(57)【要約】【課題】本発明は、試料毎に選定しなくても、１ＨＮＭＲの定量性を確保することが可能な１ＨＮＭＲ用外部標準物質、該１ＨＮＭＲ用外部標準物質が入れられているＮＭＲ試料管及びキャピラリー並びに該１ＨＮＭＲ用外部標準物質を用いる分析方法を提供することを目的とする。【解決手段】１ＨＮＭＲ用外部標準物質は、含窒素化合物又は含酸素化合物と、シフト試薬とを含む。また、二重管構造を有するＮＭＲ試料管は、外管と内管の間が溶閉されており、外管と内管の間に該１ＨＮＭＲ用外部標準物質が入れられている。さらに、１ＨＮＭＲ用外部標準物質入りキャピラリーは、該１ＨＮＭＲ用外部標準物質が、溶閉されているキャピラリーに入れられている。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
含窒素化合物又は含酸素化合物と、シフト試薬とを含むことを特徴とする１ＨＮＭＲ用外部標準物質。
【請求項２】
トリアジン及びユウロピウム（ＩＩＩ）を含むことを特徴とする請求項１に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質。
【請求項３】
前記トリアジンに対する前記ユウロピウム（ＩＩＩ）の当量比が０．０２以上であることを特徴とする請求項２に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質。
【請求項４】
トリメチルシリルエタンスルホンアミド及びプラセオジム（ＩＩＩ）を含むことを特徴とする請求項１に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質。
【請求項５】
前記トリメチルシリルエタンスルホンアミドに対する前記プラセオジム（ＩＩＩ）の当量比が０．１以上であることを特徴とする請求項４に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質。
【請求項６】
二重管構造を有するＮＭＲ試料管であって、
外管と内管の間が溶閉されており、
請求項１乃至５のいずれか一項に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質が該外管と内管の間に入れられていることを特徴とするＮＭＲ試料管。
【請求項７】
請求項１乃至５のいずれか一項に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質が、溶閉されているキャピラリーに入れられていることを特徴とする１ＨＮＭＲ用外部標準物質入りキャピラリー。
【請求項８】
請求項１乃至５のいずれか一項に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質を用いて、試料の１ＨＮＭＲを測定する工程を有することを特徴とする分析方法。
【請求項９】
請求項６に記載のＮＭＲ試料管の内管に試料を入れる工程と、
該試料が入れられたＮＭＲ試料管を用いて、前記試料の１ＨＮＭＲを測定する工程を有することを特徴とする分析方法。
【請求項１０】
請求項７に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質入りキャピラリー及び試料をＮＭＲ試料管に入れる工程と、
該１ＨＮＭＲ用外部標準物質入りキャピラリー及び試料が入れられたＮＭＲ試料管を用いて、前記試料の１ＨＮＭＲを測定する工程を有することを特徴とする分析方法。
【請求項１１】
前記試料の１ＨＮＭＲを測定することにより、前記試料を定量分析することを特徴とする請求項８乃至１０のいずれか一項に記載の分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１ＨＮＭＲ用外部標準物質、二重管構造を有するＮＭＲ試料管、１ＨＮＭＲ用外部標準物質入りキャピラリー及び分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、試料を定量分析する方法としては、ＨＰＬＣ、ＧＣ等が知られているが、ＮＭＲも用いられているようになってきている。
【０００３】
特許文献１には、酸素−１７核を含有した化合物を定量する方法として、標準物質として、試料とは酸素−１７核の共鳴周波数が異なる物質を用い、標準物質と試料とを同時にＮＭＲ測定する方法が開示されている。また、同軸二重試料管を用いて、内管に試料、外管に標準物質を入れて測定する方法が開示されている。
