【手続補正書】
【提出日】平成27年6月16日(2015.6.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の段階を含む、癌の治療および予防または癌細胞成長の阻害のいずれかまたは両方のための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）ＳＭＹＤ２ポリペプチドまたはＳＭＹＤ２ポリペプチドの機能的等価物を、メチル化されるべき基質と、前記基質のメチル化が可能な条件下において試験物質の存在下で接触させる段階；
（ｂ）前記基質のメチル化レベルを検出する段階；および
（ｃ）前記基質のメチル化レベルを前記試験物質の非存在下で検出されたメチル化レベルと比較して低下させる試験物質を選択する段階。
【請求項２】
前記基質が、ヒストンタンパク質、または少なくとも１つのメチル化部位を含むヒストンタンパク質の断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ヒストンが、ヒストンＨ４またはヒストンＨ３である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記基質が、ＨＳＰ９０ＡＢ１ポリペプチド、または少なくとも１つのメチル化部位を含むＨＳＰ９０ＡＢ１ポリペプチドの断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記メチル化部位が、配列番号６５のリジン５３１および／またはリジン５７４である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記基質が、ＲＢ１ポリペプチド、または少なくとも１つのメチル化部位を含むＲＢ１ポリペプチドの断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記メチル化部位が、配列番号６８のリジン８１０である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
以下の段階を含む、癌の治療および予防または癌細胞成長の阻害のいずれかまたは両方のための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）試験物質を、ＳＭＹＤ２ポリペプチドまたはＳＭＹＤ２ポリペプチドの機能的等価物と接触させる段階；
（ｂ）段階（ａ）のポリペプチドまたは該ポリペプチドの機能的等価物の生物学的活性を検出する段階；および
（ｃ）前記ポリペプチドまたは前記ポリペプチドの機能的等価物の生物学的活性を前記試験物質の非存在下で検出された生物学的活性と比較して抑制する試験物質を選択する段階。
【請求項９】
前記生物学的活性が、細胞増殖促進活性またはメチルトランスフェラーゼ活性である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
以下の段階を含む、癌の治療および予防または癌細胞成長の阻害のいずれかまたは両方のための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）試験物質を、ＳＭＹＤ２ポリペプチドまたはＳＭＹＤ２ポリペプチドの機能的等価物と接触させる段階；
（ｂ）前記ポリペプチドまたは前記ポリペプチドの機能的等価物と前記試験物質との間の結合活性を検出する段階；および
（ｃ）前記ポリペプチドまたは前記ポリペプチドの機能的等価物に結合する試験物質を選択する段階。
【請求項１１】
以下の段階を含む、癌の治療および予防または癌細胞成長の阻害のいずれかまたは両方のための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）試験物質を、ＳＭＹＤ２遺伝子を発現する細胞と接触させる段階；および
（ｂ）ＳＭＹＤ２遺伝子の発現レベルを前記試験物質の非存在下の発現レベルと比較して低下させる試験物質を選択する段階。
【請求項１２】
以下の段階を含む、癌の治療および予防または癌細胞成長の阻害のいずれかまたは両方のための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）試験物質を、ＳＭＹＤ２遺伝子の転写調節領域と前記転写調節領域の制御下で発現されるレポーター遺伝子とを含むベクターが導入された細胞と、接触させる段階、
（ｂ）前記レポーター遺伝子の発現または活性レベルを測定する段階；および
（ｃ）前記レポーター遺伝子の発現または活性レベルを前記試験物質の非存在下のレベルと比較して低下させる試験物質を選択する段階。
【請求項１３】
以下の段階を含む、癌の治療および予防または癌細胞成長の阻害のいずれかまたは両方のための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）ＳＭＹＤ２ポリペプチドのＨＳＰ９０ＡＢ１結合ドメインを含むポリペプチドを、ＨＳＰ９０ＡＢ１ポリペプチドのＳＭＹＤ２結合ドメインを含むポリペプチドと、試験物質の存在下で接触させる段階；
（ｂ）前記ポリペプチド間の結合を検出する段階；
（ｃ）段階（ｂ）で検出された結合レベルを前記試験物質の非存在下で検出されたものと比較する段階；および
（ｄ）前記ポリペプチド間の結合を阻害する試験物質を、癌の治療および予防または癌細胞成長の阻害のいずれかまたは両方のための候補物質として選択する段階。
【請求項１４】
