(57)【要約】【課題】本発明の課題は、糖尿病の予防および、または改善するための糖代謝改善であり、この課題を解決するには長期の服用においても副作用が少なく、糖代謝改善が期待でき、日常的に服用することができる糖代謝改善剤を開発し提供することである。【解決手段】久しく服用しても安全であるとされる神農本草経の上品に収載されているナス科（Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ）枸杞の根皮であるＬｙｃｉｕｍ  ｃｈｉｎｅｎｓｅ  Ｍｉｌｌ．または、Ｌ．ｂａｒｂａｒｕｍ  Ｌ．より選ばれる１種または２種の植物の粉末、抽出物または該抽出物の粗精製物もしくは精製物を有効成分として含む糖代謝改善剤を提供する。本発明の糖代謝改善剤により糖尿病を予防および、または改善し、日常生活の質の向上に極めて有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
地骨皮抽出物を含有することを特徴とする糖代謝改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は糖代謝改善剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
我が国においては、２０歳以上の５人に１人が糖尿病の可能性があると推定されている。また、年齢が高くなるにつれ有病率が高くなる傾向からも、患者数は今後も増えることが予想される。
【０００３】
糖尿病は、インスリン依存型（Ｉ型）糖尿病とインスリン非依存型（ＩＩ型）糖尿病に分けられ、全体の９０％はＩＩ型糖尿病であることが知られている。
【０００４】
ＩＩ型糖尿病の原因は、肝臓や筋肉組織などにおけるインスリン感受性低下や膵臓のインスリン分泌不足をきたす素因を含む複数の遺伝因子に、過食、運動不足、肥満、ストレスなどの環境因子および加齢が加わり発症する。
【０００５】
ＩＩ型糖尿病の治療は、食生活の改善、運動による血糖値のコントロールが基本とされるが、思うような治療効果の持続が難しいことが多く、薬物による治療へ進むことが多い。また、肥満、高脂血症、高血圧、動脈硬化、脂肪肝などが併発することによってメタボリックシンドロームへ発展する。
【０００６】
病態に合わせて、インスリン抵抗性改善（ビグアナイド薬、チアゾリジン薬）、インスリン分泌促進（スルホニル尿素薬、速効型インスリン分泌促進薬、ＤＰＰ−４阻害薬）、糖吸収・排泄調節（α−グルコシダーゼ阻害薬、ＳＧＬＴ２阻害薬）を作用機序とする経口血糖降下薬が処方される。
【０００７】
これらの経口血糖降下薬は、投与量や投与するタイミング等を間違えると、低血糖症状、胃腸障害、肝障害、皮膚障害等の副作用が現れることがあり、特に長期投与する場合に問題となる。
【０００８】
一方、４０００年以上前に発見され、今なお汎用する地骨皮などの生薬は歴史の中で有効性と安全性を兼ね備えたものが選ばれたと言い換えることができる。それ故、長期の服用においても安全な素材と呼ぶことができる。
【０００９】
生薬においても血糖降下作用を有するものが知られている。例えば、地黄、山茱萸、ブクリョウ、人参、蒼朮、牡丹皮、桔梗、麻子仁、麦門冬、知母、白朮等の生薬が動物実験で血糖降下作用を有することが報告されている（非特許文献１）。
【００１０】
地骨皮は、ＳｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎやＡｌｌｏｘａｎを用いて作製したＩ型糖尿病モデルにおいて血糖降下作用を示すことは報告されているが、ＫＫ−Ａｙマウスやｄｂ／ｄｂマウスのようなＩＩ型糖尿病モデルで血糖値上昇抑制作用を示すかは報告されていない（非特許文献２、３、４）。また、地骨皮を含む複数の生薬から構成される糖尿病治療用組成物は血糖値上昇抑制作用を有することが示されているが、地骨皮単独で血糖値上昇抑制作用を示すかは検討されていない（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特許第３９４７０１２号
【特許文献２】特開２００３−０８１８６０号公報
【特許文献３】特開２００８−１８９５７１号公報
【特許文献４】特開２０１１−２３６１４８号公報
【特許文献５】特開２０１４−１７７４０６号公報
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】高木正雄ら：現代東洋医学、１９９１、１２（１）、１３７−１３９
【非特許文献２】ＺＨＡＯ  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．ＹＡＫＵＧＡＫＵ  ＺＡＳＳＨＩ．２００５，１２５（１２），９８１−９８８
【非特許文献３】ＧＡＯ  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．ＹＡＫＵＧＡＫＵ  ＺＡＳＳＨＩ．２００７，１２７（１０），１７１５−１７２１
