【手続補正書】
【提出日】平成27年10月15日(2015.10.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ダニ目（Acari）、イエバエ科（Muscidae）、キイロショウジョウバエ科（Drosophilidae）、ハナバエ科（Anthomyidae）、アリマキ科（Aphididae）、トガリキジラミ科（Triozidae）、ゴミムシダマシ科（Tenebrionidae）、及びコガネムシ科（Scarabaiedae）から選択される有害生物の外寄生を調節する方法であって、
調節が望まれる場所において、クロモバクテリウムサブスチュガエＮｏｖ（Chromobacterium substugae Nov）(NRRL B-30655)発酵から回収された全細胞ブロス、濾過物、又は抽出物を前記外寄生を調節するのに効果的な量施用することを含む、方法。
【請求項２】
前記調節が望まれる場所が植物上、植物種子または土壌中である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記有害生物がダニ目（Acari）であり、前記ダニ目がコダニ（mite）である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記コダニが四翅（Tetranychus）種である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記有害生物が、イエバエ（Musca）種、ミザス（Myzus）種、バクテリセラ（Bactericera）種、シクロセファラ（Cyclocephala）種、アルフィトビウス（Alphitobius）種、キイロショウジョウバエ（Drosophila）種、デリア（Delia）種、リゾトログス（Rhizotrogus）種、ポピラ（Popilla）種、アノマラ（Anomala）種、及びオティオリンクス（Otiorhynchus）種から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記有害生物が、ムスカドメスティカス（Musca domesitcas）、キイロショウジョウバエスズキ（Drosophila suzukii）、デリアラジカム（Delia radicum）、ミザスペルシカエ（Myzus persicae）、バクテリセラコッケレリ（Bactericera cockerelli）、アルフィトビウスジアペリヌスキシ（Alphitobius diaperinusxi）、シクロセファラルリダ（Cyclocephala lurida）、リゾトログスマジャリス（Rhizotrogus majalis）、ポピラジャポニカ（Popilla japonica）、オティオリンクスサルカタス（Otiorhynchus sulcatus）、及びアノマラオリエンタリス（Anomala orientalis）から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
（ａ）単離したクロモバクテリウムサブスチュガエＮｏｖ（Chromobacterium Subtsugae Nov）（NRRL B-30655）若しくは全細胞ブロス、濾過物、上清、抽出物、又はこれらに由来する殺有害生物活性を有する殺有害生物活性物質、および
（ｂ）リグニン塩または安息香酸塩である太陽光防御物質
を含む、安定状態の生物殺有害生物剤組成物。
【請求項８】
前記安息香酸塩が、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびそれらの組合せから選択され、前記リグニン塩が、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびそれらの組合せの中和イオン由来のリグニンスルホン酸塩から選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記クロモバクテリウムサブスチュガエＮｏｖ（NRRL B-30655）が少なくとも約５％の量で存在し、前記太陽光防御物質が少なくとも約５％の量で存在する、請求項７に記
載の組成物。
【請求項１０】
太陽光への露出が原因の物理的分離および殺有害生物活性の消失に対して組成物を安定化させる方法であって、ここで、前記組成物は、単離したクロモバクテリウムサブスチュガエＮｏｖ（Chromobacterium Subtsugae Nov）（NRRL B-30655）を含み、
太陽光への露出が原因の物理的分離および殺有害生物活性の消失に対して前記組成物を安定化するのに有効な量の安定剤を前記組成物に提供することを含む方法。
【請求項１１】
前記安定剤が安息香酸塩及びリグニンスルホン酸塩から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記四翅種は、テトラニカスウルティカエ（Tetranychus urticae）である、請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
前記有害生物がコガネムシ科の幼虫である、請求項１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
