(57)【要約】      （修正有）【課題】魚類由来成分による安全性の高いチロシナーゼ活性阻害剤、該阻害剤を含有する皮膚外用剤、美白化粧料、並びに食品褐変防止剤の提供。【解決手段】サケ鼻軟骨プロテオグリカンを、タンパク質分解酵素アクチナーゼＥで消化して得られる、低分子化プロテオグリカンを有効成分とするチロシナーゼ活性阻害剤、該阻害剤を含有する皮膚外用剤、美白化粧料、並びに食品褐変防止剤。好ましくは、低分子化プロテオグリカンを０．０００３３重量％以上含有するチロシナーゼ活性阻外剤。【効果】図１より、前記チロシナーゼ活性阻害剤は、従来から非常に強力な阻害活性を有することが知られているコウジ酸と比較しても、より強いチロシナーゼ活性阻害効果を有する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
サケ鼻軟骨プロテオグリカンをタンパク質分解酵素アクチナーゼＥで消化して得られる低分子化プロテオグリカンを有効成分とするチロシナーゼ活性阻害剤。
【請求項２】
請求項１の低分子化プロテオグリカンを０．０００３３重量％以上含むチロシナーゼ活性阻害剤。
【請求項３】
請求項１に記載の低分子化プロテオグリカンを含有する皮膚外用剤。
【請求項４】
請求項１に記載の低分子化プロテオグリカンを含有する美白化粧料。
【請求項５】
請求項１に記載の低分子化プロテオグリカンを含有する食品褐変防止剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、チロシナーゼ活性阻害剤及びこのチロシナーゼ活性阻害剤を用いた医薬品、化粧品、食品褐変防止剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
メラニンは、動物組織内にある色素であり、紫外線から皮膚や組織を保護することがその大きな役割である。しかしながら、皮膚での過剰なメラニンの産生はシミ、ソバカス、斑点などの原因になっている。そしてメラニン色素の生成に関わる酸化酵素の一つとしてチロシナーゼが知られている。
【０００３】
チロシナーゼの活性を阻害することでメラニンの生成を抑制することができれば、美白効果につながることから、チロシナーゼ活性阻害剤は化粧品素材として広く利用されている（特許文献１及び特許文献２参照）。特許文献１及び特許文献２等に開示されているチロシナーゼ活性阻害剤やメラニン生成抑制剤は、いずれも効果、安全性、安定性、コスト等の観点において必ずしも十分であるとはいえなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１３−１３３３１４号公報
【特許文献２】特開２０１０−１８５３０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、優れたチロシナーゼ活性阻害効果を有するとともに、安心感の昂揚や積極的使用に貢献できるチロシナーゼ活性阻害剤及びこのチロシナーゼ活性阻害剤を用いた医薬品、化粧品、食品褐変防止剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を達成するために種々検討した結果、サケ鼻軟骨プロテオグリカンをタンパク質分解酵素アクチナーゼＥで消化して得られた低分子化プロテオグリカンに優れたチロシナーゼ活性阻害効果があることを見出し、本発明を完成させた。
【０００７】
すなわち、本発明は下記（１）〜（５）まで掲げる態様を含むものである。
（１）サケ鼻軟骨プロテオグリカンをタンパク質分解酵素アクチナーゼＥで消化して得られた低分子化プロテオグリカンを有効成分とするチロシナーゼ活性阻害剤であることを要旨とする。
（２）前記（１）に記載の低分子化プロテオグリカンを０．０００３３重量％以上含むチロシナーゼ活性阻害剤であることを要旨とする。
（３）前記（１）に記載の低分子化プロテオグリカンを含む皮膚外用剤であることを要旨とする。
（４）前記（１）に記載の低分子化プロテオグリカンを含む美白化粧料であることを要旨とする。
（５）前記（１）に記載の低分子化プロテオグリカンを含む食品褐変防止剤であることを要旨とする。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、優れたチロシナーゼ活性阻害効果を有していること、また、従来から非常に強力な活性を有することがよく知られているコウジ酸と比較しても、より強いチロシナーゼ活性阻害効果を示すことが明らかとなり、且つ天然物を原料としていることから、安心感の昂揚や積極的使用に貢献できるチロシナーゼ活性阻害剤及びこのチロシナーゼ活性阻害剤を用いた医薬品、化粧品、食品褐変防止剤が提供できる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】マッシュルーム由来チロシナーゼに対する低分子化プロテオグリカンの活性阻害効果を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、実施の形態をより具体的に説明するが、本発明の技術的思想を具体化するための方法を例示するものであって、本発明の技術的思想は、下記のものに特定するものではない。本発明の技術的思想は、特許請求の範囲に記載された請求項が規定する技術的範囲内において、種々の変更を加えることができる。
【００１１】
本発明の実施の形態に係る原料プロテオグリカンは、魚類に存在するグリコサミノグリカンとタンパク質の共有結合物からなる分子量数十万から数百万の高分子化合物である。
【００１２】
本発明の実施の形態に係る低分子化プロテオグリカンは、サケ鼻軟骨由来原料プロテオグリカンをタンパク質分解酵素であるアクチナーゼＥにより消化することで製造することができる。
【００１３】
前記原料プロテオグリカンは、青森県などの郷土料理としてよく知られている「氷頭なます」をヒントに工業原料として実用化されたもので、食経験のあるサケ鼻軟骨から酢酸を用いて抽出されており、安心感の昂揚や積極的使用に貢献できるものである。
【００１４】
