【手続補正書】
【提出日】平成27年4月1日(2015.4.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル中の特定の標的分子を同定及び定量する方法において、
（ｉ）各々が第１及び第２の検出可能な標識を有する第１及び第２リガンドを添加するステップと、（ｉｉ）前記第１及び第２リガンドが特定の標的分子上の別々の特定の部位に結合するステップとを備えるが、（ｉｉｉ）洗浄ステップが省略されているハイスループットスクリーニングアッセイで特定の標的分子を含有するサンプルをスクリーニングし、
前記第１及び第２リガンドが前記特定の標的分子に特異的に結合したときに放出される光を検出し、
サンプル中の前記特定の標的分子を同定及び定量すること
を備える、方法。
【請求項２】
前記検出可能な標識は、蛍光団、発光分子、酵素又は放射性核種を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記光が、蛍光、化学発光、又は生物発光を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記第１及び第２リガンドが、抗体、抗体フラグメント、Ｆｖフラグメント、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ヒト化抗体及び抗体フラグメント、ラクダ化抗体及び抗体フラグメント、ヒト抗体及び抗体フラグメント、単一特異性抗体若しくは二重特異性抗体、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖタンデム（（ｓｃＦｖ）フラグメント）、ダイアボディ、トリボディ若しくはテトラボディ、ペプトイド、ペプチド若しくは核酸アプタマー、抗体模倣剤、又はこれらの組合せを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記方法が、フェルスター共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）又は蛍光偏光アッセイを備えるハイスループットスクリーニングアッセイである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記特定の標的分子が、糖タンパク質、リポタンパク質、タンパク質断片、タンパク質、タンパク質断片群、ペプチド、ペプチド核酸、合成巨大分子または天然巨大分子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記特定の標的分子はサンプル中に存在するものであり、当該サンプルが、液体、半液体、ゲル、生体サンプル、インタクト細胞、透過処理済細胞、破砕細胞、細胞ホモジネート、膜、又は細胞小器官を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記第１及び第２リガンドが、ポリペプチド、抗体、抗体フラグメント、抗体模倣剤、一本鎖抗体、核酸、アプタマー、ペプトイド若しくは糖部分、又はこれらの組合せを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記第１及び第２リガンドが、ペプチドアプタマー又は核酸アプタマーである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１及び第２リガンドが、グリコサミノグリカン、ヘパラン硫酸又はコンドロイチン硫酸を含む糖部分である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
サンプル中の特定タンパク質を定量する方法であって、
ドナー蛍光団の励起に適した波長で前記サンプルが照射されることを可能にしかつハイスループットアッセイによりアクセプター蛍光団の蛍光の測定とを可能にする容器に、特定の標的分子を含有する前記サンプルを導入するステップと、
前記標的分子上の特定の部位に結合する第１リガンドであって、前記ドナー蛍光団である第１蛍光団に連結している第１リガンドを添加するステップと、
前記第１リガンドが結合するものとは別の同じ標的分子上の特定の部位に結合する第２リガンドであって、前記アクセプター蛍光団である第２蛍光団に連結している第２リガンドを添加するステップと、
各ステップ間の洗浄ステップを省略するステップと、
両リガンドに結合した標的分子を含有するサンプルを前記ドナー蛍光団を励起するのに最適な波長で照射し、前記アクセプター蛍光団によって放射された光の強度を測定するステップと、
前記特定のタンパク質を定量するステップと
を備える、方法。
【請求項１２】
前記放射された光の強度は時間分解蛍光測定によって測定される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記標的分子は支持体表面に結合していない、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記標的分子は支持体表面に結合している、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記アクセプター蛍光団がフェルスター半径によって定義される距離以下の距離だけ前記ドナー蛍光団から離れた位置にあるとき、励起が前記アクセプター蛍光団に移動される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記容器は、前記ドナー蛍光団の波長での照射と前記アクセプター蛍光団の波長での測定とを可能にする、キュベット、マルチウェルプレート、チューブ、フラスコ、ディスク、ビーズ、バイアル、カセット、フローセル、カートリッジ、マイクロ流体チップ、又はこれらの組合せを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記標的分子が、糖タンパク質、リポタンパク質、タンパク質断片、ペプチド核酸、合成巨大分子または天然巨大分子を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
標的は、液体、半液体、ゲル、生体サンプル、インタクトな細胞、透過処理済細胞、破砕細胞、細胞ホモジネート、膜、又は細胞小器官を含むサンプル中に存在している、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
標的上の異なる非オーバーラップ部位であるエピトープに特異的に結合する前記第１及び第２リガンドは、抗体若しくはエピトープ結合抗体フラグメント、一本鎖抗体、抗体模倣剤、ペプトイド、アプタマー、ポリペプチド又は核酸を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
前記第１及び第２リガンドは、ポリペプチド、アプタマー、ペプトイド若しくは糖部分、又はこれらの組合せを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項２１】
前記第１及び第２リガンドは、ペプチドアプタマー又は核酸アプタマーである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記第１及び第２リガンドは、グリコサミノグリカン、ヘパラン硫酸又はコンドロイチン硫酸を含む糖部分である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記方法は、フェルスター共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）、又は蛍光偏光アッセイを含むハイスループットスクリーニングアッセイである、請求項１１に記載の方法。
【請求項２４】
候補治療化合物をスクリーニングする方法において、
（ｉ）各々が第１及び第２の検出可能標識を有する第１及び第２リガンドを添加するステップと、（ｉｉ）前記第１及び第２リガンドが特定の標的分子上の別々の特定の部位に結合するステップとを含むが、（ｉｉｉ）洗浄ステップが省略されているハイスループットスクリーニングアッセイで特定の標的分子を含有するサンプルをスクリーニングし、
前記第１及び第２リガンドが前記特定の標的分子に特異的に結合したときに発する光を検出し、
候補治療化合物をスクリーニングすること
を備える、方法。
【請求項２５】
候補治療薬は、発光によって測定されるような、標的分子の機能、活性又は発現を調節する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
候補治療化合物をスクリーニングする方法であって、
ドナー蛍光団の励起に適した波長でのサンプルの照射とハイスループットアッセイによるアクセプター蛍光団の蛍光の測定とを可能にする容器に特定の標的分子を含有するサンプルを導入するステップと、
前記標的分子上の特定の部位に結合する第１リガンドであって、前記ドナー蛍光団である第１蛍光団に連結している第１リガンドを添加するステップと、
前記第１リガンドが結合するものとは別の、同じ標的分子上の特定の部位に結合する第２リガンドであって、前記アクセプター蛍光団である第２蛍光団に連結している第２リガンドを添加するステップ、
各ステップ間の洗浄ステップを省略するステップと、
前記ドナー蛍光団を励起するのに最適な波長で、両リガンドに結合した標的分子を含有するサンプルを照射し、前記アクセプター蛍光団によって放射された光の強度を測定するステップと、
候補化合物をスクリーニングするステップと
を備える、方法。
【請求項２７】
候補治療薬は、発光によって測定されるような、標的分子の機能、活性又は発現を調節する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項２４又は２６に記載の方法によって同定される化合物。
【請求項２９】
前記化合物が、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、核酸、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ペプチド核酸、糖タンパク質、炭水化物、有機若しくは無機分子、単離された天然分子、合成分子、小分子、又はこれらの組合せを含む、請求項２８に記載の化合物。
【請求項３０】
請求項２４又は２６に記載の方法によって同定される化合物を含む医薬組成物。