(57)【要約】【課題】  試料の一部の成分のみを対象として、別途の回収操作を行わずに、リサイクルを可能とする高速液体クロマトグラフを提供する。【解決手段】  リサイクル分析を行う高速液体クロマトグラフにカラムスイッチ機構を組込み、リサイクル対象成分を第二のカラムにスイッチした後、第二のカラムにスイッチしたリサイクル対象成分を第二の移動相を用いて複数回、第二のカラムに通じる。【選択図】図１
2011052973.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一移動相の流路の一端側から他端側に向って、順次第一送液ポンプと、試料導入装置と、第一カラムと、第一流路切換えバルブ群と、第一検出器と、
を介装するとともに、
前記第一流路切換えバルブ群の流路切換えバルブの切換えにより、前記第一移動相の流路において、第一カラムと第一検出器との間に第二カラムを介装する流路に切換える第一移動相の流路と、
第二移動相の流路の一端側から他端側に向って、順次第二流路切換えバルブ群と、第二送液ポンプと、第一流路切換えバルブ群と、第二検出器と、第二流路切換えバルブ群と、
を介装するとともに、
前記第一流路切換えバルブ群の流路切換えバルブの切換えにより、前記第二移動相の流路において、第二送液ポンプと第二検出器との間に第二カラムを介装する流路に切換える第二移動相の流路と、
を有し、
前記第一流路切換えバルブ群には、前記第二カラムに通過する移動相を第一移動相あるいは第二移動相のいずれか一方に切換える流路切換えバルブを備え、且つ第一流路切換えバルブ群は同時に各バルブが切り換り、
且つ、
前記第二流路切換えバルブ群の流路切換えバルブの切換えにより、第二流路切換えバルブ群と、第二送液ポンプと、第二カラムと、第二検出器と、第二流路切換えバルブ群とを循環する閉流路に切換える機構を備えることを特徴とすることを高速液体クロマトグラフ。
【請求項２】
第一移動相の流路の一端側から他端側に向って、順次第一送液ポンプと、試料導入装置と、第一流路切換えバルブ群と、第一検出器と、
を介装するとともに、
前記第一流路切換えバルブ群の流路切換えバルブの切換えにより、前記第一移動相の流路において、試料導入装置と第一検出器との間に第一カラムを介装する流路に切換える第一移動相の流路と、
第二移動相の流路の一端側から他端側に向って、順次第二流路切換えバルブ群と、第二送液ポンプと、第一流路切換えバルブ群と、第二カラムと、第二検出器と、第二流路切換えバルブ群と、
を介装するとともに、
前記第一流路切換えバルブ群の流路切換えバルブの切換えにより、前記第二移動相の流路において、第二送液ポンプと第二カラムとの間に第一カラムを介装する流路に切換える第二移動相の流路と、
を有し、
前記第一流路切換えバルブ群には、前記第一カラムに通過する移動相を第一移動相あるいは第二移動相のいずれか一方に切換える流路切換えバルブを備え、且つ第一流路切換えバルブ群は同時に各バルブが切り換り、
且つ、
前記第二流路切換えバルブ群の流路切換えバルブの切換えにより、第二流路切換えバルブ群と、第二送液ポンプと、第一流路切換えバルブ群と、第二カラムと、第二検出器と、第二流路切換えバルブ群とを循環する閉流路に切換える機構を備えることを特徴とすることを高速液体クロマトグラフ。
【請求項３】
第二送液ポンプと第二カラムとの流路間に試料導入装置を介装する請求項１又は２に記載の高速液体クロマトグラフ。
【請求項４】
第一流路切換えバルブ群が５以上の開口部を有する１のバルブで構成される請求項１又は２に記載の高速液体クロマトグラフ。
【請求項５】
第二流路切換えバルブ群が４以上の開口部を有する１のバルブで構成される請求項１又は２に記載の高速液体クロマトグラフ。
【請求項６】
請求項１又は２に記載の高速液体クロマトグラフを用いて、リサイクルの対象成分を第二カラムに導入した後、第二カラムに導入したリサイクルの対象成分を第二移動相を用いて複数回第二カラムに通じるリサイクル分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カラムスイッチ機構とリサイクル機構とを備える高速液体クロマトグラフ（以下、ＨＰＬＣとも表記する。）及び該装置を用いるリサイクル分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＰＬＣのリサイクル分析は、単離困難な試料成分を精度良く単離することが出来るため、有機物の精製や分析化学の分野において用いられている。ＨＰＬＣのリサイクル分析は、以下のように行われる。
【０００３】
図１３は従来の、リサイクル機構を備えるＨＰＬＣ５００の一例を示す説明図である。図１３中、５０１は移動相貯槽であり、内部の移動相５０３は、配管５０５、流路切換えバルブ５０７、配管５０９を経由して送液ポンプ５１１により吸引される。流路切換えバルブ５０７のポート５０７ａと５０７ｂとは常に流通可能になっている。移動相５０３は、送液ポンプ５１１によって試料導入装置５１３に送られる。試料導入装置５１３から導入される試料は、移動相５０３と共にカラム５１５に送られる。試料中の各成分は、移動相５０３とカラム５１５に充填されている充填材の固定相との分配係数の差に起因して、異なる速度でカラム５１５から溶出される。分配係数に応じて溶出される各成分が含まれる移動相５０３は、カラム５１５を出た後、検出器５１７に送られ、ここで各成分が検出される。検出器５１７によって検出される各成分を含む移動相５０３は配管５１９を経て回収又はリサイクルされる。
