【手続補正書】
【提出日】平成26年12月10日(2014.12.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む、脂質コート含有ウイルスの不活化方法：
a)活性を有するタンパク質を含有する流体を得；
b)有機溶媒および界面活性剤を該流体と混合して混合物を得；
c)該混合物を、約120分間以下でインキュベーションする；
ここで、工程(b)および(c)は共に約20℃以下の温度で実施され、
インキュベーション後の混合物は、生存脂質コート含有ウイルスを実質的に含まず；
インキュベーション後のタンパク質は、工程(a)で得られる活性の少なくとも25％、少なくとも50％、または少なくとも75％の活性を有する。
【請求項２】
該流体が、細胞溶解物、細胞上清、先の精製工程からの溶出物、または体液である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該タンパク質が組換え第VIII因子である請求項１記載の方法。
【請求項４】
該タンパク質が、ADAMTS-13、α1抗プラスミン、α2抗プラスミン、抗トロンビン、抗トロンビンIII、癌凝血促進物質、エリスロポエチン、第II因子、第V因子、第VI因子、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、第X因子、第XI因子、第XII因子、第XIII因子、フィブロネクチン、フィブリノゲン、ヘパリンコファクターII、高分子量キニノーゲン、筋肉内免疫グロブリン、静脈内免疫グロブリン、プラスミノーゲン、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子１、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子２、プレカリクレイン、プロテインC、プロテインS、プロテインZ、プロテインZ関連プロテアーゼ阻害剤、組織因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ、またはフォンビルブラント因子である請求項１記載の方法。
【請求項５】
該有機溶媒が、（ｉ）ジメチルエーテル、ジエチルエーテル、エチルプロピルエーテル、メチルブチルエーテル、メチルイソプロピルエーテル、またはメチルイソブチルエーテルから選ばれるエーテル、（ｉｉ）メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、n-ブタノール、イソブタノール、n-ペンタノール、またはイソペンタノールから選ばれるアルコール、（ｉｉｉ）ジ-(n-ブチル)ホスフェート、ジ-(t-ブチル)ホスフェート、ジ-(n-ヘキシル)ホスフェート、ジ-(2-エチルヘキシル)ホスフェート、ジ-(n-デシル)ホスフェート、またはエチルジ(n-ブチル)ホスフェートから選ばれるジアルキルホスフェート、または（ｉｖ）トリ-(n-ブチル)ホスフェート、トリ-(t-ブチル)ホスフェート、トリ-(n-ヘキシル)ホスフェート、トリ-(2-エチルヘキシル)ホスフェート、またはトリ-(n-デシル)ホスフェートから選ばれるトリアルキルホスフェートである請求項１記載の方法。
【請求項６】
該有機溶媒の最終濃度が、約0.1％(v/v)〜約5.0％(v/v)、約0.1％〜約1.0％(v/v)、約0.2％(v/v)〜約0.5％(v/v)、または約0.2％(v/v)〜約0.4％(v/v)、または約0.3％(v/v)である請求項１に記載の方法。
【請求項７】
該界面活性剤が、（ｉ）陰イオン界面活性剤または陽イオン界面活性剤から選ばれるイオン性界面活性剤、（ｉｉ）両性イオン性(両性)界面活性剤、または（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤である請求項１に記載の方法。
【請求項８】
該陰イオン界面活性剤が、（i）ラウリル硫酸アンモニウムまたはラウリル硫酸ナトリウム(SDS)から選ばれるアルキルサルフェート、（ii）ラウレス硫酸ナトリウムまたはミレス硫酸ナトリウムから選ばれるアルキルエーテルサルフェート、（iii）ジオクチルナトリウムスルホサクシネートから選ばれるドクセート、（iv）パーフルオロオクタンスルホネート(PFOS)またはパーフルオロブタンスルホネートから選ばれるスルホネートフルオロ界面活性剤、（v）アルキルベンゼンスルホネート、（vi）アルキルアリールエーテルホスフェート、（vii）アルキルエーテルホスフェート、（viii）脂肪酸塩またはステアリン酸ナトリウムから選ばれるアルキルカルボキシレート、（ix）ラウロイルサルコシンナトリウム、または（x）パーフルオロノナノエートまたはパーフルオロオクタノエートから選ばれるカルボキシレートフルオロ界面活性剤であり、
