【手続補正書】
【提出日】平成27年8月14日(2015.8.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【発明の名称】抗−ＣＤ１９抗体とプリン類似体の併用治療
【技術分野】
【０００１】
[クロスリファレンス]
本発明は、ここに引用により組み込まれている、２０１１年８月１６日に出願した米国暫定特許出願第６１／５２３，８６２号の利益を請求する。
【０００２】
本開示は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球腫白血病、及び／又は、急性リンパ球腫白血病を治療するための抗−ＣＤ１９抗体とプリン類似体の薬学的組合せに関する。
【背景技術】
【０００３】
Ｂ細胞は、液性免疫反応において大きな役割を果たすリンパ球である。この細胞は、ほとんどの哺乳類の骨髄中で作られ、循環するリンパ球プールの５−１５％を占める。Ｂ細胞の主な作用は、様々な抗原に対する抗体を作ることであり、適応免疫系の必須要素である。
【０００４】
免疫系の調整におけるその重要な役割のために、Ｂ細胞の異常調節は、リンパ腫や白血病など様々な疾患に関連している。これらの疾患には、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、及び急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）が含まれる。
【０００５】
ＮＨＬは、リンパ球由来の異種悪性腫瘍である。米国では、その発生率は６５，０００／年、死亡率は約２０，０００と推定されている。（米国がん学会、２００６；及びＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ）。この疾患はすべての年齢で生じ、通常の発病は４０歳以上の成人に始まり、年齢に伴って発生率が上がる。ＮＨＬは、リンパ節、血液、骨髄、脾臓に蓄積したリンパ球のクローン増殖によって特徴づけられるが、あらゆる主な器官が関係する。病理学者や医師が用いている現在の分類システムは、腫瘍の世界保健機構（ＷＨＯ）分類であり、この分類は、ＮＨＬを前駆体又は成熟Ｂ−細胞又はＴ−細胞腫瘍に分類している。ＰＤＱは、現在、臨床試験への参加にあたり、ＮＨＬを無痛又は悪性に分けている。無痛ＮＨＬグループは、主に、小胞亜型、小リンパ球性リンパ腫、ＭＡＬＴ（粘膜関連リンパ組織）、及び辺縁帯からなり、無痛性は、新たに診断されたＢ−細胞ＮＨＬ患者の約５０％に及ぶ。悪性ＮＨＬは、主にびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＬ、ＤＬＢＣＬ、又はＤＬＣＬ）（新たに診断された全患者の４０％がびまん性大細胞型細胞を有する）、バーキット型細胞、および外套細胞の組織学的診断を受けた患者を含む。ＮＨＬの臨床経過は極めて価値がある。臨床経過の主たる決定要因は組織学的亜型である。ほとんどの無痛型のＮＨＬは、不治の疾患であると考えられている。患者は初期には、化学療法又は抗体療法に反応するが、ほとんどが再発する。これまでの研究は、治療介入による生存率の改善を示していない。無症状の患者では、患者が症状を示すようになるか、あるいは、疾患の進み具合が加速して見えるまで「成り行きを見守る」ことを受け入れることができる。時間がたつと、疾患がより悪性の組織構造に変化する。平均生存期間は８乃至１０年であり、無痛の患者は、通常、その疾患の治療段階で３回又はそれ以上の治療を受ける。症候性無痛ＮＨＬ患者の初期治療は、過去においては、併用化学療法であった。最も普通に使用されている薬剤には：シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン（ＣＶＰ）；又は、シクロホスファミド、アドリアミシン、ビンクリスチン、プレドニゾン（ＣＨＯＰ）がある。患者の約７０％乃至８０％が、この初期の化学療法に反応し、寛解期間は２−３年のオーダーで終わる。最終的には、ほとんどの患者が再発する。抗−ＣＤ２０抗体である、リツキシマブの発見と臨床的使用は、反応率と生存率を有意に改善した。ほとんどの患者の現在の治療標準は、リツキシマブ＋ＣＨＯＰ（Ｒ−ＣＨＯＰ）又はリツキシマブ＋ＣＶＰ（Ｒ−ＣＶＰ）である。アルキル化剤と併用して、ＮＨＬの初期治療にインターフェロンを用いることが認められているが、米国における使用は制限されていた。リツキシマブ治療は、いくつかのタイプのＮＨＬに効果があることが示されており、現在は、無痛（濾胞性リンパ腫）と悪性ＮＨＬ（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）の両方の第一線治療として認められている。しかしながら、抗−ＣＤ２０モノクロナール抗体（ｍＡｂ）には、一次耐性（再発した無痛患者では５０％の応答）、獲得性耐性（再治療時に５０％の応答率）、まれな完全応答（再発した者の完全応答率２％）、及び再発の継続パターンといった、大きな限界がある。最終的には、多くのＢ細胞がＣＤ２０を発現せず、したがって、ほとんどのＢ細胞疾患は、抗ＣＤ２０抗体治療では治療できない。
【０００６】
ＮＨＬに加えて、Ｂ細胞の調節異常に起因するいくつかのタイプの白血病がある。慢性リンパ球性白血病（「ＣＬＬ」ともいう）は、Ｂリンパ球の異常蓄積によって生じるある種の成人白血病である。ＣＬＬでは、悪性リンパ球が正常かつ成熟して見えるが、これらのリンパ球は、感染に対して有効に戦うことができない。ＣＬＬは、成人白血病の最も普通の型のものである。男性はＣＬＬの発現が女性の２倍である。しかしながら、重要なリスク要因は年齢である。新たな例ケースの７５％異常が、５０歳を超えた患者に診断されている。毎年１０，０００例以上が診断されており、死亡率は１年で約５，０００人である（米国癌学会、２００６；及びＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ）。ＣＬＬは不治の病であるが、多くの場合進行が遅い。ＣＬＬにかかった多くの人は、何年も正常で活動的な生活を送っている。発現がゆっくりであるため、初期のＣＬＬへの治療介入は、生存期間や生活の質を改善しないと考えられているため、初期のＣＬＬでは通常治療が行われない。代わりに、時間をかけて症状を観察する。初期のＣＬＬの治療は、正しい診断と、疾病の進行具合によって異なる。ＣＬＬ治療に使用される薬は数多くある。ＦＣＲ（フルダラビン、シクロホスファミド、及びリツキシマブ）と、ＢＲ（フルダラビンとリツキシマブ）といった、併用化学療法レジメは、新規に診断されたＣＬＬと、再発したＣＬＬの両方に有効である。同種骨髄（幹細胞）移植は、リスクがあるため、ＣＬＬの最初に使う治療として稀に使用される。
【０００７】
もう一つのタイプの白血病は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）であり、急性リンパ性白血病として知られている。ＡＬＬは、骨髄中の悪性で未成熟な白血球（リンパ芽球ともいう）の過剰産生と連続増殖が特徴である。「急性」とは、分化していない未成熟な状態の循環リンパ球（芽球）を意味し、治療を受けなければ、数週間乃至数か月の平均余命で疾病が急激に進行することを意味する。ＡＬＬは、発生のピークが４乃至５歳であり、小児期に良く見られる。１２歳乃至１６歳の小児は、他よりも容易に死亡する。現在、小児ＡＬＬの少なくとも８０％が治療可能であると考えられている。４，０００例を下回る診断が毎年なされ、死亡率は年間１，５００例である（米国癌学会、２００６；及びＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ）。
【０００８】
ヒトＣＤ１９分子は、限定するものではないが、プレＢ細胞、初期発生段階のＢ細胞（すなわち、未成熟Ｂ細胞）、プラズマ細胞に最終分化する間の成熟Ｂ細胞、及び悪性Ｂ細胞を含む、ヒトＢ細胞の表面に発現した構造的に異なる細胞表面レセプタである。ＣＤ１９は、ほとんどのプレＢ急性リンパ芽球白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病、ヘアリー細胞白血病、通常の急性リンパ球性白血病、及びいくつかのヌル細胞型急性リンパ芽球白血病によって、発現する。（Ｎａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１：２４４−２５０（１９８３），Ｌｏｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，７０：１３１６−１３２４（１９８７），Ｕｃｋｕｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，７１：１３−２９（１９８８），Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，１９８４，Ｂｌｏｏｄ，６３：１４２４−１４３３（１９８４），Ｓｃｈｅｕｅｒｍａｎｎ，Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈｏｍａ，１８：３８５−３９７（１９９５））。プラズマ細胞でのＣＤ１９の発現は、更に、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ヴァルデンストレーム腫瘍などの、分化したＢ細胞腫瘍に発現することを示唆している（Ｇｒｏｓｓｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，１０２：５０９−１５（１９９８）；Ｔｒｅｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ，３０：２４８−５２（２００３））。
