【手続補正書】
【提出日】平成27年6月26日(2015.6.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の胚（例えば、体外受精された哺乳動物の胚）の発生能を評価するインビトロの方法であって、該方法は、
（ａ）１細胞期における胚中の細胞質内運動および／または１細胞期における胚の形状の周期的な変化を測定すること、および
（ｂ）その測定値を用いて、胚の発生能を予測すること
を含む、上記方法。
【請求項２】
（ｉ）前記細胞質内運動の測定が、単一細胞胚における平均細胞質内速度の測定である、または（ｉｉ）前記胚の形状の周期的な変化が、受精丘の拍動（ＦＣの拍動）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記測定が、２つの連続した速度ピークまたはＦＣの拍動を確認するのに十分な時間でなされ、さらに、２つの速度ピーク間の時間のインターバルまたはＦＣの拍動が計算され、例えば、速度ピーク間もしくはＦＣの拍動間の、より長いインターバルまたはより長い平均インターバルが、より優れた発生能の予測と相関する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
速度ピーク間もしくはＦＣの拍動間のインターバルまたは平均インターバルと、１つまたはそれより多くの予め決定された参考値とを比較することによって、前記胚の発生能が予測され、例えば、前記速度ピークまたはＦＣの拍動が、胚におけるＣａ２＋一過性上昇と同時に起こる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記平均細胞質内速度が、速度ピーク間で記録された最初の速度ピークの前、および／または記録された最後の速度ピークの後に測定され、ここで平均速度は経時的に計算され、それにより計算された速度が、平均基底細胞質内速度である、例えば、より速い平均基底細胞質内速度が、より優れた発生能の予測と相関し、および場合により、前記胚の発生能が、平均基底細胞質内速度と、１つまたはそれより多くの予め決定された参考値とを比較することによって予測される、請求項２〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記単一細胞胚が、受精と前核の形成との間の発生ステージにある、（例えば、前記単一細胞胚が受精と受精丘の退縮との間の発生ステージにある、例えば、前記哺乳動物の胚が受精丘形成が完了する発生ステージにある）および場合により、前記発生能の予測が、受精丘が存在する期間中になされた測定に基づく、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
測定を行うことが、タイムラプス画像の捕捉、それに続く定量的な画像解析を含み、例えば、前記画像が、（ｉ）単一細胞胚を通る単一面、（ｉｉ）単一細胞胚の中心を通る面、および／または（ｉｉｉ）単一細胞胚の受精丘を二等分する面、から捕捉される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記胚が培地の小液滴中に保持された状態で画像化される、および場合により、前記胚が、培地の小液滴中に単一細胞胚が緊密に詰まった集合体のなかの一つである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記画像の捕捉が、受精の４時間以内（例えば受精の２時間以内）に完了する、請求項７または請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
（i）前記定量的な画像解析が、粒子画像速度測定法（ＰＩＶ）を使用する；および／または
（ii）前記測定が、非侵襲的になされる；および／または
（iii）前記測定が、胚中に細胞内色素の非存在下でなされる；および／または
（iv）前記測定が、細胞骨格の機能に干渉することなくなされる；および／または
（v）前記測定が、受精丘の形成に干渉することなくなされる；および／または
（vi）前記発生能を予測することが、胚が胚盤胞期まで発達すると予測される確率を決定することを含む；および／または
（vii）前記発生能が、その後の培養における胚の細胞分裂の速度を含む；および／または
（viii）前記発生能が、その後の４日の培養後に生じると予測される胚中の細胞数を含む；および／または
（ix）前記発生能を予測することが、胚が母となるレシピエントに移植された後に臨月まで発達すると予測される確率を決定することを含む；および／または
（x）前記方法が、受精の２４時間以内に完了する；および／または
（xi）前記方法が、受精の４時間以内に完了する；および／または
（xii）前記胚の発生能を評価するのに、胚中の細胞質内運動および／または受精丘の拍動の測定値だけが使用される
請求項７〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記胚が、さらに培養される、および場合により前記胚の発生能を評価するのに、培養中の前記胚の発生および／または形態学の程度がさらに使用される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記哺乳動物の胚が、（ｉ）ヒト以外の哺乳動物の胚である、（ｉｉ）マウス胚である、（ｉｉｉ）家畜の胚である、または（ｉｖ）ヒト胚である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
哺乳動物の卵を受精させること、および請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法に従って結果得られた胚の発生能を評価することを含む、体外受精方法。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法に従って哺乳動物の胚の発生能を評価すること、および胚を母となるレシピエントに移植することを含む、補助繁殖方法。
【請求項１５】
複数の胚から１個またはそれより多くの胚を選択する方法であって、該方法は、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法に従って各胚の発生能を評価すること、およびそれらの予測された発生能に基づいて（場合により、補助繁殖方法で使用するために）１個またはそれより多くの胚を選択することを含む、上記方法。
【請求項１６】
胚の集合体中の１個またはそれより多くの胚を発生能に従って格付けする方法であって、該方法は、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法に従って集合体中の各胚の発生能を評価すること、およびその予測された発生能に基づいて各胚を格付けすること、および場合により、予測された発生能に基づいて複数の胚から１個またはそれより多くの胚を選択することをさらに含み、ここで、前記選択は補助繁殖方法で使用するためのものであってもよく；
例えば、速度ピーク間もしくはＦＣの拍動間の計算されたインターバルまたは平均インターバルが（例えば、少なくとも半分の標準偏差で、または少なくとも１の標準偏差で）母平均インターバルまたは速度ピーク間の平均インターバルよりも長いこと、および／または、平均基底細胞質内速度が（例えば、少なくとも半分の標準偏差で、または少なくとも１の標準偏差で）母平均の平均基底細胞質内速度よりも速いことが、高い発生能を有する胚であることの指標である、
上記方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法を行うための装置であって、該装置は、胚のタイムラプス画像を捕捉するための１個またはそれより多くのセンサーと、少なくとも１つのセンサーと連携する少なくとも１個のプロセッサーとを含み、ここで該プロセッサーは、前記画像が胚の発生能の予測値に変換されるようにコンピューターで読取り可能なインストラクションでプログラム化されており、
さらに前記装置は、場合により、
（ｉ）前記胚の温度および／またはｐＨ曝露を制御するための人工気候室；および／または
（ｉｉ）胚の温度を制御するための加熱台
を含み、そして、場合により、１個またはそれより多くの前記センサーが、白色の透過光を使用してタイムラプス画像を捕捉するように配置されている、上記装置。