(57)【要約】      （修正有）【課題】ココア抽出物、化合物、それらの組合せ、及びそれらを含有する組成物（例えば、ポリフェノール、プロシアニジン）、及び組成物を調製する方法、並びにそれらの用途を提供する。【解決手段】Ａが式（Ｉ）で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、医薬として許容される塩又はその誘導体（酸化生成物も含む）。2011006427.tif 000090【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物。
【化８】
2011006427.tif 000063
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような３〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位か結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項２】
ｎが５である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
糖がグルコース、ガラタトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
天然源から単離される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
天然源がＴｈｅｂｒｏｍａ又はＨｅｒｒａｎｉａ種、或いはそれらの種間又は種内特異的交雑種である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
実質的に純粋である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
見掛け上均質に精製される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む、抗新生物組成物。
【化９】
2011006427.tif 000064
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような３〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位か結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項１０】
ｎが５〜１２である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
糖がグルコース、ガラクトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１４】
ｎが５である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１５】
請求項９に記載の抗新生物組成物を対象に投与することを含む、治療が必要な対象を抗新生物剤にて治療する方法。
【請求項１６】
少なくとも一種の追加の抗新生物剤を投与することを更に含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
化合物及び別に包装されたキャリア又は稀釈剤を含み、更に混合又は投与のための指示書を任意的に含む、請求項９に記載の組成物のためのキット。
【請求項１８】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity）チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity）チョコレートから成る群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１９】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む抗酸化剤組成物。
【化１０】
2011006427.tif 000065
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項２０】
ｎが２〜１０である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
糖がグルコース、ガラクトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２３】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２４】
ｎが２〜１２である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２５】
請求項１９に記載の抗酸化剤組成物を対象に投与することを含む、治療が必要な対象を抗酸化剤にて治療する方法。
【請求項２６】
少なくとも一種の追加の抗酸化剤を投与することを更に含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity）チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity）チョコレートから成る群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２８】
化合物及び別に包装されたキャリア又は稀釈剤を含み、更に混合又は投与のための指示書を任意的に含む、請求項１９に記載の組成物のためのキット。
【請求項２９】
請求項１９に記載の組成物を所望の物品に接触させることを含む、該物品の保存又はその酸化の防止方法。
【請求項３０】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む、抗菌性組成物。
【化１１】
2011006427.tif 000066
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位か結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項３１】
ｎが２〜１０である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
糖がグルコース、ガラクトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３３】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３４】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３５】
ｎが２、４、５、６、８、又は１０である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３６】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity）チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity）チョコレートから成る群から選択される、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３７】
請求項３０に記載の抗菌性組成物を対象に投与することを含む、治療が必要な対象を抗菌剤にて治療する方法。
【請求項３８】
少なくとも一種の追加の抗菌剤を投与することを更に含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
化合物及び別に包装されたキャリア又は稀釈剤を含み、更に混合又は投与のための指示書を任意的に含む、請求項３０に記載の組成物のためのキット。
【請求項４０】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む、シクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼをモジュレートさせる組成物。
【化１２】
2011006427.tif 000067
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学かα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項４１】
ｎが２〜１０である、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
糖がグルコース、ガラタトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４３】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４４】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４５】
ｎが２〜５である、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４６】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity）チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity）チョコレートから成る群から選択される、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４７】
請求項４０に記載の組成物を対象に投与することを含む、治療か必要な対象をシクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼをモジュレートさせる組成物にて治療する方法。
【請求項４８】
シクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼをモジュレートさせる少なくとも一種の追加の組成物を投与することを更に含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
化合物及び別に包装されたキャリア又は稀釈剤を含み、更に混合又は投与のための指示書を任意的に含む、請求項４０に記載の組成物のためのキット。
【請求項５０】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む、ＮＯ又はＮＯシンターゼをモジュレートさせる組成物。
【化１３】
2011006427.tif 000068
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項５１】
ｎが２〜１０である、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
糖かグルコース、ガラクトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５３】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５４】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５５】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity)チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity）チョコレートから成る群から選択される、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５６】
請求項５０に記載のＮＯ又はＮＯシンターゼをモジュレートさせる組成物を対象に投与することを含む、治療が必要な対象をＮＯモジュレート剤にて治療する方法。
【請求項５７】
ＮＯ又はＮＯシンターゼをモジュレートさせる少なくとも一種の追加の組成物を投与することを更に含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
化合物及び別に包装されたキャリア又は稀釈剤を含み、更に混合又は投与のための指示書を任意的に含む、請求項５０に記載の組成物のためのキット。
【請求項５９】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を哺乳動物に投与することを含む、ＮＯ又はＮＯシンターゼ剤を用いて治療の必要な哺乳動物を治療する方法。
【化１４】
2011006427.tif 000069
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とか存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項６０】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物におけるＮＯに影響される高コレステロール血症を低減させる方法。
【化１５】
2011006427.tif 000070
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位か結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項６１】
ｎが２〜１０である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を哺乳動物の単核細胞及び／又はマクロファージに接触せさることを含む、該哺乳動物の単核細胞及び／又はマクロファージにｉＮＯＳを誘導する方法。
【化１６】
2011006427.tif 000071
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項６３】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物の単核細胞及び／又はマクロファージのＮＯ産生を促進する方法。
【化１７】
2011006427.tif 000072
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項６４】
ｎが２〜１０である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む、インビボでグルコースをモジュレートさせる組成物。
【化１８】
2011006427.tif 000073
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項６６】
ｎか２〜１０である、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６７】
糖がグルコース、ガラタトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６８】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６９】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項６５に記載の組成物。
【請求項７０】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity）チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity）チョコレートから成る群から選択される、請求項６５に記載の組成物。
【請求項７１】
請求項６５に記載のグルコースをモジュレートさせる組成物を対象に投与することを含む、治療が必要な対象をグルコースモジュレート剤にて治療する方法。
【請求項７２】
少なくとも一種の追加のグルコースモジュレート剤を投与することを更に含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
化合物及び別に包装されたキャリア又は稀釈剤を含み、更に混合又は投与のための指示書を任意的に含む、請求項６５に記載の組成物のためのキット。
【請求項７４】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む、トポイソメラーゼＩＩ阻害組成物。
【化１９】
2011006427.tif 000074
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位か結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項７５】
糖がグルコース、ガラクトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７７】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７８】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity）チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity)チョコレートから成る群から選択される、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７９】
請求項７４に記載の組成物をトポイソメラーゼＩＩに接触させることを含む、トポイソメラーゼＩＩを阻害する方法。
【請求項８０】
化合物及び別に包装されたキャリア又は稀釈剤を含み、更に混合又は投与のための指示書を任意的に含む、請求項７４に記載の組成物のためのキット。
【請求項８１】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む、非ステロイド性抗炎症組成物。
【化２０】
2011006427.tif 000075
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位か結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく：及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項８２】
糖かグルコース、ガラタトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項８１に記載の組成物。
【請求項８３】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項８１に記載の組成物。
【請求項８４】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項８１に記載の組成物。
【請求項８５】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity）チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity）チョコレートから成る群から選択される、請求項８１に記載の組成物。
【請求項８６】
請求項８１に記載の組成物を対象に投与することを含む、治療の必要な対象を非ステロイド性抗炎症剤にて治療する方法。
【請求項８７】
少なくとも一種の追加の非ステロイド性抗炎症剤を投与することを更に含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
化合物及び別に包装されたキャリア又は稀釈剤を含み、更に混合又は投与のための指示書を任意的に含む、請求項８１に記載の組成物のためのキット。
【請求項８９】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む、抗歯肉炎又は抗歯周炎組成物。
【化２１】
2011006427.tif 000076
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及ひ８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項９０】
糖がグルコース、ガラクトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項８９に記載の組成物。
【請求項９１】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項８９に記載の組成物。
【請求項９２】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項８９に記載の組成物。
【請求項９３】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity）
チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity）チョコレートから成る群から選択される、請求項８９に記載の組成物。
【請求項９４】
化合物及び別に包装されたキャリア又は稀釈剤を含み、更に混合又は投与のための指示書を任意的に含む、請求項８９に記載の組成物のためのキット。
【請求項９５】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物における歯周疾患の進行を低下させる方法。
【化２２】
2011006427.tif 000077
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項９６】
ｎが２〜１０である、請求項９５の方法。
【請求項９７】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を治療が必要な哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物における歯周疾患を治療する方法。
【化２３】
2011006427.tif 000078
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項９８】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む、血小板凝集モジュレート組成物。
【化２４】
2011006427.tif 000079
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位か結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項９９】
糖かグルコース、ガラタトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項９８に記載の組成物。
【請求項１００】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項９８に記載の組成物。
【請求項１０１】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項９８に記載の組成物。
【請求項１０２】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity）
チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity）チョコレートから成る群から選択される、請求項９８に記載の組成物。
【請求項１０３】
化合物及び別に包装されたキャリア又は稀釈剤を含み、更に混合又は投与のための指示書を任意的に含む、請求項９８に記載の組成物のためのキット。
【請求項１０４】
請求項９８に記載の化合物を哺乳動物に投与することを含む、血小板の凝集をモジュレートさせる方法。
【請求項１０５】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む、アポトーシスモジュレート組成物。
【化２５】
2011006427.tif 000080
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位か結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項１０６】
糖がグルコース、ガラクトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０７】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０８】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０９】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity）チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity）チョコレートから成る群から選択される、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１１０】
化合物及び別に包装されたキャリア又は稀釈剤を含み、更に混合又は投与のための指示書を任意的に含む、請求項１０５に記載の組成物のためのキット。
【請求項１１１】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を、ＣＯＸ−２を発現する癌細胞に接触させることを含む、アポトーシスをモジュレートさせる方法。
【化２６】
2011006427.tif 000081
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学かα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位か結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項１１２】
ｎが５である、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を、ＣＯＸ−２を発現する癌細胞に接触させることを含む組成物をＤＮＡに接触させることを含む、ＤＮＡに対する酸化損傷を抑制する方法。
【化２７】
2011006427.tif 000082
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項１１４】
糖がグルコース、ガラタトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、詰求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１５】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１６】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１７】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity）チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity）チョコレートから成る群から選択される、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１８】
化合物及び別に包装されたキャリア又は稀釈剤を含み、更に混合又は投与のための指示書を任意的に含む、請求項１１３に記載の組成物のためのキット。
【請求項１１９】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む、アテローム性動脈硬化症又は再狭窄を治療、予防、又は改善するための組成物。
【化２８】
2011006427.tif 000083
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及ひ８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位か結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項１２０】
糖がグルコース、ガラタトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースから成る群から選択される、請求項１１９に記載の組成物。
【請求項１２１】
前記ポリマー化合物が実質的に純粋である、請求項１１９に記載の組成物。
【請求項１２２】
フェノール性原子団が、カフェー酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸から成る群より選択される、請求項１１９に記載の組成物。
【請求項１２３】
錠剤、カプセル、同一性標準（Standard of Identity）チョコレート及び非同一性標準（non-Standard of Identity）
チョコレートから成る群から選択される、請求項１１９に記載の組成物。
【請求項１２４】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症又は再狭窄を治療、予防、又は改善するための方法。
【化２９】
2011006427.tif 000084
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とか存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項１２５】
ｎが２〜１０である、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物におけるＬＤＬの酸化を抑制する方法。
【化３０】
2011006427.tif 000085
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項１２７】
ｎが２〜１２である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
請求項１の化合物と適切なキャリア又は希釈剤を哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物における血栓症をモジュレートさせる方法。
【請求項１２９】
ｎが２〜１２である、請求項１２８記載の方法。
【請求項１３０】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を、治療を必要とする哺乳動物に投与することを含む、炎症性周疾患を治療するためにシクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）をモジュレートさせる方法。
【化３１】
2011006427.tif 000086
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位か結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項１３１】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を、治療を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における細菌の成長を抑制する方法。
【化３２】
2011006427.tif 000087
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項１３２】
ｎが２、４、５、６、８、又は１０である、請求項１３１記載の方法。
【請求項１３３】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、並びに医薬として許容されるキャリア又は賦形剤を含む組成物を、高血圧を低減させる治療が必要な哺乳類に投与することを含む、哺乳類の高血圧を低減させる方法。
【化３３】
2011006427.tif 000088
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖から成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項１３４】
ｎが２〜１０である請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
癌治療が必要な哺乳類に、請求項１記載の少なくとも一個の化合物を、当該治療を効果あらしめるのに十分な量において投与することを含む、哺乳類の癌の治療法。
【請求項１３６】
前記癌が前立腺癌である請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
前記癌が腎臓癌である請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３８】
前記癌が結腸癌である請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３９】
前記癌が乳癌である請求項１３５に記載の方法。
【請求項１４０】
癌がネコ白血病である請求項１３５に記載の方法。
【請求項１４１】
癌が子宮頸癌である請求項１３５に記載の方法。
【請求項１４２】
癌がＴ−細胞白血病である請求項１３５に記載の方法。
【請求項１４３】
請求項１に記載の化合物及び適切なキャリア又は稀釈剤を哺乳類に投与することを含む、哺乳類の癌細胞増殖を阻止する方法。
【請求項１４４】
ｎか５である、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
カカオ抽出物を含む医薬用のキャリア又は賦形剤。
【請求項１４６】
Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ又はＨｅｒｒａｎｉａ種、或いはそれらの種間又は種内特異的交雑種からの、３〜１８のオリゴマーを含むポリフェノール類を含む実質的に純粋なポリフェノール。
【請求項１４７】
図４８Ａ−Ｄ記載のＮＭＲスペクトルを示す構造を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項１４８】
図４９Ａ−Ｄ記載のＮＭＲスペクトルを示す構造を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項１４９】
発酵条件を操作することによりカカオ豆中のカカオ・プロシアニジン類の濃度レベルと分布とを増大させるための方法。
【請求項１５０】
化合物が式［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣで表わされるトリマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５１】
化合物が式［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣで表わされるテトラマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５２】
化合物が式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマーであって、当該ペンタマーの末端モノマー性単位の３位は、任意にガレート及び／又はβ−Ｄ−グルコースと誘導体を形成してもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５３】
化合物が式［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣで表わされるヘキサマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５４】
化合物が式［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣで表わされるヘプタマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５５】
化合物が式［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣで表わされるオタタマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５６】
化合物が式［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣで表わされるノナマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５７】
化合物が式［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣで表わされるデカマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５８】
化合物が式［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣで表わされるウンデカマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５９】
化合物が式［ＥＣ−（４β→８）］11−ＥＣで表わされるドデカマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６０】
化合物が式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣで表わされるヘキサマー、式［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣで表わされるヘプタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣで表わされるオクタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣで表わされるノナマー、式［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣで表わされるデカマー、式［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣで表わされるウンデカマー、及び式［ＥＣ−（４β→８）］11−ＥＣで表わされるドデカマーからなる群から選択されるものである、請求項９に記載の組成物。
【請求項１６１】
化合物が式ＥＣ−（４β→８）−ＥＣで表わされるダイマー、式［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣで表わされるトリマー、式［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣで表わされるテトラマー、式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣで表わされるヘキサマー、式［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣで表わされるヘプタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣで表わされるオクタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣで表わされるノナマー、及び式［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣで表わされるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項１６２】
化合物が式ＥＣ−（４β→８）−ＥＣで表わされるダイマー、式［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣで表わされるトリマー、式［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣで表わされるテトラマー、式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣで表わされるヘキサマー、式［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣで表わされるヘプタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣで表わされるオクタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣで表わされるノナマー、及び式［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣで表わされるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項１６３】
化合物が式ＥＣ−（４β→８）−ＥＣで表わされるタイマー、式［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣで表わされるトリマー、式［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣで表わされるテトラマー、式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣで表わされるヘキサマー、式［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣで表わされるヘプタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣで表わされるオクタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣで表わされるノナマー、及び式［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣで表わされるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項４０に記載の組成物。
【請求項１６４】
化合物が式ＥＣ−（４β→８）−ＥＣで表わされるダイマー、式［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣで表わされるトリマー、式［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣで表わされるテトラマー、式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣで表わされるヘキサマー、式［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣで表わされるヘプタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣで表わされるオクタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣで表わされるノナマー、及び式［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣで表わされるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項５０に記載の組成物。
【請求項１６５】
化合物が式ＥＣ−（４β→８）−ＥＣで表わされるダイマー、式［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣで表わされるトリマー、式［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣで表わされるテトラマー、式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣで表わされるヘキサマー、式［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣで表わされるヘプタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣで表わされるオクタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣで表わされるノナマー、及び式［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣで表わされるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項６５に記載の組成物。
【請求項１６６】
化合物が式ＥＣ−（４β→８）−ＥＣで表わされるダイマー、式［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣで表わされるトリマー、式［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣで表わされるテトラマー、式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣで表わされるヘキサマー、式［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣで表わされるヘプタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣで表わされるオクタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣで表わされるノナマー、式［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣで表わされるデカマー、式［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣで表わされるウンデカマー、及び式［ＥＣ−（４β→８）］11−ＥＣで表わされるドデカマーからなる群から選択されるものである、請求項７４に記載の組成物。
【請求項１６７】
化合物が式ＥＣ−（４β→８）−ＥＣで表わされるダイマー、式［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣで表わされるトリマー、式［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣで表わされるテトラマー、式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣで表わされるヘキサマー、式［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣで表わされるヘプタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣで表わされるオクタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣで表わされるノナマー、式［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣで表わされるデカマー、式［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣで表わされるウンデカマー、及び式［ＥＣ−（４β→８）］11−ＥＣで表わされるドデカマーからなる群から選択されるものである、請求項８１に記載の組成物。
【請求項１６８】
化合物が式ＥＣ−（４β→８）−ＥＣで表わされるダイマー、式［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣで表わされるトリマー、式［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣで表わされるテトラマー、式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣで表わされるヘキサマー、式［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣで表わされるヘプタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣで表わされるオクタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣで表わされるノナマー、及び式［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣで表わされるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項８９に記載の組成物。
【請求項１６９】
化合物が式ＥＣ−（４β→８）−ＥＣで表わされるダイマー、式［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣで表わされるトリマー、式［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣで表わされるテトラマー、式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣで表わされるヘキサマー、式［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣで表わされるヘプタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣで表わされるオクタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣで表わされるノナマー、式［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣで表わされるデカマー、式［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣで表わされるウンデカマー、及び式［ＥＣ−（４β→８）］11−ＥＣで表わされるドデカマーからなる群から選択されるものである、請求項９８に記載の組成物。
【請求項１７０】
化合物が式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマーである、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１７１】
化合物が式ＥＣ−（４β→８）−ＥＣで表わされるダイマー、式［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣで表わされるトリマー、式［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣで表わされるテトラマー、式［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣで表わされるペンタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣで表わされるヘキサマー、式［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣで表わされるヘプタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣで表わされるオクタマー、式［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣで表わされるノナマー、及び式［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣで表わされるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項１１９に記載の組成物。
【請求項１７２】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物、あるいはそれらの組み合せ物により誘発又は抑制される少なくとも一個の遺伝子を同定する方法であって、形質発現検定法を用いて前記少なくとも一個の遺伝子又はその遺伝子産物を前記ポリマー性化合物と接触させることを含むことを特徴とする方法。
【化３４】
2011006427.tif 000089
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと一個又は複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような２〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺが、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位が結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖から成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【請求項１７３】
前記形質発現検定法が、示差表示法（Differential Display）、ｃＤＮＡライブラリーの配列決定法、形質発現連続解析法、及び高密度オリゴヌクレオチド・アレイへのハイブリダイゼーションによる発現モニタリングから成る群から選ばれるものである、詰求項１７２に記載の方法。
【請求項１７４】
隣接するモノマー間が、４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹが隣接するモノマー同士である場合はＺがＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹがＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺがともに水素であってもよい）である、請求項１記載の化合物。
【請求項１７５】
前記化合物が、 隣接するモノマー間が４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；
また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹが隣接するモノマー同士である場合はＺかＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹがＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺがともに水素であってもよい）である、請求項９記載の組成物。
【請求項１７６】
前記化合物が、 隣接するモノマー間が４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；
また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹが隣接するモノマー同士である場合はＺがＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹがＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺがともに水素であってもよい）である、請求項１９記載の組成物。
【請求項１７７】
前記化合物が、 隣接するモノマー間が４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；
また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹが隣接するモノマー同士である場合はＺかＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹがＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺがともに水素であってもよい）である、請求項３０記載の組成物。
【請求項１７８】
