(57)【要約】【課題】  抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果を有する優れた皮膚外用剤、経口用剤を提供する。【解決手段】  ユリ属植物の球根及び／又はカルス抽出物を有効成分とする皮膚外用剤、経口用剤、保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を有効成分とする皮膚外用剤。
【請求項２】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を含有する経口用剤。
【請求項３】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を含有する保湿剤。
【請求項４】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を含有する抗老化剤。
【請求項５】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を含有する美白剤。
【請求項６】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を含有する抗酸化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を有効成分とする皮膚外用剤、経口用剤、保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、皮膚の乾燥を防ぎ、皮膚にうるおいを与える保湿成分を提供するために、様々な有効成分の配合検討がなされてきた。また、加齢、疾患、ストレス、紫外線などによるシワ、シミ、皮膚の弾力低下といった皮膚症状の要因として、乾燥、細胞機能低下、紫外線によるメラニン産生や色素沈着、真皮マトリックス成分の減少や変性、紫外線などによる細胞の酸化障害などが挙げられる。このような皮膚症状を防止・改善するために、様々な有効成分の検索および配合検討がなされてきた。特に天然由来成分は、様々な薬理作用や美容効果を有することが知られ、これまでにも数多くの植物や菌類などの抽出物の皮膚外用剤への応用が検討されてきた。
【０００３】
例えば、皮膚の老化防止、改善作用を有する皮膚外用剤を得るために、真皮線維芽細胞の賦活あるいは増殖促進作用を有する成分としてポンカンのエッセンス（特許文献１参照）等、皮膚の保湿効果と安全性に優れた保湿剤としてハリブキ属植物の抽出物（特許文献２参照）等、美白剤としては、白鶴霊芝の抽出物（特許文献３参照）等、抗酸化剤としてはサルオガセ科サルオガセ属植物の抽出物（特許文献４参照）等、抗炎症作用を有する植物エキスとして、蘇葉、カカオ及び茴香の乾燥物又はその熱水抽出エキス（特許文献５参照）、カンナ科植物の溶媒抽出物（特許文献６参照）等が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献２】特開２００７−７７０７２号公報
【特許文献３】特開２００３−８９６３０号公報
【特許文献４】特開平１０−１８２４１３号公報
【特許文献５】特開２００３−２０１２４６号公報
【特許文献６】特開平４−２７０２２４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
このように、これまで様々な天然由来成分が応用されてきた。しかしながら、天然由来成分の中には、その効果が充分ではなく、より優れた成分の開発が求められていた。それ故、本発明は抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果を有する優れた皮膚外用剤、経口用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を含有する皮膚外用剤、経口用剤が、優れた抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、ユリ属植物の球根及び／又はカルス抽出物を有効成分とする皮膚外用剤、経口用剤、保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤に関する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、ユリ属植物の球根及び／又はカルス抽出物を皮膚外用剤、経口用剤に配合することにより、優れた抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果を発揮する皮膚外用剤、経口用剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の詳細を説明する。
【００１０】
本発明に用いるユリ属植物としては特に限定されない。かかるユリ属植物として例えば、ウケユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ａｌｅｘａｎｄｒａｅｏｒｔ）、コマユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ａｍａｂｉｌｅ）、ヤマユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ａｕｒａｔｕｍ  Ｌｉｎｄｌ．）、サクユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ａｕｒａｔｕｍ  ｖａｒ．  ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌｕｍ）、リリウム・ブルビフェルム（Ｌｉｌｉｕｍ  ｂｕｌｂｉｆｅｒｕｍ）、マドンナリリー（Ｌｉｌｉｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍ  Ｌ．）、マツバユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｃｅｒｎｕｕｍ）、ヒメユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｃｏｎｃｏｌｏｒ  Ｓａｌｉｓｂ．）、ウバユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｃｏｒｄａｔｕｍ）、タカサゴユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｆｏｒｍｏｓａｎｕｍ  Ｗａｌｌａｃｅ）、カノコユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｈｅｎｒｙｉ）、ササユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ  Ｔｈｕｎｂ．  ｅｘ  Ｈｏｕｔｔ．）、ジンリョウユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ  ｖａｒ．  ａｂｅａｎｕｍ）、ニオイユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ  ｖａｒ．  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｍ）、オニユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ  Ｔｈｕｎｂ．