評価される。
【０５１１】
もう１つの実施形態は、（ａ）天然ヒトＨＥＲ２タンパク質またはそのフラグメントをその乳腺細胞において過剰発現するトランスジェニック非−ヒト哺乳動物にＡＤＣ薬物候補を投与し、ここで、そのようなトランスジェニック動物は、そのゲノムに安定に組み込まれた、その発現を該乳腺に向ける転写調節配列に操作可能に連結された、天然ヒトＨＥＲ２の生物学的活性を有する天然ヒトＨＥＲ２をコードする核酸配列またはそのフラグメントを有し、かつ抗−ＨＥＲ２抗体試料に応答しない、または貧弱にしか応答しない乳房腫瘍を発症し、あるいは該ＡＤＣ薬物候補を、該トランスジェニック非−ヒト哺乳動物から移植された腫瘍を担う非−ヒト哺乳動物に投与し；次いで、（ｂ）標的病気または疾患に対するＡＤＣ候補の効果を評価することを含むスクリーニング方法である。限定されるものではないが、該病気または疾患は乳房、卵巣、胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、結腸、甲状腺、膵臓および膀胱癌のようなＨＥＲ２−過剰発現癌であり得る。該癌は、好ましくは、細胞当たり少なくとも約５００，０００コピー、より好ましくは細胞当たり少なくとも約２，０００，０００コピーにてＨＥＲ２を発現した乳癌である。ＡＤＣ薬物方法は、例えば、当該分野でよく知られ、後に記載するアッセイ方法を用い、細胞死滅および／またはアポトーシスを誘導するそれらの能力につき評価することができる。
【０５１２】
１つの実施形態において、候補ＡＤＣは、ある範囲の用量にわたって、トランスジェニック動物に投与し、次いで、経時的に化合物に対する動物の生理学的応答を評価することによってスクリーニングされる。投与は、評価すべき化合物の化学的性質に応じて、経口であるか、または適当な注射によることができる、いくつかの場合において、化合物の効率を増強させるであろう共因子と組み合わせて化合物を投与するのが適当であろう。もし対象トランスジェニック動物から由来する細胞系を用いて、種々の疾患を治療するのに有用な化合物につきスクリーニングするならば、テスト化合物を適当な時期に細胞培養基に加え、適当な生化学および／または組織学的アッセイを用い、化合物に対する細胞応答を経時的に評価する。いくつかの場合において、化合物の効率を増強させる共因子と組み合わせて注目する化合物を培養基に適応するのが適切であろう。
【０５１３】
かくして、本明細書中において、腫瘍の発症に場合によって関連する細胞増殖および／または分化の病因において、その存在が異常な細胞機能に相関する、標的タンパク質を特異的に標的とし、それに結合するＡＤＣを同定するためのアッセイが提供される。
【０５１４】
ＥｒｂＢ（例えば、ＥｒｂＢ２）レセプターのリガンド活性化をブロックするＡＤＣを同定するために、（例えば、注目するＥｒｂＢレセプターがそれとでＥｒｂＢヘテローオリゴマーを形成するもう１つのＥｒｂＢレセプターと組み合わせて）ＥｒｂＢ（ＥｒｂＢ２）レセプターを発現する細胞へのＥｒｂＢリガンド結合をブロックする化合物の能力を測定することができる。例えば、ＨＥＲ２を過剰発現するトランスジェニック動物から単離され、かつ（それとでＨＥＲ２がヘテロ−オリゴマーを形成する）もう１つのＥｒｂＢレセプターを発現するようにトランスフェクトされた細胞をＡＤＣと共にインキュベートし、すなわち、培養し、次いで、標識されたＥｒｂＢリガンドに曝露することができる。次いで、ＥｒｂＢヘテロ−オリゴマーにおけるＥｒｂＢレセプターへのリガンド結合をブロックする化合物の能力を評価することができる。
【０５１５】
例えば、候補ＡＤＣによって、ＨＥＲ２を過剰発現し、かつここにトランスジェニック非−ヒト哺乳動物（例えば、マウス）から確立された乳癌細胞系へのヘレグリン（ＨＲＧ）の阻害は、２４−ウェル−プレート様式で氷上で単層培養を用いて行うことができる。抗−ＥｒｂＢ２モノクローナル抗体を各ウェルに加え、３０分間インキュベートすることができる。次いで、１２５Ｉ−標識ｒＨＲＧβ１１７７−２２４（２５，０００ｃｐｍ）を加えることができ、インキュベーションを４〜１６時間継続することができる。用量応答曲線を調製することができ、ＩＣ５０値（細胞傷害性活性）を注目する化合物について評価することができる。
【０５１６】
別法として、あるいは加えて、ＥｒｂＢヘテロ−オリゴマーに存在するＥｒｂＢ授与体のＥｒｂＢリガンド−刺激チロシンリン酸化をブロックするＡＤＣの能力を評価することができる。例えば、ここにトランスジェニック動物から確立された細胞形をテストＡＤＣと共にインキュベートすることができ、次いで、（所望により、検出可能な標識と結合体されていてもよい）抗−ホスホチロシンモノクローナル抗体を用い、ＥｒｂＢリガンド−依存性チロシンリン酸化活性につき評価することができる。また、米国特許第５７６６８６３号に記載されたキナーゼレセプター活性化アッセイもまた、ＥｒｂＢレセプター活性化、および化合物によるその活性のブロッキングを測定するのに利用できる。
【０５１７】
１つの実施形態において、実質的に後に記載するように、ＭＣＦ７細胞においてｐ１８０チロシンリン酸化のＨＲＧ刺激を阻害するＡＤＣにつきスクリーニングすることができる。例えば、ＨＥＲ２−トランスジェニック動物から確立された細胞形を２４−ウェルプレートで平板培養することができ、化合物を各ウェルに加え、室温にて３０分間インキュベーションとすることができ、次いでｒＨＲＧβ１１７７−２４４を最終濃度０．２ｎＭまで各ウェルに加えることができ、インキュベーションを約８分間継続することができる。培地を各ウェルから吸引することができ、１００μＬのＳＤＳ試料緩衝液（５％，ＳＤＳ，２５ｍＭ  ＤＴＴ、および２５ｍＭトリス−ＨＣｌ，ｐＨ６．８）を加えることによって反応を停止させることができる。各試料（２５μＬ）を４〜１２％グラジエントゲル（Ｎｏｖｅｘ）上で電気泳動に付すことができ、次いで、電気泳動により二フッ化ポリビニリデン膜に移すことができる。（１μｇ／ｍＬ脳）抗ホスホチロシン免疫ブロットを発色させることができ、Ｍｒ−１８０，０００）における圧倒的な反応性バンドの強度を反射率デンシトメトリーによって定量することができる。レセプターリン酸化の疎外を評価するための代替方法は、Ｐｈａｒｍ．およびＢｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．のＳａｄｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊｏｕｒ．のＫＩＲＡ（キナーゼレセプター活性化）アッセイである。ｐ１８０チロシンリン酸化のＨＲＧ刺激を阻害することが知られているＨＥＲ２に対するよく確立されたモノクローナル抗体のいくつかをこのアッセイにおいて陽性対照として用いることができる。反射率デンシトメトリーによって測定されたｐ１８０チロシンリン酸化のＨＲＧ刺激の阻害に対する用量−応答曲線を作成することができ、注目する化合物についてのＩＣ５０を計算することができる。
【０５１８】
また、例えば、実質的にＳｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １５：１３８５−１３９４に記載されているように、ＨＥＲ２−トランスジェニック動物に由来する細胞系に対するテストＡＤＣの増殖阻害効果を評価することもできる。このアッセイによると、細胞を種々の濃度にてテスト化合物で４日間処理し、クリスタルバイオレットまたはレドックス色素Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅで染色することができる。化合物とのインキュベーションは、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５細胞についてのモノクローナル抗体２Ｃ４によって表示されたものと同様なこの細胞系に対する増殖阻害効果を示すことができる（Ｓｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，前掲）。さらなる実施形態において、外因性ＨＲＧはこの阻害を有利には逆行させない。
【０５１９】
注目する抗原を特異的に標的とする増殖阻害効果を同定するために、トランスジェニック動物に由来する注目する抗原を過剰発現する癌細胞の増殖を阻害する化合物につきスクリーニングすることができ、米国特許第５６７７１７１号に記載されたアッセイを行うことができる。このアッセイによると、注目する抗原を過剰発現する癌細胞は、１０％胎児ウシ血清、グルタミンおよびペニシリンストレプトマイシンを補足したＦ１２およびＤＭＥＭ培地の１：１混合物中で増殖させる。細胞を３５ｍｍ細胞培養皿中で２０，０００細胞で平板培養し（２ｍＬ／３５ｍｍ皿）、テスト化合物を種々の濃度で加える。６日後に、電子ＣＯＵＬＴＥＲＴＭ細胞カウンターを用い、実処理細胞と比較した、細胞の数をカウントする。細胞の増殖を約２０〜１００％または約５０〜１００％だけ阻害する化合物を増殖阻害化合物として選択することができる。
【０５２０】
細胞死滅を誘導する化合物につき選択するために、例えば、ＰＩ、トリパンブルーまたは７ＡＡＤで摂取によって示された膜一体性の喪失は対照に対して評価することができる。該ＰＩ摂取アッセイは、トランスジェニック動物の注目する腫瘍組織から単離された細胞を用いる。このアッセイによると、細胞を、１０％加熱−不活化ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）および２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを補足したダルベッコウの修飾イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ）：ハムのＦ−１２（５０：５０）中で培養する。かくして、アッセイは補体および免疫エフェクター細胞の不存在下で行われる。細胞は１００×２０ｍｍ皿中にて皿当たり３×１０６の密度にて摂取し、一晩付着させる。次いで、倍地を除去し、新鮮な培地単独、または種々の濃度の化合物を含有する倍地で置き換える。細胞を３日の間インキュベートする。各処理の後、単層をＰＢＳで洗浄し、トリプシン処理によって脱着させる。次いで、細胞を１２００ｒｐｍにおいて４℃で５分間遠心し、ペレットを３ｍＬ冷Ｃａ２＋結合緩衝液（１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ，ｐＨ７．４，１４０ｍＭ  ＮａＣｌ，２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２）、細胞クランプを除去するために、３５ｍｍストレイナー−キャップを付した１２×７５ｍｍチューブに小分けする（チューブ当たり１ｍＬ，処理群当たり３チューブ）。次いで、チューブにＰＩ（１０μｇ／ｍＬ）を受けさせる。ＦＡＣＳＣＡＮＴＭフローサイトメーターおよびＦＡＣＳＣＯＮＶＥＲＴＴＭ  ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウエア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて試料を分析することができる。ＰＩ摂取によって測定して細胞死滅の統計学的に有意なレベルを誘導する化合物を細胞死滅−誘導化合物として選択することができる。
【０５２１】
アポトーシスを誘導する化合物につき選択するために、トランスジェニック動物の注目する腫瘍組織から確立された細胞を用いるアネキシン結合アッセイを行う。細胞を培養し、先のパラグラグで議論したようにさらに摂取する。次いで、培地を除去し、新鮮な培地単独、または１０μｇ／ｍＬ抗体薬物結合体（ＡＤＣ）を含有する培地で置き換える。３日のインキュベーション時間の後、単層をＰＢＳで洗浄し、トリプシン処理によって脱着される。次いで、細胞を遠心し、Ｃａ２＋結合緩衝液に再度懸濁し、細胞死滅アッセイについて前記で議論したようにチューブに小分けする。次いで、チューブに標識したアネキシン（例えば、アネキシンＶ−ＦＩＴＣ）（１μｇ／ｍＬ）受けさせる。ＦＡＣＳＴＡＮＴＭフローサイトメーターおよびＦＡＣＳＣＯＮＶＥＲＴＴＭ  ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウエア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて試料を分析することができる。対照に対して統計学的に有意なレベルのアネキシン結合を誘導する化合物をアポトーシス−誘導化合物として選択する。
【０５２２】
（４．５．３  インビトロ細胞増殖アッセイ）
一般に、抗体薬物結合体（ＡＤＣ）の細胞傷害性または細胞静止活性は：細胞培養基中のＡＤＣの抗体に、レセプタータンパク質を有する哺乳動物細胞を曝露し；約６時間〜約５日の期間、細胞を培養し、次いで、細胞生存率を測定することによって測定される。細胞−ベースのインビトロアッセイを用いて生存率（増殖）、細胞傷害性、および本発明のＡＤＣのアポトーシスの誘導（カスパーゼ活性化）を測定した。
【０５２３】
抗体薬物結合体のインビトロ能力は、細胞増殖アッセイ（実施例１８，図７〜１０）によって測定した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）ルミネセント細胞生存率アッセイは商業的に入手可能であり（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、これはＣｏｌｅｌｐｔｅｒａ  ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの組換え発現に基づく均一アッセイ方法である（米国特許第５５８３０２４号；第５６７４７１３号および第５７００６７０号）。この細胞増殖アッセイは、存在するＡＴＰ、代謝的に活性な細胞のインジケーターの定量に基づいて培養中の生きた細胞の数を測定する（Ｃｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８，米国特許第６６０２６７７号）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは９６ウェルフォーマットで行い、それを自動化高スループットスクリーニング（ＨＴＳ）で使用できるようにする（Ｃｒｅｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  ６：３９８−４０４）。均一なアッセイ手法は、血清−補足培地中で培養される細胞へ直接的に単一試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｒｅａｇｅｎｔ）を加えることができる。細胞洗浄、培地の除去、および複数のピペッティング工程は必要とされない。該システムは、試薬の添加および混合の後に、１０分以内に３８４ウェルフォーマットにて１５細胞／ウェルと少数を検出する。細胞はＡＤＣで連続的に処理することができるか、あるいはそれらは処理し、ＡＤＣから分離することができる。一般に、簡単に、すなわち、３時間処理した細胞は連続的に処理した細胞と同一の能力効果を示した。
【０５２４】
均一「添加−混合−測定」フォーマットの結果、細胞が溶解し、存在するＡＴＰの量に比例したルミネセントシグナルが発生する。ＡＴＰの量は培養に存在する細胞の数に直接的に比例する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、用いた細胞型および培地において、一般には５時間よりも大きな半減期を有する、ルシフェラーゼ反応によって生じた「グロー−タイプ」のルミネセントシグナルを発生する。生きた細胞は相対的ルミネッセンス単位（ＲＬＵ）で反映される。基質Ｂｅｅｔｌｅ  Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎは、組換えホタルルシフェラーゼによって酸化的に脱カルボキシル化され、同時にＡＴＰからＡＭＰへの変換およびフォトンの発生が伴う。延長された半減期は、試薬インジェクターを用いる必要性を排除し、多数プレートの連続的またはバッチ様式のプロセッシングに対する柔軟性を提供する。この細胞増殖アッセイは種々のマルチウェルフォーマット、例えば、９６または３８４ウェルフォーマットで用いることができる。データはルミノメーターまたはＣＣＤカメライメージングデバイスによって記録することができる。ルミネセンス出力は、経時的に測定された相対的光単位（ＲＬＵ）として表される。
【０５２５】
【化１７７】
2011231131.tif 000097
抗体薬物結合体の抗−増殖効果は細胞増殖によって測定され、これは４つの異なる乳癌細胞系に対する前記したインビトロ細胞殺傷アッセイである（図７〜１０）。ＩＣ５０値は、ＨＥＲ２レセプタータンパク質を過剰発現することが知られているＳＫ−ＢＲ−３およびＢＴ−４７４につき確立された。表２ａはＳＫ−ＢＲ−３細胞に対する細胞増殖アッセイにおける例示的抗体薬物結合体の能力（ＩＣ５０）測定を示す。表２ｂは、ＢＴ−４７４細胞に対する細胞増殖アッセイにおける例示的抗体薬物結合体の能力（ＩＣ５０）測定を示す。
【０５２６】
抗体薬物結合体：トラスツヅマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、３．８ＭＭＡＦ／Ａｂ；トラスツズマブ−ＭＣ−（Ｎ−Ｍｅ）ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、３．９ＭＭＡＦ／Ａｂ；トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ、４．１ＭＭＡＦ／Ａｂ；トラスツヅマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、４．１ＭＭＡＥ／Ａｂ；トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、３．３ＭＭＡＥ／Ａｂ；およびトラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、３．７ＭＭＡＦ／ＡｂはＭＣＦ−７細胞の増殖を阻害しなかった（図９）。
【０５２７】
抗体薬物結合体：トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、４．１ＭＭＡＥ／Ａｂ；トラスツヅマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、３．３ＭＭＡＥ／Ａｂ；トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、３．７ＭＭＡＦ／Ａｂ；トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、３．８ＭＭＡＦ／Ａｂ：トラスツズマブ−ＭＣ−（Ｎ−Ｍｅ）ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、３．９ＭＭＡＦ／Ａｂ；およびトラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ、４．１ＭＭＡＦ／ＡｂはＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞の増殖を阻害しなかった（図１０）。
【０５２８】
ＭＣＦ−７およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞はＨＥＲ２レセプタータンパク質を過剰発現しない。従って、本発明の抗−ＨＥＲ２抗体薬物結合体はＨＥＲ２を発現する細胞の阻害に対して選択性を示す。
【０５２９】
【化１７８】
2011231131.tif 000098
【０５３０】
【化１７９】
2011231131.tif 000099
Ｈ＝トラスツズマブ
７Ｃ２＝トラスツズマブとは異なるエピトープに結合する抗−ＨＥＲ２ネズミ抗体
Ｆｃ８＝ＦｃＲｎに結合しない突然変異体
Ｈｇ＝重鎖ヒンジシステインがセリンに突然変異した「ヒンジレス」全長ヒト化４Ｄ５、Ｅ．ｃｏｌｉで発現（したがって、非−グリコシル化）。
【０５３１】
抗−ＴＦ  Ｆａｂ＝抗−組織因子抗体フラグメント
＊ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞に対する活性。
【０５３２】
驚くべきかつ予期せぬ発見において、以下の表２ａおよび２ｂにおけるＡＤＣのインビトロ細胞増殖活性の結果は、一般には、抗体当たり低い薬物部分の平均数を持つＡＤＣが効率、例えば、ＩＣ５０＜０．１μｇ  ＡＤＣ／ｍＬを示したことを示す。結果は、少なくともトラスツズマブＡＤＣについては、抗体当たりの薬物部分の最適比率は８未満であり得、約２〜５であり得る。
【０５３３】
（４．５．４  インビボ血漿クリアランスおよび安定性）
ＡＤＣの薬物動態学血漿クリアランスおよび安定性をラットおよびマカクザルで調べた。血漿中濃度を経時的に測定した。表２ｃはラットにおける抗体薬物結合体および他の投与された試料の薬物動態学データを示す。ラットはＥｒｂＢレセプター抗体についての非−特異的モデルである。というのは、該ラットはＨＥＲ２レセプタータンパク質を発現することが知られていないためである。
【０５３４】
（表２ｃ    ラットにおける薬物動態学）
Ｈ＝注記した以外はシステイン［ｃｙｓ］を介して連結されたトラスツズマブ
注記した以外は２ｍｇ／ｋｇ用量
【０５３５】
【化１８０】
2011231131.tif 000100
【０５３６】
【化１８１】
2011231131.tif 000101
【０５３７】
【化１８２】
2011231131.tif 000102
ＡＵＣ  ｉｎｆは、投与の時間から無限までの血漿濃度−時間曲線下面積であり、測定されたもの（薬物、ＡＤＣ）への合計曝露の尺度である。ＣＬは単位時間における測定されたものから除去された血漿の容量と定義され、体重に対して正規化することによって表される。Ｔ１／２時間はその排除相の間に測定された体中の薬物の半減期である。％結合体時間は、別のＥＬＩＳＡ免疫アフィニティーテストによって検出された全抗体と比較したＡＤＣの相対量である（「Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ」，  Ｆｅｒｒａｉｏｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，ｐ８５−９８  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  （１９９４）  Ｐ．Ｇ．Ｗｅｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｌ．Ｐ．Ｂａｌａｎｔ，編，  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１１０，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）。％結合体の計算は単純にＡＤＣのＡＵＣｉｎｆ÷ＡＵＣｉｎｆ合計Ａｂであり、リンカー安定性の一般的インジケーターであるが、他の因子およびメカニズムも有効であり得る。
【０５３８】
図１１は抗体薬物結合体：Ｈ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ−ＴＥＧおよびＨ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットへの投与の後における血漿濃度クリアランス実験のグラフを示す。合計抗体およびＡＤＣの濃度は経時的に測定した。
【０５３９】
図１２は２段階血漿濃度クリアランス実験のグラフを示し、ここで、ＡＤＣは異なる用量で投与され、合計抗体およびＡＤＣの濃度は経時的に測定された。
【０５４０】
インビボ効率
本発明のＡＤＣのインビボ効率は、高発現ＨＥＲ２トランスジェニック外植体マウスモデルによって測定した。同種異系移植片を、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）療法に応答しない、または貧弱にしか応答しないＦｏ５  ｍｍｔｖトランスジェニックマウスから増殖させた。対象をＡＤＣで１回処理し、３〜６週間にわたってモニターして、腫瘍倍化までの時間、ｌｏｇ細胞殺傷、および腫瘍修飾を測定した。続いての用量−応答および多用量実験を行った。
【０５４１】
腫瘍はｎｅｕ、ＨＥＲ２のラットホモログの突然変異的に活性化された形態を発現するトランスジェニックマウスにおいて容易に生起するが、乳癌で過剰発現されたＨＥＲ２は突然変異せず、非突然変異ＨＥＲ２を過剰発現するトランスジェニックマウスにおいては腫瘍形成は余り頑強ではない（Ｗｅｂｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．５：６９−７６）。
【０５４２】
非突然変異ＨＥＲ２での腫瘍形成を改善するために、上流ＡＴＧを欠失して、そのような上流ＡＴＧ：においてトランスローケーションの開始を妨げ、そうでなければ、ＨＥＲ２の下流真正開始コドンからの翻訳開始の頻度を低下させるＨＥＲ２  ｃＤＮＡプラスミドを用いてトランスジェニックマウスを生産した（例えば、Ｃｈｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２４３３５−２４３４１）。加えて、キメライントロンを５’末端に加え、これは従前に報告されているように発現のレベルをやはり増強させるはずである（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ＆  Ｗｉｌｌｉａｍｓ（１９８８）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：６７１３；Ｂｕｃｈｍａｎ  ａｎｄ  Ｂｅｒｇ（１９８８）  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：４３９５；Ｂｒｉｎｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：８３６）。キメライントロンはＰｒｏｍｅｇａベクター、ｐＣＩ−ｎｅｏ哺乳動物発現ベクター（ｂｐ８９０−１０２２）に由来した。ｃＤＮＡの３’−末端には、ヒト成長ホルモンエクソン４および５およびポリアデニル化配列が近接する。さらに、ＦＶＢマウスを用いた。なぜならば、この株は腫瘍発症により感受性だからである。ＭＭＴＶ−ＬＴＲからのプロモーターを用いて、乳腺での組織−特異的ＨＥＲ２発現を確実とした。動物にＡＩＮ  ７６Ａダイエットを与えて、腫瘍形成に対する罹患性を増大させた（Ｒａｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ４５：１４９−１５８）。
【０５４３】
（表２ｄ  異種同系移植片マウスモデル−ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２  Ｆｏ５における腫瘍測定）
乳房腫瘍、無胸腺ヌードマウス
注記しない以外は日１（Ｔ＝０）において単一用量
Ｈ＝注記しない以外はシステイン［ｃｙｓ］を介して連結されたトラスツズマブ
【０５４４】
【化１８３】
2011231131.tif 000103
【０５４５】
【化１８４】
2011231131.tif 000104
【０５４６】
【化１８５】
2011231131.tif 000105
７Ｃ２＝トラスツズマブとは異なるエピトープと結合する抗−ＨＥＲ２マウス抗体
Ｆｃ８＝ＦｃＲｎに結合しない突然変異体
Ｈｇ＝重鎖ヒンジシステインがセリンに突然変異した、「ヒンジレス」全長ヒト化４Ｄ５、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現（したがって、非−グリコシル化）
２Ｈ９＝抗−ＥｐｈＢ２Ｒ
１１Ｄ１０＝抗−０７７２Ｐ。
【０５４７】
用語ＴｉはＴ＝０における腫瘍を持つ実験群における動物の数を群における合計動物で割ったものである。用語ＰＲは腫瘍の部分的緩解を獲得する動物の数を群におけるＴ＝０での腫瘍を持つ動物で割ったものである。用語ＣＲは腫瘍の完全な緩解を達成する動物の数を群におけるＴ＝０での腫瘍を持つ動物で割ったものである。用語Ｌｏｇ細胞殺傷は倍化する腫瘍容量についての日数で表した時間から倍化する対照腫瘍容量についての日数で表した時間を引いて、（賦形剤を投与した）対照動物において倍化する腫瘍容量についての時間に３．３２を掛けたもので割ったものである。ｌｏｇ−細胞−殺傷計算は、処理から得られた腫瘍成長の遅延、および対照群の腫瘍容量の倍化時間を考慮する。ＡＤＣの抗−腫瘍発生は：
＋＋＋＋      ＞３．４（かなり活性）
＋＋＋      ＝２．５〜３．４
＋＋      ＝１．７〜２．４
＋      ＝１．０〜１．６
不活性      ＝０
のｌｏｇ−細胞−殺傷値で分類される。
【０５４８】
図１３は、賦形剤、トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（１２５０μｇ／ｍ２）およびトラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ（５５５μｇ／ｍ２）を日０に投与したＭＭＴＶ−ＨＥＲ２  Ｆｏ５乳癌同種異系移植片を持つ無胸腺ヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍容量変化を意味する（Ｈ＝トラスツズマブ）。腫瘍の成長は、成長の対象（賦形剤）レベルと比較してＡＤＣでの処理によって遅延された。図１４は１０ｍｇ／ｋｇ（６６０μｇ／ｍ２）のトラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＥおよび１２５０μｇ／ｍ２トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを日０に投与したＭＭＴＶ−ＨＥＲ２  Ｆｏ５乳癌同種異系移植片を持つ無胸腺ヌードマウスにおける経時的平均腫瘍容量変化を示す。図１５は、６５０μｇ／ｍ２トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦを投与したＭＭＴＶ−ＨＥＲ２  Ｆｏ５乳癌同種異系移植片を持つ無胸腺ヌードマウスにおける経時的平均腫瘍容量変化を示す。表２ｄおよび図１３〜１５は、ＡＤＣが、元来ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２トランスジェニックマウスにおいて生起したＨＥＲ２陽性腫瘍（Ｆｏ５）の同種異系移植片において強力な抗−腫瘍発生を有することを示す。抗体単独（例えば、トラスツズマブ）はこのモデルにおいて有意な抗−腫瘍活性を有しない（Ｅｒｉｃｋｓｏｎ  ｅｔ
ａｌ．米国特許第６６３２９７９号）。図１３〜１５に示すように、腫瘍の成長は、成長の対照（賦形剤）レベルと比較してＡＤＣでの処理によって遅延された。
【０５４９】
驚くべきかつ予期せぬ発見において、表２ｄにおけるＡＤＣのインビボ抗−腫瘍活性の結果は、一般には、抗体当たりの薬物部分の低い平均数を持つＡＤＣが効率、例えば、腫瘍倍化時間＞１５日および平均ｌｏｇ細胞殺傷＞１．０を示したことを示す。図１６は、抗体薬物結合体、トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦについては、平均腫瘍容量が減少し、進行せず、ここで、ＭＭＡＦ：トラスツズマブ比率は２および４であり、他方、賦形剤（緩衝液）よりも低い速度ではあるが、腫瘍は５．９および６の比率で進行したことを示す。このマウス異種移植片モデルにおける腫瘍進行の速度は賦形剤およびトラスツズマブにつきほぼ同一、すなわち、３日であった。結果は、少なくともトラスツズマブＡＤＣでは、抗体当たりの薬物部分の最適比率は約８未満となり得、約２〜約４であり得ることを示唆する。
【０５５０】
（４．５．５  げっ歯類毒性）
抗体薬物結合体およびＡＤＣ−マイナス対照、「賦形剤」を、急性毒性ラットモデルで評価した。ＡＤＣの毒性はＡＤＣを持つ雄および雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの処理、種々の器官に対する効果の引き続いての精査および分析によって調べた。肉眼での観察は、体重の変化および病巣および出血の兆候を含むものであった。臨床的微病理学パラメーター（血清化学および血液学）、組織病理学、および剖検を投与した動物で行った。
【０５５１】
ＡＤＣを投与した後のマウスにおいて、体重喪失、または賦形剤のみを投与した動物のマウス体重変化は全身または局所化毒性の肉眼でのおよび一般的インジケーターであると考えられる。図１７〜１９は、ラット体重に対する投与後における種々のＡＤＣおよび対照（賦形剤）の効果を示す。
【０５５２】
肝臓毒性は上昇した肝臓酵素、上昇した数の有糸分裂およびアポトーシス図の増大した数および肝細胞壊死によって測定した。血液リンパ系毒性は白血球、主として顆粒球（好中球）、および／または血小板の枯渇、およびリンパ系器官の関与、すなわち、萎縮またはアポトーシス活性によって観察した。毒性は有糸分裂およびアポトーシス図の増大した数および変性腸炎のような胃腸管病巣によっても記載した。
【０５５３】
調べた肝臓負傷の指標である酵素は：ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）
−局所化／細胞質；肝臓、心臓、骨格筋、腎臓
−肝臓：７０００：１の血漿比率
−Ｔ１／２：１７時間
ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）
−局所化：細胞質；肝臓、腎臓、心臓、骨格筋
−３０００：１の肝臓：血漿比率
−Ｔ１／２：４２時間；日周期性変動
ＧＧＴ（ｇ−グルタミルトランスフェラーゼ）
−局所化：高い分泌または吸収能力を持つ細胞の原形質膜：肝臓、腎臓、腸
−腎臓負傷の貧弱なプレディクター；通常単管疾患で上昇
を含む。
【０５５４】
トラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＭＭＡＦ、トラスツズマブ−ＭＣ（Ｍｅ）−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦおよびトラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦの毒性プロフィールを雌Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットで調べた（実施例１９）。ヒト化トラスツズマブ抗体は認識可能にラット組織に結合せず、いずれの毒性も非特異的と考えられよう。８４０および２１０５ｕｇ／ｍ２  ＭＭＡＦの用量レベルにおける変種を２１０５ｕｇ／ｍ２におけるトラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦと比較した。
【０５５５】
群１、２、３、４，６および７における動物（各々、賦形剤、９．９４＆２４．９０ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＭＭＡＦ，１０．６９ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ−ＭＣ（Ｍｅ）−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、および１０．１７＆２５．５０ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ）は、実験の間に体重が増加した。群５および８における動物（各々、２６．７８ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ−ＭＣ（Ｍｅ）−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦおよび２１．８５ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ）は実験の間に体重を喪失した。実験日５では、群２、６および７における動物の体重の変化は群１動物から有意には異ならなかった。群３、４，５および８における動物の体重の変化は群１の動物から実質的に異なった（実施例１９）。
【０５５６】
トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦで処理したラット（群６および７）は双方の用量レベルにおいて賦形剤−処理対照動物から区別できず；すなわち、この結合体はこのモデルにおいて優れた安全性プロフィールを示した。トラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＭＭＡＦで処理したラット（自己−犠牲ＰＡＢ部位無し；群２および３）はＭＭＡＦ結合体に典型的な用量−依存性変化を示し；変化の程度は全長ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ結合体（群８）と比較して低かった。日５での血小板カウントは、群８（高用量トラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ）の動物における１５％と比較して群３（高用量トラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＭＭＡＦ）の動物においてベースライン値のほぼ３０％であった。ビリルビンの肝臓酵素ＡＳＴおよびＡＬＴの上昇、および血小板減少症の程度は用量−依存的にトラスツズマブ−ＭＣ（Ｍｅ）−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦで処理した動物（群４および５）において最も明らかであった；群５の動物（高用量群）は、日５において、ベースライン値のほぼ１０倍のＡＬＴのレベルを示し、血小板は剖検の時点においてほぼ９０％だけ低下した。
【０５５７】
雌Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにも高レベルにて（実施例１９、高用量実験：群２、３、４）トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ、および賦形剤  対照（群１）を投与した。肝臓酵素ＡＬＴ、ＡＳＴおよびＧＧＴの用量−依存性上昇を含めた中程度の毒性シグナルが観察された。日５では、最高容量群における動物はＡＬＴの２倍上昇およびＡＳＴの５倍上昇を示し；ＧＧＴも上昇した（６Ｕ／Ｌ）。酵素レベルは日１２に正規化に向けた傾向を示す。日５には全ての３つの用量の群において穏和な顆粒球増加症があり、血小板カウントは全ての動物において実質的に不変のままであった。形態学的変化は穏和であり；４２１０μｇ／ｍ２用量レベル（群２）で処理した動物は肝臓、脾臓、胸腺、腸および骨髄の顕著ではない履歴を示した。穏和に増大したアポトーシスおよび有糸分裂活性は５５００μｇ／ｍ２用量レベルで処理した動物において、各々、胸腺および肝臓で観察された（群３）。骨髄は正常細胞であったが、顆粒球過形成の証拠を示し、これは、これらの動物における末梢血液カウントで観察された絶対的顆粒球減少症と合致する。群４における最高用量での動物は定性的に同一の特徴を示した：肝臓における有糸分裂活性は、幾分、群３における動物と比較して増大したように見える。また、骨髄外造血が脾臓および肝臓で観察された。
【０５５８】
ＥｐｈＢ２Ｒはマウスおよびヒトの間で密接な相同性があるタイプ１のＴＭチロシンキナーゼレセプターであり、結直腸癌細胞で過剰発現される。２Ｈ９はＥｐｈＢ２Ｒに対する抗体である。裸の抗体は腫瘍増殖に対して効果を有さないが、２Ｈ９−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＭＭＡＥはＥｐｈＢ２Ｒ発現細胞を殺し、ＣＸＦ１１０３ヒト結腸腫瘍を用いるマウス異種移植片モデルにおいて効率を示した（Ｍａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：７８１−７８８）。２Ｈ９および７Ｃ２は共にマウスＩｇＧ１抗−ＨＥＲ２抗体である。２Ｈ９−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ（３．７ＭＭＡＦ／Ａｂ）、７Ｃ２−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ（４ＭＭＡＦ／Ａｂ）、およびトラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ（５．９ＭＭＡＦ／Ａｂ）の毒性プロフィールを比較した。各免疫結合体または免疫結合体の薬物部分の構造における差は薬物動態学および、結局は安全性プロフィールに影響し得る。ヒト化トラスツズマブ抗体はラット組織に認識可能に結合せず、いずれの特性も非特異的と考えられるであろう。
【０５５９】
（マカクザル毒性／安全性）
ラット毒性／安全性実験と同様に、マカクザルをＡＤＣで処理し、続いて、肝臓酵素測定、および種々の器官に対する効果の精査および分析を行った。肉眼での観察は体重の変化および病巣および出血の兆候を含んだ。臨床病理学パラメーター（血清化学および血液学）、組織病理学、および剖検を投与した動物で行った（実施例１９）。
【０５６０】
抗体薬物結合体、Ｈ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（Ｈ＝システインを介して連結したトラスツズマブ連結）はテストした用量レベルのいずれにおいても肝臓毒性の証拠を示さなかった。末梢血液顆粒球は１１００ｍｇ／ｍ２の単一用量の後の枯渇を示し、投与から１４日後に完全な回復を伴った。抗体薬物結合体Ｈ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦは５５０（一過性）および８８０ｍｇ／ｍ２用量レベルにおける肝臓酵素の上昇を示し、顆粒球減少症の証拠を示さず、および血小板の用量−依存性一過性（群２および３）の減少を示した。
【０５６１】
（４．６  本発明の化合物の合成）
例示的化合物および例示的結合体はスキーム５〜１６にて後に概説する合成手法を用いて作成することができる。後により詳細に記載するように、例示的化合物または例示的結合体は、便利には、薬物およびリガンドへの結合用の反応性部位を有するリンカーを用いて調製することができる。１つの態様において、リンカーは、限定されるものではないが、抗体のようなリガンドに存在する求核性基に対して反応性である親電子性基を有する反応性部位を有する。抗体上の有用な求核性基は、限定されるものではないが、スルフヒドリル、ヒドロキシルおよびアミノ基を含む。抗体の求核性基のへテロ原子はリンカー上の親電子性基に対して反応性であって、リンカーユニットに対する共有結合を訂正する。有用な親電子性基は、限定されるものではないが、マレイミドおよびハロアセトアミド基を含む。新電子性基は抗体付着用の便宜な部位を提供する。
【０５６２】
もう１つの実施形態において、リンカーは、抗体に存在する親電子性基に対して反応性である求核性基を有する反応性部位を有する。抗体上の有用な親電子性基は、限定されるものではないが、アルデヒドおよびケトンカルボニル基を含む。リンカーの親電子性基のヘテロ原子は抗体上の親電子性基と反応し、抗体ユニットに対する共有結合を形成することができる。リンカー上の有用な求核性基は、限定されるものではないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレートおよびアリールヒドラジドを含む。抗体上の親電子性基はリンカーに対する付着用の便宜な部位を提供する。
【０５６３】
カルボン酸官能基およびクロロホルメート官能基もまたリンカー用の有用な反応性部位である。なぜならば、それらは薬物の第二級アミノ基と反応して、アミド結合を形成できるからである。また、反応性部位として有用なのは、カルバメート結合を形成するための、限定されるものではないが、Ｎ−メチルバリンのような薬物のアミノ基と反応することができるｐ−ニトロフェニルカルボネートのようなリンカー上のカルボネート官能基である。典型的には、ペプチド−ベースの薬物は、２以上のアミノ酸および／またはペプチドフラグメントの間にペプチド結合を形成することによって調製することができる。そのようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野においてよく知られた液相合成方法（Ｅ．Ｓｃｈｒoｄｅｒ  ａｎｄ  Ｋ．Ｌuｂｋｅ，「Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐｐ７６−１３６，１９６５  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）に従って調製することができる。
【０５６４】
親電子マレイミド基を有する例示的ストレッチャーの合成はスキーム８〜９において以下に示す。リンカーの合成で有用な一般的合成方法はスキーム１０で記載する。スキーム１１はｖａｌ−ｃｉｔ基、親電子性マレイミド基およびＰＡＢ自己−犠牲スペーサー基を有するリンカーユニットの構築を示す。スキーム１２は、ＰＡＢ自己−犠牲スペーサー基を含むまたは含まない，ｐｈｅ−ｌｙｓ吸入基、親電子マレイミド基を有するリンカーの合成を示す。スキーム１３は薬物−リンカー化合物の合成のための一般的概説を表し、他方、スキーム１４は薬物−リンカー化合物を調製するための別の経路を表す。スキーム１５はＢＨＭＳ基を含有する分岐したリンカーの合成を示す。スキーム１６は薬物−リンカー−抗体結合体を形成するための薬物−リンカー化合物への抗体の付着を概説し、スキーム１４は、例えば、限定されるものではないが、抗体当たり２または４の薬物を有する薬物−リンカー−交代結合体の合成を示す。
【０５６５】
後により詳細に記載するように、例示的結合体は、薬物およびリガンドに結合するための２以上の反応性部位を有するリンカーを用いて便宜には調製される。１つの態様において、リンカーは抗体のようなリガンドに存在する求核性基に対して反応性である親電子基を有する反応性部位を有する。抗体上の有用な求核性基は、限定されるものではないが、スルフヒドリル、ヒドロキシルおよびアミノ基を含む。抗体の求核性基のヘテロ原子はリンカー上の親電子性基に対して反応性であって、リンカーユニットへの共有結合を形成する。有用な親電子性基は、限定されるものではないが、マレイミドおよびハロアセタミド基を含む。親電子性基は抗体付着のための便宜な部位を提供する。
【０５６６】
もう１つの実施形態において、リンカーは、抗体のようなリガンドに存在する親電子性基に対して反応性である求核性基を有する反応性部位を有する。抗体上の有用な親電子性基は、限定されるものではないが、アルデヒドおよびケトンカルボニル基を含む。リンカーの求核性基のヘテロ原子は抗体上の親電子性基と反応し、抗体ユニットへの共有結合を形成することができる。リンカー上の有用な求核性基は、限定されるものではないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドを含む。抗体上の親電子性基はリンカーに対する付着用の便宜な部位を提供する。
【０５６７】
（４．６．１  薬物部分の合成）
典型的には、ペプチド−ベースの薬物は２以上のアミノ酸および／またはペプチドフラグメントの間のペプチド結合を形成することによって調製することができる。そのようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野でよく知られた液相合成方法に従って調製することができる（Ｅ．Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ  ａｎｄ  Ｋ．Ｌｕｄｋｅ，「Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐｐ７６−１３６，１９６５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ参照）。
【０５６８】
オーリスタチン／ドラスタチン薬物部分は：米国特許第５６３５４８３号；米国特許第５７８０５８８号；Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：５４６３−５４６５；Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １３：２４３−２７７；およびＰｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１５：８５９−８６３の一般的方法に従って調製することができる。
【０５６９】
１つの実施形態において、薬物は、適当な縮合条件下で、好ましくは、ワン−ポット反応において、ほぼ化学量論的当量のジペプチドおよびポリペプチドを合わせることによって調製される。このアプローチは以下のスキーム５〜７で示される。
【０５７０】
スキーム５は式Ｉｂの薬物化合物の合成用の有用な中間体であるＮ−末端ポリペプチドユニットＦの合成を示す。
【０５７１】
（スキーム５）
【０５７２】
【化１８６】
2011231131.tif 000106
