【手続補正書】
【提出日】平成27年7月28日(2015.7.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
環境に対する細胞応答を観察するための方法であって、第１の環境に対する細胞応答が観察されるように、
（ａ）第１の環境内に少なくとも１つの細胞を配置する段階と、
（ｂ）生細胞干渉法を含むプロセスを使用して、第１の環境内の細胞の質量特性を観察する段階と、
（ｃ）（ｂ）で観察される質量特性を、生細胞干渉法を含むプロセスを使用して第２の環境で観察される細胞の質量特性と比較する段階と、
を含む、方法。
【請求項２】
質量特性が観察される前記少なくとも１つの細胞が、単離された単細胞として第１の環境内に存在する、請求項１記載の方法。
【請求項３】
質量特性が観察される前記少なくとも１つの細胞が、細胞集合または集塊の中で第１の環境内に存在する、請求項１記載の方法。
【請求項４】
第１の環境内に存在する複数の細胞の質量特性が観察される、請求項１記載の方法。
【請求項５】
第１の環境が試験組成物を含み、第２の環境は該試験組成物を含まない、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記試験組成物が、抗生物質、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗物質、細胞周期阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ｓｉＲＮＡ、または細胞を含む、請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記試験組成物が、ＨＥＲ２に結合する抗体を含む、請求項６記載の方法。
【請求項８】
第１の環境内の細胞の前記質量特性が、ある期間にわたって該細胞の質量特性がどのように変化するかを観察するように、複数回観察される、請求項５記載の方法。
【請求項９】
前記細胞の質量特性の変化が、時間的質量プロファイルを観察するように経時的に観察される、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
観察された時間的質量プロファイルを時間的質量プロファイルのデータベースと比較する段階をさらに含み、該時間的質量プロファイルのデータベースは、前記試験組成物に対する細胞感受性の特性を示す時間的質量プロファイル、および前記試験組成物に対する細胞抵抗性の特性を示す時間的質量プロファイルを含むように選択される、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
細胞の質量を観察するための方法であって、
（ａ）試験光線と参照光線との間の分数位相偏移を測定するように適合されている干渉顕微鏡の観察チャンバの中に細胞を配置する段階と、
（ｂ）照明波長における試験光線に細胞を暴露させる段階と、
（ｃ）細胞を通って伝搬する試験光線と参照光線との間の分数位相偏移を測定する段階と、
（ｄ）細胞の質量を観察するために、（ｃ）で得られた測定値を使用する段階と、
を含む、方法。
【請求項１２】
細胞の質量が、以下の方程式
【数１】
2014527168.tif 000001
を使用して観察され、式中、ｍは、細胞の質量であり、αは、前記位相偏移と細胞質量との間の関係を表す定数であり、φは、前記測定された分数位相偏移であり、λは、照明波長であり、積分が全細胞面積Ａにわたって行われる、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
α＝１．８×１０−３ｍ３ｋｇ−１である、請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
細胞の質量が、ある期間にわたって細胞の質量がどのように変化するかを観察するよう、複数回観察される、請求項１１記載の方法。
【請求項１５】
複数の細胞の質量を定量化するために使用される、請求項１１記載の方法。
【請求項１６】
（ａ）顕微鏡に動作可能に連結されている検出器と、
（ｂ）細胞を含有するように適合されている観察チャンバを備える、サンプルアセンブリと、
（ｃ）参照細胞を含有するように適合される参照チャンバを備える、参照アセンブリと、
（ｄ）光源からの光線を試験ビームおよび参照ビームに分割するためのビームスプリッタと、
を備える、生細胞干渉法システムを使用して行われる、請求項１１記載の方法。
【請求項１７】
