【事件の表示】
　特願２００８−２８３４１５「分析対象物を検出するための試薬及び方法ならびに分析対象物を検出するための試薬を含む装置」拒絶査定不服審判事件〔平成２１年　２月　５日出願公開、特開２００９−　２５３１８〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯
　本願は、平成１４年９月１２日（パリ条約による優先権主張　平成１３年（２００１年）９月１４日）を出願日とする特願２００２−２６６５７５号の一部を新たな特許出願とした特願２００８−２８３４１５号であって、平成２３年３月２２日付けで拒絶理由が通知され、同年９月２９日付けで意見書が提出されるとともに、同日付けで手続補正がなされ、平成２４年１月１３日付けで拒絶査定がなされ、これに対して、同年５月２４日に拒絶査定不服審判の請求がなされ、同時に手続補正がなされたものである。
　その後、平成２５年３月１３日付けで前置報告書の内容について請求人の意見を求める審尋がなされ、同年７月１９日付けで回答書が提出された。
　
第２　本願の請求項１に係る発明
　平成２４年５月２４日付けの手続補正による特許請求の範囲の補正は、請求項３についての誤記の訂正を目的とする補正であり、適法な補正である。
　よって、本願の請求項１に係る発明（以下「本願発明」という。）は、平成２４年５月２４日付け手続補正により補正された特許請求の範囲の請求項１に記載された事項により特定される次のとおりのものである。
　
「フラビンタンパク質、キノンタンパク質及びそれらの組み合わせからなる群から選択される酵素；並びに
　下記構造：
　【化１】
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8及びＲ9は、同一又は異なり、独立して、水素、カルボキシ及びスルホからなる群から選択される）で示される媒介物（当審注；以下、単に「【化１】で示される媒介物」という）又はその組み合わせ
を含む、分析対象物を検出するための試薬。」
　
第３　引用例
１　原査定の拒絶の理由に引用され、本願の原出願の優先日前に頒布された刊行物である特表平６−５０３４７２号公報（以下「引用例１」という。）には、次の事項が記載されている。（下記「２　引用例１に記載された発明の認定」において直接引用した記載に下線を付した。）
　
（１）「１．
レドックス系と、電気的導性粒子のペースト及びペースト化材料及び電荷移動仲介剤を含んで成る電極との間の電子移動を包含し、ここでのこの仲介剤が前記した一般式Ｘ（ここでその記号の定義は前記した通りである）の化合物である
 ２．
前記仲介剤が、
４−ニトロ−３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジン（＝メチレングリーン）
 ３．前記仲介剤がペースト化材料の中で完全又は部分的に結晶状で存在している、請求項１又は２に記載の方法。」（特許請求の範囲請求項１、２） 
（２）「発明の分野 
　本発明は流体サンプルの少なくとも一成分、特にグルコース含有水性媒体、例えば体液、特に
全血サンプル中のグルコースの濃度を測定するための生化学的方法、及びかかる方法において用いるための電荷移動仲介剤
（３）「上記の電極装置を含んで成る装置により実施できる、グルコース含有水性媒体のサンプル中のグルコース濃度を測定するための方法の基礎は、
グルコースと酵素グルコースオキシダーゼ（ＣＯＤ）との反応
　この反応は以下の式により図式的に説明されうる： 
　グルコース＋
グルコースオキシダーゼ−ＦＡＤ
　グルコン酸＋グルコースオキシダーゼ−ＦＡＤＨ２　　　　（Ｉ）
　グルコースオキシダーゼ−ＦＡＤＨ２＋２ＣＴＭｏｘ＋→ 
　グルコースオキシダーゼ−ＦＡＤ＋２ＣＴＭｒｅｄ＋２Ｈ＋　（II）
　２ＣＴＭｒｅｄ　→２ＣＴＭｏｘ＋＋２Ｃ−　　　　　　　　（III）
（ここで、
ＦＡＤはグルコースオキシダーゼの酸化型のフラビンアデニンジヌクレオチド部分
　この反応を表現する簡単な手段は：
　グルコース＋ＧＯＤ　→グルコン酸＋ＧＯＤ−　　（IV）
　ＧＯＤ−＋ＣＴＭｏｘ＋　→ＧＯＤ＋ＣＴＭｒｅｄ　（Ｖ）
　ＣＴＭｒｅｄ　→ＣＴＭｏｘ＋　＋Ｃ−　　　　　　（VI）
である。 
　上記の一般原理に基づく電極は知られているが、これらは仲介剤の減少により生ずる問題に悩まされ、それはその酸化型の比較的高い水溶解度に原因する。
　有意な程度の仲介剤の消耗は例えば以下の欠点、
（i）サンプルの媒体への仲介剤の迅速なる損失、起因して、一定のサンプルにおいて１回の測定しか実施できないこと；
