(57)【要約】      （修正有）【課題】遷延性の作用特性と高い亜鉛含有量を有するインスリン製剤の提供。【解決手段】アシル化インスリンを含み、６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子をさらに含む可溶性製薬学的組成物。亜鉛含有量は、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子であってよい。亜鉛含有量の上限は、インスリンの沈殿を起こし、溶液を懸濁液にする亜鉛含有量である。インスリンはアシル化インスリンであり、例えば即効型インスリンＡｓｐＢ２８ヒトインスリンのような更なるインスリンアナログと混合されてもよい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アシル化インスリンを含み、６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子をさらに含む可溶性製薬学的組成物。
【請求項２】
６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子を含む請求項１に記載の製薬学的組成物。
【請求項３】
６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１２の亜鉛原子を含む請求項１または２に記載の製薬学的組成物。
【請求項４】
６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を含む請求項１ないし３の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項５】
少なくとも８５％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する請求項１ないし４の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項６】
組成物が界面活性剤を含む請求項１ないし５の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項７】
インスリン分子が、
Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくは親インスリン部分のＢ鎖中のＬｙｓ残基のε−アミノ基の何れか一方とアミド結合を介して結合しており、かつ、少なくとも一つの遊離カルボン酸基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基と；炭素鎖中に約４から約３２の炭素原子を有する脂肪酸部分と；アミド結合を介して側鎖中の個々の成分を結合させる一ないしそれ以上の有り得るリンカーと；を含んでなる側鎖
を有する請求項１ないし６の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項８】
側鎖が少なくとも一つの芳香族基を含んでなる請求項１および７に記載の製薬学的組成物。
【請求項９】
側鎖が少なくとも一つの二官能性ＰＥＧ基を含んでなる請求項１および７に記載の製薬学的組成物。
【請求項１０】
インスリン分子が、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２
［上式中、
Ｗは、
・そのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する側鎖中のカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・Ｘから親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基までの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ２は、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
であるが、
ただし、Ｗが共有結合であってＸが−ＣＯ−であるならば、Ｚは−ＣＯＯＨとは異なる］
の側鎖を有するもの、およびその任意のＺｎ２＋錯体である、請求項１ないし７の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項１１】
アシル化インスリンが、式
2011006428.tif 000032
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
Ｘ４は、
・ｎが１、２、３、４、５もしくは６である−（ＣＨ２）ｎ；
・Ｒが、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ；−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；１又２の−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯＯＨ基で置換されたアリーレン；−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾリルであるＮＲ
｛上式中、ｐは１から６の範囲の整数である｝；
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは、
・結合
であり；
Ｗ１は、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルからなる群から選択される一または二の基で置換されていてもよいアリーレンもしくはヘテロアリーレンであるか、あるいはＷ１は結合であり；
ｍは０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｘ５は、
・−Ｏ−；
・
2011006428.tif 000033
｛Ｒは上記のように定義される｝；もしくは
・結合
であり；
Ｙ１は、
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、結合もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−
・Ｒが上記のように定義されるＮＲ；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは
・結合
であり；
Ｑ７は、
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；もしくは
・式
−（ＣＨ２）ｓ−Ｑ８−（Ｃ６Ｈ４）ｖ１−Ｑ９−（ＣＨ２）Ｗ  −Ｑ１０−（Ｃ６Ｈ４）ｖ２−Ｑ１１−（ＣＨ２）ｔ−Ｑ１２−（Ｃ６Ｈ４）ｖ３−Ｑ１３−（ＣＨ２）ｚ−
｛Ｑ８−Ｑ１３は、互いに独立して、Ｏ；Ｓもしくは結合であってよく；ｓ、ｗ、ｔおよびｚは、互いに独立して、ｓ、ｗ、ｔおよびｚの合計が４から２２の範囲になるように、０もしくは１から１０の整数であり、かつ、ｖ１、ｖ２、およびｖ３は、互いに独立して、０もしくは１であってよいが、ただし、Ｗ１が結合であるならば、Ｑ７は式−（ＣＨ２）ｖ４Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ１−（ｖ４およびｗ１の合計が６から２２の範囲になるように、ｖ４およびｗ１は整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖ではない｝
の二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ１は、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＰＯ３Ｈ２；
−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；
−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；
−テトラゾリルもしくは
Ｗ２が、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルから選択される一または二の基で置換されているアリーレンもしくはヘテロアリーレンである−Ｏ−Ｗ２
であるが；
ただし、Ｗ１が結合であり、かつｖ１、ｖ２およびｖ３が全て０であり、かつＱ８−１３が全て結合であれば、Ｚ１はＯ−Ｗ２である］
を有する請求項１ないし８の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項１２】
アシル化インスリンが、式
2011006428.tif 000034
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
それぞれのｎは独立して、０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４は、互いに独立して、
・ｓが１−２０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−もしくは（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；もしくは、１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；
・ｔが１から６の整数である−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｔ−；
・Ｒ１およびＲ２が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）１−６ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ１およびＲ２が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑが１−６である−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−；
・Ｒ３およびＲ４が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ３およびＲ４が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑ１が１−６である−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−）−、−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１；もしくは
・結合
であってよいが；
ただし、Ｑ１−Ｑ４は異なっており；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、
・Ｏ；
・結合；もしくは
・
2011006428.tif 000035
｛上式中、
Ｒは、水素もしくはそれぞれのｐが、残りのｐ'と独立して、１から６の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；もしくは−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾール−５−イルである｝
であり；かつ
Ｚは、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＯＳＯ３Ｈ
−ＯＰＯ３Ｈ２
−ＰＯ３Ｈ２もしくは
−テトラゾール−５−イル
である］
を有する請求項１ないし７および９の製薬学的組成物。
【請求項１３】
親インスリンがｄｅｓＢ３０ヒトインスリンアナログである請求項１ないし１２の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項１４】
即効型インスリンをさらに含む請求項１ないし１３の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項１５】
少なくとも８５％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する請求項１および１４項に記載の製薬学的組成物。
【請求項１６】
即効型インスリンがＡｓｐＢ２８ヒトインスリン、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリンおよび／またはＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンである請求項１および１４−１５に記載の製薬学的組成物。
【請求項１７】
６分子のアシル化インスリン毎に約４より多い亜鉛原子を組成物に添加する、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物を製造するための方法。
【請求項１８】
６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子を組成物に添加する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１２の亜鉛原子を組成物に添加する、請求項１７−１８の何れか一項に記載の方法。
【請求項２０】
保存料の添加前に、亜鉛を組成物に添加する、請求項１７−１９に記載の方法。
【請求項２１】
保存料の添加後に、亜鉛を組成物に添加する、請求項１７−１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
保存料の添加前に亜鉛の一部を添加し、保存料の添加後に亜鉛の一部を添加する、請求項１７−２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
保存料がフェノールおよび／またはｍ−クレゾールである、請求項１７−２２の何れか一項に記載の方法。
【請求項２４】
界面活性剤を製薬学的組成物と混合する、請求項１７−２３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２５】
アシル化インスリンが、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２
［上式中、
Ｗは、
・そのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する側鎖中のカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・Ｘから親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基までの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ２は、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
であるが、
ただし、Ｗが共有結合であってＸが−ＣＯ−であるならば、Ｚは−ＣＯＯＨとは異なる］
の側鎖を有するもの、およびその任意のＺｎ２＋錯体である、請求項１７ないし２４の何れか一項に記載の方法。
【請求項２６】
アシル化インスリンが、式
2011006428.tif 000036
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
Ｘ４は、
・ｎが１、２、３、４、５もしくは６である−（ＣＨ２）ｎ；
・Ｒが、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ；−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；１又２の−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯＯＨ基で置換されたアリーレン；−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾリルであるＮＲ
｛上式中、ｐは１から６の範囲の整数である｝；
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは、
・結合
であり；
Ｗ１は、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルからなる群から選択される一または二の基で置換されていてもよいアリーレンもしくはヘテロアリーレンであるか、あるいはＷ１は結合であり；
ｍは０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｘ５は、
・−Ｏ−；
・
2011006428.tif 000037
｛Ｒは上記のように定義される｝；もしくは
・結合
であり；
Ｙ１は、
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、結合もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−
・Ｒが上記のように定義されるＮＲ；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは
・結合
であり；
Ｑ７は、
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；もしくは
・式
−（ＣＨ２）ｓ−Ｑ８−（Ｃ６Ｈ４）ｖ１−Ｑ９−（ＣＨ２）Ｗ  −Ｑ１０−（Ｃ６Ｈ４）ｖ２−Ｑ１１−（ＣＨ２）ｔ−Ｑ１２−（Ｃ６Ｈ４）ｖ３−Ｑ１３−（ＣＨ２）ｚ−
｛Ｑ８−Ｑ１３は、互いに独立して、Ｏ；Ｓもしくは結合であってよく；ｓ、ｗ、ｔおよびｚは、互いに独立して、ｓ、ｗ、ｔおよびｚの合計が４から２２の範囲になるように、０もしくは１から１０の整数であり、かつ、ｖ１、ｖ２、およびｖ３は、互いに独立して、０もしくは１であってよいが、
ただし、Ｗ１が結合であるならば、Ｑ７は式−（ＣＨ２）ｖ４Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ１−（ｖ４およびｗ１の合計が６から２２の範囲になるように、ｖ４およびｗ１は整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖ではない｝
の二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ１は、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＰＯ３Ｈ２；
Ｏ−ＳＯ３Ｈ；
Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；
−テトラゾリルもしくは
Ｗ２が、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルから選択される一または二の基で置換されているアリーレンもしくはヘテロアリーレンである−Ｏ−Ｗ２
であるが；
ただし、Ｗ１が結合であり、かつｖ１、ｖ２およびｖ３が全て０であり、かつＱ８−１３が全て結合であれば、Ｚ１はＯ−Ｗ２である］
を有するもの、およびその任意のＺｎ２＋錯体である、請求項１７ないし２４に記載の方法。
【請求項２７】
アシル化インスリンが、式
2011006428.tif 000038
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
それぞれのｎは独立して、０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４は、互いに独立して、
・ｓが１−２０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−もしくは（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；もしくは、１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；
・ｔが１から６の整数である−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｔ−；
・Ｒ１およびＲ２が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）１−６ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ１およびＲ２が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑが１−６である−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−；
・Ｒ３およびＲ４が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ３およびＲ４が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑ１が１−６である−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−）−、−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１；もしくは
・結合
であってよいが；
ただし、Ｑ１−Ｑ４は異なっており；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、
・Ｏ；
・結合；もしくは
・
2011006428.tif 000039
｛上式中、
Ｒは、水素もしくはそれぞれのｐが、残りのｐ'と独立して、１から６の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；もしくは−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾール−５−イルである｝
であり；かつ
Ｚは、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＯＳＯ３Ｈ
−ＯＰＯ３Ｈ２
−ＰＯ３Ｈ２もしくは
−テトラゾール−５−イル
である］
を有するもの、およびその任意のＺｎ２＋錯体である、請求項１７ないし２４に記載の方法。
【請求項２８】
親インスリンがｄｅｓＢ３０ヒトインスリンアナログである請求項１７ないし２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項２９】
即効型インスリンを組成物と混合する請求項１７ないし２８の何れか一項に記載の方法。
【請求項３０】
即効型インスリンがＡｓｐＢ２８ヒトインスリン、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリンおよび／またはＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンである請求項４６および８０に記載の方法。
【請求項３１】
糖尿病の治療のための医薬の製造のための、請求項１−１６の何れか一項に記載の組成物の使用。
【請求項３２】
請求項１−１６に記載の製薬学的組成物の治療的有効量を製薬学的に許容される担体と共に含む、治療の必要がある患者における糖尿病の治療のための製薬学的組成物。
【請求項３３】
請求項１−１６に記載の製薬学的組成物の治療的有効量を製薬学的に許容される担体と共に患者に投与することを含む、治療の必要がある患者における糖尿病の治療方法。
【請求項３４】
糖尿病の肺性治療のための、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療において使用するための製薬学的組成物の製造のための、請求項１−１６の何れか一項に記載の組成物の使用。
【請求項３６】
実施例中に記載した組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
〔発明の分野〕
本発明は、遷延性の作用特性と高い亜鉛含有量を有するアシル化インスリンの製薬学的組成物に関する。さらに、本発明は、遷延性の作用特性と高い亜鉛含有量を有するアシル化インスリンの製薬学的組成物を製造するための方法、および糖尿病の治療のための組成物を製造する方法に関する。
【０００２】
〔発明の背景〕
現在、１型糖尿病および二型糖尿病の双方の糖尿病の治療は、いわゆる強化インスリン療法への信頼が高まっている。この療法によると、基礎インスリン要求性をカバーするための持続型インスリンの一または二回の毎日の注射を、食事と関連するインスリン要求性をカバーするための、即効型インスリンのボーラス注射により補充して含む多様な毎日のインスリン注射により、患者を治療する。
持続型インスリン組成物は、当技術分野において周知である。したがって、持続型インスリン組成物の主な型には、インスリン結晶または非晶質インスリンの注射可能な水性懸濁液が含まれる。これらの組成物では、使用されるインスリン化合物は、典型的には、プロタミンインスリン、亜鉛インスリンまたはプロタミン亜鉛インスリンである。
【０００３】
ある欠点がインスリン懸濁液の使用に関連する。例えば、正確な投与を確保するために、該懸濁液の限定量がバイアルから引き出されるまたはカートリッジから排出される前に、インスリンの粒子は、穏やかな振盪により均質に懸濁されなくてはならない。また、塊形成または凝固を避けるために、インスリン懸濁液の貯蔵は、インスリン溶液に比較してより狭い範囲で温度を保たなくてはならない。
プロタミンは非免疫性であると依然は考えられていたが、現在では、プロタミンはヒトにおいて免疫性であり、且つ薬剤目的におけるそれらの使用は抗体の形成を引き起こすことが明らかとなっている。また、プロタミン−インスリン複合体がそれ自身免疫性であることがであるという証拠も見つかっている。従って、ある患者には、プロタミンを含有する持続型インスリン組成物の使用をさけなくてはならない。
【０００４】
もう１つの種類の持続型インスリン組成物は、その溶液を注射した際にｐＨ値が上昇することから、インスリンが沈殿するであろう生理学的なｐＨよりも低いｐＨ値を有する溶液である。これらの溶液の欠点は、注射した組織に形成された沈殿の粒径分布、したがって、薬物の放出特性が、幾らか予測不能な様式で、注射部位の血流および他のパラメーターに依存することである。更なる欠点は、インスリンの固体粒子が注射部位の組織の炎症の原因となる局所的な刺激物として作用することである。
インスリンは、膵臓のランゲルハンス島で生産される５１アミノ酸のペプチドである。モノマーとして働き、その第一の機能は、膜貫通受容体に結合し、活性化することにより、グルコース分子の脂肪および筋肉組織の細胞膜を横切った輸送を促進することである。
【０００５】
インスリンの特性は、ヘキサマーへと会合することができ、その形態でそのホルモンは生合成および貯蔵の間の化学および物理的な分解から保護されるということである。インスリンについて研究されたＸ線結晶からは、ヘキサマーは、三褶曲軸の回転により関連する三つのダイマーからなることが示されている。これらのダイマーは、その三褶曲軸上に位置する核にある二つの亜鉛イオンとの相互作用を介して、密接に会合してる。
ヒトインスリンが高濃度製薬学的製剤の形態で皮下組織に注射されるとき、それは自己会合しており、モノマーへの解離は比較的緩やかである。インスリンのヘキサマーおよびダイマーは、モノマーより毛細血管壁を貫通するのが遅い。
【０００６】
亜鉛およびフェノール性添加物は、通常、貯蔵の間の分解に対する予防としての、ヘキサマー形成を促進するために、治療的インスリン製剤に用いられる。しかしながら、この形態では、注射されたインスリンの作用は、皮下組織を介してヘキサマーが拡散し、ダイマーおよびモノマーに解離する間、遅延することになる。
インスリン製剤は、大抵、インスリンを、酸性条件下で小体積の水に溶解することにより調製される。亜鉛は、その後、製剤に添加され、続いて中和され、フェノールおよびｍ−クレゾールのような保存料が添加される。これらのインスリンの製薬学的製剤は、ヘキサマーのインスリン毎に約２、３もしくは４の亜鉛原子として提供される。
国際公開第２００５／０１２３４７号は、国際公開第９５／０７９３１号に開示されるアシル化インスリンと比較して追加の負電荷を含んでなるアシル化インスリン誘導体の別の群を開示する。これらのアシル化インスリンの製薬学的製剤は、ヘキサマーのインスリン毎に約２、３もしくは４の亜鉛原子として提供される。
【０００７】
国際公開第２００３／０９４９５６号は、モノマーのインスリンと可溶性アシル化インスリンアナログを混合することにより調製される安定インスリン製剤を開示する。製剤は、ヘキサマーのインスリン毎に約２．３から約４．５のＺｎ２＋を含む。この発明のアシル化インスリンアナログはインスリンデテミル（detemir）である。
国際公開第２００３／０９４９５１号から、即効作用および持続作用の双方を有する安定可溶性インスリン製剤を製剤化することは公知である。製剤は、ヘキサマーのインスリン毎に約２．３から約４．５のＺｎ２＋の範囲の亜鉛含有量を有する。この発明のアシル化インスリンアナログはインスリンデテミル（detemir）である。
【０００８】
国際公開第９９／２１８８８号は、６分子のインスリン誘導体毎に最大５の亜鉛原子を含むヒトインスリン誘導体の凝集に関する。
ヒトインスリンは、三つの第一級アミノ基を有する：Ａ鎖およびＢ鎖のＮ末端基、およびＬｙｓＢ２９のε−アミノ基。これらの基の一または複数で置換された幾つかのインスリン誘導体が、先行技術中で知られている。したがって、米国特許第３５２８９６０号（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）は、インスリン分子のうちの１、２または３の第一級アミノ基がカルボキシアロイル（ａｒｏｙｌ）基を有するＮ−カルボキシアロイル（ａｒｏｙｌ）インスリンに関する。
欧州特許第８９４０９５号は、Ｂ鎖のＮ末端および／または位置Ｂ２８、Ｂ２９またはＢ３０のＬｙｓのε−アミノ基が、Ｗが長鎖炭化水素基であり得る式−ＣＯ−Ｗ−ＣＯＯＨの置換を有するこれらのインスリン誘導体を開示している。これらのインスリン誘導体は、作用の持続性を有し、生理学的ｐＨ値で可溶性である。
【０００９】
国際公開第９５／０７９３１号は、脂溶性（liphophilic）の側鎖が、親インスリンのＢ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはＢ鎖に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基の何れか一方に結合している持続性インスリン誘導体を開示する。
インスリンデテミル（detemir）の遅い吸収のメカニズムは、Havelundらにより研究されている(The mechanism of protraction of insulin detemir、a long-acting acylated analog of human insulin., Pharmaceutical Research, 21(2004)1498-1504)。インスリン製剤は、ヘキサマーのインスリン毎に２の亜鉛原子、続いてグリセロール、フェノール、ｍ−クレゾールおよびリン酸ナトリウムを添加することにより調製される。
【００１０】
