【手続補正書】
【提出日】平成27年10月13日(2015.10.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘテロ多量体タンパク質の産生方法であって、該方法は
ａ）プロテインＡで精製した第１のヒンジ含有ポリペプチドを得る工程であって、第１のヒンジ含有ポリペプチドはヘテロ多量体ドメインを含む工程、
ｂ）プロテインＡで精製した第２のヒンジ含有ポリペプチドを得る工程であって、第２のヒンジ含有ポリペプチドはヘテロ多量体ドメインを含む工程
ｃ）各ヒンジ含有ポリペプチドをｐＨ４〜９に調整する工程、
ｄ）第１のヒンジ含有ポリペプチドと第２のヒンジ含有ポリペプチドとを混合してアセンブリ混合物を得る工程、
ｅ）モル過剰の弱還元剤をアセンブリ混合物に添加する工程、並びに
ｆ）アセンブリ混合物をインキュベートして、第１のヒンジ含有ポリペプチドと第２のヒンジ含有ポリペプチドを含むヘテロ多量体タンパク質を形成する工程
を含む、方法。
【請求項２】
第１のヒンジ含有ポリペプチド及び第２のヒンジ含有ポリペプチドが、半抗体、イムノアドヘシン又はこれらの断片を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ヒンジ含有ポリペプチドが半抗体である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ヒンジ含有ポリペプチドがＦｃ成分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
工程ｃ）において、第１の及び／又は第２のヒンジ含有ポリペプチドが、安定化剤の存在下で、ｐＨ４−９に調整される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
工程ｃ）において、各ヒンジ含有ポリペプチドのｐＨがｐＨ５−８に調整される、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
混合後にｐＨが調整される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
アセンブリ混合物を温度１５℃〜３９℃で、好ましくは３７℃で、少なくとも３０分間インキュベートすることを更に含む、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
アセンブリ混合物がｐＨ８でインキュベートされる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
工程ｆ）において、アセンブリ混合物の酸化電位が−２００〜−６００ｍＶであり、より好ましくは−３００〜−５００ｍＶであり、最も好ましくは約−４００ｍＶである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
弱還元剤が、ＧＳＨ、β−メルカプトエチルアミン、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ、システアミン／シスタミン、グリシルシステイン及びβ−メルカプトエタノールから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
弱還元剤が５０〜２００倍モル過剰で添加される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
弱還元剤が１００〜３００倍モル過剰で添加される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
弱還元剤がＧＳＨであり、アセンブリ混合物に５０〜２００倍モル過剰で添加される、請求項１、３、６、７及び８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
弱還元剤がＧＳＨであり、アセンブリ混合物に１００〜３００倍モル過剰で添加される、請求項１、３、６、７及び８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
アセンブリ混合物のインキュベーションは、アルギニン、ヒスチジン又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である安定化剤の存在下において、温度１５℃〜３９℃で、好ましくは３７℃で行われる、請求項１４又は１５に記載の方法。
【請求項１７】
安定化剤がＰＶＰであり、最大４０％（w/v）まで添加される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ヘテロ多量体化ドメインが、ノブ、ホール、ロイシンジッパー、コイルドコイル、又は静電相互作用を生じることができる極性アミノ酸残基の１以上を含む、請求項１、３、６、７及び８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
第１のヒンジ含有ポリペプチドがノブを含み、第２のヒンジ含有ポリペプチドがホールを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
第１のヒンジ含有ポリペプチドがノブを含み、第２のヒンジ含有ポリペプチドがホールを含む、請求項１４又は１５に記載の方法。
【請求項２１】
第１のヒンジ含有ポリペプチドがノブを含み、第２のヒンジ含有ポリペプチドがホールを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
