(57)【要約】      （修正有）【課題】脂肪分解促進作用及びアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有し、且つ、食品として副作用や毒性等の安全性の点で問題がなく、経口摂取することが可能な組成物や、該組成物を含む飲食品やサプリメントを提供する。【解決手段】脂肪分解促進作用及びＡＣＥ阻害作用を有する食品用組成物を提供すべく種々の食材について鋭意検討した結果、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲンを組み合わせて調製した組成物が、優れた脂肪分解促進作用及びＡＣＥ阻害活性作用を有する。組成物を有効成分として用いることにより、脂肪分解促進作用及びＡＣＥ阻害作用を有する飲食品やサプリメント。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲンを含む組成物であって、脂肪分解促進作用を有し、かつ、そのペプシン及びトリプシン分解物がアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有することを特徴とする組成物。
【請求項２】
大麦若葉エキス１００重量部あたり、サケ白子抽出物１４．０〜１４．５重量部、ビール酵母抽出物２．８〜３．２重量部、及びトリコラーゲン５．７〜６．２重量部を含むことを特徴とする、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
サケ白子抽出物が、サケ白子を酵素処理することにより得られる、オリゴヌクレオチドとオリゴペプチドまで分解した低分子成分を含む抽出物であることを特徴とする、請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
ビール酵母抽出物が、ビール酵母を酵素処理することにより得られる、低分子化したＲＮＡ成分を含む抽出物であることを特徴とする、請求項１又は２記載の組成物。
【請求項５】
大麦若葉エキスが、３０％難消化性デキストリンを含むことを特徴とする請求項１又は２記載の組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の組成物を含むことを特徴とする経口用脂肪分解促進剤。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれかに記載の組成物を含むことを特徴とする経口用アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれかに記載の組成物を含むことを特徴とする飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂肪分解促進作用を有し、かつ、そのペプシン及びトリプシン分解物がアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有する組成物、より詳細には、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲン(チキンコラーゲン)からなる組成物や、かかる組成物を含有する経口摂取用の脂肪分解促進剤や、及び経口摂取用のＡＣＥ阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂肪は食物として摂取した余剰のエネルギーが白色脂肪組織に蓄積されたものであり、過剰な白色脂肪組織の蓄積によって肥満となり、その結果、様々な生活習慣病の原因となるばかりでなく、美容面でも大きな問題となっている。特に最近内臓周囲（腸間膜脂肪）に形成される白色脂肪組織の増大が高血圧、インスリン抵抗性、耐糖能異常、高脂血症を誘発することによりメタボリックシンドロームを引き起こすことが科学的に明らかにされ、その予防と改善が社会的に切望されている。
【０００３】
脂肪細胞に脂肪が蓄積して肥大すると、脂肪細胞からの善玉アディポカインの分泌が減り、種々の悪玉アディポカイン（例えば、ＴＮＦα、レジスチン等）が分泌され、インスリン抵抗性（すなわち、インスリン感受性の低下）が引き起こされる。その結果、血糖値を十分に低下させられなくなるので、血糖値を制御するためにインスリンが過剰分泌され、高インスリン血症となる。高インスリン血症になると、過剰のインスリンによる脂質代謝などへの作用によって、メタボリックシンドロームが引き起こされる。
