(57)【要約】      （修正有）【課題】個人における補体媒介性の炎症を検出するための方法および補体活性化を検出するための方法に用いることが出来る抗体またはその抗原結合断片および検出可能な成分を含む抗体複合体を提供する。【解決手段】検出可能部分、ならびに軽鎖ＣＤＲ１がある特定の配列であり、軽鎖ＣＤＲ２が別の特定の配列であり、且つ、軽鎖ＣＤＲ３がまた別の特定の配列である軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３、または重鎖ＣＤＲ１が前記と異なる特定の配列または別の前記と異なる特定の配列であり、重鎖ＣＤＲ２がまた別の前記と異なる配列であり、重鎖ＣＤＲ３がさらに別の前記と異なる特定の配列またはさらにまた別の前記と異なる特定の配列である重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を備える抗Ｃ３ｄ抗体複合体【選択図】図５−２
2018104436.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
検出可能部分、ならびに
軽鎖ＣＤＲ１が配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号１５であり、且つ、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号１６である軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３、または
重鎖ＣＤＲ１が配列番号１７または配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号１８であり、重鎖ＣＤＲ３が配列番号１９または２９である重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３
を備える抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項２】
検出可能部分、ならびに
軽鎖ＣＤＲ１が配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号１５であり、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号１６である軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３、ならびに
重鎖ＣＤＲ１が配列番号１７または配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号１８であり、重鎖ＣＤＲ３が配列番号１９または２９である重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３
を備える請求項１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項３】
軽鎖ＣＤＲ１が配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号１５であり、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号１６であり、重鎖ＣＤＲ１が配列番号１７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号１８であり、重鎖ＣＤＲ３が配列番号１９である、請求項２に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項４】
軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号２６であり、重鎖ＣＤＲ１が配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３が配列番号２９である、請求項２に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項５】
検出可能部分、ならびに
配列番号１２または配列番号２２と９０％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列、または
配列番号１３もしくは配列番号２３と９０％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列
を備える抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項６】
配列番号１２または配列番号２２と９０％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列、および
配列番号１３または配列番号２３と９０％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列
を備える請求項５に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項７】
配列番号１２と９０％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列、および
配列番号１３と９０％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列
を備える請求項６に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項８】
配列番号２２と９０％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列、および
配列番号２３と９０％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列
を備える請求項６に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項９】
モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、キメラ化もしくはキメラ抗体またはその抗原結合断片、ヒト化抗体またはその抗原結合断片、脱免疫化ヒト抗体またはその抗原結合断片、完全ヒト抗体またはその抗原結合断片、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ディアボディまたはその抗原結合断片、ミニボディまたはその抗原結合断片、トリアボディまたはその抗原結合断片、ドメイン抗体またはその抗原結合断片、ラクダ科抗体またはその抗原結合断片、ヒトコブラクダ抗体またはその抗原結合断片、またはファージディスプレイ抗体またはその抗原結合断片、または反復性抗原アレイまたはその抗原結合断片によって特定される抗体またはその抗原結合断片を含む請求項１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項１０】
ヒト化抗体またはその抗原結合断片を含む請求項１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項１１】
モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む請求項１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合断片が非切断型Ｃ３よりも少なくとも１０倍高い親和性でｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇに優先的に結合する、請求項１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合断片が非切断型Ｃ３よりも少なくとも１００倍高い親和性でｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇに優先的に結合する、請求項１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項１４】
前記検出可能部分が３２Ｐ、蛍光色素、高電子密度試薬、酵素、ビオチン、ジゴキシゲニン、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体、超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＳＰＩＯナノ粒子凝集体、標準超常磁性酸化鉄（「ＳＳＰＩＯ」）、ＳＳＰＩＯナノ粒子凝集体、多分散性超常磁性酸化鉄（「ＰＳＰＩＯ」）、ＰＳＰＩＯナノ粒子凝集体、単結晶型ＳＰＩＯ、単結晶型ＳＰＩＯ凝集体、単結晶型酸化鉄ナノ粒子、単結晶型酸化鉄、別のナノ粒子造影剤、リポソームまたはガドリニウムキレート（「Ｇｄ−キレート」）分子を含む他の送達ベヒクル、ガドリニウム、放射性同位体、放射性核種、炭素１１、窒素１３、酸素１５、フッ素１８、ルビジウム８２、フルオロデオキシグルコース、ガンマ線放出放射性核種、陽電子放出放射性核種、放射性標識グルコース、放射性標識水、放射性標識アンモニア、生体コロイド、微小気泡、ヨウ素化造影剤、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、金ナノ粒子凝集体、フルオロフォア、二光子フルオロフォア、ハプテン、タンパク質、および蛍光性部分からなる群より選択される、請求項１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項１５】
前記蛍光性部分がフルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、およびフルオレセイン誘導体からなる群より選択される、請求項１４に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項１６】
前記検出可能部分が常磁性部分である、請求項１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項１７】
前記常磁性部分が極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子またはその凝集体である、請求項１６に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項１８】
前記常磁性部分が極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体である、請求項１７に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項１９】
前記極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体の直径が約１０ｎｍと約１５０ｎｍの間である、請求項１８に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項２０】
前記極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体の直径が約６５ｎｍと約８５ｎｍの間である、請求項１８に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項２１】
前記極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体の直径が約７５ｎｍである、請求項１８に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項２２】
前記極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体の直径が約１５０ｎｍである、請求項１８に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項２３】
前記ナノ粒子凝集体がデキストランで被覆される、両親媒性重合体で被覆される、またはリン脂質でカプセル化される、請求項１８に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項２４】
前記リン脂質がＰＥＧ化される、請求項２３に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項２５】
前記ＰＥＧ化リン脂質がアミン官能化またはカルボン酸官能化される、請求項２４に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項２６】
前記ＰＥＧ化アミン官能化リン脂質が１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ＰＥＧ２０００である、請求項２５に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項２７】
前記抗体またはその抗原結合断片がリシンアミノ酸を介して前記検出可能部分に複合体化される、請求項１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項２８】
前記抗体またはその抗原結合断片がリシン側鎖を介して前記検出可能部分に複合体化される、請求項２７に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項２９】
前記抗体またはその抗原結合断片がシステインアミノ酸、グルタミン酸アミノ酸、アスパラギン酸アミノ酸、またはアルギニンアミノ酸を介して前記検出可能部分に複合体化される、請求項１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項３０】
前記抗体またはその抗原結合断片がシステイン側鎖、グルタミン酸側鎖、アスパラギン酸側鎖、またはアルギニン側鎖を介して前記検出可能部分に複合体化される、請求項２９に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項３１】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ａ）４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α（２−ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド、１，４−ビス−マレイミドブタン、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、４−［ｐ−アジドサリチルアミド］ブチルアミン、またはｐ−アジドフェニルグリオキサール一水和物を介して、またはｂ）チオール化抗体またはその抗原結合断片と前記検出可能部分のマレオイル活性化アミン、ＥＤＣ／ＮＨＳ活性化抗体またはその抗原結合断片と前記検出可能部分のアミン、または前記検出可能部分のＥＤＣ／ＮＨＳ活性化カルボン酸と前記抗体またはその抗原結合断片のアミンを含む反応を介して前記検出可能部分に複合体化される、請求項１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【請求項３２】
（ａ）有効量の請求項１から３１のいずれか一項に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体を個体に投与すること、（ｂ）前記個体の内部で前記抗Ｃ３ｄ抗体複合体をＣ３タンパク質断片に結合させることによって抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を形成させること、および（ｃ）前記個体の中で前記抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を検出することを含む、前記個体における補体介在性炎症の検出方法。
【請求項３３】
前記Ｃ３タンパク質断片がＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記検出が蛍光分光法を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記検出が磁気共鳴画像法、コンピューター断層撮影、陽電子放射断層撮影、単一光子放射コンピューター断層撮影、超音波検査、または放射線撮影を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記補体介在性炎症が眼炎症である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記眼補体介在性炎症が加齢黄斑変性と関係する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記加齢黄斑変性が滲出型加齢黄斑変性である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記加齢黄斑変性が非滲出型加齢黄斑変性である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記補体介在性炎症が、癌、虚血再灌流傷害、炎症性疾患、移植拒絶（細胞性または抗体介在性）、妊娠関連疾患、有害薬物反応、加齢黄斑変性、糸球体腎炎、または自己免疫もしくは免疫複合体疾患の結果生じる組織損傷と関係する、請求項３２に記載の方法。
【請求項４１】
虚血再灌流傷害の結果生じる前記組織損傷が、心筋梗塞、動脈瘤、卒中、出血性ショック、挫傷、多臓器不全、乏血性ショック、腸管虚血、脊髄損傷および外傷性脳損傷からなる群より選択される障害と関係する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記炎症性疾患が火傷、内毒血症、敗血症性ショック、成人呼吸困難症、心肺バイパス、血液透析、アナフィラキシーショック、喘息、血管性浮腫、クローン病、鎌状赤血球貧血、溶連菌感染後糸球体腎炎、膜性腎症、および膵炎からなる群より選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記移植拒絶が超急性異種移植片拒絶である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記妊娠関連疾患がＨＥＬＬＰ（溶血性貧血、肝逸脱酵素上昇、および血小板低下）、習慣性流産、および子癇前症.からなる群より選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
前記有害薬物反応が薬物アレルギーおよびＩＬ−２誘導性血管漏出症候群からなる群より選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４６】
前記自己免疫もしくは免疫複合体疾患が重症筋無力症、アルツハイマー病、多発性硬化症、視神経脊髄炎、リウマチ性関節炎、骨関節炎、全身性紅斑性狼瘡、狼瘡性腎炎、ＩｇＧ４関連疾患、インスリン依存型真性糖尿病、急性散在性脳脊髄炎、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群、血栓性血小板減少性紫斑病、自己免疫性肝炎、クローン病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、天疱瘡、シェーグレン症候群、高安動脈炎、自己免疫性糸球体腎炎、ＩＩ型膜性増殖性糸球体腎炎、膜性疾患、発作性夜間ヘモグロビン尿症、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑症、ぶどう膜炎、網膜変性疾患、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症、ＡＮＣＡ関連血管炎、溶血性尿毒症症候群、志賀毒素関連溶血性尿毒症症候群、および非典型溶血性尿毒症症候群からなる群より選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４７】
前記自己免疫性糸球体腎炎が免疫グロブリンＡ腎症またはＩ型膜性増殖性糸球体腎炎からなる群より選択される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記個体が哺乳類動物である、請求項３２に記載の方法。
【請求項４９】
前記哺乳類動物がヒトである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記投与が注射による、請求項３２に記載の方法。
【請求項５１】
前記注射が非経口性、静脈内、皮下、眼内、関節内、または筋肉内の注射である、請求項５０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年８月１７日に提出された米国仮特許出願第６１／６８４，６９１号明細書の利益を主張し、これは、その全体が、事実上、参照によって本明細書において組み込まれる。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルとして提出された「配列表」、表、またはコンピュータープログラムリスティング添付物に対する参照
２０１３年８月１５日に作成され、ファイル８５２５６の８８４０７２＿ＳＴ２５．ＴＸＴ中に書かれた配列表、９３，６７８バイト、マシンフォーマットＩＢＭ−ＰＣ、ＭＳ−Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）オペレーティングシステムは、参照によってこれによって組み込まれる。
【０００３】
補体は、免疫系の主なエフェクターメカニズムを構成する一連の血液タンパク質についての総称である。補体系は、多くの自己免疫疾患、炎症疾患、および虚血疾患の病態において重要な役割を果たす。不適切な補体活性化および宿主細胞上へのその沈着は、細胞および標的組織の補体媒介性の溶解および／または傷害ならびに炎症の強力な媒介物質の生成による組織破壊に至り得る。補体系の活性に対する鍵は、血清タンパク質、補体Ｃ３に由来する、プロセシングされたタンパク質断片の、補体活性化の組織部位への共有結合である。この異常な特性は、Ｃ３におけるチオエステル結合の存在によるものであり、これは、Ｃ３活性化の間に切断された場合に、Ｃ３を、Ｃ３ｂと呼ばれる形態に変換し、次いで、これは、エステル結合またはアミド結合を利用して、細胞および組織に付着した分子に連結することができる。一度、Ｃ３ｂが共有結合したら、それは、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ形態に急速にプロセシングされ、これらのそれぞれは、標的組織部位に共有結合し続ける。このプロセスは、炎症傷害または他の補体関連のプロセスが進行中である組織として、組織の「マーキング」をもたらす。
【０００４】
補体は、３つの経路：古典的経路、レクチン経路、および副経路のいずれかによって活性化することができる。古典的経路は、抗原−抗体複合体、ペントラキシン、またはアポトーシス細胞への補体系タンパク質Ｃ１ｑの結合を通して活性化される。ペントラキシンは、Ｃ−反応性タンパク質および血清アミロイドＰ構成成分を含む。レクチン経路は、マンノース結合レクチンへの微生物の炭水化物の結合によってまたは炭水化物もしくはアセチル化分子へのフィコリンの結合によって開始される。
【０００５】
副経路は、中性のまたは正の電荷特質を有し、かつ補体阻害剤を発現しないまたは含有しない病原体の表面上で活性化される。これは、自発的に起こる、Ｃ３の「アイドリング」と称されるプロセスから結果として生じて、立体構造的に改変されたＣ３の、Ｂ因子との相互作用を伴い、また、病原体または他の表面上での活性Ｃ３ｂの固定をもたらす。副経路はまた、ある抗体が、ＩｇＡ含有免疫複合体によって、内因性の調節メカニズムをブロックする場合にもまたは補体調節タンパク質の発現が減少する場合にも、開始され得る。そのうえ、副経路は、古典的もしくはレクチン経路を介してまたは実際にアイドリングプロセス自体を通して標的上に沈着したＣ３ｂが、Ｂ因子に結合する場合に、「増幅ループ」と呼ばれるメカニズムによって活性化される。Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ  （１９８８）  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ５７：３２１を参照されたい。例えば、Ｈｏｌｅｒｓおよび共同研究者は、炎症細胞が初期補体活性化後に動員される場合に、副経路が局所的な傷害の部位で増幅されることを示した。Ｇｉｒａｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００３，  １１２：１６４４。次いで、副経路を通しての劇的な補体増幅は、補体を固定する損傷した細胞のさらなる生成、副経路構成成分の局所的な合成を伴うメカニズムを通して、またはより可能性として高いのは、前もって形成されたＣ３およびプロペルジンを運ぶ浸潤炎症細胞が、その部位で特異的に活性化を開始するおよび／または大幅に増加させるので、起こる。
【０００６】
循環Ｂ因子が活性化Ｃ３ｂに結合する場合に、副経路増幅が開始される。次いで、この複合体は、循環Ｄ因子によって切断されて、酵素的に活性なＣ３コンバターゼ複合体、Ｃ３ｂＢｂをもたらす。Ｃ３ｂＢｂは、さらなるＣ３を切断して、Ｃ３ｂを生成し、これは炎症を駆動し、また、活性化プロセスをさらに増幅して、ポジティブフィードバックループを生成する。Ｈ因子は、アイドリングメカニズムにおける立体構造的に改変されたＣ３へのおよび増幅ループにおけるＣ３ｂへの結合についてＢ因子と競合する、副補体経路活性化および開始メカニズムの重要な調節物質（阻害剤）である。Ｈ因子へのＣ３ｂの結合はまた、Ｉ因子によるＣ３ｂの、不活性形態ｉＣ３ｂ（Ｃ３ｂｉとも呼ばれる）への分解に至り、従って、補体活性化にさらに抑制を加える。Ｈ因子は、およそ５００μｇ／ｍｌの血漿濃度で循環している液相中の補体を調節するが、細胞へのその結合は、負に荷電した表面および固定されたＣ３ｂ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、またはＣ３ｄの存在によって増強される、調節性の現象である。Ｊｏｚｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．  （２００４）  １９：２５１−２５８。
【０００７】
補体活性化、Ｃ３断片固定、および補体媒介性の炎症は、多数の疾患の病因および進行に関与する。補体活性化のダウンレギュレーションは、例えば、全身性エリテマトーデスおよび糸球体腎炎（Ｙ．  Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  （１９９６）  ９３：８５６３−８５６８）、関節リウマチ（Ｙ．  Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  （１９９５）  ９２：８９５５−８９５９）、心肺バイパスおよび血液透析（Ｃ．  Ｓ．  Ｒｉｎｄｅｒ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  （１９９５）  ９６：１５６４−１５７２）、器官移植中の超急性拒絶（Ｔ．  Ｊ．  Ｋｒｏｓｈｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  （１９９５）  ６０：１１９４−１２０２）、心筋梗塞（Ｊ．  Ｗ．  Ｈｏｍｅｉｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  （１９９３）  １５０：１０５５−１０６４；Ｈ．  Ｆ．  Ｗｅｉｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （１９９０）  ２４９：１４６−１５１）、虚血／再灌流傷害（Ｅ．  Ａ．  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  （１９９５）  ２６８：Ｈ４４８−Ｈ４５７）、例えば腎臓における、抗体媒介性の同種移植拒絶（Ｊ．  Ｂ．  Ｃｏｌｖｉｎ，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  （２００７）  １８（４）：１０４６−５６）、ならびに成人型呼吸窮迫症候群（Ｒ．  Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  （１９９２）  １４９：１７４４−１７５０）を含む、動物モデルにおけるおよびエクスビボ研究におけるいくつかの疾患を処置するのに効果的であることが示された。
【０００８】
さらに、他の炎症状態および自己免疫／免疫複合体疾患もまた、補体活性化に密接に関連し（Ｂ．  Ｐ．  Ｍｏｒｇａｎ．  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  （１９９４）  ２４：２１９−２２８）、熱傷害、重症の喘息、アナフィラキシーショック、腸炎症、じんま疹、血管浮腫、脈管炎、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋炎、膜性増殖性糸球体腎炎、非定型溶血性尿毒症症候群、シェーグレン症候群、腎臓および肺虚血／再灌流、ならびに他の器官に特異的な炎症障害を含むが、これらに限定されない。補体活性化が、局所的な組織Ｃ３活性化および炎症傷害が起こるすべての疾患の病気の発生および傷害にとって本質的かどうかは現在不確かであるが、Ｃ３断片固定は、関連する事象としてたいてい普遍的に見つけられる。
【０００９】
様々な障害が、炎症に関連しているが、補体媒介性の炎症についての非常に明確な診断は、典型的に、生検によって回収された組織試料に対して実行される免疫染色または他のインビトロ分析を介しての確認を必要とする。生検が多くの点でルーチンであるが、それらは、それらの限界を有し、リスクがないわけではない。一般に使用される針またはパンチ生検は、標的器官の小さな部分のみをサンプリングするので、試料ミスのリスクがあり、不正確な診断に至る。さらに、生検は、一般に安全な手順であるが、内出血などのような主な合併症は、かなりの数の症例において起こり得る。
【００１０】
いくつかの症例において、例えば全身性エリテマトーデスまたはループス腎炎を有する患者における、疾患を診断するまたは疾患進行をモニターする際の困難さのために、繰り返しの腎生検が、そのため、療法に対する応答を評価するためにまたは疾患再発を診断するために頻繁に必要である。例えばＳ．  Ｂａｊａｊ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ｊ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ２７：２８２２−２８２６を参照されたい。腎生検は、一般に安全な手順であるが、合併症が生検の６％以上において起こり得、腎臓内の出血および血尿は一般的である。繰り返しの生検を必要とする患者は、同時に、合併症のリスクがより高い。例えばＷ．  Ｌ．  Ｗｈｉｔｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  １５：１４２−１４７；Ｄ．  Ｃ．  Ｍｅｎｄｅｌｓｓｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ．  ２６：５８０−５８５を参照されたい。従って、補体媒介性の炎症の存在、程度、および／または範囲を検出するまたは正確に評価する非侵入性の方法は、疾患を診断し、処置戦略を処方し、かつループス腎炎を含む多くの炎症疾患に対するそれらの効能をモニターする際に、かなり価値があると思われる。
【００１１】
Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄ、およびＣ３ｄｇを含む、ＣＲ２が結合することができるＣ３またはＣ３の断片を表すまたは発現する組織に対する、補体修飾物質を標的にするための補体受容体２（ＣＲ２）またはその機能的断片の使用は、米国特許出願公開第２００８／０２６７９８０号明細書および米国特許出願公開第２００８／０２２１０１１号明細書において記載され、これらの開示は、参照によって本明細書においてこれによって組み込まれる。そのようなＣＲ２分子およびその機能的断片は、最初の２つのＮ−末端の短いコンセンサスリピートドメイン（ＳＣＲ）が、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ内に含有される曝露されたＣ３ｄドメインに対する活性な結合部位を含むので、ターゲティングのために使用することができる。
【００１２】
本発明は、当技術分野におけるこれらのおよび他の問題に対する解決策を提供する。本明細書において引用されるすべての刊行物、特許、特許出願、および公開特許出願の開示は、それらの全体が参照によって本明細書においてこれによって組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００８／０２６７９８０号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２００８／０２２１０１１号明細書
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ  （１９８８）  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ５７：３２１
【非特許文献２】Ｇｉｒａｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００３，  １１２：１６４４
【非特許文献３】Ｊｏｚｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．  （２００４）  １９：２５１−２５８
【非特許文献４】Ｙ．  Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  （１９９６）  ９３：８５６３−８５６８
【非特許文献５】Ｙ．  Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  （１９９５）  ９２：８９５５−８９５９
【非特許文献６】Ｃ．  Ｓ．  Ｒｉｎｄｅｒ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  （１９９５）  ９６：１５６４−１５７２
【非特許文献７】Ｔ．  Ｊ．  Ｋｒｏｓｈｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  （１９９５）  ６０：１１９４−１２０２
【非特許文献８】Ｊ．  Ｗ．  Ｈｏｍｅｉｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  （１９９３）  １５０：１０５５−１０６４
【非特許文献９】Ｈ．  Ｆ．  Ｗｅｉｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （１９９０）  ２４９：１４６−１５１
【非特許文献１０】Ｅ．  Ａ．  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  （１９９５）  ２６８：Ｈ４４８−Ｈ４５７
【非特許文献１１】Ｊ．  Ｂ．  Ｃｏｌｖｉｎ，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  （２００７）  １８（４）：１０４６−５６）
【非特許文献１２】Ｒ．  Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  （１９９２）  １４９：１７４４−１７５０
【非特許文献１３】Ｂ．  Ｐ．  Ｍｏｒｇａｎ．  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  （１９９４）  ２４：２１９−２２８
【非特許文献１４】Ｓ．  Ｂａｊａｊ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ｊ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ２７：２８２２−２８２６
【非特許文献１５】Ｗ．  Ｌ．  Ｗｈｉｔｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  １５：１４２−１４７
【非特許文献１６】Ｄ．  Ｃ．  Ｍｅｎｄｅｌｓｓｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ．  ２６：５８０−５８５
【発明の概要】
【００１５】
第１の態様において、抗体またはその抗原結合断片および検出可能な成分を含む
抗体複合体が提供される。
【００１６】
第２の態様において、個人における補体媒介性の炎症を検出するための方法であって、（ａ）本明細書において記載される抗Ｃ３ｄ抗体複合体の有効量を個人に投与するステップ、（ｂ）抗Ｃ３ｄ抗体複合体が個人内のＣ３タンパク質断片に結合することを可能にして、それによって、抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を形成するステップ、および（ｃ）個人における抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を検出するステップを含む方法が提供される。
【００１７】
第３の態様において、個人における補体活性化を検出するための方法であって、（ａ）本明細書において記載される抗Ｃ３ｄ抗体複合体の有効量を個人に投与するステップ、（ｂ）抗Ｃ３ｄ抗体複合体が個人内のＣ３タンパク質断片に結合することを可能にして、それによって、抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を形成するステップ、および（ｃ）個人における抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を検出するステップを含む方法が提供される。
【００１８】
第４の態様において、補体活性化を検出するための方法であって、（ａ）生物学的試料（例えば生検材料、組織、血液、血液画分、血清、または細胞、すべて任意選択で対象または患者由来）に本明細書において記載される抗Ｃ３ｄ抗体複合体の有効量を投与するステップ、（ｂ）抗Ｃ３ｄ抗体複合体が生物学的試料内のＣ３タンパク質断片に結合することを可能にして、それによって、抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を形成するステップ、および（ｃ）生物学的試料における抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を検出するステップを含む方法が提供される。いくつかの実施形態において、Ｃ３タンパク質断片は、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂである。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】酸化鉄ナノ粒子の表面に複合体化された３ｄ２９抗体のＨ因子ノックアウトマウス（それらの腎臓の糸球体中に豊富な標的Ｃ３断片沈着物（すなわちｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）を有する）への投与後の筋肉および腎臓におけるＭＲＩによって測定されるＴ２緩和における変化を示す図である。
【図２】図２は、Ｃ３ｄコートザイモサン粒子への、対照のモノクローナル抗体ＨＢ５ではなく、ＦＩＴＣラベルグループ１モノクローナル抗体３ｄ２９および３ｄ８のフローサイトメトリーによる特異的な結合を示す図である。これらのモノクローナル抗体はまた、ビオチン化および他の技術の後のＣ３ｄにも結合を保持した。
【図３】レーザー誘発性のＣＮＶ傷害の翌日の注射の４８時間後の補体Ｃ３固定の部位へのモノクローナル抗体３ｄ２９の特異的で永続性のインビボ結合を示す図である。インビボ画像化は、Ｍｉｃｒｏｎ  ＩＩＩ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して実行した。
【図４】レーザー誘発性のＣＮＶ傷害の誘発の翌日の注射の４８時間後の補体Ｃ３固定の部位へのモノクローナル抗体３ｄ２９の特異的で永続性のインビトロ結合を示す図である。インビトロ画像化は、フラットマウントおよびＢｘＷ画像捕捉システムを使用して実行した。
【図５−１】超常磁性酸化鉄ナノ粒子（ＳＰＩＯ）の表面に対する抗Ｃ３ｄ抗体のコンジュゲーションを示す図である。ＳＰＩＯの表面に抗体を複合体化するための３つの異なる方法を３つの異なるタンパク質：Ｃ３ｄ２９抗Ｃ３ｄ、ＣＲ２−Ｆｃ、および１７１（対照抗体として）を使用して試験した。（図５Ａ）ＦＡＣＳ分析を、反応の効能を決定するために使用した。非複合体ＳＰＩＯは、塗りつぶされた灰色の曲線によって示され、複合体ＳＰＩＯは、黒線の曲線によって示される。
【図５−２】超常磁性酸化鉄ナノ粒子（ＳＰＩＯ）の表面に対する抗Ｃ３ｄ抗体のコンジュゲーションを示す図である。ＳＰＩＯの表面に抗体を複合体化するための３つの異なる方法を３つの異なるタンパク質：Ｃ３ｄ２９抗Ｃ３ｄ、ＣＲ２−Ｆｃ、および１７１（対照抗体として）を使用して試験した。（図５Ｂ）コンジュゲーションのそれぞれの方法を使用し、それぞれのタンパク質について得られた抗体陽性ＳＰＩＯの割合（％）を示す。データは、タンパク質種当たりの方法当たりの３つの独立したコンジュゲーション由来の平均±標準誤差である。
【図６−１】動的光散乱法（ＤＬＳ）によって決定された複合体ＳＰＩＯサイズの分析を示す図である。非複合体ＳＰＩＯならびにＣＲ２−Ｆｃ、Ｃ３ｄ２９、および１７１複合体ＳＰＩＯについての、マレオイル、ＥＤＣ／ＮＨＳ／ＮＨ２、およびＥＤＣ／ＮＨＳコンジュゲーション方法についての数値加重サイズ分布の有力なピークの代表的なヒストグラムを示す。サイズ分布の有力なピークについての平均径（ｎｍ）は、試料ごとの上右隅に示す。タンパク質とのＳＰＩＯのコンジュゲーション後のサイズの増加が、すべての複合体試料について観察された。
【図６−２】動的光散乱法（ＤＬＳ）によって決定された複合体ＳＰＩＯサイズの分析を示す図である。非複合体ＳＰＩＯならびにＣＲ２−Ｆｃ、Ｃ３ｄ２９、および１７１複合体ＳＰＩＯについての、マレオイル、ＥＤＣ／ＮＨＳ／ＮＨ２、およびＥＤＣ／ＮＨＳコンジュゲーション方法についての数値加重サイズ分布の有力なピークの代表的なヒストグラムを示す。サイズ分布の有力なピークについての平均径（ｎｍ）は、試料ごとの上右隅に示す。タンパク質とのＳＰＩＯのコンジュゲーション後のサイズの増加が、すべての複合体試料について観察された。
【図６−３】動的光散乱法（ＤＬＳ）によって決定された複合体ＳＰＩＯサイズの分析を示す図である。非複合体ＳＰＩＯならびにＣＲ２−Ｆｃ、Ｃ３ｄ２９、および１７１複合体ＳＰＩＯについての、マレオイル、ＥＤＣ／ＮＨＳ／ＮＨ２、およびＥＤＣ／ＮＨＳコンジュゲーション方法についての数値加重サイズ分布の有力なピークの代表的なヒストグラムを示す。サイズ分布の有力なピークについての平均径（ｎｍ）は、試料ごとの上右隅に示す。タンパク質とのＳＰＩＯのコンジュゲーション後のサイズの増加が、すべての複合体試料について観察された。
【図７−１】複合体ＳＰＩＯの流体力学的サイズおよび表面特質を示す図である。（図７Ａ）非複合体および複合体ＳＰＩＯのゼータ電位。複合体タンパク質は、わずかに負から正にＮＨ２−ＳＰＩＯの負のゼータ電位を変化させ、ＣＯＯＨ−ＳＰＩＯの負のゼータ電位を低下させる。データは、タンパク質種当たりの方法当たりの３つの独立したコンジュゲーション由来の平均±標準誤差である。
【図７−２】複合体ＳＰＩＯの流体力学的サイズおよび表面特質を示す図である。（図７Ｂ）非複合体および複合体ＳＰＩＯの平均径および構成比。ＳＰＩＯの複合体種はすべて、非複合体ＳＰＩＯからの流体力学的サイズにおける増加を示す。ＥＤＣ／ＮＨＳ方法のＣ３ｄ２９−ＳＰＩＯは、凝集の特性を示す（流体力学的サイズにおけるより大きな増加および負のゼータ電位のより大きな低下）。データは、タンパク質種当たりの方法当たりの３つの独立したコンジュゲーション由来の平均±標準偏差である。
【図７−３】複合体ＳＰＩＯの流体力学的サイズおよび表面特質を示す図である。（図７Ｃ）３つの異なるタンパク質とのコンジュゲーションの３つの異なる方法についての複合体ＳＰＩＯのｎｍｏｌｅ当たりのタンパク質の推定ｎｍｏｌｅ。データは、タンパク質当たりのコンジュゲーション方法当たりの平均±標準誤差である。
【図８】ＥＬＩＳＡにおける標的Ｃ３ｄ抗原との複合体ＳＰＩＯの結合を示す図である。マレオイル（図８Ａ）、ＥＤＣ／ＮＨＳ／ＮＨ２（図８Ｂ）、およびＥＤＣ／ＮＨＳ（図８Ｃ）方法によるＳＰＩＯ複合体についてのＥＬＩＳＡによる標的Ｃ３ｄ抗原へのＳＰＩＯ結合の検出。特異的でＣ３ｄ依存性の結合は、３つすべての方法により、ＣＲ２−Ｆｃ−ＳＰＩＯおよびＣ３ｄ２９−ＳＰＩＯ複合体について検出された。データは、２つの独立した実験から二通りで試験した試料についての平均±標準偏差である。ＣＲ２−Ｆｃ−ＳＰＩＯおよびＣ３ｄ２９−ＳＰＩＯの間の吸光度における差異は、２つの異なる二次抗体の使用によるものであり得る。
【図９−１】複合体ＳＰＩＯによる標的特異的なＭＲＩシグナル低下を示す図である。（図９Ａ）ＣＲ２−Ｆｃ−ＳＰＩＯまたはＣ３ｄ２９−ＳＰＩＯと共にインキュベートしたオプソニン化ＣＨＯ細胞ペレットのＴ２緩和時間の低下が、対照１７１−ＳＰＩＯと共にインキュベートされたものと比較して、見られた。ＳＰＩＯコンジュゲーションの異なる３つの方法について試験した。データは、タンパク質当たりの方法当たり３つの独立したコンジュゲーションから得られた複合体ＳＰＩＯ由来の平均±標準誤差である。
【図９−２】複合体ＳＰＩＯによる標的特異的なＭＲＩシグナル低下を示す図である。（図９Ｂ）細胞ペレットのＴ２強調ＭＲＩスキャン由来の画像。画像は、コンジュゲーションの３つの方法すべてについてＴＥ＝４８ｍｓで得た。ＳＰＩＯに複合体化されたタンパク質のターゲティングを左側に示す。ペレットの減光は、オプソニン化細胞へのＳＰＩＯの結合を反映する。１７１−ＳＰＩＯ由来のデータを対照として使用した場合、Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定が後続する一元配置ＡＮＯＶＡによる＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、および＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図１０Ａ】補体活性化の間のｉＣ３ｂおよびＣ３ｄへのＣ３の代謝を示す図である。図１０Ａ．Ｃ３コンバターゼ（活性化酵素）の活性を通しての、可溶性Ｃ３の、最初にＣ３ｂおよびＣ３ａ形態への切断、その後に続く、補因子およびプロテアーゼの活性を通しての、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ（後者は示さず）への一連のプロセシングについての概要の説明。ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄタンパク質は、永続性の組織および細胞結合特性を示す。
【図１０Ｂ】補体活性化の間のｉＣ３ｂおよびＣ３ｄへのＣ３の代謝を示す図である。図１０Ｂ．本明細書において記載される抗Ｃ３ｄモノクローナル抗体が特異的に結合する分子実体（ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ（示さず）、およびＣ３ｄ）の例説。
【図１１−１】Ｃ３活性化断片を認識するモノクローナル抗体の生成を示す図である。抗ヒトＣ３ｄハイブリドーマを生成した。（図１１Ａ）ハイブリドーマは、ＥＬＩＳＡによって組換えヒトＣ３ｄに対してスクリーニングし、クローンのうちの９つが、タンパク質に結合した（クローン７Ｃ１０は陽性対照として使用し、残りのクローンは新しく同定された）。（図１１Ｂ）ウエスタンブロット分析によるインタクトなＣ３および組換えＣ３ｄに対するクローンの反応性について試験した。３つのパターンの反応性が見られた：グループ１のクローンは、Ｃ３ｄに強く結合し、グループ２のクローンは、インタクトなＣ３のα鎖に結合し、グループ３のクローンは、いずれの成分にも十分に結合しなかった。＊は、結果を示すクローンを表す。
【図１１−２】Ｃ３活性化断片を認識するモノクローナル抗体の生成を示す図である。抗ヒトＣ３ｄハイブリドーマを生成した。（図１１Ｃ）クローン３ｄ１１は、ウエスタンブロット分析によってＣ３断片をすべて認識した。精製タンパク質およびマウス血漿由来のα、α’、α１、α２、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ断片の様子を示す。（図１１Ｄ）血漿中のＣ３断片の免疫沈殿は、グループ１のクローンがｉＣ３ｂ形態（α１鎖）およびＣ３ｄｇを認識するが、Ｃ３およびＣ３ｂ（αおよびα’鎖）に結合しないことを実証した。クローン３ｄ１６は、Ｃ３ｄｇ断片およびＣ３ｄ断片へのいくらかの結合を実証した。
【図１２−１】図１２Ａ〜図１２Ｃは、組換えヒトＣ３ｄに対するクローン３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、および３ｄ２９の表面プラズモン共鳴法が、高親和性結合を実証することを示す図である。表面プラズモン共鳴法は、ＣＭ５チップに固定された組換えヒトＣ３ｄを使用して実行する。抗体は高親和性結合を示した、また、ＫＤをそれぞれの結果について示す。
【図１２−２】図１２Ａ〜図１２Ｃは、組換えヒトＣ３ｄに対するクローン３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、および３ｄ２９の表面プラズモン共鳴法が、高親和性結合を実証することを示す図である。表面プラズモン共鳴法は、ＣＭ５チップに固定された組換えヒトＣ３ｄを使用して実行する。抗体は高親和性結合を示した、また、ＫＤをそれぞれの結果について示す。
【図１３−１】クローン３ｄ３、３ｄ１５、および３ｄ１６が、ヒツジ赤血球上でＣ３コンバターゼを安定化することを示す図である。ヒツジ赤血球を、抗体により感作し、ヒトＣ３ｂによりオプソニン化した。それらは、Ｂ因子、Ｄ因子、およびプロペルジンにより処理し、細胞表面上にＡＰ  Ｃ３コンバターゼ（Ｃ３ｂＢｂＰ）を生成した。１μｇの抗体を１５０μｌ反応ミックスに追加し、細胞を直ちに使用した（図１３Ａおよび図１３Ｃ）または２時間、インキュベートした（図１３Ｂおよび図１３Ｄ）。（図１３Ａ）モルモット血清を膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の供給源として赤血球に追加し、ＭＡＣ複合体の平均数を計算した場合、クローン３ｄ３、３ｄ１５、および３ｄ１６により処理した細胞は、対照処理細胞よりも多くのＭＡＣ形成を実証した。（図１３Ｂ）細胞をモルモット血清の追加の２時間前にインキュベートした場合、同じ３つのクローンはより大きなＺ値を示し、これらのクローンが細胞表面上でＣ３コンバターゼを安定化することを示した。（図１３Ｃおよび図１３Ｄ）実験を、Ｂ因子の存在下または非存在下においてクローン３ｄ３、３ｄ１５、および３ｄ１６について繰り返した。Ｂ因子の非存在下において、ＭＡＣ形成はなくなり、その反応が副経路Ｃ３コンバターゼの形成を必要としたことを実証した。４００ｎｇのＨ因子を追加したことを除いて、同じ反応を繰り返した。反応を３０分間インキュベートし、Ｚ値を測定した。試験した抗体のどれも、Ｈ因子がＣ３コンバターゼを解離し、ＭＡＣ形成を妨げる能力に干渉しなかった。抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９ａ、および３ｄ１６を、副経路溶解アッセイにおいてヒツジ赤血球に追加した。様々な濃度の抗Ｃ３ｄ抗体を追加し、血清によって溶解された細胞のパーセントをそれぞれの反応について計算した。クローン３ｄ１６の追加は、一定濃度の血清を使用して溶解された細胞の割合の増加を引き起こした。
【図１３−２】クローン３ｄ３、３ｄ１５、および３ｄ１６が、ヒツジ赤血球上でＣ３コンバターゼを安定化することを示す図である。ヒツジ赤血球を、抗体により感作し、ヒトＣ３ｂによりオプソニン化した。それらは、Ｂ因子、Ｄ因子、およびプロペルジンにより処理し、細胞表面上にＡＰ  Ｃ３コンバターゼ（Ｃ３ｂＢｂＰ）を生成した。１μｇの抗体を１５０μｌ反応ミックスに追加し、細胞を直ちに使用した（図１３Ａおよび図１３Ｃ）または２時間、インキュベートした（図１３Ｂおよび図１３Ｄ）。（図１３Ａ）モルモット血清を膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の供給源として赤血球に追加し、ＭＡＣ複合体の平均数を計算した場合、クローン３ｄ３、３ｄ１５、および３ｄ１６により処理した細胞は、対照処理細胞よりも多くのＭＡＣ形成を実証した。（図１３Ｂ）細胞をモルモット血清の追加の２時間前にインキュベートした場合、同じ３つのクローンはより大きなＺ値を示し、これらのクローンが細胞表面上でＣ３コンバターゼを安定化することを示した。（図１３Ｃおよび図１３Ｄ）実験を、Ｂ因子の存在下または非存在下においてクローン３ｄ３、３ｄ１５、および３ｄ１６について繰り返した。Ｂ因子の非存在下において、ＭＡＣ形成はなくなり、その反応が副経路Ｃ３コンバターゼの形成を必要としたことを実証した。４００ｎｇのＨ因子を追加したことを除いて、同じ反応を繰り返した。反応を３０分間インキュベートし、Ｚ値を測定した。試験した抗体のどれも、Ｈ因子がＣ３コンバターゼを解離し、ＭＡＣ形成を妨げる能力に干渉しなかった。抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９ａ、および３ｄ１６を、副経路溶解アッセイにおいてヒツジ赤血球に追加した。様々な濃度の抗Ｃ３ｄ抗体を追加し、血清によって溶解された細胞のパーセントをそれぞれの反応について計算した。クローン３ｄ１６の追加は、一定濃度の血清を使用して溶解された細胞の割合の増加を引き起こした。
【図１３−３】クローン３ｄ３、３ｄ１５、および３ｄ１６が、ヒツジ赤血球上でＣ３コンバターゼを安定化することを示す図である。ヒツジ赤血球を、抗体により感作し、ヒトＣ３ｂによりオプソニン化した。それらは、Ｂ因子、Ｄ因子、およびプロペルジンにより処理し、細胞表面上にＡＰ  Ｃ３コンバターゼ（Ｃ３ｂＢｂＰ）を生成した。１μｇの抗体を１５０μｌ反応ミックスに追加し、細胞を直ちに使用した（図１３Ａおよび図１３Ｃ）または２時間、インキュベートした（図１３Ｂおよび図１３Ｄ）。（図１３Ａ）モルモット血清を膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の供給源として赤血球に追加し、ＭＡＣ複合体の平均数を計算した場合、クローン３ｄ３、３ｄ１５、および３ｄ１６により処理した細胞は、対照処理細胞よりも多くのＭＡＣ形成を実証した。（図１３Ｂ）細胞をモルモット血清の追加の２時間前にインキュベートした場合、同じ３つのクローンはより大きなＺ値を示し、これらのクローンが細胞表面上でＣ３コンバターゼを安定化することを示した。（図１３Ｃおよび図１３Ｄ）実験を、Ｂ因子の存在下または非存在下においてクローン３ｄ３、３ｄ１５、および３ｄ１６について繰り返した。Ｂ因子の非存在下において、ＭＡＣ形成はなくなり、その反応が副経路Ｃ３コンバターゼの形成を必要としたことを実証した。４００ｎｇのＨ因子を追加したことを除いて、同じ反応を繰り返した。反応を３０分間インキュベートし、Ｚ値を測定した。試験した抗体のどれも、Ｈ因子がＣ３コンバターゼを解離し、ＭＡＣ形成を妨げる能力に干渉しなかった。抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９ａ、および３ｄ１６を、副経路溶解アッセイにおいてヒツジ赤血球に追加した。様々な濃度の抗Ｃ３ｄ抗体を追加し、血清によって溶解された細胞のパーセントをそれぞれの反応について計算した。クローン３ｄ１６の追加は、一定濃度の血清を使用して溶解された細胞の割合の増加を引き起こした。
