(57)【要約】【課題】本発明は、効果的で安全性の高い抗肥満剤、及び脱共役蛋白質発現促進剤を提供することを目的とする。【解決手段】本発明は、ピンクロックローズの抽出物を含有することを特徴とする。製剤形態は種々のものが選択できるが、特に皮膚外用剤が好ましい。投与量は、使用目的、年齢、体重等によって異なるが、好ましくは０．０２〜２０ｍｇ／ｋｇ、特に好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇである。本発明は、肥満に対して優れた改善効果を発揮するため、肥満、及び肥満に関連する生活習慣病の予防・改善を目的とする化粧品、医薬品、及び医薬部外品等に有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピンクロックローズの抽出物を含有することを特徴とする脱共役蛋白質発現促進剤。
【請求項２】
請求項１記載の脱共役蛋白質発現促進剤を含有することを特徴とする抗肥満剤。
【請求項３】
請求項１記載の脱共役蛋白質発現促進剤又は請求項２記載の抗肥満剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピンクロックローズの抽出物を含有することを特徴とする抗肥満剤及び脱共役蛋白質発現促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年では、食生活の欧米化や運動不足によるエネルギーの過剰摂取により肥満が急増している。肥満とは、脂肪が過度に蓄積した状態のことであるが、脂肪の蓄積は肥満だけでなく高脂血症、糖尿病、高血圧症等の危険性を増加させる為、非常に深刻な問題となっている。そこで、種々の抗肥満剤が提案されている。
【０００３】
抗肥満剤として代表的なものに、脂質や糖質の消化や吸収を妨げることにより肥満を予防改善するものがある。例えば、カンカニクジュヨウの抽出物を含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤である（特許文献１）。
【０００４】
アディポネクチンは、脂肪組織の脂肪細胞から特異的に産生、分泌されるサイトカインであり、骨格筋や肝臓のＡＭＰキナーゼを活性化することによって脂肪燃焼を促進する。近年、アディポネクチンの産生を促進することにより肥満を予防改善するものとして、アディポネクチン産生促進剤が提案されている。例えば、冬蟲夏草の熱水抽出物を有効成分とするアディポネクチン産生促進剤である（特許文献２）。
【０００５】
又、肥満は脂肪細胞と密接な関係があることから、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化を抑制することにより、肥満を予防改善する試みもなされている。例えば、ケンフェロール等のフラボノイド類を有効成分とするグリセロリン酸脱水酵素阻害剤である（特許文献３）。
【０００６】
エネルギーの消費を亢進させるものとして、褐色脂肪細胞のミトコンドリア内膜に存在する脱共役蛋白質（ＵＣＰ）が知られている。ミトコンドリアは脂肪酸やグルコースの化学エネルギーからＡＴＰを生産する細胞内器官である。脂肪酸が分解される際の化学エネルギーによってミトコンドリア内膜の内外でプロトン勾配が形成される。このプロトン勾配による電位差を利用してＡＴＰが合成されるが、脱共役蛋白質はこのプロトン勾配を解消し、脂肪酸の化学エネルギーをＡＴＰではなく、直接熱エネルギーへ変換して放出させる（非特許文献１）。この脱共役蛋白質の発現を促進することで、エネルギー消費を亢進して脂肪を分解させ、肥満を予防改善することができる。
前述のケンフェロールは、人骨格筋芽細胞において脱共役蛋白質の発現を増加させ、酸素消費を亢進する作用を有することが報告されている（非特許文献２）。
【０００７】
本発明に関わるピンクロックローズとは、地中海沿岸原産のハンニチバナ科に属する多年生の植物で、学名を「Ｃｉｓｔｕｓ  ｉｎｃａｎｕｓ  Ｌ.」という。ピンクロックローズについては、インフルエンザの予防処置用薬剤調製のためのピンクロックローズの使用（特許文献４）、ピンクロックローズを用いた風邪の予防治療用組成物（特許文献５）、ピンクロックローズの抽出物を有効成分とする抗炎症剤（特許文献６）が開示されている。又、抗菌作用（非特許文献３）や、抗酸化作用及びＤＮＡの分裂防止作用（非特許文献４）が報告されている。
【０００８】
しかし、ピンクロックローズの抗肥満作用及び脱共役蛋白質発現促進作用については、全く知られていない。
【０００９】
【特許文献１】特開第２００９−１９６９０８号公報
【特許文献２】特開第２００７−３１３０２号公報
【特許文献３】特開平１０−９５７３２号公報
【特許文献４】国際公開第２００７/０３１２９７号公報
【特許文献５】国際公開第２００７/１１０１３３号公報
【特許文献６】特開第２００８−８８０９７号公報
【非特許文献１】斉藤昌之、「臨床栄養」、２００６年、１０８巻、Ｐ．７1８−７２４
【非特許文献２】Ｗａｇｎｅｒ  Ｓ．  ｄａ−Ｓｉｌｖａ等、「ＤＩＡＢＥＴＥＳ」、２００７年、５６巻、Ｐ．７６７―７７６
【非特許文献３】Ｈ．Ｂｏｕａｍａ等、「Ｔｈｅｒａｐｉｅ」、１９９９年、５４巻、Ｐ．７３１−７３３
【非特許文献４】Ｇ．Ａｔｔａｇｕｉｌｅ等、「Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ」、２０００年、１６巻、Ｐ．８３−９０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、効果的で安全性の高い抗肥満剤、及び脱共役蛋白質発現促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、ピンクロックローズ抽出物が、抗肥満効果、及び脱共役蛋白質発現促進効果を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
本発明に関わるピンクロックローズの抽出物は、ピンクロックローズの地上部を溶媒で抽出することによって得られる。抽出に用いるピンクロックローズは、生及び乾燥物の何れも用いることができる。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出、常温抽出等を適宜選択することができる。又、ピンクロックローズの抽出物は、市販品を用いることもできる。
【００１３】
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール類（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。これらの溶媒は１種でも２種以上を混合して用いても良い。好ましくは、水、低級アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは含水エタノールである。
【００１４】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて濃縮、希釈、濾過、活性炭等による脱色、脱臭等の処理をして用いても良い。更に、濃縮乾固物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物等として用いることもできる。
【００１５】
本発明に関わる抗肥満剤又は脱共役蛋白質発現促進剤には、上記抽出物と共に他の成分を配合することもできる。
皮膚外用剤の成分としては、例えば、炭化水素、ロウ類、各種エステル油、動物油、植物油、シリコーン油、脂肪酸、高級アルコール等の油剤、エタノール、多価アルコール等のアルコール類、酸化チタン、マイカ、酸化鉄等の顔料、カルボキシビニルポリマー、キサンタンガム、ヒアルロン酸等の高分子類、ビタミン、アミノ酸等の栄養成分、植物抽出物等の薬効成分、界面活性剤、香料、防腐剤、キレート剤等である。
