(57)【要約】【課題】防黴、防菌性、安定性および徐放性に優れた気相用防菌剤含浸物を提供する。【解決手段】下記一般式（Ｉ）、2011063544.tif 000012（Ｒ１は水素原子またはメチル基を表し、Ｒ２は炭素原子数１〜５のアルキル基を表す）で表されるイソチオシアン酸エステルを、シリカゲル、ゼオライト、濾紙、活性炭、タルクからなる群から選ばれる担体に含浸させてなることを特徴とする気相用防菌剤含浸物である。前記一般式（Ｉ）中のＲ１がメチル基であることが好ましい。【選択図】図１
2011063544.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）、
2011063544.tif 000011
（Ｒ１は水素原子またはメチル基を表し、Ｒ２は炭素原子数１〜５のアルキル基を表す）
で表されるイソチオシアン酸エステルを、シリカゲル、ゼオライト、濾紙、活性炭、タルクからなる群から選ばれる担体に含浸させてなることを特徴とする気相用防菌剤含浸物。
【請求項２】
前記一般式（Ｉ）中のＲ１がメチル基である請求項１記載の気相用防菌剤含浸物。
【請求項３】
前記一般式（Ｉ）中のＲ２がメチル基である請求項１または２記載の気相用防菌剤含浸物。
【請求項４】
前記一般式（Ｉ）で表されるイソチオシアン酸エステルが、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルである請求項１記載の気相用防菌剤含浸物。
【請求項５】
前記担体がシリカゲルである請求項１〜４のうちいずれか一項記載の気相用防菌剤含浸物。
【請求項６】
さらにプロピレンカーボネートを含む請求項１〜５のうちいずれか一項記載の気相用防菌剤含浸物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は気相用防菌剤含浸物に関し、詳しくは、防黴、防菌性、安定性および徐放性に優れた気相用防菌剤含浸物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ほとんどの天然有機物は黴や菌類、細菌類の栄養源となるため、浴室や食品のみならず、生活上の様々な物品が、周囲環境次第によっては黴や菌類に侵される危険性を有する。例えば、一眼レフカメラやデジタル一眼レフカメラの交換レンズや、バッグ、ブーツなどの皮革製品は、保管状態が悪いと黴が発生してしまうことがある。黴が発生してしまったレンズや皮革製品は使用に堪えなくなり、除去修復には高度な技術と多額の費用を要することになる。このような、物品や食品等の保管時の黴や菌類、細菌類の発生を未然に防止するために優れた気相用の防黴、防菌剤が求められている。
【０００３】
わさび、ホースラディッシュ、マスタード中に含まれるアリルイソチオシアネートは、大腸菌や黄色ぶどう球菌のような微生物に対し、抗菌作用を有し、魚肉類、畜肉類の腐敗防止剤として古くから知られている。そのほか、粉わさび、からし粉の成分であるアルキルイソチオシアネート、例えばメチルイソチオシアネート、エチルイソチオシアネート、ブチルイソチオシアネートなどやベンジルイソチオシアネートも抗菌作用を有することが知られている。
【０００４】
しかしながら、アリルイソチオシアネートは、高揮発性のため、持続性を欠き、また強い刺激臭を有するため、利用分野が制限されるのを免れない。
【０００５】
アリルイソチオシアネートの高揮発性という欠点を解消するため、特許文献１には、特定の活性炭担体にイソチオシアン酸エステルを吸着させたイソチオシアン酸エステル蒸気発生剤が開示され、特許文献２には、イソチオシアン酸エステルを特定の比表面積、細孔直径、比細孔容積を有するシリカゲル担体に吸着させたイソチオシアン酸エステル蒸気発生剤が開示されている。また、特許文献３には、活性炭担体に酸化鉄粉末とともにイソチオシアン酸アリルを吸着させた徐放性組成物が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平６−８０５２１号公報
【特許文献２】特開平６−１８３９２０号公報
【特許文献３】特開平１１−２６２３８１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、アリルイソチオシアネートの抗菌性は未だ満足できるものではなく、より一層防黴、防菌効果の高い防黴、防菌剤が求められている。また、アルキルイソチオシアネートも、低揮発性ではあるが、抗菌性、抗黴性が弱く、ベンジルイソチオシアネートは、水中での安定性を欠く上に、強い刺激臭を有するという欠点がある。
【０００８】
そこで本発明の目的は、防黴、防菌性、安定性および徐放性に優れた気相用防菌剤含浸物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者等は、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、特定の構造を有するイソチオシアン酸エステルを、シリカゲル、ゼオライト、濾紙、活性炭、タルクからなる群から選ばれる担体に含浸させてなる気相用防菌剤含浸物とすることで上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
