【事件の表示】
　特許第３３６６３２４号「化粧品用、または特に皮膚科の医薬用抗アレルギー性組成物の調製のためのククルビチンの用途、及び、その投与を含む方法」の請求項１〜３、５、７に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第３３６６３２４号の請求項１、２、４及び６に係る特許を維持する。
【理　由】
１．手続の経緯
　本件特許第3366324号の請求項1〜6に係る発明は、平成4年(1992年)2月24日を国際出願日（パリ条約による優先権主張：1991年2月28日、仏国）とする出願（特願平4-506539号）の一部を平成13年5月10日に新たな特許出願としたもので、平成14年11月1日にその特許権の設定登録がされ、その後、 滝瀬洋輔 より特許異議の申立てがされ、当審により取消理由通知がされ、その指定期間内である平成16年8月24日付けで訂正請求がされ（後日取り下げ）、更に当審により取消理由通知がされ、その指定期間内である平成16年9月24日付けで訂正請求がされたものである。
　
２．訂正の適否についての判断
　
(1) 訂正の内容
　訂正請求されている事項は、特許第3366324号明細書（以下特許明細書という）の特許請求の範囲の
「【請求項１】　美容的活性成分としてウリ科植物(Cucurbitaceae)の種子抽出物を含むことを特徴とする化粧品組成物。
　【請求項２】　0.001〜10重量％の前記ウリ科植物の種子抽出物を含むことを特徴とする、請求項１記載の化粧品組成物。
　【請求項３】　0.01〜5重量％の前記ウリ科植物の種子抽出物を含むことを特徴とする、請求項１または２記載の化粧品組成物。
　【請求項４】　前記ウリ科植物の種子抽出物が、ククルビタ・ペポ(Cucurbita pepo)の種子の抽出物であることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
　【請求項５】　敏感肌用の保護エマルションの形態であることを特徴とする、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
　【請求項６】　約10％のククルビタ・ペポの種子抽出物を含むことを特徴とする、請求項５載の化粧品組成物。
　【請求項７】　請求項１ないし６のいずれか一項に記載の化粧品組成物を、それを必要とする人の皮膚に適用することを含む化粧的ケア方法。」
を
「【請求項１】　美容的活性成分として
、酸性水溶液による1回またはそれ以上の抽出工程を含む抽出法により得られる
　【請求項２】　
0.01
　【請求項３】　前記ウリ科植物の種子抽出物が、ククルビタ・ペポ(Cucurbita pepo)の種子の抽出物であることを特徴とする、請求項１
または2
　【請求項４】　敏感肌用の保護エマルションの形態であることを特徴とする、請求項１ないし
３
　【請求項５】　約10％のククルビタ・ペポの種子抽出物を含むことを特徴とする、請求項
４
　【請求項６】　請求項１ないし
５
と訂正する。
　
(2) 訂正の目的の適否、拡張・変更の存否、及び新規事項の追加の有無
　
　請求項１についての訂正は、ウリ科植物の抽出物について、段落【0019】、【0020】の記載に基づいてその抽出法による限定を加えるものであり、請求項2についての訂正は、ウリ科植物の抽出物の配合量の下限について、請求項3の記載に基づいて減縮するとともに、請求項3を削除するものであるから、これらの訂正は特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
　また、請求項3の削除にともない、請求項4〜7の項番を繰り上げる訂正は、明りょうでない記載の釈明を目的とするものである。そして、上記訂正はいずれも、特許明細書に記載された範囲内のものであり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものではない。
　
(3) むすび
　以上のとおりであるから、上記訂正は特許法第120条の4第3項において準用する許法第126条第2項及び第3項の規定に適合するので、当該訂正を認める。
　
３．異議申立についての判断
(1) 異議申立の概要
　特許異議申立人 滝瀬洋輔 は、甲第1号証として特開昭52-51033号公報（以下、引用例という。）を提出し、本件請求項1及び7に係る発明は、引用例に記載された発明であるから特許法第29条第1項第3号の規定に該当し、また、請求項2、3、5に係る発明は、引用例に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであって、特許法第29条第2項の規定により特許を受けることができないものであるから、上記各請求項に係る発明の特許は取り消されるべきものである旨主張している。
　
(2)本件発明
　上記のとおり、訂正請求が認められるから、本件各請求項に係る発明は上記訂正請求書に添付された訂正明細書の請求項1〜6に記載されたとおりのものと認められるところ、その請求項1に係る発明は下記のとおりである。
　
「【請求項１】　美容的活性成分として、酸性水溶液による1回またはそれ以上の抽出工程を含む抽出法により得られるウリ科植物(Cucurbitaceae)の種子抽出物を含むことを特徴とする化粧品組成物。」（以下、本件発明という。）
　
(2) 引用例の記載事項
2.1 「ウリ科の果実より抽出された抽出成分及び／又はウリ科植物の種子より抽出された抽出成分を有効成分として配合することを特徴とする皮膚化粧料．．．．．．等の化粧料」（特許請求の範囲）
　
2.2 「本発明はウリ科（キウリ、スイカ、メロン等）の果実及び／又は種子より
抽出した油
　
(3)対比判断
　本件発明と、引用例記載の発明とを対比すると、両者はウリ科直物の種子から得られる抽出物を有効成分として配合した化粧料である点で一致するものの、抽出物は、前者が酸性水溶液によるものあるのに対し、後者は油である点で相違がある。
　同じ材料からの抽出物であっても、酸性水溶液による抽出物と、油とでは含まれる成分が異なることは明らかである。また、引用例には酸性水溶液による抽出成分の利用を教示する記載はない。
　したがって、本件発明が、引用例に記載された発明であるとも、また、引用例に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるとも認めることができない。
