【手続補正書】
【提出日】平成27年5月15日(2015.5.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】誤訳訂正書
【補正対象項目名】誤訳訂正１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【発明の名称】アミノ酸１および３で修飾されたシクロスポリン類似体分子
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）の類似体を含み、免疫抑制活性が低減されまたは免疫抑制活性を有さずシクロフィリン（ＣｙＰ）に結合する類似体を含む、シクロスポリン族に属する分子の新規類似体に関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロスポリンは、強力な免疫抑制活性を有する環状ポリペプチド類に属する。シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）などのこれらの化合物の少なくとも幾つかは、トリポクラディウム・インフラトゥム（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ  ｉｎｆｌａｔｕｍ）種によって二次代謝産物として産生される。ＣｓＡは、同種移植片拒絶反応、遅延型過敏症、実験的アレルギー性脳脊髄炎、フロイントアジュバント関節炎および移植片対宿主病などの体液性免疫および細胞仲介性免疫反応を抑制することが立証されている強力な免疫抑制剤であり、臓器移植における臓器拒絶反応の予防、関節リウマチの治療および乾癬の治療に使用される。
【０００３】
幾つかのシクロスポリン族化合物が公知であるが、おそらくＣｓＡが最も広く医療用に使用されている。ＣｓＡの免疫抑制効果は、Ｔ細胞が仲介する活性化事象の阻害に関連する。免疫抑制は、シクロスポリンがシクロフィリン（ＣｙＰ）と呼ばれるユビキタス細胞内タンパク質に結合することによって達成される。この複合体は、その結果、酵素カルシニューリンのカルシウムおよびカルモジュリン依存性セリン−トレオニンホスファターゼ活性を阻害する。カルシニューリンを阻害することにより、Ｔ細胞を活性化している間、サイトカイン遺伝子（ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４およびＧＭ−ＣＳＦ）の誘導に必要なＮＦＡＴｐ／ｃおよびＮＦ−κＢなどの転写因子の活性化を阻止する。
【０００４】
シクロスポリンの最初の発見以来、多種多様な天然に存在するシクロスポリンが単離され、同定されてきた。さらに、天然に存在しない多くのシクロスポリンが、部分または全合成手段および修飾細胞培養技術の適用によって調製されてきた。したがって、シクロスポリンを含む種類はかなりあり、例えば、天然に存在するシクロスポリンＡからＺ；天然に存在しない様々なシクロスポリン誘導体；ジヒドロおよびイソシクロスポリンを含む人工または合成シクロスポリン；誘導体化シクロスポリン（例えば、ＭｅＢｍｔ残基の３’−Ｏ−原子をアシル化することもでき、またはさらなる置換基をサルコシル残基の３位に導入することもできる）；ＭｅＢｍｔ残基が異性体形態で存在するシクロスポリン（例えば、ＭｅＢｍｔ残基の位置６’と７’の立体配置がトランスではなくシスであるもの）；および、変種アミノ酸がそのペプチド配列内の特定の位置に組み込まれているシクロスポリンを含む。
【０００５】
１位に修飾されたアミノ酸を含有するシクロスポリン類似体は、国際公開第９９／１８１２０号パンフレットおよび国際公開第０３／０３３５２７号パンフレットに開示されており、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。これらの出願には、「ＩＳＡＴＸ２４７」または「ＩＳＡ２４７」または「ＩＳＡ」として公知のシクロスポリン誘導体が記載されている。この類似体は、アミノ酸−１残基における修飾を除き、ＣｓＡと構造的に同一である。本出願人らは、主としてトランスＩＳＡ２４７で構成される混合物を含む、ＩＳＡ２４７のシス異性体とトランス異性体の特定の混合物が、天然に存在し現在公知のシクロスポリンより強化された免疫抑制効力と低減された毒性との組み合わせを示すことを以前に発見した。
【０００６】
シクロスポリンは、カルシニューリン、ＣｙＰアイソフォーム（ＣｙＰ−Ａ、ＣｙＰ−ＢおよびＣｙＰ−Ｄを含むがこれらに限定されない）、およびＰ糖タンパク質（ＰｇＰ）の３つの確立した細胞標的を有する。シクロスポリンのカルシニューリンへの結合により顕著な免疫抑制がもたらされ、この結合は、移植および自己免疫適応症との従来の関連性に関与する。
【０００７】
シクロフィリン族
ＣｙＰ（酵素委員会（ＥＣ）番号５．１．２．８）は、ペプチジル−プロリル  シス−トランスイソメラーゼ活性を有するタンパク質の群に属し、そのようなタンパク質は、集合的にイムノフィリンとして知られており、ＦＫ−５０６結合タンパク質およびパルブリンも含む。ＣｙＰは、原核生物と真核生物の両方の研究されているすべての生物のすべての細胞において見られ、進化を通して構造的に保存されている。ヒトには７つの主要なＣｙＰ、すなわちＣｙＰ−Ａ、ＣｙＰ−Ｂ、ＣｙＰ−Ｃ、ＣｙＰ−Ｄ、ＣｙＰ−Ｅ、ＣｙＰ−４０およびＣｙＰ−ＮＫ（ヒト天然キラー細胞から最初に同定されたもの）と、全部で１６の特有のタンパク質がある（Ｇａｌａｔ  Ａ．Ｐｅｐｔｉｄｙｌｐｒｏｌｙｌ  ｃｉｓ／ｔｒａｎｓ  ｉｓｏｍｅｒａｓｅｓ（ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎｓ）：ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ−ｔａｒｇｅｔｓ−ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００３，３：１３１５−１３４７；Ｗａｌｄｍｅｉｅｒ  ＰＣ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ｄ  ａｓ  ａ  ｄｒｕｇ  ｔａｒｇｅｔ．Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００３，１０：１４８５−１５０６）。
【０００８】
哺乳動物において同定されたＣｙＰの最初の成員はＣｙＰ−Ａであった。ＣｙＰ−Ａは１８ｋＤａの細胞質タンパク質であり、ＣｓＡ結合のための最も豊富に存在するタンパク質である。ＣｙＰ−Ａは、全細胞質タンパク質の０．６％を構成すると推定される（Ｍｉｋｏｌ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ．Ｘ−ｒａｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｍｏｎｍｅｒｉｃ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ−ｃｙｃｌｏｐｏｒｉｎ  Ａ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ａｔ  ２．１  Ａ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９３，２３４：１１１９−１１３０；Ｇａｌａｔ  Ａ，Ｍｅｔｃａｌｆｅ  ＳＭ．Ｐｅｐｔｉｄｙｌｐｒｏｌｉｎｅ  ｃｉｓ／ｔｒａｎｓ  ｉｓｏｍｅｒａｓｅｓ．Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９５，６３：６７−１１８）。
【０００９】
シクロフィリンの細胞内位置
ＣｙＰは、ほとんどの組織のほとんどの細胞区画において見られ、特有の機能をコードする。哺乳動物において、ＣｙＰ−ＡおよびＣｙＰ−４０は細胞質性であるのに対して、ＣｙＰ−ＢおよびＣｙＰ−Ｃは、小胞体タンパク質分泌経路にそれらを標的にするアミノ末端シグナル配列を有する（Ｇａｌａｔ，２００３；Ｄｏｒｎａｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｌｉｇａｎｄ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００３，３：１３９２−１４０９に概説されている）。ＣｙＰ−Ｄは、それをミトコンドリアに方向づけるシグナル配列を有し（Ａｎｄｒｅｅｖａ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９９，  ８０：３０５−３１５Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ＧＳ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎｓ：  ｂｅｙｏｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  １９９８，  ４１：５１１９−５１４３）；ＣｙＰ−Ｅは、アミノ末端ＲＮＡ結合ドメインを有し、核内に位置し（Ｍｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｎｕｃｌｅａｒ  ＲＮＡ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  １９９６，３９８：２０１−２０５）、ＣｙＰ−４０は、ＴＰＲを有し、細胞質内に位置する（Ｋｉｅｆｆｅｒ  ＬＪ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ−４０，ａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｗｉｔｈ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｐ５９  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｘ．Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃＤＮＡ  ａｎｄ  ｆｕｒｔｈｅｒ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９３，２６８：１２３０３−１２３１０）。ヒトＣｙＰ−ＮＫは、最大のＣｙＰであり、正に帯電した親水性の大きなカルボキシル末端を有し、細胞質内に位置する（Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＳＫ  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９３，  ９０：５４２−５４６；Ｒｉｎｆｒｅｔ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ−ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ａ  １５０−ｋｉｌｏｄａｌｔｏｎ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｅｘｈｉｂｉｔｓ  ｂｏｔｈ  ｐｅｐｔｉｄｙｌｐｒｏｌｙｌ  ｃｉｓ−ｔｒａｎｓｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ａｎｄ  ｃｈａｐｅｒｏｎｅ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９４，  ３３：１６６８−１６７３）
【００１０】
シクロフィリンの機能および活性
ＣｙＰは、多くの細胞プロセスに関与する多機能タンパク質である。ＣｙＰは、進化を通して高度に保存されているため、これは、ＣｙＰについての本質的役割を示唆している。初めに、ＣｙＰは、ペプチジル−プロリル結合のシス−トランス異性化を触媒するという特異的酵素特性を有することが見いだされた（Ｇａｌａｔ，  １９９５；Ｆｉｓｈｅｒ  ＧＡ  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ（ｔａｘｏｌ）（Ｔ）  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＳＤＺ  ｖａｌｓｐｏｄａｒ，  ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＭＤＲ）．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ．  １９９４５（Ｓｕｐｐｌ  １）：  ４３）。したがって、ＣｙＰは、ペプチジル−プロリル−シス−トランスイソメラーゼ（ＰＰＩａｓｅ）と呼ばれ、新たに合成されるタンパク質の適当な折畳の促進因子として作用することができ、ＰＰＩａｓｅｓは、熱応力、紫外線照射、細胞環境のｐＨの変化、および酸化剤での処理のために損傷したタンパク質の修復にも関与する。この機能は、分子シャペロニング活性として公知である（Ｙａｏ  Ｑ  ｅｔ  ａｌ．Ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒｓ  ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｏｒｇａｎｓ  Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．Ｓｕｒｇ．２００５，２９：２７６−２８０）。
【００１１】
さらに、ＣｙＰのＰＰＩａｓｅ活性は、細胞内タンパク質輸送（Ａｎｄｒｅｅｖａ，  １９９９；Ｃａｒｏｎｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｅｗ  ｍｅｍｂｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９１，  ２６６：１０７３９−４２）、ミトコンドリア機能（Ｈａｌｅｓｔｒａｐ  ＡＰ  ｅｔ  ａｌ．  ＣｓＡ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｈｅ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｐｏｒｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｈｅａｒｔｓ  ｆｒｏｍ  ｉｓｃｈａｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９９７，  １７４：１６７−７２；Ｃｏｎｎｅｒｎ  ＣＰ，  Ｈａｌｅｓｔｒａｐ  ＡＰ．Ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｉｎｎｅｒ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｕｎｄｅｒ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｔｈａｔ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｔｈｅ  ｏｐｅｎｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｃａｌｃｉｕｍ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｎｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｈａｎｎｅｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  １９９４，  ３０２：３２１−４），  ｍＲＮＡ前躯体処理（Ｂｏｕｒｑｕｉｎ  ＪＰ  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｓｅｒｉｎｅ／ａｒｇｉｎｉｎｅｒｉｃｈ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  Ｃｔｅｒｍｉｎａｌ  ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ＲＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ＩＩ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １９９７，  ２５：２０５５−６１）、および多タンパク質複合体安定性の維持（Ａｎｄｒｅｅｖａ，１９９９）を含む、多様な細胞プロセスに関与することが最近証明された。
【００１２】
シクロスポリンは、疎水性ポケット内での接触によりＣｙＰ−Ａにナノ分子的な親和性で結合し（Ｃｏｌｇａｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ−Ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  Ｍｉｃｅ  Ａｒｅ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｔｏ  Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００５，  １７４：  ６０３０−６０３８，  Ｍｉｋｏｌ，  １９９３）、ＰＰＩａｓｅ活性を阻害する。しかし、この効果は、免疫抑制には不適切であると考えられる。むしろ、ＣｓＡとＣｙＰ−Ａ間の複合体は、カルシニューリンに結合してカルシニューリンにサイトカイン遺伝子転写を調節させない複合面を生じさせる（Ｆｒｉｅｄｍａｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｗｏ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎ  ａｃｔｉｏｎ  ａｒｅ  ｒｅｖｅａｌｅｄ  ｂｙ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｆｏｒ  ａ  ｎｅｗ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ：  ｏｎｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｏｎｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ＣｓＡ．  Ｃｅｌｌ  １９９１，  ６６：  ７９９−８０６；Ｌｉｕ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ  ｉｓ  ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ−ＣｓＡ  ａｎｄ  ＦＫＢＰ−ＦＫ５０６  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．  Ｃｅｌｌ  １９９１，  ６６：  ８０７−８１５）。
