【事件の表示】
　特許第３２９１５２５号「ヒトプラスミン−α▲２▼−プラスミンインヒビター複合体の免疫学的測定方法」の請求項１に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第３２９１５２５号の請求項１に係る特許を維持する。
【理　由】
Ｉ．手続の経緯
　本件特許第３２９１５２５号の請求項１に係る発明についての出願は、平成３年１２月１９日（優先権主張日平成２年１２月２０日．日本国）を国際出願日とする出願であって、平成１４年３月２９日にその特許の設定登録がなされ、その後、株式会社シノテストより特許異議申立がなされ、取消理由通知がなされ、訂正請求がなされたものである。
II．訂正請求
１．訂正の内容
(1)特許請求の範囲の請求項１に係る記載、
「【請求項１】不溶性担体に固定化された、(１)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトプラスミノーゲンと特異的に反応し、ヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応しないモノクローナル抗体、（２)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトα2ープラスミンインヒビターと特異的に反応するモノクローナル抗体、及び(３)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体と特異的に反応し、ヒトプラスミノーゲン及びヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応しないモノクローナル抗体少なくとも２種と、被検試料とを接触させ、被検試料における凝集反応を観察することを特徴とする、ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体の測定方法。」を、
「不溶性担体に固定化された、(１)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトプラスミノーゲンと特異的に反応し、ヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応せず、ヒトプラスミノーゲンのクリングル２及びクリングル３を含む領域を認識し、ヒトプラスミノーゲンのクリングル１と反応しないモノクローナル抗体、(２)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトα2ープラスミンインヒビターと特異的に反応し、ヒトプラスミノーゲンとは反応しないモノクローナル抗体、及び(３)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体と特異的に反応し、ヒトプラスミノーゲン及びヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応しないモノクローナル抗体少なくとも２種と、被検試料とを接触させ、被検試料における凝集反応を観察することを特徴とする、ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体の測定方法。」と訂正する。
(2)明細書の第３頁下から第１行〜第４頁下から第７行(特許公報２頁第４欄第１１行〜第２４行)に係る記載、
「本発明は、不溶性担体に固定化された、(１)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトプラスミノーゲンと特異的に反応し、ヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応しないモノクローナル抗体、(２)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトα2ープラスミンインヒビターと特異的に反応するモノクローナル抗体、及び(３)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体と特異的に反応し、ヒトプラスミノーゲン及びヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応しないモノクローナル抗体少なくとも２種と、被検試料とを接触させ、被検試料における凝集反応を観察することを特徴とする、ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体の測定方法に関する。」を
「本発明は、不溶性担体に固定化された、(１)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトプラスミノーゲンと特異的に反応し、ヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応せず、ヒトプラスミノーゲンのクリングル２及びクリングル３を含む領域を認識し、ヒトプラスミノーゲンのクリングル１と反応しないモノクローナル抗体、(２)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトα2ープスミンインヒビターと特異的に反応し、ヒトプラスミノーゲンとは反応しないモノクローナル抗体、及び(３)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体と特異的に反応し、ヒトプラスミノーゲン及びヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応しないモノクローナル抗体少なくとも２種と、被検試料とを接触させ、被検試料における凝集反応を観察することを特徴とする、ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体の測定方法に関する。」と訂正する。
 
２．訂正の目的の適否、新規事項の有無及び拡張・変更の存否
