【手続補正書】
【提出日】平成27年2月16日(2015.2.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体でのクレードＦ  ＡＡＶ由来のカプシドを有するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターのターゲティングおよび／または細胞取り込み効率を改変する方法で使用するための組成物であって、かつ、クレードＦ  ＡＡＶに結合するβ−ガラクトース残基を含む細胞の能力を改変する、組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＡＡＶウイルスベクターと組み合わせてノイラミニダーゼを含み、かつ、末端のシアル酸および末端から２番目のβ−ガラクトースを有する細胞表面グリカンを含む細胞を有する被験体に前記ＡＡＶウイルスベクターを送達するためのものであって、それによって、前記ノイラミニダーゼが末端シアル酸を切断し、前記末端から二番目のβ−ガラクトースを末端β−ガラクトースに変換する、組成物。
【請求項３】
請求項２に記載の組成物であって、前記ノイラミニダーゼが前記ＡＡＶウイルスベクターの投与前に前記被検体の前処置として使用するためのものであるか、或は、前記ノイラミニダーゼが実質的に同時に前記被験体に送達するためのものである、組成物。
【請求項４】
請求項３に記載の組成物であって、同時に送達するためのものであり、かつ、前記ＡＡＶウイルスベクターと前記ノイラミニダーゼ用の担体をさらに含む、組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の組成物であって、前記末端近傍のβ−ガラクトース残基がＡＡＶ細胞表面受容体を有する第１サブセットの細胞で機能的に除去されている被検体に送達するためのものであり、それによって、前記サブセットの細胞によるＡＡＶ取り込みが低下または消失し、ＡＡＶクレードＦ受容体を有する、前記被験体の第２サブセットの細胞がＡＡＶの新たな標的になる、組成物。
【請求項６】
請求項５に記載の組成物であって、前記β−ガラクトースの酵素的除去用手段を含む、組成物。
【請求項７】
請求項６に記載の組成物であって、前記ＡＡＶベクターと組み合わせて前記β−ガラクトースを含み、かつ、前記ガラクトシダーゼが前記第１サブセットの細胞に送達されるためのものである、組成物。
【請求項８】
請求項７に記載の組成物であって、末端β−ガラクトース残基に結合するレクチンを含み、前記ＡＡＶベクターと組み合わせて、ＡＡＶクレードＦ受容体を天然に有する、被験体の第１サブセットの細胞に送達されるためのものであり、その結果、前記ＡＡＶベクターに結合する前記受容体の能力が、前記第１サブセットの細胞において機能的に除去され、前記ＡＡＶベクターがＡＡＶクレードＦ受容体を天然に有する、前記被験体の第２サブセットの細胞にターゲティングされる、組成物。
【請求項９】
請求項８に記載の組成物であって、前記レクチンが、カルシウム依存性レクチン、エリスリナ・クリスタガリ（Ｅｒｙｔｈｒｉｎａ  Ｃｒｉｓｔａｇａｌｌｉ）レクチン（ＥＣＬ）、マクロファージガラクトースレクチン（ＭＧＬ）、ヒトスカベンジャー受容体Ｃ型レクチン（ＳＲＣＬ）、およびヒトマクロファージカルシウム依存性（Ｃ型）レクチンからなる群から選択される、組成物。
【請求項１０】
請求項９に記載の組成物であって、前記ＭＧＬがヒトまたはラットのＭＧＬから選択される、組成物。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれかに記載の組成物であって、前記ＡＡＶベクターならびに末端シアル酸残基および末端近傍のβ−ガラクトース残基を有するグリカンを改変するための組成物を含み、肺の中に注入されるためのものである、組成物。
【請求項１２】
ノイラミニダーゼ及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）９細胞結合ドメインを含むカプシドを有するＡＡＶベクターを含んでなる組成物であって、該ベクターがＡＡＶ逆方向末端反復を有するミニ遺伝子及び宿主細胞中で発現を制御する調節配列に作動的に連結された異種遺伝子をさらに含むものであり、末端シアル酸残基および末端近傍のβ−ガラクトース残基を有するグリカンを含む細胞表面受容体を有する細胞中にＡＡＶベクターの遺伝子送達を増大させるためのものである、組成物。
【請求項１３】
（ａ）ノイラミニダーゼと（ｂ）アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）クレードＦカプシドを有するＡＡＶベクターの組み合わせ物および（ｃ）製薬学的に許容され得る担体を含んでなる組成物であって、前記ベクターがＡＡＶ逆方向末端反復を有するミニ遺伝子および宿主細胞中で発現を制御する調節配列に作動的に連結された異種遺伝子及びをさらに含む、組成物。