　
　また、請求項2、4に係る発明は、配合する抽出物の量、化粧品の形態等について本件発明を限定した発明であり、請求項6に係る発明は、請求項1〜5に係る発明の化粧品を使用する方法に係る発明であるから、上記と同様の理由により、引用例に記載された発明であるとも、また、引用例に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるとも認めることができない。
　
４．むすび
　以上のとおりであるから、特許異議申立人の主張する理由及び提出された証拠によっては、本件請求項1、2、4及び6に係る発明の特許を取り消すことができない。
　また、他に上記請求項に係る発明の特許を取り消すべき理由を発見しない。
　
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１６年９月２９日（２００４．９．２９）
【訂正の要旨】
審決（決定）の【理由】欄参照。
（５４）【発明の名称】
化粧品用、または特に皮膚科の医薬用抗アレルギー性組成物の調製のためのククルビチンの用途、及び、その投与を含む方法
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項１】　美容的活性成分として
、酸性水溶液による１回またはそれ以上の抽出工程を含む抽出法により得られる
　【請求項２】　
０．０１
１
　【請求項３】　前記ウリ科植物の種子抽出物が、ククルビタ・ペポ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ｐｅｐｏ）の種子の抽出物であることを特徴とする、請求項
１または２
　【請求項４】　敏感肌用の保護エマルションの形態であることを特徴とする、請求項１ないし
３
　【請求項５】　約１０％のククルビタ・ペポの種子抽出物を含むことを特徴とする、請求項
４
　【請求項６】　請求項１ないし
５
【発明の詳細な説明】
　【０００１】
　【発明の属する技術分野】
　本発明は、本質的に、化粧品用、または特に皮膚科用の医薬用抗アレルギー組成物合成の調製ためのククルビチン（ｃｕｃｕｒｂｉｔｉｎｅ）の使用、及び、その適用を含む方法に関する。
　【０００２】
　【従来の技術】
　ククルビチンは、３−アミノ−３−ピロリジンカルボン酸ともいい、下記の式（Ｉ）で表される。
　【化１】
　これは、天然物質の水溶性アミノ酸であって、ウリ科植物（ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ）中に存在する。（Ｖ．Ｈ．Ｍｉｈｒａｎｉａｎ　ｅｔ．ａｌ．，ＬＬＯＹＤＩＡ（１９６８），３１（１）２３−２９参照）。
　【０００３】
　ククルビチンは、駆虫剤、特に日本住血吸虫に対する駆虫剤として知られている。（Ｍｏｒｉｍｏｔｏ　Ｙ．ｅｔ．ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（１９８７）３５（９）３８４５−３８４９）。ククルビチンは、抽出によって左旋形が、合成によってラセミ体が得られる。ククルビチンの多くの合成方法のうち、モンテイロの方法に特に言及する。（Ｈ．Ｊ．Ｍｏｎｔｅｉｒｏ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｓｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．（１９７３）２）。この方法は、ラセミ体ククルビチンを、比較的低い収率で生成するにすぎない。他の合成方法は、ククルビチンの２つの光学異性体を別々に得ることを可能にした。これは、モリモトらの方法であり、（Ｍｏｒｉｍｏｔｏ　ｅｔ．ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，（１９８７）３５（９）３８４５−３８４９）、ブタ肝臓エステラーゼを用いた立体特異的酵素的合成方法である。しかし、この方法は複雑であり、比較的多くの工程を必要としていた。
　【０００４】
　現在では、予想しなかったことだが、ククルビチンが、アレルギーの媒体としてよく知られているヒスタミンの形成を阻害すること、従って重要なヒスタミン活性低下作用を発揮することが見いだされている。このヒスタミン活性低下作用は、ヒシチジンからヒスタミンへの変換に作用する酵素であるヒスチジン脱炭酸酵素に対するククルビチンの阻害作用によるものである。結果として、ククルビチンを投与することによって、血清中及び組織中のヒスタミン濃度を減少させることができる。
　【０００５】
　このことは、重要な技術的進歩をなす。なぜならば、特に肺及び皮膚アレルギーでのアレルギーの発現は、今日、治療者にとって多くの問題を引き起こしているからである。治療者は、その治療において限られた数の活性物質しか持たず、さらに、それらのうちのいくつかは副作用を示す。従って、アレルギーに対する新しい予防及び治療用組成物の開発に対する強い要望が、引続き存在していた。
　【０００６】
　【発明が解決しようとする課題および課題を解決するための手段】
　従って、本発明の第１の目的は、アレルギー発現の予防あるいは治療を可能にするために、アレルギー発現の場における媒介物質であるヒスタミン形成を阻害できる方法を提供する上で生ずる技術的課題を解決することである。
　【０００７】
　他の側面からみると、本発明の主要な目的は、アレルギー発現の予防あるいは治療を可能にする方法を提供する上で生ずる技術的課題を解決することである。
　また、化粧品用、特に皮膚科の医薬用組成物の、アレルギー発現の危険性を低下させることを可能にする方法を提供する上で生ずる新たな技術的課題を解決することも本発明の目的である。
　【０００８】
　さらに、ククルビチンの合成を、最小の工程で高い収率を得る簡単な合成方法で行うことを可能にする方法を提供する上で生ずる新たな技術的課題を解決することもまた、本発明の目的である。
　本発明は、抗アレルギー活性を有する化粧品用あるいは特に皮膚科の医薬用組成物の、これらすべての技術的課題を、簡単に、確実に、再現性良く解決することを可能にした。
　【０００９】
