(57)【要約】      （修正有）【課題】β−セクレターゼ酵素活性を低減または遮断し、アルツハイマー病、ダウン症候群、および混合血管起源の認知症、老年認知症、パーキンソン病に関連する認知症などの状態を処置する化合物の提供。【解決手段】（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸（カンファースルホン酸）塩。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩。
【請求項２】
以下の非常に強い、強い、および中等度のｄ−値を有するピークを実質的に表す、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンを提供することを特徴とする、（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩：
【表１】
2018104448.tif 000010
【請求項３】
本質的に図１に示す粉末Ｘ線回折パターンを提供することを特徴とする、（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩。
【請求項４】
有効成分として治療有効量の請求項１〜３のいずれか１項に記載の塩を、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤と共に含む医薬組成物。
【請求項５】
医薬として用いるための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の塩。
【請求項６】
Ａβ関連の病態を処置または防止するための医薬として使用するための、請求項５に記
載の塩。
【請求項７】
前記Ａβ関連の病態は、ダウン症候群、β−アミロイド血管障害、脳アミロイド血管障害、遺伝性脳出血、認知障害に関連する障害、ＭＣＩ（「軽度認知障害」）、アルツハイマー病、物忘れ、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病に関連する神経変性、混合血管起源の認知症、変性起源の認知症、初老期認知症、老年認知症、パーキンソン病に関連する認知症、進行性核上性麻痺、または皮質基底変性症である、Ａβ関連の病態を処置または防止するための医薬として使用するための、請求項６に記載の塩。
【請求項８】
アルツハイマー病を処置または防止するための医薬として使用するための、請求項７に記載の塩。
【請求項９】
認知増強剤、記憶増強剤、またはコリンエステラーゼ阻害剤の少なくとも１つと組み合わせて、Ａβ関連の病態を処置または防止するための医薬として使用するための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の塩。
【請求項１０】
それを必要とする患者においてＡβ関連の病態を処置または防止する方法であって、前記患者に治療有効量の請求項１〜３のいずれか１項に記載の塩を投与することを含む前記方法。
【請求項１１】
前記Ａβ関連の病態が、ダウン症候群、β−アミロイド血管障害、脳アミロイド血管障害、遺伝性脳出血、認知障害に関連する障害、ＭＣＩ（「軽度認知障害」）、アルツハイマー病、物忘れ、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病に関連する神経変性、混合血管起源の認知症、変性起源の認知症、初老期認知症、老年認知症、パーキンソン病に関連する認知症、進行性核上性麻痺、または皮質基底変性症である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
それを必要とする患者においてアルツハイマー病を処置または防止する方法であって、前記患者に治療有効量の請求項１〜３のいずれか１項に記載の塩を投与することを含む前記方法。
【請求項１３】
それを必要とする患者においてＡβ関連の病態を処置または防止する方法であって、前記患者に治療有効量の請求項１〜３のいずれか１項に記載の塩、および認知増強剤、記憶増強剤、またはコリンエステラーゼ阻害剤の少なくとも１つを投与することを含む前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンファースルホン酸（カンシラート）塩、および塩を含有する医薬組成物に関する。さらに、本発明は、Ａβ関連の病態、例えば、ダウン症候群、β−アミロイド血管障害、例えば、それだけには限定されないが、脳アミロイド血管障害、または遺伝性脳出血、認知障害に関連する障害、例えば、それだけには限定されないが、ＭＣＩ（「軽度認知障害」）、アルツハイマー病、物忘れ、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病などの疾患に関連する神経変性、または、混合血管起源および変性起源の認知症、初老期認知症、老年認知症、およびパーキンソン病に関連する認知症を含めた認知症、進行性核上性麻痺、または皮質基底変性症を処置および／または防止するための、この塩を使用した治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）を鑑別する主な神経病理学的事象は、脳実質および脳血管における４０〜４２残基のアミロイドβ−ペプチド（Ａβ）の沈着である。多くの遺伝的、生化学的、およびｉｎ  ｖｉｖｏのデータが、最終的にＡＤをまねく病理学的カスケードにおいて、Ａβに対する中心的な役割を支持している。患者は通常、６０代または７０代で早期症状（通常は物忘れ）を表す。疾患は、認知症の増大およびＡβの沈着の上昇とともに進行する。並行して、過剰リン酸化型の微小管結合タウタンパク質がニューロン内に蓄積し、ニューロンの機能に対して有害作用のある多血症をもたらす。Ａβとタウとの病態間の時間的関係に関して主流となっている作業仮説には、疾患のヒトおよび動物モデルではＡβが沈着した後にタウが凝集すると述べられている。この文脈内では、この病態学的機能を媒介するＡβの正確な分子上の性質が、現在、熱烈に研究にされている問題であることに注目する価値がある。低次元のＡβオリゴマーからＡβ原線維などの超分子アセンブリーの範囲の、毒性種の連続体が存在する可能性が濃厚である。
【０００３】
Ａβペプチドは、ヒト組織において遍在性に発現されるタンパク質である、Ｉ型タンパク質ＡＰＰ（Ａβアミロイド前駆体タンパク質）の不可欠なフラグメントである。可溶性のＡβは血漿および脳脊髄液（ＣＳＦ）の両方において、ならびに培養細胞からの培地において見出すことができることから、ＡＰＰはタンパク質分解を受けなければならない。ＡＤの病態に関連するＡＰＰには、いわゆるα−、β−、およびγ−切断の、主な切断が３つ存在する。α−切断は、ＡＰＰのＡβドメインのほぼ中央で生じ、メタロプロテアーゼＡＤＡＭ１０またはＡＤＡＭ１７（後者はＴＡＣＥとしても知られている）により実行される。β−切断は、ＡβのＮ末端で生じ、膜貫通型アスパルチルプロテアーゼβ部位ＡＰＰ切断酵素１（ＢＡＣＥ１）により産生される。γ−切断は、ＡβのＣ末端を産生し、引き続きペプチドを放出し、γ−セクレターゼと命名されるマルチサブユニットのアスパルチルプロテアーゼによって行われる。ＡＤＡＭ１０／１７切断とその後のγ−セクレターゼ切断により、ヒトにおいてアミロイド沈着を形成することができないＮ末端が切断されたＡβフラグメントである、可溶性ｐ３ペプチドの放出が引き起こされる。このタンパク分解性の経路は、非アミロイド産生性経路と通常呼ばれる。ＢＡＣＥ１およびγ−セクレターゼによる連続的な切断によりインタクトなＡβペプチドが産生され、それゆえこのプロセシングスキームはアミロイド産生性経路と呼ばれている。この知識があれば、Ａβ生成を低下させる２つの可能な手段：非アミロイド産生性プロセシングの刺激、またはアミロイド産生性プロセシングの阻害もしくは変調を想像するのが可能である。本出願は、後者の戦略である、アミロイド産生性プロセシングの阻害または変調に注目するものであ
