【手続補正書】
【提出日】平成26年12月5日(2014.12.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コレステロール生合成経路におけるタンパク質ターゲットの阻害剤を含む、癌処置用医薬。
【請求項２】
タンパク質ターゲットが、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼではない、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
タンパク質ターゲットが、オキシドスクアレンシクラーゼである、請求項２に記載の医薬。
【請求項４】
癌が、乳癌、前立腺癌、肺癌、大腸癌、卵巣癌、膵臓癌、肝臓癌、甲状腺癌、胃癌、子宮癌、リンパ腫、脳癌、皮膚癌、腎臓癌、口腔癌、咽喉癌、舌癌および膀胱癌、および白血病、ならびにそれらの薬物耐性表現型から選択される、請求項１に記載の医薬。
【請求項５】
癌細胞が、ｐ５３変異を有しない、請求項１に記載の医薬。
【請求項６】
癌細胞が、ＨＥＲ２／ｎｅｕ陽性の乳癌細胞である、請求項１に記載の医薬。
【請求項７】
癌細胞が、エストロゲン受容体およびプロゲステロン受容体陽性の乳癌細胞である、請求項１に記載の医薬。
【請求項８】
癌細胞が、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体およびＨＥＲ２／ｎｅｕに対して三重陰性の乳癌細胞である、請求項１に記載の医薬。
【請求項９】
癌細胞が、アポトーシスを受ける、請求項１に記載の医薬。
【請求項１０】
阻害剤が、ＰＲＩＭＡ−１ではない化合物である、請求項１に記載の医薬。
【請求項１１】
該化合物が、少なくとも２つの芳香環構造と結合した三級アミンである、請求項１０に記載の医薬。
【請求項１２】
化合物が、式Ｉ：
【化１】
2014505047.tif 000001
［式中、
Ｘは、水素、ハロゲン、Ｏ、ＮＲ3Ｒ4、Ｓ、ＣＨ2およびＣＨから選択され；
Ｙは、存在しないか、または、結合、ＯおよびＣＨから選択され；
Ｚは、Ｏ、ＮおよびＣＨから選択され；
破線の結合は、存在しても存在しなくてもよく；存在する場合は、該結合は、単結合であっても二重結合であってもよく；
Ｒ、Ｒ1およびＲ2は、独立して、アルキル、アルケン、アリール、アルキン、シクロアルキルおよびアルキルシクロアルキルアルキルから選択され、いずれも置換されていてもよく；
Ｒ3およびＲ4は、独立して、結合、水素、低級アルキル、低級アルケン、低級アルキン、アリールおよびシクロアルキルから選択され、いずれも置換されていてもよく；
Ｑは、臭素、塩素およびフッ素から選択される］
を有するものまたはその塩である、請求項１１に記載の医薬。
【請求項１３】
化合物が、４'−[６−(アリルメチルアミノ)ヘキシルオキシ]−４−ブロモ−２'−フルオロベンゾフェノン・フマル酸塩である、請求項１２に記載の医薬。
【請求項１４】
細胞のコレステロール生合成経路におけるタンパク質ターゲットの活性を阻害する工程を含む、癌細胞生存率を低下させる方法。
【請求項１５】
タンパク質ターゲットが、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼではない、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
タンパク質ターゲットが、オキシドスクアレンシクラーゼである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
細胞が、乳癌細胞、前立腺癌細胞、肺癌細胞、大腸癌細胞、卵巣癌細胞、膵臓癌細胞、肝臓癌細胞、甲状腺癌細胞、胃癌細胞、子宮癌細胞、リンパ腫細胞、脳癌細胞、皮膚癌細胞、腎臓癌細胞、口腔癌細胞、咽喉癌細胞、舌癌細胞および膀胱癌細胞、および白血病細胞、ならびにそれらの薬物耐性表現型である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
癌細胞が、ｐ５３変異を有していない、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
癌細胞が、アポトーシスを受ける、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
癌細胞が、ＨＥＲ２／ｎｅｕ陽性の乳癌細胞である、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
癌細胞が、エストロゲン受容体およびプロゲステロン受容体陽性の乳癌細胞である、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
癌細胞が、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体およびＨＥＲ２／ｎｅｕに対して三重陰性の乳癌細胞である、請求項１４に記載の方法。
【請求項２３】
阻害工程が、ＰＲＩＭＡ−１ではない化合物を用いて行われる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２４】
該化合物が、少なくとも２つの芳香環構造と結合した三級アミンである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
