(57)【要約】【課題】溶液における染料凝集を阻止し得、デンドリマーを形成しやすくさせ、８００ｎｍを越えて吸収または放射し得、望ましい光学物理特性を有し、組織特異的ターゲッティング能力が賦与されている染料を提供すること。【解決手段】本発明は、腫瘍検出を促進するための低分子量生体分子‐染料コンジュゲートの組成物、および前記組成物の製造方法に関するものである。本発明組成物は、染料分子の蛍光効率を保ち、溶液中では凝集せず、スターバストデンドリマーを形成し、近赤外線領域(８００ｎｍを越える)での光線を吸収または放射し得、そして組織特異的とされ得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書中に記載される発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２０００年１月１８日付け出願番号第０９／４８４３１９号の一部継続出願である。
【０００２】
（発明の分野）
この発明は、概して診断および治療用、特に腫瘍の視覚化および検出用の生物活性分子とのシアニン染料バイオコンジュゲートの組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
電磁スペクトルの可視および近赤外線領域における光を吸収および放射する幾つかの染料は、生物適合性があり、モル吸光率が高く、および／または蛍光量子収量が高い故に最近様々な生物医学的適用例に使用されている。造影剤としての染料に関連した光学モダリティーの高い感度は核医学の場合と相応しており、電離放射線の望ましくない作用を伴うことなく器官および組織の視覚化が可能となる。
【０００４】
近赤外線(ＮＩＲ)領域における吸収および放射が強いシアニン染料は、生物組織がこの領域では光学的に透過性であるため特に有用である(B.C.Wilson、Opticalproperties of tissues(「組織の光学特性」)、Encyclopedia of Human Biology、１９９１、５、５８７−５９７)。例えば、ＮＩＲ領域で吸収および放射するインドシアニングリーンは、心拍出量、肝機能および肝臓血流量をモニターするのに使用されており（Y‐L.Heら、Measurementof blood volume using indocyanine green measured with pulse-spectrometry: Itsreproducibility and reliability(「パルス分光法で測定される インドシアニングリーンを用いた血液量の測定：その再現性および信頼性」)、CriticalCare Medicine、１９９８、２６(８)、１４４６−１４５１、J.Caesarら、The use of Indocyanine green inthe measurement of hepatic blood flow and as a test of hepatic function(「肝臓血流量測定および肝機能検査におけるインドシアニングリーンの使用」)、Clin.Sci.１９６１、２１、４３−５７）、そしてその官能性誘導体は、診断目的用に生体分子をコンジュゲートするのに使用されている（R.B.Mujumdarら、Cyaninedye labeling reagents: Sulfoindocyanine succinimidyl esters(「シアニン染料標識試薬：スルホインドシアニンスクシニミジルエステル類」)、BioconjugateChemistry、１９９３、４(２)、１０５−１１１、米国特許第５４５３５０５号、ＷＯ９８／４８８４６、ＷＯ９８／２２１４６、ＷＯ９６／１７６２８、ＷＯ９８／４８８３８）。
【０００５】
シアニン染料誘導体の使用における主たる欠点は、肝臓によるこれらの染料の急速なクリアランスにより生じる肝胆汁性毒性に関する可能性である(G.R.Cherrickら、Indocyanine green: Observations on its physicalproperties,plasmadecay,and hepatic extraction(「インドシアニングリーン：その物理特性、血漿崩壊および肝臓抽出に関する観察」)、J.ClinicalInvestigation、１９６０、３９、５９２−６００)。これは、溶解状態のシアニン染料が凝集体を形成する傾向があり、それらが肝臓のクッパー細胞により吸収され得ることに関連している。
【０００６】
この問題を回避する様々な試みはこれまでのところあまり有効ではなかった。典型的には、親水性ペプチド、ポリエチレングリコールまたはオリゴサッカリドコンジュゲートが使用されたが、これらは長期循環性産物を生じるため、結局は肝臓により依然としてクリアランスされる。現行のシアニンおよびインドシアニン染料系に伴なう別の大きな問題点は、これらの染料の吸収および放射特性における大きな変化を誘発する能力の範囲にそれらが限界を示すことである。様々なヘテロ原子および環状部分をこれらの染料のポリエン鎖に組込む試みはこれまでに為されているが（L.Strekowskiら、Substitution reactions of a nucleofugal group inhetamethine cyanine dyes(「ヘタメチンシアニン染料における離核基の置換反応」)、J.Org.Chem.、１９９２、５７、４５７８−４５８０、N.NarayananおよびG.Patonay、A new method for the synthesis of heptamethine cyanine dyes:Synthesisof new near infrared fluorescent labels(「ヘプタメチンシアニン染料の新規合成方法：新規近赤外線蛍光標識の合成」)、J.Org.Chem.、１９９５、６０、２３９１−２３９５、米国特許第５７３２１０４号、同５６７２３３３号および同５７０９８４５号）、生成した染料系は、特に光音響的診断適用が非常に敏感である８３０ｎｍを越える、吸収および放射最大値に大した差異は示さない。それらはまた、肝臓吸収を促進する突起した疎水性コアを有する。さらに、ほとんどのシアニン染料は、生物医学適用に有用である、スターバーストデンドリマーの形成能を有していない。
【０００７】
腫瘍検出目的の場合、多くの慣用的染料は、正常および異常の両組織に対する傷害効果が高いためインビトロ適用例には有用である。他の染料は、特定器官または組織に関する特異性を欠くため、体の特異領域に染料を送達させるためには生物活性担体、例えばタンパク質、ペプチド、炭水化物などに結合されなければならない。近赤外線染料および染料−生体分子コンジュゲートの用途に関する幾つかの試験が既に発表されている（G.Patonayおよび M.D.Antoine、Near-Infrared Fluorogenic Labels:NewApproach to an Old Problem(「近赤外線蛍光原標識：古い問題への新規取組み方法」)、Analytical Chemistry、１９９１、６３：３２１Ａ−３２７Ａおよびそれらの参考文献：M.Brinkley、ABrief Survey of Methods for Preparing Protein Conjugates with Dyes, Haptens,andCross-Linking Reagents(「染料、ハプテンおよび架橋試薬によるタンパク質コンジュゲートの製造方法の簡単な概観」)、Perspectivesin Bioconjugate Chemistry１９９３、５９−７０頁、C.Meares(編)、ＡＣＳパブリケーション、ワシントンＤＣ、J.Slavik、FluorescentProbes in Cellular and Molecular Biology、１９９４、ＣＲＣプレス、インコーポレイテッド、米国特許第５４５３５０５号、ＷＯ９８／４８８４６、ＷＯ９８／２２１４６、ＷＯ９６／１７６２８、ＷＯ９８／４８８３８）。
【０００８】
特に興味深いのは、送達ビークルとしての抗体または他の大型タンパク質担体、例えばトランスフェリンによる腫瘍細胞のターゲッティングである(A.Beckerら、“Transferrin Mediated Tumor Delivery of Contrast Mediafor Optical Imaging and Magnetic Resonance Imaging”(「光学的画像法および磁気共鳴画像法用造影剤のトランスフェリン仲介腫瘍送達」)、生物医学的光学集会、１月２３−２９日、１９９９年、サンホセ、カリフォルニア)。上記方法は、核医学適用において広範に使用されている。染料の分子体積は担体よりかなり小さいため、その主たる利点は担体の組織特異性の保持である。しかしながら、この方法は、腫瘍細胞への高分子量バイオコンジュゲートの拡散が極めて望ましくないという点で幾つかの深刻な限界を有しており、さらに固形腫瘍では正味正の圧力が加わることにより複雑になる(R.K.Jain、Barriersto Drug Delivery in Solid Tumors(「固形腫瘍における薬剤送達に対する障害」）、Scientific American １９９４、２７１：５８−６５)。さらに、一般に多くの染料および特にシアニン染料は、水性媒質中で凝集体を形成することにより蛍光クエンチングを誘導する傾向がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従って、溶液における染料凝集を阻止し得、デンドリマーを形成しやすくさせ、８００ｎｍを越えて吸収または放射し得、望ましい光学物理特性を有し、組織特異的ターゲッティング能力が賦与されている染料が要望される。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の要約）
本発明は、腫瘍検出を促進するための低分子量生体分子‐染料コンジュゲートの組成物、および前記組成物の製造方法に関するものである。本発明組成物は、染料分子の蛍光効率を保ち、溶液中では凝集せず、スターバストデンドリマーを形成し、近赤外線領域(８００ｎｍを越える)での光線を吸収または放射し得、そして組織特異的とされ得る。
【００１１】
一態様において、本発明組成物は、一般式１
【化４】
2011116773.tif 000002