　具体的な例によると、特に、該調製は、その起源や、特に気管支、皮膚、目といった作用部位に関係ないアレルギー発現の、予防あるいは兆候の処置のための化粧品用あるいは特に皮膚科の医薬用組成物の調製である。従って、前記組成物は、特に、アレルギー性または運動誘引性の気管支喘息、枯草熱、発作性気管炎及び鼻炎、ジンマシン、アレルギー性皮疹、湿疹、アレルギー起源のレッド・ブロッチェス（ｒｅｄ　ｂｌｏｔｃｈｅｓ）または皮膚過敏症、そう痒症、クィンケ浮腫、アレルギー性結膜炎、そして薬物起源のアレルギー反応を予防あるいは治療するためのものである。
　【００１０】
　化粧品という、より特定の分野において、前記組成物は、有利に低アレルゲン性の製品群用、あるいは敏感または過敏な皮膚用とされる。
　ククルビチンは、遊離の形状でも、あるいは化粧品用または特に皮膚科の医薬用に適用される塩またはエステルのうちの一方の形でも用いられる。上記の塩とエステルは、当業者にはよく知られた従来の方法で合成される。塩の中では、モノ−あるいはジヒドロブロマイドと、モノ−あるいはジヒドロクロライドが挙がられる。エステルの中では、メチルエステルあるいはエチルエステルが挙げられる。
　【００１１】
　好ましい例によれば、ククルビチンを含む上記植物抽出物は、ウリ科植物、特にククルビタ・マキシマ・ダッチ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ｍａｘｉｍａ　Ｄｕｃｈ．）、ククルビタ・ペポ・Ｌ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ｐｅｐｏ　Ｌ．）あるいはククルビタ・モシャタ・ダッチ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ｍｏｓｃｈａｔａ　Ｄｕｃｈ．）；の抽出物であり、好ましくは、種子もしくは果肉の抽出物である。さらに好ましくは、ウリ科植物の種子の抽出物である。
　【００１２】
　特別な実施態様によれば、上記の植物抽出物は、少なくとも０．５重量％のククルビチンを含むウリ科植物の果肉の抽出物である。
　優れた具体的な例によれば、ククルビチン、あるいはその化粧品用もしくは特に皮膚科の医薬用として適用できる塩あるいはエステルのうちの一種が、全組成物中に０．００１から１０重量％、好ましくは０．０１から５重量％の濃度で存在している。
　【００１３】
　本発明は、第２の側面からみると、活性成分として、ククルビチン、あるいはその化粧品用として適用可能な塩またはエステルのいずれか一つ、あるいはそれを含有する植物抽出物を、化粧品用として適用可能な佐薬、賦形剤、または媒体中に含むことを特徴とする化粧用組成物に関する。
　【００１４】
　好ましい例としては、上記植物抽出物が、上で定義したようなウリ科植物の抽出物である。
　具体な好ましい変形例としては、ククルビチンあるいはその塩またはエステルが、抗アレルギー活性を示すために有効な量、特に、０．００１から１０重量％、好ましくは０．０１％から５重量％存在している。
　【００１５】
　第３の側面によると、本発明は、好ましくは、ククルビチンあるいはその医薬用として適用可能な塩またはエステルのいずれか一つを、抗アレルギー活性を示すのに有効な量で、特に気管支、皮膚および目におけるアレルギー発現を処置または予防するのに有効な量で、医薬用として適用可能な佐薬、賦形剤、または媒体中に含むことを特徴とする、抗アレルギー活性を有する、特に皮膚科の、医薬用組成物に関する。
　一変形例としては、上記化粧用、医薬用組成物は、上で定義した植物起源の抽出物を含む。
　【００１６】
　第４の側面は、本発明は、遊離形態、あるいは化粧品用、まはた医薬用として適用可能な塩またはエステル形態、あるいは上で定義したようにそれを含有している植物抽出物形態のいずれか一つの形態の、有効な量のククルビチンを組成物中に含み、その最終組成物が、アレルギー誘発の危険性の低下を示すようにされたことを特徴とする、化粧品用及び特に皮膚科用の医薬用組成物のアレルギー潜在性の減少方法に関する。
　【００１７】
　上記側面のいずれの場においても、ククルビチンあるいはその塩またはエステルの、局所的に使用する組成物に対する好ましい重量濃度は、０．００１から１０％であり、さらに好ましくは、０．０１から５％である。
　全身系の（ｓｙｓｔｅｍｉｃａｌｌｙ）投与（経口、非経口、経腸、吸入、等）を意図した組成物にあっては、ククルビチンの濃度は決定的なものではなく、例えば、組成物中の６０％にまで上げることができる。ヒトに対する投与量は、一般的に、０．１から２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲、好ましくは、１から１５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
　【００１８】
　さらに、天然のククルビチンである左旋形、あるいはその塩またはエステルが一般的に使用される。特に、左旋形ククルビチンの優れた供給源は、特に、ククルビタ・ペポ・Ｌ、ククルビタ・マキシマ・ダッチあるいはククルビタ・モシャタ・ダッチの種類のウリ科植物の果肉及び種子である。しかし、ククルビチンのラセミ体あるいはその塩またはエステルもまた使用してよい。
　【００１９】
　さらに、ククルビチンは、純粋な形で、あるいは当業者に周知の抽出法に従った抽出物として使用してよい。特に有利な抽出方法は、Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ　Ｈ．ＭＩＨＲＡＮＩＡＮ　ｅｔ．ａｌ．，ｉｎ　ｌｌｏｙｄｉａ，１９６８，３１，（１）２３−２９の文献に記載されており、特に２４頁を、参考文献としてここに含める。この方法は、剥皮及び脱脂したウリ科植物の種子を水で処理することを記述している。それによると、少なくとも５０℃に加熱し、数時間一定条件で撹拌する。その後、混合物を遠心分離し、上澄み液を回収して残存物をいくつかに分けた温水で１回またはそれ以上再抽出する。上澄み液と洗浄液を混合し、懸濁液中のタンパク質物質を沈澱させるため、等当量の８５％エタノールを加え、全体を冷却装置中に一晩保存する。その混合液を遠心分離し、上澄み液を回収する。例えば、回転式蒸発器により、蒸発によりアルコールを留去する。水溶液は、そのまま使用してもよく、一方、例えばドゥエックス（Ｄｏｗｅｘ）５０Ｗ−Ｘ−８型で、例えば７５×２．２ｃｍの大きさのクロマトグラフィー・カラムを通したものを使用してもよい。そのカラムは、約２００ｍｌの水で洗浄した後、１％の水酸化アンモニウム水溶液で、溶出液がニンヒドリン試験に負の応答を与えるようになるまで溶離する。溶出液は、減圧下で適当に加熱し、蒸発させて乾燥させる。シロップ状の残留物は、やはりそのまま使用してもよい。一方、再び温水で処理し、等当量の９５％エタノールを加えてもよい。その後、例えば６０％過塩素酸のような酸を滴下して、溶液のｐＨがおよそ５になるまで酸性化する。それを、数日間冷却装置中に保存し、過塩素酸ククルビチンの沈澱を得る。この沈澱を、数ｍｌの水に溶かし、好ましくはアンバーライトＣＧ−４５型で、例えば２０×１．５ｃｍの大きさのクロマトグラフィー・カラムを通す。溶出液を減圧下で蒸留することにより、実質的に純粋な状態のククルビチンを得る。