内服剤の成分としては、乳糖、ショ糖、ソルビット、マルチトール、エリスリトール、澱粉、セルロース等の賦形剤、オリーブ油、サフラワー油、魚油等の油剤、プルラン、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン等の結合剤、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、ビタミン、アミノ酸等の栄養成分、植物抽出物等の薬効成分、界面活性剤、香料、保存料等である。
【００１６】
本発明に用いる抗肥満剤又は脱共役蛋白質発現促進剤は、化粧品、医薬部外品、及び医薬品等として用いることができる。皮膚外用剤の剤型としては、化粧水、クリーム、乳液、エアゾール剤、軟膏、パップ剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅等が挙げられる。内服剤としては、散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤等が挙げられる。その他の剤型としては注射薬、座薬等がある。
【００１７】
本発明に関わる抽出物の配合量は、製剤形態、使用目的等によって異なるが、通常、乾燥固形分として０．００１〜１００％、好ましくは０．０１〜５０．０重量％である。製剤への添加法は予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。又、本発明に関わる抽出物の一日の投与量は、使用目的、年齢、体重等によって異なるが、好ましくは０．０２〜２０ｍｇ／ｋｇ、特に好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇである。
【発明の効果】
【００１８】
本発明に関わる脱共役蛋白質発現促進剤は、優れた抗肥満効果、及び脱共役蛋白質発現促進効果を発揮し、肥満の予防改善に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明を詳細に説明するため実施例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を示し、％は重量％を示す。
【実施例１】
【００２０】
製造例１  ピンクロックローズの熱水抽出物
ピンクロックローズの地上部の乾燥物１００ｇに精製水２ｋｇを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物を５０ｇ得た。
【００２１】
製造例２  ピンクロックローズの５０％エタノール抽出物
ピンクロックローズの地上部の乾燥物１００ｇに精製水１ｋｇ、及びエタノール１ｋｇを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して５０％エタノール抽出物を４５ｇ得た。
【００２２】
製造例３  ピンクロックローズのエタノール抽出物
ピンクロックローズの地上部の乾燥物１００ｇにエタノール２ｋｇを加え、常温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してエタノール抽出物を３０ｇ得た。
【実施例２】
【００２３】
処方例１  化粧水
処方                                                        配合量(部)
１．ピンクロックローズの熱水抽出物（製造例１）              １．０
２．１，３‐ブチレングリコール                              ８．０
３．グリセリン                                              ２．０
４．キサンタンガム                                          ０．０２
５．クエン酸                                                ０．０１
６．クエン酸ナトリウム                                      ０．１
７．エタノール                                              ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                                ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）          ０．１
１０．香料                                                    適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００２４】
処方例２  クリーム
処方                                                        配合量(部)
１．ピンクロックローズの２０％エタノール抽出物（市販品）    ０．５
２．スクワラン                                              ５．５
３．オリーブ油                                              ３．０
４．ステアリン酸                                            ２．０
５．ミツロウ                                                ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                            ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）        ３．０
８．ベヘニルアルコール                                      １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                              ２．５
１０．香料                                                    ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル                                ０．２
１２．パラオキシ安息香酸エチル                                ０．０５
１３．１，３‐ブチレングリコール                              ８．５
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２５】
処方例３  乳液
処方                                                          配合量(部)
１．ピンクロックローズの熱水抽出物（製造例１）                ０．０１
２．スクワラン                                                ５．０
３．オリーブ油                                                ５．０
４．ホホバ油                                                  ５．０
