【誤訳訂正書】
【提出日】平成27年4月20日(2015.4.20)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体の製造方法であって、前記方法が、（１）ＴＩＲがＤｓｂＡ変異共翻訳原核生物分泌シグナル配列を含む、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第一の翻訳開始領域（ＴＩＲ）；及び、（２）第二のＴＩＲが共翻訳又は翻訳後原核生物分泌シグナル配列を含む、抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第二のＴＩＲを含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞の培養を含み、これによって、宿主細胞中の抗体の発現において、重鎖と軽鎖が生物学的に活性な抗体を形成するように折りたたまれ集合する方法。
【請求項２】
第一の翻訳開始領域が配列番号３６から４２の一つの配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
第二の翻訳開始領域がＳＴＩＩ、ＤｓｂＡ、ＭａｌＥ又はＰｈｏＡ変異シグナル配列を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
第二の翻訳開始領域がＰｈｏＡ又はＭａｌＥ変異シグナル配列をコードするポリヌクレオチドを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
第二の翻訳開始領域が配列番号１から４２の一つの配列を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
宿主細胞が更に（３）Ｆｃポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第三の翻訳開始領域を含む、請求項１から５の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
第三の翻訳開始領域がＳＴＩＩ、ＰｈоＡ、ＭａｌＥ又はＤｓｂＡ変異シグナル配列を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
第三の翻訳開始領域がＰｈоＡ又はＤｓｂＡ変異シグナル配列を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
第三の翻訳開始領域が配列番号１から４２の一つの配列を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
第三の翻訳開始領域が配列番号２３、２４、２６から３９、４１及び４２の一つの配列を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
第一と第二の翻訳開始領域がほぼ同じ翻訳強度を示す、請求項１から１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
相対翻訳強度が約１又は２である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
第一、第二及び第三の翻訳開始領域がほぼ同じ翻訳強度を示す、請求項６から１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
相対翻訳強度が約１又は２である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
宿主細胞中のポリヌクレオチドが更にプロモーターを含む、請求項１から１４の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
プロモーターがｐｈｏＡ、ｔａｃ、ｌｐｐ、ｌａｃ−ｌｐｐ、ｌａｃ、ａｒａ、及びＴ７プロモーターからなる群から選択される原核生物プロモーターである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
宿主細胞が原核細胞である、請求項１から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
原核細胞が大腸菌である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
大腸菌が内在性プロテアーゼ活性の欠損株である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
大腸菌の遺伝子型が、ｄｅｇＰ及びｐｒｃ遺伝子を欠損し、変異ｓｐｒ遺伝子を有する、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２１】
宿主細胞がＤｓｂＡ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＧ及びＦｋｐＡからなる群から選択される原核生物ポリペプチドの少なくとも一つをコードするポリヌクレオチドを更に含む、請求項１から２０の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ポリヌクレオチドがＤｓｂＡとＤｓｂＣの双方をコードする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
宿主細胞が抗体を共同でコードする一又は複数のポリヌクレオチドを含む、請求項１から２２の何れか一項に記載の方法。
【請求項２４】
