【手続補正書】
【提出日】平成27年10月30日(2015.10.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
改変ヘテロ二量体ＣＨ３ドメインを含有する単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物であって、前記改変ヘテロ二量体ＣＨ３ドメインは、
野生型ＣＨ３ドメインポリペプチドと比較して、少なくとも３つのアミノ酸改変を含有する第一ＣＨ３ドメインポリペプチド、および、野生型ＣＨ３ドメインポリペプチドと比較して、少なくとも３つのアミノ酸改変を含有する第二ＣＨ３ドメインポリペプチドを含有し、
ここで、前記第一および第二ＣＨ３ドメインポリペプチドのうち少なくとも一つは、Ｋ３９２Ｊのアミノ酸改変を含有し、ここで、Ｊは、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＦから選択され、
ここで、前記改変ヘテロ二量体ＣＨ３ドメインは、少なくとも約７４℃の融解温度（Ｔｍ）および少なくとも９５％の純度を有し、
ここで、アミノ酸改変の少なくとも一つは、前記第一および前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドの間の境界面にあるアミノ酸のものではなく、かつ
ここで、アミノ酸残基の付番はＫａｂａｔに記載されているＥＵインデックスによる、
単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項２】
Ｔ３５０Ｘ改変を少なくとも１つ含有し、ここで、Ｘは、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、およびそれらの誘導体または変異体から選択される、天然または非天然アミノ酸である、請求項１に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項３】
改変ヘテロ二量体ＣＨ３ドメインを含有する単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物であって、前記改変ヘテロ二量体ＣＨ３ドメインは、
野生型ＣＨ３ドメインポリペプチドと比較して、アミノ酸改変をそれぞれ独立に含有する、第一ＣＨ３ドメインポリペプチドおよび第二ＣＨ３ドメインポリペプチドであって、前記アミノ酸改変がホモ二量体ＣＨ３ドメインと比較してヘテロ二量体ＣＨ３ドメインの形成を促進する、第一ＣＨ３ドメインポリペプチドおよび第二ＣＨ３ドメインポリペプチドを含有し、
ここで、前記第一および第二ＣＨ３ドメインポリペプチドのうち少なくとも一つは、アミノ酸改変Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３５０Ｉ、Ｔ３５０ＬまたはＴ３５０Ｍをさらに含有し、
ここで、前記改変ヘテロ二量体ＣＨ3ドメインは少なくとも約７４℃の融解温度（Ｔｍ）および少なくとも９５％の純度を有し、かつ
ここで、アミノ酸残基の付番はＫａｂａｔに記載されているＥＵインデックスによる、
単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項４】
Ｔ３５０Ｖ改変を少なくとも１つ含有する、請求項１または３に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項５】
前記第一および第二ＣＨ3ドメインポリペプチドの各々がアミノ酸改変Ｔ３５０Ｖを含有する、請求項１または３に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項６】
前記改変ヘテロ二量体ＣＨ３ドメインが、約７５℃もしくはそれ以上、約７７℃もしくはそれ以上、または約８０℃もしくはそれ以上の融解温度（Ｔｍ）を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項７】
少なくとも１つのＣＨ３ドメインポリペプチドが、Ｌ３５１、Ｔ３６６、Ｆ４０５およびＹ４０７のうちの少なくとも一つのアミノ酸改変を含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項８】
前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドが、Ｌ３５１、Ｆ４０５およびＹ４０７の位置でアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドが、Ｔ３６６、Ｋ３９２およびＴ３９４の位置でアミノ酸改変を含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項９】
（ａ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＬ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｂ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＬ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｃ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＬ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３６６Ｉ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；または
（ｄ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＬ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３６６Ｉ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有する、
請求項８に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項１０】
前記第一および第二ＣＨ３ドメインポリペプチドの少なくとも一つがＳ４００Ｚ改変を含有し、Ｚが陽荷電アミノ酸および陰荷電アミノ酸から選択される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項１１】
前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドが、Ｓ４００ＥおよびＳ４００Ｒから選択されるアミノ酸改変を含有する、請求項１０に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項１２】
前記第一および第二ＣＨ３ドメインポリペプチドの少なくとも一つがＮ３９０Ｚ改変を含有し、Ｚが陽荷電アミノ酸および陰荷電アミノ酸から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項１３】
前記第二ＣＨ３ドメインが、Ｎ３９０Ｒアミノ酸改変を含有する、請求項１２に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項１４】
前記第一および第二ＣＨ３ドメインポリペプチドの一方がＱ３４７Ｒのアミノ酸改変を含有し、他方のＣＨ３ドメインポリペプチドがＫ３６０Ｅのアミノ酸改変を含有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項１５】
アミノ酸改変Ｋ４０９Ｆ、Ｔ４１１ＥまたはＴ４１１Ｄのうち少なくとも一つを含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項１６】
