【手続補正書】
【提出日】平成27年7月10日(2015.7.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの伸長組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）に融合された第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドを含有する組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質であって、ここで、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドは、Ａ１ドメイン、Ａ２ドメイン、Ａ３ドメイン、ａ３ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｃ２ドメインおよび、任意選択的に、Ｂドメインまたはその一部を含有する、組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項２】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、前記Ａ１ドメイン、前記Ａ２ドメイン、前記Ａ３ドメイン、前記ａ３ドメイン、前記Ｂドメインもしくはその一部、前記Ｃ１ドメイン、または前記Ｃ２ドメインから選択される、少なくとも１つのドメイン内に挿入されており、または、前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＣ末端に融合されている、請求項１に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項３】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、前記Ｂドメインまたはその一部に挿入されている、または、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＣ末端に融合されている、または、その両方である、請求項１に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項４】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、前記Ａ１ドメイン、前記Ａ２ドメイン、前記Ａ３ドメイン、前記ａ３ドメイン、またはそれらの任意の組合せに挿入されている、請求項１に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項５】
前記Ａ１ドメインは、許容ループ１（Ａ１−１）領域および許容ループ２（Ａ１−２）領域を含有し、ここで、前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、Ａ１−１、Ａ１−２、またはその両方に挿入されている、請求項２または４に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項６】
前記Ａ２ドメインは、許容ループ１（Ａ２−１）領域および許容ループ２（Ａ２−２）領域を含有し、ここで、前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、Ａ２−１、Ａ２−２、またはその両方に挿入されている、請求項２または４に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項７】
前記Ａ３ドメインは、許容ループ１（Ａ３−１）領域および許容ループ２（Ａ３−２）領域を含有し、ここで、前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、Ａ３−１、Ａ３−２、またはその両方に挿入されている、請求項２または４に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項８】
前記許容ループ１（Ａ１−１）領域は、配列番号２のアミノ酸約１５〜アミノ酸約４５、またはアミノ酸約１８〜アミノ酸約３２の、天然成熟型ヒトＦＶＩＩＩの領域に相当し、および、ここで、前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、Ａ１−１に挿入されている、請求項５に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項９】
前記許容ループ２（Ａ１−２）領域は、配列番号２のアミノ酸約２０１〜アミノ酸約２３２、またはアミノ酸約２１１〜アミノ酸約２２４の天然成熟型ヒトＦＶＩＩＩの領域に相当し、および、ここで、前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、Ａ１−２に挿入されている、請求項５に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項１０】
前記許容ループ１（Ａ２−１）領域は、配列番号２のアミノ酸約３９５〜アミノ酸約４２１、またはアミノ酸約３９７〜アミノ酸約４１８の天然成熟型ヒトＦＶＩＩＩの領域に相当し、および、ここで、前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、Ａ２−１に挿入されている、請求項６に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項１１】
前記許容ループ２（Ａ２−２）領域は、配列番号２のアミノ酸約５７７〜アミノ酸約６３５、またはアミノ酸約５９５〜アミノ酸約６０７の天然成熟型ヒトＦＶＩＩＩの領域に相当し、および、ここで、前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、Ａ２−２に挿入されている、請求項６に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項１２】
前記許容ループ１（Ａ３−１）領域は、配列番号２のアミノ酸約１７０５〜アミノ酸約１７３２、またはアミノ酸約１７１１〜アミノ酸約１７２５の天然成熟型ヒトＦＶＩＩＩの領域に相当し、および、ここで、前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、Ａ３−１に挿入されている、請求項７に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項１３】
前記許容ループ２（Ａ３−２）領域は、配列番号２のアミノ酸約１８８４〜アミノ酸約１９１７、またはアミノ酸約１９００〜アミノ酸約１９１２の天然成熟型ヒトＦＶＩＩＩの領域に相当し、および、ここで、前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、Ａ３−２に挿入されている、請求項７に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項１４】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、配列番号２のアミノ酸１７、配列番号２のアミノ酸１８、配列番号２のアミノ酸２２、配列番号２のアミノ酸２４、配列番号２のアミノ酸２６、配列番号２のアミノ酸２８、配列番号２のアミノ酸３２、配列番号２のアミノ酸３８、配列番号２のアミノ酸４０、および、配列番号２のアミノ酸４１、から選択される成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当するアミノ酸のすぐ下流でＡ１−１に挿入される、請求項５または８に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項１５】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、配列番号２のアミノ酸２０５、配列番号２のアミノ酸２１０、配列番号２のアミノ酸２１１、配列番号２のアミノ酸２１６、配列番号２のアミノ酸２２０、配列番号２のアミノ酸２２２、配列番号２のアミノ酸２２３、配列番号２のアミノ酸２２４、および、配列番号２のアミノ酸２３０、から選択される成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当するアミノ酸のすぐ下流でＡ１−２に挿入される、請求項５または９に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項１６】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、配列番号２のアミノ酸３９９、配列番号２のアミノ酸４０３、配列番号２のアミノ酸４０５、配列番号２のアミノ酸４０９、および、配列番号２のアミノ酸４１６、から選択される成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当するアミノ酸のすぐ下流でＡ２−１に挿入される、請求項６または１０に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項１７】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、配列番号２のアミノ酸５９８、配列番号２のアミノ酸５９９、配列番号２のアミノ酸６０３、および、配列番号２のアミノ酸６１６、から選択される成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当するアミノ酸のすぐ下流でＡ２−２に挿入される、請求項６または１１に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項１８】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、配列番号２のアミノ酸１７１１、配列番号２のアミノ酸１７１３、配列番号２のアミノ酸１７２０、配列番号２のアミノ酸１７２４、配列番号２のアミノ酸１７２５、および、配列番号２のアミノ酸１７２６、から選択される成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当するアミノ酸のすぐ下流でＡ３−１に挿入される、請求項７または１２に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項１９】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、配列番号２のアミノ酸１８９６、配列番号２のアミノ酸１９００、配列番号２のアミノ酸１９０４、配列番号２のアミノ酸１９０５、および、配列番号２のアミノ酸１９１０、から選択される成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当するアミノ酸のすぐ下流でＡ３−２に挿入される、請求項７または１３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項２０】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、配列番号２のアミノ酸１６５６の成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当するアミノ酸のすぐ下流でａ３に挿入される、請求項１または２に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項２１】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、前記Ｂドメインに挿入される、請求項１または２に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項２２】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、配列番号２のアミノ酸７４０または７４５の成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当するアミノ酸のすぐ下流に挿入される、請求項２１に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項２３】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、前記Ｃ１またはＣ２ドメインに挿入される、請求項１または２に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項２４】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、配列番号２の２０２０、配列番号２のアミノ酸２０４４、配列番号２のアミノ酸２０６８、配列番号２のアミノ酸２０７３、配列番号２のアミノ酸２０９０、配列番号２のアミノ酸２０９２、配列番号２のアミノ酸２０９３、配列番号２のアミノ酸２１１１、配列番号２のアミノ酸２１１５、配列番号２のアミノ酸２１２０、配列番号２のアミノ酸２１２５、配列番号２のアミノ酸２１７１、配列番号２のアミノ酸２１７３、配列番号２のアミノ酸２１８８、配列番号２のアミノ酸２２２３、配列番号２のアミノ酸２２２４、配列番号２のアミノ酸２２２７、配列番号２のアミノ酸２２６８、配列番号２のアミノ酸２２７７、配列番号２のアミノ酸２２７８、および、配列番号２のアミノ酸２２９０、からなる群から選択される、成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当するアミノ酸のすぐ下流に挿入される、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項２５】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、配列番号２のアミノ酸１８、配列番号２のアミノ酸２２、配列番号２のアミノ酸２６、配列番号２のアミノ酸２８、配列番号２のアミノ酸３２、配列番号２のアミノ酸４０、配列番号２のアミノ酸２１１、配列番号２のアミノ酸２１６、配列番号２のアミノ酸２２０、配列番号２のアミノ酸２２４、配列番号２のアミノ酸３３３、配列番号２のアミノ酸３３６、配列番号２のアミノ酸３３９、配列番号２のアミノ酸３９９、配列番号２のアミノ酸４０３、配列番号２のアミノ酸４０９、および、配列番号２のアミノ酸４１６、配列番号２のアミノ酸５９９、配列番号２のアミノ酸６０３、配列番号２のアミノ酸１７１１、配列番号２のアミノ酸１７２０、配列番号２のアミノ酸１７９６、配列番号２のアミノ酸１８０２、配列番号２のアミノ酸１９００、配列番号２のアミノ酸１９０４、配列番号２のアミノ酸１９０５、および、配列番号２のアミノ酸１９１０、配列番号２のアミノ酸１６５６、配列番号２のアミノ酸２０６８、配列番号２のアミノ酸２１７１、配列番号２のアミノ酸２２２７、および、配列番号２のアミノ酸２２７７、からなる群から選択される、成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当するアミノ酸のすぐ下流に挿入される、請求項１に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項２６】
少なくとも２つのＸＴＥＮを含有する、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項２７】
前記少なくとも２つのＸＴＥＮは、配列番号２のアミノ酸１８、配列番号２のアミノ酸２６、配列番号２のアミノ酸４０、配列番号２のアミノ酸３９９、配列番号２のアミノ酸４０３、配列番号２のアミノ酸５９９、配列番号２のアミノ酸７４５、配列番号２のアミノ酸１６５６、配列番号２のアミノ酸１７１１、配列番号２のアミノ酸１７２０、配列番号２のアミノ酸１７２５、配列番号２のアミノ酸１９００および、配列番号２のアミノ酸１９０５、配列番号２のアミノ酸２３３２からなる群から選択される、成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当する１または２のアミノ酸のすぐ下流に挿入または融合される、請求項２６に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項２８】
前記少なくとも２つのＸＴＥＮは、以下からなる群から選択される、成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当するアミノ酸のすぐ下流に挿入または融合される、請求項２７に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質：
（ｉ）        配列番号２のアミノ酸７４５、および、２３３２
（ｉｉ）      配列番号２のアミノ酸１６５６、および、２３３２
（ｉｉｉ）    配列番号２のアミノ酸２６、および、４０３
（ｉｖ）      配列番号２のアミノ酸４０、および、４０３
（ｖ）        配列番号２のアミノ酸１８、および、４０３
（ｖｉ）      配列番号２のアミノ酸２６、および、５９９
（ｖｉｉ）    配列番号２のアミノ酸４０、および、５９９
（ｖｉｉｉ）  配列番号２のアミノ酸１８、および、５９９
（ｉｘ）      配列番号２のアミノ酸１８、および、１６５６
（ｘ）        配列番号２のアミノ酸２６、および、１６５６
（ｘｉ）      配列番号２のアミノ酸４０、および、１６５６
（ｘｉｉ）    配列番号２のアミノ酸４０３、および、１６５６
（ｘｉｉｉ）  配列番号２のアミノ酸１６５６、および、１７２０
（ｘｉｖ）    配列番号２のアミノ酸４０、および、３９９
（ｘｖ）      配列番号２のアミノ酸２６、および、１９００
（ｘｖｉ）    配列番号２のアミノ酸１８、および、３９９
（ｘｖｉｉ）  配列番号２のアミノ酸４０、および、３９９、ならびに、
（ｘｖｉｉｉ）  配列番号２のアミノ酸１６５６、および、１９００。
【請求項２９】
少なくとも３つのＸＴＥＮ、少なくとも４つのＸＴＥＮ、少なくとも５つのＸＴＥＮ、または、少なくとも６つのＸＴＥＮ、を含有する、請求項１または２に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項３０】
ｉ．前記少なくとも３つのＸＴＥＮが、配列番号２のアミノ酸１８、配列番号２のアミノ酸２６、配列番号２のアミノ酸４０、配列番号２のアミノ酸３９９、配列番号２のアミノ酸４０３、配列番号２のアミノ酸５９９、配列番号２のアミノ酸７４５、配列番号２のアミノ酸１６５６、配列番号２のアミノ酸１７１１、配列番号２のアミノ酸１７２０、配列番号２のアミノ酸１７２５、配列番号２のアミノ酸１９００、配列番号２のアミノ酸１９０５、配列番号２のアミノ酸１９１０、および、配列番号２のアミノ酸２３３２、から選択される、成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当する１以上のアミノ酸のすぐ下流に挿入または融合されるか、
ｉｉ．前記少なくとも４つのＸＴＥＮが、配列番号２のアミノ酸１８、配列番号２のアミノ酸２６、配列番号２のアミノ酸４０、配列番号２のアミノ酸４０３、配列番号２のアミノ酸４０９、配列番号２のアミノ酸７４５、配列番号２のアミノ酸１６５６、配列番号２のアミノ酸１７２０、配列番号２のアミノ酸１９００、配列番号２のアミノ酸１９０５、配列番号２のアミノ酸１９１０、および、配列番号２のアミノ酸２３３２、から選択される、成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当する１以上のアミノ酸のすぐ下流に挿入または融合されるか、または、
ｉｉｉ．前記少なくとも５つのＸＴＥＮが、配列番号２のアミノ酸１８、配列番号２のアミノ酸４０３、配列番号２のアミノ酸７４５、配列番号２のアミノ酸１６５６、配列番号２のアミノ酸１７２０、配列番号２のアミノ酸１９００、および、配列番号２のアミノ酸２３３２、から選択される、成熟型天然ヒト第ＶＩＩＩ因子中のアミノ酸に相当する１以上のアミノ酸のすぐ下流に挿入または融合される、
請求項２９に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項３１】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮが、少なくとも３６アミノ酸、少なくとも４２アミノ酸、少なくとも７２アミノ酸、少なくとも９６アミノ酸、少なくとも１４４または、少なくとも２８８アミノ酸を含有する、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項３２】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮが、少なくとも７２アミノ酸、少なくとも１４４または、少なくとも２８８アミノ酸を含有する、請求項３１に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項３３】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮが、１以上のＸＴＥＮ配列モチーフを含有し、ここで、前記１以上のＸＴＥＮ配列モチーフは、配列番号１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、および４８からなる群から選択される、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項３４】
前記１以上のＸＴＥＮ配列モチーフは、配列番号２３、２４、２５および２６からなる群から選択される、請求項３３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項３５】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、配列番号４９、５０、５１、５２、５７、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、７８、および、７９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含有する、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項３６】
前記少なくとも１つのＸＴＥＮは、配列番号２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、および、３５１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含有する、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項３７】
前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドは、天然型第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドを含有する、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項３８】
前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドは、部分的に欠失したＢドメイン、または、完全に欠失したＢドメインを含有する、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項３９】
前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドは、一本鎖第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドを含有し、ここで、配列番号２に対応するアミノ酸１６４８は、グリシンまたはアラニンである、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項４０】
少なくとも１つの異種ポリペプチドが、前記Ａ１ドメイン、前記Ａ２ドメイン、前記Ａ３ドメイン、前記Ｂドメイン、前記ａ３ドメイン、前記Ｃ１ドメイン、または前記Ｃ２ドメインに挿入され、または、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＣ末端に融合されている、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項４１】
前記少なくとも１つの異種ポリペプチドは、イムノグロブリンのＦｃ断片である、請求項４０に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項４２】
前記少なくとも１つの異種ポリペプチドは、アルブミンまたはその断片、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのＣ末端ペプチドのβサブユニット、ＨＡＰ配列、トランスフェリン、ＰＡＳポリペプチド、ポリグリシンリンカー、および、ポリセリンリンカーからなる群から選択される、請求項４０に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
【請求項４３】
請求項１〜４２のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質をコードする核酸。
【請求項４４】
