【手続補正書】
【提出日】平成27年4月6日(2015.4.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性ビヒクルと、
リポソームであって、
（ｉ）ジミリストイルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）、
（ｉｉ）ジミリストイルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）またはジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパン（「ＤＭＴＡＰ」）、あるいはＤＭＰＧおよびＤＭＴＡＰの両方、
（ｉｉｉ）少なくとも１種類のステロール、ならびに
（ｉｖ）Ｔ細胞抗原配列を含む第１のポリペプチド配列、および、天然起源の異種膜タンパク質の膜貫通配列または天然起源の異種膜タンパク質に由来する膜貫通配列を含む第２のポリペプチド配列、
を含むリポソームと、
を含む組成物であって、
前記第２のポリペプチド配列は、脂質二重層を通過するのに十分な多数の残基を有し、そのうちの少なくとも９の隣接した残基は、０．７以上の疎水性スコアを有するαヘリックスを形成すると予測され、
前記抗原ポリペプチド配列は、前記第２のポリペプチド配列のＮ末端またはＣ末端に直接または間接的に結合されて、水溶性融合ポリペプチドを提供し、前記融合ポリペプチドの抗原ポリペプチド配列は、前記リポソームの外表面上に提示される、組成物。
【請求項２】
水性ビヒクルと、
リポソームであって、
（ｉ）ジミリストイルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）、
（ｉｉ）ジミリストイルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）またはジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパン（「ＤＭＴＡＰ」）、あるいはＤＭＰＧおよびＤＭＴＡＰの両方、
（ｉｉｉ）少なくとも１種類のステロール、ならびに
（ｉｖ）インフルエンザＡ  Ｍ２細胞外ドメインの少なくとも１０の隣接した残基を含む第１のポリペプチド配列（その配列は、前記Ｍ２細胞外ドメインにおける天然起源の１つ以上のシステイン残基を除去するように修飾されている）と、膜タンパク質由来の膜貫通配列を含むインフルエンザＡ  Ｍ２とは異種の第２のポリペプチド配列と、を含む抗原ポリペプチド、
を含むリポソームと、
を含む組成物であって、
第２のポリペプチド配列は、インフルエンザＡ  Ｍ２とは異種の天然起源の膜タンパク質の、またはこれに由来する、膜貫通配列を含み、前記第２のポリペプチド配列は脂質二重層を通過するのに十分な多数の残基を有し、そのうちの少なくとも９の隣接した残基は、０．７以上の疎水性スコアを有するαヘリックスを形成すると予測され、
前記第１のポリペプチド配列は、前記第２のポリペプチド配列のＮ末端またはＣ末端に直接または間接的に結合されて、水溶性融合ポリペプチドを提供し、前記融合ポリペプチドの前記第１のポリペプチド配列は、前記リポソームの外表面上に提示される、組成物。
【請求項３】
１つ以上のシステイン残基が、対象となるシステイン残基（複数可）の別の残基への変異により、または対象となるシステイン残基（複数可）より前の細胞外ドメイン配列のトランケーションにより、インフルエンザＡ  Ｍ２細胞外ドメイン配列から除去される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ／ＤＭＴＡＰ、およびステロールの相対パーセンテージは、５０％〜９８％ＤＭＰＣ：１％〜２５％ＤＭＰＧ／ＤＭＴＡＰ：１％〜２５％ステロールである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ／ＤＭＴＡＰ、およびステロールの相対パーセンテージは７０％〜９８％ＤＭＰＣ：１％〜１５％ＤＭＰＧ／ＤＭＴＡＰ：１％〜１５％ステロールである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ／ＤＭＴＡＰ、およびステロールの相対パーセンテージは、７０％〜８５％ＤＭＰＣ：５％〜１５％ＤＭＰＧ／ＤＭＴＡＰ：１０％〜１５％ステロールである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ／ＤＭＴＡＰ、およびステロールの相対パーセンテージは、７５％ＤＭＰＣ、１０％ＤＭＰＧ／ＤＭＴＡＰ、および１５％ステロールである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記リポソームはＤＭＰＧを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記リポソームはＤＭＴＡＰを含まない、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
ペプチドグリカン、リポペプチド、リポ多糖、モノホスホリルリピドＡ、リポテイコ酸、レシキモド、イミキモド、フラゲリン、非メチル化ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチド、α−ガラクトシルセラミド、ムラミルジペプチド、オールトランスレチノイン酸、二本鎖ウイルスＲＮＡ、ヒートショックタンパク質、臭化ジオクタデシルジメチルアンモニウム、カチオン性界面活性剤、トール様受容体アゴニスト、ジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパン、およびｎｏｄ様受容体アゴニストからなる群より選択される１つ以上の追加の構成成分をさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