化合物が、式Ｉ：
【化２】
2014505047.tif 000002
［式中、
Ｘは、水素、ハロゲン、Ｏ、ＮＲ3Ｒ4、Ｓ、ＣＨ2およびＣＨから選択され；
Ｙは、存在しないか、または、結合、ＯおよびＣＨから選択され；
Ｚは、Ｏ、ＮおよびＣＨから選択され；
破線の結合は、存在しても存在しなくてもよく；存在する場合は、該結合は、単結合であっても二重結合であってもよく；
Ｒ、Ｒ1およびＲ2は、独立して、アルキル、アルケン、アリール、アルキン、シクロアルキルおよびアルキルシクロアルキルアルキルから選択され、いずれも置換されていてもよく；
Ｒ3およびＲ4は、独立して、結合、水素、低級アルキル、低級アルケン、低級アルキン、アリールおよびシクロアルキルから選択され、いずれも置換されていてもよく；
Ｑは、臭素、塩素およびフッ素から選択される］
を有するものまたはその塩である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
該化合物が、４'−[６−(アリルメチルアミノ)ヘキシルオキシ]−４−ブロモ−２'−フルオロベンゾフェノン・フマル酸塩（Ｒｏ  ４８−８０７１）である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
化合物のアポトーシス促進性または抗増殖性を測定する方法であって、
ａ）ＯＳＣ活性を含む哺乳動物癌細胞の試料を該化合物と接触させること；
ｂ）該試料中の
ｉ）アポトーシスのマーカーおよび
ｉｉ）２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレン、ラノステロールおよびコレステロールの１つ以上
の１つ以上のレベルを測定すること；および
ｃ）化合物と接触させた試料中の（ｉ）および（ｉｉ）のいずれか１つ以上のレベルを対照試料中の（ｉ）および（ｉｉ）のいずれか１つ以上のレベルと比較すること
を含む（ここで、２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレンおよびアポトーシスのマーカーのレベルは、アポトーシスおよび抗増殖のレベルと直接の相関があり、また、ラノステロールおよびコレステロールのレベルは、アポトーシスおよび抗増殖のレベルと逆の相関がある）、方法
【請求項２８】
試料中の２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレン、ラノステロールおよびコレステロールのいずれか１つのレベルを測定する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
試料中のアポトーシスのマーカーのレベルを測定する（ここで、アポトーシスのマーカーは、アネキシンＶである）、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
癌細胞の増幅を阻害する剤の同定方法であって、
ａ）ＯＳＣ活性を含む癌細胞の試験試料を準備すること；
ｂ）ｉ）試験試料を試験剤と接触させ、試験試料中の２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレン、ラノステロールおよびコレステロールのいずれか１つのレベルを対照試料中の２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレン、ラノステロールおよびコレステロールのいずれか１つのレベルと比較することによって、試験試料中のＯＳＣの活性を測定すること；または
ｉｉ）試験試料中の２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレン、ラノステロールおよびコレステロールのレベルの１回目の測定を行い、該試料を試験剤と接触させ、該試料中の２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレン、ラノステロールおよびコレステロールのいずれか１つのレベルの２回目の測定を行うことによって、試験試料中のＯＳＣの活性を測定すること
のいずれかを行うこと；および
ｃ）ｉ）対照試料と比べた試験試料中の２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレン、ラノステロールおよびコレステロールのいずれか１つのレベルの変化；または
ｉｉ）試験試料中の２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレン、ラノステロールおよびコレステロールのいずれか１つのレベルの１回目から２回目への変化
のいずれかに基づいて、試験剤がＯＳＣの細胞内活性を調節する剤であるか決定すること
を含む（ここで、２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレン、ラノステロールおよびコレステロールのいずれか１つのレベルは、細胞内ＯＳＣ活性のレベルと相関がある）、方法。
【請求項３１】
癌の処置のための化合物を同定する方法であって、
ａ）癌細胞の試験試料を準備すること；
ｂ）該試験試料を試験化合物と接触させること；