５．セタノール                                                １．５
６．モノステアリン酸グリセリン                                ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）          ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
９．香料                                                      ０．１
１０．プロピレングリコール                                      １．０
１１．グリセリン                                                ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル                                  ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２６】
処方例４  ゲル剤
処方                                                          配合量(部)
１．ピンクロックローズの２０％エタノール抽出物（市販品）      １．０
２．エタノール                                                ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル                                  ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）            ０．１
５．香料                                                      適量
６．１，３‐ブチレングリコール                                ５．０
７．グリセリン                                                ５．０
８．キサンタンガム                                            ０．１
９．カルボキシビニルポリマー                                  ０．２
１０．水酸化カリウム                                            ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００２７】
処方例５  パック
処方                                                          配合量(部)
１．ピンクロックローズの熱水抽出物（製造例１）                ０．１
２．ピンクロックローズの５０％エタノール抽出物（製造例２）    ０．１
３．ポリビニルアルコール                                    １２．０
４．エタノール                                                ５．０
５．１，３‐ブチレングリコール                                ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                                  ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）            ０．５
８．クエン酸                                                  ０．１
９．クエン酸ナトリウム                                        ０．３
１０．香料                                                      適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００２８】
処方例６  ファンデーション
処方                                                            配合量(部)
１．ピンクロックローズのエタノール抽出物（製造例３）            １．０
２．ステアリン酸                                                ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）１．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）            ２．０
５．セタノール                                                  １．０
６．液状ラノリン                                                ２．０
７．流動パラフィン                                              ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル                                    ６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム                        ０．１
１０．ベントナイト                                                ０．５
１１．プロピレングリコール                                        ４．０
１２．トリエタノールアミン                                        １．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．２
１４．二酸化チタン                                                ８．０
１５．タルク                                                      ４．０
１６．ベンガラ                                                    １．０
１７．黄酸化鉄                                                    ２．０
１８．香料                                                        適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この油相に水相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００２９】
処方例７  浴用剤
処方                                                          配合量(部)
