【手続補正書】
【提出日】平成27年7月3日(2015.7.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
驚くべきことに、変異型断片における少なくとも1つのジスルフィド結合の導入が、野生型OspA断片を含むポリペプチドに比較して、変異型OspA断片を含むポリペプチドの防御能力を増加させることが、感染のインビボモデルにより判明した。実施例に示されるように、B.アフゼリOspAのC末端断片に対する少なくとも1つのジスルフィド結合の導入は、その防御能力を、ジスルフィド結合を有しない野生型OspA断片に比較して増大させた。表2および表3では、変異型OspA断片による免疫化後には、野生型OspA断片に比較してより少数の動物のみが感染したことから、野生型断片（「S2D0」）と比較した場合の、ジスルフィド結合が導入された変異型断片（「S2D1〜5」）の防御能力を証明するデータが提供される。試験された変異型OspA断片の幾つかは、陽性対照抗原（非脂質化全長OspAタンパク質）によって運ばれるものと同等の防御を提供した。
[本発明1001]
細胞表層タンパク質A（OspA）の変異型断片を含むポリペプチドであって、変異型OspA断片が、
a）ボレリア（Borrelia）のOspAタンパク質のC末端ドメインからなり；かつ
b）少なくとも1つのジスルフィド結合の少なくとも導入によって、対応する野生型OspA断片配列とは異なる、ポリペプチド。
[本発明1002]
前記変異型OspA断片が、プラセボ対照と比較して少なくとも50%のボレリア針曝露法における防御能力の差（Δpc）を有する、本発明1001のポリペプチド。
[本発明1003]
前記変異型OspA断片における少なくとも1つのジスルフィド結合の導入が、ボレリア針曝露法において測定したときに、ジスルフィド結合を有しないそれぞれのOspA断片を含むポリペプチドに比べて前記変異型OspA断片を含むポリペプチドの防御能力を10%、より好ましくは20%、より好ましくは30%、より好ましくは40%、より好ましくは50%、より好ましくは60%、より好ましくは70%、より好ましくは80%、さらにより好ましくは90%増加させる、本発明1001のポリペプチド。
[本発明1004]
前記OspAが、B.アフゼリ（B. afzelii）、特に株K78、OspA血清型2（配列番号：19）；B.ブルグドルフェリ（B. burgdorferi）s.s.、特に株B31、OspA血清型1（配列番号：20）；B.ガリニ（B. garinii）、特に株PBr、OspA血清型3（配列番号：21）；B.ババリエンシス（B. bavariensis）、特に株PBi、OspA血清型4（配列番号：22）；B.ガリニ、特に株PHei、OspA血清型5（配列番号：23）；B.ガリニ、特に株DK29、OspA血清型6（配列番号：24）；およびB.ガリニ、特に株T25、OspA血清型7（配列番号：25）からなる群より選択されるボレリア種から得られる、本発明1001または1002のポリペプチド。
[本発明1005]
前記少なくとも1つのジスルフィド結合が、B.アフゼリ、特にB.アフゼリ株K78、OspA血清型2のOspAの、
a）位置182 +/- 3のいずれかと位置269 +/- 3のいずれかとの間、特に位置182と269の間（ジスルフィド結合型1）；
b）位置182 +/- 3のいずれかと位置272 +/- 3のいずれかとの間、特に位置182と272の間（ジスルフィド結合型2）；
c）位置244 +/- 3のいずれかと位置259 +/- 3のいずれかとの間、特に位置244と259の間（ジスルフィド結合型3）；
d）位置141 +/- 3のいずれかと位置241 +/- 3のいずれかとの間、特に位置141と241の間（ジスルフィド結合型4）；
e）位置165 +/- 3のいずれかと位置265 +/- 3のいずれかとの間、特に位置165と265の間（ジスルフィド結合型5）；
f）位置185 +/- 3のいずれかと位置272 +/- 3のいずれかとの間、特に位置185と272の間（ジスルフィド結合型6）；
g）位置199 +/- 3のいずれかと位置223 +/- 3のいずれかとの間、特に位置199と223の間（ジスルフィド結合型7）；
h）位置243 +/- 3のいずれかと位置262 +/- 3のいずれかとの間、特に位置243と262の間（ジスルフィド結合型8）；
i）位置184 +/- 3のいずれかと位置204 +/- 3のいずれかとの間、特に位置184と204の間（ジスルフィド結合型9）；
j）位置201 +/- 3のいずれかと位置214 +/- 3のいずれかとの間、特に位置201と214の間（ジスルフィド結合型10）；
k）位置246 +/- 3のいずれかと位置259 +/- 3のいずれかとの間、特に位置246と259の間（ジスルフィド結合型11）；および／もしくは
