【手続補正書】
【提出日】平成26年11月21日(2014.11.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ：
【化１】
2014507396.tif 000001
［式中、Ｒは、（Ｃ１−Ｃ７）アルキル、（Ｃ２−Ｃ７）アルケニルまたは（Ｃ２−Ｃ７）アルキニルであり；ここで、Ｒは、Ｒ１から独立して選択された置換基で１回以上置換され；ここで、
Ｒ１は、
（ａ）フルオロ、シアノもしくはヒドロキシであるか；または
（ｂ）（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニルもしくは（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキリデンであり、その各々が場合によりＲ２から独立して選択された１以上の置換基で置換されていてよく、ここで、Ｒ２は、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ２−Ｃ４）アルケニル、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−ＮＲａＣＯＲｂ、−ＣＯＯＲｃ、−ＯＣＯＲａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＯＣＯＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣＯＯＲｂ、−ＮＲａＣＯＮＲａＲｂ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＳＯ２Ｒａ、−Ｓ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＲａ、−ＳＲａ、＝Ｎ−ＯＲａもしくは＝Ｏであるか；または
（ｃ）−ＮＲａＣＯＲｂ、−ＣＯＯＲｃ、−ＯＣＯＲａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＯＣＯＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣＯＯＲｂ、−ＮＲａＣＯＮＲａＲｂ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＳＯ２Ｒａ、−Ｓ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＲａ、−ＳＲａ、＝Ｎ−ＯＲａ、−ＮＲａＲｂもしくは＝Ｏであり；
そして、ここで、
ＲａおよびＲｂは独立して、水素、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、シアノ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルもしくはアリールであり；
そして、ここで、
Ｒｃは、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ハロ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシル（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルもしくはシアノ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり；
ただし、Ｒ１がアルキルまたはアルケニルである場合、ＲとＲ１とを合した鎖長は７炭素原子鎖長を超えない、および
ただし、ＲおよびＲ１は組合せて、直鎖の非分岐鎖もしくは非置換アルキル鎖ではなく、直鎖の非分岐鎖もしくは非置換アルケニル鎖でもなく、および
ただし、Ｒは、またはＲおよびＲ１は組合せて、トランス−２−ブテン−２−イルではない。］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｒが、カルボニル基に対してアルファ位またはベータ位でＲ１により置換されている、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項３】
Ｒが、カルボニル基に対してアルファ位でＲ１により置換されている、請求項１または２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項４】
ＲがＣ１−Ｃ７−アルキルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項５】
Ｒが、エチル、プロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、２−ブチル、３−ペンチルまたはイソブチルである、請求項４に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項６】
ＲがＣ２−Ｃ７−アルケニルである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項７】
Ｒが、プロペニルまたはエテニルである、請求項６に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項８】
Ｒ１が、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、アリール、シクロアルキル、シクロアルキリデン、＝Ｎ−ＯＲａ、＝Ｏ、−ＮＲａＲｂ、−ＣＯＯＲｃまたはシアノである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項９】
Ｒ１が、エチル、メチル、フェニル、シクロヘキシル、＝Ｎ−ＯＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）（Ｃ６Ｈ５）、−ＣＯＯＣＨ３またはシクロヘキシリデンである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１０】
Ｒ１がメチルである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１１】
Ｒ２がメチルである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１２】
以下の化合物である請求項１〜１０にいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物：
インゲノール３−（２−メチル−アクリラート）、
インゲノール３−（３−メチル−ブテノアート）、
インゲノール３−（２，３−ジメチル−ブテノアート）、
インゲノール３−（２−メチレン−ブチラート）、
インゲノール３−（２−メチル−プロパノアート）、
インゲノール３−（３−メチル−ブタノアート）、
インゲノール３−（２ＲＳ−メチル−ブタノアート）、
インゲノール３−（３，３−ジメチル−ブタノアート）、
インゲノール３−（２−エチル−ブタノアート）、
インゲノール３−（２Ｒ−メチル−ブタノアート）、
インゲノール３−チグラート、
インゲノール３−（フェニル−アセテート）、
インゲノール３−（２Ｚ−（メトキシカルボニル）−アクリラート）、
インゲノール３−（２−シクロヘキシルプロパノアート）、
インゲノール３−（（２Ｚ）−２−メトキシイミノ−２−フェニル−アセテート）、
インゲノール３−（（２Ｅ）−２−メトキシイミノ−２−フェニル−アセテート）、
インゲノール３−（（Ｚ）−２−メチル−３−（ｐ−トリル）プロパ−２−エノアート）、
インゲノール３−（（Ｅ）−２−フェニルブタ−２−エノアート）、
インゲノール３−（２，２−ジフェニルアセテート）、
インゲノール３−（２−シアノ−２−シクロヘキシリデン−アセテート）または
インゲノール３−（２−（メチル（フェニル）アミノ）−２−オキソ−アセテート）。
【請求項１３】
治療における医薬として使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１４】
過形成または新形成に付随する生理学的障害または疾患の処置、防止、改善または予防に使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１５】
障害または疾患が、皮膚のいぼ、生殖器のいぼ、光線性角化症、扁平上皮癌（ＳＣＣ）、基底細胞癌（ＢＣＣ）、悪性黒子、頸部上皮内がん、肛門上皮内腫瘍または外陰上皮内腫瘍から選択される、請求項１４に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１６】
過形成または新形成に付随する生理学的障害または疾患の処置、改善または予防用医薬の製造のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物の使用。
【請求項１７】
障害または疾患が、皮膚のいぼ、生殖器のいぼ、扁平上皮癌（ＳＣＣ）、基底細胞癌（ＢＣＣ）、悪性黒子、頸部上皮内がん、肛門上皮内腫瘍または外陰上皮内腫瘍から選択される、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物を含む、過形成または新形成に付随する生理学的障害または疾患の防止、処置、改善または予防用医薬。
【請求項１９】
障害または疾患が、皮膚のいぼ、生殖器のいぼ、扁平上皮癌（ＳＣＣ）、基底細胞癌（ＢＣＣ）、悪性黒子、頸部上皮内がん、肛門上皮内腫瘍または外陰上皮内腫瘍から選択される、請求項１８に記載の医薬。
【請求項２０】
美容指標の処置または改善における使用のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項２１】
美容指標が、光線性皮膚障害または脂漏性角化症から選択される、請求項２０に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項２２】
美容指標の処置または改善用医薬の製造のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物の使用。
【請求項２３】
美容指標が、光線性皮膚障害または脂漏性角化症から選択される、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物を含む、美容指標の処置または改善用医薬。
【請求項２５】
美容指標が、光線性皮膚障害または脂漏性角化症から選択される、請求項２４に記載の医薬。
【請求項２６】
好中球の酸化バーストの刺激に応答性の疾患、障害または状態の処置または改善用の医薬組成物の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物の使用。
