【手続補正書】
【提出日】平成27年10月5日(2015.10.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液凝固因子ＶＩＩ(第ＶＩＩ因子又はＦａｃＶＩＩ)のアミノ酸配列(配列番号４)を含み、そのＣ末端にペプチドリンカーが連結されたＦａｃＶＩＩ又はその活性型ＦａｃＶＩＩａの誘導体。
【請求項２】
前記ペプチドリンカーのＣ末端アミノ酸残基が、システインである請求項１に記載の誘導体。
【請求項３】
前記ペプチドリンカーが、ＳＯＤ１(スーパーオキシドジスムターゼ)の部分配列である請求項１に記載の誘導体。
【請求項４】
前記ＳＯＤ１の部分配列が、配列内のＶＬＫＧ(バリン-ロイシン-リシン-グリシン)が自己切断部位アミノ酸配列であるＩＰＲＩ(イソロイシン-プロリン-アルギニン-イソロイシンで置換されることにより変異したものである請求項３に記載の誘導体。
【請求項５】
配列番号９、１３、１４、２０、２４及び２７からなる群から選択されるアミノ酸配列で構成される請求項１に記載の誘導体。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩ又はその活性型ＦａｃＶＩＩａの誘導体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項７】
配列番号８、１２、１５、２１、２５及び２８からなる群から選択される塩基配列で構成される請求項６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項６に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項９】
ｐＸ０ＧＣ−ＦＶＩＩ−ＡＴＫＡＶＣ、ｐＸ０ＧＣ−ＦＶＩＩ−ＧＧＧＧＳＣ、ｐＸ０ＧＣ−ＦＶＩＩ−ＳＯＤ１ １−１４９、ｐＸ０ＧＣ−ＦＶＩＩ−ＳＯＤ１ ＩＰＲＩ、ｐＸ０ＧＣ−ＦＶＩＩ−ＳＯＤ１ １−２５ＩＰＲＩ、及びｐＸ０ＧＣ−ＦＶＩＩ−ＳＯＤ１ １−９０ ＩＰＲＩからなる群から選択される請求項８に記載の発現ベクター。
【請求項１０】
請求項８に記載の発現ベクターを含む形質転換体。
【請求項１１】
寄託番号ＫＣＴＣ１２０２２ＢＰで特定される請求項１０に記載の形質転換体。
【請求項１２】
ＦａｃＶＩＩ誘導体の製造方法であって、以下の工程、
(ｉ)請求項１０の形質転換体を培養して培養液を得る工程と、
(ｉｉ)前記培養液からＦａｃＶＩＩ誘導体を回収する工程と、
を含む、方法。
【請求項１３】
前記回収したＦａｃＶＩＩ誘導体を活性化する工程をさらに含む請求項１２に記載のＦａｃＶＩＩ誘導体の製造方法。
【請求項１４】
請求項１〜５のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩ誘導体又はその活性型ＦａｃＶＩＩａのペプチドリンカーに、血中半減期を延長させることのできる非ペプチド性重合体が結合されているＦａｃＶＩＩ結合体又はその活性型ＦａｃＶＩＩａの結合体。
【請求項１５】
前記非ペプチド性重合体が、ＦａｃＶＩＩ又はその活性型ＦａｃＶＩＩａの誘導体のＣ末端に結合されている請求項１４に記載の結合体。
【請求項１６】
前記非ペプチド性重合体が、アルデヒド基、プロピオンアルデヒド基、ブチルアルデヒド基、マレイミド基、オルトピリジルジスルフィド、チオール及びスクシンイミド誘導体からなる群から選択される１個以上の反応基を有するものである請求項１４に記載の結合体。
【請求項１７】
前記スクシンイミド誘導体が、スクシンイミジルプロピオネート、スクシンイミジルカルボキシメチル、ヒドロキシスクシンイミジル又はスクシンイミジルカーボネートである請求項１４に記載の結合体。
【請求項１８】
前記非ペプチド性重合体が、２個又は３個の反応末端を有する請求項１４に記載の結合体。
【請求項１９】
前記非ペプチド性重合体が、両末端にそれぞれマレイミド反応基又はアルデヒド反応基を有する請求項１４に記載の 結合体。
【請求項２０】
前記非ペプチド性重合体が、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール−プロピレングリコール非ペプチジル共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、生分解性高分子、脂質非ペプチド性重合体、キチン類、ヒアルロン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項１４に記載の結合体。
