(57)【要約】      （修正有）【課題】Ｃ型肝炎ウイルスに感染した宿主の処置のための、新たなヌクレオシド化合物、および該化合物を含有する医薬組成物の提供。【解決手段】式Ｉのヌクレオシド、またはその酸付加塩、および該化合物を含有する医薬組成物。2011246485.tif 000031［式中、Ｒ１およびＲ３は水素であり、Ｒ２は、モノホスフェートエステル、ジホスフェートエステル、またはトリホスフェートエステル等であり、Ｒ４は、アルキル等であり、Ｒ５は、水素、アルキル等であり、Ｒ６は、水素またはアルコキシである。］【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ  
【化１】
2011246485.tif 000030
［式中：
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、独立に、水素、ＣＯＲ４、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４およびＣ（＝Ｏ）ＣＨＲ５ＮＨＲ６からなる群から選択され；またはＲ１およびＲ３はＨであり、Ｒ２は、モノホスフェートエステル、ジホスフェートエステル、またはトリホスフェートエステルであり；
Ｒ４は独立に、（ａ）Ｃ１−１８非分枝または分枝アルキル、（ｂ）Ｃ１−１８ハロアルキル、（ｃ）Ｃ３−８シクロアルキル、（ｄ）Ｃ１−１０ヘテロアルキルおよび（ｅ）フェニルからなる群から選択され、前記フェニルは、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、ハロゲン、シアノまたはニトロから選択される１〜３の基により置換されていてもよく；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−１０アルキル、フェニルまたはＣ１−３フェニルアルキルであり、前記フェニルは、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−３アルコキシ、Ｃ１−３アルキル、シアノおよびニトロからなる群から選択される１〜３の基により置換されていてもよく；
Ｒ６は、水素またはＣ１−６アルコキシである］
の化合物、またはその酸付加塩。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が各々水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の各々が、独立に、水素、ＣＯＲ４またはＣ（＝Ｏ）ＯＲ４である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４が非分枝または分枝Ｃ１−１０アルキルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が水素であり、Ｒ２およびＲ３がＣＯＲ４である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１は水素であり、Ｒ２およびＲ３はＣＯＲ４であり、Ｒ４は非分枝または分枝Ｃ１−１０アルキルである請求項１に記載の化合物；または医薬として許容なその塩。
【請求項７】
Ｒ１およびＲ３が水素であり、Ｒ２が、ＣＯＲ４、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４およびＣＯＣＨ（Ｒ５）ＮＨＲ６からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２がＣＯＣＨ（Ｒ５）ＮＨＲ６であり、Ｒ５がｉｓｏ−プロピル、ｉｓｏ−ブチルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ６が水素である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ５がＬ−アミノ酸の立体化学を有する、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ２がＣＯＲ４である、請求項７に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ４がＣ１−１０非分枝または分枝アルキルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
３’，５’−Ｏ−ビス（イソブチリル）−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン、
３’，５’−Ｏ−ビス（Ｌ−バリニル）−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン、
４’−アジド−３’−Ｏ−（Ｌ−バリニル）−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン、
４’−アジド−３’−Ｏ−イソブチリル−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン、
５’−Ｏ−（Ｌ−バリニル）−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン、
５’−Ｏ−イソブチリル−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン；
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
【請求項１３】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置のための、または当該処置用の医薬の製造のための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１４】
１日当たり、患者の体重１ｋｇ当たり１〜１００ｍｇの薬量で化合物を送達する、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記処置計画または医薬が、少なくとも１つの免疫系調節剤および／またはＨＣＶの複製を阻害する少なくとも１つの抗ウイルス剤をさらに含む、請求項１３に記載の使用。
【請求項１６】
免疫系調節剤が、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、またはコロニー刺激因子である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
免疫系調節剤が、インターフェロンまたは化学的に誘導体化されたインターフェロンである、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記処置計画または医薬が、少なくとも１つの他の抗ウイルス剤をさらに含む、請求項１５に記載の使用。
【請求項１９】
抗ウイルス化合物が、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、別のヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、非ヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶヘリカーゼ阻害剤、ＨＣＶプライマーゼ阻害剤、およびＨＣＶ融合阻害剤からなる群から選択される、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
少なくとも１つの医薬として許容な担体、希釈剤または賦形剤と混合した、請求項１に記載の化合物の治療有効量を含む、医薬組成物。
【請求項２１】
３５〜７５重量％の請求項１に記載の化合物、および少なくとも１つの医薬として許容な担体、希釈剤または賦形剤を含む残余物を包含する５００〜１５００ｍｇ圧縮錠剤を含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
４０〜６０重量％の請求項１に記載の化合物、および少なくとも１つの医薬として許容な担体、希釈剤または賦形剤を含む残余物を包含する５００〜１５００ｍｇ圧縮錠剤を含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の概要】
【０００１】
本発明は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤である、ヌクレオシド化合物およびその特定の誘導体を提供する。これらの化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の処置に有用である。それらは特に、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として、ＨＣＶ複製の阻害剤として、およびＣ型肝炎感染の処置において有用である。
【０００２】
本発明は、ＨＣＶレプリコンＲＮＡ複製のヌクレオシド阻害剤に関する。特に、本発明は、サブゲノムＨＣＶ  ＲＮＡ複製の阻害剤としてのピリミジンヌクレオシド化合物の使用、および当該化合物を含む医薬組成物に関する。
【０００３】
Ｃ型肝炎ウイルスは、世界中における慢性肝臓疾患の主たる原因である（Ｂｏｙｅｒ、Ｎ．ら、Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．２０００年、第３２巻：９８〜１１２頁）。ＨＣＶに感染した患者は、肝硬変、それに続く肝細胞癌を発症するおそれがあり、それ故、ＨＣＶは肝臓移植の主な適用症である。
【０００４】
ＨＣＶは、フラビウイルス族、ペスチウイルス族、およびＣ型肝炎ウイルスを含むヘパシウイルス族を含むウイルスファミリー、フラビビリダエ（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）の一つとして分類されている（Ｒｉｃｅ、Ｃ．Ｍ．、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅ
ｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ、ｉｎ：Ｆｉｅｌｄｓ
Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、編集者：Ｆｉｅｌｄｓ、Ｂ．Ｎ．、Ｋｎｉｐｅ、Ｄ．Ｍ．、およびＨｏｗｌｅｙ、Ｐ．Ｍ．、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ．、第３０章、第９３１〜９５９頁、１９９６年）。ＨＣＶは、約９．４ｋｂのプラスセンスの一本鎖ＲＮＡゲノムを含むエンベロープを有するウイルスである。当該ウイルスゲノムは、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、約３０１１アミノ酸のポリプロテイン前駆体をコードする長いオープンリーディングフレーム、および短い３’ＵＴＲからなる。５’ＵＴＲは、ＨＣＶゲノムの最も高度に保存されている部分であり、ポリプロテイン翻訳の開始および制御において重要である。
【０００５】
ＨＣＶのゲノム分析により、３０％以上のＤＮＡ配列まで分化する６種類の主な遺伝子型が同定されている。３０以上のサブタイプに区別されている。米国では、感染した個体の約７０％が１ａ型および１ｂ型感染である。１ｂ型はアジアで最も広まっているサブタイプである（Ｘ．ＦｏｒｎｓおよびＪ．Ｂｕｋｈ、Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  １９９９年、３巻：６９３〜７１６頁；Ｊ．Ｂｕｋｈら、Ｓｅｍｉｎ．Ｌｉｖ．Ｄｉｓ．１９９５年、１５巻：４１〜６３頁）。不幸なことに、１型感染は、２型または３型遺伝子型のいずれよりも治療に対して抵抗性である（Ｎ．Ｎ．Ｚｅｉｎ、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．、２０００年、１３巻：２２３〜２３５頁）。
【０００６】
ウイルス構造タンパク質は、ヌクレオカプシドコアタンパク質（Ｃ）および二つのエンベロープ糖タンパク質、Ｅ１およびＥ２を含む。ＨＣＶはまた、２つのプロテアーゼ、ＮＳ２−ＮＳ３領域にコードされる亜鉛依存性メタロプロテインアーゼ、およびＮＳ３領域にコードされるセリンプロテアーゼをコードする。これらのプロテアーゼは、前駆体のポリプロテインの特定の領域で成熟したペプチドに開裂する必要がある。非構造タンパク質５のカルボキシハーフ、ＮＳ５Ｂは、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを含む。残りの非構造タンパク質、ＮＳ４ＡおよびＮＳ４Ｂの機能、ならびにＮＳ５Ａ（非構造タンパク質５のアミノ末端側ハーフ）の機能はわかっていない。ＨＣＶ  ＲＮＡゲノムによりコードされる非構造タンパク質のほとんどはＲＮＡ複製に関与すると考えられている。
【０００７】
現在のところ、ＨＣＶ感染の処置に利用可能な承認された療法は数が限られている。ＨＣＶ処置の新規および既存の治療アプローチおよびＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害について概説されている：Ｒ．Ｇ．Ｇｉｓｈ、Ｓｅｍ．Ｌｉｖｅｒ．Ｄｉｓ．、１９９９年、１９巻：５頁；Ｄｉ  Ｂｅｓｃｅｇｌｉｅ、Ａ．Ｍ．およびＢａｃｏｎ、Ｂ．Ｒ．、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ、１９９９年１０月、８０〜８５頁；Ｇ．Ｌａｋｅ−Ｂａｋａａｒ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ、Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇ．Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．２００３年、３巻（３号）：２４７〜２５３頁；Ｐ．Ｈｏｆｆｍａｎｎら、Ｒｅｃｅｎｔ  ｐａｔｅｎｔｓ  ｏｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（１９９９−２００２）、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ、２００３年、１３巻（１１号）：１７０７〜１７２３頁；Ｍ．Ｐ．Ｗａｌｋｅｒら、Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．ｉｎｖｅｓｔｉｎｇ．Ｄｒｕｇｓ  ２００３年、１２巻（８号）：１２６９〜１２８０頁；Ｓ．−Ｌ．Ｔａｎら、Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｓｔａｔｕｓ  ａｎｄ  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．２００２年、１巻：８６７〜８８１頁。
【０００８】
【化１】
2011246485.tif 000002
【０００９】
リバビリン（１ａ；１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド；ビラゾール）は、インターフェロンを誘起させないブロードスペクトラムの合成抗ウイルスヌクレオシド類縁体である。リバビリンは、フラビビリダエを含むいくつかのＤＮＡウイルスおよびＲＮＡウイルスに対してインビトロ活性を有する（Ｇａｒｙ  Ｌ．Ｄａｖｉｓ、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２０００年、１１８巻：Ｓ１０４〜Ｓ１１４頁）。単剤療法でリバビリンは４０％の患者において血中アミノトランスフェラーゼ濃度を正常値まで減少させるが、ＨＣＶ−ＲＮＡの血中レベルは減少させない。リバビリンはまた、顕著な毒性を示し、貧血を引き起こすことが知られている。ビラミジン１ｂは肝細胞で１ａに変換されるプロドラッグである。
【００１０】
インターフェロン（ＩＦＮｓ）は、ほぼ１０年にわたって慢性肝炎の処置に利用されてきた。ＩＦＮｓはウイルス感染に応答して免疫細胞により生産される糖タンパク質である。インターフェロンは２つの区別されるタイプが知られており、１型にはいくつかのインターフェロンα’および１つのインターフェロンβが含まれ、２型にはインターフェロンγが含まれる。１型インターフェロンは主に感染した細胞により生産され、周りの細胞を新たな感染から保護する。ＩＦＮｓはＨＣＶを含む多くのウイルスのウイルス複製を阻害し、Ｃ型肝炎感染の単独の処置として使用される場合、ＩＦＮは血中のＨＣＶ−ＲＮＡを検出不能なレベルまで抑制する。さらに、ＩＦＮは血中アミノトランスフェラーゼ濃度を
正常化する。残念なことに、ＩＦＮの効果は一時的である。治療の停止後の再発率は７０％であり、１０〜１５％のみが、正常血中アラニントランスフェラーゼ濃度について持続性のウイルス学的著効を示す（Ｌ．−Ｂ．Ｄａｖｉｓ、上記参照）。
【００１１】
初期ＩＦＮ療法の制限の一つは、血液中の当該タンパク質の素早いクリアランスである。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）によるＩＦＮの化学的誘導体化により、持続性の面で改善された薬物動態上の特性を有するタンパク質が得られている。ＰＥＧＡＳＡＹＳ（登録商標）はインターフェロンα−２ａと４０ｋＤの分枝モノメトキシＰＥＧのコンジュゲートであり、ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（登録商標）はインターフェロンα−２ｂと１２ｋＤの分枝モノメトキシＰＥＧのコンジュゲートである（Ｂ．Ａ．Ｌｕｘｏｎら、Ｃｌｉｎ．Ｔｈｅｒａｐ．２００２年、２４巻（９号）：１３６３〜１３８３頁；Ａ．ＫｏｚｌｏｗｓｋｉおよびＪ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ、２００１年、７２巻：２１７〜２２４頁）。
【００１２】
リバビリンとインターフェロン−αによるＨＣＶの組み合わせ療法は現在のところ最適な治療法であるとされている。リバビリンとＰＥＧ−ＩＦＮ（以下参照）の組み合わせにより５４〜５６％の患者において持続性のウイルス応答が認められている。２型および３型ＨＣＶについてＳＶＲは８０％近い（Ｗａｌｋｅｒ、上記参照）。残念なことに、当該組み合わせはまた、臨床学上の異議が提起される副作用を生み出す。うつ、インフルエンザ様の症状および皮膚反応が皮下投与のＩＦＮ−αに伴い、溶血性貧血がリバビリンによる継続的処置に伴う。
【００１３】
