(57)【要約】    【課題】伸展刺激によるコラーゲン分解酵素の産生を抑制し、シワの発生を防ぐ効果を有するとともに、安全性及び使用感に優れた皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品として使用される伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤を提供することを課題とする。    【解決手段】伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤に、カラス麦属植物の抽出物、又はオランダビュ属植物の抽出物を含有させたことを特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カラス麦属植物の抽出物、又はオランダビユ属植物の抽出物を含有することを特徴とする、伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤。
【請求項２】
カラス麦属植物がエンバク（Avena sativa）又はカラス麦（Avena fatua）である請求項１記載の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤。
【請求項３】
オランダビユ属植物がオランダビユ（Psoralea corylifolia）である請求項１又は２記載の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれかに記載の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤を配合したことを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項５】
請求項１乃至３のいずれかに記載の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤を配合したことを特徴とする化粧料。
【請求項６】
請求項１乃至３のいずれかに記載の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤を配合したことを特徴とする医薬部外品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、伸展刺激により生じるコラーゲン分解酵素の生成を制御することによって、目尻、額、口元などの皮膚の収縮が生じやすい部位におけるシワ形成を抑制することのできる伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤、及びその伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤を配合した皮膚外用剤、皮膚化粧料、医薬部外品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
皮膚における色素異常には、しみ（肝斑）、そばかす（雀卵斑）、老人性色素斑などの色素増加症；尋常性白斑、脱色素性母斑、白皮症などの色素脱失症等が知られている。
【０００３】
このような色素異常は、たとえば皮膚の表皮基底層等に存在するメラノサイトで生成される色素であるメラニンの沈着により生じることが知られている。すなわち、皮膚におけるメラノサイトは、表皮最下層の基底層等に存在し、皮膚を太陽紫外線から防御する役割を果たしている。しかしながら、過剰なメラニンの産生は色素沈着となり、しみ（肝斑）、そばかす（雀卵斑）や老人性色素斑を生じ、肌の悩みの一つにあげられる。これらの色素沈着の作用機序には、一般的には日光からの紫外線等の刺激や、ホルモンバランスの異常、炎症等が引き金となって、メラノサイトにおけるメラニン色素産生を活性化させ、これが皮膚内に異常沈着するものと考えられている。
【０００４】
このような色素沈着の作用機序における治療は大別して、メラニン色素生成抑制、メラニン色素の還元、メラニン色素排泄促進が考えられている。この考えに基づき、従来から種々の特許出願がなされている。たとえば特許文献１は、アルブチンがメラニン生成抑制効果を示すことを見出してなされた外用剤に関する発明を開示するものであり、特許文献２は、グラブリジンがチロシナーゼ活性を示すことを見出してなされメラニン生成抑制外用剤に関する発明を開示するものである。また、メラニン色素の還元剤として、たとえば特許文献３のようなアスコルビン酸を用いた特許出願がなされ、さらにグルタチオンを用いた特許文献４のような特許出願もなされている。
【０００５】
しかしながら、アルブチン、グラブリジン、アスコルビン酸、グルタチオン等は、メラニン生成の抑制効果を十分に発揮できない場合があり、色素沈着の作用機序に対する効果が期待するほどには得られていない。
【０００６】
ところで、近年においては、新たな色素沈着の作用機序として皮膚の伸展刺激が注目されている。伸展刺激は、皮膚を伸展させるという、外部からの機械的な刺激を与えることで、表皮ケラチノサイトから産生されるＧＭ−ＣＳＦの量を増加させ、メラノサイトを活性化させることにより、過剰なメラニン合成を引き起こすものである。そこで、伸展刺激によって亢進されるＧＭ−ＣＳＦの産生阻害する成分を見出すことができれば、より効果的に色素沈着を改善することができると考えられる。
【０００７】
本発明者等は、このような皮膚の伸展刺激に着目し、伸展刺激介在メラニン生成の制御物質の評価方法に関する特許文献５のような特許出願を行い、さらに、伸展刺激によって亢進されるＧＭ−ＣＳＦの産生阻害する成分を見出し、特許文献６のような特許出願を行った。
【０００８】