前記化合物が、 隣接するモノマー間が４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；
また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹが隣接するモノマー同士である場合はＺかＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹがＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺがともに水素であってもよい）である、請求項４０記載の組成物。
【請求項１７９】
前記化合物が、 隣接するモノマー間が４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹが隣接するモノマー同士である場合はＺがＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹかＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺがともに水素であってもよい）である、請求項５０記載の組成物。
【請求項１８０】
前記化合物が、 隣接するモノマー間が４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；
また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹが隣接するモノマー同士である場合はＺがＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹかＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺかともに水素であってもよい）である、請求項６５記載の組成物。
【請求項１８１】
前記化合物が、 隣接するモノマー間が４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；
また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹが隣接するモノマー同士である場合はＺがＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹがＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺかともに水素であってもよい）である、請求項７４記載の組成物。
【請求項１８２】
前記化合物が、 隣接するモノマー間が４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；
また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹか隣接するモノマー同士である場合はＺがＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹがＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺがともに水素であってもよい）である、請求項８１記載の組成物。
【請求項１８３】
前記化合物が、 隣接するモノマー間が４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；
また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹが隣接するモノマー同士である場合はＺがＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹかＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺがともに水素であってもよい）である、請求項８９記載の組成物。
【請求項１８４】
前記化合物が、 隣接するモノマー間が４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；
また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹが隣接するモノマー同士である場合はＺがＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹがＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺがともに水素であってもよい）である、請求項９８記載の組成物。
【請求項１８５】
前記化合物が、 隣接するモノマー間が４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；
また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹが隣接するモノマー同士である場合はＺかＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹかＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺかともに水素であってもよい）である、請求項１０５記載の組成物。
【請求項１８６】
前記化合物が、 隣接するモノマー間が４位において（４→６）又は（４→８）で結合され；
また ＸとＹとＺのそれぞれは、水素、糖、又は隣接モノマー（但しＸとＹが隣接するモノマー同士である場合はＺがＨ又は糖、またＸとＺが隣接するモノマー同士である場合はＹがＨ又は糖であり、二個の末端モノマーの少なくとも一個の４位に前記隣接モノマーが結合することを条件とし、かつＹとＺがともに水素であってもよい）である、請求項１１９記載の組成物。
【請求項１８７】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］2−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→６）］2−ＥＣからなる群から選択されるトリマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８８】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるテトラマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８９】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣー（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるペンタマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９０】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘキサマーであって、当該ヘキサマーの末端モノマー性単位の３位は、任意にガレート又はβ−Ｄ−グルコースと誘導体を形成してもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９１】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘプタマーであって、当該ヘプタマーの末端モノマー性単位の３位は、任意にガレート又はβ−Ｄ−グルコースと誘導体を形成してもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９２】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるオクタマーであって、当該オクタマーの末端モノマー性単位の３位は、任意にガレート又はβ−Ｄ−グルコースと誘導体を形成してもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９３】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるノナマーであって、当該ノナマーの末端モノマー性単位の３位は、任意にガレート又はβ−Ｄ−グルコースと誘導体を形成してもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９４】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣー（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8ーＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるデカマーであって、当該デカマーの末端モノマー性単位の３位は、任意にガレート又はβ−Ｄ−グルコースと誘導体を形成してもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９５】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるウンデカマーであって、当該ウンデカマーの末端モノマー性単位の３位は、任意にガレート又はβ−Ｄ−グルコースと誘導体を形成してもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９６】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］11−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるドデカマーであって、当該ドデカマーの末端モノマー性単位の３位は、任意にガレート又はβ−Ｄ−グルコースと誘導体を形成してもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９７】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるペンタマー；［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘキサマー；［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘプタマー；［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるオクタマー；［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ）及び［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるノナマー；［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、 ［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるデカマー；［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるウンデカマー；及び［ＥＣ−（４β→８）］11−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるドデカマーからなる群から選択されるものである、請求項９に記載の組成物。
【請求項１９８】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］2−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→６）］2−ＥＣからなる群から選択されるトリマー；［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるテトラマー；［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるンタマー；［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘキサマー；［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘプタマー；［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるオクタマー；［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるノナマー；及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項１９９】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］2−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→６）］2−ＥＣからなる群から選択されるトリマー；［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるテトラマー；［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるペンタマー；［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘキサマー；［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘプタマー；［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるオクタマー；［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるノナマー；及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項２００】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］2−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→６）］2−ＥＣからなる群から選択されるトリマー；［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるテトラマー；［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるペンタマー；［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘキサマー；［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘプタマー；［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるオクタマー；［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるノナマー；及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項４０に記載の組成物。
【請求項２０１】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］2−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→６）］2−ＥＣからなる群から選択されるトリマー；［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるテトラマー；［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣＮ ［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣー（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるペンタマー；［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘキサマー；［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘプタマー；［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるオクタマー；ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるノナマー；及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項５０に記載の組成物。
【請求項２０２】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］2−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→６）］2−ＥＣからなる群から選択されるトリマー；［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるテトラマー；［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるペンタマー；［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘキサマー；［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘプタマー；［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるオタタマー；［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるノナマー；及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項６５に記載の組成物。
【請求項２０３】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］2−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→６）］2−ＥＣからなる群から選択されるトリマー；［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるテトラマー；［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるペンタマー；［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘキサマー；［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘプタマー；［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるオクタマー；［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるノナマー；［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるデカマー；［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるウンデカマー；及び［ＥＣ−（４β→８）］11−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるドデカマーからなる群から選択されるものである、請求項７４に記載の組成物。
【請求項２０４】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］2−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→６）］2−ＥＣからなる群から選択されるトリマー；［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるテトラマー；［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるペンタマー；［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘキサマー；［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ）［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘプタマー；［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるオタタマー；［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるノナマー；［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるデカマー；［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるウンデカマー；及び［ＥＣ−（４β→８）］11−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるドデカマーからなる群から選択されるものである、請求項８１に記載の組成物。
【請求項２０５】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］2−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→６）］2−ＥＣからなる群から選択されるトリマー；［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるテトラマー；［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるペンタマー；［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘキサマー；［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘプタマー；［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるオクタマー：［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるノナマー；及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項８９に記載の組成物。
【請求項２０６】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］2−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→６）］2−ＥＣからなる群から選択されるトリマー；［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるテトラマー；［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるペンタマー；［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘキサマー；［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘプタマー；［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるオクタマー；［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるノナマー；［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるデカマー；［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→８）ーＣ、及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるウンデカマー；及び［ＥＣ−（４β→８）］11−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるドデカマーからなる群から選択されるものである、請求項９８に記載の組成物。
【請求項２０７】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるペンタマーからなる群から選択されるものである、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項２０８】
化合物が［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］2−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→６）］2−ＥＣからなる群から選択されるトリマー；［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるテトラマー；［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるペンタマー；［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘキサマー；［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるヘプタマー；［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるオクタマー；［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるノナマー；及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−Ｃからなる群から選択されるデカマーからなる群から選択されるものである、請求項１１９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
カカオ抽出化合物及び同一物を製造及び使用するための方法関連出願の引用 
引用例として米国特許同時係属出願の１９９６年９月６日に提出された第０８／７０９，４０６号、１９９６年４月２日に提出された第０８／６３１，６６１号、及び１９９４年１０月３日に提出された第０８／３１７，２２６号（現在の米国特許第５，５５４，６４５号）及びＰＣＴ／ＵＳ９６／０４４９７が記載されており、これらは各々参照してここに組み込まれている。
【０００２】
発明の分野 
本発明は、カカオ抽出物類、及び好ましくはプロシアニジン類を富裕に含むポリフェノール類のようなそれらから作られた化合物類に関する。本発明はさらに、そうした抽出物類及び化合物類を調製するための方法、並びに、例えば抗腫瘍薬、抗酸化薬、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ酵素阻害剤、シクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ・モジュレーター、ＮＯ（一酸化窒素）又はＮＯシンターゼ・モジュレーター、非ステロイド性抗炎症薬、アポトーシスモジュレーター、血小板凝集モジュレーター、血中又はｉｎ ｖｉｖｏ中糖モジュレーター、抗菌薬及び酸化的ＤＮＡ損傷の阻害剤のようなそれらについての使用に関する。
【０００３】
参考文書はそれについて各々明らかにするために全文を引用して本開示において言及されるか、若しくは明細書の最後で請求の範囲の前の参考文献の章に記載されている。これらの参考文書は本発明の分野に属し、言及された各参考文書はそれによって参照してここに組み込まれている。
【背景技術】
【０００４】
ポリフェノール類は、様々な植物中で広範囲に発生し、その一部は食物連鎖を構成している、信じられないほど多種多様な化合物群である（非特許文献１）。一部の場合、それらはヒトの栄養にとって重要なクラスの化合物を表している。ポリフェノール類の一部は無栄養性であると考えられるが、健康に有益な影響を与える可能性があるためにこれらの化合物への関心か高まってきた。
【０００５】
例えば、クエルセチン（フラボノイドの１種）は実験的動物試験において抗癌活性を有することが証明されている（非特許文献２および３）。（＋）−カテキン及び（−）−エピカテキン（フラバン−３−オールズ）は白血病ウイルス逆転写酵素活性を阻害する（非特許文献４）ことが証明されている。ノボタニン（オリゴマー加水分解可能なタンニン）も又抗腫瘍活性を有していることが証明されている（非特許文献５）。さらに統計学的な報告書は、日本における茶の生産地域で肺癌死亡率が有意に低いことを証明している。没食子酸エピガロカテキンは、マウス皮膚腫瘍を阻害する薬理学的に活性な、緑茶に含まれている物質であると報告されている（非特許文献５）。エラグ酸も又、様々な動物腫瘍モデルにおいて抗癌活性を有していることが証明されている（非特許文献６）。最後に、プロントシアニジンのオリゴマー類はキッコーマン株式会社によって抗突然変異物質としての使用について特許が付与されている。実際に近年、食物中のフェノール化合物及び実験的動物モデルにおける腫瘍発生に及ぼすそれらの調節の領域はアメリカ化学協会の第２０２回国内会議で発表されている（Ｈｏら，１９９２；Ｈｕａｎｇら，１９９２）。
【０００６】
しかし、これらの報告書はいずれも、カカオ抽出物類又はそれらからの化合物類、そうした抽出物類又はそれらからの化合物類を調製するための方法、又はカカオ抽出物類又はそれらからの化合物類の、抗腫瘍薬、抗酸化薬、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ酵素阻害剤、シクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ・モジュレーター、ＮＯ（一酸化窒素）又はＮＯシンターゼ・モジュレーター、非ステロイド抗炎症薬、アポトーシスモジュレーター、血小板凝集モジュレーター、血中又はｉｎ ｖｉｖｏ中糖モジュレーター、抗菌薬、又は酸化的ＤＮＡ損傷阻害剤としての使用について、何ら教示も提案もしていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ferreira, D. et al., Diversity of Structure and Function in Oligomeric Flavanoids, Tetrahedron, 48: 10, 1743-1803 (1992)
【非特許文献２】Deschner, E.E., et al., Quercetin and Rutin as Inhibitors of Azoxymethanol-Induced Colonic Neoplasia, Carcinogenesis, 7, 1193-1196 (1991)
【非特許文献３】Kato, R. et al., Inhibition of 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate Induced Tumor Promotion and Ornithine Decarboxylase Activity by Quercitin: Possible Involvement of Lipoxygenase Inhibition, Carcinogenesis, 4, 1301-1305 (1983)
【非特許文献４】Chu, S. -C. et al., Inhibitory Effects of Flavonoids on Maloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase Activity, J. of Natural Products, 55: 2, 179-183 (1992)
【非特許文献５】Okuda, T. et al., Molecular Structures and Pharmacological Activities of Polyphenols-Oligomeric Hydrolyzable Tannins and Coference of the Groupe Polyphenols, Lisbon, Portugal, July 13-16, 1992
【非特許文献６】Boukharta, M. et al., Efficacy of Ellagitannins and Ellagic Acid as Cancer Chemopreventive Agents-Presented at the XVIth International Conference of the Groupe Polyphenols, Lisbon, Portugal, July 13-16, 1992
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
未発酵カカオ豆は実質的レベルのポリフェノール類を含有しているので、本発明者らは例えばカカオ内の化合物類であるカカオ抽出物類についてカカオからそうした化合物類を抽出し、抽出物類を活性についてスクリーニングすることによって類似の活性及び使用を明らかにできる可能性があると考えた。国立ガン研究所は、彼らの大規模な天然物選択プログラムの一部として抗癌活性について様々なテオブロマ（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ）属及びヘラニア（Ｈｅｒｒａｎｉａ）属をスクリーニングした。だがカカオ組織の一部の抽出物類では低レベルの活性が報告されたため、研究は続行されなかった。そこで、抗腫瘍又は抗癌の技術では、カカオおよびその抽出物類は有用であるとは見なされなかった；つまり、抗腫瘍又は抗癌の技術における教示は当業者を抗癌療法としてカカオおよびその抽出物類を使用することから遠ざけている。
【０００９】
カカオポリフェノール類が果たす香辛料開発への寄与を試験するために数多くの分析学的手法が開発されたので（Ｃｌａｐｐｅｒｔｏｎら，１９９２）、本発明者らは、抗腫瘍又は抗癌技術における知識に反して、類似方法を適用して抗癌活性についてのスクリーニングのためにサンプルを調製することを決意した。驚くべきことに、例えば国立ガン研究所のスクリーニングのような当業技術における知識には反して、本発明者らはプロシアニジン類を含有しているカカオポリフェノール抽出物類が抗癌薬又は抗腫瘍薬として重大な有用性を有していることを発見した。
【００１０】
さらに、本発明者らはプロシアニジン類を含有しているカカオ抽出物類及びカカオ抽出物類からの化合物類が抗腫瘍薬、抗酸化薬、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ酵素阻害剤、シクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ・モジュレータ一、ＮＯ（一酸化窒素）又はＮＯシンターゼ・モジュレーター、非ステロイド抗炎症薬、アポトーシスモジュレーター、血小板凝集モジュレーター、血中又はｉｎ ｖｉｖｏ中糖モジュレーター、抗菌薬、及び酸化的ＤＮＡ損傷阻害剤としての有用性を有していることを証明する。
【００１１】
本発明の目的は、カカオ抽出物及び／又はそれからの化合物類を製造するための方法を提供することである。
【００１２】
本発明のもう１つの目的は、カカオ抽出物及び／又はそれからの化合物を提供することである。
【００１３】
本発明のさらにもう１つの目的は、式Ａnの高分子化合物を提供することであるが、式中、Ａは下記の式を有する単量体であり： 
【化１】
2011006427.tif 000002
式中、ｎは少なくとも１つの末端単量体単位Ａ、及び複数の追加の単量体単位があるように２〜１８の整数であり；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖であり；
隣接単量体間の結合が４、６、又は８位で起こり；
４位での追加の単量体単位の結合がα又はβ立体化学構造を有しており；
Ｘ、Ｙ及びＺは、少なくとも１つの末端単量体単位に関して、それへの追加の単量体単位の結合が４位にあってＹ＝Ｚ＝水素であることを条件に、単量体単位Ａ、水素及び糖から構成される基から選択されており；
糖は任意にいずれかの位置で例えばエステル結合によってフェノール部分と置換されており、 さらに製薬学的に容認できる塩又はそれらの誘導体（酸化生成物を含む）である。
【００１４】
本発明のさらになおもう１つの目的は、式Ａnの高分子化合物を提供することであるが、式中、Ａは下記の式を有する単量体であり： 
【化２】
2011006427.tif 000003
式中、ｎは２〜１８、例えば３〜１８の整数であり；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖であり；
隣接単量体が（４→６）又は（４→８）によって４位で結合し；
Ｘ、Ｙ及びＺは、Ｘ及びＹが隣接単量体であればＺが水素又は糖であり、Ｘ及びＺが隣接単量体であればＹが水素又は糖であること、さらに２個の末端単量体単位中少なくとも１つに関して、隣接単量体単位の結合が４位にあって任意にＹ＝Ｚ＝水素であることを条件に、各々が水素、糖又は隣接単量体であり；
４位での追加の単量体単位の結合がα又はβ立体化学構造を有しており；
糖は任意にいずれかの位置で例えばエステル結合によってフェノール部分と置換されており、 さらに製薬学的に容認できる塩又はそれらの誘導体（酸化生成物を含む）である。
【００１５】
本発明のもう１つの目的は、抗酸化薬組成物を提供することである。
【００１６】
本発明の別の目的は、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ酵素活性の阻害を証明することである。
【００１７】
本発明のさらに別の目的は、腫瘍又は癌を治療するための方法を提供することである。
【００１８】
本発明のさらに又別の目的は、抗癌薬、抗腫瘍薬又は抗新生物薬組成物を提供することである。
【００１９】
本発明の又別の目的は、抗菌薬組成物を提供することである。
【００２０】
本発明のさらに又別の目的は、シクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ・モジュレーター組成物を提供することである。
【００２１】
本発明の又さらに別の目的は、ＮＯ又はＮＯシンターゼ・モジュレーター組成物を提供することである。
【００２２】
本発明のさらに別の目的は、非ステロイド抗炎症薬組成物を提供することである。
【００２３】
本発明のもう１つの目的は、血中又はｉｎ ｖｉｖｏ中糖モジュレーター組成物を提供することである。
【００２４】
本発明のさらにまた別の目的は、患者を抗腫瘍薬、抗酸化薬、抗菌薬、シクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ・モジュレーター、ＮＯ若しくはＮＯシンターゼ・モジュレーター、非ステロイド性抗炎症薬モジュレーター、及び／又は血中若しくはｉｎ ｖｉｖｏ中糖モジュレーター組成物を用いて治療するための方法を提供することである。
【００２５】
本発明の追加の目的は、酸化的ＤＮＡ損傷を阻害するための組成物及び方法を提供することである。
【００２６】
本発明のもう１つの追加の目的は、血小板凝集モジュレーションのための組成物及び方法を提供することである。
【００２７】
本発明のさらにもう１つの追加の目的は、アポトーシスモジュレーションのための組成物及び方法を提供することである。
【００２８】
本発明のさらにもう１つの目的は、上記の組成物のいずれかを製造するための方法を提供することである。
【００２９】
さらに、本発明の１つの目的は、上記の方法において使用するため、又は上記の組成物物類を調製するためのキットを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００３０】
驚くべきことに、カカオ抽出物類及びそれからの化合物類は抗腫瘍、抗癌又は抗新生物活性を有している、又は抗酸化薬組成物である、又はＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ酵素活性を阻害する、又は抗菌性である、又はシクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ・モジュレーターである、又はＮＯ若しくはＮＯシンターゼ・モジュレーターである、又は非ステロイド性抗炎症薬である、又はアポトーシスモジュレーターである、又は血小板凝集モジュレーターである、又は血中若しくはｉｎ ｖｉｖｏ中糖モジュレーターである、又は酸化的ＤＮＡ損傷の阻害剤であることが発見されている。
【００３１】
従って、本発明は実質的に純粋カカオ抽出物類及びそれらからの化合物類を提供する。抽出物類又は化合物類は好ましくはカカオプロシアニジン類、少なくとも（−）エピカテキン、（＋）カテキン、プロシアニジンＢ−２、２〜１２又は３〜１２、好ましくは２〜５若しくは４〜１２、より好ましくは３〜１２、最も好ましくは５〜１２のような２〜１８、例えば３〜１８のプロシアニジンのオリゴマー類、プロシアニジンＢ−５、プロシアニジンＡ−２及びプロシアニジンＣ−１から選択された少なくとも１種のカカオプロシアニジンを含むポリフェノール類のようなポリフェノール類を含んでいる。
【００３２】
本発明はさらに、実質的に純粋なカカオ抽出物類又はそれらからの化合物又はプロシアニジン類を富裕に含むポリフェノール類のような合成カカオポリフェノール類及び適切な担体、例えば製薬学的、獣医学的又は食物科学的に容認できる担体を含んでいる抗腫瘍薬、抗癌薬若しくは抗新生物薬、又は抗酸化薬、又はＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、又は抗菌薬、又はシクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ・モジュレーター、又はＮＯ若しくはＮＯシンターゼ・モジュレーター、非ステロイド抗炎症薬、アポトーシスモジュレーター、血小板凝集モジュレーター、血中若しくはｉｎ ｖｉｖｏ中糖モジュレーター、又は酸化的ＤＮＡ損傷阻害剤組成物を提供する。カカオ抽出物類又はそれらからの化合物類は好ましくはカカオプロシアニジン類を含有している。カカオ抽出物類又はそれらからの化合物類は、好ましくはカカオ豆を砕いて粉々にし、その粉末を脱脂し、さらにその粉末から活性化合物を抽出及び精製することによって得られる。
【００３３】
本発明はさらに、患者に有効な量の実質的に純粋なカカオ抽出物類又はそれらからの化合物類又は合成カカオポリフェノール類又はプロシアニジン類及び担体、例えば製薬学的、獣医学的又は食物科学的に容認できる担体を含んでいる組成物を投与することを含有している、抗腫瘍薬、抗癌剤若しくは抗新生物剤、又は抗酸化薬、又はＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、又は抗菌薬、又はシクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ・モジュレーター、又はＮＯ若しくはＮＯシンターゼ・モジュレーター、非ステロイド抗炎症薬、アポトーシスモジュレーター、血小板凝集モジュレーター、血中若しくはｉｎ ｖｉｖｏ中糖モジュレーター、又は酸化的ＤＮＡ損傷阻害剤による治療の必要のある患者を治療するための方法を包括している。カカオ抽出物類又はそれらからの化合物類はカカオプロシアニジン類であり得る；及び、好ましくはカカオ豆を砕いて粉々にし、粉末を脱脂し、及び粉末から活性化合物を抽出して精製することによって入手される。
【００３４】
さらに、本発明は実質的に純粋なカカオ抽出物類又はそれらからの化合物類又は合成カカオポリフェノール類又はプロシアニジン類及びカカオ抽出物類又はそれらからの化合物類又は合成カカオポリフェノール類又はプロシアニジン類と混合するために適切な例えば製薬学的、獣医学的又は食物科学的に容認できる担体を含んでいる、抗腫瘍薬、抗癌剤若しくは抗新生物剤、又は抗酸化薬、又はＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、又は抗菌薬、又はシクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ・モジュレーター、又はＮＯ若しくはＮＯシンターゼ・モジュレーター、非ステロイド抗炎症薬、アポトーシスモジュレーター、血小板凝集モジュレーター、血中若しくはｉｎ ｖｉｖｏ中糖モジュレーター、又は酸化的ＤＮＡ損傷阻害剤による治療の必要のある患者を治療するためのキットを提供する。
【００３５】
本発明は、図３８Ａ〜３８Ｐ及び３９Ａ〜３９ＡＡに示されているような化合物類を提供する；及ひ現在は４→６及び４→８の結合がは好ましい。
【００３６】
本発明はさらに又、本発明の化合物類を含んでいる食物保存用又は調製用組成物類、及び組成物類を食物に添加することによって食物を調製又は保存するための方法を包含している。
【００３７】
さらに、本発明はなおさらに発明化合物類を含んでいるＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ阻害剤及び適切な担体若しくは希釈剤、さらに該組成物の投与によるそうした治療の必要のある患者を治療するための方法を包含している。
【００３８】
カカオ抽出物を含む上記の実施態様を広く考察すると、本発明はさらに発明化合物類がカカオ抽出物の代用としてもしくはカカオ抽出物として使用されるような実施態様も包含している。従って、本発明はカカオ抽出物類及び発明化合物類に関して上記のものに類似するキット、方法及び組成物を包含している。
【００３９】
これら及びその他の目的及び実施態様は開示されているか、又は下記の詳細な説明から明白になるであろう。
【００４０】
下記の詳細な説明は添付の図面を参照することによってより理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】図１は、粗カカオプロシアニジン類の分別から得られた代表的なゲル浸透クロマトグラムを示す。
【図２Ａ】図２Ａは、未発酵カカオから抽出されたカカオプロシアニジン類の分離（溶出プロフィール）を示す代表的な逆相ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、未発酵カカオから抽出されたカカオプロシアニジン類の分離を示す代表的な順相ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図３】図３は、数種の代表的なプロシアニジン構造を示す。
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｅは、抗癌又は抗新生物活性についてスクリーニングするときに使用される５つのフラクションの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図４Ｂ】図４Ａ〜４Ｅは、抗癌又は抗新生物活性についてスクリーニングするときに使用される５つのフラクションの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図４Ｃ】図４Ａ〜４Ｅは、抗癌又は抗新生物活性についてスクリーニングするときに使用される５つのフラクションの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図４Ｄ】図４Ａ〜４Ｅは、抗癌又は抗新生物活性についてスクリーニングするときに使用される５つのフラクションの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図４Ｅ】図４Ａ〜４Ｅは、抗癌又は抗新生物活性についてスクリーニングするときに使用される５つのフラクションの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図５】図５は、カカオ抽出物と癌細胞であるＡＣＨＮとの用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；Ｍ＆Ｍ２ Ｆ４／９２。
【図６Ａ】６Ａは、カカオ抽出物と癌細胞であるＰＣ−３との用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；Ｍ＆ＭＡ＋Ｅ Ｕ１２Ｐ１。
【図６Ｂ】６Ｂは、カカオ抽出物と癌細胞であるＰＣ−３との用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；Ｍ＆ＭＢ＋Ｅ Ｙ１９２Ｐ１。
【図６Ｃ】６Ｃは、カカオ抽出物と癌細胞であるＰＣ−３との用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；Ｍ＆ＭＣ＋Ｅ Ｕ１２Ｐ２。
【図６Ｄ】６Ｄは、カカオ抽出物と癌細胞であるＰＣ−３との用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；Ｍ＆ＭＤ＋Ｅ Ｕ１２Ｐ２。
【図７Ａ】図７Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１Ａ ０２１２Ｐ３。
【図７Ｂ】図７Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ ０１６２Ｐ１。
【図７Ｃ】図７Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ ０１２２Ｐ３。
【図７Ｄ】図７Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ ０１２２Ｐ３。
【図７Ｅ】図７Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｅ ０２９２Ｐ８。
【図７Ｆ】図７Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＢとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ／Ｂ ０２９２Ｐ６。
【図７Ｇ】図７Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＥとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ／Ｅ ０２９２Ｐ６。
【図７Ｈ】図７Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＤとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ／Ｄ ０２９２Ｐ６。
【図８Ａ】図８Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ ０９２Ｋ３。
【図８Ｂ】図８Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ ０２１２Ｋ５。
【図８Ｃ】図８Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ ０１６２Ｋ３。
【図８Ｄ】図８Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ ０２１２Ｋ５。
【図８Ｅ】図８Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｅ ０２９２Ｋ５。
【図８Ｆ】図８Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＢとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ／Ｂ ０２９２Ｋ３。
【図８Ｇ】図８Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＢ＋ＥとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ／Ｅ ０２９２Ｋ４。
【図８Ｈ】図８Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ／Ｅ ０２９２Ｋ５。
【図９Ａ】図９Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｂ＋Ｄ、Ａ＋Ｅ、及びＤ＋ＥとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）。
【図９Ｂ】図９Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）。
【図９Ｃ】図９Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ ０１９２Ｈ５。
【図９Ｄ】図９Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ ０１９２Ｈ５。
【図９Ｅ】図９Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｅ ０１９２Ｈ５。
【図９Ｆ】図９Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＢ＋ＤとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ＆Ｄ ０２６２Ｈ２。
【図９Ｇ】図９Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＥとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１Ａ／Ｅ ０２６２Ｈ３。
【図９Ｈ】図９Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ＆Ｅ０２６２Ｈ１。
【図１０Ａ】図１０Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ ０９２Ａ５。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＢＭＭ−１ Ｂ ０９２Ａ５。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ ０１９２Ａ７。
【図１０Ｄ】図１０Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ ０１９２Ａ７。
【図１０Ｅ】図１０Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；Ｍ＆Ｍ１ Ｅ ０１９２Ａ７。
【図１０Ｆ】図１０Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＢ＋ＤとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ＆Ｄ ０３０２Ａ６。
【図１０Ｇ】図１０Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＣ＋ＤとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ＆Ｄ。
【図１０Ｈ】図１０Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＥとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ＆Ｅ ０２６２Ａ６。
【図１１Ａ】図１１Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ ０１９２５８。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ ０９２５６。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ ０１９２５９。
【図１１Ｄ】図１１Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ ０１９２５８。
