【手続補正書】
【提出日】平成26年12月1日(2014.12.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的核酸のリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(PCR)増幅におけるシグナル正規化のための反応混合物であって、試験される試料および任意でプライマーを別にして、試薬をさらに添加することなく、(a)該正規化のためにパッシブリファレンス色素の高濃度を用いるリアルタイムPCR増幅システムと、(b)該正規化のためにパッシブリファレンス色素の低濃度を用いるリアルタイムPCR増幅システムとの両方における使用に適合し、増幅反応とは無関係に蛍光シグナルを生成する複数のパッシブリファレンス色素を含有する、反応混合物。
【請求項２】
ストークスシフトを有する第1のパッシブリファレンス色素であって、低濃度パッシブリファレンス色素正規化で使用するのに十分な濃度であり、第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大および第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大を有する、第1のパッシブリファレンス色素；ならびに
該第1のパッシブリファレンス色素のストークスシフトより大きいストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、該第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大とほぼ同じ発光波長極大、および該第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大と有意に異なる励起波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、請求項1記載の混合物。
【請求項３】
前記第2のパッシブリファレンス色素が少なくとも約60nmのストークスシフトを有する、請求項2記載の混合物。
【請求項４】
前記第1のパッシブリファレンス色素が5-カルボキシ-X-ローダミンおよび/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミンまたはそれらの類似体を含む、請求項2記載の混合物。
【請求項５】
5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または6-カルボキシ-X-ローダミン色素；ならびに
少なくとも約60nmのストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、約620nmの発光波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、請求項1または2記載の混合物。
【請求項６】
5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または6-カルボキシ-X-ローダミン色素；ならびに
少なくとも約60nmのストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、約590nmの発光波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、請求項1または2記載の混合物。
【請求項７】
前記第2のパッシブリファレンス色素が550nmまたはそれ未満の励起波長極大を有する、請求項2〜6のいずれか一項記載の混合物。
【請求項８】
前記5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または前記6-カルボキシ-X-ローダミン色素の濃度が100nM未満である、請求項4〜6のいずれか一項記載の混合物。
【請求項９】
前記5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または前記6-カルボキシ-X-ローダミン色素の濃度が約10nMである、請求項4〜6のいずれか一項記載の混合物。
【請求項１０】
オリゴヌクレオチドプライマー、1つまたは複数のデオキシヌクレオシド三リン酸、緩衝液、インターカレーティング色素、逆転写酵素、およびポリメラーゼのうちの1つまたは複数をさらに含む、請求項1〜9のいずれか一項記載の混合物。
【請求項１１】
DNAポリメラーゼを含む、請求項10記載の混合物。
【請求項１２】
前記ポリメラーゼが抗体と複合体化される、請求項11記載の混合物。
【請求項１３】
前記ポリメラーゼが、化学的に不活性化されるが加熱によって活性化される、請求項11記載の混合物。
【請求項１４】
前記第2のパッシブリファレンス色素が蛍光ドットである、請求項2〜6のいずれか一項記載の混合物。
【請求項１５】
前記第2のパッシブリファレンス色素が、ある成分にコンジュゲートされている、請求項2〜6のいずれか一項記載の混合物。
【請求項１６】
請求項1〜15のいずれか一項記載の混合物を用いてポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を実施する段階であって、該混合物が、標的核酸を含むと疑われる生物学的試料をさらに含む、段階
を含む、リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応を実施する方法。
【請求項１７】
5-カルボキシ-X-ローダミン色素正規化および/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミン色素正規化を用いない機器により、または5-カルボキシ-X-ローダミン色素正規化および/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミン色素正規化を用いない増幅方法において前記PCRを実施する、請求項16記載の方法。
【請求項１８】
前記5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または前記6-カルボキシ-X-ローダミン色素と前記第2のパッシブリファレンス色素のいずれか一方または両方に由来するシグナルを検出する段階をさらに含む、請求項16記載の方法。
【請求項１９】