【図１４】クローン３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、および３ｄ２９が、ウサギ赤血球上で副経路活性化を増加させないことを示す図である。ウサギ赤血球をヒト血清と共にインキュベートする副経路溶解アッセイ（ＡＨ５０）に、様々な量のクローン３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、および３ｄ１６を追加し、溶解の増加は、３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、または３ｄ２９を追加した反応ではなく、３ｄ１６を含有する反応において観察された。
【図１５−１】抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂによるＣＲ２−Ｃ３ｄ相互作用のブロックを示す図である。（図１５Ａ）競合ＥＬＩＳＡは、抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂがＣＲ２の２つのＮ−末端ドメインの組換え構築物（ＭＢＰ−ＣＲ２）およびプレート結合Ｃ３ｄの結合に干渉するかどうかについて試験するために実行した。１０μｇ／ｍｌの濃度のＭＢＰ−ＣＲ２の結合の割合（ｙ軸）は、２６μｇ／ｍｌの濃度の個々の抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂ（ｘ軸）の存在下において決定した。値は、Ｃ３ｄコートウェルを抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂの非存在下においてＭＢＰ−ＣＲ２と共にインキュベートした陽性対照（示さず）に対して正規化する。ウェルをＣ３ｄの代わりにＢＳＡによりコーティングした陰性対照もまた、それぞれの試料について示す。（図１５Ｂ〜Ｄ）１．６２５〜２６μｇ／ｍｌの範囲にわたるｍＡｂ濃度でプレート結合Ｃ３ｄへのＭＢＰ−ＣＲ２結合をブロックするグループ１  ｍＡｂ（３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、および３ｄ２９）の能力。
【図１５−２】抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂによるＣＲ２−Ｃ３ｄ相互作用のブロックを示す図である。（図１５Ａ）競合ＥＬＩＳＡは、抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂがＣＲ２の２つのＮ−末端ドメインの組換え構築物（ＭＢＰ−ＣＲ２）およびプレート結合Ｃ３ｄの結合に干渉するかどうかについて試験するために実行した。１０μｇ／ｍｌの濃度のＭＢＰ−ＣＲ２の結合の割合（ｙ軸）は、２６μｇ／ｍｌの濃度の個々の抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂ（ｘ軸）の存在下において決定した。値は、Ｃ３ｄコートウェルを抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂの非存在下においてＭＢＰ−ＣＲ２と共にインキュベートした陽性対照（示さず）に対して正規化する。ウェルをＣ３ｄの代わりにＢＳＡによりコーティングした陰性対照もまた、それぞれの試料について示す。（図１５Ｂ〜Ｄ）１．６２５〜２６μｇ／ｍｌの範囲にわたるｍＡｂ濃度でプレート結合Ｃ３ｄへのＭＢＰ−ＣＲ２結合をブロックするグループ１  ｍＡｂ（３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、および３ｄ２９）の能力。
【図１６】クローン３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、および３ｄ２９が、インビトロおよびインビボにおいて生成されたマウスＣ３断片に結合することを示す図である。（図１６Ａ）正常マウス血清が、ザイモサン粒子上で活性化され、Ｃ３オプソニン化粒子への抗体の結合について試験した。オプソニン化粒子は、１μｇのそれぞれの抗体と共にインキュベートし、また、結合した抗体は、フローサイトメトリーによって検出した。ポリクローナル抗マウスＣ３は、陽性対照として使用した。クローン３ｄ８ｂ、３ｄ９、および３ｄ２９は、オプソニン化粒子に結合した。（図１６Ｂ）Ｈ因子欠損マウス由来の腎臓組織切片は、Ｃ３組織沈着物への抗体の結合を試験するために使用した。Ｈ因子マウスは、この場所にＩｇＧを伴うことなく、糸球体毛細血管に沿ってＣ３断片の豊富な沈着を有することが知られている。これは、マウスＣ３へのポリクローナル抗体を使用して免疫染色することによって確認した。次いで、腎臓組織切片を、５μｇ／ｍＬのそれぞれのクローンと共にインキュベートした。クローン３ｄ８ｂ、３ｄ９、および３ｄ２９は、Ｃ３と同様のパターンで毛細血管に結合した。残りの６つのクローンは、本質的な結合を実証しなかった（クローン３ｄ３１についての結果を示す）。もとの拡大×４００。
【図１７】クローン３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ（３ｄ９）、および３ｄ２９が、全身性のインビボ注射の後に組織結合Ｃ３断片を標的にすることを示す図である。（図１７Ａ）Ｈ因子欠損マウスに、０．５ｍｇのそれぞれの抗体を注射した。２４時間後、マウスを屠殺し、免疫蛍光顕微鏡検査法を、糸球体のＩｇＧを検出するために実行した。クローン３ｄ８ｂ、３ｄ９、および３ｄ２９を注射したマウスは、Ｃ３沈着と区別できないパターンで毛細血管壁に沿ったＩｇＧ沈着を実証した。これらのマウスは、細管に沿って検出可能なＣ３沈着物を有さず、また、ＩｇＧは、尿細管間質において見られなかった。検出抗体が内因性ＩｇＧに結合していないことを確認するために、クローン３ｄ２９をビオチン化し、実験を繰り返した。ストレプトアビジン−ＦＩＴＣを、注射した抗体を検出するために使用し、また、それは、毛細血管係蹄に沿って見ることができた。（図１７Ｂ）野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、細管の基底面に沿ったＣ３沈着物を示す。操作されていないＣ５７ＢＬ／６マウスに、ビオチン化３ｄ２９またはビオチン化対照抗体を注射した。マウスを２４時間後に屠殺し、３ｄ２９は、ストレプトアビジン−ＰＥを使用して腎臓において検出した。抗体は、Ｃ３沈着物と区別できないパターンで細管に沿って検出された。もとの拡大×４００。
【図１８】クローン３ｄ２９は、脈絡膜新生血管のモデルにおける網膜において組織結合Ｃ３断片にインビトロにおいて結合する。それぞれの眼における４つのレーザースポットを、アルゴンレーザー光凝固によって作った。（図１８Ａ）ＦＩＴＣ−３ｄ２９は、野生型マウスから作製したフラットマウントにおいてＣＮＶ機能傷害に強く結合した。（図１８Ｂ）低強度染色が、野生型マウスから作製されたフラットマウントにおいてＣＮＶ機能傷害の端まで、ＨＢ５、対照抗体について観察された。（図１８Ｃ）ＦＩＴＣ−３ｄ２９の低強度染色が、ｆＢ−／−マウスから作製されたフラットマウントにおいてＣＮＶ機能傷害において観察された。クローン３ｄ２９は、脈絡膜新生血管のモデルにおける網膜において、インビボにおいて、組織結合Ｃ３断片を標的にする。それぞれの眼における４つのレーザースポットを、アルゴンレーザー光凝固によって作った。（図１８Ｄ）ＦＩＴＣ−ＨＢ５を注射した野生型マウスにおける４つの脱色ＣＮＶ機能傷害を明らかにする明視野画像。（図１８Ｅ）蛍光がＦＩＴＣ−ＨＢ５を注射した、生きているＣＮＶマウスにおいて検出可能ではないことを実証する同じ眼底の蛍光画像。（図１８Ｆ）ＦＩＴＣ−３ｄ２９を注射した野生型マウスにおける４つの脱色ＣＮＶ機能傷害を明らかにする明視野画像。（図１８Ｇ）蛍光が、ＦＩＴＣ−３ｄ２９を注射した、生きているＣＮＶマウスにおいて明らかに検出可能であることを実証する同じ眼底の蛍光画像。
【図１９】３ｄ２９  ｓｃＦｖおよび３ｄ８ｂ  ｓｃＦｖのＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す図である。レーンＡ：タンパク質ラダー、レーンＢ：３ｄ２９ｓｃＦｖ；レーンＣ：３ｄ８ｂ  ｓｃＦｖ。
【図２０】３ｄ８ｂ  ｓｃＦｖブロック試験を示す図である。
【図２１】３ｄ２９  ｓｃＦｖブロック試験を示す図である。
【図２２】３ｄ８ｂＣｒｒｙタンパク質配列を示す図である。増幅するためのオーバーラップＰＣＲ。３ｄ８ｂＣｒｒｙおよびｐｓｅｌｋｏ１２Ｃｒｒｙ。レーン１：１ｋＢ  ＤＮＡラダー；レーン２：ブランケット．レーン３：３ｄ８ｂｓｃＦｖＣｒｒｙ；レーン４：ＰｓｅｌＫＯ１２ｓｃＦｖ  Ｃｒｒｙ、下線を引いたＳｐ  ｓｑ配列、Ｈｉｓタグ標識、下線を引いた第Ｘａ因子認識配列、および下線を引いたリンカーとの３ｄ  ｓｃＦｖ  Ｃｒｒｙ融合物のアミノ酸配列。配列記号：配列番号：３２。
【図２３】３ｄ８ｂｓｃＦｖ−Ｃｒｒｙのポジティブクローンを選択するドットブロットを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
定義
本明細書において使用されるように、用語「処置する」、「妨げる」は、発病におけるあらゆる遅延、症状の頻度または重症度における低下、症状の回復、患者の快適さまたは機能（例えば関節機能）における改善、疾患状態の重症度における減少などを指してもよい。処置の効果は、所定の処置を受けていない個人もしくは個人のプールとまたは処置の前もしくは処置の停止の後の同じ患者と比較することができる。用語「妨げる」は、一般に、患者における所定の疾患（例えば自己免疫疾患、炎症自己免疫疾患、癌疾患、感染性疾患、免疫疾患、もしくは他の疾患）または疾患症状の存在における減少を指す。上記に示されるように、予防は、完全（検出可能な症状はない）または部分的であってもよく、処置なしでおそらく起こると思われるよりも小さな症状が、観察される。
【００２１】
本明細書において使用される「治療有効用量または量」によって、それが投与される（例えば、疾患を処置するまたは妨げる）効果をもたらす用量を意味する。厳密な用量および処方は、処置の目的に依存し、知られている技術を使用して、当業者によって確認できるであろう（例えばＬｉｅｂｅｒｍａｎ，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  （ｖｏｌｓ．  １−３，  １９９２）；Ｌｌｏｙｄ，  Ｔｈｅ  Ａｒｔ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ  （１９９９）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｅｄｉｔｏｒ  （２００３），  ａｎｄ  Ｐｉｃｋａｒ，  Ｄｏｓａｇｅ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ  （１９９９）を参照されたい）。例えば、所定のパラメーターについて、治療有効量は、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％、または少なくとも１００％の増加または減少を示すであろう。治療効能もまた、「〜倍」の増加または減少として表現することができる。例えば、治療有効量は、標準の対照に対して、少なくとも１．２倍、１．５倍、２倍、５倍、またはそれ以上の効果を有することができる。治療有効用量または量は、疾患の１つ以上の症状を回復させてもよい。治療有効用量または量は、それが投与されている効果が、疾患に発症する危険性にある人を処置することである場合、疾患の発病または疾患の１つ以上の症状を妨げてもよいまたは遅延させてもよい。
【００２２】
用語「診断」は、疾患（例えば自己免疫疾患、炎症自己免疫疾患、癌疾患、感染性疾患、免疫疾患、または他の疾患）が対象において存在する相対的確率を指す。同様に、用語「予後診断」は、ある今後の転帰が疾患状態に関して対象において起こり得る相対的確率を指す。例えば、本発明との関連において、予後診断は、個人が疾患（例えば自己免疫疾患、炎症自己免疫疾患、癌疾患、感染性疾患、免疫疾患、もしくは他の疾患）を発症する見込みまたはその疾患の予想される重症度（例えば疾患の期間）を指すことができる。用語は、医学診断学の分野における当業者によって十分に理解されるように、絶対的なものであるようには意図されない。
【００２３】
本明細書において使用される「核酸」または「オリゴヌクレオチド」または「ポリヌクレオチド」または文法上の等価物は、互いに共有結合された少なくとも２つのヌクレオチドを意味する。用語「核酸」は、一本鎖、二本鎖、または多重鎖ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびそのアナログ（誘導体）を含む。オリゴヌクレオチドは、典型的に、約５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２５、３０、４０、５０ヌクレオチド長、またはそれ以上〜約１００ヌクレオチド長である。核酸およびポリヌクレオチドは、任意の長さのポリマーであり、より長い長さ、例えば２００、３００、５００、１０００、２０００、３０００、５０００、７０００、１０，０００などを含む。ある実施形態において、本明細書における核酸が、ホスホジエステル結合を含有する。他の実施形態において、代替の骨格、例えばホスホロアミデート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、またはＯ−メチルホスホロアミダイト連結（Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；ならびにペプチド核酸骨格および連結を有してもよい核酸アナログが、含まれる。他のアナログ核酸は、正の骨格；非イオン性骨格および非リボース骨格を含み、米国特許第５，２３５，０３３号明細書および米国特許第５，０３４，５０６号明細書ならびにＣｈａｐｔｅｒｓ  ６  ａｎｄ  ７，  ＡＳＣ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５８０，  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｓａｎｇｈｕｉ  ＆  Ｃｏｏｋなどにおいて記載されるものを含む。１つ以上の炭素環式糖を含有する核酸もまた、核酸のある１つの定義内に含まれる。リボースホスフェート骨格の修飾は、様々な理由で、例えば、生理学的環境におけるまたはバイオチップ上でのプローブとしてのそのような分子の安定性および半減期を増加させるために行われてもよい。天然に存在する核酸およびアナログの混合物を作製することができる；その代わりに、異なる核酸アナログの混合物ならびに天然に存在する核酸およびアナログの混合物が作製されてもよい。
【００２４】
特定の核酸配列はまた、「スプライス変異体」をも包含する。同様に、核酸によってコードされる特定のタンパク質は、その核酸のスプライス変異体によってコードされる任意のタンパク質を包含する。「スプライス変異体」は、名前が示唆するように、遺伝子の選択的スプライシングの産物である。転写の後に、初期核酸転写物は、異なる（選択的）核酸スプライス産物が異なるポリペプチドをコードするように、スプライスされてもよい。スプライス変異体の生成のためのメカニズムは様々であるが、エクソンの選択的スプライシングを含む。リードスルー転写によって同じ核酸に由来する選択的ポリペプチドもまた、この定義によって包含される。スプライス産物の組換え形態を含むスプライシング反応の任意の産物が、この定義に含まれる。カリウムチャネルスプライス変異体の例が、Ｌｅｉｃｈｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７３（５２）：３５０９５−３５１０１  （１９９８）において議論される。
【００２５】
核酸は、他の核酸配列と機能的な関係に置かれる場合、「作動可能に連結されている」。例えば、プレ配列または分泌リーダーについてのＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に参加するタンパク質前駆体として発現される場合、ポリペプチドについてのＤＮＡに作動可能に連結されている；プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響を与える場合、コード配列に作動可能に連結されている；またはリボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように位置する場合、コード配列に作動可能に連結されている。一般に、「作動可能に連結されている」は、連結しているＤＮＡ配列が互いに近く、分泌リーダーの場合には、隣接して、リーディングフェーズ中にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、隣接する必要はない。連結は、好都合な制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが、従来の手法に従って使用される。
【００２６】
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列との関連における用語「同一の」または「同一性」パーセントは、下記に記載されるデフォルトパラメーターによりＢＬＡＳＴもしくはＢＬＡＳＴ  ２．０配列比較アルゴリズムを使用してまたは手動のアライメントおよび目視検査によって測定されるように、同じであるまたは特定のパーセンテージの同じであるアミノ酸残基またはヌクレオチドを有する２つ以上の配列またはサブ配列を指す（すなわち、比較ウィンドウまたは指定された領域に対して最大の一致のために比較し、アライメントした場合の、特定の領域に対する約６０％の同一性、好ましくは６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の同一性）（例えばＮＣＢＩウェブサイトまたはその他同種のものを参照されたい）。そのような配列は、次いで、「実質的に同一である」と言われる。この定義はまた、試験配列の相補体（ｃｏｍｐｌｉｅｍｅｎｔ）を指してもよいまたはそれに適用されてもよい。定義はまた、欠失および／または追加を有する配列ならびに置換を有する配列を含む。下記に記載されるように、好ましいアルゴリズムは、ギャップおよびその他同種のものを入れることができる。好ましくは、同一性は、少なくとも約１０アミノ酸長もしくは２０ヌクレオチド長である領域に対してまたはより好ましくは、１０〜５０アミノ酸長もしくは２０〜５０ヌクレオチド長である領域に対して存在する。本明細書において使用されるように、アミノ酸配列同一性パーセント（％）は、配列をアライメントし、必要であれば、最大の配列同一性パーセントを実現するためにギャップを導入した後の、参照配列におけるアミノ酸と同一な、候補配列におけるアミノ酸の割合として定義される。配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどのような公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当技術分野における技術の範囲内にある様々な方法で実現することができる。比較されている完全長の配列に対して最大限のアライメントを実現するために必要とされる、任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適切なパラメーターは、知られている方法によって決定することができる。
【００２７】
配列比較のために、典型的に、一方の配列が、試験配列と比較する参照配列として働く。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列および参照配列をコンピューターに入力し、必要であれば、サブ配列の座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメーターを指定する。好ましくは、デフォルトプログラムパラメーターを使用することができるまたは代替のパラメーターを指定することができる。次いで、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメーターに基づいて、参照配列と比較して、試験配列について配列同一性パーセントを計算する。
【００２８】
本明細書において使用される「比較ウィンドウ」は、２つの配列を最適にアライメントした後に、配列が同じ数の隣接する位置の参照配列と比較されてもよい、１０〜６００、普通約５０〜約２００、より普通では約１００〜約１５０からなる群から選択されるその数の隣接する位置のいずれか１つのセグメントへの言及を含む。比較のための配列のアライメントの方法は、当技術分野においてよく知られている。比較のための配列の最適なアライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎ，  Ａｄｖ．  Ａｐｐｌ．  Ｍａｔｈ．  ２：４８２  （１９８１）の局所的相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ＆  Ｗｕｎｓｃｈ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４８：４４３  （１９７０）の相同性アライメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ  ＆  Ｌｉｐｍａｎ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：２４４４  （１９８８）の類似性検索方法によって、これらのアルゴリズムのコンピューターによる実現によって（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ＰａｃｋａｇｅのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、または手動のアライメントおよび目視検査によって（例えばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．  １９９５  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）を参照されたい）を行うことができる。
【００２９】
「選択的に（または特異的に）ハイブリダイズする」という表現は、より高度な親和性での、例えば、他のヌクレオチド配列（例えば全細胞またはライブラリーＤＮＡまたはＲＮＡ）よりもストリンジェントな条件下での、特定のヌクレオチド配列のみへの分子の結合、二重化、またはハイブリダイズを指す。
【００３０】
「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」という表現は、他の配列にではなく、典型的に核酸の複雑な混合物中のその標的サブ配列にプローブがハイブリダイズするであろう条件を指す。ストリンジェントな条件は、配列依存性であり、異なる環境において異なるであろう。より長い配列は、より高い温度で特異的にハイブリダイズする。核酸のハイブリダイゼーションに対する広範囲な手引きは、Ｔｉｊｓｓｅｎ，  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ−−Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ｐｒｏｂｅｓ，  ”Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ａｓｓａｙｓ”  （１９９３）において見つけられる。一般に、ストリンジェントな条件は、定められたイオン強度ｐＨで特異的な配列について熱融点（Ｔｍ）よりも約５〜１０℃低くなるように選択される。Ｔｍは、標的に対して相補的なプローブの５０％が、平衡状態で標的配列にハイブリダイズする温度である（定められたイオン強度、ｐＨ、および核酸濃度下で）。（標的配列が過剰に存在するとき、Ｔｍで、プローブの５０％が平衡状態で使用される）。ストリンジェントな条件はまた、ホルムアミドなどのような不安定化剤の追加により実現されてもよい。選択的なまたは特異的なハイブリダイゼーションのために、ポジティブなシグナルは、バックグラウンドの少なくとも２倍、好ましくはバックグラウンドハイブリダイゼーションの１０倍とする。例示的なストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、以下のとおりとすることができる：５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、および１％  ＳＤＳ、４２℃でインキュベートまたは５×ＳＳＣ、１％  ＳＤＳ、６５℃でインキュベートと６５℃での０．２×ＳＳＣおよび０．１％  ＳＤＳ中での洗浄。
【００３１】
ストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズしない核酸は、それらがコードするポリペプチドが実質的に同一である場合、なお、実質的に同一である。これは、例えば、遺伝子コードによって許容される最大のコドン縮重を使用して核酸のコピーが作られる場合に、起こる。そのような場合、核酸は、典型的に、中程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。例示的な「中程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、３７℃での４０％ホルムアミド、１Ｍ  ＮａＣｌ、１％  ＳＤＳのバッファー中でのハイブリダイゼーションおよび４５℃での１×ＳＳＣ中での洗浄を含む。ポジティブなハイブリダイゼーションは、バックグラウンドの少なくとも２倍とする。当業者らは、同様のストリンジェンシー条件を提供するために代替のハイブリダイゼーション条件および洗浄条件を利用することができることを容易に認識するであろう。ハイブリダイゼーションパラメーターを決定するためのさらなるガイドラインは、多数の参考文献、例えばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ｅｄ．  Ａｕｓｕｂｅｌ，  ｅｔ  ａｌ．において提供される。
【００３２】
２０のアミノ酸が、一般に、タンパク質中に見つけられる。それらのアミノ酸は、それらの側鎖の化学的特性に基づいて、９つのクラスまたはグループに分類することができる。あるアミノ酸残基の、同じクラスまたはグループ内の他のアミノ酸残基との置換は、本明細書において「保存的」置換と呼ばれる。保存的アミノ酸置換は、タンパク質の立体構造または機能を有意に改変させることなく、タンパク質において頻繁になすことができる。あるアミノ酸残基の、異なるクラスまたはグループ由来の他のアミノ酸残基置換は、本明細書において「非保存的」置換と呼ばれる。対照的に、非保存的アミノ酸置換は、タンパク質の立体構造および機能を修飾する傾向がある。
【表１】
2018104436.tif 000003
【００３３】
いくつかの実施形態において、保存的アミノ酸置換が、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、およびロイシン（Ｌ）のいずれかを、これらの脂肪族アミノ酸の任意の他のアミノ酸と；逆もまた同様であるが、セリン（Ｓ）を、トレオニン（Ｔ）と；逆もまた同様であるが、アスパラギン酸（Ｄ）を、グルタミン酸（Ｅ）と；逆もまた同様であるが、グルタミン（Ｑ）を、アスパラギン（Ｎ）と；逆もまた同様であるが、リシン（Ｋ）を、アルギニン（Ｒ）と；逆もまた同様であるが、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）を、これらの芳香族アミノ酸の任意の他のアミノ酸と；逆もまた同様であるが、メチオニン（Ｍ）を、システイン（Ｃ）と置換することを含む。他の置換もまた、特定のアミノ酸の環境およびタンパク質の三次元構造におけるその役割に依存して、保存的であると考えることができる。例えば、アラニン（Ａ）およびバリン（Ｖ）ができるように、グリシン（Ｇ）およびアラニン（Ａ）は、頻繁に交換可能になり得る。比較的疎水性であるメチオニン（Ｍ）は、ロイシンおよびイソロイシンと頻繁に、時にはバリンと交換することができる。リシン（Ｋ）およびアルギニン（Ｒ）は、アミノ酸残基の重要な特徴がその電荷であり、これらの２つのアミノ酸残基の異なるｐＫが重要ではない場所において頻繁に交換可能である。さらに他の変化は、特定の環境において「保守的である」と考えることができる（例えばＢＩＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  ａｔ  ｐｐ．  １３−１５，  ２ｎｄ  ｅｄ．  Ｌｕｂｅｒｔ  Ｓｔｒｙｅｒ  ｅｄ．  （Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  （１９９２）  ８９：１０９１５−１０９１９；Ｌｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  （１９９５）  ２７０（２０）：１１８８２−１１８８６を参照されたい）。
【００３４】
いくつかの実施形態において、非保存的アミノ酸置換が、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、およびロイシン（Ｌ）のいずれかを、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびプロリン（Ｐ）のいずれかと置換することを含む。いくつかの実施形態において、非保存的アミノ酸置換が、セリン（Ｓ）およびトレオニン（Ｔ）のいずれかを、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびプロリン（Ｐ）のいずれかと置換することを含む。いくつかの実施形態において、非保存的アミノ酸置換が、アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）のいずれかを、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびプロリン（Ｐ）のいずれかと置換することを含む。いくつかの実施形態において、非保存的アミノ酸置換が、グルタミン（Ｑ）およびアスパラギン（Ｎ）のいずれかを、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびプロリン（Ｐ）のいずれかと置換することを含む。いくつかの実施形態において、非保存的アミノ酸置換が、リシン（Ｋ）およびアルギニン（Ｒ）のいずれかを、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびプロリン（Ｐ）のいずれかと置換することを含む。いくつかの実施形態において、非保存的アミノ酸置換が、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）のいずれかを、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびプロリン（Ｐ）のいずれかと置換することを含む。いくつかの実施形態において、非保存的アミノ酸置換が、メチオニン（Ｍ）およびシステイン（Ｃ）のいずれかを、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびプロリン（Ｐ）のいずれかと置換することを含む。いくつかの実施形態において、非保存的アミノ酸置換が、ヒスチジン（Ｈ）を、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、およびプロリン（Ｐ）のいずれかと置換することを含む。いくつかの実施形態において、非保存的アミノ酸置換が、プロリン（Ｐ）を、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、およびヒスチジン（Ｈ）のいずれかと置換することを含む。
【００３５】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、本明細書において区別なく使用され、長さまたは翻訳後修飾に関係なく、アミノ酸の任意のペプチド連結鎖を意味する。下記に示されるように、本明細書において記載されるポリペプチドは、例えば野生型タンパク質、野生型タンパク質の生物学的に活性な断片、または野生型タンパク質もしくは断片の変異体とすることができる。本開示に従う変異体は、アミノ酸置換、欠失、または挿入を含有することができる。置換は、保存的または非保存的であってもよい。いくつかの実施形態において、保存的置換が、典型的に、以下のグループ内の置換を含む：グリシンおよびアラニン；バリン、イソロイシン、およびロイシン；アスパラギン酸およびグルタミン酸；アスパラギン、グルタミン、セリン、およびトレオニン；リシン、ヒスチジン、およびアルギニン；ならびにフェニルアラニンおよびチロシン。
【００３６】
発現の後に、タンパク質（例えば抗体、その抗原結合性断片、複合体、抗体複合体）を単離することができる。本明細書において記載されるタンパク質（本明細書において記載される複合体、本明細書において記載される抗体またはその抗原結合性断片）のいずれにも適用される用語「精製された」または「単離された」は、それに天然に付随する構成成分（例えばタンパク質または他の天然に存在する生物学的分子もしくは有機分子）、例えばタンパク質を発現する原核生物における他のタンパク質、脂質、および核酸から分離されたまたは精製されたポリペプチドを指す。典型的に、ポリペプチドは、試料中の総タンパク質量の少なくとも６０（例えば少なくとも６５、７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、９７、または９９）重量％を構成する場合、精製される。
【００３７】
「標識」または「検出可能な成分」は、分光学的、光化学的、生化的、免疫化学的、化学的、磁気共鳴画像法による、または他の物理的手段によって検出可能な組成物である。例えば、有用な検出可能な成分は、３２Ｐ、蛍光色素、高電子密度の試薬、酵素（例えばＥＬＩＳＡにおいて一般に使用される）、ビオチン、ジゴキシゲニン、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、超小型超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集物、超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＳＰＩＯナノ粒子凝集物、標準的超常磁性酸化鉄（「ＳＳＰＩＯ」）、ＳＳＰＩＯナノ粒子凝集物、多分散系超常磁性酸化鉄（「ＰＳＰＩＯ」）、ＰＳＰＩＯナノ粒子凝集物、単結晶ＳＰＩＯ、単結晶ＳＰＩＯ凝集物、単結晶酸化鉄ナノ粒子、単結晶酸化鉄、他のナノ粒子造影剤、ガドリニウムキレート（「Ｇｄ−キレート」）分子、ガドリニウム、放射性同位体、放射性核種（例えば炭素１１、窒素１３、酸素１５、フッ素１８、ルビジウム８２）、フルオロデオキシグルコース（例えばフッ素１８標識）、任意のガンマ線放出放射性核種、陽電子放出放射性核種、放射標識グルコース、放射標識された水、放射標識されたアンモニア、生体コロイド、マイクロバブル（例えば、アルブミン、ガラクトース、脂質、および／もしくはポリマーを含むマイクロバブルシェル；空気、重いガス（複数可）、ペルフルオロカーボン、窒素、オクタフルオロプロパン、ペルフレキサン脂質マイクロスフェア、ペルフルトレンなどを含むマイクロバブルガスコアを含む）、ヨウ化造影剤（例えばイオヘキソール、イオジキサノール、イオベルソール、イオパミドール、イオキシラン、イオプロミド、ジアトリゾ酸、メトリゾ酸、イオキサグル酸）、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、金ナノ粒子凝集物、フルオロフォア、二光子フルオロフォア、またはハプテンおよびタンパク質を含有するリポソームまたは他の送達ビヒクル、または例えば、標的ペプチドと特異的に反応性のペプチドもしくは抗体の中に放射能標識を組み込むことによって検出可能にすることができる他の実体を含む。検出可能な成分はまた、ナノ粒子、粒子、凝集物中にカプセル化され、さらなる組成物によりコーティングされ、標的作用物質（例えば抗体または抗原結合断片）への結合のために誘導体化された上記の組成物のいずれかを含む。標識に抗体を複合体化するための当技術分野において知られている任意の方法は、例えばＨｅｒｍａｎｓｏｎ，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １９９６，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏにおいて記載される方法を使用して用いられてもよい。
【００３８】
「抗Ｃ３ｄ抗体」は、ヒトＣ３ｄに結合する抗体またはその抗原結合断片である。抗Ｃ３ｄ抗体の抗原結合断片は、ヒトＣ３ｄに結合することができる抗Ｃ３ｄ抗体の任意の断片（例えば本明細書において記載される）である。いくつかの実施形態において、抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片がまた、ヒトＣ３ｄｇおよび／またはヒトｉＣ３ｂにも結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＣ３ｄに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＣ３ｄに優先的に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片が、それがヒトＣ３に結合するよりも高度な親和性でＣ３ｄに結合する。
【００３９】
「抗Ｃ３ｄｇ抗体」は、ヒトＣ３ｄｇに結合する抗体またはその抗原結合断片である。抗Ｃ３ｄｇ抗体の抗原結合断片は、ヒトＣ３ｄｇに結合することができる抗Ｃ３ｄｇ抗体の任意の断片（例えば本明細書において記載される）である。いくつかの実施形態において、抗Ｃ３ｄｇ抗体またはその抗原結合断片がまた、ヒトＣ３ｄおよび／またはヒトｉＣ３ｂにも結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｃ３ｄｇ抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＣ３ｄｇに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＣ３ｄｇに優先的に結合する。いくつかの実施形態において、抗Ｃ３ｄｇ抗体またはその抗原結合断片が、それがヒトＣ３に結合するよりも高度な親和性でＣ３ｄｇに結合する。
【００４０】
「抗ｉＣ３ｂ抗体」は、ヒトｉＣ３ｂに結合する抗体またはその抗原結合断片である。抗ｉＣ３ｂ抗体の抗原結合断片は、ヒトｉＣ３ｂに結合することができる抗ｉＣ３ｂ抗体の任意の断片（例えば本明細書において記載される）である。いくつかの実施形態において、抗ｉＣ３ｂ抗体またはその抗原結合断片がまた、ヒトＣ３ｄｇおよび／またはヒトＣ３ｄにも結合する。いくつかの実施形態において、抗ｉＣ３ｂ抗体またはその抗原結合断片が、ヒトｉＣ３ｂに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗ｉＣ３ｂ抗体またはその抗原結合断片が、ヒトｉＣ３ｂに優先的に結合する。いくつかの実施形態において、抗ｉＣ３ｂ抗体またはその抗原結合断片が、それがヒトＣ３に結合するよりも高度な親和性でｉＣ３ｂに結合する。
【００４１】
本明細書において使用されるように、用語「薬学的に許容できる」は、「生理学的に許容できる」および「薬理学的に許容できる」と同義的に使用される。医薬組成物は、一般に、保存中の緩衝作用および維持のための薬剤を含むであろう、また、投与のルートに依存して、適切な送達のためのバッファーおよびキャリヤを含むことができる。用語「診断的に許容できる」は、「生理学的に許容できる」および「薬理学的に許容できる」と同義的に使用され、診断組成物に関係する。
【００４２】
「薬学的に許容できる賦形剤」および「薬学的に許容できるキャリヤ」は、活性作用物質の対象への投与および対象による吸収を助ける物質に関係し、患者に対して深刻で不利な毒性の影響を引き起こすことなく、本発明の組成物中に含むことができる。薬学的に許容できる賦形剤の非限定的な例は、水、ＮａＣｌ、生理食塩水、乳酸リンガー、通常のスクロース、通常のグルコース、バインダー、充填剤、崩壊剤、潤滑剤、コーティング、甘味料、香料、食塩水（リンガー溶液など）、アルコール、油、ゼラチン、ラクトース、アミロース、またはデンプンなどのような炭水化物、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリジン、および着色料ならびにその他同種のものを含む。そのような調製物は、滅菌し、所望の場合、本発明の化合物と有害に反応しない、潤滑剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼす塩、バッファー、着色剤、および／または芳香剤、ならびにその他同種のものなどのような助剤と混合することができる。当業者は、他の医薬賦形剤が本発明において有用であることを認識するであろう。
【００４３】
その他に示されない限り、数値との関連における用語「約」は、公称値±公称値の１０％を示した。
抗体組成物および使用
【００４４】
本明細書において使用されるように、用語「抗体」または「免疫グロブリン」は、タンパク質の免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのタンパク質（糖タンパク質を含む）を指す。抗体または免疫グロブリン（Ｉｇ）分子は、四量体で、２つの同一の軽鎖ポリペプチドおよび２つの同一の重鎖ポリペプチドを含んでいてもよい。２つの重鎖は、ジスルフィド結合によって互いに連結され、それぞれの重鎖は、ジスルフィド結合によって軽鎖に連結される。それぞれの完全長Ｉｇ分子は、特異的な標的または抗原に対して少なくとも２つの結合部位を含有する。
【００４５】
免疫系は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭを含むいくつかの異なるクラスのＩｇ分子（アイソタイプ）を産生し、それぞれ、存在する特定のクラスの重鎖ポリペプチド：ＩｇＡ中に見つけられるアルファ（α）、ＩｇＤ中に見つけられるデルタ（δ）、ＩｇＥ中に見つけられるイプシロン（ε）、ＩｇＧ中に見つけられるガンマ（γ）、およびＩｇＭ中に見つけられるミュー（μ）によって区別される。ＩｇＧにおいて見つけられる少なくとも５つの異なるγ重鎖ポリペプチド（アイソタイプ）がある。対照的に、カッパ（κ）およびラムダ（λ）鎖と呼ばれる２つの軽鎖ポリペプチドアイソタイプのみがある。抗体アイソタイプの特有な特質は、重鎖の定常ドメインの配列によって定められる。
【００４６】
ＩｇＧ分子は、ジスルフィド結合によって互いに結合した２つの軽鎖（κまたはλ形態のいずれか）および２つの重鎖（γ形態）を含む。ＩｇＧ軽鎖のκおよびλ形態は、それぞれ、可変領域と呼ばれる比較的可変性のアミノ酸配列のドメイン（「ＶＬ」、「Ｖκ」、または「Ｖλ領域」と様々に呼ばれる）および定常領域（ＣＬ−領域）と呼ばれる比較的保存されたアミノ酸配列のドメインを含有する。同様に、それぞれのＩｇＧ重鎖は、可変領域（ＶＨ領域）および１つ以上の保存領域を含有し、完全なＩｇＧ重鎖は、３つの定常ドメイン（「ＣＨ１」、「ＣＨ２」、および「ＣＨ３領域」）ならびにヒンジ領域を含有する。それぞれのＶＬ領域またはＶＨ領域内で、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）としても知られている超可変領域は、比較的保存されたフレームワーク領域（「ＦＲ」）の間に散在する。一般に、軽鎖または重鎖ポリペプチドの可変領域は、ポリペプチドに沿って以下の順で並んだ４つのＦＲおよび３つのＣＤＲを含有する：ＮＨ２−ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４−ＣＯＯＨ。互いに、ＣＤＲおよびＦＲは、ＩｇＧ結合部位、従って、そのＩｇＧ分子が結合する特異的な標的タンパク質または抗原の三次元構造を決定する。それぞれのＩｇＧ分子は、二量体であり、２つの抗原分子に結合することができる。プロテアーゼパパインによる二量体ＩｇＧの切断は、２つの同一の抗原結合性断片（「Ｆａｂ’」）および容易に結晶化するのでこのように命名される「Ｆｃ」断片またはＦｃドメインを産生する。
【００４７】
本開示の全体にわたって使用されるように、用語「抗体」は、当技術分野において知られており、本明細書において記載される様々な方法のいずれか１つによって生成される抗体全体またはインタクトな抗体（例えばＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ）分子をさらに指す。用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ化抗体またはキメラ抗体、ヒト化抗体、脱免疫化ヒト抗体、および完全ヒト抗体を含む。抗体は、様々な種、例えば、ヒト、非ヒト霊長動物（例えばサル、ヒヒ、またはチンパンジー）、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、アレチネズミ、ハムスター、ラット、およびマウスなどのような哺乳動物のいずれかにおいて作製するまたはそれに由来することができる。抗体は、精製または組換え抗体とすることができる。
【００４８】
本明細書において使用されるように、用語「エピトープ」は、抗体が結合するタンパク質（例えばヒト補体構成成分Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂタンパク質）上の部位を指す。「重複するエピトープ」は、少なくとも１つの（例えば２、３、４、５、または６つの）共通のアミノ酸残基を含む。
【００４９】
本明細書において使用されるように、用語「特異的な結合」または「特異的に結合する」は、生理学的条件下で比較的安定している複合体（例えば、抗体および補体構成成分Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂタンパク質の間の複合体）を形成する２つの分子を指す。典型的に、結合定数（Ｋａ）が１０６Ｍ−１以上である場合、結合は、特異的であると考えられる。従って、抗体は、少なくとも１０６（またはそれ以上）（例えば少なくとも１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、１０１４、もしくは１０１５またはそれ以上）Ｍ−１のＫａでＣ３ｄまたはｉＣ３ｂまたはＣ３ｄｇタンパク質に特異的に結合することができる。
【００５０】
抗体がタンパク質抗原に結合するかどうかおよび／またはタンパク質抗原への抗体の親和性を決定するための方法は、当技術分野において知られている。例えば、タンパク質抗原への抗体の結合は、これらに限定されないが、ウエスタンブロット、ドットブロット、表面プラズモン共鳴法方法（例えばＢＩＡｃｏｒｅ  ｓｙｓｔｅｍ；Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）、または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのような様々な技術を使用して検出するおよび／または定量化することができる。例えばＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （１９８８）  ”Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．；Ｂｅｎｎｙ  Ｋ．  Ｃ．  Ｌｏ  （２００４）  ”Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  （ＩＳＢＮ：  １５８８２９０９２１）；Ｂｏｒｒｅｂａｅｋ  （１９９２）  ”Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ，”  Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，  ＮＹ；Ｂｏｒｒｅｂａｅｋ  （１９９５）  ”Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，”  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ，  Ｏｘｆｏｒｄ；Ｊｏｈｎｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈ．  １６０：１９１−１９８；Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ａｎｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｌｉｎ．  ５１：１９−２６；およびＪｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７を参照されたい。米国特許第６，３５５，２４５号明細書もまた、参照されたい。
【００５１】
抗体の免疫特異的結合性および交差反応性を分析するために使用することができるイムノアッセイは、ウエスタンブロット、ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈殿アッセイ、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線測定法、蛍光イムノアッセイ、およびプロテインＡイムノアッセイなどのような技術を使用する競合および非競合アッセイ系を含むが、これらに限定されない。そのようなアッセイはルーチン的であり、当技術分野においてよく知られている。
【００５２】
抗体はまた、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはＣ３タンパク質断片との抗体の相互作用の動態学的パラメーターを特徴付けるための、当技術分野において知られている任意の表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）に基づくアッセイを使用してアッセイすることもできる。ＢＩＡｃｏｒｅ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ；Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）；ＩＡｓｙｓ機器（Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｓｅｎｓｏｒｓ；Ｆｒａｎｋｌｉｎ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）；ＩＢＩＳシステム（Ｗｉｎｄｓｏｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｉｍｉｔｅｄ；Ｂｅｒｋｓ、ＵＫ）、ＳＰＲ−ＣＥＬＬＩＡシステム（Ｎｉｐｐｏｎ  Ｌａｓｅｒ  ａｎｄ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ  Ｌａｂ；Ｈｏｋｋａｉｄｏ、Ｊａｐａｎ）、およびＳＰＲ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ  Ｓｐｒｅｅｔａ（Ｔｅｘａｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ；Ｄａｌｌａｓ、Ｔｅｘａｓ）を含むが、これらに限定されない市販で入手可能な任意のＳＰＲ機器は、本明細書において記載される方法において使用することができる。例えばＭｕｌｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２２：  ７７−９１；Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ８２：  ３０３−３２３；Ｆｉｖａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ９：  ９７−１０１；およびＲｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １１：  ５４−６１を参照されたい。
【００５３】
いくつかの実施形態において、本開示は、１．１×１０−９Ｍまたはそれ以上のＫＤ値でヒトＣ３ｄに特異的に結合する抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。いくつかの実施形態において、そのようなＫＤ値が、１．１×１０−９Ｍ〜３．６×１０−１０Ｍの範囲にある。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片が、約ＫＤ＝１．０６×１０−９Ｍの親和性でヒトＣ３ｄに結合する。いくつかの実施形態において、抗体が、ｍＡｂ  ３ｄ２９である。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片が、約ＫＤ＝４．６５×１０−１０Ｍの親和性でヒトＣ３ｄに結合する。いくつかの実施形態において、抗体が、ｍＡｂ  ３ｄ８ｂである。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片が、約ＫＤ＝３．６７×１０−１０Ｍの親和性でヒトＣ３ｄに結合する。いくつかの実施形態において、抗体が、ｍＡｂ  ３ｄ９ａである。実施形態において、抗体が、ｍＡｂ  ３ｄ２９の誘導体（例えばそのヒト化、キメラ化、抗原結合性断片）である。実施形態において、抗体が、ｍＡｂ  ３ｄ８ｂの誘導体（例えばそのヒト化、キメラ化、抗原結合性断片）である。実施形態において、抗体が、ｍＡｂ  ３ｄ９ａの誘導体（例えばそのヒト化、キメラ化、抗原結合性断片）である。
【００５４】
