【手続補正書】
【提出日】平成27年9月4日(2015.9.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試験サンプルについて、バイアスゲノム片レベルの減少を用いて算出するための方法であって、前記方法は：
（ａ）参照ゲノムの部分にマッピングされた配列リードのカウントを得る工程であって、前記配列リードは、試験サンプルからの循環無細胞核酸のリードである、工程；
（ｂ）（ｉ）前記部分のそれぞれにマッピングされた前記配列リードの前記カウントと、（ｉｉ）前記部分のそれぞれにおけるＧＣ含量との間の、フィットさせた関係に基づいて、前記試験サンプルについてのグアニンおよびシトシン（ＧＣ）バイアス係数を決定する工程であって、前記ＧＣバイアス係数が、線形フィットさせた関係の傾きまたは非線形フィットさせた関係の曲率の推定値である、工程、
（ｃ）マイクロプロセッサを使用して、（ａ）の前記カウント、（ｂ）の前記ＧＣバイアス係数、および（ｉ）複数のサンプルのそれぞれについての前記ＧＣバイアス係数と、（ｉｉ）前記複数のサンプルについての前記部分のそれぞれにマッピングされた前記配列リードの前記カウントとの間の、前記部分のそれぞれについてフィットさせた関係に基づいて、前記部分のそれぞれにおけるゲノム片レベルを算出し、それにより算出されたゲノム片レベルを提供する工程であって、ここで前記参照ゲノムの前記部分のそれぞれにマッピングされた前記配列リードの前記カウントにおけるバイアスが、前記算出されたゲノム片レベルにおいて減少する、工程を包含する、方法。
【請求項２】
（ｂ）の前記フィットさせた関係および（ｃ）の前記フィットさせた関係が線形のものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ｂ）の前記フィットさせた関係および（ｃ）の前記フィットさせた関係のそれぞれが、独立して線形回帰によりフィットされる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
（ｃ）（ｉ）における前記複数のサンプルのそれぞれについての前記ＧＣバイアス係数が、（ｉ）前記部分のそれぞれにマッピングされた前記配列リードの前記カウントと、（ｉｉ）前記部分のそれぞれにおけるＧＣ含量との間の、前記複数のサンプルのそれぞれについてフィットさせた線形関係の傾きである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
算出されたゲノム片レベルＬが、式Ｂ：
Ｌ＝（Ｍ−ＧＳ）／Ｉ                      式Ｂ
に従い、前記参照ゲノムのそれぞれの部分に関して、前記試験サンプルについて決定され、ここで式中、Ｍは、前記試験サンプルについて前記部分にマッピングされた前記配列リードの前記カウントであり、Ｇは前記試験サンプルについての前記ＧＣバイアス係数であり、Ｉは、前記部分について（ｃ）の前記フィットさせた線形関係の切片であり、Ｓは、前記部分について（ｃ）の前記フィットさせた線形関係の傾きである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
（ｂ）の前記フィットさせた関係が非線形のものである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記参照ゲノムの前記部分のそれぞれが、所定の長さのヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
（ａ）の前に、試験被験体から循環無細胞核酸をシークエンシングすることによって前記配列リードを決定する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
（ａ）の前に、前記参照ゲノムの前記部分に前記配列リードをマッピングする工程を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記算出されたゲノム片レベルにしたがって、前記試験サンプルについて胎児の染色体異数性の有無が検出される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記胎児の染色体異数性がトリソミーである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記トリソミーが、第２１番染色体のトリソミー、第１８番染色体のトリソミー、第１３番染色体のトリソミーまたはこれらの組み合わせから選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記トリソミーの有無が、９６％もしくはそれより高い感度または９６％もしくはそれより高い特異性、あるいは９６％もしくはそれより高い感度および９６％もしくはそれより高い特異性で検出される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
（ｂ）の前に、前記参照ゲノムの前記部分の一部または全てにマッピングされた前記配列リードのカウントにおける誤差の測定値を算出する工程、および前記誤差の測定値の閾値に従い前記参照ゲノムの特定の部分について前記配列リードのカウントを除去するか、または重み付けする工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記閾値が、第１のゲノム片レベルと第２のゲノム片レベルとの間の、３．５またはそれより大きい標準偏差のギャップに従い選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記誤差の測定値がＲ因子である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
約７％〜約１０％のＲ因子を有する前記参照ゲノムの部分についての前記配列リードのカウントが（ｂ）の前に除去される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
１つまたはそれより多いマイクロプロセッサおよびメモリを含むシステムであって、前記メモリは、前記１つまたはそれより多いマイクロプロセッサによって実行可能な命令を含み、前記１つまたはそれより多いマイクロプロセッサによって実行可能な前記命令は、以下：
（ａ）（ｉ）参照ゲノムのそれぞれの部分にマッピングされた配列リードのカウントと、（ｉｉ）前記部分のそれぞれにおけるＧＣ含量との間の、フィットさせた関係に基づいて、試験サンプルについてのグアニンおよびシトシン（ＧＣ）バイアス係数を決定することであって、ここで前記ＧＣバイアス係数が、線形フィットさせた関係の傾きまたは非線形フィットさせた関係の曲率の推定値であり、そして前記配列リードは、前記試験サンプルからの循環無細胞核酸のリードである、決定すること；ならびに
（ｂ）前記試験サンプルについての前記カウント、（ａ）の前記ＧＣバイアス係数、および（ｉ）複数のサンプルのそれぞれについての前記ＧＣバイアス係数と、（ｉｉ）前記複数のサンプルについての前記部分のそれぞれにマッピングされた前記配列リードの前記カウントとの間の、前記部分のそれぞれについてフィットさせた関係に基づいて、前記部分のそれぞれにおけるゲノム片レベルを算出し、それにより算出されたゲノム片レベルを提供することであって、ここで前記参照ゲノムの前記部分のそれぞれにマッピングされた前記配列リードの前記カウントにおけるバイアスが、前記算出されたゲノム片レベルにおいて減少する、提供すること
を行うように構成される、システム。
【請求項１９】
（ａ）の前記フィットさせた関係および（ｂ）の前記フィットさせた関係が線形のものである、請求項１８に記載のシステム。
【請求項２０】
（ａ）の前記フィットさせた関係および（ｂ）の前記フィットさせた関係のそれぞれが、独立して線形回帰によりフィットされる、請求項１９に記載のシステム。
【請求項２１】
（ｂ）（ｉ）における前記複数のサンプルのそれぞれについての前記ＧＣバイアス係数が、（ｉ）前記部分のそれぞれにマッピングされた前記配列リードの前記カウントと、（ｉｉ）前記部分のそれぞれにおけるＧＣ含量との間の、前記複数のサンプルのそれぞれについてフィットさせた線形関係の傾きである、請求項２０に記載のシステム。
【請求項２２】
算出されたゲノム片レベルＬが、式Ｂ：
Ｌ＝（Ｍ−ＧＳ）／Ｉ                      式Ｂ
に従い、前記参照ゲノムのそれぞれの部分に関して、前記試験サンプルについて決定され、ここで式中、Ｍは、前記試験サンプルについて前記部分にマッピングされた前記配列リードの前記カウントであり、Ｇは前記試験サンプルについての前記ＧＣバイアス係数であり、Ｉは、前記部分について（ｂ）の前記フィットさせた線形関係の切片であり、Ｓは、前記部分について（ｂ）の前記フィットさせた線形関係の傾きである、請求項２１に記載のシステム。
【請求項２３】
（ａ）の前記フィットさせた関係が非線形のものである、請求項１８に記載のシステム。
【請求項２４】
前記１つまたはそれより多いマイクロプロセッサによって実行可能な前記命令が、前記算出されたゲノム片レベルにしたがって、前記試験サンプルについて胎児の染色体異数性の有無を決定するように構成される、請求項１８に記載のシステム。
【請求項２５】
前記胎児の染色体異数性がトリソミーである、請求項２４に記載のシステム。
【請求項２６】
前記トリソミーが、第２１番染色体のトリソミー、第１８番染色体のトリソミー、第１３番染色体のトリソミーまたはこれらの組み合わせから選択される、請求項２５に記載のシステム。
【請求項２７】
前記トリソミーの有無が、９６％もしくはそれより高い感度または９６％もしくはそれより高い特異性、あるいは９６％もしくはそれより高い感度および９６％もしくはそれより高い特異性で決定される、請求項２６に記載のシステム。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８０】
図面は、技術の実施形態を図示し、限定されるものではない。図示を簡潔および容易にするため、図面は一定の尺度ではなく、いくつかの例において、種々の態様が、具体的な実施形態の理解を容易にするため、誇張または拡大して示され得る。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
