【誤訳訂正書】
【提出日】平成27年2月5日(2015.2.5)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２０】
本発明の一態様によれば、本発明において使用される適切な極性非プロトン溶媒は環状化合物である。環状化合物は環状基本構造を有する。例にはここに開示された環状化合物を含む。他の実施態様では、極性非プロトン溶媒は以下の式１−４から選択されうる：
2012518430.tif 000001
ここで、ＸはＯであり、Ｒ１はアルキルジイルである。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸配列をハイブリダイズさせるインサイツの方法において、
− 二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を含有する第一の水性組成物中で第一の核酸配列を含む第一の二本鎖核酸配列を変性させ、
− 二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量の少なくとも変性剤を含有する第二の水性組成物中で第二の核酸配列を含む第二の二本鎖核酸配列を変性させ、
−第一及び第二の核酸配列をハイブリダイズさせるために８時間未満、第一及び第二の水性組成物を組み合わせることを含み、
ここで極性非プロトン溶媒は、環状基本構造を有し、ラクトン、スルホン、ニトリル、サルファイト、及び／又はカーボネートであるインサイツの方法。
【請求項２】
第二の水性組成物中の変性剤が極性非プロトン溶媒である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第一及び／又は前記第二の核酸を変性させる時間が１分、２分、３分、４分、５分、１０分、１５分、又は３０分である請求項１及び請求項２の何れか一項に記載の方法。
【請求項４】
ハイブリダイジングの工程が、組成物を加熱及び冷却する工程を含む、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項５】
ハイブリダイジングの工程が、１時間未満、３０分未満、１５分未満、又は５分未満を要する請求項１から４の何れか一項に記載の方法。
【請求項６】
第一及び第二の水性組成物中の極性非プロトン溶媒の濃度が１％から９５％（ｖ／ｖ）、５％から１０％（ｖ／ｖ）、１０％から２０％（ｖ／ｖ）、又は２０％から３０％（ｖ／ｖ）である請求項１から５の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
第一及び第二の水性組成物中の極性非プロトン溶媒が無毒性である請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
第一及び第二の水性組成物中の極性非プロトン溶媒が、１７．７から２２．０ＭＰａ１／２の範囲の分散溶解度パラメータ、１３から２３ＭＰａ１／２の範囲の極性溶解度パラメータ、及び３から１３ＭＰａ１／２の範囲の水素結合溶解度パラメータを有する請求項１から７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
第一及び第二の水性組成物中の極性非プロトン溶媒が
2012518430.tif 000002
（ここで、ＸがＯであり、Ｒ１がアルキルジイルである）、及び
2012518430.tif 000003
（ここで、Ｘは任意であり、存在する場合は、Ｏ又はＳから選択され、
Ｚは任意であり、存在する場合は、Ｏ又はＳから選択され、
Ａ及びＢは独立してＯ又はＮ又はＳ又はアルキルジイルの一部又は第１級アミンであり、
Ｒはアルキルジイルであり、
ＹはＯ又はＳ又はＣである）
からなる群から選択される請求項１から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
第一及び第二の水性組成物中の極性非プロトン溶媒が、
2012518430.tif 000004
からなる群から選択される請求項１から９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
第一及び第二の水性組成物が、緩衝剤、塩、促進剤、キレート剤、洗浄剤、及びブロッキング剤からなる群から選択される少なくとも一種の更なる成分を更に含む請求項１から１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