正規化のために遊離5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは遊離6-カルボキシ-X-ローダミン色素の高濃度を用いる機器により、または正規化のために遊離5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは遊離6-カルボキシ-X-ローダミン色素の高濃度を用いる増幅方法において前記PCRを実施し、かつ前記第2のパッシブリファレンス色素に由来するか、または該第2のパッシブリファレンス色素と該5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは該6-カルボキシ-X-ローダミン色素との両方に由来するシグナルを検出する段階をさらに含む、請求項18記載の方法。
【請求項２０】
前記5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または前記6-カルボキシ-X-ローダミン色素と前記第2のパッシブリファレンス色素との両方に由来するシグナルを検出する、請求項19記載の方法。
【請求項２１】
(a)前記第2のパッシブリファレンス色素に由来するか、または(b)該第2のパッシブリファレンス色素と前記5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは前記6-カルボキシ-X-ローダミン色素との両方に由来するシグナルを用いて、前記ポリメラーゼ連鎖反応における前記標的核酸のシグナルを正規化する段階を含む、請求項19記載の方法。
【請求項２２】
正規化のために遊離5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは遊離6-カルボキシ-X-ローダミン色素の低濃度を用いる機器により、または正規化のために遊離5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは遊離6-カルボキシ-X-ローダミン色素の低濃度を用いる増幅方法において前記PCRを実施し、かつ、
該5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは該6-カルボキシ-X-ローダミン色素を励起するが、前記第2のパッシブリファレンス色素を実質的に励起しない段階；ならびに
該5-カルボキシ-X-ローダミン色素由来および/もしくは該6-カルボキシ-X-ローダミン色素由来のシグナルを検出する段階
をさらに含む、請求項18記載の方法。
【請求項２３】
前記5-カルボキシ-X-ローダミン色素由来および/または前記6-カルボキシ-X-ローダミン色素由来でありかつ前記第2のパッシブリファレンス色素由来ではないシグナルを用いて、前記ポリメラーゼ連鎖反応における前記標的核酸のシグナルを正規化する段階を含む、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
前記複数のパッシブリファレンス色素を混合し、それによって前記反応混合物を生成する段階を含む、請求項1〜15のいずれか一項記載の反応混合物を作製する方法。
【請求項２５】
前記混合物が、
ストークスシフトを有する第1のパッシブリファレンス色素であって、第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大および第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大を有する、第1のパッシブリファレンス色素；ならびに
該第1のパッシブリファレンス色素のストークスシフトより大きいストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、該第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大とほぼ同じ発光波長極大、および該第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大と有意に異なる励起波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、請求項24記載の方法。
【請求項２６】
前記第2のパッシブリファレンス色素が少なくとも約60nmのストークスシフトを有する、請求項25記載の方法。
【請求項２７】
前記第1のパッシブリファレンス色素が5-カルボキシ-X-ローダミンおよび/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミンまたはそれらの類似体を含む、請求項25記載の方法。
【請求項２８】
前記第1のパッシブリファレンス色素が5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミン色素またはそれらの類似体を含み、かつ、前記第2のパッシブリファレンス色素が、少なくとも約60nmのストークスシフトを有する蛍光色素であり、該第2のパッシブリファレンス色素が約620nmの発光波長極大を有する、請求項25記載の方法。
【請求項２９】
前記混合物が、
5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または6-カルボキシ-X-ローダミン色素；ならびに
少なくとも約60nmのストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、約590nmの発光波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、請求項25記載の方法。
【請求項３０】
1つまたは複数のデオキシヌクレオシド三リン酸、オリゴヌクレオチドプライマーの1つまたは複数、1つまたは複数のデオキシヌクレオシド三リン酸、緩衝液、インターカレーティング色素、逆転写酵素、およびDNAポリメラーゼのうちの少なくとも1つまたは複数を、前記第1のパッシブリファレンス色素および前記第2のパッシブリファレンス色素と混合する段階をさらに含む、請求項25記載の方法。
【請求項３１】
ストークスシフトを有する第1のパッシブリファレンス色素であって、第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大および第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大を有する、第1のパッシブリファレンス色素；ならびに
該第1のパッシブリファレンス色素のストークスシフトより大きいストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、該第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大とほぼ同じ発光波長極大、および該第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大と有意に異なる励起波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応を実施するためのキット。
