(57)【要約】【課題】ハンタウイルス感染の正確で、効率的で、かつ迅速な、広範に利用可能なアッセイを提供する。【解決手段】ハンタウイルス感染の検出のための新規な方法および免疫診断試験キットが開示される。この方法およびキットは、ハンターン（ＨＴＮＶ）、プーマラ（ＰＵＵＶ）、ソウル（ＳＥＯＶ）、ドブラバ（ＤＯＢＶ）、シンノンブル（ＳＮＶ）およびアンデス（ＡＮＤＶ）を含む少なくとも６つの異なるハンタウイルス血清型由来の組換えＮ抗原および／または組換えＧ１抗原の組み合わせを使用する。これらおよび他のハンタウイルスタイプ由来のさらなるハンタウイルス抗原もまた存在し得る。この方法によって、極めて正確な結果が得られ、かつ感染の検出が可能になり、その結果処置を与えることおよび死亡を回避することが可能になる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書中に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ)の下で、仮特許出願第６０／５８１，０２７号（２００４年６月１８日出願）の利益を主張し、この仮特許出願は、本明細書中でその全体が参考として援用される。
【０００２】
（連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載）
本発明は、ＮＩＨ助成金Ｕ０１  ＡＩＯ５４７７９の下、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅｓからの支援によって行われた。従って、米国政府は、本発明において特定の権利を有し得る。
【０００３】
（技術分野）
本発明は、一般に、ハンタウイルスに関する。詳細には、本発明は、ハンタウイルス感染の診断のための組成物における使用のための、免疫原性ヌクレオカプシドおよび糖タンパク質ポリペプチドを含む、多数のハンタウイルス血清型由来の免疫原性試薬に関する。
【背景技術】
【０００４】
（背景）
ハンタウイルス（ブンヤウイルス科：ハンタウイルス属（Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ：Ｈａｎｔａｖｉｒｕｓ））は、脂質エンベロープがある、マイナス−センスＲＮＡウイルスである。ウイルスゲノムのＲＮＡは三部からなり、これは、それぞれ小、中および大のゲノムフラグメントについてＳ、ＭおよびＬと一般に命名された３つのフラグメントからなる。このＭセグメントは、Ｇ１およびＧ２と名付けられる、２つのエンベロープ糖タンパク質を形成するようにプロセシングされる前駆体タンパク質をコードする。このＳセグメントは、ウイルスの繊維状のらせんヌクレオカプシドを形成し、体液性の応答を誘発する、Ｎと名付けられたヌクレオカプシドタンパク質をコードする。ゲノムのＬセグメントは、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲＤＲＰ）をコードする。２０を上回る別個のハンタウイルスが、世界中の特定のげっ歯類または食虫類の宿主に関連して見出される。ヒトへの伝播の方式、天然の保有宿主およびヒト感染の臨床的特徴は概説されている（例えば、非特許文献１）を参照のこと）。
【０００５】
ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）はまた、ハンタウイルス心肺症候群（ＨＣＰＳ）としても公知であり、死亡率５０％におよぶ急性の熱性疾患である。患者は非特異的な症状を示し、劇症型の肺水腫および心血管虚脱に急激に進行する。北米におけるＨＰＳの主な因子は、シンノンブルウイルス（ＳＮＶ；フォーコーナーズウイルス（Ｆｏｕｒ  Ｃｏｒｎｅｒｓ  ｖｉｒｕｓ）およびムエルトキャニオンウイルス（Ｍｕｅｒｔｏ  Ｃａｎｙｏｎ  ｖｉｒｕｓ）としても知られる）である（非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７）。ニューヨークウイルス（ＮＹＶ）、ブラッククリークカナルウイルス（ＢＣＣＶ）およびバイユウウイルス（ＢＡＹＶ）を含む、少なくとも３つの他のハンタウイルスが、北米におけるＨＰＳに関連している。
【０００６】
世界中で、腎症状を伴う出血熱（ＨＦＲＳ）を生じるユーラシアのハンタウイルスによって、病気のより大きい犠牲が発生している。ＨＦＲＳ関連のウイルスとしては、ハンターンウイルス（ＨＴＮＶ）、プーマラウイルス（ＰＵＵＶ）、ソウルウイルス（ＳＥＯＶ）、およびドブラバ−ベルグレード（Ｄｏｂｒａｖａ−Ｂｅｌｇｒａｄｅ）ウイルス（ＤＯＢＶ）が挙げられる。（非特許文献８、非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１）が挙げられる。ＨＦＲＳの臨床的な徴候は一般に、ＨＴＮＶ感染およびＤＯＢＶ感染について最も重篤であるが、一方、ＰＵＵＶ感染は、スカンジナビア、フィンランド、西ロシアおよび中央ヨーロッパで発生する、ＨＦＲＳの軽度の形態である流行性腎症（ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｉａ  ｅｐｉｄｅｍｉｃａ）（ＮＥ）に関連する。ＨＦＲＳの最も重篤な形態では２０％におよぶ死亡率が報告されている。
【０００７】
ＨＦＲＳ関連のハンタウイルスのなかでも、ＨＴＮＶ、ＳＥＯＶおよびＤＯＢＶは抗原的に類似している。ＨＰＳ関連ウイルスはまた、お互いに密接に関連しており、ＰＵＵＶと交差反応する。抗原の交差反応性は、ウイルスのＮタンパク質の中で最も顕著である。組換え抗原診断アッセイでは、ウイルスＮ抗原は、ウイルス糖タンパク質よりも優性である。Ｎ抗原に対する抗体は、感染の経過の早期に生じて、回復期には普遍的に検出可能である。急性のＳＮＶ感染を有する全ての人が、臨床症状の発現によってＩｇＭクラスのＳＮＶのＮ抗原に対して検出可能な抗体を有し、そしてほぼ全てがＮ抗原およびＧ１抗原に対するＩｇＧ抗体を有する（非特許文献１２）。ＳＮＶのＧ１抗体は、他のハンタウイルスのＧ１抗原とは反応性ではない（非特許文献１３、非特許文献１４）。
【０００８】
ハンタウイルスは、ウイルス汚染されたげっ歯類の唾液、尿および糞便のエアロゾルの吸入を介してヒトに伝播する。研究者は、感染したげっ歯類のいる部屋に入るだけでハンタウイルス感染に罹患し得、このことはハンタウイルスが空気を通じて伝播するという有力な見解を強力に支持する。この観察はまた、屋内の曝露が極めて一般的であることを示す近年の疫学的な検討によって支持される。ヒトからヒトへの伝播は、アルゼンチンのアンデスウイルス（ＡＮＤＶ）について実証されており、そしてチリにおける２つの家族集団に起因する可能性が高い。このウイルスはまた、げっ歯類の咬傷後に伝播され得、そしておそらく、汚染された食物または水の摂取を通じて伝播され得る。
【０００９】
ハンタウイルスの全ての種は、主に特異的なげっ歯類宿主に関連していると思われる。ハンタウイルスの３つの広範な群があり、そしてそれらは、げっ歯類の亜科であるネズミ亜科（Ｍｕｒｉｎａｅ）、ハタネズミ亜科（Ａｒｖｉｃｏｌｉｎａｅ）およびアメリカネズミ亜科（Ｓｉｇｍｏｎｄｏｎｔｉｎａｅ）に関連している。これらの種々の亜科におけるげっ歯類の間の系統発生的な関係は、ほとんどの部分で、各々の特定の保有宿主に関連するウイルスの系統発生的関係および抗原的関係と類似している。ハンタウイルスのこれらの群の各々は、公知のヒト病原体である１つ以上の種またはタイプを含む。種々のハンタウイルスに関する情報を表１に示す。
【００１０】
【表１−１】
2011191322.tif 000002
【００１１】
【表１−２】
2011191322.tif 000003
ハンタウイルス感染の管理には大きな進歩があったが、首尾よい管理には、疾患の死直前の段階よりも前に患者が診断される必要がある。三次的な看護の管理における進歩が生じており、ハンタウイルス感染に起因する死亡率を減少し得る。しかし、感染の進行は極めて急速であるので、これらの進歩は、診断が適時的な様式で行われ得る患者の予後にしか影響しないようである。田舎の環境に適切であって、疾患の初期段階の間に適用され得るハンタウイルス抗体の迅速な検出のための方法は、初期介入についての見通しを改善し得る。
【００１２】
ハンタウイルス感染の適時的な診断のためにはいくつかのアッセイが試みられている。例えば、ハンタウイルス感染の血清学的診断のための種々の形式が、使用されており、これには、ビーズ凝集形式、実験室培養ウイルスを用いる免疫蛍光アッセイ形式および免疫沈降アッセイ形式、赤血球凝集素阻害形式、プラーク減少中和アッセイ形式およびフォーカス減少中和アッセイ形式、ならびにＥＬＩＳＡ形式が挙げられる（非特許文献８、非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１５、非特許文献１６、非特許文献１７）。
ストリップ・イムノブロットアッセイも、ハンタウイルス感染の効率的な診断の試みに用いられている（例えば、非特許文献１２、非特許文献１８、非特許文献１９を参照のこと）。しかし、ハンタウイルスの多数の株を同定するための普遍的なアッセイで現在利用可能なものはない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｍｅｒｔｚら，Ａｄｖ．Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄ．，第４２巻，１９９７年，ｐ．３６９〜４２１
【非特許文献２】Ｓｏｎｇら，Ｌａｎｃｅｔ，第３４４巻，１９９４年，ｐ．１６３７
【非特許文献３】Ｋｈａｎら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ，第４６巻，１９９５年，ｐ．２８１〜２８６
【非特許文献４】Ｋａｈｎら，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．，第１００巻，１９９６年，ｐ．４６〜４８
【非特許文献５】Ｍｏｒｚｕｎｏｖら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，第６９巻，１９９５年，ｐ．１９８０〜１９８３
【非特許文献６】Ｒｏｌｌｉｎら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ，第４６巻，１９９５年，ｐ．３５〜３９
【非特許文献７】Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｍｏｒｂｉｄ．Ｍｏｒｔａｌ．Ｗｅｅｋｌｙ  Ｒｅｐ．，第４３巻，１９９３年，ｐ．４５〜４８
【非特許文献８】Ｌｅｅら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．第１３７巻，１９７８年，ｐ．２９８〜３０８
【非特許文献９】Ｌｅｅら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．第１４６巻，１９８２年，ｐ．６３８〜６４４
【非特許文献１０】Ｌｅｅら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．第１４６巻，１９８２年，ｐ．６４５〜６５１
【非特許文献１１】Ｂｒｕｍｍｅｒ−Ｋｏｒｖｅｎｋｏｎｔｉｏら，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．，第１４１巻，１９８０年，ｐ．１３１〜１３４
【非特許文献１２】Ｂｈａｒａｄｗａｊら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．第１８２巻，２０００年，ｐ．４３〜４８
【非特許文献１３】Ｊｅｎｉｓｏｎら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，第６８巻，１９９４年，ｐ．３０００〜３００６
【非特許文献１４】Ｈｊｅｌｌｅら，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，第７５巻，１９９４年，ｐ．２８８１〜２８８８
【非特許文献１５】Ｌｕｎｄｋｖｉｓｔら，Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇｎｏｓ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，第２巻，１９９５年，ｐ．８２〜８６
【非特許文献１６】Ｃｈｕら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第１９８巻，１９９４年，ｐ．１９６〜２０４
【非特許文献１７】Ｅｌｇｈら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．第４５巻，１９９５年，ｐ．１４６〜５１０
【非特許文献１８】Ｈｊｅｌｌｅら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，第３５巻，１９９７年，ｐ．６００〜６０８
【非特許文献１９】Ｙｅｅら，Ｊ．Ｗｉｌｄｌ．Ｄｉｓ．，第３９巻，２００３年，ｐ．２７１〜２７７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
ハンタウイルス感染の正確で、効率的で、かつ迅速なアッセイの広範な利用可能性が高度に所望されており、そしてこれは、かなりの数の命を救い得る。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
（発明の要旨）
本発明は、ハンタウイルス感染を診断するための、そして存在するハンタウイルスのタイプを決定するための、単純、正確かつ効率的な方法を提供する。この方法によって、１つより多いハンタウイルス血清型由来のハンタウイルスのような、いくつかのハンタウイルスによって生じるハンタウイルス感染の、例えば、１時間未満での迅速な検出が可能になる。感染が検出されれば、その個体は死亡を防ぐために適切な時間で適切な処置を与えられ得る。この方法は、ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶを含む、少なくとも６つの異なるハンタウイルス血清型由来の、Ｎ抗原および／もしくはＧ１抗原、ならびに／またはこれらの抗原に対する抗体を利用する。このアッセイは、迅速かつ信頼の置ける診断試験を提供し、そして比較的洗練されていない実験室能力しかない施設での使用に適している。さらに、このアッセイを用いて、ハンタウイルス感染について野生のげっ歯類をスクリーニングして特定のげっ歯類集団がウイルスに感染しているか否かを確認し、それによって実験室の研究者ら、野外のクルー、および野生のげっ歯類とともに作業してそれに遭遇する他の人々における感染を予防し得る。
【００１６】
組換え技術を用いて本明細書に記載の生成物を作製し、他のウイルス混入物および有害なタンパク質のような通常存在する他の分子を含まないタンパク質調製物を提供し得る。
【００１７】
従って、１実施形態では、本発明は、生物学的サンプル中のハンタウイルス抗体を検出する方法に関する。この方法は：
（ａ）この生物学的サンプルと少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原とを接触させる工程であって、この少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原が、ハンタウイルスのハンターン（ＨＴＮＶ）血清型、プーマラ（ＰＵＵＶ）血清型、ソウル（ＳＥＯＶ）血清型、ドブラバ（ＤＯＢＶ）血清型、シンノンブル（ＳＮＶ）血清型およびアンデス（ＡＮＤＶ）血清型に由来するＧ１抗原および／またはＮ抗原の組み合わせを含み、ここで、この血清型の各々に由来する少なくとも１つの組換え抗原が存在し、この接触させる工程は、ハンタウイルス抗体が、この生物学的サンプル中に存在する場合、このＧ１抗原またはＮ抗原の少なくとも１つと結合して、抗体／抗原複合体を形成する条件下で行われる、工程と；
（ｂ）この抗体／抗原複合体の有無を検出し、それによってこのサンプル中のハンタウイルス抗体の有無を検出する工程と、を包含する。この少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原は、少なくとも６つのハンタウイルス血清型、すなわち、ハンターン（ＨＴＮＶ）、プーマラ（ＰＵＵＶ）、ソウル（ＳＥＯＶ）、ドブラバ（ＤＯＢＶ）、シンノンブル（ＳＮＶ）およびアンデス（ＡＮＤＶ）に由来する少なくとも１つの抗原が存在する限り、Ｇ１抗原およびＮ抗原の任意の組み合わせであり得る。好ましい実施形態では、この少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原は全てＮ抗原である。
【００１８】
さらなる実施形態では、この方法は、ハンタウイルス感染を検出するための免疫診断試験キットに関する。この試験キットは：
（ａ）少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原であって、この少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原が、ハンタウイルスのハンターン（ＨＴＮＶ）血清型、プーマラ（ＰＵＵＶ）血清型、ソウル（ＳＥＯＶ）血清型、ドブラバ（ＤＯＢＶ）血清型、シンノンブル（ＳＮＶ）血清型およびアンデス（ＡＮＤＶ）血清型に由来するＧ１抗原および／またはＮ抗原の組み合わせを含み、この血清型の各々に由来する少なくとも１つの抗原が存在する組換え抗原と；
（ｂ）この免疫診断試験を行うための説明書と、を備える。
【００１９】
好ましい実施形態では、この少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原は、全てＮ抗原である。
【００２０】
さらなる実施形態では、本発明は、生物学的サンプル中のハンタウイルス抗原を検出するための方法に関する。この方法は：
（ａ）この生物学的サンプルと少なくとも６つの異なる抗体とを接触させる工程であって、この抗体の各々が、６つのハンタウイルス抗原のうちの少なくとも１つに特異的であり、この６つのハンタウイルス抗原が、ハンタウイルスのハンターン（ＨＴＮＶ）血清型、プーマラ（ＰＵＵＶ）血清型、ソウル（ＳＥＯＶ）血清型、ドブラバ（ＤＯＢＶ）血清型、シンノンブル（ＳＮＶ）血清型およびアンデス（ＡＮＤＶ）血清型に由来するＧ１抗原および／またはＮ抗原の組み合わせを含み、ここで、この血清型の各々に由来する少なくとも１つの抗原に特異的な少なくとも１つの抗体が存在し、この接触工程は、ハンタウイルス抗原が、この生物学的サンプル中に存在する場合、この抗体に結合して抗体／抗原複合体を形成することを可能にする条件下で行われる工程と；
（ｂ）この抗体／抗原複合体の有無を検出し、それによってこのサンプル中のハンタウイルス抗原の有無を検出する工程と、を包含する。
【００２１】
上記の方法の特定の実施形態では、この抗体はモノクローナル抗体である。
【００２２】
さらに追加の実施形態では、本発明は、ハンタウイルス感染を検出するための免疫診断試験キットに関する。この試験キットは：
（ａ）少なくとも６つの異なる抗体であって、この抗体の各々が、６つのハンタウイルス抗原のうちの少なくとも１つに特異的であり、この６つのハンタウイルス抗原が、ハンタウイルスのハンターン（ＨＴＮＶ）血清型、プーマラ（ＰＵＵＶ）血清型、ソウル（ＳＥＯＶ）血清型、ドブラバ（ＤＯＢＶ）血清型、シンノンブル（ＳＮＶ）血清型およびアンデス（ＡＮＤＶ）血清型に由来するＧ１抗原および／またはＮ抗原の組み合わせを含み、この血清型の各々に由来する少なくとも１つの抗原に特異的な少なくとも１つの抗体が存在する抗体と；
（ｂ）この免疫診断試験を行うための説明書と；
を備える。
【００２３】
上記の免疫診断試験キットの特定の実施形態では、この抗体はモノクローナル抗体である。
【００２４】
さらなる実施形態では、本発明は、少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原を含む固体支持体であって、この少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原が、ハンタウイルスのハンターン（ＨＴＮＶ）血清型、プーマラ（ＰＵＵＶ）血清型、ソウル（ＳＥＯＶ）血清型、ドブラバ（ＤＯＢＶ）血清型、シンノンブル（ＳＮＶ）血清型およびアンデス（ＡＮＤＶ）血清型に由来するＧ１抗原および／またはＮ抗原の組み合わせを含み、この血清型の各々に由来する少なくとも１つの抗原が存在する、固体支持体に関する。この固体支持体は、ニトロセルロースのストリップであってもよい。
【００２５】
特定の実施形態では、この固体支持体はさらに、少なくとも１つの抗ヒト免疫グロブリン抗体を含み、このような１つ以上の抗体が、抗ヒトＩｇＭ抗体、抗ヒトＩｇＧ抗体および抗ヒトＩｇＡ抗体からなる群より選択され、上記ハンタウイルス抗原および抗ヒト免疫グロブリン抗体は、この固体支持体上の別個の位置に固定されている。
【００２６】
さらなる実施形態では、この固体支持体はさらに、少なくとも２つの内部コントロールを含み、このコントロールの１つは、この固体支持体を用いるイムノアッセイにおける陽性の結果について検出下限を規定し、そして他方のコントロールは、この固体支持体を用いるイムノアッセイにおける高度に陽性の結果を規定する。
【００２７】
さらなる実施形態では、本発明は、ハンタウイルスを検出するための免疫診断試験キットに関している。この試験キットは：
（ａ）上記のような固体支持体と；