ｃ）２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレン、ラノステロールおよびコレステロールのいずれか１つの減少度を測定すること；
ｄ）ｉ）アポトーシスのマーカーのレベルの増加；および
ｉｉ）生存癌細胞のレベルの減少
を測定してもよいこと；
ｅ）試験化合物を
ｉ）コレステロール生合成経路における酵素の活性を阻害する化合物；
ｉｉ）癌細胞におけるアポトーシスを促進する化合物；または
ｉｉｉ）癌細胞を死滅させる化合物
であると同定すること
を含む（ここで、２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレン、ラノステロールおよびコレステロールのいずれか１つのレベルは、抗癌活性のレベルと相関がある）、方法。
【請求項３２】
癌の処置のための化合物を含む組成物を製造する方法であって、
ａ）癌細胞の試験試料を準備すること；
ｂ）該試験試料を試験化合物と接触させること；
ｃ）２,３−(Ｓ)−オキシドスクアレン、ラノステロールおよびコレステロールのいずれかの減少度を測定すること；
ｄ）ｉ）アポトーシスのマーカーのレベルの増加；および
ｉｉ）生存癌細胞のレベルの減少
を測定してもよいこと；
ｅ）試験化合物を
ｉ）コレステロール生合成経路における酵素の活性を阻害する化合物；
ｉｉ）癌細胞におけるアポトーシスを促進する化合物；または
ｉｉｉ）癌細胞を死滅させる化合物
であると同定すること；および
ｆ）このように同定された試験化合物または該試験化合物の機能的類似体もしくは同族体を担体と混合して、組成物を製造すること
を含む、方法。
【請求項３３】
コレステロール生合成経路における酵素が、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼではない、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
コレステロール生合成経路における酵素が、ＯＳＣである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
アポトーシスのマーカーが、アネキシンＶである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
哺乳動物における腫瘍増殖を阻害する剤についてスクリーンニングする方法であって、
ａ）細胞を試験剤と接触させること；
ｂ）ＯＳＣの活性を検出すること；
ｃ）試験剤が哺乳動物における腫瘍増殖を阻害する剤であることの指標として、対照中のＯＳＣの活性と比べたＯＳＣ活性の減少をスコア化すること
を含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７３】
大腸癌細胞ＬｏＶｏ生存率に対するＲＯ  ４８−８０７１の効果。２４時間および４８時間処理後の大腸癌（ＬｏＶｏ）細胞増殖に対するＲｏ  ４８−８０７１の効果を示す図６Ｂを参照する。培養培地は、培養のために１０％ＦＢＳ  Ｆ−１２Ｋを使用し、処理のために５％ＦＢＳ  Ｆ−１２Ｋを使用した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７６】
肺癌細胞株Ｈ６９ＡＲ生存率に対するＲＯ  ４８−８０７１の効果。２４時間および４８時間処理後の肺癌（Ｈ６９ＡＲ）細胞増殖に対するＲｏ  ４８−８０７１の効果を示す図７Ａを参照する。培養培地は、培養のために２０％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ−１６４０を使用し、処理のために１０％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ−１６４０を使用した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８１】
エストロゲン、プロゲステロンおよびＨＥＲ−２／ｎｅｕ受容体陽性乳癌細胞株ＨＣＣ−１４２８およびＺＲ−７５生存率に対するＲＯ  ４８−８０７１の効果。２４時間および４８時間処理後の乳癌（ＨＣＣ−１４２８およびＺＲ−７５）細胞増殖に対するＲｏ  ４８−８０７１の効果を示す図９Ａおよび図９Ｂを参照する。培養培地は、培養のために１０％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ−１６４０を使用し、処理のために５％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ−１６４０を使用した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８２】
エストロゲン、プロゲステロンおよびＨＥＲ−２／ｎｅｕ受容体陰性乳癌細胞株ＭＤＡ−２３１およびＢＴ−２０生存率に対するＲＯ  ４８−８０７１の効果。２４時間および４８時間処理後の乳癌（ＭＤＡ−２３１およびＢＴ−２０）細胞増殖に対するＲｏ  ４８−８０７１の効果を示す図９Ｃおよび図９Ｄを参照する。培養培地は、培養のために１０％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ−１６４０を使用し、処理のために５％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ−１６４０を使用した。