【誤訳訂正書】
【提出日】平成27年8月6日(2015.8.6)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１６のアミノ酸配列３１０〜６２５番目で示されるタンパク質を含む免疫原性組成物。
【請求項２】
前記タンパク質が、細菌で発現またはバキュロウイルスで発現した組換えタンパク質の精製タンパク質である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
さらにアジュバントを含む、請求項１または２に記載の免疫原性組成物。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８６】
本発明の具体的一実施形態によれば、ＰＴＴＶ１特異的プライマーおよびＰＴＴＶ２特異的プライマーを用いるＳＹＢＲグリーン・シンプレックス・リアルタイムＰＣＲを使って、それぞれ豚ＴＴＶ１およびＴＴＶ２  ＤＮＡを特異的に検出することができる。ＰＴＴＶ１については、ある範囲の、２５μｌあたりのターゲットＤＮＡ濃度にわたって、標準曲線を確立した。線形範囲は、４．４×１０１〜４．４×１０８コピーにまたがることが示された。最低検出限界（４４コピー）は、３７．５７の閾サイクル数（Ｃｔ）に対応した。ＰＴＴＶ２についても標準曲線を作成し、それを使って、２５μｌの反応あたり８．６×１００〜８．６×１０８コピーの範囲にあるＤＮＡ濃度を検出した。最低検出限界（８．６コピー）に対応するＣｔは３６．５３だった。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６３】
（実施例７）
ＳＹＢＲグリーン・リアルタイム定量ＰＣＲアッセイ
ＰＴＴＶ１特異的およびＰＴＴＶ２特異的リアルタイムＰＣＲを、センシミックス（ＳｅｎｓｉＭｉｘ）ＳＹＢＲアンド・フルオレセインキット（クオンテース・リミテッド（Ｑｕａｎｔａｃｅ  Ｌｔｄ））およびマイアイキュー・アイサイクラー（ＭｙｉＱ  ｉＣＹＣＬＥＲ）リアルタイムＰＣＲ機器（バイオラッド・ラボラトリーズ（ＢＩＯ−ＲＡＤ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））を使って、それぞれ行った。各２５μｌの反応は、１２．５μｌのＳＹＢＲグリーン・マスター・ミックス、４μｌの抽出されたＤＮＡ、０．５μｌの各プライマー（１０ｎＭ）および７．５μｌの滅菌水を含有した。ＰＴＴＶ１のＰＣＲ条件は９５℃で１０分の後、４０サイクルの増幅（９５℃で１５秒、５９．４℃で３０秒、７２℃で１０秒）とした。その後、直ちに、０．５℃ごとに蛍光シグナルを測定しながら、５５℃から９５℃まで温度を徐々に上昇させることにより、融点分析を行った。ＰＴＴＶ２のＰＣＲ条件は、アニーリング温度が５６℃である点以外は、ＰＴＴＶ１と同じとした。ＰＴＴＶ１およびＰＴＴＶ２標準テンプレートを陽性対照として全てのランに含めた。増幅およびデータ解析は、マイアイキュー（ＭｙｉＱ）システムソフトウェア（バイオラッド・ラボラトリーズ（ＢＩＯ−ＲＡＤ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））を使って行った。全ての試料を同じプレート上で二つずつ測定した。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６５】
ある範囲の、２５μｌあたりのターゲットＤＮＡ濃度にわたって、ＰＴＴＶ１標準曲線を確立した。線形範囲は、４．４×１０１〜４．４×１０８コピーにまたがることが示された。最低検出限界（４４コピー）は、３７．５７の閾サイクル数（Ｃｔ）に対応した。Ｃｔ＞３７．５７の被験試料は検出限界未満とみなし、定量可能でなかった。同様に、ＰＴＴＶ２標準曲線を作成し、それを使って、２５μｌの反応あたり８．６×１００〜８．６×１０８コピーの範囲にあるＤＮＡ濃度を検出した。最低検出限界（８．６コピー）に対応するＣｔは３６．５３だった。ＰＴＴＶ１陽性またはＰＴＴＶ２陽性とみなした試料は全て、それぞれの最大検出限界より低いコピー数を持っていた。ＰＴＴＶ１またはＰＴＴＶ２標準テンプレートの１０倍希釈（図６ａおよび６ｂ；青色の曲線）ならびに２０個の雄豚血清試料を使った融解曲線は、ＰＴＴＶ１については８７．０℃、ＰＴＴＶ２については８０．０℃の融解温度（Ｔｍ）を、それぞれ示した（図６ａおよび６ｂ；赤色の曲線）。滅菌水またはヤギ血清ＤＮＡをテンプレートとして使用した陰性対照にはピークが観察されなかった（図６ａおよび７ｂ；黒い線）。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６６】