【００１３】
シクロフィリンの相同性
ＣｙＰ−Ａは、この族の原型成員であり、哺乳動物細胞において高度に保存されているタンパク質である（Ｈａｎｄｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ  ＲＥ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ：  ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｏｒ  ＣｓＡ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８４，  ２２６：  ５４４−７）。ヒトＣｙＰ−Ａの配列相同性分析は、それがヒトＣｙＰ−Ｂ、ＣｙＰ−ＣおよびＣｙＰ−Ｄに対して高度に相同性であることを示す（Ｈａｒｄｉｎｇ  ＭＷ，  Ｈａｎｄｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ  ＲＥ，  Ｓｐｅｉｃｈｅｒ  ＤＷ．  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９８６，  ２６１：８５４７−５５）。すべてのＣｙＰのシクロスポリン結合ポケットが、およそ１０９のアミノ酸の高度に保存された領域によって形成されている。公知のＣｙＰのうち、ＣｙＰ−Ｄは、ＣｙＰ−Ａと最も高い相同性を有する。実際、この領域でＣｙＰ−ＡとＣｙＰ−Ｄ間の配列同一性は１００％である（Ｗａｌｄｍｅｉｅｒ  ２００３Ｋｒｉｓｔａｌ  ＢＳ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ａｓ  ａ  Ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ  ２００４，  ３６（４）３０９−３１２）。したがって、ＣｙＰ−Ａ親和性はＣｙＰ−Ｄ親和性の非常によい予測因子であり、またその逆も当てはまる（Ｈａｎｓｓｏｎ  ＭＪ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｎｏｎｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ＮＩＭ８１１  ａｎｄ  ＵＮＩＬ０２５  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｎａｎｏｍｏｌａｒ  Ｐｏｔｅｎｃｉｅｓ  ｏｎ  Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｒａｉｎ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ，  ２００４，  ３６（４）：  ４０７−４１３）。この関係は、シクロスポリン類似体を用いて実験的に繰り返し証明されている（Ｈａｎｓｓｏｎ，  ２００４；Ｐｔａｋ  Ｒｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｖｉｒｕｓ  Ｔｙｐｅ  １  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  Ｄｅｂｉｏ−０２５，  ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｇｅｎｔ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ２００８：１３０２−１３１７；Ｍｉｌｌａｙ  ＤＰ  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  ｍｕｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００８，  １４（４）：４４２−４４７；Ｈａｒｒｉｓ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  Ｎｏｎ−Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  Ｅｔｈｅｒｓ  ａｎｄ  Ｔ��ｉｏｅｔｈｅｒｓ  Ｗｉｔｈ  Ｐｏｔｅｎｔ  ＨＣＶ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｐｏｓｔｅｒ  ＃  １９１５，  ５９ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ（ＡＡＳＬＤ），  ２００８）。ＣｙＰ全体にわたる配列相同性は、すべてのＣｙＰがシクロスポリン類似体の標的になる可能性があることを示唆している。ＣｙＰが関与する多数の細胞プロセスのため、これは、ＣｙＰへの有意な結合を保持するＣｓＡ類似体が多くの疾病徴候の治療に有用であり得ることを、さらに示唆している。
【００１４】
シクロフィリン仲介性疾患
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）：
ＨＩＶは、レトロウイルス族のレンチウイルスであり、一定のウイルスの感染および複製プロセスへのＣｙＰの関与の一例として役立つ。ＣｙＰ−Ａは、抗ＨＩＶ化学療法において有効な標的であることが、１０年以上前に確証された（Ｒｏｓｅｎｗｉｒｔｈ  ＢＡ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ａｎｔｉ−ＨＩＶ−１  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．  Ｉｎｔ．  Ａｎｔｉｖｉｒ．  Ｎｅｗｓ  １９９５，  ３：６２−６３）。ＣｙＰ−Ａは、ＨＩＶ−１複製サイクルの早期において欠くことのできない機能を果たす。それは、ＨＩＶ−１  Ｇａｇポリプロテインに特異的に結合することが見いだされた（Ｌｕｂａｎ  ＪＫＬ  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  Ｇａｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎｓ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ．  Ｃｅｌｌ  １９９３，  ７３：  １０６７−１０７８）。カプシドタンパク質ｐ２４（ＣＡ）のＧ８９およびＰ９０当たりの被定義アミノ酸配列がＣｙＰ−Ａに対する結合部位として同定された（Ｂｕｋｏｖｓｋｙ  ＡＡＡ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＨＩＶ−１  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｔｏ  ｓｉｍｉａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｆｒｏｍ  Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ  ｃａｎ  ｃｏｎｆｅｒ  ｂｏｔｈ  ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １９９７，  ９４：  １０９４３−１０９４８；Ｇａｍｂｌｅ  ＴＲＦ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ  ｂｏｕｎｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ａｍｉｎｏ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ＨＩＶ−１  ｃａｐｓｉｄ．  Ｃｅｌｌ  １９９６，  ８７：  １２８５−１２９４）。ＣＡに対するＣｙＰ−Ａの親和性は、組み立て中のビリオン粒子へのＣｙＰ−Ａの組み込みを促進する（Ｔｈａｌｉ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ  ｗｉｔｈ  ＨＩＶ−１  ｖｉｒｉｏｎｓ．  Ｎａｔｕｒｅ  １９９４，  ３７２：  ３６３−３６５）。実験に基づく証拠は、ＣｙＰ−Ａ−ＣＡ相互作用がＨＩＶ−１複製にとって不可欠であることを示しており、この相互作用の阻害は、ヒト細胞におけるＨＩＶ−１複製を害する（Ｈａｔｚｉｉｏａｎｎｏｕ  ＴＤ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｃｏｍｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｃａｐｓｉｄｓ  ｗｉｔｈ  ｏｐｐｏｓｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ．  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ２００５，  ７９：  １７６−１８３；Ｓｔｅｉｎｋａｓｓｅｒｅｒ  ＡＲ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｄｅ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＤＺ  ＮＩＭ  ８１１，  ａ  ｎｏｎｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ＣｓＡ  ａｎａｌｏｇ  ｗｉｔｈ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒ��ｓ  ｔｙｐｅ  １（ＨＩＶ−１）：  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｗｉｔｈ  ｅａｒｌｙ  ａｎｄ  ｌａｔｅ  ｅｖｅｎｔｓ  ｉｎ  ＨＩＶ−１  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ．  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ  １９９５，  ６９：  ８１４−８２４）。ＣｙＰ−Ａが関与するウイルス複製サイクルにおける段階は、ウイルス粒子の侵入後で、細胞ゲノムへの二本鎖ウイルスＤＮＡの組み込み前の事象であることが立証された（Ｂｒａａｔｅｎ  ＤＥＫ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ａｎ  ｅａｒｌｙ  ｓｔｅｐ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｉｆｅ  ｃｙｃｌｅ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｂｅｆｏｒｅ  ｔｈｅ  ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ  １９９６  ７０：  ３５５１−３５６０；Ｍｌｙｎａｒ  ＥＤ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ｎｏｎ−ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ＣｓＡ  ａｎａｌｏｇｕｅ  ＳＤＺ  ＮＩＭ  ８１１  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｉｎｔｏ  ｖｉｒｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｖｉｒｕｓ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｐｒｉｍａｒｙ  ａｎｄ  ｇｒｏｗｔｈ−ａｒｒｅｓｔｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ．  Ｇｅｎ．  Ｖｉｒｏｌ  １９９６，  ７８：８２５−８３５；Ｓｔｅｉｎｋａｓｓｅｒｅｒ，  １９９５）。ＣｓＡの抗ＨＩＶ−１活性は、１９９８年に初めて報告された（Ｗａｉｎｂｅｒｇ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ＣｓＡ  ｏｎ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １．  Ｂｌｏｏｄ  １９９８，  ７２：  １９０４−１９１０）。ＨＩＶ−１複製の阻害についてのＣｓＡおよび多くの誘導体の評価は、非免疫抑制性ＣｓＡ類似体が、免疫抑制性類似体のものに等しいまたはそれより優れてさえいる抗ＨＩＶ−１活性を有することを明らかにした（Ｂａｒｔｚ  ＳＲＥ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｎｏｎｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｏｆ  ＣｓＡ．Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １９９５，  ９２：  ５３８１−５３８５；Ｂｉｌｌｉｃｈ  ＡＦ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｄｅ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＤＺ  ＮＩＭ  ８１１，  ａ  ｎｏｎｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ＣｓＡ  ａｎａｌｏｇ  ｗｉｔｈ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ（ＨＩＶ）  ｔｙｐｅ  １：  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｗｉｔｈ  ＨＩＶ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ  １９９５，  ６９：  ２４５１−２４６１；Ｐｔａｋ，  ２００８）。
【００１５】
炎症
疾患における炎症は、感染領域への白血球の流入を伴う。白血球は、化学誘因剤族であるケモカインによってその領域に引き込まれる。インビトロ研究により、細胞外ＣｙＰ−Ａはヒト白血球およびＴ細胞についての強力な化学誘因物質であることが証明された（Ｋａｍａｌｐｒｅｅｔ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎｓ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００５；１７５：  ５１７−５２２；Ｙｕｒｃｈｅｎｋｏ  ＶＧ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｃｔｉｖｅ−ｓｉｔｅ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ  ａｒｅ  ｃｒｕｃｉａｌ  ｆｏｒ  ｉｔｓ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｖｉａ  ＣＤ１４７．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２００２；２７７：２２９５９−２２９６５；Ｘｕ  ＱＭＣ  ｅｔ  ａｌ．  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  １９９２；２６７：  １１９６８−１１９７１；Ａｌｌａｉｎ  ＦＣ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｓ  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ｂ  ｔｏ  ｔｒｉｇｇｅｒ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｔｏ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ２００２；９９：  ２７１４−２７１９）。さらに、ＣｙＰ−Ａは、インビボで注射されたとき、白血球の流入を特徴とする急速な炎症反応を誘導し得る（Ｓｈｅｒｒｙ  ＢＮ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  ａｓ  ａ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｏｆ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １９９２；８９：  ３５１１−３５１５）。ＣｙＰ−Ａは、細胞内に遍在して分布しているが、炎症反応の過程で、ＣｙＰ−Ａは、生細胞と死細胞の両方によって細胞外組織空間に放出される（Ｓｈｅｒｒｙ，１９９２）。実際、高水準のＣｙＰ−Ａが、敗血症、関節リウマチおよび血管平滑筋細胞疾患を含む、幾つかの異なる炎症性疾患において報告されている（Ｊｉｎ  ＺＧ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ  ｉｓ  ａ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ．  Ｃｉｒｃ．  Ｒｅｓ．  ２０００；８７：  ７８９−７９６；Ｔｅｇｅｒ，  １９９７；Ｂｉｌｌｉｃｈ，  １９９７）。関節リウマチの場合、関節リウマチ患者の滑液におけるＣｙＰ−Ａ水準と好中球数の間の直接的相関性が報告されている（Ｂｉｌｌｉｃｈ，１９９７）。
【００１６】
癌