Whittinghamら(Crystallographic and solution studies of N-Lithocholyl insulin: a new generation of prolonged-acting human insulin, Biochemistry 2004, 43, 5987-5995)では、アシル化インスリンアナログの製剤が調製されている。そのインスリン製剤は、ヘキサマーのインスリン毎に２−２．５の亜鉛原子、続いてグリセロールおよびフェノールを添加することにより調製される。インスリンの構造は、サイズ排除カラムクロマトグラフィーで測定される。
本発明は、先行技術の課題を解決するアシル化インスリンの製薬学的組成物に関する。
【００１１】
〔発明の概要〕
本発明は、および６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子を含んでなるアシル化インスリンを含む可溶性製薬学的組成物に関する。
亜鉛含有量は、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子であってよい。亜鉛含有量の上限は、インスリンの沈殿を起こし、溶液を懸濁液にする亜鉛含有量である。
【００１２】
本発明のある態様では、製薬学的組成物は、６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１２の亜鉛原子、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を含む。本発明の更なる態様では、製薬学的組成物は、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を含む。更なる態様では、製薬学的組成物は、６分子のアシル化インスリン毎に約６から約１０．５の亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約６．５から約１０の亜鉛原子を含むか、あるいは、製薬学的組成物は、６分子のアシル化インスリン毎に約７から約９の亜鉛原子を含む。更なる態様では、製薬学的組成物は、亜鉛濃度の約１／３から３倍のクエン酸塩を含む。
【００１３】
本発明のインスリン分子は、互いに相互作用して、亜鉛を含んでなる複合体を形成する。これらのインスリン−亜鉛複合体は、製薬学的組成部中に、ヘキサマー、ドデカマーもしくはドデカマーより高分子量の複合体として存在し得る。全ての種類のインスリンが亜鉛と複合体を形成する、例えば、ヒトインスリン、アシル化インスリン（インスリン誘導体）およびインスリンアナログ。
【００１４】
本発明のある態様では、少なくとも８５％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する。
本発明のある態様では、少なくとも９０、９２、９５、９６、９７、９８、９９もしくは９９．５％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する。
【００１５】
本発明のある態様では、製薬学的組成物は界面活性剤を含む。界面活性剤は、製薬学的組成物の重量に基づいて０．０００５−０．０１％の量で存在し得る。ある態様では、界面活性剤は、製薬学的組成物の重量に基づいて０．０００５−０．００７％の量で存在し得る。界面活性剤の例としては、ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ２０が挙げられ、それは組成物の重量に基づいて０．００１−０．００３％の量で存在し得る。別の例としては、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８が挙げられ、それは組成物の重量に基づいて０．００２−０．００６％の量で存在し得る。
【００１６】
インスリン分子は、インスリン分子の様々な位置でアシル化されてよい。ある態様では、インスリンは、親インスリン分子のＢ鎖中の位置のＬｙｓ残基のε−アミノ基、特にヒトインスリン分子のＢ２９リジン基のε−アミノ基においてアシル化される。しかしながら、本発明の他の態様によると、アシル化は、インスリン分子の別の位置で起きてもよく、例えば、Ｂ２９がリジンから別のアミノ酸残基へと改変されたとすれば、位置Ｂ１のα−アミノ基もしくはインスリン分子中の天然アミノ酸残基がリジン残基に置換された位置で起きてもよい。
したがって、ある態様では、アシル化インスリンは、位置Ｂ１のα−アミノ基もしくはインスリン分子のＡまたはＢ鎖中のリジン残基の遊離ε−アミノ基のどちらかにおいてアシル化される。
ある態様では、インスリンは、インスリン分子の位置Ｂ２９のリジン残基の遊離ε−アミノ基においてアシル化される。
【００１７】
アシル基は、脂溶性（liphophilic）基であり、典型的には、少なくとも一つの遊離カルボン酸基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含み、約６から約３２の炭素原子を有する脂肪酸部分であろう。より典型的には、脂肪酸部分は、６から２４、８から２０、１２から２０、１２−１６、１０−１６、１０−２０、１４−１８もしくは１４−１６の炭素原子を有するであろう。
【００１８】
ある態様では、製薬学的組成物は、少なくとも一つの遊離カルボン酸基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含む。ある態様では、製薬学的組成物は、４から３２の炭素原子を有する二カルボン酸性脂肪酸から誘導されるアシル基を含む。
更なる態様では、脂肪酸部分は、約６から約３２、６から２４、８から２０、１２から２０、１２−１６、１０−１６、１０−２０、１４−１８もしくは１４−１６の炭素原子を有する二カルボン酸性脂肪酸から誘導される。
【００１９】
ある態様では、製薬学的組成物は、アミド結合を介するリンカー基を介して、インスリンと結合したアシル基を含む。
アシル基は、問題の遊離アミノ基と直接結合していてよい。しかしながら、アシル基は、インスリン分子中の遊離アミノ基と、問題のアシル基とを一緒に連結するリンカーにより、アミド結合を介して結合していてもよい。
アシル化インスリンは、典型的には、ヒトインスリンと比較して、少なくとも一つ、もしくは二つの追加の負の正味荷電を有し、より典型的には、二つの追加の負の荷電を有するであろう。追加の負の荷電は、脂肪酸中の遊離カルボン酸基、あるいは、少なくとも一つが遊離カルボン酸もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含む一または複数のアミノ酸残基を含み得るリンカー基によりもたらされ得る。更なる態様では、アシル基は、二カルボン酸性脂肪酸から誘導される。
【００２０】
ある態様では、製薬学的組成物は、インスリンが、親インスリン部分のＢ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくは親インスリン部分のＢ鎖中のＬｙｓ残基のε−アミノ基の何れか一方とアミド結合を介して結合している側鎖であって、少なくとも一つの遊離カルボン酸基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基と；炭素鎖中に約４から約３２の炭素原子を有する脂肪酸部分と；側鎖中の個々の構成成分をアミド結合を介して一緒に連結する一または複数のリンカーと；を含んでなる側鎖を有するインスリンを含む。
【００２１】
ある態様では、インスリン分子は、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２
［上式中、
Ｗは、
・そのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する側鎖中のカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基が、Ｗが側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・Ｘから親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基までの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ２は、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
であるが、
ただし、Ｗが共有結合であってＸが−ＣＯ−であるならば、Ｚは−ＣＯＯＨとは異なる］
の側鎖を有するもの、およびそのＺｎ２＋錯体である。
【００２２】
ある態様では、Ｂ３０アミノ酸残基は除去されており、アシル化インスリンはｄｅｓＢ３０インスリンである。
ある態様では、Ｗは４から１０の炭素原子を有するα−アミノ酸残基であり、更なる態様では、Ｗは、α−Ａｓｐ、β−Ａｓｐ、α−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ、α−ｈＧｌｕおよびδ−ｈＧｌｕからなる群から選択される。
ある態様では、Ｘは、−ＣＯ−である。
ある態様では、Ｚ２は、−ＣＯＯＨである。
【００２３】
側鎖−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２の置換基Ｙは、ｍが６から３２、８から２０、１２から２０、もしくは１２−１６の範囲の整数である式−（ＣＨ２）ｍ−の基であってよい。
ある態様では、Ｙは、１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に６から３２、１０から３２、１２から２０、もしくは１２−１６の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖である。
ある態様では、Ｙは、式−（ＣＨ２）ｖＣ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ−（ｖおよびｗの合計が６から３０、１０から２０、もしくは１２−１６の範囲になるように、ｖおよびｗは整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖である。
更なる態様では、Ｗは、α−Ａｓｐ、β−Ａｓｐ、α−Ｇｌｕ、およびγ−Ｇｌｕからなる群から選択され；Ｘは、−ＣＯ−もしくは−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯであり；Ｙは、ｍが１２−１８の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−であり、かつ、Ｚ２は、−ＣＯＯＨもしくは−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２である。
【００２４】
アシル化インスリン化合物の非限定的な例としては、ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１７ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ−Ｎ−（γ−Ｇｌｕ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−α−Ｇｌｕ−Ｎ−（β−Ａｓｐ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｙ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｓａｒ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；（ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−β−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−α−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｄ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−β−Ｄ−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−β−Ｄ−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−β−Ｄ−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−ＩＤＡ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；およびＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−β−Ａｌａ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンが挙げられる。
ある態様では、側鎖は、少なくとも一つの芳香族基もしくは少なくとも一つの二官能性ＰＥＧ基を含んでよい。以下、略語「ＰＥＧ」は、ポリエチレングリコールに対して用いる。
【００２５】
本発明のある態様では、本発明の組成物に用いられるアシル化インスリンは、式
2011006428.tif 000002
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
Ｘ４は、
・ｎが１、２、３、４、５もしくは６である−（ＣＨ２）ｎ；
・Ｒが、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ；−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；１又２の−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯＯＨ基で置換されたアリーレン；−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾリルであるＮＲ
｛上式中、ｐは１から６の範囲の整数である｝；
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは、
・結合
であり；
Ｗ１は、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルからなる群から選択される一または二の基で置換されていてもよいアリーレンもしくはヘテロアリーレンであるか、あるいはＷ１は結合であり；
ｍは０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｘ５は、
・−Ｏ−；
・
2011006428.tif 000003
｛Ｒは上記のように定義される｝；もしくは
・結合
であり；
Ｙ１は、
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、結合もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−
・Ｒが上記のように定義されるＮＲ；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは
・結合
であり；
Ｑ７は、
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；もしくは
・式
−（ＣＨ２）ｓ−Ｑ８−（Ｃ６Ｈ４）ｖ１−Ｑ９−（ＣＨ２）Ｗ  −Ｑ１０−（Ｃ６Ｈ４）ｖ２−Ｑ１１−（ＣＨ２）ｔ−Ｑ１２−（Ｃ６Ｈ４）ｖ３−Ｑ１３−（ＣＨ２）ｚ−
｛Ｑ８−Ｑ１３は、互いに独立して、Ｏ；Ｓもしくは結合であってよく；ｓ、ｗ、ｔおよびｚは、互いに独立して、ｓ、ｗ、ｔおよびｚの合計が４から２２の範囲になるように、０もしくは１から１０の整数であり、かつ、ｖ１、ｖ２、およびｖ３は、互いに独立して、０もしくは１であってよいが、ただし、Ｗ１が結合であるならば、Ｑ７は式−（ＣＨ２）ｖ４Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ１−（ｖ４およびｗ１の合計が６から２２の範囲になるように、ｖ４およびｗ１は整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖ではない｝
の二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ１は、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＰＯ３Ｈ２；
−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；
−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；
−テトラゾリルもしくは
Ｗ２が、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルから選択される一または二の基で置換されているアリーレンもしくはヘテロアリーレンである−Ｏ−Ｗ２
であるが；
ただし、Ｗ１が結合であり、かつｖ１、ｖ２およびｖ３が全て０であり、かつＱ１−６が全て結合であれば、Ｚ１はＯ−Ｗ２である］
を有するもの、およびその任意のＺｎ２＋錯体である。
【００２６】
本発明のある態様では、Ｗ１はフェニレンである。ある態様では、Ｗ１は、窒素、酸素または硫黄を含んでなる５−７員環ヘテロ環系である。ある態様では、Ｗ１は、少なくとも一つの酸素を含んでなる５員環ヘテロ環系である。
本発明のある態様では、Ｑ７は、ｒが４から２２、８から２０、１２から２０、もしくは１４−１８の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｒ−である。ある態様では、Ｑ８、Ｑ９、Ｑ１２およびＱ１３は、全て結合であり、ｖ２は１であり、ｖ１およびｖ３は０である。ある態様では、Ｑ１０およびＱ１１は酸素である。
【００２７】
本発明のある態様では、Ｘ４およびＹ１は結合であり、Ｘ５は、
2011006428.tif 000004
［上式中、Ｒは、ｐが１−４である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨである］
である。
ある態様では、Ｚ１は、−ＣＯＯＨである。
【００２８】
本発明のある態様では、製薬学的組成物のアシル化インスリンは、
ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、およびＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−（フラニレン）ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛４−カルボキシ−４−［１０−（４−カルボキシ−フェノキシ）−デカノイルアミノ］−ブチリル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン
からなる群から選択される。
【００２９】
本発明のある態様では、製薬学的組成物中に存在するアシル化インスリンは、式
2011006428.tif 000005
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
それぞれのｎは独立して、０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４は、互いに独立して、
・ｓが１−２０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−もしくは（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；もしくは、１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；
・ｔが１から６の整数である−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｔ−；
・Ｒ１およびＲ２が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）１−６ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ１およびＲ２が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑが１−６である−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−；
・Ｒ３およびＲ４が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ３およびＲ４が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑ１が１−６である−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−）−、−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１；もしくは
・結合
であってよいが；
ただし、Ｑ１−Ｑ４は異なっており；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、
・Ｏ；
・結合；もしくは
・
2011006428.tif 000006
｛上式中、
Ｒは、水素もしくはそれぞれのｐが、残りのｐ'と独立して、１から６の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；もしくは−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾール−５−イルである｝
であり；かつ
Ｚは、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＯＳＯ３Ｈ
−ＯＰＯ３Ｈ２
−ＰＯ３Ｈ２もしくは
−テトラゾール−５−イル
である］
を有するもの、およびその任意のＺｎ２＋錯体である。
【００３０】
本発明のある態様では、ｓは、２−１２、２−４もしくは２−３の範囲である。ある態様では、ｓは好ましくは１である。
本発明のある態様では、Ｚは、−ＣＯＯＨである。
【００３１】
本発明のある態様では、製薬学的組成物のアシル化インスリンは、
ＮεＢ２９−（３−［２−｛２−（２−［ω−カルボキシ−ペンタデカノイル−γ−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル(propinoyl)）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−｛２−（２−［ω−カルボキシ−ヘプタデカノイル−γ−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル(propinoyl)）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−γ−グルタミルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（ω−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−α−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（ω−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−γ−グルタミルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［７−カルボキシヘプタノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝プロピルカルバモイル）−プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［９−カルボキシノナノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］エトキシ｝−プロピルカルバモイル）プロピオニル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（９−カルボキシノナノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝−プロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（２−［３−（２−（２−｛２−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ）−エチルカルバモイル］プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロポイオノイル(propionoyl)−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロポイオノイル(propionoyl)−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロポイオノイル(propionoyl)−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルカルバモイル）−プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［ω−カルボキシペンタデカノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（ω−カルボキシウンデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（ω−カルボキシトリデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−ガンマ−γ−Ｄ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル(propioniyl)−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン
からなる群から選択される。
【００３２】
親インスリン分子は、ヒトインスリンもしくはそのアナログである。ヒトインスリン非限定的なアナログとしては、ｄｅｓＢ３０アナログ；位置Ｂ３０のアミノ酸残基がＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基は、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓ以外の任意のコードされ得るアミノ酸であるインスリンアナログ；位置Ａ２１のアミノ酸残基がＡｓｎであるインスリンアナログおよび位置Ｂ３のアミノ酸残基がＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基がＧｌｕであるインスリンアナログが挙げられる。
【００３３】
親インスリンアナログの別の群では、位置Ｂ２８のアミノ酸残基はＡｓｐである。親インスリンアナログのこの群の具体的な例としては、欧州特許第２１４８２６号に開示されたＡｓｐＢ２８ヒトインスリンが挙げられる。
親インスリンアナログの別の群では、位置Ｂ２８のアミノ酸残基はＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基はＰｒｏである。親インスリンアナログのこの群の具体的な例としては、ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンが挙げられる。
【００３４】
親インスリンアナログの別の群では、位置Ｂ３０のアミノ酸残基はＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基は、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓ以外の任意のコードされ得るアミノ酸である。例としては、位置Ｂ２９のアミノ酸残基がＴｈｒであり、位置Ｂ３０のアミノ酸残基がＬｙｓであるインスリンアナログが上げられる。親インスリンアナログのこの群の具体的な例としては、ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０ヒトインスリンが挙げられる。
親インスリンアナログの別の群では、位置Ｂ３のアミノ酸残基はＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基はＧｌｕである。親インスリンアナログのこの群の具体的な例としては、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリンが挙げられる。
【００３５】
本発明に係る製薬学的組成物は、治療の必要のある患者における１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療のための、アシル化インスリンの治療的有効量を製薬学的に許容される担体と共に含むであろう。
本発明の更なる態様では、治療の必要のある患者における１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療のための、上記定義のアシル化インスリン誘導体の治療的有効量を、インスリンまたは作用が急速に発現するインスリンアナログと混合して、製薬学的に許容される担体および／または添加物と共に含む製薬学的組成物が提供される。
【００３６】
このように、製薬学的組成物は、二つのインスリン構成成分の混合物を含んでいてもよい：遅延性のインスリン作用を有するもの、基礎インスリン、および作用が急速に発現する別のもの、ボーラスインスリン。そのような混合物の例としては、国際公開２００５／０１２３４７号に開示されるＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリンに対応するＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと混合した、インスリンアスパルト、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリンが挙げられる。そのような混合物の別の例としては、ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと混合した、Ｌｉｓｐｒｏ、ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンが挙げられる。そのような混合物の第三の例としては、ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと混合した、グルリシン、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンが挙げられる。
【００３７】
本発明のある態様では、少なくとも８５％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する。
本発明のある態様では、少なくとも９０、９２、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する。
