(57)【要約】【課題】  酵素法によらない新規な製造方法でβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを製造する方法を提供する。 【解決手段】  糖質材料としてＤ−グルコース及びＤ−フルクトースを用い、 酵素が存在しない条件下で、 加熱して反応させてβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（β−Ｆｆ２−６Ｇ）および／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（α−Ｆｆ２−６Ｇ）を生成させ、 反応物中からβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇを取得する。 具体的には、加熱反応時に水を添加しないで加熱して反応させてβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇを製造することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖質材料としてＤ−グルコースおよびＤ−フルクトースを用い、 酵素が存在しない条件下で、 加熱して反応させてβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを生成させ、 反応物中からβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを取得することを特徴とする、β−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法。
【請求項２】
請求項１に記載のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法において、
Ｄ−グルコースおよびＤ−フルクトースの混合物に対して水を添加することなく固相で加熱して反応させ、 次いで反応物に水を添加し溶解させて、 β−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを含有する水溶液とし、該水溶液中からβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを取得することを特徴とする、β−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法。
【請求項３】
前記加熱する際の温度条件は、 １００℃以上２００℃以下となる条件である請求項１又は２に記載のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法。
【請求項４】
前記Ｄ−グルコースおよびＤ−フルクトースが粉末状または顆粒状である請求項１乃至３のいずれか１項に記載のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
β−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法に関する。 さらに詳しくは、 本発明は、 Ｄ−グルコースとＤ−フルクトースの共存下において、 加熱条件下で酵素反応を利用することなく反応させてβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを製造する方法に関する。 
【背景技術】
【０００２】
β−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース( 以下「β−Ｆｆ２−６Ｇ」と略す場合もある) および／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（以下「α−Ｆｆ２−６Ｇ」と略す場合もある) を製造する方法に関して、非特許文献１には酵素を利用してβ−Ｆｆ２−６Ｇを製造する方法が報告されている。しかしながら、β−Ｆｆ２−６Ｇを酵素反応を利用せずに製造する方法、 即ち、 酵素を用いずに、 或いは微生物を用いずに製造する方法は知られていない。さらには、 糖質材料として単糖のみを使用し、 単糖類のみからβ−Ｆｆ２−６Ｇを製造する方法は知られていない。 
【０００３】
一方、α−Ｆｆ２−６Ｇ自体については、過去に報告が無く新規化合物であるため、当然にその製造方法は知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Journal of Chromatography A, 920 (2001) 299-308.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、 酵素法によらない新規な製造方法でβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを製造する方法を提供することを目的とする。 
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記した課題を解決するための主たる本発明のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（即ち、β−Ｆｆ２−６Ｇ）および／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（即ち、α−Ｆｆ２−６Ｇ）を製造する方法は、 糖質材料としてＤ−グルコースおよびＤ−フルクトースを用い、 酵素が存在しない条件下で、 加熱して反応させてβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇを生成させ、 反応物中からβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇを取得することを特徴とする。 