［式中、Ｗ３およびＸ３は、同一または異なり得、−ＣＲ１Ｒ２、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｓｅから成る群から選ばれ、Ｙ３は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ３は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ１は単または二重結合であり、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１は、同一または異なり得、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓｅ−、−Ｐ−、−ＣＲ１Ｒ２、−ＣＲ１、アルキル、ＮＲ３および−Ｃ＝Ｏから成る群から選ばれ、Ａ１、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１は、一緒になって６−〜１２−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１２−員複素環状環を形成し得、ａ３およびｂ３は独立して０〜５であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ29〜Ｒ37は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリアルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ２０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ２０ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、シアノ、ニトロ、ハロゲン、サッカリド、ペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ��−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍは、独立して生物活性ペプチド、タンパク質、細胞、抗体、抗体フラグメント、サッカリド、グリコペプチド、ペプチド擬似物質、薬剤、薬剤ミミック、ホルモン、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃは、独立して１〜２０であり、並びにｂおよびｄは独立して１〜１００である］
で示されるシアニン染料を含む。
【００１２】
第二態様において、本発明組成物は、一般式２
【化５】
2011116773.tif 000003
［式中、Ｗ４およびＸ４は、同一または異なり得、−ＣＲ１Ｒ２、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｓｅから成る群から選ばれ、Ｙ４は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ４は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ２は単または二重結合であり、Ｂ２、Ｃ２およびＤ２は、同一または異なり得、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓｅ−、−Ｐ−、−ＣＲ１Ｒ２、−ＣＲ１、アルキル、ＮＲ３および−Ｃ＝Ｏから成る群から選ばれ、Ａ２、Ｂ２、Ｃ２およびＤ２は、一緒になって６−〜１２−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１２−員複素環状環を形成し得、ａ４およびｂ４は独立して０〜５であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ45〜Ｒ57は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリアルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ２０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ２０ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、シアノ、ニトロ、ハロゲン、サッカリド、ペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ��−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍは、独立して生物活性ペプチド、タンパク質、細胞、抗体、抗体フラグメント、サッカリド、グリコペプチド、ペプチド擬似物質、薬剤、薬剤ミミック、ホルモン、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃは、独立して１〜２０であり、並びにｂおよびｄは独立して１〜１００である］
で示されるシアニン染料を含む。
【００１３】
第三の態様において、本発明組成物は、一般式３
【化６】
2011116773.tif 000004
［式中、Ｗ５およびＸ５は、同一または異なり得、−ＣＲ１Ｒ２、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｓｅから成る群から選ばれ、Ｙ５は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ５は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ３は単または二重結合であり、Ｂ３、Ｃ３およびＤ３は、同一または異なり得、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓｅ−、−Ｐ−、−ＣＲ１Ｒ２、−ＣＲ１、アルキル、ＮＲ３および−Ｃ＝Ｏから成る群から選ばれ、Ａ３、Ｂ３、Ｃ３およびＤ１は、一緒になって６−〜１２−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１２−員複素環状環を形成し得、ａ５は独立して０〜５であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ58〜Ｒ66は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリアルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ２０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ２０ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、シアノ、ニトロ、ハロゲン、サッカリド、ペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍは、独立して生物活性ペプチド、タンパク質、細胞、抗体、抗体フラグメント、サッカリド、グリコペプチド、ペプチド擬似物質、薬剤、薬剤ミミック、ホルモン、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃは、独立して１〜２０であり、並びにｂおよびｄは独立して１〜１００である］
で示されるシアニン染料を含む。
【００１４】
第四の態様において、本発明組成物は、一般式４
【化７】
2011116773.tif 000005
［式中、Ｗ６およびＸ６は、同一または異なり得、−ＣＲ１Ｒ２、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｓｅから成る群から選ばれ、Ｙ６は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ６は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ４は単または二重結合であり、Ｂ４、Ｃ４およびＤ４は、同一または異なり得、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓｅ−、−Ｐ−、−ＣＲ１Ｒ２、−ＣＲ１、アルキル、ＮＲ３および−Ｃ＝Ｏから成る群から選ばれ、Ａ４、Ｂ４、Ｃ４およびＤ４は、一緒になって６−〜１２−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１２−員複素環状環を形成し得、ａ６は独立して０〜５であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ67〜Ｒ79は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリアルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ２０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ２０ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、シアノ、ニトロ、ハロゲン、サッカリド、ペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＯＨまたは−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍは、独立して生物活性ペプチド、タンパク質、細胞、抗体、抗体フラグメント、サッカリド、グリコペプチド、ペプチド擬似物質、薬剤、薬剤ミミック、ホルモン、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃは、独立して１〜２０であり、並びにｂおよびｄは独立して１〜１００である］
で示されるシアニン染料を含む。
【００１５】
下記の図面、詳細な説明および実施例を考えに入れると、本発明はさらに正しく認識されるはずである。
【００１６】
（図面の簡単な説明）
この特許の書類は、少なくとも一通のカラー図面を含む。カラー図面（複数も可）を伴なうこの特許のコピーは、特許庁に請求し、必要な料金を払えば提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ビスカルボン酸シアニン染料の合成に関する反応経路を示す。
【図２】テトラカルボン酸シアニン染料の合成に関する反応経路を示す。
【図３】ポリヒドロキシカルボン酸染料の合成に関する反応経路を示す。
【図４】非凝集性シアニン染料の合成に関する反応経路を示す。
【図５】長波長吸収性染料の合成に関する反応経路を示す。
【図６】シアニン染料バイオコンジュゲートの合成に関する反応経路を示す。
【図７】様々な腫瘍をもつラットへのインドシアニングリーン（ＩＣＧ）注射の２分および３０分後における画像を表す。
【図８】膵臓小葉癌（ＣＡ２０９４８）に罹ったラットにおけるＩＣＧ（図８Ａ）およびサイテート１（図８Ｂ）の取込みの比較を示す。
【図９】サイテート１注射後４５分（図９Ａ）および２７時間（図９Ｂ）における膵臓小葉癌（ＣＡ２０９４８）に罹ったラットの画像を示す。
【図１０】サイテート１による注射の約２４時間後における膵臓小葉癌（ＣＡ２０９４８）に罹ったラットから摘出された個々の器官の画像である。
【図１１】注射後２２時間のＡＲ４２−Ｊ腫瘍担持ラットにおけるボンベシネートの画像である。
【図１２】正常ラットの血液からのサイテート１のクリアランスプロフィールである。
【図１３】膵臓腫瘍担持ラットの血液からのサイテート１のクリアランスプロフィールである。
【図１４】正常ラットの血液からのサイテート２のクリアランスプロフィールである。
【図１５】膵臓腫瘍担持ラットの血液からのサイテート２のクリアランスプロフィールである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
図１は、ビスカルボン酸シアニン染料の合成に関する反応経路を示す。
【００１９】
図２は、テトラカルボン酸シアニン染料の合成に関する反応経路を示す。
【００２０】
図３は、ポリヒドロキシカルボン酸染料の合成に関する反応経路を示す。
【００２１】
図４は、非凝集性シアニン染料の合成に関する反応経路を示す。
【００２２】
図５は、長波長吸収性染料の合成に関する反応経路を示す。
【００２３】
図６は、シアニン染料バイオコンジュゲートの合成に関する反応経路を示す。
【００２４】
図７Ａ−Ｆは、様々な腫瘍をもつラットへのインドシアニングリーン（ＩＣＧ）注射の２分および３０分後における画像を表す。
【００２５】