ヒンジ含有ポリペプチドが、細菌細胞、酵母細胞、バキュロウイルス又は哺乳動物細胞により産生される、請求項１、３、６、７及び８の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ヒンジ含有ポリペプチドが、細菌細胞、好ましくは大腸菌細胞により産生される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ヘテロ多量体タンパク質の産生方法であって、該方法は
ａ）第１の可溶化剤の存在下においてｐＨ５〜９で、第１のヒンジ含有ポリペプチドを提供する工程であって、第１のヒンジ含有ポリペプチドがヘテロ多量体化ドメインを含む工程、
ｂ）第２の可溶化剤の存在下においてｐＨ５〜９で、第２のヒンジ含有ポリペプチドを提供する工程であって、第２のヒンジ含有ポリペプチドがヘテロ多量体化ドメインを含む工程、
ｃ）還元条件下で第１のヒンジ含有ポリペプチドと第２のヒンジ含有ポリペプチドとを混合してアセンブリ混合物を形成する工程、及び
ｄ）アセンブリ混合物をインキュベートして、第１のヒンジ含有ポリペプチドと第２のヒンジ含有ポリペプチドを含むヘテロ多量体タンパク質を産生する工程であって、ヘテロ多量体化ドメインで第１のヒンジ含有ポリペプチドと第２のヒンジ含有ポリペプチドとが相互作用する工程
を含む、方法。
【請求項２５】
第１の可溶化剤及び第２の可溶化剤が、アルギニン、ヒスチジン及びスクロースからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
第１の可溶化剤及び／又は第２の可溶化剤が、アルギニン、アルギニン塩又はアルギニン誘導体である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
第１の可溶化剤及び／又は第２の可溶化剤が、ヒスチジン、ヒスチジン塩又はヒスチジン誘導体である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
第１の可溶化剤及び／又は第２の可溶化剤が２０ｍＭ〜１Ｍの濃度で存在する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
第１の可溶化剤及び／又は第２の可溶化剤が２０ｍＭ〜４００ｍＭの濃度で存在する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
第１及び第２のヒンジ含有ポリペプチドはｐＨ５〜８である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３１】
第１のヒンジ含有ポリペプチド及び第２のヒンジ含有ポリペプチドは混合前に精製される、請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
第１のヒンジ含有ポリペプチド及び第２のヒンジ含有ポリペプチドは共精製される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
工程ａ）の前に第１のヒンジ含有ポリペプチドを精製する工程があり、及び／又は工程ｂ）の前に第２のヒンジ含有ポリペプチドを精製する工程がある、請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
第１のヒンジ含有ポリペプチド及び第２のヒンジ含有ポリペプチドがプロテインＡにより精製される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
第１の及び第２のヒンジ含有ポリペプチドが細菌細胞、酵母細胞、バキュロウイルス又は哺乳動物細胞により産生される、請求項２４に記載の方法。
【請求項３６】
第１の及び第２のヒンジ含有ポリペプチドが哺乳動物細胞、好ましくはＣＨＯ細胞により産生される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
第１の及び第２のヒンジ含有ポリペプチドは細菌細胞、好ましくは大腸菌細胞により産生される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
第１の及び／又は第２のヒンジ含有ポリペプチドは半抗体、イムノアドヘシン、又はこれらの機能的断片を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３９】
第１の及び／又は第２のヒンジ含有ポリペプチドは半抗体を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
半抗体がＩｇＧ半抗体である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＩｇＧ半抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４イソタイプのものである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
第１の及び／又は第２のヒンジ含有ポリペプチドはＦｃ成分を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
半抗体は、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