（ｂ）この免疫診断試験を行うための説明書と、
を備える。
【００２８】
さらなる実施形態では、本発明は、生物学的サンプル中のハンタウイルス抗体の存在を検出する方法に関する。この方法は：
（ａ）生物学的サンプルを提供する工程と；
（ｂ）上記のような固体支持体を提供する工程と；
（ｃ）この生物学的サンプルとこの固体支持体とを、ハンタウイルス抗体がこの生物学的サンプル中に存在する場合にこのハンタウイルス抗体がハンタウイルス抗原の少なくとも１つと結合して抗体／抗原複合体を形成することを可能にする条件下で、接触させる工程と；
（ｄ）抗体／抗原複合体の存在を検出して、それによって生物学的サンプルにおけるハンタウイルス抗体の存在を検出する工程とを、包含する。
【００２９】
特定の実施形態では、上記の方法は、さらに：
（ｅ）未結合のハンタウイルス抗体を除去する工程と；
（ｆ）上記の抗体／抗原複合体と会合し得る１つ以上の部分を提供する工程と；
（ｇ）この１つ以上の部分の存在を検出して、それによってこの生物学的サンプル中のハンタウイルス抗体の存在を検出する工程と；
を包含する。
【００３０】
特定の実施形態では、上記１つ以上の部分は、検出可能に標識されたハンタウイルス抗原を含む。これらおよび他の実施形態では、上記検出可能な標識は酵素であり得る。
【００３１】
さらに追加の実施形態では、本発明は、実質的にハンタウイルスを含まない、全血、血小板、血漿または血清を含む血液供給源を調製する方法に関する。この方法は：
（ａ）上記の方法のいずれか１つの方法によって、収集した血液サンプルから全血、血小板、血漿または血清のアリコートをスクリーニングする工程と；
（ｂ）ハンタウイルス抗原またはハンタウイルス抗体が検出される、任意のサンプルを排除する工程と；
（ｃ）ハンタウイルス抗原もハンタウイルス抗体も検出されないサンプルを合わせて、ハンタウイルスを実質的に含まない血液供給源を提供する工程と；
を包含する。
【００３２】
任意の上記の方法では、生物学的サンプルは、ヒト血液サンプル由来であり得る。さらに、上記の任意の実施形態では、Ｇ１抗原（単数または複数）は、配列番号４０のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含み得る。Ｇ１抗原（単数または複数）は、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６および配列番号４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗原であってもよい。
【００３３】
さらに、Ｎ抗原（単数または複数）は、配列番号３９のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含んでもよい。他の実施形態では、Ｎ抗原（単数または複数）は、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２および配列番号５３からなる群より選択される、アミノ酸配列を含む１つ以上の抗原であってもよい。
【００３４】
上記Ｇ１抗原（単数または複数）は、配列番号４０のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含んでもよく、そして上記Ｎ抗原（単数または複数）は、配列番号３９のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含む。さらなる実施形態では、このＧ１抗原（単数または複数）は、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６および配列番号４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗原であり、かつ上記Ｎ抗原（単数または複数）は、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４および配列番号３６からなる群より選択される、アミノ酸配列を含む１つ以上の抗原である。
【００３５】
さらなる実施形態では、ハンタウイルスのＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の各々に由来する少なくとも１つのＧ１抗原が存在し、かつハンタウイルスのＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の各々に由来するＮ抗原の少なくとも１つが存在する。
【００３６】
さらなる実施形態では、ハンタウイルスのＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の各々に由来する少なくとも１つのＮ抗原が、存在する。
【００３７】
本発明は例えば、以下の項目を提供する：
（項目１）
生物学的サンプル中のハンタウイルス抗体を検出する方法であって：
（ａ）該生物学的サンプルと少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原とを接触させる工程であって、該少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原が、ハンタウイルスのハンターン（ＨＴＮＶ）血清型、プーマラ（ＰＵＵＶ）血清型、ソウル（ＳＥＯＶ）血清型、ドブラバ（ＤＯＢＶ）血清型、シンノンブル（ＳＮＶ）血清型およびアンデス（ＡＮＤＶ）血清型に由来するＧ１抗原および／またはＮ抗原の組み合わせを含み、ここで、該血清型の各々に由来する少なくとも１つの組換え抗原が存在し、該接触させる工程は、ハンタウイルス抗体が該生物学的サンプル中に存在する場合に該ハンタウイルス抗体が該Ｇ１抗原またはＮ抗原の少なくとも１つと結合して抗体／抗原複合体を形成することを可能にする条件下で行われる、工程と；
（ｂ）該抗体／抗原複合体の有無を検出し、それによって該サンプル中のハンタウイルス抗体の有無を検出する工程と；
を包含する、方法。
（項目２）
前記Ｇ１抗原（単数または複数）が、配列番号４０のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記Ｇ１抗原（単数または複数）が、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６および配列番号４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗原である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記Ｎ抗原（単数または複数）が、配列番号３９のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記Ｎ抗原（単数または複数）が、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２および配列番号５３からなる群より選択される、アミノ酸配列を含む１つ以上の抗原である、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記Ｇ１抗原（単数または複数）が、配列番号４０のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含み、前記Ｎ抗原が、配列番号３９のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記Ｇ１抗原（単数または複数）が、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６および配列番号４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗原であり、かつ前記Ｎ抗原（単数または複数）が、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２および配列番号５３からなる群より選択される、アミノ酸配列を含む１つ以上の抗原である、項目６に記載の方法。
（項目８）
ハンタウイルスのＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の各々に由来する少なくとも１つのＧ１抗原が存在し、かつハンタウイルスのＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の各々に由来する少なくとも１つのＮ抗原が存在する、項目１〜項目７のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
ハンタウイルスのＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の各々に由来する少なくとも１つのＮ抗原が存在する、項目１、項目４または項目５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
ハンタウイルス感染を検出するための免疫診断試験キットであって、該試験キットが：
（ａ）少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原であって、該少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原が、ハンタウイルスのハンターン（ＨＴＮＶ）血清型、プーマラ（ＰＵＵＶ）血清型、ソウル（ＳＥＯＶ）血清型、ドブラバ（ＤＯＢＶ）血清型、シンノンブル（ＳＮＶ）血清型およびアンデス（ＡＮＤＶ）血清型に由来するＧ１抗原および／またはＮ抗原の組み合わせを含み、該血清型の各々に由来する少なくとも１つの抗原が存在する組換え抗原と；
（ｂ）該免疫診断試験を行うための説明書と；
を備える、キット。
（項目１１）
前記Ｇ１抗原（単数または複数）が、配列番号４０のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含む、項目１０に記載の免疫診断試験キット。
（項目１２）
前記Ｇ１抗原（単数または複数）が、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６および配列番号４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗原である、項目１１に記載の免疫診断試験キット。
（項目１３）
前記Ｎ抗原（単数または複数）が、配列番号３９のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含む、項目１０に記載の免疫診断試験キット。
（項目１４）
前記Ｎ抗原（単数または複数）が、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２および配列番号５３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗原である、項目１３に記載の免疫診断試験キット。
（項目１５）
前記Ｇ１抗原（単数または複数）が、配列番号４０のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含み、前記Ｎ抗原（単数または複数）が、配列番号３９のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含む、項目１０に記載の免疫診断試験キット。
（項目１６）
前記Ｇ１抗原（単数または複数）が、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６および配列番号４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗原であり、かつ前記Ｎ抗原（単数または複数）が、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２および配列番号５３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗原である、項目１５に記載の免疫診断試験キット。
（項目１７）
ハンタウイルスのＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の各々に由来する少なくとも１つのＧ１抗原が存在し、かつハンタウイルスのＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の各々に由来する少なくとも１つのＮ抗原が存在する、項目１０〜項目１６のいずれか１項に記載の免疫診断試験キット。
（項目１８）
ハンタウイルスのＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の各々に由来する少なくとも１つのＮ抗原が存在する、項目１０、項目１３または項目１４のいずれか１項に記載の免疫診断試験キット。
（項目１９）
生物学的サンプル中のハンタウイルス抗原を検出するための方法であって：
（ａ）該生物学的サンプルと少なくとも６つの異なる抗体とを接触させる工程であって、該抗体の各々が、６つのハンタウイルス抗原のうちの少なくとも１つに特異的であり、該６つのハンタウイルス抗原が、ハンタウイルスのハンターン（ＨＴＮＶ）血清型、プーマラ（ＰＵＵＶ）血清型、ソウル（ＳＥＯＶ）血清型、ドブラバ（ＤＯＢＶ）血清型、シンノンブル（ＳＮＶ）血清型およびアンデス（ＡＮＤＶ）血清型に由来するＧ１抗原および／またはＮ抗原の組み合わせを含み、ここで、該血清型の各々に由来する少なくとも１つの抗原に特異的な少なくとも１つの抗体が存在し、該接触工程は、ハンタウイルス抗原が該生物学的サンプル中に存在する場合に該ハンタウイルス抗原が該抗体に結合して抗体／抗原複合体を形成することを可能にする条件下で行われる、工程と；
（ｂ）該抗体／抗原複合体の有無を検出し、それによって該サンプル中のハンタウイルス抗原の有無を検出する工程と；
を包含する、方法。
（項目２０）
該抗体がモノクローナル抗体である、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
ハンタウイルス感染を検出するための免疫診断試験キットであって、該試験キットが：
（ａ）少なくとも６つの異なる抗体であって、該抗体の各々が、６つのハンタウイルス抗原のうちの少なくとも１つに特異的であり、該６つのハンタウイルス抗原が、ハンタウイルスのハンターン（ＨＴＮＶ）血清型、プーマラ（ＰＵＵＶ）血清型、ソウル（ＳＥＯＶ）血清型、ドブラバ（ＤＯＢＶ）血清型、シンノンブル（ＳＮＶ）血清型およびアンデス（ＡＮＤＶ）血清型に由来するＧ１抗原および／またはＮ抗原の組み合わせを含み、該血清型の各々に由来する少なくとも１つの抗原に特異的な少なくとも１つの抗体が存在する抗体と；
（ｂ）該免疫診断試験を行うための説明書と；
を備える、キット。
（項目２２）
前記抗体がモノクローナル抗体である、項目２１に記載の免疫診断試験キット。
（項目２３）
少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原を含む固体支持体であって、該少なくとも６つのハンタウイルス組換え抗原が、ハンタウイルスのハンターン（ＨＴＮＶ）血清型、プーマラ（ＰＵＵＶ）血清型、ソウル（ＳＥＯＶ）血清型、ドブラバ（ＤＯＢＶ）血清型、シンノンブル（ＳＮＶ）血清型およびアンデス（ＡＮＤＶ）血清型に由来するＧ１抗原および／またはＮ抗原の組み合わせを含み、該血清型の各々に由来する少なくとも１つの抗原が存在する、固体支持体。
（項目２４）
前記Ｇ１抗原（単数または複数）が、配列番号４０のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含む、項目２３に記載の固体支持体。
（項目２５）
前記Ｇ１抗原（単数または複数）が、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６および配列番号４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗原である、項目２４に記載の固体支持体。
（項目２６）
前記Ｎ抗原（単数または複数）が、配列番号３９のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含む、項目２３に記載の固体支持体。
（項目２７）
前記Ｎ抗原（単数または複数）が、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２および配列番号５３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗原である、項目２６に記載の固体支持体。
（項目２８）
前記Ｇ１抗原（単数または複数）が、配列番号４０のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含み、前記Ｎ抗原（単数または複数）が、配列番号３９のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を含む、項目２３に記載の固体支持体。
（項目２９）
前記Ｇ１抗原（単数または複数）が、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６および配列番号４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗原であり、かつ前記Ｎ抗原（単数または複数）が、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２および配列番号５３からなる群より選択される、アミノ酸配列を含む１つ以上の抗原である、項目２８に記載の固体支持体。
（項目３０）
ハンタウイルスのＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の各々に由来する少なくとも１つのＧ１抗原が存在し、かつハンタウイルスのＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の各々に由来する少なくとも１つのＮ抗原が存在する、項目２３〜項目２９のいずれか１項に記載の固体支持体。
（項目３１）
ハンタウイルスのＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の各々に由来する少なくとも１つのＮ抗原が存在する、項目２３、項目２６または項目２７のいずれか１項に記載の固体支持体。
（項目３２）
項目２３〜項目３１のいずれか１項に記載の固体支持体であって、少なくとも１つの抗ヒト免疫グロブリン抗体をさらに含み、前記ハンタウイルス抗原および該抗ヒト免疫グロブリン抗体が該固体支持体上の別個の位置に固定される、固体支持体。
（項目３３）
前記少なくとも１つの抗ヒト免疫グロブリン抗体が、抗ヒトＩｇＭ抗体、抗ヒトＩｇＧ抗体および抗ヒトＩｇＡ抗体からなる群より選択される、項目３２に記載の固体支持体。
（項目３４）
前記固体支持体が、該固体支持体の上に別個の位置で固定された抗ヒトＩｇＭ抗体および抗ヒトＩｇＧ抗体を含む、項目３３に記載の固体支持体。
（項目３５）
前記固体支持体が、該固体支持体の上に別個の位置で固定された抗ヒトＩｇＡ抗体をさらに含む、項目３４に記載の固体支持体。
（項目３６）
項目２３〜項目３５のいずれか１項に記載の固体支持体であって、少なくとも２つの内部コントロールをさらに含み、該コントロールの１つが、該固体支持体を用いるイムノアッセイにおける陽性の結果について検出下限を規定し、そして他方のコントロールが該固体支持体を用いるイムノアッセイにおける高度に陽性の結果を規定する、固体支持体。
（項目３７）
前記固体支持体がニトロセルロースストリップである、項目２３〜項目３６のいずれか１項に記載の固体支持体。
（項目３８）
ハンタウイルスを検出するための免疫診断試験キットであって：
（ａ）項目２３〜項目３７のいずれか１項に記載の固体支持体と；
（ｂ）該免疫診断試験を行うための説明書と、
を備える、キット。
（項目３９）
生物学的サンプル中のハンタウイルス抗体の存在を検出する方法であって：
（ａ）生物学的サンプルを提供する工程と；
（ｂ）項目２３〜項目３７のいずれか１項に記載の固体支持体を提供する工程と；
（ｃ）該生物学的サンプルと該固体支持体とを、ハンタウイルス抗体が該生物学的サンプル中に存在する場合に該ハンタウイルス抗体が前記ハンタウイルス抗原の少なくとも１つと結合して、抗体／抗原複合体を形成することを可能にする条件下で接触させる工程と；
（ｄ）該抗体／抗原複合体の存在を検出して、それによって該生物学的サンプル中のハンタウイルス抗体の存在を検出する工程と；
を包含する、方法。
（項目４０）
項目３９に記載の方法であって、さらに：
（ｅ）未結合のハンタウイルス抗体を除去する工程と；
（ｆ）前記抗体／抗原複合体と会合し得る１つ以上の部分を提供する工程と；
（ｇ）該１つ以上の部分の存在を検出して、それによって該生物学的サンプル中のハンタウイルス抗体の存在を検出する工程と；
を包含する、方法。
（項目４１）
前記１つ以上の部分が、検出可能に標識されたハンタウイルス抗原を含む、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記検出可能な標識が酵素である、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記生物学的サンプルがヒト血液サンプル由来である、項目１〜項目９、項目１９、項目２０および項目３９〜項目４２のいずれか１項に記載の方法。