スキーム５に示したように、例えば、ＰｙＢｒｏｐおよびジイソプロピルエチルアミンの存在下にて、またはＤＣＣを用い、安定なカップリング条件下で、保護されたアミノ酸Ａ（ここで、ＰＧはアミン保護基を表し、Ｒ４は水素、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、アルキル−アリール、アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環、アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、ここで、Ｒ５はＨおよびメチルから選択され；あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５および６から選択され、それらが結合している炭素分子とで環を形成する）をｔ−ブチルエステルＢ（ここで、Ｒ６は−Ｈおよび−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；およびＲ７は水素、Ｃ１−Ｃ８アルキル、およびＣ３−Ｃ８炭素環、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、アルキル−アリール、アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびアルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択される）とカップリングさせる（例えば、Ｍｉｙａｚａｋｉ，  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９９５，４３（１０），１７０６−１７１８参照）。
【０５７３】
適当な保護基ＰＧ、およびアミノ基を保護基で保護するための適当な合成方法は当該分野でよく知られている。例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版，１９９１，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ参照。例示的保護されたアミノ酸ＡはＰＧ−Ｉｌｅおよび、特に、ＰＧ−Ｖａｌであり、他方、他の適当な保護されたアミノ酸は、限定されるものではないが、ＰＧ−シクロヘキシルグリシル、ＰＧ−シクロヘキシルアラニン、ＰＧ−アミノシクロパンー１−カルボン酸、ＰＧ−アミノイソ酪酸、ＰＧ−フェニルアラニン、ＰＧ−フェニルグリシン、およびＰＧ−ｔｅｒｔ−ブチルグリシンを含む。Ｚは例示的な保護基である。Ｆｍｏｃはもう１つの例示的保護基である。例示的ｔ−ブチルエステルＢはドライソロイシンｔ−ブチルエステルである。
【０５７４】
ジペプチドＣは、例えば、クロマトグラフィーを用いて精製し、引き続いて、例えば、ＰＧがベンジルオキシルカルボニルである場合にはエタノール中のＨ２および１０％Ｐｄ−Ｃを用い、あるいはＦｍｏｃ保護基の除去のためのジメチルアミンを用いて脱保護することができる。得られたアミンＤはアミノ酸ＢＢとで容易にペプチド結合を形成する（ここで、Ｒ１は−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよび−Ｃ３−Ｃ８炭素環から選択され；およびＲ２は−Ｈおよび−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；あるいはＲ１およびＲ２は一緒になって、ＲａおよびＲｂが独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよび−Ｃ３−Ｃ８炭素環から選択され，ｎが２、３、４、５および６から選択される式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、かつそれらが結合する窒素原子と一緒になって環を形成し；およびＲ３は水素、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８（アルキル）、−アリール、アルキル−アリール、アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環、およびアルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択される）。Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ酸は商業的に入手可能なＮ，Ｎ−ジメチルバリンのような、ＢＢについての例示的アミノ酸である。他のＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ酸は  高知の手法を用いて還元的にビス−アルキル化によって調製することができる（例えば、Ｂｏｗｍａｎ，Ｒ．Ｅ．，Ｓｔｒｏｕｄ，Ｈ．Ｈ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９５０，１３４２−１３４０参照）。Ｆｍｏｃ−Ｍｅ−Ｌ−ＶａｌおよびＦｍｏｃ−Ｍｅ−Ｌ−グリシンはＮ−モノアルキル誘導体の合成で有用な２つの例示的アミノ酸ＢＢである。アミンＤおよびアミノ酸ＢＢは、塩基としてのトリエチルアミンと共にカップリング試薬ＤＥＰＣを用いてポリペプチドＥを供するように反応する。ＥのＣ−末端保護基は、引き続いて、ＨＣｌを用いて脱保護して、式Ｆのポリペプチド化合物を得る。
【０５７５】
スキーム５に示された説明的ＤＥＰＣカップリング方法およびＰｙＢｒｏｐカップリング方法は、各々、一般的手法Ａおよび一般的手法Ｂに低下に概説する。接触水素化を介するＺ−保護アミンの脱保護のための説明的方法は一般的手法Ｃにて以下に概説する。
【０５７６】
一般的手法Ａ：ＤＥＰＣを用いるペプチド合成。Ｎ−保護またはＮ，Ｎ−ジ置換アミノ酸またはペプチドＤ（１．０当量）およびアミンＢＢ（１．１当量）はジクロロメタン（０．１〜０．５Ｍ）のような非プロトン性有機溶媒で希釈する。次いで、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン（１．５当量）のような有機塩基、続いて、ＤＥＰＣ（１．１当量）を加える。ＨＰＬＣまたはＴＬＣによってモニターしつつ、得られた溶液は好ましくはアルゴン下で１２時間まで撹拌する。溶媒を室温にて真空中で除去し、例えば、ＨＰＬＣまたはフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲルカラム）を用いて租生成物を精製する。関連画分を合わせ、真空中で濃縮して、ポリペプチドＥが得られ、これを真空下で一晩乾燥する。
【０５７７】
一般的手法Ｂ：ＰｙＢｒｏｐを用いるペプチド合成。所望によりカルボキシル保護基を有してもよいアミノ酸Ｂ（１．０当量）をジクロロメタンまたはＤＭＥのような非プロトン性有機溶媒で希釈して、０．５および１．０ｍＭの間の濃度の溶液が得られ、次いで、ジイソプロピルエチルアミン（１．５当量）を加える。Ｆｍｏｃ−またはＺ保護アミノ酸Ａ（１．１当量）を一度に固体として加え、次いで、ＰｙＢｒｏｐ（１．２当量）に得られた混合物に加える。反応をＴＬＣまたはＨＰＬＣにてモニターし、続いて、一般的手法Ａに記載されたのと同様に仕上げ処理手法を行う。
【０５７８】
一般的手法Ｃ：接触水素化を介するＺ−除去。Ｚ−保護アミノ酸またはペプチドＣをエタノールで希釈して、厚壁丸底フラスコのような適当な容器中で０．５および１．０ｍＭの間の溶液を得る。炭素上の１０％パラジウムを加え（５〜１０％ｗ／ｗ）、反応混合物を水素雰囲気下に置く。反応の進行はＨＰＬＣを用いてモニターし、一般には１〜２時間内で完了する。反応混合物を予め洗浄したセライトのパッドを通して濾過し、セライトを濾過の後にメタノールのような極性有機溶媒で再度洗浄する。溶離剤溶液を真空中で濃縮して残渣が得られ、これを有機溶媒、好ましくはトルエンで希釈する、次いで、有機溶媒を真空中で除去して、脱保護されたアミンＣを得る。
【０５７９】
スキーム６は式ＫのＣ−末端ジペプチドを作成するのに有用な方法、および式Ｋのジペプチド結合を式Ｆのポリペプチドとカップリングさせて、式Ｉｂの薬物化合物を作成する方法を示す。
【０５８０】
（スキーム６）
【０５８１】
【化１８７】
2011231131.tif 000107
ジペプチドＫは、スキーム５に示すように、ポリエチルアミンの存在下で、例えば、ＤＥＰＣのようなペプチド化学でよく知られた縮合剤を用いて、修飾されたアミノ酸Ｂｏｃ−ドラプロインＧ（例えば、Ｐｅｔｔｉｔ，Ｇ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９６，７１９−７２５）と式Ｈのアミンとの縮合によって容易に調製することができる。
【０５８２】
次いで、式Ｋのジペプチドを一般的手法Ｄを用いて式Ｆのポリペプチドとカップリングさせて、式ＬのＦｍｏｃ−保護薬物化合物が得られ、これは、引き続いて、一般的手法Ｅを用いて脱保護して、式（Ｉｂ）の薬物化合物を得ることができる。
【０５８３】
一般的手法Ｄ：薬物合成。ジペプチドＫ（１．０当量）およびポリペプチドＦ（１当量）の混合物をジクロロメタンのような非プロトン性有機溶媒で希釈して、０．１Ｍ溶液が形成され、次いで、トリフルオロ酢酸のような強酸（１／２ｖ／ｖ）を加え、窒素雰囲気下で得られた混合物を０℃にて２時間撹拌する。反応をＴＬＣまたは、好ましくはＨＰＬＣを用いてモニターすることができる。溶媒を真空中で除去し、得られた残渣を好ましくはトルエンを用いて共沸により２回乾燥する。得られた残渣を高真空下で１２時間乾燥し、次いで、ジクロロメタンのような非プロトン性有機溶媒で希釈する。次いで、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン（１．５当量）のような有機塩基を加え、引き続いて、残渣に対する化学的官能性に応じてＰｙＢｒｏｐ（１．２当量）またはＤＥＰＣ（１．２当量）いずれかを加える。反応混合物をＴＬＣまたはＨＰＬＣいずれかでモニターし、完了に際して、反応を一般的手法Ａに記載したのと同様または同一の仕上げ手法に付す。
【０５８４】
一般的手法Ｅ：ジエチルアミンを用いるＦｍｏｃ−除去。Ｆｍｏｃ−保護薬物Ｌをジクロロメタンのような非プロトン性有機溶媒で希釈し、得られた溶液にジエチルアミン（１／２ｖ／ｖ）を加える。反応の進行をＴＬＣまたはＨＰＬＣによってモニターし、典型的には、２時間以内に完了する。反応混合物を真空中で濃縮し、得られた残渣を好ましくはトルエンを用いて共沸乾燥し、次いで、高真空下で乾燥して、脱保護されたアミノ基を有する薬物Ｉｂを得る。
【０５８５】
スキーム７は式（Ｉｂ）のＭＭＡＦ誘導体を製造するのに有用な方法を示す。
【０５８６】
（スキーム７）
【０５８７】
【化１８８】
2011231131.tif 000108
ジペプチドＯは、スキーム５および６に示すように、トリエチルアミンの存在下、例えば、ＤＥＰＣのようなペプチド化学でよく知られた縮合剤を用い、修飾されたアミノ酸Ｂｏｃ−ドラプロインＧ（例えば、Ｐｅｔｔｉｔ，Ｇ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９６，７１９−７２５参照）と式Ｍの保護されたアミノ酸との縮合によって容易に調製することができる。
【０５８８】
次いで、一般的手法Ｄを用いて、式Ｏのジペプチドを式Ｆのポリペプチドとカップリングさせて、式ＰのＦｍｏｃ−保護ＭＭＡＦ化合物を作製することができ、これは、引き続いて、一般的手法Ｅを用いて、式（Ｉｂ）のＭＭＡＦ薬物化合物を得ることができる。
【０５８９】
かくして、前記方法は本発明で用いることができる薬物を製造するのに有用である。
【０５９０】
（４．６．２  薬物リンカーの合成）
本発明の薬物−リンカー化合物を調製するために、薬物をリンカー上の官能性部位と反応させる。一般には、スペーサーユニット（−Ｙ−）およびストレッチャーユニット（−Ａ−）が共に存在する場合、リンカーは構造：
【０５９１】
【化１８９】
2011231131.tif 000109
を有することができる。別法として、リンカーは、スペーサーユニット（−Ｙ−）が存在しない場合、構造：
【０５９２】
【化１９０】
2011231131.tif 000110
を有することができる。
【０５９３】
また、リンカーは、ストレッチャーユニット（−Ａ−）およびスペーサーユニット（−Ｙ−）が共に存在しない場合、構造：
【０５９４】
【化１９１】
2011231131.tif 000111
を有することもできる。
【０５９５】
また、リンカーは、アミノ酸ユニット（Ｗ）およびスペーサーユニット（Ｙ）が共に存在しない場合、構造：
【０５９６】
【化１９２】
2011231131.tif 000112
を有することもできる。
【０５９７】
一般には、適当なリンカーは、任意のストレッチャーユニットおよび任意のスペーサーユニットに連結したアミノ酸ユニットを有する。反応性部位１はスペーサーの末端に存在し、反応部位２はストレッチャーの末端に存在する。もしスペーサーユニットが存在しなければ、反応性部位１はアミノ酸ユニットのＣ−末端に存在する。
【０５９８】
本発明の例示的実施形態において、反応性部位Ｎｏ．１は薬物の窒素原子に対して反応性であって、反応性部位Ｎｏ．２はりガンド上のスルフヒドリル基に対して反応性である。反応性部位１および２は異なる官能基に対して反応性であり得る。
【０５９９】
本発明の１つの態様において、反応性部位Ｎｏ．１は
【０６００】
【化１９３】
2011231131.tif 000113
である。
【０６０１】
本発明のもう１つの態様において、反応性部位Ｎｏ．１は
【０６０２】
【化１９４】
2011231131.tif 000114
である。
【０６０３】
本発明のさらにもう１つの態様において、反応性部位Ｎｏ．１は式：
【０６０４】
【化１９５】
2011231131.tif 000115
を有するｐ−ニトロフェニルカルボネートである。
【０６０５】
本発明の１つの態様において、反応性部位Ｎｏ．２はチオール−許容基である。適当なチオール−許容基は式：
【０６０６】
【化１９６】
2011231131.tif 000116
［式中、Ｘは脱離基、好ましくはＯ−メシル、Ｏ−トシル、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉ；あるいは式：  
【０６０７】
【化１９７】
2011231131.tif 000117
を有するマレイミド基を表す］
を有するハロアセタミド基を含む。
【０６０８】
有用なリンカーはＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）のような商業的源を介して得ることができるか、あるいは以下のスキーム８〜１０にまとめたように調製することができる。
【０６０９】
（スキーム８）
【０６１０】
【化１９８】
2011231131.tif 000118
［式中、Ｘは−ＣＨ２−または−ＣＨ２ＯＣＨ２−であり；Ｘが−ＣＨ２−である場合、ｎは０〜１０の範囲の整数であり；あるいはＸが−ＣＨ２ＯＣＨ２−である場合、１〜１０である。］
スキーム９に示した方法はＭｉｔｓｕｎｏｂｕ条件下でマレイミドをグリコールと合わせて、ポリエチレングリコールマレイミドストレッチャー（例えば、Ｗａｌｋｅｒ，Ｍ．Ａ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９５，６０，５３５２−５）が得られ、引き続いて、ｐ−ニトロフェニルカルボネート反応部位基をインストールする。
【０６１１】
（スキーム９）
【０６１２】
【化１９９】
2011231131.tif 000119
［式中、Ｅは−ＣＨ２−または−ＣＨ２ＯＣＨ２−であり；およびｅは０〜８の範囲の整数である。］
別法として、ＰＥＧ−マレイミドおよびＰＥＧ−ハロアセタミドストレッチャーはＦｒｉｓｃｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１９９６，７，１８０−１８６によって記載されたように調製することができる。スキーム１０はマレイミドストレッチャー基および、所望により、ｐ−アミノベンジルエーテル自己−犠牲スペーサーを含有する例示的リンカーユニットの一般的合成を示す。
【０６１３】
（スキーム１０）
【０６１４】
【化２００】
2011231131.tif 000120
［式中、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは０〜４の範囲の整数であり；およびｎは０〜１０の範囲の整数である。］  有用なストレッチャーは、有機合成の公知の技術を利用することによって、以下に記載するＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）から商業的に入手可能な中間体を用いてリンカーに取りこむことができる。式（ＩＩＩａ）のストレッチャーはスキーム１１および１２に記載したように以下の中間体とアミノ酸ユニットのＮ−末端と反応させることによってリンカーに導入することができる。
【０６１５】
【化２０１】
2011231131.tif 000121
［式中、ｎは１〜１０の範囲の整数であって、Ｔは−Ｈまたは−ＳＯ３Ｎａである］
【０６１６】
【化２０２】
2011231131.tif 000122
［式中、ｎは０〜３の範囲の整数である］
【０６１７】
【化２０３】
2011231131.tif 000123
【０６１８】
【化２０４】
2011231131.tif 000124
式（ＩＩＩｂ）のストレッチャーユニットは、以下の中間体とアミノ酸ユニットのＮ−末端とを反応させることによってリンカーに取りこむことができる。
【０６１９】
【化２０５】
2011231131.tif 000125
［式中、Ｘは−Ｂｒまたは−Ｉである］
および
【０６２０】
【化２０６】
2011231131.tif 000126
式（ＩＶ）のストレッチャーユニットは以下の中間体とアミノ酸ユニットのＮ−末端とを反応させることによってリンカーに導入することができる。
【０６２１】
【化２０７】
2011231131.tif 000127
式（Ｖａ）のストレッチャーユニットは、以下の中間体とアミノ酸ユニットのＮ−末端とを反応させることによってリンカーに導入させることができる。
【０６２２】
【化２０８】
2011231131.tif 000128
他の有用なストレッチャーは公知の手法に従って合成することができる。以下に示す式の網のオキシストレッチャーは、Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０００，４１（１０），１５３１−１５３３；およびＧｉｌｏｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９６７，２３（１１），４４４１−４４４７に記載された手法に従ってアルキルハライドとＮ−Ｂｏｃ−ヒドロキシルアミンと反応させることによって調製することができる。
【０６２３】
【化２０９】
2011231131.tif 000129
［式中、−Ｒ１７−は−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−から選択され；およびｒは１〜１０の範囲の整数である］
以下に示す式のイソチオシアネートストレッチャーは、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，１９７５，８７（１４）：５１７に記載されたイソチオシアナトカルボン酸塩化物から調製することができる。
【０６２４】
【化２１０】
2011231131.tif 000130
［式中、−Ｒ１７−は本明細書中に記載した通りである。］
スキーム１１はマレイミドストレッチャーおよび、所望により、ｐ−アミノベンジル自己−犠牲スペーサーを有するｖａｌ−ｃｉｔジペプチドリンカーを得るための方法を示す。
【０６２５】
（スキーム１１）
【０６２６】
【化２１１】
2011231131.tif 000131
［式中、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；およびｍは０〜４の範囲の整数である。］
スキーム１２はマレイミドストレッチャーユニットおよびｐ−アミノベンジル−犠牲スペーサーユニットを有するｐｈｅ−ｌｙｓ（Ｍｔｒ）ジペプチドリンカーユニットの合成を示す。出発物質ＡＤ（ｌｙｓ（Ｍｔｒ））は商業的に入手可能である（Ｂａｃｈｅｍ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）か、あるいはＤｕｂｏｗｃｈｉｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９７）  ３８：５２５７−６０に従って調製することができる。
【０６２７】
（スキーム１２）
【０６２８】
【化２１２】
2011231131.tif 000132
［式中、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；およびｍは０〜４の範囲の整数である］
スキーム１３に示すように、リンカーを式（Ｉｂ）の薬物化合物のアミノ基と反応させて、アミドまたはカルバメート基を含有する薬物−リンカー化合物を形成することができ、薬物ユニットをリンカーユニットに連結させる。反応部位Ｎｏ．１がリンカーＡＪにおけるようにカルボン酸基である場合、カップリング反応をＨＡＴＵまたはＰｙＢｒｏｐおよび適当なアミン塩基を用いて行うことができ、その結果、薬物ユニットおよびリンカーユニットの間のアミド結合を含む薬物−リンカー化合物ＡＫが得られる。反応部位Ｎｏ．１がリンカーＡＬにおけるようにカルボネートである場合、リンカーをＤＭＦ／ピリジンの混合物中のＨＯＢｔを用いて薬物にカップリングさせて、薬物ユニットおよびリンカーユニットの間のカルバメート結合を含有する薬物−リンカー化合物ＡＭを得ることができる。
【０６２９】
別法として、反応性部位Ｎｏ．１がリンカーＡＮにおけるように良好な脱離基である場合、リンカーを求核性置換プロセスを介して薬物のアミン基とカップリングさせて、薬物ユニットおよびリンカーユニットの間にアミン結合（ＡＯ）を介する薬物−リンカー化合物を得ることができる。
【０６３０】
薬物−リンカー化合物を形成するための薬物をリガンドに連結させるのに有用な例示的方法はスキーム１３に示され、一般的手法Ｇ−Ｈに概説する。
【０６３１】
（スキーム１３）
【０６３２】
【化２１３】
2011231131.tif 000133
一般的手法Ｇ：ＨＡＴＵを用いるアミド形成。薬物（Ｉｂ）（１．０当量）およびカルボン酸反応性部位（１．０当量）を含有するＮ−保護リンカーをジクロロメタンのような適当な有機溶媒で希釈し、得られた溶液をＨＡＴＵ（１．５当量）および有機塩基、好ましくは、ピリジン（１．５当量）で処理する。反応混合物を不活性雰囲気、好ましくはアルゴン下で６時間撹拌し、その間に、ＨＰＬＣを用いて反応混合物をモニターする。反応混合物を濃縮し、得られた残渣をＨＰＬＣを用いて精製して、式ＡＫのアミドを得る。
【０６３３】
手法Ｈ：ＨＯＢｔを用いるカルバメート形成。ｐ−ニトロフェニルカルボネート反応性部位（１．１当量）および薬物（Ｉｂ）（１．０当量）を有するリンカーＡＬの混合物をＤＭＦのような非プロトン性有機溶媒で希釈して、５０〜１００ｍＭの濃度を有する溶液が得られ、得られた溶液をＨＯＢｔ（２．０当量）で処理し、不活性雰囲気、好ましくはアルゴン下に置く。反応混合物を１５分間撹拌し、次いで、ピリジン（１／４ｖ／ｖ）のような有機塩基を加え、ＨＰＬＣを用いて反応の進行をモニターする。リンカーは典型的には１６時間以内で消費される。次いで、反応混合物を真空中で濃縮し、得られた残渣を、例えば、ＨＰＬＣを用いて精製して、カルバメートＡＭを得る。
【０６３４】
薬物−リンカー化合物を調製する代替方法をスキーム１４に概説する。スキーム１４の方法を用い、薬物を、付着したストレッチャーユニットを有しない部分的リンカーユニット（例えば、ＺＡ）に付着させる。これはＦｍｏｃ−保護Ｎ−末端を有するアミノ酸ユニットを有する中間体ＡＰを供する。次いで、Ｆｍｏｃ基を除去し、次いで、ＰｙＢｒｏｐまたはＤＥＰＣを用いて触媒されるカップリング反応を介して、得られたアミン中間体ＡＱをストレッチャーユニットに付着させる。ブロモアセタミドストレッチャーＡＲまたはＰＥＧマレイミドストレッチャーＡＳいずれかを含有する薬物−リンカー化合物の構築をスキーム１４に示す。
【０６３５】
（スキーム１４）
【０６３６】
【化２１４】
2011231131.tif 000134
［式中、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；およびｍは０〜４の範囲の整数である。］
分岐スペーサーを含有するリンカーユニットの調製で有用な方法をスキーム１５に示す。
【０６３７】
（スキーム１５）
【０６３８】
【化２１５】
2011231131.tif 000135
スキーム１５は、マレイミドストレッチャーユニットおよびビス（４−ヒドロキシメチル）スチレン（ＢＨＭＳ）ユニットを有するｖａｌ−ｃｉｔジペプチドリンカーの合成を示す。ＢＨＭＳ中間体（ＡＷ）の合成は従前の文献の手法から改良され（Ｆｉｒｅｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．およびＣｒｏｚｅｔ，Ｍ．Ｐ．に対する国際公開番号ＷＯ  ９８１３０５９；Ａｒｃｈａｉｍｂａｕｌｔ，Ｇ．；Ｖａｎｅｌｌｅ，Ｐ．；Ｎｏｕｇｕｉｅｒ，Ｒ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．（１９８５）  ２６：５１３３−５１３４参照）、出発物質として、商業的に入手可能なジエチル（４−ニトロベンジル）ホスホネート（ＡＴ）および商業的に入手可能な２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−５−オン（ＡＵ）を利用する。リンカーＡＹおよびＢＡはスキーム９に記載された方法を用いて中間体ＡＷから調製することができる。
【０６３９】
（４．６．３  樹状リンカー）
該リンカーは、限定されるものではないが、抗体のようなリガンドへの分岐多機能的リンカー部位を介して１を超える薬物部分の共有結合付着用の樹状タイプリンカーであり得る（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：２２１３−２２１５；Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１：１７６１−１７６８）。樹状リンカーは抗体に対する薬物のモル比率、すなわち、薬物−リンカー−リガンド結合体の能力に関連する負荷を増加させることができる。かくして、システイン作製抗体が唯一の反応性システインチオール基を担う場合、多数の薬物部分を樹状リンカーを介して付着させることができる。
【０６４０】
樹状リンカー試薬の以下の例示的実施形態は９つまでの求核性薬物部分試薬がクロロエチルナイトロジェンマスタード官能基との反応により結合体化されるのを可能とする：
【０６４１】
【化２１６】
2011231131.tif 000136
（４．６．４  抗体への薬物部分の結合体化）
スキーム１６は、抗体当たり約２〜約４の薬物を有する薬物−リンカー−リガンド結合体を作製するのに有用な方法を示す。抗体をジチオスレイトール（ＤＴＴ）のような還元剤で処理して、システインジスルフィド残基のいくつかまたは全てを還元し、高度に求核性のシステインチオール基（−ＣＨ２ＳＨ）を形成する。かくして、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １５（４）：７６５−７７３の頁７６６の結合体化方法に従い、部分的に還元された抗体を薬物−リンカー化合物、またはリンカー試薬と、マレイミドまたはα−ハロカルボニルのような親電子性官能基と反応させる。
【０６４２】
（スキーム１６）
【０６４３】
【化２１７】
2011231131.tif 000137
例えば、ｐＨ８．０の５００ｍＭホウ酸ナトリウムおよび５００ｍＭ塩化ナトリウムに溶解させた抗体、例えば、ＡＣ１０を過剰の１００ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）で処理する。３７℃における約３０分間のインキュベーションの後、緩衝液をＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５樹脂での溶出によって交換し、１ｍＭ  ＤＴＰＡを含むＰＢＳで溶出させた。溶液の２８０ｎｍにおける吸光度からの還元された抗体の濃度、およびＤＴＮＢ（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）との反応によるチオール濃度を測定し、および４１２ｎｍにおける吸光度の測定によって、チオール／Ａｂ値をチェックする。ＰＢＳに溶解させた還元された抗体を氷上で冷却する。既知の濃度によってアセトニトリルおよび水に溶解させた、ＤＭＳＯ中の薬物リンカー、例えば、ＭＣ−ｖａｌ―ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥをＰＢＳ中の冷却された還元抗体に加える。約１時間後、過剰のマレイミドを加えて、反応をクエンチし、いずれの未反応抗体チオール基もキャップする。反応混合物を遠心限外濾過によって濃縮し、ＡＤＣ、例えば、ＡＣ１０−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを、ＰＢＳ中のＧ２５樹脂を通す溶出によって精製し、脱塩し、滅菌条件下で０．２μｍフィルターを通して濾過し、貯蔵のために凍結する。
【０６４４】
種々のリンカー、および薬物部分、ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦにて、種々の抗体薬物結合体（ＡＤＣ）を調製した。以下の表は、実施例２７のプロトコルによって調製し、かつＨＰＬＣおよび薬物負荷アッセイによって特徴付けられたＡＤＣの例示的部分である。
【０６４５】
【化２１８】
2011231131.tif 000138
【０６４６】
【化２１９】
2011231131.tif 000139
【０６４７】
【化２２０】
2011231131.tif 000140
（４．７  組成物および投与の方法）
他の実施形態において、有効量の例示的化合物および／または例示的結合体および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む組成物を記載する。便宜のために、薬物ユニットおよび薬物−リンカー化合物を例示的化合物ということができ、他方、薬物−リガンド結合体および薬物−リンカー−リガンド結合体を例示的結合体ということができる。組成物は動物またはヒト投与に適している。
【０６４８】
本組成物は、該組成物が患者に投与されるのを可能とするいずれかの形態とすることができる。例えば、組成物は固体、液体または気体（エアロゾル）の形態とすることができる。典型的な投与の経路が、限定されるものではないが、経口、局所、非経口、舌下、直腸、膣、目、腫瘍内、および鼻腔内を含む。非経口投与は皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射または注入技術を含む。１つの態様において、組成物は非経口投与された。さらにもう１つの態様において例示的化合物および／または例示的結合体または組成物は静脈内投与される。
【０６４９】
薬学的組成物は例示的化合物および／または例示的結合体が患者への組成物の投与に対して生物学的に利用できるように処方することができる。組成物は一以上の投与単位の形態をとることができ、そこでは、例えば、錠剤を単一の投与形態とすることができ、エアロゾルの形態の例示的化合物および／または例示的結合体の容器は複数の投与単位を保持することができる。
【０６５０】
薬学的組成物を調製するのに用いる物質は用いる量において非毒性であり得る。薬学的組成物上の有効成分（部位）の最適な投与量は種々の因子に依存するであろうことは当業者に明らかであろう。関連する因子、限定されるものではないが、動物（例えば、ヒト）のタイプ、例示的化合物または例示的結合体の特定の形態、投与の方法、および使用する組成物を含む。
【０６５１】
薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤は、当該組成物が、例えば、錠剤または粉末の形態であるように粒状であり得る。キャリア（部位）は液体とすることができ、当該組成物が、例えば、経口シロップまたは注射液体である。加えて、キャリア（部位）は気体状または粒状として、例えば、吸入投与で有用なエアロゾル組成物を供することができる。
【０６５２】
経口投与を意図した場合、組成物は好ましくは固体または液体形態であり、ここで、半固体、半液体、懸濁液およびゲル形態が、固体または液体いずれかとしてここに考えられる形態内に含まれる。
【０６５３】
経口投与用の固体組成物として、該組成物は粉末、顆粒、圧縮錠剤、丸剤、カプセル、チューインガム、ウェーハーなどの形態に処方することができる。そのような固体組成物は、典型的には、一以上の不活性希釈剤を含有する。加えて、一以上の以下のものを存在させることができる：カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、マイクロクリスタリンセルロース、またはゼラチンのような結合剤；澱粉、ラクトースまたはデキストリンのような賦形剤、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、プリモゲル、コーンスターチ等のような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはステロテックス（Ｓｔｅｒｏｔｅｘ）のような滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素のようなグライダント；スクロースまたはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、サルチル酸メチルまたはオレンジフレーバーのようなフレーバー剤、および着色剤。
【０６５４】
組成物がカプセル、例えば、ゼラチンカプセルの形態の場合、それは、前記タイプの物質に加えて、ポリエチレングリコール、シクロデキストリンまたは脂肪油のような液体キャリアを含有することができる。
【０６５５】
組成物は液体、例えば、エリキシル、シロップ、溶液、エマルジョンまたは懸濁液の形態とすることができる。液体は経口投与または注射による送達で有用であり得る。経口投与を意図した場合、組成物は甘味剤、保存剤、色素／着色剤およびフレーバー促進剤のうちの一以上を含むことができる。注射による投与用の組成物においては、界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、緩衝液、安定化剤および等張剤のうちの１以上を含めることもできる。
【０６５６】
液体組成物は、それが溶液、懸濁液または他の同様な形態であるか否かを問わず、以下のものの１以上を含めることができる：注射用水、セーライン溶液、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウムのような滅菌希釈剤、溶媒または懸濁化媒体として働くことができる合成物またはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、シクロデキストリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒のような不揮発性油；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌剤；アスコルビン酸または二亜硫酸ナトリウムのような抗酸化剤：エチレンジアミンテトラ酢酸のようなキレート化剤；アセテート、シトレートまたはホスフェートのような緩衝液、および塩化ナトリウムまたはデキストロースのような等張性の調製用の剤。非経口組成物は、ガラス、プラスチックまたは他の材料から作成されたアンプル、ディスポーザブルシリンジまたは多用量バイアルに封入することができる。生理食塩水が、例示的なアジュバントである。注射組成物は好ましくは滅菌されている。
【０６５７】
特定の疾患または疾患の治療で効果的な例示的化合物および／または例示的結合体の量は疾患または疾患の性質に依存し、標準的な臨床技術によって決定することができる。加えて、インビトロまたはインビボアッセイは、所望により、最適な投与量範囲を同定するのを助けるのに使用することができる。組成物で使用されるべき正確な用量もまた投与経路、および病気または疾患の重症度に依存し、実行者および各患者の状況の判断に従って決定すべきである。
【０６５８】
組成物は、適当な用量が得られるように有効量の例示的化合物および／または例示的結合体を含む。典型的には、この量は組成物の重量の少なくとも約０．０１％の例示的化合物および／または例示的結合体である。経口投与が意図される場合、この量は組成物の約０．１重量％〜約８０重量％の範囲で変化させることができる。１つの態様において、経口組成物は該組成物の重量の約４％〜約５０％の例示的化合物および／または例示的結合体を含むことができる。さらにもう１つの態様において、本発明の組成物は、非経口投与単位が約０．０１重量％〜約２重量％の例示的化合物および／または例示的結合体を含有するように調製される。
【０６５９】
非経口投与では、組成物は動物の体重ｋｇ当たり約０．０１〜約１００ｍｇの例示的化合物および／または例示的結合体を含むことができる。１つの態様において、組成物は動物の体重ｋｇ当たり約１〜約１００ｍｇの例示的化合物および／または例示的結合体を含むことができる。もう１つの態様において、投与される量は約０．１〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重の例示的化合物および／または例示的結合体の範囲であろう。
【０６６０】
一般に、患者に投与される例示的化合物および／または例示的結合体の用量は、典型的には、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２０００ｍｇ／ｋｇの動物体重である。１つの態様において、患者に投与される用量は約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの動物体重であり、もう１つの態様において、患者に投与される用量は約０．１ｍｇ／ｋｇおよび約２５０ｍｇ／ｋｇの動物体重の間であり、さらにもう１つの態様において、患者に投与される用量は約０．１ｍｇ／ｋｇおよび約２０ｍｇ／ｋｇの動物体重の間であり、さらにもう１つの態様において、投与される用量は約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの動物体重の間であり、およびさらにもう１つの態様において、投与される用量は約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの動物体重の間である。
【０６６１】
例示的化合物および／または例示的結合体または組成物はいずれかの便宜な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮膚ライニング（例えば、口粘膜、直腸および腸粘膜等）を通じての吸収によって投与することができる。投与は全身または局所であり得る。種々の送達システムが知られており、例えば、リポソーム、ミクロ粒子、マイクロカプセル、カプセル等への封入を用いて、例示的化合物および／または例示的結合体または組成物を投与することができる。ある実施形態において、１を超える例示的化合物および／または例示的結合体または組成物を患者に投与する。
【０６６２】
特別な実施形態において、１以上の例示的化合物および／または例示的結合体または組成物を治療を必要とする領域に局所投与するのが望ましくあり得る。これは、例えば、限定されるものではないが、外科的処置の間における局所的注入；例えば、外科的処置後における創傷包帯と組み合わせた局所適用によって；注射によって；カテーテルによって；坐薬によって；またはインプラントによって達成することができ、インプラントはシアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜のような膜、または線維を含めた多孔性、非多孔性またはゼラチン状物質である。１つの実施形態において、投与は癌、腫瘍または神経性またはプレ−神経性組織の部位（または前者の部位）における直接的注射によることができる。もう１つの実施形態において、投与は自己免疫疾患の発現の部位（または前者の部位）における直接的注射によることができる。
【０６６３】
ある実施形態において、１以上の例示的化合物および／または例示的結合体または組成物を、脳室内およびクモ膜下腔内注射を含めたいずれかの適当な経路によって中枢神経系に導入するのが望ましくあり得る。脳室内注射が、例えば、Ｏｍｍａｙａ貯蔵器のような貯蔵器に付着させた脳室内カテーテルによって促進することができる。
【０６６４】
肺投与も、例えば、吸入器またはネビュライザー、およびエアロゾル化剤での処方を用いることによって、あるいはフルオロカーボンまたは合成肺界面活性剤での灌流を介して使用することもできる。
【０６６５】
さらにもう１つの実施形態において、例示的化合物および／または例示的結合体または組成物は制御放出システムで送達することができ、限定されるものではないが、ポンプまたは種々のポリマー材料を用いることができる。さらにもう１つの実施形態において、制御放出システムは例示的化合物および／または例示的結合体または組成物の標的、例えば、脳近隣に置くことができ、かくして、全身用量のフラクションのみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、前掲、ｖｏｌ．２、ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）参照）。Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））によるレビューで議論された他の制御放出システムを用いることもできる。
【０６６６】
用語（キャリア）とは、それと共に例示的化合物および／または例示的結合体が投与される希釈剤、補助剤または賦形剤をいう。そのような医薬キャリアは、石油、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油等のような動物、植物または合成起源のものを含めた、水および油のような液体であり得る。キャリアは生理食塩水、アカシヤガム、ゼラチン、澱粉ペースト、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素等であり得る。加えて、助剤、安定化剤、増粘剤、滑沢剤および着色剤を用いることができる。１つの実施形態において、患者に投与する場合、例示的化合部および／または例示的結合体がまたは組成物および薬学的に受容可能なキャリアは滅菌されている。水は、例示的化合物および／または例示的結合体が静脈内投与される場合の例示的キャリアである。また、セーライン溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液の、特に、注射溶液のための液体キャリアとして使用することもできる。また、適当な医薬キャリアは澱粉、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等のような賦形剤を含むこともできる。本発明の組成物が、所望であれば、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝材を含有することもできる。
【０６６７】
本発明の組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸剤、ペレット、カプセル、液体含有カプセル、粉末、徐放処方、坐薬、エマルジョン、エアロゾル、スプレー、懸濁液、または使用に適したいずれかの他の形態を採ることができる。適当な医薬キャリアの他の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」によって記載される。
【０６６８】
ある実施形態において、例示的化合物および／または例示的結合体は、動物、特にヒトへの静脈内投与に適合した薬学的組成物としてのルーチン的手法に従って処方される。典型的には、静脈内投与用のキャリアまたは賦形剤は滅菌等張水性緩衝溶液である。必要な場合、組成物が安定化剤を含有することもできる。静脈内投与用の組成物は、所望により、注射の部位における疼痛を和らげるためにリグノカインのような局所麻酔剤を含めることもできる。一般に、成分は、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたはサシェ剤のような気密的にシールした容器中の凍結乾燥粉または水を含まない濃縮物として別々に供給されるか、あるいは単位投与形態にて混合される。例示的化合物および／または例示的結合体を注入によって投与する場合、それは、例えば、滅菌医薬グレード水またはセーラインを含有する注入ボトルで分注ことができる。例示的化合物および／または例示的結合体が注射によって投与される場合、注射用の滅菌水またはセーラインのアンプルを、成分が投与に先立って混合できるように供することができる。
【０６６９】
経口送達用の組成物は、例えば、錠剤、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、顆粒、粉末、エマルジョン、カプセル、シロップまたはエリキシルの形態とすることができる。経口投与される組成物は１以上の任意の剤、例えば、フルクトース、アスパルテームまたはサッカリンのような甘味剤；ペパーミント、冬緑油、またはチェリーのようなフレーバー剤；着色剤；および保存剤を含有させて、医薬的に味の良い製剤を供することができる。さらに、錠剤または丸剤形態の場合、組成物は被覆して、胃腸管中での崩壊および吸収を遅らせ、それにより、長時間にわたる維持された作用を供することができる。浸透圧的に活性な駆動化合物を囲う選択的に透過性膜もまた経口投与される化合物に適している。これらの後のプラットフォームにおいて、カプセルの周囲の環境からの流体は、膨潤して、開口を通じて剤または剤組成物を置き換える駆動化合物によって吸収される。これらの送達プラットフォームは、中程度の放出処方のスパイクされたプロフィールとは反対に実質的に０次送達プロフィールを供することができる。グリセロールモノストアレートまたはグリセロールステアレートのような時間−遅延物質も用いることができる。
【０６７０】
組成物は局所投与を意図することができ、その場合、キャリアは溶液、エマルジョン、軟膏またはゲル基材の形態とすることができる。経皮投与を用いるとすれば、組成物は経皮パッチまたはイオントフォレシスデバイスの形態とすることができる。局所処方は約０．０５％〜約５０％ｗ／ｖ（組成物の単位用量当たりの重量）の、もう１つの態様において、０．１％〜１０％ｗ／ｖのある濃度の例示的化合物および／または例示的結合体を含むことができる。
【０６７１】
組成物は、例えば、直腸で融解し、例示的化合物および／または例示的結合体を放出する坐薬の形態で直腸投与を意図することができる。
【０６７２】
組成物は、固体または液体投与単位の物理的形態を修飾する種々の物質を含むことができる。例えば、組成物は有効成分の周りにコーティングシェルを形成する材料を含むことができる。コーティングシェルを形成する物質は典型的には不活性であり、例えば、糖、シェラック、および他の腸溶コーティング剤から選択することができる。別法として、有効成分はゼラチンカプセルに封入することができる。
【０６７３】
組成物は気体状投与単位よりなることができ、例えば、それはエアロゾルの形態とすることができる。用語エアロゾルは、圧縮パッケージよりなるシステムに対してコロイド状性質のものの範囲の種々のシステムを命名するのに用いられる。送達は液化または圧縮ガス、或いは有効成分を分注する適当なポンプシステムによることができる。
【０６７４】
固体、液体または気体形態であるかを問わず、本発明の組成物は癌、自己免疫疾患または感染症の治療で用いる薬理学的剤を含むことができる。
【０６７５】
（４．８  例示的結合体の治療的使用）
例示的化合物および／または例示的結合体は、患者において、癌、自己免疫疾患または感染症を治療するのに有用である。
【０６７６】
（４．８．１  癌の治療）
例示的化合物および／または例示的結合体は、患者において、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を阻害し、腫瘍または癌細胞においてアポトーシスを引き起こし、または癌細胞を治療するのに有用である。例示的化合物および／または例示的結合体は、それに従い、動物癌の治療のために種々の設定で用いることができる。薬物−リンカー−リガンド結合体を用いて、薬物または薬物ユニットを腫瘍細胞または癌細胞に送達することができる。理論に拘束されるつもりはないが、１つの実施形態において、例示的結合体のリガンドユニットは癌細胞または腫瘍細胞−関連抗原に結合し、またはそれと会合し、例示的結合体はレセプター−媒介エンドサイトーシスを通じて腫瘍細胞または癌細胞に摂取することができる。抗原を腫瘍細胞または癌細胞に付着させることができ、あるいは腫瘍細胞または癌細胞と会合した細胞内マトリックスタンパク質であり得る。一旦細胞内部に入れば、リンカーユニット内の１以上の特異的ペプチド配列は１以上の腫瘍細胞または癌細胞−関連プロテアーゼによって加水分解的に切断され、その結果、薬物または薬物−リンカー化合物が放出される。次いで、放出された薬物または薬物−リンカー化合物は細胞内を自由に移動し、細胞傷害性または細胞静止活性を誘導する。別の実施形態において、薬物または薬物ユニットは腫瘍細胞または癌細胞の外部で例示的結合体から切断され、薬物または薬物−リンカー化合物は引き続いて細胞に進入する。