即ち本発明の気相用防菌剤含浸物は、下記一般式（Ｉ）、
2011063544.tif 000003
（Ｒ１は水素原子またはメチル基を表し、Ｒ２は炭素原子数１〜５のアルキル基を表す）
で表されるイソチオシアン酸エステルを、シリカゲル、ゼオライト、濾紙、活性炭、タルクからなる群から選ばれる担体に含浸させてなることを特徴とするものである。
【００１１】
本発明の気相用防菌剤含浸物は、前記一般式（Ｉ）中のＲ１がメチル基であることが好ましく、前記一般式（Ｉ）中のＲ２がメチル基であることが好ましい。
【００１２】
また、本発明の気相用防菌剤含浸物は、前記一般式（Ｉ）で表されるイソチオシアン酸エステルが、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルであることが好ましく、前記担体がシリカゲルであることが好ましい。
【００１３】
また、本発明の気相用防菌剤含浸物は、さらにプロピレンカーボネートを含むことが好ましい。
【発明の効果】
【００１４】
本発明により、防黴、防菌性、安定性および徐放性に優れた気相用防菌剤含浸物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】実施例１の黴胞子菌液の塗布した箇所を示す説明図である。
【図２】実施例１の結果を示す写真である。
【図３】実施例２の結果を示す写真である。
【図４】実施例３の結果を示す写真である。
【図５】実施例４の結果を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の実施の形態につき詳しく説明する。
【００１７】
本発明の気相用防菌剤含浸物の防黴、防菌活性成分は、下記一般式（Ｉ）、
2011063544.tif 000004
（Ｒ１は水素原子またはメチル基を表し、Ｒ２は炭素原子数１〜５のアルキル基を表す）
で表されるイソチオシアン酸エステルであり、Ｒ１及び／またはＲ２がメチル基であることが好ましい。具体的には、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチル、（２Ｒ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチル、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸エチル、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸プロピル、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸ブチル、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸ペンチル、２−イソチオシアナト酢酸メチル、２−イソチオシアナト酢酸エチル、２−イソチオシアナト酢酸プロピル、２−イソチオシアナト酢酸ブチル、２−イソチオシアナト酢酸ペンチルなどが挙げられ、その中でも特に、防菌、防黴効果および徐放性に優れることから、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチル（ＭｅＡｌａＮＣＳ）が好ましい。防黴、防菌活性成分は、本発明の気相用防菌剤含浸物１００質量部に対して、０．１〜５０質量部含まれることが好ましい。
【００１８】
本発明の気相用防菌剤含浸物は、上記防黴、防菌活性成分を、シリカゲル、ゼオライト、濾紙、活性炭、タルクからなる群から選ばれる担体に含浸させてなるものである。シリカゲル、ゼオライト、濾紙、活性炭、タルクはいずれも担体として使用可能であるが、徐放性に優れることから、シリカゲルが好ましい。シリカゲルは比表面積、細孔直径等の指定はなく、一般に入手可能なものであればいずれも使用可能である。
【００１９】
本発明の気相用防菌剤含浸物の製造方法は、特に限定されず、上記防黴、防菌活性成分を上記担体に含浸、吸着させることで製造することができる。上記防黴、防菌活性成分をそのまま担体に含浸させても、溶剤に溶解してから含浸させてもよい。また、必要に応じて、防黴、防菌活性成分以外の添加剤成分を含浸させてもよい。
【００２０】
本発明の気相用防菌剤組成物には、プロピレンカーボネートが含まれることが好ましい。プロピレンカーボネートをイソチオシアネートと一緒に含浸すると、本発明の防黴、防菌活性成分であるイソチオシアネートの分解を抑えることができる。そのため、プロピレンカーボネートの配合により、本発明の防黴、防菌活性成分の含浸量を減らしても効果を維持することが可能になるため好ましい。グリコール系、アルコール系等の溶剤はＯＨ基を持つために、イソチオシアネートの分解を引き起こしてしまうため好ましくない。また、アセトンなどは引火性を有するため、気相用防菌剤組成物の使用時の安全性を考慮すると好ましくない。プロピレンカーボネートは、気相用防菌剤組成物１００質量部に対して、１０〜２５質量部含有されることが好ましく、１５〜２０質量部含有されることが効果の点からより好ましい。
【００２１】
