(57)【要約】【課題】  本発明は、非特異的な吸着・結合を抑制し、かつ生理活性物質を簡便に表面に固定化する為の固定化用基材、およびその使用方法【解決手段】  基材と、樹脂層と、ビオチン化合物とがこの順に配置されてなる生理活性物質捕捉用基材であって、前記樹脂層の基材と反対側の面が、親水性を有していることを特徴とする生理活性物質捕捉用基材。生理活性物質固定化用固相担体を用いることで、ビオチン結合タンパク質による修飾生理活性物質を基材に固定化し、それ以外の部分への不要な生理活性物質や蛍光物質の吸着および結合を抑制することできる【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
基材と、樹脂層と、ビオチン誘導体とがこの順に配置されてなる生理活性物質捕捉用基材であって、
前記樹脂層の基材と反対側の面が、親水性を有していることを特徴とする生理活性物質捕捉用基材。
【請求項２】
樹脂層を構成する樹脂が、（ａ）親水性側鎖を有するモノマーおよび（ｂ）ビオチン誘導体を固定するための官能基を有するモノマーの共重合体である請求項１記載の生理活性物質捕捉用基材。
【請求項３】
前記共重合体が、さらに（ｃ）架橋可能な官能基を有するモノマーを有するものである請求項２に記載の生理活性物質捕捉用基材。
【請求項４】
前記（ａ）親水性側鎖を有するモノマーが、アルキレングリコール残基を有するエチレン系不飽和モノマーである請求項３に記載の生理活性物質捕捉用基材。
【請求項５】
前記（ｂ）ビオチン誘導体を固定するための官能基を有するモノマーが、ビオチン誘導体を固定するための官能基を有するエチレン系不飽和重合性モノマーである請求項３または４に記載の樹脂層を構成する物質が、アルキレングリコール残基を有するエチレン系不飽和モノマー（ａ）、ビオチン誘導体を固定するための官能基を有するエチレン系不飽和重合性モノマー（ｂ）、および架橋可能な官能基を有するモノマー（ｃ）を共重合して得られる高分子物質である請求項１または２記載の生理活性物質捕捉用基材。
【請求項６】
アルキレングリコール残基を有するエチレン系不飽和重合性モノマー（ａ）が下記の一般式で表されるモノマーである請求項３記載の生理活性物質捕捉用基材。
〔式１〕
2011141232.tif 000005
（式中Ｒ１は水素原子またはメチル基を示し、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜２０のアルキル基を閉めす。Ｘは炭素数１〜１０のアルキレングリコール残基を示し、ｐは１〜１００の整数を示す。繰り返されるＸは、同一であっても、または異なるアルキレングリコール残基の連鎖であってもよい。）
【請求項７】
ビオチン誘導体を固定化するための官能基が、ｐ−ニトロフェニルエステルまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの活性エステルである請求項４記載の生理活性物質捕捉用基材。
【請求項８】
架橋可能な官能基を有するエチレン系不飽和重合性モノマーの官能基がアルコキシリルである請求項５記載の生理活性物質捕捉用基材
【請求項９】
ビオチン誘導体が、ビオチン末端カルボキシル基にアミノ基を導入し末端アミノ基修飾ビオチンからなる少なくとも一種類である請求項１〜８のいずれかに記載の生理活性物質捕捉用基材。
【請求項１０】
捕捉する生理活性物質が、ビオチン結合タンパク質およびそれにより修飾されたタンパク質である請求項１〜９のいずれかに記載の生理活性物質捕捉用基材。
【請求項１１】
生理活性物質を捕捉するための基材が、チューブ、プレートおよびビーズから選ばれる少なく１種以上である請求項１〜１０いずれか記載の生理活性物質。
【請求項１２】
前記基材を構成する樹脂が、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、環状ポリオレフィン、ポリペンテンおよびポリカーボネートからなる少なくとも１種である請求項１〜１１いずれか記載の生理活性物質。
【請求項１３】
生理活性物質の捕捉方法であって、