図８Ａ−Ｂは、膵臓小葉癌（ＣＡ２０９４８）に罹ったラットにおけるＩＣＧ（図８Ａ）およびサイテート１（図８Ｂ）の取込みの比較を示す。
【００２６】
図９Ａ−Ｂは、サイテート１注射後４５分（図９Ａ）および２７時間（図９Ｂ）における膵臓小葉癌（ＣＡ２０９４８）に罹ったラットの画像を示す。
【００２７】
図１０は、サイテート１による注射の約２４時間後における膵臓小葉癌（ＣＡ２０９４８）に罹ったラットから摘出された個々の器官の画像である。
【００２８】
図１１は、注射後２２時間のＡＲ４２−Ｊ腫瘍担持ラットにおけるボンベシネートの画像である。
【００２９】
図１２は、正常ラットの血液からのサイテート１のクリアランスプロフィールである。
【００３０】
図１３は、膵臓腫瘍担持ラットの血液からのサイテート１のクリアランスプロフィールである。
【００３１】
図１４は、正常ラットの血液からのサイテート２のクリアランスプロフィールである。
【００３２】
図１５は、膵臓腫瘍担持ラットの血液からのサイテート２のクリアランスプロフィールである。
【００３３】
図１６は、正常ラットの血液からのサイテート４のクリアランスプロフィールである。
【００３４】
（発明の詳細な説明）
式１〜４で示される染料を含む本発明の新規組成物は、現在文献に報告されているものを凌ぐ顕著な利点を呈する。これらの本発明染料は、分子内および分子間の規則正しい疎水性相互作用を阻止することにより溶液中での凝集を阻止するスターバーストデンドリマーを形成し、生物活性分子を形成し易くするため染料発色団の近位に多重結合部位を有する。堅固で伸長した発色団バックボーンの存在により、それらの蛍光量子収量が高められ、それらの最大吸収が８００ｎｍ以上に伸ばされる。これらの染料への生体分子のコンジュゲーションは、容易に達成できるものである。
【００３５】
本発明のバイオコンジュゲートはまた、互いに極めて近接している１〜１０個の受容体ターゲッティング基を組込むことによりシアニンおよびインドシアニン染料構造の対称的性質を利用しており、その結果協同効果により受容体結合が大いに促進され得る。従って、１個またはそれ以上のターゲッティングドメインを含む幾つかのシアニン染料が製造され、生物活性についてインビボで試験されている。
【００３６】
式１〜４で示される本発明の染料−バイオコンジュゲートは、様々な生物医学的適用に有用である。これらには、臓器の断層撮影法、臓器機能のモニター、冠動脈造影、蛍光内視鏡検査、検出、イメージング(画像化)および腫瘍の治療、レーザー支援誘導手術、光音響的方法および音蛍光方法があるが、これらに限定されるわけではない。
【００３７】
前述の生物医学適用の幾つかを達成する実施態様を下記に示す。本発明の新規染料は、当業界で公知の方法に従い製造され、図１−５で説明されている。
【００３８】
図１は、ビス−カルボン酸シアニン染料に関する合成図を示しており、図式中、Ａ＝ＣＨ２またはＣＨ２ＯＣＨ２、Ｒ＝ＣＯＯＨ、Ｒ’＝ＣＯＯＨ、ＮＨＦｍｏｃ；ＣＯ２ｔ−Ｂｕ、ＳＯ３、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ（式１）またはＲ１、Ｒ２＝縮合フェニル（式２）。
【００３９】
図２は、テトラカルボン酸シアニン染料に関する合成図を示しており、図式中、Ａ＝ＣＨ２またはＣＨ２ＯＣＨ２、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ（式１）またはＲ１、Ｒ２＝縮合フェニル（式２）。
【００４０】
図３は、ポリヒドロキシカルボン酸シアニン染料に関する合成図を示している。
【００４１】
図４は、非凝集性シアニン染料に関する合成図を示している。
【００４２】
図５は、長波長吸収性の調整可能なシアニン染料に関する合成図を示している。
【００４３】
一態様において、本発明バイオコンジュゲートは、式１［ただし、Ｗ３およびＸ３は、同一または異なり得、−Ｃ(ＣＨ３)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)ＣＨ３、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)２、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＲ３Ｒ４)２、−ＮＲ３、および−Ｓ−から成る群から選ばれ、Ｙ３は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ３は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ１は単または二重結合であり、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１は、独立して−Ｏ−、−Ｓ−、ＮＲ３、（ＣＨ２）ａ−ＣＲ１Ｒ２、および−ＣＲ１から成る群から選ばれ、Ａ１、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１は、一緒になって６−〜１０−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１０−員複素環状環を形成し得、ａ３およびｂ３は独立して０〜３であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ29〜Ｒ37は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１２アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ１２ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、モノまたはオリゴサッカリド、２〜３０個のアミノ酸単位を有するペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍは、独立して２〜３０個のアミノ酸単位を含む生物活性ペプチド、抗体、モノまたはオリゴサッカリド、グリコペプチド、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃは、独立して１〜１０であり、並びにｂおよびｄは独立して１〜３０である］を有する。
【００４４】
第二の態様において、本発明バイオコンジュゲートは、一般式２［ただし、Ｗ４およびＸ４は、同一または異なり得、−Ｃ(ＣＨ３)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)ＣＨ３、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)２、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＲ３Ｒ４)２、−ＮＲ３、および−Ｓ−から成る群から選ばれ、Ｙ４は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ４は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ２は単または二重結合であり、Ｂ２、Ｃ２およびＤ２は、独立して−Ｏ−、−Ｓ−、ＮＲ３、（ＣＨ２）ａ−ＣＲ１Ｒ２、および−ＣＲ１から成る群から選ばれ、Ａ２、Ｂ２、Ｃ２およびＤ２は、一緒になって６−〜１０−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１０−員複素環状環を形成し得、ａ４およびｂ４は独立して０〜３であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ45〜Ｒ57は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１２アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ１２ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、モノまたはオリゴサッカリド、２〜３０個のアミノ酸単位を有するペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍは、独立して２〜３０個のアミノ酸単位を含む生物活性ペプチド、抗体、モノまたはオリゴサッカリド、グリコペプチド、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃは、独立して１〜１０であり、並びにｂおよびｄは独立して１〜３０である］を有する。
【００４５】
第三の態様において、本発明バイオコンジュゲートは、一般式３［ただし、Ｗ５およびＸ５は、同一または異なり得、−Ｃ(ＣＨ３)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)ＣＨ３、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)２、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＲ３Ｒ４)２、−ＮＲ３、および−Ｓ−から成る群から選ばれ、Ｙ５は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ５は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ３は単または二重結合であり、Ｂ３、Ｃ３およびＤ３は、独立して−Ｏ−、−Ｓ−、ＮＲ３、（ＣＨ２）ａ−ＣＲ１Ｒ２、および−ＣＲ１から成る群から選ばれ、Ａ３、Ｂ３、Ｃ３およびＤ３は、一緒になって６−〜１０−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１０−員複素環状環を形成し得、ａ５は０〜３であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ58〜Ｒ66は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１２アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ１２ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、モノまたはオリゴサッカリド、２〜３０個のアミノ酸単位を有するペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍは、独立して２〜３０個のアミノ酸単位を含む生物活性ペプチド、抗体、モノまたはオリゴサッカリド、グリコペプチド、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃは、独立して１〜１０であり、並びにｂおよびｄが独立して１〜３０である］を有する。
【００４６】
