【手続補正書】
【提出日】平成27年10月9日(2015.10.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ディスク遠心分離機を用いて試料中のウイルス粒子を定量化するための方法であって、前記試料中のウイルス粒子の濃度は未知である、方法。
【請求項２】
前記ウイルス試料が、非凝集ウイルス粒子および／または凝集ウイルス粒子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ａ．前記試料中の粒子をディスク遠心分離により分離するステップ；
ｂ．粒子検出器を用いて前記粒子を検出するステップ；
ｃ．粒子サイズ分布を測定するステップ；
ｄ．ｉ．単一モードのサイズ分布の存在に基づき、非凝集ウイルス粒子の存在または非存在を同定し、かつ／または
ｉｉ．多モードのサイズ分布の存在に基づき、凝集ウイルス粒子の存在または非存在を同定するステップ；
ｅ．ｉ．非凝集ウイルス粒子を含む試料について、前記サイズ分布の最大重量および／もしくは前記サイズ分布の積分重量を決定するか、または
ｉｉ．凝集ウイルス粒子を含む試料について、前記サイズ分布の積分重量を決定するステップ；
ｆ．（ｉ）前記試料についての前記サイズ分布の前記最大重量を、参照のサイズ分布の最大重量と比較し、かつ／または（ｉｉ）前記試料についての前記サイズ分布の前記積分重量を、参照のサイズ分布の積分重量と比較し、これにより、前記試料中の前記ウイルス粒子を定量化するステップ；
を含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
請求項３の（ａ）において、密度勾配、好ましくはスクロース密度勾配を用いて前記粒子を分離する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記密度勾配が、
ａ）塩、好ましくは塩化ナトリウム、および／または
ｂ）バッファー、好ましくはリン酸ナトリウム
をさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
分離流体のｐＨがｐＨ３〜１１の間である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
試料中の汚染ウイルス粒子の存在または非存在を検出するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
（ａ）アジュバント粒子および抗原を含む試料へと、（ｉ）アジュバント粒子には結合するが、（ｉｉ）可溶性抗原には結合せず、（ｉｉｉ）検出可能な標識を含む（１または複数の）化合物を導入するステップと、
（ｂ）前記試料中の粒子をディスク遠心分離により分離するステップと、
（ｃ）（１または複数の）前記検出可能な標識を検出するのに適する粒子検出器を用いて前記粒子を検出するステップと、
（ｄ）粒子サイズ分布を測定するステップと、
（ｅ）（ｉ）抗原へと吸着されていないアジュバント粒子、
および／または
（ｉｉ）抗原が吸着されているアジュバント粒子
に対応する（１または複数の）粒子サイズ分布の存在または非存在を同定するステップと、場合により、
（ｆ）抗原が吸着されているアジュバント粒子の比率を同定するステップと
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
（ａ）アジュバント粒子および抗原を含む試料へと、（ｉ）抗原には結合するが、（ｉｉ）アジュバントには結合せず、（ｉｉｉ）検出可能な標識を含む（１または複数の）化合物を導入するステップと、
（ｂ）前記試料中の粒子をディスク遠心分離により分離するステップと、
（ｃ）（１または複数の）前記検出可能な標識を検出するのに適する粒子検出器を用いて前記粒子を検出するステップと、
（ｄ）粒子サイズ分布を測定するステップと、
（ｅ）（ｉ）アジュバントへと吸着されていない抗原、
および／または
（ｉｉｉ）アジュバント粒子へと吸着されている抗原
に対応する（１または複数の）粒子サイズ分布の存在または非存在を同定するステップと、場合により、
（ｆ）アジュバントへと吸着されている抗原の比率を同定するステップと
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
（ｉ）抗原には結合するが、（ｉｉ）アジュバントには結合せず、（ｉｉｉ）検出可能な標識を含む（１または複数の）前記化合物が、タンパク質特異的および／または核酸特異的である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ワクチンの製造における使用のための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ワクチンを製造するためのプロセスであって、