（ａ）基材と、樹脂層と、ビオチン誘導体とがこの順に配置され、かつ前記樹脂層の基材と反対側の面が、親水性を有している生理活性物質捕捉用基材の表面に活性エステルを含む高分子化合物で樹脂層を形成させ、ビオチン誘導体を活性エステルと反応させて固定する工程と、
（ｂ）生理活性物質を添加し、基材に生理活性物質を固相化する工程とを有することを特徴とする生理活性物質の捕捉方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非特異的な吸着・結合を抑制し、かつ生理活性物質を簡便に表面に固定化する為の固定化用基材、およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビオチンはビオチン結合性タンパク質と特異的に結合反応を生じることは古くから知られており、その結合力は抗原−抗体反応の１００万倍以上と強く、ほとんど非可逆反応に近い結合性を示す。この特性を活かし、ビオチン−ビオチン結合タンパク質反応は、生化学分野における検出反応によく用いられる。ビオチン結合タンパク質で最も古くから利用されている物質はアビジンであり、アビジンは生卵白由来のタンパク質である。また、微生物であるＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｖｉｄｉｎｉｉからストレプトアビジンが精製されるようになってからは、入手もしやすくなり、汎用されるようになった。また、アビジンを脱グリコシル化することでレクチン等、糖鎖との相互作用により発生する非特異吸着を抑えたニュートラアビジンが開発され、元来のアビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジンと、ビオチン結合タンパク質群として機能タンパク質のグループを形成している。
【０００３】
一方、ビオチンは分子量２４４の分子で分子末端にカルボシキル基を有することからヒドロキシスクシンイミドなどで活性エステル化することで簡便にアミノ残基を有する物質と結合でき、ビオチン標識することが可能となり、これらのことによりアビジン−ビオチン結合を用いた分子認識反応が広く用いられるようになった。
【０００４】
前記のようにビオチン−ビオチン結合タンパク質群の反応をより簡便に用いるために、種々のシステムが開発されている。たとえば、特開平０２−０２４５５９号公報においては、アビジンを固相化した免疫分析用プレートが記載されている。また、特開２００７−２６３６３４号公報においては、「プラスチックからなる固相担体の固相表面に、ホスホリルコリン基を有する高分子物質及び生理活性物質を固定化する為の分子を有し、該分子がビオチン又はビオチン誘導体と反応しうる分子であることを特徴とする生理活性物質固定化用固相担体」が記載されている。これらは、ビオチンと反応しうる分子を基材に固定化して、ビオチンを捕捉するメカニズムを用いており、多くの場合、アビジン固定化、ビオチン分子捕捉のメカニズムを使用する場合が多い。
【０００５】
一方、ビオチン誘導体を基材に固定化し、ビオチン結合タンパク質を捕捉する方法としては、特開２００２−１５３２７２号公報に記載されている。該特許は、バイオチップ作製に関するもので、表面修飾の一つとしてアビジンを使用することが記載されているが、アビジンに結合したビオチンの残りの反応部位を活用することが目的であり、ビオチン−アビジン−ビオチン誘導体のサンドイッチ反応を実施するためのものであり、積極的にビオチンを活用するものではない。
【０００６】
また、特開平０９−０５４０９４号公報には、ビオチン化ポリリジン臭化水素を含有する、ポリアニオンとポリカチオンの多重層を基体とする固相バイオセンサーの作製方法が記載されているが、非常に反応、製造方法が煩雑で汎用には難しいものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特公平２−０２４５５９号公報
【特許文献２】特開２００７−２６３６３４号公報
【特許文献３】特開２００２−１５３２７２号公報
【特許文献４】特開平０９−０５４０９４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ビオチン誘導体を表面に安定して保持し、ビオチン結合化合物と容易に結合反応でき、かつ、目的物以外の物理化学吸着を抑え効率よくビオチン化合物を回収する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