第四の態様において、本発明バイオコンジュゲートは、一般式４［ただし、Ｗ６およびＸ６は、同一または異なり得、−Ｃ(ＣＨ３)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)２、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＲ３Ｒ４)２、−ＮＲ３、および−Ｓ−から成る群から選ばれ、Ｙ６は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ６は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ４は単または二重結合であり、Ｂ４、Ｃ４およびＤ４は、独立して−Ｏ−、−Ｓ−、ＮＲ３、（ＣＨ２）ａ−ＣＲ１Ｒ２、および−ＣＲ１から成る群から選ばれ、Ａ４、Ｂ４、Ｃ４およびＤ４は、一緒になって６−〜１０−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１０−員複素環状環を形成し得、ａ６は０〜３であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ67〜Ｒ79は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１２アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ１２ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、モノまたはオリゴサッカリド、２〜３０個のアミノ酸単位を有するペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍは、独立して２〜３０個のアミノ酸単位を含む生物活性ペプチド、抗体、モノまたはオリゴサッカリド、グリコペプチド、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃは、独立して１〜１０であり、並びにｂおよびｄは独立して１〜３０である］を有する。
【００４７】
この発明はまた、固相または液中合成方法により本発明染料をペプチドまたは生体分子にコンジュゲートする方法に関するものである。図６は、固体支持体における自動ペプチド合成法を用いて、図１−５のシアニン染料を組込むバイオコンジュゲートの合成図を示すもので、式中、Ａ＝ＣＨ２またはＣＨ２ＯＣＨ２、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ（式１）またはＲ１、Ｒ２＝縮合フェニル（式２）、ＡＡ＝アミノ酸、Ｒ＝ＣＯＮＨペプチド、Ｒ'＝Ｒ（ビスコンジュゲート）またはＣＯＯＨ（モノコンジュゲート）、Ｐ＝固体支持体、Ｐ'＝存在または不存在はＲ'の定義により異なる。
【００４８】
この発明はまた、蛍光クエンチングの阻止方法に関するものである。シアニン染料は一般に水性媒質中で凝集体を形成し、蛍光クエンチングを誘導することが知られている。染料中における疎水性コアの存在が蛍光クエンチングを誘発する場合、生物適合性有機溶媒、例えば１−５０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を加えると、凝集が阻止されることにより蛍光が回復し、インビボ臓器視覚化が可能となった。
【００４９】
本発明染料−生体分子コンジュゲートは、腫瘍または他の異常の検出および処置を目的とした光学断層撮影法、内視鏡検査、光音響的および音蛍光的適用法に使用される。
【００５０】
染料‐生体分子コンジュゲートはまた、限局性治療にも使用される。これは、ポルフィリンまたは他のレーザー光学治療剤をバイオコンジュゲートに結合させ、適当な波長の光線を照射して薬剤を活性化し、そして異常を検出および／または処置することにより行われ得る。
【００５１】
本発明コンジュゲートはまた、腹腔鏡検査時の例えばソマトスタチンサブタイプ２（ＳＳＴ−２）陽性腫瘍の極微小転移検出用レーザー支援誘導手術、およびアテローム性硬化斑および血餅の診断を目的とした、コンジュゲートの血液クリアランスプロフィールをモニターすることによる、腫瘍および他の異常の存在検出に使用され得る。
【００５２】
本発明組成物は、経腸および非経口投与用診断および治療組成物に製剤化され得る。これらの組成物は、意図された投与型に適した慣用的医薬用担体および賦形剤と一緒に有効量の染料を含む。例えば、非経口製剤は、有利には滅菌水溶液または懸濁液中に本発明薬剤を含む。非経口組成物は、直接注射されるかまたは大量の全身投与用非経口組成物と混合され得る。上記溶液はまた、医薬的に許容し得る緩衝液を含み得、所望により電解質、例えば塩化ナトリウムを含んでいてもよい。
【００５３】
当業界で熟知されている通り、経腸投与用製剤は広範に変化し得る。一般に、上記製剤は液体であり、水溶液または懸濁液中に有効量の本発明薬剤を含む。上記経腸組成物は、所望により緩衝液、界面活性剤、揺変剤などを含み得る。経口投与用組成物はまた、香味料およびそれらの感覚刺激性の質を高める他の成分を含み得る。
【００５４】
診断組成物は、所望の増強を達成するのに有効な量で投与される。上記用量は、使用される特定染料、画像化される臓器または組織、使用されている画像化設備などにより広範に変化し得る。本発明の診断組成物は、常法で使用される。組成物は、患者、典型的には温血動物に全身的または画像化すべき臓器または組織へ局所的に投与され得、次いで患者をイメージング法にかける。
【００５５】
本発明組成物および方法は、多様な光学物理および化学特性を有する新規シアニンおよびインドシアニン染料の合成および用途にとって重要な方法を表す。この組合わせはまた、小分子ターゲッティング基を用いて光学的方法により腫瘍を画像化するための重要な方法を表す。下記実施例で本発明についてさらに詳述するが、それらは説明として示されたもので、いかなる意味でも本発明の範囲を制限する意図はないものとする。
【実施例】
【００５６】
（実施例）
実施例１
ビス(エチルカルボキシメチル)インドシアニン染料の合成（図１、Ｒ１、Ｒ２＝縮合フェニル、Ａ＝ＣＨ２、ｎ＝１およびＲ＝Ｒ'＝ＣＯ２Ｈ）
１,２−ジクロロベンゼン（４０ｍＬ）中１,１,２−トリメチル−［１Ｈ］−ベンゾ［ｅ］インドール（９.１ｇ、４３.５８ミリモル）および３−ブロモプロピオン酸（１０.０ｇ、６５.３７ミリモル）から成る混合物を１２時間１１０℃で加熱した。溶液を室温に冷却し、得られた赤色残留物を濾過し、アセトニトリル：ジエチルエーテル（１：１）混合物で洗浄した。得られた固体を真空乾燥すると、１０ｇ（６４％）の明褐色粉末が得られた。この固体の一部（６.０ｇ、１６.５６ミリモル）、グルタコンアルデヒドジアニルモノ塩酸塩（２.３６ｇ、８．２８ミリモル）および酢酸ナトリウムトリ水和物（２.９３ｇ、２１.５３ミリモル）をエタノール（１５０ｍＬ）中で９０分間還流させた。溶媒を濃縮後、４０ｍＬの２ＮＨＣｌ水溶液を残留物に加えた。混合物を遠心分離し、上清を傾瀉した。上清がほぼ無色になるまでこの手順を反復した。約５ｍＬの水：アセトニトリル（３：２）混合物を固体残留物に加え、凍結乾燥すると、２ｇの濃緑色フレークが得られた。化合物の純度は、１Ｈ−ＮＭＲおよび液体クロマトグラフィー−質量分光学的方法（ＬＣ−ＭＳ）により確立された。
【００５７】
実施例２
ビス(ペンチルカルボキシメチル)インドシアニン染料の合成（図１、Ｒ１、Ｒ２＝縮合フェニル、Ａ＝ＣＨ２、ｎ＝４およびＲ＝Ｒ'＝ＣＯ２Ｈ）
１,２−ジクロロベンゼン（２５０ｍＬ）中１,１,２−トリメチル−［１Ｈ］−ベンゾ［ｅ］インドール（２０ｇ、９５.６ミリモル）および６−ブロモヘキサン酸（２８.１ｇ、１４４.１ミリモル）から成る混合物を１２時間１１０℃で加熱した。緑色溶液を室温に冷却し、形成された褐色固体沈澱物を濾過により集めた。１,２−ジクロロベンゼンおよびジエチルエーテルで固体を洗浄後、得られた褐色粉末（２４ｇ、６４％）を室温で真空乾燥した。この固体の一部（４.０ｇ、９.８ミリモル）、グルタコンアルデヒドジアニルモノ塩酸塩（１.４ｇ、５ミリモル）および酢酸ナトリウムトリ水和物（１.８ｇ、１２.９ミリモル）をエタノール（８０ｍＬ）中で１時間還流させた。溶媒を濃縮後、２０ｍＬの２ＮＨＣｌ水溶液を残留物に加えた。混合物を遠心分離し、上清を傾瀉した。上清がほぼ無色になるまでこの手順を反復した。約５ｍＬの水：アセトニトリル（３：２）混合物を固体残留物に加え、凍結乾燥すると、約２ｇの濃緑色フレークが得られた。化合物の純度は、１Ｈ−ＮＭＲおよびＬＣ−ＭＳにより確立された。
【００５８】
実施例３
ビスエチルカルボキシメチルインドシアニン染料の合成（図１、Ｒ１、Ｒ２＝Ｈ、Ａ＝ＣＨ２、ｎ＝１およびＲ＝Ｒ'＝ＣＯ２Ｈ）
この化合物は実施例１と同じ要領で製造されたが、ただし出発材料として１,１,２−トリメチルインドールを使用した。
【００５９】
実施例４
ビス(エチルカルボキシメチル)インドシアニン染料の合成（図１、Ｒ１、Ｒ２＝縮合フェニル、Ａ＝ＣＨ２、ｎ＝１およびＲ＝Ｒ'＝ＣＯ２Ｈ）
この化合物は実施例１と同じ要領で製造されたが、ただし、ブロモプロピオン酸の代わりにω−ブロモヘキサオキシエチレングリコールプロピオリル酸を使用し、反応は１,２−ジメトキシプロパン中で行なわれた。
【００６０】
実施例５
ビスエチルカルボキシメチルインドシアニン染料の合成（図２、Ｒ１、Ｒ２＝縮合フェニル、Ａ＝ＣＨ２、およびｎ＝０）
５０ｍｌのジメチルホルムアミドおよびベンジルブロモアセテート（１６.０ｇ、７０ミリモル）の溶液を、１００ｍｌの三頚フラスコ中で攪拌した。固体重炭酸カリウム（７.８ｇ、７８ミリモル）を加えた。フラスコをアルゴンによりパージングし、氷浴で０℃に冷却した。攪拌混合物にエタノールアミン（１.９ｇ、３１ミリモル）および４ｍｌのジメチルホルムアミドの溶液を５分間かけて滴下した。滴下完了後、混合物を０℃で１時間攪拌した。氷浴を除去し、混合物を室温で一夜攪拌した。反応混合物を１００ｍｌのメチレンクロリドおよび１００ｍｌの飽和重炭酸ナトリウム溶液間に分配した。層を分離し、メチレンクロリド層を１００ｍｌの飽和重炭酸ナトリウム溶液で再洗浄した。水層を合わせ、２５ｍｌのメチレンクロリドで２回抽出した。メチレンクロリド層を合わせ、１００ｍｌの食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。メチレンクロリドを約３５℃で吸引装置により減圧除去し、そして残存しているジメチルホルムアミドを約４５℃で真空除去した。粗物質を真空ラインで一夜室温で放置した。
【００６１】
次いで、粗物質を１００ｍｌのメチレンクロリドに室温で溶かした。トリフェニルホスフィン（８.９１ｇ、３４ミリモル）を加え、攪拌しながら溶かした。アルゴンでのパージングを開始し、混合物を氷浴で０℃に冷却した。Ｎ−ブロモスクシンイミド（６.０５ｇ、３４ミリモル）を２分間にわたって分割して加えた。混合物を０℃で１.５時間攪拌した。メチレンクロリドを真空除去すると、紫色油状物が得られた。この油状物を一定して手動攪拌しながら２００ｍｌのエーテルで磨砕した。この期間中、油状物は非常に粘稠性になった。エーテル溶液を傾瀉し、油状物を１００ｍｌのエーテルで磨砕した。エーテル溶液を傾瀉し、油状物を再び１００ｍｌ分量のエーテルで磨砕した。エーテルを傾瀉し、エーテル溶液を合わせ、約２時間放置することにより、トリフェニルホスフィンオキシドを結晶化させた。エーテル溶液を結晶から傾瀉し、固体を１００ｍｌのエーテルで洗浄した。体積が約２５ｍｌとなるまで合わせたエーテル抽出物の体積を真空により低減化した。これを０℃で一夜放置した。エーテル（１０ｍｌ）を冷混合物に加え、混合して固体を懸濁させた。混合物を４５ｇのシリカゲルのカラムで濾過し、エーテルで溶離し、そして７５ｍｌフラクションを集めた。薄層クロマトグラフィーにより測定された、生成物を含むフラクションをプールし、エーテルを真空除去した。この結果、粗生成物１０.１ｇが得られた。この物質を、９：１ヘキサン：エーテルに変えながら、ヘキサンによるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにかけた。生成物含有フラクションをプールし、溶媒を真空除去した。この結果、７.４ｇ（５７％収率）の純粋生成物が得られた。