配列番号５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６７６、６７８、６８０、６８２、６８４、６８６、６８８、６９０、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０、７３２、７３４、７３６、７３８、７４０、７４２、７４４、７４６、７４８、７５０、７５２、７５４、７５６、７５８、７６０、７６２、７６４、７６６、７６８、７７０、７７２、７７４、７７６、７７８、７８０、７８２、７８４、７８６、７８８、７９０、７９２、７９４、７９６、７９８、８００、８０２、８０４、８０６、８０８、８１０、８１２、８１４、８１６、８１８、８２０、８２２、８２４、８２６、８２８、８３０、８３２、８３４、８３６、８３８、８４０、８４２、８４４、８４６、８４８、８５０、８５２、８５４、８５６、８５８、８６０、８６２、８６４、８６６、８６８、８７０、８７２、８７４、８７６、８７８、８８０、８８２、８８４、８８６、８８８、８９０、８９２、８９４、８９６、８９８、９００、９０２、９０４、９０６、９０８、９１０、９１２、９１４、９１６、９１８、９２０、９２２、９２４、９２６、９２８、９３０、９３２、９３４、９３６、９３８、９４０、９４２、９４４、９４６、９４８、９５０、９５２、９５４、９５６、９５８、９６０、９６２、９６４、９６６、９６８、９７０、９７２、９７４、９７６、９７８、９８０、９８２、９８４、９８６、９８８、９９０、９９２、９９４、９９６、９９８、１０００、１００２、１００４、１００６、１００８、１０１０、１０１２、１０１４、１０１６、１０１８、１０２０、１０２２、１０２４、１０２６、１０２８、１０３０、１０３２、１０３４、１０３６、１０３８、１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、１０５２、１０５４、１０５６、１０５８、１０６０、１０６２、１０６４、１０６６、１０６８、１０７０、１０７２、１０７４、１０７６、１０７８、１０８０、１０８２、１０８４、１０８６、１０８８、１０９０、１０９２、１０９４、１０９６、１０９８、１１００、１１０２、１１０４、１１０６、１１０８、１１１０、１１１２、１１１４、１１１６、１１１８、１１２０、１１２２、１１２４、１１２６、１１２８、１１３０、１１３２、１１３４、１１３６、１１３８、１１４０、１１４２、１１４４、１１４６、１１４８、１１５０、１１５２、１１５４、１１５６、１１５８、１１６０、１１６２、１１６４、１１６６、１１６８、１１７０、１１７２、１１７４、１１７６、１１７８、１１８０、１１８２、１１８４、１１８６、１１８８、１１９０、１１９２、１１９４、１１９６、１１９８、１２００、１２０２、１２０４、１２０６、１２０８、１２１０、１２１２、１２１４、１２１６、１２１８、１２２０、１２２２、１２２４、１２２６、１２２８、１２３０、１２３２、１２３４、１２３６、１２３８、１２４０、１２４２、１２４４、１２４６、１２４８、１２５０、１２５２、１２５４、１２５６、１２５８、１２６０、１２６２、１２６４、１２６６、１２６８、１２７０、１２７２、１２７４、１２７６、１２７８、１２８０、１２８２、１２８４、１２８６、１２８８、１２９０、１２９２、１２９４、１２９６、１２９８、１３００、１３０２、１３０４、１３０６、１３０８、１３１０、１３１２、１３１４、１３１６、１３１８、１３２０、１３２２、１３２４、１３２６、１３２８、１３３０、１３３２、１３３４、１３３６、１３３８、１３４０、１３４２、１３４４、１３４６、１３４８、１３５０、１３５２、１３５４、１３５６、１３５８、１３６０、１３６２、１３６４、１３６６、１３６８、１３７０、１３７２、１３７４、１３７６、１３７８、１３８０、１３８２、１３８４、１３８６、１３８８、１３９０、１３９２、１３９４、１３９６、１３９８、１４００、１４０２、１４０４、１４０６、１４０８、１４１０、１４１２、１４１４、１４１６、１４１８、１４２０、１４２２、１４２４、１４２６、１４２８、１４３０、１４３２、１４３４、１４３６、１４３８、１４４０、１４４２、１４４４、１４４６、１４４８、１４５０、１４５２、１４５４、１４５６、１４５８、１４６０、１４６２、１４６４、１４６６、１４６８、１４７０、１４７２、１４７４、１４７６、１４７８、１４８０、１４８２、１４８４、１４８６、および、１４８８からなる群から選択される核酸配列に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％同一の核酸配列を含有する、請求項４３に記載の核酸。
【請求項４５】
請求項４３または４４に記載の核酸を含有するベクターまたはベクターセット。
【請求項４６】
プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、またはファージである、請求項４５に記載のベクターまたはベクターセット。
【請求項４７】
アデノウイルスベクター、またはバキュロウイルスベクター、または、自律複製ベクターである、請求項４５または４６に記載のベクターまたはベクターセット。
【請求項４８】
前記核酸は、プロモーター、リーダー配列、ターミネーター、またはエンハンサーに操作可能に連結されている、請求項４５〜４７のいずれか１項に記載のベクターまたはベクターセット。
【請求項４９】
請求項４５〜４８のいずれか１項に記載のベクターまたはベクターセットを含有する宿主細胞。
【請求項５０】
前記融合タンパク質は、ｉｎ  ｖｉｖｏで発現されることができ、および、凝固促進活性を有する、請求項４９に記載の宿主細胞。
【請求項５１】
請求項１〜４２のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質および、薬学的に受容可能な担体を含有する医薬組成物。
【請求項５２】
請求項４３もしくは４４に記載の核酸、請求項４５〜４８のいずれか１項に記載のベクターもしくはベクターセット、または、請求項４９もしくは５０に記載の宿主細胞、および、薬学的に受容可能な担体、を含有する医薬組成物。
【請求項５３】
適切な条件下で、請求項４９または５０に記載の宿主細胞を培地中で培養することを含有する、組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質を作製する方法。
【請求項５４】
前記培地から前記組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質を単離することをさらに含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
凝固障害を治療するための、請求項５１または５２に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
出血症状を治療するための、請求項５１または５２に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
血友病Ａを治療するための、請求項５１または５２に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質は、本明細書に開示される特性の１以上または任
意の組み合わせを示しうることが明確に企図される。
一つの実施形態において、本発明は例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドおよび、少なくとも第一の伸長組換えポリペプチド（ＸＴ
ＥＮ）を含有する組み換え第ＶＩＩＩ融合タンパク質であって、ここで、前記第ＶＩＩＩ
因子ポリペプチドは、ａ１酸性スペーサー領域を含有するＡ１ドメイン、ａ２酸性スペー
サー領域を含有するＡ２ドメイン、ａ３酸性スペーサー領域を含有するＡ３ドメイン、Ｃ
１ドメイン、Ｃ２ドメイン、および、任意選択的にＢドメインの一部またはすべてを含有
し、ならびに、前記第一ＸＴＥＮは、（ｉ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＣ末端で
；（ｉｉ）もしＢドメインの一部またはすべてが存在する場合には、前記第ＶＩＩＩ因子
ポリペプチドのＢドメインの内で；（ｉｉｉ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＡ１ド
メインの内で；（ｉｖ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＡ２ドメインの内で；（ｖ）
前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＡ３ドメインの内で；（ｖｉ）前記第ＶＩＩＩ因子ポ
リペプチドのＣ１ドメインの内で；（ｖｉｉ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＣ２ド
メインの内で；（ｖｉｉｉ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＮ末端で、（ｉｘ）前記
第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドの２つのドメインの間で、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド
に連結されており；ならびに、ここで、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ
因子と比較した場合、前記融合タンパク質は、（ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏの凝固アッセイに
おいて、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０
％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％または、５００％の凝固促進活性
を維持しているか、または、（ｂ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏの結合アッセイにおいて、抗第ＶＩ
ＩＩ因子抗体に対する減少した結合を示す、組み換え第ＶＩＩＩ融合タンパク質。
（項目２）
第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドおよび少なくとも第一の伸長組換えポリペプチド（ＸＴＥ
Ｎ）を含有する、項目１に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質であって、ここ
で、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドは、ａ１酸性スペーサー領域を含有するＡ１ドメイ
ン、ａ２酸性スペーサー領域を含有するＡ２ドメイン、ａ３酸性スペーサー領域を含有す
るＡ３ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、および、任意選択的にＢドメインの一部
またはすべてを含有し、ならびに、ここで、前記第一のＸＴＥＮは、（ｉ）前記第ＶＩＩ
Ｉ因子ポリペプチドのＣ末端で；（ｉｉ）もしＢドメインの一部またはすべてが存在する
場合には、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＢドメインの内で；（ｉｉｉ）前記第ＶＩ
ＩＩ因子ポリペプチドのＡ１ドメインの内で；（ｉｖ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド
のＡ２ドメインの内で；（ｖ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＡ３ドメインの内で；
（ｖｉ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＣ１ドメインの内で；（ｖｉｉ）前記第ＶＩ
ＩＩ因子ポリペプチドのＣ２ドメインの内で；または、（ｖｉｉｉ）前記第ＶＩＩＩ因子
ポリペプチドの２つのドメインの間で、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドに連結されてお
り；ならびに、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子と比較した場合、前
記融合タンパク質は、（ａ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏの凝固アッセイにおいて、少なくとも約１
０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、
２００％、３００％、４００％または、５００％の凝固促進活性を維持しており、および
、（ｂ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏの結合アッセイにおいて、抗第ＶＩＩＩ因子抗体に対する減少
した結合を示す、組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目３）
前記第一のＸＴＥＮが、表５、表６、表７、表８または表９から選択される挿入部位で
、前記第ＶＩＩＩポリペプチドに連結されている、項目１または２に記載の組換え第Ｖ
ＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目４）
第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドおよび少なくとも第一の伸長組換えポリペプチド（ＸＴＥ
Ｎ）を含有する組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質であって、ここで、前記第ＶＩＩＩ
因子ポリペプチドは、ａ１酸性スペーサー領域を含有するＡ１ドメイン、ａ２酸性スペー
サー領域を含有するＡ２ドメイン、ａ３酸性スペーサー領域を含有するＡ３ドメイン、Ｃ
