【事件の表示】
　特願２００７−５３８３２６「キラルアルコールの製造方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１８年　５月　４日国際公開、ＷＯ２００６／０４５５９８、平成２０年　５月２９日国内公表、特表２００８−５１７６１２〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯
　本願は、２００５年１０月２６日（パリ条約による優先権主張外国庁受理２００４年１０月２７日、オーストリア）を国際出願日とする出願であって、その後の手続の経緯は、次のとおりである。
　
　平成１９年　４月２６日付け　　国内書面、３４条補正の翻訳文提出書
　平成２３年　３月２９日付け　　拒絶理由通知書
　平成２３年　７月　５日付け　　意見書
　　　　　　　　　　同日付け　　手続補正書
　平成２３年　８月１１日付け　　拒絶査定
　平成２３年１２月２６日付け　　審判請求書
　　　　　　　　　　同日付け　　手続補正書
　平成２５年　２月１５日付け　　審尋
　
第２　本願発明
　本願の請求項１〜１４に係る発明は、平成２３年１２月２６日付け手続補正書の特許請求の範囲の請求項１〜１４に記載された事項により特定される次のとおりのものである（以下、各々「本願発明１」〜「本願発明１４」という。）。
　
「【請求項１】
　一般式ＩａまたはＩｂ
　　【化１】　
　
　
（ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ、水素、ハロゲン元素、メチル基またはエチル基を表し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１つは、残りの５つと異なり、さらにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１つは、ハロゲン元素を表す）
で表される９５％以上の光学純度のアルコールを製造する方法であって、
　一般式ＩＩ
　　【化２】　
　
　
（ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は上記と同様である）
で表されるケトンが、補酵素としてＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを利用するＳ体またはＲ体に特異的なデヒドロゲナーゼ／オキシドレダクターゼの存在下において、酵素的に還元され、還元の間に形成されるＮＡＤまたはＮＡＤＰは、第２級アルコールによりさらにＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨそれぞれに還元されることを特徴とする方法。
【請求項２】
　Ｒ１＝Ｒ２＝Ｃｌであり、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｒ５＝Ｒ６＝Ｈであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
　Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ４＝Ｃｌであり、Ｒ３＝Ｒ５＝Ｒ６＝Ｈであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
　Ｒ１＝ＣＨ３であり、Ｒ２＝Ｃｌであり、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｒ５＝Ｒ６＝Ｈであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
　Ｒ１＝Ｃｌであり、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｒ５＝Ｒ６＝Ｈであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
　Lactobacilliales属の乳酸菌由来、またはジュードモナス由来の第２級アルコールデヒドロゲナーゼが、上記Ｒ体に特異的なデヒドロゲナーゼとして用いられることを特徴とする請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
　Lactobacillus kefir、Lactobacillus brevisまたはLactobacillus minor由来の第２級アルコールデヒドロゲナーゼが、上記Ｒ体に特異的なデヒドロゲナーゼとして用いられることを特徴とする請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
　Pichia属またはCandida属由来の第２級アルコールデヒドロゲナーゼが、上記Ｓ体に特異的なデヒドロゲナーゼとして用いられることを特徴とする請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