；Ｌｉｌｉｕｍ  ｔｉｇｒｉｎｕｍ  Ｋｅｒ−Ｇａｗｌ．）、オウゴンオニユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ  ｖａｒ．  ｆｌａｖｉｆｌｏｒｕｍ）、コオニユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｌｅｉｃｈｔｌｉｎｉｉ  Ｈｏｏｋ．  ｆ．  ｖａｒ．  ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚｉｉ（Ｒｅｇｅｌ）Ｂａｋｅｒ）、キヒラトユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｌｅｉｃｈｔｌｉｎｉｉ  ｖａｒ．  ｌｅｉｃｈｔｌｉｎｉｉ）、テッポウユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｌｏｎｇｉｆｌｏｒｕｍ  Ｔｈｕｎｂ．）、イワトユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｍａｃｕｌａｔｕｍ  Ｔｈｕｎｂ．）、スカシユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｍａｃｕｌａｔｕｍ  ｓｓｐ．  ｍａｃｕｌａｔｕｍ）、ヤマスカシユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｍａｃｕｌａｔｕｍ  ｖａｒ．  ｍｏｎｔｉｃｏｌａ）、ミヤマスカシユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｍａｃｕｌａｔｕｍ  ｖａｒ．  ｂｕｋｏｓａｎｅｎｓｅ）、エゾスカシユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｍａｃｕｌａｔｕｍ  ｓｓｐ．  ｄａｕｒｉｃｕｍ）、クルマユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｍｅｄｅｏｌｏｉｄｅｓ  Ａ．Ｇｒａｙ）、サドクルマユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｍｅｄｅｏｌｏｉｄｅｓ  ｖａｒ．  ｓａｄｏｉｎｓｕｌａｒｅ）、ウコンユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｎｅｌａｐｅｎｓｅ）、イトハユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｐｉｍｉｌｕｍ）、リリウム・ピレナイクム（Ｌｉｌｉｕｍ  ｐｙｒｅｎａｉｃｕｍ）、リーガルリリー（Ｌｉｌｉｕｍ  ｒｅｇａｌｅ  Ｗｉｌｓ．）、オトメユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｒｕｂｅｌｌｕｍ  Ｂａｋｅｒ）、カノコユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｏｓｕｍ  Ｔｈｕｎｂ．）、シマカノコユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｏｓｕｍ  ｖａｒ．  ｓｐｅｃｉｏｓｕｍ）、タキユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｏｓｕｍ  ｖａｒ．  ｃｌｉｖｏｒｕｍ）、タイワンカノコユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｏｓｕｍ  ｖａｒ．  ｇｌｏｒｉｏｓｏｉｄｅｓ）、タモトユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｏｓｕｍ  ｖａｒ．ｎｏｂｉｌｉｓｓｉｍｕｍ）、チョウセンカサユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｔｓｉｎｇｔａｕｅｎｓｅ）、チョウセンクルマユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｄｉｓｔｉｃｂｕｍ）、タケシマユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｂ��ｎｓｏｎｉｉ）、マルタゴンリリー（Ｌｉｌｉｕｍ  ｍａｒｔａｇｏｎ）、ヒメサユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｒｕｂｅｌｌｕｍ；別名オトメユリ）、ハカタユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｂｒｏｗｎｉｉ）、ノヒメユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｃａｌｌｏｓｕｍ）、キバナノヒメユリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｃａｌｌｏｓｕｍ  ｖａｒ．ｆｌａｖｉｆｌｏｒｕｍ）、リリウム・ウァシングトニアヌム（Ｌｉｌｉｕｍ  ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎｉａｎｕｍ）、リリウム・ボランデリ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｂｏｌａｎｄｅｒｉ）、リリウム・カナデンセ（Ｌｉｌｉｕｍ  ｃａｎａｄｅｎｓｅ）などが挙げられる。本発明においては、その効果の点からウケユリを用いることが最も好ましい。
【００１１】
本発明においてはユリ属植物の球根及び／又はカルスを用いる。ユリ属植物の球根及びカルスの増殖方法について詳細に述べる。
【００１２】
ユリ属植物の球根及びカルスは、該植物の組織培養を行うことにより得ることができる。ユリ属植物の組織培養法としては公知の方法であれば（例：特開昭６１−２８５９２８号公報、特開２００２−３０２４０３）特に限定されない。例えば、ユリ属植物の組織培養は該植物の球根、小球、鱗片を用いて行うことができる。これらの組織片は通常、次亜塩素酸ソーダ、エチルアルコールや炎によって殺菌した後に使用される。しかし、無菌的に栽培したユリ属植物を使用する場合には、上記の殺菌操作は不要である。
【００１３】
球根及びカルスの増殖用の基本培地としては、Ｍｕｒａｓｉｇｅ−Ｓｋｏｏｇの培地（以下ＭＳ培地と略す場合がある）、Ｌｉｎｓｍａｉｅｒ−Ｓｋｏｏｇの培地、Ｇａｍｂｏｒｇの培地、Ｗｈｉｔｅの培地、Ｔｕｌｅｃｋｅの培地、Ｎｉｔｓｃｈ  ＆  Ｎｉｔｓｃｈの培地、Ｋｎｕｄｓｏｎの培地、Ｈｙｐｏｎｅｘ培地など植物組織培養に通常用いられる培地、あるいはこれらの培地を基本培地として改変をおこなった培地などを用いることができる。本発明において、球根の増殖の目的から、基本培地にショ糖、グルコース、フラクトース、マルトース等の糖類を添加することが好ましく、これらの糖類の中でもショ糖、グルコースから選択される１種又は２種を添加することが最も好ましい。
【００１４】
