(57)【要約】      （修正有）【課題】薬剤において頻繁に使用されている陰・陽カウンターイオンの同時分析法。【解決手段】陽イオン及び陰イオンを含む薬剤のカウンターイオン含有試料を、両性イオン型官能基を有するカラムと、水、アセトニトリル及び酢酸アンモニウム緩衝液の混合溶液である溶離液と、を用いた親水性相互作用クロマトグラフィーに供する分離工程を含み、分離工程が、(i)アセトニトリル70〜90v/v%、緩衝液10〜40mmol/Lの混合溶液となるよう濃度調整された溶離液にて溶出する工程と、(iii)アセトニトリル40〜70v/v%、緩衝液30〜100mmol/Lとなるよう濃度調整された溶離液にて溶出する工程とを含み、分離工程において溶離液は、混合溶液中の水、アセトニトリル及び緩衝液の相互比率を変えることにより濃度調整される、陰陽カウンターイオンを同時に分析する。【選択図】図５
2011027501.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
陽イオン及び陰イオンを含む薬剤のカウンターイオン含有試料を、両性イオン型官能基を有する担体を含むカラムと、水、アセトニトリル及び酢酸アンモニウム緩衝液からなる混合溶液である溶離液と、を用いた親水性相互作用クロマトグラフィーに供する分離工程を含み、
前記分離工程が、
（i）アセトニトリル濃度が７０〜９０ｖ／ｖ％、緩衝液濃度が１０〜４０ｍｍｏｌ／Ｌの混合溶液となるように濃度調整された溶離液を用いて溶出する工程と、
（iii）アセトニトリル濃度が４０〜７０ｖ／ｖ％、緩衝液濃度が３０〜１００ｍｍｏｌ／Ｌとなるように濃度調整された溶離液を用いて溶出する工程と
を含み、
前記分離工程において、前記溶離液は、前記混合溶液中の水、アセトニトリル及び緩衝液の相互の比率を変えることによって濃度調整されるものである、陰陽カウンターイオンの同時分析法。
【請求項２】
前記分離工程において、前記工程（i）の後、前記工程（iii）の前に、
（ii）前記混合溶液中のアセトニトリル濃度が６０〜８０ｖ／ｖ％、緩衝液濃度が２０〜５０ｍｍｏｌ／Ｌである溶離液を用いて溶出する工程
をさらに含む、請求項１に記載の陰陽カウンターイオンの同時分析法。
【請求項３】
前記陰イオンが、マレイン酸イオン、硝酸イオン、臭化物イオン、塩化物イオン、リン酸イオン及び硫酸イオンからなる群から選ばれ、前記陽イオンが、カリウムイオン、ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、及びカルシウムイオンからなる群から選ばれる、請求項１又は２に記載の陰陽カウンターイオンの同時分析法。
【請求項４】
前記分離工程によって分離されたカウンターイオンが、蒸発光散乱検出器又は荷電化粒子検出器によって検出される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の陰陽カウンターイオンの同時分析法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬剤の陰陽カウンターイオンの同時分析法に関する。
【背景技術】
【０００２】
医学的な治療に用いられている全薬剤の５０％はイオン性の化合物であり塩の形態で存在する。これら化合物におけるAPI(Active Pharmaceutical Ingredients)のカウンターイオンの違いは、APIの薬剤としての物理化学的性質（例えば溶解性、結晶性及び吸湿性、並びに熱、光及び加水分解に対する安定性）や、薬物動態的性質（例えばバイオアベイラビリティ、剤形）に影響する。従って、医薬品開発においては、当該性質を制御する目的で、様々なカウンターイオンの評価及び選択が重要視されている。
【０００３】
一般的に、カウンターイオンの分析においては、分析機器として、イオンクロマトグラフィーやキャピラリー電気泳動が用いられており、検出器として、蒸発光散乱検出器や荷電粒子検出器等が用いられている。
【０００４】
イオンクロマトグラフィーを用いる方法においては、陰イオン及び陽イオンそれぞれに対して別個にカラム及び条件を定めて分析が行われる。
【０００５】
一方、親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）が、アミノ酸の分析や非イオン性界面活性剤の分析に用いられている（特許文献１、特許文献２参照）。