このような目的は、下記（１）〜（１５）に記載の本発明により達成される。
（１）基材と、樹脂層と、ビオチン誘導体とがこの順に配置されてなる生理活性物質捕捉用基材であって、  前記樹脂層の基材と反対側の面が、親水性を有していることを特徴とする生理活性物質捕捉用基材。
（１）樹脂層を構成する樹脂が、（ａ）親水性側鎖を有するモノマーおよび（ｂ）ビオチン誘導体を固定するための官能基を有するモノマーの共重合体である（１）記載の生理活性物質捕捉用基材。
（３）前記共重合体が、さらに（ｃ）架橋可能な官能基を有するモノマーを有するものである（２）に記載の生理活性物質捕捉用基材。
（４）前記（ａ）親水性側鎖を有するモノマーが、アルキレングリコール残基を有するエチレン系不飽和モノマーである（３）に記載の生理活性物質捕捉用基材。
（５）前記（ｂ）ビオチン誘導体を固定するための官能基を有するモノマーが、ビオチン誘導体を固定するための官能基を有するエチレン系不飽和重合性モノマーである（３）または（４）に記載の樹脂層を構成する物質が、アルキレングリコール残基を有するエチレン系不飽和モノマー（ａ）、ビオチン誘導体を固定するための官能基を有するエチレン系不飽和重合性モノマー（ｂ）、および架橋可能な官能基を有するモノマー（ｃ）を共重合して得られる高分子物質である（１）または（２）記載の生理活性物質捕捉用基材。
（６）アルキレングリコール残基を有するエチレン系不飽和重合性モノマー（ａ）が下記の一般式で表されるモノマーである（３）記載の生理活性物質捕捉用基材。
〔式１〕
2011141232.tif 000002
（式中Ｒ１は水素原子またはメチル基を示し、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜２０のアルキル基を閉めす。Ｘは炭素数１〜１０のアルキレングリコール残基を示し、ｐは１〜１００の整数を示す。繰り返されるＸは、同一であっても、または異なるアルキレングリコール残基の連鎖であってもよい。）
（７）ビオチン誘導体を固定化するための官能基が、ｐ−ニトロフェニルエステルまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの活性エステルである（４）記載の生理活性物質捕捉用基材。
（８）架橋可能な官能基を有するエチレン系不飽和重合性モノマーの官能基がアルコキシリルである（５）記載の生理活性物質捕捉用基材
（９）ビオチン誘導体が、ビオチン末端カルボキシル基にアミノ基を導入し末端アミノ基修飾ビオチンからなる少なくとも一種類である（１）〜（８）のいずれかに記載の生理活性物質捕捉用基材。
（１０）捕捉する生理活性物質が、ビオチン結合タンパク質およびそれにより修飾されたタンパク質である（１）〜（９）のいずれかに記載の生理活性物質捕捉用基材。
（１１）生理活性物質を捕捉するための基材が、チューブ、プレートおよびビーズから選ばれる少なく１種以上である（１）〜（１０）いずれか記載の生理活性物質。
（１２）前記基材を構成する樹脂が、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、環状ポリオレフィン、ポリペンテンおよびポリカーボネートからなる少なくとも１種である（１）〜（１１）いずれか記載の生理活性物質。
（１３）生理活性物質の捕捉方法であって、
（ａ）基材と、樹脂層と、ビオチン誘導体とがこの順に配置され、かつ前記樹脂層の基材と反対側の面が、親水性を有している生理活性物質捕捉用基材の表面に活性エステルを含む高分子化合物で樹脂層を形成させ、ビオチン誘導体を活性エステルと反応させて固定する工程と、
（ｂ）生理活性物質を添加し、基材に生理活性物質を固相化する工程とを有することを特徴とする生理活性物質の捕捉方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、基材表面のビオチンを介してビオチン結合タンパク質と結合するタンパク質を効率よく簡単に固相担体に結合する事が可能となり、また、該タンパク質と反応する別の物質の非特異吸着を効果的に抑制する事から、簡便かつハイスループットなＰＣＲ容器やバイオチップの作製と評価が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明によるビオチン結合タンパク質の濃度依存性曲線