【０００７】
さらに一つの具体的な本発明のβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇの製造方法は、 加熱反応時に水を使用しない方法であり、 前記主たる本発明のβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇの製造方法において、 Ｄ−グルコースおよびＤ−フルクトースの混合物に対して水を添加することなく固相で加熱して反応させ、 次いで反応物に水を添加し、 溶解させてβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを含有する水溶液とし、該水溶液中からβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを取得することを特徴とする。
【０００８】
本発明のβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇの製造方法において加熱反応させる際の温度条件は、 １００℃以上２００℃以下となる条件が好ましい。 
【０００９】
β−Ｆｆ２−６Ｇは前記したように公知化合物であるが、α−Ｆｆ２−６Ｇは新規化合物である。α−Ｆｆ２−６Ｇの構造式を次式にて示す。
【００１０】
【化１】
2011246401.tif 000002
【００１１】
対比のため、公知化合物であるβ−Ｆｆ２−６Ｇの構造式を次式にて示す。
【００１２】
【化２】
2011246401.tif 000003
【発明の効果】
【００１３】
本発明のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（即ち、β−Ｆｆ２−６Ｇ）および／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（即ち、α−Ｆｆ２−６Ｇ）を製造する方法は、 新規な製造方法を提供する点において有用であり、また、安価に製造することができ、 製造時間も比較的短いため、 製造効率が良い。 
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品についてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ分析チャートを示す図である。
【図２】β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品について１次元ＮＭＲとして 1Ｈ−ＮＭＲ分析のチャートを示す図である。
【図３】β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品について１次元ＮＭＲとして13Ｃ−ＮＭＲ分析のチャートを示す図である。
【図４】β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品について２次元ＮＭＲとしてＣＯＳＹの結果のチャートを示す図である。
【図５】β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品について２次元ＮＭＲとしてＥ−ＨＳＱＣの結果のチャートを示す図である。
【図６】β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品について２次元ＮＭＲとしてＨＳＱＣ−ＴＯＣＳＹの結果のチャートを示す図である。
【図７】β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品について２次元ＮＭＲとしてＨＭＢＣの結果のチャートを示す図である。
【図８】水を添加することなく反応させてβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを製造した場合にβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを含む合成糖溶液（糖サンプル溶液）のＨＰＬＣ（ＯＤＳ−８０Ｔｓ×２本）分析チャートを示す図である。
【図９】水を添加することなく反応させてβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを製造し活性炭カラム水溶出後、回収画分３のＨＰＬＣ分析チャート、ならびにβ−Ｆｆ２−６Ｇの標準品のＨＰＬＣ（分取用ＯＤＳ−８０Ｔｓ）分析チャートを示した図である。
【図１０】β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品と糖１について１次元ＮＭＲとして 1Ｈ−ＮＭＲを比較したチャートを示す図である。
【図１１】水を添加することなく反応させてβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを製造した場合のα−Ｆｆ２−６Ｇの回収画分のＨＰＬＣ分析チャートを示す図である。
【図１２】糖２についてＨＰＡＥＣ分析チャートを示す図である。
【図１３】糖２についてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ分析チャートを示す図である。
【図１４】糖２について１次元ＮＭＲとして 1Ｈ−ＮＭＲ分析のチャートを示す図である。
【図１５】糖２について１次元ＮＭＲとして13Ｃ−ＮＭＲ分析のチャートを示す図である。
【図１６】糖２について２次元ＮＭＲとしてＣＯＳＹの結果のチャートを示す図である。
