【手続補正書】
【提出日】平成27年9月9日(2015.9.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
修飾Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）コアタンパク質をカプシド構造に集合させるための方法であって、
修飾ＨＢＶコアタンパク質および第１の濃度の変性剤を含む溶液を提供することであって、前記修飾ＨＢＶコアタンパク質のスパイク領域がシステイン残基を含むことと、
前記溶液に還元剤を添加し、
それによって、集合カプシド構造を形成することと、を含む、方法。
【請求項２】
前記修飾ＨＢＶコアタンパク質が、アミノ酸配列の配列番号１および配列番号２のうちの少なくとも１つの１つ以上の修飾を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記スパイク領域が、配列番号１および配列番号２のうちの少なくとも１つのアミノ酸７４〜８４を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記修飾ＨＢＶコアタンパク質が、配列番号１および配列番号２のうちの少なくとも１つのアミノ酸位置７７、７９、または８０にシステインを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記修飾ＨＢＶコアタンパク質が、配列番号１および配列番号２のうちの少なくとも１つのアミノ酸位置７７にシステインを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記還元剤が、β−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、グルタチオン（ＧＳＨ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、２−メルカプトエチルアミン（ＢＭＡ）、および遊離システインのうちの少なくとも１つである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記還元剤の前記濃度が、約０．１モル当量〜約１００モル当量である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
第１の濃度の変性剤を第２の濃度に希釈し、それによって、集合カプシド構造を形成することをさらに含み、前記変性剤が前記還元剤の添加前、添加中、および添加後のうちの少なくとも１つの時点で希釈される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記第１の濃度の変性剤が、前記還元剤の添加前、添加中、および添加後のうちの少なくとも１つの時点で前記第２の濃度に希釈される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
負に荷電されたポリマーを前記溶液に添加することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記溶液のｐＨが、約ｐＨ７．０以下である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
薬物を前記溶液に添加することをさらに含み、前記薬物が前記還元剤の添加前、添加中、または添加後のうちの少なくとも１つの時点で添加される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記薬物が、前記修飾ＨＢＶコアタンパク質の前記アミノ酸尾部に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記薬物が、前記還元剤の前記添加後に拡散により前記カプシド構造にカプセル封入される、および前記アミノ酸尾部に結合され、前記還元剤の添加後に前記カプシド構造にカプセル封入される、のうちの少なくとも１つである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記薬物が、核酸、ペプチド、タンパク質、および小分子からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
修飾Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）コアタンパク質をカプシド構造に集合させるための方法であって、
修飾ＨＢＶコアタンパク質、および第１の濃度の変性剤を含む溶液を提供することと、
前記第１の濃度の変性剤を第２の濃度に希釈し、
それによって、集合カプシド構造を形成することと、を含む、方法。
【請求項１７】
前記変性剤が、尿素、グアニジン塩酸塩（ＧｕＨＣｌ）、グアニジンチオシアン酸塩（ＧＩＴＣ）、メタノール、エタノール、トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）、アセトニトリル、およびリチウム過塩化物のうちの少なくとも１つである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記変性剤の第１の濃度が、約２Ｍ〜約８Ｍである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記希釈ステップ後の前記変性剤の第２の濃度が、約０．２５Ｍ〜約４Ｍである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
負に荷電されたポリマーを前記溶液に添加することをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記溶液のｐＨが、約ｐＨ７．０以下である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記希釈ステップ前に薬物を前記溶液に添加することをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記薬物が、前記ＨＢＶコアタンパク質の前記アミノ酸尾部に結合する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記薬物が、前記アミノ酸尾部に結合され、前記希釈ステップ後に前記カプシド構造にカプセル封入される、および前記希釈ステップ後に拡散により前記カプシド構造にカプセル封入される、のうちの少なくとも１つである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記薬物が、核酸、ペプチド、タンパク質、および小分子からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＨＢＶコアタンパク質が、アミノ酸配列の配列番号１および配列番号２のうちの少なくとも１つにおいて１つ以上の修飾を含む修飾ＨＢＶコアタンパク質である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２７】