（ii）測定の再現性は仲介剤の減少の程度が予測しにくいため悪く、そしてこれは、問題の電極に対するサンプルの暴露の経過時間及び実際の測定の性能に依存すること；
（iii）低グルコース濃度での感度が非常に悪いこと；並びに
（iv）センサー電極と対照電極との適用電位がやや高めでなくてはならず、水性サンプル中に存在している別の酸化しうる物質に由来する妨害をもたらすこと；
　をもたらしうる。
　センサー電極、適当な対照電極及び適当なカウンター電極を含んで成る適当な装置を利用する上記の原理に基づく体液、特に全血中の特定のグルコース濃度の有効且つ再現性のある測定にとっての予め必須な条件は、十分によく規定された量の仲介剤がこの測定にわたって存在していることにある。
　センサー電極の中に存在している仲介剤の量は本発明の非常に重要な特徴である。この量は電極装置の寿命にわたり、水性サンプル中の酸化型の仲介剤の濃度が測定の際の酵素反応を制限せしめないことを保障するほど十分に高いべきである。」（第３頁左上欄１０行〜右下欄７行）
（４）「本発明は水性媒体のサンプル、例えば体液のサンプル、例えば全血、血漿、血清、尿又は唾液のサンプル中の一定の化合物、例えばグルコース、セオフイリン、アルコール（エタノール）、ラクテート又はコレステロールの濃度を測定するための、一定の仲介剤の群を利用する上記した電気化学原理を基礎とする方法に関する。この仲介剤はその還元型において、水の中で例えば１０ｍＭ以下の低い溶解度を有することを特徴とする。
・・・
この仲介剤は以下の特徴を有すべきである：
１）還元型における水中での低溶解度。
２）Ａｇ／ＡｇＣＬ対照電極に対する−３００〜＋４００ｍＶの酸化電位。
３）酵素反応及び電極反応における仲介剤の反応速度は全反応速度における律速段階となるべきでない。
４）これは安定でなくてはならない。
５）その他の反応に参加してはならない。」（第３頁左下欄９行〜右下欄７行）
（５）「一般式ＩＸの化合物
（式中、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１，Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４，Ｒ２５，及びＲ２６は同一又は異なっており、そしてそれぞれは水素、ニトロ、ハロゲン（好ましくはクロロ）、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ又はモルホリールを表わし、そしてＲ２７は水素、アルキル又はジアルキルアミノアルキルを表わす）」（第４頁右下欄下から５行〜第５頁左上欄３行）
（５）「式ＩＸの特定の好ましい化合物の例は、１０−メチルフェノチアジン、４−ニトロ−３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジン（メチレングリーン）、３−ジメチルアミノフェノチアジン、３−ジメチルアミノ−１０−メチルフェノチアジン、３−（モルホリン−４−イル）フェノチアジン及び２−クロロ−１０−ジメチルアミノプロビルフェノチアジンである。」（第５頁左下欄１６〜２１行）
（６）「本発明に従う方法において好ましい酵素はグルコースオキシダーゼであり、これは分類ＥＣｌ．１．３．４のオキシドリダクターゼ酵素である。しかしながら、オキシドリダクターゼである。その他の酵素、例えばセオフィリンオキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、ラクテートオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、グルコースデヒドロゲナーゼ、Ｉ７−アミノ酸オキシダーゼ又はグルコレートオキシダーゼが利用されうる。」（第６頁左上欄４〜１０行）
（７）「安定試験
　一定の仲介剤を有するペーストの安定性は以下の方法を用いて決定できる：
　該仲介剤をパラフィンに溶かす又は混合して、その後、グラファイトに結合させた酵素を加える。この混合物を均質にし、ペーストにする。このペーストをプラスト（ｐｌａｓｔ）の電極ホルダーの中に充填し、通称スチックにする。これらのスチックを０及び１０ｍＭのグルコ−ス標準液を用いて試験し、グルコースに対するこれらのスチックの活性と特徴付ける。その後、このペースト含有スチックを一定の温度、例えば４、２０、３５及び５４℃で保存する。一定の時間経過後、例えば１ケ月後、０及び１０ｍＭのグルコース標準液を用いてこのスチックを試験し、そして測定した活性値をはじめに測定した活性値と比較する。グルコースに対する測定値の変化が最も低いスチック中に存在しているかかる仲介剤が、問題の系（パスタ）において最も安定な仲介剤であると考えられる。