【図１７】糖２について２次元ＮＭＲとしてＥ−ＨＳＱＣの結果のチャートを示す図である。
【図１８】糖２について２次元ＮＭＲとしてＨＳＱＣ−ＴＯＣＳＹの結果のチャートを示す図である。
【図１９】糖２について２次元ＮＭＲとしてＨＭＢＣの結果のチャートを示す図である。
【図２０】Ｄ−グルコースおよびＤ−フルクトースから合成したβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの温度の影響を、 横軸を温度、 縦軸をβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの相対合成量（％）をとったグラフを示す図である。
【図２１】Ｄ−グルコースおよびＤ−フルクトースから合成したβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの経時変化を、 横軸を時間（分)、縦軸をβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの相対合成量（％）をとったグラフを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明のβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇの製造に用いるＤ−グルコースには、 β−Ｄ−グルコース、 無水のＤ−グルコース、 1 水和物のＤ−グルコース、 アノマー混合のＤ−グルコースの何れでもよい。Ｄ−グルコース、 Ｄ−フルクトースには市販のものが好適に利用できる。 また、 本発明で利用可能なＤ−グルコース、 Ｄ−フルクトースの形態は、 粉末状或いは顆粒の状態でもよい。 
【００１６】
本発明において使用する水には、 反応条件を厳密にする目的で精製水を用いることが好ましい。 精製水には、 ミリＱ水、 蒸留水或いはイオン交換水を用いることができる。 
【００１７】
β−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇを含有する水溶液の製造の好ましい実施の態様として、 次の方法を示す。 
【００１８】
（本発明のオリゴ糖を含有する水溶液の製造方法) 
粉末状または顆粒状のＤ−グルコースとＤ−フルクトースを三角フラスコにとり混合し、 水を添加しない状態で、 １００℃以上２００℃以下、好ましくは１１０℃以上１８０℃以下、 最も好ましくは１２０℃以上１５０℃以下に加熱する。 加熱反応時の温度が１００℃未満であるとβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの十分な製造はされず、 また２００℃を超えるとカラメル化は進み、 β−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの製造効率が落ちるため好ましくない。 
【００１９】
加熱時間は好ましくは１０分から９０分間、 さらに好ましくは１５分から４５分間加熱処理し、 精製水を添加後溶解し、 濾過してβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを生成した糖溶液を得ることができる。 濾過は、 ディスポーサブル０．４５μｍあるいは０．２２μｍフィルター（例えば、孔径０．４５μｍあるいは０．２２μｍのＤＩＳＭＩＣ−２５ｃｓ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ）で濾過してβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを含有する水溶液とすることができる。 このβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを含有する水溶液は、 −４℃以下（好ましくは−８０℃以下）のフリーザーで凍結させることにより保存できる。 
【実施例１】
【００２０】
（β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品の調製) 
β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品は以下のようにして調製した。
【００２１】
特許第３８７１２２２号公報の実施例１に記載されている方法により製造した植物エキス発酵液を用意した。該植物エキス発酵液を活性炭セライトカラムクロマトグラフィー（４．５ｃｍ×３５ｃｍ）に添加し、 水により溶出させ、 水で溶出した画分をさらにＡｍｉｄｅ−８０（商品名、 東ソー株式会社製、 カラムサイズ：７．８ｍｍ×３０ｃｍ、溶出：８０％アセトニトリル、カラム温度：８０℃、流速：２ｍＬ／ｍｉｎ、検出：示差屈折計) に供し、 ２７〜２８分に検出されたピークを分取した。 以後この分析条件を「ＨＰＬＣ条件−Ａ」とする。 得られた画分は濃縮し、 凍結乾燥させた。 
【００２２】
ただし、 得られた画分について単一になっていない場合はＨＰＬＣ条件−Ａを繰り返し行い精製を行った。 
【００２３】
前記工程で得られた凍結乾燥品について次のようにして化学構造を決定した。
【００２４】
該凍結乾燥物をＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させて以下の定性試験に用いた。 
【００２５】
ＨＰＬＣ条件−Ａで得られたピークの分子量を確認するためにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ析を行った結果、 得られたピークは３６５の（Ｍ＋Ｎａ）イオンピークを与えた。 図１にＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ分析チャートを示す。 
