(57)【要約】【課題】血中の尿毒症物質の蓄積に起因する症状若しくは疾患を効果的に改善する作用を有する、尿毒症の予防又は改善剤や、血中の尿毒症物質の濃度を効果的に低減（減少）させる作用を有する、血中尿毒症物質の低減剤を提供すること。【解決手段】配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、好ましくはリナクロチドを、経口投与などの方法により投与すると、血中における尿毒症物質の蓄積（増加）に起因する症状若しくは疾患の予防又は改善（治療）を行うことができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、及び
配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１若しくは２個のアミノ酸が付加、置換、欠失及び／又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ血中尿毒症物質の濃度を低減させる作用を有するペプチド
からなる群から選択される１種又は２種以上のペプチドを有効成分として含有することを特徴とする尿毒症の予防又は改善剤。
【請求項２】
経口投与することを特徴とする請求項１に記載の予防又は改善剤。
【請求項３】
ペプチドがリナクロチドであることを特徴とする請求項１又は２に記載の予防又は改善剤。
【請求項４】
尿毒症物質が、トリメチルアミン−Ｎ−オキシド、硫酸インドキシル、クレアチニン、硫酸フェニル、インドール、及びフェノールから選択される１又は２種以上の物質であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の予防又は改善剤。
【請求項５】
尿毒症が、トリメチルアミン−Ｎ−オキシドに起因する循環器系異常であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の予防又は改善剤。
【請求項６】
循環器系異常が動脈硬化症であることを特徴とする請求項５に記載の予防又は改善剤。
【請求項７】
配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、及び
配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１若しくは２個のアミノ酸が付加、置換、欠失及び／又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ血中尿毒症物質の濃度を低減させる作用を有するペプチド
からなる群から選択される１種又は２種以上のペプチドを有効成分として含有することを特徴とする血中尿毒症物質の低減剤。
【請求項８】
経口投与することを特徴とする請求項７に記載の低減剤。
【請求項９】
ペプチドがリナクロチドであることを特徴とする請求項７又は８に記載の低減剤。
【請求項１０】
尿毒症物質が、トリメチルアミン−Ｎ−オキシド、硫酸インドキシル、クレアチニン、硫酸フェニル、インドール、及びフェノールから選択される１又は２種以上の物質であることを特徴とする請求項７〜９のいずれかに記載の低減剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド；及び配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１若しくは２個のアミノ酸が付加、置換、欠失及び／又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ血中尿毒症物質の濃度を低減させる作用を有するペプチド；（以下、これらを総称して「本件ペプチド類」ということがある）からなる群から選択される１種又は２種以上のペプチドを有効成分として含有する尿毒症の予防又は改善剤（以下、「本件予防／改善剤」ということがある）や、血中の尿毒症物質の低減剤（以下、「本件低減剤」ということがある）に関する。
【背景技術】
【０００２】
腎臓は、体内の恒常性（バランス）を調節する臓器である。腎機能の１つとして、血液中の老廃物や毒素（尿毒症物質）を取り込み、尿中に送り出して体外に排泄する作用がある。かかる腎機能が低下すると、本来腎臓で排泄されるべき尿毒症物質は、体内に蓄積されやすくなり、吐き気や食欲低下等の症状の他、腎臓における細胞が傷害され腎機能のさらなる低下を引き起こす。また、腎機能が低下した者は、健常者と較べ、脳卒中や心筋梗塞に罹患するリスクが高いことも知られている。さらに、尿毒症物質の１つであるトリメチルアミン−Ｎ−オキシド（ＴＭＡＯ；Trimethylamine-N-oxid）は、動脈硬化の悪化の一因であることが報告されている（非特許文献１）。したがって、このような尿毒症物質の蓄積により引き起こされる症状や疾患（尿毒症）を予防又は治療することは、吐き気や食欲低下等の症状や、腎障害の悪化を治療するだけでなく、脳卒中、心臓病、動脈硬化症等を予防又は治療する観点からも必要となる。