【図１１Ｅ】図１１Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｅ ０１９２５８。
【図１１Ｆ】図１１Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＥとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ／Ｅ ０２６２５４。
【図１１Ｇ】図１１Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＢ＋ＥとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ＆Ｅ ０３０２５５。
【図１１Ｈ】図１１Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＣ＋ＥとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ＆Ｅ Ｎ６２５５。
【図１２Ａ】図１２Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ ０２１２Ｓ４。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ ０２１２Ｓ４。
【図１２Ｃ】図１２Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ ０２１２Ｓ４。
【図１２Ｄ】図１２Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ ０２１２Ｓ４。
【図１２Ｅ】図１２Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｅ Ｎ３２Ｓ１。
【図１２Ｆ】図１２Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＢ＋ＣとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ＆Ｃ Ｎ３２Ｓ２。
【図１２Ｇ】図１２Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＣ＋ＤとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ＆Ｄ Ｎ３２Ｓ３。
【図１２Ｈ】図１２Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ＆Ｅ Ｎ３２Ｓ３。
【図１３Ａ】図１３Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ Ｎ２２Ｍ４。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ Ｎ２２Ｍ４。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ Ｎ２２Ｍ４。
【図１３Ｄ】図１３Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ Ｎ２２Ｍ３。
【図１３Ｅ】図１３Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｅ ０３０２Ｍ２。
【図１３Ｆ】図１３Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＢ＋ＣとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ／Ｃ ０３０２Ｍ。
【図１３Ｇ】図１３Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＣ＋ＥとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ＆Ｅ Ｎ２２Ｍ３。
【図１３Ｈ】図１３Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ＆Ｅ Ｎ２２Ｍ３。
【図１４】図１４は、カカオプロシアニジン（特にフラクションＤ）とＣＣＲＦ−ＣＥＭ Ｔ細胞白血病細胞系との典型的な用量反応関係を示す（細胞数／ｍＬ ｖｓ．増殖日数；白い丸は対照群、黒い丸は１２５μｇフラクションＤ、白い逆三角は２５０μｇフラクションＤ、黒い逆三角は５００μｇフラクションＤ）。
【図１５Ａ】図１５Ａは、フラクションＤ＋Ｅを用いて処置されたＭＣＦ−７ ｐ１６８乳癌細胞に対するＸＴＴ及びクリスタルバイオレット細胞毒性アッセイの比較を示す（対照に対する％  ｖｓ．濃度（μg／ｍｌ）（白丸はＤＴＴ染色、黒丸はクリスタルバイオレット染色）。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、ＵＩＴ−１カカオ遺伝型から入手した様々なレベルの粗ポリフェノール類を用いて処置されたＭＤＡ ＭＢ２３１乳癌細胞系から入手した典型的な用量反応曲線を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は対照群、黒い丸は賦形剤、白い逆三角は２５０μｇ／ｍＬ、黒い逆三角は１００μｇ／ｍＬ、白い四角は１０μｇ／ｍＬである；２．０の吸光度がプレート読み取り装置の最高値で、必ずしも細胞数を表してはいない可能性がある）。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、ＵＩＴ−１カカオ遺伝型から入手した様々なレベルの粗ポリフェノール類を用いて処置されたＰＣ−３前立腺癌細胞系から入手した典型的な用量反応曲線を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は対照群、黒い丸は賦形剤、白い逆三角は２５０μｇ／ｍＬ、黒い逆三角は１００μｇ／ｍＬ、白い四角は１０μｇ／ｍＬである）。
【図１５Ｄ】図１５Ｄは、ＵＩＴ−１カカオ遺伝型から入手した様々なレベルの粗ポリフェノール類を用いて処置されたＭＣＦ−７ ｐ１６８乳癌細胞系から入手した典型的な用量反応曲線を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は対照群、黒い丸は賦形剤、白い逆三角は２５０μｇ／ｍＬ、黒い逆三角は１００μｇ／ｍＬ、白い四角は１０μｇ／ｍＬ、黒い四角は１μｇ／ｍＬである；２．０の吸光度がプレート読み取り装置の最高値で、必ずしも細胞数を表してはいない可能性がある）。
【図１５Ｅ】図１５Ｅは、ＵＩＴ−１カカオ遺伝型から入手した様々なレベルの粗ポリフェノール類を用いて処置されたＨｅｌａ子宮頸癌細胞系から入手した典型的な用量反応曲線を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は対照群、黒い丸は賦形剤、白い逆三角は２５０μｇ／ｍＬ、黒い逆三角は１００μｇ／ｍＬ、白い四角は１０μｇ／ｍＬである；２．０の吸光度がプレート読み取り装置の最高値で、必ずしも細胞数を表してはいない可能性がある）。
【図１５Ｆ】図１５Ｆは、様々なカカオポリフェノールのフラクションを用いて処置されたＨｅｌａ子宮頸癌細胞系に対する細胞毒性効果を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は１００μｇ／ｍＬのフラクションＡ−Ｅ、黒い丸は１００μｇ／ｍＬのフラクションＡ−Ｃ、白い逆三角は１００μｇ／ｍＬのフラクションＤ＆Ｅである；２．０の吸光度がプレート読み取り装置の最高値で、必ずしも細胞数を表してはいない可能性がある）。
【図１５Ｇ】図１５Ｇは、様々なカカオポリフェノールのフラクションを用いて処置されたＳＫＢＲ−３乳癌細胞系に対する１００μｌ／ｍＬでの細胞毒性効果を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は１００μｇ／ｍＬ、黒い丸はフラクションＡ−Ｃ、白い逆三角はフラクションＤ＆Ｅである）。
【図１５Ｈ】図１５Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＨｅｌａ細胞との典型的な用量反応曲線を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は対照群、黒い丸は１００μｇ／ｍＬ、白い逆三角は７５μｇ／ｍＬ、黒い逆三角は５０μｇ／ｍＬ、白い四角は２５μｇ／ｍＬ、黒い四角は１０μｇ／ｍＬである；２．０の吸光度がプレート読み取り装置の最高値で、必ずしも細胞数を表してはいない可能性がある）。
【図１５Ｉ】図１５Ｉは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＳＫＢＲ−３細胞との典型的な用量反応曲線を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は対照群、黒い丸は１００μｇ／ｍＬ、白い逆三角は７５μｇ／ｍＬ、黒い逆三角は５０μｇ／ｍＬ、白い四角は２５μｇ／ｍＬ、黒い四角は１０μｇ／ｍＬである）。
【図１５Ｊ】図１５Ｊは、軟質寒天クローニングアッセイを用いたカカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＨｅｌａ細胞との典型的な用量反応関係を示す（棒グラフ；コロニー数／左から、対照群、１、１０、５０、及び１００μｇ／ｍＬ）。
【図１５Ｋ】図１５Ｋは、８種のカカオ遺伝型から入手した粗ポリフェノール抽出物を用いて処置された場合のＨｅｌａ細胞の増殖阻害を示す（％対照群ｖｓ．濃度、μｇ／ｍＬ；白い丸はＣ−１、黒い丸はＣ−２、白い逆三角はＣ−３、黒い逆三角はＣ−４、白い四角はＣ−５、黒い四角はＣ−６、白い三角はＣ−７、黒い三角はＣ−８である；Ｃ−１＝ＵＦ−１２：園芸品種＝トリニタリオ（Ｔｒｉｎｉｔａｒｉｏ）及び種類はＵＦ−１２（ブラジル）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）；Ｃ−２＝ＮＡ−３３：園芸品種はフォラステレオ（Ｆｏｒａｓｔｅｒｏ）及び種類はＮＡ−３３（ブラジル）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）；Ｃ−３＝ＥＥＧ−４８：園芸品種はＦｏｒａｓｔｅｒｏ及び種類はＥＥＧ−４８（ブラジル）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）；Ｃ−４＝不明：園芸品種はＦｏｒａｓｔｅｒｏ及び種類は不明（西アフリカ）カカオポリフェノール類の粗抽出物である（カフェイン除去／テオブロミン除去）；Ｃ−５＝ＵＦ−６１３：園芸品種＝Ｔｒｉｎｉｔａｒｉｏ及び種類はＵＦ−６１３（ブラジル）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）；Ｃ−６＝ＩＣＳ−１００：園芸品種＝Ｔｒｉｎｉｔａｒｉｏ（ニカラグアＣｒｉｏｌｌｏ原種）及び種類はＩＣＳ−１００（ブラジル）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）；Ｃ−７＝ＩＣＳ−１３９：園芸品種＝Ｔｒｉｎｉｔａｒｉｏ（ニカラグアＣｒｉｏｌｌｏ原種）及び種類はＩＣＳ−１３９（ブラジル）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）：Ｃ−８＝ＵＩＴ−１：園芸品種＝Ｔｒｉｎｉｔａｒｉｏ及び種類はＵＩＴ−１（マレーシア）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）。
【図１５Ｌ】図１５Ｌは、発酵させたカカオ豆及び乾燥させたカカオ豆から入手した粗ポリフェノール抽出物類を用いて処置したときのＨｅｌａ細胞の増殖阻害を示す（％対照群ｖｓ．濃度、μｇ／ｍＬ）（発酵及び日光乾燥を通しての段階；白い丸は第０日のフラクション、黒い丸は第１日のフラクション、白い逆三角は第２日のフラクション、黒い逆三角は第３日のフラクション、白い四角は第４日のフラクション、そして黒い四角は第９日のフラクションである）。
【図１５Ｍ】図１５Ｍは、酵素により酸化させられたカカオプロシアニジン類のＨｅｌａ細胞に対する作用を示す（粗カカオポリフェノールにより処置されたポリフェノールオキシダーゼについての用量反応；％対照群ｖｓ．濃度、μｇ／ｍＬ；黒い四角は粗ＵＩＴ−１（カフェイン及びテオブロミン含有）、白い丸は粗ＵＩＴ−１（カフェイン及びテオブロミンを非含有）、及び黒い丸は粗ＵＩＴ−１（ポリフェノールオキシダーゼ触媒）。
【図１５Ｎ】図１５Ｎは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ及びＥの組み合わせに対する代表的な半分取逆相ＨＰＬＣ分離を示す。
【図１５Ｏ】図１５Ｏは、粗カカオポリフェノール抽出物の代表的な順相半分取ＨＰＬＣ分離を示す。
【図１６】図１６は、合成抗酸化薬ＢＨＡ及びＢＨＴに比較したカカオプロシアニジン抽出物及びフラクションについての典型的なランシマット（Ｒａｎｃｉｍａｔ）酸化曲線を示す（任意単位ｖｓ．時間（時間）；点線及び十字（＋）線はＢＨＡ及びＢＨＴである；*はＤ−Ｅである；ｘは粗である；白い四角はＡ〜Ｃである；そして白いダイアモンド形は対照である）。
【図１７】図１７は、カカオプロシアニジンのフラクションによるキネトプラストＤＮＡのトポイソメラーゼＩＩ触媒脱鎖状結合の阻害を示す典型的な寒天ゲルを示す（レーン１は０．５μｇのマーカー（Ｍ）単量体長さのキネトプラストＤＮＡ環を含んでいる；レーン２及び２０は４％ＤＭＳＯの存在下で、しかしあらゆるカカオプロシアニジン類の不在下でトポイソメラーゼＩＩと一緒に培養されたキネトプラストＤＮＡを含んでいる（対照群 −Ｃ）；レーン３及び４は０．５及び５．０μｇ／ｍＬのカカオプロシアニジンのフラクションＡの存在下でトポイソメラーゼＩＩと一緒に培養されたキネトプラストＤＮＡを含んでいる；レーン５及び６は０．５及び５．０μｇ／ｍＬのカカオプロシアニジンのフラクションＢの存在下でトポイソメラーゼＩＩと一緒に培養されたキネトプラストＤＮＡを含んでいる；レーン７、８、９、１３、１４及び１５は０．０５、０．５及び５．０μｇ／ｍＬのカカオプロシアニジンのフラクションＤの存在下でトポイソメラーゼＩＩと一緒に培養されたキネトプラストＤＮＡの複製物である；レーン１０、１１、１２、１６、１７及び１８は０．０５、０．５及び５．０μｇ／ｍＬのカカオプロシアニジンのフラクションＥの存在下でトポイソメラーゼＩＩと一緒に培養されたキネトプラストＤＮＡの複製物である；レーン１９は５．０μｇ／ｍＬのカカオプロシアニジンのフラクションＥの存在下でトポイソメラーゼＩＩと一緒に培養されたキネトプラストＤＮＡの複製物である。
【図１８】図１８は、ＤＮＡ修復適応性及び欠失性細胞系に対するカカオプロシアニジンのフラクションＤの用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．μｇ／ｍＬ；左側はｘｒｓ−６ＤＮＡ修復欠失性細胞系、ＭＭ−１ Ｄ Ｄ２８２Ｘ１；右側はＢＲＩ ＤＮＡ修復適応性細胞系、ＭＭ−１ Ｄ Ｄ２８２Ｂ１）。
【図１９】図１９は、カカオのフラクションＤ＋Ｅを用いて処置したときのＭＣＦ−７ ｐ１６８原種細胞系に比較したアドリアマイシン耐性ＭＣＦ−７細胞についての用量反応曲線を示す（％対照群ｖｓ．濃度、μｇ／ｍＬ；白い丸はＭＣＦ−７ ｐ１６８；黒い丸はＭＣＦ−７ ＡＤＲ）。
【図２０Ａ】図２０Ａは、順相半分取ＨＰＬＣによって調製した１２のフラクションの１００μｇ／ｍＬ及び２５μｇ／ｍＬで処置した場合のＨｅｌａ細胞への用量反応作用を示す（棒グラフ、％対照群ｖｓ．左から対照群及びフラクション１〜１２）。
【図２０Ｂ】図２０Ｂは、順相半分取ＨＰＬＣによって調製した１２のフラクションの１００μｇ／ｍＬ及び２５μｇ／ｍＬで処置した場合のＳＫＢＲ−３細胞への用量反応作用を示す（棒グラフ、％対照群ｖｓ．左から対照群及びフラクション１〜１２）。
【図２１】図２１は、カカオ抽出物からの、粗抽出物（Ａ）、富裕化五量体（Ｂ）及び精製五量体（Ｃ）の順相ＨＰＬＣ分離を示す。
【図２２Ａ】図２２Ａ、Ｂ及びＣは、五量体富裕プロシアニジン類、及び各々フラクションＡ〜ＣおよびフラクションＤ〜ＥのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳを示す。
【図２２Ｂ】図２２Ａ、Ｂ及びＣは、五量体富裕プロシアニジン類、及び各々フラクションＡ〜ＣおよびフラクションＤ〜ＥのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳを示す。
【図２２Ｃ】図２２Ａ、Ｂ及びＣは、五量体富裕プロシアニジン類、及び各々フラクションＡ〜ＣおよびフラクションＤ〜ＥのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳを示す。
【図２３Ａ】図２３Ａは、改良半分取ＨＰＬＣによって精製されたオリゴマープロシアニジンの溶出プロフィールを示す。
【図２３Ｂ】図２３Ｂは、改良半分取ＨＰＬＣによって精製された三量体プロシアニジンの溶出プロフィールを示す。
【図２４Ａ】図２４Ａ〜Ｄは各々、エピカテキンの構造に基づく全部（４〜８）が連結した五量体のエネルギー最小化構造を示す。
【図２４Ｂ】図２４Ａ〜Ｄは各々、エピカテキンの構造に基づく全部（４〜８）が連結した五量体のエネルギー最小化構造を示す。
【図２４Ｃ】図２４Ａ〜Ｄは各々、エピカテキンの構造に基づく全部（４〜８）が連結した五量体のエネルギー最小化構造を示す。
【図２４Ｄ】図２４Ａ〜Ｄは各々、エピカテキンの構造に基づく全部（４〜８）が連結した五量体のエネルギー最小化構造を示す。
【図２５Ａ】図２５Ａは、ベンジルメルカプテンを用いてのチオリシス後の（-）エピカテキンの相対蛍光を示す。
【図２５Ｂ】図２５Ｂは、ベンジルメルカプテンを用いてのチオリシス後の（+）カテキンの相対蛍光を示す。
【図２５Ｃ】図２５Ｃは、ベンジルメルカプテンを用いてのチオリシス後の二量体類（Ｂ２及びＢ５）の相対蛍光を示す。
【図２６】図２６Ａは、チオリシス後の二量体の相対蛍光を示す。図２６Ｂは、二量体のチオリシス及び引き続いての脱硫後のＢ５二量体の相対蛍光を示す。
【図２７Ａ】図２７Ａは、五量体を用いて処置されたＭＤＡ ＭＢ ２３１ヌードマウスモデルの処置中の相対腫瘍量を示す。
【図２７Ｂ】図２７Ｂは、五量体を用いて処置されたＭＤＡ ２３１ヌードマウスモデルの相対生存率曲線を示す。
【図２８】図２８は、カカオ抽出物からのプロシアニジン類のアセトン抽出物のハロゲン無含有分析的分離からの溶出プロフィールを示す。
【図２９】図２９は、プロシアニジン類の順相ＨＰＬＣに固相の孔径が及ぼす影響を示す（蛍光ｖｓ．時間（分））。
【図３０Ａ】図３０Ａは、カカオ豆の発酵中の基質利用を示す。
【図３０Ｂ】図３０Ｂは、発酵中の代謝産物産生を示す。
【図３０Ｃ】図３０Ｃは、カカオ豆の発酵中のプレート計数を示す。
【図３０Ｄ】図３０Ｄは、カカオ豆の発酵溶液中の各成分の相対濃度を示す。
【図３１】図３１は、ＮＯ関連性のフェニレフリンによって前収縮させたラット大動脈のアセチルコリン誘発性弛緩を示す。
【図３２】図３２は、様々な試験混合物からの血糖耐性プロフィールを示す（血糖（mg/dl）ｖｓ．時間（分）、□：対照−砂糖のみ；△：砂糖＋0.1％ポリフェノール；◇：0.1％ポリフェノールのみ）。
【図３３】図３３ＡおよびＢは、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性へのインドメタシンの作用を示す（阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ（濃度（μＭ））。
【図３４Ａ】図３４Ａは、重合化の度合い（試料番号）とＩＣ50 ＣＯＸ−１（μＭ）（試料Ｓ11はｍｇ／ｍｌ）との相関を示す。
【図３４Ｂ】図３４Ｂは、重合化の度合い（試料番号）とＩＣ50 ＣＯＸ−２（μＭ）（試料Ｓ11はｍｇ／ｍｌ）との相関を示す。
【図３５】図３５は、μＭとして表現されたＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性への化合物の作用間の相関を示す。
【図３６Ａ】図３６Ａは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｂ】図３６Ｂは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。を示す。
【図３６Ｃ】図３６Ｃは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｄ】図３６Ｄは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｅ】図３６Ｅは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｆ】図３６Ｆは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｇ】図３Ｇは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｈ】図３６Ｈは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｉ】図３６Ｉは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｊ】図３６Ｊは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｋ】図３６Ｋは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｌ】図３６Ｌは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｍ】図３６Ｍは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｎ】図３６Ｎは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｏ】図３６Ｏは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｐ】図３６Ｐは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｑ】図３６Ｑは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｒ】図３６Ｒは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｓ】図３６Ｓは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｔ】図３６Ｔは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｕ】図３６Ｕは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｖ】図３６Ｖは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３７】図３７は、カカオからプロシアニジン類を分離するための精製図式を示す。
【図３８Ａ】図３８Ａは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｂ】図３８Ｂは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｃ】図３８Ｃは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｄ】図３８Ｄは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｅ】図３８Ｅは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｆ】図３８Ｆは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｇ】図３８Ｇは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｈ】図３８Ｈは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｉ】図３８Ｉは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｊ】図３８Ｊは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｋ】図３８Ｋは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｌ】図３８Ｌは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｍ】図３８Ｍは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｎ】図３８Ｎは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｏ】図３８Ｏは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｐ】図３８Ｐは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３９Ａ】図３９Ａは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９ＡＡ】図３９ＡＡは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｂ】図３９Ｂは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｃ】図３９Ｃは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｄ】図３９Ｄは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｅ】図３９Ｅは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｆ】図３９Ｆは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｇ】図３９Ｇは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｈ】図３９Ｈは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｉ】図３９Ｉは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｊ】図３９Ｊは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｋ】図３９Ｋは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｌ】図３９Ｌは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｍ】図３９Ｍは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｎ】図３９Ｎは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｏ】図３９Ｏは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｐ】図３９Ｐは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｑ】図３９Ｑは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｒ】図３９Ｒは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｓ】図３９Ｓは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｔ】図３９Ｔは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｕ】図３９Ｕは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｖ】図３９Ｖは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｗ】図３９Ｗは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｘ】図３９Ｘは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｙ】図３９Ｙは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｚ】図３９Ｚは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図４０】図４０ＡおよびＢは、各々ＵＶ及び蛍光によって検出された、プロシアニジン類の順相ＨＰＬＣ分離のための７０分後勾配を示す。
【図４１】図４１ＡおよびＢは、各々ＵＶ及び蛍光によって検出された、プロシアニジン類の順相ＨＰＬＣ分離のための３０分後勾配を示す。
【図４２】図４２は、プロシアニジン類の分取順相ＨＰＬＣ分離を示す。
【図４３Ａ】図４３Ａは、プロシアニジンの二量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４３Ｂ】図４３Ｂは、プロシアニジンの三量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４３Ｃ】図４３Ｃは、プロシアニジンの四量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４３Ｄ】図４３Ｄは、プロシアニジンの五量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４３Ｅ】図４３Ｅは、プロシアニジンの六量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４３Ｆ】図４３Ｆは、プロシアニジンの七量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４３Ｇ】図４３Ｇは、プロシアニジンの八量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４４Ａ】図４４Ａは、エピカテキンについての構造及び1Ｈ／13ＣＮＭＲデータを示す。
【図４４Ｂ】図４４Ｂは、エピカテキンについてのＡＰＴ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４４Ｃ】図４４Ｃは、エピカテキンについてのＣＯＳＹ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４４Ｄ】図４４Ｄは、エピカテキンについてのＸＨＣＯＲＲ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４４Ｅ】図４４Ｅは、エピカテキンについての1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４４Ｆ】図４４Ｆは、エピカテキンについての13Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４５Ａ】図４５Ａは、カテキンについての構造及び1Ｈ／13Ｃ ＮＭＲデータを示す。
【図４５Ｂ】図４５Ｂは、カテキンについての1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４５Ｃ】図４５Ｃは、カテキンについてのＡＰＴ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４５Ｄ】図４５Ｄは、カテキンについてのＸＨＣＯＲＲ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４５Ｅ】図４５Ｅは、カテキンについてのＣＯＳＹ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４６Ａ】図４６Ａは、Ｂ２二量体についての構造及び1Ｈ／13Ｃ ＮＭＲデータを示す。
【図４６Ｂ】図４６Ｂは、Ｂ２二量体についての13Ｃ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４６Ｃ】図４６Ｃは、Ｂ２二量体についてのＡＰＴ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４６Ｄ】図４６Ｄは、Ｂ２二量体についての1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４６Ｅ】図４６Ｅは、Ｂ２二量体についてのＨＭＱＣ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４６Ｆ】図４６Ｆは、Ｂ２二量体についてのＣＯＳＹ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４６Ｇ】図４６Ｇは、ＨＯＨＡＨＡ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４７Ａ】図４７Ａは、Ｂ５二量体についての構造及び1Ｈ／13Ｃ ＮＭＲデータを示す。
【図４７Ｂ】図４７Ｂは、Ｂ５二量体についての1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４７Ｃ】図４７Ｃは、Ｂ５二量体についての13Ｃ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４７Ｄ】図４７Ｄは、Ｂ５二量体についてのＡＰＴ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４７Ｅ】図４７Ｅは、Ｂ５二量体についてのＣＯＳＹ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４７Ｆ】図４７Ｆは、Ｂ５二量体についてのＨＭＱＣ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４７Ｇ】図４７Ｇは、Ｂ５二量体についてのＨＯＨＡＨＡ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４８Ａ】図４８Ａは、エピカテキン／カテキン三量体についての1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４８Ｂ】図４８Ｂは、エピカテキン／カテキン三量体についてのＣＯＳＹ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４８Ｃ】図４８Ｃは、エピカテキン／カテキン三量体についてのＨＭＱＣ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４８Ｄ】図４８Ｄは、エピカテキン／カテキン三量体についてのＨＯＨＡＨＡ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４９Ａ】図４９Ａは、エピカテキン三量体についての1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４９Ｂ】図４９Ｂは、エピカテキン三量体についてのＣＯＳＹ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４９Ｃ】図４９Ｃは、エピカテキン三量体についてのＨＭＱＣ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４９Ｄ】図４９Ｄは、エピカテキン三量体についてのＨＯＨＡＨＡ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５７】図５７は、カカオプロシアニジンのオリゴマー類のミセル電気力学毛細管クロマトグラフィー分離を示す。
【図５８Ａ】図５８Ａは、三量体に結合しているＣｕ+2−イオンについてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５８Ｂ】図５８Ｂは、三量体に結合しているＺｎ+2−イオンについてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５８Ｃ】図５８Ｃは、三量体に結合しているＦｅ+2−イオンについてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５８Ｄ】図５８Ｄは、三量体に結合しているＦｅ+3イオンについてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５８Ｅ】図５８Ｅは、三量体に結合しているＣａ+2−イオンについてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５８Ｆ】図５８Ｆは、三量体に結合しているＭｇ+2−イオンについてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５９】図５９は、カカオプロシアニジンのオリゴマー類（四量体〜八量体まで）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図６０】図６０は、カカオプロシアニジンのオリゴマー類と白血病ウイルスを産生するネコＦｅＡリンパ芽球腫細胞系との用量反応関係を示す。
【図６１】図６１は、カカオプロシアニジンのオリゴマー類とネコＣＲＦＫ正常腎細胞系との用量反応関係を示す。
【図６２】図６２は、カカオプロシアニジンのオリゴマー類とイヌＭＤＣＫ正常腎細胞系との用量反応関係を示す。
【図６３】図６３は、カカオプロシアニジンのオリゴマー類とイヌＧＨ正常腎細胞系との用量反応関係を示す。
【図６４】図６４は、六量体加水分解へ時間−温度が及ぼす作用を示す。
【図６５】図６５は、三量体形成へ時間−温度が及ぼす作用を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
詳細な説明本発明の化合物 
上述のように、現在では驚くべきことにカカオ抽出物類又はそれらに由来する化合物類が抗癌、抗腫瘍、若しくは抗新生物活性、抗酸化活性を示し、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ酵素及びＤＮＡの酸化的損傷を阻害し、さらに抗菌活性を有し、シクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ、ＮＯ若しくはＮＯシンターゼ、断片化、血小板凝集及び血中又はｉｎ ｖｉｖｏ中糖公調節活性並びに非ステロイド性抗炎症薬としての有効性を有していることが見出されている。
【００４３】
抽出物類、それらに由来する化合物類又は化合物類の組み合わせは、一般にはカカオ豆を砕いて粉末にし、粉末を脱脂し、脱脂した粉末から活性化合物を抽出して精製することによって調製される。粉末はカカオ豆及びパルプを凍結乾燥し、凍結乾燥したカカオ豆からパルプ除去及び外皮除去し、外皮除去した豆を粉砕することによって調製できる。活性化合物類の抽出は溶媒抽出法によって実施できる。活性化合物を含有している抽出物類は、例えばゲル浸透クロマトグラフィー若しくは分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法又はそうした方法の組み合わせによって実質的に純粋になるまで精製することができる。
【００４４】
カカオに由来する本発明の化合物類の分離及び精製に関しては、Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ（テオブロマ）、Ｈｅｒｒａｎｉａ（ヘラニア）のいずれかの属又はそれらの属間及び属内交配を使用できることは理解されるであろう。これに関しては、Ｓｃｈｕｌｔｅｓ，“Sｙｎｏｐｓｉｓ ｏｆ Ｈｅｒｒａｎｉａ（ヘラニアの摘要），”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｒｎｏｌｄ Ａｒｂｏｒｅｔｕｍ，Ｖｏｌ．ＸＸＸＩＸ，ｐｐ．２１７ ｔｏ ２７８，ｐｌｕｓ ｐｌａｔｅｓ Ｉ ｔｏＸＶＩＩ（１９８５）、Ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓ，“Ｃｏｃｏａ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｌｌｉｅｓ，Ａ Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ Ｒｅｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ（カカオ及びその仲間、テオブロマ属の生物分類学的再分類”，Ｖｏｌ．３５，ｐａｒｔ ６，ｐｐ．３７９ ｔｏ ６１３、ｐｌｕｓ ｐｌａｔｅｓ １ ｔｏ １１（スミソニアン研究所、１９６４）、及びＡｄｄｉｓｏｎら，“Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ ｗｈｉｃｈ ｏｃｃｕｒｓ ｉｎ ｔｈｅ Ａｍａｚｏｎ（アマゾン川流域に存在するテオブロマ属に関する観察）”，Ｖｏｌ．Ｔｅｃｈ．Ｉｎｓｔ．Ａｇｒｏｎｏｍｉｃｏ ｄｅ Ｎｏｒｔｅｓ，２５（３）（１９５１）を参考文献として引用する。
【００４５】
さらに、実施例２５は、これまで一度も報告されていないＴｈｅｏｂｒｏｍａ及びＨｅｒｒａｎｉａ属及びそれらの属間及び属内交配において発見された発明化合物の濃度を列挙している；さらに実施例２５は又、カカオ発酵条件を操作することによってカカオから入手できる発明化合物の量を調節する方法について記載している。
【００４６】
実質的に純粋なプロシアニジン類の単離において利用される精製プロトコールの計画は図３７に示されている。精製計画のステップ１及び２は、実施例１及び２に記載されている；ステップ３及び４は、実施例３、１３及び２３に記載されている；ステップ５は実施例４及び１４に記載されている；ステップ６は実施例４、１４及び１６に記載されている。当業者であれば、本発明の精神又は請求の範囲から離れることなく、そして過度の実験を行うことなく活性化合物類を入手するために図３７に略述されている精製計画における変更を認識及び想起するであろう。
【００４７】
必ずしも何かの特別の理論によって結合されることを欲しなくとも、活性を有する抽出物類、それらに由来する化合物類及び化合物類の組み合わせはプロシアニジン類のようなカカオポリフェノール類であると識別されている。カカオプロシアニジン類は、有意な抗癌、抗腫瘍、若しくは抗新生物活性及び抗酸化活性を示し、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ酵素及びＤＮＡの酸化的損傷を阻害し、抗菌活性を有し、シクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ、ＮＯ又はＮＯシンターゼ、断片化、血小板凝集及び血中又はｉｎ ｖｉｖｏ中糖をモジュレーションする能力を有し、さらに非ステロイド性抗炎症薬としての有効性を有している。
【００４８】
本発明は下記の式の化合物を提供する： 
【化３】
2011006427.tif 000004
式中、ｎは第１単量体単位Ａ及び複数の他の単量体単位があるように２〜１８、例えば３〜１２の整数であり；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖であり；
４位はα又はβ立体化学構造であり；
Ｘ、Ｙ及びＺは、第１単量体単位に関して、それへの別の単量体単位の結合が４位にあってＹ＝Ｚ＝水素であること、そして結合している単量体単位がない場合は、Ｘ、Ｙ及びＺが水素である、又はＺ、Ｙが糖でＸが水素である、又はＸがα若しくはβ糖でＺ、Ｙが水素である、又はそれらの組み合わせであることを条件に、単量体単位間の結合のための位置を表している。化合物はｎを５〜１２として有することができ、一定の好ましい化合物はｎを５として有している。糖はグルコース、ガラクトース、キシロース、ラムノース、及びアラビノースを含む群から選択することができる。Ｒ、Ｘ、Ｙ及びＺのいずれか又は全ての糖はエステル結合によってフェノール成分と任意に置換することができる。
【００４９】
従って、本発明は下記の式の化合物を提供することができる： 
【化４】
2011006427.tif 000005
式中、ｎは２〜１８、例えば３〜１２、有益には５〜１２であり、そして好ましくは、第１単量体単位Ａ、 
【化５】
2011006427.tif 000006
及び複数のその他のＡの単量体単位が存在するようにｎは５であり；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖であり；
４位はα又はβ立体化学構造であり；
Ｘ、Ｙ及びＺは、第１単量体単位に関して、それへの別の単量体単位の結合が４位にあってＹ＝Ｚ＝水素であること、そして結合している単量体単位がない場合は、Ｘ、Ｙ及びＺが水素である、又はＺ、Ｙが糖でＸが水素である、又はＸがα若しくはβ糖でＺ、Ｙが水素である、又はそれらの組み合わせであることを条件に、単量体単位間の結合のための位置を表しており；及び 前記糖がエステル結合によってフェノール成分と任意に置換されている。
【００５０】
従って、本発明は式Ａnの高分子化合物を提供するが、 式中Ａは下記の式を有する単量体である： 
【化６】
2011006427.tif 000007
式中、ｎは少なくとも１つの末端単量体単位Ａ、及び少なくとも１つ又は複数の追加の単量体単位が存在するように２〜１８の整数であり；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖であり；
隣接単量体間の結合が第４、６、又は８位で起こり；
４位での追加の単量体単位の結合がα又はβ立体化学構造を有しており；
Ｘ、Ｙ及びＺは、少なくとも１つの末端単量体単位に関して、それへの追加の単量体単位の結合（即ち、末端単量体単位に隣接する単量体単位の結合）が４位にあって、さらに任意にＹ＝Ｚ＝水素であることを条件に、単量体単位Ａ、水素及び糖を含むグループから選択されており；
糖は任意にいずれかの位置で例えばエステル結合によってフェノール部分と置換されており、さらに製薬学的に容認できる塩又はそれらの誘導体（酸化生成物を含む）である。
【００５１】
好ましい実施態様では、ｎは３〜１８、２〜１８、３〜１２、例えば５〜１２であり得る；さらに、有利にはｎは５である。糖はグルコース、ガラタトース、キシロース、ラムノース及びアラビノースを含むグループから選択される。Ｒ、Ｘ、Ｙ及びＺのいずれか又は全ての糖はあらゆる位置でエステル結合によってフェノール成分と任意に置換することかできる。フェノール部位は、カフェー酸、ケイ皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸及びシナピン酸を含むグループから選択される。
【００５２】
さらに、本発明は式Ａnの高分子化合物を提供するが、式中Ａは下記の式を有する単量体である： 
【化７】
2011006427.tif 000008
式中、ｎは２〜１８、例えば３〜１２、有益には３から１２、例えば５〜１２、好ましくはｎは５であり；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖であり；
隣接単量体は４位で（４→６）又は（４→８）によって結合しており；
Ｘ及びＹが隣接単量体であればＺが水素又は糖であり、Ｘ及びＺが隣接単量体であればＹが水素又は糖であること、そして２つの末端単量体の少なくとも１つに関して少なく隣接単量体が４位にあって、さらに任意でＹ＝Ｚ＝水素であることを条件に、Ｘ、Ｙ及びＺは各々水素、糖又は隣接単量体であり；
４位での結合がα又はβ立体化学構造を有しており；
糖が例えばエステル結合によっていずれかの位置でフェノール成分と任意に置換されており、 さらに製薬学的に容認できる塩又はそれらの誘導体（酸化生成物を含む）である。
【００５３】
「少なくとも１つの末端単量体単位Ａ」の叙述に関しては、本発明の化合物類が２つの末端単量体単位を有していること、及び２つの末端単量体単位Ａが同一であっても相違していてもよいことが理解されるであろう。さらに、「少なくとも１つの末端単量体単位Ａ」の叙述は、末端単量体単位Ａが「第１単量体単位」と呼ばれている実施態様を含んでおり、それに対して別の単量体単位が添加されているその単量体に関する「第１単量体単位」の叙述を加えると、その結果として式Ａnの高分子化合物が生じることも理解されるであろう。さらに、２つの末端単量体の少なくとも１つに関しては、隣接単量体の結合場所は４位であり、任意でＹ＝Ｚ＝水素である。
【００５４】
用語「それらの組み合わせ」の叙述に関しては、本発明の化合物類の１又は２以上を同時に使用できる、例えば１又は２以上の化合物を含む配合での治療の必要のある患者に投与できることが理解されるであろう。
【００５５】
本発明の化合物類又はそれらの組み合わせはカカオ抽出物類についての上記の有用性を表示している；さらに本開示を通して、用語「カカオ抽出物」は、本発明の化合物又はそれらの組み合わせがカカオ抽出物類であり得ると理解されるように本発明の化合物類又はそれらの組み合わせに置換されてもよい。
【００５６】
本書で使用した用語「オリゴマー」は、式中ｎが２〜１８である上記の式のいずれかの化合物類又はそれらの組み合わせを指している。ｎが２のとき、オリゴマーは「二量体」と呼ばれる；ｎが３のとき、オリゴマーは「三量体」と呼ばれる；ｎが４のとき、オリゴマーは「四量体」と呼ばれる；ｎが５のとき、オリゴマーは「五量体」と呼ばれる；さらにｎか１８であるときにはオリゴマーが「十八量体」と呼ばれるように、１８までのｎを有しているオリゴマーに対しては同様の叙述を指示することができる。
【００５７】
本発明の化合物類又はそれらの組み合わせは、例えばＴｈｅｏｂｒｏｍａ、Ｈｅｒｒａｎｉａのいずれかの属又はそれらの属間若しくは属内交配のような天然源から単離することができる；又は、本発明の化合物類若しくはそれらの組み合わせは精製できる、例えば本発明の化合物類若しくはそれらの組み合わせは例えば、明らかに均質性となるまで精製して実質的に純粋にすることができる。純度とは相対的概念であって、さらに数多くの実施例は、例示された方法によれば当業者であれば実質的に純粋な本発明の化合物類又はそれらの組み合わせを入手できる、又はそれらを明白な均質性となるまで精製することができるように、本発明の化合物類又はそれらの組み合わせの単離並びにそれらの精製を例示している（例、個々の全く別個のクロマトグラフィーピークによる純度）。実施例（例、実施例３７）を考察すると、実質的に純粋な化合物又は化合物類の組み合わせは少なくとも純度約４０％、例えば少なくとも純度約５０％、有益には少なくとも純度約６０％、例えば少なくとも純度約７０％、より有益には少なくとも純度約７５〜８０％、好ましくは少なくとも純度約９０％、より好ましくは純度９０％以上、例えば少なくとも純度９０〜９５％、又はさらに純度９５％以上、例えば純度９５〜９８％であるようにさらにより純粋である。
【００５８】
さらに、ここで使用したオリゴマー類を含む単量体単位の例は、各々Ｃ及びＥＣと略記される（＋）−カテキン及び（−）−エピカテキンである。隣接単量体間の結合は４位から６位又は４位から８位である；さらにこの単量体の４位と隣接単量体単位の６位及び８位との間の結合はここでは（４→６）又は（４→８）と称されている。単量体の４位と隣接単量体の６位及び８位との間では４通りの立体化学的結合があり得る；そこで単量体単位間の立体化学的結合はここでは（４α→６）又は（４β→６）又は（４α→８）又は（４β→８）と称されている。Ｃが別のＣ又はＥＣに結合すると、本明細書ではこれらの結合は（４α→６）又は（４α→８）と称されている。ＥＣが別のＣ又はＥＣに結合すると、本明細書ではこれらの結合は（４β→６）又は（４β→８）と称されている。
【００５９】
上記の活性を引き出す化合物類の例は下記を含んでいる：二量体類のＥＣ−（４β→８）−ＥＣ及びＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、このときＥＣ−（４β→８）−ＥＣが好ましい；三量体類の［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］2−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→６）］2−ＥＣ、このとき［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣが好ましい；四量体類の［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］2−ＥＣ（４β→６）−Ｃ、このとき［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣが好ましい；及び五量体の［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ、［ＥＣ（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ及び［ＥＣ−（４β→８）］3−ＥＣ−（４β→６）−Ｃ、このとき五量体末端単量体単位の３位が任意で没食子酸塩又はβ−Ｄ−グルコースを用いて誘導されており；［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣが好ましい。
【００６０】
さらに、上記の活性を引き出す化合物類は同様に六量体から十二量体までも含んでおり、それらの例を下記に列挙する： 
六量体であって、１つの単量体（Ｃ又はＥＣ）が別のＥＣ又はＣに結合しているＥＣに対しては別の単量体への結合（４β→８）又は（４β→６）を有しており、別のＣ又はＥＣに結合しているＣに対しては（４α→８）又は（４α→６）を有しており、その後上記の五量体化合物、例えば［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］4−ＥＣ−（４β→６）−Ｃへの（４β→８）結合が続き、このとき六量体末端単量体単位の３位が任意で没食子酸塩又はβ−Ｄ−グルコースを用いて誘導されており、好ましい実施態様では六量体が［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣである六量体；
七量体であって、２つの単量体（Ｃ及び／又はＥＣ）のいずれかの組み合わせが別のＥＣ又はＣに結合しているＥＣに対しては相互に（４β→８）又は（４β→６）への結合を有しており、別のＣ又はＥＣに結合しているＣに対しては（４α→８）又は（４α→６）を有しており、その後上記の五量体化合物、例えば［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］5−ＥＣ−（４β→６）−Ｃへの（４β→８）結合が続き、このとき七量体末端単量体単位の３位が任意で没食子酸塩又はβ−Ｄ−グルコースを用いて誘導されており、好ましい実施態様では七量体が［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣである七量体；
八量体であって、３つの単量体（Ｃ及び／又はＥＣ）のいずれかの組み合わせが別のＥＣ又はＣに結合しているＥＣに対しては相互に（４β→８）又は（４β→６）への結合を有しており、別のＣ又はＥＣに結合しているＣに対しては（４α→８）又は（４α→６）を有しており、その後上記の五量体化合物、例えば［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］6−ＥＣ−（４β→６）−Ｃへの（４β→８）結合が続き、このとき八量体末端単量体単位の３位が任意で没食子酸塩又はβ−Ｄ−グルコースを用いて誘導されており、好ましい実施態様では八量体が［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣである八量体；
