【手続補正書】
【提出日】平成27年6月26日(2015.6.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体試料をハプテン及び第１の標的と特異的に結合することができる特異的結合部分を含む第１の検出プローブと接触させることと；
前記生体試料を、第１の酵素及び第１の酵素に結合されており、前記第１の検出プローブと選択的に結合する抗ハプテン抗体を含む第１のラベリングコンジュゲートと接触させることと；
前記生体試料を、第１の潜在的反応性部分及び第１の発色部分を含む第１のシグナリングコンジュゲートと接触させることと；
前記生体試料に光を照射することと；
前記第１のシグナリングコンジュゲートの前記第１の発色部分による前記光の吸光度を通して第１の標的を検出することと
を含む、生体試料中の第１の標的を検出する方法であって、
前記第１の酵素が、前記第１の標的の近位で又は前記第１の標的上で直接的に前記生体試料と共有結合する第１の反応性部分への前記第１の潜在的反応性部分の変換を触媒する、方法。
【請求項２】
前記特異的結合部分がオリゴヌクレオチド断片又は抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記酵素が酸化還元酵素又はペルオキシダーゼである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の反応性部分が、前記生体試料のチロシン残基、前記第１のラベリングコンジュゲート、前記第１の検出プローブ、又はこれらの組み合わせと反応する、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ハプテンが、オキサゾールハプテン、ピラゾールハプテン、チアゾールハプテン、ニトロアリールハプテン、ベンゾフランハプテン、トリテルペンハプテン、尿素ハプテン、チオ尿素ハプテン、ロテノイドハプテン、クマリンハプテン、シクロリグナンハプテン、ジニトロフェニルハプテン、ビオチンハプテン、ジゴキシゲニンハプテン、フルオレセインハプテン、及びローダミンハプテンからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記シグナリングコンジュゲートによる光の吸光度が、入射光の少なくとも約５％又は入射光の少なくとも約２０％の吸光度を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記第１のシグナリングコンジュゲートによる光の吸光度を通して前記標的を検出することが、赤、橙、黄、緑、藍又は紫から選択される第１の着色シグナルを検出することを含み、前記第１の着色シグナルが前記第１のシグナリングコンジュゲートの前記第１の発色部分に関連するスペクトル吸光度に関連する、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記第１のシグナリングコンジュゲートの前記第１の発色部分に関連する前記スペクトル吸光度が、約３０ｎｍ〜約２５０ｎｍの間、約３０ｎｍ〜約１５０ｎｍの間、約３０ｎｍ〜約１００ｎｍの間又は約２０ｎｍ〜約６０ｎｍの間の半値全幅（ＦＷＨＭ）を有する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
検出が、明視野顕微鏡又は同等のデジタルスキャナーを使用することを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記生体試料に光を照射することが、前記生体試料にスペクトルが狭い光源を照射することを含み、前記スペクトルが狭い光源が約３０ｎｍ〜約２５０ｎｍの間、約３０ｎｍ〜約１５０ｎｍの間、約３０ｎｍ〜約１００ｎｍの間又は約２０ｎｍ〜約６０ｎｍの間の第２の半値全幅（ＦＷＨＭ）を有するスペクトル放射を有し、場合によって、前記生体試料に光を照射することが、前記生体試料にＬＥＤ光源か又はフィルタリングした光源を照射することを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記生体試料を酵素阻害剤と接触させることと；
前記生体試料をハプテン及び第２の標的と特異的に結合することができる特異的結合部分を含む第２の検出プローブと接触させることと；
前記生体試料を、第２の酵素及び第２の酵素に結合されており、前記第２の検出プローブと選択的に結合する第２の抗ハプテン抗体を含む第２のラベリングコンジュゲートと接触させることと；
前記生体試料を、第２の潜在的反応性部分及び第２の発色部分を含む第２のシグナリングコンジュゲートと接触させることと
をさらに含み、前記第２の酵素が、前記第２の標的の近位で又は前記第２の標的上で直接的に生体試料と共有結合する第２の反応性部分への前記第２の潜在的反応性部分の変換を触媒する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の酵素と前記第２の酵素が同じである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
第３、第４、第５又は第６の標的を検出することをさらに含み、前記第３、第４、第５又は第６の標的を検出することが、
前記生体試料を合計３〜６個の検出プローブと接触させることと；
前記生体試料を、３〜６個のラベリングコンジュゲートのそれぞれが、酵素及び前記酵素と結合した抗ハプテン抗体を含む、合計３〜６個のラベリングコンジュゲートと接触させることと；
前記生体試料を、３〜６個のシグナリングコンジュゲートのそれぞれが、潜在的反応性部分及び発色部分を含む、合計３〜６個のシグナリングコンジュゲートと接触させることと
を含み、前記３〜６個のラベリングコンジュゲートの前記酵素が、それぞれ前記第３、第４、第５又は第６の標的の近位で又は前記第３、第４、第５又は第６の標的上で直接的に前記生体試料と共有結合する３〜６個の反応性部分への前記３〜６個の潜在的反応性部分の変換を触媒する、請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記生体試料を前記３〜６個のシグナリングコンジュゲートの１つと接触させる前に、前記生体試料を酵素阻害剤と接触させることをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記３〜６個の標的を検出することが、赤、橙、黄、緑、藍又は紫から選択される合計３〜６個の着色シグナルを検出することにより、前記３〜６個のシグナリングコンジュゲートによる光の吸光度を検出することを含み、前記合計３〜６個の着色シグナルが前記３〜６個のシグナリングコンジュゲートの前記合計３〜６個の発色部分に関連するスペクトル吸光度に関連し、前記３〜６個の発色部分の前記スペクトル吸光度が互いに異なる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記第１の標的及び前記第２の標的が遺伝子核酸であり、
前記第１のシグナリングコンジュゲートによる光の吸光度を通して前記第１の標的を検出することが、前記第１のシグナリングコンジュゲートの前記第１の発色部分に関連するスペクトル吸光度に関連する、赤、橙、黄、緑、藍又は紫から選択される第１の着色シグナルを検出することを含み；
前記第２のシグナリングコンジュゲートによる光の吸光度を通して前記第２の標的を検出することが、前記第２のシグナリングコンジュゲートの前記第２の発色部分に関連するスペクトル吸光度に関連する、赤、橙、黄、緑、藍又は紫から選択される第２の着色シグナルを検出することを含み；
前記第２のシグナリングコンジュゲートに近接して重複する前記第１のシグナリングコンジュゲートによる光の吸光度を通して近接した重複を検出して、前記第１のスペクトル吸光度及び前記第２のスペクトル吸光度の重複スペクトル吸光度に関連する第３の着色シグナルを生じさせる、
請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記第３の着色シグナルが正常な遺伝子配列を示し、前記第１及び第２の着色シグナルが遺伝子再配列又は転座を示す、請求項１６に記載の方法。