本発明の気相用防菌剤含浸物は、広範な菌類、細菌類、黴類に対して、発育阻害効果を発揮する。例えば、Alternaria alternata、Aspergillus niger、Aureobasidium pullulans、Candida albicans、Cladosporium cladosporioides、Fusariumoxysporum、Geotrichum candidum、Penicilliumpinophilum、Trichoderma virensなどの一般真菌類、Aspergillus penicillioides、Cladosporium sp.、Eurotium chevalieri、Eurotium rubrum、Eurotium tonophilum、Penicillium sp.、Wallemia sebiなどの好乾性真菌類、Escherichia coli、Pseudomonas aeruginosaなどの細菌類に対して効果を発揮する。
【実施例】
【００２２】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２３】
［製造例１］
（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチル（ＭｅＡｌａＮＣＳ）の製造
クロロホルム１００ｍｌ中に、チオホスゲン１０．９ｇ（９４．８ｍｍｏｌ）と炭酸カルシウム１７．３ｇ（１７３ｍｍｏｌ）と水４５ｍｌの懸濁液を加え、室温で３０分間攪拌した。次いで、Ｌ−アラニンメチルエステル塩酸塩１３．２ｇ（７８．７ｍｍｏｌ）を加えて室温で３０分間攪拌した。次に、反応液を濾過して不溶物を除去した後、有機層を分取し、濃縮して粗生成物を得た。次に、この粗生成物をカラム精製することにより、淡黄色透明液体状の（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルを収率８３％で得た。赤外線吸収特性および核磁気共鳴特性は以下の通りであった。
ＩＲ（ｎｅａｔ）２１２０，２０６５，１７５０ｃｍ−１
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００Ｍｈｚ）δ＝４．３７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），１．６１（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００Ｍｈｚ）δ＝１６９．４，５４．７，５３．２，１９．５．
【００２４】
［製造例２］
２−イソチオシアナト酢酸メチルの製造
クロロホルム１０ｍｌに、グリシンメチルエステル塩酸塩１．０ｇ（８．０ｍｍｏｌ）とチオホスゲン０．９７ｇ（８．４ｍｍｏｌ）を加えて−２０℃で３０分間攪拌した。次いで、トリエチルアミン２．４ｇ（２４ｍｍｏｌ）をクロロホルム１０ｍｌに加えた溶液を−２０℃で１時間かけて滴下した。滴下終了後、室温で３時間攪拌したのち、０．１規定塩酸１０ｍｌと水１０ｍｌを加え、有機層を分取し、濃縮して粗生成物を得た。次に、この粗生成物をカラム精製することにより、淡黄色透明液体状の２−イソチオシアナト酢酸メチルエステル０．４９ｇ（３．７ｍｍｏｌ）を得た。この際の収率は４７％であった。赤外線吸収特性および核磁気共鳴特性は以下の通りであった。
ＩＲ（ｎｅａｔ）２０８３，１７５７ｃｍ−１
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００Ｍｈｚ）δ＝４．２５（ｓ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００Ｍｈｚ）δ＝１６６．６，５３．２，４６．２．
【００２５】
［参考例１］
（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルとアリルイソチオシアネートの黴最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の比較
本発明の気相用防菌剤含浸物で使用される防黴、防菌活性成分のひとつである（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルと、アリルイソチオシアネートの各種黴類に対する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を決定した。ＭＩＣの測定方法は、日本化学療法学会の方法に準じた。なお、一般真菌は７日間培養、好乾性真菌は１４日培養後にそれぞれの菌が生育したか否かを判断した。結果は下記表１に示す。
【００２６】
【表１】
2011063544.tif 000005
【００２７】
上記表１から明らかなように、本発明で使用される（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルは、アリルイソチオシアネートと比較すると、一般真菌類に対しては最大約１５０倍の効果を示し、好乾性真菌類に対しては最大１２８０倍の効果を示す。このように、本発明で使用される防黴、防菌活性成分は、広範な菌類に対して高い生育阻害効果を示す。
【００２８】
［参考例２］
加水分解性の比較
本発明で使用するイソチオシアン酸エステルである、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチル、２−イソチオシアナト酢酸メチルと、アリルイソチオシアネートをイオン交換水に溶解し、２５℃で３日間放置後、残存率を測定した。残存率の測定法は下記実施例５での方法と同様である。得られた結果を下記表２に示す。