１ドメイン、Ｃ２ドメイン、および、任意選択的にＢドメインの一部またはすべてを含有
し、ならびに、ここで、前記第一のＸＴＥＮは、表６および表７から選択される挿入部位
で、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドに連結されており、ならびに、ここで、前記融合タ
ンパク質は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ凝固アッセイにより計測した場合、ＸＴＥＮに連結されて
いない対応する第ＶＩＩＩ因子タンパク質と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３
０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００
％、４００％または、５００％の凝固促進活性を維持している、組み換え第ＶＩＩＩ因子
融合タンパク質。
（項目５）
前記第ＶＩＩＩポリペプチド因子は、表１の配列、図３に図示される配列、および図４
に図示される配列からなる群から選択される配列に対し、最適整列した場合に、少なくと
も約８０％の配列同一性、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、また
は少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または
少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少
なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有して
いる、項目１〜４のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目６）
前記第ＶＩＩＩ因子位ポリペプチドのＣ末端で前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドに連結
されている、または前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＢドメイン内で前記第ＶＩＩＩ因
子ポリペプチドに連結されている、または任意選択的に前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド
のＢドメインを置換する、少なくとも第二のＸＴＥＮを含有する、項目１〜５のいずれ
か１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目７）
前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＢドメイン内で前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドに
連結されている、または任意選択的に前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＢドメインを置
換する、少なくとも第二のＸＴＥＮを含有する、項目１〜５のいずれか１項に記載の組
換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目８）
前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドがヒト第ＶＩＩＩ因子のＢドメイン欠失変異体を含有
し、ここで、前記Ｂドメイン欠失は、図３に記述される全長ヒト第ＶＩＩＩ因子配列に準
拠して、アミノ酸残基番号約７４１〜約７５０での第一の位置から始まり、アミノ酸残基
番号約１６３５〜約１６４８での第二の位置で終わる、項目１〜７のいずれか１項に記
載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目９）
前記第一のＸＴＥＮ配列が、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＣ末端で前記第ＶＩＩ
Ｉ因子ポリペプチドに連結されており、そして、第二のＸＴＥＮが、前記第ＶＩＩＩ因子
ポリペプチドのＢドメイン内で前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドに連結されており、ここ
で、前記第二のＸＴＥＮは、図３に記述される全長ヒト第ＶＩＩＩ因子配列に準拠して、
アミノ酸残基番号約７４１〜約７５０のＣ末端に連結されており、そして、アミノ酸残基
番号約１６３５〜約１６４８のＮ末端に連結されており、ここで、すべてのＸＴＥＮの累
積的な長さは、少なくとも約８４アミノ酸残基である、項目６〜８のいずれか１項に記
載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目１０）
前記融合タンパク質は、最適整列した場合に、表２１の配列からなる群から選択される
同等の長さの配列と比較して、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、または
少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少
なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少な
くとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％〜少なくとも約
１００％の配列同一性を有している、項目１〜９のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩ
ＩＩ因子融合タンパク質。
（項目１１）
少なくとも第二のＸＴＥＮ、任意選択的に第三のＸＴＥＮ、任意選択的に第四のＸＴＥ
Ｎ、任意選択的に第五のＸＴＥＮ、および任意選択的に第六のＸＴＥＮを含有し、ここで
、第二、第三、第四、第五、または第六のＸＴＥＮのそれぞれは、前記第ＶＩＩＩ因子ポ
リペプチドに、以下からなる群から選択される第二、第三、第四、第五、または第六の部
位で連結されている、項目１〜１０のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合
タンパク質：
（ａ）表５、表６、表７、表８および表９由来の挿入部位；
（ｂ）図３に記述される全長ヒト第ＶＩＩＩ因子配列に準拠して、アミノ酸残基番号３２
、２２０、２２４、３３６、３３９、３９０、３９９、４１６、６０３、１６５６、１７
１１、１７２５、１９０５または１９１０の６アミノ酸以内の挿入部位；
（ｃ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドの任意の２つの隣接するドメインの間の挿入部位
であって、ここで、前記２つの隣接するドメインは、Ａ１およびＡ２ドメイン、Ａ２およ
びＢドメイン、ＢおよびＡ３ドメイン、Ａ３およびＣ１ドメイン、ならびに、Ｃ１および
Ｃ２ドメインからなる群から選択される、挿入部位；
（ｄ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＢドメイン内であって、ここで、前記第二ＸＴ
ＥＮは、図３に記述される全長ヒト第ＶＩＩＩ因子配列に準拠して、アミノ酸残基番号約
７４１〜７５０のＣ末端およびアミノ酸残基番号約１６３５〜約１６４８のＮ末端に連結
されている；
（ｅ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＣ末端；および、
（ｆ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＮ末端。
（項目１２）
前記第一のＸＴＥは、少なくとも１０アミノ酸、少なくとも５０アミノ酸、少なくとも
１００アミノ酸、少なくとも２００アミノ酸、少なくとも３００アミノ酸、または少なく
とも４００アミノ酸で、第二のＸＴＥＮから分離されている、項目１１に記載の組換え
第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目１３）
対象に投与された場合に、前記融合タンパク質が、少なくとも約３時間、または少なく
とも約４時間、または少なくとも約６時間、または少なくとも約１２時間、または少なく
とも約１３時間、または少なくとも約１４時間、または少なくとも約１６時間、または少
なくとも約２４時間、または少なくとも約４８時間、または少なくとも約７２時間、また
は少なくとも約９６時間、または少なくとも約１２０時間、または少なくとも約１４４時
間、または少なくとも約７日、または少なくとも約１４日、または少なくとも約２１日の
終末相半減期を示し、ここで、前記対象は、ヒトおよび第ＶＩＩＩ因子／ｖｏｎ  Ｗｉｌ
ｌｅｂｒａｎｄ因子二重欠損マウスから選択される、項目１〜１２のいずれか１項に記
載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目１４）
表４、表１３、表１４、表１５、表１６および表１７の配列からなる群から選択される
、同等の長さのＸＴＥＮと比較して、各ＸＴＥＮが、最適整列した場合に、少なくとも約
８０％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９
２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５
％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％
、または少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有する、項目１〜１３
のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目１５）
前記融合タンパク質が、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子ポリペプ
チドと比較して、抗第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド抗体への前記融合タンパク質の減少した
結合、および増加した凝固促進活性を示す、項目１〜１４のいずれか１項に記載の組換
え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質
（項目１６）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏの凝固アッセイにより凝固促進活性が分析される場合、前ＸＴＥＮに
連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドと比較して、記融合タンパク質が
、抗ＦＶＩＩＩ抗体の存在下で、少なくとも３０％、４０％、５０％、８０％、１００％
、２００％、３００％、４００％、または５００％大きい凝固促進活性を有している、請
求項１５に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目１７）
表１０の抗体および第ＶＩＩＩ因子阻害物質を有する血友病Ａ患者由来のポリクローナ
ル抗体からなる群から選択される、抗第ＶＩＩＩ因子抗体を用いたＢｅｔｈｅｓｄａアッ
セイを用いて、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドと比較
して、抗第ＶＩＩＩ因子抗体への融合タンパク質の減少した結合が測定される、項目１
５に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目１８）
抗第ＶＩＩＩ因子抗体に対する減少した結合、および、前記維持された融合タンパク質
の凝固促進活性が、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子ポリぺプチドに
対するそれと比較して、融合タンパク質に対する、少なくとも約２、４、６、８、１０、
１２、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、１００または、２００Ｂｅｔ
ｈｅｓｄａ単位のより低いＢｅｔｈｅｓｄａ価により立証される、項目１７に記載の組
換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目１９）
少なくとも１つの伸長組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）を含有する組換え第ＶＩＩＩ因
子融合タンパク質であって、前記融合タンパク質が、以下の式ＩＸ：（Ａ１Ｎ）−（Ｓ）
ａ−（ＸＴＥＮ）ｔ−（Ｓ）ｂ−（Ａ１Ｃ）−（Ａ２  Ｎ）−（Ｓ）ｃ−（ＸＴＥＮ）ｕ
−（Ｓ）ｄ−（Ａ２Ｃ）−（ＢＮ）−（Ｓ）ｅ−（ＸＴＥＮ）ｖ−（Ｓ）ｆ−（ＢＣ）−
（Ａ３Ｎ）−（Ｓ）ｇ−（ＸＴＥＮ）ｗ−（Ｓ）ｈ−（Ａ３Ｃ）−（Ｃ１Ｎ）−（Ｓ）ｉ
−（ＸＴＥＮ）ｘ−（Ｓ）ｊ−（Ｃ１Ｃ）−（Ｃ２Ｎ）−（Ｓ）ｋ−（ＸＴＥＮ）ｙ−（
Ｓ）ｌ−（Ｃ２Ｃ）−（Ｓ）ｍ−（ＸＴＥＮ）ｚ                  ＩＸ、
の構造を有し、ここで、各出現に対し、独立して、
