【手続補正書】
【提出日】平成27年2月13日(2015.2.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タバコ植物又はその一部に由来するタバコ材料を含むタバコ製品であって、前記タバコ植物が、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆに本質的に由来するタバコ栽培品種及び前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆに由来するタバコハイブリッドからなる群から選択される栽培品種又はハイブリッドの植物であり、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆの典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている、タバコ製品。
【請求項２】
前記製品が、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎたばこ、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択される、請求項１に記載のタバコ製品。
【請求項３】
減少した量のノルニコチンを有する、請求項２に記載のタバコ製品。
【請求項４】
タバコ植物又はその一部に由来するタバコ材料を含むタバコ製品であって、前記タバコ植物が、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳに本質的に由来するタバコ栽培品種及び前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳに由来するタバコハイブリッドからなる群から選択される栽培品種又はハイブリッドの植物であり、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳの典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている、タバコ製品。
【請求項５】
前記製品が、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎたばこ、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ及び刻みタバコから成る群から選択される、請求項４に記載のタバコ製品。
【請求項６】
減少した量のノルニコチンを有する、請求項５に記載のタバコ製品。
【請求項７】
タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆに本質的に由来するタバコ栽培品種又は前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆに由来するタバコハイブリッドの種子であって、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆの典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている、種子。
【請求項８】
請求項７に記載の種子から栽培される、タバコ植物又はその一部。
【請求項９】
請求項８に記載のタバコ植物又はその一部由来の保蔵処理タバコ材料。
【請求項１０】
減少した量のノルニコチンを有する葉を含む、請求項９に記載の保蔵処理タバコ材料。
【請求項１１】
前記減少した量のノルニコチンが、前記葉の燃焼から生じる煙流において減少される、請求項１０に記載の保蔵処理タバコ材料。
【請求項１２】
タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳに本質的に由来するタバコ栽培品種又は前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳに由来するタバコハイブリッドの種子であって、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳの典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている、種子。
【請求項１３】
請求項１２に記載の種子から栽培される、タバコ植物又はその一部。
【請求項１４】
請求項１３に記載のタバコ植物又はその一部由来の保蔵処理タバコ材料。
【請求項１５】
減少した量のノルニコチンを有する葉を含む、請求項１４に記載の保蔵処理タバコ材料。
【請求項１６】
前記減少した量のノルニコチンが、前記葉の燃焼から生じる煙流において減少される、請求項１５に記載の保蔵処理タバコ材料。
【請求項１７】
乾燥質量に基づき少なくとも約１０％の、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆに本質的に由来するタバコ栽培品種及び前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆに由来するタバコハイブリッドからなる群から選択される前記栽培品種又はハイブリッド由来の保蔵処理タバコ材料を有するタバコ材料のブレンドを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のタバコ製品。
【請求項１８】