促進剤がデキストラン硫酸であり、塩がＮａＣｌ及び／又はホスフェートバッファーである請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
デキストラン硫酸が５％から４０％の濃度で存在し、ＮａＣｌが０ｍＭから１２００ｍＭの濃度で存在し、及び／又はホスフェートバッファーが０ｍＭから５０ｍＭの濃度で存在する請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
デキストラン硫酸が１０％から３０％の濃度で存在し、ＮａＣｌが３００ｍＭから６００ｍＭの濃度で存在し、及び／又はホスフェートバッファーが５ｍＭから２０ｍＭの濃度で存在する請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
促進剤が、ホルムアミド、ＤＭＳＯ、グリセロール、プロピレングリコール、１，２−プロパンジオール、ジエチレングリコール、エチレングリコール、グリコール、及び１，３プロパンジオールからなる群から選択され、緩衝剤がクエン酸バッファーである請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
ホルムアミドが０．１−５％の濃度で存在し、ＤＭＳＯが０．０１％から１０％の濃度で存在し、グリセロール、プロピレングリコール、１，２−プロパンジオール、ジエチレングリコール、エチレングリコール、グリコール、及び１，３プロパンジオールが０．１％から１０％の濃度で存在し、クエン酸バッファーが１ｍＭから５０ｍＭの濃度で存在する請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
第一及び第二の水性組成物が４０％の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒、１０％のデキストラン硫酸、３００ｍＭのＮａＣｌ、及び／又は５ｍＭのホスフェートバッファーを含有する請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
第一及び第二の水性組成物が１５％の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒、２０％のデキストラン硫酸、６００ｍＭのＮａＣｌ、及び１０ｍＭのクエン酸バッファーｐＨ６．２を含有する請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
インサイツハイブリダイゼーション用途における標的の別々の変性を実施するための、環状基本構造を有し、ラクトン、スルホン、ニトリル、サルファイト、及び／又はカーボネートである少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を１％から９５％（ｖ／ｖ）含有する組成物の使用。
【請求項２０】
極性非プロトン溶媒の濃度が請求項６に記載される、請求項１９に記載の組成物の使用。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９３】
更なる実施態様
実施態様１．  核酸配列をハイブリダイズさせる方法において、
−  第一の核酸配列を、二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を含有する第一の水性組成物と組み合わせ、
−  第二の核酸配列を、二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量の少なくとも変性剤を含有する第二の水性組成物と組み合わせ、
−  第一及び第二の核酸配列を第一及び第二の核酸配列をハイブリダイズさせるのに少なくとも十分な時間の間組み合わせる
ことを含み、ここで極性非プロトン溶媒はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）では無い方法。
実施態様２．  核酸配列をハイブリダイズさせる方法において、
−  第一の核酸配列を、二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を含有する第一の水性組成物と組み合わせ、