九量体であって、４つの単量体（Ｃ及び／又はＥＣ）のいずれかの組み合わせが別のＥＣ又はＣに結合しているＥＣに対しては相互に（４β→８）又は（４β→６）への結合を有しており、別のＣ又はＥＣに結合しているＣに対しては（４α→８）又は（４α→６）を有しており、その後上記の五量体化合物、例えば［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］7−ＥＣ−（４β→６）−Ｃへの（４β→８）結合が続き、このとき九量体末端単量体単位の３位が任意で没食子酸塩又はβ−Ｄ−グルコースを用いて誘導されており、好ましい実施態様では九量体が［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣである九量体；
十量体であって、５つの単量体（Ｃ及び／又はＥＣ）のいずれかの組み合わせが別のＥＣ又はＣに結合しているＥＣに対しては相互に（４β→８）又は（４β→６）への結合を有しており、別のＣ又はＥＣに結合しているＣに対しては（４α→８）又は（４α→６）を有しており、その後上記の五量体化合物、例えば［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］8−ＥＣ−（４β→６）−Ｃへの（４β→８）結合が続き、このとき十量体末端単量体単位の３位が任意で没食子酸塩又はβ−Ｄ−グルコースを用いて誘導されており、好ましい実施態様では十量体が［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣである十量体；
十一量体であって、６つの単量体（Ｃ及び／又はＥＣ）のいずれかの組み合わせが別のＥＣ又はＣに結合しているＥＣに対しては相互に（４β→８）又は（４β→６）への結合を有しており、別のＣ又はＥＣに結合しているＣに対しては（４α→８）又は（４α→６）を有しており、その後上記の五量体化合物、例えば［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］9−ＥＣ−（４β→６）−Ｃへの（４β→８）結合が続き、このとき＋一量体末端単量体単位の３位が任意で没食子酸塩又はβ−Ｄ−グルコースを用いて誘導されており、好ましい実施態様では＋一量体が［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣである＋一量体；
十二量体であって、７つの単量体（Ｃ及び／又はＥＣ）のいずれかの組み合わせが別のＥＣ又はＣに結合しているＥＣに対しては相互に（４β→８）又は（４β→６）への結合を有しており、別のＣ又はＥＣに結合しているＣに対しては（４α→８）又は（４α→６）を有しており、その後上記の五量体化合物、例えば［ＥＣ−（４β→８）］11−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→６）−ＥＣ、［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→８）−Ｃ、及び［ＥＣ−（４β→８）］10−ＥＣ−（４β→６）−Ｃへの（４β→８）結合が続き、このとき十二量体末端単量体単位の３位が任意で没食子酸塩又はβ−Ｄ−グルコースを用いて誘導されており、好ましい実施態様では十二量体が［ＥＣ−（４β→８）］11−ＥＣである十二量体。
【００６１】
詳細な説明から上記のリストは例であって本発明の化合物類の数種の非限定的例の例証であり、決して本発明に包含される本発明の化合物類の全てを網羅したリストではないことが理解されるであろう。
【００６２】
実施例３Ａ、３Ｂ、４、１４、２３、２４、３０及び３４は本発明の化合物類を分離するための方法を記載している。実施例１３、１４Ａ〜Ｄ及び１６は本発明の化合物類を精製するための方法を記載している。実施例５、１５、１８、１９、２０及び２９は本発明の化合物類を識別するための方法を記載している。図３８Ａ〜Ｐ及び３９Ａ〜ＡＡは本発明の代表的五量体についての立体科学的ライブラリーを例示している。実施例１７は本発明の化合物類を分子模型を作成する方法を記載している。実施例３６は、カカオ中のｎが１３〜１８である高オリゴマー類についての証拠を提供している。
【００６３】
さらに、本発明は好ましくはカカオプロシアニジン類を含有するカカオ抽出物に関して記載されているが、熟練の有機化学者であれば本開示から活性化合物類を入手及び／又は調製するための合成経路を認識及び想起するであろう（例えば、実施例１１参照）。従って、本発明は配糖体類、没食子酸塩類、エステル類等その他を含むがこれらに限定されない合成カカオポリフェノール類若しくはプロシアニジン類若しくはそれらの誘導体類及び／又はそれらの合成前駆物質を包含している。つまり、本発明の化合物類は、カカオから又はＴｈｅｏｂｒｏｍａ又はＨｅｒｒａｎｉａ ｇｅｎｅｒａ内のいずれかの属から、並びに合成経路からの分離から調製することができる；さらに配糖体類、没食子酸塩類、エステル類等その他のような本発明の化合物類の誘導体類及び合成前駆物質は本発明の化合物類に含まれている。誘導体類はさらに糖又は没食子酸塩成分がＹ若しくはＺの位置の末端単量体上にある、又は置換された糖若しくは没食子酸塩成分がＹ若しくはＺの位置の末端単量体上にある上記の式の化合物類も含むことができる。
【００６４】
例えば、実施例８の方法Ｃは、一定の癌細胞系に対する改良された細胞毒性（図１５Ｍ参照）を引き出すために、本発明の化合物類又はそれらの組み合わせを酸化的に修飾するためのカカオ酵素類の使用について記載している。本発明は、運動学的及び熱力学的因子を考慮に入れて（加水分解に関しては実施例４１も参照）、例えばポリフェノールオキシダーゼ、ぺルオキシダーゼ、カタラーゼの組み合わせ、及び／又はヒドロラーゼ類、エステラーゼ類、レダクターゼ類、トランスフェラーゼ類等のような酵素類及びいずれかの組み合わせを酵素的に用いて本発明の化合物類を酵素的に修飾する（例、化学的に有意な成分の分解又は添加）能力を含んでいる。
【００６５】
本発明の化合物類の合成に関しては、当業者であれば過度の実験を行わなくとも本開示及び現行技術に基づいて追加の合成経路を想起することができるであろう。例えば、高分子化合物類並びに単量体類の注意深い逆合成分析に基づいて。例えば、本発明の化合物類のフェノール性の特性を前提とすると、当業者は例えば集中的、直線的若しくは生物模擬的アプローチ又はそれらの組合せにおいて、過度の実験を行わなくとも本発明の化合物類を調製するための追加の合成方法として合成有機化学の技術における当業者にとって周知の標準的反応と一緒に有機金属の添加、フェノール結合及び光化学反応と結び付けて様々な選択的保護／保護除去の方法を利用することができる。これに関してはＷ．Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ Ｍｏｄｅｒｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｅｓｉｓ（有機合成の数種の現代的方法），３Γｄ ｅｄ.，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８６、及びＪ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（高等有機化学），３ｒｄ ｅｄ.，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９８５，ｃａｎ Ｒｅｎｓｂｕｒｇら，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，２４：７０５−２７０６（Ｄｅｃ．２１，１９９６），Ｂａｌｌｅｎｅｇｇｅｒら，（Ｚｙｍａ ＳＡ）、欧州特許第００９６ ００７ Ｂ１号、及び下記の参考文献に記載の文書を参照として引用するが、これらは全てこれによって参照して本明細書に組み込まれている。
【００６６】
本発明の化合物類の有用性 
本発明の化合物類に関して、驚くべきことに本発明の化合物類は明確な活性を有しており、そうしたものとして本発明の化合物類は下記に記載する様々な疾患状態の治療への幅広い利用可能性を有していることが見出されている。
【００６７】
ＣＯＸ／ＬＯＸ関連性の有用性 
最も優勢な心血管疾患であるアテローム硬化症は心臓発作、卒中及び血管循環問題の主要原因である。アテローム硬化症は、多くの細胞タイプ、生化学的事象及び分子的因子を含有する複雑な疾患である。この疾患、疾患の状態及び疾患の進行には幾つかの態様があり、それらは低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）酸化、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）／リポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）生化学及び一酸化窒素（ＮＯ）生化学の相互依存性の結果によって識別される。
【００６８】
臨床試験は、ＬＤＬの血漿中濃度上昇がアテローム形成の促進と関連していることを堅固に確定している。アテローム硬化症性病変に集積するコレステロールは主としてＬＤＬを含む血漿中リポタンパク質類から生じる。ＬＤＬの酸化はアテローム形成開始における決定的な事象で、スーパーオキシド陰イオン基（O2・−）の産生増強と関連しているO2・−又はその他の反応種（例、・ＯＨ、ＯＮＯＯ・−、脂質ペルオキシ基、銅イオン、及びタンパク質をベースとする鉄）によるＬＤＬの酸化は受容体媒介性エンドサイトーシスによる細胞への取り込みに対するＬＤＬの親和性を低下させる。酸化的に修飾されたＬＤＬはその後、初期アテローム硬化症性病変において観察される「泡沫細胞」に密接に似ている細胞に引き続いて転換するマタロファージによって急速に取り込まれる。
【００６９】
酸化されたリポタンパク質類はさらに、ＬＤＬ粒子内での脂質ヒドロペルオキシド類の形成を通して血管損傷を促進する可能性がある。この事象は不飽和ＬＤＬ脂質類のラジカル連鎖酸化反応を開始させ、従ってマクロファージ取り込みのためにより多くの酸化されたＬＤＬを産生する。
【００７０】
これらのプロセスから酸化されたＬＤＬと一緒に詰め込まれた泡沫細胞の集団的集積は早期の「脂肪線条」を生じさせ、アテローム硬化症のより増悪した複雑な病変に進行し、これは場合によっては冠動脈疾患に至る。
【００７１】
Ｊｅａｎ ＭａｒｘによってＳｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２６５（Ｊｕｌｙ １５，１９９４）の３２０貞で一般的に考察されているように、米国では毎年約３３０，０００人の患者か、危険なアテローム硬化斑によって詰まった（アテローム硬化症）例えば冠動脈のような血管を切開し、それによって正常な血流を回復するために設計された手技である冠動脈及び／又は末梢血管形成術を受けている。これらの患者の大多数では、手術は意図された通りに行われる。しかしこれらの患者の３３％近く（もしかすると一部の評価ではそれ以上かも知れない）は再狭窄を発生し、治療された血管が急速に再び詰まってしまう。これらの患者の状態が血管形成術を受ける以前より良くなることは決してなく、時々は悪化する。血管壁の平滑筋細胞（ＳＭＣｓ）の過度の増殖が再狭窄の一因となるのである。病的ＳＭＣｓ内の酸化されたＬＤＬの集積増加は再狭窄のようなアテローム形成性関連プロセスの一因となるであろう。Ｚｈｏｕら，“Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｐｒｉｏｒ Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ＩｎｆｅｃｔｉｏｎＡｎｄ Ｔｈｅ Ｒｉｓｋ ｏｆ Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ Ａｆｔｅｒ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ａｔｈｅｒｅｃｔｏｍｙ（主要サイトメガロウイルス感染症と冠動脈アテレクトミー後の再狭窄のリスクとの関連性”,Ａｕｇｕｓｔ ２９，１９９６，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３３５：６２４−６３０、及びその中に引用されている文献は、全てが参照として本明細書に組み込まれている。従って、アテローム硬化症に関する本発明の有用性は再狭窄に適用することができる。
【００７２】
本発明の化合物類によるシクロオキシゲナーゼ類（ＣＯＸ；プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ）の阻害に関して、シクロオキシゲナーゼ類が多数の生理学的プロセスに含まれているプロスタグランジン類及びその他のアラキドン酸代謝産物（つまり、エイコサノイド類）の産生における中心酵素類であることは知られている。ＣＯＸ−１は血小板を含む数多くの組織において現れる構成的酵素であるが、他方この酵素の第２イソ型であるＣＯＸ−２は、様々なサイトカイン類、ホルモン類及び発癌プロモーター類によって誘導可能である。ＣＯＸ−１は、血小板凝集に含まれ、引き続いてアテローム硬化症の進行に含まれるトロンボキサンＡ２を産生する。その阻害は心血管疾患への予防的効果にとっての基礎である。
【００７３】
ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の活性はアスピリンや他の非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）によって阻害され、ＮＳＡＩＤの胃の副作用はＣＯＸ−１の阻害に関連すると考えられている。さらに、定期的にＮＳＡＩＤを服用している患者は、これらのタイプの薬剤を投与されていない人に比べて、収縮性結腸直腸癌の危険率が４０〜５０％低いことが分かっている；また、ヒト結腸直腸腺癌の８６％においてＣＯＸ−２ ｍＲＮＡレベルが著明に高い。
【００７４】
ＣＯＸ−２発現細胞系のひとつの重要な特性は、アポトーシス、すなわちプログラムされた細胞死の調節に関与する遺伝子の発現の増強である。いくつかのＮＳＡＩＤかニワトリ胚線維芽細胞における細胞死の増加とアポトーシスの誘発に関連づけられてきた。
【００７５】
細胞のリポキシゲナーゼも、不飽和脂質の過酸化を通してＬＤＬの酸化的変化に関わっている。脂質ペルオキシ基の生成は、不飽和ＬＤＬ脂質のラジカル鎖のさらなる酸化に寄与し、マクロファージ取込みのためのより酸化されたＬＤＬを生じる。
【００７６】
意外にも、本発明の化合物がＣＯＸ／ＬＯＸに関連する疾患の治療において有用性を持つことが分かった。実施例２８では、ＣＯＸは、既知のＮＳＡＩＤ、インドメタシンと同様の濃度の本発明の個々の化合物によって阻害された。
【００７７】
ＣＯＸ阻害のためには、本発明の化合物はｎが２〜１８のオリゴマーである。
【００７８】
好ましい実施態様では、本発明の化合物はｎが２〜１０のオリゴマーであり、より好ましくは本発明の化合物はｎが２〜５のオリゴマーである。
【００７９】
上記に引用したＣＯＸ／ＬＯＸに関する阻害活性を誘発する化合物の例は、上述した二量体、三量体、四量体および五量体を含む。
【００８０】
それ故、推定上のＣＯＸ−２発現結腸癌細胞系への細胞毒性作用と結合した、ＣＯＸ−２への本発明の化合物の重要な潜在的阻害能力を考慮すると、本発明の化合物は、癌へと導く多段階進行の阻害因子としてのアポトーシス活性、ならびに広域スペクトルの予防作用を持つＮＳＡＩＤ属薬剤の成員としての活性を有している（例えば、実施例８、図９Ｄ〜９Ｈ参照）。
【００８１】
さらに、ＣＯＸが触媒する、アラキドン酸からプロスタグランジンＨ2への変換の最後から２番目の産物であるプロスタグランジンは、炎症、痛み、熱、胎児の発育、分娩および血小板凝集に関わっている。それ故、本発明の化合物はＮＳＡＩＤと同じ状態について、例えば心臓血管系疾患や卒中等に対して有効である（実際に、トロンボキサンＡ2の産生を抑える血小板ＣＯＸ−１の阻害が、心臓血管系疾患に対するアスピリンの予防作用の基礎である）。
【００８２】
炎症は損傷に対する生体組織の応答であり、酵素活性化、メディエイタの放出、体液の溢出、細胞移動、組織崩壊と修復という複雑な連続過程を含む。炎症は、ＣＯＸおよびＬＯＸ酵素にとっての基質であるアラキドン酸を遊離させる、ホスホリパーゼＡ2によって活性化される。ＣＯＸはアラキドン酸をプロスタグランジンＰＧＥ2に変換する。プロスタグランジンＰＧＥ２は、急性水腫から慢性関節炎までの範囲にわたる炎症状態において検出される主要なエイコサノイドである。ＮＳＡＩＤによるその阻害は治療のための頼みの綱である。
【００８３】
関節炎は、広い範囲の疾患と病理過程を含み、その大半が関節組織を冒す、リウマチ性疾患のひとつである。これらの疾患によって影響を及ぼされる基礎構造は、滑膜、軟骨、骨、腱、靭帯、および間質組織を含む結合組織である。一時性結合組織症候群は、捻挫と挫傷、腱炎、および腱鞘異常を含む。最も重症の形態の関節炎は、慢性関節リウマチ、変形性関節症、通風および全身性エリテマトサスである。
【００８４】
リウマチ性疾患に加えて、その他の疾患も炎症を特徴とする。歯肉炎および歯周炎も慢性関節リウマチに類似した病理像をたどる。炎症性胞疾患は、腸の特発性慢性炎症状態、潰瘍性大腸炎およびクローン病をさす。脊椎炎は脊椎の関節の慢性炎症をさす。肥満に結びついた変形性関節症の高い発生率も存在する。
【００８５】
従って、本発明の化合物は、炎症、痛み、熱、胎児の発育、分娩および血小板凝集に関わる状態の治療において有用性を持つ。
【００８６】
本発明の化合物によるＣＯＸの阻害は、同時にプロスタグランジン、例えばＰＧＤ2、ＰＧＥ2の形成も阻害することになる。それ故、本発明の化合物はプロスタグランジンＰＧＤ2、ＰＧＥ2に関連する状態の治療において有用性を持つ。
【００８７】
ＮＯに関連する有用性 
酸化窒素（ＮＯ）は、アテローム発生の過程に絶対不可欠に関与する血小板凝集、単球付着と化学走性、および血管平滑筋の増殖を阻害することが知られている。データは、アテローム性動脈硬化症の組織ではその酸素遊離基との反応によりＮＯが減少するという見解を裏付けている。これらの反応によるＮＯの喪失は、血小板および炎症細胞の血管壁への付着増加を導き、ＮＯの弛緩機序をさらに損なうことになる。このようにして、ＮＯの喪失はアテローム発生の過程を促進し、進行性疾患状態へと導く。
【００８８】
高血圧は、卒中、心臓発作、心不全、不規則心拍および腎不全を含む心臓血管系疾患の腫瘍原因である。高血圧とは、血管内の血液の圧が、体内を通って循環する時に正常よりも高い状態である。持続的な期間にわたって収縮期血圧が１５０ｍｍＨｇを越えるか、または拡張期血圧が９０ｍｍＨｇを越えると、身体に損傷が生じる。例えば、過度の拡張期血圧はどこかで血管を破壊することがある。
【００８９】
それが脳内で起これば、卒中が生じる。またアテローム性動脈硬化症を導く可能性のある血管の肥厚や狭窄を引き起こすこともある。高い血圧はまた、血液を駆出する時に高い静止（拡張期）血圧を克服するべく心筋がより激しく働くことになるので、心筋を拡大させる場合もある。この拡大は最終的に不規則心拍あるいは心不全を生じうる。何ら症状を生じさせず、血圧を調べた時にしか検出できないため、高血圧は「サイレントキラー」と呼ばれている。
【００９０】
血圧の調節は、構成Ｃａ+2／カルモジュリン依存性形態の酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）の発現、略してｅＮＯＳをひとつの機序として含む複雑な事象である。この酵素によって生成されるＮＯは脈管の筋弛緩（拡張）を生じさせ、それが血圧を低下させる。ＮＯの産生が阻害因子によってあるいはアテローム性動脈硬化症のような病理状態のために遮断されることにより、ｅＮＯＳによって正常なレベルのＮＯか生成されない時には、血管の筋肉が適切な度合まで弛緩しない。その結果生じる血管収縮は血圧を上昇させ、一部の形態の高血圧症の原因になると考えられる。
【００９１】
血管内皮細胞はｅＮＯＳを含む。ｅＮＯＳによって合成されたＮＯは様々な方向に拡散し、下にある血管平滑筋に達すると、ＮＯはグアニリルシクラーゼのヘム基と結合して、ｃＧＭＰの増加を生じさせる。ｃＧＭＰの増加は細胞内の遊離Ｃａ+2の減少を引き起こす。環状ＧＭＰは、Ｃａ+2トランスポーターをリン酸化するタンパク質キナーゼを活性化して、筋細胞の細胞内構造においてＣａ+2を分離させると考えられる。筋収縮はＣａ+2を必要とするので、Ｃａ+2濃度が低下すると共に収縮力は低下する。筋弛緩は脈管を拡張させ、それによって血圧を低下させる。それ故、ｅＮＯＳの阻害は血圧の上昇を引き起こす。
【００９２】
ＮＯＳ阻害因子の投与によって、あるいはアテローム性動脈硬化症のような病理状態のためにＮＯの産生が遮断されることにより、正常なレベルのＮＯが生成されない時には、血管の筋肉は適切な度合まで弛緩しない。その結果生じる血管収縮は血圧を上昇させ、一部の形態の高血圧症の原因になると考えられる。高血圧患者においてｅＮＯＳの活性を上昇させる治療方法を見いだすことは非常に興味深いが、実際の治療は報告されていない。ニトログリセリンあるいはイソソルビドジニトレートのような、ＮＯを放出することができる薬理物質が、現在もなお血管緊張低下療法の中心である。
【００９３】
本発明の化合物はＬＤＬの酸化を阻害するが、これらの化合物のより包括的な作用は、ＮＯを通してのアテローム性動脈硬化症への多次元的作用である。本発明の化合物によるＮＯの調節は、高血圧の調節、ＮＯが関連する高コレステロール血症の低下、血小板凝集と単球付着の阻害を含めた一連の有益な作用をもたらし、前述したものすべてがアテローム性動脈硬化症の進行に関わっている。
【００９４】
免疫系におけるＮＯの役割は、血管におけるその機能とは異なっている。マクロファージは、ｉＮＯＳと称される、構成性ではなく誘導性の形態のＮＯＳを含む。ｉＮＯＳの転写は、サイトカインと呼ばれる多数の生物学的応答変更因子によって正と負の両方に制御される。最も重要なインデューサーはγ−インターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン１、インターロイキン２、およびグラム陰性菌の細胞壁の成分であるリポ多糖類（ＬＰＳ）である。刺激されたマタロファージは、リボヌタレオチドをＤＮＡ合成に必要なデオキシリボヌクレオチドに転換する酵素、リボヌクレアーゼレダクターゼを阻害するのに十分なＮＯを産生する。ＤＮＡ合成の阻害は、マクロファージやｉＮＯＳを有する他の組織が、速やかに分化する腫瘍細胞あるいは病原菌の増殖を抑制することができる重要な方法であると考えられる。
【００９５】
ＮＯと病原菌の作用に関して、微生物は、個人の身体接触や損傷、習慣、職業、環境を反映する感染過程、ならびに不適切な保管、取扱いおよび汚染から生じる食物由来の疾患において重要な役割を果たす。
【００９６】
本発明の化合物、それらの組合せおよびそれらを含む組成物は、ＮＯ濃度の調節に関連する状態の治療において有用である。実施例９は、本発明の化合物の抗酸化作用（遊離基の阻害因子としての）について記述している。ＮＯは遊離基であり、本発明の化合物は強力な抗酸化剤であるので、本発明の化合物をｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの実験モデルに投与すると、ＮＯレベルの低下を生じさせるであろうと考えられた。ＮＯの低下は降圧作用ではなく昇圧作用を生じさせるはずである。予想に反して、本発明の化合物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験からはＮＯの上昇を誘発し、ｉｎ ｖｉｖｏ試験からは降圧作用を生じさせた（実施例３１および３２）。これらの結果は予期されておらず、全く予想外であった。
【００９７】
実施例２７は、本発明の化合物とグルコースを含む溶液を摂取した直後のエリシマ（ｅｒｙｔｈｍｉａ：顔面潮紅）について記述しており、従って血管拡張作用を意味する。
【００９８】
実施例３１は、ｉｎ ｖｉｖｏの動物モデルで本発明の化合物によって誘発される降圧作用について記述しており、高血圧の治療における本発明の化合物の効果を明らかにしている。この実施例では、本発明の化合物、それらの組合せおよびそれらを含む組成物は、ｎが２〜１８、好ましくはｎが２〜１０であるオリゴマーを含む。
【００９９】
実施例３２は、ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルでの本発明の化合物によるＮＯ産生の調節を述べている。この実施例では、本発明の化合物、それらの組合せおよびそれらを含む組成物は、ｎが２〜１８、このましくはｎが２〜１０であるオリゴマーを含む。
【０１００】
さらに、実施例３５は、ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ／ＭＳによって検出されるＣｕ+2−、Ｆｅ+2−およびＦｅ+3−オリゴマー複合体の形成についての証拠を提供している。これらの結果は、本発明の化合物が銅及び／又は鉄イオンと結合して、ＬＤＬ酸化へのそれらの作用を最小限に抑えることができることを示唆している。
【０１０１】
さらに、本発明の化合物は、感染の治療および食物腐敗の予防のために有用な抗菌作用を持つ。実施例２２および３０は、以下に略述するような、臨床的におよび食物にとって重要性を持ついくつかの代表的な微生物相に対する本発明の化合物の抗菌作用を述べている。
【０１０２】
2011006427.tif 000009
【０１０３】
実施例３３は、マクロファージのＮＯ産生への本発明の化合物の作用について記述している。この実施例において、その結果は、本発明の化合物が、リポ多糖類（ＬＰＳ）あるいはサイトカインによる刺激から独立する場合とそれに依存する場合のいずれにも、単球／マクロファージのＮＯ産生を誘発することを明らかにしている。ＮＯを産生するマクロファージは病原菌の増殖を抑制することができる。
【０１０４】
抗菌作用を誘発する本発明の化合物は、ｎが２〜１８であるオリゴマー、好ましくはｎが２、４、５、６、８および１０であるオリゴマーである。
【０１０５】
上記に引用したＮＯに関する抗菌作用を誘発する化合物の例は、上に論じた二量体、四量体、六量体、八量体および十量体である。
【０１０６】
制癌有用性 
癌は３つのグループに分類される：癌腫、肉腫およびリンパ腫。癌腫は、皮膚、様々な器官の内層、腺および組織において発生する悪性疾患である。肉腫は、骨、筋肉あるいは結合組織において生じる悪性疾患である。３番目のグループは白血病とリンパ腫を含む。これらはいずれも血球形成器官内で発現するからである。癌の主要な種類は、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、膀胱癌、非ホジキン型リンパ腫、子宮癌、皮膚の黒色腫、腎臓癌、白血病、卵巣癌および膵癌である。
【０１０７】
癌の発現は、遺伝性の遺伝因子、電離放射線、汚染物質、ラドン、およびＤＮＡに対する遊離基の損傷のような多くの因子によって引き起こされる、細胞のＤＮＡに対する変性から生じる。突然変異を生じた細胞は、細胞分裂の定められた過程に欠陥を生じさせる。これらの細胞はアポトーシス（プログラムされた細胞の死）を受けることができずに分裂を続け、悪性腫瘍の起始を示すか、あるいは時間を経て悪性疾患に至るより多くの突然変異を生じさせる。
【０１０８】
多くの異なる癌に共通する３つの主要な特徴がある。それは、（１）無限に増殖することができる能力；（２）周辺組織への腫瘍の侵襲；および（３）転移の過程である。
【０１０９】
ある種の癌は特徴的な方法で転移する。例えば、甲状腺、肺、乳房、腎、および前立腺の癌は、しばしば骨に転移する。肺癌は一般に脳や副腎に広がり、結腸直腸癌はしばしば肝に転移する。白血病は、発症の時点で全身性疾患とみなされ、身体全体の骨髄において認められる。
【０１１０】
意外にも、本発明の化合物は上述した様々な癌の治療において有用であることが見出された。実施例６、７、８および１５は、ヒトＨｅＬａ（頚部の）、前立腺、乳房、腎、Ｔ細胞性白血病および結腸癌細胞系に対する制癌作用を誘発する本発明の化合物を述べている。実施例１２（図２０）は、ＨＰＬＣによって十分に精製された、オリゴマー（二量体〜十二量体）のプロシアニジンで処理したＨｅＬａおよびＳＫＢＲ−３乳癌細胞系への用量反応作用を例示している。これらの癌細胞系に対する細胞毒性は、五量体から十二量体までのプロシアニジンに依存し、より低いオリゴマーは作用を示さなかった。
【０１１１】
何らかの理論に結びつけるのは望むところではないが、上述した作用を説明する最小限の構造モチーフが存在すると思われた。実施例３７も、ネコリンパ芽球様癌細胞株に対するより高いオリゴマー（五量体〜十量体）の同様の細胞毒性作用を示している。より高いオリゴマーに関しては、正常イヌおよびネコ細胞系に対しても細胞毒性作用が観察された（図５８〜６１）。
【０１１２】
実施例８（図９Ｄ〜Ｈ）において、本発明の化合物は、推定上のＣＯＸ−２発現ヒト結腸癌細胞系（ＨＣＴ １１６）に対する細胞毒性を誘発することが示された。
【０１１３】
実施例９は本発明の化合物による抗酸化作用について記述している。本発明の化合物は、ＤＮＡ鎖の破壊、ＤＮＡ−タンパク質の架橋結合、およびヌクレオチドの遊離基酸化を阻害し、突然変異の発生を減少させる及び／又は予防する。
【０１１４】
実施例１０は、ドキソルビシンのような化学療法剤の標的である、トポイソメラーゼＩＩ阻害因子としての本発明の化合物について記述している。
【０１１５】
実施例２１は、ヌードマウスモデル（マウスの平均体重は２５ｇである）においてヒト乳癌細胞系（ＭＤＡ−ＭＡＢ−２３１／ＬＣＣ６）に対する抗腫瘍作用を誘発した、実質的に純粋な五量体のｉｎ ｖｉｖｏ作用を述べている。より高い用量（５ｍｇ）で五量体に関するｉｎ ｖｉｖｏ実験を反復したが、不慮の動物毒性により完全には成功しなかった。現在のところ、この毒性は本発明の化合物の血管拡張作用に関連するものと考えられる。
【０１１６】
実施例３３は、マクロファージのＮＯ産生への本発明の化合物の影響を述べている。ＮＯを産生するマクロファージは、速やかに分裂する腫瘍細胞の増殖を阻害することができる。
【０１１７】
さらに、本発明は、アポトーシスによる細胞増殖の阻害を誘発するための本発明の化合物の使用を含む。
【０１１８】
抗癌作用のためには、本発明の化合物は、ｎが２〜１８、例えば３〜１２のような３〜１８であるオリゴマーであり、好ましくはｎが５〜１２、最も好ましくはｎが５であるオリゴマーである。
【０１１９】
上記に引用した癌に関する阻害作用を誘発する化合物は、上に論じた五量体から十二量体までを含む。
【０１２０】
製剤および方法 
それ故、集合的に、本発明の化合物、それらの組合せおよびそれらを含む組成物は、アテローム性動脈硬化症、心臓血管系疾患、癌、血圧調節及び／又は高血圧、炎症性疾患、病原菌および食物腐敗のいくつかの面に対して広い範囲の活性を示した。
【０１２１】
それ故、本発明の化合物、それらの組合せおよびそれらを含む組成物は、トロンボキサンＡ2の形成を阻害することによって血小板凝集に影響を及ぼし、それによって血栓症の危険性を低下させる、ＣＯＸ阻害物質である。さらに、ＣＯＸの阻害は血小板および炎症細胞の血管壁への付着を低下させ、ＮＯの緊張低下機序の改善を導く。既知のＮＳＡＩＤ、インドメタシンと同様の濃度でのＣＯＸの阻害と結びついたこれらの結果は、抗血栓効果を示唆している。
【０１２２】
さらに、本発明の化合物、それらの組合せおよびそれらを含む組成物は、超酸化物陰イオンラジカルおよびリポキシゲナーゼ媒介の脂質過酸化物ラジカルのレベルを低下させることによってＬＤＬの酸化を阻害する抗酸化剤である。この段階でのＬＤＬ酸化の阻害は、マクロファージの活性化を遅らせ、泡沫細胞の形成を遅延させて、アテローム性動脈硬化症のさらなる進行を妨げる。ＬＤＬ酸化の阻害はまた、再狭窄の進行も遅らせることができる。それ故、本発明の化合物またはそれらの組合せ、あるいは本発明の化合物またはそれらの組合せを含む組成物は、アテローム性動脈硬化症及び／又は再狭窄の予防及び／又は治療のために使用することができる。またそれ故、本発明の化合物は、再狭窄を生じやすい患者において再狭窄を予防あるいは治療するための血管形成術あるいは同様の手法の前あるいは後に投与することができる。
【０１２３】
再狭窄及び／又はアテローム性動脈硬化症の治療あるいは予防のために、本発明の化合物あるいは本発明の化合物を含む組成物は、単独であるいは他の治療と共に、この開示と当分野で知識から、例えば再狭窄及び／又はアテローム性動脈硬化症の最初の徴候あるいは症状が現われた時、血管形成術の直前、同時あるいは術後に、あるいはその後医療当業者が所望にするできるだけ早い時点で、余計な実験を必要とせずに、医療当業者の所望に応じて投与することができる；また本発明の化合物あるいはその組成物の単独あるいは他の治療と併せての投与は、例えば月に１回、月に２回、年に２回、年に１回のレジメンで、あるいは他の何らかのレジメンで、何ら余計な実験を必要とせずに、医療当業者により必要に応じた期間継続することができる。
【０１２４】
さらに、本発明の化合物、それらの組合せおよびそれらを含む組成物は、ｉｎ ｖｉｖｏで降圧作用を生じ、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＮＯを誘発することが示された。これらの結果は、高血圧の治療、およびＮＯレベルが著しく低下する、高コレステロール血症を含む臨床状態において実際的な適用を有する。
【０１２５】
本発明の化合物、それらの組合せおよびそれらを含む組成物の製剤は、製薬、食品科学、医学および獣医学の当業者には周知の標準的手法を用いて、活性化合物の即時あるいは遅延放出のための液体、懸濁液、錠剤、カプセル、注射液あるいは坐剤の形態で調製することができる。
【０１２６】
担体もポリマー遅延放出系と考えられる。合成ポリマーは、制御された放出を行う組成の製剤において特に有用である。この初期の例が、Ｋｒｅｕｔｅｒ，Ｊ．，Ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ ａｎｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｍ．Ｄｏｎｂｒｏｗ（編集），ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，ｐ．１２５−１４８が報告した、いわゆるナノ微粒子を形成する１ミクロン以下の直径を持った球体への、メチルメタクリレートの重合作用であった。
【０１２７】
薬剤のため、また細菌では抗原のための担体として頻繁に選択されるのは、ポリ（ｄ，１−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）である。これは、受食性縫合、骨板および他の一時的プロテーゼにおける医療用途の長い歴史を持ち、全く毒性を示さなかった生分解性ポリエステルである。極めて多様な薬剤がＰＬＧＡマイクロカプセルに製剤されてきた。例えば、Ｅｌｄｒｉｄｇｅ，Ｊ．Ｈ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ iｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９８９，１４６：５９−６６が検討したように、ＰＬＧＡの適合に関して多くのデータが蓄積されている。直径１〜１０ミクロンのＰＬＧＡマイクロスフェアのエントラップメントは、経口投与された時に作用を及ぼすことができる。ＰＬＧＡのマイクロ被包工程は、油中水型乳剤の相分離を用いる。本発明の化合物を水溶液として調製し、ＰＬＧＡを塩化メチレンや酢酸エチルのような適当な有機溶媒に溶解する。これら２つの不混和性溶液を高速撹拌によって同時乳化する。次にポリマーのための非溶媒を加え、水滴の周囲で沈殿を生じさせ、胚状マイクロカプセルを形成させる。マイクロカプセルを収集し、一連の作用物質（ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ゼラチン、アルキン酸塩、メチルセルロース）のひとつで安定化させ、溶媒を真空内で乾燥させるか溶媒抽出することによって除去する。
【０１２８】
さらに、遅効性製剤の調製に関しては、参照してここに組み込まれる米国特許第５，０２４，８４３号、５，０９１，１９０号、５，０８２，６６８号、４，６１２，００８号および４，３２７，７２５号が参照できる。
【０１２９】
さらに、対象とするカカオ遺伝子型の同定と結合した選択的処理工程を使用して、上述した疾患状態のための治療の必要に応じて患者に活性化合物を供給送達するための賦形剤として、ならびに保存されたレベルの本発明の化合物を供給送達するための手段として、同一性基準（Ｓｔａｎｄａｒｄ−ｏｆ−Ｉｄｅｎｔｉｔｙ（ＳＯＩ））および非ＳＯＩチョコレート製品を調製することができた。
【０１３０】
これに関して、１９９６年９月６日に出願された、同時係属中の米国特許出願第０８／７０９，４０６号が参照でき、これは参照してここに組み込まれる。ＵＳＳＮ第０８／７０９，４０６号は、独自の組合せの加工処理段階を用いてカカオ豆から保存されたレベルのポリフェノールを含むカカオバター及び／又は固体のカカオを生成する方法に関する。この方法は、別途の豆のロースティングあるいは液体ミル装置（粉砕・撹拌・泡立て装置）を必要とせず、カカオ豆を長時間強い熱処理にかけずに、及び／又は脂肪の溶媒抽出を使用せずに加工処理する選択肢を可能にする。この工程の有益性は、従来のカカオの加工処理で認められたのと異なって、ポリフェノールの保存が高められていることであり、加工処理後に得られるポリフェノールの量に対する処理していない豆で認められるポリフェノールの最初の量の比率は２またはそれ以下である。
【０１３１】
本発明の組成物は、製薬学的に許容される担体あるいは賦形剤を含む製剤中に上述した化合物の１つ以上を含有し、かかる本発明の化合物は抗癌、抗腫瘍あるいは抗新生物作用、抗酸化作用を持つ。本発明の組成物はＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ酵素を阻害し、ＤＮＡへの酸化損傷を阻害し、単球／マクロファージのＮＯ産生を誘発し、抗菌、シクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ、ＮＯまたはＮＯシンターゼ、アポトーシス、血小板凝集ならびに血中またはｉｎ ｖｉｖｏグルコース調節作用を有し、非ステロイド系抗炎症薬としての効果を持つ。
【０１３２】
本発明のもうひとつの実施形態は、製薬学的に許容される担体あるいは賦形剤に加えて、本発明の化合物あるいはそれらの組合せ、ならびに少なくともひとつの追加的な抗新生物、血圧低下、抗炎症、抗菌、抗酸化および造血薬を含む。
【０１３３】
そのような組成物は、本文中のデータ、ならびに特定の被験者あるいは患者の年齢、性別、体重、遺伝および状態のような要素、投与経路、特定のオリゴマーの相対的濃度、ならびに毒性（例えば、ＬＤ50）を考慮に入れて、医療、栄養あるいは獣医学の当業者には周知の用量と手法で、必要に応じて被験者あるいは患者に投与することができる。
【０１３４】
かかる組成物は、他の抗新生物、抗腫瘍あるいは抗癌薬、抗酸化薬、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ酵素阻害剤、酸化的に損傷されたＤＮＡあるいはシクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼの阻害剤、アポトーシス、血小板凝集、血中またはｉｎ ｖｉｖｏグルコースあるいはＮＯあるいはＮＯシンターゼの調節薬、非ステロイド系抗炎症薬、及び／又は抗新生物、抗腫瘍あるいは抗癌薬、抗酸化薬、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ酵素阻害剤、酸化的に損傷されたＤＮＡの阻害剤、あるいはシクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ、アポトーシス、血小板凝集、血中またはｉｎ ｖｉｖｏグルコースあるいはＮＯあるいはＮＯシンターゼの調節薬、及び／又は非ステロイド系抗炎症薬の好ましくない作用を軽減するあるいは緩和する薬剤を、特定の被験者あるいは患者の年齢、性別、体重、遺伝および状態、ならびに投与経路を考慮に入れて、同時投与するあるいは連続的に投与することができる。
【０１３５】
ヒトあるいは家畜用の本発明の組成物の例は次のものを含む：例えばカプセル、錠剤、丸剤等のような固体あるいは液体剤型、ならびに本発明が可食ソース（例えば、カカオあるいはチョコレートフレーバーの固体あるいは液体組成物）由来であることから本発明が非常に適していると考えられるチュアブルの固体あるいは飲料剤型のような、経口投与のための可食組成物；懸濁液、シロップあるいはチンキのような、開口部、例えば口、鼻、肛門、膣等の投与のための液体製剤（カカオあるいはチョコレートフレーバーの組成物を含む）；ならびに、滅菌懸濁液あるいは乳剤のような、非経口、皮下、皮内、筋肉内あるいは静脈内投与（例えば注射投与）のための製剤。しかし、組成物中の有効成分はタンパク質と結合する可能性があり、血流中に投与した時、血中タンパク質の沈降反応のために凝固が起こりうる；当業者はこの点を考慮に入れなければならない。
【０１３６】
そのような組成物においては、活性なカカオ抽出物を、滅菌水、生理食塩水、グルコース、ＤＭＳＯ、エタノール等のような適当な担体、希釈液あるいは賦形剤と混合することができる。本発明の活性なカカオ抽出物は、例えば等張の水性、塩類、グルコースあるいはＤＭＳＯ緩衝液中で還元するための凍結乾燥形態で提供することができる。一部の塩類溶液では、何らかの沈降反応が認められている；この所見は、例えば「塩析（ｓａｌｔｉｎｇ ｏｕｔ）」手法によって本発明の化合物を分離するための手段として用いることができる。
【０１３７】
実施例３８は、製薬、栄養補助および食品領域における適用のための錠剤形態の本発明の化合物の調製を述べている。さらに、実施例３９は、同様の適用のためのカプセル剤型の本発明の化合物の調製を述べている。さらに、実施例４０は、参照してここに組み込まれる、同時係属中の米国特許出願第０８／７０９，４０６号に述べられている方法から得られる、本発明の化合物あるいはカカオ固体を含む同一性基準（Ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ Ｉｄｅｎｔｉｔｙ（ＳＯＩ）および非ＳＯＩチョコレートの製剤を述べている。
【０１３８】
キット 
さらに、本発明はまた、活性カカオ抽出物を提供するキットを含む。キットは、適当な担体、希釈液、あるいは賦形剤を含む別途の容器を含みうる。キットはまた、追加的な抗癌、抗腫瘍あるいは抗新生物薬、抗酸化薬、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ酵素阻害剤、あるいは酸化によるＤＮＡ損傷の阻害剤、あるいは抗菌薬、あるいはシクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ、ＮＯまたはＮＯシンターゼ非ステロイド系抗炎症薬、アポトーシスおよび血小板凝集の調節薬あるいは血中またはｉｎ ｖｉｖｏグルコースの調節薬、及び／又は抗新生物、抗腫瘍あるいは抗癌薬、抗酸化薬、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ酵素阻害剤あるいは抗菌薬、シクロオキシゲナーゼ及び／又はリポキシゲナーゼ、ＮＯあるいはＮＯシンターゼ、アポトーシス、血小板凝集および血中またはｉｎ ｖｉｖｏグルコースの調節薬及び／又は非ステロイド系抗炎症薬の好ましくない作用を軽減するあるいは緩和する薬剤を、同時投与あるいは連続投与のために含むことができる。追加薬剤は、別途の容器であるいは活性カカオ抽出物と混合して供給することができる。さらに、キットは、成分の混合あるいは組合せのため及び／又は投与のための指示を含みうる。
【０１３９】
遺伝子の同定 
本発明のさらなる実施形態は、本発明の化合物あるいは化合物の組合せによる緊密な細胞接触の結果として発現される遺伝子の調節を含む。それ自体として、本発明は、アテローム性動脈硬化症、高血圧、癌、心臓血管系疾患および炎症を含むがそれらに限定されないいくつかの疾患に関連する、本発明の化合物あるいは化合物の組合せによって誘発されるあるいは阻害される遺伝子の同定のための方法を含む。特に、「正常な」非疾患状態での発現に比べて、これらの疾患状態では異なって発現される遺伝子が、本発明の化合物あるいは化合物の組合せによる接触の前後に同定され、記述される。
【０１４０】
これまでに論じてきたように、これらの疾患および疾患状態は、一部には、様々な生物分子と遊離基との相互作用に基づく。これらの疾患における中心的な問題は、遊離基の反応の多くが反応性酸素種を含み、それらが順次疾患の進行に関わる生理的状態を誘発することである。例えば、反応性酸素種は核因子（ＮＦ）−κＢのような転写因子の調節に関連づけられてきた。ＮＦ−κＢの標的遺伝子は、統合された炎症反応に結びつく一連の遺伝子を含む。これらは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、誘発性ＮＯＳ、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）タラスＩ抗原その他をコードする遺伝子を含む。また、転写因子の作用を調節する遺伝子は、順次、酸化ストレスによって誘発されると考えられる。酸化ストレスはラジカル捕捉系とラジカル生成系との間の不均衡である。これらの状態の既知の例の一部（ＷｉｎｙａｒｄとＢｌａｋｅ，１９９７）はｇａｄｄ１５３（成長停止とＤＮＡ損傷によって誘発される遺伝子）を含み、この物質は、ＮＦ−ＩＬ６と結合して、ＤＮＡと結合することのできないヘテロダイマーを形成することが示されている。ＮＦ−ＩＬ６は、インターロイキン６および８をコードする遺伝子を含めて、いくつかの遺伝子の発現を下方調節する。酸化ストレス誘発性遺伝子のもうひとつの例は、成長停止において転写因子ｐ５３の作用を調節するｇａｄｄ４５である。ｐ５３は、細胞分裂を停止させ、アポトーシスを受ける異常細胞（例えば癌）を誘発することかできるｐ５３タンパク質をコードする。
【０１４１】
一部は遊離基の機序に基づく多様な疾患における使用のための、本発明の化合物あるいは化合物の組合せの意外な、明白ではない新規の有用性の豊富さを考慮して、本発明はさらに、遺伝子発現アッセイを用いて、特定疾患あるいは疾患状態のｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏ動物モデルでの本発明の化合物による遺伝子あるいは遺伝子産物への一時的作用を調べるための戦略を含む。これらのアッセイは次のものを含むがそれらに限定されない：鑑別ディスプレイ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｄｉｓｐｌａｙ）、ｃＤＮＡライブラリーの配列決定法、遺伝子発現の系列分析（ＳＡＧＥ）、高密度オリゴヌクレオチド配列とのハイブリダイゼーションによる発現モニタリング、および様々な逆転写酵素−ポリメリゼーション連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）に基づくプロトコールあるいはそれらの組合せ（Ｌｏｃｋｈａｒｔら、１９９６）。
【０１４２】
遺伝学的評価過程と結合した、本発明の化合物あるいは本発明において具体化される化合物の組合せの包括的な生理学的作用は、誘発されるあるいは阻害される、既知あるいは新規の遺伝子および遺伝子産物の発見を可能にする。例えば、本発明は、ＲＴ−ＰＣＲを用いた、リンパ球におけるｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでのサイトカイン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２およびＴＮＦ−α）の誘発及び／又は阻害を含む。同様に、本発明は、刺激条件及び／又は酸化剤刺激条件（例えばＴＮＦ−αあるいはＨ2Ｏ2）での心臓血管系領域についての選択遺伝子（例えばスーパーオキシドジスムターゼ、ヘムオキシダーゼ、ＣＯＸ １と２、およびその他の酸化防御遺伝子）の誘発及び／又は阻害を確認するための鑑別ディスプレイの適用を含む。
【０１４３】
癌領域については、本発明は、対照と酸化ストレスを与えた細胞における、ＣｕＺｎ−スーパーオキシドジスムターゼ、Ｍｎ−スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ等々のような遺伝子あるいは遺伝子産物の誘発及び／又は阻害を確認するための鑑別ディスプレイの適用を含む。
【０１４４】
以下の非制限的実施例は、例示のためにのみ示すものであって、本発明を制限するものとみなしてはならず、その真意あるいは範囲から逸脱することなく多くの明白な変形が可能である。
【実施例１】
【０１４５】
実施例１： カカオ源および調製方法 カカオの３つの認知されている園芸種（Ｅｎｒｉｑｕｅｓ，１９６７；Ｅｎｇｅｌｓ，１９８１）を代表するいくつかのテオブロマ（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ）カカオ遺伝子型が、世界の３つの主要カカオ生産源から得られる。この研究に使用されるそれらの遺伝子型のリストが表１に示されている。採収されたカカオの莢を開き、果肉付きの豆を取り出して凍結乾燥した。凍結乾燥塊（ｍａｓｓ）から果肉を手で取り、豆を下記のように分析にかけた。未発酵の凍結乾燥カカオ豆を、初めに手で外皮を取り、ＴＥＫＭＡＲミルで粉砕して微粉末塊にした。次に、得られる塊を、溶剤として再蒸留ヘキサンを用いて、Ｓｏｘｈｌｅｔ抽出によって一晩脱脂した。周囲温度において、真空によって、残留溶剤を脱脂塊から除去した。
【０１４６】
表１： テオブロマカカオ源物質の記載
【表１】
2011006427.tif 000010
【０１４７】
実施例２： プロシアニジン抽出手順
Ａ．方法１ 
ＪａｌａｌおよびＣｏｌｌｉｎ（１９７７）によって記載されている方法の改良法を用いて、実施例１の脱脂、未発酵、凍結乾燥カカオ豆から、プロシアニジンを抽出した。２×４００ｍＬの７０％アセトン／脱イオン水、続いて４００ｍＬの７０％メタノール／脱イオン水を用いて、プロシアニジンを、脱脂カカオ塊の５０ｇバッチから抽出した。抽出物を溜め、溶剤を、部分真空に維持した回転蒸発器を用いて４５℃において蒸発させることによって除去した。得られる水性相を、脱イオン水でＩＬに稀釈し、４００ｍＬのＣＨＣｌ３で２回抽出した。溶剤相を捨てた。次に、水性相を５００ｍＬ酢酸エチルで４回抽出した。生じるエマルジョンを、２０００×ｇにおいて３０分間、１０℃で操作されるＳｏｒｖａｌｌ ＲＣ ２８Ｓ遠心機による遠心分離によって砕いた。合わせた酢酸エチル抽出物に、１００〜２００ｍＬの脱イオン水を加えた。溶剤を、部分真空に維持した回転蒸発器を用いて４５℃蒸発させることによって除去した。得られる水性相を、液体Ｎ2中で凍結し、続いて、ＬＡＢＣＯＮＣＯ凍結乾燥システムによって凍結乾燥した。種々のカカオ遺伝子型から得られる粗プロシアニジンの収量を、表２に示す。
【０１４８】
表２： 粗プロシアニジン収量
【表２】
2011006427.tif 000011
【０１４９】
Ｂ．方法２ 
あるいは、７０％水性アセトンを用いて、実施例１の脱脂、未発酵、凍結乾燥カカオ豆から、プロシアニジンが抽出される。１０ｇの脱脂物質を、溶剤１００ｍＬを用いて、５〜１０分間でスラリーにした。スラリーを、４℃で３０００×ｇにおいて１５分間遠心分離し、上清をグラスウールに通した。濾液を、部分真空下に蒸留し、得られる水性相を、液体Ｎ2中において凍結し、続いて、ＬＡＢＣＯＮＣＯ凍結乾燥システムによって凍結乾燥した。粗プロシアニジンの収率は、１５〜２０％の範囲であった。
【０１５０】
どのような特定の理論にも縛られるものではないが、粗収率の差は、種々の遺伝子型、地理的起源、園芸種、および調製方法における違いを反映したものであると考えられる。
【０１５１】
実施例３： カカオプロシアニジンの部分精製 
Ａ． ゲル透過クロマトグラフィー 
実施例２から得られるプロシアニジンを、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０（２８×２．５ｃｍ）での液体クロマトグラフィーによって、部分精製した。脱イオン水からメタノールへの段階勾配によって、分離を補助した。初期勾配組成物は脱イオン水中１５％メタノールで開始し、それに続いて、３０分毎に段階的に、脱イオン水中２５％メタノール、脱イオン水中３５％メタノール、脱イオン水中７０％メタノール、および最終的に１００％メタノールであった。キサンチンアルカロイド（カフェインおよびテオブロミン）の溶離後の流出液を、単一フラクションとして収集した。該フラクションは、キサンチンアルカロイドを含まないサブフラクション（ｓｕｂｆｒａｃｔｉｏｎ）を生じ、これをさらにサブフラクション化（ｓｕｂｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ）して、ＭＭ２Ａ〜ＭＭ２Ｅで示される５つのサブフラクションを生じた。部分真空に維持した回転蒸発器による４５℃での蒸発によって、各々のサブフラクションから溶剤を除去した。得られる水性相を、液体Ｎ2中において凍結し、ＬＡＢＣＯＮＣＯ凍結乾燥システムによって、一晩、凍結乾燥した。フラクション化を示す代表的ゲル透過クロマトグラムを、図１に示す。約１００ｇの物質が、この方法によってサブフラクション化された。
【０１５２】
クロマトグラフィー条件： 
カラム；２８×２．５ｃｍ Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０
移動相；メタノール／水の段階勾配、３０分毎の段階１５：８５、２５：７５、３５：６５、７０：３０、１００：０
流速；１．５ｍＬ／分
検出器;λ1＝２５４ｎｍおよびλ2＝３６５ｎｍにおけるＵＶ、チャート（ｃｈａｒｔ）速度：０．５ｍｍ／分
カラム充填量；１２０ｍｇ。
【０１５３】
Ｂ． 半分取高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ） 
方法１． 逆相分離 
実施例２及び／又は３Ａから得られるプロシアニジンを、半分取ＨＰＬＣによって部分的に精製した。可変波長検出器、１ｍＬ注入ループを有するＲｈｅｏｄｙｎｅ ７０１０注入バルブを備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ １０５０ ＨＰＬＣシステムを、Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＦＲＡＣ−１００フラクションコレクターと結合させた。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ １カラムと連結したＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｕｌｔｒａｃａｒｂ離を行った。移動相組成は、下記線状勾配条件下において使用されるＡ＝水；Ｂ＝メタノールであった：［時間、％Ａ］；５ｍＬ／分の流速において、（０，８５）、（６０，５０）、（９０，０）、および（１１０，０）。２５４ｎｍにおけるＵＶによって、化合物が検出された。
【０１５４】
代表的半分取ＨＰＬＣ痕跡を、フラクションＤ＋Ｅに存在するプロシアニジンの分離に関して、図１５Ｎに示す。個々のピークまたは選択クロマトグラフィー領域か、さらなる精製およびその後の評価のために、設定された時間間隔において、または手動で、フラクション収集によって収集された。注入充填量は、材料の２５〜１００ｍｇの範囲であった。
【０１５５】
方法２． 標準相分離 
