【事件の表示】
　特願２００８−１５７００６「生物学的細胞の同定および計数のための方法」拒絶査定不服審判事件〔平成２０年１０月２３日出願公開、特開２００８−２５６７１３〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯 
　本願は、平成１４年２月２２日（パリ条約による優先権主張２００１年２月２３日、フランス（ＦＲ））に出願した特願２００２−４６６５８号の一部を新たな特許出願として、平成２０年６月１６日に出願したものであって，平成２２年６月４日付けで拒絶理由が通知され，同年８月１９日付けで手続補正がなされ，平成２３年１月２０日付けで拒絶理由が通知され，同年６月２４日付けで手続補正がなされ，同年１１月２２日付けで拒絶査定がなされ，平成２４年３月２８日に拒絶査定不服審判の請求がなされたものである。
　さらに，平成２５年４月１２日付けで当審拒絶理由が通知され、同年８月８日付けで手続補正がなされたものである。
　
第２　本願発明
　本願の請求項１〜１６に係る発明は、平成２５年８月８日付け手続補正書により補正された特許請求の範囲の請求項１〜１６に記載された事項により特定されるものであり、その請求項１に係る発明は、次のとおりのものと認める。
　
「【請求項１】
　以下の操作からなる血液サンプルを含む生物学的サンプル中の有核の生物学的細胞を同定および計数する方法であって、
　前記血液サンプルを含む生物学的サンプルをサンプル中の有核の生物学的細胞を同定し計数するための試薬と混合し、インキュベートする操作において、
　赤血球を溶解するのに適した濃度の少なくとも１つのイオン性および／または非イオン性デタージェントから選択される細胞溶解剤と、残りの未溶解細胞の細胞内核酸をマークするように設計された色素とを含み、
　赤血球の溶解、細胞内核酸の染色、および有核細胞の固定を単一の段階で行うことを特徴とし、
　抵抗性容量、軸方向の発光回折、軸方向の発光透過、軸方向発光移入、および蛍光から選択される少なくとも２つの測定パラメーターを用いてフローサイトメトリーにより得られた溶液を測定し、並びに、
　測定したパラメーターにより集団における有核細胞を分類および計数すること、
と、
からなることを特徴とする方法。」（以下，「本願発明」という。）
　
第３　引用刊行物記載の発明 （下線は当審で付与した。）
（１）　本願出願前に頒布された刊行物である特開平１０−３１９０１０号公報（以下、「刊行物１」という。）には、「白血球分類計数用試薬および分類計数方法」に関して図面とともに次の事項が記載されている。
（１−ア）「【特許請求の範囲】・・・
【請求項３】  
以下の工程からなる白血球分類計数方法：１)血液試料を、血液試料中の赤血球を測定の障害とならない程度に溶解し、正常または異常細胞を染色に好適な状態にする溶血剤と混合する工程、２)前記1)で調製した試料と、以下の構造式で表される細胞中のＲＮＡに特異的に結合し蛍光強度の増加する色素と混合することにより血液試料中の有核細胞を蛍光染色する工程
【化２】 構造式省略
３)前記２）で調製した測定用試料をフローサイトメータで測定し、少なくとも１つの散乱光と、少なくとも１つの蛍光を測定する工程、および４）前記３）で測定した散乱光と蛍光の強度差を用いて正常な白血球を少なくとも５つに分類計数する工程。
【請求項４】  
血液試料中の赤血球を測定の傷害とならない程度に溶解し、白血球を染色に好適な状態にする溶血剤が、少なくとも1つのノニオン性界面活性剤と少なくとも１つのカチオン性界面活性剤を含み、ｐＨが４．５〜１１．０の間にある、
・・・
【請求項６】  
散乱光が、前方低角散乱光、前方高角散乱光、側方散乱光から選ばれる少なくとも一つである
　
（１−イ）「【０００１】【発明の属する技術分野】本発明はフローサイトメトリーによる白血球の分類計数用試薬及び計数方法に関する。」
　