（項目４４）
実質的にハンタウイルスを含まない、全血、血小板、血漿または血清を含む血液供給源を調製する方法であって：
（ａ）項目１〜項目９、項目１９、項目２０および項目３９〜項目４２のいずれか１項に記載の方法によって、収集した血液サンプルから全血、血小板、血漿または血清のアリコートをスクリーニングする工程と；
（ｂ）ハンタウイルス抗原またはハンタウイルス抗体が検出される、任意のサンプルを排除する工程と；
（ｃ）ハンタウイルス抗原もハンタウイルス抗体も検出されないサンプルを合わせて、ハンタウイルスを実質的に含まない血液供給源を提供する工程と；
を包含する、方法。
本発明のこれらのそして他の実施形態は、本明細書の開示の観点から当業者に容易に想起される。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１Ａ】図１Ａおよび図１Ｂ（配列番号１および配列番号２）は、Ｇ１およびＧ２のエンベロープタンパク質をコードする、ＨＴＮＶ単離株７６−１１８の全長Ｍセグメントの代表的なヌクレオチド配列（図１Ａ）、ならびに対応するＧ１タンパク質のアミノ酸配列（図１Ｂ）を示す。
【図１Ｂ】図１Ａおよび図１Ｂ（配列番号１および配列番号２）は、Ｇ１およびＧ２のエンベロープタンパク質をコードする、ＨＴＮＶ単離株７６−１１８の全長Ｍセグメントの代表的なヌクレオチド配列（図１Ａ）、ならびに対応するＧ１タンパク質のアミノ酸配列（図１Ｂ）を示す。
【図２Ａ】図２Ａおよび図２Ｂ（配列番号３および配列番号４）は、Ｇ１およびＧ２のエンベロープタンパク質をコードする、ＰＵＵＶ単離株ＣＧ１８２０の全長Ｍセグメントの代表的なヌクレオチド配列（図２Ａ）、ならびに対応するＧ１タンパク質のアミノ酸配列（図２Ｂ）を示す。
【図２Ｂ】図２Ａおよび図２Ｂ（配列番号３および配列番号４）は、Ｇ１およびＧ２のエンベロープタンパク質をコードする、ＰＵＵＶ単離株ＣＧ１８２０の全長Ｍセグメントの代表的なヌクレオチド配列（図２Ａ）、ならびに対応するＧ１タンパク質のアミノ酸配列（図２Ｂ）を示す。
【図３Ａ】図３Ａおよび図３Ｂ（配列番号５および配列番号６）は、Ｇ１およびＧ２のエンベロープタンパク質をコードする、ＳＥＯＶ単離株８０−３９の全長Ｍセグメントの代表的なヌクレオチド配列（図３Ａ）、ならびに対応するＧ１タンパク質のアミノ酸配列（図３Ｂ）を示す。
【図３Ｂ】図３Ａおよび図３Ｂ（配列番号５および配列番号６）は、Ｇ１およびＧ２のエンベロープタンパク質をコードする、ＳＥＯＶ単離株８０−３９の全長Ｍセグメントの代表的なヌクレオチド配列（図３Ａ）、ならびに対応するＧ１タンパク質のアミノ酸配列（図３Ｂ）を示す。
【図４Ａ】図４Ａおよび図４Ｂ（配列番号７および配列番号８）は、Ｇ１およびＧ２のエンベロープタンパク質をコードする、ＤＯＢＶの全長Ｍセグメントの代表的なヌクレオチド配列（図４Ａ）、ならびに対応するＧ１タンパク質のアミノ酸配列（図４Ｂ）を示す。
【図４Ｂ】図４Ａおよび図４Ｂ（配列番号７および配列番号８）は、Ｇ１およびＧ２のエンベロープタンパク質をコードする、ＤＯＢＶの全長Ｍセグメントの代表的なヌクレオチド配列（図４Ａ）、ならびに対応するＧ１タンパク質のアミノ酸配列（図４Ｂ）を示す。
【図５Ａ】図５Ａおよび図５Ｂ（配列番号９および配列番号１０）は、Ｇ１およびＧ２のエンベロープタンパク質をコードする、ＳＮＶ単離株ＮＭ  Ｈ１０の全長Ｍセグメントの代表的なヌクレオチド配列（図５Ａ）、ならびに対応するＧ１タンパク質のアミノ酸配列（図５Ｂ）を示す。
【図５Ｂ】図５Ａおよび図５Ｂ（配列番号９および配列番号１０）は、Ｇ１およびＧ２のエンベロープタンパク質をコードする、ＳＮＶ単離株ＮＭ  Ｈ１０の全長Ｍセグメントの代表的なヌクレオチド配列（図５Ａ）、ならびに対応するＧ１タンパク質のアミノ酸配列（図５Ｂ）を示す。
【図６Ａ】図６Ａおよび図６Ｂ（配列番号１１および配列番号１２）は、Ｇ１およびＧ２のエンベロープタンパク質をコードする、ＡＮＤＶ単離株Ｃｈｉｌｅ−９７１７８６９の全長Ｍセグメントの代表的なヌクレオチド配列（図６Ａ）、ならびに対応するＧ１タンパク質のアミノ酸配列（図６Ｂ）を示す。
【図６Ｂ】図６Ａおよび図６Ｂ（配列番号１１および配列番号１２）は、Ｇ１およびＧ２のエンベロープタンパク質をコードする、ＡＮＤＶ単離株Ｃｈｉｌｅ−９７１７８６９の全長Ｍセグメントの代表的なヌクレオチド配列（図６Ａ）、ならびに対応するＧ１タンパク質のアミノ酸配列（図６Ｂ）を示す。
【図７】図７Ａおよび図７Ｂ（配列番号１３および配列番号１４）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＨＴＮＶのＧ１ペプチドのヌクレオチド配列（図７Ａ）および対応するアミノ酸配列（図７Ｂ）を示す。
【図８】図８Ａおよび図８Ｂ（配列番号１５および配列番号１６）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＰＵＵＶのＧ１ペプチドのヌクレオチド配列（図８Ａ）および対応するアミノ酸配列（図８Ｂ）を示す。
【図９】図９Ａおよび図９Ｂ（配列番号１７および配列番号１８）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＥＯＶのＧ１ペプチドのヌクレオチド配列（図９Ａ）および対応するアミノ酸配列（図９Ｂ）を示す。
【図１０】図１０Ａおよび図１０Ｂ（配列番号１９および配列番号２０）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＤＯＢＶのＧ１ペプチドのヌクレオチド配列（図１０Ａ）および対応するアミノ酸配列（図１０Ｂ）を示す。
【図１１】図１１Ａおよび図１１Ｂ（配列番号２１および配列番号２２）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＮＶのＧ１ペプチドのヌクレオチド配列（図１１Ａ）および対応するアミノ酸配列（図１１Ｂ）を示す。
【図１２】図１２Ａおよび図１２Ｂ（配列番号２３および配列番号２４）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＡＮＤＶのＧ１ペプチドのヌクレオチド配列（図１２Ａ）および対応するアミノ酸配列（図１２Ｂ）を示す。
【図１３】図１３Ａおよび図１３Ｂ（配列番号２５および配列番号２６）は、被験体アッセイにおける使用のための単離株７６−１１８由来の全長のＨＴＮＶのＮの代表的なヌクレオチド配列（図１３Ａ）および対応するアミノ酸配列（図１３Ｂ）を示す。
【図１４】図１４Ａおよび図１４Ｂ（配列番号２７および配列番号２８）は、被験体アッセイにおける使用のための単離株ＣＧ１８２０由来の全長のＰＵＵＶのＮの代表的なヌクレオチド配列（図１４Ａ）および対応するアミノ酸配列（図１４Ｂ）を示す。
【図１５】図１５Ａおよび図１５Ｂ（配列番号２９および配列番号３０）は、被験体アッセイにおける使用のための単離株８０−３９由来の全長のＳＥＯＶのＮの代表的なヌクレオチド配列（図１５Ａ）および対応するアミノ酸配列（図１５Ｂ）を示す。
【図１６】図１６Ａおよび図１６Ｂ（配列番号３１および配列番号３２）は、被験体アッセイにおける使用のための全長のＤＯＢＶのＮの代表的なヌクレオチド配列（図１６Ａ）および対応するアミノ酸配列（図１６Ｂ）を示す。
【図１７】図１７Ａおよび図１７Ｂ（配列番号３３および配列番号３４）は、被験体アッセイにおける使用のための単離株ＮＭ  Ｈ１０由来の全長ＳＮＶのＮの代表的なヌクレオチド配列（図１７Ａ）および対応するアミノ酸配列（図１７Ｂ）を示す。
【図１８】図１８Ａおよび図１８Ｂ（配列番号３５および配列番号３６）は、被験体アッセイにおける使用のための単離株Ｃｈｉｌｅ−９７１７８６９由来の全長ＡＮＤＶのＮの代表的なヌクレオチド配列（図１８Ａ）および対応するアミノ酸配列（図１８Ｂ）を示す。
【図１９】図１９Ａおよび図１９Ｂ（配列番号３７および配列番号３８）は、実施例に記載された、Ｇ１抗原およびＮ抗原とのＳＯＤ融合において用いられた、代表的なヒトＳＯＤヌクレオチドおよびアミノ酸配列を、それぞれ示す。この融合されたＳＯＤ配列は、図１９Ｂのアミノ酸１〜１５８（図１９Ａのヌクレオチド１〜４８９）を含み、このアミノ酸は、クローニングのための制限部位を提供するために、Ｃ末端において非ＳＯＤ配列の５つのアミノ酸（ＴＲＱＮＫ、配列番号４１）を含む。
【図２０】図２０（配列番号４２）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＯＤ／ＨＴＮＶのＧ１の融合体のアミノ酸配列を示す。
【図２１】図２１（配列番号４３）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＯＤ／ＰＵＵＶのＧ１の融合体のアミノ酸配列を示す。
【図２２】図２２（配列番号４４）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＯＤ／ＳＥＯＶのＧ１の融合体のアミノ酸配列を示す。
【図２３】図２３（配列番号４５）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＯＤ／ＤＯＢＶのＧ１の融合体のアミノ酸配列を示す。
【図２４】図２４（配列番号４６）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＯＤ／ＳＮＶのＧ１の融合体のアミノ酸配列を示す。
【図２５】図２５（配列番号４７）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＯＤ／ＡＮＤＶのＧ１の融合体のアミノ酸配列を示す。
【図２６】図２６（配列番号４８）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＯＤ／ＨＴＮＶのＮの融合体のアミノ酸配列を示す。
【図２７】図２７（配列番号４９）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＯＤ／ＰＵＵＶのＮの融合体のアミノ酸配列を示す。
【図２８】図２８（配列番号５０）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＯＤ／ＳＥＯＶのＮの融合体のアミノ酸配列を示す。
【図２９】図２９（配列番号５１）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＯＤ／ＤＯＢＶのＮの融合体のアミノ酸配列を示す。
【図３０】図３０（配列番号５２）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＯＤ／ＳＮＶのＮの融合体のアミノ酸配列を示す。
【図３１】図３１（配列番号５３）は、被験体アッセイにおける使用のための代表的なＳＯＤ／ＡＮＤＶのＮの融合体のアミノ酸配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施は、他に示さない限り、当該分野の範囲内の、ウイルス学、化学、生化学、組換えＤＮＡ技術および免疫学の従来の方法を使用する。このような技術は、文献において詳細に説明される。例えば、Ｆｕｄａｍｅｎｔａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第三版、第Ｉ巻および第ＩＩ巻（Ｂ．Ｎ．ＦｉｅｌｄｓおよびＤ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ編）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第Ｉ巻〜第ＩＶ巻（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）；Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，現行版）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版、１９８９）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．ＣｏｌｏｗｉｃｋおよびＮ．Ｋａｐｌａｎ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）を参照のこと。
前出または下記のいずれであろうと、本明細書に引用される全ての刊行物、特許および特許出願は、その全体が本明細書に参考として援用される。
【００４０】
本明細書全体にわたって以下のアミノ酸略号を用いる：
アラニン：Ａｌａ（Ａ）        アルギニン：Ａｒｇ（Ｒ）
アスパラギン：Ａｓｎ（Ｎ）    アスパラギン酸：Ａｓｐ（Ｄ）
システイン：Ｃｙｓ（Ｃ）      グルタミン：Ｇｌｎ（Ｑ）
グルタミン酸：Ｇｌｕ（Ｅ）    グリシン：Ｇｌｙ（Ｇ）
ヒスチジン：Ｈｉｓ（Ｈ）      イソロイシン：Ｉｌｅ（Ｉ）
ロイシン：Ｌｅｕ（Ｌ）        リジン：Ｌｙｓ（Ｋ）
メチオニン：Ｍｅｔ（Ｍ）      フェニルアラニン：Ｐｈｅ（Ｆ）
プロリン：Ｐｒｏ（Ｐ）        セリン：Ｓｅｒ（Ｓ）
トレオニン：Ｔｈｒ（Ｔ）      トリプトファン：Ｔｒｐ（Ｗ）
チロシン：Ｔｙｒ（Ｙ）        バリン：Ｖａｌ（Ｖ）
（Ｉ．定義）
本発明の記載では、以下の用語を使用し、以下に示すとおりに規定されるものとする。
【００４１】
本明細書および添付の特許請求の範囲において用いる場合、単数形「ある、１つの（ａ）、（ａｎ）」および「この、その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に他を示すのでない限り、複数の言及を包含することに注意しなければならない。従って、例えば、「１つのＧ１ポリペプチド（ａ  Ｇ１  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」という言及は、２つ以上のこのようなポリペプチドの混合物などを包含する。
【００４２】
「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」および「タンパク質（ｐｒｏｔｅｉｎ）」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指しており、この生成物の最小の長さは限定しない。従って、ペプチド、オリゴペプチド、二量体、多量体などは、この定義に包含される。全長タンパク質およびそのフラグメントの両方が、この定義によって包含される。この用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などを含む。さらに、本発明の目的に関しては、「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」とは、タンパク質が所望の活性を維持している限り、天然の配列に対して、（一般には本質的に保存的な）欠失、付加および置換のような改変を含むタンパク質をいう。これらの改変は、部位特異的変異誘発を介するような故意的な改変であってもよく、またはこのタンパク質を生成する宿主の変異もしくはＰＣＲ増幅に起因するエラーなどを介するような偶発的な改変であってもよい。
【００４３】
「抗原（ａｎｔｉｇｅｎ）」という用語は、本発明での使用のための種々のハンタウイルスポリペプチドに関連して用いる場合に、天然抗原であるか、組換え抗原であるかまたは合成抗原であるかにかかわらず、ハンタウイルス抗体を認識する１つ以上のエピトープを含み、検討中のハンタウイルス株の種々の単離株のいずれかに由来する、Ｎ、Ｇ１などのポリペプチドを指す。従って、「ハンタウイルス抗原（ｈａｎｔａｖｉｒｕｓ  ａｎｔｉｇｅｎ）」は、任意のハンタウイルス血清型、株および単離株由来の抗原であって、マウス亜科、アメリカネズミ亜科およびハタネズミ亜科の任意の種々の単離株を包含するが、これらには限定されない。例えば、ＳＮＶ抗原は、任意の種々のシンノンブルウイルス単離株、例えば、プロトタイプのＮｅｗ  Ｍｅｘｉｃｏ  ＳＮＶ単離株、３Ｈ２２６、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ単離株類、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ単離株類などに由来する。同様に、ＳＥＯＶ抗原は、任意の種々のソウルウイルス単離株などに由来する。本発明における使用のためのさらなる抗原は、他のＨＰＳ関連ハンタウイルスおよびＨＦＲＳ関連ハンタウイルスに由来し得、このウイルスとしては、限定はしないが、シンノンブルウイルス（ＳＮＶ；フォーコーナーズウイルスおよびムエルトキャニオンウイルスウイルスとしても公知）；アンデスウイルス（ＡＮＤＶ）；ニューヨークウイルス（ＮＹＶ）；ブラッククリークカナルウイルス（ＢＣＣＶ）；バイユウウイルス（ＢＡＹＶ）；ハンターンウイルス（ＨＴＮＶ）、プーマラウイルス（ＰＵＵＶ）、ソウルウイルス（ＳＥＯＶ）およびドブラバ−ベルグレード（ＤＯＢＶ）ウイルスが挙げられる。これらのウイルスのゲノム配列は公知であり、そして本発明の使用のためのいくつかの抗原配列は、以下にさらに詳述される。
【００４４】
検討中の抗原は、参照分子の全長アミノ酸配列を含む必要はなく、このポリペプチドが適切なハンタウイルス抗体と反応するために必要な程度に多くの分子を含むだけでよい。従って、参照分子の１つまたは少数のエピトープだけしか存在する必要はない。さらに、抗原は、全長参照分子または参照分子のフラグメントと、別のタンパク質、例えば、別のハンタウイルス抗原および／またはハンタウイルス抗原の反応性を破壊しないタンパク質との間の融合タンパク質を含んでもよい。従って、この抗原は全長配列、フラグメント、短縮された配列および部分的な配列、ならびにこの参照分子のアナログ形態、ムテイン形態および前駆形態を含んでもよいことが容易に理解される。この用語はまた、この抗原がハンタウイルス抗体と反応する能力を保持する限り、参照配列に対する欠失、付加および置換を意図する。
【００４５】
これに関して、特定のハンタウイルス株内で、天然のバリエーションが、単離株の間で出現する。従って、この用語は、このようなバリエーションを包含することが意図され、そして特に、アミノ酸組成において、参照抗原から、約２０パーセント以下まで、さらに好ましくは約１０〜１５パーセント以下まで、そして最も好ましくは、約５パーセント以下まで変化する抗原を、包含することが意図される。参照分子と実質的に同じアミノ酸配列を有するが、この抗原の抗体結合能力に実質的に影響しないわずかなアミノ酸置換を保有するタンパク質は、従って、参照ポリペプチドの定義の範囲内である。
【００４６】
ハンタウイルス血清型、株または単離株「〜に由来する、由来の（ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ）」抗原とは、参照のハンタウイルスゲノムによってコードされる抗原の配列を含む抗原を意図する。代表的には、抗原は、１つ以上のエピトープを含み、そして一般には、下記に規定されるような参照ポリペプチドに対して実質的に相同なアミノ酸配列を有する。従って、「〜に由来する、由来の」という用語は、分子のもとの供給源を特定するために用いられるが、この分子が作製される方法を限定することは意味せず、例えば、この方法は、化学的合成または組換え手段によるものであってもよい。
【００４７】
「アナログ（ａｎａｌｏｇ）」および「ムテイン（ｍｕｔｅｉｎ）」という用語は、参照分子の生物学的に活性な誘導体であって、本明細書に記載されるアッセイにおける免疫反応性のような所望の活性を保持する誘導体を指す。一般には、「アナログ」という用語は、改変が免疫原性活性を破壊せず、以下で規定されるような参照分子に対して、「実質的に相同（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）」である限り、天然の分子に対して、１つ以上のアミノ酸付加、（一般には本質的に保存的な）置換および／または欠失を有する、天然のポリペプチド配列および構造を有する化合物をいう。種々の単離株の間で多数の保存された領域および可変領域が公知であり、そして一般には、これらの領域に由来するエピトープのアミノ酸配列は、この２つの配列が整列される場合、高い程度の配列相同性、例えば、５０％を超える、一般には６０％〜７０％を超えるアミノ酸配列相同性を有する。「ムテイン（ｍｕｔｅｉｎ）」という用語は、１つ以上のペプチド模倣物（「ペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄｓ）」）を有するペプチドをいう。好ましくは、アナログまたはムテインは、天然の分子と少なくとも同じ免疫反応性を有する。ポリペプチドアナログおよびムテインを作製するための方法は、当該分野で公知であり、そして下にさらに記載される。
【００４８】