【０００４】
各成分を含む移動相を回収する場合は、流路切換えバルブ５０７の流路を点線で示す流路５０８に切換えることにより、配管５１９と配管５２１との間の流通を可能とさせて、一方、配管５１９と配管５０９との間の実線で示す流路５１０の流通を遮断させる。これにより、各成分を含む移動相は、配管５１９から配管５２１へと送られ、各成分を含む移動相は回収液５２５として回収槽５２３に回収される。この回収液５２５は通常廃液とされる、または、不図示のフラクションコレクター等を用いることにより保持時間毎に溶出成分が収集されても良い。
【０００５】
各成分を含む移動相５０３をリサイクルする場合は、流路切換えバルブ５０７を切換えにより、配管５１９と配管５０９との間が、実線で示される流路５１０で連結されることにより、これら配管５１９と配管５０９との間の流通が可能になる。一方、配管５１９と配管５２１との間の流通を遮断させる。これにより、各成分を含む移動相はバルブ５０７によって配管５０９へと送られ、再びカラム５１５に導入されて、各成分間の分離が繰返される。
【０００６】
リサイクル分析は、試料中の各成分の分離度を高めるのに有効である。図７は従来のリサイクル分析の結果の一例を示すクロマトグラムである。保持時間約３分に現れる１本のピーク（２成分を含有）は、リサイクルを繰返すとピークが２本に分裂していき、各成分の単離が可能となる。
【０００７】
リサイクル分析においては各成分のピークは保持時間毎に繰返し現れる。例えば、保持時間が約３分である成分のピークはリサイクル分析を行うと、２巡目のピークが約６分、３巡目のピークが約９分に現れる。
【０００８】
図８はある試料のＨＰＬＣ分析結果の一例を示すクロマトグラムである。このクロマトグラムには、保持時間約３分のピーク群と保持時間約６分のピーク群とが現れている。
【０００９】
図９は、図８の試料のリサイクル分析を約６分間行った分析結果を示すクロマトグラムである。このクロマトグラムにおいては、保持時間約３分のピーク群の２巡目のピーク群と保持時間約６分のピーク群の１巡目のピーク群とが重なっている。このような試料の場合は、リサイクルを行うことにより保持時間の異なる成分が混合するため、所望のピークを分離することが出来ない。この問題を解決するため、リサイクルの対象成分のみを分離回収した後、この回収した対象成分を別途リサイクルすることが行われる。この方法による場合は、リサイクルの対象成分の回収操作が煩雑になる。また、リサイクルの対象成分の回収洩れを生じさせることもあり、成分回収量を低下させる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開平０５−２２３８０３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、その課題は、試料中の一部成分のみを対象として、別途の回収操作を行わずに、リサイクル分析を可能とする事である。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者は上記課題を解決するため鋭意検討した結果、リサイクル分析を行うＨＰＬＣに、カラムスイッチ機構を組込むことで上記課題を解決することが出来ることを見出し、本発明を完成するに至った。上記課題を解決する本発明は以下に記載するものである。
【００１３】
〔１〕
第一移動相の流路の一端側から他端側に向って、順次第一送液ポンプと、試料導入装置と、第一カラムと、第一流路切換えバルブ群と、第一検出器と、
を介装するとともに、
前記第一流路切換えバルブ群の流路切換えバルブの切換えにより、前記第一移動相の流路において、第一カラムと第一検出器との間に第二カラムを介装する流路に切換える第一移動相の流路と、
第二移動相の流路の一端側から他端側に向って、順次第二流路切換えバルブ群と、第二送液ポンプと、第一流路切換えバルブ群と、第二検出器と、第二流路切換えバルブ群と、
を介装するとともに、
前記第一流路切換えバルブ群の流路切換えバルブの切換えにより、前記第二移動相の流路において、第二送液ポンプと第二検出器との間に第二カラムを介装する流路に切換える第二移動相の流路と、
を有し、
前記第一流路切換えバルブ群には、前記第二カラムに通過する移動相を第一移動相あるいは第二移動相のいずれか一方に切換える流路切換えバルブを備え、且つ第一流路切換えバルブ群は同時に各バルブが切り換り、
且つ、
前記第二流路切換えバルブ群の流路切換えバルブの切換えにより、第二流路切換えバルブ群と、第二送液ポンプと、第二カラムと、第二検出器と、第二流路切換えバルブ群とを循環する閉流路に切換える機構を備えることを特徴とすることを高速液体クロマトグラフ。
【００１４】
〔２〕
第一移動相の流路の一端側から他端側に向って、順次第一送液ポンプと、試料導入装置と、第一流路切換えバルブ群と、第一検出器と、
を介装するとともに、
前記第一流路切換えバルブ群の流路切換えバルブの切換えにより、前記第一移動相の流路において、試料導入装置と第一検出器との間に第一カラムを介装する流路に切換える第一移動相の流路と、
第二移動相の流路の一端側から他端側に向って、順次第二流路切換えバルブ群と、第二送液ポンプと、第一流路切換えバルブ群と、第二カラムと、第二検出器と、第二流路切換えバルブ群と、
を介装するとともに、