【請求項２１】
非ペプチド性重合体を介して、免疫グロブリンＦｃ領域に連結された、請求項１〜５のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩ誘導体又はＦａｃＶＩＩａ誘導体からなる、ＦａｃＶＩＩ又はその活性型ＦａｃＶＩＩａの複合体。
【請求項２２】
前記非ペプチド性重合体は、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール−プロピレングリコール共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、生分解性高分子、脂質重合体、キチン類、ヒアルロン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項２１に記載の複合体。
【請求項２３】
前記非ペプチド性重合体は、１個、２個又は３個の反応末端を有する請求項２１に記載の複合体。
【請求項２４】
前記非ペプチド性重合体は、両末端にそれぞれマレイミド反応基又はアルデヒド反応基を有する請求項２１に記載の複合体。
【請求項２５】
免疫グロブリンＦｃ領域が、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４ドメインからなる群から選択される１個〜４個のドメインからなる請求項２１に記載の複合体。
【請求項２６】
免疫グロブリンＦｃ領域がヒンジ領域をさらに含む請求項２１に記載の複合体。
【請求項２７】
免疫グロブリンＦｃ領域が、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ又はＩｇＭに由来する請求項２１に記載の複合体。
【請求項２８】
免疫グロブリンＦｃ領域がＩｇＧ４Ｆｃ領域である請求項２１に記載の複合体。
【請求項２９】
免疫グロブリンＦｃ領域がヒト非グリコシル化ＩｇＧ４Ｆｃ領域である請求項２１に記載の複合体。
【請求項３０】
ＦａｃＶＩＩａ複合体の製造方法であって、以下の工程、
(ｉ)一方の末端にスクシンイミド誘導体又はアルデヒド反応基を有する非ペプチド性重合体を、ｐＨ５．０〜ｐＨ９．０において、免疫グロブリンＦｃのアミン基と共有結合で連結する工程と、
(ｉｉ)前記(ｉ)の反応混合物から、前記アミン基において非ペプチド性重合体が共有結合した免疫グロブリンＦｃ領域を含む結合体を回収する工程と、
(ｉｉｉ)回収した結合体の非ペプチド性重合体の他方の末端に、請求項１〜５のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩ誘導体のＣ末端チオール基を共有結合で連結することにより、非ペプチド性重合体の末端のそれぞれにおいて免疫グロブリンＦｃ領域及びＦａｃＶＩＩ誘導体に結合されたＦａｃＶＩＩ複合体を生成する工程と、
(ｉｖ)前記(ｉｉｉ)で生成したＦａｃＶＩＩ複合体を活性化することにより、非ペプチド性重合体を介して、ＦａｃＶＩＩａ及び免疫グロブリンＦｃ領域を有するＦａｃＶＩＩａ複合体を生成する工程と、
を含む方法。
【請求項３１】
ＦａｃＶＩＩａ複合体の製造方法であって、以下の工程、
(ｉ)一方の末端にスクシンイミド誘導体又はアルデヒド反応基を有する非ペプチド性重合体を、ｐＨ５．０〜ｐＨ９．０において、免疫グロブリンＦｃのアミン基と共有結合で連結する工程と、
(ｉｉ)前記(ｉ)の反応混合物から、前記アミン基において、非ペプチド性重合体が共有結合した免疫グロブリンＦｃ領域を含む結合体を回収する工程と、
(ｉｉｉ)回収した結合体の非ペプチド性重合体の他方の末端に、請求項１〜５のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩａ誘導体のＣ末端チオール基を共有結合で連結することにより、非ペプチド性重合体の末端のそれぞれにおいて、免疫グロブリンＦｃ領域及びＦａｃＶＩＩａ誘導体を有するＦａｃＶＩＩａ複合体を生成する工程と、
を含む 方法。
【請求項３２】
ＦａｃＶＩＩａ結合体の製造方法であって、以下の工程、
(ｉ)請求項１〜５のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩ誘導体のＣ末端チオール基に、アルデヒド基、プロピオンアルデヒド基、ブチルアルデヒド基、マレイミド基、オルトピリジルジスルフィド、チオール及びスクシンイミド誘導体からなる群から選択される反応基を有する非ペプチド性重合体を共有結合させる工程と、