「アナログ」および「ムテイン」という用語はまた、参照分子に対して行われる、目的のある変異を包含する。特に好ましいアナログは、本質的に保存的である置換、すなわち、それらの側鎖に関するアミノ酸のファミリー内で生じるような置換を含む。詳細には、アミノ酸は一般に４つのファミリーに分けられる：（１）酸性−アスパラギン酸およびグルタミン酸；（２）塩基性−リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電極性−グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン。フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンは時には、芳香族アミノ酸として分類される。例えば、イソロイシンもしくはバリンでのロイシン、グルタミン酸でのアスパラギン酸、セリンでのトレオニンの単独の置換、または構造的に関連するアミノ酸でのアミノ酸の類似の保存的置換は、生物学的活性に大きな効果を有さないことが合理的に予測可能である。例えば、目的の抗原は、この分子の所望の機能が完全なままである限り、最大約５〜１０個の保存的もしくは非保存的なアミノ酸置換、または最大約１５〜２５、５０もしくは７５の保存的もしくは非保存的なアミノ酸置換さえ、または５〜７５の任意の整数の保存的もしくは非保存的なアミノ酸置換を含んでもよい。当業者は、当該分野で周知の、Ｈｏｐｐ／ＷｏｏｄｓプロットおよびＫｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅプロットを参照することによって、変化に耐容し得る目的の分子の領域を容易に決定し得る。
【００４９】
「フラグメント（ｆｒａｇｍｅｎｔ）」とは、インタクトな全長ポリペプチド配列および構造の一部のみからなる抗原を意図する。フラグメントは、天然のポリペプチドのＣ末端欠失、Ｎ末端欠失および／または内部欠失を含んでもよい。本発明のアッセイにおける使用のための代表的なＧ１フラグメントは、本明細書の図７〜図１２に示される。「免疫原性フラグメント（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ  ｆｒａｇｍｅｎｔ）」とは、１つ以上のエピトープを含み、それによって本明細書に記載の免疫学的応答のうちの１つ以上を誘発するハンタウイルスポリペプチドのフラグメントを意味する。特定のハンタウイルスタンパク質の「免疫原性フラグメント（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ  ｆｒａｇｍｅｎｔ）」は一般に、検討中のフラグメントが本明細書で規定されるような免疫学的応答を誘発する能力を保持する場合、エピトープを規定する全長分子の少なくとも約５〜１０個の連続するアミノ酸残基、好ましくは全長分子の少なくとも約１５〜２５個の連続するアミノ酸残基、そして最も好ましくは全長分子の少なくとも約２０〜５０個以上の連続するアミノ酸残基または５アミノ酸と全長配列との間の任意の整数の連続するアミノ酸残基を含む。
【００５０】
「Ｎ抗原」とは、検討中のハンタウイルスのヌクレオカプシドタンパク質由来である、上で規定されたような抗原を意味する。種々のハンタウイルスＮタンパク質についてのＤＮＡおよび対応するアミノ酸配列が公知である。例えば、ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶに由来する代表的なＮ抗原のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列は、それぞれ図１３〜図１８に示される。さらに、多数の単離株のＮタンパク質をコードするＳセグメントは、ＧｅｎＢａｎｋに寄託されており、そして下にさらに記載される。さらなる配列が、１９９５年１月５日公開の国際公開番号ＷＯ９５／００６４８に記載される。Ｈｊｅｌｌｅら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ（１９９４）６８：５９２〜５９６は、ＳＮＶ、プロスペクトヒルウイルス（ＰＨＶ）およびＰＵＵＶに由来するＮ抗原のアミノ酸配列を記載する。
【００５１】
上記に例示されるとおり、本発明のアッセイにおける使用のためのＮ抗原とは、検討中の特定のハンタウイルス感染を有する個体由来の生物学的サンプルに存在する抗体との反応性が維持されるように、全長タンパク質または実質的に全長のタンパク質、ならびに１つ以上のエピトープを含むこのタンパク質のフラグメント、融合体または変異体を包含する。例えば、本明細書に記載されるアッセイにおける使用のためのＮ抗原は、全長ＳＮＶ  Ｎ配列と別のハンタウイルス抗原のような別のタンパク質との間の組換え融合体であってもよく、そして／または全長ＳＮＶ  Ｎ配列と組換え発現において補助するタンパク質（例えば、５０ｋＤａのＥ．ｃｏｌｉマルトース結合タンパク質、またはヒトもしくは酵母のスーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）タンパク質）との融合体であってもよい。本発明のアッセイにおいて有用なＮタンパク質の代表的な免疫反応性フラグメントは、ＳＮＶ  ＮＭ  １０に対して番号付けして、Ｎポリペプチドの１７位〜５９位に見出されるアミノ酸の配列に対応している４３個のアミノ酸のアミノ末端近位セグメントであり、かつアミノ酸配列ＱＬＶＴＡＲＱＫＬＫＤＡＥＲＡＶＥＬＤＰＤＤＶＮＫＳＴＬＱＳＲＲＡＡＶＳＡＬＥＴＫＬＧ（配列番号３９）を有する。このフラグメントは、Ｎタンパク質のイムノドミナントのエピトープを含み、そしてこのエピトープに対する抗体は、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶおよびＨＴＮＶに由来するＮタンパク質と交差反応性である（例えば、Ｙａｍａｄａら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９５）６９：１９３９〜１９４３；および１９９５年３月２日公開の国際公開番号ＷＯ  ９５／０６２５０を参照のこと）。従って、このフラグメント、およびこの配列を含むより大きいフラグメントは、本明細書におけるアッセイにおいて用途を見出す。Ｎタンパク質のエピトープの説明については、また、Ｌｕｎｄｋｖｉｓｔら、Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９５）２：８２〜８６；およびＧｏｔｔら、Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ．（１９９１）１９：１〜１６を参照のこと。
【００５２】
「Ｇ１抗原」とは、上で規定されるような抗原であって、検討中のハンタウイルスの、Ｇ１として公知のエンベロープ糖タンパク質に由来する抗原を意味する。種々のハンタウイルスＧ１タンパク質についてのＤＮＡおよび対応するアミノ酸配列が公知である。代表的なＧ１領域は本明細書の図１〜図６に示される。さらに、多数の単離株由来のＧ１タンパク質をコードするＭセグメントが、ＧｅｎＢａｎｋに寄託されており、そして下にさらに記載される。上記の説明どおり、本発明のアッセイにおける使用のためのＧ１抗原としては、全長タンパク質または実質的に全長のタンパク質、およびこのタンパク質のフラグメント、融合体または変異体であって、検討中の特定のハンタウイルス感染を有する個体由来の生物学的サンプルに存在する抗体との反応性が保持されるような１つ以上のエピトープを含むものが挙げられる。本明細書に記載のアッセイで用いられるＧ１抗原としては、抗原の組換え体発現を容易にするための、検討中のＧ１抗原と図１９に示されるヒトスーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）配列との間の融合体が挙げられる。多数のハンタウイルス血清型由来のＧ１タンパク質の多数のさらなる代表的な免疫反応性フラグメントを本明細書の図７〜図１２に示す。Ｇ１タンパク質の別の代表的な免疫反応性フラグメントは、ＳＮＶ  ＮＭ  Ｈ１０に対して番号付けして、アミノ酸５９と８９との間のセグメントにマッピングされた３１個のアミノ酸ペプチドであり、そしてアミノ酸配列ＬＫＩＥＳＳＣＮＦＤＬＨＶＰＡＴＴＴＱＫＹＮＱＶＤＷＴＫＫＳＳ（配列番号４０）を有する。Ｇ１タンパク質のこの部分は、種々のＳＮＶ単離株由来のＳＮＶ抗体によって認識される免疫反応性の直鎖状エピトープを構成する（Ｊｅｎｉｓｏｎら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９４）６８：３０００〜３００６）。このフラグメントは、この配列を含むより大型のフラグメントと同様に、本明細書のアッセイにおいて用途を見出す。
【００５３】
ハンタウイルス抗原の「免疫原性（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ）」配列とは、少なくとも１つのハンタウイルスエピトープを有するアミノ酸配列を含む分子であって、その分子が検討中のハンタウイルスに対する抗体と反応し得、適切な宿主において抗体の産生を刺激し得るような分子を意味する。「エピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅ）」とは、抗原上のある部位であって、それに対して特異的なＢ細胞および／またはＴ細胞が応答して、検討中のハンタウイルスエピトープが、生物学的サンプル中に存在するハンタウイルス抗体と反応し得るようにさせ、そして抗体産生を刺激し得るようにさせる部位を意味する。この用語はまた、「抗原性決定基（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ）」または「抗原性決定部位（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ  ｓｉｔｅ）」と交換可能に用いられる。エピトープは、このエピトープに対して固有の空間的構成で３つ以上のアミノ酸を含んでもよい。一般には、エピトープは、少なくとも５つのこのようなアミノ酸からなり、そしてさらに一般的には少なくとも８〜１０個またはそれ以上のこのようなアミノ酸からなる。
【００５４】
エピトープを含む所定のポリペプチドの領域は、当該分野で周知の多数のエピトープマッピング技術を用いて同定され得る。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，６６巻（Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編、１９９６）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙを参照のこと。例えば、直鎖状のエピトープは、例えば、タンパク質分子の一部に対応する多数のペプチドを、固体支持体上で同時に合成すること、およびこのペプチドがこの支持体に結合したままでこのペプチドを抗体と反応させることによって決定され得る。このような技術は当該分野で公知であり、そして例えば、その全体が全て本明細書に参考として援用される、米国特許第４，７０８，８７１号；Ｇｅｙｓｅｎら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：３９９８〜４００２；Ｇｅｙｓｅｎら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１７８〜１８２；Ｇｅｙｓｅｎら（１９８６）Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９〜７１５に記載される。同様に、立体配置的なエピトープは、例えば、ｘ線結晶学および２次元核磁気共鳴などによりアミノ酸の空間的立体構成を決定することによって容易に同定される。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、前出を参照のこと。タンパク質の抗原性領域はまた、例えば、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐから入手可能であるＯｍｉｇａバージョン１．０ソフトウェアプログラムを用いて算出されるような、標準的な抗原性プロットおよび疎水性親水性指標プロットを用いて同定され得る。このコンピュータープログラムは、抗原性プロフィールを決定するためにはＨｏｐｐ／Ｗｏｏｄｓ法、Ｈｏｐｐら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９８１）７８：３８２４〜３８２８を、そして疎水性親水性指標プロットのためにはＫｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ技術、Ｋｙｔｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９８２）１５７：１０５〜１３２を使用する。
【００５５】
「免疫原性組成物（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」とは、少なくとも１つの免疫原性ポリペプチド（例えば、Ｎおよび／またはＧ１のハンタウイルス抗原）を含む組成物である。
【００５６】
「実質的に精製された（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｉｆｉｅｄ）」とは一般に、物質（化合物、ポリヌクレオチド、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチド組成物）の単離であって、この物質が存在するサンプルのほとんどの割合がこの物質からなるような、物質の単離をいう。代表的には、サンプル中で実質的に精製された成分は、そのサンプルのうち５０％、好ましくは８０〜８５％、さらに好ましくは９０〜９５％を含む。目的のポリヌクレオチドおよびポリペプチドを精製するための技術は、当該分野で周知であり、そしてこれには、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーおよび密度による沈降が挙げられる。
【００５７】
「単離された（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」とは、ポリペプチドについて言及する場合、この示された分子が、その分子が天然に見出される生物体全体から分離されて別個であるか、または同じタイプの他の生物学的な高分子の実質的な非存在下で存在するポリペプチドを意味する。ポリヌクレオチドに関して「単離された（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」という用語は、それが天然に通常関連している配列を全体にまたは部分的に欠く核酸分子；または天然に存在するとおりの配列であるがそれに会合している異種配列を有する配列；または染色体から解離されている分子である。
【００５８】
「等価な抗原性決定基（ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ）」とは、抗原性決定基が配列の変化に起因して必ずしも同一である必要はないが、検討中のハンタウイルス配列中の等価な位置に存在する、ハンタウイルスの異なる単離株または株に由来する抗原性決定基を意味する。一般には等価な抗原性決定基のアミノ酸配列は、２つの配列を整列させた場合、高い程度の配列相同性、例えば３０％より大きい、通常は４０％より大きい、例えば、６０％より大きい、そしてさらに８０〜９０％より大きい相同性である、アミノ酸配列相同性を有する。
【００５９】
「相同性（ｈｏｍｏｌｏｇｙ）」とは、２つのポリヌクレオチド部分の間、または２つのポリペプチド部分の間の同一性のパーセントをいう。２つの核酸配列、または２つのポリペプチド配列は、その配列がその分子のある規定の長さにわたって、少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約７５％、さらに好ましくは少なくとも約８０％〜８５％、好ましくは少なくとも約９０％、そして最も好ましくは少なくとも約９５％〜９８％の配列同一性を示す場合、お互いに対して「実質的に相同性（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）」である。本明細書において用いる場合、実質的に相同性とはまた、特定の配列に対して完全な同一性を示す配列をも意味する。
【００６０】
一般には「同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」とは、それぞれ２つのポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列の、ヌクレオチドとヌクレオチドとの、またはアミノ酸とアミノ酸との、正確な対応をいう。同一性パーセントは、配列を整列させること、この２つの整列された配列の間のマッチの正確な数をカウントすること、この参照配列の長さで割ること、そしてこの結果に１００を掛けることにより、２つの分子（参照配列およびこの参照配列に対して同一性％が未知である配列）の間の配列情報の直接比較によって決定され得る。ペプチド分析のためのＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２〜４８９，１９８１）の局所相同性アルゴリズムに適合する、ＡＬＩＧＮ（Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ編、補遺５、３：３５３〜３５８、Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）のような容易に入手可能なコンピュータープログラムが分析を補助するのに用いられ得る。ヌクレオチド配列同一性を決定するためのプログラムは、例えば、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，バージョン８（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩから入手可能）において利用可能なプログラムである、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＧＡＰであり、これもＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎのアルゴリズムに依拠する。これらのプログラムは、製造業者によって推奨され、そして上記のＷｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅに記載される初期パラメーターを用いて容易に利用される。例えば、参照配列に対する特定のヌクレオチド配列の同一性パーセントは、６つのヌクレオチド位置の初期スコアリングテーブルおよびギャップペナルティーにより、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎの相同性アルゴリズムを用いて決定され得る。
【００６１】
本発明に関連して同一性パーセントを確立する別の方法は、Ｊｏｈｎ  Ｆ．ＣｏｌｌｉｎｓおよびＳｈａｎｅ  Ｓ．Ｓｔｕｒｒｏｋによって開発され、そしてＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｏｕｎａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）によって頒布された、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈが著作権を有するＭＰＳＲＣＨパッケージのプログラムを用いることである。この一連のパッケージから、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムが使用されてもよく、ここでは初期パラメーターがスコアリングテーブルに用いられる（例えば、１２のギャップオープンペナルティ、１のギャップエクステンションペナルティー、および６のギャップ）。作成されたデータからの「マッチ（Ｍａｔｃｈ）」値は、「配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」を反映する。配列の間の同一性パーセントまたは類似性パーセントを算出するための他の適切なプログラムは一般に当該分野で公知であり、例えば、別のアラインメントプログラムは、初期パラメーターとともに用いられるＢＬＡＳＴである。例えば、ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰは、以下の初期パラメーターを用いて用いられ得る：遺伝暗号＝標準；フィルター＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；期待値＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；記載＝５０配列；検索（ｓｏｒｔ  ｂｙ）＝ＨＩＧＨ  ＳＣＯＲＥ；データベース＝非重複、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＤＳトランスレーション＋Ｓｗｉｓｓプロテイン＋Ｓｐｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は、容易に入手可能である。
【００６２】
あるいは、相同な領域の間に安定な二本鎖を形成する条件下でのポリヌクレオチドのハイブリダイゼーション、およびその後の一本鎖特異的ヌクレアーゼ（単数または複数）による消化、および消化されたフラグメントのサイズ決定によって相同性は決定され得る。実質的に相同であるＤＮＡ配列は、その特定のシステムについて規定されるとおり、例えば、ストリンジェントな条件下で、サザンハイブリダイゼーション実験において同定され得る。適切なハイブリダイゼーション条件を決定することは、当業者の範囲内である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、前出；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、前出を参照のこと。