方法が宿主細胞培養物から抗体を回収することを更に含む、請求項１から２３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２５】
抗体が宿主細胞培養培地から回収される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
方法が回収された抗体と薬学的に許容可能な担体、賦形剤、又は抗体を含む薬学的製剤を調製するための担体とを混合することを更に含む、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
形成されるイムノグロブリンポリペプチド複合体の少なくとも５０％が抗体である、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２８】
形成されるイムノグロブリンポリペプチド複合体の少なくとも７０％が抗体である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項１から２８の何れか一項に記載の方法。
【請求項３０】
抗体がキメラ抗体、親和性成熟抗体、二重特異的抗体、ヒト化抗体、抗体断片又はヒト抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
抗体断片が、一アーム抗体である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
抗体がｃ−ｍｅｔに結合する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
抗体が二重特異的抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
（１）ＤｓｂＡ変異共翻訳原核生物分泌シグナル配列を含み、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第一のＴＩＲ；及び（２）共翻訳又は翻訳後原核生物分泌シグナル配列を含み、抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第二のＴＩＲを含み、これによって、宿主細胞中の抗体の発現において、重鎖と軽鎖が折りたたまれ、集合して生物学的に活性な抗体を形成する、ポリヌクレオチド。
【請求項３５】
第一の翻訳開始領域（ＴＩＲ）が配列番号３６から４２の一つの配列を含む、請求項３４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３６】
第二の翻訳開始領域（ＴＩＲ）がＳＴＩＩ、ＤｓｂＡ、ＭａｌＥ又はＰｈｏＡ変異シグナル配列を含む、請求項３４又は３５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３７】
第二の翻訳開始領域（ＴＩＲ）がＰｈоＡ又はＭａｌＥ変異シグナル配列をコードするポリヌクレオチドを含む、請求項３６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３８】
第二の翻訳開始領域（ＴＩＲ）が配列番号１から４２の一つの配列を含む、請求項３６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３９】
第二のＴＩＲが配列番号１、２、８、９、１１、１３、２９、３６、３７及び４０の一つの配列を含む、請求項３６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４０】
前記宿主細胞が、（３）Ｆｃポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第三のＴＩＲを更に含む、請求項３４から３９の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４１】
前記第三の翻訳開始領域（ＴＩＲ）がＳＴＩＩ、ＰｈоＡ、ＭａｌＥ又はＤｓｂＡ変異シグナル配列を含む、請求項４０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４２】
前記第三の翻訳開始領域（ＴＩＲ）がＰｈоＡ又はＤｓｂＡ変異シグナル配列を含む、請求項４０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４３】
前記第三の翻訳開始領域（ＴＩＲ）が配列番号１から４２の一つの配列を含む、請求項４０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４４】
前記第一及び第二の翻訳開始領域（ＴＩＲ）がほぼ同じ翻訳強度を示す、請求項３４から４３の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４５】
相対翻訳強度が約１又は２である、請求項４４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４６】
前記第一、第二及び第三の翻訳開始領域がほぼ同じ翻訳強度を示す、請求項４０から４３の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４７】
相対翻訳強度が約１又は２である、請求項４６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４８】
前記宿主細胞中のポリヌクレオチドがプロモーターを更に含む、請求項３４から４７の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４９】