【００２６】
さらに、 ＨＰＬＣ条件−Ａで得られたピークの構造を明らかにするため１次元ＮＭＲ分析および２次元ＮＭＲ分析を行った。 それらのチャートを図２−図７に示す。 また、 得られたピークのケミカルシフトを表１に示す。
【００２７】
【表１】
2011246401.tif 000004
【００２８】
以上の結果から、ＨＰＬＣ条件−Ａで得られたピークは公知物質と同一のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（略語：β−Ｆｆ２−６Ｇ）であると認められた。 
【００２９】
前記工程による、ＨＰＬＣ分析、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ分析およびＮＭＲ分析により単一にしたβ−Ｆｆ２−６Ｇを標準品として以後使用した。 
【００３０】
（加熱処理によるβ−Ｆｆ２−６Ｇの合成）
Ｄ−グルコース（シグマ社製、 純度９９％）３０ｇおよびＤ−フルクトース（シグマ社製、純度９９％）３０ｇを三角フラスコに測りとり、 混合し、 アルミホイルで蓋をし、 予め１５０℃に温めておいた電気炉で６０分加熱した。 加熱後、 総量が３００ｍＬとなるようにＭｉｌｌｉ−Ｑ水を加えて溶解させることによりβ−Ｆｆ２−６Ｇ含有水溶液を得た。 得られたβ−Ｆｆ２−６Ｇ含有水溶液を「糖サンプル溶液」とした。 
【００３１】
前記工程で得られた糖サンプル溶液を以下の条件でＨＰＬＣ分析を行った。 
【００３２】
ＨＰＬＣ装置（デュアルポンプ；ＤＰ−８０２０：商品名、東ソー株式会社製、検出器; ＲＩ−８０２０：商品名、東ソー株式会社製）、インテグレータ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｃｏｒｄｅｒ２１：商品名、東ソー株式会社製）、カラム（ＯＤＳ−８０Ｔｓ  ｃｏｌｕｍｎ：商品名、４．６ｍｍ×２５ｃｍ、×２本、東ソー株式会社製）、 溶出（Ｈ2 Ｏ、０．４ｍＬ／ｍｉｎ）、カラム温度（室温）、注入量（１０μＬ）。以後この分析条件を「ＨＰＬＣ条件−Ｂ」とする。
【００３３】
糖サンプル溶液のＨＰＬＣ分析のチャートを図８に示す。その結果、 様々な物質が生成されていることが確認できる。 
【００３４】
次に、 前記工程で得られた糖サンプル溶液を活性炭セライトカラムクロマトグラフィー（４．８ｃｍ×３５ｃｍ）に添加し、 画分１（約６００ｍＬ）、 画分２（約７５０ｍＬ）、 画分３（約２２５０ｍＬ）の総量３６００ｍＬの水で溶出させ、 溶出させたサンプルは、 それぞれ減圧濃縮装置を用いて濃縮した。 
【００３５】
それぞれ濃縮したサンプルについて、 分取用ＨＰＬＣ装置（デュアルポンプ；ＤＰ−８０２０：商品名、東ソー株式会社製、検出器; ＲＩ−８０２０：商品名、東ソー株式会社製）、インテグレータ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｃｏｒｄｅｒ２１：商品名、東ソー株式会社製）、カラム（ＯＤＳ−８０Ｔｓ  ｃｏｌｕｍｎ：商品名、２０ｍｍ×２５ｃｍ、東ソー株式会社製）、 溶出（Ｈ2 Ｏ、３．０ｍＬ／ｍｉｎ）、カラム温度（３５℃）、注入量（２００ｍＬ）を行った。 以後この分析条件を「ＨＰＬＣ条件−Ｃ」とする。
【００３６】
その結果、 水で溶出させた画分３の中に、 β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品と同溶出時間（２７ｍｉｎ頃）にピークが認められた。図９にクロマトグラフィーのチャートを示す。 図９によると標準品であるβ−Ｆｆ２−６Ｇと同溶出時間にピークが検出されていることが確認できる。 この目的のピークを糖１とした。 
【００３７】
目的のピーク糖１について、 ＨＰＬＣ条件−Ｃを行い４０回分取した。 ただし、 得られた画分について単一になっていない場合はＨＰＬＣ条件−Ｂを行い精製を行った。 
【００３８】
得られた分取液を凍結濃縮乾燥し、 糖１; １７８ｍｇの凍結乾燥物を得た。 得られた凍結乾燥物をＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させて以下の定性試験に用いた。 
【００３９】
ＨＰＬＣ条件−Ｃで得られたピークの分子量を確認するためにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ分析を行った結果、 得られたピーク糖１は、 ３６５の（Ｍ＋Ｎａ）イオンピークを与えた。 
【００４０】
次に、 糖１の構造を確認するためＮＭＲ分析を行った結果、 β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品との１次元ＮＭＲ分析の比較により、糖１はβ−Ｆｆ２−６Ｇと同一のチャートであることが認められた。 それらのチャートを図1 0 に示す。 
【００４１】
以上を総合して、糖１は、 ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ分析、１次元ＮＭＲ分析の結果、 公知物質のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（略語：β−Ｆｆ２−６Ｇ）と同一物質であると判定した。
【実施例２】
【００４２】
（加熱処理によるα−Ｆｆ２−６Ｇの合成）