【００２９】
【表２】
2011063544.tif 000006
【００３０】
上記表２から明らかなように、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルは加水分解に対する耐性に特に優れている。
【００３１】
（実施例１）
標準寒天培地に図１のように黴胞子菌液を画線（塗布）した。次に、密封容器内で完全気化後に最大到達濃度が、０．１、０．２、０．４ｐｐｍになるよう（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチル（ＭｅＡｌａＮＣＳ）またはアリルイソチオシアネート（Ａｌｌｙｌ−）を含浸させたクロマト用濾紙片を、シャーレの蓋の内側の中央に貼り付けた。その後、３Ｌポリエチレン製密封容器内でシャーレに入れた各黴菌を７日間培養し、密封容器から取り出してからさらに室温で７日間培養した。結果は図２に示す。
【００３２】
図２から明らかなように、本発明の気相用防菌剤含浸物は、各種黴類に対して高い生育阻害効果を示した。アリルイソチオシアネートを含浸させたものと比較してもその効果は顕著であった。
【００３３】
（実施例２）
実施例１と同様に標準寒天培地に黴胞子菌液を画線（塗布）した。次に各比較化合物、および、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチル（ＭｅＡｌａＮＣＳ）をそれぞれプロピレンカーボネートを溶剤として２．０重量％濃度の溶液を調整し、これを４０μｌ抗生物質検定用ディスク（濾紙）に含浸させて、含浸物をシャーレの蓋の内側の中央に貼り付けた。その後室温にて７日間培養して生育阻害効果を試験した。なお、比較化合物として、実際にカメラレンズ等の防黴剤として使用されている、イソプロピルメチルフェノール、α−ブロモシンナムアルデヒド（ＢＣＡ）、２−ベンズイミダゾールカルバミン酸メチルエステル（ＢＣＭ）、ベンジルイソチオシアネートを用いた。得られた結果を図３に示す。
【００３４】
図３から明らかなように、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチル（ＭｅＡｌａＮＣＳ）を濾紙に含浸させた本発明の気相用防菌剤含浸物は、菌類への広い抗菌スペクトルを有し、実際に防黴剤として使用されている化合物を含浸させたものよりも、蒸気状態での菌類の生育阻害効果が高いことが分かった。
【００３５】
（実施例３）
菌類の生育阻害効果が長期間持続するかどうかを調べるため、効果持続性試験を行った。（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチル０．７５ｇ、プロピレンカーボネート０．７５ｇおよびシリカゲル１４．２５ｇを３００ｍｌフラスコに入れ、十分混合して５％含浸物とした。この５％含浸物を厚さ２０μｍの中密度ポリエチレンフィルム製の袋に入れてシールし、効果持続性試験製剤とした。次に、２０ｌの容器中へ、実施例１と同様に各種菌類を塗布したシャーレと効果持続性試験製剤を入れ、２４時間曝露後、菌類塗布シャーレを取り出し、７日間培養後の菌類生育の有無を観察した。効果持続性試験製剤は室温に放置し、３０日毎に上記と同様な試験を繰り返して、菌類の生育阻害効果が長期間持続するかを検証した。得られた結果を図４に示す。
【００３６】
図４の結果から明らかなように、４ヶ月経た後であっても、本発明の気相用防菌剤含浸物は、菌類に対して生育阻害効果を示すことが分かった。
【００３７】
（実施例４）
（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルを０．５％含浸させたシリカゲル１ｇを厚さ２０μｍの中密度ポリエチレンフィルムの袋に入れシールした。また、予め９ｃｍプラスチックスシャーレに１０％ゼラチン入りグルコースペプトン液体培地を９ｍｌ分注後、室温下で完全乾燥させた被試験体を作成した。これに、好乾性真菌であるEurotium tonophilum、Eurotium chevalieri、Eurotium repensの胞子菌液を３カ所接種した。２０％グリセリン添加精製水を１０ｍｌ入れた３ｌプラスチック容器に上記の菌を接種したシャーレを蓋を解放した状態で単独で、もしくは、上記の０．５％含浸シリカゲルとともに、入れた。それらを室温で２週間培養した。得られた結果を図５に示す。
【００３８】
１０％ゼラチン入りグルコースペプトン液体培地を完全に乾燥させたものは、汚れたレンズや皮革を模したものであり、２０％グリセリン添加精製水をプラスチック容器に入れたのは、容器内の相対湿度を約８５〜９２％にし、押し入れや下駄箱に近い環境にするためである。図５から明らかなように、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルを０．５％含浸させたシリカゲルは、３種類の好乾性真菌すべての生育を効果的に阻害した。このことから、本発明の気相用防菌剤含浸物が、いわゆるレンズ黴や皮革に生える黴に対しても有効であることが分かった。