そして本発明者等は、上記のようなメラニン生成の抑制とは別の観点から、皮膚の伸展刺激による表情シワの作用機序として、コラーゲン分解酵素が関与しているのではないかとの仮説の下に、このような皮膚の伸展刺激によるコラーゲン分解酵素の産生を抑制するために鋭意研究を重ねた結果、コラーゲン分解酵素であるマトリックス・メタロプロテアーゼ−１（以下、ＭＭＰ−１という）を減少させるような有効成分を見出し、本発明を完成し得るに至った。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開昭６３−８３１４号公報
【特許文献２】特開平０１−３１１０１１号公報
【特許文献３】特開２００３−１０４８６４号公報
【特許文献４】特開平１１−２６９０５８号公報
【特許文献５】特開２００８−２０３３２４号公報
【特許文献６】特開２００９−１０８１１５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、伸展刺激によるコラーゲン分解酵素の産生を抑制し、シワの発生を防ぐ効果を有するとともに、安全性及び使用感に優れた皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品として使用される伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤を提供することを課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、このような課題を解決するために、カラス麦属植物の抽出物、又はオランダビュ属植物の抽出物を含有することを特徴とする、伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤を提供するものである。また、本発明は、このような伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤を配合した皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品を提供するものである。カラス麦属植物としては、たとえばエンバク（Avena sativa）やカラス麦（Avena fatua）が用いられ、オランダビユ属植物としては、たとえばオランダビユ（Psoralea corylifolia）が用いられる。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、真皮中のコラーゲン分解酵素であるＭＭＰ−１を減少させることで、コラーゲンの分解が抑制され、それによってシワの発生を予防、改善することができ、且つ安全性の高い伸展刺激介在のコラーゲン分解酵素生成抑制剤、並びにその伸展刺激介在のコラーゲン分解酵素生成抑制剤を配合した皮膚外用剤、化粧料等を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明の実施形態について説明する。
本発明の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤は、上述のように、カラス麦属植物の抽出物、又はオランダビユ属植物の抽出物を含有するものである。ここで、「含有する」とは、本発明の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤が、カラス麦属植物の抽出物、又はオランダビユ属植物の抽出物のみからなるものである場合の他、これらの抽出物以外のものが含有されていてもよいことを意味する。
【００１４】
本発明の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤の１つである「カラス麦属植物」は、イネ科の植物である。カラス麦属植物としては、エンバク（Avena sativa）、カラス麦（Avena fatua）、ハダカエンバク（Avena nuda）、セイヨウチャヒキ（Avena strigosa）、Avena byzantina、Avena abyssinica、Avena barbata 、Avena brevis 等が例示されるが、本発明においては、特にエンバク（Avena sativa）を用いることが望ましい。カラス麦属植物から抽出物を抽出する場合の抽出部位としては、特に限定されるものではないが、穀粒を用いることが好ましい。
【００１５】
また、本発明の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤の他の１つである「オランダビユ属植物」は、マメ科の植物である。「オランダビユ属植物」としては、オランダビユ（Psoralea corylifolia）が例示される。オランダビユ属植物から抽出物を抽出する場合の抽出部位としては、特に限定されるものではないが、果実又は種子を用いることが好ましい。
【００１６】
本発明で使用する植物抽出物における各々の植物体の各種部位は前述した部位が好ましいが、この他、花、花穂、果皮、果実、茎、葉、根皮、根、又は全草等から選ばれる１種又は２種以上を用いることができる。また、生薬として入手可能なものはそれを利用しても良い。抽出物は、これら各種の抽出部位から溶媒を用いて直接抽出することで得られるものの他、圧搾処理を施した後に得られる圧搾液及び／又は残渣に溶媒を加えて抽出することで得られるものも、本発明における抽出物の範囲に含まれる。
【００１７】
抽出に用いる溶媒としては、通常の植物の抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができる。たとえば、水、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等のアルコール類、含水アルコール類、クロロホルム、ジクロルエタン、四塩化炭素、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン等の有機溶媒類等であり、それらは単独あるいは組み合わせて用いることができる。