　【００２０】
　従って、上記の方法によれば、ククルビチンを、純粋な状態でも、あるいは種々の含有量の抽出物としても得ることが可能になる。ククルビチンが、ウリ科植物の抽出物の形態で使用される場合、ククルビチン含有量は、抽出物中少なくとも０．５重量％に等しいのが好ましい。ククルビチンの好ましい供給源は、ククルビタ・ペポ。Ｌ、ククルビタ・マキシマ。ダッチそしてククルビタ・モシャタ・ダッチのようなククルビタ種（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ｓｐｅｃｉｅｓ）の種子である。
　【００２１】
　第５の側面としては、本発明は、アレルギー発現の予防または治療するための、ヒト及び動物の治療方法を含んでいる。その治療方法は、アレルギー発現の予防あるいは治療に有効な量の、ククルビチン、あるいはその医薬用として適用可能な塩またはエステルのいずれか一つ、あるいはそれを含有する植物抽出物を、ヒトまたは動物に投与することを特徴としている。
　【００２２】
　特に、上記の治療は、アレルギー性または運動誘引性の気管支喘息、枯草熱、発作性気管炎及び鼻炎、ジンマシン、アレルギー性皮疹、湿疹、アレルギー起源のレッド・ブロッチェスまたは皮膚過敏症、そう痒症、クィンケ浮腫、アレルギー性結膜炎、そして薬物起源のアレルギー反応を予防あるいは治療することに応用される。
　【００２３】
　具体的な例としては、ククルビチンあるいは医薬用に適用可能なその塩またはエステルが、好ましくは０．００１から１０重量％の濃度で局所的に投与される。
　具体的なもう一つの例としては、ククルビチンあるいは医薬用として適用可能な塩またはエステルが、ヒトに対して、０．１から２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲、好ましくは、１から１５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の投与量で全身的に投与される。
　【００２４】
　本発明はさらに、ククルビチン、化粧または医薬的に許容できる塩またはエステル、あるいは上で定義したような、それを含有する植物抽出物が、化粧品用または医薬用として適用可能な媒体、賦形剤、または佐薬に含まれていることを特徴とする、化粧品用あるいは、特に皮膚科の医薬用の組成物の製造方法に関する。
　【００２５】
　具体的な例としては、ククルビチンあるいは化粧品用または医薬用として適用可能なその塩またはエステルが、アレルギー発現の危険性を低減するために、完全な化粧品または医薬用製剤に含まれている。
　具体的な他の例としては、抗アレルギー活性を有する組成物が調製される。調製の種々の変形例が、前述した記載の結果として得られる。
　【００２６】
　上で述べた側面のいずれか一つの場において、特別な具体例としては、前記ククルビチン、あるいはその塩またはエステルを含む組成物、あるいは前記植物抽出物を含む組成物は、さらに、リポソーム型小胞を含んでいる。特別な例によれば、ククルビチンあるいはその塩またはエステルは、リポソーム型小胞中に少なくとも部分的にカプセル化されている。「リポソーム型の小胞」とは、水和したラメラ脂質相と、イオン性または非イオン性両親媒性脂質からなる小胞の両方を意味する。また、「リポソーム型小胞中に少なくとも部分的に含まれる」とは、この記載及び特許請求の範囲においては、ククルビチン、その塩またはエステルが、結合の形態とは無関係に、リポソーム型小胞に結合していることを意味する。しかし、好ましい結合は、リポソーム型小胞中で、ククルビチン、その塩またはエステルが、カプセル化することにある。しかし、目的とする本発明の抗アレルギー効果を得るために、全ての量が、含まれるまたはカプセル化される必要はない。
　【００２７】
　「リポソーム」型小胞は、脂質物質から合成されることが知られている。「脂質」という用語は、慣習的に「脂質」と呼ばれている、一般的に５以上の炭素原子を含む、いわゆる脂質炭素鎖を含む全ての物質を含んでいる。
　本発明によれば、ラメラ脂質相またはリポソーム型小胞のどちらかを形成するために、両親媒性脂質、即ちイオン性または非イオン性でも同じだが、親水性基と親油性基を持つ分子からなる脂質が、脂質として用いられ、これらの両親媒性脂質は、水相が存在すれば、ラメラ脂質相あるいはリポソーム型小胞を形成することができる。
　【００２８】
　特に、これらの脂質の中で、リン脂質、ホスホアミノ脂質、糖脂質、ポリオキシエチレン化脂肪アルコール、選択的にポリオキシエチレン化されたポリオールのエステルが挙げられる。そのような物質は、例えば、選択的に水素化された卵または大豆レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン、セレブロシド、オキシエチレン化ステアリン酸ポリグリセロールからなる。
　【００２９】
　水和したラメラ脂質相またはリポソーム中に、本発明に従って使用される化合物の含有は、例えば、ＵＳ−Ａ−４５０８７０３公報の記載や、それとＵＳ−Ａ−４６２１０２３公報の記載を組み合わせたような、周知の合成方法に従って行われる。
　【００３０】
　第７の側面として、本発明は、１−ベンジル−３−ピロリジノンを出発原料とすることを特徴とする、ククルビチンの合成方法を含んでいる。