プロモーターが、ｐｈｏＡ、ｔａｃ、ｌｐｐ、ｌａｃ−ｌｐｐ、ｌａｃ、ａｒａ、及びＴ７プロモーターからなる群から選択される原核生物プロモーターである、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５０】
前記宿主細胞が原核細胞である、請求項３４から４９の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５１】
前記原核細胞が大腸菌である、請求項５０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５２】
前記大腸菌が内在性プロテアーゼ活性の欠損株である、請求項５１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５３】
前記大腸菌の遺伝子型がｄｅｇＰ及びｐｒｃ遺伝子を欠損し、変異ｓｐｒ遺伝子を有する、請求項５１又は５２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５４】
宿主細胞がＤｓｂＡ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＧ及びＦｋｐＡからなる群から選択される原核生物ポリペプチドの少なくとも一つをコードするポリヌクレオチドを更に含む、請求項３４から５４の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５５】
前記ポリヌクレオチドがＤｓｂＡとＤｓｂＣの双方をコードする、請求項５４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５６】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項３４から５５の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５７】
抗体がキメラ抗体、親和性成熟抗体、二重特異的抗体、ヒト化抗体、抗体断片又はヒト抗体である、請求項３４から５５の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５８】
抗体断片が一アーム抗体である、請求項５７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５９】
抗体がｃ−ｍｅｔに結合する、請求項５８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６０】
抗体が二重特異的抗体である、請求項５７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６１】
抗体重鎖が一又は複数の変異Ｔ３６６Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及び／又はＴ３６６Ｗを含む、請求項５８又は６０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６２】
Ｆｃポリペプチドが一又は複数の変異Ｔ３６６Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及び／又はＴ３６６Ｗを含む、請求項５８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６３】
請求項１から３３の何れか一項に記載の抗体の製造方法を含む、抗体を含む医薬を製造するための方法。
【請求項６４】
請求項３４から６２の何れか一項に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
【請求項６５】
前記宿主細胞が原核細胞である、請求項６４に記載の宿主細胞。
【請求項６６】
前記原核細胞が大腸菌である、請求項６５に記載の宿主細胞。
【請求項６７】
前記大腸菌が内在性プロテアーゼ活性の欠損株である、請求項６６に記載の宿主細胞。
【請求項６８】
前記大腸菌の遺伝子型がｄｅｇＰ及びｐｒｃ遺伝子を欠損し、変異ｓｐｒ遺伝子を有する、請求項６６又は６７に記載の宿主細胞。
【請求項６９】
前記宿主細胞が原核生物シャペロンタンパク質をコードするポリヌクレオチドを更に含む、請求項６４から６８の何れか一項に記載の宿主細胞。
【請求項７０】
前記原核生物シャペロンタンパク質がＤｓｂＡ及び／又はＤｓｂＣである、請求項６９に記載の宿主細胞。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
本発明は、共翻訳分泌シグナルペプチド（共翻訳様式での転座を指示するシグナルペプチド）を含むＴＩＲ変異及び／又は翻訳後分泌シグナルペプチド（翻訳後様式での転座を指示するシグナルペプチド）を含むＴＩＲ変異を含む、新規の翻訳開始領域（ＴＩＲ）変異の使用を含む異種タンパク質の産生の増加のための新規の方法を提供する。更に、ここで示されるのは、ピーク発現のための、共翻訳又は翻訳後分泌シグナルペプチドを含むＴＩＲに作用可能に連結される抗体軽鎖と共翻訳分泌シグナルペプチドを含むＴＩＲに作用可能に連結される抗体重鎖を含むベクターを用いた増加された抗体の産生である。新規のＴＩＲ変異体がまたここで提供される。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