【請求項２７】
ケラチノサイトＩＬ−８放出の刺激に応答性の疾患、障害または状態の処置または改善用の医薬組成物の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物の使用。
【請求項２８】
ネクローシスの誘導に応答性の疾患、障害または状態の処置または改善用の医薬組成物の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物の使用。
【請求項２９】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物を含む、好中球の酸化バーストの刺激に応答性の生理学的障害または疾患の防止、処置、改善または予防用医薬。
【請求項３０】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物を含む、ケラチノサイトＩＬ−８放出の刺激に応答性の生理学的障害または疾患の防止、処置、改善または予防用医薬。
【請求項３１】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物を含む、ネクローシスの誘導に応答性の生理学的障害または疾患の防止、処置、改善または予防用医薬。
【請求項３２】
好中球の酸化バーストの刺激に応答性の疾患、障害または状態の処置または改善に使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項３３】
ケラチノサイトＩＬ−８放出の刺激に応答性の疾患、障害または状態の処置または改善に使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項３４】
ネクローシスの誘導に応答性の疾患、障害または状態の処置または改善に使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項３５】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される立体異性体、塩、インビボ加水分解性エステル、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物を、薬学的に許容されるビヒクルまたは賦形剤と共に含む、医薬組成物。
【請求項３６】
局所投与に適した、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される立体異性体、塩、インビボ加水分解性エステル、プロドラッグ、水和物もしくは溶媒和物を、１以上の他の治療上の活性薬剤を含む、医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】インゲノール−３−アシラートＩ
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、３−アシル−インゲノールの新規誘導体およびその誘導体に、ならびにその医薬としての及び治療における使用に関する。本発明は、前記化合物を含む医薬および前記化合物による疾患の治療方法も提供する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
（発明の背景）
インゲノール−３−アンゲラート(PEP005, インゲノールメブテート（mebutate）)は、様々なトウダイグサ属種（Euphorbia species）、特にチェボタイゲキ（Euphorbia peplus）から単離されるインゲノールファミリーのジテルペン−エステルである。この化合物は、現在、光線性角化症および非黒色腫性の皮膚癌の処置に関する臨床開発の対象である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
多くの他のインゲノール−３−アシラート、主として長鎖飽和および不飽和脂肪族脂肪酸が、トウダイグサ属種から単離された[H. Gotta, Z. Naturforschung, (1984), 39b, 683-94; K. Abo, Fitoterapia, (1988), 244-46, S. Zayed, J. Cancer Res. Clin. Oncol. (2001), 127, 40-47]。さらに、少数のインゲノール−３−アシラートが、半合成されている（B. Sorg et. al., Z. Naturforsch., (1982), 37b, 748-56）。これらインゲノール誘導体の幾つかは、強い刺激物および強い腫瘍促進物質（tumor-promoting agent）であると記載および検証されている[B. Sorg et. al., Z. Naturforsch., (1982), 37b, 748-56; B. Sorg et. al., Carcinogenesis, (1987), 8, 1-4]。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
脂肪族インゲノールエステルの他にも、インゲノールの芳香族エステルが知られている。ミリアミンＣ、インゲノール−３−アントラニル酸塩（anthraniloate）誘導体が記載された(Marston, A. Planta Medica, (1983), 47, 141-47)。また、インゲノール−３−ベンゾエートが記載されている(Sorg, B.; Z Naturforschung , (1982), 37b, 748-56)。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
アンゲリカ酸およびアンゲリカ酸エステルは、インゲノール−３−アンゲラート（angelate）で存在するため、二重結合の異性化により、チグリン酸エステルを形成する傾向が、特に塩基性のｐＨの場合に、ある[Beeby, P., Tetrahedron Lett. (1977), 38, 3379-3382, Hoskins, W.M., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, (1977), 538-544, Bohlmann, F. et. al., Chem. Ber. (1970), 103, 561-563]。
さらに、インゲノール−３−アシラートは、再編しインゲノール−５−アシラートおよびインゲノール−２０−アシラートを与えるため不安定であることが知られている[Sorg, B. et. al, Z. Naturforsch., (1982), 37B, 748-756]。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
ＷＯ９９／０８９９４は、トウダイグサ属植物からの化合物群の単離および癌や他の腫瘍性疾患、下記するところの、光線性角化症または日光性角化症におけるそれらの使用を記載する。ＷＯ０１／９３８８３は、被検体におけるＰＫＣ関連の状態または障害の予防に関する、本願発明と異なるインゲノール誘導体を記載する。ＷＯ０１／９３８８３に記載の疾患は、喘息、アテローム性動脈硬化症、アトピー性皮膚炎、自己免疫疾患、双極性障害、血液疾患、心肥大、抑うつ症、糖尿病、高血圧、過形成皮膚病、多発性硬化症、心筋虚血、変形性関節症、乾癬、関節リウマチ、移植および潜伏ウイルである。ＷＯ０１／９３８８４は、本願発明と異なるインゲノール誘導体、および病原体、ウイルス、酵母、真菌、ワーム、昆虫、クモ形類、線虫、好気性細菌（aemobe）等により生じる結果としての炎症性状態を処置するにあたっての、それらの使用を開示する。ＷＯ０１／９３８８５は、免疫増強に関する、本願発明と異なるインゲノール誘導体を記載する。ＷＯ０８／１３１４９１は、ＨＰＶウイルス感染に関する本発明と異なるインゲノール誘導体を記載する。ＷＯ０６／０６３３８２は、固形癌の処置に関する、本願発明と異なるインゲノール誘導体を開示する。ＡＵ  ２００６２０１６６１は、インゲノール−３−アンゲラートを用いる、急性骨髄性白血病を処置する方法を開示する。ＷＯ０２／１１７４３は、前立腺および膀胱がんにおける特定の使用を記載する。創傷治癒を促進するためのインゲノール誘導体は、ＷＯ０７／０５９５８４に記載されている。ＷＯ２０１０／０９１４７２は、他の美容適用におけるインゲノールおよび誘導体の使用を記載する。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
インゲノール−３−アンゲラートは、２つの作用モードを有すると考えられている：１）直接的な細胞毒性（cytoxicity）による細胞死の誘導またはアポトーシスの誘導、および２）好中球リクルートおよび活性化により支配される免疫活性化作用（Rosen, R.H., et al., J Am Acad Derm (2011), e-published Nov 2011; Ersvaer, E., et al., Toxins, (2010), 2, 174-194）。ナノモル濃度の前記試薬が、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）の典型的なアイソフォームおよび新規アイソフォームの活性化および調節を引き起こす。ＰＫＣデルタの特定の重要性が考慮される。ＰＫＣデルタの活性化を通じて、前記試薬は、感受性細胞にアポトーシスを引き起こす（Hampson, P., et al., Blood, (2005), 106, 1362-1368; Cozzi, S.J.,et al., Cancer Res, (2006), 66, 10083-10091）。癌細胞に対する迅速な細胞毒性が、マイクロモルの高濃度で観察される（Ogbourne, S.M., et al., Cancer Res (2004), 64, 2833-2839）。様々なＰＫＣアイソフォームの活性化を通じて、前記試薬は、炎症促進性のメディエーターの放出（Challacombe, J.M., et al., J Immunol (2006), 177, 8123-8132）、脈管内皮の活性化（Hampson, P., et al., Cancer Immunol Immunother, (2008), 57, 1241-1251）；ケラチン生成細胞におけるインターロイキン８の導入を通じた好中球の化学誘導および動物モデルにおけるアジュバント特性を通じたＣＤ８＋細胞による特定の抗癌免疫応答の展開（Le, T.T., et al., Vacccine, (2009), 27, 3053-3062）を含む、炎症促進性作用も誘導する。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
