【手続補正書】
【提出日】平成27年5月15日(2015.5.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体において網膜疾患または網膜の状態を処置するための、明所（昼間）視を改善するための、矯正視力を改善するための、黄斑機能を改善するための、視野を改善するための、または暗所（夜間）視を改善するための医薬の製造における製剤、製造産物、または組成物の使用であって、
該製剤、製造産物、または組成物は、
（１）哺乳動物網膜前駆細胞を含む細胞集団であって、
該哺乳動物網膜前駆細胞は、ネスチン、Ｓｏｘ２、Ｋｉ−６７、ＭＨＣクラスＩ、およびＦａｓ／ＣＤ９５からなる群から選択される１種または複数のマーカーを発現し、
ネスチンは、該集団内の該細胞の９０％超によって発現され、
Ｓｏｘ２は、該集団内の該細胞の８０％超によって発現され、
Ｋｉ−６７は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現され、
ＭＨＣクラスＩは、該集団内の該細胞の７０％超によって発現され、
Ｆａｓ／ＣＤ９５は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現される、細胞集団；
（２）以下：
（ａ）（ｉ）ヒトについて、在胎１７〜１８週齢、または在胎１６〜１９週齢、または在胎１５〜２０週齢、または在胎１４〜２６週齢、または在胎１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、もしくは２６週齢、あるいは非ヒト動物、必要に応じてネコ、イヌ、もしくはブタの細胞について３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１週間、またはネコについて６〜７週間、またはブタ細胞について６〜９週間において、
（ｉｉ）哺乳動物網膜が明らかに形成される後であるが、光受容体外側セグメントが完全に形成され、網膜の血管新生が実質的に完了し、または完了する前の段階において、または類似の哺乳動物の胎児期において、
回収した細胞の試料を酵素的に解離して、細胞の解離懸濁物ならびに／または小サイズおよび中サイズ細胞群を作製するステップであって、
該回収した細胞の試料は、哺乳動物胎児からの複数の哺乳動物胎児神経網膜細胞を含み、
必要に応じて、細胞の該試料は、ヒトまたはネコまたはイヌの細胞を含み、
必要に応じて、回収した細胞および／または小細胞群の該試料は、トリプシンもしくは均等物、またはＴＲＹＰ−ＬＥ  ＥＸＰＲＥＳＳ（商標）（ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ）もしくは均等物を使用して酵素的に解離される、ステップと、
（ｂ）無血清培地または血清を含む培地を含み、抗生物質および抗真菌薬を含み、または抗生物質も抗真菌薬も含まない滅菌環境下で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０以上を超えない継代にわたって該細胞および／または小細胞群を培養するステップと
を含む方法によって作製される胎児神経網膜細胞の異種混合物：
（３）以下：
後に網膜が形成されるが、光受容体外側セグメントが該網膜全体にわたって完全に形成される前、および網膜の血管新生が実質的に完了し、または完了する前の段階で回収された哺乳動物胎児網膜組織を解離して、細胞および細胞群の解離懸濁物を生成するステップと、
該解離懸濁物を１０〜３０継代にわたって培養するステップ、
を含む方法によって単離された哺乳動物網膜前駆細胞を含む細胞集団であって、
該哺乳動物網膜前駆細胞は、ネスチン、Ｓｏｘ２、Ｋｉ−６７、ＭＨＣクラスＩ、およびＦａｓ／ＣＤ９５からなる群から選択される１種または複数のマーカーを発現し、ネスチンは、該集団内の該細胞の９０％超によって発現され、Ｓｏｘ２は、該集団内の該細胞の８０％超によって発現され、Ｋｉ−６７は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現され、ＭＨＣクラスＩは、該集団内の該細胞の７０％超によって発現され、Ｆａｓ／ＣＤ９５は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現される、細胞集団；あるいは
（４）（１）、（２）および（３）の任意の組み合わせ
を含む、使用。
【請求項２】
前記被験体がヒトまたは非ヒト哺乳動物である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記医薬が、前記被験体の硝子体腔もしくは網膜下腔内への注射用に製剤化される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記網膜疾患または網膜の状態が、網膜色素変性症（ＲＰ）、レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）、シュタルガルト症、アッシャー症候群、コロイデレミア、桿体−錐体もしくは錐体−桿体ジストロフィー、繊毛障害、ミトコンドリア障害、進行性網膜萎縮、網膜変性疾患、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、地図状萎縮、家族性もしくは後天性黄斑症、網膜光受容体疾患、網膜色素上皮を基礎とする疾患、糖尿病性網膜症、類嚢胞黄斑浮腫、ブドウ膜炎、網膜剥離、外傷性網膜損傷、医原性網膜損傷、黄斑円孔、黄斑部毛細血管拡張症、神経節細胞疾患、視神経細胞疾患、緑内障、視神経症、虚血性網膜疾患、未熟児網膜症、網膜血管閉塞、家族性細動脈瘤、網膜血管疾患、眼血管疾患、血管疾患、または虚血性視神経症を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記医薬中の前記細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群から選択される１種または複数のマーカーをさらに発現する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