そして、この親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）を用いて、陰イオン及び陽イオンを同時に、且つそれぞれ複数のイオンを一斉に分析する試みも報告されている（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３参照）。具体的には、イソクラチック溶離法や２液グラジエント法などが報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平６−３３１６２０号公報
【特許文献２】特開平９−４３２１８号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】32nd The International Symposium on High Performance Liquid Phase Separations、ポスター第3
【非特許文献２】「カレント・ファーマスーティカル・アナリシス（Current Pharmaceutical Analysis）」、第４巻、ｐ．２５−３２、２００８年
【非特許文献３】「ＬＣＧＣアジア・パシフィック（LCGC Asia Pacific）」、第９巻、第３号、２００６年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
イオンクロマトグラフは、検出原理上、陰イオンと陽イオンを同時に分離することができない。このため、製薬メーカーにおける医薬開発段階においては、これに代わる簡易分析法の開発が急務とされている。
【０００９】
親水性相互作用クロマトグラフィーを用いた薬剤中カウンターイオンの一斉分析の試みは上述のように幾つか報告されているが、一斉分析法として確立されたものではない。
例えば、当該報告されている方法では、一価イオン（Na+、Br-、K+、Cl-）の分離が不十分であり、二価イオン（Ca2+）が検出されないという問題がある。
【００１０】
そこで、本発明の目的は、陰イオン及び陽イオンを同時に且つそれぞれのイオンの複数を一斉に分析することが可能な方法を提供することにある。特に、本発明の目的は、薬剤において頻繁に使用されている陰・陽カウンターイオンを同時に、且つ、例えば１０種程度の陰・陽カウンターイオンを一斉分析する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、溶離液として３種の液体からなるものを使用し、溶離液中における当該３種の液体それぞれの濃度を変化させることによって、従来では分離することが出来なかったイオンの分離を可能にする濃度制御を実現できることを見出し、本発明を完成するに至った。
なお、本発明においては、一斉分析と同時分析とは、同義で用いている。
【００１２】
本発明は、以下の発明を含む。
（１）
陽イオン及び陰イオンを含む薬剤のカウンターイオン含有試料を、両性イオン型官能基を有する担体を含むカラムと、水、アセトニトリル及び酢酸アンモニウム緩衝液からなる混合溶液である溶離液と、を用いた親水性相互作用クロマトグラフィーに供する分離工程を含み、
前記分離工程が、
（i）アセトニトリル濃度が７０〜９０ｖ／ｖ％、緩衝液濃度が１０〜４０ｍｍｏｌ／Ｌの混合溶液となるように濃度調整された溶離液を用いて溶出する工程と、
（iii）アセトニトリル濃度が４０〜７０ｖ／ｖ％、緩衝液濃度が３０〜１００ｍｍｏｌ／Ｌとなるように濃度調整された溶離液を用いて溶出する工程と
を含み、
前記分離工程において、前記溶離液は、前記混合溶液中の水、アセトニトリル及び緩衝液の相互の比率を変えることによって濃度調整されるものである、陰陽カウンターイオンの同時分析法。
【００１３】
本発明は、溶離液の組成の変化を、水、アセトニトリル及び緩衝液の３液相互の比率を変化させることによって実現するものである。本発明においては、このように溶離液の組成変化に３液が関与する系を、３液系と記載することがある。
【００１４】
（２）
前記分離工程において、前記工程（i）の後、前記工程（iii）の前に、
（ii）前記混合溶液中のアセトニトリル濃度が６０〜８０ｖ／ｖ％、緩衝液濃度が２０〜５０ｍｍｏｌ／Ｌである溶離液を用いて溶出する工程
をさらに含む、（１）に記載の陰陽カウンターイオンの同時分析法。
【００１５】
上記（１）又は（２）の方法において、分離工程に供される試料には、薬剤の賦形剤が含まれてよい。
【００１６】
（３）