仲介剤の評価に関する標準方法
１）ＧＯＤ−固定化グラファイト、パラフィン及び仲介剤を含むペーストを調製する。もしこの仲介剤がパラフィン中で高い溶解度を有するなら、ｍＬのパラフィン当り１０ｍｇの仲介剤を利用する。もしこの仲介剤がパラフィン中で低い溶解度を有するなら、ｍＬのパラフィン当り５０ｍｇの結晶を利用して、グラファイトを加える前に均質な混合物を獲得しておく。得られるペーストをスチックの中に充填する。
２）ペーストの活性は、循環電圧計の中で測定し、ここで電流は、電位の関数（ＣＶ運動曲線）として測定する。５種類の濃度のグルコース、即ち、０、５、１０、１５及び２０ｍＭを測定する。得られる結果に基づき、以下を評価する：
　ａ）仲介剤がグラファイト電極により酸化及び還元されうるか、
　ｂ）仲介剤が還元型ＧＯＤであることができるか、
　ｃ）利用すべき、電極にとっての最適電位、
　ｄ）グルコース濃度の関数としての直線性応答が問題の仲介剤の濃度を用いて獲得できるか、
　ｅ）仲介剤の濃度を最適化できるか。
３）最適電位での時間の関数として応答を測定する。グルコース濃度に対する安定な応答を示す時間間隔を評価する。
４）問題のペースト中の仲介剤の安定性を決定する。
　サンプル相中の仲介剤の濃度はＢｉｏｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｓｔｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓ　８（１９８１）、１０３−１１３に記述の方法を用いて決定 できる。」（第７頁左上欄１０行〜右上欄２０行）
（８）「実施例１ 
　以下の手順によりグルコースオキシダーゼ（ＧＯＤ）（Ｅ．Ｃ．１．１．３．４．）をグラファイト粒子上に固定化した：１０ｇのグラファイトを空気中１００℃で２４時間酸化させた。この表層酸化粒子を、０．１Ｍの酢酸緩衝液（ｐＨ４．７６）１００ｍＬ中の５００ｍｇの１−シクロへキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミドメト−Ｐ−トルエンスルホン酸塩で２時間活性化し、次いでほぼ中性のｐＨとなるまで蒸留水で洗い、そして乾かした。この活性化グラファイトを、８０，０００ＩＵのＧＯＤ及び４％のグルタルアルデヒドを含む０．０１のリン酸緩衝液（ｐＨ７．３）３０ｍＬと１６時間４℃で混合し、乾かし、そして均一な粒子を得るために４８メッシュに通した。
　５％のメチレングリーン（４−ニトロ−３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジン）を含むパラフィン油１ｇをＧＯＤ修飾化グラファイト２ｇと慎重に混ぜて均一なパスタを得た。
　このパスタをプラスックロッドの中に充填し、それにおいて、新たによく規定された電極領域を導入するために、これは薄い断面スライスが切断されることが可能である。各測定の前、この電極表層は再生せしめた。利用できる有効電極面積は３ｍｍ２である。
　有効電極の試験において、Ａｇ補助電極及びＡｇ／ＡｇＣＬ対照電極が利用される。循環電圧計において、仲介剤の再酸化に由来する触媒電流−５０ｍＶで始まり、そして５０〜４００ｍＶで安定となることが観察された。この電流は利用したグルコースの濃度に比例した。
　クロノアンペロメトリーは電位を適用してから３０〜６０後に集積電流を利用して１００ｍＶで実施した。４０ｍＭのグルコースまでの直線性が得られた。電流は５００ｍＡ／（ｓｅｃ２ｍＭ）であった。このシグナルは溶液中の酸素濃度に影響されなかった。メチレングリーンを有さない対照パスタは、異なるグルコース濃度により影響されなかった。
実施例２ 
　特定の仲介剤間の比較。 
　実施例１と同し手順を利用して表中のデーターが得られた。
　以下の略後を用いている：メチレングリーンー＝ＭＧ、メンド−ラブルー＝ＭＢ、１−ジメチルアミノ−４−モルホリノベンゼン＝　ＭＤＭＰ、１．４．−ジモルホリノベンゼン＝ＢＭＰ、１．４−ジピベリジノベンゼン＝ＢＰＰ、１−モルホリノ−４−ピベリジノベンゼン＝ＭＰＰ。
・・・
 実施例３
　特定の仲介剤の安定性試験。
　実施例１と同じ基礎的手順を利用してデーターを得た。進行を促進するために、特定の仲介剤を有するロッドを異なる温度で保存し、これは新たな分析学的性質を示すことができる。
　実施例２と同し略語を用いた。
・・・