−  上記第一の核酸配列を、第二の核酸配列と二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに効果的な量の少なくとも一種の変性剤を含有する第二の水性組成物と、第一及び第二の核酸配列をハイブリダイズさせるのに少なくとも十分な時間の間、組み合わせる
ことを含み、ここで極性非プロトン溶媒はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）では無い方法。
実施態様３．  核酸配列をハイブリダイズさせる方法において、
−  第一の核酸配列を、二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量で少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を含有する第一の水性組成物と組み合わせ、
−  上記第一の核酸配列を、第一及び第二核酸配列をハイブリダイズさせるのに少なくとも十分な時間の間、第二の核酸配列と組み合わせる
ことを含み、ここで極性非プロトン溶媒はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）では無い方法。
実施態様４．  第二の水性組成物中の変性剤が極性非プロトン溶媒である実施態様１又は２に記載の方法。
実施態様５．  第一の核酸配列が生物学的試料中にある実施態様１から４のいずれか一つに記載の方法。
実施態様６．  生物学的試料は細胞学又は組織学の試料である実施態様５に記載の方法。
実施態様７．  第一の核酸配列が一本鎖配列であり及び第二の核酸配列が二本鎖配列である実施態様１−６のいずれかに記載の方法。
実施態様８．  第一の核酸配列が二本鎖配列であり及び第二の核酸配列が一本鎖配列である実施態様１−６のいずれかに記載の方法。
実施態様９．  第一及び第二の核酸配列が二本鎖配列である実施態様１−６のいずれかに記載の方法。
実施態様１０．  第一及び第二の核酸配列が一本鎖配列である実施態様１−６のいずれかに記載の方法。
実施態様１１．  第一及び第二の核酸配列を変性させるのに十分な量のエネルギーが提供される実施態様１−１０のいずれかに記載の方法。
実施態様１２．  第一の核酸配列を変性させるのに十分な量のエネルギーが提供される実施態様１−１１のいずれかに記載の方法。
実施態様１３．  第二の核酸配列を変性させるのに十分な量のエネルギーが提供される実施態様１−１２のいずれかに記載の方法。
実施態様１４．  エネルギーが組成物を加熱することで提供される実施態様１１−１３に記載の方法。
実施態様１５．  加熱工程が、マイクロ波、温浴、熱板、熱線、ペルチェ素子、誘導加熱又は加熱ランプの使用によって実施される実施態様１４に記載の方法。
実施態様１６．  第一の核酸を変性させる温度が７０℃から８５℃である実施態様１２−１５のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１７．  第二の核酸を変性させる温度が７０℃から８５℃である実施態様１２−１６のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１８．  第一の核酸を変性させる温度が６０℃から７５℃である実施態様１２−１５のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１９．  第二の核酸を変性させる温度が６０℃から７５℃である実施態様１２−１５又は１８のいずれか一項に記載の方法。
実施態様２０．  第一の核酸を変性させる温度が６２℃、６７℃、７２℃又は８２℃である実施態様１２−１５のいずれか一項に記載の方法。
実施態様２１．  第二の核酸を変性させる温度が６２℃、６７℃、７２℃又は８２℃である実施態様１２−１５又は２０のいずれか一項に記載の方法。
実施態様２２．  第一の核酸を変性させるのに十分な時間が提供される実施態様１−２１のいずれか一項に記載の方法。
実施態様２３．  第二の核酸を変性させるのに十分な時間が提供される実施態様１−２２のいずれか一項に記載の方法。
実施態様２４．  時間は１分、２分、３分、４分、５分、１０分、１５分、又は３０分である実施態様２２又は２３に記載の方法。
実施態様２５．  ハイブリダイジング工程が組成物を加熱し冷却する工程を含む実施態様１−２４のいずれか一項に記載の方法。
実施態様２６．  ハイブリダイゼーション工程が８時間未満を要する実施態様１−２５のいずれか一項に記載の方法。