【０００９】
したがって、ＣＤ１９抗原は、非ホジキンリンパ腫（ここに記載した各サブタイプを含む）、慢性リンパ球性白血病、及び／又は急性リンパ芽球白血病、の治療における免疫治療ターゲットである。ＣＤ１９は、ここに引用により組み込まれているＷＯ２００００７４７１８号において、自己免疫疾患の治療における免疫治療ターゲットとしても示唆されている。
【００１０】
ＣＤ１９治療を以下に示すＣＤ３−ζ及びＣＤ２８分子の両方を含む抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞を、濾胞性リンパ腫を罹患している患者に投与した。Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ  ｌｉｎｅａｇｅ  ｃｅｌｌ  ａｎｄ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｉｎ  ａ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｔｏ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ＣＤ１９，Ｂｌｏｏｄ，ｖｏｌ．１１６，ｎｏ：２０（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０１０）．ここに引用により全体が組み込まれているＳａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｐｒｏｍｉｓｅ  ａｎｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｐｉｔｆａｌｌｓ  ｏｆ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，ｖｏｌ．２１，ｎｏ．２，２  Ａｐｒｉｌ  ２００９も、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲｓ）について述べている。ここに引用により全体が組み込まれているＲｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌ  Ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ１９  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  Ｐｒｉｏｒ  ｔｏ  Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００８），ｗｗｗ．ｇｅｍｃｒｉｓ．ｏｄ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ａｂｓｔｒａｃｔｓ／９４０＿ｓ．ｐｄｆ（２０１２年１月１３日検索）は、フルダラビンを用いた抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲｓ）について述べている。また、Ｅｓｈｈａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ＵＳＡ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，ｖｏｌ．９０，ｎｏ．２（１５  Ｊａｎｕａｒｙ  １９９３）参照。しかしながら、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，ばかりでなくＥｓｈｈａｒ  ｅｔ  ａｌ．，も、本明細書で例示したようなフルダラビンと組合せたＣＤ１９に特異的抗体については記載していない。
【００１１】
ＣＬＬの治療における治療としてのフルダラビンは、Ｍｏｎｔｓｅｒｒａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖｉｅｗ，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，ｖｏｌ．７，ｎｏ．３（１  Ｓｅｐｔ．１９９３）に記載されているが、ここに例示したようなフルダラビンと組合せたＣＤ１９に特異的な抗体は示唆していない。
【００１２】
Ｂ細胞疾患におけるＣＤ１９の使用は、引用により全体が組み込まれているＵＳ２０１１１０４１５０号に、潜在的な併用パートナーの長いリストにあるフルダラビンの大雑把な記載と共に議論されているが、これは例示的抗体も、ここに例示されている非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球腫白血病、及び／又は、急性リンパ球腫白血病の治療における併用の相乗効果も、教示も示唆もしていない。
【００１３】
非特異的Ｂ細胞リンパ腫へのＣＤ１９の使用が、引用により全体が組み込まれているＷＯ２００７０７６９５０号に、潜在的な併用パートナーの長いリストにあるフルダラビンの大雑把な記載と共に議論されているが、これは例示的抗体も、ここに例示されている非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球腫白血病、及び／又は、急性リンパ球腫白血病の治療における併用の相乗効果も、教示も示唆もしていない。
【００１４】
白血病とリンパ腫におけるＣＤ１９抗体の使用は、引用により全体が組み込まれているＷＯ２００５０１２４９３号で、潜在的な併用パートナーの長いリストにあるフルダラビンの大雑把な記載と共に議論されているが、ここに例示されている非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球腫白血病、及び／又は、急性リンパ球腫白血病の治療における併用の相乗効果も、教示も示唆もしていない。
【００１５】
ＣＬＬ、ＮＨＬ及びＡＬＬにおけるＣＤ１９抗体の使用は、引用により全体が組み込まれている、Ｓｃｈｅｕｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＣＤ１９  Ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｖｏｌ．１８，３８５−３９７（１９９５）に記載されているが、ここに例示されている組合せを示唆するものではない。
【００１６】
ＣＤ１９に特異的な更なる抗体は、ＷＯ２００５０１２４９３（ＵＳ７１０９３０４）、ＷＯ２０１００５３７１６（ＵＳ１２／２６６，９９９）（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；ＷＯ２００７００２２２３（ＵＳ８０９７７０３）（Ｍｅｄａｒｅｘ）；ＷＯ２００８０２２１５２（１２／３７７，２５１）及びＷＯ２００８１５０４９４（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＷＯ２００８０３１０５６（ＵＳ１１／８５２，１０６）（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；ＷＯ２００７０７６９５０（ＵＳ１１／６４８，５０５）（Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｇｍｂｈ）；ＷＯ２００９／０５２４３１（ＵＳ１２／２５３，８９５）（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；及びＷＯ２０１００９５０３１（１２／７１０，４４２）（Ｇｌｅｎｍａｒｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に記載されている。これらはすべて引用により全体が組み込まれている。
【００１７】
ＣＤ１９に特異的な抗体と、その他の薬剤の組合せは、ＷＯ２０１０１５１３４１（ＵＳ１３／３７７，５１４）（Ｔｈｅ  Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；ＵＳ５６８６０７２（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ）、及びＷＯ２００２０２２２１２（ＰＣＴ／ＵＳ０１／２９０２６）（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に記載されている。これらはすべて、引用により全体が組み込まれている。
【００１８】
