【手続補正書】
【提出日】平成27年3月19日(2015.3.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナイーブ幹細胞状態の特性が得られるように細胞を誘導する方法、又はナイーブ幹細胞をナイーブ幹細胞状態に細胞を維持する方法であって、細胞をＭＵＣ１＊アクチベータの存在下で培養することを含む、方法。
【請求項２】
ナイーブ幹細胞状態の特性が得られるように細胞を誘導する方法、又はナイーブ幹細胞をナイーブ幹細胞状態に維持する方法であって、誘導する細胞又はナイーブ幹細胞状態を有する細胞を、フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面に付着させることを含む方法。
【請求項３】
ナイーブ幹細胞状態の特性が得られるように細胞を誘導する方法において、
前記ＭＵＣ１＊アクチベータが、二量体分子又は二価分子、ＮＭ２３又はＮＭ２３の突然変異体若しくは変異体、二価の抗体又は抗体変異体から選ばれる、及び／又は
前記細胞が、ヒト細胞、幹細胞、ヒト幹細胞又はヒト前駆細胞、胚起源細胞、より幹様となるように誘導された細胞、胚盤胞由来のヒト細胞から選ばれる、及び／又は
前記細胞が、線維芽細胞である、がん細胞である、若しくは成長的に不活性であるヒトフィーダー細胞又はその分泌物の存在下で培養される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
以下のいずれかの条件である請求項２の方法；
（１）前記表面では、窒素（Ｎ）が少なくとも約０．５％であり、酸素（Ｏ）及び窒素（Ｎ）の合計量が少なくとも約１７．２％以上であり、接触角が少なくとも約１３．９度である。
（２）前記表面は、１．７％〜２．１％の窒素と、２６．４％〜２８．７％の酸素とを含み、窒素と酸素とが合わせて２８．２％〜３０．７％であり、前記表面では、接触角が１４．３度〜１８．８度である。
（３）前記表面がＶｉｔａ（商標）表面（ThermoFisher, USA）である。
（４）前記表面が、幹細胞又は前駆細胞上に存在する、以下から選ばれる細胞表面分子に結合する、以下から選ばれる作用物質を更に含む、又は上記（１）〜（３）のいづれかの条件において、前記表面が、幹細胞又は前駆細胞上に存在する、以下から選ばれる細胞表面分子に結合する；
（a）前記細胞表面分子がＭＵＣ１である。
（b）前記細胞表面分子がＭＵＣ１＊である。
（c）前記細胞表面分子がＰＳＭＧＦＲ配列から本質的になる。
（d）前記作用物質が抗体である。
（e-1）前記作用物質がＰＳＭＧＦＲに結合するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体である。
（e-2）前記作用物質がＰＳＭＧＦＲに結合するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体であって、該モノクローナル抗体が以下のκ鎖可変領域ＣＤＲ配列を有する：
ＣＤＲ１：RSSQTIVHSNGNTYLE（配列番号２０）；ＣＤＲ２：KVSNRFS（配列番号２１）；及びＣＤＲ３：FQGSHVPFT（配列番号２２）。
（e-3）前記作用物質がＰＳＭＧＦＲに結合するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体であって、該モノクローナル抗体が以下のκ鎖可変領域ＣＤＲ配列を有する：
ＣＤＲ１：RASKSVSTSGYSYMH（配列番号２６）；ＣＤＲ２：LVSNLES（配列番号２７）；及びＣＤＲ３：QHIRELTRSE（配列番号２８）。
（f）前記作用物質がＳＳＥＡ１、ＳＳＥＡ４、Ｔｒａ  １−６０、Ｔｒａ  １−８１又はＣＤ３４に結合するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体である。
（g）前記作用物質がＮＭ２３、又はＮＭ２３の突然変異体若しくは変異体であるとともに、二量体又は二価である。
【請求項５】
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤の非存在下で行う、請求項２〜４のいずれか一項に記載の方法であって、以下から選択される処理をおこなう方法；
（１）前記表面上にプレーティングする前に、前記細胞をトリプシン処理して単一細胞にすることを含む。
（２）前記細胞を低密度で前記表面上にプレーティングすることを含む。