【０００３】
尿毒症物質吸着機能を有する製剤として、活性炭の一種、球形吸着炭クレメジン（登録商標：呉羽化学）が知られている（特許文献１、２）。クレメジンは、石油系炭化水素由来の球形微多孔質炭素を高温で酸化及び還元処理して得た黒色球形の粒子であり、体内に吸収されずに、消化管に存在する有害物質を吸着し、便とともに排泄されることにより血中尿毒症物質の除去（低減）及び腎機能の低下を抑える目的で使用される。その他、尿毒症物質吸着機能を有する血中尿毒症物質の低減剤として、カーボンナノチューブ（特許文献３）、尿毒症物質特異的認識ポリマー（特許文献４）等が知られている。また、本発明者らは、チロシン類が、血中の尿毒症物質の濃度を低減させる作用を有することを報告している（特願２０１６−２１３７０３）。
【０００４】
一方、リンゼス（Linzess）（登録商標）（リナクロチド）は、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを有効成分とする便秘型過敏性腸症候群治療薬である。しかしながら、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドが、尿毒症の予防又は治療効果を有することはこれまで知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特公昭６２−２９３６８号公報
【特許文献２】特公昭６３−６０００９号公報
【特許文献３】特開２００６−８６０２号公報
【特許文献４】特開２００４−１３１４０６号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Tang WH et al. N Engl J Med. 2013; 368: 1575-84.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、血中の尿毒症物質の蓄積に起因する症状若しくは疾患を効果的に改善する作用を有する、尿毒症の予防又は改善剤や、血中の尿毒症物質の濃度を効果的に低減（減少）させる作用を有する、血中尿毒症物質の低減剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究を続けている。その過程において、本件ペプチド類が、血中尿毒症物質の濃度を効果的に低減させる作用を有することを見いだした。本実施例で具体的に示した、尿毒症物質の１つであるＴＭＡＯは、動脈硬化悪化の一因であることが報告されている（非特許文献１）。したがって、かかる従来技術も考慮すると、本件ペプチド類は、ＴＭＡＯに起因する循環器系異常（例えば、動脈硬化症）等の尿毒症に対して予防又は治療効果を有することが十分考えられる。本発明は、これらの知見に基づき完成するに至ったものである。
【０００９】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
〔１〕配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、及び
配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１若しくは２個のアミノ酸が付加、置換、欠失及び／又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ血中尿毒症物質の濃度を低減させる作用を有するペプチド
からなる群から選択される１種又は２種以上のペプチドを有効成分として含有することを特徴とする尿毒症の予防又は改善剤。
〔２〕経口投与することを特徴とする上記〔１〕に記載の予防又は改善剤。
〔３〕ペプチドがリナクロチドであることを特徴とする上記〔１〕又は〔２〕に記載の予防又は改善剤。
〔４〕尿毒症物質が、トリメチルアミン−Ｎ−オキシド、硫酸インドキシル、クレアチニン、硫酸フェニル、インドール、及びフェノールから選択される１又は２種以上の物質であることを特徴とする上記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の予防又は改善剤。
〔５〕尿毒症が、トリメチルアミン−Ｎ−オキシドに起因する循環器系異常であることを特徴とする上記〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の予防又は改善剤。
〔６〕循環器系異常が動脈硬化症であることを特徴とする上記〔５〕に記載の予防又は改善剤。
〔７〕配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、及び