半抗体が、テザーを更に含む単鎖ポリペプチドを含み、該単鎖ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の方向でＶＬ−テザー−ＶＨ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３のとおり、互いに関連して配置されているドメインを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
半抗体がＣＬドメイン及びＣＨ１ドメインを更に含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
半抗体が、テザーを更に含む単鎖ポリペプチドを含み、前記単鎖ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の方向でＶＬ−ＣＬ−テザー−ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３のとおり、互いに関連して配置されているドメインを含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
工程ａ）〜ｄ）の一以上が温度２５℃〜４２℃に加熱される、請求項２４に記載の方法。
【請求項４８】
工程ａ）〜ｄ）の一以上が温度３２℃〜３７℃に加熱される、請求項２４又は３０に記載の方法。
【請求項４９】
工程ａ）の第１のヒンジ含有ポリペプチド及び工程ｂ）の第２のヒンジ含有ポリペプチドが加熱される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
工程ｄ）のアセンブリ混合物が加熱される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
全工程ａ）〜ｄ）が加熱される、請求項４７に記載の方法。
【請求項５２】
全工程ａ）〜ｄ）が温度３２℃〜３７℃に加熱される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
還元条件の酸化電位が−２００〜−６００ｍＶ、より好ましくは−３００〜−５００ｍＶ、最も好ましくは約−４００ｍＶである、請求項２４に記載の方法。
【請求項５４】
還元剤が工程ｃ）の混合物に添加され、該還元剤はグルタチオン（ＧＳＨ）、β−メルカプトエチルアミン、グルタチオン（ＧＳＨ）／グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）、システアミン／シスタミン、グリシルシステイン及びβ−メルカプトエタノールからなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
還元剤が５０〜２００倍モル過剰で、アセンブリ混合物に添加される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
還元剤が１００〜３００倍モル過剰で、アセンブリ混合物に添加される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
還元剤がＧＳＨであり、５０〜２００倍モル過剰で、３７℃でアセンブリ混合物に添加される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
還元剤がＧＳＨであり、１００〜３００倍モル過剰で、３７℃でアセンブリ混合物に添加される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
アセンブリ混合物がｐＨ７〜ｐＨ９、好ましくはｐＨ８でインキュベートされる、請求項４９及び５５−５８の何れか一項に記載の方法。
【請求項６０】
ヘテロ多量体化ドメインが、ノブ（例えば突起）、ホール（例えば空洞）、ロイシンジッパー、コイルドコイル、又は静電相互作用を生じることができる極性アミノ酸残基の１以上を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項６１】
第１のヒンジ含有ポリペプチドがノブを含み、第２のヒンジ含有ポリペプチドがホールを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
工程ａ）〜ｄ）の１以上において、安定化剤の添加を更に含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項６３】
安定化剤は、工程ｃ）又は工程ｄ）で添加される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
安定化剤がアルギニン、ヒスチジン、及び／又はＰＶＰである、請求項５２、５５−５８及び６３の何れか一項に記載の方法。
【請求項６５】
ヘテロ多量体タンパク質を回収する工程を更に含む、請求項２４、５２、５５−５８及び６３の何れか一項に記載の方法。
【請求項６６】
ヘテロ多量体タンパク質を回収する工程がヘテロ多量体タンパク質の精製を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
多重特異性抗体の産生方法であって、該方法が
ａ）アルギニン又はヒスチジンの存在下、ｐＨ５〜９で、第１の半抗体を提供する工程であって、第１の半抗体がヘテロ多量体化ドメインを含む工程、
ｂ）アルギニン又はヒスチジンの存在下、ｐＨ５〜９で第２の半抗体を提供する工程であって、第２の半抗体がヘテロ多量体化ドメインを含む工程、
ｃ）還元条件下で第１の半抗体と第２の半抗体とを混合してアセンブリ混合物を形成する工程、及び