　スライス間及びロッド間の再現性を考慮すると、全てのパスタは３５℃で少なくとも７０日以内は安定である。５４℃でのデーターより、４℃で安定性は少なくとも２年であろうことが外挿できる。」（第７頁右下欄下から２行〜第８頁右下欄３行）
　
２　引用例１に記載された発明の認定
　上記記載を総合すれば、引用例１には、
「グルコースオキシダーゼ−ＦＡＤ、及び電荷移動仲介剤としてフェノチアジン系化合物である４−ニトロ−３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジンを含むグルコース濃度を測定するのためのペースト」の発明（以下「引用発明」という。）が記載されている。
　
３　原査定の拒絶の理由に引用され、本願の原出願の優先日前に頒布された刊行物である特開平８−３３４４９０号公報（以下「引用例２」という。）には、次の事項が記載されている。
　
「【請求項１】　補酵素類であるジヒドロニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、ジヒドロニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート（ＮＡＤＰＨ）又はそれらの類似体の電気化学的再生に適切な電極であって、該電極表面に、置換又は非置換の、３−フェニルイミノ−３Ｈ−フェノチアジン類及び３−フェニルイミノ−３Ｈ−フェノキサジン類の群から選択されるメディエーター化合物の１種又はそれ以上を含有するメディエーター機能が付与されていることを特徴とする電極。
【請求項２】　メディエーターが、式（IV）又は式（Ｖ）：
【化１】
（式中、Ｒ1 及びＲ2 は、メディエーターの酸化−還元（レドックス）電位を調節するか、メディエーターの溶解性を変化させるか、又はポリマー若しくは固体支持体にメディエーターを共有結合させる部位として機能する、置換基である）で示される、請求項１記載の電極。
【請求項３】　Ｒ1 及びＲ2 が、同一でも異なっていてもよく、水素、低級アルキル、アリール、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、芳香族及び脂肪族ケト、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、スルホ及びジヒドロキシボロンよりなる群から選択され、ここで脂肪族及び芳香族基は置換されているか又は非置換である、請求項２記載の電極。」
　
「【請求項７】　メディエーターが、　３−（４′−クロロ−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−ジエチルアミノ−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−エチル−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−トリフルオロメチル−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−メトキシカルボニル−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−ニトロ−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−メトキシ−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
７−アセチル−３−（４′−メトキシカルボニルフェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
７−トリフルオロメチル−３−（４′−メトキシカルボニル−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−ω−カルボニル−ｎ−ブチル−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−アミノメチル−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−（２″−（５″−（ｐ−アミノフェニル）−１，３，４−オキサジアゾリル））フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−β−アミノエチル−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