ＣｙＰ−Ａは、小細胞および非小細胞肺癌、膀胱癌、肝細胞癌、膵臓癌ならびに乳癌を含むがこれらに限定されない、多くの癌組織および細胞株において過剰発現されることが近年証明された（Ｌｉ，  ２００６；Ｙａｎｇ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ  ｉｓ  ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ＥＲＫ１／２  ｓｉｇｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２００７；３６１：  ７６３−７６７；Ｃａｍｐａ，  ２００３）。外因性ＣｙＰ−Ａが供給されると、癌細胞の成長が刺激され（Ｌｉ，２００６；Ｙａｎｇ，２００７）、一方、ＣｓＡは成長を阻止する（Ｃａｍｐａ，２００３）。ごく最近では、ＣｙＰ（ＡおよびＢ）は、ヒト乳癌細胞を成長させる生化学経路に複雑に関与すること、およびＣｙＰノックダウン実験は、癌細胞成長、増殖および運動性を低下させることが立証された（Ｆａｎｇ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ｂ  ｉｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  Ｉｍｐｌｉｃａｔｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２００９；１７４（１）：  ２９７−３０８；Ｚｈｅｎｇ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｌｙｌ  Ｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｊａｎｕｓ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｋｉｎａｓｅ  ２  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００８；６８（１９）：  ７７６９−７７７８）。最も興味深いこととして、乳癌細胞を異種移植したマウスのＣｓＡ治療は、腫瘍壊死を誘導し、転移を完全に阻害した（Ｚｈｅｎｇ，２００８）。この研究者らは、「シクロフィリンＢ作用は、ヒト乳癌の病理発生に有意に寄与し得る」および「シクロフィリン阻害は、ヒト乳癌の治療における新規治療戦略になり得る」という結論を下している（Ｆａｎｇ，２００９；Ｚｈｅｎｇ，２００８）。
【００１７】
Ｃ型肝炎
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、世界中で最も流行している肝臓病であり、世界保健機構により流行病と見なされている。ＨＶＣは、発見される前に何十年間も患者を感染させる場合があるので、「静かな」流行病と呼ばれることが多い。調査は、世界中で２億人を超える人がＨＣＶに感染していること、世界人口の約３．３％の全体発生率を示唆している。米国だけでもほぼ４００万人がＨＣＶに感染しているまたはしたことがあり、これらのうちの２７０万人が進行中の慢性感染症を有する。すべてのＨＣＶ感染個体が、生命を脅かす重篤肝疾患を発症するリスクを有する。慢性Ｃ型肝炎の現行の標準的な療法は、どちらも一般化された抗ウイルス剤である、リバビリンと組み合わせたペグインターフェロンの併用からなる（Ｃｒａｘｉ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｒｉｂａｖｉｒｉｎ．  Ｓｅｍｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ  ２００３；２３（Ｓｕｐｐｌ  １）：  ３５−４６）。この治療についての失敗率はおよそ５０％である（Ｍｏｌｉｎｏ  ＢＦ．  Ｓｔｒａｔｅｇｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ：  ３ｒｄ  ａｎｎｕａｌ  ｖｉｒａｌ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ｄｒｕｇ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｗｏｒｌｄ  ｓｕｍｍｉｔ  ２００７．  ＡＭＲＩ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ１２（１））。
【００１８】
ＣｙＰ−Ｂは、ＨＣＶゲノムの効率的複製に不可欠であることが、最近、立証された（Ｗａｔａｓｈｉ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ｂ  Ｉｓ  ａ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  ２００５，  １９：  １１１−１２２）。ウイルスは、その効率的ゲノム複製については、ＣｙＰ−Ｂなどの宿主由来因子に依存する。ＣｙＰ−Ｂは、ＨＣＶ  ＲＮＡポリメラーゼＮＳ５Ｂと相互作用して、そのＲＮＡ結合活性を直接刺激する。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）によって仲介される内因性ＣｙＰ−Ｂ発現の低下も、ＣｙＰ−ＢへのＮＳ５Ｂの結合の誘導喪失も、ＨＣＶ複製水準を低下させる。したがって、ＣｙＰ−Ｂは、ＨＣＶ複製機構においてＮＳ５Ｂの刺激調節因子として機能する。ウイルス複製に対するこの調節メカニズムにより、ＣｙＰ−Ｂは、抗ウイルス療法戦略の標的として特定される。
【００１９】
他のＨＣＶ治療とは異なり、ＣｙＰの阻害は、ＨＣＶウイルスを直接標的にしない。したがって、ＣｙＰ結合薬に対する耐性が現行のＨＣＶ治療薬より遅く発生すると考えられる（Ｍａｎｎｓ  ＭＰ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ｗａｙ  ｆｏｒｗａｒｄ  ｉｎ  ＨＣＶ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−ｆｉｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｒｉｇｈｔ  ｐａｔｈ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２００７；６：  ９９１−１０００）。さらに、宿主−ウイルス相互作用水準での干渉により、ＣｙＰ阻害は、インターフェロンに基づく治療に対してばかりでなく、プロテアーゼおよびポリメラーゼ阻害剤などのＨＣＶ複製酵素を直接標的にする将来の治療に対しても相補的であり得る、抗ＨＣＶ治療への新規手法の道を開くことができる（Ｆｌｉｓｉａｋ  Ｒ，  Ｄｕｍｏｎｔ  ＪＭ，  Ｃｒａｂｂｅ  Ｒ．  Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ  ２００７，  １６（９）：  １３４５−１３５４）。適切な実験ＨＣＶモデルがないことが、ＨＣＶウイルス複製に作用する新規抗ＨＣＶ薬の開発を著しく妨げてきた。この障害は、幾つかの適切な細胞培養モデル（サブゲノムＨＣＶレプリコンシステム）およびヒト肝臓細胞を含有するマウスモデルの開発により、つい最近克服された（Ｇｏｔｏ  Ｋ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，  ＣｓＡ，  ａｎｄ  ＮＩＭ８１１．  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ  ２００６；３４３：  ８７９−８８４Ｍｅｒｃｅｒ  ＤＦ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｈｕｍａｎ  ｌｉｖｅｒｓ．  Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２００１；７：  ９２７−９３３）。シクロスポリンは、最近、スクリーニングモデルおよび小規模臨床試験において抗ＨＣＶ活性を実証した（Ｗａｔａｓｈｉ  Ｋ，  ｅｔ  ａｌ．  ＣｓＡ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｇｅｎｏｍｅ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ．  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２００３；３８：１２８２−１２８８；Ｉｎｏｕｅ  Ｋ，  Ｙｏｓｈｉｂａ  Ｍ．  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｓ  ａｎ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｃｏｕｎｔｅｒｍｅａｓｕｒｅ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｉｎ  ｌｉｖｅｒ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｅｎｄ−ｓｔａｇｅ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ  ２００５；３７：１２３３−１２３４）。
【００２０】
筋肉変性障害
ＣｙＰ−Ｄは、すべての細胞においてミトコンドリア膜透過性遷移孔（ＭＴＰ）の不可欠部分である。ＭＴＰ孔の機能は、細胞内のカルシウムホメオスタシスをもたらすことである。正常状態では、ＭＴＰ孔の開閉は可逆的である。細胞への過剰なカルシウム流入を伴う病的状態では、これは、ミトコンドリアに過剰な負荷をかけ、ＭＰＴ孔の不可逆的開口を誘導して、細胞死またはアポトーシスをもたらす。ＣｓＡは、ウルリッヒ型先天性筋ジストロフィーおよびベスレム（Ｂｅｔｈｌａｍ）筋疾患にかかった患者においてミトコンドリア機能不全および筋アポトーシスを治すと報告されている［（Ｍｅｒｌｉｎｉ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．ＣｓＡ  ｃｏｒｒｅｃｔｓ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｕｓｃｌｅ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ＶＩ  ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ．ＰＮＡＳ  ２００８；１０５（１３）：５２２５−５２２９］。ＣｓＡは、単離された心臓ミトコンドリアにおいてＭＴＰ開口を用量依存的に阻害し、それによってアポトーシスを防止し、細胞に修復のための貴重な時間を与えることが、インビトロで立証されている（Ｇｏｍｅｚ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２００７，  ２９３：  Ｈ１６５４−Ｈ１６６１）。急性心筋梗塞が生じた５８人の患者における臨床研究により、再灌流時のＣｓＡの投与は、プラセボで見られるものより小さい梗塞を伴うことが立証された（Ｐｉｏｔ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  ｏｎ  Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  Ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００８；３９５（５）：  ４７４−４８１））。
【００２１】
慢性神経変性疾患
ＣｓＡは、脳外傷の結果としての、急性脳虚血および損傷の症例において、神経保護剤として作用することができる（Ｋｅｅｐ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ  ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  ｐｒｏｌｏｎｇｓ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｌａｔｅ−ｓｔａｇｅ  ＡＬＳ  ｍｉｃｅ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００１；８９４：３２７−３３１）。ＣｓＡで治療した動物は、治療がないときのわずか１０％の生存率に比べて劇的な８０％の生存率を示した。これは、主として、ミトコンドリアＣｙＰ−ＤへのＣｓＡの結合の結果であることが、後に確証された。その後、ＣｓＡの有用性が慢性神経変性に及ぶことが確証され、その後、ルー・ゲーリッグ（Ｇｅｒｈｉｇ’ｓ）病（ＡＬＳ）のラットモデルにおいても立証され（米国特許第５，９７２，９２４号明細書）、この場合、ＣｓＡ治療は残りの寿命を倍より多く増加させた。ＣｙＰ−ＤノックアウトマウスにおけるＣｙＰ−Ｄ不活性化が、実験的自己免疫性脳脊髄炎の軸索、多発性硬化症の動物モデルを保護することも、最近、証明された（Ｆｏｒｔｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ｄ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ａｘｏｎｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ，ａｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．ＰＮＡＳ  ２００７；１０４（１８）：７５５８−７５６３）。アルツハイマー病マウスモデルにおいて、ＣｙＰ−Ｄ欠乏は、学習、記憶およびシナプス機能を実質的に向上させる（Ｄｕ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ｄ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００８，１４（１０）：１０９７−１１０５）。さらに、ＣｓＡは、ハンチントン病のラットモデルにおいて有効であること（Ｌｅｖｅｎｔｈａｌ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．ＣｓＡ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｓｔｒｉａｔａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｆｒｏｍ  ３−ｎｉｔｒｏｐｒｏｐｉｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ２０００，４２５（４）：４７１−４７８）、およびパーキンソン病のマウスモデルにおいて部分的に有効であること（Ｍａｔｓｕｕｒａ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．ＣｓＡ  ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ６−ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｂｒａｉｎ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９６，７３３（１）：１０１−１０４）が証明されている。したがって、ミトコンドリア依存性壊死は、ＣｙＰ−Ｄの阻害がこれらの疾病のための新たな薬理学的治療戦略をもたらし得ることを示唆する顕著な疾病メカニズムの代表である（Ｄｕ，２００８）。
【００２２】
細胞内カルシウムイオン（Ｃａ２＋）ホメオスタシスの喪失に起因する細胞、組織および臓器傷害
Ｃａ２＋は、健常ミトコンドリア機能を含む、細胞水準での多数の生理プロセスに関与する。心筋梗塞、卒中、急性肝毒性、胆汁鬱滞、および移植臓器の保存／再灌流傷害などの一定の病的状態では、ミトコンドリアは、カルシウムの水準を調節する能力を喪失し、ミトコンドリアのマトリックス内の過剰なカルシウム蓄積がミトコンドリア内膜に大きな孔を開ける結果となる。（Ｒａｓｏｌａ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｐｏｒｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  ｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ２００７，１２：８１５−８３３）。その孔を通る１．５キロダルトンまでのイオンおよび分子の非選択的コンダクタンス、ミトコンドリア膜透過性遷移と呼ばれるプロセスは、ミトコンドリアの膨潤、および最後は細胞死となる他の事象（アポトーシスの誘導を含む）をもたらす。ＭＴＰの構成要素の１つがＣｙＰ−Ｄである。ＣｙＰ−Ｄは、イムノフィリン分子であって、そのイソメラーゼ活性はＭＰＴＰの開口を調節し、ＣｓＡまたはＣｓＡ類似体によるイソメラーゼ活性の阻害は、ＭＰＴＰの生成を阻害し、それにより、細胞死を防止する。
【００２３】
非免疫抑制性シクロスポリン類似体シクロフィリン阻害剤
上で述べた適応症におけるＣｓＡの有利な効果にもかかわらず、臨床実践では免疫抑制の付随効果がＣｙＰ阻害剤としてのＣｓＡの有用性を制限する。現在、免疫抑制活性をほとんど有しないまたは低減された免疫抑制活性を有し（すなわち、ＣｓＡの免疫抑制（ｉｍｍｕｎｏｓｐｐｒｅｓｓｉｖｅ）効力の<１０％）、なおＣｙＰに結合する能力（すなわち、ＣｓＡと比較して>１０％のＣｙＰ結合能力）を保持することが証明されているＣｓＡ類似体はほんの少数しかない。
【００２４】
ＮＩＭ  ８１１（Ｍｅｌｌｅ４−シクロスポリン）
ＮＩＭ  ８１１は、アミノ酸４が修飾された、真菌トリポクラディウム・ニウェウム（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ  ｎｉｖｅｕｍ）の発酵産生物であり、（カルシニューリン結合を欠くため）免疫抑制活性を示さないが、ＣｙＰ−Ａに対する結合親和性を保持する（Ｒｏｓｅｎｗｉｒｔｈ  ＢＡ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｂｙ  ＳＤＺ  ＮＩＭ  ８１１，ａ  ｎｏｎｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  Ａｎａｌｏｇｕｅ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  １９９４，３８：１７６３−１７７２）。
【００２５】
ＤＥＢＩＯ  ０２５（ＭｅＡｌａ３ＥｔＶａｌ４−シクロスポリン）
ＤＥＢＩＯ  ０２５は、ＣｓＡのアミノ酸３および４での二重化学修飾体である。ＤＥＢＩＯ  ０２５も免疫抑制活性を示さないが、ＣｙＰ−Ａ  ＰＰＩａｓｅ活性を保持する（Ｋｒｉｓｔａｌ，２００４）。
【００２６】
ＳＣＹ−６３５（ジメチルアミノエチルチオＳａｒ３−ヒドロキシＬｅｕ４−シクロスポリン）
ＳＣＹ−６３５は、ＣｓＡのアミノ酸３および４での二重化学修飾体である。ＳＣＹ−６３５も免疫抑制活性を示さないが、ＣｙＰ−Ａ  ＰＰＩａｓｅ活性を保持する（国際出願公開ＷＯ２００６／０３９６６８号パンフレット）。
【００２７】
一般に、これらの化合物は、カルシニューリンへの結合を担うＣｓＡの面に対する修飾を有し、一般にはアミノ酸３および４の修飾を必要とする。アミノ酸３および４の修飾は、骨の折れる複雑なものである。この手法は、シクロスポリン環を開環する工程と、そのアミノ酸を置換および／または修飾する工程と、その後、その環を閉環して修飾シクロスポリンを生じさせる工程とを必要とするからである。
【００２８】