抗ＨＣＶ療法としての医薬開発のための潜在的な分枝標的のいくつかがこれまでに同定されており、限定はされないが、ＮＳ２−ＮＳ３自己プロテアーゼ、Ｎ３プロテアーゼ、Ｎ３ヘリカーゼおよびＮＳ５Ｂポリメラーゼが含まれる。ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼは、プラスセンスの一本鎖ＲＮＡゲノムの複製において完全に必須である。この酵素は、医薬品化学者の間で大きな興味を持たれている。ＮＳ５Ｂのヌクレオシド阻害剤および非ヌクレオシド阻害剤の両方が知られている。
【００１４】
ヌクレオシド阻害剤は、ポリメラーゼに結合するヌクレオシドを妨げる、連鎖停止剤、または競争的阻害剤のいずれかとして作用しうる。連鎖停止剤として機能するために、ヌクレオシド類縁体は細胞に取り込まれ、インビボでトリホスフェートに変換されて、ポリメラーゼのヌクレオシド結合部位を競争的に阻害しなければならない。このトリホスフェートへの変換は、通常、潜在的なヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤に付加的な構造上の要件を与える細胞キナーゼにより媒介される。さらに、これにより、ＨＣＶ複製の阻害剤としてのヌクレオシドの直接的な評価は、ｉｎ  ｓｉｔｕのホスホリレーションが可能な細胞ベースのアッセイに限られる。
【００１５】
２００１年１１月２９日に公開されたＷＯ０１／９０１２１において、Ｊ．−Ｐ．ＳｏｍｍａｄｏｓｓｉおよびＰ．Ｌａｃｏｌｌａは、式２および式３の１’−アルキルおよび２’−アルキルヌクレオシドの抗ＨＣＶポリメラーゼ活性を開示および例示する。２００１年１２月６日に公開されたＷＯ０１／９２２８２において、Ｊ．−Ｐ．ＳｏｍｍａｄｏｓｓｉおよびＰ．Ｌａｃｏｌｌａは、式２および式３の１’−アルキルおよび２’−アルキルヌクレオシドによるフラビウイルスおよびペスチウイルスの処置を開示および例示する。いずれも２００３年４月３日に公開されたＷＯ０３／０２６６７５およびＷＯ０３／０２６５８９において、Ｇ．Ｇｏｓｓｅｌｉｎらは、４’−アルキルヌクレオシド４およびフラビウイルスおよびペスチウイルスの処置のための４’−アルキルヌクレオシドの使用を開示する。いずれも２００４年１月８日に公開されたＷＯ２００４／００３０００およびＷＯ２００４／００２９９９において、Ｊ．−Ｐ．Ｓｏｍｍａｄｏｓｓｉらは、１’−、２’−、３’−および４’−置換β−Ｄおよびβ−Ｌヌクレオシドを開示する。２０
０４年１月８日に公開されたＷＯ２００４／００２４２２において、Ｊ．−Ｐ．Ｓｏｍｍａｄｏｓｓｉらは、２’−Ｃ−メチルリボフラノシルシチジンの３’−Ｏ−Ｌ−バリンエステルおよびＨＣＶの処置におけるその使用を開示する。
【００１６】
Ｉｄｅｎｉｘは、シチジン類縁体２（Ｂ＝シトシン）のバリンエステル５である関連化合物ＮＭ２８３についての臨床試験を報告している。さらに、Ｉｄｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｌｔｄ．はまた、ＷＯ０４／０４６３３１において、生物学的に活性な２’−分枝β−Ｄまたはβ−Ｌヌクレオシドまたは医薬として許容なその塩またはそのプロドラッグにより生じたフラビビリダエ変異株を開示する。
【００１７】
【化２】
2011246485.tif 000003
【００１８】
２００２年７月２５日に公開されたＷＯ０２／０５７４２５において、Ｓ．Ｓ．Ｃａｒｒｏｌｌらは、炭水化物サブユニットが化学的に修飾されている、ＲＮＡ−依存性ＲＮＡポリメラーゼのヌクレオシド阻害剤を開示する。２００２年７月２５日に公開されたＷＯ０２／０５７８７において、Ｓ．Ｓ．Ｃａｒｒｏｌｌらは、塩基が置換されていてもよい７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン基である、関連する２α−メチルおよび２β−メチルリボース誘導体６を開示する。Ｓ．Ｓ．Ｃａｒｒｏｌｌ（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００３年、２７８巻（１４号）：１１９７９〜１１９８４頁）らは、２’−Ｏ−メチルシチジン（６ａ）によるＨＣＶポリメラーゼの阻害を開示する。２００４年１２月２３日に開示された米国公開公報Ｎｏ．２００４／０２５９９３４において、Ｄ．Ｂ．Ｏｌｓｅｎらは、コロナビリダエ（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）ウイルス複製の阻害方法およびヌクレオシド化合物によるコロナビリダエウイルス感染の処置方法を開示する。
【００１９】
【化３】
2011246485.tif 000004
【００２０】
２００２年１２月１９日に公開されたＷＯ０２／１００４１５（ＵＳ２００３／０２３６２１６Ａ１）において、Ｒ．Ｒ．Ｄｅｖｏｓらは、ＨＣＶ活性を示す４’−置換ヌクレオシド化合物を開示する。明確に特定されている４つの化合物には、４’−アジド化合物７ａ、４’−エチニル化合物７ｂ、４’−エトキシ化合物７ｃおよび４’−アセチル化合
物７ｄが含まれる。例示されているリボース部分の修飾には、２’−デオキシ誘導体８ａ、３’−デオキシ誘導体８ｂ、３’−メトキシ誘導体８ｅ、３’−フルオロ誘導体８ｃおよび２’，２’−ジフルオロ誘導体８ｄが含まれる。２００４年６月３日に公開されたＷＯ２００４／０４６１５９（ＵＳ２００４／１２１９８０）において、Ｊ．Ａ．Ｍａｒｔｉｎらは、ＨＣＶ−媒介疾患の処置に有用な７ａのプロドラッグを開示する。
【００２１】
【化４】
2011246485.tif 000005
【００２２】
米国出願のいずれも、参照することにより本明細書においてその全体が援用される。「ＨＣＶ  ＲＮＡ複製阻害剤としての４’−置換ヌクレオシド誘導体」との題名の２００２年６月１１日に出願された米国出願番号Ｎｏ．１０／１６７，１０６、および２００３年１１月１９日に出願された米国出願Ｎｏ．１０／７１７，２６０は、本発明に関連する化合物を開示する。両方の出願とも参照することによりその全体を本明細書に援用する。
【００２３】
Ｙ．−Ｈ．Ｙｕｎら（Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１９８５年、１８巻（５号）：３６４〜３５頁）は、４’−アジド−２’−デオキシ−２’−フルオロ−アラビノフラノシルヌクレオシド（９：Ｒ＝Ｈ、ＭｅおよびＣｌ）の合成および抗ウイルス活性を開示する。
【００２４】
【化５】
2011246485.tif 000006
【００２５】
Ｇ．Ｓ．ＪｅｏｎおよびＶ．Ｎａｉｒ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９９６年、５２巻（３９号）：１２６４３〜５０頁）は、ＨＩＶ逆転写酵素阻害剤としての４’−アジドメチル−２’，３’−デオキシリボヌクレオシド１０（Ｂ＝アデニン、チミンおよびウラシル）の合成を開示する。
【００２６】
４’−アジドヌクレオシドについてのいくつかのコンピューターによる研究が報告されている：Ｄ、Ｇａｌｉｓｔｅｏら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｔｒｕｃｔ．１９９６年、３８４巻（
１号）：２５〜３３頁；Ｊ．Ｐｅｐｅら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９９６年、３２巻（１０号）：７７５〜７８６頁；Ｅ．Ｅｓｔｒａｄａら、Ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｔｏｗａｒｄ  ｔｈｅ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ａｎｔｉ
ＨＩＶ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｆｏ．Ｃｏｍｐ．Ｓｃｉ．、２００２年、４２巻（５号）：１１９４〜１２０３頁。
【００２７】
Ｉ．Ｓｕｇｉｍｏｔｏらは、４’−エチニル−２’−デオキシシチジン（１１）および４’位のその他の２炭素置換基の合成、ならびにＨＩＶおよびＨ．ｓｉｍｐｌｅｘのバイオアッセイを開示する（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．１８３、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ４’β−Ｂｒａｎｃｈｅｄ  Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｓ  ａｓ  ａ  Ｎｅｗ  Ｔｙｐｅ  ｏｆ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ａｇｅｎｔ、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１９９９年、９巻：３８５〜８８頁）。Ｔ．Ｗａｄａら（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１９９６年、１５巻（１−３）：２８７〜３０４頁）は、４’−Ｃ−メチルヌクレオシドの合成および抗ＨＩＶ活性を開示する。
【００２８】
２００１年５月１０日に公開されたＷＯ０１／３２１５３において、Ｒ．Ｓｔｏｒｅｒは、ヌクレオシドのジオキソラン類縁体を投与することによるフラビビリダエウイルス感染の治療方法または予防方法を開示する。
【００２９】
２００２年３月７日に公開されたＷＯ０２／１８４０４において、Ｒ．Ｄｅｖｏｓらは、新規および既知のプリンおよびピリミジンヌクレオシド誘導体、ならびにサブゲノムＨＣＶ複製阻害剤としてのそれらの使用、ならびに当該ヌクレオシド誘導体を含む医薬組成物を開示する。開示された化合物は、置換されたプリン塩基およびピリミジン塩基を有するヌクレオシドからなる。
【００３０】
ＥＰＡ公開Ｎｏ．０３５２２４８は、ＨＩＶ、ヘルペスおよび肝炎の処置のための、広範囲のＬ−リボフラノシルプリンヌクレオシドを開示する。Ａｋｔｉｅｂｏｌａｇｅｔ  Ａｓｔｒａにより出願されたＷＯ８８／０９００１において、類似の明細書が確認されている。
【００３１】
Ｋ．Ｋｉｔａｎｏら（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９９７年、５３巻（３９号）：１３３１５〜１３３２２頁）は、４’−フルオロメチル  ２−デオキシ−Ｄ−エリスロ−、リボ−およびアラビノ−ペントフラノシルシトシンの合成、および抗腫瘍活性を開示する。
【００３２】
ＨＩＶ逆転写酵素の非ヌクレオシドアロステリック阻害剤は、単独で、ならびにヌクレオシド阻害剤との組み合わせおよびプロテアーゼ阻害剤との組み合わせにおいて、有効な治療法であることがわかっている。いくつかの種類の非ヌクレオシドＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ阻害剤が記載されており、現在、開発の種々の段階にある。当該阻害剤には、ベンズイミダゾール（Ｈ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら、ＷＯ０１／４７８３３；Ｈ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら、ＷＯ０３／０００２５４；Ｐ．Ｌ．Ｂｅａｕｌｉｅｕら、ＷＯ０３／０２０２４０Ａ２；Ｐ．Ｌ．Ｂｅａｕｌｉｅｕら、ＵＳ６，４４８，２８１Ｂ１；Ｐ．Ｌ．Ｂｅａｕｌｉｅｕら、ＷＯ０３／００７９４５Ａ１）；インドール（Ｐ．Ｌ．Ｂｅａｕｌｉｅｕら、ＷＯ０３／００１０１４１Ａ２）；ベンゾチアジアジン、例えば、１（Ｄ．Ｄｈａｎａｋら、ＷＯ０１／８５１７２Ａ１、２００１年５月１０日出願；Ｄ．Ｃｈａｉら、ＷＯ２００２／０９８４２４、２００２年６月７日出願、Ｄ．Ｄｈａｎａｋら、ＷＯ０３／０３７２６２Ａ２、２００２年１０月２８日出願；Ｋ．Ｊ．Ｄｕｆｆｙら、ＷＯ０３／０９９８０１Ａ１、２００３年５月２３日出願；Ｍ．Ｇ．Ｄａｒｃｙら、ＷＯ２００３／０５９３５６、２００２年１０月２８日；Ｄ．Ｃｈａｉら、ＷＯ２００４／０５２３１２、２００４年６月２４日出願；Ｄ．Ｃｈａｉら、ＷＯ２００４／０５２３１３、２００３年１２月１３
日出願；Ｄ．Ｍ．Ｆｉｔｃｈら、ＷＯ２００４／０５８１５０、２００３年１２月１１日出願；Ｄ．Ｋ．Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎら、ＷＯ２００５／０１９１９１、２００４年８月１９日出願；Ｊ．Ｋ．Ｐｒａｔｔら、ＷＯ２００４／０４１８１８Ａ１、２００３年１０月３０日出願）；チオフェン、例えば、２（Ｃ．Ｋ．Ｃｈａｎら、ＷＯ０２／１００８５１Ａ２）；ベンゾチオフェン（Ｄ．Ｃ．ＹｏｕｎｇおよびＴ．Ｒ．Ｂａｉｌｅｙ、ＷＯ００／１８２３１）；β−ケトピルベート（Ｓ．Ａｔｔａｍｕｒａら、ＵＳ６，４９２，４２３Ｂ１、Ａ．Ａｔｔａｍｕｒａら、ＷＯ００／０６５２９）；ピリミジン（Ｃ．Ｇａｒｄｅｌｌｉら、ＷＯ０２／０６２４６Ａ１）；ピリミジンジオン（Ｔ．Ｒ．ＢａｉｌｅｙおよびＤ．Ｃ．Ｙｏｕｎｇ、ＷＯ００／１３７０８）；トリアジン（Ｋ．−Ｈ．Ｃｈｕｎｇら、ＷＯ０２／０７９１８７Ａ１）；ロダニン誘導体（Ｔ．Ｒ．ＢａｉｌｅｙおよびＤ．Ｃ．Ｙｏｕｎｇ、ＷＯ００／１０５７３；Ｊ．Ｃ．Ｊｅａｎら、ＷＯ０１／７７０９１Ａ２）；２，４−ジオキソピラン（Ｒ．Ａ．Ｌｏｖｅら、ＥＰ２５６６２８Ａ２）；フェニルアラニン誘導体（Ｍ．Ｗａｎｇら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００３年、２７８巻：２４８９〜２４９５頁）が含まれる。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂを阻害するチアジンは、２００５年８月２２日出願の米国出願公開Ｎｏ．２００６／００４０９２７においてＪ．Ｆ．Ｂｌａｋｅらにより開示されている。
【００３３】
【化６】
2011246485.tif 000007
【００３４】
ウイルス複製に必要なＨＣＶプロテアーゼの阻害剤もまた開示されている（Ｆ．ＭｃＰｈｅｅら、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ２００３年、２８巻（５号）：４６５〜４８８頁；Ｙ．Ｓ．Ｔｓａｎｔｒｉｚｏｓら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇ．２００３年、４２巻（１２号）：１３５６〜１３６０頁）。本発明のヌクレオシド化合物は、これらの、およびその他のポリメラーゼ阻害剤およびプロテアーゼ阻害剤と組み合わせて使用してもよい。
【００３５】
これらの取り組みの結果は概説されている（Ｊ．Ｚ．ＣｈｅｎおよびＺ．Ｈｏｎｇ、Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉ−ＨＣＶ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．２００３年、３巻（３号）：２０７〜２１９頁）。非ヌクレオシド阻害剤は本発明に関連しない。
【００３６】
本発明の目的は、Ｃ型肝炎ウイルスに感染した宿主の処置のための、新たなヌクレオシド化合物、方法および組成物を提供することである。
現在のところ、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の予防的処置方法はなく、現在承認されている療法のうち、ＨＣＶのみを対象とするものは限られている。新たな医薬化合物の設計および開発が不可欠である。
【００３７】
驚くべきことに、２’−デオキシ−２’−β−メチル−４’−アジド−シチジンまたはそのエステルは、ＨＣＶの処置に有用であり、宿主への投与後により低い毒性を示した。本発明はまた、当該化合物および少なくとも１つの医薬として許容な担体、賦形剤または
希釈剤の医薬組成物を提供する。
【００３８】
組み合わせ療法は、ウイルス疾患の処置、およびその他の承認されたまたは治験中のＨＣＶ治療薬と相助的である新規な化合物において有用であることがわかっており、本発明は、場合によっては医薬として許容な担体、賦形剤または希釈剤の少なくとも１つを含んでいてもよい、１以上のその他の有効な抗ウイルス剤または免疫賦活剤と組み合わせて、または交互に、上記の一般式のヌクレオシド、または医薬として許容なその塩を用いる、ＨＣＶの処置が提供される。
【００３９】
本発明は、式Ｉのヌクレオシド、またはその酸付加塩、または医薬として許容なその塩、およびＨＣＶに感染した宿主の処置のための当該化合物の使用を提供する：
【００４０】
【化７】
2011246485.tif 000008
【００４１】
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、独立に、水素、ＣＯＲ４、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４、およびＣ（＝Ｏ）ＣＨＲ５ＮＨＲ６からなる群より選択され；
Ｒ４は、独立に、（ａ）Ｃ１−１８非分枝または分枝アルキル、（ｂ）Ｃ１−１８ハロアルキル、（ｃ）Ｃ３−８シクロアルキル、（ｄ）Ｃ１−１０ヘテロアルキル、および（ｅ）フェニルからなる群より選択され、前記フェニルは、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、ハロゲン、シアノ、またはニトロから独立に選択される１〜３の基により置換されていてもよく；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−１０アルキル、フェニル、またはＣ１−３フェニルアルキルであり、前記フェニルは、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−３アルコキシ、Ｃ１−３アルキル、シアノ、およびニトロからなる群より独立に選択される１〜３の基により置換されていてもよく；
Ｒ６は、水素またはＣ１−６アルコキシである］。
【００４２】
本発明はまた、宿主におけるＨＣＶの治療または予防のための医薬の製造における、その他の有効な抗ウイルス剤と組み合わせてもよく、少なくとも１つの医薬として許容な担体、賦形剤または希釈剤を含んでもよい、式Ｉの化合物、または医薬として許容なその塩の使用を提供する。
【００４３】
理論により拘束はされることを意図しないが、本発明の化合物は、ヒト細胞においてキナーゼにより、５’−Ｏ−モノホスフェート、５’−Ｏ−ジホスフェート、および最終的に、抗ウイルス活性を有する代謝物である５’−Ｏ−トリホスフェートに、逐次リン酸化されると考えられる。したがって、本発明のさらなる側面は、これらの５’−Ｏリン酸化種、すなわち、Ｒ１およびＲ３がＨであり、およびＲ２がモノホスフェート、ジホスフェートまたはトリホスフェートエステルである、式Ｉの化合物を提供する。
