【事件の表示】
　特許第３０６０３７３号「ロタマーゼ酵素活性の阻害剤」の請求項１ないし６、１１ないし１３、１８ないし２０、２５、２６、３１、３２、３７、３８、４３ないし４５、５０ないし５２、５７、５８、６３、６４、６９、７０に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第３０６０３７３号の請求項１ないし６、１１ないし１３、１８ないし２０、２５、２６、３１、３２、３７、３８、４３ないし４５、５０ないし５２、５７、５８、６３、６４、６９、７０に係る特許を取り消す。
【理　由】
１．手続の経緯
　　　　　　　　　　　　　
　本件特許第３０６０３７３号の請求項１〜７４に係る発明については、平成８年４月３０日（優先権主張日　１９９５年６月７日　米国）に特許出願され、平成１２年４月２８日に特許権の設定登録がされた。その後大橋直人により請求項１〜６、１１〜１３，１８〜２０、２５、２６、３１、３２、３７、３８、４３〜４５、５０〜５２、５７、５８、６３、６４、６９、７０に対し特許異議の申立てがされ、取消理由の通知後、その指定期間内である平成１４年３月７日に訂正請求がされたものである。
　　　
２．訂正請求について
　　　　　　　　　　　　
（１）訂正の内容
　　　
「【請求項１】　神経修復が助長されることができる神経病理学的状態において、神経成長および再生を促進する薬剤の製造において使用するためのものであって、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド。
【請求項２】　神経学的障害を治療する薬剤の製造において使用するためのものであって、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド。
【請求項３】　神経変性から神経を保護する薬剤の製造において使用するためのものであって、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド。」
を
「【請求項１】　神経修復が助長されることができる神経病理学的状態において、神経成長および再生を促進する薬剤の製造において使用するためのものであって、ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体であり、前記イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害するところの、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド。
【請求項２】　神経学的障害を治療する薬剤の製造において使用するためのものであって、ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体であり、前記イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害するところの、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド。
【請求項３】　神経変性から神経を保護する薬剤の製造において使用するためのものであって、ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体であり、前記イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害するところの、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド。」
に訂正する。
　　　　　
（２）訂正の適否
　　
　上記訂正はいずれの請求項についても「非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド」を「ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体であり、前記イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害するところの、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド。」に減縮するものであって、訂正前の特許明細書の段落【００１５】等に訂正により追加された事項に対応する記載が見られる。したがって、上記訂正は願書に添付した明細書に記載された事項の範囲内のものであって、特許請求の範囲を拡張または変更するものでもない。
　以上のとおりであるから、上記訂正は、特許法第１２０条の４第２項及び同条３項において準用する特許法第１２６条第２項から第３項の規定に適合するので、当該訂正を認める。
　　　　　　　
３．本件発明　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　
　上記訂正は、これを認容することができるから、本件請求項１〜６、１１〜１３，１８〜２０、２５、２６、３１、３２、３７、３８、４３〜４５、５０〜５２、５７、５８、６３、６４、６９、７０に係る発明は、上記訂正請求書に添付された訂正明細書の特許請求の範囲の対応する請求項に記載された事項により特定されるとおりのものである。
　　　　　　　　　　　　　　
【請求項１】　神経修復が助長されることができる神経病理学的状態において、神経成長および再生を促進する薬剤の製造において使用するためのものであって、ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体であり、前記イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害するところの、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド。
【請求項２】　神経学的障害を治療する薬剤の製造において使用するため
のものであって、ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体であり、前記イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害するところの、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド。
【請求項３】　神経変性から神経を保護する薬剤の製造において使用する
ためのものであって、ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体であり、前記イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害するところの、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド。　
【請求項４】　イムノフィリンリガンドを、神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子、毛様体神経栄養因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量と組み合わせて使用する請求項１、２または３のうちのいずれか１項記載の使用のためのイムノフィリンリガンド。
【請求項５】　神経病理学的状態、神経変性または神経学的障害は、物理的損傷または疾病状態による末梢ニューロパシー、脳への物理的損傷、脊髄への物理的損傷、脳損傷と関連する発作および神経変性に関連する神経学的障害を含む請求項１、２、３または４のうちのいずれか１項記載の使用のためのイムノフィリンリガンド。
【請求項６】　神経学的障害がアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮側索硬化からなる群から選択される請求項５記載の使用のためのイムノフィリンリガンド。
【請求項１１】　ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激するかまたはニューロン再生を促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経学的障害を治療する医薬組成物。
【請求項１２】　神経学的障害が物理的損傷または疾病状態による末梢ニューロパシー、脊髄への物理的損傷、脳損傷と関連する発作および神経変性に関連する神経学的障害からなる群から選択される請求項１１記載の医薬組成物。
【請求項１３】　神経学的障害がアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮側索硬化からなる群から選択される請求項１２記載の医薬組成物。
【請求項１８】　ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を神経栄養成長因子、グリア誘導成長因子、毛様体神経栄養因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量と組み合わせて動物に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激するかまたはニューロン再生を促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経学的障害を治療する医薬組成物。
【請求項１９】　神経学的障害が物理的損傷または疾病状態による末梢ニューロパシー、脊髄への物理的損傷、脳損傷と関連する発作および神経変性に関連する神経学的障害からなる群から選択される請求項１８記載の医薬組成物。
【請求項２０】　神経学的障害がアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮側索硬化からなる群から選択される請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２５】　ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を損傷した末梢神経に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激または促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、損傷した末梢神経の成長を刺激する医薬組成物。
【請求項２６】　神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子、毛様体神経栄養因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子を投与し損傷した末梢神経の成長を刺激または促進することをさらに含む請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項３１】　ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、神経再生を促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経再生および成長を促進する医薬組成物。
【請求項３２】　神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量を投与し神経再生を促進することをさらに含む請求項３１記載の医薬組成物。
【請求項３７】　ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、神経変性を予防することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経変性を防止する医薬組成物。
【請求項３８】　神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量を投与し神経変性を予防することをさらに含む請求項３７記載の医薬組成物。
【請求項４３】　ピペコリン酸誘導体はＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有し、ピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激するかまたはニューロン再生を促進し、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経学的障害を治療する薬剤の製造における使用のためのピペコリン酸誘導体。
【請求項４４】　神経学的障害が物理的損傷または疾病状態による末梢ニューロパシー、脊髄への物理的損傷、脳損傷と関連する発作および神経変性に関連する神経学的障害からなる群から選択される請求項４３記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
【請求項４５】　神経学的障害がアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮側索硬化からなる群から選択される請求項４４記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
【請求項５０】　ピペコリン酸誘導体はＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有し、ピペコリン酸誘導体の有効量を神経栄養成長因子、グリア誘導成長因子、毛様体神経栄養因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量と組み合わせて動物に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激するかまたはニューロン再生を促進し、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経学的障害を治療する薬剤の製造における使用のためのピペコリン酸誘導体。
【請求項５１】　神経学的障害が物理的損傷または疾病状態による末梢ニューロパシー、脊髄への物理的損傷、脳損傷と関連する発作および神経変性に関連する神経学的障害からなる群から選択される請求項５０記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
【請求項５２】　神経学的障害がアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮側索硬化からなる群から選択される請求項５１記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
【請求項５７】　ピペコリン酸誘導体はＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有し、ピペコリン酸誘導体の有効量を損傷した末梢神経に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激または促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、損傷した末梢神経の成長を刺激する薬剤の製造における使用のためのピペコリン酸誘導体。
【請求項５８】　神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子、毛様体神経栄養因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子を投与し損傷した末梢神経の成長を刺激または促進することをさらに含む請求項５７記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
【請求項６３】　ピペコリン酸誘導体はＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有し、ピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、神経再生を促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経再生および成長を促進する薬剤の製造における使用のためのピペコリン酸誘導体。
【請求項６４】　神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量を投与し神経再生を促進することをさらに含む請求項６３記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
【請求項６９】　ピペコリン酸誘導体はＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有し、ピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、神経変性を予防することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経変性を予防する薬剤の製造における使用のためのピペコリン酸誘導体。
【請求項７０】　神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量を投与し神経変性を予防することをさらに含む請求項６９記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　　　　　　
  　　　　　　　　　　　　　　
４．取消理由の概要
　　　　　　　　　　　　　
　平成１３年８月２７日付け取消理由通知で示された理由のうち特許法第３６条第４項、第６項２号についてのものは以下のとおりである。
　