（３）前記細胞を低密度で前記表面上にプレーティングすることを含み、前記細胞を、規定構造１ｃｍ２当たり約１×１０３個の細胞〜規定構造１ｃｍ２当たり１×１０４個の細胞という密度でプレーティングする。
（４）前記細胞を低密度で前記表面上にプレーティングすることを含み、前記細胞を、前記細胞を規定構造１ｃｍ２当たり約５２６３個の細胞でプレーティングする。
（５）前記細胞を低容量の培地で前記表面上にプレーティングすることを含む。
（６）前記細胞を低容量の培地で前記表面上にプレーティングすることを含み、前記培地の容量が前記表面を被覆するだけのものである。
（７）前記細胞を低容量の培地で前記表面上にプレーティングすることを含み、前記培地の容量が規定構造１ｃｍ２当たり０．１ｍＬ〜０．２ｍＬである。
（８）前記細胞をＥＤＴＡの存在下で前記表面上にプレーティングすることを含む。
（９）前記プレーティングした細胞を、力を加えることで前記表面に密着させることを含む。
（１０）前記プレーティングした細胞を、力を加えることで前記表面に密着させることを含み、前記力が遠心力である。
【請求項６】
ヒト幹細胞株を樹立する方法であって、胚盤胞から細胞を採取することと、該細胞をＮＭ２３又は二量体ＮＭ２３の存在下で培養することとを含む、方法。
【請求項７】
ナイーブ細胞マーカーの発現が増大した細胞を選択する方法であって、ナイーブ細胞マーカーの発現が増大した細胞を含有すると思われる細胞の集団を、フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面に曝すことと、選択された細胞を該表面の存在下で培養することとを含む、方法、又は、
以下のいずれかの条件で、ナイーブ細胞マーカーの発現が増大した細胞を選択する方法であって、ナイーブ細胞マーカーの発現が増大した細胞を含有すると思われる細胞の集団を、フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面に曝すことと、選択された細胞を該表面の存在下で培養することとを含む、方法；
（１）前記表面では、窒素（Ｎ）が少なくとも約０．５％であり、酸素（Ｏ）及び窒素（Ｎ）の合計量が少なくとも約１７．２％以上であり、接触角が少なくとも約１３．９度である。
（２）前記表面は、１．７％〜２．１％の窒素と、２６．４％〜２８．７％の酸素とを含み、窒素と酸素とが合わせて２８．２％〜３０．７％であり、前記表面では、接触角が１４．３度〜１８．８度である。
（３）前記表面がＶｉｔａ（商標）表面（ThermoFisher, USA）である。
【請求項８】
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体であって、前記表面では、窒素（Ｎ）が少なくとも約０．５％であり、酸素（Ｏ）及び窒素（Ｎ）の合計量が少なくとも約１７．２％以上であり、接触角が少なくとも約１３．９度である、物体、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体であって、前記表面がＶｉｔａ表面若しくはＶｉｔａ様表面である、物体、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体であって、前記細胞表面分子がＭＵＣ１である、物体、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体であって、前記細胞表面分子がＭＵＣ１＊である、物体、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体であって、前記細胞表面分子がＰＳＭＧＦＲ配列から本質的になる、ＵＣ１＊である、物体、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体であって、前記作用物質が抗体である、物体、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体であって、前記作用物質がＰＳＭＧＦＲに結合するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体である、物体、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体であって、前記作用物質がＰＳＭＧＦＲに結合するモノクローナル抗体であって、該モノクローナル抗体が以下のκ鎖可変領域ＣＤＲ配列を有する、物体：