る。
【０００４】
アミロイド産生性プラークおよび血管のアミロイド血管障害も、トリソミー２１（ダウン症候群）、ダッチ型のアミロイドーシスを有する遺伝性脳出血（Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ
Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ  ｗｉｔｈ  Ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ  ｏｆ
ｔｈｅ  Ｄｕｔｃｈ−ｔｙｐｅ）（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、および他の神経変性障害を有する患者の脳を特徴付けるものである。認知症誘発性障害を含めた他の神経変性障害では、神経原線維変化も生じる（非特許文献１）。β−アミロイド沈着物は、優勢的にＡβペプチドの凝集であり、次にこのＡβペプチドはアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のタンパク質分解の生成物である。より具体的には、Ａβペプチドは、１つまたはそれ以上のγ−セクレターゼによるＣ末端の、およびβ−セクレターゼ酵素（ＢＡＣＥ）によるＮ末端のＡＰＰの切断に起因し、ＢＡＣＥは、β−アミロイド産生性経路の一部としてアスパルチルプロテアーゼすなわちＡｓｐ２またはベータ部位ＡＰＰ切断酵素（ＢＡＣＥ）としても知られている。
【０００５】
ＢＡＣＥ活性は、ＡＰＰからのＡβペプチドの産生に直接相関し（非特許文献２）、試験により、ＢＡＣＥの阻害によりＡβペプチドの生成が阻害されることがますます指摘される（非特許文献３）。ＢＡＣＥは、部分的に活性なプロ酵素として合成され、脳組織において豊富に発現される膜結合性１型タンパク質（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｂｏｕｎｄ  ｔｙｐｅ  １  ｐｒｏｔｅｉｎ）である。これは主なβ−セクレターゼ活性を表すと考えられており、アミロイドβ−ペプチド（Ａβ）の生成における律速段階と考えられている。
【０００６】
したがって、ＢＡＣＥ活性を低減または遮断する薬物は、脳における、またはＡβもしくはそのフラグメントが沈着する他所の、ＡβレベルおよびＡβのフラグメントのレベルを低減しなければならず、ゆえにアミロイドプラークの形成、およびＡβまたはそのフラグメントの沈着を伴うＡＤまたは他の病弊の進行を遅らせなければならない。ＢＡＣＥはしたがって、ダウン症候群、β−アミロイド血管障害などのＡβ関連の病態、例えば、それだけには限定されないが、脳アミロイド血管障害、または遺伝性脳出血、認知障害に関連する障害、例えば、それだけには限定されないが、ＭＣＩ（「軽度認知障害」）、アルツハイマー病、物忘れ、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病などの疾患に関連する神経変性、または混合血管および変性起源の認知症、初老期認知症、老年認知症、およびパーキンソン病に関連する認知症を含めた認知症、進行性核上性麻痺、または皮質基底変性症の処置および／または予防としての薬物を開発するための重要な候補である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｖａｒｇｈｅｓｅ，Ｊ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００３年、４６巻、４６２５〜４６３０頁
【非特許文献２】Ｓｉｎｈａら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９９年、４０２巻、５３７〜５４０頁
【非特許文献３】Ｒｏｂｅｒｄｓ，Ｓ．Ｌ．ら、Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２００１年、１０巻、１３１７〜１３２４頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、本明細書に提供する化合物などの阻害物質によりＢＡＣＥを阻害することにより、Ａβおよびその部分の沈着を阻害することは有用である。
【０００９】
Ａβの沈着を阻害する治療上の可能性は、セクレターゼ酵素を単離および特徴づけし、
これらの潜在的な阻害物質を同定するように多くのグループを動機付けているものである。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩の粉末Ｘ線ディフラクトグラム（ｄｉｆｆｒａｃｔｏｇｒａｍ）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩に関する。（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩は、（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンファースルホン酸塩と代替的に記述することができる。
【００１２】
本発明の一実施形態は、以下の、表１に示す、ｄ−間隔値を有するピークを実質的に表す粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンを提供することを特徴とする、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩である：
【００１３】
【表１】
2018104448.tif 000002
【００１４】
【表２】
2018104448.tif 000003
【００１５】
本発明の別の一実施形態は、以下の、表２に示す、非常に強い、強い、および中等度のｄ−間隔値を有するピークを実質的に表す粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンを提供することを特徴とする、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩である：
【００１６】
【表３】
2018104448.tif 000004
【００１７】
本明細書で用いられる、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩という用語は、その溶媒和物および共結晶も全て包含する。
【００１８】
化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンの代替的な塩には、コハク酸塩、塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩、フマル酸塩、および１．５ナフタレンジスルホン酸塩が含まれる。
【００１９】
本発明の特定の一態様において、治療有効量の化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩を、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤と共に有効成分として含む医薬組成物を提供する。
