【手続補正書】
【提出日】平成27年8月4日(2015.8.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１０ｂおよびｍｉＲ−１３３ａから選択されるマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）に特異的なアンチセンス分子を有効量含む骨肉腫の治療剤。
【請求項２】
アンチセンス分子が安定化ＲＮＡである請求項１記載の治療剤。
【請求項３】
安定化ＲＮＡがロックド核酸（ＬＮＡ）オリゴヌクレオチドである請求項２記載の治療剤。
【請求項４】
アンチセンス分子がＤＮＡである請求項１記載の治療剤。
【請求項５】
アンチセンス分子が、２０〜３０ヌクレオチド長であり、
５’−ACATACTTCTTTACATTCCA−３’（配列番号４）、
５’−ACAAATTCGGTTCTACAGGGT−３’（配列番号５）または
５’−CAGCTGGTTGAAGGGGACCAA−３’（配列番号６）
に少なくとも９０％同一なヌクレオチド配列を含む請求項１記載の治療剤。
【請求項６】
アンチセンス分子が、２１〜３０ヌクレオチド長であり、
５’−ACATACTTCTTTACATTCCA−３’（配列番号４）、
５’−ACAAATTCGGTTCTACAGGGT−３’（配列番号５）または
５’−CAGCTGGTTGAAGGGGACCAA−３’（配列番号６）
に少なくとも９５％同一なヌクレオチド配列を含む請求項５記載の治療剤。
【請求項７】
アンチセンス分子の配列が、
５’−ACATACTTCTTTACATTCCA−３’（配列番号４）、
５’−ACAAATTCGGTTCTACAGGGT−３’（配列番号５）または
５’−CAGCTGGTTGAAGGGGACCAA−３’（配列番号６）
である請求項６記載の治療剤。
【請求項８】
アンチセンス分子が、２０〜３０ヌクレオチド長であり、
５’−AUACAUACUUCUUUACAUUCCA−３’（配列番号７）、
５’−CACAAAUUCGGUUCUACAGGGUA−３’（配列番号８）、
５’−CAGCUGGUUGAAGGGGACCAAA−３’（配列番号９）、
５’−ATACATACTTCTTTACATTCCA−３’（配列番号１０）、
５’−CACAAATTCGGTTCTACAGGGTA−３’（配列番号１１）または
５’−CAGCTGGTTGAAGGGGACCAAA−３’（配列番号１２）
に少なくとも９０％同一なヌクレオチド配列を含む請求項１記載の治療剤。
【請求項９】
アンチセンス分子が、２１〜３０ヌクレオチド長であり、
５’−AUACAUACUUCUUUACAUUCCA−３’（配列番号７）、
５’−CACAAAUUCGGUUCUACAGGGUA−３’（配列番号８）、
５’−CAGCUGGUUGAAGGGGACCAAA−３’（配列番号９）、
５’−ATACATACTTCTTTACATTCCA−３’（配列番号１０）、
５’−CACAAATTCGGTTCTACAGGGTA−３’（配列番号１１）または
５’−CAGCTGGTTGAAGGGGACCAAA−３’（配列番号１２）
に少なくとも９５％同一なヌクレオチド配列を含む請求項８記載の治療剤。
【請求項１０】
アンチセンス分子の配列が、
５’−AUACAUACUUCUUUACAUUCCA−３’（配列番号７）、
５’−CACAAAUUCGGUUCUACAGGGUA−３’（配列番号８）、
５’−CAGCUGGUUGAAGGGGACCAAA−３’（配列番号９）、
５’−ATACATACTTCTTTACATTCCA−３’（配列番号１０）、
５’−CACAAATTCGGTTCTACAGGGTA−３’（配列番号１１）または
５’−CAGCTGGTTGAAGGGGACCAAA−３’（配列番号１２）
である請求項９記載の治療剤。
【請求項１１】
アンチセンス分子が核酸送達ビヒクルに関連付けられている請求項１〜１０のいずれか１項に記載の治療剤。
【請求項１２】
骨肉腫が転移性骨肉腫である請求項１〜１１のいずれか１項に記載の治療剤。
【請求項１３】
５’−ACATACTTCTTTACATTCCA−３’（配列番号４）、
５’−ACAAATTCGGTTCTACAGGGT−３’（配列番号５）または
５’−CAGCTGGTTGAAGGGGACCAA−３’（配列番号６）に少なくとも９０％同一なヌクレオチド配列を含む２０〜３０ヌクレオチド長の単離された核酸分子。
【請求項１４】
単離された核酸分子が、２１〜３０ヌクレオチド長であり、５’−ACATACTTCTTTACATTCCA−３’（配列番号４）、
５’−ACAAATTCGGTTCTACAGGGT−３’（配列番号５）または
５’−CAGCTGGTTGAAGGGGACCAA−３’（配列番号６）
に少なくとも９５％同一なヌクレオチド配列を含む請求項１３記載の単離された核酸分子。
【請求項１５】
単離された核酸分子の配列が、５’−ACATACTTCTTTACATTCCA−３’（配列番号４）、
５’−ACAAATTCGGTTCTACAGGGT−３’（配列番号５）または
５’−CAGCTGGTTGAAGGGGACCAA−３’（配列番号６）
である請求項１４記載の単離された核酸分子。
【請求項１６】
５’−AUACAUACUUCUUUACAUUCCA−３’（配列番号７）、
５’−CACAAAUUCGGUUCUACAGGGUA−３’（配列番号８）、