この基本培地には、植物ホルモンを添加することができる。植物ホルモンとしては、ベンジルアデニン、カイネチン、ゼアチン、イソペンテニルアデニン、インドール酢酸、インドール酪酸、ナフタレン酢酸、２，４−ジクロルフェノキシ酢酸、２，４，５−トリクロルフェノキシ酢酸等があげられる。鱗片から小球、球根を形成させる場合、及びカルス増殖の際には、植物ホルモンを添加することが必須である。小球から球根を形成させる場合、及び球根を肥大させる場合には植物ホルモンの添加は任意である。
【００１５】
組織培養は基本的に光を照射しない状態（以下暗黒状態と略す場合がある）で行うが、培地交換時等短時間光が当たることは妨げない。培養温度は、発芽温度より低く設定することが好ましく、通常３０℃以下の温度で培養する。培地は適宜交換し、常に新しい培地を用いることにより、効率よく増殖させることができる。より具体的には、１週間〜６ヶ月ごとに交換することが好ましく、さらには２週間〜３ヶ月ごとに交換する。
【００１６】
鱗片、小球から球根を得る際、カルスを形成する場合がある。かかる場合、カルス部分のみを取り分けて、増殖させることにより、効率よくカルスを増殖させることができる。その際の組織培養方法は、上述と同様である。
【００１７】
本発明における球根及び／又はカルスの抽出の際は、生のまま用いてもよいが、抽出効果を考えると、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬するか、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効果を上げるため、攪拌や抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００１８】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類、アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界流体や亜臨界流体を用いてもよい。これらの抽出溶媒の中でも本発明の効果の点から、水及びエタノールから選択される１種又は２種を用いることが好ましい。
【００１９】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもでき、これらの生理作用を損なわない範囲で脱色、脱臭、脱塩等の精製処理やカラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。ユリ属植物の球根及び／又はカルスの前記抽出物やその処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶解して用いることもできる。
【００２０】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物は、優れた保湿作用、抗老化作用、美白作用、抗酸化作用を有し、保湿剤、抗老化剤、美白剤、抗酸化剤として利用することができる。また、ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を有効成分とする保湿剤、抗老化剤、中性脂肪蓄積抑制剤、美白剤、抗炎症剤は、皮膚に外用するだけではなく、毛髪に利用することや経口摂取も可能であり、医薬品、医薬部外品、化粧品あるいは経口用剤などに応用することが可能である。
【００２１】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を含有する保湿剤は、表皮細胞における高いフィラグリン合成促進作用を発揮し、皮膚に対する保湿剤として有用である。
【００２２】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を含有する抗老化剤は、真皮線維芽細胞にして優れた細胞賦活作用し、真皮線維芽細胞賦活剤として有用である。
【００２３】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を含有する美白剤は、優れた美白作用を発揮するが、特にメラニン産生促進作用に対して優れた効果を発揮し、美白剤として有用である。
【００２４】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を含有する抗酸化剤は、過酸化脂質存在下で表皮細胞が高い生存率を示し、抗酸化剤として有用である。
【００２５】
また、ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、シワ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミ、乾燥、小じわ等の皮膚症状の防止・改善や、腹部、太腿、顔などの部分的な肥満防止・改善に優れた効果を発揮する皮膚外用剤を得ることができ、保湿用皮膚外用剤、老化防止改善用皮膚外用剤、美白用皮膚外用剤、としても用いることができる。さらに、ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物は、美容、健康維持、又は栄養補給を目的とする医薬品、医薬部外品、経口用剤などに用いることもできる。
【００２６】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を皮膚外用剤や経口用剤に配合する際の配合量は、皮膚外用剤や経口用剤の種類や使用目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して、０．０００１〜５０．０質量％が好ましく、より好ましくは０．００１〜２５．０質量％である。
【００２７】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を皮膚外用剤に配合する場合その剤型は任意であり、例えば、ローションなどの可溶化系、クリームや乳液などの乳化系，カラミンローション等の分散系として提供することができる。さらに、噴射剤と共に充填したエアゾール，軟膏剤，粉末，顆粒などの種々の剤型で提供することもできる。
【００２８】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を配合する皮膚外用剤には、必要に応じて、通常医薬品，医薬部外品，皮膚化粧料，毛髪用化粧料及び洗浄料などに配合される、油性成分，保湿剤，粉体，色素，乳化剤，可溶化剤，洗浄剤，紫外線吸収剤，増粘剤，薬剤，香料，樹脂，防菌防黴剤，アルコール類等の他の成分を適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の保湿剤、細胞賦活剤、抗酸化剤、痩身剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、との併用も可能である。
【００２９】
ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物を経口用剤に配合する場合その形態は特に限定されないが、液剤等の液状の形態や、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、飴剤等の固形剤、あるいはゼリー、グミ、ガムなどの様々な形態に加工し使用することができ、医薬品、医薬部外品、栄養補助経口用剤、健康経口用剤等として用いることができる。その際、他の添加剤、例えば、賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、防腐剤、コーティング剤、保存剤、矯味剤、香料、着色剤、可塑剤などを添加することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の保湿剤、細胞賦活剤、抗酸化剤、痩身剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、との併用も可能である。