（実施例９）
雄豚血清試料および精液試料中の豚ＴＴＶ１およびＴＴＶ２の定量
ウイルス負荷量を、元の雄豚血清試料１ｍｌあたりのＰＴＴＶ１ゲノムまたはＰＴＴＶ２ゲノムのコピー数として表した。ＰＴＴＶ１  ＤＮＡは２０個の血清試料の全てに検出され、１．９１×１０３〜３．２５×１０５コピー／ｍｌの範囲にあった。一方、ＰＴＴＶ２  ＤＮＡは１９個の血清試料（＃１０以外）に検出され、３．５９×１０２〜１．３９×１０６コピー／ｍｌの範囲にあった。この結果は、従来のネステッドＰＣＲを使用した本発明者らの先の研究と合致した（表５）。精液試料はいずれもＰＴＴＶ１陽性ではなかったが、３つの精液試料は、極めて低いウイルス負荷量（それぞれ２３０、２４４および３５７コピー／ｍｌ）でＰＴＴＶ２陽性だった。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７４】
（実施例１５）
ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび抗Ｈｉｓタグ・ウェスタンブロット
抗６×Ｈｉｓタグ・モノクローナル抗体（ロックランド（Ｒｏｃｋｌａｎｄ））を使って精製組換えタンパク質を検出するために、ウェスタンブロットを開発した。等体積の各精製切断ＯＲＦ１タンパク質とＬＤＳ／１０％β−ＭＥとを混合し、９５℃で１０分間煮沸した。煮沸した試料のうち１０μｌを、４−１２％ビス−トリス・ポリアクリルアミドゲル（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））の適当な各ウェルに加え、１×ＭＥＳ泳動バッファー（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））中、２００ボルトで、４３分間泳動した。トランスブロット（Ｔｒａｎｓ  ｂｌｏｔ）セミドライ転写装置と１×転写バッファー（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））とを使って、タンパク質をＰＶＤＦメンブレン（バイオラッド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ））に転写した。転写が完了したら、ＰＶＤＦメンブレンを、オデッセイ（Ｏｄｙｓｓｅｙ）ブロッキングバッファー（リ−コール（Ｌｉ−Ｃｏｒ））中、室温で１時間、インキュベートした。抗６×ＨｉｓタグＭＡｂをオデッセイ（Ｏｄｙｓｓｅｙ）ブロッキングバッファー／０．２％ツイーン２０で１：１０００に希釈し、先のオデッセイ（Ｏｄｙｓｓｅｙ）ブロッキングバッファーを除去してから、メンブレンに移した。ＭＡｂを振とう機上に放置して、メンブレンと共に室温で２時間、または４℃で終夜、インキュベートした後、メンブレンをトリス緩衝食塩水／０．０５％ツイーン２０（ＴＢＳ−Ｔ、シグマ（Ｓｉｇｍａ））で３回洗浄した。ヤギ抗ウサギＩｇＧ  ＩＲＤｙｅ８００（リ−コール（Ｌｉ−Ｃｏｒ））抗体を、オデッセイ（Ｏｄｙｓｓｅｙ）ブロッキングバッファー／０．２％ツイーン２０／０．１％ＳＤＳで１：５０００に希釈した。それを、洗浄したばかりのＰＶＤＦメンブレンに移し、穏やかに振とうしながら室温で１時間インキュベートした。メンブレンをＴＢＳ−Ｔで３回、ＴＢＳで１回洗浄し、リ−コール（Ｌｉ−Ｃｏｒ）オデッセイ（Ｏｄｙｓｓｅｙ）で撮像した。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７５】
（実施例１６）
血清ウェスタンブロット