５’−CAGCUGGUUGAAGGGGACCAAA−３’（配列番号９）、
５’−ATACATACTTCTTTACATTCCA−３’（配列番号１０）、
５’−CACAAATTCGGTTCTACAGGGTA−３’（配列番号１１）または
５’−CAGCTGGTTGAAGGGGACCAAA−３’（配列番号１２）に少なくとも９０％同一なヌクレオチド配列を含む２０〜３０ヌクレオチド長の単離された核酸分子。
【請求項１７】
単離された核酸分子が、２１〜３０ヌクレオチド長であり、５’−AUACAUACUUCUUUACAUUCCA−３’（配列番号７）、
５’−CACAAAUUCGGUUCUACAGGGUA−３’（配列番号８）、
５’−CAGCUGGUUGAAGGGGACCAAA−３’（配列番号９）、
５’−ATACATACTTCTTTACATTCCA−３’（配列番号１０）、
５’−CACAAATTCGGTTCTACAGGGTA−３’（配列番号１１）または
５’−CAGCTGGTTGAAGGGGACCAAA−３’（配列番号１２）
に少なくとも９５％同一なヌクレオチド配列を含む請求項１６記載の単離された核酸分子。
【請求項１８】
単離された核酸分子の配列が、
５’−AUACAUACUUCUUUACAUUCCA−３’（配列番号７）、
５’−CACAAAUUCGGUUCUACAGGGUA−３’（配列番号８）、
５’−CAGCUGGUUGAAGGGGACCAAA−３’（配列番号９）、
５’−ATACATACTTCTTTACATTCCA−３’（配列番号１０）、
５’−CACAAATTCGGTTCTACAGGGTA−３’（配列番号１１）または
５’−CAGCTGGTTGAAGGGGACCAAA−３’（配列番号１２）
である請求項１７記載の単離された核酸分子。
【請求項１９】
核酸分子が核酸送達ビヒクルに関連付けられている請求項１３〜１８のいずれか１項に記載の単離された核酸分子。
【請求項２０】
抗がん治療に対する骨肉腫の抵抗性を評価する方法であって、
骨肉腫細胞を含む組織試料からＣＤ１３３を発現する細胞を単離する工程；
ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１０ｂおよびｍｉＲ−１３３ａからなる群より選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の該ＣＤ１３３発現細胞による第１の発現レベルを測定する工程；
該ＣＤ１３３発現細胞を抗がん療法と接触させる工程；ならびに
該少なくとも１つのｍｉＲＮＡの該ＣＤ１３３発現細胞による第２の発現レベルを測定する工程を含み、第１の発現レベルよりも高い第２の発現レベルが、その骨肉腫が抗がん療法に抵抗性であることを示す方法。
【請求項２１】
抗がん療法が、シスプラチン、ドキソルビシン、メトトレキサートおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
骨肉腫のスクリーニング方法であって、対象由来の組織試料において、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１０ｂおよびｍｉＲ−１３３ａからなる群より選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を特異的に検出できるアッセイを行う工程を含み、アッセイによる、該少なくとも１つのｍｉＲＮＡの試料中における存在の検出が、対象が骨肉腫を有する危険性があることを示す方法。
【請求項２３】
組織が血液である請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
組織が血清である請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
骨肉腫をモニタリングする方法であって、
（ａ）骨肉腫を有する対象または骨肉腫の治療をしている対象から得られた組織試料において、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１０ｂおよびｍｉＲ−１３３ａからなる群より選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の発現レベルを特異的に定量することができるアッセイを行う工程；ならびに
（ｂ）対象由来の後に得られた組織試料において工程（ａ）を繰り返す工程を含み、先に得られた試料におけるその少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現レベルよりも高い後に得られた試料におけるその少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現レベルが、その骨肉腫が進行性であることを示し、そして先に得られた試料におけるその少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現レベルよりも低い後に得られた試料におけるその少なくとも１つのｍｉＲＮＡの発現レベルが、その骨肉腫が退行性であることを示す工程
を含む骨肉腫をモニタリングする方法。
【請求項２６】
組織が血液である請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
組織が血清である請求項２５記載の方法。