【非特許文献４】Ｙｅ  Ｚ．  ｅｔ  ａｌ．Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ．Ｒｅｓ．２００８，２２，１６６５−１６７０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
先に述べた糖尿病を解決することが課題であり、この課題を解決するには、血糖値上昇抑制能を有する糖代謝改善剤を開発し提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、糖代謝改善剤を開発すべく種々検討した結果、ＩＩ型糖尿病モデルマウス（ｄｂ／ｄｂマウス）を用いて地骨皮抽出物に血糖値上昇抑制能を発現すること、血糖値上昇抑制能により膵機能保護能が発現し血清インスリン値が維持されること、また、マウス筋芽細胞（Ｃ２Ｃ１２細胞）を用いて糖取り込み促進作用を示すこと、さらにマウスマクロファージ様細胞（ＲＡＷ２６４．７）を用いてＮＯ産生抑制作用を示すこと、加えてリパーゼ活性阻害作用を示すという新しい知見を得て、前記課題を解決したものである。
【発明の効果】
【００１５】
本発明により、糖代謝を改善することによって、日常生活の質の向上に極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】試験例１で実施した血糖値に及ぼす結果である。
【図２】試験例１で実施した血清インスリン値に及ぼす結果である。
【図３】試験例２で実施した筋管細胞に対する糖取り込み促進作用の結果である。
【図４】試験例３で実施した筋芽細胞に対する糖取り込み促進作用の結果である。
【図５】試験例４で実施したＮＯ産生抑制作用の結果である。
【図６】試験例５で実施したリパーゼ活性阻害作用の結果である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下に本発明を説明する。前述のように本発明は糖代謝改善剤に関する。
【００１８】
本発明における地骨皮は、久しく服用しても安全であるとされている神農本草経の上品に収載されているナス科（Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ）枸杞の根皮であり、Ｌｙｃｉｕｍ  ｃｈｉｎｅｎｓｅ  Ｍｉｌｌ．または、Ｌ．  ｂａｒｂａｒｕｍ  Ｌ．の１種または２種を使用することができる。
【００１９】
上記植物の粉末化や抽出は常法によって行えばよい。抽出は、例えば上記植物の１種または２種を乾燥して刻み、または粉末状にして抽出溶媒を加え、冷浸または加熱することによって行うことができる。抽出溶媒としては、医薬品製造に使用可能な常水、水溶性有機溶媒あるいはこれらの混合溶媒を使用することができる。上記水溶性有機溶媒としてはエタノールが好ましい。
【００２０】
尚、本発明における抽出物とは、抽出液、該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、該抽出物を乾燥して得られる乾燥物、または抽出エキスのいずれをも意味するものとする。上記抽出物の粗精製および精製は常法によって行えばよく、例えば吸着剤による吸着および溶出、クロマトグラフィー等を適当に組合わせて実施することができる。
【００２１】
以上のようにして得られる上記植物の１種または２種の粉末、抽出物、該抽出物の粗精製物および精製物は、後述する実施例から明らかなように、血糖値上昇抑制能を有するため、糖代謝改善剤の有効成分として使用することができる。本発明の糖代謝改善剤は、４０００年以上前に発見されてから有効性と安全性を兼ね備えたものとして選ばれ、久しく服用しても安全であるとされる神農本草経の上品に収載されている枸杞の根皮由来であり、長期の服用が可能であると考えられる。
【００２２】
本発明の糖代謝改善剤は、濃縮エキスまたは乾燥エキス末をそのまま本発明の薬剤として用いることができるが、必要に応じて、賦形剤、結合剤、崩壊剤、崩壊抑制剤、吸収促進剤、吸着剤、滑沢剤等の通常の医薬添加物、例えば、ブドウ糖、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、炭酸カルシウム、タルク、ヒドロキシプポピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、トウモロコシでんぷん、結晶セルロース、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルセルロース、炭酸カルシウム、無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、アルギン酸ナトリウム、寒天、炭酸水素ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、アラビアゴム末、グリセリン、ベントナイト、ポリエチレングリコール等を加えて常法により、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の固定製剤に製剤化して用いることもできる。
