(57)【要約】【課題】生体中の炎症部位への選択的集積性に優れる炎症部位集積性化合物、該化合物を主成分とする核医学画像診断剤及び該化合物の標識前駆体を提供する。【解決手段】式（１）で表される炎症部位集積性化合物。Ｚ−Ｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−（Ｘ）ｎ−Ｌｙｓ（−（Ｔ）ｍ−ＨａｌＢ）−（Ｕ）ｋ（ＮＨ２）      （１）（式（１）中、Ｚはアミノ基の保護基；ＹはＭｅｔ又はＮｌｅ；Ｘは１個もしくはそれ以上のアミノ酸及び／又は有機合成可能な化合物よりなるスペーサー、ｎは０又は１を表し；Ｔはスペーサー、ｍは０又は１；Ｕは少なくとも一種類の酸性アミノ酸を含むペプチドよりなるスペーサー、ｋは０又は１；ＨａｌＢはベンゼン核に放射性ハロゲンを有する置換安息香酸の残基を表す。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表される炎症部位集積性化合物。
Ｚ−Ｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−（Ｘ）ｎ−Ｌｙｓ（−（Ｔ）ｍ−ＨａｌＢ）−（Ｕ）ｋ（ＮＨ２）      （１）
（式（１）中、Ｚはアミノ基の保護基を表し；
ＹはＭｅｔ又はＮｌｅを表し；
（Ｘ）ｎにおいて、Ｘは１個もしくはそれ以上のアミノ酸及び／又は有機合成可能な化合物よりなるスペーサー、ｎは０又は１を表し；
Ｔはスペーサー、ｍは０又は１を表し；
Ｕは少なくとも一種類の酸性アミノ酸を含むペプチドよりなるスペーサー、ｋは０又は１を表し；
ＨａｌＢはベンゼン核に放射性ハロゲンを有する置換安息香酸の残基を表す。
【請求項２】
Ｚがホルミル基である請求項１記載の炎症部位集積性化合物。
【請求項３】
Ｘが（−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−）であり、ｎが１である請求項１記載の炎症部位集積性化合物。
【請求項４】
Ｕが、（−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−）又は（−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−ＤＡｒｇ−Ｓｅｒ）である請求項１記載の炎症部位集積性化合物。
【請求項５】
ｍが０である請求項１記載の炎症部位集積性化合物。
【請求項６】
Ｔが下記式（２）で表され、ｍが１である請求項１記載の炎症部位集積性化合物。
−ＨＮ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｐＣＨ２ＣＯＯ−      （２）
（式（２）おいて、ｐは１〜６の整数を表す。）
【請求項７】
ｐが３である（この場合の式（２）を「ＰＥＧ３」と表す。）請求項６記載の炎症部位集積性化合物。
【請求項８】
ＨａｌＢのハロゲンが、１２１Ｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１２４Ｉ又は１８Ｆである請求項１記載の炎症部位集積性化合物。
【請求項９】
ＨａｌＢのハロゲンが１８Ｆである（この場合のＨａｌＢを「［１８Ｆ］ＦＢ」と表す。）請求項１記載の炎症部位集積性化合物。
【請求項１０】
式（１）で表される炎症部位集積性化合物が、
ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−ＮＨ２；
ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−ＮＨ２；
ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−ＮＨ２；
ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−ＤＡｒｇ−Ｓｅｒ−ＮＨ２；
ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（−ＰＥＧ３−［１８Ｆ］ＦＢ）−ＮＨ２；
よりなる群から選ばれる一である請求項１記載の炎症部位集積性化合物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の炎症部位集積性化合物を主成分とする核医学画像診断剤。
【請求項１２】
糖尿病足病変に伴う炎症部位を診断する請求項１１記載の核医学画像診断剤。
【請求項１３】
請求項１記載の化合物の標識前駆体であって、下記式（３）で表される標識前駆体。
Ｚ−Ｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−（Ｘ）ｎ−Ｌｙｓ（−（Ｔ）ｍ）−（Ｕ）ｋ（ＮＨ２）
（式（１）中、Ｚはアミノ基の保護基を表し；
ＹはＭｅｔ又はＮｌｅを表し；
（Ｘ）ｎにおいて、Ｘは１個もしくはそれ以上のアミノ酸及び／又は有機合成可能な化合物よりなるスペーサー、ｎは０又は１を表し；
Ｔはスペーサー、ｍは０又は１を表し；
Ｕは少なくとも一種類の酸性アミノ酸を含むペプチドよりなるスペーサー、ｋは０又は１を表す。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、炎症部位集積性化合物、核医学画像診断剤及び標識前駆体に関するものである。更に詳しくは、本発明は、放射性ハロゲンを含有し、かつ糖尿病足病変をはじめとする種々の病変に伴って発生する生体中の炎症部位への選択的集積性に優れる炎症部位集積性化合物、該化合物を主成分とする核医学画像診断剤及び該化合物の標識前駆体に関するものである。
【背景技術】
【０００２】  ヒトをはじめとする哺乳動物は、有害な外部刺激を受けた場合、防御作用として免疫応答反応を行う。免疫応答反応の代表的なものとして、炎症反応をあげることができる。炎症反応により、個体に侵入した異物の除去、侵された組織の破壊、破壊された組織の修復等が行われる。【０００３】  ところで、糖尿病に伴う重大な病変として、糖尿病足病変がある。糖尿病足病変とは、糖尿病患者の下肢に生じる、主に感染症を起因とした、潰瘍、深部組織の破壊性病変であり、神経障害や種々の程度の末梢血流障害を合併している病変である。糖尿病足病変が進行すると、病変部組織に壊死が発生し、足を切断する必要が生じるという重大な事態に陥る。したがって、糖尿病足病変を早期に発見して治療し、治療の効果を追跡しつつ、効果的な治療を行う必要がある。ところが、かかる要求を十分に満たす方法は見出されていない。本発明はかかる現状においてなされたものである。【０００４】  糖尿病足病変を含む炎症部位には、防御反応として、ホルミル化ペプチド受容体（ＦＰＲ）を発現する白血球が集積することが知られている。【０００５】  ＦＰＲへの親和性を有するペプチドとして、走化性ホルミル化ペプチドであるホルミル−メチオニル−ロイシル−フェニルアラニル（ｆＭＬＦ）含有ペプチドが知られている。非特許文献１には、１２５Ｉで放射性核種標識したｆＭＬＦが記載されている。非特許文献２には、１２５Ｉで放射性核種標識したｆＭＬＦが生体内で炎症に集積することが記載されている。特許文献１には、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン５酢酸）を介した１１１ＩｎｆＭＬＦが開示されている。非特許文献３には、メルカプトアセチルグリシルグリシンを介したＴｃ−９９ｍｆＭＬＦが記載されている。非特許文献４には、ジアミノジチオール化合物を介したＴｃ−９９ｍｆＭＬＦが記載されている。特許文献２には、放射性核種ｆＭＬＦの光親和性を介して身体外で白血球を放射性核種標識するための使用が記載されている。特許文献３には、放射性核種標識可能なｆＭＬＦが記載されている。特許文献４には、白血球の受容体ＦＰＲとの結合部位、全白血球中の単球及びリンパ球への結合性を向上させる部位並びに放射性金属で標識可能な部位を含むペプチドが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】  特許第２９３１０９３号明細書
