【手続補正書】
【提出日】平成26年12月4日(2014.12.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つ以上のＮ−グリカン構造を含む単離ヒト組換えリソソーム酸リパーゼ（ＬＡＬ）を含む、組成物。
【請求項２】
前記ＬＡＬが実質的に配列番号２のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ＬＡＬが配列番号２で記載されるアミノ酸配列からなる、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＬＡＬが、配列番号２のＡｓｎ１５、Ａｓｎ５１、Ａｓｎ８０、Ａｓｎ１４０、Ａｓｎ２５２およびＡｓｎ３００からなる群より選択される少なくとも１つの位置においてＮ−結合グリコシル化されている、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＬＡＬが、配列番号２のＡｓｎ１５、Ａｓｎ８０、Ａｓｎ１４０、Ａｓｎ２５２およびＡｓｎ３００においてＮ−グリコシル化されている、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記ＬＡＬが、リン酸化マンノースを含むＮ−グリカン構造を配列番号２のＡｓｎ８０、Ａｓｎ１４０またはＡｓｎ２５２において含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＬＡＬが、リン酸化マンノースを含むＮ−グリカン構造をＡｓｎ８０において含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
Ａｓｎ８０に関連したＮ−グリカン構造の少なくとも３０％がリン酸化マンノースを有する、請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
Ａｓｎ８０に関連したＮ−グリカン構造の少なくとも５０％がリン酸化マンノースを有する、請求項５に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ＬＡＬが、二リン酸化マンノースを含むＮ−グリカン構造をＡｓｎ８０において含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項１１】
Ａｓｎ８０に関連したＮ−グリカン構造の少なくとも５０％が二リン酸化マンノースを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＬＡＬが、リン酸化マンノース（Ｍ６Ｐ）を含むＮ−グリカン構造をＡｓｎ１４０において含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項１３】
Ａｓｎ１４０に関連したＮ−グリカン構造の約１０％〜約５０％がＭ６Ｐを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＬＡＬが、リン酸化マンノース（Ｍ６Ｐ）を含むＮ−グリカン構造をＡｓｎ２５２において含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項１５】
Ａｓｎ２５２におけるＮ−グリカン構造の少なくとも５０％がＭ６Ｐを含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＬＡＬが、高マンノース基を含むＮ−グリカン構造をＡｓｎ８０またはＡｓｎ２５２において含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記高マンノース基が６、７、８、９または１０個のマンノースを含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記高マンノース基が７、８または９個のマンノースを含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ＬＡＬが、７、８または９個のマンノースを含むＮ−グリカン構造をＡｓｎ８０において含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
Ａｓｎ８０におけるＮ−グリカン構造の少なくとも８０％が７、８または９個のマンノースを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ＬＡＬが、７、８または９個のマンノースを含むＮ−グリカン構造をＡｓｎ２５２において含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２２】
Ａｓｎ２５２におけるＮ−グリカン構造の少なくとも７０％が７、８または９個のマンノースを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ＬＡＬが、末端ガラクトースを含むＮ−グリカン構造をＡｓｎ１５、Ａｓｎ１４０またはＡｓｎ３００において含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項２４】
Ａｓｎ１５に関連したＮ−グリカン構造の約２％〜約１０％が末端ガラクトースを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項２５】
Ａｓｎ１４０に関連したＮ−グリカン構造の５％未満が末端ガラクトースを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項２６】
Ａｓｎ３００に関連したＮ−グリカン構造の１００％未満が末端ガラクトースを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ＬＡＬのＡｓｎ５１が非グリコシル化または実質的に非グリコシル化である、請求項５に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ＬＡＬが、キシロースを有さないＮ−グリカン構造を含み、かつ前記Ｎ−グリカン構造の１５％未満がシアル酸を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２９】
前記ＬＡＬが、キシロースを有さないＮ−グリカン構造を含み、かつ前記Ｎ−グリカン構造の１０％未満がシアル酸を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