【００４４】
ヌクレオシド阻害剤の抗ウイルス活性は、典型的には、ヌクレオシドの宿主細胞への取り込み、ヌクレオシドの活性トリホスフェートへの変換、トリホスフェートの細胞内安定性、およびウイルスポリメラーゼのＲＮＡ合成活性を妨害するためのトリホスフェートの能力の複合的結果である。以下の生物学的実施例に示すとおり、本発明の化合物は、イン
ビボで速やかにリン酸化されて活性トリホスフェートとなり、分子内でのトリホスフェートの半減期は長いことから、抗ウイルス活性種は持続的に高濃度を維持することができる。
【００４５】
本発明の１つの態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が、本明細書で既に定義したとおりである式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩が提供される。語句「本明細書で既に定義したとおり」は、上記の式Ｉの定義に示される各基についての最も広い定義を意味する。以下に示すその他の態様において、明確に定義されていない各々の態様に示される置換基は、発明の概要に示される最も広い定義を保持する。
【００４６】
本発明の別の態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３が水素である式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩が提供される。
本発明の別の態様において、Ｒ１およびＲ３がＨであり、Ｒ２が、モノホスフェート、ジホスフェートまたはトリホスフェートエステルである式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩が提供される。
【００４７】
本発明のさらに別の態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、各々独立に、水素、ＣＯＲ４またはＣ（＝Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４は本明細書に既に定義したとおりである式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩が提供される。
【００４８】
本発明のさらに別の態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、各々独立に、水素、ＣＯＲ４またはＣ（＝Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４が、低級アルキル、特にメチル、エチル、ｉ−プロピル、またはｔ−ブチルなどの非分枝または分枝Ｃ１−１０アルキルである式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩が提供される。
【００４９】
本発明のさらに別の態様において、Ｒ１が水素であり；Ｒ２およびＲ３がＣＯＲ４である式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩が提供される。
本発明のさらに別の態様において、Ｒ１が水素であり；Ｒ２およびＲ３がＣＯＲ４であり、Ｒ４が、低級アルキル、特にメチル、エチル、ｉ−プロピル、またはｔ−ブチルなどの非分枝または分枝Ｃ１−１０アルキルである式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩が提供される。化合物が２つのＲ４部分を含む場合、合成の簡便性から、それらは典型的には同一である。
【００５０】
本発明のさらに別の態様において、Ｒ１およびＲ３が水素であり；Ｒ２が、ＣＯＲ４、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４またはＣＯＣＨ（Ｒ５）ＮＨＲ６であり；およびＲ４、Ｒ５およびＲ６が本明細書において既に定義したとおりである式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩が提供される。
【００５１】
本発明のさらに別の態様において、Ｒ１およびＲ２が水素であり；Ｒ３が、ＣＯＲ４、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４またはＣＯＣＨ（Ｒ５）ＮＨＲ６であり；Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が本明細書において既に定義したとおりである式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩が提供される。
【００５２】
本発明の別の態様において、Ｒ２がＣＯＣＨ（Ｒ５）ＮＨＲ６であり、Ｒ５が、ｉｓｏ−プロピル、ｉｓｏ−ブチルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ６が水素である式Ｉの化合物が提供される。この態様の好ましい配置において、Ｒ５基の立体配置は（Ｓ）であり、すなわちＲ２はＬ−脂肪族アミノ酸残基である。この態様におけるＲ１は典型的にはＨであり、一方、Ｒ３は、ＨまたはＣＯＣＨ（Ｒ５）ＮＨＲ６であり、Ｒ５はｉｓｏ−プロピル、ｉｓｏ−ブチルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ６は水素である。化合物が２つの前記ＣＯＣＨ（Ｒ５）ＮＨＲ６部分を有する場合、合成の簡便性から、それらは典型的には
同一である。
【００５３】
本発明の別の態様において、Ｒ３がＣＯＣＨ（Ｒ５）ＮＨＲ６であり、Ｒ５がｉｓｏ−プロピル、ｉｓｏ−ブチルまたはｓｅｃ−ブチルであり、およびＲ６が水素である式Ｉの化合物が提供される。この態様の好ましい配置において、Ｒ５基の立体配置は（Ｓ）であり、すなわち、Ｒ３はＬ−脂肪族アミノ酸残基である。この態様において、Ｒ１は典型的にはＨである。
【００５４】
本発明のさらに別の態様において、Ｒ１およびＲ３が水素であり；Ｒ２がＣＯＲ４であり；およびＲ４が本明細書において既に定義されたとおりである式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩が提供される。
【００５５】
本発明のさらに別の態様において、Ｒ１およびＲ３が水素であり；Ｒ２がＣＯＲ４であり；およびＲ４が、低級アルキル、特にメチル、エチル、ｉ−プロピル、またはｔ−ブチルなどの非分枝または分枝Ｃ１−１０アルキルである式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩が提供される。
【００５６】
本発明のさらに別の態様において、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置方法であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が本明細書において既に定義されたとおりである、治療有効量の式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩を、それを必要とする哺乳類に投与することを含む前記方法が提供される。
【００５７】
本発明のさらに別の態様において、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置方法であって、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が水素である、治療有効量の式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩を、それを必要とする哺乳類に投与することを含む前記方法が提供される。
【００５８】
本発明のさらに別の態様において、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置方法であって、Ｒ１が水素であり；Ｒ２およびＲ３が各々ＣＯＲ４であり；Ｒ４が、非分枝または分枝Ｃ１−１０低級アルキルから選択される、治療有効量の式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩を、それを必要とする哺乳類に投与することを含む前記方法が提供される。
【００５９】
本発明の別の態様において、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置方法であって、Ｒ１およびＲ３が水素であり；Ｒ２がＣＯＲ４またはＣＯＣＨ（Ｒ５）ＮＨＲ６であり；Ｒ４が、非分枝または分枝のＣ１−１０低級アルキルからなる群から選択され；Ｒ５およびＲ６が本明細書において既に定義されたとおりである；、治療有効量の式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩を、それを必要とする哺乳類に投与することを含む前記方法が提供される。
【００６０】
本発明の別の態様において、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置方法であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が本明細書において既に定義されたとおりである、式Ｉの化合物；または医薬として許容なその塩を、１日に患者の体重１ｋｇ当たり１〜１００ｍｇの薬量で、それを必要とする哺乳類に投与することを含む前記方法が提供される。
【００６１】
本発明の別の態様において、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置方法であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が本明細書において既に定義されたとおりである、治療有効量の式Ｉの化合物、または医薬として許容なその塩；および少なくとも１つの免疫系調節剤、および／または少なくとも１つのＨＣＶの複製を阻害す
る抗ウイルス剤を、それを必要とする哺乳類に併用投与することを含む前記方法が提供される。
【００６２】
本発明の別の態様において、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置方法であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が本明細書において既に定義されたとおりである、治療有効量の式Ｉの化合物、または医薬として許容なその塩；およびインターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、またはコロニー刺激因子から選択される少なくとも１つの免疫系調節剤を、それを必要とする哺乳類に併用投与することを含む前記方法が提供される。医学の技術分野における当業者であれば、これらの免疫系分子は天然の形態であってもよく、またはそれらは有益な薬物動態学上の特性を付与するために化学的に誘導体化されていてもよいことを了解するであろう。
【００６３】
本発明の別の態様において、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置方法であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が本明細書において既に定義されたとおりである、治療有効量の式Ｉの化合物、または医薬として許容なその塩；およびインターフェロンまたは化学的に誘導体化されたインターフェロンを、それを必要とする哺乳類に併用投与することを含む前記方法が提供される。
【００６４】
本発明の別の態様において、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置方法であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５が本明細書において既に定義されたとおりである、治療有効量の式Ｉの化合物、または医薬として許容なその塩；および少なくとも１つの別の抗ウイルス剤を、それを必要とする哺乳類に併用投与することを含む前記方法が提供される。
【００６５】
本発明の別の態様において、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）により媒介される疾患の処置方法であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５が本明細書において既に定義されたとおりである、治療有効量の式Ｉの化合物、または医薬として許容なその塩；および少なくとも１つのＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、別のヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、非ヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶヘリカーゼ阻害剤、ＨＣＶプライマーゼ阻害剤またはＨＣＶ融合阻害剤を、それを必要とする哺乳類に併用投与することを含む前記方法が提供される。
【００６６】
本発明の１つの態様において、少なくとも１つの医薬として許容される担体、希釈剤または賦形剤と混合された、治療有効量の式Ｉの化合物、または医薬として許容なその塩を含む医薬組成物であって、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が本明細書において既に定義されたとおりである、前記組成物が提供される。
【００６７】
本発明の別の態様において、３５〜７５重量％の式Ｉの化合物（ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が本明細書において既に定義されたとおりである）、または医薬として許容なその塩；および残余として少なくとの１つの医薬として許容される担体、希釈剤または賦形剤を含有する、５００〜１５００ｍｇ圧縮錠剤を含む、医薬組成物が提供される。
【００６８】
本発明の別の態様において、４０〜６０重量％の式Ｉの化合物（ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が本明細書において既に定義されたとおりである）、または医薬として許容なその塩；および残余として少なくとの１つの医薬として許容される担体、希釈剤または賦形剤を含有する、５００〜１５００ｍｇ圧縮錠剤を含む、医薬組成物が提供される。
【００６９】
本明細書（英文明細書）で使用される「ａ」または「ａｎ」を付加した要素に関するフ
レーズは、１またはそれ以上の当該要素を意味し、例えば「ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ」（化合物）は、１以上の化合物または少なくとも１の化合物を意味する。このように、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１以上」および「少なくとも１の」は本明細書において置き換え可能なものとして使用されうる。
【００７０】
「本明細書で既に定義した」との句は、式Ｉの定義において示される各基についての最初の定義を意味する。
本明細書で使用される用語「任意の（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」または「場合によっては（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」は、記載される事象または状況が存在しても存在しなくてもよく、当該記載が、前記事象または状況が存在する例、および存在しない例を包含することを意味する。例えば、「置換されていてもよいフェニル（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｐｈｅｎｙｌ）」は、当該フェニルが置換されていても置換されていなくてもよく、当該記載が無置換のフェニルおよび置換基が存在するフェニルの両方を包含することを意味する。
【００７１】
本発明の化合物は、ヌクレオシドと連結したときにジアステレオマーを生じさせる、カルボン酸エステル、アミドまたはカルボネート部分の側鎖に存在する不斉中心を有してもよい。本発明の化合物の側鎖のすべての立体異性体は、混合物、純粋な形態または実質的に純粋な形態のいずれにおいても本明細書の意図する範囲である。本発明の化合物の定義は、単離された光学異性体、エナンチオマー、およびラセミ体を含むそれらの混合物双方すべてを包含する。純粋な光学異性体は、α−Ｄ−リボースからの立体特異的合成により合成可能であり、ラセミ体は、物理的方法、例えば、ジアステレオ誘導体の分別晶出、分離または結晶化、またはキラルカラムクロマトグラフィーによる分離などにより調製することができる。個々の光学異性体は、慣用の方法、例えば、光学活性な酸との塩の形成、その後の結晶化などにより、ラセミ体から入手可能である。
【００７２】
本明細書で使用される用語「アルキル」は、１〜１８の炭素原子を含有する非分枝鎖または分枝鎖の炭化水素基を意味する。用語「低級アルキル」は、１〜６の炭素原子を含有する非分枝鎖または分枝鎖の炭化水素基を意味する。代表的な低級アルキルには、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルまたはペンチルが含まれる。
【００７３】
用語「アルキル」が、「フェニルアルキル」または「ヒドロキシアルキル」のように別の用語に続く接尾語として使用される場合、これは、既に定義したアルキル基が、別の具体的に指定した基から選択される１〜２の置換基により置換されていることを意図する。したがって、例えば「フェニルアルキル」は１〜２のフェニル置換基を有するアルキル基を意味し、ベンジル、フェニルエチルおよびビフェニルが含まれる。「アルキルアミノアルキル」は、１〜２のアルキルアミノ置換基を有するアルキル基である。
【００７４】
本明細書で使用される用語「ハロアルキル」は、１、２、３またはそれ以上の水素原子がハロゲンにより置換された、既に定義した非分枝鎖または分枝鎖アルキル基を意味する。例として、１−フルオロメチル、１−クロロメチル、１−ブロモメチル、１−ヨードメチル、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、トリブロモメチル、トリヨードメチル、１−フルオロエチル、１−クロロエチル、１−ブロモエチル、１−ヨードエチル、２−フルオロエチル、２−クロロエチル、２−ブロモエチル、２−ヨードエチル、２，２−ジクロロエチル、３−ブロモプロピル、または２，２，２−トリフルオロエチルが挙げられる。