【００６３】
「組換え体（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ）」とは本明細書において用いる場合、ゲノム起源、ｃＤＮＡ起源、ウイルス起源、半合成起源または合成起源のポリヌクレオチドであって、その起源または操作のおかげで、天然において会合するポリヌクレオチドの全てまたは一部と会合しないポリヌクレオチドを意味する核酸分子をいう。「組換え体」という用語は、タンパク質またはポリペプチドに関して用いられる場合、組換えポリヌクレオチドの発現によって生成されるポリペプチドを意味する。一般には、目的の遺伝子はクローニングされ、次いで下にさらに記載されるとおり、形質転換された生物体において発現される。宿主生物体は、発現条件下で、外来遺伝子を発現してタンパク質を生成する。
【００６４】
「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」とは、抗原に存在する目的のエピトープに特異的に結合する分子を意図する。「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｂｉｎｄｓ）」とは、抗体と、例えば、この抗体が反応させられる試験基質との間で生じ得る非特異的な結合とは対照的に、抗体がエピトープを認識して、「鍵と鍵穴（ｌｏｃｋ  ａｎｄ  ｋｅｙ）」のタイプの相互作用でこのエピトープと相互作用して、抗原と抗体との間の複合体を形成することを意味する。従って、抗ハンタウイルスＧ１抗体とは、ハンタウイルスＧ１タンパク質のエピトープに特異的に結合する分子である。「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、本明細書において用いる場合、ポリクローナル調製物およびモノクローナル調製物の両方から得られる抗体を包含し、そして、以下を包含する：ハイブリッド（キメラ）抗体分子（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９１）３４９：２９３〜２９９；および米国特許第４，８１６，５６７号）；Ｆ（ａｂ’）２フラグメントおよびＦ（ａｂ）フラグメント；Ｆｖ分子（非共有結合的なヘテロ二量体、例えば、Ｉｎｂａｒら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９７２）６９：２６５９〜２６６２；およびＥｈｒｌｉｃｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ（１９８０）１９：４０９１〜４０９６を参照のこと）；単鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）（例えば、Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９８８）８５：５８７９〜５８８３を参照のこと）；二量体および三量体の抗体フラグメント構築物；ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｉｅｓ）（例えば、Ｐａｃｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ（１９９２）３１：１５７９〜１５８４；Ｃｕｍｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９２）１４９Ｂ：１２０〜１２６を参照のこと）；ヒト化抗体分子（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ（１９８８）３３２：３２３〜３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８）２３９：１５３４〜１５３６；および１９９４年９月２１日公開、英国特許公開第ＧＢ２，２７６，１６９号を参照のこと）；ならびにこのような分子から得られる任意の機能的フラグメントであって、親の抗体分子の免疫学的結合特性を保持するフラグメント。
【００６５】
本明細書において用いる場合、「モノクローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、相同な抗体集団を有する抗体組成物をいう。この用語は、抗体の種または供給源に関して限定されず、抗体が作製される方式によって限定されることもないものとする。この用語は、免疫グロブリン全体、ならびにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖおよび他のフラグメントのようなフラグメント、ならびに親のモノクローナル抗体分子の免疫学的結合特性を示すキメラのおよびヒト化した相同抗体集団を包含する。
【００６６】
本明細書において用いる場合、「固体支持体（ｓｏｌｉｄ  ｓｕｐｐｏｒｔ）」とは、固体表面であって、そこに高分子、例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチドが結合され得る固体表面をいい、例えば、磁気ビーズ、ラテックスビーズ、マイクロタイタープレートウェル、ガラスプレート、ナイロン、アガロース、ポリアクリルアミド、シリカ粒子、ニトロセルロース膜などをいう。
【００６７】
「免疫学的に反応性（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ｒｅａｃｔｉｖｅ）」とは、検討中の抗原が、ハンタウイルスに感染した個体由来の生物学的サンプル中に存在する抗ハンタウイルス抗体と特異的に反応することを意味する。
【００６８】
「免疫複合体（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ）」とは、抗体が抗原上のエピトープに対して結合する場合に形成される組み合わせを意図する。
【００６９】
本明細書において用いる場合、「生物学的サンプル（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓａｍｐｌｅ）」とは、限定はしないが、血液、血漿、血清、糞便、尿、骨髄、胆汁、脊髄液、リンパ液、脳脊髄液、皮膚のサンプル、皮膚の分泌物、呼吸器の分泌物、腸の分泌物および尿生殖器の管の分泌物、涙液、唾液、乳汁、血球、器官、生検のような、被験体から単離される組織または体液のサンプルをいい、そしてまた、限定はしないが、培養培地中の細胞および組織の増殖から生じる順化培地を含むインビトロの細胞培養成分のサンプル、例えば組換え細胞、および細胞成分をいう。上記で詳述されるサンプルは必ずしも、この供給源から直接得られる形態である必要はない。例えば、このサンプルは、例えば、分析の前の加熱、遠心分離などによって、使用の前に処理され得る。
【００７０】
本明細書において用いる場合、「標識（ｌａｂｅｌ）」および「検出可能な標識（ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ  ｌａｂｅｌ）」という用語は、限定はしないが、放射性同位体、蛍光剤、半導体ナノ結晶、化学発光剤（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｒ）、発色団、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素インヒビター、色素、金属イオン、金属ゾル、リガンド（例えば、ビオチン、ストレプトアビジンまたはハプテン）などを包含する、検出可能な分子をいう。「蛍光剤（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｒ）」という用語は、蛍光を検出可能範囲で示し得る、物質またはその一部をいう。本発明のもとで用いられ得る標識の特定の例としては、限定はしないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、フルオレセイン、ＦＩＴＣ，ローダミン、ダンシル、ウンベリフェロン、ジメチルアクリジニウムエステル（ＤＭＡＥ）、テキサスレッド、ルミノール、ＮＡＤＰＨおよびα−β−ガラクトシダーゼが挙げられる。
【００７１】
（ＩＩ．本発明を実施する様式）
本発明を詳細に記載する前に、本発明は、特定の処方物またはプロセス・パラメーターに限定されず、当然ながら変化し得るものとして理解されるべきである。本明細書において用いられる専門用語は、本発明の特定の実施形態を記載するだけの目的であって、限定は意図しないこともまた、理解される。
【００７２】
本明細書に記載されるものと同様または等価な多数の方法および物質が、本発明の実施において用いられ得るが、好ましい物質および方法が本明細書に記載される。
【００７３】
本発明は、ハンタウイルス感染を正確に検出するための新規な診断方法の発明に基づく。この方法は、ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶを含む少なくとも６つの異なるハンタウイルス血清型に由来する、イムノドミナントなエピトープを含むハンタウイルスの組換えＮ抗原およびＧ１抗原、ならびに／またはこれらの抗原に対する抗体を利用する。特定の実施形態では、このアッセイは、例えば、上記の血清型の各々に由来する６つの組換えＧ１抗原（および／または６つのＧ１抗原に対する抗体）、および／または上記の血清型の各々に由来する６つの組換えＮ抗原を包含する。代替の実施形態では、このアッセイは、例えば、他の５つの血清型のうちの１つ以上と交差反応する抗体を生成する、これらの６つの血清型のうちのいずれか１つに由来する少なくとも１つの組換えＮ抗原、および６つの血清型の各々に由来する６つの組換えＧ１抗原を含んでもよい。例えば、このアッセイは、ＳＮＶ由来のＮ抗原（および／またはＮ抗原に対する抗体）を含んでもよい。このアッセイはまた、好ましくはＨＴＮＶ血清型、ＰＵＵＶ血清型、ＳＥＯＶ血清型、ＤＯＢＶ血清型、ＳＮＶ血清型およびＡＮＤＶ血清型の６つ全てに由来するＧ１抗原（および／またはＧ１抗原に対する抗体）を含む。あるいは、このアッセイは、これらの６つの血清型のいずれか１つに由来する１つのＧ１抗原（および／またはそれに対する抗体）およびこれらの６つの血清型の各々に由来する６つのＮ抗原（および／またはそれに対する抗体）を含んでもよい。別の実施形態では、このアッセイは、例えば、これらの６つの血清型のうち３つに由来するＧ１抗原（および／またはそれに対する抗体）およびこれらの６つの血清型の他の３つに由来する３つのＮ抗原（および／またはそれに対する抗体）を含んでもよい。あるいは、このアッセイは、２つのＧ１抗原（および／またはそれに対する抗体）および４つのＮ抗原（および／またはそれに対する抗体）、または４つのＧ１抗原（および／またはそれに対する抗体）および２つのＮ抗原（および／またはそれに対する抗体）、または１つのＧ１抗原（および／またはそれに対する抗体）および５つのＮ抗原（および／またはそれに対する抗体）、または５つのＧ１抗原（および／またはそれに対する抗体）および１つのＮ抗原（および／またはそれに対する抗体）、または４つのＧ１抗原（および／またはそれに対する抗体）および４つのＮ抗原（および／またはそれに対する抗体）、または５つのＧ１抗原（および／またはそれに対する抗体および５つのＮ抗原（および／またはそれに対する抗体）などを含んでもよい。６つの血清型ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶが示される限り、組換えＧ１抗原およびＮ抗原（および／またはそれに対する抗体）の任意の組み合わせが用いられてもよいことが容易に理解される。
【００７４】
本発明のアッセイはまた、表１に記載される種々のハンタウイルス株のいずれかまたはその後に同定されたその他のハンタウイルス株に由来する、さらなるハンタウイルス抗原を利用し得る。
【００７５】
必要に応じて他のハンタウイルスのタンパク質および／または抗体と組み合わせた、６つの血清型ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶに由来するハンタウイルスのＮ抗原および／またはＧ１抗原（および／またはそれに対する抗体）の使用によって、種々の公知のハンタウイルス血清型のいずれかによって生じる感染の診断が可能になる。さらに、このアッセイは、感染を生じる特定のハンタウイルス血清型が特定され得るように適合され得る。例えば、種々のＨＰＳ関連のハンタウイルスおよびＨＦＲＳ関連のハンタウイルスに感染した患者由来の生物学的サンプルは、ＳＮＶのＮ抗原と反応するが、ＳＮＶのＧ１抗原とは必ずしも反応しない。従って、ＳＮＶのＮ抗原との反応性が存在し、かつＳＮＶのＧ１抗原との反応性が存在しないことによって、ＳＮＶ以外のハンタウイルスなどによる感染が示される。広範な種々の抗原および抗原の組み合わせ（またはこれらの抗原に対する抗体）は、本発明の診断アッセイにおいて用いられ得ることが容易に理解される。
【００７６】
この方法は、ヒトにおけるハンタウイルス感染、そしてげっ歯類集団におけるハンタウイルス感染を検出するのに有用である。この方法は、限定はしないが、全血、血清および血漿を含む血液サンプルにおけるハンタウイルス感染を検出し得る。従って、この方法は、被験体（例えばヒト被験体またはげっ歯類被験体）におけるハンタウイルス感染を診断するために用いられ得、そして提供された血液サンプルにおけるハンタウイルス混入を検出するために用いられ得る。個々の提供されたサンプルまたはプールされたサンプル由来のアリコートは、ハンタウイルスの存在下でスクリーニングされ得、そしてハンタウイルスで汚染されたこれらのサンプルまたはプールされたサンプルは、それらが合わされる前に排除され得る。この方法では、実質的にハンタウイルス混入のない血液供給源が提供され得る。
【００７７】
本発明をさらに理解するために、さらに詳細な考察が、ハンタウイルスに関して、そして本発明の組成物および方法における使用のための種々のハンタウイルスの抗原および抗体に関して下に示される。
【００７８】
（ハンタウイルス抗原）
上記で説明されるとおり、ハンタウイルス科のウイルスは、Ｂｕｎｙａｖｉｒｕｓ属に属し、そしてこのウイルスはエンベロープがある、マイナス−センスＲＮＡウイルスである。このウイルスゲノムのＲＮＡは三連であり、それぞれ小、中および大のゲノムフラグメントについてＳ、ＭおよびＬと一般に命名される３つのフラグメントからなる。Ｍセグメントは、単一のオープンリーディングフレームにおいてＧ１およびＧ２と名付けられる２つのエンベロープ糖タンパク質をコードする。このＳセグメントは、Ｎと名付けられるヌクレオカプシドタンパク質をコードし、そしてこのゲノムのＬセグメントは、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼをコードする。
【００７９】
いくつかの別個のハンタウイルスが世界中の特定のげっ歯類宿主に関連して見出される（表１を参照のこと）。上記で説明したとおり、少なくとも６つの主要なハンタウイルス血清型ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶに由来するＮ抗原および／またはＧ１抗原が、本明細書において用途を見出す。これらの血清型に属すると同定された多数の単離株由来のＮ抗原およびＧ１抗原の配列、ならびにこれらの抗原をコードする核酸配列は公知である。Ｇ１抗原が由来し得る代表的な配列は、本明細書の図１〜図１２に示される。この図に示されるＧ１抗原は、Ｎ末端メチオニンを含むが、本明細書における使用のためのＧ１ペプチドは、特に合成方法によって生成される場合、このメチオニンを含む必要はない。本明細書における使用のためのＧ１抗原は、全長Ｇ１タンパク質またはＧ１タンパク質の免疫原性フラグメントを含み得る。少なくとも、ＳＮＶ  ＮＭ  Ｈ１０に対して番号付けして、アミノ酸５９〜８９に示される３１個のアミノ酸配列（ＬＫＩＥＳＳＣＮＦＤＬＨＶＰＡＴＴＴＱＫＹＮＱＶＤＷＴＫＫＳＳ（配列番号４０）に相当する領域を含むフラグメントが、特に有用である。Ｇ１タンパク質のこの領域は、免疫反応性の直鎖状エピトープを構成し、そして本明細書の図７〜図１２に示されるＧ１免疫原性フラグメントの各々において見出される。この配列は、本明細書における目的の６つのハンタウイルス血清型で同じではない。従って、この配列に「対応する（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｓ）」非ＳＮＶハンタウイルス由来のアミノ酸配列は、同じ領域におさまる非ＳＮＶハンタウイルス由来のアミノ酸セグメントであり、この配列に対して相同性を示すが、この配列に対して１００％の同一性を示す必要はないということが理解されるべきである。他の５つのハンタウイルス血清型における対応する領域は、本明細書の図７〜図１２を参照して、容易に同定可能である。
【００８０】
配列番号４０に示されるアミノ酸の配列に相当するアミノ酸の配列を含む免疫原性Ｇ１抗原は、例えば、３１アミノ酸から最大でＧ１分子の全長までを含み得、例えば、３１〜５００アミノ酸、好ましくは３１〜２５０アミノ酸、そしてさらに好ましくは３１〜１５０アミノ酸、例えば、３１〜５０．．．６０．．．７０．．．７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６．．．９０．．．１００．．．２００．．．３００．．．４００．．．５００、最大でＧ１分子の全長まで、またはこれらの範囲内の任意の整数のアミノ酸を含んでもよい。さらに、本明細書における使用のためのＧ１抗原は、エンベロープのＣ末端に見出される膜貫通結合ドメインおよび／または細胞質テールの全てまたは一部を欠いてもよい。従って、本発明は、膜貫通結合ドメインおよび細胞質テールを保持するエンベロープポリペプチド、ならびにこの膜貫通結合ドメインおよび／または細胞質テールの全てもしくは一部を欠く抗原、ならびにＧ１タンパク質の隣接部分の使用を意図する。このようなドメインの位置は、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ技術、Ｋｙｔｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９８２）１５７：１０５〜１３２のような、当該分野で周知のコンピュータープログラムおよびアルゴリズムを用いて容易に決定され得る。
【００８１】
Ｇ１抗原が由来し得るさらなる配列は周知である。例えば、Ｇ１配列は、以下の登録番号でＮＣＢＩに寄託された配列のような種々のＨＴＮＶ配列のいずれかに由来し得る：ＮＣ＿００５２１９、ＡＦ３４５６３６、Ｄ２５５３２、Ｄ２５５２９、Ｄ００３７７、Ｄ００３７６、ＡＦ２８８６４５、ＡＦ３６６５６９、ＡＦ０３５８３１、Ｙ００３８６、Ｕ３８１７７、Ｕ３７７２９、Ｍ１４６２７およびＬ０８７５３。Ｇ１配列は、以下の登録番号でＮＣＢＩに寄託された配列のような種々のＳＮＶ配列のいずれかに由来し得る：Ｌ３７９０３、Ｌ２５７８３、ＡＦ０３０５５２、ＡＦ０３０５５１およびＵ０２４７１。Ｇ１配列は、以下の登録番号でＮＣＢＩに寄託された配列などの種々のＡＮＤＶ配列のいずれかに由来し得る：ＮＣ＿００３４６７およびＡＦ２９１７０３。Ｇ１配列は、以下の登録番号でＮＣＢＩに寄託された配列のような種々のＳＥＯＶ配列のいずれかに由来し得る：ＡＦ４５８１０４、ＡＢ０２７５２１、ＡＦ２８８６５４、ＡＦ２８８６５２、ＡＦ２８８６５０およびＳ４７７１６。Ｇ１配列は、以下の登録番号でＮＣＢＩに寄託された配列のような種々のＰＵＵＶ配列のいずれかに由来し得る：ＮＣ＿００５２２３、ＡＹ５２６２１８、Ｕ１４１３６、Ｕ２２４１８、Ｌ０８７５４、Ｌ０８７５５、Ｘ６１０３４，Ｘ５５１２９およびＭ２９９７９。Ｇ１配列は、以下の登録番号でＮＣＢＩに寄託された配列のような種々のＤＯＢＶ配列のいずれかに由来し得る：ＮＣ＿００５２３４、ＡＪ４１０６１６、ＡＹ１６８５７８、ＡＹ１６８５７７およびＬ３３６８５。
【００８２】
Ｎ抗原が由来し得る代表的な配列は、本明細書の図１３〜図１８に示される。Ｇ１抗原について上述されたとおり、Ｎ抗原はＮ末端メチオニンを含んでも含まなくてもよい。本明細書における使用のためのＮ抗原は、全長Ｎタンパク質を含んでもよく、Ｎタンパク質の免疫原性フラグメントを含んでもよい。少なくとも、ＳＮＶ  ＮＭ  Ｈ１０に対して番号付けして、Ｎポリペプチドの１７位〜５９位に見出される４３個のアミノ酸配列（ＱＬＶＴＡＲＱＫＬＫＤＡＥＲＡＶＥＬＤＰＤＤＶＮＫＳＴＬＱＳＲＲＡＡＶＳＡＬＥＴＫＬＧ（配列番号３９）に相当する領域を含むフラグメントが、特に有用である。Ｎタンパク質のこの領域は、イムノドミナントなエピトープを含み、そしてこのエピトープに対する抗体は、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶおよびＨＴＮＶに由来するＮタンパク質と交差反応性である。
【００８３】
この配列は、本明細書における目的の６つのハンタウイルス血清型で同じではない。従って、この配列に「対応する（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｓ）」非ＳＮＶハンタウイルス由来のアミノ酸配列は、同じ領域におさまる非ＳＮＶハンタウイルス由来のアミノ酸セグメントであり、この配列に対して相同性を示すが、この配列に対して１００％の同一性を示す必要はないということが理解される。他の５つのハンタウイルス血清型における対応する領域は、本明細書の図１３〜図１８を参照して容易に同定可能である。
【００８４】