ＥＬＩＳＡ開発用の陽性および陰性血清対照を同定するために、血清ウェスタンブロットを開発し、使用した。上述のＳＤＳ−ＰＡＧＥ後に、タンパク質をＰＤＶＦメンブレンに転写し、次にそれを、室温においてオデッセイ（Ｏｄｙｓｓｅｙ）ブロッキングバッファー（リ−コール（Ｌｉ−Ｃｏｒ））中で１時間インキュベートした。選択した血清試料をオデッセイ（Ｏｄｙｓｓｅｙ）ブロッキングバッファー／０．２％ツイーン２０で１：１００に希釈し、先のオデッセイ（Ｏｄｙｓｓｅｙ）ブロッキングバッファーを除去してからメンブレンに移した。血清試料を振とう機上に放置して、室温で２時間、メンブレンと共にインキュベートした後、メンブレンをトリス緩衝食塩水／０．０５％ツイーン２０（ＴＢＳ−Ｔ、シグマ（Ｓｉｇｍａ））で３回洗浄した。ヤギ抗豚ＩｇＧ  ＩＲＤｙｅ８００抗体（ロックランド（Ｒｏｃｋｌａｎｄ））を、オデッセイ（Ｏｄｙｓｓｅｙ）ブロッキングバッファー／０．２％ツイーン２０／０．１％ＳＤＳで１：２５００に希釈した。それを洗浄したばかりのＰＶＤＦメンブレンに移し、穏やかに振とうしながら室温で１時間インキュベートした。メンブレンをＴＢＳ−Ｔで３回、ＴＢＳで１回洗浄し、リ−コール（Ｌｉ−Ｃｏｒ）オデッセイ（Ｏｄｙｓｓｅｙ）で撮像した。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７６】
（実施例１７）
間接的ＰＴＴＶ１ａ、ＰＴＴＶ１ｂおよびＰＴＴＶ２特異的ＥＬＩＳＡ
プレートのコーティングに使用した抗原の至適濃度ならびに抗血清およびコンジュゲートの希釈度を、交差力価測定法によって決定した。ＥＬＩＳＡは、精製組換えＨｉｓタグ付き融合タンパク質のそれぞれ（それぞれＰＴＴＶ１ａ、ＰＴＴＶ１ｂおよびＰＴＴＶ２ｃ）をｐＨ９．６の１×カーボネート・コーティング・バッファー（Ｃａｒｂｏｎａｔｅ  Ｃｏａｔｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ：ＣＣＢ）で６８０ｎｇ／ｍｌに希釈し、ミディアム・バインディング（ｍｅｄｉｕｍ  ｂｉｎｄｉｎｇ）ＥＬＩＳＡプレート（グライナー（Ｇｒｅｉｎｅｒ））を１００μｌ／ウェルでコーティングすることによって開始した。プレートを覆い、３７℃で２時間インキュベートした。コーティング後に、希釈タンパク質を除去し、各ウェルを３００μｌの１×ＴＢＳ−Ｔで３回洗浄した。次に、プロテイン・フリー・ブロッキング・バッファー（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｒｅｅ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ）（ピアス（Ｐｉｅｒｃｅ））を３００μｌ／ウェルの体積で加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。同時に、９６ウェル希釈ブロックでは、血清試料を１５０μｌのプロテイン・フリー・ブロッキング・バッファー（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｒｅｅ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ）で１：１００に希釈した。次に、そのブロックを除去し、１００μｌの各希釈血清試料を、ＥＬＩＳＡプレート上の対応する各ウェルに移した。プレートを３７℃で２時間インキュベートした後、各ウェルを３００μｌのＴＢＳ−Ｔで３回洗浄した。次に、ＨＲＰコンジュゲート抗豚ＩｇＧ抗体（ロックランド（Ｒｏｃｋｌａｎｄ））を、１２ｍｌのプロテイン・フリー・ブロックで１：４０００に希釈し、プレートの各ウェルに１００μｌを加えた。これを３７℃で１時間インキュベートした後、各ウェルを３００μｌのＴＢＳ−Ｔで３回洗浄した。ＥＬＩＳＡを発色させるために、１００μｌのシュアー・ブルー・リバース１−コンポーネント（Ｓｕｒｅ  Ｂｌｕｅ  Ｒｅｓｅｒｖｅ  １−Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）（ケー・ピー・エル（ＫＰＬ））をプレートの各ウェルに加えた。２０分後に、発色を停止させるために１００μｌの１Ｎ  ＨＣｌを各ウェルに加えた。次にプレートを４５０ｎｍで読んだ。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８１】
（実施例２２）
ＰＴＴＶ感染性クローンのインビトロ・トランスフェクション