ａ）Ａ１Ｎは、図３に記述される全長ヒト第ＶＩＩＩ因子配列に準拠して、少なくともア
ミノ酸残基番号１から、アミノ酸残基番号３７１を超えない範囲にある配列を有する、第
ＶＩＩＩ因子のＡ１ドメインの断片である；
ｂ）いかなるＡ１Ｎ断片の配列もＡ１Ｃ断片において重複していないという条件下で、Ａ
１Ｃは、少なくともアミノ酸残基番号２から、アミノ酸残基番号３７２を超えない範囲に
ある配列を有する、第ＶＩＩＩ因子のＡ１ドメインの断片である；
ｃ）Ａ２Ｎは、少なくともアミノ酸残基番号３７３から、アミノ酸残基番号７３９を超え
ない範囲にある配列を有する、第ＶＩＩＩ因子のＡ２ドメインの断片である；
ｄ）いかなるＡ２Ｎ断片の配列もＡ２Ｃ断片において重複していないという条件下で、Ａ
２Ｃは、少なくともアミノ酸残基番号３７４から、アミノ酸残基番号７４０を超えない範
囲にある配列を有する、第ＶＩＩＩ因子のＡ２ドメインの断片である；
ｅ）ＢＮは、少なくともアミノ酸残基番号７４１から、アミノ酸残基番号１６４７を超え
ない範囲にある配列を有する、第ＶＩＩＩ因子のＢドメインの断片である；
ｆ）いかなるＢＮ断片の配列もＢＣ断片において重複していないという条件下で、ＢＣは
、少なくともアミノ酸残基番号７４２から、アミノ酸残基番号１６４８を超えない範囲に
ある配列を有する、第ＶＩＩＩ因子のＢドメインの断片である；
ｇ）Ａ３Ｎは、少なくともアミノ酸残基番号１６４９から、アミノ酸残基番号２０１８を
超えない範囲にある配列を有する、第ＶＩＩＩ因子のＡ３ドメインの断片である；
ｈ）いかなるＡ３Ｎ断片の配列もＡ３Ｃ断片において重複していないという条件下で、Ａ
３Ｃは、少なくともアミノ酸残基番号１６５０から、アミノ酸残基番号２０１９を超えな
い範囲にある配列を有する、第ＶＩＩＩ因子のＡ３ドメインの断片である；
ｉ）Ｃ１Ｎは、少なくともアミノ酸残基番号２０２０から、アミノ酸残基番号２１７１を
超えない範囲にある配列を有する、第ＶＩＩＩ因子のＣ１ドメインの断片である；
ｊ）いかなるＣ１Ｎ断片の配列もＣ１Ｃ断片において重複していないという条件下で、Ｃ
１Ｃは、少なくともアミノ酸残基番号２０２１から、アミノ酸残基番号２１７２を超えな
い範囲にある配列を有する、第ＶＩＩＩ因子のＣ１ドメインの断片である；
ｋ）Ｃ２Ｎは、少なくともアミノ酸残基番号２１７３から、アミノ酸残基番号２３３１を
超えない範囲にある配列を有する、第ＶＩＩＩ因子のＣ２ドメインの断片である；
ｌ）いかなるＣ２Ｎ断片の配列もＣ２Ｃ断片において重複していないという条件下で、Ｃ
２Ｃは、少なくともアミノ酸残基番号２１７４から、アミノ酸残基番号２３３２を超えな
い範囲にある配列を有する、第ＶＩＩＩ因子のＣ２ドメインの断片である；
ｍ）Ｓは、任意選択的に開裂配列、または制限酵素部位と互換性のあるアミノ酸を含むこ
とができる、１〜約５０アミノ酸残基を有する、スペーサー配列である；
ｎ）ａは、０または１のいずれかである、
ｏ）ｂは、０または１のいずれかである、
ｐ）ｃは、０または１のいずれかである、
ｑ）ｄは、０または１のいずれかである、
ｒ）ｅは、０または１のいずれかである、
ｓ）ｆは、０または１のいずれかである、
ｔ）ｇは、０または１のいずれかである、
ｕ）ｈは、０または１のいずれかである、
ｖ）ｉは、０または１のいずれかである、
ｗ）ｊは、０または１のいずれかである、
ｘ）ｋは、０または１のいずれかである、
ｙ）ｌは、０または１のいずれかである、
ｚ）ｍは、０または１のいずれかである、
ａａ）ｔは、０または１のいずれかである、
ｂｂ）ｕは、０または１のいずれかである、
ｃｃ）ｖは、０または１のいずれかである、
ｄｄ）ｗは、０または１のいずれかである、
ｅｅ）ｘは、０または１のいずれかである、
ｆｆ）ｙは、０または１のいずれかである、
ｇｇ）ｚは、０または１のいずれかであるが、ｔ＋ｕ＋ｖ＋ｗ＋ｘ＋ｙ＋ｚ≧１であるこ
とを条件とする、
ｈｈ）各ＸＴＥＮは、独立して、伸長組換えタンパク質である；および、
ここで、前記融合タンパク質は、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子ポ
リペプチドの凝固促進活性の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、０％、６０
％、７０％、８０％、９０％または１００％を有しており、または、
ここで、前記融合タンパク質は、ＥＬＩＳＡまたはＢｅｔｈｅｓｄａアッセイであるｉｎ
ｖｉｔｒｏアッセイにより測定された場合、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第Ｖ
ＩＩＩ因子と比較して、抗第ＶＩＩＩ因子抗体への減少した結合を示す、
組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目２０）
ｚが１である、項目１９に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目２１）
ｖが１であり、ここで、（ＸＴＥＮ）Ｖ  が、図３に記述される全長ヒト第ＶＩＩＩ因
子配列に準拠して、アミノ酸残基番号約７４１〜約７５０のＣ末端およびアミノ酸残基番
号１６３５〜約１６４８のＮ末端に連結されている、項目１９に記載の組換え第ＶＩＩ
Ｉ因子融合タンパク質。
（項目２２）
ｔ、ｕ、ｖ、ｗ、ｘ、ｙおよびｚの総和が、２、３、４、５または６である、項目１
９に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目２３）
ｔ、ｕ、ｖ、ｗ、ｘ、ｙおよびｚの総和が２であり、および、ｖが１であり、および、
ｚが１である、項目２２に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目２４）
ｔ、ｕ、ｖ、ｗ、ｘ、ｙおよびｚの総和が３であり、ならびに、ｖおよびｚがそれぞれ
１であり、ならびに、ｔ、ｕ、ｗ、ｘまたはｙのうちの１つが１である、項目２２に記
載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目２５）
ｔ、ｕ、ｖ、ｗ、ｘ、ｙおよびｚの総和が４であり、ならびに、ｖおよびｗおよびｚが
それぞれ１であり、ならびに、ｔ、ｕ、ｘまたはｙのうちの１つが１である、項目２２
に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目２６）
すべてのＸＴＥＮの累積の長さが、約８４〜約３０００の間、または約１４４〜約２０
００の間、または約２８８〜約１０００アミノ酸残基である、項目１〜２５のいずれか
１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目２７）
最適整列した場合に、表４、表１３、表１４、表１５、表１６および表１７の配列から
なる群から選択される、同等の長さのＸＴＥＮと比較して、各ＸＴＥＮが、少なくとも約
８０％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９
２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５
％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％
、または少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有する、項目１９〜２
６のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目２８）
各ＸＴＥＮが、独立して、表５、表６、表７、表８、および表９から選択される挿入部
位で、前記融合タンパク質に連結されている、項目１９〜２７のいずれか１項に記載の
組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目２９）
ＸＴＥＮが、アミノ酸残基番号３２、２２０、２２４、３３６、３３９、３９９、４１
６、６０３、１６５６、１７１１、１７２５、１９０５および１９１０からなる群から選
択される、成熟天然型ヒト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸に対応する、アミノ酸のすぐ下流に
挿入される、項目１９〜２８のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパ
ク質。
（項目３０）
式Ｘ：（Ａ１）‐ａ１−（Ａ２）‐ａ２−［Ｂ］を含有する第一のポリペプチド；およ
び、式ＸＩ：ａ３−（Ａ３）‐（Ｃ１）‐（Ｃ２）を含有する第二のポリペプチド、を含
有する組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質であって；
ここで、前記第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドが融合している、またはヘテ
ロ二量体として存在しており；
ここで、ａ）Ａ１は、第ＶＩＩＩ因子のＡ１ドメインであり；ｂ）Ａ２は、第ＶＩＩＩ因
子のＡ２ドメインであり；ｃ）［Ｂ］は、第ＶＩＩＩ因子のＢドメイン、その断片、また
は欠失されており；ｄ）Ａ３は、第ＶＩＩＩ因子のＡ３ドメインであり；ｅ）Ｃ１は、第
ＶＩＩＩ因子のＣ１ドメインであり；ｆ）Ｃ２は、第ＶＩＩＩ因子のＣ２ドメインであり
；ｇ）ａ１、ａ２およびａ３は、酸性スペーサー領域であり；
ここで、前記Ａ１ドメインは、ＸＴＥＮ許容ループ−１（Ａ１−１）領域およびＸＴＥＮ
許容ループ−２（Ａ１−２）を含有し；
ここで、前記Ａ２ドメインは、ＸＴＥＮ許容ループ−１（Ａ２−１）領域およびＸＴＥＮ
許容ループ−２（Ａ２−２）を含有し；
ここで、前記Ａ３ドメインは、ＸＴＥＮ許容ループ−１（Ａ３−１）領域およびＸＴＥＮ
許容ループ−２（Ａ３−２）を含有し；
ここで、ＸＴＥＮ配列が、Ａ１−１、Ａ１−２、Ａ２−１、Ａ２−２、Ａ３−１またはＡ
３−２領域のうちの少なくとも１つへ挿入され；および、
ここで、前記組換え第ＶＩＩＩ因子タンパク質は、凝固促進活性を示す、組換え第ＶＩＩ
Ｉ因子融合タンパク質。
（項目３１）
式Ｘ：（Ａ１）‐ａ１−（Ａ２）‐ａ２−［Ｂ］を含有する第一のポリペプチド；およ
び、式ＸＩ：ａ３−（Ａ３）‐（Ｃ１）‐（Ｃ２）を含有する第二のポリペプチド、を含
有する組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質であって；
ここで、前記第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドが融合している、またはヘテ
ロ二量体として存在しており；
ここで、ａ）Ａ１は、第ＶＩＩＩ因子のＡ１ドメインであり；ｂ）Ａ２は、第ＶＩＩＩ因
子のＡ２ドメインであり；ｃ）［Ｂ］は、第ＶＩＩＩ因子のＢドメイン、その断片、また
は、欠失されており、もしくは任意選択的に存在しておらず；ｄ）Ａ３は、第ＶＩＩＩ因
子のＡ３ドメインであり；ｅ）Ｃ１は、第ＶＩＩＩ因子のＣ１ドメインであり；ｆ）Ｃ２
は、第ＶＩＩＩ因子のＣ２ドメインであり；ｇ）ａ１、ａ２およびａ３は、酸性スペーサ
ー領域であり；
ここで、ＸＴＥＮが、ａ３に挿入されており；および、
ここで、前記融合タンパク質は凝固促進活性を示す、組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク
質。
（項目３２）
前記第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドが、式（Ａ１）‐ａ１‐（Ａ２）‐
ａ２‐［Ｂ］‐［ａ３］‐（Ａ３）‐（Ｃ１）‐（Ｃ２）を含有する単一ポリペプチド鎖
を形成する、項目３０または３１に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目３３）
前記ＸＴＥＮ許容ループが、表面に露出された、フレキシブルなループ構造内に包含さ
れ、および、ここで、ＤＳＳＰデータベースのアクセッション番号２Ｒ７Ｅとして保存さ
れている成熟第ＶＩＩＩ因子の二次構造に従い、Ａ１−１はβストランド１およびβスト
ランド２の間に位置し、ならびに、Ａ１−２はβストランド１１およびβストランド１２
の間に位置し、Ａ２−１はβストランド２２およびβストランド２３の間に位置し、Ａ２
−２はβストランド３２およびβストランド３３の間に位置し、Ａ３−１はβストランド
３８およびβストランド３９の間に位置し、Ａ３−４はβストランド４５およびβストラ
ンド４６の間に位置している、項目３０に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質
。
（項目３４）
Ａ１−１を含有する、前記表面に露出された、フレキシブルなループ構造が、天然型成
熟ヒト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸約１５〜アミノ酸約４５の領域に対応する、項目３３
に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目３５）
Ａ１−１が、天然型成熟ヒト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸約１８〜アミノ酸約４１におけ