ＣＤＲ１：RSSQTIVHSNGNTYLE（配列番号２０）；ＣＤＲ２：KVSNRFS（配列番号２１）；及びＣＤＲ３：FQGSHVPFT（配列番号２２）、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体であって、前記作用物質がＰＳＭＧＦＲに結合するモノクローナル抗体であって、該モノクローナル抗体が以下のκ鎖可変領域ＣＤＲ配列を有する、物体：
ＣＤＲ１：RASKSVSTSGYSYMH（配列番号２６）；ＣＤＲ２：LVSNLES（配列番号２７）；及びＣＤＲ３：QHIRELTRSE（配列番号２８）、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体であって、前記作用物質がＳＳＥＡ１、ＳＳＥＡ４、Ｔｒａ  １−６０、Ｔｒａ  １−８１又はＣＤ３４に結合するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体である、物体、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体であって、前記作用物質がＮＭ２３、又はＮＭ２３の突然変異体若しくは変異体であるとともに、二量体又は二価である、物体。
【請求項９】
ナイーブ幹細胞状態又はプライム幹細胞状態の特性を示すマイクロＲＮＡシグネチャを同定する方法であって、
（ｉ）ヒトの胚性幹細胞又は人工多能性幹細胞をＮＭ２３の二量体変異体又は二価変異体の存在下で培養することと、
（ｉｉ）前記細胞をＭＵＣ１＊抗体で被覆した幹細胞増殖表面に付着させるとともに、該細胞を成長させることと、
（ｉｉｉ）前記細胞を採取するとともに、工程（ｉｉ）の幹細胞で発現するマイクロＲＮＡを同定することと、
（ｉｖ）ｂＦＧＦベース培地中のヒトの胚性幹細胞又は人工多能性幹細胞をネズミフィーダー細胞の層上で別に培養することと、
（ｖ）前記細胞を採取するとともに、工程（ｉｖ）の細胞で発現するマイクロＲＮＡを同定することと、
（ｖｉ）工程（ｉｉｉ）で同定されたマイクロＲＮＡと、工程（ｖ）で同定されたマイクロＲＮＡとを比較することと、
（ｖｉｉ）工程（ｉｉｉ）では存在しているか、又は発現が増大しており、工程（ｖ）では存在していないか、又は発現が低減しているマイクロＲＮＡを同定することにより、ナイーブ細胞状態に特有のマイクロＲＮＡを同定することと、
（ｖｉｉｉ）工程（ｖ）では存在しており、工程（ｉｉｉ）では存在していないか、又は発現が低減しているマイクロＲＮＡを同定することにより、プライム細胞状態に特有のマイクロＲＮＡを同定することと、
を含む、方法、又は
ナイーブ幹細胞状態又はプライム幹細胞状態の特性を示すマイクロＲＮＡシグネチャを同定する方法であって、
（ｉ）ヒトの胚性幹細胞又は人工多能性幹細胞をＮＭ２３の二量体変異体又は二価変異体の存在下で培養することと、
（ｉｉ）前記細胞をＭＵＣ１＊抗体で被覆した幹細胞増殖表面に付着させるとともに、該細胞を成長させることと、
（ｉｉｉ）前記細胞を採取するとともに、工程（ｉｉ）の幹細胞で発現するマイクロＲＮＡを同定することと、
（ｉｖ）ｂＦＧＦベース培地中のヒトの胚性幹細胞又は人工多能性幹細胞をネズミフィーダー細胞の層上で別に培養することと、
（ｖ）前記細胞を採取するとともに、工程（ｉｖ）の細胞で発現するマイクロＲＮＡを同定することと、
（ｖｉ）工程（ｉｉｉ）で同定されたマイクロＲＮＡと、工程（ｖ）で同定されたマイクロＲＮＡとを比較することと、
（ｖｉｉ）工程（ｉｉｉ）では存在しているか、又は発現が増大しており、工程（ｖ）では存在していないか、又は発現が低減しているマイクロＲＮＡを同定することにより、ナイーブ細胞状態に特有のマイクロＲＮＡを同定することと、
（ｖｉｉｉ）工程（ｖ）では存在しており、工程（ｉｉｉ）では存在していないか、又は発現が低減しているマイクロＲＮＡを同定することにより、プライム細胞状態に特有のマイクロＲＮＡを同定することと、
を含む、方法であって、前記幹細胞増殖表面がＶｉｔａ表面又はＶｉｔａ様表面である、方法。
【請求項１０】
ナイーブ幹細胞状態又はプライム幹細胞状態の特性を示すマイクロＲＮＡシグネチャを同定する方法であって、
（ｉ）ヒトの胚性幹細胞又は人工多能性幹細胞の第１のセット及び第２のセットを、ＮＭ２３の二量体変異体又は二価変異体の存在下で培養することと、
（ｉｉ）前記細胞をＭＵＣ１＊抗体で被覆した第１の幹細胞増殖表面に付着させることと、