抗ガン剤の発見と開発における近年の進歩にもかかわらず、ＣＤ１９発現腫瘍を含む多くの形の癌の予後が良くないことは明らかである。したがって、これらの形の癌を治療するための改善された組成物と方法が求められている。
【発明の概要】
【００１９】
単用にしろ併用にしろ、従来技術には非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球腫白血病、及び／又は、急性リンパ球腫白血病の治療において例示した抗体とフルダラビンの組合せの相乗効果を示唆するものはない。
【００２０】
一の態様では、本開示は、ＣＤ１９に特異的な抗体とプリン類似体の相乗的組合せに関する。このような組合せは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球腫白血病、及び／又は、急性リンパ球腫白血病といった、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療に有用である。
【００２１】
インビトロ及びインビボモデルは、ある化合物又は化合物の組合せがヒトにおいてどのように挙動するかを表すと考えられている。更に、化合物をインビトロ又はインビボで組合せると、その組合せが相加効果のみを有すると思われる。驚いたことに、発明者らは、特定のＣＤ１９に特異的な抗体とフルダラビンの組合せが、その抗体と、フルダラビン単独の場合に比べて、慢性Ｂ細胞白血病細胞株（ＭＥＣ−１）で、ある相乗レベルの特定の細胞死滅を仲介することを発見した。このインビトロモデルは、ヒトの慢性リンパ球腫白血病（ＣＬＬ）の治療において、この組合せがどのように作用するかを表している。更に、また、予想外に、発明者らは、特定のＣＤ１９に特異的な抗体とフルダラビンの組合せが、その抗体とフルダラビン単用の場合に比べて、バーキットリンパ球腫ＳＣＩＤマウスモデルで相乗的に腫瘍の成長を阻害し、相乗的に平均生存日数を延ばすことを発見した。これらのインビトロモデルは、ヒトの非ホジキンリンパ球腫の治療においてどのように作用するかを示している。すなわち、例示した抗ＣＤ１９抗体とフルダラビンの組合せは、ＮＨＬとＣＬＬに罹患したモデルにおいて相乗的に作用した。ＮＨＬもＣＬＬもＢ細胞関連疾患であり、ＣＤ１９は、Ｂ細胞に多く発現するので、例示した組合せは、同じ作用機序を有し、例えば、ＡＬＬなどのその他のＢ細胞関連疾患においても相乗的に作用するであろう。
【００２２】
したがって、例示したＣＤ１９に特異的な抗体とフルダラビンの組合せは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球腫白血病、及び／又は、急性リンパ球腫白血病のヒトの治療に有効である。更に、本明細書で例示したＣＤ１９に特異的な抗体は、すでに臨床試験に入っており、このような組合せをヒトで確認することができる。
【００２３】
フルダラビン及びその他のプリン類似体の作用機序は同様であるため、プリン類似体が核酸の合成を妨げ、したがって、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球腫白血病、及び／又は、急性リンパ球腫白血病を罹患しているヒトを、例示した抗ＣＤ１９抗体とフルダラビン以外のプリン類似体の組合せで治療するときにも、相乗性がみられると考えられる。
【００２４】
例示した抗ＣＤ１９抗体とその他の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９に結合するので、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球腫白血病、及び／又は、急性リンパ球腫白血病を罹患しているヒトを、なんらかの抗ＣＤ１９抗体と、例えばフルダラビンなどのプリン類似体の組合せで治療する場合にも、相乗性がみられると考えられる。
【００２５】
例示した抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９の特定のエピトープに結合するため、例示した抗体と交差競合する抗体、または、例示した抗体と同じエピトープに結合する抗体は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球腫白血病、及び／又は、急性リンパ球腫白血病を罹患している人を、例えばフルダラビンなどのプリン類似体と組合せて治療する場合にも、相乗的に作用すると考えらえる。
【００２６】
本開示の一の態様は、相乗的組合せを具え、この組合せでは、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域と、フルダラビンを含む。好ましい態様では、この組合せが、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球腫白血病、及び／又は、急性リンパ球腫白血病の治療に使用される。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、ＭＥＣ−１細胞におけるＭＯＲ００２０８とフルダラビンを単用及び併用した場合の細胞毒性効果を示す。
【図２】図２は、ＭＥＣ−１細胞におけるＭＯＲ００２０８とフルダラビンの組合せのＡＤＣＣ投与応答曲線を示す。
【図３】図３は、ＭＯＲ００２０８可変ドメインのアミノ酸配列を示す。
【図４】図４は、ＭＯＲ００２０８のＦｃ領域のアミノ酸配列を示す。
【図５】図５は、フルダラビン（Ｆｌｕ）で７２時間前処理を行ったＭＥＣ−１ターゲット細胞の正規化した特定の死滅を示す。
【図６】図６は、実施例２で説明したＭＯＲ００２０８、ＦＬＵ、及び組合せ（ＭＯＲ００２０８／ＦＬＵ）ＳＣＩＤマウスモデル群の平均腫瘍成長を示す。
【図７】図７は、実施例３で説明したＭＯＲ００２０８、ＦＬＵ、及び組合せ（ＭＯＲ００２０８／ＦＬＵ）ＳＣＩＤマウスモデル群の平均生存時間を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
「相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）、相乗作用（ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ）、相乗的（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ）は、組合せの期待された相加効果以上であることを意味する。組合せの相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｙ）、相乗作用（ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ）、相乗的（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ）は、ここでは、Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．及び／又は、Ｗｅｂｂ  ｅｔ  ａｌ．の方法によって決定する。Ｔｉｎ−Ｃｈａｏ  Ｃｈｏｕ，Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ  ａｎｄ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｉｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ  ５８：６２１−６８１（２００６）参照。これは、引用によって全体が組み込まれている。また、Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｓｓｕｅｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｅｎｄｐｏｉｎｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍｏｄｅｌｓ，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ４６：２５５−２７８（１９９７）参照。これは、引用によって全体が組み込まれている。また、Ｗｅｂｂ，Ｊ．Ｌ．（１９６３）Ｅｎｚｙｍｅ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｌｉｃ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ参照。これは、引用によって全体が組み込まれている。
【００２９】
用語「抗体」は、モノクロナール抗体を意味し、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥなどのアイソタイプを含む。ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合によって結合した二つの同じ重鎖と二つの同じ軽鎖からなる。各重鎖及び軽鎖は、定常領域と可変領域を含む。各可変領域は、「相補性決定領域（ＣＤＲｓ）」、又は、「超可変領域」と呼ばれる３つのセグメントを含む。これらの領域は、光源のエピトープとの結合を担っている。これらの領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と呼ばれ、Ｎ末端から順に番号が付けられている。ＣＤＲｓの他に最も高度に保存された部分は、「骨格領域」と呼ばれる。「抗体フラグメント」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）２断片、又は、少なくとも一方の可変重鎖又は可変軽鎖を含むその他の断片を意味し、各々がＣＤＲｓ及び骨格領域を含む。