【０００４】
アディポネクチンは、善玉アディポカインの１つであり、脂肪酸の燃焼および糖の取り込みを促進し、インスリン抵抗性を改善する（非特許文献１）。アディポネクチンによる脂肪酸の燃焼作用は、脂肪細胞で生じるのではなく、肝臓および骨格筋におけるＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）の活性化によるものである。肝臓においては、糖の新生を抑制して脂肪酸を燃焼し、そして骨格筋では、糖を取り込んで脂肪酸を燃焼させる。
【０００５】
アディポネクチンの発現は、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化に伴って誘導される。そして、脂肪細胞が肥大していないときに脂肪細胞から活発に分泌される。一方、脂肪細胞が肥大した場合には、上述のＴＮＦαなどによってアディポネクチンの作用が減弱される。また、脂肪細胞が肥大すると、アディポネクチンの転写は抑制され、アディポネクチンが欠乏して代謝異常が引き起こされる（非特許文献１）。
【０００６】
野菜または果実由来のカロテノイドが、インスリン誘導時における前駆脂肪細胞からの脂肪細胞への分化を抑制することが報告されているが（特許文献１）、上述のように、前駆脂肪細胞からの脂肪細胞への分化を抑制するとアディポネクチンの発現も抑制されるため、脂肪細胞への分化を抑制することが、即抗肥満作用につながるかは疑わしい。
【０００７】
従来から、肥満の予防と改善については、食事制限、過剰エネルギーの吸収の遅延及び阻害、あるいは消化管における糖質吸収阻害物質の探索など、摂取エネルギーを制限するような様々な研究が行われてきた。しかし、エネルギー摂取の制限は基礎代謝量を低下させる要因にもなり、必ずしも肥満が改善されないことがある。したがって、肥満を解消するためには蓄積された脂肪を積極的に代謝、分解して熱エネルギーとして発散することが理想的である。これらのことから、近年、食品素材中から脂肪分解促進作用を有する機能性成分の探索が活発に行われ、多くの脂肪分解促進剤及び飲食品が提案されている。
【０００８】
既に知られている天然由来の脂肪分解促進剤の有効成分としては、ミカン科植物（特許文献２）、アザミ族の植物（特許文献３）、コショウ科植物（特許文献４）、オレンジリーフ、オレンジフラワー、フキタンポポ葉およびカラマスルート（特許文献５）、ハトムギ、大麦、決明子、蕃石榴およびプーアル茶（特許文献６）などがある。さらに最近では、ハスまたはその抽出物を有効成分とする脂肪分解促進剤（特許文献７）、カバノキ科シラカバの抽出液及びイネ科クマザサの抽出物の少なくともいずれかを含有する脂肪分解促進剤（特許文献８）、小麦タンパク質の加水分解物を含有する脂肪蓄積抑制および促進剤（特許文献９）等を挙げることができる。
【０００９】
一方、高血圧症は代表的なメタボリックシンドロームの症状であり、その患者数は年々増加している。高血圧症は脳出血、クモ膜下出血、脳梗塞、心筋梗塞、狭心症、腎硬化症など種々の合併症を引き起こすことが知られており、高血圧症の発症メカニズムについて様々な研究が行われてきており、血圧の昇圧に関与するレニン・アンジオテンシン系と、降圧に関与するカリクレイン・キニン系が重要な役割を果たしていることが知られている。レニン・アンジオテンシン系では主に肝臓から分泌されるアンジオテンシノーゲンが腎臓で生産されるレニンによってアンジオテンシンIとなり、更にアンジオテンシン変換酵素(ＡＣＥ)によってアンジオテンシンIIに変換される。このアンジオテンシンIIは血管平滑筋を収縮させ、血圧を上昇させる。一方、降圧系のカリクレインはキニノーゲンに作用してブラジキニンを産生する。このブラジキニンには血管を拡張して血圧を下げる効果があるが、ＡＣＥにはこのブラジキニンを分解してしまう作用がある。このように、ＡＣＥは昇圧ペプチドであるアンジオテンシンIIの産生と降圧ペプチドであるブラジキニンの不活化という２つの作用によって血圧の上昇に関与していることが明らかにされている。従って、このＡＣＥの酵素活性を抑制することにより血圧の上昇を抑制することが可能となる。ＡＣＥ阻害活性物質として開発されたプロリン誘導体であるカプトプリルやエナラプリル等は高血圧症の治療に広く用いられている。