l）位置167 +/- 3のいずれかと位置178 +/- 3のいずれかとの間、特に位置167と178の間（ジスルフィド結合型12）
にあるか、またはB.アフゼリ株K78以外のボレリア、特にB.ブルグドルフェリs.s.、特に株B31、OspA血清型1；B.ガリニ、特に株PBr、OspA血清型3；B.ババリエンシス、特に株PBi、OspA血清型4；B.ガリニ、特に株PHei、OspA血清型5；B.ガリニ、特に株DK29、OspA血清型6；もしくはB.ガリニ、特に株T25、OspA血清型7からのOspAの相同アミノ酸間にある、本発明1001〜1003のいずれかのポリペプチド。
[本発明1006]
前記変異型OspA断片が、配列番号：34、配列番号：35、配列番号：179、配列番号：180、配列番号：181、配列番号：182および配列番号：183からなるアミノ酸配列の群に由来し、かつ少なくとも1つのジスルフィド結合の少なくとも導入によって該アミノ酸配列とは異なり、特に該少なくとも1つのジスルフィド結合が、
a）位置182と269の間（ジスルフィド結合型1）；
b）位置182と272の間（ジスルフィド結合型2）；
c）位置244と259の間（ジスルフィド結合型3）；
d）位置141と241の間（ジスルフィド結合型4）；
e）位置165と265の間（ジスルフィド結合型5）；
f）位置185と272の間（ジスルフィド結合型6）；
g）位置199と223の間（ジスルフィド結合型7）；
h）位置243と262の間（ジスルフィド結合型8）；
i）位置184と204の間（ジスルフィド結合型9）；
j）位置201と214の間（ジスルフィド結合型10）；
k）位置246と259の間（ジスルフィド結合型11）；および／または
l）位置167と178の間（ジスルフィド結合型12）
にある、本発明1001〜1005のいずれかのポリペプチド。
[本発明1007]
a）前記ポリペプチドが脂質化されているか、もしくは前記ポリペプチドが、脂質付加シグナル、好ましくはボレリア細胞表層タンパク質（Osp）の脂質付加シグナル、より好ましくは
2015522270.tif 000001
、最も好ましくは大腸菌由来のlpp脂質付加シグナル
2015522270.tif 000002
を含む；および／または
b）前記ポリペプチドが、アミノ酸配列
2015522270.tif 000003
を含まず、特に該アミノ酸配列
2015522270.tif 000004
が、B.ブルグドルフェリs.s.株B31以外のボレリア種からの相同配列によって、好ましくは
2015522270.tif 000005
によって置換されている；および／または
c）前記ポリペプチドが、脂質付加のための部位としてのN末端システイン残基を先頭とするリンカーペプチド、好ましくはCSSもしくはCKQN（配列番号：211）を含む；および／または
d）前記ジスルフィド結合の導入が、OspA断片の変異していない区域のシステインとジスルフィド結合を形成する1つのシステインの導入によるものである；および／または
e）前記ジスルフィド結合の導入が、ジスルフィド結合を形成する2つのシステインの導入によるものである；および／または
f）前記ジスルフィド結合の導入が、1つもしくは2つのシステインの導入によるもの、特にアミノ酸付加もしくは好ましくは置換によるものである；および／または
g）前記変異型OspA断片が、対応する野生型OspA断片に対して、少なくとも1つのジスルフィド結合の導入だけ異なる、特に1つ、2つ、3つもしくは4つのジスルフィド結合の導入だけ異なる；および／または
h）OspAタンパク質のC末端ドメインが、OspAタンパク質の最もC末端側の140〜152の連続したアミノ酸を含む；および／または
i）前記ポリペプチドがOspAのN末端β-シートを含まない、
本発明1001または1002のポリペプチド。
[本発明1008]
少なくとも2つの、本発明1001〜1007のいずれかの変異型OspA断片を含む、本発明1001〜1007のいずれかのポリペプチド。
[本発明1009]
Lip-S1D4-S2D4（配列番号：185）、Lip-S1D1-S2D1（配列番号：186）、Lip-S3D4-S4D4（配列番号：187）、Lip-S3D1-S4D1（配列番号：188）、Lip-S5D4-S6D4（配列番号：189）、Lip-S5D1-S6D1（配列番号：190）、Lip-S2D4-S1D4（配列番号：191）、Lip-S2D1-S1D1（配列番号：192）、Lip-S4D4-S3D4（配列番号：193）、Lip-S4D1-S3D1（配列番号：194）、Lip-S6D4-S5D4（配列番号：195）、Lip-S6D1-S5D1（配列番号：196）、Lip-S1D4-S2D1（配列番号：197）、Lip-S1D1-S2D4（配列番号：198）、S3D4-S4D1（配列番号：199）、S3D1-S4D4（配列番号：200）、S5D4-S6D1（配列番号：201）、S5D1-S6D4（配列番号：202）、S2D4-S1D1（配列番号：203）、S2D1-S1D4（配列番号：204）、S4D4-S3D1（配列番号：205）、S4D1-S3D4（配列番号：206）、S6D4-S5D1（配列番号：207）およびLip-S6D1-S5D4、（配列番号：208）からなる群より選択されるヘテロ二量体を含む、または該ヘテロ二量体からなる、本発明1008のポリペプチド。