抗体親和性を決定するための測定法は、標準的であり、よく知られている技術である。親和性を測定するための例示的な方法として、ＢＩＡｃｏｒｅ分析は、ヒトＣ５ａに対するヒト化抗体のそれぞれの親和性を定量化するために使用された。例えばＫａｒｌｓｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｒｓｓｏｎ  （２００４）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４８：３８９−４１５を参照されたい。簡潔に言えば、それぞれのヒト化抗体は、捕捉技術を使用して、３〜４つの濃度のヒトＣ５ａ（抗原）によりスクリーニングされた。抗体は、０．６ｎＭ〜５．９ｎＭのヒトＣ５ａの範囲の様々な濃度を有するＣＭ５センサーチップ上に直接固定された抗Ｆｃ（ヒト）によって捕捉され、センサーチップ表面上を通過した。表面は、結合した抗体および抗原を除去するためのそれぞれのサイクルの後に、２０ｍＭ  ＨＣｌ、０．０２％  Ｐ２０により再生した。データは、１：１  Ｌａｎｇｍｕｉｒ  Ｍｏｄｅｌ  Ｆｉｔ（Ｒｍａｘ：Ｇｌｏｂａｌ  Ｆｉｔ；ＲＩ：Ｌｏｃａｌ  Ｆｉｔ）を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ  ＢＩＡ評価ソフトウェアを使用して評価した。（ｋａ：結合速度定数）、（ｋｄ：解離速度定数）、およびＫＤ（平衡解離定数）などのような反応速度情報は、そのフィットから得た。これらのおよび同様の技術は、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂに結合する抗体などのような他の抗体に適用可能である。
【００５５】
いくつかの実施形態において、本開示は、補体構成成分タンパク質Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ３ｃ、またはＣ３ｆへの結合と比較して、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂに好ましくは結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態において、抗体が、３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、または３ｄ２９である。いくつかの実施形態において、本明細書において記載される抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体が、補体構成成分タンパク質Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ３ｃ、またはＣ３ｆのいずれか１つではなく、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂに結合する。補体Ｃ３タンパク質およびタンパク質をコードする核酸は、免疫学および生物学の分野内でよく知られており、本明細書において記載されるＣ３およびＣ３断片のアミノ酸および核酸配列は、よく知られているまたは当業者によって容易に得られる。例えば、ヒトＣ３アミノ酸および核酸配列は、受入番号Ｐ０１０２４の下でＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔおよび受入番号ＮＭ＿００００６４．２の下でＧｅｎＢａｎｋデータベースにおいて見つけられてもよい。受入番号Ｐ０１０２４およびＮＭ＿００００６４．２はまた、Ｃ３断片（例えば、Ｃ３ｂの切断によって形成されるＣ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、ｉＣ３ｂ）についての配列情報ならびにタンパク質および核酸と関係するさらなる参考文献をも提供する。Ｃ３断片の特徴および配列はまた、Ｄｅ  Ｂｒｕｉｊｎ，  Ｍ．Ｈ．Ｌ．  ａｎｄ  Ｆｅｙ  Ｇ．Ｈ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  （１９８５）  Ｆｅｂ；８２（３）：７０８−１２においても議論される。いくつかの実施形態において、本開示は、補体構成成分タンパク質Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ３ｃ、またはＣ３ｆへのその結合と同等の親和性で、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂに結合する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。いくつかの実施形態において、抗体が、３ｄ１１または３ｄ３１である。いくつかの実施形態において、本開示は、補体構成成分タンパク質Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ３ｃ、またはＣ３ｆのいずれか１つではなく、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂに弱く結合する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。いくつかの実施形態において、抗体が、３ｄ３または３ｄ１５である。
【００５６】
従って、いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片が、遊離Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂ（例えば、ｈＣ３ｄまたはｈＣ３ｄｇまたはｈｉＣ３ｂなどのようなヒトタンパク質）に、切断されていない未変性Ｃ３タンパク質に対するその対応する親和性よりも少なくとも２（例えば少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２５、２５０、２７５、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、または１００００）倍大きな親和性で、結合する。いくつかの実施形態において、優先的な結合が、切断されていない未変性Ｃ３タンパク質に対してよりも、遊離Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂに対して１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍、２０００倍、３０００倍、４０００倍、５０００倍、６０００倍、７０００倍、８０００倍、９０００倍、１００００倍、１００，０００倍、または１，０００，０００倍大きい。
【００５７】
いくつかの実施形態において、本開示は、遊離または循環または非沈着Ｃ３断片への結合と比較して、沈着したまたはオプソニン化されたＣ３断片、例えばＣ３ｄ、Ｃ３ｄｇ、ｉＣ３ｂに好ましくは結合する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。いくつかの実施形態において、そのような抗体またはその抗原結合性断片が、遊離したＣ３またはＣ３断片ではなく、沈着したＣ３断片のみに結合する。他の実施形態において、本開示は、補体断片Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂに結合し、循環Ｃ３（例えばＣ３、Ｃ３ｂ、または（Ｃ３Ｈ２Ｏ））から組織結合Ｃ３断片を識別することができる抗体を含む。いくつかの実施形態において、そのような抗体が、ｍＡｂ  ３ｄ９ａ、３ｄ２９、および３ｄ８ｂを含む。いくつかの実施形態において、そのような抗体が、本明細書において記載される抗体から選択される抗体を含む。いくつかの実施形態において、そのような抗原結合性断片が、本明細書において記載される抗原結合性断片を含む。いくつかの実施形態において、本発明の抗体が、市販で入手可能な抗Ｃ３ｄ抗体よりも大きな特異性でＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂに結合する。いくつかの実施形態において、市販で入手可能な抗Ｃ３ｄ抗体が、Ｑｕｉｄｅｌカタログ番号Ａ２０７およびＡ２５０によって指定され、Ｑｕｉｄｅｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｑｕｉｄｅｌ  Ｃｏｒｐ．、Ｓａｎ  ＤｉｅｇｏおよびＳａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）から市販で入手可能である。
【００５８】
いくつかの実施形態において、本開示はまた、マウスモノクローナル抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、および３ｄ１６の変異体であり、これらのマウス抗体のＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂ結合能力を維持する抗体またはその抗原結合性断片をも提供する。例えば、本開示は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、もしくはその抗原結合性断片、キメラ化抗体もしくはキメラ抗体もしくはその抗原結合性断片、ヒト化抗体もしくはその抗原結合性断片、脱免疫化ヒト抗体もしくはその抗原結合性断片、完全ヒト抗体もしくはその抗原結合性断片、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、二特異性抗体もしくはその抗原結合性断片、ミニボディもしくはその抗原結合性断片、トリアボディもしくはその抗原結合性断片、ドメイン抗体もしくはその抗原結性合断片、ラクダ科の動物の抗体もしくはその抗原結合性断片、ヒトコブラクダ抗体もしくはその抗原結合性断片、ファージディスプレイ抗体もしくはその抗原結合性断片、または反復骨格アレイ（例えば反復抗原ディスプレイ）により同定された抗体もしくはその抗原結合性断片である抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。例えば、本開示は、３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９などのキメラ化バージョン、ヒト化バージョン、または単鎖バージョンを提供する。
【００５９】
ハイブリドーマ細胞株を調製するための方法は、数か月、例えば２〜４か月にわたって数回、例えば４〜６回、ヒトＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂタンパク質（またはその免疫原性断片）を含有する免疫原性組成物を皮下におよび／または腹腔内に注射することによって、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスを免疫化するステップを含む。免疫化マウス由来の脾臓細胞は、最後の注射の２〜４日後に採取され、融合プロモーター、好ましくはポリエチレングリコールの存在下において骨髄腫細胞株Ｓｐ２／０の細胞と融合される。好ましくは、骨髄腫細胞は、分子量およそ４０００の約３０％〜約５０％ポリエチレングリコールを含有する溶液中で免疫化マウス由来の３〜２０倍過剰な脾臓細胞と融合される。融合の後に、細胞は、通常の骨髄腫細胞が所望のハイブリドーマ細胞を押しのけるのを妨げるために、一定の間隔で、選択培地、例えばＨＡＴ培地を補足した、上に記載される、適した培養培地において増やされる。
【００６０】
抗体およびその断片は、いくつかの実施形態において、「キメラ」とすることができる。キメラ抗体およびその抗原結合性断片は、２つ以上の異なる種（例えばマウスおよびヒト）由来の部分を含む。キメラ抗体は、ヒト定常ドメイン遺伝子セグメント上にスプライスされた所望の特異性のマウス可変領域により産生することができる（例えば米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照されたい）。このように、非ヒト抗体は、それらをヒトの臨床上の適用にとってより適したものにするために修飾することができる（例えば、ヒト対象における補体関連性の障害を処置するまたは妨げるための方法）。
【００６１】
本開示のモノクローナル抗体は、非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形態を含む。ヒト化またはＣＤＲ移植ｍＡｂは、それらがマウス抗体ほど急速に血液循環から取り除かれず、不利な免疫反応を典型的に引き起こさないので、ヒトのための治療剤として特に有用である。ヒト化抗体を調製するための方法は、当技術分野において一般によく知られている。例えば、ヒト化は、げっ歯動物ＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列と置換することによって、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法に従って本質的に実行することができる（例えばＪｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６）  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６を参照されたい）。例えばＳｔａｅｌｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４３：１２４３−１２５７もまた参照されたい。いくつかの実施形態において、非ヒト（例えばマウス）抗体のヒト化形態が、レシピエント抗体の超可変（ＣＤＲ）領域残基が、所望の特異性、親和性、および結合能力を有する、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長動物などのような非ヒト種由来の超可変領域残基（ドナー抗体）と交換されるヒト抗体（レシピエント抗体）である、ヒト抗体（レシピエント抗体）である。いくつかの事例において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域残基もまた、対応する非ヒト残基と交換される（従って、「復帰突然変異」と呼ばれる）。そのうえ、ファージディスプレイライブラリーは、抗体配列内の選ばれる位置のアミノ酸を変更するために使用することができる。ヒト化抗体の特性はまた、ヒトフレームワークの選択によっても影響を与えられる。さらに、ヒト化およびキメラ化抗体は、例えば親和性またはエフェクター機能などのような抗体特性をさらに改善するために、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見つけられない残基を含むように修飾することができる。
【００６２】
完全ヒト抗体もまた、本開示において提供される。用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域（存在する場合）を有する抗体を含む。ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えばインビトロにおけるランダムもしくは部位特異的突然変異またはインビボにおける体細胞変異によって導入された突然変異）を含むことができる。しかしながら、用語「ヒト抗体」は、マウスなどのような他の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列上に移植された抗体（すなわちヒト化抗体）を含まない。完全ヒト抗体またはヒト抗体は、ヒト抗体遺伝子を持つ（可変（Ｖ）、多様（Ｄ）、ジョイント（Ｊ）、および定常（Ｃ）エクソンを持つ）トランスジェニックマウスまたはヒト細胞に由来してもよい。例えば、内因性の免疫グロブリン産生の非存在下においてヒト抗体の完全なレパートリーを、免疫化と同時に産生することができるトランスジェニック動物（例えばマウス）を産生することが現在可能である（例えばＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：２５５１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  （  １９９３）  Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７：３３；およびＤｕｃｈｏｓａｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５５：２５８．を参照されたい）。トランスジェニックマウス株は、再構成されていないヒト免疫グロブリン遺伝子由来の遺伝子配列を含有するように遺伝子操作することができる。ヒト配列は、ヒト抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードしてもよく、マウスにおいて正確に機能し、再構成を受けて、ヒトに類似する広い抗体レパートリーをもたらすと思われる。トランスジェニックマウスは、特異的な抗体およびそれらのコードＲＮＡの多様なアレイを作るために、標的タンパク質（例えば補体構成成分Ｃ３ｄもしくはＣ３ｄｇもしくはｉＣ３ｂタンパク質、その断片、またはＣ３ｄもしくはＣ３ｄｇもしくはｉＣ３ｂタンパク質を発現する細胞）により免疫化することができる。次いで、そのような抗体の抗体鎖構成成分をコードする核酸は、動物からディスプレイベクターの中にクローニングされてもよい。典型的に、重鎖配列および軽鎖配列をコードする核酸の個別の集団は、クローニングされ、次いで、個別の集団は、ベクターの中への挿入に際して再結合され、ベクターの任意の所定のコピーは、ランダムな組み合わせの重鎖および軽鎖を受ける。ベクターは、抗体鎖をアセンブルし、ベクターを含有しているディスプレイパッケージの外側表面上にディスプレイすることができるように、抗体鎖を発現するように設計される。例えば、抗体鎖は、ファージの外側表面由来のファージコートタンパク質との融合タンパク質として発現することができる。その後、ディスプレイパッケージは、標的に結合する抗体のディスプレイについてスクリーニングすることができる。
【００６３】
従って、いくつかの実施形態において、本開示は、例えば、本明細書において記載されるマウスモノクローナル抗体の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むヒト化抗体、脱免疫化抗体、または霊長動物化抗体を提供し、これらは、マウスモノクローナル抗体対応物がその抗原（例えばＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂ）に結合する能力（例えば少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、もしくは１００％またはさらに１００％超）を保持する。例えば、本開示は、マウスモノクローナル抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、または３ｄ１６のいずれか１つの６つのＣＤＲ（例えば重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、および軽鎖ＣＤＲ３）のセットならびにヒトフレームワーク領域（ヒト定常領域またはＦｃ領域を有するまたは有さない）を含むヒト化抗体を特色とする。
【００６４】
ＣＤＲおよびフレームワーク領域の厳密な境界は、異なる方法に従って異なって定められ、抗体遺伝子操作の当業者によく知られている。いくつかの実施形態において、軽鎖または重鎖可変ドメイン内のＣＤＲまたはフレームワーク領域の位置が、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．  ［（１９９１）  ”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．”  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ］によって定められるものとすることができる。そのような場合、ＣＤＲは、「Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ」（例えば「Ｋａｂａｔ  ＬＣＤＲ２」または「Ｋａｂａｔ  ＨＣＤＲ１」）と呼ぶことができ、フレームワーク領域は、「Ｋａｂａｔフレームワーク領域」（例えば「Ｋａｂａｔ  ＬＦＲ１」または「Ｋａｂａｔ  ＨＦＲ３」）と呼ぶことができる。いくつかの実施形態において、軽鎖または重鎖可変領域のＣＤＲまたはフレームワーク領域の位置が、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３によって定められるものとすることができる。従って、これらの領域は、「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ」（例えば「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＬＣＤＲ２」または「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＨＣＤＲ３」）または「Ｃｈｏｔｈｉａフレームワーク領域」（例えば「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＬＦＲ１」または「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＬＦＲ３」）とそれぞれ呼ぶことができる。いくつかの実施形態において、軽鎖および重鎖可変領域のＣＤＲまたはフレームワーク領域の位置が、Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組み合わせの定義によって定められるものとすることができる。そのような実施形態において、これらの領域が、「組み合わせのＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ」または「組み合わせのＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａフレームワーク領域」とそれぞれ呼ぶことができる。Ｔｈｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．［（１９９６）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３３（１７／１８）：１３８９−１４０１］は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの定義に従うＣＤＲおよびフレームワーク領域境界の同定を例証する。
【００６５】
いくつかの実施形態において、軽鎖または重鎖可変ドメインを有するＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域の位置が、Ｈｏｎｎｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ［（２００１）  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３０９：  ６５７−６７０］によって定められるものとすることができる。
【００６６】
そのうえ、ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーから誘導することができる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２７：３８１；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２２：５８１−５９７；およびＶａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １４：３０９  （１９９６））。合成ヒト抗体Ｖ領域のランダム化された組み合わせを使用する合成ファージライブラリーを作ることができる。抗原上での選択によって、Ｖ領域が性質上、非常にヒトに似ている完全ヒト抗体を作製することができる。例えば、これらのそれぞれの内容が、それらの全体が参照によって本明細書において組み込まれる米国特許第６，７９４，１３２号明細書、米国特許第６，６８０，２０９号明細書、米国特許第４，６３４，６６６号明細書、およびＯｓｔｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８３），  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：３６１−３６７を参照されたい。
【００６７】
ヒト抗体の生成については、これらの開示が、それらの全体が参照によってこれによって組み込まれるＭｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６およびＧｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  （１９９８）  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １８８：４８３−４９５もまた参照されたい。ヒト抗体は、米国特許第５，９３９，５９８号明細書；米国特許第６，６７３，９８６号明細書；米国特許第６，１１４，５９８号明細書；米国特許第６，０７５，１８１号明細書；米国特許第６，１６２，９６３号明細書；米国特許第６，１５０，５８４号明細書；米国特許第６，７１３，６１０号明細書；および米国特許第６，６５７，１０３号明細書ならびに米国特許出願公開第２００３−０２２９９０５  Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４−００１０８１０  Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４−００９３６２２  Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６−００４０３６３  Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５−００５４０５５  Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５−００７６３９５  Ａ１号明細書、および米国特許出願公開第２００５−０２８７６３０  Ａ１号明細書においてさらに議論され、正確に概説される。国際公開第９４／０２６０２号パンフレット、国際公開第９６／３４０９６号パンフレット、および国際公開第９８／２４８９３号パンフレットならびに欧州特許第０  ４６３  １５１  Ｂ１号明細書もまた参照されたい。上記に引用される特許、出願、および参考文献のそれぞれの開示は、それらの全体が参照によってこれによって組み込まれる。
【００６８】
代替のアプローチにおいて、ＧｅｎＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｉｎｃ．を含む他のものは、「ミニローカス」アプローチを利用した。ミニローカスアプローチにおいて、外因性のＩｇ遺伝子座を、Ｉｇ遺伝子座由来の小片（個々の遺伝子）の包含を通して模倣する。従って１つ以上のＶＨ遺伝子、１つ以上のＤＨ遺伝子、１つ以上のＪＨ遺伝子、ミュー定常領域、および第２の定常領域（好ましくはガンマ定常領域）は、動物への挿入のための構築物に形成される。このアプローチは、例えば、これらの開示が参照によってこれによって組み込まれる米国特許第５，５４５，８０７号明細書；米国特許第５，５４５，８０６号明細書；米国特許第５，６２５，８２５号明細書；米国特許第５，６２５，１２６号明細書；米国特許第５，６３３，４２５号明細書；米国特許第５，６６１，０１６号明細書；米国特許第５，７７０，４２９号明細書；米国特許第５，７８９，６５０号明細書；および米国特許第５，８１４，３１８号明細書；米国特許第５，５９１，６６９号明細書；米国特許第５，６１２，２０５号明細書；米国特許第５，７２１，３６７号明細書；米国特許第５，７８９，２１５号明細書；米国特許第５，６４３，７６３号明細書；米国特許第５，５６９，８２５号明細書；米国特許第５，８７７，３９７号明細書；米国特許第６，３００，１２９号明細書；米国特許第５，８７４，２９９号明細書；米国特許第６，２５５，４５８号明細書；および米国特許第７，０４１，８７１号明細書において記載される。これらのそれぞれの開示がそれらの全体が参照によってこれによって組み込まれる欧州特許第０  ５４６  ０７３  Ｂ１号明細書、国際公開第９２／０３９１８号パンフレット、国際公開第９２／２２６４５号パンフレット、国際公開第９２／２２６４７号パンフレット、国際公開第９２／２２６７０号パンフレット、国際公開第９３／１２２２７号パンフレット、国際公開第９４／００５６９号パンフレット、国際公開第９４／２５５８５号パンフレット、国際公開第９６／１４４３６号パンフレット、国際公開第９７／１３８５２号パンフレット、および国際公開第９８／２４８８４号パンフレットもまた、参照されたい。さらにこれらのそれぞれの開示がそれらの全体が参照によってこれによって組み込まれるＴａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２０：  ６２８７；Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｉｎｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ５：  ６４７；Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：  ３７２０−４；Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：  １１７；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：  ８５６−８５９；Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６：  ５７９−５９１；Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５４：  ６４５３−６５；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：  ８４５；およびＴｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００���）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １０：  ２９９８−３００５を参照されたい。
【００６９】
いくつかの実施形態において、脱免疫化抗体またはその抗原結合性断片が、提供される。脱免疫化抗体またはその抗原結合性断片は、抗体またはその抗原結合性断片を、所定の種に対して（例えばヒトに対して）非免疫原性にまたはそれほど免疫原性でないようにするように修飾した抗体である。脱免疫化は、当業者らに知られている様々な技術のいずれかを利用して抗体またはその抗原結合性断片を修飾することによって実現することができる（例えば国際公開第０４／１０８１５８号パンフレットおよび国際公開第００／３４３１７号パンフレットを参照されたい）。例えば、抗体またはその抗原結合性断片は、抗体またはその抗原結合性断片のアミノ酸配列内の可能性のあるＴ細胞エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープを同定し、かつ例えば組換え技術を使用して、抗体またはその抗原結合性断片由来の１つ以上の可能性のあるＴ細胞エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープを除去することによって、脱免疫化されてもよい。次いで、修飾された抗体またはその抗原結合性断片は、任意選択で産生され、例えば結合親和性などのような１つ以上の所望の生物学的活性を保持するが、免疫原性が低下した抗体またはその抗原結合性断片を同定するために試験されてもよい。可能性のあるＴ細胞エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープを同定するための方法は、例えばコンピューターによる方法（例えば国際公開第０２／０６９２３２号パンフレットを参照されたい）、インビトロまたはインシリコ技術、および生物学的アッセイまたは物理的方法（例えばＭＨＣ分子へのペプチドの結合の決定、抗体またはその抗原結合性断片を受ける種由来のＴ細胞受容体へのペプチド：ＭＨＣ複合体の結合の決定、抗体またはその抗原結合性断片を受ける種のＭＨＣ分子を有するトランスジェニック動物を使用するタンパク質またはそのペプチド部分の試験、または抗体またはその抗原結合性断片を受ける種由来の免疫系細胞により再組織されたトランスジェニック動物による試験など）などのような、当技術分野において知られている技術を使用して実行されてもよい。様々な実施形態において、本明細書において記載される脱免疫化抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体が、脱免疫化抗原結合性断片、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２、モノクローナル抗体、マウス抗体、遺伝子操作された抗体（例えばキメラ、単鎖、ＣＤＲ移植、ヒト化、完全ヒト抗体、および人工的に選択された抗体など）、合成抗体、ならびに半合成抗体を含む。
【００７０】
いくつかの実施形態において、本開示はまた、二重特異性抗体をも提供する。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくはヒトまたはヒト化抗体である。本発明の場合、結合特異性のうちの１つは、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂに対するものであり、もう１つは、第１のもの以外の任意の他の抗原に対するものである。
【００７１】
二重特異性抗体を作製するための方法は、当業者らの範囲内にある。従来、二重特異性抗体の組換え産生は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づき、２つの重鎖／軽鎖対は、異なる特異性を有する（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ  （１９８３）  Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７−５３９）。所望の結合特異性（抗体−抗原結合部）を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合することができる。重鎖可変領域の融合物は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも一部分を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。免疫グロブリン重鎖融合物および所望の場合に免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、個別の発現ベクターの中に挿入され、適した宿主生物の中に同時形質移入される。二重特異性抗体を生成するための例証となる現在知られている方法のさらなる詳細については、例えばＳｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０；国際公開第９６／２７０１１号パンフレット；Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１；Ｓｈａｌａｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  （１９９２）  １７５：２１７−２２５；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８（５）：１５４７−１５５３；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５２：５３６８；およびＴｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４７：６０を参照されたい。二重特異性抗体はまた、架橋抗体またはヘテロ複合体抗体をも含む。ヘテロ複合体抗体は、任意の好都合な架橋方法を使用して作製されてもよい。適した架橋剤は、当技術分野においてよく知られており、多くの架橋技術と共に米国特許第４，６７６，９８０号明細書において開示される。
【００７２】
組換え細胞培養から二重特異性抗体断片を直接作製し、単離するための様々な技術もまた、記載されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを使用して産生されてきた。例えばＫｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８（５）：１５４７−１５５３を参照されたい。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結されてもよい。抗体ホモ二量体は、単量体を形成するためにヒンジ領域で還元され、次いで、抗体ヘテロ二量体を形成するために再び酸化されてもよい。この方法はまた、抗体ホモ二量体の産生についても利用することができる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８によって記載される「二特異性抗体」技術は、二重特異性抗体断片を作製するための代替のメカニズムを提供した。断片は、同じ鎖上の２つのドメインの間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。従って、ある断片のＶＨおよびＶＬドメインは、他の断片の相補的なＶＬおよびＶＨドメインと対になるように強いられ、それによって、２つの抗原結合性部位を形成する。単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体の使用によって二重特異性抗体断片を作製するための他の戦略もまた報告されている。例えばＧｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５２：５３６８を参照されたい。その代わりに、抗体は、例えばＺａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  ８（１０）：１０５７−１０６２において記載されるように「直鎖抗体」とすることができる。簡潔に言えば、これらの抗体は、抗原結合領域の対を形成する直列Ｆｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）の対を含む。直鎖抗体は、二重特異性または単一特異性であってもよい。
【００７３】
２つを超える結合価を有する抗体（例えば三重特異性抗体）は、企図され、例えばＴｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４７：６０において記載される。
【００７４】
本開示はまた、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２５（１１）：１２９０−１２９７において記載される二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）分子などのような多重特異性抗体の変異体形態を包含する。ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、２つの異なる親抗体由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組換えＤＮＡ技術によって直接または短いリンカーを介して直列に連結され、その後に軽鎖定常ドメインが続くように設計される。同様に、重鎖は、直列に連結された２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、その後に定常ドメインＣＨ１およびＦｃ領域が続く。２つの親抗体からＤＶＤ−Ｉｇ分子を作製するための方法は、例えば国際公開第０８／０２４１８８号パンフレットおよび国際公開第０７／０２４７１５号パンフレットにおいてさらに記載される。
【００７５】
本開示はまた、ラクダ科の動物またはヒトコブラクダの抗体（例えばフタコブタクダ、ヒトコブラクダ、またはアルパカに由来する抗体）をも提供する。そのような抗体は、ほとんどの哺乳動物由来の典型的な２鎖（断片）または４鎖（抗体全体）抗体と異なり、一般に、軽鎖を欠く。米国特許第５，７５９，８０８号明細書；Ｓｔｉｊｌｅｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９：１２５６−１２６１；Ｄｕｍｏｕｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｎａｔｕｒｅ  ４２４：７８３−７８８；およびＰｌｅｓｃｈｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  １４：４４０−４４８を参照されたい。
【００７６】
ラクダ科の動物の抗体および抗体断片の遺伝子操作ライブラリーは、例えばＡｂｌｙｎｘ（Ｇｈｅｎｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）から市販で入手可能である。非ヒト起源の他の抗体と同様に、ラクダ科の動物の抗体のアミノ酸配列は、より密接にヒト配列に類似している配列を得るために、組換えで改変することができる、すなわち、ナノボディは、「ヒト化し」、それによって、抗体の可能性のある免疫原性をさらに低下させることができる。
【００７７】
いくつかの実施形態において、本開示はまた、マウスモノクローナル抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、および３ｄ１６の突然変異体である抗体もしくはその抗原結合性断片または上記およびその中に記載されるそれらの変異体抗体もしくはその抗原結合性断片を提供する。好ましくは、そのような突然変異体抗体またはその抗原結合性断片は、親マウスｍＡｂのＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂ結合能力を維持する。そのような突然変異およびこれらの突然変異体を調製するための方法は、標準的な手法であり、当技術分野においてよく知られている。いくつかの実施形態において、そのような突然変異が、少なくとも１つの単一アミノ酸置換、欠失、挿入、または他の修飾を導入する。いくつかの実施形態において、本明細書において記載される抗体またはその抗原結合性断片（例えばマウスモノクローナル抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、または３ｄ１６）が、２０以下の（例えば１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１以下の）アミノ酸修飾（例えばアミノ酸置換、欠失、または追加）を含む。いくつかの実施形態において、本明細書において記載される抗体またはその抗原結合性断片が、そのＣＤＲ中にアミノ酸修飾を含有しない。いくつかの実施形態において、本明細書において記載される抗体またはその抗原結合性断片が、重鎖のＣＤＲ３中にアミノ酸修飾を含有しない。いくつかの実施形態において、本明細書において記載される抗体またはその抗原結合性断片が、そのＣＤＲ中に１つ以上の（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０）アミノ酸修飾を含有する。いくつかの実施形態において、本明細書において記載される抗体またはその抗原結合性断片が、重鎖のＣＤＲ３中に１つ以上の（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０）アミノ酸修飾を含有する。
【００７８】
本明細書において使用されるように、用語「抗体断片」、「抗原結合性断片」、「抗原結合断片」、または同様の用語は、抗原（例えばＣ３タンパク質断片または補体構成成分Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、もしくはｉＣ３ｂ）に結合する能力を保持する、抗体の断片を指し、抗原結合断片は、任意選択で、もとの抗体の一部分ではないさらなる組成物（例えば異なるフレームワーク領域または突然変異）およびもとの抗体由来の断片（複数可）を含んでいてもよい。例として、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、またはＦ（ａｂ’）２断片を含むが、これらに限定されない。ｓｃＦｖ断片は、ｓｃＦｖが由来する抗体の重鎖および軽鎖可変領域の両方を含む単一のポリペプチド鎖である。そのうえ、補体構成成分Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂタンパク質に結合する二特異性抗体（これらのそれぞれの開示がそれらの全体が参照によって本明細書において組み込まれるＰｏｌｊａｋ  （１９９４）  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２（１２）：１１２１−１１２３；Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３（１−２）：１７７−１８９）、ミニボディ、トリアボディ（Ｓｃｈｏｏｎｏｏｇｈｅ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ９：７０）、およびドメイン抗体（「重鎖免疫グロブリン」またはラクダ科の動物としても知られている；Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２１（１１）：４８４−４９０）（これらのそれぞれの開示は、それらの全体が参照によって本明細書において組み込まれる）は、組成物の中に組み込み、本明細書において記載される方法において使用することができる。いくつかの実施形態において、本明細書において記載される抗原結合断片のいずれも、抗体に関係のある断片に言及する場合、そのような断片が実際に抗体に由来したかどうかまたは同じエピトープまたは重複するエピトープまたは抗体のエピトープ中に含有されるエピトープに結合する抗原結合断片であるかどうかにかかわらず、「その抗原結合断片」または等価物の用語の下に含まれてもよい。例えば、３ｄ８ａマウスモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、本明細書において記載される抗原結合断片のいずれをも、例えば、そのようなラクダ科の動物の抗体が全体的に３ｄ８ａマウスモノクローナル抗体の断片ではなくても、含んでいてもよい。その抗原結合断片は、もとの抗体と同じまたは重複する抗原に結合する抗原結合性断片を含んでいてもよく、抗原結合断片は、もとの抗体の断片である部分（例えば１つ以上のＣＤＲ、１つ以上の可変領域など）を含む。
【００７９】
いくつかの実施形態において、本明細書において記載される抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体が、親抗体と比較して、改変された安定性または半減期をもたらす、改変されたまたは突然変異した配列を含む。これは、例えば、インビトロもしくはインビボにおけるより高度な親和性もしくはより長いクリアランス時間についての増加した安定性もしくは半減期またはより低い親和性もしくはより迅速な除去についての減少した安定性もしくは半減期を含む。そのうえ、本明細書において記載される、改変された抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体は、例えば、改変されたグリコシル化パターン（例えば、改変されていない定常領域と比べた、１つ以上の糖構成成分の追加、１つ以上の糖構成成分の損失、または１つ以上の糖構成成分の組成の変化）を含む、改変された翻訳後修飾をもたらす、１つ以上の（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０）アミノ酸置換、欠失、または挿入を含有してもよい（例えば１つ以上のＣＤＲ、１つ以上のフレームワーク領域、および／または定常領域において）。
【００８０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体は、その対応する改変されていない定常領域に対してエフェクター機能が低下した（例えば、又は全くない）改変重鎖定常領域を含む。すなわち、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、定常領域の対応する改変されていない（天然）形態のエフェクター機能の約０〜５０％（例えば、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１％未満）を示す改変定常領域を含む。抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体の定常領域に関与するエフェクター機能は、定常またはＦｃ領域の特性を改変することで調節されてもよい。改変されたエフェクター機能は、例えば以下の活性のうちの１つ以上における調節を含む：抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス、１つ以上のＦｃ受容体との結合、および炎症誘発性反応。調節とは、改変されていない形態の定常領域の活性に比べて改変された定常領域を含有する対象抗体によって示されるエフェクター機能活性の増加、低下、又は排除を指す。特定の実施形態では、調節とは、活性が消滅するか完全に不在となる状況を含む。
【００８１】
改変されたＦｃＲ結合親和性および／またはＡＤＣＣ活性および／または改変されたＣＤＣ活性を有する改変定常領域は、定常領域の改変されていない形態に比べて増強または減少したＦｃＲ結合活性および／またはＡＤＣＣ活性および／またはＣＤＣ活性を有するポリペプチドである。ＦｃＲに対して結合の増加を示す改変定常領域は、改変されていないポリペプチドに比べてより大きい親和性で少なくとも１つのＦｃＲと結合する。ＦｃＲとの結合の低下を示す改変定常領域は、定常領域の改変されていない形態に比べてより低い親和性で少なくとも１つのＦｃＲと結合する。ＦｃＲとの低下した結合を示すこのような変異体は、ＦｃＲとの天然配列免疫グロブリンの定常またはＦｃ領域の結合のレベルと比べて、ＦｃＲとの認識可能な結合をほとんどまたは全く有さない、例えば、０〜５０％（例えば、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％未満）のＦｃＲとのとの結合である場合がある。同様に、調節されたＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を示す改変定常領域は、改変されていない定常領域に比べて、増加したまたは低下したＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を示してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、改変定常領域を有する抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体は、定常領域の改変されていない形態のＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性の約０〜５０％（例えば、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％未満）を示すことができる。本明細書に記載される、低下したＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを示す改変定常領域を含む抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体は、本明細書に例示するように、低下したＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を示すか、全く示さない場合がある。
【００８２】
いくつかの実施形態では、改変定常領域は、天然配列定常領域または改変されていない定常領域に比べて、少なくとも１つのアミノ酸置換、挿入、および／または欠失、例えば、天然配列定常領域または親ポリペプチドの定常領域において、約１〜約１００のアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を有する。いくつかの実施形態では、本明細書における改変定常領域は、改変されていない定常領域と少なくとも約７０％の相同性（類似性）または同一性を有し、いくつかの場合では少なくとも約７５％および他の場合では少なくとも約８０％の相同性または同一性を有し、他の実施形態では少なくとも約８５％、９０％、または９５％の相同性もしくは同一性を有する。改変定常領域はまた、１つ以上のアミノ酸欠失または挿入を含有していてもよい。さらに、改変定常領域は、結果として改変翻訳後修飾となる、例えば、改変グリコシル化パターン（例えば、１つ以上の糖成分の追加、１つ以上の糖成分の欠損、または改変されていない定常領域に対する１つ以上の糖成分の組成の変更）を含む１つ以上のアミノ酸置換、欠失、挿入を含んでいてもよい。
【００８３】
エフェクター機能が改変されているかまたはそれを含まない抗体は、抗体を変異体定常、Ｆｃ、もしくは重鎖領域を有する抗体を操作または産生することによって生成されてもよく、組換えＤＮＡ技術ならびに／または細胞培養および発現条件を用いて、改変された機能および／または活性を有する抗体を産生してもよい。例えば、組換えＤＮＡ技術を用いて、エフェクター機能を含む、抗体機能に影響を及ぼす領域（例えば、Ｆｃまたは定常領域など）における１つ以上のアミノ酸置換、欠失、挿入を操作してもよい。あるいは、例えばグリコシル化パターンなどの、翻訳後修飾における変更を、抗体が産生される細胞培養および発現条件を操作することで達成してもよい。１つ以上の置換、添加、または欠失を抗体のＦｃ領域に導入する好適な方法は当該技術分野において周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，”Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）、上記、Ｂｏｒｒｅｂａｅｋ（１９９２）、上記、Ｊｏｈｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）、上記、国際公開公報第０６／５３３０１号、および米国特許第７，７０４，４９７号に記載の標準的なＤＮＡ突然変異法などが挙げられる。
【００８４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体は、低下したエフェクター機能を示すか、エフェクター機能を示さない。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体はハイブリッド定常領域、またはその一部、例えばＧ２／Ｇ４ハイブリッド定常領域を含む（例えば、Ｂｕｒｔｏｎ．ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎ  ５１：１−１８、Ｃａｎｆｉｅｌｄ．ｅｔ  ａｌ（１９９１）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７３：１４８３−１４９１、およびＭｕｅｌｌｅｒ．ｅｔ  ａｌ（１９９７）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３４（６）：４４１−４５２を参照）。上記を参照のこと。
【００８５】
上に記載するようにＧ２／Ｇ４構成物を用いるのに加えて、本明細書に記載される、低下したエフェクター機能を有する抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体は、抗体のある領域のアミノ酸配列に他のタイプの変更を導入することで産生してもよい。このようなアミノ酸配列は、例えば、国際公開公報第９４／２８０２７号および国際公開公報第９８／４７５３１号、ならびにＸｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００：１６−２６に記載のＡｌａ−Ａｌａ突然変異を含むが、これらに限られない。したがって、いくつかの実施形態では、Ａｌａ−Ａｌａ突然変異を含む、定常領域内での１つ以上の突然変異を有する抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体は、低エフェクター機能を有するかエフェクター機能を有さない。これらの実施形態によれば、抗体の定常領域は、２３４位にアラニンへの置換を、または２３５位にアラニンの突然変異を含み得る。さらに、改変定常領域は、二重突然変異である、２３４位でアラニンの突然変異と２３５位でアラニンの第２の突然変異を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体はＩｇＧ４フレームワークを有し、Ａｌａ−Ａｌａ突然変異は、２３４位でのフェニルアラニンからアラニンへの突然変異および／または２３５位でのロイシンからアラニンへの突然変異を説明付ける。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体はＩｇＧ１フレームワークを有し、Ａｌａ−Ａｌａ突然変異は２３４位でのロイシンからアラニンへの突然変異および／または２３５位でのロイシンからアラニンへの変異を説明付ける。抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体は、ＣＨ２ドメインにおける点突然変異Ｋ３２２Ａを含む他の突然変異を代替的にもしくは付加的に保有していてもよい（Ｈｅｚａｒｅｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７５：１２１６１−１２１６８）。そのような突然変異を定常領域内に有する抗体は、遮断または非遮断抗体であってもよい。
【００８６】
重鎖定常領域に導入されたときに結果としてエフェクター機能が低下する追加での置換は、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ．ｅｔ  ａｌ（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（９）：６５９１−６６０４に記載されている。特に、その全体が本明細書に参照によって引用されるＳｈｉｅｌｄｓらの表１（「ヒトＩｇＧ１変異体のヒトＦｃＲｎおよびＦｃγＲへの結合」）の開示を参照のこと。ライブラリーの各抗体が、重鎖定常領域における１つ以上の置換によって異なる抗ＩｇＥ抗体のライブラリーをスクリーニングすることによって、Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、およびＦｃγＲＩＩＩＡを含む）のパネルとの結合について、著者らは特定のＦｃ−Ｆｃ受容体相互作用を調節する置換をいくつか同定した。例えば、ＣＨ２ドメインがＤ２６５Ａ置換（Ｋａｂａｔら（上記）に準ずる重鎖アミノ酸番号付け）を含む変異体ＩｇＧ２ａ重鎖定常領域は、変異体定常領域とＩｇＧ  Ｆｃ受容体であるＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃγＲＩ、およびＦｃγＲＩＶとの相互作用が完全に欠如する結果を得た。Ｓｈｉｅｌｄｓ．ｅｔ  ａｌ（２００１）、６５９５ページ、表１。また、Ｂａｕｄｉｎｏ．ｅｔ  ａｌ（２００８）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８１：６６６４−６６６９（上記）も参照のこと。
【００８７】
ヒンジ領域内での変更もまた、エフェクター機能に影響を及ぼす。例えば、ヒンジ領域の欠失はＦｃ受容体に対する親和性を低下させる場合があり、補体活性化を低下させ得る（Ｋｌｅｉｎ．ｅｔ  ａｌ（１９８１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：５２４−５２８）。したがって、本開示はまた、ヒンジ領域における改変を有する抗体に関する。
【００８８】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体は、増強または低下された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を示す改変定常領域を含み得る。調節されたＣＤＣ活性は、抗体のＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失を導入することで達成することができる。例えば、米国特許第６，１９４，５５１号を参照のこと。あるいは、またはさらに、システイン残基をＦｃ領域に導入してもよく、そのことによってこの領域で鎖間ジスルフィド結合形成が可能となる。これによって形成されるホモダイマー抗体は、改善または低下された内在化性能および／または上昇または低下した補体媒介細胞殺滅を有していてもよい。例えば、Ｃａｒｏｎ．ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７６：１１９１−１１９５およびＳｈｏｐｅｓ（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８：２９１８−２９２２、国際公開公報第９９／５１６４２号および同第９４／２９３５１号、Ｄｕｎｃａｎ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０、ならびに米国特許第５，６４８，２６０号および同第５，６２４，８２１号を参照のこと。
【００８９】
抗体のエフェクター機能を調節する別の潜在的な手段としてグリコシル化が挙げられ、これは、例えばＲａｊｕ（２００３）ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  １（４）：４４−５３に要約されている。ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎによれば、ヒトＩｇＧオリゴ糖類の微小不均一性は、ＣＤＣおよびＡＤＣＣなどの生体機能に影響を与えることができ、様々なＦｃ受容体に結合し、Ｃｌｑタンパク質に結合する。（１９９７）ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２。抗体のグリコシル化パターンは、産生細胞および細胞培養条件（Ｒａｊｕ、上記）によって異なり得る。そのような違いはエフェクター機能と薬動態学の両方における変化につながり得る。例えば、Ｉｓｒａｅｌ．ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８９（４）：５７３−５７８、Ｎｅｗｋｉｒｋ．ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０６（２）：２５９−２６４を参照のこと。エフェクター機能における違いは、エフェクター細胞上のＦｃγ受容体（ＦｃγＲｓ）に結合するＩｇＧの能力に関連していてもよい。Ｓｈｉｅｌｄｓらは、ＦｃγＲとの改善された結合を有するアミノ酸配列の改変を有するＩｇＧが、ヒトエフェクター細胞を用いて最大１００％増強されたＡＤＣＣを示すことができることを示している。（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（９）：６５９１−６６０４。これらの改変は、結合界面で見出されないアミノ酸における変更を含むが、糖成分の性質ならびに構造パターンの双方がまた、観察される違いに寄与している可能性がある。さらに、ＩｇＧのオリゴ糖成分におけるフコースの有無によって、結合およびＡＤＣＣを増強させることができる。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ．ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（３０）：２６７３３−２６７４０を参照のこと。Ａｓｎ２９７に連結されるフコシル化される炭水化物を欠失するＩｇＧは、ＦｃγＲＩ受容体との正常な受容体結合を示した。対照的に、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体との結合は５０倍改善され、特により低い抗体濃度にて増強されたＡＤＣＣを伴った。
【００９０】
Ｓｈｉｎｋａｗａらは、ラットハイブリドーマ内で産生されたヒトＩＬ−５受容体に対する抗体が、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）内で産生された抗体と比べて５０％超より高いＡＤＣＣを示すことを示した（Ｓｈｉｎｋａｗａ．ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８（５）：３４６６−７３）。単糖組成およびオリゴ糖プロファイリングは、ラットハイブリドーマ産生ＩｇＧがＣＨＯ産生タンパク質よりも低いフコース含有量を有していることを示した。この著者らは、ＩｇＧ１のフコシル化不足がＡＤＣＣ活性の増強において決定的な役割を有すると結論付けた。
【００９１】
Ｕｍａｎａらは異なる手法をとり、ｃｈＣＥ７、キメラのＩｇＧ１抗神経芽細胞種抗体のグリコシル化パターンを変更した。（１９９９）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７（２）：１７６−１８０）。テトラサイクリンを用いて、彼らはＡＤＣＣ活性に関与するとされていたオリゴ糖を二分する糖転移酵素（ＧｎＴＩＩＩ）の活性を調節した。親抗体のＡＤＣＣ活性はかろうじてバックグラウンドレベルよりも上だった。様々なテトラサイクリンレベルで産生されたｃｈＣＥ７のＡＤＣＣ活性の測定は、最大ｃｈＣＥ７生体外ＡＤＣＣ活性について最適範囲のＧｎＴＩＩＩ発現を示した。この活性は、定常領域に関連づけられる、二分された複合型オリゴ糖のレベルと相関した。新たに最適化された変異体は、相当なＡＤＣＣ活性を示した。同様に、ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎはグリコシル化に不足するＣＨＯ細胞系において抗体を産生し、この細胞系にて産生される抗体は補体媒介細胞溶解ができないことを示した。（１９９４）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８０：１０８７−１０９６。よって、エフェクター機能に影響を与える周知の改変としては、グリコシル化パターンにおける修飾またはグリコシル化残基数の変更が挙げられ、本開示はグリコシル化がＡＤＣＣおよびＣＤＣを含む改変エフェクター機能を増強または低下させるために改変される抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体に関する。改変グリコシル化は、グリコシル化残基数の低下または増加に加えて、グリコシル化残基のパターンまたは位置の変更を含む。
【００９２】
抗体のエフェクター機能を改変する他の手法もまだ存在する。例えば、抗体産生細胞は高変異誘発的であり得て、その結果、抗体分子全体にわたってランダムに改変されたポリペプチド残基を有する抗体を生成する。例えば、国際公開公報第０５／０１１７３５号を参照のこと。高変異誘発性宿主細胞は、ＤＮＡミスマッチ修復に不足する細胞を含む。このように産生される抗体は、より抗原性が低いおよび／または有利な薬物動態を有していてもよい。さらに、そのような抗体は、増強または低下したエフェクター機能などの特性について選択されてもよい。本明細書に記載される抗体または抗原結合フラグメントを調製するのに便利な分子生物学的方法の付加的な内容は以下に記載するとおりである。
【００９３】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、軽鎖ＣＤＲ１はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号１４またはアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号１５またはアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号１６またはアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号２６であり、あるいは、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、重鎖ＣＤＲ１はアミノ酸突然変異（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号１７またはアミノ酸突然変異（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号２７またはアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号３５であり、重鎖ＣＤＲ２はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号１８またはアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号２８またはアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号３６であり、重鎖ＣＤＲ３はアミノ酸突然変異（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号１９またはアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号２９またはアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号３７である。いくつかの実施形態では、突然変異は非保存的および／または保存的なアミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、突然変異は保存的なアミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、突然変異は非保存的なアミノ酸置換である。
【００９４】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４または配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５または配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６または配列番号２６であり、あるいは、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７または配列番号２７または配列番号３５であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８または配列番号２８または配列番号３６であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９または配列番号２９または配列番号３７である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４または配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５または配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６または配列番号２６であり、あるいは、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７または配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８または配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９または配列番号２９である。
【００９５】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４または配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５または配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６または配列番号２６であり、あるいは、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７または配列番号２７または配列番号３５であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８または配列番号２８または配列番号３６であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９または配列番号２９または配列番号３７である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４または配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５または配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６または配列番号２６であり、ならびに、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、３を含み、重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７または配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８または配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９または配列番号２９である。
【００９６】
抗体またはその抗原結合フラグメントのいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば３、２、１つ、または０）含む配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号１５であり、軽鎖ＣＤＲ３はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号１６であり、重鎖ＣＤＲ１はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号１７であり、重鎖ＣＤＲ２はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号１８であり、重鎖ＣＤＲ３はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号１９である。抗体またはその抗原結合フラグメントのいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６であり、重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９である。
【００９７】
抗体またはその抗原結合フラグメントのいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号２６であり、重鎖ＣＤＲ１はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３はアミノ酸突然変異を３つ以下（例えば、３、２、１つ、または０）含む配列番号２９である。抗体またはその抗原結合フラグメントのいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号２６であり、重鎖ＣＤＲ１は配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号２９である。
【００９８】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２または配列番号２２と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列、あるいは、配列番号１３または配列番号２３または配列番号３４に少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２または配列番号２２と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列、ならびに、配列番号１３または配列番号２３または配列番号３４と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２もしくは配列番号２２と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列、あるいは、配列番号１３もしくは配列番号２３と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２もしくは配列番号２２と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列、ならびに、配列番号１３または配列番号２３と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【００９９】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３４と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列、および、配列番号１３と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列、および、配列番号２３に少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、多クローン性抗体単クローン性抗体もしくはその抗原結合フラグメント、キメラ化またはキメラの抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体もしくはその抗原結合フラグメント、非免疫化ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメント、完全ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体もしくは抗体フラグメント、一価抗体もしくは抗体フラグメント、単鎖抗体、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、Ｆｄフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）もしくはその抗原結合フラグメント、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）もしくはその抗原結合フラグメント、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）もしくはその抗原結合フラグメント、ドメイン抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ラクダ類抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ヒトコブラクダ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ＣＤＲグラフト抗体もしくはその抗原結合フラグメント、合成抗体もしくはその抗原結合フラグメント、半合成抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ファージ提示型抗体もしくはその抗原結合フラグメント、および反復性バックボーンアレイ（例えば反復性抗原表示）によって同定される抗体、もしくはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される。
【０１００】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０もしくは配列番号３０と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する配列を少なくとも２０ヌクレオチドの連続的な塩基配列にわたって（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド、または配列番号２０もしくは配列番号３０のそれぞれ全てにわたって）含む塩基配列から発現される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する配列を少なくとも２０ヌクレオチドの連続的な塩基配列にわたって（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチドまたは配列番号２０全てにわたって）含む塩基配列から発現される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３０と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する配列を少なくとも２０ヌクレオチドの連続的な塩基配列にわたって（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチドまたは配列番号３０全てにわたって）含む塩基配列から発現される軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１もしくは配列番号３１もしくは配列番号３３と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する配列を少なくとも２０ヌクレオチドの連続的な塩基配列にわたって（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチドまたは配列番号２１もしくは配列番号３１もしくは配列番号３３それぞれ全てにわたって）含む塩基配列から発現される重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する配列を少なくとも２０ヌクレオチドの連続的な塩基配列にわたって（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチドまたは配列番号２１全てにわたって）含む塩基配列から発現される重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３１と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する配列を少なくとも２０ヌクレオチドの連続的な塩基配列にわたって（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチドまたは配列番号３１全てにわたって）含む塩基配列から発現される重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３３と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する配列を少なくとも２０ヌクレオチドの連続的な塩基配列にわたって（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチドまたは配列番号３３全てにわたって）含む塩基配列から発現される重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、中程度に厳しいハイブリッド形成条件下で配列番号２０または配列番号３０からなる核酸とハイブリッド形成する塩基配列から発現される、軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、塩基配列は、厳しいハイブリッド形成条件下で、配列番号２０または配列番号３０からなる核酸とハイブリッド形成する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、中程度に厳しいハイブリッド形成条件下で配列番号２０からなる核酸とハイブリッド形成する塩基配列から発現される、軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、塩基配列は、厳しいハイブリッド形成条件下で、配列番号２０からなる核酸とハイブリッド形成する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、中程度に厳しいハイブリッド形成条件下で配列番号３０からなる核酸とハイブリッド形成する塩基配列から発現される、軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、塩基配列は、厳しいハイブリッド形成条件下で、配列番号３０からなる核酸とハイブリッド形成する。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、中程度に厳しいハイブリッド形成条件下で配列番号２１または配列番号３１または配列番号３３からなる核酸とハイブリッド形成する塩基配列から発現される、重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、塩基配列は、厳しいハイブリッド形成条件下で、配列番号２１または配列番号３１または配列番号３３からなる核酸とハイブリッド形成する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、中程度に厳しいハイブリッド形成条件下で配列番号２１からなる核酸とハイブリッド形成する塩基配列から発現される、重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、塩基配列は、厳しいハイブリッド形成条件下で、配列番号２１からなる核酸とハイブリッド形成する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、中程度に厳しいハイブリッド形成条件下で配列番号３１からなる核酸とハイブリッド形成する塩基配列から発現される、重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、塩基配列は、厳しいハイブリッド形成条件下で、配列番号３１からなる核酸とハイブリッド形成する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、中程度に厳しいハイブリッド形成条件下で配列番号３３からなる核酸とハイブリッド形成する塩基配列から発現される、重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、塩基配列は、厳しいハイブリッド形成条件下で、配列番号３３からなる核酸をハイブリダイズする。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３０、または配列番号３１の塩基配列によってコード化される１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、または６つ）のＣＤＲを含み、１つ以上のＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６つ）をコード化する塩基配列においてヌクレオチド突然変異体を６つ以下（６、５、４、３、２、１つ、または０）有する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３０、または配列番号３１の塩基配列によってコード化される１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、または６つ）のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３０、または配列番号３１のＣＤＲ塩基配列によってコード化されるＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、または６つ）含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０または配列番号３０の塩基配列によってコード化される軽鎖可変領域ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）含み、１つ以上のＣＤＲ（例えば、１、２、または３つ）をコード化する塩基配列においてヌクレオチド突然変異体を６つ以下（６、５、４、３、２、１つ、または０）有する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０または配列番号３０の塩基配列によってコード化される軽鎖可変領域ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０または配列番号３０のＣＤＲ塩基配列によってコード化される軽鎖可変領域ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）含む。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１または配列番号３１の塩基配列によってコード化される重鎖可変領域ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）含み、１つ以上のＣＤＲ（例えば、１、２、または３つ）をコード化する塩基配列においてヌクレオチド突然変異体を６つ以下（６、５、４、３、２、１つ、または０）有する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１または配列番号３１の塩基配列によってコード化される重鎖可変領域ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１または配列番号３１のＣＤＲ塩基配列によってコード化される重鎖可変領域ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３３の塩基配列によってコード化される重鎖可変領域ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）含み、１つ以上のＣＤＲ（例えば、１、２、または３つ）をコード化する塩基配列においてヌクレオチド突然変異体を６つ以下（６、５、４、３、２、１つ、または０）有する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３３の塩基配列によってコード化される重鎖可変領域ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３３のＣＤＲ塩基配列によってコード化される重鎖可変領域ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）含む。本明細書に用いられるように、ＣＤＲ塩基配列は、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３３に含まれる塩基配列を示し、配列番号１４から配列番号１９、配列番号２４から配列番号２９、および配列番号３５から配列番号３７から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲをコード化する。ＣＤＲ塩基配列（ＣＤＲをコード化する塩基配列）は、配列番号２０、２１、３０、３１、および３３のそれぞれにて、連続順（例えば、ＣＤＲ１、次にＣＤＲ２、次にＣＤＲ３）に下線が引かれている。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載され、配列番号１２〜１９、２２〜２９、および３４〜３７から選択されるアミノ酸配列の全てまたはその一部、もしくは配列番号２０、２１、３０、３１、および３３（本明細書および上に記載される任意の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む）の配列の全てまたは一部を含む塩基配列から発現される抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、本明細書でこれらの用語が使われるように、または本発明の抗体もしくは抗原結合フラグメントを説明するために本明細書に用いられる均等用語のように（例えば、単離された組成物として、結合体内にて含まれる、抗体結合体にて含まれる）、抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｃ３ｄｇ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｃ３ｄ／Ｃ３ｄｇ抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ｉＣ３ｂ抗体またはその抗原結合フラグメント、本明細書に記載される抗体または抗原結合フラグメント、本明細書に記載される抗体、またはその抗原結合フラグメント、本明細書に記載されるフラグメント、本開示によって提供される抗体またはその抗原結合フラグメント、本開示が含む抗体またはその抗原結合フラグメント、抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体、本開示によって提供されるその抗原結合フラグメント、抗体もしくはそのフラグメント、Ｃ３ｄｇおよびＣ３ｄおよびｉＣ３ｂからなる群から選択される結合相手に結合する抗体、または、好適な標的部分である対応する結合相手に結合する能力を保持するそのような抗体のフラグメント、対応する結合相手と結合する能力を保持して好適な標的部分である本発明の抗体またはそのフラグメント、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０１０７】
配列番号１２〜２１は、適宜、マウス抗体３ｄ８ｂのアミノ酸または塩基配列である。配列番号２２〜３１は、適宜、マウス抗体３ｄ２９のアミノ酸または塩基配列である。配列番号３３〜３７は、適宜、マウス抗体３ｄ１６のアミノ酸または塩基配列である。配列番号３２は、３ｄ  ｓｃＦｖ  Ｃｒｒｙ融合タンパク質のアミノ酸配列である（例えば、構築物）。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメント、および薬学的に許容可能な賦形剤を含む。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、本開示に記載の、単離された抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合フラグメント、単離された抗Ｃ３ｄｇ抗体またはその抗原結合フラグメント、単離された抗ｉＣ３ｂ抗体またはその抗原結合フラグメントは、多クローン性抗体単クローン性抗体もしくはその抗原結合フラグメント、キメラ化またはキメラの抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体もしくはその抗原結合フラグメント、非免疫化ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメント、完全ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメント、二重特異性抗体もしくは抗体フラグメント、一価抗体もしくは抗体フラグメント、単鎖抗体、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、Ｆｄフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ダイアボディもしくはその抗原結合フラグメント、ミニボディもしくはその抗原結合フラグメント、トリアボディもしくはその抗原結合フラグメント、ドメイン抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ラクダ類抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ヒトコブラクダ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ＣＤＲグラフト抗体もしくはその抗原結合フラグメント、合成抗体もしくはその抗原結合フラグメント、半合成抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ファージ提示型抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または反復性バックボーンアレイ（例えば、反復性抗原表示によって同定される抗体、もしくはその抗原結合フラグメントを含むが、それらに限られない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は単クローン性抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ハイブリドーマ細胞系３ｄ−８ｂ／２（ＡＴＣＣ寄託ＰＴＡ−１０９９９）によって産生されるｍＡｂ  ３ｄ８ｂである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ハイブリドーマ細胞系３ｄ−９ａ／２５（ＡＴＣＣ寄託ＰＴＡ−１０９９８）によって産生されるｍＡｂ  ３ｄ９ａである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体はハイブリドーマ細胞系３ｄ−２９／５／２（ＡＴＣＣ寄託ＰＴＡ−１１０００）によって産生されるｍＡｂ  ３ｄ２９である。いくつかの実施形態では、本開示に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ｍＡｂ  ３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、または本開示に記載される他のｍＡｂに由来する、操作もしくは組換えられた抗体もしくはその抗原結合フラグメントを含むがこれらに限られず、これらは周知の標準的な方法で容易にスクリーニングまたは産生することができ、多くがこの開示で取り上げられている。一般的に、この開示におけるこれらのｍＡｂに由来する抗体もしくはフラグメントは全て、限定することなく、それらの、Ｃ３ｄ／Ｃ３ｄｇタンパク質および／またはｉＣ３ｂたんぱく質に対する結合親和性、結合活性、もしくは異種間活性、Ｃ３または他のＣ３フラグメントにわたる選択性、もしくはそれらの発現パターンならびに溶解性、安定性、半減期、他のタンパク質／対象との交差反応性、またはこれらの抗体もしくはフラグメントの、エフェクター活性などの他の本質的な活性または特性を修飾するために、設計、スクリーニング、産、および／またはテスト���れる。
【０１１０】
本明細書では、３ｄ−８ｂ／２（ＡＴＣＣ寄託ＰＴＡ−１０９９９）、３ｄ−９ａ／２５（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１０９９８）、３ｄ−２９／５／２（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０００）、３ｄ−１１／１４（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０１１）、３ｄ−３１／Ａ６／９（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０２７）、３ｄ−３／２８／４（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０２５）、３ｄ−１５Ａ９（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０１２）、３ｄ−１０／１４／１（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０１０）、および３ｄ−１６／３／３（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０２６）からなる群から選択される、ハイブリドーマ細胞を記載する。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、本開示は上に記載するハイブリドーマ細胞によって産生される単離抗体を提供する。さらに別の態様では、本開示は上に列挙するハイブリドーマによって産生される任意の抗体の６つのＣＤＲのセットを含む、ヒト化、霊長化、またはキメラ化抗体を特色とする。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、本開示は、この開示で記載する抗体またはその抗原結合フラグメントをコード化する単離核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、配列番号２０または配列番号３０と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する塩基配列を、少なくとも２０ヌクレオチドの連続する塩基配列にわたって（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド、もしくは配列番号２０または配列番号３０それぞれの全てにわたって）含む。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、配列番号２１または配列番号３１または配列番号３３と少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％）同一性を有する塩基配列を、少なくとも２０ヌクレオチドの連続する塩基配列にわたって（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド、もしくは配列番号２１または配列番号３１または配列番号３３それぞれの全てにわたって）含む。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、中程度に厳しいハイブリッド形成条件下で配列番号２０または配列番号３０からなる核酸とハイブリッド形成する、塩基配列を含む。いくつかの実施形態では、塩基配列は、厳しいハイブリッド形成条件下で、配列番号２０または配列番号３０からなる核酸とハイブリッド形成する。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、中程度に厳しいハイブリッド形成条件下で配列番号２１または配列番号３１または配列番号３３からなる核酸とハイブリッド形成する、塩基配列を含む。いくつかの実施形態では、塩基配列は、厳しいハイブリッド形成条件下で、配列番号２１または配列番号３１または配列番号３３からなる核酸とハイブリッド形成する。いくつかの実施形態では、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、または配列番号２９と同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲをコード化する核酸を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、または配列番号２９と比較したときにアミノ酸突然変異体を３つ以下（３、２、１つ、または０）で有するアミノ酸配列を有するＣＤＲをコード化する核酸を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸突然変異体は保存的および非保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸突然変異は保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸突然変異は非保存的である。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６と同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲをコード化する核酸を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６と比較したときにアミノ酸突然変異を３つ以下（３、２、１つ、または０）で有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲをコード化する核酸を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸突然変異は保存的および非保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸突然変異は保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸突然変異は非保存的である。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２７、配列番号２８、または配列番号２９と同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲをコード化する核酸を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２７、配列番号２８、または配列番号２９と比較したときに、アミノ酸突然変異を３つ以下（３、２、１つ、または０）で有するアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲをコード化する核酸を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸突然変異は保存的および非保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸突然変異は保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸突然変異は非保存的である。
【０１１５】
別の実施形態では、本開示は、全て本明細書に記載されるように、抗体、またはその抗原結合フラグメント、またはＣＤＲの塩基配列を含有するベクターを提供する。このようなベクターとしては、プラスミドベクター、コスミドベクター、ウイルスベクター、シャトルベクター、または原核細胞もしくは真核細胞の発現について周知の任意のベクターが挙げられるが、これらに限られない。
【０１１６】
別の実施形態では、本開示は、全て本明細書に記載されるように、抗体、またはその抗原結合フラグメント、またはＣＤＲをコード化する単離核酸の塩基配列を含有するベクターを含有する細胞を提供する。このような細胞は、例えば、原核細胞または真核細胞を含む。
【０１１７】
別の実施形態では、本開示は以下を特色とする：（ａ）本明細書に記載される抗体、抗原結合フラグメント、またはＣＤＲもしくは構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）の任意の１つをコード化する核酸、（ｂ）核酸を含むベクター（例えば、発現ベクター）、および（ｃ）ベクターまたは発現ベクターを含む細胞（例えば、細菌細胞、植物細胞、心筋細胞、昆虫細胞、または哺乳動物細胞）。
【０１１８】
さらに別の実施形態は、本開示は、本明細書に記載される抗体、抗体の抗原結合フラグメント、またはＣＤＲ、または構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体−結合体）を産生する方法を特色とする。本方法は、細胞によって抗体、フラグメント、または構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体−結合体）の発現を許容するのに好適な条件下で上述の細胞を培養することを含む。本方法は任意で、細胞、または細胞が培養される媒体から、抗体、フラグメント、または構築物を精製することを含むことができる。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、本開示は、この開示に記載される任意の単離抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、この開示に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントをコード化する核酸を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、この開示に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントをコード化する単離核酸の塩基配列を含有するベクターを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるそのようなベクターを含有する細胞を含む医薬組成物を提供する。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、本開示は、この開示に記載の任意の構築物を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、この開示に記載の結合体を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、この開示に記載の任意の抗体結合体を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、この開示に記載の任意の抗Ｃ３ｄ抗体結合体を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は薬学的に許容可能な賦形剤を含む。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、本開示は、この開示に記載の任意の単離抗体もしくはその抗原結合フラグメントと、治療的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。好適な賦形剤は周知であり、本明細書に記載される。
【０１２２】