【００１８】
カラス麦属植物又はオランダビユ属植物の抽出物の配合量は、通常乾燥固形分として、０．０００００１〜５重量％とすることが好ましい。０．０００００１重量％未満では本発明の効果が十分に得られない可能性があり、一方、５重量％を越えても、その増量に見合った効果の向上は認められないからである。この観点からは、０．００００１〜１重量％がより好ましい。
【００１９】
本発明の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤中には本発明の効果を損なわない範囲において、一般に化粧料で用いられ、或いは医薬部外品、医薬品等の皮膚外用剤に用いられる各種任意成分を必要に応じて適宜配合することができる。このような任意成分として、たとえば、精製水、エタノール、油性成分、保湿剤、増粘剤、防腐剤、乳化剤、薬効成分、粉体、紫外線吸収剤、色素、香料、乳化安定剤等を挙げることができる。
【００２０】
本発明における伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤の形態は、液状、乳液、軟膏、クリーム、ゲル、エアゾール等外皮に適用可能な性状のものであれば問われるものではなく、必要に応じて適宜基剤成分等を配合して所望の形態を調製することができる。また、本発明の伸展刺激介在のコラーゲン分解酵素生成抑制剤は、医薬品、医薬部外品又は化粧品等の多様な分野において適用可能である。
【００２１】
本発明において、「伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成」とは、伸展刺激の負荷に起因するコラーゲン分解酵素の生成をいう。本発明の「伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤」は、このように、伸展刺激の負荷に起因するコラーゲン分解酵素の生成を抑制するようなコラーゲン分解酵素生成抑制剤である。本発明の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤は、目尻、額、口元等の皮膚の収縮が生じ易い部位におけるシワの形成等の原因となるコラーゲン分解酵素の生成を抑制し得るものである。
【００２２】
このような目尻、額、口元等の皮膚の収縮は、自然に生じるものであり、そのような皮膚の収縮による伸展刺激の負荷が生じる時期を予測し、或いは伸展刺激の負荷が生じているか否か等を確認することは容易ではない。従って、このような自然発生的な伸展刺激の負荷に起因するコラーゲン分解酵素生成の抑制効果を、本発明の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤について確認することも容易ではない。
【００２３】
しかしながら、このような伸展刺激の負荷を人為的に生じさせて確認することは可能である。そのような伸展刺激の負荷を人為的に生じさせる手段として、細胞を所定間隔で伸展させることができる手段、たとえば後述の実施例のような培養細胞伸展装置等の手段を採用することができる。このような伸展刺激は、皮膚における伸縮の方向性と頻度の観点から、好ましくは、周期的に一軸方向に細胞を伸展させる刺激であることが望ましい。
【００２４】
このような伸展の度合いは、皮膚における伸縮割合の観点から、通常の培養条件（伸展刺激を負荷しない条件）での培養容器の大きさに対して、１．０１〜１．４０倍、好ましくは、１．０４〜１．２０倍となる条件が望ましい。このような伸展刺激を、後述の実施例のような培養細胞伸展装置の１つであるＳＴ−１４０（商品名：ストレックス株式会社製）を用いて行う場合、たとえば前記伸展刺激の条件としては、１分間に２回、一軸方向に１０％の伸展刺激を８日間行う条件等が挙げられる。
【００２５】
この場合の培養細胞としては、たとえばＮＨＤＦ（ヒト繊維芽細胞）を用いることができる。また培地としては、用いられる細胞の培養に適した培地が挙げられる。たとえば、ウシ胎仔血清を含有したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、ウシ胎仔血清を含有したイーグル培地、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）など各種成長因子を含むメディウム１５３培地などが挙げられる。特に、株化細胞を用いる場合には、ウシ胎仔血清を含有したダルベッコ改変イーグル培地またはウシ胎仔血清を含有したイーグル培地を用いることが望ましい。
【００２６】
このような細胞の培養によって、皮膚の伸展刺激とコラーゲン分解酵素の生成との相関関係を確認することができる。
【００２７】
ＭＭＰ−１量は、たとえば、培養後の培地上清を回収し、該培地上清に含まれるＭＭＰ−１を、ＭＭＰ−１に対するモノクローナル抗体を用いたＥＬＩＳＡにより定量化する方法等により測定されうる。
【００２８】
また、皮膚の伸展刺激負荷後８日目の細胞を回収し、その細胞内のｍＲＮＡを回収するとともに、そのｍＲＮＡに相補的なｃＤＮＡを合成し、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法によって、そのｃＤＮＡの定量、ひいてはｍＲＮＡを定量することによって、ＭＭＰ−１量を測定することもできる。
【実施例】
【００２９】
以下、本発明の実施例について説明する。
【００３０】
（実施例１）
本実施例は、伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤の一例として、エンバク（   Avena sativa）の抽出物を用いたものである。その調製法について説明すると、先ず、乾燥したエンバクの穀粒粉砕物１００ｇを１０倍量の５０容量％１，３−ブチレングリコール溶液に浸漬し、室温にて５昼夜放置した。その抽出後、濾過してエンバクの抽出物（乾燥固形分：約０．６質量％）を得た。