一態様では、本発明は、翻訳開始領域を提供する。幾つかの実施態様では、変異体は変異翻訳開始領域（幾つかの実施態様では、原核生物翻訳後分泌シグナル配列又は原核生物共翻訳分泌シグナル配列）を含む。幾つかの実施態様では、変異体は、ＰｈｏＡ、ＭａｌＥ、ＤｓｂＡ又はＳＴＩＩのような分泌シグナル配列の核酸変異を含む。幾つかの実施態様では、変異体は更にＭｌａＩ、ＢｓｓＨＩＩ又はＸｂａＩ制限サイトを含む。幾つかの実施態様では、変異体は、表２に示す配列を含む翻訳開始領域変異を含む。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
一態様では、本発明は変異分泌シグナル配列を提供する。幾つかの実施態様では、分泌シグナル配列は原核生物翻訳後分泌シグナル配列又は原核生物共翻訳分泌シグナル配列である。幾つかの実施態様では、変異体はＰｈｏＡ、ＭａｌＥ、ＤｓｂＡ又はＳＴＩＩ分泌シグナル配列の核酸変異体である。幾つかの実施態様では、変異体は表２に示す分泌シグナル配列を含む。本発明の変異分泌シグナル配列は、例えば、ここに開示する任意の方法における使用に適している。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
別の態様では、本発明は本発明の翻訳開始領域を含むポリペプチドを提供する。幾つかの実施態様では、翻訳開始領域は、表２に示す配列（例えば、配列番号１から４２の一つ）を含む。幾つかの実施態様では、翻訳開始領域は、配列番号１から１４、１６から２４、２６から３９、４１から４２の一つを含む。ポリヌクレオチドは、例えば、ここに開示する任意の方法における使用に適している。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
別の態様では、本発明は、本発明の分泌シグナル配列を含むポリヌクレオチドを提供する。幾つかの実施態様では、分泌シグナル配列は、表２に示す配列を含む。（例えば、配列番号１から４２の一つ）。幾つかの実施態様では、翻訳開始領域は、配列番号１から１４、１６から２４、２６から３９、４１から４２の一つを含む。ポリヌクレオチドは、例えば、ここに開示する任意の方法における使用に適している。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
別の態様では、本発明は、異種ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される本発明の翻訳開始領域を含むポリヌクレオチドであって、これによって、宿主（例えば、原核生物宿主細胞、例えば、大腸菌細胞）における異種ポリペプチドの発現において、異種ポリペプチドが折りたたまれ、集合して生物学的に活性な異種ポリペプチドを形成するポリヌクレオチドを提供する。異種ポリペプチドの例を更にここに開示する。幾つかの実施態様では、異種ポリペプチドは、抗体重鎖である。幾つかの実施態様では、異種ポリペプチドは、抗体軽鎖である。幾つかの実施態様では、異種ポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドである。幾つかの実施態様では、異種ポリペプチドは、多量体ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、異種ポリペプチドは、異種多量体である。幾つかの実施態様では、翻訳開始領域は、ここに開示する任意の翻訳開始領域、例えば、表２に示す配列を含む翻訳開始領域である。幾つかの実施態様では、翻訳開始領域は、配列番号１から４２の一つの配列を含む。幾つかの実施態様では、翻訳開始領域は、配列番号１から１４、３６から３９、４１から４２の一つの配列を含む。幾つかの実施態様では、翻訳開始領域は、変異ＳＴＩＩ、ＤｓｂＩ、ＰｈｏＡ、又はＭａｌＥシグナル配列を含む。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
別の態様では、本発明は、（１）ＴＩＲが共翻訳原核生物シグナル配列を含む、第一の異種ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第一の翻訳開始領域（ＴＩＲ）；及び、（２）第二のＴＩＲが共翻訳又は翻訳後原核生物分泌シグナル配列を含む、第二の異種をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第二のＴＩＲを含むポリヌクレオチドであって、これによって、宿主細胞中の抗体の発現において、第一と第二の異種ポリペプチドが生物学的に活性な抗体を形成するように折りたたまれ集合するポリヌクレオチドを提供する。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
別の態様では、本発明は、（１）抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される本発明の第一の翻訳開始領域、及び、（２）抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第二の翻訳開始領域を含むポリヌクレオチドであって、これによって、宿主細胞（例えば、原核生物宿主細胞、例えば、大腸菌宿主細胞）中の抗体の発現において、重鎖と軽鎖が生物学的に活性な抗体を形成するように折りたたまれ集合するポリヌクレオチドを提供する。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