　特許請求の範囲の請求項１〜６、１１〜１３，１８〜２０、２５、２６、３１、３２、３７、３８、４３〜４５、５０〜５２、５７、５８、６３、６４、６９、７０に記載における「非免疫抑制性」「ＦＫＢＰ型イムノフィリン」なる用語が明確でなく、どのような化合物が請求項１〜６の薬剤の製造に使用する「ＦＫＢＰ型イムノフィリンリガンド」であり、請求項１１〜１３，１８〜２０、２５、２６、３１、３２、３７、３８の医薬組成物の有効成分であるのか、あるいはどのような化合物が請求項４３〜４５、５０〜５２、５７、５８、６３、６４、６９、７０の薬剤製造に使用するピペコリン酸誘導体であるのか想定できず、当業者が上記請求項に係る発明を容易に実施することができない。
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
５．判断
　　　　　　　　　　　　
　本件異議申立ての対象となった請求項は、いずれも本件発明の薬剤の製造に使用する、あるいは医薬組成物の有効成分であるピペコリン酸誘導体が
（ａ）ロタマ−ゼ活性を示すＦＫＢＰ型イムノフィリンに対して親和性を有し、
（ｂ）該ＦＫＢＰ型イムノフィリンのロタマ一ゼ活性を阻害し、
（ｃ）非免疫抑制性である
という性質で特定されている。
　ピペコリン誘導体であれば常に（ａ）〜（ｃ）の要件が備わっているとする技術常識は存在せず、本件特許明細書においては、神経栄養作用に関連するロタマ−ゼ軸索成長データが具体的に開示され（ａ）（ｂ）（ｃ）の性質を備えるピペコリン誘導体としては、表２、表３に見られる３種の化合物（ＷＡＹ１２４４６６，実施例１２，１３）があるが、ＷＡＹ−１２４４６６と構造的に近似したピペコリン誘導体であるラパマイシンは条件（ｃ）を満たさないことも示されている。そうすると、単に「ピペコリン酸誘導体」というだけでは、目的とする作用を有する化合物とは言えず、「ピペコリン酸誘導体」が本件発明の特定の薬剤の用途に使用できるものであるためには、上記（ａ）〜（ｃ）の特定事項を満たすことが必要であるといえる。
　以下、これらの特定事項が明確であるか否か検討する。
　　　　
（ａ）及び（ｂ）の「ＦＫＢＰ型イムノフィリン」について
　　　　　　　　　　　　　　　
　本件明細書段落【０００２】には【従来の技術】として「イムノフィリンという用語は主要な免疫抑制剤、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）、ＦＫ５０６およびラパマイシンに対する受容体として機能する多くのタンパク質を意味する。イムノフィリンの公知群はシクロフィリン、およびＦＫ５０６結合タンパク質、例えばＦＫＢＰである。・・ＦＫ５０６およびラパマイシンはＦＫＢＰに結合する。」と記載され、ＦＫＢＰとはＦＫ５０６に結合するタンパクであるとされている。
　また、段落【００７３】の「イムノフィリンは、軸索成長を制御するＣａ2+に影響を与えるカルシニューリン以外の部位に作用し得る。・・さらに、ＦＫ５０６はＦＫＢＰ２５ステロイド受容体およびその他の未同定標的、例えばＦＫＢＰ１３に関連するものを包含するその他の部位に作用する。」の記載、及び段落【００８６】の「我々は組換えＦＫＢＰ−１２への 3Ｈ−ＦＫ５０６結合の阻害を試験することによりＦＫＢＰ−１２への結合における薬剤の効力を評価した。ＦＫＢＰ−１２に対する薬剤の親和性と軸索成長の刺激およびロタマーゼ活性阻害の効力との間に顕著な類似点がある。」の記載によれば、ＦＫＢＰ型イムノフィリンは１種ではなく少なくともＦＫＢＰ１２、２５、１３が存在するが、本件明細書においては、薬剤の効力はＦＫＢＰ１２へのＦＫ５０６の結合の阻害を試験することで評価されており、他のＦＫＢＰを用いた場合であっても同様に評価可能であるのか否かは明らかにされていない。
　特許権者は「当業者は、ＦＫＢＰ型イムノフィリンを個々の特定の種類毎ではなく一つの族として一緒に扱っている。その理由は、ＦＫＢＰ型イムノフィリンが共通の特徴を有することにある。その特徴とは、ＦＫ５０６によって潜在的に阻害されるプロリル−ロタマ−ゼ活性を示す可溶性の小タンパク質であることである。つまり、ＦＫＢＰ型イムノフィリンとは、このような共通の機能的特徴並びに該機能的特徴の原因となる共通の構造的特徴を有する−群の物質として扱うことができ、これが当業者の技術常識なのである。」と主張する。
　しかしながら、ＦＫＢＰ型イムノフィリンには多数の種類があり、各ＦＫＢＰはそれぞれが異なる特徴を有していることは本件優先日当時広く知られているのであるから（ＮＡＴＵＲＥ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ，Ｖｏｌ．１，Ｎｏ．１，ＪＡＮＵＡＲＹ　１９９５　ｐｐ．３２〜３７、Ｇｅｎｅ，１６０，　１９９５　ｐｐ．２９７〜３０２参照）、ＦＫＢＰ型イムノフィリンと総称する場合があったとしても、これを機能的特徴や構造的特徴が共通の一群の物質とすることはできない。
　従って、（ａ）（ｂ）の要件によりロタマーゼ活性を有するＦＫＢＰ型イムノフィリンに親和性を有しそのロタマーゼ活性を阻害する」という性質の特定がなされても、これがいかなる機能的特徴に対応するものか明確でなく、従ってこれらによって本件発明の薬剤の用途に使用可能なピペコリン酸誘導体とそうでないピペコリン誘導体とが明確に区別され特定されているということはできない。
　　　　　　　　　　　　
（ｃ）「非免疫抑制性」について
　　　　　　　　　
　本件明細書には「非免疫抑制性」について特に定義した記載は存在しない。
　段落【００７７】に「・・・ラパマイシンの
非免疫抑制性
　特許権者は、参考資料１を提出し、免疫抑制剤について少なくとも一種の免疫応答の発現を減じることができる薬剤であると記載されていること、また明細書の段落【０００４】にも、「免疫抑制は免疫抑制剤とイムノフィリンとの複合体の形成に由来する。」との記載から、非免疫抑制性イムノフィリンリガンドとは、その他の作用を引き起こすかもしれないが、免疫抑制効果は引き起こさないように対象であるイムノフィリンに結合するところのイムノフィリンリガンドを意味するということが当業者であるならば容易に理解でき、そして非免疫抑制性イムノフィリンリガンドに属する物質の範囲も当然に明らかであると主張する。
　しかし、上記資料における「少なくとも一種の免疫応答の発現を減じることができるものが免疫抑制剤である」の記載を考慮すると、免疫応答には、種々のタイプがあること、その内の少なくとも一種の応答の発現を減じるものが免疫抑制剤であることは理解することができるが、この記載は「非免疫抑制性」の意味自体を直接的に説明するものではない。また、明細書の「免疫抑制は免疫抑制剤とイムノフイリンとの複合体の形成に由来する。」の記載を反対解釈すると、イムノフィリンとの複合体を形成しないものが非免疫抑制性であることとなり、（ａ）の条件と矛盾する。結局、文言上も本件明細書からも、ピペコリン酸誘導体のうち「非免疫抑制性」であるものとはどのようなものか、どのような手法で非免疫抑制性か否かを決定するのか明らかでない。
　したがって、本件明細書の上記請求項の記載は特許を受けようとする発明を明確に記載したものとはいえない。
　
　さらに、数多くのピペコリン酸誘導体の中から神経栄養性を有する化合物を得ようとしても、（ａ）〜（ｃ）の特定事項がいずれも不明確である以上、本件明細書に具体的に記載された化合物以外に上記特定事項を満足するピペコリン酸誘導体を想定できず、当業者は上記請求項に係る発明を容易に実施することができないといわざるを得ない。
　　　
６．むすび
　　　　　　　　　
　以上のとおりであるから、本件請求項１〜６、１１〜１３，１８〜２０、２５、２６、３１、３２、３７、３８、４３〜４５、５０〜５２、５７、５８、６３、６４、６９、７０に係る発明については、本件明細書は特許法第３６条第４項及び同条第６項第２号を満たしていないから、その発明の特許は特許法第１１３条第４号に該当し、取り消されるべきものである。
　　　　　　　　　
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１７年３月８日（２００５．３．８）
【訂正の要旨】
審決（決定）の【理由】欄参照。
（５４）【発明の名称】
ロタマーゼ酵素活性の阻害剤
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項１】神経修復が助長されることができる神経病理学的状態において、神経成長および再生を促進する薬剤の製造において使用するためのものであって、
ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体型のイムノフィリンリガンドであり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害するところの、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド
　【請求項２】神経学的障害を治療する薬剤の製造において使用するためのものであって、
ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体型のイムノフィリンリガンドであり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害するところの、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド
　【請求項３】神経変性から神経を保護する薬剤の製造において使用するためのものであって、
ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体型のイムノフィリンリガンドであり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害するところの、非免疫抑制性であるイムノフィリンリガンド
　【請求項４】イムノフィリンリガンドを、神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子、毛様体神経栄養因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量と組み合わせて使用する請求項１、２または３のうちのいずれか１項記載の使用のためのイムノフィリンリガンド。
　【請求項５】神経病理学的状態、神経変性または神経学的障害は、物理的損傷または疾病状態による末梢ニューロパシー、脳への物理的損傷、脊髄への物理的損傷、脳損傷と関連する発作および神経変性に関連する神経学的障害を含む請求項１、２、３または４のうちのいずれか１項記載の使用のためのイムノフィリンリガンド。
　【請求項６】神経学的障害がアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮側索硬化からなる群から選択される請求項５記載の使用のためのイムノフィリンリガンド。
　【請求項７】イムノフィリンリガンドがＷａｙ−１２４，６６６である請求項１、２、３または４のうちのいずれか１項記載の使用のためのイムノフィリンリガンド。
　【請求項８】イムノフィリンリガンドがＲａｐ−Ｐａである請求項１、２、３または４のうちのいずれか１項記載の使用のためのイムノフィリンリガンド。
　【請求項９】イムノフィリンリガンドがＳＬＢ−５０６である請求項１、２、３または４のうちのいずれか１項記載の使用のためのイムノフィリンリガンド。
　【請求項１０】イムノフィリンリガンドが以下の化合物：
次式
　【化１】
［式中、ｎは１、２または３を表す。］
で表される化合物、
４−（４−メトキシフェニル）ブチル（２Ｓ）−１−［２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）アセチル］ヘキサヒドロ−２−ピリジンカルボキシレート、４−（４−メトキシフェニル）ブチル（２Ｓ）−１−［２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）アクリロイル］ヘキサヒドロ−２−ピリジンカルボキシレート、
４−（４−メトキシフェニル）ブチル（２Ｓ）−１−［２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロパノイル］ヘキサヒドロ−２−ピリジンカルボキシレート、
４−（４−メトキシフェニル）ブチル（２Ｓ）−１−［２−オキソ−（３，４，５−トリメトキシフェニル）アセチル］ヘキサヒドロ−２−ピリジンカルボキシレート、
次式
　【化２】
で表される化合物、
３−シクロヘキシルプロピル（２Ｓ）−１−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）ヘキサヒドロ−２−ピリジンカルボキシレート、
３−フェニルプロピル（２Ｓ）−１−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）ヘキサヒドロ−２−ピリジンカルボキシレート、
３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロピル（２Ｓ）−１−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）ヘキサヒドロ−２−ピリジンカルボキシレート、
（１Ｒ）−２，２−ジメチル−１−フェネチル−３−ブテニル（２Ｓ）−１−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）ヘキサヒドロ−２−ピリジンカルボキシレート、
（１Ｒ）−１，３−ジフェニルプロピル（２Ｓ）−１−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）ヘキサヒドロ−２−ピリジンカルボキシレート、
（１Ｒ）−１−シクロヘキシル−３−フェニルプロピル（２Ｓ）−１−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）ヘキサヒドロ−２−ピリジンカルボキシレート、
（１Ｓ）−１，３−ジフェニルプロピル（２Ｓ）−１−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）ヘキサヒドロ−２−ピリジンカルボキシレート、
（１Ｓ）−１−シクロヘキシル−３−フェニルプロピル（２Ｓ）−１−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）ヘキサヒドロ−２−ピリジンカルボキシレート、
（２２ａＳ）−１５，１５−ジメチルパーヒドロピリド［２，１−ｃ］［１，９，４］ジオキサザシクロノナデシン−１，１２，１６，１７−テトラオン、
（２４ａＳ）−１７，１７−ジメチルパーヒドロピリド［２，１−ｃ］［１，９，４］ジオキサザシクロヘニコシン−１，１４，１８，１９−テトラオン、
次式
　【化３】
で表される化合物、
（３Ｒ，４Ｒ，２３ａＳ）−８−アリル−４，１０−ジメチル−３−［２−（３−ピリジル）エチル］−１，３，４，５，６，７，８，１１，１２，１５，１６，１７，１８，２０，２１，２２，２３，２３ａ−オクタデカヒドロ−１４Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，１０，４］ジオキサザシクロイコシン−１，７，１４，１７，１８−ペンタオン、
（３Ｒ，４Ｒ，２４ａＳ）−８−アリル−４，１０−ジメチル−３−［２−（３−ピリジル）エチル］−１，３，４，５，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２１，２２，２３，２４，２４ａ−イコサヒドロピリド［２，１−ｃ］［１，１１，４］ジオキサザシクロヘニコシン−１，７，１４，１８，１９−ペンタオン、
（３Ｒ，４Ｒ，２５ａＳ）−８−アリル−４，１０−ジメチル−３−［２−（３−ピリジル）エチル］−１，３，４，５，６，７，８，１１，１２，１５，１６，１７，１８，１９，２０，２２，２３，２４，２５，２５ａ−イコサヒドロ−１４Ｈ−ピリド［２，１−ｃ］［１，１２，４］ジオキサザシクロドコシン−１，７，１４，１９，２０−ペンタオン、
次式
　【化４】
［式中、ｎは１，２または３を表す。］
で表される化合物、
次式
　【化５】
［式中、ｎは１，２または３を表す。］
で表される化合物、
次式
　【化６】
で表される化合物、
（１Ｒ）−１−（３−ベンゾイルフェニル）−３−フェニルプロピル（１Ｒ）−２−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）ピペリジン−１−カルボキシレート、
（１Ｒ）−１−［３−（ジアリルカルバモイル）フェニル］−３−フェニルプロピル（１Ｒ）−２−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）ピペリジン−１−カルボキシレート、
次式
　【化７】
で表される化合物、
エチル１−（２−オキソ−３−フェニルプロパノイル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−ピルボイル−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−（２−オキソブタノイル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−（３−メチル−２−オキソブタノイル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−（４−メチル−２−オキソペンタノイル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−（３，３−ジメチル−２−オキソブタノイル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−（３，３−ジメチル−２−オキソペンタノイル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