【実施例】
【００３０】
以下に、ユリ科植物の組織培養方法、ユリ属植物の球根及び／又はカルスの抽出物の製造例、各作用を評価するための試験、皮膚外用剤や経口用剤の処方例についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれによってなんら限定されるものではない。
【００３１】
ユリ科植物の組織培養方法
（１）カルス及び小球の誘導１（初期培地）
ウケユリ球根から組織培養によって得られた無菌状態の鱗片を、初期培地に接種した。初期培地はＭＳ培地にインドール酢酸０．０１ｍｇ／Ｌ、ベンジルアデニン０．０５ｍｇ／Ｌ、ショ糖６０ｇ／Ｌ、ゲランガム２．０ｇ／Ｌを添加し、塩酸、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを５．６に調整した後、オートクレーブにより１２０℃、１．５気圧で１５分間滅菌したものを用いた。培養は、培養ポットを用いて、室温、暗黒条件下で行い、一ヶ月に１回培地を交換した。培地交換時に誘導されたカルスを用いてカルスの継代培養を行った。また、かかる初期培養により得られた小球は、保存用培地を用いて球根の増殖に供した。
【００３２】
（２）カルス及び球根の誘導（保存用培地）
ウケユリ鱗片から組織培養によって得られた無菌状態の小球を、保存用培地に接種した。保存用培地は、ＭＳ培地にショ糖６０ｇ／Ｌ、ゲランガム２．０ｇ／Ｌを添加し、塩酸、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを５．６に調整した後、オートクレーブにより１２０℃、１．５気圧で１５分間滅菌したものを用いた。培養は、培養ポットを用いて、室温、暗黒条件下で行い、一ヶ月に１回培地を交換した。培地交換時に誘導されたカルスを用いてカルスの継代培養を下記のとおり行った。また、かかる保存用培養により得られた小球及び球根は、継代し初期培地、保存用培地を用いて球根の増殖に供した。
【００３３】
（３）カルスの継代培養
誘導されたカルスを、カルス継代培養用培地に接種した。カルス継代培養用培地は、ＭＳ培地を２倍希釈し、最終濃度としてグルコースを３０ｇ／Ｌ、ベンジルアデニンを１ｍｇ／Ｌ、２，４−ジクロフェノキシ酢酸を０．５ｍｇ／Ｌ、ゲランガムを３ｇ／Ｌとなるように添加したものを、塩酸、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを６．０に調整した後、オートクレーブにより１２０℃、１．５気圧で１５分間滅菌したものを用いた。培養は、室温で暗黒条件下で行い、カルスが培養ポットの８割以上になった時点で新しい培地に移植して、カルスの増殖を行った。
【００３４】
［抽出物１］  ウケユリの球根の乾燥粉砕物１００ｇを、２．０ｋｇの精製水に分散させ、１２０℃で２０分間加熱抽出した。抽出上清を濾別したのち、凍結乾燥を行い、抽出物１を得た。
【００３５】
［抽出物２］  ウケユリの球根の乾燥粉砕物１００ｇを、２．０ｋｇの５０容量％エタノール水溶液に分散させ、攪拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出上清を濾別したのち、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物２を得た。
【００３６】
［抽出物３］  ウケユリの球根の乾燥粉砕物１００ｇを、２．０ｋｇの５０容量％１，３−ブチレングリコール水溶液に分散させ、攪拌しながら室温にて４８時間抽出した。抽出上清を濾別したのち、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物３を得た。
【００３７】
［抽出物４］  ウケユリのカルスの乾燥粉砕物１００ｇを、２．０ｋｇの精製水に分散させ、１２０℃で２０分間加熱抽出した。抽出上清を濾別したのち、凍結乾燥を行い、抽出物４を得た。
【００３８】
［抽出物５］  ウケユリのカルスの乾燥粉砕物１００ｇを、２．０ｋｇの５０容量％エタノール水溶液に分散させ、攪拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出上清を濾別したのち、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物５を得た。
【００３９】
［抽出物６］  ウケユリのカルスの乾燥粉砕物１００ｇを、２．０ｋｇの５０容量％１，３−ブチレングリコール水溶液に分散させ、攪拌しながら室温にて４８時間抽出した。抽出上清を濾別したのち、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物６を得た。
【００４０】
［試験例１］ヒト真皮線維芽細胞賦活作用（抗老化効果）
試料として、抽出物５を用いて評価を行った。
正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には１質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後、表１に示す濃度になるように抽出物５を添加した１％質量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭに交換し、さらに４８時間培養した。次に４００μｇ／ｍＬとなるよう培地にて調整したＭＴＴ試薬を、上清を除いた細胞に添加し、約２時間培養した。最後に２−プロパノールにて生じたフォルマザンを抽出し、５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて細胞賦活作用を評価した。評価では、試料培養液の他に、コントロールとして１％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭを、ポジティブコントロールとして５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭを用いた。評価結果を、試料無添加のコントロールにおける細胞賦活作用を１００とした相対値にて表２に示す。
なお有効性評価試験結果について、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊で表す。
【００４１】
【表１】
2011016760.tif 000002
【００４２】
表１から明らかなように、抽出物５のウケユリカルスのエタノール水溶液抽出物には、有意なヒト真皮線維芽細胞賦活作用が認められた。このことから、ウケユリカルスの抽出物には、ヒト真皮線維芽細胞賦活作用が認められ、優れた抗老化作用を有することが明らかとなった。
【００４３】
［試験例２］ヒト表皮細胞フィラグリン産生促進作用（保湿効果）
