【手続補正書】
【提出日】平成27年10月7日(2015.10.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたチモーゲン活性化ペプチド（ＺＡＰ）であり、ＺＡＰはアミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｂｎ（配列番号２）からなり、Ｘ１はＬ、Ｉ、又はＶであり、Ｘ２はＩ又はＶであり、Ｘ３はＧ、Ｄ、又はＮであり、Ｘ４はＧ又はＡであり、Ｂは任意のアミノ酸であり、ｎは、７−１１の数字であり、Ｘ１がＶであるときにＸ３はＮではなく、ＺＡＰはセリンプロテアーゼ様ドメインに、約１００μＭ未満の結合親和性で結合することができる、チモーゲン活性化ペプチド（ＺＡＰ）。
【請求項２】
単離されたチモーゲン活性化ペプチド（ＺＡＰ）であり、ＺＡＰはアミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｂｎ（配列番号２）からなり、Ｘ１は大きな疎水性アミノ酸であり、Ｘ２は大きな疎水性アミノ酸又は芳香族アミノ酸であり、Ｘ３はＧ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、Ｑ、Ｄ−Ｇｌｙ、Ｄ−Ａｓｐ、Ｄ−Ｇｌｕ、Ｄ−Ａｓｎ、又はＤ−Ｇｌｎであり、Ｘ４はＧ又はＡであり、Ｂは任意のアミノ酸であり、ｎは０−４６の数字であるチモーゲン活性化ペプチド（ＺＡＰ）。
【請求項３】
Ｘ１はＭ、Ｌ、Ｉ、Ｖ又はノルロイシンである（配列番号４）、請求項１又は２に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項４】
Ｘ１はＬ、Ｉ、又はＶである（配列番号５）、請求項３に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項５】
Ｘ１はＩである（配列番号７）、請求項４に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項６】
Ｘ２はＭ、Ｌ、Ｉ、Ｖ、ノルロイシン、Ｆ又はＹである（配列番号８）、請求項１から５の何れか一項に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項７】
Ｘ２はＩ、Ｖ、Ｌ又はＦである（配列番号９）、請求項６に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項８】
Ｘ２はＩ又はＶである（配列番号１０）、請求項７に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項９】
Ｘ３はＧ、Ｄ、又はＮである（配列番号１１）、請求項１から８の何れか一項に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項１０】
Ｘ３はＧである（配列番号１２）、請求項９に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項１１】
Ｘ４はＧである（配列番号１３）、請求項１から１０の何れか一項に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項１２】
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４（配列番号１４）はＩＶＧＧ（配列番号１５）、ＩＶＤＧ（配列番号１６）、ＩＶｄＧ、ＩＶＧＧ（配列番号１７）、ＩＩＧＧ（配列番号１８）、ＶＶＮＧ（配列番号１９）、ＶＶＧＧ（配列番号２０）、ＩＶＧＧ（配列番号２１）、ＬＩＤＧ（配列番号２２）、ＩＶＥＧ（配列番号２３）、ＩＴＧＧ（配列番号２４）、ＩＶＮＧ（配列番号２５）、ＩＦＮＧ（配列番号２６）、ＩＹＧＧ（配列番号２７）、ＩＬＧＧ（配列番号２８）、又はＩＫＧＧ（配列番号２９）であり、ｄはＤ−アスパラギン酸である、請求項１から１１の何れか一項に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項１３】
ＺＡＰは、セリンプロテアーゼドメイン又はセリンプロテアーゼ様ドメインを含むポリペプチドに特異的に結合し、及びセリンプロテアーゼチモーゲンドメイン又はセリンプロテアーゼ様チモーゲンドメインを含むポリペプチドを活性化させる、請求項１から１２の何れか一項に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項１４】