４−［２−（エチルオキシカルボニル）ピペリジノ］−２，２−ジメチル−３，４−ジオキソブチルアセテート、
エチル１−［２−（２−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピラニル）−２−オキソアセチル］−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−［２−（２−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピラニル）−２−オキソアセチル］−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−［２−（１−ヒドロキシシクロヘキシル）−２−オキソアセチル］−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−［２−（１−メトキシシクロヘキシル）−２−オキソアセチル］−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−（２−シクロヘキシル−２−オキソアセチル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−（２−オキソ−２−ピペリジノアセチル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−［２−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−６−ピラニル）−２−オキソアセチル］−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−（２−オキソ−２−フェニルアセチル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
エチル１−（４−メチル−２−オキソ−１−チオキソペンチル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
３−フェニルプロピル１−（２−ヒドロキシ−３，３−ジメチルペンタノイル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
（１Ｒ）−１−フェニル−３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロピル１−（３，３−ジメチルブタノイル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
（１Ｒ）−１，３−ジフェニルプロピル１−（ベンジルスルホニル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロピル１−（ベンジルスルホニル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
１−（２−［（２Ｒ，３Ｒ，６Ｓ）−６−［（２Ｓ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ，９Ｓ，１１Ｒ）−２，１３−ジメトキシ−３，９，１１−トリメチル−１２−オキソ−３，５，７−トリデカトリエニル］−２−ヒドロキシ−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピラニル］−２−オキソアセチル）−２−ピペリジンカルボン酸、
メチル１−（２−［（２Ｒ，３Ｒ，６Ｓ）−６−［（２Ｓ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ，９Ｓ，１１Ｒ）−２，１３−ジメトキシ−３，９，１１−トリメチル−１２−オキソ−３，５，７−トリデカトリエニル］−２−ヒドロキシ−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピラニル］−２−オキソアセチル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
イソプロピル１−（２−［（２Ｒ，３Ｒ，６Ｓ）−６−［（２Ｓ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ，９Ｓ，１１Ｒ）−２，１３−ジメトキシ−３，９，１１−トリメチル−１２−オキソ−３，５，７−トリデカトリエニル］−２−ヒドロキシ−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピラニル］−２−オキソアセチル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
ベンジル１−（２−［（２Ｒ，３Ｒ，６Ｓ）−６−［（２Ｓ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ，９Ｓ，１１Ｒ）−２，１３−ジメトキシ−３，９，１１−トリメチル−１２−オキソ−３，５，７−トリデカトリエニル］−２−ヒドロキシ−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピラニル］−２−オキソアセチル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
１−フェニルエチル１−（２−［（２Ｒ，３Ｒ，６Ｓ）−６−［（２Ｓ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ，９Ｓ，１１Ｒ）−２，１３−ジメトキシ−３，９，１１−トリメチル−１２−オキソ−３，５，７−トリデカトリエニル］−２−ヒドロキシ−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピラニル］−２−オキソアセチル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
（Ｚ）−３−フェニル−２−プロペニル１−（２−［（２Ｒ，３Ｒ，６Ｓ）−６−［（２Ｓ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ，９Ｓ，１１Ｒ）−２，１３−ジメトキシ−３，９，１１−トリメチル−１２−オキソ−３，５，７−トリデカトリエニル］−２−ヒドロキシ−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピラニル］−２−オキソアセチル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
３−（３，４−ジメトキシフェニル）プロピル１−（２−［（２Ｒ，３Ｒ，６Ｓ）−６−［（２Ｓ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ，９Ｓ，１１Ｒ）−２，１３−ジメトキシ−３，９，１１−トリメチル−１２−オキソ−３，５，７−トリデカトリエニル］−２−ヒドロキシ−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピラニル］−２−オキソアセチル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
Ｎ２−ベンジル−１−（２−［（２Ｒ，３Ｒ，６Ｓ）−６−［（２Ｓ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ，９Ｓ，１１Ｒ）−２，１３−ジメトキシ−３，９，１１−トリメチル−１２−オキソ−３，５，７−トリデカトリエニル］−２−ヒドロキシ−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピラニル］−２−オキソアセチル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
Ｎ２−（３−フェニルプロピル）−１−（２−［（２Ｒ，３Ｒ，６Ｓ）−６−［（２Ｓ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ，９Ｓ，１１Ｒ）−２，１３−ジメトキシ−３，９，１１−トリメチル−１２−オキソ−３，５，７−トリデカトリエニル］−２−ヒドロキシ−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−２−ピラニル］−２−オキソアセチル）−２−ピペリジンカルボキシレート、
次式
　【化８】
［式中、Ｒはメチル基（Ｍｅ）またはベンジル基（Ｂｎ）を表す。］
で表される化合物、
次式
　【化９】
で表される化合物、
次式
　【化１０】
で表される化合物、
次式
　【化１１】
［式中、ｎは２を表し、
Ｒ１は次式
　【化１２】
または
　【化１３】
で表される基を表し、そして
Ｒ２はフェニル−ｏ−第三ブチル基を表す。］
で表される化合物、
次式
　【化１４】
［式中、
Ｒ１がｍ−ＯＣＨ３Ｐｈを表し、そしてＲ３がＶａｌ−ｏ−第三ブチル基を表すか、
Ｒ１がｍ−ＯＣＨ３Ｐｈを表し、そしてＲ３がＬｅｕ−ｏ−第三ブチル基を表すか、
Ｒ１がｍ−ＯＣＨ３Ｐｈを表し、そしてＲ３がＩｌｅｕ−ｏ−第三ブチル基を表すか、
Ｒ１がｍ−ＯＣＨ３Ｐｈを表し、そしてＲ３がヘキサヒドロ−フェニル−ｏ−第三ブチル基を表すか、
Ｒ１がｍ−ＯＣＨ３Ｐｈを表し、そしてＲ３がアリルアラニン−ｏ−第三ブチル基を表すか、または
Ｒ１がＢ−ナフチル基を表し、そしてＲ３がＶａｌ−ｏ−第三ブチル基を表す。］で表される化合物、
次式
　【化１５】
［式中、
Ｒ１がＣＨ２（ＣＯ）−ｍ−ＯＣＨ３Ｐｈを表し、Ｒ４がＣＨ２Ｐｈを表し、そしてＲ５がＯＣＨ３を表すか、または
Ｒ１がＣＨ２（ＣＯ）−Ｂ−ナフチル基を表し、Ｒ４がＣＨ２Ｐｈを表し、そしてＲ５がＯＣＨ３を表す。］
で表される化合物、
次式
　【化１６】
［式中、
Ｒ１がｍ−ＯＣＨ３Ｐｈを表し、Ｘがトランス−ＣＨ＝ＣＨを表し、Ｒ４がＨを表し、そしてＹがＯＣ（ｏ）Ｐｈを表すか、
Ｒ１がＯＣＨ３Ｐｈを表し、Ｘがトランス−ＣＨ＝ＣＨを表し、Ｒ４がＨを表し、そしてＹがＯＣ（ｏ）ＣＦ３を表すか、
Ｒ１がｍ−ＯＣＨ３Ｐｈを表し、そしてＸがトランス−ＣＨ＝ＣＨＩを表すか、
Ｒ１がｍ−ＯＣＨ３Ｐｈを表し、Ｘがトランス−ＣＨ＝ＣＨを表し、Ｒ４がＨを表し、そしてＹがＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を表すか、または
Ｒ１がｍ−ＯＣＨ３Ｐｈを表し、ＸがＣ＝Ｏを表し、Ｒ４がＨを表し、そしてＹがＰｈを表す。］
で表される化合物、
次式
　【化１７】
で表される化合物、
次式
　【化１８】
［式中、
Ｒ１がＨを表し、Ｒ２がＯＭｅを表し、そしてＲ３がＣＨ２ＯＭｅを表すか、
Ｒ１がＨを表し、Ｒ２がＨを表し、そしてＲ３がＨを表すか、または
Ｒ１がＭｅを表し、Ｒ２がＨを表し、そしてＲ３がＨを表す。］
で表される化合物
からなる群から選択されるピペコリン酸誘導体である請求項１、２、３または４のうちのいずれか１項記載の使用のためのイムノフィリンリガンド。
　【請求項１１】ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激するかまたはニューロン再生を促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経学的障害を治療する医薬組成物。
　【請求項１２】神経学的障害が物理的損傷または疾病状態による末梢ニューロパシー、脊髄への物理的損傷、脳損傷と関連する発作および神経変性に関連する神経学的障害からなる群から選択される請求項１１記載の医薬組成物。
　【請求項１３】神経学的障害がアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮側索硬化からなる群から選択される請求項１２記載の医薬組成物。
　【請求項１４】ピペコリン酸誘導体がＷａｙ−１２４，６６６である請求項１１記載の医薬組成物。
　【請求項１５】ピペコリン酸誘導体がＲａｐ−Ｐａである請求項１１記載の医薬組成物。
　【請求項１６】ピペコリン酸誘導体がＳＬＢ−５０６である請求項１１記載の医薬組成物。
　【請求項１７】ピペコリン酸誘導体が請求項１０において定義されるものである請求項１１記載の医薬組成物。
　【請求項１８】ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を神経栄養成長因子、グリア誘導成長因子、毛様体神経栄養因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量と組み合わせて動物に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激するかまたはニューロン再生を促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経学的障害を治療する医薬組成物。
　【請求項１９】神経学的障害が物理的損傷または疾病状態による末梢ニューロパシー、脊髄への物理的損傷、脳損傷と関連する発作および神経変性に関連する神経学的障害からなる群から選択される請求項１８記載の医薬組成物。
　【請求項２０】神経学的障害がアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮側索硬化からなる群から選択される請求項１９記載の医薬組成物。
　【請求項２１】ピペコリン酸誘導体がＷａｙ−１２４，６６６である請求項１８記載の医薬組成物。
　【請求項２２】ピペコリン酸誘導体がＲａｐ−Ｐａである請求項１８記載の医薬組成物。
　【請求項２３】ピペコリン酸誘導体がＳＬＢ−５０６である請求項１８記載の医薬組成物。
　【請求項２４】ピペコリン酸誘導体が請求項１０において定義されるものである請求項１８記載の医薬組成物。
　【請求項２５】ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を損傷した末梢神経に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激または促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、損傷した末梢神経の成長を刺激する医薬組成物。
　【請求項２６】神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子、毛様体神経栄養因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子を投与し損傷した末梢神経の成長を刺激または促進することをさらに含む請求項２５記載の医薬組成物。
　【請求項２７】ピペコリン酸誘導体がＷａｙ−１２４，６６６である請求項２５記載の医薬組成物。
　【請求項２８】ピペコリン酸誘導体がＲａｐ−Ｐａである請求項２５記載の医薬組成物。
　【請求項２９】ピペコリン酸誘導体がＳＬＢ−５０６である請求項２５記載の医薬組成物。
　【請求項３０】ピペコリン酸誘導体が請求項１０において定義されるものである請求項２５記載の医薬組成物。
　【請求項３１】ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、神経再生を促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経再生および成長を促進する医薬組成物。
　【請求項３２】神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量を投与し神経再生を促進することをさらに含む請求項３１記載の医薬組成物。
　【請求項３３】ピペコリン酸誘導体がＷａｙ−１２４，６６６である請求項３１記載の医薬組成物。
　【請求項３４】ピペコリン酸誘導体がＲａｐ−Ｐａである請求項３１記載の医薬組成物。
　【請求項３５】ピペコリン酸誘導体がＳＬＢ−５０６である請求項３１記載の医薬組成物。
　【請求項３６】ピペコリン酸誘導体が請求項１０において定義されるものである請求項３１記載の医薬組成物。
　【請求項３７】ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、神経変性を予防することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経変性を防止する医薬組成物。
　【請求項３８】神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量を投与し神経変性を予防することをさらに含む請求項３７記載の医薬組成物。
　【請求項３９】ピペコリン酸誘導体がＷａｙ−１２４，６６６である請求項３７記載の医薬組成物。
　【請求項４０】ピペコリン酸誘導体がＲａｐ−Ｐａである請求項３７記載の医薬組成物。
　【請求項４１】ピペコリン酸誘導体がＳＬＢ−５０６である請求項３７記載の医薬組成物。
　【請求項４２】ピペコリン酸誘導体が請求項１０において定義されるものである請求項３７記載の医薬組成物。
