【手続補正書】
【提出日】平成27年7月2日(2015.7.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
連続水相中に分散された粒子を含む安定な水中油型エマルジョンであって、該粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜１８０ｎｍであり；該エマルジョンが油とカチオン性脂質とを含み、ここで：
（ｉ）油：脂質（モル：モル）の比が少なくとも約８：１（モル：モル）であり；
（ｉｉ）該エマルジョン中のカチオン性脂質の濃度が少なくとも約２．５ｍＭであり；および
（ｉｉｉ）該カチオン性脂質がＤＣ−コレステロールではない、水中油型エマルジョン。
【請求項２】
油：脂質（モル：モル）の比が約１０：１（モル：モル）〜約４３：１（モル：モル）である、請求項１に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項３】
前記水中油型エマルジョンが約０．２％〜約８％（ｗ／ｖ）の油を含む、請求項１または２に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項４】
前記油がスクアレンまたはスクアランである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項５】
前記粒子が、さらに界面活性剤を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項６】
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である、請求項５に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項７】
カチオン性水中油型エマルジョンが約０．０１％〜約２．５％（ｖ／ｖ）の界面活性剤を含み、
該界面活性剤がＳＰＡＮ８５（ソルビタントリオレエート）、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリソルベート８０）またはそれらの組合せである、請求項５〜６のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項８】
前記カチオン性脂質の頭部が第４級アミンを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項９】
前記カチオン性脂質が：１，２−ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）、Ｎ，Ｎ−ジオレオイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、およびＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１０】
前記カチオン性脂質が、約２．５８ｍＭ（１．８ｍｇ／ｍＬ）〜約７．１６ｍＭ（５ｍｇ／ｍＬ）の濃度のＤＯＴＡＰである、請求項９に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョンの調製方法であって、（ａ）前記カチオン性脂質を前記油に直接溶解させ、油相を形成すること；（ｂ）該エマルジョンの水相を提供すること；および（ｃ）該油相を該水相中に均質化によって分散させることを含む、方法。
【請求項１２】
ステップ（ａ）がさらに、前記油を約３０℃〜約６５℃の温度まで加熱することを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
安定なカチオン性水中油型エマルジョンの粒子と複合体を形成したＲＮＡ分子を含む組成物であって、該粒子が、２５℃で液相である油、およびカチオン性脂質を含み；ここで：
（ｉ）油：脂質（モル：モル）の比が少なくとも約８：１（モル：モル）であり；
（ｉｉ）該組成物中のカチオン性脂質の濃度が少なくとも約１．２５ｍＭであり；および
（ｉｉｉ）該カチオン性脂質がＤＣ−コレステロールではない、組成物。
【請求項１４】
前記粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜１８０ｎｍである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物のＮ／Ｐ比が約４：１〜約２０：１である、請求項１３〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記水中油型エマルジョンが約０．１％〜約５％（ｗ／ｖ）の油を含む、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記油がスクアレンまたはスクアランである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
カチオン性水中油型エマルジョンの粒子と複合体を形成したＲＮＡ分子を含む組成物の調製方法であって：
（ｉ）請求項１〜１０のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョンを提供すること；
（ｉｉ）該ＲＮＡ分子を含む水性溶液を提供すること；および
（ｉｉｉ）（ｉ）の該水中油型エマルジョンと（ｉｉ）の該水性溶液とを合わせ、それにより該組成物を調製することを含む、調製方法。
【請求項１９】
（ｉ）の前記カチオン性水中油型エマルジョンと（ｉｉ）のＲＮＡ溶液とを約１：１（ｖ／ｖ）の比で合わせる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＲＮＡ分子を含む前記水性溶液が、スクロース、トレハロース、ソルビトール、デキストロースおよびそれらの組合せからなる群より選択される非イオン性張度調整剤を含む、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＲＮＡ分子が、２つ以上の抗原をコードするポリシストロン性ＲＮＡである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２２】
被験体において免疫応答を生じさせるための、請求項１３〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