【０００４】
しかしながら、試料毎に、標準物質として、試料とは酸素−１７核の共鳴周波数が異なる物質を選定しないと、ＮＭＲの定量性を確保することができないという問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００４−２８６７１２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記の従来技術が有する問題に鑑み、試料毎に選定しなくても、１ＨＮＭＲの定量性を確保することが可能な１ＨＮＭＲ用外部標準物質、該１ＨＮＭＲ用外部標準物質が入れられているＮＭＲ試料管及びキャピラリー並びに該１ＨＮＭＲ用外部標準物質を用いる分析方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
請求項１に記載の発明は、１ＨＮＭＲ用外部標準物質において、含窒素化合物又は含酸素化合物と、シフト試薬とを含むことを特徴とする。
【０００８】
請求項２に記載の発明は、請求項１に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質において、トリアジン及びユウロピウム（ＩＩＩ）を含むことを特徴とする。
【０００９】
請求項３に記載の発明は、請求項２に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質において、前記トリアジンに対する前記ユウロピウム（ＩＩＩ）の当量比が０．０２以上であることを特徴とする。
【００１０】
請求項４に記載の発明は、請求項１に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質において、トリメチルシリルエタンスルホンアミド及びプラセオジム（ＩＩＩ）を含むことを特徴とする。
【００１１】
請求項５に記載の発明は、請求項４に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質において、前記トリメチルシリルエタンスルホンアミドに対する前記プラセオジム（ＩＩＩ）の当量比が０．１以上であることを特徴とする。
【００１２】
請求項６に記載の発明は、二重管構造を有するＮＭＲ試料管であって、外管と内管の間が溶閉されており、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質が該外管と内管の間に入れられていることを特徴とする。
【００１３】
請求項７に記載の発明は、１ＨＮＭＲ用外部標準物質入りキャピラリーにおいて、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質が、溶閉されているキャピラリーに入れられていることを特徴とする。
【００１４】
請求項８に記載の発明は、分析方法において、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質を用いて、試料の１ＨＮＭＲを測定する工程を有することを特徴とする。
【００１５】
請求項９に記載の発明は、分析方法において、請求項６に記載のＮＭＲ試料管の内管に試料を入れる工程と、該試料が入れられたＮＭＲ試料管を用いて、前記試料の１ＨＮＭＲを測定する工程を有することを特徴とする。
【００１６】
請求項１０に記載の発明は、分析方法において、請求項７に記載の１ＨＮＭＲ用外部標準物質入りキャピラリー及び試料をＮＭＲ試料管に入れる工程と、該１ＨＮＭＲ用外部標準物質入りキャピラリー及び試料が入れられたＮＭＲ試料管を用いて、前記試料の１ＨＮＭＲを測定する工程を有することを特徴とする。
【００１７】
請求項１１に記載の発明は、請求項８乃至１０のいずれか一項に記載の分析方法において、前記試料の１ＨＮＭＲを測定することにより、前記試料を定量分析することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、試料毎に選定しなくても、１ＨＮＭＲの定量性を確保することが可能な１ＨＮＭＲ用外部標準物質、該１ＨＮＭＲ用外部標準物質が入れられているＮＭＲ試料管及びキャピラリー並びに該１ＨＮＭＲ用外部標準物質を用いる分析方法を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】本発明のＮＭＲ試料管の一例を示す図である。