配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１若しくは２個のアミノ酸が付加、置換、欠失及び／又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ血中尿毒症物質の濃度を低減させる作用を有するペプチド
からなる群から選択される１種又は２種以上のペプチドを有効成分として含有することを特徴とする血中尿毒症物質の低減剤。
〔８〕経口投与することを特徴とする上記〔７〕に記載の低減剤。
〔９〕ペプチドがリナクロチドであることを特徴とする上記〔７〕又は〔８〕に記載の低減剤。
〔１０〕尿毒症物質が、トリメチルアミン−Ｎ−オキシド、硫酸インドキシル、クレアチニン、硫酸フェニル、インドール、及びフェノールから選択される１又は２種以上の物質であることを特徴とする上記〔７〕〜〔９〕のいずれかに記載の低減剤。
【発明の効果】
【００１０】
本件ペプチド類は、血中の尿毒症物質濃度の増加（上昇）を減少（抑制）又は予防する作用を有するため、血中の尿毒症物質濃度を正常値に調節し、血中の尿毒症物質の蓄積（増加）に起因する症状若しくは疾患の予防又は改善（治療）に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】健常マウスの「対照群」（ｎ＝８）、リナクロチド未投与のアデニン誘発性慢性腎臓病（ＣＫＤ；chronic kidney disease）マウスの「０−ＣＫＤ群」（ｎ＝７）、１０μｇ／ｋｇ／日のリナクロチドを投与したＣＫＤマウスの「１０−ＣＫＤ群」（ｎ＝８）、及び１００μｇ／ｋｇ／日のリナクロチドを投与したＣＫＤマウスの「１００−ＣＫＤ群」（ｎ＝９）から血漿試料を調製し、血漿中のＴＭＡＯ（図１Ａ）、及び硫酸インドキシル（Indoxyl sulfate；Ｉｎｄ−Ｓ）（図１Ｂ）の濃度を測定した結果（平均値±標準偏差［Ｓ．Ｄ．］）を示す図である。図中の「＊」及び「＊＊」は、ウィルコクソン（Wilcoxon）の符号付順位検定により、統計学的に有意差（それぞれ、Ｐ＜０．０５及びＰ＜０．０１）があることを示す。
【図２】「対照群」（ｎ＝８）、「０−ＣＫＤ群」（ｎ＝７）、「１０−ＣＫＤ群」（ｎ＝８）、及び「１００−ＣＫＤ群」（ｎ＝９）から血漿試料を調製し、血漿中のクレアチニン（Creatinine）（図２Ａ）、及び硫酸フェニル（Phenyl sulfate；ＰＳ）（図２Ｂ）の濃度を測定した結果（平均値±標準偏差［Ｓ．Ｄ．］）を示す図である。図中の「＊」及び「＊＊」は、ウィルコクソンの符号付順位検定により、統計学的に有意差（それぞれ、Ｐ＜０．０５及びＰ＜０．０１）があることを示す。
【００１２】
また本発明の実施の他の形態として、本件ペプチド類から選択される１種又は２種以上のペプチドを血中尿毒症物質の低減を必要とする患者に投与することにより、尿毒症を予防又は改善（治療）する方法や、尿毒症の予防又は改善（治療）剤として使用するための、本件ペプチド類から選択される１種又は２種以上のペプチドや、尿毒症の予防又は改善（治療）における使用のための、本件ペプチド類から選択される１種又は２種以上のペプチドや、尿毒症の予防又は改善（治療）剤を製造するための、本件ペプチド類から選択される１種又は２種以上のペプチドの使用を挙げることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本件予防／改善剤は、「尿毒症を予防又は改善するため」という用途が限定された本件ペプチド類を有効成分として含有する剤であり、また、本件低減剤は、血中の尿毒症物質を低減するため」という用途が限定された本件ペプチド類を有効成分として含有する剤である（これら剤を総称して、「本件剤」ということがある）。
【００１４】
本件ペプチド類としては、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１若しくは２個のアミノ酸が付加、置換、欠失及び／又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ血中尿毒症物質の濃度を低減させる作用を有するペプチドであれば特に制限されず、修飾されたアミノ酸及び／又は安定同位体標識されたアミノ酸を含むものであってもよい。かかるアミノ酸の修飾としては、例えば、ペプチド結合の主鎖、アミノ酸側鎖、アミノ末端、及び／又はカルボキシル末端において、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、ビオチン化、ジスルフィド結合（Ｓ−Ｓ結合）、糖鎖の付加、リン酸化等を挙げることができる。
【００１５】
本件ペプチド類としては、配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１番目のシステイン（Ｃ）残基と、６番目のＣ残基とがジスルフィド結合し、２番目のＣ残基と、１０番目のＣ残基とがジスルフィド結合し、かつ５番目のＣ残基と、１３番目のＣ残基とがジスルフィド結合したペプチド、すなわち、下記の構造式で表わされるリナクロチド（Linaclotide）が好ましい。