また、本発明は、被験体において免疫応答を生じさせる方法であって、本明細書に記載されるとおりの組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法に関する。好ましくは、単回投与で被験体に投与される（該組成物の一成分として）カチオン性脂質の量は約３０ｍｇ以下である。特定の実施形態では、カチオン性脂質がＤＯＴＡＰであり、単回投与で被験体に投与されるＤＯＴＡＰの総量が約２４ｍｇ以下または約４ｍｇ以下である。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
連続水相中に分散された粒子を含む水中油型エマルジョンであって、該粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜１８０ｎｍであり；該エマルジョンが油とカチオン性脂質とを含み、ここで：
（ｉ）油：脂質（モル：モル）の比が少なくとも約８：１（モル：モル）であり；
（ｉｉ）該エマルジョン中のカチオン性脂質の濃度が少なくとも約２．５ｍＭであり；および
（ｉｉｉ）該カチオン性脂質がＤＣ−コレステロールではない、水中油型エマルジョン。
（項目２）
前記粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜約１５０ｎｍである、項目１に記載の水中油型エマルジョン。
（項目３）
前記粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜約１３０ｎｍである、項目１または２に記載の水中油型エマルジョン。
（項目４）
前記水中油型エマルジョンが安定である、項目１〜３のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目５）
油：脂質（モル：モル）の比が約１０：１（モル：モル）〜約４３：１（モル：モル）である、項目１〜４のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目６）
前記水中油型エマルジョンが約０．２％〜約８％（ｗ／ｖ）の油を含む、項目１〜５のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目７）
前記油がスクアレンまたはスクアランである、項目１〜６のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目８）
前記粒子が、さらに界面活性剤を含む、項目１〜７のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目９）
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である、項目８に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１０）
前記界面活性剤がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂質でない、項目８または９に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１１）
カチオン性水中油型エマルジョンが約０．０１％〜約２．５％（ｖ／ｖ）の界面活性剤を含む、項目８〜１０のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１２）
前記界面活性剤がＳＰＡＮ８５（ソルビタントリオレエート）、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリソルベート８０）またはそれらの組合せである、項目８〜１１のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１３）
カチオン性水中油型エマルジョンが約０．５％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ８０および約０．５％（ｖ／ｖ）のＳＰＡＮ８５を含む、項目１２に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１４）
前記カチオン性脂質の頭部が第４級アミンを含む、項目１〜１３のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１５）
前記カチオン性脂質が：１，２−ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）、Ｎ，Ｎ−ジオレオイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、およびＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）からなる群より選択される、項目１〜１３のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１６）
前記カチオン性脂質がＤＯＴＡＰである、項目１５に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１７）
前記エマルジョン中のＤＯＴＡＰの濃度が少なくとも約２．５８ｍＭ（１．８ｍｇ／ｍＬ）である、項目１６に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１８）
前記エマルジョン中のＤＯＴＡＰの濃度が約２．５８ｍＭ（１．８ｍｇ／ｍＬ）〜約７．１６ｍＭ（５ｍｇ／ｍＬ）である、項目１６に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１９）
項目１〜１８のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョンの調製方法であって、（ａ）前記カチオン性脂質を前記油に直接溶解させ、油相を形成すること；（ｂ）該エマルジョンの水相を提供すること；および（ｃ）該油相を該水相中に均質化によって分散させることを含む、方法。
（項目２０）
ステップ（ａ）がさらに、前記油を約３０℃〜約６５℃の温度まで加熱することを含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
カチオン性水中油型エマルジョンの粒子と複合体を形成したＲＮＡ分子を含む組成物であって、該粒子が、２５℃で液相である油、およびカチオン性脂質を含み；ここで：
（ｉ）油：脂質（モル：モル）の比が少なくとも約８：１（モル：モル）であり；