アシル化インスリン誘導体と即効型インスリンアナログとは、約９０％／１０％；約７５％／２５％、約７０％／３０％  約５０％／５０％、約２５％／７５％、約３０％／７０％もしくは約１０％／９０％のモル比で混合することができる。
【００３８】
ある態様では、本発明の製薬学的組成物は、約６．５から約８．５のｐＨを有するであろう。別の態様では、ｐＨは約７．０から約８．２であるか、ｐＨは約７．２から約８．０もしくは約７．４から約８．０であるか、あるいは、ｐＨは、約７．４から約７．８である。
【００３９】
本発明は、さらに、６分子のアシル化インスリン毎に約４より多い亜鉛原子を組成物に添加する、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物を製造するための方法を含む。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．３より多い亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５より多い亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５より多い亜鉛原子を組成物に添加する。更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５より多い亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約６．５より多い亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約７．０より多い亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約７．５より多い亜鉛原子を組成物に添加する。
【００４０】
本発明のある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子を組成物に添加することを含む。
本発明のある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１２の亜鉛原子を組成物に添加することを含む。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を組成物に添加する。
更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約６から約１０．５の亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約６．５から約１０の亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約７から約９の亜鉛原子を組成物に添加する。
【００４１】
本発明のある態様では、本方法は、保存料の添加前に、亜鉛を組成物に添加することを含む。本発明の更なる態様では、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に１より多い亜鉛原子であるか、あるいは、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に２より多い亜鉛原子であるか、あるいは、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に３より多い亜鉛原子であるか、あるいは、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子であるか、あるいは、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に５より多い亜鉛原子である。
【００４２】
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加するか、あるいは、さらにより好ましくは、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する。更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約６から約１０．５の亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約６．５から約１０の亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約７から約９の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する。
【００４３】
本発明のある態様では、本方法は、保存料の添加後に、亜鉛を組成物に添加することを含む。本発明のある態様では、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも０．５の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約２より多い亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約３より多い亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約４より多い亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
【００４４】
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約０．５から約１２、約１から約１１．４、約１．５から約１１、約２から約１０．５、約３から約１０、もしくは約４から約９の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
【００４５】
更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約６から約１０．５、もしくは６分子のアシル化インスリン毎に約６．５から約１０、もしくは６分子のアシル化インスリン毎に約７から約９の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
本発明のある態様では、本方法は、保存料の添加前に亜鉛の一部を添加し、保存料の添加後に亜鉛の一部を添加することを含む。
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも０．５の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも０．５の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。
【００４６】
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２または３の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも４、５、６、７、８、９、１０もしくは１１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること含む。
【００４７】
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２または３の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１０の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること含む。
【００４８】
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２または３の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に最大約９の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。
本発明のある態様では、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子であり、保存料の添加後に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子である。ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも４、５、６、７、８もしくは９の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。
【００４９】
本発明のある態様では、添加する保存料は、フェノールおよび／またはｍ−クレゾールである。
本発明のある態様では、本方法は、一工程で、製薬学的組成物に亜鉛原子の総量を添加することを含む。
本発明のある態様では、本方法は、二以上の工程で、製薬学的組成物に亜鉛原子を添加することを含む。例えば、亜鉛は、それぞれの工程が最大１Ｚｎ／６ｉｎｓのうちの少量の添加を含む１、２、３、４または５工程で、組成物に添加されてよい。亜鉛は、それぞれの工程が２Ｚｎ／６ｉｎｓ、３Ｚｎ／６ｉｎｓ、４Ｚｎ／６ｉｎｓ、５Ｚｎ／６ｉｎｓもしくは６Ｚｎ／６ｉｎｓのうちの少量の添加を含む１、２、３、４または５工程で、組成物に添加されてよい。
【００５０】
本発明のある態様では、本方法は、製薬学的組成物に界面活性剤を添加することを含む。界面活性剤は、製薬学的組成物の重量に基づいて０．０００５−０．０１％の量で製薬学的組成部中に混合し得る。ある態様では、界面活性剤は、組成物の重量に基づいて０．０００５−０．００７％の量で製薬学的組成物中に混合し得る。界面活性剤の例としては、ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ２０が挙げられ、それは組成物の重量に基づいて０．００１−０．００３％の量で製薬学的組成物中に混合し得る。別の例としては、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８が挙げられ、それは組成物の重量に基づいて０．００２−０．００６％の量で製薬学的組成物中に混合し得る。
【００５１】
本発明の更なる態様では、本方法は、インスリンが、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２
［上式中、
Ｗは、
・そのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する、側鎖中にカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・Ｘから親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基までの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ２は、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
であるが、
ただし、Ｗが共有結合であってＸが−ＣＯ−であるならば、Ｚは−ＣＯＯＨとは異なる］
の側鎖を有するアシル化インスリンを含む。
【００５２】
本発明のある態様では、アシル化インスリンは、ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１７ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ−Ｎ−（γ−Ｇｌｕ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−α−Ｇｌｕ−Ｎ−（β−Ａｓｐ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｙ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｓａｒ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；（ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−β−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−α−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｄ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−β−Ｄ−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−β−Ｄ−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−β−Ｄ−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−ＩＤＡ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；およびＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−β−Ａｌａ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択されるもの、およびそのＺｎ２＋錯体である。
【００５３】
本発明のある態様では、製薬学的組成物を調整するための方法に用いられるアシル化インスリンは、式
2011006428.tif 000007
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
Ｘ４は、
・ｎが１、２、３、４、５もしくは６である−（ＣＨ２）ｎ；
・Ｒが、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ；−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；１又２の−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯＯＨ基で置換されたアリーレン；−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾリルであるＮＲ
｛上式中、ｐは１から６の範囲の整数である｝；
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは、
・結合
であり；
Ｗ１は、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルからなる群から選択される一または二の基で置換されていてもよいアリーレンもしくはヘテロアリーレンであるか、あるいはＷ１は結合であり；
ｍは０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｘ５は、
・−Ｏ−；
・
2011006428.tif 000008
｛Ｒは上記のように定義される｝；もしくは
・結合
であり；
Ｙ１は、
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、結合もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−
・Ｒが上記のように定義されるＮＲ；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは
・結合
であり；
Ｑ７は、
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；もしくは
・式
−（ＣＨ２）ｓ−Ｑ８−（Ｃ６Ｈ４）ｖ１−Ｑ９−（ＣＨ２）Ｗ  −Ｑ１０−（Ｃ６Ｈ４）ｖ２−Ｑ１１−（ＣＨ２）ｔ−Ｑ１２−（Ｃ６Ｈ４）ｖ３−Ｑ１３−（ＣＨ２）ｚ−
｛Ｑ８−Ｑ１３は、互いに独立して、Ｏ；Ｓもしくは結合であってよく；ｓ、ｗ、ｔおよびｚは、互いに独立して、ｓ、ｗ、ｔおよびｚの合計が４から２２の範囲になるように、０もしくは１から１０の整数であり、かつ、ｖ１、ｖ２、およびｖ３は、互いに独立して、０もしくは１であってよいが、ただし、Ｗ１が結合であるならば、Ｑ７は式−（ＣＨ２）ｖ４Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ１−（ｖ４およびｗ１の合計が６から２２の範囲になるように、ｖ４およびｗ１は整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖ではない｝
の二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ１は、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＰＯ３Ｈ２；
Ｏ−ＳＯ３Ｈ；
Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；
−テトラゾリルもしくは
Ｗ２が、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルから選択される一または二の基で置換されているアリーレンもしくはヘテロアリーレンである−Ｏ−Ｗ２
であるが；
ただし、Ｗ１が結合であり、かつｖ１、ｖ２およびｖ３が全て０であり、かつＱ８−１３が全て結合であれば、Ｚ１はＯ−Ｗ２である］
を有するもの、およびその任意のＺｎ２＋錯体である。
【００５４】
本発明のある態様では、Ｗ１はフェニレンである。ある態様では、Ｗ１は、窒素、酸素または硫黄を含んでなる５−７員環ヘテロ環系である。ある態様では、Ｗ１は、少なくとも一つの酸素を含んでなる５員環ヘテロ環系である。
本発明のある態様では、Ｑ７は、ｒが４から２２、８から２０、１２から２０、もしくは１４−１８の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｒ−である。ある態様では、Ｑ８、Ｑ９、Ｑ１２およびＱ１３は、全て結合であり、ｖ２は１であり、ｖ１およびｖ３は０である。ある態様では、Ｑ１０およびＱ１１は酸素である。
【００５５】
本発明のある態様では、Ｘ４およびＹ１は結合であり、Ｘ５は、
2011006428.tif 000009
［上式中、Ｒは、ｐが１−４である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨである］
である。
ある態様では、Ｚ１は、−ＣＯＯＨである。
【００５６】
本発明のある態様では、本方法で用いられるアシル化インスリンは、
ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、およびＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−（フラニレン）ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛４−カルボキシ−４−［１０−（４−カルボキシ−フェノキシ）−デカノイルアミノ］−ブチリル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン
からなる群から選択される。
【００５７】
本発明のある態様では、本方法で用いられるアシル化インスリンは、式
2011006428.tif 000010
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
それぞれのｎは独立して、０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４は、互いに独立して、
・ｓが１−２０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−もしくは（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；もしくは、１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；
・ｔが１から６の整数である−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｔ−；
・Ｒ１およびＲ２が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）１−６ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ１およびＲ２が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑが１−６である−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−；
・Ｒ３およびＲ４が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ３およびＲ４が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑ１が１−６である−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−）−、−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１；もしくは
・結合
であってよいが；
ただし、Ｑ１−Ｑ４は異なっており；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、
・Ｏ；
・結合；もしくは
・
2011006428.tif 000011
｛上式中、
Ｒは、水素もしくはそれぞれのｐが、残りのｐ'と独立して、１から６の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；もしくは−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾール−５−イルである｝
であり；かつ
Ｚは、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＯＳＯ３Ｈ
−ＯＰＯ３Ｈ２
−ＰＯ３Ｈ２もしくは
−テトラゾール−５−イル
である］
を有するもの、およびその任意のＺｎ２＋錯体である。
【００５８】
本発明のある態様では、ｓは、２−１２、２−４もしくは２−３の範囲の整数である。ある態様では、ｓは好ましくは１である。
本発明のある態様では、Ｚは、−ＣＯＯＨである。
【００５９】
本発明のある態様では、製薬学的組成物を調整するための方法で用いられるアシル化インスリンは、ＮεＢ２９−（３−［２−｛２−（２−［ω−カルボキシ−ペンタデカノイル−γ−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル（ｐｒｏｐｉｎｏｙｌ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−｛２−（２−［ω−カルボキシ−ヘプタデカノイル−γ−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル（ｐｒｏｐｉｎｏｙｌ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−γ−グルタミルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（ω−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−α−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（ω−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−γ−グルタミルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［７−カルボキシヘプタノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝プロピルカルバモイル）−プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［９−カルボキシノナノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］エトキシ｝−プロピルカルバモイル）プロピオニル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（９−カルボキシノナノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝−プロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（２−［３−（２−（２−｛２−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ）−エチルカルバモイル］プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−��トキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルカルバモイル）−プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［ω−カルボキシペンタデカノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（ω−カルボキシウンデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（ω−カルボキシトリデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−ガンマ−γ−Ｄ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル（ｐｒｏｐｉｏｎｉｙｌ）−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される。
【００６０】
本発明のある態様では、本方法は、即効型インスリンを組成物に添加することを含む。即効型インスリンは、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンおよびＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンもしくはそれらの混合物である。
【００６１】
本発明のある態様では、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物は、糖尿病の治療のために用いられる。
本発明のある態様では、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物は、糖尿病の治療のための医薬の製造のために用いられる。
ある態様では、本発明は、製薬学的に許容される担体および／または製薬学的に許容される添加物を有する本発明の製薬学的組成物に関し、その組成物は、治療を必要とする患者における１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療のために提供され得る。
【００６２】
本発明のある態様では、治療の必要のある患者において、１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態を治療するための方法であって、製薬学的に許容される担体および／または添加物を含む製薬学的組成物の治療的有効量を患者に投与することを含む方法が提供される。
本発明のある態様では、１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療において用いるための製薬学的組成物の製造のための方法が提供される。
【００６３】
本発明のある態様では、治療の必要のある患者において、１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態を治療するための製薬学的組成物が提供される。
本発明のある態様では、治療の必要のある患者において、１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態を治療するための方法であって、本発明に係る製薬学的組成物の治療的有効量を患者に投与することを含む方法が提供される。
本発明のある態様では、１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療において用いるための製薬学的組成物の製造のための方法が提供される。
【００６４】
本明細書で定義されるアシル化インスリンを含む製薬学的組成物は、ＯＡＤもしくはＧＬＰ−１と同時または連続して投与してよい。ファクターは、双方の化合物を含む単回投与形態、あるいは、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物と、第二単位投与形態としてのＯＡＤを含む製薬学的組成物を含む製薬学的組成物の製剤を含む部分キット形態で提供されてよい。
第一または第二または第三などの単位投与がこの明細書の至るところで記述されるとき、これは投与の好ましい順序を示すものではなく、単に便宜上の目的のためになされるものである。
【００６５】
アシル化インスリンおよびＯＡＤまたはＧＬＰ−１の製剤を含む製薬学的組成物の製剤を「同時に」投与するとは、単回投与形態での化合物の投与、もしくは、第一の薬剤の投与に続く、１５分、１０、５または２分以下の時間間隔での第二の薬剤の投与を意味する。どちらのファクターが最初に投与されてもよい。
「連続的に」投与するとは、第一の薬剤の投与に続く、１５分以上の時間間隔での第二の薬剤の投与を意味する。二つの単位投与形態のどちらが最初に投与されてもよい。好ましくは、双方の製品は、同じ静脈経路を通して注射する。
【００６６】
本発明の更なる態様では、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物は、一日一回、ＯＡＤまたはＧＬＰ−１と共に、同時または連続して投与される。より好ましい態様では、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物は、さらに、即効型インスリンを含み、ＯＡＤまたはＧＬＰ−１と共に一日一回投与される。本発明のある態様では、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物は、独立型の集中治療で一日五回まで与えられ得る。さらにより好ましい態様では、製薬学的組成物は、さらに即効型インスリンを含み、集中治療は、一日五回まで与えられる独立型の治療であり得る。
【００６７】
本発明は、以下の項に要約されるであろう：
１．
アシル化インスリンを含み、６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子をさらに含む可溶性製薬学的組成物。
２．
６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子を含む項１に記載の製薬学的組成物。
【００６８】
３．
６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１２の亜鉛原子を含む項１または２に記載の製薬学的組成物。