メモリおよび１つまたはそれより多いマイクロプロセッサを含むシステムであって、上記１つまたはそれより多いマイクロプロセッサは、上記メモリ内の命令にしたがって、試験サンプルについて、バイアスゲノム片レベルの減少を用いて算出するためのプロセスを実行するように構成され、上記プロセスは：
（ａ）参照ゲノムの部分にマッピングされた配列リードのカウントを得る工程であって、上記配列リードは、試験サンプルからの循環無細胞核酸のリードである、工程；
（ｂ）（ｉ）上記部分のそれぞれにマッピングされた上記配列リードの上記カウントと、（ｉｉ）上記部分のそれぞれにおけるＧＣ含量との間の、フィットさせた関係に基づいて、上記試験サンプルについてのグアニンおよびシトシン（ＧＣ）バイアス係数を決定する工程、
（ｃ）（ａ）の上記カウント、（ｂ）の上記ＧＣバイアス係数、および（ｉ）複数のサンプルのそれぞれについての上記ＧＣバイアス係数と、（ｉｉ）上記複数のサンプルについての上記部分のそれぞれにマッピングされた上記配列リードの上記カウントとの間の、上記部分のそれぞれについてフィットさせた関係に基づいて、上記部分のそれぞれにおけるゲノム片レベルを算出し、それにより算出されたゲノム片レベルを提供する工程であって、ここで上記参照ゲノムの上記部分のそれぞれにマッピングされた上記配列リードの上記カウントにおけるバイアスが、上記算出されたゲノム片レベルにおいて減少する、工程を包含する、システム。
（項目２）
上記ＧＣバイアス係数が、線形フィットさせた関係の傾きまたは非線形フィットさせた関係の曲率の推定値である、項目１に記載のシステム。
（項目３）
（ｂ）の上記フィットさせた関係および（ｃ）の上記フィットさせた関係が線形のものである、項目１または２に記載のシステム。
（項目４）
（ｂ）の上記フィットさせた関係および（ｃ）の上記フィットさせた関係のそれぞれが、独立して線形回帰によりフィットされる、項目１〜３のいずれか１項に記載のシステム。
（項目５）
（ｃ）（ｉ）における上記複数のサンプルのそれぞれについての上記ＧＣバイアス係数が、（ｉ）上記部分のそれぞれにマッピングされた上記配列リードの上記カウントと、（ｉｉ）上記部分のそれぞれにおけるＧＣ含量との間の、上記複数のサンプルのそれぞれについてフィットさせた線形関係の傾きである、項目１〜４のいずれか１項に記載のシステム。
（項目６）
上記算出されたゲノム片レベルＬが、式Ｂ：
Ｌ＝（Ｍ−ＧＳ）／Ｉ                      式Ｂ
に従い、上記参照ゲノムのそれぞれの部分に関して、上記試験サンプルについて決定され、ここで式中、Ｍは、上記試験サンプルについて上記部分にマッピングされた上記配列リードの上記カウントであり、Ｇは上記試験サンプルについての上記ＧＣバイアス係数であり、Ｉは、上記部分について（ｃ）の上記フィットさせた線形関係の切片であり、Ｓは、上記部分について（ｃ）の上記フィットさせた線形関係の傾きである、項目１〜５のいずれか１項に記載のシステム。
（項目７）
（ｂ）の上記フィットさせた関係が非線形のものである、項目１または２に記載のシステム。
（項目８）
上記参照ゲノムの上記部分のそれぞれが、所定の長さのヌクレオチド配列を含む、項目１〜７のいずれか１項に記載のシステム。
（項目９）
上記プロセスが、（ａ）の前に、上記試験サンプルから循環無細胞核酸をシークエンシングすることによって上記配列リードを決定する工程を含む、項目１〜８のいずれか１項に記載のシステム。
（項目１０）
上記プロセスが、（ａ）の前に、上記参照ゲノムの上記部分に上記配列リードをマッピングする工程を含む、項目１〜９のいずれか１項に記載のシステム。
（項目１１）
上記試験サンプルが、ヒト妊娠女性に由来し、かつ上記プロセスが、上記算出されたゲノム片レベルにしたがって、上記試験サンプルについて胎児の染色体異数性の有無を決定する工程を含む、項目１〜１０のいずれか１項に記載のシステム。
（項目１２）
上記胎児の染色体異数性がトリソミーである、項目１１に記載のシステム。
（項目１３）
上記トリソミーが、第２１番染色体のトリソミー、第１８番染色体のトリソミー、第１３番染色体のトリソミーまたはこれらの組み合わせから選択される、項目１２に記載のシステム。
（項目１４）
上記トリソミーの有無が、９６％もしくはそれより高い感度または９６％もしくはそれより高い特異性、あるいは９６％もしくはそれより高い感度および９６％もしくはそれより高い特異性で決定される、項目１２または１３に記載のシステム。
（項目１５）
上記プロセスが、（ｂ）の前に、上記参照ゲノムの上記部分の一部または全てにマッピングされた上記配列リードのカウントにおける誤差の測定値を算出する工程、および上記誤差の測定値の閾値に従い上記参照ゲノムの特定の部分について上記配列リードのカウントを除去するか、または重み付けする工程を含む、項目１〜１４のいずれか１項に記載のシステム。
（項目１６）
上記閾値が、第１のゲノム片レベルと第２のゲノム片レベルとの間の、３．５またはそれより大きい標準偏差のギャップに従い選択される、項目１５に記載のシステム。
（項目１７）
上記誤差の測定値がＲ因子である、項目１５または１６に記載のシステム。
（項目１８）
約７％またはそれより大きいＲ因子を有する上記参照ゲノムの部分についての上記配列リードのカウントが（ｂ）の前に除去される、項目１７に記載のシステム。
（項目１９）
試験サンプルについて、バイアスゲノム片レベルの減少を用いて算出するための方法であって、上記方法は：
（ａ）参照ゲノムの部分にマッピングされた配列リードのカウントを得る工程であって、上記配列リードは、試験サンプルからの循環無細胞核酸のリードである、工程；
（ｂ）（ｉ）上記部分のそれぞれにマッピングされた上記配列リードの上記カウントと、（ｉｉ）上記部分のそれぞれにおけるＧＣ含量との間の、フィットさせた関係に基づいて、上記試験サンプルについてのグアニンおよびシトシン（ＧＣ）バイアス係数を決定する工程；ならびに
（ｃ）マイクロプロセッサを使用して、（ａ）の上記カウント、（ｂ）の上記ＧＣバイアス係数、および（ｉ）複数のサンプルのそれぞれについての上記ＧＣバイアス係数と、（ｉｉ）上記複数のサンプルについての上記部分のそれぞれにマッピングされた上記配列リードの上記カウントとの間の、上記部分のそれぞれについてフィットさせた関係に基づいて、上記部分のそれぞれにおけるゲノム片レベルを算出し、それにより算出されたゲノム片レベルを提供する工程であって、ここで上記参照ゲノムの上記部分のそれぞれにマッピングされた上記配列リードの上記カウントにおけるバイアスが、上記算出されたゲノム片レベルにおいて減少する、工程
を包含する、方法。
（項目２０）
上記ＧＣバイアス係数が、線形フィットさせた関係の傾きまたは非線形フィットさせた関係の曲率の推定値である、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
（ｂ）の上記フィットさせた関係および（ｃ）の上記フィットさせた関係が線形のものである、項目１９または２０に記載の方法。
（項目２２）
（ｂ）の上記フィットさせた関係および（ｃ）の上記フィットさせた関係のそれぞれが、独立して線形回帰によりフィットされる、項目１９〜２１のいずれか１項に記載の方法。
（項目２３）
（ｃ）（ｉ）における上記複数のサンプルのそれぞれについての上記ＧＣバイアス係数が、（ｉ）上記部分のそれぞれにマッピングされた上記配列リードの上記カウントと、（ｉｉ）上記部分のそれぞれにおけるＧＣ含量との間の、上記複数のサンプルのそれぞれについてフィットさせた線形関係の傾きである、項目１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
上記算出されたゲノム片レベルＬが、式Ｂ：
Ｌ＝（Ｍ−ＧＳ）／Ｉ                      式Ｂ
に従い、上記参照ゲノムのそれぞれの部分に関して、上記試験サンプルについて決定され、ここで式中、Ｍは、上記試験サンプルについて上記部分にマッピングされた上記配列リードの上記カウントであり、Ｇは上記試験サンプルについての上記ＧＣバイアス係数であり、Ｉは、上記部分について（ｃ）の上記フィットさせた線形関係の切片であり、Ｓは、上記部分について（ｃ）の上記フィットさせた線形関係の傾きである、項目１９〜２３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
（ｂ）の上記フィットさせた関係が非線形のものである、項目１９または２０に記載の方法。
（項目２６）
上記参照ゲノムの上記部分のそれぞれが、所定の長さのヌクレオチド配列を含む、項目１９〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
（ａ）の前に、上記試験サンプルから循環無細胞核酸をシークエンシングすることによって上記配列リードを決定する工程を含む、項目１９〜２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
（ａ）の前に、上記参照ゲノムの上記部分に上記配列リードをマッピングする工程を含む、項目１９〜２７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
上記試験サンプルが、ヒト妊娠女性に由来し、かつ上記方法が、上記算出されたゲノム片レベルにしたがって、上記試験サンプルについて胎児の染色体異数性の有無を決定する工程を含む、項目１９〜２８のいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
上記胎児の染色体異数性がトリソミーである、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
上記トリソミーが、第２１番染色体のトリソミー、第１８番染色体のトリソミー、第１３番染色体のトリソミーまたはこれらの組み合わせから選択される、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
上記トリソミーの有無が、９６％もしくはそれより高い感度または９６％もしくはそれより高い特異性、あるいは９６％もしくはそれより高い感度および９６％もしくはそれより高い特異性で決定される、項目３０または３１に記載の方法。
（項目３３）