【００６２】
１０％パラジウム炭素（１ｇ）および１５０ｍｌのメタノール中ベンジルエステル（１０ｇ）の溶液から成る混合物を２時間２５ｐｓｉで水素化分解した。混合物をセライトで濾過し、残留物をメタノールで洗浄した。溶媒を濃縮すると、定量的収率で粘稠性油状物が得られた。
【００６３】
ブロミドと１,１,２−トリメチル−［１Ｈ］−ベンゾ［ｅ］インドールとの反応を実施例１と同じ要領で実施した。
【００６４】
実施例６
ビス（エチルカルボキシメチルジヒドロキシル）インドシアニン染料（図３）
ヒドロキシ−インドール化合物は、公知方法（P.L.Southwickら、「蛍光性バイオラベル用中間体としての（２,３,３−トリメチル−３−Ｈ−インドール−５−イル）酢酸誘導体の一ポットフィッシャー合成」(Onepot Fischer synthsis of (2,3,3-trimethyl-3-H-Iindol-5-yl)-acetic acidderivatives as intermediates for fluorescent biolabels)、Org.Prep.Proced.Int.Briefs、１９８８、２０(３)、２７９−２８４）により容易に製造される。室温で３０分間および還流温度で１分間酢酸（５０ｍＬ）中ｐ−カルボキシメチルフェニルヒドラジン塩酸塩（３０ミリモル、１当量）および１,１−ビス（ヒドロキシメチル）プロパノン（４５ミリモル、１.５当量）の反応により、固体残留物として（３,３−ジヒドロキシメチル−２−メチル−３−Ｈ−インドール−５−イル）酢酸が得られる。実施例５記載の要領で製造された３−ブロモプロピル−Ｎ,Ｎ−ビス（カルボキシメチル）アミンと中間体インドールとの反応および後続のインドール中間体とグルタコンアルデヒドジアニルモノ塩酸塩（実施例１参照）との反応により、目的生成物が得られる。
【００６５】
実施例７
ビス（プロピルカルボキシメチル）インドシアニン染料の合成（図４）
文献に記載（G.A.ReynoldsおよびK.H.Drexhage、「赤外線で吸収する安定したヘプタメチンピリリウム染料」（Stable heptamethine pyrylium dyes thatabsorb in the infrared）、J.Org.Chem.１９７７、４２（５）、８８５−８８８）の要領で中間体２−クロロ−１−ホルミル−３−ヒドロキシメチレンシクロヘキサンを製造した。等量（各々４０ｍＬ）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）およびジクロロメタンを混合し、溶液をアセトン−ドライアイス浴中で−１０℃に冷却した。アルゴン雰囲気下、ジクロロメタン中オキシ塩化リン（４０ｍＬ）を冷ＤＭＦ溶液に滴下した後、１０ｇのシクロヘキサノンを加えた。生成した溶液を室温に温まるまで放置し、６時間還流させた。室温に冷却後、混合物を氷冷水中に注ぎ、１２時間４℃で貯蔵した。濾過後、黄色粉末約８ｇが得られた。インドール中間体と環状ジアルデヒドの縮合は、実施例１記載の要領で実施される。さらにビスイソプロピリデンアセタール保護モノサッカリドによる染料の官能化は、文献に記載された方法により達成された（J.H.Flanaganら、時間経過順識別法を用いたＤＮＡ配列決定適用における塩基‐招集（コーリング）用近赤外線重原子修飾蛍光染料（Nearinfrared heavy-atom-modified fluorescent dyes for base-calling inDNA-sequencing application using temporaldiscrimination）、Anal.Chem.、１９９８、７０（１３）、２６７６−２６８４）。
【００６６】
実施例８
ビス（エチルカルボキシメチル）インドシアニン染料の合成（図５）
これらの染料は、実施例７記載の要領で製造される。これらの染料は赤外線領域で吸収する。図５に示された典型的な実例は、１０３６ｎｍでの予測吸収最大値を有する。
【００６７】
実施例９
ペプチドの合成
下記方法は、オクトレオテートの合成を目的とする。オクトレオテートのアミノ酸配列は、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ'−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ'−Ｔｈｒ（配列番号１）（ただし、Ｃｙｓ'は２個のシステインアミノ酸間における分子内ジスルフィド結合の存在を示す）である。この発明の他のペプチドは、場合によっては軽微な修飾を伴ない得る類似方法により製造された。
【００６８】
オクタペプチドは、アプライド・バイオシステムズ（４３２ＡモデルのＳＹＮＥＲＧＹペプチド・シンセサイザー）から市販されているペプチド合成装置を用いた自動フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）固相ペプチド合成法により製造された。最初のペプチドカートリッジは、２５マイクロモル割合でＦｍｏｃ−Ｔｈｒによる前荷重ワン樹脂を含んでいた。後続のカートリッジは、次のアミノ酸：Ｃｙｓ（Ａｃｍ）、Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）、Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）およびＴｙｒ（ｔ−Ｂｕ）に関する側鎖保護基を伴うＦｍｏｃ保護アミノ酸を含んでいた。アミノ酸カートリッジをペプチド合成装置に置き、Ｃ−末端からＮ−末端位置へ生成物を合成させた。カップリング反応は、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）／Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の存在下において７５マイクロモルの保護アミノ酸により実施された。ジメチルホルムアミド中２０％ピペリジンによりＦｍｏｃ保護基を除去した。合成完了後、チオール基をトリフルオロ酢酸タリウムにより閉環し、６時間トリフルオロ酢酸（８５％）：水（５％）：フェノール（５％）：チオアニソール（５％）を含む開裂混合物により固体支持体から生成物を開裂した。ペプチドをｔ−ブチルメチルエーテルにより沈澱させ、水：アセトニトリル（２：３）混合物により凍結乾燥した。ペプチドをＨＰＬＣにより精製し、ＬＣ／ＭＳにより分析した。
【００６９】
オクトレオチド、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ'−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ'−Ｔｈｒ−ＯＨ（配列番号２）（ただし、Ｃｙｓ'は２個のシステインアミノ酸間における分子内ジスルフィド結合の存在を示す）は、同じ手順により製造された。
【００７０】
ボンベシン類似体は同じ手順により製造されたが、トリフルオロ酢酸タリウムによる閉環は必要とされなかった。側鎖脱保護および樹脂からの開裂は、各々５０μＬのエタンジチオール、チオアニソールおよび水、および８５０μＬのトリフルオロ酢酸により実施された。２種の類似体が製造された：Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２（配列番号３）およびＧｌｙ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２（配列番号４）。
【００７１】
コレシストキニンオクタペプチド類似体は、閉環段階を伴わずにオクトレオテートの場合と同じ要領で製造された。３種の類似体が製造された：Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（配列番号５）、Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｎｌｅ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（配列番号６）、およびＤ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｎｌｅ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｎｌｅ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（配列番号７）（ただし、Ｎｌｅはノルロイシンである）。
【００７２】
ニューロテンシン類似体、Ｄ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ（配列番号８）は、閉環段階を伴わずにオクトレオテートと同様にして製造された。
【００７３】
実施例１０
ペプチド−染料コンジュゲートの合成（図６）
下記方法は、オクトレオテート−シアニン染料コンジュゲートの合成に関するものであるが、他のペプチド−染料コンジュゲートの合成にも類似方法が使用される。
【００７４】
オクトレオテートは実施例９記載の要領で製造されたが、ペプチドは固体支持体から開裂されず、ＰｈｅのＮ−末端Ｆｍｏｃ基は保持されていた。チオール基はトリフルオロ酢酸タリウムにより閉環され、Ｐｈｅを脱保護することにより遊離アミンが脱離された。ビスエチルカルボキシメチルインドシアニン染料（５３ｍｇ、７５マイクロモル）が、ＤＭＳＯ（３７５μＬ）中ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔの０.２モル溶液、およびＤＭＳＯ（３７５μＬ）中ジイソプロピルエチルアミンの０.２モル溶液から成る活性化試薬に加えられた。約３０分で活性化は完了し、樹脂結合ペプチド（２５マイクロモル）を染料に加えた。室温で３時間カップリング反応を実施した。混合物を濾過し、固体残留物をＤＭＦ、アセトニトリルおよびＴＨＦで洗浄した。緑色残留物を乾燥後、ペプチドが樹脂から開裂され、８５％トリフルオロ酢酸、２.５％水、２.５％チオアニソールおよび２.５％フェノールの混合物により側鎖保護基が除去された。樹脂を濾過し、冷ｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）を用いて染料−ペプチドコンジュゲートを沈澱させ、これをアセトニトリル：水（２：３）混合物に溶かし、凍結乾燥した。生成物をＨＰＬＣにより精製すると、モノオクトレオテート−ビスエチルカルボキシメチルインドシアニン染料（サイテート１、８０％）およびビスオクトレオテート−ビスエチルカルボキシメチルインドシアニン染料（サイテート２、２０％）が得られた。モノオクトレオテートコンジュゲートは、反応時間を２時間に減らすことによりビスコンジュゲートに対しほぼ独占的（＞９５％）に得られる。しかしながら、これはまた、不完全反応を誘発するため、非染料コンジュゲートペプチドによる受容体の飽和を回避するためには染料コンジュゲートから遊離オクトレオテートを注意深く分離しなければならない。
【００７５】