前記陰イオンが、マレイン酸イオン、硝酸イオン、臭化物イオン、塩化物イオン、リン酸イオン及び硫酸イオンからなる群から選ばれ、前記陽イオンが、カリウムイオン、ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、及びカルシウムイオンからなる群から選ばれる、（１）又は（２）に記載の陰陽カウンターイオンの同時分析法。
【００１７】
（４）
前記分離工程によって分離されたカウンターイオンが、蒸発光散乱検出器又は荷電化粒子検出器によって検出される、（１）〜（３）のいずれかに記載の陰陽カウンターイオンの同時分析法。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によると、陰イオン及び陽イオンを同時に且つそれぞれのイオンの複数を一斉に分析することが可能な方法が可能になる。特に、本発明によると、薬剤において頻繁に使用されている陰・陽カウンターイオンを同時に、且つ、例えば１０種程度の陰・陽カウンターイオンを一斉分析する方法が可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】参考例１で得られた、アセトニトリル及び酢酸アンモニウム緩衝液を含む溶離液中のアセトニトリル濃度と、イオンの保持挙動との関係を示したグラフである。
【図２】参考例２で得られた、アセトニトリル及び酢酸アンモニウム緩衝液を含む溶離液中の酢酸アンモニウム緩衝液濃度と、イオンの保持挙動との関係を示したグラフである。
【図３】参考例３で得られた、アセトニトリル及び酢酸アンモニウム緩衝液を含む溶離液のｐＨと、イオンの保持挙動との関係を示したグラフである。
【図４】参考例４で得られた、カラムの温度とイオンの保持挙動との関係を示したグラフである。
【図５】実施例１で得られた、薬剤の１０種のカウンターイオンの分析結果を表すクロマトグフラフである。
【図６】実施例２で得られた、トラゾドン塩酸塩錠のイオン分析結果を表す。
【図７】実施例３で得られた、ラニチジン塩酸塩錠のイオン分析結果を表す。
【図８】実施例４で得られた、デキストロメトルファン臭化水素酸塩錠のイオン分析結果を表す。
【図９】実施例５で得られた、エナラプリルマレイン酸塩錠のイオン分析結果を表す。
【図１０】実施例６で得られた、ジクロフェナックナトリウム錠のイオン分析結果を表す。
【図１１】実施例７で得られた、アスパラカリウム錠のイオン分析結果を表す。
【図１２】比較例１で得られた、エナラプリルマレイン酸塩錠の陰イオン分析結果を表す。
【図１３】比較例１で得られた、エナラプリルマレイン酸塩錠の陽イオン分析結果を表す。
【図１４】実施例におけるイオン定量のために作成された各イオンについての検量線である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
［１．試料］
本発明において分析対象となる試料には、薬剤のカウンターイオンが含まれる。
カウンターイオンとしては、API(Active Pharmaceutical Ingredients)の対イオンになりうるものであればよく、有機イオン及び無機イオンを問わない。
陰イオンとしては、例えば、マレイン酸イオン、硝酸イオン、臭化物イオン、塩化物イオン、リン酸イオン及び硫酸イオンなどが挙げられる。
陽イオンとしては、例えば、カリウムイオン、ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、及びカルシウムイオンなどが挙げられる。
【００２１】
また、試料には、賦形剤が含まれてよい。賦形剤としては、薬剤に含まれうるもの、すなわち薬学的に許容されるものであれば特に限定されない。具体的には、ラクトース、デンプン、デキストリン、スクロース、グルコース、フルクトースなどが挙げられる。また、試料には、その他の薬剤に含まれうる不純物が含まれてよい。
【００２２】
［２．カラム］
本発明では陰イオン及び陽イオン（以下、単に、陰陽イオンと表記する場合がある）を同時に分離するため、カラムには、両性イオン型官能基が結合した担体が用いられる。
両性イオン性官能基としては、ベタイン基、すなわち正電荷と負電荷とを当該官能基内の隣り合わない位置に持ち、正電荷をもつ原子には解離しうる水素原子が結合していない官能基であることが好ましい。例えば、ホスホベタイン基、カルボキシベタイン基、スルホベタイン基などが挙げられる。
【００２３】
担体としては、公知のもの、例えばシリカゲル及びその他のポリマーなどを特に制限することなく用いることができる。