（１−ウ）「【０００８】【発明が解決しようとする課題】本発明は、簡便に高精度で幼若白血球や異常白血球等の異常細胞を分類計数すると同時に、正常白血球の分類計数ならびに、白血球計数を行うことができる試薬及び方法を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者は、ある色素を使用することによって、簡便に白血球を少なくとも５分類できることを見出した。すなわち本発明は、以下の構造式を有するＲＮＡに特異的に結合し蛍光強度の増加する色素を少なくとも１つ含むことを特徴とする。」
　
（１−エ）「【００１２】【発明の実施の形態】本発明でいう血液試料とは、末梢血液、骨髄液、尿、アフェレーシスで採取した血液試料など、白血球を含む体液試料をいう。
・・・
【００１４】本発明でいう、血液試料中の赤血球を測定の障害とならない程度に溶解し、正常または異常細胞を染色に好適な状態にする溶血剤と混合する工程とは、血液試料を適当な溶血剤と混合する工程である。
【００１５】本工程の目的は、測定対象とする白血球細胞の細胞膜に少なくとも色素分子が透過するのに十分な細孔をあけるだけである。この目的に使用する溶血剤は、少なくとも一つのカチオン性界面活性剤、少なくとも一つのノニオン性界面活性剤、ｐＨを一定に保つための緩衝剤を含むｐＨ4.5 - 11.0、好ましくはｐＨ5.0 -10.0の水溶液である。」
　
（１−オ）「【００２１】溶血剤のｐＨは4.5 - 11.0、好ましくは5.0 - 10.0であり、ｐＨを一定に保つために例えば、
クエン酸塩、ＨＥＰＥＳ、リン酸塩などの緩衝剤を含む。
【００２２】ｐＨが高すぎる場合は白血球が損傷を受けやすくなり、好ましくない。
【００２３】細胞中のＲＮＡに特異的に結合し蛍光強度の増加する色素としては、ＲＮＡの存在しない環境では蛍光強度が低く、ＲＮＡと結合することによって蛍光強度の増加する色素が使用できる。」
　
（１−カ）「【００５６】実施例３  白血球分類計数試薬組成例
以下の組成の試薬を調製した。
ＨＥＰＥＳ                                      10 mM   市販品
フタル酸２Ｎａ                                  20 mM   市販品
ＢＣ３０ＴＸ（ポリオキシエチレン（３０）セチルエーテル）         
                                              1500 ppm  日光ケミカルズ
ラウリルトリメチルアンモニウムクロライド       550 ppm  市販品
色素化合物Ａ                                   0.5 ppm
ＮａＯＨでｐＨを７．０に調整
【００５７】上記試薬１．０ｍｌに抗凝固剤処理した
健常人の血液
【００５８】光源は６３３ｎｍの赤色半導体レーザを使用した。蛍光は６６０ｎｍ以上の波長の蛍光（赤蛍光）を測定した。
【００５９】図１にＸ軸に側方散乱光、Ｙ軸に赤蛍光をとったスキャッタグラムを示す。
【００６０】図２にＸ軸に前方低角散乱光、Ｙ軸に赤蛍光をとったスキャッタグラムを示す。」
　
　上記（１−ア）〜（１−カ）の記載と図１〜２２を参照すると、上記刊行物１には、 
「以下の工程からなる白血球分類計数方法：
１)血液試料を、血液試料中の赤血球を測定の障害とならない程度に溶解し、白血球を染色に好適な状態にする少なくとも1つのノニオン性界面活性剤と少なくとも１つのカチオン性界面活性剤を含み、ｐＨが４．５〜１１．０の間にある溶血剤と混合する工程、
２)前記1)で調製した試料と、細胞中のＲＮＡに特異的に結合し蛍光強度の増加する色素と混合することにより血液試料中の有核細胞を蛍光染色する工程：
３)前記２）で調製した測定用試料をフローサイトメータで測定し、前方低角散乱光、前方高角散乱光、側方散乱光から選ばれる少なくとも１つの散乱光と、少なくとも１つの蛍光を測定する工程、および
