【手続補正書】
【提出日】平成27年2月3日(2015.2.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２４】
固体ナンノクロロプシス（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ）ペレットのＳＣＦ抽出
抽出容器に、２４．６０ｇの固体ペレット（乾燥重量基準）を装填し、粉砕剤および結合剤を補正すると約２１．２４ｇの藻類をもたらした。ペレットをＣＯ２によりフラッシュし、次いで約４０℃に加熱し、約３１１ｂａｒに加圧した。ペレットをこれらの条件において３．８ｇ／ｍｉｎのＣＯ２の流速において約６．７ｈｒ抽出し、約７１ｇのＣＯ２／ｇ藻類の最終溶媒フィード（Ｓ／Ｆ）比を得た。抽出収率は装填された藻類の６．２％であった。
上記に基づき、本明細書に記載の方法［すなわち、（ａ）ある水分レベルを有し、含油微生物を含む微生物バイオマス、および少なくとも１つの吸油し得る粉砕剤を混合して破砕バイオマス混合物を提供する工程；（ｂ）少なくとも１つの結合剤を前記破砕バイオマス混合物とブレンドして固体ペレットを形成し得る固定可能な混合物を提供する工程；ならびに（ｃ）固定可能な混合物から前記固体ペレットを形成する工程を含む方法］は、ナンノクロロプシス（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ）からの破砕微生物バイオマスを含む固体ペレットを生成するために首尾良く利用することができることが結論づけられる。本方法論は、多くの他の含油微生物に好適であることが証明されることが仮定されるが、それぞれの特定の微生物についてのプロセスの最適化が破砕効率の増加をもたらすことが予期される。さらに、本実施例は、固体ナンノクロロプシス（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ）ペレットを種々の手段において溶媒により抽出して油を含む抽出物を提供することができることを実証する。当技術分野において周知のとおり、異なる抽出法は、異なる量の抽出油をもたらし；抽出収率は、抽出プロセスの最適化時に特定の固体ペレットについて増加させることができることが予期される。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２５】
以上、本発明を要約すると下記のとおりです。
１．ａ）ある水分レベルを有し含油微生物を含む微生物バイオマス、および少なくとも１つの吸油し得る粉砕剤を混合して、破砕バイオマス混合物を提供すること；
ｂ）少なくとも１つの結合剤を前記破砕バイオマス混合物とブレンドして、固体ペレットを形成し得る固定可能な混合物を提供すること；ならびに
ｃ）前記固定可能な混合物から前記固体ペレットを形成すること
を含む方法。
２．前記少なくとも１つの粉砕剤が、好ましくは
ａ）前記少なくとも１つの粉砕剤は、２．０から６．０のＭｏｈ硬度およびＡＳＴＭ法Ｄ１４８３−６０に従って測定される０．８以上の吸油係数を有する粒子である；
ｂ）前記少なくとも１つの粉砕剤は、シリカおよびケイ酸塩からなる群から選択される；ならびに
ｃ）前記少なくとも１つの粉砕剤は、前記固体ペレット中の微生物バイオマス、粉砕剤および結合剤の質量の総和に対して約１から２０質量パーセント存在する、
からなる群から選択される特性を有する、上記１に記載の方法。
３．前記微生物バイオマスの水分レベルが、約１から１０質量パーセントの範囲である、上記１に記載の方法。
４．前記少なくとも１つの結合剤が、好ましくは
ａ）前記少なくとも１つの結合剤は、水ならびにスクロース、ラクトース、フルクトース、グルコース、および可溶性デンプンからなる群から選択される炭水化物から選択される；ならびに
ｂ）前記少なくとも１つの結合剤は、前記固体ペレット中の微生物バイオマス、粉砕剤および結合剤の質量の総和に対して約０．５から１０質量パーセント存在する、
からなる群から選択される特性を有する、上記１に記載の方法。
５．前記バイオマスを混合する工程（ａ）および少なくとも１つの結合剤をブレンドする工程（ｂ）を押出機中で実施し、同時に実施し、または押出機中で同時に実施する、上記１に記載の方法。
６．前記固定可能な混合物から前記固体ペレットを形成する工程（ｃ）は、