（ｂ）の前に、上記参照ゲノムの上記部分の一部または全てにマッピングされた上記配列リードのカウントにおける誤差の測定値を算出する工程、および上記誤差の測定値の閾値に従い上記参照ゲノムの特定の部分について上記配列リードのカウントを除去するか、または重み付けする工程を含む、項目１９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３４）
上記閾値が、第１のゲノム片レベルと第２のゲノム片レベルとの間の、３．５またはそれより大きい標準偏差のギャップに従い選択される、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
上記誤差の測定値がＲ因子である、項目３３または３４に記載の方法。
（項目３６）
約７％またはそれより大きいＲ因子を有する上記参照ゲノムの部分についての上記配列リードのカウントが（ｂ）の前に除去される、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
シークエンシング装置および１つまたはそれより多い演算装置を含むシステムであって、
上記シークエンシング装置は、上記シークエンシング装置にロードされた核酸のヌクレオチド塩基に対応するシグナルを生成するよう構成され、上記核酸は、胎児を有する妊娠したヒト女性からの試験サンプルに由来する循環無細胞核酸である、あるいは上記シークエンシング装置にロードされる上記循環無細胞核酸は、処理または改変され、そして
上記１つまたはそれより多い演算装置は、メモリおよび１つまたはそれより多いプロセッサを含み、上記メモリは、上記１つまたはそれより多いプロセッサによって実行可能な命令を含み、上記１つまたはそれより多いプロセッサによって実行可能な上記命令は、以下：
（ａ）上記シグナルから配列リードを生成して、上記配列リードを参照ゲノムにマッピングし；
（ｂ）上記参照ゲノムの部分にマッピングされた配列リードのカウントを得；
（ｃ）（ｉ）上記部分のそれぞれにマッピングされた上記配列リードの上記カウントと、（ｉｉ）上記部分のそれぞれにおけるＧＣ含量との間の、フィットさせた関係に基づいて、上記試験サンプルについてのグアニンおよびシトシン（ＧＣ）バイアス係数を決定し；そして
（ｄ）（ｂ）の上記カウント、（ｃ）の上記ＧＣバイアス係数、および（ｉ）複数のサンプルのそれぞれについての上記ＧＣバイアス係数と、（ｉｉ）上記複数のサンプルについての上記部分のそれぞれにマッピングされた上記配列リードの上記カウントとの間の、上記部分のそれぞれについてフィットさせた関係に基づいて、上記部分のそれぞれにおけるゲノム片レベルを算出し、それにより算出されたゲノム片レベルを提供するよう構成され、ここで上記参照ゲノムの上記部分のそれぞれにマッピングされた上記配列リードの上記カウントにおけるバイアスが、上記算出されたゲノム片レベルにおいて減少する、
システム。
（項目３８）
上記ＧＣバイアス係数が、線形フィットさせた関係の傾きまたは非線形フィットさせた関係の曲率の推定値である、項目３７に記載のシステム。
（項目３９）
（ｃ）の上記フィットさせた関係および（ｄ）の上記フィットさせた関係が線形のものである、項目３７または３８に記載のシステム。
（項目４０）
（ｃ）の上記フィットさせた関係および（ｄ）の上記フィットさせた関係のそれぞれが、独立して線形回帰によりフィットされる、項目３７〜３９のいずれか１項に記載のシステム。
（項目４１）
（ｄ）（ｉ）における上記複数のサンプルのそれぞれについての上記ＧＣバイアス係数が、（ｉ）上記部分のそれぞれにマッピングされた上記配列リードの上記カウントと、（ｉｉ）上記部分のそれぞれにおけるＧＣ含量との間の、上記複数のサンプルのそれぞれについてフィットさせた線形関係の傾きである、項目３７〜４０のいずれか１項に記載のシステム。
（項目４２）
上記算出されたゲノム片レベルＬが、式Ｂ：
Ｌ＝（Ｍ−ＧＳ）／Ｉ                      式Ｂ
に従い、上記参照ゲノムのそれぞれの部分に関して、上記試験サンプルについて決定され、ここで式中、Ｍは、上記試験サンプルについて上記部分にマッピングされた上記配列リードの上記カウントであり、Ｇは上記試験サンプルについての上記ＧＣバイアス係数であり、Ｉは、上記部分について（ｄ）の上記フィットさせた線形関係の切片であり、Ｓは、上記部分について（ｄ）の上記フィットさせた線形関係の傾きである、項目３７〜４１のいずれか１項に記載のシステム。
（項目４３）
（ｃ）の上記フィットさせた関係が非線形のものである、項目３７または３８に記載のシステム。
（項目４４）
上記参照ゲノムの上記部分のそれぞれが、所定の長さのヌクレオチド配列を含む、項目３７〜４３のいずれか１項に記載のシステム。
（項目４５）
上記メモリが、上記算出されたゲノム片レベルにしたがって、上記試験サンプルについて胎児の染色体異数性の有無を決定するよう構成された命令を含む、項目３７〜４４のいずれか１項に記載のシステム。
（項目４６）
上記胎児の染色体異数性がトリソミーである、項目４５に記載のシステム。
（項目４７）
上記トリソミーが、第２１番染色体のトリソミー、第１８番染色体のトリソミー、第１３番染色体のトリソミーまたはこれらの組み合わせから選択される、項目４６に記載のシステム。
（項目４８）
上記トリソミーの有無が、９６％もしくはそれより高い感度または９６％もしくはそれより高い特異性、あるいは９６％もしくはそれより高い感度および９６％もしくはそれより高い特異性で決定される、項目４６または４７に記載のシステム。
（項目４９）
上記メモリが、（ｃ）の前に、上記参照ゲノムの上記部分の一部または全てにマッピングされた上記配列リードのカウントにおける誤差の測定値を算出し、そして上記誤差の測定値の閾値に従い上記参照ゲノムの特定の部分について上記配列リードのカウントを除去するか、または重み付けするよう構成された命令を含む、項目３７〜４８のいずれか１項に記載のシステム。
（項目５０）
上記閾値が、第１のゲノム片レベルと第２のゲノム片レベルとの間の、３．５またはそれより大きい標準偏差のギャップに従い選択される、項目４９に記載のシステム。
（項目５１）
上記誤差の測定値がＲ因子である、項目４９または５０に記載のシステム。
（項目５２）
約７％またはそれより大きいＲ因子を有する上記参照ゲノムの部分についての上記配列リードのカウントが（ｃ）の前に除去される、項目５１に記載のシステム。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
【図１】図１は、正倍数体のＺ値とトリソミーのＺ値とのギャップを減少させることもあるゲノム領域内のビンカウントの不確定要素の上昇の仕方について図示する。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図２】図２は、Ｚスコアの予測指数を減少させることもあるゲノム領域内のカウントの３倍体と正倍数体との差の低下の仕方についてグラフにより図示する。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図３】図３は、第２１番染色体内のゲノムビンの位置におけるｐ値の従属度を図示する。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図４】図４は、ビンのフィルタリング法を概略的に表す。多数の正倍数体サンプルを列挙し、ビンカウント不確定要素（ＳＤまたはＭＡＤ値）を評価し、最大の不確定要素を含むビンをフィルタリングすることもある。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図５】図５は、２例の患者の第２１番染色体におけるカウントプロファイルをグラフにより図示する。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図６】図６は、第１８番染色体からの無益のビンをフィルタリングするために使用される患者のカウントプロファイルをグラフにより図示する。図６において、下の２つのトレースは、第１８番染色体に大きな欠失がある患者を示す。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図７】図７は、第１８番染色体内のゲノムビンの位置におけるＰ値の従属度をグラフにより図示する。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図８】図８は、ビンカウント正規化を概略的に表す。本手法は、まず既知の正倍数体カウントプロファイルをデータセットから列挙し、カウント合計に対してそれらを正規化する。各ビンにおいて、中央値カウントおよび中央値からの偏差を評価する。かなり分散性のあるビン（３平均絶対偏差を超える（例えば、ＭＡＤ））は排除されることもある。残りのビンを残りのカウント合計に対して再度正規化し、いくつかの実施形態において、中央値を再正規化の後に再評価する。最後に、得られた参照プロファイル（下のトレース、左パネルを参照のこと）を使用して、試験サンプルのビンカウントを正規化し（上部のトレース、左パネルを参照のこと）、カウントの曲線を平滑化し（右部のトレースを参照のこと）、無益のビンを考慮にいれていないギャップをそのままにする。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図９】図９は、正規化されたカウントプロファイルの挙動期待値を図示する。大部分の正規化ビンカウントは多くの場合、無作為なノイズが重なり、１に集中する。欠失および重複（例えば、母体もしくは胎児、または母体および胎児の欠失および重複）は、０．５の正数倍への上昇にシフトすることもある。３倍体の胎児染色体に対応するプロファイル上昇は、多くの場合、胎児画分に比例して上方にシフトする。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図１０】図１０は、第１８番染色体のヘテロ接合の母体の欠失のある正規化Ｔ１８カウントプロファイルをグラフにより図示する。トレースしたグラフの薄灰色の線分は、トレースしたグラフの黒色の線分より高い平均の上昇を示す。