る領域に対応する、項目３３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目３６）
Ａ１−２を含有する、表面に露出された、フレキシブルなループ構造が、天然型成熟ヒ
ト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸約２０１〜アミノ酸約２３２における領域に対応する、請求
項３３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目３７）
Ａ１−２が、天然型成熟ヒト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸約２１８〜アミノ酸約２２９に
おける領域に対応する、項目３３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目３８）
Ａ２−１を含有する、表面に露出された、フレキシブルなループ構造が、天然型成熟ヒ
ト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸約３９５〜アミノ酸約４２１における領域に対応する、請求
項３３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目３９）
Ａ２−１が、天然型成熟ヒト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸約３９７〜アミノ酸約４１８に
おける領域に対応する、項目３３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目４０）
Ａ２−２を含有する、表面に露出された、フレキシブルなループ構造が、天然型成熟ヒ
ト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸約５７７〜アミノ酸約６３５における領域に対応する、請求
項３３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目４１）
Ａ２−２が、天然型成熟ヒト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸約５９５〜アミノ酸約６０７に
おける領域に対応する、項目３３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目４２）
Ａ３−１を含有する、表面に露出された、フレキシブルなループ構造が、天然型成熟ヒ
ト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸約１７０５〜アミノ酸約１７３２における領域に対応する、
項目３３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目４３）
Ａ３−１が、天然型成熟ヒト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸約１７１１〜アミノ酸約１７２
５における領域に対応する、項目３３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目４４）
Ａ３−２を含有する、表面に露出された、フレキシブルなループ構造が、天然型成熟ヒ
ト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸約１８８４〜アミノ酸約１９１７における領域に対応する、
項目３３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目４５）
Ａ３−２が、天然型成熟ヒト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸約１８９９〜アミノ酸約１９１
１における領域に対応する、項目３３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目４６）
ＸＴＥＮが、Ａ１−１、Ａ１−２、Ａ２−１、Ａ２−２、Ａ３−１またはＡ３−２領域
の内の少なくとも２つに挿入されている、項目３０および項目３２〜４５のいずれか
１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目４７）
ＸＴＥＮが、アミノ酸残基番号３２、２２０、２２４、３９９、４１６、６０３、１７
１１、１７２５、１９０５および１９１０からなる群から選択される、成熟天然型ヒト第
ＶＩＩＩ因子のアミノ酸に対応する、アミノ酸のすぐ下流に挿入される、項目３０およ
び項目３２〜４６のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目４８）
追加のＸＴＥＮ配列が、ａ３酸性スペーサー領域に挿入される、項目３０および請求
項３２〜４７のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目４９）
前記追加のＸＴＥＮ配列が、成熟天然型ヒト第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸１６５６に対応
するアミノ酸のすぐ下流のａ３酸性スペーサーに挿入される、項目４８に記載の組換え
第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目５０）
前記Ａ１ドメインは、ＸＴＥＮ許容ループ−１（Ａ１−１）領域およびＸＴＥＮ許容ル
ープ−２（Ａ１−２）を含有し；
前記Ａ２ドメインは、ＸＴＥＮ許容ループ−１（Ａ２−１）領域およびＸＴＥＮ許容ル
ープ−２（Ａ２−２）を含有し；
前記Ａ３ドメインは、ＸＴＥＮ許容ループ−１（Ａ３−１）領域およびＸＴＥＮ許容ル
ープ−２（Ａ３−２）を含有し；
ここで、追加のＸＴＥＮ配列が、Ａ１−１、Ａ１−２、Ａ２−１、Ａ２−２、Ａ３−１
またはＡ３−２領域のうちの少なくとも１つへ挿入される、項目３１に記載の組換え第
ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目５１）
追加のＸＴＥは、アミノ酸残基番号３２、２２０、２２４、３３６、３３９、３９０、
３９９、４１６、６０３、１６５６、１７１１、１７２５、１９０５または１９１０から
なる群から選択される、成熟天然型ヒト第ＶＩＩＩ因子に対応するアミノ酸のすぐ下流に
挿入される、項目３１に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目５２）
前記融合タンパク質が、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子の凝固促
進活性の、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％
を示し、ここで、前記凝固促進活性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ凝固アッセイにより分析される
、項目１５〜５１のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目５３）
前記凝固促進活性は、発色分析、１段階凝固アッセイ、またはその両方により測定され
る、項目５２に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目５４）
前記融合タンパク質が、細胞培養培地中で発現され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ凝固アッセイに
より分析された場合、約０．５ＩＵ／ｍｌ、または約１．０、または約１．５、または約
２．０ＩＵ／ｍｌを超えるｉｎ  ｖｉｔｒｏ凝固促進活性を示す、項目１〜５３のいず
れか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目５５）
前記融合タンパク質が、対象に投与された場合に、少なくとも約３時間、または４時間
、または６時間、または１２時間、または１３時間、または１４時間、または１６時間、
または２４時間、または４８時間、または７２時間、または９６時間、または１２０時間
、または１４４時間、または７日、または１４日、または２１日の終末相半減期を示す、
項目３０〜５４のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目５６）
前記対象がヒトである、項目５５に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目５７）
前記対象が、ＶＩＩＩ／ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子二重欠損マウスである、請
求項５５に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目５８）
前記融合タンパク質が、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子と比較し
て、抗第ＶＩＩＩ因子抗体への減少した結合を示す、項目３０〜５７のいずれか１項に
記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目５９）
前記第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質が、表１０の抗体および第ＶＩＩＩ因子阻害物質を
有する血友病Ａ患者由来のポリクローナル抗体からなる群から選択される、抗第ＶＩＩＩ
因子抗体を用いたＢｅｔｈｅｓｄａアッセイにおいて分析された場合に、ＸＴＥＮに連結
されていない第ＶＩＩＩ因子と比較して、少なくとも約２、４、６、８、１０、１２、１
５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、１００または２００Ｂｅｔｈｅｓｄａ
単位だけ低いＢｅｔｈｅｓｄａ価を有する、項目５８に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融
合タンパク質。
（項目６０）
第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドならびに、少なくとも第一および第二の伸長組換えポリペ
プチド（ＸＴＥＮ）を含有する組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質であって、ここで、
前記第一のＸＴＥＮは、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＣ２ドメイン内で前記第ＶＩ
ＩＩ因子ポリペプチドに連結され、前記第二のＸＴＥＮは、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプ
チドのＡ１またはＡ２ドメイン内で前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドに連結され；
ここで、（ａ）前記融合タンパク質は、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ
因子と比較して、Ａ１、Ａ２またはＣ２ドメイン内に位置するエピトープへ結合すること
ができる第ＶＩＩＩ因子阻害抗体である、抗第ＶＩＩＩ因子抗体への減少した結合を示し
；および／または、（ｂ）ここで、前記融合タンパク質は、凝固促進活性を示す、組換え
第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目６１）
前記第二のＸＴＥＮは、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＡ２ドメイン内で前記第Ｖ
ＩＩＩ因子ポリペプチドに連結されている、項目６０に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融
合タンパク質。
（項目６２）
前記抗第ＶＩＩＩ因子抗体は、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＡ２ドメインに結合
する、項目６０に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目６３）
前記抗第ＶＩＩＩ因子抗体は、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＣ２ドメインに結合
する、項目６０に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目６４）
前記組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質は、第三のＸＴＥＮをさらに含有し、ここで
、前記第三のＸＴＥＮは、Ｂドメイン内にある挿入部位、もしくはＢドメインを置換する
挿入部位で、またはＣ末端で、前記第ＶＩＩＩ因子に連結されている、項目６０に記載
の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目６５）