実施態様２７．  ハイブリダイゼーション工程が１時間未満を要する実施態様２６に記載の方法。
実施態様２８．  ハイブリダイゼーション工程が３０分未満を要する実施態様２７に記載の方法。
実施態様２９．  ハイブリダイゼーション工程が１５分未満を要する実施態様２８に記載の方法。
実施態様３０．  ハイブリダイゼーション工程が５分未満を要する実施態様２９に記載の方法。
実施態様３１．  ブロッキング工程を更に含む実施態様１−３０のいずれか一項に記載の方法。
実施態様３２．  水性組成物中の極性非プロトン溶媒の濃度が約１％から９５％（ｖｖ）である実施態様１−３１の何れか一に記載の方法。
実施態様３３．  極性非プロトン溶媒の濃度が５％から１０％（ｖｖ）である実施態様３２に記載の方法。
実施態様３４．  極性非プロトン溶媒の濃度が１０％から２０％（ｖｖ）である実施態様３２に記載の方法。
実施態様３５．  極性非プロトン溶媒の濃度が２０％から３０％（ｖｖ）である実施態様３２に記載の方法。
実施態様３６．  水性組成物中の極性非プロトン溶媒が無毒性である実施態様１−３５の何れか一に記載の方法。
実施態様３７．  但し、水性組成物中の極性非プロトン溶媒はホルムアミドを含有しない実施態様１−３６の何れか一に記載の方法。
実施態様３８．  但し、水性組成物中の極性非プロトン溶媒は１０％未満のホルムアミドを含有する実施態様１−３６の何れか一に記載の方法。
実施態様３９．  但し、水性組成物は２％未満のホルムアミドを含有する実施態様３８に記載の方法。
実施態様４０．  但し、水性組成物は１％未満のホルムアミドを含有する実施態様３９に記載の方法。
実施態様４１．  水性組成物中の極性非プロトン溶媒は、ラクトン、スルホン、ニトリル、サルファイト、及び／又はカーボネートの官能性を有する実施態様１−４０の何れか一に記載の方法。
実施態様４２．  水性組成物中の極性非プロトン溶媒が、１７．７から２２．０ＭＰａ１／２の範囲の分散溶解度パラメータ、１３から２３ＭＰａ１／２の範囲の極性溶解度パラメータ、及び３から１３ＭＰａ１／２の範囲の水素結合溶解度パラメータを有する実施態様１−４１の何れか一に記載の方法。
実施態様４３．  水性組成物中の極性非プロトン溶媒が環状塩基構造を有する実施態様１−４２の何れか一に記載の方法。
実施態様４４．  水性組成物中の極性非プロトン溶媒が
2012518430.tif 000005
（ここで、ＸがＯであり、Ｒ１がアルキルジイルである）、及び
2012518430.tif 000006
（ここで、Ｘは任意であり、存在する場合は、Ｏ又はＳから選択され、
Ｚは任意であり、存在する場合は、Ｏ又はＳから選択され、
Ａ及びＢは独立してＯ又はＮ又はＳ又はアルキルジイルの一部又は第１級アミンであり、
Ｒはアルキルジイルであり、
ＹはＯ又はＳ又はＣである）
からなる群から選択される実施態様１−４３の何れか一に記載の方法。
実施態様４５．  水性組成物中の極性非プロトン溶媒が、アセトアニリド、アセトニトリル、Ｎ−アセチルピロリドン、４−アミノピリジン、ベンズアミド、ベンズイミダゾール、１，２，３−ベンゾトリアゾール、ブタジエンジオキシド、２，３−ブチレンカーボネート、γ−ブチロラクトン、カプロラクトン（イプシロン）、クロロ無水マレイン酸、２−クロロシクロヘキサノン、クロロエチレンカーボネート、クロロニトロメタン、無水シトラコン酸、クロトンラクトン、５−シアノ−２−チオウラシル、シクロプロピルニトリル、硫酸ジメチル、ジメチルスルホン、１，３−ジメチル−５−テトラゾール、１，５−ジメチルテトラゾール、１，２−ジニトロベンゼン、２，４−ジニトロトルエン、ジフェイニルスルホン、１，２−ジニトロベンゼン、２，４−ジニトロトルエン、ジフェイニルスルホン、イプシロン−カプロラクタム、エタンスルホニルクロリド、エチルエチルホスフィネート、Ｎ−エチルテトラゾール、エチレンカーボネート、エチレントリチオカーボネート、エチレングリコールサルフェート、グリコールサルファイト、フルフラール、２−フロニトリル、２−イミダゾール、イサチン、イソキサゾール、マロノニトリル、４−メトキシベンゾニトリル、１−メトキシ−２−ニトロベンゼン、メチルαブロモテトロネート、１−メチルイミダゾール、Ｎ−メチルイミダゾール、３−メチルイソキサゾール、Ｎ−メチルモルホリン−Ｎ−オキシド、メチルフェニルスルホン、Ｎ−メチルピロリジノン、メチルスルホラン、メチル−４−トルエンスルホネート、３−ニトロアニリン、ニトロベンズイミダゾール、２−ニトロフラン、１−ニトロソ−２−ピロリジノン、２−ニトロチオフェン、２−オキサゾリジノン、９，１０−フェナントレンキノン、Ｎ−フェニルシドノン、無水フタル酸、ピコリノニトリル（２−シアノピリジン）、１，３−プロパンスルトン、β−プロピオラクトン、プロピレンカーボネート、４Ｈ−ピラン−４−チオン、４Ｈ−ピラン−４−オン（γ−ピロン）、ピリダジン、２−ピロリドン、サッカリン、スクシノニトリル、スルファニルアミド、スルホラン、２，２，６，６−テトラクロロシクロヘキサノン、テトラヒドロチアピランオキシド、テトラメチレンスルホン（スルホラン）、チアゾール、２−チオウラシル、３，３，３−トリクロロプロペン、１，１，２−トリクロロプロペン、１，２，３−トリクロロプロペン、トリメチレンスルフィド−ジオキシド、及びトリメチレンサルファイトからなる群から選択される実施態様１−４４の何れか一に記載の方法。
実施態様４６．  水性組成物中の極性非プロトン溶媒が、
2012518430.tif 000007
からなる群から選択される実施態様１−４４の何れか一に記載の方法。
実施態様４７．  水性組成物中の極性非プロトン溶媒が、
2012518430.tif 000008
である実施態様１−４４の何れか一に記載の方法。
実施態様４８．  水性組成物が、緩衝剤、塩、促進剤、キレート剤、洗浄剤、及びブロッキング剤からなる群から選択される少なくとも一種の更なる成分を更に含む実施態様１−４７に記載の方法。
実施態様４９．  促進剤がデキストラン硫酸であり、塩がＮａＣｌ及び／又はホスフェートバッファーである実施態様４８に記載の方法。
実施態様５０．  デキストラン硫酸が５％から４０％の濃度で存在し、ＮａＣｌが０ｍＭから１２００ｍＭの濃度で存在し、及び／又はホスフェートバッファーが０ｍＭから５０ｍＭの濃度で存在する実施態様４９に記載の方法。
実施態様５１．  デキストラン硫酸が１０％から３０％の濃度で存在し、ＮａＣｌが３００ｍＭから６００ｍＭの濃度で存在し、及び／又はホスフェートバッファーが５ｍＭから２０ｍＭの濃度で存在する実施態様５０に記載の方法。
実施態様５２．  促進剤が、ホルムアミド、ＤＭＳＯ、グリセロール、プロピレングリコール、１，２−プロパンジオール、ジエチレングリコール、エチレングリコール、グリコール、及び１，３プロパンジオールからなる群から選択され、緩衝剤がクエン酸バッファーである実施態様４８に記載の方法。
実施態様５３．  ホルムアミドが０．１−５％の濃度で存在し、ＤＭＳＯが０．０１％〜１０％の濃度で存在し、グリセロール、プロピレングリコール、１，２−プロパンジオール、ジエチレングリコール、エチレングリコール、グリコール、及び１，３プロパンジオールが０．１％から１０％の濃度で存在し、クエン酸バッファーが１ｍＭから５０ｍＭの濃度で存在する実施態様５２に記載の方法。
実施態様５４．  ブロッキング剤が、全ヒトＤＮＡ、ニシン精液ＤＮＡ、サケ精液ＤＮＡ、及びウシ胸腺ＤＮＡからなる群から選択される実施態様４８に記載の方法。
実施態様５５．  全ヒトＤＮＡ、ニシン精液ＤＮＡ、サケ精液ＤＮＡ、及びウシ胸腺ＤＮＡが０．０１から１０μｇ／μＬの濃度で存在する実施態様５４に記載の方法。
実施態様５６．  水性組成物が４０％の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒、１０％のデキストラン硫酸、３００ｍＭのＮａＣｌ、及び／又は５ｍＭのホスフェートバッファーを含有する実施態様４８に記載の方法。
実施態様５７．  水性組成物が１５％の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒、２０％のデキストラン硫酸、６００ｍＭのＮａＣｌ、及び／又は１０ｍＭのホスフェートバッファー含有する実施態様４８に記載の方法。
実施態様５８．  水性組成物が１５％の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒、２０％のデキストラン硫酸、６００ｍＭのＮａＣｌ、及び１０ｍＭのクエン酸バッファーｐＨ６．２を含有する実施態様４８に記載の方法。
実施態様５９．  水性組成物が室温で一相を含む実施態様１−５８の何れか一に記載の方法。
実施態様６０．  水性組成物が室温で複数相を含む実施態様１−５８の何れか一に記載の方法。