前記第一流路切換えバルブ群の流路切換えバルブの切換えにより、前記第二移動相の流路において、第二送液ポンプと第二カラムとの間に第一カラムを介装する流路に切換える第二移動相の流路と、
を有し、
前記第一流路切換えバルブ群には、前記第一カラムに通過する移動相を第一移動相あるいは第二移動相のいずれか一方に切換える流路切換えバルブを備え、且つ第一流路切換えバルブ群は同時に各バルブが切り換り、
且つ、
前記第二流路切換えバルブ群の流路切換えバルブの切換えにより、第二流路切換えバルブ群と、第二送液ポンプと、第一流路切換えバルブ群と、第二カラムと、第二検出器と、第二流路切換えバルブ群とを循環する閉流路に切換える機構を備えることを特徴とすることを高速液体クロマトグラフ。
【００１５】
上記〔１〕又は〔２〕に記載の発明は以下の発明を含む。
【００１６】
〔３〕
第二送液ポンプと第二カラムとの流路間に試料導入装置を介装する〔１〕又は〔２〕に記載の高速液体クロマトグラフ。
【００１７】
〔４〕
第一流路切換えバルブ群が５以上の開口部を有する１のバルブで構成される〔１〕又は〔２〕に記載の高速液体クロマトグラフ。
【００１８】
〔５〕
第二流路切換えバルブ群が４以上の開口部を有する１のバルブで構成される〔１〕又は〔２〕に記載の高速液体クロマトグラフ。
【００１９】
〔６〕
〔１〕又は〔２〕に記載の高速液体クロマトグラフを用いて、リサイクルの対象成分を第二カラムに導入した後、第二カラムに導入したリサイクルの対象成分を第二移動相を用いて複数回第二カラムに通じるリサイクル分析方法。
【発明の効果】
【００２０】
本発明のＨＰＬＣを用いれば、従来リサイクル中に保持時間が重なり混合していた試料であっても単離させることが出来る。そのため、様々な物質の分離、精製に好適である。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】本発明のＨＰＬＣの一例を示す説明図である。
【図２】（ａ）及び（ｂ）ともに、図１のＨＰＬＣにおける第一移動相の流路を示す説明図である。
【図３】（ａ）―（ｃ）はいずれも、図１のＨＰＬＣにおける第二移動相の流路を示す説明図である。
【図４】ある試料のＨＰＬＣ分析結果の一例を示すクロマトグラムである。
【図５】図４の試料をカラムスイッチを行ってＨＰＬＣ分析し、第一検出器により検出された結果を示すクロマトグラムである。
【図６】図４の試料をカラムスイッチを行ってリサイクル分析し、第二検出器により検出された結果を示すクロマトグラムである。
【図７】ある試料のリサイクル分析結果の一例を示すクロマトグラムである。
【図８】ある試料のＨＰＬＣ分析結果の一例を示すクロマトグラムである。
【図９】図８の試料のリサイクルを行ったＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグラムである。
【図１０】本発明のＨＰＬＣの他の例を示す説明図である。
【図１１】（ａ）及び（ｂ）ともに、図１０のＨＰＬＣにおける第一移動相の流路を示す説明図である。
【図１２】（ａ）―（ｃ）はいずれも、図１０のＨＰＬＣにおける第二移動相の流路を示す説明図である。
【図１３】従来の、リサイクル機構を備えるＨＰＬＣの一例を示す説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下、本発明のＨＰＬＣと該装置を用いる分析方法について、２つの実施態様を挙げて説明する。
【００２３】
＜第一の実施態様＞
先ず、本発明の、カラムスイッチ機構とリサイクル機構とを備える高速液体クロマトグラフ（以下、単に本発明のＨＰＬＣともいう。）について説明する。
【００２４】
図１は本発明のＨＰＬＣの一例を示す説明図である。このＨＰＬＣの流路は、第一移動相１３の流れる流路と第二移動相３５が流れる流路とを有し、両流路間には第一流路切換えバルブを介装することにより、両流路を関連づけている。第一移動相１３の流れる流路は、第一移動相貯槽１１から回収槽５７に向って、順次配管１５と、第一送液ポンプ１７と、試料導入装置１９と、第一カラム２１と、第一流路切換えバルブ２３と、配管２５と、第一検出器２７と、配管２８と、で構成されている。前記第一流路切換えバルブ２３の切換えにより、前記第一移動相１３の流れる流路において、第一カラム２１と配管２５との間に、第一流路切換えバルブ２３を介して、配管２９と、第二カラム３１と、配管５５と、が介装される流路に切換える事が出来るように構成されている。
【００２５】
また、第二移動相３５の流れる流路は、第二移動相貯槽３３から回収槽５７に向って、順次配管３７と、第二流路切換えバルブ３９と、配管４１と、第二送液ポンプ４３と、配管４５と、第一流路切換えバルブ２３と、配管４７と、第二検出器４９と、配管５１と、第二流路切換えバルブ３９と、配管５３と、で構成されている。前記第一流路切換えバルブ２３の切換えにより、前記第二移動相３５の流れる流路において、配管４５と配管４７との間に第一流路切換えバルブ２３を介して、配管２９と、第二カラム３１と、配管５５と、が介装される流路に切換える事が出来るように構成されている。更に、第二流路切換えバルブ３９を切換えることにより、配管５１と配管４１とを流通可能とし、且つ配管５１と配管５３との流通を遮断して、リサイクルを行う事が出来るように構成されている。
【００２６】