[本発明1010]
Lip-S1D1-S2D1（配列番号：186）、Lip-S4D1-S3D1（配列番号：194）およびLip-S5D1-S6D1（配列番号：190）からなる群より選択されるヘテロ二量体を含む、または該ヘテロ二量体からなる、本発明1008のポリペプチド。
[本発明1011]
a）前記少なくとも2つの変異型OspA断片のうちの2つの変異型OspA断片が、リンカーを介して接続され、特にリンカーが、
2015522270.tif 000006
を含む；並びに／または
b）前記ポリペプチドが、2つの異なる、本発明1001〜1007のいずれかの変異型OspA断片を含む、最大で500アミノ酸の全体のサイズを有する；並びに／または
c）前記ポリペプチドが、脂質付加のための部位としてのN末端システイン残基を先頭とするリンカーペプチド、好ましくはCSSもしくはCKQN（配列番号：211）を含む；並びに／または
d）前記ポリペプチドが、（i）2つの異なる、本発明1001〜1007のいずれかの変異型OspA断片、（ii）アミノ酸配列
2015522270.tif 000007
からなるリンカー、および（iii）任意で、脂質付加のための部位としてのN末端システイン残基、好ましくはCSSを含む；並びに／または
e）前記ポリペプチドが、（i）2つの異なる、本発明1001〜1007のいずれかの変異型OspA断片、（ii）最大で23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12もしくは11アミノ酸、好ましくは最大で10、9、8、7もしくは6アミノ酸、さらにより好ましくは最大で5、4、3、2もしくは1アミノ酸からなる断片のN末端伸長部であって、それぞれのボレリアOspAの断片のN末端に直接位置している該N末端伸長部、および（iii）任意で、N末端システインもしくはN末端CSSペプチドもしくはCKQNペプチド（配列番号：211）を含む、
本発明1001〜1010のいずれかのポリペプチド。
[本発明1012]
配列番号：185〜208を有するアミノ酸配列；もしくは該アミノ酸配列の任意の機能的変種、好ましくは、配列番号：185〜208の配列のいずれかに対して少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有する機能的変種の群から選択されるポリペプチドを含む、または該ポリペプチドからなる、本発明1001〜1011のいずれかのポリペプチド。
[本発明1013]
本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドをコードする、核酸。
[本発明1014]
本発明1013の核酸分子を含む、ベクター。
[本発明1015]
本発明1013の核酸または本発明1014のベクターを含む宿主細胞であって、好ましくは大腸菌（E. coli）である、宿主細胞。
[本発明1016]
本発明1014のベクターで適切な宿主細胞を形質転換する、または本発明1014のベクターを適切な宿主細胞にトランスフェクトする工程を含む、本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドを発現する細胞を産生するための方法。
[本発明1017]
本発明1013の核酸分子を発現させる工程を含む、本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドを産生するための方法。
[本発明1018]
a）ポリペプチドをコードするベクターを宿主細胞に導入する工程、
b）該ポリペプチドを発現させる条件下で該宿主細胞を増殖させる工程、
c）該宿主細胞をホモジナイズする工程、および
d）該宿主細胞のホモジネートを精製工程に供する工程
を特徴とする、本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドを産生するための方法。
[本発明1019]
本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドの少なくとも1つおよび／または本発明1013の核酸と、任意で、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
[本発明1020]
Lip-S1D1-S2D1（配列番号：186）、Lip-S4D1-S3D1（配列番号：194）およびLip-S5D1-S6D1（配列番号：190）と、任意で、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