【実施例】
【００２３】
以下に実施例を示して、本発明およびその効果を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれに限定されるものではない。
【００２４】
〔地骨皮抽出物の製造〕
地骨皮(Ｌ．ｃｈｉｎｅｎｓｅ  Ｍｉｌｌ．または、Ｌ．ｂａｒｂａｒｕｍ  Ｌ．の１種または２種)の乾燥した根皮を８ｍｍ程度に刻んだものに常水を加えて加熱し、３０分沸騰抽出を行った。その後、熱時抽出液を遠心分離機で分離することにより滓を除去した。この滓除去抽出液を減圧濃縮することにより地骨皮抽出物を得た。
【００２５】
試験例１：ＩＩ型糖尿病モデル動物に対する評価試験
ＩＩ型糖尿病モデルマウスであるＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７ｍ＋／＋Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊマウス（ｄｂ／ｄｂマウス、日本チャールズリバー、９週齢）を用いて、地骨皮抽出物の作用を検討した。尚、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本チャールズリバー、９週齢）を正常群として設定した。また、各群８匹とした。７日間の予備飼育の後、絶食下の体重と血糖値を基に群分けを行い、正常群と対照群には水道水を、地骨皮抽出物群には地骨皮抽出物が２００ｍｇ／ｋｇとなるように水道水に混ぜて１２週間飲水投与を行った。尚、血糖値は、臨床化学自動分析装置ＳＰＯＴＣＨＥＭ（ＳＰ−４４１０、アークレイ）を用いて測定した（図１，ｎ＝６−８、平均±ＳＤ）。一方、血清インスリン値は、レビスインスリンマウスＥＬＩＳＡキットＵタイプ（シバヤギ）を用いて測定した（図２，ｎ＝５−８、平均±ＳＤ）。
【００２６】
試験例２：筋管細胞を用いた糖取り込み促進作用の検討
マウス筋芽細胞Ｃ２Ｃ１２（ＡＴＣＣ株）は１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）、ペニシリン（１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）培地（シグマ−アルドリッチ）に懸濁して１．５×１０４ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるよう１２ウェルプレートに播種し、３日間培養することによりコンフルエントとした。次に馬血清（ＨＳ）２％含有ＤＭＥＭ培地に交換し４日間培養することにより、筋管細胞へと分化誘導させた。その後、地骨皮抽出物をＤＭＥＭ培地で１２５、２５０、５００、１０００ μｇ／ｍＬとなるよう希釈し１ウェルあたり１ｍＬずつ添加後（コントロールは培地のみ）、２４時間培養した。尚、糖取り込み能測定は、ＫＲＰＨ緩衝液［２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ ７．４、５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、１ｍＭ ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、１３６ｍＭ ＮａＣｌ、４．７ｍＭ ＫＣｌ］で２回洗浄後、０．１ｍＭ  ２−デオキシグルコース（２−ＤＧ）を含むＫＲＰＨ緩衝液を１ｍＬずつ添加し、ＣＯ２インキュベーター内（３７℃、ＣＯ２濃度５％）で３０分間培養した。培養後、氷冷ＰＢＳで２回洗浄した後、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ８．０）緩衝液を加え、ピペッティングにより細胞を回収した後、２−Ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ（２ＤＧ）Ｕｐｔａｋｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｋｉｔ（コスモバイオ）を用いて細胞内に取りこんだ２−ＤＧ量を測定した。図３は筋管細胞における糖取り込み量を示したグラフである（平均±ＳＤ、ｎ＝４）。陽性対照にはＡＭＰ活性プロテインキナーゼの細胞透過性活性因子で、骨格筋によるインスリン非依存性のグルコース吸収を引き起こす５−Ａｍｉｎｏｉｍｉｄａｚｏｌｅ−４−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ  １−β−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｉｄｅ（ＡＩＣＡＲ、和光純薬工業、終濃度２ｍＭ）を設定した。
【００２７】
試験例３：筋芽細胞を用いた糖取り込み促進作用の検討