（ｉｉｉ）細胞の前記第１のセットにおいてマイクロＲＮＡのレベルを測定することと、
（ｉｖ）同一の細胞の前記第２のセットの細胞を採取するとともに、細胞の該第２のセットを第２の幹細胞増殖表面上にプレーティングすることと、
（ｖ）前記第２の幹細胞増殖表面上で一定期間成長させることと、
（ｖｉ）細胞の前記第２のセットにおいてマイクロＲＮＡのレベルを測定することと、
（ｖｉｉ）細胞の前記第１のセットでは存在しているか、又は発現が増大しており、細胞の前記第２のセットでは存在していないか、又は発現が低減しているマイクロＲＮＡを同定することを含む、ナイーブ幹細胞状態に特有のマイクロＲＮＡを同定することと、
（ｖｉｉｉ）細胞の前記第２のセットでは存在しているか、又は発現が増大しており、細胞の前記第１のセットでは存在していないか、又は発現が低減しているマイクロＲＮＡを同定することにより、プライム幹細胞状態に特有のマイクロＲＮＡを同定することと、
を含む、方法、又は
ナイーブ幹細胞状態又はプライム幹細胞状態の特性を示すマイクロＲＮＡシグネチャを同定する方法であって、
（ｉ）ヒトの胚性幹細胞又は人工多能性幹細胞の第１のセット及び第２のセットを、ＮＭ２３の二量体変異体又は二価変異体の存在下で培養することと、
（ｉｉ）前記細胞をＭＵＣ１＊抗体で被覆した第１の幹細胞増殖表面に付着させることと、
（ｉｉｉ）細胞の前記第１のセットにおいてマイクロＲＮＡのレベルを測定することと、
（ｉｖ）同一の細胞の前記第２のセットの細胞を採取するとともに、細胞の該第２のセットを第２の幹細胞増殖表面上にプレーティングすることと、
（ｖ）前記第２の幹細胞増殖表面上で一定期間成長させることと、
（ｖｉ）細胞の前記第２のセットにおいてマイクロＲＮＡのレベルを測定することと、
（ｖｉｉ）細胞の前記第１のセットでは存在しているか、又は発現が増大しており、細胞の前記第２のセットでは存在していないか、又は発現が低減しているマイクロＲＮＡを同定することを含む、ナイーブ幹細胞状態に特有のマイクロＲＮＡを同定することと、
（ｖｉｉｉ）細胞の前記第２のセットでは存在しているか、又は発現が増大しており、細胞の前記第１のセットでは存在していないか、又は発現が低減しているマイクロＲＮＡを同定することにより、プライム幹細胞状態に特有のマイクロＲＮＡを同定することと、
を含む、方法であって、前記第１の幹細胞増殖表面がＶｉｔａ表面又はＶｉｔａ様表面であり、前記第２の幹細胞増殖表面がビトロネクチンである、方法。
【請求項１１】
ナイーブ幹細胞状態の特性が得られるように細胞を誘導する方法であって、ナイーブ状態の特性を示すマイクロＲＮＡを細胞に導入することを含む、方法。
【請求項１２】
患者においてがんを治療又は予防する治療・予防剤であって、該患者に、細胞がナイーブ状態からより分化した状態へと移行すると上方調節されるタンパク質若しくは核酸を投与することを含む、細胞がナイーブ状態からより分化した状態へと移行すると上方調節されるタンパク質若しくは核酸を含む、がんの治療・予防剤、又は
患者においてがんを治療又は予防する治療・予防剤であって、該患者に、細胞がナイーブ状態からより分化した状態へと移行すると上方調節されるタンパク質若しくは核酸を投与することを含む、細胞がナイーブ状態からより分化した状態へと移行すると上方調節されるタンパク質若しくは核酸を含む、がんの治療・予防剤における前記核酸がマイクロＲＮＡである、治療・予防剤、又は
患者においてがんを治療又は予防する治療・予防剤であって、該患者に、細胞がナイーブ状態からより分化した状態へと移行すると上方調節されるタンパク質若しくは核酸を投与することを含む、細胞がナイーブ状態からより分化した状態へと移行すると上方調節されるタンパク質若しくは核酸を含む、がんの治療・予防剤における細胞のより分化した状態がプライム状態である、治療・予防剤。
【請求項１３】
幹細胞増殖表面上で幹細胞又は前駆細胞を培養する方法であって、
（ａ）前記幹細胞又は前記前駆細胞のサンプルを得ることと、
（ｂ）前記幹細胞又は前記前駆細胞を前記表面に接触させることと、
（ｃ）前記幹細胞又は前記前駆細胞を、ＭＵＣ１＊を二量体化する第１の作用物質を含む培地中で培養することと、
を含む、方法。
【請求項１４】
表面に結合するように幹細胞又は前駆細胞を適応させる方法であって、
（ａ）前記幹細胞又は前記前駆細胞を、ＭＵＣ１＊を二量体化する第１の作用物質を含む培地中で予めインキュベートすることと、
（ｂ）前記幹細胞又は前記前駆細胞を前記表面に接触させることと、