【００７５】
本明細書で使用される用語「シクロアルキル」は、３〜８の炭素原子を含む飽和炭素環式環、すなわちシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シク
ロヘプチル、またはシクロオクチルが挙げられる。
【００７６】
本明細書で使用される用語「シクロアルキルアルキル」は、基Ｒ’Ｒ”−であり、ここでＲ’は本明細書で定義したシクロアルキル基であり、Ｒ”は本明細書で定義したアルキレン基であり、当該シクロアルキルアルキル部分の結合部はアルキレン基上にあろうことは理解されよう。シクロアルキルアルキル基の例には、限定はされないが、シクロプロピルメチル、シクロヘキシルメチル、シクロペンチルエチルが含まれる。Ｃ３−７シクロアルキル−Ｃ１−３アルキルは、基Ｒ’Ｒ”−であり、ここでＲ’はＣ３−７シクロアルキルであり、Ｒ”は本明細書で定義したＣ１−３アルキレンである。
【００７７】
本明細書で使用される用語「アルキレン」は、特段指示がなければ、１〜８の炭素原子の２価の飽和直鎖炭化水素基、または３〜８の炭素原子の２価の分枝鎖飽和炭化水素基を意味する。アルキレン基の例には、特に限定はされないが、メチレン、エチレン、プロピレン、２−メチル−プロピレン、ブチレン、２−エチルブチレンが含まれる。
【００７８】
本明細書で使用される用語「アルケニル」は、２〜１８の炭素原子、好ましくは２〜４の炭素原子を有し、１または２のオレフィン性二重結合、好ましくは１つのオレフィン性二重結合を有する無置換の（または置換された）炭化水素鎖基を意味する。例としては、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル（アリル）、または２−ブテニル（クロチル）が挙げられる。
【００７９】
本明細書で使用される用語「アルキニル」は、２〜１８の炭素原子（好ましくは２〜４の炭素原子）を有し、１または可能な場合は２の三重結合（好ましくは１つの三重結合）を有する無置換の炭化水素鎖基を意味する。例としては、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、または３−ブチニルが挙げられる。
【００８０】
本明細書で使用される用語「アルコキシ」は、無置換の非分枝鎖または分枝鎖アルコキシ基を意味し、ここで「アルキル」部分は既に定義したとおりであり、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、ヘプチルオキシなど（それらの異性体を含む）である。本明細書で使用される「低級アルコキシ」は、既に定義した「低級アルキル」基を有するアルコキシ基を意味する。
【００８１】
本明細書で使用される用語「アルキルチオ」または「チオアルキル」は、非分枝鎖または分枝鎖（アルキル）Ｓ−基を意味し、ここで当該「アルキル」部分は既に定義したとおりである。例としては、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、ｉ−プロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、ｉ−ブチルチオ、またはｔ−ブチルチオである。
【００８２】
本明細書で使用される用語「アルキルスルフィニル」および「アリールスルフィニル」は、式−Ｓ（＝Ｏ）Ｒの基を意味し、ここでＲはそれぞれアルキルまたはアリールであって、アルキルおよびアリールは本明細書に定義したとおりである。
【００８３】
本明細書で使用される用語「アルキルスルホニル」および「アリールスルホニル」は、式−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒの基を意味し、Ｒはそれぞれアルキルまたはアリールであって、アルキルおよびアリールは本明細書に定義したとおりである。
【００８４】
本明細書で使用される用語「アリール」は、炭素原子および水素原子を含む、置換されていてもよい単環式または多環式の芳香族基を意味する。好適なアリール基の例としては、限定はされないが、フェニルおよびナフチル（例えば、１−ナフチルまたは２−ナフチル）が挙げられる。アリールの好適な置換基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ア
リールオキシ、シクロアルキル、アシル、アシルアミノ、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシ、ニトロおよびシアノからなる群から選択される。
【００８５】
本明細書で使用される用語「アシル」（「アルキルカルボニル」）は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒの基を意味し、ここで、Ｒは、水素、１〜７の炭素原子を含む非分枝または分枝のアルキル、またはフェニル基である。
【００８６】
本明細書で使用される用語「アルコキシカルボニル」および「アリールオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲの基を意味し、ここで、Ｒはそれぞれアルキルまたはアリールであり、アルキルおよびアリールは本明細書に定義されたとおりである。
【００８７】
用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素、好ましくはフッ素、塩素、臭素を表す。
本明細書で使用される用語「アシル化剤」は、無水物、アシルハライド、またはその他のカルボン酸の活性化された誘導体を意味する。本明細書で使用される用語「無水物」は、前のパラグラフで定義される、一般構造ＲＣ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｒの化合物を意味する。本明細書で使用される用語「アシルハライド」は基ＲＣ（Ｏ）Ｘを意味し、ここでＸはブロモまたはクロロである。本明細書で使用される、化合物の「活性化された誘導体」との用語は、目的の化学反応において当該化合物を活性にする、元の化合物の過渡的な反応性形態を意味し、ここで元の化合物は穏やかな反応性であるのみか、または非反応性である。活性化では、元の化合物よりも高い自由エネルギー含量である誘導体または分子内での化学基の形成により活性化され、これにより活性化体は別の試薬との反応に感受性となる。本発明の背景において、カルボキシ基の活性化は特に重要である。本明細書で使用される用語「アシル化剤」には、さらにカルボネートエステルＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ４を生成する試薬が含まれ、ここでＲ４は本明細書で既に定義したとおりである。
【００８８】
本明細書で使用される用語「保護基」は、（ａ）望まない化学反応への関与から反応性基を守り；および（ｂ）反応性基の保護が不要となった後に容易に除去することが可能である化学基を意味する。例えば、トリアルキルシリルは、１級のヒドロキシ官能基の保護基であり、アセトニドはビシナルジオールの保護基である。
【００８９】
この出願を通して示される化合物の図による記述において、太く先細のくさび形の結合は、不斉炭素が属する環の面の上にある置換基を示し（またはβを指示し）、破線のくさび形の結合は、不斉炭素が属する環の面の下にある置換基を示す（またはαを指示する）。
【００９０】
本明細書で使用される用語「組み合わせ」または「組み合わせ療法」は、同時または異なるときに、複数の薬剤を併用投与または連続投与することにより、治療法において当該薬剤を投与することを意味する。
【００９１】
本明細書で使用される用語「化学的に誘導体化されたインターフェロン」は、インターフェロンの物理的特性および／または化学的特性を改変するポリマーと共有結合により連結したインターフェロン分子を意味する。当該ポリマーの非限定的列挙としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）などのポリアルキレンオキシドホモポリマー、ポリオキシエチレン化されたポリオール、それらのコポリマー、およびそれらのブロックポリマーなどが挙げられ、ただし当該コブロックポリマーの水溶性は維持されている。当該技術分野の当業者であれば、当該ポリマーとインターフェロンを連結する多数のアプローチに気付くであろう（例えば、Ａ．ＫｏｚｌｏｗｓｋｉおよびＪ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ、２００１年、７２
巻（１−３号）：２１７〜２４頁）。本発明で意図される化学的に誘導体化されたＩＦＮαの非限定的列挙には、ペグインターフェロン−α−２ａ（ＰＥＧＡＳＡＹ（登録商標））およびペグインターフェロン−α−２ｂ（ＰＥＧＩＮＴＲＯＮ（登録商標））が含まれる。
【００９２】
式Ｉの化合物は互変異性を示す。互変異性化合物は、２以上の相互変換可能な種として存在しうる。プロトトロピック互変異性は、２原子間での共有結合した水素原子の移動により生じる。一般に、互変異性は平衡に存在し、各互変異性体の単離の試みは、通常、化学的特性および物理的特性が化合物の混合物と一致する混合物を与える。平衡の位置は分子内の化学的特性に依存する。例えば、アセトアルデヒドなどの、多くの脂肪族アルデヒドおよびケトンでは、ケト体が優勢であり、一方フェノールにおいてはエノール体が優勢である。よくあるプロトロピック互変異性体としては、ケト／エノール互変異性体
【００９３】
【化８】
2011246485.tif 000009
【００９４】
アミド／イミド酸互変異性体
【００９５】
【化９】
2011246485.tif 000010
【００９６】
およびアミジン互変異性体
【００９７】
【化１０】
2011246485.tif 000011
【００９８】
が挙げられる。後ろの２つは、ヘテロアリール環およびヘテロ環式環において特によく見受けられ、本発明は当該化合物のすべての互変異性体を包含する。
通常使用される略語には以下のものが含まれる：アセチル（Ａｃ）、アゾ−ビス−イソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）、気圧（Ａｔｍ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピロカルボネートまたはｂｏｃ無水物（ＢＯＣ２Ｏ）、ベンジル（Ｂｎ）、ブチル（Ｂｕ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺまたはＺ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウン−デク−７−エン（ＤＢＵ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）、ジ−ｉｓｏ−プロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）、ジ−ｉｓｏ−ブチルアルミニウムヒドリド（ＤＩＢＡＬまたはＤＩＢＡＬ−Ｈ）、ジ−ｉｓｏ−プロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、エチル（Ｅｔ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、２−エトキシ−２Ｈ−キノリン−１−カルボン酸エチル（ＥＥＤＱ）、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ、Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート酢酸（ＨＡＴＵ）、（ＨＯＡｃ）、１−Ｎ−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、リチウムヘキサメチルジシラジド（ＬｉＨＭＤＳ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、融点（ｍｐ）、ＭｅＳＯ２−（メシルまたはＭｓ）、メチル（Ｍｅ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ｍ−クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）、質量分析（ｍｓ）、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（ＮＢＳ）、Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）、Ｎ−クロロコハク酸イミド（ＮＣＳ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ピリジニウムクロロクロメート（ＰＣＣ）、ピリジニウムジクロメート（ＰＤＣ）、フェニル（Ｐｈ）、プロピル（Ｐｒ）、ｉｓｏ−プロピル（ｉ−Ｐｒ）、ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）、ピリジン（ｐｙｒ）、室温（ｒｔまたはＲＴ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルまたはｔ−ＢｕＭｅ２Ｓｉ（ＴＢＤＭＳ）、トリエチルアミン（ＴＥＡまたはＥｔ３Ｎ）、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル（ＴＥＭＰＯ）、トリフレートまたはＣＦ３ＳＯ２−（Ｔｆ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリメチルシリルまたはＭｅ３Ｓｉ（ＴＭＳ）、ｐ−トルエンスルホン酸１水和物（ＴｓＯＨまたはｐＴｓＯＨ）、４−Ｍｅ−Ｃ６Ｈ４ＳＯ２−またはトシル（Ｔｓ）、Ｎ−ウレタン−Ｎ−カルボキシ無水物（ＵＮＣＡ）。ノルマル（ｎ）、イソ（ｉ−）、セカンダリー（ｓｅｃ−）、ターシャリー（ｔｅｒｔ−）およびネオなどの接頭語を含む慣用の命名法は、アルキル部分とともに使用される場合、それらの通常の意味を表す（Ｊ．ＲｉｇａｕｄｙおよびＤ．Ｐ．Ｋｌｅｓｎｅｙ、Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ＩＵＰＡＣ  １９７９  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ）。
【００９９】
本発明の化合物は、以下に記述および図示される例示的な合成反応スキームにおいて示される種々の方法により製造することができる。これらの化合物の調製において使用される出発物質および試薬は、一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．などの販売業者から入手可能であるか、または当業者に既知の方法により、Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ
Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１〜２１巻；Ｒ．Ｃ．ＬａＲｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９９９年；Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｂ．ＴｒｏｓｔおよびＩ．Ｆｌｅｍｉｎｇ（Ｅｄｓ．）ｖｏｌ．１〜９巻、Ｐｅｒｇａｍｏｎ、Ｏｘｆｏｒｄ、１９９１年；Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ａ．Ｒ．ＫａｔｒｉｔｚｋｙおよびＣ．Ｗ．Ｒｅｅｓ（Ｅｄｓ）Ｐｅｒｇａｍｏｎ、Ｏｘｆｏｒｄ  １９８４年、１〜９巻；Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＩＩ、Ａ．Ｒ．ＫａｔｒｉｔｚｋｙおよびＣ．Ｗ．Ｒｅｅｓ（Ｅｄｓ）Ｐｅｒｇａｍｏｎ、Ｏｘｆｏｒｄ  １９９６年、１〜１１巻；およびＯｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年、１〜４０巻などの文献に記載の手法にしたがって調製される。以下の合成反応スキームは、本発明の化合物を合成することができるいくつかの方法の単なる例示であり、これらの合成反応の種々の変法を作成することができ、この出願に含まれる開示を参照した当該技術分野の当業者により当該変法が示唆されるであろう。
【０１００】
合成反応スキームの出発物質および中間体は、限定はされないが、濾過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィーなどを含む慣用の技術により、必要な場合は単離および精製可能である。当該物質は、物理的定数およびスペクトルデータを含む慣用の手段を使用して特定可能である。
【０１０１】
反することが特定されない限り、本明細書で記載される発明は、大気圧の不活性雰囲気下で、約−７８℃〜約１５０℃、より好ましくは約０℃〜１２５℃の範囲の反応温度で、もっとも好ましく簡便には、約室温（または周囲温度）、例えば約２０℃で行われる。
【０１０２】
ヌクレオシドの２’および３’−位の化学修飾が探索される一方で、もっとも考えられる理由としてその合成に伴う別の合成的難問のために、４’−位の修飾はあまり行われていなかった。Ｍａａｇら（Ａｎｔｉ−ＨＩＶ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ４’−Ａｚｉｄ
ａｎｄ  ４’−Ｍｅｔｈｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ、Ｊ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．１９９２年、３５巻：１４４０〜１４５１頁）は、４’−アジド−２−デオキシリボヌクレオシドおよび４−アジドヌクレオシドの合成を開示する。Ｃ．Ｏ’Ｙａｎｇら（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９２年、３３巻（１号）：３７〜４０頁および３３巻（１号）：４１〜４４頁）は、４’−シアノ、４’−ヒドロキシメチル−および４’−ホルミルヌクレオシド化合物、置換ヌクレオシドを開示する。これらの化合物は、抗−ＨＩＶ化合物として評価される。Ｍａａｇら（上掲）は、４’−アジドヌクレオシド１６ｃが、５−メチレン−テトラヒドロ−フラン−２−イルヌクレオシド１５（式中、Ｂはチミン、ウラシル、アデニンまたはグアノシンである）にヨウ化アジドを付加させることにより調製可能であることを教示した。