（ｉ）請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法を用いることにより、バルク材料から採取される試料中の非凝集ウイルス粒子および／または凝集ウイルス粒子を定量化するステップと、
（ｉｉ）場合により、前記試料中のウイルス粒子の量に基づき、前記バルク材料中の前記ウイルス粒子の濃度を、ワクチン組成物中で用いるのに適する濃度へと調整するステップと、
（ｉｉｉ）前記ワクチンを前記バルク材料から調製するステップと
を含む、プロセス。
【請求項１３】
ディスク遠心分離機を用いて粒子密度および／または粒子サイズを決定するための方法であって、
ａ．少なくとも２つの異なる分離流体中の未知濃度のウイルス粒子を含む試料の沈降速度を測定するステップであって、前記流体が、異なるレオロジー特性を有する、ステップ；
ｂ．回帰分析、好ましくは線形回帰分析を実施するステップ、
を含む方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の粒子の沈殿速度を決定するための方法であって、
ａ．沈降出発点から検出器までの距離を測定するステップ；
ｂ．保持時間を決定するステップ；
ｃ．ステップ（ａ）から得られる値を、ステップ（ｂ）から得られる値で除するステップ、
を含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６４】
本発明の方法はまた、アジュバント粒子の作製を最適化するのにも有用である。本発明の方法は、作製法（例えば、ウイルス粒子および／または（１または複数の）アジュバント粒子を作製するための）により、意図される（１または複数の）粒子サイズまたは所望される（１または複数の）粒子サイズが作製されるのかどうかを決定するのに有用である。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
ディスク遠心分離機を用いて試料中のウイルス粒子を定量化するための方法。
（項目２）
上記ウイルス試料が、非凝集ウイルス粒子および／または凝集ウイルス粒子を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
ａ．上記試料中の粒子をディスク遠心分離により分離するステップ；
ｂ．粒子検出器を用いて上記粒子を検出するステップ；
ｃ．粒子サイズ分布を測定するステップ；
ｄ．ｉ．単一モードのサイズ分布の存在に基づき、非凝集ウイルス粒子の存在または非存在を同定し、かつ／または
ｉｉ．多モードのサイズ分布の存在に基づき、凝集ウイルス粒子の存在または非存在を同定するステップ；
ｅ．ｉ．非凝集ウイルス粒子を含む試料について、上記サイズ分布の最大重量および／もしくは上記サイズ分布の積分重量を決定するか、または
ｉｉ．凝集ウイルス粒子を含む試料について、上記サイズ分布の積分重量を決定するステップ；
ｆ．（ｉ）上記試料についての上記サイズ分布の上記最大重量を、参照のサイズ分布の最大重量と比較し、かつ／または（ｉｉ）上記試料についての上記サイズ分布の上記積分重量を、参照のサイズ分布の積分重量と比較し、これにより、上記試料中の上記ウイルス粒子を定量化するステップ；
を含む、項目１または項目２に記載の方法。
（項目４）
項目３の（ａ）において、密度勾配、好ましくはスクロース密度勾配を用いて上記粒子を分離する、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
上記密度勾配が、
ａ）塩、好ましくは塩化ナトリウム、および／または
ｂ）バッファー、好ましくはリン酸ナトリウム
をさらに含む、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
分離流体のｐＨがｐＨ３〜９の間である、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
上記試料を、生物学的分子に対する特異性を増強させてあり、検出可能な標識を含む化合物で処理する、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
上記検出可能な標識が蛍光標識である、項目７に記載の方法。
（項目９）
上記粒子検出器が蛍光検出器である、項目８に記載の方法。
（項目１０）
上記ディスク遠心分離機が光沈降速度計である、項目１から９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