（ａ）前記回収された細胞および／または小細胞群は、ダルベッコ変法イーグル培地を含む培地：Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｉｘｔｕｒｅ  Ｆ−１２（商標）（ＤＭＥＭ／Ｆ１２（商標））培地、またはＡＤＶＡＮＣＥＤ  ＤＭＥＭ／Ｆ１２（商標）培地（Ｇｉｂｃｏ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ））、またはＵＬＴＲＡＣＵＬＴＵＲＥ（商標）培地（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ−Ｌｏｎｚａ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）で、Ｎ２補充物（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、またはＢ２７もしくはＢ２７  Ｘｅｎｏ  Ｆｒｅｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｌ−グルタミンもしくはＧｌｕｔａＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ならびにＥＧＦおよびｂＦＧＦからなるヒト組換え増殖因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、または他の増殖因子と必要に応じて一緒に培養され、
（ｂ）該ＤＭＥＭ／Ｆ１２（商標）培地は、ヒト細胞のために使用され、該ＵＬＴＲＡＣＵＬＴＵＲＥ（商標）培地は、ネコまたはイヌの細胞のために使用され、
（ｃ）前記方法は、低酸素条件、または妊娠の間に発生中の胎児網膜の酸素レベルに近似するもしくは密接に模倣する酸素条件下、あるいは２％、２．５％、３％、３．５％の酸素で該収集された細胞を培養し、あるいは増殖させるステップを含み、
（ｄ）該培地は、ビタミンＣを補充され、必要に応じて該ビタミンＣは、１日または２日毎に添加され、必要に応じて該ビタミンＣは、０．１ｍｇ／ｍｌもしくは０．０５ｍｇ／ｍｌ、または０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌの間の初期濃度を有する量で添加され、あるいは
（ｅ）該培地は、アルブミン、またはヒトもしくはネコもしくはイヌのアルブミン、または組換えアルブミンを補充され、あるいはアルブミンは、１．０ｍｇ／ｍｌの初期濃度を有する量で添加される、項（２）の胎児神経網膜細胞の異種混合物のための請求項１に記載の使用。
【請求項７】
（ａ）前記組織が、ヒトまたは非ヒト哺乳動物から回収され、
（ｂ）該組織が、在胎１２週齢〜２８週齢のヒト胎児網膜から、または出生後もしくは新生児の網膜から回収され、
（ｃ）該組織が、在胎３週齢〜１１週齢の非ヒト胎児網膜から、または出生後もしくは新生児の網膜から回収され、
（ｄ）前記細胞が大気酸素レベルで培養され、必要に応じて該細胞が、０．５％〜７％の間の酸素レベルで培養され、
（ｅ）該細胞が、ビタミンＣおよびアルブミンを必要に応じて含む無血清または低血清細胞培養培地で培養され、あるいは
（ｆ）前記集団内の該細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群から選択される１種または複数のマーカーをさらに発現する、
項（３）の哺乳動物網膜前駆細胞を含む細胞集団のための請求項１に記載の使用。
【請求項８】
胎児神経網膜細胞の前記異種混合物を作製するための前記方法が、
（ａ）細胞表面マーカーまたは遺伝子マーカーに基づいて胎児神経網膜細胞を選択し、培養前もしくは培養後のいずれかに、または両方で該細胞を必要に応じて選択するステップであって、
必要に応じて該細胞表面マーカーまたは遺伝子マーカーは、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１および／またはＧＤ２ガングリオシド、必要に応じてＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ１３３、またはＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４を含むステップ、あるいは
（ｂ）胎児神経網膜細胞トランスクリプトームプロファイル、プロテオームプロファイル、および／またはゲノムプロファイルに基づいて胎児神経網膜細胞を選択するステップをさらに含む、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
胎児神経網膜細胞の異種混合物を含む、製剤、製造産物、あるいは組成物を作成する方法であって、
（ａ）（ｉ）ヒトについて、在胎１７〜１８週齢、または在胎１６〜１９週齢、または在胎１５〜２０週齢、または在胎１４〜２６週齢、または在胎１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、もしくは２６週齢、あるいは非ヒト動物、必要に応じてネコ、イヌ、もしくはブタの細胞について３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１週間、またはネコについて６〜７週間、またはブタ細胞について６〜９週間において、
（ｉｉ）哺乳動物網膜が明らかに形成される後であるが、光受容体外側セグメントが完全に形成され、網膜の血管新生が実質的に完了し、または完了する前の段階において、または類似の哺乳動物の胎児期において、