【図２】非特異的吸着能の比較
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明の生理活性物質固定化用基材について説明する。
【００１３】
本発明に使用する生理活性物質を固定化する為の分子としては、ビオチン結合タンパク質誘導体と特異的に反応するビオチン分子が好ましく、特に末端アミノ基修飾ビオチンが好ましい。例えば、Ｂｉｏｔｉｎｙｌ−３，６，９−ｔｒｉｏｘａｕｎｄｅｃａｎｅｄｉａｍｉｎｅ、Ａｍｉｎｅ−ＰＥＯ−Ｂｉｏｔｙｎｅ、Ａｍｉｎｅ−ＰＥＧ２−Ｂｉｏｔｙｎｅ、Ａｍｉｎｅ−ＰＥＧ３−Ｂｉｏｔｙｎなどの分子があげられる。これらの分子の特徴は、ビオチンと末端のアミノ基の間にＰＥＯやＰＥＧなどのスペーサーを有していることで、これは、ビオチンを固定化した際に、基材との間にある程度の距離を持たせて、それによりビオチン−ビオチン結合タンパク質の相互作用において立体障害による結合不足を解消する狙いがある。
前述のようにビオチンとビオチン結合タンパク質との相互作用は非常に強く、特異性も高い。
【００１４】
本発明に使用する高分子物質はアルキレングリコール残基、ビオチン誘導体を固定化するための官能基、かつ架橋可能な官能基を有する高分子物質が好適である。
アルキレングリコール残基を有するエチレン系不飽和重合性モノマー（ａ）は、下記の一般式で表されるモノマーを用いた共重合体であることが好ましい。
〔式１〕
2011141232.tif 000003
【００１５】
式中Ｒ１は水素原子またはメチル基を示し、Ｒ２は水素原子または炭素数１〜２０のアルキル基を示す。Ｘは炭素数１〜１０のアルキレングリコール残基を示し、ｐは１〜１００の整数を示す。繰り返されるＸは、同一であっても、または異なるアルキレングリコール残基の連鎖であってもよい。
【００１６】
また、ビオチン誘導体を固定化するための官能基は、反応性のしやすさを考慮すると、ｐ-ニトロフェニルエステル又はＮ-ヒドロキシスクシンイミドエステルの活性エステルであることが好ましい。
【００１７】
架橋可能な官能基としては架橋可能な官能基を有するエチレン系不飽和重合性モノマーの官能基としてアルコキシリル基が好ましい。
【００１８】
本発明の生理活性物質固定化用固相基材の製造工程の一例を下記に示す。
（ａ）プラスチック固相基材を準備する。
プラスチック固相基材表面は、プラズマ処理等によりカルボキシル基、水酸基、アミノ基等の官能基が表面に導入されていることが好ましい。
（ｂ）親水基及び官能基を有する高分子物質を塗布する。
（ｃ）生理活性物質を固定化するための分子を導入する。
前記生理活性物質を固定化するための分子は、ビオチン誘導体であり、特に末端アミノ基修飾ビオチンであることが好ましい。
【００１９】
（固相化基材）
本発明の基材には、プラスチック、ガラス、金属などを用いることが可能であるが、形状加工性や価格などを考慮するとプラスチックを用いることが好適である。用いるプラスチックとしては、熱可塑性、熱硬化性樹脂を用いることができるが、熱可塑性樹脂の方が製造効率の観点から好ましい。熱可塑性樹脂としては、例えばポリエチレンやポリプロピレン等の直鎖状ポリオレフィン、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリアミド、環状ポリオレフィン、含フッ素樹脂等が挙げられる。耐熱性、耐薬品性、成形性に特に優れるポリエチレン、ポリプロピレン、環状ポリオレフィンを用いることがより好ましい。
【００２０】
（基材の形状）
固相担体の形状としては、チューブ、マイクロウェルプレート、マイクロビーズ、平板状基板、微細流路形状を有した基板等が挙げられる。
【００２１】
（生理活性物質の固定化）