　Candida boidinii ADH、Candida parasilosisまたはPichia capsulata由来の第２級アルコールデヒドロゲナーゼが、上記Ｓ体に特異的なデヒドロゲナーゼとして用いられることを特徴とする請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
　上記オキシドレダクターゼの重量活性は、１０〜５，０００Ｕ／ｍｌの範囲であることを特徴とする請求項１から９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
　上記オキシドレダクターゼの重量活性は、１００〜１，０００Ｕ／ｍｌの範囲であることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
　上記ケトン１ｋｇを還元するための上記オキシドレダクターゼの使用量は、５，０００〜１０，０００，０００Ｕであることを特徴とする請求項１から９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
　上記ケトン１ｋｇを還元するための上記オキシドレダクターゼの使用量は、１０，０００〜１，０００，０００Ｕであることを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
　上記第２級アルコールとして、２−プロパノール、２−ブタノール、２−ペンタノール、４−メチル−２−ペンタノール、２−オクタノールおよびシクロヘキサノールからなる群のアルコールを用いることを特徴とする請求項１から１３のいずれか１項に記載の方法。
」
　
第３　刊行物及び刊行物に記載された事項
１　原査定の拒絶理由に引用された本願の優先日前に頒布された刊行物である「特表平７−５０５７７０号公報」（原査定の引用文献１。以下、「刊行物１」という。）には、次の事項が記載されている。
　なお、下線は、当審にて付したものである。以下、同様である。
　
（刊１−１）「【特許請求の範囲】
１．β−、γ−及びδ−
ケトエステルをＮＡＤＨ−依存酵素反応して対応する光学的に活性な
ヒドロキシ酸エステルにすることができる、ケトエステル−還元酵素であり、これはカンジダ　パラプシロシス
シュードモナス　アシドボランス
の菌株から単離することができる
・・・
４．精製された形で次のパラメーターを有する；　
−ｐＨ−最適条件は、ケトエステル−還元に関してｐＨ７．８ないし８．０及び逆反応に関して約ｐＨ９．５．である、　
−ケトエステル−還元に最適な温度は、３６℃ないし４０℃及び逆反応に最適な温度は５０℃ないし５６℃である、　
−Ｈｇ２−、Ｐｂ２−、Ａｇ−、Ｃｕ２−、Ｎｉ２−、Ｓｎ２−及びＣｏ２−イオンによる急速な脱活性化、ｐ−ヒドロキシ安息香酸水銀、５．５′−ジチオビス（２−ニトロベンゾアート）及びヨードアセトアミドによる並びにキレート化された２．２′−ビピリジル及びｏ−フエナントロリンによる著しい阻害及びＳＨ−保護試薬、たとえばジチオトレイトールによる安定化、
−
脂肪族
ケトン
の還元のための並びに第一及び第二アルコールの酸化のための更なる能力
ことを特徴とする、請求の範囲１ないし３のいずれかに記載のケトエステル−還元酵素。
５．
オキソ−化合物を酵素還元して光学的に活性なＳ−ヒドロキシ化合物とするにあたり
ＮＡＤＨの存在下に
・・・」
　
（刊１−２）「したがって
本発明の目的は、ＮＡＤＨによって共触媒反応を生じる、
ケトエステルの酵素反応及びこれに適する酵素である
カンジダ　パラブシロシス
中に見い出され
カンジダ
から単離されたケトエステル−還元酵素
　長鎖アルカン酸又はアルカン、すなわち特にドデカン酸及びテトラデカンを炭素源として含有する栄養培地上でカンジダ　パラブシロシス又はロードコッカスエリスロポリスを増殖した場合、
新規ケトエステル−還元酵素（ＫＥＲｅｄ）
  
カンジダ　パラブシロシス
によるＫＥＲｅｄの形成及びこの菌株から酵素の単離
　精製されたＫＥＲｅｄは次のパラメーターの点で優れている。：
・・・
−
脂肪族
ケトン
の還元ための並びに第一及び第二アルコールの酸化のための更なる能力
　
（刊１−３）「β−、γ−及びδ−ケトエステルを、酵素還元反応に付して対応する光学的活性ヒドロキシカルボン酸エステルとすることは、次の反応式に従って行われる。
　
　
　式中Ｒ及びＲ゛は幅広い意味を有することができ、それは
たとえば表４から明らか
　
（刊１−４）「
　
　
」
　
（刊１−５）「次に、本発明を例によって詳述する。その際、ここでの説明は添付の図面を参照して述べられている。図面は下記の通りである：
・・・
図６（ａ）ラセミ混合物に対する及び（ｂ）本発明によるＫＥＲｅｄ−反応生成物に対する（Ｒ）−及び（Ｓ）−３−ヒドロキシ酪酸メチルエステルのクロマトグラフィー分離。
・・・」（３頁右上欄９〜２２行）
　
（刊１−６）「
　
　
」（８頁右下）
　
２　原査定の拒絶理由に引用された本願の優先日前に頒布された刊行物である「特表２００４−５２７２５１号公報」（原査定の引用文献２。以下、「刊行物２」という。）には、次の事項が記載されている。
　