インゲノール−３−アンゲラートと比較して、類似の又は改善された生物活性を有する新規のインゲノール誘導体を見出す必要性がある。さらに、細胞毒性もしくはアポトーシスによる細胞死を誘導する、及び／又は、免疫活性化作用を誘導する新規インゲノール誘導体を見出す必要性がある。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
本発明は、インゲノール−３−アンゲラートの使用と関連した状態の処置に有用な、あるいは細胞毒性（cytoxicity）による細胞死誘導またはアポトーシスの誘導および／または免疫活性化作用により影響のある状態に有用な、分枝もしくは置換された３−Ｏ−アシルインゲノール誘導体を提供する。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
本発明化合物の幾つかは、インゲノール−３−アンゲラートと比較して、好中球の酸化バーストにおける改善された活性を示す。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
本発明化合物の幾つかは、インゲノール−３−アンゲラートと比較して、ＩＬ−８放出アッセイにおいて改善された活性を示す。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本発明化合物の幾つかは、インゲノール−３−アンゲラートと比較して、ネクローシスアッセイにおいて改善された活性を示す。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
実施形態において、本発明は、以下のものである式Ｉの化合物を提供する：
インゲノール３−（２−メチル−アクリラート）、
インゲノール３−（３−メチル−ブテノアート）、
インゲノール３−（２，３−ジメチル−ブテノアート）、
インゲノール３−（２−メチレン−ブチラート）、
インゲノール３−（２−メチル−プロパノアート）、
インゲノール３−（３−メチル−ブタノアート）、
インゲノール３−（２ＲＳ−メチル−ブタノアート）、
インゲノール３−（３，３−ジメチル−ブタノアート）、
インゲノール３−（２−エチル−ブタノアート）、
インゲノール３−（２Ｒ−メチル−ブタノアート）、
インゲノール３−チグラート、
インゲノール３−（フェニル−アセテート）、
インゲノール３−（２Ｚ−（メトキシカルボニル）−アクリラート）、
インゲノール３−（２−シクロヘキシルプロパノアート）、
インゲノール３−（（２Ｚ）−２−メトキシイミノ−２−フェニル−アセテート）、
インゲノール３−（（２Ｅ）−２−メトキシイミノ−２−フェニル−アセテート）、
インゲノール３−（（Ｚ）−２−メチル−３−（ｐ−トリル）プロパ−２−エノアート）、
インゲノール３−（（Ｅ）−２−フェニルブタ−２−エノアート）、
インゲノール３−（２，２−ジフェニルアセテート）、
インゲノール３−（２−シアノ−２−シクロヘキシリデン−アセテート）または
インゲノール３−（２−（メチル（フェニル）アミノ）−２−オキソ−アセテート）。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
実施形態において、本発明は、インゲノール３−（２−メチレン−ブチラート）である式Ｉの化合物を提供する。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
実施形態において、本発明は、インゲノール３−（（Ｚ）−２−メチル−３−（ｐ−トリル）プロパ−２−エノアート）である式Ｉの化合物を提供する。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
実施形態において、本発明は、インゲノール３−（２，３−ジメチル−ブテノアート）である式Ｉの化合物を提供する。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
実施形態において、本発明は、インゲノール３−（２−エチル−ブタノアート）である式Ｉの化合物を提供する。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
実施形態において、本発明は、インゲノール３−（２−シクロヘキシルプロパノアート）である式Ｉの化合物を提供する。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
実施形態において、本発明は、インゲノール３−（（Ｅ）−２−フェニルブタ−２−エノアート）である式Ｉの化合物を提供する。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４３】
本発明の実施形態において、治療上の活性化合物は、適切な溶媒中に溶解される。適切な溶媒は、グリコール、ケトン、アセテートおよびエーテルである。インゲノール化合物は、アルコール類、例えばベンジルアルコールおよびイソプロピルアルコール中で良好な安定性を有することが示された。一般に、インゲノール化合物は、低ｐＨで良好な安定性を有することが、これまでに示されている。本発明の実施形態において、医薬製剤のｐＨは７未満である。本発明の実施形態において、医薬製剤のｐＨは６未満である。本発明の実施形態において、医薬製剤のｐＨは４．５未満である。本発明の実施形態において、医薬製剤のｐＨは４．０未満である。本発明の実施形態において、医薬製剤のｐＨは４．５未満であり、２．５以上である。本発明の実施形態において、医薬製剤のｐＨは４．０未満であり、２．５以上である。好ましいｐＨ範囲は、適当な緩衝液を含めることにより得ることができる。本発明の実施形態において、緩衝液は、酢酸緩衝液である。本発明の実施形態において、クエン酸緩衝液が用いられる。本発明の実施形態において、クエン酸−リン酸の混合緩衝液が用いられる。
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５１】
局所適用用のゲル中でのインゲノール誘導体の製剤化は、ＷＯ０７／０６８９６３（引用により本願明細書中に組み込まれる）に記載されている。
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５４】
スキームＩ
【化６】
2014507396.tif 000002
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５５】
スキーム２
【化７】
2014507396.tif 000003
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５６】
一般式Ｉの化合物は、例えば、限定するものではないが、“Protective Groups in Organic Synthesis”, 第4版. P.G.M. Wuts; T.W. Greene, John Wiley, 2007 またはP.J. Kocienski, “Protecting Groups”, 第3版. G. Thieme, 2003 および本明細書中で引用する文献に記載される方法に従い、インゲノールをヒドロキシル保護剤またはジヒドロキシル保護剤と反応させて保護されたインゲノール誘導体ａまたはｃを得るためのスキーム１または２に従って、合成することができる。
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５７】
例えば、保護基（Ｐｇ）がトリフェニルメチルである化合物ａは、インゲノールを、トリフェニルメチル試薬、例えばトリフェニルメチルピリジニウムフルオロボレートまたはトリフェニルメチルクロライドと、適切な溶媒、例えばピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジクロロメタン中で、塩基の存在下または非存在下で反応させることにより合成できる（例えば、Opferkuch et.al., Z. Naturforschung, (1981), 36B, 878)。
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５８】
保護基（Ｐｇ）がシリルである化合物ａは、例えば、インゲノールを、シリルクロリド、例えばｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルクロリドまたはトリイソプロピルシリルクロリドと、適切な溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ピリジン、ジクロロメタン、テトラヒドロフランまたはアセトニトリル中で、適切な塩基、例えばイミダゾール、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンまたは４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジンの存在下で反応させることによって（例えば、Sorg, B. et. al, Z. Naturforsch., (1982), 37B, 1640-47)、あるいは、化合物（ＩＩ）、シリルトリフラート、例えばｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネートと、適切な溶媒、例えばジクロロメタン中で、適切な塩基、例えばトリエチルアミンの存在下で反応させることによって、合成することができる。
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５９】
Ｐｇが２−テトラヒドロピラニルである化合物ａは、例えば、インゲノールを、ジヒドロピランと、適切な溶媒、例えばジクロロメタンまたはアセトニトリル中で、適切な酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸の存在下で反応させることにより合成することができる。
【手続補正３０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６０】
保護基（Ｐｇ）がアセタール、例えばベンジリデンアセタールである化合物ｃは、例えば、インゲノールを、ベンズアルデヒドまたはベンズアルデヒドジメチルアセタールと、適切な溶媒、例えばジクロロメタンまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中で、適切な酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸の存在下で反応させることにより、調製することができる。