ＺＡＰは、プロＨＧＦのβ鎖ドメインに特異的に結合し、ｃ−Ｍｅｔを介したＨＧＦシグナル伝達を活性化する、請求項１３に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項１５】
ＺＡＰは、プロＨＧＦのβ鎖ドメインの活性化ポケットに特異的に結合する、請求項１４に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項１６】
ＺＡＰは、セリンプロテアーゼチモーゲンドメイン又はセリンプロテアーゼ様チモーゲンドメインを含むポリペプチドをアロステリックに活性化する、請求項１３から１５の何れか一項に記載の単離されたＺＡＰ。
【請求項１７】
担体にコンジュゲートした請求項１から１６の何れか一項に記載のＺＡＰを含むＺＡＰ融合体。
【請求項１８】
担体は、生分解性ポリマー（例えば、ＰＥＧ、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、及びそれらの共重合体、炭水化物、デンプン、セルロース、キチン、及びリグニン又はポリペプチド担体（例えば、Ｆｃ及び血清アルブミン））である、請求項１７に記載のＺＡＰ融合体。
【請求項１９】
担体へのＺＡＰのコンジュゲーションは、担体へコンジュゲートしていないＺＡＰと比較して、ＺＡＰの半減期及び／又は生物学的利用能を向上させる、請求項１７又は１８に記載のＺＡＰ融合体。
【請求項２０】
請求項１から１６の何れか一項に記載のＺＡＰ又は請求項１７から１９の何れか一項に記載のＺＡＰ融合体の有効量を含む、個体において疾患又は障害を治療するための医薬。
【請求項２１】
疾患または障害の症状は、線維症又は肝硬変である、請求項２０に記載の医薬。
【請求項２２】
請求項１から１６の何れか一項に記載のＺＡＰ又は請求項１７から１９の何れか一項に記載のＺＡＰ融合体の有効量を含む、個体において組織再生及び／又は組織修復を促進するための医薬。
【請求項２３】
セリンプロテアーゼドメイン又はセリンプロテアーゼ様ドメインを含むポリペプチドに特異的に結合し、セリンプロテアーゼチモーゲンドメイン又はセリンプロテアーゼ様チモーゲンドメインを含むポリペプチドを活性化することが可能なＺＡＰを同定する方法であり、前記方法は、（ａ）プロ形態のセリンプロテアーゼチモーゲンドメイン又はセリンプロテアーゼ様チモーゲンドメインを含むポリペプチド又はその断片を含む第一のサンプルを候補のＺＡＰと接触させ、（ｂ）成熟形態のセリンプロテアーゼチモーゲンドメイン又はセリンプロテアーゼ様チモーゲンドメインを含むポリペプチド又はその断片を含む第二のサンプルを候補のＺＡＰと接触させ、（ｃ）（ａ）と（ｂ）の中の候補のＺＡＰの結合の量を測定することを含み、ここで（ｂ）と比較して（ａ）中の候補のＺＡＰのより強い結合は、候補のＺＡＰがセリンプロテアーゼドメイン又はセリンプロテアーゼ様ドメインを含むポリペプチドに特異的に結合し、セリンプロテアーゼチモーゲンドメイン又はセリンプロテアーゼ様チモーゲンドメインを含むポリペプチドを活性化することが可能であることを示している方法。
【請求項２４】
方法は、候補のＺＡＰ及び標的の存在下で、プロ形態にあるセリンプロテアーゼチモーゲンドメイン又はセリンプロテアーゼ様チモーゲンドメインを含むポリペプチド又はその断片の活性をアッセイすることを更に含み、ここで活性は、候補のＺＡＰが、セリンプロテアーゼドメイン又はセリンプロテアーゼ様ドメインを含むポリペプチドを特異的に結合し、セリンプロテアーゼチモーゲンドメイン又はセリンプロテアーゼ様チモーゲンドメインを含むポリペプチドを活性化することが可能であることを示している、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
標的はｃ−Ｍｅｔである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
セリンプロテアーゼチモーゲンドメイン又はセリンプロテアーゼ様チモーゲンドメインを含むポリペプチドはＨＧＦであり、プロ形態でセリンプロテアーゼチモーゲンドメイン又はセリンプロテアーゼ様チモーゲンドメインを含むポリペプチド又はその断片はプロＨＧＦであり、成熟形態のセリンプロテアーゼチモーゲンドメイン又はセリンプロテアーゼ様チモーゲンドメインを含むポリペプチド又はその断片は成熟ＨＧＦである、請求項２３から２５の何れか一項に記載の方法。
【請求項２７】
候補のＺＡＰは請求項１から１６の何れか一項に記載の一以上のＺＡＰ又は請求項１７から１９の何れか一項に記載のＺＡＰ融合体である、請求項２３から２５の何れか一項に記載の方法。