このようなカラムとして、例えば、Merk SeQuant社製のZIC(登録商標)-pHILICを用いることができる。ZIC-pHILICは、多孔質ポリマー基材に両性イオン型官能基として、スルホベタイン基が化学結合したカラムである。
【００２４】
［３．溶離液］
本発明で用いられる溶離液は、水、アセトニトリル及び緩衝液からなる混合溶液である。緩衝液としては、揮発性緩衝液が用いられる。具体的には酢酸アンモニウムが用いられる。
この溶離液においては、水と、アセトニトリルと、緩衝液との濃度をそれぞれ変化させる。濃度を変化させるべき対象をこの３液とすることによって、従来では分離することが出来なかったイオンの分離を可能にする緻密な濃度制御を実現することができる。
【００２５】
［４．各種パラメータと保持挙動との関係］
［４−１．有機溶媒比率と保持挙動との関係］
陰イオン、陽イオンともに、溶離液中のアセトニトリル比率が高いと保持が強くなる傾向にある。
また、陰イオン、陽イオンともに、多価イオンほど、上記の傾向が強くなる傾向にある。
【００２６】
［４−２．緩衝液濃度と保持挙動との関係］
陰イオンは、緩衝液濃度が大きくなると保持は大きくなる傾向にある。
陽イオンは、緩衝液濃度が大きくなると保持は小さくなる傾向にある。
【００２７】
［４−３．溶離液ｐＨと保持挙動との関係］
二価の陽イオン、リン酸イオン及びマレイン酸イオンは、溶離液のｐＨが高いほど保持が大きくなる傾向にある。
【００２８】
［４−４．カラム温度と保持挙動との関係］
カラム温度は、溶離液中のアセトニトリル濃度、緩衝液濃度、及びｐＨに比べて、保持挙動に与える影響は小さい。
【００２９】
［５．分離工程］
本発明においては、分離は親水性相互作用クロマトグラフィーを用いる。親水性相互作用クロマトグラフィーは、極性の高い固定相に極性の高い溶媒を移動相に使用する順相クロマトの一種で、水系の溶離液を用いるものである。本発明の分離工程は、以下の工程（i）及び（iii）を含み、適宜工程（ii）をさらに含むことができる。好ましくは、工程（i）、（ii）及び（iii）は、この順番で行われる。
【００３０】
分離工程においては、それぞれの工程において３液それぞれの濃度が相互に異なる段階溶離が行われる。また、それぞれの工程においては、特に記載した場合を除いては、下記に示した濃度範囲から選択した特定の濃度においてイソクラチック溶離が行われてもよいし、当該濃度範囲から選択した特定の濃度範囲内でグラジエント溶離が行われてもよい。また、下記に示した濃度範囲から特定の濃度を選択する際には、上記４に記載した傾向を考慮することができる。
【００３１】
［５−１．工程（i）］
本工程（i）は、試料中の一価イオンの溶出及び分離に適用することが好ましい。
工程（i）においては、アセトニトリル濃度が７０〜９０ｖ／ｖ％、緩衝液濃度が１０〜４０ｍｍｏｌ／Ｌである混合液となるように濃度調整した溶離液を用いる。
アセトニトリル濃度は、さらに、７５〜８５ｖ／ｖ％、例えば８０ｖ／ｖ％であってよい。また、緩衝液濃度は、さらに、１５〜３０ｍｍｏｌ／Ｌ、或いは１５〜２５ｍｍｏｌ／Ｌ、例えば２５ｍｍｏｌ／Ｌであってよい。
【００３２】
［５−２．工程（ii）］
本工程（ii）は賦形剤などの不純物が試料に含まれうる場合に、これらの不純物と、一価イオン及び多価イオンとの分離に適用することが好ましい。
【００３３】
工程（ii）においては、溶離液は、上記工程（i）における濃度と同じであってもよいし、アセトニトリル濃度が６０〜８０ｖ／ｖ％、緩衝液濃度が２０〜５０ｍｍｏｌ／Ｌである混合液となるように濃度調整されたものであってもよい。また、イソクラチック溶離が行われてもよいし、グラジエント溶離が行われてもよい。
【００３４】
特に、グラジエント溶離が行われることが好ましい。グラジエント溶離は、工程（i）に記載した溶離液の濃度範囲か、好ましくは上記の溶離液（アセトニトリル濃度が６０〜８０ｖ／ｖ％、緩衝液濃度が２０〜５０ｍｍｏｌ／Ｌである混合液）の濃度範囲から適宜選ばれうる濃度範囲内において、濃度勾配を設けることによって行うことができる。
【００３５】
［５−３．工程（iii）］
本工程（iii）は、試料中の多価イオンの溶出及び分離に適用することが好ましい。
工程（iii）においては、アセトニトリル濃度が４０〜７０ｖ／ｖ％、緩衝液濃度が３０〜１００ｍｍｏｌ／Ｌである混合液となるように濃度調整した溶離液を用いる。