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図１１】図１１は、第１８番染色体のヘテロ接合の母体の欠失のある同じ患者から採取した２つのサンプルにおける正規化ビンワイズカウントプロファイルをグラフにより図示する。実質的に同一のトレースを使用して、２つのサンプルが同じドナーからのものであるかどうかを決定することができる。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図１２】図１２は、これまでの試験からの２つのサンプルと比較し、１つの試験からのサンプルの正規化ビンワイズカウントプロファイルをグラフにより図示する。第２２番染色体の重複は、一義的に患者の同一性を指摘している。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図１３】図１３は、図１２に示された同じ３例の患者の第４番染色体の正規化ビンワイズカウントプロファイルをグラフにより図示する。第４番染色体の重複により、図１２で確立した患者の同一性を確認した。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図１４】図１４は、正倍数体サンプルからの第５番染色体の正規化ビンカウントの分布をグラフにより図示する。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図１５】図１５は、これらの正規化されたカウントプロファイルの異なるノイズレベルの２つのサンプルをグラフにより図示する。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図１６】図１６は、ピーク上昇の信頼度を決定する因子：ノイズ標準偏差（例えば、σ）および参照基準値からの平均の偏差（例えば、Δ）を概略的に表す。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図１７】図１７は、相関関数を正規化ビンカウントに適用する結果をグラフにより図示する。図１７に示される相関関数を使用し、任意に選択した正倍数体患者の第５番染色体のビンカウントを正規化した。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図１８】図１８は、サンプル推定値（■のデータ点）として評価し、平均値の標準誤差（▲のデータ点）と比較し、自己相関ρ＝０．５において相関された推定値（●のデータ点）を含む、第５番染色体の平均の伸長上昇における標準偏差をグラフにより図示する。図１８に示される異常は約１８ビン長である。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図１９】図１９は、第４番染色体の平均のピーク上昇において算出されたＺ値をグラフにより図示する。患者は、第４番染色体にヘテロ接合の母体の重複を有する（図１３を参照のこと）。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図２０】図２０は、図１９からのｔ検定およびＺ値に基づき、平均のピーク上昇におけるｐ値をグラフにより図示する。ｔ分布の次数は、異常の長さにより決定される。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図２１】図２１は、異なるサンプルからの一致する異常間の端比較を概略的に表す。図２１に、オーバーラップ、封じ込め、および隣り合う偏差を示す。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図２２】図２２は、関連のないサンプルのかろうじて接触する異常（中間のトレース）と対比して、第４番染色体の一致するヘテロ接合の重複（上部のトレースおよび下部のトレース）をグラフにより図示する。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図２３】図２３は、数字により評価された、カウントプロファイルの第１の導関数による端検出を概略的に表す。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図２４】図２４は、実際のデータから得られたカウントプロファイルの第１の導関数をノイズと区別することが難しいことをグラフにより図示する。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図２５】図２５は、ノイズを抑制し、信号を増強させるために、１分だけシフトしたカウントプロファイルの第３の指数をグラフにより図示する（上部のトレースを参照のこと）。図２５にも（下部のトレースを参照のこと）、上部のトレースの第１の導関数が示される。端は間違いなく検出可能である。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図２６】図２６は、種々の患者の第２１番染色体上昇の中央値のヒストグラムをグラフにより図示する。点付きのヒストグラムは、８６例の正倍数体患者における第２１番染色体上昇の中央値を示す。斜線付きのヒストグラムは、３５例のトリソミー２１患者における第２１番染色体上昇の中央値を示す。カウントプロファイルを、上昇の中央値を評価する前に正倍数体参照に対して正規化した。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図２７】図２７は、トリソミーサンプルの第２１番染色体における正規化されたカウントの分布をグラフにより図示する。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図２８】図２８は、種々の患者の面積比をグラフにより図示する。点付きのヒストグラムは、８６例の正倍数体患者の第２１番染色体の面積比を図示する。斜線付きのヒストグラムは、３５例のトリソミー２１患者の第２１番染色体の面積比を図示する。カウントプロファイルを、面積比を評価する前に正倍数体参照セットに対して正規化した。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図２９】図２９は、正規化されたカウント上昇の中央値に対してプロットした第２１番染色体の面積比を図示する。白抜きの円は、約８６例の正倍数体サンプルを表す。黒塗りの円は、約３５例のトリソミー患者を表す。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図３０】図３０は、トリソミー患者のセットにおいて評価する場合の異なる９個の分類基準の関係をグラフにより図示する。基準は、Ｚスコア、正規化されたカウント上昇の中央値、面積比、測定された胎児画分、フィットさせた胎児画分、フィットさせた胎児画分と測定値の比、フィットさせた胎児画分の残差二乗和、胎児画分の固定値および倍数性の固定値の残差二乗和、およびフィットさせた倍数性を含む。実験の詳細および結果については実施例１を参照のこと。
【図３１】図３１は、トリソミー例（破線）および正倍数体（実線、下部）の例におけるファイ関数プロファイルのシミュレーション値をグラフにより図示する。
【図３２】図３２は、トリソミーの測定値（黒塗りの円）および正倍数体のデータセット（白抜きの円）から得られたファイ関数値をグラフにより図示する。実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図３３】図３３は、測定された胎児画分の関数として、線形化した二乗差の和をグラフにより図示する。図３３〜３５について、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図３４】図３４は、胎児数量アッセイ（例えば、ＦＱＡ）の胎児画分値から得られた値に対してプロットされたＹカウントに基づき、胎児画分の推定値をグラフにより図示する。図３３〜３５について、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図３５】図３５は、ＦＱＡ測定された胎児画分に対してプロットしたＴ２１患者におけるＺ値をグラフにより図示する。図３３〜３５について、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図３６】図３６は、測定された胎児画分に対してプロットされたＹ染色体に基づき、胎児画分の推定値をグラフにより図示する。図３６〜３９について、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図３７】図３７は、測定された胎児画分に対してプロットされた第２１番染色体（Ｃｈｒ２１）に基づき、胎児画分の推定値をグラフにより図示する。図３６〜３９について、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図３８】図３８は、測定された胎児画分に対してプロットされたＸ染色体カウントから得られた胎児画分の推定値をグラフにより図示する。図３６〜３９について、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図３９】図３９は、測定された胎児画分に対してプロットされたＴ２１の症例における正規化ビンカウントの中央値をグラフにより図示する。図３６〜３９について、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図４０】図４０は、誤差の固定値ΔＦ＝＋／−０．２％のＦ０の関数としてフィットさせた３倍体の倍数性（例えば、Ｘ）のプロファイルシミュレーション値をグラフにより図示する。図４０および４１において、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図４１】図４１は、測定された胎児画分の関数として３倍体のフィットさせた倍数性をグラフにより図示する。図４０および４１について、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図４２】図４２は、測定された胎児画分内の異なる誤差レベルでのフィットさせた倍数性の確率分布をグラフにより図示する。図４２の上部パネルは、測定された胎児画分の誤差を０．２％に設定する。図４２の中央のパネルは、測定された胎児画分の誤差を０．４％に設定する。図４２の下部のパネルは、測定された胎児画分の誤差を０．