【手続補正書】
【提出日】平成27年5月13日(2015.5.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１６３遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されており、前記ＣＤ１６３対立遺伝子の不活性化により、ブタ生殖器呼吸器症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）に結合および／またはそれを脱コートすることができないＣＤ１６３タンパク質を生じる、遺伝子的に改質されたブタ。
【請求項２】
ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されている、遺伝子的に改質されたブタ。
【請求項３】
ＣＤ１６３遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されており、前記ＣＤ１６３対立遺伝子の不活性化により、ブタ生殖器呼吸器症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）に結合および／またはそれを脱コートすることができないＣＤ１６３タンパク質を生じ；かつ／または
ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されている、
請求項１または２に記載の遺伝子的に改質されたブタ。
【請求項４】
ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されており、ＣＤ１６３遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されている、遺伝子的に改質されたブタ。
【請求項５】
ＣＤ１６３遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されており、前記ＣＤ１６３対立遺伝子の不活性化により、ブタ生殖器呼吸器症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）に結合および／またはそれを脱コートすることができないＣＤ１６３タンパク質を生じる、遺伝子的に改質されたブタを産生するための方法であって、以下を含む方法：
ブタ卵母細胞を除核することと、
前記卵母細胞を、ドナーブタ線維芽細胞と融合させることであって、前記線維芽細胞のゲノムが少なくとも１つの不活性化されたＣＤ１６３対立遺伝子を含むことと、
前記卵母細胞を活性化して、胚を産生すること。
【請求項６】
ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されている、遺伝子的に改質されたブタを産生するための方法であって、以下を含む、方法：
ブタ卵母細胞を除核することと、
前記卵母細胞を、ドナーブタ線維芽細胞と融合させることであって、前記線維芽細胞のゲノムが少なくとも１つの不活性化されたＳＩＧＬＥＣ−１対立遺伝子を含むことと、
前記卵母細胞を活性化して胚を産生すること。
【請求項７】
前記胚を代理母ブタの生殖器系に移植することをさらに含む、請求項５または６に記載の方法であって、前記代理母ブタは発情を開始しているがまだ排卵は完了しておらず、妊娠および満期出産により、ゲノムが少なくとも１つの不活性化されたＳＩＧＬＥＣ−１対立遺伝子または少なくとも１つの不活性化されたＣＤ１６３対立遺伝子を含む遺伝子的に改質されたブタが産生される、方法。
【請求項８】
ＣＤ１６３遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されており、前記ＣＤ１６３遺伝子の不活性化により、ブタ生殖器呼吸器症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）に結合および／またはそれを脱コートすることができないＣＤ１６３タンパク質を生じる、遺伝子的に改質されたブタを産生するための方法であって、以下を含む方法：
請求項５または７に記載の方法によって産生された、ＣＤ１６３遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されている雌の遺伝子的に改質されたブタを、請求項５または７に記載の方法によって産生された雄の遺伝子的に改質されたブタと交配して、Ｆ１子孫を産生することと、
前記Ｆ１子孫をスクリーニングして、前記ＣＤ１６３遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されている遺伝子的に改質されたブタを特定すること。
【請求項９】
ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されている遺伝子的に改質されたブタを産生するための方法であって、以下を含む方法：
請求項６または７に記載の方法によって産生された、ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されている雌の遺伝子的に改質されたブタを、請求項６または７に記載の方法によって産生された雄の遺伝子的に改質されたブタと交配して、Ｆ１子孫を産生することと、
前記Ｆ１子孫をスクリーニングして、前記ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されている遺伝子的に改質されたブタを特定すること。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの対立遺伝子が部分的または完全な欠失によって不活性化されている；
前記少なくとも１つの対立遺伝子がＣｒｅ−ｌｏｘ組換え系を使用して不活性化されている；
前記ＳＩＧＬＥＣ−１対立遺伝子が、エキソン１の一部ならびにエキソン２および３の全部の欠失によって不活性化されている；かつ／または
前記ＣＤ１６３対立遺伝子が、ＣＤ１６３Ｌのスカベンジャー受容体システインリッチ（ＳＲＣＲ）ドメイン８を用いてのエキソン７の置換によって不活性化されている、
請求項５〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記除核が、顕微操作培地においてマイクロピペットを用いて行なわれる；
前記融合が融合培地において行なわれる；かつ／または
前記卵母細胞の活性化が、前記卵母細胞をチメロサールの存在下でインキュベーションすることを含む、
請求項５〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記移植が、前記胚を、前記代理母の卵巣采を通して輸卵管へと移植することを含む、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の両方の対立遺伝子およびＣＤ１６３遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されており、前記ＣＤ１６３遺伝子の不活性化により、ブタ生殖器呼吸器症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）に結合および／またはそれを脱コートすることができないＣＤ１６３タンパク質を生じる、遺伝子的に改質されたブタを産生するための方法であって、以下を含む方法：
請求項１に記載の雌の遺伝子的に改質されたブタを、請求項２に記載の雄の遺伝子的に改質されたブタと交配するか、あるいは請求項１に記載の雄の遺伝子的に改質されたブタを、請求項２に記載の雌の遺伝子的に改質されたブタと交配して、Ｆ１子孫を産生することと、前記Ｆ１子孫をスクリーニングして、前記ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されており、前記ＣＤ１６３遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されている遺伝子的に改質されたブタを特定することと、前記ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されており、前記ＣＤ１６３遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されている前記遺伝子的に改質されたブタを、互いに交配して、Ｆ２子孫を産生することと、前記Ｆ２子孫をスクリーニングして、前記ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の両方の対立遺伝子および前記ＣＤ１６３遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されている遺伝子的に改質されたブタを特定すること；
ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されている雌の遺伝子的に改質されたブタを、ＣＤ１６３遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されている雄の遺伝子的に改質されたブタと交配するか、あるいはＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されている雄の遺伝子的に改質されたブタを、ＣＤ１６３遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されている雌の遺伝子的に改質されたブタと交配して、Ｆ１子孫を産生することと、前記Ｆ１子孫を交配して、Ｆ２子孫を産生することと、前記Ｆ２子孫をスクリーニングして、前記ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の両方の対立遺伝子および前記ＣＤ１６３遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されている遺伝子的に改質されたブタを特定すること；または
ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子およびＣＤ１６３遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されている遺伝子的に改質されたブタを、ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子およびＣＤ１６３遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されている別の遺伝子的に改質されたブタと交配して、Ｆ１子孫を産生することと、前記Ｆ１子孫をスクリーニングして、前記ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の両方の対立遺伝子および前記ＣＤ１６３遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されている遺伝子的に改質されたブタを特定すること。
【請求項１４】
前記スクリーニングが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）またはサザンブロットを使用することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されている；
ＣＤ１６３遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されており、前記ＣＤ１６３遺伝子の不活性化により、ブタ生殖器呼吸器症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）に結合および／またはそれを脱コートすることができないＣＤ１６３タンパク質を生じる；
ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子およびＣＤ１６３遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子が不活性化されており、前記ＣＤ１６３遺伝子の不活性化により、ブタ生殖器呼吸器症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）に結合および／またはそれを脱コートすることができないＣＤ１６３タンパク質を生じる；または
ＳＩＧＬＥＣ−１遺伝子の両方の対立遺伝子およびＣＤ１６３遺伝子の両方の対立遺伝子が不活性化されており、前記ＣＤ１６３遺伝子の不活性化により、ブタ生殖器呼吸器症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）に結合および／またはそれを脱コートすることができないＣＤ１６３タンパク質を生じる、
請求項５〜１４のいずれか一項に記載の方法によって産生される遺伝子的に改質されたブタの子孫。