【００２０】
本発明の別の一態様において、医薬として使用するための、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２
’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩を提供する。
【００２１】
本発明の別の一態様において、Ａβ関連の病態を処置または防止するための医薬としての、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩の使用を提供する。
【００２２】
本発明の別の一態様において、Ａβ関連の病態を処置または防止するために医薬としての、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩の使用であって、Ａβ関連の病態が、ダウン症候群、β−アミロイド血管障害、脳アミロイド血管障害、遺伝性脳出血、認知障害に関連する障害、ＭＣＩ（「軽度認知障害」）、アルツハイマー病、物忘れ、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病に関連する神経変性、混合血管起源の認知症、変性起源の認知症、初老期認知症、老年認知症、パーキンソン病に関連する認知症、進行性核上性麻痺、または皮質基底変性症である、使用を提供する。
【００２３】
本発明の別の一態様において、アルツハイマー病を処置または防止するための医薬としての、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩の使用を提供する。
【００２４】
本発明の別の一態様において、Ａβ関連の病態を処置または防止するための医薬の製造における、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩の使用を提供する。
【００２５】
本発明の別の一態様において、Ａβ関連の病態を処置または防止するための医薬の製造における、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩の使用であって、前記Ａβ関連の病態が、ダウン症候群、β−アミロイド血管障害、脳アミロイド血管障害、遺伝性脳出血、認知障害に関連する障害、ＭＣＩ（「軽度認知障害」）、アルツハイマー病、物忘れ、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病に関連する神経変性、混合血管起源の認知症、変性起源の認知症、初老期認知症、老年認知症、パーキンソン病に関連する認知症、進行性核上性麻痺、または皮質基底変性症である、使用を提供する。
【００２６】
本発明の別の一態様において、アルツハイマー病を処置または防止するための医薬の製造における、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩の使用を提供する。
【００２７】
本発明の別の一態様において、ＢＡＣＥの活性を阻害する方法であって、前記ＢＡＣＥを、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プ
ロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩と接触させることを含む方法を提供する。
【００２８】
本発明の別の一態様において、それを必要とする患者においてＡβ関連の病態を処置または防止する方法であって、前記患者に治療有効量の化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩を投与することを含む方法を提供する。
【００２９】
本発明の別の一態様において、それを必要とする患者においてＡβ関連の病態を処置または防止する方法であって、前記患者に治療有効量の化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩を投与することを含み、前記Ａβ関連の病態が、ダウン症候群、β−アミロイド血管障害、脳アミロイド血管障害、遺伝性脳出血、認知障害に関連する障害、ＭＣＩ（「軽度認知障害」）、アルツハイマー病、物忘れ、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病に関連する神経変性、混合血管起源の認知症、変性起源の認知症、初老期認知症、老年認知症、パーキンソン病に関連する認知症、進行性核上性麻痺、または皮質基底変性症である、方法を提供する。
【００３０】
本発明の別の一態様において、それを必要とする患者においてアルツハイマー病を処置または予防する方法であって、前記患者に治療有効量の化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩を投与することを含む方法を提供する。
【００３１】
いくつかの実施形態において、本発明は、ＢＡＣＥの活性を阻害する方法であって、ＢＡＣＥを化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩と接触させることを含む方法を提供する。ＢＡＣＥは、主なβ−セクレターゼ活性を表すと考えられており、アミロイド−β−タンパク質（Ａβ）の生成における律速段階であると考えられている。したがって、本明細書に提供する化合物などの阻害物質によるＢＡＣＥの阻害は、Ａβおよびその部分の沈着を阻害するのに有用である。Ａβおよびその部分の沈着はアルツハイマー病などの疾患に関連しているので、ＢＡＣＥは、Ａβ関連の病態、例えば、ダウン症候群、およびβ−アミロイド血管障害、例えば、それだけには限定されないが、脳アミロイド血管障害、遺伝性脳出血、認知障害に関連する障害、例えば、それだけには限定されないが、ＭＣＩ（「軽度認知障害」）、アルツハイマー病、物忘れ、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病などの疾患に関連する神経変性、または混合血管起源および変性起源の認知症、初老期認知症、老年認知症、およびパーキンソン病に関連する認知症を含めた認知症、進行性核上性麻痺、または皮質基底変性症の処置および／または予防としての薬物を開発するための重要な候補である。
【００３２】
いくつかの実施形態において、本発明は、Ａβ関連の病態、例えば、ダウン症候群、およびβ−アミロイド血管障害、例えば、それだけには限定されないが、脳アミロイド血管障害、遺伝性脳出血、認知障害に関連する障害、例えば、それだけには限定されないが、ＭＣＩ（「軽度認知障害」）、アルツハイマー病、物忘れ、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病などの疾患に関連する神経変性、または混合血管起源および変性起源の認知症、初老期認知症、老年認知症、およびパーキンソン病に関連する認
知症を含めた認知症、進行性核上性麻痺、または皮質基底変性症を予防するための方法であって、治療有効量の化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩を哺乳動物（ヒトを含む）に投与することを含む方法を提供する。
【００３３】