回収した細胞の試料を酵素的に解離して、細胞の解離懸濁物ならびに／または小サイズおよび中サイズ細胞群を作製するステップであって、
該回収した細胞の試料は、哺乳動物胎児からの複数の哺乳動物胎児神経網膜細胞を含み、
必要に応じて細胞の該試料は、ヒトまたはネコまたはイヌの細胞を含み、
必要に応じて回収した細胞および／または小細胞群の該試料は、トリプシンもしくは均等物、またはＴＲＹＰ−ＬＥ  ＥＸＰＲＥＳＳ（商標）（ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ）もしくは均等物を使用して酵素的に解離される、ステップと、
（ｂ）無血清培地または血清を含む培地を含み、抗生物質および抗真菌薬を含み、または抗生物質も抗真菌薬も含まない滅菌環境下で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０以上を超えない継代にわたって該細胞および／または小細胞群を培養するステップであって、
必要に応じて該細胞および／または小細胞群は、ダルベッコ変法イーグル培地を含む培地：Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｉｘｔｕｒｅ  Ｆ−１２（商標）（ＤＭＥＭ／Ｆ１２（商標））培地、またはＡＤＶＡＮＣＥＤ  ＤＭＥＭ／Ｆ１２（商標）培地（Ｇｉｂｃｏ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ））、またはＵＬＴＲＡＣＵＬＴＵＲＥ（商標）培地（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ−Ｌｏｎｚａ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）で、Ｎ２補充物（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、またはＢ２７もしくはＢ２７  Ｘｅｎｏ  Ｆｒｅｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｌ−グルタミンもしくはＧｌｕｔａＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ならびにＥＧＦおよびｂＦＧＦからなるヒト組換え増殖因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、または他の増殖因子と必要に応じて一緒に培養され、
必要に応じて該ＤＭＥＭ／Ｆ１２（商標）培地は、ヒト細胞のために使用され、該ＵＬＴＲＡＣＵＬＴＵＲＥ（商標）培地は、ネコまたはイヌの細胞のために使用され、
低酸素条件、または妊娠の間に発生中の胎児網膜の酸素レベルに近似するもしくは密接に模倣する酸素条件下、あるいは２％、２．５％、３％、３．５％の酸素で必要に応じて該細胞を培養し、あるいは増殖させ、
必要に応じて該培地は、ビタミンＣを補充され、必要に応じて該ビタミンＣは、１日または２日毎に添加され、必要に応じて該ビタミンＣは、０．１ｍｇ／ｍｌもしくは０．０５ｍｇ／ｍｌ、または０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌの間の初期濃度を有する量で添加され、
必要に応じて該培地は、アルブミン、またはヒトもしくはネコもしくはイヌのアルブミン、または組換えアルブミンを補充され、あるいはアルブミンは、１．０ｍｇ／ｍｌの初期濃度を有する量で添加され、
必要に応じて細胞の該試料は、病原体、細菌、エンドトキシン、真菌、マイコプラズマ、ウイルス、肝炎ウイルス、またはＨＩＶウイルスの存在についてスクリーニングされ、
必要に応じて細胞の該試料は、正常核型の存在についてスクリーニングされ、
必要に応じて細胞の該試料は、テロメラーゼ活性の上昇を呈さず、
必要に応じて細胞の該試料は、生存能についてスクリーニングされ、
必要に応じて細胞の該試料は、腫瘍形成能についてスクリーニングされる、ステップ
を含む、方法。
【請求項１０】
胎児神経網膜細胞の前記異種混合物を作製するための前記方法が、
（ａ）細胞表面マーカーまたは遺伝子マーカーに基づいて胎児神経網膜細胞を選択し、培養前もしくは培養後のいずれかに、または両方で該細胞を必要に応じて選択するステップであって、
必要に応じて該細胞表面マーカーまたは遺伝子マーカーは、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１および／またはＧＤ２ガングリオシド、必要に応じてＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ１３３、またはＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４を含むステップ、あるいは
（ｂ）胎児神経網膜細胞トランスクリプトームプロファイル、プロテオームプロファイル、および／またはゲノムプロファイルに基づいて胎児神経網膜細胞を選択するステップをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
哺乳動物網膜前駆細胞の集団を単離するための方法であって、
後に網膜が形成されるが、光受容体外側セグメントが該網膜全体にわたって完全に形成される前、および網膜の血管新生が実質的に完了し、または完了する前の段階で回収された哺乳動物胎児網膜組織を解離して、細胞および細胞群の解離懸濁物を生成するステップと、