（刊２−１）「【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式Ｉ
Ｒ１−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２    （Ｉ）
［式中、Ｒ１及びＲ２は相互に無関係に、同じ又は異なり、次のものを表す
１．　水素原子、
２．　−（Ｃ１〜Ｃ２０）−アルキル、この場合にアルキルは直鎖又は分枝鎖である、
３．　−（Ｃ２〜Ｃ２０）−アルケニル、この場合にアルケニルは直鎖又は分枝鎖であり、かつ場合により１、２、３又は４個の二重結合を含有する、
４．　−（Ｃ２〜Ｃ２０）−アルキニル、この場合にアルキニルは直鎖又は分枝鎖であり、かつ場合により１、２、３又は４個の三重結合を含有する、
５．　−（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリール、
６．　−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル−（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリール、又は
７．　Ｒ１及びＲ２は−Ｃ（Ｏ）−基と一緒になって−（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリール又は−（Ｃ５〜Ｃ１４）−ヘテロ環を形成し、
その際、上記の１〜７に挙げられた基は非置換であるか、又は相互に無関係に次の基により１〜３箇所置換されてる、
ａ）  −ＯＨ、
ｂ）  ハロゲン、たとえばフッ素、塩素、臭素又はヨウ素、
ｃ）  −ＮＯ２、
ｄ）  −Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ２０）−アルキル、この場合にアルキルは直鎖又は分枝鎖であり、非置換であるか又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ又はニトロにより１〜３箇所置換されている、又は
ｅ）  −（Ｃ５〜Ｃ１４）−ヘテロ環、このヘテロ環は非置換であるか又はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ又はニトロにより１〜３箇所置換されている］
のケト化合物をエナンチオ選択的に還元する方法において、
ａ）  式Ｉの化合物、アルコール−デヒドロゲナーゼ、水、補因子及びｌｏｇＰ  ０．５〜４．０の有機溶剤を、
ｂ）  二相系の形でインキュベートし、かつ
ｃ）  生成したキラルのヒドロキシ化合物を単離することを特徴とする、ケト化合物のエナンチオ選択的還元方法。
・・・
【請求項９】
補因子としてＮＡＤＰＨ又はＮＡＤＨ
・・・
【請求項１１】
イソプロパノールを添加する
・・・」
　
（刊２−２）「【技術分野】
【０００１】
本発明は、有機ケト化合物を酵素を用いてエナンチオ選択的に還元して相応するキラルのヒドロキシ化合物にする方法、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｉｎｏｒからのアルコール−デヒドロゲナーゼ、及び酵素を用いてラセミ体から（Ｓ）−ヒドロキシ化合物をエナンチオ選択的に得る方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
光学活性ヒドロキシ化合物は、多数の薬理学的に重要な化合物を製造するための有用な合成原料である。この化合物は古典的な化学的方法によって製造が困難であることが多く、薬理学的用途に必要なエナンチオマー純度が達成できるのはまれである。従って、キラル化合物の製造のために、一般にバイオテクノロジーによる方法が用いられ、この場合に立体選択的反応は完全な微生物か又は単離された酵素を用いて実施される。
【０００３】
この場合に、
単離された酵素を使用することが有利であることが多い
一般的に比較的高い収率ならびに比較的高いエナンチオマー純度が達成できる
【０００４】
デヒドロゲナーゼ及び特に
アルコール−デヒドロゲナーゼは、有機ケト化合物を相応するキラルのアルコールにする立体化選択的還元により、キラルの生成物を得るために有用な触媒
これらの酵素は補酵素としてＮＡＤＨ
又はＮＡＤＰＨ
）が必要
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｉｕｓ属からの（Ｒ）−特異的アルコール−デヒドロゲナーゼ
【０００５】
アルコール−デヒドロゲナーゼを使用する欠点は、もちろん有機溶剤中でこのアルコール−デヒドロゲナーゼの酵素安定性及び酵素活性がわずかであることであり、かつ還元すべきケト化合物の水溶性がわずかなことが多いことである。さらに、有機溶剤中でアルコール−デヒドロゲナーゼを使用することに対して他の制限的要因は補因子需要としてのＮＡＤＰ又はＮＡＤの使用が必要であることである、それというのもこの補因子（ＮＡＤＰ又はＮＡＤ）は水溶性であり、かつ経済的方法で再生されるためである。
【０００６】