【００１０】
また、最近では食品素材蛋白質の酵素分解物であるペプチドにＡＣＥ阻害活性のあることが報告されている。例えば、ゼラチンのコラーゲナーゼ分解物(特許文献１０)、カゼインのトリプシン分解物(特許文献１１〜１６)、γ−ゼインのサーモライシン分解物(特許文献１７)、イワシ筋肉のペプシン分解物(特許文献１８)、かつお節のサーモライシン分解物(特許文献１９)、ゴマ蛋白のサーモライシン分解物(特許文献２０)、κ−カゼインのペプシン等の分解物(特許文献２１)など多数の報告がなされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開２００３−９５９３０号公報
【特許文献２】特開平８−８１３８２号公報
【特許文献３】特開平８−３０１７８０号公報
【特許文献４】特開平８−２４５４１０号公報
【特許文献５】特開平１１−２２８４３１号公報
【特許文献６】特開２００２−２７５０７８号公報
【特許文献７】特開２００４−３０７３６５号公報
【特許文献８】特開２００６−０４５１２０号公報
【特許文献９】特開２００７−１０６６８３号公報
【特許文献１０】特開昭５２−１４８６３１号公報
【特許文献１１】特開昭５８−１０９４２５号公報
【特許文献１２】特開昭５９−４４３２３号公報
【特許文献１３】特開昭６０−２３０８６号公報
【特許文献１４】特開昭６０−２３０８７号公報
【特許文献１５】特開昭６１−３６２２６号公報
【特許文献１６】特開昭６１−３６２２７号公報
【特許文献１７】特開平２−３２１２７号公報
【特許文献１８】特開平３−１１０９７号公報
【特許文献１９】特開平４−１４４６９６号公報
【特許文献２０】特開平８−２３１５８８号公報
【特許文献２１】特開平８−２６９０８８号公報
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】門脇孝ら、「アディポネクチンと糖尿病・心血管病の分子メカニズム」，第１２８回日本医学会シンポジウム記録集「糖尿病と動脈硬化」２００４年１２月２日，３４−４５頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、脂肪分解促進作用及びＡＣＥ阻害作用を有し、且つ、食品として副作用や毒性等の安全性の点で問題がなく、経口摂取することが可能な組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
発明者らは、種々の食材について脂肪分解促進作用及びＡＣＥ阻害活性について鋭意検討した結果、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲン（チキンコラーゲン）を組み合わせて調製した混合物が、優れた脂肪分解促進作用を有することを、さらに、大麦若葉、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、トリコラーゲンの混合物を消化酵素であるペプシン及びトリプシンを用いて処理した消化混合物がＡＣＥ阻害活性を示すことを見い出し、本発明を完成するに至った。
【００１５】
すなわち本発明は、
（１）サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲンを含む組成物であって、脂肪分解促進作用を有し、かつ、そのペプシン及びトリプシン分解物がアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有することを特徴とする組成物、
（２）大麦若葉エキス１００重量部あたり、サケ白子抽出物１４．０〜１４．５重量部、ビール酵母抽出物２．８〜３．２重量部、及びトリコラーゲン５．７〜６．２重量部を含むことを特徴とする、上記（１）記載の組成物、
（３）サケ白子抽出物が、サケ白子を酵素処理することにより得られる、オリゴヌクレオチドとオリゴペプチドまで分解した低分子成分を含む抽出物であることを特徴とする、上記（１）又は（２）記載の組成物
（４）ビール酵母抽出物が、ビール酵母を酵素処理することにより得られる、低分子化したＲＮＡ成分を含む抽出物であることを特徴とする、上記（１）又は（２）記載の組成物
（５）大麦若葉エキスが、３０％難消化性デキストリンを含むことを特徴とする上記（１）又は（２）記載の組成物、
（６）上記（１）〜（５）のいずれかに記載の組成物を含むことを特徴とする経口用脂肪分解促進剤、