該解離懸濁物を１０〜３０継代にわたって培養するステップであって、該哺乳動物網膜前駆細胞は、ネスチン、Ｓｏｘ２、Ｋｉ−６７、ＭＨＣクラスＩ、およびＦａｓ／ＣＤ９５からなる群から選択される１種または複数のマーカーを発現し、ネスチンは、該集団内の該細胞の９０％超によって発現され、Ｓｏｘ２は、該集団内の該細胞の８０％超によって発現され、Ｋｉ−６７は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現され、ＭＨＣクラスＩは、該集団内の該細胞の７０％超によって発現され、Ｆａｓ／ＣＤ９５は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現される、ステップと
を含む、方法。
【請求項１２】
前記組織が、ヒトまたは非ヒト哺乳動物から回収される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記組織が、在胎１２週齢〜２８週齢のヒト胎児網膜から、または出生後もしくは新生児の網膜から回収されるか、あるいは在胎３週齢〜１１週齢の非ヒト胎児網膜から、または出生後もしくは新生児の網膜から回収される、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞が大気酸素レベルで培養されるか、または該細胞が、０．５％〜７％の間の酸素レベルで培養されるか、そして／または該細胞が、ビタミンＣおよびアルブミンを必要に応じて含む無血清または低血清細胞培養培地で培養される、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記集団内の前記細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群から選択される１種または複数のマーカーをさらに発現する、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
哺乳動物網膜前駆細胞を含む細胞集団であって、該哺乳動物網膜前駆細胞は、ネスチン、Ｓｏｘ２、Ｋｉ−６７、ＭＨＣクラスＩ、およびＦａｓ／ＣＤ９５からなる群から選択される１種または複数のマーカーを発現し、ネスチンは、該集団内の該細胞の９０％超によって発現され、Ｓｏｘ２は、該集団内の該細胞の８０％超によって発現され、Ｋｉ−６７は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現され、ＭＨＣクラスＩは、該集団内の該細胞の７０％超によって発現され、Ｆａｓ／ＣＤ９５は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現される、細胞集団。
【請求項１７】
前記細胞がヒトまたは非ヒト哺乳動物に由来する、請求項１６に記載の細胞集団。
【請求項１８】
前記集団内の前記細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群から選択される１種または複数のマーカーをさらに発現する、請求項１６または１７に記載の細胞集団。
【請求項１９】
被験体において網膜疾患または網膜の状態を処置するための、明所（昼間）視を改善するための、矯正視力を改善するための、黄斑機能を改善するための、視野を改善するための、または暗所（夜間）視を改善するための、製剤、製造産物、または組成物であって、
該製剤、製造産物、または組成物は、
（１）哺乳動物網膜前駆細胞を含む細胞集団であって、
該哺乳動物網膜前駆細胞は、ネスチン、Ｓｏｘ２、Ｋｉ−６７、ＭＨＣクラスＩ、およびＦａｓ／ＣＤ９５からなる群から選択される１種または複数のマーカーを発現し、
ネスチンは、該集団内の該細胞の９０％超によって発現され、
Ｓｏｘ２は、該集団内の該細胞の８０％超によって発現され、
Ｋｉ−６７は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現され、
ＭＨＣクラスＩは、該集団内の該細胞の７０％超によって発現され、
Ｆａｓ／ＣＤ９５は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現される、細胞集団；
（２）以下：
（ａ）（ｉ）ヒトについて、在胎１７〜１８週齢、または在胎１６〜１９週齢、または在胎１５〜２０週齢、または在胎１４〜２６週齢、または在胎１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、もしくは２６週齢、あるいは非ヒト動物、必要に応じてネコ、イヌ、もしくはブタの細胞について３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１週間、またはネコについて６〜７週間、またはブタ細胞について６〜９週間において、
（ｉｉ）哺乳動物網膜が明らかに形成される後であるが、光受容体外側セグメントが完全に形成され、網膜の血管新生が実質的に完了し、または完了する前の段階において、または類似の哺乳動物の胎児期において、
回収した細胞の試料を酵素的に解離して、細胞の解離懸濁物ならびに／または小サイズおよび中サイズ細胞群を作製するステップであって、
該回収した細胞の試料は、哺乳動物胎児からの複数の哺乳動物胎児神経網膜細胞を含み、
必要に応じて、細胞の該試料は、ヒトまたはネコまたはイヌの細胞を含み、
必要に応じて、回収した細胞および／または小細胞群の該試料は、トリプシンもしくは均等物、またはＴＲＹＰ−ＬＥ  ＥＸＰＲＥＳＳ（商標）（ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ）もしくは均等物を使用して酵素的に解離される、ステップと、
（ｂ）無血清培地または血清を含む培地を含み、抗生物質および抗真菌薬を含み、または抗生物質も抗真菌薬も含まない滅菌環境下で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０以上を超えない継代にわたって該細胞および／または小細胞群を培養するステップと
を含む方法によって作製される胎児神経網膜細胞の異種混合物：
（３）以下：