本発明の実施の形態に係る低分子化プロテオグリカンには、優れたチロシナーゼ活性阻害効果があり、医薬品、化粧品あるいは食品褐変防止剤に利用することができる。
【００１５】
以下に実施例を示して本発明の実施の形態を具体的に説明するが、これは単に例示の目的で述べるものであり、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００１６】
（低分子化プロテオグリカンの製造）
原料プロテオグリカン（市販の鮭由来プロテオグリカン：角弘プロテオグリカン研究所社製）を、タンパク質分解酵素アクチナーゼＥ（科研製薬製）を用いて消化し、得られた分解生成物をセファアクリルＳ−５００ＨＲゲルろ過クロマトグラフィー（Ｖ０＝２２０ｍＬ、Ｖｔ＝５８９ｍＬ）により精製し、溶出位置３５０ｍＬから５５０ｍＬまでの画分を集め（４１０ｋＤａデキストランの溶出位置は４０７ｍＬ）、低分子化プロテオグリカンとした。この低分子化プロテオグリカンを試料としてチロシナーゼ活性阻害試験を行った。
【００１７】
（低分子化プロテオグリカンを用いたチロシナーゼ活性阻害試験）  
マッシュルーム由来チロシナーゼ（シグマ社製）を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）に溶解して酵素溶液（４０Ｕ／ｍＬ）とした。基質はＬ−ＤＯＰＡ（３，４−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−Ｌ−ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ，シグマ社製）を用い、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）に溶解して２ｍＭの基質溶液とした。各濃度の低分子化プロテオグリカン溶液を調製し、陽性対照にはコウジ酸（東京化成製）を用いた。酵素反応は、９６穴マイクロプレートにて行った。マイクロプレートの各ウェルに酵素溶液５０μＬと阻害剤５０μＬを加え、充分混合攪拌した。室温で２分間プレインキュベートした後、基質であるＬ−ＤＯＰＡ溶液を５０μＬ添加し、３７℃で１０分間インキュベートした。その後、マイクロプレートリーダー（ＴｒｉＳｔａｒ  ＬＢ９４１、ベルトールドジャパン社製）を用いて、波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。チロシナーゼ活性阻害剤を用いない区分（チロシナーゼの活性を阻害していないもの）の吸光度をＡ、各阻害剤を添加した区分（チロシナーゼの活性を阻害したもの）の吸光度をＢとし、チロシナーゼ阻害率を  阻害率（％）＝｛（Ａ−Ｂ）／Ａ｝×１００  として計算した。
【００１８】
低分子化プロテオグリカン及び陽性対照であるコウジ酸を用いてマッシュルーム由来チロシナーゼ活性に対する阻害効果を調べた結果を図１に示す。低分子化プロテオグリカンは陽性対照であるコウジ酸よりも強い阻害効果を示した。低分子化プロテオグリカンは濃度３．３、９．９、３３、９９、３３０、９９０μｇ／ｍＬにおいて、マッシュルーム由来チロシナーゼ活性をそれぞれ１８．０、２５．６、５３．４、７８．８、８２．９、８４．９％阻害した。一方、陽性対照であるコウジ酸は濃度２０、４０、６０、８０、１００μｇ／ｍＬにおいて、マッシュルーム由来チロシナーゼ活性をそれぞれ３６.１、５３．３、６５．１、６８．５、７０．４％阻害した。これらの結果から、マッシュルーム由来チロシナーゼ活性に対する低分子化プロテオグリカン及びコウジ酸の５０％阻害濃度ＩＣ５０は、それぞれ２８．５、３５．３μｇ／ｍＬと計算され、低分子化プロテオグリカンには、コウジ酸よりも１．２４倍の強いチロシナーゼ活性阻害効果があることが分かった。なお、原料プロテオグリカンには顕著なチロシナーゼ活性阻害効果は見られなかった。
【００１９】
本発明のチロシナーゼ活性阻害剤は、従来のチロシナーゼ活性阻害剤と同様に、医薬品、化粧品及び食品褐変防止剤の有効成分として利用可能である。この場合、チロシナーゼ阻害剤の添加量は、特に限定されるものではなく、皮膚外用剤や化粧料、食品褐変防止剤の種類によって異なるが、目的にあわせて適宜配合すればよい。
【００２０】
本発明のチロシナーゼ活性阻害剤を皮膚外用剤として利用する場合、その形態としては、軟膏剤、クリーム剤、乳剤、ゲル剤、ローション剤、トリートメント剤、貼付剤などが挙げられる。
【００２１】
また、本発明のチロシナーゼ活性阻害剤を化粧料として利用する場合、その形態としては、クリーム、乳液、ローション、化粧水、ジェル、美容液、パックなどの基礎化粧品、また、日焼け止めクリーム、日焼け止めローション、日焼け止めリップクリームなどの日焼け止め化粧料、また、メイクアップベースクリーム、パウダーファンデーション、リキッドファンデーション、口紅などのメイクアップ化粧料、さらには、ハンドクリーム、レッグクリーム、ボディローション、浴用剤などのボディ用化粧料などが挙げられる。
【００２２】
さらに、本発明のチロシナーゼ活性阻害剤を食品褐変防止剤として利用する場合、その対象となる食品としては、各種フルーツ、椎茸、マッシュルームなどのきのこ類、カニやエビなどの海産物などが挙げられる。その使用方法としては、本発明の阻害剤を適当な媒体で希釈し、この溶液を対象物に噴霧、浸漬させることで食品表面の褐変を防止することができる。
【産業上の利用可能性】
【００２３】
本発明の低分子化プロテオグリカンは、優れたチロシナーゼ阻害活性を有し、しかも、青森県などの郷土料理としてよく知られている「氷頭なます」をヒントに工業原料として実用化されたプロテオグリカンから酵素分解により得られる物質であるため、安心感の昂揚や積極的使用に貢献できるものである。従って、低分子化プロテオグリカンを有効成分とするチロシナーゼ活性阻害剤は、医薬品、化粧品あるいは食品褐変防止剤の分野で広く利用することが可能である。
【図１】
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