前記修飾ＨＢＶコアタンパク質が、Ｃ末端切り詰め変異体である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
１〜４つのアルギニンに富む反復が、前記修飾ＨＢＶコアタンパク質のカルボキシル末端から切り詰められる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記Ｃ末端切り詰め変異体が、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、および配列番号６のうちの少なくとも１つから選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記修飾ＨＢＶコアタンパク質が、カルボキシル末端アミノ酸尾部をさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記アミノ酸尾部が、野生型尾部および合成尾部のうちの少なくとも１つである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記アミノ酸尾部が、正に荷電される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記正に荷電されたアミノ酸尾部が、リジンに富む尾部およびアルギニンに富む尾部のうちの少なくとも１つである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記リジンに富む尾部が、約４〜約３０リジン、および約４〜約３０リジンのリジンドメインのうちの少なくとも１つを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記リジンドメインが、約９リジンである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記集合カプシド構造の形成を測定すること、および前記集合カプシド構造を精製すること、のうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３７】
請求項１に記載の方法により生成されるウイルス性カプシド。
【請求項３８】
請求項１６に記載の方法により生成されるウイルス性カプシド。
【請求項３９】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）コアタンパク質をカプシド構造に集合させるための方法であって、
修飾ＨＢＶコアタンパク質および第１の濃度の変性剤を含む溶液を提供することであって、前記修飾ＨＢＶコアタンパク質のスパイク領域がシステイン残基を含むことと、
薬物を前記溶液に添加することと、
還元剤を前記溶液に添加することであって、前記薬物が、前記還元剤の前記添加前に前記溶液に添加されることと、
前記還元剤の前記添加後に前記第１の濃度の前記変性剤を第２の濃度に希釈することであって、前記薬物が前記変性剤の希釈前に前記溶液に添加され、
それによって、集合カプシド構造を形成し、前記薬剤が前記カプシド構造にカプセル封入されることと、を含む、方法。
【請求項４０】
治療のための組成物であって、
適切な治療薬を保持し、薬学的に許容される担体を伴う修飾Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）コアタンパク質ウイルス性カプシドを含む、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明のこれらの特徴および利点は、次の説明および添付の特許請求の範囲からより完全に明らかになるか、または以下に記載される本発明の実践により学ぶことができるだろう。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
修飾Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）コアタンパク質をカプシド構造に集合させるための方法であって、
修飾ＨＢＶコアタンパク質および第１の濃度の変性剤を含む溶液を提供することであって、前記修飾ＨＢＶコアタンパク質のスパイク領域がシステイン残基を含むことと、
前記溶液に還元剤を添加し、
それによって、集合カプシド構造を形成することと、を含む、方法。
（項目２）
前記修飾ＨＢＶコアタンパク質が、アミノ酸配列の配列番号１および配列番号２のうちの少なくとも１つの１つ以上の修飾を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記スパイク領域が、配列番号１および配列番号２のうちの少なくとも１つのアミノ酸７４〜８４を含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記修飾ＨＢＶコアタンパク質が、配列番号１および配列番号２のうちの少なくとも１つのアミノ酸位置７７、７９、または８０にシステインを含む、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記修飾ＨＢＶコアタンパク質が、配列番号１および配列番号２のうちの少なくとも１つのアミノ酸位置７７にシステインを含む、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記還元剤が、β−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、グルタチオン（ＧＳＨ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、２−メルカプトエチルアミン（ＢＭＡ）、および遊離システインのうちの少なくとも１つである、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記還元剤の前記濃度が、約０．１モル当量〜約１００モル当量である、項目１に記載の方法。
（項目８）
第１の濃度の変性剤を第２の濃度に希釈し、それによって、集合カプシド構造を形成することをさらに含み、前記変性剤が前記還元剤の添加前、添加中、および添加後のうちの少なくとも１つの時点で希釈される、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記第１の濃度の変性剤が、前記還元剤の添加前、添加中、および添加後のうちの少なくとも１つの時点で前記第２の濃度に希釈される、項目８に記載の方法。
（項目１０）
負に荷電されたポリマーを前記溶液に添加することをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記溶液のｐＨが、約ｐＨ７．０以下である、項目１に記載の方法。