本発明は、プロセス条件を変更することにより前記の欠点を改善することを目的とする。この課題は、本発明の場合に、有機溶剤、アルコール−デヒドロゲナーゼ、水、補因子及びケト化合物を含有する二相系を使用することにより解決される。
【０００７】
本発明によるこの方法は、溶剤の酵素安定化作用による高い耐用時間、
製造されたキラルのヒドロキシ化合物の９９．９％を越えるエナンチオマー純度
　
（刊２−３）「【００２０】
使用されたＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの再生のために、本発明による方法の場合に付加的にイソプロパノールを添加することができる
・・・
【００２２】
本発明による方法において、例えば酵母、ウマの肝臓、Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂｉｕｍ  ｂｒｏｃｋｉｉ又はＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓからのアルコール−デヒドロゲナーゼを使用する場合には、式Ｉの化合物から相応する（Ｓ）−ヒドロキシ化合物が得られる。本発明による方法において、例えばＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｅｆｉｒ又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓからのアルコール−デヒドロゲナーゼを使用する場合には、式Ｉの化合物から相応する（Ｒ）−ヒドロキシ化合物が得られる。
・・・
【００２９】
本発明は、さらにＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｉｎｏｒからの高い最適温度を示すアルコール−デヒドロゲナーゼに関する。・・・Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｉｎｏｒからのこのアルコール−デヒドロゲナーゼはＲ特異的であり、この場合に、式Ｉの化合物から相応する（Ｒ）−ヒドロキシ化合物を得ることができる。・・・」
　
第４　刊行物１に記載された発明
　刊行物１には、（刊１−１）のとおり、カンジダ　パラプシロシス（・・・）、シュードモナス　アシドボランス（・・・）の菌株から、ケトエステルをＮＡＤＨ依存的に還元する酵素を単離することができること、当該酵素は、脂肪族ケトンを還元する能力と、第一及び第二アルコールを酸化する能力とを有すること、当該酵素は、ＮＡＤＨの存在下にオキソ化合物を酵素還元して光学的に活性なＳ体のヒドロキシ化合物とすることが記載されており、その脂肪族ケトンとして、具体的に、（刊１−４）のとおりのものも開示されている。
　したがって、刊行物１には、脂肪族ケトンを不斉還元する方法として、次の発明（以下、「刊行物１発明」という。）が記載されているということができる。
　
（刊行物１発明）：
「ＮＡＤＨの存在下、カンジダ　パラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａ　Ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、シュードモナス　アシドボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ）の菌株から単離した酵素によって、次式（Ａ）で表される脂肪族ケトンを酵素的に還元し、光学的に活性なＳ体のヒドロキシ化合物を得る方法。
式（Ａ）：
　
　
ここで、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｃｌ、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｒ５＝Ｒ６＝Ｈであるか、Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｃｌ、Ｒ３＝Ｒ４＝Ｒ５＝Ｒ６＝Ｈであるか、または、Ｒ１＝Ｃｌ、Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ４＝Ｒ５＝Ｒ６＝Ｈである。」
　
第５　対比・判断
１　本願発明１と刊行物１発明の対比
ア　刊行物１発明において式（Ａ）で表される脂肪族ケトンは、本願発明２，４，５に係るケトンに対応するものでもあり、本願発明１の一般式ＩＩで表されるケトンに包含されるものである。
　
イ　また、刊行物１発明における「カンジダ　パラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａ　Ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）の菌株から単離した酵素」は、本願明細書の段落【００２３】の記載「好ましい実施形態において、酵素による還元に用いられるデヒドロゲナーゼは、微生物を出発原料として得られる。・・・」及び【００２６】の記載「PichiaまたはCandida属由来、特にはCandida boidinii ADH、Candida parasilosisまたはPichia capsulata由来の第２級アルコールデヒドロゲナーゼは、Ｓ体に特異的なデヒドロゲナーゼとして用いられる。・・・」に照らしても明らかなように、本願発明８に係るデヒドロゲナーゼに対応するものでもあり、本願発明１の「Ｓ体・・・に特異的なデヒドロゲナーゼ」に包含されるものである。