上記粒子検出器が、３００〜６００ｎｍの範囲の検出波長を用いる、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
上記ウイルスがインフルエンザウイルスである、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
元のウイルス出発材料より小さい粒子サイズの比率において相対的増大を検出することにより、ウイルス粒子全体が破壊されたのかどうかを検出するための、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
試料中の汚染ウイルス粒子の存在または非存在を検出するための、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
試料中の汚染微生物粒子の存在または非存在を検出するための、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
上記試料が、分割剤で処理されている、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
上記試料が、分割された粒子を含むのかどうかを決定するための、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
化合物の分割効率を決定するための、項目１６または項目１７に記載の方法。
（項目１９）
生物学的粒子の分割に対する感受性を決定するための、項目１６から１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
抗原が（１または複数の）アジュバント粒子へと吸着されているのかどうかを同定するための、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
上記試料中における、（１または複数の）アジュバント粒子へと吸着されている抗原の比率を同定するための、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
（ａ）アジュバント粒子および抗原を含む試料へと、（ｉ）アジュバント粒子には結合するが、（ｉｉ）可溶性抗原には結合せず、（ｉｉｉ）検出可能な標識を含む（１または複数の）化合物を導入するステップと、
（ｂ）上記試料中の粒子をディスク遠心分離により分離するステップと、
（ｃ）（１または複数の）上記検出可能な標識を検出するのに適する粒子検出器を用いて上記粒子を検出するステップと、
（ｄ）粒子サイズ分布を測定するステップと、
（ｅ）（ｉ）抗原へと吸着されていないアジュバント粒子、
および／または
（ｉｉ）抗原が吸着されているアジュバント粒子
に対応する（１または複数の）粒子サイズ分布の存在または非存在を同定するステップと、場合により、
（ｆ）抗原が吸着されているアジュバント粒子の比率を同定するステップと
を含む、項目２０または項目２１に記載の方法。
（項目２３）
上記アジュバントがアルミニウム塩である、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
（ａ）アジュバント粒子および抗原を含む試料へと、（ｉ）抗原には結合するが、（ｉｉ）アジュバントには結合せず、（ｉｉｉ）検出可能な標識を含む（１または複数の）化合物を導入するステップと、
（ｂ）上記試料中の粒子をディスク遠心分離により分離するステップと、
（ｃ）（１または複数の）上記検出可能な標識を検出するのに適する粒子検出器を用いて上記粒子を検出するステップと、
（ｄ）粒子サイズ分布を測定するステップと、
（ｅ）（ｉ）アジュバントへと吸着されていない抗原、
および／または
（ｉｉｉ）アジュバント粒子へと吸着されている抗原
に対応する（１または複数の）粒子サイズ分布の存在または非存在を同定するステップと、場合により、
（ｆ）アジュバントへと吸着されている抗原の比率を同定するステップと
を含む、項目２０から２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
（ｉ）抗原には結合するが、（ｉｉ）アジュバントには結合せず、（ｉｉｉ）検出可能な標識を含む（１または複数の）上記化合物が、タンパク質特異的および／または核酸特異的である、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
ワクチンの製造における使用のための、先行する項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