  訂正事項(1)は、１）請求項１に記載の「(１)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトプラスミノーゲンと特異的に反応し、ヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応しないモノクローナル抗体」を、「(１)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトプラスミノーゲンと特異的に反応し、ヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応せず、ヒトプラスミノーゲンのクリングル２及びクリングル３を含む領域を認識し、ヒトプラスミノーゲンのクリングル１と反応しないモノクローナル抗体」に限定し、２）請求項１に記載の「(２)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトα2ープラスミンインヒビターと特異的に反応するモノクローナル抗体」を、「(２)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトα2ープラスミンインヒビターと特異的に反応し、ヒトプラスミノーゲンとは反応しないモノクローナル抗体」に訂正するものであるから、 訂正事項(1)は、特許請求の範囲の減縮に該当し、また、訂正事項(2)は、訂正事項(1)に伴うものであって、明りょうでない記載の釈明に該当する。
　また、この訂正は新規事項に該当せず、実質上特許請求の範囲を拡張し、または変更するものではない。
３．むすび
　以上のとおりであるから、本件訂正請求は、特許法１２０条の４,第２項及び同条第３項で準用する１２６条第２項及び第３項の規定に適合するので、請求のとおり当該訂正を認める。
　
III．特許異議申立
１．特許異議申立書の理由の概要
　特許異議申立人は、下記甲第１号証乃至甲第３号証を提出し、訂正前の本件請求項１に係る発明は、甲第１号証乃至甲第２号証に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたものであるから特許法第２９条第２項の規定により、特許を受けることができないと主張している。
甲第１号証：Thrombosis　and　Haemostasis　Vol.56，No.2(1986)124ー127
甲第２号証：Ｊ．Lab．Clin．Med．Vol．93，No.2(1979)199ー209
甲第３号証：「ヒトＰＩＣ測定反応の模式図」
２．判断
　訂正後の本件請求項１に係る発明（以下、「本件発明」という。）は、上記訂正請求により訂正された特許請求の範囲の請求項１に記載された事項により特定される、以下のとおりのものである。
　「不溶性担体に固定化された、(１)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトプラスミノーゲンと特異的に反応し、ヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応しないモノクローナル抗体（以下ＰＩＣー１という）、（２)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体及びヒトα2ープラスミンインヒビターと特異的に反応するモノクローナル抗体（以下ＰＩＣー２という）、及び(３)ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体と特異的に反応し、ヒトプラスミノーゲン及びヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応しないモノクローナル抗体（以下ＰＩＣー３という）、少なくとも２種と、被検試料とを接触させ、被検試料における凝集反応を観察することを特徴とする、ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体（以下ヒトＰＩＣという）の測定方法。」
　特許異議申立人株式会社シノテストの提出した甲第１乃至２号証刊行物を検討する。　
　甲第１号証刊行物には、マイクロタイタープレートに被覆されたモノクローナル抗体(ＭＡー３４Ｆ７又はＭＡー7Ｂ９)と、パーオキシダーゼで標識したモノクローナル抗体(ＭＡーＴＰｍ１)とを用いた酵素免疫測定法(ＥＬＩＳＡ)により、ヒトＰＩＣを測定する方法が開示されており、１）前記モノクローナル抗体ＭＡーＴＰｍ１の反応特異性として、ヒトＰＩＣ及びヒトプラスミノーゲンと特異的に反応すること、２）前記モノクローナル抗体ＭＡー３４Ｆ７及びＭＡー７Ｂ９の反応特異性として、ヒトＰＩＣ及びヒトα2ープラスミンインヒビターと特異的に反応する(１２４頁左欄要約、１２５頁左欄第２０〜２７行、１２５頁右欄第５〜３９行）ことが記載されている。
　甲第２号証刊行物には、ヒトＰＩＣを免疫原として得られた抗血清(ポリクローナル抗体)について、プラスミノーゲン及びα2ープラスミンインヒビターに対する吸着処理を行って調製した抗ＰＩＣポリクローナル抗体を、ラテックス粒子に結合させたラテックス試薬を用いる、ＰＩＣ測定方法が開示されており、前記抗ヒトＰＩＣポリクローナル抗体は、ヒトＰＩＣを免疫原として得られた抗血清から、プラスミノーゲン固定化カラムによりプラスミノーゲン特異抗体を除き、更にヒトＰＩＣ固定化カラムでプラスミンインヒビ夕ー反応性抗体とヒトＰＩＣ反応性抗体とを取り出し、更にプラスミンインヒビターを溶液で加えてプラスミンインヒビ夕ーとの反応性を消失させたものである(２００頁下から５行〜２０１頁９行）ことが記載されている。
  そこで、本件発明と甲第１号証刊行物に記載された発明を比較すると、両者は、ヒトＰＩＣ及びヒトプラスミノーゲンと特異的に反応するモノクローナル抗体とヒトＰＩＣ及びヒトα2ープラスミンインヒビターと特異的に反応するモノクローナル抗体を使用するヒトＰＩＣの測定方法である点で一致するが、両者は次の点で相違する。
１）測定方法に関して、
　前者が凝集法であるのに対して、後者がＥＬＩＳＡ法である点
