【手続補正書】
【提出日】平成27年3月2日(2015.3.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中の検体を検出する装置に用いるナノピペットであって、このナノピペットが、
（ａ）ナノポアに至るナノピペットの内部ボアを規定するキャピラリー部分
を具え、
（ｂ）前記内部ボアは、その内部に電極と、前記ナノポアを通して外部溶液と連通する内部溶液とを含むように適合されており、
前記ナノピペットが更に、
（ｃ）前記ナノポアの内側表面上の被膜であって、
（i）前記内側表面に直接結合された高分子電解質の層と、
（ii）前記高分子電解質に結合され、イオン又は小分子より成る基から選択した検体を結合するのに特異的な結合分子と
を有する当該被膜
を具えているナノピペット。
【請求項２】
請求項１に記載のナノピペットにおいて、前記結合分子をボロン酸としたナノピペット。
【請求項３】
請求項２に記載のナノピペットにおいて、前記高分子電解質をポリカチオンとしたナノピペット。
【請求項４】
請求項３に記載のナノピペットにおいて、前記ポリカチオンをポリアルキルピリジン又はポリアミンとしたナノピペット。
【請求項５】
請求項２に記載のナノピペットにおいて、前記被膜が更に、前記ナノポア内に延在するとともにこのナノポアを部分的に封鎖する部分を有しているナノピペット。
【請求項６】
請求項１に記載のナノピペットにおいて、前記結合分子をキレート剤としたナノピペット。
【請求項７】
請求項６に記載のナノピペットにおいて、前記高分子電解質の層を、（ａ）ポリアルキル系の層と、（ｂ）ポリアミンの層と、（ｃ）ポリアルキル系及びポリアミンの交互に重なった層とより成る群から選択したナノピペット。
【請求項８】
請求項７に記載のナノピペットにおいて、前記ポリアミンをポリアルキルピリジンとしたナノピペット。
【請求項９】
請求項１に記載のナノピペットにおいて、前記結合分子を、多糖又はポリペプチドであるイオン結合ポリマーとしたナノピペット。
【請求項１０】
請求項９に記載のナノピペットにおいて、前記イオン結合ポリマーをキトサンとしたナノピペット。
【請求項１１】
請求項９に記載のナノピペットにおいて、前記イオン結合ポリマーをカルモジュリンとしたナノピペット。
【請求項１２】
試料中の糖検体を測定するナノピペット装置であって、このナノピペット装置が、
（ａ）内部ボアと前記試料内に開口するナノポアとを有するナノピペットと、
（ｂ）内部溶液と接触するように配置された、前記内部ボア内の電極及び前記試料と接触するように配置された基準電極と、
（ｃ）前記ナノポアの内側表面上の被膜と
を具え、
（ｄ）前記被膜は、糖を結合するのに特異的であり、この糖を結合させるのに有効な結合分子を有しており、
前記ナノピペットが更に、
（ｅ）電極間に電圧を発生させるとともに、前記試料、前記ナノポア及び前記内部溶液を通る正及び負のイオン電流を測定し、前記試料中の糖が、前記結合分子を有する前記被膜に結合された際に、負のイオン電流に濃度に依存する変化を生ぜしめるようにする電圧制御回路
を具えているナノピペット装置。
【請求項１３】
請求項１２に記載のナノピペット装置において、前記結合分子をタンパク質としたナノピペット装置。
【請求項１４】
請求項１２に記載のナノピペット装置において、前記結合分子をボロン酸としたナノピペット装置。
【請求項１５】
請求項１２に記載のナノピペット装置において、前記ナノピペットを石英としたナノピペット装置。
【請求項１６】
請求項１２に記載のナノピペット装置において、前記電圧制御回路が電圧クランプ増幅器を有しているナノピペット装置。
【請求項１７】
請求項１２に記載のナノピペット装置において、前記被膜がポリカチオンを有しているナノピペット装置。
【請求項１８】
溶液中の２種類の異なるイオンからイオン化合物を形成するイオン化合物形成方法であって、この方法が、
（ａ）ナノピペットの内部と外部溶液との間にナノポアを有するナノピペットの内側の溶液内に電荷を有する少なくとも１種類の第１のイオンを生ぜしめるステップと、
（ｂ）外部溶液内に第２のイオンの種を生ぜしめるステップと、
（ｃ）ナノピペットの内側の溶液内の電荷を有する前記少なくとも１種類の第１のイオンに対し反対の電荷のナノポアにまたがる電圧を印加し、この電圧は、前記イオンの種をナノポアに移動させ、これにより前記第２のイオンと反応させてイオン化合物を形成するのに充分な電圧とするステップと
を具えるイオン化合物形成方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載のイオン化合物形成方法において、この方法が更に、ナノポアを通るイオン電流を測定するとともに、イオン化合物の形成を表す電流変化を検出するステップを具えるイオン化合物形成方法。
