【手続補正書】
【提出日】平成27年10月21日(2015.10.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体からの生物学的サンプル中の分析物の量を定量的に測定するための非競合アッセイ方法であって：
ａ）該生物学的サンプルを
（ｉ）結合剤であって、該分析物に選択的に結合して、該結合剤および該分析物の捕捉複合体を形成する結合剤、および
（ｉｉ）アプタマーであって、該捕捉複合体に結合した該分析物に選択的に結合して、該結合剤、アプタマーおよび分析物の複合体を形成するアプタマー、と反応させる工程、および
ｂ）アプタマーが結合した複合体の量を測定する工程；を含み、
該分析物が、２，０００ダルトン未満の分子量を有し、複合体形成物の量が、該サンプル中の該分析物の量と直接関連する、方法。
【請求項２】
前記結合剤が抗体を含む、請求項１に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項３】
前記アプタマーが、前記捕捉複合体に選択的に結合する、核酸アプタマー、またはペプチドアプタマーである、請求項１〜２のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項４】
前記結合剤が、第一の検出可能な標識と連結する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項５】
前記アプタマーが、第二の検出可能な標識と連結する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項６】
前記第一の検出可能な標識および前記第二の検出可能な標識が、別々の励起波長および発光波長の組み合わせを有する蛍光分子である、請求項５に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項７】
前記第一の検出可能な標識および前記第二の検出可能な標識が、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）ドナー−アクセプターペアを形成する、請求項５または６に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項８】
前記核酸アプタマーの結合剤が、フルオロフォアおよび消光剤ペアを含み、前記複合体の形成が、結果として該フルオロフォアの検出可能な消光または非消光を生じさせる、請求項４〜７のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項９】
前記分析物が、ホルモン、薬物、または薬物代謝物である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項１０】
前記薬物が乱用薬物である、請求項９に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項１１】
前記薬物がオピオイドまたはオピオイド代謝物である、請求項１０に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項１２】
前記オピオイドが、モルヒネ、コデイン、テバイン、ヘロイン、ヒドロモルフォン、ヒドロコドン、オキシコドン、オキシモルフォン、デソモルフィン、ニコモルフィン、プロポキシフェン、ジプロパノイルモルフィン、ベンジルモルフィン、エチルモルフィン、ブプレノルフィン、フェンタニル、ペチジン、メペリジン、メタドン、トラマドール、デキストロプロポキシフェン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１１に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項１３】
前記薬物が、オキシコドン、ヒドロコドン、またはそれらの組み合わせである、請求項１１に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項１４】
前記薬物代謝物が、ノルオキシコドン、オキシモロフォン、ヒドロモルフォン、ノルヒドロコドン、またはそれらの組み合わせである、請求項１１に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項１５】
前記分析物がＴＨＣまたはその代謝物である、請求項１０に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項１６】
前記分析物がニコチンまたはその代謝物である、請求項１１に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項１７】
側方流動イムノアッセイを含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の非競合アッセイ方法であって、