コレステロール、クロロぎ酸コレステリル、スチグマステロール、シトステロール、エルゴステロール、ラノステロール、デスモステロール、およびカンプエステロールからなる群より選択されるステロールを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記第１のポリペプチド配列は、配列番号：１〜９のいずれか１つの残基２〜２２由来の少なくとも１０の隣接した残基を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記第１のポリペプチド配列は、配列番号：１０〜１２のいずれか１つに由来する少なくとも１０の隣接した残基を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記第１のポリペプチド配列は、配列番号：１３〜１５のいずれか１つに由来する少なくとも１０の隣接した残基を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記第１のポリペプチド配列は配列番号：１６を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記第２のポリペプチド配列はチトクロムｂ５、ムチン−４β鎖、トランスフェリン受容体、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、アミノペプチダーゼＮ、ジペプチジルペプチダーゼ４、腫瘍壊死因子シンタキシン３、ＢｃｌＸＬ、およびＲ９ＡＰからなる群より選択されるタンパク質によりコードされる膜貫通配列を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記第２のポリペプチド配列は配列番号：１７〜２５のいずれか１つに由来する少なくとも１０の隣接した残基を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記第２のポリペプチド配列はチトクロムｂ５タンパク質によりコードされる膜貫通配列を含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記第２のポリペプチド配列は、配列番号：２６〜４２のいずれか１つによりコードされる膜貫通配列を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２０】
前記第１のポリペプチド配列がＴ細胞抗原配列を含み、および前記第２のポリペプチド配列が膜貫通配列を含み、
前記第１のポリペプチド配列は、配列番号：６０〜８１からなる群より選択される１種類以上の配列を含む、
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
動物を免疫化する方法において使用するための、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の組成物であって、前記方法が、非経口的経路を介して前記動物に前記組成物を投与することを含む、組成物。
【請求項２２】
請求項１または２に記載のリポソーム組成物を調製するための方法であって、
化学的方法により、抗原ポリペプチドを組換えにより発現または合成することと（ここで、前記抗原ポリペプチドは未変性条件下で単量体形態である）、
前記抗原ポリペプチドを水溶液中に精製することと、
前記抗原ポリペプチドを含む前記水溶液を、（ｉ）ＤＭＰＣ、（ｉｉ）ＤＭＰＧ、ＤＭＴＡＰ、またはＤＭＰＧおよびＤＭＴＡＰの両方、および（ｉｉｉ）少なくとも１種類のステロールを含む脂質混合物に添加することと、
前記抗原ポリペプチドおよび脂質混合物を乾燥させることと、
前記乾燥させた抗原ポリペプチドおよび脂質混合物を、水性ビヒクルの存在下において超音波処理してリポソームを形成させることと、
を含む、方法。
【請求項２３】
融合タンパク質をコードする単離された核酸配列であって、その配列が、
チオレドキシンをコードする第１の核酸配列と、
対象となるポリペプチド配列をコードする第２の核酸配列と、
天然起源の異種膜タンパク質の、またはこれに由来する、膜貫通配列をコードする第３の核酸配列と、
を含み、
前記第２のポリペプチド配列は、脂質二重層を通過するのに十分な多数の残基を有し、そのうちの少なくとも９の隣接した残基は０．７以上の疎水性スコアを有するαヘリックスを形成すると予測され、
前記核酸配列は、核酸が発現される場合に、チオレドキシンが膜貫通配列のＮ末端で発現されるように構成される、核酸配列。
【請求項２４】
前記融合タンパク質をコードする核酸配列に機能可能に連結された発現調節配列、親和性マーカーをコードする核酸配列、またはプロテアーゼ切断部位をコードする核酸配列、から選択される１つ以上の追加の核酸配列をさらに含む、請求項２３に記載の単離された核酸配列。
【請求項２５】
前記単離された核酸配列の少なくとも一部が、宿主細胞における発現のためにコドン最適化される、請求項２３または２４に記載の単離された核酸配列。
【請求項２６】
前記単離された核酸配列の少なくとも一部が、大腸菌における発現のためにコドン最適化される、請求項２５に記載の単離された核酸配列。
【請求項２７】
前記第２の核酸配列は、抗原配列、ポリペプチド標的リガンド、または融合ポリペプチド配列をコードする、請求項２３〜２６のいずれか１項に記載の単離された核酸配列。
【請求項２８】
前記第３の核酸配列は、チトクロムｂ５、ムチン−４β鎖、トランスフェリン受容体、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、アミノペプチダーゼＮ、ジペプチジルペプチダーゼ４、腫瘍壊死因子シンタキシン３、ＢｃｌＸＬ、およびＲ９ＡＰからなる群より選択されるタンパク質によりコードされる膜貫通配列をコードする、請求項２３〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記第３の核酸配列は、配列番号：１７〜２５のいずれか１つに由来する少なくとも１０の隣接した残基を含む、請求項２３〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記第３の核酸配列は、チトクロムｂ５タンパク質によりコードされる膜貫通配列を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
前記第３の核酸配列は、配列番号：２６〜４２のいずれか１つによりコードされる膜貫通配列を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３２】
請求項２３〜３１のいずれか１項に記載の単離された核酸配列で形質転換された宿主細胞。
【請求項３３】
対象となるポリペプチド配列を取得する方法であって、請求項３２に記載の宿主細胞由来の単離された核酸配列によりコードされる融合タンパク質を発現することを含む、方法。
【請求項３４】
前記発現された融合タンパク質の全てまたは一部を水溶液中に精製することをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記精製タンパク質を含む水溶液を、（ｉ）ＤＭＰＣ、（ｉｉ）ＤＭＰＧ、ＤＭＴＡＰ、またはＤＭＰＧおよびＤＭＴＡＰの両方、ならびに（ｉｉｉ）少なくとも１種類のステロールを含む脂質混合物に添加することと、
前記精製タンパク質および脂質混合物を乾燥させることと、
前記乾燥させた精製タンパク質および脂質混合物を、水性ビヒクルの存在下において超音波処理してリポソームを形成させることと、
をさらに含む、請求項３４に記載の方法。