[本発明1021]
Lip-S1D1-S2D1（配列番号：186）およびLip-S5D1-S6D1（配列番号：190）と、任意で、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
[本発明1022]
Lip-S1D1-S2D1（配列番号：186）およびLip-S4D1-S3D1（配列番号：194）と、任意で、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
[本発明1023]
Lip-S4D1-S3D1（配列番号：194）およびLip-S5D1-S6D1（配列番号：190）と、任意で、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
[本発明1024]
前記薬学的に許容される賦形剤がL-メチオニンを含む、本発明1019〜1023のいずれかの医薬組成物。
[本発明1025]
ボレリア由来またはボレリア以外の病原体由来の少なくとも1つの付加的な抗原をさらに含む、本発明1019〜1024のいずれかの医薬組成物。
[本発明1026]
前記付加的な抗原が、ダニ媒介性病原体に由来する、本発明1025の医薬組成物。
[本発明1027]
前記ダニ媒介性病原体が、ボレリア・ヘルムシー（Borrelia hermsii）、ボレリア・パルケリ（Borrelia parkeri）、ボレリア・ダットニイ（Borrelia duttoni）、ボレリア・ミヤモトイ（Borrelia miyamotoi）、ボレリア・タリカテ（Borrelia turicatae）、リケッチア・リケッチイ（Rickettsia rickettsii）、リケッチア・オストラーリス（Rickettsia australis）、リケッチア・コノリイ（Rickettsia conorii）、リケッチア・ヘルベティカ（Rickettsia helvetica）、リケッチア・パルケリ（Rickettsia parkeri）、フランシセラ・ツラレンシス（Francisella tularensis）、アナプラズマ・ファゴサイトフィルム（Anaplasma phagocytophilum）、エーリキア・センネツ（Ehrlichia sennetsu）、エーリキア・シャフェンシス（Ehrlichia chaffeensis）、コクシエラ・バーネッティイ（Coxiella burnetii）およびボレリア・ロネスタリ（Borrelia lonestari）、ダニ媒介性脳炎ウイルス（TBEV）、コロラドダニ熱ウイルス（CTFV）、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス（CCHFV）、キャサヌール森林病ウイルス（KFDV）、ポワッサンウイルス、ハートランドウイルス、オムスク出血熱ウイルス（OHFV）およびバベシア属（Babesia）の種を含む群から選択される、本発明1026の医薬組成物。
[本発明1028]
前記少なくとも1つの付加的な抗原が、第2のワクチン組成物に含まれている、本発明1025〜1027のいずれかの医薬組成物。
[本発明1029]
前記第2のワクチン組成物が、好ましくはダニ媒介性脳炎ワクチン、日本脳炎ワクチン、またはロッキー山紅斑熱ワクチンである、本発明1028の医薬組成物。
[本発明1030]
ポリカチオン性重合体、特にポリカチオン性ペプチド、免疫賦活性オリゴデオキシヌクレオチド（ODN）、特にオリゴ(dIdC)13（配列番号：32）、少なくとも2つのLysLeuLysモチーフを含むペプチド、特にペプチド
2015522270.tif 000008
、神経刺激性化合物、特にヒト成長ホルモン、水酸化アルミニウムもしくはリン酸アルミニウム、フロイント完全もしくは不完全アジュバント、またはこれらの組み合わせからなる群から好ましくは選択される免疫賦活性物質をさらに含むことを特徴とする、本発明1019〜1029のいずれかの医薬組成物。
[本発明1031]
前記免疫賦活性物質が、ポリカチオン性重合体と免疫賦活性デオキシヌクレオチドの、または少なくとも2つのLysLeuLysモチーフを含むペプチドと免疫賦活性デオキシヌクレオチドのいずれかの組み合わせ、好ましくは
2015522270.tif 000009
とオリゴ(dIdC)13（配列番号：32）の組み合わせである、本発明1030の医薬組成物。
[本発明1032]
前記ポリカチオン性ペプチドがポリアルギニンである、本発明1031の医薬組成物。
[本発明1033]
ワクチンである、本発明1019〜1032のいずれかの医薬組成物。
[本発明1034]
医薬としての、特にワクチンとしての使用のための、本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドまたは本発明1019〜1033のいずれかの医薬組成物。