ａ）必要に応じて、結合剤を前記生物学的サンプルに加える工程；
ｂ）該生物学的サンプルを、適用ポイント、任意選択のコンジュゲートゾーン、捕捉ゾーン、および吸収ゾーンを含む膜小片に適用する工程であって、該コンジュゲートゾーンが該結合剤を含み、該捕捉ゾーンが、該膜小片内、または該膜小片上に固定化された前記アプタマーを含み、該生物学的サンプルを該適用ポイントに適用する、工程；
ｃ）必要に応じて、該生物学的サンプル中に存在する分析物が、毛管作用によって該膜小片を通り、該コンジュゲートゾーンまで移動することを可能にし、かつ該分析物に対する該結合剤の結合が、捕捉複合体を形成することを可能にする条件下で、該膜小片を維持する工程；
ｄ）該捕捉複合体が、毛管作用によって該膜小片を通り、該捕捉ゾーンまで移動することを可能にし、かつ該アプタマーに対する該捕捉複合体の結合が、複合体を形成することを可能にする条件下で、該膜小片を維持する工程；
ｅ）さらに、該捕捉ゾーンに固定化されていない結合剤の該吸収ゾーンへの移動を可能にする条件下で、該膜小片を維持する工程；および
ｆ）該捕捉ゾーンの複合体の量を決定する工程、を含み、
該サンプル中の分析物の量が、該捕捉ゾーンに存在する複合体の量と直接関連する、方法。
【請求項１９】
前記膜小片が、セルロース、硝酸セルロース、酢酸セルロース、グラスファイバー、ナイロン、高分子電解質、アクリルコポリマー、ポリエーテルスルホンからなる群から選択される材料を含む、請求項１８に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項２０】
前記膜小片が単層融合マトリクス材料を含む、請求項１８に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項２１】
前記複合体の量が、前記捕捉ゾーンで検出される第一の検出可能な標識の量の、該捕捉ゾーンで検出されるコントロールの検出可能な標識の量に対する比として決定される、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記アプタマーを、前記膜小片内に捕捉されている粒子に結合体化する、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項２３】
前記コントロールの検出可能な標識が、前記粒子内または前記粒子上にある、請求項２２に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項２４】
前記アプタマーが、前記捕捉ゾーン内の捕捉ラインに存在する、請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項２５】
前記捕捉ラインで検出される結合剤の量が、コントロール捕捉ラインで検出されるコントロール分析物と特異的に結合する結合剤の量に対して正規化される、請求項２４に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項２６】
前記コントロール分析物が、前記生物学的サンプルを前記膜小片の前記適用ポイントへ投与する前に、該サンプルに加えられる、請求項２５に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項２７】
前記生物学的サンプル中の分析物の量が、複数の標準分析物から計算し、かつ内部コントロールを用いて調整した応答曲面に対して、検出される結合剤の量をプロットすることによって、決定される、請求項１８〜２６のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項２８】
前記応答曲面が内部コントロールを用いて調整される、請求項２７に記載の非競合アッセイ方法。
【請求項２９】
２，０００ダルトン未満の分子量を有する、ホルモン、薬物、または薬物代謝物からなる群から選択される分析物のための、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法を行うためのキットであって、
該キットが、適用ポイント、捕捉ゾーン、および吸収ゾーンを含む膜小片を含み、
該捕捉ゾーンが、結合剤−分析物複合体に選択的に結合するが、フリーの分析物には結合しない、該膜小片内、または該膜小片上に固定化されたアプタマーを含む、キット。
【請求項３０】
前記膜小片が、さらにコンジュゲートゾーンを含み、該コンジュゲートゾーンが前記結合剤を含み、該結合剤が、該膜小片内、または該膜小片上に固定化された抗体を含む、請求項２９に記載のキット。
【請求項３１】
前記捕捉ゾーンが固定化されたコントロール分析物を含む、請求項２９に記載のキット。
【請求項３２】