乾燥質量に基づき少なくとも約５０％の、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆに本質的に由来するタバコ栽培品種及び前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆに由来するタバコハイブリッドからなる群から選択される前記栽培品種又はハイブリッド由来の保蔵処理タバコ材料を有するタバコ材料のブレンドを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のタバコ製品。
【請求項１９】
乾燥質量に基づき少なくとも約８０％の、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆに本質的に由来するタバコ栽培品種及び前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆに由来するタバコハイブリッドからなる群から選択される前記栽培品種又はハイブリッド由来の保蔵処理タバコ材料を有するタバコ材料のブレンドを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のタバコ製品。
【請求項２０】
約１．０ｍｇ／ｇ未満のノルニコチン含有量を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のタバコ製品。
【請求項２１】
前記タバコ植物が、同様の条件下で栽培及び加工されたＴＮ ９０ ＬＣと比較して、乾燥質量で約０．１０％未満の減少した量のノルニコチンを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載がタバコ製品。
【請求項２２】
乾燥質量に基づき少なくとも約１０％の、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳに本質的に由来するタバコ栽培品種及び前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳに由来するタバコハイブリッドからなる群から選択される前記栽培品種又はハイブリッド由来の保蔵処理タバコ材料を有するタバコ材料のブレンドを含む、請求項４〜６のいずれか１項に記載のタバコ製品。
【請求項２３】
乾燥質量に基づき少なくとも約５０％の、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳに本質的に由来するタバコ栽培品種及び前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳに由来するタバコハイブリッドからなる群から選択される前記栽培品種又はハイブリッド由来の保蔵処理タバコ材料を有するタバコ材料のブレンドを含む、請求項４〜６のいずれか１項に記載のタバコ製品。
【請求項２４】
乾燥質量に基づき少なくとも約８０％の、タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳに本質的に由来するタバコ栽培品種及び前記タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳに由来するタバコハイブリッドからなる群から選択される前記栽培品種又はハイブリッド由来の保蔵処理タバコ材料を有するタバコ材料のブレンドを含む、請求項４〜６のいずれか１項に記載のタバコ製品。
【請求項２５】
約１．０ｍｇ／ｇ未満のノルニコチン含有量を含む、請求項４〜６のいずれか１項に記載のタバコ製品。
【請求項２６】
前記タバコ植物が、同様の条件下で栽培及び加工されたＴＮ ９０ ＬＣと比較して、乾燥質量で約０．１０％未満の減少した量のノルニコチンを含む、請求項４〜６のいずれか１項に記載がタバコ製品。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
市販のタバコ品種（variety）において見出される優勢なアルカロイドはニコチンであり、典型的には、総アルカロイドプールの９０〜９５％を占める。残りのアルカロイド部分は、主に三種の更なるピリジンアルカロイド、ノルニコチン、アナバシン、及びアナタビン（anatabine）から成る。ノルニコチンは、酵素ニコチンＮ−デメチラーゼの活性によって、ニコチンから直接生成される。ノルニコチンは、通常、総ピリジンアルカロイドプールの５％未満に相当するが、「転換」と称されるプロセスによって、最初はごくわずかな量のノルニコチンを生産するタバコ植物が、大部分の葉のニコチンをノルニコチンに代謝的に「転換」する後代を生じる。遺伝的に転換しているタバコ植物（「コンバータ」と称される）において、ノルニコチン生産の大部分は、成葉の老化（senescence）及び保蔵処理（curing）の間に生じる（Wernsman and Matzinger (1968) Tob. Sci. 12:226-228）。バーレイタバコは、特に遺伝的転換をする傾向があり、いくつかの栽培品種において観察される１世代につき２０％の高さの率を有する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