図２（ａ）及び（ｂ）は、図１のＨＰＬＣにおける第一移動相の流路を示す説明図である。図２（ａ）及び（ｂ）の流路のうち、実線で示す流路は第一移動相の流路を示し、この流路は後述する（１）カラムスイッチを行わない分析の場合に使用する。
【００２７】
図２（ａ）中、１１は第一移動相貯槽であり、内部の第一移動相１３が、配管１５を経由して第一送液ポンプ１７により吸引される。第一移動相１３は、第一送液ポンプ１７によって試料導入装置１９に送られる。第一移動相１３は、試料導入装置１９から導入される試料と共に、第一カラム２１の入口に送られる。第一カラム２１の出口から出た第一移動相１３は第一流路切換えバルブ２３のポート２３ａと２３ｆとを通って第一検出器２７に送られる。第一検出器２７を出た移動相１３は配管２８を経て回収槽５７に送られ、回収液５９となる。
【００２８】
図２（ｂ）は、図２（ａ）の第一流路切換えバルブ２３を切換えた場合における第一移動相の流路を示している。第一カラム２１の出口から出た第一移動相１３は第一流路切換えバルブ２３のポート２３ａと２３ｂとを通り、配管２９を経由して、第二カラム３１の入口へと送られる。第二カラム３１の出口から出た第一移動相１３は配管５５を経由して、第一流路切換えバルブ２３のポート２３ｅと２３ｆとを通り、配管２５を経由して、第一検出器２７に送られる。第一検出器２７を出た移動相１３は配管２８を経て回収槽５７に送られ、回収液５９となる。
【００２９】
図３（ａ）―（ｃ）は、図１のＨＰＬＣにおける第二移動相の流路を示す説明図である。図３（ａ）―（ｃ）の流路のうち、実線で示す流路は第二移動相の流路を示している。
【００３０】
図３（ａ）では、第二送液ポンプ４３により吸引された第二移動相３５は配管３７を経て第二流路切換えバルブ３９に送られる。第二流路切換えバルブ３９のポート３９ａと３９ｄとは常に流通可能になっている。第二移動相３５は配管４１、第二送液ポンプ４３、配管４５を経て第一流路切換えバルブ２３に送られる。第一流路切換えバルブ２３はポート２３ｃと２３ｂとが流通可能になっている。その後、第二移動相３５は配管２９を経て第二カラム３１の入口に送られる。第二カラムの出口から出た第二移動相３５は配管５５を経て第一流路切換えバルブ２３に送られる。第一流路切換えバルブ２３はポート２３ｅと２３ｄとが流通可能になっている。第一流路切換えバルブ２３を出た第二移動相３５は配管４７を経て第二検出器４９へと送られる。その後、配管５１を経て第二流路切換えバルブ３９へ送られる。第二流路切換えバルブ３９はポート３９ｃと３９ｂとが流通可能になっている。第二流路切換えバルブ３９を出た第二移動相３５は配管５３を経て回収槽５７に送られ、回収液５９となる。
【００３１】
図３（ｂ）は、図３（ａ）の第一流路切換えバルブ２３を切換えた場合における第二移動相の流路を示している。第一流路切換えバルブ２３はポート２３ｃと２３ｄとが流通可能になっている。第一流路切換えバルブ２３を出た第二移動相３５は配管４７を経て第二検出器４９へと送られる。第二検出器４９を出た第二移動相３５は配管５１を経て第二流路切換えバルブ３９へと送られる。第二流路切換えバルブ３９のポート３９ｃと３９ｄとが流通可能になっている場合（図３ｂの流路）はリサイクル流路を構成する。即ち、配管４１と、第二送液ポンプ４３と、配管４５と、第一流路切換えバルブ２３と、配管４７と、第二検出器４９と、配管５１と、第二流路切換えバルブ３９とから成る閉流路のリサイクル流路が構成される。一方、第二流路切換えバルブ３９のポート３９ｃと３９ｂとが流通可能になっている場合（不図示）は、第二移動相３５は配管５３を経て回収槽５７に送られ、回収液５９となる。
【００３２】
図３（ｃ）は、図３（ａ）の第二流路切換えバルブ３９を切換えた場合における第二移動相の流路を示している。第二流路切換えバルブ３９はポート３９ｃと３９ｄとが流通可能になっている。これにより、配管４１と、第二送液ポンプ４３と、配管４５と、第一流路切換えバルブ２３と、配管２９と、第二カラム３１と、配管５５と、第一流路切換えバルブ２３と、配管４７と、第二検出器４９と、配管５１と、第二流路切換えバルブ３９とから成る閉流路のリサイクル流路が構成される。
【００３３】
第一流路切換えバルブ２３は、ポート２３ａと２３ｆとの間、ポート２３ｅと２３ｄとの間、ポート２３ｃと２３ｂとの間が流通可能となっている場合には、ポート２３ｆと２３ｅとの間、ポート２３ｄと２３ｃとの間、ポート２３ｂと２３ａとの間の流通は遮断されるように構成されている。同様に、ポート２３ｆと２３ｅとの間、ポート２３ｄと２３ｃとの間、ポート２３ｂと２３ａとの間が流通可能となっている場合には、ポート２３ａと２３ｆとの間、ポート２３ｅと２３ｄとの間、ポート２３ｃと２３ｂとの間の流通は遮断されるように構成されている。即ち、第一移動相の流路が図２（ａ）の流路となる場合には、第二移動相の流路は図３（ａ）又は図３（ｃ）の流路となる。第一移動相の流路が図２（ｂ）の流路となる場合には、第二移動相の流路は図３（ｂ）の流路となる。
【００３４】
次に、本発明のＨＰＬＣを用いる分析方法について説明する。
【００３５】
本発明のＨＰＬＣは（１）カラムスイッチを行わない分析、（２）特定成分についてカラムスイッチを行う分析、（３）上記（２）の特定成分につきリサイクルを行う分析、を行うことが出来る。以下に、本発明のＨＰＬＣを用いて行う上記（１）―（３）について説明する。
【００３６】
（１）カラムスイッチを行わない分析