【特許文献２】  米国特許第４，９８６，９７９号明細書
【特許文献３】  米国特許第５，７９２，４４４号明細書
【特許文献４】  国際公開第２００４／０２９０８０号パンフレット
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】  Ｄａｙ，ＡＲ．ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．７７，２９１−２９４（１９７７）
【非特許文献２】  Ｊｉａｎｇ，ＭＳ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｋｌｅａｒｍｅｄｉｚｉｎ，２１，１１０−１１３（１９８２）
【非特許文献３】  Ｖｅｒｂｅｋｅ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ，，Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７，７６９−７７９（２０００）
【非特許文献４】  Ｂａｉｄｏｏ，Ｋ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９，２０８−２１７（１９９８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】  しかしながら、ＰＥＴをはじめとする核医学診断を行うために最適な構造を持ったペプチドがさらに求められており、またその放射性ペプチドを核医学診断剤として利用するためには、自然界に存在するｆＭＬＦより、ターゲットである白血球に発現するＦＰＲへの十分に高い親和性、つまり集積性を有することが望ましい。ところが、従来の技術によると、かかる要求を十分に満たす放射性化合物は見出されていなかった。【０００９】  かかる状況において、本発明が解決しようとする課題は、放射性ハロゲンを含有し、かつ糖尿病足病変をはじめとする種々の病変に伴って発生する生体中の炎症部位への選択的集積性に優れる炎症部位集積性化合物、該化合物を主成分とする核医学画像診断剤及び該化合物の標識前駆体を提供する点にある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】  すなわち、本発明のうち一の発明は、下記式（１）で表される炎症部位集積性化合物に係るものである。
Ｚ−Ｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−（Ｘ）ｎ−Ｌｙｓ（−（Ｔ）ｍ−ＨａｌＢ）−（Ｕ）ｋ（ＮＨ２）      （１）
（式（１）中、Ｚはアミノ基の保護基を表し；
ＹはＭｅｔ又はＮｌｅを表し；
（Ｘ）ｎにおいて、Ｘは１個もしくはそれ以上のアミノ酸及び／又は有機合成可能な化合物よりなるスペーサー、ｎは０又は１を表し；
Ｔはスペーサー、ｍは０又は１を表し；
Ｕは少なくとも一種類の酸性アミノ酸を含むペプチドよりなるスペーサー、ｋは０又は１を表し；
ＨａｌＢはベンゼン核に放射性ハロゲンを有する置換安息香酸の残基を表す。
また、本発明のうち第二の発明は、上記第一の発明の炎症部位集積性化合物を主成分とする核医学画像診断剤に係るものである。
また、本発明のうち第三の発明は、上記第一の発明の化合物の標識前駆体であって、下記式（３）で表される標識前駆体に係るものである。
Ｚ−Ｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−（Ｘ）ｎ−Ｌｙｓ（−（Ｔ）ｍ）−（Ｕ）ｋ（ＮＨ２）      （３）
（式（１）中、Ｚはアミノ基の保護基を表し；
ＹはＭｅｔ又はＮｌｅを表し；
（Ｘ）ｎにおいて、Ｘは１個もしくはそれ以上のアミノ酸及び／又は有機合成可能な化合物よりなるスペーサー、ｎは０又は１を表し；
Ｔはスペーサー、ｍは０又は１を表し；
Ｕは少なくとも一種類の酸性アミノ酸を含むペプチドよりなるスペーサー、ｋは０又は１を表す。
【発明の効果】
【００１１】  本発明により、放射性ハロゲンを含有し、かつ糖尿病足病変をはじめとする種々の病変に伴って発生する生体中の炎症部位への選択的集積性に優れる炎症部位集積性化合物、該化合物を主成分とする核医学画像診断剤及び該化合物の標識前駆体を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】放射性ハロゲン含有モノマー［１８Ｆ］ＳＦＢの合成スキーム
【図２】ｔ−ｂｕｔｙｌ  ４−Ｎ，Ｎ，Ｎ−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−ａｍｍｏｎｉｕｍｂｅｎｚｏａｔｅ  ｔｒｉｆｌａｔｅの合成スキーム
【発明を実施するための形態】
【００１３】  以下、本発明を実施するための形態について、詳細に説明する。
【００１４】  本明細書で用いるアミノ酸は全て三文字表記で記し、特に断りのないかぎり左側をＮ末端側、右側をＣ末端側として表記した。アミノ酸に続くかっこ内は、特に断りのないかぎり側鎖に結合したペプチドならびに有機化合物を表すものである。また、かっこ内のアミノ酸配列は全体構造を把握しやすくするために、右側をＮ末端側、左側をＣ末端側として表記した。さらに、本明細書において、Ｄ体のアミノ酸は三文字表記ではＤアミノ酸で記載した。
【００１５】  本発明の炎症部位集積性化合物は、下記式（１）で表される炎症部位集積性化合物である。
Ｚ−Ｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−（Ｘ）ｎ−Ｌｙｓ（−（Ｔ）ｍ−ＨａｌＢ）−（Ｕ）ｋ（ＮＨ２）      （１）
【００１６】  式（１）中、Ｚはアミノ基の保護基を表す。Ｚの具体例としては、ホルミル基、アセチル基などの炭素数１〜９のアシル基、ｔ−Ｂｏｃ基（ｔｅｒ−ブトキシカルボニル基）などの炭素数２〜９のアシルオキシ基、メチル、エチル、プロピルなどの炭素数１〜６の低級アルキル基、カルバミル基などをあげることができる。これらのうちでは、ＦＰＲへの親和性の観点から、ホルミル基が好ましい。