【図２】本発明の１ＨＮＭＲ用外部標準物質入りキャピラリーの一例を示す図である。
【図３】図２の１ＨＮＭＲ用外部標準物質入りキャピラリーの変形例を示す図である。
【図４】実施例で得られた試料溶液の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
次に、本発明を実施するための形態を図面と共に説明する。
【００２１】
本発明の１ＨＮＭＲ用外部標準物質は、含窒素化合物又は含酸素化合物と、シフト試薬とを含む。
【００２２】
シフト試薬としては、ユーロピウムイオン、プラセオジムイオン、ジスプロシウムイオン、イッテルビウムイオン、ガドリニウムイオン、ホルミウムイオン、ランタンイオン等のランタノイドイオンが挙げられる。ユーロピウムイオン及びイッテルビウムイオンは、化合物の１ＨＮＭＲの化学シフトを低磁場側に移動させ、プラセオジムイオン及びジスプロシウムイオンは、化合物の１ＨＮＭＲの化学シフトを高磁場側に移動させる。
【００２３】
一般に、シフト試薬は、ニトリル、アミン、Ｎ−オキシド、アルコール、エーテル、アルデヒド、ケトン、エステル、カルボン酸、エポキシド等の含窒素化合物又は含酸素化合物と錯体を形成し、含窒素化合物又は含酸素化合物の化学シフトを変化させる。
【００２４】
含窒素化合物又は含酸素化合物としては、特に限定されないが、トリアジン、ベンゼントリカルボン酸、フェナジン、キノリン、トリメチルアミン、エチレンジアミン、トリメチルシリルエタンスルホンアミド、トリメチルシリルメチルアルコール、トリメチルシリルメチルアミン、アセトン、アセチルアセトン、１，３−ジフェニル―１，３―プロパンジオン、ジピバロイルメタン、ヘプタフルオロジメチルオクタンジオン、デカフルオロヘプタンジオン、ジアセチル、アラニン、スチレンオキシド、エチレングリコール等が挙げられる。
【００２５】
一般に、化合物の１ＨＮＭＲの化学シフトは０〜９．５ｐｐｍに存在する。一方、シフト試薬を用いると、化合物の１ＨＮＭＲの化学シフトを０〜９．５ｐｐｍよりも低磁場側又は高磁場側に移動させることができる。このとき、本発明の１ＨＮＭＲ用外部標準物質は、１ＨＮＭＲの化学シフトを０〜９．５ｐｐｍよりも低磁場側又は高磁場側に移動させることができる。その結果、ＮＭＲ試料管の中で、本発明の１ＨＮＭＲ用外部標準物質を試料と混合せずに分離した状態で１ＨＮＭＲを測定すると、シフト試薬は試料に作用しないため、本発明の１ＨＮＭＲ用外部標準物質由来のピークを試料由来のピークと完全に分離することができる。
【００２６】
本発明の１ＨＮＭＲ用外部標準物質の１ＨＮＭＲの化学シフトを９．５ｐｐｍよりも低磁場側に移動させるためには、例えば、トリアジン及びユウロピウム（ＩＩＩ）を混合するとよい。
【００２７】
トリアジンの重クロロホルム中の１ＨＮＭＲの化学シフトは、９．２ｐｐｍに存在するため、外部標準物質として、トリアジンを用いて、１ＨＮＭＲを測定すると、１ＨＮＭＲスペクトルのトリアジンのピークと試料のピークが重なることがある。一方、トリアジンにユウロピウム（ＩＩＩ）を添加すると、トリアジンの１ＨＮＭＲの化学シフトを９．５〜１２ｐｐｍに移動させることができる。このとき、化合物の１ＨＮＭＲの化学シフトは、通常、０〜９．５ｐｐｍに存在するため、本発明の１ＨＮＭＲ用外部標準物質は、試料毎に選定しなくても、１ＨＮＭＲの定量性を確保することができる。
【００２８】
このとき、トリアジンに対するユウロピウム（ＩＩＩ）の当量比が０．０２以上であることが好ましく、０．０２〜０．１がさらに好ましい。トリアジンに対するユウロピウム（ＩＩＩ）の当量比が０．０２未満であると、トリアジンの１ＨＮＭＲの化学シフトが９．５ｐｐｍよりも低磁場側に移動しないことがある。また、トリアジンに対するユウロピウム（ＩＩＩ）の当量比が０．１を超えると、信号の線幅が広がり、トリアジン由来のピークの正確な面積が求められなくなることがある。
【００２９】
一方、本発明の１ＨＮＭＲ用外部標準物質の１ＨＮＭＲの化学シフトを０ｐｐｍよりも高磁場側に移動させるためには、例えば、トリメチルシリルエタンスルホンアミド及びプラセオジム（ＩＩＩ）を混合するとよい。