６−（４′−エチルフェニル）アミノ−３−（４′−エチル−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
６−（４′−〔２−（２−エタノ−ルオキシ）エトキシ〕エトキシフェニル）アミノ−３−（４′−〔２−（２−エタノールオキシ）エトキシ〕エトキシ−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−〔２−（２−エタノールオキシ）エトキシ〕エトキシ−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジンホウ酸、３−（３′，５′−ジカルボキシ−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（４′−カルボキシ−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン、
３−（３′，５′−ジカルボキシ−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノキサジン、
３−（２′，５′−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジンジスルホン酸及び３−（３′−フェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジンスルホン酸からなる群から選択される、請求項１記載の電極。」
　
「【０００１】
【発明の属する技術分野】診断薬産業においては、酵素の有する選択性を、電流測定による検出の感度と結びつけた分析方法に関心が集まっている。ニコチンアミド補酵素（ＮＡＤ及びＮＡＤＰ）の還元は、これらが、デヒドロゲナーゼによって触媒される反応において生成することから、特に重要である。デヒドロゲナーゼにより触媒される、次式：
【０００２】
【化２】
【０００３】の反応は、生物学的細胞中及び分析学的反応において重要な役割を果たしている。種々の基質から生成物への転換を選択的に触媒する、数百の異なるデヒドロゲナーゼが知られている。基質、例えば
グルコースが酸化されると、酵素であるＮＡＤ
+
 及び／又はＮＡＤＰ
+ 
は、それぞれＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨに還元される。これらの補酵素類は、それらがデヒドロゲナーゼ酵素と共に作用して、エネルギー移動酸化還元対を形成する能力のせいで、その反応における必要な因子である。
【０００４】補酵素ＮＡＤ+ 及びＮＡＤＰ+ は、もしこれらを安価な使い捨ての分析器具で、経済的に使用しようとするならば、これらを再生、再酸化してもとの状態に戻すことが必須になるような、高価な化学薬品である。
【０００５】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】ＮＡＤＨは、１ボルトオーダーの高い過電圧によってのみ、種々の塩基電極材において直接的に酸化される。しかし、この過電圧は、
ＮＡＤＨから電極への電子の移動を媒介する機能物を電極表面に吸着させることにより、減少させることができる。このような媒介物（メディエーター）
　
「【００２３】
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（酸化型はＮＡＤ
+
 、還元型はＮＡＤＨ）
酵素を基質濃度測定の手段として使用することを目的とする、アンペロメトリー（電流滴定）によるバイオセンサー
　
「【００２８】本発明において有用なメディエーターは、一般式（IV）及び（Ｖ）で示されている。合成され、試験された該化合物類の構造は、アラビア数字で番号をつけて、表１の第１欄に示す。表１の第２〜７欄は実施例III 及びIVに記載したメディエーターの評価の結果を要約したものである。」
　
「【００３１】
【表３】
　
「【００３９】
３−（３′，５′−ジカルボキシフェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン（化合物１８）