【請求項１４】
（ａ）レクチンと（ｂ）アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）クレードＦカプシドを有するＡＡＶベクターの組み合わせ物および（ｃ）製薬学的に許容され得る担体を含んでなる組成物であって、かつ、前記ベクターがＡＡＶ逆方向末端反復を有するミニ遺伝子および宿主細胞中で発現を制御する調節配列に作動的に連結された異種遺伝子をさらに含む、組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物であって、前記カプシドがＡＡＶクレードＦカプシドから選択され、かつ、前記ＡＡＶクレードが、１０００単離物当たり少なくとも７５％のブートストラップ値および０．０５以下のポアソン補正距離尺度による近隣結合ヒューリスティックを使用して決定された場合に、ＡＡＶ９に系統発生的に関連する、組成物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の組成物であって、前記クレードが、少なくともＡＡＶ  ｈｕ．１４／ＡＡＶ９、ｈｕ．３１、およびｈｕ．３２を含む、組成物。
【請求項１７】
請求項１５に記載の組成物であって、前記クレードが、ＡＡＶ９またはその受容体結合ドメインを含有するＡＡＶを含む、組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物であって、前記ＡＡＶベクターがＡＡＶ９カプシドを含み、かつ、前記ＡＡＶ９カプシドが配列番号１のアミノ酸２０３〜７３６を有するＡＡＶ９  ｖｐ３と少なくとも９５％同一である、組成物。
【請求項１９】
請求項１２に記載の組成物であって、前記ノイラミニダーゼが前記ＡＡＶの送達前に前記被験体に送達されるためのものである、組成物。
【請求項２０】
請求項２〜４，１２、１３のいずれか、またはそれらの請求項に従属するいずれかの請求項に記載の組成物であって、前記ノイラミニダーゼが、細菌ノイラミニダーゼ、ヒトノイラミニダーゼからなる群から選択される、組成物。
【請求項２１】
操作されたＡＡＶ９細胞結合ドメインを含むＡＡＶカプシドを有する組換えＡＡＶベクターであって、前記ＡＡＶ９細胞結合ドメインが、ＡＡＶ９、配列番号１の番号付けに基づいた位置で、ガラクトース結合ドメインを形成するアミノ酸Ｙ４４６、Ｎ４７０、Ａ４７２、Ｖ４７３、Ｄ２７１、Ｎ２７２、およびＷ５０３を含み、これらのアミノ酸の１つまたは複数が、ＡＡＶ９細胞結合ドメインが操作されたＡＡＶカプシドにとって天然である別のアミノ酸に置換されている、組換えＡＡＶベクター。
【請求項２２】
誘導気道に形質導入する野生型（ｗｔ）ＡＡＶ９の天然の能力を実質的に低下または除去するように改変された組換えＡＡＶ９ベクターであって、前記ベクターが、配列番号１の位置に基づく位置２７１、４４６、および４７０からなる群から選択される天然ＡＡＶ９アミノ酸が置換されているＡＡＶ９カプシドを有する、組換えＡＡＶ９ベクター。
【請求項２３】
請求項２２に記載の組換えＡＡＶ９ベクターであって、前記天然ＡＡＶ９アミノ酸がアラニンに置換されている、組換えＡＡＶ９ベクター。
【請求項２４】
クレードＦ  アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）からのカプシドを有するＡＡＶベクターを単離する方法であって、
クレードＦ  ＡＡＶからのカプシドを有するＡＡＶベクターを含む試料を、固体支持体に結合されたβ−ガラクトースを含む分子と接触せしめるために曝し、それによって、β−ガラクトースに結合する部位を有する精製標的を前記分子により選択的に結合させる工程、
前記固体支持体を洗浄して、前記固体支持体に非特異的に結合された物質を前記試料から除去する工程、及び
前記固体支持体から前記ウイルスベクターを分離する工程
を含んでなる、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、分離されるウイルスベクターを濃縮する工程をさらに含む、方法。
【請求項２６】
請求項２４または請求項２５に記載の方法であって、前記固体支持体がアフィニティーカラムに充填されている、方法。
【請求項２７】
肝臓及び心臓に形質導入する能力を保持させながら、気道上皮へのＡＡＶ９ベクターのターゲッティングを消失させる方法であって、配列番号１の位置に基づく位置２７１、４４６、および４７０からなる群から選択される天然のＡＡＶ９アミノ酸を別のアミノ酸に置換する工程を含んでなる、方法。