　この合成方法の具体的で特別な例は、１−ベンジル−３−ピロリジノンを、塩化アンモニウムとシアン化カリウムとのアンモニア溶液を用いて処理し、（±）−３−アミノ−１−ベンジル−３−シアノピロリジンを得る。この化合物を、酸性または塩基性加水分解し、（±）−３−アミノ−１−ベンジル−３−ピロリジンカルボン酸に変換し、最後に水素による還元、好ましくは、触媒による水素添加分解を行って、（±）−３−アミノ−３−ピロリジンカルボン酸または（±）−ククルビチンを得る。
　【００３１】
　好ましい例としては、上記アンモニア溶液が水性アルコール溶液であり、アルコールはイソプロパノールまたはメタノールであるのが好ましい。
　他の好ましい変形例では、上記加水分解が、６Ｎの臭化水素酸水溶液を用いて行われる。
　さらに他の好ましい例では、触媒による水素添加が、水性反応媒体中に分散された炭上のパラジウムのような触媒存在下で、水素雰囲気で水中で行われる。
　合成方法の好ましい具体例としては、１−ベンジル−３−ピロリジノンを、塩化アンモニウムとシアン化カリウムと、１：４：４のモル比率で、室温で、少なくとも４８時間反応させる。
　【００３２】
　具体的な他の特別な例では、光学異性体を、ラセミ混合物から、当業者に周知の分離方法で、特に、ジアステレオマーの合成を経て分離する。
　本発明のククルビチンの合成方法は、特に、ラセミ体のククルビチンを、従来法の２倍から３倍の高収率で合成できる。
　【００３３】
　本発明の他の目的、特徴、効果は、以下に続く説明によって明らかになるだろう。その説明は、ククルビチンの合成の種々の実施例、薬理的試験の結果を報告する種々の例、化粧品または医薬用製剤の種々の例を参照して与えられる。なお、実施例において、特に断わらない場合は、パーセントは重量％を意味している。
　【００３４】
　【実施例】
（実施例１）
ラセミ混合物形態のククルビチン（ｃｕｃｕｒｂｉｔｉｎｅ）の合成
操作手順を以下に示す。
ａ）（±）−３−アミノ−１−ベンジル−３−シアノピロリジンの合成
　２−プロパノ−ル、３ｍｌ中に溶解する１−ベンジル−３−ピロリジノン０．５ｇ（２．８５ｍｍｏｌ）を、２８％のアンモニア溶液７ｍｌ中の塩化アンモニウム０．６１５ｇ（１１．４ｍｍｏｌ）とシアン化カリウム０．７４１ｇ（１１．４ｍｍｏｌ）の溶液に加える。この混合物は、室温で３日間撹拌する。この溶液は、１０％の炭酸カリウムの溶液１５ｍｌで洗浄され、ジクロロメタン（３×ｃ１５ｍｌ）で抽出される。硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶媒を蒸発させた後、油（０．４７５ｇ）が得られる。
　【００３５】
　生成物は、固体充填物を持つシリカカラムで精製される。それが４：２のエ−テル／石油エ−テルの混合物で抽出される。
　ベ−ジュの固体０．４０２ｇが得られ（収率：７０％）、この固体は以下のＮＭＲスペクトルを持つ３−アミノ−１−ベンジル−３−シアノ−ピロリジンからなる。
　　１ＨＮＭＲ、３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３
　　１．８（ブロ−ドｓ，２Ｈ，ＮＨ２）；１．９７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ４，４´＝１３．４，Ｊ４，５＝８，Ｊ４，５´＝５．４）；２．５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ４，４´＝８，Ｊ４，５´＝８，Ｊ４´，５´＝５．４）；２．６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ２，２´＝９．４）；３．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ２´，２＝９．４）；３．６７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｃ６Ｈ５）；７．３３（ｍ，５Ｈ，芳香性プロトン）。
　【００３６】
ｂ）（±）−３−アミノ−１−ベンジル−３−ピロリジンカルボン酸、または、（±）−１−ベンジルククルビチンの合成
　上記のように得られる化合物の加水分解は、酸性媒体中または塩基性媒体中のいずれかで実行される。
　【００３７】
酸性媒体中の加水分解
　ステップａ）で得られた３−アミノ−１−ベンジル−３−シアノピロリジン０．３ｇ（１．４９ｍｍｏｌ）を、４８％の臭化水素酸５ｍｌ中に溶かし、４時間、４０−５０℃に保持する。臭化水素酸が蒸発した後、生成物をシリカカラムで精製する。不純物は、ＣＨ２Ｃｌ２／メタノ−ル１５％で取り除かれ、アミノ酸は、メタノ−ル／水１５％で抽出される。
　メタノ−ルを除去した後、化合物は、最小量の水性媒体中、加熱下、獣炭で脱色され、その後、凍結乾燥される。
　【００３８】
　暗黄色の固体が得られ（収率：８０％）、これは、以下のＮＭＲスペクトルを持つモノまたはジヒドロブロマイド形態の（±）−３−アミノ−１−ベンジル−３−ピロリジンカルボン酸からなる。
　　１ＨＮＭＲ、３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ
　　２．４７−２．６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ４）；２．７５−２．９１（ｍ，１Ｈ，Ｈ４′；３．６９−３．９４）（ｍ，３Ｈ，Ｈ５，Ｈ５´，Ｈ２）；４．１２（ｄ，Ｊ２，２´＝１４．２，１Ｈ，Ｈ２´）；４．５８（２ｄ，Ｊ＝１３．８，２Ｈ，ＣＨ２−Ｃ６Ｈ５）；７．６２（ｓ，５Ｈ，芳香性プロトン）。
　【００３９】
塩基性媒体中の加水分解
　ステップａ）の３−アミノ−１−ベンジル−３−シアノピロリジン２８０ｍｇ（１．３９ｍｍｏｌ）を、エタノ−ル２ｍｌに溶かす。１０％の水酸化ナトリウム溶液５ｍｌを加え、混合物を５時間還流する。冷却後、４８％の臭化水素酸で酸性化する。
　生成物は、シリカカラム、メタノ−ル／水１０％で精製される。生成物は、獣炭で脱色され、その後、凍結乾燥される。臭化ナトリウム塩を存在させることにより、１００％以上の収率が得られた。
　【００４０】
　存在する塩を取り除くために、ピロリジン２００ｍｇが用いられ、１０％の水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ８に達せられる。Ｄｕｏｌｉｔｅ　Ｃｌ−に２規定の臭化水素酸を充填する。塩は蒸留水で取り除かれる。ピロリジンを引き離すために、０．１規定の臭化水素酸溶液が使用される。