オクトレオテート−ビスペンチルカルボキシメチルインドシアニン染料は、若干の修正を加えながらも上記と同じ要領で製造された。ビスペンチルカルボキシメチルインドシアニン染料（６０ｍｇ、７５マイクロモル）が、ＤＭＳＯ（４００μＬ）中ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔの０.２モル溶液、およびＤＭＳＯ（４００μＬ）中ジイソプロピルエチルアミンの０.２モル溶液から成る活性化試薬に加えられた。約３０分で活性化は完了し、樹脂結合ペプチド（２５マイクロモル）を染料に加えた。室温で３時間反応を実施した。混合物を濾過し、固体残留物をＤＭＦ、アセトニトリルおよびＴＨＦで洗浄した。緑色残留物を乾燥後、ペプチドが樹脂から開裂され、８５％トリフルオロ酢酸、２.５％水、２.５％チオアニソールおよび２.５％フェノールの混合物により側鎖保護基が除去された。樹脂を濾過し、冷ｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）を用いて染料−ペプチドコンジュゲートを沈澱させ、これをアセトニトリル：水（２：３）混合物に溶かし、凍結乾燥した。生成物をＨＰＬＣにより精製すると、オクトレオテート−１,１,２−トリメチル−［１Ｈ］−ベンゾ［ｅ］インドールプロピオン酸コンジュゲート（１０％）、モノオクトレオテート−ビスペンチルカルボキシメチルインドシアニン染料（サイテート３、６０％）およびビスオクトレオテート−ビスペンチルカルボキシメチルインドシアニン染料（サイテート４、３０％）が得られた。
【００７６】
実施例１１
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中におけるペプチド−染料コンジュゲートの製剤
染料−ペプチドコンジュゲートは、水中では可溶性に乏しく、可溶化剤または共溶媒の添加を必要とする。１−２０％水性エタノールをコンジュゲートに加えると、インビトロ蛍光強度が部分的にクエンチングされ、インビボでは完全に蛍光はクエンチングされた（コンジュゲートは電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラにより検出されなかった）。１−５０％のＤＭＳＯを加えることにより、インビトロおよびインビボでのコンジュゲートの蛍光強度は再確立または増強された。染料の蛍光は１週間にわたって強いままであった。ＤＭＳＯ製剤は、この発明用に使用された実験動物にとって認容性良好であった。
【００７７】
実施例１２
インドシアニングリーン（ＩＣＧ）による膵管腺癌（ＤＳＬ６Ａ）のイメージング
非侵襲性インビボ蛍光イメージング装置を用いて、動物モデルにおいて腫瘍検出用に開発された造影剤の効率を評価した。名目波長７８０ｎｍおよび名目電力４０ｍＷのレーザーマックス・インコーポレイテッドのレーザーダイオードを使用した。検出装置は、ローデンストック１０ｍｍＦ２レンズ（ストック＃５４２.０３２.００２.２０）を装着したプリンストン・インスツルメントＲＴＥ／ＣＣＤ−１３１７−Ｋ／２型ＣＣＤカメラであった。造影剤から放射された蛍光のみが画像化されるように、８３０ｎｍ干渉レンズ（ＣＶＩレーザー・コーポレーション、部品＃Ｆ１０−８３０−４−２）をＣＣＤインプットレンズの正面に固定した。典型的な例では、動物の画像を造影剤の注射前に撮った。それに続いてこの画像を注射後画像から差し引いた（ピクセル単位で）。しかしながら、一旦動物が試料領域から除かれ、注射の数時間後に撮られる画像用に後の時点で戻されると、バックグラウンドサブトラクションは決して為されなかった。
【００７８】
固体（ドナー）移植片からの材料を導入することによりＤＳＬ６Ａ腫瘍を雄ルイスラットの左脇腹領域に誘導すると、腫瘍は約１４日で触診可能となった。筋肉内注射により０.８ｍＬ／ｋｇでキシラジン：ケタミン：アセプロマジン、１.５：１.５：０.５により動物に麻酔をかけた。腫瘍領域（左脇腹）の毛を剃って、腫瘍および周囲表面領域を露出させた。コックの栓およびヘパリン化食塩水を含む注射器２本を備えた２１ゲージ蝶形物をラットの後方尾部静脈へ設置した。蝶形装置によるＩＣＧ投与前に静脈の開通性をチェックした。各動物に水中ＩＣＧの０.４２ｍｇ／ｍＬ溶液５００μＬを与えた。
【００７９】
図７Ａ−Ｂは、ＩＣＧ（５.４μｍ）の０.５ｍＬ水溶液のボーラス注射後２分（図７Ａ）および３０分（図７Ｂ）時点での腫瘍画像である。テトラカルボン酸シアニン染料は、図２（ただし、Ａ＝ＣＨ２またはＣＨ２ＯＣＨ２、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ（式１）またはＲ１、Ｒ２＝縮合フェニル（式２））に示された要領で合成された。
【００８０】
図面は、指示された時点で測定された蛍光強度の偽色彩画像であり、画像は腫瘍および周囲小領域に制約されている。示されている通り、腫瘍における染料強度はＩＣＧ注射後３０分で顕著に減少した。
【００８１】
実施例１３
インドシアニングリーン（ＩＣＧ）による前立腺癌（Ｒ３３２７−Ｈ）のイメージング
使用されたイメージング装置および方法は実施例１２の場合と同様である。前立腺腫瘍（ダニングＲ３３２７−Ｈ）を、固体移植片から雄の若年コペンハーゲンラットの左脇腹領域に誘導した。これらの腫瘍は非常にゆっくりと増大し、触診できる塊は移植の４−５ヶ月後に存在した。図７Ｃ−Ｄは、注射の２分後（図７Ｃ）および３０分後（図７Ｄ）に画像化された前立腺癌腫（Ｒ３３２７−Ｈ）誘導ラットの画像である。
【００８２】
図面は、指示された時点で測定された蛍光強度の偽色彩画像であり、画像は腫瘍および周囲小領域に制約されている。示されている通り、腫瘍における染料強度はＩＣＧ注射後３０分で顕著に減少した。
【００８３】
実施例１４
インドシアニングリーン（ＩＣＧ）によるラット膵臓小葉癌（ＣＡ２０９４８）のイメージング
使用されるイメージング装置および方法は実施例１２の場合と同様である。固体移植片技術により左脇腹領域にＳＳＴ−２受容体を発現するラット膵臓小葉癌（ＣＡ２０９４８）を誘導したところ、触診可能な塊は移植の９日後に検出された。注射の２および３分後に得られた画像は図７Ｅ−Ｆに示されている。図７Ｅ−Ｆは、注射の２分後（図７Ｅ）および３０分後（図７Ｆ）に画像化されたＳＳＴ−２受容体を発現する膵臓小葉癌（ＣＡ２０９４８）が誘導されたラットの画像である。
【００８４】
図面は、指示された時点で測定された蛍光強度の偽色彩画像であり、画像は腫瘍および周囲小領域に制約された。示されている通り、腫瘍における染料強度はＩＣＧ注射後３０分で顕著に減少し、ほとんど存在していなかった。
【００８５】
実施例１５
サイテート１によるラット膵臓小葉癌（ＣＡ２０９４８）のイメージング
使用されたイメージング装置および方法は実施例１２の場合と同様であるが、ただし各動物には水中２５％ジメチルスルホキシドのサイテート１溶液の１.０ｍｇ／ｍＬ溶液５００μｌを与えた。
【００８６】
固体移植技術により左脇腹領域にＳＳＴ−２受容体を発現するラット膵臓小葉癌（ＣＡ２０９４８）を誘導したところ、触診できる塊は移植の２４日後に検出された。画像は注射後の様々な時点で得られた。腫瘍への取込みは２分で見られたが、最大となったのは約５分後であった。
【００８７】
図８Ａ−Ｂは、ＣＡ２０９４８セルライン誘導ラットにおける４５分時点でのＩＣＧおよびサイテート１の取込み比較を示す。４５分までにＩＣＧはほぼ一掃されたが（図８Ａ）、サイテート１はまだ強い状態である（図８Ｂ）。この染料蛍光は注射後数時間の間腫瘍において強い状態のままであった。
【００８８】
実施例１６
インドシアニングリーンによるイメージングと比較したサイテート１によるラット膵臓小葉癌（ＣＡ２０９４８）のイメージング
インドシアニングリーン（ＩＣＧ）を用い、ＣＣＤカメラ装置を用いて３種の異なるセルラインを光学的に画像化した。セルラインのうちの２種、ＤＳＬ６／Ａ（膵臓）およびダニングＲ３３２７Ｈ（前立腺）は、時間経過に伴い腫瘍への緩慢な薬剤の灌流を示し、各々について妥当な画像が得られた。第三のライン、ＣＡ２０９４８（膵臓）は、注射の僅か３０分後には存在しない軽微ではあるが一時的な灌流を示した。これは、他の２腫瘍ラインと比べてこのラインにはＩＣＧの非特異的局在性の無いことを示していたことから、この型の腫瘍に関する異なる血管構造が示唆された（図７Ａ−Ｆ参照）。最初の２腫瘍ライン（ＤＳＬ６／ＡおよびＲ３３２７Ｈ）は、同じくソマトスタチン（ＳＳＴ−２）受容体に富むＣＡ２０９４８ほど高度に血管化されてはいない。従って、この腫瘍モデルにおける染料の検出および保持は、受容体依存的特異性の優れた指標である。
【００８９】
オクトレオテートは、ソマトスタチン（ＳＳＴ−２）受容体をターゲッティングすることが知られているため、シアノ−オクトレオテート（サイテート１およびサイテート２）が製造された。サイテート１は、ＣＡ２０９４８ルイスラットモデルで評価された。ＣＣＤカメラ装置を用いると、この染料の局在性は注射の４５分後に腫瘍で（矢印により示されている）観察された（図９Ａ）。注射後２７時間の時点で、動物を再び画像化した（図９Ｂ）。腫瘍視覚化は容易に観察された（矢印により示されている）ことから、ＣＡ２０９４８腫瘍ラインに存在するＳＳＴ−２受容体に関するこの薬剤の特異性を示していた。
【００９０】
個々の臓器をサイテート１投与の約２４時間後に除去し、画像化した。図１０に示されている通り、サイテート１の高い取込みが膵臓、腎傍および腫瘍組織において観察され、心臓、筋肉、脾臓および肝臓はそれよりかなり低い取込みを示した。これらのデータは、同じモデル系における放射性標識オクトレオテートと完全な相関関係を示す（M. de Jongら、Cancer Res.１９９８、５８、４３７−４４１）。
【００９１】
実施例１７
ボンベシネートによるラット膵臓小葉癌（ＡＲ４２−J）のイメージング
ＡＲ４２−Ｊセルラインは、外分泌ラット膵臓小葉癌から誘導される。それは、連続培養で培養されるかまたは無胸腺ヌードマウス、ＳＣＩＤマウスまたはルイスラットにおいてインビボで維持され得る。このセルラインは、コレシストキニン（ＣＣＫ）、表皮成長因子（ＥＧＦ）、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（ＰＡＣＡＰ）、ソマトスタチン（ＳＳＴ−２）およびボンベシンを含む多様なホルモン受容体を発現することが知られているため、インビトロ受容体検定法にとって特に魅力的である。
【００９２】
このモデルでは、ＣＡ２０９４８ラットモデルに関して記載した方法と同様にして固体腫瘍材料を用いて雄のルイスラットに移植した。触診可能な塊は移植の７日後に存在しており、移植の１０−１２日後にイメージング試験を動物で行ったところ、塊は約２−２.５ｇに達していた。
【００９３】
図１１は、ボンベシネートの注射後２２時間時点における、実施例１６に記載された、ＡＲ４２−Ｊ腫瘍担持ラットにおけるボンベシネートの画像である。図１１に示されている通り、腫瘍におけるバイオコンジュゲートの特異的局在性（矢印により示されている）が観察された。
【００９４】
実施例１８
ペプチド染料コンジュゲートの血液クリアランスプロフィールのモニター
染料発色団の励起に適当な波長のレーザーを、光ファイバー束の一端に向け、他端をラットの耳から数ミリメートルのところに配置した。第２の光ファイバー束もまた、同じ耳付近に配置することにより、放射された蛍光を検出し、他端をデータ収集用オプティックス（光学機器）およびエレクトロニクス（電子機器）へ指向させた。収集オプティックストレインにおける干渉フィルター（ＩＦ）を用いて、染料発色団にとって適当な波長の放射された蛍光を選択した。
【００９５】
スプラーグ‐ドーリーまたはフィッシャー３４４ラットをこれらの試験で使用した。体重１ｋｇ当たり１.３５ｇの用量で腹腔内注射によるウレタン投与により動物に麻酔をかけた。動物が所望の麻酔段階に達した後、１２"管を備えた２１ゲージ蝶形物を各動物の側面尾部静脈に設置し、ヘパリン化食塩水で洗い流した。動物を加熱パッドに置き、全試験中常に暖かく保った。左耳たぶをガラス製顕微鏡スライドに貼付することにより動きおよび振動を低減化した。