【００１７】  式（１）中、Ｙはアミノ酸であるＭｅｔ又はＮｌｅを表す。
【００１８】  式（１）中、（Ｘ）ｎにおいて、Ｘは１個もしくはそれ以上のアミノ酸及び／又は有機合成可能な化合物よりなるスペーサーであり、ｎは０又は１である。なお、Ｘが（−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−）であり、ｎが１であることが好ましい。
【００１９】  式（１）中、Ｔはスペーサーであり、ｍは０又は１を表す。
【００２０】  本発明の炎症部位集積性化合物の好ましい具体例として、Ｔが下記式（２）で表され、ｍが１であるものをあげることができる。
−ＨＮ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｐＣＨ２ＣＯＯ−      （２）
（式（２）おいて、ｐは１〜６の整数を表す。）
【００２１】  式（１）中、ＨａｌＢはベンゼン核に放射性ハロゲンを有する置換安息香酸の残基を表す。ＨａｌＢのハロゲンとしては、ＳＰＥＣＴ用として１２１Ｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉ及び１３１Ｉがあげられ、ＰＥＴ用としては１２４Ｉ及び１８Ｆをあげることができる。なお、ＰＥＴ用としては、汎用性の観点から、１８Ｆ（この場合のＨａｌＢを「［１８Ｆ］ＦＢ」と表す。）が好ましい。
【００２２】  式（１）中、Ｕは少なくとも一種類の酸性アミノ酸を含むペプチドよりなるスペーサー、ｋは０又は１を表す。
【００２３】  本発明の炎症部位集積性化合物の、より具体的で好ましい例として、下記のものをあげることができる。
ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−ＮＨ２；（配列番号１）
ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−ＮＨ２；（配列番号２）
ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−ＮＨ２；（配列番号３）
ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−ＤＡｒｇ−Ｓｅｒ−ＮＨ２；（配列番号４）
ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（−ＰＥＧ３−［１８Ｆ］ＦＢ）−ＮＨ２；（配列番号５）
【００２４】  本発明の炎症部位集積性化合物は、たとえば以下に示すステップ−１〜ステップ−３を用いる方法により合成することができる。
【００２５】［ステップ−１］標識前駆体の合成
標識前駆体であるペプチドは、「固相法」又は「液相法」として知られるペプチド合成法により、調製することができる。例えば、社団法人日本生化学会編集『生化学実験講座』、第１巻、「タンパク質ＩＶ」、第２０７〜４９５頁、１９７７年、東京化学同人発行及び社団法人日本生化学会編集『新生化学実験講座』、第１巻、「タンパク質ＶＩ」、第３〜７４頁、１９９２年、東京化学同人発行などにはペプチド合成の詳細が記載されている。また、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメトオキシカルボニル）固相合成法を用いてペプチド合成機にて合成することができる。すなわち、合成する各ペプチドのＣ末端に相当するアミノ酸が導入されているＦｍｏｃアミノ酸を樹脂に結合させ、（Ｉ）Ｆｍｏｃ基の脱保護と洗浄、（ＩＩ）Ｆｍｏｃアミノ酸の縮合と洗浄、の操作を繰り返してペプチド鎖を延長し、最後に最終脱保護反応させて、目的とするペプチドを合成することができる。
【００２６】  ペプチドを単離精製するためには、公知の分離操作を組み合わせて行うことができる。例えば、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどのペプチド又は蛋白質を精製するための方法が用いられ、必要に応じて、これら方法を適宜組合せてもよい。そして、最終使用形態に応じて、精製したペプチドを濃縮、また必要に応じてさらに凍結乾燥して単離すればよい。
【００２７】［ステップ−２］放射性ハロゲン含有モノマー［１８Ｆ］ＳＦＢの合成
下記に記載した手順に従い、放射性ハロゲン含有モノマー［１８Ｆ］ＳＦＢを得ることができる（図１）。
【００２８】１．相間移動触媒を遮光バイアル中で脱水アセトニトリルに溶かし、１８Ｆ−のＫ２ＣＯ３水溶液を必要な放射能分を加えて攪拌する。相間移動触媒としては、１８Ｆイオンとの間で包摂体を形成する性質を有する種々の化合物を用いることができる。具体的には、放射性フッ素標識有機化合物の製造に用いられている種々の化合物を用いることができ、１８−クラウン−６−エーテル及びその他の種々のアミノポリエーテルを用いることができる。最も好ましい態様としては、クリプトフィックス２．２．２．（商品名、メルク社製）を用いることができる。
２．窒素ガスを吹き付けながら加熱して溶媒を飛ばす。更に脱水アセトニトリルを加えて溶媒を飛ばし、完全に水を飛ばす。
３．ｔ−ｂｕｔｙｌ  ４−Ｎ，Ｎ，Ｎ−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−ａｍｍｏｎｉｕｍｂｅｎｚｏａｔｅ  ｔｒｉｆｌａｔｅを脱水アセトニトリルに溶かし、反応バイアルに加えて強く攪拌し、反応させる。なお、ｔ−ｂｕｔｙｌ  ４−Ｎ，Ｎ，Ｎ−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−ａｍｍｏｎｉｕｍｂｅｎｚｏａｔｅ  ｔｒｉｆｌａｔｅと脱水アセトニトリルの量比については、ｔ−ｂｕｔｙｌ  ４−Ｎ，Ｎ，Ｎ−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−ａｍｍｏｎｉｕｍｂｅｎｚｏａｔｅ  ｔｒｉｆｌａｔｅが完全に溶解する限りにおいて限定されないが、好ましくはｔ−ｂｕｔｙｌ  ４−Ｎ，Ｎ，Ｎ−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−ａｍｍｏｎｉｕｍｂｅｎｚｏａｔｅ  ｔｒｉｆｌａｔｅ  ０．３〜０．５ｍｇの場合、脱水アセトニトリルは１００〜２００μＬとすることができる。
４．反応後、ｔｅｔｒａｐｒｏｐｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ  ｈｙｄｒｏｘｉｄｅを加えて攪拌し、反応させる。
５．反応後、ＴＳＴＵを（脱水）アセトニトリルに溶かして反応バイアルに加えて攪拌し、反応させる。
６．反応液を５％酢酸水溶液で希釈し、アセトニトリルと水で活性化したＳｅｐ−Ｐａｋ（登録商標、日本ウォーターズ株式会社製）ｐｌｕｓ  ＰＳ−２  に通し、水／アセトニトリルでカラムを洗浄し、アセトニトリルで放射性ハロゲン含有モノマーである［１８Ｆ］ＳＦＢを溶出する。