実施例２及び／又は３Ａから得られるプロシアニジン抽出物を、半分取ＨＰＬＣによって部分的に精製した。Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ １０５０ ＨＰＬＣシステム、２５４ｎｍに設定されたＭｉｌｌｉｐｏｒｅ−Ｗａｔｅｒｓモデル４８０ＬＣ検出器を、ピークモードに設定されたＰｈａｒｍａｃｉａ Ｆｒａｃ−１００フラクションコレクターと結合させた。Ｓｕｐｅｌｃｏ ５μｍ Ｓｕｐｅｌｇｕａｒｄ ＬＣ−Ｓｉガードカラム（２０×４．６ｍｍ）と連結したＳｕｐｅｌｃｏ５μｍ Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−Ｓｉカラム（２５０×１０ｍｍ）によって、分離を行った。プロシアニジンを下記条件下の線状勾配によって溶離した：（時間、％Ａ、％Ｂ）；（０，８２，１４）、（３０，６７．６，２８．４）、（６０，４６，５０）、（６５，１０，８６）、（７０，１０，８６）、それに続く１０分間の再平衡化。移動相組成は、Ａ＝ジクロロメタン；Ｂ＝メタノール；およびＣ＝酢酸：水（１：１）であった。３ｍＬ／分の流速が用いられた。２５４ｎｍにおけるＵＶによって成分が検出され、Ｋｉｐｐ ＆ Ｚｏｎａｎ ＢＤ４１レコーダーに記録された。注入容量は、０．２５ｍＬの７０％水性アセトンに溶解したプロシアニジン抽出物１０ｍｇの１００〜２５０μＬの範囲であった。代表的半分取ＨＰＬＣ痕跡を、図１５０に示す。個々のピークまたは選択クロマトグラフィー領域が、さらなる精製および後の評価のために、設定された時間間隔において、または手動で、フラクション収集によって収集された。
【０１５６】
ＨＰＬＣ条件：
２５０×１０ｍｍ Ｓｕｐｅｌｃｏ ＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌＬＣ−Ｓｉ（５μｍ）半分取カラム
２０×４．６ｍｍ Ｓｕｐｅｌｃｏ ＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌＬＣ−Ｓｉ（５μｍ）ガードカラム
検出器： Ｗａｔｅｒｓ ＬＣ分光光度計モデル４８０ ＠ ２５４ｎｍ
流速： ３ｍＬ／分、
カラム温度： 周囲温度、
注入： ２５０μＬの７０％水性アセトン抽出物：
2011006427.tif 000012
【０１５７】
得られたフラクションは以下の通りであった：
2011006427.tif 000013
【０１５８】
実施例４： プロシアニジン抽出物の分析ＨＰＬＣによる分析
方法１． 逆相分離 
実施例３から得られるプロシアニジン抽出物を、０．４５μフィルターで濾過し、ダイオードアレイ検出器およびＨＰモデル１０４６Ａプログラム制御蛍光検出器を取り付けたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ １０９０ ３元ＨＰＬＣシステムによって、分析した。Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ ５μ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳカラム（２００×２．１ｍｍ）において、４５℃で分離を行った。フラボノールおよびプロシアニジンを、６０％ＢからＡの線状勾配によって溶離し、続いて、流速０．３ｍＬ／分においてＢでカラムを洗浄した。移動相組成は、Ｂ＝メタノール中０．５％酢酸、およびＡ＝ナノ純水（ｎａｎｏｐｕｒｅ ｗａｔｅｒ）中０．５％酢酸であった。ＡおよびＢにおける酢酸濃度は、２％まで増加することができる。λex＝２７６ｎｍ、およびλex＝３１６ｎｍの蛍光、ならびに２８０ｎｍのＵＶによって、成分を検出した。（＋）−カテキンおよび（−）−エピカテキンの濃度を、参考標準溶液との比較によって求めた。プロシアニジン濃度は、（−）−エピカテキンの応答因子を用いて推定された。種々の成分の分離を示す代表的ＨＰＬＣクロマトグラムを、１つのカカオ遺伝子型に関して、図２Ａに示す。類似したＨＰＬＣプロフィールが、他のカカオ遺伝子型からも得られた。
【０１５９】
ＨＰＬＣ条件：
カラム： ２００×２．１ｍｍ Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ（５μ）
ガードカラム： ２０×２．１ｍｍ ＨｅｗｌｅｔｔＰａｃｋａｒｄ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ（５μ）
検出器： ダイオードアレイ ＠２８０ｎｍ
蛍光 λex＝２７６ｎｍ；λem＝３１６ｎｍ
流速： ０．３ｍＬ／分
カラム温度：４５℃
2011006427.tif 000014
【０１６０】
方法２． 標準相分離 
実施例２及び／又は３から得られるプロシアニジン抽出物を、０．４５μフィルターで濾過し、ＨＰモデル１０４６Ａプログラム制御蛍光検出器およびダイオードアレイ検出器を取り付けたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ １０９０ ＳｅｒｉｅｓＩＩ ＨＰＬＣシステムによって、分析した。Ｓｕｐｅｌｃｏ Ｓｕｐｅｌｇｕａｒｄ ＬＣ−Ｓｉ ５μガードカラム（２０×４．６ｍｍ）に連結した５μ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｉｍｍ）において、３７℃で分離を行った。プロシアニジンを、下記条件下における線状勾配によって溶離した：（時間、％Ａ、％Ｂ）；（０，８２，１４）、（３０，６７．６，２８．４）、（６０，４６，５０）、（６５，１０，８６）、（７０，１０，８６）、それに続く８分間の再平衡化。移動相組成は、Ａ＝ジクロロメタン、Ｂ＝メタノール、およびＣ＝酢酸：水（容量比１：１）であった。
【０１６１】
０．５ｍＬ／分の流速が用いられた。λex＝２７６ｎｍ、およびλem＝３１６ｎｍの蛍光、または２８０ｎｍのＵＶによって、成分を検出した。種々のプロシアニジンの分離を示す代表的ＨＰＬＣクロマトグラムを、１つのカカオ遺伝子型に関して、図２Ｂに示す。類似したＨＰＬＣプロフィールが、他のカカオ遺伝子型からも得られた。
【０１６２】
ＨＰＬＣ条件：
２５０×３．２ｍｍ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ２０×４． ６ｍｍ Ｓｕｐｅｌｃｏ ＳｕｐｅｌｇｕａｒｄＬＣ−Ｓｉ（５μ）ガードカラム；
検出器：フォトダイオードアレイ ＠ ２８０ｎｍ
蛍光 λex＝２７６ｎｍ；λem＝３１６ｎｍ
流速： ０．５ｍＬ／分
カラム温度：３７℃
2011006427.tif 000015
【０１６３】
実施例５： プロシアニジンの同定 
Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（２８×２．５ｃｍ）カラムでの液体クロマトグラフィー、それに続く、１０μ Ｂｏｎｄａｐａｋ Ｃ１８（１００×８ｍｍ）カラムを用いる半分取ＨＰＬＣ、または５μ Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−Ｓｉ（２５０×１０ｍｍ）カラムを用いる半分取ＨＰＬＣによって、プロシアニジンを精製した。
【０１６４】
陽および陰イオンモードにおけるリキッドセカンダリーイオンマススペクトロメトリー（Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ Ｉｏｎ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）（ＬＳＩＭＳ）法を用いて、ＶＧ ＺＡＢ−Ｔ高分解ＭＳシステムにおいて、ファーストアトムボンバードメント−マススペクトロメトリー（Ｆａｓｔ Ａｔｏｍ Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ−Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）（ＦＡＢ−ＭＳ）によって、部分精製単離物を分析した。セシウムイオンガンを、３０ｋＶにおいてイオン化源として用い、および「マジックブリットマトリックス（Ｍａｇｉｃ Ｂｕｌｌｅｔ Ｍａｔｒｉｘ）」（１：１ ジチオトレイトール／ジチオエリトリトール）をプロトンドナーとして用いた。
【０１６５】
ＬＳＩＭＳによるこれらのフラクションの分析調査は、表に示されるような多数のフラバン−３−オールオリゴマーの存在を示した。
【０１６６】
表３： カカオプロシアニジンフラクションからのＬＳＩＭＳ
（陽イオン）データ 
【表３】
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【０１６７】
主なマスフラグメントイオンは、プロシアニジンの陽および陰イオンＦＡＢ−ＭＳ分析に関して以前に報告された研究と一致した（Ｓｅｌｆら、１９８６、およびＰｏｒｔｅｒら、１９９１）。ｍ／ｚ ５７７（Ｍ＋Ｈ）+に対応するイオン、およびｍ／ｚ ５９９（Ｍ＋Ｎａ）+におけるそれのナトリウムアダクトは、単離物における二重結合プロシアニジン二量体の存在を示唆した。高オリゴマーが、それらのプロトン化分子イオン（Ｍ＋Ｈ）＋よりも、ナトリウムアダクト（Ｍ＋Ｎａ）＋を形成する可能性が高かったということは興味深いことである。プロシアニジン異性体Ｂ−２、Ｂ−５、およびＣ−１は、Ｒｅｖｉｌｌａら（１９９１）、Ｓｅｌｆら（１９８６）、およびＰｏｒｔｅｒら（１９９１）によって報告された研究に基づいて試験的に同定された。八量体および十量体の両方までのプロシアニジンは、部分精製フラクションにおけるＦＡＢ−ＭＳによって立証された。さらに、十二量体までのプロシアニジンの証拠は、標準相ＨＰＬＣ分析によって観察された（図２Ｂ参照）。表４は、逆相ＨＰＬＣ分析に基づく、キサンチンアルカロイドを含まない単離物中に見い出されるプロシアニジンの相対濃度を示している。
【０１６８】
表４： キサンチンアルカロイドを含まない単離物中の、プロシアニジンの相対濃度
【表４】
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【０１６９】
表５： 水性アセトン抽出物中の、プロシアニジンの相対濃度 
【表５】
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【０１７０】
図３は、いくつかのプロシアニジン構造を示し、図４Ａ〜４Ｅは、下記の抗癌または抗新生物活性のスクリーニングに使用される５つのフラクションの代表的ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。図４Ａ〜４ＥのＨＰＬＣ条件は以下の通りである： 
ＨＰＬＣ条件： 
ＨＰモデル１０４６Ａプログラム制御蛍光検出器を取り付けたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ １０９０ ３元ＨＰＬＣシステム
カラム： Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ５μ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ（２００×２．１ｍｍ）、流速０．３ｍＬ／分における６０％ＢからＡの線状勾配。Ｂ＝メタノール中０．５％酢酸；Ａ＝脱イオン水中０．５％酢酸。λex＝２８０ｎｍ；λem＝３１６ｎｍ。
【０１７１】
図１５ Ｏは、抗癌または抗新生物活性のスクリーニングに使用される追加の１２フラクションの代表的半分取ＨＰＬＣクロマトグラムを示す（前記ＨＰＬＣ条件）。
【０１７２】
実施例６： カカオ抽出物（プロシアニジン）の抗癌、抗腫瘍、または抗新生物活性 
Ｍｏｓｍａｎｎ（１９８３）によって初めに開発されたＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド−微量滴定プレートテトラゾリウム細胞毒性アッセイを用いて、実施例５からのサンプルをスクリーニングした。サンプル、標準（シプラチンおよびクロラムブチル）、およびＭＴＴ試薬を、１０ｍｇ／ｍＬの濃度において１００％ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）に溶解した。一連の希釈物を原液から調製した。サンプルの場合、０．０１〜１０μｇ/ｍＬの範囲の希釈物が、０．５％ＤＭＳＯ中に調製された。
【０１７３】
全てのヒト腫瘍細胞系を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから得た。１０％ウシ胎児血清、１００単位/ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、および２４０単位／ｍＬナイスタチンを含有するα−ＭＥＭ中で、細胞を単一層として増殖させた。細胞を３７℃で湿った５％ＣＯ2雰囲気下に維持した。
【０１７４】
トリプシン処理後、細胞を数え、５×１０５細胞／ｍＬ（癌細胞系によって変動）の濃度に調節した。細胞懸濁液２００μＬを４列の９６穴微量滴定プレートの穴に入れた。細胞を４時間結合させた（ａｔｔａｃｈ）後、ＤＭＳＯ含有サンプル溶液２μＬを、４重の穴に加えた。マグニチュードサンプル希釈物のオーダーを用いる初期用量反応調査実験を、試験される用量範囲を決めるために用いた。次に、５４０ｎｍにおける穴（ｗｅｌｌ）吸光度を、ＢＩＯ ＲＡＤ ＭＰ４５０プレートリーダーで測定した。４重のサンプル処理穴の平均吸収を対照標準と比較し、結果を、対照標準吸収プラス／マイナス標準偏差のパーセンテージとして表した。紫色ホルマザン生成物へのＭＭＴの還元は、穴中の生存細胞の数と、線状に相関する。従って、還元生成物の吸収を測定することによって、サンプルの所定用量における細胞生存率の定量化が得られる。対照標準穴は、１％ＤＭＳＯの最終濃度を含有した。
【０１７５】
サンプルの２つを最初に、このプロトコールによって試験した。サンプルＭＭ１は、カカオプロシアニジンの非常に粗い分離物（ｃｒｕｄｅ ｉｓｏｌｅｔｅ）を表し、認識できる量のカフェインおよびテオブロミンを含有した。サンプルＭＭ２は、ゲル透過クロマトグラフィーによって部分精製されたカカオプロシアニジン分離物を表した。カフェインおよびテオブロミンは、ＭＭ２に存在しなかった。両サンプルとも、下記癌細胞型に対する活性に関してスクリーニングした： ＨＣＴ１１６ 結腸癌 ＡＣＨＮ 腎臓腺癌 ＳＫ−５ 黒色腫 Ａ４９８ 腎臓腺癌 ＭＣＦ−７ 乳癌 ＰＣ−３ 前立腺癌 ＣＡＰＡＮ−２ 膵臓癌 ＭＭ１において、調査された癌細胞系のどれに対しても、ほとんどまたは全く活性が観察されなかった。ＭＭ２は、ＨＣＴ−１１６、ＰＣ−３、およびＡＣＨＮ癌細胞系に対して活性を有することが見い出された。しかし、ＭＭ１およびＭＭ２の両方が、生存能力のある細胞数の減少を反映する吸収の減少を不明確にする程度に、ＭＴＴを干渉することが見い出された。プレートの周辺に沿った穴において化学反応がより速く進むように見えるので、この干渉は大きいエラーバー（ｅｒｒｏｒ ｂａｒｓ）にも寄与した。これらの効果の典型的な例が、図５に示されている。試験物質の高濃度において、示されている高生存レベルよりもむしろ、生存の大きい減少が観察されることが予測されたであろう。それにもかかわらず、顕微鏡試験は、ＭＴＴ干渉効果にもかかわらず、細胞毒性効果が生じたことを示した。例えば、ＡＣＨＮ細胞系に対するＭＭ２の効果に関する、０．５μｇ／ｍＬのＩＣ50値が、このようにして得られた。
【０１７６】
発明者の観点において、これらの予備結果は、ＭＴＴの干渉を排除するために、アッセイ手順の修正を必要とした。このことは下記のように行われた。加湿された５％ＣＯ2雰囲気中、３７℃で１８時間プレートをインキュベートした後、培地を慎重に吸引し、新たなα−ＭＥＭ培地と入れ替えた。この培地も、アッセイの３日目に穴から吸引し、新たに調製されたＭｃＣｏｙ培地１００μＬと入れ替えた。次に、ＰＢＳ（燐酸緩衝溶液）中のＭＴＴの５ｍｇ／ｍＬの原液１μＬを、各プレートの穴に加えた。加湿された５％ＣＯ2雰囲気下に、３７℃で４時間インキュベートした後、イソプロパノール中０．０４Ｎ ＨＣｌ１００μＬを、プレートの全ての穴に加え、続いて、生存能力のある細胞によって生成されるホルマザンを可溶化するために充分に混合した。さらに、活性にかかわる特定成分を決定するために、プロシアニジンをサブフラクション化することが決定された。
【０１７７】
前記のサブフラクション化法によって、さらにスクリーニングするためのサンプルを製造した。図１に示される領域および図４Ａ〜４Ｅに示される成分分布を代表する、５つのフラクションを調製した。サンプルをＭＭ２Ａ〜ＭＭ２Ｅに記号化して、これらの分析的特徴を反映させ、およびカフェインおよびテオブロミンの不存在を明示した。
【０１７８】
各々のフラクションを個々に、ＨＣＴ−１１６、ＰＣ−３、およびＡＣＨＮ癌細胞系に対してスクリーニングした。結果は、活性がどの特定のフラクションにも集中していないことを示した。「活性な」天然生成物分離物中の成分は相互依存的に作用しうるので、この種の結果は、異常とは見なされない。カカオプロシアニジン分離物（ＭＭ２）の場合には、２０を越える検出可能な成分が単離物を構成した。活性を、個々の成分に関係付けるよりもむしろ、種々のフラクション中に存在する成分の組合せに関係付けることができると考えられた。
【０１７９】
これらの結果に基づいて、フラクションを組合せ、同じ癌細胞系に対するアッセイを繰り返すことが決定された。いくつかのフラクションの組合せは、ＰＣ−３癌細胞系に対する細胞毒性効果を生じた。特に、ＭＭ２ＡおよびＭＭ２Ｅの組合せに対して、各々４０μｇ／ｍＬのＩＣ50値、およびＭＭ２ＣおよびＭＭ２Ｅの組合せに対して、各々２０μｇ／ｍＬのＩＣ50値が得られた。ＨＣＴ−１１６およびＡＣＨＮ細胞系に対しても活性が報告されたが、前記と同様に、ＭＴＴ指示薬（ｉｎｄｉｃａｔｏｒ）の干渉が正確な観察を妨げた。データを向上させるために、ＨＣＴ−１１６およびＡＣＨＮ系に関して反復試験が繰り返し行われた。しかし、これらの結果は、細菌汚染およびサンプル物質の枯渇によって、決定的ではなかった。図６Ａ〜６Ｄは、カカオ抽出物とＰＣ−３癌細胞との間の用量反応関係を示している。
【０１８０】
それにもかかわらず、これらのデータから、カカオ抽出物、特にカカオポリフェノールまたはプロシアニジンが、特に、ヒトＰＣ−３（前立腺）、ＨＣＴ−１１６（結腸）、およびＡＣＨＮ（腎臓）癌細胞系に関して、有意な抗腫瘍；抗癌または抗新生物活性を有することが明らかである。さらに、それらの結果は、特定のプロシアニジンフラクションがＰＣ−３細胞系に対する活性に関わっていることを示唆している。
【０１８１】
実施例７： カカオ抽出物（プロシアニジン）の抗癌、抗腫瘍、または抗新生物活性 
前記の発見を確認し、フラクション組合せをさらに研究するために、他の包括的スクリーニングを行った。
【０１８２】
全ての調製された物質および方法は、前記と同じであるが、但し、標準４反復／試験用量は、８または１２反復／試験用量に増加された。この試験のために、個々の、または組合せの、５つのカカオプロシアニジンフラクションが、下記癌細胞系に対してスクリーニングされた。
【０１８３】
ＰＣ−３ 前立腺癌 
ＫＢ 鼻咽腔／ＨｅＬａ癌 
ＨＣＴ−１１６ 結腸癌 
ＡＣＨＮ 腎臓癌 
ＭＣＦ−７ 乳癌 
ＳＫ−５ 黒色腫 
Ａ−５４９ 肺癌 
ＣＣＲＦ−ＣＥＭ Ｔ細胞白血病 
個々のスクリーニングは、フラクションＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ（図４Ａ〜４Ｅ、およびそれに関する前記の記載を参照）の、各細胞系に対する種々の用量レベル（０．０１〜１００μｇ／ｍＬ）を分析することから成る。組合せスクリーニングは、各細胞系に対して、Ａ＋Ｂ、Ａ＋Ｃ、Ａ＋Ｄ、Ａ＋Ｅ、Ｂ＋Ｃ、Ｂ＋Ｄ、Ｂ＋Ｅ、Ｃ＋Ｄ、Ｃ＋Ｅ、およびＤ＋Ｅのフラクションの等しい用量レベルを組み合わせることから成る。これらのアッセイからの結果を個々に検討し、続いて、包括的に要約する。
【０１８４】
Ａ．ＰＣ−３前立腺細胞系 
図７Ａ〜７Ｈは、カカオプロシアニジンフラクションとＰＣ−３細胞系との間の、典型的な用量反応関係を示す。図７Ｄおよび７Ｅは、フラクションＤおよびＥが、７５μｇ／ｍＬのＩＣ50値において活性であったことを示す。他のプロシアニジンフラクション組合せにおける用量反応曲線から得たＩＣ５０値は、フラクションＤまたはＥが存在した場合に、６０〜８０μｇ／ｍＬの範囲であった。個々のＩＣ50値を、表６に示す。
【０１８５】
Ｂ．ＫＢ鼻咽腔／ＨｅＬａ細胞系 
図８Ａ〜８Ｈは、カカオプロシアニジンフラクションとＫＢ鼻咽腔／ＨｅＬａ細胞系との間の、典型的な用量反応関係を示す。図８Ｄおよび８Ｅは、フラクションＤおよびＥが、７５μｇ／ｍＬのＩＣ５０値において活性であったことを示す。図８Ｆ〜８Ｈは、フラクション組合せ試験から得られた代表的な結果を示す。この場合、プロシアニジンフラクションの組合せＡ＋Ｂは効果を有さす、一方、組合せＢ＋ＥおよびＤ＋Ｅは、６０μｇ／ｍＬのＩＣ50値において活性であった。他のフラクション組合せからの他の用量反応曲線から得たＩＣ50値は、フラクションＤまたはＥが存在した場合に、６０〜８０μｇ／ｍＬの範囲であった。
【０１８６】
個々のＩＣ50値を、表６に示す。これらの結果は、ＰＣ−３細胞系に対して得られた結果と本質的に同じであった。
【０１８７】
Ｃ．ＨＣＴ−１１６結腸細胞系 
図９Ａ〜９Ｈは、カカオプロシアニジンフラクションとＨＣＴ−１１６結腸細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す。図９Ｄおよび９Ｅは、フラクションＥが、約４００μｇ／ｍＬのＩＣ50値において活性であったことを示す。この値は、既存曲線の延長によって得られた。フラクションＤの用量反応曲線の傾斜も、活性を示した。しかし、曲線の傾斜がゆるすぎるために信頼できる値を得ることができないので、このプロットからＩＣ50値が決定されなかった。図９Ｆ〜９Ｈは、フラクション組合せ試験から得た代表的結果を示している。この場合、プロシアニジンフラクション組合せＢ＋Ｄは認識できる活性を示さなかったが、一方、フラクション組合せＡ＋ＥおよびＤ＋Ｅは、各々５００μｇ／ｍＬおよび８５μｇ／ｍＬのＩＣ５０値において活性であった。他のフラクション組合せの用量反応曲線から得たＩＣ50値は、フラクションＥが存在した場合に、平均約２５０μｇ／ｍＬであった。推定ＩＣ50値を表６に示す。
【０１８８】
Ｄ．ＡＣＨＮ腎臓細胞系 
図１０Ａ〜１０Ｈは、カカオプロシアニジンフラクションとＡＣＨＮ腎臓細胞系との間の典型的な用量反応関係を示している。図１０Ａ〜１０Ｅは、どの個々のフラクションも、この細胞系に対して活性でないことを示す。図１０Ｆ〜１０Ｈは、フラクション組合せ試験から得た代表的結果を示している。この場合、プロシアニジンフラクション組合せＢ＋Ｃは不活性であるが、一方、フラクション組合せＡ＋Ｅは、推定ＩＣ50値が約５００μｇ／ｍＬであった。Ｃ＋Ｄ組合せと同様の用量反応曲線は、それらの傾斜が非常に緩いので不活性と見なされた。他のフラクション組合せの推定ＩＣ50値を、表６に示す。
【０１８９】
Ｅ．Ａ−５４９肺細胞系 
図１１Ａ〜１１Ｈは、カカオプロシアニジンフラクションとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す。このアッセイに使用された用量において、どの個々のフラクションまたはフラクションの組合せからも、活性を検出することができなかった。しかし、プロシアニジンフラクションは、それにもかかわらず、この細胞系に関して有効性を有すると考えられる。
【０１９０】
Ｆ．ＳＫ−５黒色腫細胞系 
図１２Ａ〜１２Ｈは、カカオプロシアニジンフラクションとＳＫ−５黒色腫細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す。このアッセイに使用された用量において、どの個々のフラクションまたはフラクションの組合せからも、活性を検出することができなかった。しかし、プロシアニジンフラクションは、それにもかかわらず、この細胞系に関して有効性を有すると考えられる。
【０１９１】
Ｇ．ＭＣＦ−７乳細胞系 
図１３Ａ〜１３Ｈは、カカオプロシアニジンフラクションとＭＣＦ−７乳細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す。このアッセイに使用された用量において、どの個々のフラクションまたはフラクションの組合せからも、活性を検出することができなかった。しかし、プロシアニジンフラクションは、それにもかかわらず、この細胞系に関して有効性を有すると考えられる。
【０１９２】
Ｈ．ＣＲＦ−ＣＥＭ Ｔ細胞白血病系 
ＣＣＲＦ−ＣＥＭ Ｔ細胞白血病系に対する典型的な用量反応曲線を初めに得た。しかし、種々のフラクション濃度における、時間に対する細胞数の顕微鏡計数は、４日間で８０％の増殖減少をもたらした。代表的用量反応関係が、図１４に示されている。
【０１９３】
Ｉ．要約 
ＣＣＲＦ−ＣＥＭ Ｔ細胞白血病以外の全ての細胞系に関して、これらのアッセイから得たＩＣ50値が、表６にまとめて記載されている。Ｔ細胞白血病データは、異なるアッセイ手順が使用されたので、意図的に表から省かれている。これらの結果の一般的要約は、最も高い活性が、フラクションＤおよびＥに関係していることを示した。これらのフラクションは、ＰＣ−３（前立腺）およびＫＢ（鼻咽腔／ＨｅＬａ）細胞系に対して最も活性であった。これらのフラクションはまた、かなり高い用量においてのみではあるが、ＨＣＴ−１１６（結腸）およびＡＣＨＮ（腎臓）細胞系に対しても活性であることが証明された。ＭＣＦ−７（乳）、ＳＫ−５（黒色腫）およびＡ−５４９（肺）細胞系に対して、活性が検出されなかった。しかし、プロシアニジンフラクションは、それにもかかわらず、これらの細胞系に関して有効性を有すると考えられる。ＣＣＲＦ−ＣＥＭ（Ｔ細胞白血病）細胞系に対しても、活性が示された。フラクションＤおよびＥが最も組成的に複雑であることにも注目すべきである。それにもかかわらず、このデータから、カカオ 抽出物、特に、カカオプロシアニジンが、有意な抗腫瘍、抗癌、 または抗新生物活性を有することが明らかである。
【０１９４】
表６： 種々の細胞系に対するカカオプロシアニジンフラクシ ョンのＩＣ50値 （ＩＣ50値（μｇ／ｍＬ））
【表６】
2011006427.tif 000019
【０１９５】
１００μｇ／ｍＬを越える値は、用量反応曲線から推定された。
【０１９６】
実施例８． カカオ抽出物（プロシアニジン）の抗癌、抗腫瘍、または抗新生物活性 
いくつかの追加的生体外アッセイ手順を用いて、実施例６および７で示された結果を補足し、拡張した。
【０１９７】
方法Ａ． クリスタルバイオレット染色アッセイ 
全てのヒト腫瘍細胞系を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから得た。抗生物質を含まない１０％ウシ胎児血清を含有するＩＭＥＭ中において、細胞を単一層として増殖させた。細胞を、加湿された５％ＣＯ2雰囲気中で、３７℃に維持した。
【０１９８】
トリプシン処理後に、細胞を数え、１０００〜２０００細胞／１００ｍＬの濃度に調節した。細胞増殖を、９６穴微量滴定プレート中に細胞（１０００〜２０００細胞／穴）を入れることによって測定した。１００μＬ細胞／穴の添加後、細胞を２４時間結合させた。２４時間経過時に、種々のカカオフラクションを種々の濃度で加えて、用量反応結果を得た。カカオフラクションを２倍濃度において培地に溶解し、各溶液１００μＬを３重穴に加えた。続く日に、５０μＬクリスタルバイオレット（１２５ｍＬメタノール、３７５ｍＬ水に溶解した２．５ｇクリスタルバイオレット）でプレートを１５分間染色した。染料を除去し、プレートを徐々に冷水に浸して、過剰染料を除去した。洗浄をさらに２回繰り返し、プレートを乾燥させた。各穴に１００μＬの０．１Ｍクエン酸ナトリウム／５０％エタノールを加えることによって、残留染料を可溶化した。可溶化後、５４０ｎｍ（４１０ｎｍにおける規準フィルター）におけるＥＬＩＳＡプレートリーダーで細胞の数を定量した。ＥＬＩＳＡリーダーから得られる結果を、ｙ軸に吸収およびＸ軸に日数増加のグラフにした。
【０１９９】
方法Ｂ． 軟寒天クローニングアッセイ 
Ｎａｗａｔａら（１９８１）によって記載されている方法に従って、細胞を軟寒天中でクローン化した。カカオフラクションの種々の濃度を用いて、０．８％寒天を含有する培地中に、単一細胞懸濁液を形成した。懸濁液を、１．０％寒天を含有する培地を塗布した３５ｍｍ皿に等分した。１０日間インキュベート後、直径が６０μｍよりも大きいコロニーの数を、オミニクロン３６００イメージ分析シシテム（Ｏｍｉｎｉｃｒｏｎ３６００ Ｉｍａｇｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ）で求めた。ｙ軸にコロニーの数、およびｘ軸にカカオフラクションの濃度として、結果をプロットした。
【０２００】
方法Ｃ． ＸＴＴ−ミクロインキュベーションテトラゾリウムアッセイ 
Ｓｃｕｄｉｅｒｏら（１９８８）によって記載されるＸＴＴアッセイ手順を用いて、種々のカカオフラクションをスクリーニングした。ＸＴＴアッセイは、下記の変更以外は、ＭＴＴ法（実施例６）を用いる前記のアッセイと本質的に同じであった。ＸＴＴ（（２，３−ビス（２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルホフェニル）−５−（（フェニルアミノ）カルボニル）−２Ｈ−テトラゾリウムヒドロキシド）を、３７℃に予め温めた、血清を含まない１ｍｇ／ｍＬ培地において調製した。ＰＭＳを、５ｍＭ ＰＢＳにおいて調製した。ＸＴＴおよびＰＭＳを混合した；ＰＭＳ １０μＬ／ｍＬ ＸＴＴおよび５０μＬ ＰＭＳ−ＸＴＴを、各穴に加えた。３７℃で４時間インキュベート後、プレートを機械シェーカーで３０分間混合し、４５０〜６００ｎｍにおいて吸収を測定した。ｙ軸に吸収、およびｘ軸に日数増加または濃度として、結果をプロットした。
【０２０１】
方法ＡおよびＣに関して、ｙ軸に％制御、ｘ軸に日数増加または濃度として、結果をプロットした。
【０２０２】
ＸＴＴおよびクリスタルバイオレットアッセイ手順の比較を、カカオフラクションＤおよびＥ（実施例３Ｂ）を用いて、乳癌細胞系ＭＣＦ−７ ｐ１６８に対して行って、どちらのアッセイが最も感度が高いかを決定した。図１５Ａに示されるように、両方のアッセイが、＞７５μｇ／ｍＬの濃度において、同じ用量反応効果を示した。この値よりも低い濃度においては、クリスタルバイオレットアッセイの方が、ＸＴＴアッセイ結果よりも大きい標準偏差を示した。しかし、クリスタルバイオレットアッセイは使用が容易であり、特に指定のない限り、後の全てのアッセイがこの手順によって行われた。
【０２０３】
乳癌細胞系ＭＤＡ ＭＢ２３１、前立腺癌細胞系ＰＣ−３、乳癌細胞系ＭＣＦ−７ ｐ１６３、および頸癌細胞系Ｈｅｌａのそれぞれに対する、粗ポリフェノール抽出物（実施例２）の効果を示すために、クリスタルバイオレットアッセイ結果が示されている（図１５Ｂ〜１５Ｅ）。全ての場合において、２５０μｇ／ｍＬの用量が、５〜７日間で、全ての癌細胞増殖を完全に阻害した。Ｈｅｌａ細胞系は、１００μｇ／ｍＬの用量でも増殖を阻害したので、該抽出物に対してより感受性であると考えられた。実施例３Ｂからのカカオフラクションも、Ｈｅｌａおよび他の乳癌細胞系ＳＫＢＲ−３に対して、評価された。結果（図１５Ｆおよび１５Ｇ）は、フラクションＤおよびＥが最も高い活性を有することを示した。図１５Ｈおよび１５Ｉに示されるように、ＤおよびＥの約４０μｇ／ｍＬのＩＣ50値が、両方の癌細胞系から得られた。
【０２０４】
カカオフラクションＤおよびＥは、基質依存性増殖を阻害する試験化合物の能力を測定する軟寒天クローニングアッセイにおいても試験された。図１５Ｊに示されるように、１００μｇ／ｍＬの濃度が、Ｈｅｌａ細胞のコロニー形成を完全に阻害した。
【０２０５】
カカオの３つの園芸種を代表する８種のカカオ遺伝子型から得られる粗ポリフェノール抽出物も、Ｈｅｌａ細胞系に対して分析された。図１５Ｋに示されるように、全てのカカオ種が、同様の用量反応効果を示した。ＵＩＴ−１種は、Ｈｅｌａ細胞系に対して最も高い活性を示した。これらの結果は、全てのカカオ遺伝子型が、地理的起源、園芸種、および遺伝子型に関係なく、少なくとも１種のヒト癌細胞系に対する活性を引き出すポリフェノールフラクションを有することを示した。
【０２０６】
他の一連のアッセイは、ブラジルのカカオ豆の１トン規模の慣例的な５日の発酵、それに続く４日の日光乾燥段階から日常的に調製される粗ポリフェノール抽出物に対して行われた。図１５Ｌに示される結果は、これらの初期加工段階の明白な有効性を示さず、ポリフェノールの組成においてほとんど変化かないことを示唆した。しかし、ポリフェノールオキシダーゼ（ＰＰＯ）が、発酵段階の間にポリフェノールを酸化させることが既知である（ＬｅｈｒｉａｎおよびＰａｔｔｅｒｓｏｎ） １９８３）。酵素によって酸化されたポリフェノールが、活性に対してどのような影響を及ぼすかを調査するために、他の実験を行った。微粉砕、未発酵、凍結乾燥、脱脂ブラジルカカオ豆を、１ｇｍ粉末：１０ｍＬアセトンの割合において、アセトンで抽出することによって、粗ＰＰＯを調製した。スラリーを３０００ｒｐｍにおいて１５分間、遠心分離にかけた。
【０２０７】
これを３回繰り返し、各回毎に上清を捨て、第４回目の抽出物をブフナー（Ｂｕｃｈｎｅｒ）濾過漏斗に注いだ。アセトン粉末を風乾し、続いて、ＭｃＬｏｒｄおよびＫｉｌａｒａ（１９８３）によって記載されている手順に従ってアッセイを行った。粗ポリフェノールの溶液（１００ｍｇ／１０ｍＬ クエン酸−燐酸緩衝液、０．０２Ｍ、ｐＨ５．５）に、アセトン粉末（４０００単位活性／ｍｇタンパタ質）１００ｍｇを加え、スラリー中に空気流を泡立たせながら３０分間攪拌した。サンプルを５０００×ｇにおいて１５分間遠心分離にかけ、上清を２０ｍＬ酢酸エチルで３回抽出した。酢酸エチル抽出物を合わせ、部分真空下での蒸留によって乾燥させ、水５ｍＬを加え、続いて凍結乾燥した。次に、該物質をＨｅｌａ細胞に対してアッセイにかけ、用量反応を、酵素処理されていない粗ポリフェノール抽出物と比較した。結果（図１５Ｍ）は 、酵素酸化抽出物の用量反応曲線において有意な変化を示し、酸化生成物が、それらの天然形態よりも阻害性であることを示した。
【０２０８】
実施例９： プロシアニジンを含有するカカオ抽出物の抗酸化活性 
文献における証拠は、天然の抗酸化剤（ビタミンＣ、Ｅ、およびβ−カロチン）の消費と、癌を含む病気の低発生率との関係を示唆している（Ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ Ｆｏｏｄｓ；１９９３；Ｃａｒａｇａｙ， １９９２）。一般に、これらの抗酸化剤は、ある種の腫瘍促進に関わるある種の酸化およびフリーラジカル工程に影響を及ぼすと考えられている。さらに、抗発癌性であることが示されているある種の植物ポリフェノール化合物は、実質的な抗酸化活性をも有している（Ｈｏら、１９９２；Ｈｕａｎｇら、１９９２）
プロシアニジンを含有するカカオ抽出物が抗酸化特性を有するかどうかを調査するために、標準Ｒａｎｃｉｍａｔ法が用いられた。実施例１、２および３に記載された方法を用いて、カカオ抽出物を調製し、さらに操作して、ゲル透過クロマトグラフィーからの２つのフラクションを得た。これらの２つのフラクションは事実上、合わせたフラクションＡ−Ｃ、ならびにＤおよびＥであり（図１参照）、それらの抗酸化特性を、合成抗酸化剤ＢＨＡおよびＢＨＴと比較した。
【０２０９】
皮を取り除いた後、炒っていないピーナッツからビーナッツ油を圧搾した。各試験化合物を、約１００ｐｐｍおよび約２０ｐｐｍの２つのレベルにおいて（実際のレベルは表７に示されている）、油の中に入れた（ｓｐｉｋｅｄ ｉｎｔｏ）。メタノール可溶化抗酸化剤５０μＬを、各サンプルに加えて、抗酸化剤の分散を補助した。対照標準サンプルを、抗酸化剤を含有しないメタノール５０μＬを用いて調製した。
【０２１０】
１００℃および空気２０ｃｃ／分において、Ｒａｎｃｉｍａｔ安定性試験によって、酸化安定性に関してサンプルを二重に評価した。実験パラメーターは、活性酸素法（Ａｃｔｉｖｅ Ｏｘｙｇｅｎ Ｍｅｔｈｏｄ）（ＡＯＭ）またはスウィフト安定性試験（Ｓｗｉｆｔ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔ）（ｖａｎ Ｏｏｓｔｅｎら、１９８１）に使用されるパラメーターと適合するように選択された。典型的なＲａｎｃｉｍａｔ痕跡が図１６に示されている。１００ｍｅｑのペルオキシドレベルに達するのに必要な時間として、結果を表８に示す。
【０２１１】
表７： 抗酸化剤の濃度
【表７】
2011006427.tif 000020
【０２１２】
表８： 種々の抗酸化剤を用いた、ピーナッツ油の酸化安定性 
【表８】
2011006427.tif 000021
【０２１３】
これらの結果は、全ての試験添加剤に関して、ピーナッツ油の増加した酸化安定性を示した。酸化安定性の最も大きい増加は、カカオの粗酢酸エチル抽出物を入れたサンプルによって達成された。これらの結果は、プロシアニジンを含有するカカオ抽出物が、等量の合成ＢＨＡおよびＢＨＴと同等かまたはそれらよりも大きい抗酸化能力を有することを示した。従って、本発明は、ＢＨＡまたはＢＨＴの既知の用途において、例えば抗酸化剤及び／又は食物添加剤として、ＢＨＴまたはＢＨＡに代わって使用することができる。これに関連して、本発明が食用源からのものであることにも注目すべきである。これらの結果から、当業者は、そのような「ＢＨＡまたはＢＨＴ」の用途に使用するための、本発明の好適な量、例えば、食物に添加する量を、不当な実験を行うことなく容易に決定することができる。
【０２１４】
実施例１０： トポイソメラーゼＩＩ阻害試験 
ＤＮＡトポイソメラーゼＩおよびＩＩは、ＤＮＡ鎖の切断および再結合を触媒し、それによって、ＤＮＡのトポロジカル状態を制御する酵素である（Ｗａｎｇ、１９８５）。トポイソメラーゼの細胞内作用の研究に加えて、最も重要な発見の１つは、チシン（ｅｌｌｉｐｔｉｃｉｎｅ））ならびに非挿入エピポドフィロトキシン（ｅｐｉｐｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎｓ）を含む多くの医療的に重要な抗腫瘍化合物（Ｙａｍａｓｈｉｔａら、１９９０）の主要な（ｐｒｉｍａｒｙ）細胞標的としてのトポイソメラーゼＩＩの同定であった。いくつかの抗腫瘍剤が、変性剤への曝露時にＤＮＡ切断を誘起させるＤＮＡ−トポイソメラーゼＩＩ複合体（切断複合体）を安定化させる共通の特性を有することを、いくつかの証拠が示している。抗腫瘍剤による切断複合体形成は、細胞死に導きうる嵩高いＤＮＡアダクトを産生させることが示唆されている。
【０２１５】
この魅力的なモデルに従って、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ切断複合体の特定の新規誘導物質が、抗癌、抗腫瘍、または抗新生物剤として有用である。ＤＮＡを標的にする活性を有する細胞毒性化合物の同定の試みにおいて、いくつかのＤＮＡ損傷感受性細胞系に対する強化された細胞毒活性、およびリンパ腫から得られるヒトトポイソメラーゼＩＩでの酵素アッセイに関して、カカオプロシアニジンがスクリーニングされた。
【０２１６】
Ａ．トポイソメラーゼＩＩよるキネトプラストＤＮＡの脱連鎖化 
Ｍｕｌｌｅｒら（１９８９）によって記載されているキネトプラストＤＮＡのトポイソメラーゼＩＩ脱連鎖化の生体外阻害を、下記のように行った。トポイソメラーゼＩＩ活性を有する核抽出物を、Ｍｉｌｌｅｒら（１９８１）およびＤａｎｋｓら（１９８８）の方法の改質法によって、ヒトリンパ腫から調製した。精製酵素の１単位は、３４℃で３０分間で０．２５μｇのキネトプラストＤＮＡを脱連鎖化するのに充分であった。キネトプラストＤＮＡは、トリパノソームＣｒｉｔｈｉｄｉａｆａｓｃｉｃｕｌａｔａから得た。１９．５μＬのＨ2Ｏ、２．５μＬの１０×緩衝液（１×緩衝液は５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１２０ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2、０．５ｍＭ ＡＴＰ、０．５ｍＭ ジチオトレイトール、および３０μｇ ＢＳＡ／ｍＬを含有する）、１μＬのキネトプラストＤＮＡ（０．２μｇ）、および種々の濃度における１μＬのＤＭＳＯ含有カカオプロシアニジン試験フラクションを含有する０．５ｍＬミクロ遠心機中において、各反応を行った。この組合せを、充分に混合し、氷の上に維持した。水浴中３４℃で３０分間インキュベートする直前に、１単位のトポイソメラーゼを加えた。
【０２１７】
インキュベート後に、５μＬの停止緩衝液（５％サルコシル、０．００２５％ブロモフェノールブルー、２５％グリセロール）を加えることによって、脱連鎖アッセイを停止させ、氷の上に置いた。臭化エチジウム（０．５μｇ／ｍＬ）を含有するＴＡＥ緩衝液中の１％アガロースゲル上で、ＤＮＡを電気泳動にかけた。３１０ｎｍ波長における紫外線照明によって、ＤＮＡが視覚化された。ゲルをポラロイドランドカメラを用いて写真に撮った。
【０２１８】
図１７は、これらの実験の結果を示す。充分に連鎖されたキネトプラストＤＮＡは、１％アガロースゲル中に移入しない。トポイソメラーゼＩＩによるキネトプラストＤＮＡの脱連鎖化は、ゲル中に移動するモノマーＤＮＡ（モノマーサークル、形態ＩおよびＩＩ）のバンドを発生させる。カカオプロシアニジンの添加による酵素の阻害が、増加する濃度の関数としての、モノマーバンドの漸進的消夫によって明らかである。これらの結果に基づいて、カカオプロシアニジンフラクションＡ、Ｂ、ＤおよびＥが、０．５〜５．０μｇ／ｍＬの範囲の濃度において、トポイソメラーゼＩＩを阻害することが示された。これらの阻害剤濃度は、ミトキサントロンおよびｍ−ＡＭＳＡ（４’−（９−アクリジニルアミノ）メタンスルホン−ｍ−アニシジド）に関して得られる濃度と非常に類似していた。
【０２１９】
Ｂ．薬剤感受性細胞系 
いくつかのＤＮＡ損傷感受性細胞系に対する細胞毒性に関して、カカオプロシアニジンをスクリーニングした。該細胞系の１つは、Ｐ．Ｊｅｇｇｏ（Ｋｅｍｐら、１９８４）によって開発されたｘｒｓ−６ ＤＮＡ二本鎖切断修復突然変異体であった。ｘｒｓ−６細胞系のＤＮＡ修復欠陥は、それらを、Ｘ線照射、ブレオマイシンのようなＤＮＡ二本鎖切断を直接的に生じさせる化合物、およびトポイソメラーゼＩＩを阻害する化合物に対して特に感受性にし、従って、Ｗａｒｔｅｒｓら（１９９１）によって示唆されているように、二本鎖切断を間接的に誘発させると考えられる。修復欠陥への細胞毒性を、ＤＮＡ修復に優れたＣＨＯ系、ＢＲ１に対する細胞毒性と比較した。修復欠陥（ｘｒｓ−６）系に対する増加した細胞毒性が、ＤＮＡ切断性二本鎖切断形成の証拠であると理解された。
【０２２０】
ＤＮＡ修復に優れたＣＨＯ系、ＢＲ１は、Ｂａｒｒｏｗｓら（１９８７）によって開発され、標準ＣＨＯ ＤＮＡ修復酵素に加えて、０6−アルキルグアニン−ＤＮＡ−アルキルトランスフェラーゼを発現させる。ＣＨＯ二本鎖切断修復欠陥系（ｘｒｓ−６）は、Ｄｒ．Ｐ．Ｊｅｇｇｏおよび共同研究者（Ｊｅｇｇｏら、１９８９）による寛大な寄贈物（ｇｅｎｅｒｏｕｓｇｉｆｔ）であった。これらの系の両方を、血清および実施例６に記載の抗生物質を含有するα−ＭＥＭ中において単一層として増殖させた。細胞を、加湿された５％ＣＯ2雰囲気中で３７℃に維持した。カカオプロシアニジンで処理する前に、単一層として増殖させた細胞を、トリプシン処理によって分離した。実施例６に記載のＭＴＴアッセイ手順によって、アッセイを行った。
【０２２１】
結果（図１８）は、ｘｒｓ−６細胞に対して強化された細胞毒性を示さず、カカオプロシアニジンが、切断性二本鎖切断形成とは異なる方法で、トポイソメラーゼＩＩを阻害したことを示唆した。即ち、カカオプロシアニジンは、ＤＮＡと相互作用して非切断性複合体を形成する前に、トポイソメラーゼＩＩと相互作用する。
【０２２２】
非切断性複合体形成化合物は、比較的新規な発見である。アントラサイクリン、ポドフィリンアルカロイド、アントラセンジオン、アクリジン、およびエリプチシンは全て、臨床的抗癌、抗腫瘍、または抗新生物使用に関して承認されており、それらは切断性複合体を形成する（Ｌｉｕ、１９８９）。切断性複合体を生じないと考えられるいくつかの新規な種類のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤が、最近同定された。これらは、アモナフィド（ａｍｏｎａｆｉｄｅ）（Ｈｓｉａｎｇら、１９８９）、ジスタマイシン（ｄｉｓｔａｍｙｃｉｎ）（Ｆｅｓｅｎら、１９８９）、フラバノイド（ｆｌａｖａｎｏｉｄｓ）（Ｙａｍａｓｈｉｔａら、１９９０）、サイントピン（ｓａｉｎｔｏｐｉｎ）（Ｙａｍａｓｈｉｔａら、１９９１）、メンブラノン（ｍｅｍｂｒａｎｏｎｅ）（Ｄｒａｋｅら、１９８９）、テルペノイド（ｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ）（Ｋａｗａｄａら、１９９１）、アントラピラゾール（ａｎｔｈｒａｐｙｒａｚｏｌｅｓ）（Ｆｒｙら、１９８５）、ジオキソピペラジン（Ｔａｎａｂｅら、１９９１）、およびマリンアクリジン−デルシイチン（ｍａｒｉｎｅ ａｃｒｉｄｉｎｅ−ｄｅｒｃｉｔｉｎ）（Ｂｕｒｒｅｓら、１９８９）を含む。
【０２２３】
切断性複合体が形成される前に、カカオプロシアニジンがトポイソメラーゼＩＩを不活性化するので、それらは、単独で、または他の既知の機械論的に定義されるトポイソメラーゼＩＩ阻害剤との組合せにおいて、化学療法的価値を有する。さらに、カカオプロシアニジンは、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤の新規種類であるとも考えられ（Ｋａｓｈｉｗａｄａら、１９９３）、従って、他の既知の阻害剤よりも細胞に対する毒性が低く、それによって化学療法におけるそれらの有効性を高めている。
【０２２４】
多剤抵抗性を付与する膜結合グリコプロテイン（ｇｐ１７０）（Ｌｅｏｎｅｓｓａら、１９９４）およびそれの親細胞系ＭＣＦ−７ ｐ１６８を発現するヒト乳癌細胞系ＭＣＦ−７（ＡＤＲ）が、カカオフラクションＤおよびＥの有効性を評価するために使用された。図１９に示されるように、親細胞系は、フラクションＤおよびＥの増加する用量レベルにおいて阻害されたか、一方、アドリアマイシン（ＡＤＲ）抵抗性細胞系は、より高い用量においてより低い有効性であった。これらの結果は、カカオフラクションＤおよびＥが、多剤抵抗性細胞系に対して有効であることを示す。
【０２２５】
実施例１１： プロシアニジンの合成 
プロシアニジンの合成は、Ｄｅｌｃｏｕｒら（１９８３）によって開発された方法に改良を加えて行われた。還元条件下における（＋）−カテキンとジヒドロクエルセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）との縮合に加えて、未発酵カカオ豆に自然に発生する（−）−エピカテキンの高濃度を反映させるために、（−）−エピカテキンも使用された。合成生成物を単離し、精製し、分析し、実施例３、４、および５に記載の方法によって同定した。このようにして、ビフラバノイド、トリフラバノイド、およびテトラフラバノイドを調製し、分析標準として、およびカカオ抽出物に関して前記に記載した方法において、使用した。
【０２２６】
実施例１２： 標準相半分取フラクションのアッセイ 
ポリフェノール抽出物は組成的に複雑であるので、さらなる精製、用量反応アッセイ、および包括的構造同定のために、どの成分が癌細胞系に対して活性であるかを決定する必要がある。標準相半分取ＨＰＬＣ分離（実施例３Ｂ）が、オリゴマーサイズに基づいて、カカオプロシアニジンを分離するために使用された。原抽出物以外に、１２のフラクションを分離し（図２Ｂおよび１５ Ｏ）、１００μｇ／ｍＬおよび２５μｇ／ｍＬ用量において、ＨｅｌａおよびＳＫＢＲ−３癌細胞系に対して評価し、どのオリゴマーが最も高い活性を有するかを決定した。図２０ＡおよびＢに示されるように、フラクション４〜１１（五量体〜十二量体）が、１００μｇ／ｍＬのレベルにおいてＨｅｌａおよびＳＫＢｒ−３癌細胞系を有意に阻害した。これらの結果は、これらの特定オリゴマーが、ＨｅｌａおよびＳＫＢＲ−３細胞に対して最も高い活性を有することを示した。さらに、カカオフラクションＤおよびＥの標準相ＨＰＬＣ分析は、前記調査、例えば実施例７に使用されたこのフラクションが、これらのオリゴマーを多く含むことを示した。
【０２２７】
実施例１３： ＨＰＬＣ精製法方法Ａ． ＧＰＣ精製 
実施例２で得たプロシアニジンを、溶離剤として１００％メタノールを用い、流速３．５ｍＬ／分において、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ２０（７２．５×２．５ｃｍ）での液体クロマトグラフィーによって、部分的に精製した。１時間半後、溶離剤のフラクションを収集し、フラクションを回転蒸発器によって濃縮し、水に再溶解し、凍結乾燥した。これらのフラクションを、五量体を多く含むフラクションと呼んだ。実施例２から得られる抽出物約２．００ｇをこのようにしてサブフラクション化した。結果を表９に示す。
【表９】
2011006427.tif 000022
【０２２８】
方法Ｂ． 標準相分離 
Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−Ｓｉ、１００Å、５μｍ（２５０×４．６ｍｍ）、流速１．０ｍＬ／分において、あるいは、３５×３．２ｍｍ）、流速０．５ｍＬ／分において、標準相クロマトグラフィーにかけることによって、実施例２で得たプロシアニジンを分離精製した。下記条件下における段階勾配によって分離を補助した：（時間、％Ａ、％Ｂ）；（０，８２，１４）、（３０，６７．６，２８．４）、（６０，４６，５９）、（６５，１０，８６）、（７０，１０，８６）。移動相組成は、Ａ＝ジクロロメタン；Ｂ＝メタノール；およびＣ＝酢酸：水（１：１）であった。λex＝２７６ｎｍおよびλem＝３１６ｎｍの蛍光、ならびに２８０ｎｍのＵＶによって、成分を検出した。注入容量は、実施例２から得たプロシアニジン５．０μＬ（２０ｍｇ／ｍＬ）であった。これらの結果を図４０Ａおよび４０Ｂに示す。
【０２２９】
あるいは、下記条件下における段階勾配によって分離を補助した：（時間、％Ａ、％Ｂ）；（０，７６，２０）、（２５，４６，５０）、（３０，１０，８６）。移動相組成は、Ａ＝ジクロロメタン；Ｂ＝メタノール；およびＣ＝酢酸：水（１：１）であった。結果を図４１Ａおよび４１Ｂに示す。
【０２３０】
方法Ｃ．逆相分離 
Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ ５μｍ（２００×２．１ｍｍ）、およびＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ ５μｍガードカラム（２０×２．１ｍｍ）での逆相クロマトグラフィーによって、実施例２から得たプロシアニジンを分離精製した。２０分間における２０％Ｂ〜Ａへの線状勾配、続いて流速０．３ｍＬ／分における１００％Ｂでカラム洗浄によって、プロシアニジンを溶離した。移動相組成は、Ｂ＝メタノール中１．０％酢酸、Ａ＝ナノ純水中２．０％酢酸の脱泡混合物であった。２８０ｎｍのＵＶ、ならびにλex＝２７６ｎｍおよびλem＝３１６ｎｍの蛍光によって、成分を検出し；注入容量は２．０μＬ（２０ｍｇ／ｍＬ）であった。
【０２３１】
実施例１４： 
五量体を含むフラクションのＨＰＬＣ分離 方法Ａ． 半分取標準相ＨＰＬＣ ピークモードに設定されたＰｈａｒｍａｃｉａ Ｆｒａｃ−１００フラクションコレクターと組み合わせた、２５４ｎｍに設定されたＭｉｌｌｉｐｏｒｅ−Ｗａｔｅｒｓモデル４８０ＬＣ検出器を取り付けたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ １０５０ ＨＰＬＣシステムによって、半分取標準相ＨＰＬＣによって、五量体を多く含むフラクションをさらに精製した。Ｓｕｐｅｌｃｏ ５μ Ｓｕｐｅｌｇｕａｒｄ ＬＣ−Ｓｉガードカラム（２０×４．６ｍｍ）に連結したＳｕｐｅｌｃｏ ５μｍ Ｓｕｐｅｌｃｏｓｅｌ ＬＣ−Ｓｉ、１００Åカラム（２５０×１０ｍｍ）で、分離を行った。下記条件下における線状勾配によって、プロシアニジンを溶離した：（時間、％Ａ、％Ｂ）；（０，８２，１４）（３０、６７，６，２８．４）（６０，４６，５０）（６５，１０，８６）（７０，１０，８６）、それに続く１０分間の再平衡化。移動相組成は、Ａ＝ジクロロメタン；Ｂ＝メタノール；およびＣ＝酢酸：水（１：１）であった。３ｍＬ／分の流速を用いた。成分を２５４ｎｍのＵＶによって検出し、Ｋｉｐｐ ＆ Ｚｏｎａｎ ＢＤ４１レコーダーに記録した。注入容量は、７０％水性アセトン０．２５ｍＬ中に溶解したプロシアニジン抽出物１０ｍｇの１００〜２５０μＬの範囲であった。さらなる精製および後の評価のために、個々のピークまたは選択クロマトグラフィー領域を、設定された時間間隔において、または手動で、収集した。
【０２３２】
ＨＰＬＣ条件：
２５０×１００ｍｍ Ｓｕｐｅｌｃｏ Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−Ｓｉ（５μｍ）半分取カラム ２０×４．６ｍｍ Ｓｕｐｅｌｃｏ Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−Ｓｉ（５μｍ）ガードカラム
検出器： Ｗａｔｅｒｓ ＬＣ
分光光度計 モデル４８０ ＠ ２５４ｎｍ
流速： ３ｍＬ／分
カラム温度： 周囲温度
注入： 五量体を多く含む抽出物２５０μＬ
2011006427.tif 000023
【０２３３】
方法Ｂ． 逆相分離 
実施例１３において得られるプロシアニジン抽出物を、０．４５μナイロンフィルターで濾過し、ダイオードアレイ検出器およびＨＰモデル１０４６Ａプログラム制御蛍光検出器を取り付けたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ １０９０三元相ＨＰＬＣシステムによって分析した。Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ５μ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳカラム（２００×２．１ｍｍ）によって４５℃で、分離を行った。６０％Ｂ〜Ａの線状勾配、続いて流速０．３ｍＬ／分におけるＢでのカラム洗浄によって、プロシアニジンを溶離した。移動相組成は、Ｂ＝メタノール中０．５％酢酸、およびＡ＝ナノ純水中０．５％酢酸の脱泡混合物であった。ＡおよびＢの移動相における酢酸レベルは、２％まで増加させることができる。λex＝２７６ｎｍおよびλem＝３１６ｎｍの蛍光、ならびに２８０ｎｍのＵＶによって、成分を検出した。（＋）−カテキンおよび（−）−エピカテキンの濃度は、参考標準溶液との比較によって決められた。プロシアニジンレベルは、（−）−エピカテキンの応答因子を用いて推定された。
【０２３４】
方法Ｃ． 標準相分離 
実施例１３において得られる五量体を多く含むプロシアニジン抽出物を、０．４５μナイロンフィルターで濾過し、ＨＰモデル１０４６Ａプログラム制御蛍光検出器およびダイオードアレイ検出器を取り付けたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ １０９０シリーズＩＩ ＨＰＬＣシステムによって分析した。Ｓｕｐｅｌｃｏ Ｓｕｐｅｌｇｕａｒｄ ＬＣ−Ｓｉ ５μガードカラム（２０×４．６ｍｍ）に連結された５μ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒｅ（登録商標）シリカ１００カラム（２５０×３．２ｍｍ）によって３７℃で、分離を行った。下記条件下における洗浄勾配によってプロシアニジンを溶離した：（時間、％Ａ、％Ｂ）；（０，８２，１４）、（３０，６７．６，２８．４）、（６０，４６，５０）、（６５，１０，８６）、（７０，１０，８６）、それに続く８分間の再平衡化。移動相組成は、Ａ＝ジクロロメタン、Ｂ＝メタノール、およびＣ＝酢酸：水（容量比１：１）であった。０．５ｍＬ／分の流速を用いた。λex＝２７６ｎｍおよびλem＝３１６ｎｍの蛍光、または２８０ｎｍのＵＶによって、成分を検出した。種々のプロシアニジンの分離を示す代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを、１つの遺伝子型に関して図２に示す。Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ、Ｈｅｒｒａｎｉａ及び／又はそれら間の、またはそれら内の特定の雑種から、同様のＨＰＬＣプロフィールが得られた。