後に網膜が形成されるが、光受容体外側セグメントが該網膜全体にわたって完全に形成される前、および網膜の血管新生が実質的に完了し、または完了する前の段階で回収された哺乳動物胎児網膜組織を解離して、細胞および細胞群の解離懸濁物を生成するステップと、
該解離懸濁物を１０〜３０継代にわたって培養するステップ、
を含む方法によって単離された哺乳動物網膜前駆細胞を含む細胞集団であって、
該哺乳動物網膜前駆細胞は、ネスチン、Ｓｏｘ２、Ｋｉ−６７、ＭＨＣクラスＩ、およびＦａｓ／ＣＤ９５からなる群から選択される１種または複数のマーカーを発現し、ネスチンは、該集団内の該細胞の９０％超によって発現され、Ｓｏｘ２は、該集団内の該細胞の８０％超によって発現され、Ｋｉ−６７は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現され、ＭＨＣクラスＩは、該集団内の該細胞の７０％超によって発現され、Ｆａｓ／ＣＤ９５は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現される、細胞集団；あるいは
（４）（１）、（２）および（３）の任意の組み合わせ
を含む、製剤、製造産物、または組成物。
【請求項２０】
前記被験体がヒトまたは非ヒト哺乳動物である、請求項１９に記載の製剤、製造産物、または組成物。
【請求項２１】
前記製剤、製造産物、または組成物が、前記被験体の硝子体腔もしくは網膜下腔内への注射のためのものである、請求項１９または２０に記載の製剤、製造産物、または組成物。
【請求項２２】
前記網膜疾患または網膜の状態が、網膜色素変性症（ＲＰ）、レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）、シュタルガルト症、アッシャー症候群、コロイデレミア、桿体−錐体もしくは錐体−桿体ジストロフィー、繊毛障害、ミトコンドリア障害、進行性網膜萎縮、網膜変性疾患、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、地図状萎縮、家族性もしくは後天性黄斑症、網膜光受容体疾患、網膜色素上皮を基礎とする疾患、糖尿病性網膜症、類嚢胞黄斑浮腫、ブドウ膜炎、網膜剥離、外傷性網膜損傷、医原性網膜損傷、黄斑円孔、黄斑部毛細血管拡張症、神経節細胞疾患、視神経細胞疾患、緑内障、視神経症、虚血性網膜疾患、未熟児網膜症、網膜血管閉塞、家族性細動脈瘤、網膜血管疾患、眼血管疾患、血管疾患、または虚血性視神経症を含む、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の製剤、製造産物、または組成物。
【請求項２３】
前記製剤、製造産物、または組成物中の前記細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群から選択される１種または複数のマーカーをさらに発現する、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の製剤、製造産物、または組成物。
【請求項２４】
（ａ）前記回収された細胞および／または小細胞群は、ダルベッコ変法イーグル培地を含む培地：Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｉｘｔｕｒｅ  Ｆ−１２（商標）（ＤＭＥＭ／Ｆ１２（商標））培地、またはＡＤＶＡＮＣＥＤ  ＤＭＥＭ／Ｆ１２（商標）培地（Ｇｉｂｃｏ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ））、またはＵＬＴＲＡＣＵＬＴＵＲＥ（商標）培地（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ−Ｌｏｎｚａ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）で、Ｎ２補充物（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、またはＢ２７もしくはＢ２７  Ｘｅｎｏ  Ｆｒｅｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｌ−グルタミンもしくはＧｌｕｔａＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ならびにＥＧＦおよびｂＦＧＦからなるヒト組換え増殖因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、または他の増殖因子と必要に応じて一緒に培養され、
（ｂ）該ＤＭＥＭ／Ｆ１２（商標）培地は、ヒト細胞のために使用され、該ＵＬＴＲＡＣＵＬＴＵＲＥ（商標）培地は、ネコまたはイヌの細胞のために使用され、
（ｃ）前記方法は、低酸素条件、または妊娠の間に発生中の胎児網膜の酸素レベルに近似するもしくは密接に模倣する酸素条件下、あるいは２％、２．５％、３％、３．５％の酸素で該収集された細胞を培養し、あるいは増殖させるステップを含み、
（ｄ）該培地は、ビタミンＣを補充され、必要に応じて該ビタミンＣは、１日または２日毎に添加され、必要に応じて該ビタミンＣは、０．１ｍｇ／ｍｌもしくは０．０５ｍｇ／ｍｌ、または０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌの間の初期濃度を有する量で添加され、あるいは
（ｅ）該培地は、アルブミン、またはヒトもしくはネコもしくはイヌのアルブミン、または組換えアルブミンを補充され、あるいはアルブミンは、１．０ｍｇ／ｍｌの初期濃度を有する量で添加される、項（２）の胎児神経網膜細胞の異種混合物のための請求項１９に記載の製剤、製造産物、または組成物。
【請求項２５】
（ａ）前記組織が、ヒトまたは非ヒト哺乳動物から回収され、
（ｂ）該組織が、在胎１２週齢〜２８週齢のヒト胎児網膜から、または出生後もしくは新生児の網膜から回収され、