【００２９】  なお、上記の方法による出発原料であるｔ−ｂｕｔｙｌ  ４−Ｎ，Ｎ，Ｎ−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−ａｍｍｏｎｉｕｍｂｅｎｚｏａｔｅ  ｔｒｉｆｌａｔｅの製造方法は公知であり（たとえば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ  ５９（２００３）  ４３−４８）次の手順に従って合成することができる。
４−Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ  ｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ  （１）を含む冷却された乾燥ＴＨＦ中にｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅを加える。しばらく後（たとえば３０分後）にｔｅｒｔ−ＢｕＯＨを加え、室温に保つ（たとえば２時間）。その後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。抽出物をショートシリカゲルカラムに通し、減圧下に溶媒を除去することにより、ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ  ｅｓｔｅｒ  （２）が得られる。
（２）をｎｉｔｒｏｍｅｔｈａｎｅに溶解させ、冷却する。ｍｅｔｈｙｌ  ｔｒｉｆｌａｔｅを加え、攪拌する（たとえば１時間）。反応物をｄｉｅｔｈｙｌ  ｅｔｈｅｒに注ぎ、真空乾燥することによりｔ−ｂｕｔｙｌ  ４−Ｎ，Ｎ，Ｎ−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−ａｍｍｏｎｉｕｍｂｅｎｚｏａｔｅ  ｔｒｉｆｌａｔｅ  （３）が得られる。
【００３０】［ステップ−３］ペプチドの標識
標識前駆体であるペプチドをアセトニトリル（以下、ＭｅＣＮと表記する）とＢｏｒａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒの混合液に溶かし、７０℃  Ａｒ気流下で濃縮した［１８Ｆ］ＳＦＢに加える。ＭｅＣＮ／トリエチルアミン（以下、Ｅｔ３Ｎと表記する）＝９８／２でｐＨを８．５〜９．０にし、反応させる。ＨＰＬＣを用いて分取、精製し、純度確認を行う。
【００３１】  本発明の炎症部位集積性化合物は、炎症部位への高い集積性を有し、糖尿病足病変に伴う炎症部位の診断をはじめ、核医学画像診断剤の主成分として最適に用いることができる。なお、炎症を伴う疾患としては、糖尿病足病変、炎症性腸疾患等を例示することができる。
【００３２】  本発明の核医学画像診断剤は、本発明に係る放射性ヨウ素標識ペプチドを溶解した液として調製することができる。放射性ヨウ素標識ペプチドを溶解する液は、水、生理食塩水やリンゲル液等を用いることができる。放射性ヨウ素標識ペプチドの水溶性が低い場合には、必要に応じて可溶化剤を添加するか、当該ペプチドを溶解させることができる液に溶解後、生体認容性ある液と混合する。たとえば、放射性ヨウ素標識ペプチドとして、配列番号１〜５に記載のペプチドを用いた場合には、当該ペプチドをＤＭＳＯに溶解し、１０％ＤＭＳＯになるよう、ｂｉｎｄｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒあるいは生理食塩液を加えていき、水溶液を作製するといった方法を用いればよい。また、必要に応じて、安定化剤を配合してもよい。
【００３３】  本発明に係る核医学画像診断剤の投与量は、投与された薬剤の分布を画像化するために十分な濃度であれば特に限定する必要はない。たとえば、１８Ｆ標識ペプチドの場合は、体重６０ｋｇの成人一人当り５０〜６００ＭＢｑ程度、静脈投与又は局所投与して使用することができる。投与された薬剤の分布は、ＰＥＴ装置やＳＰＥＣＴ装置を用いて公知の方法により画像化することができる。
【実施例】
【００３４】  次に、本発明を実施例により説明する。
実施例に用いた化合物は次のとおりである。なお、本実施例においては、炎症部位への集積性を評価するという目的に鑑み、非標識化合物を用いるコールドテストとした。【００３５】本発明による化合物の非標識化合物
化合物１：ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１９Ｆ］ＦＢ）−ＮＨ２；
化合物２：ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１９Ｆ］ＦＢ）−ＮＨ２；
化合物３：ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１９Ｆ］ＦＢ）−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−ＮＨ２；
化合物４：ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１９Ｆ］ＦＢ）−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−ＤＡｒｇ−Ｓｅｒ−ＮＨ２；
化合物５：ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（−ＰＥＧ３−［１９Ｆ］ＦＢ）−ＮＨ２；【００３６】  以下の方法により、上記化合物１〜５を得た。
ここで、アミノ酸の表示については、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、スレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、バリン（Ｖａｌ、Ｖ）、トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）と１文字あるいは３文字表示とする。
また、ペプチドは、ペプチド自動合成機（４３３Ａ型：Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用い、樹脂に固定したアミノ酸誘導体に、１個ずつアミノ酸をカルボキシル末端側から結合させていく方法（固相合成法）によりペプチドを合成した。【００３７】  なお、化合物１〜５（非標識化合物）の合成においては、公知の方法に準じてリジンの側鎖に非放射性ＦＢを導入したアミノ酸を予め調製し、自動合成機を用いた合成の原料として用いた。