ヒト表皮ケラチノサイトＨａＣａｔ細胞を、１０質量％のＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地にて３７℃、５％二酸化炭素条件下で培養した。コンフルエントな状態になったところで、抽出物５を表２に示す濃度で添加したＤＭＥＭ培地に交換して２４時間培養した。ＲＮＡｐｒｏｔｅｃｔＣｅｌｌＲｅａｇｅｎｔ及びＲＮｅａｓｙ  Ｐｒｏｔｅｃｔ  Ｃｅｌｌ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて総ＲＮＡの抽出を行い、ＲＴ−ＰＣＲ法を用いてフィラグリンｍＲＮＡ発現量の測定を行った。内部標準としてはＧＡＰＤＨを用いた。ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡ発現量を補正値として用い、抽出物無添加の細胞でのｍＲＮＡ発現量を１として場合の相対値にて、結果を表２に示す。
【００４４】
【表２】
2011016760.tif 000003
【００４５】
表２から明らかなように、抽出物５のウケユリカルスのエタノール水溶液抽出物には、明らかなフィラグリン産生促進作用が認められた。このことから、ウケユリカルスの抽出物には、フィラグリン産生促進作用が認められ、優れた保湿効果を有することが明らかとなった。
【００４６】
［試験例３］メラニン産生抑制作用（美白作用）
Ｂ１６マウスメラノーマ細胞（Ｂ１６Ｆ０細胞）を１ディッシュ当り１８０００個となるように９０ｍｍディッシュに播種した。播種培地には５質量％のＦＢＳを添加したＤＭＥＭを用いた。２４時間後、抽出物１を表４に示す濃度で添加した５％質量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭに交換し、さらに５日間培養した。培養終了後、トリプシン処理にて細胞をはがし、１．５ｍＬマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。得られた沈殿物は下記判定表３を基にその黒化状況を目視判定した。評価ではネガティブコントロールに５％質量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ、ポジティブコントロールに５０ｍＭ乳酸ナトリウムを含有する５％質量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭを用いた。評価結果を表４に示す。
【００４７】
【表３】
2011016760.tif 000004
【００４８】
【表４】
2011016760.tif 000005
【００４９】
表４から明らかなように、抽出物１のウケユリ球根の熱水抽出物には、濃度依存的な美白作用が認められた。このことから、ウケユリ球根の抽出物には、美白作用が認められ、優れた保湿効果を有することが明らかとなった。
【００５０】
［試験例４］ヒト表皮角化細胞過酸化脂質耐性作用（抗酸化作用）
ヒト表皮角化細胞ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には１０質量％のＦＢＳを添加したＤＭＥＭを用いた。２４時間後、抽出物５を表５に示す濃度で添加した１０重量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに２４時間培養した。任意濃度のｔ−ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅを添加したＨＡＮＫ’Ｓ（＋）溶液に交換し、２時間培養した。さらに、１５０μｇ／ｍｌニュートラルレッドを含有するＰＢＳ（−）に交換し、３７℃にて２時間培養した。次に１％酢酸を含む５０％エタノール水溶液に交換し、細胞内に取りこまれたニュートラルレッドを抽出し、抽出液の５４０ｎｍの吸光度を測定した。評価結果をｔ−ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅ無添加のコントロールにおける細胞生存率を１００としたときの相対値にて表５に示す。
【００５１】
【表５】
2011016760.tif 000006
【００５２】
表５から明らかなように、抽出物５のウケユリカルスのエタノール水溶液抽出物には、有意なヒト表皮角化細胞過酸化脂質耐性作用が認められた。このことから、ウケユリカルスの抽出物には、ヒト表皮角化細胞過酸化脂質耐性作用が認められ、優れた抗酸化効果を有することが明らかとなった。
【００５３】
［処方例１］乳液
（１）スクワラン                                            １０．０（質量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン                            ４．０
（３）水素添加パーム核油                                      ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質                                    ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）                     １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン                              １．０
（７）グリセリン                                              ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル                                ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー                                ０．１５
（１０）精製水                                              ５３．８５
（１１）アルギニン（１質量％水溶液）                        ２０．０
（１２）抽出物１                                              ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、（１１）と（１２）を順次加え、均一に混合する。
【００５４】
［処方例２］化粧水
（１）エタノール                                            １５．０（質量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油           ０．３
（３）香料                                                    ０．１
（４）精製水                                                ７８．３８
（５）クエン酸                                                ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム                                      ０．１
