【事件の表示】
　昭和６０年特許願第５０３６２７号「リポソ−ム類における抗腫瘍剤類の被包」拒絶査定に対する審判事件〔平成　７年１２月　６日出願公告、特公平　７−１１２９６８、昭和６１年　２月２７日国際公開、ＷＯ８６／０１１０２、昭和６２年　１月１６日国内公表、特表昭６２−５００１０１、特許請求の範囲に記載された発明の数（２）〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　原査定を取り消す。
　本願の発明は、特許すべきものとする。
【理　由】
１．本願発明
　本願は、昭和60年8月7日（パリ条約による優先権主張1984年8月8日及び1985年6月26日、アメリカ合衆国）に国際出願されたものであって、出願公告後の平成12年8月8日付け手続補正書によって補正されたされた明細書及び図面の記載からみて、特許請求の範囲第１項に記載された発明（以下、本願第１発明という。）及び同第６項に記載された発明（以下、本願第２発明という。）の要旨は、特許請求の範囲に記載されたとおりの
「１．膜を横切って１種またはそれ以上の帯電した種の濃度勾配を有するリポソーム類を調製する工程を包含し、該濃度勾配が、イオン化可能な抗腫瘍剤類をリポソーム類中に装填せしめることのできる配向を有する膜貫通ポテンシャルを発生することができるものであり、医薬製剤を調製するためにリポソームに薬剤を装填する際の外部媒体中の薬剤装填初期濃度を高濃度にし、医薬製剤のための有効濃度のイオン化可能な抗腫瘍剤類をリポソーム類に該濃度勾配を維持しながら高補足効率でかつ装填時に低減された放出速度を有するように装填する方法。
６．膜を横切って１種またはそれ以上の帯電した種の濃度勾配を有するリポソーム類を調製する工程を包含し、該濃度勾配が、イオン化可能な抗腫瘍剤類をリポソーム類中に装填せしめることのできる配向を有する膜貫通ポテンシャルを発生することができるものであり、医薬製剤を調製するためにリポソームに薬剤を装填する際の外部媒体中の薬剤装填初期濃度を高濃度にし、医薬製剤のための有効濃度のイオン化可能な抗腫瘍剤類をリポソーム類に該濃度勾配を維持しながら高補足効率でかつ装填時に低減された放出速度を有するように装填する方法により装填されたイオン化可能な抗腫瘍剤類を含有する医薬製剤。」
にあるものと認められる。
　
２．原査定の概要
　原査定の理由である特許異議の決定の理由の概要は、本願第１発明及び第２発明は、Biochim. Biophys. Acta, 455 (1976) p.269-271（以下、引用例１という）、Biochim. Biophys. Acta, 274 (1972) p.323-335（以下、引用例２という）、Cancer Vol.16, 1963, p.283-288（以下、引用例３という）及びMedical Physics 9(2)1982年3,4月号, p.149-175（以下、引用例４という）に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定によって特許を受けることができないというものである。
　
３．引用例
　原査定の拒絶理由である特許異議の決定に引用された引用例１には、次の事項が記載されている。
(ｉ)リポソームを、その膜を横切るpH勾配(外側緩衝液に対して、内部が酸性)を伴って調製した。これらのリポソームは、外部緩衝液に添加されたいくつかのカテコールアミン(ドーパミン、ノルエピネフリン、及びエピネフリン)を効果的に濃縮した。我々の観察結果は、pH勾配が、細胞内小器官(sub-cellular)貯蔵部位によるカテコールアミンの捕捉に貢献し得ることを示唆する機構を支持する。(要約)
(ii)エーテル(2μmol／ml)中に溶解した卵ホスファチジルコリン7mlを、クエン酸−リン酸緩衝液、pH5.0(14ml)中に55℃で注入してリポソームを調製した。この条件で注入すると、エーテルは蒸発し、リン脂質が直径0.05〜0.2μmの小球を形成し、これは緩衝液を効率よく被包する。リポソーム−緩衝液混合物を、1.2μmのミリポアフィルタで濾過して大きな多重ラメラリポソームの小分画を除去した。このリポソーム−緩衝液混合物をNaOHで滴定してpH8に滴定して、pH3ユニットの初期勾配を確立した。トリチウムで標識したカテコールアミン(エピネフリン、ノルエピネフリン、ドーパミン)をリポソーム−緩衝液混合物へ最終濃度が10μM(5000cpm／0.1ml)になるまで添加した。2mlのリポソーム−緩衝液のインキュベーション混合物を指定した間隔で取り出し、溶出するためにpH8クエン酸−リン酸塩緩衝液を用いてセファデックスG−50カラムを通して濾過した。(270頁5〜14行)