【０１０３】
【化１１】
2011246485.tif 000012
【０１０４】
米国特許出願公報２００５００３８２４０（２００５年２月１７日公開、Ｔ．Ｊ．Ｃｏｎｎｏｌｌｙら）は、４’−アジドヌクレオシドの改善された調製方法を開示する。ＷＯ０２／１００４１５において、Ｒ．Ｄｅｖｏｓらは、ＨＣＶ  ＮＳ５ＢウイルスＤＮＡポリメラーゼを阻害する、新規４’−置換ヌクレオシド誘導体を開示する。ヨウ化アジドの付加はウリジン１５（Ｂ＝ウラシル）において最も効率的に行われ、Ａ．Ｄ．Ｂｏｒｔｈｗｉｃｋらにより記載の方法を利用して、当該化合物を対応するシチジンに変換することができる（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９０年、３３巻（１号）：１７９頁；Ｋ．Ｊ．ＤｉｖａｋａｒおよびＣ．Ｂ．Ｒｅｅｓｅ、Ｊ．Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．Ｉ、１９８２年、１１７１〜１１７６頁もまた参照されたい）。
【０１０５】
【化１２】
2011246485.tif 000013
【０１０６】
４−アミノ−１−（５−アジド−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２−オン（２２）は、１−（４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（１８ａ）（Ｄ．Ｏ．Ｃｉｃｅｒｏら、“Ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ａｎａｌｏｇｓ  ｏｆ  ２’−ｄｅｏｘｙ−  ａｎｄ  ２’，３’−ｄｉｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ”、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１９９４年、４巻（７号）：８６１〜６頁；Ａ．Ｉｒｉｂａｒｒｅｎ、ＥＰ５４７００８  Ａ１（タイトル：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｗ  （２’Ｒ）−  ａｎｄ  （２’Ｓ）−２’−ｄｅｏｘｙ−２’−Ｃ−ｈｙｄｒｏｃａｒｂｙｌ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｕｓｅｆｕｌ  ｉｎ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ｒｅｓｅａｒｃｈ、ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、１９９３年６月１６日公開）から、Ｍａａｇら（上掲の文献を参照されたい）の手法（スキームＡ）を使用して調製される。
【０１０７】
４−アミノ−１−（５−アジド−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２−オン（２２）は、ＨＣＶポリメラーゼ活性についての細胞系レプリコンアッセイにおいて良好な活性を示す（表１）。さらに、当該化合物は、上記アッセイにおいて低レベルの細胞毒性を示した。
【０１０８】
【表１】
2011246485.tif 000014
【０１０９】
ヌクレオシド誘導体は、しばしば強力な抗ウイルス剤（例えば、ＨＩＶ、ＨＣＶ、単純ヘルペス、ＣＭＶ）および抗癌化学療法剤となる。残念なことに、それらの実務上の利用は２つの要因により限定される。第１に、薬物動態学的特性の悪さは、腸からのヌクレオシドの吸収、およびヌクレオシドの細胞内濃度を頻繁に限定し、第２に、最適ではない物理的特性が、活性成分の送達を高めるために利用されうる製剤の選択肢を限定する。
【０１１０】
Ａｌｂｅｒｔは、固有の生物学的活性には欠けるが、活性な薬剤物質への代謝による変換が可能な化合物を表現するためにプロドラッグとの用語を導入した（Ａ．Ａｌｂｅｒｔ、Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ、ＣｈａｐｍａｎおよびＨａｌｌ、Ｌｏｎｄｏｎ、１９５１年）。プロドラッグは近年概説されている（Ｐ．Ｅｔｔｍａｙｅｒら、Ｊ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２００４年、４７巻（１０号）：２３９３〜２４０４頁；Ｋ．Ｂｅａｕｍｏｎｔら、Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．２００３年、４巻：４６１〜４８５頁；Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｆｏｒ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ
ｇｒｏｕｐｓ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｅｎｔｉｔｉｅｓ  ｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ（編集）Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ａｍｅｒｓｔｅｒｄａｍ  １９８５年；Ｇ．Ｍ．Ｐａｕｌｅｔｔｉら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．１９９７年、２７巻：２３５〜２５６頁；Ｒ．Ｊ．ＪｏｎｅｓおよびＮ．Ｂｉｓｃｈｏｆｂｅｒｇｅｒ、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．１９９５年、２７巻；１〜１５頁、およびＣ．Ｒ．Ｗａｇｎｅｒら、Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．２０００年、２０巻：４１７〜４５頁）。特定の酵素、多くは加水分解酵素により代謝的変換が触媒されうる一方で、活性化合物はまた、非特異的な化学プロセスにより再生されうる。
【０１１１】
医薬として許容なプロドラッグは、本発明の化合物を形成するために対象において、代謝される、例えば、加水分解または酸化される化合物を意味する。生物学的変換による、毒物学上の不利益を伴うフラグメントの形成は避けられるべきである。プロドラッグの典型例としては、活性化合物の官能性部分に連結した生物学的に不安定な保護基を有する化合物が挙げられる。糖部分のヒドロキシ基（複数でもよい）のアルキル化、アシル化またはその他の脂肪親和性基による変換は、プロヌクレオチドの設計において利用されている。これらのプロヌクレオチドはインビボで加水分解または脱アルキル化され、活性化合物を生じさせる。
【０１１２】
経口投与によるバイオアベイラビリティーを限定する要因は、胃腸管からの吸収および腸壁および肝臓による初回通過排泄である場合が多い。消化管を通じての細胞間吸収の最適化には、０を上回るＤ（７．４）が求められる。しかしながら、分配係数の最適化は成功を保証するものではない。プロドラッグは、腸細胞の能動拡散トランスポーターを避けなければならない場合がある。腸細胞における細胞内代謝により、排出ポンプにより腸管内腔に戻る代謝物の受動輸送または能動輸送が生じうる。プロドラッグはまた、標的の細胞または受容体に到達するまでは、血中での望まれない生物的変換に対して耐性でなければならない。
【０１１３】
想定されるプロドラッグは、分子内に存在する化学的官能性に基づき、合理的に設計することができる場合がある一方で、活性化合物の化学修飾により製造される全く新たな分子体が、元の化合物には存在しない望ましくない物理的、化学的および生物学的特性を示しうる。複数の経路から複数の代謝物が生じる場合には、代謝物の同定についての規制上の要件に関して難題が持ち上がる場合がある。したがって、プロドラッグの特定は、依然として不確かで困難な課題である。さらに、プロドラッグ候補化合物の薬物動態学的特性の評価は困難かつ費用のかかる試みである。動物モデルにおける薬物動態学的結果は、ヒトに当てはめることが困難な場合がある。
【０１１４】
米国特許第６，８４６，８１０（２００５年１月２５日登録、Ｊ．Ａ．Ｍａｒｔｉｎら）は、アシル化４’−アジドヌクレオシドが有効なプロドラッグであることを確認したことを示している。２２のジアシル誘導体２３は、元のヌクレオシド２２のアシル化により調製することができる。
【０１１５】
本発明の化合物は、水性の有機溶媒中での２２のアシル化により１工程で簡便に調製することができる。溶媒は、均一の水性溶液または２相の溶液のいずれであってもよい。水性有機溶媒のｐＨは、アシル化で生じる酸を中和するために塩基を添加することにより７．５を上回るように維持される。塩基は、アルカリ、アルカリ金属水酸化物または３級アミンのいずれであってもよい。当該反応は、アシル化の触媒として当該技術分野において知られているＤＭＡＰの存在下で行われる。本製造方法の長所は、ヘテロ環塩基のアシル化が起こることなく、目的の化合物が得られる点である。
【０１１６】
あるいは、アシル化は、簡便には、ＤＣＭ、クロロホルム、四塩化炭素、エーテル、ＴＨＦ、ジオキサン、ベンゼン、トルエン、ＭｅＣＮ、ＤＭＦ、水酸化ナトリウム溶液、またはスルホランなどの溶媒中で、場合によっては無機塩基または有機塩基の存在下で、−２０〜２００℃の温度、好ましくは−１０〜１６０℃の温度で、対応のアシルハライドまたは無水物を用いて行われる。アシル化反応はまた、相間移動触媒およびＤＭＡＰの存在下、２相の有機性−水性媒体中のショッテン・バウマン条件下で行ってもよい。
【０１１７】
ヒドロキシ基の選択的アシル化を遂行することができる。あるいは、Ｎ，Ｏ，Ｏ−トリアシルヌクレオシドのＮ−アシル基は、臭化亜鉛を用いて選択的に開裂させ、保護されたジアシル化合物を製造することができる（Ｒ．Ｋｉｅｒｚｅｋら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９８１年、２２巻（３８号）：３７６２〜６４頁）。
【０１１８】
炭水化物基上の特定のヒドロキシの選択的アシル化は、便宜的には酵素触媒によるアシル化または脱アシル化によって達成することができる。酵素触媒は、有機変換について穏和な選択的条件を与える。Ｓ．Ｍ．Ｒｏｂｅｒｔｓは、調製における生物的変換を概説している（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  １、２００１年、１４７５頁；２０００年、６１１頁；１９９９年、１頁；および１９９８年、１５７頁）。．Ｍ．Ｍａｈｍｏｕｄｉａｎら（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９９年、２９巻：２２９〜２３３頁）は、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼの固定化プレパレーションを用いる、２−アミノ−９−β−Ｄ−アラビンフラノシル−６−メトキシ−９Ｈ−プリンの５’位の選択的アシル化を報告している。５’−ヒドロキシの選択的アシル化が報告されている他の酵素としては、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓプロテアーゼ、Ｌｉｐｏｚｙｍｅ  ＩＭ（Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉリパーゼ）、ＣＬＥＣ−ＢＬ（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓプロテアーゼ）、サビナーゼ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．プロテアーゼ）、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ−２４３（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓプロテアーゼ）、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｓｐ．リパーゼおよびリポラーゼ（Ｎｏｖｏ）が挙げられる。
【０１１９】
Ｌｉｐｏｌａｓｅ（登録商標）酵素プレパレーション（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ由来のリパーゼ、Ｓｉｇｍａカタログ＃Ｌ０７７７）は、トリアシル誘導体の５’−アシル基を選択的に加水分解し、２’，３’−ジアシル化合物を与えることが報告されている。ＷＯ２００４／０４３８９４において、Ｇ．Ｇ．Ｈｅｒａｌｄｓｓｏｎらは、魚油のエステル化におけるＴ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓリパーゼの使用を開示している。Ｎ．Ｗｅｂｅｒら（Ｅｕｒ．Ｊ．ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｓｃｉ．ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２００３年、１０５巻（１０号）：６２４〜６２６頁）は、オレイン酸メチルのＴ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓによる触媒的エステル交換反応を開示する。Ｖ．Ｂｏｄａ
ｉら（Ａｄｖ．Ｓｙｎｔｈ．Ｃａｔ．２００３年、３４５巻（６および７号）：８１１〜８１８頁）は、選択的生物的変換に使用することができる、好熱性糸状菌由来の新規加水分解酵素を記載する。
【０１２０】
位置選択的な酵素的エステル加水分解の他の報告としては、Ｒ．Ｈａｎｓｏｎら、Ｂｉｏｏｒｇ．ａｎｄ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０００年、２６８１〜２６８７頁（ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａ  ｌｏｂｕｃａｖｉｒ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｖｉａ  ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ａｃｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ）；Ｒ．Ｐｆａｕら、Ｓｙｎ  Ｌｅｔｔ  １９９９年、１８１７〜１８１９頁（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｅｓｔｅｒ）；Ａ．Ｂｉａｎｃｏら、Ｊ．ｏｆ  Ｍｏｌ．Ｃａｔ．Ｂ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  １９９７年、２０９〜２１２頁（ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ａｃｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ
ｆｏｒ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｓｉａｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）；Ｙ．Ｏｔａら、Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９７年）、１６６〜１６７頁（ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｅｒ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  ｏｆ  １，２，３−ｔｒｉｈｅｘａｎｏｌｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ）；Ｕ．Ｔ．Ｂｏｒｎｓｃｈｅｕｅｒら、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ
Ｔｅｃｈｎｏｌ．１９９５年、５７８〜８６頁（ｌｉｐａｓｅ  ｃａｔａｌｙｚｅｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ  ｏｆ  ｍｏｎｏａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ；総説）；Ｃ．Ｔ．Ｇｏｏｄｈｕｅら、ＷＯ９４／０３６２５（ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｃｅｓｓ
ｆｏｒ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｍｏｎｏｅｓｔｅｒｓ）；Ｎ．Ｗ．Ｂｏａｚ、ＷＯ９１／１５４７０（Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｌｃｏｈｏｌ−ｅｓｔｅｒ  ｍｉｘｔｕｒｅ  ｂｙ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ）；Ｙ．Ｓ．Ｓａｎｇｈｖｉら、ＵＳ２００２１４２３０７（ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ３’，５’−ｄｉ−Ｏ−ｌｅｖｕｌｉｎｙｌｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）；Ｊ．Ｇａｒｃｉａら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００２年、４５１３〜４５１９頁（ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ３’，５’−ｄｉ−Ｏ−ｌｅｖｕｌｉｎｙｌｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）；Ｏ．Ｋｉｒｋら、Ｂｉｏｃａｔ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ（１９９５年）、９１〜７頁（ｌｉｐａｓｅ  ｃａｔａｌｙｚｅｄ  ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ａｃｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅａｃｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）が挙げられる。