ＰＫ−１５細胞を６ウェルプレート上に１ウェルあたり２×１０５細胞の密度で播種し、トランスフェクションに先だって６０％〜７０％コンフルエンスまで成長させた。ＤＮＡクローンｐＳＣ−２ＰＴＴＶ２ｂ−ＲＲおよびｐＳＣ−２ＰＴＴＶ２ｃ−ＲＲをそれぞれＰＫ−１５細胞に、リポフェクトアミン（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）ＬＴＸ（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））を使って、製造者のプロトコールに従って、直接トランスフェクトした。クローンｐＳＣ−ＰＴＴＶ１ａ、ｐＳＣ−ＰＴＴＶ２ｃおよびＴＴＶ２−＃４７１９４２−ｆｕｌｌについては、上述のように作製された、それらのライゲーションされたコンカテマーを、それぞれトランスフェクションに使用した。細胞を３〜５日間培養した後、豚ＴＴＶのＯＲＦ１の発現を検出するために、免疫蛍光アッセイ（ＩＦＡ）に付した。あるいは、トランスフェクト細胞を、新しい６ウェルプレートに継代し、３日間培養を続けてから、ＩＦＡ検出を行う。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８５】
いくつかの実施形態の説明によって本発明を例示し、例示的実施形態について詳細に説明したが、本願請求項の範囲をそのような詳細に制限または多少なりとも限定することは、本願出願人の意図するところではない。さらなる変更は当業者には明白であるだろう。したがって本発明は、さらに広いその態様において、ここに示し説明した具体的詳細、代表的装置および方法、ならびに例示的実施例に限定されない。したがって、本願出願人の一般的発明概念の要旨または範囲から逸脱することなく、そのような詳細から逸脱することができる。
［付記事項］
［付記１］
ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡの遺伝子型からなる群より選択されるゲノム配列に対して少なくとも８５％の相同性を有する少なくとも１コピーのゲノム配列を含有する感染性ＰＴＴＶをコードする核酸分子を含む、豚トルクテノウイルス（ＰＴＴＶ）の感染性核酸分子。
［付記２］
少なくとも１コピーのゲノム配列が、ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡからなる群より選択されるゲノム配列に対して少なくとも９５％の相同性を有する、付記１に記載の感染性核酸分子。
［付記３］
前記ゲノム配列が、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２に示す配列から選択される、付記１に記載の感染性核酸分子。
［付記４］
付記３に記載の感染性核酸分子を含有する、生物学的に機能的なプラスミドまたはウイルスベクター。
［付記５］
２コピー以上の感染性核酸分子を含有する、付記４に記載の生物学的に機能的なプラスミドまたはウイルスベクター。
［付記６］
付記４に記載の感染性核酸分子を含むベクターによってトランスフェクトされた適切な宿主細胞。
［付記７］
付記６に記載の感染性核酸分子を含有する細胞によって産生される無発病性の感染性ＰＴＴＶ。
［付記８］
無毒性の生理学的に許容される担体と、
（ａ）ＰＴＴＶ遺伝子型または亜型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡからなる群より選択されるゲノム配列に対して少なくとも８０％の相同性を有する少なくとも１コピーのゲノム配列またはその相補鎖を含有する核酸分子、
（ｂ）ＰＴＴＶ遺伝子型または亜型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡからなる群より選択されるゲノム配列に対して少なくとも８０％の相同性を有する少なくとも１コピーのゲノム配列またはその相補鎖を含有する核酸分子を含有する生物学的に機能的なプラスミドまたはウイルスベクター、
（ｃ）ＰＴＴＶ遺伝子型または亜型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡからなる群より選択されるゲノム配列に対して少なくとも８５％の相同性を有するゲノム配列から誘導され、それを含有する、無発病性、感染性かつ非病原性豚トルクテノウイルス、
（ｄ）ＰＴＴＶ遺伝子型または亜型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ１／１、およびＯＲＦ２／２からなる群より選択されるポリヌクレオチド配列に従って翻訳されたポリペプチド配列の免疫原性フラグメントまたは完全タンパク質
からなる群より選択される免疫原量の構成要素とを含む、ワクチン。