（７）上記（１）〜（５）のいずれかに記載の組成物を含むことを特徴とする経口用アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、及び
（８）上記（１）〜（５）のいずれかに記載の組成物を含むことを特徴とする飲食品に関する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明により、優れた脂肪分解促進作用及びその消化物がＡＣＥ阻害作用を有する組成物の提供が可能となった。本発明の組成物は、食品として副作用や毒性等の問題がないため、長期間継続して簡便に摂取することが可能であり、肥満や高血圧などの成人病予防・改善に極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の組成物の存在下で培養した脂肪細胞の培養上清中のグリセロール量が、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、又はチキンコラーゲンの単独存在下で培養した脂肪細胞の培養上清中のグリセロール量と比較して顕著に増加していることを示す図である。図の縦軸は、無添加区の培養上清中のグリセロール量を基準とした百分率の値を示している。
【図２】本発明の組成物の存在下で培養した脂肪細胞の生存率と、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、又はチキンコラーゲンの単独存在下で培養した脂肪細胞生存率との間に顕著な差が認められないことを示す図である。図の縦軸は、無添加区の脂肪細胞の生存率を基準とした百分率の値を示している。
【図３】本発明の組成物のペプシン及びトリプシン処理物のＡＣＥ阻害活性が、ペプシン及びトリプシン処理したサケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、又はチキンコラーゲン処理物単独のＡＣＥ阻害活性と比較し顕著に優れていることを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の、脂肪分解促進作用を有し、且つ、ペプシン及びトリプシンによる分解後にアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有する組成物としては、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲン（チキンコラーゲン）を含む組成物であれば特に制限されるものではないが、大麦若葉エキス１００重量部あたり、サケ白子抽出物１４．０〜１４．５重量部、ビール酵母抽出物２．８〜３．２重量部、及びトリコラーゲン５．７〜６．２重量部を含む組成物であることが得に好ましい。
上記サケ白子抽出物としては、食品用として使用できるものであれば特に制限されるものではないが、サケ白子を酵素処理することにより、オリゴヌクレオチドとオリゴペプチドまで分解した低分子成分を含むサケ白子抽出物が好ましい。特に分子量１０００〜３０００のオリゴヌクレオチド、オリゴペプチドを２０〜５０％含有するサケ白子抽出物が好ましい。このようなサケ白子抽出物は、例えば日生バイオ株式会社等より入手することができる。
上記ビール酵母抽出物としては、食品用として使用できるものであれば特に制限されるものではないが、ビール酵母を酵素処理することにより、低分子化したＲＮＡを含むビール酵母抽出物が好ましい。特に分子量１０００〜３０００のＲＮＡを２０〜５０％含有するビール酵母抽出物が好ましい。このようなビール酵母抽出物は、例えば日生バイオ株式会社等より入手することができる。
上記大麦若葉エキスとしては、特に制限されるものではないが、食品用に低温でスプレードライした大麦若葉エキスを好適に用いることができる。大麦若葉エキスに難消化性デキストリンを含んでいるものも用いることができる。難消化性デキストリンを含んだ大麦若葉エキスとしては２０〜３０％の難消化性デキストリンを含有しているラクソン社製の大麦若葉エキスを好適に挙げることができる。
上記トリコラーゲンとしては、特に制限されるものではないが、食品用のトリコラーゲンを好適に用いることができ、例えば株式会社エル・エス・ファクトリー社製のトリコラーゲンを好適に挙げることができる。
【００１９】