（ｉｉ）該組成物中のカチオン性脂質の濃度が少なくとも約１．２５ｍＭであり；および
（ｉｉｉ）該カチオン性脂質がＤＣ−コレステロールではない、組成物。
（項目２２）
前記粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜１８０ｎｍである、項目２１に記載の組成物。
（項目２３）
前記粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜１５０ｎｍである、項目２１に記載の組成物。
（項目２４）
前記粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜約１３０ｎｍである、項目２１に記載の組成物。
（項目２５）
前記組成物のＮ／Ｐ比が少なくとも約４：１である、項目２１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２６）
前記組成物のＮ／Ｐ比が約４：１〜約２０：１である、項目２１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２７）
前記組成物のＮ／Ｐ比が約４：１〜約１５：１である、項目２１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２８）
油：脂質（モル：モル）の比が約１０：１（モル：モル）〜約４３：１（モル：モル）である、項目２１〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２９）
前記水中油型エマルジョンが約０．１％〜約５％（ｗ／ｖ）の油を含む、項目２１〜２８のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３０）
前記油がスクアレンまたはスクアランである、項目２９に記載の組成物。
（項目３１）
前記粒子が、さらに界面活性剤を含む、項目２１〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３２）
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である、項目３１に記載の組成物。
（項目３３）
前記界面活性剤がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂質ではない、項目３１または３２に記載の組成物。
（項目３４）
前記カチオン性水中油型エマルジョンが約０．００５％〜約１．２５％（ｖ／ｖ）の界面活性剤を含む、項目３１〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３５）
前記界面活性剤がＳＰＡＮ８５（ソルビタントリオレエート）、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリソルベート８０）またはそれらの組合せである、項目３１〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３６）
前記カチオン性水中油型エマルジョンが約０．２５％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ８０および約０．２５％（ｖ／ｖ）のＳＰＡＮ８５を含む、項目３５に記載の組成物。
（項目３７）
前記カチオン性脂質の頭部が第４級アミンを含む、項目２１〜３６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３８）
前記カチオン性脂質が：１，２−ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）、Ｎ，Ｎ−ジオレオイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、およびＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）からなる群より選択される、項目２１〜３６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３９）
前記カチオン性脂質がＤＯＴＡＰである、項目３８に記載の組成物。
（項目４０）
前記組成物中のＤＯＴＡＰの濃度が少なくとも約１．２９ｍＭ（０．９ｍｇ／ｍＬ）である、項目３９に記載の組成物。
（項目４１）
前記組成物中のＤＯＴＡＰの濃度が約１．２９ｍＭ（０．９ｍｇ／ｍＬ）〜約３．５８ｍＭ（２．５ｍｇ／ｍＬ）である、項目３９に記載の組成物。
（項目４２）
前記ＲＮＡ分子が、抗原をコードする自己複製ＲＮＡ分子である、項目２１〜４１のいずれか１項に記載の組成物。
（項目４３）
前記自己複製ＲＮＡがアルファウイルス由来ＲＮＡレプリコンである、項目４２に記載の組成物。
（項目４４）
カチオン性水中油型エマルジョンの粒子と複合体を形成したＲＮＡ分子を含む組成物の調製方法であって：
（ｉ）項目１〜１８のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョンを提供すること；
（ｉｉ）該ＲＮＡ分子を含む水性溶液を提供すること；および
（ｉｉｉ）（ｉ）の該水中油型エマルジョンと（ｉｉ）の該水性溶液とを合わせ、それにより該組成物を調製することを含む、調製方法。
（項目４５）
（ｉ）の前記カチオン性水中油型エマルジョンと（ｉｉ）のＲＮＡ溶液とを約１：１（ｖ／ｖ）の比で合わせる、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記ＲＮＡ分子を含む前記水性溶液が塩を含む、項目４４または４５に記載の方法。
（項目４７）
前記塩がＮａＣｌである、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記水性溶液が約２０ｍＭのＮａＣｌを含む、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記ＲＮＡ分子を含む前記水性溶液がバッファーである、項目４４〜４８のいずれか１項に記載の方法。
（項目５０）
前記バッファーがクエン酸バッファーである、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記バッファーが約２ｍＭのクエン酸塩を含む、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記ＲＮＡ分子を含む前記水性溶液が非イオン性張度調整剤を含む、項目４４〜５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目５３）