対照的に、アミノ酸１の側鎖の修飾は、シクロスポリン環の開環を必要としない。しかし、アミノ酸１は、（カルシニューリン結合に対して）ＣｙＰ結合に関係しており、ＣｓＡの免疫抑制効率を増加させるために修飾されてきた。例えば、米国特許第６，６０５，５９３号明細書には、免疫抑制効力が増加されたＣｓＡ類似体を結果として生じるアミノ酸１の単一修飾が開示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２９】
したがって、容易に合成され、ＣｙＰ仲介性疾患の治療において効果的であるシクロスポリン類似体分子（「ＣＡＭ」）を有することが望ましい。また、生来のＣｓＡの機能の少なくとも幾らかを与えるが、生来のＣｓＡと比較して、改善されたもしくは追加の特性、効果または機能を有するＣｓＡ類似体を提供することが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００３０】
一態様によると、本発明の化合物は、本明細書に定義による非免疫抑制薬である、サイクロスポリンＡ類似体を含む。別の態様によると、本化合物は、シクロフィリン−Ａを含むシクロフィリンに対して親和性を有する。他の態様によると、本発明の化合物は、シクロフィリン仲介性疾患または症状に関して有用で、そのような疾患および症状に関して治療を発展させているシクロスポリン−Ａ類似体を含む。
【００３１】
一態様によると、本発明は式Ｌ：
【化１】
2014505035.tif 000001
【００３２】
の化合物に関する
［式中、
ａ．Ｒ’はＨまたはアセチルであり；
ｂ．Ｒ１は、長さが炭素原子２から１５の飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族炭素鎖であり；
ｃ．Ｒ２は、
ｉ．Ｈ；
ｉｉ．非置換、Ｎ−置換、またはＮ，Ｎ−二置換アミド；
ｉｉｉ．Ｎ−置換または非置換のアシル保護アミン；
ｉｖ．カルボン酸；
ｖ．Ｎ−置換または非置換のアミン；
ｖｉ．ニトリル；
ｖｉｉ．エステル；
ｖｉｉｉ．ケトン；
ｉｘ．ヒドロキシ、ジヒドロキシ、トリヒドロキシ、またはポリヒドロキシアルキル；ならびに
ｘ．置換または非置換のアリール；
ｘｉ．水素、ケトン、ヒドロキシル、ニトリル、カルボン酸、エステル、１，３−ジオキソラン、ハロゲンおよびオキソからなる群から選択される置換基を場合によって含有する飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖；
ｘｉｉ．ハライド、エステルおよびニトロからなる群から選択される置換基を含有する芳香族基；ならびに
ｘｉｉｉ．（ｘｉ）の飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖と（ｘｉｉ）の芳香族基との組み合わせからなる群から選択され；ならびに
ｄ．Ｒ２３は、飽和または不飽和、直鎖または分岐の、置換されていてもよい脂肪族炭素鎖である。］。
【００３３】
一態様において、置換基Ｒ１−Ｒ２は以下からなる群から選択される：
【化２】
2014505035.tif 000002
2014505035.tif 000003
2014505035.tif 000004
2014505035.tif 000005
【００３４】
別の態様において、Ｒ２は以下からなる群から選択される。
【００３５】
【化３】
2014505035.tif 000006
2014505035.tif 000007
【００３６】
［式中、
ｉ．Ｒ５は、長さが１から１０の炭素の間の、飽和または不飽和の直鎖または分岐の脂肪族炭素鎖であり；
ｉｉ．Ｒ６は、モノヒドロキシル化、ジヒドロキシル化、トリヒドロキシル化またはポリヒドロキシル化された、長さが炭素１から１０の間の、飽和または不飽和の直鎖または分岐の脂肪族炭素鎖である。］。
【００３７】
一態様において、Ｒ１−Ｒ２は、水素、ケトン、ヒドロキシル、ニトリル、ハロゲン、オキソ、カルボン酸、エステルおよび１，３−ジオキソランからなる群から選択される置換基で置換されていてもよい炭素２から５の間の、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖を含む。
【００３８】
一態様において、Ｒ２３は以下からなる群から選択される。
【００３９】
【化４】
2014505035.tif 000008
【００４０】
一態様において、Ｒ２３は、置換されていてもよいＣ１−Ｃ３アルキルを含む置換されていてもよいアルキルを含む。前記アルキルはアミノで置換されていてもよく、Ｃ１−Ｃ３−Ａｌａを含み、前記化合物はＤエピマーを含む。前記実施形態において、Ｒ２３はＭｅＡｌａであってもよい。
【００４１】
一態様において、上記の式Ｌ
【化５】
2014505035.tif 000009
【００４２】
には、以下からなる群から選択される。
【００４３】
【化６】
2014505035.tif 000010
【００４４】
一態様において、Ｒ２３は、長さが炭素１から６、１から５、１から４、１から３または２の直鎖または分岐脂肪族炭素鎖である。
【００４５】
一態様において、本発明は、シクロフィリン仲介性疾患または傷害を治療する条件下での本明細書に記載される化合物の哺乳動物への投与、または前記疾患もしくは傷害を治療するための、前記化合物もしくは組成物の使用、または前記使用もしくは治療のための医薬を調製するための化合物の使用を含む、哺乳動物のシクロフィリン仲介性疾患を治療または予防する方法に関する。前記疾患または傷害は、シクロフィリンの過剰発現によって仲介されるか、またはこの疾患はシクロフィリンの先天性過剰発現である。前記シクロフィリン仲介性疾患または傷害は、
ａ．ウイルス感染症；
ｂ．炎症性疾患；
ｃ．癌；
ｄ．筋肉障害；
ｅ．神経障害；および
ｆ．虚血、再潅流、細胞内カルシウムホメオスタシスの喪失、イオンホメオスタシスの喪失、遊離ラジカル生成の増加、またはミトコンドリアの機能障害を誘発する毒素に関連した傷害からなる群から選択することができ；
ウイルス感染症は、ヒト免疫不全ウイルス、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、ＳＡＲＳ−ＣｏＶ、ｈＣｏＶ−ＮＬ６３、ｈＣｏＶ−ＨＫＵ−１、ｈＣｏＶ−ＯＣ４３、ｈＣＯＶ−２２９Ｅ、コロナウイルス、ネコ感染性腹膜炎ウイルス、および伝染性胃腸炎ウイルスからなる群から選択されるウイルスによって場合によって引き起こされ；
炎症性疾患は、喘息、自己免疫疾患、慢性炎症、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏性疾患、炎症性腸疾患、敗血症、血管平滑筋細胞疾患、動脈瘤、骨盤炎症性疾患、再灌流傷害、関節リウマチ、移植拒絶反応および脈管炎からなる群から選択され；
癌は、小細胞および非小細胞肺癌、膀胱癌、肝細胞癌、膵臓癌、乳癌、膠芽腫、結腸直腸癌、扁平上皮癌、黒色腫ならびに前立腺癌からなる群から場合によって選択され；
筋肉障害は、心筋再灌流傷害、筋ジストロフィー、ＶＩ型コラーゲン筋障害、心動停止後症候群（ＰＣＡＳ）、心不全、アテローム性動脈硬化症および腹部大動脈瘤からなる群から場合によって選択され；
神経障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、多系統萎縮症、多発性硬化症、脳性麻痺、癲癇、卒中、糖尿病性神経障害、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリッグ病）、双極性障害、興奮毒性損傷、肝性脳症、低血糖症、マンガン毒症、神経性標的喪失症、アラキドン（ａｒａｃｈａｄｏｎｉｃ）酸などの有毒脂肪酸症、機械的神経損傷、脊髄損傷および脳損傷からなる群から場合によって選択され；細胞のカルシウムホメオスタシスの喪失に関連した傷害は、心筋梗塞、卒中、急性肝毒性、胆汁鬱滞および移植器官の保存／再潅流傷害からなる群から場合によって選択される。
【００４６】
一態様において、本発明は、
１）適切な溶媒の存在下でシクロスポリン−Ａ（ＣｓＡ）を塩基性リチウムアルキルアミドと反応させ、続いて、適切な求電子試薬と反応させて式１：
【化７】
2014505035.tif 000011
【００４７】
の化合物を生成する工程と
２）適切な溶媒の存在下で式１の化合物をＡＣ２Ｏと反応させて式２Ａ：
【化８】
2014505035.tif 000012
【００４８】
の化合物を形成する工程と
３）式２Ａの化合物を酸化剤と反応させて式３Ａ：
【化９】
2014505035.tif 000013
【００４９】
の化合物を形成する工程と
４）式３Ａの化合物を求電子試薬と反応させて式４Ａ：
【化１０】
2014505035.tif 000014
【００５０】
の化合物を形成する工程と
５）式４Ａの化合物を場合によって脱アシル化する工程とを含む、上記の式Ｌの化合物を調製するプロセスに関する。
【００５１】
一態様において、式Ｌの上記調製は、前記溶媒中の過剰のＬｉＣｌを添加して、式ＬのＬエピマーを主に形成する工程を含むか、または、式Ｌの前記調製は、ＬｉＣｌのない状態で実行して式ＬのＤエピマーを主に形成する。前記塩基性リチウムアルキルアミドは、リチウムジイソプロピルアミド（ｄｉｉｓｐｒｏｐｙｌａｍｉｄｅ）を含むことができる。
【００５２】
一態様において、前記求電子試薬は、以下の表に定義される群から選択され、前記表に規定された対応するＲ２３を生成する。
【００５３】
【表１】
2014505035.tif 000015
【００５４】
一態様において、本発明は、本明細書に定義される式Ｌを調製する方法であって、
１）適切な溶媒の存在下で式１Ａの化合物をジメチルアミノピリジン（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｉｄｉｎｅ）と反応させて式２の化合物を形成する工程と：
【化１１】
2014505035.tif 000016
【００５５】
場合によって続いて式３：
【化１２】
2014505035.tif 000017
【００５６】
のアルデヒドを形成し、
場合によって続いてウィッティヒ反応によって式Ｌの化合物を生成する工程とを含み、Ｒ２３は、
【化１３】
2014505035.tif 000018
【００５７】
からなる群から選択される方法に関する。
【００５８】
一態様において、本発明は、本明細書に定義される式Ｌの調製であって、好適な溶媒中の適切な求電子試薬の存在下でリチウムジイソプロピルアミド（ｄｉｉｓｐｒｏｐｙｌａｍｉｄｅ）を場合によって含む塩基性リチウムアルキルアミドと式５の化合物を反応させて式Ｌの化合物を形成する工程を含み、Ｒ２３は置換されていてもよいＣ１−Ｃ３アルキルを含む、式Ｌの調製に関する。
【００５９】
【化１４】
2014505035.tif 000019
【００６０】
一般に、本文書に開示されるすべての化学式について、
「カルボン酸」は、カルボン酸部分が以下の置換基の１つに連結されている基を含む：
１．置換されていてもよいアルキル（例えば、炭素２から１５のアルキル）；
２．置換されていてもよいアルケニル（例えば、炭素２から１５のアルケニル）；および
３．置換されていてもよいアルキニル（例えば、炭素２から１５のアルキニル）。
【００６１】
上記の置換基としては、ハロゲン（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素など）、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、置換されていてもよいチオール（例えば、チオール、Ｃ１−４アルキルチオなど）、置換されていてもよいアミノ（例えば、アミノ、モノ−Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ−Ｃ１−４アルキルアミノ、五〜六員環式アミノ、例えばテトラヒドロピロール、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリン、ピロール、イミダゾールなど）、ハロゲン化されていてもよいＣ１−４アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシなど）、ハロゲン化されていてもよいＣ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルコキシ（例えば、メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、エトキシエトキシ、トリフルオロメトキシエトキシ、トリフルオロエトキシエトキシなど）、ホルミル、Ｃ２−４アルカノイル（例えば、アセチル、プロピオニルなど）、Ｃ１−４アルキルスルホニル（例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニルなど）などを挙げることができ、および前記置換基の数は、好ましくは１から３である。
【００６２】
さらに、上の「置換されていてもよいアミノ」の置換基は、互いに結合して、環式アミノ基（例えば、置換基を窒素原子などに結合させることができるように五〜六員環の環構成窒素原子から水素原子を取り去ることにより形成される基、例えばテトラヒドロピロール、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリン、ピロール、イミダゾールなど）を形成してもよい。環式アミノ基は置換されていてもよく、その置換基の例としては、ハロゲン（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素など）、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、置換されていてもよいチオール（例えば、チオール、Ｃ１−４アルキルチオなど）、置換されていてもよいアミノ（例えば、アミノ、モノ−Ｃ．置換１−４アルキルアミノ、ジ−Ｃ１−４アルキルアミノ、五〜六員環式アミノ、例えば、テトラヒドロピロール、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリン、ピロール、イミダゾールなど）、エステル化またはアミド化されていてもよいカルボキシル（例えば、カルボキシル、Ｃ１−４アルコキシ−カルボニル、カルバモイル、モノ−Ｃ１−４アルキル−カルバモイル、ジ−Ｃ１−４アルキル−カルバモイルなど）、ハロゲン化されていてもよいＣ１−４アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシなど）、ハロゲン化されていてもよいＣ１−４アルコキシ−Ｃ置換１−４アルコキシ（例えば、メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、エトキシエトキシ、トリフルオロメトキシエトキシ、トリフルオロエトキシエトキシなど）、ホルミル、Ｃ２−４アルカノイル（例えば、アセチル、プロピオニルなど）、Ｃ１−４アルキルスルホニル（例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニル）などが挙げられ、置換基の数は好ましくは１から３である。
【００６３】
「アミン」は、非置換であってもよい基、またはアミン部分が、
１．置換されていてもよいアルキル基（例えば、炭素２から１５のアルキル）、
２．置換されていてもよいアルケニル（例えば、炭素２から１５のアルケニル）、
３．置換されていてもよいアルキニル（例えば、炭素２から１５のアルキニル）、
４．置換されていてもよいホルミルもしくはアシル（例えば、炭素２から４のアルカノイル（例えば、アセチル、プロピニル、ブチリル、イソブチリルなど）、炭素１から４のアルキルスルホニル（例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニルなど）など）、
５．置換されていてもよいアリール（例えば、フェニル、ナフチルなど）など
から独立して選択することができる１個もしくは２個の置換基でＮ−置換もしくはＮ，Ｎ二置換され、上で「カルボン酸」について定義したような置換基から独立して選択される置換基に連結されている基を含む。
【００６４】
「アミド」は、アミド部分のカルボン酸基が、上で「カルボン酸」について定義したような置換基から独立して選択される置換基に連結され、
１．置換されていてもよいアルキル基（例えば、炭素２から１５のアルキル）、
２．置換されていてもよいアルケニル（例えば、炭素２から１５のアルケニル）、
３．置換されていてもよいアルキニル（例えば、炭素２から１５のアルキニル）、
４．置換されていてもよいホルミルもしくはアシル（例えば、炭素２から４のアルカノイル（例えば、アセチル、プロピニル、ブチリル、イソブチリルなど）、炭素１から４のアルキルスルホニル（例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニルなど）など）、
５．置換されていてもよいアリール（例えば、フェニル、ナフチルなど）など
からそれぞれ独立して選択することができる１個または２個の置換基でＮ−置換またはＮ，Ｎ二置換されたアミド部分のアミノ基に連結している化合物を含む。
【００６５】
「アリール」は、単環式または縮合多環式芳香族炭化水素基によって例示することができ、例えば、Ｃ６−１４アリール基、例えばフェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリルまたはアセナフチレニルなどが好ましく、フェニルが好ましい。前記アリールは、１個もしくは複数の置換基、例えば、低級アルコキシ（例えば、Ｃ１−６アルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシまたはプロポキシなど）、ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素など）、低級アルキル（例えば、Ｃ１−６アルキル、例えば、メチル、エチルまたはプロピルなど）、低級アルケニル（例えば、Ｃ２−６アルケニル、例えば、ビニルもしくはアリールなど）、低級アルキニル（例えば、Ｃ２−６アルキニル、例えば、エチニルまたはプロパルギルなど）、置換されていてもよいアミノ、置換されていてもよいヒドロキシル、シアノ、置換されていてもよいアミジノ、カルボキシル、低級アルコキシカルボニル（例えば、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、例えば、メトキシカルボニルまたはエトキシカルボニルなど）、置換されていてもよいカルバモイル（例えば、五〜六員の芳香族単環式複素環式基（例えば、ピリジルなど）で置換されていてもよいＣ１−６アルキルもしくはアシル（例えば、ホルミル、Ｃ２−６アルカノイル、ベンゾイル、ハロゲン化されていてもよいＣ１−６アルコキシカルボニル、ハロゲン化されていてもよいＣ１−６アルキルスルホニル、ベンゼンスルホニルなど）、１−アゼチジニルカルボニル、１−ピロリジニルカルボニル、ピペリジノカルボニル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカルボニル（この硫黄原子は酸化されていてもよい）、１−ピペラジニルカルボニルなどで置換されていてもよいカルバモイル）などで置換されていてもよい。これらの置換基はいずれも、１から３の置換可能な位置で独立して置換されていてもよい。
