【手続補正書】
【提出日】平成27年5月8日(2015.5.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
特異的な多量体を選択的に形成する組換えによって作製された成長因子もしくは転写因子のタンパク質構築物であって、当該多量体化の状態が、ホモ若しくはヘテロの二量体の生物学的に活性な状態であり、該二量体は２つの単量体又は該単量体の２つの断片を含み、この２つの単量体又は単量体の２つの断片がリンカーペプチドを通じて連結して単量体−リンカー−単量体構築物が形成され、該リンカーは、ＧＳ、ＧＳ２、ＧＳ３、ＩｇＧ１ヒンジ領域若しくはＩｇＧ２ａヒンジ領域、又はそれらの組合せを含み、単量体は成長因子又は転写因子であり、単量体が以下から選ばれる；
１）単量体がＮＭ２３、
２）単量体がＮＭ２３のＨ１、Ｈ２もしくはＨ７、
３）単量体が二量体の形成を支持するとともに、より高次の多量体の形成を阻害する、ＮＭ２３若しくはその突然変異体、
４）単量体が突然変異型ＮＭ２３でＳ１２０Ｇ又はＰ９６Ｓ又はＮＭ２３及びＰ９６Ｓ、
５）単量体が二量体の形成を支持する、ＮＭ２３又は１個〜１０個のＣ末端アミノ酸が欠失しているその突然変異体、
６）単量体が二量体の形成を支持する、ＮＭ２３又は１個〜６個のＣ末端アミノ酸が欠失しているその突然変異体、
７）以下から選択されるＮＭ２３；
ＮＭ２３  Ｓ１２０Ｇ  ＧＳ２、
ＮＭ２３  Ｐ９６Ｓ  ＧＳ２、
ＮＭ２３  Ｐ９６Ｓ／Ｓ１２０Ｇ  ＧＳ２、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ１  ＧＳ２、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ２  ＧＳ２、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ６  ＧＳ２、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ１／Ｓ１２０Ｇ  ＧＳ２、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ２／Ｓ１２０Ｇ  ＧＳ２、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ６／Ｓ１２０Ｇ  ＧＳ２、
ＮＭ２３  Ｓ１２０Ｇ  ＧＳ３、
ＮＭ２３  Ｐ９６Ｓ  ＧＳ３、
ＮＭ２３  Ｐ９６Ｓ／Ｓ１２０Ｇ  ＧＳ３、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ１  ＧＳ３、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ２  ＧＳ３、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ６  ＧＳ３、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ１／Ｓ１２０Ｇ  ＧＳ３、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ２／Ｓ１２０Ｇ  ＧＳ３、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ６／Ｓ１２０Ｇ  ＧＳ３、
ＮＭ２３  Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ１ｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６Ｓ  ＩｇＧ１ｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６Ｓ／Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ１ｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ１  ＩｇＧ１ｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ２  ＩｇＧ１ｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ６  ＩｇＧ１ｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ１／Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ１ｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ２／Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ１ｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ６／Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ１ｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６Ｓ  ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６Ｓ／Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ１  ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ２  ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ６  ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ１／Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ２／Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ６／Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ１ｈ／ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６Ｓ  ＩｇＧ１ｈ／ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６Ｓ／Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ１ｈ／ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ１  ＩｇＧ１ｈ／ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ２  ＩｇＧ１ｈ／ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ６  ＩｇＧ１ｈ／ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ１／Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ１ｈ／ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ２／Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、又は、
ＮＭ２３  Ｐ９６ＳΔＣ６／Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ２ａｈ  ｎｏＣ、
である、タンパク質構築物。
【請求項２】
特異的な多量体を選択的に形成する組換えによって作製されたタンパク質構築物であって、多量体化状態がより高次な多量体であって、その不活性状態である、タンパク質構築物であって以下から選ばれる特徴を持つタンパク質構築物；
１）二量体の形成を抑えるように遺伝子操作されている。
２）より高次の多量体の形成を支持するように遺伝子操作されている。
３）四量体、五量体又は六量体の形成を支持するように遺伝子操作されている。
４）より高次の多量体の形成を支持するように遺伝子操作され、該より高次の多量体がＩｇＭ抗体のＦｃ部分に遺伝子的に融合するタンパク質を含む。
５）より高次の多量体の形成を支持するように遺伝子操作された成長因子である。
６）より高次の多量体の形成を支持するように遺伝子操作されたＮＭ２３である。
７）より高次の多量体の形成を支持するように遺伝子操作された転写因子である。
８）より高次の多量体の形成を支持するように遺伝子操作されたｐ５３である。
【請求項３】
特異的な多量体若しくは二量体を選択的に形成する組換えによって作製されたタンパク質構築物であって、以下から選ばれる手段で形成されるタンパク質構築物；
１）該特異的な多量体がタンパク質単量体と第２の構成要素とを組換えによって結び付けることによって形成される、
２）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成される、
３）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成され、該第２の構成要素がリンカーペプチドである、
４）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成され、該第２の構成要素がタンパク質又はタンパク質断片である、
５）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成され、該多量体が化学結合を介して前記第２の構成要素間に形成される、
６）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成され、該多量体が共有結合若しくは共有結合のジスルフィド結合を介して該第２の構成要素間に形成される、
７）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成され、該第２の構成要素がＩｇＧ１ヒンジ若しくはＩｇＧ２ａヒンジ、又はＮＭ２３−Ｓ１２０Ｇ−ＩｇＧ１ｈ、ＮＭ２３−Ｓ１２０Ｇ−ＩｇＧ２ａｈ、もしくはＮＭ２３  Ｓ１２０Ｇ  ＩｇＧ１Ｆｃ、
８）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成され、該多量体が非共有結合を介して前記第２の構成要素間に形成される、
９）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成され、該多量体が非共有結合を介して前記第２の構成要素間に形成され、該第２の構成要素が別のタンパク質との結合に対して高い親和性を有するタンパク質である、
１０）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成され、該多量体が非共有結合を介して前記第２の構成要素間に形成され、該第２の構成要素が別のタンパク質との結合に対して高い親和性を有し、該第２の構成要素が抗体のＦｃ領域の全体又は一部、Ｆｏｓ又はＪｕｎである、
１１）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成され、該多量体が非共有結合を介して前記第２の構成要素間に形成され、該第２の構成要素が別のタンパク質との結合に対して高い親和性を有し、該第２の構成要素が抗体のＦｃ領域のＩｇＧ１Ｆｃである、