アセトニトリル濃度は、さらに、５０〜７０ｖ／ｖ％、或いは６０〜７０ｖ／ｖ％、例えば６５ｖ／ｖ％であってよい。また、緩衝液濃度は、さらに、４０〜９０ｍｍｏｌ／Ｌ、５０〜９０ｍｍｏｌ／Ｌ、６０〜９０ｍｍｏｌ／Ｌ、７０〜９０ｍｍｏｌ／Ｌ、或いは８０〜９０ｍｍｏｌ／Ｌ、例えば８７．５ｍｍｏｌ／Ｌであってよい。
【００３６】
［６．検出工程］
上記工程で分離されたイオンの検出には、陰イオン及び陽イオンを同時に検出することができる検出器を、特に制限することなく用いることができる。このような検出器としては、蒸発光錯乱検出器（例えば島津製作所製；ELSD-LTII）や荷電化粒子検出器（ＥＳＡ製；Corona(R)CAD(R)）などが挙げられる。
【実施例】
【００３７】
以下に実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。
【００３８】
以下に、各種パラメータと保持挙動との関係について検証した例を参考例として示す。参考例１〜４においては、以下の条件が適用された。なお、全ての陰陽イオン標準品は、揮発性の対イオン（具体的にはアンモニウムイオン又は酢酸イオン）を有する試薬を採用した。
【００３９】
装置      ：高速液体クロマトグラフProminence（島津製作所製）
分析カラム：ZIC(R)-pHILIC（150mmL.×4.6mmI.D.）（Merck製）
溶離液    ：酢酸アンモニウム緩衝液（2,10,20,30mmol/L）
アセトニトリル水溶液（40,50,60,70,80v/v%）
カラム温度：30,40,50℃
流速      ：1.0mL/min
注入量    ：5μL
検出器    ：荷電化粒子検出器Corona(R)CAD(R)（ESA製）
ガス圧    ：35psi（N2）
フィルタ  ：なし
レンジ    ：500pA
対象成分  ：陰イオン−塩化物イオン、硫酸イオン、リン酸イオン、マレイン酸イオン、
臭化物イオン、硝酸イオン
陽イオン−ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、
マグネシウムイオン
【００４０】
［参考例１：有機溶媒比率と保持挙動との関係］
２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．０）とアセトニトリルとからなる溶離液を用い、カラム温度３０℃の条件下で、溶離液中のアセトニトリル濃度（換言すれば水比率）によって保持挙動が実際にどのように変わるかを示したグラフを図１に示す。図１においては、縦軸は保持の大きさ（保持係数k。以下において同じである）を表し、横軸は水比率（体積基準）を表す。
【００４１】
図１が示すとおり、陰イオン、陽イオンともに、溶離液中のアセトニトリル比率が高いと保持が大きく、その傾向が、多価イオンのほうが強いことがわかる。また、２液系では、アセトニトリル濃度のわずかな差でも、保持が極端に変わりうることがわかる。特にアセトニトリル濃度が７０ｖ／ｖ％を超える（水比率３０ｖ／ｖ％を下回る）と、保持が極端に大きくなることがわかる。すなわち、２液系では、保持挙動の調整が極めて難しい（すなわち２液で調整可能な範囲においては、保持挙動が大きく変動しやすく、他のイオンとピークが重なりやすい）ため、このことが、従来法においてイオンの分離を不可能にしてきたことが示唆される。
【００４２】
［参考例２：緩衝液濃度と保持挙動との関係］
酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．０）と８０ｖ／ｖ％のアセトニトリルとからなる溶離液を用い、カラム温度３０℃の条件下で、酢酸アンモニウム緩衝液濃度によって保持挙動が実際にどのように変わるかを示したグラフを図２に示す。図２においては、縦軸は保持の大きさを表し、横軸は緩衝液濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）を表す。
【００４３】
図２が示すとおり、陰イオンは、緩衝液濃度が大きくなると保持は大きくなり、陽イオンは、緩衝液濃度が大きくなると保持は小さくなっていることがわかる。また、陰イオンは、１０ｍｍｏｌ／Ｌを超えると保持はほぼ一定になることがわかる。
【００４４】
［参考例３：溶離液ｐＨと保持挙動との関係］