４．
６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を含む項１ないし３の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
５．
少なくとも８５％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する項１ないし４の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００６９】
６．
少なくとも９２％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する項１ないし５の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
７．
少なくとも９５％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する項１ないし６の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
８．
少なくとも９７％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する項１ないし７の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００７０】
９．
組成物が界面活性剤を含む項１ないし８の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１０．
アシル化インスリンが、親インスリン部分のＢ鎖中のＬｙｓ残基のε−アミノ基でアシル化されたインスリンである項１ないし９の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１１．
アシル基が、少なくとも一つの遊離カルボン酸基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含んでなる項１ないし１０の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００７１】
１２．
アシル基が、４から３２の炭素原子を有する二カルボン酸性脂肪酸から誘導される項１または１０−１１の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１３．
アシル基が、アミド結合を介したリンカー基を介して、インスリン分子と結合している項１または１０−１２の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１４．
リンカー基が、少なくとも一つの遊離カルボキシル基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含んでなる項１または１３に記載の製薬学的組成物。
【００７２】
１５．
インスリン分子が、親インスリン部分のＢ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはＢ鎖中のＬｙｓ残基のε−アミノ基の何れか一方とアミド結合を介して結合している側鎖であって、少なくとも一つの遊離カルボン酸基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含んでなる側鎖と、炭素鎖に約４から約３２の炭素原子を有する脂肪酸部分と；あり得る、側鎖中の個々の構成成分をアミド結合を介して一緒に連結する一または複数のリンカーとを有する項１ないし１４の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１６．
側鎖が少なくとも一つの芳香族基を含んでなる項１−１５に記載の製薬学的組成物。
１７．
側鎖が少なくとも一つの二官能性ＰＥＧ基を含んでなる項１−１５に記載の製薬学的組成物。
【００７３】
１８．
インスリン分子が、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２
［上式中、
Ｗは、
・そのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する、側鎖中にカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・Ｘから親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基までの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ２は、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
であるが、
ただし、Ｗが共有結合であってＸが−ＣＯ−であるならば、Ｚは−ＣＯＯＨとは異なる］
の側鎖を有するもの、およびそのＺｎ２＋錯体である、項１−１５の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１９．
Ｚ２が−ＣＯＯＨである項１−１５および１８の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００７４】
２０．
アシル化インスリンが、ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１７ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ−Ｎ−（γ−Ｇｌｕ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−α−Ｇｌｕ−Ｎ−（β−Ａｓｐ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｙ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｓａｒ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；（ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−β−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−α−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｄ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−β−Ｄ−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−β−Ｄ−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−β−Ｄ−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−ＩＤＡ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；およびＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−β−Ａｌａ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される項１−１５および１８−１９の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００７５】
２１．
アシル化インスリンが、式
2011006428.tif 000012
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
Ｘ４は、
・ｎが１、２、３、４、５もしくは６である−（ＣＨ２）ｎ；
・Ｒが、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ；−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；１又２の−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯＯＨ基で置換されたアリーレン；−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾリルであるＮＲ
｛上式中、ｐは１から６の範囲の整数である｝；
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは、
・結合
であり；
Ｗ１は、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルからなる群から選択される一または二の基で置換されていてもよいアリーレンもしくはヘテロアリーレンであるか、あるいはＷ１は結合であり；
ｍは０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｘ５は、
・−Ｏ−；
・
2011006428.tif 000013
｛Ｒは上記のように定義される｝；もしくは
・結合
であり；
Ｙ１は、
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、結合もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−
・Ｒが上記のように定義されるＮＲ；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは
・結合
であり；
Ｑ７は、
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；もしくは
・式
−（ＣＨ２）ｓ−Ｑ８−（Ｃ６Ｈ４）ｖ１−Ｑ９−（ＣＨ２）Ｗ  −Ｑ１０−（Ｃ６Ｈ４）ｖ２−Ｑ１１−（ＣＨ２）ｔ−Ｑ１２−（Ｃ６Ｈ４）ｖ３−Ｑ１３−（ＣＨ２）ｚ−
｛Ｑ８−Ｑ１３は、互いに独立して、Ｏ；Ｓもしくは結合であってよく；ｓ、ｗ、ｔおよびｚは、互いに独立して、ｓ、ｗ、ｔおよびｚの合計が４から２２の範囲になるように、０もしくは１から１０の整数であり、かつ、ｖ１、ｖ２、およびｖ３は、互いに独立して、０もしくは１であってよいが、ただし、Ｗ１が結合であるならば、Ｑ７は式−（ＣＨ２）ｖ４Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ１−（ｖ４およびｗ１の合計が６から２２の範囲になるように、ｖ４およびｗ１は整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖ではない｝
の二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ１は、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＰＯ３Ｈ２；
−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；
−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；
−テトラゾリルもしくは
Ｗ２が、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルから選択される一または二の基で置換されているアリーレンもしくはヘテロアリーレンである−Ｏ−Ｗ２
であるが；
ただし、Ｗ１が結合であり、かつｖ１、ｖ２およびｖ３が全て０であり、かつＱ８−１３が全て結合であれば、Ｚ１はＯ−Ｗ２である］
を有するもの、およびその任意のＺｎ２＋錯体である、項１−１６に記載の製薬学的組成物。
【００７６】
２２．
Ｗ１がフェニレンである項１または２１に記載の製薬学的組成物。
２３．
Ｗ１が、窒素、酸素または硫黄を含んでなる５−７員環ヘテロ環系である項１または２１に記載の製薬学的組成物。
２４．
Ｗ１が、少なくとも一つの酸素を含んでなる５−７員環ヘテロ環系である項１、２１および２３に記載の製薬学的組成物。
【００７７】
２５．
本発明のある態様では、Ｑ７は、ｒが４から２２、８から２０、１２から２０、もしくは１４−１８の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｒ−である項２１−２４に記載の製薬学的組成物。
２６．
Ｑ８、Ｑ９、Ｑ１２およびＱ１３は、全て結合であり、ｖ２は１であり、ｖ１およびｖ３は０である項２１−２４に記載の製薬学的組成物。
２７．
Ｑ１０およびＱ１１は酸素である項２６に記載の製薬学的組成物。
【００７８】
２８．
Ｘ４およびＹ１は結合であり、Ｘ５は、
2011006428.tif 000014
［上式中、Ｒは、ｐが１−４である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨである］
である項２１−２７に記載の製薬学的組成物。
２９．
Ｚ１は、−ＣＯＯＨである項２１−２８に記載の製薬学的組成物。
【００７９】
３０．
アシル化インスリンが、式
2011006428.tif 000015
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
それぞれのｎは独立して、０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４は、互いに独立して、
・ｓが１−２０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−もしくは（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；もしくは、１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；
・ｔが１から６の整数である−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｔ−；
・Ｒ１およびＲ２が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）１−６ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ１およびＲ２が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑが１−６である−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−；
・Ｒ３およびＲ４が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ３およびＲ４が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑ１が１−６である−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−）−、−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１；もしくは
・結合
であってよいが；
ただし、Ｑ１−Ｑ４は異なっており；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、
・Ｏ；
・結合；もしくは
・
2011006428.tif 000016
｛上式中、
Ｒは、水素もしくはそれぞれのｐが、残りのｐ'と独立して、１から６の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；もしくは−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾール−５−イルである｝
であり；かつ
Ｚは、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＯＳＯ３Ｈ
−ＯＰＯ３Ｈ２
−ＰＯ３Ｈ２もしくは
−テトラゾール−５−イル
である］
を有するもの、およびその任意のＺｎ２＋錯体である、項１−１５および１７の製薬学的組成物。
【００８０】
３１．
ｓが、２−１２、２−４もしくは２−３の範囲の整数である項１または３０に記載の製薬学的組成物。
３２．
ｓが好ましくは１である項１または３０に記載の製薬学的組成物。
３３．
Ｚが−ＣＯＯＨである項３０−３２に記載の製薬学的組成物。
３４．
親インスリンがｄｅｓＢ３０ヒトインスリンアナログである項１ないし３３の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００８１】
３５．
親インスリンが、ヒトインスリン；ｄｅｓＢ１ヒトインスリン；ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＧｌｙＡ２１ヒトインスリン；ＧｌｙＡ２１ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン；ブタインスリン；ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン；ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２ヒトインスリン；およびＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリンもしくはＡｓｐＢ２８ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される項１ないし３４の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００８２】
３６．
アシル化インスリンが、
ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、およびＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−（フラニレン）ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛４−カルボキシ−４−［１０−（４−カルボキシ−フェノキシ）−デカノイルアミノ］−ブチリル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン
からなる群から選択される項１−１６、２１−２９および３４−３５に記載の製薬学的組成物。
【００８３】
３７．
アシル化インスリンが、ＮεＢ２９−（３−［２−｛２−（２−［ω−カルボキシ−ペンタデカノイル−γ−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル（ｐｒｏｐｉｎｏｙｌ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−｛２−（２−［ω−カルボキシ−ヘプタデカノイル−γ−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル（ｐｒｏｐｉｎｏｙｌ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−γ−グルタミルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（ω−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−α−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（ω−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−γ−グルタミルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［７−カルボキシヘプタノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝プロピルカルバモイル）−プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［９−カルボキシノナノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］エトキシ｝−プロピルカルバモイル）プロピオニル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（９−カルボキシノナノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝−プロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（２−［３−（２−（２−｛２−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ）−エチルカルバモイル］プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏ��ｏｙｌ）−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルカルバモイル）−プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［ω−カルボキシペンタデカノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（ω−カルボキシウンデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（ω−カルボキシトリデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−ガンマ−γ−Ｄ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル（ｐｒｏｐｉｏｎｉｙｌ）−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される項１−１５、１７および３０−３５に記載の製薬学的組成物。
【００８４】
３８．
約６．５から８．５のｐＨを有する項１−３７の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
３９．
即効型インスリンをさらに含む項１−３８の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
４０．
少なくとも８５％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する項１および３９に記載の製薬学的組成物。
【００８５】
４１．
少なくとも９２％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する項１および３９−４０に記載の製薬学的組成物。
４２．
少なくとも９５％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する項１および３９−４１に記載の製薬学的組成物。
【００８６】
４３．
少なくとも９７％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する項１および３９−４２に記載の製薬学的組成物。
４４．
少なくとも９９％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する項１および３９−４３に記載の製薬学的組成物。
【００８７】
４５．
即効型インスリンが、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリンおよび／またはＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンである項３９−４４に記載の製薬学的組成物。
４６．
６分子のアシル化インスリン毎に約４より多い亜鉛原子を組成物に添加する、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物を製造するための方法。
４７．
６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子を組成物に添加する項４６に記載の方法。
【００８８】
４８．
６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１２の亜鉛原子を組成物に添加する項４６−４７の何れか一項に記載の方法。
４９．
保存料の添加前に、亜鉛を組成物に添加する項４６−４８に記載の方法。
５０．
６分子のアシル化インスリン毎に１より多い亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する項４６−４９の何れか一項に記載の方法。
【００８９】
５１．
６分子のアシル化インスリン毎に２より多い亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する項４６−５０の何れか一項に記載の方法。
５２．
６分子のアシル化インスリン毎に３より多い亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する項４６−５１の何れか一項に記載の方法。
５３．
６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する項４６−５２の何れか一項に記載の方法。
【００９０】
５４．
６分子のアシル化インスリン毎に５より多い亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する項４６−５３の何れか一項に記載の方法。
５５．
保存料の添加後に、亜鉛を組成物に添加する項４６−４８に記載の方法。
５６．
６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも０．５の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する項４６−４８および５５に記載の方法。
【００９１】
５７．
６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する項４６−４８および５５−５６の何れか一項に記載の方法。
５８．
保存料の添加前に亜鉛の一部を添加し、保存料の添加後に亜鉛の一部を添加する項４６ないし５７の何れか一項に記載の方法。
５９．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子であり、保存料の添加後に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子である項４６ないし５８の何れか一項に記載の方法。
【００９２】
６０．
保存料がフェノールおよび／またはｍ−クレゾールである項４６ないし５９の何れか一項に記載の方法。
６１．
界面活性剤を製薬学的組成物と混合する項４６ないし６０の何れか一項に記載の方法。
【００９３】
６２．
アシル化インスリンが、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２
［上式中、
Ｗは、
・そのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する、側鎖中にカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・Ｘから親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基までの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ２は、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
であるが、
ただし、Ｗが共有結合であってＸが−ＣＯ−であるならば、Ｚは−ＣＯＯＨとは異なる］
の側鎖を有するもの、およびそのＺｎ２＋錯体である、項４６ないし６１の何れか一項に記載の方法。
【００９４】
６３．
アシル化インスリンが、ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１７ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ−Ｎ−（γ−Ｇｌｕ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−α−Ｇｌｕ−Ｎ−（β−Ａｓｐ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｙ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｓａｒ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；（ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−β−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−α−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｄ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−β−Ｄ−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−β−Ｄ−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−β−Ｄ−Ａｓｐ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−ＩＤＡ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；およびＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−β−Ａｌａ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される項４６ないし６２の何れか一項に記載の方法。
【００９５】
６４．
アシル化インスリンが、式
2011006428.tif 000017
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
Ｘ４は、
・ｎが１、２、３、４、５もしくは６である−（ＣＨ２）ｎ；
・Ｒが、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ；−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；１又２の−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯＯＨ基で置換されたアリーレン；−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾリルであるＮＲ
｛上式中、ｐは１から６の範囲の整数である｝；
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは、