本発明者らは、診断薬または検出可能な部分を、補体のＣ３ｄおよび／またはＣ３ｄｇおよび／またはｉＣ３ｂフラグメントに存在する特定のエピトープに標的化することが、診断薬を局所的に制限して、補体活性化の部位である組織または細胞にて最適な効果を出すことができる点で驚くほどに有効であることを見出した。よって、本発明者らは補体のＣ３ｄおよび／またはＣ３ｄｇおよび／またはｉＣ３ｂフラグメントに結合する抗体を単離し、診断薬および検出可能部分の標的化に用いた。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトＣ３ｄタンパク質におけるエピトープに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを特色とする。いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトＣ３ｄｇタンパク質におけるエピトープに結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントを特色とする。いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトｉＣ３ｂタンパク質におけるエピトープに結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントを特色とする。例えば、抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体は、ヒト補体成分Ｃ３ｄタンパク質の抗原性ペプチドフラグメント内もしくはそれと重なるエピトープ、またはヒト補体成分Ｃ３ｄｇタンパク質におけるエピトープ、またはヒト補体成分ｉＣ３ｂタンパク質におけるエピトープと結合することができる。いくつかの実施形態では、これらの抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体は、単クローン性抗体または抗原結合活性を保つ抗体フラグメントである。いくつかの実施形態では、これらの単クローン性抗体は、ハイブリドーマ細胞３ｄ−８ｂ／２（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１０９９９）、３ｄ−９ａ／２５（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１０９９８）、３ｄ−２９／５／２（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０００）、３ｄ−１１／１４（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０１１）、３ｄ−３１／Ａ６／９（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０２７）、３ｄ３／２８／４（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０２５）、３ｄ−１５Ａ９（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０１２）、３ｄ−１０／１４／１（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０１０）、および３ｄ−１６／３／３（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０２６）によって産生されるものを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、および３ｄ１６の任意の１つによって認識されるエピトープ内、またはそれと重なるエピトープに結合する、抗体、もしくはその抗原結合フラグメントを提供する。いくつかの実施形態では、３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、および３ｄ１６の任意の１つの抗体によって認識されるエピトープ内で、またはそれと重なってエピトープと結合するこれらの抗体もしくはそれらの抗原結合フラグメントは、Ｃ３ｄもしくはＣ３ｄｇもしくはｉＣ３ｂに結合することについて、３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、および３ｄ１６の抗体の少なくとも１つと競合しない。いくつかの実施形態では、３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、および３ｄ１６の抗体のいずれか１つによって認識されるエピトープ内でまたはそれと重なってエピトープと結合するこれらの抗体もしくはそれらの抗原結合フラグメントは、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂに結合することについて、３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、および３ｄ１６を含む抗体の少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、または９つ）と競合する。いくつかの実施形態では、３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、および３ｄ１６の抗体の任意の１つによって認識されるエピトープ内で、またはそれと重なってエピトープに結合するこれらの抗体もしくはそれらの抗原結合フラグメントは、３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、および３ｄ１６の抗体の少なくとも１つがＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂと結合するのを抑止する。いくつかの実施形態では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、および３ｄ１６の抗体の任意の１つに由来する（３ｄ  ｓｃＦｖ）。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは３ｄ８ｂ  ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは３ｄ２９ｓｃＦｖである。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、本開示に提供される抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ヒト補体成分Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇタンパク質またはｉＣ３ｂタンパク質内で、もしくはそれと重なってエピトープと結合する別の抗体もしくは結合相手の結合をクロスブロックすることができる。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体、もしくはそれらの抗原結合フラグメントは、ヒト補体成分Ｃ３ｄタンパク質またはＣ３ｄｇタンパク質またはｉＣ３ｂタンパク質のペプチドフラグメント内で、もしくはそれと重なってエピトープに結合する抗体の結合をクロスブロックすることができる。本明細書に用いられるように、用語「クロスブロック抗体」は、抗体、または抗原性結合活性を維持するその抗体フラグメントを示し、抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体、もしくはその抗原性結合活性を維持する抗体フラグメントの、補体成分Ｃ３ｄタンパク質またはＣ３ｄｇタンパク質またはｉＣ３ｂタンパク質のエピトープへの結合量を、クロスブロック抗体、もしくはその抗原性結合活性を維持するその抗体フラグメントの不在下で抗Ｃ３ｄ抗体または抗Ｃ３ｄｇ抗体または抗ｉＣ３ｂ抗体のエピトープとの結合量に比例して低下させる。第１の抗体、もしくはその抗体フラグメントが、第２の抗体、もしくはその抗体フラグメントのエピトープへの結合をクロスブロックするかを判断する好適な方法は、周知である。例えば、クロスブロック抗体は、３ｄ−９ａ／２５抗Ｃ３ｄ単クローン性抗体（ハイブリドーマ細胞系ＡＴＣＣ指定ＰＴＡ−１１０２５によって産生）とＣ３ｄとの結合を、テスト抗体の存在下と不在下とで比較することによって同定することができる。このような場合、テスト抗体の不在下での３ｄ−９ａ／２５抗体の結合と比較してテスト抗体の存在下での３ｄ−９ａ／２５抗体の結合が低下すると、テスト抗体がクロスブロック抗体であることが示される。
【０１２５】
別の実施形態では、本明細書は、標的化診断薬部分（例えば、構築物、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）の任意の有効量および本明細書に記載される方法で用いるための使用説明書を含む、診断組成物を含有する製品またはキットを提供する。よって、いくつかの実施形態では、製品は、Ｃ３ｄおよびＣ３ｄｇおよびｉＣ３ｂから選択される、検出可能部分に連結される結合相手に結合する単クローン性抗体を含む抗Ｃ３ｄ抗体結合体を有効量で含む診断組成物の使用説明書を含む。診断用組成物はさらに、本明細書に記載されるように個体への投与用に処方される１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでいてもよい。キットはさらに、注射器、吸入器、または全身投与もしくは局所投与に有用な他のデバイスなどの、投与用の手段を含んでいてもよい。
【０１２６】
さらに別の実施形態では、本開示は、ラベルを含む容器と、本明細書に記載の任意の抗体または抗原結合フラグメントまたは構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）を含む組成物とを含む製品を特色とし、ラベルは、組成物が、補体関連不調、病気、または状態を有する、有すると疑われる、または発症するリスクがあるヒトに投与されることを示す。製品は１つ以上の付加的な薬剤を含むことができる。
【０１２７】
別の態様では、開示は、（ｉ）本明細書に記載される任意の抗体またはその抗原結合フラグメントと、（ｉｉ）ヒトに抗体または抗原結合フラグメントを送出する手段もしくは（ｉｉ）本明細書に記載される任意の構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）と、（ｉｖ）ヒトに構築物を送出する手段とを含む診断用または観察用キットを特色とする。手段は、構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）のヒトへの皮内投与に好適であり得る。手段は、ヒトへの、構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）、または抗体もしくはその抗原結合フラグメントの眼内投与に好適であり得る。手段は、ヒトへの、構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）、または抗体もしくはその抗原結合フラグメントの関節内投与に好適であり得る。
【０１２８】
検出可能部分
ＭＲＩは、高解像度の組織画像を非侵襲的に取得するために用いることができる。常磁性剤またはＵＳＰＩＯナノ粒子もしくはその凝集体は、Ｔ２荷重磁気共鳴画像における信号減衰を強化し、そのようなナノ粒子が結合リガンドへ接合することで、細胞レベルにおける特定の分子の検出を可能とする。例えば、ナノ粒子検出剤を用いたＭＲＩは、細胞移動（Ｊ．Ｗ．Ｂｕｌｔｅ．ｅｔ  ａｌ，２００１，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９：１１４１−１１４７）、アポトーシス（Ｍ．Ｚｈａｏ．ｅｔ  ａｌ，２００１，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．７：１２４１−１２４４）を画像化することができ、がんの小さな病巣を検出することができる。例えば、Ｙ．Ｗ．Ｊｕｎ．ｅｔ  ａｌ，２００５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｒｎ．Ｓｏｃ  １２７：５７３２−５７３３、Ｙ．Ｍ．Ｈｕｈ．ｅｔ  ａｌ，２００５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｒｎ．Ｓｏｃ．１２７：１２３８７−１２３９１を参照のこと。造影ＭＲＩは、高分子または分子事象の動的非侵襲性画像化に好適であるが、対象の分子に特異的に結合するリガンドを有する必要がある。Ｊ．Ｗ．Ｂｕｌｔｅ．ｅｔ  ａｌ，２００４，ＮＭＲ  Ｂｉｏｍｅｄ．１７：４８４−４９９。蛍光色素およびフルオフォア（例えば、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、およびフルオレセイン誘導体）を用いて、例えば分光光度法、二光子蛍光、二光子レーザー顕微鏡、または蛍光顕微鏡検査法（例えば、組織生検の）によって高解像度の組織画像を非侵襲的に取得することができる。ＭＲＩは、例えば常磁性分子、常磁性ナノ粒子、超小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体、超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＳＰＩＯナノ粒子凝集体、単結晶酸化鉄ナノ粒子、単結晶酸化鉄、他のナノ粒子造影剤と合わせて用いることで、高解像度の組織画像を非侵襲的に取得するのに用いることができる。ＭＲＩは、例えばリポソーム、またはガドリニウムキレート（「Ｇｄキレート」）分子を含有する他の伝達媒体を含むガドリニウムを合わせて用いることで、高解像度の組織画像を非侵襲的に取得するのに用いることができる。例えば、放射性核種（例えば、炭素１１、窒素１３、酸素１５、フッ素１８、ルビジウム８２）、フルオロデオキシグロコース（例えば、フッ素１８標識）、任意のガンマ線放出放射性核種、ポジトロン放出放射性核種、放射標識されたグルコース、放射標識された水放射標識されたアンモニアを合わせて用いることで、ポジトロン放射形断層撮影法（ＰＥＴ）、ＰＥＴ／コンピューター断層撮影法（ＣＴ）、単一光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、およびＳＰＥＣＴ／ＣＴを用いて高解像度の組織画像を非侵襲的に取得することができる。例えば生体コロイドまたは微小気泡（例えば、アルブミン、ガラクトース、脂質、および／またはポリマーを含む微小気泡シェル、大気、重質ガス、パーフルオロカーボン、窒素、オクタフルオロプロパン、パーフレキサン脂質ミクロスフィア、パーフルトレンなどの微小気泡ガス）を合わせて用いることで、高解像度の組織画像を非侵襲的に取得するために超音波（超音波検査）およびコントラスト増強超音波（コントラスト増強超音波検査）を用いることができる。���えば、ヨウ素化造影剤（例えば、イオへキソール、イオジキサノール、イオベルソール、イオパミドール、イオキシラン、イオプロミド、ジアトリゾ酸、メトリゾ酸、イオキサグル酸）、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、または金ナノ粒子凝集体を合わせて用いることで、Ｘ線撮像（Ｘ線検査）またはＣＴを用いて高解像度の組織画像を非侵襲的に取得することができる。これらの検出方法および器具ならびに対応する方法によって測定または検出することができる検出可能部分は、非限定的な例である。
【０１２９】
本明細書に用いられるように、用語「超小超常磁性酸化鉄ナノ粒子」または「ＵＳＰＩＯナノ粒子」は、直径が１〜５０ｎｍの範囲内、より典型的には直径が５〜４０ｎｍの間の超常磁性酸化鉄粒子を示す（合成後に塗布される被膜を除外する）。ＵＳＰＩＯナノ粒子は一般に不対スピンの結晶含有領域を有するマグヘマイト（Ｆｅ２Ｏ３）または磁鉄鉱（Ｆｅ３Ｏ４）からなる。これらの磁気ドメインは磁場不在下であると異常をきたすが、磁場が印加されると（すなわち、ＭＲＩを受けている間）、結果として残留磁化を招くことなく、磁気ドメインが個別の対になっていない電子の合計よりもずっと大きい磁気モーメントを生成するのに整列される。血流に注入されると、ＵＳＰＩＯナノ粒子はマクロファージによって取り込まれ、炎症している組織に堆積される。これらの鉄部分はＴ２荷重画像上の信号減衰に対してマイナスに影響し、それらの関連する濃度は低下したＴ２−信号強度、または、より正確には、低下したスピン−スピンＴ２緩和時間によって評価することができる。低下したＴ２緩和時間（横緩和時間）は、したがって、炎症を検出するのに用いることができる。短縮されたＴ２緩和時間は、粒子が位置する磁気共鳴画像の暗化を結果として引き起こし、これによって「ネガティブコントラスト（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒａｓｔ）」を生成される。この手法は、いくつかのモデルで腎臓での炎症を検知する上でその使用に成功している。いくつかの場合では、ＵＳＰＩＯナノ粒子は合成後に凝集されて、直径が２５ｎｍ、５０ｎｍ、７５ｎｍ、１００ｎｍ、または１５０ｎｍ、もしくはそれよりも大きいその凝集体（本明細書では「超小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体」もしくは「ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体」）を産生してもよい。
【０１３０】
ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体は、任意の天然または合成ポリマー、界面活性剤、リン脂質、または無機材料を含む、標的基の付着を、直接的、もしくはペプチド、ポリペプチド、タンパク質、または他の化学基を含む様々な種類のリンカーを介して可能とするために修飾または誘導体化され得る多種多様の材料で被覆されてもよく、あるいは被覆されていなくてもよい。使用可能な被覆としては、ポリ（エチレン酢酸ビニル共重合体）、ポリビニルピロリドン（「ＰＹＰ」）、ポリ（乳酸−グリコール酸共重合体）（「ＰＬＧＡ」）、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリビニルアルコール（「ＰＹＡ」）、ポリアクリル酸などに基づく合成ポリマー、ゼラチン、デキストラン、キトサン、プルランなどの天然ポリマー、オレイン酸ナトリウム、ドデシルアミン、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどの界面活性剤、金またはシリカなどの無機材料、ならびにリン脂質などの生体物質が挙げられる。
【０１３１】
本明細書ではさらに、個体における補体媒介炎症を、本明細書に提供される抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはナノ粒子凝集体組成物を用いて検出する非侵襲性な方法を提供する。ある実施形態では、本発明は個体における補体媒介炎症を検出する非侵襲性な方法を提供し、方法は、（ａ）個体に、抗体標的超小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子またはその凝集体を有効量で含む組成物を投与することと、（２）個体の磁気共鳴画像を撮像することとを含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、補体媒介炎症は代替補体媒介炎症である。
【０１３２】
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、個体に投与される組成物は、本明細書に記載される任意の抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子組成物を含む医薬組成物である。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、個体に投与される組成物は、本明細書に記載される任意の抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体組成物を含む医薬組成物である。
【０１３３】
本明細書に用いられるように、用語「磁気共鳴画像法」または「ＭＲＩ」は、身体の詳細な画像を任意の面で提供する、身体の構造および機能を視覚化するのに一般的に用いられる非侵襲性の医療画像法を示す。ＭＲＩは、コンピューター断層撮影法（ＣＴ）などの他の非侵襲性画像法に比べて、異なる軟組織間でより大きなコントラストを提供し、それによって神経、筋骨格、心血管系、および腫瘍（がん）の画像法において特に有用である。ＣＴと違い、電離放射線を必要とせず、代わりに身体の中の水分中の水素原子の核磁化を整列させるための強力な磁場を用いる。この磁化のアラインメントを系統的に改変するのに無線周波数電磁場が用いられ、それによって、水素核に、スキャナによって検出可能な回転磁場が発生される。この信号は、身体の画像またはその一部を再構築するのに十分な情報を作り上げるために、追加の磁場によって操作可能である。
【０１３４】
個体がスキャナの中で横になると、個体の身体中に豊富に見つかる水分子の水素核（すなわち、陽子）が、強い主磁界と整列する。高周波で振動して主磁界に対して垂直である第２の電磁場は、次に陽子の一部を主磁界とのアラインメントから押し出すためにパルスされる。これらの陽子はその後、主磁界とのアラインメントに流れ戻り、その際に検出可能な無線周波数信号を放出する。様々な身体組織における陽子（例えば、脂肪対筋肉）が様々な速度で再整列されるため、様々な身体構造を画像化することができる。血管、臓器、腫瘍または炎症の部位の外観を強調するために、造影剤を静脈内に注入してもよい。
【０１３５】
本明細書に用いるように、抗体標的超小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子またはナノ粒子凝集体組成物（本明細書に記載される任意の医薬組成物を含む）の「有効量」または「診断的な有効量」は、臨床的に有用な補体媒介炎症の磁気共鳴画像を産生するのに十分な量である。臨床的に有用な磁気共鳴画像とは、経験のある臨床医が、診断、治療介入の効き目を観察するなどの目的で、炎症の度合いおよび／または程度を評価できるだけの十分な詳細を含むものである。本明細書に用いられるように、抗体標的検出可能部分または抗体結合体または抗Ｃ３ｄ抗体結合体（本明細書に記載される任意の医薬組成物を含む）の「有効量」または「診断的な有効量」は、抗体標的検出可能部分または抗体結合体または抗Ｃ３ｄ抗体結合体を検出することができる検出方法と組み合わされたときに補体媒介炎症または補体活性化（例えば、個体、患者、ヒト、哺乳動物、臨床試料、組織、もしくは生検）の臨床的に有用な特徴または測定を得るのに十分な量である。補体媒介炎症または補体活性化の臨床的に有用な特徴または測定とは、経験のある臨床医が、診断、治療介入の効き目を観察するなどの目的で、炎症の度合いおよび／または程度を評価できるだけの十分な詳細を含むものである。
【０１３６】
超小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体、超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＳＰＩＯナノ粒子凝集体または他のナノ粒子造影剤（検出可能部分の例）を、活性炎症の部位に、補体活性化の部位への抗体標的を介して送出することで、そのような炎症の非侵襲性磁気共鳴画像法を可能とし、身体全体にわたって補体活性化の特異的な検出を可能とし、補体媒介炎症を他の炎症と区別する。
【０１３７】
したがって、一態様では、本発明は、非侵襲性医療または診断的画像適用についての抗体標的ナノ粒子造影剤を含む組成物を提供する。ある実施形態では、抗体標的ナノ粒子造影剤組成物はＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体を含む。ある実施形態では、抗体標的ナノ粒子造影剤組成物は、抗体標的リポソームまたは他のガドリニウムキレート（「Ｇｄキレート」）分子を含有する抗体標的送出媒体を含む。抗体標的ナノ粒子造影剤または組成物および抗体標的超小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子または凝集体は、抗体結合体の例である。
【０１３８】
超小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子またはその凝集体の少なくとも２つの物理化学的特徴が、個々のナノ粒子またはナノ粒子凝集体の大きさで変動する。最初に、ＵＳＰＩＯナノ粒子の調製品の、ＭＲＩ画像法のコントラストを増強させる能力およびコントラスト増強の度合いの両方が、ナノ粒子径によって変動する。これは、個々のＵＳＰＩＯナノ粒子の磁気モーメントもまた、粒子径で変動するからである。約１５ｎｍまで（好ましくは１０ｎｍ未満）の直径を有する酸化鉄ナノ粒子は超常磁性であり続けるが、より大きい酸化鉄ナノ粒子はその超常磁性特性を失う。したがって、ＭＲＩ造影試薬として使用するのに好適なＵＳＰＩＯナノ粒子の直径には上限がある。この限度は、より小さい個々のＵＳＰＩＯナノ粒子の多粒子凝集体を使用することで解消することができる。各ナノ粒子凝集体内の個々のナノ粒子の磁気モーメントは付加的であるために、このようなＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体は効果的にＭＲＩコントラストを増強させる。個々の酸化鉄ナノ粒子とは違い、超小超常磁性酸化鉄ナノ粒子の凝集体はより大きな大きさを有することで常磁性特性は失わない。
【０１３９】
第２に、生体内半減期（例えば、循環血漿または血液半減期および組織半減期）ならびにＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の生体分布は、ナノ粒子または凝集体の大きさで変動する。例えば、直径が１０ｎｍ以下のＵＳＰＩＯナノ粒子（単結晶酸化鉄ナノ粒子）は、８１分以下の循環血液半減期を有し（Ｒ．Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ．ｅｔ  ａｌ，１９９０，Ｒａｄｉａｌ．１７５（２）：４８９−４９３）、直径が５０ｎｍ以下のＵＳＰＩＯナノ粒子は３０分以下の循環半減期を有し（Ｄ．Ｐｏｕｌｉｑｕｅｎ．ｅｔ  ａｌ，１９９１，Ｍａｇｎｅｔ．Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇ．９（３）：２７５−２８３）、直径が１５０ｎｍ以下のＵＳＰＩＯナノ粒子は３０分以下の循環半減期を有すると考えられており、直径が８０ｎｍ以下のＵＳＰＩＯナノ粒子は約１から数日（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９以上の日数）の組織半減期ならびに４５日以下の全身半減期を有する（Ｒ．Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ．ｅｔ  ａｌ，１９８９，Ａｍ．Ｊ．Ｒｏｅｎｔｇｅｎｏｌ．１５２（１）：１６７−１７３）。効果的な標的化ＭＲＩ造影増強試薬は、所望の標的（例えば、Ｃ３分解性生物の腎性沈殿物）を認識してそれに結合できるだけの長さで血管構造内を循環しなければならないが、いかなる潜在的な毒性を最小限にできるだけの速さで排出される。臨床的に有用な磁気共鳴画像を生成するための最適なＵＳＰＩＯナノ粒子またはナノ粒子凝集体の大きさは、画像化される臓器（例えば、腎臓、目、網膜）、組織、および／または生理現象（例えば、補体媒介炎症）によって変動する。
【０１４０】
ＵＳＰＩＯナノ粒子またはナノ粒子凝集体の循環半減期もまた、異なる材料で被覆することで改変（すなわち、低下または延長）することができる。例えば、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはナノ粒子凝集体は、他の材料のうち、天然または合成ポリマー、界面活性剤、リン脂質で被覆されていてもよく、これらは、直接的、もしくはペプチド、ポリペプチド、タンパク質、または他の化学基を含むリンカーの様々な種類を介して間接的に、標的基の付着を許容するべく修飾または誘導体化されていてもよい。いくつかの場合では、被膜はさらに、合成ポリマー、天然ポリマー、両親媒性ポリマー、もしくは凝集体を安定化させる、または溢出、オプソニン作用、食作用、エンドサイトーシス、もしくは他の生理学的クリアランスの形態に対する感受性を最小化するのに好適な他の分子（例えば、ポリビニルピロリドン（「ＰＶＰ」）、ポリ（乳酸−グリコール酸共重合体）（「ＰＬＧＡ」）、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリビニルアルコール（「ＰＹＡ」）、ポリアクリル酸など）を取り込むように修飾されていてもよい。ＵＳＰＩＯナノ粒子またはナノ粒子凝集体の大きさ、特定の被膜、ナノ粒子またはナノ粒子凝集体を所望の臓器（例えば、腎臓、目、網膜）、組織、および／または生理現象（例えば、補体媒介炎症）に標的化するのに好適な修飾または誘導体化は、経験的に決められてもよい。本明細書では、凝集体がその標的に到達できるだけの長さを有する循環半減期を有する産生に好適な最適なＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体の大きさの範囲および安定した標的ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体の産生のための被膜の種類を同定し、特定の組織における補体媒介炎症の検出を、標的を見つけて結合することができないほどに速く排出されないで行うことを可能とする。
【０１４１】
実施形態では、本開示は（ｉ）本明細書に記載される任意の抗体もしくはその抗原結合フラグメントと、ヒトにその抗体もしくは抗原結合フラグメントを送出する手段、または（ｉｉ）任意の構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）と、ヒトに構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）を送出する手段を含む、診断用もしくは観察用キットを特色とする。
【０１４２】
ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１ｎｍから約１０００ｎｍの間である。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約５ｎｍから約５００ｎｍの間である。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１０ｎｍから約１００ｎｍの間である。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約５０ｎｍから約１５０ｎｍの間である。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約６５ｎｍから約８５ｎｍの間である。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約７５ｎｍである。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１５０ｎｍである。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１ｎｍから約１０００ｎｍの間であり、両親媒性のポリマーで被膜される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約５ｎｍから約５００ｎｍの間であり、両親媒性のポリマーで被膜される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１０ｎｍから約１００ｎｍの間であり、両親媒性のポリマーで被膜される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約５０ｎｍから約１５０ｎｍの間であり、両親媒性のポリマーで被膜される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約６５ｎｍから約８５ｎｍの間であり、両親媒性のポリマーで被膜される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約７５ｎｍであり、両親媒性のポリマーで被膜される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１５０ｎｍであり、両親媒性のポリマーで被膜される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１ｎｍから約１０００ｎｍの間であり、リン脂質に被包されている。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約５ｎｍから約５００ｎｍの間であり、リン脂質に被包されている。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１０ｎｍから約１００ｎｍの間であり、リン脂質に被包されている。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約５０ｎｍから約１５０ｎｍの間であり、リン脂質に被包されている。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約６５ｎｍから約８５ｎｍの間であり、リン脂質に被包されている。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約７５ｎｍであり、リン脂質に被包されている。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１５０ｎｍであり、リン脂質に被包されている。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、リン脂質は１，２−ジステアロイ１−ｓｎ−グロセロ−３−ホスホエタノールアミン（「ＤＳＰＥ」）を含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、リン脂質はペグ化されている。用語「ペグ化」は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と接合するという通常の意味を示す。本明細書に記載されるある実施形態では、ペグ化リン脂質はさらに抗体または細菌標的基と架橋するのに好適な官能基を含む。本明細書に記載されるある実施形態では、ペグ化リン脂質はさらに、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄなどを含むがこれらに限られない、Ｃ３に向けられる抗体もしくはそのフラグメントを架橋するのに好適な官能基を含む。本明細書に記載されるある実施形態では、官能基はアミンである。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、官能基はマレイミドである。本明細書に記載される任意の実施形態では、官能基はチオールである。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ペグ化リン脂質はポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）を、ＰＥＧ１００からＰＥＧ５０００、ＰＥＧ５００からＰＥＧ５０００、ＰＥＧ１０００からＰＥＧ５０００、またはＰＥＧ２０００からＰＥＧ４０００の範囲内の分子量で含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ペグ化リン脂質は、ＰＥＧ１００、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ５００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ７００、ＰＥＧ８００、ＰＥＧ９００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ１５００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ２５００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３５００、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ４５００、またはＰＥＧ５０００を含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、リン脂質はＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００を含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、リン脂質はアミン官能化ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００を含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、リン脂質はアミン官能化ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００を含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、リン脂質はマレイミド官能化ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００を含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体は抗体標的され、リン脂質で被包され、約２０分から約４０分間の循環血漿半減期を有し、１〜数日（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９日、もしくはそれ以上の日数）の組織半減期を有する。
【０１４３】
ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１ｎｍから約１０００ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約５ｎｍから約５００ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１０ｎｍから約１００ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約５０ｎｍから約１５０ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約６５ｎｍから約８５ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約７５ｎｍであり、デキストランで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１５０ｎｍであり、デキストランで被覆される。
【０１４４】
ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１ｎｍから約１０００ｎｍの間であり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約５ｎｍから約５００ｎｍの間であり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１０ｎｍから約１００ｎｍの間であり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約５０ｎｍから約１５０ｎｍの間であり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約６５ｎｍから約８５ｎｍの間であり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約７５ｎｍであり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１５０ｎｍであり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、リン脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（「ＤＳＰＥ」）を含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、リン脂質はペグ化されている。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ペグ化リン脂質はさらに、抗体標的基と架橋するのに好適な官能基を含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、官能基はアミンである。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、官能基はマレイミドである。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、官能基はチオールである。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ペグ化リン脂質はポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）を、ＰＥＧ１００からＰＥＧ５０００、ＰＥＧ５００からＰＥＧ５０００、ＰＥＧ１０００からＰＥＧ５０００、またはＰＥＧ２０００からＰＥＧ４０００の範囲内の分子量で含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ペグ化リン脂質は、ＰＥＧ１００、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ５００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ７００、ＰＥＧ８００、ＰＥＧ９００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ１５００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ２５００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３５００、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ４５００、またはＰＥＧ５０００を含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、リン脂質はＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００を含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、リン脂質はアミン官能化ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００を含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、リン脂質はアミン官能化ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００を含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、リン脂質はマレイミド官能化ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００を含む。
【０１４５】
抗体標的検出可能部分は、本明細書に記載される任意の抗体または抗原結合フラグメントに接続される（例えば、直接結合される、共有結合される、リンカーを介して結合される、可逆的に結合される）検出可能部分（例えば、ＵＳＰＩＯ、フルオフォア、蛍光部分、常磁性種、放射性同位元素、本明細書に記載される他の検出可能部分）であり、標的は抗体またはその抗原結合フラグメントによって認識される抗原である。抗体標的検出可能部分は、抗体の抗原結合フラグメントに接続された検出可能部分を含み、このような部分は抗体標的部分または抗体標的検出可能分子または抗体標的検出可能組成物の定義に含まれる。抗体標的検出可能部分は抗体結合体である。抗体が抗Ｃ３ｄ、抗Ｃ３ｄｇ、または抗ｉＣ３ｂ抗体もしくはその抗原結合フラグメントである抗体標的検出可能部分は、抗Ｃ３ｄ抗体結合体である。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体は約２０分から約４０分の循環血漿半減期を有し、１から数日の組織半減期（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９日、またはそれ以上の日数）を有する。
【０１４７】
ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１ｎｍから約１０００ｎｍの間であり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約５ｎｍから約５００ｎｍの間であり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１０ｎｍから約１００ｎｍの間であり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約５０ｎｍから約１５０ｎｍの間であり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約６５ｎｍから約８５ｎｍの間であり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約７５ｎｍであり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は約１５０ｎｍであり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。
【０１４８】
ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１ｎｍから１０００ｎｍの間である。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は５ｎｍから５００ｎｍの間である。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１０ｎｍから１００ｎｍの間である。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は５０ｎｍから１５０ｎｍの間である。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は６５ｎｍから８５ｎｍの間である。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は７５ｎｍである。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１５０ｎｍである。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１ｎｍから１０００ｎｍの間であり、両親媒性のポリマーで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は５ｎｍから５００ｎｍの間であり、両親媒性のポリマーで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１０ｎｍから１００ｎｍの間であり、両親媒性のポリマーで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は５０ｎｍから１５０ｎｍの間であり、両親媒性のポリマーで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は６５ｎｍから８５ｎｍの間であり、両親媒性のポリマーで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は７５ｎｍであり、両親媒性のポリマーで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１５０ｎｍであり、両親媒性のポリマーで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１ｎｍから１０００ｎｍの間であり、リン脂質に被包されている。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体は５ｎｍから５００ｎｍの間であり、リン脂質に被包されている。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１０ｎｍから１００ｎｍの間であり、リン脂質に被包される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は５０ｎｍから１５０ｎｍの間であり、リン脂質に被包される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は６５ｎｍから８５ｎｍの間であり、リン脂質に被包される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は７５ｎｍであり、リン脂質に被包される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１５０ｎｍであり、リン脂質に被包される。
【０１４９】
ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１ｎｍから１０００ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は５ｎｍから５００ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１０ｎｍから１００ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は５０ｎｍから１５０ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は６５ｎｍから８５ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は７５ｎｍであり、デキストランで被覆される。ある実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１５０ｎｍであり、デキストランで被覆される。
【０１５０】
ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１ｎｍから１０００ｎｍの間であり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は５ｎｍから５００ｎｍの間であり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１０ｎｍから１００ｎｍの間であり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は５０ｎｍから１５０ｎｍの間であり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は６５ｎｍから８５ｎｍの間であり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は７５ｎｍであり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。ある実施形態では、リン脂質被包抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１５０ｎｍであり、抗体標的基をリン脂質被膜に付着されて含む。
【０１５１】
ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１ｎｍから１０００ｎｍの間であり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は５ｎｍから５００ｎｍの間であり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１０ｎｍから１００ｎｍの間であり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は５０ｎｍから１５０ｎｍの間であり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は６５ｎｍから８５ｎｍの間であり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は７５ｎｍであり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。ある実施形態では、デキストラン被覆抗体標的ＵＳＰＩＯナノ粒子またはその凝集体の直径は１５０ｎｍであり、抗体標的基をデキストラン被膜に付着されて含む。
【０１５２】
実施形態では、ＵＳＰＩＯは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、および５０ｎｍからなる群から選択される直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、および５０ｎｍからなる群から選択される直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３。１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、および２００ｎｍからなる群から選択される直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３。１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、および２００ｎｍからなる群から選択される直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯ凝集体は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３。１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、および２００ｎｍからなる群から選択される直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯ凝集体は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３。１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、および２００ｎｍからなる群から選択される直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯ凝集体は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３。１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、および１０００ｎｍからなる群から選択される直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯ凝集体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３。１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４