配列番号３９に示されるアミノ酸の配列に相当するアミノ酸の配列を含む免疫原性Ｎ抗原は、例えば、４３アミノ酸から最大でＮ分子の全長までを含み得、例えば、４３〜３５０アミノ酸、好ましくは４３〜３００アミノ酸、そしてさらに好ましくは４３〜２００アミノ酸、さらにそれより好ましくは４３〜１００アミノ酸、例えば、４３〜６０．．．７０．．．８０．．．９０．．．１００．．．２００．．．３００．．．４００、最大でＮ分子の全長まで、またはこれらの範囲内の任意の整数のアミノ酸を含んでもよい。
【００８５】
Ｎ抗原が由来し得るさらなる配列は周知である。例えば、Ｎ配列は、以下の登録番号でＮＣＢＩに寄託された配列のような種々のＨＴＮＶ配列のいずれかに由来し得る：ＡＢ１２７９９８、ＡＢ０２７１０１、ＡＢ０２７５２３、ＡＢ０２７０９７、Ｄ２５５３３、ＡＦ２８８６４６、ＡＦ２８８６４４、ＡＦ４２７３２４、ＡＦ４２７３２３、ＡＦ４２７３２２、ＡＦ４２７３２０、ＡＦ４２７３１９、ＡＦ４２７３１８、ＡＦ３６６５６８、ＡＹ０１７０６４、ＡＦ３２１０９５、ＡＦ３２１０９４、ＡＦ２８８２９６、Ｕ３７７６８およびＭ１４６２６。Ｎ配列は、以下の登録番号でＮＣＢＩに寄託された配列のような種々のＳＮＶ配列のいずれかに由来し得る：ＮＣ＿００５２１６、Ｌ３７９０４、Ｌ２５７８４、Ｌ３３８１６、Ｌ３３６８３およびＵ０２４７４。Ｎ配列は、以下の登録番号ＮＣ＿００３４６６、ＡＦ３２５９６６、ＡＦ００４４６６０、およびＡＦ２９１７０２としてＮＣＢＩに寄託された配列などの任意の種々のＡＮＤＶ配列のいずれかに由来し得る：。Ｎ配列は、以下の登録番号でＮＣＢＩに寄託された配列のような種々のＳＥＯＶ配列のいずれかに由来し得る：ＮＣ＿００５２３６、ＡＦ４８８７０８、ＡＦ４８８７０７、ＡＹ２７３７９１、ＡＢ０２７５２２、ＡＦ３２９３９０、ＡＦ２８８６５５、ＡＦ２８８６５３、ＡＦ２８８６４３、ＡＦ４０６９６５、ＡＹ００６４６５。Ｎ配列は、以下の登録番号でＮＣＢＩに寄託された配列のような種々のＰＵＵＶ配列のいずれかに由来し得る：ＮＣ＿００５２２４、ＡＹ５２６２１９、ＡＪ３１４６０１、ＡＪ３１４６００、ＡＪ３１４５９９、ＡＪ３１４５９８、ＡＪ３１４５９７、ＡＦ４４２６１３、ＡＦ３６７０７１、ＡＦ３６７０７０、ＡＦ３６７０６８、ＡＦ３６７０６７、ＡＦ３６７０６６、ＡＦ３６７０６５、ＡＦ３６７０６４、ＡＪ２７７０３０、ＡＪ２７７０７６、ＡＪ２７７０７５、ＡＪ２７７０３４、ＡＪ２７７０３３、ＡＪ２７７０３２、ＡＪ２７７０３１、ＡＪ２３８７９１、ＡＪ２３８７９０、ＡＪ２３８７８９、ＡＪ２３８７８８、Ｘ６１０３５、ＡＢ０１０７３１、ＡＢ０１０７３０、Ｕ１４１３７、ＡＦ２９４６５２、Ｕ２２４２３、Ｌ０８８０４、Ｌ１１３４７およびＭ３２７５０。Ｎ配列は、以下の登録番号でＮＣＢＩに寄託された配列のような種々のＤＯＢＶ配列のいずれかに由来し得る：ＮＣ＿００５２３３、ＡＪ６１６８５４、ＡＪ４１０６１９、ＡＪ４１０６１５、ＡＪ１３１６７３、ＡＪ１３１６７２、ＡＪ２６９５５０、ＡＪ２６９５４９、ＡＪ００９７７５、ＡＪ００９７７３、ＡＹ１６８５７６およびＬ４１９１６。
【００８６】
組換えＮ抗原およびＧ１抗原は、別個の生成物として提供されてもよく、またはＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶの６つの血清型に由来する抗原に加えて、これらの６つの血清型の１つ以上に由来する他のハンタウイルス抗原を含むかまたはこれらの６つの血清型の１つ以上に由来する他のハンタウイルス抗原を含まない、種々のＮ抗原およびＧ１抗原の融合体として提供されてもよい。一例として、融合体は、上記の６つの血清型由来のＧ１抗原を含んでもよい。この融合体は単独で用いられてもよく、またはこれらの６つの血清型の１つ以上に由来する１つ以上のＮ抗原を含む第二の融合体と組み合わせて用いられてもよい。同様に、融合体は、上記の６つの血清型由来のＮ抗原を含んでもよく、そしてこの融合体は単独で用いられてもよいし、またはこれらの６つの血清型の１つ以上に由来する１つ以上のＧ１抗原を含む第二の融合体とともに用いられてもよい。あるいは、全てのＮ抗原およびＧ１抗原は、単独の融合体中で提供されても、または複数の融合体中で提供されてもよい。本発明の融合タンパク質は、ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶに由来するＮおよび／またはＧ１抗原が存在する限り、多数の形態をとり得ることが容易に理解される。融合体が生成される場合、ポリペプチドは、ネイティブウイルスで見出されるのと同じ順序で組織化される必要はない。従って、例えば、Ｇ１ポリペプチドは、ＮポリペプチドのＮ末端またはＣ末端などに融合されてもよい。他の可能性のある融合タンパク質としては、ヒトもしくは酵母のスーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）タンパク質、またはＳＯＤタンパク質のフラグメントと、ハンタウイルスのＧ１および／もしくはＮポリペプチドとの融合体が挙げられる。ヒトＳＯＤ融合抗原として発現される組換えタンパク質の例については、Ｂａｒｒら、Ｖａｃｃｉｎｅ（１９８７）５：９０〜１０１；Ｐｉｃｈｕａｎｔｅｓら、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｆｕｃｔ．Ｇｅｎｅｔ．（１９８９）６：３２４〜３２７；Ｐｉｃｈｕａｎｔｅｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９０）２３：１３８９０〜１３８９８を参照のこと。
【００８７】
本発明での使用のための抗原は、標準的な技術を用いて得られ得る。例えば、ハンタウイルス抗原は、当該分野で周知の組換え方法を用いて都合よく生成される。例えば、ハンタウイルス抗原の組換え体生成の説明については、１９９５年１月５日公開の国際出願第ＷＯ９５／００６４８号；１９９５年３月２日公開の国際公開第ＷＯ９５／０６２４０号；およびＨｊｅｌｌｅら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ（１９９４）６８：５９２〜５９６を参照のこと。
【００８８】
オリゴヌクレオチドプローブは、ハンタウイルスゲノムの公知の配列に基づいて考案され得、そして本発明において有用な抗原をコードするハンタウイルス遺伝子のゲノムライブラリーもしくはｃＤＮＡライブラリーをプローブ検出するために用いられ得る。次いでこの遺伝子は、標準的な技術を用いてさらに単離されてもよく、そして所望の場合、全長配列の所望の部分で遺伝子を変異させるために制限酵素が使用されてもよい。
【００８９】
同様に、ハンタウイルス遺伝子は、公知の技術を用いて、例えば、フェノール抽出によって（例えば、１９９５年１月５日公開の国際公開第ＷＯ９５／００６４８号を参照のこと）、感染組織から直接単離されてもよく、そしてこの配列は、任意の所望の改変を生成するようにさらに操作されてもよい。ＤＮＡを獲得して単離するために用いられる技術の説明については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出を参照のこと。最終的に、ハンタウイルス抗原をコードする遺伝子は、公知の配列に基づいて、合成的に生成されてもよい。このヌクレオチド配列は、所望の特定のアミノ酸配列の適切なコドンで消化され得る。一般には、この配列が発現されるところの、意図される宿主にとって好ましいコドンが選択される。完全な配列は一般に、標準的な方法によって調製される重複するオリゴヌクレオチドから集合させられて、完全なコード配列に集合させられる。例えば、Ｅｄｇｅ，Ｎａｔｕｒｅ（１９８１）２９２：７５６；Ｎａｍｂａｉｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８４）２２３：１２９９；Ｊａｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８４）２５９：６３１１を参照のこと。
【００９０】
ポリヌクレオチドは、天然に存在する種々のポリペプチドのコード配列を含んでもよいし、または天然には存在しない人工的な配列を含んでもよい。これらのポリヌクレオチドは、所望の場合、標準的な分子生物学的技術を用いて連結され、融合タンパク質のコード配列を形成してもよい。
【００９１】
一旦コード配列が、調製されるかまたは単離されれば、このような配列は、任意の適切なベクター内またはレプリコン内にクローニングされてもよい。多数のクローニングベクターが当業者に公知であり、そして適切なクローニングベクターの選択は、好みの問題である。適切なベクターとしては、限定はしないが、適切な制御エレメントと会合された場合複製可能である、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、染色体またはウイルスが挙げられる。次いで、コード配列を、発現のために用いられる系に依存して、適切な制御エレメントの制御下に配置する。従って、このコード配列は、目的のＤＮＡ配列が適切な形質転換体によってＲＮＡに転写されるように、プロモーター、リボソーム結合部位（細菌による発現のため）および必要に応じてオペレーターの制御下におかれてもよい。コード配列は、翻訳後プロセシングにおいて宿主によって後に除去され得るシグナルペプチドまたはリーダー配列を含んでもよいし、含まなくてもよい。例えば、米国特許第４，４３１，７３９号；同第４，４２５，４３７号；同第４，３３８，３９７号を参照のこと。
【００９２】
存在するならば、シグナル配列は、目的のハンタウイルスポリペプチドと会合して見出される天然のリーダーであってもよい。例えば、発現されているハンタウイルスポリペプチドがＧ１抗原である場合、天然のＧ１リーダー配列の全てまたは一部が含まれ得る。あるいは、分泌の効率を増大し得る異種シグナル配列が存在し得る。多数の代表的なリーダー配列が当該分野で公知であり、そしてこれには、限定はしないが、酵母α因子リーダー、ＴＰＡシグナルペプチド、Ｉｇシグナルペプチドなどが挙げられる。これらの配列および他のリーダー配列の配列は当該分野で周知である。
【００９３】
制御配列に加えて、宿主細胞の増殖に対して配列の発現の調節を可能にする調節配列を付加することが所望され得る。調節配列は、当業者に公知であり、そして化学的または物理的な刺激（調節性化合物の存在を含む）に対する応答において遺伝子の発現をオンまたはオフにする配列が例として挙げられる。他のタイプの調節エレメントもまた、ベクター中に存在し得る。例えば、構築物の発現レベルを増大するために、本明細書においてエンハンサー要素が用いられ得る。例としては、ＳＶ４０初期遺伝子エンハンサー（Ｄｉｊｋｅｍａら（１９８５）ＥＭＢＯ  Ｊ．４：７６１）、ラウス肉腫ウイルスの長末端反復（ＬＴＲ）由来のエンハンサー／プロモーター（Ｇｏｒｍａｎら（１９８２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７９：６７７７）、およびＣＭＶイントロンＡ配列に含まれる要素（米国特許第５，６８８，６８８号）ヒトのようなＣＭＶ由来の要素（Ｂｏｓｈａｒｔら（１９８５）Ｃｅｌｌ  ４１：５２１）、が挙げられる。この発現カセットはさらに、適切な宿主細胞における自律性の複製のための複製起点、１つ以上の選択マーカー、１つ以上の制限部位、高コピー数のための能力、および強力なプロモーターを含んでもよい。
【００９４】
特定のコード配列が適切な調節性配列を有するベクター内に配置されるように、発現ベクターが構築され、制御配列に対するコード配列の位置および方向は、このコード配列がこの制御配列の「制御（ｃｏｎｔｒｏｌ）」下で転写されるようになっている（すなわち、この制御配列でＤＮＡ分子に結合するＲＮＡポリメラーゼは、このコード配列を転写する）。目的の分子をコードする配列の改変が、この目的を達成するために所望され得る。例えば、ある場合には、適切な方向で制御配列に付加することができるように（すなわち、リーディングフレームを維持するために）配列を改変することが必要であるかもしれない。制御配列および他の調節性配列は、ベクターへの挿入の前にコード配列に連結されてもよい。あるいは、コード配列は、制御配列および適切な制限部位を既に含む、発現ベクターに直接クローニングされてもよい。
【００９５】
上記で説明されるとおり、目的のポリペプチドの変異体またはアナログを生成することも所望され得る。本発明の組成物における使用のためのハンタウイルスポリペプチドの変異体またはアナログは、目的の分子をコードする配列の一部の欠失によって調製され得るか、配列の挿入によって調製され得るか、および／または配列内の１つ以上のヌクレオチドの置換によって調製され得る。ヌクレオチド配列を改変するための技術、例えば、部位特異的突然変異などは、当業者に周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出；Ｋｕｎｋｅｌ、Ｔ．Ａ．（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８５）８２：４４８；Ｇｅｉｓｓｅｌｓｏｄｅｒら（１９８７）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ５：７８６；ＺｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈ（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１００：４６８；Ｄａｌｂｉｅ−ＭｃＦａｒｌａｎｄら（１９８２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７９：６４０９を参照のこと。
【００９６】
組換え発現を容易にするために、目的の分子を、例えば５０ｋＤａのＥ．ｃｏｌｉマルトース結合タンパク質との融合体、ヒトもしくは酵母のスーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）またはそのフラグメントとの融合体のような、融合タンパク質として、あるいはユビキチン融合タンパク質として発現してもよい。
【００９７】
この分子は、全てが当該分野で周知の昆虫発現系、哺乳動物発現系、細菌発現系、ウイルス発現系および酵母発現系を含む、広範な種々の系において発現され得る。例えば、バキュロウイルス系のような昆虫細胞の発現系は、当業者に公知であり、そして例えば、ＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ、Ｔｅｘａｓ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  Ｎｏ．１５５５（１９８７）に記載される。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系の材料および方法は、とりわけ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ（「ＭａｘＢａｃ」キット）のキット形態で市販される。同様に、細菌および哺乳動物細胞の発現系は、当該分野で周知であり、そして例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（前出）に記載される。酵母発現系もまた、当該分野で公知であって、例えば、Ｙｅａｓｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｂａｒｒら、編，１９８９）Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，Ｌｏｎｄｏｎに記載される。
【００９８】
上記の系での使用のための多数の適切な宿主細胞もまた、公知である。例えば、哺乳動物細胞株は当該分野で公知であり、そしてこれには、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な不死化細胞株、例えば、限定はしないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト胚性腎細胞、ヒト肝臓癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙウシ腎臓（「ＭＤＢＫ」）細胞、などが挙げられる。同様に、細菌の宿主、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓおよびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．は、本発明の発現構築物での用途を見出す。本発明において有用な酵母宿主としては、とりわけ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｍａｌｔｏｓａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ，Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ  ｇｕｉｌｌｅｒｉｍｏｎｄｉｉ、Ｐｉｃｉｈａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅおよびＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａが挙げられる。バキュロウイルス発現ベクターでの使用のための昆虫細胞としては、とりわけ、Ａｅｄｅｓ  ａｅｇｙｐｔｉ、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ、Ｂｏｍｂｙｘ  ｍｏｒｉ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、およびＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉが挙げられる。
【００９９】
目的のヌクレオチド配列を含む核酸分子は、当該分野で周知の種々の遺伝子送達技術を用いて、宿主細胞ゲノムに安定的に組み込まれてもよいし、または適切な宿主細胞において安定的なエピソームエレメント上に維持されてもよい。例えば、米国特許第５，３９９，３４６号を参照のこと。
【０１００】
選択された発現系および宿主に依存して、この分子は、タンパク質が発現される条件下で上記の発現ベクターにより形質転換された宿主細胞を増殖させることによって生成される。次いで、この発現されたタンパク質を、宿主細胞から単離して、精製する。発現系がタンパク質を増殖培地中に分泌する場合、この産物は、培地から直接精製されてもよい。分泌されない場合、これは、細胞溶解液から単離されてもよい。適切な増殖条件および回収方法の選択は、当該分野の範囲内である。
【０１０１】
このハンタウイルス抗原は、生物学的サンプル中のウイルスに対する反応性抗体の存在を検出する診断薬として本明細書において用いられる。さらに、この抗原は、どのハンタウイルスタイプが感染を担うかを決定するために用いられ得る。この抗原はまた、診断薬における使用のための抗体を産生するために用いられ得る。
【０１０２】
（ハンタウイルス抗体）
ハンタウイルス抗原を用いて、ハンタウイルス特異的なポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を生成し得る。ハンタウイルス特異的なポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体は、ハンタウイルス抗原に特異的に結合する。ポリクローナル抗体は、マウス、ウサギ、ヤギまたはウマのような哺乳動物に対してハンタウイルス抗原を投与することによって生成され得る。免疫化された動物由来の血清を収集して、その抗体を、例えば、硫酸アンモニウムでの沈殿、およびその後のクロマトグラフィー（好ましくはアフィニティークロマトグラフィー）によって血漿から精製する。ポリクローナル抗血清を産生および処理するための技術は当該分野で公知である。
【０１０３】
このタンパク質に存在するハンタウイルス特異的エピトープに対するモノクローナル抗体はまた、容易に生成され得る。ハンタウイルス抗原で免疫された哺乳動物、例えば、マウス（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ（１９７５）２５６：４９５〜４９７を参照のこと）またはウサギ（例えば、その全体が参照によって本明細書に援用される、米国特許第５６７５，０６３号を参照のこと）に由来する正常なＢ細胞を、例えば、ＨＡＴ−感受性マウス骨髄腫細胞と融合して、ハイブリドーマを生成し得る。ハンタウイルス特異的な抗体を生成するハイブリドーマは、ＲＩＡまたはＥＬＩＳＡを用いて同定してもよく、そして半固体寒天中でのクローニングによって、または限界希釈によって単離してもよい。ハンタウイルス特異的な抗体を生成するクローンは、別の回のスクリーニングによって単離される。
【０１０４】
キメラ抗体を提供することが所望され得る。ヒトアミノ酸配列および非ヒトアミノ酸配列からなるキメラ抗体が、ヒトにおけるそれらの免疫原性を減じるためにマウスモノクローナル抗体分子から形成され得る（Ｗｉｎｔｅｒら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３；Ｌｏｂｕｇｌｉｏら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：４２２０；Ｓｈａｗら（１９８７）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４；およびＢｒｏｗｎら（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３５７７；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４；およびＪｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２；１９９２年１２月２３日公開の欧州特許公開番号５１９，５９６号；および１９９４年９月２１日公開の英国特許公開番号２，２７６，１６９号）。