いくつかの実施形態において、本発明は、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩、ならびに認知増強剤および／または記憶増強剤を哺乳動物（ヒトを含む）に投与することによる、Ａβ関連の病態、例えば、ダウン症候群、およびβ−アミロイド血管障害、例えば、それだけには限定されないが、脳アミロイド血管障害、遺伝性脳出血、認知障害に関連する障害、例えば、それだけには限定されないが、ＭＣＩ（「軽度認知障害」）、アルツハイマー病、物忘れ、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病などの疾患に関連する神経変性、または混合血管起源および変性起源の認知症、初老期認知症、老年認知症、およびパーキンソン病に関連する認知症を含めた認知症、進行性核上性麻痺、または皮質基底変性症を処置または防止する方法を提供する。
【００３４】
いくつかの実施形態において、本発明は、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩、およびコリンエステラーゼ阻害剤または抗炎症剤を哺乳動物（ヒトを含む）に投与することによる、Ａβ関連の病態、例えば、ダウン症候群、およびβ−アミロイド血管障害、例えば、それだけには限定されないが、脳アミロイド血管障害、遺伝性脳出血、認知障害に関連する障害、例えば、それだけには限定されないが、ＭＣＩ（「軽度認知障害」）、アルツハイマー病、物忘れ、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病などの疾患に関連する神経変性、または混合血管起源および変性起源の認知症、初老期認知症、老年認知症、およびパーキンソン病に関連する認知症を含めた認知症、進行性核上性麻痺、または皮質基底変性症を処置または防止する方法を提供する。
【００３５】
いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の化合物および非定型抗精神病剤を哺乳動物（ヒトを含む）に投与することによる、Ａβ関連の病態、例えば、ダウン症候群、およびβ−アミロイド血管障害、例えば、それだけには限定されないが、脳アミロイド血管障害、遺伝性脳出血、認知障害に関連する障害、例えば、それだけには限定されないが、ＭＣＩ（「軽度認知障害」）、アルツハイマー病、物忘れ、アルツハイマー病に関連する注意欠陥症状、アルツハイマー病などの疾患に関連する神経変性、または混合血管起源および変性起源の認知症、初老期認知症、老年認知症、およびパーキンソン病に関連する認知症を含めた認知症、進行性核上性麻痺、または皮質基底変性症、または本明細書に記載する任意の他の疾患、障害、もしくは状態を処置または防止する方法を提供する。非定型抗精神病剤には、それだけには限定されないが、オランザピン（販売名Ｚｙｐｒｅｘａ）、アリピプラゾール（販売名Ａｂｉｌｉｆｙ）、リスペリドン（販売名Ｒｉｓｐｅｒｄａｌ）、クエチアピン（販売名Ｓｅｒｏｑｕｅｌ）、クロザピン（販売名Ｃｌｏｚａｒｉｌ）、ジプラシドン（販売名Ｇｅｏｄｏｎ）、およびオランザピン／フルオキセチン（販売名Ｓｙｍｂｙａｘ）が含まれる。
【００３６】
いくつかの実施形態において、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’
−アミンのカンシル酸塩で処置される哺乳動物またはヒトは、本明細書に記載する疾患または障害などの特定の疾患または障害と診断されている。このような場合、処置される哺乳動物またはヒトは、このような処置を必要としている。しかし、診断を予め行う必要はない。
【００３７】
本出願において述べる定義は、本出願を通して用いる用語を明確にしようとするものである。「本明細書」という用語は本出願全体を意味する。
【００３８】
本明細書で用いられる「薬学的に許容される」は本明細書において用いられて、健全な医学上の判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしに、理にかなった損／益比に見合った、ヒトおよび動物の組織と接触させて用いるのに適する、化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。
【００３９】
本明細書に規定する抗認知症処置は、単独の治療法として適用してもよく、または本発明の化合物に加えて従来の化学療法を伴ってもよい。このような化学療法は、以下の範疇の薬剤：アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、抗炎症剤、認知増強剤および／もしくは記憶増強剤、または非定型抗精神病剤を１つまたはそれ以上含むことができる。
【００４０】
このような共同処置は、処置の個々の構成成分を補助に、並行に、同時に、逐次に、または別々に投与することにより実現され得る。このような組合せ生成物は本発明の化合物を使用する。
【００４１】
さらなる従来の化学療法は、１つまたはそれ以上の以下の範疇の薬剤：（ｉ）抗うつ薬、（ｉｉ）非定型抗精神病薬、（ｉｉｉ）向精神病薬、（ｉｖ）抗不安薬、（ｖ）抗痙攣薬、（ｖｉ）現在用いられているアルツハイマーの治療法、（ｖｉｉ）パーキンソンの治療法、（ｖｉｉｉ）偏頭痛治療法、（ｉｘ）脳卒中治療法、（ｘ）尿失禁治療法、（ｘｉ）神経因性疼痛治療法、（ｘｉｉ）侵害受容性疼痛治療法、（ｘｉｉｉ）不眠症治療法、および（ｘｉｖ）気分安定剤を含むことができる。前述の治療法に対して知られている処置を、本明細書に記載する本発明と組み合わせて用いてもよい。
【００４２】
このような組合せ生成物は、本明細書に記載する投与量範囲内の化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩、ならびに認可されている投与量範囲内の、および／または当業者によって決定された、１種または複数の他の薬学上の有効化合物を使用する。
【００４３】
本発明の化合物は、経口的に、非経口的に、頬側に、膣内に、直腸内に、吸入、ガス注入、舌下に、筋肉内に、皮下に、局所に、鼻腔内に、腹腔内に、胸郭内に、静脈内に、硬膜外に、くも膜下腔内に、脳室内に、および関節中への注射により投与することができる。
【００４４】
投与量は、特定の患者に最も好適であるとして個々のレジメンおよび投与量レベルを決定する場合、投与経路、疾患の重症度、患者の年齢および体重、ならびに担当医により通常考慮される他の因子に依存する。
【００４５】
認知症の治療に用いるための本発明の化合物の有効量は、温血動物、特にヒトにおける認知症の症状を症候的に軽減して、認知症の進行を遅くし、または認知症の症状を有する患者における悪化のリスクを低減するのに十分な量である。
【００４６】
本発明の化合物に加えて、本発明の医薬組成物は、本明細書に言及する１つまたはそれ以上の疾患状態を処置する上で価値のある１つまたはそれ以上の薬理学的な薬剤をやはり含有していてもよく、またはこれらと同時投与（同時もしくは逐次的に）してもよい。
【００４７】
投与しようとする、化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩の量は、処置される患者に対して変化し、１日あたり約１０ｎｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重まで、好ましくは１日あたり１０ｎｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇまで変化する。例えば、投与量は、当業者であれば、本開示から、および当技術分野における知識から容易に確認することができる。したがって、当業者であれば、化合物の量を、ならびに組成物中の、および本発明の方法において投与しようとする、任意選択の添加剤、ビヒクル、および／または担体の量を容易に決定することができる。
