【手続補正書】
【提出日】平成27年6月19日(2015.6.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１、配列番号２、または配列番号３を含む、変異体Ｍ遺伝子を有する組換えインフルエンザウイルス。
【請求項２】
前記Ｍ遺伝子の変異により、前記ウイルスにＭ２蛋白質を発現できなくさせるか、または前記ウイルスに配列番号４のアミノ酸配列を有するトランケート型Ｍ２蛋白質を発現させる、請求項１に記載の組換えインフルエンザウイルス。
【請求項３】
前記変異体Ｍ遺伝子が、インビトロ宿主細胞系での少なくとも１０継代の間に、機能性Ｍ２蛋白質をコードする野生型または非野生型配列に復帰せず、
前記宿主細胞が、前記変異体遺伝子の野生型バージョンを生成するように修飾されており、それにより前記遺伝子産物を前記ウイルスにトランスに提供する、
請求項１に記載の組換えインフルエンザウイルス。
【請求項４】
前記ウイルスが、インフルエンザＡ型ウイルスである、請求項１に記載の組換えウイルス。
【請求項５】
前記ウイルスに感染された哺乳動物において非病原性である、請求項１に記載の組換えウイルス。
【請求項６】
前記インビトロ細胞系が、チャイニーズハムスター卵巣細胞又はベロ細胞を含む、請求項３に記載の組換えウイルス。
【請求項７】
宿主細胞を、配列番号１、配列番号２または配列番号３を含む組換えインフルエンザウイルスと接触させることと、前記宿主細胞をウイルス複製に適した条件下で十分な時間インキュベートすることとを含む、組換えインフルエンザウイルスを増殖させる方法であって、
前記宿主細胞が、インフルエンザＭ遺伝子の野生型バージョンを生成するように修飾されており、それにより前記遺伝子産物を前記ウイルスにトランスに提供する、方法。
【請求項８】
更に、子孫ウイルス粒子を単離すること、及び／又は、前記ウイルス粒子をワクチンに製剤化することを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記変異体Ｍ遺伝子が、前記宿主細胞の少なくとも１０継代の間に、機能性Ｍ２蛋白質をコードする野生型または非野生型配列に復帰しない、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記宿主細胞が、ＣＨＯ細胞又はベロ細胞である、請求項７に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６０】
結果を図５１〜５３に示す。データは、季節性インフルエンザワクチンＦｌｕＬａｖａｌにおいて配合された、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／７／２００９  ＮＹＭＣ  Ｘ−１８１、Ａ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２１０／２００９  ＮＹＭＣ  Ｘ−１８７（Ａ／Ｐｅｒｔｈ／１６／２００９様ウイルス）、およびＢ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／６０／２００８の３つのウイルス株に対する抗体レベルの定性的吸収を示す。３０日目に、ＩＭおよびＩＤ送達は、全てのウイルスＨＡに対して同等のＩｇＧ応答を生じた。ＩＤプライムのみ群は、６０日目により高い力価を示しており、ＩＤ送達が全てのウイルスＨＡへの長期持続性免疫を誘発することが示唆される。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕配列番号１を含む核酸配列。
〔２〕配列番号２を含む核酸配列。
〔３〕配列番号３を含む核酸配列。
〔４〕（ｉ）プロモーターと、（ii）転写終止配列とに動作可能に連結された配列番号１、配列番号２または配列番号３を含む組成物。
〔５〕Ｍ遺伝子内に変異を含む組換えインフルエンザウイルス。
〔６〕配列番号１、配列番号２、または配列番号３を含む、前記〔５〕に記載の組換えインフルエンザウイルス。
〔７〕前記Ｍ遺伝子内の変異により、前記ウイルスにＭ２蛋白質を発現できなくさせるか、または前記ウイルスに配列番号４のアミノ酸配列を有するトランケート型Ｍ２蛋白質を発現させる、前記〔５〕または〔６〕に記載の組換えインフルエンザウイルス。
〔８〕前記Ｍ遺伝子内の変異が、インビトロ宿主細胞系での少なくとも１０継代の間に、機能性Ｍ２蛋白質をコードする野生型または非野生型配列に復帰しない、前記〔５〕〜〔７〕のいずれか一項に記載の組換えインフルエンザウイルス。