２）ヒトＰＩＣ及びヒトプラスミノーゲンと特異的に反応するモノクローナル抗体に関して、
　前者のモノクローナル抗体ＰＩＣー１が、「ヒトプラスミノーゲンのクリングル２及びクリングル３を含む領域を認識し、ヒトプラスミノーゲンのクリングル１と反応しない」のに対し、後者のモノクローナル抗体ＭＡーＴＰｍ１は、ヒトプラスミノーゲンのクリングル１と反応する点。（なお、後者のモノクローナル抗体ＭＡーＴＰｍ１が、ヒトプラスミノーゲンのクリングル１と反応することは、特許権者が実施した比較試験から明らかである。）　
３）ヒトＰＩＣ及びヒトα2ープラスミンインヒビターと特異的に反応するモノクローナル抗体に関して、
  前者のモノクローナル抗体ＰＩＣー２が、「ヒトプラスミノ−ゲンとは反応しない」点。
３）前者が、ヒトプラスミンーα2ープラスミンインヒビター複合体と特異的に反応し、ヒトプラスミノーゲン及びヒトα2ープラスミンインヒビターとは反応しないモノクローナル抗体（以下ＰＩＣー３という）を使用する場合もある点。
　よって、本件発明におけるモノクローナル抗体ＰＩＣー１及びモノクローナル抗体ＰＩＣー２及びモノクローナル抗体ＰＩＣー３は、いずれも、甲第１号証刊行物に記載されておらず、従って、甲第１号証刊行物には、本件発明におけるモノクローナル抗体ＰＩＣー１及びモノクローナル抗体ＰＩＣー２及びモノクローナル抗体ＰＩＣー３の組み合わせについても、その組み合わせを使用する凝集法についても、記載も示唆もされていない。
　そして、本件発明で採用する凝集法は、反応途中で、何度も次の反応に障害となる成分を洗浄除去するＥＬＩＳＡ法と比較して、不溶性担体に固定化された少なくとも２種類のモノクローナル抗体と被検試料とを接触することにより、簡便かつ迅速にＰＩＣを測定することが可能であるという格別の効果を奏するものである。
   次に、本件発明と甲第２号証刊行物に記載された発明を比較すると、両者は、不溶性担体に固定化されたヒトＰＩＣと反応する抗体と、被検試料とを接触させ、被検試料における凝集反応を観察する、ヒトＰＩＣの測定方法である点で一致するが、ヒトＰＩＣと反応する抗体に関して、前者がモノクローナル抗体ＰＩＣー１〜ＰＩＣー３を使用しているのに対して、後者が抗血清(ポリクローナル抗体)を使用する点で相違する。
   この点に関して、特許異議申立人は、甲第１号証刊行物に記載されたヒトＰＩＣ測定におけるモノクローナル抗体の組み合わせを、甲第２号証刊行物に記載されたヒトＰＩＣのラテックス凝集測定法に適用して本件発明を得ることは容易である旨主張している。
　しかしながら、或るモノクローナル抗体の組み合わせがＥＬＩＳＡ法において使用可能であるとしても、モノクローナル抗体は、その抗原認識部位が１箇所であるため、凝集反応に用いることは不利であるから、そのモノクローナル抗体の組み合わせを凝集法にそのまま適用することができるか否かは、当業者といえども容易に予想することができるものではなく、しかも、凝集法によりＰＩＣを正確に測定可能なモノクローナル抗体を取得すること自体容易なこととは認められない。
　しかも、前述したとおり、本件特許発明におけるモノクローナル抗体ＰＩＣー１〜ＰＩＣー３は、甲第１乃至２号証刊行物いずれにも記載されておらずまた、それを、示唆する記載もないことから、特許異議申立人の主張は採用できない。
　そして、本件発明は、反応特異性の異なる３種類のモノクローナル抗体ＰＩＣー１〜ＰＩＣー３を取得し、その内、少なくとも２種を組み合わせて使用することにより、モノクローナル抗体を用いるラテックス凝集法の構築を可能としたものであり、その結果、血漿中の遊離プラスミノーゲン及びα2ープラスミンインヒビターの干渉を受けることなく、患者血漿中のプラスミンーα2ープラスミンインヒビ夕ー複合体(ＰＩＣ)の量を特異的に、簡便かつ迅速に、測定することができるという格別な効果を奏するものである。
　したがって、本件発明は、甲第１号証乃至甲第２号証に記載された発明に基いて当業者が容易に発明をすることができたものとはとはいえない。
　なお、特許異議申立人は、「被検試料中にヒトＰＩＣ及び過剰量のヒトプラスミノーゲンが存在する場合、及びヒトＰＩＣ及び過剰量のヒトα2ープラスミンインヒビターが存在する場合は、測定原理上負の誤差が生じる」点を指摘しているが、負の誤差の発生は、抗体結合ラテックス粒子を過剰量存在させることにより防止できるから、この点に記載不備はない。
　また、ＰＩＣー１とＰＩＣー３の組み合わせ、或いは、ＰＩＣー２とＰＩＣー３の組み合わせを使用する実施例は明細書に記載されていないが、いずれの場合でもＰＩＣ上の異なるエピトープを認識する２種のモノクローナル抗体を使用することになり、良好な凝集を得ることは明らかであるから、この点に記載不備はない。
　したがって、本件明細書には、記載に不備なところはないのであるから、特許法３６条４項に規定する要件を具備するものである。
３．まとめ
　以上のとおりであるから、特許異議申立の理由及び証拠によっては、本件発明についての特許を取り消すことはできない。
　また他に本件発明についての特許を取り消すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１５年７月３０日（２００３．７．３０）
【訂正の要旨】
審決（決定）の【理由】欄参照。
（５４）【発明の名称】
ヒトプラスミン−α２−プラスミンインヒビター複合体の免疫学的測定方法
【発明の詳細な説明】
技術分野
　本発明は、ヒトプラスミン−α２−プラスミンインヒビター複合体（Ｐｌａｓｍｉｎ−α２−Ｐｌａｓｍｉｎ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｃｏｍｐｌｅｘ：以下ＰＩＣの略称を用いることがある）に対して反応性を有する各種のモノクローナル抗体群を用いたヒトプラスミン−α２−プラスミンインヒビター複合体の免疫学的定量方法に関する。
背景技術