（ｃ）該組織が、在胎３週齢〜１１週齢の非ヒト胎児網膜から、または出生後もしくは新生児の網膜から回収され、
（ｄ）前記細胞が大気酸素レベルで培養され、必要に応じて該細胞が、０．５％〜７％の間の酸素レベルで培養され、
（ｅ）該細胞が、ビタミンＣおよびアルブミンを必要に応じて含む無血清または低血清細胞培養培地で培養され、あるいは
（ｆ）前記集団内の該細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群から選択される１種または複数のマーカーをさらに発現する、
項（３）の哺乳動物網膜前駆細胞を含む細胞集団のための請求項１９に記載の製剤、製造産物、または組成物。
【請求項２６】
胎児神経網膜細胞の前記異種混合物を作製するための前記方法が、
（ａ）細胞表面マーカーまたは遺伝子マーカーに基づいて胎児神経網膜細胞を選択し、培養前もしくは培養後のいずれかに、または両方で該細胞を必要に応じて選択するステップであって、
必要に応じて該細胞表面マーカーまたは遺伝子マーカーは、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１および／またはＧＤ２ガングリオシド、必要に応じてＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ１３３、またはＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４を含むステップ、あるいは
（ｂ）胎児神経網膜細胞トランスクリプトームプロファイル、プロテオームプロファイル、および／またはゲノムプロファイルに基づいて胎児神経網膜細胞を選択するステップをさらに含む、請求項１９に記載の製剤、製造産物、または組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
代替の実施形態では、被験体は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物である。いくつかの実施形態では、組成物は、被験体の硝子体腔もしくは網膜下腔内への注射用に製剤化される。網膜疾患または網膜の状態は、網膜色素変性症（ＲＰ）、レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）、シュタルガルト症、アッシャー症候群、コロイデレミア、桿体−錐体もしくは錐体−桿体ジストロフィー、繊毛障害（ｃｉｌｉｏｐａｔｈｙ）、ミトコンドリア障害、進行性網膜萎縮、網膜変性疾患、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、地図状萎縮、家族性もしくは後天性黄斑症、網膜光受容体疾患、網膜色素上皮を基礎とする疾患（ｒｅｔｉｎａｌ  ｐｉｇｍｅｎｔ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−ｂａｓｅｄ  ｄｉｓｅａｓｅ）、糖尿病性網膜症、類嚢胞黄斑浮腫、ブドウ膜炎、網膜剥離、外傷性網膜損傷、医原性網膜損傷、黄斑円孔、黄斑部毛細血管拡張症、神経節細胞疾患、視神経細胞疾患、緑内障、視神経症、虚血性網膜疾患、未熟児網膜症、網膜血管閉塞、家族性細動脈瘤（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｍａｃｒｏａｎｅｕｒｙｓｍ）、網膜血管疾患、眼血管疾患、血管疾患、または虚血性視神経症を含み得る。
本発明の好ましい実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
哺乳動物網膜前駆細胞を含む細胞集団であって、該哺乳動物網膜前駆細胞は、ネスチン、Ｓｏｘ２、Ｋｉ−６７、ＭＨＣクラスＩ、およびＦａｓ／ＣＤ９５からなる群から選択される１種または複数のマーカーを発現し、ネスチンは、該集団内の該細胞の９０％超によって発現され、Ｓｏｘ２は、該集団内の該細胞の８０％超によって発現され、Ｋｉ−６７は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現され、ＭＨＣクラスＩは、該集団内の該細胞の７０％超によって発現され、Ｆａｓ／ＣＤ９５は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現される、細胞集団。
（項目２）
前記細胞がヒトまたは非ヒト哺乳動物に由来する、項目１に記載の細胞集団。
（項目３）
前記集団内の前記細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群から選択される１種または複数のマーカーをさらに発現する、項目１に記載の細胞集団。
（項目４）
哺乳動物網膜前駆細胞の集団を単離するための方法であって、
後に網膜が形成されるが、光受容体外側セグメントが該網膜全体にわたって完全に形成される前、および網膜の血管新生が実質的に完了し、または完了する前の段階で哺乳動物胎児網膜組織を回収するステップと、
該回収した組織を解離して、細胞および細胞群の解離懸濁物を生成するステップと、
該解離懸濁物を約１０〜３０継代にわたって培養するステップであって、該哺乳動物網膜前駆細胞は、ネスチン、Ｓｏｘ２、Ｋｉ−６７、ＭＨＣクラスＩ、およびＦａｓ／ＣＤ９５からなる群から選択される１種または複数のマーカーを発現し、ネスチンは、該集団内の該細胞の９０％超によって発現され、Ｓｏｘ２は、該集団内の該細胞の８０％超によって発現され、Ｋｉ−６７は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現され、ＭＨＣクラスＩは、該集団内の該細胞の７０％超によって発現され、Ｆａｓ／ＣＤ９５は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現される、ステップとを含む、方法。