【０６７７】
１つの実施形態において、リガンドユニットは腫瘍細胞または癌細胞に結合する。
【０６７８】
もう１つの実施形態において、リガンドユニットは、腫瘍細胞または癌細胞の表面にある腫瘍細胞または癌細胞抗原に結合する。
【０６７９】
もう１つの実施形態において、リガンドユニットは、腫瘍細胞または癌細胞と会合した細胞外マトリックスタンパク質である腫瘍または癌細胞抗原に結合する。
【０６８０】
特定の腫瘍細胞または癌細胞に対するリガンドユニットの特異性は、最も効果的に治療される腫瘍または癌を決定するのに重要であり得る。例えば、ＢＲ９６リガンドユニットを有する例示的結合体は肺、乳房、結腸、卵巣および膵臓のものを含めた抗原陽性含羞を治療するのに有用であり得る。抗―ＣＤ３０または抗−ＣＤ４０リガンドユニットを有する例示的結合体は血液学的悪性疾患を治療するのに有用であり得る。
【０６８１】
例示的結合体で治療することができる他の特定のタイプの癌は、限定されるものではないが、表３に介されるものを含む。
【０６８２】
（表３）  固体腫瘍は限定されるものではないが以下のものを含む：
線維肉腫
粘液肉腫
脂肪肉腫
軟骨肉腫
骨肉腫
脊索腫
血管肉腫
内皮肉腫
リンパ管肉腫
リンパ管内皮肉腫
滑膜腫
中皮腫
ユーイング腫瘍
平滑筋肉腫
横紋筋肉腫
結腸癌
結腸直腸癌
腎癌
膵癌
骨癌
乳癌
卵巣癌
前立腺癌
食道癌
胃癌
口腔癌
鼻癌
咽喉癌
扁平上皮癌
基底細胞癌
腺癌
汗腺癌
脂腺癌
乳頭癌
乳頭腺癌
嚢胞腺癌
髄様癌
気管支原性癌
腎細胞癌
肝癌
胆管癌
絨毛癌
セミノーマ
胎児性癌
ウィルムス腫瘍
子宮頚部癌
子宮癌
精巣癌肺小細胞癌
膀胱癌
肺癌
上皮癌
神経膠腫
多形性神経膠芽細胞腫
星細胞腫
髄芽腫
頭蓋咽頭腫
脳室上衣細胞腫
松果体腫
血管芽腫
聴神経腫
希突起神経膠腫
髄膜腫
皮膚癌
黒色腫
神経芽腫
網膜芽腫
以下を含む血液の癌。ただしこれらに限定されない：
急性リンパ芽球性白血病「ＡＬＬ」
Ｂ細胞性急性リンパ芽球性白血病
Ｔ細胞性急性リンパ芽球性白血病
急性骨髄芽球性白血病「ＡＭＬ」
急性前骨髄球性白血病「ＡＰＬ」
急性単芽球性白血病
急性赤白血病
急性巨核芽球性白血病
急性骨髄単球性白血病
急性非リンパ性白血病
急性未分化白血病
慢性骨髄性白血病「ＣＭＬ」
慢性リンパ性白血病「ＣＬＬ」
ヘアリー細胞白血病
多発性骨髄腫
急性白血病および慢性白血病：
リンパ芽球性
骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）
リンパ性
骨髄性（ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ）白血病
リンパ腫：
ホジキン病
非ホジキンリンパ腫
多発性骨髄腫
ワルデンストローム・マクログロブリン血症
重鎖病
真性多血症。
【０６８３】
例示的結合体は結合体化−特異的腫瘍または癌標的化を提供し、かくして、これらの化合物の一般的毒性を低下させる。リンカーユニットは血液中の例示的結合体を安定化させ、なお、細胞内で腫瘍−特異的プロテアーゼによって切断することができ、薬物を遊離する。
【０６８４】
（４．８．２  癌についての多様式療法）
限定されるものではないが、腫瘍、転移、または制御されない細胞増殖によって特徴付けられる他の病気または疾患を含めた癌は、例示的結合体および／または例示的化合物の投与によって治療し、または予防することができる。
【０６８５】
他の実施形態において、癌を治療または予防する方法が提供され、それは有効量の例示的結合体および化学治療剤をそれを必要とする患者に投与することを含む。１つの実施形態において、化学治療剤は、それに関して癌の治療が難治性であることが判明していないものである。もう１つの実施形態において、化学治療剤が、それに関して癌の治療が難治性であることが判明しているものである。例示的結合体は、癌に対しての治療として外科的処置も受けた患者に投与することができる。
【０６８６】
１つの実施形態において、治療のさらなる方法は放射線療法である。
【０６８７】
特別な実施形態において、例示的結合体は、化学治療剤と共に、または放射線療法と共に投与される。もう１つの特別な実施形態において、化学治療剤または放射線療法は例示的結合体の投与に先立って、またはそれに引き続いて投与され、１つの態様において、少なくとも１時間、５時間、１２時間、１日、１週間、１ヶ月先立ってまたは引き続いて、さらなる態様において、例示的結合体の投与に数ヶ月（例えば、３ヶ月まで）先立ってまたは引き続いて投与される。
【０６８８】
化学療法剤は一連の期間にわたって投与することができる。表４にリストされた化学治療剤のいずれか１つまたは組合せを投与することができる。放射線に関しては、いずれかの放射線療法プロトコルを、治療するべき癌のタイプに応じて用いることができる。例えば、限定されるものではないが、Ｘ−線放射線を投与することができ；特に、高エネルギーメガボルト（その１ＭｅＶエネルギーを超える放射線）を深い腫瘍で用いることができ、電子線および正中電圧ｘ−線放射線を皮膚癌で用いることができる。ラジウム、コバルトおよび他の元素の放射性同位体のようなガンマ−線を発する放射性同位体も投与することができる。
【０６８９】
加えて、例示的化合物および／または例示的結合体での癌の治療方法が、化学療法または放射線療法があまりにも毒性であることが判明し、または判明する可能性がある場合、例えば、治療すべき対象にとって許容できないまたは我慢できない副作用をもたらす場合、化学療法または放射線療法の代替法として提供される。治療すべき動物は、所望により、いずれの治療が許容できまたは我慢できるかが判明するのに従い、外科的処置、放射線療法または化学療法のようなもう１つの癌治療で治療することもできる。
【０６９０】
例示的化合物および／または例示的結合体もまた、限定されるものではないが、白血病およびリンパ腫を含めたある種の癌の治療のためのように、インビトロまたはエクス・ビボ様式で用いることもでき、そのような治療はオートゴラス幹細胞移植を含む。これは、動物のオートゴラス造血幹細胞が収穫され、全ての癌細胞をパージし、次いで、伴う高容量放射線療法と共に、またはそれなくして、高容量の例示的化合物および／または例示的結合体の投与を介して動物の残りの骨髄細胞集団を根絶し、幹細胞グラフトを動物に逆注入する多工程プロセスを含むことができる。次いで、骨髄の機能が回復し、動物が回復する間、サポートするケアを供する。
【０６９１】
（４．８．３  癌についての多薬物療法）
有効量の例示的結合体および抗癌剤であるもう１つの治療剤をそれを必要とする患者に投与することを含む癌を治療する方法が開示される。適当な抗癌剤は、限定されるものではないが、メトトレキセード、タキソール、Ｌ−アスパラギナーゼ、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシ尿素、シタラビン、シクロホスファミド、イフォスファミド、ニトロソ尿素、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、デカルバジン、プロカルリジン、トポテカン、ナイトロジェンマスタード、サイトヒサン、エトポシド、５−フルオロウラシル、ＢＣＮＵ、イリノテカン、カンプトテシン、ブレオマイシン、ドキソルミシン、イラルミシン、ダウノルミシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、マイトキサントロン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセルおよびドセタキセルを含む。１つの態様において、抗癌剤は、限定されるものではないが、表４にリストされた薬物を含む。
【０６９２】
（表４）
【０６９３】
【化２２１】
2011231131.tif 000141
【０６９４】
【化２２２】
2011231131.tif 000142
【０６９５】
【化２２３】
2011231131.tif 000143
（４．８．４  自己免疫疾患の治療）
例示的結合体は、自己免疫疾患を生じる細胞を殺し、またはその複製を阻害するのに、または自己免疫疾患を治療するのに有用である。例示的結合体は、それに従って、患者において自己免疫疾患の治療のために種々の設定で用いることができる。薬物−リンカー−リガンド結合体を用いて、薬物を標的細胞に送達することができる。理論に拘束されるつもりはないが、１つの実施形態において、薬物−リガンド結合体は標的細胞の表面の抗原に会合し、レセプター−媒介エンドサイトーシスを通じて例示的結合体は標的−細胞内に摂取される。一旦細胞内に入れば、リンカーユニット内の１以上の特異的ペプチド配列は酵素的にまたは加水分解的に切断され、その結果、薬物は放出される。次いで、放出された薬物は自由にサイトゾル中を移動し、細胞傷害性または細胞静止活性を誘導する。別の実施形態において、薬物は標的細胞の外側で例示的結合体から切断され、薬物は引き続いて細胞に進入する。
【０６９６】
１つの実施形態において、リガンドユニットは自己免疫抗原に結合する。１つの態様において、抗原は、自己免疫疾患に関与する細胞の表面にある。
【０６９７】
もう１つの実施形態において、リガンドユニットは、細胞の表面にある自己免疫抗原に結合する。
【０６９８】
１つの実施形態において、リガンドは、自己免疫疾患状態に関係する活性化された活性化されたリンパ球に結合する。
【０６９９】
さらなる実施形態において、例示的結合体は、特定の自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を生じる細胞を殺し、または該細胞の増殖を阻害する。
【０７００】
例示的結合体で治療できる自己免疫疾患のタイプは限定されるものではないが、Ｔｈ２リンパ球関連疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、アトピー性喘息、鼻結膜炎、アレルギー性鼻炎、オーメン症候群、全身硬化症、および移植片ｖｓ宿主病）；Ｔｈ１リンパ球−関連疾患（例えば、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、ハシモト甲状腺炎、グラベ病、原発性胆汁性肝硬変、ヴェゲナー肉芽腫症、および結核）；活性化されたＢリンパ球―関連疾患（例えば、全身エリテマトーテス、グッドパスツール症候群、慢性関節リウマチ、およびＩ型糖尿病）；および表５に介されたものを含む。
【０７０１】
（表５）
慢性活動性肝炎
アジソン病
アレルギー性胞隔炎
アレルギー反応
アレルギー性鼻炎
アルポート症候群
アナフィラキシー
強直性脊椎炎
抗リン脂質抗体症候群
関節炎
回虫症
アスペルギルス症
アトピー性アレルギー
アトピー性皮膚炎
アトピー性鼻炎
ベーチェット病
愛鳥家肺
気管支喘息
カプラン症候群
心筋症
セリアック病
シャーガス病
慢性糸球体腎炎
コーガン症候群
寒冷凝集素症
先天性風疹感染
クレスト症候群
クローン病
クリオグロブリン血症
クッシング症候群
皮膚筋炎
円板状ループスドレスラー症候群
イートン・ランバート症候群
エコーウイルス感染
脳脊髄炎
内分泌性眼症
エプスタイン・バーウイルス感染
ウマ慢性肺気腫
エリテマトーデス
エヴァンズ症候群
フェルティ症候群
線維筋痛
フックス毛様体炎
胃萎縮
消化器アレルギー
巨細胞性動脈炎
糸球体腎炎
グッドパスチャー症候群
移植片対宿主病
グレーブス病
ギラン・バレー症
橋本病
溶血性貧血
ヘノッホ・シェーンライン紫斑病
特発性副腎萎縮
特発性肺線維症
ＩｇＡ腎症
炎症性腸疾患
インスリン依存性糖尿病
若年性関節炎
若年性糖尿病（１型）
ランバート・イートン症候群
蹄葉炎
扁平苔癬
ルポイド肝炎
ループス（狼瘡）
リンパ球減少症
メニエール病
混合性結合組織病
多発性硬化症
重症筋無力症
悪性貧血
多腺性症候群
初老期認知症
原発性無ガンマグロブリン血症
原発性胆汁性肝硬変
乾癬
乾癬性関節炎
レイノー現象
反復流産
ライター症候群リウマチ熱
関節リウマチ
サンプター症候群
住血吸虫症
シュミット症候群
強皮症
シャルマン症候群
シェーグレン症候群
全身強直症候群
交感性眼炎
全身性エリテマトーデス
高安動脈炎
側頭動脈炎
甲状腺炎
血小板減少症
甲状腺中毒症
中毒性表皮壊死融解症
インスリン抵抗性Ｂ型
１型糖尿病
潰瘍性大腸炎
ブドウ膜炎
尋常性白斑
ワルデンストローム・マクログロブリン血症
ヴェゲナー肉芽腫症。
【０７０２】
（４．８．５  自己免疫疾患の多薬物療法）
有効量の例示的結合体および自己免疫疾患の治療で知られたもう１つの治療剤をそれを必要とする患者に投与することを含む自己免疫疾患を治療する方法も開示される。１つの実施形態において、抗−自己免疫疾患剤は、限定されるものではないが、表６にリストされた剤を含む。
【０７０３】
（表６）
サイクロスポリン
サイクロスポリンＡ
ニコフェニレートモフェティル
シロリムス
タクロリムス
エナメルセプト
プレドニゾン
アザチオプリン
メトトレキセートシクロホスファミド
プレドニゾン
アミノカプロン酸
クロロキン
ヒドロキシクロロキン
ヒドロクロチゾン
デキサメタゾン
クロラムブシル
ＤＨＥＡ
ダナゾールブロモシリプチン
メレキシカム
インフリキシバム。
【０７０４】
（４．８．６  感染症の治療）
例示的結合体は感染症を生じる細胞を殺傷し、または該細胞の増殖を阻害するのに、または感染症を治療するのに有用である。例示的結合体は、それに従い、患者において感染症の治療のために種々の設定で用いることができる。薬物−リンカー−リガンド結合体は、薬物を標的細胞に送達するのに用いることができる。１つの実施形態において、リガンドユニットは感染症の細胞に結合する。
【０７０５】
１つの実施形態において、結合体は特定の感染症を生じる細胞を殺し、またはその増殖を阻害する。
【０７０６】
例示的結合体で治療することができる感染症の特定のタイプは、限定されるものではないが、表７で開示されたものを含む。
【０７０７】
（表７）
細菌性疾患：
ジフテリア
百日咳
潜在性菌血症
尿路感染
胃腸炎
蜂巣炎
喉頭蓋炎
気管炎
アデノイド肥大
咽後膿瘍
膿痂疹
膿瘡
肺炎
心内膜炎
化膿性関節炎
肺炎球菌
腹膜炎
菌血症
髄膜炎
急性化膿性髄膜炎
尿道炎
子宮頚管炎
直腸炎
咽頭炎
卵管炎
精巣上体炎
淋疾
梅毒
リステリア症
炭疽ノカルジア症
サルモネラ
腸チフス熱
赤痢
結膜炎
副鼻腔炎
ブルセラ症
野兎病
コレラ
腺ペスト
破傷風
壊死性小腸炎
放線菌症
嫌気性混合感染
梅毒
回帰熱
レプトスピラ症
ライム病
鼡咬熱
結核
リンパ節炎
ハンセン病
クラミジア
クラミジア肺炎
トラコーマ
封入体結膜炎
全身性真菌疾患：
ヒストプラスマ症
コクシジオイド症
ブラストミセス症
スポロトリコーシス
クリプトコッカス症
全身性カンジダ症
アスペルギルス症
ムコール症
足菌腫
クロモミコーシス
リケッチア症：
チフス
ロッキー山紅斑熱
エールリッヒア症
東半球ダニ媒介性リケッチア症
リケッチア痘症
Ｑ熱
バルトネラ症
寄生虫症：
マラリア
バベシア症
アフリカ睡眠病
シャーガス病
リーシュマニア症
ダムダム熱
トキソプラズマ症
髄膜脳炎
角膜炎
赤痢アメーバ症
ジアルジア症
クリプトスポリジウム症
イソスポーラ症
シクロスポリン症
微胞子虫症
回虫症
鞭虫感染
鉤虫感染
蟯虫感染
眼球幼虫移行症
旋毛虫症
糸状虫症
リンパ性糸状虫症
ロア糸状虫症
河川盲目症
イヌ糸状虫感染
住血吸虫症
水泳者そう痒
ウェステルマン肺吸虫
肝臓寄生吸虫
肝蛭症
肥大吸虫症
タイ肝吸虫症
条虫感染
包虫症
多包虫症
ウイルス疾患：
麻疹
亜急性硬化性全脳炎
感冒
ムンプス
風疹
ばら疹
第五病
水痘
ＲＳ（呼吸器合胞体）ウイルス感染クループ
細気管支炎
伝染性単核症
灰白髄炎
ヘルパンギーナ
手足口病
ボルンホルム病
陰部ヘルペス
性器疣贅
無菌性髄膜炎
心筋炎
心膜炎
胃腸炎
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）
ライ症候群
川崎症候群
インフルエンザ
気管支炎
ウイルス性「マイコプラズマ」肺炎
急性熱性呼吸器疾患
急性咽頭結膜熱
流行性角結膜炎
単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）
単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）
帯状疱疹
巨細胞封入体病
狂犬病
進行性多巣性白質脳症
クールー病
致死性家族性不眠症
クロイルフェルト・ヤコブ病
ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病
熱帯性痙攣性不全対麻痺
西部ウマ脳炎
カリフォルニア脳炎
セントルイス脳炎
黄熱
デング熱
リンパ性脈絡髄膜炎
ラッサ熱
出血熱
ハンタウイルス性肺症候群
マールブルグウイルス感染
エボラウイルス感染
痘瘡。
【０７０８】
（４．８．７  感染症の多薬物療法）
例示的結合体、および抗感染症剤であるもう１つの治療剤をそれを必要とする患者に投与することを含む感染症を治療する方法が開示される。１つの実施形態において、抗―感染症剤は、限定されるものではないが、表８にリストされた剤である。
【０７０９】
（表８）
β−ラクタム抗生物質：
ペニシリンＧ
ペニシリンＶ
クロキサシリン
リクロキサシリン
メチシリン
ナフシリン
オキサシリン
アムピシリン
アモキシシリン
バカムピシリン
アズロシリン
カルベニシリン
メズロシリン
ピペラシリン
チカルシリン
アミノグリコシド：
アミカシン
ゲンカマイシン
カナマイシン
ネオマイシン
ネチルミシン
ストレプトマイシン
トブラマイシン
マクロライド：
アジスロマイシン
クラリスロマイシン
エリスロマイシン
リンコマイシン
クリンダマイシン
テトラサイクリン：
デメクロサイクリン
ドキシサイクリン
ミノサイクリン
オキシテトラサイクリン
テトラサイクリン
キノロン：
シノキサシン
ナリジキシン酸
フルオロキノロン：
シプロフロキサシン
エノキサシングレパフロキサシン
レボフロキサシン
ロメフロキサシン
ノルフロキサシン
オフロキサシン
スパルフロキサシン
トロバフロキサシン
ポリペプチド：
バシドラシン
コリスチン
ポリミキシンＢ
スルホンアミド：
スルフイソオキサゾール
スルファメトキサゾール
スルファジアジン
スルファメチゾール
スルフアセタミド
雑多な抗菌剤：
トリメトプリム
スルファメタゾール
クロラムフェニコール
バンコマイシン
メトロニダゾール
キヌプリスチン
ダルフォプリスチン
リファムピン
スペクチノマイシン
ニトロフラントイン
抗ウイルス剤：
一般的抗ウイルス剤：
イドキスラジン
ビダラビン
トリフルリジン
アシクリビール
ファムシシクロビール
ペンシシクロビール
バラシクロビール
ガンシシクロビール
フォスカルメット
リバビリン
アマンタジン
リマンタジン
シドフォビール
アンチセンスオリゴヌクレオチド
免疫グロブリン
インターフェロン
ＨＩＶ感染のための薬剤：
テノフォビール
エムトリシタビン
ジドブジン
ジダノシン
ザルシタビン
スタブジン
ラミブジン
ネビラビン
レラビルジン
サキナビール
リトナビール
インディナビール
ネルフィナビール。
【実施例】
【０７１０】
（５．実施例）
実施例１−化合物ＡＢの調製
【０７１１】
【化２２４】
2011231131.tif 000144
Ｆｍｏｃ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（１４．６１ｇ、２４．３ミリモル、１．０当量、Ｆｉｒｅｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．に対する米国特許第６２１４３４５号）をＤＭＦ（１２０ｍＬ、０．２Ｍ）で希釈し、この溶液にジエチルアミン（６０ｍＬ）を加えた。反応をＨＰＬＣによってモニターし、２時間以内に完了することが見出された。反応混合物を濃縮し、音波処理下で、酢酸エチル（約１００ｍＬ）を用いて得られた残渣を十分間にわたって沈殿させた。エーテル（２００ｍＬ）を加え、沈殿をさらに５分間音波処理した。溶液を３０分間撹拌することなく放置し、次いで、濾過し、高真空下で乾燥して、Ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨが得られ、これをさらに精製することなく次の工程で用いた。収率：８．８４ｇ（９６％）。Ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（８．０ｇ、２１ミリモルをＤＭＦ（１１０ｍＬ）で希釈し、得られた溶液をＭＣ−ＯＳｕ（Ｗｉｌｌｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、（１９９３）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃ  Ｃｈｅｍ．４：５２１；６．５ｇ、２１ミリモル、１．０当量）で処理した。ＨＰＬＣによると、反応は２時間後に完了した。反応混合物を濃縮し、得られた油を酢酸エチル（５０ｍＬ）を用いて沈殿させた。１５分間音波処理した後、エーテル（４００ｍＬ）を加え、全ての大きな粒子が破壊されるまで混合物をさらに音波処理した。次いで、溶液を濾過し、固体を乾燥して、全ての灰色がかった白色固体中間体を得た。収率：１１．６３ｇ（９６％）；ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ７５７．９［Ｍ−Ｈ］。
【０７１２】
Ｆｍｏｃ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（１４．６１ｇ、２４．３ミリモル、１．０当量、Ｆｉｒｅｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．に対する米国特許第６２１４３４５号）をＤＭＦ（１２０ｍＬ、０．２Ｍ）で希釈し、この溶液にジエチルアミン（６０ｍＬ）を加えた。反応をＨＰＬＣによってモニターし、２時間以内で完了することが判明した。反応混合物を濃縮し、音波処理下で、酢酸エチル（約１００ｍＬ）を用いて得られた残渣を１０分間にわたって沈殿させた。エーテル（２００ｍＬ）を加え、沈殿をさらに５分間音波処理した。溶液を撹拌することなく３０分間放置し、次いで、濾過し、高真空下で乾燥して、Ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨが得られ、これをさらに精製することなく次の工程で用いた。収率：８．８４ｇ（９６％）。Ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（８．０ｇ、２１ミリモル）をＤＭＦ（１１０ｍＬ）で希釈し、得られた溶液をＭＣ−ＯＳｕ（Ｗｉｌｌｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、（１９９３）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．４：５２１；６．５ｇ、２１ミリモル、１．０当量）で処理した。反応はＨＰＬＣによると２時間後に完了した。反応混合物を濃縮し、得られた油を酢酸エチル（５０ｍＬ）を用いて沈殿させた。１５分間の音波処理の後、エーテル（４００ｍＬ）を加え、全ての大きな粒子が破壊されるまで混合物をさらに音波処理した。次いで、溶液を濾過し、固体を乾燥して、灰色がかった白色固体中間体を得た。収率：１１．６３ｇ（９６％）；ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ７５７．９［Ｍ−Ｈ］。
【０７１３】
灰色がかった白色固体中間体（８．０ｇ、１４．０ミリモル）をＤＭＦ（１２０ｍＬ、０．１２Ｍ）で希釈し、得られた溶液にビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（８．５ｇ、２８．０ミリモル、２．０当量）およびＤＩＥＡ（３．６６ｍＬ、２１．０ミリモル、１．５当量）を加えた。反応はＨＰＬＣによると１時間以内に完了した。反応混合物を濃縮して油が得られ、これをＥｔＯＡｃで沈殿させ、次いで、ＥｔＯＡｃ（約２５ｍＬ）でトリチュレートした。溶質をさらにエーテル（約２００ｍＬ）で沈殿させ、１５分間でトリチュレートした。固体を濾過し、高真空下で乾燥して、化合物ＡＢが得られ、これはＨＰＬＣによると９３％の純度であり、これをさらに精製することなく次の工程で用いた。収率：９．７ｇ（９４％）。
【０７１４】
実施例２−化合物１の調製
【０７１５】
【化２２５】
2011231131.tif 000145
フェニルアラニンｔ−ブチルエステルＨＣｌ塩（８６８ｍｇ、３ミリモル）、Ｎ−Ｂｏｃ−ドラプロイン（６６８ｍｇ、１当量）、ＤＥＰＣ（８２０μＬ、１．５当量）、およびＤＩＥＡ（１．２ｍＬ）をジクロロメタン（３ｍＬ）で希釈した。室温（約２８度摂氏）にて二時間の後、反応混合物をジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、順次、飽和水性（ＡＱ）、ＮａＨＣＯ３（２×１０ｍＬ）、飽和ａｑ．  ＮａＣｌ（２×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣を酢酸エチルに再度懸濁させ、酢酸エチルへのフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、濃縮して、白色固体としてジペプチドを得た：６８４ｍｇ（４６％）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４９１．３［Ｍ＋Ｈ］＋
ｔ−ブチルエステルの存在下における選択的Ｂｏｃ切断では、前記ジペプチド（５００ｍｇ、１．２８ミリモル）をジオキサン（２ｍＬ）で希釈した。４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン（９６０μＬ、３当量）を加え、反応混合物を室温にて一晩撹拌した。ほとんど完了したＢｏｃ脱保護は、最少量のｔ−ブチルエステル切断にてＲＰ−ＨＰＬＣによって観察された。混合物を氷浴で乾燥し、トリエチルアミン（５００μＬ）を加えた。１０分後、混合物を冷却浴から除去し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、順次、飽和ａｑ．  ＮａＨＣＯ３（２×１０ｍＬ）、飽和ａｑ．  ＮａＣｌ（２×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮して、黄色フォームを得た：２８７ｍｇ（５７％）。中間体をさらに精製することなく用いた。
【０７１６】
（「Ｐｅｎｔａｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｔｈｅｒｅｔｏ」なる発明の名称のＷＯ  ０２／０８８１７２に記載されたように調製された；０．７３ミリモル）トリペプチドＦｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕを室温にてＴＦＡ（３ｍＬ）、ジクロロメタン（３ｍＬ）で二時間処理した。混合物を濃縮乾固し、残渣をトルエン（３×２０ｍＬ）で共蒸発させ、真空中で一晩乾燥した。残渣をジクロロメタン（５ｍＬ）で希釈し、脱保護されたジペプチド（２８７ｍｇ、０．７３ミリモル）、続いてＤＩＥＡ（５５０μＬ、４当量）、ＤＥＰＣ（２０１μＬ、１．１当量）に加えた。室温で２時間後、反応混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、順次、１０％ａｑ．クエン酸（２×２０ｍＬ）、飽和ａｑ．ＮａＨＣＯ３（２×１０ｍＬ）、飽和ａｑ．ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣を酢酸エチルに再度懸濁させ、酢酸エチルにてフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、濃縮して、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−ｄａｐ−ｐｈｅ−Ｏ−ｔ−Ｂｕを白色固体として得た：５３３ｍｇ（７１％）。Ｒｆ
０．４  （ＥｔＯＡｃ）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １０１０．６［Ｍ＋Ｈ］＋
生成物（２００ｍｇ、０．２ミリモル）をジクロロメタン（３ｍＬ）、ジエチルアミン（１ｍＬ）で希釈した。反応混合物を室温にて一晩撹拌した。溶媒を除去して油が得られ、これをジクロロメタン中の段階的グラジエント０〜１０％  ＭｅＯＨへのフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、化合物１を白色固体として得た：１３７ｍｇ（８７％）。Ｒｆ  ０．３（１０％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ７８８．６［Ｍ＋Ｈ］＋
実施例３−化合物２の調製
【０７１７】
【化２２６】
2011231131.tif 000146
化合物２は、室温での７時間における４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン（４ｍＬ）での処理によって化合物１（３０ｍｇ、０．０３８ミリモル）から調製した。溶媒を除去し、残渣を真空中で一晩乾燥して、化合物２を吸湿性白色固体として得た：３５ｍｇ（ＨＣｌ塩として計算して１２０％）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ７３２．５６  ［Ｍ＋Ｈ］＋
実施例４−化合物３の調製
【０７１８】
【化２２７】
2011231131.tif 000147
Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−ｄａｐ−ｐｈｅ−Ｏ−ｔ−Ｂｕ（実施例２、５０ｍｇ）を４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン（４ｍＬ）で室温にて１６時間処理した。溶媒を除去し、残渣を真空中で一晩乾燥して、５０ｍｇの吸湿性白色固体中間体を得た。
【０７１９】
白色固体中間体（２０ｍｇ、０．０２ミリモル、１．５当量）をジクロロメタン（１ｍＬ）で希釈し；ＤＥＰＣ（５μＬ、０．０３ミリモル、１．５当量）を加え、続いて、ＤＩＥＡ（１１μＬ、０．０６ミリモル、３当量）、およびｔ−ブチルアミン（３．２μＬ、０．０３ミリモル、１．５当量）を加えた。室温での２時間後、反応はＲＰ−ＨＰＬＣによると不完全であることが判明した。より多くのＤＥＰＣ（１０μＬ）およびｔ−ブチルアミン（５μＬ）を加え、反応をさらに４時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン（１５ｍＬ）で希釈し、順次、水（５ｍＬ）、０．１Ｍ  ａｑ．ＨＣｌ（１０ｍＬ）、飽和ａｑ．ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣をジクロロメタンで希釈し、ジクロロメタン中の段階的グラジエント０〜５％ＭｅＯＨでのフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、濃縮して、Ｆｍｏｃ保護中間体を白色固体として得られた。７．３ｍｇ（３６％）Ｒｆ  ０．７５（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０７２０】
Ｆｍｏｃ保護中間体をジクロロメタン（０．５ｍＬ）で希釈し、ジエチルアミン（０．５ｍＬ）で室温にて３時間処理した。反応混合物を濃縮乾固した。生成物を、ジクロロメタン中の段階的グラジエント０〜１０％ＭｅＯＨでのフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって単離して、化合物３を白色固体として得た：４ｍｇ（７０％）。Ｒｆ  ０．２（１０％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ７８７［Ｍ＋Ｈ］＋、
８０９［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０７２１】
実施例５−化合物４の調製
【０７２２】
【化２２８】
2011231131.tif 000148
Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン（２６５ｍｇ、１ミリモル、１当量）およびトリエチレングリコールモノメチルエーテル（１６４μＬ、１ミリモル、１当量）をジクロロメタン（５ｍＬ）で希釈した。次いで、ＤＣＣ（４１２ｍｇ、２ミリモル、２当量）を加え、続いて、ＤＭＡＰ（１０ｍｇ）を加えた。反応混合物を室温にて一晩撹拌した。沈殿を濾過した。溶媒を真空中で除去し、残渣を酢酸エチルで希釈し、酢酸エチルでのシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物を含有する画分を引き出し、濃縮し、真空中で乾燥して、白色固体を得た：３７７ｍｇ（９１％）。Ｒｆ  ０．５（ＥｔＯＡｃ）ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４３４［Ｍ＋Ｎａ］＋
Ｂｏｃ保護基の除去は、４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン（６ｍＬ）を含むジオキサン（１０ｍＬ）での前記物質の室温での六時間の処理によって行った。溶媒を真空中で除去し、残渣を真空中で乾燥して、白色固体を得た。
【０７２３】
フェニルアラミン−トリエチレングリコールモノメチルエーテルエステルのＨＣｌ塩（２３６ｍｇ、０．４５８ミリモル、１当量）およびＮ−Ｂｏｃ−ドラプロイン（１５８ｍｇ、０．５５ミリモル、１．２当量）をジクロロメタン（３ｍＬ）で希釈した。ＤＥＰＣ（１２５μＬ、１．５当量）を混合物に加え、続いて、ＤＩＥＡ（２５０μＬ、３当量）を加えた。室温での２時間後、反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、順次、飽和ａｑ．ＮａＨＣＯ３（２×１０ｍＬ）、１０％ａｑ．クエン酸（２×１０ｍＬ）、飽和ａｑ．ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣を酢酸エチルに再度懸濁させ、酢酸エチルでのシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、濃縮して、白色フォーム中間体を得た：１３１ｍｇ（５０％）。Ｒｆ  ０．２５（ＥｔＯＡｃ）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ５８１．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０７２４】
Ｂｏｃ脱保護はジクロロメタン（２ｍＬ）、ＴＦＡ（０．５ｍＬ）中で室温にて２時間行った。溶媒を真空中で除去し、残渣をトルエン（３×２５ｍＬ）で共蒸発させ、次いで、真空中で乾燥させ、１３８ｍｇのジペプチドＴＦＡ塩を得た。
【０７２５】
Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−ＯＨ（実施例２、１４７ｍｇ、０．２３ミリモル、１当量）、およびジペプチドＴＦＡ塩（１３８ｍｇ）をジクロロメタン（２ｍＬ）で希釈した。混合物にＤＥＰＣ（６３μＬ、１．５当量）を加え、続いて、ＤＩＥＡ（１６０μＬ、４当量）を加えた。室温での２時間後に、反応混合物をジクロロメタン（３０ｍＬ）で希釈し、順次、１０％ａｑ．クエン酸（２×２０ｍＬ）、飽和ａｑ．ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣をジクロロメタンに再度懸濁し、ジクロロメタン中の段階的グラジエント０〜５％ＭｅＯＨでのシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、濃縮して、白色フォームを得た：２０５ｍｇ（８１％）。Ｒｆ  ０．４（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １１００．６［Ｍ＋Ｈ］＋、１１２２．４［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０７２６】
Ｆｍｏｃ保護基をジクロロメタン（６ｍＬ）中のジエチルアミン（２ｍＬ）での処理によって除去した。室温での６時間の後、溶媒での真空を除去し、ジクロロメタン中の段階的グラジエント０〜１０％ＭｅＯＨでのシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって生成物を単離した。関連画分を合わせ、濃縮した。ジクロロメタン／ヘキサン１：１からの蒸発の後、化合物４を白色フォームとして得た：１３３ｍｇ（８０％）。Ｒｆ０．１５（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ８７８．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０７２７】
実施例６−化合物５の調製
【０７２８】
【化２２９】
2011231131.tif 000149
Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−ＯＨ（実施例２、０．５０ｇ、０．７８ミリモル）およびｄａｐ−ｐｈｅ−ＯＭｅ・ＨＣｌ（０．３ｇ、０．７８ミリモル、Ｐｅｔｔｉｔ、Ｇ．Ｒ．、ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １９９８、１３、２４３−２７７に従って調製）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解させ、続いて、ジイソプロピルエチルアミン（０．３０ｍＬ、１．７１ミリモル、２．２当量）を加えた。ＤＥＰＣ（０．２０ｍＬ、１．１７、１．５当量）を加え、内容物をＡｒ上で放置した。反応はＨＰＬＣによると１時間以内に完了した。混合物を濃縮して油とし、１００％ＥｔＯＡｃで溶出するＳｉＯ２クロマトグラフィー（３００×２５ｍｍからの）によって精製した。生成物を白色フォーム状固体として単離した。収率：０．６５ｇ（８７％）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ９６８．３５［Ｍ＋Ｈ］＋、９９１．３４［Ｍ＋Ｎａ］＋；ＵＶ  λｍａｘ  ２１５、２６５ｎｍ。
【０７２９】
塩化メチレン（５ｍＬ）中のＦｍｏｃ−保護ペプチド（０．１４ｇ、０．１４ミリモル）をジエチルアミン（２ｍＬ）で処理し、内容物を室温にて２時間放置した。ＨＰＬＣによると完了した反応を濃縮して油とし、２ｍＬのＤＭＳＯ中に取り、分取用ＨＰＬＣ（Ｃ１２−ＲＰカラム、５μ、１００Å、（０．１％ＴＦＡを含有する）水中のＭｅＣＮの直線グラジエント、４０分での１０〜１００％、続いて、１００％での２０分間、２５ｍＬ／分の流速）に注入した。生成物を含有する画分を蒸発させ、トリフルオロアセテート塩についての白色粉末を得た。収率：０．１２６ｇ（９８％）。Ｒｆ  ０．２８（１００％
ＥｔＯＡｃ）；ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ７４６．５９［Ｍ＋Ｈ］＋、７６８．５１［Ｍ＋Ｎａ］＋；ＵＶ  λｍａｘ  ２１５ｎｍ。
【０７３０】
実施例７−化合物６の調製
【０７３１】
【化２３０】
2011231131.tif 000150
化合物５のトリフルオロアセテート塩（０．１１ｇ、０．１３ミリモル）、化合物ＡＢ（０．１０３ｇ、０．１４ミリモル、１．１当量）およびＨＯＢｔ（３．４ｍｇ、２６μモル、０．２当量）をＤＭＦ／ピリジン（各々、２ｍＬ／０．５ｍＬ）に懸濁させた。ジイソプロピルエチルアミン（２２．５μＬ、０．１３ミリモル、１．０当量）を加え、黄色溶液をアルゴン下で撹拌した。３時間後、さらに１．０当量のＤＩＥＡを加えた。２４時間後、０．５当量の活性化されたリンカーを反応混合物に含めた。合計４０時間後、反応を完了した。内容物を蒸発させ、ＤＭＳＯ中に取り、分取用ＨＰＬＣ（Ｃ１２−ＲＰカラム、５μ、１００Å、（０．１％ＴＦＡを含有する）水中のＭｅＣＮの直線グラジエント、４０分の１０〜１００％、続いて、１００％における２０分、５０ｍＬ／分の流速）に注入した。所望の画分を蒸発させて、生成物を黄色油として得た。塩化メチレン（約２ｍＬ）および過剰のエーテルを加えて、化合物６を白色沈殿として得られ、これを濾過し、乾燥した。収率：９０ｍｇ（５２％）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １３４４．３２［Ｍ＋Ｈ］＋、１３６６．２９［Ｍ＋Ｎａ］＋；ＵＶ  λｍａｘ２１５、２４８ｎｍ。
【０７３２】
実施例８−化合物７の調製
【０７３３】
【化２３１】
2011231131.tif 000151
化合物４（１３３ｍｇ、０．１５ミリモル、１当量）、化合物ＡＢ（１２３ｍｇ、０．１６７ミリモル、１．１当量）、およびＨＯＢｔ（４ｍｇ、０．２当量）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）で希釈した。２分後、ピリジン（５ｍＬ）を加え、反応をＲＰ−ＨＰＬＣを用いてモニターした。反応は１８時間以内に完了したことが示された。反応混合物をジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、順次、１０％ａｑ．クエン酸（２×１０ｍＬ）、水（１０ｍＬ）、飽和ａｑ．ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣をジクロロメタンに再度懸濁させ、ジクロロメタン中の段階的グラジエント０〜１０％ＭｅＯＨでのシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、濃縮して、化合物７を白色フォームとして得た：４６ｍｇ（２１％）。Ｒｆ  ０．１５（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １４７６．９４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０７３４】
実施例９−ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ  ｔ−ブチルエステル８の調製
【０７３５】
【化２３２】
2011231131.tif 000152
化合物１（８３ｍｇ、０．１１ミリモル）、化合物ＡＢ（８５ｍｇ、０．１２ミリモル、１．１当量）、およびＨＯＢｔ（２．８ｍｇ、２１μモル、０．２当量）を乾燥ＤＭＦ（１．５ｍＬ）およびピリジン（０．３ｍＬ）中にアルゴン下で取った。３０時間後、ＨＰＬＣによると反応は実質的に完了したことが判明した。混合物を蒸発させ、最少量のＤＭＳＯ中に取り、分取用ＨＰＬＣ（Ｃ１２−ＲＰカラム、５μ、１００Å、（０．１％ＴＦＡを含有する）水中のＭｅＣＮの直線グラジエント、４０分の１０〜１００％、続いて、１００％における２０分、２５ｍＬ／分の流速）によって精製して、化合物８を白色固体として得た。収率：１０３ｍｇ（７１％）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １３８７．０６［Ｍ＋Ｈ］＋、１４０９．０４［Ｍ＋Ｎａ］＋；ＵＶ  λｍａｘ  ２０５、２４８ｎｍ。
【０７３６】
実施例１０−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ９の調製
【０７３７】
【化２３３】
2011231131.tif 000153
化合物８（４５ｍｇ、３２μモル）を塩化メチレン（６ｍＬ）に懸濁させ、続いて、ＴＦＡ（３ｍＬ）に加えた。得られた溶液を２時間放置した。反応混合物を真空中で濃縮し、分取用ＨＰＬＣ（Ｃ１２−ＲＰカラム、５μ、１００Å、（０．１％ＴＦＡを含有する）水中のＭｅＣＮの直線グラジエント、４０分の１０〜１００％、続いて、１００％における２０分、２５ｍＬ／分の流速）によって精製した。所望の画分を濃縮して、マレイミドカプロイド−バリン−シトルリン−ｐ−ヒドロキシメチルアミノベンゼン−ＭＭＡＦ（ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ）９を灰色がかった白色固体として得た。収率：１１ｍｇ（２５％）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １３３０．２９［Ｍ＋Ｈ］＋、  １３５２．２４［Ｍ＋Ｎａ］＋；ＵＶ  λｍａｘ  ２０５、２４８ｎｍ。
【０７３８】
実施例１１−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ  ｔｅｒｔ−ブチルアミド１０の調製
【０７３９】
【化２３４】
2011231131.tif 000154
化合物３（２１７ｍｇ、０．２７６ミリモル、１．０当量）、化合物ＡＢ（２０４ｍｇ、０．２７６ミリモル、１．０当量）、およびＨＯＢｔ（１１ｍｇ、０．０８２８ミリモル、０．３当量）をピリジン／ＤＭＦ（６ｍＬ）で希釈した。この混合物にＤＩＥＡ（０．０４８ｍＬ）を加え、混合物を約１６時間撹拌した。揮発性有機物を真空中で蒸発させた。粗残渣を段階的グラジエント（ＤＣＭ中の０〜５〜１０％メタノール）でのＣｈｒｏｍａｔｏｔｒｏｎ（登録商標）（放射状薄層クロマトグラフィー）によって精製して、ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ  ｔｅｒｔ−ブチルアミド１０を得た。収率：１７２ｍｇ（４５％）；ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １３８６．３３［Ｍ＋Ｈ］＋、  １４０８．３６［Ｍ＋Ｎａ］＋；ＵＶ  λｍａｘ  ２１５、２４８ｎｍ。
【０７４０】
実施例１２−ＡＣ１０およびＭＣ−ＭＭＡＥの結合体化によるＡＣ１０−ＭＣ−ＭＭＡＥの調製
ｐＨ８．０の５００ｍＭホウ酸ナトリウムおよび５００ｍＭ塩化ナトリウムに溶解させたＡＣ１０を過剰の１００ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）で処理する。３７℃における３０分間のインキュベーションの後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５樹脂での溶出によって緩衝液を交換し、１ｍＭ  ＤＴＰＡを含むＰＢＳで溶出させた。溶液の２８０ｎｍにおける急高度からの還元された抗体濃度、およびＤＴＮＢ（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）との反応によるチオール濃度を測定し、次いで、４１２ｎｍにおける吸光度を測定することによってチオール／Ａｂ値をチェックする。ＰＢＳに溶解させた還元抗体を氷上で冷却する。
【０７４１】
ＤＭＳＯに溶解させた薬物リンカー試薬、マレイミドカプロイド−モノメチルオーリスタチンＥ、すなわち、ＭＣ−ＭＭＡＥをアセトニトリルおよび水に既知の濃度で希釈し、ＰＢＳ中の冷却された還元抗体ＡＣ１０に加える。約１時間後、過剰のマレイミドを加えて、反応をクエンチし、いずれの未反応抗体チオール基もキャップする。反応混合物を遠心限外濾過によって濃縮し、ＡＣ１０−ＭＣ−ＭＭＡＥを精製し、ＰＢＳ中のＧ２５樹脂を通す溶出によって脱塩し、滅菌条件下で０．２μＭフィルターを解して濾過し、貯蔵のために凍結する。
【０７４２】
実施例１３−ＡＣ１０およびＭＣ−ＭＭＡＦの結合体化によるＡＣ１０−ＭＣ−ＭＭＡＦの調製
実施例１２の手法に従い、ＡＣ１０およびＭＣ−ＭＭＡＦの結合体化によってＡＣ１０−ＭＣ−ＭＭＡＦを調製した。
【０７４３】
実施例１４−ＡＣ１０およびＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの結合体化によるＡＣ１０−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
実施例１２の手法に従って、ＡＣ１０およびＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの結合体化によって、ＡＣ１０−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを調製した。
【０７４４】
実施例１５−ＡＣ１０およびＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ（９）の結合体化によるＡＣ１０−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦの調製
実施例１２の手法に従い、ＡＣ１０およびＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ（９）の結合体化によってＡＣ１０−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦを調製した。
【０７４５】
実施例１６−選択された化合物の細胞傷害性の測定