【００４８】
製造方法
（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩
化合物（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩は、適切な溶媒、例えば、２−プロパノール、アセトニトリル、もしくはアセトン、またはこれらの水との混合物中の、（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンの溶液から出発し、引き続き得られた溶液を、室温から８０℃の間の温度で、直接、または２−プロパノールもしくは水などの適切な溶媒に溶解して、（１Ｓ）−（＋）−１０−カンファースルホン酸と混合することにより得てもよい。溶媒を蒸発させることにより、かつ／または溶液を冷却することにより、または塩反応（ｓａｌｔ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）の結晶化として直接的に、結晶化を得てもよい。種結晶を用いて結晶化を開始させてもよい。種は、バッチ自体から、小体積の溶液をサンプリングし、次いでこれを速やかに冷却して結晶化を引き起こすことにより製造してもよい。次いで、結晶を、種としてバッチに加える。
【００４９】
ＸＲＰＤ分析
粉末Ｘ線回折分析（ＸＲＰＤ）を、Ｇｉａｃｏｖａｚｚｏ，Ｃ．ら（１９９５年）、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ｏｆ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｒ．およびＳｎｙｄｅｒ．Ｒ．Ｌ．（１９９６年）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｘ−Ｒａｙ  Ｐｏｗｄｅｒ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｒｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｂｕｎｎ，Ｃ．Ｗ．（１９４８年）、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ、Ｃｌａｒｅｎｄｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ；またはＫｌｕｇ，Ｈ．Ｐ．およびＡｌｅｘａｎｄｅｒ，Ｌ．Ｅ．（１９７４年）、Ｘ−ｒａｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋにおいて記載されているなど、標準法にしたがって製造した試料に対して行った。Ｘ線回折分析を、ＰＡＮａｎｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’Ｐｅｒｔ  ＰＲＯ  ＭＰＤ回折計を用いて、１°から６０°までの２θを９６分の間行った。ＸＲＰＤ距離値は、最終の小数位に対して±２の範囲で変化し得る。
【００５０】
相対強度は、可変スリットで測定したディフラクトグラムに由来する。
【００５１】
測定された相対強度対最強のピークは、相対的ピーク高さが５０％を超える非常に強力（ｖｓ）、２５から５０％の間である強力（ｓ）、１０から２５％の間である中等度（ｍ）、５から１０％の間である弱い（ｗ）、および５％未満である非常に弱い（ｖｗ）として示される。当業者であればＸＲＰＤ強度は、様々な試料間で、および様々な試料調製物間で、選択方位を含めた様々な理由で変動し得ることが理解されよう。当業者であれば、測定角におけるわずかな移行、したがってｄ−間隔が、回折計における試料表面レベルの変動を含めた様々な理由で生じ得ることも理解されよう。
【実施例】
【００５２】
（実施例１）
６’−ブロモスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン］−１’，４（３’Ｈ）−ジオン
【化１】
2018104448.tif 000005
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２２３ｇ、１．９９ｍｏｌ）を、２０〜３０℃で、ＴＨＦ（１６．７５Ｌ）中の６−ブロモ−１−インダノン（８．３８ｋｇ、３９．７ｍｏｌ）の撹拌した混合物を含有している１００Ｌ反応器に投入した。次いで、メチルアクリレート（２．３３Ｌ、２５．８ｍｏｌ）を、温度を２０〜３０℃の間に維持しながら、１５分の間に混合物に投入した。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８９．１ｇ、０．７９ｍｏｌ）をＴＨＦ（４００ｍＬ）に溶解した溶液を加え、その後、２０〜３０℃で２０分の間に、メチルアクリレート（２．３３Ｌ、２５．８ｍｏｌ）を加えた。次いで、３度目のＴＨＦ（４００ｍＬ）に溶解したカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（９０ｇ、０．８０ｍｏｌ）を加え、その後、２０〜３０℃で、２０分の間に、３度目のメチルアクリレート（２．３３Ｌ、２５．８ｍｏｌ）を加えた。ＴＨＦ（２１．９Ｌ）に溶解したカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（４．８６ｋｇ、４３．３ｍｏｌ）を、２０〜３０℃で、１時間の間に反応器に投入した。反応をおよそ６５℃に加熱し、溶媒２３Ｌを留去した。反応温度を６０℃に下げ、水（５１．１Ｌ）に溶解した５０％水酸化カリウム水溶液（２．４２Ｌ、３１．７ｍｏｌ）を、５５〜６０℃で、３０分の間に混合物に加え、その後、混合物を６０℃で６時間撹拌し、２時間の間に２０℃に冷却した。２０℃で１２時間撹拌した後、固体材料をろ去し、水（８．４Ｌ）とＴＨＦ（４．２Ｌ）との混合物で２回洗浄し、次いで、真空下５０℃で乾燥させて、６’−ブロモスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン］−１’，４（３’Ｈ）−ジオン（７．７８ｋｇ；２６．６ｍｏｌ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １．７８−１．８４（ｍ，２Ｈ）、１．９５（ｔｄ，２Ｈ）、２．３２−２．３８（ｍ，２Ｈ）、２．５１−２．５９（ｍ，２Ｈ）、３．２７（ｓ，２Ｈ）、７．６０（ｄ，１Ｈ）、７．８１（ｍ，１Ｈ）、７．８９（ｍ，１Ｈ）。
【００５３】
（実施例２）
（１ｒ，４ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン］−１’（３’Ｈ）−オン
【化２】
2018104448.tif 000006