Ｄ−グルコース（シグマ社製、 純度９９％）３０ｇおよびＤ−フルクトース（シグマ社製、 純度９９％）３０ｇを三角フラスコに測りとり、 混合し、 アルミホイルで蓋をし、 予め１５０℃に温めておいた電気炉で６０分加熱した。 加熱後、 Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水を加えて総量が３００ｍＬになるように溶解させることにより糖サンプル溶液を得た。
【００４３】
前記加熱処理工程で得られた糖サンプル溶液を活性炭セライトカラムクロマトグラフィー（４．８ｃｍ×３５ｃｍ）に添加し、画分１（約６００ｍＬ）、画分２（約７５０ｍＬ）、画分３（約２２５０ｍＬ）の総量３６００ｍＬの水で溶出させ、溶出させたサンプルは、それぞれ減圧濃縮装置を用いて濃縮した。
【００４４】
それぞれ濃縮したサンプルについて、ＨＰＬＣ条件−Ｃを行った。 その結果、 水で溶出させた画分３の中に、 未同定のピーク（２９ｍｉｎ頃）が検出されていることが認められたため、 この目的のピークを糖２とした。 それらのチャートを図１１に示す。 
【００４５】
目的のピーク糖２について、 ＨＰＬＣ条件−Ｃを行い４０回分取した。 ただし、 得られた画分について単一になっていない場合はＨＰＬＣ条件−Ｂを行い精製を行った。 
【００４６】
得られた分取液を凍結濃縮乾燥し、 糖２; ２３４ｍｇの凍結乾燥物を得た。 得られた凍結乾燥物をＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させて以下の定性試験に用いた。 
【００４７】
前記ＨＰＬＣ条件−Ｃにより得られた分取物（ＯＤＳ−８０Ｔｓ分取画分）のピークが単一の物質であることを確認するために、 分取物について以下の条件でＨＰＡＥＣ分析を行った。 
【００４８】
カラム（Ｄｉｏｎｅｘ，ＣａｒｂｏＰａｃ  ＰＡｌ：商品名、４．０ｍｍＩＤ×２５０ｍｍ、ダイオネックス株式会社製）、ガードカラム（Ｄｉｏｎｅｘ，ＣａｒｂｏＰａｃ：商品名、 ダイオネックス株式会社製）、移動層Ａ（１５０ｍＭ  ＮａＯＨ）、移動層Ｂ（５００ｍＭ  ｓｏｄｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ  ｉｎ  １５０ｍＭ  ＮａＯＨ）、グラジエント条件（０→１分：２５ｍＭ、１→２分：２５−５０ｍＭ、２→２０分：５０−２０００ｍＭ、２０−２２分：５００ｍＭ、２２−３０分：２５ｍＭ）、カラム温度（室温）、注入量（２５μＬ）、測定電位（（Ｅｌ）：０．１Ｖ（５００ｍｓ））、酸化電位（（Ｅ２）：０．６Ｖ（１００ｍｓ））、還元電位（（Ｅ３）：−０．６Ｖ（５０ｍｓ））。以後この分析条件を「ＨＰＬＣ条件−Ｄ」とする。 
【００４９】
得られた分析結果を分取画分のＨＰＡＥＣ分析のチャートとして図１２に示す。 図１２によれば、 溶出時間９．８分頃に単一のピークが検出されていることが確認できる。 
【００５０】
また、 ショ糖の相対保持時間を１．０とした時の分取したピークの相対保持時間は１．７７であり、 既知の物質の相対保持時間の中に該当するものはなかった。 
【００５１】
（化学構造の決定）
ＨＰＬＣ条件−Ｃで得られたピークの分子量を確認するためにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ分析を行った。糖２のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳの結果のチャートを図１３に示す。図１３によれば、得られたピーク糖２は、 ３６５の（Ｍ＋Ｎａ）イオンピークを与えた。
【００５２】
次に、 糖２の構造を確認するため１次元ＮＭＲ分析および２次元ＮＭＲ分析を行った。 それらのチャートを図１４−図１９に示す。 また、 糖２のケミカルシフトを表２に示す。
【００５３】
【表２】
2011246401.tif 000005
【００５４】
以上を総合して、ＨＰＬＣ条件−Ｄ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳおよびＮＭＲ分析により、 ＨＰＬＣ条件−Ａで得られたピークは新規化合物であるα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（略語：α−Ｆｆ２−６Ｇ）であると決定した。 
【実施例３】
【００５５】
（各温度における加熱処理によるβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの合成）
Ｄ−グルコース（シグマ社製、純度９９％）１００ｍｇおよびＤ−フルクトース（シグマ社製、 純度９９％）１００ｍｇをガラス試験管に測りとり、 混合し、 アルミホイルで蓋をし、 反応温度を１１０℃から１８０℃までの１０℃刻みに１１０℃、１２０℃、１３０℃、１４０℃、１５０℃、１６０℃、１７０℃、１８０℃に温めておいたサーモバスヒーターでそれぞれ６０分間加熱し、 加熱後、 Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水を１ｍＬ加え、 溶解させることによりβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇ含有水溶液を得た。 得られたβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇ含有水溶液を「糖サンプル溶液」とした。 
【００５６】
前記工程で得られた糖サンプル溶液について、前記実施例１のＨＰＬＣ条件−Ｂを行った。 β−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの最も多く製造される温度を１００％とし、 各温度におけるβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの濃度のグラフ（相対合成量％）のグラフを図２０に示す。 