２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム緩衝液と８０ｖ／ｖ％アセトニトリルとからなる溶離液を用い、カラム温度３０℃の条件下で、酢酸アンモニウム緩衝液のｐＨによって保持挙動が実際にどのように変わるかを示したグラフを図３に示す。図３においては、縦軸は保持の大きさを表し、横軸はｐＨを表す。図３が示すとおり、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、リン酸イオン及びマレイン酸イオンは、溶離液のｐＨが高いほど保持が大きくなっていることがわかる。
【００４５】
［参考例４：カラム温度と保持挙動との関係］
２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．０）と８０ｖ／ｖ％アセトニトリルとからなる溶離液を用い、カラム温度によって保持挙動が実際にどのように変わるかを示したグラフを図４に示す。図４においては、縦軸は保持の大きさを表し、横軸はカラム温度を表す。図４が示すとおり、カラム温度による保持挙動に与える影響は小さい。
【００４６】
以下に、本発明の方法によってカウンターイオンの一斉分析を行った実施例を示す。実施例では、以下の条件が適用された。
【００４７】
装置      ：高速液体クロマトグラフProminence（島津製作所製）
分析カラム：ZIC(R)-pHILIC（150mmL.×4.6mmI.D.）（Merck製）
溶離液    ：（Ａ）水
（Ｂ）250mmol/L酢酸アンモニウム緩衝液（pH5.0）
（Ｃ）アセトニトリル
溶離法    ：３液系
カラム温度：30℃
流速      ：1.0mL/min
注入量    ：5μL
検出器    ：荷電化粒子検出器Corona(R)CAD(R)（ESA製）
ガス圧    ：35psi（N2）
フィルタ  ：なし
レンジ    ：500pA
対処成分  ：陰イオン−塩化物イオン、硫酸イオン、リン酸イオン、マレイン酸イオン、
臭化物イオン、硝酸イオン
陽イオン−ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、
マグネシウムイオン
【００４８】
［実施例１：３液系による１０種カウンターイオンの一斉分析］
薬剤に頻繁に用いられる１０種のカウンターイオンについて、一斉分析を行った。なお、全ての陰陽イオン標準品は、揮発性の対イオン（具体的にはアンモニウムイオン又は酢酸イオン）を有する試薬を採用した。また、ボイドマーカー（t0）としてアントラセンを使用した。
【００４９】
溶離液の組成のコントロールは、３液系によって行った。
一価イオンの溶出及び分離を目的とした工程（i）では、溶離液中のアセトニトリル濃度を８０ｖ／ｖ％、酢酸アンモニウム緩衝液の濃度を２０ｍｍｏｌ／Ｌに調整したイソクラチック溶離を行った。
賦形剤などの不純物の溶出を目的とした工程（ii）では、  溶離液中のアセトニトリル濃度については８０ｖ／ｖ％から６５ｖ／ｖ％の勾配、酢酸アンモニウム緩衝液の濃度については２０ｍｍｏｌ／Ｌから３５ｍｍｏｌ／Ｌの勾配を設けるように調整したグラジエント溶離を行った。
多価イオンの溶出及び分離を目的とした工程（iii）では、溶離液中のアセトニトリル濃度を６５ｖ／ｖ％、酢酸アンモニウム緩衝液の濃度を８７．５ｍｍｏｌ／Ｌに調整したイソクラチック溶離を行った。
【００５０】
一斉分析の結果を図５に示す。図５が示すように、１０種全てのイオンが、完全に分離されて検出された。
【００５１】
［実施例２：製剤（トラゾドン塩酸塩錠）の分析］
以下のようにして製剤の前処理を行った。
有効成分トラゾドン塩酸塩２５．０ｍｇを含む錠剤を１錠粉砕し、５ｍＬの水を加えて３０分間超音波を照射後、遠心分離し、上澄みを水／アセトニトリル＝５／５（体積比）混合溶媒で５倍希釈した。
得られた試料を、実施例１と同じ条件に供した。得られた分析結果を図６に示す。
【００５２】
［実施例３：製剤（ラニチジン塩酸塩錠）の分析］
以下のようにして製剤の前処理を行った。
有効成分ラニチジン塩酸塩１６８ｍｇを含む錠剤を１錠粉砕し、５０ｍＬの水を加えて３０分間超音波を照射後、遠心分離し、上澄みを水／アセトニトリル＝５／５（体積比）混合溶媒で５倍希釈した。
得られた試料を、実施例１と同じ条件に供した。得られた分析結果を図７に示す。
【００５３】
［実施例４：製剤（デキストロメトルファン臭化水素塩錠）の分析］
以下のようにして製剤の前処理を行った。
有効成分デキストロメトルファン臭化水素塩１５ｍｇを含む錠剤を１錠粉砕し、５ｍＬの水を加えて３０分間超音波を照射後、遠心分離し、上澄みを水／アセトニトリル＝５／５（体積比）混合溶媒で５倍希釈した。