幾つかの実施態様では、第一の翻訳開始領域は、共翻訳原核生物分泌シグナル配列（例えば、シグナル認識ペプチドを介する翻訳を指示するシグナル配列）を含む。幾つかの実施態様では、第一の翻訳開始領域は、ＳＴＩＩ又はＤｓｂＡシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第一の翻訳開始領域はＤｓｂＡシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第一の翻訳開始領域は、ＰｈｏＡ又はＭａｌＥシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第一の翻訳開始領域は、配列番号：１から１０及び３６から２９及び４１及び４２の一つの配列を含む。幾つかの実施態様では、第一の翻訳開始領域は、配列番号１から４２の一つの配列を含む。幾つかの実施態様では、第一の翻訳開始領域は、配列番号１から１４，１６から２４、２６から３９、４１から４２の一つの配列を含む。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
幾つかの実施態様では、第二の翻訳開始領域は（ｉ）共翻訳原核生物分泌シグナル配列又は翻訳後原核生物分泌シグナル配列（例えば、ｓｅｃ経路を介する翻訳を指示するシグナル配列）を含む。幾つかの実施態様では、第二の翻訳開始領域は、ＳｔＩＩ、ＤｓｂＡ、ＭａｌＥ又はＰｈｏＡシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第二の翻訳開始領域は、ＰｈｏＡ又はＭａｌＥシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第二の翻訳開始領域は、配列番号１から４２の一つの配列を含む。幾つかの実施態様では、第二の翻訳開始領域は、配列番号１から１４、１６から２４、２６から３９、４１から４２の一つの配列を含む。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２０】
幾つかの実施態様では、抗体をコードするポリヌクレオチドは、（３）Ｆｃポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第三の翻訳開始領域を更に含む。幾つかの実施態様では、第三の翻訳開始領域は、ＳＴＩＩ、ＰｈｏＡ又はＤｓｂＡシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第三の翻訳開始領域は、ＤｓｂＡシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第三の翻訳開始領域は、ＰｈｏＡシグナル配列を含む。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
別の態様では、本発明は、（１）ＴＩＲが共翻訳原核生物分泌シグナル配列を含み、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第一の翻訳開始領域（ＴＩＲ）；及び（２）第二のＴＩＲが共翻訳又は翻訳後原核生物分泌シグナル配列を含み、抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結された第二のＴＩＲを含み、これにより、宿主細胞中の抗体発現において、重鎖及び軽鎖が折りたたまれ、集合して生物学的に活性な抗体を形成する、ポリヌクレオチドを提供する。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２２】
別の態様では、本発明は、抗体断片（例えば、一価抗体断片）をコードするポリヌクレオチドを提供し、前記ポリヌクレオチドは（１）抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される本発明の第一の翻訳開始領域；（２）抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第二の翻訳開始領域；及び（３）Ｆｃポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第三の翻訳開始領域を含み、これにより、宿主細胞（例えば、原核生物宿主細胞）中の抗体発現における、重鎖、軽鎖及びＦｃポリペプチドが折りたたまれ、集合して生物学的に活性な抗体（例えば、一アーム抗体）を形成する。幾つかの実施態様では、第三の翻訳開始領域は、共翻訳原核生物分泌シグナル配列又は翻訳後原核生物分泌シグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第三の翻訳開始領域はＳＴＩＩ、ＰｈｏＡ、ＭａｌＥ、又はＤｓｂＡシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第三の翻訳開始領域は、ＤｓｂＡシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第三の翻訳開始領域は、ＰｈｏＡシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第三の翻訳開始領域は、配列番号１から４２の一つの配列を含む。幾つかの実施態様では、第三の翻訳開始領域は、配列番号１から１４、１６から２４、２６から３９、４１から４２の一つの配列を含む。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