６％に設定する。実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図４３】図４３は、患者サンプルから得られたデータセットにおけるフィットさせた倍数性の正倍数体およびトリソミーの分布をグラフにより図示する。図４３および４４において、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図４４】図４４は、測定された胎児画分に対してプロットされたフィットさせた胎児画分をグラフにより図示する。図４３および４４において、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図４５】図４５は、測定された胎児画分の関数として、フィットさせた胎児画分における正倍数体とトリソミーとの残差二乗和の差の予測値を概略的に図示する。図４５〜４７について、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図４６】図４６は、患者サンプルから得られたデータセットを使用して、測定された胎児画分の関数として正倍数体とトリソミーとの残差二乗和の差をグラフにより図示する。データ点は、測定された胎児画分内の不確定要素の固定値を仮定して胎児画分値を当て嵌めることにより得られる。図４５〜４７について、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図４７】図４７は、測定された胎児画分の関数として、正倍数体とトリソミーとの残差二乗和の差をグラフにより図示する。データ点は、測定された胎児画分内の不確定要素が胎児画分ΔＦ＝２／３＋Ｆ０／６に比例することを仮定して胎児画分値を当て嵌めることにより得られる。図４５〜４７について、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図４８】図４８は、参照カウントの体系的オフセットにおける測定された胎児画分のプロファイルに対してプロットされたフィットさせた胎児画分の従属度の予測値を概略的に図示する。下部および上部の平行枝は、それぞれ正倍数体および３倍体の例を表す。図４８および４９において、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図４９】図４９は、実際のデータに人工的に重ねた体系的誤差Δのシミュレーション値の影響をグラフにより表す。上部パネルの主要な斜線および下部の右パネルの上部の斜線は理想的な一致を表す。全てのパネルの濃灰色の線は、それぞれ正倍数体および３倍体の例の式（５１）および（５３）を表す。データ点は、種々のレベルの人工的な体系的シフトを組み込んだ実際の測定値を表す。体系的シフトは、各パネル上部のオフセットとして記載される。図４８および４９において、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図５０】図５０は、正倍数体および３倍体のデータセット用に得られた、体系的オフセットの関数としてのフィットさせた胎児画分をグラフにより図示する。図５０および５１において、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図５１】図５１は、実際のデータのフィットさせた胎児画分に沿って、式（６１）に基づき、シミュレーションをグラフにより図示する。黒色の線は、式（４０）の上下の２つの標準偏差（式（６１）の平方根として得られる）を表す。ΔＦは２／３＋Ｆ０／６に設定される。図５０および５１において、実験の詳細および結果については実施例２を参照のこと。
【図５２】実施例３は、図５２〜６１Ｆを扱う。図５２は、第１２番染色体、ビン１４５７のヘテロ接合の母体の微小欠失に対する累積和アルゴリズムの適用の一例をグラフにより図示する。左右の線形モデルに関連する切片の差は２．９２であり、ヘテロ接合欠失が６ビン幅であることを示す。
【図５３】実施例３は、図５２〜６１Ｆを扱う。図５３は、仮想的ヘテロ接合欠失、およそ２ゲノム片幅およびその関連する累積和プロファイルをグラフにより図示する。左右の切片の差は−１である。
【図５４】実施例３は、図５２〜６１Ｆを扱う。図５４は、仮想的ホモ接合欠失、およそ２ゲノム片幅およびその関連する累積和プロファイルをグラフにより図示する。左右の切片の差は−２である。
【図５５】実施例３は、図５２〜６１Ｆを扱う。図５５は、仮想的ヘテロ接合欠失、およそ６ゲノム片幅およびその関連する累積和プロファイルをグラフにより図示する。左右の切片の差は−３である。
【図５６】実施例３は、図５２〜６１Ｆを扱う。図５６は、仮想的ホモ接合欠失、およそ６ゲノム片幅およびその関連する累積和プロファイルをグラフにより図示する。左右の切片の差は−６である。
【図５７】実施例３は、図５２〜６１Ｆを扱う。図５７は、仮想的ヘテロ接合重複、およそ２ゲノム片幅およびその関連する累積和プロファイルをグラフにより図示する。左右の切片の差は１である。
【図５８】実施例３は、図５２〜６１Ｆを扱う。図５８は、仮想的ホモ接合重複、およそ２ゲノム片幅およびその関連する累積和プロファイルをグラフにより図示する。左右の切片の差は２である。
【図５９】実施例３は、図５２〜６１Ｆを扱う。図５９は、仮想的ヘテロ接合重複、およそ６ゲノム片幅およびその関連する累積和プロファイルをグラフにより図示する。左右の切片の差は３である。
【図６０】実施例３は、図５２〜６１Ｆを扱う。図６０は、仮想的ホモ接合重複、およそ６ゲノム片幅およびその関連する累積和プロファイルをグラフにより図示する。左右の切片の差は６である。
【図６１−１】実施例３は、図５２〜６１Ｆを扱う。図６１Ａ〜Ｆは、胎児画分が高値（４０〜５０％）の女性および幼児臨床研究から得られたデータの胎児ヘテロ接合重複における候補をグラフにより図示する。異常が母親由来であり、胎児ではない可能性を除外するため、独立母体プロファイルを使用した。罹患した領域のプロファイル上昇は、胎児画分の推定値に従い、およそ１．２５である。
【図６１−２】実施例３は、図５２〜６１Ｆを扱う。図６１Ａ〜Ｆは、胎児画分が高値（４０〜５０％）の女性および幼児臨床研究から得られたデータの胎児ヘテロ接合重複における候補をグラフにより図示する。異常が母親由来であり、胎児ではない可能性を除外するため、独立母体プロファイルを使用した。罹患した領域のプロファイル上昇は、胎児画分の推定値に従い、およそ１．２５である。
【図６１−３】実施例３は、図５２〜６１Ｆを扱う。図６１Ａ〜Ｆは、胎児画分が高値（４０〜５０％）の女性および幼児臨床研究から得られたデータの胎児ヘテロ接合重複における候補をグラフにより図示する。異常が母親由来であり、胎児ではない可能性を除外するため、独立母体プロファイルを使用した。罹患した領域のプロファイル上昇は、胎児画分の推定値に従い、およそ１．２５である。
【図６２】図６２は、正倍数体の胎児を妊娠する妊娠女性から得られたＣｈｒ２０、Ｃｈｒ２１（約５５７５０〜約５６７５０）およびＣｈｒ２２における上昇のプロファイルを示す。
【図６３】図６３は、トリソミー２１の胎児を妊娠する妊娠女性から得られたＣｈｒ２０、Ｃｈｒ２１（約５５７５０〜約５６７５０）およびＣｈｒ２２における上昇のプロファイルを示す。
【図６４】図６４は、正倍数体の胎児を妊娠する妊娠女性から得られたＣｈｒ２０、Ｃｈｒ２１（約５５７５０〜約５６７５０）およびＣｈｒ２２における未処理カウントのプロファイルを示す。
【図６５】図６５は、トリソミー２１の胎児を妊娠する妊娠女性から得られたＣｈｒ２０、Ｃｈｒ２１（約５５７５０〜約５６７５０）およびＣｈｒ２２における未処理カウントのプロファイルを示す。
【図６６】図６６は、正倍数体の胎児を妊娠する妊娠女性から得られたＣｈｒ２０、Ｃｈｒ２１（約５５７５０〜約５６７５０）およびＣｈｒ２２における正規化されたカウントのプロファイルを示す。
【図６７】図６７は、トリソミー２１の胎児を妊娠する妊娠女性から得られたＣｈｒ２０、Ｃｈｒ２１（約５５７５０〜約５６７５０）およびＣｈｒ２２における正規化されたカウントのプロファイルを示す。
【図６８】図６８は、正倍数体の胎児を妊娠する妊娠女性から得られたＣｈｒ２０、Ｃｈｒ２１（約４７７５０〜約４８３７５）およびＣｈｒ２２における正規化されたカウントのプロファイルを示す。
【図６９】図６９は、トリソミー２１の胎児を妊娠する妊娠女性から得られたＣｈｒ２０、Ｃｈｒ２１（約４７７５０〜約４８３７５）およびＣｈｒ２２における正規化されたカウントのプロファイルを示す。
【図７０】図７０は、ＬＯＥＳＳ  ＧＣ補正前（上部パネル）およびＬＯＥＳＳ  ＧＣ後（下部パネル）のカウント（ｙ軸）対ＧＣ含量（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図７１】図７１は、第１番染色体の複数のサンプルにおける、ＬＯＥＳＳ  ＧＣ（Ｙ軸）により正規化されたカウント（Ｙ軸）対ＧＣ画分のグラフを示す。
【図７２】図７２は、第１番染色体の複数のサンプルにおける、ＬＯＥＳＳ  ＧＣにより正規化させ、かつ傾きを補正したカウント（Ｙ軸）対ＧＣ画分（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図７３】図７３は、第１番染色体における、傾斜前（黒塗りの円）および傾斜後（白抜きの円）の分散（Ｙ軸）対ＧＣ画分（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図７４】図７４は、染色体における、頻度（Ｙ軸）対ＧＣ画分（Ｘ軸）ならびに中央値（左の垂直線）および平均値（右の垂直線）のグラフを示す。
【図７５−１】図７５Ａ〜Ｆは、左パネルのＬＯＥＳＳ  ＧＣにより正規化され、かつ傾斜において補正したカウント（Ｙ軸）対ＧＣ画分（Ｘ軸）（左パネル）と、第４番染色体、第１５番染色体およびＸ染色体（図７５Ａ、上部〜下部に記載）の、第５番染色体、第６番染色体および３（図７５Ｂ、上部〜下部に記載）の、第８番染色体、第２番染色体、第７番染色体および第１８番染色体（図７５Ｃ、上部〜下部に記載）の、第１２番染色体、第１４番染色体、第１１番染色体および第９番染色体（図７５Ｄ、上部〜下部に記載）の、第２１番染色体、第１番染色体、第１０番染色体、第１５番染色体および第２０番染色体（図７５Ｅ、上部〜下部に記載）の、および第１６番染色体、第１７番染色体、第２２番染色体および第１９番染色体（図７５Ｆ、上部〜下部に記載）の頻度（Ｙ軸）対ＧＣ画分（Ｘ軸）（右パネル）のグラフを示す。中央値（左の垂直線）および平均値（右の垂直線）を右パネルに示す。