００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、および１０００ｎｍからなる群から選択される直径を有する。
【０１５３】
実施形態では、ＵＳＰＩＯは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、および１５ｎｍからなる群から選択される直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、および１５ｎｍからなる群から選択される直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯは１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０ｎｍからなる群から選択される直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０ｎｍからなる群から選択される直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯは約１から１５ｎｍの間の直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯは１から１５ｎｍの間の直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯは約１から１０ｎｍの間の直径を有する。実施形態では、ＵＳＰＩＯは１から１０ｎｍの間の直径を有する。実施形態では、本明細書に記載される任意のＵＳＰＩＯを、様々な大きさのＵＳＰＩＯ（例えば、両親媒性のポリマーで被覆されたもの、リン脂質被包されたもの、デキストランで被覆したものなど、もしくはその組み合わせ）について上記のように修飾してもよい。
【０１５４】
診断用組成物及び診断方法
本発明の非侵襲的方法により、３つの補体経路のいずれかが関与する多くの疾患と関連する補体媒介性炎症を検出することができる。このような疾患としては、例えば、（１）急性心筋梗塞、動脈瘤、脳卒中、出血性ショック、挫滅、多臓器不全、血液量減少性ショック、腸管虚血、脊髄損傷、及び外傷性脳損傷後の虚血再灌流による組織損傷；（２）例えば、火傷、内毒血症、及び敗血症性ショックなどの炎症性疾患、成人呼吸促迫症候群、心肺バイパス、血液透析；アナフィラキシーショック、重症喘息、血管浮腫、クローン病、鎌状赤血球貧血、連鎖球菌感染後糸球体腎炎、膜性腎炎、及び膵炎；（３）移植拒絶反応、例えば、超急性異種移植片拒絶反応；（４）習慣性流産及び子癇前症などの妊娠関連疾患；並びに、（５）薬物有害反応、例えば、薬物アレルギー、ＩＬ−２誘導血管漏出症候群、及びＸ線撮影造影剤アレルギーが挙げられる。また、限定するものではないが、重症筋無力症、アルツハイマー病、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、インスリン依存性糖尿病、急性散在性脳脊髄炎、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性肝炎、クローン病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、天疱瘡、シェーグレン症候群、及び高安動脈炎などの自己免疫障害に関連する補体媒介性炎症も、本明細書記載の方法により検出できる。
【０１５５】
特定の実施形態では、本明細書で提供される方法により検出される補体媒介性炎症は、心肺バイパス術後合併症；心筋梗塞；虚血／再潅流傷害；急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；敗血症；火傷；心肺バイパス術及び血液透析に関連する炎症；血漿交換療法；血小板フェレーシス；白血球フェレーシス；体外膜型肺（ＥＣＭＯ）；ヘパリン誘起体外低密度リポ蛋白析出（ＨＥＬＰ）；Ｘ線撮影造影剤誘導アレルギー反応；移植拒絶反応；その他の炎症性状態、自己免疫障害、及び自己免疫／免疫複合体疾患、例えば、多発性硬化症、重症筋無力症、膵炎、関節リウマチ、ＩｇＧ４媒介性／関連疾患、アルツハイマー病、喘息、熱傷、アナフィラキシーショック、腸炎、じんま疹、血管浮腫、血管炎、糸球体腎炎、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス及びループス腎炎、の群から選択される疾患に関連する。
【０１５６】
２型膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ  ＩＩ）は、持続性蛋白尿、血尿、及び腎炎症候群の原因となる希な腎臓疾患である。ＭＰＧＮ  ＩＩのＦＨ欠損及び機能不全がいくつかの症例で報告されている。例えば、ＭＰＧＮ  ＩＩのヒト患者でＦＨの変異が見つかっている。Ｎｏｒｗｅｇｉａｎ  Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ品種のブタは、劣性遺伝するＦＨ欠損を有する。これらの動物はＭＰＧＮ  ＩＩを発症し、腎糸球体内に塊状の補体沈着物を示し、腎不全のために若年齢で死亡する。さらに、低補体血症性ＭＰＧＮ  ＩＩの患者においてでＦＨを認識する自己抗体が報告されている。従って、補体活性化副経路がＭＰＧＮ  ＩＩの発症と進行に関与しているということが証拠により示唆される。
【０１５７】
溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）は、末梢における連続的な血小板分解及び腎臓の微小循環中の血小板トロンビンに起因する微小血管症性溶血性貧血、血小板減少症を特徴とし、最終的には急性腎不全に至る疾患である。例えば、Ｚｉｐｆｅｌ，２００１，  Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ，２７（３）：１９１−１９９、を参照されたい。現時点で、非下痢型のＨＵＳ（非典型ＨＵＳ又はａＨＵＳとしても知られる）は、ＦＨの変異及び突然変異と関連するというかなりの証拠が存在する。さらに、  ＦＨに対する自己抗体がａＨＵＳ患者で報告されている。従って、補体活性化副経路がＨＵＳとａＨＵＳの発症と進行に関与しているということが証拠から示唆される。
【０１５８】
関節リウマチは、種々の全身症状を示すことがある慢性疾患である。この疾患は原因不明であり、また、通常、対称分布的に末梢関節に影響を与える持続性炎症性滑膜炎に至ることを特徴とする。この状態の最も重要な特徴には、軟骨破壊、骨侵食、及び最終的にこの疾患の顕著な特徴である関節変形を引き起こす、補体媒介性炎症が挙げられる。
【０１５９】
本発明で使用する場合、「虚血再灌流（Ｉ／Ｒ）障害」との用語は、低酸素組織への再灌流後の血管内皮及びその下にある実質組織の炎症性損傷をいう。虚血再灌流障害は全身症候群であり、種々の組織（例えば、心筋、中枢神経系、後肢及び腸を含む）への急性及び慢性両方の損傷に関与する。虚血再灌流障害は、壊死及び不可逆的細胞損傷を引き起こす。補体経路（補体活性化副経路を含む）は、Ｉ／Ｒ損傷の主要な媒介因子である。従って、本発明で提供される非侵襲的方法は、全ての器官又は組織で起こる虚血再灌流障害に関連する補体媒介性炎症の検出に有用であり、虚血再灌流障害としては、限定するものではないが、腸管虚血再灌流障害、腎虚血再灌流障害、心臓虚血再灌流障害、他の内部臓器（例えば、肺、肝臓）の虚血再灌流障害、中枢神経系虚血再灌流障害、四肢又は指の虚血再灌流障害、外傷誘発性の血液量減少症、又は全ての移植臓器もしくは組織の虚血再灌流障害が挙げられる。虚血再灌流障害は、また、種々の他の状態に併発する場合がある。それらの状態としては、限定するものではないが、脳卒中、脊髄損傷、外傷誘発性の血液量減少性ショック、及び関節リウマチ等の自己免疫疾患（例えば、滑膜の虚血傷害によって非常に悪化する可能性がある）、又は種々の他の炎症性疾患（炎症によって媒介される疾患、又は虚血現象及び再灌流を引き起こす、もしくは虚血現象及び再灌流に関連することのある症状である炎症を伴う疾患）が挙げられる。虚血再灌流障害が起こる他の状態及び疾患は、当業者にとって公知である。
【０１６０】
また、本明細書で提供される非侵襲的方法を使用して、ドルーゼン関連疾患の補体媒介性炎症を検出することもできる。「ドルーゼン関連疾患」との用語は、ドルーゼンの形成又はドルーゼン様細胞外疾患プラークが起こるいずれかの疾患を意味し、ドルーゼン又はドルーゼン様細胞外疾患プラークは、前記疾患の原因になる、もしくはそれに関与する、もしくはその徴候となる。例えば、黄斑ドルーゼンの形成によって特徴づけられる加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、ドルーゼン関連疾患とみなされる。非眼性ドルーゼン関連疾患としては、限定するものではないが、アミロイド症、弾力線維症、デンスデポジット病、及び／又はアテローム性動脈硬化症が挙げられる。「ドルーゼン関連疾患」との用語は、ＭＰＧＮ  ＩＩなどの糸球体腎炎も含む。
【０１６１】
別の実施形態では、本開示は、対象において補体活性化をモニター又は診断する方法を提供し、該方法は、本明細書に記載される有効量の構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）を対象に投与するステップを含む。
【０１６２】
別の実施形態では、特段の断りのない限り、又は特定の文脈から他の方法が明らかでない限り、本明細書において、本明細書に記載される方法に関連して本明細書に記載されるいずれかの組成物の使用が提供される。
【０１６３】
投与は、例えば、局所注入、注射により、又はインプラントにより行うことができる。インプラントは、シリコンゴム膜などの膜もしくは繊維を含む多孔性、非多孔性、又はゼラチン状材料であってもよい。インプラントは、対象に対し組成物の持続的放出又は周期的放出を行うように構成できる。例えば、米国特許出願公開第２００８０２４１２２３号；米国特許第５，５０１，８５６号；同４，８６３，４５７号；及び同３，７１０，７９５号；欧州特許第４８８４０１号；及び同４３０５３９号を参照されたい。これら特許のそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。本明細書に記載の抗体又は構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、例えば、浸透圧ポンプ、生分解性インプラント、電気拡散系、電気浸透系、蒸気圧ポンプ、電解ポンプ、発泡ポンプ、圧電ポンプ、浸食に基づく系、もしくは電気機械的系などの、拡散系、浸食系、又は対流系をベースにした埋め込み型装置により対象に送達できる。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、手段はシリンジ、例えば、二重筒シリンジによるものであってよい。いくつかの実施形態では、手段は、構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）又は抗体もしくはその抗原結合断片を含む経強膜パッチ又はコンタクトレンズであってもよい。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、手段は、構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）又は抗体もしくはその抗原結合断片のヒトへの肺内送達に適するものである。例えば、手段は吸入器又は噴霧器であってよい。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、キットは、ヒトの補体関連疾患のモニタリング又は診断に使用する少なくとも１つの追加の活性薬剤を含む。
【０１６７】
さらに別の実施形態では、本開示は、（ａ）本明細書に記載のいずれかの抗体もしくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のいずれかの構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）を含むプレフィルシリンジを特徴とする。構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）又は抗体もしくはその抗原結合断片は、眼内、硝子体内、又は関節腔内投与用として処方できる。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）又は抗体もしくはその抗原結合断片は、筋肉内又は皮下投与用として処方される。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体もしくは構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、局所投与により対象に送達される。本発明で使用する場合、「局所投与」又は「局所送達」は、目的の標的組織もしくは部位への組成物もしくは薬剤の血管系を経由した輸送に依存しない送達を意味する。例えば、組成物は、組成物もしくは薬剤の注射もしくは移植、又は組成物もしくは薬剤を含む装置の導入もしく移植により送達できる。標的組織もしくは部位の付近への局所投与後、組成物もしくは薬剤、又は１種もしくは複数種のその成分は、目的の標的組織もしくは部位に拡散することができる。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体もしくは構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、関節（例えば、多関節）に局所投与できる。例えば、補体関連疾患が関節炎である実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体もしくは構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、関節に（例えば、関節腔に）又は関節の付近に直接投与できる。本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体もしくは構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）を局所投与できる関節腔内結合部の例には、股関節、膝、肘、手首、胸鎖、顎関節、手根、及びいずれか関節炎状態にある他の結合部が挙げられる。本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体もしくは構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、嚢、例えば、肩峰、二頭筋橈骨、肘橈骨、三角筋、膝蓋下、坐骨、及び医学分野で公知のいずれか他の嚢にも投与できる。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体もしくは構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、眼に局所投与できる。本発明で使用する場合、「眼」との用語は、眼に関連するいずれか及び全ての解剖学的組織ならびに構造を意味する。眼は、外側強膜、中間脈絡膜層、及び内側網膜の３つの別個の層から構成される壁を有する。レンズの後部の空洞は、硝子体液と呼ばれるゼラチン状液体で満たされている。眼の背部には網膜があり、ここでは光を検出する。角膜は光学的に透明な組織で、眼の背部に画像を伝達する。角膜は、眼の中への薬剤の浸透のための１つの経路を備える。眼に関連するその他の解剖学的組織構造には、導涙系が含まれ、これは、分泌系、分配系、及び排出系を含む。分泌系は、まばたき及び涙の蒸発による温度変化により刺激される分泌腺と、遠心性副交感神経分布を有し、物理的又は感情的刺激に反応して涙液を分泌する反射分泌腺とを含む。分配系は、眼瞼及び開いた眼の眼瞼端の周りの涙液メニスカスを含み、これらはまばたきにより眼表面上に涙液を広げて乾燥領域が拡大するのを減らす。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体もしくは構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、眼の後眼房に投与できる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体もしくは構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、硝子体内に投与できる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体もしくは構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、経強膜的に投与できる。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体又は構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、肺を介して対象に投与できる。肺への薬物送達は、吸入により実現でき、本明細書における吸入投与は、経口、及び／又は経鼻でよい。肺送達用の医薬装置の例には、定量吸入器、ドライパウダー吸入器（ＤＰＩ）、及び噴霧器が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体又は構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、ドライパウダー吸入器を使用して対象の肺に投与できる。これらの吸入器は、分散性で安定な粉末製剤を肺に送達する噴霧剤不含装置である。ドライパウダー吸入器は、医学の技術分野でよく知られており、限定するものではないが、ＴｕｒｂｏＨａｌｅｒ（登録商標）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄ）ＡＩＲ（登録商標）吸入器（Ａｌｋｅｒｍｅｓ（登録商標）；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）；Ｒｏｔａｈａｌｅｒ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄ）；及び、Ｅｃｌｉｐｓｅ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ；Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）、が含まれる。また、国際公開第ＷＯ  ０４／０２６３８０号、同ＷＯ  ０４／０２４１５６号、及び同ＷＯ  ０１／７８６９３号、を参照されたい。ＤＰＩ装置は、インスリン及び成長ホルモンなどのポリペプチドの肺内投与用に使用されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体又は構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、定量吸入器を使用して肺内に投与できる。これらの吸入器は、噴霧剤を利用して個別の用量の化合物を肺に送達する。定量吸入器により投与される化合物の例としては、例えば、Ａｓｔｏｖｅｎｔ（登録商標）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ；Ｒｉｄｇｅｆｉｅｌｄ，Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）、及びＦｌｏｖｅｎｔ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、が挙げられる。また、例えば、米国特許第６，１７０，７１７号；第５，４４７，１５０号；及び、第６，０９５，１４１号、も参照されたい。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体又は構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、噴霧器を使用して対象の肺に投与できる。噴霧器は、圧縮空気を使用して、液化エアロゾル又はミストとして化合物を送達する。噴霧器は、例えば、ジェット噴霧器（例えば、空気又は液体ジェット噴霧器）又は超音波噴霧器であってよい。追加の装置及び肺内投与法は、例えば、米国特許出願公開第２００５０２７１６６０号及び同第２００９０１１０６７９号に記述されている。これら特許のそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又は結合体もしくは構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）は、単位剤形として存在し、特に自己投与に好適するであろう。本開示の処方された製品は、容器、通常は、例えば、バイアル、カートリッジ、プレフィルシリンジ又は使い捨てペン型注射器に収容できる。米国特許第６，３０２，８５５号に記載のような投与器も、例えば、本開示の注入系と一緒に使用可能である。
【０１７６】
本発明で使用する場合、「対象」はいずれの哺乳動物であってもよい。例えば、対象は、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、オランウータン、ゴリラ、マカク、ヒヒ、又はチンパンジー）、ウマ、雌ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、スナネズミ、ハムスター、ラット、又はマウスであってよい。いくつかの実施形態では、対象は乳幼児（例えば、ヒト乳幼児）である。いくつかの実施形態では、対象は、患者である。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、本開示は、構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）の検出可能成分もしくは部分に対し、インビボで所定の領域もしくは区画を特異的に標的にさせる方法を提供し、その結果、このような構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）の標的成分もしくは部分とこのような領域もしくは区画に位置するターゲット分子との間の特異的相互作用により、他の領域もしくは区画の場合とは異なり、このような領域もしくは区画中の、このような検出可能成分もしくは部分の局所濃度を高めるか、又は、検出可能成分もしくは部分のこのような領域もしくは区画に位置する少なくとも１つの所定の分子へのアクセシビリティを高める。いくつかの実施形態では、本開示は、構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）の特異的に活性な又は検出可能成分もしくは部分に対し、このような活性な又は検出可能成分もしくは部分に融合して（例えば、直接に又は１種又は複数種のリンカーを介して）特異的に補体成分タンパク質に結合できる抗体もしくはその抗原結合断片を使用して、補体活性化物の表面を標的にさせる方法を提供する。いくつかの実施形態では、このような補体成分タンパク質は、Ｃ３ｄ又はＣ３ｄｇ又はｉＣ３ｂである。
【０１７８】
本明細書に定義されているように、補体関連疾患（例えば、敗血症、重度の火傷、ＲＡ、ループス腎炎、グッドパスチャー症候群、又は喘息）の改善のための対象（例えば、ヒト患者）のモニタリングは、疾患パラメーターの変化、例えば、所与の疾患の１種又は複数種の症状の改善に関し、対象を評価することを意味する。補体関連疾患の症状は、医学の技術分野において周知である。いくつかの実施形態では、評価は投与後、少なくとも１時間、例えば、少なくとも、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、又は４８時間、又は少なくとも１日、２日、４日、１０日、１３日、２０日又はそれを超える日数、又は少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間又はそれを超える期間行われる。対象は、治療の開始前；治療中；又は１種又は複数種の治療用成分が投与された後、の期間のうちの１以上の期間で評価できる。評価は、さらなる治療に対する必要性の評価、例えば、投与量、投与頻度、又は治療持続期間を変更するべきか否かの評価を含めることができる。また、評価には、選択された治療法に追加する、又は治療法を中断する必要性を評価すること、例えば、本明細書に記載の補体関連疾患の治療の内のいずれかを追加するか、又は中断することを評価することを含めることができる。いくつかの実施形態では、対象（例えば、患者）のモニタリングには、本明細書記載のいずれかの方法における本明細書に記載のいずれかの構築物又は結合体の使用が含まれる。
【０１７９】
また、本明細書に記載の組成物を適切なパッケージングに収めた製品も提供される。本明細書に記載の組成物（例えば、眼用組成物）のための適切なパッケージングには、当該技術分野で公知の、例えば、バイアル（例えば、密封バイアル）、容器、アンプル、ボトル、広口瓶、フレキシブルパッケージング（例えば、密封されたＭｙｌａｒ製又はプラスティック袋）等が挙げられる。これらの製品は、さらに無菌化及び／又は密封してもよい。
【０１８０】
また、本開示は、本明細書に記載の組成物（又は単位剤形及び／又は製品）を含むキットを提供する。前記キットは、組成物の使用方法、例えば、本明細書に記載の使用方法についての説明書をさらに含めてもよい。本明細書に記載のキットには、他の緩衝液、希釈液、フィルター、針、シリンジ、及び本明細書に記載のいずれかの方法の実行に関する説明書を含む添付文書などの、商業上及びユーザーの観点から望ましい他の内容物をさらに含めてもよい。
【０１８１】
本開示の組成物及び製剤は、補体活性化に関連する状態の、好ましくは、終末補体阻害剤（例えば、Ｃ３の活性化の後の補体経路ステップの阻害剤）により大きな影響を受けない補体副経路に関係する状態の診断、予後、モニタリング、又は特定に有用である。
【０１８２】
特定の実施形態では、本発明は、それを必要とする個体において補体媒介性炎症を検出する非侵襲的方法に提供する。該方法は、（ａ）該個体に抗体標的化極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子又はその凝集体を投与するステップと、（ｂ）該個体の磁気共鳴画像を採取するステップとを含む。特定の実施形態では、組成物は、抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子もしくはその凝集体又は本明細書に記載のその他の抗体標的化により検出可能成分又は抗体結合体を含むいずれかの医薬組成物である。特定の実施形態では、個体は哺乳動物である。特定の実施形態では、哺乳動物はヒト、マウス、又はラットである。特定の実施形態では、抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子もしくはその凝集体又はその他の抗体標的化検出可能成分又は抗体結合体を含む組成物は、注射により投与される。特定の実施形態では、注射は、非経口、静脈内、皮下、又は筋肉内投与で行われる。本明細書に記載のいくつかの実施形態では、補体媒介性炎症は、選択的補体媒介性炎症である。いくつかの実施形態では、本明細書において、それを必要とする個体において、補体媒介性炎症又は補体活性化を検出する非侵襲的方法が提供される。該方法は、（ａ）有効量の抗体標的化検出可能成分（すなわち、抗体結合体）を含む組成物を個体に投与するステップと、（ｂ）検出可能成分の存在を検出できる器具及び／又は方法（例えば、ＭＲＩ、ＣＴ、ＳＰＥＣＴ、Ｘ線検査、分光法、顕微鏡、ＰＥＴ、超音波、又は本明細書に記載のいずれかの他の検出方法）を使用して抗体標的化検出可能成分（すなわち、抗体結合体）の存在を測定するステップとを含む。
【０１８３】
本明細書に記載の抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子又はナノ粒子凝集体組成物又はその他の抗体標的化検出可能成分又は抗体結合体は、限定するものではないが、静脈内（例えば、輸液ポンプによって）、腹腔内、眼内、動脈内、小胞内、小胞内、筋肉内、皮下、髄腔内、経胸膜、動脈内、皮下、関節腔内、嚢内、脳室内、頭蓋内、尿道内、肝内、及び腫瘍内のいずれかの経路を介して個体に投与できる。特定の実施形態では、抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子もしくはナノ粒子凝集体組成物又はその他の抗体標的化検出可能成分又は抗体結合体は、（例えば、静脈内注射により）全身投与される。いくつかの実施形態では、抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子もしくはナノ粒子凝集体組成物又はその他の抗体標的化検出可能成分又は抗体結合体は、局所投与される（例えば、動脈内又は眼内注射により）。
【０１８４】
特定の実施形態では、組成物は、眼又は眼組織に直接投与される。特定の実施形態では、組成物は、注射によって眼に（眼内注射）又は眼に関連する組織に投与される。抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子又はナノ粒子凝集体組成物又はその他の抗体標的化検出可能成分もしくは抗体結合体は、例えば、眼内注射、眼周囲注射、網膜下注射、硝子体内注射、経中隔注射、強膜下注射、脈絡膜内注射、前房内注射、結膜下注射、テノン嚢下注射、眼球後注射、又は眼球周囲注射により投与できる。これらの方法は当該技術分野で公知である。例えば、網膜薬物送達のための典型的な眼周囲経路については、「Ｐｅｒｉｏｃｕｌａｒ  ｒｏｕｔｅｓ  ｆｏｒ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ」，  Ｒａｇｈａｖａ  ｅｔ  ａｌ．（２００４），Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．１（１）：９９−１１４、に開示されている。抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子又はナノ粒子凝集体組成物又はその他の抗体標的化検出可能成分又は抗体結合体は、例えば、硝子体液、眼房水、胸膜、結膜、胸膜と結膜との間の領域、網膜、脈絡膜層、黄斑に投与でき、さらに、個体の眼内もしくは眼に近接する他の領域にも投与できる。
【０１８５】
特定の実施形態では、抗体標的化組成物は、血管内に（例えば、静脈内に（ＩＶ）又は動脈内に）投与される。特定の実施形態（例えば、腎疾患の治療のため）では、組成物は動脈（例えば、腎動脈）に直接投与される。
【０１８６】
特定の実施形態では、補体媒介性炎症は、虚血再灌流障害、炎症性疾患、移植拒絶反応、妊娠関連疾患、薬物有害反応、及び自己免疫又は免疫複合体疾患によって生じる組織損傷に関連する。特定の実施形態では、虚血再灌流障害から生じる組織損傷は、心筋梗塞、動脈瘤、脳卒中、出血性ショック、挫滅、多臓器不全、血液量減少性ショック、腸管虚血、脊髄損傷、及び外傷性脳損傷からなる群から選択される疾患に関連する。特定の実施形態では、炎症性疾患は、火傷、内毒血症、敗血症性ショック、成人呼吸促迫症候群、心肺バイパス、血液透析、アナフィラキシーショック、喘息、血管浮腫、クローン病、鎌状赤血球貧血、連鎖球菌感染後糸球体腎炎、膜性腎炎、及び膵炎、からなる群から選択される。特定の実施形態では、移植拒絶反応は超急性異種移植片拒絶反応である。特定の実施形態では、妊娠関連疾患は、再発性胎児喪失及び子癇前症からなる群から選択される。特定の実施形態では、薬物有害反応は、薬物アレルギー及びＩＬ−２誘発血管漏出症候群からなる群から選択される。特定の実施形態では、自己免疫又は免疫複合体疾患は、重症筋無力症、アルツハイマー病、多発性硬化症、関節リウマチ、ＩｇＧ４媒介／関連疾患、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、インスリン依存性糖尿病、急性散在性脳脊髄炎、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性肝炎、クローン病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、天疱瘡、シェーグレン症候群、高安動脈炎、自己免疫性糸球体腎炎、２型膜性増殖性糸球体腎炎、溶血性尿毒症症候群、及び非定型溶血性尿毒症症候群、からなる群から選択される。特定の実施形態では、自己免疫性糸球体腎炎は、免疫グロブリンＡ腎症又は１型膜性増殖性糸球体腎炎に関連する。
【０１８７】
また、本明細書において、本明細書で提供される抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子又はナノ粒子凝集体組成物を使用して、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、それを必要とする個体において、膜性腎症又はループス腎炎に関連する補体媒介性炎症を検出する非侵襲的方法が提供される。特定の実施形態では、補体媒介性炎症は、選択的補体媒介性炎症である。
【０１８８】
本発明で使用する場合、「全身性エリテマトーデス」又は「ループス」又は「ＳＬＥ」との用語は、慢性的な、場合によっては致命的な自己免疫疾患を意味する。その他の自己免疫疾患と同様に、ＳＬＥでは、免疫系が身体の細胞及び組織を攻撃し、炎症及び組織損傷を生じさせる。ＳＬＥは、身体のどの部分にも影響を与えルことができるが、多くの場合、心臓、関節、皮膚、肺、血管、肝臓、腎臓、及び神経系を傷つける。疾患の経過は、予測不可能で、病気又は発赤の期間が寛解期間と交互に現れる。診断は、捕えどころのない場合があり、患者が原因不明の症状及び無治療のＳＬＥに何年間も苦しめられることもある。共通の初期の及び慢性病訴は、発熱、倦怠感、関節痛、筋肉痛、疲労、及び認知能力の一時的喪失である。場合によっては、疾患は、ループス腎炎の発症を含む慢性腎機能不全を伴う。
【０１８９】
本発明で使用する場合、「膜性腎症」又は「ループス腎炎」との用語は、慢性自己免疫疾患ＳＬＥが理由の腎臓の炎症を意味する。ループス腎炎に苦しめられている人は、腎症状がある場合も、ない場合もあるが、該疾患は、重量増、高血圧、黒っぽい泡沫状尿、又は眼の周り、脚、足首又は指の腫脹により顕在化する。
【０１９０】
ＳＬＥは、多面的臨床症状を有する複合自己免疫疾患である。ループス患者の８０％までが、腎臓の異常を発症するが、腎臓予後はこの集団内で大きく変動する。ＤＩＳＥＡＳＥＳ  ＯＦ  ＴＨＥ  ＫＩＤＮＥＹ  ＡＮＤ  Ｕｒｉｎａｒｙ  ＴＲＡＣＴ：ＣＬＩＮＩＣＯＰＡＴＨＯ−ＬＯＧＩＣ  ＦＯＵＮＤＡＴＩＯＮＳ  ＯＦ  ＭＥＤＩＣＩＮＥ（Ｒ．Ｗ．Ｓｃｈｒｉｅｒ  ｅｄ．，８ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．），中のＣ．Ｐａｒｉｋｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）「Ｔｈｅ  Ｌｏｎｇ  Ｔｅｒｍ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  ｏｆ  Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ」。さらに、それぞれの患者で、一つのパターンから別のパターンへと疾患が変化することがある。腎臓での疾患の発症が無痛性の血尿又は蛋白尿だけで済む場合があるが、患者がループス腎炎を発症し、急性又は末期腎不全に至る場合もある。活動性増殖性腎炎の患者は、通常、細胞傷害性薬物又はミコフェノール酸モフェチルと組み合わせて、ステロイドで治療される。Ｗａｌｄｍａｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．７０：１４０３−１４１２。しかし、これらの薬剤に関連する死亡率が大きいという理由から、積極的治療を必要とする患者の特定には、注意深い検討が必要である。治療の持続期間及び強さについても、良好に患者が反応している程度に応じて頻繁に調節される。従って、ループス腎炎のＳＬＥ患者を治療するための大きな課題は、疾患の活動性を評価することと、薬理的治療を調整して毒性を最少化すると同時に寛解を得ることである。
【０１９１】
ループス腎炎の種々の組織型を分類するための最も一般的に使用される系は、最初、世界保健機関（「ＷＨＯ」）で開発されたもので、光学顕微鏡検査による糸球体の外観をベースにしている。Ｊ．Ｊ．Ｗｅｅｎｉｎｇ  ら，２００４，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１５：２４１−２５０。増殖性ループス腎炎（ＷＨＯクラスＩＩＩ又はＩＶ）は、予後最悪で、ほとんどの大きな臨床試験は、これらの患者の治療に対する反応に重点を置いてきた。疾患の組織型は、時間の経過とともに、又は治療に反応して変化するが、しかし、臨床パラメーターは疾患の活動性とうまく相関しない。Ｃ３とＣ４循環濃度の摂動の測定などの血清学的調査も、疾患活動性の正確さに欠けるマーカーであり、腎臓疾患活動性に特異的ではない。
【０１９２】
組織学的には、ＳＬＥの顕著な特徴は、ループの周りに沈着した周辺内皮下免疫複合体を有する糸球体毛細管ループからなる「ワイヤーループ」異常を有する膜性腎症（「ループス腎炎」とも呼ばれる）である。ワイヤーループ病変は、糸球体の基底膜に沿った免疫複合体沈着物から生じ、これが免疫蛍光法画像における特徴的顆粒状外観の原因となる。従って、活動性ループス腎炎は、糸球体間質、内皮下、及び／又は上皮下免疫複合体の存在に基づいている。補体活性化は、ループス腎炎などの活動性免疫複合体病にとって必須の前提条件である。
【０１９３】
増殖性ループス腎炎の効果的治療には、多くの場合、シクロホスファミド又はミコフェノール酸モフェチルなどの強力な免疫抑制剤が必要であるために、通常、治療は腎臓生検の検査により誘導される。活動性ループス腎炎などの糸球体疾患の確定診断は、限定するものではないが、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、Ｃ３、Ｃ４、及びＣ１ｑを含む炎症の臨床マーカーに対する光学顕微鏡、電子顕微鏡、及び免疫蛍光染色による腎臓生検組織の検査に基づいている。
【０１９４】
経皮腎臓生検は、ループス腎炎の確定診断及び疾患の経過のモニタリングに対するゴールドスタンダードである。しかしながら、本明細書で考察のように、腎臓生検は、限界とリスクがある。針生検は、腎臓の小さい部分のみを試料採取するために、不正確な診断につながるサンプリング誤差のリスクが存在する。さらに、生検は一般に安全な手順であるが、かなりの割合の生検で大きな合併症が発生する可能性があり、また、腎臓内出血及び血尿はよくあることである。Ｗ．Ｌ．Ｗｈｉｔｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，１．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１５：１４２−１４７；Ｄ．Ｃ．Ｍｅｎｄｅｌｓｓｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ａｍ．Ｊ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ２６：５８０−５８５。従って、ＳＬＥに関連するループス腎炎を含む腎臓炎症を画像化し、診断する、正確で、安全、かつ非侵襲的方法を開発する必要がある。
【０１９５】
ＭＲＩを使用して、非侵襲的に高解像度の組織画像を取得することができる。常磁性剤又はＵＳＰＩＯナノ粒子もしくはその凝集体は、Ｔ２強調磁気共鳴画像の信号減衰を増強し、このようなナノ粒子の結合リガンドへの結合により細胞レベルでの特異的分子の検出が可能となる。例えば、ナノ粒子検出剤を用いたＭＲＩは、細胞遊走（Ｊ．Ｗ．Ｂｕｌｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９：１１４１−１１４７）、アポトーシス（Ｍ．Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．７：１２４１−１２４４）を画像化でき、また、癌の小さな病巣を検出できる。例えば、Ｙ．Ｗ．Ｊｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｒｎ．Ｓｏｃ．１２７：５７３２−５７３３；Ｙ．Ｍ．Ｈｕｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｒｎ．Ｓｏｃ．１２７：１２３８７−１２３９１、を参照されたい。コントラスト強調ＭＲＩは、高分子又は分子事象の非侵襲動的画像化に好適するが、目的の分子に特異的に結合するリガンドが必要である。Ｊ．Ｗ．Ｂｕｌｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，ＮＭＲ  Ｂｉｏｍｅｄ．１７：４８４−４９９。蛍光染料及びフルオロフォア（例えば、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、及びフルオレセイン誘導体）を使用して、例えば、（例えば、組織生検の）分光測光法、二光子蛍光法、二光子レーザー顕微鏡法、又は蛍光顕微鏡法により非侵襲的に高解像度組織画像を取得できる。ＭＲＩを使用して、例えば、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体、超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＳＰＩＯナノ粒子凝集体、単結晶酸化鉄ナノ粒子、単結晶酸化鉄、その他のナノ粒子造影剤を用いて非侵襲的にナノ粒子組織画像を取得できる。ＭＲＩを使用して、例えば、ガドリニウムキレート（「Ｇｄキレート」）含有リポソーム又はその他の送達担体などのガドリニウムを用いて非侵襲的に高解像度の組織画像を取得することができる。陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、ＰＥＴ／コンピューター断層撮影（ＣＴ）、単一光子放射型コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、及びＳＰＥＣＴ／ＣＴを使い、例えば、放射性核種（例えば、炭素１１、窒素１３、酸素１５、フッ素１８、ルビジウム８２）、フルオロデオキシグルコース（例えば、フッ素１８標識）、いずれかのガンマ線放射性核種、陽電子放射性核種、放射標識グルコース、放射標識水、放射標識アンモニアを用いて、非侵襲的に高解像度組織画像を取得できる。超音波及びコントラスト強調超音波を使用して、例えば、生体コロイド又は微小気泡（例えば、アルブミン、ガラクトース、脂質、及び／又はポリマーを含む微小気泡シェルと；空気、重質ガス、パーフルオロカーボン、窒素、オクタフルオロプロパン、ペルフレキサン脂質微小球、パーフルトレンなどを含む微小気泡ガスコアとを含む）を用いて非侵襲的に高解像度組織画像を取得できる。Ｘ線画像処理（Ｘ線検査）又はＣＴを使用して、例えば、ヨウ素標識造影剤（例えば、イオヘキソール、イオジキサノール、イオベルソール、イオパミドール、イオキシラン、イオプロミド、ジアトリゾ酸、メトリゾ酸、イオキサグル酸）、硫酸バ��ウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、又は金ナノ粒子凝集体を用いて非侵襲的に高解像度組織画像を取得できる。
【０１９６】
補体（例えば、補体活性化副経路）は、ＳＬＥに関連する腎臓炎症及びループス腎炎の病因及び進行に関与することがわかっているので、補体経路（例えば、補体活性化副経路）の成分を標的にできるリガンドは、ＵＳＰＩＯナノ粒子もしくはその凝集体のＳＬＥ患者の腎臓炎症部位への標的化送達に有用であろう。例えば、特異的抗体（又はその抗原結合断片）を使うことが可能であり、これは、選択的補体タンパク質Ｃ３のＣ３ｂ、ｉＣ３ｂ及びＣ３ｄ開裂産物に結合する。リン脂質封入又はデキストランでコーティングされたＵＳＰＩＯナノ粒子もしくはその凝集体は、チオール、アミン、又はカルボキシル基への直接の又は抗体又は抗体断片を介した結合により、抗体又は抗体断片などのタンパク質リガンドに共有結合できる。その後、標識タンパク質を使用して、ＵＳＰＩＯナノ粒子もしくはその凝集体又はその他の抗体標的化検出可能成分又は抗体結合体に対し、補体媒介性（例えば、選択的補体媒介性）炎症の部位を標的にさせることができる。
【０１９７】
従って、特定の実施形態では、本発明は、それを必要とする個体において、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、膜性腎症、又はループス腎炎に関連する補体媒介性炎症検出する非侵襲的方法を提供する。該方法は、（１）該個体に抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子もしくはその凝集体又はその他の抗体標的化検出可能成分もしくは抗体結合体の有効量を含む組成物を投与するステップと、（２）該個体の磁気共鳴画像又はステップ（１）で投与された検出可能成分を検出できる測定値を採取するステップとを含む。特定の実施形態では、補体媒介性炎症は、選択的補体媒介性炎症である。特定の実施形態では、個体は哺乳動物である。特定の実施形態では、哺乳動物はヒト、マウス、又はラットである。特定の実施形態では、抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子もしくはその凝集体又はその他の抗体標的化検出可能成分又は抗体結合体を含む組成物は、注射により投与される。特定の実施形態では、注射は、非経口、静脈内、皮下、又は筋肉内投与で行われる。
【０１９８】
診断用結合体組成物
一態様では、（ａ）Ｃ３ｄ結合部分と、（ｂ）補体診断部分とを含む構築物が提供され、（ａ）と（ｂ）とは結合される（「結合体」又は「結合体分子」）。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、Ｃ３ｄ結合部分は、抗Ｃ３ｄ抗体もしくは抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくは抗ｉＣ３ｂ抗体、又はその抗原結合断片を含み、また、本明細書に記載の抗Ｃ３ｄ／Ｃ３ｄｇ抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書に記載の抗Ｃ３ｄ抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書に記載の抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の抗ｉＣ３ｂ抗体もしくはその抗原結合断片、の内のいずれかを含む。いくつかの実施形態では、補体診断部分は、本明細書に記載の検出可能成分を含む。いくつかの実施形態では、補体診断部分は、本明細書に記載の検出可能成分である。「抗Ｃ３ｄ抗体結合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）」又は「抗Ｃ３ｄ抗体結合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）」は、結合体又は結合体分子であり、Ｃ３ｄ結合部分は、抗Ｃ３ｄ抗体もしくは抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくは抗ｉＣ３ｂ抗体又はこれらの抗体のいずれかの抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗Ｃ３ｄ抗体もしくはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗ｉＣ３ｂ抗体もしくはその抗原結合断片を含む。
【０２００】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、本明細書に記載（例えば、態様、実施形態、上記抗体組成物及び使用セクション、実施例、表、図、請求項を含む）の抗体又は抗原結合断片のいずれかからなる群から選択される抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、本明細書に記載（例えば、態様、実施形態、上記検出可能成分セクション、実施例、表、図、請求項を含む）の検出可能成分又は標識のいずれかからなる群から選択される検出可能成分を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗体又はその抗原結合断片を含み、抗体又はその抗原結合断片は本明細書に記載の少なくとも１つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗体又はその抗原結合断片を含み、抗体又はその抗原結合断片は本明細書に記載の６個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗体又はその抗原結合断片を含み、抗体又はその抗原結合断片は本明細書に記載の核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗体又はその抗原結合断片を含み、抗体又はその抗原結合断片は本明細書に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、本明細書に記載の核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、本明細書に記載のアミノ酸配列を含む。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、補体診断部分は、化合物、組成物、又はタンパク質である。いくつかの実施形態では、補体診断部分は、本明細書に記載のいずれかの標識又は検出可能成分である。いくつかの実施形態では、Ｃ３ｄ結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄもしくは抗Ｃ３ｄｇ、又は抗ｉＣ３ｂ部分）はＣ３ｄに結合する。いくつかの実施形態では、Ｃ３ｄ結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄもしくは抗Ｃ３ｄｇ、又は抗ｉＣ３ｂ部分）はＣ３ｄｇに結合する。いくつかの実施形態では、Ｃ３ｄ結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄもしくは抗Ｃ３ｄｇ、又は抗ｉＣ３ｂ部分）はｉＣ３ｂに結合する。いくつかの実施形態では、Ｃ３ｄ結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄもしくは抗Ｃ３ｄｇ、又は抗ｉＣ３ｂ部分）はＣ３ｄ及びＣ３ｄｇに結合する。いくつかの実施形態では、Ｃ３ｄ結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄもしくは抗Ｃ３ｄｇ、又は抗ｉＣ３ｂ部分）はＣ３ｄ、Ｃ３ｄｇ、及びｉＣ３ｂに結合する。
【０２０２】
さらに別の実施形態では、本開示は、補体活性化をモニタリング又は診断する構築物を提供し、該構築物は、（ａ）抗Ｃ３ｄ抗体又はその抗原結合断片を含むＣ３ｄ結合部分（例えば、本明細書に記載のような）と、（ｂ）検出可能成分を含む補体診断部分とを含む。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示の構築物は、補体副経路（ＣＡＰ）の補体活性をモニター又は診断する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示の構築物は融合タンパク質である。
【０２０４】