本発明の組成物は、経口用の脂肪分解促進剤の他、経口用の脂肪蓄積抑制、肥満予防剤、肥満改善剤として用いることができ、また、経口用ＡＣＥ阻害剤の他、カプトプリルなどの合成医薬品とは異なって、摂取後副作用がない、あるいは極めて少ない血圧上昇抑制剤、高血圧症の予防若しくは改善剤として用いることができる。さらに、本発明の組成物は飲食品に配合して用いることにより、飲食品に脂肪分解促進作用及びＡＣＥ阻害作用を付与することができる。下記の実施例に記載のように、本発明の組成物は消化酵素であるペプシン及びトリプシンで消化した後に、優れたＡＣＥ阻害作用を示すことから、食品として経口摂取することにより高血圧症の予防・改善に効果を奏することができる。本発明の組成物を飲食品に配合して用いるためには、その有効成分の有効量を飲食品の製造原料段階、あるいは製造した製品の段階等で添加、配合する。ここで「有効成分の有効量」とは、個々の飲食品において通常喫食される量を摂取した場合に、有効成分が摂取されるような含有量を意味するものであり、受容者の年齢および体重、症状、投与時間、剤形、投与方法、薬剤の組み合わせ等に依存して決定することができる。
【００２０】
本発明の飲食品は、本発明の組成物を含有するものであれば特に制限されるものではなく、具体的には、本発明の組成物をそのまま飲食品やサプリメントとして調製したものや、各種タンパク質、糖類、脂肪、微量元素、ビタミン類等をさらに配合したものや、液状、半液体状若しくは固体状にしたものや、一般の飲食品へ添加、配合したものを例として挙げることができる。
【００２１】
さらに、本発明の飲食品は、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、あるいは病者用食品であってもよい。本発明の経口用脂肪分解促進剤、経口用ＡＣＥ阻害剤、及び飲食品は、その製造に関しては、通常用いられる添加物や配合剤、例えば、賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、分散剤、保存剤、湿潤化剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化材、カプセル基剤、食品素材等の補助剤を用いることができる。該補助剤の成分としては、例えば、乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、炭酸カルシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、またはその塩、アラビアガム、ポリエチレングルコール、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウム、プルラン、カラギーナン、デキストリン、還元パラチノース、ソルビトール、キシリトール、ステビア、合成甘味料、クエン酸、アスコルビン酸、酸味料、重曹、ショ糖エステル、植物硬化油脂、塩化カリウム、サフラワー油、ミツロウ、大豆レシチン、香料等を具体的に挙げることができる。
【００２２】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２３】
（１）試料の調製
本発明の実施例において、評価に用いた試料は、サケ白子抽出物（日生バイオ株式会社製）、ビール酵母抽出物（日生バイオ株式会社製）、大麦若葉エキス（ラクソン社製、３０％難消化性デキストリン含有）、チキンコラーゲン（トリコラーゲン：株式会社エル・エス・ファクトリー社製）を単独又は組み合わせて調製した。試料の調製に用いた各成分の濃度を表１に示す。
【００２４】
【表１】
2011074051.tif 000002
【００２５】
（２）脂肪細胞への分化及び脂肪分解活性の測定