【００９６】
光ファイバーから送達された入射レーザー光線を貼付された耳に集中させた。次いで、データ収集を開始し、そして試験薬剤投与前に蛍光のバックグラウンド読取り値を得た。サイテート１または２の場合、ペプチド−染料コンジュゲートを、側面尾部静脈におけるボーラス注射により、典型的には０.５〜２.０ｍＬを動物に投与した。この手順を正常および腫瘍担持ラットにおいて幾つかのペプチドコンジュゲートにより反復した。正常および腫瘍担持動物におけるペプチド染料コンジュゲートの血液クリアランスをモニターする方法としての代表的プロフィールは図１２〜１６に示されている。一区画モデル用の標準シグマプロットソフトウェアプログラムを用いてデータを分析した。
【００９７】
サイテート１または２で処理したラットでは、蛍光シグナルは、ピーク値まで急速に増加した。次いで、シグナルは、血流から一掃されたコンジュゲートとしての時間の関数として減少した。図１２は、７８０ｎｍで励起後に８３０ｎｍでモニターされた正常ラット血液からのサイテート１のクリアランスプロフィールを示す。図１３は、同じく７８０ｎｍで励起後に８３０ｎｍでモニターされた膵臓腫瘍（ＣＡ２０９４８）担持ラット血液からのサイテート１のクリアランスプロフィールを示す。
【００９８】
図１４は、正常ラット血液からのサイテート２のクリアランスプロフィールを示し、図１５は、７８０ｎｍで励起後に８３０ｎｍでモニターされた膵臓腫瘍（ＣＡ２０９４８）担持ラット血液からのサイテート２のクリアランスプロフィールを示す。
【００９９】
図１６は、７８０ｎｍで励起後に８３０ｎｍでモニターされた正常ラット血液からのサイテート４のクリアランスプロフィールを示す。
【０１００】
本明細書に示され、記載されている本発明の具体例は、当技術分野に習熟した本発明者らの実施態様に過ぎず、何らかの意味で限定しているわけではないものと理解すべきである。従って、本発明の精神および請求の範囲から逸脱することなく、それらの実施態様に対し様々な変化、修飾または改変を加えるかまたはそれらの手段に訴えることもあり得る。引用された参考文献は、出典明示により本明細書の一部とする。
本発明は、例えば、以下を提供する：
（項目１）  式
【化１】
2011116773.tif 000006
［式中、Ｗ３およびＸ３は、独立して−ＣＲ１Ｒ２、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｓｅから成る群から選ばれ、Ｙ３は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ３は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ１は単または二重結合であり、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１は、独立して−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓｅ−、−Ｐ−、−ＣＲ１Ｒ２、−ＣＲ１、アルキル、ＮＲ３および−Ｃ＝Ｏから成る群から選ばれ、Ａ１、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１は、一緒になって６−〜１２−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１２−員複素環状環を形成し得、ａ３およびｂ３は独立して０〜５であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ29〜Ｒ37は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリアルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ２０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ２０ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、シアノ、ニトロ、ハロゲン、サッカリド、ペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍは、独立して生物活性ペプチド、タンパク質、細胞、抗体、抗体フラグメント、サッカリド、グリコペプチド、ペプチド擬似物質、薬剤、薬剤ミミック、ホルモン、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃは、独立して１〜２０であり、並びにｂおよびｄは独立して１〜１００の範囲で変化する］
で示される化合物。
（項目２）  Ｗ３およびＸ３が、独立して−Ｃ(ＣＨ３)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)ＣＨ３、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)２、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＲ３Ｒ４)２、−ＮＲ３、および−Ｓ−から成る群から選ばれ、Ｙ３が、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ３が、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ１が単または二重結合であり、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１が、独立して−Ｏ−、−Ｓ−、ＮＲ３、（ＣＨ２）ａ−ＣＲ１Ｒ２、および−ＣＲ１から成る群から選ばれ、Ａ１、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１が、一緒になって６−〜１０−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１０−員複素環状環を形成し得、ａ３およびｂ３が独立して０〜３であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ29〜Ｒ37が、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１２アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ１２ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、モノまたはオリゴサッカリド、２〜３０個のアミノ酸単位を有するペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍが、独立して２〜３０個のアミノ酸単位を含む生物活性ペプチド、抗体、モノまたはオリゴサッカリド、グリコペプチド、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃが、独立して１〜１０であり、並びにｂおよびｄが独立して１〜３０である、項目１記載の化合物。
（項目３）  Ｗ３およびＸ３が各々Ｃ((ＣＨ２)ＯＨ)２であり、Ｙ３が−(ＣＨ２)２−ＣＯＮＨ−Ｂｍであり、Ｚ３が−(ＣＨ２)２−ＣＯＮＨ−Ｄｍであり、Ａ１が単結合であり、Ａ１、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１が一緒になって６員炭素環状環を形成し、ａ３およびｂ３が各々１であり、Ｒ２９がガラクトースであり、Ｒ３０〜Ｒ３７が各々水素であり、Ｂｍがオクトレオテートであり、Ｄｍがボンベシンである、項目２記載の化合物。
（項目４）  診断または治療処置の遂行方法であって、式
【化２】
2011116773.tif 000007
［式中、Ｗ３およびＸ３は、独立して−ＣＲ１Ｒ２、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｓｅから成る群から選ばれ、Ｙ３は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ３は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ１は単または二重結合であり、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１は、独立して−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓｅ−、−Ｐ−、−ＣＲ１Ｒ２、−ＣＲ１、アルキル、ＮＲ３および−Ｃ＝Ｏから成る群から選ばれ、Ａ１、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１は、一緒になって６−〜１２−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１２−員複素環状環を形成し得、ａ３およびｂ３は独立して０〜５であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ29〜Ｒ37は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリアルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ２０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ２０ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、シアノ、ニトロ、ハロゲン、サッカリド、ペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍは、独立して生物活性ペプチド、タンパク質、細胞、抗体、抗体フラグメント、サッカリド、グリコペプチド、ペプチド擬似物質、薬剤、薬剤ミミック、ホルモン、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃは、独立して１〜２０であり、並びにｂおよびｄは独立して１〜１００である］で示される化合物の治療有効量、および組成物を形成するための医薬的に許容し得る担体または賦形剤を個体に投与し、光線を用いて化合物を活性化させ、そして診断または治療処置を遂行することを含む方法。