前記非イオン性張度調整剤が糖または糖アルコールである、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記非イオン性張度調整剤が、スクロース、トレハロース、ソルビトール、デキストロースおよびそれらの組合せからなる群より選択される、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記非イオン性張度調整剤がスクロースである、項目５２に記載の方法。
（項目５６）
前記水性溶液が約５６０ｍＭのスクロースを含む、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記ＲＮＡ分子を含む前記水性溶液がポリマーを含む、項目４４〜５６のいずれか１項に記載の方法。
（項目５８）
前記ポリマーがＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ１２７である、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記水性溶液が約０．０５％〜約２０％（ｗ／ｖ）のポリマーを含む、項目５７または５８に記載の方法。
（項目６０）
前記水性溶液が約１％（ｗ／ｖ）のＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ１２７を含む、項目５７〜５９のいずれか１項に記載の方法。
（項目６１）
連続水相中に分散された粒子を含む水中油型エマルジョンであって、該エマルジョンが油とカチオン性脂質を含み、前記粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜１８０ｎｍであり、該油が０．６％〜４％（ｗ／ｖ）存在し；前記エマルジョン中のカチオン性脂質の濃度が少なくとも約１．２５ｍＭである、水中油型エマルジョン。
（項目６２）
前記水中油型エマルジョンが安定である、項目６１に記載の水中油型エマルジョン。
（項目６３）
前記エマルジョン中のカチオン性脂質の濃度が少なくとも約２．５ｍＭである、項目６１または６２に記載の水中油型エマルジョン。
（項目６４）
前記油がスクアレンまたはスクアランである、項目６１〜６３のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目６５）
前記粒子が、さらに界面活性剤を含む、項目６１〜６４のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目６６）
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である、項目６５に記載の水中油型エマルジョン。
（項目６７）
前記界面活性剤がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂質ではない、項目６６に記載の水中油型エマルジョン。
（項目６８）
前記カチオン性水中油型エマルジョンが約０．０１％〜約２．５％（ｖ／ｖ）の界面活性剤を含む、項目６５〜６７のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目６９）
前記界面活性剤がＳＰＡＮ８５（ソルビタントリオレエート）、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリソルベート８０）またはそれらの組合せである、項目６５〜６８のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目７０）
前記カチオン性脂質の頭部が第４級アミンを含む、項目６１〜６９のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目７１）
前記カチオン性脂質が：１，２−ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）、Ｎ，Ｎ−ジオレオイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、およびＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）からなる群より選択される、項目６１〜６９のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目７２）
前記カチオン性脂質がＤＯＴＡＰである、項目７１に記載の水中油型エマルジョン。
（項目７３）
項目６１〜７２のいずれか１項に記載のカチオン性水中油型エマルジョンの粒子と複合体を形成したＲＮＡ分子を含む組成物。
（項目７４）
前記組成物のＮ／Ｐ比が少なくとも約４：１である、項目７３に記載の組成物。
（項目７５）
前記組成物のＮ／Ｐ比が約４：１〜約２０：１である、項目７３に記載の組成物。
（項目７６）
前記組成物のＮ／Ｐ比が約４：１〜約１５：１である、項目７３に記載の組成物。
（項目７７）
前記ＲＮＡ分子が、抗原をコードする自己複製ＲＮＡ分子である、項目７３〜７６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目７８）
前記自己複製ＲＮＡがアルファウイルス由来ＲＮＡレプリコンである、項目７７に記載の組成物。
（項目７９）
前記エマルジョン粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜約１８０ｎｍである、項目７３〜７８のいずれか１項に記載の組成物。
（項目８０）
前記組成物が緩衝化されており、約６．０〜約８．０のｐＨを有する、項目２１〜４３および７３〜７９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目８１）
前記組成物がさらに無機塩を含み、該無機塩の濃度が３０ｍＭ以下である、項目２１〜４３および７３〜８０のいずれか１項に記載の組成物。
（項目８２）
前記組成物がさらに非イオン性張度調整剤を含み、等張性である、項目２１〜４３および７３〜８１に記載の組成物。
（項目８３）
前記水中油型エマルジョンが安定である、項目１〜２０のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目８４）