・結合
であり；
Ｗ１は、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルからなる群から選択される一または二の基で置換されていてもよいアリーレンもしくはヘテロアリーレンであるか、あるいはＷ１は結合であり；
ｍは０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｘ５は、
・−Ｏ−；
・
2011006428.tif 000018
｛Ｒは上記のように定義される｝；もしくは
・結合
であり；
Ｙ１は、
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、結合もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−
・Ｒが上記のように定義されるＮＲ；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは
・結合
であり；
Ｑ７は、
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；もしくは
・式
−（ＣＨ２）ｓ−Ｑ８−（Ｃ６Ｈ４）ｖ１−Ｑ９−（ＣＨ２）Ｗ  −Ｑ１０−（Ｃ６Ｈ４）ｖ２−Ｑ１１−（ＣＨ２）ｔ−Ｑ１２−（Ｃ６Ｈ４）ｖ３−Ｑ１３−（ＣＨ２）ｚ−
｛Ｑ８−Ｑ１３は、互いに独立して、Ｏ；Ｓもしくは結合であってよく；ｓ、ｗ、ｔおよびｚは、互いに独立して、ｓ、ｗ、ｔおよびｚの合計が４から２２の範囲になるように、０もしくは１から１０の整数であり、かつ、ｖ１、ｖ２、およびｖ３は、互いに独立して、０もしくは１であってよいが、ただし、Ｗ１が結合であるならば、Ｑ７は式−（ＣＨ２）ｖ４Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ１−（ｖ４およびｗ１の合計が６から２２の範囲になるように、ｖ４およびｗ１は整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖ではない｝
の二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ１は、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＰＯ３Ｈ２；
Ｏ−ＳＯ３Ｈ；
Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；
−テトラゾリルもしくは
Ｗ２が、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルから選択される一または二の基で置換されているアリーレンもしくはヘテロアリーレンである−Ｏ−Ｗ２
であるが；
ただし、Ｗ１が結合であり、かつｖ１、ｖ２およびｖ３が全て０であり、かつＱ８−１３が全て結合であれば、Ｚ１はＯ−Ｗ２である］
を有するもの、およびその任意のＺｎ２＋錯体である、項４６ないし６１の何れか一項に記載の方法。
【００９６】
６５．
Ｗ１がフェニレンである項４６および６４に記載の方法。
６６．
Ｗ１が、窒素、酸素または硫黄を含んでなる５−７員環ヘテロ環系である項４６および６４に記載の方法。
６７．
Ｗ１が、少なくとも一つの酸素を含んでなる５員環ヘテロ環系である項６６に記載の方法。
【００９７】
６８．
本発明のある態様では、Ｑ７は、ｒが４から２２、８から２０、１２から２０、もしくは１４−１８の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｒ−である項４６および６４−６７に記載の方法。
６９．
Ｑ８、Ｑ９、Ｑ１２およびＱ１３は、全て結合であり、ｖ２は１であり、ｖ１およびｖ３は０である項４６および６４−６８に記載の方法。
７０．
Ｑ１０およびＱ１１は酸素である項６９に記載の方法。
【００９８】
７１．
Ｘ４およびＹ１は結合であり、Ｘ５は、
2011006428.tif 000019
［上式中、Ｒは、ｐが１−４である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨである］
である項６４に記載の方法。
７２．
Ｚ１が−ＣＯＯＨである項６４−７１に記載の方法。
【００９９】
７３．
アシル化インスリンが、式
2011006428.tif 000020
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
それぞれのｎは独立して、０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４は、互いに独立して、
・ｓが１−２０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−もしくは（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；もしくは、１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；
・ｔが１から６の整数である−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｔ−；
・Ｒ１およびＲ２が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）１−６ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ１およびＲ２が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑが１−６である−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−；
・Ｒ３およびＲ４が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ３およびＲ４が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑ１が１−６である−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−）−、−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１；もしくは
・結合
であってよいが；
ただし、Ｑ１−Ｑ４は異なっており；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、
・Ｏ；
・結合；もしくは
・
2011006428.tif 000021
｛上式中、
Ｒは、水素もしくはそれぞれのｐが、残りのｐ'と独立して、１から６の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；もしくは−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾール−５−イルである｝
であり；かつ
Ｚは、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＯＳＯ３Ｈ
−ＯＰＯ３Ｈ２
−ＰＯ３Ｈ２もしくは
−テトラゾール−５−イル
である］
を有するもの、およびその任意のＺｎ２＋錯体である、項４６−６１に記載の方法。
【０１００】
７４．
ｓが、２−１２、２−４もしくは２−３の範囲である項７３に記載の方法。
７５．
ｓが好ましくは１である項７３に記載の方法。
７６．
Ｚが−ＣＯＯＨである項７３−７５に記載の方法。
７７．
親インスリンがｄｅｓＢ３０ヒトインスリンアナログである項４６ないし７６の何れか一項に記載の方法。
【０１０１】
７８．
親インスリンが、ヒトインスリン；ｄｅｓＢ１ヒトインスリン；ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＧｌｙＡ２１ヒトインスリン；ＧｌｙＡ２１ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン；ブタインスリン；ＬｙｓＢ２８  ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン；ＧｌｙＡ２１  ＡｒｇＢ３１  ＡｒｇＢ３２ヒトインスリン；およびＬｙｓＢ３  ＧｌｕＢ２９ヒトインスリンもしくはＡｓｐＢ２８  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される項４６ないし７７の何れか一項に記載の方法。
【０１０２】
７９．
アシル化インスリンが、
ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、およびＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−（フラニレン）ＣＯ］ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛４−カルボキシ−４−［１０−（４−カルボキシ−フェノキシ）−デカノイルアミノ］−ブチリル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン
からなる群から選択される項４６−６１、６４−７２または７７−７８に記載の方法。
【０１０３】
８０．
アシル化インスリンが、ＮεＢ２９−（３−［２−｛２−（２−［ω−カルボキシ−ペンタデカノイル−γ−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル（ｐｒｏｐｉｎｏｙｌ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−｛２−（２−［ω−カルボキシ−ヘプタデカノイル−γ−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル（ｐｒｏｐｉｎｏｙｌ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−γ−グルタミルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（ω−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−α−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（ω−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−γ−グルタミルｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［７−カルボキシヘプタノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝プロピルカルバモイル）−プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［９−カルボキシノナノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］エトキシ｝−プロピルカルバモイル）プロピオニル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（９−カルボキシノナノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝−プロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（２−［３−（２−（２−｛２−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ）−エチルカルバモイル］プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏ��ｏｙｌ）−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルカルバモイル）−プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［ω−カルボキシペンタデカノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（ω−カルボキシウンデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（ω−カルボキシトリデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−γ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−ガンマ−γ−Ｄ−グルタミル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル（ｐｒｏｐｉｏｎｉｙｌ）−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（ω−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−γ−グルタミル｝ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンからなる群から選択される項４６−６１または７３−７８の何れか一項に記載の方法。
【０１０４】
８１．
即効型インスリンを組成物と混合する項４６ないし８０の何れか一項に記載の方法。
８２．
即効型インスリンが、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリンおよび／またはＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンである項４６および８０に記載の方法。
８３．
糖尿病の治療のための医薬の製造のための、項１−４５の何れか一項に記載の組成物の使用。
【０１０５】
８４．
項１−４５に記載の製薬学的組成物の治療的有効量を製薬学的に許容される担体と共に含む、治療の必要がある患者における糖尿病の治療のための製薬学的組成物。
８５．
項１−４５に記載の製薬学的組成物の治療的有効量を製薬学的に許容される担体と共に患者に投与することを含む、治療の必要がある患者における糖尿病の治療方法。
８６．
糖尿病の肺性治療のための、項８５に記載の方法。
【０１０６】
８７．
１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療において使用するための製薬学的組成物の製造のための、項１−４５に記載の組成物の使用。
８８．
実施例に記載される組成物。
本発明の別の態様は、以下に要約される。
９１．
アシル化インスリンを含み、６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子をさらに含む可溶性製薬学的組成物。
【０１０７】
９２．
アシル化インスリンを含み、６分子のアシル化インスリン毎に５より多い亜鉛原子をさらに含む項９１に記載の可溶性製薬学的組成物。
９３．
６分子のアシル化インスリン毎に最大約１４の亜鉛原子を含む項９１−９２に記載の製薬学的組成物。
９４．
６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１４の亜鉛原子を含む項９１−９３に記載の製薬学的組成物。
【０１０８】
９５．
６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１３の亜鉛原子を含む項９１−９４の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
９６．
６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１２の亜鉛原子を含む項９１−９５の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
９７．
６分子のアシル化インスリン毎に約５．３から約１２の亜鉛原子を含む項９１−９６の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【０１０９】
９８．
６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１１．４の亜鉛原子を含む項９１−９７の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
９９．
６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を含む項９１−９８の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１００．
アシル化インスリンが、ＬｙｓＢ２９（Ｎε−テトラデカノイル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンもしくはＬｙｓＢ２９Ｎε−リトコロイル（lithocholoyl）−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンである項９１−９９の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【０１１０】
１０１．
アシル化インスリンが、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ
［上式中、
Ｗは、
・そのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する、側鎖中にカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・Ｘから親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基までの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚは、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
である］
の側鎖を有さない項９１−１００の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【０１１１】
１０１．
アシル化インスリンがＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンではない0項９１−１０１の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１０２．
約６．５から８．５のｐＨを有する項９１ないし１０１の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１０３．
即効型インスリンをさらに含む項９１ないし１０２の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１０４．
即効型インスリンが、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリンおよび／またはＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンである項１０３に記載の製薬学的組成物。
【０１１２】
１０９．
６分子のアシル化インスリン毎に約４より多い亜鉛原子を組成物に添加する、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物を製造するための方法。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．３より多い亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５より多い亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５より多い亜鉛原子を組成物に添加する。
１１０．
６分子のアシル化インスリン毎に最大約１４の亜鉛原子を組成物に添加する項１０９に記載の方法。
【０１１３】
１１１．
６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１４の亜鉛原子を組成物に添加する項１０９−１１０の何れか一項に記載の方法。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を組成物に添加する。
【０１１４】
１１２．
保存料の添加前に、亜鉛を組成物に添加する項１０９−１１１に記載の方法。
１１３．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に１より多い亜鉛原子である項１０９−１１２の何れか一項に記載の方法。
１１４．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に２より多い亜鉛原子である項１０９−１１３の何れか一項に記載の方法。
【０１１５】
１１５．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に３より多い亜鉛原子である項１０９−１１４の何れか一項に記載の方法。
１１６．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子である項１０９−１１５の何れか一項に記載の方法。
【０１１６】
１１７．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に５より多い亜鉛原子である項１０９−１１６の何れか一項に記載の方法。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加するか、あるいは、より好ましくは、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加するか、あるいは、さらにより好ましくは６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する。
【０１１７】
１１８．
保存料の添加後に、亜鉛を組成物に添加する項１０９−１１１の何れか一項に記載の方法。
１１９．
６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも０．５の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する項１１８に記載の方法。
【０１１８】
１２０．
６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する項１１８−１１９に記載の方法。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約２より多い亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約３より多い亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約４より多い亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、より好ましくは、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、さらにより好ましくは、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
【０１１９】
１２１．
保存料の添加前に亜鉛の一部を添加し、保存料の添加後に亜鉛の一部を添加する項１０９−１２０の何れか一項に記載の方法。
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２−３の亜鉛原子を保存料の添加後に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。
【０１２０】
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２−３の亜鉛原子を保存料の添加後に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１０の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。
【０１２１】
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２−３の亜鉛原子を保存料の添加後に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に最大約９の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。
【０１２２】
１２２．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子であり、保存料の添加後に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子である項１２１の何れか一項に記載の方法。
１２３．
保存料がフェノールおよび／またはｍ−クレゾールである項１１２−１２２の何れか一項に記載の方法。
【０１２３】
１２４．
アシル化インスリンが、ＬｙｓＢ２９（Ｎε−テトラデカノイル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンもしくはＬｙｓＢ２９Ｎε−リトコロイル（lithocholoyl）−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンである項１０９−１２３の何れか一項に記載の方法。
１２５．
アシル化インスリンが、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ
［上式中、
Ｗは、
・そのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する、側鎖中にカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・Ｘから親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基までの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚは、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
である］
の側鎖を有さない項１０９−１２４の何れか一項に記載の方法。
【０１２４】
１２６．
アシル化インスリンがＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンではない項１２５の何れか一項に記載の方法。
１２７．
即効型インスリンを組成物に添加する項１０９−１２６の何れか一項に記載の方法。
１２８．
即効型インスリンが、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリンおよび／またはＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンである項１２７に記載の方法。
１２９．
糖尿病の治療のための医薬のの製造のための、項９１−１０４の何れか一項に記載の組成物の使用。
【０１２５】
〔発明の詳細な説明〕
本発明は、通常水準（６分子のアシル化インスリン毎に２から４の亜鉛原子）を超える亜鉛含有量の増加が、あるアシル化インスリン誘導体、特にアシル化インスリンＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの中および高分子量インスリン複合体を増加させるという驚くべき知見に基づいたものである
本発明によれば、所望の度合いの会合を有するインスリンを含むインスリン製剤を設計することができる。
【０１２６】
さらに、アシル化インスリンを即効型インスリンアナログと混合するとき、鈍化が起きることなく、真の二相性特性が得られる。したがって、本発明によると、即効型インスリンアナログと遷延性アシル化インスリンの混合物であって、即効型インスリンとアシル化インスリンの注射部位からの消失速度は、別個の組成物で注射するときと同様である可溶性組成物が提供される。二相性製薬学的組成物としてのインスリンを投与することにより、注射の回数は減少し、より利便性が高く、安全な治療となる。
本発明は、さらに、インスリン製剤を調製するときに、保存料の添加後に亜鉛を加えることができるという驚くべき知見に基づいたものである。亜鉛は、典型的には、酢酸亜鉛、塩化亜鉛またはクエン酸亜鉛をインスリン製剤に添加することにより提供される。
【０１２７】
本発明によれば、本発明のアシル化インスリン組成物は、吸入により送達され、その急速な吸収を成し得る。吸入による投与は、薬物動態学的に、インスリンの皮下投与に比較し得る結果となり得る。本発明のアシル化インスリン組成物の吸入は、循環インスリンレベルの急速な上昇と、それに続く急速な血中グルコースレベルの降下につながる。異なる吸入装置が、典型的には、類似の粒子サイズおよび類似の肺付着レベルで比較すると、類似の薬物動態学を与える。
【０１２８】
本発明によれば、本発明のアシル化インスリン組成物は、それらの迅速な吸収を達成するために吸入法によって送達してもよい。吸入法による投与は、インスリン類の皮下投与と同等の薬物動態を生じ得る。本発明のアシル化インスリン組成物の吸入は、循環インスリンレベルの迅速な上昇、続く血糖値の迅速な落下を引き起こす。異なる吸入装置でも、同様の粒径および同様の肺沈着レベルを比較すると、典型的には同様の薬物動態を提供する。
【０１２９】
本発明によれば、本発明のアシル化インスリン組成物は、は、吸入法による治療剤の投与のための、当技術分野において既知の種々の吸入装置のいずれにより送達してもよいこれらの装置には、定用量吸入器、ネブライザー、乾燥粉末発生装置、噴霧器、その他を含む。好ましくは、本発明のアシル化インスリン組成物は、乾燥粉末吸入器または噴霧器により送達される。本発明のアシル化インスリン組成物を投与するための吸入装置には、いくつかの望ましい特色がある。例えば、吸入装置による送達は、信頼でき、再現性があり、かつ正確であることが都合よい。吸入装置は、小粒子、例えば約１０μｍ未満、例えば快適に呼吸できるためには、約１〜５μｍを送達すべきである。本発明の実施に適した市販の吸入装置の幾つかの具体例としては、Ｔｕｒｂｏｈａｌｅｒ（商標）（Ａｓｔｒａ）、Ｒｏｔａｈａｌｅｒ（登録商標）（Ｇｌａｘｏ）、Ｄｉｓｋｕｓ（登録商標）（Ｇｌａｘｏ）、Ｓｐｉｒｏｓ（商標）吸入器（Ｄｕｒａ）、Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって市場に出されている装置、ＡＥＲｘ（商標）（Ａｒａｄｉｇｍ）、Ｕｌｔｒａｖｅｎｔネブライザー（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ）、Ａｃｏｒｎ  ＩＩ（登録商標）ネブライザー（Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、Ｖｅｎｔｏｌｉｎ（登録商標）定用量吸入器（Ｇｌａｘｏ）、Ｓｐｉｎｈａｌｅｒ（登録商標）粉末吸入器（Ｆｉｓｏｎｓ）、Ｃ−ｈａｌｅｒ（登録商標）（Ｍｉｃｒｏｄｒｕｇ）、Ｅ−ｆｌｅｘ（登録商標）（Ｍｉｃｒｏｄｒｕｇ）等が挙げられる。
