【手続補正書】
【提出日】平成27年7月14日(2015.7.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物被験体の胸腔内液若しくは漿液中の癌細胞の存在によって特徴付けられる、癌の検出方法であって、該方法が
ａ）被験体の胸腔内液若しくは漿液のサンプルを、癌細胞上の決定子に結合するがしかし胸腔内液若しくは漿液中の他の細胞および細胞以外の成分にベースライン閾値より上で結合しない第一のリガンドに結合されたコロイド状磁性粒子、と接触させること；ならびに
ｂ）胸腔内液と磁性粒子の混合物若しくは漿液と磁性粒子の混合物を磁場に曝し、該胸腔内液若しくは漿液中に存在する場合はリガンドに結合された磁性粒子が結合された細胞が濃縮された細胞画分を生じること
を含んでなる、上記方法。
【請求項２】
ｃ）胸腔内液若しくは漿液中のリガンドに結合された磁性粒子が結合された細胞の数について濃縮された画分を分析すること；および
ｄ）胸腔内液若しくは漿液中のベースライン閾値より大きいリガンドに結合された磁性粒子が結合された細胞の数を同定することにより癌の検出を提供すること
をさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
胸腔内液が胸水である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
接触段階、曝す段階および分析段階により胸腔内液若しくは漿液を分析する前若しくは後に異常細胞の存在について胸腔内液若しくは漿液の細胞学的若しくは免疫細胞学的検査を実施することをさらに含んでなる、請求項１若しくは２に記載の方法。
【請求項５】
胸腔内液若しくは漿液を前記接触段階の前に希釈することをさらに含んでなる、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
胸腔内液若しくは漿液が希釈液で１：１０の比で希釈される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
接触段階が、被験体から胸腔内液サンプル若しくは漿液サンプルを抜き出すことの２４時間以内に起こる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
胸腔内液若しくは漿液と磁性粒子の混合物に、癌細胞若しくは非癌細胞で発現される抗原に特異的な第二のリガンドか、または濃縮された画分中の他の細胞若しくは細胞破片から非癌細胞を識別することが可能である試薬、を添加すること；
胸腔内液若しくは漿液と磁性粒子の混合物に、癌細胞の第二の細胞決定子を結合する標識試薬を添加すること；
胸腔内液若しくは漿液と磁性粒子の混合物に、細胞破片から生存細胞を識別する細胞特異的色素を添加すること；あるいは
濃縮された画分から非癌細胞、無核細胞、細胞破片および結合されない物質を分析前に精製すること
を含んでなる１若しくはそれ以上の付加的な段階をさらに含んでなる、請求項１若しくは２に記載の方法。
【請求項９】
第一のリガンドが最低１種の癌細胞決定子に特異的なモノクローナル抗体若しくはそのフラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
さらに、第二のリガンドが、胸腔内液中の白血球に特異的に結合するか、若しくは癌細胞上の特異的腫瘍マーカーに結合して、胸腔内液若しくは漿液中に存在する癌細胞の特異性を高める若しくはそれらを同定する、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
第一のリガンド、第二のリガンド若しくは標識試薬の最低１種が肺癌細胞若しくは乳癌細胞に特異的に結合する、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
癌が、肺癌、リンパ腫、中皮腫、転移性乳癌、転移性卵巣癌および転移性前立腺癌よりなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
第一のリガンドが上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）に特異的に結合する、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
第一のリガンドがＬ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）に特異的に結合する、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
第一のリガンドがクローディン４に特異的に結合する、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
第一のリガンドがＥｐＣＡＭ若しくはＬ１ＣＡＭに特異的に結合し、かつ、第二のリガンドがクローディン４に特異的に結合する、請求項８に記載の方法。
【請求項１７】
ベースライン閾値が３．５ｍｌの胸腔内液あたり約１１００  ＥｐＣＡＭ+細胞である
、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