カチオン性水中油型エマルジョンの粒子と複合体を形成したＲＮＡ分子を含む組成物であって：
（ｉ）項目６１〜７２のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョンを提供すること；
（ｉｉ）該ＲＮＡ分子を含む水性溶液を提供すること；および
（ｉｉｉ）（ｉ）の該水中油型エマルジョンと（ｉｉ）の該水性溶液とを合わせ、それにより該組成物を調製することを含むプロセスを用いて調製される、組成物。
（項目８５）
前記ＲＮＡ分子が、２つ以上の抗原をコードするポリシストロン性ＲＮＡである、項目２１〜４３、７３〜８２および８４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目８６）
前記ポリシストロン性ＲＮＡがアルファウイルスレプリコンである、項目８５に記載の組成物。
（項目８７）
前記アルファウイルスレプリコンが、第１の抗原をコードする第１のヌクレオチド配列および第２の抗原をコードする第２のヌクレオチド配列を含み、該第１のヌクレオチド配列および該第２のヌクレオチド配列が制御エレメントに作動可能に連結されている、項目８６に記載の組成物。
（項目８８）
前記第１のヌクレオチド配列が第１の制御エレメントに作動可能に連結されており、該第２のヌクレオチド配列が第２の制御エレメントに作動可能に連結されている、項目８７に記載の組成物。
（項目８９）
第３のタンパク質またはその断片をコードする第３のヌクレオチド配列をさらに含んでおり、該第３のヌクレオチド配列が制御エレメントに作動可能に連結されている、項目８７または８８に記載の組成物。
（項目９０）
前記第３のヌクレオチド配列が第３の制御エレメントに作動可能に連結されている、項目８９に記載の組成物。
（項目９１）
第４のタンパク質またはその断片をコードする第４のヌクレオチド配列をさらに含んでおり、該第４のヌクレオチド配列が制御エレメントに作動可能に連結されている、項目８９または９０に記載の組成物。
（項目９２）
前記第４のヌクレオチド配列が第４の制御エレメントに作動可能に連結されている、項目９１に記載の組成物。
（項目９３）
第５のタンパク質またはその断片をコードする第５のヌクレオチド配列をさらに含んでおり、該第５のヌクレオチド配列が制御エレメントに作動可能に連結されている、項目９１または９２に記載の組成物。
（項目９４）
前記第５のヌクレオチド配列が第５の制御エレメントに作動可能に連結されている、項目９３に記載の組成物。
（項目９５）
前記制御エレメントが独立して、サブゲノムプロモーター、ＩＲＥＳおよびウイルス２Ａ部位からなる群より選択される、項目８７〜９４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目９６）
被験体において免疫応答を生じさせる方法であって、項目２１〜４３、７３〜８２および８４〜９５のいずれか１項に記載の組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法。
（項目９７）
単回投与で前記被験体に投与される前記カチオン性脂質の総量が約３０ｍｇ以下である、項目９６に記載の方法。
（項目９８）
単回投与で前記被験体に投与されるＤＯＴＡＰの総量が約２４ｍｇ以下である、項目９６に記載の方法。
（項目９９）
単回投与で前記被験体に投与されるＤＯＴＡＰの総量が約４ｍｇ以下である、項目９６に記載の方法。
（項目１００）
連続水相中に分散された粒子を含む水中油型エマルジョンであって、該粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜１８０ｎｍであり；該エマルジョンが油とカチオン性脂質を含み、ここで：
（ｉ）油：脂質（モル：モル）の比が少なくとも約４：１（モル：モル）であり；
（ｉｉ）該エマルジョン中のカチオン性脂質の濃度が少なくとも約２．５ｍＭであり；
（ｉｉｉ）該油が約０．２％〜約８％（ｗ／ｖ）存在し；および
（ｉｖ）該カチオン性脂質がＤＣ−コレステロールではない、水中油型エマルジョン。
（項目１０１）
前記油が０．６％〜４％（ｗ／ｖ）存在する、項目１００に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１０２）
前記油が約１％〜約３．２％（ｗ／ｖ）存在する、項目１００または１０１に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１０３）
前記粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜約１５０ｎｍである、項目１００〜１０２のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１０４）
前記粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜約１３０ｎｍである、項目１００〜１０３のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１０５）
前記水中油型エマルジョンが安定である、項目１００〜１０４のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１０６）
油：脂質（モル：モル）の比が約４：１（モル：モル）〜約４３：１（モル：モル）である、項目１００〜１０５のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１０７）
前記油がスクアレンまたはスクアランである、項目１００〜１０６のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１０８）
前記粒子が、さらに界面活性剤を含む、項目１００〜１０７のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１０９）
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である、項目１０８に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１１０）
前記界面活性剤がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂質ではない、項目１０８または１０９に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１１１）