（項目１２）
薬物を前記溶液に添加することをさらに含み、前記薬物が前記還元剤の添加前、添加中、または添加後のうちの少なくとも１つの時点で添加される、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記薬物が、前記修飾ＨＢＶコアタンパク質の前記アミノ酸尾部に結合する、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記薬物が、前記還元剤の前記添加後に拡散により前記カプシド構造にカプセル封入される、および前記アミノ酸尾部に結合され、前記還元剤の添加後に前記カプシド構造にカプセル封入される、のうちの少なくとも１つである、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記薬物が、核酸、ペプチド、タンパク質、および小分子からなる群から選択される、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
修飾Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）コアタンパク質をカプシド構造に集合させるための方法であって、
修飾ＨＢＶコアタンパク質、および第１の濃度の変性剤を含む溶液を提供することと、
前記第１の濃度の変性剤を第２の濃度に希釈し、
それによって、集合カプシド構造を形成することと、を含む、方法。
（項目１７）
前記変性剤が、尿素、グアニジン塩酸塩（ＧｕＨＣｌ）、グアニジンチオシアン酸塩（ＧＩＴＣ）、メタノール、エタノール、トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）、アセトニトリル、およびリチウム過塩化物のうちの少なくとも１つである、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記変性剤の第１の濃度が、約２Ｍ〜約８Ｍである、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記希釈ステップ後の前記変性剤の第２の濃度が、約０．２５Ｍ〜約４Ｍである、項目１６に記載の方法。
（項目２０）
負に荷電されたポリマーを前記溶液に添加することをさらに含む、項目１６に記載の方法。
（項目２１）
前記溶液のｐＨが、約ｐＨ７．０以下である、項目１６に記載の方法。
（項目２２）
前記希釈ステップ前に薬物を前記溶液に添加することをさらに含む、項目１６に記載の方法。
（項目２３）
前記薬物が、前記ＨＢＶコアタンパク質の前記アミノ酸尾部に結合する、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記薬物が、前記アミノ酸尾部に結合され、前記希釈ステップ後に前記カプシド構造にカプセル封入される、および前記希釈ステップ後に拡散により前記カプシド構造にカプセル封入される、のうちの少なくとも１つである、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記薬物が、核酸、ペプチド、タンパク質、および小分子からなる群から選択される、項目２２に記載の方法。
（項目２６）
前記ＨＢＶコアタンパク質が、アミノ酸配列の配列番号１および配列番号２のうちの少なくとも１つにおいて１つ以上の修飾を含む修飾ＨＢＶコアタンパク質である、項目１６に記載の方法。
（項目２７）
前記修飾ＨＢＶコアタンパク質が、Ｃ末端切り詰め変異体である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
１〜４つのアルギニンに富む反復が、前記修飾ＨＢＶコアタンパク質のカルボキシル末端から切り詰められる、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記Ｃ末端切り詰め変異体が、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、および配列番号６のうちの少なくとも１つから選択される、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
前記修飾ＨＢＶコアタンパク質が、カルボキシル末端アミノ酸尾部をさらに含む、項目２６に記載の方法。
（項目３１）
前記アミノ酸尾部が、野生型尾部および合成尾部のうちの少なくとも１つである、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記アミノ酸尾部が、正に荷電される、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
前記正に荷電されたアミノ酸尾部が、リジンに富む尾部およびアルギニンに富む尾部のうちの少なくとも１つである、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記リジンに富む尾部が、約４〜約３０リジン、および約４〜約３０リジンのリジンドメインのうちの少なくとも１つを含む、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記リジンドメインが、約９リジンである、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記集合カプシド構造の形成を測定すること、および前記集合カプシド構造を精製すること、のうちの少なくとも１つをさらに含む、項目２６に記載の方法。
（項目３７）
項目１に記載の方法により生成されるウイルス性カプシド。
（項目３８）
項目１６に記載の方法により生成されるウイルス性カプシド。
（項目３９）
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）コアタンパク質をカプシド構造に集合させるための方法であって、
修飾ＨＢＶコアタンパク質および第１の濃度の変性剤を含む溶液を提供することであって、前記修飾ＨＢＶコアタンパク質のスパイク領域がシステイン残基を含むことと、
薬物を前記溶液に添加することと、
還元剤を前記溶液に添加することであって、前記薬物が、前記還元剤の前記添加前に前記溶液に添加されることと、
前記還元剤の前記添加後に前記第１の濃度の前記変性剤を第２の濃度に希釈することであって、前記薬物が前記変性剤の希釈前に前記溶液に添加され、
それによって、集合カプシド構造を形成し、前記薬剤が前記カプシド構造にカプセル封入されることと、を含む、方法。
（項目４０）
治療の方法であって、
治療を必要とする患者に、適切な治療薬を保持し、薬学的に許容される担体を伴う修飾Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）コアタンパク質ウイルス性カプシドを投与することを含む、方法。