得られた試料を、実施例１と同じ条件に供した。得られた分析結果を図８に示す。
【００５４】
［実施例５：製剤（エナラプリルマレイン酸塩錠）の分析］
以下のようにして製剤の前処理を行った。
有効成分エナラプリルマレイン酸塩２．５ｍｇを含む錠剤を１錠粉砕し、３ｍＬの水を加えて３０分間超音波を照射後、遠心分離し、上澄みを水／アセトニトリル＝５／５（体積比）混合溶媒で５倍希釈した。
得られた試料を、実施例１と同じ条件に供した。得られた分析結果を図９に示す。
【００５５】
［実施例６：製剤（ジクロフェナックナトリウム錠）の分析］
以下のようにして製剤の前処理を行った。
有効成分ジクロフェナックナトリウム２５ｍｇを含む錠剤を１錠粉砕し、５ｍＬの水を加えて３０分間超音波を照射後、遠心分離し、上澄みを水／アセトニトリル＝５／５（体積比）混合溶媒で５倍希釈した。
得られた試料を、実施例１と同じ条件に供した。得られた分析結果を図１０に示す。
【００５６】
［実施例７：製剤（アスパラカリウム錠）の分析］
以下のようにして製剤の前処理を行った。
有効成分Ｌ−アスパラギン酸カリウム３００ｍｇを含む錠剤を１錠粉砕し、２００ｍＬの水を加えて３０分間超音波を照射後、遠心分離し、上澄みを水／アセトニトリル＝５／５（体積比）混合溶媒で５倍希釈した。
得られた試料を、実施例１と同じ条件に供した。得られた分析結果を図１１に示す。
【００５７】
［比較例１：イオンクロマトグラフィーによる製剤の分析］
［エナラプリルマレイン酸塩錠の分析］
実施例５に記載の方法で前処理して調製した試料に、制酸目的で炭酸水素ナトリウムを加え、精製水を用いて１０〜２０倍に希釈し、イオンクロマトグラフProminence HIC-NS（島津製作所製）を用いたイオンクロマトグラフィーに供した。
イオンクロマトグラフィーの条件は、以下のとおりである。
【００５８】
（陰イオン分析用）
カラム      ：Shim-pack IC-A3（150mmL.×4.6mm I.D.）
溶離液      ：8mmol/L p-ヒドロキシ安息香酸
3.2mmol/L Bis-tris、50mmol/L ホウ酸
カラム温度  ：40℃
流量        ：1.2mL/min
注入量      ：50μL
【００５９】
（陽イオン分析用）
カラム      ：Shim-pack IC-A4（150mmL.×4.6mm I.D.）
溶離液      ：2.5mmol/L しゅう酸
カラム温度  ：40℃
流量        ：1.0mL/min
注入量      ：50μL
【００６０】
陰イオン分析結果を示すクロマトグラフを図１２に、陽イオン分析結果を示すクロマトグラフを図１３に示す。
【００６１】
［その他の製剤の分析］
トラゾドン塩酸塩錠、ラニチジン塩酸塩錠、デキストロメトルファン臭化水素塩錠、ジクロフェナックナトリウム錠、アスパラカリウム錠についても、上記と同様の分析に供した。
【００６２】
<<製剤の分析結果>>
実施例２〜７（一斉分析法）で得られた全ての製剤の分析結果と、比較例１（イオンクロマトグラフィー）で得られた全ての製剤の分析結果とを、それらの製剤情報とともに表１に示す。なお、図１４に示す検量線を作成し、定量はこの検量線に基づいて行った。
【００６３】
【表１】
2011027501.tif 000003
【００６４】
表１より、本発明の方法を用いて製剤を分析した結果、回収率は９４〜１０３％であった。また、本発明の方法による分析の結果、イオンクロマトグラフィーを用いた比較例の方法と同等の定量値が得られたことを確認した。
【図１】
2011027501.tif 000004
【図２】
2011027501.tif 000005
【図３】
2011027501.tif 000006
【図４】
2011027501.tif 000007
【図５】
2011027501.tif 000008
【図６】
2011027501.tif 000009
【図７】
2011027501.tif 000010
【図８】
2011027501.tif 000011
【図９】
2011027501.tif 000012
【図１０】
2011027501.tif 000013
【図１１】
2011027501.tif 000014
【図１２】
2011027501.tif 000015
【図１３】
2011027501.tif 000016
【図１４】
2011027501.tif 000017