ＭＭＡＦおよび化合物１〜５の細胞傷害性活性をＬｅｗｉｓ  Ｙ陽性細胞系ＯＶＣＡＲ−３について評価し、Ｈ３３９６乳房含羞、Ｌ２９８７肺含羞およびＬＳ１７４ｔ結腸含羞Ｌｅｗｉｓ  Ｙ陽性細胞系を細胞傷害性につきアッセイすることができる。化合物１〜５の細胞傷害性を評価するために、細胞を１５０μＬの培養基中にウェル当たりほぼ５〜１０、０００で接種することができ、次いで、アッセイの最初に四連にて段階的用量の化合物１〜５で処理した。細胞傷害性アッセイはテスト化合物の付加後通常９６時間行う。５０μＬのレサズリン色素をインキュベーションの最後の４〜６時間の間に各ウェルに加えて、培養の最後に目に見える細胞を評価することができる。色素の還元は、各々、５３５ｎｍおよび５９０ｎｍの励起および発光波長を用いて蛍光分光分析によって測定した。分析では、処理された細胞によるレザズリン還元の程度を未処理対照細胞のそれと比較することができる。
【０７４６】
１時間の曝露アッセイの間、細胞に１時間薬物をパルスし、次いで、洗浄することができる；細胞傷害性効果は９６時間のインキュベーション後に測定することができる。
【０７４７】
実施例１７−選択された化合物についてのインビトロ傷害性データ
図１０は、ＣＤ３０＋細胞系Ｋａｒｐａｓ２９９についての一般的手法Ｉに記載されたようにアッセイした化合物７〜１０のｃＡＣ１０結合体の細胞傷害性効果を示す。２つの別々の実験のデータを示す。化合物７および９のｃＡＣ１０結合体はｃＡＣ１０−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＭＭＡＥよりもわずかに活性であることが判明した。
【０７４８】
（表１０）
【０７４９】
【化２３５】
2011231131.tif 000155
他の実験において、ＢＲ９６−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＭＭＡＦは遊離ＭＭＡＦよりも少なくとも２５０倍優れていた。
【０７５０】
一般的手法Ｉ−細胞傷害性の測定。例示的結合体７〜１０の細胞傷害性を評価するために、１５０μＬの培養基中にウェル当たりほぼ５〜１０，０００にて細胞を摂取し、次いで、アッセイの最初に四連にて段階的用量の例示的結合体７〜１０で処理した。細胞傷害性アッセイは、テスト化合物の添加後９６時間行った。インキュベーションの最後の４〜６時間の間に、５０μＬのレサズリン色素を各ウェルに加え、培養の最後に目に見える細胞を評価した。色素の還元は、各々、５３５ｎｍおよび５９０ｎｍの励起及び発光波長を用いる蛍光分光測定によって測定した。分析では、処理した細胞によるレサズリン還元の程度を未処理対照細胞のそれと比較した。
【０７５１】
実施例１８−インビトロ細胞増殖アッセイ
ＡＤＣの効率は、以下のプロトコルを使用する細胞増殖アッセイによって測定することができる（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ＴＢ２８８；Ｍｅｎｄｏｚａ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：５４８５−５４８８）：
１．培地中に約１０４細胞（ＳＫＢＲ−３、ＢＴ４７４、ＭＣＦ７またはＭＤＡ−ＭＢ−４６８）を含有する１００μＬの細胞培養のアリコットを９６−ウェルの不透明な壁のプレートの各ウェルに沈積させた。
２．対照細胞を培地を含有させ、かつ細胞無くして調製した。
３．ＡＤＣを実験ウェルに加え、３〜５日間インキュベートした。
４．プレートをほぼ３０分間で室温に平衡化させた。
５．各ウェルに存在する細胞培養基の容量にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬の容量を加えた。６．内容物をオービタルシェーカーで２分間混合して、細胞の溶解を誘導した。
７．プレートを室温にて１０分間インキュベートして、ルミネセンスシグナルを安定化させた。
８．ルミネセンスを記録し、ＲＬＵ＝相対的ルミネセンス単位としてグラフに報告する。
【０７５２】
実施例１９−ラットにおける血漿クリアランス
抗体薬物結合体および全抗体の血漿クリアランス薬物動態学をＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，各々、２５０−２７５グラム）で調べた。動物にボーラス尾静脈注射（ＩＶ  Ｐｕｓｈ）によって投与した。ほぼ３００μＬの全血を頸静脈を介して、または尾に刺して各時点：投与後０（プレ用量）、１０および３０分；１、２、４、８、２４および３６時間；および２、３、４、７、１４、２１、２８日においてリチウム／ヘパリン抗凝固剤容器に収集した。全抗体はＥＬＩＳＡ−ＥＣＤ／ＧｘｈｕＦｃ−ＨＲＰによって測定した。抗体薬物結合体はＥＬＩＳＡ−ＭＭＡＥ／ＭＭＡＦ／ＥＣＤ−Ｂｉｏ／ＳＡ−ＨＲＰによって測定した。
【０７５３】
実施例２０−サルにおける血漿クリアランスラン
抗体薬物結合体及び全抗体の血漿クリアランス薬物動態学はマカクザルで実験することができる。図１２は、日１および日２１に投与された、異なる用量：０．５、１．５、２．５および３．５ｍｇ／ｋｇにおけるマカクザルへのＨ−ＭＣ−ｖｃ−ＭＭＡＥの投与後における２−段階血漿濃度クリアランスを示す。全抗体およびＡＤＣの濃度は経時的に測定したｃｉｔ（Ｈ＝トラスツズマブ）。
【０７５４】
実施例２１―トランスジェニック外植体マウスにおける腫瘍容量インビボ効率
トランスジェニック実験に適した動物はＴａｃｏｎｉｃ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，Ｎ．Ｙ．）のような標準的な商業的源から得ることができる。多くの株が適当であるが，腫瘍形成に対するそれらのより高い罹患性のためＦＶＢ雌マウスが好ましい。接合ではＦＶＢ雄を用いることができ、精管切除ＣＤ．１ウマを用いて偽妊娠を刺激した。精管切除マウスはいずれかの商業的供給業者から得ることができる。創始体をＦＶＢマウスまたは１２９／ＢＬ６×ＦＶＢ  ｐ５３ヘテロ接合性マウスいずれかで育種することができる。ｐ５３対立遺伝子においてヘテロ接合性を持つマウスを用いて、腫瘍形成を潜在的に増加させることができる。いくつかのＦ１腫瘍は混合株のものである。創始腫瘍はＦＶＢのみであり得る。
【０７５５】
腫瘍（Ｆｏ５  ｍｍｔｖトランスジェニックマウスから調製した同種異系移植片）を有する動物をＡＤＣのＩＶ注射によって単一または複数用量で処理することができる。腫瘍容量は注射後の種々の時点で評価することができる。
【０７５６】
実施例２２−ｔ−ブチルエステルを介するＭＣ−ＭＭＡＦの合成
合成１：
【０７５７】
【化２３６】
2011231131.tif 000156
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯｔＢｕ（化合物１，１２８．６ｍｇ，０．１６３ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２（０．５００ｍＬ）に懸濁させた。６−マレイミドかプロン酸（６８．９ｍｇ，０．３２６ミリモル）および１，３−ジイプロピルカグボジイミド（０．０５０５Ｌ，０．３２６ミリモル）を加え、続いてピリジン（０．５００ｍＬ）を加えた。反応混合物を１．０時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は出発化合物１の完全な消費を示した。減圧下で揮発性有機物を蒸発させた。ＣＨ２Ｃｌ２中の０〜５％メタノールの段階グラジエントを用い、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーを介して単離した。合計９６ｍｇの純粋なＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯｔＢｕ（１２）（６０％収率）を回収した。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ９８１．２６［Ｍ＋Ｈ］＋；１００３．４７［Ｍ＋Ｍａ］＋；９７９．６５［Ｍ−Ｈ］−。
【０７５８】
ＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯｔＢｕ（化合物１２，７４ｍｇ，０．０７５４ミリモル）を室温にてＣＨ２Ｃｌ２（２．０ｍＬ）およびＴＦＡ（１ｍＬ）に懸濁させた。２．５時間後、ＨＰＬＣ分析は出発物質の完全な消費を示した。減圧下で揮発性有機物を蒸発させ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１２  Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｍａｘ−ＲＰ  ８０Åカラム（２５０×２１．２０ｍｍ）を用いて、生成物を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣを介して単離した。溶離剤：３０分間にわたる直線グラジエント１０％〜９０％ＭｅＣＮ／０．０５％ＴＦＡ（ａｑ）、次いで、さらに２０分間のイソクラティック９０％ＭｅＣＮ／０．０５％ＴＦＡ（ａｑ）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ９２５．３３［Ｍ＋Ｈ］＋；９４７．３０［Ｍ＋Ｎａ］＋；９２３．４５［Ｍ−Ｈ］−。
【０７５９】
実施例２３ａ−ジメトキシベンジルエステルを介するＭＣ−ＭＭＡＦ（１１）の合成
合成２：
【０７６０】
【化２３７】
2011231131.tif 000157
Ｆｍｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン−２，４−ジメトキシベンジルエステル（Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢ）の調製
三口５−Ｌ丸底フラスコにＦｍｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン（２００ｇ，５１６ミリモルＢａｃｈｅｍ）、２，４−ジメトキシベンジルアルコール（９５．４ｇ，５６７ミリモル，Ａｌｄｒｉｃｈ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（２．０Ｌ）を充填した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドｔ−ブチルアセタール（１５５ｍＬ，５８６ミリモル，Ｆｌｕｋａ）をＮ２下で２０分間にわたって得られた懸濁液に加え、その結果、透明な溶液が得られた。次いで、反応を室温にて一晩撹拌し、その時点の後、ＴＬＣ分析（０．４２，ヘプタン／ＥｔＯＡｃ＝２：１）は、反応が完了したことを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、淡黄色油が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）に再度溶解させ、シリカゲルの短プラグ（２５ｃｍ×２５ｃｍ，ＣＨ２Ｃｌ２）を通して精製して、無色フォーム（２５０ｇ）を得た。ＭｅＣＮ（１Ｌ）を得られたフォームに加え、それによりバッチを全体的に溶解させた。次いで、それを濃縮乾固し、ＭｅＣＮ（１Ｌ）に再度溶解させ、得られた懸濁液を１時間撹拌し、濾過し、フィルターケーキをＭｅＣＮ（２×２００ｍＬ）で濯いで、Ｆｍｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン−２，４−ジメトキシベンジルエステルを白色固体として得た（１１３．５８ｇ，４１％，ＨＰＬＣ分析によると９５．５％ＡＵＣ）。データ：ＨＰＬＣ
Ｌ−フェニルアラニン−２，４−ジメトキシベンジルエステル（Ｐｈｅ−ＯＤＭＢ）の調製
５００ｍＬ丸底フラスコにＦｍｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン−２，４−ジメトキシベンジルエステル（２６．００ｇ，４８．３ミリモル）、ＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）およびジエチルアミン（７５ｍＬ，Ａｃｒｏｓ）を充填した。混合物を室温にて撹拌し、ＨＰＬＣを完了にてモニターした。４時間後、混合物を濃縮した（浴温度＜３０°Ｃ）。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）に再度懸濁し、濃縮した。これを１回反復した。残渣にＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を加え、これはゲルの形成を引き起こした。この残渣をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）で希釈し、濃縮し、減圧下で曇った油が一晩で放置した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に懸濁  させ、次いで、トルエン（１２０ｍＬ）を加えた。混合物を濃縮し、残渣を一晩真空下に放置した。
【０７６１】
データ：ＨＰＬＣ、１Ｈ  ＮＭＲ
Ｆｍｏｃ−ドラプロイン（Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ）の調製
Ｂｏｃ−ドラプロイン（５８．８ｇ，０．２０５モル）を１，４−ジオキサン（２５６ｍＬ，１．０２モル，Ａｒｄｒｉｃｈ）中の４Ｎ  ＨＣｌに懸濁させた。１．５時間撹拌した後、ＴＬＣ分析は反応が完了したことを示し（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、混合物をほとんど濃縮乾固した。さらなる１，４−ジオキサンを充填し（５０ｍＬ）、混合物を濃縮乾固し、真空下で一晩乾燥した。得られた白色固体をＨ２Ｏ（４００ｍＬ）に溶解させ、機械的スターラー及び温度プローブを備えた３−Ｌの三口丸底フラスコに移した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２１４．３ｍＬ，１．２３モル，Ａｃｒｏｓ）を１分間にわたって加え、２０．５〜２８．２℃（内部）の発熱を引き起こした。混合物を氷浴中で冷却し、１，４−ジオキサンを加えた（４００ｍＬ）。１，４−ジオキサン（４００ｍＬ）中のＦｍｏｃ−ＯＳｕ（８９．９０ｇ，０．２６７モル，Ａｄｖａｎｃｅｄ
ＣｈｅｍＴｅｃｈ）の溶液を１５分間にわたって滴下漏斗から加え、反応温度を９℃未満に維持した。混合物を室温まで温め、１９時間撹拌し、その後、混合物をロータリー蒸発によって水性スラリー（３９０ｇ）まで濃縮した。懸濁液をＨ２Ｏ（７５０ｍＬ）およびＥｔ２Ｏ（７５０ｍＬ）で希釈し、豊富な白色沈殿が形成された。層を分離し、固体を有機層と共に保った。濃塩酸（３０ｍＬ）を用いて水性層を酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、５９．２５ｇの黄色油Ａを得た。Ｅｔ２Ｏ抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）で１回抽出し、固体を水性層と共に保った。濃塩酸（５０ｍＬ）を用いて水性懸濁液を酸性化し、Ｅｔ２Ｏ（５０ｍＬ）で抽出し、固体を有機層と共に保った。有機層を濾過し、濃縮して、３２．３３ｇの黄色油Ｂを得た。２つの油（ＡおよびＢ）を合わせ、ＣＨ２Ｃｌ２（３．５Ｌ）、次いで３％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（９Ｌ）で溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、６８．２３ｇのＦｍｏｃ−ドラプロインを白色フォームとして得た（８１％，ＨＰＬＣ（ＡＵＣ）によると９７．５％純度）。
【０７６２】
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢの調製
粗製Ｐｈｅ−ＯＤＭＢ（４８．３ミリモル）を５分間で無水ＤＭＦ（１０５ｍＬ，Ａｃｒｏｓ）に懸濁し、Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（１９．８０ｇ，４８．３ミリモル）を加えた。混合物を氷浴中で冷却し、ＴＢＴＵ（１７．０８ｇ，５３．２０ミリモル，Ｍａｔｒｉｘ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ）を加えた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２５．３ｍＬ，１４５．０ミリモル，Ａｃｒｏｓ）をシリンジを介して３分間にわたって加えた。１時間後、氷浴を取り除き、混合物を３０分間にわたって温めた。混合物を水（１Ｌ）に注ぎ、酢酸エチル（３００ｍＬ）で抽出した。分離後、水性層を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で再度抽出した。合わせた有機層をブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過（濾紙）して、不溶物（無機物およびいくらかのジベンゾフルベン）を除去した。濃縮後、残渣（４１ｇ）をシリカ（４１ｇ）に吸着させ、クロマトグラフィー（２２ｃｍ×８ｃｍカラム；６５％ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（２．５Ｌ）；３３％ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（３．８Ｌ））によって精製して、２９．４ｇの生成物を白色フォーム（８６％，ＨＰＬＣによると９２％純度）として得た。
【０７６３】
データ：ＨＰＬＣ，１Ｈ  ＮＭＰ，ＴＬＣ（１：１  ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  Ｒｆ＝０．３３，バニリン染色において赤色）
Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢの調製
１−Ｌ丸底フラスコにＦｍｏｃ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢ（２７．６６ｇ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１２２ｍＬ）およびジエチルアミン（６１ｍＬ，Ａｃｒｏｓ）を充填した。溶液を室温にて撹拌し、ＨＰＬＣによって完了をモニターした。７時間後、混合物を濃縮した（浴温度＜３０℃）。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）に懸濁させ、濃縮した。これを２回反復した。残渣にＭｅＯＨ（２０ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）を加え、溶液を濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）およびトルエン（４００ｍＬ）に懸濁させ、濃縮し、残渣を真空下で放置して、クリーム様残渣を得た。
【０７６４】
データ：ＨＰＬＣ，１Ｈ  ＮＭＲ，ＭＳ。
【０７６５】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢの調製
粗製Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢ（３９．１ミリモル）を５分間で無水ＤＭＦ（１３５ｍＬ，Ａｃｒｏｓ）に懸濁させ、Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨ（２４．９４ｇ，３９．１ミリモル，調製については実施例２を参照）を加えた。混合物を氷浴中で冷却し、ＴＢＴＵ（１３．８１ｇ，４３．０ミリモル，Ｍａｔｒｉｘ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ）を加えた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２０．５ｍＬ，１１７．３ミリモル，Ａｃｒｏｓ）を２分間にわたってシリンジを介して加えた。１時間後、氷浴を取り除き、混合物を３０分間にわたって温めた。混合物を水（１．５Ｌ）に注ぎ（酢酸エチル（４８０ｍＬ）で希釈した。１５分間放置した後、層を分離し、水性層を酢酸エチル（３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過（濾紙）して、不溶物およびいくらかのジベンゾフルベン）を除去した。濃縮の後、残渣（４９ｇ）をフラスコから掻き落とし、シリカ（４９ｇ）に吸着させ、クロマトグラフィー（１５ｃｍ×１０ｃｍ  ｄｉａカラム；２：１  ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３Ｌ）、ＥｔＯＡｃ（５Ｌ）；２５０ｍＬ画分）によって精製して、３１．８４ｇのＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢを白色フォームとして得た（７３％，ＨＰＬＣ（ＡＵＣ）により９３％純度）。
【０７６６】
データ：ＨＰＬＣ、ＴＬＣ（２：１  ＥｔＯＡｃ／ヘプタン，Ｒｆ＝０．２１，バニリン染色において赤色）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢの調製
１−Ｌの丸底フラスコをＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢ（２８．５０ｇ）、ＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）およびジエチルアミン（４０ｍＬ）を充填した。混合物を室温にて一晩撹拌し、次いで、減圧下で濃縮した。残渣をシリカ（３０ｇ）に吸着し、フラッシュクロマトグラフィー（１５ｃｍ×８ｃｍ  ｄｉａカラム；２％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２Ｌ）、３％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１Ｌ）、６％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（４Ｌ）；２５０ｍＬ画分）によって精製して、１５．８８ｇのＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢを白色フォームとして得た（６９％，ＨＰＬＣ（ＡＵＣ）により９６％純度）。
【０７６７】
データ：ＨＰＬＣ，ＴＬＣ（６％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．２４，バニリン染色において赤色）
ＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢの調製
５０ｍＬの丸底フラスコにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢ（７５０ｍｇ，０．８５ミリモル）、無水ＤＭＦ（４ｍＬ）、マレイミドカプロン酸（１８０ｍｇ、０．８５ミリモル）、およびＴＢＴＵ（３００ｍｇ，０．９３ミリモル、Ｍａｔｒｉｘ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ）を室温で充填した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４５０μＬ，２．５７ミリモル）をシリンジを介して加えた。１．５時間後、混合物を水（５０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈した。ＮａＣｌを加え、分離を改良した。層の分離の後、水性層を酢酸エチル（２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。得られた油（１ｇ）をフラッシュクロマトグラフィー［１００ｍＬシリカ；２５％ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ），１０％ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ），ＥｔＯＡｃ（１．５Ｌ）］によって精製して、ＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢ（１３）を白色フォームとして得た（５２１ｍｇ，５７％，ＨＰＬＣ（ＡＵＣ）により９４％純度）。
【０７６８】
データ：１Ｈ  ＮＭＲ，ＨＰＬＣ
ＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＨ（ＭＣ−ＭＭＡＦ）（１１）の調製
５０ｍＬの丸底フラスコにＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯＤＭＢ（化合物１３，４２８ｍｇ，０．３９ミリモル）、２．５％ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に溶解させた。溶液はピンク色〜紫色に２分間にわたって変色した。完了はＨＰＬＣおよびＴＬＣによってモニターした（６％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ，ＫＭｎＯ４染色）。４０分後、３滴の水を加え、曇ったピンク色〜紫色混合物を濃縮して５２１ｍｇのピンク色算さを得た。クロマトグラフィー（１５％ＩＰＡ／ＤＣＭ）による精製により、２７０ｍｇのＭＣ−ＭＭＡＦ（７３％，ＨＰＬＣにより９２％純度）を白色固体として得た。
【０７６９】
実施例２３ｂ−ｍｃ−ＭＭＡＦのアナログの合成
【０７７０】
【化２３８】
2011231131.tif 000158
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯｔＢｕ（化合物１，３５ｍｇ，０．０４４ミリモル）をＤＭＦ（０．２５０ｍＬ）に懸濁させた。４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−安息香酸（１１ｍｇ、０．０４９ミリモル）およびＨＡＴＵ（１７ｍｇ、０．０４４ミリモル）を加え、続いて、ＤＩＥＡ（０．０３１ｍＬ，０．１７ミリモル）を加えた。反応混合物を２．０時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は出発化合物１の完全な消費を示した。
【０７７１】
生成物はＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１２  Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｍａｘ−ＲＰ  ８０Åカラム（２５０×２１．２０ｍｍ）を用いて、分取用ＲＰ−ＨＰＬＣを介して単離した。溶離剤；８分間にわたる直線グラジエント１０％〜８０％  ＭｅＣＮ／０．０５％  ＴＦＡ（ａｑ）、次いで、さらに１２分間のイソクラティック８０％  ＭｅＣＮ／０．０５％ＴＦＡ（ａｑ）。合計２０ｍｇの純粋な生成物（１４）が単離された（０．０２ミリモル，４６％収率）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｘ  ９８７．８５［Ｍ＋Ｈ］＋；１０１９．４１［Ｍ＋Ｎａ］＋；９８５．５４［Ｍ−Ｈ］−。
【０７７２】
ＭＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ−ＯｔＢｕ（化合物１４，３８ｍｇ，０．０３８５ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）およびＴＦＡ（１ｍＬ）に懸濁させた。混合物を２．０時間撹拌し、次いで、揮発性有機物を減圧下で蒸発させた。生成物をＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１２Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｍａｘ−ＲＰ  ８０Åカラム（２５０×２１．２０ｍｍ）を用いる分取用Ｒｐ−ＨＰＬＣによって精製した。溶離剤：８分間にわたる直線グラジエント１０％〜８０％ＭｅＣＮ／０．０５％ＴＦＡ（ａｑ）、ついで、さらに１２分間のイソクラティック８０％ＭｅＣＮ／０．０５％  ＴＦＡ（ａｑ）。合計１４．４ｍｇのＭＢ−ＭＭＡＦ生成物が単離された（０．０１５ミリモル，４０％収率）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ９３０．９６）Ｍ＋Ｈ］＋；９５２．９８［Ｍ＋Ｎａ］＋；９２９．３７［Ｍ−Ｈ］−。
【０７７３】
実施例２３ｃ−ＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ（１６）の調製
【０７７４】
【化２３９】
2011231131.tif 000159
ＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）中のＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−ＯＨ（３．０３ｇ，８．５７ミリモル）およびＮ，Ｎ’−ジスクシイミジルカルボネート（３．２９ｇ，１２．８６ミリモル）の室温懸濁液にＤＩＥＡ（４．４８ｍＬ，２５．７１ミリモル）を加えた。この反応混合物を３．０時間撹拌して、次いで、分液ロートに注ぎ、そこで、有機混合物を０．１Ｍ  ＨＣｌ（ａｑ）で抽出した。粗製有機残渣を減圧下で濃縮し、２０〜１００％酢酸エチル／ヘキサン直線グラジエントを用いるシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって生成物を単離した。合計２．１８ｇの純粋なＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−ＯＳｕ（４．８０ミリモル，５６％収率）を回収した。
【０７７５】
ＤＭＥ（１３ｍＬ）およびＴＨＦ（６．５ｍＬ）中のＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−ＯＳｕ（２．１８ｇ，４．８４ミリモル）の室温懸濁液に、Ｈ２Ｏ（１３ｍＬ）中のＬ−シトルリン（０．８５ｇ，４．８４ミリモル）およびＮａＨＣＯ３（０．４１ｇ，４．８４ミリモル）の溶液を加えた。懸濁液を室温にて１６時間撹拌し、次いで、それをｔｅｒｔ−ＢｕＯＨ／ＣＨＣｌ３／Ｈ２Ｏに抽出し、１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ２〜３に酸性化した。有機相を分離し、乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし、その結果、２．０１ｇのＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＣＯＯＨが得られ、これをさらに精製することなく用いた。
【０７７６】
粗製Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＣＯＯＨを２：１  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に懸濁し、それにｐ−アミノベンジルアルコール（０．９７ｇ，７．９ミリモル）およびＥＥＤＱ（１．９５ｇ，７．９ミリモル）を加えた。この懸濁液を１２５時間撹拌し、次いで、揮発性有機物を減圧下で除去し、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いるシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製した。純粋なＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（０．５５ｇ、０．８９６ミリモル，１８．５％収率）を回収した。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ６１４．４８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０７７７】
ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中のＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（０．５５ｇ，０．８９６ミリモル）の懸濁液にＳＴＲＡＴＯＳＰＨＥＲＥＳｔｍ（ピペリジン−樹脂−結合）（＞５ミリモル／ｇ，１５０ｍｇ）を加えた。室温で１６時間撹拌した後、混合物を（ＭｅＯＨで予め洗浄した）セライトを通して濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をジエチルエーテルおよびヘキサンでトリチュレートした。得られた固体物質ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨをＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に懸濁させ、それにＭＣ−ＯＳｕ（０．２８ｇ，０．８９６ミリモル）、ＤＩＥＡ（０．１７ｍＬ，０．９９ミリモル）、およびＤＭＦ（１５ｍＬ）を加えた。この懸濁液を１６時間撹拌したが、反応混合物のＨＰＬＣ分析は不完全な反応を示し、そこで、懸濁液を減圧下で６ｍＬの容量まで濃縮し、次いで、１０％ＮａＨＣＯ３（ａｑ）溶液を加え、懸濁液をさらに１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２グラジエントを用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製し、その結果，４２ｍｇ（０．０７２ミリモル，８％収率）のＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＴＡＢ−ＯＨを得た。
【０７７８】
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（２．３７ｇ，４．０４ミリモル）およびビス（ニトロフェニル）カルボネート（２．５９ｇ，８．５２ミリモル）の懸濁液にＤＩＥＡ（１．０６ｍＬ，６．０６ミリモル）を加えた。この懸濁液を５．５時間撹拌し、減圧下で濾過し、ジエチル−テルでのトリチュレーションによって精製した。ＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯ−ｐＮＰ（１４７ｍｇ，０．１９６ミリモル）を１：５  ピリジン／ＤＭＦ溶液（３ｍＬ）に懸濁させ、それにＨＯＢｔ（５ｍｇ、０．０３９ミリモル）、ＤＩＥＡ（０．１７ｍＬ，０．９７８ミリモル）およびＭＭＡＦ（化合物２，１５０ｍｇ、０．２０５ミリモル）を加えた。この反応混合物を室温にて１６時間撹拌し、次いで、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１２  Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｍａｘ−ＲＰ  ８０Åカラム（２５０×２１．２０ｍｍ）を用いる分取用ＲＰ−ＨＰＬＣ（×３）によって精製した。溶離剤：３０分間にわたる直線グラジエント１０％〜９０％ＭｅＣＮ／０．０５％ＴＦＡ（ａｑ）、次いで、さらに２０分間のイソクラティック９０％ＭｅＣＮ／０．０５％ＴＦＡ（ａｑ）。ＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ（１６）が黄色固体として得られた（２４．５ｍｇ，０．０１８２，０．４５％収率）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １３４４．９５［Ｍ＋Ｈ］＋：１３６６．９４；［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０７７９】
実施例２３ｄ−スベリル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ（１７）のスクシンイミドエステルの調製
【０７８０】
【化２４０】
2011231131.tif 000160
（化合物１７）
化合物１（３００ｍｇ，０．３８ミリモル）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ｐＮＰ（４３６ｍｇ，０．５７ミリモル，１．５当量）を５ｍＬの無水ピリジンに懸濁させた。ＨＯＢｔ（１０ｍｇ，０．０７６ミリモル，０．２当量）を加え、続いて、ＤＩＥＡ（１９９μＬ，１．１４ミリモル，３当量）を加えた。反応混合物を１０分間音波処理し、次いで、室温にて一晩撹拌した。ピリジンを減圧下で除去し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２に再度懸濁した。混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２中の０〜１０％のＭｅＯＨの段階的グラジエントでのシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって分離した。生成物を含有する画分を引き出し、濃縮し、真空中で一晩乾燥して、３１７ｍｇ（５９％収率）のＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ−ＯｔＢｕを得た。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １４１５．８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０７８１】
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ−ＯｔＢｕ（１００ｍｇ）を２０％ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中で２時間撹拌した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈した。有機層を、順次、水（２×３０ｍＬ）およびブライン（１×３０ｍＬ）で洗浄した。有機相を濃縮し、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２でのシリカゲルのパッドに負荷した。生成物を３０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出させた。真空中で一晩乾燥した後、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦを白色固体として得た。３８ｍｇ，４０％。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １３５７．７［Ｍ−Ｈ］−。
【０７８２】
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、６７ｍｇをＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）、ジエチルアミン（２ｍＬ）およびＤＭＦ（２ｍＬ）に懸濁させた。混合物を室温にて２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をピリジン（２ｍＬ）、次いで、トルエン（２×５ｍＬ）で共蒸発させ、真空中で乾燥した。Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ―ＭＭＡＦが茶色がかった油として得られ、さらに精製することなく用いた。
【０７８３】
６７ｍｇのＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦから調製した全てのＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦをピリジン（２ｍＬ）に懸濁させ、ピリジン（１ｍＬ）中のジスクシンイミジルスベレート（７４ｍｇ，０．２ミリモル，４当量）の溶液に加えた。反応混合物を室温にて撹拌した。３時間後、エーテル（２０ｍＬ）を加えた。沈殿を収集し、さらなる量のエーテルで洗浄した。赤味がかった固体を３０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２に懸濁させ、溶離剤として３０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いるシリカゲルのパッドを通して濾過した。化合物１７が白色固体として得られた：２０ｍｇ（２９％収率）。ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  １３８８．５［Ｍ−Ｈ］−。
【０７８４】
実施例２４−ｍｃＭＭＡＦ抗体−薬物結合体のインビボの効率
Ｋａｒｐａｓ−２９９  ＡＬＣＬ異種移植片におけるｃＡＣ１０−ｍｃＭＭＡＦの効率：抗体（ｃＡＣ１０−ｍｃＦ４）当たり平均４つの薬物部分を持つｃＡＣ１０−ｍｃＭＭＡＦのインビボ効率を評価するために、Ｋａｒｐａｓ−２９９ヒトＡＬＣＬ細胞を免疫不全Ｃ．Ｂ−１７  ＳＣＩＤマウスに皮下移植した（マウス当たり５×１０６細胞）。式（０．５×Ｌ×Ｗ２）（式中、ＬおよびＷは２つの二方向測定のより長い方およびより短い方である）を用いて腫瘍容量を計算した。実験動物における平均腫瘍容量がほぼ１００ｍｍ３（範囲４８〜１６２）に到達すると、マウスを３つの群（群当たり５匹のマウス）に分け、未処理のまま放置するか、あるいは１または２ｍｇ／ｋｇのｃＡＣ１０−ｍｃＦ４いずれかの尾静脈を介する単一静脈内注射を与えた（図１）。未処理マウスにおける腫瘍は療法の開始から７日以内に迅速に＞１，０００ｍｍ３の平均容量まで成長した。対照的に、ｃＡＣ１０−ｍｃＦ４処理腫瘍の全ては、１ｍｇ／ｋｇ群においては３／５および完全な腫瘍応答が得られる２ｍｇ／ｋｇ群においては５／５の迅速な退行を示した．２ｍｇ／ｋｇ群における完全な応答体の１つにおいて腫瘍はほぼ４週間後に再発したが、療法から１０週間後において、この群における残りの４／５応答体、および１ｍｇ／ｋｇ群での３つの完全な応答体においては検出可能な腫瘍はなかった。
【０７８５】
Ｌ２９８７  ＮＳＣＬＣ異種移植片におけるｃＢＲ９６−ｍｃＭＭＡＦの効率：ｃＢＲ９６はＬｅＹ抗原を認識するキメラ抗体である。抗体（ｃＢＲ９６−ｍｃＦ４）当たり４つの薬物を持つｃＢＲ９６−ｍｃＭＭＡＦのインビボ効率を評価するために、Ｌ２９８６非−小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍フラグメントを無胸腺ヌードマウスに移植した。腫瘍が平均してほぼ１００ｍｍ３となれば、マウスを３つの群：未処理および２つの療法群に分けた。療法では、図３ａに示すように、マウスにｃＢＲ９６−ｍｃＦ４を３または１０ｍｇ／ｋｇ／注射にて４日ごとに合計４回の注射（ｑ４ｄｘ４）を投与した。図３ｂに示すように、マウスにはｃＢＲ９６−ｍｃＦ４または非−結合対象結合体、ｃＡＣ１０−ｍｃＦ４を１０ｍｇ／ｋｇ／注射にて４日ごとに合計４回の注射（ｑ４ｄｘ４）を投与した。図３ａおよび３ｂに示すように、ＢＲ９６−ｍｃＦ４は対照と比較して顕著な腫瘍成長の遅延を生じた。
【０７８６】
図２は皮下Ｌ５４０ＣＹにおけるｃＡＣ１０−ｍｃＭＭＡＦのインビボの単一容量の効率アッセイを示す。この実験では、未処理群では４匹のマウス、および処理群の各々では１０匹のマウスがいた。
【０７８７】
実施例２５−ＭＣ−ＭＭＡＦ抗体−薬物結合体のインビトロ効率
ＣＤ３０＋細胞系に対するｃＡＣ１０−抗体−薬物結合体の活性。図４ａおよび１６ｂは代表的な実験からの用量−応答曲線を示し、そこでは、Ｋａｒｐａｓ２９９（退形成大細胞リンパ腫）およびＬ４２８（ホジキンリンパ腫）の培養を、系列的に希釈されたｃＡＣ１０−ｍｃＭＭＡＦ（図４ａ）またはｃＡＣ１０−ｖｃＭＭＡＦ（図４ｂ）と共に９６時間インキュベートした。培養を５０μＭのレサズリン［７−ヒドロキシ−３Ｈ−フェノキサジン−３−オン１０−オキサイド］で４時間標識し，蛍光を測定した。データは、４−パラメータ用量−応答曲線フィット手法を用いてＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン４．００にてデータを換算した。ＩＣ５０値は、未処理対照培養と比較して増殖が５０％低下した濃度と定義される。各濃度は四連でテストした。
【０７８８】
Ｌｅｙ＋細胞系に対するｃＢＲ９６−抗体−薬物結合体の活性。図５ａおよび５ｂは代表的な実験からの用量−応答曲線を示し、そこでは、Ｈ３３９６（乳房癌腫）およびＬ２９８７（非小細胞肺癌腫９の培養を、系列的に希釈されたｃＢＲ９６−ｍｃＭＭＡＦ（図５ａ）または−ｖｃＭＭＡＦ（図５ｂ）と共に９６時間インキュベートした。培養を５０μＭレサズリンで４時間標識し，蛍光を測定した。４−パラメータ用量−応答曲線フィット手法を用い、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン４．００にてデータを換算した。ＩＣ５０値は、未処理対照培養と比較して増殖が５０％低下した濃度と定義される。各濃度は四連でテストする。
【０７８９】
ＣＤ７０＋腎臓細胞癌種細胞系に対するｃ１Ｆ６−抗体−薬物結合体の活性。図６ａおよび６ｂは代表的な実験からの用量−応答曲線を示し、そこではＣａｋｉ−１および７８６−Ｏ細胞の培養を、系列的に希釈されたｃ１Ｆ６−ｍｃＭＭＡＦ（図６ａ）または−ｖｃＭＭＡＦ（図６ｂ）と共に９６時間インキュベートした。培養を５０μＭレサズリンで４時間標識し，蛍光を測定した。４−パラメータ用量−応答曲線フィット手法を用い、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン４．００にてデータを換算した。ＩＣ５０値は、未処理対照培養と比較して増殖が５０％低下する濃度と定義される。各濃度は四連でテストされる。
【０７９０】
実施例２６−トラスツズマブの精製
４４０ｍｇのＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８，ｒｈｕＭＡｂ  ＨＥＲ２，米国特許第５８２１３３７号）抗体を含有する１つのバイヤルを５０ｍＬ  ＭＥＳ緩衝液（２５ｍＭ  ＭＥＳ，５０ｍＭ  ＮａＣｌ，ｐＨ５．６）に溶解させ、同一緩衝液で平衡化してあるカチオン交換カラム（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｓ．１５ｃｍ×１．７ｃｍ）に負荷した。次いで、カラムを同一緩衝液（５カラム容量）で洗浄した。トラスツズマブを、緩衝液のＮａＣｌ濃度を２００ｍＭまで上昇させることによって溶出させた。抗体を含有する画分をプールし、１０ｍｇ／ｍＬまで希釈し、５０ｍｍリン酸カリウム、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ６．５を含有する緩衝液に透析した。
【０７９１】
実施例２７−トラスツズマブおよびＭＣ−ＭＭＡＥの結合体化によるトラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＥの調製
ｐＨ８．０の５００ｍＭホウ酸ナトリウムおよび５００ｍＭ塩化ナトリウムに溶解させたトラスツズマブを過剰の１００ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）で処理する。３７℃での約３０分間のインキュベーションの後、緩衝液をＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５樹脂上での溶出によって交換し、１ｍＭ  ＤＴＰＡを含むＰＢＳで溶出させる。溶液の２８０ｎｍにおける吸光度からの還元抗体濃度およびＤＴＮＢ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）との反応によるチオール濃度を測定し、および４１２ｎｍにおける吸光度を測定することによって、チオール／Ａｂ値をチェックする。ＰＢＳに溶解させた還元抗体を氷上で冷却する。
【０７９２】
ＤＭＳＯに溶解させた薬物リンカー試薬、マレイミドカプロイル−モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、すなわち、ＭＣ−ＭＭＡＥを既知の濃度にてアセトニトリルおよび水に溶解させ、ＰＢＳ中の冷却された還元抗体トラスツズマブに加える。約１時間後、過剰のマレイミドを加えて、反応をクエンチし、いずれの未反応抗体チオール基もキャップする。反応混合物を遠心限外濾過によって濃縮し、ＰＢＳ中のＧ２５樹脂を通す溶出によってトラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＥを精製し、脱塩し、滅菌条件下で０．２μｍフィルターを通して濾過し、貯蔵のために凍結させる。
【０７９３】
実施例２８−トラスツズマブおよびＭＣ−ＭＭＡＦの結合体化によるトラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦの調製
実施例２７の手法に従い、トラスツズマブおよびＭＣ−ＭＭＡＦの結合体化によってトラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦを調製した。
【０７９４】
実施例２９−トラスツズマブおよびＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの結合体化によるトラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの調製