アミノ酸改変Ｄ３９９ＲまたはＤ３９９Ｋのうち少なくとも一つを含有する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項１７】
前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドが、Ｋ４０９Ｆ、Ｔ４１１ＥおよびＴ４１１Ｄから選択されるアミノ酸改変を少なくとも一つ含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドが、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｉ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９ＲおよびＤ３９９Ｋから選択されるアミノ酸改変を少なくとも一つ含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項１８】
前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドが、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ａ、Ｔ３６６Ｍ、またはＴ３６６Ｌのアミノ酸改変のうち一つを含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドが、Ｌ３５１Ｙのアミノ酸改変を含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項１９】
前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドが、Ｋ３９２Ｌのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドが、Ｓ４００ＲまたはＳ４００Ｖのアミノ酸改変のうち一つを含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項２０】
（ａ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｂ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｃ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｄ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｒ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｅ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｆ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５ＶおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｇ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５ＴおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｈ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５ＳおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｉ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｊ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｋ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＱ３４７Ｒ、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｌ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｒ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｄ、Ｋ３９２ＭおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｍ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｒ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｅ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；
（ｎ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｒ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有するか；または
（ｏ）前記第一ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ３ドメインポリペプチドがＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２ＦおよびＴ３９４Ｗのアミノ酸改変を含有する、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項２１】
Ｇ型イムノグロブリン（ＩｇＧ）に基づく、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項２２】
前記ＩｇＧが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のうちの一つである、請求項２１に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項２３】
イムノグロブリンＭ（ＩｇＭ）、イムノグロブリンＡ（ＩｇＡ）、イムノグロブリンＤ（ＩｇＤ）またはイムノグロブリンＥ（ＩｇＥ）に基づく、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項２４】
二重特異性抗体または多重特異性抗体である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項２５】
癌抗原に結合する抗原結合ドメインを少なくとも1つ含有する、請求項１〜２４のいずれか１項記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項２６】
治療用抗体由来の抗原結合ドメインを少なくとも一つ含有する、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項２７】