　汎発性血管内凝固症候群（ＤＩＣ：Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ　ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ　ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ）患者の血漿中や、ウロキナーゼ又はティシュープラスミノーゲンアクチベータ（ｔ−ＰＡ）を用いた血栓溶解療法実施中の患者血漿中では、プラスミノーゲンが活性化されてプラスミンが生成される。生成されたプラスミンは、流血中では瞬時にα２プラスミンインヒビター（α２ＰＩ：青木ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５１，５９５６−５９６５，１９７６）と１：１の複合体、即ち前記のＰＩＣを形成する。従って、ＰＩＣを測定することにより、プラスミンの生成、即ち、線溶系活性化の事象を把握することができる。最近、血漿中のＰＩＣはＤＩＣの診断及び血栓溶解療法のモニター等の分子マーカーとして重要視されている。そのため、血液あるいは血漿中のＰＩＣの量を正確かつ簡単に測定する必要がある。
　従来から知られているＰＩＣの測定法としては、以下の５つの方法を挙げることができる。第１の方法は、二次元交叉免疫電気泳動法を用いる方法である。第２の方法は、ＰＩＣのネオアンチゲンを認識するポリクローナル抗体を用いたラテックス凝集法である。第３の方法は、プラスミノーゲンに対するポリクローナル抗体とα２−プラスミンインヒビターに対するポリクローナル抗体の両者を用い、その一方を固定化抗体とし、他方を酵素標識抗体とした、酵素免疫測定法である。第４の方法は、α２−プラスミンインヒビターに存在するプラスミンの繊維素溶解作用を阻止する部位を特異的に認識するモノクローナル抗体とプラスミンポリクローナル抗体の両者を用い、その一方を固定化抗体とし、他方を酵素標識抗体とし、血漿検体を１２００倍に希釈して測定する酵素免疫測定法である。第５の方法は、ＰＩＣのネオアンチゲンを認識するモノクローナル抗体２種又は３種を用いるラテックス凝集法である。
　しかしながら、第１の方法には、感度が低く定量性に欠けるという欠点があった。第２の方法には、ＰＩＣを特異的に測定できないという欠点があった。第３の方法は、感度は良好であるが、抗血清の安定な確保が困難であり、免疫反応が２工程であるので操作が煩雑で、測定に長時間を要するという欠点があった。第４の方法は、α２−プラスミンインヒビターに対するモノクローナル抗体を使用する点及び免疫反応を１工程で操作する点で前記の第３の方法が改良されているが、酵素免疫反応が有する欠点、即ち、操作が煩雑で測定に長時間を要するという問題点を解消するものではなかった。更に、第４の方法には、１工程の免疫反応を導入するために、検体を１２００倍に希釈する工程が必要になるという欠点もあった。第５の方法は、ポリクローナル抗体を用いた第２の方法と比較して、特異性や測定感度において差異はなく、ＰＩＣを特異的に測定できないという問題点を解決するものではなかった。
　本発明者は、ＰＩＣを簡便に、正確にそして再現性よく測定する方法を開発するべく鋭意研究をした結果、ＰＩＣ及びプラスミノーゲンの両者に反応性を示す第１のモノクローナル抗体（ＰＩＣ−１）、ＰＩＣ及びα２−プラスミンインヒビターの両者に反応性を示す第２のモノクローナル抗体（ＰＩＣ−２）、そしてＰＩＣに特異的反応性を示すが、ＰＩＣの構成タンパク質であるプラスミノーゲン及びα２−プラスミンインヒビターには反応性を示さない第３のモノクローナル抗体（ＰＩＣ−３）の、３種のモノクローナル抗体を見出し、これらのモノクローナル抗体の２種以上の組み合わせを用いると、血漿中のＰＩＣを、血漿検体の希釈工程を必要とせず、迅速かつ正確に、しかも検体中に遊離の状態で存在するプラスミノーゲン及びα２−プラスミンインヒビターの妨害を受けずに、特異的に測定することができることを見出した。従って、本発明の目的は、前記の各モノクローナル抗体を用いる新規の免疫学的定量方法を提供することにある。
発明の開示
　従って、本発明は、不溶性担体に固定化された、（１）ヒトプラスミン−α２−プラスミンインヒビター複合体及びヒトプラスミノーゲンと特異的に反応し、ヒトα２−プラスミンインヒビターとは反応
せず、ヒトプラスミノーゲンのクリングル２及びクリングル３を含む領域を認識し、ヒトプラスミノーゲンのクリングル１と反応
し、ヒトプラスミノーゲンとは反応しない
図面の簡単な説明
　第１図は、本発明のモノクローナル抗体ラテックス複合体を用いて、健常人血漿（１２検体）及びＤＩＣ患者血漿（１５検体）中のＰＩＣ量を測定した結果を示す説明図である。
発明を実施するための最良の形態
　以下、本発明を、モノクローナル抗体、ハイブリドーマ及び免疫学的測定方法の順に説明する。
　免疫原として用いるヒトＰＩＣは、例えば、Ｐｌｏｗらの方法（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．９３，１９９−２０９，１９７９）に従って調製することができる。即ち、ヒト（健常人）の血漿からプラスミノーゲンを除去し、プラスミノーゲン不含のこの血漿に、プラスミンを徐々に加えることによりＰＩＣを生成させ、生成したＰＩＣを適当な親和性ゲルに吸着させる。この吸着ＰＩＣを適当な緩衝液で溶出させ、更に、イオン交換クロマトグラフィーや分子ふるいクロマトグラフィー等による精製操作で処理し、純化ヒトＰＩＣを得る。こうして得られたヒトＰＩＣは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳ−Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）で単一のバンドを示す。
　次に、精製したヒトＰＩＣ免疫原溶液を用いて哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ又はウマ）をイン・ビボ免疫法により免疫する。
　具体的には、例えば、精製したヒトＰＩＣ免疫原溶液を等量のフロインド氏完全アジュバント又は不完全アジュバントと乳化するまで混合する。この混合液を、例えばマウスの皮下に投与する（第１回免疫）。以後、２〜４週間の間隔で同様の操作を行い、数回免疫する。最終免疫から数日後に脾臓を無菌的に取り出し、ステンレスメッシュなどで押しつぶして脾臓細胞を調製し、細胞融合工程に用いる。