【００１６】
【化１】
2018127435.tif 000002
【００１７】
本件ペプチド類の作製方法については特に制限なく、本件ペプチド類のアミノ酸配列情報を基に、公知のペプチド合成法に従って作製することができる。ペプチド合成法としては、例えば、固相合成法、及び液相合成法のいずれであってもよい。固相合成法を用いて本件ペプチド類を作製する場合、例えば、Ｆｍｏｃ法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、ｔＢｏｃ法（ｔ−ブチルオキシカルボニル法）などの固相合成法を用い、本件ペプチド類を構成し得るペプチド又はアミノ酸と、残余部分とを縮合し、（生成物が保護基を有する場合は）保護基を脱離することにより目的とする本件ペプチド類を製造することができる。固相合成法のために、ＡＰＥＸ３９６（アドバンストケムテック社製）、４３３Ａ（アプライドバイオシステムズ社製）、ＰＳ３（プロテインテクノロジーズ社製）、９０５０（パーセプティブ社製）、ＰＳＳＭ−８（島津製作所製）などの市販のペプチド合成機器を用いることができる。固相合成法において用いるレジンとしては、特に制限されず、例えば「Ｒｉｎｋ  ａｍｉｄｅ  ＡＭ  Ｒｅｓｉｎ」、「Ｆｍｏｃ−ＡＡ−Ｗａｎｇ  Ｒｅｓｉｎ」、「ＡＡ−２−Ｃｌ−Ｔｒｔ  Ｒｅｓｉｎ」を挙げることができる。また、液相合成法を用いて本件ペプチド類を作製する場合、Ｎ−保護アミノ酸誘導体を一残基ずつ段階的に縮合していく方法により、本件ペプチド類を作製することができる。保護基の有無などによって、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）法、活性エステル法、混合酸無水物法などの方法を用いることができる。また、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ・ＨＣｌ）、（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）試薬、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＤＩ）などの縮合剤を用いる方法によっても、本件ペプチド類を作製することができる。また、本件ペプチド類として、リンゼス（Linzess）（登録商標）（リナクロチド）（アステラス社製）等の市販品を用いることもできる。
【００１８】
本件剤には、医薬品（尿毒症の予防用又は改善［治療］用製剤、血中尿毒症物質の低減用製剤）の他、健康補助食品、保健機能食品、サプリメント等の特定の機能を有し、健康維持などを目的として摂食される医薬品類似の（食品）組成物や機能性食品も含まれる。
【００１９】
本件予防／改善剤の予防又は改善対象の疾患である尿毒症としては、尿毒症物質に起因する症状又は疾患であれば特に制限されず、かかる症状又は疾患としては、例えば、食欲不振、悪心、嘔吐、口臭、口内炎、腸炎等の消化器系異常；無欲、無関心、記銘力低下、うつ状態、傾眠、昏睡、多発神経炎、（発達性）協調運動障害、食思不振等の神経系異常；動脈硬化症（例えば、アテローム性動脈硬化症、細動脈硬化症、中膜石灰化硬化症）、貧血、赤血球造血障害、高血圧、虚血性心疾患、心膜炎、心筋炎、（血液）凝固異常、心不全、心血管障害、心筋梗塞、心筋症、不整脈、動脈硬化性腎動脈狭窄、動脈硬化性腎症、脳梗塞、頚部血管狭窄等の循環器系異常；色素沈着、掻痒（感）、皮下出血、皮膚萎縮、感染、アトピー、脱毛等の皮膚異常（疾患）；アルブミン尿、急性腎不全、急性尿細管壊死、腎性貧血、慢性腎不全、尿細管間質障害、急性腎炎、慢性腎炎、ネフローゼ、糖尿病性腎症、腎性骨異常症（例えば、腎性骨異栄養症）、溢水等の腎機能障害；脳卒中；癌；自閉症；免疫不全；骨異常症；副甲状腺亢進症；インスリン抵抗性；栄養不良；炎症；震戦；ＩｇＡ腎症、嚢胞腎、肝機能障害（例えば、劇症肝炎、脂肪肝、ＮＡＳＨ、ＮＡＦＬＤ）、癌（例えば、胆汁発がん）等のＬＰＳ（Lipopolysaccharide）が関与する症状又は疾患；潰瘍性大腸炎、クローン病等の炎症性腸疾患；ループス、強皮症、リウマチ等の自己免疫疾患；肥満；メタボリックシンドローム；糖尿病；自閉症；パーキンソン病；アルツハイマー病；サルコペニアを挙げることができる。
【００２０】
本明細書において、「尿毒症物質（「尿毒症性毒素」ともいう）」とは、正常な腎により排泄される物質（老廃物や毒素等）であって、腎機能低下等の何らかの原因により排泄機能が低下したときに、血中に増加（蓄積）して尿毒症の症状又は疾患を引き起こす物質を意味する。
【００２１】