【手続補正３１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６１】
保護基（Ｐｇ）がケタール、例えばイソプロピリデンケタールを表す化合物ｃは、例えば、インゲノールを、アセトンなどのケトンまたは２，２−ジメトキシプロパンなどのジメトキシケタールと、適切な溶媒、例えばジクロロメタンまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中で、適切な酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸の存在下で反応させることによって合成することができる（例えば、B. Sorg, Z. Naturforsch.  (1982), 37b, 748-756）。アセトンおよび２,２−ジメトキシプロパンも溶媒として用いることができる。
【手続補正３２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６２】
スキーム１および２で示されるように、保護されたインゲノール誘導体ａまたはｃは、限定するものではないが、J. Otera, Wiley-VCH, 2003による“エステル化”および本明細書中で引用される文献に記載されるヒドロキシル基のエステル化方法に従って、エステル化して、一般式ｂまたはｄの化合物を得てもよい。化合物ｂまたはｄは、例えば、化合物ａまたはｃを、活性酸誘導体（activated acid derivative）、例えば酸クロリドなどの酸ハロゲン化物と反応させることによって合成することができる。酸クロリドとの反応によるエステル化は、適切な溶媒、例えばジクロロメタンまたはトルエン中で、活性剤を用いずに行うことができるし、あるいは塩基、例えばピリジン、トリエチルアミンまたは４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジンの存在下で行うことができる（例えば、B. Sorg, Z. Naturforsch.  (1982), 37b, 748-756）。
【手続補正３３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７１】
上記スキーム１または２の式ｂ、ｄまたはＩの化合物は、例えば、化合物ａ、ｃまたはインゲノールを、アシル供与体、例えば酸無水物、ビニルエステルもしくはチオエステルなどのエステルと、酵素、例えばリパーゼまたはエステラーゼの存在下で反応させることによって、酵素的エステル化で合成することができる。
【手続補正３４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７３】
【化８】
2014507396.tif 000004
インゲノール−５，２０−アセトニド
インゲノール(1.00g、2.30mmol)を、アセトン中のp-トルエンスルホン酸一水和物の溶液中に溶解した(0.47 mg/mL, 22.5 mL)。該溶液を、室温で２５分間攪拌した。この溶液に、飽和水性NaHCO3溶液(0.2 mL)を加えた。得られた混合液を、減圧下で濃縮した。残渣を塩水中に採り、酢酸エチルで抽出した。合した有機相を、硫酸ナトリウムにより乾燥させ、真空にて濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル 19:1 −＞ ヘプタン/酢酸エチル 0:1）により精製し、標記化合物を白色固体として得た(616mg、69%)。(また、Opferkuch, H. J. et.al., Z. Naturforsch., (1981), 86b, 878-887も参照のこと)。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.91 (q, J = 1.5 Hz, 1H), 5.79 (m, 1H), 4.25 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.20 − 4.07 (m, 3H), 3.93 (s, 1H), 3.51 (s, 1H), 2.57 − 2.41 (m, 2H), 2.25 (ddd, J = 15.7, 8.4, 2.9 Hz, 1H), 1.85 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.77 (dt, J = 15.8, 5.9 Hz, 1H), 1.41 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.00 − 0.87 (m, 4H), 0.70 (td, J = 8.4, 6.4 Hz, 1H). 
【手続補正３５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７５】
手順ａ
カルボン酸 (0.100 mmol)、ジシクロヘキシルカルボジイミド (0.100 mmol)、4-(N,N-ジメチルアミノ)-ピリジン (0.0025 mmol)およびインゲノール-5,20-アセトニド (0.050 mmol)の混合物を、ジクロロメタン中、室温で２０〜２４時間攪拌した。該混合物を、酢酸エチルと混合し、ろ過し、そして、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空にて濃縮し、そしてフラッシュクロマトグラフィー(ヘプタン −＞ ヘプタン/酢酸エチル 7:3)により精製し、標記化合物を白色固体として得た。
【手続補正３６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７６】
手順ｂ
アシル塩化物塩 (0.0625 mmol)、ジイソプロピルエチルアミン (0.075 mmol)、4-(N,N-ジメチルアミノ)-ピリジン (0.070 mmol)およびインゲノール-5,20-アセトニド (0.050 mmol)の混合物を、テトラヒドロフラン中、５５℃で６〜２０時間攪拌した。該混合物を、酢酸エチルと混合し、ろ過し、そして、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空にて濃縮し、そしてフラッシュクロマトグラフィー(ヘプタン −＞ ヘプタン/酢酸エチル 7:3)により精製し、標記化合物を白色固体として得た。
【手続補正３７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７７】
手順ｃ
カルボン酸 (0.100 mmol)、ジシクロヘキシルカルボジイミド (0.100 mmol)、4-(N,N-ジメチルアミノ)-ピリジン (0.025 mmol)およびインゲノール-5,20-アセトニド (0.050 mmol)の混合物を、アセトニトリル中、マイクロ波加熱器にて１５０℃で５分間攪拌した。該混合物を、酢酸エチルと混合し、ろ過し、そして、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空にて濃縮し、そしてフラッシュクロマトグラフィー(ヘプタン −＞ ヘプタン/酢酸エチル 7:3)により精製し、標記化合物を白色固体として得た。
【手続補正３８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７８】
手順ｄ
アシル塩化物塩 (0.125 mmol)、ジイソプロピルエチルアミン (0.250 mmol)、4-(N,N-ジメチルアミノ)-ピリジン (0.025 mmol)およびインゲノール-5,20-アセトニド (0.050 mmol)の混合物を、アセトニトリル中、マイクロ波加熱器にて１５０℃で２０分間攪拌した。該混合物を、酢酸エチルと混合し、ろ過し、そして、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空にて濃縮し、そしてフラッシュクロマトグラフィー(ヘプタン −＞ ヘプタン/酢酸エチル 7:3)により精製し、標記化合物を白色固体として得た。
【手続補正３９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８０】
手順ｅ
インゲノール-5,20-アセトニド-3-アシレート (0.10 mmol)を、テトラヒドロフラン (0.47 mL)中にアルゴン下で溶解した。ＨＣｌ水溶液(4 M, 4.7 μL)を加えた。該溶液を、室温で２０〜２７時間攪拌した。該溶液を、真空にて濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー (ヘプタン/酢酸エチル 5:1 −＞ ヘプタン/酢酸エチル 3:7)により精製し、標記化合物を得た。
【手続補正４０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８１】
【化１１】
2014507396.tif 000005
調製例201:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(2-メチル-アクリラート) (化合物201) 
化合物201は、手順ａに従って調製した。
出発物質： 2-メチル-アクリル酸.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.12-6.11 (m, 1H), 6.05 (m, 1H), 5.79-5-77 (m, 1H), 5.62 (s, 1H), 5.60 (m, 1H), 4.25-4.11 (m, 3H), 4.02 (s, 1H), 3.14 (s, 1H), 2.61-2.54 (m, 1H), 2.31-2.22 (m, 1H), 1.97 (m, 3H), 1.81-1.72 (m, 4H), 1.47 (s, 3H), 1.42 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.99 (d, 3H), 0.94-0.88 (m, 1H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正４１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８２】
【化１２】
2014507396.tif 000006
調製例202:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(3-メチル-ブテノアート) (化合物202) 
化合物202は、手順ａに従って調製した。
出発物質： 3-メチル-ブテン酸.