　細胞融合に用いるもう一方の親細胞であるミエローマ細胞（骨髄腫細胞）としては、各種の公知の細胞株、例えば、ｐ３（ｐ３／×６３−Ａｇ８）〔Ｎａｔｕｒｅ，２５６，４９５−４９７（１９７５）〕、ｐ３−Ｕ１〔ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓ　ｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８１；１−７（１９７８）〕、ＮＳ−１〔Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６；５１１−５１９（１９７６）〕、ＭＰＣ−１１〔Ｃｅｌｌ，８；４０５−４１５（１９７６）〕、ＳＰ２／０〔Ｎａｔｕｒｅ，２７６；２６９−２７０（１９７８）〕、ＦＯ〔Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，３５；１−２１（１９８０）〕、×６３．６．５５．３〔Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２３；１５４８−１５５０（１９７９）〕、Ｓ１９４〔Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１４８；３１３−３２３（１９７８）〕、又はラットにおけるＲ２１０〔Ｎａｔｕｒｅ，２７７；１３１−１３３（１９７９）〕などを使用することができる。
　免疫脾臓細胞とミエローマ細胞との細胞融合は通常の方法で行うことができ、例えば、公知の融合促進剤（ポリエチレングリコール又はセンダイウイルスなど）を用い、場合により補助剤（ジメチルスルホキシドなど）を用いることもできる。免疫脾臓細胞とミエローマ細胞との使用比率も常法と同様でよく、例えば、ミエローマ細胞に対して脾臓細胞を約１〜１０倍程度の量で用いる。融合用培地としては、例えば、４０％（ｗ／ｖ）ポリエチレングリコールを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いることができる。融合は、前記の培地内で免疫脾臓細胞とミエローマ細胞とをよく混合することによって行う。続いて、選別用培地（例えば、ＨＡＴ培地）を用いてハイブリドーマ以外の細胞を除去し、ハイブリドーマ培養上清の抗体産生の有無を、例えばＥＬＩＳＡ法によって測定し、目的とするハイブリドーマを分離する。
　こうして得られた、モノクローナル抗体ＰＩＣ−１、ＰＩＣ−２又はＰＩＣ−３を分泌するハイブリドーマＰＩＣ−１、ＰＩＣ−２又はＰＩＣ−３は、通常の培地で継代培養することができ、また液体窒素等の中で容易に長期間保存することができる。
　また、前記のハイブリドーマを培養する培地としては、ハイブリドーマの培養に適した任意の培地を用いることができ、好適にはＤＭＥＭにウシ胎児血清、Ｌ−グルタミン、Ｌ−ピルビン酸及び抗生物質（ペニシリンＧとストレプトマイシン）を含む培地が用いられる。
　前記のハイブリドーマの培養は、イン・ビトロの場合には例えば培地中で５％ＣＯ２濃度及び３７℃で約３日間、またイン・ビボ例えばマウスの腹腔中で培養する場合には約１４日間実施するのが好ましい。
　前記のハイブリドーマＰＩＣ−１、ＰＩＣ−２又はＰＩＣ−３を常法によって培養した培養液から、あるいは前記３種のいずれかのハイブリドーマを投与した適当な哺乳動物（例えばマウス又はラット）の腹水から、目的とするモノクローナルを分離し、精製することが可能である。
　このようにして製造された培養液又はマウスの腹水からモノクローナル抗体を分離、精製する場合にはタンパク質の単離、精製に一般的に用いられる方法を用いることが可能である。そのような方法としては硫安塩析、イオン交換クロマトグラフィー、分子篩ゲルを用いる分子篩カラムクロマトグラフィー、プロテインＡ結合多糖類を用いる親和性カラムクロマトグラフィー、透析、凍結乾燥の方法等がある。
　こうして得られた抗ＰＩＣモノクローナル抗体は、その反応性によって以下の３種に分類することができる。
（１）ＰＩＣ及びプラスミノーゲンとは反応するが、α２−プラスミンインヒビターとは反応しない第１のモノクローナル抗体（ＰＩＣ−１）。
（２）ＰＩＣ及びα２−プラスミンインヒビターとは反応するが、プラスミノーゲンとは反応しない第２のモノクローナル抗体（ＰＩＣ−２）。
（３）ＰＩＣとは反応するが、プラスミノーゲン及びα２−プラスミンインヒビターとは反応しない第３のモノクローナル抗体（ＰＩＣ−３）。
　前記の第１のモノクローナル抗体（ＰＩＣ−１）は、好ましくはヒトプラスミノーゲンのクリングル２及びクリングル３を含む領域を認識する。
　前記の第１〜第３の抗ＰＩＣモノクローナル抗体を不溶性担体に固定化させ、それらの少なくとも２種を被検試料と接触させると、被検試料中の遊離のプラスミノーゲン及びα２−プラスミンインヒビターとは凝集反応を起こさず、ＰＩＣとの間でのみ凝集反応を起こさせることができるので、ＰＩＣの免疫学的定量方法に用いることができ、そして免疫学的定量用試薬としても有用である。
　本発明の免疫学的定量方法に用いる被検試料は、ＰＩＣを含有する可能性のある試料であれば特に制限されるものではないが、例えば、生体試料、特には血液、血清、血漿又は尿、好ましくは血漿である。本発明の免疫学的定量方法においては、被検試料を希釈せずに、そのまま使用しても、被検試料中に遊離の状態で存在するプラスミノーゲン及びα２−プラスミンインヒビターの妨害を避けることができる。即ち、本発明方法によれば、被検試料中に存在するプラスミノーゲン及びα２−プラスミンインヒビターの干渉を受けずに、ヒトプラスミン−α２−プラスミンインヒビター複合体の測定を行うことができる。
　不溶性担体としては、抗原抗体の凝集反応を利用する免疫学的測定方法において一般的に用いられる任意の不溶性担体を用いることができ、例えば、ラテックス粒子（特には、ポリスチレンラテックス粒子）を挙げることができる。