タバコの葉の保蔵処理及び加工の間、ノルニコチンの一部は、実験動物において発癌性であると主張されているタバコ特異的ニトロソアミン（ＴＳＮＡ）である、化合物ＮＮＮに代謝される（Hecht and Hoffmann (1990) Cancer Surveys 8:273-294; Hoffmann et al. (1994) J. Toxicol. Environ. Health 41:1-52; Hecht (1998) Chem. Res. Toxicol. 11:559-603）。鉄管保蔵処理タバコ（flue-cured tobacco）において、ＴＳＮＡは、従来の保蔵処理バーン（curing barn）において見出される直接燃焼加熱系によって形成される燃焼ガス中に存在する微量の窒素酸化物とのアルカロイドの反応によって、優勢に形成されることが見出される（Peele and Gentry (1999) “Formation of Tobacco-specific Nitrosamines in Flue-cured Tobacco,” CORESTA Meeting, Agro-Phyto Groups, Suzhou, China）。
熱交換器によるこれらの保蔵処理バーンの改良は、保蔵処理空気との燃焼ガスの混合を事実上排除し、この方法で保蔵処理される（cure）タバコにおけるＴＳＮＡの形成を劇的に減少させた（Boyette and Hamm (2001) Rec. Adv. Tob, Sci. 27:17-22.）。対照的に、空気保蔵処理（air-cured）バーレイタバコにおいて、ＴＳＮＡ形成は、葉媒介性（leaf-borne）微生物によって触媒されるプロセスである、亜硝酸塩とのタバコアルカロイドの反応によって主に進行する（Bush et al. (2001) Rec. Adv. Tob. Sci, 27:2346）。これまで、許容され得る品質規格を維持しながら、保蔵処理条件の変更によってＴＳＮＡを減らす試みは、空気保蔵処理タバコについて成功することを証明していない。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８０】
別の特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、後代植物を生産するために所望の形質を含む別のタバコ栽培品種の植物と交配し、前記所望の形質が、除草剤抵抗性、害虫抵抗性、耐病性、高収率、高グレード指数（high grade index）、治癒可能性、保蔵処理品質、機械的収穫可能性（harvestability）、保持能力、葉の品質、高さ、植物成熟、早期成熟、早期〜中間の成熟、中間の成熟、中間〜遅い成熟、遅い成熟、小さい茎、中間の茎、大きい茎、植物あたりの葉の数、植物あたり５〜１０の葉、植物あたり１１〜１５の葉、植物あたり１６〜２１の葉、及びそれらのあらゆる組み合わせから成る群から選択される、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子をＦ1後代植物に栽培し、前記所望の形質を有するＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配Ｆ２後代植物種子を生産する工程、（ｄ）前記戻し交配Ｆ２後代植物種子を戻し交配Ｆ２後代植物に栽培し、前記所望の形質を含むＦ２戻し交配後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して１回以上繰り返して、前記所望の形質及び同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代植物を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を含む。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
別の特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、後代植物を生産するために所望の形質を含む別のタバコ栽培品種の植物と交配し、前記所望の形質が、除草剤抵抗性、害虫抵抗性、耐病性、高収率、高グレード指数、治癒可能性、保蔵処理品質、機械的収穫可能性、保持能力、葉の品質、高さ、植物成熟、早期成熟、早期〜中間の成熟、中間の成熟、中間〜遅い成熟、遅い成熟、小さい茎、中間の茎、大きい茎、植物あたりの葉の数、植物あたり５〜１０の葉、植物あたり１１〜１５の葉、植物あたり１６〜２１の葉、及びそれらのあらゆる組み合わせから成る群から選択される、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子をＦ1後代植物に栽培し、前記所望の形質を有するＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配後代植物種子を生産する工程、（ｄ）前記戻し交配後代植物種子を戻し交配後代植物に栽培し、前記所望の形質を含む戻し交配後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して１回以上繰り返して、前記所望の形質及び同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代植物を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を含む。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８２】