【００６６】
「ケトン」は、ケトン部分のカルボニル基が、前記「カルボン酸」について上で定義したような置換基から独立して選択される１または２個の置換基に連結されている化合物を含む。
【００６７】
「エステル」は、エステル基が、「カルボン酸」または「アリール」について定義したような置換基から独立して選択される１または２個の置換基で構成されるカルボン酸エステルまたはアルコールエステルのいずれかを含む。
【００６８】
「アルキル」は、他に定義されない限り、好ましくは、長さが炭素単位１から１５のアルキルである。
【００６９】
「芳香族基」は、上で定義した通りのアリール、または五〜六員の芳香族単環式複素環式環、例えば、フリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、フラザニル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニルなど；および八〜十六員（好ましくは、十〜十二員）の芳香族縮合複素環式基によって例示することができる。
【００７０】
「非免疫抑制性」は、細胞培養でのヒトリンパ球の増殖を阻害する化合物の能力によって測定して、好ましくは、下記の実施例１９に述べる方法によって測定して、ＣｓＡと比較して実質的に低減された免疫系抑制水準を示す化合物の能力を指す。
【００７１】
「類似体」は、１個または複数の官能基がＣｓＡと異なる、ＣｓＡの構造類似体を意味する。好ましくは、そのような類似体は、ＣｙＰに結合するＣｓＡの能力の少なくともかなりの部分を保持する。
【００７２】
式Ｉの好ましい化学種は、Ｒ’がＨであり、Ｒ１が、炭素２から１５の間の長さの飽和または不飽和アルキルであり、Ｒ２が、
１．カルボキシル基を含むカルボン酸；
２．置換基が、Ｈ、炭素１から７の間の長さのアルキルから独立して選択され、または前記置換基が、Ｏ、ＮもしくはＳから選択される複素環式環を形成するＮ−置換またはＮ，Ｎ−二置換アミド；
３．炭素１から７の間の長さのエステル；
４．炭素１から７の間の長さのモノヒドロキシル化またはジヒドロキシル化アルキル；
５．炭素１から７の間の長さのＮ−置換または非置換アシル保護アミン；
６．ニトリル；
７．ケトンであって、そのケトンのカルボキシル基がＲ１および炭素１と７の間の長さの飽和または不飽和アルキル鎖に連結されているケトン；
８．二酸化窒素、フッ素、アミン、エステルまたはカルボキシル基
から独立して選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよいフェニルから選択される。
【００７３】
本発明の化合物は、光学活性化合物の形態で存在してもよい。本発明は、上の式の範囲内の光学活性化合物のすべての鏡像異性体を、個々にも、ラセミ体の混合物ででも、包含する。その上、本発明は、本明細書に定義される化合物のプロドラッグを含む。
【００７４】
別の態様によると、本発明の化合物は、哺乳動物、好ましくはヒトにおけるＣｙＰ仲介性疾患の治療または予防または研究に有用であり得る。そのような疾患は、通常、ＣｙＰの先天性過剰発現などのＣｙＰの過剰発現によって仲介される。
【００７５】
本発明の化合物によって治療することができるＣｙＰ仲介性疾患としては、
ａ．ウイルス感染症；
ｂ．炎症性疾患；
ｃ．癌；
ｄ．筋肉変性障害；
ｅ．神経変性障害；および
ｆ．細胞内カルシウムホメオスタシスの喪失に関連した傷害が挙げられる。
【００７６】
前記ウイルス感染症は、ヒト免疫不全ウイルス、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎およびＥ型肝炎からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる。前記炎症性疾患は、喘息、自己免疫疾患、慢性炎症、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏性疾患、炎症性腸疾患、敗血症、血管平滑筋細胞疾患、動脈瘤、骨盤内感染症、再灌流傷害、関節リウマチ、移植拒絶反応、および脈管炎からなる群から選択される。前記癌は、小細胞および非小細胞肺癌、膀胱癌、肝細胞癌、膵臓癌ならびに乳癌からなる群から選択することができる。前記筋肉変性障害は、心筋再灌流傷害、筋ジストロフィー、およびＶＩ型コラーゲンミオパチーからなる群から選択することができる。前記神経変性障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、多系統萎縮症、多発性硬化症、脳性麻痺、発作、糖尿病性神経障害、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリッグ病）、脊髄損傷、および脳損傷からなる群から選択することができる。前記細胞内カルシウムホメオスタシスの喪失に関連した傷害は、心筋梗塞、発作、急性肝毒性、胆汁鬱滞および移植臓器の保存／再灌流傷害からなる群から選択することができる。
【発明を実施するための形態】
【００７７】
一態様によると、本発明の化合物は、その必要がある温血動物にニートでまたは医薬担体と共に投与することができる。医薬担体は、固体でも液体であってもよい。本化合物は、従来の無毒性で薬学的に許容される担体、アジュバントおよびビヒクルを含有する投薬単位調合物で、経口的に、局所的に、非経口的に、吸入スプレーにより、または直腸内に投与することができる。非経口という用語は、本明細書において用いる場合、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射または注入技法を含む。
【００７８】
本発明の混合物を含有する医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性もしくは油性懸濁剤、分散性粉末もしくは顆粒、乳剤、硬質もしくは軟質カプセル剤、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤のような、経口使用に適する形態であってもよい。経口使用に意図される組成物は、医薬組成物の製造についての当分野において公知の方法に従って調製することができ、そのような組成物は、薬学的に上品で味のよい製剤を提供するために、甘味剤、着香剤、着色剤および保存剤からなる群から選択される１種または複数の薬剤を含有してもよい。無毒性で薬学的に許容される賦形剤と混合した活性成分を含有する錠剤も、公知の方法によって製造することができる。使用される賦形剤は、例えば、（１）不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；（２）造粒剤および崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプンまたはアルギン酸；（３）結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム；ならびに（４）滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであってもよい。錠剤は被覆されなくてもよく、または胃腸管内での崩壊および吸収を遅らせ、それによって長期間にわたって持続作用をもたらすために公知の技術により被覆されてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を利用することができる。錠剤はまた、米国特許第４，２５６，１０８号明細書、同第４，１６０，４５２号明細書、および同第４，２６５，８７４号明細書に記載されている技術によって被覆して、制御放出用の浸透圧治療錠を形成することもできる。
【００７９】
幾つかの事例において、経口使用のための調合物は、硬質ゼラチンカプセルの形態であってもよく、この場合、活性成分は、不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合される。それらは、軟質ゼラチンカプセルの形態であることもあり、この場合、活性成分は、水または油性媒質、例えば、ピーナッツ油、液状パラフィンもしくはオリーブ油と混合される。
【００８０】
水性懸濁剤は、通常、水性懸濁剤の製造に適する賦形剤と混合して活性材料を含有する。そのような賦形剤としては、（１）懸濁化剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアラビアゴム、または（２）分散剤もしくは湿潤剤（天然に存在するリン脂質、例えばレシチン、アルキレンオキシドと脂肪酸の縮合生成物、例えばステアリン酸ポリオキシエチレン、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合生成物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、エチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合生成物、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール、もしくはエチレンオキシドと、脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合生成物、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンであってもよい）を挙げることができる。
【００８１】
水性懸濁剤は、１種または複数の保存薬、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｎ−プロピル；１種または複数の着色剤；１種または複数の着香剤；および１種または複数の甘味剤、例えば、スクロース、アスパルテームまたはサッカリンも含有してもよい。
【００８２】
油性懸濁剤は、植物油、例えばラッカセイ油、オリーブ油、ごま油もしくはココナッツ油、オメガ３脂肪酸を含有する魚油、または鉱物油、例えば液状パラフィンに活性成分を懸濁させることによって調合することができる。油性懸濁剤は、増粘剤、例えば、蜜蝋、硬質パラフィンまたはセチルアルコールを含有してもよい。味のよい経口製剤を提供するために甘味剤および着香剤が添加されてもよい。アスコルビン酸などの抗酸化物質の添加により、これらの組成物を保存することができる。
【００８３】
分散性粉末および顆粒は、水性懸濁剤の調製に適する。これらは活性成分を、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤、および１種もしくは複数の保存薬との混合物で提供する。適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤は、上で既に述べたものによって例示される。追加の賦形剤、例えば、上で記載した甘味、着香剤および着色剤もまた存在してもよい。
【００８４】
本発明の混合物を含有する医薬組成物はまた、水中油乳剤の形態であってもよい。油相は、植物油、例えばオリーブ油もしくはラッカセイ油、または鉱物油、例えば液状パラフィン、またはその混合物であってもよい。適切な乳化剤は、（１）天然に存在するゴム、例えば、アラビアゴムおよびトラガカントゴム、（２）天然に存在するリン脂質、例えば、大豆およびレシチン、（３）脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導されたエステルまたは部分エステル３０、例えば、モノオレイン酸ソルビタン、（４）前記部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物、例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンであってもよい。乳剤は、甘味剤および着香剤も含有してもよい。
【００８５】
シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、アスパルテームまたはスクロースを用いて調合してもよい。そのような調合物は、粘滑薬、保存薬、ならびに着香剤および着色剤も含有してもよい。
【００８６】
医薬組成物は、滅菌注射用の水性または油性懸濁剤の形態であってもよい。この懸濁剤は、上で述べた適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知の方法に従って調合することができる。滅菌注射用製剤はまた、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液のような、無毒性で非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用の溶液または懸濁剤であってもよい。利用することができる許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、リンゲル溶液および等張塩化ナトリウム溶液などがある。加えて、滅菌固定油が、従来、溶媒または懸濁化媒質として利用されている。このために、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無菌固定油を利用することができる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸が注射剤の調製に使用されている。
【００８７】
本発明の化合物を薬物の直腸内投与のために坐剤の形態で投与することもできる。適切な組成物は、化合物を、常温で固体であるが直腸温度では液体であり、そのため直腸内で融解して薬物を放出する適切な無刺激賦形剤と混合することによって調製することができる。そのような材料はカカオ脂およびポリエチレングリコールである。
【００８８】
局所使用のために、通常、シクロスポリンとともに使用される適切なクリーム剤、軟膏、ゼリー剤、液剤または懸濁剤などが用いられてもよい。
【００８９】
特に好ましい実施形態において、非活性成分として界面活性剤、エタノール、親油性および／または両親媒性溶媒を含有する溶液が使用される。具体的には、異性体類似体の混合物と非医療成分：ｄ−アルファトコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシナート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）油、Ｔｗｅｅｎ  ４０およびエタノールとを含有する経口複合乳剤調合物が使用される。経口溶液として化合物および同じ非医療成分とを含有する軟質ゼラチンカプセル（ゼラチン、グリセリン、水およびソルビトールを含む）も、好ましく使用することができる。
【００９０】
しかし、特定の患者のための具体的な用量水準は、利用する具体的な化合物の活性、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与回数、投与経路、排泄率、薬の組み合わせ、ならびに治療を受ける特定の疾患または症状の性質および重症度を含む様々な要因に依存し得る。
【００９１】
方法論
下で述べる反応は、ＣｓＡのアミノ酸１残基（ＡＡ１）およびアミノ酸３残基（ＡＡ３）で修飾される所望の化合物を合成することができる化学反応の一般的な例である。ＡＡ１への修飾は、
【化１５】
2014505035.tif 000020
【００９２】
と表現され、ＡＡ３への修飾は
【化１６】
2014505035.tif 000021
【００９３】
と表現され、ＡＡ１およびＡＡ３への修飾はどちらも、必要な化学的性質を有する試薬を使用する。当業者には、特定の反応体の置換を行うことができることは理解されよう。
【００９４】
調製した化合物の素性および純度を、一般に、質量分析法、ＨＰＬＣおよびＮＭＲ分光分析法を含む方法論によって確証した。質量スペクトル（ＥＳＩ−ＭＳ）は、ヒューレット・パッカード１１００  ＭＤＳシステムで測定した。ＮＭＲスペクトルは、バリアンＭｅｒｃｕｒｙＰｌｕｓ  ４００ＭＨｚ分光計を使用して、重水素化溶媒（ホスホニウム塩についてはＤＭＳＯ、他のすべての化合物についてはベンゼン）中で測定した。分析ＨＰＬＣおよび分取逆相ＨＰＬＣは、アジレント１１００系列システムで行った。
【００９５】
ホスホニウム塩化合物の合成
トリフェニルホスフィンまたは任意の他の適切なホスフィンとハロゲン化アルキル（Ｒ−Ｘ；Ｘ＝Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）との反応により、ホスホニウム塩を調製する。適切なハロゲン化アルキルは、任意の鎖長または分子量の任意の第一級または任意の第二級脂肪族ハロゲン化物である。これらのハロゲン化アルキルは、分岐または非分岐、飽和または不飽和であってもよい。
【００９６】
反応をトルエン中で行うと（反応１）、生成物が反応溶液から直接沈殿する。しかし、未反応物質は、反応時間を短縮するためおよび満足のいく収率を達成するためにジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などのより極性の高い溶媒を必要とする（反応２）。
【００９７】
反応１：
【化１７】
2014505035.tif 000022
【００９８】
式中、Ｘは、ハライド（Ｃｌ、ＢｒおよびＩを含むがこれらに限定されない）であり、Ｒ１０は、ケトン、ヒドロキシル、ニトリル、カルボン酸、エステルおよび１，３−ジオキソランの群から選択される置換基を場合によって含む、飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分岐脂肪族鎖；ハライド、エステルおよびニトロの群から選択される置換基を場合によって含む芳香族基；または上述の飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分岐脂肪族鎖と上述の芳香族基の組み合わせである。
【００９９】
実施例１．４０４−１５の合成
【化１８】
2014505035.tif 000023
【０１００】
例証となる例として、トリフェニルホスフィン（１３ｍｍｏｌ）を５０ｍＬトルエンに溶解し、クロロアセトン（１０ｍｍｏｌ）を添加して透明な溶液を得る。この反応物を還流しながら終夜撹拌する。無色の固体を濾別し、トルエンおよびヘキサンで洗浄し、真空中で乾燥する。
【０１０１】
反応１を用いるとき、以下の化合物が、合成できる化合物のさらなる例である。
