【誤訳訂正書】
【提出日】平成27年10月21日(2015.10.21)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７２】
抗LRP6-1はOIRモデルの網膜で血管漏出を減少させて、炎症を抑制した。血液網膜バリアの故障のために糖尿病性網膜症の特徴の1つは漏れやすい血管である。OIRラット(増殖性糖尿病性網膜症のモデル)はVEGF(Wntシグナル伝達の目標の遺伝子)などの血管新生性因子の乏血で仲介された過剰発現のため増加する網膜の血管透過性を表します。血管漏出への抗LRP6-1の抑制効果はOIRモデルで評価された。抗LRP6-1はP12齢で硝子体内的に右眼(10μg/目)に注がれ、同じ量の比較対照免疫グロブリンで反対の目を処理した。網膜の血管漏出は、P16齢でエヴァンスブルー−アルブミン漏出方法を使用することで測定された。比較対照免疫グロブリンが注入されたそれと比べて、抗LRP6-1が注入された目が低い網膜の血管透過性をかなり持っていたのを示した(図20A)。次に、血管漏出と炎症に貢献する因子の網膜のレベルが測定された。 比較対照の免疫グロブリンと比べて、抗LRP6-1はOIRラットの網膜でICAM-1、TNF-α、およびVEGFの発現を抑圧した。また、抗LRP6-1はLRP6とβ-カテニンの網膜のレベルを下に規制し、Wntシグナル伝達活性化(図20B-D)を抑制することを通して抗LRP6-1がOIRの網膜で脈管形成性であるか炎症性の活性化を減衰させたのを示した。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７３】
抗LRP6-1はSTZ誘発糖尿病ラットで網膜の血管漏出と白血球うっ滞を減少させました。 糖尿病性網膜症への抗LRP6-1の有益な効果を評価するために、抗LRP6-1は硝子体内的にSTZ誘発糖尿病ラットに注がれました。比較対照のための同じ投与量の非特異的IgGで処理した。網膜の血管透過性は、エヴァンスブルー−アルブミン漏出方法を使用することで抗LRP6-1注射に続いて、2週間測定されて、免疫グロブリン比較対照に較べられました。 結果は、免疫グロブリンを注入したものよりかなり低い血管透過性が、抗LRP6-1が注入された目で示された(図21A)。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７４】
白血球うっ滞などの網膜の炎症は糖尿病性網膜症の別の特徴です。網膜の炎症への抗LRP6-1の効果を決定するために、STZ-糖尿病患者網膜でモノクローナル抗体注射に続いて、白血球うっ滞分析評価は2週間実行された。非糖尿病患者比較対照と比べて、未処置のSTZ糖尿病の、そして、免疫グロブリンで扱われたSTZ-糖尿病患者の網膜は、網膜の脈管構造(図21B)でかなり増加する数の粘着性の白血球を見せました。白血球の数は抗LRP6-1が注入されたSTZ-糖尿病患者グループでかなり減少し、抗LRP6-1が網膜の炎症(図21B)に抑制影響を与えるのを示した。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７６】
非糖尿病患者マウスでそれと比べて、STZ誘発糖尿病の網膜はICAM-1とTNF-αの過剰発現を示した。非特異的IgGではなく、抗LRP6-1は、糖尿病の網膜(図21 C)でICAM-1とTNF-αの過剰発現を抑圧した。さらに、非糖尿病患者マウスでそれと比べて、LRP6の網膜のレベルはSTZ誘発糖尿病の網膜で増加した。しかしながら、レベルは、糖尿病の抗LRP6-1が注入されたマウスで減少したが、非特異的IgGが注入されたそれで減少したというわけではない。これらのデータは、糖尿病の網膜でのWnt経路の活性化が一部LRP6の過剰発現のためであったのを示します。そして、抗LRP6-1はLRP6の下方への規制を通してICAM-1とTNF-αの過剰発現を抑圧します。一緒に取って、結果は、それが糖尿病の網膜の血管漏出と炎症を減衰させて抗LRP6-1が糖尿病性網膜症に有益な影響を与えるのを示した。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７７】
実施例3の議論
前の実施例群は、糖尿病性網膜症で、網膜でWntシグナル伝達の異常調節するのを示して、その結果、Wntシグナル伝達経路が糖尿病性網膜症で主要な病原性であることを示している。 DKK1(Wntシグナル伝達の特定の抑制剤)が糖尿病性網膜症モデルにおける網膜の炎症、血管漏出、および炎症を改善することができるという観測で、糖尿病性網膜症でのWntシグナル伝達の病原性の役割は支持されます。これらの調査結果は、Wntシグナル伝達が糖尿病性網膜症の潜在的治療法の目標を表すのを示します。Wntシグナル伝達のよく研究された分子カスケードにもかかわらず、Wnt経路を妨げる効果的な戦略は糖尿病性網膜症の治療法のアプリケーションのために確立されていません。Wntシグナル伝達のDKK親族や、SERPINA3KやIGF1BPなどの自然な抑制剤は特定されたが、治療法としてこれらのアプリケーションで生産の低い安定性と高いコストを含むこれらの自然な抑制剤を使用することの制限があります。本実施例は、初めて、抗LRP6モノクローナル抗体が糖尿病性網膜症でWnt/β-カテニンシグナル伝達の抑制で網膜の血管漏出と網膜の炎症を減衰させると報告します。さらに、これらの結果は糖尿病性網膜症の発展とLRP6の不可欠でのWnt経路活性化の原因的な役割を支持することを提供します。治療法の可能性を示して、これらの観測は、まず第一に、抗LRP6-1でLRP6を妨げると糖尿病性網膜症を改善することができるのを確証した。 そのうえ、この実施例はWntシグナル伝達経路を妨げるための十分な目標としてそのLRP6を明らかにします。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７８】