ＤＣＭ（３．８Ｌ）に溶解したボランｔｅｒｔ−ブチルアミン錯体（８４５ｇ、９．７ｍｏｌ）を、６’−ブロモスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン］−１’，４（３’Ｈ）−ジオン（７．７ｋｇ、２６．３ｍｏｌ）のＤＣＭ（４２．４Ｌ）中スラリーに、およそ０〜５℃で、およそ２５分かけて投入した。反応を、１時間、０〜５℃で撹拌したままにし、その後、分析により変換が＞９８％であったことを確認した。塩化ナトリウム（２．７７ｋｇ）、水（１３．３Ｌ）、および３７％塩酸（２．６１Ｌ、３２ｍｏｌ）から製造した溶液を投入した。混合物をおよそ１５℃に温め、層に落ち着いた後、相を分離した。有機相をメタンスルホン酸メチル（２．６８Ｌ、３１．６ｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムクロリド（１３１ｇ、０．４７ｍｏｌ）と一緒に反応器に戻し、混合物を２０℃で激しく振盪した。次いで、５０％水酸化ナトリウム（１２．５Ｌ、２３６ｍｏｌ）を、およそ１時間かけて、激しく振盪している反応混合物に投入し、反応を終夜、２０℃で激しく振盪したままにした。水（１９Ｌ）を加え、分離後、水相を廃棄した。有機層をおよそ４０℃に加熱し、溶媒３３Ｌを留去した。エタノール（２１Ｌ）を投入し、温度を上げながら蒸留を再開した（最高７９℃で２２Ｌを留去した）。エタノール（１３．９Ｌ）を、およそ７５℃で投入した。水（１４．６Ｌ）を、温度を７２〜７５℃の間に維持しながら３０分かけて投入した。溶液およそ４００ｍＬを、５００ｍＬポリエチレン製ボトルに引き込み、試料を自発的に結晶化させた。バッチを５０℃に冷却し、その後、結晶化したスラリー試料を溶液に戻し加えた。混合物を４０℃に冷却した。混合物を４時間の間に２０℃に冷却し、その後それを終夜撹拌した。固体をろ去し、エタノール（６．６Ｌ）と水（５Ｌ）との混合物で洗浄し、真空下５０℃で乾燥させて、（１ｒ，４ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン］−１’（３’Ｈ）−オン（５．８３ｋｇ、１８．９ｍｏｌ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １．２２−１．３２（ｍ，２Ｈ）、１．４１−１．４８（ｍ，２Ｈ）、１．５６（ｔｄ，２Ｈ）、１．９９−２．０７（ｍ，２Ｈ）、３．０１（ｓ，２Ｈ）、３．１６−３．２３（ｍ，１Ｈ）、３．２７（ｓ，３Ｈ）、７．５６（ｄ，１Ｈ）、７．７７（ｄ，１Ｈ）、７．８６（ｄｄ，１Ｈ）。
【００５４】
（実施例３）
（１ｒ，４ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン］−１’（３’Ｈ）−イミン塩酸塩
【化３】
2018104448.tif 000007
（１ｒ，４ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン］−１’（３’Ｈ）−オン（５．８２ｋｇ；１７．７ｍｏｌ）を、周囲温度で１００Ｌ反応器に投入し、引き続きチタン（ＩＶ）エトキシド（７．４Ｌ；３５．４ｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルスルフィナミド（２．９４ｋｇ；２３．０ｍｏｌ）の２−メチルテトラヒドロフラン（１３．７Ｌ）溶液を投入した。混合物を撹拌し、８２℃に加熱した。８２℃で３０分後、温度をさらに上げ（最高９７℃）、溶媒８Ｌを留去した。反応を８
７℃に冷却し、２−メチルテトラヒドロフラン（８．２Ｌ）を加え、反応温度を８２℃にした。反応を終夜、８２℃で撹拌したままにした。反応温度を（９７℃に）上げ、溶媒８．５Ｌを留去した。反応を８７℃に冷却し、２−メチルテトラヒドロフラン（８．２Ｌ）を加え、反応温度を８２℃にした。３．５時間後、反応温度を（９７℃に）さらに上げ、溶媒８Ｌを留去した。反応を８７℃に冷却し、２−メチルテトラヒドロフラン（８．２Ｌ）を加え、反応温度を８２℃にした。２時間後、反応温度を（９７℃に）さらに上げ、溶媒８．２Ｌを留去した。反応を８７℃に冷却し、２−メチルテトラヒドロフラン（８．２Ｌ）を加え、反応温度を８２℃にした。反応を終夜、８２℃で撹拌した。反応温度を（９７℃に）さらに上げ、溶媒８Ｌを留去した。反応を２５℃に冷却した。ジクロロメタン（１６．４Ｌ）を投入した。分離反応器（ｓｅｐａｒａｔｅ  ｒｅａｃｔｏｒ）に水（３０Ｌ）を加え、激しく振盪し、硫酸ナトリウム（７．５４ｋｇ）を加え、得られた溶液を１０℃に冷却した。硫酸（２．３Ｌ、４２．４ｍｏｌ）を水溶液に加え、温度を２０℃に調整した。酸性の水溶液６Ｌを引き込み、後のために保存した。有機反応混合物を、よく振盪しながら、５分かけて酸性の水溶液に投入した。有機反応容器（ｏｒｇａｎｉｃ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｖｅｓｓｅｌ）をジクロロメタン（１６．４Ｌ）で洗浄し、ジクロロメタンの洗浄溶液も酸性水に加えた。混合物を１５分間撹拌し、次いで２０分間静置させた。下の水相を流し出し、保存した酸性洗浄液６Ｌを加え、引き続き水（５．５Ｌ）を加えた。混合物を１５分間撹拌し、次いで２０分間静置させた。下の有機層をカーボイ（ｃａｒｂｏｙ）に流し出し、上の水層を廃棄した。有機層を容器に戻し投入し、引き続き硫酸ナトリウム（２．７４ｋｇ）を投入し、混合物を３０分間振盪した。硫酸ナトリウムをろ去し、ジクロロメタン（５．５Ｌ）で洗浄し、合わせた有機相を、清浄な容器に投入した。バッチを蒸留のために加熱した（最高温度５７℃で３１Ｌ回収）。バッチを４０℃に冷却し、ジクロロメタン（１６．４Ｌ）を加えた。バッチを蒸留のために加熱した（最高温度５４℃で１７Ｌ回収）。バッチを２０℃に冷却し、ジクロロメタン（５．５Ｌ）およびエタノール（２．７Ｌ）、その後ジエチルエーテル（１０．６Ｌ；２１．２ｍｏｌ）中２Ｍ塩化水素を、温度を１６〜２３℃の間に維持しながら４５分かけて反応に投入した。得られたスラリーを２０℃で１時間撹拌し、その後固体をろ去し、ジクロロメタンおよびジエチルエーテルの１：１混合物で３回洗浄した（３×５．５Ｌ）。固体を真空下、５０℃で乾燥させて、（１ｒ，４ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン］−１’（３’Ｈ）−イミン塩酸塩（６．０ｋｇ；１４．３ｍｏｌ；１Ｈ  ＮＭＲによるアッセイ８２％ｗ／ｗ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １３０（ｍ，２Ｈ）、１．７０（ｄ，２Ｈ）、１．９８（ｍ，２Ｈ）、２．１０（ｍ，２Ｈ）、３．１７（ｓ，２Ｈ）、３．２３（ｍ，１Ｈ）、３．２９（ｓ，３Ｈ）、７．６１（ｄ，１Ｈ）、８．０４（ｄｄ，１Ｈ）、８．７５（ｄ，１Ｈ）、１２．９０（ｂ��  ｓ，２Ｈ）。
【００５５】
（実施例４）
（１ｒ，４ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシ−５’’−メチル−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’（３’’Ｈ）−チオン
【化４】
2018104448.tif 000008
トリメチルオルトホルメート（４．９５Ｌ；４５．２ｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３．５Ｌ；２０．０ｍｏｌ）を、イソプロパノール（５０．５Ｌ）中（１ｒ，４ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン］