さらにサンプル採取器具を含み、該サンプル採取器具が、前記分析物に選択的に結合する結合剤を含む、請求項２９に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
開示される側方流動イムノアッセイは、即時に結果を提供するために、採取の場所で、生物学的サンプル中の小分析物（例えば薬物、薬物代謝物、重金属、またはホルモン）の量の迅速および正確な決定を提供する。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
被験体からの生物学的サンプル中の分析物の量を定量的に測定するための非競合アッセイ方法であって：
ａ）該生物学的サンプルを
（ｉ）結合剤であって、該分析物に選択的に結合して、該結合剤および該分析物の捕捉複合体を形成する結合剤、および
（ｉｉ）捕捉剤であって、該捕捉複合体に選択的に結合するが、フリーの分析物には結合せず、該結合剤、捕捉剤および分析物のサンドイッチ複合体を形成する捕捉剤、と反応させる工程、および
ｂ）サンドイッチ複合体形成物を測定する工程；を含み、
該サンドイッチ複合体形成物の量が、該サンプル中の該分析物の量と直接関連する、方法。
（項目２）
被験体からの生物学的サンプル中の分析物の量を定量的に測定するための非競合アッセイ方法であって：
ａ）該分析物に集団で選択的に結合して、結合剤、捕捉剤および分析物のサンドイッチ複合体を形成する該結合剤および該捕捉剤と、該生物学的サンプルを反応させる工程、および
ｂ）サンドイッチ複合体形成物を測定する工程、を含み、
該サンドイッチ複合体形成の量が、該サンプル中の該分析物の量と直接関連する、方法。
（項目３）
前記結合剤が、分析物に選択的に結合する、抗体、核酸アプタマー、またはペプチドアプタマーを含む、項目１または２のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
（項目４）
前記捕捉剤が、前記捕捉複合体に選択的に結合する、抗体、核酸アプタマー、またはペプチドアプタマーを含む、項目１〜３のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
（項目５）
前記結合剤が、第一の検出可能な標識と連結する、項目１〜４のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
（項目６）
前記捕捉剤が、第二の検出可能な標識と連結する、項目１〜５のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
（項目７）
前記第一の検出可能な標識および前記第二の検出可能な標識が、別々の励起波長および発光波長の組み合わせを有する蛍光分子である、項目６に記載の非競合アッセイ方法。
（項目８）
前記第一の検出可能な標識および前記第二の検出可能な標識が、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）ドナー−アクセプターペアを形成する、項目６または７に記載の非競合アッセイ方法。
（項目９）
前記核酸アプタマーの結合剤または捕捉剤が、フルオロフォアおよび消光剤ペアを含み、前記サンドイッチ複合体の形成が、結果として該フルオロフォアの検出可能な消光または非消光が生じる、項目５〜８のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
（項目１０）
前記分析物が、２，０００ダルトン未満の分子量を有する、ホルモン、薬物、または薬物代謝物である、項目１〜９のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
（項目１１）
前記薬物が乱用薬物である、項目１０に記載の非競合アッセイ方法。
（項目１２）
前記薬物がオピオイドまたはオピオイド代謝物である、項目１１に記載の非競合アッセイ方法。
（項目１３）
前記オピオイドが、モルヒネ、コデイン、テバイン、ヘロイン、ヒドロモルフォン、ヒドロコドン、オキシコドン、オキシモルフォン、デソモルフィン、ニコモルフィン、プロポキシフェン、ジプロパノイルモルフィン、ベンジルモルフィン、エチルモルフィン、ブプレノルフィン、フェンタニル、ペチジン、メペリジン、メタドン、トラマドール、デキストロプロポキシフェン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、項目１２に記載の非競合アッセイ方法。
（項目１４）
前記薬物が、オキシコドン、ヒドロコドン、またはそれらの組み合わせである、項目１２に記載の非競合アッセイ方法。
（項目１５）
前記薬物代謝物が、ノルオキシコドン、オキシモロフォン、ヒドロモルフォン、ノルヒドロコドン、またはそれらの組み合わせである、項目１２に記載の非競合アッセイ方法。
（項目１６）
前記分析物がＴＨＣまたはその代謝物である、項目１１に記載の非競合アッセイ方法。
（項目１７）