表７の部位からなる群から選択される挿入部位の１、２、３、４、５もしくは６アミノ
酸で、または、表７の部位からなる群から選択される挿入部位の１、２、３、４、５もし
くは６アミノ酸以内で、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド内に連結される、第三のＸＴＥ
Ｎを含有する項目６０に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目６６）
表９の部位からなる群から選択される挿入部位の１、２、３、４、５もしくは６アミノ
酸で、または、表９の部位からなる群から選択される挿入部位の１、２、３、４、５もし
くは６アミノ酸以内で、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド内に連結される、第三のＸＴＥ
Ｎを含有する項目６０に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目６７）
抗第ＶＩＩＩ因子抗体の、前記融合タンパク質への結合が、ＥＬＩＳＡアッセイにより
分析された場合に、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドと
比較して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％または
４０％だけ減少している、項目６０〜６６のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因
子融合タンパク質。
（項目６８）
前記抗第ＶＩＩＩ因子抗体が、表１０の抗体および第ＶＩＩＩ因子阻害物質を有する血
友病Ａ患者由来のポリクローナル抗体からなる群から選択される、項目６０〜６７のい
ずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目６９）
前記融合タンパク質が、抗第ＶＩＩＩ因子抗体の存在下で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ凝固アッ
セイにより分析された場合に、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子と比
較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、８０％、１００％、２０
０％、３００％、４００％または５００％の凝固促進活性を維持している、項目６０〜
６８のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目７０）
前記分析が、発色分析である、項目６９に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク
質。
（項目７１）
各ＸＴＥＮが、以下の点で特徴付けられる配列を有する、項目１〜７０のいずれか１
項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質：
（ａ）前記ＸＴＥＮは、少なくとも３６アミノ酸残基を含有する；
（ｂ）グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、グルタミン
酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）の総和が、前記ＸＴＥＮの総アミノ酸残基の約８０％超を
占める；
（ｃ）実質的に非反復であり、（ｉ）前記ＸＴＥＮが、アミノ酸がセリンでない限り、同
一である３つの連続したアミノ酸を含有しない；（ｉｉ）ＸＴＥＮ配列の少なくとも約８
０％が、非重複配列モチーフから構成され、前記配列モチーフのそれぞれは、グリシン（
Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプ
ロリン（Ｐ）から選択される４〜６つのアミノ酸からなる、約９〜約１４アミノ酸残基を
含有し、ここで、任意の２つの連続するアミノ酸残基は、各配列モチーフ内で２回より多
くは存在しない；または（ｉｉｉ）前記ＸＴＥＮは、１０未満の部分配列スコアを有する
；
（ｄ）前記ＸＴＥＮは、ＧＯＲアルゴリズムによる決定で、９０％超のランダムコイル構
造を有している；
（ｅ）前記ＸＴＥＮは、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎアルゴリズムによる決定で、２％未満の
αヘリックスおよび２％未満のβシートを有している；および、
（ｆ）前記ＸＴＥＮは、ＴＥＰＩＴＯＰＥアルゴリズムにより分析された場合に、推定Ｔ
細胞エピトープを欠失しており、ここで、前記アルゴリズムによる前記推定に対する前記
ＴＥＰＩＴＯＰＥの閾値スコアは、−９の閾値を有している、。
（項目７２）
各ＸＴＥＮが、最適整列した場合に、独立して、表４、表１３、表１４、表１５、表１
６および表１７からなる群から選択される、同等の長さの１以上のＸＴＥＮ配列と比較し
て、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、また
は少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または
少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少
なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有する
、項目１〜７１のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目７３）
少なくとも１つのＸＴＥＮが、ＡＥ４２＿１、ＡＥ４２＿２、ＡＥ４２＿３、ＡＧ４２
＿１、ＡＧ４２＿２、ＡＧ４２＿３、ＡＧ４２＿４、ＡＥ１４４＿１Ａ、ＡＥ１４４＿２
Ａ、ＡＥ１４４＿２Ｂ、ＡＥ１４４＿３Ａ、ＡＥ１４４＿３Ｂ、ＡＥ１４４＿４Ａ、ＡＥ
１４４＿４Ｂ、ＡＥ１４４＿５Ａ、ＡＥ１４４＿６Ｂ、ＡＧ１４４＿１、ＡＧ１４４＿２
、ＡＧ１４４＿Ａ、ＡＧ１４４＿Ｂ、ＡＧ１４４＿Ｃ、ＡＧ１４４＿Ｆ、ＡＧ１４４＿３
、ＡＧ１４４＿４、ＡＥ２８８＿１、ＡＥ２８８＿２、ＡＧ２８８＿１およびＡＧ２８８
＿２から選択される配列と比較して、少なくとも９０％、または少なくとも約９１％、ま
たは少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、また
は少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または
少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有す
る、項目１〜７２のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目７４）
成熟ヒト第ＶＩＩＩ因子に対して付番された、残基Ｒ１６４５、Ｒ１６４８、Ｙ１６８
０、Ｒ１６８９およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される前記第ＶＩＩ
Ｉ因子配列中に、１、２または３のアミノ酸置換を含有し、ここで、各置換は独立して、
アラニン、グリシンまたはフェニルアラニンであるアミノ酸へのものである、項目１〜
７３のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目７５）
前記融合タンパク質が、少なくとも約１．３、または少なくとも約２、または少なくと
も約３、または少なくとも約４、または少なくとも約５、または少なくとも約６、または
少なくとも約７、または少なくとも約８、または少なくとも約９、または少なくとも約１
０の見かけ分子量係数を示す、項目１〜７４のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ
因子
（項目７６）
少なくとも１つのＸＴＥＮが、１または２の開裂配列（各々が、第ＸＩａ因子、第ＸＩ
Ｉａ因子、カリクレイン（ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ）、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸａ因子、第
Ｘａ因子、第ＩＩａ因子（トロンビン）、エラスターゼ−２、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ１３
、ＭＭＰ−１７およびＭＭＰ−２０からなる群から選択される哺乳類プロテアーゼにより
開裂可能である）を介して、第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドに連結され、ここで、前記哺乳
類プロテアーゼによる、前記開裂配列での開裂により、前記ＸＴＥＮから前記第ＶＩＩＩ
因子配列が放出され、ここで、前記放出された第ＶＩＩＩ因子配列は、非開裂の融合タン
パク質と比較して、凝固促進活性の増加を示す、項目１〜７５のいずれか１項に記載の
組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目７７）
前記開裂配列（複数含む）は、第ＸＩａ因子により開裂可能である、項目７６に記載
の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目７８）
少なくとも３つの独立したＸＴＥＮを含有する組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質で
あって、ここで、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドは、ａ１酸性スペーサー領域を含有す
るＡ１ドメイン、ａ２酸性スペーサー領域を含有するＡ２ドメイン、ａ３酸性スペーサー
領域を含有するＡ３ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、および、任意選択的にＢド
メインの一部またはすべてを含有し、および、ここで、前記少なくとも３つのＸＴＥＮの
それぞれは、第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドの異なる挿入部位で位置し、ここで、前記異な
る挿入部位のそれぞれは、独立して、以下からなる群から選択される、組換え第ＶＩＩＩ
因子融合タンパク質：
（ａ）表５、表６、表７、表８および表９由来の挿入部位；
（ｂ）図３に記述される全長ヒト第ＶＩＩＩ因子配列に準拠して、アミノ酸残基３２、２
２０、２２４、３３６、３３９、３９０、３９９、４１６、６０３、１６５６、１７１１
、１７２５、１９０５または１９１０の６アミノ酸以内の挿入部位；
（ｃ）前記第ＶＩＩＩ因子配列の任意の２つの隣接するドメインの間の挿入部位であって
、ここで、前記２つの隣接するドメインは、Ａ１およびＡ２、Ａ２およびＢ、ＢおよびＡ
３、Ａ３およびＣ１、ならびに、Ｃ１およびＣ２からなる群から選択される、挿入部位；
（ｄ）図３に記述される全長ヒト第ＶＩＩＩ因子配列に準拠して、アミノ酸残基番号約７
４１〜約７５０での第一の位置から始まり、アミノ酸残基番号約１６３５〜約１６４８で
の第二の位置で終わる、内部Ｂドメイン欠失を有する挿入部位；
（ｅ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＣ末端；
（ｆ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドのＮ末端；
（ｇ）前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドの２つの隣接するドメインの間；
ここで、前記すべてのＸＴＥＮの累積の長さは少なくとも約８４〜約３０００アミノ酸残
基である。
（項目７９）
前記融合タンパク質は、ＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰ（配列番号３１）、ＧＳＳＴＰＳＧ
ＡＴＧＳＰ（配列番号３２）、ＧＳＳＰＳＡＳＴＧＴＧＰ（配列番号３３）ＧＡＳＰＧＴ
ＳＳＴＧＳＰ（配列番号３４）および、ＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳ
ＧＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＴＥＰＳＥＧＳＡＰＧＳ
ＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰ
ＳＥＧＳＡＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＳ
ＡＰ（配列番号５９）から選択される配列を含有しない、項目７８に記載の組換え第Ｖ
ＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目８０）
前記融合タンパク質は、ＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＥＰ
ＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＴＥＰＳＥＧＳＡＰＧＳＥＰＡＴＳＧ
ＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＳＡＰ
ＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＳＡＰ（配列番
号５９）、ＰＧＳＳＰＳＡＳＴＧＴＧＰＧＳＳＰＳＡＳＴＧＴＧＰＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳ
ＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＳＳＰＳＡＳＴＧＴＧＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＴ
ＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰＧＡＳＰＧＴ
ＳＳＴＧＳＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳ（配列番号７１）、また
は、ＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰＧ
ＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＴＰＧＳ
ＧＴＡＳＳＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＳＳＰＳＡＳＴＧ
ＴＧＰＧＳＳＰＳＡＳＴＧＴＧＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰＧ
ＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＳＳＰＳＡＳＴＧＴＧＰＧＳＳＰＳＡＳＴＧＴＧＰＧＡＳＰＧ
ＴＳＳＴＧＳＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳＰＧＳＳＰＳＡＳＴＧ
ＴＧＰＧＡＳＰＧＴＳＳＴＧＳＰＧＳＳＰＳＡＳＴＧＴＧＰＧＴＰＧＳＧＴＡＳＳＳＰＧ
ＳＳＴＰＳＧＡＴＧＳ（配列番号８０）からなるＸＴＥＮ配列を含有しない、項目７８
または７９に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目８１）
前記融合タンパク質は、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子と比較し
て、少なくとも約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約
７０％、または約８０％、または約９０％の凝固促進活性を維持している、項目７８〜
８０のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目８２）
前記融合タンパク質は、前記ＸＴＥＮを欠落している対応する第ＶＩＩＩ因子ポリペプ
チドと比較して、対象に投与された場合に、延長された終末相半減期を示す、項目７８
〜８０のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目８３）
前記融合タンパク質は、対象に投与された場合に、少なくとも約３時間、または４時間
、または６時間、または１２時間、または１３時間、または１４時間、または１６時間、
または２４時間、または４８時間、または７２時間、または９６時間、または１２０時間
、または１４４時間、または７日、または１４日、または２１日の終末相半減期を示す、
項目８２に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目８４）
前記対象がヒトである、項目８３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目８５）
前記対象が、第ＶＩＩＩ因子／ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子二重欠損マウスであ
る、項目８３に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目８６）
第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドおよび少なくとも１つのＸＴＥＮを含有する組換え第ＶＩ
ＩＩ因子融合タンパク質であって、ここで、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドは、Ａ１ド
メイン、Ａ２ドメイン、Ａ３ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｃ２ドメインおよび、任意選択的
にＢドメインの一部またはすべてを含有し、ここで、前記少なくとも１つのＸＴＥＮ（複
数含む）のそれぞれは、前記第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドに、残基番号１８〜３２、また
は４０、または２１１〜２２４、または３３６〜４０３、または５９９、または７４５〜
１６４０、または１６５６〜１７２８、または１７９６〜１８０４、または１９００〜１
９１２、または２１７１〜２３３２から選択される挿入部位で、連結され、；および、こ
こで、前記融合タンパク質は、ＸＴＥＮに連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子と比
較して、少なくとも約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、また
は約７０％、または約８０％、または約９０％の凝固促進活性を有している、組換え第Ｖ
ＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目８７）
項目１〜８６のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質および薬
学的に受容可能な担体を含有する、医薬組成物。
（項目８８）
対象における凝固障害を治療する方法であって、前記対象に項目８７に記載の医薬組
成物の凝固有効量を含有する組成物を投与することを含む、方法。
（項目８９）
ＸＴＥＮが連結されていない対応する第ＶＩＩＩ因子を含有し、同等の投与量で対象に
投与される組成物と比較して、前記投与の後の凝固促進第ＶＩＩＩ因子の血液濃度がより
高いレベルに維持されている、項目８８に記載の方法。
（項目９０）
前記血液濃度が、前記投与後の少なくとも４８時間の間、約０．０５ＩＵ／ｍｌ、また
は約０．１ＩＵ／ｍｌ、または約１．５ＩＵ／ｍｌ以上に維持されている、項目８９に
記載の方法。
（項目９１）
項目８７に記載の医薬組成物の凝固有効量を、血液と接触させることを含む、対象に
おいて、血液を凝固させる方法。
（項目９２）
第ＶＩＩＩ因子の循環阻害物質を有する対象における、凝固障害を治療する方法であっ
て、前記対象に、項目８７に記載の医薬組成物の凝固有効量を投与することを含み、こ
こで、前記組成物は、ＸＴＥＮに連結されていない対照の第ＶＩＩＩを含有し、前記対象
に同等の量を用いて投与される組成物と比較して、前記対象においてより高い凝固促進活
性を示す、方法。
（項目９３）
対照における出血症状を治療する方法であって、項目８７に記載の医薬組成物の凝固
有効量を前記対象に投与することを含み、ここで、ＸＴＥＮに連結されておらず、および
前記対象に同等の量を用いて投与される対応する第ＶＩＩＩ因子と比較して、前記融合タ
ンパク質の前記凝固有効量により、少なくとも２倍、または少なくとも３倍長い期間、出
血症状が止められる、方法。
（項目９４）
前記凝固障害が、血友病Ａである、項目８８〜９３のいずれか１項に記載の方法。
（項目９５）
血友病Ａ患者の治療のための医薬レジメンにおける使用のための組換え第ＶＩＩＩ因子
融合タンパク質であって、前記レジメンは、項目１〜８６のいずれか１項に記載の前記
組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質を含有する医薬組成物を含有する、組換え第ＶＩＩ
Ｉ因子融合タンパク質。
（項目９６）
前記医薬レジメンに、前記血友病Ａ患者に止血をもたらすために必要とされる医薬組成
物の量を決定するステップがさらに含まれる、項目９５に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子
融合タンパク質。
（項目９７）
血友病Ａ患者の治療のための前記医薬レジメンに、前記対象に、２回以上の連続投与で
、医薬組成物を有効量で投与することが含まれる、項目９５の組換え第ＶＩＩＩ因子融
合タンパク質であって、ここで、ＸＴＥＮに連結されておらず、同等の投与量を用いて投
与される第ＶＩＩＩ因子と比較して、前記投与により、前記血友病Ａ疾患に関連する少な
くとも１、２または３つのパラメータの、少なくとも１０％、または２０％、または３０
％、または４０％、または５０％、または６０％、または７０％、または８０％、または
９０％大きい改善がもたらされる、組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目９８）
前記改善されるパラメータが、凝固促進第ＶＩＩＩ因子の血液濃度、減少した活性化部
分プロトンビン（ａＰＴＴ）アッセイ時間、減少した１段階または２段階凝固アッセイ時
間、出血症状の発生の遅延、減少した発色分析時間、減少した出血アッセイ時間、出血イ
ベントの消散、または天然ＦＶＩＩＩに対する減少したＢｅｔｈｅｓｄａ価、から選択さ
れる、項目９７に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目９９）
項目１〜８６のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質を含有す
る、血友病Ａの治療に用いられる組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目１００）
項目１〜８６のいずれか１項に記載の組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質、または
その相補物をコードする核酸。
（項目１０１）
シグナルペプチドをコードする配列をさらに含有する、項目１００に記載の核酸であ
って、前記配列は、以下である、核酸：
ＡＴＧＣＡＡＡＴＡＧＡＧＣＴＣＴＣＣＡＣＣＴＧＣＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＴＴＴ
ＴＧＣＧＡＴＴＣＴＧＣＴＴＴＡＧＴ（配列番号１６１３）またはその相補体。
（項目１０２）
項目１００または項目１０１に記載の核酸を含有する、発現ベクター。
（項目１０３）
項目１０２に記載の発現ベクターを含有する、単離された宿主細胞。
（項目１０４）
（ａ）項目１０２の発現ベクターを含有する宿主細胞を提供すること、
（ｂ）前記宿主細胞を、前記融合タンパク質の産生をもたらす条件下で培養すること、
および、
（ｃ）前記融合タンパク質を回収すること、
を含む、項目１〜８６のいずれか１項に記載の融合タンパク質を製造する方法。
（項目１０５）
最適整列した場合に、表２１から選択される同等の長さの配列と比較して、少なくとも
約８０％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約
９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９
５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８
％、または少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の配列同一性を有するポリ
ペプチドを含有する、組換え第ＶＩＩＩ因子融合タンパク質。
（項目１０６）
（ａ）最適整列した場合に、表２１から選択される同等の長さの配列と比較して、少な
くとも約８０％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なく
とも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくと
も約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも
約９８％、または少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の配列同一性を有す
る配列、または、
（ｂ）（ａ）のポリヌクレオチドの相補体、
から選択されるポリヌクレオチド配列を含有する単離された核酸。
（項目１０７）
（ａ）の核酸の５´末端に連結される、配列ＡＴＧＣＡＡＡＴＡＧＡＧＣＴＣＴＣＣＡ
ＣＣＴＧＣＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＴＴＴＴＧＣＧＡＴＴＣＴＧＣＴＴＴＡＧＴ、ま
たは、（ｂ）の３´末端に連結される配列の相補体、をさらに含有する、項目１０６に
記載の単離された核酸。