　【請求項４３】ピペコリン酸誘導体はＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有し、ピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激するかまたはニューロン再生を促進し、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経学的障害を治療する薬剤の製造における使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項４４】神経学的障害が物理的損傷または疾病状態による末梢ニューロパシー、脊髄への物理的損傷、脳損傷と関連する発作および神経変性に関連する神経学的障害からなる群から選択される請求項４３記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項４５】神経学的障害がアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮側索硬化からなる群から選択される請求項４４記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項４６】ピペコリン酸誘導体がＷａｙ−１２４，６６６である請求項４３記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項４７】ピペコリン酸誘導体がＲａｐ−Ｐａである請求項４３記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項４８】ピペコリン酸誘導体がＳＬＢ−５０６である請求項４３記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項４９】ピペコリン酸誘導体が請求項１０において定義されたものである請求項４３記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項５０】ピペコリン酸誘導体はＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有し、ピペコリン酸誘導体の有効量を神経栄養成長因子、グリア誘導成長因子、毛様体神経栄養因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量と組み合わせて動物に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激するかまたはニューロン再生を促進し、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経学的障害を治療する薬剤の製造における使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項５１】神経学的障害が物理的損傷または疾病状態による末梢ニューロパシー、脊髄への物理的損傷、脳損傷と関連する発作および神経変性に関連する神経学的障害からなる群から選択される請求項５０記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項５２】神経学的障害がアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮側索硬化からなる群から選択される請求項５１記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項５３】ピペコリン酸誘導体がＷａｙ−１２４，６６６である請求項５０記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項５４】ピペコリン酸誘導体がＲａｐ−Ｐａである請求項５０記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項５５】ピペコリン酸誘導体がＳＬＢ−５０６である請求項５０記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項５６】ピペコリン酸誘導体が請求項１０において定義されるものである請求項５０記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項５７】ピペコリン酸誘導体はＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有し、ピペコリン酸誘導体の有効量を損傷した末梢神経に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激または促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、損傷した末梢神経の成長を刺激する薬剤の製造における使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項５８】神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子、毛様体神経栄養因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子を投与し損傷した末梢神経の成長を刺激または促進することをさらに含む請求項５７記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項５９】ピペコリン酸誘導体がＷａｙ−１２４，６６６である請求項５７記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項６０】ピペコリン酸誘導体がＲａｐ−Ｐａである請求項５７記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項６１】ピペコリン酸誘導体がＳＬＢ−５０６である請求項５７記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項６２】ピペコリン酸誘導体が請求項１０において定義されるものである請求項５７記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項６３】ピペコリン酸誘導体はＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有し、ピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、神経再生を促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経再生および成長を促進する薬剤の製造における使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項６４】神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量を投与し神経再生を促進することをさらに含む請求項６３記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項６５】ピペコリン酸誘導体がＷａｙ−１２４，６６６である請求項６３記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項６６】ピペコリン酸誘導体がＲａｐ−Ｐａである請求項６３記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項６７】ピペコリン酸誘導体がＳＬＢ−５０６である請求項６３記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項６８】ピペコリン酸誘導体が請求項１０において定義されるものである請求項６３記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項６９】ピペコリン酸誘導体はＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有し、ピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、神経変性を予防することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害し、そして前記ピペコリン酸誘導体は非免疫抑制性である、動物における神経変性を予防する薬剤の製造における使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項７０】神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量を投与し神経変性を予防することをさらに含む請求項６９記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項７１】ピペコリン酸誘導体がＷａｙ−１２４，６６６である請求項６９記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項７２】ピペコリン酸誘導体がＲａｐ−Ｐａである請求項６９記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項７３】ピペコリン酸誘導体がＳＬＢ−５０６である請求項６９記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
　【請求項７４】ピペコリン酸誘導体が請求項１０において定義されるものである請求項６９記載の使用のためのピペコリン酸誘導体。
【発明の詳細な説明】
　【０００１】
　【発明の属する技術分野】
　本発明は、イムノフィリンタンパク質と関連する酵素活性の阻害剤、特に、ペプチジル−プロリルイソメラーゼまたはロタマーゼ酵素活性の阻害剤としてＦＫＢＰ型のイムノフィリンに対する親和性を有する神経栄養性（ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ）ピペコリン酸誘導体化合物を使用する方法に関するものである。
　【０００２】
　【従来の技術】
　イムノフィリンという用語は主要な免疫抑制剤、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）、ＦＫ５０６およびラパマイシンに対する受容体として機能する多くのタンパク質を意味する。イムノフィリンの公知群はシクロフィリン、およびＦＫ５０６結合タンパク質、例えばＦＫＢＰである。シクロスポリンＡはシクロフィリンに結合し、ＦＫ５０６およびラパマイシンはＦＫＢＰに結合する。これらのイムノフィリン−薬剤複合体は種々の細胞間信号変換系、特に免疫系および神経系と相互作用する。
　【０００３】
　イムノフィリンはペプチジル−プロリルイソメラーゼ（ＰＰＩアーゼ）またはロタマーゼ酵素活性を有することが知られている。ロタマーゼ活性はイムノフィリンタンパク質のシスおよびトランス異性体の相互変換の触媒作用の役目を果たすものであると決められている。
　【０００４】
　イムノフィリンは免疫組織において最初に発見され、そして研究された。イムノフィリンのロタマーゼ活性の阻害はＴ細胞の増殖の阻害を導き、それにより免疫抑制剤、例えばシクロスポリンＡ、ＦＫ５０６およびラパマイシンにより示される免疫抑制作用を引き起こすことが当業者により当初推定された。さらに研究され、ロタマーゼ活性の阻害は、本質的に、そしてそれ自体では、免疫抑制剤活性に対して十分ではないことが示されている（Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９０，ｖｏｌ．２５０，ｐｐ．５５６−５５９）。また、免疫抑制は免疫抑制剤とイムノフィリンとの複合体の形成に由来する。イムノフィリン−薬剤複合体は作用のそれらの様式として第３のタンパク質の標的と相互作用することが示されている（Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ等、Ｃｅｌｌ，１９９１，ｖｏｌ．６６，ｐｐ．８０７−８１５）。ＦＫＢＰ−ＦＫ５０６およびＦＫＢＰ−ＣｓＡの場合、薬剤−イムノフィリン複合体はＴ細胞増殖を導く信号を伝達するＴ細胞受容体阻害性の酵素カルシニューリンに結合する。同様に、ラパマイシンとＦＫＢＰとの複合体はＲＡＦＴ１／ＦＲＡＰタンパク質と相互作用し、そしてＩＬ−２受容体からの信号伝達を阻害する。
　【０００５】
　イムノフィリンは中枢神経系に高濃度で存在することが見出されている。イムノフィリンは免疫系に比べ中枢神経系に１０−５０倍豊富に存在する。神経組織内でイムノフィリンは酸化窒素合成、神経伝達物質放出およびニューロン突起伸長に影響を及ぼすようである。
　【０００６】
　酸化窒素は体内で種々の役割を果たしている。脳において酸化窒素は神経伝達物質であると考えられている。それはアルギニンから、アルギニンのグアニジノ基を酸化して酸化窒素とシトルリンを形成する酸化窒素シンターゼにより形成される。グルタメート受容体のＮ−メチル−ｄ−アスパルテート（ＮＭＤＡ）サブタイプの刺激は酸化窒素シンターゼを急速かつ顕著に活性化し、そしてｃＧＭＰ形成を刺激する。アルギニン誘導体、例えばニトロアルギニンでの酸化窒素シンターゼの阻害はｃＧＭＰレベルにおけるグルタメート誘導増加をブロックする。酸化窒素シンターゼはカルシウム−カルモジュリン要求酵素であり、そしてＮ−メチル−ｄ−アスパルテート受容体は、グルタメート刺激により開口されてカルシウムが細胞中に急送され、そして酸化窒素シンターゼを活性化するカルシウムチャンネルを有するので、Ｎ−メチル−ｄ−アスパルテート受容体活性化は酸化窒素シンターゼ活性を刺激する。
　【０００７】
　グルタメートは生理学的神経伝達物質である。しかしながら、過剰に放出されると、グルタメートはＮ−メチル−ｄ−アスパルテート受容体を介して神経毒性を誘引する。大脳皮質ニューロン培養体のグルタメートまたはＮ−メチル−ｄ−アスパルテートでの処理は９０％までのニューロンを殺し、そしてこれらの作用はＮ−メチル−ｄ−アスパルテート拮抗薬剤によりブロックされる。このＮ−メチル−ｄ−アスパルテート神経毒性は血管発作（拍動）を伴う神経障害の主因であると考えられている。従って、大脳血管閉塞を伴うグルタメートの大量放出があり、そして数多くのＮ−メチル−ｄ−アスパルテート拮抗剤は発作障害をブロックする。酸化窒素シンターゼのリン酸化はその触媒活性を阻害する。酸化窒素シンターゼリン酸化を高めることにより、ＦＫ５０６は酸化窒素形成を機能的に阻害し得、そしてそのためにグルタメート神経毒性をブロックする。実際、低濃度のＦＫ５０６およびシクロスポリンＡは両方とも皮質培養体においてＮ−メチル−ｄ−アスパルテート神経毒性をブロックする。ラパマイシンはＦＫ５０６の治療効果を逆にするので、ＦＫＢＰの仲介機能は明らかである。免疫抑制剤として既に市販されているＦＫ５０６はおそらく発作患者に臨床的に使用され得る。
　【０００８】
　ＦＫ５０６はまた成長関連プロテイン−４３（ＧＡＰ４３）のリン酸化を増大する。ＧＡＰ４３はニューロン突起伸長に包含され、そしてそのリン酸化はこの活性を高めるように思われる。従って、ＦＫ５０６、ラパマイシンおよびシクロスポリンのニューロン突起伸長における作用はＰＣ１２細胞を用いて試験された。ＰＣ１２細胞は神経成長因子（ＮＧＦ）により刺激される際に軸索を伸ばす神経様細胞の連続系である。
　【０００９】
　驚くべきことに、ピコモル濃度の免疫抑制剤、例えばＦＫ５０６およびラパマイシンがＰＣ１２細胞および知覚神経、すなわち後根ガングリオン（神経節）細胞（ＤＲＧ）における軸索の成長を刺激することが見出されている（Ｌｙｏｎｓ等、Ｐｒｏｃ．ｏｆ　Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９４，ｖｏｌ．９１，ｐｐ．３１９１−３１９５）。全身の動物実験において、ＦＫ５０６は顔面神経損傷の後に神経再生を刺激することが見出され、そして座骨神経機能障害を有する動物における機能回復を結果的に導く。
　【００１０】
　より詳しくは、ＦＫＢＰに対する高い親和性を有する薬剤が強力なロタマーゼ阻害剤であり、そして優れた神経栄養作用を示すことが見出されている。Ｓｎｙｄｅｒ等、「イムノフィリンおよび神経系」、Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌｕｍｅ１，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ１９９５，３２−３７。これらの発見は種々の末梢ニューロパシー（神経障害）の処置や中枢神経系（ＣＮＳ）のニューロン再成長の増加における免疫抑制剤の使用を示唆する。神経変性障害、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮側索硬化（ＡＬＳ）が該障害において影響を受けたニューロンの特定の集合に特異的な神経栄養基質の損失または減少した利用可能性に起因して生じ得ることが研究により示されている。
　【００１１】
　中枢神経系における特定のニューロン集合体に影響を及ぼすいくつかの神経栄養因子は同定されている。例えば、アルツハイマー病は神経成長因子（ＮＧＦ）の減少または損失に起因することが推定されている。このため、アルツハイマー病患者を外因性神経成長因子またはその他の神経栄養タンパク質、例えば脳誘導成長因子、グリア誘導神経因子、毛様体神経栄養因子および変性性ニューロン集合体の残存を増加するためのニューロトロピン−３で治療することが提案されている。
　【００１２】
　種々の神経学的疾病状態におけるこれらのタンパク質の臨床への適用は、神経系の標的への、大きいタンパク質の移送および生体利用可能性の難しさにより妨げられている。一方、神経栄養活性を有する免疫抑制剤は比較的小さく、そして優れた生体利用可能性および特異性を示す。しかしながら、長期にわたり投与されると、免疫抑制剤は、腎毒性、例えば糸球体濾過の損傷および不可逆的な間隙性線維症（Ｋｏｐｐ等、１９９１，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１：１６２）；神経学的欠損、例えば不随意の震えまたは非特異的大脳アンギナ、例として非局在の頭痛（Ｄｅ　Ｇｒｅｏｎ等、１９８７，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１７：８６１）；および血管系の高血圧やそれに起因する合併症（Ｋａｈａｎ等、１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：１７２５）等を含む多くの非常に危険な副作用を示す。