該陽イオン界面活性剤が、（i）セチルトリメチルアンモニウムブロミド(CTAB)またはセチルトリメチルアンモニウムクロリド(CTAC)から選ばれるアルキルトリメチルアンモニウム塩、（ii）塩化セチルピリジウム(CPC)、（iii）ポリエトキシレート化獣脂アミン(POEA)、（iv）塩化ベンザルコニウム(BAC)、（v）塩化ベンゼトニウム(BZT)、（vi）5-ブロモ-5-ニトロ-1,3-ジオキサン、（vii）ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド、（viii）ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド(DODAB)、（ix）pH依存性第一級アミン、（x）pH依存性第二級アミンまたは（xi）pH依存性第三級アミン、または（xii）オクテニジン２塩酸塩であり、
両性イオン性界面活性剤が、（i）3-[(3-コラミドプロピル)ジメチルアンモニオ]-1-プロパンスルホネート(CHAPS)、（ii）スルタイン、（iii）ベタインまたは（iv）レシチンであり、
非イオン性界面活性剤が、（i）ポリソルベート20ソルビタンモノオレエート(TWEEN（登録商標)20)、ポリソルベート40ソルビタンモノオレエート(TWEEN（登録商標)40)、ポリソルベート60ソルビタンモノオレエート(TWEEN（登録商標)60)、ポリソルベート61ソルビタンモノオレエート(TWEEN（登録商標)61)、ポリソルベート65ソルビタンモノオレエート(TWEEN（登録商標)65)、ポリソルベート80ソルビタンモノオレエート(TWEEN（登録商標)80)、またはポリソルベート81ソルビタンモノオレエート(TWEEN（登録商標)81)から選ばれるポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル、（ii）ポロキサマー124(PLURONIC（登録商標)L44)、ポロキサマー181(PLURONIC（登録商標)L61)、ポロキサマー182(PLURONIC（登録商標)L62)、ポロキサマー184(PLURONIC（登録商標)L64)、ポロキサマー188(PLURONIC（登録商標)F68)、ポロキサマー237(PLURONIC（登録商標)F87)、ポロキサマー338(PLURONIC（登録商標)L108)またはポロキサマー407(PLURONIC（登録商標)F127) から選ばれるポロキサマー、（iii）アルキルフェノールポリグリコールエーテル、（iv）ポリエチレングリコールアルキルアリールエーテル、（v）オクタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノドデシルエーテル、BRIJ（登録商標)30またはBRIJ（登録商標)35から選ばれるポリオキシエチレングリコールアルキルエーテル、（vi）2-ドデカオキシエタノール(LUBROL（登録商標)-PX)、（vii）ポリオキシエチレン(4-5)p-t-オクチルフェノール(TRITON（登録商標)X-45)またはポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル(TRITON（登録商標)X-100) から選ばれるポリオキシエチレングリコールオクチルフェノールエーテル、（viii）ポリオキシエチレングリコールアルキルフェノールエーテル、（ix）ノニルフェノキシポリエトキシルエタノールまたはオクチルフェノキシポリエトキシルエタノールから選ばれるフェノキシポリエトキシルエタノール、（x）グルコシドアルキルエーテル、（xi）マルトシドアルキルエーテル、（xii）チオグルコシドアルキルエーテル、（xiii）ジギトニン、（xiv）グリセロールアルキルエステル、（xv）アルキルアリールポリエーテルサルフェート、（xvi）アルコールスルホネート、（xvii）ソルビタンアルキルエステル、（xviii）コカミドモノエタノールアミンまたはコカミドジエタノールアミンから選ばれるコカミドエタノールアミン、（xix）スクロースモノラウレート、（xx）ドデシルジメチルアミンオキシド、または（xxi）コール酸ナトリウムである請求項７に記載の方法。
【請求項９】
該第一級アミンがpH<10で正に荷電されるか、または第二級アミンがpH<4で荷電される請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
該ポリオキシエチレングリコールアルキルフェノールエーテルがノノキシノール-9であり、該グルコシドアルキルエーテルがオクチルグルコピラノシドであり、該マルトシドアルキルエーテルがドデシルマルトピラノシドであり、該チオグルコシドアルキルエーテルがヘプチルチオグルコピラノシドであり、および/または該グリセロールアルキルエステルがラウリン酸グリセリルである請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