【０１０２】
【表２】
2014505035.tif 000024
2014505035.tif 000025
【０１０３】
代替として、適切なホスホニウム塩は下に説明するような反応２によって合成されてもよい。
【０１０４】
反応２：
【化１９】
2014505035.tif 000026
【０１０５】
式中、Ｘは、ハライド（Ｃｌ、ＢｒおよびＩを含むがこれらに限定されない）であり、Ｒ１０は、ケトン、ヒドロキシル、ニトリル、カルボン酸、エステルおよび１，３−ジオキソランの群から選択される置換基を場合によって含む、飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分岐脂肪族鎖；ハライド、エステルおよびニトロの群から選択される置換基を場合によって含む芳香族基；または上述の飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分岐脂肪族鎖と上述の芳香族基の組み合わせである。
【０１０６】
実施例２：４０４−５１の合成
【化２０】
2014505035.tif 000027
【０１０７】
例証となる例として、トリフェニルホスフィン（１１ｍｍｏｌ）を１０ｍLのＤＭＦに溶解し、４−ブロモ酪酸（１０ｍｍｏｌ）を添加する。この反応物を１１０℃で７時間撹拌し、次いで、終夜放置して冷却する。５０ｍＬトルエンを添加し、結晶質無色固体を濾過によって収集する。生成物をトルエンおよびヘキサンで洗浄し、真空中で終夜乾燥する。
【０１０８】
トルエンでの処理後に結晶化が起こらない場合、生成物を２０ｍLのＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：１混合物）で抽出する。水相をトルエンおよびヘキサンで洗浄し、乾固させる。残留物を５０ｍＬ酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）と共に還流温度で２０〜３０分間撹拌する。結晶質固体が得られた場合、その生成物を濾過によって収集し、ＥｔＯＡｃおよびヘキサンで洗浄し、乾固させる。生成物が油またはゴムとして得られた場合、ＥｔＯＡｃを傾瀉し、残存生成物を真空中で乾燥する。
【０１０９】
反応２を用いるとき、以下の化合物が、合成できる化合物のさらなる例である。
【０１１０】
【表３】
2014505035.tif 000028
2014505035.tif 000029
2014505035.tif 000030
【０１１１】
ウィッティヒ反応
ウィッティヒ反応は、広範な基質および反応体に広く適用できる。反応中に基質に導入される側鎖は、可変長の任意の数の分岐および非分岐の飽和および不飽和脂肪族化合物（Ｒ’）を表すことができ、広範な官能基を含有することができる。
【０１１２】
ウィッティヒ反応では、カリウムｔ−ブトキシド（ＫＯｔＢｕ）などの塩基を使用して、ホスホニウム塩からイリドを生じる。このイリドは、基質、ＣｓＡ−アルデヒドのカルボニル基と反応してアルケンを形成する。カルボン酸側鎖を含有するホスホニウム塩は、イリドを生じるのに少なくとも２当量の塩基を必要とする。
【０１１３】
反応３：ウィッティヒ反応によるホスホニウム塩化合物を使用する、アセチル化シクロスポリン類似体中間体の合成
【化２１】
2014505035.tif 000031
【０１１４】
式中、Ｘは、ハライド（Ｃｌ、ＢｒおよびＩを含むがこれらに限定されない）であり、Ｒ１２は、ケトン、ヒドロキシル、ニトリル、カルボン酸、エステルおよび１，３−ジオキソランの群から選択される置換基を場合によって含む、飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分岐脂肪族鎖；ハライド、エステルおよびニトロの群から選択される置換基を場合によって含む芳香族基；または上述の飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分岐脂肪族鎖と上述の芳香族基の組み合わせである。
【０１１５】
実施例３：ウィッティヒ反応による、ホスホニウム塩化合物を使用する化合物４０４−２０の合成：
【化２２】
2014505035.tif 000032
【０１１６】
例証となる例として、オーブン乾燥した２５０ｍＬフラスコにアルゴン雰囲気下でトリフェニルブチルホスホニウムブロミド（６．０ｍｍｏｌ）および４０ｍＬ無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を装填する。この懸濁液を０℃に冷却し、カリウムｔ−ブトキシド（６．０ｍｍｏｌ）を添加してオレンジ色を得る。反応物を周囲温度で１〜２時間撹拌し、次いで、ＣｓＡ−アルデヒド（２０ｍＬ無水ＴＨＦに溶解した２．０ｍｍｏｌ）を添加する。３時間、室温で撹拌を継続する。１０ｍＬ飽和ＮＨ４Ｃｌおよび２０ｍＬ氷水で反応を停止する。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を合わせ、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲル（ヘキサン／アセトン３：１）で精製する。
【０１１７】
反応３を用いるとき、以下の化合物が、合成できる化合物のさらなる例である。
【０１１８】
【表４】
2014505035.tif 000033
2014505035.tif 000034
2014505035.tif 000035
2014505035.tif 000036
2014505035.tif 000037
【０１１９】
脱アセチル化
反応４：アセチル化シクロスポリン類似体の脱アセチル化
【化２３】
2014505035.tif 000038
【０１２０】
式中、Ｒ１２は、ケトン、ヒドロキシル、ニトリル、カルボン酸、エステル、アミド、アシル保護アミンおよび１，３−ジオキソランの群から選択される置換基を場合によって含む、飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分岐脂肪族鎖；ハライド、エステル、アミンおよびニトロの群から選択される置換基を場合によって含む芳香族基；または上述の飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分岐脂肪族鎖と上述の芳香族基の組み合わせである。
【０１２１】
実施例４：脱アセチル化による化合物４０４−９０の合成
【化２４】
2014505035.tif 000039
【０１２２】
例証となる例として、１０ｍLのＭｅＯＨ中の４０４−２０（０．１６ｍｍｏｌ）の溶液を２ｍLのＨ２Ｏ中のテトラメチルアンモニウムヒドロキシド五水和物（０．４７ｍｍｏｌ）の溶液と合わせる。混合物を２日間室温で撹拌する。反応物を真空中で濃縮し、５ｍLのＨ２Ｏを添加する。反応物をＥｔＯＡｃで抽出し、抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮乾固させる。粗生成物を逆相分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０１２３】
脱アセチル化化合物の精製は、一般に、シリカゲル（ヘキサン／アセトン  ２：１）を用いてまたは分取ＨＰＬＣによって行う。化合物４０４−６０、４０４−１３７、４１６−０８、４２０−９８および４２０−１００（カルボン酸）の場合、抽出前に反応物を１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ２〜３に酸性化する。
【０１２４】
反応４を用いるとき、以下の化合物が、合成できる化合物のさらなる例である。
【０１２５】
【表５】
2014505035.tif 000040
2014505035.tif 000041
2014505035.tif 000042
2014505035.tif 000043
2014505035.tif 000044
【０１２６】
二重結合の水素化
大気圧下で二重結合を水素化して飽和側鎖を得ることができる。ヒドロキシル、カルボニルおよびカルボキシルなどの官能基は、この条件下で安定であり、保護を必要としない。Ｒ’は、アセチル基または水素のいずれかを表す。α，β−不飽和カルボニル化合物の場合、活性化された二重結合への遊離ヒドロキシ基の求核付加による環化を避けるために、脱アセチル化前に二重結合を還元しなければならない。
【０１２７】
反応５：
【化２５】
2014505035.tif 000045
【０１２８】
式中、Ｒ１２は、ケトン、ヒドロキシル、ニトリル、カルボン酸、エステル、アミド、アシル保護アミンおよび１，３−ジオキソランの群から選択される置換基を場合によって含む、飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分岐脂肪族鎖；ハライド、エステル、アミンおよびニトロの群から選択される置換基を場合によって含む芳香族基；または上述の飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分岐脂肪族鎖と上述の芳香族基の組み合わせであり、Ｒ’はＨまたはアセチル基のいずれかである。
【０１２９】
実施例５：４０４−５６の合成：
【化２６】
2014505035.tif 000046
【０１３０】
例証となる例として、４０４−０３（０．３４ｍｍｏｌ）を４０ｍＬ無水ＥｔＯＨに溶解し、４３ｍｇ  Ｐｄ／Ｃ（１０％）および０．２ｍＬ酢酸を添加する。この混合物を水素下、大気圧で２日間撹拌する。反応物をセライトに通して濾過し、真空中で濃縮する。粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０１３１】
反応５を用いるとき、以下の化合物が、合成できる化合物のさらなる例である。
【０１３２】
【表６】
2014505035.tif 000047
2014505035.tif 000048
【０１３３】
ニトリル基の還元
水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）および塩化ニッケル（ＩＩ）（ＮｉＣｌ２）からインサイチューで生成するホウ化ニッケルを用いて、ニトリル基の対応する第一級アミンへの還元を達成することができる。適切な捕捉試薬の添加によって、アシル保護第一級アミン（それぞれ、カルバマートまたはアミド）をもたらし、第二級アミンの形成を望ましくない副反応として防止する。所与の条件下で二重結合を部分的に還元し、生成物の混合物が得られる。飽和と不飽和の保護アミン化合物の両方を単離し、精製する。反応４２０−１２３については、混合物を分離しなかった。その代わり、この混合物を接触水素化に付して完全飽和化合物を生じさせた。
【０１３４】
反応６：
【化２７】
2014505035.tif 000049
【０１３５】
アシルが、ＢＯＣ、アセチルまたはブチリルのいずれか１つである場合、アシル化剤は、二炭酸ジ−ｔ−ブチル、無水酢酸および無水酪酸のいずれか１つであり、Ｒ１は、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族基である。上記のアシル化剤を広範なアシル化剤に置き換えて広範なアシル保護アミンを同様に生成できることは、当業者に理解されよう。
【０１３６】
実施例６：４２０−０８の合成
【化２８】
2014505035.tif 000050
【０１３７】
例証となる例として、４０４−１８７（０．２５７ｍｍｏｌ）を１５ｍＬメタノールに溶解し、０℃に冷却する。二炭酸ジ−ｔ−ブチル（０．５１４ｍｍｏｌ）および塩化ニッケル（ＩＩ）（０．０２５ｍｍｏｌ）を添加して透明な溶液を得る。水素化ホウ素ナトリウム（３．８５ｍｍｏｌ）を１時間にわたって少しずつ添加する。得られた混合物を周囲温度で終夜撹拌する。追加の水素化ホウ素ナトリウム（１．９５ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、３時間、室温で撹拌を継続する。ＨＰＬＣは、４２０−０８−１（カルバマート化合物）と４２０−０８−２（二重結合が還元されたカルバマート化合物）の混合物を示す。この反応物をジエチレントリアミン（０．２５７ｍｍｏｌ）と共に３０分間撹拌し、次いで真空中で濃縮する。残留物を７５ｍLのＥｔＯＡｃに投入し、２０ｍＬ飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を真空中で除去する。粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０１３８】
反応６を用いるとき、以下の化合物が、合成できる化合物のさらなる例である。
【０１３９】
【表７】
2014505035.tif 000051
【０１４０】
アミン脱保護
トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用する酸加水分解により、ＢＯＣ保護アミン（カルバマート）を遊離アミンに転換することができる。
【０１４１】
反応７：
【化２９】
2014505035.tif 000052
【０１４２】
式中、Ｒ１は、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖であり、Ｒ’は、Ｈまたはアセチル基のいずれかである。
【０１４３】
実施例７：４２０−２３の合成
【化３０】
2014505035.tif 000053
【０１４４】
例証となる例として、４２０−１７（０．０２６ｍｍｏｌ）を４ｍＬ無水ＤＣＭに溶解し、２ｍＬトリフルオロ酢酸を０℃で添加する。反応物を室温で３時間撹拌する。２０ｍＬジクロロメタンを添加する。反応混合物をＨ２Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を除去し、粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０１４５】
反応７を用いるとき、以下の化合物が、合成できる化合物のさらなる例である。
【０１４６】
【表８】
2014505035.tif 000054
【０１４７】
アミノ基の保護
確立した方法を用いて広範な保護基を使用して遊離アミノ官能基を保護することができる。ニトリルから出発する還元的導入と比べると、広範な保護剤が利用できる。合わせて、反応７および８は、アシル保護アミノ化合物の調製のための反応６の代替経路を提供する。
【０１４８】
反応８：
【化３１】
2014505035.tif 000055
【０１４９】
アシルが、ＢＯＣ、アセチルまたはブチリルのいずれか１つである場合、アシル化剤は、二炭酸ジ−ｔ−ブチル、無水酢酸および無水酪酸のいずれか１つである。ジカルボナート、無水物およびハロゲン化アシルを含む広範なアシル化剤を利用して広範なアシル保護アミンを生じさせることができることは、当業者には理解されよう。Ｒ１は、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族基である。
【０１５０】
実施例８：４２０−２７の合成
【化３２】
2014505035.tif 000056
【０１５１】
例証となる例として、４２０−２５（０．０３９ｍｍｏｌ）を窒素下で３ｍＬ無水ピリジンに溶解する。反応物を０℃に冷却し、無水酢酸（０．５９ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を周囲温度で終夜撹拌する。溶媒を真空中で除去し、残留物を２５ｍLのＥｔＯＡｃに投入する。反応物を２×１０ｍＬの１Ｍ  ＨＣｌ、２×１０ｍＬ飽和ＮａＨＣＯ３溶液および１０ｍＬ塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を真空中で除去して、生成物を無色の固体として得る。
【０１５２】
アルデヒドの脱保護
１，３−ジオキソラン部分を酸加水分解によりアルデヒド官能基に転換する。
【０１５３】
反応９および実施例９：４０４−４７の合成
【化３３】
2014505035.tif 000057
【０１５４】
例証となる例として、２０ｍＬギ酸中の４０４−３３（０．２４６ｍｍｏｌ）の溶液を室温で４５分間撹拌する。１００ｍＬ氷水および２００ｍＬ飽和ＮａＨＣＯ３溶液をこの反応物にゆっくり添加する（強く泡立つ）。反応物を２×１５０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水、および塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を除去し、生成物を真空中で乾燥する。
【０１５５】
ニトロ基の還元
芳香族ニトロ化合物を接触水素化によってアニリンに還元する。この反応は、二重結合の還元をもたらす。
【０１５６】
反応１０および実施例１０：４０４−１２０の合成
【化３４】
2014505035.tif 000058
【０１５７】
例証となる例として、４０４−８９（０．１３ｍｍｏｌ）を２ｍＬエタノールに溶解し、ラネーニッケル（０．１８ｇ、Ｈ２Ｏ中５０％、エタノールで３回洗浄し、次いで、２ｍＬエタノールに懸濁させたもの）および０．１ｍＬ酢酸を添加する。反応物を室温で２日間撹拌する。反応物をセライトに通して濾過し、濾過ケーキをメタノールで洗浄する。濾液を乾固させる。残留物をＥｔＯＡｃに投入し、ＮａＨＣＯ３溶液および塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水する。溶媒を真空中で除去する。粗生成物をシリカゲル（ヘキサン／アセトン２：１）で精製する。
【０１５８】
アミド合成
アミンの対応する酸塩化物との反応によってカルボン酸からアミドを調製する（反応１１）。この合成は、ＤＣＣおよびＨＯＢｔなどの好適なカップリング試薬の使用により、酸から直接進行し得る（反応１２）。
【０１５９】
反応１１：
【化３５】
2014505035.tif 000059
【０１６０】
Ｒ１が、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖である場合、Ｒ１５およびＲ１６は、独立して、水素、または飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分岐脂肪族鎖であり、あるいはＮＲ１５Ｒ１６は一緒に、モルホリニル部分を形成する。
【０１６１】
実施例１１：４０４−８５の合成
【化３６】
2014505035.tif 000060
【０１６２】
例証となる例として、３６５−７３（０．０４ｍｍｏｌ）および塩化チオニル（６８ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で合わせ、加熱して２時間還流する。反応物を放置して冷却し、濃縮乾固させる。２０ｍＬトルエンを添加し、反応物を再び濃縮乾固させる（２回）。残留物を５ｍＬ無水トルエンに投入し、ジエチルアミン（０．４８ｍｍｏｌ）を添加する。反応物を室温で終夜撹拌する。５ｍLのＨ２Ｏを添加し、混合物を２０ｍLのＥｔＯＡｃで抽出する。抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を真空中で除去し、粗生成物をシリカゲル（ヘキサン／アセトン３：１）で精製する。