（７）グリセリン                                              １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース                              ０．１
（９）抽出物２                                                ５．０
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。溶解後、（４）〜（８）を順次添加した後、十分に攪拌し、（９）を加え、均一に混合する。
【００５５】
［処方例３］クリーム
（１）スクワラン                                            １０．０（質量％）
（２）ステアリン酸                                            ２．０
（３）水素添加パーム核油                                      ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質                                    ０．１
（５）セタノール                                              ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン                        ２．０
（７）グリセリン                                            １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル                                ０．１
（９）アルギニン（２０質量％水溶液）                        １５．０
（１０）精製水                                              ３６．７
（１１）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液）          １５．０
（１２）抽出物３                                              ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（１１）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（１２）を加え、均一に混合する。
【００５６】
［処方例４］美容液
（１）精製水                                                ２７．４５（質量％）
（２）グリセリン                                            １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル                                    １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液）            １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム（１質量％水溶液）                １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル                            １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル                  ３．０
（８）Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸
ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル）              ２．０
（９）硬化パーム油                                            ２．０
（１０）スクワラン（オリーブ由来）                            １．０
（１１）ベヘニルアルコール                                    ０．７５
（１２）ミツロウ                                              １．０
（１３）ホホバ油                                              １．０
（１４）１，３−ブチレングリコール                          １０．０
（１５）Ｌ−アルギニン（１０質量％水溶液）                    ２．０
（１６）抽出物４                                              ５．０
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、５０℃にて（１５）を加える。さらに４０℃まで冷却し、（１６）を加え、均一に混合する。
【００５７】
［処方例５］水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー                                ０．５（質量％）
（２）精製水                                                ７８．７
（３）水酸化ナトリウム（１０質量％水溶液）                    ０．５
（４）エタノール                                            １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル                                ０．１
（６）香料                                                    ０．１
（７）抽出物５                                              １０．０
（８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油           ０．１
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に攪拌混合する。
【００５８】
［処方例６］クレンジング料
（１）スクワラン                                            ７７．０（質量％）
（２）イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル          １５．０
（３）精製水                                                  ３．０
（４）抽出物６                                                ５．０