マウス前駆脂肪細胞株３Ｔ３−Ｌ１細胞を、９６ｗｅｌｌ培養プレートに３×１０４ｃｅｌｌｓ／２５０μｌ／ｗｅｌｌとなるように播種し、１０％ＣＳを含むＤＭＥＭ培地（１０％ＣＳ／ＤＭＥＭ）を用いて２日間プレインキュベートを行い、コンフルエント （ｄａｙ０）になるまで培養した。脂肪細胞分化誘導剤[０．５ｍＭイソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）、１μＭデキサメサゾン（ＤＥＸ）、１０μｇ／ｍｌインスリン]を培地に添加し、さらに３日間培養することにより脂肪細胞への分化誘導を行った。分化誘導後の細胞を、１０μｇ／ｍｌインスリンを含む１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ培地にて３日間培養した後、基本培地で６日間培養した。この６日間の培養中、培地を２日間おきに交換し脂肪滴を蓄積させた。その後、表１に記載の混合物、及び、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、チキンコラーゲンを単独で添加して、さらに、４８時間の培養を行った。培養終了後に上清を回収し、Adipolysis assay kitを用いて培養上清中のグリセロール量を測定した。この培養上清中のグリセロール量を脂肪分解の指標とした。グリセロール遊離率はコントロールの値を１００％とした場合の相対的な値である。
脂肪分解促進率％＝[Ａ/Ｂ]×１００
Ａ：抽出物添加時の遊離グリセロール量
Ｂ：抽出物無添加時の遊離グリセロール量
【００２６】
（３）試験結果
上述のように、脂肪分解促進作用の判定は、脂肪分解により生成するグリセロール量の測定値を指標として求めた。結果をグラフにしたものを図１に、数値化したものを表２にそれぞれ示す。大麦若葉エキスを含む混合物（試料）を添加した区において、１ｍｇ／ｍｌと５ｍｇ／ｍｌ濃度において、それぞれｃｏｎｔｒｏｌの２０８．６７％、５０４．１７％の値を示した。一方、各成分を単独で添加した区における脂肪分解率は、大麦エキス８１０μｇ／ｍｌ添加区で１４１．５７％、  ４．０５ｍｇ／ｍｌ添加区で２５５．２２％；サケ白子抽出物１１６μｇ／ｍｌ添加区で９５％、５８０μｇ／ｍｌ添加区で９５．４４％；ビール酵母抽出物２４μｇ／ｍｌ添加区で９５％、１２０μｇ／ｍｌ添加区で８１．６％；チキンコラーゲン４８μｇ／ｍｌ添加区で８７．６７％、２４０μｇ／ｍｌ添加区で１１６．７％を示した。以上のように、大麦若葉エキス、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、チキンコラーゲン成分を組み合わせて調製した試料が示すような顕著な脂肪分解促進作用は、各成分単独では認められないことが明らかとなり、大麦若葉エキス、サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、チキンコラーゲン成分の組み合わせることにより顕著な相乗効果が認められることが示された。
【００２７】
【表２】
2011074051.tif 000003
【００２８】
（４）細胞生存率の測定
さらに、上清を回収した後の細胞生存率を、Cell counting Kit-8（Dojindo社製）を用いて測定した。図２に結果を示すように、混合物及び各成分の添加区において生存率には差が認められないことを確認した。
【実施例２】
【００２９】
（１）試料及び各成分のペプシン及びトリプシン分解物の調製
０．１Ｍ  ＨＣｌ・ＫＣｌ（ｐＨ２．５）を用いて、表１に示す混合物及び各成分の１０％溶液を調製し、ペプシンを加えて、３７℃で２．５時間酵素処理した。処理後、沸騰水浴中９０℃で１０分間加熱し、ペプシンを失活させた。この処理液を、０．１Ｍ  リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を用いて５倍希釈し、さらに、トリプシンを加えて、３７℃で２４時間酵素処理した。処理後、沸騰水浴中９０℃で１０分間加熱し、トリプシンを失活させた。この処理液を遠心し、上清を凍結乾燥し、以下の実験に用いた。
【００３０】
（２）アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性の測定
ＡＣＥ阻害活性の測定はＬｉｅｂｅｒｍａｎ測定法の変法に基づいて行った。上記のようにして酵素処理した凍結乾燥試料を酵素処理前の濃度と同様に表１に記載の濃度となるように調製した。この調製液（３０μＬ）に、４００ｍＭ ＮａＣｌを含むホウ酸緩衝液（ｐＨ８．３）で５ｍＭに希釈したＨｉｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ基質溶液（２５０μｌ）を添加し、３７℃の恒温水槽中で５分間保温した。６００ｍｕ／ｍｌ（６ｍＵ）のＡＣＥ溶液（１００μｌ）を添加し、直ちに撹拌した後、３７℃で６０分間反応を行った。１Ｎ塩酸（２５０μｌ）を添加し、撹拌して反応を停止させた後、酢酸エチル（１．５ｍｌ）を添加し、十分に撹拌することにより馬尿酸を遊離させた。３，０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離後に上層の酢酸エチル層を１．０ｍｌ回収し、エバポレーターで乾固した。さらに減圧デシケーター内で６０分間乾燥させた後、超純水を３ｍｌ添加し、その溶液の吸光値（２２８ｎｍ）を測定した。なお、阻害活性は以下の式により阻害率（％）として算出した。