本開示は、本明細書に記載の、２つの成分又は部分、例えば、標的化成分又は部分及び活動性診断成分又は部分を含めることができる結合体分子を提供する。これらの成分もしくは部分は共有結合によって直接一緒に融合されるか、又はリンカーを介して融合される。このようなリンカーには、限定するものではないが、ペプチドを含めることができる。代表的ペプチドリンカーは、限定するものではないが、（ＧｌｙＳｅｒ）ｎ（配列番号３８）、ｎ＝１〜８；（ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）ｎ（配列番号３９）、ｎ＝１〜４；（ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）ｎ（配列番号４０）、ｎ＝１〜８；又は（ＧｌｙＳｅｒＳｅｒＧｌｙ）ｎ（配列番号４１）、ｎ＝１〜４；である。いくつかの実施形態では、本明細書で開示の構築物のＣ３ｄ結合部分及び補体診断部分は、リンカーなしで直接に結合される。いくつかの実施形態では、このような２つの部分は化学結合により直接に結合される。いくつかの実施形態では、このような２つの部分はリンカーにより結合される。リンカー配列の例は、当該技術分野において公知であり、例えば、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）（配列番号４２）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２（配列番号４３）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号４４）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号４５）、（ＳｅｒＧｌｙ４）（配列番号４６）、（ＳｅｒＧｌｙ４）２（配列番号４７）、（ＳｅｒＧｌｙ４）３（配列番号４８）、及び（ＳｅｒＧｌｙ４）４（配列番号４９）、が挙げられる。また、リンカー配列は、補体因子の様々なドメイン間で見出される「天然の」リンカー配列も含むことができる。例えば、ヒトＣＲ２の最初の２つのＮ末端ショートコンセンサス反復ドメイン間のリンカー配列であるＶＳＶＦＰＬＥ（配列番号５０）又はＥＹＦＮＫＹＳＳ（配列番号５１）を使用可能である。いくつかの実施形態では、ヒトＣＲ２（ＥＥＩＦ、配列番号５２）の第４と第５のＮ末端ショートコンセンサス反復ドメイン間のリンカー配列が使用される。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のタンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合断片）を異種の成分に結合できる。異種の成分がポリペプチドである実施形態では、本明細書に記載の融合タンパク質及び対応する異種の成分は融合タンパク質を介して結合できる。異種の成分は、例えば、異種のポリペプチド、治療薬（例えば、毒素又は薬剤）、又は検出可能標識もしくは検出可能成分、例えば、限定するものではないが、放射性標識、酵素標識、蛍光標識、発光標識、３２Ｐ、蛍光染料、高電子密度試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡで通常用いられるものなど）、ビオチン、ジゴキシゲニン、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体、超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）、ＳＰＩＯナノ粒子凝集体、単結晶酸化鉄ナノ粒子、単結晶酸化鉄、その他のナノ粒子造影剤、ガドリニウムキレート（「Ｇｄキレート」）分子含有リポソームもしくはその他の送達担体、ガドリニウム、放射性同位元素、放射性核種（例えば、炭素１１、窒素１３、酸素１５、フッ素１８、ルビジウム８２）、フルオロデオキシグルコース（例えば、フッ素１８標識した）、いずれかのガンマ線放射性核種、陽電子放射性核種、放射標識グルコース、放射標識水、放射標識アンモニア、生体コロイド、微小気泡（例えば、アルブミン、ガラクトース、脂質、及び／又はポリマーを含む微小気泡シェルと；空気、重質ガス、パーフルオロカーボン、窒素、オクタフルオロプロパン、ペルフレキサン脂質微小球、パーフルトレンなどを含む微小気泡ガスコアとを含む）、ヨウ素標識造影剤（例えば、イオヘキソール、イオジキサノール、イオベルソール、イオパミドール、イオキシラン、イオプロミド、ジアトリゾ酸、メトリゾ酸、イオキサグル酸）、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、金ナノ粒子凝集体、フルオロフォア、二光子フルオロフォア、ハプテン、タンパク質、又は検出可能にできるその他の構成要素であってよい。好適な異種のポリペプチドには、例えば、抗体精製に使われる抗原性のタグ（例えば、ＦＬＡＧ、ポリヒスチジン、赤血球凝集素（ＨＡ）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、又はマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ））、が挙げられる。また、異種のポリペプチドには、診断又は検出可能マーカーとして有用なポリペプチド、例えば、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、又はクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）が挙げられる。異種の成分がポリペプチドである場合、成分を本明細書に記載の融合タンパク質に組み込むことができ、融合タンパク質が得られる。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、検出可能成分は放射性標識である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は酵素標識である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は蛍光標識である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は発光標識である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は３２Ｐである。いくつかの実施形態では、検出可能成分は蛍光染料である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は高電子密度試薬である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は酵素（例えば、通常ＥＬＩＳＡで使われるような）である。いくつかの実施形態では、検出可能成分はビオチンである。いくつかの実施形態では、検出可能成分はジゴキシゲニンである。いくつかの実施形態では、検出可能成分は常磁性分子である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は常磁性組成物である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は常磁性ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、検出可能成分はＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、検出可能成分はＳＰＩＯナノ粒子凝集体である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は単結晶酸化鉄ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は単結晶酸化鉄である。いくつかの実施形態では、検出可能成分はナノ粒子造影剤である。いくつかの実施形態では、検出可能成分はリポソームである。いくつかの実施形態では、検出可能成分はガドリニウムキレート（「Ｇｄキレート」）分子を含む送達担体である。いくつかの実施形態では、検出可能成分はガドリニウムである。いくつかの実施形態では、検出可能成分は放射性同位元素である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は放射性核種（例えば、炭素１１、窒素１３、酸素１５、フッ素１８、又はルビジウム８２）である。いくつかの実施形態では、検出可能成分はフルオロデオキシグルコース（例えば、フッ素１８標識した）である。いくつかの実施形態では、検出可能成分はガンマ線放射性核種である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は陽電子放射性核種である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は放射標識グルコースである。いくつかの実施形態では、検出可能成分は放射標識水である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は放射標識アンモニアである。いくつかの実施形態では、検出可能成分は生体コロイドである。いくつかの実施形態では、検出可能成分は、微小気泡（例えば、アルブミン、ガラクトース、脂質、及び／又はポリマーを含む微小気泡シェルと、空気、重質ガス、パーフルオロカーボン、窒素、オクタフルオロプロパン、ペルフレキサン脂質微小球、もしくはパーフルトレンを含む微小気泡ガスコアとを含む）である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は、ヨウ素標識造影剤（例えば、イオヘキソール、イオジキサノール、イオベルソール、イオパミドール、イオキシラン、イオプロミド、ジアトリゾ酸、メトリゾ酸、又はイオキサグル酸）である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は硫酸バリウムである。いくつかの実施形態では、検出可能成分は二酸化トリウムである。いくつかの実施形態では、検出可能成分は金である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は金ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は金ナノ粒子凝集体である。いくつかの実施形態では、検出可能成分はフルオロフォアである。いくつかの実施形態では、検出可能成分は二光子フルオロフォアである。いくつかの実施形態では、検出可能成分はハプテンである。いくつかの実施形態では、検出可能成分はタンパク質である。いくつかの実施形態では、検出可能成分は検出可能にできる構成要素である。いくつかの実施形態では、異種のポリペプチドは、抗体精製に使われる抗原性のタグ（例えば、ＦＬＡＧ、ポリヒスチジン、赤血球凝集素（ＨＡ）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、又はマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ））である。いくつかの実施形態では、異種のポリペプチドは、診断又は検出可能マーカー、例えば、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、又はクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）である。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の結合体は、２つの独立に生成されたポリペプチド断片、例えば、抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、抗Ｃ３ｄ抗体のＦａｂ断片もしくはその抗原結合断片）及び補体モジュレーターポリペプチド（例えば、可溶型のＣＤ５９）又は検出可能成分に結合により作られる。いくつかの実施形態では、２つのタンパク質（例えば、本明細書に記載の融合タンパク質及び異種の成分又は結合体の２つの構成成分）は、多くの公知の化学架橋剤のいずれかを使用して化学的に架橋できる。このような架橋剤の例は、２つのアミノ酸残基を「立体障害のある」ジスルフィド結合を含む結合を介して連結する架橋剤である。これらの結合では、架橋結合単位内のジスルフィド結合は、例えば、還元グルタチオン又は酵素ジスルフィド還元酵素の作用による還元から（ジスルフィド結合の両側にある立体障害基により）保護される。１つの好適な試薬である４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α（２−ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）は、片方のタンパク質上の末端リシン及びもう一方のタンパク質上の末端システインを利用して、２つのタンパク質間にこのような結合を形成する。それぞれのタンパク質上の異なる結合成分により架橋するヘテロ二機能性試薬も同様に使用可能である。その他の有用な架橋剤には、限定するものではないが、２つのアミノ基を結合する試薬（例えば、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド）、２つのスルフヒドリル基を結合する試薬（例えば、１，４−ビスマレイミドブタン）、アミノ基とスルフヒドリル基を結合する試薬（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、アミノ基とカルボキシル基を結合する試薬（例えば、４−［ｐ−アジドサリチルアミド］ブチルアミン）、及びアミノ基とアルギニンの側鎖中に存在するグアニジウム基を結合する試薬（例えば、ｐ−アジドフェニルグリオキサール一水和物）が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１種又は複数種のリンカーは、抗体又はその抗原結合断片（例えば、抗Ｃ３ｄ抗体、抗Ｃ３ｄｇ抗体、抗ｉＣ３ｂ抗体、又はそれらの抗原結合断片）を本明細書に記載の検出可能成分に連結できる。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の結合体は、化学的にタンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合断片）に結合できる異種の成分を含むことができる。例えば、いくつかの実施形態では、放射性標識をタンパク質（例えば、抗体又はその抗原結合断片）のアミノ酸主鎖に直接結合できる（例えば、インビボ画像処理調査用の標識した融合タンパク質として使用するために）。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、循環中の、例えば、血液、血清、又はその他の組織の抗体の安定化及び／又は保持を改善する成分を使用してタンパク質を改質できる。例えば、本明細書に記載のタンパク質は、例えば、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  １０（６）：９７３−８：Ｋｉｎｓｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｉｅｓ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５４：４７７−４８５；及びＲｏｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５４：４５９−４７６、に記載のように、ペグ化できる。安定化成分は、ポリペプチドの安定性、又は保持を、少なくとも１．５（例えば、少なくとも２、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、又は５０もしくはそれ超）倍改善できる。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のタンパク質は、グリコシル化できる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のタンパク質は、抗体のグリコシル化を低減させるか、又は消失させるように、酵素もしくは化学処理に供するか、又は細胞から作製できる。グリコシル化の減らされたポリペプチドを作製する方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、米国特許第６，９３３，３６８号；Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）ＥＭＢＯ  Ｊ  １０（１０）：２７１７−２７２３；及びＣｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３０：１３６１に記載されている。
【０２１１】
第１の態様では、抗体又はその抗原結合断片、及び検出可能成分を含む抗体結合体が提供される。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に記載（例えば、態様、実施形態、上記抗体組成物及び使用セクション、実施例、表、図、請求項を含む）の抗体又は抗原結合断片のいずれかからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、検出可能成分は、本明細書に記載（例えば、態様、実施形態、上記検出可能成分セクション、実施例、表、図、請求項を含む）の検出可能成分又は標識のいずれかからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に記載の６個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に記載の核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体結合体は、本明細書に記載の核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体結合体は、本明細書に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体結合体は、抗体又はその抗原結合断片と、検出可能成分を結合するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、抗体結合体は、抗体又はその抗原結合断片と、検出可能成分を結合するリンカーを含まない。抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片と検出可能成分は、共有結合により結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは本明細書に記載のリンカーである。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体又はその抗原結合断片、キメラ化もしくはキメラ抗体又はその抗原結合断片、ヒト化抗体又はその抗原結合断片、脱免疫化ヒト抗体又はその抗原結合断片、完全ヒト抗体又はその抗原結合断片、二重特異性抗体又は抗体断片、一価抗体又は抗体断片、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ断片（ＳｃＦｖ）、Ｆｖ、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ’（ａｂ’）２断片、ダイアボディ又はその抗原結合断片、ミニボディ又はその抗原結合断片、トリアボディ又はその抗原結合断片、ドメイン抗体又はその抗原結合断片、ラクダ類抗体又はその抗原結合断片、ヒトコブラクダ抗体又はその抗原結合断片、ＣＤＲグラフト抗体又はその抗原結合断片、合成抗体又はその抗原結合断片、半合成抗体又はその抗原結合断片、ファージディスプレイ抗体又はその抗原結合断片、及び反復主鎖配列（例えば、反復抗原提示）であると特定された抗体及びその抗原結合断片、からなる群から選択される。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、抗体もしくはその抗原結合断片、抗体結合体の部分は、抗Ｃ３ｄ抗体もしくは抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくは抗ｉＣ３ｂ抗体、又はその抗原結合断片を含み、また、本明細書に記載の抗Ｃ３ｄ／Ｃ３ｄｇ抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書に記載の抗Ｃ３ｄ抗体もしくはその抗原結合断片、本明細書に記載の抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の抗ｉＣ３ｂ抗体もしくはその抗原結合断片、の内のいずれかを含む。「抗Ｃ３ｄ抗体結合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）」又は「抗Ｃ３ｄ抗体結合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）」は、結合体又は結合体分子（例えば、抗体結合体もしくは抗体結合体分子）であり、結合部分（例えば、抗体結合体の抗体もしくはその抗原結合断片）は、抗Ｃ３ｄ抗体もしくは抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくは抗ｉＣ３ｂ抗体又はこれらの抗体のいずれかの抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、本明細書に記載（例えば、態様、実施形態、上記抗体組成物及び使用セクション、実施例、表、図、請求項を含む）の抗体又は抗原結合断片のいずれかからなる群から選択される抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、本明細書に記載（例えば、態様、実施形態、上記検出可能成分セクション、実施例、表、図、請求項を含む）の検出可能成分又は標識のいずれかからなる群から選択される検出可能成分を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗体又はその抗原結合断片を含み、抗体又はその抗原結合断片は本明細書に記載の少なくとも１つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗体又はその抗原結合断片を含み、抗体又はその抗原結合断片は本明細書に記載の６個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗体又はその抗原結合断片を含み、抗体又はその抗原結合断片は本明細書に記載の核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗体又はその抗原結合断片を含み、抗体又はその抗原結合断片は本明細書に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、本明細書に記載の核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、本明細書に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄ抗体もしくは抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくは抗ｉＣ３ｂ抗体又はそれらの抗原結合断片）と、検出可能成分とを結合するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄ抗体もしくは抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくは抗ｉＣ３ｂ抗体又はそれらの抗原結合断片）と、検出可能成分とを結合するリンカーを含まない。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄ抗体もしくは抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくは抗ｉＣ３ｂ抗体又はそれらの抗原結合断片）と、検出可能成分は、共有結合により結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは本明細書に記載のリンカーである。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、補体診断部分は、化合物、組成物、又はタンパク質である。いくつかの実施形態では、補体診断部分は、本明細書に記載のいずれかの標識又は検出可能成分である。いくつかの実施形態では、Ｃ３ｄ結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄ部分）はＣ３ｄに結合する。いくつかの実施形態では、Ｃ３ｄ結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄ部分）はＣ３ｄｇに結合する。いくつかの実施形態では、Ｃ３ｄ結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄ部分）はｉＣ３ｂに結合する。いくつかの実施形態では、Ｃ３ｄ結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄ部分）はＣ３ｄ及びＣ３ｄｇに結合する。いくつかの実施形態では、Ｃ３ｄ結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄ部分）はＣ３ｄ、Ｃ３ｄｇ、及びｉＣ３ｂに結合する。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載され、配列番号１２〜１９、２２〜２９、及び３４〜３７から選択されるか、又は配列番号２０、２１、３０、３１、及び３３の全て又は一部を含む核酸配列から発現したアミノ酸配列の全て又は一部を含む抗体又はその抗原結合断片（本明細書に記載のいずれかの抗体又はその抗原結合断片を含む）は、抗Ｃ３ｄ抗体又はその抗原結合断片、抗Ｃ３ｄｇ抗体又はその抗原結合断片、抗Ｃ３ｄ／Ｃ３ｄｇ抗体又はその抗原結合断片、抗ｉＣ３ｂ抗体又はその抗原結合断片、抗体又は本明細書に記載の抗原結合断片、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片、本明細書に記載の断片、本開示で提供される抗体又はその抗原結合断片、本開示が含む抗体又はその抗原結合断片、抗Ｃ３ｄ抗体又は抗Ｃ３ｄｇ抗体又は抗ｉＣ３ｂ抗体、本開示に提供されるその抗原結合断片、抗体又はその断片、Ｃ３ｄｇ及びＣ３ｄ及びｉＣ３ｂ又は好適な標的化成分であるそれぞれの結合相手に結合する能力を保持する抗体の断片からなる群から選択される結合相手に結合する抗体、本発明の抗体又は好適な標的化成分であるそれぞれの結合相手に結合する能力を保持するその断片、単離抗体又はその抗原結合断片である。この項でのこれらの用語は、本発明の抗体又は抗原結合断片を記載するためにこれらの用語又は同義語が本明細書で使用されるそのままの意味で使われている（例えば、単離組成物として、結合体中に含まれる、抗体結合体中に含まれる）。
【０２１７】
配列番号１２〜２１は、適宜、マウス抗体３ｄ８ｂのアミノ酸又は核酸配列である。配列番号２２〜３１は、適宜、マウス抗体３ｄ２９のアミノ酸又は核酸配列である。配列番号３３〜３７は、適宜、マウス抗体３ｄ１６のアミノ酸又は核酸配列である。配列番号３２は、３ｄ  ＳｃＦｖ  Ｃｒｒｙ融合タンパク質（例えば、構築物）である。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ハイブリドーマ細胞株３ｄ−８ｂ／２（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１０９９９）により作製されたｍＡｂ  ３ｄ８ｂである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ハイブリドーマ細胞株３ｄ−９ａ／２５（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１０９９８）により作製されたｍＡｂ  ３ｄ９ａである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ハイブリドーマ細胞株３ｄ−２９／５／２（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０００）により作製されたｍＡｂ  ３ｄ２９である。いくつかの実施形態では、本開示で記載の抗体又はその抗原結合断片には、限定するものではないが、ｍＡｂ  ３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、又は本開示中で記載のその他のｍＡｂ由来の任意の操作された又は組換え型抗体もしくはその抗原結合断片が含まれ、これらは、当該技術分野において周知の標準的な方法により容易に選別又は作製できる。一般に、本開示のｍＡｂ由来の全てのこれらの抗体又は断片は、Ｃ３ｄ／Ｃ３ｄｇタンパク質及び／又はｉＣ３ｂタンパク質に対するそれらの結合親和性、結合力、もしくは種間活性、Ｃ３又はその他のＣ３断片に対する選択性；又はそれらの発現パターン及び溶解度、安定性、半減期、その他のタンパク質／標的との交差反応性；又はエフェクター活性などのこれらの抗体もしくは断片の他の固有の活性もしくは特徴を制限なく調整するために、設計、選別、作製及び／又は試験を行うことができる。
【０２１９】
本明細書において、３ｄ−８ｂ／２（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１０９９９）、３ｄ−９ａ／２５（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１０９９８）、３ｄ−２９／５／２（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０００）、３ｄ−１１／１４（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０１１）、３ｄ−３１／Ａ６／９（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０２７）、３ｄ−３／２８／４（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０２５）、３ｄ−１５Ａ９（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０１２）、３ｄ−１０／１４／１（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０１０）、及び３ｄ−１６／３／３（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０２６）、からなる群から選択されるハイブリドーマ細胞が記載される。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片は、上記で挙げたハイブリドーマ細胞の１つにより作製される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片は、上記で挙げたハイブリドーマのいずれかにより作製されたいずれかの抗体の６ＣＤＲセットを含むヒト化、霊長類化、又はキメラ化抗体である。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示で記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする単離核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、それぞれ、配列番号２０又は配列番号３０の全てと比較して）、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）配列番号２０又は配列番号３０に同一の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、それぞれ、配列番号２１又は配列番号３１又は配列番号３３の全てと比較して）、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）配列番号２１又は配列番号３１又は配列番号３３に同一の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２０又は配列番号３０からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該核酸配列は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２０又は配列番号３０からなる核酸にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２１又は配列番号３１又は配列番号３３からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該核酸配列は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２１又は配列番号３１又は配列番号３３からなる核酸にハイブリダイズする。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３５、配列番号３６、又は配列番号３７と同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３５、配列番号３６、又は配列番号３７と比較した場合、３個以下（３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異のあるアミノ酸配列を有するＣＤＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は保存的及び非保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は非保存的である。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、又は配列番号２９と同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、又は配列番号２９と比較した場合、３個以下（３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異のあるアミノ酸配列を有するＣＤＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は保存的及び非保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は非保存的である。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号２４、配列番号２５、又は配列番号２６と同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号２４、配列番号２５、又は配列番号２６と比較した場合、３個以下（３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異のあるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域ＣＤＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は保存的及び非保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は非保存的である。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３５、配列番号３６、又は配列番号３７と同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３５、配列番号３６、又は配列番号３７と比較した場合、３個以下（３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異のあるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は保存的及び非保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は非保存的である。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２７、配列番号２８、又は配列番号２９と同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２７、配列番号２８、又は配列番号２９と比較した場合、３個以下（３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異のあるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は保存的及び非保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は保存的である。いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は非保存的である。
【０２２７】
別の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片、又はＣＤＲの核酸配列を含むベクターを提供する。このようなベクターには、限定するものではないが、プラスミドベクター、コスミドベクター、ウイルスベクター、シャトルベクター、又は原核もしくは真核細胞における発現用として当該技術分野で周知のいずれかのベクターが含まれる。
【０２２８】
別の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、又はＣＤＲをコードする単離核酸の核酸配列を含むベクターを含む細胞を提供する。このような細胞には、例えば、原核細胞又は真核細胞が含まれる。
【０２２９】
別の実施形態では、本開示は、（ａ）本明細書に記載の抗体、抗原結合断片、又はＣＤＲ又は構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）の内のいずれか１つをコードする核酸、（ｂ）核酸を含むベクター（例えば、発現ベクター）、及び（ｃ）ベクター又は発現ベクターを含む細胞（例えば、細菌、植物、真菌、昆虫、又は哺乳動物細胞）を特徴とする。
【０２３０】
さらに別の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の抗体、抗体の抗原結合断片、又はＣＤＲ、又は構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）作製方法を特徴とする。該方法は、細胞による抗体、断片、又は構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）の発現を可能とするのに適する条件下で上述の細胞を培養するステップを含む。該方法に、任意選択で細胞から又は細胞が培養された培地から抗体、断片、又は構築物を精製するステップを含めることができる。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示で記載の単離抗体又はその抗原結合断片のいずれかを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本開示で記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本開示で記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする単離核酸の核酸配列を含むベクターを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載のこのようなベクターを含む細胞を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本開示で記載の構築物のいずれかを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本開示で記載の結合体を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本開示で記載の抗体結合体のいずれかを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本開示で記載の抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいずれかを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤を含む。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示で記載の単離抗体又はその抗原結合断片及び治療的に許容可能な賦形剤のいずれかを含む医薬組成物を提供する。適切な賦形剤は当該技術分野において周知であり、本明細書に記載されている。
【０２３３】
本発明者らは、補体のＣ３ｄ及び／又はＣ３ｄｇ及び／又はｉＣ３ｂ断片上に存在する特定のエピトープに対し、診断薬又は検出可能成分の標的化が、補体活性化の部位である組織又は細胞で最適効果を発揮するように診断薬を局在化させるという観点から極めて効果的であることを発見した。従って、本発明者らは、補体のＣ３ｄ及び／又はＣ３ｄｇ及び／又はｉＣ３ｂ断片に結合する抗体を単離し、診断薬及び検出可能成分の標的化にそれらを使用した。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトＣ３ｄタンパク質中のエピトープに結合する抗体又はその抗原結合断片を特徴とする。いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトＣ３ｄｇタンパク質中のエピトープに結合する抗体又はその抗原結合断片を特徴とする。いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトｉＣ３ｂタンパク質中のエピトープに結合する抗体又はその抗原結合断片を特徴とする。例えば、抗Ｃ３ｄ抗体又は抗Ｃ３ｄｇ抗体又は抗ｉＣ３ｂ抗体は、ヒト補体成分Ｃ３ｄタンパク質の抗原性ペプチド断片内の、もしくは抗原性ペプチド断片と重なり合うエピトープに、又はヒト補体成分Ｃ３ｄｇタンパク質中のエピトープに、又はヒト補体成分ｉＣ３ｂタンパク質中のエピトープに結合できる。いくつかの実施形態では、これらの抗Ｃ３ｄ抗体又は抗Ｃ３ｄｇ抗体又は抗ｉＣ３ｂ抗体は、モノクローナル抗体又は抗原結合活性を維持している抗体断片である。いくつかの実施形態では、これらのモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ細胞３ｄ−８ｂ／２（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１０９９９）、３ｄ−９ａ／２５（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１０９９８）、３ｄ−２９／５／２（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０００）、３ｄ−１１／１４（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０１１）、３ｄ−３１／Ａ６／９（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０２７）、３ｄ３／２８／４（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０２５）、３ｄ−１５Ａ９（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０１２）、３ｄ−１０／１４／１（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０１０）、及び３ｄ−１６／３／３（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１１０２６）によりにより作製されたものを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、及び３ｄ１６のいずれか１つの中のエピトープ、又はそれと重なり合うエピトープ、それにより認識されるエピトープと結合する抗体もしくはその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、及び３ｄ１６のいずれか１つの中のエピトープ、又はそれと重なり合うエピトープ、それにより認識されるエピトープと結合するこれらの抗体もしくはその抗原結合断片は、Ｃ３ｄ又はＣ３ｄｇ又はｉＣ３ｂに対する結合に関して、抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、及び３ｄ１６の内の少なくとも１つとは競合しない。いくつかの実施形態では、抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、及び３ｄ１６の内の少なくとも１つの中のエピトープ、又はそれと重なり合うエピトープ、それにより認識されるエピトープと結合するこれらの抗体もしくはその抗原結合断片は、Ｃ３ｄ又はＣ３ｄｇ又はｉＣ３ｂに対する結合に関して、３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、及び３ｄ１６を含む抗体の内の少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、又は９つ）と競合する。いくつかの実施形態では、抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、及び３ｄ１６のいずれか１つの中のエピトープ、又はそれと重なり合うエピトープ、それにより認識されるエピトープと結合するこれらの抗体もしくはその抗原結合断片は、Ｃ３ｄ又はＣ３ｄｇ又はｉＣ３ｂに対する、抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、及び３ｄ１６の内の少なくとも１つの結合を抑制する。別の態様において、抗体、又はその抗原結合断片は、ＳｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＳｃＦｖは、抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ２９、３ｄ１１、３ｄ３１、３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１０、及び３ｄ１６のいずれか１つのから誘導される（３ｄ  ＳｃＦｖ）。いくつかの実施形態では、ＳｃＦｖは３ｄ８ｂ  ＳｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＳｃＦｖは３ｄ２９  ＳｃＦｖである。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、本開示で提供される抗Ｃ３ｄ抗体もしくは抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくは抗ｉＣ３ｂ抗体、又はその抗原結合断片は、ヒト補体成分Ｃ３ｄもしくはＣ３ｄｇタンパク質もしくはｉＣ３ｂタンパク質中のエピトープ、又はそれと重なり合うエピトープに結合する別の抗体もしくは結合相手の結合を交差ブロックできる。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体もしくは抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくは抗ｉＣ３ｂ抗体、又はその抗原結合断片は、ヒト補体成分Ｃ３ｄタンパク質もしくはＣ３ｄｇタンパク質もしくはｉＣ３ｂタンパク質のペプチド断片中のエピトープ、又はそれと重なり合うエピトープに結合する抗体の結合を交差ブロックできる。
【０２３６】
いくつかの実施形態は、非侵襲的医学又は画像診断用途のための抗体標的化ナノ粒子造影剤である。特定の実施形態では、抗体標的化ナノ粒子造影剤組成物は、ＵＳＰＩＯナノ粒子又はその凝集体を含む。特定の実施形態では、抗体標的化ナノ粒子造影剤組成物は、ガドリニウムキレート（「Ｇｄキレート」）分子を含む抗体標的化リポソーム又はその他の抗体標的化送達担体を含む。抗体標的化ナノ粒子造影剤又は組成物及び抗体標的化極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子又は凝集体は、抗体結合体の例である。
【０２３７】
別の実施形態では、本明細書において、有効量のいずれかの標的化診断薬成分（例えば、構築物、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）を含む診断組成物、及び本明細書に記載される方法による使用に関する使用説明書を含む製品又はキットが提供される。従って、いくつかの実施形態では、製品は、Ｃ３ｄ及びＣ３ｄｇ及びｉＣ３ｂから選択される結合相手に結合するモノクローナル抗体を含む有効量の抗Ｃ３ｄ抗体結合体（結合により検出可能成分を形成する）を含む診断組成物の使用のための使用説明書を含む。診断組成物は、本明細書に記載の個体への投与用に処方された１種又は複数種の薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含んでもよい。キットには、投与手段、例えば、シリンジ、吸入器、又は全身投与もしくは局所投与に有用なその他の装置をさらに含めてもよい。
【０２３８】
さらに別の実施形態では、本開示は、ラベル；及び本明細書に記載のいずれかの構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）含有組成物を含む容器を含む製品を特徴とし、ラベルは、組成物が補体関連障害、疾患、又は状態である、そうであると疑われる、又は発症の危険があるヒトに投与されるべきであることを表示する。製品には、１種又は複数種の追加の薬剤を含めることができる。
【０２３９】
いくつかの実施形態は、診断又はモニタリングキットであり、該キットは、（ｉ）本明細書に記載のいずれかの抗体もしくはその抗原結合断片と、（ｉｉ）抗体又は抗原結合断片をヒトに送達するための手段、又は（ｉｉ）本明細書に記載のいずれかの構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）と、（ｉｖ）構築物をヒトに送達するための手段とを含む。手段は、構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）のヒトの皮下送達に適するものであってよい。手段は、構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）のヒトの眼内送達に適するものであってよい。手段は、構築物（例えば、結合体、抗Ｃ３ｄ抗体結合体）のヒトの関節腔内送達に適するものであってよい。
【０２４０】
本明細書に記載のいくつかの実施形態では、個体に投与される組成物は、本明細書に記載のいずれかの抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子組成物を含む医薬組成物である。本明細書に記載のいくつかの実施形態では、個体に投与される組成物は、本明細書に記載のいずれかの抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体組成物を含む医薬組成物である。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、抗体結合体は抗Ｃ３ｄ抗体結合体である。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗Ｃ３ｄ抗体、又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗Ｃ３ｄｇ抗体、又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、抗ｉＣ３ｂ抗体、又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄ抗体もしくは抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくは抗ｉＣ３ｂ抗体又はこれらの抗体のいずれかの抗原結合断片）と、検出可能成分とを結合するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄ抗体もしくは抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくは抗ｉＣ３ｂ抗体又はこれらの抗体のいずれかの抗原結合断片）と、検出可能成分とを結合するリンカーを含まない。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、結合部分（例えば、抗Ｃ３ｄ抗体もしくは抗Ｃ３ｄｇ抗体もしくは抗ｉＣ３ｂ抗体又はこれらの抗体のいずれかの抗原結合断片）と、検出可能成分は、共有結合により結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは本明細書に記載のリンカーである。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３を含む抗体もしくはその抗原結合断片を含む（軽鎖ＣＤＲ１は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１４、もしくは３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１５、もしくは３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２５であり、さらに軽鎖ＣＤＲ３は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１６、もしくは３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２６である）；又は、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（重鎖ＣＤＲ１は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１７、もしくは３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２７、もしくは３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号３５であり、重鎖ＣＤＲ２は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１８、もしくは３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２８、もしくは３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号３６であり、さらに重鎖ＣＤＲ３は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１９、もしくは３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２９、もしくは３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号３７である）。いくつかの実施形態では、変異は非保存的及び／又は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、変異は保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、変異は非保存的アミノ酸置換である。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４又は配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５又は配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６又は配列番号２６である）、又は重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７又は配列番号２７又は配列番号３５であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８又は配列番号２８又は配列番号３６であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９又は配列番号２９又は配列番号３７である）を含む抗体もしくはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４又は配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５又は配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６又は配列番号２６である）、又は重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７又は配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８又は配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９又は配列番号２９である）を含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４又は配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５又は配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６又は配列番号２６である）、及び重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７又は配列番号２７又は配列番号３５であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８又は配列番号２８又は配列番号３６であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９又は配列番号２９又は配列番号３７である）を含む抗体もしくはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４又は配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５又は配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６又は配列番号２６である）、及び重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７又は配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８又は配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９又は配列番号２９である）を含む。