リジンの側鎖に非放射性ＦＢを導入したアミノ酸は次のとおり調製した。すなわち、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（５ｇ，１３．６ｍｍｏｌ）を水：ＴＨＦ（１：９，３０ｍｌ）に溶解し、ＤＩＥＡ（４．７ｍｌ，２７．１ｍｍｏｌ、ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）を加えた後、氷冷下に攪拌しながらＦＢ−Ｃｌ（１．５３ｍｌ，１２．９ｍｍｏｌ，４−Ｆ−ｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）を加えた。その後反応液を一昼夜攪拌の後、０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液（３００ｍｌ）に反応液を加えた後、酢酸エチル３００ｍｌで目的とする表題誘導体を抽出した。得られた酢酸エチル層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮により白色固体粉末を得た。このものを該当するペプチド合成のアミノ酸誘導体原料として使用した。【００３８】実施例１  化合物１（ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＮＨ２）−［１９Ｆ］ＦＢ）の合成
（１）保護ペプチド樹脂の合成
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製のペプチド自動合成機（４３３Ａ）を用いて添付のソフトに従って１個ずつアミノ酸をカルボキシル末端側から結合させていく方法（固相合成法）によりペプチドを合成した。保護ペプチド樹脂の合成を行った。
Ｆｍｏｃ−ＳＡＬ  Ｒｅｓｉｎ  （０．６５ｍｏｌ／ｇ、０．３２ｍｍｏｌ  ｓｃａｌ）を出発樹脂担体として使用し、通常のＦｍｏｃ−ペプチド合成法に使われる各Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を原料として、配列にしたがって逐次ペプチド鎖の延長を行った。Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を上記ペプチド合成機の反応容器にセットし、合成機に添付されているソフトウエアーに従って、活性化剤として、１−［ビスジメチルアミノメチレン］−１Ｈ−ベンゾトリアゾリウムー３−オキシドーヘキサフルオロホスフェイト（ＨＢＴｕ），１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解して反応槽に加えて反応させた。得られた樹脂をピペリジン含有Ｎ−メチルピロリドン中で緩やかに攪拌してＦｍｏｃ基を除いて次のアミノ酸誘導体の縮合に進めた。使用したＦｍｏｃアミノ酸誘導体は側鎖に官能基のあるアミノ酸はそれぞれＴｙｒ（ＯＢｕ），Ｌｙｓ（ＦＢ）  そしてＦｍｏｃ−Ｎｌｅを用いた。配列に従って逐次アミノ酸を延長してＨ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−ＳＡＬ  Ｒｅｓｉｎ保護ペプチド樹脂を得た。その後ホルミル−ＮｌｅをＤＩＣ−ＨＯＯＢｔで縮合して目的とする配列の保護ペプチド樹脂の構築を行った。
（２）脱保護と樹脂からの切り出し
得られた保護ペプチド樹脂をトリフルオロ酢酸を用いる定法のＴＦＡ−ＴＩＳ−Ｈ２０−（９５／２．５／２．５，ｖ／ｖ）  脱保護条件で室温、２時間処理し脱保護と樹脂からのペプチドの切り離しを同時に行った。反応液から担体樹脂をろ別の後、ＴＦＡを留去。残渣にエーテルを加えて得られる粗生成物の沈殿をろ取した。
（３）ペプチドの単離精製
得られた粗生成ペプチドを島津製ＬＣ−８Ａ−１のＨＰＬＣ分取装置（カラム：ＯＤＳ３０×２５０ｍｍ）を用いて０．１％トリフルオロ酢酸を含む水−アセトニトリルの系で分取精製し、目的のペプチドの分画を得、アセトニトリルを留去した後、凍結乾燥粉末とし、目的物をトリフルオロ酢酸塩として得た。
得られたペプチドが目的のものであることを確認するために、ＥＭＩ−ＭＳ及びＨＰＬＣの分析を行った。
ＨＰＬＣ分析条件：
カラム  ＹＭＣ  Ａ−３０２（ＯＤＳ，１５０×４．６ｍｍ  Ｉ．Ｄ．）
カラム温度  ４０℃
溶離液  ＭｅＣＮ／Ｗａｔｅｒ／０．１％ＴＦＡ（２５ｍｉｎ  ｌｉｎｅａｒ）
流速  １．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器  ２２０ｎｍ
注入量  １μＬ
分析結果：
溶離液ＭｅＣＮ  ２０−７０％，溶液  １ｍｇ／２００μＬ  ＤＭＳＯ
ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  ２０．３ｍｉｎ，純度  ９２．３％
ｍ／ｚ  ９４５．５（［Ｍ＋Ｈ］＋  ９４６．１），ｍ／ｚ  ４７３．４（［Ｍ＋２Ｈ］２＋  ４７３．６）  分子量  ９４５．１【００３９】実施例２  ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＮＨ２）−［１８Ｆ］ＦＢの合成
［ステップ−１］標識前駆体の合成
標識前駆体：ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＮＨ２）
（１）保護ペプチド樹脂の合成
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製のペプチド自動合成機（４３３Ａ）を用いて添付のソフトに従って１個ずつアミノ酸をカルボキシル末端側から結合させていく方法（固相合成法）によりペプチドを合成した。保護ペプチド樹脂の合成を行った。Ｆｍｏｃ−ＳＡＬ  Ｒｅｓｉｎ（０．６５ｍｏｌ／ｇ、０．３２ｍｍｏｌ  ｓｃａｌ）を出発樹脂担体として使用し、通常のＦｍｏｃ−ペプチド合成法に使われる各Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を原料として、配列にしたがって逐次ペプチド鎖の延長を行った。Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を上記ペプチド合成機の反応容器にセットし、合成機に添付されているソフトウエアーに従って、活性化剤として、１−［ビスジメチルアミノメチレン］−１Ｈ−ベンゾトリアゾリウムー３−オキシドーヘキサフルオロホスフェイト（ＨＢＴｕ），１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解して反応槽に加えて反応させた。得られた樹脂をピペリジン含有Ｎ−メチルピロリドン中で緩やかに攪拌してＦｍｏｃ基を除いて次のアミノ酸誘導体の縮合に進めた。
使用したＦｍｏｃアミノ酸誘導体は側鎖に官能基のあるアミノ酸はそれぞれＴｙｒ（ＯＢｕ），Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）  そしてＦｍｏｃ−Ｎｌｅを用いた。配列に従って逐次アミノ酸を延長してＨ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−ＳＡＬＲｅｓｉｎ保護ペプチド樹脂を得た。その後ホルミル−ＭｅｔをＤＩＣ−ＨＯＯＢｔで縮合して目的とする配列の保護ペプチド樹脂の構築を行った。【００４０】（２）脱保護と樹脂からの切り出し
得られた保護ペプチド樹脂をトリフルオロ酢酸を用いる定法のＴＦＡ−ＴＩＳ−Ｈ２Ｏ−（９５／２．５／２．５，ｖ／ｖ）  脱保護条件で室温、２時間処理し脱保護と樹脂からのペプチドの切り離しを同時に行った。反応液から担体樹脂をろ別後、ＴＦＡを留去し、残渣にエーテルを加えて得られる粗生成物の沈殿をろ取した。【００４１】（３）ペプチドの単離精製