前記ＬＡＬが、キシロースを有さないＮ−グリカン構造を含み、かつ前記Ｎ−グリカン構造の５％未満がシアル酸を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３１】
前記ＬＡＬが、キシロースを有さないＮ−グリカン構造を含み、かつ前記Ｎ−グリカン構造の１％未満がシアル酸を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３２】
前記ＬＡＬが、シアル酸およびキシロースを実質的に含まない、請求項１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記ＬＡＬがＮ−グリカン構造を含み、前記Ｎ−グリカン構造の５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満または１％未満がフコースを含む、
請求項１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記ＬＡＬがフコースを含まない、請求項１に記載の組成物。
【請求項３５】
前記ＬＡＬがＮ−グリカン構造を含み、前記Ｎ−グリカン構造の少なくとも３０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％および９５％がリン酸化マンノース（Ｍ６Ｐ）を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ＬＡＬがＮ−グリカン構造を含み、前記Ｎ−グリカン構造の少なくとも９０％がリン酸化マンノース（Ｍ６Ｐ）を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３７】
前記ＬＡＬが、以下のＮ−結合グリコシル化プロファイルを含む、請求項５に記載の組成物：
ｇ）Ａｓｎ１５において、
ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２または
Ｇａｌ１ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；
ｈ）Ａｓｎ８０において、
Ｐｈｏｓ２Ｍａｎ７ＧｌｃＮＡｃ２；
ｉ）１４０において、
Ｐｈｏｓ１Ｍａｎ６ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ１Ｐｈｏｓ１Ｍａｎ６ＧｌｃＮＡｃ２、
Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２または
Ｇａｌ１ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；
ｊ）Ａｓｎ２５２において、
Ｍａｎ７ＧｌｃＮＡｃ２、
Ｍａｎ８ＧｌｃＮＡｃ２、
Ｍａｎ９ＧｌｃＮＡｃ２、
Ｐｈｏｓ１Ｍａｎ８ＧｌｃＮＡｃ２または
Ｐｈｏｓ１Ｍａｎ９ＧｌｃＮＡｃ２；および
ｋ）Ａｓｎ３００において、
ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
Ｇａｌ１ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ５Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
Ｇａｌ１ＧｌｃＮＡｃ５Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ６Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２または
Ｇａｌ１ＧｌｃＮＡｃ６Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２
（式中、
Ｍａｎ＝マンノース、
ＧｌｃＮＡｃ＝Ｎ−アセチルグルコサミン、
Ｐｈｏｓ＝リン酸、
Ｇａｌ＝ガラクトース
である）。
【請求項３８】
前記ＬＡＬが、配列番号２のＡｓｎ１５、Ａｓｎ５１、Ａｓｎ８０、Ａｓｎ１４０、Ａｓｎ２５２およびＡｓｎ３００においてＮ−結合グリコシル化されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３９】
前記ＬＡＬが、以下の構造から選択されるＮ−グリカンを含む、請求項１に記載の組成物：
【化１】
2013526856.tif 000001
（式中、
四角＝Ｎ−アセチルグルコサミン
黒四角＝マンノース−６−リン酸
丸＝マンノース
黒丸＝ガラクトース
黒三角＝フコース
である）。
【請求項４０】
前記ＬＡＬが生殖系列トランスジェニックトリにおいて産生される、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
前記ＬＡＬが前記生殖系列トランスジェニックトリの輸卵管細胞から産生される、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記オリゴ糖構造がトリ由来である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４３】
前記トリがニワトリである、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
組換えヒトリソソーム酸リパーゼ（ＬＡＬ）の混合物を含み、前記混合物が、配列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号１９からなる群より選択される少なくとも２つのヒトＬＡＬを含む、組成物。
【請求項４５】
前記ヒトＬＡＬの混合物が、以下の構造から選択されるＮ−グリカンを含む、請求項４４に記載の組成物：
【化２】
2013526856.tif 000002
（式中、
四角＝Ｎ−アセチルグルコサミン
黒四角＝マンノース−６−リン酸
丸＝マンノース
黒丸＝ガラクトース
黒三角＝フコース
である）。
【請求項４６】
前記ＬＡＬが、以下のＮ−結合グリコシル化プロファイルを含む、請求項４４に記載の組成物：
ａ）配列番号２、３、４および１９のそれぞれＡｓｎ１５、Ａｓｎ１３、Ａｓｎ１０およびＡｓｎ９において、
ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２または
Ｇａｌ１ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；
ｂ）配列番号２、３、４および１９のそれぞれＡｓｎ８０、Ａｓｎ７８、Ａｓｎ７５およびＡｓｎ７４において、
Ｐｈｏｓ２Ｍａｎ７ＧｌｃＮＡｃ２；
ｃ）配列番号２、３、４および１９のそれぞれＡｓｎ１４０、Ａｓｎ１３８、Ａｓｎ１３５およびＡｓｎ１３４において、