【００３０】
トリメチルシリルエタンスルホンアミドの重クロロホルム中の１ＨＮＭＲの化学シフトは、０．０６ｐｐｍに存在するため、外部標準物質として、トリメチルシリルエタンスルホンアミドを用いて、１ＨＮＭＲを測定すると、１ＨＮＭＲスペクトルのトリメチルシリルエタンスルホンアミドのピークと試料のピークが重なることがある。これに、プラセオジム（ＩＩＩ）を添加すると、トリメチルシリルエタンスルホンアミドの１ＨＮＭＲの化学シフトを−２〜０ｐｐｍに移動させることができる。このとき、化合物の１ＨＮＭＲの化学シフトは、通常、０〜９．５ｐｐｍに存在するため、本発明の１ＨＮＭＲ用外部標準物質は、試料毎に選定しなくても、１ＨＮＭＲの定量性を確保することができる。
【００３１】
このとき、トリメチルシリルエタンスルホンアミドに対するプラセオジム（ＩＩＩ）の当量比が０．１以上であることが好ましい。トリメチルシリルエタンスルホンアミドに対するプラセオジム（ＩＩＩ）の当量比が０．１未満であると、トリメチルシリルエタンスルホンアミドの１ＨＮＭＲの化学シフトが０ｐｐｍよりも高磁場側に移動しないことがある。
【００３２】
ユウロピウム（ＩＩＩ）及びプラセオジム（ＩＩＩ）としては、特に限定されないが、ユウロピウム（ＩＩＩ）及びプラセオジム（ＩＩＩ）のトリフルオロメチルヒドロキシメチレン−ｄ−カンファアト錯体、ヘプタフルオロプロピルヒドロキシメチレン−ｄ−カンファアト錯体、Ｄ，Ｄ−ジカンフォリルメタネート錯体、ヘプタフルオロジメチルオクタンジオナト錯体、ジピバロイルメタン錯体、テトラメチルヘプタンジオン錯体、デカフルオロヘプタンジオン錯体等が挙げられる。
【００３３】
図１に、本発明のＮＭＲ試料管の一例を示す。ＮＭＲ試料管１０は、同軸の円筒二重管構造を有し、外管１１と内管１２の間が溶閉されており、外管１１と内管１２の間には、重溶媒に溶解した外部標準物質１３が入れられている。なお、外部標準物質１３は、本発明の１ＨＮＭＲ用外部標準物質である。
【００３４】
重溶媒としては、外部標準物質１３を溶解させることが可能であれば、特に限定されないが、重クロロホルム、重アセトニトリル、重アセトン、重ベンゼン、重シクロヘキサン、重水、重ジクロロベンゼン、重ジエチルエーテル、重ジメチルホルムアミド、重ジメチルスルホキシド、重ジオキサン、重酢酸エチル、重エタノール、重メタノール、重ニトロベンゼン、重ピリジン、重テトラクロロエタン、重トルエン、重トリフルオロ酢酸等が挙げられる。
【００３５】
ＮＭＲ試料管１０の長さは、通常、１４０〜２２０ｍｍである。
【００３６】
外管１１及び内管１２を構成する材料としては、１ＨＮＭＲを測定する際に悪影響を及ぼさなければ、特に限定されないが、ガラス、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリエーテルエーテルケトン、ポリ塩化ビニル、ポリテトラフルオロエチレン等が挙げられる。
【００３７】
外管１１の厚さは、通常、０．１〜０．４ｍｍである。
【００３８】
内管１２の厚さは、通常、０．１〜０．４ｍｍである。
【００３９】
内管１２の内径は、通常、１〜９．５ｍｍである。
【００４０】
外管１１の内径と内管１２の外径の差は、通常、０．１〜８．２ｍｍである。
【００４１】
外管１１と内管１２の間に入れられている外部標準物質１３の量は、１ＨＮＭＲを測定する際に悪影響を及ぼさない範囲であれば、特に限定されない。
【００４２】
なお、ＮＭＲ試料管１０は、一端を閉じた管に外部標準物質１３を入れた後、その中に、同軸になるように、一端を閉じた管を配置し、管と管の間を溶閉することにより、製造することができる。このとき、内管１２の上部を外管１１に接するまで均等に広げて溶閉すると、定量性が向上する。
【００４３】
次に、１ＨＮＭＲを測定することにより、試料を定量分析する方法について説明する。
【００４４】
まず、ＮＭＲ試料管１０のファクターを求める。具体的には、純度が既知のファクター用標準物質を重溶媒に溶解させたものを所定量内管１２に入れ、脱着可能な栓をした後、１ＨＮＭＲを測定する。このとき、内管１２に入れたファクター用標準物質の濃度をＡ０［ｍｏｌ／Ｌ］、１ＨＮＭＲスペクトルにおける外部標準物質１３の面積を１としたときのファクター用標準物質の１Ｈ分の面積をＢ０とすると、Ｆ［ｍｏｌ／Ｌ］は、式