別の特徴において、本発明は、以下の工程、（ａ）ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物を、後代植物を生産するために所望の形質を含む別のタバコ栽培品種の植物と交配し、前記所望の形質が、除草剤抵抗性、害虫抵抗性、耐病性、高収率、高グレード指数、治癒可能性、保蔵処理品質、機械的収穫可能性、保持能力、葉の品質、高さ、植物成熟、早期成熟、早期〜中間の成熟、中間の成熟、中間〜遅い成熟、遅い成熟、小さい茎、中間の茎、大きい茎、植物あたりの葉の数、植物あたり５〜１０の葉、植物あたり１１〜１５の葉、植物あたり１６〜２１の葉、及びそれらのあらゆる組み合わせから成る群から選択される、Ｆ1後代種子を生産する工程、（ｂ）前記Ｆ1後代種子をＦ1後代植物に栽培し、前記所望の形質を含むＦ1後代植物を選択する工程、（ｃ）前記選択されたＦ1後代植物をＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の植物と交配して、戻し交配後代植物種子を生産する工程、（ｄ）前記戻し交配後代植物種子を戻し交配後代植物に栽培し、前記所望の形質及び同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、戻し交配後代植物を選択する工程、並びに（ｅ）工程（ｃ）及び（ｄ）を連続して１回以上繰り返して、前記所望の形質及び同じ環境条件下で栽培されるとき、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及びＮＣ ＥＸ９０から成る群から選択されるタバコ栽培品種の本質的に全ての生理学的及び形態学的特徴を含む、選択された第４代以降の戻し交配後代植物を生産する工程、を含む、タバコ栽培品種に所望の形質を導入する方法を含み、前記植物は耐病性の所望の形質を有する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２０】
本発明の更なる特徴は、タバコを含む製品を提供し、前記タバコは更に本発明の植物及びその一部由来のタバコを含む。発明の他の特徴は、本発明の植物由来の、保蔵処理した植物の葉及び他の植物部位を提供する。従って、いくつかの特徴において、保蔵処理植物部位は、葉、花粉、胚珠、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、プロトプラスト、根、根端、雌しべ、葯、花、苗条、茎、さや、葉柄、さく果等、及びそれらの組み合わせを含むが、それらに制限されない。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２１】
従って、いくつかの特徴において、本発明は、ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）と呼ばれるタバコ植物の葉を含む保蔵処理タバコを提供する。別の特徴において、本発明は、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）と呼ばれるタバコ植物の葉を含む保蔵処理タバコを提供する。更に別の特徴において、本発明は、ＮＣ ＥＸ９０と呼ばれるタバコ植物の葉を含む保蔵処理タバコを提供する。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２２】
ある特徴において、本発明は、本発明は、ＮＣＢＥＸ１Ｆ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている）と呼ばれるタバコ植物の茎を含む保蔵処理タバコを提供する。別の特徴において、本発明は、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ（前記栽培品種の典型的なサンプル種子はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている）と呼ばれるタバコ植物の茎を含む保蔵処理タバコを提供する。更に別の特徴において、本発明は、ＮＣ ＥＸ９０と呼ばれるタバコ植物の茎を含む保蔵処理タバコを提供する。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２３】
更に他の特徴において、本発明は、ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ、及び／又はＮＣ ＥＸ９０と呼ばれるタバコ植物の葉及び茎を含む保蔵処理タバコを提供し、これらの栽培品種の典型的なサンプル種子は、ＮＣＢＥＸ１ＦについてはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８、及びＮＣＢＥＸ１ＭＳについてはＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３０】
本発明の植物由来のタバコ製品はまた、シガレット及び他の喫煙品、特にフィルタエレメントを含む喫煙品、を含み、喫煙可能な（smokeable）材料のロッドは、タバコブレンド内の保蔵処理タバコを含む。ある特徴において、タバコ製品は、パイプタバコ、シガータバコ、シガッレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ及び刻みタバコであってもよい。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３１】
ある特徴において、本発明のタバコ製品は、混合タバコ製品であり得る。発明の他の特徴において、本発明のタバコ製品は、減少ニコチンタバコ製品であり得る。更に他の特徴において、本発明のタバコ製品は、減少したニコチン含有量を有する混合タバコ製品であり得る。従って、本発明のタバコ製品は、混合減少ニコチンタバコ製品であり得る。タバコ製品材料は、本発明由来のタバコ材料のブレンドを含み、前記ブレンドは、タバコ材料の乾燥質量に基づき、少なくとも約５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は９５質量％の保蔵処理タバコを含む。ＵＳ２００８／０２４５３７７は、ブレンド混合物に関する参照によりその全体が本願に組み込まれる。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４０】