ＥＰＣＡＭ＋細胞が１種若しくはそれ以上の付加的な特異的腫瘍マーカーについて染色される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
付加的な特異的腫瘍マーカーがサイトケラチン、クローディン４、サバイビン若しくはテロメラーゼの１種である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
胸痛、席、呼吸困難、疲労および炎症よりなる群から選択される臨床症状について哺乳動物被験体の臨床評価を実施すること；
被験体からの胸腔内液若しくは漿液サンプルを、前記サンプル中のタンパク質若しくはアルブミンの濃度を測定する試薬と接触させること；ならびに
被験体の疾患の間かまたは被験体の癌の処置の前若しくは後の異なる時点で、胸腔内液若しくは漿液中の癌細胞の数を分析するために、請求項１の前記段階（ａ）および（ｂ）を反復すること
を含んでなる１若しくはそれ以上の段階をさらに含んでなる、請求項１若しくは２に記載の方法。
【請求項２１】
前記被験体が癌に対し処置されておりかつ該方法が処置の有効性若しくは予後の決定を可能にする、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記胸水が、接触段階前の被験体からの胸腔内液のサンプルの決定的でない細胞学的若しくは免疫細胞化学的検査後に未知の病因のものであると決定された、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
漿液若しくは胸腔内液のサンプルを、接触段階の前に本質的に均質な大きさの孔を含んでなるフィルターを通して濾過すること；
予後および予測マーカーを使用して、濃縮された細胞画分を分析すること；
遺伝子の変異解析を使用して、濃縮された細胞画分を分析すること；ならびに
濃縮された細胞画分の蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを実施すること、
を含んでなる１若しくはそれ以上の段階を含んでなる、請求項１若しくは２に記載の方法。
【請求項２４】
予後および予測マーカーが、ＥＧＦＲ、ＥＲ、Ｋｉ６７、ＰＲ、Ｈｅｒ２／ｎｕ、ＢＣＬ２、Ｍ３０、Ｃｏｘ−２、ＰＴＥＮ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＡＫＴ、ＰＡＲＰ、ＣＭＥＴ、Ｐ５３、Ｐ２７、ＣＥＡ、ＡＲ、ＰＳＭＡおよびＰＳＡよりなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
遺伝子がＥＧＦＲ、ＢＲＡＦ、ＡＲＡＦ、Ｋ−ｒａｓおよびＰ５３よりなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
細胞学的若しくは分子マーカーを使用して、濃縮された細胞画分を特徴づけること；
濃縮された細胞画分を培養すること；および
細胞学的若しくは分子いずれかのマーカーを使用して、濃縮された細胞画分を特徴づけること
を含んでなる１若しくはそれ以上の付加的な段階を実施することをさらに含んでなる、請求項１若しくは２に記載の方法。
【請求項２７】
培養された濃縮された画分を分析すること；および
培養された濃縮された画分で薬物動態研究を実施すること
を含んでなる１若しくはそれ以上の段階をさらに含んでなる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
哺乳動物被験体の胸腔内液若しくは漿液中の癌細胞の存在を特徴とする癌の検出方法であって、該方法が
ａ）既知の本質的に均一の孔径の孔を含んでなるフィルターで被験体の胸腔内液若しくは漿液のサンプルを濾過して胸水腫瘍細胞（ＰＥＴＣ）を濃縮すること；
ｂ）濾過されたＰＥＴＣの数を分析すること；および
ｃ）胸腔内液若しくは漿液中のベースライン閾値より大きい濾過されたＰＥＴＣの数を同定することにより癌の検出を提供すること
を含んでなる、上記方法。
【請求項２９】
予後および予測マーカーを使用して、濃縮された細胞画分を分析すること；
遺伝子の変異解析を使用して、濃縮された細胞画分を分析すること；および
濃縮された細胞画分の蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを実施すること
を含んでなる１若しくはそれ以上の段階を含んでなる、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
予後および予測マーカーが、ＥＧＦＲ、ＥＲ、Ｋｉ６７、ＰＲ、Ｈｅｒ２／ｎｕ、ＢＣＬ２、Ｍ３０、Ｃｏｘ−２、ＰＴＥＮ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＡＫＴ、ＰＡＲＰ、ＣＭＥＴ、Ｐ５３、Ｐ２７、ＣＥＡ、ＡＲ、ＰＳＭＡおよびＰＳＡよりなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
遺伝子がＥＧＦＲ、ＢＲＡＦ、ＡＲＡＦ、Ｋ−ｒａｓおよびＰ５３よりなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。