【手続補正書】
【提出日】平成27年3月19日(2015.3.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
環境汚染物質の生物的環境浄化で使用するための組成物であって、
１種以上の芳香族カチオン性ペプチドを発現する組み換え細菌を含み、
該芳香族カチオン性ペプチドが以下のペプチド：
【化１】
2014520246.tif 000001
【化２】
2014520246.tif 000002
【化３】
2014520246.tif 000003
からなる群より選ばれることを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記組み換え細菌が、前記１種以上の芳香族カチオン性ペプチドをコードする核酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記核酸配列が、誘導プロモータの制御下で発現する、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記核酸配列が、構成的プロモータの制御下で発現する、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記核酸配列がプラスミドＤＮＡを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
前記核酸配列がゲノムインサートを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項７】
前記組み換え細菌が、表７に挙げた細菌種由来である、請求項１に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５９】
（０２７０）  他の実施形態は以下の請求項で示される。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕チトクロムｃ含有試料においてチトクロムｃ還元を増加させる方法であって、
試料を有効量のペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2と接触させることを含む
ことを特徴とする方法。
〔２〕チトクロムｃ含有試料においてチトクロムｃを通る電子拡散を強化する方法であって、
試料を有効量のペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2と接触させることを含む
ことを特徴とする方法。
〔３〕チトクロムｃ含有試料においてチトクロムｃ周囲にπ−π相互作用を引き起こす方法であって、
試料を有効量のペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2と接触させることを含む
ことを特徴とする方法。
〔４〕センサであって、
あるレベルのペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2をドープしたチトクロムｃと、前記ペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2のレベルの変化によって引き起こされるチトクロムｃの性質における変化を測定するための計測器とを含む
ことを特徴とするセンサ。
〔５〕前記ペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2のレベルが、前記チトクロムｃの温度及び前記チトクロムｃのｐＨの少なくとも一方における変動に応答して変化する、前記〔４〕に記載のセンサ。
〔６〕前記性質が導電率であり、前記計測器が、前記チトクロムｃと電気的に連通するアノード及びカソードを含む、前記〔４〕に記載のセンサ。
〔７〕前記性質がフォトルミネッセンスであり、前記計測器が、前記チトクロムｃが放出する光の強度及び前記チトクロムｃが放出する光の波長の少なくとも一方における変化を測定するための光検出器を含む、前記〔４〕に記載のセンサ。
〔８〕検出方法であって、
ペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2のレベルにおける変化によって引き起こされる、あるレベルのペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2をドープしたチトクロムｃの性質における変化を測定することを含む
ことを特徴とする方法。
〔９〕前記ペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2のレベルが、前記チトクロムｃの温度及び前記チトクロムｃのｐＨの少なくとも一方における変動に応
答して変化する、前記〔８〕に記載の方法。
〔１１〕前記性質が、導電率、フォトルミネッセンス強度及びフォトルミネッセンス波長の少なくとも１つである、前記〔８〕に記載の方法。
〔１２〕スイッチであって、
チトクロムｃと、前記チトクロムｃと通じているペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2のソースと、前記チトクロムｃと通じている前記ペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2の量を制御するためのアクチュエータとを含む
ことを特徴とするスイッチ。
〔１３〕前記アクチュエータが、前記チトクロムｃの温度及び前記チトクロムｃのｐＨの少なくとも一方を制御する、前記〔１１〕に記載のスイッチ。
〔１４〕スイッチング方法であって、
チトクロムｃと通じているペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2のレベルを変化させることを含む
ことを特徴とする方法。
〔１５〕前記ペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2のレベルを変化させることが、前記チトクロムｃの温度及び前記チトクロムｃのｐＨの少なくとも一方を変化させることを含む、前記〔１３〕に記載の方法。
〔１６〕発光素子であって、
有効量のペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2をドープしたチトクロムｃと、前記チトクロムｃからの光の放出を刺激するためのソースとを含む
ことを特徴とする発光素子。
〔１７〕発光方法であって、