特にダニ目（Acarina）、コガネムシ科（Scarabeidae）、キイロショウジョウバエ科（Drosophilidae）、トガリキジラミ科（Triozidae）、アリマキ科（Aphidae）、イエバエ科（Muscidae）、ハナバエ科（Anthomyiidae）またはゴミムシダマシ科（Tenebrionidae families）に属する一種または複数種の有害生物の外寄生に対する、クロモバクテリウム（Chromobacterium）種、濾過物、上清、抽出物、殺ダニ剤および殺虫剤としてそれらに由来する殺有害生物剤活性化合物または代謝産物を含む組成物または配合物の使用を提供する。（バイオ殺有害生物剤とも呼ばれる）生物殺有害生物剤配合物、特にクロモバクテリウム（Chromobacterium）種、濾過物、上清、抽出物、それらに由来する代謝産物または殺有害生物剤活性化合物を含む配合物、それらを生成するための方法、および有害生物外寄生の調節としての使用法をさらに提供する。より具体的には、物理的均一性の維持により改善された貯蔵寿命、および太陽光への露出時の分解に対する高い耐性が原因の使用後のより長期の殺虫活性を有する、安定状態の生物殺有害生物剤を提供する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
クロモバクテリウムピスシンエア（Chromobacterium piscinae）、クロモバクテリウムシュードビオラセム（C.pseudoviolaceum）、クロモバクテリウムサブスチュガエ（Chromobacterium substugae）、およびより詳細にはクロモバクテリウムサブスチュガエ種nov（Chromobacterium substugae sp.nov）株、およびさらにより詳細には米国特許第７，２４４，６０７号中に記載されたＮＲＲＬＢ−３０６５５の確認済みの特性を有するクロモバクテリウムサブスチュガエ種nov（Chromobacterium substugae sp.nov）株だけには限られないが、これらを含めた、クロモバクテリウム（Chromobacterium）種株、特にビオラセイン産生株の上清、濾過物および／または抽出物、および／または前記上清、濾過物および／または抽出物由来の１つまたは複数の代謝産物を含むかまたはそれらを使用する、１つまたは複数のダニ（Acari）（節足動物）、イエバエ科（Muscidae）、キイロショウジョウバエ科（Drosophilidae）、ハナバエ科（Anthomyidae）、アリマキ科（Aphididae）、トガリキジラミ科（Triozidae）、ゴミムシダマシ科（Tenebrionidae）、および／またはコガネムシ科（Scarabaiedae）有害生物の調節および／または外寄生に関する組成物および方法を提供する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
具体的には、調節が望まれる場所における、節足動物（ダニまたはダニ目）および／またはハナバエ科（Anthomyidae）、キイロショウジョウバエ科（Drosophilidae）、イエバエ科（Muscidae）、アリマキ科（Aphididae）、トガリキジラミ科（Triozidae）、ゴミムシダマシ科（Tenebrionidae）またはコガネムシ科（Scarabaiedae）に属する一種または複数種の昆虫有害生物の外寄生を調節するための方法であって、前記場所において節足動物および／またはハナバエ科（Anthomyidae）、キイロショウジョウバエ科（Drosophilidae）、イエバエ科（Muscidae）、アリマキ科（Aphididae）、トガリキジラミ科（Triozidae）、ゴミムシダマシ科（Tenebrionidae）またはコガネムシ科（Scarabaiedae）に属する一種もしくは複数種の昆虫有害生物の外寄生を調節するのに有効である量の、（ａ）クロモバクテリウム（Chromobacterium）種株の上清、濾過物および／または抽出物、および／または前記上清、濾過物および／または抽出物由来の１つまたは複数の代謝産物、ならびに（ｂ）別の殺有害生物剤物質、特に殺ダニ剤および／またはダニおよび／またはハナバエ科（Anthomyidae）、キイロショウジョウバエ科（Drosophilidae）、イエバエ科（Muscidae）、アリマキ科（Aphididae）、トガリキジラミ科（Triozidae）、ゴミムシダマシ科（Tenebrionidae）もしくはコガネムシ科（Scarabaiedae family）に属する一種もしくは複数種の昆虫有害生物に対して有効である可能性がある殺虫剤を施用することを含む方法を提供する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
ダニ（Acari）、ハナバエ科（Anthomyidae）、キイロショウジョウバエ科（Drosophilidae）、イエバエ科（Muscidae）、アリマキ科（Aphididae）、トガリキジラミ科（Triozidae）、ゴミムシダマシ科（Tenebrionidae）またはコガネムシ科（Scarabaiedae）に属する１つまたは複数の昆虫有害生物に対して有効である可能性があり、（ａ）と（ｂ）が場合によっては相乗効果量で存在し得る、（ａ）クロモバクテリウム（Chromobacterium）種株の上清、濾過物および／または抽出物、および／または前記上清、濾過物および／または抽出物由来の１つまたは複数の代謝産物（複数可）、および（ｂ）別の殺有害生物剤物質、特に殺ダニ剤および／または殺虫剤を活性成分として含む、ダニ（Acari）、ハナバエ科（Anthomyidae）、キイロショウジョウバエ科（Drosophilidae）、イエバエ科（Muscidae）、アリマキ科（Aphididae）、トガリキジラミ科（Triozidae）、ゴミムシダマシ科（Tenebrionidae）またはコガネムシ科（Scarabaiedae）に属する少なくとも１つの節足動物および／または１つまたは複数の昆虫有害生物の外寄生を調節する殺有害生物剤の組合せも本明細書で提供する。殺有害生物剤物質は、（ａ）微生物由来、（ｂ）天然産物および／または（ｃ）化学物質殺有害生物剤、および特に化学物質殺虫剤であってよい。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