　モノクローナル抗体を不溶性担体に固定化させるには、公知の方法、例えば、化学結合法（架橋剤としてカルボジイミド、グルタルアルデヒド等を用いる）又は物理吸着法を用いることができる。こうして、モノクローナル抗体と不溶性担体との複合体を形成し、これを本発明の免疫学的定量方法に用いることができる。
　本発明の免疫学的定量方法においては、前記の不溶性担体に固定化した少なくとも２種のモノクローナル抗体を使用するが、或る１種のモノクローナル抗体を不溶性担体に固定化して調製した複合体を２種又は３種用いるか、あるいは、２種又は３種のモノクローナル抗体を或る１種の不溶性担体に固定化して調製した複合体を用いることができる。更に、或る１種のモノクローナル抗体を不溶性担体に固定化して調製した複合体１種と、２種のモノクローナル抗体を或る１種の不溶性担体に固定化して調製した複合体１種との組み合わせを用いることもできる。モノクローナル抗体２種の組み合わせは任意でよいが、前記の第１のモノクローナル抗体（ＰＩＣ−１）と第２のモノクローナル抗体（ＰＩＣ−２）との組み合わせを用いるのが好ましい。
　本発明の測定方法においては、前記のモノクローナル抗体固定化不溶性担体複合体の既知一定量と未知量のＰＩＣを含有する水性被検試料の一定量とを適当な反応容器（例えば、スライド板上あるいは反応セル）中で接触させる。例えば血漿試料の場合には、血漿試料（非希釈液）１容量部に対して前記の複合体懸濁水（１％以上の濃度）を１容量部又は１容量部以上加えて接触させる。また、凝集像をより鮮明にするために、試料と複合体懸濁水に更に緩衝液（例えば、トリス塩酸緩衝液）を加えて接触させてもよい。こうして形成される凝集の程度からＰＩＣ濃度の定量を行うことができる。この凝集反応は、血漿試料中に存在する遊離のプラスミノーゲン及びα２−プラスミンインヒビターの妨害を受けない。例えば、スライド板の場合には目視的に、反応セルの場合は特定の波長を用いて分光学的に凝集反応を測定し、被検試料中のＰＩＣ濃度を定量することができる。
実施例
　次に、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例によって限定されるものではない。
実施例１：ＰＩＣの精製
（ａ）ヒトプラスミン−α２−プラスミンインヒビター複合体（ＰＩＣ）の精製はＰｌｏｗらの方法（Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．９３，１９９−２０９，１９７９）に従って行った。簡単に説明すると、ヒト（健常人）血漿１００ｍｌをリジン−セファロースカラム（ベッド容量、１００ｍｌ）に通過させ、プラスミノーゲンを除去した。プラスミノーゲン不含のこの血漿に、プラスミン水溶液（６０μｇ／ｍｌ）１００ｍｌを徐々に加えた後、３７℃で１０分間保温した。反応後の水溶液をリジン−セファロースカラム（ベッド容量、２００ｍｌ）に通し、ＰＩＣを吸着させた。ＰＩＣ吸着カラムを０．１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した後、５０ｍＭε−アミノカプロン酸を含むＰＢＳでＰＩＣを溶出させた。
　更に、得られたＰＩＣをウルトロゲルＡＣＡ４４による分子篩クロマトグラフィーによって精製した。この精製ＰＩＣを免疫原及び抗ＰＩＣモノクローナル抗体のスクリーニングに使用した。
（ｂ）免疫化脾臓細胞の調製：
　ＰＩＣ免疫原溶液（Ａ２８０ｎｍ＝０．１）を等量のフロインド氏完全アジュバンドと乳化するまで混合し、その混合液２００μｌをＢＡＬＢ／ｃ系マウスの腹腔内に投与することにより免疫を行った（第１回免疫）。３０日経過後、前記と同様の混合液２００μｌを前記マウスの腹腔内に投与した（第２回免疫）。第２回免疫から２１日経過後、ＰＩＣ免疫原溶液（Ａ２８０ｎｍ＝０．１）を等量の生理食塩水で希釈して調製したＰＩＣ希釈液２００μｌを、前記マウスの静脈内に投与した（最終免疫）。最終免疫から３日経過後、脾臓を無菌的にマウスから取り出し、次の細胞融合工程に使用した。
（ｃ）細胞融合
　１５％ウシ胎児血清を含むＤＭＥ培地５ｍｌを入れたシャーレに、無菌的に抽出した前記の脾臓を入れた。次に、１５％ウシ胎児血清を含むＤＭＥ培地約１５ｍｌで前記脾臓を還流して脾臓細胞を流出させた後、この脾臓細胞懸濁液をナイロンメッシュに通した。この脾臓細胞を５０ｍｌ遠心チューブに集め、５００×ｇで１０分間遠心した。こうして得たペレットにヘモライジング溶液（１５５ｍＭ−ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ−ＫＨＣＯ３、１ｍＭ−Ｎａ２ＥＤＴＡ：ｐＨ７．０）４ｍｌを加え、懸濁させた。０℃で５分間放置して懸濁液中の赤血球を破壊させた。１５％ウシ胎児血清１０ｍｌを含むＤＭＥ培地を加えてから遠心分離した。こうして得たペレットをＤＭＥ培地で遠心法により洗浄し、生きている脾臓細胞数を測定した。
　一方、予め培養しておいたマウスミエローマ細胞（骨髄腫細胞）ＳＰ２／０−Ａｇ１４（理化学研究所ジーンバンク細胞銀行）約２×１０７個に前記脾臓細胞１×１０８個を加え、ＤＭＥ培地中でよく混合し、遠心分離を行った（５００×ｇ、１０分間）。その上清を吸引し、ペレットをよく解きほぐし、４０％ポリエチレングリコール４０００溶液（３８℃に保温）０．５ｍｌを滴下し、遠心チューブを手で１分間穏やかに回転することによってポリエチレングリコール溶液と細胞ペレットとを混合させた。次に、３８℃に保温しておいたＤＭＥ培地を３０秒毎に１ｍｌずつ加えて、チューブを穏やかに回転させた。この操作を１０回繰り返した後、１５％ウシ胎児血清２０ｍｌを含むＤＭＥ培地を加えて、遠心分離（５００×ｇ、１０分間）を行った。上清を除去した後、１５％ウシ胎児血清を含むＨＡＴ培地（ＤＭＥ培地にアミノプテリン４×１０−７Ｍ、チミジン１．６×１０−５Ｍ、ヒポキサンチン１×１０−４Ｍになるように添加したもの）で細胞ペレットを遠心法によって２回洗浄した後、前記ＨＡＴ培地４０ｍｌに懸濁した。この細胞懸濁液を９６ウエル細胞培養プレートの各ウエルに２００μｌずつ分注し、５％炭酸ガスを含む炭酸ガス培養器で３７℃にて培養を開始した。培養中、２〜３日間隔で各ウエルの培地を約１００μｌ除き、新たに前記のＨＡＴ培地１００μｌを加えることによりＨＡＴ培地中で増殖するハイブリドーマを選択した。８日目から１５％ウシ胎児血清を含むＨＴ培地（ＤＭＥ培地にチミジン１．６×１０−５Ｍ、ヒポキサンチン１×１０−４Ｍになるように添加したもの）に交換し、ハイブリドーマを観察するとともに、１０日目に、後記のＥＬＩＳＡ法により、ＰＩＣ抗体産生ハイブリドーマをスクリーニングした。