Ｆ＝Ａ０／Ｂ０・・・（１）
で表される。
【００４５】
ファクター用標準物質としては、特に限定されないが、フタル酸水素カリウム、エタノール等が挙げられる。
【００４６】
このとき、外部標準物質１３の１ＨＮＭＲスペクトルのピークは、９．５ｐｐｍよりも低磁場側に存在するため、ファクター用標準物質の１ＨＮＭＲスペクトルのピークと重ならず、１ＨＮＭＲの定量性を確保することができる。
【００４７】
次に、試料中の化合物Ｘ（分子量Ｍ）の含有量を求める。具体的には、試料を重溶媒に溶解させたものを所定量内管１２に入れ、脱着可能な栓をした後、１ＨＮＭＲを測定する。なお、試料が液体である場合は、重溶媒に溶解させずに、そのまま用いることもできる。このとき、内管１２に入れた試料の濃度をＡ１［ｇ／Ｌ］、１ＨＮＭＲスペクトルにおける外部標準物質１３の面積を１としたときの化合物Ａの１Ｈ分の面積をＢ１とすると、内管１２に入れられた化合物Ｘの濃度Ｃ１［ｇ／Ｌ］は、式
Ｃ１＝Ｂ１×Ｆ×Ｍ・・・（２）
で表される。したがって、試料中の化合物Ｘの含有量Ｄ１［質量％］は、
Ｄ１＝（Ｃ１／Ａ１）×１００・・・（３）
で表される。
【００４８】
このとき、外部標準物質１３の１ＨＮＭＲスペクトルのピークは、９．５ｐｐｍよりも低磁場側に存在するため、試料のＮＭＲスペクトルのピークと重ならず、１ＨＮＭＲの定量性を確保することができる。
【００４９】
なお、試料に含まれる化合物Ｘ以外の成分の量も同時に求めてもよい。
【００５０】
また、外部標準物質１３を用いて、試料の１ＨＮＭＲを測定する際には、ＮＭＲ試料管１０において、外管１１と内管１２の間が溶閉されておらず、外管１１内に内管１２を固定することが可能なものを用いてもよい（例えば、特開平１−３０２１４８号公報参照）。このとき、外部標準物質１３は、外管１１及び内管１２のいずれに入れてもよいし、内管１２が溶閉されていてもよい。
【００５１】
図２に、本発明の１ＨＮＭＲ用外部標準物質入りキャピラリーの一例を示す。外部標準物質入りキャピラリー２０は、溶閉されているキャピラリー２１に、重溶媒に溶解した外部標準物質２２が入れられている。なお、外部標準物質２２は、本発明の１ＨＮＭＲ用外部標準物質である。
【００５２】
キャピラリー２１を構成する材料としては、１ＨＮＭＲを測定する際に悪影響を及ぼさなければ、特に限定されないが、ガラス、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリエーテルエーテルケトン、ポリ塩化ビニル、ポリテトラフルオロエチレン等が挙げられる。
【００５３】
キャピラリー２１の長さは、通常、２５〜２２０ｍｍである。
【００５４】
キャピラリー２１の厚さは、通常、０．１〜０．４ｍｍである。
【００５５】
キャピラリー２１の内径は、通常、０．５〜９．５ｍｍである。
【００５６】
キャピラリー２１に入れる外部標準物質２２の量は、１ＨＮＭＲを測定する際に悪影響を及ぼさない範囲であれば、特に限定されない。
【００５７】
なお、外部標準物質入りキャピラリー２０は、一端を閉じたキャピラリーに外部標準物質２２を入れた後、キャピラリーを溶閉することにより、製造することができる。
【００５８】
また、図３に示すように、キャピラリー２１にスペーサー２３を取り付け、外部標準物質入りキャピラリー２０'がＮＭＲ試料管と同軸になるように配置すると、定量性が向上する。このとき、キヤピラリー２１の上部に糸２４が付けられているため、ＮＭＲ試料管から外部標準物質入りキャピラリー２０'を容易に取り出すことができる。なお、糸２４は、スペーサー２３に付けられていてもよい。
【００５９】
次に、１ＨＮＭＲを測定することにより、試料を定量分析する方法について説明する。
【００６０】
まず、外部標準物質入りキャピラリー２０のファクターを求める。具体的には、外部標準物質入りキャピラリー２０と共に、純度が既知のファクター用標準物質を重溶媒に溶解させたものを所定量ＮＭＲ試料管に入れ、脱着可能な栓をした後、１ＨＮＭＲを測定する。このとき、ＮＭＲ試料管に入れたファクター用標準物質の濃度をＡ０［ｍｏｌ／Ｌ］、１ＨＮＭＲスペクトルにおける外部標準物質２２の面積を１としたときのファクター用標準物質の１Ｈ分の面積を、Ｂ０とすると、Ｆ［ｍｏｌ／Ｌ］は、式
Ｆ＝Ａ０／Ｂ０・・・（１）
で表される。
【００６１】