前記少なくとも１つの治療用抗体が、アバゴボマブ、アダリムマブ、アレムツズマブ、アウログラブ、バピネオズマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ブリアキヌマブ、カナキヌマブ、カツマキソマブ、セルトリズマブペゴール、セツキシマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、エファリズマブ、ガリキシマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゴリムマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、インフリキシマブ、イピリムマブ、ルミリキシマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、ムロモナブ、ミコグラブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、ラニビズマブ、レスリズマブ、リツキシマブ、テプリズマブ、トシリズマブ／アトリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、プロキシニウム（Ｐｒｏｘｉｎｉｕｍ）（商標）、レンカレックス（Ｒｅｎｃａｒｅｘ）（商標）、ウステキヌマブ、およびザルツムマブからなる群から選択される、請求項２６に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項２８】
第一抗原結合ドメインおよび第二抗原結合ドメインを含み、ここで、
（ａ）前記第一および第二抗原結合ドメインが同じ治療用抗体に由来するか、または
（ｂ）前記第一および第二抗原結合ドメインが異なる治療用抗体に由来する、
請求項２６または２７に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項２９】
治療薬に結合されている、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項３０】
請求項１〜２９のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物および薬学的に受容可能な担体を含む、組成物。
【請求項３１】
それを必要とする患者において疾患、障害、または感染を治療するために使用するための、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項３２】
前記疾患、障害、または感染が、癌または免疫疾患である、請求項３１に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
【請求項３３】
請求項１〜２８のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物をコードする１種または複数種のポリヌクレオチドを含有する、核酸組成物。
【請求項３４】
前記１種または複数種のポリヌクレオチドが、１種または複数種の発現ベクターによって含有されている、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
請求項１〜２８のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物をコードする１種または複数種のポリヌクレオチドを含有する、発現ベクター。
【請求項３６】
請求項３３もしくは３４に記載の核酸組成物、または請求項３５に記載の発現ベクターを含有する、宿主細胞。
【請求項３７】
以下の段階を含む、哺乳動物細胞において請求項１〜２８のいずれか１項に記載の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物を発現させる方法：
（ａ）請求項３３もしくは３４に記載の核酸組成物、または請求項３５に記載の発現ベクターを少なくとも１つの哺乳動物細胞にトランスフェクトし、少なくとも１つの一時的または安定にトランスフェクトされた哺乳動物細胞を作製する段階、および
（ｂ）前記少なくとも１つの一時的または安定にトランスフェクトされた哺乳動物細胞を、単離ヘテロ多量体構築物を発現させるのに適した条件下で培養する段階。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるヘテロ多量体構築物で用いられる改変Ｆｃ領域は、Ｇ型イムノグロブリン、たとえばクラス２イムノグロブリン（ＩｇＧ２）またはクラス３イムノグロブリン（ＩｇＧ３）と定義されるイムノグロブリンを含有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヘテロ多量体構築物に用いられる改変Ｆｃ領域は、イムノグロブリンＭ（またはＩｇＭ）を含有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヘテロ多量体構築物に用いられる改変Ｆｃ領域は、イムノグロブリンＡ（またはＩｇＡ）を含有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヘテロ多量体構築物に用いられる改変Ｆｃ領域は、イムノグロブリンＤ（またはＩｇＤ）を含有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヘテロ多量体構築物に用いられる改変Ｆｃ領域は、イムノグロブリンＥ（またはＩｇＥ）を含有する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるヘテロ多量体構築物に用いられる改変Ｆｃ領域は、全種類のイムノグロブリンＧアイソタイプ、たとえば、クラス１イムノグロブリン（ＩｇＧ１）、クラス２イムノグロブリン（ＩｇＧ２）、クラス３イムノグロブリン（ＩｇＧ３）またはクラス４イムノグロブリン（ＩｇＧ４）と定義されるイムノグロブリンを含有する。
[本発明1001]
改変ヘテロ二量体ＣＨ3ドメインを含有する単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物であって、前記改変ＣＨ3ドメインは、
野生型ＣＨ3ドメインポリペプチドと比較して、少なくとも3つのアミノ酸改変を含有する第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチド、および、野生型ＣＨ3ドメインポリペプチドと比較して、少なくとも3つのアミノ酸改変を含有する第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドを含有し、
ここで、前記第一および第二ＣＨ3ドメインポリペプチドのうち少なくとも一つは、Ｋ392Ｊのアミノ酸改変を含有し、ここで、Ｊは、Ｌ、Ｉまたは側鎖体積が、Ｋの側鎖体積よりも大幅に大きくないアミノ酸であり、
ここで、前記第一および第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドは、少なくとも約74℃の融解温度（Ｔｍ）および少なくとも95％の純度を有するヘテロ二量体ＣＨ3ドメインを優先的に形成し、および、
ここで、アミノ酸改変の少なくとも一つは、前記第一および前記第二ＣＨ3ドメインポリペプチドの間の境界面にあるアミノ酸のものではない、単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1002]
Ｔ350Ｘ改変を少なくとも1つ含有し、ここで、Ｘは、バリン、イソロイシン、メチオニンおよびそれらの誘導体または変異体から選択される、天然または非天然アミノ酸である、本発明1001の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1003]
Ｔ350Ｖ改変を少なくとも1つ含有する、本発明1001の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1004]
前記改変ＣＨ3ドメインが、少なくとも約75℃またはそれ以上の融解温度（Ｔｍ）を有する、本発明1001〜1003のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1005]
前記改変ＣＨ3ドメインが約77℃またはそれ以上のＴｍを有する、本発明1004の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1006]