本発明において生理活性物質を固相上に固定化する際には、生理活性物質を溶解又は分散させた液体を付着する方法が好ましい。生理活性物質を溶解又は分散した液体のｐＨは６．０〜８．０であることが好ましく、ｐＨ６．５〜７．５がより好ましい。この範囲外だと、生理活性物質や生理活性物質を固定化する分子が変性・分解する恐れがある。
生理活性物質付着後は、固相表面の親水基の特性により、界面活性剤を含む水や緩衝液で洗浄することで、生理活性物質と反応しうる別の物質の固相表面への非特異吸着を抑制することが可能となる。しかし、生理活性物質と反応しうる別の物質に固相表面の分子と反応しうるビオチン又はビオチン誘導体が含まれる場合、生理活性物質を固定化した以外の固相表面に残存する分子の不活性化処理を、ビオチン又はビオチン誘導体を有する他の化合物で行うことが好ましい。
【００２２】
（固定化する生理活性物質の構造）
固定化する生理活性物質にビオチン結合タンパク質又はビオチン結合タンパク質誘導体を、一般的な方法で導入する事で、基材表面に固定化されたビオチン誘導体によって、効果的に目的の生理活性物質を固定化する事が可能となる。より反応性を高める為に、ビオチン結合タンパク質の導入位置は生理活性物質の末端や外側であることが望ましい。生理活性物質の合成法が進歩してきた事で、任意の位置にビオチン結合タンパク質を導入できるようになってきており、生理活性を発現する為に重要な部位に影響を及ぼさないような位置で生理活性物質を担体表面に固定化することが可能である。
【実施例】
【００２３】
以下、本発明を実施例および比較例に基づいて詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例１】
【００２４】
（高分子化合物の合成例）
ポリエチレングリコールメチルエーテルメタクリレート（別名メトキシポリエチレングリコールメタクリレート）（ＰＥＧＭＡ、数平均分子量＝約４７５  Ａｌｄｒｉｃｈ製）、ｐ−ニトロフェニルオキシカルボニル−ポリエチレングリコールメタクリレート（ＭＥＯＮＰ）、３−メタクリロキシプロピルジメチルエトキシシラン（ＭＰＤＥＳ  ＧＥＬＥＳＴ、INC.製）をそれぞれ順に０．９０ｍｏｌ／Ｌ、０．０５ｍｏｌ／Ｌ、０．０５ｍｏｌ／Ｌ、になるように脱水エタノールに溶解させ、モノマー混合溶液を作製した。そこにさらに０．００２ｍｏｌ／Ｌの２、２−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ、和光純薬製）を添加し、均一になるまで撹拌した。その後、アルゴンガス雰囲気下、６０℃で１．５時間反応させた後、反応溶液をジエチルエーテル中に滴下し、沈殿を収集した。得られた高分子化合物を重エタノール溶媒中１Ｈ―ＮＭＲで測定し、０．１５ｐｐｍ付近に現れるＭＰＤＥＳのＳｉに結合したメチル基に帰属されるピーク、３．３５ｐｐｍ付近に現れるＰＥＧＭＡの末端メトキシ基に帰属されるピーク、７．６および８．４ｐｐｍ付近に現れるＭＥＯＮＰのベンゼン環に帰属されるピーク、それぞれの積分値より、この高分子化合物の組成比を算出した。表１に結果を示した。
表１  高分子組成比
2011141232.tif 000004
単位：ｍｏｌ％
【００２５】
（ポリマーコート）
以下に、前記高分子化合物のコーティング方法について述べる。
コーティングの基材は、市販のＥＬＩＳＡ用９６ウェルマルチウェルプレート（住友ベークライト製、品番ＭＳ−８４９６Ｆ）を使用した。塗布作業直前に該プレートを酸素プラズマ処理を実施し、プレートの前処理を行った。
前記で合成した高分子化合物の０．３ｗｔ％エタノール溶液を調製し、以下の手順で基材に塗布した。
前記のマイクロウェルプレートの各ウェルに０．３ｗｔ％エタノール溶液を０．３ｍL分注し、３０分静置。次にウェル内の溶液を廃棄後、室温で６０分乾燥し、各ウェルに高分子化合物の層を形成させた。
【００２６】
（ビオチン固相化）
次に、マルチウェルプレートに塗布した高分子化合物にビオチンを固相化する方法に関して述べる。
市販の末端アミン型ビオチン（ＥＺ−Ｌｉｎｋ（（＋）−Ｂｉｏｔｉｎｙｌ−３，６，９−ｔｒｉｏｘａｕｎｄｅｃａｎｅｄｉａｍｉｎｅ）Ｐｉｅｒｃｅ社、２１３４７）をリン酸２水素カリウム１．２Ｍ水溶液に１０ｎＭになるように調製し、前述の高分子化合物塗布マルチウェルプレートの各ウェルに１００μＬづつ分注し、室温で２時間反応させる。