【請求項２０】
請求項１８に記載のイオン化合物形成方法において、この方法が更に、ナノポアを通るイオン電流を測定するとともに、イオン化合物の形成を表す前記電流変化を発振とするイオン化合物形成方法。
【請求項２１】
請求項１８に記載のイオン化合物形成方法において、前記イオン化合物を不溶性とするイオン化合物形成方法。
【請求項２２】
請求項１８に記載のイオン化合物形成方法において、前記第１のイオン又は前記第２のイオンを、アニオンと反応してイオン化合物を形成する金属カチオンとするイオン化合物形成方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載のイオン化合物形成方法において、前記金属カチオンを遷移金属とするイオン化合物形成方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載のイオン化合物形成方法において、前記金属カチオンを、Mg2+、Ca2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+、Fe2+、Fe3+、Cr3+、Cr6+、Cd2+、Mo2+、Co3+、Co2+、Hg2+、Ni2+、A13+、A12+、Ar3+、Ar3-及びPb2+より成る群から選択するイオン化合物形成方法。
【請求項２５】
請求項１８に記載のイオン化合物形成方法において、前記アニオンを、リン酸塩、塩化物、硫酸塩、一リン酸塩、ピロリン酸塩、メタリン酸塩、トリポリリン酸塩、トリメタリン酸塩及びオルトリン酸塩より成る群から選択するイオン化合物形成方法。
【請求項２６】
請求項２５に記載のイオン化合物形成方法において、前記アニオンを、グルコン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、ＥＤＴＡ、シトラコン酸塩、シトラマル酸塩、ステアリン酸塩、オレイン酸塩、ラウリン酸塩、オクトエートアスコルビン酸塩、ピコリン酸塩及びオロチン酸塩より成る群から選択した有機カルボン酸アニオンより成る群から選択するイオン化合物形成方法。
【請求項２７】
請求項１８に記載のイオン化合物形成方法において、前記アニオンをタンパク質とするイオン化合物形成方法。
【請求項２８】
請求項１８に記載のイオン化合物形成方法において、この方法が更に、沈殿物が形成された後に前記電圧を反転させるステップを有しているイオン化合物形成方法。
【請求項２９】
請求項１８に記載のイオン化合物形成方法において、この方法が更に、イオン化合物の形成が行われたことを検出するステップを有しているイオン化合物形成方法。
【請求項３０】
ナノポア内に延在してこのナノポアを部分的に遮断するようにナノポアに被着する高分子電解質／検出用分子を含み、検出用分子をより多く試料に曝すようにする請求項１に記載のデバイス。
【請求項３１】
キレート剤を、多糖であるイオン結合ポリマーとした請求項１に記載のデバイス。
【請求項３２】
糖尿病の危険性がある対象者が必要としうるためにグルコース検出に対し適合させた請求項１に記載のデバイス。
【請求項３３】
請求項１に記載されたナノピペット装置を用いて、試料中の検体を決定する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２６】
ポリマーＰＶＰ‐ＢＡの合成：ポリ（4-ビニルピリジン）（ＭＷ 60,000）をSigma 社から購入し、そのまま用いた。o-ブロモメチルフェニルボロン酸の合成を、決められた手順を用いて実行した。磁気撹拌子を含む１０ｍＬの丸底フラスコに、ポリ（4-ビニルピリジン）（０．１００ｇ、０．００１６７ミリモル）及びm-ブロモメチルフェニルボロン酸（０．２０６ｇ、０．９５４ミリモル）を加えた。次に、Ｎ，Ｎ‐ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）及びメタノール（２ｍＬ）を加えて試薬を溶解させた。混合体を２３時間撹拌させ、次にジクロロメタン（１０ｍＬ）を入れた５０ｍＬのビーカーに液滴状に添加して生成物を沈殿させた。このビ−カーを氷の浴内に入れてこの生成物を完全に沈殿させた。次に、溶液を、上部が取り外し可能なツーピースフリットフィルタ内に注ぎ、アルゴンガスを用いて不活性状態の下で真空フィルタ処理した。この生成物をジクロロメタンの３×１５ｍＬ部分で洗浄し、次いで真空デシケータ内に入れて一晩中乾燥させた。隔離された生成物は０．２５７ｇ（９０％の収率）であった。１Ｈ‐ＮＭＲはポリマーの８２％アルキル化を呈した（データは示さない）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３６】
【表１】
2014508300.tif 000001