【手続補正書】
【提出日】平成26年12月9日(2014.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
栄養膜細胞表面抗原−２（Ｔｒｏｐ−２）に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、
（ａ）（ｉ）配列ＳＹＧＶＨ（配列番号３０）、ＧＧＳＩＳＳＹ（配列番号３６）、もしくはＧＧＳＩＳＳＹＧＶＨ（配列番号３７）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列ＶＩＷＴＸ１ＧＸ２ＴＤＹＮＳＡＬＭＸ３（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳであり、Ｘ２は、ＳもしくはＶであり、Ｘ３は、ＳもしくはＧである）（配列番号４９）、もしくはＷＴＸ１ＧＸ２（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳであり、Ｘ２は、ＳもしくはＶである）（配列番号５０）を含むＶＨ  ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列ＤＹＤＲＹＴＸ１ＤＹ（式中、Ｘ１、はＥもしくはＭである）（配列番号８２）を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域相補性決定領域、ならびに／または
（ｂ）（ｉ）配列ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＸ１ＹＳＹＭＨ（式中、Ｘ１は、Ｇ、Ｌ、もしくはＮである）（配列番号６３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号５５）を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＱＨＳＲＥＬＰＹＴ（配列番号５６）を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域相補性決定領域
を含む、単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、
配列番号５もしくは８５に示したＶＨ配列のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに／または
配列番号３もしくは６に示したＶＬ配列のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域
を含む、単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
ＶＨ領域が、（ｉ）配列ＳＹＧＶＨ（配列番号３０）、ＧＧＳＩＳＳＹ（配列番号３６）、またはＧＧＳＩＳＳＹＧＶＨ（配列番号３７）を含むＶＨ  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＶＩＷＴＳＧＶＴＤＹＮＳＡＬＭＧ（配列番号３８）またはＷＴＳＧＶ（配列番号３９）を含むＶＨ  ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹ（配列番号３５）、ＤＹＤＲＹＴＭＤＹ（配列番号９９）、またはＤＹＤＲＹＴＥＤＹ（配列番号１００）を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含む、請求項２に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項４】
ＶＬ領域が、（ｉ）配列ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨ（配列番号５４）またはＲＡＳＫＳＶＳＴＳＬＹＳＹＭＨ（配列番号５７）を含むＶＬ  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号５５）を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＱＨＳＲＥＬＰＹＴ（配列番号５６）を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む、請求項３に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項５】
ＶＨ領域が、配列番号５、８５に示した配列、またはＣＤＲ内にない残基中に１つもしくはいくつかの保存的アミノ酸置換を有するバリアントを含み、かつ／またはＶＬ領域が、配列番号３、６に示したアミノ酸配列、またはＣＤＲ内にないアミノ酸中に１つもしくはいくつかのアミノ酸置換を有するそのバリアントを含む、請求項４に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項６】
配列番号６６に示した配列を含む軽鎖、および配列番号６５または１０２に示した配列を含む重鎖を含む、請求項５に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項７】
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８７２を有する発現ベクターによって生成されるＶＨ領域を含む、請求項３に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項８】
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８７１を有する発現ベクターによって生成されるＶＬ領域を含む、請求項４に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項９】
表面プラズモン共鳴によって測定して約６．５ｎＭ以下の一価抗体結合親和性（ＫＤ）でヒトＴｒｏｐ−２（配列番号２７）のドメイン３およびドメイン４に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、
（ａ）（ｉ）配列ＳＹＷＩＮ（配列番号４０）、ＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号４１）、もしくはＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮ（配列番号４２）を含む重鎖可変（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列ＮＩＸ１ＰＳＤＳＹＳＮＹＮＸ２ＫＦＫＤ（式中、Ｘ１は、ＹもしくはＦであり、Ｘ２は、ＱもしくはＫである）（配列番号５１）、もしくはＸ１ＰＳＤＳＹ（式中、Ｘ１は、ＹもしくはＦである）（配列番号５２）を含むＶＨ  ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列ＧＳＸ１ＦＤＹ（式中、Ｘ１は、ＳもしくはＧである）（配列番号５３）を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域相補性決定領域、ならびに／または
（ｂ）（ｉ）配列ＲＡＳＱＴＩＧＴＳＩＨ（配列番号５９）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＹＡＳＥＳＩＳ（配列番号６０）を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列Ｘ１ＱＳＸ２ＳＷＰＦＴ（Ｘ１は、ＱもしくはＳであり、Ｘ２は、ＮもしくＦである）（配列番号６４）を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域相補性決定領域
を含む、単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、
配列番号１３に示したＶＨ配列のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに／または
配列番号１２に示したＶＬ配列のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域
を含む、単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
ＶＨ領域が、（ｉ）配列ＳＹＷＩＮ（配列番号４０）、ＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号４１）、またはＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮ（配列番号４２）を含むＶＨ  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＮＩＦＰＳＤＳＹＳＮＹＮＫＫＦＫＤ（配列番号４６）またはＦＰＳＤＳＹ（配列番号４７）を含むＶＨ  ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＧＳＧＦＤＹ（配列番号４８）を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含む、請求項１１に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１３】
ＶＬ領域が、（ｉ）配列ＲＡＳＱＴＩＧＴＳＩＨ（配列番号５９）を含むＶＬ  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＹＡＳＥＳＩＳ（配列番号６０）を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＳＱＳＦＳＷＰＦＴ（配列番号６２）を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む、請求項１２に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１４】