【０１２１】
当該技術分野の当業者であれば、標準的な化学的方法論によっても選択的なエステル化が達成できることを認識するであろう。５’−ヒドロキシ基の選択的な保護が記載されており、それによって２’−ヒドロキシの直接的なエステル化が可能となり、あるいは第２の保護基を導入して、脱保護および１級アルコールのアシル化が可能となる。
【０１２２】
本発明の化合物は、種々の経口投与用剤形および担体において製剤されうる。経口投与は、錠剤、コーティング錠剤、ハードおよびソフトゼラチンカプセル、溶液、エマルション、シロップ、または懸濁液の形態であり得る。本発明の化合物は、その他の投与経路の中で、坐剤として投与された場合に有効である。最も簡便な投与手法は、簡便な日々の投与方針を使用する経口投与であり、これは疾患の重篤性および抗ウイルス剤投与に対する患者の反応によって調節することができる。
【０１２３】
本発明の化合物、および医薬として使用可能なそれらの塩は、１以上の慣用の賦形剤、担体、または希釈剤とともに、医薬組成物および単位剤形の形態の中に含まれていてもよい。医薬組成物および単位剤形は、追加の活性化合物を伴って、または伴わないで、慣用の成分を慣用の割合で含んでいてもよく、単位剤形は、用いられる意図された一日薬量範囲に相応の任意の好適な有効量の活性成分を含有してよい。医薬組成物は、固体、例えば
、錠剤またはフィルドカプセル、半固体、粉末、徐放製剤；または液体、例えば、懸濁液、エマルション、または経口使用のためのフィルドカプセル；または直腸内または膣内投与のための坐剤の形態で使用されうる。典型的な製剤は、約５％〜約９５％の活性化合物（複数でもよい、ｗ／ｗ）を含有するであろう。用語「製剤（ｐｒｅｐａａｔｉｏｎ）」および「剤形」は、活性化合物の固体製剤および液体製剤の療法を含むことが意図され、当該技術分野の当業者は、活性化合物が、望まれる薬量および薬物動態学的パラメーターに依存して異なる製剤に存在しうることを理解するであろう。
【０１２４】
本明細書で使用される用語「賦形剤」は、医薬組成物を調製するために使用される化合物を意味し、一般に、安全、無毒で、生物学的および他の点において望ましくないということはなく、人への医薬としての使用および獣医学的使用に許容される賦形剤が含まれる。本発明の化合物は単独で投与することもできるが、一般に、意図される投与経路および標準的医薬プラクティスの観点から選択される、１以上の好適な医薬の賦形剤、希釈剤または担体と混合して投与される。
【０１２５】
活性成分の医薬として許容な塩の形態はまた、塩ではない形態にはない、活性成分の望ましい薬物動態的特性をまず与え、生体内での治療活性の観点から、活性成分の薬力学にポジティブに影響をさらに与える。本明細書で使用される化合物の「医薬として許容な塩」との句は、医薬として許容され、元の化合物の望まれる薬理学的特性を有する塩を意味する。当該塩としては、（１）無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などと形成する酸付加塩；または有機酸、例えば、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、サリチル酸、ムコン酸などと形成する酸付加塩が挙げられる。なお、医薬として許容な塩への言及のすべては、同じ酸付加塩の本明細書で定義される溶媒付加体（溶媒和物）または結晶体（結晶多形）を含む。
【０１２６】
固体形製剤としては、粉剤、錠剤、丸薬、カプセル、坐剤、および分散性顆粒が挙げられる。固体担体は、希釈剤、香味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、またはカプセル化材としても働きうる１以上の物質であってもよい。粉剤において担体は、一般に、細かく粉砕された活性成分と混合された細かく粉砕された固体である。錠剤において活性成分は、一般に、必要な結合能を有する担体と好適な割合で混合され、望まれる形およびサイズに圧縮される。好適な担体としては、限定はされないが、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、ココアバターなどが挙げられる。固体形製剤は、活性成分の他に、着色剤、香味剤、安定化剤、バッファー、人工および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含んでいてもよい。
【０１２７】
液体製剤もまた経口投与に好適であり、液体製剤としては、エマルション、シロップ、エリキシル、および水性懸濁液などが挙げられる。これらには、使用の直前に液体形製剤に変換するように意図された固体形製剤も含まれる。エマルションは、溶液、例えば、水性ポリエチレングリコール溶液中で調製され、レシチン、ソルビタンモノオレート、またはアカシアなどの乳化剤を含んでいてもよい。水性懸濁液は、天然または合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、およびその他のよく知られた懸濁剤などの粘着性物質と共に、水中で細かく粉砕した活性成分を分散させることにより調製することができる。
【０１２８】
本発明の化合物は、坐剤として投与するために製剤してもよい。脂肪酸グリセリドまたはココアバターの混合物などの低融点ワックスをまず融解させ、例えば攪拌することにより、活性成分を均一に分散させる。融解した均一の混合物は、その後、都合のよいサイズの型に注がれ、冷却され、固化する。
【０１２９】
本発明の化合物は、膣投与のために製剤化してもよい。活性成分の他に前記担体などを含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペースト、フォームまたはスプレーが、適切な製剤として当該技術分野において知られている。
【０１３０】
医薬担体、希釈剤および賦形剤と共に、好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １９９５年、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ編集、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、第１９版、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａに記載されている。当業者である製剤科学者は、本発明の組成物を不安定にすることなく、かつその治療活性を落とすことなく、本明細書の教示の範囲内の製剤を変更し、特定の投与経路のための数々の製剤を提供するであろう。
【０１３１】
水または他の媒体中によりよく溶解するように本化合物を修飾することは、軽微な修飾（例えば、塩の形成）により容易に達成されるであろう。これは十分に当該分野における通常の技術の範囲内である。患者における最大の有利な効果のために本化合物の薬物動態を操作することを目的として、特定の化合物の投与経路および投薬計画を修正することもまた、十分に当該分野の通常の技術範囲である。
【０１３２】
本明細書で使用される用語「治療有効量」は、個体において疾患の症状を低下させるために必要な量を意味する。薬量は、特定の事例の各々における個々の要件に対して調整されるであろう。薬量は、広い制限内で、処置する疾患の重篤度、患者の年齢および一般的な健康状態、患者が処置されている他の医薬、投与経路および投与剤形、ならびに関与する臨床実務家の好みおよび経験によって変動しうる。経口投与について、１日につき約０．１〜約１０ｇの日薬量が単独療法および／または組み合わせ療法において適切である。好ましい日薬量は、１日につき約０．５〜約７．５ｇであり、より好ましくは１日につき１．５〜約６．０ｇである。一般に、ウイルスを急速に抑制または除去するために、多量の開始時の「付加用量」により処置を開始し、その後、再感染の防止のために十分なレベルに薬量を減らす。本明細書に記載した疾患の処置における通常の技術の１つにより、過度の実験を必要とせず、個人的知識、経験および本出願の開示に基づいて、所定の疾患および患者について本発明の化合物の治療有効量を確定させることができるであろう。
【０１３３】
限定はされないが、血清タンパク質（例えば、アルブミン、凝固因子、アルカリホスファターゼ、アミノトランスフェラーゼ（例えば、アラニントランスアミナーゼ、アスパルテートトランスアミナーゼ）、５’−ヌクレオシダーゼ、グルタミニルトランスペプチダーゼなど）などのタンパク質レベル、ビリルビンの合成、コレステロールの合成、および胆汁酸の合成を含む肝機能の試験；限定はされないが、炭水化物代謝、アミノ酸およびアンモニア代謝を含む肝代謝機能の試験から、治療効率を確定させることができる。あるいは、治療有効性はＨＣＶ−ＲＮＡの測定により観察してもよい。これらの試験の結果から薬量を最適化することができる。
【０１３４】
本発明の態様において、活性化合物または塩は、リバビリン、別のヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶ非ヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、ＨＣＶヘリカーゼ阻害剤、またはＨＣＶ拡散阻害剤などの別の抗ウイルス剤と組み合わせて投与することができる。活性化合物またはその誘導体または塩が別の抗ウイルス
剤と組み合わせて投与される場合、その活性は元の化合物を上回って増加する場合がある。処置が組み合わせ治療の場合、その投与は、当該ヌクレオシド誘導体の投与と併用または連続的であってもよい。よって、本明細書で使用する「併用投与」には、薬剤の同じ時の投与または別の時の投与が含まれる。
【０１３５】
２以上の薬剤の同時投与は、２以上の活性成分を含む１つの製剤により、または１つの活性薬剤を含む２以上の剤形の実質的な同時投与により達成されうる。
なお、本明細書での処置（治療）に対する言及は、既存の状態の治療および予防に拡張される。さらに、本明細書で使用されるＨＣＶの「処置（治療）」との用語はまた、ＨＣＶ感染に関連するまたは媒介される疾患または状態、またはその臨床的症状の治療または予防を含む。
【０１３６】
実施例１
工程１：乾燥ＴＨＦ（３０ｍｌ）中の１８ａ（２．１７ｇ、８．９６ｍｍｏｌ、１当量当量）、イミダゾール（７３２ｍｇ、１０．７ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＰｈ３Ｐ（２．８２ｇ、１０．７ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を氷浴で冷却し、乾燥ＴＨＦ（１０ｍｌ）中のヨウ素（２．５０ｇ、９．８５ｍｍｏｌ、１．１当量）の溶液を１０分かけて滴下して加えた。反応混合物を０〜５℃でさらに１０分間攪拌した。氷浴を取り外し、反応混合物を室温で７０時間攪拌した。反応混合物をＤＣＭ（２００ｍｌ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液中の０．５Ｍ  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（１５０ｍｌ）で洗浄した。水層をＤＣＭ（４×５０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機抽出液を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、濃縮した。残渣を、ＭｅＯＨ／ＤＣＭの段階的グラジエント（１〜５％ｖ／ｖ  ＭｅＯＨ）で溶出するＳｉＯ２クロマトグラフィーにより精製し、１．７５ｇ（５５％）の１８ｂを得た
１Ｈ−ＮＭＲデータ（ＣＤＣｌ３、２５℃）：δ８．２２（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．５９（ｄ、１Ｈ）、６．１９（ｄ、１Ｈ）、５．７５（ｄｄ、１Ｈ）、３．７９（ｍ、１Ｈ）、３．６５（ｍ、１Ｈ）、３．５７（ｄｄ、１Ｈ）、３．４７（ｄｄ、１Ｈ）、２．６９（ｍ、１Ｈ）、２．１３（ｄ、１Ｈ）、１．００（ｄ、３Ｈ）。
【０１３７】
工程２：ＭｅＯＨ（８１ｍｌ）中の１８ｂ（１．８４ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）および０．４Ｍナトリウムメトキシドの溶液を６０℃で５時間攪拌し、その後、氷浴で冷却した。ピリジニウム型ＤＯＷＥＸ  Ｈ＋（使用前にＤＯＷＥＸ  Ｈ＋をピリジン（１０ｍｌ／ｇ樹脂）で処理し、濾過し、ＭｅＯＨで洗浄して調製）を、溶液のｐＨが中性になるまで（全体で５〜６ｇ）少しずつ加えた。氷浴を取り外し、混合物を室温で５分間攪拌した。樹脂を濾過により除去し、ＭｅＯＨ（１００ｍｌ）で洗浄した。残渣を６％ＥｔＯＨ／ＤＣＭ中に懸濁させ、ＳｉＯ２カラムに付し、ＥｔＯＨ／ＤＣＭグラジエント（６−７％ｖ／ｖ  ＥｔＯＨ）で溶出させ、０．９４２ｇ（８０％）の１９を得た。これは次の工程に使用するために十分な純度であった。
【０１３８】
工程３：ベンジルトリエチルアンモニウムクロリド（１．９１ｇ、８．４ｍｍｏｌ、２当量）およびアジ化ナトリウム（５４６ｍｇ、８．４ｍｍｏｌ、２当量）を乾燥ＭｅＣＮ（３２ｍｌ）に懸濁させ、超音波を数分間照射した。得られた細かい懸濁液を室温で３時間攪拌し、その後、Ｎ２雰囲気下で、化合物１９（９４２ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ、１当量）の乾燥ＴＨＦ溶液（３０ｍｌ）中に濾過した。ＮＭＭ（１４０μｌ、０．１０６ｍｍｏｌ、０．３当量）を加え、得られた溶液を氷浴で冷却し、乾燥ＴＨＦ（３９ｍｌ）中のヨウ素（１．８１ｇ、７．１４ｍｍｏｌ、１．７当量）の溶液を１時間かけて滴下して加えた。得られた反応混合物を０〜５℃でさらに２時間攪拌した。Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン（６９ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ、０．１当量）を加え、発泡が弱まるまで当該溶液を攪拌した。ＮＭＭ（２．３１ｍｌ、２１．０ｍｍｏｌ、５当量）およびＤＭＡＰ（５１３ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ、１当量）を加え、その後、ベンゾイルクロリド（１．１ｍｌ、
９．２４ｍｍｏｌ、２．２当量）を滴下して加えた。反応混合物を０〜５℃で３０分間攪拌し、その後、冷蔵庫で一晩保管した。ＴＬＣおよびＬＣ−ＭＳ分析の双方により、反応の完了が確認された。ＭｅＯＨ（５ｍｌ）を加え、数分後に溶液をロタベーパーにより半量まで濃縮し、その後、攪拌しながら、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液中の０．１Ｍ  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（３００ｍｌ）を加え、混合物を室温に昇温した。混合物をＤＣＭ（１５０ｍｌ）で抽出し、水層をＤＣＭ（５０ｍｌ）で２回抽出した。合わせた有機抽出液を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、濃縮した。その後、有機層を５％クエン酸で抽出し、水層をＤＣＭ（２×５０ｍｌ）で２回洗浄した。ＤＣＭ抽出液を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、減圧下濃縮した。残渣を、ＥｔＯＨ／ＤＣＭの段階的グラジエント（０、０．５、０．７５、１．０、１．５および２．０％ＥｔＯＨ）で溶出させるＳｉＯ２クロマトグラフィーにより精製し、１．７２ｇ（８３％）の２０ａを得た。
【０１３９】
１Ｈ−ＮＭＲデータ（ＣＤＣｌ３、２５℃）：δ８．２２−７．４６（７Ｈ）、６．４９−６．３９（１Ｈ）、５．８４（ｄｄ、１Ｈ）、５．５５−５．４７（１Ｈ）、３．８５（ｄ、１Ｈ）、３．７４（ｄ、１Ｈ）、３．１８（ｍ、１Ｈ）、１．０９（ｄ、３Ｈ）。
【０１４０】
工程４：ＤＣＭ（１５５ｍｌ）中の化合物２０ａ（１．７２ｇ、３．４７ｍｍｏｌ、１当量）の溶液を、１．７５Ｍ  Ｋ２ＨＰＯ４水溶液（５５ｍｌ）中のＢｕ４ＮＨＳＯ４（８２５ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ、０．７当量）およびｍ−クロロ安息香酸（３５９ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ、０．６６当量）の混合物と合わせた。この２相系を室温で激しく攪拌し、５５％ＭＣＰＢＡ、１０％ｍ−クロロ安息香酸および３５％Ｈ２Ｏ（２×３．５７ｇ、２×１６．５ｍｍｏｌまたは２×３．２８当量ＭＣＰＢＡおよび２×３．３ｍｍｏｌまたは２×０．６６当量ｍ−クロロ安息香酸に対応）を含む、購入により入手可能な試薬の混合物を、１．５時間の間隔をあけて２分割して加えた。混合物を室温でさらに１８時間激しく攪拌した。ＬＣ−ＭＳ分析により、＞９６％の反応を確認した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５００ｍｌ）中のＮａ２Ｓ２Ｏ３５Ｈ２Ｏ（３５ｇ）の溶液を加え、混合物を室温で３０分間激しく攪拌した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（２×１０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４０ｍｌ）で洗浄した。ＮａＨＣＯ３水溶液層をＤＣＭ（２×１０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、濃縮した。残渣を、ＥｔＯＨ／ＤＣＭのグラジエント（１〜２％ｖ／ｖ  ＥｔＯＨ）により溶出するＳｉＯ２クロマトグラフィーにより精製し、１ｇ（５６％）の２０ｂを得た。
【０１４１】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、２５℃）：δ８．１９（ｂｒｓ、１Ｈ）、８．０７−７．８８（４Ｈ）、７．６５−７．３６（６Ｈ）、６．５７−６．４５（１Ｈ）、５．６４（ｄｄ、１Ｈ）、５．５１−５．４２（１Ｈ）、４．８０（ｍ、２Ｈ）、３．２４（ｍ、１Ｈ）、１．０９（ｄ、３Ｈ）。
【０１４２】