【０１０５】
親のモノクローナル抗体分子の免疫学的結合特性を示し得る抗体分子フラグメント、例えば、Ｆ（ａｂ’）２分子、Ｆｖ分子およびｓＦｖ分子は、公知の技術を用いて生成され得る。Ｉｎｂａｒら（１９７２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ６９：２６５９；Ｈｏｃｈｍａｎら（１９７６）Ｂｉｏｃｈｅｍ  １５：２７０６；Ｅｈｒｌｉｃｈら（１９８０）Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９：４０９１；Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５（１６）：５８７９；ならびにＨｕｓｔｏｎらの米国特許第５，０９１，５１３号および同第５，１３２，４０５号；ならびにＬａｄｎｅｒらの同第４，９４６，７７８号。
【０１０６】
代替として、ファージ−ディスプレイシステムを用いて、インビトロにおいてモノクローナル抗体分子集団を増殖させ得る。Ｓａｉｋｉら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２４：１６３；Ｓｃｈａｒｆら（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３３：１０７６；米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号；Ｙａｎｇら（１９９５）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２５４：３９２；Ｂａｒｂａｓ，ＩＩＩら（１９９５）Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｏｍｐ．Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ８：９４；Ｂａｒｂａｓ，ＩＩＩら（１９９１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：７９７８。
【０１０７】
一旦生成されれば、ファージディスプレイライブラリーを用いて、公知の技術を用いてＦａｂ分子の免疫学的結合親和性を改善し得る。例えば、Ｆｉｇｉｎｉら（１９９４）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３９：６８を参照のこと。ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦａｂ分子の重鎖部分および軽鎖部分のコード配列は、単離されても合成されてもよく、そして発現のための適切なベクターまたはレプリコンにクローニングされ得る。上記に記載されたものを含む、任意の適切な発現系を用いてもよい。
【０１０８】
ハンタウイルス感染ヒト由来の血清サンプルのようなサンプル中の、ハンタウイルスまたはハンタウイルス抗原の存在を検出するために、ハンタウイルスエピトープに対する抗体は特に有用である。ハンタウイルス抗原についてのイムノアッセイは、１つの抗体またはいくつかの抗体を、単独で、またはハンタウイルス抗原と組み合わせて利用し得る。ハンタウイルス抗原についてのイムノアッセイは、例えば、ハンタウイルスエピトープに対するモノクローナル抗体、１つのハンタウイルスポリペプチドのエピトープに対するモノクローナル抗体の組み合わせ、異なるハンタウイルスポリペプチドのエピトープに対するモノクローナル抗体、同じハンタウイルス抗原に対するポリクローナル抗体、異なるハンタウイルス抗原に対するポリクローナル抗体、またはモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体の組み合わせを使用し得る。イムノアッセイプロトコールは、例えば、標識抗体を用いて、例えば競合アッセイ、直接反応アッセイまたはサンドイッチタイプのアッセイに基づき得、そして下にさらに記載される。この標識は、例えば、蛍光、化学発光または放射活性であってもよい。
【０１０９】
ハンタウイルス抗体はさらに、免疫親和性カラムによってハンタウイルス粒子またはハンタウイルス抗原を単離するために用いられ得る。この抗体は、この抗体がその免疫選択性活性を保持するように、例えば、吸着によってまたは共有結合によって固体支持体に結合され得る。抗体の抗原結合部位が接近可能なままであるように、必要に応じて、スペーサー基が含まれてもよい。次いでこの固定された抗体を用いて、血液または血漿のような生物学的サンプル由来のハンタウイルス粒子またはハンタウイルス抗原に結合させてもよい。この結合されたハンタウイルス粒子またはハンタウイルス抗原を、例えばｐＨの変化によってカラムマトリックスから回収する。
【０１１０】
（ハンタウイルス診断アッセイ）
上記で説明されるとおり、免疫原性ハンタウイルス抗原およびこの抗原に対する抗体をアッセイにおいて用いて、ハンタウイルス感染を同定し得る。代表的には、生物学的サンプル中のハンタウイルスの存在は、サンプル中のハンタウイルスに対する抗体の存在によって決定されるが、適切な場合には、ウイルスタンパク質の存在は、サンプル中のハンタウイルスの指標として検出されて用いられ得る。この試薬は、限定はしないが、全血、血清および血漿を含む血液サンプル中でハンタウイルスを検出するために用いられ得る。この抗原および抗体は、被験体、例えば、ヒトまたはげっ歯類の被験体におけるハンタウイルス感染を検出するために、そして提供された血液サンプルにおけるハンタウイルス混入を検出するために用いられ得る。従って、個々の提供されたサンプルまたはプールされたサンプル由来のアリコートを、ハンタウイルスの存在についてスクリーニングして、ハンタウイルスが混入したそれらのサンプルまたはプールされたサンプルを、それらが合わされる前に排除し得る。この方法では、ハンタウイルス混入を実質的に含まない血液供給源を得ることができる。「実質的にハンタウイルスを含まない（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｆｒｅｅ  ｏｆ  ｈａｎｔａｖｉｒｕｓ）」とは、本明細書に記載のアッセイを用いて、好ましくは下にさらに詳細に記載されるストリップ・イムノブロットアッセイを用いて、ハンタウイルスの存在が検出されないことを意味する。
【０１１１】
本明細書における使用のためのアッセイとしては、ウエスタンブロット；凝集試験；酵素標識イムノアッセイおよび酵素媒介イムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）；ビオチン／アビジンタイプのアッセイ；ラジオイムノアッセイ；免疫電気泳動法；免疫沈降、ストリップ・イムノブロットアッセイなどが挙げられる。反応としては一般には、露呈標識（ｒｅｖｅａｌｉｎｇ  ｌａｂｅｌｓ）例えば、蛍光標識、化学発光標識、放射性標識、酵素標識もしくは色素分子、または抗原と抗原に反応する抗体（単数または複数）との間の複合体の形成を検出するための他の方法が挙げられる。
【０１１２】
前述のアッセイは一般に、抗原−抗体複合体が結合されている固相支持体からの、液相中の未結合の抗体または抗原の分離を包含する。本発明の実施において使用され得る固体支持体としては、ニトロセルロース（例えば、メンブレン形態またはマイクロタイターウェル形態）；ポリ塩化ビニル（例えば、シートまたはマイクロタイターウェル）；ポリスチレンラテックス（例えば、ビーズまたはマイクロタイタープレート）；フッ化ポリビニリデン；ジアゾ化ペーパー；ナイロンメンブレン；活性化ビーズ、磁気反応性ビーズなどのような基板が挙げられる。
【０１１３】
本発明の１局面では、ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶの少なくとも６つのハンタウイルス血清型に由来するハンタウイルスＧ１抗原および／またはＮ抗原を、サンプル中の抗ハンタウイルス抗体の捕捉もしくは検出またはその両方のために用いる。本発明の別の局面では、ハンタウイルス抗原に対する抗体をサンプル中の抗ハンタウイルス抗原の捕捉もしくは検出またはその両方のために用いてもよい。分析物（すなわち、サンプル中の抗ハンタウイルス抗体またはハンタウイルス抗原）の「捕捉（ｃａｐｔｕｒｅ）」とは、この分析物が、捕捉分子の結合によってサンプルの他の成分から分離され得ることを意味する。代表的には、この捕捉分子は、固体支持体と直接または間接的に会合される。代表的には、この検出分子は、検出可能標識と直接または間接的に会合される。
【０１１４】
代表的には、固体支持体は最初に、適切な結合条件下で固相成分（例えば、少なくとも６つのハンタウイルス血清型、ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶに由来するハンタウイルスのＧ１抗原および／もしくはＮ抗原、ならびに／または抗ハンタウイルス抗体）と反応され、その結果この成分はこの支持体に十分に固定される。時には、支持体に対する固定は、より良好な結合特性を有するタンパク質と最初にカップリングすることによって増強され得る。適切なカップリングタンパク質としては、限定はしないが、高分子、例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む血清アルブミン、キーホール・リンペット・ヘモシアニン、免疫グロブリン分子、サイログロブリン、オボアルブミンおよび当業者に周知の他のタンパク質が挙げられる。支持体に対して抗原または抗体を結合するために用いられ得る他の分子としては、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマーなどが挙げられる。このような分子およびこれらの分子をカップリングする方法は、当業者に周知である。例えば、Ｂｒｉｎｋｌｅｙ、Ｍ．Ａ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．（１９９２）３：２〜１３；Ｈａｓｈｉｄａら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９８４）６：５６〜６３；ならびにＡｎｊａｎｅｙｕｌｕおよびＳｔａｒｏｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊ．ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．（１９８７）３０：１１７〜１２４を参照のこと。
【０１１５】
固体支持体と固相成分との反応後、固定化されていない固相成分を洗浄によってこの支持体から除去し、次いでこの支持体結合成分を、リガンド成分（すなわち、ハンタウイルスの抗原または抗体）を含むと疑われる生物学的サンプルと、適切な結合条件下で接触させる。非結合リガンドを除去するための洗浄後、二次結合因子部分を、適切な結合条件下で添加してもよく、ここで二次結合因子が、結合されたリガンドと選択的に会合し得る。次いで、二次結合因子の存在は当該分野で周知の技術を用いて検出され得る。
【０１１６】
さらに詳細には、ＥＬＩＳＡ法を用いてもよく、ここではマイクロタイタープレートのウェルが、ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶの少なくとも６つのハンタウイルス血清型に由来するハンタウイルスＧ１抗原および／またはＮ抗原、ならびに／または本発明の抗体でコーティングされる。次いで、抗ハンタウイルス免疫グロブリン分子またはハンタウイルス抗原のいずれかを含むかまたは含むと疑われる生物学的サンプルを、このコーティングされたウェルに添加する。抗原−抗体結合を可能にするのに十分なインキュベーション期間後、未結合の部分を除去するためにプレート（単数または複数）を洗浄し得、検出可能に標識された二次結合分子を添加し得る。この二次結合分子を、任意の捕捉サンプルと反応させて、プレートを洗浄し、二次結合分子の存在を当該分野で周知の方法を用いて検出する。
【０１１７】
１つの特定の形式では、ＥＬＩＳＡ抗原サンドイット形式を用いる。この場合、固体支持体は、ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶの少なくとも６つのハンタウイルス血清型に由来するハンタウイルスＧ１抗原および／またはＮ抗原を用いてコーティングする。次いで、このサンプルを、抗ハンタウイルス抗体が存在するならば抗ハンタウイルス抗体が１つ以上のまたはハンタウイルス抗原に結合して抗原／抗体複合体を形成することを可能にする条件下で支持体と接触させる。未結合の試薬を除去して、結合された抗原／抗体複合体と反応する酵素的に標識された抗原（例えば標識されたハンタウイルスＮ抗原および／またはＧ１抗原）を添加する。酵素基質を用いてシグナルを生成する。
【０１１８】
別の形式で、固体支持体を種特異的な抗アイソタイプ抗体（例えば、抗ヒトＩｇＭ抗体、抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＡ抗体など）でコーティングする。次いでこの支持体とサンプルとを、このサンプル中に存在する抗体のこの抗アイソタイプ抗体に対する結合を可能にする条件下で接触させる。未結合の抗体を除去し得、結合した抗ハンタウイルス抗体の存在を、本発明の標識されたハンタウイルス抗原を用いて検出し得る。この標識は、代表的には、酵素標識、例えば、ＨＲＰ、ＡＰである。
【０１１９】
別の実施形態では、生物学的サンプル由来の結合したハンタウイルスリガンドの存在は、この抗体リガンドに対する抗体を含む二次結合因子を用いて容易に検出され得る。多数の抗ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）分子が当該分野で公知であり、これは、当業者に公知の方法を用いて、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼまたはウレアーゼのような検出可能酵素標識に対して容易に結合体化され得る。次いで、適切な酵素基質を用いて検出可能なシグナルを生成する。他の関連の実施形態では、当業者に公知の方法を用いて、競合タイプのＥＬＩＳＡ技術を行ってもよい。
【０１２０】
サンプル中の抗ハンタウイルス抗体の検出のための他の形式は、公知であり、そして本発明のハンタウイルス抗原の組み合わせは、ハンタウイルス抗原を使用する任意の公知の方式で用いられ得る。例えば、Ｌｅｅら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．（１９７８）１３７：２９８〜３０８；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．（１９８２）１４６：６３８〜６４４；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．（１９８２）１４６：６４５〜６５１；Ｌｕｎｄｋｖｉｓｔら、Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇｎｏｓ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９５）２：８２〜８６；Ｃｈｕら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（１９９４）１９８：１９６〜２０４；Ｅｌｇｈら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９５）４５：１４６〜１５０；Ｈｊｅｌｌｅら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（１９９７）３５：６００〜６０８；Ｂｈａｒａｄｗａｊら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．（２０００）１８２：４３〜４８；Ｙｅｅら、Ｊ．Ｗｉｌｄｌ．Ｄｉｓ．（２００３）３９：２７１〜２７７）を参照のこと。
【０１２１】
ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶの少なくとも６つのハンタウイルス血清型に由来するハンタウイルスのＧ１抗原および／またはＮ抗原は、以下のとおりＩｇＭ捕捉ＥＬＩＳＡで用いられ得る。抗ヒトＩｇＭ抗体（例えば、ヤギ抗ヒトＩｇＭ抗体）は、固体支持体に結合され、この支持体は、ハンタウイルスに対するヒトＩｇＭの存在について試験されるべきサンプルと、抗ハンタウイルスＩｇＭがもし存在するならば抗ハンタウイルスＩｇＭが固体支持体に結合された１つ以上の抗ヒトＩｇＭ抗体に対して結合して抗体／抗体複合体を形成することを可能にする条件下で接触させられる。ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶの少なくとも６つのハンタウイルス血清型に由来するハンタウイルスＧ１抗原および／またはＮ抗原は、抗体／抗体複合体中の抗ハンタウイルスＩｇＭに対して結合し、抗体／抗体／抗原複合体の形成を可能にする条件下で添加される。未結合抗原が除去されて、検出可能に標識された抗ハンタウイルス抗体が、結合された抗原に対する結合を可能にする条件下で添加される。サンプル中のハンタウイルスに対するＩｇＭの存在は、固体支持体に結合された、結合された抗ヒトＩｇＭ  Ａｂ／ヒト抗ハンタウイルスＩｇＭ／抗原複合体に対する検出可能に標識された抗ハンタウイルス抗体の存在によって決定される。あるいは、ハンタウイルス抗原自体が、検出可能に標識され得、これによって、検出可能に標識された抗ハンタウイルス抗体の必要性が省かれる。
【０１２２】
ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶの少なくとも６つのハンタウイルス血清型に由来するハンタウイルスＧ１抗原および／またはＮ抗原はまた、以下のような間接的なＩｇＧ  ＥＬＩＳＡにおいて用いられ得る。抗原に特異的な抗体が、固体支持体に結合され、この支持体は、ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶの少なくとも６つのハンタウイルス血清型に由来するハンタウイルスＧ１抗原および／またはＮ抗原と、この抗原がこの支持体に結合した抗ハンタウイルス抗体に結合して抗体／抗原複合体を形成することを可能にする条件下で接触させられる。未結合の抗原を除去して、その支持体を、ハンタウイルスに対するヒトＩｇＧの存在について検出されるべきサンプルと、ヒト抗ハンタウイルスＩｇＧがもし存在するならばヒト抗ハンタウイルスＩｇＧの抗体／抗原複合体中の抗原に対する結合を可能にする条件下で接触させる。結合した抗ハンタウイルスＩｇＧの存在は、検出可能に標識された抗ヒトＩｇＧ抗体を用いて検出され得る。
【０１２３】
前述のアッセイ系式のいくつかは「ＥＬＩＳＡ」（酵素結合免疫吸着アッセイ（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｌｉｎｋｅｄ  ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｂａｎｔ  Ａｓｓａｙ））アッセイと呼ばれるが、「酵素結合した（ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ）」結合部分以外の検出可能標識の使用が可能であり、そして多くの状況で望まれ得ることが当業者には明らかである。他の適切な検出可能標識が本明細書で記載されており、そして当該分野で周知である。
【０１２４】
アッセイはまた、ハンタウイルス抗原または抗原とこれらの分子に特異的なリガンドとが沈殿条件下で複合体を形成するように、溶液中で行われてもよい。１つの特定の実施形態では、この分子は、当該分野で公知のカップリング技術を用いて、例えば、直接化学的カップリングまたは間接カップリングによって、固相粒子（例えば、アガロースビーズなど）に結合されてもよい。次いで、このコーティングされた粒子を適切な結合条件下で、ハンタウイルスの抗体または抗原を含むことが疑われる生物学的サンプルと接触させる。結合された抗体間の架橋は、複合体凝集の形成を生じ、これが洗浄および／または遠心分離を用いて、サンプルから沈殿および分離され得る。この反応混合物は、上記の免疫診断方法のような多数の標準的な方法のいずれかを用いて複合体の有無を決定するために分析され得る。
【０１２５】
なおならなる実施形態では、免疫親和性マトリックスが提供され得、ここでは、例えば、ハンタウイルス抗体を含むことが疑われる生物学的サンプル由来の抗体のポリクローナル集団が基板に対して固定される。サンプルの最初の親和性精製は、固定された抗原を用いて行われてもよい。従って、得られたサンプル調製物は、抗ハンタウイルス部分のみを含み、親和性支持体における潜在的な非特異的結合特性を回避する。免疫グロブリン（インタクトまたは特定のフラグメントのいずれか）を高効率で固定する多数の方法および抗原結合活性の良好な保持が当該分野で公知である。一旦免疫グロブリン分子を固定して免疫親和性マトリックスを得れば、標識された分子を適切な結合条件下で、結合された抗体と接触させる。任意の非特異的に結合したハンタウイルス抗原が免疫親和性支持体から洗浄された後、結合された抗原の存在は、当該分野で公知の方法を用いて標識についてアッセイすることによって決定され得る。