【請求項３２】
前記第2のパッシブリファレンス色素が少なくとも約60nmのストークスシフトを有する、請求項31記載のキット。
【請求項３３】
前記第1のパッシブリファレンス色素が5-カルボキシ-X-ローダミンおよび/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミンまたはそれらの類似体を含む、請求項31記載のキット。
【請求項３４】
前記第1のパッシブリファレンス色素が5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミン色素またはそれらの類似体を含み、かつ
前記第2のパッシブリファレンス色素が、少なくとも60nmのストークスシフトを有する蛍光色素であり、該第2のパッシブリファレンス色素が約620nmの発光波長極大を有する、
請求項31記載のキット。
【請求項３５】
前記混合物が、
5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または6-カルボキシ-X-ローダミン色素；ならびに
少なくとも約60nmのストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、約590nmの発光波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、請求項31記載のキット。
【請求項３６】
1つまたは複数のデオキシヌクレオシド三リン酸、オリゴヌクレオチドプライマーの1つまたは複数、1つまたは複数のデオキシヌクレオシド三リン酸、緩衝液、インターカレーティング色素、逆転写酵素、およびDNAポリメラーゼのうちの1つまたは複数をさらに含む、請求項31〜35のいずれか一項記載のキット。
【請求項３７】
前記第1のパッシブリファレンス色素および前記第2のパッシブリファレンス色素を前記キット内の異なる容器に含む、請求項31〜35のいずれか一項記載のキット。
【請求項３８】
前記第1のパッシブリファレンス色素および前記第2のパッシブリファレンス色素を前記キット内の同じ容器に含む、請求項31〜35のいずれか一項記載のキット。
【請求項３９】
前記第2のパッシブリファレンス色素が前記第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大の30nm以内に発光波長極大を有する、請求項2記載の混合物。
【請求項４０】
ストークスシフトを有する第1のパッシブリファレンス色素であって、低濃度パッシブリファレンス色素正規化で使用するのに十分な濃度であり、第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大および第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大を有し、かつ5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミン色素またはそれらの類似体を含む、第1のパッシブリファレンス色素；ならびに
該第1のパッシブリファレンス色素のストークスシフトより大きいストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、該第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大の30nm以内にある発光波長極大、および550nm以下の励起波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、請求項1記載の混合物。
【請求項４１】
前記第2のパッシブリファレンス色素が590〜630nmの発光波長極大および470〜510nmの励起波長極大を有する、請求項40記載の混合物。
【請求項４２】
逆転写酵素をさらに含む、請求項1記載の混合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
いくつかの態様において、ストークスシフトを有する第1および/または第2のパッシブリファレンス色素は蛍光ドットである。
[本発明1001]
標的核酸のリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(PCR)増幅におけるシグナル正規化のための反応混合物であって、(a)該正規化のためにパッシブリファレンス色素の高濃度を用いるリアルタイムPCR増幅システムと、(b)該正規化のためにパッシブリファレンス色素の低濃度を用いるリアルタイムPCR増幅システムとの両方における使用に適合し、増幅反応とは無関係に蛍光シグナルを生成する複数のパッシブリファレンス色素を含有する、反応混合物。
[本発明1002]
ストークスシフトを有する第1のパッシブリファレンス色素であって、低濃度パッシブリファレンス色素正規化で使用するのに十分な濃度であり、第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大および第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大を有する、第1のパッシブリファレンス色素；ならびに
該第1のパッシブリファレンス色素のストークスシフトより大きいストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、該第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大とほぼ同じ発光波長極大、および該第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大と有意に異なる励起波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、本発明1001の混合物。
[本発明1003]
前記第2のパッシブリファレンス色素が少なくとも約60nmのストークスシフトを有する、本発明1002の混合物。
[本発明1004]
前記第1のパッシブリファレンス色素が5-カルボキシ-X-ローダミンおよび/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミンまたはそれらの類似体を含む、本発明1002の混合物。