【００３１】
（実施例２）
本実施例は、伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤の一例として、オランダビユ（Psoralea corylifolia）の抽出物を用いたものである。その調製法は実施例１と同様であり、オランダビユの種子の乾燥粉砕物１００ｇを１０倍量の５０容量％エタノール溶液に浸漬し、室温にて５昼夜抽出した後、濾過してオランダビユの抽出物（乾燥固形分：約０．５質量％）を得た。
【００３２】
（試験例１）
上記のようにして調製した実施例１及び２の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤について、ＮＨＤＦ（ヒト繊維芽細胞）を用いたＭＭＰ−１の産生試験を行った。ＭＭＰ−１の定量はＥＬＩＳＡによって行った。その試験方法は次のとおりである。
【００３３】
すなわち、先ず、タイプ１コラーゲン被膜シリコンチャンバーに、ＮＨＤＦを播種し、培地として１０質量％ウシ胎仔血清を含有したダルベッコ改変イーグル培地（以下、「ウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭ」という）３ｍｌを用いて、前記ＮＨＤＦを５体積％ＣＯ2、３７℃の条件で２４時間培養した。次に、前記シリコンチャンバーの中の培地を除去し、その後、シリコンチャンバーを、培養細胞伸展装置［商品名：ＳＴ−１４０、ストレックス株式会社製］にセットした。
【００３４】
新たに１０質量％ウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭに、上記実施例１で得られたエンバク抽出物を、終濃度０．５％になるように添加して培地を得た。同様にして実施例２で得られたオランダビユ抽出物については、終濃度１％になるように、１０質量％ウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭに培地に添加して新たに培地を得た。一方、１０質量％ウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭに伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤を添加しないものを比較例として準備した。
【００３５】
このようにして実施例１及び２の伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤を添加した培地、及び比較例として準備した培地を、前記培養細胞伸展装置にセットしたシリコンチャンバーに添加し、１分間に２回、１軸方向に１０％の伸展刺激を８日間加えた。ここで、前記「１０％の伸展刺激」とは、左右にシリコンチャンバーを伸展させることにより、培養面積が１．１倍になることをいう。
【００３６】
伸展刺激負荷後３日目と７日目には、終濃度０．５％になるように、上記実施例１で得られたエンバク抽出物を、新たに１０質量％ウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭに添加した培地に培地交換した。また、実施例２で得られたオランダビユ抽出物については、伸展刺激負荷後３日目と７日目に、終濃度１％になるように、１０質量％ウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭに添加した培地に培地交換した。その後、８日目に培養上清を得て、トリプシンとＥＤＴＡとの混合液を用いて、細胞をシリコンチャンバーから剥離させ、回収した。
【００３７】
回収された細胞を１ｍｌのＰＢＳに懸濁後、細胞を血球計算盤にて数えた。回収した上清は、培養上清中に産生されたＭＭＰ−１の量をＥＬＩＳＡ法により定量した。測定は、ｈＭＭＰ−１測定用キット「第一ファインケミカル株式会社製」を用いて、添付の説明書に記載の方法に準じて行った。伸展刺激負荷下で伸展刺激介在コラーゲン分解酵素生成抑制剤を添加していない培地で培養した比較例の場合のＭＭＰ−１量を１００として、ＭＭＰ−１産生率を算出した。試験結果を表１に示す。
【００３８】
【表１】
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【００３９】
表１からも明らかなように、エンバク抽出物（実施例１）、オランダビユ抽出物（実施例２）をそれぞれ０．５質量％、１質量％添加することで、伸展刺激負荷下のＮＨＤＦによるＭＭＰ−１の産生率が比較例に比べて少なくなった。このことから、実施例１及び２の伸展刺激介在のコラーゲン分解酵素生成抑制剤に、ＭＭＰ−１の産生抑制効果があることがわかった。
【００４０】
次に、上記実施例１及び２の伸展刺激介在のコラーゲン分解酵素生成抑制剤を配合した、本発明の化粧料組成物の処方例を以下に示す。
【００４１】
（処方例１）スキンケアローション
組成                                   配合比（質量％）
エタノール                                 ５．０％
１，３−ブチレングリコール                 ７．０％
ソルビット液                             １０．０％
実施例１のエンバク抽出物                   ０．０１％
パラオキシ安息香酸メチル                   ０．１５％
クエン酸                                   ０．０５％
クエン酸ナトリウム                         ０．２％