【０２３５】
ＨＰＬＣ条件：２５０×３．２ｍｍ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｉｃｈｒｏｓｕｐｅｌｃｏ Ｓｕｐｅｌｇｕａｒｄ ＬＣ−Ｓｉ（５μ）ガードカラム
検出器： フォトダイオードアレイ ＠ ２８０ｎｍ
蛍光 λem＝２７６ｎｍ；λem＝３１６ｎｍ
流速： ０．５ｍＬ／分
カラム温度： ３７℃
2011006427.tif 000024
【０２３６】
方法Ｄ． 分取標準相分離 
実施例１３で得た五量体を多く含むフラクションを、Ｒｉｇａｕｄら（１９９３）Ｊ．Ｃｈｒｏｍ．６５４，２５５−２６０の方法に改良を加えて、分取標準相クロマトグラフィーによってさらに精製した。
【０２３７】
周囲温度において、５μ Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−Ｓｉ １００Åカラム（５０×２ｃｍ）によって、適切なガードカラムを用いて、分離を行った。下記条件下における線状勾配によって、プロシアニジンを溶離した：（時間、％Ａ、％Ｂ）流速）；（０，９２．５，７．５，１０）；（１０，９２．５，７．５，４０）；（３０，９１．５，１８．５，４０）；（１４５，８８，２２，４０）；（１５０，２４，８６，４０）；（１５５，２４，８６，５０）；（１８０，０，１００，５０）。使用の前に、移動相成分を下記プロトコールによって混合した： 
溶剤Ａの製造（８２％ＣＨ2Ｃｌ2、１４％メタノール、２％酢酸、２％水）： 
１．水８０ｍＬを計量し、４Ｌボトルに装入する
２．酢酸８０ｍＬを計量し、同じ４Ｌボトルに装入する
３．メタノール５６０ｍＬを計量し、同じ４Ｌボトルに装入する
４．塩化メチレン３２８０ｍＬを計量し、４Ｌボトルに装入する
５．ボトルに栓をし、充分に混合する
６．高純度ヘリウムで混合物を５〜１０分間パージして、脱泡する
段階１〜６を２回繰り返して、溶剤Ａの８容量を得る
溶剤Ｂの調製（９６％メタノール、２％酢酸、２％水）：
１．水８０ｍＬを計量し、４Ｌボトルに装入する
２．酢酸８０ｍＬを計量し、同じ４Ｌボトルに装入する
３．メタノール３８４０ｍＬを計量し、同じ４Ｌボトルに装入する
４．ボトルに栓をし、充分に混合する
５．高純度ヘリウムで混合物を５〜１０分間パージして、脱泡する
段階１〜５を繰り返して、溶剤Ｂの４容量を得る。
【０２３８】
移動相組成は、Ａ＝塩化メチレン、２％酢酸および２％水；Ｂ＝メタノール、２％酢酸および２％水。カラム充填量は、７ｍＬ中０．７ｇであった。２５４ｎｍのＵＶによって成分を検出した。カカオプロシアニジンの典型的分取標準相ＨＰＬＣ分離が、図４２に示されている。
【０２３９】
ＨＰＬＣ条件：カラム： ５０×２ｃｍ ５μ Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−Ｓｉ ラン＠周囲温度
移動相：Ａ＝塩化メチレン、２％酢酸および２％水
Ｂ＝メタノール、２％酢酸および２％水
勾配／流速プロフィール：
2011006427.tif 000025
【０２４０】
実施例１５： プロシアニジンの同定 
Ｌｅｃｒｏｙ ９３５０ ５００ ＭＨｚ オシロスコープを取り付けたＨＰ Ｇ２０２５Ａ ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳシステムを用いて、Ｍａｔｒｉｘ Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｌａｓｅｒ Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ−Ｔｉｍe ｏｆ Ｆｌｉｇｈｔ／Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ）によって、実施例１４の方法Ｄによって得られるプロシアニジンを分析した。低分子量ぺプチド標準（ＨＰ Ｐａｒｔ Ｎｏ．Ｇ２０５１Ａ）またはペプチド標準（ＨＰ Ｐａｒｔ Ｎｏ．Ｇ２０５２Ａ）、２，５−ジヒドロキシ安息香酸（ＤＨＢ）（ＨＰ Ｐａｒｔ Ｎｏ．Ｇ２０５６Ａ）をサンプルマトリッタスとして、製造者の指示に従って装置を校正した。サンプル１．０ｍｇを７０／３０のメタノール／水 ５００μＬに溶解し、次に、１：１、１：１０、または１：５０（サンプル：マトリックス）の割合で、サンプルをＤＨＢマトリックスと混合し、真空下においてｍｅｓａで乾燥した。検出器電圧を４．７５ｋＶに設定し、レーザーパワーを１．５および８μＪに設定して、サンプルを陽イオンモードで分析した。多数の単一ショットの合計としてデータを集め、分子量単位およびフライトの時間（ｔｉｍｅ ｏｆ ｆｌｉｇｈｔ）として示した。代表的なＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳを図２２Ａに示す。
【０２４１】
実施例３の方法Ａに記載のように調製され、実施例６および７に記載のような生体外評価に使用され、その結果が表６に要約されている部分精製プロシアニジンから得たＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳスペクトルを、図２２およびＣは示している。このデータは、本明細書に記載される新規化合物が主に、フラクションＤ〜Ｅに見い出され、フラクションＡ〜Ｃには見い出されないことを示している。
【０２４２】
スペクトルは下記のようにして得られた： 
精製されたＤ〜Ｅフラクションを、フラクションを初めにＳＥＰ−ＰＡＣＫ（登録商標）Ｃ−１８カートリッジによって精製した以外は前記と同様のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳにかけた。１ｍＬナノ純水中のフラクションＤ〜Ｅ５ｇを、予め平衡させたＳＥＰ−ＰＡＣＫ（登録商標）カートリッジに充填した。カラムを５ｍＬのナノ純水で洗浄して汚染物を除去し、プロシアニジンを２０％メタノール１ｍＬで溶離した。実施例３の方法Ａで単離されたフラクションＡ〜Ｃを、さらに精製せずにそのまま使用した。
【０２４３】
これらの結果は、前記の結果（実施例５、表３、図２０ＡおよびＢを参照）を確認し、拡大するものであり、新規化合物が陽イオンの封鎖剤としての有効性を有することを示している。特に、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳの結果は、ｎ＝５およびそれ異常のプロシアニジンオリゴマー（図２０ＡおよびＢ；ならびに本発明の目的および要旨における式を参照）が、ＨｅＬａおよびＳＫＢＲ−３癌細胞系モデルに対する高癌活性と非常に関係が深いことを示した。ｎ＝４またはそれ以下のオリゴマーは、これらのモデルに対して有効でなかった。五量体構造は明らかに、その中に、またはより高いオリゴマー中に、活性を与える構造的刺激（ｍｏｔｉｆ）を有する。さらに、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳデータは、Ｎａ+、２Ｎａ+、Ｋ+、２Ｋ+、Ｃａ++の強いＭ+イオンを示し、陽イオン封鎖剤としての有効性を立証した。
【０２４４】
実施例１６： オリゴマーフラクションの精製 
方法Ａ．半分取逆相ＨＰＬＣによる精製 
実施例１４の方法ＡおよびＢおよびＤから得られるプロシアニジンをさらに分離して、さらなる構造的同定および解明のための同様のオリゴマーの実験量を得た（例えば、実施例１５、１８、１９、および２０）。可変波長検出器、１ｍＬ注入ループを有するＲｈｅｏｄｙｎｅ ７０１０注入バルブを取り付けたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ １０５０ ＨＰＬＣシステムを、Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＦＲＡＣ−１００フラクションコレクターと組み合わせた。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ １０μ０μ ＯＤＳカラム（２５０×２２．５ｍｍ）で、分離を行った。移動相組成は、Ａ＝水；Ｂ＝下記線状勾配下に使用されるメタノールである：（時間、％Ａ）；（０，８５）、（６０，５０）、（９０，０）、および（１１０，０）、流速５ｍＬ／分。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳおよびＮＭＲによってさらに評価するために、個々のピークまたは選択クロマトグラフィー領域を、フラクション収集によって、設定された時間間隔において、または手動で、収集した。注入量は、物質２５〜１００ｍｇの範囲であった。代表的溶離プロフィールが、図２３ｂに示されている。
【０２４５】
方法Ｂ．改良半分取ＨＰＬＣ 
実施例１４の方法ＡおよびＢおよびＤから得られるプロシアニジンをさらに分離して、さらなる構造的同定および解明のための同様のオリゴマーの実験量を得た（例えば、実施例１５、１８、１９および２０）。Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−Ｓｉ５μカラム（２５０×１０ｍｍ）およびＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌＬＣ−Ｓｉ ５μ（２０×２ｍｍ）ガードカラム。流速３．０ｍＬ／分および周囲温度において、分離を行った。流動相組成は、Ａ＝ジクロロメタン、Ｂ＝メタノール；およびＣ＝酢酸：水（１：１）であり、下記の線状勾配条件下で用いた：（時間、％Ａ、％Ｂ）；（０，８２，１４）；（２２，７４，２１）；（３２，７４，２１）；（６０，７４，５０，４）；（６１，８２，１４）、それに続く７分間のカラム再平衡化。注入容量は、多く含まれる五量体１２ｍｇを含有する６０μＬであった。２８０ｎｍのＵＶによって成分を検出した。代表的な溶離プロフィールが、図２３Ａに示されている。
【０２４６】
実施例１７： 五量体のモデリング 
Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９４、Ｄｅｓｋｔｏｐ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｏｄｅｌｌｅｒ、バージョン３．０を用いて、分子モデリングによってエネルギー最小構造を決定した。エピカテキンの構造に基づく［ＥＣ（４→８）］4−ＥＣ（ＥＣ＝エピカテキン）五量体の４つの代表的な図が、図２４Ａ〜Ｄに示されている。螺旋構造が示唆されている。一般に、エピカテキンが第一モノマーであり、結合が４→８であるとき、β配置が生じ、第一モノマーがカテキンであり、結合が４→８であるとき、α配置が生じる；これらの結果は、第二モノマーがエピカテキンであるかまたはカテキンであるかに関係なく得られる（例外は、ｅｎｔ−ＥＣ（４→８）ｅｎｔ−ＥＣである）。図３８Ａ〜３８Ｐは好ましい五量体を示し、図３９Ａ〜３９Ｐは、五量体を含む五量体までの一連の立体異性体を示し、これらから本発明の範囲に含まれる他の化合物を、不要な実験をすることなく、調製することができる。
【０２４７】
実施例１８： プロシアニジンのＮＭＲ評価
13Ｃ ＮＭＲ分光分析法は、特にフェノールが通常良好な質のスペクトルを与えるので、プロシアニジンの研究に有用な方法であると一般に考えられ、一方、ＮＭＲスペクトルはかなり幅か広い（ｂｒｏａｄｅｄｅｄ）。オリゴマーの13Ｃ ＮＭＲスペクトルは、ＡまたはＢ環の置換パターン、Ｃ環の相対的立体化学、およびある場合にはフラバノイド間結合の位置に関する有用な情報を提供する。それでもなお、1Ｈ ＮＭＲスペクトルは重要な情報を提供する。
【０２４８】
さらに、ＨＯＨＡＨＡは、α、β、γ、またはδプロトンに対応する交差ピークを得るためのシーケンスにおいて、第一水素の磁性を第二へ移動させるパルス法を利用している。ＣＯＳＹは、垂直および水平軸が1Ｈ化学移動および１Ｄスペクトルを生じる２Ｄ−Ｆｏｕｒｉｅｒ変換ＮＭＲ法であり；交差点がプロトン間の相関を提供し、それによって、スピン−スピン結合が決定される。ＨＭＱＣスペクトルは、プロトン以外の核のＮＭＲスペクトルの感度高め、第二および第三炭素からそれぞれのプロトンへの交差ピークを表すことができる。ＡＰＴは、炭素に存在する水素の数を決定するのに使用される13Ｃ法である。炭素における偶数のプロトンが、陽のシグナルとなり、一方炭素における奇数のプロトンが陰のシグナルとなる。
【０２４９】
従って、13Ｃ ＮＭＲ、1Ｈ ＮＭＲ、ＨＯＨＡＨＡ（ホモ核Ｈａｒｔｍａｎｎ−Ｈａｈｎ）、ＨＭＱＣ（ヘテロ核多量子結合）（ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｑｕａｎｔｕｍ ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）、ＣＯＳＹ（ホモ核相関分光分析）（Ｈｏｍｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）、ＡＰＴ（結合プロトン試験）（ａｔｔａｃｈｅｄ ｐｒｏｔｏｎ ｔｅｓｔ）、およびＸＨＣＯＲＲ（ＨＭＱＣにおける変形）（ａ ｖａｒｉａｔｉｏｎｏｎ ＨＭＱＣ）分光分析法を用いて、本発明の化合物の構造を解明した。
【０２５０】
方法Ａ．単量体 
全スペクトルを、サンプル濃度約１０ｍｇ／ｍＬにおいて、室温で、ジュウテリウム置換メタノール中に取った。内部標準としてメタノールを用いて、スペクトルをＢｒｕｋｅｒ ５００ＭＨＺ ＮＭＲに取った。
【０２５１】
図４４Ａ〜Ｅは、エピカテキン単量体の構造の特徴づけるために使用されたＮＭＲスペクトルを示している。図４４Ａは、管状の1Ｈおよび13Ｃ化学移動を示している。図４４Ｂ〜Ｅは、エピカテキンの1Ｈ、ＡＰＴ、ＸＨＣＯＲＲおよびＣＯＳＹスペクトルを示している。
【０２５２】
同様に、図４５Ａ〜Ｆは、カテキン単量体の構造の特徴づけるために使用されたＮＭＲスペクトルを表している。図４５Ａは、管状の1Ｈおよび13Ｃ化学移動を示している。図４４Ｂ〜Ｆは、カテキン1Ｈ、13Ｃ、ＡＰＴ、ＸＨＣＯＲＲおよびＣＯＳＹスペクトルを示している。
【０２５３】
方法Ｂ．二量体 
アセトンを内部標準として用いて、サンプル濃度約１０ｍｇ／ｍＬにおいて、Ｄ2Ｏ中の７５％ジュウテリウム置換アセトン中に、全スペクトルを取った。
【０２５４】
図４６Ａ〜Ｇは、Ｂ２二量体の構造の特徴をづけるために使用されたスペクトルを示す。図４６Ａは、管状の1Ｈおよび13Ｃ化学移動を示している。ＴおよびＢは、二量体の上半分および二量体の下半分を示している。
【０２５５】
図４６ＢおよびＣは、室温において、Ｂｒｕｋｅｒ ５００ＭＨＺ ＮＭＲに取られた13ＣおよびＡＰＴスペクトルを各々示す。
【０２５６】
図４６Ｄ〜Ｇは各々、ＡＭＺ−３６０ ＭＨＺ ＮＭＲに−７℃において取られた1Ｈ、ＨＭＱＣ、ＣＯＳＹ、およびＨＯＨＡＨＡを示す。
【０２５７】
図４７Ａ〜Ｇは、Ｂ５二量体の構造を示すために使用されたスペクトルを示す。図４７Ａは、管状の13Ｃおよび1Ｈ化学移動を示す。
【０２５８】
図４７Ｂ〜Ｄは、室温においてＢｒｕｋｅｒ ５００ ＭＨＺ ＮＭＲに取られた1Ｈ，13Ｃ、およびＡＰＴを各々示す。
【０２５９】
図４７Ｅは、勾配パルスを用いて、室温において、ＡＭＸ−３６０に取られたＣＯＳＹスペクトルを示す。
【０２６０】
図４７ＦおよびＧは、室温において、ＡＭＸ−３６０ ＭＨＺ ＮＭＲに取られたＨＭＱＣおよびＨＯＨＡＨＡを各々示す。
【０２６１】
方法Ｃ．三量体−エピカテキン／カテキン 
アセトンを内部標準として用い、ＡＭＸ−３６０ ＭＨＺＮＭＲにおいて、適切なサンプル濃度１０ｍｇ／ｍＬにおいて、−３℃で、Ｄ2Ｏ中７５％ジュウテリウム置換アセトン中に、全スペクトルを取った。
【０２６２】
図４８Ａ〜Ｄは、エピカテキン／カテキン三量体の構造の特徴をづけるために使用されたスペクトルを示す。これらの図は、1Ｈ、ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、およびＨＯＨＡＨＡを各々示す。ＣＯＳＹスペクトルは、勾配パルスを用いて取られた。
【０２６３】
方法Ｄ．三量体−全エピカテキン 
アセトンを内部標準として用い、ＡＭＸ−３６０ ＭＨＺＮＭＲにおいて、適切なサンプル濃度１０ｍｇ／ｍＬにおいて、−１．８℃で、Ｄ2Ｏ中７０％ジュウテリウム置換アセトン中に、全スペクトルを取った。
【０２６４】
図４９Ａ〜Ｄは、全エピカテキン三量体の構造の特徴を示すために使用されたスペクトルを示す。これらの図は、1Ｈ、ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、およびＨＯＨＡＨＡを各々示す。ＣＯＳＹスペクトルは、勾配パルスを用いて取られた。
【０２６５】
実施例１９： プロシアニジンのチオール開裂 
プロシアニジンの構造の特徴を示すために、ベンジルメルカプタン（ＢＭ）をカテキン、エピカテキン、または二量体Ｂ２およびＢ５と反応させた。ベンジルメルカプタン、ならびにフロログルシノールおよびチオフェノールは、アルコール／酢酸環境下にプロシアニジンの加水分解（チオール開裂）に使用することができる。カテキン、エピカテキンまたは二量体（Ｂ２およびＢ５二量体の１：１混合物）（２．５ｍｇ）を、エタノール１．５ｍＬ、ＢＭ１００μＬおよび酢酸５０μＬに溶解し、容器（Ｂｅｃｋｍａｎアミノ酸分析器）を、排気し、窒素による最終パージ後に反応器が密封されるまで、窒素で繰り返しパージした。反応器を９５℃で熱ブロックに入れ、反応のアリコートを３０分、６０分、１２０分、および２４０分において取った。各アリコートの相対蛍光を、エピカテキン、カテキン、および二量体を各々表す図２５Ａ〜Ｃに示す。高オリゴマーも同様にチオール開裂される。
【０２６６】
実施例２０： 二量体のチオール開裂および脱硫 
二量体（Ｂ２またはＢ５；１．０ｍｇ）を、６００μＬ エタノール、４０μＬ ＢＭ、および酢酸２０μＬ中に溶解することによって、ベンジルメルカプタンを用いて二量体Ｂ２およびＢ５を加水分解した。混合物を、Ｂｅｃｋｍａｎアミノ酸分析器中で窒素下に９５℃で４時間加熱した。逆相ＨＰＬＣによる分析のために、アリコートを取り、各７５μＬのエタノールラニーニッケルおよび没食子酸（１０ｍｇ／ｍＬ）を、２ｍＬガラス瓶中の残留反応媒質に加えた。容器を水素でパージし、１時間の間に時々振った。生成物を０．４５μフィルターで濾過し、逆相ＨＰＬＣで分析した。代表的溶離プロフィールを図２６ＡおよびＢに示す。高オリゴマーも同様に脱硫される。このデータは、エピカテキンまたはカテキンの重合を示唆しており、従って、本発明の化合物の調製の合成経路を示す。
【０２６７】
実施例２１： ＭＤＡ ＭＢ ２３１ ヌードマウスモデルにおける五量体のｉｎ ｖｉｖｏ（生体内）活性 
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１／ＬＣＣ６細胞系。１０％ウシ胎児血清を含有し、加湿された５％ＣＯ2雰囲気中で３７℃に維持した改良最少必須培地（ＩＭＥＭ）中で、細胞系を増殖させた。
【０２６８】
マウス：６〜８週の雌のＮｃｒ ｎｕ／ｎｕ（無胸腺）マウスを、ＮＣＩから購入し、動物施設に入れ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅおよびＡｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅによって設けられた規則に従って管理した。腫瘍を持つマウスの体重を１日置き、および毎週計って、適切な薬剤用量を決めた。
【０２６９】
腫瘍移植：組織培養によって調製したＭＤＡ−ＭＤ−２３１をＩＭＥＭで３．３×１０6細胞／ｍＬに稀釈し、０．１５ｍＬ（即ち、０．５×１０6細胞）を、マウスの両側の乳首２と３の間に皮下注射した。腫瘍容量を、掛け算によって算出した：長さ×幅×高さ×０．５。処置群の腫瘍容量を平均し、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ試験を用いて、ｐ値を計算した。
【０２７０】
サンプル製造：血漿サンプルを心臓穿刺によって得、血液化学測定のために１５〜２０ｍＭ ＥＤＴＡと共に−７０℃で保管した。対象標準群と実験群との間に、差異は認められなかった。腫瘍細胞系ＭＤＡ−ＭＢ−２３４１の５００，０００個の細胞を予め皮下感染された１５匹のヌードマウスを、各５匹の３つの群に任意に分け、下記の１つを腹膜注射した：（ｉ）（ＤＭＳＯ）賦形剤のみを含有する偽薬；（ｉｉ）賦形剤（ＤＭＳＯ）中の、実施例１４の方法Ｄにおいて単離された精製五量体プロシアニジン抽出物２ｍｇ／マウス；および（ｉｉｉ）賦形剤（ＤＭＳＯ）中の、実施例１４の方法Ｄにおいて単離された精製五量体プロシアニジン抽出物１０ｍｇ／マウス。
【０２７１】
（ｉｉｉ）群のマウスは、１０ｍｇ投与後約４８〜７２時間以内に死んだが、一方、（ｉｉ）群のマウスは、見かけ上、正常であった。（ｉｉｉ）群のマウスの死因は不明であり、必ずしも本発明化合物の投与が原因とは言えない。それでもなお、１０ｍｇは毒性において上限であると見なされた。
【０２７２】
（ｉ）および（ｉｉ）群の処置を週に１度繰り返し、腫瘍成長を、実験群および対照標準群に関してそれぞれ監視した。２週間の処置後、（ｉｉ）群のマウスに毒性の兆候は観察されず、この群への投与量を１週間毎に１／２対数の割合で徐々に増加させた。下記表は、（ｉｉ）群のマウスの処置スケジュールの間に投与された用量を示す。
【０２７３】
2011006427.tif 000026
【０２７４】
処置の結果が、図２７ＡおよびＢ、ならびに表１０に示されている。
【０２７５】
表１０： 生体内抗癌結果 
【表１０−１】
2011006427.tif 000027
【表１０−２】
2011006427.tif 000028
【表１０−３】
2011006427.tif 000029
【０２７６】
新規フラクションおよび新規化合物が、抗新生物組成物において明らかに有効性を有し、低度〜中等度の投与量において毒性ではなく、高投与量における毒性を不要な実験をすることなく測定できることを、これらの結果が実証している。
【０２７７】
実施例２２： カカオ抽出物の抗微生物活性 
方法Ａ： 食物腐蝕または病原において重大な種々の微生物に対する、カカオ豆からの粗プロシアニジン抽出物の抗微生物活性を評価するために、試験を行った。実施例２の方法Ａからのカカオ抽出物を試験に使用した。各試験培養物の増殖に適した寒天培地に（９９ｍＬ）、０．４５％塩水中の各細胞培養物懸濁液１ｍＬをまき（最終集団１０2〜１０4ｃｆｕ／ｍＬ）、ペトリ皿に入れた。＃２コルク錐（直径５ｍｍ）で硬化寒天に穴を開けた。プレートを４℃で一晩遠心分離にかけて、抽出物を寒天中に拡散させ、続いて、原微生物（ｔｅｘｔ ｏｒｇａｎｉｓｍ）に適した増殖温度において培養した。結果は以下の通りであった。
【０２７８】
2011006427.tif 000030
【０２７９】
原培養物（ｔｅｘｔ ｃｕｌｔｕｒｅ）としてＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓを用いて、前記の穴拡散アッセイ（方法Ａ）を行う他の試験において、カカオ豆からの精製プロシアニジン抽出物の抗微生物活性が示された。結果は以下の通りであった：カカオ抽出物：
実施例１３、方法Ａに記載の１０ｍｇ／１００μＬ脱カフェイン／脱テオブロミンアセトン抽出物実施例１４、方法Ｄに記載の１０ｍｇ／１００μＬ 二量体（９９％純粋）
実施例１４、方法Ｄに記載の１０ｍｇ／１００μＬ 三量体（９５％純粋）
実施例１４、方法Ｄに記載の１０ｍｇ／１００μＬ 六量体（８８％純粋）
実施例１４、方法Ｄに記載の１０ｍｇ／１０μＬ 八量体／九量体（９２％純粋）
実施例１４、方法Ｄに記載の１０ｍｇ／１００μＬ 九量体＆高量体（８７％純粋）
2011006427.tif 000031
【０２８０】
方法Ｂ： 実施例２の方法２に記載の粗プロシアニジン抽出物を、種々の濃度において、ＴＳＢ（Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ 大豆汁（Ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈ））にフェノールレッド（０．０８ｇ／Ｌ）と共に加え、ＴＳＢにＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓまたはＳ．ｎｅｗｐｏｒｔ（１０5ｃｆｕ／ｍＬ）を植え付け、３５℃で１８時間培養した。結果は以下の通りである：
2011006427.tif 000032
【０２８１】
表中、酸生成による汁培養物の赤色から黄色への変化から明らかであるように、＋＝増殖、および−＝非増殖である。阻害の確認を、ＴＳＢ管からＸＬＤプレートに平板化する（ｐｌａｔｉｎｇ）ことによって行った。
【０２８２】
この実施例は、新規化合物が食物製造および保存に有用であることを示している。
【０２８３】
この実施例はさらに、グラム陰性およびグラム陽性細菌増殖が、新規化合物によって阻害されることを示している。このことから、新規化合物は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉを阻害するのに使用することができる。Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉは、胃潰瘍および胃癌の誘発に関係している。従って、新規化合物は、細菌由来のこれらのまたは他の疾病の処置および防止に使用することができる。好適な投与経路、投与量、および処方は、疾患および対象の年齢、体重、性別、一般的健康状態のような当分野で既知の要因を考慮することによって、不要な実験をすることなく、決めることができる。
【０２８４】
実施例２３： 抽出物のハロゲンを含まない分析分離 
１００Å Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−Ｓｉ ５μｍ（２５０×４．６ｍｍ）で、流速１．０ｍＬ／分において、カラム温度３７℃で、ハロゲンを含まない標準相クロマトグラフィーによる分析分離によって、実施例２から得られるプロシアニジンを部分精製した。下記条件下における線状勾配によって、分離を補助した：（時間、％Ａ、％Ｂ）；（０，８２，１４）；（３０，６７．６，２８．４）；（６０，４６，５０）。移動相組成は、Ａ＝３０／７０％ ジエチルエーテル／トルエン；Ｂ＝メタノール；およびＣ＝酢酸／水（１：１）。成分を、２８０ｎｍのＵＶによって検出した。代表的溶離プロフィールが表２８に示されている。
【０２８５】
実施例２４： プロシアニジンの標準相ＨＰＬＣ分離のための固定相の孔寸法の効果 プロシアニジンの分離を向上させるために、シリカ固定相のより大きい孔寸法の使用が調査された。シリカ−３００、５μｍ、３００Å（２５０×２．０ｍｍ）、または、シリカ−１０００、５μｍ、１０００Å（２５０×２．０ｍｍ）で、分離を行った。線状勾配を移動相組成として用いた：Ａ＝ジクロロメタン；Ｂ＝メタノール；およびＣ＝酢酸／水（１：１）。λex＝２７６ｎｍおよびλem＝３１６ｎｍの蛍光によって、２８０ｎｍのＵＶ検出器によって、成分を検出した。流速は、１．０ｍＬ／分であり、炉温度は３７℃であった。３種のカラム（１００Å孔寸法、実施例１３、方法Ｄより）からの代表的クロマトグラムが、図２９に示されている。これは、プロシアニジンの分離に有効な孔寸法を示している。
【０２８６】
実施例２５： 発酵を操作することによって所望のプロシアニジンを得る 
カカオ発酵に関わる系統を代表する微生物菌株を、Ｍ＆Ｍ／Ｍａｒｓカカオ培養収集（ｃｏｃｏａ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から選択した。下記の単離物を使用した： 
Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ ＡＴＣＣ １５９７３ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． （ＢＨ４２）
Ｃａｎｄｉｄａ ｃｒｕｚｉｉ （ＢＡ１５）
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ （ＢＡ１３）
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ （ＢＥ３５）
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ （ＭＥ１２）
各菌株を、原培養（ｓｔｏｃｋ ｃｕｌｔｕｒｅ）から新たな培地に移した。酵母およびＡｃｅｔｏｂａｃｔｅｒを、２６℃で７２時間培養し、ｂａｃｉｌｌｉおよびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓを３７℃で４８時間培養した。使用前に、斜面を５ｍＬ燐酸緩衝液で採集した（ｈａｒｖｅｓｔｅｄ）。
【０２８７】
カカオ豆を、新鮮な莢から採集し、果肉および種皮を取り除いた。豆を過酸化水素（３５％）で２０分間滅菌し、続いて、泡立ちが止むまでカタラーゼで処理した。豆を滅菌水で２回濯ぎ、工程を繰り返した。豆をガラス広口瓶に分割して入れ、下記表に詳述されている方法で処理した： 
2011006427.tif 000033
【０２８８】
卓上規模の発酵を２反覆で行った。全ての処置物を下記の様にインキュベートした：
第１日：２６℃ 
第２日：２６℃〜５０℃ 
第３日：５０℃ 
第４日：４５℃ 
第５日：４０℃ 
モデル発酵を、プレート計数によって試験期間にわたって監視し、微生物集団、および微生物代謝物質の産生に関する発酵培地のＨＰＬＣ分析を評価した。処理後、豆を層流フード下で乾燥して、０．６４の水活性にし、６６℃で１５分間炒った。サンプルをプロシアニジン分析のために製造した。１つの処理に対して３つの豆を粉砕し、ヘキサンで脱脂し、続いて、アセトン：水：酢酸（７０：２９．５：０．５％）溶液で抽出した。アセトン溶液抽出物を濾過してガラス瓶にいれ、実施例１３の方法Ｂに記載のように、ポリフェノールレベルを標準相ＨＰＬＣによって定量した。残りの豆を粉砕し、味みした。モデル卓上発酵工程の培養および分析プロフィールを図３０Ａ〜Ｃに示す。種々の発酵処理にかけたカカオ豆のプロシアニジンプロフィールを図３０Ｄに示す。
【０２８９】
この実験は、本発明が特定のカカオ遺伝子型に限定される必要がないことを示し、および、発酵操作によって、特定のＴｈｅｏｂｒｏｍａまたはＨｅｒｒａｎｉａ種あるいはそれらの種間または種内の特定の雑種によって産生されるプロシアニジンレベルを、調節することができる、例えば強化することができることを示している。
【０２９０】
下記表は、Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ ｇｅｎｕｓおよびそれらの種間または種内の特定の雑種を代表するサンプルにおいて測定されたプロシアニジンレベルを示す。サンプルは、実施例１および２（方法１および２）に記載のように製造され、実施例１３の方法Ｂに記載のように分析された。このデータは、新規化合物を含有する抽出物が、ＴｈｅｏｂｒｏｍａおよびＨｅｒｒａｎｉａ種、およびそれらの種間および種内の特定の雑種において、見出されることを示している。
【０２９１】
2011006427.tif 000034
【０２９２】
実施例２６：ＮＯにおけるプロシアニジンの効果方法Ａ． 
この研究の目的は、プロシアニジン（実施例１４の方法Ｄと同様に）と、脳の血管拡張を誘導することが知られているＮＯとの間の関係を確立することである。１００μｇ／ｍＬから０．１μｇ／ｍＬまでの範囲の濃度で、ナイトレートの生成（ＮＯの異化）における、ＨＵＶＥＣ（ヒト臍帯静脈内皮細胞）から単量体および高オリゴマーの効果を評価する。２４から４８時間まで各々のプロシアニジンの存在下または不在下でＨＵＶＥＣ（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓから）を調べた。実験の終わりに、上清を収集し、そして熱量計アッセイによってナイトレート含有率を測定した。別の実験で、ＨＵＶＥＣを、２４から４８時間までプロシアニジンの存在下または不在下でＮＯ生成を誘導することが知られているアセチルコリンとインキュベートした。実験の終わりに、上清を収集し、そして熱量計アッセイによってナイトレート含有率を測定した。ＮＯシンターゼの特異的な遮断剤であるニトロアルギニンまたは（１）−Ｎ−メチルアルギニンを添加することによって、ＮＯの役割を確かめた。
【０２９３】
方法Ｂ． フェニレフリン誘導の収縮ラット動脈の血管弛緩 
ラット動脈での各々のプロシアニジン（１００μｇ／ｍＬから０．１μｇ／ｍＬ）の効果は、フェニレフリン誘導の収縮ラツト動脈の血管弛緩の研究の目的である。単離したラット動脈を、プロシアニジンの存在下または不在下でインキュベートし（実施例１４の方法Ｄと同様に）、そして筋肉緊張（正常）の変化を目視により評価する。ラット動脈の収縮および弛緩の両方を測定した。その後、他の臓器を使用して、エピネフリンを添加することにより、単離ラット動脈の早期収縮を誘導した。いったん収縮が安定化すると、プロシアニジンを添加し、そしてラット動脈の収縮および弛緩を測定する。ニトロアルギニンまたは（１）−Ｎ−メチルアルギニンを添加することによって、ＮＯの役割を確認する。それがフェニレフリン早期収縮ラット大動脈によって影響される場合、ＮＯのアセチルコリン誘導弛緩は、図３１に示される。
【０２９４】
方法Ｃ． ラットでの低血圧症の導入 
この方法は、血圧における各々のプロシアニジンの効果（実施例１４の方法Ｄと同様）に指向される。収縮期および弛緩期血圧を監視するために、ラットに機器を取りつける。各々のプロシアニジンを静脈で注入し（用量範囲＝１００−０．１μｇ／ｋｇ）、そして血圧の変化を評価する。さらに、エピネフリンによって引起こされた血圧の変化における各プロシアニジンの効果を測定する。ニトロアルギニンまたは（１）−Ｎ−メチルアルギニンを添加することによって、ＮＯの役割を確認する。
【０２９５】
次の実施例と共に、これらの研究では、発明の化合物が、血管拡張を調節するのに有用であり、そしてさらに血圧を調節することまたは冠状症状、および偏頭痛症状に取組むことに関して有用であることを例示する。
【０２９６】
実施例２７：満腹時のカカオポリフェノールの効果 
空腹と満腹の発生についてのｉｎ ｖｉｖｏで生じるシグナル現象についての指標として血液グルコース濃度を使用して、４８歳の健康な男性成人の提供者を用いて一連の簡潔な実験を行って、カカオポリフェノールが、グルコース濃度を調節するかどうかを決定した。Ｃｌａｐｐｅｒｔｏｎら（１９９２年）によって記載された方法に従って、ブラジルのカカオ豆からカカオポリフェノールを部分的に精製した。この材料は、カフェインまたはセオブロミンを含まなかった。７５ｍｇのカカオポリフェノールと一緒に、またはなしに、１０ｆｌ．ｏｚのＤｅｘｉｃｏｌａ７５（カフェイン不含）グルコース耐性試験飲料（Ｃｕｒｔｉｎ Ｍａｔｈｅｓｏｎ ０９１−４２１）を摂取した後、一定基準で絶食血液グルコース濃度の０．１％を分析した。このレベルのポリフェノールは、試験飲料の総グルコースを表し、そして標準的な１００ｇチョコレートバーに存在するおよその量を反映した。Ａｃｃｕ−Ｃｈｅｋ ＩＩＩ血液グルコース監視システム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して、血液グルコース濃度を測定した。試験飲料を摂取する前に、そして以下の一定間隔：１５、３０、４５、６０、７５、９０、１２０および１８０分で試験飲料を摂取した後、血液グルコース濃度を測定した。各グルコース耐性試験の開始前に、高および低グルコース濃度対照を測定した。各グルコース耐性試験は二重に行った。１０ｆｌ．ｏｚ．蒸留水（グルコースなし）中に溶解させた７５ｍｇカカオポリフェノールを含む対照試験溶液も行った。
【０２９７】
以下の表１１は、この研究で行われる各グルコース耐性試験に関して得られたデータおよび対照値を列記する。図３２は、３時間のコースを通して得られた血液グリコール濃度の標準偏差での平均値のプロットを表す。カカオポリフェノールを含有する試験混合物を摂取した後、血糖レベルに実質的な増加が得られたこをは容易に明らかである。２つの主なグルコース耐性プロフィールの差異は、カカオポリフェノールのみの溶液を摂取した後に得られるプロフィールによって解消されなかった。グルコース試験飲料にカカオポリフェノールを添加すると、グルコース耐性プロフィールをかなり上昇させた。典型的なグリコール耐性プロフィールが正常であると考えられる場合でさえ、血液グルコースレベルでのこの上昇は、中程度の糖尿病と考えられる範囲にある（Ｄａｖｉｄｓｏｎ，Ｉ．ら編、実験室方法によるＴｏｄｄ−Ｓａｎｄｆｏｒｄの臨床診断、第１４版；Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．；ペンシルベニア州フィラデルフィア、１９６９、１０章、５５０−９頁）。これは、追加のグルコースでの差分が、本発明の化合物の結果としてグリコーゲン貯蔵から血流に放出されたことを示唆する。したがって、本発明の化合物は、糖が存在した場合に、血液グルコースレべルを調節するのに使用できる。
【０２９８】
表１１． グルコース耐性試験データおよび対照の結果 
【表１１】
2011006427.tif 000035
【０２９９】
ａ＝予測範囲：253−373mg/dL 
ｂ＝予測範囲：50-80mq/dL 
対象は、本発明の化合物の摂取に続いて顔面紅潮（紅斑）およびもうろう状態を経験し、血管拡張の調節が示される。
【０３００】
表１２および１３に表されたデータは、カカオの生の材料および市販のチョコレートに関する発明抽出物、そしてここに含まれる本発明の化合物は、医薬、獣医学および食品科学製品および用途のビヒクルとして使用できるという事実を例示する。
【表１２】
2011006427.tif 000036
【表１３】
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【０３０１】
実施例２８：シクロオキシゲナーゼ１および２におけるプロシアニジンの効果 室温で、１０分間、アラキドン酸（５μＭ）と一緒に、様々な濃度の単量体から十量体までを含むプロシアニジン溶液およびプロシアニジン混合物の存在下で、シクロオキシゲナーゼ１および２（ＣＯＸ１／ＣＯＸ２）活性におけるプロシアニジンの効果を、それぞれラムの精巣およびヒツジ胎児から由来する酵素をインキュベートすることによって評価した。Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ（フランス国）から得たＰＧＥ２ ＥＩＡキットを使用することにより、出来高を評価した。対照化合物としてインドメタシンを使用した。結果は、以下の表（ここで、ＩＣ50値は、μＭ（Ｓ１１以外、それは、実施例１３方法Ａから調製されたプロシアニジン混合物を表し、そしてサンプルＳ１からＳ１０までは、実施例１４の方法Ｄと同様に、連続してプロシアニジンオリゴマー（単量体から十量体まで）を表す）の単位で表され、そしてＩＣ50は、ｍｇ／ｍＬの単位で表される）を表す。
【０３０２】
2011006427.tif 000038
【０３０３】
（*）サンプル１１（それはｍｇ／ｍＬである）以外ではｕＭとして表される。 
阻害の研究の結果は、図３３ＡおよびＢに表され、それはＣＯＸ１およびＣＯＸ２活性におけるインドメタシンの効果を示す。図３４ＡおよびＢは、プロシアニジンの重合の程度と、ＣＯＸ１およびＣＯＸ２でのＩＣ50の間の相互関係を示す；図３５は、ＣＯＸ１およびＣＯＸ２でのＩＣ50値の間の相互関係を示す。さらに、図３６ＡからＶは、ＣＯＸ１およひＣＯＸ２での各サンプル（Ｓ１−Ｓ１１）のＩＣ50示す。
【０３０４】
これらの結果は、本発明の化合物が、鎮痛性、抗凝固性、および抗炎症剤有用性を示すことを指す。さらに、ＣＯＸ２は、結腸癌に関連してきた。本発明の化合物によるＣＯＸ２活性の阻害は、本発明の化合物が結腸癌に対する抗ネオプラスチック活性を示す、もっともらしい機構を例示する。
【０３０５】
ＣＯＸ１およびＣＯＸ２は、プロスタグランジンの合成にも関係している。したがって、この実施例での結果は、本発明の化合物が、腎機能、免疫応答、熱、痛み、有糸分裂生起、アポトプシス、プロスタグランジン合成、潰瘍形成（例えば、胃の）および増殖を促進できることも示す。腎機能の調節は、血圧に影響を与えることに注目し、そしてさらに、発明の化合物が、血圧、血管拡張および冠状症状（例えば、アンギオテンシン、ブラディキニンの調節）に関係している。
【０３０６】
Ｓｅｉｂｅｒｔら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９１：１２０１３−１２０１７（１９９４年１２月）、Ｍｉｔｃｈｅｌｌら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０：１１６９３−１１６９７（１９９４年１２月）、Ｄｅｗｉｔｔら、Ｃｅｌｌ ８３：３４５−３４８（１９９５年１１月３日）、Ｌａｎｇｅｎｂａｃｋら、Ｃｅｌｌ ８３：４８３−９２（１９９５年１１月３日）およびＳｕｊｉｉら、Ｃｅｌｌ ８３：４９３−５０１（１９９５年１１月３日）、Ｍｏｒｈａｍら、Ｃｅｌ１ ８３：４７３−８２（１９９５年１１月３日）を参照する。
【０３０７】
さらに実施例９、２６、および２７を参照する。実施例９では、本発明の化合物の抗酸化剤活性が示される。実施例２６では、ＮＯにおける効果が示される。そして、実施例２７は、顔面血管拡張の証拠を提供する。この実施例での結果から、実施例９、２６および２７と組合せて、本発明の化合物は、生理学的効果を制御するフリーラジカル機構を調節できる。同様に、ロイコトリエン合成に向けて生化学的に指向されたリポキシゲナーゼ媒介フリーラジカル型の反応は、本発明の化合物によって調節でき、それにより次の生理学的効果（例えば、炎症、免疫応答、冠状症状、癌化機構、熱、痛み、潰瘍形成）に影響を及ぼす。
【０３０８】
したがって、鎮痛特性を示すことに加えて、他の鎮痛剤と共に投与される場合、発明の化合物による共力効果もありうる。同様に、抗ネオプラスチック特性を示すことに加えて、他の抗ネオプラスチック剤と共に投与される場合、発明の化合物による共力効果もありうる。
【０３０９】
実施例２９：プロシアニジンの円偏光二色性／研究 
実施例１４の方法Ｄでの通り精製プロシアニジンの構造を解明するのに努力してＣＤ（円偏光二色性）調査を行った。ＣＤスペクトラム・ソフトウエアＡＶＩＶ６０ＤＳＶ４． １ｆを使用して、２５℃でスペクトラムを収集した。
【０３１０】
サンプルを、３００ｎｍ〜１８５ｎｍで、１．５ｎｍバンド幅で、１．００ｎｍごとに走査した。代表的ＣＤスペクトラムは、図４３Ａ〜Ｇに示され、それは、二量体〜八量体までのＣＤスペクトラムを示す。
【０３１１】
これらの結果は、発明の化合物の螺旋特性の指標となる。
【０３１２】
実施例３０：Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ（ヘリコバクター・ピロリ）およびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（スタフィロコッカス・アウレウス）におけるカカオ・プロシアニジンの阻害効果 
Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ（ヘリコバクター・ピロリ）およびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（スタフィロコッカス・アウレウス）に対するプロシアニジン・オリゴマーの抗微生物活性を評価する調査を行った。実施例１３方法Ａに記述される通り五量体に富む材料を製造し、そして実施例１４方法Ｃに記述される通り分析し、ここで８９％は五量体であり、そして１１％は高度のオリゴマー（ｎは６〜１２である）であった。精製五量体（９６．３％）を実施例１４方法Ｄに記述される通り製造した。
【０３１３】
Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ（ヘリコバクター・ピロリ）およびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（スタフィロコッカス・アウレウス）を、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ｔｈｅ ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ）から入手した。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉについては、バイアルを、０．５ｍＬトリプチカーゼ大豆ブロスで再水和し、そして懸濁液を、５％線維素除去ヒツジ血液を含有する新鮮ＴＳＡのスラントに移した。スラントを３７℃で、３〜５日間、嫌気ジャー中の微好気条件（５〜１０％二酸化炭素、ＣａｍｐｙＰａｋＰｌｕｓ、ＢＢＬ）でインキュベートした。スラントの底にあるブロスの貯蔵で、成長がよいことか認められたら、ブロスを、ヒツジ血液を有するＴＳＡの追加のスラントに接種するのに使用した。連続予備培養で生存率が低下するので、スラントから回収されるブロスを貯蔵し、そして−８０℃で保存した。アッセイのための培養物は、冷凍バイアルから直接使用された。Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（エス．アウレウス）培養を、ＴＳＡスラントに維持し、使用２４時間前に、新鮮スラントに移した。
【０３１４】
各培養の細胞懸濁液を製造し（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ、１０8〜１０9ｃｆｕ／ｍＬ；Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（エス．アウレウス）１０6〜１０7ｃｆｕ／ｍＬ）、そして０．５ｍＬを、５％ヒツジ血液を有するＴＳＡプレートに拡散させた。標準アッセイディスク（Ｄｉｆｃｏ）を、無菌にした濾過に漬け、五量体の一連の希釈（無菌水中２３ｍｇ／ｍＬ）を行った。試験ディスクおよびブランク対照ディスク（無菌水）を接種したプレートに載せた。８０ｕｇメトロニダゾール（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉに対する阻害）または３０ｕｇバンゴマイシン（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（エス．アウレウス）に対する阻害）（ＢＢＬ Ｓｅｎｓｉｄｉｓｅｓ）を含有する対照ディスクも、適切な組のプレートに載せた。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ接種プレートを、微好気条件下でインキュベートした。Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（エス．アウレウス）の組を、嫌気的にインキュベートした。発芽後成長に続いて阻害の領域を測定した。
【０３１５】
表１４ Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ（ヘリコバクター・ピロリ）およびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（スタフィロコッカス・アウレウス）に対する五量体を用いたバイオアッセイ 
【表１４】
2011006427.tif 000039
【０３１６】
ＮＩ＝阻害なし。
【０３１７】
実施例３１：モルモットでの非防御低血圧 
モルモット血圧における５つのカカオ・プロシアニジンフラクションの効果を調査した。簡潔には、モルモット（およそ４００ｇ体重；雄および雌）を４０ｍｇ／ｋｇペントバルビタールナトリウムの注入により麻酔をかけた。頚動脈に、動脈血圧を監視するためにカニューレを挿入した。５つのカカオ・プロシアニジンフラクションの各々を、頚静脈血管を通して静脈に注入した（用量範囲０．１ｍｇ／ｋｇ−１００ｍｇ／ｋｇ）。ポリグラフで、血圧の変化を記録した。これらの実験では、ＮＯの役割を、カカオ・プロシアニジンフラクションを投与する１０分前にＬ−Ｎ−メチルアルギニン（１ｍｇ／ｋｇ）を投与するすることで確認した。
【０３１８】
カカオ・プロシアニジンフラクションを、米国特許第５，５５４，６４５号に記載の手段にしたがって、製造および分析し、それにより参照してここに組込まれた。
【０３１９】
フラクションＡ：単量体−四量体を含む分取ＨＰＬＣフラクションを表す。ＨＰＬＣ分析は、以下の組成：
単量体 ４７．２％
二量体 ２３．７
三量体 １８．７
四量体 １０．３
を示した。
【０３２０】
フラクションＢ：五量体−十量体を含む分取ＨＰＬＣフラクションを表す。ＨＰＬＣ分析は、以下の組成：
五量体 ６４．３％
六量体 ２１．４
七量体 ７．４
八量体 １．９
九量体 ０．９
十量体 ０．２
を示した。
【０３２１】
フラクションＣ：フラクションＡおよびＢ（上述）の製造に使用したカカオ・プロシアニジンに富むフラクションを表す。ＨＰＬＣ分析は、以下の組成：
単量体 ３４．３％
二量体 １７．６
三量体 １６．２
四量体 １２．６
五量体 ８．５
六量体 ５．２
七量体 ３．１
八量体 １．４
九量体 ０．７
十量体 ０．３
を示した。
【０３２２】
フラクションＤ：ミルクチョコレートから製造されたプロシアニジン抽出物を表す。ＨＰＬＣ分析は、表１２にブランド８として列記されたものと同様の組成物を示した。さらに、カフェイン１０％およびテオブロミン６．３％が存在した。
【０３２３】
フラクションＥ：アルカリ化リカーで製造されたダークチョコレートから製造されたプロシアニジン抽出物を表す。ＨＰＬＣ分析は、表１２にブランド１２として列記されたものと同様の組成物を示した。さらに、カフェイン１６．０％およびテオブロミン５．８％が存在した。
【０３２４】
３つの別々の実験で、麻酔をかけられたモルモットの動脈血圧に１０ｍｇ／ｋｇカカオ・プロシアニジンフラクションを投与する効果を調査した。静脈注射により、プロシアニジンフラクションＡおよびＥは、約２０％の血圧減少を起こした。この減少は、溶媒（ＤＭＳＯ）対照（１５±５％、ｎ＝５）から得られるものとわずかに異なっていた。対称的に、プロシアニジンフラクションＢ、ＣおよびＤ（１０ｍｇ／ｋｇ）は、Ｃについて５０−６０％まで、血圧での目立った減少を誘導した。これらの実験で、低血圧効果の等級（オーダー）は、以下の通りであった：Ｃ＞Ｂ＞Ｄ＞＞Ａ＝Ｅ。
【０３２５】
図５０Ａ及びＢは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ及びＣが各々血圧に及ぼす作用を示している；血圧レベルはフラクションＡの投与後１分間以内に２１．４３％低下し、１５分後に正常値に回復したが、フラクションＣの投与後１分間以内に５０．５％低下した血圧は５分後に正常値に回復した。
【０３２６】
プロシアニジンフラクションを注射した後に顕在化した血圧の代表的な記録は、フラクションＡについては図５０Ａで、そしてフラクションＣについては図５０Ｂで明らかにされた。図５１は、麻酔をかけたモルモットにおける動脈血圧へのカカオプロシアニジンのフラクションが及ぼす作用を示している。図５１は、これらのフラクションによる血圧における相対的効果を例示する。
【０３２７】
フラクションＣを投与することによって誘導されるモルモットでの低血圧におけるＮＯの可能な原因を、Ｌ−Ｎ−メチルアルギニン（ＬＮＭＭＡ）を用いて分析した。この薬理学上の剤は、ＮＯシンターゼを阻害することによってＮＯの形成を阻害する。カカオ・プロシアニジンフラクションを注入する１０分前に、Ｌ−ＮＭＭＡを、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。図５２は、麻酔をかけたモルモットにおけるカカオプロシアニジンのフラクションＣにより誘発された動脈圧の変化へのＬ−ＮＭＭＡの作用を示している。図５２に示される通り、Ｌ−ＮＭＭＡを動物を処置することは、プロシアニジンフラクションＣによって引起こされた低血圧を完全に遮断した。実際、この阻害剤での処置に続いて、フラクションＣによって生じた血圧の変化は、溶媒のみで表されるものと類似した。
【０３２８】
実施例３２：ＮＯにおけるカカオ・プロシアニジンフラクションの効果
ヒト臍帯血管内皮細胞での生成 Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓからヒト臍帯血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を得、そして製造業者の仕様書に従って、培養を行った。ＨＵＶＥＣ細胞を、１２ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ）中に５，０００細胞／ｃｍ2で種まきした。同じ条件下での第３継代後、それらを融合に達しさせた。上清を、実施例３１に記載された通り、定義された濃度のブラディキニン（２５、５０および１００ｎＭ）またはカカオ・プロシアニジンフラクションＡ−Ｅ（１００μｇ／ｍＬ）を含む新たな培養基に換えた。２４時間培養を継続し、そして細胞不含の上清を収集し、以下に記載される通りＮＯ含有率を評価するまで冷凍貯蔵した。選択実験で、ＮＯシンターゼ（ＮＯＳ）アンタゴニスト、Ｎω−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル（Ｌ−ＮＡＭＥ、１０μＭ）を添加して、観察したＮＯ生成中でのＮＯＳの改善を評価した。
【０３２９】
グリース（Ｇｒｉｅｓｓ）反応によって培養上清で亜硝酸塩濃度を測定することによって、ＨＵＶＥＣのＮＯ生成を計算した。グリース試薬は、１％スルファニルアミド、０．１％Ｎ−（１−ナフチル）−エチレンジアミン・ジヒドロクロライドであった。簡潔には、５０μＬのアリコート量を、四種に様々な上清から取り、そして１５０μＬのグリース試薬でインキュべートした。５４０ｎｍでの吸光度を、マルチスキャン（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎｓ ＭＣＣ／３４０）装置で測定した。亜硝酸ナトリウムを規定濃度で使用して、標準曲線を確立した。細胞なしの培養基（ブランク）の吸光度を、上清を含む細胞で得られた値から減じた。 
図５３は、ＨＵＶＥＣによるＮＯ産生へのブラジキニンの作用を示している。図５３は、用量依存性のＮＯの放出が観察されるＨＵＶＥＣによるＮＯ生成におけるブラディキニンの効果を例示する。阻害剤Ｌ−ＮＡＭＥは、ブラディキニン誘導ＮＯ放出を完全に阻害した。
【０３３０】
図５４は、ＨＵＶＥＣによるマクロファージＮＯ産生へのカカオプロシアニジンのフラクションが及ぼす作用を示している。図５４は、ＨＵＶＥＣ細胞によるＮＯ生成におけるカカオ・プロシアニジンフラクションの効果を例示する。フラクションＢ、ＣおよびＤは、中程度であるが、ＨＵＶＥＣによる際立った量のＮＯ生成を誘導する。はるかに、フラクションＣは、ニトリットの生成により評価される通り、ＮＯ形成を誘導するのに最も効果的なフラクションであった一方で、フラクションＥはほとんど効果がなかった。ＮＯ生成についてのフラクションＣの効果は、Ｌ−ＮＡＭＥの存在下で劇的に減らされた。興味深いことには、フラクションＢ、ＣおよびＤは、フラクションＡおよびＥより高い量のプロシアニジン・オリゴマーを含有した。フラクションＤとＥの間の際立った差は、Ｅが、チョコレート材料の一部としてアルカリ化カカオリカーを使用したダークチョコレートから製造されたということだった。アルカリ化は、これらの化合物のレベルを迅速に奪うプロシアニジンの塩基触媒の重合を引起こす。このタイプのチョコレートに見られるプロシアニジンレベルの分析上の比較は、ブランド１２がアルカリ化カカオリカーから製造されたダークチョコレートであり、そしてブランド１１が典型的なミルクチョコレートである表１２で明らかにする。したがって、ミルクチョコレートから得られた抽出物は、ＮＯを誘導する能力のある、高い比率のプロシアニジン・オリゴマーを含有する。ＮＯ阻害剤Ｌ−ＮＭＭＡをフラクションＣサンプルに添加すると、明らかにＮＯを阻害させる。プロシアニジンフラクションから得られた結果は、ブラディキニン誘導ＮＯ試験で観察されたものに一致した（図５３参照）。
【０３３１】