該界面活性剤の最終濃度が、約0.1％(v/v)〜約10.0％(v/v)または約0.5％(v/v)〜約5.0％(v/v)である請求項１記載の方法。
【請求項１２】
該界面活性剤が複数の界面活性剤である、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
1つの界面活性剤の最終濃度が、約0.1％(v/v)〜約10.0％(v/v)、約0.5％(v/v)〜約5.0％(v/v)、または約0.5％(v/v)〜約1.0％(v/v)であり、界面活性剤の残りの最終濃度が、約0.1％(v/v)〜約5％(v/v)、または約0.1％(v/v)〜約1.0％(v/v)、または約0.2％(v/v)〜約4％(v/v)である請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
工程(c)において、該混合物を約10分間〜約90分間または約30分間〜約60分間インキュベーションする、請求項１記載の方法。
【請求項１５】
該工程(b)および(c)の両方を約0℃〜約16℃の温度、約2℃〜約12℃の温度、約2℃〜約8℃の温度、約2℃〜約4℃の温度で実施する、請求項１記載の方法。
【請求項１６】
インキュベーション後の該混合物がインキュベーション前より生存脂質コート含有ウイルスに対して少なくとも100倍少ないID50を含み、1×101 PFU/mL未満の生存脂質コート含有ウイルスを含み、生存脂質コート含有ウイルスを実質的に含まず、および/または生存脂質コート含有ウイルスを完全に含まない請求項１記載の方法。
【請求項１７】
該脂質コート含有ウイルスが、DNAウイルス、RNAウイルスまたは逆転写ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、シンドビスウイルス、単純ヘルペスウイルス、仮性狂犬病ウイルス、センダイウイルス、水疱性口内炎ウイルス、西ナイルウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス、コロナウイルス、ウマ関節炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群ウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス、ワクシニアウイルス；ヘルペスウイルス科のウイルス、ポックスウイルス科のウイルス、ヘパドナウイルス科のウイルス；フラビウイルス科のウイルス、トガウイルス科のウイルス、コロナウイルス科のウイルス、デルタウイルスウイルス、オルソミクソウイルス科のウイルス、パラミクソウイルス科のウイルス、ラブドウイルス科のウイルス、ブニヤウイルス科のウイルスまたはフィロウイルス科のウイルス、レトロウイルス科のウイルス、および/またはヘパドナウイルス科のウイルスである請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
該方法が、さらに工程(c)後に混合物から溶媒を除去し、非イオン性界面活性剤を除去し、および/または非生存ウイルスを除去する１またはそれ以上の工程を含む請求項１記載の方法。
【請求項１９】
以下の工程を含む脂質コート含有ウイルスの不活化方法：
a)活性を有する第VIII因子を含有する流体を得、
b)該流体を、トリ(n-ブチル)ホスフェート、ポリオキシエチレンオクチルフェニルおよびポリソルベート80ソルビタン(ポリオキシエチレン)と混合して混合物を得、
ここで、トリ(n-ブチル)ホスフェートの最終濃度は約0.1％(v/v)〜約5.0％(v/v)であり、ポリオキシエチレンオクチルフェニルの最終濃度は約0.5％(v/v)〜約10.0％(v/v)であり、ポリソルベート80ソルビタンの最終濃度は約0.1％(v/v)〜約5.0％(v/v)である、
c)該混合物を約120分間以下でインキュベーションする；
ここで、工程(b)および(c)は共に約20℃以下の温度で実施され、インキュベーション後の該混合物は生存脂質コート含有ウイルスを実質的に含まず、インキュベーション後の第VIII因子は工程(a)で得られる活性の少なくとも25％の活性を有する。
【請求項２０】
トリ(n-ブチル)ホスフェートの該濃度が約0.3％(v/v)であり、ポリオキシエチレンオクチルフェニルの該濃度が約1.0％(v/v)であり、ポリソルベート80ソルビタンの該濃度が約0.3％(v/v)である、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
該工程(b)および(c)の両方を約0℃〜約16℃の温度、約2℃〜約12℃の温度、約2℃〜約8℃の温度、約2℃〜約4℃の温度で実施する、請求項１９または２０記載の方法。
【請求項２２】
本明細書に記載の方法から得られる脂質コート含有ウイルスを実質的に含まない第VIII因子。