　【００１３】
　【発明が解決しようとする課題】
　本発明は、軸索の成長を増加し、そして種々の神経病理学的状態においてニューロン成長および再生を促進し、その場合、ニューロン修復は物理的損傷や疾病状態、例えば糖尿病による末梢神経損傷、中枢神経系（脊髄および脳）への物理的損傷、発作を伴う脳損傷を包含して促進され得るための、そしてパーキンソン病、アルツハイマー病および筋萎縮側索硬化を包含する神経変性に関連する神経学的障害の治療のための、非常に有効である小分子ＦＫＢＰロタマーゼ阻害剤を含有する、非免疫抑制性ピペコリン酸誘導体化合物を提供する。
　【００１４】
　【課題を解決するための手段】
　本発明はＦＫＢＲ型のイムノフィリンに対する親和性を有する神経栄養性ピペコリン酸誘導体化合物をイムノフィリンタンパク質と関係がある酵素活性の阻害剤、特にペプチジル−プロリルイソメラーゼまたはロタマーゼ酵素活性の阻害剤として使用する方法に関するものである。
　【００１５】
　本発明の好ましい態様は、ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激するか、またはニューロン再生を促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害する、動物における神経学的障害を治療する方法である。
　【００１６】
　本発明のもう一つの好ましい態様は、ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を神経栄養成長因子、脳誘導成長因子、グリア誘導成長因子、毛様体神経栄養因子およびニューロトロピン−３からなる群から選択される神経栄養因子の有効量と組み合わせて動物に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激するか、またはニューロン再生を促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害する、動物における神経学的障害を治療する方法である。
　【００１７】
　本発明のもう一つの好ましい態様は、ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体化合物の有効量を損傷した末梢神経に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激または促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害する、損傷した末梢神経の成長を刺激する方法である。
　【００１８】
　本発明のもう一つの好ましい態様は、ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体化合物の有効量を損傷した末梢神経に投与し、損傷した末梢神経の成長を刺激することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害する、損傷した末梢神経の成長を刺激する方法である。
　【００１９】
　本発明のもう一つの好ましい態様は、ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体化合物の有効量を動物に投与し、ニューロン再生を促進することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害する、動物におけるニューロン再生および成長を促進する方法である。
　【００２０】
　本発明の別の好ましい態様は、ＦＫＢＰ型イムノフィリンに対する親和性を有するピペコリン酸誘導体の有効量を動物に投与し、神経変性を防止することからなり、前記ＦＫＢＰ型イムノフィリンはロタマーゼ活性を示し、そして前記ピペコリン酸誘導体は前記イムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害する、動物における神経変性を防止する方法である。
　【００２１】
　本発明の新規な神経栄養性ピペコリン酸誘導体化合物はＦＫ５０６結合性タンパク質、例えばＦＫＢＰ−１２に対する親和性を有する。本発明の神経栄養化合物がＦＫＢＰに結合されると、それらはプロリル−ペプチジルシス−トランスイソメラーゼ活性または前記結合タンパク質のロタマーゼ活性を阻害し、そして予期されなかったことに軸索（ｎｅｕｒｉｔｅ）の成長を刺激することが見出された。
　【００２２】
　本発明の化合物は無機または有機酸および塩基から誘導される塩の形態で使用され得る。そのような酸塩には以下のものが包含される：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ビスルフェート酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミススルフェートヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩化水素塩、臭化水素塩、ヨウ化水素塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモエート（パルミチン酸塩）、ペクチン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、タルタル酸塩、チオシアン酸塩、トシレートおよびウンデカン酸塩。塩基塩はアンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えばナトリウムおよびカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えばカルシウム塩およびマグネシウム塩、有機塩基との塩、例えばジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、およびアミノ酸例えばアルギニン、リジン等との塩を包含する。また、塩基性窒素含有基はそのような試薬、例えば低級アルキルハロゲン化物例えば塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピルおよびブチル；ジアルキルスルフェート、例としてジメチル、ジエチル、ジブチルおよびジアミルスルフェート、長鎖ハロゲン化物、例えば塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリル、アルアルキルハロゲン化物、例として臭化ベンジルおよびフェンエチル等で四級化されていてもよい。水もしくは油溶性または分散性生成物がそれにより得られる。
　【００２３】
　本発明の神経栄養化合物は患者に周期的に投与され、神経学的障害に治療を施すか、またはニューロン再生および成長を刺激することが望ましいその他の理由、例えば神経変性に関連する種々の末梢神経病的および神経学的障害に治療を施すことができる。本発明の化合物は種々の哺乳類の神経学的障害の治療のために、ヒト以外の哺乳動物に投与されてもよい。
　【００２４】
　本発明の新規化合物はロタマーゼ活性の強力な阻害剤であり、そして非常に高度の神経栄養活性を有する。この活性は損傷したニューロンの刺激、ニューロン再生の促進、神経変性の防止、およびニューロン変性や末梢神経病と関連することが知られている様々な神経学的障害の治療に有用である。治療され得る神経学的障害には以下のものが包含されるが、それらに限定されるものではない：三叉神経痛、舌咽神経痛、ベル麻痺、重症筋無力症、筋ジストロフィー、筋萎縮側索硬化、進行性筋萎縮、進行性球状遺伝性筋萎縮、ヘルニア様破壊または脱出インバータブラエ（ｉｎｖｅｒｔａｂｒａｅ）椎間板症候群、頸部脊椎症、叢障害（ｐｌｅｘｕｓ　ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、胸部出口破損症候群、末梢ニューロパシー例えば鉛、ダプソン、マダニ、ポルフィリア（ｐｏｒｐｈｙｒｉａ）またはギャン−バレー症候群により引き起こされる疾病、アルツハイマー病およびパーキンソン病。
　【００２５】
　上記の目的のために、本発明の化合物は経口で、非経口で、吸入スプレーにより、局部的に、直腸に、経鼻で、経頬で、経膣で、または慣用の非毒性の薬学的に許容され得る担体、助剤およびビヒクルを含有する投与配合剤中の移入レザバーを介して投与され得る。本明細書において使用されるような非経口という用語は皮下、静脈内、筋肉内、腹膜腔内、脊髄内、心室内（脳室内）、胸骨内および頭蓋内注射または注入（輸液）法を包含する。
　【００２６】
　中枢神経系標的として治療を有効にするために、イムノフィリン−薬剤複合体は末端で投与された場合に血液脳関門を容易に通過すべきである。血液脳関門を通過できない本発明の化合物は心室内（脳室内）経路により有効に投与され得る。
　【００２７】
　薬剤組成物は、例えば滅菌注入水性または油性懸濁液として、滅菌注入製剤の形態であってよい。この懸濁液は適当な分散剤または水和剤および懸濁剤を用いて当業界では公知の技術に従って製剤化され得る。滅菌注入製剤はまた、非毒性で非経口（注射）に適合し得る希釈剤または溶剤中の滅菌注入液または懸濁液、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液であってよい。使用され得る適用可能なビヒクルおよび溶剤は水、リンガー液および等張塩化ナトリウム液である。さらに、滅菌固定油が溶剤または懸濁媒体として通常使用される。この目的のために、合成モノ−またはジグリセリド等のあらゆる非刺激性の固定油が使用され得る。脂肪酸、例えばオレイン酸およびそのグリセリド誘導体は、注入可能なオリーブ油またはヒマシ油、特にそれらのポリオキシエチル化体の製造における用途を見出す。これらの油溶液または懸濁液はまた、長鎖アルコール希釈剤または分散剤を含有し得る。
　【００２８】
　化合物はカプセルまたは錠剤の形態で、例えば水性懸濁液または水溶液として経口投与され得る。経口用の錠剤の場合、慣用の担体はラクトースおよびコーンスターチを包含する。滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムもまた典型的に添加される。カプセル形態での経口投与のために、有用な希釈剤はラクトースおよび乾燥コーンスターチを包含する。水性懸濁液が経口用途に要求される場合、活性成分は乳化剤および懸濁剤と組合せられる。所望するならば、ある種の甘味料および／または香味料および／または着色料が添加され得る。
　【００２９】
　本発明の化合物はまた、薬剤の直腸投与のために坐剤の形態で投与され得る。これらの組成物は、室温で固体であるが、直腸温度で液体であり、そのため直腸内で融解して薬剤を放出するであろう適当な非刺激性の賦形剤と薬剤とを混合することにより製造され得る。そのような物質はココアバター、密蝋およびポリエチレングリコールを包含する。
　【００３０】
　本発明の化合物はまた、特に治療が行われる病気が眼、皮膚またはより下部の腸管の神経学的障害等の局部適用により容易に接近し得る領域または器官を包含する場合には、局部に投与されてもよい。適当な局部製剤は上記領域の各々のために容易に調製される。
　【００３１】
　眼への使用のために、上記化合物は等張ｐＨ調整滅菌生理食塩水中の微小化懸濁液として、または好ましくは防腐薬、例えば塩化ベンジルアルコニウムを含み、もしくは含まずに等張ｐＨ調整滅菌生理食塩水中の溶液として製剤化され得る。また、眼への使用のために、上記化合物は軟膏例えばワセリン中に製剤化されてもよい。
　【００３２】
　皮膚への局部的適用のために、上記化合物は該化合物を懸濁または溶解されてその中に含有する適当な軟膏、例えば以下の１種またはそれ以上の混合物中に製剤化され得る：鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックスおよび水。また、上記化合物は例えば以下の１種またはそれ以上の混合物：鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水中に懸濁または溶解されて活性化合物を含有する適当なローションまたはクリームに製剤化されてもよい。
　【００３３】
　より下部の腸管に対する局部適用は直腸坐剤製剤（上記参照）または適当な浣腸製剤で行われ得る。
　【００３４】
　上記有効化合物約０．１ｍｇないし約１００００ｍｇのオーダーでの投与レベルが上記状態の処置に有用であり、約０．１ｍｇないし約１０００ｍｇのレベルが好ましい。単一投与形態を製造するために担体物質と組合せられ得る有効成分の量は処置される主体および投与の特定の様式に応じて変化するであろう。
　【００３５】
　しかしながら、特定の患者に対する特定の投与レベルは使用される特定化合物の活性、年齢、体重、全般的な健康状態、性別、食事、投与時間、排泄の頻度、薬剤の併用、処置される特定の疾病の程度および投与の形態等の種々の因子に依存するであろう。
　【００３６】
　上記化合物はその他の神経栄養薬剤、例えば神経栄養成長因子（ＮＧＦ）、グリア誘導神経因子、脳誘導神経因子、毛様体神経栄養因子およびニューロトロピン−３と共に投与され得る。その他の神経栄養薬剤の投与レベルは上記の因子および薬剤併用の神経栄養作用に依存するであろう。
　【００３７】
　【発明の実施の形態】
方法および操作
座骨神経挫傷
　本実施例は通常の末梢神経における高レベルのＦＫＢＰを示し、そしてこれらが神経挫傷に続いて増加することを示す。
　ＦＫＢＰがＧＡＰ−４３の作用におけるニューロン突起伸長に生理学的に関連しているならば、末梢神経においてＦＫＢＰの実質的レベルを予測し得る。従って、我々はラット座骨神経、ならびに２日齢の幼ラットから単離された成長円錐体における〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性を測定し、そして大脳皮質および種々の末梢組織の値と比較した。
　【００３８】
〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６オートラジオグラフィーは、解凍および風乾後、５０ｍＭ　Ｈｅｐｅｓ、２ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン、５％エタノールおよび０．０２％ツイーン２０（ｐＨ７．４）からなる緩衝液中で１時間予備培養した未固定切片上で記載されるように行われた。切片を次に１ｎＭ〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６（８６．５Ｃｉ／ミリモル；デュポン−ＮＥＮ、マサチューセッツ州ボストン）に予備培養緩衝液中室温で１時間曝露した。非特異的結合は１μＭ　ＦＫ−５０６の添加により決定された。保温の後、スライドを氷冷予備培養緩衝液中で４×５分間洗浄し、そして風乾した。放射標識切片を次にトリチウム感受性フィルムまたはコダックＮＴＢ−２エマルジョンを被覆したカバースリップに並列した。
　【００３９】
　【表１】
座骨神経および成長円錐体への〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６の結合性
〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６の結合性は方法の項に記載したように評価された。表１（Ａ）において実験は３回反復され、１０％未満の変動だった。表１（Ｂ）において、値は平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．（ｎ＝３）て表される。＊Ｐ＜０．０５個々の平均値に対するスチューデントｔ試験。
　【００４０】
　試験された全ての組織の中で、座骨神経結合レベルが最高であり、大脳皮質のものより幾分高く、そしてリンパ球と結合したＦＫＢＰを含有する胸腺および脾臓におけるレベルより約１０倍高い。表１（Ａ）参照。
　神経再生におけるＦＫＢＰの役割に対する証拠は、我々が成熟ラットの座骨神経を挫傷させ、そして神経挫傷部から５ｍｍ離れた基部において７日後に〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６の結合性を測定した実験に由来する。
　【００４１】
　スプラーグ−ダウレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラット（１７５−２００ｇ）をロムプン（１２ｍｋ／ｋｇ）、ケタミン（３０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻痺させた。無菌法を用いて、顔面神経を宝石商摂子でもって茎乳突孔からその出口に向け遠位に２ｍｍの箇所で２×３０秒間圧搾した（この操作を本明細書で、挫傷とも記載する）。同様の操作が大腿部中央のレベルにある座骨神経を圧搾するために使用された。
　【００４２】
　挫傷部の基部側における全体の結合性が４組、対照の値と比較された。全タンパク質は基部側断片において実質的に増加しており、タンパク質ｍｇあたりの〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性は基部断片において２倍程度である。
　【００４３】
顔面神経挫傷
　この例は顔面神経損傷がＦＫＢＰおよびＧＡＰ−４３の同時発現を増加することを示す。