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。
【００５９】
［処方例７］洗顔フォーム
（１）ステアリン酸                                          １６．０（質量％）
（２）ミリスチン酸                                          １６．０
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン                        ２．０
（４）グリセリン                                            ２０．０
（５）水酸化ナトリウム                                        ７．５
（６）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン                      １．０
（７）精製水                                                ３１．５
（８）抽出物１                                                ６．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合攪拌する。冷却を開始し、４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。
【００６０】
［処方例８］メイクアップベースクリーム
（１）スクワラン                                            １０．２（質量％）
（２）セタノール                                              ２．０
（３）グリセリントリ−２−エチルヘキサン酸エステル            ２．５
（４）親油型モノステアリン酸グリセリル                        １．０
（５）プロピレングリコール                                  １１．０
（６）ショ糖脂肪酸エステル                                    １．３
（７）精製水                                                ６５．４
（８）酸化チタン                                              １．０
（９）ベンガラ                                                ０．１
（１０）黄酸化鉄                                              ０．４
（１１）香料                                                  ０．１
（１２）抽出物２                                              ５．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに、（８）〜（１０）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１１）と（１２）の成分を加え、均一に混合する。
【００６１】
［処方例９］乳液状ファンデーション
（１）メチルポリシロキサン                                    ２．０（質量％）
（２）スクワラン                                              ５．０
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル                            ５．０
（４）セタノール                                              １．０
（５）ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタンモノステアリン酸エステル                    １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン                              ０．７
（７）１，３−ブチレングリコール                              ８．０
（８）キサンタンガム                                          ０．１
（９）パラオキシ安息香酸メチル                                ０．１
（１０）精製水                                              ５３．６
（１１）酸化チタン                                            ９．０
（１２）タルク                                                ７．４
（１３）ベンガラ                                              ０．５
（１４）黄酸化鉄                                              １．１
（１５）黒酸化鉄                                              ０．１
（１６）香料                                                  ０．１
（１７）抽出物３                                              ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１０）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（１１）〜（１５）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１６）と（１７）の成分を順次加え、均一に混合する。
【００６２】
［処方例１０］油中水型エモリエントクリーム
（１）流動パラフィン                                        ３０．０（質量％）
（２）マイクロクリスタリンワックス                            ２．０
（３）ワセリン                                                ５．０
（４）ジグリセリンオレイン酸エステル                          ５．０
（５）塩化ナトリウム                                          １．３
（６）塩化カリウム                                            ０．１
（７）プロピレングリコール                                    ３．０