[本発明1035]
ボレリア感染症、特にB.ブルグドルフェリs.s.、B.ガリニ、B.アフゼリ、B.アンデルソニ（B. andersoni）、B.ババリエンシス、B.ビセッティ（B. bissettii）、B.バライシアナ（B. valaisiana）、B.ルシタニエ（B. lusitaniae）、B.スピエルマニ（B. spielmanii）、B.ジャポニカ（B. japonica）、B.タヌキイ（B. tanukii）、B.ツルジ（B. turdi）またはB.シニカ（B. sinica）感染症、好ましくはB.ブルグドルフェリs.s.、B.アフゼリまたはB.ガリニ感染症を治療または予防する方法における使用のための、本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドまたは本発明1019〜1032のいずれかの医薬組成物。
[本発明1036]
本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドもしくは本発明1019〜1032のいずれかの医薬組成物の治療的有効量を対象に投与する工程を含む、その必要のある対象におけるボレリア感染症を治療もしくは予防する方法、または本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドもしくは本発明1018〜1033のいずれかの医薬組成物の治療的有効量を対象に投与する工程を含む、その必要のある対象を免疫する方法。
[本発明1037]
本発明1001の変異型OspA断片に選択的に結合するが、対応する野生型OspA断片に結合しない、抗体、または少なくともその有効な部分。
[本発明1038]
前記変異型OspA断片のジスルフィド結合に結合する、本発明1037の抗体。
[本発明1039]
モノクローナル抗体である、本発明1037または1038の抗体。
[本発明1040]
前記有効な部分が、Fab断片、F(ab)断片、F(ab)N断片、F(ab)2断片またはFv断片を含む、本発明1037〜1039のいずれかの抗体。
[本発明1041]
キメラ抗体である、本発明1037〜1040のいずれかの抗体。
[本発明1042]
ヒト化抗体である、本発明1037〜1041のいずれかの抗体。
[本発明1043]
本発明1037〜1042のいずれかの抗体を産生する、ハイブリドーマ株化細胞。
[本発明1044]
a）非ヒト動物において、本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドを該動物に投与することによって免疫応答を開始させる工程、
b）抗体を含む体液を該動物から取り出す工程、および
c）該抗体を含む体液をさらなる精製工程に供することによって抗体を産生する工程
を特徴とする、本発明1037〜1043のいずれかの抗体を産生するための方法。
[本発明1045]
a）非ヒト動物において、本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドを該動物に投与することによって免疫応答を開始させる工程、
b）該動物から脾臓または脾細胞を取り出す工程、
c）該脾臓または脾細胞のハイブリドーマ細胞を産生する工程、
d）該ポリペプチドに特異的なハイブリドーマ細胞を選択し、かつクローン化する工程、
e）クローン化されたハイブリドーマ細胞の培養によって抗体を産生する工程、および
f)任意で、さらなる精製工程を行う工程
を特徴とする、本発明1037〜1043のいずれかの抗体を産生するための方法。
[本発明1046]
本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドまたは本発明1013の核酸分子または本発明1014のベクターまたは本発明1019〜1033のいずれかの医薬組成物の有効量を動物またはヒトに投与する工程を含む、ボレリア生物による感染に対して動物またはヒトを免疫するための方法であって、該有効量が、該動物またはヒトにおける免疫応答を誘発するのに適切である、方法。
[本発明1047]
本発明1001〜1012のいずれかのポリペプチドまたは本発明1013の核酸分子または本発明1014のベクターまたは本発明1019〜1033のいずれかの医薬組成物の有効量を動物またはヒトに投与する工程を含む、ボレリア生物に対する動物またはヒトにおける免疫応答を刺激するための方法であって、該有効量が、該動物またはヒトにおける免疫応答を刺激するのに適切である、方法。
[本発明1048]
ボレリア生物が、B.ブルグドルフェリ、特にB.ブルグドルフェリs.s.、B.ガリニ、B.アフゼリ、B.アンデルソニ、B.ババリエンシス、B.ビセッティ、B.バライシアナ、B.ルシタニエ、B.スピエルマニ、B.ジャポニカ、B.タヌキイ、B.ツルジまたはB.シニカ、好ましくはB.ブルグドルフェリs.s.、B.アフゼリまたはB.ガリニを含む群から選択される、本発明1046または1047の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２０】