【０１３０】
当業者であれば認識するであろうとおり、本発明のアシル化インスリン組成物の製剤、送達される製剤の量および単一用量の投与の期間は、使用される吸入装置のタイプに依存する。ネブライザーなどの幾つかのエアロゾル送達系については、投与の頻度および系が活性化される延べ時間は主に、エアロゾル内のインスリンコンジュゲートの濃度に依存する。例えば、投与の期間が短いほど、ネブライザー溶液において高濃度のインスリンコンジュゲートを使用することができる。定用量吸入器などの装置では、より高いエアロゾル濃度を生じさせることができ、所望の量のインスリンコンジュゲートを送達するために、操作をより短い期間にすることができる。粉末吸入器などの装置は、所与の装入量の薬剤が装置から放出されるまで、活性薬剤を送達する。この種の吸入器では、所与の量の粉末中の本発明のインスリン誘導体の量により、単独投与で送達される用量を決定する。
【０１３１】
吸入装置によって送達される製剤中の本発明のインスリン誘導体の粒径は、インスリンが肺内、より好ましくは下気道または肺胞でこれを作る能力に関して重要である。好ましくは、本発明のアシル化インスリン組成物は、また、送達されたインスリンコンジュゲートの少なくとも約１０％、好ましくは約１０から約２０％もしくはそれ以上が肺に沈着するように製剤される。約２μｍ〜約３μｍの粒径で、口呼吸しているヒトのための肺沈着の最高効率が得られることが知られている。粒径が上記の約５μＭを上回るとき、肺沈着は大きく減少する。約１μｍを下回る粒径では、肺沈着の減少を引き起こし、治療的に有効な十分量の粒子を送達することが困難になる。したがって、吸入によって送達されるアシル化インスリン組成物の粒子は、好ましくは約１０μＭ未満、より好ましくは約１μＭから約５μＭの範囲の粒径を有する。インスリン誘導体の製剤は、選ばれた吸入装置において所望の粒径を生じるように選択される。
【０１３２】
乾燥粉末としての投与する上で有利には、本発明のアシル化インスリン組成物は、約１０μＭ未満、好ましくは約１から約５μｍの粒径をもつ粒状形態で調製される。好ましい粒径は、患者の肺の肺胞に送達するために有効である。好ましくは、乾燥粉末は、大多数の粒子が所望の範囲のサイズを有するように製造された粒子で主に構成される。有利には、乾燥粉末の少なくとも約５０％は、約１０μｍ未満の直径を有する粒子でできている。このような製剤は、インスリンコンジュゲートとその他の所望の成分とを含む溶液の噴霧乾燥、粉砕または臨界点凝縮によって達成することができる。また、本発明に有用な粒子を作製するために適したその他の方法は、当該技術分野において既知である。
【０１３３】
粒子は、通常、乾燥粉末製剤から容器内に分離し、次いで担体気流を経て患者の肺に輸送される。典型的には、現在の乾燥粉末吸入器では、固体を分解する力は、単に患者の吸入のみによって提供される。吸入器のもう一つのタイプでは、患者の吸入によって発生する気流が、粒子の塊をほぐす羽根車モーターを活性化する。
【０１３４】
乾燥粉末吸入器からの投与のための本発明のアシル化インスリン組成物の製剤は、典型的にはアシル化インスリンを含む微細に分割された乾燥粉末を含むが、粉末には、増量剤、担体、賦形剤、別の添加物等も含むことができる。添加物には、例えば特定の粉末吸入器からの送達のために必要とされる粉末を希釈するために、製剤のプロセシングを容易にするために、製剤に有利な粉体物性を提供するために、吸入装置からの粉末の分散を促進するために、製剤を安定化するために（例えば、抗酸化剤または緩衝剤）、製剤に味を提供するために、その他のためにインスリンコンジュゲートの乾燥粉末製剤で含めることができる。添加物は、患者の気道に悪影響を与えないことが都合よい。アシル化インスリンは、分子レベルで添加物と混合することができ、または固体製剤には、添加物の粒子と混合し、またはコーティングしたインスリンコンジュゲートの粒子を含めることができる。典型的な添加物には、一糖、二糖および多糖；例えば乳糖、グルコース、ラフィノース、メレチトース、ラクチトール、マルチトール、トレハロース、ショ糖、マンニトール、デンプンまたはこれらの組み合わせなどの糖アルコールおよびその他のポリオール；ソルビトール、ジホスファチジルコリンまたはレシチンなどの界面活性物質；その他を含む。典型的には、増量剤などの添加物は、上記した目的のために有効な量で、たいてい製剤の約５０％〜約９０重量％で存在する。また、インスリンアナログタンパク質などのタンパク質製剤のための、当該技術分野において既知の付加的な薬剤も、製剤に含めることができる。
【０１３５】
本発明のアシル化インスリン組成物を含むスプレーは、圧力下でノズルを介してインスリンコンジュゲートの懸濁液または溶液を圧力をかけることによって産生することができる。ノズルサイズおよび配置、加圧力、および液体の流加速度は、所望出力および粒径を達成するように選ぶことができる。エレクトロスプレーは、例えばキャピラリーまたはノズルフィードと組み合わせた電場によって産生することができる。有利には、噴霧器によって送達されるインスリンコンジュゲートの粒子は、約１０μｍ未満、好ましくは約１μｍから約５μｍの範囲の粒径を有する。
【０１３６】
噴霧器の用途に適した本発明のアシル化インスリン組成物の製剤は、典型的には溶液１ｍｌあたり約１ｍｇ〜約２０ｍｇのインスリンコンジュゲートの濃度で水溶液中にインスリン誘導体を含む。製剤には、例えば、賦形剤、緩衝剤、等張剤、保存料、界面活性物質および好ましくは、亜鉛などの薬剤を含むことができる。製剤は、緩衝液、還元剤、バルクタンパク質または炭水化物などのインスリン誘導体の安定化のための賦形剤または薬剤を含むこともできる。インスリンコンジュゲートを製剤化するのに有用なバルクタンパク質には、アルブミン、プロタミン等が含まれる。インスリンコンジュゲートを製剤化するのに有用な典型的な炭水化物には、ショ糖、マンニトール、乳糖、トレハロース、グルコース等が含まれる。また、インスリン誘導体製剤は、界面活性剤を含むことができ、エアロゾルを形成する際に溶液の微粒化によって生じる表面で誘導されるインスリンコンジュゲートの凝集を減少させ、または防止することができる。例えば、ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコール、並びにポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの種々の一般的な界面活性物質を使用することができる。量は、一般に製剤の約０．００１〜約４重量％の間の範囲である。
【０１３７】
本発明の製薬学的組成物は、治療を必要とする患者に対して非経口的に投与してもよい。非経口的な投与は、シリンジ、任意にペン様シリンジもしくは簡便な投薬機器を用いて、皮下、筋肉内、または静脈内注射により行ってもよい。あるいは、非経口的な投与は、注入ポンプを用いて行うことができる。
【０１３８】
本発明のある態様は、製薬学的に許容される担体および／または製薬学的に許容される添加物と一緒になった本発明の製薬学的組成物に関し、それは、治療を必要とする患者における１型糖尿病、２型糖尿病もしくは高血糖を引き起こす他の状態の経肺治療のために提供され得る。
【０１３９】
本発明のある態様では、治療を必要とする患者における１型糖尿病、２型糖尿病もしくは高血糖を引き起こす他の状態の治療に用いるための製薬学的組成物の製造のための方法が提供され、その組成物は、経肺で用いられ、製薬学的に許容される担体および／または製薬学的に許容される添加物と一緒になった本発明の製薬学的組成物の治療的有効量を含む。
【０１４０】
アシル化インスリン誘導体の注射用組成物は、所望の最終産物を得るのに適切な成分を溶解および混合することに関する製薬産業の通常の技法を用いて調製することができる。したがって、ある手順によれば、インスリン誘導体を、調製される組成物の最終体積よりも幾分少ない量の水中に溶解する。等張剤、保存料もしくは、保存の混合物、酢酸塩、クエン酸塩もしくは塩酸塩としての亜鉛またはその混合物、およびバッファーを必要に応じて添加することができ、さらに、界面活性剤を添加してもよく、そして、溶液のｐＨ値が−必要ならば−必要に応じて、例えば、塩酸のような酸、もしくは、例えば、水酸化ナトリウム水溶液のような塩基を用いて調整する。最終的に、溶液の体積を、水を用いて、成分の所望の濃度が得られるように調整する。
【０１４１】
バッファーは、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、ＡＤＡ（Ｎ−［２−アセタミド］−２−イミノ二酢酸）、ＡＣＥＳ（Ｎ−［２−アセタミド］−２−アミノエタンスルホン酸）、ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ−ｂｉｓ［２−ヒドロキシエチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ｂｉｃｉｎｅ（Ｎ，Ｎ−ｂｉｓ−［２−ヒドロキシエチル］グリシン）、ＢＩＳ−ＴＲＩＳ（ｂｉｓ［２−ヒドロキシエチル］イミノｔｒｉｓ［ヒドロキシメチル］−メタン）、ＤＩＰＳＯ（３［Ｎ，Ｎ−ｂｉｓ（２−ヒドロキシエチル］アミン］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、エチレンジアミンジヒドロクロリド、グリシルグリシン、ＨＥＰＥＳ（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］）、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−ヒドロキシプロパンスルホン酸］）、イミダゾール、ＭＯＢＳ（４−［Ｎ−モリホリノ］ブタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−［Ｎ−モリホリノ］プロパンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ｂｉｓ［２−エタンスルホン酸］）、ＴＡＰＳＯ（３−［Ｎ−ｔｒｉｓ（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸、ＴＨＡＭ（ｔｒｉｓ［ヒドロキシメチル］−アミノメタン）、ＴＥＳ（Ｎ−ｔｒｉｓ［ヒドロキシメチル］メチル−２−アミノエタンスルホン酸、ｔｒｉｃｉｎｅ（Ｎ−ｔｒｉｓ［ヒドロキシメチル］メチルグリシン）、アジピン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、および／またはそれらの塩、および／またはそれらの混合物からなる群から選択してもよい。
【０１４２】
本発明の更なる態様では、製剤は、フェノール、ｏ−クレゾール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、２−フェノキシエタノール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸ブチル、２−フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、およびブロノポール、安息香酸、イミドウレア、クロロヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、クロロクレゾール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル、塩化ベンゼトニウム、クロロフェネシン（３−（４−クロロフェノキシ）プロパン−１，２−ジオール）もしくはそれらの混合物からなる群から選択され得る製薬学的に許容される保存料をさらに含む。本発明の更なる態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる態様では、保存料は、５ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる態様では、保存料は、１０ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの具体的な保存料のそれぞれ一つは、本発明の代替的な態様を構成する。製薬学的組成物における保存料の使用は、当業者には周知のことである。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995を参照のこと。
【０１４３】
本発明の更なる態様では、製剤は、塩（例えば、塩化ナトリウム）、糖もしくは糖アルコール、アミノ酸（例えば、ｌ−グリシン、ｌ−ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン）、１，２−プロパンジオール（プロピレングリコール）、１，３−プロパンジオール、１，３−ブタンジオール）ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）、もしくはそれらの混合物を、さらに含む。フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルスターチおよびカルボキシメチルセルロース−Ｎａを含む、例えば、一糖、二糖もしくは多糖のような任意の糖、あるいは水溶性グルカン類を用いてもよい。ある態様では、糖添加物はスクロースである。糖アルコールは、少なくとも一つの−ＯＨ基を有するＣ４−Ｃ８炭化水素として定義され、例えば、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール、およびアラビトールを含む。ある態様では、糖アルコール添加物は、マンニトールである。上述の糖および糖アルコールは、別個にあるいは組み合わせて用いられ得る。糖および糖アルコールが液体組成物に可溶性で、かつ本発明の方法を用いて達成される安定化効果に悪影響を与えない限り、用いられる量に制限は課されない。ある態様では、糖および糖アルコールの濃度は、約１ｍｇ／ｍｌから約１５０ｍｇ／ｍｌである。本発明の更なる態様では、等張剤は、約１ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる態様では、等張剤は、約１ｍｇ／ｍｌから約７ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる態様では、等張剤は、約８ｍｇ／ｍｌから約２４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の更なる態様では、等張剤は、約２５ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの具体的な等張剤のそれぞれ一つは、本発明の代替的な態様を構成する。製薬学的組成物における等張剤の使用は、当業者には周知のことである。簡便には、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995を参照のこと。
【０１４４】
本発明の更なる態様では、特に、インスリン誘導体を、インスリンアスパルトのような即効型インスリンと混合する際には、製剤は、フィブリル化を防止するために界面活性剤を含む。例えば、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル類およびアルコール類、およびポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル類のような、種々の一般的な界面活性剤を用いることができる。量は一般的に、製剤の約０．００１から約０．１重量％の範囲であろう。
典型的な等張剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、ジメチルスルホン、１，２プロパンジオール、およびグリセロールであり、典型的な保存料は、フェノール、ｍ−クレゾール、メチルｐ−ヒドロキシ安息香酸およびベンジルアルコールである。
【０１４５】
適するバッファーの例としては、酢酸ナトリウム、グリシルグリシン、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）、ｔｒｉｓ−ヒドロキシメチル−アミノメタン、エチレンジアミンジヒドロクロリド、およびリン酸ナトリウムが挙げられる。
本発明の組成物は、インスリンに感受性の状態の治療に用いることができる。したがって、それらは、１型糖尿病、２型糖尿病および、例えば重傷者および大きな手術を受けた人に時々見られるような高血糖の治療に用いることができる。任意の患者についての最適な投与レベルは、具体的なアシル化インスリンもしくはアシル化インスリンと用いられる即効型インスリンとの混合物の効率、年齢、体重、生理的活動、および患者の常食、他の薬物との有り得る組み合わせ、および治療されるべき状態の重篤さを含む種々の因子に依存する。本発明のインスリン誘導体の１日投与量は、既知のインスリン組成物と同様に、個々の患者それぞれについて、当業者により決定されることが推奨される。
本発明の組成物に含まれるアシル化インスリンもしくはインスリンアナログを調製するための出発産物は、周知のペプチド合成により、もしくは適する形質転換微生物中での周知の組み換え生産により、生産することができる。したがって、インスリン出発産物は、ポリペプチドをコードするＤＮＡを含み、適切な栄養培地でペプチドの発現が許容される条件下でポリペプチドを発現することのできる宿主細胞、を培養し、その後、生じたペプチドを培養物から回収することを含む。
【０１４６】
細胞を培養するために用いる培地は、適切な補助物質を含有する最少培地または混合培地などの、宿主細胞を生育するために適する任意の一般的な培地であってよい。適切な培地は、市販の供給元から入手可能であるかまたは公開された製法（例えばＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎのカタログにおいて）に従って調製してもよい。細胞によって生産されるペプチドは、対象のペプチドの種類に応じて、遠心または濾過によって培地から宿主細胞を分離すること、硫酸ナトリウムなどの塩によって上清または濾過液のタンパク質性成分を沈殿する、例えばイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィーなどの種々のクロマトグラフィーの手順による精製、を含む一般的な手順によって培養培地から回収してもよい
【０１４７】
インスリンポリペプチドをコードするＤＮＡ配列はゲノム起源または、ｃＤＮＡ起源のものでよく、例えばゲノムもしくはｃＤＮＡのライブラリを調製して、標準的な技法に従って合成オリゴヌクレオチドプローブを用いたハイブリダイゼーションによってポリペプチドのすべてまたは一部をコードするするＤＮＡ配列に関してスクリーニングすることによって得られ得る（例えば、Sambrook, J, Fritsch, EF and Maniatis, T, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989を参照のこと）。また、ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、確立された標準的な方法、例えばBeaucage and Caruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859 - 1869によって記述されるホスホアミダイト法またはMatthes等, EMBO Journal 3 (1984), 801 - 805によって記述される方法によって合成して調製されてもよい。また、例えば、米国特許第４６８３２０２号またはSaiki et al., Science 239 (1988), 487 - 491に記載のように、ＤＮＡ配列は、特定のプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって調製されてもよい。
ＤＮＡ配列は、簡便には、組換えＤＮＡ手順の対象となり得る任意のベクターに挿入してよく、ベクターの選択は導入すべき宿主細胞によることが多いであろう。したがって、ベクターは自己複製するベクター、すなわち染色体外の独立体として存在すし、その複製が染色体複製から独立しているベクター、例えばプラスミドであってよい。あるいは、ベクターは、宿主細胞に導入される場合、宿主細胞ゲノムに組み込まれ、組み込まれている染色体（一または複数）と共に複製されるものであってもよい。
【０１４８】
好ましくは、ベクターは、例えばプロモーターのような、ペプチドをコードするＤＮＡ配列がＤＮＡの転写に必要な付加的なセグメントに作用可能に連結されている発現ベクターである。プロモーターは、選択した宿主細胞において転写活性を示す任意のＤＮＡ配列であってよく、宿主細胞に同種なまたは異種なタンパク質をコードする遺伝子由来でよい。種々の宿主細胞における本発明のペプチドをコードするＤＮＡの転写を管理するのに適切なプロモーターの例は、当技術分野で周知であり、例えば、Sambrook, et al., Molecular Cloning: a laboratory manual, second edition 1989が参照される。
また、ペプチドをコードするＤＮＡ配列は、必要ならば、適切なターミネーター、ポリアデニル化シグナル、転写促進因子配列および翻訳促進因子配列に作用可能に連結されてよい。さらに、本発明の組み換えベクターは、問題の宿主細胞においてベクターが複製することを可能にするＤＮＡ配列を更に含んでもよい。
【０１４９】
ベクターはまた、選択可能なマーカー、例えば、遺伝子産物が、薬剤、例えばアンピシリン、カナマイシン、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、ハイグロマイシンもしくはメトトレキサートに対する耐性を与えるか、もしくは宿主細胞における欠損を補完する遺伝子を含んでよい。
【０１５０】
宿主細胞の分泌経路にインスリンペプチドを導くために、分泌シグナル配列（リーダー配列、プレプロ配列またはプレ配列としも知られる）は、組換えベクターに提供されてよい。分泌シグナル配列は、正しい読み取り枠においてペプチドをコードするＤＮＡ配列に連結される。分泌シグナル配列は、一般的に、ペプチドをコードするＤＮＡ配列の５’位に位置する。分泌シグナル配列は、そのペプチドに通常相関したものであってもよいし、あるいは他の分泌タンパク質をコードする遺伝子由来でもよい。
【０１５１】
本ペプチド、プロモーターおよび任意的にターミネーターおよび／または分泌性シグナル配列それぞれをコードするＤＮＡ配列をライゲートし、複製のために必要な情報を含む適切なベクターにこれらを挿入するために使用される手順は、当業者にとって周知である（例えば、Sambrook et al.、上記参照のこと）。
【０１５２】
ＤＮＡ配列または組換えベクターが導入される宿主細胞は、本ペプチドを産生することができる任意の細胞であってよく、細菌、酵母、真菌類および高等真核細胞が含まれる。当該技術分野において周知かつ使用される適切な宿主細胞の例には、これらに限定されないが、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）または哺乳動物ＢＨＫまたはＣＨＯ細胞株が含まれる。
【０１５３】
〔定義〕
ここで用いられる場合、「有効量」という用語は、治療しない場合と比較して患者に対して効果のある治療のために十分な投与量を意味する。
【０１５４】
「製薬学的組成物」という用語は、ここで用いられる場合、活性化合物またはそれらの塩を、バッファー、保存料、および張度調節剤のような製薬学的な賦形剤と共に含んでなる生成物を意味し、前記製薬学的組成物は、ヒトに投与することによって疾患または障害の重症度を治療、予防、または軽減するのに有用である。それ故、製薬学的組成物は、製薬学的製剤としても当技術分野において既知である。再構成されるための製薬学的組成物のｐＨは、室温において、所定の再構成液体中の再構成により製造された再構成組成物について計測されるｐＨ値である。
【０１５５】
「製薬学的に許容される」という用語は、ここで用いられる場合、通常の製薬学的な適用に適している、すなわち、患者等において有害事象が生じないことを意味する。
【０１５６】
「バッファー（緩衝剤、緩衝液）」という用語は、ここで用いられる場合、化学反応により生じ得るような、時間にわたって組成物のｐＨが変化する傾向を低下させる、製薬学的組成物中での化学化合物を意味する。バッファーには、リン酸ナトリウム、ＴＲＩＳ、グリシルグリシンおよびクエン酸ナトリウムのような化学物質が含まれる。
【０１５７】
「保存料」という用語は、ここで用いられる場合、微生物活性（増殖および代謝）を妨げるためまたは遅延させるために製薬学的組成物に添加される化学物質を称する。製薬学的に許容されるな保存料の例は、フェノール、ｍ−クレゾール、ならびにフェノールおよびｍ−クレゾールの混合物である。
【０１５８】
「等張剤」という用語は、ここで用いられる場合、製薬学的組成物の浸透圧をヒトの血漿の浸透圧により近づけるように調節するのに役立つ製薬学的組成物中の化学物質を称する。等張化剤には、ＮａＣｌ、グリセロール、マンニトール等が含まれる。
【０１５９】
「安定化剤」という用語は、ここで用いられる場合、ペプチドを安定化するため、すなわちそのような組成物の貯蔵寿命および／または有効期間を増大させるための、ペプチド含有製薬学的組成物に加える化学物質を称する。製薬学的製剤中に用いられる安定化剤の例としては、Ｌ−グリシン、Ｌ−ヒスチジン、アルギニン、ポリエチレングリコール、およびカルボキシメチルセルロースが挙げられる。さらに、フェノール類、亜鉛イオン類および塩化ナトリウムも、安定化剤として作用し得る。
【０１６０】
「界面活性剤」という用語は、ここで用いられる場合、インスリン、インスリンアナログおよびインスリン誘導体を境界面から離れさせるように、空気に対する接触面および疎水性表面を装飾するように機能する、製薬学的組成物中の化学物質を称する。例えば、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル類およびアルコール類、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル類のような、種々の標準的な界面活性剤を用いることができる。例としては、ポリソルベート２０（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ２０）が挙げられる。
【０１６１】
「疾患の治療」という用語は、ここで用いられる場合、病気、状態もしくは疾患を進行させた患者の管理および世話を意味する。治療の目的は、病気、状態もしくは疾患を治すことである。治療には、病気、状態もしくは疾患と関連した症状もしくは合併症を緩和することと同様に、病気、状態もしくは疾患を終結させるもしくは制御するための、活性化合物の投与が含まれる。
【０１６２】
「疾患の予防」という用語は、ここで用いられる場合、病気の臨床的発現より前の、病気を進行させる危険性についての、管理および世話として定義される。予防の目的は、病気、状態もしくは疾患の進行を防ぐことであり、症状および合併症の発現を予防するもしくは遅延させるため、および、関連した病気、状態もしくは疾患の進行を予防もしくは遅延させるための、活性化合物の投与が含まれる。
【０１６３】
「ヒトインスリン」という用語は、ここで用いられる場合、その構造および性質が周知であるヒトホルモンを意味する。ヒトインスリンは、システイン残基間をジスルフィド架橋により結合された２つのポリペプチド鎖、すなわちＡ鎖およびＢ鎖を有する。Ａ鎖は２１アミノ酸ペプチドであり、Ｂ鎖は３０アミノ酸ペプチドであり、２つの鎖は３つのジスルフィド架橋により結合されている：１つ目は、Ａ鎖の位置６および位置１１のシステインの間、２つ目は、Ａ鎖の位置７のシステインとＢ鎖の位置７のシステインの間、３つ目は、Ａ鎖の位置２０のシステインとＢ鎖の位置１９のシステインの間である。
【０１６４】
「基礎インスリン」という用語は、ここで用いられる場合、糖尿病の標準的なモデルにおいて１５時間より長い時間作用を有し、夜の間と、食事と食事の間のインスリン要求をカバーするのに適したインスリンペプチドの製剤を意味する。好ましくは、基礎インスリンは、少なくとも２０時間の時間作用を有する。好ましくは、基礎インスリンは、少なくとも１０時間の時間作用を有する。好ましくは、基礎インスリンは、１５から４８時間の時間作用を有する。好ましくは、基礎インスリンは、ＮＰＨインスリンもしくはＮεＢ２９−テトラデカノイルｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの市販の製薬学的組成物について観察されるのと類似の時間作用を有する。
【０１６５】
「ボーラスインスリン」、「食事関連インスリン」もしくは「即効型インスリン」という用語は、ここで用いられる場合、即効性であり、食中、食後のインスリン要求をカバーするのに適したインスリンペプチドを意味する。
【０１６６】
「二相性インスリン」という用語は、ここで用いられる場合、「ボーラスインスリン」および「基礎インスリン」の混合物を含む製薬学的組成物を意味する。
【０１６７】
「ｄｅｓＢ３０」または「Ｂ（１−２９）」とは、Ｂ３０アミノ酸残基を欠くインスリンＢ鎖もしくはそのアナログを意味する。「Ａ（１−２１）」は天然インスリンＡ鎖もしくはそのアナログを意味する。Ｃペプチドとそのアミノ酸配列は、三文字のアミノ酸コードで示されている。ｄｅｓＢ３０、ｄｅｓＢ２９ヒトインスリンとは、Ｂ２９およびＢ３０を欠くヒトインスリンである。
【０１６８】
「Ｂ１」、「Ａ１」等とは、それぞれインスリンのＢ鎖の位置１（Ｎ末端から数えて）のアミノ酸残基およびインスリンのＡ鎖の位置１（Ｎ末端から数えて）のアミノ酸残基を意味する。特定の位置にあるアミノ酸残基は、例えば、位置Ｂ１のアミノ酸残基がフェニルアラニン残基であることを意味する、ＰｈｅＢ１のようにして表し得る。
【０１６９】
「インスリン類似体」は、ここで用いられる場合、天然発生型インスリンに、形式上由来し得る分子構造を有するポリペプチド、例えば、天然発生型インスリン中の少なくとも一のアミノ酸残基の欠失および／または置換、および／または、少なくとも一のアミノ酸残基の付加によるヒトインスリンのそれ、を意味する。
【０１７０】
付加および／または置換されるアミノ酸残基は、コード可能なアミノ酸残基または他の天然発生型の残基または純粋な合成アミノ酸残基の何れであってもよい。インスリンアナログは、Ｂ鎖の位置２８が天然のＰｒｏ残基からＡｓｐ、ＬｙｓまたはＩｌｅに修飾され得るものでもよい。別の態様では、位置Ｂ２９のＬｙｓはＰｒｏへと修飾されてもよい。ある態様では、Ｂ３０はＬｙｓであってよく、Ｂ２９は、Ｃｙ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓ以外の任意のコード可能なアミノ酸であり得る。
【０１７１】