前記カチオン性水中油型エマルジョンが約０．０１％〜約２．５％（ｖ／ｖ）の界面活性剤を含む、項目１０８〜１１０のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１１２）
前記界面活性剤がＳＰＡＮ８５（ソルビタントリオレエート）、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリソルベート８０）またはそれらの組合せである、項目１０８〜１１１のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１１３）
前記カチオン性水中油型エマルジョンが約０．５％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ８０および約０．５％（ｖ／ｖ）のＳＰＡＮ８５を含む、項目１１２に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１１４）
前記カチオン性脂質の頭部が第４級アミンを含む、項目１００〜１１３のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１１５）
前記カチオン性脂質が：１，２−ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）、Ｎ，Ｎ−ジオレオイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、およびＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）からなる群より選択される、項目１００〜１１３のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１１６）
前記カチオン性脂質がＤＯＴＡＰである、項目１１５に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１１７）
前記エマルジョン中のＤＯＴＡＰの濃度が少なくとも約２．５８ｍＭ（１．８ｍｇ／ｍＬ）である、項目１１６に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１１８）
前記エマルジョン中のＤＯＴＡＰの濃度が約２．５８ｍＭ（１．８ｍｇ／ｍＬ）〜約７．１６ｍＭ（５ｍｇ／ｍＬ）である、項目１１６に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１１９）
項目１００〜１１８のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョンの調製方法であって、（ａ）前記カチオン性脂質を前記油に直接溶解させ、油相を形成すること；（ｂ）該エマルジョンの水相を提供すること；および（ｃ）該油相を該水相中に均質化によって分散させることを含む、方法。
（項目１２０）
ステップ（ａ）がさらに、前記油を約３０℃〜約６５℃の温度まで加熱することを含む、項目１１９に記載の方法。
（項目１２１）
カチオン性水中油型エマルジョンの粒子と複合体を形成したＲＮＡ分子を含む組成物であって、該粒子が、２５℃で液相である油、およびカチオン性脂質を含み；ここで：
（ｉ）油：脂質（モル：モル）の比が少なくとも約４：１（モル：モル）であり；
（ｉｉ）該組成物中のカチオン性脂質の濃度が少なくとも約１．２５ｍＭであり；および
（ｉｉｉ）該油が約０．１％〜約４％（ｗ／ｖ）存在し；および
（ｉｖ）該カチオン性脂質がＤＣ−コレステロールではない、組成物。
（項目１２２）
前記油が０．３％〜２％（ｗ／ｖ）存在する、項目１２１に記載の組成物。
（項目１２３）
前記油が約０．５％〜約１．６％（ｗ／ｖ）存在する、項目１２１または１２２に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１２４）
前記粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜１８０ｎｍである、項目１２１〜１２３のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１２５）
前記粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜１５０ｎｍである、項目１２１〜１２４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１２６）
前記粒子の平均直径が約８０ｎｍ〜約１３０ｎｍである、項目１２１〜１２５のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１２７）
前記組成物のＮ／Ｐ比が少なくとも約４：１である、項目１２１〜１２６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１２８）
前記組成物のＮ／Ｐ比が約４：１〜約２０：１である、項目１２１〜１２６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１２９）
前記組成物のＮ／Ｐ比が約４：１〜約１５：１である、項目１２１〜１２６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１３０）
油：脂質（モル：モル）の比が約４：１（モル：モル）〜約４３：１（モル：モル）である、項目１２１〜１２９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１３１）
前記油がスクアレンまたはスクアランである、項目１２１〜１３０のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１３２）
前記粒子が、さらに界面活性剤を含む、項目１２１〜１３１のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１３３）
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である、項目１３２に記載の組成物。
（項目１３４）
前記界面活性剤がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂質ではない、項目１３２または１３３に記載の組成物。