　凍結乾燥後、（±）−３−アミノ−１−ベンジル−３−ピロリジンカルボン酸１２０ｍｇが得られる（収率：４０％）。
　【００４１】
ｃ）（±）−３−アミノ−３−ピロリジンカルボン酸、または、（±）−ククルビチンの合成
　ステップｂ）で得られた（±）−３−アミノ−１−ベンジル−３−ピロリジンカルボン酸ヒドロブロマイド３００ｍｇを、１０ｍｌの水に溶かす。パラジウム１０％を含む炭０．５ｍｇを分散させ、この懸濁液を、大気圧下、水素雰囲気中に置く。撹拌は、１８時間続けられる。濾紙を通して濾過して凍結乾燥させ、黄色の固体を得た（９８％）。これは、以下のＮＭＲスペクトルを持つ（±）−３−アミノ−３−ピロリジンカルボン酸、または、（±）−ククルビチンからなる。
　　１ＨＮＭＲ、３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ
　　２．４５（ｍ，１Ｈ，Ｈ４）；２．６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ４′）；３．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ２，２´，＝１３．４）；３．６７−３．７８（ｍ，２Ｈ，Ｈ５，Ｈ５´）；４（ｄ，１Ｈ，Ｊ２´，２，＝１３．４）。
　【００４２】
（実施例２）
（±）−ククルビチン合成の収率の最適化
　操作手順は、上記実験例１のように、ステップｂ）において、６規定の臭化水素酸を用いて加水分解させたが、ステップａ）の反応物の割合を変化させた。
　得られた収率を以下の表１に示す。
　【００４３】
　【表１】
　　Ｎ．Ｂ．Ｐ：１−ベンジル−３−ピロリジノン（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏｎｅ）
　　＊　　　　：アミノニトリル（ａｍｉｎｏｎｉｔｏｒｉｌｅ）、単離されていない
　　ＣＮ　　　：３−アミノ−１−ベンジル−３−シアノピロリジンの収率
　　ＣＯＯＨ−：３−アミノ−３−ピロリジンカルボン酸の全体の収率
　【００４４】
　表１の最後のコラムは、初期の反応物に対する（±）−ククルビチンの収率を含む。
　収率は、反応が室温で４８時間を越えて進行し、１−ベンジル−３−ピロリジノン、塩化アンモニウム、シアン化カリウムの各反応物が１：４：４の割合で使用されれば、最も良好であることが観察された。
　さらに、臭化水素酸を用いた加水分解は、加水分解剤として同じ濃度の塩化水素酸を用いたときより高い収率を導くことが観察された。
　【００４５】
（実施例
３
ククルビチンの光学異性体の分離
　分離方法は、それ自体知られているように、エステル化による酸性基の保護と環状アミン基の保護の後、光学的に活性な試薬を用いて（±）ククルビチンのカップリングによるジアステレオマ−の誘導体の調製に基づく。ククルビチンの一つまたは他の異性体に相当する異性体の各形は、クロマトグラフィ−により分離され、特に、高速液体クロマトグラフィ−、または、シリカカラムにより分離される。その後のククルビチンの二つの鏡像体を再生するために、保護するエステルを鹸化し、そして、酸性基を自由にするために加水分解し、例えば、アミン基がベンジルラジカルによる置換によって保護される場合には、実施例１に述べた水素添加分解によりアミン基を自由にする。
　【００４６】
　この方法に用いられる試薬として、−（１Ｓ）−カムファニルクロライド（ｃａｍｐｈａｎｙｌ　ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、−（Ｓ）−（−）−α−メトキシ−α−（トリフルオロメチル）フェニル酢酸、−Ｎ−（タ−ト−ブトキシカルボニル（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−Ｌ−アラニンのような左旋性のＳ光学活性な化合物を用いることができる。
　この例は、（１Ｓ）−カムファニルクロライドを用いたカップリング手段により、ククルビチンのラセミ体の分割を述べる。
ａ）（＋）−１−ベンジルククルビチンの酸性基の保護：メチルエステルの合成
　【００４７】
　実験例１のステップｂ）で得られた（±）−１−ベンジルククルビチンの０．１ｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を、チオニルクロライド（０．２８ｍｍｏｌ）とメタノ−ル（２ｍｌ）とを氷で冷却した溶液にゆっくり加える。反応温度は、−５℃以上に上げてはいけない。混合物を０℃で２時間撹拌し、そして、二日間で室温に戻す。
　蒸発後、生成物は、固体充填物を持つシリカカラムで精製される。（溶離剤はＣＨ２Ｃｌ２／メタノ−ル　１０から５０％まで）
　黄色の生成物が、７０％の収率で得られ、これは（±）−１−ベンジルククルビチン　メチルエステルからなる。
　【００４８】
ｂ）（１Ｓ）−（−）−カムファニルクロライドとのカップリング
　塩化メチレン１．５ｍｌ中に溶解させた（±）−１−ベンジルククルビチンメチルエステルの１モルをトリエチルアミンの１モルで中和する。（１Ｓ）−（−）−カムファニルクロライド１．１当量を加える。混合物は、１６時間室温で撹拌される。
　生成物は、固体充填物（溶離剤はＣＨ２Ｃｌ２／メタノール１０％）を持つシリカコラムで精製される。
　ジアステレオイソマ−の分離は、各種カラムのＨＰＬＣによって達成され、特に、ＮＨ２−グラフトゾルバックス（ｇｒａｆｔｅｄ　Ｚｏｒｂａｘ）で達成される。
　【００４９】
（実施例４）
ククルビタ・ペポの果肉からのククルビチンの製造
　新鮮なククルビタ・ペポの果物を半分に切断し、種の抽出物の製造に使用される種が取り除かれる。その結果得られた果肉が、粉末にされ、凍結乾燥される。粉末を回復させ、粉末１００ｇに対して１リットルの割合で石油エ−テルを用いて脱脂される。ククルビタ・ペポの果肉の望ましい抽出物からなる不溶物は、濾過作用によって回収する。この抽出物の中のククルビチンの割合は、ＨＰＬＣにより検査され、ククルビチンの重量で０．０３％の濃度が、脱脂した乾燥抽出物に得られた。
　【００５０】