　
ウ　そして、刊行物１発明における「Ｓ体のヒドロキシ化合物を得る方法」は、本願発明１の「一般式ＩａまたはＩｂで表されるアルコールを製造する方法」に対応することは明らかである。
　
エ　以上から、本願発明１と刊行物１発明との間には、次の一致点・相違点があるということができる。
　
（一致点）：一般式ＩａまたはＩｂで表されるアルコールを製造する方法であって、式（Ａ）で表されるケトンが、補酵素としてＮＡＤＨを利用するＳ体に特異的なデヒドロゲナーゼの存在下において、酵素的に還元される方法。
　
（相違点）：ＮＡＤＨに関し、本願発明１は、「還元の間に形成されるＮＡＤまたはＮＡＤＰは、第２級アルコールによりさらにＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨそれぞれに還元されること」を特定するのに対して、刊行物１発明は、かかる事項を具備しない点。
　
２　相違点についての容易想到性の判断
ア　刊行物２には、前記第３の２のとおり、ケト化合物を、単離された酵素によりエナンチオ選択的に還元する方法として、アルコールデヒドロゲナーゼの存在下、補酵素としてＮＡＤＨを添加する方法が記載されており、特に、（刊２−３）のとおり、「使用されたＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの再生のために、本発明による方法の場合に付加的にイソプロパノールを添加することができる」ことも開示されている。ここで、イソプロパノール添加による補酵素ＮＡＤＨの再生はデヒドロゲナーゼの由来に依存するものではないことを踏まえれば、刊行物１発明においても、還元の間に補酵素であるＮＡＤＨを再生するべく、還元の間にイソプロパノールを付加的に添加することは、その採用が強く動機付けられる、すなわち、前記相違点に係る構成は、当業者が容易に想到し得るところであるということができる。（なお、イソプロパノールは、ＣＨ３ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３で表される２−プロパノールであり、本願発明１４において第２級アルコールとして列挙されたものの一つであることは当業者において自明である。）。
　
イ　そして、本願発明１は、本願の発明の詳細な説明の記載を参酌しても、当業者の予測を超えた格別顕著な効果を奏するものであるとはいえない。
　特に、「９５％以上の光学純度のアルコール」に関して、審判請求人は、刊行物１には記載されていない格別顕著な効果である旨主張するが、刊行物１には、本願発明１と同一の基質を用い、「補酵素としてＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを利用するＳ体またはＲ体に特異的なデヒドロゲナーゼ／オキシドレダクターゼの存在下で」反応させることが記載されており、その図６には、３−ヒドロキシ酪酸メチルエステルのクロマトグラフィー分離の結果ではあるが、補酵素としてＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを利用するＳ体またはＲ体に特異的なデヒドロゲナーゼ／オキシドレダクターゼの存在下で反応させることにより、実際に、光学純度が十分に高い（Ｓ）体が得られていることも示されている（刊１−５）（刊１−６）から、「９５％以上の光学純度」は当業者が十分に予測し得る程度のものである。他方、本願の発明の詳細な説明の記載を参酌しても、付加的にイソプロパノール等のアルコールを添加することにより、エナンチオマー純度が向上するとは認められない（付加的にイソプロパノール等のアルコールを添加することが、還元の間に補酵素であるＮＡＤＨを再生するという、刊行物２に記載された効果を超える予測し得ない効果を奏するものではない）。以上から、本願発明１と刊行物１発明との間で、エナンチオマー純度に格別の差異があるということはできない。
　
３　小活
　以上のとおりであるから、本願発明１は、刊行物１及び２に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明することができたものであり、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないものである。
　
第６　むすび
　以上のとおりであるから、本願発明１は、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　したがって、本願発明２〜１４について検討するまでもなく、本願は拒絶すべきものである。
　よって、結論のとおり審決する。