２時間反応後、末端アミン型ビオチン溶液を除去し、超純水でプレートを洗浄。このままでは未反応の活性エステルが存在するので、ブロッキング操作を行う。０．１Ｍエタノールアミン溶液（ｐＨ９．０）を各ウェルに３００μＬを加え、室温で１時間反応。１時間後、ブロッキング液を除去後、超純水で洗浄、遠心分離器で２０００ｒｐｍで２分遠心し、遠心乾燥をおこなった。
【実施例２】
【００２７】
評価１：ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンの検出
ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（ＨＲＰ標識ストレプトアビジン）を用いて、前記ビオチン固定化プレートの性能評価を行った。具体的には以下の通りである。
ＨＲＰ標識ストレプトアビジン（ＣＨＥＭＩＣＯＮ  ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ、ＳＡ１０８）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ（−）、日水製薬製、０５９１３）に、以下の濃度に倍々希釈した溶液を作製。１２ｎＭ、６ｎＭ、３ｎＭ、１．５ｎＭ、０．３７５ｎＭ、０．１８ｎＭ。０点としてＰＢＳ（−）のみの０ｎＭも準備。
前記ビオチン固定化プレートのウェルに作製したＨＲＰ標識ストレプトアビジン希釈溶液を１００μＬ／ウェルで分注し、室温で１時間反応させた。
【００２８】
反応後、０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ１００（コスモ・バイオ社、品番：〔ＣＢＣ〕６４８４６６）ＰＢＳ（−）溶液を洗浄液として３００μＬ／ウェルで３回洗浄して、で未反応のＨＲＰ標識ストレプトアビジンを除去。
固定化されたストレプトアビジンを標識したＨＲＰの活性で測定した。
ＨＲＰ活性は、ペルオキシダーゼ用発色キット（住友ベークライト製、品番ＭＬ−１１２０Ｔ）を用いて発色反応させて測定した。
【００２９】
＜比較例１＞
比較例１として、市販のビオチン固定化プレート（ピアス社製、ビオチンプレート、１５１２９）を用いて実施例１と同様の反応を実施した。
図１に結果を示す。
本発明品において、アビジンの固定化量が、市販品に比べて多いことが観察でき、本発明の優位性を示した。
【実施例３】
【００３０】
評価２：ＢＳＡ−ＨＲＰの非特異的吸着量
ペルオキシダーゼ標識ウシ血清アルブミン（ＨＲＰ標識ＢＳＡ、ＲｏｃｋＬａｎｄ社製  品番：００１−０３３３）をＰＢＳ（−）で濃度１μｇ／ｍＬに調製。
前記ビオチン固定化プレートのウェルに作製したＨＲＰ標識ＢＳＡ希釈溶液を１００μＬ／ウェルで分注し、室温で１時間反応させた。
こちらも反応後、０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ１００（コスモ・バイオ社、品番：〔ＣＢＣ〕６４８４６６）ＰＢＳ（−）溶液を洗浄液として３００μＬ／ウェルで３回洗浄して、ＨＲＰ標識ＢＳＡを除去。
非特異的に固定化されたＨＲＰ標識ＢＳＡを、標識したＨＲＰの活性で測定した。
ＨＲＰの活性は、ペルオキシダーゼ用発色キット（住友ベークライト製、品番ＭＬ−１１２０Ｔ）を用いて発色反応させて測定した。
【００３１】
＜比較例２＞
比較例２として、市販のビオチン固定化プレート（ピアス社製、ビオチンプレート、１５１２９）を用いて実施例３と同様の反応を実施した。
【００３２】
結果を図２に示す。
図２に示すように、比較例ではビオチン−アビジン結合によらない、非特異的な吸着により吸光度が０．５近辺まで上昇しており、それを防ぐためにブロッキング操作を加える必要があることがわかる。
これに対して本発明を用いたプレートでは、追加のブロッキング操作が不必要であることが見て取れる。
【産業上の利用可能性】
【００３３】
本発明の生理活性物質固定化用固相担体を用いることで、生理活性物質を基材に固定化し、それ以外の部分への不要な生理活性物質や蛍光物質の吸着および結合を抑制することできる。
【図１】
2011141232.tif 000006
【図２】
2011141232.tif 000007