カラムスイッチを行わない分析は、第一移動相を用いて分析を行う。この際、第一移動相の流路は図２（ａ）の実線で示す流路としておく。試料導入装置１９から導入された試料は、第一移動相１３と共に第一カラム２１に送られる。第一カラム２１内において試料は固定相に保持される。その後も第一移動相１３は供給され続ける。第一カラム２１内では、試料中の各成分は、移動相と固定相との分配係数の差に起因して各成分が異なる速度で第一カラム２１中の固定相から溶出されていく。各成分が分配される第一移動相１３はカラム２１を出た後、第一流路切換えバルブ２３を経て第一検出器２７に送られる。第一検出器２７によって検出される各成分を含む第一移動相１３は配管２８を経て回収槽５７に送られ、回収液５９が回収される。この回収液５９は廃液とされる、または、不図示のフラクションコレクター等により保持時間毎に収集される。この際、第二移動相３５の流路は後述する図３（ａ）の流路又は図３（ｃ）の流路となっている。本分析では第二移動相３５は使用しないので流通させる必要はない。
【００３７】
このカラムスイッチを行わない分析（１）は、通常の分析を行う場合、又はリサイクルを行う分析を行う前に、予め各成分の溶出時間を測定する場合に用いる。
【００３８】
（２）特定成分についてカラムスイッチを行う分析
先ず、予め上記（１）の分析を行い、特定成分（カラムスイッチの対象成分）の保持時間を確認しておく。次に図２（ａ）の実線で示す流路で、試料導入装置１９から試料を導入する。カラムスイッチを行わない分析（１）で得られる特定成分の保持時間を参考に第一流路切換えバルブ２３の切換え操作を行う。特定成分以外の成分（特定成分よりも保持時間の短い成分）は、図２（ａ）の実線で示す流路により、回収槽５７へと送られる。この際、第二移動相３５は図３（ａ）又は図３（ｃ）の実線で示す流路を流れている。
【００３９】
特定成分が第一カラム２１から溶出する直前に、第一流路切換えバルブ２３を切換えて、第一移動相の流路を図２（ｂ）の実線で示す流路とする。これにより特定成分は第二カラム３１へと送られ、第二カラム３１内に保持される。この際、第二移動相３５は図３（ｂ）の実線で示す流路を流れている。
【００４０】
第一カラム２１から特定成分の溶出が終ったら、第一流路切換えバルブ２３を切換えて、図２（ａ）の実線で示す流路とする。これにより、特定成分以外の成分（特定成分よりも保持時間の長い成分）は回収槽５７へと送られる。この際、第二移動相３５は図３（ａ）の実線で示す流路を流れており、第二移動相３５により、第二カラム３１から、特定成分の溶出が行われる。第二カラム３１から溶出された特定成分は、第二検出器４９により検出される。第二検出器４９を出た第二移動相は第二流路切換えバルブ３９を経て回収槽５７へ送られ、回収液５９とされる。
【００４１】
この場合は、第二カラム３１で特定成分（複数成分からなる）が各成分に分離され、更にリサイクルを必要としない場合である。
【００４２】
（３）上記（２）の特定成分につきリサイクルを行う分析
上記（２）の第二カラム３１にストックされた特定成分を溶出させる際に、第二流路切換えバルブ３９を切換えて配管５１と配管４１とを流通可能とさせ、図３（ｃ）の実線で示す流路とする。これにより、配管４１と、第二送液ポンプ４３と、配管４５と、第一流路切換えバルブ２３と、配管２９と、第二カラム３１と、配管５５と、第一流路切換えバルブ２３と、配管４７と、第二検出器４９と、配管５１と、第二流路切換えバルブ３９とから成る閉流路のリサイクル流路が構成される。
【００４３】
第二検出器４９の出力結果を参照し、特定成分を構成する各成分が十分に分離されてリサイクルが不要となった場合には、第二流路切換えバルブ３９を切換えて図３（ａ）の流路とする。これにより、各成分が溶出された第二移動相３５は配管５３を経由して回収槽５７へ送られ、回収液５９となる。
【００４４】
＜第二の実施態様＞
先ず、本発明の、カラムスイッチ機構とリサイクル機構とを備える高速液体クロマトグラフ（以下、単に本発明のＨＰＬＣともいう。）の他の実施態様について説明する。
【００４５】
図１０は本発明のＨＰＬＣの他の例を示す説明図である。第一移動相１１３の流路において、第一移動相貯槽１１１から回収槽１４９に向って、順次配管１１５と、第一送液ポンプ１１７と、配管１１９と、試料導入装置１２１と、配管１２３と、第一流路切換えバルブ１２５と、配管１３３と、第一検出器１３５と、配管１３７と、が介装されている。前記第一流路切換えバルブ１２５の切換えにより、前記第一移動相１１３の流路において、配管１２３と配管１３３との間に、第一流路切換えバルブ１２５と、配管１２７と、第一カラム１２９と、配管１３１と、第一流路切換えバルブ１２５と、を介装する流路に切換える事が出来るように構成されている。
【００４６】
また、第二移動相１５５の流路において、第二移動相貯槽１５３から回収槽１４９に向って、順次配管１５７と、第二流路切換えバルブ１５９と、配管１６１と、第二送液ポンプ１６３と、配管１６５と、第一流路切換えバルブ１２５と、配管１６７と、第二カラム１６９と、配管１７１と、第二検出器１７３と、配管１７５と、第二流路切換えバルブ１５９と、配管１７７と、が介装されている。前記第一流路切換えバルブ１２５の切換えにより、前記第二移動相１５５の流路において、配管１６５と配管１６７との間に第一流路切換えバルブ１２５と、配管１２７と、第一カラム１２９と、配管１３１と、第一流路切換えバルブ１２５と、を介装する流路に切換える事が出来るように構成されている。更に、第二流路切換えバルブ１５９を切換えることにより、配管１７５と配管１６１とを流通可能とし、且つ配管１７５と配管１７７との流通を遮断して、リサイクルを行う事が出来るように構成されている。