有効量のペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2をドープしたチトクロムｃを刺激することを含む
ことを特徴とする方法。
〔１８〕前記試料が、センサ、コンダクタ、スイッチ又は発光素子の部品を含む、前記〔１〕−〔３〕のいずれかに記載の方法。
〔１９〕バイオセンサであって、
ペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2をドープしたチトクロムｃを含む
ことを特徴とするバイオセンサ。
〔２０〕前記ペプチドドープチトクロムｃが、電極への電子流におけるメディエータを含む、前記〔１９〕に記載のバイオセンサ。
〔２１〕前記ペプチドドープチトクロムｃが電極上に直接固定される、前記〔１９〕に記載のバイオセンサ。
〔２２〕前記ペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2及び／又はチトクロムｃが前記バイオセンサ内の表面に固定される、前記〔１９〕に記載のバイオセンサ。
〔２３〕前記ペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2及び／又はチトクロムｃが前記バイオセンサ内で自由に拡散可能である、前記〔１９〕に記載のバイオセンサ。
〔２４〕試料における基質の検出方法であって、
（ａ）試料を、
（ｉ）基質特異性の酸化還元活性酵素と、
（ｉｉ）ペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2をドープしたチトクロムｃと、
（ｉｉｉ）電極
とを含むバイオセンサと接触させ、
（ｂ）前記バイオセンサ内で電子の流れを検出することを含む
ことを特徴とする方法。
〔２５〕前記ペプチドドープチトクロムｃが、電極への電子流におけるメディエータを含む、前記〔２４〕に記載の方法。
〔２６〕前記ペプチドドープチトクロムｃが電極上に直接固定される、前記〔２４〕に記載の方法。
〔２７〕前記ペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2及び／又はチトクロムｃが前記バイオセンサ内の表面に固定される、前記〔２４〕に記載の方法。
〔２８〕前記ペプチドＤ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2及び／又はチトクロムｃが前記バイオセンサ内で自由に拡散可能である、前記〔２４〕に記載の方法。
〔２９〕環境汚染物質の生物的環境浄化で使用するための組成物であって、
１種以上の芳香族カチオン性ペプチドを発現する組み換え細菌を含む
ことを特徴とする組成物。
〔３０〕前記組み換え細菌が、前記１種以上の芳香族カチオン性ペプチドをコードする核酸配列を含む、前記〔２９〕に記載の組成物。
〔３１〕前記核酸配列が、誘導プロモータの制御下で発現する、前記〔３０〕に記載の組成物。
〔３２〕前記核酸配列が、構成的プロモータの制御下で発現する、前記〔３０〕に記載の組成物。
〔３３〕前記核酸配列がプラスミドＤＮＡを含む、前記〔３０〕に記載の組成物。
〔３４〕前記核酸配列がゲノムインサートを含む、前記〔３０〕に記載の組成物。
〔３５〕前記組み換え細菌が、表７に挙げた細菌種由来である、前記〔２９〕に記載の組成物。
〔３６〕環境汚染物質の生物的環境浄化方法であって、
環境汚染物質含有材料を、１種以上の芳香族カチオン性ペプチドを発現している組み換え細菌を含む生物的環境浄化組成物と接触させることを含む
ことを特徴とする方法。
〔３７〕前記環境汚染物質が金属を含む、前記〔３６〕に記載の方法。
〔３８〕前記金属が、Ｓｃ、Ｔｉ、Ｖ、Ｃｒ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｙ、Ｚｒ、Ｎｂ、Ｍｏ、Ｔｃ、Ｒｕ、Ｐｄ、Ａｇ、Ｃｄ、Ｈｆ、Ｔａ、Ｗ、Ｒｅ、Ｏｓ、Ｉｒ、Ｐｔ、Ａｕ、Ｈｇ、Ｒｆ、Ｄｂ、Ｓｇ、Ｂｈ、Ｈｓ、Ｃｎ、Ａｌ、Ｇａ、Ｉｎ、Ｓｎ、Ｔｉ、Ｐｂ又はＢｉを含む、前記〔３７〕に記載の方法。
〔３９〕前記環境汚染物質が非金属を含む、前記〔３６〕に記載の方法。
〔４０〕前記非金属がサルフェートを含む、前記〔３９〕に記載の方法。
〔４１〕前記環境汚染物質がパークロレートを含む、前記〔３６〕に記載の方法。
〔４２〕前記パークロレートが、ＮＨ4ＣｌＯ4、ＣｓＣｌＯ4、ＬｉＣｌＯ4、Ｍｇ（ＣｌＯ4）2、ＨＣｌＯ4、ＫＣｌＯ4、ＲｂＣｌＯ4、ＡｇＣｌＯ4又はＮａＣｌＯ4を含む、前記〔４１〕に記載の方法。
〔４３〕前記環境汚染物質がニトレートを含む、前記〔３６〕に記載の方法。
〔４４〕前記ニトレートが、ＨＮＯ3、ＬｉＮＯ3、ＮａＮＯ3、ＫＮＯ3、ＲｂＮＯ3、ＣｓＮＯ3、Ｂｅ（ＮＯ3）2、Ｍｇ（ＮＯ3）2、Ｃａ（ＮＯ3）2、Ｓｒ（ＮＯ3）2、Ｂａ（ＮＯ3）2、Ｓｃ（ＮＯ3）3、Ｃｒ（ＮＯ3）3、Ｍｎ（ＮＯ3）2、Ｆｅ（ＮＯ3）3、Ｃｏ（ＮＯ3）2、Ｎｉ（ＮＯ3）2、Ｃｕ（ＮＯ3）2、Ｚｎ（ＮＯ3）2、Ｐｄ（ＮＯ3）2、Ｃｄ（ＮＯ3）2、Ｈｇ（ＮＯ3）2、Ｐｂ（ＮＯ3）2又はＡｌ（ＮＯ3）3を含む、前記〔４３〕に記載の方法。
〔４５〕前記環境汚染物質が放射性核種を含む、前記〔３６〕に記載の方法。
〔４６〕前記放射性核種がアクチニドを含む、前記〔４５〕に記載の方法。
〔４７〕前記放射性核種がウラニウムを含む、前記〔４５〕に記載の方法。
〔４８〕前記環境汚染物質が、メチル−ｔｅｒｔ−ブチル−エーテル（ＭＴＢＥ）、塩化ビニル又はジクロロエチレンを含む、前記〔３６〕に記載の方法。
〔４９〕生物的環境浄化をインシチュで行う、前記〔３６〕に記載の方法。
〔５０〕生物的環境浄化をエクスシチュで行う、前記〔３６〕に記載の方法。
〔５１〕前記細菌が、前記１種以上の芳香族カチオン性ペプチドをコードする核酸配列を含む、前記〔３６〕に記載の方法。
〔５２〕前記核酸配列が、誘導プロモータの制御下で発現する、前記〔５１〕に記載の方法。
〔５３〕前記核酸配列が、構成的プロモータの制御下で発現する、前記〔５１〕に記載の方法。
〔５４〕前記核酸配列がプラスミドＤＮＡを含む、前記〔５１〕に記載の方法。
〔５５〕前記核酸配列がゲノムインサートを含む、前記〔５１〕に記載の方法。
〔５６〕前記組み換え細菌が、表７に挙げた細菌種由来である、前記〔３６〕に記載の方法。
〔５７〕前記芳香族カチオン性ペプチドが、Ｄ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2を含む、前記〔３６〕−〔５６〕のいずれかに記載の方法。