　その後、脱脂された乾燥抽出物を水に入れ、完全に溶解するまで、撹拌下、約５０℃に加熱される。９５％のエタノ−ルの当量が、懸濁液中の蛋白性物質を沈澱させるために加えられ、これが遠心分離により取り除かれる。そのときに、澄んだ上清の残物が、６０％の過塩素酸を用いてｐＨ５．０まで酸性化される。このように酸性化された溶液は、収集する過塩素酸ククルビチンを沈澱させるために、少なくとも２日間冷凍機中に置かれる。ククルビチンは、その技術の熟練者の慣習的な方法で、特に、陽イオン交換樹脂（Ｎａ＋型）を通る輸送および減圧下で溶出液の蒸発により、過塩素酸ククルビチンから得られる。
　【００５１】
（実施例５）
ククルビタ・ペポの種の抽出物の調製
　あらかじめはぎとられたククルビタ・ペポの種１．５ｋｇをすりつぶす。得られた粉末は、脂肪を取り除くために、３回、（３リットル、２リットル、１．８リットル）のヘキサンで抽出される。得られた乾燥ケ−キは、約ｐＨ４に維持された塩酸溶液で抽出される。この抽出は、３つのステ−ジで行なわれ、二つは約２２℃の室温で、三つ目は７０℃で行なわれる。各ステ−ジでは、ケ−キ溶液（ｃａｋｅ−ｓｏｌｕｔｉｏｎ）が塩酸溶液（最初の場合が２リットルであり、残り２つの場合が２．５リットルである）に接触する時間は、２４時間である。
　【００５２】
　排液後、固形残留分は取り除かれ、水性の相は、集められ、部分的に蒸発され、遠心分離される。遠心分離されたペレットは、蒸留水で洗浄され、その後、捨てられる。洗浄液は、遠心分離された濃縮物に混ぜられる。
　【００５３】
　水の留分は再濃縮され、そして、等重量のエタノ−ルで処理する。白い沈澱物が遠心分離によって取り除かれる。水性−アルコ−ル性の上清は、例えば、水酸化ナトリウムを用いて中和され、そのまま使用することもできる（−）−ククルビチンを含む抽出物を構成する。
　使用される種のバッチにより、（−）−ククルビチンを３から５％含有する粉末を得るために、アルコ−ルを消散させ、得られた水性溶液を霧状にすることも可能である。
　【００５４】
（実施例６）
ククルビタ・ペポの種の（−）−ククルビチンが豊富な抽出物の調製と、精製された（−）−ククルビチンの生成
Ａ−ククルビタ・ペポの種の抽出物の調製
　出発物質は、剥皮されたまたはそうでないククルビタの種であって、バッチまたは原料により、重量で０．２から０．４パ−セントの（−）−ククルビチン含量を持つもの、または、バッチまたは原料により、重量で０．４から０．８パ−セントの（−）−ククルビチン含有量を持つククルビタの種の油のないケ−キで構成される．
　【００５５】
　出発物質は、約１００マイクロメ−タ−の粉状にされていることが望ましい。この粉状の物質は、室温で、粉状のケ−キの場合は２時間、種の場合は１６時間まで、約ｐＨ３．５の酸性の水（重量で０．１％濃度の硫酸）に漬けて処理される。使用される酸性の水の量は、出発物質の重量の約５倍である。そして、全部を、大気圧で、１時間沸騰させる。８０℃に冷却した後、混合物を濾過し、適切に遠心分離する。得られた水相は、８０℃から９０℃の温度に引き上げられ、その後、０．５マイクロメ−タ−のフィルターを通して細かく濾過される。リットル当たり約１０ｇの乾燥物を含有する果汁がそのために得られる。
　【００５６】
　この果汁は、部分的な吸引下、加熱による予備濃縮を行って、乾燥物質の約２５０ｇ／ｌの濃度に変化させる。この予備濃縮物は、その後、４℃で４８時間置かれ、減圧下、後の濃度をリットル当たり５００ｇの乾燥物となるように濃縮し、再び４８時間４℃におく。これらの操作の後に、加圧濾過機を通す濾過を行う。乾燥物質を４０から５０％含み、（−）−ククルビチンを１から２％含有する抽出物が、その結果として得られる。収率は、出発物質のトン当たり、抽出物が約２００リットルである。
　【００５７】
Ｂ−精製された（−）−ククルビチンの製造
　リットル当たり乾燥物質を２５０から３００ｇ含有する前記含有物は、水酸化ナトリウムを用いて、ｐＨ７．５に中和される。混合物は、加圧濾過機を通して濾過され、そして、濾過液は、陽イオン交換樹脂（Ｎａ＋型）を通過させる。溶出が、アンモニア溶液を用いて行なわれる。部分的な減圧下、溶出液を熱的に濃縮した後、シロップが得られ、この乾燥物質は、重量で約５０％の（−）−ククルビチンを含む。望ましくは、このシロップは、凍結乾燥される。この目的のために、タルクのような中性の粉末のキャリァを混合させるのがよい。
　【００５８】
（実施例７）
ヒスタミン生成に関するククルビチンの阻止活性についての例証
（１−Ａ）酵素的試験による
　この試験は、ヒスチジンをヒスチミンに転化するヒスタジンデカルボキシラーゼ（ＨＤＣ）酵素に対するククルビチンの阻止活性を、ＨＤＣ阻止剤として知られているトリトカリン（ｔｒｉｔｏｑｕａｌｉｎｅ）のそれと比較した結果に基づいている。このトリトカリンは、カルピ　Ｃ．，マギ　Ｇ．Ｃ．「Ｂｕｌｌ．Ｓｏｃ　Ｉｔａｌ．Ｓｐｅｒ．」１９６８年，４４（６　５４３−４）に記載され、「Ｈｙｐｏｓｔａｍｉｎｅ（登録商標）」として低ヒスタミン剤として治療的に用いられているものである。
　【００５９】
　ＨＤＣに対する阻止活性は下式の化学反応に基づく測色分析によって容易に評価することができる。
　【化２】
　上式において、ＭＢＴＨは３−メチル−２−ベンゾチアゾリノン　ヒドラゾンであり、ＤＭＡＢは３−（ジメチルアミノ）安息香酸である。
　【００６０】
　実験によれば、青色呈色の生成は消費されたヒスチジンの濃度に比例することが観察された。そこで、反応の開始速度を決定し、かつ、いわゆるミカエリス曲線（「Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」第二版．オクスフォード大学出版，１９８９年版に記載）を描くことが可能となる。
　この開始速度は、１分間当りの吸光度の変化として表すことができる。
　【００６１】
　ヒスチジンの種々な初期濃度、すなわち、１３２ｎｍｏｌ、２６５ｎｍｏｌおよび５３０ｎｍｏｌにおいて、それぞれ活性体なしの場合、ＨＤＣ阻止剤として知られるトリトカリンを用いた場合、および本発明に従う阻止剤としてのラセミ体ククルビチンを用いた場合に得られた結果を下記表２に示す。またこの結果をミカエリス曲線として図１に示す。
　【００６２】
　【表２】
　【００６３】
　表２および図１のミカエリス曲線に示された結果から明らかなように、ククルビチンはトリトカリンより遥かに強力なＨＤＣ阻止能力を有している。これは当業者にとって驚くべき結果である。
　【００６４】
（１−Ｂ）ＲＩＡ分析による