いくつかの特徴において、成功した交配は、繁殖性であり、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ対立遺伝子を有し、必要に応じてＮＣＢＥＸ１Ｆ又はＮＣ ＥＸ９０のような親の一種を用いて戻し交配され得るＦ1植物を生じる。いくつかの特徴において、Ｆ2世代における植物集団は、ｃｙｐ８２ｅ４Ｗ３２９Ｓｔｏｐ及びｃｙｐ８２ｅ５ｖ２Ｗ４２２Ｓｔｏｐ対立遺伝子について選別される。選択された植物を親の一種と交配し得、第一の戻し交配（ＢＣ１）世代植物を自家受粉して、変異ニコチンデメチラーゼ遺伝子発現（例えば、ニコチンデメチラーゼ遺伝子のヌルバージョン）について再び選別されるＢＣ１ Ｆ2集団を生産する。戻し交配、自家受粉、及び選別の工程は、最終的な選別が、繁殖性であり、反復親と適度に似ている植物を産生するまで、例えば、少なくとも４回繰り返される。必要に応じて、この植物を自家受粉し、続いて後代を再び選別して、前記植物がＮＣＢＥＸ１Ｆと同じ低く安定なニコチン転換表現系を示すことを確かめる。選択された植物の原原種は、例えば、野外試験、ニコチンデメチラーゼのヌル条件の確認、アルカロイドのレベルを決定するための保蔵処理葉の化学的分析及び／又はノルニコチンのニコチン＋ノルニコチンに対する比を決定するための保蔵処理葉の化学的分析を含む標準的な方法を用いて産生される。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４５】
ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ及び／又はＮＣ ＥＸ９０を含む本発明のタバコ植物は、当分野において周知の技術を用いて遺伝子構築物又は導入遺伝子によって形質転換され得ることが理解される。制限無しに、所望の形質の例は、除草剤抵抗性、害虫抵抗性、耐病性、高収率、高グレード指数、治癒可能性、保蔵処理品質、機械的収穫可能性、保持能力、葉の品質、高さ、植物成熟（例えば、早期成熟、早期〜中間の成熟、中間の成熟、中間〜遅い成熟、又は遅い成熟）、茎のサイズ（例えば、小さい、中間の、又は大きい茎）、又は植物あたりの葉の数（例えば、小さい（例えば、５〜１０の葉）、中間の（例えば、１１〜１５の葉）、又は大きい（例えば、１６〜２１の葉）数の葉）、又はそれらのあらゆる組み合わせである。本発明のあらゆる植物は、組織培養のベースとして使用され、再生され、形質転換され、又はそれらのあらゆる組み合わせがなされ得る。ある特徴において、組織培養、形質転換、又は両方によって誘導される本発明の植物は、同様の条件下で栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆ、ＮＣＢＥＸ１ＭＳ又はＮＣ ＥＸ９０の本質的に全ての形態学的及び生理学的特徴を有する。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４９】
所望の形質を有するＢＣ5Ｆ3後代系統の識別
四つのＢＣ5Ｆ3後代系統由来の植物を、保蔵処理葉化学、収率、及び物理的品質の評価のために３ヶ所のノースカロライナのフィールド研究場所で、２０１０年の間（Waynesville、Laurel Springs、及びReidsville）、３回の反復を有するランダム化された完備ブロック計画で栽培する。それぞれの反復されるブロックは、２０植物プロットである。植物は、成熟で切断された茎であり、空気保蔵処理され、以前のＵＳＤＡタバコグレーダ（grader）によって評価される。プロット質量を用いて、約４０４７ｍ2（１エーカー）当たりの収量を決定する。５０グラムの混成の葉のサンプルを、それぞれのプロットから回収し、ニコチン、ノルニコチン、アナタビン、及びアナバシンの割合についてガスクロマトグラフィーによって分析する。高い収量、高グレード及び所望のアルカロイド含有量を有するＢＣ5Ｆ3後代系統＃３を識別し、「ＮＣ ＥＸ９０」と名づける。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５０】
ＮＣ ＥＸ９０の分析
ガスクロマトグラフィーアルカロイド分析の結果は、表１に示される。
１自由度ＣＯＮＳＴＲＡＳＴステートメントによる分析を、ＳＡＳのＰＲＯＣ ＧＬＭ機能を用いて行なう。この系統は、ＴＮ ９０ ＬＣの市販のシードロットと比較して、有意により低いレベルのノルニコチン（Ｐ＜０．０００１）及びニコチン転換（Ｐ＝０．０００２）を示す（表１）。総アルカロイドに対する第二級アルカロイドの比は、ＴＮ ９０ ＬＣに対してＮＣ ＥＸ９０について有意に低い（Ｐ＝０．００７１）。二つの系統は、ニコチン、アナタビン、アナバシン、収量、又は保蔵処理葉品質に関して有意には異ならない。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５６】
ＴＮ ９０ ＬＣに対するＮＣＢＥＸ１ＭＳのニコチン転換における形質安定性の証明