阻害率（％）＝（ＥＣ−ＥＳ／ＥＣ−ＥＢ）×１００
【００３１】
ここでのＥＳは、試料溶液を添加したときの吸光値、ＥＣは試料溶液の代わりに超純水を添加したときの吸光値、ＥＢはあらかじめ１Ｎ塩酸を添加して反応させたときの吸光値をそれぞれ示している。
【００３２】
（３）試験結果
図３に結果に示すように、混合物１ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌの場合、対応する濃度の各組成物単独の場合に比べてＡＣＥ阻害活性が顕著に高いことが明らかとなり、相乗的な効果が認められた。
【実施例３】
【００３３】
一本あたり、大麦若葉エキス１６８７ｍｇ、サケ白子抽出物２４０ｍｇ、ビール酵母抽出物５０ｍｇ、チキンコラーゲン１００ｍｇ、難消化性デキストリン７２３ｍｇ、デキストリン５００ｍｇを配合した、スティックタイプのサプリメントを調製した。
【図１】
2011074051.tif 000004
【図２】
2011074051.tif 000005
【図３】
2011074051.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成22年2月24日(2010.2.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲンを含む組成物であって、脂肪分解促進作用を有し、かつ、そのペプシン及びトリプシン分解物がアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有する組成物を含むことを特徴とする経口用脂肪分解促進剤。
【請求項２】
組成物が、大麦若葉エキス１００重量部あたり、サケ白子抽出物１４．０〜１４．５重量部、ビール酵母抽出物２．８〜３．２重量部、及びトリコラーゲン５．７〜６．２重量部を含むことを特徴とする、請求項１記載の経口用脂肪分解促進剤。
【請求項３】
サケ白子抽出物が、サケ白子を酵素処理することにより得られる、オリゴヌクレオチドとオリゴペプチドまで分解した低分子成分を含む抽出物であることを特徴とする、請求項１又は２記載の経口用脂肪分解促進剤。
【請求項４】
ビール酵母抽出物が、ビール酵母を酵素処理することにより得られる、低分子化したＲＮＡ成分を含む抽出物であることを特徴とする、請求項１又は２記載の経口用脂肪分解促進剤。
【請求項５】
大麦若葉エキスが、３０％難消化性デキストリンを含むことを特徴とする請求項１又は２記載の経口用脂肪分解促進剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
すなわち本発明は、
（１）サケ白子抽出物、ビール酵母抽出物、大麦若葉エキス、及びトリコラーゲンを含む組成物であって、脂肪分解促進作用を有し、かつ、そのペプシン及びトリプシン分解物がアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有する組成物を含むことを特徴とする経口用脂肪分解促進剤、
（２）組成物が、大麦若葉エキス１００重量部あたり、サケ白子抽出物１４．０〜１４．５重量部、ビール酵母抽出物２．８〜３．２重量部、及びトリコラーゲン５．７〜６．２重量部を含むことを特徴とする、上記（１）記載の経口用脂肪分解促進剤、
（３）サケ白子抽出物が、サケ白子を酵素処理することにより得られる、オリゴヌクレオチドとオリゴペプチドまで分解した低分子成分を含む抽出物であることを特徴とする、上記（１）又は（２）記載の経口用脂肪分解促進剤、
（４）ビール酵母抽出物が、ビール酵母を酵素処理することにより得られる、低分子化したＲＮＡ成分を含む抽出物であることを特徴とする、上記（１）又は（２）記載の経口用脂肪分解促進剤、
（５）大麦若葉エキスが、３０％難消化性デキストリンを含むことを特徴とする上記（１）又は（２）記載の経口用脂肪分解促進剤に関する。