−１’（３’Ｈ）−イミン塩酸塩（６．２５ｋｇ；１４．９ｍｏｌ）を含有している反応器に投入した。反応混合物を撹拌し、澄明な溶液が得られるように、１時間の間に７５℃に加熱した。温度を７０℃に設定し、イソプロパノール（１９．５ｋｇ；４０．６ｍｏｌ）中２−オキソプロパンチオアミドの２Ｍ溶液を１時間かけて投入し、その後、反応を６９℃で終夜撹拌した。バッチに（１ｒ，４ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシ−５’’−メチル−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’（３’’Ｈ）−チオン（３ｇ；７．６ｍｍｏｌ）を播種し、温度を６０℃に下げ、１時間撹拌した。混合物を蒸留により濃縮した（蒸留温度およそ６０℃；３１Ｌを留去した）。水（３１Ｌ）を１時間６０℃で加えた後、温度を９０分の間に２５℃に下げ、その後、混合物を３時間撹拌した。固体をろ去し、イソプロパノールで２回洗浄し（２×５．２Ｌ）、真空下４０℃で乾燥させて、（１ｒ，４ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシ−５’’−メチル−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’（３’’Ｈ）−チオン（４．８７ｋｇ；１０．８ｍｏｌ；１Ｈ  ＮＭＲによるアッセイ８７％ｗ／ｗ）を得た。
【００５６】
（実施例５）
（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシ−５’’−メチル−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンＤ（＋）−１０−カンファースルホン酸塩
【化５】
2018104448.tif 000009
メタノール中７Ｍアンモニア（３２Ｌ；２２４ｍｏｌ）を、（１ｒ，４ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシ−５’’−メチル−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’（３’’Ｈ）−チオン（５．１０ｋｇ；１１．４ｍｏｌ）および酢酸亜鉛二水和物（３．０２ｋｇ；１３．８ｍｏｌ）を含有している反応器に投入した。反応器を密封し、混合物を８０℃に加熱し、２４時間撹拌し、その後、これを３０℃に冷却した。１−ブタノール（５１Ｌ）を投入し、反応混合物を減圧留去によりおよそ５０Ｌに濃縮した。１−ブタノール（２５Ｌ）を加え、混合物を減圧蒸留により２７Ｌに濃縮した。混合物を３０℃に冷却し、１Ｍ水酸化ナトリウム（３０Ｌ；３０ｍｏｌ）を投入した。二相性の混合物を１５分間振盪した。下の水相を分離して除いた。水（２０Ｌ）を投入し、混合物を３０分間振盪した。下の水相を分離して除いた。有機相を７０℃に加熱し、その後、（１Ｓ）−（＋）−１０−カンファースルホン酸（２．４ｋｇ；１０．３ｍｏｌ）を投入した。混合物を７０℃で１時間撹拌し、次いで、３時間かけて２０℃に徐々に下げた（ｒａｍｐｅｄ  ｄｏｗｎ）。固体をろ去し、エタノール（２０Ｌ）で洗浄し、５０℃の真空中で乾燥させて、（１ｒ，４ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシ−５’’−メチル−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミン（＋）−１０−カンファースルホン酸塩（３．１２ｋｇ；５．１３ｍｏｌ；１Ｈ  ＮＭＲによるアッセイ１０２％ｗ／ｗ）を得た。
【００５７】
（実施例６）
（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’
−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミン
Ｎａ２ＰｄＣｌ４（１．４ｇ；４．７６ｍｍｏｌ）および３−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスホニウム）プロパンスルホネート（２．６ｇ；９．６９ｍｍｏｌ）を水（０．１Ｌ）に溶解したものを、１−ブタノール（７．７Ｌ）および水（２．６Ｌ）の混合物中（１ｒ，４ｒ）−６’−ブロモ−４−メトキシ−５’’−メチル−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミン（＋）−１０−カンファースルホン酸塩（１ｋｇ；１．５８ｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．７６３ｋｇ；５．５２ｍｏｌ）を含有している容器に投入した。混合物を窒素で注意深く不活性化し、その後、５−（プロパ−１−インイル）ピリジン−３−イルボロン酸（０．２９ｋｇ；１．６２ｍｏｌ）を投入し、混合物を再び窒素で注意深く不活性化した。反応混合物を７５℃に加熱し、２時間撹拌し、その後、分析により完全な変換が示された。温度を４５℃に調整した。撹拌を停止し、下の水相を分離して除いた。有機層を水で３回洗浄した（３×４Ｌ）。反応温度を２２℃に調整し、Ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃｓ  ＳＰＭ３２スカベンジャー（０．１９５ｋｇ）を投入し、混合物を終夜振盪した。スカベンジャーをろ去し、１−ブタノール（１Ｌ）で洗浄した。反応を減圧下の蒸留により３Ｌに濃縮した。酢酸ブチル（７．７Ｌ）を投入し、混合物を再び、減圧下の蒸留により３Ｌに濃縮した。酢酸ブチル（４．８Ｌ）を投入し、混合物を６０℃に加熱した。混合物を１時間撹拌し、その後、減圧下の蒸留によりおよそ４Ｌに濃縮した。温度を６０℃に設定し、ヘプタン（３．８Ｌ）を２０分かけて加えた。混合物を３時間かけて２０℃に冷却し、次いで、終夜、撹拌したままにした。固体をろ去し、酢酸ブチル：ヘプタンの１：１混合物で２回洗浄した（２×２Ｌ）。生成物を５０℃の真空下で乾燥させて、（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミン（０．５６２ｋｇ；１．３６ｍｏｌ；１Ｈ  ＮＭＲによるアッセイで１００％ｗ／ｗ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ０．９７（ｄ，１Ｈ）、１．１２−１．３０（ｍ，２Ｈ）、１．３７−１．５１（ｍ，３Ｈ）、１．８３（ｄ，２Ｈ）、２．０９（ｓ，３Ｈ）、２．１７（ｓ，２Ｈ）、２．８９−３．１２（ｍ，３Ｈ）、３．２０（ｓ，３Ｈ）、６．５４（ｓ，２Ｈ）、６．８３（ｓ，１Ｈ）、７．４０（ｄ，１Ｈ）、７．５４（ｄ，１Ｈ）、７．９０（ｓ，１Ｈ）．  ８．５１（ｄ，１Ｈ）、８．６７（ｄ，１Ｈ）
【００５８】
（実施例７）
（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩の製造
（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミン１．１０５ｋｇを、６０℃の、２−プロパノール８．１０Ｌおよび水４７５ｍＬに溶解した。次いで、１．０モル当量（６２２グラム）の（１Ｓ）−（＋）−１０カンファースルホン酸を６０℃で投入した。（１Ｓ）−（＋）−１０カンファースルホン酸が全て溶解するまで、スラリーを振盪した。さらなる２−プロパノールを６０℃で加え（６．０Ｌ）、次いで、留出物４．３Ｌが回収されるまで内容物を蒸留した。次いで、ヘプタン９．１Ｌを６５℃で投入した。１時間遅れた後、バッチは不透明になった。次いで、さらなる蒸留を約７５℃で行い、留出物８．２Ｌを回収した。次いで、バッチを２時間かけて２０℃に冷却し、終夜、その温度で維持した。次いで、バッチをろ過し、２−プロパノール１．８Ｌおよびヘプタン２．７Ｌの混合物で洗浄した。最後に、物質を減圧５０℃で乾燥させた。収率は１．４４ｋｇ（８３．６％ｗ／ｗ）であった。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １２．１２（１Ｈ，ｓ）、９，７０（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ４０．２）、８．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ
２．１）、８．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １．７）、８．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ２．１，
１．７）、７．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ７．８，１．２）、７．５０（２Ｈ，ｍ）、３．２２（３Ｈ，ｓ）、３．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １６．１）、３．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １６．１）、３．０２（１Ｈ，ｍ）、２．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １４．７）、２．６０（１Ｈ，ｍ）、２．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １４．７）、２．４０（３Ｈ，ｓ）、２．２２（１Ｈ，ｍ）、２．１０（３Ｈ，ｓ）、１．９１（３Ｈ，ｍ）、１．８１（１Ｈ，ｍ）、１．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ  １８．１）、１．５０（２Ｈ，ｍ）、１．２５（６Ｈ，ｍ）、０．９８（３Ｈ，ｓ）、０．６９（３Ｈ，ｓ）。
【００５９】
生物学的アッセイ
（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩の活性のレベルは、以下の方法を用いて試験することができる：
【００６０】
ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイ
ＴＲ−ＦＲＥＴにおいて用いるβ−セクレターゼ酵素を、以下の通りに製造した：
ヒトβ−セクレターゼの可溶性部分（アミノ酸１〜アミノ酸４６０）に対するｃＤＮＡを、哺乳動物発現ベクターＡＳＰ２−Ｆｃ１０−１−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ−ｎｅｏＫを用いてクローニングした。遺伝子をＩｇＧ１（アフィニティタグ）のＦｃドメインに融合させ、ＨＥＫ２９３細胞中に安定にクローニングした。精製したｓＢＡＣＥ−Ｆｃを、５０ｍＭグリシンｐＨ２．５中、−８０℃で貯蔵し、１Ｍ  ＴｒｉｓでｐＨ７．４に調整し、純度は４０％であった。
【００６１】
酵素（切断型）を６μｇ／ｍＬ（保存液１．３ｍｇ／ｍＬ）に希釈し、ＴｒｕＰｏｉｎｔ  ＢＡＣＥ１基質を反応バッファー（酢酸ナトリウム、ｃｈａｐｓ、トリトンｘ−１００、ＥＤＴＡ  ｐＨ４．５）中２００ｎＭ（保存液１２０μＭ）に希釈した。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ最終濃度５％）中の酵素および化合物を混合し、ＲＴで１０分間プレインキュベートした。次いで、基質を加え、反応をＲＴで１５分間インキュベートした。０．３５倍容の停止溶液（酢酸ナトリウム、ｐＨ９）を加えて反応を停止させた。生成物の蛍光を、励起波長３４０〜４８５ｎｍおよび発光波長５９０〜６１５ｎｍのＶｉｃｔｏｒ  ＩＩプレートリーダー上で測定した。酵素の最終濃度は２．７μｇ／ｍｌであり；基質の最終濃度は１００ｎＭであった（Ｋｍはおよそ２５０ｎＭ）。ジメチルスルホキシド対照は、試験化合物の代わりに、１００％の活性レベルを規定し、０％の活性は酵素を欠くウエルにより（反応バッファーで置き換えたもの）、または飽和投与量の既知の阻害物質である、２−アミノ−６−［３−（３−メトキシフェニル）フェニル］−３，６−ジメチル−５Ｈ−ピリミジン−４−オンにより規定された。対照の阻害物質をやはり投与量反応アッセイにおいて用い、ＩＣ５０はおよそ１５０ｎＭであった。
【００６２】
（１ｒ，１’Ｒ，４Ｒ）−４−メトキシ−５’’−メチル−６’−［５−（プロパ−１−イン−１−イル）ピリジン−３−イル］−３’Ｈ−ジスピロ［シクロヘキサン−１，２’−インデン−１’２’−イミダゾール］−４’’−アミンのカンシル酸塩は、このアッセイにおいて、平均ＩＣ５０が０．２ｎＭであった。
【００６３】
ｓＡＰＰβ放出アッセイ
ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、Ｇｌｕｔａｍａｘ、１０％ＦＣＳ、および１％非必須アミノ酸を含む、ＤＭＥＭ／Ｆ−１２中で培養し、冷凍保存し、１バイアルあたり７．５〜９．５×１０６細胞の濃度で、−１４０℃で貯蔵する。細胞を解凍し、３８４ウエルの組織培養物処理したプレートに、Ｇｌｕｔａｍａｘ、１０％ＦＣＳ、および１％非必須アミノ酸を含むＤＭＥＭ／Ｆ−１２中１００００細胞／ウエル付近の濃度で、細胞懸濁液１００μＬ／ウエルを播種する。次いで、細胞プレートを３７℃、５％ＣＯ２で７〜２４時間インキ
ュベートする。細胞培地を除去し、引き続き、Ｇｌｕｔａｍａｘ、１０％ＦＣＳ、１％非必須アミノ酸、および１％ＰｅＳｔを含むＤＭＥＭ／Ｆ−１２中で希釈した化合物３０μＬを、ＤＭＳＯの最終濃度が１％になるまで加える。化合物を細胞と一緒に１７時間（終夜）、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートする。メソスケールディスカバリー（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）（ＭＳＤ）プレートを、ｓＡＰＰβ放出の検出に用いる。ＭＳＤ  ｓＡＰＰβプレートを、Ｔｒｉｓ洗浄バッファー（４０μＬ／ウエル）中１％ＢＳＡ中で、ｒ．ｔ．の振盪機上１時間、ブロックし、Ｔｒｉｓ洗浄バッファー（４０μＬ／ウエル）中で１回洗浄する。予めブロックし、洗浄したＭＳＤ  ｓＡＰＰβマイクロプレートに培地２０μＬを移し、細胞プレートをＡＴＰアッセイにおいてさらに用いて、細胞毒性を測定する。ＭＳＤプレートを、ｒ．ｔ．で２時間振盪しながらインキュベートし、培地を廃棄する。検出抗体１０μＬを１ウエルあたり（１ｎＭ）加え、引き続きｒ．ｔ．で２時間、振盪しながらインキュベートし、次いで廃棄する。１ウエルあたり４０μＬのリードバッファー（Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ）を加え、プレートをＳＥＣＴＯＲ  Ｉｍａｇｅｒにおいて読み取る。
【００６４】
ＡＴＰアッセイ
ｓＡＰＰβ放出アッセイにおいて指摘した通り、培地２０μＬをｓＡＰＰβ検出用細胞プレートから移した後、プレートを用いて、全細胞のＡＴＰを測定するＣａｍｂｒｅｘ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅからのＶｉａＬｉｇｈｔＴＭ  Ｐｌｕｓ細胞増殖／細胞毒性キットを用いて、細胞毒性を分析する。アッセイを、製造元のプロトコールにしたがって行う。簡潔に述べると、１ウエルあたり細胞溶解試薬１０μＬを加える。プレートをｒ．ｔ．で１０分間インキュベートする。再構成したＶｉａＬｉｇｈｔＴＭ  ＰｌｕｓＡＴＰ試薬２５μＬを加えた２分後に発光を測定する。毒性閾値（Ｔｏｘ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）は、対照の７５％未満のシグナルである。
【図１】
2018104448.tif 000011
【外国語明細書】
2018104448000001.pdf