【手続補正書】
【提出日】平成27年5月26日(2015.5.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイコバクテリア細胞から単離されたマイコバクテリアRNA、およびマイコバクテリア細
胞から単離されたマイコバクテリア細胞壁を含む組成物であって、フェノールまたはストレプトマイセス・グリセウスのプロテアーゼを含まず、前記単離されたマイコバクテリアのRNAは2〜150塩基の長さのオリゴリボヌクレオチドおよびポリリボヌクレオチドの形態
である、組成物。
【請求項２】
無傷のマイコバクテリア細胞をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記無傷のマイコバクテリア細胞が前記組成物の0.05重量%〜95重量％又は0.19重量％〜19.6重量％であることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
マイコバクテリアRNAおよびマイコバクテリア細胞壁を含む組成物であって、以下の逐次
的工程によって製造される組成物：
A）マイコバクテリア細胞バイオマスを破壊して、破壊されたマイコバクテリア細胞、
無傷のマイコバクテリア細胞、破壊されたマイコバクテリア細胞壁およびRNAを生成する
こと；
B）無傷のマイコバクテリア細胞を、破壊されたマイコバクテリア細胞壁およびRNAから任意に分離すること；  
C）破壊されたマイコバクテリア細胞部分の可溶性細胞質成分を前記破壊されたマイコ
バクテリア細胞壁およびマイコバクテリアRNAから分離して、マイコバクテリア細胞壁、
及び単離されたリボ核酸組成物を得ること；並びに
工程Cの後、さらにマイコバクテリア細胞壁、単離されたリボ核酸組成物を、2〜150塩
基の長さのオリゴリボヌクレオチドおよびポリリボヌクレオチドを生成するのに十分な温度で加熱すること。
【請求項５】
フェノールまたはストレプトマイセス・グリセウスのプロテアーゼを含まない、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記加熱工程において、生成されたオリゴリボヌクレオチドおよびポリリボヌクレオチドが20〜40塩基の長さ又は2〜40塩基の長さである、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
前記マイコバクテリア細胞がチモテ菌（Mycobacterium phlei）、マイコバクテウム・バ
ッカエ（Mycobacterium vaccae）、マイコバクテウム・スメグマチス（Mycobacterium smegmatis）、またはウシ結核菌BCG（Mycobacterium bovis BCG）から成る群から選択され
る、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記マイコバクテリア細胞がチモテ菌（Mycobacterium phlei）である、請求項１〜７の
いずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
細菌細胞から単離された細菌RNA、および細菌細胞から単離された細菌細胞壁を含む組成
物であって、フェノールまたはストレプトマイセス・グリセウスのプロテアーゼを含まず、前記単離された細菌のRNAは2〜150塩基の長さのオリゴリボヌクレオチドおよびポリリ
ボヌクレオチドの形態であることを特徴とする、組成物。
【請求項１０】
前記単離された細菌RNA及び細菌細胞壁がグラム陽性菌又はグラム陰性菌由来である、請
求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記単離RNA及び細胞壁がマイコバクテリア細胞由来の組合せにおいて単離された、請求
項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記単離RNA及び細胞壁が細菌細胞由来の組合せにおいて単離された、請求項９に記載の
組成物。
【請求項１３】
細菌RNAおよび細菌細胞壁を含む組成物であって、以下の逐次的工程によって製造される
組成物：
A）細菌細胞バイオマスを破壊して、破壊された細菌細胞、無傷の細菌細胞、破壊され
た細菌細胞壁およびRNAを生成すること；
B）無傷のマイコバクテリア細胞を、破壊されたマイコバクテリア細胞壁およびRNAから任意に分離すること；  
C）破壊された細菌細胞部分の可溶性細胞質成分を前記破壊された細菌細胞壁および細
菌RNAから分離して、細菌細胞壁、及び単離されたリボ核酸組成物を得ること；並びに、
工程Cの後、さらに細菌細胞壁、単離されたリボ核酸組成物を、2〜150塩基の長さのオ
リゴリボヌクレオチドおよびポリリボヌクレオチドを生成するのに十分な温度で加熱すること。
【請求項１４】
フェノールまたはストレプトマイセス・グリセウスのプロテアーゼを含まない、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記加熱工程において、生成されたオリゴリボヌクレオチドおよびポリリボヌクレオチドが20〜40塩基の長さ又は2〜40塩基の長さである、請求項４に記載の組成物。
【請求項１６】
さらに薬理学的に許容できる担体又は送達系を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
癌の治療のための、請求項１〜１６の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
免疫系を刺激するための、請求項１〜１７の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