【０１６３】
反応１１を用いるとき、以下の化合物が、合成できる化合物のさらなる例である。
【０１６４】
【表９】
2014505035.tif 000061
【０１６５】
反応１２：
【化３７】
2014505035.tif 000062
【０１６６】
Ｒ１が、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖である場合、Ｒ１５およびＲ１６は、独立して、水素、または飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分岐脂肪族鎖であり、あるいはＮＲ１５Ｒ１６は一緒に、モルホリニル部分を形成する。
【０１６７】
実施例１２：４２０−１０４の合成
【化３８】
2014505035.tif 000063
【０１６８】
例証となる例として、４２０−９８（０．０７８ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で１０ｍＬ無水ＤＣＭに溶解する。ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、０．１１７ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢｔ、０．０７８ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、混合物を１５分間撹拌する。ジメチルアミン（０．７８ｍｍｏｌ）を添加して透明無色の溶液を得る。１５分後、冷却浴を取り外し、周囲温度で５日間撹拌を継続する。反応物を分液漏斗に移し、２０ｍLのＤＣＭおよび１０ｍLの０．５Ｍ  ＨＣｌを添加する。有機層を取り出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し濃縮乾固させる。残留物を１０ｍＬアセトニトリルに投入する。溶解しない固体を濾別し、濾液を真空中で濃縮する。粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０１６９】
反応１２を用いるとき、以下の化合物が、合成できる化合物のさらなる例である。
【０１７０】
【表１０】
2014505035.tif 000064
【０１７１】
エステル化
酸性触媒（反応１３）またはカップリング試薬（ＤＣＣおよびＤＭＡＰ、反応１４）のいずれかを使用して、カルボン酸エステルを対応するカルボン酸およびアルコールから調製する。
【０１７２】
反応１３：
【化３９】
2014505035.tif 000065
【０１７３】
式中、Ｒ１は、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖であり、Ｒ１７は、ハロゲンまたはヒドロキシル置換基を場合によって含む、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖である。
【０１７４】
実施例１３：４０４−１７１の合成
【化３９】
2014505035.tif 000066
【０１７５】
例証となる例として、４０４−６０（０．０５９ｍｍｏｌ）、４ｍLのＥｔＯＨおよび２μＬ濃Ｈ２ＳＯ４の混合物を加熱して４時間還流する。溶媒を蒸発させ、残留物をアセトニトリルに投入する。粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０１７６】
反応１３を用いるとき、以下の化合物が、合成できる化合物のさらなる例である。
【０１７７】
【表１１】
2014505035.tif 000067
【０１７８】
反応１４：
【化４１】
2014505035.tif 000068
【０１７９】
式中、Ｒ１は、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖であり、Ｒ１７は、ハロゲンまたはヒドロキシル置換基を場合によって含む、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖である。
【０１８０】
実施例１４：４２０−２４
【化４２】
2014505035.tif 000069
【０１８１】
例証となる例として、４０４−６０（０．０５３ｍｍｏｌ）を４ｍＬ無水ＤＣＭに溶解し、窒素雰囲気下で０℃に冷却する。ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、０．００５ｍｍｏｌ）、２−フルオロプロパノール（０．２７ｍｍｏｌ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、０．０５８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を０℃で１５分間撹拌する。冷却浴を取り外し、周囲温度で撹拌を終夜継続する。２０ｍLのＤＣＭを添加し、次いで反応物をＨ２Ｏで洗浄し、蒸発乾固させる。残留物を１０ｍＬアセトニトリルに投入し、濾過する。濾液を真空中で濃縮する。粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０１８２】
アルコール
ウィッティヒ反応での直接合成に加えて、アルコールは、幾つかの反応によって得られる。水素化ホウ素ナトリウムでのカルボニル基の還元は、（アルデヒドから出発すると）第一級アルコールまたは（ケトンから出発すると）第二級アルコールをそれぞれもたらす。
【０１８３】
ヒドロホウ素化法による二重結合の酸化は、異性体の混合物を生じ得る。この反応は、主として、反マルコフニコフ配向で進行する。末端オレフィンの場合、第一級アルコールが主生成物である。
【０１８４】
過酸化水素での酸化によってオレフィンをジオールに転換することができる。
【０１８５】
カルボニル化合物のグリニャール試薬との反応は、（アルデヒドから出発すると）第二級アルコールおよび（ケトンから出発すると）第三級アルコールをもたらす。この方法により、炭素鎖を伸長することができる。
【０１８６】
反応１５：
【化４３】
2014505035.tif 000070
【０１８７】
式中、Ｒ’はＨまたはアセチルであり、Ｒ１は、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖であり、Ｒ２０は、飽和または不飽和の、直鎖または分岐脂肪族鎖である。
【０１８８】
実施例１５：４０４−９８の合成
【化４４】
2014505035.tif 000071
【０１８９】
例証となる例として、４０４−６１（０．０３６５ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で４．５ｍＬ無水ＥｔＯＨに溶解する。水素化ホウ素ナトリウム（０．１５ｍｍｏｌ、０．５ｍＬ無水ＥｔＯＨに懸濁させたもの）を０℃で添加し、得られた混合物を周囲温度で終夜撹拌する。追加の水素化ホウ素ナトリウム（０．０８ｍｍｏｌ）を添加し、終夜撹拌を継続する。氷浴で冷却しながら５ｍLの１Ｍ  ＨＣｌで反応を停止し、ＥｔＯＡｃで抽出する。抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮乾固させる。粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０１９０】
反応１５を用いるとき、以下の化合物が、合成できる化合物のさらなる例である。
【０１９１】
【表１２】
2014505035.tif 000072
【０１９２】
反応１６：
【化４５】
2014505035.tif 000073
【０１９３】
式中、Ｒ１は飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖である。
【０１９４】
実施例１６：４２０−２８−１の合成
【化４６】
2014505035.tif 000074
【０１９５】
例証となる例として、４０４−１６（０．１８ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、４ｍＬ無水ＴＨＦに溶解する。反応物を０℃に冷却し、ＢＨ３・ＴＨＦ（ＴＨＦ中１Ｍ溶液、０．０６ｍｍｏｌ）を添加する。反応物を室温で終夜撹拌する。ＨＰＬＣは、反応が完了していないことを示す。追加のＢＨ３・ＴＨＦ（０．５ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を室温で４時間継続する。反応物を０℃に冷却し、１．０ｍLの１Ｍ  ＮａＯＨおよび０．３０ｍLの３０％過酸化水素溶液を添加する。混合物を室温で終夜撹拌する。反応物を２５ｍLのＥｔＯＡｃで抽出する。抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮乾固させる。生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０１９６】
反応１７：
【化４７】
2014505035.tif 000075
【０１９７】
式中、Ｒ１は、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖であり、Ｒ’は、Ｈまたはアセチル基のいずれかである。
【０１９８】
実施例１７：４２０−４９の合成
【化４８】
2014505035.tif 000076
【０１９９】
例証となる例として、４２０−４９（０．０３７ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で５ｍＬ無水ＴＨＦに溶解する。反応物を−７０℃に冷却し、アリルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１Ｍ溶液、０．２２ｍｍｏｌ）を添加する。反応物を−７０℃で１５分間撹拌し、次いで放置して室温にする。９０分後、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で反応を停止する。反応物を２５ｍLのＥｔＯＡｃで抽出する。抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮乾固させる。生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。アセチル化化合物と脱アセチル化化合物の混合物を得る。
【０２００】
反応１８：
【化４９】
2014505035.tif 000077
【０２０１】
式中、Ｒ１は、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖であり、Ｒ２３は、飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪族鎖である。
【０２０２】
実施例１８：４０４−１２６の合成
【化５０】
2014505035.tif 000078
【０２０３】
例証となる例として、４０４−１６（０．０５４ｍｍｏｌ）を１ｍＬギ酸に溶解し、過酸化水素（３０％水溶液、０．５２ｍｍｏｌ）を添加する。反応物を室温で終夜撹拌し、次いで、濃縮乾固させる。残留物を２５ｍLのＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を真空中で除去する。反応物を９ｍLのＴＨＦおよび３ｍLの１Ｍ  ＮａＯＨに投入し、室温で４時間撹拌する。溶媒を除去し、残留物を２５ｍLのＥｔＯＡｃと５ｍLのＨ２Ｏの間で分配する。有機層は塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を蒸発させ、粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０２０４】
実施例１９：アミノ酸３の修飾
ＣｓＡは、以下に略述するようにＡＡ３で置換を受ける。過剰のＬＤＡ（リチウムジイソプロピルアミド）との反応は、それぞれ４つのリチウムアザエノラート単位ならびにアミノ酸１側鎖上にリチウムアルコキシド単位およびＡＡ３上にリチウムエノラート単位を含有するヘキサリチオ誘導体をもたらす。適切な求電子試薬とのその後の反応は、ＡＡ３（サルコシン）残基上に置換体を生成する。適切な求電子試薬は、例えばハロゲン化アルキル、アルデヒド、二酸化炭素、二硫化アルキルである（表１）。ＤおよびＬエピマーの両方を、反応条件に応じて相対比で得ることができる。経路Ａ（以下を参照）はＤ生成物を主にもたらすが、経路Ｂ（過剰ＬｉＣｌの添加）では両エピマーの混合物が得られる。
【０２０５】
【化５１】
2014505035.tif 000079
【０２０６】
経路Ａ：［Ｄ−ＭｅＳａｒ］３−ＣｓＡ
オーブン乾燥したフラスコに、アルゴン雰囲気下に１６０ｍＬ無水ＴＨＦおよびジイソプロピルアミン（２．０７ｍＬ、１４．８ｍｍｏｌ）を装填する。溶液を−７８℃に冷却し、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中２．５Ｍ、５．４ｍＬ、１３．５ｍｍｏｌ）を添加する。３０分間撹拌した後、ＣｓＡ（２．４０ｇ、２．０ｍｍｏｌ、４０ｍＬ無水ＴＨＦに溶解）を添加する。反応物を−７８℃で１時間撹拌する。追加のｎ−ブチルリチウム（３．２ｍＬ、８．０ｍｍｏｌ）を添加し、続いてヨウ化メチル（１．２５ｍＬ、２０．０ｍｍｏｌ）を添加する。撹拌は−７８℃で１．５時間継続し、次いで、反応物を室温にさらに１．５時間暖める。２０ｍＬ  Ｈ２Ｏを添加し、ＴＨＦを真空中で除去する。さらなる５０ｍＬ  Ｈ２Ｏを添加し、抽出を１５０ｍＬＥｔＯＡｃで実行する。抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を真空中で除去し、粗生成物はシリカゲル（ヘキサン／アセトン３：１）で精製する。収率：０．７４ｇ（０．６１ｍｍｏｌ、３０％）。
【０２０７】
経路Ｂ：［ＭｅＳａｒ］３−ＣｓＡ
乾燥した１００ｍＬのフラスコに、アルゴン雰囲気下に７．５ｍＬ無水ＴＨＦおよびジイソプロピルアミン（０．４６ｍＬ、３．３ｍｍｏｌ）を装填する。溶液を０℃に冷却し、ｎ−ブチルリチウム（１．３２ｍＬ、ヘキサン中２．５Ｍ溶液、３．３ｍｍｏｌ）を添加する。反応物を０℃で２０分間撹拌し、次いで、−７８℃に冷却する。１２ｍＬ無水ＴＨＦ中のＣｓＡ（６０１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）および塩化リチウム（６３６ｍｇ、１５ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン雰囲気下で調製し−７８℃に冷却する。次いで、ＬＤＡ溶液をカニューレによってこの混合物へ移す。反応物は−７８℃で２時間撹拌する。追加のｎ−ブチルリチウム（１．２０ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）、続いてヨウ化メチル（０．６２ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を−２０℃に暖め、３時間この温度で撹拌する。反応物を室温に暖め、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で反応を停止し、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を真空中で除去し、粗生成物はシリカゲル（ヘキサン／アセトン３：１）で精製する。収率：［ＬＭｅＡｌａ３］−ＣｓＡ：３０２ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ、５０％）。［ＤＭｅＡｌａ３］−ＣｓＡ：７６ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ、１２％）。
【０２０８】
【表１３】
2014505035.tif 000080
【０２０９】
以下に述べる実施例２０および２１は、必要な化学的性質を有する試薬を使用してＣｓＡのアミノ酸１および３で修飾される所望の化合物を合成することができる化学反応の一般的な例であり、特定の反応体の置き換えがなされてよいことは当業者によって理解されよう。
【０２１０】
実施例２０：アルキル化ＣｓＡのＡＡ１修飾
実施例２０は、ＡＡ１側鎖の修飾前の、ＣｓＡの３位での置換基導入のための合成経路を提供する。３−アルキル化の後、２ステップの手順で、ウィッティヒ反応による１位の修飾に適する基質であるアセチル化アルデヒド（以下の実施例の化合物３）をもたらす。この方法は、強塩基および酸化剤などのステップ１−３に使用される反応条件下で安定性が限られたＡＡ１側鎖への残基の導入を可能にする。
【０２１１】
このシーケンスを使用して調製される化合物のさらなる例を表２に要約する。
【０２１２】
ステップ１：ＡＡ３側鎖のアルキル化
【化５２】
2014505035.tif 000081
【０２１３】
合成は、上記のように経路ＡまたはＢに従ってそれぞれ実行する。
【０２１４】
ステップ２：ＡＡ１側鎖上のヒドロキシ基のアセチル化
【化５３】
2014505035.tif 000082
【０２１５】
オーブン乾燥したフラスコに、窒素下で［Ｄ−ＭｅＳａｒ］３−ＣｓＡ（１．８４ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）および２０ｍＬ無水ピリジン、続いて無水酢酸（１０ｍＬ、０．１ｍｏｌ）を装填する。反応物を周囲温度で終夜撹拌する。混合物は１００ｍＬ氷水へ注ぎ、氷がすべて溶融するまで撹拌する。固体を濾過によって収集し、風乾する。固体は５０ｍＬＥｔＯＡｃに溶解し、１ＭＨＣｌ（２ｘ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液および塩水で洗浄する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し蒸発させる。粗生成物をシリカゲル（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１０：０．５）で精製する。
【０２１６】
ステップ３：アルデヒド形成
【化５４】
2014505035.tif 000083
【０２１７】