ファクター用標準物質としては、特に限定されないが、フタル酸水素カリウム、エタノール等が挙げられる。
【００６２】
このとき、外部標準物質２２の１ＨＮＭＲスペクトルのピークは、９．５ｐｐｍよりも低磁場側に存在するため、ファクター用標準物質の１ＨＮＭＲスペクトルのピークと重ならず、１ＨＮＭＲの定量性を確保することができる。
【００６３】
次に、試料中の化合物Ｘ（分子量Ｍ）の含有量を求める。具体的には、外部標準物質入りキャピラリー２０と共に、試料を重溶媒に溶解させたものを所定量ＮＭＲ試料管に入れ、脱着可能な栓をした後、１ＨＮＭＲを測定する。なお、試料が液体である場合は、重溶媒に溶解させずに、そのまま用いることもできる。このとき、ＮＭＲ試料管に入れた試料の濃度をＡ１［ｇ／Ｌ］、１ＨＮＭＲスペクトルにおける外部標準物質２２の面積を１としたときの化合物Ａの１Ｈ分の面積をＢ１とすると、ＮＭＲ試料管に入れられた化合物Ｘの濃度Ｃ１［ｇ／Ｌ］は、式
Ｃ１＝Ｂ１×Ｆ×Ｍ・・・（２）
で表される。したがって、試料中の化合物Ｘの含有量Ｄ１［質量％］は、
Ｄ１＝（Ｃ１／Ａ１）×１００・・・（３）
で表される。
【００６４】
このとき、外部標準物質２２の１ＨＮＭＲスペクトルのピークは、９．５ｐｐｍよりも低磁場側に存在するため、試料のＮＭＲスペクトルのピークと重ならず、１ＨＮＭＲの定量性を確保することができる。
【００６５】
なお、試料に含まれる化合物Ｘ以外の成分の量も同時に求めてもよい。
【実施例】
【００６６】
［ファクター用標準物質溶液の調製］
フタル酸水素カリウム（分子量２０４．２２１２）２００．５ｍｇを精密に量り、重水に溶解させ、正確に２０ｍＬとし、０．０４９０８９ｍｏｌ／Ｌのファクター用標準物質溶液を得た。
【００６７】
［ファクターの評価］
外管１１と内管１２の間に、重クロロホルムに溶解した外部標準物質１３が入れられたＮＭＲ試料管１０（図１参照）の内管１２にファクター用標準物質溶液を適量入れ、脱着可能な栓をした。なお、トリアジンに対するユウロピウム（ＩＩＩ）の当量比は、０．０５である。次に、ＥＣＡ−４００（日本電子社製；４００ＭＨｚ）を用いて、パルス幅５．３５マイクロ秒、繰り返し時間約６０秒間、積算回数１６回の条件で、１ＨＮＭＲを６回測定した。得られた１ＨＮＭＲスペクトルからＢ０を得た（表１参照）。このとき、３個のＮＭＲ試料管１〜３を用いた。
【００６８】
【表１】
2011141159.tif 000002
次に、式（１）を用いて、ＮＭＲ試料管１〜３のファクターＦを算出したところ、それぞれ０．１４３８３［ｍｏｌ／Ｌ］、０．１４９５９［ｍｏｌ／Ｌ］、０．１４１７２［ｍｏｌ／Ｌ］となった。
【００６９】
［試料溶液の調製］
食品添加物を精密に量り、重クロロホルムに溶解させ、正確に２ｍＬとし、試料溶液１〜３を得た（表２参照）。
【００７０】
【表２】
2011141159.tif 000003
［食品添加物中のメタノールの残留量の評価］
ファクターを評価したＮＭＲ試料管１〜３の内管１２に、それぞれ試料溶液１〜３を適量入れ、脱着可能な栓をした。次に、積算回数を６４回に変更した以外は、ファクターの評価と同一の条件で、１ＨＮＭＲをそれぞれ３回測定した。得られた１ＨＮＭＲスペクトル（図４参照）のメタノールのメチル基由来のピークからＢ１を得た（表３参照）。
【００７１】
【表３】
2011141159.tif 000004
次に、式（２）及び（３）を用いて、食品添加物中のメタノール（分子量３２．０４）の残留量Ｄ１を算出した（表４参照）。
【００７２】
【表４】
2011141159.tif 000005
なお、ガスクロマトグラフィーにより食品添加物中のメタノールの残留量を測定したところ、０．０６９７質量％であった。このことから、本実施例は、１ＨＮＭＲの定量性が確保されていることがわかる。
【符号の説明】
【００７３】
１０    ＮＭＲ試料管
１１    外管
１２    内管
１３    外部標準物質
２０、２０'    外部標準物質入りキャピラリー
２１    キャピラリー
２２    外部標準物質
２３    スペーサー
２４    糸
【図１】
2011141159.tif 000006
【図２】
2011141159.tif 000007
【図３】
2011141159.tif 000008
【図４】
2011141159.tif 000009