Ｐｈｏｓ１Ｍａｎ６ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ１Ｐｈｏｓ１Ｍａｎ６ＧｌｃＮＡｃ２、
Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２
ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２
ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２または
Ｇａｌ１ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；
ｄ）配列番号２、３、４および１９のそれぞれＡｓｎ２５２、Ａｓｎ２５０、Ａｓｎ２４７およびＡｓｎ２４６において、
Ｍａｎ７ＧｌｃＮＡｃ２、
Ｍａｎ８ＧｌｃＮＡｃ２、
Ｍａｎ９ＧｌｃＮＡｃ２、
Ｐｈｏｓ１Ｍａｎ８ＧｌｃＮＡｃ２または
Ｐｈｏｓ１Ｍａｎ９ＧｌｃＮＡｃ２；および
ｅ）配列番号２、３、４および１９のそれぞれＡｓｎ３００、Ａｓｎ２９８、Ａｓｎ２９５およびＡｓｎ２９４において、
ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
Ｇａｌ１ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ５Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
Ｇａｌ１ＧｌｃＮＡｃ５Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、
ＧｌｃＮＡｃ６Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２または
Ｇａｌ１ＧｌｃＮＡｃ６Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２。
【請求項４７】
単離リソソーム酸リパーゼ（ＬＡＬ）分子を含み、前記ＬＡＬが、トランスジェニックニワトリの輸卵管細胞内で産生され、前記ＬＡＬをコードする導入遺伝子を含む前記トランスジェニックニワトリの卵白から単離される、組成物。
【請求項４８】
前記ＬＡＬがヒトＬＡＬである、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
前記輸卵管細胞が管状腺細胞である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
前記単離ヒトＬＡＬがニワトリ由来のグリコシル化パターンを含む、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
ＬＡＬ欠損症に関連した状態に罹患している患者を治療する方法であって、組換えヒトＬＡＬを含む組成物の治療有効量を前記患者に投与することを含む方法。
【請求項５２】
前記組換えヒトＬＡＬが請求項１〜３３のいずれか１項に記載の組成物である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記状態がコレステリルエステル蓄積症（ＣＥＳＤ）である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記状態がウォルマン病である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
前記患者に約０．３５ｍｇ／ｋｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇの間の前記ＬＡＬ組成物を投与する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５６】
前記患者に約０．３５ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇの間の前記ＬＡＬ組成物を投与する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５７】
前記患者に約１．０ｍｇ／ｋｇ〜３．０ｍｇ／ｋｇの間の有効量を隔週で投与する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５８】
グリコシル化ヒトリソソーム酸リパーゼ（ＬＡＬ）を作製する方法であって、プロモーターと作動可能に連結されたヒトＬＡＬをコードする導入遺伝子を含み、かつ輸卵管細胞内で前記ヒトＬＡＬを発現する生殖系列トランスジェニックトリを作製し、前記ＬＡＬが、前記輸卵管細胞内でグリコシル化され、前記トランスジェニックトリが産む硬殻卵内に蓄積される、方法。
【請求項５９】
グリコシル化ヒトリソソーム酸リパーゼ（ＬＡＬ）を産生する、トランスジェニックトリ。
【請求項６０】
請求項５９に記載のトランスジェニックトリが産む卵。
【請求項６１】
請求項５９に記載のトランスジェニックトリにより産生されたヒトＬＡＬを含有する、卵白。
【請求項６２】
請求項１に記載のヒト組換えリソソーム酸リパーゼをコードする核酸配列を担持する、ベクター。
【請求項６３】
請求項６２に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項６４】
ＬＡＬ欠損症に関連した状態に罹患している患者を治療する方法であって、組換えヒトＬＡＬを含む組成物の治療有効量を前記患者に投与することと、第二の治療剤を前記患者に投与することとを含む、方法。
【請求項６５】
前記第二の治療剤が、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンからなる群より選択されるコレステロール低化剤である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記第二の治療剤が免疫抑制剤である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
請求項１に記載の組成物を薬学的に許容される担体、希釈剤または添加剤とともに含む、医薬製剤。
【請求項６８】
クエン酸三ナトリウム脱水和物、クエン酸およびヒト血清アルブミンからなる群より選択される少なくとも１つの薬剤を含む、請求項６７に記載の医薬製剤。
【請求項６９】
ｐＨが約５．６〜約６．２の間に維持された水溶液で提供される、請求項６７に記載の医薬製剤。
【請求項７０】
ｐＨが５．７〜６．１の間に維持されている、請求項６９に記載の医薬製剤。