実施態様６１．  水性組成物が室温で二相を含む実施態様６０に記載の方法。
実施態様６２．  水性組成物の相が混合される実施態様６０又は６１に記載の方法。
実施態様６３．  ハイブリダイゼーション用途における標的の別々の変性を実施するための水性組成物において、２本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を含有し、該極性非プロトン溶媒がジメチルスルホキサイド（ＤＭＳＯ）ではない組成物。
実施態様６４．  極性非プロトン溶媒の濃度が実施態様３２から３５の何れか一に記載の通りに定義される実施態様６３の水性組成物。
実施態様６５．  極性非プロトン溶媒が実施態様３６、又は４１から４７の何れか一に記載の通りに定義される実施態様６３又は６４の水性組成物。
実施態様６６．  水性組成物が実施態様３７から４０又は４８から６２の何れか一に記載の通りに定義される実施態様６１から６５の何れか一の水性組成物。
実施態様６７．  ハイブリダイゼーション用途における標的の別々の変性を実施するための、少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を１％から９５％（ｖ／ｖ）含有する組成物の使用。
実施態様６８．  極性非プロトン溶媒の濃度が実施態様３２から３５の何れか一に記載の通りに定義される実施態様６７に記載の組成物の使用。
実施態様６９．  極性非プロトン溶媒が実施態様３６又は４１から４７の何れか一に記載の通りに定義される実施態様６７又は６８に記載の組成物の使用。
実施態様７０．  水性組成物が実施態様３７から４０又は４８から６２の何れか一に記載の通りに定義される実施態様６７から６９の何れか一に記載の組成物の使用。
実施態様７１．  ハイブリダイゼーションアッセイを実施するためのキットにおいて、
−  実施態様６３−６６の何れか一に記載の第一の水性組成物と、
−  少なくとも一の核酸配列を含んでなる第二の水性組成物
を含むキット。
実施態様７２．  第二の水性組成物が、二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量の少なくとも一種の変性剤を更に含有する実施態様７１に記載のキット。
実施態様７３．  第二の水性組成物中の変性剤が極性非プロトン溶媒である実施態様７２のキット。
実施態様７４．  第二の水性組成物中の極性非プロトン溶媒の濃度が実施態様３２から３５の何れか一に記載の通りに定義される実施態様７３のキット。
実施態様７５．  第二の水性組成物中の極性非プロトン溶媒が実施態様３６又は４１から４７の何れか一に記載の通りに定義される実施態様７３又は７４のキット。
実施態様７６．  第二の水性組成物が実施態様３７から４０又は４８から６２の何れか一に記載の通りに定義される実施態様７１から７５の何れか一のキット。
実施態様２−１．
核酸配列をハイブリダイズさせるインサイツの方法において、
−  二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を含有する第一の水性組成物中で第一の核酸配列を含む第一の二本鎖核酸配列を変性させ、
−  二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量の少なくとも変性剤を含有する第二の水性組成物中で第二の核酸配列を含む第二の二本鎖核酸配列を変性させ、
−  第一及び第二の核酸配列を、第一及び第二の核酸配列をハイブリダイズさせるために８時間未満少なくとも一の極性非プロトン溶媒を含有する水性組成物中で組み合わせる
ことを含み、
ここで極性非プロトン溶媒はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）では無いインサイツの方法。
実施態様２−２．
第二の水性組成物中の変性剤が極性非プロトン溶媒である実施態様２−１に記載の方法。
実施態様２−３．
例えば前記第一及び／又は前記第二の核酸を変性させる時間が１分、２分、３分、４分、５分、１０分、１５分、又は３０分である実施態様２−１及び実施態様２−２の何れか一に記載の方法。
実施態様２−４．
ハイブリダイジングの工程が、組成物を加熱及び／又は冷却する工程を含み、例えばハイブリダイゼーションの工程が１時間未満、例えば３０分未満、例えば１５分未満、例えば５分未満を要する実施態様１−２から２−３の何れか一に記載の方法。
実施態様２−５．