　顔面神経挫傷に続いて、ＧＡＰ−４３のｍＲＮＡレベルは顔面神経核において増加する。ｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを用いて、我々は顔面神経挫傷に続いてＦＫＢＰ、ＧＡＰ−４３およびカルシニューリンのｍＲＮＡレベルを測定した。
　【００４４】
　ラットは１５０−２００ｍｌ氷冷リン酸緩衝液（ＰＢＳ）（０．１Ｍ、ｐＨ７．４）で心臓を通すように灌流された。組織を除去し、そしてすぐにイソペンタン（−８０℃）中に凍結させた。低温切片（厚さ１８μｍ）を切断し、そしてゼラチン被覆スライド上に載せて解凍した。
　【００４５】
　ｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーションは〔３５Ｓ〕ｄＡＴＰで末端標識されたアンチセンスオリゴヌクレオチドプローブを用いて上記のように行われた。ＦＫＢＰに対し、Ｍａｋｉ等、（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７，５４４０−５４４３およびＳｔａｎｄａｅｒｔ，Ｒ．Ｆ．等、（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ３４６，６７１−６７４（これらの文献は参照により本明細書に編入される）に開示されたクローン化ｃＤＮＡの以下の領域：７０−１１４、２１４−２５８、４４１−４８５に相補的な３種のオリゴヌクレオチドが使用された。ＧＡＰ−４３に対し、Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ，Ａ．等、（１９８７）ＥＭＢＯ　Ｊ．６，３６４１−３６４６（該文献は参照により本明細書に編入される）に開示されたクローン化ｃＤＮＡのヌクレオチド９６１−１００８、１０８１−１１２８、１２０１−１２４８に相補的な３種のアンチセンスオリゴヌクレオチドが使用された。カルシニューリンＡαに対し、Ｉｔｏ等、（１９８９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６３，１４９２−１４９７（該文献は参照により本明細書に編入される）に開示されたヌクレオチド１３６３−１４１０および１７１１−１７５８に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドが、そしてカルシニューリンＡβに対し、Ｋｕｎｏ，Ｔ．等、（１９８９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６５，１３５２−１３５８（該文献は参照により本明細書に編入される）に開示されたヌクレオチド１３３９−１３８６および１５６９−１６１６が使用された。切片を解凍し、そして乾燥させ、次にＰＢＳ中の４％の新たに解重合したパラホルムアルデヒド中に５分間固定した。ＰＢＳ中で２回すすいだ後、切片を０．１Ｍトリエタノールアミン、０．５％ＮａＣｌ（ｐＨ８．０）中の０．２５％無水酢酸でアセチル化し、次に規格アルコール中で水分除去を行い、クロロホルム中で５分間脱脂し、９５％エタノールに再び水和させ、そして風乾した。ハイブリダイゼーションは５０％脱イオン化ホルムアルデヒド、１０％硫酸デキストラン、４×ＳＳＣ、１×デンハルツ溶液、２０ｍＭリン酸緩衝液、０．１ｍｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡ、０．１ｍｇ／ｍｌ酵母トランスファーＲＮＡ、１０ｍＭジチオトレイトール、２．０％べータメルカプトエタノール（ＢＭＤ）、１．０ｍＭ　ＥＤＴＡおよび標識プローブ（２００００００ｄｐｍ／切片）を含有する緩衝液中３７℃で一晩行われた。ハイブリダイゼーションに続き、切片を１×ＳＳＣ、１．０％ＢＭＥ中室温で１５分間すすぎ、次に５５℃で１０分間２回風乾し、そしてフィルム上に置くか、またはコダックＮＴＢ−２エマルジョン中に浸漬した。
　【００４６】
　ＦＫＢＰおよびＧＡＰ−４３発現の顕著な増加が観察され、カルシニューリン発現に変化は見られなかった。顔面神経挫傷後２４時間以内では、ＦＫＢＰ発現は１−２週間明らかなピークレベルで増加し、ｍＲＮＡ濃度は３週間で実質的に消失する。より高倍率下での実験は、ＦＫＢＰｍＲＮＡに対する銀粒子の増加したレベルがニューロン細胞体に限られていることを示す（図２）。切断した顔面核のノーザンブロット分析は、ＦＫＢＰ特異的ｍＲＮＡの増加したレベルを確認する。ＧＡＰ−４３ｍＲＮＡはＦＫＢＰのものと近似する時間経過を辿る。一方、カルシニューリン発現における変化は試験したあらゆる時点で検出されない。
　【００４７】
　切断顔面核からの全細胞ＲＮＡが単離された。１０または２０μｇの全ＲＮＡの試料が１％アガロース、２．０％ホルムアルデヒドゲルで電気泳動され、そしてナイロン膜に１０ｎＭ　ＮａＯＨ中で移し取られた。ランダムプライムにより１×１０９ｃｐｍ／ｕｇの比活性まで〔３５Ｓ〕ｄＣＴＰで標識されたＦＫＢＰに対するｃＤＮＡプローブを、５０％ホルムアミド、２×ＳＳＰＥ、７％ＳＤＳ、０．５％Ｂｌｏｔｔｏおよび１００ｕｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡからなる緩衝液中４２℃で一晩バイブリッド形成させた。ブロットを室温で２０分間洗浄し、そして０．１５×ＳＳＣ、０．１５％ＳＤＳ中６５℃で２×１５分間洗浄し、次いで４８０９６時間フィルムに曝露した。
　【００４８】
　非損傷側に、対照領域に比べ銀粒のわずかな増加が観察される。これは反対側のニューロンもまた軸索切断に応答するという発見と一致する。
　顔面神経挫傷に続いて、ラットは顔面神経麻痺を示したが、これは神経再生の完了と一致する３週間で機能回復するひげ動作の欠失により明らかである。我々のラットの中に我々はまた、３週間で機能の回復を伴う神経挫傷の後のひげ動作の欠失を観察した。従って、ＧＡＰ−４３およびＦＫＢＰの高められた発現の時間経過は神経再生の過程と相互に関連する
　【００４９】
座骨神経再生
　この例は座骨神経再生と関連するＦＫＢＰおよびＧＡＰ−４３における変化を示す。
　座骨神経損傷に続いて、ＧＡＰ−４３ｍＲＮＡレベルは脊髄運動ニューロンおよび後根ガングリオンニューロン細胞の両方において高められる。座骨神経挫傷に供したラットにおいて、我々はＬ−４，５（図３）および後根ガングリオンニューロン細胞にＧＡＰ−４３発現（図４）の報告された増加と一致する運動ニューロンにおけるＦＫＢＰに対するｍＲＮＡレベルでの顕著な増加を観察した。高倍率で、我々はニューロン細胞体に局在化したＦＫＭＢｍＲＮＡ銀粒を観察した（図３）。我々はＦＫＢＰに選択的に結合する条件下で〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性のオートラジオグラフィーによるＦＫＢＰタンパク質レベルを追跡した。高められたＦＫＢＰは後根ガングリオンにおいて一次知覚ニューロンにおいて検出され、一方、座骨神経挫傷に続いて運動ニューロン細胞に増加はないことが明らかである。
　【００５０】
　増加ＦＫＢＰ発現の再生選択性との関連はリシンでの実験によりさらに支持される。末梢神経に注入された場合、リシンは関連神経再生なしに破壊される細胞体中に戻される。我々はリシン（ＲＣＡ６０、シグマ、ミズーリ州セントルイス）０．５ｕｇを、ＳｔｒｅｉｔおよびＫｒｅｕｔｚｂｎｅｒｇの方法に従って０．５ｕｌＰＢＳおよび０．１％ファストグリーン中、その他の実験において圧搾が行われたのと顔面神経の同じ部位に注射した（Ｓｔｒｅｉｔ等、（１９８８）Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．２６８，２４８−２６３）。
　【００５１】
　我々はリシン処理後２、４および７日目にＦＫＢＰｍＲＮＡに対するｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーション局在化試験を行った（図５）。ＦＫＢＰｍＲＮＡにおける増加がリシン処理後に観察されない。リシン処理の後にも神経挫傷の後にもグリオーシスが起こる。リシン処理に続いてＦＫＢＰｍＲＮＡの増加がないのは、顔面核におけるＦＫＢＰｍＲＮＡの選択的ニューロン局在化と一致する。
　【００５２】
座骨神経におけるＦＫＢＰ移送
　この例はＦＫＢＰが座骨神経において急速に移送されるされることを示す。
　ＦＫＢＰｍＲＮＡの増加にもかかわらず、座骨神経挫傷に続いて運動ニューロンにおいてＦＫＢＰタンパク質が増加しないことは、該タンパク質が細胞体から出て神経突起中に急速に移送されることを示唆する。このことは、ＦＫＢＰｍＲＮＡが低レベルのＦＫＢＰタンパク質を含有する小脳のグラニュール細胞に集中し、ＦＫＢＰタンパク質レベルがグラニュール細胞から生じる平行繊維と結合した小脳の分子層に高度に集中しているという初期の観察と適合する。ＦＫＢＰの可能な移送を試験するために、我々は座骨神経を圧搾し、そして７日後、圧搾部の１０および２０ｍｍの基部側の位置を結紮した。結紮６時間後、我々は〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性を結紮部位の３ｍｍ領域において追跡した（図６）。
　【００５３】
　軸索移送試験のために、古典的結紮法がＴｅｔｚｌａｆｆ等の方法に続いて使用された。座骨神経挫傷１週間後、２種の集合結紮部（５１０縫合）が最初の圧搾部位から１０ｍｍの位置にある最も遠位の結紮から約１０ｍｍ離れた神経上に置かれた。６時間後、神経５−３ｍｍ部分が基部側、遠位側、および図５に示される集合結紮部の間の領域から集められた。神経部分が、５０ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７．４　１０容量中にホモジネートすることにより〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性アッセイのために調製された。ホモジネートを１５０００×ｇ４℃で２０分間遠心分離し、そして上清を集め、クマーシーブルー染料結合性アッセイ（パース）を用いて全タンパク質濃度を評価した。〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性は、５０ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７．４、２ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン、２５０ｐＭ〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６および種々の濃度の非標識ＦＫ−５０６からなるアッセイ緩衝液最終容量０．４ｍｌ中に全可溶性タンパク質２ｕｇを含有する一部に対し、記載されるように（４）行われた。２５℃で６０分間保温した後、０．３５ｍｌをＬＨ−２０セファデックス（ファルマシアＬＫＢ）の０．８ｍｌカラム上に載せ、そしてアッセイ緩衝液０．４ｍｌで洗浄した。溶離液は集められ、そしてシンチレーションカウンターで計測した。
　【００５４】
　結果は図５に示される。〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性レベルは挫傷部から結紮まで２０ｃｍの基部側において最高であり、その他の部位においてほぼ４倍のレベルであった。部位Ａ−Ｄにおける〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性レベルに基づいて、我々はＦＫＢＰに対する前方への移送の速度を計算した。日あたり２４０ｍｍの速度はニューロンタンパク質に対して最速移送速度を示すＧＡＰ−４３に対する移送速度と実質的に同じである。
　【００５５】
　神経挫傷に続きＦＫＢＰの蓄積を可視化するために、我々は座骨神経の圧搾の部位をマークするために緩い結紮を行い、そしてＦＫＢＰｍＲＮＡに対するｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーションおよび〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性に対するオートラジオグラフィーを行った（図７）。ほとんどのＦＫＢＰｍＲＮＡおよび〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性は挫傷部に近い基部側に蓄積する。これらのレベルは対照の非挫傷座骨神経におけるよりもかなり高い。高倍率でのｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーションおよびオートラジオグラフィー調製物の試験はニューロン繊維に結合した銀粒子を表す。同定を我々が正確に決定し得ない細胞に局在した銀粒子もあるが、それらはシュワン細胞、マクロファージまたは繊維芽細胞であるかもしれない。
　【００５６】
ＰＣ１２細胞中のＦＫＢＰ
　この例はＰＣ１２細胞がＦＫＢＰを含有し、そしてＦＫＢＰレベルが神経成長因子により高められることを示す。我々は、基礎麻酔条件下〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６の細胞への結合性を追跡し、そして神経成長因子（ＮＧＦ）で処理することによりＦＫＢＰの存在に対してＰＣ１２細胞を試験した。
　【００５７】
　ＰＣ１２細胞中のＦＫＢＰレベルは〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性曲線のスカッチャード分析から得られた。培養体が培養ウエルから掻き取られ、そして５０ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７．４、１ｍＭ　ＥＤＴＡ、１００μｇ／ｍｌフェニルメチルスルホニルフルオリドの１０容量中にホモジネートし、そして４℃、４００００×ｇで２０分間遠心分離した。タンパク質は標準としてウシ血清アルブミンを用いるクーマシーブルー染料結合アッセイにより決定された。２５０ｐＭ〔３Ｈ〕ジヒドロＦＫ−５０６（８６．５Ｃｉ／ミリモル、デュポン／ＮＥＮ）の結合性が５０ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７．４、２ｍｇ／ｍｌＢＳＡおよび種々の濃度の非標識ＦＫ−５０６を含有するアッセイ緩衝液最終容量０．４ｍｌ中に可溶性タンパク質５μｇを含有する試料に対して評価された。２５℃で６０分間保温した後、０．３５ｍｌをアッセイ緩衝液で予め平衡化したＬＨ−２０セファデックス（ファルマシアＬＫＢ）の０．８ｍｌカラム上に載せた。カラムをさらにアッセイ緩衝液０．４ｍｌで洗浄し、溶離液を集め、フォーミュラ９６３（デュポン／ＮＥＮ）と混合し、そしてベックマンシンチレーションカウンターで計測した。結合した全体の〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６から１μＭの非標識ＦＫ−５０６の存在下で得られる結合性を差し引くことにより特異的結合性が決定された。
　【００５８】
　結果は図８に示されている。〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６は未処理ＰＣ１２細胞ホモジネートに飽和状に結合する。典型的な試験において、約１０００ｃｐｍが結合し、１μＭ　ＦＫ５０６の存在下での非特異的結合性が約１５０ｃｐｍである。〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性の５０％阻害は結合部位が真正のＦＫＢＰに相当することを示す１−２ｎＭ　ＦＫ５０６で生じる。〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６結合性はＮＧＦ処理に続いて顕著に増加する。顕著な増加は１０−１５時間で現れる。結合性は２０時間で３倍になり、そして中程度の増加が１００時間目に現れる。
　【００５９】
ＰＣ１２細胞中の増加した軸索伸長
　この例はＦＫ−５０６およびラパマイシンがＰＣ１２細胞中で軸索伸長を増加することを示す。
　ＰＣ１２細胞は１０％熱不活性化ウマ血清および５％熱不活性化ウシ胎児血清を補足したダルベッコの変性イーグル培地（ＤＭＥＭ）中３７℃で５％ＣＯ２に維持された。ＮＧＦにおける分化のために、ラット脚コラーゲンを５μｇ／ｃｍ２で被覆した３５ｍｍ培養ウエル中に１×１０５で細胞を置き、そして２％ウマ胎児血清、ＮＧＦおよび／またはＦＫ５０６もしくはラパマイシンを補足したＤＭＥＭに培地を代える前に付着させた。軸索成長の定量のために、ランダム写真が作成され（ウエルあたり３−４）、そして突起形成ニューロンが５μｍより大きい突起に対して計測された。実験条件は写真撮影者および細胞計測者により知らされなかった。４回の別々の試験が示された各々のデータ点に対して二重に行われた。軸索が同定され、そして写真あたり約１００細胞から計測した。従って、１２００−１６００細胞からの軸索がデータ点あたり計測された。
　【００６０】
　観察されるように、ＮＧＦは１ｎｇ／ｍｌで最高刺激の１／２、そして約５０−１００ｎｇ／ｍｌで最高増加を示して、軸索成長を強力に刺激する（図９，１０）。ＦＫ５０６（１００ｎＭ）はＮＧＦへの感受性を高めることによりＮＧＦの効果を著しく増加させる。従って、ＦＫ５０６は最高の成長を引き出すのに必要とされるＮＧＦ濃度を２０−５０倍減らす。ＦＫ５０６の不在下での最高成長の１／２が５ｎｇ／ｍｌＮＧＦで生じ、そしてＦＫ５０６の存在下では０．１ｎｇ／ｍｌＮＧＦで生じる。ＮＧＦの最高濃度（１０−１００ｎｇ／ｍｌ）では、ＦＫ５０６は追加の軸索成長を生じない。
　【００６１】
　ＦＫ５０６はその神経栄養効果において極めて強力である。最高以下の濃度のＮＧＦ（１ｎｇ／ｍｌ）の存在下、１ｎＭのＦＫ５０６が５０ｎｇ／ｍｌＮＧＦで観察されたのと同じ最大成長を生じる（図１１）。ＦＫ５０６の最大効果の１／２が約１００ｐＭで得られる。ＮＧＦの不在下、ＦＫ５０６は軸索成長を引き出さない（図１０）。
