【手続補正書】
【提出日】平成27年10月5日(2015.10.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イソプレンを産生することのできる組換え細胞であって、ホスホケトラーゼ活性を有するポリペプチドをコードしている１種以上の異種核酸と、（ｉ）完全なＭＶＡ経路の１種以上のポリペプチドをコードしている１種以上の核酸、及び（ｉｉ）イソプレンシンターゼポリペプチドをコードしている異種核酸と、を含み、好適な培地で前記組換え細胞を培養することにより、イソプレンの産生が得られる、組換え細胞。
【請求項２】
イソプレノイド前駆体を産生することのできる組換え細胞であって、ホスホケトラーゼ活性を有するポリペプチドをコードしている１種以上の異種核酸と、完全なＭＶＡ経路の１種以上のポリペプチドをコードしている１種以上の核酸とを含み、好適な培地で前記組換え細胞を培養することによりイソプレノイド前駆体の産生が得られる、組換え細胞。
【請求項３】
イソプレノイドを産生することのできる組換え細胞であって、ホスホケトラーゼ活性を有するポリペプチドをコードしている１種以上の異種核酸と、（ｉ）完全なＭＶＡ経路の１種以上のポリペプチドをコードしている１種以上の核酸及び（ｉｉ）ポリプレニルピロリン酸シンターゼポリペプチドをコードしている異種核酸とを含み、好適な培地で前記組換え細胞を培養することにより、イソプレノイドの産生が得られる、組換え細胞。
【請求項４】
ホスホケトラーゼ活性を有するポリペプチドをコードしている前記１種以上の異種核酸が、キシルロース５−リン酸からグリセルアルデヒド３−リン酸及びアセチルリン酸を合成することができる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５】
ホスホケトラーゼ活性を有するポリペプチドをコードしている前記１種以上の異種核酸が、フルクトース６−リン酸からエリスロース４−リン酸及びアセチルリン酸を合成することができる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項６】
ホスホケトラーゼ活性を有するポリペプチドをコードしている前記異種核酸が、ビフィドバクテリウム・ロングム（Bifidobacterium longum）、エンテロコッカス・ガリニアラム（Enterococcus galliniarum）、クロストリジウム・アセトブチリカム（Clostridium acetobutilicum）、ノストック・パンクチホルム（Nostoc punctiforme）、ロードシュードモナス・パルストリス（Rhodopseudomonas palustris）、パントエア（Pantoea）、ムチラギニバクター・パルジス（Mucilaginibacter paludis）、サーモビフィダ・フスカ（Thermobifida fusca）、ビフィドバクテリウム・ブレビ（Bifidobacterium breve）、ラーネラ・アクアティリス（Rahnella aquatili）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Bifidobacterium animalis）、ガードネレラ・バギナリス（Gardnerella vaginalis）、ストレプトマイセス・アベルミティリス（Streptomyces avermitilis）、ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantarum）、及びラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項７】
ホスホケトラーゼ活性を有するポリペプチドをコードしている前記異種核酸が、ビフィドバクテリウム・ロングム（Bifidobacterium longum）、エンテロコッカス・ガリニアラム（Enterococcus galliniarum）、及びクロストリジウム・アセトブチリカム（Clostridium acetobutilicum）からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項８】
イソプレンシンターゼポリペプチドをコードしている前記異種核酸が植物のイソプレンシンターゼポリペプチドである、請求項１に記載の細胞。
【請求項９】
前記イソプレンシンターゼポリペプチドが、クズ属（Pueraria）又はハコヤナギ属（Populus）、又はウラジロハコヤナギとヤマナラシの交雑種（Populus alba x Populus tremula）由来のポリペプチドである、請求項１に記載の細胞。
【請求項１０】
前記イソプレンシンターゼポリペプチドが、プエラリア・モンタナ（Pueraria montana）又はプエラリア・ロバタ（Pueraria lobata）、ヤマナラシ（Populus tremuloides）、ウラジロハコヤナギ（Populus alba）、ポプラ・ニグラ（Populus nigra）、及びポプラ・トリコカルパ（Populus trichocarpa）からなる群から選択される、請求項１に記載の細胞。
【請求項１１】