別の態様では、本発明は、抗体をコードするポリヌクレオチドを提供し、前記ポリヌクレオチドは（１）第一の翻訳開始領域がＳＴＩＩ又はＤｓｂＡシグナル配列を含み、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される本発明の第一の翻訳開始領域；（２）第二の翻訳開始領域がＳＴＩＩ、ＤｓｂＡ、ＭａｌＥ又はＰｈｏＡシグナル配列を含み、抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第二の翻訳開始領域を含み、これにより、宿主細胞（例えば、原核生物宿主細胞）中の抗体発現における、軽鎖及び重鎖が折りたたまれ、集合して生物学的に活性な抗体を形成する。幾つかの実施態様では、第一の翻訳開始領域はＤｓｂＡシグナル配列を含み、第二のほんやくは、ＭａｌＥ又はＰｈｏＡシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、抗体をコードするポリヌクレオチドは更に（３）Ｆｃポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結される第三の翻訳開始領域を含む。幾つかの実施態様では、第三の翻訳開始領域はＳＴＩＩ、ＰｈｏＡ又はＤｓｂＡシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第三の翻訳開始領域は、ＰｈｏＡシグナル配列を含む。幾つかの実施態様では、第三の翻訳開始領域は、ＤｓｂＡシグナル配列を含む。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２５】
幾つかの実施態様では、本発明のポリヌクレオチドは、異種ポリペプチドと作用可能に連結されるプロモーターを更に含む。幾つかの実施態様では、プロモーターはｐｈｏＡ、ｔａｃ、ｌｐｐ、ｌａｃ−ｌｐｐ、ｌａｃ、ａｒａ、ｔｒｐ、及びＴ７プロモーターからなる群から選択される原核生物プロモーターである。幾つかの実施態様では、プロモーターはｐｈｏＡプロモーターである。抗体重鎖及び軽鎖の発現に関する幾つかの実施態様では、ポリヌクレオチドは更に（ａ）第一のプロモーターが軽鎖と作用可能に連結される、第一のプロモーター及び（ｂ）第二のプロモーターが重鎖と作用可能に連結される、第二のプロモーターを含む。幾つかの実施態様では、第一及び第二のプロモーターは双方共にｐｈｏＡプロモーターである。抗体重鎖及び軽鎖とＦｃポリペプチドの発現に関する幾つかの実施態様では、ポリヌクレオチドは（ｃ）第三のプロモーターがＦｃポリペプチドと作用可能に連結される第三のプロモーターを更に含む。幾つかの実施態様では、第三のプロモーターはＦｃポリペプチドである。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
一態様では、本発明は本発明のポリヌクレオチド又はベクターを含む宿主細胞を提供する。幾つかの実施態様では、宿主細胞は抗体（幾つかの実施態様では、二重特異的又は一アーム抗体）をコードする本発明のポリヌクレオチドを含む。宿主細胞は集合的に抗体をコードする一以上のポリヌクレオチドを含み得る。ベクターは任意の型、例えば、発現ベクターのような組換えベクターであり得る。種々の宿主細胞の任意のものを使用し得る。一実施態様では、宿主細胞は、原核生物細胞、例えば、大腸菌である。幾つかの実施態様では、大腸菌は内在性プロテアーゼ活性を欠損する株である。幾つかの実施態様では、大腸菌の遺伝子型はｄｅｇＰ及びｐｒｃ遺伝子を欠損し、変異ｓｐｒ遺伝子を有する。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
幾つかの実施態様では、宿主細胞は更に原核生物シャペロンタンパク質（例えば、Ｄｓｂタンパク質（ＤｓｂＡ、ＤｓｂＢ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＤ、ＦｋｐＡ及び／又はＤｓｂＧ））をコードするポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施態様では、シャペロンタンパク質は、宿主細胞中で過剰発現する。幾つかの実施態様では、シャペロンタンパク質はＤｓｂＡ及び／又はＤｓｂＣである。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
本発明はまた本発明の変異ＴＩＲ及びシグナル配列を用いた方法を提供する。ここに開示される変異ＴＩＲ、シグナル配列及びポリヌクレオチドは何れも、例えば、ここに開示される本発明の方法のような、方法における使用に適している。更なる態様では、本発明は本発明の異種ポリペプチドを作製する方法を提供する。例えば、本発明は異種ポリペプチド（例えば、ここに定義される通り、全長抗体及びその断片を含む抗体）を調製する方法を提供し、前記方法はポリヌクレオチドが発現するための、本発明のポリヌクレオチド（例えば、翻訳開始領域を含むポリヌクレオチド）を含む宿主細胞の培養を含み、これにより、宿主細胞（例えば、原核生物宿主細胞）中の前記ポリヌクレオチドの発現において、異種ポリペプチドが折りたたまれ、生物学的に活性な異種ポリペプチドを形成する。抗体の発現に関する実施態様では、宿主細胞中の前記ポリヌクレオチドの発現において、軽鎖及び重鎖が折りたたまれ、集合して生物学的に活性な抗体を形成する。幾つかの実施態様では、方法は更に宿主細胞培養からの異種ポリペプチド（例えば、抗体）の回収を含む。幾つかの実施態様では、異種ポリペプチドは宿主細胞培養から回収される。幾つかの実施態様では、発明は更に回収した異種ポリペプチド（例えば、抗体）と薬学的に許容可能な担体、賦形剤、又は異種ポリペプチド（例えば、抗体）を含む薬学的製剤を製造するための担体とを組み合わせることを含む。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５７】