【００４７】
図１１（ａ）及び（ｂ）は、図１０のＨＰＬＣにおける第一移動相の流路を示す説明図である。図１１（ａ）及び（ｂ）の流路のうち、実線で示す流路は第一移動相の流路を示している。
【００４８】
図１１（ａ）中、１１１は第一移動相貯槽であり、内部の第一移動相１１３が、配管１１５を経由して第一送液ポンプ１１７により吸引される。第一移動相１１３は、第一送液ポンプ１１７によって配管１１９を経て試料導入装置１２１に送られる。第一移動相１１３は、試料導入装置１２１から導入される試料と共に、配管１２３を経て第一流路切換えバルブ１２５に送られる。第一移動相１１３は、第一流路切換えバルブのポート１２５ａと１２５ｂとを通って第一カラム１２９の入口に送られる。第一カラム１２９の出口から出た第一移動相１１３は第一流路切換えバルブ１２５のポート１２５ｅと１２５ｆとを通って第一検出器１３５に送られる。第一検出器１３５を出た移動相１１３は配管１３７を経て回収槽１４９に送られ、回収液１５１となる。
【００４９】
図１１（ｂ）は、図１１（ａ）の第一流路切換えバルブ１２５を切換えた場合における第一移動相の流路を示している。試料導入装置１２１を出た第一移動相１１３は配管１２３を経て、第一流路切換えバルブ１２５のポート１２５ａと１２５ｆとを通り、配管１３３を経由して、第一検出器１３５へと送られる。第一検出器１３５を出た移動相１１３は配管１３７を経て回収槽１４９に送られ、回収液１５１となる。
【００５０】
図１２（ａ）―（ｃ）は、図１０のＨＰＬＣにおける第二移動相の流路を示す説明図である。図１２（ａ）―（ｃ）の流路のうち、実線で示す流路は第二移動相の流路を示している。
【００５１】
図１２（ａ）では、第二送液ポンプ１６３により吸引された第二移動相１５５は配管１５７を経て第二流路切換えバルブ１５９に送られる。第二流路切換えバルブ１５９のポート１５９ａと１５９ｄとは常に流通可能になっている。第二移動相１５５は配管１６１、第二送液ポンプ１６３、配管１６５を経て第一流路切換えバルブ１２５に送られる。第一流路切換えバルブ１２５はポート１２５ｃと１２５ｄとが流通可能になっている。その後、第二移動相１５５は配管１６７を経て第二カラム１６９の入口に送られる。第二カラム１６９を出た第二移動相１５５は配管１７１を経て第二検出器１７３へと送られる。その後、配管１７５を経て第二流路切換えバルブ１５９へ送られる。第二流路切換えバルブ１５９はポート１５９ｃと１５９ｂとが流通可能になっている。第二流路切換えバルブ１５９を出た第二移動相１５５は配管１７７を経て回収槽１４９に送られ、回収液１５１となる。
【００５２】
図１２（ｂ）は、図１２（ａ）の第一流路切換えバルブ１２５を切換えた場合における第二移動相の流路を示している。第一流路切換えバルブ１２５はポート１２５ｃと１２５ｂとが流通可能になっている。第一流路切換えバルブ１２５を出た第二移動相１５５は配管１２７を経て第一カラム１２９へと送られる。第一カラム１２９を出た第二移動相１５５は配管１３１を経て第一流路切換えバルブ１２５へと送られる。第一流路切換えバルブ１２５はポート１２５ｅと１２５ｄとが流通可能になっている。その後、第二移動相１５５は配管１６７を経て第二カラム１６９へと送られる。第二カラム１６９を出た第二移動相１５５は配管１７１、第二検出器１７３、配管１７５を経て第二流路切換えバルブ１５９に送られる。第二流路切換えバルブ１５９はポート１５９ｃと１５９ｂとが流通可能になっている。第二移動相１５５は配管１７７を経て回収槽１４９に送られ、回収液１５１となる。
【００５３】
図１２（ｃ）は、図１２（ａ）の第二流路切換えバルブ１５９を切換えた場合における第二移動相の流路を示している。第二流路切換えバルブ１５９はポート１５９ｃと１５９ｄとが流通可能になっている。これにより、配管１６１と、第二送液ポンプ１６３と、配管１６５と、第一流路切換えバルブ１２５と、配管１６７と、第二カラム１６９と、配管１７１と、第二検出器１７３と、配管１７５と、第二流路切換えバルブ１５９とから成る閉流路のリサイクル流路が構成される。
【００５４】
第一流路切換えバルブ１２５は、ポート１２５ａと１２５ｆとの間、ポート１２５ｅと１２５ｄとの間、ポート１２５ｃと１２５ｂとの間が流通可能となっている場合には、ポート１２５ｆと１２５ｅとの間、ポート１２５ｄと１２５ｃとの間、ポート１２５ｂと１２５ａとの間の流通は遮断されるように構成されている。同様に、ポート１２５ｆと１２５ｅとの間、ポート１２５ｄと１２５ｃとの間、ポート１２５ｂと１２５ａとの間が流通可能となっている場合には、ポート１２５ａと１２５ｆとの間、ポート１２５ｅと１２５ｄとの間、ポート１２５ｃと１２５ｂとの間の流通は遮断されるように構成されている。即ち、第一移動相の流路が図１１（ａ）の流路となる場合には、第二移動相の流路は図１２（ａ）又は図１２（ｃ）の流路となる。第一移動相の流路が図１１（ｂ）の流路となる場合には、第二移動相の流路は図１２（ｂ）の流路となる。
【００５５】
次に、このＨＰＬＣを用いる分析方法について説明する。
【００５６】