【００３０】
プリン類似体は、プリン代謝構造に似た代謝拮抗物質であり、これによって核酸の合成を阻害する。フルダラビンは、例えば、プリン核酸、アデニン及びグアニンの代用をすることによって、ＲＮＡとＤＮＡに組み込むことができる。プリン類似体は、例えば、がん細胞、骨髄細胞又は、消化管に存在する細胞といった、人の急速に増殖する細胞の成長を阻害する。プリン類似体は、メルカプトプリン、アザチオプリン、チオグアニン及びフルダラビンを含む。
【００３１】
メルカプトプリンは、急性白血病、リンパ腫、関節リウマチ、及び、クローン病や潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患の治療に用いられる。メルカプトプリンは、以下の化学構造を有する。
2014525925.tif 000001
【００３２】
アザチオプリンは主な免疫抑制細胞毒性物質である。これは、拒絶反応を制御する移植に広く使用されている。アザチオプリンは、６−メルカプトプリンに非酵素的に開裂して、プリン類似体及びＤＮＡ合成の抑制剤として作用する。免疫反応の誘導期におけるリンパ球のクローン性増殖を抑制することによって、細胞と液性免疫の双方に影響する。アザチオプリンは、以下の化学構造を有する。
2014525925.tif 000002
【００３３】
チオグアニンは、小児急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）の初期及び／又は後期の強化治療に使用されるが、６−メルカプトプリンは、主に、治療の別の時点、すなわち、ＡＬＬの維持療法の間に、使用される。チオグアニンは以下の化学構造を有する。
2014525925.tif 000003
【００３４】
フルダラビン又はリン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））は、慢性リンパ球腫白血病と無痛性非ホジキンリンパ腫の治療に使用する化学療法薬である。フルダラビンは、プリン類似体の一つである。フルダラビンは、リボヌクレアーゼ還元酵素とＤＮＡポリメラーゼを阻害することによって、ＤＮＡの合成を阻害するとともに、Ｓ期に特異的である（これらの酵素が、ＤＮＡの複製が行われる間に非常に活性があるため）。フルダラビンは、以下の化学構造を有する。
2014525925.tif 000004
【００３５】
ここで使用する「ＦＬＵ」は、フルダラビンを意味する。
【００３６】
「ＶＨ」は、抗体、又は抗体断片の免疫グロブリン重鎖の可変領域を意味する。「ＶＬ」は、抗体、又は抗体断片の免疫グロブリン軽鎖の可変領域を意味する。
【００３７】
用語「ＣＤ１９」は、ＣＤ１９として知られているタンパク質を意味し、以下と同義であるＢ４，Ｂ−リンパ球抗原ＣＤ１９，Ｂ−リンパ球表面抗原Ｂ４，ＣＶＩＤ３，分化抗原ＣＤ１９，ＭＧＣ１２８０２，及びＴ−細胞表面抗原Ｌｅｕ−１２。
【００３８】
ヒトＣＤ１９は、以下のアミノ酸配列を有する：
2014525925.tif 000005
【００３９】
「ＭＯＲ００２０８は、抗ＣＤ１９抗体である。可変ドメインのアミノ酸配列が図３に示されている。ＭＯＲ００２０８の重鎖及び軽鎖Ｆｃ領域のアミノ酸配列が図４に示されている。「ＭＯＲ００２０８」と「ＸｍＡｂ５５７４」は、図３及び図４に示す抗体と同義に用いられている。ＭＯＲ００２０８抗体は、米国特許出願第１２／３７７，２５１号に記載されており、これは引用によって全体が組み込まれている。
【００４０】
ＣＤ１９に特異的な更なる抗体は、引用によって全体が組み込まれている米国特許第７，１０９，３０４号（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；引用によって全体が組み込まれている米国特許出願第１１／９１７，７５０号（Ｍｅｄａｒｅｘ）；引用によって全体が組み込まれている米国特許出願第１１／８５２，１０６号（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；引用によって全体が組み込まれている米国特許出願第１１／６４８，５０５号（Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨ）；引用によって全体が組み込まれている米国特許第７，９６８，６８７号（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；引用によって全体が組み込まれている米国特許出願第１２／７１０，４４２号（Ｇｌｅｎｍａｒｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；に記載されている。
【００４１】
「Ｆｃ領域」は、抗体の定常領域を意味し、ヒトでは、ＩｇＧ１，２，３，４サブクラスあるいはその他である。ヒトＦｃ領域の配列は、ＩＭＧＴ，ヒトＩＧＨＣ−ＲＥＧＩＯＮｓ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／Ｐｒｏｔｅｉｎｓ／ｐｒｏｔｅｉｎ／ｈｕｍａｎ／ＩＧＨ／ＩＧＨＣ／Ｈｕ＿ＩＧＨＣａｌｌｇｅｎｅｓ，ｈｔｍｌ（２０１１年５月１６日検索）で入手可能である。
【００４２】
「ＲｅｆｍＡｂ３３」は、抗体であり、そのアミノ酸配列は以下のとおりである：
Ｆｃ領域を含む重鎖：
2014525925.tif 000006
Ｆｃ領域を含む軽鎖
2014525925.tif 000007
【００４３】
ＲｅｆｍＡｂ３３はＲＳＶに特異的であり、ＭＯＲ００２０８と同じＦｃ領域を共有しているため、イソタイプ対照として使用される。
【００４４】
「組合せ」は、例えば、抗体とフルダラビンの化合物など、一以上のアイテムを意味する。
【００４５】
本開示は、また、組合せ、この組合せを含む薬剤及び医薬組成物に関する。例えば、ＣＤ１９に特異的な抗体とフルダラビンといった、本発明の相乗的組合せの二つの成分は、一緒に、同時に、あるいは別々に投与してもよい。一緒に投与した場合、二つの成分は、一つの医薬組成物中で一緒に調整することができる。この組成物は、薬学的に許容可能なキャリア又は賦形剤を含んでいてもよい。代替的に、二つの成分は、異なる医薬組成物中で整してもよい。この場合、二つの成分は、同時にあるいは連続して投与することができる。一実施例では、フルダラビンを、例えば、ＭＯＲ００２０８などのＣＤ１９に特異的な抗体の投与の前に、及び／又は、この投与と別に投与している。
【００４６】
医薬組成物は、例えばヒトの治療的使用のための抗体などの活性成分を含む。医薬組成物は、許容可能なキャリアまたは賦形剤を含んでいてもよい。
【００４７】
「投与した」又は「投与」は、限定するものではないが、例えば、静脈投与、筋肉投与、皮内投与、皮下投与ルートといった注入可能な形で、あるいは、例えば、鼻スプレィ、吸入用エアロゾルといった粘膜ルートで、又は摂取可能な溶液、カプセル、又は錠剤による送達を含む。
【００４８】
化合物又は組合せの「治療的有効量」は、所定の疾病又は疾患及びその合併症を治癒する、緩和する、あるいは部分的に停止させるのに十分な量を意味する。特定の治療目的に有効な量は、疾病又は損傷の重症度、並びに、対象の重量及び全身状態による。適宜の投与量は、日常の実験を使用して、マトリックス値を構築し、このマトリックスの様々なポイントを試験することで、決定する。これらはすべて訓練を受けた医師又は臨床科学者の当業者レベルにある。
【００４９】
本明細書の「ＣＤＲｓ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅ  ａｌ．又はＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．によって定義されている。Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ，Ｌｅｓｋ  ＡＭ．（１９８７）Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，１９６（４）：９０１−１７参照。これは、引用により全体が組み込まれている。Ｋａｂａｔ  Ｅ．Ａ，Ｗｕ  Ｔ．Ｔ．，Ｐｅｒｒｙ  Ｈ．Ｍ．，Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ  Ｋ．Ｓ．ａｎｄ  Ｆｏｅｌｌｅｒ  Ｃ．（１９９１）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ  ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ参照。これは、引用により全体が組み込まれている。