フェノチアジン（１．０ｇ、５．０mmol）と５−アミノイソフタル酸（０．９ｇ、５．０mmol）を、ＭｅＯＨ２００ml中に溶解し、１０℃に冷却し、１M のＡｇＮＯ3 ３０ml（３０mmol）を加えた。１０℃で３０分攪拌した後、Ｈ2 Ｏ（４０ml）を加え、更に５分間攪拌を続けた。固形の生成物をろ取し、Ｈ2 Ｏ（５０ml）で洗浄した。固形物を、濃ＮＨ4 ＯＨ水溶液１０mlを含むＭｅＯＨ５００mlに溶解し、２０分間攪拌した後にろ過してＡｇを取り除いた。ろ液を、減圧下でもとの容量の約半分まで濃縮し、一晩５℃で冷蔵した。ついで、混合物をCelite（Celite Corp.）を通してろ過し、減圧下で固形物が分離しはじめるまで濃縮した。得られた溶液約１００mlを、再びCeliteを通してろ過し、酢酸エチル９００mlで希釈し、１５分間放置した。分離した赤色の固形物をろ過により回収し、酢酸エチルで洗浄し、乾燥して化合物１８（１．５５ｇ、８２．５％）を得た。」
　
「【００４７】実施例IV（プリント電極上のメディエーターの評価）
プリントされたセンサーカードと、グラファイト／炭素作用電極及び銀／塩化銀参照電極からなる、プリント電極の実験を実施した。グラファイト／炭素電極に用いたインキは、No.423SS（Acheson Colloids Co., Port Huron, MI）であり、銀／塩化銀参照電極には、１５〜２５％ＡｇＣｌと混合したNo.427SS銀インキ（販売元上記と同じ）を用いた。電極の表面部分は、０．０３cm2 であった。
【００４８】サイクリックボルタンメトリー実験を、プリント電極上で、グラファイト電極上で実施したと同様に実施した。図１では、０．６mMの化合物１８の、pH＝７．０の０．６mMＰＩＰＥＳ緩衝液のみの中で測定した場合と、５mMＮＡＤＨの存在下での場合とのサイクリックボルタモグラムを示した。ＮＡＤＨの存在下、電圧２６mVにおける電流の増加は、ＮＡＤＨにより還元されたメディエーターの酸化によるものである。このメディエーターは、これがＮＡＤＨを酸化してＮＡＤ+ にするときに還元され、ついで、電極において電気化学的に再酸化される。実際、
このメデイエーターは、ＮＡＤＨを直接に酸化するのに必要な電位よりもかなり低い電位においてその電気化学的酸化を促進した。
【００４９】グルコース濃度を測定するバイオセンサーは、酵素であるグルコースデヒドロゲナーゼが、グルコースをグルコノラクトンに酸化する際にＮＡＤ+ を還元してＮＡＤＨにすることを利用している。メディエーターによるＮＡＤＨからＮＡＤ+ への電気化学的再酸化が、該グルコース濃度に比例する電流を生じさせる。
【００５０】典型的グルコースバイオセンサーは、以下のようにして製造した。：２５mMのＫＣｌを含有するpH＝７．０のリン酸緩衝液１００mM中メディエーター４mMの溶液を調製し、５％スルフィノール（Surfynol, Air Products and Chemicals, Inc., Allentown, PA)１．９６ｇ、ＮＡＤ（０．３２ｇ）、グルコースデヒドロゲナーゼＧＤＨ（Toyobo）０．７０ｇ、pH＝７．０の０．５M ＰＩＰＥＳ緩衝液１．４４ｇ及び脱イオン水５．５mlからなる同量の溶液で希釈した。混合物１．７５μl をセンサー領域に塗布し、室温で放置して乾燥し、約２０分乾燥した。この電極を小さなキャピラリー挿入部（gap)を有するフォーマット中に組み入れ、グルコース水溶液で処理して表１の６欄に記載した電位で電流を測定した。これを、グルコースを各０、５０、１００、２００及び５００mg/dl の濃度で含む試料に関して行い、
グルコース濃度に対する電流の最小二乗法により得られた直線（lisine line)の傾斜が、各メディエーターの相対感度（μA/グルコースmg/dl)を表していた。傾斜が大きくなるにしたがって、メディエーターの性能は良好になる。これらの傾斜は、表１の最終欄に示した。
【００５１】図３は、化合物１８に関して、１００mV及び３００mVの電位においてグルコース濃度に対する電流をプロットしたものを示す。」
　
第４　本願発明と引用発明の対比、及び、当審の判断
１　ここで、本願発明と引用発明を対比する。
（１）引用発明の「グルコースオキシダーゼ−ＦＡＤ」が、本願発明の「フラビンタンパク質」に相当する。
　
（２）引用発明の「電荷移動仲介剤としてフェノチアジン系化合物である４−ニトロ−３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジン」と、本願発明の「【化１】で示される媒介物」とは、「フェノチアジン系化合物の媒介物」である点で一致する。
　
（３）引用発明の「グルコース濃度を測定するのためのペースト」が、本願発明の「分析対象物を検出するための試薬」に相当する。
　
２　一致点
　したがって、本願発明と引用発明とは、本願発明の選択式の記載も含めて、
「フラビンタンパク質、キノンタンパク質及びそれらの組み合わせからなる群から選択される酵素；並びにフェノチアジン系化合物の媒介物を含む、分析対象物を検出するための試薬。」の発明である点で一致し、次の点で相違する。