[本発明1005]
5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または6-カルボキシ-X-ローダミン色素；ならびに
少なくとも約60nmのストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、約620nmの発光波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、本発明1001または1002の混合物。
[本発明1006]
5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または6-カルボキシ-X-ローダミン色素；ならびに
少なくとも約60nmのストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、約590nmの発光波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、本発明1001または1002の混合物。
[本発明1007]
前記第2のパッシブリファレンス色素が550nmまたはそれ未満の励起波長極大を有する、本発明1001〜1006のいずれかの混合物。
[本発明1008]
前記5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または前記6-カルボキシ-X-ローダミン色素の濃度が100nM未満である、本発明1001〜1006のいずれかの混合物。
[本発明1009]
前記5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または前記6-カルボキシ-X-ローダミン色素の濃度が約10nMである、本発明1001〜1006のいずれかの混合物。
[本発明1010]
オリゴヌクレオチドプライマー、1つまたは複数のデオキシヌクレオシド三リン酸、緩衝液、インターカレーティング色素、逆転写酵素、およびポリメラーゼのうちの1つまたは複数をさらに含む、本発明1001〜1009のいずれかの混合物。
[本発明1011]
DNAポリメラーゼを含む、本発明1010の混合物。
[本発明1012]
前記ポリメラーゼが抗体と複合体化される、本発明1011の混合物。
[本発明1013]
前記ポリメラーゼが、化学的に不活性化されるが加熱によって活性化される、本発明1011の混合物。
[本発明1014]
前記第2のパッシブ色素が蛍光ドットである、本発明1001〜1006のいずれかの混合物。
[本発明1015]
前記第2のパッシブリファレンス色素が、ある成分にコンジュゲートされている、本発明1001〜1006のいずれかの混合物。
[本発明1016]
本発明1001〜1015のいずれかの混合物を用いてポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を実施する段階であって、該混合物が、標的核酸を含むと疑われる生物学的試料をさらに含む、段階
を含む、リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応を実施する方法。
[本発明1017]
5-カルボキシ-X-ローダミン色素正規化および/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミン色素正規化を用いない機器により、または5-カルボキシ-X-ローダミン色素正規化および/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミン色素正規化を用いない増幅方法において前記PCRを実施する、本発明1016の方法。
[本発明1018]
前記5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または前記6-カルボキシ-X-ローダミン色素と前記第2のパッシブリファレンス色素のいずれか一方または両方に由来するシグナルを検出する段階をさらに含む、本発明1016の方法。
[本発明1019]
正規化のために遊離5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは遊離6-カルボキシ-X-ローダミン色素の高濃度を用いる機器により、または正規化のために遊離5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは遊離6-カルボキシ-X-ローダミン色素の高濃度を用いる増幅方法において前記PCRを実施し、かつ前記第2のパッシブリファレンス色素に由来するか、または該第2のパッシブリファレンス色素と該5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは該6-カルボキシ-X-ローダミン色素との両方に由来するシグナルを検出する段階をさらに含む、本発明1018の方法。
[本発明1020]
前記5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または前記6-カルボキシ-X-ローダミン色素と前記第2のパッシブリファレンス色素との両方に由来するシグナルを検出する、本発明1019の方法。
[本発明1021]
(a)前記第2のパッシブリファレンス色素に由来するか、または(b)該第2のパッシブリファレンス色素と前記5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは前記6-カルボキシ-X-ローダミン色素との両方に由来するシグナルを用いて、前記ポリメラーゼ連鎖反応における前記標的核酸のシグナルを正規化する段階を含む、本発明1019の方法。
[本発明1022]
正規化のために遊離5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは遊離6-カルボキシ-X-ローダミン色素の低濃度を用いる機器により、または正規化のために遊離5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは遊離6-カルボキシ-X-ローダミン色素の低濃度を用いる増幅方法において前記PCRを実施し、かつ、
該5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは該6-カルボキシ-X-ローダミン色素を励起するが、前記第2のパッシブリファレンス色素を実質的に励起しない段階；ならびに
該5-カルボキシ-X-ローダミン色素由来および/もしくは該6-カルボキシ-X-ローダミン色素由来のシグナルを検出する段階