【００５０】
「交差競合」は、標準競合結合アッセイにおけるＣＤ１９に対するその他の抗体又は結合剤の結合を防ぐ、抗体又はその他の結合剤の能力を意味する。この能力又は、抗体又はその他の結合剤が、別の抗体又は結合分子のＣＤ１９に対する結合を妨害できる範囲、したがって、本発明に係る交差競合といえるかどうかは、標準的な競合結合アッセイを用いて決定できる。適当なアッセイの一つでは、Ｂｉａｃｏｒｅ技術（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ３０００器具（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）による）を使用しており、表面プラズモン共鳴技術を使用した相互作用の範囲を測定することができる。交差競合を測定するもう一つのアッセイは、ＥＬＩＳＡベースの方法を使用している。交差競合に基づく「エピトープビニング」の高スループット工程が、ＷＯ２００３／４８７３１号に記載されている。
【００５１】
「エピトープ」は、抗体に特異的に結合できる、あるいは、分子と相互作用できる、あらゆるタンパク質決定因子を含む。エピトープの決定因子は、一般的に、アミノ酸、炭水化物、又は糖側鎖といった分子の化学的活性表面グループからなり、特定の三次元構造特性、並びに、特定の電荷特性を有する。エピトープは、リニアであっても、立体配座であってもよい。「リニアエピトープ」は、タンパク質と、その相互作用分子（抗体など）間のすべての作用ポイントが、そのタンパク質の一時アミノ酸配列に沿って線形に生じる（連続的）。「立体配座エピトープ」は、互いに三次元構造を成し絵いるアミノ酸が不連続的であるエピトープを意味する。立体配座エピトープでは、相互作用するポイントが、互いに離れているタンパク質上のアミノ酸残基の上で生じる。
【００５２】
「〜と同じエピトープに結合」とは、抗体又はその他の結合剤が、ＣＤ１９に結合して、例示した抗体と同じエピトープを有する能力を意味する。ＣＤ１９に対する例示した抗体又はその他の結合剤のエピトープは、標準的なエピトープマッピング技術を用いて決定できる。エピトープマッピング技術は、この分野では良く知られており、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６（Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ中のエピトープマッピングプロトコルを含む。例えば、リニアエピトープは、例えば、多数のペプチドを個相支持体上で同時に合成するなどによって、決定できる。このペプチドは、タンパク質分子の一部に相当し、支持体に付いたままで抗体を有するペプチドと反応する。このような技術は、この分野では公知であり、例えば、米国特許第４，７０８，８７１号；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：７８−１８２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：７０９−７１５などに記載されている。同様に、立体配座エピトープは、例えば、水素／デューテリウム交換、Ｘ線結晶学、及び二次元核磁気共鳴などによる、アミノ酸の空間構造を決定することによって、すでに同定されている。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｓｕｐｒａ．参照。タンパク質の抗原性領域も、例えば、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐから入手可能なＯｍｉｇａ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．０ソフトウエアプログラムを用いて計算したものなど、標準的な抗原性及び水治療法プロットを用いて同定されている。このコンピュータプログラムは、抗原性プロファイルの決定にＨｏｐｐ／Ｗｏｏｄｓ  ｍｅｔｈｏｄ，Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：３８２４−３８２８を用いるとともに、水治療法プロットには、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，Ｋｙｔｅ  ｅｌ  ａｌ．，（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２を用いている。
【実施例】
【００５３】
本開示の一態様は、非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、及び／又は急性リンパ芽球性白血病の治療に用いるＣＤ１９に特異的な抗体とプリン類似体の組合せを含む。実施例において、この組合せは相乗的である。
【００５４】
ここで、例示した抗ＣＤ１９抗体とフルダラビンの組合せは、ＮＨＬ及びＣＬＬ罹患しているインビトロ及びインビボモデルにおいて、相乗的に作用する。ＮＨＬもＣＬＬも、Ｂ−細胞関連の疾患であり、ＣＤ１９がＢ細胞に多く発現しているため、例示した組合せは、同じ作用機序を持ち、例えば、ＡＬＬなどのその他のＢ細胞関連の疾患の治療において相乗的に作用する。したがって、例示したＣＤ１９に特異的な抗体とフルダラビンの組合せは、非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病のヒトの治療に有効である。
【００５５】
フルダラビンとその他のプリン類似体の作用機序が同じであるので、プリン類似体が核酸の合成を阻害して、非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病にかかっているヒトを、例示した抗ＣＤ１９抗体と、例えば、メルカプトプリン、アザチオプリン、及びチオグアニンなどのフルダラビン以外のプリン類似体の組合せを用いて治療する際に相乗性がみられると考えられている。
【００５６】
例示した抗ＣＤ１９抗体とその他の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９に結合するので、非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球性白血病に罹患しているヒトを、抗ＣＤ１９抗体とプリン類似体の合せで治療する際に、相乗性がみられると考えられている。この場合、抗ＣＤ１９抗体は、例えば、米国特許出願第１２／３７７，２５１号（Ｘｅｎｃｏｒ）；ＷＯ２００５０１２４９３号、ＷＯ２０１００５３７１６号（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；ＷＯ２００７００２２２３（Ｍｅｄａｒｅｘ）；ＷＯ２００８０２２１５２号（Ｘｅｎｃｏｒ）；ＷＯ２００８０３１０５６号（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；ＷＯ２００７／０７６９５０号（Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨ）；ＷＯ２００９／０５２４３１号（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；及びＷＯ２０１００９５０３１号（Ｇｌｅｎｍａｒｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に記載されている。これらは、すべて、引用により全体が組み込まれている。
【００５７】
実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域とを有する抗体と、交差競合する抗体を含む。
【００５８】
実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域とを有する抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む。
【００５９】
実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含む。
【００６０】
実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列
2014525925.tif 000008
の可変重鎖と、配列
2014525925.tif 000009
の可変軽鎖を含む。
【００６１】
実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列
2014525925.tif 000010
の重鎖定常領域を含む。
【００６２】
実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列
2014525925.tif 000011
の軽鎖定常領域を含む。
【００６３】
実施例では、プリン類似体がフルダラビンである。
【００６４】
実施例では、前記組合せの成分である、ＣＤ１９に特異的な抗体とフルダラビンを、別々に投与している。一実施例では、フルダラビンを、ＣＤ１９に特異的な抗体を投与する前に投与する。