前記改変ＣＨ3ドメインが約80℃またはそれ以上のＴｍを有する、本発明1004〜1005のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1007]
少なくとも1つのＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｌ351，Ｆ405およびＹ407のうちの少なくとも一つのアミノ酸改変を含有する改変ＣＨ3ドメインポリペプチドである、本発明1001〜1006のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1008]
少なくとも1つのＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｔ366のアミノ酸改変を含有する改変ＣＨ3ドメインポリペプチドである、本発明1001〜1007のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1009]
前記第一ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｌ351、Ｆ405およびＹ407の位置でアミノ酸改変を含有する改変ＣＨ3ドメインポリペプチドであり、前記第二ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｔ366、Ｋ392およびＴ394の位置でアミノ酸改変を含有する改変ＣＨ3ドメインポリペプチドである、本発明1001〜1008のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1010]
前記第一ＣＨ3ドメインポリペプチドがＬ351Ｙ、Ｆ405Ａ、およびＹ407Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ3ドメインポリペプチドがＴ366Ｌ、Ｋ392ＭおよびＴ394Ｗのアミノ酸改変を含有する、本発明1009の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1011]
前記第一ＣＨ3ドメインポリペプチドがＬ351Ｙ、Ｆ405Ａ、およびＹ407Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ3ドメインポリペプチドがＴ366Ｌ、Ｋ392ＬおよびＴ394Ｗのアミノ酸改変を含有する、本発明1009の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1012]
前記第一ＣＨ3ドメインポリペプチドがＬ351Ｙ、Ｆ405Ａ、およびＹ407Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ3ドメインポリペプチドがＴ366Ｉ、Ｋ392ＭおよびＴ394Ｗのアミノ酸改変を含有する、本発明1009の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1013]
前記第一ＣＨ3ドメインポリペプチドがＬ351Ｙ、Ｆ405Ａ、およびＹ407Ｖのアミノ酸改変を含有し、前記第二ＣＨ3ドメインポリペプチドがＴ366Ｉ、Ｋ392ＬおよびＴ394Ｗのアミノ酸改変を含有する、本発明1009の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1014]
前記第一および第二ＣＨ3ドメインポリペプチドのうち少なくとも1つが、Ｓ400の位置でアミノ酸改変を含有する改変ＣＨ3ドメインポリペプチドである、本発明1001〜1011のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1015]
Ｓ400Ｚ改変を含有し、Ｚが陽荷電アミノ酸および陰荷電アミノ酸から選択される、本発明1012の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1016]
前記第一ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｓ400ＥおよびＳ400Ｒから選択されるアミノ酸改変を含有する、本発明1001〜1013のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1017]
前記第一および第二ＣＨ3ドメインポリペプチドのうち少なくとも1つが、Ｎ390の位置でアミノ酸改変を含有する改変ＣＨ3ドメインポリペプチドである、本発明1001〜1011のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1018]
Ｎ390Ｚ改変を含有し、Ｚが陽荷電アミノ酸および陰荷電アミノ酸から選択される、本発明1015の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1019]
前記第二ＣＨ3ドメインが、Ｎ390Ｒアミノ酸改変を含有する、本発明1001〜1016のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1020]
前記第一ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｓ400Ｅのアミノ酸改変を含有する改変ＣＨ3ドメインポリペプチドであり、前記第二ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｎ390Ｒのアミノ酸改変を含有する改変ＣＨ3ドメインポリペプチドである、本発明1001〜1017のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1021]
前記第一および第二ＣＨ3ドメインポリペプチドのそれぞれが、改変ＣＨ3ドメインポリペプチドであり、前記改変ＣＨ3ドメインポリペプチドの一つはＱ347Ｒのアミノ酸改変を含有し、他方の改変ＣＨ3ドメインポリペプチドがＫ360Ｅのアミノ酸改変を含有する、本発明1001〜1018のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1022]
少なくとも一つのＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｋ409およびＴ411のうちの少なくとも一つのアミノ酸改変を含有する改変ＣＨ3ドメインである、本発明1001〜1004のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1023]
Ｋ409Ｆ、Ｔ411ＥおよびＴ411Ｄのうち少なくとも一つを含有する、本発明1022の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1024]
少なくとも一つのＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｄ399のアミノ酸改変を含有する改変ＣＨ3ドメインポリペプチドである、本発明1001〜1023のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1025]
Ｄ399ＲおよびＤ399Ｋのうち少なくとも一つを含有する、本発明1024の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1026]