実施例２７の手法に従い、トラスツズマブおよびＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥの結合体化によって、トラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを調製した。
【０７９５】
実施例３０−トラスツズマブおよびＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ９の結合体化によるトラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦの調製  実施例２７の手法に従い、トラスツズマブおよびＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ９の結合体化によってトラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦを調製した。
【０７９６】
実施例３１−ラット毒性
遊離薬物およびＡＤＣの急性毒性プロフィールを、青年Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（各々７５〜１２５ｇｍ，Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ））で評価した。動物に日１に注射し、ベースライン、日３および日５において完全な化学および血液学的プロフィールが得られ、日５において完全な剖検が行われた。肝臓酵素測定を全ての動物について行い、以下の組織：胸骨、肝臓、腎臓、胸腺、脾臓、大および小腸につき各群に対して３つのランダムな動物でルーチン的組織学を行った。実験群は以下の通りであった：
【０７９７】
【化２４１】
2011231131.tif 000161
トラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＭＭＡＦ、トラスツズマブ−ＭＣ（Ｍｅ）−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦおよびトラスツズマブ−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦについて、ＭＭＡＦのＭＷとして７３１．５およびヘルセプチンのＭＷとして１４５１６７を用いてμｇのＭＭＡＦ／ｍ２を計算した。
【０７９８】
体表面積を以下のようにして計算した：［｛（グラムで表した体重の０．６６７乗）×１１．８｝／１００００］（Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｒｅｖｉｅｗｅｒｓ，２００２）。
【０７９９】
１０ｍＬ／ｋｇの用量容量にて、実験日１に、単一静脈内ボーラス尾−静脈注射によって用量溶液を投与した。動物の体重を実験日１の投与後に、およびその後毎日動物の体重を測定した。血液学的分析のために、ＥＤＴＡを含有する試験管に全血を収集した。臨床化学分析のために、全血を血清セパレーター試験管に収集した。血液試料を実験日４、実験日３、および実験日５に投与後に収集した。全血を剖検時にヘパリンナトリウムを含有する試験管にも収集し、可能な後の分析のために血漿を−７０℃で凍結した。以下の組織を収集し、剖検時に中性緩衝化ホルマリンに入れた：肝臓、腎臓、心臓、胸腺、脾臓、脳、胸骨、および胃、大腸および小腸を含めたＧＩ管の切片。胸骨、小腸、大腸、肝臓、胸腺、脾臓及び腎臓を調べた。
【０８００】
各時点における肝臓関連血清酵素レベルを正常な雌Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットからの範囲（第５〜９５番目１００分位数）と比較した。各時点における白血球細胞および血小板カウントを正常な雌Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットからの範囲
（５番目および９５番目１００分位数）と比較した。
【０８０１】
正常な雌Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける高用量実験：
群１：賦形剤
群２：トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ，５２．２４ｍｇ／ｋｇ，４２１０μｇ／ｍ２
群３：トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ，６８．２５ｍｇ／ｋｇ，５５００μｇ／ｍ２
群４：トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ，８６．００ｍｇ／ｋｇ，６９３０μｇ／ｍ２。
【０８０２】
１１匹の動物からの組織をルーチン的組織学のために提出した。これらの動物は、トラスツズマブ−ＭＣ−ＭＭＡＦ免疫結合体を用いる急性用量−範囲毒性実験の一部であった。動物は投与後１２日間追跡した。
【０８０３】
実施例３２−マカクザル毒性／安全性
４匹の（２雄，２雌）ナイーブなＭａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（マカクザツ）の３つの群を、トラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥおよびトラスツズマブ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦにつき実験した。静脈内投与は実験の日１および２２に行った。
【０８０４】
【化２４２】
2011231131.tif 000162
【０８０５】
【化２４３】
2011231131.tif 000163
Ｈ＝トラスツズマブ。
【０８０６】
投与は他の種に関連するように動物の表面積で表し、すなわち、μｇ／ｍ２における用量は種から独立しており、かくして、種の間で比較可能であるＡＤＣの処方はＰＢＳ、５．４ｍＭリン酸ナトリウム、４．２ｍＭリン酸カリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．５を含有した。
【０８０７】
各投与後５分、６時間、１０時間、および１、３、５、７、１４、２１日に、血液学分析プレ用量のために血液を収集した。赤血球（ＲＢＣ）および血小板（ＰＬＴ）カウントは光散乱方法によって測定した。白血球（ＷＢＣ）カウントはペルオキシダーゼ／高塩基球方法によって測定した。網状赤血球カウントはカチオン性色素での光散乱方法によって測定した。細胞カウントはＡｄｖｉａ  １２０装置で測定した。ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）はＯｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００装置にて、Ｔｏｔａｌ  Ａｂ  ＥＬＩＳＡ−ＥＣＤ／ＧｘｈｕＦｃ−ＨＲＰ．Ｃｏｎｊ．Ａｂ  ＥＬＩＳＡ−ＭＭＡＥ／ＭＭＡＦ／ＥＣＤ−Ｂｉｏ／ＳＡ−ＨＲＰテストを用いて、ＵＶ／ＮＡＤＨ；ＩＦＣＣ方法によってＵ／Ｌで測定した。
【０８０８】
実施例３３−抗−ＥｒｂＢ２モノクローナル抗体４Ｄ５の生産、特徴付けおよびヒト化
ＥｒｂＢ２の細胞外ドメインに特異的に結合するネズミモノクローナル抗体４Ｄ５はＦｅｎｄｌｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：１５５０−１５５８に記載したように生産した。簡単に述べれば、Ｈｕｄｚｉａｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）  ８４：７１５８−７１６３（１９８７）に記載したように生産されたＮＩＨ  ３Ｔ３／ＨＥＲ２−３４００細胞（ほぼ１×１０５のＥｒｂＢ２分子／細胞を発現）を、２５ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で収穫し、これを用いてＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫化した。週０、２、５および７に、０．５ｍＬのＰＢＳ中の１０７細胞の腹腔内注射をマウスに与えた。３２Ｐ−標識ＥｒｂＢ２を免疫沈澱させた抗血清を持つマウスに、週９および１３に、小麦胚アグルチニン−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＷＧＡ）で精製ＥｒｂＢ２膜抽出物の腹腔内注射を与えた。これに続いて、０．１ｍＬのＥｒｂＢ２調製物の静脈内注射を与え、脾臓細胞をマウス骨髄腫系Ｘ６３−Ａｇ８．６５３と融合させた。ハイブリドーマ上清を、ＥＬＩＳＡおよびラジオ免疫沈澱によってＥｒｂＢ２−結合につきスクリーニングした。
【０８０９】
エピトープマッピングおよび特徴付け
モノクローナル抗体４Ｄ５が結合したＥｒｂＢ２エピトープは競合結合分析によって測定した（Ｆｅｎｄｌｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：１５５０−１５５８（１９９０））。ＰＡＮＤＥＸＴＭ  Ｓｃｒｅｅｎ  Ｍａｃｈｉｎｅを用い、交差−ブロッキング実験を直接的蛍光によって無傷細胞に対して行って、蛍光を定量した。確立された手法を用い、モノクローナル抗体はフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で結合体した（Ｗｏｆｓｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｐ．２８７，Ｍｉｓｈｅｌ  ａｎｄ  Ｓｃｈｉｉｇｉ（編）  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ：Ｗ．Ｊ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．（１９８０））。ＮＩＨ  ３Ｔ３／ＨＥＲ２−３４００細胞の密集単層をトリプシン処理し、１回洗浄し、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および０．１％ＮａＮ３を含有する冷ＰＢＳに１．７５×１０６細胞／ｍＬで再度懸濁した。最終濃度の１％ラテックス（ＩＤＣ，Ｐｏｒｔｌａｎｄ，ＯＲ）を加えて、ＰＡＮＤＥＸＴＭプレート膜の閉鎖を低下させた。懸濁液中の細胞、２０μＬ、および２０μＬの精製されたモノクローナル抗体（１００μｇ／ｍＬ〜０．１μｇ／ｍＬ）をＰＡＮＤＥＸＴＭプレートウェルに加え、氷上で３０分間インキュベートした。２０μＬ中のＦＩＴＣ−標識モノクローナル抗体の所定の希釈を各ウェルに加え、３０分間インキュベートし、洗浄し、ＰＡＮＤＥＸＴＭによって蛍光を定量した。モノクローナル抗体は、もし各々が無関係なモノクローナル抗体で対照と比較して５０％以上だけ他の結合をブロックしたならば、エピトープを共有すると考えられた。この実験においては、モノクローナル抗体４Ｄ５にはエピトープＩが割り当てられた（約５２９〜約６２５のアミノ酸残基，ＥｒｂＢ２細胞外ドメイン内で包括的）。
【０８１０】
乳癌細胞系ＳＫ−ＢＲ−３を用いて、モノクローナル抗体４Ｄ５の増殖阻害特徴を評価した（Ｈｕｄｚｉａｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９（３）：１１６５−１１７２参照）。簡単に述べれば、０．２５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）トリプシンを用いることによってＳＫ−ＢＲ−３細胞を脱着させ、ｍＬ当たり４×１０５細胞の密度にて完全な培地に懸濁させた。１００μＬのアリコット（４×１０４細胞）を９６−ウェルミクロ希釈プレートに平板培養し、細胞を接着させ、次いで、１００μＬの培地単独、またはモノクローナル抗体（最終濃度５μｇ／ｍＬ）を含有する培地を加えた。７２時間後、プレートをＰＢＳ（ｐＨ７．５）で２回洗浄し、クリスタルバイオレット（メタノール中０．５％）で染色し、Ｓｕｇａｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０：９４３−９４５に記載されたように相対的細胞増殖につき分析した。モノクローナル抗体４Ｄ５は約５６％だけＳＫ−ＢＲ−３相対的細胞増殖を阻害した。
【０８１１】
また、ＭＣＦ７細胞の全細胞溶解物からのＭｒ１８０，０００範囲のタンパク質のＨＲＧ−刺激チロシンリン酸化を阻害するその能力につきモノクローナル抗体４Ｄ５を評価した（Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５６：１４５７−１４６５）。ＭＣＦ７細胞は相対的に低いレベルにおけるを除き、全ての公知のＥｒｂＢレセプターを発現すると報告されている。ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、およびＥｒｂＢ４はほとんど同一の分子サイズを有するので、全−細胞溶解物をウェスターンブロット分析によって評価する場合、いずれのタンパク質がチロシンリン酸化されるようになるかを区別するのは可能ではない。しかしながら、これらの細胞はＨＲＧチロシンリン酸化アッセイで理想的である。なぜならば、用いるアッセイ条件下では、外因的に加えられたＨＲＧの不存在下では、それらはＭｒ１８０，０００の範囲において低レベル〜検出できないレベルのチロシンリン酸化タンパク質を呈するからである。
【０８１２】
ＭＣＦ７細胞を２４−ウェルプレートで平板培養し、ＥｒｂＢ２に対するモノクローナル抗体を各ウェルに加え、室温にて３０分間インキュベートし；次いで、ｒＨＲＧβ１１７７−２４４を最終濃度０．２ｎＭまで各ウェルに加え、インキュベーションを８分間継続した。培地を各ウェルから注意深く吸引し、１００μＬのＳＤＳ試料緩衝液（５％ＳＤＳ，２５ｍＭ  ＤＴＴ、および２５ｍＭトリス−ＨＣｌ，ｐＨ６．８）を加えることによって反応を停止させた。各試料（２５μＬ）を４〜１２％グラジエントゲル（Ｎｏｖｅｘ）で電気泳動に付し、次いで、二フッ化ポリビニリデン膜に電気泳動により移した。抗ホスホチロシン（４Ｇ１０，ＵＢＩから，１μｇ／ｍＬで使用）免疫ブロットを発色させ、Ｍｒ１８０，０００における圧倒的な反応性バンドの強度を従前に記載されているように反射率デンシトメトリーによって定量した（Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１２０５−１２１０；Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１４６６１−１４６６５（１９９４））。
【０８１３】
モノクローナル抗体４Ｄ５はＭｒ１８０，０００においてＨＲＧ−誘導チロシンリン酸化シグナルの発生を阻害した。しかしながら、ＨＲＧの不存在下では、Ｍｒ１８０，０００範囲ではタンパク質のチロシンリン酸化を刺激することができなかった。また、この抗体はＥＧＦＲ（Ｆｅｎｄｌｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：１５５０−１５５８（１９９０））、ＥｒｂＢ３、またはＥｒｂＢ４と交差反応しない。モノクローナル抗体４Ｄ５は５０％だけチロシンリン酸化のＨＲＧ刺激をブロックできた。
【０８１４】
外因性ｒＨＲＧβ１の存在下または不存在下におけるＭＤＡ−ＭＢ−１７５およびＳＫ−ＢＲ−３細胞に対するモノクローナル抗体４Ｄ５の増殖阻害活性を評価した（Ｓｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １５：１３８５−１３９４（１９９７））。ＭＤＡ−ＭＢ−１７５細胞におけるＥｒｂＢ２レベルは正常な乳房上皮細胞で見出されたレベルよりも４〜６倍高く、ＥｒｂＢ２−ＥｒｂＢ４レセプターはＭＤＡ−ＭＢ−１７５細胞において構成的にチロシンリン酸化される。モノクローナル抗体４Ｄ５は、外因性ＨＲＧの存在下および不存在下双方において、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５細胞の細胞増殖を阻害できなかった。４Ｄ５による細胞増殖の阻害はＥｒｂＢ２発現レベルに依存する（Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３７：２５５−２６３（１９９３））。ＳＫ−ＢＲ−３細胞における６６％の最大阻害は検出できた。しかしながら、この効果は外因性ＨＲＧによって克服できた。
【０８１５】
ここに引用してその全開示を援用する米国特許第５８２１３３７号に記載されているように、「遺伝子変換突然変異誘発」戦略を用い、ネズミモノクローナル抗体４Ｄ５をヒト化した。以下の実験で用いるヒト化モノクローナル抗体４Ｄ５はｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８と命名する。この抗体はＡｇＧ１イソタイプのものである。
【０８１６】
引用した文献
本発明は、その範囲が、本発明の少数の態様の説明を意図する実施例に開示された特別な実施形態によって限定されず、機能的に同等であるいずれの実施形態も本発明の範囲内のものである。事実、示され、本明細書中に記載されたものに加えて本発明の種々の変形は当業者に明らかとなり、かつ添付の請求の範囲の範囲内に入ることを意図する。
【０８１７】
本明細書中で引用した全ての文献は、あたかも各個々の刊行物または特許または特許出願が全ての目的で引用によるその全体が特異的にかつ個々に取り込まれることが指令されるように、同一程度まで全ての目的で、引用によりその全体が援用される。
【産業上の利用可能性】
【０８１８】
例えば、本発明は、以下を提供する：
（項目１）
式：
Ｌ−（Ｄ）ｐ
［式中、
Ｌ−はリガンドユニットであり；
ｐは１〜約２０の範囲であり；および
−Ｄは式ＤＥおよびＤＦから選択される薬物部分であり：
【化１】
2011231131.tif 000164
ここで、独立して、各位置において：
Ｒ２はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５はＨ，およびメチルから選択され；
あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環を形成し、かつ式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、およびｎは２、３、４、５、および６から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリールまたはＣ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１はＨ，Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され；および  ｎは０〜６の範囲の整数である］
を有する化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
（項目２）
さらに、リンカーユニット（ＬＵ）を含み、前記化合物が式：
Ｌ−ＬＵ−Ｄ
を有する項目１記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
（項目３）
式：
ＬＵ−Ｄ
［式中、
−ＬＵはリンカーユニットであり；および
−Ｄは式ＤＥおよびＤＦから選択される薬物部分であり：
【化２】
2011231131.tif 000165
ここで、独立して、各位置において：
Ｒ２はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５はＨ、およびメチルから選択され；
あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環を形成し、かつ式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、およびｎは２、３、４、５、および６から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリールまたはＣ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり； Ｒ１１はＨ，Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され；および
ｎは０〜６の範囲の整数である］
を有する化合物、またはその薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物。
（項目４）
前記化合物が式Ｉａ’：
【化３】
2011231131.tif 000166
［式中、
Ａｂは抗体であり、
Ａはストレッチャーユニットであり、
ａは０または１であり、
各Ｗは、独立して、アミノ酸ユニットであり、
ｗは０〜１２の範囲の整数であり、
Ｙはスペーサーユニットであり、および
ｙは０、１、または２であり、
ｐは１〜約２０の範囲であり、および
Ｄは式ＤＥおよびＤＦから選択される薬物部分であり：
【化４】
2011231131.tif 000167
【化５】
2011231131.tif 000168
ここで、独立して、各位置において：
Ｒ２はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；  Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環及びＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５はＨ，およびメチルから選択され；
あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環を形成し、かつ式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、およびｎは２、３、４、５、および６から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリールまたはＣ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１はＨ，Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され；および
ｎは０〜６の範囲の整数である］
を有する薬物結合体、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物である項目１記載の化合物。
（項目５）
Ｄが式ＤＦ：
【化６】
2011231131.tif 000169
である項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目６）
Ｄが式ＤＥ：
【化７】
2011231131.tif 000170
である項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目７）
式：
Ａｂ−（Ｄ）ｐ
［式中、ａ、ｗおよびｙは各々０である］
を有する項目１記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目８）
前記抗体が前記抗体のシステイン残基を介して前記薬物部分に結合した項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目９）
ｐが２〜５である項目８記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目１０）
ｐが２〜８である項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目１１）
ｐが２〜５である項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目１２）
式：
【化８】
2011231131.tif 000171
［式中、Ｌは抗体であって、Ｒ１７はＣ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−、および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−であり；およびｒは１〜１０の範囲の整数である］
を有する項目４または８記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目１３）
式：
【化９】
2011231131.tif 000172
を有する項目１２記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目１４）
式：
【化１０】
2011231131.tif 000173
［式中、ｗおよびｙは各々０である］
を有する項目１２記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目１５）
Ｄが式ＤＥである項目１４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目１６）
式ＤＥが式：
【化１１】
2011231131.tif 000174
を有する項目１５記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目１７）
Ｄが式ＤＦである項目１４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目１８）
式ＤＦが式：
【化１２】
2011231131.tif 000175
を有する項目１７記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目１９）
式：
【化１３】
2011231131.tif 000176
を有する項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目２０）
式：
【化１４】
2011231131.tif 000177
を有する項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目２１）
式：
【化１５】
2011231131.tif 000178
を有する項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目２２）
Ｄが式ＤＥである項目２１記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目２３）
式ＤＥが式：
【化１６】
2011231131.tif 000179
を有する項目２２記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目２４）
Ｄが式ＤＦである項目２１記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目２５）
式ＤＦが式：
【化１７】
2011231131.tif 000180
を有する項目２４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目２６）
式：
【化１８】
2011231131.tif 000181
を有する項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目２７）
ｗが２〜１２の範囲の整数である項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目２８）
ｗが２である項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目２９）
Ｗｗが−バリン−シトルリン−である項目２８記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目３０）
Ｗｗが５−アミノ吉草酸、ホモフェニルアラニンリシン、テトライソキノリンカルボキシレートリシン、シクロヘキシルアラニンリシン、イソメペコチン酸リシン、β−アラニンリシン，グリシンセリンバリングルタミンおよびイソネペクチン酸である項目２７記載
の抗体−薬物結合体化合物。
（項目３１）
Ｄが式：
【化１９】
2011231131.tif 000182
を有する項目４、６または７記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目３２）
Ｄが式：
【化２０】
2011231131.tif 000183
を有する項目４、５または７記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目３３）
Ｄが式：
【化２１】
2011231131.tif 000184
を有する項目５記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目３４）
Ｄが式：
【化２２】
2011231131.tif 000185
を有する項目５記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目３５）
Ｄが式：
【化２３】
2011231131.tif 000186
を有する項目５記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目３６）
Ｄが式：
【化２４】
2011231131.tif 000187
を有する項目５記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目３７）
Ｄが式：
【化２５】
2011231131.tif 000188
を有する項目５記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目３８）
Ｄが式：
【化２６】
2011231131.tif 000189
を有する項目５記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目３９）
Ｄが式：
【化２７】
2011231131.tif 000190
を有する項目５記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目４０）
Ｄが式：
【化２８】
2011231131.tif 000191
を有する項目５記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目４１）
Ｄが式：
【化２９】
2011231131.tif 000192
を有する項目５記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目４２）
前記抗体がモノクローナル抗体である項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目４３）
前記抗体が二重特異性抗体である項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目４４）
該抗体がキメラ抗体である項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目４５）
該抗体がヒト化抗体である項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目４６）
該抗体が抗体フラグメントである項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目４７）
該抗体フラグメントがＦａｂフラグメントである項目４６記載の抗体−薬物結合体化合
物。
（項目４８）
前記抗体−薬物結合体化合物が該抗体−薬物結合体の抗体に特異的な細胞−表面レセプターを持つ細胞に進入するまで、実質量の薬物部分は該抗体から切断されず、および該薬物部分は、該抗体−薬物結合体が細胞に進入すると該抗体から切断される項目４記載の抗
体−薬物結合体化合物。
（項目４９）
哺乳動物における前記化合物または該化合物の細胞内代謝産物の生物学的利用能が、前記抗体−薬物結合体化合物の前記薬物部分を含む薬物化合物と比較した場合に改良される請求項４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目５０）
哺乳動物における前記化合物または該化合物の細胞内代謝産物の生物学的利用能が、前記薬物部分を有しない該化合物のアナログと比較した場合に改良される項目４記載の抗体
−薬物結合体化合物。
（項目５１）
前記薬物部分が前記化合物の抗体、または該化合物の細胞内代謝産物から哺乳動物において細胞内で切断される項目４記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目５２）
式：
【化３０】
2011231131.tif 000193
［式中、Ａｂは抗体であり、Ｖａｌはバリンであって、Ｃｉｔはシトルリンである］
を有する抗体−薬物結合体化合物。
（項目５３）
前記抗体がＡＣ１０、Ｓ２Ｃ６、ＢＲ９６、１Ｆ６、および２Ｆ２の少なくとも１つである項目５２記載の抗体−薬物結合体化合物。
（項目５４）
有効量の項目４記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、および薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたは賦形剤を含む薬学的組成物。
（項目５５）
さらに、治療有効量の、チューブリン−形成阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、およびＤＮＡ結合剤から選択される化学療法剤を含む項目５４記載の薬学的組成物。
（項目５６）
腫瘍細胞または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害するための方法であって、該方法は、腫瘍細胞または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害するのに効果的である、一定量の項目４記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物で、腫瘍細胞または癌細胞を処理する工程を包含する、方法。
（項目５７）
癌を処置するための方法であって、該方法は、一定量の項目４記載の抗体−薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物を患者に投与する工程を包含し、ここで、該量は癌を処置するのに効果的である、方法。
（項目５８）
さらに、有効量のさらなる抗癌剤、免疫抑制剤、または抗感染剤を投与する工程を包含する項目５７記載の方法。
（項目５９）
自己免疫疾患を処置するための方法であって、該方法は、一定量の項目４記載の抗体−
薬物結合体化合物またはその薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物を患者に投与する工程を包含し、ここで、該量は該自己免疫疾患を処置するのに効果的である、方法。
（項目６０）
感染症を処置するための方法であって、該方法は、一定量の項目４記載の抗体―薬物結合体化合物またはその薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物を患者に投与する工程を包含し、ここで、該量は感染症を処置するのに効果的である、方法。
（項目６１）
前記抗体−薬物結合体化合物が薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたは賦形剤を含む処方物である項目５７記載の方法。
（項目６２）
前記患者に投与される抗体−薬物結合体化合物の量が約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ患者体重の範囲である項目６１記載の方法。
（項目６３）
前記抗体−薬物結合体が約３週間間隔で投与される項目６１記載の方法。
（項目６４）
前記抗体−薬物結合体化合物が非経口または静脈内投与される項目６１記載の方法。
（項目６５）
前記抗体−薬物結合体化合物が薬学的に受容可能な非経口ビヒクルと共に処方される請求項６４記載の方法。
（項目６６）
前記抗体−薬物結合体化合物が単位投与注射形態に処方される項目５７記載の方法。
（項目６７）
癌細胞を検出するためのアッセイであって、該アッセイは：
細胞を項目４記載の抗体薬物結合体化合物に曝露し、そして、該抗体−薬物結合体化
合物の該細胞への結合の程度を測定する工程を包含する、アッセイ。
（項目６８）
前記結合の程度が免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定される項目６７記載のアッセイ。
（項目６９）
製品であって、該製品は、
項目４記載の抗体薬物結合体化合物；
容器；および
該化合物がＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０およびＬｅｗｉｓ  Ｙのうちの少なくとも１つの過剰発現によって特徴付けられる癌を処置するために使用され得ることを示すパッケージインサートまたはラベル；
を含む製品。
（項目７０）
前記リンカーユニット（ＬＵ）が：
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−
［式中、
−Ａ−がストレッチャーユニットであり、
ａが０または１であり、
各−Ｗ−が独立してアミノ酸ユニットであり、  ｗが０〜１２の範囲の整数であり、
−Ｙ−がスペーサーユニットであり、および
ｙが０、１または２である］
を含む項目２記載の化合物。
（項目７１）
前記リンカーユニットが：
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−
［式中、
−Ａ−がストレッチャーユニットであり、
ａが０または１であり、
各−Ｗ−が独立してアミノ酸ユニットであり、
ｗが０〜１２の範囲の整数であり、
―Ｙ−がスペーサーユニットであって、および
ｙが０、１または２である］
を含む項目３記載の化合物。
（項目７２）
式：
【化３１】
2011231131.tif 000194
［式中、
Ｌ−はリガンドユニットであり；
−Ａ−はストレッチャー部位であり；
ａは０または１であり；
各−Ｗ−は独立してアミノ酸ユニットであり；
ｗは０〜１２の範囲の整数であり；
各ｎは独立して０または１であり；
ｐは１〜約２０の範囲であり；および
Ｄの各出現は独立してＤが式ＤＥおよびＤＦから選択される薬物部分であり：
【化３２】
2011231131.tif 000195
【化３３】
2011231131.tif 000196
ここで、独立して、各位置において：
Ｒ２はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５はＨ、およびメチルから選択され；
あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって炭素環を形成し、かつ式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキルおよびＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、およびｎは２、３、４、５および６から選択され；
Ｒ６はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環およびＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨおよびＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリールまたはＣ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ１２であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され；および
ｎは０〜６の範囲の整数である］
を有する化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
（項目７３）
ｗが２〜１２の範囲の整数である項目７２記載の化合物。
（項目７４）
式：
【化３４】
2011231131.tif 000197
［式中、独立して、各位置において、
Ｒ２は−水素および−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３は−水素、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４は−水素、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、ここで、Ｒ５は−Ｈおよび−メチルから選択され；あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって、ＲａおよびＲｂが、独立して，−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキルおよび−Ｃ３−Ｃ８炭素環から選択され、およびｎは２、３、４、５および６から選択される式―（ＣＲａＲｂ）ｎ―を有し、かつそれらが結合する炭素原子とで環を形成し；
Ｒ６は−Ｈおよび−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７は−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール，−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環および−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９は−Ｈおよび−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリール基または−Ｃ３−Ｃ８複素環から選択され；
Ｚは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、または−ＮＲ１２−、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１は−Ｈ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、−Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３は−Ｃ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４は−Ｈまたは−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１５の各出現は、独立して，−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各出現は、独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；および
ｎは０〜６の範囲の整数である］
を有する化合物。
（項目７５）
式：
【化３５】
2011231131.tif 000198
を有する項目７４記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、またはその薬学的に受容可能な溶媒和物。
（項目７６）
式：
【化３６】
2011231131.tif 000199
を有する項目７４記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、またはその薬学的に受容可能な溶媒和物。
（項目７７）
式：
【化３７】
2011231131.tif 000200
を有する項目７４記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、またはその薬学的に受容可能な溶媒和物。
（項目７８）
式：
【化３８】
2011231131.tif 000201
を有する項目７４記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、またはその薬学的に受容可能な溶媒和物。
（項目７９）
式：
【化３９】
2011231131.tif 000202
を有する項目７４記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、またはその薬学的に受容可能な溶媒和物。
（項目８０）
式：
【化４０】
2011231131.tif 000203
を有する項目７４記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、またはその薬学的に受容可能な溶媒和物。
（項目８１）
式：
【化４１】
2011231131.tif 000204
を有する項目７４記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、またはその薬学的に受容可能な溶媒和物。
（項目８２）
式：
【化４２】
2011231131.tif 000205
を有する項目７４記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、またはその薬学的に受容可能な溶媒和物。
（項目８３）
式：
【化４３】
2011231131.tif 000206
を有する項目７４記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、またはその薬学的に受容可能な溶媒和物。
（項目８４）
式：
【化４４】
2011231131.tif 000207
を有する項目７４記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、またはその薬学的に受容可能な溶媒和物。
（項目８５）
式：
【化４５】
2011231131.tif 000208
［式中：
Ｒ２は−水素および−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３は−水素、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール，−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環、および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４は−水素、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環，−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、ここで、Ｒ５は−Ｈおよびメチルから選択され、あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって、ＲａおよびＲｂが、独立して、―Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、および−Ｃ３−Ｃ８炭素環から選択され、かつｎが２、３、４、５および６から選択される式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、かつそれらが結合する炭素原子とで環を形成し；
Ｒ６は−Ｈおよび−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７は−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、−Ｃ３−Ｃ８複素環および−Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は、独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ３−Ｃ８炭素環および−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９は−Ｈおよび−Ｃ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリール基または、−Ｃ３−Ｃ８複素環から選択され；