【０１２６】
本発明の特に好ましい実施形態では、ストリップ・イムノブロット・アッセイ（ＳＩＡ）を、試験ストリップ上に固定されたＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶの少なくとも６つのハンタウイルス血清型に由来するハンタウイルスのＧ１抗原および／またはＮ抗原を用いて、生物学的サンプル中のハンタウイルス抗体を検出するために用いる。ＳＩＡ技術は、当該分野で周知であり、そして従来的なウエスタンブロッティング技術およびドットブロッティング技術を組み合わせる（例えばＲＩＢＡ（登録商標）（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐ．，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ）ＳＩＡ）。これらのアッセイでは、ハンタウイルス抗原を、メンブレン支持体上で、例えば、バンドまたはドットとして、個々の別個の部分として固定する。従って、メンブレン支持体上に「別個に固定された（ｄｉｓｃｒｅｔｅｌｙ  ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ）」とは、この抗原が別個の成分として存在して、混合されず、その結果、存在する抗原の各々との反応性またはその欠失が評価され得ることを意味する。次いで、ハンタウイルスに対する抗体を含むことが疑われる生物学的サンプルを試験メンブレンと反応させる。生物学的サンプル中の抗ハンタウイルス反応性の可視化は、比色定量酵素基質と組み合わせて抗ヒト免疫グロブリン酵素結合体を用いて達成される。内部コントロール（例えば、抗ヒトＩｇＭ抗体および抗ヒトＩｇＧ抗体）もまた、試験メンブレン上に存在してもよい。このアッセイは、手動で行われてもいし、または自動形式で用いられてもよい。
【０１２７】
ストリップ・イムノブロットアッセイの実施で用いられ得る固体支持体としては、限定はしないが、セルロース、ポリアミド（ナイロン）、ポリアクリロニトリル、ポリビニリデンジフルオライド、ポリスルホン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリエチレンおよび上記の組み合わせまたは誘導体からなる複合樹脂を含む多数の一次ポリマーに由来するメンブレン支持体が挙げられる。特に好ましいのは、セルロース由来の支持体、例えば、ニトロセルロースメンブレン、およびナイロンメンブレンである。この基板は一般に、支持体として不活性なプラスチック裏打ちを有する所望のメンブレンを含む。
【０１２８】
このメンブレンに対して加えられた抗原の量は、検討中の抗原に依存して変化する。一般には、抗原は、約２０〜５００ｎｇ／ストリップ、好ましくは５０〜２５０ｎｇ／ストリップ、さらに好ましくは７５〜１５０ｎｇ／ストリップの量でこのストリップに対して加えられる。当業者は、有効な結果を生じるのに必要な抗原の量を容易に決定し得る。あるいは、低濃度および高濃度のような２つの濃度のこの抗原が、存在してもよい。従って、例えば、ＳＮＶのＮ抗原は、上記で特定されたような濃度で、そして１つ以上のさらなるバンドで、例えば、約２５〜２００ｎｇの濃度で、例えば、５０〜１５０ｎｇ、例えば、１００ｎｇ／ストリップで提供され得る。高レベルのコントロールは、十分に陽性の結果を得るのに十分高い量で、例えば２００〜５００ｎｇ／ストリップ、特に２５０〜３５０ｎｇ／ストリップ、例えば、３００ｎｇ／ストリップの量で存在する。試験ストリップに対して加えられる抗原の濃度は、用いられる特定の抗原に依存して変化し、当業者によって容易に決定され得ることが明らかである。
【０１２９】
抗免疫グロブリン抗体、例えば、抗ヒトＩｇＭ抗体、抗ヒトＩｇＧ抗体および／または抗ヒトＩｇＡ抗体は、単独の濃度で、または２つの濃度（１つが低くかつ１つが高い濃度）で存在してもよい。例えば、抗ＩｇＧ抗体は、約５０〜２５０ｎｇ／ｍｌ、さらに好ましくは約７５〜２００ｎｇ／ｍｌ、そして最も好ましくは約１００〜１８５ｎｇ／ｍｌの濃度で存在し得る。約４００〜１２００ｎｇ／ｍｌ、より好ましくは約４５０〜１０００ｎｇ／ｍｌ、そして最も好ましくは約５００〜９５０ｎｇ／ｍｌの濃度のように、別の内部コントロールを得るために、さらに高濃度の抗ＩｇＧ抗体がまた、低濃度の抗ＩｇＧとともに存在してもよい。
【０１３０】
メンブレン支持体と所望の抗原およびＩｇ分子との反応後、任意の非固定固相成分を、洗浄によってメンブレンから除去し、次いでメンブレン結合成分を、ハンタウイルスに対する抗体を含有することが疑われる生物学的サンプルと、適切な結合条件下で接触させる。任意の非結合抗体を除去するための洗浄後、二次結合因子部分を、二次結合因子が、結合抗体と選択的に会合し得る、適切な結合条件下で添加する。次いで、二次結合因子の存在は当該分野で周知の技術を用いて検出され得る。
【０１３１】
特に好ましい実施形態では、生物学的サンプル由来の結合した抗ハンタウイルス抗原リガンドの存在は、抗体リガンドに対する抗体を含む二次結合因子を用いて容易に検出され得る。市販のヤギ抗ヒトＩｇまたはウサギ抗ヒトＩｇのような多数の抗ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）分子が、当該分野で公知である。本明細書における使用のためのＩｇ分子は、ＩｇＧタイプ、ＩｇＡタイプまたはＩｇＭタイプの分子である。Ｉｇ分子は、当業者に公知の方法を用いて、とりわけ西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アルカリホスファターゼおよびウレアーゼのような検出可能酵素標識に対して容易に結合体化され得る。次いで適切な酵素基質を用いて、検出可能なシグナルを生成する。
【０１３２】
さらに、ヒト重鎖抗体およびヒト軽鎖抗体に対する結合体を用いて、ＳＩＡをＩｇＧ応答およびＩｇＭ応答の両方を検出可能にさせることができる。この設計は、感染の初期段階で抗体応答の検出の感度を増大するように機能し得る。
【０１３３】
ハンタウイルス抗原および／またはその抗体、結合した試薬を有する固体支持体、ならびに他の検出試薬を含む、上記のアッセイ試薬は、上記のアッセイを行うための適切な説明書および他の必要な試薬とともにキットで提供され得る。このキットはまた、コントロール処方物（陽性および／または陰性）、アッセイ方式が標識された試薬を要する場合標識試薬、そして標識がシグナルを直接生成しない場合シグナル生成試薬（例えば、酵素基質）を含み得る。アッセイを行うための説明書（例えば、書面、テープ、ＶＣＲ、ＣＤ−ＲＯＭなど）が通常、キットに含まれる。このキットはまた、用いられる特定のアッセイに依存して、他のパッケージング試薬および物質（すなわち、洗浄緩衝液など）を含んでもよい。標準的なアッセイ、例えば、上記に記載されるアッセイは、これらのキットを用いて行われてもよい。
【０１３４】
（ＩＩＩ．実験）
以下は、本発明を行うための特定の実施形態の実施例である。この実施例は、例示の目的のみのために提供され、そして本発明の範囲はいかなる方法でも限定しない。
【０１３５】
用いられる数（例えば、量、温度など）に関して正確性を保障するために労力を払っているが、ある程度の実験誤差および偏差は当然ながら許されるべきである。
【実施例】
【０１３６】
（実施例１）
（ハンタウイルス組換えＧ１タンパク質のクローニングおよび発現）
表２に示されるハンタウイルスＧ１抗原は以下のとおりに調製した。ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶのＧ１タンパク質の８０〜８３個のアミノ酸を含む組換えＧ１抗原をコードするヌクレオチドフラグメントを、各々の株について目的の領域に相当するオリゴヌクレオチドの組み合わせを用いて合成した。この組換え抗原におけるＧ１タンパク質配列の一部を表２に示す。これらのフラグメントを、サブクローニングベクターにアニーリングして、連結してクローニングして、正確なヌクレオチド配列をＤＮＡ配列決定によって確認した。目的の領域を、制限エンドヌクレアーゼ処理によって切り出して、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターフラグメントとともにｐＢＳ２４．１中にクローニングした。プラスミドｐＢＳ２４．１は、高コピー数の発現ベクターであって、これは、多種多様の組換えタンパク質を発現するように広範に用いられている（Ｐｉｃｈｕａｎｔｅｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９０）２３：１３８９０〜１３８９８；Ｐｉｃｈｕａｎｔｅｓら、「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ  ｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｉｎ  ｙｅａｓｔ」Ｃｌｅｌａｎｄ  ＪＬ、Ｃｒａｉｋ  Ｃ編、Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：ａ  ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ（１９９６）Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ１２６〜１６１）。これは、２μ配列および自律複製のための逆方向反復（ＩＲ）配列、転写終結を確実にするためのα因子ターミネーター、ならびに選択のためのｌｅｕ２−ｄおよびＵＲＡ３を含む。アンピシリン耐性のためのβラクタマーゼ遺伝子およびＣｏｌＥ１複製起点もまた、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉにおける選択および自律複製のためにこのベクター中に存在する。
【０１３７】
ＳＯＤ融合構築物については、目的の領域を、ヒトＳＯＤ遺伝子とともにＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターを既に含んだ、遺伝子操作されたｐＢＳ２４．１ベクター内にクローニングした。ハンタウイルス組換え抗原のクローニングに用いられるヒトＳＯＤのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、Ｈａｌｌｅｗｅｌｌら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８７）５：３６３〜３６６に記載される。得られたプラスミドを、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株ＡＤ３に形質転換して、その組換えタンパク質の発現を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびイムノブロット分析によってモニターした。生成された種々のＳＯＤ／Ｇ１の融合体としては、図１９に示されるＳＯＤ配列のＣ末端に融合された図７〜図１２に示されるＧ１配列が挙げられる。ＳＯＤ／Ｇ１の融合体は、配列番号４２〜４７によって示される。
【０１３８】
以下のプロトコールに従って、ＳＯＤ融合体を生成した。この考察は、ＳＮＶのＧ１／ＳＯＤ融合体の産生を詳細に説明するが、残りの融合体は同じ方法で生成された。全長Ｇ１の広範な部分の発現が、不安定性および可変性の発現によって阻害されたので、ＳＮＶのＧ１（単離株ＮＭ  Ｈ１０の開始メチオニンに対して残基３５〜１１７）のより小さい部分（８２アミノ酸）を、図１９に示されるヒトスーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）配列との融合体において用いた。５’末端上にＮｃｏＩ部位を、そして３’末端上にＳａｌＩ部位および２つの終止コドンを導入したプライマーを用いて、ｐＦＣＶ−Ｍ−１２７５（Ｙａｍａｄａら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ（１９９５）６９：１９３９〜１９４３）から、ＰＣＲによって小さいＧ１フラグメントを合成した。２６８ｂｐのＮｃｏＩ／ＳａｌＩ−消化フラグメントを用いて、ｐＳＯＤ／ＨＩＶ２ＰＲ１１３（Ｐｉｃｈｕａｎｔｅｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９０）２６５：１３８９０〜１３８９８）の３４７ｂｐのインサートを置き換えて、構築物ｐＳＯＤ／Ｇ１を作製した。ｐＳＯＤ／Ｇ１の６０３ｂｐのＳｔｕＩ／ＳａｌＩフラグメントを、ベクターｐＳＩ１／ＰＲ１７９（Ｐｉｃｈｕａｎｔｅｓら、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｆｕｎｃｔ．Ｇｅｎｅｔ．（１９８９）６：３２４〜３２７）に連結して、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターを得た。次いで、得られた構築物の２０９３ｂｐのＢａｍＨＩ／ＳａｌＩカセットを酵母発現ベクターｐＢＳ２４．１に導入して、最終発現構築物ｐＳＯＤ／ＳＮＶ−Ｇ１を作製した。このタンパク質は、プロテアーゼ欠損（ｐｒｂｌ  １１２２，ｐｅｐ４−３）Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株ＡＢ１２２（Ｐｉｃｈｕａｎｔｅｓら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（１９９６）第５章、１２９〜１６１頁、ＣｌｅｌａｎｄおよびＣｒａｉｋ編、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）中の２３ｋＤ  ＳＯＤ−Ｇ１の融合体として発現された。この構築物中で発現されたＧ１の８２アミノ酸部分は、イムノドミナントエピトープにまたがり、そしていくつかのさらなる隣接配列を含む。抗原のＳＮＶのＧ１部分の配列は図１１Ｂに示される。
【０１３９】
【表２】
2011191322.tif 000004
＊生成されたタンパク質のアミノ酸配列はまた、Ｇ１配列のＮ末端上にメチオニン（Ｍ）を含んだ。
【０１４０】
（実施例２）
（ハンタウイルス組換えＮタンパク質のクローニングおよび発現）
表３に示されるハンタウイルスＮ抗原は、以下のとおり調製した。ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶのハンタウイルスヌクレオカプシドタンパク質の遺伝子を、テンプレートとしてハンタウイルス組換えプラスミド由来のＤＮＡを用いてＰＣＲによって増幅した。組換えタンパク質中のハンタウイルスＮタンパク質配列の一部を表３に示す。ＨＴＮＶおよびＤＯＢＶのヌクレオカプシド遺伝子は、化学的に合成した。クローニングおよび発現は、本質的に上記のとおり行なった。生成された種々のＮ抗原は図１３〜図１８に示しており、そしてＮ抗原／ＳＯＤ融合体のＮ末端に直接隣接して存在するＳＯＤ配列を図１９に示す。
【０１４１】
【表３】
2011191322.tif 000005
（実施例３）
（ハンタウイルス組換えタンパク質の精製）
上記のように生成したハンタウイルスタンパク質組換え体を、Ｄｉｎｏ−Ｍｉｌｌ装置を用いて、溶解緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ，０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８）中で、形質転換されたＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞を溶解することによって精製した。この溶解物を、１〜３Ｍの尿素を含有する溶解緩衝液を用いて数回洗浄して、ｐＨを１１．５に増大することによってタンパク質を可溶化し、次いでゲル濾過クロマトグラフィーに供した。組換えのＡＮＤＶのＧタンパク質およびＤＯＢＶのＧタンパク質の精製はまた、硫酸アンモニウム沈殿およびＰＢＳ、０．１％  ＳＤＳ、１ｍＭ  ＥＤＴＡでの可溶化を含んだ。
【０１４２】
（実施例４）
（ハンタウイルス組換えタンパク質を用いるポリクローナル抗体生成）
精製された、ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶの組換えＳＯＤ融合Ｇ１抗原、ならびにＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶの組換え非融合Ｎタンパク質（上記の表２および３を参照のこと）を用いて、ウサギのポリクローナル抗体を生成した。２匹のウサギを免疫して５０ｍｌの抗血清を生成した。次いで、４〜２０％のＴｒｉｓ  Ｇｌｙｃｉｎｅゲル上でのウエスタンブロット分析を用いて組換えタンパク質に対してこのポリクローナル抗体を試験した。各々の６つのＧ１抗原に対して生成した抗体は、種々のサイブタイプのＧ１抗原と交差反応することが示された。同様に、４つのＮタンパク質の各々に対して生成された抗体は、種々のサブタイプのＮ抗原と交差反応性であることが示された。
【０１４３】
（実施例５）
（ストリップ・イムノブロットアッセイ（ＳＩＡ））
上記のような、６つの血清型由来の、ＳＯＤ配列を伴うかまたは伴わない、組換えＧ１抗原および組換えＮ抗原を、ＲＩＢＡ（登録商標）試験（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐ．，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ）のようなＳＩＡ中で用いる。このメンブレンは、支持体として不活性なプラスチック裏打ちを有するニトロセルロースからなる。各々ＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶに由来する６つのＧ１抗原、およびＨＴＮＶ、ＰＵＵＶ、ＳＥＯＶ、ＤＯＢＶ、ＳＮＶおよびＡＮＤＶの各々に由来する６つのＮ抗原を、ニトロセルロースストリップに対して別のバンドで、７５〜１５０ｎｇ／ストリップの濃度で加える。内部コントロールとして、さらなるバンドは、精製されたヒトＩｇＧを、低レベルであるレベルＩ（５０〜１５０ｎｇ／ストリップ）で、および高レベルであるレベルＩＩ（２５０〜３５０ｎｇ／ストリップ）で含む。
【０１４４】
製造業者の指示に従ってアッセイ手順を行う。全ての工程は室温で行う。各々のストリップを番号付けし、次いで別のチューブに入れて、ここに標本希釈緩衝液（リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）とウシタンパク質安定化剤および界面活性剤、防腐剤として０．１％アジ化ナトリウムおよび０．０５％硫酸ゲンタマイシンを含有する）に含まれる１：５０希釈のヒト血清を添加する。このチューブを４〜４．５時間穏やかに振盪し、その溶液を吸引によって取り出し、１ｍｌの新鮮な希釈液を各々のチューブに添加する。このチューブを３０分間振盪し、この溶液を吸引によって取り出し、洗浄緩衝液濃縮物（５０×）（防腐剤として０．０１％チメロサールを含むリン酸緩衝化界面活性剤溶液）から作製した１ｍｌの洗浄緩衝液を各々のチューブに添加する。各々のチューブの内容物を、単一の洗浄容器に空けて、ストリップを２０秒間の回旋によって洗浄する。洗浄緩衝液を、デカントして、３０ｍｌの新鮮緩衝液を添加して、このプロセスを繰り返す。残りの溶液を吸引によって取り除き、２０ｍｌの結合体溶液（ペルオキシダーゼ標識したヤギ抗ヒトＩｇＧ（重鎖および軽鎖）、とウシタンパク質安定化剤、防腐剤としての０．０１％チメロサール含有）を添加する。この容器を、９〜１１分間１１０ｒｐｍで回転して、結合体溶液をデカントして、洗浄工程を３回繰り返す。残りの溶液を吸引によって再度取り除き、そして２０ｍｌの基質／展開液（４−クロロ−１−ナフトール含有メタノール／リン酸緩衝化過酸化水素）を添加して、その後に１１０ｒｐｍで１５〜２０分回転させる。この溶液をデカントして、そのストリップを蒸留水中で２回洗浄する。展開されたストリップを吸収性の紙上に表を上に置いて、暗野で３０分間乾燥させる。
【０１４５】
血清は、反応性が、レベルＩのＩｇＧコントロールのバンド以上である場合にのみ、所定の抗原に対して反応性であるとみなされる（１＋の反応性を示すものとして規定される）。レベルＩＩのＩｇＧコントロールのバンドに対して等価な反応性は、３＋の反応性を示すものとみなす。レベルＩのＩｇＧコントロールのバンドとレベルＩＩのＩｇＧコントロールのバンドとの中間の反応性強度は、２＋であるとみなされ、そしてレベルＩＩのバンドよりも強力な反応性は、４＋であるとみなす。
【０１４６】
従って、ハンタウイルス感染を検出するための新規な方法を開示する。本発明の好ましい実施形態は、ある程度詳細に記載されているが、本明細書に記載の本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく明白な改変が行われ得ることが理解される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【配列表】
2011191322000001.app
【外国語明細書】
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