得られた粗生成ペプチドを島津製ＬＣ−８Ａ−１のＨＰＬＣ分取装置（カラム：ＯＤＳ３０×２５０ｍｍ）を用いて０．１％トリフルオロ酢酸を含む水−アセトニトリルの系で分取精製し、目的のペプチドの分画を得、アセトニトリルを留去した後、凍結乾燥粉末とし、目的物をトリフルオロ酢酸塩として得た。
得られたペプチドが目的のものであることを確認するために、ＥＭＩ−ＭＳ及びＨＰＬＣの分析を行った。
ＨＰＬＣ分析条件：
カラム  ＹＭＣ  Ａ−３０２（ＯＤＳ，１５０×４．６ｍｍ  Ｉ．Ｄ．）
カラム温度  ４０℃
溶離液  ＭｅＣＮ／Ｗａｔｅｒ／０．１％ＴＦＡ（２５ｍｉｎ  ｌｉｎｅａｒ）
流速  １．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器  ２２０ｎｍ
注入量  １μＬ
分析結果：
溶離液ＭｅＣＮ  ２０−７０％，溶液  １ｍｇ／２００μＬ  ＤＭＳＯ
ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  １４．５ｍｉｎ，純度  ９３．９％
ｍ／ｚ  ８２３．５（［Ｍ＋Ｈ］＋  ８２４．０），ｍ／ｚ  ４１２．４（［Ｍ＋２Ｈ］２＋  ４１２．５）  分子量  ８２３．０【００４２】［ステップ−２］放射性ハロゲン含有モノマーの合成
１．Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商品名、メルク社製）２．２．２．（商品名、メルク社製）（１０ｍｇ）を遮光バイアル中で脱水アセトニトリル（５００  μＬ）に溶かし、１８Ｆ−のＫ２ＣＯ３水溶液（１００〜５００  μＬ）を加えて攪拌した。
２．窒素ガスを吹き付けながら１１０℃の油浴で加熱して溶媒を飛ばした（目安：１０  ｍｉｎ）。更に脱水アセトニトリル（４００  μＬ×３，  目安：各３  ｍｉｎ）を加えて溶媒を飛ばし、完全に水を飛ばした。
３．ｔ−ｂｕｔｙｌ  ４−Ｎ，Ｎ，Ｎ−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−ａｍｍｏｎｉｕｍｂｅｎｚｏａｔｅ  ｔｒｉｆｌａｔｅ（０．５ｍｇ）を脱水アセトニトリル（１  ｍＬ）に溶かし、反応バイアルに加えて強く攪拌し、９０℃で１０  ｍｉｎ反応させた。
４．反応後、ｔｅｔｒａｐｒｏｐｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ  ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ（１  ｍｏｌ／Ｌ  ｉｎ  Ｈ２Ｏ，２０  μＬ）を加えて攪拌し、１２０℃で５  ｍｉｎ反応させた。
５．反応後、ＴＳＴＵ（１５  ｍｇ）を（脱水）アセトニトリル（１００  μＬ）に溶かして反応バイアルに加えて攪拌し、９０℃で２  ｍｉｎ反応させた。
６．反応液を５％酢酸水溶液（１０  ｍＬ）で希釈し、アセトニトリルと水（各５  ｍＬ）で活性化したＳｅｐ−Ｐａｋ（登録商標、日本ウォーターズ株式会社製）  ｐｌｕｓ  ＰＳ−２に通し、水／アセトニトリル（８０／２０，  ２０  ｍＬ）でカラムを洗浄し、アセトニトリル（２．５ｍＬ）で［１８Ｆ］ＳＦＢを溶出した。【００４３】［ステップ−３］ペプチドの放射性フッ素標識
標識前駆体であるペプチド０．３ｍｇをＭｅＣＮ  ４０μＬ，  Ｂｏｒａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒ  ４０μＬに溶かし、７０℃  Ａｒ気流下で濃縮した［１８Ｆ］ＳＦＢに加えた。ＭｅＣＮ／Ｅｔ３Ｎ＝９８／２でｐＨを８．５−９．０にし、１時間３０分反応させた。ＨＰＬＣを用いて分取、純度確認を行った。
ＨＰＬＣ分析条件：
カラム  Ｃｏｓｍｏｓｉｌ（５Ｃ１８−ＡＲＩＩ，２５０×１０ｍｍ  Ｉ．Ｄ．）
カラム温度  ４０℃
溶離液  ＭｅＯＨ／Ｗａｔｅｒ／０．１％ＴＦＡ
流速  １．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器  ２２０ｎｍ
注入量  ２５μＬ
分析結果：ＭｅＯＨ  ７０−９０％，
ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  ２２．８ｍｉｎ，放射化学的収率  ３１％、放射化学的純度  ９９％以上【００４４】実施例３  化合物２（ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＮＨ２）−［１９Ｆ］ＦＢ）の合成
（１）保護ペプチド樹脂の合成
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製のペプチド自動合成機（４３３Ａ）を用いて添付のソフトに従って１個ずつアミノ酸をカルボキシル末端側から結合させていく方法（固相合成法）によりペプチドを合成した。保護ペプチド樹脂の合成を行った。
Ｆｍｏｃ−ＳＡＬ  Ｒｅｓｉｎ  （０．６５ｍｏｌ／ｇ、０．３２ｍｍｏｌ  ｓｃａｌ）を出発樹脂担体として使用し、通常のＦｍｏｃ−ペプチド合成法に使われる各Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を原料として、配列にしたがって逐次ペプチド鎖の延長を行った。Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を上記ペプチド合成機の反応容器にセットし、合成機に添付されているソフトウエアーに従って、活性化剤として、１−［ビスジメチルアミノメチレン］−１Ｈ−ベンゾトリアゾリウムー３−オキシドーヘキサフルオロホスフェイト（ＨＢＴｕ），１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解して反応槽に加えて反応させた。得られた樹脂をピペリジン含有Ｎ−メチルピロリドン中で緩やかに攪拌してＦｍｏｃ基を除いて次のアミノ酸誘導体の縮合に進めた。使用したＦｍｏｃアミノ酸誘導体は側鎖に官能基のあるアミノ酸はそれぞれＴｙｒ（ＯＢｕ），Ｌｙｓ（ＦＢ）  そしてＦｍｏｃ−Ｎｌｅを用いた。配列に従って逐次アミノ酸を延長してＨ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−ＳＡＬ  Ｒｅｓｉｎ保護ペプチド樹脂を得た。その後ホルミル−ＮｌｅをＤＩＣ−ＨＯＯＢｔで縮合して目的とする配列の保護ペプチド樹脂の構築を行った。
（２）脱保護と樹脂からの切り出し
得られた保護ペプチド樹脂をトリフルオロ酢酸を用いる定法のＴＦＡ−ＴＩＳ−Ｈ２Ｏ−（９５／２．５／２．５，ｖ／ｖ）脱保護条件で室温、２時間処理し脱保護と樹脂からのペプチドの切り離しを同時に行った。反応液から担体樹脂をろ別の後、ＴＦＡを留去。残渣にエーテルを加えて得られる粗生成物の沈殿をろ取した。
（３）ペプチドの単離精製