（８）１，３−ブチレングリコール                              ５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル                                ０．１
（１０）抽出物４                                              ５．０
（１１）精製水                                              ４３．４
（１２）香料                                                  ０．１
製法：（５）と（６）を（１１）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に攪拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（１０）を（１１）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを攪拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１２）を加え、均一に混合する。
【００６３】
［処方例１１］パック
（１）精製水                                                ５８．９（質量％）
（２）ポリビニルアルコール                                  １２．０
（３）エタノール                                            １７．０
（４）グリセリン                                              ５．０
（５）ポリエチレングリコール（平均分子量１０００）            ２．０
（６）抽出物５                                                ５．０
（７）香料                                                    ０．１
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、攪拌しながら冷却を開始する。４０℃まで冷却し、（６）と（７）を加え、均一に混合する。
【００６４】
［処方例１２］入浴剤
（１）香料                                                    ０．３（質量％）
（２）抽出物６                                                ５．０
（３）炭酸水素ナトリウム                                    ４６．０
（４）硫酸ナトリウム                                        ４８．７
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。
【００６５】
［処方例１３］ヘアーワックス
（１）ステアリン酸                                            ３．０（質量％）
（２）マイクロクリスタリンワックス                            ２．０
（３）セチルアルコール                                        ３．０
（４）高重合メチルポリシロキサン                              ２．０
（５）メチルポリシロキサン                                    ５．０
（６）ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）
メチルポリシロキサン共重合体                  １．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル                                ０．１
（８）１，３−ブチレングリコール                              ７．５
（９）アルギニン                                              ０．７
（１０）精製水                                              ７０．６
（１１）抽出物１                                              ５．０
（１２）香料                                                  ０．１
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（１０）の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて（１１）と（１２）の成分を加え、均一に混合する。
【００６６】
［処方例１４］ヘアートニック
（１）エタノール                                            ４６．０（質量％）
（２）精製水                                                ４８．９
（３）抽出物２                                                ５．０
（４）香料                                                    ０．１
製法：（１）〜（４）の成分を混合、均一化する。
【００６７】
［処方例１５］飲料
（１）抽出物３                                                ８．０（質量％）
（２）エリスリトール                                          １．０
（３）クエン酸                                                ０．１
（４）ステビア                                                ０．０１
（５）精製水                                                ９０．８９
製法：（１）〜（５）を均一に混合する。
【００６８】
［処方例１６］錠剤
（１）抽出物４                                                ０．３０（質量部）
（２）還元麦芽糖水飴                                          ０．５３
（３）トウモロコシデンプン                                    ０．１５
（４）グリセリン脂肪酸エステル                                ０．０２
製法：（１）〜（３）を篩過して混合し、さらに（４）を添加して混合した。打錠機にて打錠を行い、全量３００ｍｇの錠剤を得た。
行い、全量３００ｍｇの錠剤を得た。