（項目５）
前記組織が、ヒトまたは非ヒト哺乳動物から回収される、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記組織が、在胎約１２週齢〜約２８週齢のヒト胎児網膜から、または出生後もしくは新生児の網膜から回収される、項目４に記載の方法。
（項目７）
前記組織が、在胎約３週齢〜約１１週齢の非ヒト胎児網膜から、または出生後もしくは新生児の網膜から回収される、項目４に記載の方法。
（項目８）
前記細胞が大気酸素レベルで培養される、項目４に記載の方法。
（項目９）
前記細胞が、約０．５％〜約７％の間の酸素レベルで培養される、項目４に記載の方法。
（項目１０）
前記細胞が、ビタミンＣおよびアルブミンを必要に応じて含む無血清または低血清細胞培養培地で培養される、項目４に記載の方法。
（項目１１）
前記集団内の前記細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群から選択される１種または複数のマーカーをさらに発現する、項目４に記載の方法。
（項目１２）
網膜疾患または網膜の状態を処置する必要のある被験体において網膜疾患または網膜の状態を処置するための方法であって、哺乳動物網膜前駆細胞を含む有効量の組成物を該被験体に投与するステップであって、該哺乳動物網膜前駆細胞は、ネスチン、Ｓｏｘ２、Ｋｉ−６７、ＭＨＣクラスＩ、およびＦａｓ／ＣＤ９５からなる群から選択される１種または複数のマーカーを発現し、ネスチンは、該集団内の該細胞の９０％超によって発現され、Ｓｏｘ２は、該集団内の該細胞の８０％超によって発現され、Ｋｉ−６７は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現され、ＭＨＣクラスＩは、該集団内の該細胞の７０％超によって発現され、Ｆａｓ／ＣＤ９５は、該集団内の該細胞の３０％超によって発現される、ステップと、該被験体の視覚の変化を必要に応じて測定するステップとを含み、それによって該網膜疾患または網膜の状態を処置する、方法。
（項目１３）
前記被験体が、ヒトまたは非ヒト哺乳動物である、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記組成物が、前記被験体の硝子体腔もしくは網膜下腔内への注射用に製剤化される、項目１２に記載の方法。
（項目１５）
前記網膜疾患または網膜の状態が、網膜色素変性症（ＲＰ）、レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）、シュタルガルト症、アッシャー症候群、コロイデレミア、桿体−錐体もしくは錐体−桿体ジストロフィー、繊毛障害、ミトコンドリア障害、進行性網膜萎縮、網膜変性疾患、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、地図状萎縮、家族性もしくは後天性黄斑症、網膜光受容体疾患、網膜色素上皮を基礎とする疾患、糖尿病性網膜症、類嚢胞黄斑浮腫、ブドウ膜炎、網膜剥離、外傷性網膜損傷、医原性網膜損傷、黄斑円孔、黄斑部毛細血管拡張症、神経節細胞疾患、視神経細胞疾患、緑内障、視神経症、虚血性網膜疾患、未熟児網膜症、網膜血管閉塞、家族性細動脈瘤、網膜血管疾患、眼血管疾患、血管疾患、または虚血性視神経症を含む、項目１２に記載の方法。
（項目１６）
前記組成物中の前記細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群から選択される１種または複数のマーカーをさらに発現する、項目１２に記載の方法。
（項目１７）
（ａ）（ｉ）ヒトについて、在胎約１７〜１８週齢、または在胎約１６〜１９週齢、または在胎１５〜２０週齢、または在胎１４〜２６週齢、または在胎約１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、もしくは２６週齢、あるいは非ヒト動物、必要に応じてネコ、イヌ、もしくはブタの細胞について約３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１週間、またはネコについて６〜７週間、またはブタ細胞について６〜９週間において、
（ｉｉ）哺乳動物網膜が明らかに形成される後であるが、光受容体外側セグメントが完全に形成され、網膜の血管新生が実質的に完了し、または完了する前の段階において、または類似の哺乳動物の胎児期において、
哺乳動物胎児からの複数の哺乳動物胎児神経網膜細胞を含む細胞の試料を回収するステップであって、
必要に応じて細胞の該試料は、ヒトまたはネコまたはイヌの細胞を含む、ステップと、
（ｂ）回収した細胞の該試料を酵素的に解離して、細胞の解離懸濁物ならびに／または小サイズおよび中サイズ細胞群を作製するステップであって、
必要に応じて回収した細胞および／または小細胞群の該試料は、トリプシンもしくは均等物、またはＴＲＹＰ−ＬＥ  ＥＸＰＲＥＳＳ（商標）（ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ
ＣＡ）もしくは均等物を使用して酵素的に解離される、ステップと、
（ｃ）無血清培地または血清を含む培地を含み、抗生物質および抗真菌薬を含み、または抗生物質も抗真菌薬も含まない滅菌環境下で、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０以上を超えない継代にわたって該細胞および／または小細胞群を培養するステップと
を含み、