(iii)これらの条件で、我々は試験された各カテコールアミンが顕著に蓄積されたことを観察した。リポソームへの捕捉は比較的ゆっくり生じ、最長でアミンを加えた後90分であった。この時点で我々はノルエピネフリンについては濃度が対照基準に比べて12倍であったことを発見した。エピネフリンとドーパミンは各々18倍及び23倍濃縮された。…塩化アンモニウムを加えることによって勾配が破壊されたときに、蓄積されたカテコールアミンは放出され、その捕捉が可逆的で、pH勾配に依存するものであることが立証された。…対照に対して10−20倍という観察された蓄積は3pH単位勾配に対応する理想的なモノアミンに対して期待されるほんの一部であることに注目すべきである。これは恐らく時間の経過によるpH勾配の崩壊のためである。我々は△pH指示薬として9−アミノアクリジンを用いてこの系における崩壊率を測定した。そして30分でpH勾配の半分が失われたことを見出した。（271頁10〜26行）
(iv)第１図に、pH勾配3単位で、右肩上がりのグラフでカテコールアミン類がほぼ6000〜8000cpm捕捉されていること及びpH濃度勾配がないもの（対照）は300〜1300cpm捕捉されていることが示されている。
　同じく引用例２には、膜を横切るpH勾配を測定するための蛍光プローブとしてアテブリン及び9−アミノアクリジンをテストするためにリン脂質のリポソームが用いられたこと、9−アミノアクリジンの蛍光のクエンチングは定量的にリポソーム膜を横切るpH勾配の大きさと関係しており、この関係はこのアミンのリポソーム系の内側と外側の容積間での分布が理想的なモノアミンの分布であることを示したこと（要約）が記載されている。
　同じく、引用例３には、キナクリジン（アテブリン）が抗癌剤として用いられること（283頁左欄8〜14行）が記載されている。
　引用例４には、「最近の、in vivo 及び in vitro 両方におけるリポソームに用いる癌の研究は、有望な結果を示している。腫瘍を有する動物において、リポソーム薬剤送達システムは、退縮、腫瘍成長の遅延、及び生存期間の増加をもたらした。リポソームの臨床適用はまだ初期段階にあるが、将来の治療における潜在性は有望視される。」（要約）、「水溶性薬品を効率よく装填するための生物物理的方法にはリポソーム膜を横切る遷移的pH及び／又はポテンシャル勾配があり、それによると小さなイオン上の薬品のベシクルへの蓄積は顕著に（20倍にまで）なる。[参照文献275…]」（171頁左欄5〜10行）と記載され、また、参照文献275がBiochim. Biophys. Acta 455,269[1975]（175頁右欄）であることが記載されている。
　
３．対比・判断
  刊行物１におけるカテコールアミン類のリポソーム内への捕捉量は、5000cpm／0.1mlと2mlのアリコートからのカテコールアミン類の最高濃度8000cpm（摘示事項iv）から算定すると、
      
0.8μmolであること、その外部緩衝液である媒体に添加されたカテコールアミン類は10μMであること（摘示事項ii）から、その捕捉効率は
　　　　　　0.8/10×100＝8％
である。
　そうすると、引用例１には、リポソームの膜を横切る３単位pH勾配を伴って調製したリポソーム（摘示事項ｉ）の外側緩衝液中のカテコールアミン類の添加濃度を10μmol、捕捉効率8％でリポソーム内にカテコールアミン類を捕捉したこと、これは対照（pH勾配のないもの）のものの12〜23倍濃縮したこと、時間の経過によるpH勾配の崩壊のため、30分でpH勾配の半分が失われたこと（摘示事項iii）、及びこれらはpH勾配が細胞内小器官貯蔵部位におけるカテコールアミンの捕捉に貢献することを示唆するものであることが記載されているものと認められる。