　ククルビチンの抗ヒスタミン活性は、以下の方法にしたがって、放射線免疫学的測定法（ラジオイムノアッセイまたは「ＲＩＡ」と称する）によっても例証することができる。
　この測定法は、ＨＤＣ酵素の作用下に生成するヒスタミンを、ＲＩＡ法によって直接に測定するものである。この測定法は当業界ではよく知られたものであり、特に、イムノテック社（フランス国マルセイユ）から市販されている「ＨＩＳＴＡＭＩＮＥ　ラジオイムノアッセイ　キット（Ｃａｔ．≠　１３０２）」と呼ばれる測定キットの使用説明書に詳しく記載されている。
　【００６５】
　それぞれ活性体なしの場合、対照活性体としてのトリトカリンを用いた場合、および本発明に従う抗ヒスタミン剤としての合成ラセミ体ククルビチンを用いた場合について、ｐＨ６．３のリン酸塩緩衝液中１６×１０−３モル濃度のヒスチジンに対して放出されたヒスタミンの量をナノモルの水準で時間を追って測定する。トリトカリンとククルビチンとは、２×１０−３モルの濃度で用いた。
　この結果を、放出されたヒスチジンのナノモル量で表して下記の表３に示す。またこの結果を曲線として図２に示す。ここでは、放出されたヒスタミンのナノモル数を縦軸に、分単位の時間を横軸にとり、活性体なしの曲線は実線で、トリトカリンで得られた曲線は一点鎖線で、またククルビチンで得られた曲線は点線で示した。
　【００６６】
　【表３】
　　＊Ｉ　：阻止率％
　　＊＊　：放出されたヒスタミンのナノモル数
　【００６７】
　表３から、放出されるヒスタミンの量がククルビチンの存在によって著しく低減されたことは明かである。
　ここに得られたＲＩＡ法による測定結果から、ククルビチンはヒスタミン生成に関して、トリトカリンよりさらに強力に、僅か数分以内に著しい阻止能力を発現するものであることが確認された。
　以下の実施例では、本発明に従う化粧品または医薬品、特に皮膚病学的組成物の種々な処方例を示す。
　【００６８】
（実施例８）
錠剤
　経口投与錠一錠あたり
　　（±）−ククルビチン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００ｍｇ
　　でん粉　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３８ｍｇ
　　ラクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　７５ｍｇ
　　タルク　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０ｍｇ
　　その他の賦形剤（ステアリン酸マグネシウムを含む）を加えて総量
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５０ｍｇ
　適用：アレルギー性症候群、特に皮膚性および呼吸器性症候群に対する予防的および治療的処置。
　投与量：成人に対し１日１〜１０錠。１５才未満の児童に対しては半分に減量。
　【００６９】
（実施例９）
エロゾルパウダー
　加圧缶中１００ｇあたり
　　（±）−ククルビチン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３ｇ
　　マンニトール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１ｇ
　　噴射ガス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　９６ｇ
　適用：気管支ぜんそく、およびぜんそく様気管支炎を含む全ての呼吸器系アレルギー性症候群に対する予防的および治療的処置。
　投与量：気管支内投与、１日平均４〜６回吸入。
　【００７０】
（実施例１０）
過敏症皮膚に対する刺戟緩和乳液
　　実施例５に示した種子抽出液（分析値：（−）−ククルビチン３％）
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０ｇ
　　過敏症皮膚用の通常の化粧用乳剤（脂肪族アルコール、ポリオキシエチレン化脂肪族アルコール、鉱油、パルミチン酸イソプロピル、グリセロール、ゲル化剤、保存料、香料、水）を加えて総量
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００ｇ
　【００７１】
（実施例１１）
低アレルギー性メーキャップ用ファンデーション
　　実施例４に従って（−）−ククルビチンを強化したククルビタ・ペポ果実の抽出物（（−）−ククルビチン１％含有）
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０ｇ
　　通常のメーキャップ用ファンデーション基材（脂肪酸エステル、スクワラン、大豆レシチン、揮発性シリコーン、プロピレングリコール、キサンタンガム、遮光剤、顔料、保存料、香料、水）を加えて総量
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００ｇ
　【００７２】
（実施例１２）
抗刺戟性マスカラ
　　（±）−ククルビチン　　　　　　　　　　　１．０ｇ
　　ウルトラマリンブルー　　　　　　　　　　　９．０ｇ
　　ヘキサデシルアルコール　　　　　　　　　　７．４ｇ
　　プロピレングリコール　　　　　　　　　　　９．０ｇ
　　ステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　１１．３ｇ
　　モノステアリン酸グリセリド　　　　　　　　４．４ｇ
　　トリエチルアミン　　　　　　　　　　　　　３．６ｇ
　　保存料　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３ｇ
　　水を加えて総量　　　　　　　　　　　　　　１００ｇ
【図面の簡単な説明】
　【図１】　種々のヒスチジン初期濃度における、活性体なしの場合、ＨＤＣ阻止剤として知られるトリトカリンを用いた場合、および本発明にかかる阻止剤としてのラセミ体ククルビチンを用いた場合に得られた反応の開始速度に係るミカエリス曲線を示す。
　【図２】　ＲＩＡ法による測定結果を示す。放出されたヒスタミンのナノモル数を縦軸に、分単位の時間を横軸にとり、活性体なしの曲線は実線で、トリトカリンで得られた曲線は一点鎖線で、またククルビチンで得られた曲線は点線で示す。