上記尿毒症物質としては、例えば、トリメチルアミン−Ｎ−オキシド（ＴＭＡＯ；Trimethylamine-N-oxid）、１−メチルアデノシン（1-methyladenosine）、１−メチルグアノシン（1-methylguanosine）、１−メチルイノシン（1-methylinosine）、ＡＤＭＡ（Asymmetric dimethylarginine）、α−ケト−δ−グアニジノ吉草酸（α-keto-δ-guanidinovaleric acid）、α−Ｎ−アセチルアルギニン（α-N-acetylarginine）、アラビトール（Arabitol）、アルギニン酸（Argininic acid）、ベンジルアルコール（Benzylalcohol）、β−グアニジノプロピオン酸（β-guanidinopropionic acid）、β−リポトロピン（β-lipotropin）、クレアチン（Creatine）、クレアチニン（Creatinine）、シチジン（Cytidine）、ジメチルグリシン（Dimethylglycine）、エリスリトール（Erythritol）、γ−グアニジノ酪酸（γ-guanidinobutyric acid）、グアニジン（Guanidine）、グアニジノ酢酸（Guanidinoacetic acid）、グアニジノコハク酸（Guanidonosuccinic acid）、ヒポキサンチン（Hypoxanthine）、マロンジアルデヒド（Malondialdehyde）、マンニトール（Mannitol）、メチルグアニジン（Methylguanidine）、ミオイノシトール（Myoinositol）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン（N2,N2-dimethylguanosine）、Ｎ４−アセチルシチジン（N4-acetylcytidine）、Ｎ６−メチルアデノシン（N6-methyladenosine）、Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン（N6-threonylcarbamoyladenosine）、オロト酸（Orotic acid）、オロチジン（Orotidine）、シュウ酸塩（Oxalate）、フェニルアセチルグルタミン（Phenylacetylglutamine）、プソイドウリジン（Pseudouridine）、ＳＤＭＡ（Symmetric dimethylarginine）、ソルビトール（Sorbitol）、タウロシアミン（Taurocyamine）、トレイトール（Threitol）、チミン（Thymine）、ウラシル（Uracil）、尿素（Urea）、尿酸（Uric acid）、ウリジン（Uridine）、キサンチン（Xanthine）、キサントシン（Xanthosine）、アドレノメジュリン（Adrenomedullin）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（Atrial Natriuretic Peptide；ＡＮＰ）、β２−マイクログロブリン（β2-microglobulin）、β−エンドルフィン（β-endorphin）、コレシストキニン（Cholecystokinin）、ＣＣ１６（Clara cell protein）、補体Ｄ因子（Complement factor D）、システチンＣ（Cystatin C）、脱顆粒抑制タンパク質１（Degranulation inhibiting protein 1）、デルタ睡眠誘発ペプチド（Delta-sleep inducing peptide）、エンドセリン（Endothelin）、ヒアルロン酸（Hyaluronic acid）、インターロイキン−１β（Interleukin-1β）、インターロイキン−６（Interleukin-6）、κ−Ｉｇ軽鎖（κ-Ig light chain）、λ−Ｉｇ軽鎖（λ-Ig light chain）、レプチン（Leptin）、メチオニン−エンケファリン（Methionine-enkephalin）、神経ペプチド（Neuropeptide）、副甲状腺ホルモン（Parathyroid hormone）、レチノール結合タンパク質（Retinol-binding protein）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α（Tumor necrosis factor-α）、２−メトキシレゾルシノール（2-methoxyresorcinol）、３−デオキシグルコソン（3-deoxyglucosone）、ＣＭＰＦ（3-Carboxy-4-methyl-5-propyl-2-furanpropionate）、フルクトースリジン（Fructoselysine）、グリオキサール（Glyoxal）、馬尿酸（Hippuric acid）、ホモシステイン（Homocysteine）、ヒドロキノン（Hydroquinone）、インドール−３−酢酸（Indole-3-acetic