ＨＵＶＥＣの結果の場合のように、カカオ・プロシアニジンフラクションＣは、モルモットにおける主要な低血圧効果を顕在化した一方で、フラクションＡおよびＥは、最も効果が低かった。さらに、高分子量のプロシアニジン・オリゴマーの存在は、ＮＯ生成を刺激することに関係した。
【０３３２】
実施例３３：マクロファージのＮＯ生成におけるカカオ・プロシアニジンフラクションの効果 
新鮮なヒトヘパリン処理済血液（７０ｍＬ）を、室温で、同量のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）と一緒に添加した。１０ｍＬ血液−ＰＢＳに対して３ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅを使う希釈比で、血液−ＰＢＳ混合液の底にＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ溶液を層にした。試験管を３０分間、２０００ｒｐｍで、１８−２０℃で遠心分離した。血漿および血小板を含む上層を捨てた。単核細胞層を、別の遠心管に移し、そして細胞を、Ｈａｎｋｓの平衡生理食塩溶液で２回洗浄した。単核細胞層を、１０％胎児ウシ血清で補足した完全ＲＰＭＩ１６４０に再懸濁し、計数し、そしてトリパンブルー封入法によって生存率を測定した。細胞ぺレットを、２０％胎児ウシ血清で補足して、１×１０6細胞／ｍＬの最終濃度になった完全ＲＰＭＩ１６４０に再懸濁した。アリコート量の細胞懸濁液を、９６ウェル培養プレートに載せ、そして１０％胎児ウシ血清で補足したＲＰＭＩ１６４０で３回洗浄し、非接着細胞（リンパ球）を捨てた。
【０３３３】
実施例３１で記載された５つのプロシアニジンフラクションの存在または不在下で、これらの細胞を４８時間インキュベートした。インキュベーション期間の終わりに、培養基を収集し、遠心分離し、そして硝酸アッセイ測定法のために細胞不含上清を冷凍貯蔵した。
【０３３４】
グレース反応により亜硝酸濃度を測定することによって、マクロファージＮＯ生成を測定した。グレース試薬は、１％スルファニルアミド、０．１％Ｎ−（１−ナフチル）−エチレンジアミンジヒドロクロライドであった。簡潔には、５０μＬのアリコート量を、４重に上清から取り、１５０μＬのグレース試薬と共にインキュベートした。５４０ｎｍでの吸光度を、マルチスキャン（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ ＭｕｌｔｉｓｋａｎｓＭＣＣ／３４０）装置で測定した。亜硝酸ナトリウムを規定濃度で使用して、標準曲線を確立した。細胞なしの培養基（ブランク）の吸光度を、上清を含有する細胞で得られた値から減じた。
【０３３５】
別の実験で、マクロファージを、５Ｕ／ｍＬガンマーインターフェロンの存在下で１２時間初回免疫し、そしてその後、１００μｇ／ｍＬの５つのプロシアニジンフラクションの存在または不在下で、次の３６時間、１０μｇ／ｍＬ ＬＰＳで刺激した。
【０３３６】
図５５は、マクロファージＮＯ産生にカカオプロシアニジンのフラクションが及ぼす作用を示している。図５５は、１００μｇ／ｍＬでの唯一プロシアニジンフラクションＣが、単核細胞／マクロファージによってＮＯ生成を誘導できたことを示す。これらの細胞による基本的なＮＯ生成は、検出できず、そしてニトリットは、１００μｇ／ｍＬで使用されたカカオ・プロシアニジンフラクションのいずれかで検出できなかった。図５６は、ＬＰＳ誘発性及びγ−インターフェロン活性化マクロファージへのカカオプロシアニジンのフラクションが及ぼす作用を示している。図５６は、プロシアニジンフラクションＡおよびＤが、γ−インターフェロン初回免疫済単核細胞／マクロファージによってＬＰＳ−誘導ＮＯ生成を増強することを示す。プロシアニジンフラクションの不在下で培養されたＬＰＳ−刺激単核細胞／マクロファージが、４μモル／１０5細胞／４８時間のみを生成したので、プロシアニジンフラクションＣは、ほとんど有効でなかった。γ−インターフェロンのみでは、ＮＯを誘導する上で効果的でなかった。
【０３３７】
まとめると、これらの結果は、特定の濃度で使用された発明の化合物の混合物が、ＬＰＳまたはサイトカインによる刺激から独立または依存の両方で単核細胞／マタロファージＮＯ生成を誘導する能力があることを例示する。
【０３３８】
前述から、本発明の組成物、方法およびキットと同様に、抽出およびカカオ・ポリフェノール、特に発明の化合物は、際立った、非常に多くの利用性を示すことは明らかである。
【０３３９】
抗親生物形成の利用性は、ここでのｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏのデータによって明確に示され、そして発現の化合物を、従来の抗親生物形成剤の代わりに、またはと関連して使用できることを示す。
【０３４０】
本発明の化合物は、抗酸化安定性と同様に、ＢＨＴとＢＨＡのものと同じ抗酸化剤活性を示す。したがって、本発明は、抗酸化剤、例えば抗酸化剤、食品添加剤のようなＢＨＡおよびＢＨＴの公知利用性で、ＢＨＴまたはＢＨＡの代わりに、またはと共に使用できる。
【０３４１】
本発明は、現在それらの公知利用性におけるトポイソメラーゼＩＩ阻害剤の代わりに、またはと共に使用することもできる。
【０３４２】
本発明の化合物は、細菌起源の疾患を避けるかまたは治療する場合と同様に、食品保存または製造に使用できる。簡潔には、発明の化合物は、抗微生物として使用できる。
【０３４３】
本発明の化合物は、シクロオキシゲナーゼおよび／またはリポキシゲナーゼ、ＮＯまたはＮＯ−シンターゼまたは血液またはｉｎ ｖｉｖｏでのグルコースモジュレーターとしても使用でき、したがって、痛み、熱、炎症性冠状症状、潰瘍化、発癌性機構、血管拡張、並びに鎮痛性、抗凝固性、抗炎症および免疫応答モジュレーターの処置、回避または刺激をするのに有用である。
【０３４４】
さらに、本発明は、医療製品のためのビヒクルとしての化合物または抽出物を利用することを含む。したがって、本発明によって構想された多くの組成物および方法がある。例えば、抗酸化剤または保存組成物、トポイソメラーゼＩＩ阻害組成物、酸化からのように食品または任意の所望の物品を保存する方法、およびトポイソメラーゼＩＩを阻害するための方法がある。本組成物は、本発明の化合物を包含できる。本方法は、食品、物品またはトポイソメラーゼＩＩを、個々の組成物または本発明の化合物と接触させることを含む。他の組成物、方法および具体例は、前述から明らかである。
【０３４５】
この点で、本発明は、食用に適した源から得られ、そしてｉｎ ｖｉｔｒｏでの活性は、ｉｎ ｖｉｖｏでの少なくともある種の活性を示すことができること、そしてここにｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏのデータから、用量、投与の経路、および配合が、過度の実験なしに得られることに言及している。
【０３４６】
実施例３４．カカオ・プロシアニジンのミセル界面動電キャピラリークロマトグラフィー 
プロシアニジン・オリゴマーを分離するミセル界面動電キャピラリークロマトグラフィー（ＭＥＣＣ）を使用して、迅速な方法が開発された。その方法は、Ｄｅｌｇａｄｏら、（１９９４年）により報告されたものの改正法である。ＭＥＣＣ法は、７０分の順相ＨＰＬＣ分析によって得られたものと同じ分離に達するのにわずか１２分しか必要としない。図５７は、実施例２によって得られたカカオ・プロシアニジンのＭＥＣＣ分離を示す。
【０３４７】
ＭＥＣＣ条件： 
実施例２に記載された方法によって、カカオ・プロシアニジン抽出物を製造し、そして２００ｍＭホウ酸、５０ｍＭドデシル硫酸ナトリウム（電気泳動用純度）およびＮａＯＨから構成されるＭＥＣＣ緩衝液中で１ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解させて、ｐＨ＝８．５に調整した。
【０３４８】
サンプルを、０．４５ｕｍフィルターに通過させ、そして以下の条件で操作されるＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＨＰ−３Ｄ ＣＺＥシステムを使用して電気泳動した：
入口緩衝液：上記のランニング緩衝液
出口緩衝液：上記のランニング緩衝液
キャピラリー：５０ｃｍ×７５ｕｍｉ．ｄ．未被覆融合シリカ
検出：ダイオードアレイ検出器を備えて、２００ｎｍ
注入：３秒間、５０ｍＢａｒ（１５０ｍＢａｒ秒）
電圧：６ワット
電流：システムの限度（＜３００ｕＡ）
温度：２５℃
キャピラリー条件：各可動の前後で可動緩衝液で５分間フラッシュ 
この方法は、温度、圧力、電圧パラメーターの輪郭を描くこと、並びに可動緩衝液中に有機修飾剤およびキラル選択剤を含有することにより修飾できる。
【０３４９】
実施例３５．ＭＡＬＤＩ−金属塩溶液を用いたプロシアニジン・オリゴマーのＴＯＦ ＭＳ／ＭＳ分析 
様々な金属塩溶液と組合せた三量体で、一連のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ分析を行って、オリゴマーの陽イオンアダクトが検出できるかどうかを測定した。実験の重要性は、生理学上の加工および疾病にとって重要な金属陽イオンをｓｕｓｑｕｅｓｔｅｒｉｎｇ（隔離）または送出することによって、プロシアニジン・オリゴマーが、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで生理学上の役割を果たす証拠を提供することであった。
【０３５０】
使用された方法は、実施例１５に記載された通りであった。簡潔には、２ｕＬの硫酸亜鉛二水和物の１０ｍＭ溶液、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、塩化第二鉄６水和物、硫酸第一鉄・７水和物、および硫酸第二銅を個々に、実施例１４で記載される通り均質性を示す精製された４ｕＬの三量体（１０ｍｇ／ｍＬ）と混合し、そして４４ｕＬのＤＨＢを添加した。
【０３５１】
結果（図５８Ａ−Ｆ）は、ｍ／ｚ値が、理諭的に計算された質量についての±ｌａｍｕ標準偏差値に一致する銅および鉄（第一鉄および第二鉄）の［金属−三量体＋Ｈ］+イオンを示した。カルシウムおよびマグネシウムについての［金属−三量体＋Ｈ］+質量は、ｍ／ｚ値が±１ａｍｕ標準偏差値の範囲にあるナトリウムおよびカリウムについての［金属−三量体＋Ｈ］+質量から厳密には分割できなかった。［Ｚｎ+2−三量体＋Ｈ］+イオンは検出できなかった。これらの陽イオンの内のいくつかは、多価であるので、多金属−オリゴマーリガンド種および／または金属多オリゴマー種である可能性があった。しかし、それらの推定質量でのこれらのアダクトについての走査を行うことには、失敗したことを証明した。
【０３５２】
上記銅、鉄、カルシウム、マグネシウムおよび亜鉛について示された結果は、酸化状態としてのそのような因子および問題のイオンの周期律表での相対位置を考慮に入れて、他の金属イオンと本発明の化合物との間の反応の次の分析についての一般的な教示として使用できる。
【０３５３】
実施例３６．ＭＡＬＤＩ−高分子量プロシアニジン・オリゴマーのＴＯＦ／ＭＳ分析 
実施例３方法Ａで製造した通りの高分子プロシアニジン・オリゴマーと関連したＧＰＣ溶出剤で分析的試験を行った。本目的は、ｎ＞１２を示すプロシアニジン・オリゴマーが存在するかどうかを決定することであった。存在すれば、これらのオリゴマーは、本発明のさらなる化合物を表す。本発明に具備される単離、分離および精製の方法を存在させるための調整は、抗癌、抗腫瘍または抗新生物形成活性、抗酸化剤活性、ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ阻害酵素、ＤＮＡに対する酸性損傷阻害についての続くｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの評価のためにこれらのオリゴマーを得、そして、抗微生物のＮＯまたはＮＯシンターゼ、アポトーシス、血小板凝集、および血液またはｉｎ ｖｉｖｏグルコース刺激活性、並びに非ステロイド性抗炎症剤と同じ効率を示すために行われる。
【０３５４】
図５９は、上記ＧＰＣ溶出剤サンプルのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトラムを表す。四量体からオクタ十量体を代表するプロシアニジン・オリゴマーを特徴づける［Ｍ＋Ｎａ］+および／または［Ｍ＋Ｋ］+および／または［Ｍ＋２Ｎａ］+イオンは明白である。
【０３５５】
酸および熱処理は、プロシアニジン・オリゴマーの加水分解を起こすことが知られていた。したがって、本発明は、低分子量のプロシアニジン・オリゴマー（例えば、ｎが２〜１２である）を製造する方法として高分子量のプロシアニジン・オリゴマー（例えば、ｎは１３〜１８である）の制御された加水分解を含む。
【０３５６】
実施例３７．プロシアニジン・オリゴマーとイヌおよびネコのセルラインとの用量応答関係 
Ｗａｌｔｈａｍ ｏｎ−ｔｈｅ−ｗｏｌｄｓ，Ｍｅｌｔｏｎ Ｍｏｗｂｒａｙ，Ｌｅｉｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，Ｕ．Ｋ のワルタム・センター・フォー・ペット・ニュートリション（Ｗａｌｔｈａｍ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｐｅｔ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）から得られたいくつかのイヌおよびネコのセルラインに対する、プロシアニジン・オリゴマーの用量応答効果を評価した。これらのセルラインは、イヌの正常な腎臓ＧＨセルライン、イヌの正常な腎臓ＭＤＣＫセルライン、ネコの正常な腎臓ＣＲＦＫセルライン、および実施例８方法Ａで記載された条件下で培養された白血病ウイルスを生成したネコのリンパ芽球型ＦｅＡセルラインであった。
【０３５７】
ｎが２〜１０である単量体およびプロシアニジン・オリゴマーを実施例１４方法Ｄで記載された通り精製した。実施例１４の方法Ｃに記載された通り、分析的な順相ＨＰＬＣによってオリゴマーを試験もし、ここで以下の結果を得た。
【０３５８】
2011006427.tif 000040
【０３５９】
オリゴマーの純度が＜９０％であるこれらの場合、本発明で使用された方法は、これらの精製のために使用される。
【０３６０】
各セルラインは、単量体および各プロシアニジン・オリゴマーを、１０ｕｇ／ｍＬ、５０ｕｇ／ｍＬおよび１００ｕｇ／ｍＬで投与した。結果は図６０−６３に示される。図に示される通り、個々の高用量のオリゴマー（１００ｕｇ／ｍＬ）投与は、ネコＦｅＡリンパ芽球型およびネコの正常腎臓ＣＲＦＫセルラインでと類似する阻害効果を生じた。これらの場合に、細胞毒性は、四量体で現れ、そしてオリゴマーの程度が徐々に高くなると、細胞毒性作用は徐々に高く顕在化する。対称的に、イヌのＧＨおよびＭＤＣＫ正常腎臓セルラインに対する個々のオリゴマーの高用量（１００ｕｇ／ｍＬ）投与は、細胞毒性の出現を開始するのに、より高度のオリゴマーを必要とした。イヌのＧＨ正常腎臓セルラインについては、細胞毒性は、五量体で現れた。イヌのＭＤＣＫ正常腎臓セルラインについては、細胞毒性は、六量体に現れた。これらの場合の両方で、高オリゴマーを投与するのは、細胞毒性のレベルを上昇させた。
【０３６１】
実施例３８．錠剤配合例 
１９９６年９月６日に提出された、参照してここに組込まれる米国特許出願連続番号第０８／７０９，４０６号で記載された方法によって得られたカカオ固形物を使用して、錠剤配合例を製造した。簡潔には、未加工の豆に見られた本発明の化合物の初期量と、加工後に得られたものとの比が、２以下の伝統的に加工したカカオに見られたそれらのレベルと対称的に、自然に生じた本発明の化合物を増強する工程によって、この食用に適した材料を製造した。簡便には、この固形カカオ材料は、ＣＰ−カカオ固形物としてここに示される。例えば単離されたおよび／または精製された形態で、発明の化合物または化合物類は、ＣＰ−カカオ固形物の代わりに、または組合せて、この実施例で記載された通り錠剤で使用できる。
【０３６２】
錠剤配合例は、以下のものを含む（含有率は、重量パーセントとして表された）：
ＣＰ−カカオ固形物                                              ２４．０％
４倍天然バニラ抽出物（Ｂｕｓｈ Ｂｏａｋｅ Ａｌｌｅｎ）            １．５％
ステアリン酸マグネシウム（乾燥滑剤）（ＡｅｒＣｈｅｍ，Ｉｎｃ．）  ０．５％
Ｄｉｐａｃ錠剤用糖（Ａｍｓｔａｒ Ｓｕｇａｒ Ｃｏｒｐ．）        ３７．０％
キシリトール（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｘｙｒｏｆｉｎ，Ｉｎｃ．）      ３７．０％
１００．０％
ＣＰ−カカオ固形物およびバニラ抽出物を、食品プロセッサーで２分間混練する。糖およびステアリン酸マグネシウムを、一緒に穏やかに混合し、続いてＣＰ−カカオ固形物／バニラ混合物中で混練する。この材料を、最大圧力および圧縮で、Ｍａｎｅｓｔｙ Ｔａｂｌｅｔ Ｐｒｅｓｓ（Ｂ３Ｂ）に通して、１．５−１．８グラムの重さのある丸型の錠剤（１５ｍｍ×５ｍｍ）を製造した。ＣＰ−カカオ固形物（１１％脂肪）の代わりに市販で入手可能な低脂肪天然カカオ粉（１１％脂肪）を用いて、上記配合の別の錠剤を製造した。両方の錠剤配合例は、許容しうる風味特徴およびきめの特質を示す製品を製造した。
【０３６３】
実施例４の方法２に記載の手段を使用して、２つの錠剤配合例の分析を行った。この場合、分析は、以下に報告される五量体の濃度および本発明の単量体および化合物（ここでｎは、２〜１２である）の総レベルに焦点を当てた。
【０３６４】
2011006427.tif 000041
【０３６５】
ND＝検出されず 
データは、明確に、他の錠剤配合例でよりＣＰ−カカオ固形物錠剤中に高いレベルの五量体および総レベルの本発明の化合物を示した。したがって、ＣＰ−カカオ固形物で製造された錠剤配合例は、医薬、補足および食品用途のための本発明の化合物の経口投与のための理想の送出ビヒクルである。
【０３６６】
この分野の技師は、発明の化合物または化合物の組合せを、不可逆的に結合するポリビニルピロリドン以外、フレーバー、着色剤、賦形剤、ビタミン、ミネラル、ＯＴＣ薬、糖フィラー、ＵＶ保護剤（例えば、二酸化チタン、着色剤等）、バインダー、ヒドロゲル等の広範な範囲を網羅する他の錠剤配合例を充分に製造することができる。糖フィラーの量は、本発明の化合物または化合物の組合せの用量を調整して操作してもよい。
【０３６７】
上の多くの外観の変形物は、実施例の概念および範囲を逸脱することなく明白であり、可能性がある。
【０３６８】
実施例３９．カプセル配合例 
本発明の化合物の経口送出についての実施例３８の変形物は、ゼラチンから作られた軟質密封カプセルやグリセロールのような可塑剤と同様に、ゼラチンから作られたプッシューフィット・カプセルで作られる。プッシューフィット・カプセルは、ラクトースまたはしょ糖のようなフィラーと都合よく混合できて、本発明の化合物の用量を操作できる粉末の形態で、実施例３８で記載された通りの本発明の化合物または化合物の組合せ、またはＣＰ−カカオ固形物を含有する。軟質カプセルでは、本発明の化合物または化合物の組合せまたはＣＰ−カカオ固形物は、脂肪油またはカカオ脂またはそれらの組合せのような適切な液体に懸濁される。本発明の化合物または化合物類は、光感受性、例えばＵＶに感受性があり、可能性があるので、カプセルは、二酸化チタンのようなＵＶ保護剤またはＵＶに対して保護する適切な着色剤を含むことができる。カプセルは、先の実施例に記述されたもののようなフィラーを含有することもできる。
【０３６９】
上の多くの外観の変形物は、実施例の概念および範囲を逸脱することなく当業者に明白であり、可能性がある。
【０３７０】
実施例４０．識別の標準規格（ＳＯＩ）および非識別の標準規格（非−ＳＯＩ）ダークおよびミルクチョコレート配合例 
本発明で実施された方法によって誘導される本発明の化合物または化合物類の組合せの配合例は、ヒトおよび獣医学用途の送出ビヒクルとしてＳＯＩおよび非−ＳＯＩダークおよびミルクチョコレート内に作られる。１９９６年９月に提出された係属中の米国特許出願連続番号第０８／７０９４０６号に参照され、それにより参照してここに組込まれる。米国特許出願連続番号第０８／７０９４０６号は、加工段階の特徴的な組合せを用いてカカオ豆から本発明の保存レベルの化合物を有するカカオ脂および／またはカカオ固形物を製造する方法に関する。簡潔には、この加工法によって得られる食用に適したカカオ固形物は、未加工の豆に見られた本発明の化合物の初期量と、加工後に得られたものとの比が、２以下の従来の加工カカオに見られるそれらの濃度と対比して、本発明の化合物が天然に生じることを保存する。簡便には、このカカオ固形物材料は、ＣＰ−カカオ固形物としてここに示される。ＣＰ−カカオ固形物は、ＳＯＩおよび非ＳＯＩチョコレート、飲料、スナック、焼き製品を製造するための粉末または液体として、そして料理用の成分として使用される。
【０３７１】
ここで使用される場合、語句「ＳＯＩチョコレート」は、連邦食品医薬品および化粧品条例の下に、米国食品医薬品局によって確立された識別の標準規格にかけた米国で食品に使用されるチョコレートのすべてを意味する。米国の様々なタイプのチョコレートの定義および基準は、充分に確立されている。ここで使用される場合、語句「非−ＳＯＩ」は、標準化されたチョコレートの特定の範囲外に入る組成物を有する非標準化チョコレートの全てを意味する。
【０３７２】
カカオ脂または乳脂が、部分的にまたは完全に置換えられた場合；またはｎｕｔｒａｔｉｖｅ炭水化物甘味剤を、部分的にまたは完全に置換えた場合；またはフレーバー、模造乳、バター、カカオ粉、またはチョコレートを添加するか、または配合例中の他の添加または欠失を、チョコレートまたはそれらの組合せについての米国ＦＤＡ識別の標準規格以外でなされると、非標準化チョコレートの例が生じる結果となる。
【０３７３】
菓子、チョコレートは、棒状または新規の形状のようなチョコレートの固形片の形態を取ることができ、そしてチョコレートが、天然風味物質と分類されるフレーバー・アンド・エクストラクト・マニュファクチャラーズ・アソシエーション（Ｆｌａｖｏｒ ＆ Ｅｘｔｒａｃｔ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｅｒｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＦＥＭＡ））の材料、天然ジュース、スパイス、ハーブおよび抽出物と；天然識別物質、およびＦＥＭＡ ＧＲＡＳリスト、ＦＥＭＡおよびＦＤＡリスト、ヨーロッパ協会（ＣｏＥ）リスト、ＦＡＯ／ＷＨＯ食品標準プログラムによって適合したフレーバー業界の国際組織（ＩＯＦＩ）、Ｃｏｄｅｘ Ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ、および食品化学コーディックスによって定義されたような人工風味物質、およびカラメル、ヌガー、果物片、ナッツ、ウエハース等のような一般的にコーティングをする他の食品と組合せられた他のより複雑な菓子の成分として組込むこともできる。これらの食品は、通常の雰囲気条件下で、６５−８５゜Ｆで微生物学的に貯蔵安定であるとして特徴づけられる。他の複雑な菓子は、コーディアルチェリー類またはピーナッツバターのようなチョコレート軟質封入物に囲まれて生じる。他の複雑な菓子は、チョコレートを伴うコーティング用アイスクリームまたは他の冷凍または冷蔵デザートから生じる。一般に、食品をコーティングしたり囲んだりするのに使用されるチョコレートは、普通のチョコレート固形物バーまたは新規の形状のために使われるチョコレートより流動性がなければばらない。
【０３７４】
さらに、チョコレートは、脂肪および非脂質固形物を含み、ニュートレイティブ（ｎｕｔｒａｔｉｖｅ）炭水化物甘味剤および食品に適した乳化剤を有する低脂肪チョコレートでもありうる。低脂肪チョコレートとして、米国特許番号第４，８１０，５１６号、第４，７０１，３３７号、第５，４６４，６４９号、第５，４７４，７９５号およびＷＯ９６／１９９２３号で参照される。
【０３７５】
ダークチョコレートは、あらゆる付与配合例に使用されるチョコレートリカーまたはアルカリ化リカーまたはカカオ固形物またはアルカリ化カカオ固形物の量からそれらの暗い色を操作する。しかし、実施例２７表１３は、アルカリ化加工のため本発明の化合物の損失を教示するので、アルカリ化カカオ固形物またはリカーの使用は、本発明のダークチョコレート配合例には使用されなかった。
【０３７６】
ＳＯＩおよび非−ＳＯＩダークおよびミルクチョコレートの配合の例は、表１６および１７に列記される。これらの配合例では、ＣＰ−カカオ固形物に存在する本発明の化合物の量は、市販で入手可能なカカオ固形物に存在する本発明の化合物に比較された。
【０３７７】
以下は、これらのチョコレート配合例を製造する上で使用される加工段階を記載する。
【０３７８】
非−ＳＯＩダークチョコレートのための加工法
１．光を避けるために全てのミキサーおよびリファイナーを工程の間覆いをかけたままにする
２．３０−３５℃の間の温度を維持しながら、４０％の遊離脂肪（カカオ脂および無水乳脂肪）を除いて、全ての成分を一回分として処理する
３．２０ミクロンまで微細に破砕する
４．１時間、３５℃で乾燥コンチェにかける
５．湿潤コンチェサイクルの初め；湿潤コンチェ１時間に、全レシチンおよび１０％カカオ脂を添加する
６．残りの全ての脂肪を添加し、必要であれば標準化し、そして１時間３５℃で混合する
７．チョコレートを調合し、成形しそして包装する。
【０３７９】
ＳＯＩダークチョコレートのための加工法
１．６０℃の温度で、乳脂肪を除外した全ての成分を一回分として処理する
２．２０ミクロンまで微細に破砕する
３．３．５時間、６０℃で乾燥コンチェにかける
４．レシチンおよび乳脂肪を添加し、そして１時間、６０℃で湿潤コンチェにかける
５．必要であれば標準化し、そして１時間、３５℃で混合する
６．チョコレートを調合し、成形しそして包装する。
【０３８０】
非−ＳＯＩミルクチョコレートのための加工法
１．光を避けるために全てのミキサーおよびリファイナーを工程の間覆いをかけたままにする
２．糖、全乳粉、溶融乳粉および６６％のカカオ脂を一回分として処理し、７５℃で２時間コンチェにかける
３．バッチを３５℃に冷却し、カカオ粉、エチルバニラ、チョコレートリカーおよび２１％のカカオ脂を添加し、３５℃で２０分間混合する
４．２０ミクロンまで微細に破砕する
５．残りのカカオ脂を加え、１時間、３５℃で乾燥コンチェにかける
６．無水乳脂肪およびレシチンを添加し、そして１時間３５℃で湿潤コンチェにかける
７．チョコレートを調合し、成形しそして包装する。
【０３８１】
非−ＳＯＩミルクチョコレートのための加工法
１．６０℃の間の温度で、６５％のカカオ脂および乳脂肪を除外する全ての成分の一回分として処理する
２．３．２０ミクロンまで微細に破砕する
３．３．５時間、６０℃で乾燥コンチェにかける
４．レシチン、１０％カカオ脂および無水乳脂肪を添加し、湿潤コンチェで、６０℃で１時間
５．残りのカカオ脂を添加し、必要であれば標準化し、そして１時間３５℃で混合する
６．チョコレートを調合し、成形しそして包装する。
【０３８２】
配合例に使用されるＣＰ−カカオ固形物および市販のチョコレートリカーは、配合物に組込む前に実施例４方法２で記載された通り五量体、およびｎが２〜１２である本発明の単量体および化合物の総レベルについて分析した。その後、これらの値は、表１６およひ１７に示される通り各チョコレート配合中の期待レベルを計算するのに使用した。非−ＳＯＩダークチョコレートおよび非−ＳＯＩミルクチョコレートの場合に、それらの製品は、五量体、そしてｎが２〜１２である本発明の単量体および化合物の総レベルについて分析された。結果は、表１６および１７に表される。
【０３８３】
これらの配合例から得た結果は、ＣＰ−カカオ固形物て配合されたＳＯＩおよび非−ＳＯＩダークおよびミルクチョコレートは、およそ６．５倍以上の期待五量体、およびＳＯＩおよび非−ＳＯＩダークチョコレートでの３．５倍以上の期待総レベル、そしておよそ４．５、７．０倍以上の期待五量体およびＳＯＩおよび非−ＳＯＩミルクチョコレートでの２．５、３．５倍以上の期待総レベルをそれそれ含有した。
【０３８４】
ＣＰ−カカオ固形物で製造された加工チョコレートに存在する期待レベルの本発明の化合物間の差異が、市販で入手可能なカカオ固形物で製造されたそれらの配合より劇的に高いので、いくつかのチョコレート製品の分析を行わなかった。しかし、加工の効果は、非−ＳＯＩダークおよびミルクチョコレート製品で評価された。表で示される通り、２５−５０％の五量体の損失が起こった一方で、総レベルでのわずかな差異が観察された。あらゆる理論と結びつけることを望まずに、これらの損失は、オリゴマーを加水分解できる（例えば、三量体は、単量体および二量体に加水分解できる）ミルク成分からの加熱および／または低鎖脂肪酸（例えば、酢酸、プロピオン酸および酪酸）によると考えられる。代わりに、時間を消費する加工段階は、配合内のタンパク質源への本発明の化合物の酸化または不可逆的な結合を見越すことができる。したがって、本発明は、チョコレート配合の変法、およびこれらの損失を回避するかまたは最小限にするためのこれらの効果に取組む加工法を含む。
【０３８５】
技帥は、様々のチョコレート用途のための本発明の化合物の天然に生じるレベルを合理的に調整する配合、成分、加工、および混合物の広い範囲を網羅するこれらの実施例で多くの変法を認識する。
【０３８６】
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【０３８７】
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【０３８８】
実施例４１．プロシアニジン・オリゴマーの加水分解 
実施例１４の方法Ｄは、本発明の化合物を精製する分取順相ＨＰＬＣを記述する。可動相に溶解したフラクションとして、オリゴマーを得る。その後、Ｒｏｔｏｖａｐ装置での標準真空蒸留（２０−２９インチＨｇ：４０℃）によって、溶媒を取除く。真空蒸留滞留時間を延長するかまたは＞４０℃の温度を使用する場合、特定のオリゴマーの損失は、より小さなオリゴマーの増加と一緒に起こることが観察された。
【０３８９】
より小さなオリゴマーでの増加を付随する特定のオリゴマーの損失は、可動相溶媒混合物に存在する残渣の酢酸からの時間−温度の酸加水分解に起因した。１００ｍｇの六量体が、塩化メチレン、酢酸、水、およびメタノールを含有する５０ｍＬの可動相に溶解され（溶媒比率については実施例１４方法Ｄ参照）、時間−温度依存性蒸留に欠ける以下の試験によって、この観察を確認した。特定時間で、実施例４方法２に記述された通り、アリコート量を分析的順相ＨＰＬＣ分析のために取った。結果は、六量体レベルが時間−温度依存形態で減少する図６４および６５に例示される。図６５は、時間−温度依存形態での加水分解製品（三量体）の内の１つの外観を示す。単量体および他のオリゴマー（二量体〜五量体）も、時間−温度依存形態で現れた。
【０３９０】
これらの結果は、本発明の重合体化合物を取り扱うときに、厳密な操作および注意がされなければならないことを示した。
【０３９１】
実施例５、１５、１８、１９、２０および２９で見られるものと一緒に上で供された結果は、上記方法が、本発明の付与オリゴマーのいずれかを同定するために本発明で具体化された他の方法を補足するのに使用できることを示す。
【０３９２】
例えば、例外的に（＋）−カテンキンまたは（−）−エピカテキンを生じるすべての付与オリゴマーの完全加水分解は、多くの「混合」単量体基材オリゴマー構造可能性を排除し、そして各単量体についての立体化学的結合の可能性の特徴があらゆる付与オリゴマーを含むのを減少させる。
【０３９３】
さらに、（＋）−カテンキンまたは（−）−エピカテキンの両方を特定比率で生じるあらゆる付与オリゴマーの完全加水分解は、習熟した技師に、あらゆる付与オリゴマーの単量体組成物についての情報を提供し、そしてそのため、各単量体についての立体化学的結合の可能性の特徴が、オリゴマーを含む。
【０３９４】
習熟した技師は、個々の単量体の酸触媒されたエピマー化が起こり、適切な対照実験および激しくない加水分解条件が考慮される（例えば、濃ＨＣｌ、ＨＮＯ3等の代わりに酢酸のような有機酸の使用）べきであるという事実を認識する。
【０３９５】
このように詳細に本発明の好ましい具体例を記載して、添付の請求項に定義される発明は、本発明の概念および範囲から逸脱しないで多く外観の変異が可能であるので、上記説明で規定された特定の詳細によって限定されないと解釈されるべきである。
【参考文献】
【０３９６】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図７Ｇ】
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【図７Ｈ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図８Ｇ】
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【図８Ｈ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図９Ｇ】
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【図９Ｈ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１０Ｇ】
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【図１０Ｈ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１１Ｈ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｆ】
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【図１２Ｇ】
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【図１２Ｈ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｈ】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｈ】
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【図１５Ｉ】
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【図１５Ｊ】
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【図１５Ｋ】
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【図１５Ｌ】
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【図１５Ｍ】
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【図１５Ｎ】
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【図１５Ｏ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２４Ｄ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２６】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３０Ｃ】
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【図３０Ｄ】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３５】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３６Ｃ】
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【図３６Ｄ】
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【図３６Ｅ】
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【図３６Ｆ】
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【図３６Ｇ】
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【図３６Ｈ】
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【図３６Ｉ】
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【図３６Ｊ】
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【図３６Ｋ】
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【図３６Ｌ】
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【図３６Ｍ】
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【図３６Ｎ】
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【図３６Ｏ】
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【図３６Ｐ】
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【図３６Ｑ】
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【図３６Ｒ】
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【図３６Ｓ】
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【図３６Ｔ】
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【図３６Ｕ】
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【図３６Ｖ】
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【図３７】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３８Ｃ】
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【図３８Ｄ】
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【図３８Ｅ】
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【図３８Ｆ】
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【図３８Ｇ】
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【図３８Ｈ】
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【図３８Ｉ】
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【図３８Ｊ】
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【図３８Ｋ】
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【図３８Ｌ】
2011006427.tif 000245
【図３８Ｍ】
2011006427.tif 000246
【図３８Ｎ】
2011006427.tif 000247
【図３８Ｏ】
2011006427.tif 000248
【図３８Ｐ】
2011006427.tif 000249
【図３９Ａ】
2011006427.tif 000250
【図３９ＡＡ】
2011006427.tif 000251
【図３９Ｂ】
2011006427.tif 000252
【図３９Ｃ】
2011006427.tif 000253
【図３９Ｄ】
2011006427.tif 000254
【図３９Ｅ】
2011006427.tif 000255
【図３９Ｆ】
2011006427.tif 000256
【図３９Ｇ】
2011006427.tif 000257
【図３９Ｈ】
2011006427.tif 000258
【図３９Ｉ】
2011006427.tif 000259
【図３９Ｊ】
2011006427.tif 000260
【図３９Ｋ】
2011006427.tif 000261
【図３９Ｌ】
2011006427.tif 000262
【図３９Ｍ】
2011006427.tif 000263
【図３９Ｎ】
2011006427.tif 000264
【図３９Ｏ】
2011006427.tif 000265
【図３９Ｐ】
2011006427.tif 000266
【図３９Ｑ】
2011006427.tif 000267
【図３９Ｒ】
2011006427.tif 000268
【図３９Ｓ】
2011006427.tif 000269
【図３９Ｔ】
2011006427.tif 000270
【図３９Ｕ】
2011006427.tif 000271
【図３９Ｖ】
2011006427.tif 000272
【図３９Ｗ】
2011006427.tif 000273
【図３９Ｘ】
2011006427.tif 000274
【図３９Ｙ】
2011006427.tif 000275
【図３９Ｚ】
2011006427.tif 000276
【図４０】
2011006427.tif 000277
【図４１】
2011006427.tif 000278
【図４２】
2011006427.tif 000279
【図４３Ａ】
2011006427.tif 000280
【図４３Ｂ】
2011006427.tif 000281
【図４３Ｃ】
2011006427.tif 000282
【図４３Ｄ】
2011006427.tif 000283
【図４３Ｅ】
2011006427.tif 000284
【図４３Ｆ】
2011006427.tif 000285
【図４３Ｇ】
2011006427.tif 000286
【図４４Ａ】
2011006427.tif 000287
【図４４Ｂ】
2011006427.tif 000288
【図４４Ｃ】
2011006427.tif 000289
【図４４Ｄ】
2011006427.tif 000290
【図４４Ｅ】
2011006427.tif 000291
【図４４Ｆ】
2011006427.tif 000292
【図４５Ａ】
2011006427.tif 000293
【図４５Ｂ】
2011006427.tif 000294
【図４５Ｃ】
2011006427.tif 000295
【図４５Ｄ】
2011006427.tif 000296
【図４５Ｅ】
2011006427.tif 000297
【図４６Ａ】
2011006427.tif 000298
【図４６Ｂ】
2011006427.tif 000299
【図４６Ｃ】
2011006427.tif 000300
【図４６Ｄ】
2011006427.tif 000301
【図４６Ｅ】
2011006427.tif 000302
【図４６Ｆ】
2011006427.tif 000303
【図４６Ｇ】
2011006427.tif 000304
【図４７Ａ】
2011006427.tif 000305
【図４７Ｂ】
2011006427.tif 000306
【図４７Ｃ】
2011006427.tif 000307
【図４７Ｄ】
2011006427.tif 000308
【図４７Ｅ】
2011006427.tif 000309
【図４７Ｆ】
2011006427.tif 000310
【図４７Ｇ】
2011006427.tif 000311
【図４８Ａ】
2011006427.tif 000312
【図４８Ｂ】
2011006427.tif 000313
【図４８Ｃ】
2011006427.tif 000314
【図４８Ｄ】
2011006427.tif 000315
【図４９Ａ】
2011006427.tif 000316
【図４９Ｂ】
2011006427.tif 000317
【図４９Ｃ】
2011006427.tif 000318
【図４９Ｄ】
2011006427.tif 000319
【図５７】
2011006427.tif 000320
【図５８Ａ】
2011006427.tif 000321
【図５８Ｂ】
2011006427.tif 000322
【図５８Ｃ】
2011006427.tif 000323
【図５８Ｄ】
2011006427.tif 000324
【図５８Ｅ】
2011006427.tif 000325
【図５８Ｆ】
2011006427.tif 000326
【図５９】
2011006427.tif 000327
【図６０】
2011006427.tif 000328
【図６１】
2011006427.tif 000329
【図６２】
2011006427.tif 000330
【図６３】
2011006427.tif 000331
【図６４】
2011006427.tif 000332
【図６５】
2011006427.tif 000333
【手続補正書】
【提出日】平成22年8月30日(2010.8.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａが下記式で表わされるモノマーである式Ａnで表わされるポリマー化合物、あるいはその医薬として許容される塩、誘導体又は酸化生成物。
【化８】
2011006427.tif 000334
（式中ｎは、少なくとも一個の末端モノマー性単位Ａと複数の付加的なモノマー性単位とが存在するような３〜１８の整数を表し；
Ｒは３−（α）−ＯＨ、３−（β）−ＯＨ、３−（α）−Ｏ−糖、又は３−（β）−Ｏ−糖を表し；
隣接するモノマー間が、４位、６位、及び８位から成る群より選択される位置において結合され；
４位における付加的なモノマー性単位の結合の立体化学がα又はβであり；
ＸとＹとＺとは、前記少なくとも一個の末端モノマー性単位の４位に前記付加的なモノマー性単位か結合することを条件として、モノマー性単位Ａと水素と糖とから成る群より選択され、ＹとＺとは同時に水素であってもよく；及び 該糖はフェノール性原子団で置換されていてもよい。）
【手続補正書】
【提出日】平成22年10月7日(2010.10.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
【図１】図１は、粗カカオプロシアニジン類の分別から得られた代表的なゲル浸透クロマトグラムを示す。
【図２Ａ】図２Ａは、未発酵カカオから抽出されたカカオプロシアニジン類の分離（溶出プロフィール）を示す代表的な逆相ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、未発酵カカオから抽出されたカカオプロシアニジン類の分離を示す代表的な順相ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図３】図３は、数種の代表的なプロシアニジン構造を示す。
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｅは、抗癌又は抗新生物活性についてスクリーニングするときに使用される５つのフラクションの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図４Ｂ】図４Ａ〜４Ｅは、抗癌又は抗新生物活性についてスクリーニングするときに使用される５つのフラクションの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図４Ｃ】図４Ａ〜４Ｅは、抗癌又は抗新生物活性についてスクリーニングするときに使用される５つのフラクションの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図４Ｄ】図４Ａ〜４Ｅは、抗癌又は抗新生物活性についてスクリーニングするときに使用される５つのフラクションの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図４Ｅ】図４Ａ〜４Ｅは、抗癌又は抗新生物活性についてスクリーニングするときに使用される５つのフラクションの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図５】図５は、カカオ抽出物と癌細胞であるＡＣＨＮとの用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；Ｍ＆Ｍ２ Ｆ４／９２。
【図６Ａ】６Ａは、カカオ抽出物と癌細胞であるＰＣ−３との用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；Ｍ＆ＭＡ＋Ｅ Ｕ１２Ｐ１。
【図６Ｂ】６Ｂは、カカオ抽出物と癌細胞であるＰＣ−３との用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；Ｍ＆ＭＢ＋Ｅ Ｙ１９２Ｐ１。
【図６Ｃ】６Ｃは、カカオ抽出物と癌細胞であるＰＣ−３との用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；Ｍ＆ＭＣ＋Ｅ Ｕ１２Ｐ２。
【図６Ｄ】６Ｄは、カカオ抽出物と癌細胞であるＰＣ−３との用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；Ｍ＆ＭＤ＋Ｅ Ｕ１２Ｐ２。
【図７Ａ】図７Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１Ａ ０２１２Ｐ３。
【図７Ｂ】図７Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ ０１６２Ｐ１。
【図７Ｃ】図７Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ ０１２２Ｐ３。
【図７Ｄ】図７Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ ０１２２Ｐ３。
【図７Ｅ】図７Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｅ ０２９２Ｐ８。
【図７Ｆ】図７Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＢとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ／Ｂ ０２９２Ｐ６。
【図７Ｇ】図７Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＥとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ／Ｅ ０２９２Ｐ６。
【図７Ｈ】図７Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＤとＰＣ−３細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ／Ｄ ０２９２Ｐ６。
【図８Ａ】図８Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ ０９２Ｋ３。
【図８Ｂ】図８Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ ０２１２Ｋ５。
【図８Ｃ】図８Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ ０１６２Ｋ３。
【図８Ｄ】図８Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ ０２１２Ｋ５。
【図８Ｅ】図８Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｅ ０２９２Ｋ５。
【図８Ｆ】図８Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＢとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ／Ｂ ０２９２Ｋ３。
【図８Ｇ】図８Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＢ＋ＥとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ／Ｅ ０２９２Ｋ４。
【図８Ｈ】図８Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＫＢ鼻咽頭／Ｈｅｌａ細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ／Ｅ ０２９２Ｋ５。
【図９Ａ】図９Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｂ＋Ｄ、Ａ＋Ｅ、及びＤ＋ＥとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）。
【図９Ｂ】図９Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）。
【図９Ｃ】図９Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ ０１９２Ｈ５。
【図９Ｄ】図９Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ ０１９２Ｈ５。
【図９Ｅ】図９Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｅ ０１９２Ｈ５。
【図９Ｆ】図９Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＢ＋ＤとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ＆Ｄ ０２６２Ｈ２。
【図９Ｇ】図９Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＥとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１Ａ／Ｅ ０２６２Ｈ３。
【図９Ｈ】図９Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＨＣＴ−１１６細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ＆Ｅ０２６２Ｈ１。
【図１０Ａ】図１０Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ ０９２Ａ５。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＢＭＭ−１ Ｂ ０９２Ａ５。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ ０１９２Ａ７。
【図１０Ｄ】図１０Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ ０１９２Ａ７。