　
３　相違点
　フェノチアジン系化合物の媒介物が、本願発明においては、【化１】で示される媒介物又はその組み合わせのであるのに対して、引用発明においては、４−ニトロ−３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジンである点。
　
４　当審の判断
（１）相違点の検討
　引用例２には、基質（例えばグルコース）濃度測定のバイオセンサーに用いられ、基質（グルコース）の酸化還元を触媒するデヒドロゲナーゼ酵素と共に作用する補酵素であるニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（酸化型はＮＡＤ+ 、還元型はＮＡＤＨ）のＮＡＤＨから電極への電子の移動を媒介する媒介物（メディエーター）として、「３−（３′，５′−ジカルボキシフェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン（引用例２の表１の化合物１８）」（以下「化合物１８」という）が用いられることが記載されている（【００４７】〜【００５０】の「実施例IV」参照）。
　上記の化合物１８は、本願明細書の【００３１】の【化１４】で示される「媒介物Ｉ」の物質であり、本願発明における【化１】で示される媒介物に包含される物質であるから、引用例２には、上記の媒介物として本願発明における【化１】で示される媒介物を用いることが記載されている。
　なお、上記【化１４】で示される「媒介物Ｉ」は、
である。
　そして、引用例２の上記の【００４７】〜【００５０】の「実施例IV」において、グルコース酸化の際のメディエータ（媒介物）としての「化合物１８」について「このメデイエーターは、ＮＡＤＨを直接に酸化するのに必要な電位よりもかなり低い電位においてその電気化学的酸化を促進した。」と記載され、また、「グルコース濃度に対する電流の最小二乗法により得られた直線（lisine line)の傾斜が、各メディエーターの相対感度（μA/グルコースmg/dl)を表していた。傾斜が大きくなるにしたがって、メディエーターの性能は良好になる。これらの傾斜は、表１の最終欄に示した。」（【００５０】）と記載されているところ、表１から、化合物１８の上記傾斜が、他との比較で最も高いことを知ることができるから、化合物１８がグルコース酸化の際のメディエータ（媒介物）として、性能が良好であることが記載されているといえる。
　そうすると、引用発明においても、フェノチアジン系化合物の媒介物として、４−ニトロ−３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジンに換えて、上記引用例２に記載の化合物１８（３−（３′，５′−ジカルボキシフェニルイミノ）−３Ｈ−フェノチアジン）を採用して、上記相違点に係る本願発明の発明特定事項を得ることは、当業者が容易に想到し得たことである。
　
（２）本願発明の作用効果について
ア　この点、請求人は、本願発明の作用効果について、平成２５年７月１９日付けで提出された回答書において、参考資料として実験成績証明書を添付して、
「実験成績証明書では、引用文献１に記載され、実施例でも使用されているフェノチアジンであるメチレングリーンを含むセンサと、本願発明に係るフェノチアジン媒介物を含むセンサとを、全血検体を用いて比較しました。結果から、実験１及び２のいずれにおいても、本願発明に係るフェノチアジン媒介物を含むセンサが良好な線形性（Ｒ２＝０．９９９８）を示したのに対し、メチレングリーンを含むセンサは、正確かつ精密な試験結果を提供しうるバイオセンサとしての使用に耐えうる、良好な線形性を示すものではありませんでした。 
 　また、本願明細書には、引用文献２に係る発明に相当するＮＡＤ／媒介物の組み合わせに対して、本願発明に係るＰＱＱ／媒介物の組み合わせが、改善された安定性を示すことが記載されています（本願明細書：図３）。 
 　引用文献１のフェノチアジンを本願発明に係るフェノチアジン媒介物に置き換えることにより、あるいは引用文献２のＮＡＤ依存性の酵素を非ＮＡＤ依存性である補因子ベースの酵素に置き換えることにより、本願発明の構成とすることで、それぞれ改善された優れた効果を奏することは、引用文献１、２及び本願の出願時の技術常識からは予測できるものではなく、そうしてみると、本願発明は、引用文献１、２及び本願の出願時の技術常識からは予測できない優れた効果を奏するものであると思料いたします。 」
と主張している。
　