前記ＨＳＰ９０ＡＢ１結合ドメインを含むポリペプチドが、配列番号６３の１００位〜２４７位のアミノ酸残基を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＳＭＹＤ２結合ドメインを含むポリペプチドが、配列番号６５の５００位〜７２４位のアミノ酸残基を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
以下の段階を含む、癌の治療および予防または癌細胞成長の阻害のいずれかまたは両方のための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）ＳＭＹＤ２ポリペプチドのＲＢ１結合ドメインを含むポリペプチドを、ＲＢ１ポリペプチドのＳＭＹＤ２結合ドメインを含むポリペプチドと、試験物質の存在下で接触させる段階；
（ｂ）前記ポリペプチド間の結合を検出する段階；および
（ｃ）段階（ｂ）で検出された結合レベルを前記試験物質の非存在下で検出されたものと比較する段階；および
（ｄ）前記ポリペプチド間の結合を阻害する試験物質を、癌の治療および予防または癌細胞成長の阻害のいずれかまたは両方のための候補物質として選択する段階。
【請求項１７】
前記ＲＢ１結合ドメインを含むポリペプチドが、配列番号６３の３３０位〜４３３位のアミノ酸残基を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＳＭＹＤ２結合ドメインを含むポリペプチドが、配列番号６８の７７３位〜８１３位のアミノ酸残基を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
以下の段階を含む、癌を治療もしくは予防するかまたは癌細胞成長を阻害するための候補物質をスクリーニングする方法：
（ａ）試験物質を、ＳＭＹＤ２遺伝子およびＲＢ１遺伝子を発現する細胞と接触させる段階；
（ｂ）段階（ａ）のＲＢ１ポリペプチドまたは該ＲＢ１ポリペプチドの機能的等価物のリン酸化レベルを検出する段階；および
（ｃ）前記ポリペプチドまたは前記ポリペプチドの機能的等価物のリン酸化レベルを前記試験物質の非存在下で検出されたリン酸化レベルと比較して低下させる試験物質を選択する段階。
【請求項２０】
ＲＢ１ポリペプチドのリン酸化レベルが、配列番号６８のセリン８０７および／またはセリン８１１でリン酸化されたＲＢ１に対する抗体によって検出される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
以下の構成要素を含む、癌の治療および予防または癌細胞成長の阻害のいずれかまたは両方のための候補物質をスクリーニングするためのキット：
（ａ）ＳＭＹＤ２ポリペプチドまたはＳＭＹＤ２ポリペプチドの機能的等価物；
（ｂ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）からなる群より選択される構成要素
（ｉ）ヒストンタンパク質、または少なくとも１つのメチル化部位を含むヒストンタンパク質の断片、
（ｉｉ）ＨＳＰ９０ＡＢ１ポリペプチドまたはＨＳＰ９０ＡＢ１ポリペプチドの機能的等価物；
（ｉｉｉ）ＲＢ１ポリペプチドまたはＲＢ１ポリペプチドの機能的等価物；
（ｃ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）からなる群より選択される試薬；
（ｉ）ヒストンタンパク質またはヒストンタンパク質の機能的等価物のメチル化レベルを検出するための試薬；
（ｉｉ）ＨＳＰ９０ＡＢ１ポリペプチドまたはＨＳＰ９０ＡＢ１ポリペプチドの機能的等価物のメチル化レベルを検出するための試薬；
（ｉｉｉ）ＲＢ１ポリペプチドまたはＲＢ１ポリペプチドの機能的等価物のメチル化レベルを検出するための試薬；および
（ｄ）メチル供与体。
【請求項２２】
前記ヒストンタンパク質が、ヒストンＨ４またはヒストンＨ３である、請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
段階（ｃ）（ｉ）の試薬が、メチル化ヒストンＨ４タンパク質またはメチル化ヒストンＨ３タンパク質に対する抗体である、請求項２１に記載のキット。
【請求項２４】
段階（ｃ）（ｉｉ）の試薬が、配列番号６５のリジン５３１および／またはリジン５７４でメチル化されたＨＳＰ９０ＡＢ１ポリペプチドに対する抗体である、請求項２１に記載のキット。
【請求項２５】
段階（ｃ）（ｉｉｉ）の試薬が、配列番号６８のリジン８１０でメチル化されたＲＢ１ポリペプチドに対する抗体である、請求項２１に記載のキット。
【請求項２６】
前記メチル供与体が、Ｓ−アデノシルメチオニンである、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項２７】
以下からなる群より選択される試薬を含む、対象における癌の存在または癌を発症する素因を検出または診断するためのキット：
（ａ）ＳＭＹＤ２遺伝子のｍＲＮＡを検出するための試薬；
（ｂ）ＳＭＹＤ２遺伝子によってコードされるタンパク質を検出するための試薬、および
（ｃ）ＳＭＹＤ２遺伝子によってコードされるタンパク質の生物学的活性を検出するための試薬。
【請求項２８】
前記試薬が、ＳＭＹＤ２遺伝子のｍＲＮＡに結合するプローブまたはプライマーセットである、請求項２７に記載のキット。
【請求項２９】
前記試薬が、ＳＭＹＤ２遺伝子によってコードされるタンパク質に対する抗体または該タンパク質の断片に対する抗体である、請求項２７に記載のキット。
【請求項３０】
前記生物学的活性が、細胞増殖促進活性またはメチルトランスフェラーゼ活性である、請求項２７〜２９のいずれか一項に記載のキット。