【図７５−２】図７５Ａ〜Ｆは、左パネルのＬＯＥＳＳ  ＧＣにより正規化され、かつ傾斜において補正したカウント（Ｙ軸）対ＧＣ画分（Ｘ軸）（左パネル）と、第４番染色体、第１５番染色体およびＸ染色体（図７５Ａ、上部〜下部に記載）の、第５番染色体、第６番染色体および３（図７５Ｂ、上部〜下部に記載）の、第８番染色体、第２番染色体、第７番染色体および第１８番染色体（図７５Ｃ、上部〜下部に記載）の、第１２番染色体、第１４番染色体、第１１番染色体および第９番染色体（図７５Ｄ、上部〜下部に記載）の、第２１番染色体、第１番染色体、第１０番染色体、第１５番染色体および第２０番染色体（図７５Ｅ、上部〜下部に記載）の、および第１６番染色体、第１７番染色体、第２２番染色体および第１９番染色体（図７５Ｆ、上部〜下部に記載）の頻度（Ｙ軸）対ＧＣ画分（Ｘ軸）（右パネル）のグラフを示す。中央値（左の垂直線）および平均値（右の垂直線）を右パネルに示す。
【図７５−３】図７５Ａ〜Ｆは、左パネルのＬＯＥＳＳ  ＧＣにより正規化され、かつ傾斜において補正したカウント（Ｙ軸）対ＧＣ画分（Ｘ軸）（左パネル）と、第４番染色体、第１５番染色体およびＸ染色体（図７５Ａ、上部〜下部に記載）の、第５番染色体、第６番染色体および３（図７５Ｂ、上部〜下部に記載）の、第８番染色体、第２番染色体、第７番染色体および第１８番染色体（図７５Ｃ、上部〜下部に記載）の、第１２番染色体、第１４番染色体、第１１番染色体および第９番染色体（図７５Ｄ、上部〜下部に記載）の、第２１番染色体、第１番染色体、第１０番染色体、第１５番染色体および第２０番染色体（図７５Ｅ、上部〜下部に記載）の、および第１６番染色体、第１７番染色体、第２２番染色体および第１９番染色体（図７５Ｆ、上部〜下部に記載）の頻度（Ｙ軸）対ＧＣ画分（Ｘ軸）（右パネル）のグラフを示す。中央値（左の垂直線）および平均値（右の垂直線）を右パネルに示す。
【図７６】図７６は、第１９番染色体における、ＬＯＥＳＳ  ＧＣにより正規化され、かつ傾斜において補正したカウント（Ｙ軸）対ＧＣ画分（Ｘ軸）のグラフを示す。染色体の転換点（ｐｉｖｏｔ）を、右の四角の領域に示し、ゲノムの転換点を左の四角の領域に示す。
【図７７】図７７は、第１３番染色体（上部右）、第２１番染色体（上部中央）、および第１８番染色体（上部右）における、ｐ値（Ｙ軸）対ビン（Ｘ軸）のグラフを示す。特定のビンの染色体の位置を、下部パネルに示す。
【図７８】図７８は、無益なビンをＺスコア算出から除外した場合の第２１番染色体のＺスコア（Ｙ軸）および全てのビンにおける第２１番染色体のＺスコア（Ｘ軸）を示す。トリソミー２１の例を黒丸により示す。正倍数体を白丸により示す。
【図７９】図７９は、無益なビンをＺスコア算出から除外した場合の第１８番染色体のＺスコア（Ｙ軸）および全てのビンにおける第１８番染色体のＺスコア（Ｘ軸）を示す。
【図８０】図８０は、第１８番染色体における、選択されたビン（Ｙ軸）対全てのビン（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図８１】図８１は、第２１番染色体における、選択されたビン（Ｙ軸）対全てのビン（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図８２】図８２は、７サンプルにおける、カウント（Ｙ軸）対ＧＣ含量（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図８３】図８３は、未処理カウント（Ｙ軸）対ＧＣバイアス係数（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図８４】図８４は、頻度（Ｙ軸）対切片（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図８５】図８５は、頻度（Ｙ軸）対傾き（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図８６】図８６は、ログ中央値カウント（Ｙ軸）対ログ切片（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図８７】図８７は、頻度（Ｙ軸）対傾き（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図８８】図８８は、頻度（Ｙ軸）対ＧＣ含量（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図８９】図８９は、傾き（Ｙ軸）対ＧＣ含量（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図９０】図９０は、ビンｃｈｒ２＿２４０４における交差検証誤差（Ｙ軸）対Ｒワーク（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図９１】図９１は、ビンｃｈｒ２＿２３４５における交差検証誤差（Ｙ軸）対Ｒワーク（Ｘ軸）（上部左）、未処理カウント（Ｙ軸）対ＧＣバイアス係数（Ｘ軸）（上部右）、頻度（Ｙ軸）対切片（Ｘ軸）（下部左）および頻度（Ｙ軸）対傾き（Ｘ軸）（下部右）のグラフを示す。
【図９２】図９２は、ビンｃｈｒ１＿３１における交差検証誤差（Ｙ軸）対Ｒワーク（Ｘ軸）（上部左）、未処理カウント（Ｙ軸）対ＧＣバイアス係数（Ｘ軸）（上部右）、頻度（Ｙ軸）対切片（Ｘ軸）（下部左）および頻度（Ｙ軸）対傾き（Ｘ軸）（下部右）のグラフを示す。
【図９３】図９３は、ビンｃｈｒ１＿１０における交差検証誤差（Ｙ軸）対Ｒワーク（Ｘ軸）（上部左）、未処理カウント（Ｙ軸）対ＧＣバイアス係数（Ｘ軸）（上部右）、頻度（Ｙ軸）対切片（Ｘ軸）（下部左）および頻度（Ｙ軸）対傾き（Ｘ軸）（下部右）のグラフを示す。
【図９４】図９４は、ビンｃｈｒ１＿９における交差検証誤差（Ｙ軸）対Ｒワーク（Ｘ軸）（上部左）、未処理カウント（Ｙ軸）対ＧＣバイアス係数（Ｘ軸）（上部右）、頻度（Ｙ軸）対切片（Ｘ軸）（下部左）および頻度（Ｙ軸）対傾き（Ｘ軸）（下部右）のグラフを示す。
【図９５】図９５は、ビンｃｈｒ１＿８における交差検証誤差（Ｙ軸）対Ｒワーク（Ｘ軸）（上部左）、未処理カウント（Ｙ軸）対ＧＣバイアス係数（Ｘ軸）（上部右）、頻度（Ｙ軸）対切片（Ｘ軸）（下部左）および頻度（Ｙ軸）対傾き（Ｘ軸）（下部右）のグラフを示す。
【図９６】図９６は、頻度（Ｙ軸）対最大値（Ｒｃｖ、Ｒｗｏｒｋ）（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図９７】図９７は、技術的複製物（Ｘ軸）対ログ１０交差検証誤差（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図９８】図９８は、Ｃｈｒ２１におけるＺスコアギャップ分離（Ｙ軸）対交差検証誤差閾値（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図９９】図９９Ａ（全てのビン）および図９９Ｂ（交差検証ビン）は、実施例４に記載のビン選択により、おもにマッピング性の低いビンを除去されることを例証する。
【図１００】図１００は、Ｃｈｒ１８＿６における、正規化されたカウント（Ｙ軸）対ＧＣ（Ｘ軸）バイアスのグラフを示す。
【図１０１】図１０１は、Ｃｈｒ１８＿８における、正規化されたカウント（Ｙ軸）対ＧＣバイアス（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図１０２】図１０２は、頻度（Ｙ軸）対切片誤差（Ｘ軸）のヒストグラムを示す。
【図１０３】図１０３は、頻度（Ｙ軸）対傾き誤差（Ｘ軸）のヒストグラムを示す。
【図１０４】図１０４は、傾き誤差（Ｙ軸）対切片（Ｘ軸）のグラフを示す。
【図１０５】図１０５は、上昇（Ｙ軸）およびビン数（Ｘ軸）を含むＣｈｒ４（約１２４００〜約１５７５０）を含む正規化プロファイルを示す。
【図１０６】図１０６は、Ｃｈｒ２０、Ｃｈｒ２１およびＣｈｒ２２における、未処理カウント（上部パネル）および正規化されたカウント（下部パネル）のプロファイルを示す。また、ＰＥＲＵＮ正規化前（上部）および後（下部）のプロファイルにおける、標準偏差（Ｘ軸）対頻度（Ｙ軸）の分布を示す。
【図１０７】図１０７は、未処理カウント（上部）、リピートマスキング（中央）および正規化されたカウント（下部）における、正倍数体およびトリソミーの例の染色体表現の分布を示す。
【図１０８】図１０８は、Ｃｈｒ１３における、線形加法モデル（Ｙ軸）対ＧＣＲＭを用いて得られた結果のグラフを示す。
【図１０９】図１０９は、Ｃｈｒ１８における、線形加法モデル（Ｙ軸）対ＧＣＲＭを用いて得られた結果のグラフを示す。
【図１１０】図１１０は、Ｃｈｒ２１における線形加法モデル（Ｙ軸）対ＧＣＲＭを用いて得られた結果のグラフを示す。
【図１１１】図１１１は、Ｃｈｒ２１における線形加法モデル（Ｙ軸）対ＧＣＲＭを用いて得られた結果のグラフを示す。
【図１１２】図１１２Ａ〜Ｃは、正倍数体ＷＩサンプルの正規化常染色体プロファイルのパディングを図示する。図１１２Ａは、パディングされていないプロファイルの一例である。図１１２Ｂは、パディングされたプロファイルの一例である。図１１２Ｃは、パディング補正の一例である（例えば、調節されたプロファイル、調節された上昇）。
【図１１３】図１１３Ａ〜Ｃは、正倍数体ＷＩサンプルの正規化常染色体プロファイルのパディングを図示する。図１１３Ａは、パディングされていないプロファイルの一例である。図１１３Ｂは、パディングされたプロファイルの一例である。図１１３Ｃは、パディング補正の一例である（例えば、調節されたプロファイル、調節された上昇）。
【図１１４】図１１４Ａ〜Ｃは、トリソミー１３ＷＩサンプルの正規化常染色体プロファイルのパディングを図示する。図１１４Ａは、パディングされていないプロファイルの一例である。図１１４Ｂは、パディングされたプロファイルの一例である。図１１４Ｃは、パディング補正の一例である（例えば、調節されたプロファイル、調節された上昇）。