化合物２（８００ｍｇ、０．６３６ｍｍｏｌ）を含有するフラスコに、１０ｍＬジオキサンおよび１０ｍＬ  Ｈ２Ｏを添加する。ＮａＩＯ４（５４４ｍｇ、２．５４ｍｍｏｌ）およびＯｓＯ４（水／ジオキサン１：１中７．９ｍＭ溶液、４．０５ｍＬ、３２ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で終夜撹拌する。７５ｍＬ  Ｈ２Ｏを添加し、反応物は３×２５ｍLのＥｔＯＡｃで抽出する。抽出物は、水、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水および塩水（それぞれ２５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥する。溶媒を真空中で除去し、粗生成物をシリカゲル（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ３：１）で精製する。
【０２１８】
ステップ４：ウィッティヒ反応
【化５５】
2014505035.tif 000084
【０２１９】
オーブン乾燥したフラスコに、アルゴン雰囲気下にトリフェニル−６−ヘキサン酸ホスホニウムブロミド（９０ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ）および５ｍＬ無水ＴＨＦを装填する。カリウムｔ−ブトキシド（ＴＨＦ中１Ｍ溶液、０．３９ｍＬ、０．３９ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、溶液は３０分間撹拌して、明るいオレンジ色が得られる。化合物３（８１ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ、１ｍＬ無水ＴＨＦに溶解）を反応物に滴下添加し、撹拌を室温で終夜継続する。反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で停止し、ＥｔＯＡｃで抽出する。抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を真空中で除去し、粗生成物はシリカゲル（トルエン／アセトン３：１）で精製する。
【０２２０】
ステップ５：脱アセチル化
【化５６】
2014505035.tif 000085
【０２２１】
化合物４（３０ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を２ｍＬメタノールおよび０．５ｍＬ水に溶解し、テトラメチルアンモニウムヒドロキシド五水和物（１２ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）を添加する。脱保護の完了をＨＰＬＣで確認するまで、この反応物を数日間室温で撹拌する。反応物は１ＭＨＣｌでｐＨ２に酸性化し、真空中で濃縮する。残留物をＥｔＯＡｃに投入し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を蒸発させ、粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０２２２】
【化５７】
2014505035.tif 000086
【０２２３】
１，３−修飾シクロスポリン誘導体の概略説明
実施例２０の方法を用いるとき、以下の化合物が、合成できる化合物のさらなる例である。（Ｘは上記の概略説明を参照；Ｘ中のＲの言及は、ＣｓＡのＡＡ１への構造の結合を示すものである。）。
【０２２４】
【表１４】
2014505035.tif 000087
【０２２５】
ＡＡ１修飾化合物のアルキル化
反応２１では、先にＡＡ１側鎖上に修飾した化合物のＡＡ３残基に置換基を導入する。反応１９によって入手可能な基に加えて、この経路は、例えば、チオメチル残基がこの方法のステップ３のアルデヒドの形成中に酸化を受ける場合がある、反応２０で使用される反応条件下では不安定な、ＡＡ３での置換基の導入を可能にする。
【０２２６】
実施例２１
【化５８】
2014505035.tif 000088
【０２２７】
乾燥した２５ｍＬフラスコに、アルゴン雰囲気下に１．５ｍＬ無水ＴＨＦおよびジイソプロピルアミン（０．６２μＬ、８７ｍｍｏｌ）を装填する。溶液を０℃に冷却し、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中２．５Ｍ、０．２５ｍＬ、０．６２ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を０℃で２０分間撹拌し、次いで、−７０℃に冷却する。透明なＬＤＡ溶液を、−７０℃で１．５ｍＬ無水ＴＨＦ中の４０４−７６（１１８ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）および塩化リチウム（１２０ｍｇ、２．８４ｍｍｏｌ）の溶液へ移す。撹拌は−７０℃で２時間継続する。追加のｎ−ブチルリチウム（０．２３ｍＬ、０．５８ｍｍｏｌ）、続いてヨウ化メチル（１１８μＬ、１．８９ｍｍｏｌ）を添加する。−２０℃に反応物を暖め、終夜この温度で維持する。反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で停止し、ＥｔＯＡｃで抽出する。抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発乾固させる。粗生成物をシリカゲル（ヘキサン／アセトン３：１→２：１）で精製する。
【０２２８】
【表１５】
2014505035.tif 000089
【０２２９】
ＡＡ１（またはＡＡ３、それぞれの）残基での官能基への追加の修飾を実行してエステル、アミド、アルコールなどの様々な誘導体化合物を得ることができる。飽和化合物は、ウィッティヒ反応で作られた二重結合の還元により得ることができる。
【０２３０】
実施例２２：カルボン酸からのアミド形成−４４０−０８の合成
【化５９】
2014505035.tif 000090
【０２３１】
窒素雰囲気下に４４０−０２（４８ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）を５ｍＬ無水ＤＣＭに溶解し、０℃に冷却する。ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１１．６ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ、５．０ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物は０℃で１５分間撹拌する。ジメチルアミン（ＴＨＦ中２Ｍ溶液、０．１９ｍＬ、０．３８ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を室温で３日間継続する。反応物を２０ｍＬＤＣＭで希釈し、１５ｍＬ０．５ＭＨＣｌで洗浄する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、次いで、乾固させる。粗の混合物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０２３２】
実施例２３：エステル形成−４４０−３１の合成
【化６０】
2014505035.tif 000091
【０２３３】
４４０−２０（３０ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を４ｍＬ無水ＥｔＯＨおよび濃Ｈ２ＳＯ４２μＬに溶解する。反応物を加熱して３時間還流し、次いで、放置して室温に冷却する。反応物を乾固させる。粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０２３４】
実施例２４：ニトリル化合物からのアミド形成（逆向きアミド）−４４０−１５の合成
【化６１】
2014505035.tif 000092
【０２３５】
５０ｍＬのフラスコに、窒素下に４４０−０９（８０ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）および５ｍＬＭｅＯＨを装填する。反応物を０℃に冷却し、Ｎｉ（ＩＩ）Ｃｌ２・６Ｈ２Ｏ（１．４ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）および無水酢酸（１９μＬ、０．２０ｍｍｏｌ）を添加する。水素化ホウ素ナトリウム（１０４ｍｇ、２．７５ｍｍｏｌ）を２時間おいて２バッチで添加する。次いで、反応物を室温に暖め、終夜撹拌する。反応が完了した後、７ｍLの１ＭＨＣｌを添加する。溶液を真空中で濃縮してその原体積のおよそ半分にする。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液および塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥する。溶媒を真空中で除去する。幾つかの飽和化合物を含む生成物を、さらなる精製をせず以下のステップに使用する。
【０２３６】
実施例２５：４４０−２５の合成
【化６２】
2014505035.tif 000093
【０２３７】
４４０−１５（８３ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）を１０ｍＬ無水ＥｔＯＨに溶解する。パラジウム（炭素上１０重量％、８ｍｇ）および酢酸３−４滴を添加する。ＨＰＬＣによって完了するまで、反応物を室温で大気圧下に数日間水素化する。反応物をセライトに通して濾過し、濾液は蒸発乾固させる。粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製し、次いで、脱アセチル化ステップにかける。
【０２３８】
実施例２６：４４０−３２の合成
【化６３】
2014505035.tif 000094
【０２３９】
４４０−２５（４１ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を４ｍＬ  ＭｅＯＨに溶解し、テトラメチルアンモニウムヒドロキシド五水和物（１６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、１ｍＬ  Ｈ２Ｏに溶解）を添加する。反応物を室温で２日間撹拌する。反応物を真空中で濃縮する。５ｍＬ  Ｈ２Ｏを添加し、生成物はＥｔＯＡｃで抽出する。抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発乾固させる。粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【０２４０】
【表１６】
2014505035.tif 000095
【０２４１】
シクロフィリンＡイソメラーゼ阻害アッセイ
酵素アッセイを、小さな変更を加えた、科学文献に記載されているプロトコルに従って本発明の１，３ＣｓＡ類似体によるＣｙＰ−Ａ活性の阻害を測定するのに用いた。このアッセイは、シスからトランス異性体へのコンフォメーションのプロリン含有ペプチド中のコンフォメーション変化を触媒するＣｙＰ−Ａの能力に基づいている。手短に言えば、ニトロアニリド部分を含むペプチド基質を、ＣｙＰ−Ａ、試験化合物（ＣｓＡ類似体、ＣｓＡまたはジメチルスルホキシドビヒクル）、および第２の酵素、アルファキモトリプシンを含有する反応混合物に供給した。各試験化合物を３回繰り返してまたは４回繰り返して１０通りの濃度で試験した。ペプチドを、非触媒反応およびＣｙＰ触媒反応プロセスの両方によってシスコンフォメーションからトランスコンフォメーションに転換した。ペプチドのシス異性体ではなく、トランス異性体が、アルファキモトリプシンの基質である。アルファキモトリプシンは、直ちにペプチドの残りからニトロアニリドを切断し、シス−トランス異性化に比例した速度で遊離ニトロアニリドが蓄積した。遊離ニトロアニリドは着色した生成物であるので、その蓄積は分光光度計でその吸光度を測定することにより定量した。ニトロアニリドの蓄積を６分間測定し、各反応の１次速度定数はＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して計算した。各反応のＣｙＰ−Ａの触媒反応速度定数は、反応速度定数の合計から非触媒反応速度定数（ＣｙＰ−Ａがない反応に由来）を減じることにより求めた。阻害剤濃度の関数としての触媒反応速度定数のプロットは、そのＩＣ５０値によって定義される化合物の効力を実証した。
【０２４２】
詳細プロトコル
Ａ．ペプチド
アッセイペプチドは、Ｎ−スクシニル−アラニン−アラニン−プロリン−フェニルアラニン−ｐ−ニトロアニリドであった。これを溶解し、トリフルオロエタノールアミンおよび塩化リチウムの溶液（ＴＦＥ／ＬｉＣｌ）中の濃度３ｍＭにした。ＴＦＥ／ＬｉＣｌは、毎日新たにトリフルオロエタノールアミンに塩化リチウムを溶解して１７ｍｇ／ｍｌの濃度にすることにより調製した。ＬｉＣｌの溶解後、加熱乾燥したモレキュラーシーブを添加し、溶液を緩やかに少なくとも３０分間混合することによってＴＦＥ／ＬｉＣｌ溶液の水分を減らした。次いで、ペプチドをＴＦＥ／ＬｉＣｌに溶解し、アッセイ前に溶液を４℃−８℃に冷却した。乾燥ＴＦＥ／ＬｉＣｌ中へペプチドを溶解することによって、各アッセイ反応の初めにより多量のペプチドをシスコンフォメーションで存在するように促した。データ分析では、本発明者らのアッセイ中にペプチドのおよそ６０％がシス異性体として始まった。これは、科学文献に報告されたデータと一致する。酵素反応において、ペプチドは２０倍希釈して１５０μＭの最終アッセイ濃度にした。
【０２４３】
Ｂ．試験化合物
試験化合物はＣｓＡ、ＣｓＡ類似体またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）からなっていた。ＣｓＡおよびＣｓＡ類似体のストック溶液は、無菌の微小遠心分離管中でＤＭＳＯに溶解し濃度１０ｍｇ／ｍｌにすることによって作製した。使用しないとき、ストック溶液は−２０℃で保存した。試験化合物のさらなる希釈をアッセイの日毎に行った。ＤＭＳＯおよびＣｓＡを、ビヒクル対照および参照化合物としてそれぞれ働くようにすべての実験で試験した。
【０２４４】
ＣｓＡおよびＣｓＡ類似体の１０ｍｇ／ｍｌストック溶液は、微小遠心分離管中でＤＭＳＯで希釈し、化合物の分子量に基づいて５０μＭにした。次いで、ＤＭＳＯ中の各化合物の９つの３倍連続希釈を９６ウェルポリスチレンプレート中で行った。ＤＭＳＯ溶液またはＤＭＳＯビヒクル単独のアリコートを、反応緩衝剤中で５０倍希釈して（処方に関しては以下を参照）、１０００、３３３、１１１、３７、１２、４．１、１．４、０．４６、０．１５および０．０５ｎＭのＣｓＡまたはＣＳＡ類似体の最終濃度にした。アッセイ前に反応緩衝液を少なくとも１時間４℃−８℃で保存した。
【０２４５】
Ｃ．反応緩衝剤
反応緩衝剤用の出発溶液（塩分含有緩衝剤）はヘペス５０ｍＭ、塩化ナトリウム１００ｍＭおよびヒト血清アルブミン１ｍｇ／ｍｌからなり、水酸化ナトリウムでｐＨ８．０に調節した。使用しないとき、塩分含有緩衝剤は４℃で保存した。各アッセイ日に、牛アルファキモトリプシンを、ある体積の塩分含有緩衝剤に溶解し１ｍｇ／ｍｌの濃度にした。アルファキモトリプシン溶液のアリコートを取り出し非触媒反応の対照反応緩衝剤として働くようにした。組み換えヒトＣｙＰ−Ａをキモトリプシン溶液の残りに添加し、５ｎＭの濃度にした。アルファキモトリプシンおよびＣｙＰ−Ａを含有する溶液は反応緩衝剤と呼び、反応溶液の調製に使用した。
【０２４６】
Ｄ．反応のプロトコル
アッセイ反応はすべて、４℃−８℃の温度範囲内の低温室で行った。アッセイ前に溶液および装置をすべて少なくとも１時間低温室で保存した。利用可能な装置で測定するのに十分に遅い速度で反応が進むように、低温が必要であった。測定装置は、ＯＤ  ４０５ｎｍで吸光度読み取りのために構成されたＢＭＧ  Ｐｏｌａｒｓｔａｒマイクロプレートリーダーであった。反応は９６ウェル平底ポリスチレンアッセイプレート中で実施した。各アッセイの実行は、プレートの１列の１２の別々の反応からなっていた。ペプチドを、プレートの１列に単一チャネルピペッタを用いて１ウェル当たり５μｌに小分けし、次いでプレートをマイクロプレートリーダーのプレートホルダーに装入した。１２チャネルピペッタを使用しペプチドの一様な溶解を保証するために繰り返しピペット操作することによって各反応物を完全に混合し、各ペプチド含有ウェルへの反応緩衝剤９５μｌの分注により反応を始めた。各アッセイの実行での１２の反応は以下に示す：
ａ）１０の反応、１種の試験化合物の１０通りの濃度それぞれの１回の繰り返しを表す（反応緩衝剤中にＣｙＰ−Ａ）
ｂ）５μｌのＤＭＳＯビヒクルを用いる１つの反応（反応緩衝剤中にＣｙＰ−Ａ）
ｃ）５μｌのＤＭＳＯビヒクルを用いる１つの反応（反応緩衝剤中にＣｙＰ−Ａはない）
【０２４７】
吸光度記録は混合直後に始めた。反応緩衝剤の添加から最初のＯＤ４０５記録まで、混合時間および装置設定によりおよそ１５秒が経過した。その後の読み取りは、合計６０の読み取りのために６秒間隔で３６０秒にわたり行った。３または４の反応実行を各試験化合物について行い、データの反復が得られた。
【０２４８】
Ｅ．データ分析
未加工データはＯＤ４０５の時間依存性の増加からなっていた。ＣｙＰ−Ａが存在し阻害剤がない状態で、ＯＤ４０５のプラトーによって実証されるように、ペプチドはおよそ１５０秒以内にトランス異性体に完全に転換された。ＯＤ４０５対時間のデータをＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いてプロットし、一相指数方程式に当てはめて各反応の第１速度定数Ｋを誘導した。ＣｙＰ−Ａがない反応において、速度定数は、ペプチドの自発的な非触媒反応の、熱的シス−トランス異性化を完全に表し、非触媒反応の速度定数Ｋ０として定義した。ＣｙＰ−Ａを含有する反応において、異性化は、非触媒および酵素触媒プロセスの両方によって生じた。したがって、ＣｙＰ−Ａ含有反応の速度定数Ｋは、非触媒反応速度定数Ｋ０および触媒反応速度定数Ｋｃａｔの和を表していた。Ｋｃａｔは、速度定数Ｋの合計からＫ０（ＣｙＰ−Ａがない反応から得られた）を減じることにより計算した。Ｋｃａｔは、一般に、５ｎＭ  ＣｙＰ−Ａ、１５０μＭペプチド基質を含み、阻害剤を含まない反応のＫ０より３倍高かった。
【０２４９】
阻害剤効力を実証するために、Ｋｃａｔ対阻害剤濃度のプロットをシグモイド用量反応非線形回帰に当てはめた。ソフトウェアで計算したＥＣ５０値は、Ｋｃａｔを５０％阻害した試験化合物濃度を表していた。アッセイ条件中の実験間ばらつきについて正規化するために、参照化合物としてＣｓＡをすべての実験で実行し、ＣｓＡ類似体の効力は、ＥＣ５０値に基づくＣｓＡと比較して効力の倍数として表した。例えば、ＣｓＡの１／２であるＣｓＡ類似体のＥＣ５０はＣｓＡと比較して２倍の効力を表すが、ＣｓＡより５倍高いＣＳＡ類似体のＩＣ５０はＣｓＡと比較して０．２倍の効力を示した。
【図面の簡単な説明】
【０２５０】
【図１Ａ−１Ｃ】添付図１Ａ−１Ｃに示す表５は、シクロフィリンＡの阻害と、本発明による位置１ならびに位置１および３で修飾したＣｓＡ類似体の免疫抑制とを示す。