(ｉｉ)前記ＦａｃＶＩＩ誘導体に非ペプチド性重合体が共有結合により連結されることにより調製されたＦａｃＶＩＩ結合体を回収する工程と、
(ｉｉｉ)前記回収したＦａｃＶＩＩ結合体を活性化することにより、ＦａｃＶＩＩａ領域が非ペプチド性重合体と連結されたＦａｃＶＩＩａ結合体を生成する工程と、
を含む方法。
【請求項３３】
ＦａｃＶＩＩａ結合体の製造方法であって、以下の工程、
(ｉ)請求項１〜５のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩａ誘導体のＣ末端チオール基に、アルデヒド基、プロピオンアルデヒド基、ブチルアルデヒド基、マレイミド基、オルトピリジルジスルフィド、チオール及びスクシンイミド誘導体からなる群から選択される反応基を有する非ペプチド性重合体を共有結合させる工程と、
(ｉｉ)前記ＦａｃＶＩＩａ誘導体に非ペプチド性重合体が共有結合により連結されることにより調製されたＦａｃＶＩＩａ結合体を回収する工程と、
を含むＦａｃＶＩＩａ結合体の製造方法。
【請求項３４】
請求項３２又は３３に記載の方法で得られた、回収されたＦａｃＶＩＩａ結合体の非ペプチド性重合体の他方の末端に連結された免疫グロブリンＦｃ領域からなるＦａｃＶＩＩａ複合体。
【請求項３５】
前記ＦａｃＶＩＩ誘導体、ＦａｃＶＩＩ結合体又はＦａｃＶＩＩ複合体の活性化が、オンカラム(on-column)活性化又はインソリューション(in-solution)活性化により行われるものである請求項３０〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記非ペプチド性重合体はポリエチレングリコールである請求項３０〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
請求項３０〜３３のいずれかに記載の方法で製造されたＦａｃＶＩＩａ結合体又はＦａｃＶＩＩａ複合体。
【請求項３８】
ＦａｃＶＩＩ誘導体又はＦａｃＶＩＩａ誘導体とキャリアが、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール−プロピレングリコール共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、生分解性高分子、脂質重合体、キチン類、ヒアルロン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択される非ペプチド性重合体を介して連結されたＦａｃＶＩＩ又はその活性型ＦａｃＶＩＩａの複合体。
【請求項３９】
前記ＦａｃＶＩＩ結合体又はＦａｃＶＩＩａ結合体を構成する非ペプチド性重合体の一方の末端が、抗体、アルブミン及びトランスフェリンからなる群から選択されるキャリアに結合されている請求項１４に記載の複合体。
【請求項４０】
前記キャリアが、抗体、アルブミン及びトランスフェリンからなる群から選択される請求項３８に記載の複合体。
【請求項４１】
前記非ペプチド性重合体が、１個、２個又は３個の反応末端を有する請求項３８に記載の複合体。
【請求項４２】
前記非ペプチド性重合体が、両末端にそれぞれマレイミド反応基又はアルデヒド反応基を有する請求項３８に記載の複合体。
【請求項４３】
請求項１〜５のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩ誘導体又はＦａｃＶＩＩａ誘導体、請求項１４〜２０のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩ結合体又はＦａｃＶＩＩａ結合体、請求項２１〜２９のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩ複合体又はＦａｃＶＩＩａ複合体、又は請求項３７に記載のＦａｃＶＩＩａ結合体又はＦａｃＶＩＩａ複合体を有効成分として含む血友病予防又は治療用の医薬組成物。
【請求項４４】
請求項１〜５のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩ誘導体又はＦａｃＶＩＩａ誘導体、請求項１４〜２０のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩ結合体又はＦａｃＶＩＩａ結合体、請求項２１〜２９のいずれかに記載のＦａｃＶＩＩ複合体又はＦａｃＶＩＩａ複合体、又は請求項３７に記載のＦａｃＶＩＩａ結合体又はＦａｃＶＩＩａ複合体を有効成分として含む血液凝固用の医薬組成物。