acid）、硫酸インドキシル（Indoxyl sulfate）又はその前駆体（インドール［Indole］）、キヌレニン（Kinurenine）、キヌレン酸（Kynurenic acid）、レプチン（Leptin）、メラトニン（Melatonin）、メチルグリオキサール（Methylglyoxal）、Ｎ−カルボキシメチルリジン（N-(carboxymethyl)lysine）、硫酸ｐ−クレシル（p-Cresyl sulfate）又はその前駆体（ｐ−クレゾール［p-Cresol］）、ペントシジン（Pentosidine）、硫酸フェニル（Phenyl sulfate）又はその前駆体（フェノール［Phenol］）、Ｐ−ＯＨ−馬尿酸（P-OHhippuric axid）、プトレシン（Putrescine）、キノリン酸（Quinolinic acid）、レチノール結合タンパク質（Retinol-binding protein）、スペルミジン（Spermidine）、スペルミン（Spermine）などを挙げることができる。
【００２２】
上記尿毒症物質としては、ＴＭＡＯ、硫酸インドキシル及びその前駆体（インドール）、クレアチニン、並びに硫酸フェニル及びその前駆体（フェノール）から選択される１又は２種以上の物質が好ましく、また、上記尿毒症としては、ＴＭＡＯに起因する循環器系異常が好ましく、ＴＭＡＯに起因する動脈硬化症がより好ましい。
【００２３】
本明細書において、「血中尿毒症物質の低減」とは、尿毒症物質又はその前駆体の産生（生成）抑制や、尿毒症物質又はその前駆体の体外への排出促進等の作用により、血液中に含まれる尿毒症物質の濃度が低減（減少）することを意味する。
【００２４】
本件剤は、必要に応じて、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、等張剤、添加剤、被覆剤、可溶化剤、潤滑剤、滑走剤、溶解補助剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等の配合成分がさらに添加されたものを例示することができる。かかる配合成分としては、具体的に、水、生理食塩水、動物性脂肪及び油、植物油、乳糖、デンプン、ゼラチン、結晶性セルロース、ガム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、グリセリンを例示することができる。
【００２５】
本件剤の投与形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液などの剤型で投与する経口投与や、溶液、乳剤、懸濁液などの剤型を注射、又はスプレー剤の型で鼻孔内投与する非経口投与を挙げることができ、経口投与が好ましい。
【００２６】
本件剤の投与量は、年齢、体重、性別、症状、薬剤への感受性等に応じて適宜決定される。通常、１μｇ〜２００ｍｇ／ｄａｙの投与量の範囲で、好ましくは２μｇ〜２０００μｇ／ｄａｙの投与量の範囲で、より好ましくは３〜２００μｇ／ｄａｙの投与量の範囲で、さらに好ましくは４〜２０μｇ／ｄａｙの投与量の範囲で、一日あたり単回又は複数回（例えば、２〜４回）に分けて投与されるが、症状の改善の状況に応じて投与量を調節してよい。
【００２７】
本件剤の投与対象としては、特に制限されないが、通常、血中尿毒症物質の低減を必要とする者、具体的には、腎機能低下等が原因で、血中の尿毒症物質の濃度が増加（上昇）した者や、尿毒症物質が体内に蓄積した者である。
【００２８】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例】
【００２９】
１．方法
［アデニン誘発性ＣＫＤマウスの作製］
Ｃ５７ＢＬ／６（７週齢、オス、日本クレア社製）を、１週間馴化させ、各ケージの体重に、ばらつきが無いようグルーピングした。ＣＫＤ群には、８週齢時から０．２％アデニン飼料（日本クレア社製）を６週間給与し、対照群には通常飼料（ＣＥ−２）を給与した。脱水による死亡を防ぐため、通常の給水に加え、外付けの給水ボトルもセットした。飼育は中央棟の飼育マニュアルに則り、４〜５匹／ケージ、飼育温度２４℃、１２時間の明暗サイクル、不断給餌、自由飲水とした。
【００３０】
［リナクロチドのストック液の調製］
１５ｍＬチューブに、リナクロチド（Cat＃：L465880、Toronto Research Chemicals社製）５ｍｇを加え、５ｍＬの生理食塩水で溶解し、１ｍｇ／ｍＬのリナクロチドを調製し、−２０℃で保存した。
【００３１】
［アデニン誘発性ＣＫＤマウスへのリナクロチド投与試験］