【図１１５】図１１５Ａ〜Ｃは、トリソミー１８ＷＩサンプルの正規化常染色体プロファイルのパディングを図示する。図１１５Ａは、パディングされていないプロファイルの一例である。図１１５Ｂは、パディングされたプロファイルの一例である。図１１５Ｃは、パディング補正の一例である（例えば、調節されたプロファイル、調節された上昇）。
【図１１６】図１１６は、プロファイル内の母体の重複を示す。
【図１１７】図１１７は、プロファイル内の母体の重複を示す。
【図１１８】図１１８は、プロファイル内の母体の重複を示す。
【図１１９】図１１９は、プロファイル内の母体の重複を示す。
【図１２０】図１２０は、プロファイル内の母体の重複を示す。
【図１２１】図１２１は、プロファイル内の母体の欠失を示す。
【図１２２】図１２２は、プロファイル内の母体の重複を示す。
【図１２３】図１２３は、プロファイル内の母体の重複を示す。
【図１２４】図１２４は、プロファイル内の母体の欠失を示す。
【図１２５】図１２５は、プロファイル内の母体の欠失を示す。
【図１２６】図１２６は、プロファイル内の母体の重複を示す。
【図１２７】図１２７は、プロファイル内の母体の欠失を示す。
【図１２８】図１２８は、プロファイル内の母体の重複を示す。
【図１２９】図１２９は、プロファイル内の母体の重複を示す。
【図１３０】図１３０は、プロファイル内の母体の欠失を示す。
【図１３１】図１３１は、プロファイル内の母体の重複を示す。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４５７】
ピーク端
サンプルの異常の平均の上昇の比較に加え、比較された伸長の開始および終了も、統計学的分析に有用な情報を提供することができる。ピーク端の比較における分解能の上限を、多くの場合、ビンの大きさ（例えば、本明細書に記載の実施例の５０ｋｂｐ）により決定する。図２１は、３つの考えられるピーク端のシナリオ；（ａ）１つのサンプルからのピークを、別のサンプルからの一致するピーク内に完全に含有することができ、（ｂ）１つのサンプルからの端が別のサンプルからの端に部分的にオーバーラップすることができ、または（ｃ）１つのサンプルからの主要な端は、別のサンプルの末端にほんのわずか接触し、またはオーバーラップすることができることを図示する。図２２は、（ｃ）に記載のシナリオの一例（ａｎｄ  ｅｘａｍｐｌｅ）を図示する（例えば、中間のトレースの末端が上部のトレースの主要な末端にほんのわずか接触する、中間のトレースを参照のこと）。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４６１】
染色体上昇中央値
正倍数体患者の標的染色体内の正規化された上昇中央値は、胎児画分に関わらず、１に近いままであることが期待される。しかし、図９および１０に示されるように、トリソミー患者の上昇中央値は、胎児画分とともに増加する。この増加は、一般に、傾き０．５の実質的な線形である。実験測定値により、これらの期待値を確認する。図２６は、８６個の正倍数体のサンプル（図２６の点付きの棒で示す）における上昇中央値のヒストグラムを図示する。中央値は、１前後に緊密に集められている（中央値＝１．００００、中央絶対偏差（ＭＡＤ）＝０．００４２、平均値＝０．９９９６、標準偏差（ＳＤ）＝０．００４６）。図２６に示されるヒストグラムに示されるように、１．０１２を超える正倍数体の上昇中央値はない。対照的に、図２６に示される３５個のトリソミーサンプルの中から（斜線付きの棒）、１つを除いて全てが、正倍数体の範囲のかなり上の１．０２を超える上昇中央値を有する。この例の２群の患者間のギャップは、正倍数体または異数体としての分類を可能にするのに十分大きいものである。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４６３】
面積比
正規化されたカウントの分布の中央値は、一般に、点推定値であり、それ自体は、多くの場合、積分推定値に比べ、あまり信頼性のない推定値、例えば、分布下面積（例えば、曲線下面積）である。高値の胎児画分を含有するサンプルは、点推定値を使用することにより影響される程ではないが、低値の胎児画分にて、不規則誤差によるわずかに増加した中央値カウントを有する正倍数体サンプルからの実際に上昇した正規化されたプロファイルを区別することが困難になる。胎児画分が相対的に低い（例えば、Ｆ＝約７％、Ｆ（７％））トリソミー例からの正規化されたカウントの分布の中央値を図示するヒストグラムを、図２７に示す。分布の中央値は、１＋Ｆ／２＝１．０３５から遠くない１．０２１である。しかし、分布の幅（ＭＡＤ＝０．０５４、ＳＤ＝０．０８２）は、正倍数体値の１からの中央値の偏差をかなり超え、サンプルが異常であるという任意の主張は除外される。分布の視覚的に判断し、代替えの分析を提案する：ピークの右へのシフトは相対的に小さいが、１の正倍数体期待値から左への面積（右肩下がりの斜線付き）と右への面積（右肩上がりの斜線付き）との間の均衡をかなり摂動させる。したがって、２つの面積間の比は、積分推定値であり、分類が胎児画分の低値により困難である例において有利となり得る。曲線下の右肩上がりの斜線付きおよび右肩下がりの斜線付きの面積における積分推定値の計算を、以下にさらに詳細に説明する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４９３】
【化３２】
2014534507.tif 000001
トリソミー（破線）および正倍数体（実線、下部）の例において、典型的なモデルパラメータ値におけるファイ関数プロファイルのシミュレート値を、図３１に示す。図３２は、実際のデータを使用する例を示す。図３１および３２において、横座標の下のデータ点は、一般に、正倍数体として分類される例を表す。横座標より上のデータ点は、一般にトリソミー２１（Ｔ２１）の例として分類される例を表す。図３２において、第４象限（例えば、中央下部の象限）の孤立のデータ点は、１例が罹患した胎児の双胎妊娠である。図３２を作製するために利用されたデータセットは、他の罹患した双胎サンプルを同様に含み、横座標へのＴ２１のデータ点の広がりを説明する。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５０３】
測定された胎児画分の誤差：フィットさせた胎児画分の質
Ｙ染色体にマッピングされた配列タグの数（例えば、Ｙカウント）に基づいた胎児画分の推定値は、ＦＱＡ胎児画分値に対して相対的に大きな偏差を示すこともある（図３４を参照のこと）。３倍体におけるＺ値も、多くの場合、図３５に示される斜線の周りに相対的な広がりを示す。図３５の斜線は、トリソミー２１の例における胎児画分の増加を伴う、第２１番染色体における染色体表現の理論的増加の期待値を表す。胎児画分を、適切な方法を使用して評価することができる。胎児画分を推定するために利用することができる方法の非限定的な例は、胎児数量アッセイ（例えば、ＦＱＡ）である。胎児画分を推定する他の方法は、当技術分野において公知である。胎児画分を推定するために利用される種々の方法も、図３６〜３９に示されるように中央斜線の周りに実質的に同様な広がりを示すこともある。図３６において、偏差は、フィットさせた胎児画分において観察されるものと実質的に類似する（例えば、高値のＦ０において負）（式（３３）を参照のこと）。いくつかの実施形態において、０％〜２０％の範囲の平均の染色体Ｙ（例えば、染色体Ｙ）の胎児画分（図３６の中間のヒストグラムの線を参照のこと）に対する線形の近似値の傾きは、約３／４である。特定の実施形態において、標準偏差に対する線形の近似値（図３６、上部および下部のヒストグラムの線を参照のこと）は、約２／３＋Ｆ０／６である。いくつかの実施形態において、第２１番染色体（例えば、第２１番染色体）に基づく胎児画分の推定値は、胎児画分を当て嵌めることにより得られたものに実質的に類似する（図３７を参照のこと）。性別に基づく胎児画分の推定値の別の定量的に類似のセットを、図３８に示す。図３９は、Ｔ２１の例における正規化されたビンカウントの中央値を図示し、これは、線形の近似値が１＋Ｆ０／２に実質的に類似する傾きを有すると期待される（図３９のグラフにおける起点から上部の中間点までの灰色の線を参照のこと）。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５１８】
いくつかの例において、Ｆの誤差が高値のときに顕著となることもある、より高い倍数性値に向かうバイアスは、多くの場合、図４２のパネルＡ〜Ｃに示されるように、密度関数の非対称形状：相対的に長く、右側の垂直線の右にゆっくり低下する尾部、Ｘの線に垂直であり、Ｘ軸に沿っている形状に反映される。いくつかの実施形態において、ΔＦの任意の値に対して、右側の垂直線（Ｘｖ＝３／２）の左の、確率密度関数の下の面積は、右側の垂直線の右の面積に等しい。すなわち、全てのフィットさせた倍数性の半分が、多くの場合、過大推定値であるが、全てのフィットさせた倍数性のもう半分は、過小推定値であることもある。いくつかの例において、バイアスは、一般に、一方の、または他方の方向の広がりではなく、Ｘの誤差の範囲を考慮するにすぎない。いくつかの実施形態において、分布の中央値は、Ｘｖに等しい。図４３は、実際のデータにおいて得られた正倍数体およびトリソミーの分布を図示している。測定された胎児画分における不確定要素は、３倍体についてフィットさせた倍数性の値に見られる分散の一部を説明することもあるが、正倍数体におけるＸの推定値の誤差は、多くの場合、ビンカウントからの誤差伝播を試験することを必要とする。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５７１】
図７２は、転換点の周りの染色体特異的ＬＯＥＳＳ曲線を、これらのサンプルにおいて測定されたＧＣバイアス係数に比例する角度で傾斜させることにより、曲線全てを融合させたことを示す。染色体特異的ＬＯＥＳＳ曲線を、サンプル特異的ＧＣバイアス係数により傾斜させることにより、図７３に示されるように、複数のサンプルにおいて得られたＬＯＥＳＳ曲線のファミリーの広がりを顕著に減少させた（黒塗りの円（傾斜前）および白抜きの円（傾斜後））。黒塗りの円および白抜きの円が接触する点は、転換点と一致した。さらに、染色体特異的転換点のＧＣ含量の軸上の位置は、所与の染色体のＧＣ含量の中央値と一致したことが明らかとなった（図７４、左の垂直線：中央値、右の垂直線：平均値）。同様の結果を、図７５Ａ〜図７５Ｆに示されるように、全ての染色体において得られた（左の垂直線：中央値、右の垂直線：平均値）。全ての常常染色体およびＸ染色体を、ＧＣ含量の中央値に従い、順序付けた。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５９２】