得られた粗生成ペプチドを島津製ＬＣ−８Ａ−１のＨＰＬＣ分取装置（カラム：ＯＤＳ３０×２５０ｍｍ）を用いて０．１％トリフルオロ酢酸を含む水−アセトニトリルの系で分取精製し、目的のペプチドの分画を得、アセトニトリルを留去した後、凍結乾燥粉末とし、目的物をトリフルオロ酢酸塩として得た。
得られたペプチドが目的のものであることを確認するために、ＥＭＩ−ＭＳ及びＨＰＬＣの分析を行った。
分析結果：
溶離液ＭｅＣＮ  ２０−７０％，溶液  １ｍｇ／２００μＬ  ＤＭＳＯ
ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  １８．８ｍｉｎ，純度  ９６．１％
ｍ／ｚ  ９６３．８（［Ｍ＋Ｈ］＋  ９６４．２），ｍ／ｚ  ４８２．５（［Ｍ＋２Ｈ］２＋  ４８２．６）  分子量  ９６３．２【００４５】実施例４  化合物３（ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１９Ｆ］ＦＢ）−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−ＮＨ２）の合成
（１）保護ペプチド樹脂の合成
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製のペプチド自動合成機（４３３Ａ）を用いて添付のソフトに従って１個ずつアミノ酸をカルボキシル末端側から結合させていく方法（固相合成法）によりペプチドを合成した。保護ペプチド樹脂の合成を行った。
Ｆｍｏｃ−ＳＡＬ  Ｒｅｓｉｎ（０．６５ｍｏｌ／ｇ、０．３２ｍｍｏｌ  ｓｃａｌ）を出発樹脂担体として使用し、通常のＦｍｏｃ−ペプチド合成法に使われる各Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を原料として、配列にしたがって逐次ペプチド鎖の延長を行った。Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を上記ペプチド合成機の反応容器にセットし、合成機に添付されているソフトウエアーに従って、活性化剤として、１−［ビスジメチルアミノメチレン］−１Ｈ−ベンゾトリアゾリウムー３−オキシドーヘキサフルオロホスフェイト（ＨＢＴｕ），１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解して反応槽に加えて反応させた。得られた樹脂をピペリジン含有Ｎ−メチルピロリドン中で緩やかに攪拌してＦｍｏｃ基を除いて次のアミノ酸誘導体の縮合に進めた。使用したＦｍｏｃアミノ酸誘導体は側鎖に官能基のあるアミノ酸はそれぞれＴｙｒ（ＯＢｕ），Ｌｙｓ（ＦＢ）  そしてＦｍｏｃ−Ｎｌｅを用いた。配列に従って逐次アミノ酸を延長してＨ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−ＳＡＬ  Ｒｅｓｉｎ保護ペプチド樹脂を得た。その後ホルミル−ＮｌｅをＤＩＣ−ＨＯＯＢｔで縮合して目的とする配列の保護ペプチド樹脂の構築を行った。
（２）脱保護と樹脂からの切り出し
得られた保護ペプチド樹脂をトリフルオロ酢酸を用いる定法のＴＦＡ−ＴＩＳ−Ｈ２Ｏ−（９５／２．５／２．５，ｖ／ｖ）  脱保護条件で室温、２時間処理し脱保護と樹脂からのペプチドの切り離しを同時に行った。反応液から担体樹脂をろ別の後、ＴＦＡを留去。残渣にエーテルを加えて得られる粗生成物の沈殿をろ取した。
（３）ペプチドの単離精製
得られた粗生成ペプチドを島津製ＬＣ−８Ａ−１のＨＰＬＣ分取装置（カラム：ＯＤＳ３０×２５０ｍｍ）を用いて０．１％トリフルオロ酢酸を含む水−アセトニトリルの系で分取精製し、目的のペプチドの分画を得、アセトニトリルを留去した後、凍結乾燥粉末とし、目的物をトリフルオロ酢酸塩として得た。
得られたペプチドが目的のものであることを確認するために、ＥＭＩ−ＭＳ及びＨＰＬＣの分析を行った。
分析結果：
溶離液ＭｅＣＮ  ２０−７０％，溶液  １ｍｇ／２００μＬ  ＤＭＳＯ
ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  １８．６ｍｉｎ，純度  ９１．５％
ｍ／ｚ  １２９０．８（［Ｍ＋Ｈ］＋  １２９１．４），ｍ／ｚ  ６４６．０（［Ｍ＋２Ｈ］２＋  ６４６．２）  分子量  １２９０．４【００４６】実施例５  化合物４（ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１９Ｆ］ＦＢ）−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−ＤＡｒｇ−Ｓｅｒ−ＮＨ２）の合成
（１）保護ペプチド樹脂の合成
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｌｏｓｙｓｔｅｍｓ社製のペプチド自動合成機（４３３Ａ）を用いて添付のソフトに従って１個ずつアミノ酸をカルボキシル末端側から結合させていく方法（固相合成法）によりペプチドを合成した。保護ペプチド樹脂の合成を行った。
Ｆｍｏｃ−ＳＡＬ  Ｒｅｓｉｎ（０．６５ｍｏｌ／ｇ、０．３２ｍｍｏｌ  ｓｃａｌ）を出発樹脂担体として使用し、通常のＦｍｏｃ−ペプチド合成法に使われる各Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を原料として、配列にしたがって逐次ペプチド鎖の延長を行った。Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を上記ペプチド合成機の反応容器にセットし、合成機に添付されているソフトウエアーに従って、活性化剤として、１−［ビスジメチルアミノメチレン］−１Ｈ−ベンゾトリアゾリウムー３−オキシドーヘキサフルオロホスフェイト（ＨＢＴｕ），１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解して反応槽に加えて反応させた。得られた樹脂をピペリジン含有Ｎ−メチルピロリドン中で緩やかに攪拌してＦｍｏｃ基を除いて次のアミノ酸誘導体の縮合に進めた。使用したＦｍｏｃアミノ酸誘導体は側鎖に官能基のあるアミノ酸はそれぞれＴｙｒ（ＯＢｕ），Ｌｙｓ（ＦＢ）そしてＦｍｏｃ−Ｎｌｅを用いた。配列に従って逐次アミノ酸を延長してＨ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−ＳＡＬ  Ｒｅｓｉｎ保護ペプチド樹脂を得た。その後ホルミル−ＮｌｅをＤＩＣ−ＨＯＯＢｔで縮合して目的とする配列の保護ペプチド樹脂の構築を行った。
（２）脱保護と樹脂からの切り出し
得られた保護ペプチド樹脂をトリフルオロ酢酸を用いる定法のＴＦＡ−ＴＩＳ−Ｈ２Ｏ−（９５／２．５／２．５，ｖ／ｖ）  脱保護条件で室温、２時間処理し脱保護と樹脂からのペプチドの切り離しを同時に行った。反応液から担体樹脂をろ別の後、ＴＦＡを留去。残渣にエーテルを加えて得られる粗生成物の沈殿をろ取した。
（３）ペプチドの単離精製
得られた粗生成ペプチドを島津製ＬＣ−８Ａ−１のＨＰＬＣ分取装置（カラム：ＯＤＳ３０×２５０ｍｍ）を用いて０．１％トリフルオロ酢酸を含む水−アセトニトリルの系で分取精製し、目的のペプチドの分画を得、アセトニトリルを留去した後、凍結乾燥粉末とし、目的物をトリフルオロ酢酸塩として得た。