「作用可能に連結される」とは、そのように記載された成分が意図された様式で機能することを許容する関係にある、２以上の成分の並置を指す。例えば、連結された配列の翻訳制御又は調整のためにそれがシスで機能する場合、プロモーターはコーディング配列に作用可能に連結される。一般的に、必ずしもそうではないが、「作用可能に連結される」ＤＮＡ配列は連続しており、２個のタンパク質コード配列を連結する必要があるか又は分泌リーダーの場合、連続的で且つ読取り枠内にある。しかしながら、作用可能なプロモーターは一般的にコード配列の上流に位置しているが、必ずしも連続しているというわけではない。作用可能なエンハンサーは、コード配列の上流の中及びプロモーターからかなりの距離の上流に位置し得る。連結は、当該分野で知られている組換え方法、例えば、ＰＣＲ法を用いるか、アニーリングによるか、又は都合の良い制限サイトにおけるライゲーションによって達成される。都合の良い制限サイトが存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプタまたはリンカーが、慣用法に従って使用される。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５９】
「プロモーター」は、それが作用可能に連結した遺伝子又は配列の転写を制御するポリヌクレオチド配列を意味する。プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼ結合及び転写開始のシグナルを含む。使用されるプロモーターは、選択された配列の発現が考えられる宿主細胞の細胞型において機能し得る。様々な異なった供給源からの構成的、誘導性及び抑制性プロモーターを含む多数のプロモーターが当該分野においてよく知られており（またＧｅｎＢａｎｋのようなデータベースにおいて同定され）、クローン化ポリヌクレオチドとして（例えばＡＴＣＣのような寄託期間並びに他の商業的又は個人の供給源から）入手できる。誘導プロモーターでは、プロモーターの活性は、例えば誘導剤のようなシグナルに応答して増加又は減少する。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２９】
細菌性のＳｅｃトランスロカーゼは、原核生物におけるタンパク質輸送を容易にする。分泌タンパク質は、２つの異なる機構、即ち、共翻訳及び翻訳後標的化によってＳｅｃトランスロカーゼに対して標的化され得る。後者において、分泌タンパク質を含むシグナル配列は、その合成時にリボソームから完了した状態で放出され、Ｓｅｃトランスロカーゼに向けられる。種々のグラム陰性菌において、分泌タンパク質は、転移能を有し、折りたたまれていない状態のこれらのタンパク質を維持する分泌特異的シャペロンＳｅｃＢによってＳｅｃ−トランスロカーゼに誘導される。共翻訳標的化の間、シグナル認識粒子（ＳＲＰ）は、それがリボソームから出現し、ＳＲＰ／リボソーム／新生の分泌タンパク質鎖の全三元複合体が、Ｓｅｃ−トランスロカーゼに標的化される一方で、分泌タンパク質のシグナル配列に結合する。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３２】
典型的には、ＴＩＲ変異体は、関心のある遺伝子発現のための適切な要素を有するプラスミドベクター中で提供されるであろう。例えば、典型的なコンストラクトは、シグナル配列の５’のプロモーター、関心のある遺伝子又はレポーター遺伝子挿入のための、シグナル配列の３’の制限酵素認識サイト、及び得られたプラスミドで形質転換した細菌の選択及び／又は維持のための、薬剤耐性マーカーのような選択可能なマーカーを含むであろう。プラスミドベクターを更にここに記載し例示する。原核生物宿主と共に使用するための適切なプロモーターは、当該分野で知られており、幾つかをここに例示し記載する。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７２】
抗原をコードするＤＮＡ分子の構築に続いて、そのＤＮＡ分子は、プラスミド等の発現ベクターの発現コントロール配列と作用可能に連結し、このコントロール配列は、そのベクターで形質転換した宿主細胞によって認識される。一般的に、プラスミドベクターは、その宿主細胞と適合する種から誘導された複製及びコントロール配列を有する。このベクターは、通常は、形質転換細胞で表現型の選択を提供することが可能なタンパク質をコードする配列だけでなく複製部位を有する。原核宿主細胞及び真核宿主細胞での発現に好適なベクターは当分野で公知であり、さらにそのいくつかを本明細書に記載する。酵母菌などの真核生物、又は哺乳動物などの多細胞生物由来の細胞が用いられうる。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７３】
場合によっては、抗原をコードするＤＮＡは宿主細胞によって培地中への発現産物の分泌を生じさせる分泌リーダー配列に作用可能に連結される。分泌リーダー配列の例には、stII、エコチン(ecotin)、lamB、ヘルペスGD、lpp、アルカリホスファターゼ、インベルターゼ、及びアルファ因子が含まれる。ここでの使用にまた適しているのはプロテインＡの３６アミノ酸リーダー配列である(Abrahmsen等, EMBO J., 4:3901(1985))。