［付記９］
生ＰＴＴＶウイルスを含有する、付記８に記載のワクチン。
［付記１０］
死滅ＰＴＴＶウイルスを含有する、付記８に記載のワクチン。
［付記１１］
ポリペプチド配列の免疫原性フラグメントまたは完全タンパク質が、ＰＴＴＶ遺伝子型または亜型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ１／１ およびＯＲＦ２／２から発現された精製細菌発現またはバキュロウイルス発現組換えタンパク質を含む、付記８に記載のワクチン。
［付記１２］
ポリペプチド配列の免疫原性フラグメントまたは完全タンパク質が、ＰＴＴＶ遺伝子型または亜型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのＯＲＦ１から発現された精製細菌発現またはバキュロウイルス発現組換えタンパク質を含む、付記１１に記載のワクチン。
［付記１３］
アジュバントをさらに含む、付記８に記載のワクチン。
［付記１４］
免疫学的有効量の付記８に記載のワクチンを豚に投与することを含む、ＰＴＴＶウイルス感染に対して豚を免疫化する方法。
［付記１５］
前記ワクチンを豚に非経口投与、鼻腔内投与、皮内投与、または経皮投与することを含む、付記１４に記載の方法。
［付記１６］
前記ワクチンを豚にリンパ系内投与または筋肉内投与することを含む、付記１４に記載の方法。
［付記１７］
配列番号９に示すＰＴＴＶ１ａ−ＶＡのヌクレオチド配列に対して８５％の相同性を有するポリ核酸配列からなる単離されたポリヌクレオチド。
［付記１８］
前記ポリ核酸配列が、配列番号９に示す前記ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡのヌクレオチド配列に対して９５％の相同性を有する、付記１７に記載の単離されたポリヌクレオチド。
［付記１９］
前記ポリ核酸配列が、配列番号９に示す前記ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡのヌクレオチド配列からなる、付記１７に記載の単離されたポリヌクレオチド。
［付記２０］
配列番号１０に示すＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡのヌクレオチド配列に対して８５％の相同性を有するポリ核酸配列からなる単離されたポリヌクレオチド。
［付記２１］
前記ポリ核酸配列が、配列番号１０に示す前記ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡのヌクレオチド配列に対して９５％の相同性を有する、付記２０に記載の単離されたポリヌクレオチド。
［付記２２］
前記ポリ核酸配列が、配列番号１０に示す前記ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡのヌクレオチド配列からなる、付記２０に記載の単離されたポリヌクレオチド。
［付記２３］
配列番号１１に示すＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡのヌクレオチド配列に対して８５％の相同性を有するポリ核酸配列からなる単離されたポリヌクレオチド。
［付記２４］
前記ポリ核酸配列が、配列番号１１に示す前記ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡのヌクレオチド配列に対して９５％の相同性を有する、付記２３に記載の単離されたポリヌクレオチド。
［付記２５］
前記ポリ核酸配列が、配列番号１１に示す前記ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡのヌクレオチド配列からなる、付記２３に記載の単離されたポリヌクレオチド。
［付記２６］
配列番号１２に示すＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのヌクレオチド配列に対して８５％の相同性を有するポリ核酸配列からなる単離されたポリヌクレオチド。
［付記２７］
前記ポリ核酸配列が、配列番号１２に示す前記ＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのヌクレオチド配列に対して９５％の相同性を有する、付記２３に記載の単離されたポリヌクレオチド。