このＨＰＬＣは（４）カラムスイッチを行わない分析、（５）特定成分についてカラムスイッチを行う分析、（６）上記（５）の特定成分につきリサイクルを行う分析、を行うことが出来る。以下に、このＨＰＬＣを用いて行う上記（４）―（６）について説明する。
【００５７】
（４）カラムスイッチを行わない分析
カラムスイッチを行わない分析は、第一移動相を用いて分析を行う。この際、第一移動相の流路は図１１（ａ）の実線で示す流路としておく。試料導入装置１２１から導入された試料は、第一移動相１１３と共に第一カラム１２９に送られる。第一カラム１２９内において試料は固定相に保持される。その後も第一移動相１１３は供給され続ける。第一カラム１２９から溶出された各成分を含む第一移動相１１３は第一カラム１２９を出た後、第一検出器１３５に送られる。第一検出器１３５によって検出される各成分を含む第一移動相１１３は配管１３７を経て回収槽１４９に送られ、回収液１５１が回収される。この回収液１５１は廃液とされる、または、不図示のフラクションコレクター等により保持時間毎に収集される。この際、第二移動相１５５の流路は後述する図１２（ａ）の流路又は図１２（ｃ）の流路となっている。本分析では第二移動相１５５は使用しないので流通させる必要はない。
【００５８】
（５）特定成分についてカラムスイッチを行う分析
先ず、予め上記（４）の分析を行い、特定成分（カラムスイッチの対象成分で複数成分の混合物）の保持時間を確認しておく。次に図１１（ａ）の実線で示す流路で、試料導入装置１２１から試料を導入する。特定成分の保持時間を参考に第一流路切換えバルブ１２５の切換え操作を行う。特定成分以外の成分（特定成分よりも保持時間の短い成分）は、図１１（ａ）の実線で示す流路により、回収槽１４９へと送られる。この際、第二移動相１５５は図１２（ａ）又は図１２（ｃ）の実線で示す流路を流れている。
【００５９】
特定成分が第一カラム１２９から溶出する直前に、第一流路切換えバルブ１２５を切換えて、第一移動相の流路を図１１（ｂ）の実線で示す流路に切り換える。これにより、第二移動相１５５は図１２（ｂ）の実線で示す流路に切り換わる。特定成分は第一カラム１２９から第二移動相１５５により溶出される。特定成分を含む第二移動相１５５は配管１３１、第一流路切換えバルブ１２５を経て第二カラム１６９に送られ、カラム内に保持される。
【００６０】
特定成分の溶出が終ったら、第一流路切換えバルブ１２５を切換えて、図１１（ａ）の実線で示す流路とする。これにより、特定成分以外の成分（特定成分よりも保持時間の長い成分）は回収槽１４９へと送られる。この際、第二移動相１５５は図１２（ａ）の実線で示す流路を流れており、第二移動相１５５により、第二カラム１６９から、特定成分の溶出が行われる。第二カラム１６９から溶出された特定成分は、第二検出器１７３により検出される。第二検出器１７３を出た第二移動相１５５は第二流路切換えバルブ１５９を経て回収槽１４９へ送られ、回収液１５１とされる。この場合は、第二カラム１６９で特定成分中の各成分が十分分離されている場合である。
【００６１】
（６）上記（５）の特定成分につきリサイクルを行う分析
上記（５）の第二カラム１６９にストックされた特定成分を溶出させる際に、第二流路切換えバルブ１５９を切換えて配管１７５と配管１６１とを流通可能とさせ、図１２（ｃ）の実線で示す流路とする。これにより、配管１６１と、第二送液ポンプ１６３と、配管１６５と、第一流路切換えバルブ１２５と、配管１６７と、第二カラム１６９と、配管１７１と、第二検出器１７３と、配管１７５と、第二流路切換えバルブ１５９とから成る閉流路のリサイクル流路が構成される。
【００６２】
第二検出器１７３の出力結果を参照し、各成分が十分に分離されてリサイクルが不要となった場合には、第二流路切換えバルブ１５９を切換えて図１２（ａ）の流路とする。これにより、各成分が溶出された第二移動相１５５は配管１７７を経由して回収槽１４９へ送られ、回収液１５１となる。
【００６３】
図１及び図１０中、第二流路には試料導入装置は介装されていないが、介装されていても良い。第二流路に試料導入装置が介装されている場合、第一流路と第二流路とが独立した２台のＨＰＬＣとして使用できる。図１中、第一流路にはリサイクル機構は備えていないが、リサイクル機構を備えていても良い。これにより、２種類のリサイクル対象成分を同時にリサイクルすることが出来る。
【００６４】
図中、第一流路切換えバルブは６方バルブを使用しているが、複数のバルブを組合わせて構成しても良い（この場合の複数のバルブを総称して第一流路切換えバルブ群という）。同様に、第二流路切換えバルブは複数のバルブを組合わせて構成しても良い（この場合の複数のバルブを総称して第二流路切換えバルブ群という）。これらの場合は、バルブ群は各バルブ群を構成する各バルブを同時に切換える必要がある。同時に切換えない場合は、流路が一時的に遮断され、内部が高圧となる結果、装置が破損するおそれがある。従って同時とは、このような流路の遮断が許される範囲内の時間を指す。
【００６５】
第一移動相と第二移動相とは同一組成であっても良いし、異なる組成であっても良い。第一移動相と第二移動相とが同一の組成である場合には、第一移動相貯槽と第二移動相貯槽とは同一の貯槽であっても良い。また、第一送液ポンプと第二送液ポンプとは同一の送液速度であっても、異なる送液速度であっても良い。第一検出器と第二検出器とは同一の検出方式であっても、異なる検出方式であっても良い。第一カラムと第二カラムとは同一のカラムを用いても良いし、異なるカラムを用いても良い。カラムとしては、逆相系カラムや順相系カラム、またＧＰＣカラムやイオン交換カラム等の一般的にＨＰＬＣに用いられるカラムが使用できる。移動相は使用するカラムの種類に応じて公知の物が適宜選択される。