【手続補正４２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８３】
【化１３】
2014507396.tif 000007
調製例203:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(2,3-ジメチル-ブテノアート) (化合物203) 
化合物203は、手順ａに従って調製した。
出発物質： 2,3-ジメチル-ブテン酸.
【手続補正４３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８４】
【化１４】
2014507396.tif 000008
調製例204:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(2-メチレン-ブタノアート) (化合物204) 
化合物204は、手順ａに従って調製した。
出発物質： 2-メチレン-ブタン酸.
【手続補正４４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８５】
【化１５】
2014507396.tif 000009
調製例205:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(2-メチル-プロパノアート) (化合物205) 
化合物205 は、手順ａに従って調製した。
出発物質： 2-メチル-プロパン酸.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.05-6.04 (m, 1H), 5.78-5.76 (m, 1H), 5.54 (s, 1H), 4.24-4.10 (m, 3H), 4.00 (s, 1H), 3.09 (s, 1H), 2.65-2.54 (m, 2H), 2.31-2.22 (m, 1H), 1.80-1.71 (m, 4H), 1.45 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.21 (d, 3H), 1.19 (d, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.98 (d, 3H), 0.93-0.87 (m, 1H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正４５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８６】
【化１６】
2014507396.tif 000010
調製例206:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(3-メチル-ブタノアート) (化合物206
化合物206 は、手順ａに従って調製した。
出発物質： 3-メチル-ブタン酸.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.04-6.03 (m, 1H), 5.79-5.77 (m, 1H), 5.55 (s, 1H), 4.24-4.10 (m, 3H), 4.00 (s, 1H), 3.15 (s, 1H), 2.60-2.52 (m, 1H), 2.32-2.04 (m, 4H), 1.80-1.71 (m, 4H), 1.45 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.99 (d, 6H), 0.98 (d, 3H), 0.94-0.87 (m, 1H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正４６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８７】
【化１７】
2014507396.tif 000011
調製例207:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(2(RS)-メチル-ブタノアート) (化合物207aおよび207b) 
化合物207aおよび207bは、手順ａに従って調製した。
出発物質： (RS)-2-メチル-ブタン酸.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.05-6.03 (m, 1H), 5.79-5.76 (m, 1H), 5.55 (s, 1H), 4.24-4.10 (m, 3H), 4.00 (s, 1H), 3.12 (s, 1H), 2.61-2.53 (m, 1H), 2.48-2.40 (m, 1H), 2.31-2.22 (m, 1H), 1.80-1.66 (m, 5H), 1.56-1.47 (m, 1H),  1.46 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.20-1.16 (2xd, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.99-0.87 (m, 7H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正４７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８８】
【化１８】
2014507396.tif 000012
調製例208:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(3,3-ジメチル-ブタノアート) (化合物208
化合物208は、手順ａに従って調製した。
出発物質： 3,3-ジメチル-ブタン酸.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.04-6.02 (m, 1H), 5.78-5.77 (m, 1H), 5.55 (s, 1H), 4.24-4.10 (m, 3H), 4.00 (s, 1H), 3.15 (s, 1H), 2.62-2.55 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 1H), 2.27 (s, 2H), 1.78-1.69 (m, 4H), 1.45 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 1.05 (s, 3H), 0.97 (d, 3H), 0.93-0.87 (m, 1H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正４８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８９】
【化１９】
2014507396.tif 000013
調製例209:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(2-エチル-ブタノアート) (化合物209) 
化合物209は、手順ａに従って調製した。
出発物質： 2-エチル-ブタン酸.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.05-6.03 (m, 1H), 5.78-5.76 (m, 1H), 5.56 (s, 1H), 4.25-4.10 (m, 3H), 4.01 (s, 1H), 3.16 (s, 1H), 2.64-2.54 (m, 1H), 2.31-2.21 (m, 2H), 1.78-1.48 (m, 8H), 1.46 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.98 (d, 3H), 0.94 (t, 3H), 0.93 (t, 3H), 0.93-0.87 (m, 1H), 0.72-0.65 (m, 1H).
【手続補正４９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９０】
【化２０】
2014507396.tif 000014
調製例210:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(2R-メチル-ブタノアート) (化合物210) 
化合物210は、手順ａに従って調製した。
出発物質： (R)-2-メチル-ブタン酸.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ6.05-6.03 (m, 1H), 5.79-5.76 (m, 1H), 5.55 (s, 1H), 4.24-4.10 (m, 3H), 4.00 (s, 1H), 3.12 (s, 1H), 2.61-2.53 (m, 1H), 2.50-2.39 (m, 1H), 2.31-2.22 (m, 1H), 1.79-1.66 (m, 5H), 1.59-1.47 (m, 1H),  1.45 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.19-1.16 (d, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.99-0.87 (m, 7H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正５０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９１】
【化２１】
2014507396.tif 000015
調製例211:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-チグラート (化合物211) 
化合物211は、手順ａに従って調製した。
出発物質： チグリン酸.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.90-6.82 (m, 1H), 6.05-6.04 (m, 1H), 5.78-5.76 (m, 1H), 5.62 (s, 1H), 4.24-4.11 (m, 3H), 4.01 (s, 1H), 3.17 (s, 1H), 2.61-2.56 (m, 1H), 2.31-2.22 (m, 1H), 1.86-1.72 (m, 10H), 1.45 (s, 3H), 1.42 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.00 (d, 3H), 0.94-0.88 (m, 1H), 0.73-0.63 (m, 1H).
【手続補正５１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９２】
【化２２】
2014507396.tif 000016
調製例212:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(フェニル-アセテート) (化合物212) 
化合物212は、手順ａに従って調製した。
出発物質： フェニル-酢酸.