［付記２８］
前記ポリ核酸配列が、配列番号１２に示す前記ＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのヌクレオチド配列からなる、付記２３に記載の単離されたポリヌクレオチド。
［付記２９］
ＰＴＴＶ遺伝子型または亜型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ１／１、およびＯＲＦ２／２からなる群より選択されるポリヌクレオチド配列に従って翻訳されたポリペプチド配列の免疫原性フラグメントまたは完全タンパク質を含むワクチン。
［付記３０］
前記免疫原性フラグメントまたは完全タンパク質が、ＰＴＴＶ遺伝子型または亜型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのキャプシドタンパク質である、付記２９に記載のワクチン。
［付記３１］
前記ポリヌクレオチド配列が、ＰＴＴＶ遺伝子型または亜型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのＯＲＦ１からなる群より選択される、付記２９に記載のワクチン。
［付記３２］
前記ポリヌクレオチド配列がＰＴＴＶ遺伝子型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡのＯＲＦ１である、付記３１に記載のワクチン。
［付記３３］
前記ポリヌクレオチド配列がＰＴＴＶ遺伝子型ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡのＯＲＦ１である、付記３１に記載のワクチン。
［付記３４］
前記ポリヌクレオチド配列がＰＴＴＶ亜型ＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのＯＲＦ１である、付記３１に記載のワクチン。
［付記３５］
前記ポリペプチド配列が、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、および配列番号２８に示す配列からなる群より選択される、付記２９に記載のワクチン。
［付記３６］
前記ポリペプチド配列が配列番号１３に示される、付記３５に記載のワクチン。
［付記３７］
前記ポリペプチド配列が配列番号１３のＣ末端領域（ａａ３１７−６３５）である、付記３６に記載のワクチン。
［付記３８］
前記ポリペプチド配列が配列番号１４に示される、付記３５に記載のワクチン。
［付記３９］
前記ポリペプチド配列が配列番号１４のＣ末端領域（ａａ３２２−６３９）である、付記３８に記載のワクチン。
［付記４０］
前記ポリペプチド配列が配列番号１６に示される、付記３５に記載のワクチン。
［付記４１］
前記ポリペプチド配列が配列番号１６のＣ末端領域（ａａ３１０−６２５）である、付記４０に記載のワクチン。
［付記４２］
前記ポリペプチド配列が配列番号２０に示される、付記３５に記載のワクチン。
［付記４３］
アジュバントをさらに含有する、付記２９に記載のワクチン。
［付記４４］
免疫学的有効量の付記２９に記載のワクチンを豚に投与することを含む、ＰＴＴＶウイルス感染に対して豚を免疫化する方法。
［付記４５］
免疫原性フラグメントまたは完全タンパク質を豚に投与することを含む、付記４４に記載の方法。
［付記４６］
ワクチンを豚に非経口投与、鼻腔内投与、皮内投与、または経皮投与することを含む、付記４４に記載の方法。
［付記４７］
ワクチンを豚にリンパ系内投与または筋肉内投与することを含む、付記４４に記載の方法。
［付記４８］
ＰＴＴＶ１感染を診断し、ＰＴＴＶ１負荷量を定量するための方法であって、
ＰＴＴＶ１感染が疑われる試料からＤＮＡを抽出すること、
配列番号２９および配列番号３０に示す配列を含むプライマーを使ってポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行うこと、および
ＰＴＴＶ１特異的増幅を検出すること
を含む方法。
［付記４９］
前記ポリメラーゼ連鎖反応がＳＹＢＲグリーン・リアルタイムＰＣＲである、付記４８に記載の方法。
［付記５０］
ＰＴＴＶ２感染を診断し、ＰＴＴＶ２負荷量を定量するための方法であって、
ＰＴＴＶ２感染が疑われる試料からＤＮＡを抽出すること、