【００６５】
実施例では、前記組合せが、医薬組成物である。いくつかの実施例では、この組成物が許容可能なキャリアを含む。いくつかの実施例では、この組合せを有効投与量で投与する。
【００６６】
別の態様では、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域と、フルダラビンを含むＣＤ１９に特異的な抗体の相乗的組合せが、フルダラビン単独の場合より、単離したヒトＰＢＭＣｓの存在下におけるＡＤＣＣによるＭＥＣ−１細胞の死滅を少なくとも２倍、３倍、４倍、あるいは５倍効果的に仲介することができる。
【００６７】
本開示の態様は、非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球性白血病の治療に用いる、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域とフルダラビンを含むＣＤ１９に特異的な抗体の相乗的組合せを含む。実施例では、非ホジキンリンパ球種は、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯、びまん性大細胞型Ｂ細胞、バーキット細胞、外套細胞からなる群から選択される。
【００６８】
別の態様は、治療が必要な固体における非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球性白血病の治療方法であり、この方法は、ＣＤ１９に特異的な抗体とプリン類似体を投与するステップを具える。この方法の実施例では、ＣＤ１９に特異的な抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含む。この方法の実施例では、抗体が、例示したＣＤ１９に特異的な抗体を含む。この方法の実施例では、プリン類似体がフルダラビンである。
【００６９】
実施例
実施例１：ＭＯＲ００２０８とフルダラビンを単独で、及び組合せて使用したＭＥＣ−１細胞増殖の抑制
【００７０】
材料
ＭＥＣ−１細胞：慢性Ｂ細胞白血病細胞株ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ４９７；細胞培地：Ｉｓｃｏｖｅ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＩＭＤＭ）ｗｉｔｈ  ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｔ  Ｎｏ．：３１９８０−０４８，２０％  ＦＣＳ；ＰＢＭＣｓ：１０％のＦＣＳを加えたＲＰＭＩ１６４０，ｗｉｔｈ  ｓｔａｂｉｌｅ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ，ＰＡＮ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧｍｂＨ，Ｃａｔ  Ｎｏ．：Ｐ０４−１３５００；Ｂｉｏｃｈｒｏｍｅ  ＡＧ  ＣＡＴ  Ｎｏ．：Ｌ６１１５  ＬＯＴ  Ｎｏ．：１０５０Ｔ；フルダラビン：Ｂａｙｅｒ，２５ｍｇ／ｍｌ  ｉｎ  ｄｄＨ２Ｏ，ＬＯＴ  Ｎｏ．：９１００ＳＴ；及び、ＭＯＲ００２０８として同じＦｃ領域を持つＲｅｆｍＡｂ３３（ａｎｔｉ−ＲＳＶ）。
【００７１】
方法
ＭＯＲ００２０８とフルダラビン単独で、及び組合せて細胞毒性をＭＥＣ−１細胞中で試験した。ＦＬＵは、プリン類似体であり、したがって、ＭＥＣ−１細胞中の直接細胞毒性を介して機能する。ＭＯＲ００２０８は、ＣＤ１９をターゲットとしており、追加的に、ＭＥＣ−１を死滅させる際にＡＤＣＣを介して機能する。以下の群について、ＭＥＣ−１細胞死滅を測定した：１８μｇ／ｍｌのＦＬＵ；６６ｐｍのＭＯＲ００２０８、及び６６ｐｍのＭＯＲ００２０８と１８μｇ／ｍｌのＦＬＵの組合せ。これらの濃度は、ＭＯＲ００２０８及びＦＬＵについて、ＥＣ５０近辺又はＥＣ５０である場合に選択した。
【００７２】
ＦＬＵグループとＭＯＲ００２０８＋ＦＬＵ組合せグループの両方において、ＡＤＣＣアッセイ測定に先立ってＦＬＵで７２時間、ＭＥＣ−１細胞をインキュベートした。ＭＥＣ−１細胞を、１ｍｇ／ｍｌのカルセインＡＭで染色し、次いで計数して、２×１０５／ｍｌに調整した。ＰＢＭＣｓを計数して、６×１０６／ｍｌに調整した。ＡＤＣＣアッセイを以下の通り行った：  ９６ウエルプレートを使用して、ＭＥＣ−１細胞の１００μｌ細胞懸濁液をウエルに加え、各ウエルにＰＢＭＣｓの１００μｌ細胞懸濁液を加えて、Ｅ：Ｔ比を３０：１とした。培地中で、抗体を１μｇ／ｍｌに希釈した。細胞を遠心分離して再懸濁させた。ターゲット：エフェクタ細胞ペレットに、１００μｌの抗体溶液又は対照溶液を加えた。混合物を３７℃のＣＯ２インキュベータ中で４時間インキュベートした。ＡＤＣＣ測定を以下の通り行った：インキュベートした細胞溶液（〜１００μｌ）をＦＡＣＳ管に移して、各管に２００μｌのＦＡＣＳバッファ（ＤＰＢＳ＋３％ＦＣＳ）と０．５μｌのＰｌストック溶液を加えた。ＦＡＣＳ−Ｃａｌｉｂｕｒを用いた。死滅したＭＥＣ−１細胞を、ヨウ化物で染色した。表１と図１は、生のデータを示す。
【００７３】
2014525925.tif 000012
【００７４】
これらの値は、死滅細胞のパーセンテージを示す。各実験は、異なるドナーからのＰＢＭＣを表す。各実験で使用した対象は、ＲｅｆＭａｂ３３単独である。
【００７５】
表２は、特定の死滅用に正規化した表１の生データと、相乗性の決定に使用したＣｈｏｕ計算結果を示す。
【００７６】
2014525925.tif 000013
【００７７】
表２に示す値は、以下の通り計算する：１）表１に示す生データ（死滅細胞％）から、バックグラウンド（対照）を差し引いて、各治療グループについての特定の死滅の値を、ＭＯＲ００２０８＋ＦＬＵの組合せを１に設定して、正規化する。表２の平均値を図５に示す。ＭＯＲ００２０８＋ＦＬＵの組合せのＣｈｏｕファクタ計算に用いる、例示的ＡＤＣＣ投与応答曲線を、図２に示す。
【００７８】
Ｃｈｏｕインデックス（ＣＩ）計算を行って、ＭＯＲ００２０８とＦＬＵ単独の場合と、例示した抗ＣＤ１９抗体とフルダラビンの組合せの相乗性を決定した。このような計算は、全体が引用により組み込まれているＴｉｎｇ−Ｃｈａｏ  Ｃｈｏｕ，Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ  ａｎｄ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｉｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ．５８：６２１−６８１（２００６）と、全体が引用により組み込まれているＣｈｏｕ  ＴＣ，Ｔａｌａｌａｙ  Ｐ，Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：ｔｈｅ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｒｕｇｓ  ｏｒ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ａｄｖ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ  ２２：２７−５５に記載されている。Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの方法は、ＣＩ−ｉｓｏｂｏｌ法を用いておこなわれる。
【００７９】
インヒビタ（薬剤など）の効果についての半数効果方程式モデルは、Ｆａ／Ｆｕ＝（Ｄ／Ｄ５０）＾ｍ、ここでＤが当量、Ｆａ及びＦｕは、当量Ｄ（Ｆａ＋Ｆｕ＝１）によって影響されたまた影響されていないシステムの一部であり；Ｄ５０は、半数効果（例えば、ＩＣ５０、ＥＤ５０、ＬＤ５０）を生み出す当量である。直線回帰計算にＥｘｃｅｌ  Ｆｉｔのソフトウエアを用いて、パラメータｍ及びＤ５０を推定した。
【００８０】
ＭＥＣ−１細胞へのこの組合せの効果は、上述した通り細胞死滅のパーセンテージで測定される。処理を行った細胞株の細胞死滅パーセンテージの、対象に露出させた細胞株の細胞死滅パーセンテージに対する比率である画分Ｆｕを決定する。すなわち：
Ｆｕ＝細胞死パーセンテージ（処理細胞株）／細胞死パーセンテージ（非処理細胞株）
【００８１】
細胞株の細胞死パーセンテージは、半数効果方程式の定数Ｄ５０であり、これは上述の直線回帰により推測できる。
【００８２】
ＣＩ−ｉｓｏｂｏｌ法
ＣＩ−ｉｓｏｂｏｌ法は、薬剤間の相乗性の定量評価を行う。組合せインデックス（ＣＩ）は、単一又は組合せた薬剤治療の染料効果データから推測する。１より小さいＣＩの値は、相乗性を表しており、ＣＩ＝１は、相加効果を表しており、ＣＩ＞１は、拮抗を表している。薬剤の相互作用（相乗性又は拮抗性）が大きいほど、ＣＩの値は１から遠くなる。
【００８３】
形式的には、組合せ薬剤治療の組合せインデックス（ＣＩ）は、
ＣＩ＝Ｄ１／ＤＸ１＋Ｄ２／ＤＸ２