（ｉ）前記固定可能な混合物をダイに通して押出してストランドを形成すること；
（ｉｉ）前記ストランドを乾燥および破壊すること；ならびに
（ｉｉｉ）前記固定可能な混合物をダイに通して押出してストランドを形成する工程（ｉ）ならびに前記ストランドを乾燥および破壊する工程（ｉｉ）の組合せ
からなる群から選択される工程を含む、上記１に記載の方法。
７．前記固体ペレットが、約０．５から約１．５ｍｍの平均直径および約２．０から約８．０ｍｍの平均長さを有する、上記１に記載の方法。
８．前記固体ペレットを、粗砕機を使用して形成し、流動床乾燥機を使用して乾燥させ、または粗砕機を使用して形成し、かつ流動床乾燥機を使用して乾燥させる、上記１に記載の方法。
９．前記含油微生物が、酵母、藻類、菌類、細菌、ユーグレナ類、ストラメノパイル、卵菌綱からなる群から選択される、上記１に記載の方法。
１０．前記含油微生物が、少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸を油中に含む、上記１に記載の方法。
１１．前記微生物バイオマスが、前記含油微生物の少なくとも５０％の破壊効率を有する破砕バイオマスである、上記１に記載の方法。
１２．前記微生物バイオマスを、
（ａ）約０．０４から０．４ＫＷ／（ｋｇ／ｈｒ）の総比エネルギーインプット（ＳＥＩ）；
（ｂ）次第に短くなるピッチ長を有するブッシュエレメントを使用する圧密帯域；および
（ｃ）流動制限を使用する圧縮帯域
を含む２軸スクリュー押出機中で破砕して破砕バイオマスを生成し；
前記押出機中で前記圧密帯域は前記圧縮帯域よりも先行する、上記１１に記載の方法。
１３．前記流動制限を、好ましくは、リバーススクリューエレメント、制限／ブリスター
リングエレメントまたはニーディングエレメントから提供する、上記１１に記載の方法。１４．ｄ）溶媒により前記固体ペレットを抽出して油を含む抽出物を提供することをさらに含む、上記１１に記載の方法。
１５．前記溶媒が、液体または超臨界流体二酸化炭素を含む、上記１２に記載の方法。
１６．上記１に記載の方法により作製されたペレット化含油微生物バイオマス。
１７．ａ）約７０から約９８．５質量パーセントの、含油微生物を含む破砕バイオマス；
ｂ）約１から約２０質量パーセントの、少なくとも１つの吸油し得る粉砕剤；および
ｃ）約０．５から１０質量パーセントの少なくとも１つの結合剤
を含み、（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の質量パーセントは、固体ペレット中の（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の総和に対する固体ペレット。
１８．（ａ）約０．５から約１．５ｍｍの平均直径および約２．０および約８．０ｍｍの平均長さ；ならびに
（ｂ）約０．１から５．０質量パーセントの水分レベル
からなる群から選択される特性を有する、上記１７に記載の固体ペレット。
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）ある水分レベルを有し含油微生物を含む微生物バイオマス、および少なくとも１つの吸油し得る粉砕剤を混合して、破砕バイオマス混合物を提供すること；
ｂ）少なくとも１つの結合剤を前記破砕バイオマス混合物とブレンドして、固体ペレットを形成し得る固定可能な混合物を提供すること；ならびに
ｃ）前記固定可能な混合物から前記固体ペレットを形成すること
を含む方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法により作製されたペレット化含油微生物バイオマス。
【請求項３】
ａ）約７０から約９８．５質量パーセントの、含油微生物を含む破砕バイオマス；
ｂ）約１から約２０質量パーセントの、少なくとも１つの吸油し得る粉砕剤；および
ｃ）約０．５から１０質量パーセントの少なくとも１つの結合剤
を含み、（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の質量パーセントは、固体ペレット中の（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の総和に対する固体ペレット。