配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１および配列番号３２に示す配列を含むプライマーを使ってポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行うこと、および
ＰＴＴＶ２特異的増幅を検出すること
を含む方法。
［付記５１］
前記ポリメラーゼ連鎖反応がＳＹＢＲグリーン・リアルタイムＰＣＲである、付記５０に記載の方法。
［付記５２］
ＰＴＴＶ１感染とＰＴＴＶ２感染を同時に検出し診断するための方法であって、
ＰＴＴＶ感染が疑われる試料からＤＮＡを抽出すること、
配列番号３１および配列番号３２に示す配列を含むプライマーを使ってポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行うこと、および
ＰＴＴＶ１およびＰＴＴＶ２特異的増幅を検出すること
を含む方法。
［付記５３］
前記ポリメラーゼ連鎖反応がＳＹＢＲグリーン・リアルタイムＰＣＲである、付記５２に記載の方法。
［付記５４］
ＰＴＴＶ１ａ感染とＰＴＴＶ１ｂ感染を同時に検出し診断するための方法であって、
ＰＴＴＶ１感染が疑われる試料からＤＮＡを抽出すること、
配列番号３３および配列番号３４に示す配列を含むプライマーを使って第１ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行うこと、
配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、および配列番号３８に示す配列を含むプライマーを使って第２ＰＣＲを行うこと、および
ＰＴＴＶ１ａおよびＰＴＴＶ１ｂ特異的増幅を検出すること
を含む方法。
［付記５５］
ＰＴＴＶ感染を診断するための方法であって、
ＰＴＴＶ亜型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ１／１、およびＯＲＦ２／２からなる群より選択されるポリヌクレオチド配列に従って翻訳されたポリペプチド配列の免疫原性フラグメントまたは完全タンパク質を固定化すること、
ＰＴＴＶ感染が疑われる豚からの血清試料を前記固定化免疫原性フラグメントまたは完全タンパク質と接触させること、および
前記免疫原性フラグメントに特異的な、捕捉された抗体を検出すること
を含む方法。
［付記５６］
前記ポリヌクレオチド配列が、ＰＴＴＶ遺伝子型または亜型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡ、ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡ、ＰＴＴＶ２ｂ−ＶＡ、およびＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのＯＲＦ１からなる群より選択される、５５に記載の方法。
［付記５７］
前記ポリヌクレオチド配列がＰＴＴＶ遺伝子型ＰＴＴＶ１ａ−ＶＡのＯＲＦ１である、付記５６に記載のワクチン。
［付記５８］
前記ポリヌクレオチド配列がＰＴＴＶ遺伝子型ＰＴＴＶ１ｂ−ＶＡのＯＲＦ１である、付記５６に記載の方法。
［付記５９］
前記ポリヌクレオチド配列がＰＴＴＶ亜型ＰＴＴＶ２ｃ−ＶＡのＯＲＦ１である、付記５６に記載の方法。
［付記６０］
前記ポリペプチド配列が、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、および配列番号２８に示す配列からなる群より選択される、付記５５に記載の方法。
［付記６１］
前記ポリペプチド配列が配列番号１３に示される、付記６０に記載の方法。
［付記６２］
前記ポリペプチド配列が配列番号１６に示される、付記６０に記載のワクチン。
［付記６３］
前記免疫原性フラグメントが、配列番号１３のＣ末端領域（ａａ３１７−６３５）、配列番号１４のＣ末端領域（ａａ３２２−６３９）、または配列番号１６のＣ末端領域（ａａ３１０−６２５）である、付記６２に記載のワクチン。
［付記６４］
前記ポリペプチド配列が配列番号２０に示される、付記６０に記載のワクチン。
［付記６５］
前記捕捉された抗体の検出がウェスタンブロットによる、付記５５に記載の方法。
［付記６６］
前記捕捉された抗体の検出が酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）による、付記５５に記載の方法。