【００５７】
図２０によれば、 β−Ｆｆ２−６Ｇの合成温度は、１１０℃以上１８０℃以下が好ましく、 さらに好ましくは１１０℃以上１５０℃以下、 最も好ましくは１２０℃以上１４０℃以下、 最大合成量（１００％）が１３０℃であることが分かる。 また、 α−Ｆｆ２−６Ｇの合成温度は、１１０℃以上１８０℃以下が好ましく、 さらに好ましくは１１０℃以上１５０℃以下、 最も好ましくは１２０℃以上１４０℃以下、 最大合成量（１００％）が１３０℃であることが分かる。 
【実施例４】
【００５８】
（各反応時間における加熱処理によるβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの合成）
前記実施例３の加熱処理によるβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの合成において、１４０℃での加熱時の反応時間を０、１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１８０分間とした以外は前記実施例３と同様に行い、 β−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇ含有水溶液を得た。 得られたβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇ含有水溶液を「糖サンプル溶液」とした。 
【００５９】
前記工程で得られた糖サンプル溶液について、前記実施例１のＨＰＬＣ条件−ＡでＨＰＬＣを行った。 β−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇが最も多く製造される温度を１００％とし、 各反応時間におけるβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの濃度のグラフ（相対合成量％）のグラフを図２１に示す。 図２１によれば、 β−Ｆｆ２−６Ｇの合成時の加熱時間は好ましくは１５分〜９０分、さらに好ましくは１５分〜６０分間であることが分かる。 また、 α−Ｆｆ２−６Ｇの合成時の加熱時間は好ましくは１５分〜９０分、さらに好ましくは１５分〜６０分間であることが分かる。 
【実施例５】
【００６０】
（グルコースとフルクトースの比率による合成量の違い) 
前記加熱処理によるβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの合成方法において、 Ｄ−グルコースとＤ−フルクトースの比率をそれぞれ、 Ｄ−グルコース：Ｄ−フルクトース＝１：０、１：１、１：２、２：１、０：１と変えて、 β−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの製造量を確認した。 その結果を表３にて示す。
【００６１】
【表３】
2011246401.tif 000006
【００６２】
表３によれば、β−Ｆｆ２−６Ｇは、Ｄ−グルコース：Ｄ−フルクトースが１：１、１：２、２：１の時にβ−Ｆｆ２−６Ｇが製造されることが分かる。 Ｄ−グルコース：Ｄ−フルクトース＝１〜２：２〜１が好ましく、 さらに好ましくはＤ−グルコース：Ｄ−フルクトース＝１：２であることが分かる。 また、 α−Ｆｆ２−６Ｇは、Ｄ−グルコース：Ｄ−フルクトースが１：１、１：２、２：１の時にα−Ｆｆ２−６Ｇが製造されることが分かる。 Ｄ−グルコース：Ｄ−フルクトース＝１〜２：２〜１が好ましく、 さらに好ましくはＤ−グルコース：Ｄ−フルクトース＝２：１であることが分かる。 
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明はβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇの効率のよい製造方法を提供できる。
【図１】
2011246401.tif 000007
【図２】
2011246401.tif 000008
【図３】
2011246401.tif 000009
【図４】
2011246401.tif 000010
【図５】
2011246401.tif 000011
【図６】
2011246401.tif 000012
【図７】
2011246401.tif 000013
【図８】
2011246401.tif 000014
【図９】
2011246401.tif 000015
【図１０】
2011246401.tif 000016
【図１１】
2011246401.tif 000017
【図１２】
2011246401.tif 000018
【図１３】
2011246401.tif 000019
【図１４】
2011246401.tif 000020
【図１５】
2011246401.tif 000021
【図１６】
2011246401.tif 000022
【図１７】
2011246401.tif 000023
【図１８】
2011246401.tif 000024
【図１９】
2011246401.tif 000025
【図２０】
2011246401.tif 000026
【図２１】
2011246401.tif 000027
【手続補正書】
【提出日】平成22年7月2日(2010.7.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
【表１】
2011246401.tif 000028
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
【表２】
2011246401.tif 000029