１．ピンクロックローズの熱水抽出物（製造例１）                ５．０
２．炭酸水素ナトリウム                                      ５０．０
３．黄色２０２号（１）                                        適量
４．香料                                                      適量
５．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００３０】
処方例８  軟膏
処方                                                          配合量(部)
１．ピンクロックローズの２０％エタノール抽出物（市販品）      ０．０１
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）          ２．０
３．モノステアリン酸グリセリン                              １０．０
４．流動パラフィン                                            ５．０
５．セタノール                                                ６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                                  ０．１
７．プロピレングリコール                                    １０．０
８．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３１】
処方例９  錠剤
処方                                                          配合量(部)
１．ピンクロックローズの熱水抽出物（製造例１）                １．０
２．乾燥コーンスターチ                                      ２９．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム                    ２０．０
４．微結晶セルロース                                        ４０．０
５．ポリビニルピロリドン                                      ７．０
６．タルク                                                    ３．０
［製法］成分１〜５を混合し、次いで１０部の水を加え、押出し造粒後乾燥する。成形した顆粒に成分６を加えて混合し、打錠する。
【００３２】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００３３】
実験例
マウス背部より摘出した褐色脂肪組織を、細切処理し、０．２％コラゲナーゼＳ１（新田ゼラチン社製）中で、３７℃、１時間インキュベートした。酵素処理した組織を、１００μｍ径のセルストレーナー（ベクトンディッキンソン社製）にてろ過し、遠心分離した。沈殿した褐色脂肪前駆細胞をリン酸緩衝生理食塩水にて洗浄し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地中で、コンフレントに達するまで５％ＣＯ２存在下、３７℃で培養した。細胞がコンフレントに達した後、０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ溶液にて剥離し、２×１０４個／ウェルとなるように、２４ウェルプレートに播種した。再びコンフレントに達した後、培地を分化誘導培地１(ＤＭＥＭ、１０％  ＦＢＳ、１０μｇ／ｍＬ  インスリン、３３μＭ  ビオチン、１μＭ  デキザメタゾン、０．５ｍＭ  ３−イソブチルメチルキサンチン、０．２ｍＭ  インドメタシン)に置換し、３日間培養した。次いで、培地を分化誘導培地２（ＤＭＥＭ、１０％  ＦＢＳ、１０μｇ／ｍＬ  インスリン、３３μＭ  ビオチン）に置換し２日間培養した後、ピンクロックローズ２０％エタノール抽出物（フラックスマン社製）を添加し、２４時間培養した。また、コントロールとして、ピンクロックローズ抽出物を添加しない未適用対照と、カンカニクジュヨウ抽出物（自社にて熱水抽出したもの）、冬蟲夏草抽出物（大蔵製薬社製）、及びケンフェロール（ＳＩＧＭＡ社製）を添加した群を設けた。培養終了時に、細胞よりＴＯＲＩＺＯＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）にて細胞を溶解することによって総ＲＮＡを抽出し、総ＲＮＡを基に、ＲＴ−ＰＣＲ法によりｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ＲＴ−ＰＣＲ法にはＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔIII  Ｐｌａｔｉｎｕｍ  Ｔｗｏ−Ｓｔｅｐ  ｑＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ  ｗｉｔｈ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用い、定量ＰＣＲ反応に供し、脱共役蛋白質１の発現量を定量した。発現量は、ＧＡＰＤＨの発現量にて規格化（ノーマライズ）した。尚、各遺伝子の発現の測定に使用したプライマーは、次の通りである。
【００３４】
脱共役蛋白質１用のプライマーセット
ＧＣＡＧＣＣＴＡＣＡＧＡＧＧＴＣＧＴＧＡＡ （配列番号１）
ＧＧＧＴＴＴＧＡＴＣＣＣＡＴＧＣＡＧＡＴ    （配列番号２）
ＧＡＰＤＨ用のプライマーセット
ＴＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＴＧＣＴＴＡＧＣ    （配列番号３）
ＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＧＡＴＧ    （配列番号４）
【００３５】
定量化は、ΔΔＣｔ法にて行い、ピンクロックローズ抽出物無添加時の遺伝子発現量に対するピンクロックローズ抽出物添加時の遺伝子発現量を算出した。その結果を表１に示す。表示の通りピンクロックローズ抽出物を添加したときに、脱共役蛋白質１の発現の上昇が見られた。脱共役蛋白質１の発現は、添加するピンクロックローズ抽出物の濃度に依存しており、無添加条件と比較して０．５ｍｇ／ｍＬ添加時には約５倍の発現上昇が見られた。又、前述した抗肥満剤として既知であるカンカニクジュヨウ抽出物、冬蟲夏草抽出物及びケンフェロール添加群よりも著しく効果が高く、また、低濃度でも十分高い効果が得られた。
【００３６】
【表１】
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【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明に関わるピンクロックローズの抽出物を含有することを特徴とする抗肥満剤、及び脱共役蛋白質発現促進剤は、各剤の目的に対して優れた改善効果を発揮する。よって、肥満や生活習慣病の予防を目的とする化粧品、医薬品、及び医薬部外品等に有用である。
【配列表】
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