Ｚは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、または−ＮＲ１２−であり、ここで、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１は−Ｈ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、−Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４<猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢胣뺁臣꾁裢袼볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼볯㲓甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲍甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ볯袼볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼볯㲕甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲉甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰讁苣뢁諦閁苣鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†뷯꾁볯鲀볯邼볯邼臣蒯鯥꺁闦낕臣芁苣鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼볯㲓甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣ꞁ臣誂볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯钼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꾁裢ꢼ臣龁臣銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣ꞁ臣誂볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯閼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꺁郥몇迧꾁胣겋ꯧ鞁臣膀裢ꢼ胣銈볯꾼볯ꢼ胣銈볯ꎼ볯㲨甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲎甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢꺼볯늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯隼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲒甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢胣銈볯ꎼ볯㲨甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲎甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢뎼볯㲯甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꢼ臣龁臣銈볯ꎼ볯㲨甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲎甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢뎼볯㲯甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪��潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣ꞁ臣誂볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯隼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꺁郥몇迧꾁胣겋ꯧ鞁臣貼裢ꢼ胣銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣膀臣龁臣銈볯ꎼ볯㲨甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲎甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢胢ꎼ볯꾼볯ꞁ臣誂볯誁苣뎁⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†뷯꾁볯鲀볯꺁꿧늛臣뒕闦ꞁ臣讂볯㲽甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣隌郥ꦉ胣뺁臣꾁臣꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣뚺ꫥ貒觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧颼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯隼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㤰⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯閼꣨覼臣隌郥ꦉ胣뺁臣꾁臣꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣뚺ꫥ貒觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧颼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰〱⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯閼꣨覼臣隌郥ꦉ胣뺁臣꾁臣꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣뚺ꫥ貒觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧颼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯颼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰ㄱ⼼㹡⼼䥄㹖ਊ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧颼볯風볨꺁賥袐觧膀臣龁臣鶁臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁뫦銪鋥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯馼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥钼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰ㄲ㰲愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧颼볯風볨꺁賥袐觧膀臣龁臣鶁臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁뫦銪鋥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯邼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰ㄲ㰳愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧��볯風볨꺁賥袐觧膀臣龁臣鶁臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁뫦銪鋥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯醼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰ㄲ㰴愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧颼볯風볨꺁賥袐觧膀臣龁臣鶁臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁뫦銪鋥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯銼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰ㄲ㰵愯㰾䐯噉ਾ㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯閼꣨覼臣隌郥ꦉ胣뺁臣꾁臣꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣뚺ꫥ貒觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧馼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㘱⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯閼꣨覼臣隌郥ꦉ胣뺁臣꾁臣꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣뚺ꫥ貒觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧馼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯钼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㜱⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯閼꣨覼臣隌郥ꦉ胣뺁臣꾁臣꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣뚺ꫥ貒觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧馼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風菣겂菣覃菣讃菣袃臣鞊뷤ꞁ臣讂ꃩ꺛볯銼꣨覼臣隌郥ꦉ臣龁臣늩賥袐觧꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣뚺ꫥ貒觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧馼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風菣겂菣覃菣讃菣袃臣鞊뷤ꞁ臣讂ꃩ꺛볯風볨꺁賥袐觧뺁臣꾁ꧨ隌郥ꦉ臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁뫦銪鋥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯鞼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨ꪃ苣뎃菣ꚃ菣莃菣貁諦鎽臣芁苣薠鯧銼꣨覼臣隌郥ꦉ臣龁臣늩賥袐觧꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣뚺ꫥ貒觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧馼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽臣ꊃ菣꾂菣벃菣ꮃ諦鎽臣芁苣薠鯧馼볯膀볯隼臣龁臣馼볯꺁臣骁苣讁볯薠臣風볨꺁賥袐觧膀臣龁臣늩賥袐觧꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣뚺ꫥ貒觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧馼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳��∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風菣躃苣궃菣誃菣鞊뷤貁뷯ꊼ볯馼볯膀뷯ꆼ볯醼볯膀볯ꚼ볯膀볯銼볯隼臣龁臣醼볯隼臣芁苣薠鯧馼볯風볨꺁賥袐觧膀臣龁臣늩賥袐觧꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣뚺ꫥ貒觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯邼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰ㄲ㰸愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧醼꣨覼臣隌郥ꦉ胣뺁臣꾁臣꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣뚺ꫥ貒觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯醼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꮅ飧내菨뺁臣꾁駧내菨銂껦랂臣膀臣龁臣鶁臣鞢껦銂飩뎮臣讂臣膂臣릖돦ꞁ臣ꎁ臣膀ꧨ릖돦꾁胣肸껥辇臣薠鯧醼胣銼胣钼胣鞼볯뺁臣꾁볯閼胣馼볯꺁臣骁苣讁볯薠臣風볨꺁賥袐觧膀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣龁臣鶁臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁臣꺁뫦銪鋥ꦉ苣ꎂ胨ꮁ諦躸臣讂럥讨苣薌郥鞁胣늩蟩꾁藨趘듧麃臣龁臣貙듧麃苣몮若鞁胣뺁臣꾁臣꺁ꋥ隮苣뮘껥馁苣꺁臣릊黦蒚臣芁苣膀雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯邼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢駧銂蟥꺽臣讂臣膂臣릖돦ꞁ臣ꎁ臣膀ꧨ릖돦꾁胣肸껥辇臣薠鯧醼胣銼胣鞼볯膀臣龁臣颼볯鲀볯鞼臣蒁臣貂臣醼ꃩꮁ꣨覼臣隌郥ꦉ胣뺁臣꾁ꧨ隌郥ꦉ臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁뫦銪鋥ꦉ苣ꎂ胨ꮁ諦躸臣讂臣ꢁ苣ꮐ臣膀ꧨ辇臣貙苣ꚇ뷧馁苣꺁臣릊黦蒚臣芁苣膀雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯邼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢蟨놷藥ꮖ雧ꎂ苣ꚇ뷧馁苣龁苣꺁雦閳臣芁臣ꚁ胣늩雦閳臣膀룤骮蟩꺁ꃩ꺛볯膀볯膀볯膀볯銼胣뺁臣꾁볯閼胣馼볯꺁臣骁苣讁볯薠臣風볨꺁賥袐觧膀臣龁臣늩賥袐觧꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣鶁臣뚺ꫥ貒觧銂苦薀臣閊룤馁苣ꖷ꣧銂賥ꮐ臣膀ꧨ辇臣ꪇ럥超雧뺖苦銂蟥꺽臣讂臣ꮁ諥鲞髧ꞁ臣讂胣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯钼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰龄鿦螗苣ꚇ뷧馁苣龁苣꺁雦閳臣芁臣ꚁ胣늩雦閳臣膀룤骮蟩꺁ꃩ꺛볯膀볯膀볯銼胣뺁臣꾁볯閼胣馼볯꺁臣骁苣讁볯薠臣風볨꺁賥袐觧膀臣龁臣늩賥袐觧꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣鶁臣뚺ꫥ貒觧銂苦薀臣閊룤馁苣ꖷ꣧銂賥ꮐ臣膀ꧨ辇臣龄鿦螗苣ꚇ뷧馁苣꺁臣릊黦蒚臣芁苣膀雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴��⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯邼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣覂臣膀鳦릊蟩꺁臣覂臣讂諦貙觥銂諦躸臣讂럥讨苣薌郥馁苣薠鯧醼볯醼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯隼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰閁苣ꮁ胣뮲駧覜諥辇臣閁苣ꪁ苣鞊駧ꒉ苣閊룤馁苣ꖷ꣧銂賥ꮐ臣讂ꃩ꺛볯邼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯邼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣覂臣膀닦芙鳦릊蟩꺁藥ꮖ諦뚈觥銂諦躸臣讂럥讨苣薌郥馁苣薠鯧醼볯鎼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯颼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰閁苣ꮁ胣뮲駧覜諥辇臣鞊裢龄鿦螗苣閊룤馁苣ꖷ꣧銂賥ꮐ臣讂ꃩ꺛볯邼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯邼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢跥ꊛ臣貂胣뺲ꏨ閁苣龁뷥讅臣芁苣薠鯧醼胣銼胣钼胣鞼볯膀臣龁臣颼볯鲀볯鞼臣蒁臣貂臣醼ꃩꮁ꣨覼臣隌郥ꦉ胣뺁臣꾁ꧨ隌郥ꦉ臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁臣꺁뫦銪鋥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯醼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風苦薀臣銃菣ꞁ臣讂ꃩ꺛볯邼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯醼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風苦薀臣銃菣ꞁ臣讂ꃩ꺛볯邼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯醼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風苦薀臣銃菣ꞁ臣讂ꃩ꺛볯邼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯醼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風苦薀臣銃菣ꞁ臣讂ꃩ꺛볯邼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯醼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽臣ꎼ볯鎼볯膀볯꒼볯邼胣겼뷯鞽뷯鎽†볯膀臣袂臣ꎼ볯鞼볯ꮁ뗧袐臣讂ꃩ꺛볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯閼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤貁볯銽뷯ꊼ菣뮂菣뾂菣ꮁ뗧袐臣讂胣芁苣蒁臣것苣鞃苣벃볯醼볯鲀볯鎼볯覼臣醼믤誸臣邵郥馁苣鞊뷤ꞁ臣ꪁ臣薠鯧钼臣龁臣閼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧骼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯ꊼ볯낼볯醼볯袼ꫩꊽ藦ꊽ裦뾂菣醃苣ꪳ菣뮂菣뾂菣銈苣ꒂ菣ꦼ볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼†볯邼볯銼볯鎼볯鮼⼼㹵戼��㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯ꖼ볯隼볯겼볯뒼볯貼볯겼볯鞼볯閼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯뾼볯邼볯钼볯隼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯鎼볯뎼볯ꖼ볯낼볯袼觥讫藨꺁볯麛蛨ꮲ胩誸髧鞊軥貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼†볯醼볯钼볯馼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯钼볯邼볯鞼볯낼볯ꎼ볯醼볯閼볯궼볯ꎼ볯隼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯鎼볯醼볯颼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯낼볯袼볯낼볯貼볯뎼볯꺼볯뎼볯늼볯ꢷꃦ내菨鞢볥ꂛ귥貼菣붂菣ꪃ菣膀볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼†볯邼볯颼볯鎼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯隼볯꺼뷯邽뷯鎼뷯袼볯ꆼ볯ꦼ裢鎼볯貼볯낼볯ꦼ볯芽胣뎼볯ꎼ볯钼볯銼볯뚺돨궂菣ꪃ苣벃菣ꆂ菣ꪃ菣鎼볯袼菣뎃藩誃菣ꪃ苣ꂃ볯貼菣뎃菣벃볯貼苣ꒂ菣ꦼ볯誃菣ꪃ苣ꂃ裢鶾귥Ꞁ菣뎃藩袃菣뎃苣鶃菣뾂菣鎼뷯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼†볯邼볯钼볯钼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯鞼볯뎼뷯趽뷯₁閼뷯袼볯겼볯醼볯鎼볯銼볯ꮼ볯ꆼ볯醼볯钼볯貼볯趽볯钼볯邼볯閼볯뎼볯궼볯閼볯貼볯ꖼ볯ꆼ볯貼苣麃菣ꦂ菣뎃볯芽†볯貽뷯螽볯鎽뷯趽뷯覃菣ꒂ菣貼볯麛菣궃菣鲃苣鶃菣뢂菣ꪃ菣벃菣袼苣ꒂ菣ꦼ臣袂臣뾂苣鞃볯銈꟦覼볯鲆단骀菣ꆃ苣뎃볯뒼볯覼臣袂臣궟臣내菨ꪳ菣ꆃ苣뎃볯袼苣麃菣ꦂ菣뎃볯閼볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯ꊼ볯钼볯颼볯颼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯颼볯낼볯ꎼ볯₡袽뷯螽볯銼볯邼볯邼볯邼볯醼볯늼뷯讽볯ꎼ볯鎼볯邼볯颼볯醼볯늼뷯讽볯늼볯ꮼ볯꺼†뷯꒼볯ꆼ†볯鞼볯邼볯閼볯ꎼ볯銼볯늼볯ꮼ볯꺼†뷯꒼볯ꆼ†볯鞼볯邼볯閼볯ꎼ볯銼臩鶼귥貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯림볯閼볯隼볯颼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯馼볯ꖼ볯ꊼ볯袼苣뎃菣뮂菣뎃苣ꒂ菣ꊼ菣뮂菣뾂菣貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯림볯鞼볯钼볯鎼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯뎼볯鞼볯鎼볯늼볯ꚼ볯銼볯貼믤뎃苣뎃菣꾂돨ꚼ볯ꪼ볯邼볯醼볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼†볯醼볯鞼볯鎼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯뒼볯ꆼ볯銼볯ꢼ볯꺼볯₣颼볯鎼볯貼볯낼볯ꆼ裢醼볯낼볯ꆼ볯ꆼ볯醼볯뎼볯ꆼ볯낼볯貼볯뒼볯ꆼ볯��銼볯뎼볯궼볯貼觥讫藨貙雩ꎀ臩鶼귥醼볯趉ꯧ명駧ꊖ胩뾂菣醃苣ꪳ볯貼觥讫藨銼臣隼鯥鲆단骀룤꺚諦龎볯隼鯥鲆단骀觥讫藨뾂菣醃苣ꪳ볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯钼볯閼볯鎼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯銼볯뒼뷯邽볯钼볯ꊼ볯銼볯钼볯邼볯ꚼ볯ꪼ볯邼볯钼볯貼볯늼볯궼볯貼볯늼볯궼볯ꊼ볯肸臩Ꞁ菣뮂菣뾂菣鲽鳥蒚苣膃苣뎃菣ꎃ菣ꮃ볯떂菣閃苣龃菣벃볯貼菣뎃菣벃볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼†볯醼볯隼볯隼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯늼볯낼볯꾼볯ꎼ볯貼볯늼볯貼볯늼볯ꚼ볯ꎼ볯ꦼ볯뒼볯貼볯꒼볯ꚼ볯貼菣ꦃ菣ꮂ菣랂菣벃菣銈铧ꖝ裦랕鯥邭볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₰邼볯鎼볯邼볯뺁臣꾁볯궼†볯邼볯銼볯銼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯꒼볯醼볯ꎼ볯銼볯鲣뷤것苣鞃苣벃볯覼臣龁臣ꎼ볯꒼볯袼볯鎼뷯込苣鞃苣뾂苣뎃菣벃菣Ꚃ苣ꮃ苣것苣鞃苣벃볯뺁臣꾁볯鎽볯鞼볯鞼볯銼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥궼볯隼볯邼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯閼볯ꎼ볯鞼볯芽볯ꦼ볯芽볯超雧낂菣隃菣뎃裢ꊖ胩캣覼볯ꊼ볯馼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯邼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯隼볯ꚼ뷯늼볯銼볯ꦼ볯Ꞽ볯钼볯ꦼ볯뒼볯钼볯뎼볯ꆼ볯醼볯袼볯ꢼ볯覃菣ꒂ菣ꮐ鳦鮃苣閃苣뾂菣벂苣뎃苣벃苣뎃菣꾂돨醼뷯覼볯뎼볯ꆼ볯醼볯貼볯낼볯낼볯ꎼ볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯邼볯隼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯鞼볯ꢼ볯늼볯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯醼볯鞼볯邼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯ꎼ볯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯醼볯鞼볯颼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯꒼볯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯ꎼ볯醼볯邼볯鎼볯鮼†볯銼볯覼볯겼볯邼볯캲袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯ꚼ볯颼볯馼볯醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯銽뷯隽뷯莽뷯躽볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯銼볯馼볯閼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯銼볯ꖼ뷯袽뷯銼볯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼†볯邼볯钼볯銼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼��뎼볯Ꞽ볯閼볯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯뢼볯馼볯鎼볯颼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯뎼볯ꆼ볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯銼볯鞼볯鎼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯閼볯Ꞽ볯꒼볯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯림볯隼볯鞼볯鎼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯ꆼ볯ꚼ裢늼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₰钼볯鎼볯鞼볯躼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯鞼볯ꎼ볯銼볯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼裢邼볯醼볯隼볯躼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯颼볯ꎼ볯鞼볯膽볯ꎼ볯鞼볯ꆼ볯ꎼ볯鞼볯캙貼藥ꮖ苣궃菣ꪃ菣銈雩ꎀ뇎볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₰邼볯醼볯鞼볯躼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯馼볯ꎼ볯ꎼ볯閼볯邃菣궂菣袃菣뎃菣ꮅ菣뮂菣뾂菣醼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₰邼볯醼볯邼볯躼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯邼볯ꢼ볯ꆼ裢꒼볯ꊼ볯骃菣膃菣ꮁ뗧袐臣膀臣貂苣銂볯꒼볯讼볯ꪃ菣醃郧ꮁ迦몤臣讂볯ꢼ볯꾂菣릂볯ꦼ裥邭볯ꦼ뷯鞊軥覼臣캮떂菣ꚃ菣莃菣貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯醼볯醼볯醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯鎼볯覼볯銼볯閼볯鞃菣뎃뷤開胦것苣鞃苣벃볯銼볯ꪃ苣뎃菣讞苣ꪂ菣膃菣趃菣閼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₰邼볯銼볯閼볯躼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯銼볯ꎼ볯鞼볯袼볯門듧麃裥隌諦龎볯꒼볯銼볯겼뷯芽裢銼胣Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₰邼볯醼볯鞼볯躼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯鎼볯겼볯隼볯袼菣뎃菣莐諦龎볯钼볯늼볯醼볯閼볯膀菣ꒂ苣뎃菣莃菣ꪃ菣벃菣袼볯늼볯覼菣ꆂ菣ꪃ菣꺁苣ꒂ菣ꦼ蛨뾂菣醃苣ꪳ볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₰邼볯閼볯鞼볯躼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯钼볯ꚼ볯늼볯醼볯ꚼ뷯것苣鞃苣벃裢颧苣뎃菣꾂돨醼胣Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₰钼볯鎼볯鞼볯躼볯覼볯誁苣뎁⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯鎼볯覼볯늼볯ꆼ볯袼藥ꮖ苣궃菣ꪃ菣릂菣醃菣閃苣龃菣벃菣뮂菣뾂菣袃菣뎃苣궃菣놂菣랂菣뎃雩ꎀ볯膀볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯醼볯閼��醼볯醼볯芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯隼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤貁볯銽뷯ꊼ菣뮂菣뾂菣ꮁ뗧袐臣讂胣뺁臣꾁菣뮂菣뾂菣袼볯覼胣袼볯閼볯꺁볯ꖻ룤ꮁ뗧袐臣讂諦鎽臣꾁臣蒁ꃩ꺛볯閼胣馼볯뺁臣꾁볯鞼꣨覼臣隌郥ꦉ胣뺁臣꾁ꧨ隌郥ꦉ臣겖⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁臣꺁뫦銪鋥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯궼볯늼볯ꊼ볯ꢪ뷥讅뷥邈苣뎃菣꾂돨것苣鞃苣벃裢뾂苣鞃볯ꊼ볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯醼볯邼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯醼볯袼볯ꆼ볯醼볯뎼볯ꎼ볯ꆼ볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼볯邼볯鎼볯颼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯뒼볯ꆼ볯醼볯趉ꯧ명臣隼鯥鲆단骀룤꺚諦龎볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯銼볯钼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯鞼볯銼볯袼볯ꆼ볯銼볯貼볯떼볯醼볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯ꚼ볯隼볯钼볯隼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯閼볯궼볯ꚼ볯궼볯ꚼ볯궼볯겼볯貼볯궼볯貼럥뢠듧麃ꋥ랼鯥邭볯ꆃ苣蚃菣뎃胣Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯閼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯膽뷯覽볯芽볯꺼볯낼볯銈볯ꊼ볯꺼볯뒼볯ꦼ뷯膀볯겼볯鎼볯ꆼ볯貼뫦ꪳ苣ꎃ菣ꊂ菣閃苣龃菣벃볯钼볯ꪃ菣뢅菣袃菣Ꚃ菣覼볯ꆃ菣邃菣銼볯뾂苣鞃볯ꦼ菣袃菣Ꚃ菣銈뻤颭胦ꪃ菣뢅菣ꦃ菣릂菣벃苣벃볯芽볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯隼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯薽뷯膽†볯芽볯ꚼ볯ꪼ볯邼볯鞼볯貼볯ꦼ볯ꆼ볯钼볯閼볯궼뷯躼볯銼볯醼볯貼볯ꖼ볯ꆼ볯ꊼ볯뎼볯궼볯Ꞽ볯뮂菣閃苣ꪃ菣閼뷯₂ꢼ뷯辽뷯貼뷯薽뷯膽菣ꆃ苣뎃볯鞼鯥袃菣뎃菣릂菣뎃苣뎃菣钃菣袃볯뾂苣鞃볯誁苣뎁苣ꒂ菣ꦼ裢颧볯躼蛨ꮲ胩覃菣ꒂ菣袼볯궼볯誁苣뎁鿧蒁듧麃돨覃菣ꒂ菣貼볯뮂菣閃苣ꪃ菣覼볯ꊼ볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯邼볯邼볯鞼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯뎼볯ꆼ†뷯貽뷯袼볯鞼볯邼볯閼볯ꎼ볯銼볯覽뷯貼볯閼볯邼볯邼볯꾼볯隼볯覽뷯貼볯ꦼ볯ꖼ볯₮莽볯꺼볯₡銼볯邼볯邼볯邼볯醼볯貼볯ꦼ볯ꖼ볯₮莽볯꺼볯₡銼볯邼볯邼볯邼볯醼볯몁볤邭��Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯鎼볯颼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯뒼볯늼볯ꢂ菣覃苣ꪃ菣뾂苣鞃볯것苣鞃苣벃볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯銼볯閼볯隼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯邼볯궼볯Ꞽ볯颼볯袼볯꺼볯醼볯钼볯꺻菦뾂菣醃苣ꪳ볯겼볯銼볯鎼볯閼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯鞼볯隼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯醼볯뎼볯ꖼ볯낼볯袼볯Ꞽ볯ꎼ†볯隼볯馼볯ꦼ볯ꎼ볯銈볯貼볯ꎼ볯꺼볯낼볯貼볯뒼볯궼볯醼볯뎼볯ꖼ볯낼볯貼볯뒼볯낼볯趉ꯧ명駧ꊖ胩몁볤邭볯貼觥讫藨貙雩ꎀ苣뎃菣꾂돨醼볯趉ꯧ명볯꺁볯麛蛨ꮲ胩誸髧鞊軥貼볯麛蛨ꮲ胩趉ꯧ명苣뎃菣꾂돨貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯ꚼ볯閼볯醼볯颼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯銽뷯궼볯袼볯늼볯銼볯閼볯貼볯겼볯銼볯邼볯醼볯뒼볯낼볯钼볯뒼볯낼볯钼볯貼룤躁胦것苣鞃苣벃뷦ꢜ髧ꮂ菣ꪂ菣膃菣趃菣貼苣隃菣ꆂ菣ꪃ菣궼볯ꆃ菣邃菣钼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯鞼볯鎼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯鎼볯ꎼ볯ꦼ볯뒼볯袼볯늼볯ꎼ볯醼볯ꎼ볯Ꞽ볯貼볯늼볯낼볯꾼볯뒼볯Ꞽ볯醼볯蚃菣袃苣ꮃ苣躃菣麃裢놔鷦邈闩ꂛ귥貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯銼볯鎼臣龁臣꺼볯₭邼볯鎼볯醼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯钼볯ꎼ볯銼볯袼볯늼볯袼ꏨ鎽菣뮂菣뾂菣銼볯뺁臣꾁볯鎼볯늼볯ꎼ볯蒽볯ꢂ菣릂苣ꒂ菣邃菣ꮃ苣ꒂ菣릂菣뮂菣뾂菣覼臣龁臣ꢼ뷯躼볯鎼볯馼볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯銼볯邼볯钼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯꒼볯馼뷯袼볯Ꞽ뷯袼藥ꮖ苣궃菣ꪃ菣銈雩ꎀ닎볯貼볯銼볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼†볯邼볯隼볯隼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯莽볯ꢼ볯袼볯ꚼ볯낼볯貼볯늼볯ꆼ볯貼볯낼볯낼볯ꆼ볯뎼볯銼菣ꆃ苣뎃郥覜菣릂菣ꆂ苣벃苣ꊂ菣ꮂ菣뾂菣醃苣ꪳ볯膽볯貼볯낼볯낼볯ꊼ볯뎼볯ꆼ볯醼볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼†볯鎼볯鞼볯钼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯ꖼ볯銼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥궼볯醼볯鎼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯颼볯꺼볯ꆼ볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯��苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥궼볯颼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯馼볯궼볯낼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꊼ볯邼볯鞼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯邼볯ꦼ볯銼볯늼뇎볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯醼볯钼볯鞼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯醼볯ꊼ뷯薽뷯覽뷯膽뷯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯ꚼ볯銼볯邼볯鎼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯邽뷯芽볯늼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯钼볯钼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯鎼볯ꆼ볯겼볯隼볯馼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯邼볯銼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯钼볯낼볯ꎼ볯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯ꪼ볯馼볯钼볯隼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯ꖼ볯ꆼ볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯銼볯邼볯隼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯隼볯ꊼ볯ꚼ볯銈볯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯钼볯醼볯鞼볯醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯꒼볯銼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯銈볯邼볯鞼볯銼볯醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯꒼볯馼뷯袼볯꒼볯馼볯貼볯꒼볯馼뇎볯超雧낂菣隃菣뎃裢ꊖ胩캣貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯鞼볯钼볯醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯뢼볯늼볯袼菣벃苣莃菣ꪃ菣醃藨것苣鞃苣벃볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯鞼볯鞼볯醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯鎼볯覼볯겼볯銈볯꾼볯袼菣鞃菣覃臣邵郥鞁胣鶁苣覂苣ꎼ볯钼볯뒼菣뎃菣莐臣邏ꓧ馁苣궼볯ꎼ苣ꦃ苣ꦼ볯蚈귥袼볯膽諦龎볯꺁닎苣隃菣讃菣袃볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₰邼볯銼볯醼볯躼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯醼볯낼볯뢼볯袼菣ꪃ菣鲽该Ꞁ菣뮂菣뾂菣낼볯뢼菣겂菣覃黥ꒂ苣뎃菣ꎃ菣ꮃ볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯閼볯銼볯銼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯鎼볯覼볯꒼볯銼볯ꊼ胢내菨蚈賥鞊軥ꎼ볯鞼볯貼볯馽뷯銈볯膀볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯鞼볯鎼볯醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯��㸢†볯鎼볯覼볯림볯钼볯ꪃ菣醃郧鞊軥隼볯袼볯낼볯邼볯覼胣궃苣랂菣ꪃ菣膃菣钃菣袃볯겼볯늼볯閃苣龃菣벃臣뾂苣鞃볯鲆苣뎃菣꾂돨貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯閼볯鎼볯醼볯鮼†볯鎼볯覼볯ꎼ볯ꢼ볯袼볯莽菣뮂菣뾂菣銈꟦뾂菣醃苣ꪳ볯膀볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯钼볯醼볯邼볯醼볯鮼臣袂臣㲳甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯閼볯ꦼ볯뒼볯銼볯超雧낂菣隃菣뎃苣벃菣벃菣ꆂ菣ꪃ菣것苣鞃苣벃菣ꦃ菣릂菣벃苣벃苣ꞃ菣ꊖ胩貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯醼볯閼볯醼볯醼볯芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯鞼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰랼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲗甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣銈菣Ꞃ菣ꮃ苣ꦃ菣뎃裢ꪃ苣뎃裢ꞁ臣讂ꃩ꺛볯颼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯醼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲷甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鞽⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰貁裢꺼裢ꆃ菣ꮃ菣ꪃ菣銈苣袃菣ꪃ菣銈臣芁苣薠鯧銼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯馼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰醼믤誸臣겖觧ꢃ裥ꮁ藥覜뗧袐臣龁諦鎽苣ꮐ苣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣芁臣ꚁ볯늩賥袐觧貁볥ꦼ뷯骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯隼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㤱⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯込룤骼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯芽臣醼믤誸臣ꮅ飧銈雩ꎀ諦龎볯醼볯鲀볯鎼볯覼볯㲚甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯궼볯늼볯ꊼ볯ꢪ뷥讅뷥邈苣뎃菣꾂돨것苣鞃苣벃裢뾂苣鞃볯ꊼ볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯醼볯邼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯醼볯袼볯ꆼ볯醼볯뎼볯ꎼ볯ꆼ볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼볯邼볯鎼볯颼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯뒼볯ꆼ볯醼볯趉ꯧ명臣隼鯥鲆단骀룤꺚諦龎볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯銼볯钼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯鞼볯銼볯袼볯ꆼ볯銼볯貼볯떼볯醼볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯ꚼ볯隼볯钼볯隼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯��㸢†볯閼볯궼볯ꚼ볯궼볯ꚼ볯궼볯겼볯貼볯궼볯貼럥뢠듧麃ꋥ랼鯥邭볯ꆃ苣蚃菣뎃胣Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯閼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯膽뷯覽볯芽볯꺼볯낼볯銈볯ꊼ볯꺼볯뒼볯ꦼ뷯膀볯겼볯鎼볯ꆼ볯貼뫦ꪳ苣ꎃ菣ꊂ菣閃苣龃菣벃볯钼볯ꪃ菣뢅菣袃菣Ꚃ菣覼볯ꆃ菣邃菣銼볯뾂苣鞃볯ꦼ菣袃菣Ꚃ菣銈뻤颭胦ꪃ菣뢅菣ꦃ菣릂菣벃苣벃볯芽볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯隼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯薽뷯膽†볯芽볯ꚼ볯ꪼ볯邼볯鞼볯貼볯ꦼ볯ꆼ볯钼볯閼볯궼뷯躼볯銼볯醼볯貼볯ꖼ볯ꆼ볯ꊼ볯뎼볯궼볯Ꞽ볯뮂菣閃苣ꪃ菣閼뷯₂ꢼ뷯辽뷯貼뷯薽뷯膽菣ꆃ苣뎃볯鞼鯥袃菣뎃菣릂菣뎃苣뎃菣钃菣袃볯뾂苣鞃볯誁苣뎁苣ꒂ菣ꦼ裢颧볯躼蛨ꮲ胩覃菣ꒂ菣袼볯궼볯誁苣뎁鿧蒁듧麃돨覃菣ꒂ菣貼볯뮂菣閃苣ꪃ菣覼볯ꊼ볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯邼볯邼볯鞼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯뎼볯ꆼ†뷯貽뷯袼볯鞼볯邼볯閼볯ꎼ볯銼볯覽뷯貼볯閼볯邼볯邼볯꾼볯隼볯覽뷯貼볯ꦼ볯ꖼ볯₮莽볯꺼볯₡銼볯邼볯邼볯邼볯醼볯貼볯ꦼ볯ꖼ볯₮莽볯꺼볯₡銼볯邼볯邼볯邼볯醼볯몁볤邭볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯鎼볯颼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯覼볯뒼볯늼볯ꢂ菣覃苣ꪃ菣뾂苣鞃볯것苣鞃苣벃볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯銼볯閼볯隼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯邼볯궼볯Ꞽ볯颼볯袼볯꺼볯醼볯钼볯꺻菦뾂菣醃苣ꪳ볯겼볯銼볯鎼볯閼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯鞼볯隼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯醼볯뎼볯ꖼ볯낼볯袼볯Ꞽ볯ꎼ†볯隼볯馼볯ꦼ볯ꎼ볯銈볯貼볯ꎼ볯꺼볯낼볯貼볯뒼볯궼볯醼볯뎼볯ꖼ볯낼볯貼볯뒼볯낼볯趉ꯧ명駧ꊖ胩몁볤邭볯貼觥讫藨貙雩ꎀ苣뎃菣꾂돨醼볯趉ꯧ명볯꺁볯麛蛨ꮲ胩誸髧鞊軥貼볯麛蛨ꮲ胩趉ꯧ명苣뎃菣꾂돨貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯ꚼ볯閼볯醼볯颼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯銽뷯궼볯袼볯늼볯銼볯閼볯貼볯겼볯銼볯邼볯醼볯뒼볯낼볯钼볯뒼볯낼볯钼볯貼룤躁胦것苣鞃苣벃뷦ꢜ髧ꮂ菣ꪂ菣膃菣趃菣貼苣隃菣ꆂ菣ꪃ菣궼볯ꆃ菣邃菣钼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯鞼볯鎼볯��覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯鎼볯ꎼ볯ꦼ볯뒼볯袼볯늼볯ꎼ볯醼볯ꎼ볯Ꞽ볯貼볯늼볯낼볯꾼볯뒼볯Ꞽ볯醼볯蚃菣袃苣ꮃ苣躃菣麃裢놔鷦邈闩ꂛ귥貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯銼볯鎼臣龁臣꺼볯₭邼볯鎼볯醼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯钼볯ꎼ볯銼볯袼볯늼볯袼ꏨ鎽菣뮂菣뾂菣銼볯뺁臣꾁볯鎼볯늼볯ꎼ볯蒽볯ꢂ菣릂苣ꒂ菣邃菣ꮃ苣ꒂ菣릂菣뮂菣뾂菣覼臣龁臣ꢼ뷯躼볯鎼볯馼볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯銼볯邼볯钼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯꒼볯馼뷯袼볯Ꞽ뷯袼藥ꮖ苣궃菣ꪃ菣銈雩ꎀ닎볯貼볯銼볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼†볯邼볯隼볯隼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯莽볯ꢼ볯袼볯ꚼ볯낼볯貼볯늼볯ꆼ볯貼볯낼볯낼볯ꆼ볯뎼볯銼菣ꆃ苣뎃郥覜菣릂菣ꆂ苣벃苣ꊂ菣ꮂ菣뾂菣醃苣ꪳ볯膽볯貼볯낼볯낼볯ꊼ볯뎼볯ꆼ볯醼볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯궼†볯鎼볯鞼볯钼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯醼볯覼볯ꖼ볯銼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥궼볯醼볯鎼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯颼볯꺼볯ꆼ볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥궼볯颼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯馼볯궼볯낼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꊼ볯邼볯鞼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯邼볯ꦼ볯銼볯늼뇎볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯醼볯钼볯鞼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯醼볯ꊼ뷯薽뷯覽뷯膽뷯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯ꚼ볯銼볯邼볯鎼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯邽뷯芽볯늼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₭邼볯钼볯钼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯鎼볯ꆼ볯겼볯隼볯馼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯邼볯銼볯銼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯钼볯낼볯ꎼ볯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯ꪼ볯馼볯钼볯隼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯ꖼ볯ꆼ볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥ꆼ볯銼볯邼볯隼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯隼볯ꊼ볯ꚼ볯銈볯袼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯钼볯醼볯鞼볯��醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯꒼볯銼볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯銈볯邼볯鞼볯銼볯醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯꒼볯馼뷯袼볯꒼볯馼볯貼볯꒼볯馼뇎볯超雧낂菣隃菣뎃裢ꊖ胩캣貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯鞼볯钼볯醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯銼볯覼볯뢼볯늼볯袼菣벃苣莃菣ꪃ菣醃藨것苣鞃苣벃볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯鞼볯鞼볯醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯鎼볯覼볯겼볯銈볯꾼볯袼菣鞃菣覃臣邵郥鞁胣鶁苣覂苣ꎼ볯钼볯뒼菣뎃菣莐臣邏ꓧ馁苣궼볯ꎼ苣ꦃ苣ꦼ볯蚈귥袼볯膽諦龎볯꺁닎苣隃菣讃菣袃볯Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₰邼볯銼볯醼볯躼볯覼볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯醼볯낼볯뢼볯袼菣ꪃ菣鲽该Ꞁ菣뮂菣뾂菣낼볯뢼菣겂菣覃黥ꒂ苣뎃菣ꎃ菣ꮃ볯貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯閼볯銼볯銼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯鎼볯覼볯꒼볯銼볯ꊼ胢내菨蚈賥鞊軥ꎼ볯鞼볯貼볯馽뷯銈볯膀볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯鞼볯鎼볯醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯鎼볯覼볯림볯钼볯ꪃ菣醃郧鞊軥隼볯袼볯낼볯邼볯覼胣궃苣랂菣ꪃ菣膃菣钃菣袃볯겼볯늼볯閃苣龃菣벃臣뾂苣鞃볯鲆苣뎃菣꾂돨貼볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯邼볯閼볯鎼볯醼볯鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯鎼볯覼볯ꎼ볯ꢼ볯袼볯莽菣뮂菣뾂菣銈꟦뾂菣醃苣ꪳ볯膀볯薽뷯芽뷯躽뷯ꊂ苣뮂菣랂菣뎃闧랏볯낼†볯钼볯醼볯邼볯醼볯鮼臣袂臣㲳甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾袼볯閼볯ꦼ볯뒼볯銼볯超雧낂菣隃菣뎃苣벃菣벃菣ꆂ菣ꪃ菣것苣鞃苣벃菣ꦃ菣릂菣벃苣벃苣ꞃ菣ꊖ胩銼胣Ꞽ뷯躽뷯膽뷯讽苣꾂苣莃苣ꞃ菣ꪕ迥꺼볯₰醼볯銼볯鞼볯躼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣邵郥馁苣鞊뷤ꞁ臣誂胣㲁甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾ꆼ臣릂菣것菣膃菣벃菣讃菣袃臣芁苣膀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†뷯꾁볯뺁臣꾁볯ꞁ臣誂胣㲁甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾蒐볯꾁诧讫臣ꚁ苣龃菣뢅菣讃菣袃臣芁苣膀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†뷯꾁볯鲀볯銼臣蒯鯥꺁闦낕臣芁苣膀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯꾁苣骃菣떂菣ꚃ菣莃菣ꞁ臣誂胣誁��뎁⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†뷯꾁볯膀볯뺁臣꾁볯ꞁ臣誂胣㲁甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾邽臣醼胣銼볯꺁꿧늛臣芁苣膀臣袂臣₳꒼臣込볯㲤甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼ꖼ⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰誁苣뎁볯㲤甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼ꚼ⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰讁苣뢁諦閁苣讂雨ꦉ菩蚈臣芁苣骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰〲⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†臣鎁臣膀볯㲤甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼ꖼ⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰誁苣뎁볯㲤甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼ꚼ⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꺁돦骷臣ꆼ胣랼臣龁臣림臣뺯臣讂藥覜뗧袐菩趽苣몤臣膀臣袂臣겋ꯧ鞁臣膀郥趽뷧ꮁ臣蒁臣膀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꾁볯誁苣뎁볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣讁苣뢁諦閁苣鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꾁볯膀볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣膀볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰궂듧낒胣ꊂ菣벃菣膀볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣銈苣ꪃ菣ꮃ胣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ裢袼볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰궂듧낒볯膀볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰螤듧낒臣袂臣��⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ裢袼볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰螤듧낒볯讁苣뢁諦閁苣鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼钼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꾁볯膀볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣膀볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰궂듧낒胣ꊂ菣벃菣膀볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣銈苣ꪃ菣ꮃ胣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ裢袼볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰궂듧낒볯膀볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰螤듧낒臣袂臣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ裢袼볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰螤듧낒볯讁苣뢁諦閁苣鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼閼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꾁볯貼臣袂臣ꆃ菣ꮃ臣覂臩麊臣貂볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾芁苣蒁臣늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲔甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣袂臣늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲕甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨��⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣肸럧ꮁ臣ꎁ臣궂듧낒苣ꊽ裦鞁胣讁臣込裢袼볯늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲁甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼芽⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲎甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢銂鳦鞁胣鎁臣ꞁ胣늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲁甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣袂臣늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲂甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣膀诧讫臣ꚁ胣ꢼ胣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ臣袂臣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲓甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苧ꂴ鋧讁苣뢁諦閁苣膀臣袂臣躽臣銼胣鎼胣钼胣閼臣袂臣隼臣覂臩麊臣貂볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲖甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣ꢼ臣袂臣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ臣覂臩麊臣貂볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲗甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣ꢼ胣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ胣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲓甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苧ꂴ鋧膀苣ꪃ菣ꮃ胣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ裢ꊂ菣벃菣膀볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣銈볯ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲓甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苧ꂴ鋧覼胣��⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲓甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢ꓨꂴ鋧誁苣뎁볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣銈볯ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲓甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢ꓨꂴ鋧覼臣覂臩麊臣貂볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾蒐볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꾁胣겋ꯧ鞁臣膀볯膀볯ꢼ胣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ胣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲓甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苧ꂴ鋧誁苣뎁볯銈볯ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ볯讁苣뢁諦閁苣鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼馼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꾁볯誁苣뎁볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣讁苣뢁諦閁苣鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼볯㲐甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣ꊂ菣벃菣뺁臣꾁볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰螤듧낒臣覂臩麊臣貂볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾몼臣꾼胣뎼胣꺼볯膀臣龁臣꺼볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼볯㲒甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣芁苣膀臣鎁臣膀볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼볯㲒甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬��灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ臣芁苣鮼⼼㹵戼㹲㰊畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼‾㰠甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼볯㲑甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣ꢼ볯ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯邼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣膀苣ꪃ菣ꮃ胣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲓甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢ꓨꂴ鋧膀裢袼볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼볯㲓甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲍甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯钼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰膀臣龁臣銈볯늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯鎼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꾼볯㲉甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼趽⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯ꢼ볯늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯閼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲒甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣覂臩麊臣貂볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾趽臣醼胣醼볯邼볯꺁꿧늛臣뒕闦ꞁ臣誂볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯鎼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꾁볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣ꞁ臣誂볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯钼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꾁볯뺁臣꾁볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꊂ菣궂菣ꞁ臣誂볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯閼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꺁郥몇迧꾁胣겋ꯧ鞁臣膀볯膀볯꾼볯ꢼ胣銈볯ꎼ볯㲨甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲎甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢꺼볯늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯隼⼼��⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲒甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢胣銈볯ꎼ볯㲨甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲎甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢뎼볯㲯甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꢼ胣뺁臣꾁裢袼볯ꢼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲒甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲉甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼躽⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯꾼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲓甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ臣芁苣鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼볯㲖甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣蒐蟥뺏臣膀诧讫臣ꚁ胣ꢼ胣ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲑甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣ꮃ苣ꮃ胣뺁臣꾁裢袼볯ꢼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲒甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲉甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼躽⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯꾼볯ꢼ臣芁苣鮼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼醼볯㲘甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣銈볯袼볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲒甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ볯늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲉甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈苣ꪃ菣ꮃ胣銈볯袼볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲒甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ볯늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲉甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲓甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢ꎼ⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯扵㰾⁵��湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢ꓨꂴ鋧覼胣誁苣뎁裢ꎼ볯늼⼼㹵猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲘甯㰾猯灵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲉甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼銼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯袼볯㲲甯㰾畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹰甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲒甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢裢袼볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼鎼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銈볯㲣甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼颼⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰궂듧낒볯讁苣뢁諦閁苣鮼臣袂臣㲳甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾躽臣邼胣隼臣蒯鯥꺁闦낕臣芁苣붼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂賥袐觧膀臣龁臣鶁臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁臣꺁뫦銪鋥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯銼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯貁볥꒼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲥甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㈲㰱愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꞁ臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯醼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꒼臣込볯㲤甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼ꚼ⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㈲⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣芁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯銼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볥骼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢††볯芽裢袼볯覼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲐甯㰾猯扵㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾뮼볥궸胣膽胣鞽臣袂臣馽臣蒐胣邼臣芁苣붼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯鎼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾趉꣨鞊뷤貁ꧨ鞊뷤꺁苣릂菣ꒂ菣议鿥銂믤鞁臣겖觧ꢃ裥ꮁ뗧袐臣龁ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦㲗甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯钼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰邽臣醼胣钼臣芁苣薠鯧醼볯鎼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯��牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯銼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢뷯貁볯鲀볯ꞁ臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯隼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰邽臣銼胣閼臣芁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯銼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯邼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㌲⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯銼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯颼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥隼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㈲㰴愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰뮼볥궸胣鞽臣袂臣馽臣蒐胣邼臣芁苣붼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯銼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯馼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꒼臣込볯㲤甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼ꖼ⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꞁ臣讂ꃩ꺛볯銼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯邼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰込볯㲤甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼ꖼ⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰貁볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯銼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㔲⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯銼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯醼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꒼臣込볯㲤甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼ꚼ⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꞁ臣讂ꃩ꺛볯銼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯銼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰込볯㲤甯㰾畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢甼ꚼ⼼㹵⼼畳㹢甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰貁볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㘲⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯鎼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯鎼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥隼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴��㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㈲㰷愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯鎼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㠲⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯鎼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯閼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥隼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㈲㰹愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧醼볯钼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯鎼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯貁볥꒼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲥甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣芁苣薠鯧醼볯閼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯鎼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볥꒼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲥甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥隼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㌲㰰愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧醼볯隼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯鎼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯貁볥꒼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲦甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣芁苣薠鯧醼볯钼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯鎼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볥꒼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵볯㲦甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥隼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㌲㰱愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧醼볯颼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯钼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㈳⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯醼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰鞽臣銼胣醼볯꺁꿧늛臣뒕闦ꞁ臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦��鎽裢겖觧邵郥鎽胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯钼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢뷯貁볯ꞁ臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯鎼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰랼⼼㹵猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰㰾㹵뷯㲗甯㰾猯扵㰾⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣銈菣ꪃ菣銈苣袃菣ꪃ菣銈臣芁苣薠鯧醼볯銼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯钼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯貁볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯邼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㌳⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯閼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꒼臣込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥鞼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㌲㰴愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯钼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯貁볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯銼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㔳⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯鞼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꒼臣込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥鞼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㌲㰶愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯钼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯貁볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯钼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㜳⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯馼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꒼臣込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥鞼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㌲㰸愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯閼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯貁볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯隼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㤳⼼��⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯醼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꒼臣込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥鞼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㐲㰰愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯閼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯貁볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯颼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰ㄴ⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯鎼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꒼臣込볯㲚甯㰾牢ਾ䐼噉邀賥鞼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㐲㰲愯㰾䐯噉ਾ㰊牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂鳦馁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯閼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯貁볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯邼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㌴⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢苣覜臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯閼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤貁볯ꖼ볯銼菣뮂菣뾂菣ꮁ觧낕髧ꮁ뗧袐臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢邵郥鎽賥袐⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯隼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨ꢼ볯늼볯것苣鞃苣벃臣내菨隤菣ꆃ苣뎃臣릉闧蒚臣邵郥鞁胣讁臣ꢼ볯늼볯것苣鞃苣벃苣躁觥몙迧馁苣ꮅ飧내菨꺁ꋥ隮苣뮘껥馁苣薠鯧醼볯閼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯閼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽臣ꊃ菣꾂菣벃菣ꮃ諦鎽臣芁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯閼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽臣貺蟩릉闧Ꞁ諦鎽臣芁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯閼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽臣궂菣ꦃ諦鎽臣芁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭��樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯隼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽臣銃菣隌諦鎽臣芁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯隼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風菣袃賥鞊뷤貁뷯閽볯ꆼ뷯钼볯閼裢醼胣袽뷯궼볯芽볯꒼볯銈볯膀뷯閽볯ꆼ뷯钼볯閼裢鎼胣袽뷯궼볯芽볯꒼볯銈볯膀뷯閽볯ꆼ뷯钼볯閼裢閼胣袽뷯궼볯芽볯閼裢隼胣袽뷯궼볯芽볯꒼볯銈볯誁苣뎁뷯閽볯ꆼ뷯钼볯閼裢颼볯袃菣릂菣몂菣隃볯讁苣뢁諦閁苣讂ꃩ꺛볯隼볯風볨㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯銼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤貁뷯閽볯ꆼ뷯钼볯閼裢颼볯袃菣릂菣몂菣隃볯ꞁ臣讂ꃩ꺛볯隼볯風볨꺁諦鎽裢겖⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯鎼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤貁諦鎽菣ꦃ苣ꆃ菣袃臣芁苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣袼ꃩ꺛볯隼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽菣ꦃ苣ꆃ菣袃臣ꚼ뷯芽菣ꦃ苣ꆃ菣袃臣芁苣薠鯧醼볯鎼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤㲓甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯隼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧貁ꧨ鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤꺁諦鎽臣릉闧蒚臣내菨銈ꇨꊝ菣뮂菣뾂菣銂賦ꒁ듧麃臣늀藥馁苣뺁臣膀껥ꪳ蟩꺁雨ꦉ菩蚈臣늩諦鎽臣覂裥궖臣貂臣膀臣ꒁꧨ겖觧ꢃ裥貁ꧨ鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤貁ꧨ내菨ꮁ胩ꖅ臣讂ꃥ袐臣鞊뷤讁苣螈雦閁苣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯隼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰몓매開觧ꮁ臣醁苣趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣龁臣늩賥袐觧꺁듧麃蛥ꎻ골ꎔ觧꺁铧ꦉ귥蒚裥ꢔ菨貁胣늩諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧꺁雨ꦉ菩蚈苣ꮐ苣겖觧隌郥ꦉ臣钯볨鞁臣릔觨閁苣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯鞼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰몓매開觧ꮁ臣醁苣趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣龁臣늩賥袐觧꺁듧麃蛥ꎻ골ꎔ觧꺁铧ꦉ귥蒚裥ꢔ菨貁胣趉꣨겖觧ꢃ裥銂鳦鞁臣��諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧꺁苣誃菣낂臣钯볨鞁臣뒠郥ꮁ铦꾉臣貂苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯隼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風雨ꦉ菩蚈臣趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣鞊뷤膀臣龁臣늩諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧꺁듧麃蛥ꎻ골ꎔ觧讁苣膀鏥뎹该ꦉ臣誁臣ꚁ듧麃蛥ꞁ裥궖臣貂苣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨㲬甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯隼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볥骼⼼㹵戼㹲㰊䥄㹖胣隌볯醼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㐴⼼㹡⼼䥄㹖ਊ戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯込룤貼볯膽뷯꾁菣ꪃ菣ꞁ臣ꎁ臣貼볯覽뷯꾁苣袃菣ꪃ菣ꞁ臣讂볯㲽甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰讁苣뢁諦閁苣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯邼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤貁뷯閽볯ꆼ뷯钼볯閼裢颼볯袃菣릂菣몂菣隃볯ꞁ臣讂ꃩ꺛볯隼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯醼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰覜諥辇臣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣뺁臣꾁臣꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ胣誁苣뎁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣貸蟩ꒉ胣궂菣ꪃ苣뺁臣꾁돨ꊽ觥銂郥肂雨ꚭ髧蒵裦ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯鞼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣覂臣膀닦芙鳦릊蟩꺁胣膃菣벃菣ꪃ菣銈뷥邈飩뎮觥膀菣鶃苣붂菣ꦃ菣벂飩뎮觥膀臣袂臣꒼볯ꆼ뗧袐觥讁苣뢁諦閁苣讂賥ꚭ駧閳觥銂郥肂ꃩ꺛볯鞼볯風볨꺁雨ꚭ髧蒵裦ꦉ胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯鞼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢藨趘듧麃臣龁臣貙듧麃苣몮若鞁胣뺁臣꾁臣꺁ꋥ隮苣뮘껥馁苣龁苣꺁雦閳臣芁臣ꚁ胣늩雦閳臣膀藨趘듧麃臣龁臣貙듧麃苣몮若馁苣꺁臣膀臣龁臣鶁臣鞢껦銂飩뎮臣讂臣ꮁ諥鲞髧ꞁ臣讂胣肸껥辇臣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣龁臣鶁臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁뫦銪鋥ꦉ臣ꮅ飧내菨뺁臣꾁駧내菨銂蟥蚐臣讂럥讨苣薌郥馁苣膀雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯鞼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢駧銂蟥꺽臣讂臣膂臣릖돦ꞁ臣ꎁ臣膀ꧨ릖돦꾁胣肸껥辇臣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊��銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣龁臣鶁臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁臣꺁뫦銪鋥ꦉ苣躁觥鞢껦鲚껥銂賦ꒁ苦薀臣閊룤馁苣ꖷ꣧銂賥ꮐ臣膀ꧨ辇臣貙苣ꚇ뷧馁苣膀雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯鞼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣覂臣膀鳦릊蟩꺁臣覂臣讂諦貙觥銂諦躸臣讂럥讨苣薌郥馁苣薠鯧醼볯钼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯隼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰閁苣ꮁ胣覜諥辇臣超雧醊裥ꒉ苣閊룤馁苣ꖷ꣧銂賥ꮐ臣讂ꃩ꺛볯鞼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯鞼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢臣覂臣膀鳦릊蟩꺁諦龄鿦螗觥銂諦躸臣讂럥讨苣薌郥馁苣薠鯧醼볯钼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯颼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꪇ럥超雧뺖苦銂蟥꺽臣讂臣膂臣릖돦ꞁ臣ꎁ臣膀ꧨ릖돦꾁胣肸껥辇臣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣龁臣鶁臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁꇥ뺁臣꾁臣꺁뫦銪鋥ꦉ苣ꎂ胨ꮁ諦躸臣讂럥讨苣薌郥鞁胣늩蟩꾁蟨놷藥ꮖ雧ꎂ苣ꚇ뷧馁苣꺁臣릊黦蒚臣芁苣鎁臣銂觧뒾臣馁苣芀볯薠鯧醼볯馼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰龄鿦螗苣ꚇ뷧馁苣龁苣꺁雦閳臣芁臣ꚁ胣늩雦閳臣膀룤骮蟩꺁ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧뺁臣꾁臣꺁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣ꦡ臣龁臣뚺ꫥ貒觧銂苦薀臣閊룤馁苣ꖷ꣧銂賥ꮐ臣膀ꧨ辇臣龄鿦螗苣ꚇ뷧馁苣꺁臣릊黦蒚臣芁苣膀雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯颼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢듧麃ꋥ隮苣뮘껥馁苣龁苣꺁雦閳臣芁臣ꚁ胣늩雦閳臣膀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†듧麃鿥誤鿥궸臣몓매開觧내菨銂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧ꮁ鯦늜臣讂럥讨胣誁苣뎁⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†ꧨ鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣내菨랂껥Ꞁ듦Ꞁ苣겸껥馁苣ꖷ꣧㲋甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂賥ꮐ臣膀臣貂臣袂苣膀ꧨ내菨꺁ꋥ隮臣뮘껥閁苣讂胣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯醼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰閁苣ꮁ胣趉꣨내菨銂듧隼駦鎖胣蒴볯ꖗ雩릟ꓩ馁苣ꖷ꣧銂賥ꮐ臣讂胣薠鯧醼볯邼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯銼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨몓매開觧내菨貁觥風諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥��袐觧ꮁ꿥馁苣ꢼ볯늼볯것苣鞃苣벃苣뎃菣꾂돨銂鳦馁苣薠鯧醼볯邼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯鎼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨몓매開觧내菨貁볯ꮼ裢ꊼ볯銈볯뎹駧내菨ꞁ臣讂ꃩ꺛볯颼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯颼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧꺁듧麃若뎮胦뮴胦貁胣늩諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧꺁觥風雨ꦉ菩蚈臣覂껥ꪳ髧ꮁ臣讂雨ꦉ賥袐觧꺁臣貂臣銼胥袂苣节ꓥ趁臣薠鯧醼볯邼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯閼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰貙苣ꚇ뷧馁苣릖돦ꞁ臣ꎁ臣膀ꧨ릖돦꾁胣薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣袂臣겖귥蒚臣鞏껥꾏菨ꪁ룥袇觥膀苣ꎃ菣ꊂ臣龁臣ꚳ뷥ꒉ臣ꚇ雦ꦉ苣ꎂ胨ꮁ諦躸臣讂럥讨苣薌郥馁苣膀雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯颼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧貁볯銽뷯ꊼ볯몁볤邭臣袂臣ꚁ苣벃菣閁苣讂菣뮂菣뾂菣ꮁ觧낕髧ꮁ뗧袐臣讂ꃩ꺛볯颼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯颼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風苦薀臣閊룤閁苣讂諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧꺁蟩貁듧邼볯醼胣蒴볯邼뷯螽볯讽뷯ꎂ胨鎽蟩꺁꿧늛臣芁苣薠鯧醼볯閼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯颼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤貁냥ꪁ臣ꢁ苣鎼胩鎖雩钚臣閊룤閁苣讂ꃩ꺛볯颼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯颼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧貁鷩貵迥閊룤閁苣讂ꃩ꺛볯颼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯馼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧貁雨ꚭ髧ꮁ迥릮迥붃臣麝뗧ꎏ菣銃苣ꮃ臣놅臣ꚇ雦閁苣讂ꯨ花ꃩ醼볯馼꣨覼臣릖돦芀볯薠鯧醼볯醼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣颍뷤閊룤ꢳ냥ꊽ藦ꮁ蟥릖臣貂苣薠鯧醼볯閼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯銼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣馝蓨薆諦躸臣貂苣薠鯧醼볯閼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯��볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰閁苣ꮁ胣袼볯覼胣袼볯閼볯讁苣뢁諦閁苣讂藨趘裢ꊖ胩鞊軥ꮁ뗧袐臣讂곧貺臣鞊뷤銂諦躸臣讂럥讨苣薌郥馁苣薠鯧醼볯閼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯钼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨견뫤꺁諦鎽臣내菨랂껥Ꞁ觥ꢁ뗧袐뷤隌臣貂苣薠鯧醼볯鎼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯閼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰ꮅ飧銈雩ꎀ諦龎苣躁觥몙迧馁苣ꮅ飧내菨꺁ꋥ隮苣뮘껥馁苣릖돦ꞁ臣ꎁ臣膀ꧨ릖돦꾁胣늩藨趘裢ꊖ胩鞊軥ꮁ觧낕髧ꮁ뗧袐臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁諦鎽雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣誁苣뎁賥ꚭ⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢駧閳觥銂苦薀臣閊룤馁苣ꖷ꣧銂賥ꮐ臣膀臣鎁臣膀ꧨ鞊뷤겖觧邵郥鎽臣袂臣늩賥ꚭ駧閳觥꾁胣蒐胣膀ꧨꎂ胨ꮁ臣蒁臣ꮅ飧내菨꺁ꋥ隮苣뮘껥馁苣꺁臣릊黦蒚臣辇臣閊룤閁苣讂胣릖돦芀볯薠鯧醼볯隼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣趉꣨ꮅ飧내菨銂觥風賥ꚭ駧閳觥ꮁ꿥鞁臣龄뷤閁臣讂ꃩ꺛⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯馼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯馼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯銽뷯ꊼ볯것苣鞃苣벃臣躁觥몙迧ꮁ苣ꎁ臣릉뻥颻臣覂苣讂髩뎮臣립苣蒂臣蒁胣뺁臣꾁ꧨ鲚껥ꢁ裥궖臣貂臣銃菣ꎂ胨銂蟥꺽臣讂臣膂臣릖돦ꞁ臣ꎁ臣膀ꧨ릖돦꾁胣覜諥辇臣薠鯧醼볯㲑甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ胣誁苣뎁賥ꚭ駧閳觥꺁뗧袐臣銂諦躸臣讂럥讨苣薌郥馁苣膀雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯馼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢駧내菨銂ꓦ몇臣讂臣膂臣ꊂ菣뮂苣ꞁ臣ꎁ臣膀ꧨꊂ菣뮂苣꾁胣㲁甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣내菨銂鯦늜臣讂럥讨胣誁苣뎁⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢†ꧨ鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣늩듧麃臣꺁뗧袐臣讨뫥銂룦骮臣讂럥讨볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂賥ꮐ臣讂胣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧醼볯馼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨내菨貁매貙듧麃臣芁苣薠鯧醼볯颼꣨覼臣ꊂ菣뮂苣芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯邼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨邵郥꺁꣧ꚺ臣膀鯨覅苣뎃苣ꒂ菣ꖃ菣��ꒂ菣ꪃ菣ꒂ苣벃苣ꞃ菣袼볯ꦼ볯ꢼ볯ꮁ苣ꎁ臣ꮅ飧銈雩ꎀ諦龎裢뎂菣螃苣뎃苣뢠藩꺁菣馃菣銂룦骮臣讂럥讨臣袂臣ꚁ뇦骮臣貂苣薠鯧醼볯颼꣨覼臣ꊂ菣뮂苣芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯醼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨邵郥꺁꣧ꚺ臣超雧蒵맧隌귥袼볯ꢼ볯覼臣袂臣ꚁ뇦骮臣貂苣薠鯧醼볯颼꣨覼臣ꊂ菣뮂苣芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯銼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰붣鏥ꞁ臣ꎁ臣膀ꧨ붣鏥꾁胣㲁甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾薠鯧醼볯馼꣨覼臣鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾릮駥鮼臣袂臣㲳甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰‾늩賥袐觧貁볯銽뷯ꊼ볯것苣鞃苣벃臣躁觥몙迧ꮁ苣ꎁ臣릉뻥颻臣覂苣讂駧銂蟥꺽臣讂臣膂臣뾽铧閁苣鞾苣鎁臣銂ꓧ馁菣莃苣벃苣ꒂ菣떂菣袃臣龁臣ꦃ菣ꮃ볯㲛甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰銂郥肂胣붣鏥芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯鎼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨ꦃ菣ꮃ臣醃菣놂菣뢂苣뎃苣벃菣貁胣趉꣨隌郥ꦉ臣ꖼ뷯芽볯銼菣뮂菣뾂菣꺁臩낉駧뺏臣袂臣ꚁ觧뒾믤醁苣貂苣貙苣ꚇ뷧馁苣龁苣ꮁ뷤ꢔ臣貂뻥讂臣ꢁ苣몤臣薠鯧銼볯銼꣨覼臣붣⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢鏥芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯钼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨貙臣뎹駧ꞁ臣讂ꃩ꺛볯邼볯風볨꺁ꏨ膓胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯邼볯覼觥風駧貁볯讼菣馃菣뺁臣꾁臣貂苣誸鯥讂菣馃菣ꮁ臣蒁臣ꖼ뷯芽볯銼菣뮂菣뾂菣꺁臩낉駧뺏臣袂臣ꚁ觧뒾믤醁苣貂苣薠鯧銼볯钼꣨覼臣붣鏥芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯隼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰몓매開觧ꮁ臣蒁臣貙苣ꚇ뷧馁苣龁苣꺁雦閳臣芁臣ꚁ胣鎁臣ꞁ胣늩駧꾁볯銽뷯ꊼ볯袼볯ꖼ볯銼볯것苣鞃苣벃臣躁觥몙迧ꮁ苣ꎁ臣릉뻥颻臣覂苣膀臣ꒁ諦銈볯銽뷯ꊼ볯鞊뷤ꞁ臣ꚇ뷧ꮁ꿥鞁臣鲿귧鞁臣蒁臣膀臣龁臣Ʝ볥ꮁ臣讁뿥钭臣骁胣늩雦閳臣膀닦芙鳦릊蟩꺁ꃩ꺛볯醼볯風⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볨꺁諦鎽雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ苣늩鏥뎹该ꦉ臣閊룤馁苣ꖷ꣧銂賥ꮐ臣讂胣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯鞼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨몓매開觧貁菣袃臣芁苣薠鯧銼볯隼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧��볯颼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣鞊뷤貁ꋥ隮飩뎮諦鎽臣芁苣薠鯧銼볯隼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯馼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣내菨뮭苣颪냥馁苣薠鯧銼볯隼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯邼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣ꊂ菣袃菣랂苣銂ꫨ躰臣讂ꃩ꺛볯邼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯醼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風駧貁매貙胣떍럥貙胣莃駧膀귥꺮蛥鲆駧膀铥늶藨貙胣몂駧膀藨鎇駧膀뗧뢅駧膀뗧뒛藨貙胣는諧명駧膀蛨鎇駧膀觥讫藨貙臣袂臣肆菨貙臣覂臩麊臣貂苣薠鯧銼볯隼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯銼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨貙臣뎹駧ꞁ臣ꎁ臣膀ꧨ뎹駧貁볯讼菣馃菣뺁臣꾁臣貂苣誸鯥讂菣馃菣ꮁ臣ꖼ뷯芽볯銼苣躁觥몙迧馁苣薠鯧銼볯醼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯鎼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨뎹駧貁볯讼菣馃菣ꮁ臣ꖼ뷯芽볯銼苣躁觥몙迧馁苣薠鯧銼볯醼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯钼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣鞊뷤貁볯꒼볯ꊃ菣꾂菣벃菣ꮃ諦鎽臣龔觧ꚭ髧릉뻥銂鳦馁苣薠鯧銼볯隼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯閼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣鞊뷤貁볯꒼볯ꊃ菣꾂菣벃菣ꮃ諦鎽臣겜돨蒚臣貐룤꺁苣钃菣벃菣ꮁ뗧袐臣讂ꃩ꺛볯邼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯醼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽裢겖觧邵郥鎽賥袐觧꺁諦鎽臣ꊃ菣꾂菣벃菣ꮃ諦鎽볯꒼볯袼볯뒼볯ꎼ†볯늼볯€醼볯钼볯鎼볯ꞁ臣讂ꃩ꺛볯邼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯醼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽臣銃菣隌臣貂臣薠鯧銼볯隼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯颼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤貁菣袃賥鞊뷤袽뷯궼볯芽볯꒼볯銈볯膀뷯閽볯ꆼ뷯钼볯閼裢銼胣袽뷯궼볯芽볯꒼볯銈볯膀뷯閽볯ꆼ뷯钼볯閼裢钼胣袽뷯궼볯芽볯꒼볯銈��膀뷯閽볯ꆼ뷯钼볯閼裢隼胣袽뷯궼볯芽볯꒼볯銈볯誁苣뎁뷯閽볯ꆼ뷯钼볯閼裢颼볯袃菣릂菣몂菣隃볯讁苣뢁諦閁苣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰袼ꃩ꺛볯醼볯覼⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢觥風諦鎽臣銃菣隌諦鎽뷯閽볯ꆼ뷯钼볯閼裢颼볯袃菣릂菣몂菣隃볯ꞁ臣讂ꃩ꺛볯醼볯風볨ら臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯邼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤銈雨ꦉ뗧袐뷤隌郥ꦉ臣鞊뷤貁諦鎽菣ꦃ苣ꆃ菣袃臣芁苣薠鯧銼볯隼꣨覼臣릖돦芀⼼㹵戼㹲㰊⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯薠鯧銼볯醼볯㲉甯㰾牢ਾ甼砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰趉꣨鞊뷤閃菣낂菣뎃菣貁볯膽뷯閃菣낂菣뎃菣ꞁ臣讂ꃩ꺛볯銼볯風볨꺁雦閳胣㲂甯ਾ䐼噉邀볯颼볯馼胣㲑䐯噉ਾ†볯超裥ꢡ볯㲉牢ਾ䐼噉邀闦醼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㔴⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦銼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㘴⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㜴⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦钼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㠴⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㤴⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦隼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰〵⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰ㄵ⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦颼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㈵⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㌵⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㔲㰴愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯醼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㔵⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㔲㰶愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㜵⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㔲㰸愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㤵⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㘲㰰愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰ㄶ⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㘲㰲愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㌶⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦銼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㘲㰴愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯��胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㔶⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦銼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㘲㰶愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㜶⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦銼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㘲㰸愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㤶⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦銼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㜲㰰愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰ㄷ⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦銼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㜲㰲愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㌷⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鎼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㜲㰴愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯醼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㔷⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鎼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㜲㰶愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㜷⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鎼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㜲㰸愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㤷⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鎼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㠲㰰愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰ㄸ⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鎼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㠲㰲愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㌸⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦钼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㠲㰴愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯醼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㔸⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦钼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㠲㰶愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㜸⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦钼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㠲㰸愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㤸⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦钼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㤲㰰愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰ㄹ⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦钼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㤲㰲愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㌹⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㤲㰴愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯��胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㔹⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㤲㰶愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㜹⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㤲㰸愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㈰㤹⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰〳㰰愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㄰⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦閼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰〳㰲愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㌰⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦隼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰〳㰴愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯醼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㔰⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦隼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰〳㰶愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㜰⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦隼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰〳㰸愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㤰⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦隼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰ㄳ㰰愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰ㄱ⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦隼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰ㄳ㰲愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㌱⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鞼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰ㄳ㰴愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯醼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㔱⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鞼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰ㄳ㰶愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㜱⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鞼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰ㄳ㰸愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㤱⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鞼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㈳㰰愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰ㄲ⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鞼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㈳㰲愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㌲⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦颼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㈳㰴愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯��胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㔲⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦颼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㈳㰶愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㜲⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦颼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㈳㰸愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㤲⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦颼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㌳㰰愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰ㄳ⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦颼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㌳㰲愯㰾䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣낕볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㌳⼼㹡⼼䥄㹖ਊ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀鯥醼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㈴⼼㹡⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㐳㰳愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥鎼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㐳㰴愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥鎼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㐳㰵愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥钼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㘴⼼㹡⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㐳㰷愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥隼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰㠴⼼㹡⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㐳㰹愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥颼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩㸢〲ㄱ㌲ㄱㄳ琮晩ꃂ〰㌰〵⼼㹡⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣뎛볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㔳㰱愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㔳㰲愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㔳㰳愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㔳㰴愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㔳㰵愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㔳㰶愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㔳㰷愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㔳㰸愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㔳㰹愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㘳㰰愯㰾䐯噉ਾ䐼噉邀鯥醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱⸱楴≦㈾㄰㈱ㄳ㌱⸱楴쉦゠〰㘳㰱愯㰾䐯噉ਾ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀藩鞈ꇨ醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦⸢㈯㄰㈱ㄳ㌱⼱⸲㄰㈱ㄳ㌱䔱〫㔱㈯㄰㈱ㄳ㌱〱〰〰⸱灡≰㈾㄰㈱ㄳ㌱〱〰〰⸱灡㱰愯㰾䐯噉ਾ⼼��㹖㰊䥄㹖胣隤鯥麪飦내鯦醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㈱ㄳ㌱〱〰〰⸱摰≦㈾㄰㈱ㄳ㌱〱〰〰⸱摰㱦愯㰾䐯噉ਾ⼼潢祤ਾ⼼瑨汭ਾ