エデト酸塩                                 ０．０５％
香料                                       ０．１％
ＰＯＥ硬化ヒマシ油                         ０．５％
精製水                                     残量
【００４２】
（処方例２）スキンケアローション
組成                                   配合比（質量％）
エタノール                                 ５．０％
１，３−ブチレングリコール                 ７．０％
ソルビット液                             １０．０％
実施例２のオランダビユ抽出物               ０．０１％
パラオキシ安息香酸メチル                   ０．１５％
クエン酸                                   ０．０５％
クエン酸ナトリウム                         ０．２％
エデト酸塩                                 ０．０５％
香料                                       ０．１％
ＰＯＥ硬化ヒマシ油                         ０．５％
精製水                                     残量
【００４３】
（処方例３）スキンケアクリーム
組成                                   配合比（質量％）
セタノール                                 ２．５％
スクワラン                               １０．０％
サラシミツロウ                             １．０％
トリオクタン酸グリセリル                   ５．０％
ミリスチン酸オクチルドデシル             １５．０％
酢酸トコフェロール                         ０．１％
１，３−ブチレングリコール                 ７．０％
モノステアリン酸グリセリン                 ３．０％
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアレート   １．０％
ソルビタンモノステアレート                 ２．０％
実施例１のエンバク抽出物                   ０．１％
濃グリセリン                               ５．０％
パラオキシ安息香酸ブチル                   ０．１％
パラオキシ安息香酸メチル                   ０．２％
精製水                                     残量
【００４４】
（処方例４）スキンケアクリーム
組成                                   配合比（重量％）
セタノール                                 ２．５％
スクワラン                               １０．０％
サラシミツロウ                             １．０％
トリオクタン酸グリセリル                   ５．０％
ミリスチン酸オクチルドデシル             １５．０％
酢酸トコフェロール                         ０．１％
１，３−ブチレングリコール                 ７．０％
モノステアリン酸グリセリン                 ３．０％
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアレート   １．０％
ソルビタンモノステアレート                 ２．０％
実施例２のオランダビユ抽出物               ０．１％
濃グリセリン                               ５．０％
パラオキシ安息香酸ブチル                   ０．１％
パラオキシ安息香酸メチル                   ０．２％
精製水                                     残量
【００４５】
（その他の実施例）
尚、上記各実施例１及び２の伸展刺激介在のコラーゲン分解酵素生成抑制剤の調製方法は、該実施例１及び２に記載した方法に限定されるものではなく、他の方法によって調製することも可能である。
【００４６】
また、該実施例１及び２では、伸展刺激介在のコラーゲン分解酵素生成抑制剤が、それぞれエンバク抽出物、オランダビユ抽出物のみからなる場合について説明したが、これらの２種以上を含有させて伸展刺激介在のコラーゲン分解酵素生成抑制剤とすることも可能である。また、これらエンバク抽出物、オランダビユ抽出物以外のものを伸展刺激介在のコラーゲン分解酵素生成抑制剤に含有させることも可能である。
【００４７】
さらに、上記処方例１乃至４では、スキンケアローション及びスキンケアクリームに伸展刺激介在のコラーゲン分解酵素生成抑制剤を配合する場合について説明したが、スキンケアローション、スキンケアクリーム以外の化粧料に伸展刺激介在のコラーゲン分解酵素生成抑制剤を配合することも可能である。また、化粧料以外の皮膚外用剤に、本発明の伸展刺激介在のコラーゲン分解酵素生成抑制剤を配合することも可能であり、さらに医薬部外品に配合することも可能である。