  本願第１発明と引用例１に記載のものを対比すると、pHは水素イオン濃度であること、カテコールアミン類は遊離のアミノ基をもつ化合物であるからイオン化可能な化合物であること、かつリポソーム内にカテコールアミン類を対照の12〜23倍濃縮されていること、リポソーム内に化合物を捕捉することと、薬剤（化合物であることは明らかである。）を装填することはリポソーム内に化合物を取り込む意味では同じことを意味するものであるから（以下、捕捉と装填は同意語として用いる。）、膜を横切って帯電した種の濃度勾配を有するリポソーム類を調製する工程を包含すること、該濃度勾配がイオン化可能な化合物をリポソーム内に装填できる配向を有する膜貫通ポテンシャルを発生することができるものであること、リポソームにイオン化可能な化合物を装填するする方法である点で一致し、前者は、抗腫瘍剤の医薬製剤を調製するために外部媒体中の薬剤初期濃度を高濃度にし、該濃度勾配を維持しながら高補足効率でかつ装填時に低減された放出速度を有するようにする方法であるのに対して、後者は、細胞内小器官貯蔵部位のカテコールアミン類の捕捉について機構を示唆するものであって、外部媒体中の初期濃度を10μMにし、pHの濃度勾配が30分で半分失われて、捕捉効率が8％でリポソーム内にカテコールアミン類を捕捉する方法である点で相違する。
　そこで、これらの相違点について検討する。
　引用例２には膜を横切るpH勾配を測定するための蛍光プローブとしてアテブリン及び9−アミノアクリジンをテストするためにリン脂質のリポソームが用いられたこと、引用例３には、キナクリジン（アテブリン）が抗癌剤として用いられることが記載されているが、医薬製剤としてのリポソームについては記載されてないし、リポソーム内に高捕捉率で薬剤を装填することについても何ら記載されていない。そして、引用例４には、リポソームが将来の治療における潜在性は有望視されること、水溶性薬品を効率よく装填するための方法にはリポソーム膜を横切る遷移的pH及び／又はポテンシャル勾配があり、薬品のベシクルへの蓄積は顕著になる旨が記載されているが、これは引用例１を参照文献としているものであるから、引用例１に記載の程度に薬剤が捕捉されることを示すに止まるものものである。そうすると、引用例２〜４にはいずれもリポソームに薬剤を高捕捉率で装填することについては記載されていないものである。
　ところが、本願第１発明におけるリポソームは、本件明細書の例１及び第１図にリポソームの外部媒体にアドリアマイシンを添加後120分で捕捉率が95％以上で右肩上がりの装填曲線でリポソームに装填していることが記載されている。また、本件明細書及び図面と同じく、本件の第１優先権主張日1984年8月8日の優先権証明書の第７図に外部媒体へアドリアマイシンを添加後、捕捉率がほぼ90％であることが示され、第７図のアドリアマイシンの装填濃度曲線は120分まで右肩上がりを示しているから、装填時の放出速度は低減されていることが認められる（すなわち、本願第１発明は、1984年8月8日の優先権主張は認められる。）。このことは、アドリアマイシンの装填時に120分にわたり、90％以上の高捕捉率（捕捉効率）でリポソーム内に装填されていることを示すものである。そして、薬剤を高捕捉率で装填できることは、リポソームを構成する脂質の量に対して装填すべき薬剤が相対的に多くなり、人体への脂質の摂取量を少なくするものであるから、医薬製剤として適用できるという優れた効果を奏するものである。
　したがって、本願第１発明は、引用例１に記載のpH勾配を用いるカテコールアミンの装填方法において、引用例２〜４に記載の事項を組合わせても、イオン化可能な抗腫瘍剤類をリポソームへ装填することは想到できるとしても、8％の捕捉率でもって、90％以上の捕捉率は予測できるものとは認められない。
　次に、本願第２発明について検討すると、第２発明は、第１発明にかかる方法よって装填されたリポソーム製剤であるから、第１発明が当業者が容易に発明することができたとは認められない以上、同じく、刊行物１〜４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたとは認められない。
　　
５．むすび
　以上のとおりであるから、本願第１及び第２発明は引用例１〜４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるとは認められない。
　また、他に拒絶の理由を発見しない。
　よって、結論のとおり審決する。