１２）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成され、該多量体が非共有結合を介して前記第２の構成要素間に形成され、該第２の構成要素が別のタンパク質との結合に対して高い親和性を有し、ホモ二量体化することが可能である、
１３）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成され、該多量体が非共有結合を介して前記第２の構成要素間に形成され、該第２の構成要素が別のタンパク質との結合に対して高い親和性を有し、ヘテロ二量体化することが可能である、
１４）該特異的な多量体が第２の構成要素間に形成され、該第２の構成要素がＩｇＭ抗体のＦｃドメインの断片である。
【請求項４】
特異的な多量体を選択的に形成する組換えによって作製されたタンパク質構築物であって、ジスルフィド結合を介した多量体の形成を促進するように、システインが前記タンパク質に挿入されている、タンパク質構築物。
【請求項５】
細胞への若しくは該細胞の核への侵入を促すアミノ酸配列を含む、又は前記タンパク質構築物のその発現宿主細胞からの分泌を促すアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいづれか一に記載のタンパク質構築物。
【請求項６】
以下のいずれかの核酸；
１）請求項１〜４のいづれか一に記載のタンパク質をコードする核酸配列を含む単離核酸。
２）請求項１〜４のいづれか一に記載のタンパク質をコードする核酸配列を含む単離核酸であって、細胞への又は該細胞の核への侵入を促すアミノ酸配列をコードする配列を更に含む、核酸。
３）請求項１〜４のいづれか一に記載のタンパク質をコードする核酸配列を含む単離核酸であって、前記タンパク質のその発現宿主細胞からの分泌を促すアミノ酸配列をコードする配列を更に含む、核酸。
４）請求項１〜４のいづれか一に記載のタンパク質をコードする核酸配列を含む単離核酸であって、二量体の形成を支持する、ＮＭ２３又はその突然変異体をコードする核酸を含む、核酸。
【請求項７】
以下のいずれかのベクター；
１）請求項６のいづれか一に記載の核酸を含む発現ベクター。
２）請求項６のいづれか一に記載の核酸を含むプラスミドである、発現ベクター。
３）請求項６のいづれか一に記載の核酸を含むウイルスである、発現ベクター。
【請求項８】
請求項７に記載のいづれか一のベクターを含む宿主細胞。
【請求項９】
細胞を増殖する方法であって、細胞又は幹細胞若しくは前駆細胞に請求項７に記載のいづれか一のベクターをトランスフェクト又は形質導入することを含む、方法。
【請求項１０】
体細胞において多能性を誘導する方法であって、該細胞に請求項７のいづれか一に記載のベクターをトランスフェクト又は形質導入することを含む、方法。
【請求項１１】
未熟細胞の投与による治療によって軽減される病態を患う患者の治療剤であって、
（ｉ）宿主細胞に請求項７のいづれか一に記載のベクターをトランスフェクト又は形質導入することであって、幹細胞、前駆細胞又はｉＰＳ細胞を得、
（ｉｉ）得られた幹細胞、前駆細胞又はｉＰＳ細胞を前記患者に投与する、
治療剤。
【請求項１２】
前記ベクターにおける前記細胞に固有の１つ又は複数の遺伝子の核酸配列が修飾されている、請求項１１に記載の治療剤。
【請求項１３】
以下から選択される標的化遺伝子の発現を変化させる方法；
１）（ｉ）転写因子変異体をコードする核酸を作製する工程と、（ｉｉ）前記核酸を標的化細胞に導入させる工程と、を含む、方法、
２）（ｉ）転写因子変異体をコードする核酸を作製する工程と、（ｉｉ）前記核酸を標的化細胞に導入させる工程と、（ｉｉｉ）前記標的化遺伝子のプロモータ部位付近の位置に挿入されるように、前記核酸を設計する工程を更に含む、方法。
３）前記標的化細胞が幹細胞又は前駆細胞である、上記１）又は２）に記載の方法。
４）前記前駆細胞が造血細胞である、上記１）〜３）のいづれか一に記載の方法。
５）前記前駆細胞がＢ細胞又はＢ細胞前駆体である、上記１）〜３）のいづれか一に記載の方法。
６）対象の遺伝子が発現されていることが望ましい場合には活性状態を促進し、対象の遺伝子が抑制されていることが望ましい場合には活性状態を促進しないように、前記転写因子の多量体化状態を操作することを含む、上記１）に記載の方法。
【請求項１４】
幹細胞又は前駆細胞の産生の増大の恩恵を受け得る疾病の以下から選ばれる治癒剤又は軽減剤；
１）疾患、遺伝的欠陥又は不健康な病態を患う又はそれらを発症するリスクがある患者に、請求項８に記載の細胞を投与することを含む、剤。
２）前記細胞が受精卵又は未受精卵である、上記１）に記載の、剤。
３）前記細胞が幹細胞又は前駆細胞である、上記１）に記載の、剤。
４）前記細胞を治療される前記患者から得る、上記１）に記載の、剤。
５）前記細胞がｉＰＳ細胞である、上記１）に記載の、剤。
６）前記ｉＰＳ細胞が治療される前記患者由来のものである、上記５）に記載の、剤。
【請求項１５】
二量体化を支持するとともに、より高次の多量体の形成を抑える成長因子突然変異体を同定する方法であって、以下から選択される方法；
１）該成長因子の標的受容体への結合の親和性を決定することを含み、より高次の多量体は前記二量体と同じ親和性では該標的受容体と結合しない、方法。
２）前記成長因子がＮＭ２３であり、前記標的受容体がＭＵＣ１＊である、上記１）に記載の方法。
３）前記標的受容体が、GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA（配列番号１）の配列を有するＰＳＭＧＦＲペプチドから本質的になるＭＵＣ１＊細胞外ドメインペプチドである、上記２）に記載の方法。