必要に応じて該細胞および／または小細胞群は、ダルベッコ変法イーグル培地を含む培地：Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｉｘｔｕｒｅ  Ｆ−１２（商標）（ＤＭＥＭ／Ｆ１２（商標））培地、またはＡＤＶＡＮＣＥＤ  ＤＭＥＭ／Ｆ１２（商標）培地（Ｇｉｂｃｏ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ））、またはＵＬＴＲＡＣＵＬＴＵＲＥ（商標）培地（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ−Ｌｏｎｚａ
Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）で、Ｎ２補充物（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、またはＢ２７もしくはＢ２７  Ｘｅｎｏ  Ｆｒｅｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｌ−グルタミンもしくはＧｌｕｔａＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ならびにＥＧＦおよびｂＦＧＦからなるヒト組換え増殖因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、または他の増殖因子と必要に応じて一緒に培養され、
必要に応じて該ＤＭＥＭ／Ｆ１２（商標）培地は、ヒト細胞のために使用され、該ＵＬＴＲＡＣＵＬＴＵＲＥ（商標）培地は、ネコまたはイヌの細胞のために使用され、
低酸素条件、または妊娠の間に発生中の胎児網膜の酸素レベルに近似するもしくは密接に模倣する酸素条件下、あるいは約２％、２．５％、３％、３．５％の酸素で必要に応じて該細胞を培養し、あるいは増殖させ、
必要に応じて該培地は、ビタミンＣを補充され、必要に応じて該ビタミンＣは、１日または２日毎に添加され、必要に応じて該ビタミンＣは、約０．１ｍｇ／ｍｌもしくは０．０５ｍｇ／ｍｌ、または約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌの間の初期濃度を有する量で添加され、
必要に応じて該培地は、アルブミン、またはヒトもしくはネコもしくはイヌのアルブミン、または組換えアルブミンを補充され、あるいはアルブミンは、約１．０ｍｇ／ｍｌの初期濃度を有する量で添加され、
必要に応じて細胞の該試料は、病原体、細菌、エンドトキシン、真菌、マイコプラズマ、ウイルス、肝炎ウイルス、またはＨＩＶウイルスの存在についてスクリーニングされ、
必要に応じて細胞の該試料は、正常核型の存在についてスクリーニングされ、
必要に応じて細胞の該試料は、テロメラーゼ活性の上昇を呈さず、
必要に応じて細胞の該試料は、生存能についてスクリーニングされ、
必要に応じて細胞の該試料は、腫瘍形成能についてスクリーニングされる
方法によって作製される胎児神経網膜細胞の異種混合物を含む、製剤、製造産物、あるいは組成物。
（項目１８）
胎児神経網膜細胞の前記異種混合物を作製するための前記方法が、
（ａ）細胞表面マーカーまたは遺伝子マーカーに基づいて胎児神経網膜細胞を選択し、培養前（前向きに）もしくは培養後に、または両方で該細胞を必要に応じて選択するステップであって、
必要に応じて該細胞表面マーカーまたは遺伝子マーカーは、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１および／またはＧＤ２ガングリオシド、必要に応じてＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ１３３、またはＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４を含むステップ、あるいは
（ｂ）胎児神経網膜細胞トランスクリプトームプロファイル、プロテオームプロファイル、および／またはゲノムプロファイルに基づいて胎児神経網膜細胞を選択するステップをさらに含む、項目１７に記載の製剤、製造産物、あるいは組成物。
（項目１９）
網膜疾患または網膜の状態を処置するための方法であって、
（ａ）項目１７〜１８のいずれかに記載の製剤、製造産物、または組成物を提供するステップと、（ｂ）（ａ）の該製剤、製造産物、または組成物を硝子体腔もしくは網膜下腔内に注射するステップとを含み、
必要に応じて該硝子体腔もしくは網膜下腔は、ヒトまたはネコまたはイヌの硝子体腔もしくは網膜下腔であり、必要に応じて標準的な眼内注射手順が使用され、必要に応じて該方法は、前房穿刺をさらに含み、それによって該網膜疾患または網膜の状態を処置し、必要に応じて該網膜疾患または網膜の状態は、アッシャー病、網膜色素変性症（ＲＰ）、網膜変性疾患、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、滲出型ＡＭＤ、もしくは萎縮型ＡＭＤ、地図状萎縮、網膜光受容体疾患、糖尿病性網膜症、類嚢胞黄斑浮腫、ブドウ膜炎、網膜剥離、網膜損傷、黄斑円孔、黄斑部毛細血管拡張症、外傷性もしくは医原性網膜損傷、神経節細胞もしくは視神経細胞疾患、緑内障、または視神経症、虚血性網膜疾患、例えば、未熟児網膜症、網膜血管閉塞、もしくは虚血性視神経症を含む、方法。
（項目２０）
明所（昼間）視を改善するための、または矯正視力を改善する、または黄斑機能を改善する、または視野を改善する、または暗所（夜間）視を改善するための方法であって、
（ａ）項目１７〜１８のいずれかに記載の製剤、製造産物、または組成物を提供するステップと、（ｂ）（ａ）の該製剤、製造産物、または組成物を硝子体腔もしくは網膜下腔内に注射するステップとを含み、
必要に応じて該硝子体腔もしくは網膜下腔は、ヒトまたはネコまたはイヌの硝子体腔もしくは網膜下腔であり、必要に応じて標準的な眼内注射手順が使用され、必要に応じて該方法は、前房穿刺をさらに含み、それによって該手順の安全性を改善する；それによって該明所（昼間）視を改善する、または矯正視力を改善する、または黄斑機能を改善する、または視野を改善する、方法。