（項目５）  Ｗ３およびＸ３が、独立して−Ｃ(ＣＨ３)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)ＣＨ３、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)２、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＲ３Ｒ４)２、−ＮＲ３、および−Ｓ−から成る群から選ばれ、Ｙ３が、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ３が、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ１が単または二重結合であり、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１が、独立して−Ｏ−、−Ｓ−、ＮＲ３、（ＣＨ２）ａ−ＣＲ１Ｒ２、および−ＣＲ１から成る群から選ばれ、Ａ１、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１が、一緒になって６−〜１０−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１０−員複素環状環を形成し得、ａ３およびｂ３が独立して０〜３であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ29〜Ｒ37が、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１２アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ１２ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、モノまたはオリゴサッカリド、２〜３０個のアミノ酸単位を有するペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍが、独立して２〜３０個のアミノ酸単位を含む生物活性ペプチド、抗体、モノまたはオリゴサッカリド、グリコペプチド、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃが、独立して１〜１０であり、並びにｂおよびｄが独立して１〜３０である化合物の治療有効量を個体に投与することを含む、項目４記載の方法。
（項目６）  Ｗ３およびＸ３が各々Ｃ((ＣＨ２)ＯＨ)２であり、Ｙ３が−(ＣＨ２)２−ＣＯＮＨ−Ｂｍであり、Ｚ３が−(ＣＨ２)２−ＣＯＮＨ−Ｄｍであり、Ａ１が単結合であり、Ａ１、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１が一緒になって６員炭素環状環を形成し、ａ３およびｂ３が各々１であり、Ｒ２９がガラクトースであり、Ｒ３０〜Ｒ３７が各々水素であり、Ｂｍがオクトレオテートであり、Ｄｍがボンベシン(７−１４)である化合物の治療有効量を個体に投与することを含む、項目５記載の方法。
（項目７）  上記処置に３５０−１３００ｎｍ領域の波長の光線が使用される、項目４記載の方法。
（項目８）  診断的処置が光学断層撮影法である、項目４記載の方法。
（項目９）  診断的処置が蛍光内視鏡検査法である、項目４記載の方法。
（項目１０）  さらに蛍光、吸光度および光散乱から成る群から選択され、その場合３５０−１３００ｎｍ領域の波長の光線が使用される方法により上記化合物の血液クリアランスプロフィールをモニターすることを含む、項目４記載の方法。
（項目１１）  上記処置がさらに造影および治療を含み、上記造影および治療が、吸収、光散乱、光音響および音蛍光技術から成る群から選択される、項目４記載の方法。
（項目１２）  上記処置により、アテローム硬化斑および血餅が診断され得る、項目４記載の方法。
（項目１３）  上記処置が限局性治療の実施を含む、項目４記載の方法。
（項目１４）  上記治療処置がレーザー光学治療を含む、項目４記載の方法。
（項目１５）  治療的処置が、微小転移巣を検出するためのレーザー支援誘導手術を含む、項目４記載の方法。
（項目１６）  さらにインビボまたはインビトロ蛍光クエンチングを阻止するために組成物に対し１〜５０パーセント濃度で生物適合性有機溶媒を加えることを含む、項目４記載の方法。
（項目１７）  １〜５０パーセントのジメチルスルホキシドを含む媒質に上記化合物を溶かす、項目１６記載の方法。
（項目１８）  式
【化３】
2011116773.tif 000008
［式中、Ｗ３およびＸ３は、独立して−ＣＲ１Ｒ２、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｓｅから成る群から選ばれ、Ｙ３は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ３は、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｂ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ｃ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ３)−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｄ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ１は単または二重結合であり、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１は、独立して−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓｅ−、−Ｐ−、−ＣＲ１Ｒ２、−ＣＲ１、アルキル、ＮＲ３および−Ｃ＝Ｏから成る群から選ばれ、Ａ１、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１は、一緒になって６−〜１２−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１２−員複素環状環を形成し得、ａ３およびｂ３は独立して０〜５であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ29〜Ｒ37は、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリアルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ２０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ２０ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、シアノ、ニトロ、ハロゲン、サッカリド、ペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍは、独立して生物活性ペプチド、タンパク質、細胞、抗体、抗体フラグメント、サッカリド、グリコペプチド、ペプチド擬似物質、薬剤、薬剤ミミック、ホルモン、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃは、独立して１〜２０であり、並びにｂおよびｄは独立して１〜１００の範囲で変化する］で示されるシアニン染料バイオコンジュゲートおよび医薬的に許容し得る担体または賦形剤を含む組成物。
（項目１９）  Ｗ３およびＸ３が、独立して−Ｃ(ＣＨ３)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＯＨ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)ＣＨ３、−Ｃ((ＣＨ２)ａＣＯ２Ｈ)２、−Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)ＣＨ３、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＨ２)２、Ｃ((ＣＨ２)ａＮＲ３Ｒ４)２、−ＮＲ３、および−Ｓ−から成る群から選ばれ、Ｙ３が、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ｚ３が、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｄｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＲ３Ｒ４および−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２ＮＲ３Ｒ４から成る群から選ばれ、Ａ１が単または二重結合であり、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１が、独立して−Ｏ−、−Ｓ−、ＮＲ３、（ＣＨ２）ａ−ＣＲ１Ｒ２、および−ＣＲ１から成る群から選ばれ、Ａ１、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１が、一緒になって６−〜１０−員炭素環状環または所望により１個またはそれ以上の酸素、窒素または硫黄原子を含んでいてもよい６−〜１０−員複素環状環を形成し得、ａ３およびｂ３が独立して０〜３であり、Ｒ１〜Ｒ４およびＲ29〜Ｒ37が、独立して水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１２アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ５−Ｃ１２ポリヒドロキシアリール、Ｃ１−Ｃ１０アミノアルキル、モノまたはオリゴサッカリド、２〜３０個のアミノ酸単位を有するペプチド、−ＣＨ２(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＯＨ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯ２Ｈ、−(ＣＨ２)ａ−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＨ２−ＮＨＣＯ−Ｂｍ、−(ＣＨ２)ａ−ＯＨおよび−ＣＨ２−(ＣＨ２ＯＣＨ２)ｂ−ＣＯ２Ｈから成る群から選ばれ、ＢｍおよびＤｍが、独立して２〜３０個のアミノ酸単位を含む生物活性ペプチド、抗体、モノまたはオリゴサッカリド、グリコペプチド、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、およびエコー源性剤から成る群から選択され、ａおよびｃが、独立して１〜１０であり、並びにｂおよびｄが独立して１〜３０である、項目１８記載の組成物。
（項目２０）  Ｗ３およびＸ３が各々Ｃ((ＣＨ２)ＯＨ)２であり、Ｙ３が−(ＣＨ２)２−ＣＯＮＨ−Ｂｍであり、Ｚ３が−(ＣＨ２)２−ＣＯＮＨ−Ｄｍであり、Ａ１が単結合であり、Ａ１、Ｂ１、Ｃ１およびＤ１が一緒になって６員炭素環状環を形成し、ａ３およびｂ３が各々１であり、Ｒ２９がガラクトースであり、Ｒ３０〜Ｒ３７が各々水素であり、Ｂｍがオクトレオテートであり、Ｄｍがボンベシン(７−１４)である、項目１９記載の組成物。
（配列表）
【数１】
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【数２】
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【数３】
2011116773.tif 000011
【図１】
2011116773.tif 000012
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図１０】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図９】
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【図１１】
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【外国語明細書】
2011116773000001.pdf