ここに、LRP6(E1E2)の1番目と2番目のプロペラドメインに特異的な抗LRP6-1が様々な網膜細胞におけるWntシグナル伝達ならびにその後の脈管形成性であって炎症性の因子の発現を阻害したのが示されます。生体外でのWntシグナル伝達と炎症性因子への抑制効果に基づいて、糖尿病性網膜症への潜在的有益な効果は動物モデルで決定した。まず最初に、OIRと糖尿病のマウスの両方で、モノクローナル抗体は糖尿病の黄斑浮腫(DME)(糖尿病患者の視力の損失の一番の原因)の根本原因である網膜の血管漏出を減少させました。2番目に、抗LRP6-1は網膜の白血球うっ滞、次に局部乏血をもたらす毛細血管の損なわれた内皮、血管漏出、および閉鎖に通じることができる主要な炎症性の変化、を抑圧した。網膜の血管漏出と白血球うっ滞への効果のためのメカニズムに向かって、これらの生体外の、そして、生体内の結果は、抗LRP6-1が糖尿病における網膜の炎症で重要な役割を果たすために示されたVEGF、ICAM-1、およびTNF-αの発現を下に規制するのをともに示した。VEGFはWntシグナル伝達の標的遺伝子として確固とします。ICAM-1とTNF-αのプロモータ領域の配列分析は、TCF/LEFの結合サイトが、ICAM-1とTNF-αの発現がWnt経路によって直接規制されるかもしれないことを示して、これらのプロモーターの末端の領域にあるのを明らかにした。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７９】
古典的Wnt経路は、単一のエフェクタを利用する保存されたシグナル経路であり、当該エフェクタは、多くの目標の遺伝子の発現を規制するための多機能転写活性剤β-カテニンです。しかしながら、Wnt経路のさまざまの時空的な活性化は20のWntリガンド、10のFrizzledレセプター、および2つのコレセプターの中の複数の組み合わせから起こります。多数の多様性を提供する。これらの多様性はWntリガンドかFrizzledレセプターの封鎖でWnt経路を阻害する治療法のアプローチを抑制します。しかしながら、以下の事実に基づいて、LRP6はWntシグナル伝達を妨げるための理想的な目標であると信じられています。 1) 古典的Wnt経路は2つのコレセプター、LRP5またはLRP6の1つを必要とします。 2) LRP6のノックアウトはLRP5のノックアウトより厳しい表現型を表し、これはLRP6がWntシグナル伝達でLRP5より重要な役割を果たすのを示すものです。 3) LRP6には、抗体によって細胞外的にアクセスしやすい大きい細胞外ドメインがあります。 さらに、実施例１で糖尿病患者と動物モデルから特異的に概説された研究は、DKK1でLRP6を妨げると動物モデルにおける糖尿病性網膜症を改善することができるのを示した。糖尿病におけるWntシグナル伝達活性化のための正確なメカニズムは不鮮明ですが、現在および以前の研究は、脂質酸化製品(4-hydroxynonenal)での、および高グルコースでのLRP6のリン酸化がWntシグナル伝達活性化に十分であることを示した。 Wntリガンド仲介シグナル伝達化はこの特定の状態における副次的効果であるように思えます。 これらの調査結果は、LRP6を妨げると、WntリガンドやFrizzledレセプターよりむしろ、糖尿病の状態での少なくとも正準な経路を阻害するための効果的な手段が提供されるのを強く示しています。  
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８０】
LRP6はタイプ１  シングルトランスメンブランレセプターです。そのより大きいエクトドメインはYWTDプロペラドメインで4つの同様のEGFのような反復(1Eから4E)から構成されます。 1番目と2番目のベータプロペラ領域を含んでいるLRP6E1E2ドメインがWnt-Fzと相互作用するのに協働するのが示されたが、LRP6E3E4はアンタゴニストDKK1に結合サイトを供給します。しかしながら、最近の生体外の再構成研究は、Wnt3Aが3E4Eドメインに特異的に、そして、DKK1が相互作用の協働的パターンで1E2Eおよび3E4Eの双方へ結合することを示した。 また、Wnt1が優先的に1Eのドメインに付くのも、さらに3EがWnt3A結合に十分であることも示されている。LRP6に関するそれらの異なった拘束力があるサイトにもかかわらず、Wnt1とWnt3Aによって誘発されたTOPFLASH活性化の両方が抗LRP6-1によって抑制されます。これは抗LRP6-1が1EドメインにWnt1リガンドが結合することを妨げるだけではなく、3Eドメインに対するWnt3A相互作用にも抑制影響を与えることを示すものである。Wnt3Aによって誘発されたWntシグナル伝達における抗LRP6-1の抑制は、二価抗LRP6-1がLRP6に付いて、Wnt3Aの近づきにくさを引き起こすLRP6 エクトドメインの三次元構造を変える可能なメカニズムによって説明されるかもしれません。また、抗LRP6-1がWntリガンド結合に利用可能なLRP6の下方への規制を引き起こすLRP6を動揺させるのも、ありそうです。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８１】