免疫系を刺激することは、造血性の前駆体の分化を刺激すること、サイトカインもしくはケモカインの分泌を増加させること、造血性の成長因子の合成を増加させること、ヌクレ
オチド結合オリゴマー形成ドメイン2（NOD2）受容体を活性化すること、またはToll様受
容体2（TLR2）受容体を活性化することを含むことを特徴とする、請求項１８に記載の組
成物。
【請求項２０】
造血性の成長因子の合成を刺激するための、請求項１〜１９の何れか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記マイコバクテリアがチモテ菌であり、造血性の成長因子が、マクロファージコロニー刺激因子（M-CSF）、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）、顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）、間質細胞由来因子-1アルファ（SDF-1a）、白血病阻害因子（LIF）及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
癌治療の補助剤として又は免疫刺激治療の補助剤として用いるための、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
単離されたマイコバクテリアRNA及びマイクロバクテリア細胞壁を含む組成物の製造方法
であって、以下の逐次的工程を含む、方法：
A）マイコバクテリア細胞バイオマスを破壊して、破壊されたマイコバクテリア細胞、
無傷のマイコバクテリア細胞、破壊されたマイコバクテリア細胞壁およびRNAを生成する
こと；
B）無傷のマイコバクテリア細胞を、破壊されたマイコバクテリア細胞壁およびRNAから任意に分離すること；並びに
C）破壊されたマイコバクテリア細胞部分の可溶性細胞質成分を前記破壊されたマイコ
バクテリア細胞壁およびマイコバクテリアRNAから分離して、マイコバクテリア細胞壁、
及び単離されたリボ核酸組成物を得ること。
【請求項２４】
前記単離されたマイコバクテリアRNAは、2〜4000塩基の長さ、2〜150塩基の長さ、または2〜40塩基の長さのオリゴリボヌクレオチドおよびポリリボヌクレオチドの形態である、
請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
2〜150塩基の長さまたは2〜40塩基の長さのオリゴリボヌクレオチドおよびポリリボヌク
レオチドを生成するために十分な温度にて工程B後に無傷のマイコバクテリア細胞を加熱
することをさらに含み、前記無傷のマイコバクテリア細胞は、不活性化される、請求項２３又は２４に記載の方法。
【請求項２６】
破壊工程Aは、10,000psi以上での高圧ホモジナイゼーションを含む、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記破壊工程Aは、前記分離工程BまたはCの前に2〜5回繰り返される、請求項２３〜２６
のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記分離工程Cの後に前記破壊工程Aを2〜5回繰り返すことをさらに含む、請求項２３〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記分離工程Bは低速遠心であり、かつ前記分離工程Cは高速遠心である、請求項２３〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
次の逐次的工程をさらに含む、請求項２３〜２９のいずれか一項に記載の方法：
工程AおよびBを繰り返して無傷のマイコバクテリア細胞の数を制御すること、並びに、
2〜150塩基の長さまたは2〜40塩基の長さのオリゴリボヌクレオチドおよびポリリボヌ
クレオチドを得るために十分な温度に、マイコバクテリア細胞壁、リボ核酸組成物を加熱すること。
【請求項３１】
単離された細菌RNA及びマイクロバクテリア細胞壁を含む組成物の製造方法であって、前
記組成物はフェノールまたはストレプトマイセス・グリセウスのプロテアーゼを含まず、単離されたRNAはオリゴヌクレオチド及びポリリボヌクレオチドの形態であり、前記オリ
ゴリボヌクレオチドおよびポリリボヌクレオチドが2〜4000塩基、2〜150塩基、20〜40塩
基又は2〜40塩基の長さであって、以下の逐次的工程を含む、方法：
A）細菌細胞バイオマスを破壊して、破壊された細菌細胞、無傷の細菌細胞、破壊され
た細菌細胞壁およびRNAを生成すること；
B）無傷の細菌細胞を、破壊された細菌細胞壁およびRNAから任意に分離すること；並びに
C）破壊された細菌細胞部分の可溶性細胞質成分を前記破壊された細菌細胞壁およびRNAから分離して、細菌細胞壁、及び単離されたリボ核酸組成物を得ること。
【請求項３２】
前記単離された細菌RNA及び細菌細胞壁がグラム陽性菌またはグラム陰性菌に由来する、
請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記マイコバクテリア細胞がチモテ菌（Mycobacterium phlei）、マイコバクテウム・バ
ッカエ（Mycobacterium vaccae）、マイコバクテウム・スメグマチス（Mycobacterium smegmatis）、またはウシ結核菌BCG（Mycobacterium bovis BCG）から成る群から選択され
る、請求項２３〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記マイコバクテリア細胞がチモテ菌（Mycobacterium phlei）である、請求項２３〜３
０及び３３のいずれか一項に記載の方法。