得られたペプチドが目的のものであることを確認するために、ＥＭＩ−ＭＳ及びＨＰＬＣの分析を行った。
分析結果：
溶離液ＭｅＣＮ  ２０−７０％，溶液  １ｍｇ／４００μＬ  ７５％ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ
注入量  ２μＬ，ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  １６．７ｍｉｎ，純度  ９７．５％
ｍ／ｚ  ７６７．６（［Ｍ＋２Ｈ］２＋  ７６７．８）  分子量１５３３．７【００４７】実施例６  化合物５（ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＮＨ２）−ＰＥＧ３−［１９Ｆ］ＦＢ）の合成
（１）保護ペプチド樹脂の合成
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製のペプチド自動合成機（４３３Ａ）を用いて添付のソフトに従って１個ずつアミノ酸をカルボキシル末端側から結合させていく方法（固相合成法）によりペプチドを合成した。保護ペプチド樹脂の合成を行った。
Ｆｍｏｃ−ＳＡＬ  Ｒｅｓｉｎ（０．６５ｍｏｌ／ｇ、０．３２ｍｍｏｌ  ｓｃａｌ）を出発樹脂担体として使用し、通常のＦｍｏｃ−ペプチド合成法に使われる各Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を原料として、配列にしたがって逐次ペプチド鎖の延長を行った。Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体を上記ペプチド合成機の反応容器にセットし、合成機に添付されているソフトウエアーに従って、活性化剤として、１−［ビスジメチルアミノメチレン］−１Ｈ−ベンゾトリアゾリウムー３−オキシドーヘキサフルオロホスフェイト（ＨＢＴｕ），１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解して反応槽に加えて反応させた。得られた樹脂をピペリジン含有Ｎ−メチルピロリドン中で緩やかに攪拌してＦｍｏｃ基を除いて次のアミノ酸誘導体の縮合に進めた。使用したＦｍｏｃアミノ酸誘導体は側鎖に官能基のあるアミノ酸はそれぞれＴｙｒ（ＯＢｕ），Ｌｙｓ（ＦＢ）そしてＦｍｏｃ−Ｎｌｅを用いた。配列に従って逐次アミノ酸を延長してＨ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ε（［１８Ｆ］ＦＢ）−ＳＡＬ  Ｒｅｓｉｎ保護ペプチド樹脂を得た。その後ホルミル−ＮｌｅをＤＩＣ−ＨＯＯＢｔで縮合して目的とする配列の保護ペプチド樹脂の構築を行った。
（２）脱保護と樹脂からの切り出し
得られた保護ペプチド樹脂をトリフルオロ酢酸を用いる定法のＴＦＡ−ＴＩＳ−Ｈ２Ｏ−（９５／２．５／２．５，ｖ／ｖ）  脱保護条件で室温、２時間処理し脱保護と樹脂からのペプチドの切り離しを同時に行った。反応液から担体樹脂をろ別の後、ＴＦＡを留去。残渣にエーテルを加えて得られる粗生成物の沈殿をろ取した。
（３）ペプチドの単離精製
得られた粗生成ペプチドを島津製ＬＣ−８Ａ−１のＨＰＬＣ分取装置（カラム：ＯＤＳ３０×２５０ｍｍ）を用いて０．１％トリフルオロ酢酸を含む水−アセトニトリルの系で分取精製し、目的のペプチドの分画を得、アセトニトリルを留去した後、凍結乾燥粉末とし、目的物をトリフルオロ酢酸塩として得た。
得られたペプチドが目的のものであることを確認するために、ＥＭＩ−ＭＳ及びＨＰＬＣの分析を行った。
分析結果：
溶離液ＭｅＣＮ  ３０−８０％，溶液  １ｍｇ／２００μＬ  ＤＭＳＯ
ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  １４．３ｍｉｎ，  純度  ９８．０％
ｍ／ｚ  １１３４．９（［Ｍ＋Ｈ］＋  １１３５．３），ｍ／ｚ  ５６８．３（［Ｍ＋２Ｈ］２＋  ５６８．２）  分子量  １１３４．３【００４８】実施例７  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｓｓａｙ／Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ：ホルミル化ペプチド受容体（ＦＰＲ）に対する結合親和性の評価
得られた化合物１〜５について、次の方法によりＦＰＲに対する結合親和性を評価した。
ｂｉｎｄｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒ（１７０μＬ）中に様々な濃度のペプチド（ＤＭＳＯ溶液，１０μＬ）と、２ｎｍｏｌ／Ｌの［１２５Ｉ］ＷＫＹＭＶｍ（１０μＬ）と、ＦＰＲ（１０μＬ）を加え、２５℃で１時間インキュベート後、ポリリジンｂｕｆｆｅｒによりコーティングしたＧＦ／Ｃフィルターを用いて濾取（セルハーベスタ）し、ｗａｓｈ後、フィルター上に残った放射能をγカウンターで測定した。
※ｂｉｎｄｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒ：５０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｈｅｐｅｓ，ｐＨ  ７．４，５ｍｍｏｌ／Ｌ  ＭｇＣｌ２，１ｍｍｏｌ／Ｌ  ＣａＣｌ２，０．２％  ＢＳＡ
ｗａｓｈ  ｂｕｆｆｅｒ：５０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｈｅｐｅｓ，ｐＨ  ７．４，５００ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ，０．１％  ＢＳＡ
ポリリジンｂｕｆｆｅｒ：ポリＬ−リジン臭化水素酸塩１００ｍｇ／ｗａｓｈ  ｂｕｆｆｅｒ    １００ｍＬ
評価結果を表１に示した。【００４９】
【表１】
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【００５０】  表１の結果から、本発明による化合物はＦＭＬＰに比べ、低いＫｉを示し、よって高いＦＰＲへの親和性、すなわち高い炎症集積性を有することがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００５１】  本発明は、炎症部位集積性化合物及び核医学画像診断剤に関するものである。更に詳しくは、本発明は、放射性ハロゲンを含有し、かつ糖尿病足病変をはじめとする種々の病変に伴って発生する生体中の炎症部位への選択的集積性に優れる炎症部位集積性化合物、該化合物を主成分とする核医学画像診断剤及び該化合物の標識前駆体に利用することができる。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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