【手続補正書】
【提出日】平成27年9月1日(2015.9.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有するＧＶＨＤ非誘導の抗第三者細胞を含む単離された細胞集団を作製する方法であって、前記細胞は寛容性誘導細胞であり、かつ／または、抗疾患活性を備え、かつ、リンパ節へのホーミングを移植後に行うことができ、前記方法が、
（ａ）末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＩＬ−２１の存在下において第三者抗原（１つまたは複数）と接触させて、その結果、抗原反応性細胞の濃縮を可能にするようにすること、および、
（ｂ）工程（ａ）から生じる前記細胞を、抗原非存在の環境で、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７の存在下において培養して、その結果、前記セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む細胞の増殖を可能にするようにし、それにより、前記単離された細胞集団を作製すること
を含む方法。
【請求項２】
前記ＰＢＭＣに由来する非接着性細胞を工程（ａ）の前に枯渇化することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＰＢＭＣに由来するＣＤ４＋細胞および／またはＣＤ５６＋細胞を工程（ａ）の前に枯渇化することをさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＣＤ４５ＲＡ＋細胞および／またはＣＤ４５ＲＯ−細胞を工程（ａ）の前に前記ＰＢＭＣから選択することをさらに含む、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記ＰＢＭＣはＣＤ８＋Ｔ細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
工程（ａ）から生じる前記細胞を、工程（ａ）の後で、工程（ｂ）の前に、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７の存在下において第三者抗原（１つまたは複数）とともに培養することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記第三者抗原（１つまたは複数）は樹状細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記樹状細胞は、放射線照射された樹状細胞である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記第三者抗原（１つまたは複数）が、第三者細胞、細胞抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、タンパク質抽出物、自己の提示細胞によって、非自己の提示細胞によって、または、人工小胞もしくは人工抗原提示細胞に提示される精製されたタンパク質および合成されたペプチドからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有するＧＶＨＤ非誘導の抗第三者細胞を含む単離された細胞集団を作製する方法であって、前記細胞は寛容性誘導細胞であり、かつ／または、移植片対白血病（ＧＶＬ）活性を備え、かつ、リンパ節へのホーミングを移植後に行うことができ、前記方法が、
（ａ）非接着性の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＣＤ４＋細胞および／またはＣＤ５６＋細胞を枯渇化することができる作用因により処理して、その結果、ＣＤ８＋Ｔ細胞を得るようにすること、
（ｂ）前記ＣＤ８＋Ｔ細胞をＩＬ−２１の存在下において第三者樹状細胞と１２時間〜５日間接触させて、その結果、抗原反応性細胞の濃縮を可能にするようにすること、
（ｃ）工程（ｂ）から生じる前記細胞を、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７の存在下において前記第三者樹状細胞とともに１２時間〜３日間培養すること、および、
（ｄ）工程（ｃ）から生じる前記細胞を、抗原非存在の環境で、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７の存在下において５日間〜２０日間培養して、その結果、前記セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む細胞の増殖を可能にするようにし、それにより、前記単離された細胞集団を作製すること
を含む方法。
【請求項１１】
セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有するＧＶＨＤ非誘導の抗第三者細胞を含む単離された細胞集団を作製する方法であって、前記細胞は抗疾患活性を備え、かつ、リンパ節へのホーミングを移植後に行うことができ、前記方法は、
（ａ）非接着性の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＣＤ４＋細胞および／またはＣＤ５６＋細胞を枯渇化することができる作用因により処理して、その結果、ＣＤ８＋Ｔ細胞を得るようにすること、
（ｂ）前記ＣＤ８＋Ｔ細胞をＩＬ−２１の存在下において非同系樹状細胞と１２時間〜５日間接触させて、その結果、抗原反応性細胞の濃縮を可能にするようにすること、
（ｃ）工程（ｂ）から生じる前記細胞を、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７の存在下において前記非同系樹状細胞とともに１２時間〜３日間培養すること、および、
（ｄ）工程（ｃ）から生じる前記細胞を、抗原非存在の環境で、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７の存在下において５日間〜２０日間培養して、その結果、前記セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む細胞の増殖を可能にするようにし、それにより、前記単離された細胞集団を作製すること
を含む方法。
【請求項１２】
ＣＤ４５ＲＡ＋細胞および／またはＣＤ４５ＲＯ−細胞を、工程（ａ）の後で、工程（ｂ）の前に前記ＰＢＭＣから選択することをさらに含む、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＣＤ８＋Ｔ細胞はナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞を含む、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記樹状細胞は、インビトロ拡大培養された樹状細胞または放射線照射された樹状細胞を含む、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＩＬ−２１の存在下において接触させることが１２時間〜５日間行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＩＬ−２１の存在下において接触させることが２〜３日間行われる、請求項１，１０または１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＩＬ−２１の存在下において接触させることが３日間行われる、請求項１，１０または１１に記載の方法。