【図１０Ｅ】図１０Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；Ｍ＆Ｍ１ Ｅ ０１９２Ａ７。
【図１０Ｆ】図１０Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＢ＋ＤとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ＆Ｄ ０３０２Ａ６。
【図１０Ｇ】図１０Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＣ＋ＤとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ＆Ｄ。
【図１０Ｈ】図１０Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＥとＡＣＨＮ腎細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ＆Ｅ ０２６２Ａ６。
【図１１Ａ】図１１Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ ０１９２５８。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ ０９２５６。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ ０１９２５９。
【図１１Ｄ】図１１Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ ０１９２５８。
【図１１Ｅ】図１１Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｅ ０１９２５８。
【図１１Ｆ】図１１Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＡ＋ＥとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ／Ｅ ０２６２５４。
【図１１Ｇ】図１１Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＢ＋ＥとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ＆Ｅ ０３０２５５。
【図１１Ｈ】図１１Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＣ＋ＥとＡ−５４９肺細胞系との間の典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ＆Ｅ Ｎ６２５５。
【図１２Ａ】図１２Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ ０２１２Ｓ４。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ ０２１２Ｓ４。
【図１２Ｃ】図１２Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ ０２１２Ｓ４。
【図１２Ｄ】図１２Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ ０２１２Ｓ４。
【図１２Ｅ】図１２Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｅ Ｎ３２Ｓ１。
【図１２Ｆ】図１２Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＢ＋ＣとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ＆Ｃ Ｎ３２Ｓ２。
【図１２Ｇ】図１２Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＣ＋ＤとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ＆Ｄ Ｎ３２Ｓ３。
【図１２Ｈ】図１２Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＳＫ−５黒色腫細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ＆Ｅ Ｎ３２Ｓ３。
【図１３Ａ】図１３Ａは、カカオプロシアニジンのフラクションＡとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ａ Ｎ２２Ｍ４。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、カカオプロシアニジンのフラクションＢとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ Ｎ２２Ｍ４。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、カカオプロシアニジンのフラクションＣとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ Ｎ２２Ｍ４。
【図１３Ｄ】図１３Ｄは、カカオプロシアニジンのフラクションＤとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ Ｎ２２Ｍ３。
【図１３Ｅ】図１３Ｅは、カカオプロシアニジンのフラクションＥとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｅ ０３０２Ｍ２。
【図１３Ｆ】図１３Ｆは、カカオプロシアニジンのフラクションＢ＋ＣとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｂ／Ｃ ０３０２Ｍ。
【図１３Ｇ】図１３Ｇは、カカオプロシアニジンのフラクションＣ＋ＥとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｃ＆Ｅ Ｎ２２Ｍ３。
【図１３Ｈ】図１３Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＭＣＦ−７乳癌細胞系との典型的な用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．用量、μｇ／ｍＬ）；ＭＭ−１ Ｄ＆Ｅ Ｎ２２Ｍ３。
【図１４】図１４は、カカオプロシアニジン（特にフラクションＤ）とＣＣＲＦ−ＣＥＭ Ｔ細胞白血病細胞系との典型的な用量反応関係を示す（細胞数／ｍＬ ｖｓ．増殖日数；白い丸は対照群、黒い丸は１２５μｇフラクションＤ、白い逆三角は２５０μｇフラクションＤ、黒い逆三角は５００μｇフラクションＤ）。
【図１５Ａ】図１５Ａは、フラクションＤ＋Ｅを用いて処置されたＭＣＦ−７ ｐ１６８乳癌細胞に対するＸＴＴ及びクリスタルバイオレット細胞毒性アッセイの比較を示す（対照に対する％  ｖｓ．濃度（μg／ｍｌ）（白丸はＤＴＴ染色、黒丸はクリスタルバイオレット染色）。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、ＵＩＴ−１カカオ遺伝型から入手した様々なレベルの粗ポリフェノール類を用いて処置されたＭＤＡ ＭＢ２３１乳癌細胞系から入手した典型的な用量反応曲線を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は対照群、黒い丸は賦形剤、白い逆三角は２５０μｇ／ｍＬ、黒い逆三角は１００μｇ／ｍＬ、白い四角は１０μｇ／ｍＬである；２．０の吸光度がプレート読み取り装置の最高値で、必ずしも細胞数を表してはいない可能性がある）。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、ＵＩＴ−１カカオ遺伝型から入手した様々なレベルの粗ポリフェノール類を用いて処置されたＰＣ−３前立腺癌細胞系から入手した典型的な用量反応曲線を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は対照群、黒い丸は賦形剤、白い逆三角は２５０μｇ／ｍＬ、黒い逆三角は１００μｇ／ｍＬ、白い四角は１０μｇ／ｍＬである）。
【図１５Ｄ】図１５Ｄは、ＵＩＴ−１カカオ遺伝型から入手した様々なレベルの粗ポリフェノール類を用いて処置されたＭＣＦ−７ ｐ１６８乳癌細胞系から入手した典型的な用量反応曲線を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は対照群、黒い丸は賦形剤、白い逆三角は２５０μｇ／ｍＬ、黒い逆三角は１００μｇ／ｍＬ、白い四角は１０μｇ／ｍＬ、黒い四角は１μｇ／ｍＬである；２．０の吸光度がプレート読み取り装置の最高値で、必ずしも細胞数を表してはいない可能性がある）。
【図１５Ｅ】図１５Ｅは、ＵＩＴ−１カカオ遺伝型から入手した様々なレベルの粗ポリフェノール類を用いて処置されたＨｅｌａ子宮頸癌細胞系から入手した典型的な用量反応曲線を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は対照群、黒い丸は賦形剤、白い逆三角は２５０μｇ／ｍＬ、黒い逆三角は１００μｇ／ｍＬ、白い四角は１０μｇ／ｍＬである；２．０の吸光度がプレート読み取り装置の最高値で、必ずしも細胞数を表してはいない可能性がある）。
【図１５Ｆ】図１５Ｆは、様々なカカオポリフェノールのフラクションを用いて処置されたＨｅｌａ子宮頸癌細胞系に対する細胞毒性効果を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は１００μｇ／ｍＬのフラクションＡ−Ｅ、黒い丸は１００μｇ／ｍＬのフラクションＡ−Ｃ、白い逆三角は１００μｇ／ｍＬのフラクションＤ＆Ｅである；２．０の吸光度がプレート読み取り装置の最高値で、必ずしも細胞数を表してはいない可能性がある）。
【図１５Ｇ】図１５Ｇは、様々なカカオポリフェノールのフラクションを用いて処置されたＳＫＢＲ−３乳癌細胞系に対する１００μｌ／ｍＬでの細胞毒性効果を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は１００μｇ／ｍＬ、黒い丸はフラクションＡ−Ｃ、白い逆三角はフラクションＤ＆Ｅである）。
【図１５Ｈ】図１５Ｈは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＨｅｌａ細胞との典型的な用量反応曲線を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は対照群、黒い丸は１００μｇ／ｍＬ、白い逆三角は７５μｇ／ｍＬ、黒い逆三角は５０μｇ／ｍＬ、白い四角は２５μｇ／ｍＬ、黒い四角は１０μｇ／ｍＬである；２．０の吸光度がプレート読み取り装置の最高値で、必ずしも細胞数を表してはいない可能性がある）。
【図１５Ｉ】図１５Ｉは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＳＫＢＲ−３細胞との典型的な用量反応曲線を示す（吸光度（５４０ｎｍ）ｖｓ．日数；白い丸は対照群、黒い丸は１００μｇ／ｍＬ、白い逆三角は７５μｇ／ｍＬ、黒い逆三角は５０μｇ／ｍＬ、白い四角は２５μｇ／ｍＬ、黒い四角は１０μｇ／ｍＬである）。
【図１５Ｊ】図１５Ｊは、軟質寒天クローニングアッセイを用いたカカオプロシアニジンのフラクションＤ＋ＥとＨｅｌａ細胞との典型的な用量反応関係を示す（棒グラフ；コロニー数／左から、対照群、１、１０、５０、及び１００μｇ／ｍＬ）。
【図１５Ｋ】図１５Ｋは、８種のカカオ遺伝型から入手した粗ポリフェノール抽出物を用いて処置された場合のＨｅｌａ細胞の増殖阻害を示す（％対照群ｖｓ．濃度、μｇ／ｍＬ；白い丸はＣ−１、黒い丸はＣ−２、白い逆三角はＣ−３、黒い逆三角はＣ−４、白い四角はＣ−５、黒い四角はＣ−６、白い三角はＣ−７、黒い三角はＣ−８である；Ｃ−１＝ＵＦ−１２：園芸品種＝トリニタリオ（Ｔｒｉｎｉｔａｒｉｏ）及び種類はＵＦ−１２（ブラジル）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）；Ｃ−２＝ＮＡ−３３：園芸品種はフォラステレオ（Ｆｏｒａｓｔｅｒｏ）及び種類はＮＡ−３３（ブラジル）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）；Ｃ−３＝ＥＥＧ−４８：園芸品種はＦｏｒａｓｔｅｒｏ及び種類はＥＥＧ−４８（ブラジル）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）；Ｃ−４＝不明：園芸品種はＦｏｒａｓｔｅｒｏ及び種類は不明（西アフリカ）カカオポリフェノール類の粗抽出物である（カフェイン除去／テオブロミン除去）；Ｃ−５＝ＵＦ−６１３：園芸品種＝Ｔｒｉｎｉｔａｒｉｏ及び種類はＵＦ−６１３（ブラジル）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）；Ｃ−６＝ＩＣＳ−１００：園芸品種＝Ｔｒｉｎｉｔａｒｉｏ（ニカラグアＣｒｉｏｌｌｏ原種）及び種類はＩＣＳ−１００（ブラジル）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）；Ｃ−７＝ＩＣＳ−１３９：園芸品種＝Ｔｒｉｎｉｔａｒｉｏ（ニカラグアＣｒｉｏｌｌｏ原種）及び種類はＩＣＳ−１３９（ブラジル）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）：Ｃ−８＝ＵＩＴ−１：園芸品種＝Ｔｒｉｎｉｔａｒｉｏ及び種類はＵＩＴ−１（マレーシア）カカオポリフェノール類の粗抽出物類である（カフェイン除去／テオブロミン除去）。
【図１５Ｌ】図１５Ｌは、発酵させたカカオ豆及び乾燥させたカカオ豆から入手した粗ポリフェノール抽出物類を用いて処置したときのＨｅｌａ細胞の増殖阻害を示す（％対照群ｖｓ．濃度、μｇ／ｍＬ）（発酵及び日光乾燥を通しての段階；白い丸は第０日のフラクション、黒い丸は第１日のフラクション、白い逆三角は第２日のフラクション、黒い逆三角は第３日のフラクション、白い四角は第４日のフラクション、そして黒い四角は第９日のフラクションである）。
【図１５Ｍ】図１５Ｍは、酵素により酸化させられたカカオプロシアニジン類のＨｅｌａ細胞に対する作用を示す（粗カカオポリフェノールにより処置されたポリフェノールオキシダーゼについての用量反応；％対照群ｖｓ．濃度、μｇ／ｍＬ；黒い四角は粗ＵＩＴ−１（カフェイン及びテオブロミン含有）、白い丸は粗ＵＩＴ−１（カフェイン及びテオブロミンを非含有）、及び黒い丸は粗ＵＩＴ−１（ポリフェノールオキシダーゼ触媒）。
【図１５Ｎ】図１５Ｎは、カカオプロシアニジンのフラクションＤ及びＥの組み合わせに対する代表的な半分取逆相ＨＰＬＣ分離を示す。
【図１５Ｏ】図１５Ｏは、粗カカオポリフェノール抽出物の代表的な順相半分取ＨＰＬＣ分離を示す。
【図１６】図１６は、合成抗酸化薬ＢＨＡ及びＢＨＴに比較したカカオプロシアニジン抽出物及びフラクションについての典型的なランシマット（Ｒａｎｃｉｍａｔ）酸化曲線を示す（任意単位ｖｓ．時間（時間）；点線及び十字（＋）線はＢＨＡ及びＢＨＴである；*はＤ−Ｅである；ｘは粗である；白い四角はＡ〜Ｃである；そして白いダイアモンド形は対照である）。
【図１７】図１７は、カカオプロシアニジンのフラクションによるキネトプラストＤＮＡのトポイソメラーゼＩＩ触媒脱鎖状結合の阻害を示す典型的な寒天ゲルを示す（レーン１は０．５μｇのマーカー（Ｍ）単量体長さのキネトプラストＤＮＡ環を含んでいる；レーン２及び２０は４％ＤＭＳＯの存在下で、しかしあらゆるカカオプロシアニジン類の不在下でトポイソメラーゼＩＩと一緒に培養されたキネトプラストＤＮＡを含んでいる（対照群 −Ｃ）；レーン３及び４は０．５及び５．０μｇ／ｍＬのカカオプロシアニジンのフラクションＡの存在下でトポイソメラーゼＩＩと一緒に培養されたキネトプラストＤＮＡを含んでいる；レーン５及び６は０．５及び５．０μｇ／ｍＬのカカオプロシアニジンのフラクションＢの存在下でトポイソメラーゼＩＩと一緒に培養されたキネトプラストＤＮＡを含んでいる；レーン７、８、９、１３、１４及び１５は０．０５、０．５及び５．０μｇ／ｍＬのカカオプロシアニジンのフラクションＤの存在下でトポイソメラーゼＩＩと一緒に培養されたキネトプラストＤＮＡの複製物である；レーン１０、１１、１２、１６、１７及び１８は０．０５、０．５及び５．０μｇ／ｍＬのカカオプロシアニジンのフラクションＥの存在下でトポイソメラーゼＩＩと一緒に培養されたキネトプラストＤＮＡの複製物である；レーン１９は５．０μｇ／ｍＬのカカオプロシアニジンのフラクションＥの存在下でトポイソメラーゼＩＩと一緒に培養されたキネトプラストＤＮＡの複製物である。
【図１８】図１８は、ＤＮＡ修復適応性及び欠失性細胞系に対するカカオプロシアニジンのフラクションＤの用量反応関係を示す（フラクション生存率ｖｓ．μｇ／ｍＬ；左側はｘｒｓ−６ＤＮＡ修復欠失性細胞系、ＭＭ−１ Ｄ Ｄ２８２Ｘ１；右側はＢＲＩ ＤＮＡ修復適応性細胞系、ＭＭ−１ Ｄ Ｄ２８２Ｂ１）。
【図１９】図１９は、カカオのフラクションＤ＋Ｅを用いて処置したときのＭＣＦ−７ ｐ１６８原種細胞系に比較したアドリアマイシン耐性ＭＣＦ−７細胞についての用量反応曲線を示す（％対照群ｖｓ．濃度、μｇ／ｍＬ；白い丸はＭＣＦ−７ ｐ１６８；黒い丸はＭＣＦ−７ ＡＤＲ）。
【図２０Ａ】図２０Ａは、順相半分取ＨＰＬＣによって調製した１２のフラクションの１００μｇ／ｍＬ及び２５μｇ／ｍＬで処置した場合のＨｅｌａ細胞への用量反応作用を示す（棒グラフ、％対照群ｖｓ．左から対照群及びフラクション１〜１２）。
【図２０Ｂ】図２０Ｂは、順相半分取ＨＰＬＣによって調製した１２のフラクションの１００μｇ／ｍＬ及び２５μｇ／ｍＬで処置した場合のＳＫＢＲ−３細胞への用量反応作用を示す（棒グラフ、％対照群ｖｓ．左から対照群及びフラクション１〜１２）。
【図２１】図２１は、カカオ抽出物からの、粗抽出物（Ａ）、富裕化五量体（Ｂ）及び精製五量体（Ｃ）の順相ＨＰＬＣ分離を示す。
【図２２Ａ】図２２Ａ、Ｂ及びＣは、五量体富裕プロシアニジン類、及び各々フラクションＡ〜ＣおよびフラクションＤ〜ＥのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳを示す。
【図２２Ｂ】図２２Ａ、Ｂ及びＣは、五量体富裕プロシアニジン類、及び各々フラクションＡ〜ＣおよびフラクションＤ〜ＥのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳを示す。
【図２２Ｃ】図２２Ａ、Ｂ及びＣは、五量体富裕プロシアニジン類、及び各々フラクションＡ〜ＣおよびフラクションＤ〜ＥのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳを示す。
【図２３Ａ】図２３Ａは、改良半分取ＨＰＬＣによって精製されたオリゴマープロシアニジンの溶出プロフィールを示す。
【図２３Ｂ】図２３Ｂは、改良半分取ＨＰＬＣによって精製された三量体プロシアニジンの溶出プロフィールを示す。
【図２４Ａ】図２４Ａ〜Ｄは各々、エピカテキンの構造に基づく全部（４〜８）が連結した五量体のエネルギー最小化構造を示す。
【図２４Ｂ】図２４Ａ〜Ｄは各々、エピカテキンの構造に基づく全部（４〜８）が連結した五量体のエネルギー最小化構造を示す。
【図２４Ｃ】図２４Ａ〜Ｄは各々、エピカテキンの構造に基づく全部（４〜８）が連結した五量体のエネルギー最小化構造を示す。
【図２４Ｄ】図２４Ａ〜Ｄは各々、エピカテキンの構造に基づく全部（４〜８）が連結した五量体のエネルギー最小化構造を示す。
【図２５Ａ】図２５Ａは、ベンジルメルカプテンを用いてのチオリシス後の（-）エピカテキンの相対蛍光を示す。
【図２５Ｂ】図２５Ｂは、ベンジルメルカプテンを用いてのチオリシス後の（+）カテキンの相対蛍光を示す。
【図２５Ｃ】図２５Ｃは、ベンジルメルカプテンを用いてのチオリシス後の二量体類（Ｂ２及びＢ５）の相対蛍光を示す。
【図２６】図２６Ａは、チオリシス後の二量体の相対蛍光を示す。図２６Ｂは、二量体のチオリシス及び引き続いての脱硫後のＢ５二量体の相対蛍光を示す。
【図２７Ａ】図２７Ａは、五量体を用いて処置されたＭＤＡ ＭＢ ２３１ヌードマウスモデルの処置中の相対腫瘍量を示す。
【図２７Ｂ】図２７Ｂは、五量体を用いて処置されたＭＤＡ ２３１ヌードマウスモデルの相対生存率曲線を示す。
【図２８】図２８は、カカオ抽出物からのプロシアニジン類のアセトン抽出物のハロゲン無含有分析的分離からの溶出プロフィールを示す。
【図２９】図２９は、プロシアニジン類の順相ＨＰＬＣに固相の孔径が及ぼす影響を示す（蛍光ｖｓ．時間（分））。
【図３０Ａ】図３０Ａは、カカオ豆の発酵中の基質利用を示す。
【図３０Ｂ】図３０Ｂは、発酵中の代謝産物産生を示す。
【図３０Ｃ】図３０Ｃは、カカオ豆の発酵中のプレート計数を示す。
【図３０Ｄ】図３０Ｄは、カカオ豆の発酵溶液中の各成分の相対濃度を示す。
【図３１】図３１は、ＮＯ関連性のフェニレフリンによって前収縮させたラット大動脈のアセチルコリン誘発性弛緩を示す。
【図３２】図３２は、様々な試験混合物からの血糖耐性プロフィールを示す（血糖（mg/dl）ｖｓ．時間（分）、□：対照−砂糖のみ；△：砂糖＋0.1％ポリフェノール；◇：0.1％ポリフェノールのみ）。
【図３３】図３３ＡおよびＢは、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性へのインドメタシンの作用を示す（阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ（濃度（μＭ））。
【図３４Ａ】図３４Ａは、重合化の度合い（試料番号）とＩＣ50 ＣＯＸ−１（μＭ）（試料Ｓ11はｍｇ／ｍｌ）との相関を示す。
【図３４Ｂ】図３４Ｂは、重合化の度合い（試料番号）とＩＣ50 ＣＯＸ−２（μＭ）（試料Ｓ11はｍｇ／ｍｌ）との相関を示す。
【図３５】図３５は、μＭとして表現されたＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性への化合物の作用間の相関を示す。
【図３６Ａ】図３６Ａは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｂ】図３６Ｂは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。を示す。
【図３６Ｃ】図３６Ｃは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｄ】図３６Ｄは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｅ】図３６Ｅは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｆ】図３６Ｆは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｇ】図３Ｇは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｈ】図３６Ｈは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｉ】図３６Ｉは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｊ】図３６Ｊは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｋ】図３６Ｋは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｌ】図３６Ｌは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｍ】図３６Ｍは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｎ】図３６Ｎは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｏ】図３６Ｏは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｐ】図３６Ｐは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｑ】図３６Ｑは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｒ】図３６Ｒは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｓ】図３６Ｓは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｔ】図３６Ｔは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｕ】図３６Ｕは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−１に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−１活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３６Ｖ】図３６Ｖは、プロシアニジン類を含有するサンプルのＣＯＸ−２に関するＩＣ50値（μＭ）を示す（ＣＯＸ−２活性の阻害％ｖｓ．Ｌｏｇ［濃度（Ｍ）］。
【図３７】図３７は、カカオからプロシアニジン類を分離するための精製図式を示す。
【図３８Ａ】図３８Ａは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｂ】図３８Ｂは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｃ】図３８Ｃは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｄ】図３８Ｄは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｅ】図３８Ｅは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｆ】図３８Ｆは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｇ】図３８Ｇは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｈ】図３８Ｈは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｉ】図３８Ｉは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｊ】図３８Ｊは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｋ】図３８Ｋは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｌ】図３８Ｌは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｍ】図３８Ｍは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｎ】図３８Ｎは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｏ】図３８Ｏは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３８Ｐ】図３８Ｐは、五量体の好ましい構造を示す。
【図３９Ａ】図３９Ａは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９ＡＡ】図３９ＡＡは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｂ】図３９Ｂは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｃ】図３９Ｃは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｄ】図３９Ｄは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｅ】図３９Ｅは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｆ】図３９Ｆは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｇ】図３９Ｇは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｈ】図３９Ｈは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｉ】図３９Ｉは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｊ】図３９Ｊは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｋ】図３９Ｋは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｌ】図３９Ｌは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｍ】図３９Ｍは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｎ】図３９Ｎは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｏ】図３９Ｏは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｐ】図３９Ｐは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｑ】図３９Ｑは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｒ】図３９Ｒは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｓ】図３９Ｓは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｔ】図３９Ｔは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｕ】図３９Ｕは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｖ】図３９Ｖは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｗ】図３９Ｗは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｘ】図３９Ｘは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｙ】図３９Ｙは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図３９Ｚ】図３９Ｚは、五量体の立体異性体のライブラリーを示す。
【図４０】図４０ＡおよびＢは、各々ＵＶ及び蛍光によって検出された、プロシアニジン類の順相ＨＰＬＣ分離のための７０分後勾配を示す。
【図４１】図４１ＡおよびＢは、各々ＵＶ及び蛍光によって検出された、プロシアニジン類の順相ＨＰＬＣ分離のための３０分後勾配を示す。
【図４２】図４２は、プロシアニジン類の分取順相ＨＰＬＣ分離を示す。
【図４３Ａ】図４３Ａは、プロシアニジンの二量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４３Ｂ】図４３Ｂは、プロシアニジンの三量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４３Ｃ】図４３Ｃは、プロシアニジンの四量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４３Ｄ】図４３Ｄは、プロシアニジンの五量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４３Ｅ】図４３Ｅは、プロシアニジンの六量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４３Ｆ】図４３Ｆは、プロシアニジンの七量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４３Ｇ】図４３Ｇは、プロシアニジンの八量体のＣＤ（円二色性）スペクトルを示す。
【図４４Ａ】図４４Ａは、エピカテキンについての構造及び1Ｈ／13ＣＮＭＲデータを示す。
【図４４Ｂ】図４４Ｂは、エピカテキンについてのＡＰＴ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４４Ｃ】図４４Ｃは、エピカテキンについてのＣＯＳＹ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４４Ｄ】図４４Ｄは、エピカテキンについてのＸＨＣＯＲＲ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４４Ｅ】図４４Ｅは、エピカテキンについての1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４４Ｆ】図４４Ｆは、エピカテキンについての13Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４５Ａ】図４５Ａは、カテキンについての構造及び1Ｈ／13Ｃ ＮＭＲデータを示す。
【図４５Ｂ】図４５Ｂは、カテキンについての1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４５Ｃ】図４５Ｃは、カテキンについてのＡＰＴ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４５Ｄ】図４５Ｄは、カテキンについてのＸＨＣＯＲＲ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４５Ｅ】図４５Ｅは、カテキンについてのＣＯＳＹ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４６Ａ】図４６Ａは、Ｂ２二量体についての構造及び1Ｈ／13Ｃ ＮＭＲデータを示す。
【図４６Ｂ】図４６Ｂは、Ｂ２二量体についての13Ｃ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４６Ｃ】図４６Ｃは、Ｂ２二量体についてのＡＰＴ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４６Ｄ】図４６Ｄは、Ｂ２二量体についての1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４６Ｅ】図４６Ｅは、Ｂ２二量体についてのＨＭＱＣ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４６Ｆ】図４６Ｆは、Ｂ２二量体についてのＣＯＳＹ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４６Ｇ】図４６Ｇは、ＨＯＨＡＨＡ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４７Ａ】図４７Ａは、Ｂ５二量体についての構造及び1Ｈ／13Ｃ ＮＭＲデータを示す。
【図４７Ｂ】図４７Ｂは、Ｂ５二量体についての1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４７Ｃ】図４７Ｃは、Ｂ５二量体についての13Ｃ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４７Ｄ】図４７Ｄは、Ｂ５二量体についてのＡＰＴ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４７Ｅ】図４７Ｅは、Ｂ５二量体についてのＣＯＳＹ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４７Ｆ】図４７Ｆは、Ｂ５二量体についてのＨＭＱＣ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４７Ｇ】図４７Ｇは、Ｂ５二量体についてのＨＯＨＡＨＡ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４８Ａ】図４８Ａは、エピカテキン／カテキン三量体についての1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４８Ｂ】図４８Ｂは、エピカテキン／カテキン三量体についてのＣＯＳＹ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４８Ｃ】図４８Ｃは、エピカテキン／カテキン三量体についてのＨＭＱＣ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４８Ｄ】図４８Ｄは、エピカテキン／カテキン三量体についてのＨＯＨＡＨＡ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４９Ａ】図４９Ａは、エピカテキン三量体についての1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４９Ｂ】図４９Ｂは、エピカテキン三量体についてのＣＯＳＹ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４９Ｃ】図４９Ｃは、エピカテキン三量体についてのＨＭＱＣ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４９Ｄ】図４９Ｄは、エピカテキン三量体についてのＨＯＨＡＨＡ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５０】図５０は、カカオプロシアニジンのオリゴマー類のミセル電気力学毛細管クロマトグラフィー分離を示す。
【図５１Ａ】図５１Ａは、三量体に結合しているＣｕ+2−イオンについてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５１Ｂ】図５１Ｂは、三量体に結合しているＺｎ+2−イオンについてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５１Ｃ】図５１Ｃは、三量体に結合しているＦｅ+2−イオンについてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５１Ｄ】図５１Ｄは、三量体に結合しているＦｅ+3イオンについてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５１Ｅ】図５１Ｅは、三量体に結合しているＣａ+2−イオンについてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５１Ｆ】図５１Ｆは、三量体に結合しているＭｇ+2−イオンについてのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５２】図５２は、カカオプロシアニジンのオリゴマー類（四量体〜八量体まで）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。
【図５３】図５３は、カカオプロシアニジンのオリゴマー類と白血病ウイルスを産生するネコＦｅＡリンパ芽球腫細胞系との用量反応関係を示す。
【図５４】図５４は、カカオプロシアニジンのオリゴマー類とネコＣＲＦＫ正常腎細胞系との用量反応関係を示す。
【図５５】図５５は、カカオプロシアニジンのオリゴマー類とイヌＭＤＣＫ正常腎細胞系との用量反応関係を示す。
【図５６】図５６は、カカオプロシアニジンのオリゴマー類とイヌＧＨ正常腎細胞系との用量反応関係を示す。
【図５７】図５７は、六量体加水分解へ時間−温度が及ぼす作用を示す。
【図５８】図５８は、三量体形成へ時間−温度が及ぼす作用を示す。
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2011006427.tif 000335
【図２Ａ】
2011006427.tif 000336
【図２Ｂ】
2011006427.tif 000337
【図３】
2011006427.tif 000338
【図４Ａ】
2011006427.tif 000339
【図４Ｂ】
2011006427.tif 000340
【図４Ｃ】
2011006427.tif 000341
【図４Ｄ】
2011006427.tif 000342
【図４Ｅ】
2011006427.tif 000343
【図５】
2011006427.tif 000344
【図６Ａ】
2011006427.tif 000345
【図６Ｂ】
2011006427.tif 000346
【図６Ｃ】
2011006427.tif 000347
【図６Ｄ】
2011006427.tif 000348
【図７Ａ】
2011006427.tif 000349
【図７Ｂ】
2011006427.tif 000350
【図７Ｃ】
2011006427.tif 000351
【図７Ｄ】
2011006427.tif 000352
【図７Ｅ】
2011006427.tif 000353
【図７Ｆ】
2011006427.tif 000354
【図７Ｇ】
2011006427.tif 000355
【図７Ｈ】
2011006427.tif 000356
【図８Ａ】
2011006427.tif 000357
【図８Ｂ】
2011006427.tif 000358
【図８Ｃ】
2011006427.tif 000359
【図８Ｄ】
2011006427.tif 000360
【図８Ｅ】
2011006427.tif 000361
【図８Ｆ】
2011006427.tif 000362
【図８Ｇ】
2011006427.tif 000363
【図８Ｈ】
2011006427.tif 000364
【図９Ａ】
2011006427.tif 000365
【図９Ｂ】
2011006427.tif 000366
【図９Ｃ】
2011006427.tif 000367
【図９Ｄ】
2011006427.tif 000368
【図９Ｅ】
2011006427.tif 000369
【図９Ｆ】
2011006427.tif 000370
【図９Ｇ】
2011006427.tif 000371
【図９Ｈ】
2011006427.tif 000372
【図１０Ａ】
2011006427.tif 000373
【図１０Ｂ】
2011006427.tif 000374
【図１０Ｃ】
2011006427.tif 000375
【図１０Ｄ】
2011006427.tif 000376
【図１０Ｅ】
2011006427.tif 000377
【図１０Ｆ】
2011006427.tif 000378
【図１０Ｇ】
2011006427.tif 000379
【図１０Ｈ】
2011006427.tif 000380
【図１１Ａ】
2011006427.tif 000381
【図１１Ｂ】
2011006427.tif 000382
【図１１Ｃ】
2011006427.tif 000383
【図１１Ｄ】
2011006427.tif 000384
【図１１Ｅ】
2011006427.tif 000385
【図１１Ｆ】
2011006427.tif 000386
【図１１Ｇ】
2011006427.tif 000387
【図１１Ｈ】
2011006427.tif 000388
【図１２Ａ】
2011006427.tif 000389
【図１２Ｂ】
2011006427.tif 000390
【図１２Ｃ】
2011006427.tif 000391
【図１２Ｄ】
2011006427.tif 000392
【図１２Ｅ】
2011006427.tif 000393
【図１２Ｆ】
2011006427.tif 000394
【図１２Ｇ】
2011006427.tif 000395
【図１２Ｈ】
2011006427.tif 000396
【図１３Ａ】
2011006427.tif 000397
【図１３Ｂ】
2011006427.tif 000398
【図１３Ｃ】
2011006427.tif 000399
【図１３Ｄ】
2011006427.tif 000400
【図１３Ｅ】
2011006427.tif 000401
【図１３Ｆ】
2011006427.tif 000402
【図１３Ｇ】
2011006427.tif 000403
【図１３Ｈ】
2011006427.tif 000404
【図１４】
2011006427.tif 000405
【図１５Ａ】
2011006427.tif 000406
【図１５Ｂ】
2011006427.tif 000407
【図１５Ｃ】
2011006427.tif 000408
【図１５Ｄ】
2011006427.tif 000409
【図１５Ｅ】
2011006427.tif 000410
【図１５Ｆ】
2011006427.tif 000411
【図１５Ｇ】
2011006427.tif 000412
【図１５Ｈ】
2011006427.tif 000413
【図１５Ｉ】
2011006427.tif 000414
【図１５Ｊ】
2011006427.tif 000415
【図１５Ｋ】
2011006427.tif 000416
【図１５Ｌ】
2011006427.tif 000417
【図１５Ｍ】
2011006427.tif 000418
【図１５Ｎ】
2011006427.tif 000419
【図１５Ｏ】
2011006427.tif 000420
【図１６】
2011006427.tif 000421
【図１７】
2011006427.tif 000422
【図１８】
2011006427.tif 000423
【図１９】
2011006427.tif 000424
【図２０Ａ】
2011006427.tif 000425
【図２０Ｂ】
2011006427.tif 000426
【図２１】
2011006427.tif 000427
【図２２Ａ】
2011006427.tif 000428
【図２２Ｂ】
2011006427.tif 000429
【図２２Ｃ】
2011006427.tif 000430
【図２３Ａ】
2011006427.tif 000431
【図２３Ｂ】
2011006427.tif 000432
【図２４Ａ】
2011006427.tif 000433
【図２４Ｂ】
2011006427.tif 000434
【図２４Ｃ】
2011006427.tif 000435
【図２４Ｄ】
2011006427.tif 000436
【図２５Ａ】
2011006427.tif 000437
【図２５Ｂ】
2011006427.tif 000438
【図２５Ｃ】
2011006427.tif 000439
【図２６】
2011006427.tif 000440
【図２７Ａ】
2011006427.tif 000441
【図２７Ｂ】
2011006427.tif 000442
【図２８】
2011006427.tif 000443
【図２９】
2011006427.tif 000444
【図３０Ａ】
2011006427.tif 000445
【図３０Ｂ】
2011006427.tif 000446
【図３０Ｃ】
2011006427.tif 000447
【図３０Ｄ】
2011006427.tif 000448
【図３１】
2011006427.tif 000449
【図３２】
2011006427.tif 000450
【図３３】
2011006427.tif 000451
【図３４Ａ】
2011006427.tif 000452
【図３４Ｂ】
2011006427.tif 000453
【図３５】
2011006427.tif 000454
【図３６Ａ】
2011006427.tif 000455
【図３６Ｂ】
2011006427.tif 000456
【図３６Ｃ】
2011006427.tif 000457
【図３６Ｄ】
2011006427.tif 000458
【図３６Ｅ】
2011006427.tif 000459
【図３６Ｆ】
2011006427.tif 000460
【図３６Ｇ】
2011006427.tif 000461
【図３６Ｈ】
2011006427.tif 000462
【図３６Ｉ】
2011006427.tif 000463
【図３６Ｊ】
2011006427.tif 000464
【図３６Ｋ】
2011006427.tif 000465
【図３６Ｌ】
2011006427.tif 000466
【図３６Ｍ】
2011006427.tif 000467
【図３６Ｎ】
2011006427.tif 000468
【図３６Ｏ】
2011006427.tif 000469
【図３６Ｐ】
2011006427.tif 000470
【図３６Ｑ】
2011006427.tif 000471
【図３６Ｒ】
2011006427.tif 000472
【図３６Ｓ】
2011006427.tif 000473
【図３６Ｔ】
2011006427.tif 000474
【図３６Ｕ】
2011006427.tif 000475
【図３６Ｖ】
2011006427.tif 000476
【図３７】
2011006427.tif 000477
【図３８Ａ】
2011006427.tif 000478
【図３８Ｂ】
2011006427.tif 000479
【図３８Ｃ】
2011006427.tif 000480
【図３８Ｄ】
2011006427.tif 000481
【図３８Ｅ】
2011006427.tif 000482
【図３８Ｆ】
2011006427.tif 000483
【図３８Ｇ】
2011006427.tif 000484
【図３８Ｈ】
2011006427.tif 000485
【図３８Ｉ】
2011006427.tif 000486
【図３８Ｊ】
2011006427.tif 000487
【図３８Ｋ】
2011006427.tif 000488
【図３８Ｌ】
2011006427.tif 000489
【図３８Ｍ】
2011006427.tif 000490
【図３８Ｎ】
2011006427.tif 000491
【図３８Ｏ】
2011006427.tif 000492
【図３８Ｐ】
2011006427.tif 000493
【図３９Ａ】
2011006427.tif 000494
【図３９ＡＡ】
2011006427.tif 000495
【図３９Ｂ】
2011006427.tif 000496
【図３９Ｃ】
2011006427.tif 000497
【図３９Ｄ】
2011006427.tif 000498
【図３９Ｅ】
2011006427.tif 000499
【図３９Ｆ】
2011006427.tif 000500
【図３９Ｇ】
2011006427.tif 000501
【図３９Ｈ】
2011006427.tif 000502
【図３９Ｉ】
2011006427.tif 000503
【図３９Ｊ】
2011006427.tif 000504
【図３９Ｋ】
2011006427.tif 000505
【図３９Ｌ】
2011006427.tif 000506
【図３９Ｍ】
2011006427.tif 000507
【図３９Ｎ】
2011006427.tif 000508
【図３９Ｏ】
2011006427.tif 000509
【図３９Ｐ】
2011006427.tif 000510
【図３９Ｑ】
2011006427.tif 000511
【図３９Ｒ】
2011006427.tif 000512
【図３９Ｓ】
2011006427.tif 000513
【図３９Ｔ】
2011006427.tif 000514
【図３９Ｕ】
2011006427.tif 000515
【図３９Ｖ】
2011006427.tif 000516
【図３９Ｗ】
2011006427.tif 000517
【図３９Ｘ】
2011006427.tif 000518
【図３９Ｙ】
2011006427.tif 000519
【図３９Ｚ】
2011006427.tif 000520
【図４０】
2011006427.tif 000521
【図４１】
2011006427.tif 000522
【図４２】
2011006427.tif 000523
【図４３Ａ】
2011006427.tif 000524
【図４３Ｂ】
2011006427.tif 000525
【図４３Ｃ】
2011006427.tif 000526
【図４３Ｄ】
2011006427.tif 000527
【図４３Ｅ】
2011006427.tif 000528
【図４３Ｆ】
2011006427.tif 000529
【図４３Ｇ】
2011006427.tif 000530
【図４４Ａ】
2011006427.tif 000531
【図４４Ｂ】
2011006427.tif 000532
【図４４Ｃ】
2011006427.tif 000533
【図４４Ｄ】
2011006427.tif 000534
【図４４Ｅ】
2011006427.tif 000535
【図４４Ｆ】
2011006427.tif 000536
【図４５Ａ】
2011006427.tif 000537
【図４５Ｂ】
2011006427.tif 000538
【図４５Ｃ】
2011006427.tif 000539
【図４５Ｄ】
2011006427.tif 000540
【図４５Ｅ】
2011006427.tif 000541
【図４６Ａ】
2011006427.tif 000542
【図４６Ｂ】
2011006427.tif 000543
【図４６Ｃ】
2011006427.tif 000544
【図４６Ｄ】
2011006427.tif 000545
【図４６Ｅ】
2011006427.tif 000546
【図４６Ｆ】
2011006427.tif 000547
【図４６Ｇ】
2011006427.tif 000548
【図４７Ａ】
2011006427.tif 000549
【図４７Ｂ】
2011006427.tif 000550
【図４７Ｃ】
2011006427.tif 000551
【図４７Ｄ】
2011006427.tif 000552
【図４７Ｅ】
2011006427.tif 000553
【図４７Ｆ】
2011006427.tif 000554
【図４７Ｇ】
2011006427.tif 000555
【図４８Ａ】
2011006427.tif 000556
【図４８Ｂ】
2011006427.tif 000557
【図４８Ｃ】
2011006427.tif 000558
【図４８Ｄ】
2011006427.tif 000559
【図４９Ａ】
2011006427.tif 000560
【図４９Ｂ】
2011006427.tif 000561
【図４９Ｃ】
2011006427.tif 000562
【図４９Ｄ】
2011006427.tif 000563
【図５０】
2011006427.tif 000564
【図５１Ａ】
2011006427.tif 000565
【図５１Ｂ】
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【図５１Ｃ】
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【図５１Ｄ】
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【図５１Ｅ】
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【図５１Ｆ】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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