観察チャンバが、該チャンバ内で細胞培地を循環させるように適合されている少なくとも１本の灌流導管を備える、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
生細胞干渉法システムが、細胞の１つまたは複数の画像を処理して記憶するように適合されているプロセッサ要素とメモリ記憶要素とを備える、請求項１６記載の方法。
【請求項１９】
細胞の質量特性が、治療組成物に対する細胞応答を定量化するように観察される、請求項１１記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞が、癌に罹患している個人から得られ、前記治療組成物が、癌を治療するために使用される、請求項１９記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明の典型的な実施形態では、本方法は、顕微鏡に動作可能に連結される検出器と、細胞を含有するように適合される観察チャンバを備えるサンプルアセンブリと、参照細胞を含有するように適合される参照チャンバを備える参照アセンブリと、光源からの光線を試験ビームおよび参照ビームに分割するためのビームスプリッタとを備える、生細胞干渉法システムを使用して行われる。本発明のある実施形態では、観察チャンバは、チャンバ内で細胞培地を循環させるように適合される、少なくとも１本の灌流導管を備える。本発明のいくつかの実施形態では、生細胞干渉法システムは、細胞（複数可）の１つ以上の画像を処理して記憶するように適合されるプロセッサ要素とメモリ記憶要素とを備える。本発明のある実施形態では、細胞の質量特性は、治療薬に対する細胞の応答を定量化するように観察される。随意に、１つ以上の細胞は、癌に罹患している個人から得られ、治療薬は、典型的には、（例えば、治療薬に対する癌細胞の感受性を評価するように設計されている方法で）癌を治療するために使用されるものである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
付録を含む以下の発明を実施するための形態から、本発明の他の目的、特徴、および利点が当業者に明白となるであろう。しかしながら、発明を実施するための形態および具体的実施例は、本発明のいくつかの実施形態を示しながら、限定ではなく例証として挙げられることを理解されたい。本発明の範囲内の多くの変更および修正が、その精神から逸脱することなく行われてもよく、本発明は、全てのそのような修正を含む。
[本発明1001]
環境に対する細胞応答を観察するための方法であって、第1の環境に対する細胞応答が観察されるように、
（ａ）第1の環境内に少なくとも1つの細胞を配置する段階と、
（ｂ）生細胞干渉法を含むプロセスを使用して、第1の環境内の細胞の質量特性を観察する段階と、
（ｃ）（ｂ）で観察される質量特性を、生細胞干渉法を含むプロセスを使用して第2の環境で観察される細胞の質量特性と比較する段階と、
を含む、方法。
[本発明1002]
質量特性が観察される前記少なくとも1つの細胞が、単離された単細胞として第1の環境内に存在する、本発明1001の方法。
[本発明1003]
質量特性が観察される前記少なくとも1つの細胞が、細胞集合または集塊の中で第1の環境内に存在する、本発明1001の方法。
[本発明1004]
第1の環境内に存在する複数の細胞の質量特性が観察される、本発明1001の方法。
[本発明1005]
第1の環境が試験組成物を含み、第2の環境は該試験組成物を含まない、本発明1001の方法。
[本発明1006]
前記試験組成物が、抗生物質、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗物質、細胞周期阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ｓｉＲＮＡ、または細胞を含む、本発明1005の方法。
[本発明1007]
前記試験組成物が、ＨＥＲ2を結合する抗体を含む、本発明1006の方法。
[本発明1008]
第1の環境内の細胞の前記質量特性が、ある期間にわたって該細胞の質量特性がどのように変化するかを観察するように、複数回観察される、本発明1005の方法。
[本発明1009]
前記細胞の質量特性の変化が、時間的質量プロファイルを観察するように経時的に観察される、本発明1008の方法。
[本発明1010]
観察された時間的質量プロファイルを時間的質量プロファイルのデータベースと比較する段階をさらに含み、該時間的質量プロファイルのデータベースは、前記試験組成物に対する細胞感受性の特性を示す時間的質量プロファイル、および前記試験組成物に対する細胞抵抗性の特性を示す時間的質量プロファイルを含むように選択される、本発明1009の方法。