ＮＣＢＥＸ１ＭＳ及びＴＮ ９０ ＬＣの５０の植物由来の葉を、ジャックらのImplications of reducing nornicotine accumulation in burley tobacco: Appendix A - The LC Protocol. Rec. Adv. Tob. Sci. 2007, 33, 58-79に開示されるような「ＬＣ」方法を用いて回収する。葉を空気保蔵処理し、ガスクロマトグラフィーを用いてアルカロイドプロファイルについて分析する。図２Ａ及び２Ｂ並びに表２を参照されたい。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５９】
上記に開示され、添付の特許請求の範囲において挙げられる所有の近交系植物系統の少なくとも２５００の種子の寄託は、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）、１０８０１大学大通り、マナサス、ＶＡ２０１１０、になされている。ＮＣＢＥＸ１Ｆ及びＮＣＢＥＸ１ＭＳに関する寄託の日付は、それぞれ２０１１年９月６日及び２０１１年９月６日であった。それぞれの品種についての２５００の種子の寄託は、本願の出願日前から維持されている同じ寄託から受け継がれた。特許の付与があると、寄託についての全ての制限は取り除かれ、寄託は３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８０１−１．８０９の全ての用件を満たすことを意図される。近交系統ＮＣＢＥＸ１Ｆ及びＮＣＢＥＸ１ＭＳについてのＡＴＣＣ受託番号は、それぞれＰＴＡ−１１７１８、ＰＴＡ−１１７１９である。これらの寄託は、３０年の期間、又は最後のリクエストの後５年、又は特許の有効期間のいずれか長いものに亘って保管所において維持され、また、その期間に必要に応じて交換されるであろう。出願人は、この特許又は植物多様性保護法（７Ｕ．Ｓ．Ｃ．２３２１以下参照）の下に認められるその権利のいかなる侵害も無視しない。
本発明の好ましい態様は、下記の通りである。
〔１〕タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆの種子から栽培されるタバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている、タバコ製品。
〔２〕前記製品が、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎたばこ、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ、及び刻みタバコから成る群から選択される、前記〔１〕に記載のタバコ製品。
〔３〕減少した量のノルニコチンを有する、前記〔２〕に記載のタバコ製品。
〔４〕タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳの種子から栽培されるタバコ植物又はその一部から製造されるタバコ製品であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている、タバコ製品。
〔５〕前記製品が、シガリロ、非通気式リセスフィルターシガレット、通気式リセスフィルターシガレット、シガー、嗅ぎたばこ、パイプタバコ、シガータバコ、シガレットタバコ、噛みタバコ、葉タバコ、シュレッデドタバコ及び刻みタバコから成る群から選択される、前記〔４〕に記載のタバコ製品。
〔６〕減少した量のノルニコチンを有する、前記〔５〕に記載のタバコ製品。
〔７〕タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１Ｆの種子であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている、種子。
〔８〕前記〔７〕に記載の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部。
〔９〕前記〔８〕に記載のタバコ植物又はその一部の収穫された葉。
〔１０〕減少した量のノルニコチンを有する、前記〔９〕に記載の収穫された葉。
〔１１〕前記減少した量のノルニコチンが、前記葉の燃焼から生じる煙流において減少される、前記〔１０〕に記載の収穫された葉。
〔１２〕タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳの種子であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている、種子。
〔１３〕前記〔１２〕に記載の種子を栽培することによって生産される、タバコ植物又はその一部。
〔１４〕前記〔１３〕に記載のタバコ植物又はその一部の収穫された葉。
〔１５〕減少した量のノルニコチンを有する、前記〔１４〕に記載の収穫された葉。
〔１６〕前記減少した量のノルニコチンが、前記葉の燃焼から生じる煙流において減少される、前記〔１５〕に記載の収穫された葉。
〔１７〕タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＦのＦ2後代植物であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１８でＡＴＣＣに寄託されている、Ｆ2後代植物。
〔１８〕タバコ栽培品種ＮＣＢＥＸ１ＭＳのＦ2後代植物であって、前記栽培品種の典型的なサンプル種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１１７１９でＡＴＣＣに寄託されている、Ｆ2後代植物。
〔１９〕細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である、前記〔１７〕に記載のＦ2後代植物。
〔２０〕細胞質雄性不稔（ＣＭＳ）である、前記〔１８〕に記載のＦ2後代植物。