〔９〕前記ウイルスが、インフルエンザＡ型ウイルスである、前記〔５〕〜〔８〕のいずれか一項に記載の組換えウイルス。
〔１０〕感染された哺乳動物において非病原性である、前記〔５〕〜〔９〕のいずれか一項に記載の組換えウイルス。
〔１１〕前記インビトロ細胞系が、チャイニーズハムスター卵巣細胞を含む、前記〔８〕に記載の組換えウイルス。
〔１２〕前記インビトロ細胞系が、ベロ細胞を含む、前記〔８〕に記載の組換えウイルス。
〔１３〕前記〔５〕〜〔１０〕のいずれか一項に記載の組換えインフルエンザウイルスを含む細胞。
〔１４〕前記細胞が、インビトロのものである、前記〔１３〕に記載の細胞。
〔１５〕前記細胞が、インビボのものである、前記〔１３〕に記載の細胞。
〔１６〕Ｍ遺伝子内に変異を含む組換えインフルエンザウイルスを含む組成物。
〔１７〕配列番号１、配列番号２または配列番号３を含む、前記〔１６〕に記載の組成物。
〔１８〕前記Ｍ遺伝子内の変異により、前記ウイルスにＭ２蛋白質を発現できなくさせるか、または前記ウイルスに配列番号４のアミノ酸配列を有するトランケート型Ｍ２蛋白質を発現させる、前記〔１６〕または〔１７〕に記載の組成物。
〔１９〕前記ウイルスが、インフルエンザＡ型ウイルスである、前記〔１６〕〜〔１８〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔２０〕投与された哺乳動物に対して非病原性である、前記〔１６〕〜〔１９〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔２１〕哺乳動物への投与後約３週間以内に前記哺乳動物において検出可能な免疫応答を誘発する、前記〔１６〕〜〔２０〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔２２〕Ｍ遺伝子内に変異を含む組換えインフルエンザウイルスを含むワクチン。
〔２３〕配列番号１、配列番号２または配列番号３を含む、前記〔２２〕に記載のワクチン。
〔２４〕前記Ｍ遺伝子内の変異により、前記ウイルスにＭ２蛋白質を発現できなくさせるか、または前記ウイルスに配列番号４のアミノ酸配列を有するトランケート型Ｍ２蛋白質を発現させる、前記〔２２〕または〔２３〕に記載のワクチン。
〔２５〕前記ウイルスが、インフルエンザＡ型ウイルスである、前記〔２２〕〜〔２４〕のいずれか一項に記載のワクチン。
〔２６〕投与された哺乳動物に対して非病原性である、前記〔２２〕〜〔２５〕のいずれか一項に記載のワクチン。
〔２７〕哺乳動物への投与後約３週間以内に前記哺乳動物において検出可能な免疫応答を誘発する、前記〔２２〕〜〔２６〕のいずれか一項に記載のワクチン。
〔２８〕前記組換えウイルスに加えて、少なくとも２種の異なるインフルエンザウイルス株を含む、前記〔２２〕〜〔２７〕のいずれか一項に記載のワクチン。
〔２９〕少なくとも１種のインフルエンザＢ型ウイルスまたはインフルエンザＢ型ウイルス抗原を含む、前記〔２２〕〜〔２８〕のいずれか一項に記載のワクチン。
〔３０〕少なくとも１種のインフルエンザＣ型ウイルスまたはインフルエンザＣ型ウイルス抗原を含む、前記〔２２〕〜〔２９〕のいずれか一項に記載のワクチン。
〔３１〕ヒトインフルエンザＡ型ウイルスおよび非ヒト種からのパンデミックインフルエンザウイルスを含む１種以上のウイルスまたはウイルス抗原を含む、前記〔２２〕〜〔３０〕のいずれか一項に記載のワクチン。
〔３２〕前記ヒトインフルエンザＡ型ウイルスが、Ｈ１Ｎ１、Ｈ２Ｎ２およびＨ３Ｎ２を含む群から選択される、前記〔２２〕〜〔３１〕のいずれか一項に記載のワクチン。
〔３３〕宿主細胞を組換えインフルエンザウイルスの配列番号１、配列番号２または配列番号３と接触させることと、前記宿主細胞をウイルス複製に適した条件下で十分な時間インキュベートすることと、子孫ウイルス粒子を単離することと、を含む、組換えインフルエンザウイルスを増殖させる方法。
〔３４〕宿主細胞をバイオリアクターに入れることと、前記宿主細胞を組換えウイルスの配列番号１、配列番号２または配列番号３と接触させることと、前記宿主細胞をウイルス増殖に適した条件下で十分な時間インキュベートすることと、子孫ウイルス粒子を単離することと、前記子孫ウイルス粒子をワクチンとしての投与のために製剤化することと、を含む、ワクチンを調製する方法。