ｄ）アセンブリ混合物をインキュベートして、第１の半抗体及び第２の半抗体を含む多重特異性抗体を形成する工程であって、ヘテロ多量体化ドメインで第１の半抗体と第２の半抗体とが相互作用する工程
を含む、方法。
【請求項６８】
アルギニン又はヒスチジンが２０ｍＭ〜４００ｍＭの濃度で存在する、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
混合前に、第１の半抗体及び第２の半抗体が精製される、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
第１の及び第２の半抗体が、細菌細胞、酵母細胞、バキュロウイルス又は哺乳動物細胞により産生される、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
第１の及び第２の半抗体は哺乳動物細胞、好ましくはＣＨＯ細胞により産生される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
第１の及び第２の半抗体は細菌細胞、好ましくは大腸菌細胞により産生される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７３】
半抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４イソタイプのものである、請求項６７に記載の方法。
【請求項７４】
第１の及び／又は第２の半抗体はＦｃ成分を含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項７５】
工程ａ）〜ｄ）の一以上は温度２５℃〜４２℃に、好ましくは３２℃〜３７℃に加熱される、請求項６７に記載の方法。
【請求項７６】
還元剤が工程ｃ）の混合物に添加され、該還元剤はグルタチオン（ＧＳＨ）、β−メルカプトエチルアミン、グルタチオン（ＧＳＨ）／グルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）、システアミン／シスタミン、グリシルシステイン及びβ−メルカプトエタノールからなる群から選択される、請求項６５に記載の方法。
【請求項７７】
還元剤がＧＳＨであり、５０〜２００倍モル過剰で、アセンブリ混合物に添加される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
還元剤がＧＳＨであり、１００〜３００倍モル過剰で、アセンブリ混合物に添加される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
ヘテロ多量体化ドメインが、ノブ（例えば突起）、ホール（例えば空洞）、ロイシンジッパー、コイルドコイル、又は静電相互作用を生じることができる極性アミノ酸残基の１以上を含む、請求項６７、７５、７７及び７８の何れか一項に記載の方法。
【請求項８０】
第１のヒンジ含有ポリペプチドがノブを含み、第２のヒンジ含有ポリペプチドがホールを含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
工程ａ）〜ｄ）の１以上において、安定化剤の添加を更に含む、請求項６７、７５、７７及び７８の何れか一項に記載の方法。
【請求項８２】
安定化剤は、工程ｃ）又は工程ｄ）で添加される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
安定化剤がアルギニン、ヒスチジン、及び／又はＰＶＰである、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
多重特異性抗体を回収する工程を更に含む、請求項６７、７５、７７及び７８の何れか一項に記載の方法。
【請求項８５】
多重特異性抗体を回収する工程が多重特異性抗体の精製を含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
ヒンジ含有ポリペプチド及び可溶化剤を含む組成物であって、組成物はｐＨ５からｐＨ９、好ましくはｐＨ８である、組成物。
【請求項８７】
可溶化剤が、アルギニン、ヒスチジン及びスクロースからなる群から選択される、請求項８６に記載の組成物。
【請求項８８】
アルギニンがアルギニン塩又はアルギニン誘導体であり、ヒスチジンがヒスチジン塩又はヒスチジン誘導体である、請求項８７に記載の組成物。
【請求項８９】
アルギニン又はヒスチジンが濃度２０ｍＭから１Ｍで存在する、請求項８７に記載の組成物。
【請求項９０】
アルギニン又はヒスチジンが濃度２０ｍＭから４００ｍＭで存在する、請求項８９に記載の組成物。
【請求項９１】
ヒンジ含有ポリペプチドが、半抗体、イムノアドヘシン又はこれらの機能的断片を含む、請求項８６に記載の組成物。
【請求項９２】
半抗体がＩｇＧ半抗体である、請求項９１に記載の組成物。
【請求項９３】
ＩｇＧ半抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４イソタイプのものである、請求項９２に記載の組成物。
【請求項９４】
ヒンジ含有ポリペプチドはＦｃ成分を含む、請求項８６に記載の組成物。
【請求項９５】
ヒンジ含有ポリペプチド又は半抗体は、ノブ又はホールを含む、請求項８６に記載の組成物。
【請求項９６】
更に第２のヒンジ含有ポリペプチドを含む請求項８４に記載の組成物。
【請求項９７】
第１のヒンジ含有ポリペプチドはノブを含み、第２のヒンジ含有ポリペプチドはホールを含む、請求項９６に記載の組成物。