マウス筋芽細胞Ｃ２Ｃ１２は１０％ＦＢＳ、ペニシリン（１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を含むＤＭＥＭ培地に懸濁して１．５×１０４ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるよう１２ウェルプレートに播種し、３日間培養することによりコンフルエントとした。その後、地骨皮抽出物をＨＳ２％含有ＤＭＥＭ培地で１２５、２５０、５００、１０００μｇ／ｍＬとなるよう希釈して１ウェルあたり１ｍＬずつ添加後（コントロールは培地のみ）、２４時間培養した。その後、血清を除いた培地に交換しＣＯ２インキュベーター内（３７℃、ＣＯ２濃度５％）で２時間培養することで血清飢餓処理を行った。ＫＲＰＨ緩衝液で２回洗浄後、０．１ｍＭ  ２−ＤＧを含むＫＲＰＨ緩衝液を１ｍＬずつ添加し、陽性対照のみＩｎｓｕｌｉｎ（シグマ−アルドリッチ、終濃度１μＭ）を含むＫＲＰＨ緩衝液で３０分間培養した。細胞回収と糖取り込み測定は試験例２と同様に行った。図４は筋芽細胞における糖取り込み量を示したグラフである。（平均±ＳＤ、ｎ＝４）
【００２８】
試験例４：ＮＯ産生抑制作用
マウスマクロファージ様細胞ＲＡＷ２６４．７（ＥＣＡＣＣ標準株）は１０％ＦＢＳ、ペニシリン（１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を含むＤＭＥＭ培地に懸濁して１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように９６ウェルプレートに播種し、２４時間後に地骨皮抽出物を添加した。その後、３０分後にＩＦＮ−γ（５０ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）を添加した。さらに３時間後に培地交換によりＬＰＳ（０．５μｇ／ｍＬ）を添加の後、ＣＯ２インキュベーター内（３７℃、ＣＯ２濃度５％）で１８時間培養し、培養上清を回収してＧｒｉｅｓｓ法によりＮＯを測定した（図５，ｎ＝４、平均±ＳＤ）。尚、一酸化窒素合成酵素の基質であるＬ−ａｒｇｉｎｉｎｅのアナログとして競合的に結合し、阻害作用を示すＮＧ−Ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ−Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ（Ｌ−ＮＭＭＡ、同仁化学研究所）を陽性対照（終濃度１００μＭ）として設定した。
【００２９】
試験例５：リパーゼ活性阻害作用
測定は「リパーゼキットＳ」（ＤＳファーマバイオメディカル）を用い、測定法を一部改変してリパーゼ活性阻害作用を評価した。酵素溶液は、ブタ由来リパーゼ（シグマ−アルドリッチ）を１２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し０．０５ｍｇ／ｍＬの濃度として用いた。はじめに試験管へ発色液５００μＬ、エステラーゼ阻害液１０μＬ、酵素溶液４０μＬ、地骨皮抽出物１５０μＬを添加し混和した（コントロールは地骨皮抽出物の代わりに超純水を添加）。次に３０℃で５分間プレインキュベートした後、基質溶液を５０μＬ添加して遮光下で反応を開始した（ブランクへは反応停止液添加後添加）。３０分間の反応後、反応停止液を１０００μＬ添加して反応を停止した。その後、４１２ｎｍにおける吸光度を測定した。尚、リパーゼ活性阻害率は次式を用いて計算し、得られたそれぞれの値を基にリパーゼ活性を５０％阻害するために必要な濃度（ＩＣ５０値、μｇ／ｍＬ）を算出した。
リパーゼ活性阻害率（％）＝１００−（地骨皮抽出物の吸光度−地骨皮抽出物のブランク吸光度 ）／（コントロールの吸光度−コントロールのブランク吸光度）×１００
図６は地骨皮抽出物のリパーゼ活性阻害率を示したグラフである。地骨皮抽出物は０．５〜４ｍｇ／ｍＬにおいて濃度依存的なリパーゼ活性阻害を示し、ＩＣ５０値は２．２７ｍｇ／ｍＬと算出された。
【００３０】
試験例１〜３より、地骨皮抽出物は血糖値上昇抑制能を有し、膵機能保護能が発現していると考えられた。血糖値上昇抑制能には骨格筋における糖取り込み促進作用の関与が示された。また、試験例４、５より、ＮＯ産生抑制作用による抗炎症作用、リパーゼ活性阻害作用による脂肪吸収阻害も期待できるため、血糖値上昇抑制作用のみを示す糖代謝改善剤よりも追加効果が期待できると考えられた。
【産業上の利用可能性】
【００３１】
地骨皮は枸杞の根皮であり、日本および中国を含む東アジアに潤沢に存在する資源で、その抽出・精製は医薬品製造で用いられる常法により行うことができる。そのため、日常的に継続して服用することが可能であるとともに、産業上の利用も十分に可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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