（ｄ）ハイブリドーマの樹立
　ハイブリドーマ培養液の上清における産生抗体の有無はＥＬＩＳＡ法により測定した。９６ウエルＥＬＩＳＡ用プレート（ＩｍｍｕｌｏｎＩＩ、日本ダイナテック株式会社）の各ウエルに前記のＰＩＣ免疫原溶液（Ａ２８０ｎｍ＝０．０５、生理食塩水で希釈した）５０μｌずつを分注し、２５℃で２時間放置した。次に、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−生理食塩水で３回洗浄した後、各ウエルに培養液上清５０μｌを加え、２５℃で１時間反応させた。
　次に、Ｔｗｅｅｎ２０−生理食塩水で２００倍に希釈したペルオキシターゼ結合抗マウス抗体（ダコ社、デンマーク）５０μｌを各ウエルに加えた。反応終了後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−生理食塩水で各ウエルを３回洗浄し、０．５ｍＭアミノアンチピリン、１０ｍＭフェノール及び０．００５％過酸化水素水を含む溶液２５０μｌを各ウエルに加え、２５℃で３０分間反応させ、各ウエルの４９０ｎｍにおける吸光度を測定した。その結果、１９２ウエル中、３ウエルに抗体産生が認められた。その３ウエル中のハイブリドーマを２４ウエルプレートに移し、１５％ウシ胎児血清を含むＨＴ培地で４〜５日間培養した。その後、再度ＥＬＩＳＡ法によって抗ＰＩＣ抗体の産生の有無を確認してから限界希釈法によりクローニングした。限界希釈法は、ＨＴ培地でハイブリドーマが５個／ｍｌとなるように希釈した細胞浮遊液を、予め正常ＢＡＬＢ／Ｃ系マウスの腹腔細胞がウエル当たり２×１０４個分注してある９６ウエルプレートの各ウエルに１００μｌずつ分注した。１０日後、ＥＬＩＳＡ法によって抗ＰＩＣ特異的抗体を産生するハイブリドーマのクローンをスクリーニングした。
　その結果、各ハイブリドーマにつき、２０〜４０個の抗体産生クローンが得られた。これらのクローンの中から、増殖力が強く、抗体分泌能が高く、しかも安定なクローンを選び、前記と同様の方法で再クローン化を行い、３種の抗ＰＩＣ抗体産生ハイブリドーマＰＩＣ−１、ＰＩＣ−２及びＰＩＣ−３を樹立した。これら３種のハイブリドーマから分泌される３種のモノクローナル抗体ＰＩＣ−１、ＰＩＣ−２及びＰＩＣ−３とヒトプラスミノーゲン（アテンズ・リサーチ社、アメリカ）あるいはヒトα２−プラスミンインヒビター（アテンズ・リサーチ社、アメリカ）との反応性を、９６ウエルＥＬＩＳＡ用プレートにヒトプラスミノーゲンあるいはヒトα２−プラスミンインヒビターを被覆し、前記のＥＬＩＳＡ法と同様の方法により調べた。モノクローナル抗体ＰＩＣ−１はヒトプラスミノーゲンと反応したが、ヒトα２−プラスミンインヒビターとは反応しなかった。モノクローナル抗体ＰＩＣ−２はα２−プラスミンインヒビターと反応したが、ヒトプラスミノーゲンとは反応しなかった。一方、モノクローナル抗体ＰＩＣ−３はヒトプラスミノーゲンにも、ヒトα２−プラスミンインヒビターにも反応しなかった。
　前記の各ハイブリドーマは通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（あて名：〒３０５日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号）に１９９０年１２月４日から国内寄託され、１９９１年１２月１６日から国際寄託に移管されている。国際寄託番号（国際寄託番号につづく［］内は国内寄託番号）は、ハイブリドーマＰＩＣ−１が微工研条寄第３６８１号（ＦＥＲＭ　ＢＰ−３６８１）［微工研菌寄第１１８８８号（ＦＥＲＭ　Ｐ−１１８８８）］、ハイブリドーマＰＩＣ−２が微工研条寄第３６８２号（ＦＥＲＭ　ＢＰ−３６８２）［微工研菌寄第１１８８９号（ＦＥＲＭ　Ｐ−１１８８９）］そしてハイブリドーマＰＩＣ−３が微工研条寄第３６８３号（ＦＥＲＭ　ＢＰ−３６８３）［微工研菌寄第１１８９０号（ＦＥＲＭ　Ｐ−１１８９０）］である。
実施例２：モノクローナル抗体の製造
（ａ）イン・ビトロ法
　マウスハイブリドーマＰＩＣ−１、ＰＩＣ−２及びＰＩＣ−３を、それぞれ１５％ウシ胎児血清を含むＤＭＥ培地で、３７℃で５％二酸化炭素雰囲気中において７２〜９６時間培養した。培養物を遠心分離（１００００×ｇ、１０分間）後、上清に固形の硫酸アンモニウムを５０％最終濃度となるように徐々に加えた。混合物を氷冷下で３０分間攪拌した後、６０分間放置してから遠心分離（１００００×ｇ、１０分間）処理し、得られた沈渣を少量の１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解し、１０００倍量の１０ｍＭリン酸緩衝液ですでに平衡化したＤＥＡＥ−セルロースのカラムに充填した。モノクローナル抗体の溶出は１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）と０．２Ｍ−ＮａＣｌを含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）の間で濃度勾配法により行った。溶出されたモノクローナル抗体を限外濾過法で濃縮し、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）に対して透析した。ウシ血清ＩｇＧを除くために、透析物をヤギ抗ウシ血清ＩｇＧ−セファロース４Ｂカラムに通した。次に、通過液を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）で平衡化したプロテインＡ−セファロース４Ｂカラムに充填した。カラムをｐＨ３．５の緩衝液で溶出して、精製した抗ＰＩＣ特異モノクローナル抗体ＰＩＣ−１、同様にモノクローナル抗体ＰＩＣ−２、及びモノクローナル抗体ＰＩＣ−３の溶液を得た。