【手続補正５２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９３】
【化２３】
2014507396.tif 000017
調製例213:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(2Z-(メトキシカルボニル)-アクリラート) (化合物213) 
化合物213は、手順ａに従って調製した。
出発物質： フマル酸モノ-メチルエステル.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.93 (d, 1H), 6.85 (d, 1H), 6.09 (m, 1H), 6.80-6.78 (m, 1H), 5.62 (s, 1H), 4.26-4.09 (m, 3H), 4.02 (s, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.59-3.53 (m, 1H), 2.29-2.20 (m, 1H), 2.82-2.73 (m, 4H), 1.47 (s, 3H), 1.43 (s, 3H), 1.27 (bs, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.00 (d, 3H), 0.94-0.85 (m, 1H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正５３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９４】
【化２４】
2014507396.tif 000018
調製例214:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(2−シクロヘキシルプロパノアート) (化合物214) 
化合物214は、手順ｃに従って調製した。
出発物質： 2−シクロヘキシルプロパン酸.
【手続補正５４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９５】
【化２５】
2014507396.tif 000019
調製例215:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-((2Z)-2-メトキシイミノ-2-フェニル-アセテート) (化合物215) 
化合物215は、手順ｃに従って調製した。
出発物質： (2Z)-2-メトキシイミノ-2-フェニル-酢酸.
【手続補正５５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９６】
【化２６】
2014507396.tif 000020
調製例216:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-((2E)-2-メトキシイミノ-2-フェニル-アセテート) (化合物216) 
化合物216は、手順ｃに従って調製した。
出発物質： (2E)-2-メトキシイミノ-2-フェニル-酢酸.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.47-7.36 (m, 5H), 6.03-6.02 (m, 1H), 5.78-5.76 (m, 1H), 5.70 (s, 1H), 4.23-4.09 (m, 3H), 4.05 (s, 3H), 4.01 (s, 1H), 3.32 (s, 1H), 2.28-2.13 (m, 2H), 1.77 (d, 3H), 1.68-1.57 (m, 1H), 1.45 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.92-0.86 (m, 1H), 0.81 (d, 3H), 0.70-0.62 (m, 1H).
【手続補正５６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９７】
【化２７】
2014507396.tif 000021
調製例217:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-((Z)-2-メチル-3-(p-トリル)プロパ−2-エノアート) (化合物217) 
化合物217は、手順ｃに従って調製した。
出発物質： (Z)-2-メチル-3-(p-トリル)プロパ−2-エン酸.
【手続補正５７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９８】
【化２８】
2014507396.tif 000022
調製例218:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-((E)-2-フェニルブタ−2-エノアート) (化合物218) 
化合物218は、手順ｃに従って調製した。
出発物質： (E)-2-フェニルブタ−2-エン酸.
【手続補正５８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９９】
【化２９】
2014507396.tif 000023
調製例219:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(2,2-ジフェニルアセテート) (化合物219) 
化合物219は、手順ｃに従って調製した。
出発物質： 2,2-ジフェニル酢酸.
【手続補正５９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２００
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２００】
【化３０】
2014507396.tif 000024
調製例220:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(2-シアノ-2−シクロヘキシリデン-アセテート) (化合物220) 
化合物220は、反応時間を４０分にしたことを除き、手順ｄに従って調製した。
出発物質：2-シアノ-2−シクロヘキシリデン-酢酸から、ジクロロメタン中の１．２５等量の塩化オキサリルおよびN,N-ジメチルホルムアミドの液滴との室温で３０分間の反応の後、真空にて揮発物を蒸散させて調製した、2-シアノ-2−シクロヘキシリデン-塩化アセチル．
【手続補正６０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０１】
【化３１】
2014507396.tif 000025
調製例221:
インゲノール-5,20-アセトニド-3-(2-(メチル(フェニル)アミノ)-2-オキソ−アセテート) (化合物221) 
化合物221は、手順ｃに従って調製した。
出発物質： 2-(メチル(フェニル)アミノ)-2-オキソ−酢酸.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.41-7.24 (m, 5H), 5.99-5.98 (m, 1H), 5.76-5.73 (m, 1H), 5.39 (s, 1H), 4.19-4.02 (m, 3H), 3.87-3.86 (m, 1H), 3.36 (s, 3H), 2.75 (s, 1H), 2.46-2.41 (m, 1H), 2.24-2.15 (m, 1H), 1.79-1.67 (m, 1H), 1.51 (d, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.32 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.94 (d, 3H), 0.91-0.84 (m, 1H), 0.72-0.64 (m, 1H).
【手続補正６１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０２】
【化３２】
2014507396.tif 000026
実施例101:
インゲノール３-(2-メチル-アクリラート) (化合物101) 
化合物101は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物201.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.15 (s, 1H), 6.06-6.04 (m, 2H), 5.65-5.64 (m, 1H), 5.56 (s, 1H), 4.20-4.11 (m, 3H), 4.05 (s, 1H), 3.49 (bs, 1H), 2.9-2.7 (bs, 2H), 2.55-2.50 (m, 1H), 2.31-2.22 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.79 (d, 3H), 1.80-1.72 (m, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.98 (d, 3H), 0.98-0.91 (m, 1H), 0.74-0.65 (m, 1H).
【手続補正６２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０３】
【化３３】
2014507396.tif 000027
実施例102:
インゲノール３-(3-メチル-ブテノアート) (化合物102) 
化合物102は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物202.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.05 (d, 1H), 6.02-6.01 (m, 1H), 5.77-5.76 (m, 1H), 5.51 (s, 1H), 4.15-4.09 (m, 3H), 4.03 (s, 1H), 3.48 (bs, 1H), 2.79 (bs, 2H), 2.54-2.49 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 1H), 2.20 (d, 3H), 1.94 (d, 3H), 1.88-1.72 (m, 1H), 1.78 (d, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.98-0.91 (m, 4H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正６３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０４】
【化３４】
2014507396.tif 000028
実施例103
インゲノール３-(2,3-ジメチル-ブテノアート) (化合物103) 
化合物103は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物203.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.07-6.05 (d, 1H), 6.03-6.02 (m, 1H), 5.50 (s, 1H), 4.15-4.09 (m, 3H), 4.05 (s, 1H), 3.47 (bs, 1H), 2.55-2.48 (m, 1H), 2.30-2.21 (m, 1H), 2.07 (m, 3H), 1.89 (m, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.80 (m, 3H), 1.99-1.55 (m, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.96-0.88 (d, 4H), 0.74-0.65 (m, 1H).
【手続補正６４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０５】
【化３５】
2014507396.tif 000029
実施例104:
インゲノール３-(2-メチレン-ブチラート) (化合物104) 
化合物104は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物204.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.19 (s, 1H), 6.06-6.04 (m, 2H), 5.61 (m, 1H), 5.57 (s, 1H), 4.20-4.11 (m, 3H), 4.05 (s, 1H), 3.5 (bs, 1H), 2.9 (bs, 2H), 2.55-2.50 (m, 1H), 2.39-2.22 (m, 3H), 1.79 (d, 3H), 1.80-1.72 (m, 1H), 1.11 (t, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.98 (d, 3H), 0.97-0.91 (m, 1H), 0.74-0.65 (m, 1H).