〔３５〕Ｍ遺伝子内に変異を含む組換えインフルエンザウイルスを含む組成物を投与することと、を含み、前記Ｍ遺伝子内の変異により、前記ウイルスにＭ２蛋白質を発現できなくさせるか、または前記ウイルスに配列番号４のアミノ酸配列を有するトランケート型Ｍ２蛋白質を発現させる、対象を免疫処置する方法。
〔３６〕Ｍ遺伝子内に変異を含む組換えインフルエンザウイルスを含む組成物を投与することと、を含み、前記Ｍ遺伝子内の変異により、前記ウイルスにＭ２蛋白質を発現できなくさせるか、または前記ウイルスに配列番号４のアミノ酸配列を有するトランケート型Ｍ２蛋白質を発現させる、対象におけるインフルエンザＡ型ウイルスによる感染の可能性または重症度を低減する方法。
〔３７〕前記組換えインフルエンザウイルスが、配列番号１、配列番号２または配列番号３を含む、前記〔３５〕または〔３６〕に記載の方法。
〔３８〕前記組成物の少なくとも１種のブースター用量を提供することを含み、前記少なくとも１種のブースター用量が、最初の投与後３週間目に提供される、前記〔３５〕〜〔３７〕のいずれか一項に記載の方法。
〔３９〕前記組成物を鼻腔、筋肉内または皮膚内に投与することを含む、前記〔３５〕〜〔３８〕のいずれか一項に記載の方法。
〔４０〕前記投与が、皮膚内に実施される、前記〔３９〕に記載の方法。
〔４１〕前記投与が、マイクロニードル送達デバイスを用いて実施される、前記〔４０〕に記載の方法。
〔４２〕（ａ）（ｉ）穿刺機構と、（ii）皮膚を穿刺することが可能な複数のマイクロニードルを含む免疫原性組成物層と、を含み、免疫原性組成物を皮膚内投与させることが可能である、マイクロニードル送達デバイスを提供することと、（ｂ）前記穿刺機構を押し下げることと、を含み、前記免疫原性組成物が、Ｍ遺伝子内に変異を含む組換えインフルエンザウイルスを含み、前記Ｍ遺伝子内の変異により、前記ウイルスにＭ２蛋白質を発現できなくさせるか、または前記ウイルスに配列番号４のアミノ酸配列を有するトランケート型Ｍ２蛋白質を発現させる、免疫原性組成物の皮膚内投与方法。
〔４３〕前記組換えインフルエンザウイルスが、配列番号１、配列番号２または配列番号３を含む、前記〔４２〕に記載の方法。
〔４４〕前記マイクロニードルアレイが、最初、デバイスハウジングの内部に配置されており、レバーの動作により前記マイクロニードルを前記デバイスの底を貫通させて皮膚内に挿入させ、それにより前記ワクチン液を皮膚に注入させる、前記〔４２〕に記載の方法。
〔４５〕前記ウイルスが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ベロ細胞、またはメイディン・ダービー・イヌ腎臓細胞からなる群より選択される非変性宿主細胞中で複製しない、Ｍ遺伝子内の変異を含む組換えインフルエンザウイルス。
〔４６〕前記Ｍ遺伝子内の変異により、前記ウイルスにＭ２蛋白質を発現できなくさせるか、または前記ウイルスに配列番号４のアミノ酸配列を有するトランケート型Ｍ２蛋白質を発現させる、前記〔４５〕に記載の組換えウイルス。
〔４７〕インフルエンザウイルスＭ２イオンチャネル遺伝子をコードする核酸を含み、前記核酸が前記細胞内で発現される、組換え細胞。
〔４８〕２，６−シアル酸受容体遺伝子を含む組換え細胞。
〔４９〕（ｉ）ウイルスＭ２イオンチャネル遺伝子、および（ii）２，６−シアル酸受容体遺伝子、を発現する細胞内ゲノムまたは発現ベクターを含む組換え細胞。
〔５０〕前記細胞は、真核細胞である、前記〔４７〕〜〔４９〕のいずれか一項に記載の組換え細胞。
〔５１〕前記真核細胞が、チャイニーズハムスター卵巣細胞またはベロ細胞である、前記〔４７〕〜〔５０〕のいずれか一項に記載の組換え細胞。
〔５２〕機能性Ｍ２蛋白質を発現しないヒトインフルエンザウイルスを更に含む、前記〔４７〕〜〔５１〕のいずれか一項に記載の組換え細胞。
〔５３〕（Ａ）（ｉ）機能性Ｍ２イオンチャネル蛋白質を構成的に発現するか、または（ii）前記機能性Ｍ２イオンチャネル蛋白質を発現するようにウイルス感染後に導入され、前記細胞により発現された前記機能性Ｍ２イオンチャネル蛋白質の存在下のみで複製に成功する、前記〔４７〕〜〔５２〕の１項に記載の細胞を、ヒトインフルエンザウイルス粒子に感染させることと、（Ｂ）子孫ウイルス粒子を単離することと、を含む、組換えインフルエンザウイルス粒子を生成する方法。
〔５４〕前記単離されたウイルス粒子をワクチンに配合させることを更に含む、前記〔５３〕に記載の方法。
〔５５〕前記ウイルスが、ヒトインフルエンザウイルスを含み、前記ウイルスが、機能性Ｍ２蛋白質を発現しない、前記〔５３〕または〔５４〕に記載の方法。