イ　しかしながら，上記の実験成績証明書で示された効果及び本願明細書の図３で示された効果は、いずれも、フェノチアジン媒介物として、本願明細書の【００３１】の【化１４】で示される「媒介物Ｉ」（引用例２の「化合物１８」）を用いた場合に得られる効果であって、フェノチアジン媒介物として、本願発明の【化１】で示される媒介物を用いる場合に得られる一般化された効果を示したものということはできない。すなわち、本願発明の【化１】で示される媒介物には、引用例２の表１の「化合物１８」の他に、表１の「化合物１９」や「化合物２１」、さらには、例えば、本願発明の【化１】においてＲ１〜Ｒ９が全て水素である物質なども含まれるが、媒介物としてそれらの物質を用いた場合の効果は何ら検証されておらず、媒介物として上記の物質を用いた場合にも上記の実験成績証明書で示された効果及び本願明細書の図３で示された効果と同様の効果を奏するものか否かは全く不明である。よって、上記主張は、請求項１に係る発明の（請求項１に係る発明に一般化された）効果についての主張と言うことができないから、採用することができない。
　
ウ　また、上記（１）に述べたように、引用例２から、化合物１８がグルコース酸化の際のメディエータ（媒介物）として、性能が良好であることがわかっているのであるから、引用発明においても媒介物として化合物１８を採用してみようと当業者が試みることは当然であり、それにより何らか別の効果が確認されたとしても、それは単に新たな効果が確認されただけのことであって、当該効果の有無に関わらず、当業者は上記の引用発明への化合物１８の採用を試みるであろうから、上記新たな効果の確認は、上記の採用の容易性を否定することにはならない。すなわち、請求人によって主張された効果は、それによって、化合物１８の引用発明への採用の容易性を覆す主張とはならない。
　
エ　さらに、センサのグルコース濃度に対する出力電流の関係から得られる傾斜に関して、引用例２から化合物１８のセンサが当該傾斜が大きく、性能の良さを表すものであることが認められるところ、当該傾斜の線形性については引用例２に記載がないが、傾斜の大きいことによって測定誤差やその他の設定の誤差などの影響を含みにくいものであることから、実験による傾斜の線形性についての良さも確認されやすいのではないかと予測されるところである。
　すなわち、上記の実験成績証明書で示された効果が、引用発明に引用例２に記載の化合物１８を採用したときに生じる、当業者が予測できないほどの格別顕著な効果であるということもできない。
　
オ　一方、本願明細書の図３で示される効果については、引用発明に引用例２に記載された化合物１８を採用したときに生じる効果について検証するものではない。すなわち、引用発明は、「酵素としてグルコースオキシダーゼ−ＦＡＤ、電荷移動仲介剤（媒介物）としてフェノチアジン系化合物を含む試薬」に関するものであって、引用発明に引用例２の化合物１８を採用することの意味は、（媒介物としての）フェノチアジン系化合物の中から、特に化合物１８を選択することを意味しているのであるから、引用発明に引用例２の化合物１８を採用することによって生ずる効果を検証するためには、少なくとも、媒介物として化合物１８以外のフェノチアジン系化合物を含む試薬を比較対象としなければ、上記の効果の検証はできないといえるところ、本願明細書の図３で示される検証においては、媒介物として化合物１８以外のフェノチアジン系化合物を含む試薬についての効果（比較対象の効果）を示すものは何ら挙げられていない。
　すなわち、そもそも、本願明細書の図３で示される効果は、引用発明と対比したときの本願発明の効果を示すものではないから、これを根拠とする請求人の本願発明の作用効果の主張は採用することができない。
　
（３）まとめ
　したがって、本願発明は、引用発明及び引用例２に記載された発明に基いて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
５　むすび
　以上のとおりであるから、本願発明は、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　
第５　結言
　以上のとおり、本願発明は、引用発明及び引用例２に記載された発明に基いて当業者が容易に発明をすることができたものであり、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないから、その余の請求項に係る発明について論及するまでもなく、本願は拒絶すべきものである。
　
　よって、結論のとおり審決する。