と規定されている。ここで、Ｄ１及びＤ２は、それぞれ組合せの薬剤１と薬剤２の当量であり；ＤＸ１とＤＸ２は、組合せの効果と同じ効果を与えるであろう薬剤１と薬剤２のみでの処置の当量である。この当量ＤＸ１とＤＸ２は、単一の薬剤処置の染料効果データから推測する必要がある。本質的に、半量効果方程式は、各薬剤のデータに合致している。ある薬剤の半量効果方程式から、効果（すなわち、Ｆａ、Ｆｕ）を生み出すのに必要な当量（すなわち、Ｄ）を推測することができる。加法線からポイントが遠くなるにつれて、１とＣＩとの差が大きくなり、（相乗又は拮抗）効果が強くなる。
【００８４】
結果
表２に示すように、Ｃｈｏｕインデックス値は、ＭＯＲ００２０８及びフルダラビン単独の場合に比べて、ＭＥＣ−１細胞の特定の死滅に関するＭＯＲ００２０８とフルダラビンの組合せの明白な相乗性を示している。この結論は、３つの実験の各々のＣｈｏｕ計算値である０．０３、０．３及び０．３に基づいており、この値は、平均０．２１である。ここで、ＣＩ＜１は、相乗性を示している。したがって、ＭＯＲ００２０８とフルダラビンの組合せが、ヒトの非ホジキンリンパ球種（ＮＨＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、及び／又は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の治療において相乗的に挙動する。
【００８５】
上記Ｃｈｏｕ計算の結果を確認するために、表２の正規化したデータの統計的優位性を、ボンフェローニ多重比較法を用いて評価した。Ｊａｍｅｓ，  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｍｅｄｉｃａｔｅｄ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｂｅｆｏｒｅ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ＣＤ２０−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ  ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｅｔｅｎｔ  ｍｉｃｅ，  Ｂｌｏｏｄ，１１４（２７）：５４５４−６３（Ｅｐｕｂ  ２００９  Ｏｃｔ  ３０）参照。これは、引用により全体が組み込まれている。結果を表３に示す。
【００８６】
2014525925.tif 000014
【００８７】
結果
表３に示すように、ボンフェローニ多重比較法は、ＦＬＵ＋ＭＯＲ００２０８の併用処置が、ＦＬＵとＭＯＲ００２０８の単用処置より、ＭＥＣ−１を特異的死滅において、統計的により有効であることを示している。
【００８８】
実施例２：
皮下移植（ＳＣ）したヒトのＲａｍｏｓ  Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ  Ｂ細胞リンパ腫腫瘍成長モデルにおけるＭＯＲ００２０８とＦＬＵの単用と併用
【００８９】
材料
ＲＡＭＯＳヒトバーキットリンパ腫細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５９６、ｌｏｔ＃  ３９５３１３８）；ビークル対照：０．９％塩化ナトリウム、２５ｍｇ／ｍｌマンニトール、ｐＨ７．０；ＳＣＩＤマウス（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｄｅｌａｉｄｅ，  Ｗａｉｔｅ  Ｃａｍｐｕｓ，Ｕｒｒｂａｒａｉｅ，ＳＡ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ，Ｓｔｒａｉｎ  Ｃ．Ｂ．−１７−ｌｇｈ−１ｂ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ）。
【００９０】
方法
６乃至７週齢のメス、Ｃ．Ｂ．−１７  ＳＣＩＤマウスに、ＲＡＭＯＳ細胞（〜５×１０６細胞／マウス）を皮下移植した。稙菌後１４日目にマウスを８匹ずつ１０グループに分けた。各グループが比較的同じサイズの大きさの腫瘍を持つようにした。１４日目に処置を開始した。治療計画を表４に示す。研究期間は６３日であった。
【００９１】
2014525925.tif 000015
【００９２】
ＭＯＲ００２０８と、フルダラビンを、体重１０ｇあたり０．１ｍＬ投与した。初期の読み出しは、腫瘍の成長、特に、研究第３８日目の腫瘍の体積であった。腫瘍の重量を、式（Ｉ×ｗ２）／２を用いて計算した。ここで、Ｉとｗは、より大きい及びより小さい寸法を意味する。
【００９３】
結果を表５に示し、平均値を図６に示す。
【００９４】
2014525925.tif 000016
【００９５】
研究第３８日目の腫瘍体積の評価項目に加えて、１）第３８日目の腫瘍成長パーセンテージの低減、及び２）４０００ｍｇの腫瘍になるまでの時間の延長のパラメータを評価した。結果を表６に示す。
【００９６】
2014525925.tif 000017
【００９７】
表６の評価項目は両方とも、フラクショナルプロダクト法（Ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｃｏｎｃｅｐｔ：ＦＰＣ）を用いて評価して、ＭＯＲ００２０８とＦＬＵ単独の場合に比べて、ＭＯＲ００２０８とＦＬＵの組合せの治療に相乗性が存在するかどうかを調べた。組合せの治療群が、ＦＰＣ計算より一層有効であれば、相乗性が存在する。フラクショナルプロダクト法は、引用により全体が組み込まれている、Ｗｅｂｂ，Ｊ．Ｌ．（１９６３）Ｅｎｚｙｍｅ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載された、式１−［（１−Ａ）＊（１−Ｂ）］＝ｆｐｃ（％）を用いて計算した。ＦＰＣ計算が終了した後、結果としてのＦＰＣ値と表６からの値を、ＦＰＣ値を１に設定して正規化した。これらの計算結果を表７に示す。
【００９８】
2014525925.tif 000018
【００９９】
結果
両評価項目は、腫瘍成長の阻害手段であり、両評価項目において、第３８日目で腫瘍成長（％）が下がり、４０００ｍｇに達した時間（％）が延びた。ＭＯＲ００２０８＋ＦＬＵ１２５の組合せは、ＭＯＲ００２０８とＦＬＵ単独の場合に比べて、明らかな相乗性を示した。
【０１００】
上述のＦＰＣ計算の結果を確認するために、研究３８日目における、平均腫瘍体積［ｍｍ＾３］のデータ（表５に示す）を、ボンフェローニの多重比較法を用いて、統計的有意性について評価した。その結果を表８に示す。
【０１０１】
2014525925.tif 000019
【０１０２】
０．０５未満のＰ値は、統計的有意性を示す。
【０１０３】
表５及び６に示すように、ＭＯＲ００２０８とフルダラビンの組合せ１２５ｍｇ／ｋｇは、ＭＯＲ００２０８とフルダラビン単独の場合より、インビボでの腫瘍成長の阻害がより効果的であった。この、ＭＯＲ００２０８とフルダラビン単独の場合に比べてインビボでの腫瘍成長抑制におけるＭＯＲ００２０８とフルダラビンの組合せ１２５ｍｇ／ｋｇの有効性の増加は、表８に示すように統計的に有意であることが確認された。更に、表７に示すようにフラクショナルプロダクト法の計算が、ＭＯＲ００２０８とフルダラビン単独の場合に比べてインビボでの腫瘍成長抑制におけるＭＯＲ００２０８とフルダラビンの組合せ１２５ｍｇ／ｋｇの相乗性を明らかに示している。したがって、ＭＯＲ００２０８とフルダラビンの組合せは、ヒトの非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、及び急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）の治療において相乗的に作用する。
【０１０４】
更に、ＭＯＲ００２０８とフルダラビンの組合せ１２５ｍｇ／ｋｇは、より高い当量のフルダラビン単独の２５０ｍｇ／ｋｇより、インビボでの腫瘍成長抑制がより効果的であった。フルダラビンは、より高い当量で有意な副作用を指名しているので、この結果は、より安全で、より効果的な、高い当量のフルダラビンの代替が、ＭＯＲ００２０８とフルダラビンの組合せであることを示している。
【０１０５】
実施例３
ＳＣＩＤマウスのヒト非ホジキンＲＡＭＯＳ腫瘍におけるＭＯＲ００２０８とフルダラビンの単用と併用、生存モデル
【０１０６】
材料
シクロホスファミド（Ｆｌｕｋａ，Ｂｕｃｈｓ  Ｓｗｉｔｅｒｌａｎｄ，Ｌｏｔ．Ｎｏ．０７５５１６６１）；ビークル対照：０．９％塩化ナトリウム、２５ｍｇ／ｍｌマンニトール、ｐＨ７．０：ＳＣＩＤマウス（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｄｅｌａｉｄｅ，Ｗａｉｔｅ  Ｃａｍｐｕｓ，Ｕｒｒｂａｒａｉｅ，ＳＡ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ，Ｓｔｒａｉｎ  Ｃ．Ｂ．−１７−ｌｇｈ−１ｂ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ）；ＲＡＭＯＳヒトリンパ腫細胞（ＡＴＣＣ  ｎｕｍｂｅｒ  ＣＲＬ−２６３８）。