また、位置Ａ２１のＡｓｎは、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌ、特にＧｌｙ、Ａｌａ、ＳｅｒまたはＴｈｒ、そして特にＧｌｙへと修飾されてよい。さらに、位置Ｂ３のＡｓｎはＬｙｓまたはＡｓｐに修飾されてよい。インスリンアナログの更なる例は、ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンアナログ；ＰｈｅＢ１が欠失しているインスリンアナログ；Ａ鎖および／またはＢ鎖がＮ末端伸展を有するインスリンアナログおよびＡ鎖および／またはＢ鎖がＣ末端伸展を有するインスリンアナログである。このように、一つか二つのＡｒｇは、位置Ｂ１もしくは位置Ｂ３０に拭かされてよい。
【０１７２】
ある態様では、インスリンアナログは、天然ペプチドと比較して６つ未満の修飾（置換、欠失、付加）を含む。別の態様では、アナログは、天然ペプチドと比較して５つ未満の修飾（置換、欠失、付加）を含む。別の態様では、アナログは、天然ペプチドと比較して４つ未満の修飾（置換、欠失、付加）を含む。別の態様では、アナログは、天然ペプチドと比較して３つ未満の修飾（置換、欠失、付加）を含む。別の態様では、アナログは、天然ペプチドと比較して２つ未満の修飾（置換、欠失、付加）を含む。別の態様では、アナログは、天然ペプチドと比較して１つのみの修飾（置換、欠失、付加）を含む。
【０１７３】
「インスリン類似体」は、ここで用いられる場合、例えばインスリン骨格の一または複数の位置に側鎖が導入されることにより、もしくはインスリン中のアミノ酸残基の基を酸化または還元することにより、もしくは遊離のカルボン酸をエステル基に変換することまたは遊離のアミノ基またはヒドロキシ基をアシル化することにより、化学的に修飾された天然発生型インスリンまたはインスリンアナログを意味する。
【０１７４】
「アシル化インスリン」は、ここで用いられる場合、遊離のアミノ基またはヒドロキシ基をアシル化することにより、化学的に修飾された天然発生型インスリン、例えば、ヒトインスリンのそれ、インスリン分子、インスリン誘導体もしくはインスリンアナログを意味する。
【０１７５】
「非鈍化」という用語は、ここで用いられる場合、一製剤中に処方される場合に、速効型インスリンとアシル化インスリンの双方が、別々の製剤として速効型インスリンとアシル化インスリンとを投与する場合の作用プロファイルと、同一もしくは実質的に同一の作用プロファイルを有していることを意味する。
【０１７６】
「ＯＡＤ」もしくは「ＯＡＤ（ｓ）」という用語は、ここで用いられる場合、傾向の抗糖尿病薬もしくは複数の抗糖尿病薬を意味する。ＯＡＤ（ｓ）の非限定的なリストとしては、スルホニルウレア（ＳＵ）、ビアグナイド類、例えば、メルホルミン（Melformin）もしくはチアゾリジンジオン類（ＴＺＤ）を挙げ得る。
【０１７７】
「コード可能なアミノ酸」もしくは「コード可能なアミノ酸残基」という表現は、ヌクレオチドのトリプレット（「コドン」）によりコードされ得るアミノ酸もしくはアミノ酸残基を示すために用いられる。
【０１７８】
ｈＧｌｕはホモグルタミン酸である。
α−Ａｓｐは、−ＨＮＣＨ（ＣＯ−）ＣＨ２ＣＯＯＨのＬ体である。
β−Ａｓｐは、−ＨＮＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−のＬ体である。
α−Ｇｌｕは、−ＨＮＣＨ（ＣＯ−）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨのＬ体である。
γ−Ｇｌｕは、  −ＨＮＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−のＬ体である。
α−ｈＧｌｕは、−ＨＮＣＨ（ＣＯ−）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨのＬ体である。
δ−ｈＧｌｕは、−ＨＮＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−のＬ体である。
β−Ａｌａは、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨである。
Ｓａｒは、サルコシン（Ｎ−メチルグリシン）である。
【０１７９】
「側鎖にカルボン酸基を有するアミノ酸残基」という表現は、Ａｓｐ、ＧｌｕおよびｈＧｌｕのようなアミノ酸残基を示す。アミノ酸は、Ｌ−もしくはＤ−の何れの配置も取り得る。何も特記されていなければ、アミノ酸残基はＬ配置であると解される。
「中性側鎖を有するアミノ酸残基」という表現は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎのようなアミノ酸残基を示す。
【０１８０】
本発明に係るインスリン誘導体が「生理学的ｐＨ値で可溶性である」と記載されている場合は、インスリン誘導体が生理学的ｐＨ値で十分に溶解する注射可能なインスリン組成物を調製するのに使用可能であることを意味する。このような好ましい溶解度は、インスリン誘導体単独の固有の特性、またはインスリン誘導体と、ビヒクルに含まれる一または複数の成分との好ましい相互作用の結果の何れかに拠り得る。
【０１８１】
「高分子インスリン」もしくは「ｈｍｗ」という表現は、ヒトインスリン複合体、インスリンアナログ、もしくはインスリン誘導体の分子量が、ヒト血清アルブミンより高いか、インスリンアナログもしくはインスリン誘導体の１２量複合体より高いか、または約７２ｋダルトンより高いことを意味する。
「中間分子量インスリン」もしくは「ｍｍｗ」という表現は、ヒトインスリン複合体、インスリンアナログ、もしくはインスリン誘導体の分子量が、ほぼインスリン６量体から２４〜８０ｋダルトンのインスリン１２量体までであることを意味する。
「低分子量インスリン」もしくは「ｌｍｗ」なる表現は、ヒトインスリン、インスリンアナログもしくはインスリン誘導体の分子量が、２４ｋダルトン未満であることを意味する。
【０１８２】
「正味荷電」という表現は、分子の全体の荷電を意味する。ｐＨ７．４で、ヒトインスリンは、約−３の負の正味荷電を有するか、あるいは、六量体を形成した際には、インスリン単量体当たり、約−２．５の負の正味荷電を有する。
【０１８３】
以下の略語が、明細書および実施例で使用される：
ｈＧｌｕ      ホモグルタミン酸
Ｓａｒ：      サルコシン（Ｎ−メチル−グリシン）
Ｓ．ｃ．      皮下
アシルｉｎｓ  アシル化インスリン
Ｉｎｓ        インスリン
【０１８４】
各文献が、出典明示により個々にかつ具体的に援用されるように記載され、その全内容がここに記載されているかと同程度に、ここに引用された、刊行物、特許出願および特許を含む全ての文献は、出典明示によりその全内容がここに援用される（法律により許容される最大範囲）。
全ての表題および副題は、ここでは便宜的に使用され、決して本発明を限定するものと解すべきではない。
【０１８５】
ここに提供される任意かつ全ての例、または例示的な言語（例えば「例えば、等」）の使用は、単に本発明をより明らかにすることを意図しており、特に請求項に記載がない限り、本発明の範囲に限定をもたらすものではない。明細書中の如何なる語句も請求項に記載していない要素が本発明の実施に必須であることを示しているものと解すべきではない。
ここでの特許文献の引用および援用は単に便宜上なされているものに過ぎず、そのような特許文献の有効性、特許性、および／または権利行使性についての見解を反映させるものではない。
この発明は、適用される法律に容認される場合、ここに付加される請求項に列挙された主題事項の全ての修正点および等価物を含む。
【０１８６】
〔実施例〕
実施例１
Ａ：インスリンアスパルト６００μＭ、３Ｚｎ／６インスリン、１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾール、７ｍＭのｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン、１０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５および８ｍｌの体積：
３１ｍｇのインスリンアスパルトを２ｍｌの水に懸濁し、３０μＬの１ＮのＨＣｌを加えて、溶液を得た。その後、２４０μＬの１０ｍＭのＺｎ（ＡｃＯ）２を加え、続いて、３２００μＬの４％グリセロール、４００μＬの０．３２Ｍフェノール、８００μＬのｍ−クレゾール、５６０μＬの０．１Ｍｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン、１６０μＬの０．５ＭのＮａＣｌを加え、その後、１ＮのＮａＯＨによりｐＨを調整し、最終的に、水で体積を８ｍｌまで調整した。溶液を０．２２μｍの滅菌フィルターを通して濾過した。
【０１８７】
Ｂ：ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン１２００μＭ、３Ｚｎ／６ｉｎｓ、１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾール、７ｍＭのｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン、１０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５および７ｍｌの体積：
５８ｍｇのＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを２ｍｌの水に懸濁し、溶解し、続いて、４２０μＬの１０ｍＭのＺｎ（ＡｃＯ）２、２８００μＬの４％グリセロール、３５０μＬの０．３２Ｍフェノール、７００μＬのｍ−クレゾール、４９０μＬの０．１Ｍｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン、１４０μＬの０．５ＭのＮａＣｌを加え、最終的に１ＮのＮａＯＨの添加によりｐＨ７．５に調整し、水を加え、７ｍｌを得た。溶液を０．２２μｍの滅菌フィルターを通して濾過した。
【０１８８】
Ｃ：インスリンアスパルト６００μＭ、４Ｚｎ／６ｉｎｓ、１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾール、７ｍＭのｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン、１０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５および１５ｍｌの体積：
製剤は、製剤Ａと同様に調製した。
【０１８９】
Ｄ：ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン１２００μＭ、４Ｚｎ／６ｉｎｓ、１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾール、７ｍＭのｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン、１０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５および２０ｍｌの体積：  製剤は、製剤Ｂと同様に調製した。
【０１９０】
Ｅ：インスリンアスパルト６００μＭ、６Ｚｎ／６ｉｎｓ、１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾール、７ｍＭのｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン、１０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５：
製剤は、製剤Ｃと同様に調製し、最終的に、１ｍｌ当たり２０μＬの１０ｍＭのＺｎ（ＡｃＯ）２を加え、ｐＨを７．５に調整した。
【０１９１】
Ｆ：ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン１２００μＭ、６Ｚｎ／６ｉｎｓ、１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾール、７ｍＭのｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン、１０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５：
製剤は、製剤Ｄと同様に調製し、最終的に、１ｍｌ当たり４０μＬの１０ｍＭのＺｎ（ＡｃＯ）２を加え、ｐＨを７．５に調整した。
【０１９２】
Ｇ：インスリンアスパルト６００μＭ、８Ｚｎ／６ｉｎｓ、１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾール、７ｍＭのｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン、１０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５：
製剤は、製剤Ｃと同様に調製し、最終的に、１ｍｌ当たり４０μＬの１０ｍＭのＺｎ（ＡｃＯ）２を加え、ｐＨを７．５に調整した。
【０１９３】
Ｈ：ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン１２００μＭ、８Ｚｎ／６ｉｎｓ、１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾール、７ｍＭのｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン、１０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５：
製剤は、製剤Ｄと同様に調製し、最終的に、１ｍｌ当たり８０μＬの１０ｍＭのＺｎ（ＡｃＯ）２を加え、ｐＨを７．５に調整した。
【０１９４】
媒質：１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾール、７ｍＭのｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン、１０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５。
【０１９５】
ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭおよび３、４、６、および８で変化するＺｎ／６アシル−ｉｎｓの製剤を、上記の製剤Ｂ、Ｄ、Ｆ、およびＨを同量の媒質で希釈することにより得た。サイズ排除カラムクロマトグラフィーにより、１４０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン  ｐＨ７．４、および０．０１％ＮａＮ３、３７℃および０．２５ｍｌ／ｍｉｎで溶出したＳｕｐｅｒｏｓｅ６ＨＲカラム上での高分子量インスリンの形成能力について、製剤を試験した。高分子量排除限界から開始し、単量体ピークの最後で終わるように、４分毎に、計１４フラクションとなるように、フラクションを集めた。インスリンアナログのフラクション濃度を、逆相クロマトグラフィーで定量し、発色性亜鉛キレート剤ｔｅｒｐｙ添加後のｐＨ２．５での偏位で亜鉛濃度をを定量した（図３、４、５および６）。アルブミンより大きなサイズを有するＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの相対的な量（フラクション［１−８］）は、それぞれ、３、４、６、および８Ｚｎ／６インスリンについて、６７．４、８８．９、９８．０、および９７．９％と測定された。さらに、高分子量フラクションでは、亜鉛濃度は、ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンにより、特に高分子量フラクションにおいて、フォローされた。
３および６で変化する亜鉛／インスリンのインスリンアスパルト６００μＭ（ＡおよびＥ）からなる製剤は、単量体として溶出され（フラクション［１２−１３］）、添加した亜鉛の少しの部分しかフォローしなかった、図面１−２を参照のこと。
【０１９６】
インスリンアナログおよびアシル化インスリンの混合
インスリン１８０μＭアスパルトおよび４２０μＭのＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンおよび３、６、および８Ｚｎ／６インスリンで変化する亜鉛濃度からなる製剤を、上記ストック溶液ＡからＨおよび上記媒質を同様に混合することにより得た。亜鉛／６アシル化インスリンの濃度を計算した例としては、３Ｚｎ／６インスリンを有するアスパルト１８０μＭ、および３Ｚｎ／６アシル−ｉｎｓを有するＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン４２０μＭの混合が、４．３Ｚｎ／６アシル化インスリン［（１８０×３＋４２０×３）／４２０＝４．３Ｚｎ／アシル−ｉｎｓ］となることが挙げられる。サイズ排除カラムクロマトグラフィーにより、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６ＨＲカラム上での高分子量インスリンの形成能力について、製剤を試験し、インスリンアナログと亜鉛の双方を定量するために、フラクションを同様に集めた。図面８から理解できるように、４．３Ｚｎ／６アシル−インスリンの製剤に相当する、３Ｚｎ／６インスリンと混合したアナログは、高分子量フラクション［１−８］で、主に、ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（７２．５％のＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）および亜鉛を示したが、フラクション［９−１４］の残りの平均として、インスリンアスパルトおよびＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの等価量が計測される形で、インスリンアスパルトも示した（図８）。６Ｚｎ／６ｉｎｓからなるインスリンアスパルトおよびＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの残りは、それぞれ図２および図５に示される。アスパルト１８０μＭ＋ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン４２０μＭに対し、６Ｚｎ／６ｉｎｓ（図２および図５）の二つの薬剤を混合し、８．６Ｚｎ／６アシル−ｉｎｓに相当するものは、高分子量および低分子量のインスリンアスパルトにおいて、ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの完全に区別されるフラクションを示した（図１０）。インスリンアスパルトおよびＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの等量を１２  Ｚｎ／６アシル−ｉｎｓに混合したものも、同様に、区別されるフラクションを示した（図１２）。さらに、個々の製剤における８Ｚｎ／６ｉｎｓまでの亜鉛の濃度の増加は、ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンについては、図６中に、アスパルト１８０μＭ＋ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン４２０μＭの混合物につちえは、図１１に示されている。
【０１９７】
図面から明確であるように、亜鉛の量の増加は、驚くべきことに、製薬学的処方におけるインスリンアスパルトおよびＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの分離を引き起こし、そのアナログ間の有意な鈍化を示さなかった。
亜鉛の量の増加は、アナログが現実的な鈍化を示さないように、製薬学的処方におけるインスリンアスパルトおよびＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの分離を引き起こした。
【０１９８】
実施例２
２Ａ：フェノールおよびｍ−クレゾールの前に添加した３Ｚｎ／６アシル化インスリン
ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭ、３Ｚｎ／６インスリン、１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾール、２０ｍＭのＮａＣｌ、７ｍＭのリン酸塩、ｐＨ７．５、１．５μＣｉの１２５Ｉ−ＴｙｒＡ１４−ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンのトレーサー、および２ｍｌの体積。
１．２ｍｇのＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを４００μＬの水に溶解し、３μＣｉの１２５Ｉ−ＴｙｒＡ１４−ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン  トレーサーを加え、続いて、８００μＬの４％グリセロールを加え、１０−１５分間減圧遠心処理して、トレーサー溶液に含まれる添加エタノールを除去した。６０μＬの１０ｍＭのＺｎ（ＡｃＯ）２を加え、続いて、２分間隔で１００μＬの０．３２Ｍフェノール、２００μＬの０．１６Ｍのｍ−クレゾール、８０μＬの０．５ＭのＮａＣｌ、および１４０μＬの０．１Ｍリン酸ナトリウムを加え、ｐＨをｐＨ７．５ｍＭに調整し、合計の体積を２ｍｌに調整した。溶液は、０．２２μｍの滅菌フィルターを通じて濾過し、ブタでの皮下注射の後の消失実験に用いられた。製剤例２Ａから２Ｄのクロスオーバー研究でのアッセイ下で記載されるように、Ｔ５０％±ＳＥＭ（ｈ）は、９．６±０．７ｈと決定された。
【０１９９】
２Ｂ：フェノールおよびｍ−クレゾールの前に添加した３Ｚｎ／６アシル化インスリンおよび後に添加した３Ｚｎ／６アシル化インスリン
ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭ、１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾールの前に添加した３Ｚｎ／６アシル化インスリンおよび後に添加した３Ｚｎ／６アシル化インスリン、２０ｍＭのＮａＣｌ、７ｍＭのリン酸塩、ｐＨ７．５、１．５μＣｉヨウ素−Ｉ１２５−ＴｙｒＡ１４−ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン  トレーサー、２ｍｌの体積。
【０２００】
２．２ｍｇのＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを４００μＬの水に溶解し、３μＣｉの１２５Ｉ−ＴｙｒＡ１４−ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン  トレーサーを加え、続いて、８００μＬの４％グリセロールを加え、１０−１５分間減圧遠心処理して、トレーサー溶液に含まれる添加エタノールを除去した。６０μＬの１０ｍＭのＺｎ（ＡｃＯ）２を加え、続いて、２分間隔で１００μＬの０．３２Ｍフェノール、２００μＬの０．１６Ｍのｍ−クレゾール、８０μＬの０．５ＭのＮａＣｌ、および１４０μＬの０．１Ｍリン酸ナトリウムを加え、ｐＨをｐＨ７．５ｍＭに調整し、合計の体積を２ｍｌに調整した。溶液は、０．２２μｍの滅菌フィルターを通じて濾過し、ブタでの皮下注射の後の消失実験に用いられた。製剤例２Ａから２Ｄのクロスオーバー研究でのアッセイ下で記載されるように、Ｔ５０％±ＳＥＭは、１１．９±１．０ｈと決定された。
【０２０１】
２Ｃ：バッファーを含まず、フェノールおよびｍ−クレゾールの前に添加した３Ｚｎ／６アシル化インスリンおよび後に添加した３Ｚｎ／６アシル化インスリン
ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭ、１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾールの前に添加した３Ｚｎ／６アシル化インスリンおよび後に添加した３Ｚｎ／６アシル化インスリン、２０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５、１．５μＣｉの１２５Ｉ−ＴｙｒＡ１４−ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン  トレーサー、および２ｍｌの体積。
【０２０２】
８．２ｍｇのＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを４００μＬの水に溶解し、３μＣｉの１２５Ｉ−ＴｙｒＡ１４−ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン  トレーサーを加え、続いて、８００μＬの４％グリセロールを加え、１０−１５分間減圧遠心処理して、トレーサー溶液に含まれる添加エタノールを除去した。６０μＬの１０ｍＭのＺｎ（ＡｃＯ）２を加え、続いて、２分間隔で１００μＬの０．３２Ｍフェノール、２００μＬの０．１６Ｍのｍ−クレゾール、８０μＬの０．５ＭのＮａＣｌを加え、ｐＨをｐＨ７．５ｍＭに調整し、合計の体積を２ｍｌに調整した。溶液は、０．２２μｍの滅菌フィルターを通じて濾過し、ブタでの皮下注射の後の消失実験に用いられた。製剤例２Ａから２Ｄのクロスオーバー研究でのアッセイ下で記載されるように、Ｔ５０％±ＳＥＭは、１４．４±２．４ｈと決定された。
【０２０３】
２Ｄ：バッファーを含まず、フェノールおよびｍ−クレゾールの後に添加した６Ｚｎ／６アシル化インスリン
ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭ、１．６％グリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾールの後に加えた６Ｚｎ／６アシル化インスリン、２０ｍＭのＮａＣｌ、７ｍＭのリン酸塩、ｐＨ７．５、１．５μＣｉの１２５Ｉ−ＴｙｒＡ１４−ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン  トレーサー、および２ｍｌの体積。
【０２０４】
８．２ｍｇのＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを４００μＬの水に溶解し、３μＣｉの１２５Ｉ−ＴｙｒＡ１４−ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを加え、続いて、８００μＬの４％グリセロールを加え、１０−１５分間減圧遠心処理して、トレーサー溶液に含まれる添加エタノールを除去した。１００μＬの０．３２Ｍフェノールを加え、続いて、２分間隔で、２００μＬの０．１６Ｍのｍ−クレゾール、１２０μＬの１０ｍＭのＺｎ（ＡｃＯ）２、８０μＬの０．５ＭのＮａＣｌを加え、ｐＨをｐＨ７．５ｍＭに調整し、合計の体積を２ｍｌに調整した。溶液は、０．２２μｍの滅菌フィルターを通じて濾過し、ブタでの皮下注射の後の消失実験に用いられた。製剤例２Ａから２Ｄのクロスオーバー研究でのアッセイ下で記載されるように、Ｔ５０％±ＳＥＭは、１３．５±１．７ｈと決定された。
【０２０５】
実施例３
ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの結晶化による単離
ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンは、６ｍｏｌのインスリン当たり２−６ｍｏｌの亜鉛の亜鉛含有量および過剰のフェノール様分子（好ましくは、フェノール）を有するヘキサマー（六量体）として結晶化され得る。沈殿化剤として、イオン性の塩が用いられ、ＮａＣｌが好ましい。さらに、結晶化は、少量の有機溶媒（エタノール）により促進され得る。
【０２０６】
タンパク質溶液の調製（溶液Ａ）：
１．５ｍｇの凍結乾燥ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを、４ｍｌの０．０２  ｍｏｌ／ｌ  ｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタンバッファー（ＨＣｌを用いてｐＨ７．０に調整）に懸濁した。
１．８ｍｌのこのＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン溶液に対し、０．０１０ｍｏｌ／ｌのＺｎ（ＯＡｃ）２を含有する水溶液を６９．５μｌと、２ｍｏｌ／ｌのフェノールを含有するエタノール溶液１８μｌを添加する。
【０２０７】
沈殿化剤溶液の調製（溶液Ｂ）：
５ｍｌの０．１Ｍｔｒｉｓヒドロキシメチルアミノメタン含有溶液（ＨＣｌを用いてｐＨ７．５に調整）に対し、１．７５ｇＮａＣｌおよび１ｍｌのエタノールを加え、終体積を１０ｍｌに調整する。
結晶化：
等量（典型的には、５００μｌ）の溶液ＡおよびＢをガラスバイアル中で混合する。室温で１２時間経過の後に、再結晶化は完全となり、生じた結晶は、濾過もしくは遠心分離により単離することができる。
【０２０８】
実施例４
製剤：
Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０インスリン（６００μＭまで）を水に懸濁し、水酸化ナトリウムの添加により溶解し、以下の順で以下のものを添加した：グリセロール１．６％、フェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾール１６ｍＭ、酢酸亜鉛０から６Ｚｎ／６ｉｎｓ、塩化ナトリウム１０ｍＭ、リン酸塩７ｍＭ、ｐＨ７．５、および体積調整のための水。
【０２０９】
ＳＥＣ法：
場合によっては２ｍＭのフェノールを加えた、３７℃、ｐＨ７．３の等張の１０ｍＭのｔｒｉｓ緩衝生理食塩水を用いた、２０μＬの注入体積、０．０５ｍｌ／ｍｉｎの流量、１３０ｍｉｎのランタイムでの、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６ＰＣカラム（０．３２×３０ｃｍ）上でのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による分析。青色デキストラン（≫５ＭＤａ、ＫＡＶ０．０）、Ｔｙｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（チログロブリン）（６６９ｋＤａ、ＫＡＶ０．２８）、Ｆｅｒｒｉｔｉｎ（フェリチン）（４４０ｋＤａ、ＫＡＶ０．３９）、Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ（オバルブミン）（４４．５ｋＤａ、ＫＡＶ０．５６）、Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ（リボヌクレアーゼ）（１３．７ｋＤａ、ＫＡＶ０．６９）という第一基準およびＡｌｂｕｍｉｎ（アルブミン）（６６ｋＤａ、ＫＡＶ０．５３）、Ｃｏ（ＩＩＩ）インスリン−ヘキサマー（３５ｋＤａ、ＫＡＶ０．６１）、および単量体インスリンＸ２（６ｋＤａ、ＫＡＶ０．７３）という第二基準。青色デキストランの保持時間は、１７．９ｍｉｎ（ｔ０）およびカラムなしでは０．７４ｍｉｎ（ｔｄ）であり、かつ、アルブミン（ＨＳＡ）の保持時間は、約３４．１ｍｉｎであった。
【０２１０】
ＫＡＶ＝（ｔ−ｔ０）／（Ｖ／ｆ＋ｔｄ−ｔ０）
ｔ：保持時間（ｍｉｎ）
ｔ０：青色デキストランの保持時間（排除限界）
ｔｄ：カラム無しでの青色デキストランの保持時間（空隙容量）