【実施例】
【００６６】
以下、本発明のＨＰＬＣによる具体的な試料の分離結果を説明する。
【００６７】
第一送液ポンプ：ＳＳＣ−３４６１（センシュー科学製）、第二送液ポンプ：Ｌ−２１３０（日立ハイテク製）、第一検出器：ＳＳＣ−５４１０（センシュー科学製）、第二検出器：Ｌ−２４５０（日立ハイテク製）、試料導入装置：ＲＨＥＯＤＹＮＥ７１２５（ＲＨＥＯＤＹＮＥ製）、第一及び第二カラム：ＯＤＳ１０φ×１５０ｍｍ（センシュー科学製）を用いて図１の装置を構成した。
【００６８】
この装置を用いて、第一及び第二移動相として水／アセトニトリル（１／１）混液を用いて、複数成分含有試料（ｐ―ヒドロキシ安息香酸（メチル、エチル、ブチル、ｎ−ブチル、イソプロピル）、カフェイン、レソルシノール、ｔ−ブチルヒドロキノン、各２ｍｇ／ｍＬ）の分離を行った。カラム温度は４０℃とした。移動相の流速は３ｍＬ／ｍｉｎ．としたところ、第一カラム及び第二カラムの圧力はそれぞれ３．３ＭＰａ、３．４ＭＰａとなった。第一及び第二検出器の検出波長は２５４ｎｍとした。
【００６９】
先ず、図２（ａ）の実線で示す流路において、リサイクルを行わないＨＰＬＣ分析を行い、図４に示すクロマトグラムを得た。各成分のうち、保持時間約８分に現れる２本のピークの分離が不十分であった。そのため、この２成分を対象としてリサイクルを行った。なお、この試料を従来の図１３に示すＨＰＬＣでリサイクルを行うと保持時間約２分の成分や保持時間約４分の成分のピークと重なって保持時間約８分の成分の分離が行えない。
【００７０】
図２（ａ）の実線で示す流路において保持時間０〜７分までの成分を溶出させた。保持時間７〜９分では流路を図２（ｂ）の実線で示す流路に切換えてカラムスイッチを行った。その後、保持時間９分以降では図２（ａ）の実線で示す流路に切換えた。図５は本発明のＨＰＬＣを用いて、図４と同じ試料をカラムスイッチを行ってＨＰＬＣ分析し、第一検出器で検出されたクロマトグラムである。保持時間７〜９分の成分はカラムスイッチを行っているため、第一検出器では検出されていない。第二カラムにストックされた保持時間７〜９分の成分は、図３（ｃ）の実線で示す流路によってリサイクル分析を行った。そのクロマトグラムを示すのが図６である。
【００７１】
このクロマトグラムによれば、保持時間１６分から８分毎にピークが現れている。なお、保持時間１６分のピークは第一カラムを通過し、更に第二カラムを１回通過した成分のピークである（これを１巡目とする）。このクロマトグラムによれば、保持時間約５６分（６巡目）で２成分の分離が達成されている。
【符号の説明】
【００７２】
１００・・・本発明のＨＰＬＣ
１１・・・第一移動相貯槽
１３・・・第一移動相
１７・・・第一送液ポンプ
１９・・・試料導入装置
２１・・・第一カラム
２３・・・第一流路切換えバルブ
２３ａ〜ｆ・・・バルブのポート
２７・・・第一検出器
３１・・・第二カラム
３３・・・第二移動相貯槽
３５・・・第二移動相
３９・・・第二流路切換えバルブ
３９ａ〜ｄ・・・バルブのポート
４３・・・第二送液ポンプ
４９・・・第二検出器
５７・・・回収槽
５９・・・回収液
１５、２５、２８、２９、３７、４１、４５、４７、５１、５３、５５・・・配管
２００・・・本発明のＨＰＬＣ
１１１・・・第一移動相貯槽
１１３・・・第一移動相
１１７・・・第一送液ポンプ
１２１・・・試料導入装置
１２５・・・第一流路切換えバルブ
１２５ａ〜ｆ・・・バルブのポート
１２９・・・第一カラム
１３５・・・第一検出器
１４９・・・回収槽
１５１・・・回収液
１５３・・・第二移動相貯槽
１５５・・・第二移動相
１５９・・・第二流路切換えバルブ
１５９ａ〜ｄ・・・バルブのポート
１６３・・・第二送液ポンプ
１６９・・・第二カラム
１７３・・・第二検出器
１１５、１１９、１２３、１２７、１３１、１３３、１３７、１５７、１６１、１６５、１６７、１７１、１７５、１７７・・・配管
５００・・・従来のリサイクル機構を備えたＨＰＬＣ
５０１・・・移動相貯槽
５０３・・・移動相
５０７・・・流路切換えバルブ
５０７ａ、５０７ｂ、５０７ｃ、５０７ｄ・・・バルブのポート
５１１・・・送液ポンプ
５１３・・・試料導入装置
５１５・・・カラム
５１７・・・検出器
５２３・・・回収槽
５２５・・・回収液
５０５、５０９、５１９、５２１・・・配管
【図１】
2011052973.tif 000003
【図２】
2011052973.tif 000004
【図３】
2011052973.tif 000005
【図４】
2011052973.tif 000006
【図５】
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【図６】
2011052973.tif 000008
【図７】
2011052973.tif 000009
【図８】
2011052973.tif 000010
【図９】
2011052973.tif 000011
【図１０】
2011052973.tif 000012
【図１１】
2011052973.tif 000013
【図１２】
2011052973.tif 000014
【図１３】
2011052973.tif 000015