４）前記３）で測定した散乱光と蛍光の強度差を用いて正常な白血球を少なくとも５つに分類計数する工程。」の発明（以下、「引用発明」という。）が記載されていると認められる。
　
（２）　本願出願前に頒布された刊行物である特表２００２−５０３３３３号公報（以下、「刊行物Ａ」という。）には、「自動分析実施方法および装置」に関して図面とともに次の事項が記載されている。
（３−ア）「末梢白血球の分化物分析において多目的試薬系を用いる方法は、
赤血球を溶解すると共に白血球を固定する迅速な単試薬法
　
（３）　本願出願前に頒布され、当審拒絶理由通知で引用した刊行物である特表平８−５０７１４７号公報（以下、「刊行物Ｂ」という。）には、「全血試料を高速溶解するための多目的試薬系」に関して図面とともに次の事項が記載されている。
（３−ア）「【特許請求の範囲】１．  有核血液細胞を決定するために、
全血試料の赤血球を溶解すると同時に白血球を固定する
　
（４）　本願出願前に頒布され、当審拒絶理由通知で引用した刊行物である特開平３−２６６９９９号公報（以下、「刊行物Ｃ」という。）には、「全血からの少なくとも一つの白血球のサブ‐ポピュレーションの自動フローサイトメトリー測定用の試薬及び該試薬を用いた測定方法」に関して図面とともに次の事項が記載されている。
（４−ア）「一般的に言うと、詳細な信頼のおける分析は、・・・コストは非常に高く、・・・、方法を単純化するのが常に好ましい。
課題を解決するための手段
本出願人は、
単一の反応で赤血球の溶解、白血球の保護のための固定化
を可能にし
　
第４　対比・判断 
　本願発明と引用発明とを対比する。
ア　引用発明の「血液試料」は、本願発明の「血液サンプルを含む生物学的サンプル」に相当することが明らかである。
　
イ　引用発明の「白血球」は、有核であるから、本願発明の「有核の生物学的細胞」に包含されるので、引用発明の「白血球分類計数方法」は、本願発明の「有核の生物学的細胞を同定および計数する方法」に相当する。
　
ウ　引用発明の「溶血剤」は「血液試料中の赤血球を測定の障害とならない程度に溶解し、」「少なくとも1つのノニオン性界面活性剤と少なくとも１つのカチオン性界面活性剤を含」むのであるから、機能からみて、本願発明の「細胞溶解剤」に相当する。
　そして、引用発明の「１)血液試料を、血液試料中の赤血球を測定の障害とならない程度に溶解し、白血球を染色に好適な状態にする少なくとも1つのノニオン性界面活性剤と少なくとも１つのカチオン性界面活性剤を含み、ｐＨが４．５〜１１．０の間にある溶血剤と混合する工程」は、本願発明の「赤血球の溶解」に相当する。
　
エ　引用発明の「蛍光強度の増加する色素」は、「細胞中のＲＮＡに特異的に結合し蛍光強度の増加する」ものであるから、機能からみて、本願発明の「細胞内核酸の染色」をする「細胞内核酸をマークするように設計された色素」に相当する。
　してみれば、引用発明の「２)前記1)で調製した試料と、細胞中のＲＮＡに特異的に結合し蛍光強度の増加する色素と混合することにより血液試料中の有核細胞を蛍光染色する工程」は、本願発明の「細胞内核酸をマークするように設計された色素」により「細胞内核酸の染色」する工程に相当する。
　
オ　引用発明の「前方低角散乱光」、「蛍光」は、それぞれ本願発明の「軸方向の発光回折」、「蛍光」に相当するから、引用発明の「３)前記２）で調製した測定用試料をフローサイトメータで測定し、前方低角散乱光、前方高角散乱光、側方散乱光から選ばれる少なくとも１つの散乱光と、少なくとも１つの蛍光を測定する工程」は、本願発明の「「軸方向の発光回折」と「蛍光」という２つの測定パラメーターを用いてフローサイトメトリーにより得られた溶液を測定」することを含んでいるので、本願発明の「抵抗性容量、軸方向の発光回折、軸方向の発光透過、軸方向発光移入、および蛍光から選択される少なくとも２つの測定パラメーターを用いてフローサイトメトリーにより得られた溶液を測定」とに一致することになる。