ＶＨ領域が、配列番号１３に示した配列、またはＣＤＲ内にない残基中に１つもしくはいくつかの保存的アミノ酸置換を有するバリアントを含み、かつ／またはＶＬ領域が、配列番号１２に示したアミノ酸配列、またはＣＤＲ内にないアミノ酸中に１つもしくはいくつかのアミノ酸置換を有するそのバリアントを含む、請求項１３に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１５】
配列番号６８に示した配列を含む軽鎖、および配列番号６７に示した配列を含む重鎖を含む、請求項１４に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１６】
Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合し、請求項２または４に記載の抗体と競合する単離抗体。
【請求項１７】
表面プラズモン共鳴によって測定して、約６．５ｎＭ以下の一価抗体結合親和性（ＫＤ）を有する、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１８】
特定の部位で遺伝子工学的に改変されたアシルドナーグルタミン含有タグを含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９】
タグが、アミノ酸配列ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）、ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）、またはＬＬＱを含む、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２０】
２２２位、３４０位、または３７０位でアミノ酸修飾をさらに含む、請求項１９に記載の抗体。
【請求項２１】
アミノ酸修飾が、リシンからアルギニンへの置換である、請求項２０に記載の抗体。
【請求項２２】
請求項１から１５および１８から２１のいずれか一項に記載の、抗体または抗原結合断片のコンジュゲートであって、抗体または抗原結合断片が、細胞毒性剤、免疫調節剤、造影剤、治療用タンパク質、バイオポリマー、およびオリゴヌクレオチドからなる群から選択される作用物質にコンジュゲートしている、コンジュゲート。
【請求項２３】
作用物質が細胞毒性剤である、請求項２２に記載のコンジュゲート。
【請求項２４】
細胞毒性剤が、ＭＭＡＤ（モノメチルオーリスタチンＤ）、または０１０１（２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）である、請求項２３に記載のコンジュゲート。
【請求項２５】
式：抗体−（アシルドナーグルタミン含有タグ）−（リンカー）−（細胞毒性剤）を有する、請求項２４に記載のコンジュゲート。
【請求項２６】
アシルドナーグルタミン含有タグが、アミノ酸配列ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）、ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）、ＬＬＱ、またはＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＰであり、Ｘ２は、Ａ、Ｇ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ３は、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ４は、Ｇ、Ｋであるかもしくは存在せず、Ｘ５は、Ｋであるかもしくは存在しない）（配列番号８８）を含み、リンカーが、アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル、またはアミノ−ＰＥＧ６−プロピオニルを含む、請求項２５に記載のコンジュゲート。
【請求項２７】
１）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−（アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ））−０１０１、２）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤ、３）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、４）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤ、５）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、および６）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤからなる群から選択される、請求項２６に記載のコンジュゲート。
【請求項２８】
コンジュゲート１）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、２）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤ、３）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、４）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤ、５）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、または６）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤが、該抗体の２２２位でリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含む、請求項２７に記載のコンジュゲート。
【請求項２９】
コンジュゲートが、１）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、２）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤ、３）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、または４）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤであって、かつ、抗体の重鎖のＣ末端におけるアミノ酸リシンが欠失している、請求項２７に記載のコンジュゲート。
【請求項３０】
前記抗体のＮ２９７Ｑ位およびＫ２２２Ｒ位におけるアミノ酸置換、アミノ−ＰＥＧ６−プロピオニルを含むリンカー、ならびにＭＭＡＤを含む細胞毒性剤を含む、請求項２４に記載のコンジュゲート。
【請求項３１】
コンジュゲートが、抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１であって、該抗体の２２２位でリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含み、該抗体の重鎖のＣ末端におけるアミノ酸リシンが欠失している、請求項２４に記載のコンジュゲート。
【請求項３２】
治療有効量の請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗体または請求項２２から３１のいずれか一項に記載のコンジュゲート、および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
【請求項３３】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。
【請求項３４】
請求項３３に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項３５】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗体を組換え産生する単離宿主細胞。
【請求項３６】
抗体を生成する方法であって、抗体の産生をもたらす条件下で請求項３５に記載の宿主細胞を培養するステップと、宿主細胞または培養物から抗体を単離するステップとを含む、方法。
【請求項３７】
対象におけるＴｒｏｐ−２発現に関連する状態を治療する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項３２に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項３８】
状態ががんである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
がんが、膀胱、乳房、子宮頸部、絨毛癌、大腸、食道、胃、グリア芽細胞腫、頭頸部、腎臓、肺、口腔、卵巣、膵臓、前立腺、および皮膚のがんからなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
Ｔｒｏｐ−２発現腫瘍を有する対象における腫瘍増殖または進行を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項３２に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項４１】
対象におけるＴｒｏｐ−２発現がん細胞の転移を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項３２に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項４２】
Ｔｒｏｐ−２発現腫瘍を有する対象における腫瘍退縮を誘導する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項３２に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図４】
2014534233.tif 000001
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図５】
2014534233.tif 000002