ＣＫＤ群におけるアデニン誘発性ＣＫＤマウスの飲水量及び体重を測定した後、リナクロチドのストック液を、生理的水溶液を１００μＬ投与したときのリナクロチド投与量が、１０μｇ／ｋｇ（マウス体重）／日、又は１００μｇ／ｋｇ／日となるように、生理的水溶液で調整し、１００μＬのリナクロチド含有生理的水溶液、又はコントロールの生理的水溶液を、１ｍＬシリンジを装着したマウス用経口ゾンデ（ディスポーザブルフィーディングニードル、ＦＧ７２０２、先玉径２．０ｍｍ、サイズ１．１８×５０ｍｍ）を用いて２週間継続的に投与した。
【００３２】
［血漿試料のサンプリングと測定］
２週間の投与後、定法にしたがって心臓採血（５００μＬ）と血漿試料の調製を行い、TSQ Quantum Ultra（Thermo Fisher Scientific社製）及びNANOSPACE SI-2（資生堂社製）から構成されるＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて、血漿中の４種類の尿毒症物質（ＴＭＡＯ、硫酸インドキシル、クレアチニン、及び硫酸フェニル）の濃度を測定した。
【００３３】
２．結果
０−ＣＫＤ群マウスにおける血中ＴＭＡＯ濃度は４４．７μＭであり、対照群マウスにおける血中ＴＭＡＯ濃度１．５８μＭと比べ、増加していた（図１Ａ、並びに表１及び５参照）。また、０−ＣＫＤ群マウスにおける血中硫酸インドキシル濃度（１６．７μｇ／ｍＬ）、クレアチニン濃度（３０．７μＭ）、及び硫酸フェニル濃度（２３．２μＭ）についても同様に、対照群マウスにおける血中硫酸インドキシル濃度（１．０１μｇ／ｍＬ）、クレアチニン濃度（１１．７μＭ）、及び硫酸フェニル濃度（３．４８μＭ）と比べ、増加していた（図１Ｂ、２Ａ、及び２Ｂ、並びに表２〜５参照）。
一方、リナクロチドを投与したＣＫＤマウスである１０−ＣＫＤ群マウス及び１００−ＣＫＤ群マウスにおける血中ＴＭＡＯ濃度、硫酸インドキシル濃度、クレアチニン濃度、及び硫酸フェニル濃度は、いずれにおいても、リナクロチド未投与のＣＫＤマウスである０−ＣＫＤ群マウスと比べ、減少していた（図１及び２、並びに表１〜５参照）。
これらの結果は、リナクロチドの有効成分である配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドは、腎機能低下により血中に蓄積した尿毒症物質（ＴＭＡＯ、硫酸インドキシル、クレアチニン、硫酸フェニル等）を低減させる効果を有し、尿毒症の改善に有効であることを示している。一方、動脈硬化モデルマウスの血中のＴＭＡＯ濃度は、健常マウスと比べ、増加することや、かかるモデルマウスに抗菌薬を投与して腸内細菌数を減少させると、血中のＴＭＡＯ濃度増加は抑制され、動脈硬化の悪化が生じなかったことが報告されている（非特許文献１参照）。かかる従来技術も考慮すると、リナクロチドの有効成分である配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるペプチドは、腸内細菌叢を調節する等により、ＴＭＡＯに起因する動脈硬化症等の循環器系異常に対して予防又は治療効果を有することが十分考えられる。さらに、上記非特許文献１には、抗菌薬を動脈硬化モデルマウスに継続的に投与すると、抗菌薬耐性の腸内微生物叢が増加し、ＴＭＡＯ抑制効果が認められなくなったことも記載されている（１５８３頁の左欄参照）。一方、抗菌薬ではなくペプチドを有効成分とする本件剤は、かかる問題点が生じるおそれがないため、動脈硬化症等の循環器系異常に対する予防又は治療効果は持続することが期待される。
【００３４】
【表１】
2018127435.tif 000003
【００３５】
【表２】
2018127435.tif 000004
【００３６】
【表３】
2018127435.tif 000005
【００３７】
【表４】
2018127435.tif 000006
【００３８】
【表５】
2018127435.tif 000007
表中の「０−ＣＫＤ群／対照群比率」は、「対照群マウスにおける血中の各種尿毒症物質（ＴＭＡＯ、硫酸インドキシル、又はクレアチニン）濃度」に対する「０−ＣＫＤ群マウスにおける血中の各種尿毒症物質濃度」の比率を示す。また、表中の「１０−ＣＫＤ群／０−ＣＫＤ群比率」は、「０−ＣＫＤ群マウスにおける血中の各種尿毒症物質濃度」に対する「１０−ＣＫＤ群マウスにおける血中尿毒症物質濃度」の比率を示す。また、表中の「１００−ＣＫＤ群／０−ＣＫＤ群比率」は、「０−ＣＫＤ群マウスにおける血中の各種尿毒症物質濃度」に対する「１００−ＣＫＤ群マウスにおける血中尿毒症物質濃度」の比率を示す。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明は、血中の尿毒症物質（例えば、ＴＭＡＯ）の蓄積（増加）に起因する症状若しくは疾患（例えば、動脈硬化症等の循環器系異常）の予防又は改善（治療）に資するものである。
【図１】
2018127435.tif 000008
【図２】
2018127435.tif 000009
【配列表】
2018127435000001.app