前記第一ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｋ409Ｆ、Ｔ411ＥおよびＴ411Ｄから選択されるアミノ酸改変を少なくとも一つ含有する改変ＣＨ3ドメインポリペプチドであり、前記第二ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｙ407Ａ、Ｙ407Ｉ、Ｙ407Ｖ、Ｄ399ＲおよびＤ399Ｋから選択されるアミノ酸改変を少なくとも一つ含有する改変ＣＨ3ドメインポリペプチドである、本発明1001〜1025のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1027]
第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｔ366Ｖ、Ｔ366Ｉ、Ｔ366Ａ、Ｔ366ＭおよびＴ366Ｌのアミノ酸改変のうち一つを含有し、第二改変ＣＨ3ドメインが、Ｌ351Ｙのアミノ酸改変を含有する、本発明1001〜1026のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1028]
第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｋ392ＬまたはＫ392Ｅのアミノ酸改変のうち一つを含有し、第二改変ＣＨ3ドメインが、Ｓ400ＲまたはＳ400Ｖのアミノ酸改変のうち一つを含有する、本発明1001〜1027のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1029]
第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドおよび第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドを含有する改変ＣＨ3ドメインを含有する単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物であって、各改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが少なくとも4つのアミノ酸変異を含有し、
ここで、前記第一および第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドのうち少なくとも一つは、Ｎ390ＺおよびＳ400Ｚから選択される変異を含有し、ここで、Ｚは、陽荷電アミノ酸および陰荷電アミノ酸から選択され、および、
前記第一および第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドは、少なくとも約70℃の融解温度（Ｔｍ）および少なくとも90％の純度を有するヘテロ二量体ＣＨ3ドメインを選択的に形成する、単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1030]
第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドおよび第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドを含有する改変ＣＨ3ドメインを含有する単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物であって、各改変ＣＨ3ドメインポリペプチドは、少なくとも3つのアミノ酸変異を含有し、
ここで、前記第一および前記第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドはＴ411ＥおよびＴ411Ｄから選択される変異を含有し、
ここで、前記第一および第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドは、少なくとも約70℃の融解温度（Ｔｍ）および少なくとも90％の純度を有するヘテロ二量体ＣＨ3ドメインを選択的に形成する、単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1031]
前記第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｆ405およびＹ407の位置でアミノ酸改変を含有し、前記第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｔ394の位置でアミノ酸改変を含有する、本発明1029〜1030のいずれかの単離ヘテロ多量体。
[本発明1032]
前記第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｌ351の位置でアミノ酸改変を含有する、本発明1031の単離ヘテロ多量体。
[本発明1033]
前記第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドがＴ366位およびＫ392位のうちの少なくとも一つの改変を含有する、本発明1031の単離ヘテロ多量体。
[本発明1034]
前記改変ＣＨ3ドメインが、少なくとも約75℃の融解温度（Ｔｍ）を有し、少なくとも約95％の純度で形成される、本発明1029〜1034のいずれかの単離ヘテロ多量体。
[本発明1035]
少なくとも一つの改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｎ390Ｒ、Ｓ400ＥおよびＳ400Ｒのうちの少なくとも一つのアミノ酸改変を含有する、本発明1029〜1034のいずれかの単離ヘテロ多量体。
[本発明1036]
前記第一および第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドのうち一つが、347位のアミノ酸改変を含有し、他方の改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、360位にアミノ酸改変を含有する、本発明1029〜1035のいずれかの単離ヘテロ多量体。
[本発明1037]
前記第一および第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドのうち少なくとも一つが、Ｔ350Ｖのアミノ酸改変を含有する、本発明1029〜1036のいずれかの単離ヘテロ多量体。
[本発明1038]
前記第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｌ351Ｙ、Ｆ405ＡおよびＹ407Ｖから選択されるアミノ酸改変を少なくとも1つを含有し、前記第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｔ366Ｌ、Ｔ366Ｉ、Ｋ392Ｌ、Ｋ392ＭおよびＴ394Ｗから選択されるアミノ酸改変を少なくとも一つ含有する、本発明1029〜1037のいずれかの単離ヘテロ多量体。
[本発明1039]
前記第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｄ399位およびＹ407位でアミノ酸改変を含有し、第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドがＫ409位およびＴ411位でアミノ酸改変を含有する、本発明1029〜1030のいずれかの単離ヘテロ多量体。
[本発明1040]
前記第一ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｌ351位でアミノ酸改変を含有し、前記第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｔ366位およびＫ392位でアミノ酸改変を含有する、本発明1039の単離ヘテロ多量体。
[本発明1041]
前記第一および第二ＣＨ3ドメインポリペプチドのうち少なくとも一つが、Ｔ350Ｖのアミノ酸改変を含有する、本発明1040の単離ヘテロ多量体。
[本発明1042]