【手続補正６５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０６】
【化３６】
2014507396.tif 000030
実施例105:
インゲノール３-(2-メチル-プロパノアート) (化合物105)  
化合物105は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物205.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.05-6.02 (m, 2H), 5.45 (s, 1H), 4.19-4.11 (m, 3H), 4.03 (s, 1H), 3.45 (bs, 1H), 2.65 (m, 1H), 2.54-2.49 (m, 1H), 2.5 (bs, 1H), 2.31-2.22 (m, 1H), 1.81-1.71 (m, 1H), 1.77 (d, 3H), 1.23 (d, 3H), 1.21 (d, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.97 (d, 3H), 0.97-0.86 (m, 2H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正６６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０７】
【化３７】
2014507396.tif 000031
実施例106:
インゲノール３-(3-メチル-ブタノアート) (化合物106) 
化合物106は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物206.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.05-6.02 (m, 2H), 5.43 (s, 1H), 4.19-4.11 (m, 3H), 4.03 (s, 1H), 3.49 (bs, 1H), 2.6-2.4 (bs, 1H), 2.53-2.45 (m, 1H), 2.31-2.23 (m, 3H), 2.17-2.04 (m, 1H), 1.81-1.71 (m, 1H), 1.78 (d, 3H), 1.27 (bs, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.00 (d, 6H), 0.97 (d, 3H), 0.97-0.86 (m, 1H), 0.73-0.66 (m, 1H).
【手続補正６７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０８】
【化３８】
2014507396.tif 000032
実施例107:
インゲノール３-(RS-2-メチル-ブタノアート) (化合物107aおよび化合物107b) 
化合物107aおよび107b実施例は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物207aおよび207b.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.06-6.02 (m, 2H), 5.46 (s, 1H), 4.19-4.11 (m, 3H), 4.03 (s, 1H), 3.45 (bs, 1H), 2.6 (bs, 1H), 2.54-2.41 (m, 2H), 2.31-2.22 (m, 1H), 1.78 (d, 3H), 1.80-1.64 (m, 2H), 1.57-1.47 (m, 1H), 1.28 (bs, 1H), 1.21-1.18 (m, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.98-0.85 (m, 7H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正６８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０９】
【化３９】
2014507396.tif 000033
実施例108:
インゲノール３-(3,3-ジメチル-ブタノアート) (化合物108) 
化合物108は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物208.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.06-6.02 (m, 2H), 5.47 (s, 1H), 4.19-4.11 (m, 3H), 4.03 (s, 1H), 3.51 (s, 1H), 2.6-2.4 (bs, 1H), 2.54-2.49 (m, 1H), 2.30 (s, 2H), 2.30-2.21 (m, 1H), 1.78 (d, 3H), 1.77-1.70 (m, 1H), 1.27 (bs, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 1.05 (s, 3H), 0.96 (d, 3H), 0.98-0.88 (m, 1H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正６９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１０】
【化４０】
2014507396.tif 000034
実施例109:
インゲノール３-(2-エチル-ブタノアート) (化合物109) 
化合物109は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物209.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.06-6.03 (m, 2H), 5.43 (s, 1H), 4.19-4.11 (m, 3H), 4.04 (s, 1H), 3.50 (s, 1H), 2.6-2.4 (bs, 1H), 2.54-2.49 (m, 1H), 2.34-2.22 (m, 2H), 1.78 (d, 3H), 1.79-1.51 (m, 5H), 1.27 (bs, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.98-0.89 (m, 10H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正７０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１１】
【化４１】
2014507396.tif 000035
実施例110:
インゲノール３-(2R-メチル-ブタノアート) (化合物110) 
化合物110は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物210.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.06-6.02 (m, 2H), 5.46 (s, 1H), 4.19-4.11 (m, 3H), 4.03 (s, 1H), 3.46 (bs, 1H), 2.6-2.4 (bs, 1H), 2.54-2.44 (m, 2H), 2.31-2.22 (m, 1H), 1.78 (d, 3H), 1.80-1.66 (m, 2H), 1.57-1.48 (m, 1H), 1.27 (bs, 1H), 1.19 (d, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.98-0.86 (m, 7H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正７１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１２】
【化４２】
2014507396.tif 000036
実施例111:
インゲノール３-チグラート (化合物111) 
化合物111は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物211.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.95-6.88 (m, 1H), 6.05-6.03 (m, 2H), 5.51 (s, 1H), 4.14-4.11 (m, 3H), 4.05 (s, 1H), 3.47 (bs, 1H), 2.77 (bs, 2H), 2.54-2.49 (m, 1H), 2.30-2.21 (m, 1H), 1.87-1.72 (m, 10H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.98 (d, 3H), 0.98-0.91 (m, 1H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正７２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１３】
【化４３】
2014507396.tif 000037
実施例112:
インゲノール３-(フェニル-アセテート) (化合物112) 
化合物112は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物212.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.36-7.25 (m, 5H), 6.00-5.98 (m, 2H), 5.53 (s, 1H), 4.16-4.00 (m, 3H), 3.94 (s, 1H), 3.72 (s, 2H), 3.14 (bs, 1H), 2.3-1.9 (bs, 1H), 2.23-2.18 (m, 1H), 2.09-1.99 (m, 1H), 1.74 (d, 3H), 1.69-1.59 (m, 1H), 1.27 (bs, 1H), 1.05 (s, 6H), 0.93-0.85 (m, 4H), 0.70-0.62 (m, 1H).
【手続補正７３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１４】
【化４４】
2014507396.tif 000038
実施例113:
インゲノール３-(2Z-(メトキシカルボニル))-アクリラート (化合物113) 
化合物113は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物213.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.95 (d, 1H), 6.88 (d, 1H), 6.09 (m, 1H), 6.05 (d, 1H), 5.65 (s, 1H), 4.54 (d, 1H), 4.20-4.13 (m, 3H), 4.05 (d, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.57 (s, 1H), 2.54-2.43 (m, 2H), 2.31-2.22 (m, 1H), 1.81-1.72 (m, 4H), 1.07 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.97 (d, 3H), 0.95-0.89 (m, 1H), 0.74-0.65 (m, 1H).
【手続補正７４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１５】
【化４５】
2014507396.tif 000039
実施例114:
インゲノール３-(2−シクロヘキシルプロパノアート) (化合物114) 
化合物114は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物214.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.06-6.02 (m, 2H), 5.46 (d, 1H), 3.32 (t, 1H), 4.19-4.11 (m, 3H), 4.04-4.03 (m, 1H), 3,52 (s, 1H), 2.55-2.47 (m, 1H), 2.39-2.23 (m, 2H), 1.80-1.60 (m, 10H), 1.30-0.86 (m, 19H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正７５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１６】
【化４６】
2014507396.tif 000040
実施例115:
インゲノール３-((2Z)-2-メトキシイミノ-2-フェニル-アセテート) (化合物115) 
化合物115は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物215.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.70-7.66 (m, 2H), 7.45-7.38 (m, 3H), 6.12-6.11 (m, 1H), 6.09 (s, 1H), 6.07-6.05 (m, 1H), 4.22-4.12 (m, 4H), 4.07 (s, 3H), 4.00 (d, 1H), 3.58 (d, 1H), 2.41-2.36 (m, 1H), 2.29-2.18 (m, 2H), 1.83 (d, 3H), 1.80-1.73 (m, 1H), 1.12 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 0.96-0.86 (m, 4H), 0.75-0.67 (m, 1H).