【００３９】
（実施例５）
（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチル、２−イソチオシアナト酢酸メチルと、アリルイソチオシアネートをそれぞれシリカゲルに含浸させた場合の気散性（残存率）を下記のように測定した。
【００４０】
〈含浸方法〉
各イソチオシアネート０．７５ｇ、プロピレンカーボネート０．７５ｇおよびシリカゲル１４．２５ｇを３００ｍｌフラスコに入れて、手で充分混合させ、５％含浸物とする。初めは湿り感があるが、すぐに湿り気は感じなくなった。
【００４１】
〈分析方法〉
上記含浸物をそのまま、もしくは、厚さ２０μｍのポリエチレンフィルムの袋に入れて、所定期間室温で放置した後、含浸物より２．００ｇを容器に移し、メタノール１５ｍｌを加えて、６０分間攪拌溶出させて濾過した。この溶液を液体クロマトグラフィーにかけ、ベンズアミドとの面積比を算出し、残存率を求めた。残存率は、含浸直後を１００％とした。得られた結果を下記表３、表４に示す。表３はシリカゲル含浸物をそのまま放置した場合、表４はシリカゲル含浸物をポリエチレンフィルムの袋に入れて放置した場合の残存率を示す。
【００４２】
【表３】
2011063544.tif 000007
【００４３】
【表４】
2011063544.tif 000008
【００４４】
上記表３および表４から明らかなように、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチル、２−イソチオシアナト酢酸メチルはシリカゲルに含浸させた場合に、気散性が低く、徐放性に優れる。特に（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルは３０日経過後も残存率が高く、気相用防菌剤含浸物として有用である。それに対してアリルイソチオシアネートはシリカゲルに含浸させると、すぐに気散してしまい、数日の放置でほとんど残存が見られなくなった。なお、２−イソチオシアナト酢酸メチルを含浸したシリカゲルは、途中で濃黄色への着色が観察された。
【００４５】
（比較例１）
（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルを、上記実施例５と同様の方法で下記表５に示すゼオライトに含浸させてそのまま放置した場合の残存率を測定した。得られた結果を下記表５に示す。
【００４６】
【表５】
2011063544.tif 000009
【００４７】
上記表５から明らかなように、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルをゼオライトに含浸させると、ゼオライト３Ａ、４Ａ、５Ａでは７日後にはほぼすべて気散してしまい、天然ゼオライトでも７日後には、半分以上が気散してしまった。このように、ゼオライトを使用した場合は、防黴、防菌活性成分が早期に気散してしまい、効果が消失してしまうのが早いため、気相用防菌剤としては適さないことが分かる。
【００４８】
（実施例６）
プロピレンカーボネート（ＰＣ）の含浸濃度とイソチオシアネートの安定性
シリカゲル含浸物１００質量部に対して、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルを５質量部、プロピレンカーボネートを０、５、１０、１５、２０質量部含浸させた、シリカゲル含浸物１．０ｇを厚さ２０μｍのポリエチレン製の袋に入れ、密封シールをした。それを３Ｌの密封容器中へ入れて、室温で３０日間放置し、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルの残存率を上記実施例５の分析方法と同様にして調べた。また、イソチオシアネートの分析のための内部標準としたベンズアミドの分析面積で、各分解ピークの分析面積を割った値を分解ピークの数値とした。この値によりイソチオシアネートの分解産物の相対量が分かる。分解ピークの数値が大きい程分解が多くなっていると評価できる。得られた結果を下記表６に示す。残存率については、分解のみならず、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルの放出の度合いも影響するため、ここでは分解の評価基準とはならない。
【００４９】
【表６】
2011063544.tif 000010
【００５０】
上記表６の結果から明らかなように、プロピレンカーボネートの含浸量が多いほど、分解産物の相対量である分解ピークの数値が減っていることから、（２Ｓ）−２−イソチオシアナトプロパン酸メチルの分解が抑えられていることが分かる。
【００５１】
上記各実施例の結果から、本発明の気相用防菌剤含浸物は、非接触状態での各種菌類に対する生育阻害効果が高く、かつ、防黴、防菌活性成分の徐放性に優れるため、物品の長期の保管時の黴などの発生や菌類の増殖を防止する気相用防菌剤として有用であることが分かる。
【図１】
2011063544.tif 000013
【図２】
2011063544.tif 000014
【図３】
2011063544.tif 000015
【図４】
2011063544.tif 000016
【図５】
2011063544.tif 000017