前記完全なＭＶＡ経路の１種以上のポリペプチドが、（ａ）２分子のアセチルＣｏＡを縮合させてアセトアセチルＣｏＡを生成する酵素；（ｂ）アセトアセチル−ＣｏＡをアセチル−ＣｏＡと縮合させてＨＭＧ−ＣｏＡを生成する酵素（例えば、ＨＭＧシンターゼ）；（ｃ）ＨＭＧ−ＣｏＡをメバロン酸に変換する酵素；（ｄ）メバロン酸をメバロン酸５−リン酸にリン酸化する酵素；（ｅ）メバロン酸５−リン酸を５−ジホスホメバロン酸に変換する酵素；及び（ｆ）５−ジホスホメバロン酸をイソペンテニルピロリン酸に変換する酵素から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１２】
前記組換え細胞が、１−デオキシ−Ｄ−キシルロース５−リン酸（ＤＸＰ）経路の１種以上のポリペプチドをコードしている１種以上の核酸を更に含む、請求項１１に記載の細胞。
【請求項１３】
前記１種以上の核酸が、誘導型プロモータ又は構成型プロモータ下に配置される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１４】
前記１種以上の核酸が、１つ以上の多コピープラスミドにクローニングされる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１５】
前記１種以上の核酸が、前記細胞の染色体に組み込まれる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１６】
前記組換え細胞が、グラム陽性菌細胞、グラム陰性菌細胞、真菌細胞、糸状菌細胞、藻類細胞、又は酵母細胞である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１７】
前記組換え細胞が、バチルス・スブチリス（Bacillus subtilis）、ストレプトマイセス・リビダンス（Streptomyces lividans）、ストレプトマイセス・セリカラー（Streptomyces coelicolor）、ストレプトマイセス・グリセウス（Streptomyces griseus）、大腸菌（Escherichia coli）、パントエア・シトレア（Pantoea citrea）、トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）、アスペルギルス・オリゼ（Aspergillus oryzae）、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）、サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisieae）、及びヤロウイア・リポリティカ（Yarrowia lipolytica）からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１８】
前記イソプレノイドが、モノテルペン、ジテルペン、トリテルペン、テトラテルペン、セスキテルペン（sequiterpene）及びポリテルペンからなる群から選択される、請求項３に記載の細胞。
【請求項１９】
前記イソプレノイドが、セスキテルペンである、請求項３に記載の細胞。
【請求項２０】
前記イソプレノイドが、アビエタジエン、アモルファジエン、カレン、α−ファルネセン（famesene）、β−ファルネセン、ファルネソール、ゲラニオール、ゲラニルゲラニオール、リナロール、リモネン、ミルセン、ネロリドール、オシメン、パチョロール、β−ピネン、サビネン、γ−テルピネン、テルピンデン（terpindene）及びバレンセンからなる群から選択される、請求項３に記載の細胞。
【請求項２１】
前記組換え細胞が、酢酸キナーゼ遺伝子の発現が減少するように又は酢酸キナーゼ遺伝子を欠失させるように、更に遺伝子操作されている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２２】
前記組換え細胞が、ホスホトランスアセチラーゼ遺伝子の活性が増加するように更に遺伝子操作されている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２３】
イソプレンの生産量が、ホスホケトラーゼ活性を有するポリペプチドをコードしている１種以上の異種核酸を含まない細胞と比較して、少なくとも５％又は少なくとも１０％増加している、請求項１に記載の細胞。
【請求項２４】
イソプレノイド前駆体の生産量が、ホスホケトラーゼ活性を有するポリペプチドをコードしている１種以上の異種核酸を含まない細胞と比較して、少なくとも５％又は少なくとも１０％増加している、請求項２に記載の細胞。
【請求項２５】
イソプレノイドの生産量が、ホスホケトラーゼ活性を有するポリペプチドをコードしている１種以上の異種核酸を含まない細胞と比較して、少なくとも５％又は少なくとも１０％増加している、請求項３に記載の細胞。
【請求項２６】
イソプレン産生法であって、（ａ）イソプレン産生に好適な条件下で請求項１に記載の組換え細胞を培養する工程、及び（ｂ）イソプレンを産生させる工程、を含む、方法。
【請求項２７】
イソプレノイド前駆体の産生法であって、（ａ）イソプレノイド前駆体の産生に好適な条件下で請求項２に記載の組換え細胞を培養する工程、及び（ｂ）イソプレノイド前駆体を産生させる工程、を含む、方法。
【請求項２８】
イソプレノイドの産生法であって、（ａ）イソプレノイドの産生に好適な条件下で請求項３に記載の組換え細胞を培養する工程、及び（ｂ）イソプレノイドを産生させる工程、を含む、方法。