【０１０７】
方法
ＲＡＭＯＳ細胞に稙菌を行う前の２日間、ＳＣＩＤマウスにシクロホスファミドで前処理を行った（５日前と４日前）。稙菌を行う日（３日前）に、マウスを８匹ずつ１０群に分け、尾静脈に静脈内注射によって、１×１０６ＲＡＭＯＳ細胞を稙菌した。各群に対する投与計画を表９に示し、０日目に実行した。研究期間は３週間であった。
【０１０８】
2014525925.tif 000020
【０１０９】
読み出しは、数日の平均生存時間であった。個々の治療群に比べた時の組合せの効果が相乗的であるかどうかを評価するために、Ｃｌａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．の方法を用いた。
【０１１０】
Ｃｌａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．  相乗性
この方法は、ここに引用により全体が組み込まれている、Ｂｒｅｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ４６：２５５−２７８（１９９７）、Ｉｓｓｕｅｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｅｎｄｏｐｏｉｎｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍｏｄｅｌｓに記載されている。
【０１１１】
以下の通りに、データを分析した。
拮抗      （ＡＢ）／Ｃ  ＜（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）
相加      （ＡＢ）／Ｃ  ＝（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）
相乗      （ＡＢ）／Ｃ  ＞（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）
ここで、Ａは、ＭＯＲ００２０８を用いた治療であり；Ｂは、ＦＬＵを単用した治療であり；Ｃは、治療ビークルに対する応答であり；ＡＢは治療ＡとＢの組合せである。各研究群についての数日の平均生存時間と、Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．分析を表１０に示す。
【０１１２】
2014525925.tif 000021
【０１１３】
結果
ＭＯＲ００２０８とＦＬＵの組合せは、ＭＯＲ００２０８とＦＬＵの単用の場合に比べて、平均生存に数において明らかな相乗性を示した。
【０１１４】
上記相乗性の計算結果を確認するために、ＭＯＲ００２０８とフルダラビン１２５ｍｇ／ｋｇの組合せの平均生存日数を、Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ法（Ｐ値）と、Ｇｅｈａｎ−Ｗｉｌｃｏｘｏｎ法（Ｐ値）を用いて、ＭＯＲ００２０８及びフルダラビン単用の場合と比較した。結果を表１１に示す。
【０１１５】
2014525925.tif 000022
【０１１６】
結果
表１０は、ＭＯＲ００２０８とフルダラビン組合せ１２５ｍｇ／ｋｇが、ＭＯＲ００２０８とフルダラビン単用の場合に比べて、バーキットリンパ腫ＳＣＩＤマウスモデルにおいて、平均生存時間が相乗的に伸びたことを示す。表１１に示すように、インビボでＭＯＲ００２０８とフルダラビン１２５ｍｇ／ｋｇを併用した場合の平均生存時間の増加が、ＭＯＲ００２０８とフルダラビン単用の場合に比べて、統計的に有意であることを確認した。したがって、ＭＯＲ００２０８とフルダラビンの組合せは、ヒトの非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ球腫白血病（ＣＬＬ）、及び／又は、急性リンパ球腫白血病（ＡＬＬ）の治療においても、相乗的に作用すると考えられる。
【０１１７】
更に、ＭＯＲ００２０８とフルダラビンの組合せ１２５ｍｇ／ｋｇは、より多い投与量のフルダラビン２５０ｍｇ／ｋｇ単用の場合に比べて、インビボでの平均生存時間の増加により効果があった。フルダラビンは、投与量が多い場合に効果はあるが有意な副作用を示すので、この結果は、高い投与量のフルダラビンに対してより安全で、より効果的な代替が、ＭＯＲ００２０８とフルダラビンの組合せであることを示している。
【０１１８】
発明の説明、特定の実施例、及びデータは、例示的な実施例を示しているが、説明のためのものであり、本発明を限定するものではないと解するべきである。本発明の範囲内における様々な変更や変形は、ここに含まれている議論、開示、及びデータから当業者に明らかになり、したがって、本発明の一部であると考えられる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１９に特異的な抗体の相乗的組合せにおいて、非ホジキンリンパ球種、慢性リンパ球性白血病、及び／又は、急性リンパ芽球性白血病の治療に用いる、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域と、フルダラビンを含む抗体と交差競合する抗体を含むことを特徴とする組合せ。
【請求項２】
請求項１に記載の組合せにおいて、前記抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含む抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むことを特徴とする組合せ。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の組合せにおいて、前記抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号：１）のＨＣＤＲ１領域と、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号：２）のＨＣＤＲ２領域と、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号：３）のＨＣＤＲ３領域と、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号：４）のＬＣＤＲ１領域と、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号：５）のＬＣＤＲ２領域と、配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号：６）のＬＣＤＲ３領域を含むことを特徴とする組合せ。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれか１項に記載の組合せにおいて、前記抗体が、配列
2014525925.tif 000023
の可変重鎖と、配列
2014525925.tif 000024
の可変軽鎖を含むことを特徴とする組合せ。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれか１項に記載の組合せにおいて、前記抗体が、配列
2014525925.tif 000025
の重鎖定常領域を含むことを特徴とする組合せ。
【請求項６】
請求項１乃至５のいずれか１項に記載の組合せにおいて、ＣＤ１９に特異的な前記抗体とフルダラビンが別個に投与されることを特徴とする組合せ。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれか１項に記載の組合せにおいて、前記フルダラビンが、前記ＣＤ１９に特異的な抗体の投与の前に投与されることを特徴とする組合せ。
【請求項８】
請求項１乃至７のいずれか１項に記載の組合せにおいて、当該組合せが、単離したＰＢＭＣｓの存在下でＡＤＣＣによるＭＥＣ−１細胞の死滅を、フルダラビン単独の場合より少なくとも２倍の効率で死滅できることを特徴とする組合せ。
【請求項９】
非ホジキンリンパ球種の治療に用いる請求項１乃至８のいずれか１項に記載の組合せにおいて、この非ホジキンリンパ球腫が、濾胞性リンパ腫、小リンパ球腫リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯｝、びまん性大細胞型Ｂ細胞、バーキット、及び外套細胞からなる群から選択されることを特徴とする組合せ。
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2014525925.tif 000026
【図２】
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【図３】
2014525925.tif 000028
【図４】
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【図５】
2014525925.tif 000030
【図６】
2014525925.tif 000031
【図７】
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