Ｉ：線形モデルの切片（図８３の斜線）。このモデルパラメータを、所与の実験設定において、サンプルに独立し、ビン特異的に固定する。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５９３】
Ｓ：線形モデルの傾き（図８３の斜線）。このモデルパラメータを、所与の実験設定において、サンプルに独立し、ビン特異的に固定する。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０６１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０６１０】
図９７は、交差検証誤差と、技術的反復物のセットから推定されたビン当たりの相対的誤差を相関させる。中央領域のデータ点（すなわち、２本の垂直線の間に位置するデータ点）は、７％〜１０％の交差検証誤差に対応する。２本の垂直線の右側の領域のデータ点は、１０％を超える交差検証誤差を含むビンを示す。２本の垂直線の左側の領域のデータ点（誤差＜７％）は、ビンの塊を表す。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2014534507.tif 000002
【図２】
2014534507.tif 000003
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2014534507.tif 000009
【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１Ａ】
2014534507.tif 000062
【図６１Ｂ】
2014534507.tif 000063
【図６１Ｃ】
2014534507.tif 000064
【図６１Ｄ】
2014534507.tif 000065
【図６１Ｅ】
2014534507.tif 000066
【図６１Ｆ】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【図７２】
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【図７３】
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【図７４】
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【図７５−１】
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【図７５−２】
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【図７５−３】
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【図７６】
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【図７７】
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【図７８】
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【図７９】
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【図８０】
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【図８１】
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【図８２】
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【図８３】
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【図８４】
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【図８５】
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【図８６】
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【図８７】
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【図８８】
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【図８９】
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【図９０】
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【図９１】
2014534507.tif 000099
【図９２】
2014534507.tif 000100
【図９３】
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【図９４】
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【図９５】
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【図９６】
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【図９７】
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【図９８】
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【図９９】
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【図１００】
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【図１０１】
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【図１０２】
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【図１０３】
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【図１０４】
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【図１０５】
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【図１０６】
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【図１０７】
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【図１０８】
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【図１０９】
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【図１１０】
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【図１１１】
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【図１１２】
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【図１１３】
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【図１１４】
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【図１１５】
2014534507.tif 000123
【図１１６】
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【図１１７】
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【図１１８】
2014534507.tif 000126
【図１１９】
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【図１２０】
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【図１２１】
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【図１２２】
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【図１２３】
2014534507.tif 000131
【図１２４】
2014534507.tif 000132
【図１２５】
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【図１２６】
2014534507.tif 000134
【図１２７】
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【図１２８】
2014534507.tif 000136
【図１２９】
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【図１３０】
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【図１３１】
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