を含む、方法、又は
表面に結合するように幹細胞又は前駆細胞を適応させる方法であって、
（ａ）前記幹細胞又は前記前駆細胞を、ＭＵＣ１＊を二量体化する第１の作用物質を含む培地中で予めインキュベートすることと、
（ｂ）前記幹細胞又は前記前駆細胞を前記表面に接触させることと、
を含む、方法であって、前記表面がＭＵＣ１＊を二量体化する第２の作用物質を含む、方法、又は
表面に結合するように幹細胞又は前駆細胞を適応させる方法であって、
（ａ）前記幹細胞又は前記前駆細胞を、ＭＵＣ１＊を二量体化する第１の作用物質を含む培地中で予めインキュベートすることと、
（ｂ）前記幹細胞又は前記前駆細胞を前記表面に接触させることと、
を含む、方法であって、工程（ａ）の後でかつ工程（ｂ）の前に、
（ａ）（ｉ）前記ＭＵＣ１＊を二量体化する第１の作用物質を含む培地中でのインキュベートの後に、前記幹細胞又は前記前駆細胞をペレット状にする工程と、
（ａ）（ｉｉ）前記第１の作用物質を含まない培地中で前記幹細胞又は前記前駆細胞を再懸濁する工程と、
（ａ）（ｉｉｉ）前記幹細胞又は前記前駆細胞を前記表面上にプレーティングする工程と、
（ａ）（ｉｖ）４８時間にわたって放置する工程と、
を更に含む、方法。
【請求項１５】
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面に結合するように幹細胞を適応させる方法であって、該細胞を、ＭＵＣ１＊を二量体化する作用物質を含む培地中で予めインキュベートした後、該幹細胞を該表面へと導入することを含む、方法、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面に結合するように幹細胞を適応させる方法であって、該細胞を、ＭＵＣ１＊を二量体化する作用物質を含む培地中で予めインキュベートした後、該幹細胞を該表面へと導入することを含み、前記表面では、窒素（Ｎ）が少なくとも約０．５％であり、酸素（Ｏ）及び窒素（Ｎ）の合計量が少なくとも約１７．２％以上であり、接触角が少なくとも約１３．９度である、方法、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面に結合するように幹細胞を適応させる方法であって、該細胞を、ＭＵＣ１＊を二量体化する作用物質を含む培地中で予めインキュベートした後、該幹細胞を該表面へと導入することを含み、（ｉ）前記幹細胞を、ＭＵＣ１＊を二量体化する作用物質を含む培地中でインキュベートすることと、（ｉｉ）他の細胞と付着させる前に、前記幹細胞に、該細胞を前記表面に接触させる力を加えることと、（ｉｉｉ）前記細胞を、前記作用物質を含まない培地中で再懸濁することと、（ｉｖ）前記表面上にプレーティングすることと、（ｖ）４８時間にわたって放置することと、（ｖｉ）ＭＵＣ１＊を二量体化する作用物質を添加することと、を含む、方法、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面に結合するように幹細胞を適応させる方法であって、該細胞を、ＭＵＣ１＊を二量体化する作用物質を含む培地中で予めインキュベートした後、該幹細胞を該表面へと導入することを含み、前記表面がＶｉｔａ（商標）表面（ThermoFisher, USA）である、方法、又は
フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面に結合するように幹細胞を適応させる方法であって、該細胞を、ＭＵＣ１＊を二量体化する作用物質を含む培地中で予めインキュベートした後、該幹細胞を該表面へと導入することを含み、（ｉ）前記幹細胞を、ＭＵＣ１＊を二量体化する作用物質を含む培地中でインキュベートすることと、（ｉｉ）他の細胞と付着させる前に、前記幹細胞に、該細胞を前記表面に接触させる力を加えることと、（ｉｉｉ）前記細胞を、前記作用物質を含まない培地中で再懸濁することと、（ｉｖ）前記表面上にプレーティングすることと、（ｖ）４８時間にわたって放置することと、（ｖｉ）ＭＵＣ１＊を二量体化する作用物質を添加することと、を含む、方法において、前記力が遠心力、圧力、又は真空である、方法。
【請求項１６】
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキット、又は
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記表面では、窒素（Ｎ）が少なくとも約０．５％であり、酸素（Ｏ）及び窒素（Ｎ）の合計量が少なくとも約１７．２％以上であり、接触角が少なくとも約１３．９度である、キット、又は