ウイルス粒子の定量化をリアルタイムで実施する、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
ワクチンを製造するためのプロセスであって、
（ｉ）先行する項目のいずれか一項に記載の方法を用いることにより、バルク材料から採取される試料中の非凝集ウイルス粒子および／または凝集ウイルス粒子を定量化するステップと、
（ｉｉ）場合により、上記試料中のウイルス粒子の量に基づき、上記バルク材料中の上記ウイルス粒子の濃度を、ワクチン組成物中で用いるのに適する濃度へと調整するステップと、
（ｉｉｉ）上記ワクチンを上記バルク材料から調製するステップと
を含む、プロセス。
（項目２９）
ディスク遠心分離機を用いて粒子密度および／または粒子サイズを決定するための方法であって、
ａ．少なくとも２つの異なる分離流体中の試料の沈降速度を測定するステップであって、上記流体が、異なるレオロジー特性を有する、ステップ；
ｂ．回帰分析、好ましくは線形回帰分析を実施するステップ、
を含む方法。
（項目３０）
粒子の沈殿速度を決定するための方法であって、
ａ．沈降出発点から検出器までの距離を測定するステップ；
ｂ．保持時間を決定するステップ；
ｃ．ステップ（ａ）から得られる値を、ステップ（ｂ）から得られる値で除するステップ、
を含む、方法。
（項目３１）
密度および／またはサイズの変化において現れる精子形態の同定に使用するための、項目２９または項目３０に記載の方法。
（項目３２）
（ｉ）精液試料中の精子の密度および／またはサイズを参照と比較するステップと、（ｉｉ）上記精液試料中の非典型的な精子の密度および／またはサイズの同定とを含む、項目３１に記載の方法、
精液試料中の精子粒子を特徴付ける方法であって、
（ａ）上記精液試料中の粒子を、ディスク遠心分離により分離するステップと、
（ｂ）粒子検出器を用いて上記粒子を検出するステップと、
（ｃ）粒子サイズ分布を測定するステップと、
（ｄ）ｉ．単一モードのサイズ分布の存在に基づき、非凝集精子粒子の存在または非存在を同定し、かつ／または
ｉｉ．多モードのサイズ分布の存在に基づき、凝集精子粒子の存在または非存在を同定し、ならびに／あるいは
ｉｉｉ．非凝集精子粒子を含む試料について、上記サイズ分布の最大重量および／もしくは上記サイズ分布の積分重量を決定するか、または
ｉｖ．凝集精子粒子を含む試料について、上記サイズ分布の積分重量を決定するステップと、
ｖ．上記試料についての上記サイズ分布の最大重量を、参照のサイズ分布の最大重量と比較するか、または
ｖｉ．上記試料についての上記サイズ分布の積分重量を、参照のサイズ分布の積分重量と比較し、
これにより、上記試料中の上記ウイルス粒子を定量化するステップと、
場合により、
（Ａ）精子粒子のサイズの変動および／または精子粒子の密度の変動を測定するステップと、
（Ｂ）上記精子粒子のサイズの変動および／または精子粒子の密度の変動を、参照の精子粒子のサイズの変動および／または精子粒子の密度の変動と比較し、
これにより、上記試料中の均質でない精子集団の存在または非存在を同定するステップと
を含む、方法。
（項目３３）
密度および／またはサイズの変化において現れる精子形態を、ディスク遠心分離機を用いて同定する方法であって、
ａ．精液試料中の精子粒子の沈降速度を測定するステップと、
ｂ．上記精液試料中の精子粒子の上記沈降速度を、沈降速度が公知である参照の沈降速度と比較するステップと、
ｃ．上記精液試料中の上記精子粒子の観察された沈降速度が、上記精液試料中の上記精子粒子の、上記参照に基づき予測される沈降速度と異なるのかどうかを同定するステップと
を含む、方法。
（項目３４）
生物学的試料中の異常な粒子サイズ、異常な粒子密度、および／または異常な粒子量を、ディスク遠心分離機を用いて同定する方法であって、
ａ．生物学的試料の粒子サイズ分布を測定するステップと、
ｂ．上記生物学的試料の上記粒子サイズ分布を、対照の粒子サイズ分布と比較するステップと、
ｃ．上記生物学的試料中の上記粒子の上記粒子サイズ分布が、対照試料の粒子サイズ分布と異なるのかどうかを同定するステップと、
ｄ．上記生物学的試料が、上記対照と比較して、異常に高レベルの粒子を含有するのか、異常に低レベルの粒子を含有するのか、正常レベルの粒子を含有するのかを決定するステップと
を含む、方法。
（項目３５）
上記生物学的試料が、精子試料、血液試料、または唾液試料である、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
先行する項目のいずれか一項に記載の方法による使用のための、ディスク遠心分離機。
（項目３７）
項目２６もしくは項目２７に記載の方法または項目２８に記載のプロセスにより作製されるワクチン組成物。