　【００６２】
　ラパマイシンは、カルシニューリンを介して作用すると考えられず、その他のリン酸化カスケードに影響を与え得る強力な免疫抑制剤である。ＦＫＢＰでＦＫ５０６拮抗剤としておそらく作用することにより、ＦＫＢＰおよびカルシニューリンを介して生じるＦＫ５０６の作用をラパマイシンは強力にブロックする。ラパマイシン（１μＭ）はＦＫ５０６の神経栄養作用をブロックしない。実際、ラパマイシンはそれ自身神経栄養性であり、１ｎＭで高い軸索成長を付与する。ラハマイシンおよびＦＫ５０６は異なる機構を介して作用するように考えられる。従って、ラパマイシンは突起の数ならびにそれらの長さを増し、ＦＫ５０６は主に軸索の長さを増す。さらに、ＦＫ５０６およびラパマイシンの効果は付加的であるように考えられる。
　【００６３】
後根ガングリオン
　この例は、ＦＫ５０６が感覚ガングリオンに対して神経栄養性であることを示す。我々は１６日目の胚状態のラットからの後根ガングリオンの一次培養体へのＦＫ５０６の作用を試験した。
　【００６４】
　Ｅ１６段階の胚を妊娠スプラーグ−ダウレイラットから取りだし、そして後根ガングリオンを摘出する。全体のガングリオン外植片をコラーゲン被覆３５ｍｍ皿（ファルコン）中、Ｎ２培地（ダルベッコ変性イーグル培地とハムＦ１２培地との１：１混合物、プロゲステロン、セレニウム、インシュリン、プトレスシン、グルコース、およびペニシリン−ストレプトマイシンを補足）を用いて１５％ＣＯ２環境中３７℃で培養した。感覚ガングリオンは種々の濃度のＮＧＦおよび／またはＦＫ５０６またはラパマイシンまたは抗ＮＧＦ抗体で処理された。ガングリオンはオリンパスＩＭＴ−２倒立顕微鏡を用いて相コントラストの下、２−３日毎に観察され、そして軸索長さの測定が行われた。各ガングリオンの軸索領域は４つの象限に分割され、そして各象限における最大軸索の長さがアイピースマイクロメーターを用いてミクロン単位で計測された。これらの測定の平均をガングリオンに対する軸索長さとして採用した。
　【００６５】
〔３Ｈ〕ＦＫ５０６オートラジオグラフィーに対し、後根ガングリオン培養体をコラーゲン５μｇ／ｃｍ２で被覆したチャンバースライド上で増殖させた。培養体を０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中の氷冷した４％の新たに解重合したパラホルムアルデヒドでスライド上に１時間固定し、次いでリン酸緩衝液で２回洗浄した。固定された培養体はスライドを５０ｍＭ　Ｈｅｐｅｓ、２ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン、および０．０２％ツイーン２０（ｐＨ７．４）からなる緩衝液中で予備培養することにより〔３Ｈ〕ＦＫ−５０６で標識された。次いで、１ｎＭ〔３Ｈ〕ＦＫ５０６を含有する同一アッセイ緩衝液中で培養した。非特異的結合は１μＭ非標識ＦＫ５０６を添加することにより決定された。スライドを次に乾燥前に４×５分すすぎ、そして次にトリチウム感受性フィルムに並列した。
　【００６６】
〔３Ｈ〕ＦＫ５０６結合部位のオートラジオグラフィーは、これらのガングリオンにおいてＦＫＢＰ結合銀粒子の実質的なレベルを示す（図１２）。１μＭ非標識ＦＫ５０６では、オートラジオグラフの粒子は結合の特異性を示していなかった。以前に報告されたように、ＮＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）はガングリオン突起の数および長さを著しく増やす（図１３）。ＦＫ５０６（１μＭ）は単独で同様の神経栄養効果を生じるが、１ｎＭという低濃度のＦＫ５０６が成長におけるかなりの増加を生じる。ＦＫ５０６拮抗剤として作用するラパマイシン（１μＭ）はＦＫ５０６（１μＭ）の効果をブロックし、従ってＦＫ５０６の作用はＦＫＢＰの特徴的な薬剤特異性を示す。
　【００６７】
　添加されるＮＧＦの不在下で、ＦＫ５０６はＰＣ１２細胞における軸索成長を刺激しないことから、感覚ガングリオンにおいてＦＫ５０６は単独で神経栄養性である。ガングリオンにおけるシュワン細胞はＮＧＦを製造し得、そしてシュワン細胞によるＮＧＦの製造はタンパク質リン酸化反応により制御される。ＦＫ５０６単独の作用が内因性ＮＧＦの効力を包含するのかを確認するために、我々はＮＧＦに対する抗体の影響を調べた（図１３）。抗ＮＧＦはＦＫ５０６（１μＭ）の神経栄養効果を著しく減じた。我々が添加したＮＧＦの存在下または不在下で抗ＮＧＦに曝露した細胞中で毒性の形態学的証拠を観察しなかったように、抗ＮＧＦは毒性作用を示さない。
　【００６８】
　ＦＫ５０６は軸索成長の刺激に極めて効力がある。１ｐＭという低濃度のＦＫ５０６が検出し得る増加を生じる。０．１ないし１０ｎＭ　ＦＫ５０６で徐々に増加する成長が生じ（データは示していない）、最大の成長は１μＭのＦＫ５０６を必要とする。
　【００６９】
　軸索成長の時間経過はＮＧＦおよびＦＫ５０６の全ての濃度で同様である。いくらかの成長が１日目に現れ、成長は約５−６日でプラトーに達し始めている。
　【００７０】
　ＦＫ５０６の効果は低濃度のラパマイシン、ＦＫＢＰでのＦＫ５０６公知拮抗剤により逆にされるので、ＦＫ５０６神経栄養効果は感覚ガングリオンにおけるＦＫＢＰ（ＦＫ５０６結合性タンパク質）を包含する。ラパマイシンＰＣ１２細胞においてＦＫ５０６効果をブロックしないことは、ラパマイシンの別々の刺激効果をおそらく反映している。ＰＣ１２細胞における軸索成長のラパマイシン刺激に対する機構は直ちに明らかとはならない。その免疫抑制作用はＦＫ５０６のものとは異なる機構を包含すると考えられる。ラパマイシンはＳ６リボソームサブユニットをリン酸化するＳ６キナーゼを阻害し得る。ラパマイシンはまたホスファチジルイノシトール−３−キナーゼを阻害する。
　【００７１】
　プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）仲介リン酸化はニューロン再生の間の突起成長に関連している。その他の証拠はニューロン突起伸長におけるＰＫＣの阻害効果を示唆する。
　【００７２】
　ＧＡＰ−４３は軸索に高度に集中した主なカルシニューリン基質であり、そしてそのリン酸化はＦＫＢＰにより制御される。低レベルのＧＡＰ−４３を有するＰＣ１２細胞系が通常の軸索成長を示すので、ＧＡＰ−４３は軸索伸長に直接包含され得ない。しかしながら、リン酸化ＧＡＰ−４３のレベルは軸索がそれらの標的に近づく際に増加されるので、ＧＡＰ−４３およびそのリン酸化は標的化軸索に包含され得る。ＧＡＰ−４３のリン酸化はまた、軸索伸長を制御するＣａ２＋の移動に影響を及ぼし得る。リン酸化ＧＡＰ−４３はホスファチジルイノシトールビスホスフェート形成を阻害し、イノシトール１，４，５−トリホスフェートおよび会合したＣａ２＋放出のレベルを消失させる。さらに、ＧＡＰ−４３のリン酸化はＣａ２＋を結合するのに利用し得る生成遊離カルモジュリンを有するカルモジュリンに対する親和性を低下する。
　【００７３】
　イムノフィリンは、軸索成長を制御するＣａ２＋に影響を与えるカルシニューリン以外の部位に作用し得る。ＦＫＢＰはＣａ２＋放出チャンネルであるリアノジン受容体に結合する。骨格筋の筋小胞体において、ＦＫ５０６はリアノジン受容体からＦＫＢＰを解離して、Ｃａ２＋誘導Ｃａ２＋放出機構を促進する。さらに、ＦＫ５０６はＦＫＢＰ２５ステロイド受容体およびその他の未同定標的、例えばＦＫＢＰ１３に関連するものを包含するその他の部位に作用する。従って、その他の有効な機構は軸索伸長においていくつかの役割を果たし得る。
　【００７４】
　イムノフィリンの非免疫抑制性および免疫抑制性リガンドはＰＣ１２細胞において軸索成長を刺激する
　本試験において、我々はＰＣ１２細胞および無傷ニワトリ感覚ガングリオンにおいて軸索伸長の際のイムノフィリンのリガンド数の影響を詳細に調べた。我々は、非免疫抑制性および免疫抑制性リガンドがＰＣ１２細胞および感覚ガングリオンの両方での軸索成長の増加において極めて有効であることを報告する。
　【００７５】
　我々の初期の研究において、我々は神経成長因子（ＮＧＦ）の効力を約１０倍に高めることにより免疫抑制剤がＰＣ１２細胞における軸索成長を刺激することを見出した（Ｌｙｏｎｓ等、１９９４）。添加されるＮＧＦの不在下で、神経栄養効果は観察されない。本試験において、我々は免疫抑制剤ＦＫ５０６およびラパマイシンの０．１−１００ｎｇ／ｍｌのＮＧＦの存在下でのＰＣ１２軸索成長への効果を評価した。
　【００７６】
　添加されるＮＧＦの不在下で、いずれの薬剤も軸索成長を刺激しない。０．１ｎｇ／ｍｌのＮＧＦ単独では、５０ｎｇ／ｍｌで明白である最大効果の約１５％のみの軸索伸長におけるわずかな増加を生じる（図１４）。ラパマイシンはその他の薬剤に比べより大きい範囲まで、０．１−０．５ｎｇ／ｍｌＮＧＦで３−４倍の刺激でもって軸索成長を刺激する。ラパマイシンにより誘導される増加の範囲はより高濃度のＮＧＦで減少し、そして５−５０ｎｇ／ｍｌＮＧＦでは統計学的に有意ではない。ＦＫ５０６はまた、より低いＮＧＦ濃度で最も明らかな効果を有し、かつ０．５ｎｇ／ｍｌＮＧＦで明らかな軸索成長の最大２．５倍増加を有し、神経栄養性である。
　【００７７】
　構造においてシクロスポリンＡ、ＦＫ５０６およびラパマイシンに関連する免疫抑制薬剤の３種の主要な構造群がある。ＦＫ５０６およびシクロスポリンＡは別々のイムノフィリンタンパク質に結合するけれども、それらは両方カルシニューリンを阻害することにより免疫抑制剤として作用する。ラパマイシンは非常に高い親和性でＦＫＢＰ−１２に結合するが、薬剤−イムノフィリン複合体はカルシニューリンに結合しない。また、免疫抑制作用は最近同定され、そしてクローン化されたタンパク質で、ＲＡＦＴ−１（ラパマイシンおよびＦＫ５０６標的）と表記されるもの、およびＦＲＡＰと表記されるもの（ＳａｂａｔｉｎｉおよびＳｙｎｄｅｒ，１９９４；Ｂｒｏｗｎ等、１９９４；Ｃｈｅｎ等、１９９４）に結合するラパマイシン−ＦＫＢＰ−１２複合体に起因する。ラパマイシンはＦＫＢＰ−１２に強力に結合するが、カルシニューリンを阻害しないので、それはＦＫ５０６に対する拮抗剤として作用し得る。ラパマイシンの非免疫抑制性誘導体が存在する。これらの１種であるＷＡＹ−１２４４６６、ラパマイシンのトリエン誘導体はＦＫＢＰ−１２に対して高い親和性で結合し、そしてロタマーゼ活性を阻害するが、免疫抑制作用を欠いている。シクロスポリンＡは大環状ウンデカペプチドである。アラニンの６位にメチル基を単に付加すると、カルシニューリンを阻害せず、免疫抑制作用を欠く薬剤を生じるが、それはシクロスポリンＡと同じ範囲までシクロフィリンのロタマーゼ活性を阻害する（Ｍｅ　ＣｓＡ　ｒｅｆ）。
　【００７８】
　免疫抑制活性が神経栄養作用に必要とされるか否かを確認するために、我々はＦＫ５０６、ラパマイシンおよびシクロスポリンＡの神経栄養作用を非免疫抑制剤ＷＡＹ−１２４４６６と比較し、ＰＣ１２細胞上で広範囲の濃度を評価する（図１５、１６）。全ての試験は０．５ｎｇ／ｍｌＮＧＦの存在下に行われた。前に観察されたように、ＦＫ５０６は非常に強力に軸索伸長を刺激し、最大刺激の１／２が０．５ｎＭで、そして最大効果が５−１００ｎＭである。
　【００７９】
　ラパマイシンは調べられた最も有効な薬剤であり、そして最大レベルの軸索伸長を生じる。反復された実験において、最大伸長の５０％が約０．２−０．４ｎＭで現れ、最大効果が約１０−１００ｎＭで現れる。ラパマイシンでの最大軸索伸長は５０ｎｇ／ｍｌＮＧＦの最大効果に匹敵する。ＷＡＹ１２４４６６はまた神経栄養性であるが、ラパマイシンに比べより低い最大効果を生じる。ＷＡＹ−１２４４６６での１／２最大刺激は約１０ｎＭで生じ、そして最大効果が１００−１０００ｎＭで生じる。従って、ラパマイシンはＷＡＹ−１２４４６６より約１００倍強力であり、ＦＫＢＰ−１２への結合において４０倍高い効力に類似する（表２）。
　【００８０】
　シクロスポリンＡは軸索成長の刺激においてＦＫ５０６またはラパマイシンに比べ実質的により低い効力であり、ロタマーゼ活性の阻害において実質的により低い効力に相当する。シクロスポリンＡでの軸索成長の５０％最大刺激は５０ｎＭで明白であり、１００ｎＭで最大効果であり、そしてより高濃度のシクロスポリンＡでは軸索成長が減少する。シクロスポリンＡでの最大刺激は５０ｎｇ／ｍｌＮＧＦの効果の約６０％である。
　【００８１】
　突起伸長の一般的なパターンは種々のイムノフィリンリガンドおよびＮＧＦと類似している。最大効果の５０％を誘導する濃度、ＮＧＦ（１−５ｎｇ／ｍｌ）では、細胞の４０−５０％が少なくとも細胞体と同じ程度まで伸長し、１５％がより突起を細胞体の長さの３−５倍まで伸ばす。パターンは試験された種々の薬剤とかなり類似している。ラパマイシンおよびＷＡＹ１２４４６６はＦＫ５０６に比べ細胞あたり、より多い数の突起を生じる傾向がある。シクロスポリンＡは数または突起に関し中間である傾向にある。
　【００８２】
イムノフィリンの非免疫抑制性および免疫抑制性リガンドによりニワトリ後根ガングリオンに誘導された神経伸長
　我々の以前の研究において、我々はラット後根ガングリオンの外植片において免疫抑制薬剤の神経栄養効果を観察し、１ピコモルという低い濃度のＦＫ５０６で観察された神経成長において顕著に増加することを見出した（Ｌｙｏｎｓ等、１９９４）。ラットガングリオンにおいて、神経栄養効果はＮＧＦの不在下でさえもＦＫ５０６でもって観察された。本試験において、我々は神経成長の研究に使用するのにより容易であるニワトリ後根ガングリオンの外植片を用いた。添加されるＮＧＦの不在下、我々はイムノフィリンリガンド薬剤の最小の効果を観察した。ニワトリ細胞はＰＣ１２細胞に比べＮＧＦに対してより感受性であり、その結果、我々は軸索最小成長を生じるため、そしてイムノフィリンリガンドの神経栄養作用を示すために０．１ｎｇ／ｍｌＮＧＦを用いる（図１８、１９）。
　【００８３】
　後根ガングリオンは妊娠１０日目のニワトリ胚から取り出された。全体のガングリオン外植片を、２ｍＭグルタミンと１０％ウシ胎児血清を補足し、そして１０μＭシトシンβ−Ｄアラビノフラノシド（ＡｒａＣ）を含有するリーボビッツＬ１５＋グルコース培地を有する薄層マトリゲルコート１２ウエルプレート上、３７℃で５％ＣＯ２含有環境において培養した。２４時間後、ＤＲＧは種々の濃度の神経成長因子、イムノフィリンリガンドまたはＮＧＦ＋薬剤で処理された。薬剤処理４８時間後、ガングリオンは相コントラストまたはホフマンモジュレーションコントラストの下でツァイス・アキシオバート倒立顕微鏡を用いて可視化された。外植片の顕微鏡写真が作成され、そして軸索成長が定量された。ＤＲＧ直径より長い軸索が陽性として、各実験条件あたり計量された軸索の全数により計測された。４種のＤＲＧのうち３種がウエルあたり培養され、そして各処理は二重に行われた。
　【００８４】
　ガングリオンでの神経成長の刺激における種々のイムノフィリンリガンドの相対効力はＰＣ１２細胞におけるそれらの相対効力に類似している。従って、ラパマイシンは１ｎＭのＥＣ５０でもって最大効力の薬剤であり、ＷＡＹ−１２４４６６に比べ１０倍強力であり、ＦＫ５０６は１−２ｎＭのＥＣ５０を示す。
　【００８５】
　突起の数、その長さおよび分岐の最大増加はイムノフィリンリガンドおよびＮＧＦの最大に有効な濃度（１００ｎｇ／ｍｌ）で全く同様である。種々の薬剤の徐々に増加する濃度でもって、突起のより多い数、より広範囲の分岐および個々の突起のより長い長さを観察する。
　【００８６】
　我々は組換えＦＫＢＰ−１２への３Ｈ−ＦＫ５０６結合の阻害を試験することによりＦＫＢＰ−１２への結合における薬剤の効力を評価した。ＦＫＢＰ−１２に対する薬剤の親和性と軸索成長の刺激およびロタマーゼ活性阻害の効力との間に顕著な類似点がある。明らかに、神経成長の刺激はカルシニューリン阻害に関係しない。カルシニューリン阻害は免疫抑制活性と十分に適合し、ＷＡＹ−１２４４６６は免疫抑制性ではなく、そしてカルシニューリンを阻害しない。ラパマイシンは強力な免疫抑制剤であるが、ラパマイシン−ＦＫＢＰ−１２複合体はＲＡＦＴ−１に結合して免疫抑制性過程を開始する（ＳａｂａｔｉｎｉおよびＳｎｙｄｅｒ、１９９４；ＳｎｙｄｅｒおよびＳａｂａｔｉｎｉ、１９９５）。結果を表２にまとめて示す。
　【００８７】
　【表２】
　【００８８】
　我々はニワトリ後根ガングリオン外植片培養体における軸索成長を促進するための非免疫抑制性イムノフィリンリガンドの活性を比較した（表３）。これらの化合物の各々はカルシニューリンを阻害することができないが、イムノフィリンＦＫＢＰ−１２と相互作用して表３に挙げた種々の阻害定数でもってロタマーゼ活性を阻害する。ＤＲＧにおける軸索成長を促進するためのこれらの化合物の能力はＦＫＢＰ−１２のロタマーゼ活性を阻害する能力と高い相関関係にある。
　【００８９】
　【表３】
　【００９０】
　イムノフィリンへの結合、ロタマーゼ活性の阻害および軸索成長の刺激における薬剤の効力の間の非常に密接な相関関係は、ロタマーゼ活性の阻害が薬剤の神経栄養作用に関連することを意味する。軸索成長の刺激およびイムノフィリンへの結合における薬剤の顕著に高い効力は、あらゆるその他の標的が神経栄養作用を説明し得ることと非常に異なるものにしている。ロタマーゼ以外のイムノフィリンの生物学的活性が薬剤の影響を受けて神経栄養作用を仲介し得るものと予想される。しかしながら、そのような活性は未だ報告されていない。
　【００９１】