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記表面がＶｉｔａ（商標）表面（ThermoFisher, USA）である、キット。
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記細胞表面分子がＭＵＣ１である、キット、又は
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記細胞表面分子がＭＵＣ１＊である、キット、又は
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記細胞表面分子がＰＳＭＧＦＲ配列から本質的になるＭＵＣ１＊である、キット、又は
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記作用物質が抗体である、キット、又は
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記細胞表面分子がＰＳＭＧＦＲ配列から本質的になるＭＵＣ１＊であって、前記作用物質がＰＳＭＧＦＲに結合するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体である、キット、又は
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記細胞表面分子がＰＳＭＧＦＲ配列から本質的になるＭＵＣ１＊であり、前記作用物質がＰＳＭＧＦＲに結合するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体であり、前記モノクローナル抗体が以下のκ鎖可変領域ＣＤＲ配列を有する、キット：ＣＤＲ１：RSSQTIVHSNGNTYLE（配列番号２０）；ＣＤＲ２：KVSNRFS（配列番号２１）；及びＣＤＲ３：FQGSHVPFT（配列番号２２）、又は
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記細胞表面分子がＰＳＭＧＦＲ配列から本質的になるＭＵＣ１＊であり、前記作用物質がＰＳＭＧＦＲに結合するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体であり、前記モノクローナル抗体が以下のκ鎖可変領域ＣＤＲ配列を有する、キット：ＣＤＲ１：RASKSVSTSGYSYMH（配列番号２６）；ＣＤＲ２：LVSNLES（配列番号２７）；及びＣＤＲ３：QHIRELTRSE（配列番号２８）、又は
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記作用物質がＳＳＥＡ１、ＳＳＥＡ４、Ｔｒａ  １−６０、Ｔｒａ  １−８１又はＣＤ３４に結合するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体である、キット、又は
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記表面では、窒素（Ｎ）が少なくとも約０．５％であり、酸素（Ｏ）及び窒素（Ｎ）の合計量が少なくとも約１７．２％以上であり、接触角が少なくとも約１３．９度であり、前記作用物質がＮＭ２３、又はＮＭ２３の突然変異体若しくは変異体であるとともに、二量体又は二価である、キット、又は
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記細胞表面分子がＰＳＭＧＦＲ配列から本質的になるＭＵＣ１＊であって、前記作用物質がＰＳＭＧＦＲに結合するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体であり、前記抗体がヒト化している、キット、又は
（ｉ）フィーダー層を欠いた幹細胞増殖表面を含む物体であって、幹細胞又は前駆細胞上に存在する細胞表面分子に結合する作用物質と結合する、物体と、
（ｉｉ）ＮＭ２３とともに最小培地を含む幹細胞成長培地と、
備えるキットであって、前記表面では、窒素（Ｎ）が少なくとも約０．５％であり、酸素（Ｏ）及び窒素（Ｎ）の合計量が少なくとも約１７．２％以上であり、接触角が少なくとも約１３．９度であり、前記最小培地が異種成分を含まない、キット。