（項目１３５）
前記カチオン性水中油型エマルジョンが約０．００５％〜約１．２５％（ｖ／ｖ）の界面活性剤を含む、項目１３２〜１３４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１３６）
前記界面活性剤がＳＰＡＮ８５（ソルビタントリオレエート）、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリソルベート８０）またはそれらの組合せである、項目１３２〜１３５のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１３７）
前記カチオン性水中油型エマルジョンが約０．２５％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ８０および約０．２５％（ｖ／ｖ）のＳＰＡＮ８５を含む、項目１３６に記載の組成物。
（項目１３８）
前記カチオン性脂質の頭部が第４級アミンを含む、項目１２１〜１３７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１３９）
前記カチオン性脂質が：１，２−ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）、Ｎ，Ｎ−ジオレオイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、およびＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）からなる群より選択される、項目１２１〜１３８のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１４０）
前記カチオン性脂質がＤＯＴＡＰである、項目１３９に記載の組成物。
（項目１４１）
前記組成物中のＤＯＴＡＰの濃度が少なくとも約１．２９ｍＭ（０．９ｍｇ／ｍＬ）である、項目１４０に記載の組成物。
（項目１４２）
前記組成物中のＤＯＴＡＰの濃度が約１．２９ｍＭ（０．９ｍｇ／ｍＬ）〜約３．５８ｍＭ（２．５ｍｇ／ｍＬ）である、項目１４０に記載の組成物。
（項目１４３）
前記ＲＮＡ分子が、抗原をコードする自己複製ＲＮＡ分子である、項目１２１〜１４２のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１４４）
前記自己複製ＲＮＡがアルファウイルス由来ＲＮＡレプリコンである、項目１４３に記載の組成物。
（項目１４５）
カチオン性水中油型エマルジョンの粒子と複合体を形成したＲＮＡ分子を含む組成物の調製方法であって：
（ｉ）  項目１００〜１１８のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョンを提供すること；
（ｉｉ）該ＲＮＡ分子を含む水性溶液を提供すること；および
（ｉｉｉ）（ｉ）の該水中油型エマルジョンと（ｉｉ）の該水性溶液とを合わせ、それにより該組成物を調製することを含む、方法。
（項目１４６）
（ｉ）の前記カチオン性水中油型エマルジョンと（ｉｉ）のＲＮＡ溶液を約１：１（ｖ／ｖ）の比で合わせる、項目１４５に記載の方法。
（項目１４７）
前記油が約１％〜約３．２％（ｗ／ｖ）存在する、項目６１に記載の水中油型エマルジョン。
（項目１４８）
前記ＲＮＡ分子が、２つ以上の抗原をコードするポリシストロン性ＲＮＡである、項目１２１〜１４４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１４９）
前記ポリシストロン性ＲＮＡがアルファウイルスレプリコンである、項目１４８に記載の組成物。
（項目１５０）
前記アルファウイルスレプリコンが、第１の抗原をコードする第１のヌクレオチド配列および第２の抗原をコードする第２のヌクレオチド配列を含み、該第１のヌクレオチド配列および該第２のヌクレオチド配列が制御エレメントに作動可能に連結されている、項目１４９に記載の組成物。
（項目１５１）
前記第１のヌクレオチド配列が第１の制御エレメントに作動可能に連結されており、前記第２のヌクレオチド配列が第２の制御エレメントに作動可能に連結されている、項目１５０に記載の組成物。
（項目１５２）
第３のタンパク質またはその断片をコードする第３のヌクレオチド配列をさらに含んでおり、該第３のヌクレオチド配列が制御エレメントに作動可能に連結されている、項目１５０または１５１に記載の組成物。
（項目１５３）
前記第３のヌクレオチド配列が第３の制御エレメントに作動可能に連結されている、項目１５２に記載の組成物。
（項目１５４）
第４のタンパク質またはその断片をコードする第４のヌクレオチド配列をさらに含んでおり、該第４のヌクレオチド配列が制御エレメントに作動可能に連結されている、項目１５２または１５３に記載の組成物。
（項目１５５）
前記第４のヌクレオチド配列が第４の制御エレメントに作動可能に連結されている、項目１５４に記載の組成物。
（項目１５６）
第５のタンパク質またはその断片をコードする第５のヌクレオチド配列をさらに含んでおり、該第５のヌクレオチド配列が制御エレメントに作動可能に連結されている、項目１５４または１５５に記載の組成物。
（項目１５７）
前記第５のヌクレオチド配列が第５の制御エレメントに作動可能に連結されている、項目１５６に記載の組成物。
（項目１５８）
前記制御エレメントが独立して、サブゲノムプロモーター、ＩＲＥＳおよびウイルス２Ａ部位からなる群より選択される、項目１５０〜１５７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１５９）
被験体において免疫応答を生じさせる方法であって、項目１２１〜１４４のいずれか１項に記載の組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法。
（項目１６０）
単回投与で前記被験体に投与される前記カチオン性脂質の総量が約３０ｍｇ以下である、項目１５９に記載の方法。
（項目１６１）
単回投与で前記被験体に投与されるＤＯＴＡＰの総量が約２４ｍｇ以下である、項目１５９に記載の方法。
（項目１６２）
単回投与で前記被験体に投与されるＤＯＴＡＰの総量が約４ｍｇ以下である、項目１５９に記載の方法。
（項目１６３）
さらに抗酸化剤を含んでいる、項目１〜１８、２１〜４３、６１〜８３、８５〜９５、１００〜１１８、１２１〜１４４または１４７〜１５８のいずれか１項に記載の水中油型エマルジョンまたは組成物。