OIRとSTZ誘発糖尿病ラットモデルを使用する生体内の研究は、抗LRP6-1が古典的Wnt経路の活性化を抑制するだけではなく、LRP6レベルを下方に規制することを示した。これは、総LRP6の網膜のレベルが比較対照免疫グロブリンが注入されたそれより抗LRP6-1(注射の1週間後の)が注入されたマウスで低いからである。 しかしながら、細胞培養結果は、抗LRP6-1がLRP6の活性化を妨げるが、6時間の処理の後に総LRP6レベルを減少させないのを示した。 生体外の、そして、生体内の結果の間のこの不一致は抗LRP6-1よる処理時間の違いによって説明されるかもしれない。これは、糖尿病患者では、1週間網膜は治療されたが、糖尿病ラットでは網膜は１週間処理されたからである。抗LRP6-1がOIRと糖尿病の動物モデルのLRP6の総レベルを下に規制するメカニズムは不明瞭です。 しかしながら、LRP6のエクトドメインとの抗体結合がLRP6を動揺させるか、内面化を引き起こして、またはその結果、LRP6の総レベルを減少させることがありそうです。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８２】
糖尿病性網膜症にかかわる複数の病原性のメカニズムの規制におけるWntシグナル伝達の見かけのかかわり合いは対象とされた療法の好奇心をそそる候補にWnt経路を作ります。 VEGF(脈管形成、血管透過性、および内皮細胞の移動を規制する)は糖尿病性網膜症の網膜で過剰発現され、β-カテニンによって規制されたWnt目標の遺伝子です。 この実施例は、抗LRP6-1が高グルコースに露出された網膜細胞における、およびOIRラットの網膜におけるVEGFの過剰発現を抑圧したのを示した。さらに、Wnt経路がNF−κBの直接活性化による網膜の炎症を抑制する、およびSTAT3を含む転写調節因子がクロストークするのを規制するのが知られています。また、結果は、ICAM-1とTNF-αの一時的発現がWntシグナル伝達活性化のVEGF発現と平行していたのを示し、これらの発現がWntシグナル伝達のコントロールの下にあるという補足的証拠を提供した。したがって、これらの調査結果は糖尿病性網膜症における重要な病原性の役割を果たすのが知られている重複因子の表現がWnt経路によって下方に規制されているという可能性のある証拠を提供します。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８３】
最近の臨床実験は、抗VEGF化合物がAMDに有望な影響を与えるのを示した。 しかしながら、糖尿病性網膜症では、抗VEGF化合物はAMDほど有効ではない。可能な理由は糖尿病性網膜症が複合したそして多因子疾患であるということです。VEGFに加えて、複数の増殖因子が糖尿病性網膜症における役割を果たすのが知られています。 したがって、VEGFのみを妨げるのは糖尿病性網膜症を改善するのに十分でないかもしれません。 Wnt経路が糖尿病性網膜症で巻き込まれるICAM-1や、PDGFや、VEGFや、TNF-αや、MMPやCOX2などの炎症性の、そして、脈管形成性な複数の因子を規制するので、糖尿病性網膜症では、抗LRP6抗体は抗VEGF化合物より強力な効力を持っているかもしれません。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８４】
治療法の目的にヒト化されたモノクローナル抗体を使用する利点は、内在性Wnt抑制剤と比べて、それらの高い特異性と安定性であり、低い免疫原性（immunogenecity）と毒性です。現在の研究が単に概念研究の証拠であることは注目に値します。抗体は、ヒト化される必要があります。効力、毒性、および免疫原性は、測定する必要があるでしょう。
結論として、これらの調査結果は、まず第一に、抗LRP6モノクローナル抗体が糖尿病性網膜症で治療法の可能性を持っているのを示した。また、データは網膜の血管漏出と網膜の炎症の主要な原因としてLRP6活性化を含意します、その結果、同様の病原性のメカニズムで続いたAMDのLRP6と対象とされた療法のかかわり合いを広げます。その上、これらの結果は、抗LRP6-1がLRP6の総レベルを減少させるのを示し、異なったwntリガンドにかかわらず拮抗効果を示した。細胞生存、安定性問題、および効力における副作用のための問題は残っていましたが、それはまず第一に、糖尿病性網膜症における、LRP6ターゲッティング療法の治療法の可能性を示した。さらに、この研究はWntシグナル伝達の活性化および/または、LRP6の過剰発現に関連している病気で、抗体ベースの、そして、LRP6によって対象とされた療法を調査する強い原理を提供します。