【図１】OspA血清型1〜6のアミノ酸配列の配列比較。配列比較は、タンパク質の膜関連N末端部分が、より曝露されるC末端部分よりも高度に保存されたアミノ酸配列を有することを図示する。配列比較は、以下のOspAポリペプチドの表示のアミノ酸（17〜273または17〜274）を示している：血清型3（ST3）OspA（配列番号：21）、ST1 OspA（配列番号：20）、ST4 OspA（配列番号：22）、ST5 OspA（配列番号：23）、ST6 OspA（配列番号：24）、およびST2 OspA（配列番号：19）。（OspAのN末端の16アミノ酸は、プロセシングの間に切断される脂質付加シグナルであり、したがって、完全にプロセシングされたOspAタンパク質には存在しない。）
【図２】ボレリア種の2つの異なるOspA血清型由来の変異型OspA C末端断片を含む、本発明の変異型OspAヘテロ二量体の産生。（A）脂質化変異型OspAヘテロ二量体をコードする核酸の略図。成分は、5'から3'へと、脂質付加シグナル配列（Lipシグナル）、N末端脂質付加のための小さなシステイン含有ペプチド（脂質付加ペプチド= LP）、2つの非天然システインを有するOspAの変異型C末端断片、短いリンカーペプチド（LN1）を含み、2つの非天然のシステインを有する第2の変異型OspA C末端断片のためのコード配列が続く。（B）中間の変異型OspAヘテロ二量体ポリペプチドは、核酸構築物の翻訳直後の新生産物を含む。NからC末端へと、このポリペプチドは、脂質付加シグナル配列（Lipシグナル）、脂質付加のためのシステイン含有ペプチド（LP）、非天然ジスルフィド結合を有する変異型OspA断片、短いリンカーペプチド（LN1）からなり、非天然ジスルフィド結合を有する第2の変異型OspA断片が続く。（C）翻訳後修飾の後の最終的な脂質化変異型OspAヘテロ二量体ポリペプチド。ヘテロ二量体は、NからC末端へと、脂質化N末端システイン（「Lip」によって示された）を有する短いシステイン含有ペプチド、ジスルフィド結合によって安定化された変異型OspA断片、リンカーペプチド（LN1）、およびジスルフィド結合によって安定化された第2の変異型OspA断片からなる。脂質付加シグナル配列は、示したようにポリペプチドの翻訳後修飾の間に、切断される。
【図３】本発明に従った好ましい医薬組成物の例。2つの異なるボレリアOspA血清型由来の変異型OspA断片をそれぞれ含む3つの変異型OspAヘテロ二量体が、組成物において存在し、6つの異なるボレリアOspA血清型由来のOspA抗原を共に提供する。このような医薬組成物は、6つのボレリア血清型に対して同時の免疫化を可能にする。
【図４】全長野生型OspAタンパク質並びに本発明の脂質化変異型OspA断片単量体およびヘテロ二量体のN末端システインの脂肪酸置換の例であるPam3Cysの化学構造の図解。本発明の全長OspAタンパク質またはポリペプチドの翻訳後修飾の間に、N末端脂質付加シグナル配列は切断され、かつ脂肪酸、最も一般的には3つのパルミトイル部分（「Pam3」）が酵素的にN末端システイン残基（硫黄原子「S」を矢印によって示す）に共有結合される。ポリペプチド鎖の残りの残基は、Pam3Cys残基からみてC末端側に位置し、「Xn」によって表される。（Bouchon, et al. (1997) Analytical Biochemistry 246: 52-61から変更。）
【図５】免疫されたマウス由来の抗体の、ボレリアスピロヘータの細胞表面への結合。マウスを、示された抗原それぞれ1μgで3回、2週間の間隔にて、免疫した：OspA血清型1〜6の脂質化されたおよびHisタグ付き全長OspAタンパク質；Lip-S1D1-S2D1、Lip-S4D1-S3D1、またはLip-S5D1-S6D1単独で、もしくはLip-S1D1-S2D1、Lip-S4D1-S3D1およびLip-S5D1-S6D1を共に1：1：1の比において（「混合ワクチン」）。最後の投与から1週間後に血清を収集した。血清のいくつかの希釈物を、ボレリアの細胞表面への結合について、細胞染色およびフローサイトメトリーにより試験した。非特異的結合を考慮するために、Al(OH)3アジュバント単独で免疫された対照マウスから収集された血清で染色したときに観察された蛍光強度値を減算した。（使用したボレリアは、B.ブルグドルフェリ、OspA血清型1、株N40；B.アフゼリ、OspA血清型2、株「C」；B.ガリニ、OspA血清型3、株「D」；B.ババリエンシス、OspA血清型4、株Fin；B.ガリニ、OspA血清型5、株「E」；B.ガリニ、OspA血清型6、株「B」であった。）
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2015522270000001.app