前記分析物がニコチンまたはその代謝物である、項目１０に記載の非競合アッセイ方法。
（項目１８）
側方流動イムノアッセイを含む、項目１〜１７のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
（項目１９）
項目１８に記載の非競合アッセイ方法であって、
ａ）必要に応じて、結合剤を前記生物学的サンプルに加える工程；
ｂ）該生物学的サンプルを、適用ポイント、任意選択のコンジュゲートゾーン、捕捉ゾーン、および吸収ゾーンを含む膜小片に適用する工程であって、該コンジュゲートゾーンが該結合剤を含み、該捕捉ゾーンが、該膜小片内、または該膜小片上に固定化された前記捕捉剤を含み、該生物学的サンプルを該適用ポイントに適用する、工程；
ｃ）必要に応じて、該生物学的サンプル中に存在する分析物が、毛管作用によって該膜小片を通り、該コンジュゲートゾーンまで移動することを可能にし、かつ該分析物に対する該結合剤の結合が、捕捉複合体を形成することを可能にする条件下で、該膜小片を維持する工程；
ｄ）該捕捉複合体が、毛管作用によって該膜小片を通り、該捕捉ゾーンまで移動することを可能にし、かつ該捕捉複合体に対する該捕捉剤の結合が、サンドイッチ複合体を形成することを可能にする条件下で、該膜小片を維持する工程；
ｅ）さらに、該捕捉ゾーンに固定化されていない結合剤の該吸収ゾーンへの移動を可能にする条件下で、該膜小片を維持する工程；および
ｆ）該捕捉ゾーンのサンドイッチ複合体の量を決定する工程、を含み、
該サンプル中の分析物の量が、該捕捉ゾーンに存在するサンドイッチ複合体の量と直接関連する、方法。
（項目２０）
前記膜小片が、セルロース、硝酸セルロース、酢酸セルロース、グラスファイバー、ナイロン、高分子電解質、アクリルコポリマー、ポリエーテルスルホンからなる群から選択される材料を含む、項目１９に記載の非競合アッセイ方法。
（項目２１）
前記膜小片が単層融合マトリクス材料を含む、項目１９に記載の非競合アッセイ方法。
（項目２２）
前記サンドイッチ複合体の量が、前記捕捉ゾーンで検出される第一の検出可能な標識の量の、該捕捉ゾーンで検出されるコントロールの検出可能な標識の量に対する比として決定される、項目１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記捕捉剤を、前記膜小片内に捕捉されている粒子に結合体化する、項目１９〜２１のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
（項目２４）
前記コントロールの検出可能な標識が、前記粒子内または前記粒子上にある、項目２３に記載の非競合アッセイ方法。
（項目２５）
前記捕捉剤が、前記捕捉ゾーン内の捕捉ラインに存在する、項目１９〜２４のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
（項目２６）
前記捕捉ラインで検出される結合剤の量が、コントロール捕捉ラインで検出されるコントロール分析物と特異的に結合する結合剤の量に対して正規化される、項目２５に記載の非競合アッセイ方法。
（項目２７）
前記コントロール分析物が、前記生物学的サンプルを前記膜小片の前記適用ポイントへ投与する前に、該サンプルに加えられる、項目２６に記載の非競合アッセイ方法。
（項目２８）
前記生物学的サンプル中の分析物の量が、複数の標準分析物から計算し、かつ内部コントロールを用いて調整した応答曲面に対して、検出される結合剤の量をプロットすることによって、決定される、項目１９〜２７のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法。
（項目２９）
前記応答曲面が内部コントロールを用いて調整される、項目２８に記載の非競合アッセイ方法。
（項目３０）
２，０００ダルトン未満の分子量を有する、ホルモン、薬物、または薬物代謝物からなる群から選択される分析物のための、項目１〜２９のいずれか一項に記載の非競合アッセイ方法を行うためのキットであって、
該キットが、適用ポイント、捕捉ゾーン、および吸収ゾーンを含む膜小片を含み、
該捕捉ゾーンが、結合剤−分析物複合体に選択的に結合するが、フリーの分析物には結合しない、該膜小片内、または該膜小片上に固定化された捕捉剤を含み、
該捕捉剤が、抗体、核酸アプタマー、またはペプチドアプタマーを含む、キット。
（項目３１）
前記膜小片が、さらにコンジュゲートゾーンを含み、該コンジュゲートゾーンが、該膜小片内、または該膜小片上に固定化された、抗体、核酸アプタマー、またはペプチドアプタマーからなる群から選択される結合剤を含む、項目３０に記載のキット。
（項目３２）
前記捕捉ゾーンが固定化されたコントロール分析物を含む、項目３０に記載のキット。
（項目３３）
さらにサンプル採取器具を含み、該サンプル採取器具が、前記分析物に選択的に結合する結合剤を含む、項目３０に記載のキット。