（１）植物における有害生物（例えば、線虫、昆虫、土壌媒介菌）の外寄生を調節するための方法、または土壌中の土壌媒介菌を調節するための方法であって、
前記植物における外寄生を調節するのに有効である量の、
（Ｉ）（ａ）殺有害生物剤および／または抗菌活性を有し、
（ｂ）ＬＴＱ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  ＸＬハイブリッド型フーリエ変換質量分析計により決定して約９５０〜１４５０の分子量を有し、
（ｃ）５．２２（ｓｅｘｔ、１Ｈ）、２．６２（ｄｄ、１Ｈ）、２．５３（ｄｄ、１Ｈ）、および１．３１（ｄ、３Ｈ）の１ＨＮＭＲδ値を有し、１６９．２、６７．６、４０．９、および１９．８の１３ＣＮＭＲδ値を有し、
（ｄ）構造−（−Ｏ−ＣＨＣＨ３−ＣＨ２−ＣＯ−）ｎ−（式中、ｎ＝６〜５０である）を含み、
（ｅ）クロモバクテリウム（Chromobacterium）種から入手可能である化合物、および
（ＩＩ）場合によっては別の殺有害生物剤物質を、植物および／またはその種子および／または前記植物の成長に使用する培養基に施用することを含む方法をさらに提供する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６１】
本明細書中で定義する用語「調節」を使用して、有害生物外寄生の量または有害生物外寄生の拡大率を変えることを意味する。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
前述の化合物を入手するための方法をさらに提供する。この方法は、化合物を生成するのに十分な条件下において全細胞ブロス中でクロモバクテリウム（Chromobacterium）種株を培養すること、および全細胞ブロスから生成した化合物を単離することを含む。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０１】
２スポットハダニに対するクロモバクテリウムサブスチュガエ（Chromobacterium substugae）（ＭＢＩ−２０３）の効果−マメ科植物
凍結乾燥ＭＢＩ−２０３を蒸留水と混合して、様々な濃度の全細胞ブロスの細胞を均等にした。非外寄生状態のマメ科植物、ファセオラスブルガリス（Phaseolus vulgaris）にはＭＢＩ−２０３を噴霧した。次いで噴霧した植物からリーフディスクを採取し、２スポットハダニ、テトラニカスウルティカエ（Tetranychus urticae）の食料源としてペトリ皿に置いた。１０匹のコダニを各々の皿に置き、７５°Ｆ、１２：１２（Ｌ：Ｄ）でインキュベートした。生存状態および死亡状態のコダニの評価は外寄生後１、３、および７日で記録した。１×ＣＦＤは、全細胞ブロスの細胞濃度に戻した凍結乾燥物質である（０．０１０３ｇ凍結乾燥／ｍＬｄＨ２Ｏ）。結果は図３中に示す。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５１】
Ｌ−ブロス中２０−Ｌ発酵クロモバクテリウムサブスチュガエ（C.substugae）由来の全細胞ブロス（ＷＣＢ）を、酢酸エチルを使用した液液抽出法により抽出した。酢酸エチル層を分離し、ロータリー式エバポレーターを使用し真空下で乾燥させて粗製抽出物を得た。次いで粗製抽出物を、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、酢酸エチル（ＥＡ）、メタノール（ＭｅＯＨ）などの異なる溶媒を使用し、溶媒の混合物で洗浄すること（洗浄）により分画化した。次いでこれらの画分を、ロータリー式エバポレーターを使用して乾燥状態まで濃縮し、生成した乾燥残渣は異なる有害生物（昆虫、線虫）を使用して生物活性に関してスクリーニングする。次いで活性画分をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ２０サイズ排除クロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ；５０／５０）に施して１０画分を得た（図９）。次いでこれらの画分を、ロータリー式エバポレーターを使用して乾燥状態まで濃縮し、モモアカアブラムシ、モモアカアブラムシ（ＧＰＡ）の子孫生成による昆虫忌避性アッセイ、および抗線虫バイオアッセイ（エムインコグニタ（M.incognita）および／またはエムハプラ（M.hapla）を使用して、生成した乾燥残渣（画分）を生物活性に関してスクリーニングした。次いで活性画分を、逆相ＨＰＬＣ（Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｐ４０００（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に施し純化合物を得て、次いでそれを前述のバイオアッセイでスクリーニングして活性化合物を位置特定／同定した。化合物の同一性を確認するため、ＬＣ／ＭＳおよびＮＭＲなどの追加的質量分析データを記録した。