【手続補正書】
【提出日】平成27年5月29日(2015.5.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
操作されたＺｎフィンガータンパク質ＤＮＡ結合ドメインを含むタンパク質であって、前記ＤＮＡ結合ドメインが、Ｎ末端からＣ末端に向かってＦ１からＦ４、Ｆ１からＦ５またはＦ１からＦ６と配列された４、５または６つのＺｎフィンガー認識領域を含み、前記Ｆ１からＦ４、Ｆ１からＦ５またはＦ１からＦ６が表１の単一列に示される配列を含む、上記タンパク質。
【請求項２】
請求項１に記載のタンパク質および野生型のまたは操作された切断ドメインまたは切断ハーフドメインを含む融合タンパク質。
【請求項３】
請求項１または請求項２に記載のタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項４】
請求項１もしくは２に記載のタンパク質または請求項３に記載のポリヌクレオチドを含む単離細胞。
【請求項５】
前記細胞が胚性幹細胞（ＥＳＣ）、造血幹細胞、神経幹細胞、皮膚幹細胞、筋幹細胞、肺幹細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）および線維芽細胞からなる群から選択される、請求項４に記載の細胞。
【請求項６】
細胞における嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子を改変するための組成物であって、
ＣＦＴＲを切断する一つまたは複数の請求項２に記載の融合タンパク質を含む上記組成物。
【請求項７】
前記改変が、挿入、欠失、置換およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
ＣＦＴＲ遺伝子に導入される外来性配列をさらに含む、請求項６または請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記改変がＣＦＴＲ遺伝子における変異を修復する、請求項６〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記変異がΔＦ５０８、ΔＩ５０７およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
嚢胞性線維症（ＣＦ）の研究用モデル系を作製するための、細胞を改変する請求項６〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記モデル系が細胞株または非ヒト動物を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
対象においてＣＦを治療するための、請求項９または１０に記載の組成物であって、前記組成物が、前記対象の一つまたは複数の細胞におけるＣＦＴＲ遺伝子を改変することを特徴とする、上記組成物。
【請求項１４】
前記細胞がインビトロで改変され、前記細胞が前記対象に投与されることを特徴とする、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載のタンパク質、請求項２に記載の融合タンパク質、または請求項３に記載のポリヌクレオチドを含むキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
これらの態様および他の態様は、下記の実施形態を含む全体としての本開示を考慮することにより、当業者には容易に明らかになるであろう。
１．
操作されたＺｎフィンガータンパク質ＤＮＡ結合ドメインを含むタンパク質であって、前記ＤＮＡ結合ドメインが、Ｎ末端からＣ末端に向かってＦ１からＦ４、Ｆ１からＦ５またはＦ１からＦ６と配列された４、５または６つのＺｎフィンガー認識領域を含み、前記Ｆ１からＦ４、Ｆ１からＦ５またはＦ１からＦ６が表１の単一列に示される配列を含む、上記タンパク質。
２．
実施形態１に記載のタンパク質および野生型のまたは操作された切断ドメインまたは切断ハーフドメインを含む融合タンパク質。
３．
実施形態１または２に記載のタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
４．
実施形態１もしくは２に記載のタンパク質または実施形態３に記載のポリヌクレオチドを含む単離細胞。
５．
前記細胞が胚性幹細胞（ＥＳＣ）、造血幹細胞、神経幹細胞、皮膚幹細胞、筋幹細胞、肺幹細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）および線維芽細胞からなる群から選択される、実施形態４に記載の細胞。
６．