前記改変ＣＨ3ドメインが、少なくとも約75℃またはそれ以上の融解温度（Ｔｍ）を有し、少なくとも約95％の純度で形成される、本発明1039〜1041のいずれかの単離ヘテロ多量体。
[本発明1043]
前記第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｌ351Ｙ、Ｄ399Ｒ、Ｄ399Ｋ、Ｓ400Ｄ、Ｓ400Ｅ、Ｓ400Ｒ、Ｓ400Ｋ、Ｙ407ＡおよびＹ407Ｖから選択されるアミノ酸改変を含有し、前記第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドが、Ｔ366Ｖ、Ｔ366Ｉ、Ｔ366Ｌ、Ｔ366Ｍ、Ｎ390Ｄ、Ｎ390Ｅ、Ｋ392Ｌ、Ｋ392Ｉ、Ｋ392Ｄ、Ｋ392Ｅ、Ｋ409Ｆ、Ｋ409Ｗ、Ｔ411ＤおよびＴ411Ｅから選択されるアミノ酸改変を含有する、本発明1039の単離ヘテロ多量体。
[本発明1044]
Ｌ351Ｙ、Ｆ405ＡおよびＹ407Ｖのアミノ酸改変を含有する第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドを含有し、および、Ｔ366Ｉ、Ｋ392ＭおよびＴ394Ｗのアミノ酸改変を含有する第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドを含有する、改変ＣＨ3ドメインを含有する単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1045]
Ｌ351Ｙ、Ｆ405ＡおよびＹ407Ｖのアミノ酸改変を含有する第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドを含有し、および、Ｔ366Ｉ、Ｋ392ＬおよびＴ394Ｗのアミノ酸改変を含有する第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドを含有する、改変ＣＨ3ドメインを含有する単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1046]
Ｌ351Ｙ、Ｆ405ＡおよびＹ407Ｖのアミノ酸改変を含有する第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドを含有し、および、Ｔ366Ｌ、Ｋ392ＭおよびＴ394Ｗのアミノ酸改変を含有する第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドを含有する、改変ＣＨ3ドメインを含有する単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1047]
Ｌ351Ｙ、Ｆ405ＡおよびＹ407Ｖのアミノ酸改変を含有する第一改変ＣＨ3ドメインポリペプチドを含有し、および、Ｔ366Ｌ、Ｋ392ＬおよびＴ394Ｗのアミノ酸改変を含有する第二改変ＣＨ3ドメインポリペプチドを含有する、改変ＣＨ3ドメインを含有する単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1048]
Ｇ型イムノグロブリン（ＩｇＧ）に基づく改変Ｆｃ領域を含有する、本発明1001〜1047のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1049]
前記ＩｇＧが、ＩｇＧ2およびＩｇＧ3のうちの一つである、本発明1048の単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1050]
イムノグロブリンＭ（ＩｇＭ）に基づく改変Ｆｃ領域を含有する、本発明1001〜1047のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1051]
イムノグロブリンＡ（ＩｇＡ）に基づく改変Ｆｃ領域を含有する、本発明1001〜1047のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1052]
イムノグロブリンＤ（ＩｇＤ）に基づく改変Ｆｃ領域を含有する、本発明1001〜1047のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1053]
イムノグロブリンＥ（ＩｇＥ）に基づく改変Ｆｃ領域を含有する、本発明1001〜1047のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1054]
前記ヘテロ多量体が、二重特異性抗体である、本発明1001〜1049のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1055]
前記ヘテロ多量体が、多特異性抗体である、本発明1001〜1049のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1056]
本発明1001〜1055のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物、および薬学的に受容可能な担体を含有する組成物。
[本発明1057]
本発明1001〜1055のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物をコードする核酸を含有する、哺乳類宿主細胞。
[本発明1058]
治療用抗体を少なくとも一つ含有する、本発明1001〜1055のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1059]
前記ヘテロ多量体が、アバゴボマブ、アダリムマブ、アレムツズマブ、アウログラブ、バピネオズマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ブリアキヌマブ、カナキヌマブ、カツマキソマブ、セルトリズマブペゴール、セツキシマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、エファリズマブ、ガリキシマブ、ゲムツズマブ、オゾガミシン、ゴリムマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、インフリキシマブ、イピリムマブ、ルミリキシマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、ムロモナブ、ミコグラブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、ラニビズマブ、レスリズマブ、リツキシマブ、テプリズマブ、トシリズマブ／アトリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、プロキシニウム（Ｐｒｏｘｉｎｉｕｍ）（商標）、レンカレックス（Ｒｅｎｃａｒｅｘ）（商標）、ウステキヌマブ、およびザルツムマブからなる群から選択される治療用抗体を少なくとも一つ含有している、本発明1001〜1055のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物。
[本発明1060]
癌抗原により特徴付けられる癌を有する患者における癌の治療方法であって、前記方法が、前記患者に、本発明1001〜1059のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物の治療有効量を投与することを含む、方法。
[本発明1061]
免疫抗原により特徴付けられる免疫疾患を有する患者における免疫疾患の治療方法であって、前記方法が、前記患者に、本発明1001〜1059のいずれかの単離ヘテロ多量体Ｆｃ構築物の治療有効量を投与することを含む、方法。