　そして、引用発明の「４）前記３）で測定した散乱光と蛍光の強度差を用いて正常な白血球を少なくとも５つに分類計数する工程。」は、本願発明の「測定したパラメーターにより集団における有核細胞を分類および計数すること」に相当する。
　
カ　引用発明の「以下の工程」に含まれる「１）」及び「２）」の工程は、反応する際にインキュベートが必要なことは明白であって、本願発明の「前記血液サンプルを含む生物学的サンプルをサンプル中の有核の生物学的細胞を同定し計数するための試薬と混合し、インキュベートする操作」を含むことは明らかである。
　
　そうすると、本願発明と引用発明とは、 
「以下の操作からなる血液サンプルを含む生物学的サンプル中の有核の生物学的細胞を同定および計数する方法であって、
　前記血液サンプルを含む生物学的サンプルをサンプル中の有核の生物学的細胞を同定し計数するための試薬と混合し、インキュベートする操作において、
　赤血球を溶解するのに適した濃度の少なくとも１つのイオン性および／または非イオン性デタージェントから選択される細胞溶解剤と、残りの未溶解細胞の細胞内核酸をマークするように設計された色素とを含み、
　赤血球の溶解、細胞内核酸の染色を行うことを特徴とし、
　抵抗性容量、軸方向の発光回折、軸方向の発光透過、軸方向発光移入、および蛍光から選択される少なくとも２つの測定パラメーターを用いてフローサイトメトリーにより得られた溶液を測定し、並びに、
　測定したパラメーターにより集団における有核細胞を分類および計数すること、
と、
からなる方法。」である点で一致し、次の点で相違している。 　
　 
（相違点）
　「赤血球の溶解、細胞内核酸の染色」について、本願発明では、有核細胞の固定の段階を有し、さらに、該有核細胞の固定と共に単一の段階で行うのに対して、引用発明では、そのような特定をしていない点。
　
（１）相違点についての検討
　上記刊行物Ａには「赤血球を溶解すると共に白血球を固定する迅速な単試薬法」と記載され、上記刊行物Ｂには「全血試料の赤血球を溶解すると同時に白血球を固定する」と記載され、上記刊行物Ｃには「単一の反応で赤血球の溶解、白血球の保護のための固定化及び好酸性の細胞の染色を可能にし」と記載されているように、血液分類分析において、「白血球の固定」行程を有し、「赤血球の溶解、および白血球の固定」を同時、すなわち、単一の段階にて行うことは優先日前周知技術である。
　そして、上記刊行物Ｃには、「一般的に言うと、詳細な信頼のおける分析は、・・・コストは非常に高く、・・・、方法を単純化するのが常に好ましい。」と「時間とコスト」という課題とその解決のための「単一の反応」で行うという技術事項も記載されている。
　そうすると、固定を行った後で染色すると、固定の影響で色素が細胞に染みこみにくく、不都合なことは自明なことであって、引用発明において、上記周知の赤血球の溶解、および白血球の固定を同時に行う技術を適用する際に、染色も同時に行うべく構成し相違点における本願発明の構成とすることは、当業者が容易に想到し得る事項であるというべきである。
　
　そして、本願発明の作用効果は、刊行物１の記載事項および周知技術から当業者が予測し得る範囲内のものにすぎない。
　
　したがって、本願発明は、引用発明および周知技術に基いて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
第５　むすび 
　以上のとおり，本願発明は，特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　したがって，その他の請求項について言及するまでもなく，本願は拒絶されるべきものである。
　よって，結論のとおり審決する。