細胞における嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子または肺サーファクタントタンパク質Ｂ（ＳＰ−Ｂ）遺伝子を改変する方法であって、ＣＦＴＲまたはＳＰ−Ｂに標的化された一つまたは複数の融合タンパク質を用いてＣＦＴＲまたはＳＰ−Ｂ遺伝子を切断することを含み、該融合タンパク質が実施形態２に記載の融合タンパク質およびＳＰ−Ｂに標的化されたヌクレアーゼからなる群から選択される、上記方法。
７．
前記改変が、挿入、欠失、置換およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態６に記載の方法。
８．
ＣＦＴＲまたはＳＰ−Ｂ遺伝子に外来性配列を導入することをさらに含む、実施形態６または７に記載の方法。
９．
前記改変がＣＦＴＲまたはＳＰ−Ｂ遺伝子における変異を修復する、実施形態６〜８のいずれか１項に記載の方法。
１０．
前記変異がΔＦ５０８、ΔＩ５０７、１２１ｉｎｓ２およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態９に記載の方法。
１１．
嚢胞性線維症（ＣＦ）または肺サーファクタントタンパク質Ｂ欠損症の研究用モデル系を作製する方法であって、実施形態６〜１０のいずれかの方法に従って細胞を改変することを含む、上記方法。
１２．
前記モデル系が細胞株または非ヒト動物を含む、実施形態１１に記載の方法。
１３．
対象においてＣＦまたはＳＰ−Ｂ欠損症を治療する方法であって、実施形態９または１０に記載の方法に従って、前記対象の一つまたは複数の細胞におけるＣＦＴＲまたはＳＰ−Ｂ遺伝子を改変することを含む、上記方法。
１４．
前記細胞がインビトロで改変され、前記細胞が前記対象に投与される、実施形態１３に記載の方法。
１５．
実施形態１に記載のタンパク質、実施形態２に記載の融合タンパク質、または実施形態３に記載のポリヌクレオチドを含むキット。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
操作されたＺｎフィンガータンパク質ＤＮＡ結合ドメインを含むタンパク質であって、前記ＤＮＡ結合ドメインが、Ｎ末端からＣ末端に向かってＦ１からＦ４、Ｆ１からＦ５またはＦ１からＦ６と配列された４、５または６つのＺｎフィンガー認識領域を含み、前記Ｆ１からＦ４、Ｆ１からＦ５またはＦ１からＦ６が表１の単一列に示される配列を含む、上記タンパク質。
（項目２）
項目１に記載のタンパク質および野生型のまたは操作された切断ドメインまたは切断ハーフドメインを含む融合タンパク質。
（項目３）
項目１または項目２に記載のタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
（項目４）
項目１もしくは２に記載のタンパク質または項目３に記載のポリヌクレオチドを含む単離細胞。
（項目５）
前記細胞が胚性幹細胞（ＥＳＣ）、造血幹細胞、神経幹細胞、皮膚幹細胞、筋幹細胞、肺幹細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）および線維芽細胞からなる群から選択される、項目４に記載の細胞。
（項目６）
細胞における嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子を改変する方法であって、
一つまたは複数の項目２に記載の融合タンパク質を用いてＣＦＴＲを切断すること、を含む上記方法。
（項目７）
前記改変が、挿入、欠失、置換およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、項目６に記載の方法。
（項目８）
ＣＦＴＲ遺伝子に外来性配列を導入することをさらに含む、項目６または項目７に記載の方法。
（項目９）
前記改変がＣＦＴＲ遺伝子における変異を修復する、項目６〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記変異がΔＦ５０８、ΔＩ５０７およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、項目９に記載の方法。
（項目１１）
嚢胞性線維症（ＣＦ）の研究用モデル系を作製する方法であって、項目６〜１０のいずれかの方法に従って細胞を改変することを含む、上記方法。
（項目１２）
前記モデル系が細胞株または非ヒト動物を含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
対象においてＣＦを治療する方法であって、項目９または１０に記載の方法に従って、前記対象の一つまたは複数の細胞におけるＣＦＴＲ遺伝子を改変することを含む、上記方法。
（項目１４）
前記細胞がインビトロで改変され、前記細胞が前記対象に投与される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
項目１に記載のタンパク質、項目２に記載の融合タンパク質、または項目３に記載のポリヌクレオチドを含むキット。