（ｂ）イン・ビボ法
　プリスタン（２，６，１０，１４−テトラメチルペンタデカン）０．５ｍｌを１０〜１２週齢のＢＡＬＢ／ｃ系マウスの腹腔内に投与し、それから１４〜２０日目のマウスの腹腔内にインビトロで増殖されたハイブリドーマＰＩＣ−１、ＰＩＣ−２、又はＰＩＣ−３をマウス一匹あたり２×１０６個となるように接種した。各ハイブリドーマにつき一匹のマウスから約１０〜１５ｍｌの腹水が得られた。その抗体濃度は、２〜１０ｍｇ／ｍｌであった。腹水中のモノクローナル抗体の精製は、前記のイン・ビトロ精製と同様の方法（但し、ヤギ抗ウシ血清ＩｇＧ−セファロース４Ｂのカラムを通す操作を除く）で行なった。
実施例３：モノクローナル抗体の免疫グロブリンクラス及び特異性の同定
　抗ＰＩＣ特異モノクローナル抗体ＰＩＣ−１、ＰＩＣ−２及びＰＩＣ−３の免疫グロブリンクラス及び特異性の同定はそれぞれオクテロニー免疫拡散法、エンザイムイムノアッセイ法及びイムノブロット法により行った。結果は表１に示す通りである。
　表１において、「＋」はＥＬＩＳＡ法で反応を示すことを、そして「−」はＥＬＩＳＡ法で反応を示さないことを意味する。更に、「有」はイムノブロット法で反応を示すことを、そして「無」はイムノブロット法で反応を示さないことを意味する。
実施例４：抗体と不溶性担体（ラテックス）との結合
　モノクローナル抗体ＰＩＣ−１（２．０ｍｇ／ｍｌ）を含有する水溶液２ｍｌと、ラテックス溶液（２％、Ｄｏｗ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ社：粒径０．４８２μｍ）２ｍｌとを混合し、約１時間攪拌した。遠心（２０，０００×ｇ、１０分間）した後、沈澱を０．１％ＢＳＡ溶液に懸濁し、約１時間攪拌した。再び遠心（２０，０００×ｇ、１０分間）した後、沈澱を水に懸濁し、約２時間攪拌した。こうして、モノクローナル抗体ＰＩＣ−１／ラテックス複合体含有液を得た。同様にしてモノクローナル抗体ＰＩＣ−２又はモノクローナル抗体ＰＩＣ−３を用いて、単独の各モノクローナル抗体とラテックスとの複合体の含有液を調製した。
　抗体混合物とラテックスとの複合体は以下のように調製した。モノクローナル抗体ＰＩＣ−１、モノクローナル抗体ＰＩＣ−２及びモノクローナル抗体ＰＩＣ−３をそれぞれ０．６６ｍｇ／ｍｌずつ含有する水溶液２ｍｌと、ラテックス溶液（２％、Ｄｏｗ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ社：粒径０．４８２μｍ）２ｍｌとを混合し、約１時間攪拌した。以下、前記と同様に処理して、モノクローナル抗体ＰＩＣ−１／モノクローナル抗体ＰＩＣ−２／モノクローナル抗体ＰＩＣ−３／ラテックス複合体を調製した。
　モノクローナル抗体ＰＩＣ−１及びモノクローナル抗体ＰＩＣ−２をそれぞれ１ｍｇ／ｍｌずつ含有する水溶液とラテックス溶液とを等量混合すること以外は前記と同様にして、モノクローナル抗体ＰＩＣ−１／モノクローナル抗体ＰＩＣ−２／ラテックス複合体を調製した。
実施例５：スライド凝集反応による定量
　実施例４で調製した抗体ラテックス複合体含有液４０μｌと種々な濃度のＰＩＣを含有する水溶液４０μｌとをスライドガラス上で混合し、揺動して３分後に凝集像を目視的に判定した。結果を以下の表２に示す。
　表２において、「＋」は凝集ありを、そして「−」は凝集なしを各々意味する。また、表２の抗体／ラテックス複合体の欄において、複合体の種類をその複合体に結合するモノクローナル抗体によって示す。従って、例えばＰＩＣ−１はモノクローナル抗体ＰＩＣ−１／ラテックス複合体を意味し、ＰＩＣ−１＋ＰＩＣ−２はモノクローナル抗体ＰＩＣ−１／ラテックス複合体とモノクローナル抗体ＰＩＣ−２／ラテックス複合体との等量混合液を意味する。更に、ＰＩＣ−１／ＰＩＣ−２はモノクローナル抗体ＰＩＣ−１／モノクローナル抗体ＰＩＣ−２／ラテックス複合体を意味する。
　表２において、「＋」は凝集ありを、そして「−」は凝集なしを各々意味する。
実施例６：精製ＰＩＣの添加回収試験
　５種の検体（健常人Ａ、健常人Ｂ、ＤＩＣ患者Ｃ、ＤＩＣ患者Ｄ及びＤＩＣ患者Ｅから採取した血漿）中のＰＩＣ濃度を、実施例５のモノクローナル抗体ＰＩＣ−１／モノクローナル抗体ＰＩＣ−２／ラテックス複合体溶液を用いて測定した。次いで、それぞれの検体に精製ＰＩＣ２μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ及び８μｇ／ｍｌを添加し、添加回収試験を行った。測定値は検体を倍々希釈して凝集の消失する希釈倍数から半定量的に測定した。結果は表３に示すように、良好な回収が得られた。
実施例７：健常人とＤＩＣ患者群のＰＩＣ値
　実施例６で使用したモノクローナル抗体ＰＩＣ−１／モノクローナル抗体ＰＩＣ−２／ラテックス複合体溶液を用いて、健常人血漿１２検体、ＤＩＣ患者血漿１５検体のＰＩＣ量を測定した。結果を図１に示す。健常人群のＰＩＣ量は全例１μｇ／ｍｌ未満であった。それに対してＤＩＣ患者群は全例２μｇ／ｍｌ以上であった。
産業上の利用可能性
　以上詳細に説明したとおり、本発明によれば、血漿試料の希釈操作を行わなくても、血漿中の遊離プラスミノーゲン及び遊離α２−プラスミンインヒビターの干渉を受けることなく、患者血漿中のＰＩＣ量を特異的に、簡便かつ迅速に、凝集法により測定することができる。これは、本発明によって初めて可能になったものである。従って、本発明はＤＩＣ等の診断及び病理研究に有用な手段を提供するものである。
（５７）【特許請求の範囲】
１．不溶性担体に固定化された、（１）ヒトプラスミン−α２−プラスミンインヒビター複合体及びヒトプラスミノーゲンと特異的に反応し、ヒトα２−プラスミンインヒビターとは反応
せず、ヒトプラスミノーゲンのクリングル２及びクリングル３を含む領域を認識し、ヒトプラスミノーゲンのクリングル１と反応
し、ヒトプラスミノーゲンとは反応しない