をさらに含む、本発明1018の方法。
[本発明1023]
前記5-カルボキシ-X-ローダミン色素由来および/または前記6-カルボキシ-X-ローダミン色素由来でありかつ前記第2のパッシブリファレンス色素由来ではないシグナルを用いて、前記ポリメラーゼ連鎖反応における前記標的核酸の該シグナルを正規化する段階を含む、本発明1022の方法。
[本発明1024]
前記複数のパッシブリファレンス色素を混合し、それによって前記反応混合物を生成する段階を含む、本発明1001〜1015のいずれかの反応混合物を作製する方法。
[本発明1025]
前記混合物が、
ストークスシフトを有する第1のパッシブリファレンス色素であって、第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大および第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大を有する、第1のパッシブリファレンス色素；ならびに
該第1のパッシブリファレンス色素のストークスシフトより大きいストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、該第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大とほぼ同じ発光波長極大、および該第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大と有意に異なる励起波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、本発明1024の方法。
[本発明1026]
前記第2のパッシブリファレンス色素が少なくとも約60nmのストークスシフトを有する、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記第1のパッシブリファレンス色素が5-カルボキシ-X-ローダミンおよび/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミンまたはそれらの類似体を含む、本発明1025の方法。
[本発明1028]
前記第1のパッシブリファレンス色素が5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミン色素またはそれらの類似体を含み、かつ、前記第2のパッシブリファレンス色素が、少なくとも約60nmのストークスシフトを有する蛍光色素であり、該第2のパッシブリファレンス色素が約620nmの発光波長極大を有する、本発明1025の方法。
[本発明1029]
前記混合物が、
5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または6-カルボキシ-X-ローダミン色素；ならびに
少なくとも約60nmのストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、約590nmの発光波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、本発明1025の方法。
[本発明1030]
1つまたは複数のデオキシヌクレオシド三リン酸、オリゴヌクレオチドプライマーの1つまたは複数、1つまたは複数のデオキシヌクレオシド三リン酸、緩衝液、インターカレーティング色素、逆転写酵素、およびDNAポリメラーゼのうちの少なくとも1つまたは複数を、前記第1のパッシブリファレンス色素および前記第2のパッシブリファレンス色素と混合する段階をさらに含む、本発明1025の方法。
[本発明1031]
ストークスシフトを有する第1のパッシブリファレンス色素であって、第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大および第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大を有する、第1のパッシブリファレンス色素；ならびに
該第1のパッシブリファレンス色素のストークスシフトより大きいストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、該第1のパッシブリファレンス色素の発光波長極大とほぼ同じ発光波長極大、および該第1のパッシブリファレンス色素の励起波長極大と有意に異なる励起波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応を実施するためのキット。
[本発明1032]
前記第2のパッシブリファレンス色素が少なくとも約60nmのストークスシフトを有する、本発明1031のキット。
[本発明1033]
前記第1のパッシブリファレンス色素が5-カルボキシ-X-ローダミンおよび/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミンまたはそれらの類似体を含む、本発明1031のキット。
[本発明1034]
前記第1のパッシブリファレンス色素が5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/もしくは6-カルボキシ-X-ローダミン色素またはそれらの類似体を含み、かつ
前記第2のパッシブリファレンス色素が、少なくとも60nmのストークスシフトを有する蛍光色素であり、該第2のパッシブリファレンス色素が約620nmの発光波長極大を有する、
本発明1031のキット。
[本発明1035]
前記混合物が、
5-カルボキシ-X-ローダミン色素および/または6-カルボキシ-X-ローダミン色素；ならびに
少なくとも約60nmのストークスシフトを有する第2のパッシブリファレンス色素であって、約590nmの発光波長極大を有する、第2のパッシブリファレンス色素
を含む、本発明1031のキット。
[本発明1036]
1つまたは複数のデオキシヌクレオシド三リン酸、オリゴヌクレオチドプライマーの1つまたは複数、1つまたは複数のデオキシヌクレオシド三リン酸、緩衝液、インターカレーティング色素、逆転写酵素、およびDNAポリメラーゼのうちの1つまたは複数をさらに含む、本発明1031〜1035のいずれかのキット。
[本発明1037]
前記第1のパッシブリファレンス色素および前記第2のパッシブリファレンス色素を前記キット内の異なる容器に含む、本発明1031〜1035のいずれかのキット。
[本発明1038]
前記第1のパッシブリファレンス色素および前記第2のパッシブリファレンス色素を前記キット内の同じ容器に含む、本発明1031〜1035のいずれかのキット。