Ｖｔ：総カラム容量（ｍＬ）
ｆ：流量（ｍＬ／ｍｉｎ）
【０２１１】
データフォーマット：
ＫＡＶピーク１        ｘ．ｘｘ
面積ピーク１（％）  ｘｘｘ
ＫＡＶピーク２        ｘ．ｘｘ
面積ピーク２（％）  ｘｘｘ
【０２１２】
ＫＡＶ面積ピーク１は、アルブミンより大きな自己会合に対応するＫＡＶ＜０．４６に対する合計面積の相対的面積％として、ＫＡＶ＝０からＫＡＶ＝０．４６（３２ｍｉｎ）で計測される。ＫＡＶピーク１については、約０．５６（アルブミンサイズ）の積分値のカットは、アルブミンサイズとインスリンヘキサマーサイズの中間である。
【０２１３】
ピークフラクションの特異的検出を用いた、持続型インスリン誘導体および即効型インスリンアスパルトの混合物に対するＳＥＣ法：
インスリンアスパルト（３Ｚｎ／６ｉｎｓ）および遷延作用型インスリン誘導体の５０：５０の混和性は、ＳＥＣからのフラクションを集め、即効型および遷延作用型のインスリンの高分子量フラクション（ピーク１）および低分子量フラクション（ピーク２）における存在をＨＰＬＣにより定量化することにより計測する。フラクションカットは、上述した以下の積分値カットである。
溶出液にフェノールの無いＳＥＣ法では、ピーク１は、アルブミンより大きな会合形態をを含有し、ピーク２は、インスリンのジヘキサマー、ヘキサマー、ダイマーおよびモノマー携帯を含有する。
溶出液に２ｍＭのフェノールを含むＳＥＣ法では、ピーク１は、インスリンのジヘキサマーおよび他のより大きな携帯を含有し、ピーク２は、インスリンのヘキサマー、ダイマーおよびモノマー形態を含有する。
【０２１４】
双方のアナログに対してインスリンアスパルトを参照物質として用い、４．５ｍｉｎ線形、５ｍｉｎの急な初期状態、７ｍｉｎのランタイム、０．５ｍｌ／ｍｉｎの流量、１４μＬの注入体積および２７６ｎｍでのＵＶ検出で、Ａ：０．２Ｍ硫酸ナトリウム、０．０４Ｍリン酸ナトリウム、１０％アセトニトリル、ｐＨ７．２およびＢ：３０℃の７０％アセトニトリルを用い、１９−３４％Ｂの勾配溶出した、ＺｏｒｂａｘＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ−Ｃ１８２．１×１５ｍｍ（１．８μｍ）上でのＨＰＬＣ逆相クロマトグラフィーによる、インスリン誘導体およびインスリンアスパルトの特異的な検出。
【０２１５】
データフォーマット：
インスリン誘導体ピーク１面積（％）      ｘｘｘ
インスリンアスパルトピーク２面積（％）  ｘｘｘ
【０２１６】
結果：
【表１】
2011006428.tif 000022
2011006428.tif 000023
2011006428.tif 000024
2011006428.tif 000025
【０２１７】
結論：  体温で生理食塩水溶出液を用いたＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）は、フェノール性保存料が存在しない場合は、皮下組織への注射の後のインスリン自己会合のモデルとして用いられる。溶出液ＳＥＣにフェノールを含ませることにより、製薬学的製剤中および注射直後のインスリン自己会合の状態を評価することができる。
Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０インスリン６００μＭは、一例として、０から６Ｚｎ／６ｉｎｓと段階的に増加する亜鉛濃度で製剤化され、亜鉛濃度が５Ｚｎ／６ｉｎｓの際には、ＳＥＣ法によれば、超高分子量への自己会合が示され、かつ９０％より多くがヒトアルブミン以上の自己会合が示された。ＳＥＣ溶出液にフェノールを含ませると、二つの鋭いピークが、インスリンジヘキサマーサイズおよびインスリンモノマーサイズに観察され、４Ｚｎ／６ｉｎｓの際には、９５％より多くがジヘキサマーサイズだった。
【０２１８】
全ての製剤を、インスリンアスパルト（３Ｚｎ／６ｉｎｓ）と、等濃度および等体積で混合し、集めたピークの内容を具体的に解析した。４Ｚｎ／６ｉｎｓの際には、Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０インスリンの９５％より多くが、超高分子量で見出され、アスパルトの９５％より多くがモノマーサイズで見出された。溶出液にフェノールを含ませると、二つのピークが、インスリンジヘキサマーサイズおよびインスリンモノマーサイズに観察され、４Ｚｎ／６ｉｎｓの際には、持続型インスリンの９５％より多くが、モノマーおよびヘキサマーサイズの中間のインスリンアスパルトの９５％より多くから離れたジヘキサマーサイズだった。
持続型アナログ製剤がモノマー形態の５％未満を含む場合、等モル製剤混合物の非鈍化が観察された。
【０２１９】
実施例５．
Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０インスリンと、インスリンアスパルトとの混和性：ブタにおける正常血糖クランプ研究
製剤
Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０インスリン（ｉｎｓ．誘導体）（１２００μＭまで）を水に懸濁し、溶解し、グリセロール１．６％、および１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾールを加えた。亜鉛添加の前に、水酸化ナトリウムによりｐＨを７．５に調整し、最大１Ｚｎ／６ｉｎｓから３Ｚｎ／６ｉｎｓまで（ａｄ  Ｉ）、５．６２Ｚｎ／６ｉｎｓまで（ａｄ  ＩＩ）、および６Ｚｎ／６ｉｎｓまで（ＩＩＩ）の少量ずつ酢酸亜鉛を添加した。その後、塩化ナトリウムを１０ｍＭまで加え、水酸化ナトリウムによりｐＨを７．５に調整し、水により体積を調整した。
【０２２０】
インスリンアスパルト（６００μＭまで）を水に懸濁し、ｐＨを約２．５までの塩酸、３Ｚｎ／６ｉｎｓまでの酢酸亜鉛、１．６％までのグリセロール、１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾール、１０ｍＭまでの塩化ナトリウムを加え、ｐＨを７．５に調整し、および終体積まで水を加えた（ＩＶ）。
最終的に、インスリンアスパルト（ＩＶ）は、Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０インスリンと、１：８のモル関係かつ合計の亜鉛濃度が３．３８Ｚｎ／６ｉｎｓ．誘導体（Ｉ）（ｌｏｗＺｎｍｉｘ）および６Ｚｎ／６ｉｎｓ．誘導体（ＩＩ）（ｈｉｇｈＺｎｍｉｘ）となるように混合した。
【０２２１】
動物実験
メスのブタ（Ｎ＝８、中間体重８０ｋｇ）を研究の１８時間前に絶食させた。インスリンアスパルトおよびＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０インスリンの混合の効果を調べるために、それぞれのブタに、ｌｏｗＺｎｍｉｘ（Ｉ）もしくｈｉｇｈＺｎｍｉｘ（ＩＩ）もしくは二つのアナログ（ＩＩＩおよびＩＶ）の何れかを順不同で与え、同一のブタに別々に投与した。投与量は、０．９ｎｍｏｌ／ｋｇのインスリンアスパルトおよび７．２ｎｍｏｌ／ｋｇのＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０インスリンであった。ブタは、２０％グルコース溶液の注入により、個々の空腹時血糖値における正常血糖を保たせた。血漿グルコース濃度の変化に応じて、グルコース注入速度の調整が実験的に行なわれた。血液試料は、免疫反応性のインスリンの特異的ＥＬＩＳＡ血漿分析のために、０−２４ｈで集められ、その薬理学的特性は、図１３および図１４に示される。
【０２２２】
結論
二つの混合処方における双方のインスリン構成成分の鈍化の程度を調べた。インスリンアスパルトおよびインスリン４５４の双方の顕著な鈍化は、混合物中に低亜鉛濃度の場合（３．３８Ｚｎ／６ｉｎｓ．誘導体）に観察された。しかしながら、亜鉛濃度が６亜鉛／６ｉｎｓ．誘導体まで増加した場合は、薬理学的特性の鈍化は観察されなかった（非鈍化が観察された）。グルコース注入速度は、個々のインスリンアナログの薬理学的特性の合計とよく匹敵した。
【０２２３】
実施例６
亜鉛バッファーとしてのクエン酸塩
Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０インスリン（ｉｎｓ．誘導体）（６００μＭまで）を水に懸濁し、溶解し、グリセロール１．６％、およびフェノール１６ｍＭおよびｍ−クレゾール１６ｍＭを加える。ｐＨを水酸化ナトリウムで７．５に調整し、クエン酸塩を、酢酸亜鉛に関してそれぞれ０．６、１．８および６ｍＭの６亜鉛／６インスリン誘導体の三つの製剤に添加した。その後、塩化ナトリウムを１０ｍＭまで加え、リン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）を５ｍＭまで加え、続いてｐＨを水酸化ナトリウムで７．５または７．８まで調整し、体積を水で調整する。
２ｍＭフェノールを含む溶出液を用いた実施例４に記載のＳＥＣ法により、５℃保存と比較して、３７℃２週間保存後で、製剤について研究した。３、５および６Ｚｎ／６ｉｎｓ．誘導体でクエン酸塩を有しない対照製剤も含めた。
インスリンアスパルト（３Ｚｎ／６ｉｎｓ）と、持続性インスリン誘導体との３０：７０の混和性を、ＳＥＣからの分画を集め、ＨＰＬＣにより即効性および持続性のインスリンを、高分子量画分（ピーク１）および低分子量画分（ピーク２）で定量化することにより測定した。画分カットと定量化は、実施例４に従った。
【０２２４】
結果：
【表２】
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【０２２５】
結論：
２ｍＭフェノールを含むＳＥＣ生理食塩水溶出液を用いると、持続型インスリン誘導体は、主に、ジヘキサマー形態（および、より多く会合した形態）に相当するアルブミンのサイズで会合しており、モノマー形態でのインスリン誘導体の量は、３から５および６Ｚｎ／６ｉｎｓ．誘導体へと増加する亜鉛濃度で減少する。６Ｚｎ／６ｉｎｓ．誘導体の亜鉛濃度まで１、３もしくは１０クエン酸塩当量を添加すると、３Ｚｎ／ｉｎｓ．誘導体での対照と比較して、モノマーインスリン誘導体の含有量が減少した。自己会合様式は、３７℃で２週間の貯蔵の後も変化しなかった。
クエン酸塩無しで製剤化されたインスリンアスパルト（３Ｚｎ／６ｉｎｓ）と、本実施例の上記系に示すように製剤化された持続性インスリン誘導体との３０：７０の混和性を、５℃および３７℃２週間保存後について、表に示す。３つのレベルでのクエン酸塩と６Ｚｎ／６ｉｎｓとを含むインスリン誘導体製剤は、３７℃２週間保存の後も、インスリンアスパルトと混合可能であることが示され、インスリンアスパルトは、３Ｚｎ／６ｉｎｓにおける通常のレベルの亜鉛の高分子量画分に、部分的に含まれた。
【０２２６】
実施例７
クエン酸亜鉛を加える。
Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０インスリン（ｉｎｓ．誘導体）（６００μＭまで）を水に懸濁し、溶解し、グリセロール１．６％、およびフェノール１６ｍＭおよびｍ−クレゾール１６ｍＭを加える。ｐＨを水酸化ナトリウムで７．５に調整し、クエン酸亜鉛を０．６ｍＭの亜鉛イオンになるまで添加する。その後、塩化ナトリウムを１０ｍＭまで加え、リン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）を５ｍＭまで加え、続いてｐＨを７．５まで調整し、体積を水で調整する。
【０２２７】
実施例８
界面活性剤を添加し、即効性アナログと混合する。
Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０インスリン（ｉｎｓ．誘導体）（６００μＭまで）を水に懸濁し、溶解し、グリセロール１．６％、および１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾールを加える。ｐＨを水酸化ナトリウムで７．５に調整し、酢酸亜鉛で６亜鉛／６インスリン誘導体にする（任意によって、クエン酸塩としての亜鉛）。その後、塩化ナトリウムを１０ｍＭまで加え、界面活性剤、例えばｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８またはｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ２０を約０．００２％まで加え、リン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）を５ｍＭまで加え、続いてｐＨを７．５まで調整し、体積を水で調整する。インスリンアスパルト（ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン）もしくはインスリンＬｉｓＰｒｏ（ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン）もしくはインスリングルリシン（ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリン）（全て６００μＭ）を、実施例７または実施例８により製剤化されるＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０インスリンと、約３／７から約７／３のモル比で混合する。
【０２２８】
実施例９
表３は、６のインスリン毎に２もしくは６のＺｎ（ＩＩ）を有する実施例４に記載されるようにして測定されたＳＥＣを示す。
表に記述される化合物の調製については、国際公開第２００６／０８２２０４号および国際公開第２００６／０８２２０５号を参照のこと。
【０２２９】
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【０２３０】
実施例１０
１，１６−ヘキサデカン二酸  モノベンジルエステルの調製
ヘキサデカン二酸（２０．０ｇ、６９．８ｍｍｏｌ）、ｎ−オクタンおよびＤｏｗｅｘ（登録商標）を懸濁させ、過熱還流する。６時間後、追加のギ酸ベンジル（２２．０ｇ、１６２ｍｍｏｌ）を加える。加熱を５０時間続ける。反応混合液を８０℃で濾過する。濾液を２０℃まで冷却し、沈殿を濾過により集める。粗生成物（２０．２ｇ）をジクロロメタン（２２０ｍｌ）に２０℃で４時間懸濁させる。懸濁液を濾過し、濾液を排出させて２０−３０℃で乾燥させる。結果として生じる固体（１３．９ｇ）を２−プロパノール（１４０ｍｌ）から再結晶する。
生成物を濾過により単離し、３０−４０℃で減圧下、一定重量まで乾燥させる。収量１０．２ｇ（３９％）の白色物質。
【０２３１】
Ｌ−２−（１５−ベンジルオキシカルボニル−ペンタデカノイルアミノ）−ペンタン二酸  ５−ベンジルエステル  １−（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）エステルの調製
１，１６−ヘキサデカン二酸  モノベンジルエステル（２０．０ｇ、５３．１ｍｍｏｌ）を、３５−４０℃でアセトンに溶解する。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（６．４２ｇ／５５．８ｍｍｏｌ）を加える。結果として生じる溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（１２．１ｇ／５８．４ｍｍｏｌ）を加える。反応混合液を３５℃で３−４時間攪拌する。結果として生じた懸濁液に、トリエチルアミン（７．４０ｍｌ、５３．１ｍｍｏｌ）ｏｇ  Ｌ−グルタミン酸α−ベンジルエステル（１２．６ｇ／５３．１ｍｍｏｌ）を加える。反応混合液を３５−４０℃で８−１６時間攪拌する。反応混合液を２０−２５℃まで冷却する。メタンスルホン酸（３．４５ｍｌの／５３．１ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（１２．１ｇ／５３．１ｍｍｏｌ）を加える。反応混合液を２０−２５℃で８−１６時間攪拌する。反応混合液を濾過し、濾液を排出させて乾燥させる。残留物を、水（１００ｍｌ）およびトルエン（２００ｍｌ）で分画する。トルエン相を水の蒸留により乾燥させた。シリカゲル（２０ｇ）を残留物に加える。懸濁液を２０−２５℃で３０分間攪拌し、濾過する。濾液の体積を、減圧下のエバポレーションにより約１００−１２０ｍｌまで減少させた。Ｎ−ヘプタン（１５０ｍｌ）を、１５−３０分間にわたって加える。結果として生じる懸濁液を２時間攪拌する。生成物を濾過により単離し、２０−２５℃で減圧下、一定重量まで乾燥させる。収量２１ｇ（５８％）の白色物質。
【０２３２】
Ｌ−２−（１５−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−ペンタン二酸  ５−（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）エステル（ＰＣ２４１４）の調製
Ｌ−２−（１５−ベンジルオキシカルボニル−ペンタデカノイルアミノ）−ペンタン二酸  ５−ベンジルエステル  １−（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）エステル（５．０ｇ、７．３ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（９５μｌ）を含むアセトン（９５ｍｌ）に溶解する。パラジウム炭素、１０％（０．５０ｇ）を加える。３０−３５℃で攪拌しながら水素を加える。水素の消費が停止したとき、反応混合液を濾過する。濾液を２０℃に冷却し、ｎ−ヘプタン（１４０ｍｌ）を１５−３０分間にわたって加える。結果として生じる懸濁液を２−３時間で０−５℃に冷却する。生成物を濾過により単離し、２０−２５℃で減圧下、一定重量まで乾燥させる。収量３ｇ（８４％）の白色物質。
生成物は、アセトン−ｄ６を溶媒として用いてプロトンＮＭＲ（Ｂｒｕｋｅｒ６００ＭＨｚ）により分析した。
【０２３３】
１ＤスペクトルからのプロトンＮＭＲ帰属（内標準は、δ０．０ｐｐｍのＴＭＳ）
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【０２３４】
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【０２３５】
ＰＣ２４１４を用いたヒトインスリンｄｅｓＢ３０の位置Ｂ２９のリジンのε−アミノ基アシル化
４ｇのｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを６４ｇの精製水に懸濁する。１．８５ｍｌのトリエチルアミン（ＴＥＡ）を加えて、ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを溶解させ、ｐＨを１１．４−１２．０まで上げる。溶液を２−５℃まで冷却する。
４４８ｍｇのＰＣ２４１４を、１０−１５％の硫酸で安定化した３．５ｇのＮＭＰ（Ｎ−メチル−２−ピロリドン）に加える。
ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン溶液を攪拌し、ＰＣ２４１４溶液を、温度を低く保ちながら２０分間にわたって加える。
【０２３６】
ＰＣ２４１４の添加後、反応混合液を、Ｔｒｉｓ−ヒドロキシメチルアミノメタン（２０ｍｍｏｌ／ｋｇ）、酢酸アンモニウム（３０ｍｍｏｌ／ｋｇ）、エタノール４２，５％ｗ／ｗ、残部精製水、ｐＨ７，５からなる２．５重量の溶液で希釈する。
希釈後、かき混ぜながら、緩やかに１Ｍ酢酸を加えることにより、ｐＨを７．５に調整する。
ＨＰＬＣによる分析により、１４，２２％の残留ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを有する７２，１１％のＬｙｓＢ２９（Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−グルタミル）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンの形成が示される。
【０２３７】
分析ＨＰＬＣ法：
オクチルジメチルシリル置換シリカを充填された、約100 Åの孔サイズと約３．５μｍの粒径を有する１５０Ｘ４．６ｍｍ内径のカラムを、４０℃で１ｍｌ／分の流速で、１：７．８％（ｗ／ｗ）を含むＮａＯＨ水溶液でｐＨ５．９に調整された２０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４．Ｈ２Ｏおよび１００ｍｍｏｌのＮａ２ＳＯ４バッファー、および２：４２，８％ｗ／ｗのアセトニトリルを含むアセトニトリル溶媒からなり、２５％（ｗ／ｗ）アセトニトリルとなるように調整した混合液を用いて、平衡化する。
ＬｙｓＢ２９（Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−グルタミル）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンは、約２０分後にカラムから溶出した。ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンは約６分後にカラムから溶出した。
【０２３８】
アッセイ（II）
ヒトインスリンに対する本発明のインスリン誘導体の効力
実験日の体重が238-383 gであったＳＤオスラットを、固定（clamp）実験に用いた。ラットは、制御された環境条件下で、餌に自由に接近でき、固定実験の前一晩（３ｐｍから）絶食した。
【０２３９】
〔実験プロトコール〕
外科手術の前に少なくとも１週間の間、動物施設でラットを馴養した。固定実験の前に、約１週間、タイゴン（Tygon）カテーテルをハロタン麻酔下で、頚静脈（注入用）および頚動脈（血液採取用）に挿入し、首部背面で外面化して固定した。術後のラットにストレプトシリン（Streptocilin vet.）(Boehringer Ingelheim; 0.15 ml/rat, i.m.)を与え、回復期間の間、動物ケアユニット(25 ℃)に置いた。鎮痛のために、アノルフィン（Anorphin）(0.06 mg/rat, s.c.)を、麻酔の間投与し、リマディル（Rimadyl）(1.5 mg/kg, s.c.)を、麻酔から完全に回復した後(2-3 h)に投与し、２日間、日に一度投与した。
【０２４０】
用いた固定技術は（１）から適用させた。実験日の7 amに、一晩絶食させた(前日の3 pmから)ラットの体重を量り、サンプリングシリンジおよび注入システム（Harvard 22 Basic pumps, Harvard, and Perfectum Hypodermic glass syringe, Aldrich）に接続し、次いで、個々の固定ケージに置き、ここで、実験開始前約４５分安静にさせた。ラットは、全実験期間中、それらの通常の土台（beddin）上で自由に動くことができ、飲料水に自由に接近できた。血漿グルコースレベルが10分間隔で測定される基礎期間30分の後、試験されるインスリン誘導体およびヒトインスリン（ラット当たりの一つの投与レベル、投与レベル当たり n = 6〜7）を一定速度で300分、注入（i.v.）した。血漿グルコースレベルは、10分の間隔で終始測定し、20％グルコース水溶液の注入は正常血糖を維持するために、これに従って調節された。再懸濁した赤血球のサンプルは、各ラットからプールし、頚動脈カテーテルを介して約1/2 ml容量で戻された。
【０２４１】
各実験日において、試験される個々のインスリン誘導体およびヒトインスリン溶液の溶液サンプルを、固定実験の前および終了時に採取し、該ペプチドの濃度をＨＰＬＣで確かめた。ラットインスリンおよびＣ-ペプチド並びに試験されるインスリン誘導体およびヒトインスリンの血漿濃度を、実験の前および終了時の関連する時点で測定した。ラットは、ペントバルビタールを過剰投与して実験終了時に殺した。
【０２４２】
アッセイ（ＩＩＩ）
ブタにおける、本発明のインスリン誘導体のＴ５０％の測定
Ｔ５０％は、外部γ−カウンターで測定したとき、試験されるインスリンのＡ１４Ｔｙｒ［１２５Ｉ］標識化誘導体の注入量の５０％が注入部位から消失する時間である。
実験動物ケアの原則に従い、薬物動態学的研究および薬力学的研究のために、特異的病原体の無いＬＹＹＤ、非糖尿病メスブタ、Ｄａｎｉｓｈ  Ｌａｎｄｒａｃｅ、ＹｏｒｋｓｈｉｒｅおよびＤｕｒｏｃの交雑育種を用いた（Ｈｏｌｍｅｎｌｕｎｄ、Ｈａａｒｌｏｅｖ、Ｄｅｎｍａｒｋ）。ブタには意識があり、４−５月齢で体重７０−９５ｋｇであった。動物は実験の前に、一晩１８時間絶食させた。
【０２４３】
１２５Ｉを有するＴｙｒＡ１４で標識したインスリン誘導体の処方された製剤を、前述のようにブタに皮下注射した（Ribel, U., Jorgensen, K, Brange, J, and Henriksen, U. The pig as a model for subcutaneous insulin absorption in man. Serrano-Rios, M and Lefebvre, P. J. 891-896. 1985. Amsterdam; New York; Oxford, Elsevier Science Publishers. 1985 (Conference Proceeding)）。
実験の開始において、６０ｎｍｏｌの投与量の本発明に係るインスリン誘導体（試験化合物）と、６０ｎｍｏｌの投与量インスリンデテミル（detemir）（何れもＴｙｒＡ１４で１２５Ｉ標識されている）を、それぞれのブタの首の二つの異なる位置で注射した。
【０２４４】
皮下注射の部位からの放射性標識の消失は、従来の外部ガンマ計測法（Ribel, U. Subcutaneous absorption of insulin analogues. Berger, M. and Gries, F. A. 70-77 (1993). Stuttgart; New York, Georg Thime Verlag (Conference Proceeding)）の改変を用いてモニターした。この改変法により、コードレスの携帯型デバイスを用いて、数日間、皮下貯蔵物からの放射能活性の消失を連続的に測定することができる（Scancys Laboratorieteknik, Varlose, DK-3500, Denmark）。測定は、１分間隔で行い、計測値はバックグラウンド活性で補正した。
【図面の簡単な説明】
【０２４５】
全ての図は、ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンおよび／またはインスリンアスパルトの製剤の、３７℃で生理食塩水により溶出されたＳｕｐｅｒｏｓｅ６ＨＲでのサイズ排除クロマトグラフィーの結果を上図に、高分子量画分から低分子量画分またはインスリンモノマー画分までをカバーするそれぞれ１４画分の内容を下図に示したものである。
図中、以下の略語が用いられる：
アスパルト：            インスリンアスパルト
Ｚｎ／６Ｉｎｓ：        ６分子のインスリン当たりの亜鉛原子
Ｚｎ／アシル−ｉｎｓ：  ６分子のアシル化インスリン当たりの亜鉛原子
アシル−ｉｎｓ          アシル化インスリン
【図１】６分子のインスリンアスパルト毎に３の亜鉛原子を有するインスリンアスパルト６００μＭ
【図２】６分子のインスリンアスパルト毎に６の亜鉛原子を有するインスリンアスパルト６００μＭ
【図３】６分子のアシル化インスリン毎に３の亜鉛原子を有するＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭ
【図４】６分子のアシル化インスリン毎に４の亜鉛原子を有するＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭ
【図５】６分子のアシル化インスリン毎に６の亜鉛原子を有するＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭ
【図６】６分子のアシル化インスリン毎に８の亜鉛原子を有するＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭ
【図７】６分子のアシル化インスリン毎に３，６の亜鉛原子の総亜鉛含有量を有するインスリンアスパルト１８０μＭとＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン８４０μＭとの混合物
【図８】６分子のアシル化インスリン毎に４．３の亜鉛原子の総亜鉛含有量を有するインスリンアスパルト１８０μＭとＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン４２０μＭとの混合物
【図９】６分子のアシル化インスリン毎に４．５の亜鉛原子の総亜鉛含有量を有するインスリンアスパルト３００μＭとＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭとの混合物
【図１０】６分子のアシル化インスリン毎に８．６の亜鉛原子の総亜鉛含有量を有するインスリンアスパルト１８０μＭとＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン４２０μＭとの混合物
【図１１】６分子のアシル化インスリン毎に１１．４の亜鉛原子の総亜鉛含有量を有するインスリンアスパルト１８０μＭとＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン４２０μＭとの混合物
【図１２】６分子のアシル化インスリン毎に１２の亜鉛原子の総亜鉛含有量を有するインスリンアスパルト３００μＭとＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン３００μＭとの混合物
【図１３】別々に提供されたインスリンアスパルト（ＩＶ、破線、Ｎ＝８）、およびＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕインスリンと混合して提供されたインスリンアスパルトの低亜鉛濃度（Ｉ、３．３８Ｚｎ／６ｉｎｓ誘導体、実線、Ｎ＝８）および高亜鉛濃度（ＩＩ、６Ｚｎ／６ｉｎｓ誘導体、点線、Ｎ＝７）の血漿特性
【図１４】別々に提供された２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０インスリン（ＩＩＩ、破線、Ｎ＝８）、およびインスリンアスパルトと混合して提供された２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０インスリンの低亜鉛濃度（Ｉ、３．３８Ｚｎ／６ｉｎｓ誘導体、実線、Ｎ＝８）および高亜鉛濃度（ＩＩ、６Ｚｎ／６ｉｎｓ誘導体、点線、Ｎ＝７）の血漿特性
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【手続補正書】
【提出日】平成22年8月31日(2010.8.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アシル化インスリンを含み、６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子をさらに含む可溶性製薬学的組成物。
【外国語明細書】
2011006428000001.pdf
2011006428000002.pdf
2011006428000003.pdf
2011006428000004.pdf