【請求項１８】
工程（ａ）の後で、工程（ｂ）の前に、活性化された細胞について選択することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
工程（ｂ）の後で、工程（ｃ）の前に、活性化された細胞について選択することをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項２０】
前記活性化された細胞について選択することが、ＣＤ１３７＋細胞および／またはＣＤ２５＋細胞を選択することによって行われる、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記活性化された細胞について選択することが、前記接触させることの１２時間後〜７２時間後に行われる、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７の存在下において前記第三者抗原（１つまたは複数）とともに培養することが１２時間〜３日間行われる、請求項６に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗原非存在の環境で、前記ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７の存在下において培養することが５日間〜２０日間行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗原非存在の環境で、前記ＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−７の存在下において培養することが７日間〜１１日間行われる、請求項１，１０または１１に記載の方法。
【請求項２５】
同種反応性細胞を工程（ｂ）の後で枯渇化することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
同種反応性細胞を工程（ｄ）の後で枯渇化することをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項２７】
前記同種反応性細胞を枯渇化することが、前記セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）を含む前記細胞を宿主の抗原提示細胞（ＡＰＣ）と接触させた後でＣＤ１３７＋細胞および／またはＣＤ２５＋細胞を枯渇化することによって行われる、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
Ｔセントラルメモリー表現型を有する前記抗第三者細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ４５ＲＯ＋のシグナチャーを含む、請求項１，１０または１１に記載の方法。
【請求項２９】
前記単離された細胞集団の少なくとも５０％がＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞であり、その少なくとも５０％が前記シグナチャーを有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有するＧＶＨＤ非誘導の抗第三者細胞を含む単離された細胞集団であって、前記細胞は寛容性誘導細胞であり、かつ／または、抗疾患活性を備え、かつ、リンパ節へのホーミングを移植後に行うことができ、請求項１〜２９に記載の方法に従って作製される、単離された細胞集団。
【請求項３１】
悪性疾患、ウイルス性疾患および自己免疫疾患からなる群から選択される疾患をその必要性のある対象において処置するために識別される医薬の製造のための、請求項３０に記載の単離された細胞集団の治療効果的な量の使用。
【請求項３２】
前記悪性疾患は白血病またはリンパ腫を含む、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
細胞移植または組織移植を必要としている対象を処置するために識別される医薬の製造のための、請求項３０に記載の単離された細胞集団の治療効果的な量の使用。
【請求項３４】
前記細胞移植片または組織移植片は、ＨＬＡ同一の同種ドナー、ＨＬＡ非同一の同種ドナー、同系ドナー、および、異種ドナーからなる群から選択されるドナーに由来する、請求項３３に記載の使用。
【請求項３５】
前記細胞移植片または組織移植片は未成熟造血細胞を含む、請求項３３に記載の使用。
【請求項３６】
前記細胞移植片または組織移植片が、肝臓、膵臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、皮膚、腸、および、リンパ系／造血系の組織または臓器からなる群から選択される、請求項３３に記載の使用。
【請求項３７】
前記細胞移植または組織移植は複数の臓器の同時移植を含む、請求項３３に記載の使用。
【請求項３８】
前記同時移植は、未成熟造血細胞および実質臓器を移植することを含む、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
前記未成熟造血細胞および前記実質臓器が、同じドナーから得られる、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
前記細胞移植片または組織移植片および前記単離された細胞集団は、同じドナーに由来する、請求項３３に記載の使用。
【請求項４１】
前記細胞移植片または組織移植片は前記対象と同系であり、かつ、前記単離された細胞集団は前記対象と非同系である、請求項３３に記載の使用。
【請求項４２】
前記細胞移植片または組織移植片は前記対象と同系であり、かつ、前記単離された細胞集団は前記対象と同系である、請求項３３に記載の使用。
【請求項４３】
未成熟造血細胞の移植を必要としている対象を処置するために識別される医薬の製造のための、請求項３０に記載の単離された細胞集団の治療効果的な量の使用。
【請求項４４】
前記未成熟造血細胞および前記単離された細胞集団は、同じドナーに由来する、請求項４３に記載の使用。
【請求項４５】
前記ドナーは前記対象と非同系である、請求項４４に記載の使用。
【請求項４６】
前記未成熟造血細胞および前記単離された細胞集団は、前記対象に由来する、請求項４３に記載の使用。
【請求項４７】
前記対象はヒト対象である、請求項３１，３３または４３に記載の使用。