水性組成物中の極性非プロトン溶媒の濃度が約１％から９５％（ｖ／ｖ）、例えば５％から１０％（ｖ／ｖ）、例えば１０％から２０％（ｖ／ｖ）、例えば２０％から３０％（ｖ／ｖ）である実施態様２−１から２−４の何れか一に記載の方法。
実施態様２−６．
水性組成物中の極性非プロトン溶媒が無毒性である実施態様２−１から２−５の何れか一に記載の方法。
実施態様２−７．
水性組成物中の極性非プロトン溶媒が、ラクトン、スルホン、ニトリル、サルファイト、及び／又はカーボネートの官能性を有する実施態様２−１から２−６の何れか一に記載の方法。
実施態様２−８．
水性組成物中の極性非プロトン溶媒が、１７．７から２２．０ＭＰａ１／２の範囲の分散溶解度パラメータ、１３から２３ＭＰａ１／２の範囲の極性溶解度パラメータ、及び３から１３ＭＰａ１／２の範囲の水素結合溶解度パラメータを有する実施態様２−１から２−７の何れか一に記載の方法。
実施態様２−９．
水性組成物中の極性非プロトン溶媒が
2012518430.tif 000009
（ここで、ＸがＯであり、Ｒ１がアルキルジイルである）、及び
2012518430.tif 000010
（ここで、Ｘは任意であり、存在する場合は、Ｏ又はＳから選択され、
Ｚは任意であり、存在する場合は、Ｏ又はＳから選択され、
Ａ及びＢは独立してＯ又はＮ又はＳ又はアルキルジイルの一部又は第１級アミンであり、
Ｒはアルキルジイルであり、
ＹはＯ又はＳ又はＣである）
からなる群から選択される実施態様２−１から２−８の何れか一に記載の方法。
実施態様２−１０．
水性組成物中の極性非プロトン溶媒が、
2012518430.tif 000011

からなる群から選択される実施態様２−１から２−９の何れか一に記載の方法。
実施態様２−１１．
水性組成物が、緩衝剤、塩、促進剤、キレート剤、洗浄剤、及びブロッキング剤からなる群から選択される少なくとも一種の更なる成分を更に含む実施態様２−１から２−１０の何れか一に記載の方法。
実施態様２−１２．
促進剤がデキストラン硫酸であり、塩がＮａＣｌ及び／又はホスフェートバッファーである実施態様２−１１に記載の方法。
実施態様２−１３．
デキストラン硫酸が５％から４０％の濃度で存在し、ＮａＣｌが０ｍＭから１２００ｍＭの濃度で存在し、及び／又はホスフェートバッファーが０ｍＭから５０ｍＭの濃度で存在し、例えば、デキストラン硫酸が１０％から３０％の濃度で存在し、ＮａＣｌが３００ｍＭから６００ｍＭの濃度で存在し、及び／又はホスフェートバッファーが５ｍＭから２０ｍＭの濃度で存在する実施態様２−１２に記載の方法。
実施態様２−１４．
促進剤が、ホルムアミド、ＤＭＳＯ、グリセロール、プロピレングリコール、１，２−プロパンジオール、ジエチレングリコール、エチレングリコール、グリコール、及び１，３プロパンジオールからなる群から選択され、緩衝剤がクエン酸バッファーである実施態様２−１１に記載の方法。
実施態様２−１５．
ホルムアミドが０．１−５％の濃度で存在し、ＤＭＳＯが０．０１％から１０％の濃度で存在し、グリセロール、プロピレングリコール、１，２−プロパンジオール、ジエチレングリコール、エチレングリコール、グリコール、及び１，３プロパンジオールが０．１％から１０％の濃度で存在し、クエン酸バッファーが１ｍＭから５０ｍＭの濃度で存在する実施態様２−１４に記載の方法。
実施態様２−１６．
水性組成物が４０％の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒、１０％のデキストラン硫酸、３００ｍＭのＮａＣｌ、及び／又は５ｍＭのホスフェートバッファーを含有する実施態様２−１１に記載の方法。
実施態様２−１７．
水性組成物が１５％の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒、２０％のデキストラン硫酸、６００ｍＭのＮａＣｌ、及び１０ｍＭのクエン酸バッファーｐＨ６．２を含有する実施態様２−１１に記載の方法。
実施態様２−１８．
インサイツハイブリダイゼーション用途における標的の別々の変性を実施するための、少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を１％から９５％（ｖ／ｖ）含有する組成物の使用。
実施態様２−１９．
極性非プロトン溶媒の濃度が実施態様２−５又は２−６又は２−７から２−１０に記載される、実施態様２−１８に記載の組成物の使用。