工程５：ジエステル２０ｂ（１００ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、１当量）および１，２，４−トリアゾール（１３１ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ、１０当量）を乾燥ピリジンから共沸させ、乾燥ピリジン（１ｍｌ）に再度溶解させた。溶液を氷浴中で冷却し、ＭｅＣＮ（０．５ｍｌ）中のＰＯＣｌ３（４４μｌ、０．４７５ｍｍｏｌ、２．５当量）の溶液を数分かけて加えた。反応混合物を０〜５℃でさらに５分間攪拌し、その後、室温で３時間攪拌した。反応混合物をロータリーエバポレーターで半量に濃縮し、その後、飽和ＮＨ３／エタノール溶液（２０ｍｌ）で処理し、得られた溶液を室温で一晩攪拌した。エバポレーション後の残渣を、段階的なＥｔＯＨ／ＤＣＭのグラジエント（６、１０、１５および２０％ｖ／ｖ  ＥｔＯＨ）により溶出するＳｉＯ２クロマトグラフィーにより精製し、０．０３６ｇ（６６％）の２２を得て、これはＬＣＭＳで９８％純度（〜２．０％の２’−異性体の混入物）であった。この反応を、９００ｍｇの化合物２０ｂを用いて繰り返し、クロマ
トグラフィーの後に２７０ｍｇ（５４％、９７％純度）の２２を得た。
【０１４３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、２５℃）：δ７．６９（ｄ、１Ｈ）、７．１４（ｄ、２Ｈ）、６．３２（ｂｒｓ、１Ｈ）、５．７２（ｄ、１Ｈ）、５．７８（ｂｒｓ、２Ｈ）、３．８９（ｂｒｓ、１Ｈ）、３．７４（ｄ，ｄ，ｄ、２Ｈ）、２．５４（ｍ、１Ｈ）、０．７７（ｄ、３Ｈ）。
【０１４４】
実施例２
イソ酪酸（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソ−２Ｈ−ピリミジン−１−イル）−２−イソブチリルオキシメチル−４−メチル−テトラヒドロフラン−３−イルエステル（２５）
【０１４５】
【化１３】
2011246485.tif 000015
【０１４６】
ＴＨＦ（７ｍｌ）および希釈食塩水（７ｍｌ）中の２２（０．７００ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）の溶液のｐＨを、希釈ＫＯＨ水溶液で約１１に調整する。氷冷した攪拌中の二相反応系にイソブチリルクロリドをゆっくりと（滴下により）加えながら、必要に応じて希釈したＫＯＨ水溶液を加えてｐＨを約１１に保つ。反応の程度をＨＰＬＣにより観察する。ＨＰＬＣで変換がほぼ完了したことを確認した時点で、追加のイソブチリルクロリド（１当量）を加える。反応混合物を室温で一晩放置する。溶液をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）により希釈し、水層のｐＨを濃ＨＣｌで約７．５に調整する。層を分離し、有機層を水で３回洗浄し、乾固するまで濃縮して２５を得る。
【０１４７】
実施例３
ペンタン酸（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソ−２Ｈ−ピリミジン−１−イル）−２−アジド−４−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３−イルエステル（２７）
【０１４８】
【化１４】
2011246485.tif 000016
【０１４９】
ＭＴＢＥ（１３ｍｌ）およびリン酸バッファー（１５ｍｌ、５ｍＭリン酸ナトリウムお
よび０．１Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ約６．５に調整）中のジペンタノエートエステル２６（Ｒ”＝ｎ−Ｃ４Ｈ９、１．９ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｌｉｐｏｌａｓｅ（登録商標）（約２ｍＬ、Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  Ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ由来のリパーゼ、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｌ０７７７）を加える。反応混合物を３５℃に加温し、２時間攪拌する。ＮａＨＣＯ３の添加により、反応混合物のｐＨを６．５に維持する。２時間後、反応は８％完了まで進行する。２ｍｌの追加のＬｉｐｏｌａｓｅ（登録商標）を加え、攪拌を６時間継続し、酵素の追加のアリコート（２ｍｌ）を加え、反応をさらに２４時間攪拌する。アセトン（１０ｍＬ）、ＭＴＢＥ（２０ｍｌ）および食塩水（１０ｍＬ）を溶液に加え、反応を５０℃に加温する。相を分離し、有機相を熱したＭＴＢＥで２回抽出する。合わせた有機相を熱した食塩水で２回洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、減圧下濃縮する。
【０１５０】
実施例４
テトラデカン酸（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソ−２Ｈ−ピリミジン−１−イル）−２−アジド−３−ブチリルオキシ−４−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イルメチルエステル（２８）
【０１５１】
【化１５】
2011246485.tif 000017
【０１５２】
２９（１．０ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）、ビニルミリステート（１．２ｇ、４．５７ｍｍｏｌ）、ポリアクリレート樹脂上に固定化したＣａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｔｉｃａリパーゼ（０．３０ｇ；Ｓｉｇｍａカタログｎｏ．Ｌ４７７７、Ｎｏｖｏｓｏｍｅ）およびＴＨＦ（２０ｍｌ）の懸濁液を一晩６０℃に加温する。ＨＰＬＣ分析により反応が約３３％完了したことを確認し、追加のビニルミリステート（２．４ｍＬ）およびリパーゼ（０．３ｇ）を加える。さらに４８時間後、反応は５０％完了であり、追加の酵素（０．３ｇ）およびビニルミリステート（３ｍＬ）を加えた。約８０時間後（合計反応時間）、モノエステルへの変換が完了する。粗製の反応混合物をＣＥＬＩＴＥ（登録商標）を通して濾過し、濾過に使用した固まりをＴＨＦで洗浄する。合わせた有機相を濃縮する。残渣をＭｅＯＨ（５０ｍｌ）に溶解させ、ヘキサン（２×２０ｍｌ）で抽出する。メタノール性溶液を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃに溶解させ、ＮａＨＣＯ３で洗浄し、ＥｔＯＡｃ相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、濃縮し、０．９３０ｇの２８（Ｒ”＝Ｃ１３Ｈ２７）を得て、これはＭｅＯＨ／ＤＣＭのグラジエント（０〜１０％ＭｅＯＨ）で溶出するにＳｉＯ２のクロマトグラフィーより精製する。
【０１５３】
実施例５
３’，５’−Ｏ−ビス（Ｌ−バリニル）−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（３４）
【０１５４】
【化１６】
2011246485.tif 000018
【０１５５】
Ｎ４−［（ジメチルアミノ）メチレン］−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（３２）
ＤＭＦ（３０ｍｌ）中の２２（１．８１ｇ、６．４２ｍｍｏｌ）の溶液をジメチルホルムアミドジメチルアセタール（８．２ｍｌ、６１．７３ｍｍｏｌ）で処理し、１．５時間室温で攪拌する。減圧下溶液を濃縮し、エタノールと共に共沸する。エタノール／エーテルからの結晶化により表題の化合物３２を得る。
【０１５６】
３’，５’−Ｏ−ビス［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリニル］−Ｎ４−［（ジメチルアミノ）メチレン］−４’−アジド−２’−b−Ｃ−メチル−２’−デ
オキシシチジン（３３）
乾燥アセトニトリル（３０ｍｌ）およびＤＭＦ（１５ｍｌ）の混合液中の３２（１．２６ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（１．６２ｇ、７．４８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１．４３ｇ、７．４８ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１．０４ｍｌ、７．４８ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．１ｇ）を連続的に添加する。得られた混合物を室温で攪拌する。反応の進行をＨＰＬＣで追跡し、反応混合物に、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（０．６３ｇ）、ＥＤＣ（０．７２ｇ）、ＴＥＡ（０．５２ｍｌ）およびＤＭＡＰ（０．０５ｇ）をさらに補充する。出発物質が全体的に消費された後に、減圧下で溶媒を除去する。残渣を酢酸エチルに取り、水および食塩水で洗浄する。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント５−４０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶液）により精製し、表題化合物３３を得る。
【０１５７】
３’，５’−Ｏ−ビス（Ｌ−バリニル）−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（３塩酸塩、３４）
ＥｔＯＨ中の３３（１．６ｇ、２．１７ｍｍｏｌ）の高濃度溶液に、１３ｍｌの１Ｍ  ＨＣｌ／ＥｔＯＨ溶液をゆっくりと加える。反応混合物を室温で４時間攪拌し、エーテルで希釈する。析出物を濾取し、エーテルで洗浄し、表題の化合物３４を３塩酸塩として得た。
【０１５８】
実施例６
３’，５’−Ｏ−ビス（イソブチリル）−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（イソ酪酸（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（４−アミノ−２−オキソ−２Ｈ−ピリミジン−１−イル）−２−イソブチリルオキシメチル−４−メチル−テトラヒドロフラン−３−イルエステル）（２５）
【０１５９】
【化１７】
2011246485.tif 000019
【０１６０】
３’，５’−Ｏ−ビス（イソブチリル）−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（２５）
乾燥ピリジン（２５ｍｌ）中の２２（１．２６ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、無水イソ酪酸（１．７７ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）を０℃で加える。反応をＨＰＬＣで追跡し、完了時に水でクエンチし、過剰の無水イソ酪酸を分解させ、Ｎ４−保護を除去する。溶媒を減圧下で留去し、エタノールで共沸する。残渣を酢酸エチルに溶解させ、ＮａＨＣＯ３、食塩水で洗浄する。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント１０−４０％
ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶液）による精製により、表題化合物２５を得る。
【０１６１】
実施例７
４’−アジド−３’−Ｏ−（Ｌ−バリニル）−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（３７）
【０１６２】
【化１８】
2011246485.tif 000020
【０１６３】
Ｎ４，５’−Ｏ−ビス（モノメトキシトリチル）−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（３５）  
ピリジン（５０ｍｌ）中の２２（２．８２ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびＭＭＴｒＣｌ（９．１５ｇ、３０ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃で一晩攪拌する。ＭｅＯＨ（５ｍｌ）を加えてさらに２時間攪拌した後に、溶媒を留去し、残渣を酢酸エチルおよび水の間で分配させる。有機相を水、食塩水で洗浄し、濃縮する。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（０〜
５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶液）による精製により、表題化合物３５を得る。
【０１６４】
Ｎ４，５’−Ｏ−ビス（モノメトキシトリチル）−４’−アジド−３’−［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリニル］−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（３６）  
乾燥アセトニトリル（３０ｍｌ）およびＤＭＦ（１５ｍｌ）の混合液中の３５（３．０９ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（０．８１ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（０．７２ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．５２ｍｌ、３．７４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０７ｇ）を連続的に加える。得られた混合物を室温で攪拌する。反応の進行をＨＰＬＣで追跡し、反応混合物に、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（０．４ｇ）、ＥＤＣ（０．３６ｇ）、ＴＥＡ（０．２６ｍｌ）およびＤＭＡＰ（０．０４ｇ）をさらに補充する。出発物質が全体的に消費されたときに、減圧下で溶媒を除去する。残渣を酢酸エチルに取り、水および食塩水で洗浄する。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（グラジエント５〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶液）による精製により、表題の化合物３６を得る。
【０１６５】
４’−アジド−３’−Ｏ−（Ｌ−バリニル）−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（２塩酸塩、３７）
ＥｔＯＨ中の３６（２．４ｇ、２．３４ｍｍｏｌ）の高濃度溶液に、１３ｍｌの１Ｍ  ＨＣｌ／ＥｔＯＨ溶液を加える。反応混合物を室温で４時間攪拌し、エーテルで希釈する。析出物を濾取し、エーテルで洗浄して、表題の化合物（３７）を２塩酸塩として得る。
【０１６６】
実施例８
４’−アジド−３’−Ｏ−イソブチリル−２’−b−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチ
ジン（３８）
【０１６７】
【化１９】
2011246485.tif 000021
【０１６８】
４’−アジド−３’−Ｏ−イソブチリル−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（３８）
乾燥ピリジン（２５ｍｌ）中の３５（３．０９ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、無水イソ酪酸（０．８９ｇ、５．６１ｍｍｏｌ）を０℃で加える。反応をＨＰＬＣで追跡し、完了時に水でクエンチして、過剰の無水イソ酪酸を分解する。溶媒を減圧下留去し、エタノールで共沸する。残渣を酢酸エチルに溶解させ、ＮａＨＣＯ３、食塩水で洗浄し、濃縮する。粗製のＭＭＴｒ保護３’−イソブチリル誘導体を８０％ＡｃＯＨに溶解させ、ＭＭＴｒ基が十分に脱保護されるまで５０℃で攪拌する。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０〜２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製し、表題化合物３８を得る。
【０１６９】
実施例９
５’−Ｏ−（Ｌ−バリニル）−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシ
シチジン（４３）
【０１７０】
【化２０】
2011246485.tif 000022
【０１７１】
５’−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（３９）
ＤＭＦ（５ｍｌ）中の２２（２．８２ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（１．０２ｇ、１５ｍｍｏｌ）およびＴＢＳＣｌ（１．９５ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加える。出発物質が消費されたときに反応混合物をＭｅＯＨ（１ｍｌ）でクエンチし、酢酸エチルおよび水の間で分配する。有機相を水、食塩水で洗浄し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０〜２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶液）により精製し、表題化合物を得る。
【０１７２】
５’−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−４’−アジド−Ｎ４，３’−Ｏ−ビス（モノメトキシトリチル）−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（４０）  
乾燥ピリジン（５０ｍｌ）中の３９（３．７ｇ、９．３４ｍｍｏｌ）およびＭＭＴｒＣｌ（８．６３ｇ、２８ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で一晩攪拌する。ＭｅＯＨ（５ｍｌ）を添加し、さらに２時間攪拌した後に、溶媒を留去し、残渣を酢酸エチルおよび水の間で分配させる。有機相を水、食塩水で洗浄し、濃縮する。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（０〜５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）による精製により、表題の化合物４０を得る。