[本発明1011]
細胞の質量を観察するための方法であって、
（ａ）試験光線と参照光線との間の分数位相偏移を測定するように適合されている干渉顕微鏡の観察チャンバの中に細胞を配置する段階と、
（ｂ）照明波長における試験光線に細胞を暴露させる段階と、
（ｃ）細胞を通って伝搬する試験光線と参照光線との間の分数位相偏移を測定する段階と、
（ｄ）細胞の質量を観察するために、（ｃ）で得られた測定値を使用する段階と、
を含む、方法。
[本発明1012]
細胞の質量が、以下の方程式
[数1]
2014527168.tif 000002
を使用して観察され、式中、ｍは、細胞の質量であり、αは、前記位相偏移と細胞質量との間の関係を表す定数であり、φは、前記測定された分数位相偏移であり、λは、照明波長であり、積分が全細胞面積Ａにわたって行われる、本発明1011の方法。
[本発明1013]
α＝1．8×10−3ｍ3ｋｇ−1である、本発明1011の方法。
[本発明1014]
細胞の質量が、ある期間にわたって細胞の質量がどのように変化するかを観察するよう、複数回観察される、本発明1011の方法。
[本発明1015]
複数の細胞の質量を定量化するために使用される、本発明1011の方法。
[本発明1016]
（ａ）顕微鏡に動作可能に連結されている検出器と、
（ｂ）細胞を含有するように適合されている観察チャンバを備える、サンプルアセンブリと、
（ｃ）参照細胞を含有するように適合される参照チャンバを備える、参照アセンブリと、
（ｄ）光源からの光線を試験ビームおよび参照ビームに分割するためのビームスプリッタと、
を備える、生細胞干渉法システムを使用して行われる、本発明1011の方法。
[本発明1017]
観察チャンバが、該チャンバ内で細胞培地を循環させるように適合されている少なくとも1本の灌流導管を備える、本発明1016の方法。
[本発明1018]
生細胞干渉法システムが、プロセッサ要素と、細胞の1つまたは複数の画像を処理して記憶するように適合されているメモリ記憶要素とを備える、本発明1016の方法。
[本発明1019]
細胞の質量特性が、治療組成物に対する細胞応答を定量化するように観察される、本発明1011の方法。
[本発明1020]
前記細胞が、癌に罹患している個人から得られ、前記治療組成物が、癌を治療するために使用される、本発明1019の方法。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
本発明の典型的な実施形態では、本方法は、顕微鏡に動作可能に連結される検出器と、細胞を含有するように適合される観察チャンバを備えるサンプルアセンブリと、参照細胞を含有するように適合される参照チャンバを備える参照アセンブリと、光源からの光線を試験ビームおよび参照ビームに分割するためのビームスプリッタとを備える、生細胞 干渉法システムを使用して行われる。本発明のある実施形態では、観察チャンバは、チャンバ内で細胞培地を循環させるように適合される、少なくとも１本の灌流導管を備える。本発明のいくつかの実施形態では、生細胞干渉法システムは、細胞の１つ以上の画像を処理して記憶するように適合されるプロセッサ要素とメモリ記憶要素とを備える。本発明のある実施形態では、細胞質量特性（例えば、細胞の質量、細胞の重量、細胞の体積等）は、治療薬に対する細胞の応答を定量化するように観察される。随意に、例えば、細胞は、癌に罹患している個人から得られ、治療薬は、癌を治療するために使用される。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
本発明の実施形態は、これらのシステムの種々の順列を含む。例えば、ある実施形態では、観察チャンバは、チャンバ内で細胞培地を循環させるように適合される、少なくとも１本の灌流導管を備える。本発明のいくつかの実施形態はさらに、細胞の１つ以上の画像を処理して記憶するように適合されるプロセッサ要素とメモリ記憶要素とを備える。本発明のある実施形態では、細胞は、蛍光マーカー（例えば、緑色蛍光タンパク質）等の当技術分野で公知である別のマーカー／プローブで標識され、本システムは、これらの標識細胞を撮像するように適合される光学的要素を含む。本発明のいくつかの実施形態は、ＦＴ赤外線分光法、ラマン分光法等で使用されるデバイスおよびプロセス（例えば、ソフトウェアベースのプロセス）等の、細胞特性を観察するために使用される付加的な要素を含む。