　薬剤の非常に高い効力とロタマーゼ阻害と神経栄養作用との間の緊密な相関関係のために、我々はロタマーゼ阻害が神経栄養効果にほぼ包含されると結論する。多くのタンパク質がコラーゲン（Ｓｔｅｉｎｍａｎｎ等、１９９１）およびトランスフェリン（ＬｏｄｉｓｈおよびＫｉｎｇ、１９９１）等のイムノフィリンのロタマーゼ活性に対する基質として報告されいている。天然の細胞間カルシウムチャンネルであるリアノジン受容体およびＩＰ−３受容体の最近高度に精製された調製物がＦＫＢＰ−１２との複合体に存在することが報告されている。これらの複合体からＦＫＢＰ−１２の解離はカルシウムチャンネルに「漏れ（ｌｅａｋｙ）」を引き起こす（Ｃａｍｅｒｏｎ等、１９９５）。カルシウム流（フラックス）は軸索伸長に関連し、その結果、ＩＰ−３受容体およびリアノジン受容体は薬剤の神経栄養作用に関連するであろう。薬剤はＩＰ−３受容体またはリアノジン受容体としてＦＫＢＰ−１２と同じ部位に結合するので、該薬剤はＦＫＢＰ−１２からのチャンネル（流れ）を置き換えると推定せざるを得ない。シクロスポリンにおけるこれらのカルシウムチャンネル（流れ）の間の相互関係は報告されておらず、その結果、このモデルはシクロスポリンＡの神経栄養作用を説明しない。
　【００９２】
　ここで研究された薬剤の神経栄養作用は極端に低い濃度で証明されており、これは神経栄養タンパク質、例えば脳誘導成長因子、ニューロトロピン−３および神経栄養成長因子のものに匹敵し得る効力であることを示す。
　【００９３】
　【実施例】
　以下の実施例は本発明の好ましい態様の説明であり、そしてそれにより本発明を制限するものではない。全てのポリマー分子量は平均分子量である。全ての％は特記しない限り最終的伝達系または調製された配合剤の重量％に基づいており、そして全量は１００重量％に等しい。
　【００９４】
　本発明の目的のために使用され得る例示されるピペコリン酸誘導体化合物は以下のものを包含する。
　【００９５】
実施例１
　【化１９】
　本実施例のピペコリン酸誘導体化合物はＯｃａｉｎ等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌ．１９２，Ｎｏ．３，１９９３に開示されている。該化合物はＷｙｅｔｈ−ＡｙｅｒｓｔでＰｈｉｌ　Ｈｕｇｈｅｓ博士によって４−フェニル−１，２，４−トリアゾリン−３，５−ジオンとラパマイシンとの反応により合成された。
　【００９６】
実施例２
　【化２０】
　このピペコリン酸誘導体化合物はＣｈａｒｋｒａｂｏｒｔｙ等、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍａｒｃｈ１９９５，２：１５７−１６１に開示されている。
　【００９７】
実施例３−５
　【化２１】
　実施例のピペコリン酸誘導体化合物はＩｋｅｄａ等、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９４，１１６，４１４３−４１４４に開示されており、該文献は参照により本明細書に編入される。
　【００９８】
実施例６−９
　実施例のピペコリン酸誘導体化合物はＷａｎｇ等、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．９，ｐｐ．１１６１−１１６６，１９９４、特に化合物２ａ−２ｄに開示されており、該文献は参照により本明細書に編入される。
　【００９９】
実施例１０
　【化２２】
　本実施例のピペコリン酸誘導体、化合物１０はＢｉｒｋｅｎｓｈａｗ等、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．２１，ｐｐ．２５０１−２５０６，１９９４に開示されており、該文献は参照により本明細書に編入される。
　【０１００】
実施例１１−２１
　実施例のピペコリン酸誘導体化合物はＨｏｌｔ等、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９３，１１５，９９２５−９９３８、特に化合物４−１４に開示されており、該文献は参照により本明細書に編入される。
　【０１０１】
実施例２２−３０
　実施例のピペコリン酸誘導体化合物はＣａｆｆｅｒｙ等、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．２１，ｐｐ．２５０７−２５１０，１９９４に開示されており、該文献は参照により本明細書に編入される。
　【０１０２】
実施例３１
　【化２３】
　本実施例のピペコリン酸誘導体、化合物３１はＴｅａｇｕｅ等、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．３，Ｎｏ．１０，ｐｐ．１９４７−１９５０，１９９３に開示されており、該文献は参照により本明細書に編入される。
　【０１０３】
実施例３２−３４
　実施例のピペコリン酸誘導体化合物はＹａｍａｓｈｉｔａ等、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．２，ｐｐ．３２５−３２８，１９９４、特に化合物１１、１２および１９に開示されており、該文献は参照により本明細書に編入される。
　【０１０４】
実施例３５−５５
　実施例のピペコリン酸誘導体化合物はＨｏｌｔ等、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．２，ｐｐ．３１５−３２０，１９９４、特に化合物３−２１および２３−２４に開示されており、該文献は参照により本明細書に編入される。
　【０１０５】
実施例５６−６８
　実施例のピペコリン酸誘導体化合物はＨｏｌｔ等、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．３，Ｎｏ．１０，ｐｐ．１９７７−１９８０，１９９３、特に化合物３−１５に開示されており、該文献は参照により本明細書に編入される。
　【０１０６】
実施例６９−８３
　本発明の実施例化合物はＨａｕｓｋｅ等、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９２，３５，４２８４−４２９６、特に化合物６、９−１０、２１−２４、２６、２８、３１−３２および５２−５５に開示されており、該文献は参照により本明細書に編入される。
　【０１０７】
実施例８４
　【化２４】
　本実施例のピペコリン酸誘導体はＴｅａｇｕｅ等、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．１３，ｐｐ．１５８１−１５８４，１９９４に開示されており、該文献は参照により本明細書に編入される。
　【０１０８】
実施例８５−８８
　実施例のピペコリン酸誘導体化合物はＳｔｏｃｋｓ等、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．１２，ｐｐ．１４５７−１４６０，１９９４、特に化合物２、１５−１７に開示されており、該文献は参照により本明細書に編入される。
　【０１０９】
スキーム１
　【化２５】
　【０１１０】
スキーム２
　【化２６】
　【０１１１】
スキーム３
　【化２７】
　【０１１２】
スキーム４
　【化２８】
　【化２９】
　【化３０】
　【０１１３】
スキーム５
　【化３１】
　【０１１４】
スキーム６
　【化３２】
　【化３３】
　【０１１５】
スキーム７
　【化３４】
　【化３５】
　【化３６】
　【０１１６】
スキーム８
　【化３７】
　【化３８】
　【化３９】
　【化４０】
　【０１１７】
スキーム９
　【化４１】
　【０１１８】
　本発明は上記のように、同じものが多くの方法で変更され得ることが明らかである。そのような変更は本発明の精神および範囲から逸脱しないものとみなされ、そしてそのような全ての変更が本発明の特許請求の範囲内に包含されるものと意図される。
【図面の簡単な説明】
　【図１】
神経挫傷後の顔面核におけるＦＫＢＰ−１２およびＧＡＰ−４３の発現を示す生物の形態を表す写真。ＦＫＢＰ−１２（左側）およびＧＡＰ−４３（右側）に対する顔面核におけるｍＲＮＡの発現の時間経過を比較するｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーション。右側顔面核は挫傷と同じ側であり、そして左側は未操作の対照である（図１Ｂ）。未処理対照へのＦＫＢＰ−１２（左側）に対する、および顔面神経挫傷後７日目のカルシニューリンＡα，βに対する（右側）ｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーション。
　実験は少なくとも３回反復され、同じ結果が得られた。
　【図２】
神経挫傷に続く顔面運動ニューロンに対するＦＫＢＰ−１２の局在性を示す生物の形態を表す写真。挫傷後７日目の顔面核の運動ニューロン（図２Ａ）における、および対照顔面核の運動ニューロン（図２Ｂ）におけるＦＫＢＰ−１２に対するｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの明視野顕微鏡写真。
　【図３】
座骨神経挫傷後の腰部脊髄運動ニューロンにおけるＦＫＢＰ−１２ｍＲＮＡの上昇制御を示す生物の形態を表す写真。右側座骨神経の挫傷後７日目のＦＫＢＰ−１２に対するｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーション。上の図（図３Ａ）は下側腰部脊髄の前角（矢印で示す）における運動ニューロンの応答を示す。対応する運動ニューロンプールの明視野顕微鏡写真は下の図に示されている：（図３Ｂ）神経挫傷とは反対側である左側、（図３Ｃ）神経挫傷と同じ側である右側。この実験は３回反復され、同じ結果が得られた。
　【図４】
座骨神経挫傷後１および６週目の後根ガングリオンにおけるＦＫＢＰおよびＦＫＢＰ−１２ｍＲＮＡの誘導を示す生物の形態を表す写真。ＦＫＢＰ　ｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーションに対して処理された座骨神経挫傷と同じ側のＬ４後根ガングリオンを介する切片の暗視野顕微鏡写真は左側の図であり、そして〔３Ｈ〕ＦＫ５０６オートラジオグラフィーに対するものは右側の図である。これらの結果は各々の時間に対して３回反復された。
　【図５】
右側顔面神経のリシン損傷を示す生物の形態を表す写真。ニッスル染色（下側の図、図５Ａ）は顔面神経へのリシン注入後７日目のグリア増殖を伴う右側顔面核における運動ニューロンの広範囲に及ぶ変性を示す。顔面神経／核のリシン損傷後７日目のＦＫＢＰｍＲＮＡに対するｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーションは上側の図（図５Ｂ）に示されている。この実験は３回反復され、同じ結果が得られた。
　【図６】
挫傷後７日目の座骨神経の断片における〔３Ｈ〕ＦＫ５０６結合性を示す図面。図面は採取した神経の３ｍｍ断片を示す：くびれ部は方法に記載したように６時間の採取時間、７日目に適用した結紮位置を示す。遠位の結紮部は最初の挫傷部位から１０ｍｍ離れている。ＦＫＢＰの前方への移動は１２４ｍｍ／日である。データは平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．（ｎ＝３）である。
　【図７】
座骨神経におけるＦＫＢＰの移動を示す生物の形態を表す写真。ＦＫＢＰ−１２ｉｎ　ｓｉｔｕハイブリダイゼーションに対して（図７Ａ、図７Ｂ）、および〔３Ｈ〕ＦＫ５０６オートラジオグラフィーに対して（図７Ｃ、７Ｄ）に対して処理された、対照（未処理）座骨神経および７日目座骨神経挫傷部位を介する切片の暗視野顕微鏡写真。矢印は神経挫傷の観測を示す。この実験は３回反復され、同じ結果が得られた。
　【図８】
ＮＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下または不在下で維持されたＰＣ細胞における〔３Ｈ〕ＦＫ５０６結合のレベルを示すグラフ。各々の時間に対してｎ＝３。バーはＳ．Ｅ．Ｍ．を表す。
　【図９】
ＰＣ１２細胞における軸索伸長の免疫抑制が介在した増加を示す生物の形態を表す写真。ＮＧＦの存在下、ＦＫ５０６またはラパマイシンを添加または添加せずに、４８時間増殖した培養体のホフマンコントラスト顕微鏡写真（６４）。図９Ａ：１．０ｎｇ／ｍｌＮＧＦ中で増殖したＰＣ−１２細胞。図９Ｂ：５０ｎｇ／ｍｌＮＧＦ。図９Ｃ：１．０ｎｇ／ｍｌＮＧＦおよび１００ｎＭ　ＦＫ５０６。図９Ｄ：１．０ｎｇ／ｍｌＮＧＦおよび１００ｎＭラパマイシン。倍率２００倍。
　【図１０】
ＰＣ−１２細胞中での軸索増殖へのＦＫ５０６の影響を示すグラフ。培養体は１００ｎＭ　ＦＫ５０６の存在下または不在下に種々の濃度のＮＧＦと処理され、そして軸索伸長は４８時間目に測定された。増殖は方法の項に記載したように、５μｍより大きい軸索成長を有する細胞を数えることにより定量化した。ｎ＝４の別々の実験が各時間に対して行われ、そして誤差バーはＳＥＭを表す。
　【図１１】
ＰＣ−１２細胞中での軸索増殖のＦＫ５０６有効性に対する濃度応答関係を示すグラフ。細胞は１ｎｇ／ｍｌＮＧＦおよび種々の濃度のＦＫ５０６でもって４８時間処理された。軸索増殖応答は図１０および方法の項に記載されるように計測された。ｎ＝４の別々の実験が各データ点に対して行われた。＊ｐ＜０．００１スチューゲントｔ試験。
　【図１２】
後根ガングリオン外植片培養体上の〔３Ｈ〕ＦＫ５０６オートラジオグラフィーを示す生物の形態を表す写真。１００ｎｇ／ＮＧＦでの培養２６日後、広範囲の突起は豊富なＦＫＢＰ結合銀粒を示す。オートラジオグラフィーの粒は１μｍの非標識ＦＫ５０６で消失される。
　【図１３】
異なる基質で増殖させた後根ガングリオンの相コントラスト顕微鏡写真である生物の形態を表す写真。図１３Ａ：ＮＧＦ１００ｎｇ／ｍｌ、図１３Ｂ：ＦＫ５０６　１μＭ、図１３Ｃ：ＦＫ５０６　１μＭおよび抗ＮＧＦ抗体、図１３Ｄ：成長因子の添加なし、図１３Ｅ：ＦＫ５０６　１ｐＭ、図１３Ｆ：ＦＫ５０６　１μＭおよびラパマイシン１μＭ。スケールバーは２０５μｍである。ＮＧＦは豊富な軸索増殖を生じ（図１３Ａ）、また１μＭ　ＦＫ５０６も同様である（図１３Ｂ）。ＦＫ５０６の効果は１ｐＭまで濃度を減少させることにより実質的に低下される（図１３Ｅ）。しかしながら、１ｐＭ　ＦＫ５０６での軸索増殖はその不在下（図１３Ｄ）に比べ多い。ＦＫ５０６効果はまた、培養体における非ニューロン細胞により生じるＮＧＦの効果を消失させるための抗ＮＧＦ抗体を添加することにより消失される。ＮＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）（図１３Ａ）または１μＭ　ＦＫ５０６（図１３Ｂ）に応答して大きい神経繊維束を生じる豊富な軸索は白く見え、一方、小さい神経繊維束または個別の軸索は黒く見える。非ニューロン細胞、シュワン細胞およびいくつかの繊維芽細胞は１μＭ　ＦＫ５０６（図１３Ｂ）に比べ１ｐＭ　ｆｋ５０６（図１３Ｅ）または抗ＮＧＦ抗体（図１３Ｃ）の場合、はっきりしている。培養体中に非ニューロン細胞により産生されるＮＧＦは成長因子が添加されない培養体中に見られる限定された軸索増殖を生じる（図１３Ｄ）。白く見える多数の屈折非ニューロン細胞は少数の軸索を暗くする傾向がある（図１３Ｄ）。ラパマイシンはＦＫ５０６の存在下で軸索増殖を完全に阻害する（図１３Ｆ）。顕微鏡写真は各実験条件からの１２−３０のガングリオンの代表例である。全ての実験群間の相違は高度の再現性があった。
　【図１４】
ＰＣ−１２細胞におけるＮＧＦ仲介軸索伸長へのＦＫ５０６およびラパマイシンの影響を示すグラフ。ＰＣ１２細胞（継代６０）は種々の濃度のＮＧＦ単独または１００ｎＭ　ＦＫ５０６、１００ｎＭラパマイシンまたは１００ｎＭ　Ｗａｙ１２４４６６の存在下で処理された。軸索増殖は９６時間後に陽性を示す細胞の直径より大きい突起部を有する細胞でもって計測した。ｎ＝３の別々の実験が各時間に対して行われ、そして誤差バーはＳ．Ｅ．Ｍ．を表す。
　【図１５】
ピコモル濃度の（Ａ）ＦＫ５０６および（Ｂ）ラパマイシンとＷＡＹ−１２４４６６はＰＣ１２細胞中でＮＧＦ（０．５ｎｇ／ｍｌ）により誘導された軸索伸長を強化することを示すグラフ。より少ない継代のＰＣ１２細胞は種々の濃度のＦＫ５０６（□）、ラパマイシン（●）またはＷＡＹ−１２４４６６（○）の存在下に０．５ｎｇ／ｍｌＮＧＦと共に４日間処理された。軸索伸長は図１４において上記したように定量された。０．５ｎｇ／ｍｌＮＧＦ（Ｌと表記）および５０ｎｇ／ｍｌＮＧＦ（Ｈと表記）の存在下での軸索産生のレベルが比較のために示されている。
　【図１６】
イムノフィリンリガンド＋０．５ｎｇ／ｍｌＮＧＦ自身または５０ｎｇ／ｍｌＮＧＦで処理されたＰＣ１２細胞の顕微鏡写真である生物の形態を表す写真。
　【図１７】
イムノフィリンリガンド＋０．５ｎｇ／ｍｌＮＧＦ自身または５０ｎｇ／ｍｌＮＧＦで処理されたＰＣ１２細胞の顕微鏡写真である生物の形態を表す写真。
　【図１８】
イムノフィリンリガンドはニワトリ感覚ガングリオンにおいて最大軸索伸長を生じるために必要なＮＧＦの量を減少することを示す生物の形態を表す写真。全体の後根ガングリオン外植片は９−１０日齢のニワトリ胚から単離され、そしてＬ１５培地と高グルコースを、１０μＭ　Ａｒａ　Ｃペニシリンおよびストレプトマイシンを補足した１０％ウシ胎児血清と共に含有するマトリゲル被覆１２ウエル皿中に５％ＣＯ２雰囲気下３７℃で培養された。感覚ガングリオンは１ｎｇ／ｍｌ　ＮＧＦ、１ｎｇ／ｍｌ　ＮＧＦ＋１００ｎＭ　ＦＫ５０６または１００ｎｇ／ｍｌ　ＮＧＦと４８時間処理され、そしてニューロン突起が計測され、そして写真撮影された。
　【図１９】
ＦＫ５０６、ラパマイシンおよびＷＡＹ−１２４４６６が感覚ガングリオンにおいてＮＧＦ依存軸索産生を強化することを示すグラフ。ニワトリＤＲＧの外植片は図１８において上記したように培養された。ＦＫ５０６、ラパマイシンおよびＷＡＹ−１２４４６６（各々１００ｎＭプラスまたはマイナス０．１ｎｇ／ｍｌＮＧＦ）がＤＲＧ外植片培養体に添加された。４８時間目に、軸索増殖が定量され、そして培養体が写真撮影された。