【０１７３】
４’−アジド−Ｎ４，３’−Ｏ−ビス（モノメトキシトリチル）−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（４１）  
ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の４０（５．３ｇ、５．６４ｍｍｏｌ）の溶液をＴＢＡＦ／ＴＨＦ溶液（１Ｍ、５．７ｍｌ、５．７ｍｍｏｌ）で処理し、室温で２時間攪拌する。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水、食塩水で洗浄し、濃縮する。シリカゲルによるクロマト
グラフィー（０〜５％酢酸エチル／ＣＨＣｌ３）により、表題の化合物４１を得る。
【０１７４】
５’−［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリニル］−Ｎ４，３’−Ｏ−ビス（モノメトキシトリチル）−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（４２）  
乾燥アセトニトリル（３０ｍｌ）およびＤＭＦ（１５ｍｌ）の混合液中の４１（３．０９ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（０．８１ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（０．７２ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．５２ｍｌ、３．７４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０７ｇ）を連続的に加える。得られた混合物を室温で攪拌する。反応の進行をＨＰＬＣにより追跡し、反応混合物に、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（０．４ｇ）、ＥＤＣ（０．３６ｇ）、ＴＥＡ（０．２６ｍｌ）およびＤＭＡＰ（０．０４ｇ）をさらに補充する。出発物質が全体的の消費された時に、溶媒を減圧下で除去する。残渣を酢酸エチルに取り、水および食塩水で洗浄する。シリカゲルクロマトグラフィー（グラジエント５〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製により、表題化合物４２を得る。
【０１７５】
５’−Ｏ−（Ｌ−バリニル）−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（２塩酸塩、４３）
ＥｔＯＨ中の４２（２．４ｇ、２．３４ｍｍｏｌ）の高濃度の溶液に、１３ｍｌの１Ｍ
ＨＣｌ／ＥｔＯＨ溶液をゆっくりと加える。反応混合物を室温で４時間攪拌し、エーテルで希釈する。析出物を濾取し、エーテルで洗浄し、表題の化合物４３を２塩酸塩として得る。
【０１７６】
実施例１０
５’−Ｏ−イソブチリル−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（４４）
【０１７７】
【化２１】
2011246485.tif 000023
【０１７８】
５’−Ｏ−イソブチリル−４’−アジド−２’−β−Ｃ−メチル−２’−デオキシシチジン（４４）  
乾燥ピリジン（２５ｍｌ）中の４１（３．０９ｇ、３．７４ｍｍｏｌ）の溶液に無水イソ酪酸（０．８９ｇ、５．６１ｍｍｏｌ）を０℃で加える。反応をＨＰＬＣにより追跡し、完了時に水でクエンチして、過剰の無水イソ酪酸を分解させる。溶媒を減圧下で留去し、エタノールで共沸する。残渣を酢酸エチルに溶解させ、ＮａＨＣＯ３、食塩水で洗浄し、濃縮する。粗製のＭＭＴｒ保護３’−イソブチリル誘導体を８０％ＡｃＯＨに溶解させ、ＭＭＴｒ基が十分に脱保護されるまで５０℃で攪拌する。溶媒を留去し、残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（０〜２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶液）により精製し、表題の化合物４４を得る。
【０１７９】
実施例１１
ウミシイタケルシフェラーゼアッセイ
このアッセイは、ＨＣＶ  ＲＮＡ複製を阻害する式Ｉの化合物の能力を測定し、それにより、ＨＣＶ感染の処置のためのそれらの潜在的有効性を測定する。細胞内ＨＣＶレプリコンＲＮＡレベルについての単純なリードアウトをレポーターとして利用する。ウミシイタケ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼ遺伝子を、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列の直後の、レプリコン構築物ＮＫ５．１（Ｋｒｉｅｇｅｒら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５巻：４６１４頁）の最初のオープンリーディングフレームに導入し、口蹄疫ウイルス由来の自己切断ペプチド２Ａ（ＲｙａｎおよびＤｒｅｗ、ＥＭＢＯ、１３巻：９２８〜９３３頁）を経由してネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（ＮＰＴＩＩ）遺伝子と融合させた。インビトロでの転写の後、ＲＮＡをヒトヘパトーマＨｕｈ７細胞にエレクトロポレーションにより導入し、Ｇ４１８−耐性コロニーを単離し、増殖させた。選択された安定細胞系２２０９−２３は複製のＨＣＶサブゲノムＲＮＡを含み、レプリコンにより発現するウミシイタケルシフェラーゼの活性は細胞のＲＮＡレベルを反映する。観測した活性が細胞増殖の減少の起因するものでないことを確認しながら、化学化合物の抗ウイルス活性および細胞毒性を並行して測定するために、アッセイを２重のプレート、１つは乳白色のプレート、１つは透明のプレートで行った。
【０１８０】
５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、ＧｉｂｃｏＢＲＬ、カタログ番号１０１０６−１６９）を含むダルベッコＭＥＭ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ、カタログ番号３１９６６−０２１）中で培養されたウミシイタケルシフェラーゼＨＣＶレプリコン細胞（２２０９−２３）を、９６ウェルプレート上にウェル当たり５０００細胞で配置し、一晩インキュベートした。２４時間後、培養培地中の異なる希釈度の化学化合物を細胞に添加し、その後さらに３７℃で３日間インキュベーションした。インキュベーション時間の終わりに、白いプレートの細胞を回収し、デュアルルシフェラーゼレポーターアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｅ１９６０）を使用してルシフェラーゼ活性を測定した。以下のパラグラフに記載したすべての試薬は製造業者のキットに含まれており、試薬の調製は製造業者の指示書にしたがった。細胞をウェル毎に２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．０、ＰＢＳ）で２回洗浄し、２５μＬの１ｘパッシブ溶解バッファー（ｐａｓｓｉｖｅ  ｌｙｓｉｓ
ｂｕｆｆｅｒ）で溶解させ、室温で２０分間インキュベーションした。１００μＬのＬＡＲＩＩ試薬を各ウェルに加えた。その後、プレートをＬＢ９６Ｖマイクロプレートルミノメーター（ＭｉｃｒｏＬｕｍａｔＰｌｕｓ、Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）に挿入し、１００μＬのＳｔｏｐ＆Ｇｏ（登録商標）試薬を各ウェルに注入し、２秒遅延、１０秒測定プログラムを使用してシグナルを測定した。ＩＣ５０、無処理細胞の対照値と比較して５０％のレプリコンレベルの減少に必要な薬剤の濃度は、ルシフェラーゼ活性の減少パーセンテージ対薬剤濃度のプロットから計算できる。
【０１８１】
Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ製のＷＳＴ−１試薬（カタログ番号１６４４８０７）を細胞毒性アッセイに使用した。１０μＬのＷＳＴ−１試薬を、ブランクとして培地のみを含むウェルも含めて各ウェルに添加した。その後、細胞を３７℃で１〜１．５時間インキュベーションし、９６ウェルプレートリーダーにより４５０ｎｍでのＯＤ値を測定した（レファレンスフィルター６５０ｎｍ）。また、ＣＣ５０、無処理細胞の対照値に対して５０％の細胞増殖を減少させるために必要な薬剤の濃度は、ＷＳＴ−１値の減少パーセンテージ対薬剤濃度のプロットから計算できる。
【０１８２】
実施例１２
ＭＴ４／ＸＴＴアッセイ
本発明の化合物をまた、同時感染に対する活性についてアッセイすることができる。例えば、ＨＣＶなどの血液感染についてリスクを有する個体は、ＨＩＶと同時感染している場合がある。
【０１８３】
例えば、ＭＴ−４細胞のＸＴＴによる多重判定（Ｗｅｉｓｌｏｗら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．１９８９年、８１巻、８号、５７７頁以下参照）、好ましくは、タンパク質結合の寄与を示すために４０〜５０％のヒト血清の存在下での判定を含む多重判定を使用して、化合物をＨＩＶ活性についてアッセイすることができる。要するに、典型的ＸＴＴアッセイでは、１０％ウシ胎仔血清（または必要に応じて４０〜５０％ヒト血清）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地中で培養し、９６ウェルプレートに播種し（２×１０４細胞／ウェル）、ウェル当たり１０〜２０ＴＣＩＤ５０のＨＩＶ−１ＩＩＩＢ（野生型）または変異型ウイルス（例えば、ＲＴ  Ｉｌｅ１００、Ｃｙｓ１８１またはＡｓｎ  １０３の変異を有するもの）を感染させた、ヒトＴ細胞系ＭＴ４細胞を使用する。連続的に希釈した試験化合物を各ウェルに加え、培地をＣＯ２富化雰囲気下３７℃でインキュベーションし、細胞の生存率をＸＴＴ生体染色色素で５日目または６日目に判定した。結果は典型的にはＥＤ５０μＭで示される。実施例１の化合物は、ＸＴＴアッセイにおいて約０．６μＭのＥＤ５０を示す。
【０１８４】
実施例１３
細胞内トリホスフェート濃度および半減期
本発明の化合物の推定される活性種はβ−Ｄ−２’−デオキシ−２’−β−Ｃ−メチル−４’−アジドシチジントリホスフェートである。トリチウム化した元の化合物と共にあらかじめインキュベーションした新鮮なヒト初代肝細胞（ＣｅｌｌｚＤｉｒｅｃｔまたはＩｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）においてトリホスフェートの安定性が判定される。肝細胞はコラーゲンでコーティングされた６ウェルプレート（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で、典型的には１．５×１０６細胞／ウェルで完全血清含有培地（ＣｅｌｌｚＤｉｒｅｃｔまたはＩｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）／３７oＣ／
５％ＣＯ２を使用して培養される。Ｈｕ４９７、ＭＨＬ−０９１８０６およびＨｕ５０４などの種々の肝細胞株が入手可能であり、したがって、当該株を並行して試験し、株の間での平均値を算出することは有用である。
【０１８５】
典型的には、プレインキュベーションは２μＭのトリチウム化した元の化合物（ｐａｒｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）を１０μＣｉ／ｍＬで用いて２４時間行う。細胞外の元の化合物を除去するために、ｔ０で細胞単層を細胞培養培地で洗浄し、細胞培地を新たな細胞培養培地を用いて再度インキュベーションする。細胞内トリホスフェートの濃度は、７２時間までの異なる時点で定量する。便宜的な時点は、各時点において２重の細胞培養による、０、０．５、１、２、４、６、８、２４、４８および７２時間である。
【０１８６】
適当な時点において、細胞培養培地を吸引することにより細胞を回収し、冷却したＰＢＳにより細胞を洗浄する。抽出媒体（１ｍＬのあらかじめ冷却した６０％（ｖ／ｖ）メタノール）中に細胞を剥がし取り、−２０℃で２４時間メタノールへ抽出する。抽出サンプルを遠心分離し、細胞の残骸を除去する。上澄みを新たな試験管に取りだし、濃縮し、分析のために液体窒素中に保存する。細胞抽出物の乾燥したペレットを水に溶解させ、ナノフィルター（例えば、ｎａｎｏｓｅｐ遠心濾過デバイス、Ｐａｌｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で濾過する。ＨＰＬＣ分析の前に、サンプルに元の化合物およびそのモノホスフェート体、ジホスフェート体およびトリホスフェート体について非標識化標準品を加える。典型的なＨＰＬＣシステムとして、放射線検出器（例えば、β−ＲＡＭ、ＩＮ／ＵＳ
Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ）と組み合わせたＷｈａｔｍａｎ  Ｐａｒｔｉｓｉｌ  １０ＳＡＸ（４．６×２５０ｍｍ）カラムを備えたイオン交換ＨＰＬＣが使用される。慣用の移動相は、例えば、１ｍＬ／分の流速の、リニアグラジエント０％水性バッファーから１００％リン酸バッファー（例えば、０．５Ｍ  ＫＨ２ＰＯ４／０．８Ｍ  ＫＣｌ）である。β−ＲＡＭでの放射性種の検出のために、カラム溶出液に対して５：１の比率のＦｌｏＳｃｉｎｔ  ＩＶまたはＵｌｔｉｍａＦｌｏＡＰ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用することができる。元の化合物および細胞内代謝物は、ラジオクロマトグラムにおいて細胞内
種の保持時間を、細胞抽出サンプルに混ぜて、典型的には２７０ｎｍのＵＶ吸収により検出する非放射性標準品の保持時間と比較することにより同定する。
【０１８７】
ヒト初代肝細胞がトリチウム化された本発明の化合物（例えば、２μＭおよび１０μＣｉ／ｍＬ）と共にインキュベーションされるような類似の手法により、取り込みおよびリン酸化の経時変化が測定される。好適な時間経過は、細胞回収前７２、４８、２４、１６、６および１時間での２重の培養への化合物の添加である。本発明の化合物のリン酸化の用量応答を判断するために、ヒト初代肝細胞を０、２、１０、２５、５０、１００および２５０μＭのトリチウム化した試験化合物と共に２４時間インキュベーションする。非放射性標識化試験化合物を添加することにより最終濃度に到達させる。一般的に２４時間のインキュベーションの後に２重の細胞培養を回収する。
【０１８８】
当該アッセイにおいて、本発明化合物のトリホスフェート半減期の平均は２１．４時間（標準偏差４．２２時間）である。２μＭ、２４時間での定常状態のトリホスフェートレベルは百万細胞当たり約１５ｐＭである。ヒト肝臓実質細胞の平均量として３μＬを使用すると、トリホスフェートのこの濃度は、元の化合物のＫｉを実質的に上回る値に対応する。
【０１８９】
トリホスフェートの長い半減期および高濃度は、投薬後長期間にわたって活性種が抗ウイルス活性濃度でＨＣＶ感染性細胞に存在するであろうことを意味する。さらには、このことは、薬剤エスケープ変異株を発生させる最適ではない薬剤への接触の機会を最小化するための１日１回投与によっても、１日の最小トラフ濃度が高いままであることを意味する。
【０１９０】
本発明のトリホスフェートの長い半減期とは対照的に、類縁の２’−β−Ｃメチル化合物ＰＳＩ−６１３０（β−Ｄ−２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−β−Ｃ−メチルシチジン、以下に記載）のトリホスフェートの半減期はたったの４．７時間であり、２４時間定常状態のトリホスフェート濃度は百万細胞当たりたったの１．３ｐＭである。
【０１９１】
【化２２】
2011246485.tif 000024
【０１９２】
実施例１４
いくつかの経路で投与するための本化合物の医薬組成物をこの実施例に記載するように調製した。
【０１９３】
経口投与用組成物（Ａ）
【０１９４】
【表２】
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【０１９５】
成分を混合し、各々約５００〜１０００ｍｇを含む、カプセル剤として調剤する。
経口投与用組成物（Ｂ）
【０１９６】
【表３】
2011246485.tif 000026
【０１９７】
成分は、メタノールなどの溶媒を使用して混合し、造粒する。その後、製剤を乾燥し、適切な打錠機により錠剤を形成する（約２０ｍｇの活性化合物を含む）。
経口投与用組成物（Ｃ）
【０１９８】
【表４】
2011246485.tif 000027
【０１９９】
成分を混合し、経口投与用の懸濁液を形成する。
経口投与用組成物（Ｄ）
【０２００】
【表５】
2011246485.tif 000028
【０２０１】
活性成分を注射用水の一部に溶解させる。その後、攪拌子ながら十分な量の塩化ナトリウムを加え、溶液を等張にする。溶液を、注射用水の残りにより重量を調節し、０．２ミクロンのメンブランフィルターを通して濾過し、無菌条件下でパッケージ化する。
【０２０２】
坐剤製剤（Ｅ）
【０２０３】
【表６】
2011246485.tif 000029
【０２０４】
成分を合わせて溶解させ、スチームバス上で混合し、２．５ｇの合計重量となるように型に注ぐ。
上記の発明は、明確性および理解を目的として、例示および実施例により詳細に述べられている。当該技術分野の当業者には明らかであるとおり、添付のクレームの範囲内において変更および修正を実施してもよい。したがって、上記記載は例示を意図するのであって、限定を意図するのではないことが了解されよう。したがって、本発明の範囲は、上記記載を参照して判断されるべきではなく、その代わりに、当該クレームに認められる均等物のすべての範囲と共に、以下に添付する実施例を参照して判断すべきである。
【０２０５】
この出願で引用したすべての特許、特許出願および公報は、個々の特許、特許出願または公報の各々が個々に表示されているのと同様の範囲ですべての目的について、その全体を参照により本明細書に援用する。
【手続補正書】
【提出日】平成23年8月5日(2011.8.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式：
【化１】
2011246485.tif 000032
の化合物。
【外国語明細書】
2011246485000001.pdf