【手続補正７６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１７】
【化４７】
2014507396.tif 000041
実施例116:
インゲノール３-((2E)-2-メトキシイミノ-2-フェニル-アセテート) (化合物116) 
化合物116は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物216.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.70-7.66 (m, 2H), 7.45-7.38 (m, 3H), 6.12-6.05 (m, 3H), 4.22-4.09 (m, 4H), 4.07 (s, 3H), 4.00 (d, 1H), 3.60 (d, 1H), 2.41-2.36 (m, 1H), 2.29-2.20 (m, 2H), 1.83 (d, 3H), 1.80-1.73 (m, 1H), 1.12 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 0.99-0.92 (m, 4H), 0.75-0.67 (m, 1H).
【手続補正７７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１８】
【化４８】
2014507396.tif 000042
実施例117:
インゲノール３-((Z)-2-メチル-3-(p-トリル)プロパ−2-エノアート) (化合物117) 
化合物117は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物217.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.70 (s, 1H), 7.32 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 6.07-6.05 (m, 2H), 5.60 (s, 1H), 4.44 (d, 1H), 4.17-4.08 (m, 4H), 3.55 (s, 1H), 2.61-2.49 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.31-2.23 (m, 1H), 2.15 (d, 3H), 1.83 (d, 3H), 1.80-1.73 (m, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 1.01 (d, 3H), 0.98-0.92 (m, 1H), 0.74-0.66 (m, 1H).
【手続補正７８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１９】
【化４９】
2014507396.tif 000043
実施例118:
インゲノール３-((E)-2-フェニルブタ−2-エノアート) (化合物118) 
化合物118は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物218.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.39-7.30 (m, 3H), 7.24 (q, 1H), 7.20-7.15 (m, 2H), 5.99-5.96 (m, 1H), 5.95-5.93 (m, 1H), 5.57 (s, 1H), 4.16-3.93 (m, 4H), 3.80 (d, 1H), 3.19 (s, 1H), 2.34 (t, 1H), 1.95-1.83 (m, 2H), 1.78 (s, 3H), 1.77 (d, 3H), 1.57-1.46 (m, 1H), 1.05 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.93-0.85 (m, 1H), 0.76 (d, 3H), 0.65-0.58 (m, 1H). 
【手続補正７９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２０】
【化５０】
2014507396.tif 000044
実施例119:
インゲノール３-(2,2-ジフェニルアセテート) (化合物119) 
化合物119は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物219.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.35-7.25 (m, 10H), 6.01-5.96 (m, 2H), 5.62 (s, 1H), 5.12 (s, 1H), 4.13-3.93 (m, 5H), 3.14 (s, 1H), 2.34 (t, 1H), 2.12-2.05 (m, 1H), 2.04-1.93 (m, 1H), 1.72 (d, 3H), 1.61-1.52 (m, 1H), 1.05 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.91-0.83 (m, 4H), 0.67-0.59 (m, 1H).
【手続補正８０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２１】
【化５１】
2014507396.tif 000045
実施例120:
インゲノール３-(2-シアノ-2−シクロヘキシリデン-アセテート) (化合物120) 
化合物120は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物220.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.12-6.10 (m, 1H), 6.08-6.06 (m, 1H), 5.67 (s, 1H), 4.20-4.02 (m, 5H), 3.56 (s, 1H), 3.02 (t, 2H), 2.71-2.63 (m, 3H), 2.32-2.23 (m, 1H), 2.13-2.08 (m, 1H), 1.85-1.65 (m, 10H), 1.09 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 1.00 (d, 3H), 0.96-0.88 (m, 1H), 0.75-0.67 (m, 1H).
【手続補正８１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２２】
【化５２】
2014507396.tif 000046
実施例121:
インゲノール３-(2-(メチル(フェニル)アミノ)-2-オキソ−アセテート) (化合物121) 
化合物121は、手順ｅに従って調製した。
出発物質： 化合物221.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.43-7.33 (m, 3H), 7.28-7.24 (m, 2H), 6.00-5.98 (m, 2H), 5.52 (s, 1H), 4.16-4.02 (m, 3H), 3.84 (s, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.29 (s, 1H), 2.38-2.32 (m, 2H), 2.24-2.14 (m, 1H), 1.81-1.69 (m, 1H), 1.50 (d, 3H), 1.08 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.96 (d, 3H), 0.93-0.87 (m, 1H), 0.73-0.65 (m, 1H).
【手続補正８２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２７】
実施例３
ネクローシスアッセイ
HeLa細胞(ATCC CCL-002)を、10% ウシ胎児血清、100IU/ml ペニシリンおよび100μg/ml ストレプトマイシンを含有する最小必須培地(Invitrogen catalog no. 42360)中で増殖させた。4,000−6,000細胞を、96ウェルの透明底面の黒ViewPlates-プレート (Perkin Elmer)中、100μlの培地に播種し、一晩インキュベートした。化合物を、96ウェル・ポリプロピレンプレート(Greiner)中、15μＭ〜600μＭの濃度範囲に溶解および前希釈した。実験時に、細胞プレートを３７℃の加熱ブロック上に置き、培地を取り除き、４０μｌの新鮮な予め温めた培地をウェルごとに加えた。細胞を１５分間インキュベートした後に、化合物を添加した。並行して、高濃度化合物溶液の水相による効果的な混合を確実にするために、３μｌの化合物を、250μｌ／秒のピペッティング速度のTecanフリーダム-EVOピペッティング・ステーション上で197μｌの増殖培地で希釈した。次いで、これらの事前希釈プレートを、加熱ブロック上で３７℃で１０分間平衡化した。80μlの予め希釈した化合物を、化合物濃度１０μＭ〜４００μＭを生成するHeLa細胞を含有する対応のウェルに手動で移した。対照条件は、増殖培地中の１％ ＤＭＳＯ(100% 生存率)および増殖培地中の400μＭ インゲノールメブテート（0％ 生存率）であった。プレートを、加熱ブロック上３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベートの最後に、10μｌのPrestoBlue試薬(Invitrogen)を各ウェルに加え、プレートを黒シールで密封し、続いて３７℃で１０分間、穏やかに振盪（150rpm）しながらインキュベートした。続いて、プレートを室温に２０〜３０分間置いた。その後、すぐにプレートを、535ｎｍ励起および630ｎｍ発光のEnvision Fluorescenceリーダー(Perkin Elmer)にて読み込んだ。試験化合物の効果を陽性対照(4 10-4 M PEP0005/インゲノールメブテート)の効果に対して規格化した後に、試験化合物滴定曲線を、４パラメータ・シグモイド曲線にフィッティングした。AbsEC50は、５０％の効果を与える試験化合物の濃度を意味する。
【手続補正８３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２９】
【表１−１】
2014507396.tif 000047
【表１−２】
2014507396.tif 000048