【０２４５】
抗体もしくはその抗原結合断片を含む抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１５であり、軽鎖ＣＤＲ３は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１６であり、重鎖ＣＤＲ１は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１７であり、重鎖ＣＤＲ２は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１８であり、さらに、重鎖ＣＤＲ３は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１９である。抗体又はその抗原結合断片のいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６であり、重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９である。
【０２４６】
抗体もしくはその抗原結合断片を含む抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１５であり、軽鎖ＣＤＲ３は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１６であるか、又は重鎖ＣＤＲ１は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１７であり、重鎖ＣＤＲ２は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１８であり、重鎖ＣＤＲ３は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号１９である。抗体又はその抗原結合断片のいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６であるか、又は重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９である。
【０２４７】
抗体もしくはその抗原結合断片を含む抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２６であり、重鎖ＣＤＲ１は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２８であり、さらに、重鎖ＣＤＲ３は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２９である。抗体又はその抗原結合断片のいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号２６であり、又は重鎖ＣＤＲ１は配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号２９である。
【０２４８】
抗体もしくはその抗原結合断片を含む抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２６であるか、又は重鎖ＣＤＲ１は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３は、３個以下（例えば、３、２、１、又は０個）のアミノ酸変異を含む配列番号２９である。抗体又はその抗原結合断片のいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号２６であるか、又は重鎖ＣＤＲ１は配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号２９である。＊変異の有無の両方の場合の配列番号３５、３６、３７を追加。
【０２４９】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１２又は配列番号２２に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列、又は配列番号１３又は配列番号２３又は配列番号３４に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１２又は配列番号２２に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号１３又は配列番号２３又は配列番号３４に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１２又は配列番号２２に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列、又は配列番号１３又は配列番号２３に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１２又は配列番号２２に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号１３又は配列番号２３に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０２５１】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１２に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１３に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２２に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２３に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３４に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１２に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号１３に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２２に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号２３に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０２５４】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、それぞれ、配列番号２０又は配列番号３０の全てと比較して）、配列番号２０又は配列番号３０に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の配列を含む核酸配列から発現した軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、配列番号２０の全てと比較して）、配列番号２０に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の配列を含む核酸配列から発現した軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、配列番号３０の全てと比較して）、配列番号３０に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の配列を含む核酸配列から発現した軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０２５５】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、それぞれ、配列番号２１又は配列番号３１又は配列番号３３の全てと比較して）、配列番号２１又は配列番号３１又は配列番号３３に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の配列を含む核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、配列番号２１の全てと比較して）、配列番号２１に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の配列を含む核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、配列番号３１の全てと比較して）、配列番号３１に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の配列を含む核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、配列番号３３の全てと比較して）、配列番号３３に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の配列を含む核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、配列番号２０の全てと比較して）、配列番号２０に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の配列を含む核酸配列から発現した軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、配列番号２１の全てと比較して）、配列番号２１に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の配列を含む核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、配列番号３０の全てと比較して）、配列番号３０に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の配列を含む核酸配列から発現した軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び、少なくとも２０ヌクレオチドの連続核酸配列と比較して（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、７５、１００、１２５、１５０ヌクレオチド又は、配列番号３１の全てと比較して）、配列番号３１に対し、少なくとも６０％（例えば、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％）同一の配列を含む核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０２５７】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２０又は配列番号３０からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該核酸配列は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２０又は配列番号３０からなる核酸にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２０からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該核酸配列は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２０からなる核酸にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号３０からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該核酸配列は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号３０からなる核酸にハイブリダイズする。
【０２５８】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２１又は配列番号３１又は配列番号３３からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該核酸配列は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２１又は配列番号３１又は配列番号３３からなる核酸にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２１からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該核酸配列は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２１からなる核酸にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号３１からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該核酸配列は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号３１からなる核酸にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号３３からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該核酸配列は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号３３からなる核酸にハイブリダイズする。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２０からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２１からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２０からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号２１からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号３０からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号３１からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号３０からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号３１からなる核酸にハイブリダイズする核酸配列から発現した重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０２６０】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３０又は配列番号３１の核酸配列によりコードされる１個以上（例えば、１、２、３、４、５、又は６個）のＣＤＲを含み、これらの核酸配列は、１個以上（例えば、１、２、３、４、５、又は６個）のＣＤＲをコードする核酸配列中に６個以下（６、５、４、３、２、１、又は０個）のヌクレオチド変異を有する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３０又は配列番号３１の核酸配列によりコードされる１個以上（例えば、１、２、３、４、５、又は６個）のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３０又は配列番号３１のＣＤＲ核酸配列によりコードされる１個以上（例えば、１、２、３、４、５、又は６個）のＣＤＲを含む。
【０２６１】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２０又は配列番号３０の核酸配列によりコードされる１個以上（例えば、１、２、又は３個）の軽鎖可変領域ＣＤＲを含み、これらの核酸配列は、１個以上（例えば、１、２、又は３個）のＣＤＲをコードする核酸配列中に６個以下（６、５、４、３、２、１、又は０個）のヌクレオチド変異を有する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２０又は配列番号３０の核酸配列によりコードされる１個以上（例えば、１、２、又は３個）の軽鎖可変領域ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２０又は配列番号３０のＣＤＲ核酸配列によりコードされる１個以上（例えば、１、２、又は３個）の軽鎖可変領域ＣＤＲを含む。
【０２６２】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１又は配列番号３１又は配列番号３３の核酸配列によりコードされる１個以上（例えば、１、２、又は３個）の重鎖可変領域ＣＤＲを含み、これらの核酸配列は、１個以上（例えば、１、２、又は３個）のＣＤＲをコードする核酸配列中に６個以下（６、５、４、３、２、１、又は０個）のヌクレオチド変異を有する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１又は配列番号３１又は配列番号３３の核酸配列によりコードされる１個以上（例えば、１、２、又は３個）の重鎖可変領域ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１又は配列番号３１又は配列番号３３のＣＤＲ核酸配列によりコードされる１個以上（例えば、１、２、又は３個）の重鎖可変領域ＣＤＲを含む。
【０２６３】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１又は配列番号３１の核酸配列によりコードされる１個以上（例えば、１、２、又は３個）の重鎖可変領域ＣＤＲを含み、これらの核酸配列は、１個以上（例えば、１、２、又は３個）のＣＤＲをコードする核酸配列中に６個以下（６、５、４、３、２、１、又は０個）のヌクレオチド変異を有する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１又は配列番号３１の核酸配列によりコードされる１個以上（例えば、１、２、又は３個）の重鎖可変領域ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１又は配列番号３１のＣＤＲ核酸配列によりコードされる１個以上（例えば、１、２、又は３個）の重鎖可変領域ＣＤＲを含む。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、検出可能成分及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４又は配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５又は配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６又は配列番号２６である）、又は重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７又は配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８又は配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９又は配列番号２９である）を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、検出可能成分及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４又は配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５又は配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６又は配列番号２６である）、及び重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２及び３（重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７又は配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８又は配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９又は配列番号２９である）を含む。
【０２６５】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６であるか、又は重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９である。
【０２６６】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号２６であるか、又は重鎖ＣＤＲ１は配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号２９である。
【０２６７】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号１５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号１６であり、及び重鎖ＣＤＲ１は配列番号１７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号１８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号１９である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２は配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３は配列番号２６であり、重鎖ＣＤＲ１は配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号２８であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号２９である。
【０２６８】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲ１は配列番号３５であり、重鎖ＣＤＲ２は配列番号３６であり、重鎖ＣＤＲ３は配列番号３７である。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、検出可能成分及び配列番号１２又は配列番号２２に９０％同一な軽鎖可変領域アミノ酸配列、又は配列番号１３又は配列番号２３に９０％同一な重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、配列番号１２又は配列番号２２に９０％同一な軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号１３又は配列番号２３に９０％同一な重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、配列番号１２に９０％同一な軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号１３に９０％同一な重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、配列番号２２に９０％同一な軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号２３に９０％同一な重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、検出可能成分及び配列番号１２又は配列番号２２に９０％同一な軽鎖可変領域アミノ酸配列、又は配列番号１３又は配列番号２３又は配列番号３３に９０％同一な重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、配列番号１２又は配列番号２２に９０％同一な軽鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号１３又は配列番号２３又は配列番号３３に９０％同一な重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片、キメラ化もしくはキメラ抗体又はその抗原結合断片、ヒト化抗体又はその抗原結合断片、脱免疫化ヒト抗体又はその抗原結合断片、完全ヒト抗体又はその抗原結合断片、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ断片（ＳｃＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ’（ａｂ’）２断片、ダイアボディ又はその抗原結合断片、ミニボディ又はその抗原結合断片、トリアボディ又はその抗原結合断片、ドメイン抗体又はその抗原結合断片、ラクダ類抗体又はその抗原結合断片、ヒトコブラクダ抗体又はその抗原結合断片、ファージディスプレイ抗体又はその抗原結合断片、又は反復主鎖配列（例えば、反復抗原提示）であると特定された抗体及びその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、ヒト化抗体、又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ３ｄ抗体結合体は、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片を含む。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、非開裂Ｃ３より少なくとも１０倍高い親和性でｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄ又はＣ３ｄｇに選択的に結合する。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、非開裂Ｃ３より少なくとも１００倍高い親和性でｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄ又はＣ３ｄｇに選択的に結合する。
【０２７２】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は、３２Ｐ、蛍光染料、高電子密度試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡで通常用いられるものなど）、ビオチン、ジゴキシゲニン、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体、超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＳＰＩＯナノ粒子凝集体、単結晶酸化鉄ナノ粒子、単結晶酸化鉄、その他のナノ粒子造影剤、ガドリニウムキレート（「Ｇｄキレート」）分子含有リポソームもしくはその他の送達担体、ガドリニウム、放射性同位元素、放射性核種（例えば、炭素１１、窒素１３、酸素１５、フッ素１８、ルビジウム８２）、フルオロデオキシグルコース（例えば、フッ素１８標識）、いずれかのガンマ線放射性核種、陽電子放射性核種、放射標識グルコース、放射標識水、放射標識アンモニア、生体コロイド、微小気泡（例えば、アルブミン、ガラクトース、脂質、及び／又はポリマーを含む微小気泡シェルと；空気、重質ガス、パーフルオロカーボン、窒素、オクタフルオロプロパン、ペルフレキサン脂質微小球、パーフルトレンなどを含む微小気泡ガスコアとを含む）、ヨウ素標識造影剤（例えば、イオヘキソール、イオジキサノール、イオベルソール、イオパミドール、イオキシラン、イオプロミド、ジアトリゾ酸、メトリゾ酸、イオキサグル酸）、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、又は金ナノ粒子凝集体、フルオロフォア、二光子フルオロフォア、又はハプテン及びタンパク質、又は、例えば、ペプチド中に、又は標的ペプチドと特異的に反応する抗体中に放射標識を組み込むことにより検出可能にできるその他の構成要素、からなる群から選択される。
【０２７３】
抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は３２Ｐである。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は蛍光染料である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は高電子密度試薬である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は酵素（例えば、ＥＬＩＳＡで通常用いられるようなもの）である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分はビオチンである。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分はジゴキシゲニンである。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は常磁性分子である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は常磁性ナノ粒子である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分はＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）ナノ粒子である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分はＳＰＩＯナノ粒子凝集体である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は単結晶酸化鉄ナノ粒子である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は単結晶酸化鉄である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は別のナノ粒子造影剤である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分はガドリニウムキレート（「Ｇｄキレート」）分子含有リポソーム又はその他の送達担体である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分はガドリニウムである。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は放射性同位元素である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は放射性核種（例えば、炭素１１、窒素１３、酸素１５、フッ素１８、又はルビジウム８２）である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分はフルオロデオキシグルコース（例えば、フッ素１８標識した）である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分はガンマ線放射性核種である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は陽電子放射性核種である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は放射標識グルコースである。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は放射標識水である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は放射標識アンモニアである。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は生体コロイドである。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は、微小気泡（例えば、アルブミン、ガラクトース、脂質、及び／又はポリマーを含む微小気泡シェルと、空気、重質ガス、パーフルオロカーボン、窒素、オクタフルオロプロパン、ペルフレキサン脂質微小球、パーフルトレンなどと含む微小気泡ガスコアとを含む）である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は、ヨウ素標識造影剤（例えば、イオヘキソール、イオジキサノール、イオベルソール、イオパミドール、イオキシラン、イオプロミド、ジアトリゾ酸、メトリゾ酸、イオキサグル酸、）である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は硫酸バリウムである。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は二酸化トリウムである。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は金である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は金ナノ粒子である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は金ナノ粒子凝集体である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分はフルオロフォアである。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は二光子フルオロフォアである。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分はハプテンである。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分はタンパク質である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は蛍光成分である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、及びフルオレセイン誘導体からなる群から選択される。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は常磁性成分である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子又はその凝集体である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、検出可能成分は極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体は、約１０ｎｍ〜約１５０ｎｍの直径である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体は、約６５ｎｍ〜約８５ｎｍの直径である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体は、約７５ｎｍの直径である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体は、約１５０ｎｍの直径である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、ナノ粒子凝集体は、デキストランでコーティング、両親媒性ポリマーでコーティング、又はリン脂質で封入される。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、リン脂質はペグ化されている。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、ペグ化リン脂質は、アミン官能化又はカルボン酸官能化される。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、ペグ化アミン官能化リン脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ＰＥＧ２０００、である。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、抗体、又は抗原結合断片、リシンアミノ酸を介して検出可能成分に結合される。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、抗体、又は抗原結合断片、リシン側鎖を介して検出可能成分に結合される。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、抗体、もしくは抗原結合断片、システイン、グルタメート、アスパルタート、又はアルギニンアミノ酸を介して検出可能成分に結合される。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、抗体、もしくは抗原結合断片、システイン、グルタメート、アスパルタート、又はアルギニン側鎖を介して検出可能成分に結合される。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α（２−ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド、１，４−ビスマレイミドブタン、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、４−［ｐ−アジドサリチルアミド］ブチルアミン、又はｐ−アジドフェニルグリオキサール１水和物を介して検出可能成分に結合される。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、チオール化抗体又はその抗原結合断片及びマレオイル活性化ＮＨ２−ＳＰＩＯを含む反応により検出可能成分に連結される。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＥＤＣ／ＮＨＳ活性化抗体又はその抗原結合断片及びＮＨ２−ＳＰＩＯを含む反応によりアミド結合を形成して、検出可能成分に連結される。抗Ｃ３ｄ抗体結合体のいくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＥＤＣ／ＮＨＳ活性化ＣＯＯＨ−ＳＰＩＯ又は他の活性化ＣＯＯＨ検出可能成分及び抗体又はその抗原結合断片上のアミンを含む反応によりアミド結合を形成して、検出可能成分に連結される。
【０２７４】
抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１ｎｍと約１０００ｎｍの間である。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約５ｎｍと約５００ｎｍの間である。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１０ｎｍと約１００ｎｍの間である。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約５０ｎｍと約１５０ｎｍの間である。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約６５ｎｍと約８５ｎｍの間である。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約７５ｎｍである。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１５０ｎｍである。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１ｎｍと約１０００ｎｍの間であり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約５ｎｍと約５００ｎｍの間であり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１０ｎｍと約１００ｎｍの間であり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約５０ｎｍと約１５０ｎｍの間であり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約６５ｎｍと約８５ｎｍの間であり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約７５ｎｍであり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１５０ｎｍであり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１ｎｍと約１０００ｎｍの間であり、リン脂質でカプセル化される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約５ｎｍと約５００ｎｍの間であり、リン脂質でカプセル化される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１０ｎｍと約１００ｎｍの間であり、リン脂質でカプセル化される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約５０ｎｍと約１５０ｎｍの間であり、リン脂質でカプセル化される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約６５ｎｍと約８５ｎｍの間であり、リン脂質でカプセル化される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約７５ｎｍであり、リン脂質でカプセル化される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１５０ｎｍであり、リン脂質でカプセル化される。
【０２７５】
抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１ｎｍと約１０００ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約５ｎｍと約５００ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１０ｎｍと約１００ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約５０ｎｍと約１５０ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約６５ｎｍと約８５ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約７５ｎｍであり、デキストランで被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１５０ｎｍであり、デキストランで被覆される。
【０２７６】
抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１ｎｍと約１０００ｎｍの間であり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約５ｎｍと約５００ｎｍの間であり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１０ｎｍと約１００ｎｍの間であり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約５０ｎｍと約１５０ｎｍの間であり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約６５ｎｍと約８５ｎｍの間であり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約７５ｎｍであり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１５０ｎｍであり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。
【０２７７】
抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１ｎｍと約１０００ｎｍの間であり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約５ｎｍと約５００ｎｍの間であり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１０ｎｍと約１００ｎｍの間であり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約５０ｎｍと約１５０ｎｍの間であり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約６５ｎｍと約８５ｎｍの間であり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約７５ｎｍであり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が約１５０ｎｍであり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。
【０２７８】
抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１ｎｍと１０００ｎｍの間である。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が５ｎｍと５００ｎｍの間である。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１０ｎｍと１００ｎｍの間である。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が５０ｎｍと１５０ｎｍの間である。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が６５ｎｍと８５ｎｍの間である。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が７５ｎｍである。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１５０ｎｍである。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１ｎｍと１０００ｎｍの間であり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が５ｎｍと５００ｎｍの間であり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１０ｎｍと１００ｎｍの間であり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が５０ｎｍと１５０ｎｍの間であり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が６５ｎｍと８５ｎｍの間であり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が７５ｎｍであり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１５０ｎｍであり、両親媒性重合体で被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１ｎｍと１０００ｎｍの間であり、リン脂質でカプセル化される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が５ｎｍと５００ｎｍの間であり、リン脂質でカプセル化される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１０ｎｍと１００ｎｍの間であり、リン脂質でカプセル化される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が５０ｎｍと１５０ｎｍの間であり、リン脂質でカプセル化される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が６５ｎｍと８５ｎｍの間であり、リン脂質でカプセル化される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が７５ｎｍであり、リン脂質でカプセル化される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１５０ｎｍであり、リン脂質でカプセル化される。
【０２７９】
抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１ｎｍと１０００ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が５ｎｍと５００ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１０ｎｍと１００ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が５０ｎｍと１５０ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が６５ｎｍと８５ｎｍの間であり、デキストランで被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が７５ｎｍであり、デキストランで被覆される。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１５０ｎｍであり、デキストランで被覆される。
【０２８０】
抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１ｎｍと１０００ｎｍの間であり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が５ｎｍと５００ｎｍの間であり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１０ｎｍと１００ｎｍの間であり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が５０ｎｍと１５０ｎｍの間であり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が６５ｎｍと８５ｎｍの間であり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が７５ｎｍであり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、リン脂質カプセル化抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１５０ｎｍであり、リン脂質被覆に結合している抗体標的化基を含む。
【０２８１】
抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１ｎｍと１０００ｎｍの間であり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が５ｎｍと５００ｎｍの間であり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１０ｎｍと１００ｎｍの間であり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が５０ｎｍと１５０ｎｍの間であり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が６５ｎｍと８５ｎｍの間であり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が７５ｎｍであり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。抗Ｃ３ｄ抗体複合体の実施形態では、デキストラン被覆抗体標的化ＵＳＰＩＯナノ粒子またはそれらの凝集体は直径が１５０ｎｍであり、デキストラン被覆に結合している抗体標的化基を含む。
【０２８２】
実施形態において、ＵＳＰＩＯは、１ｎｍ、２ｎｍ、３ｎｍ、４ｎｍ、５ｎｍ、６ｎｍ、７ｎｍ、８ｎｍ、９ｎｍ、１０ｎｍ、１１ｎｍ、１２ｎｍ、１３ｎｍ、１４ｎｍおよび１５ｎｍからなる群より選択される直径を有する。実施形態において、ＵＳＰＩＯは、約１ｎｍ、約２ｎｍ、約３ｎｍ、約４ｎｍ、約５ｎｍ、約６ｎｍ、約７ｎｍ、約８ｎｍ、約９ｎｍ、約１０ｎｍ、約１１ｎｍ、約１２ｎｍ、約１３ｎｍ、約１４ｎｍおよび約１５ｎｍからなる群より選択される直径を有する。実施形態において、ＵＳＰＩＯは、１ｎｍ、２ｎｍ、３ｎｍ、４ｎｍ、５ｎｍ、６ｎｍ、７ｎｍ、８ｎｍ、９ｎｍおよび１０ｎｍからなる群より選択される直径を有する。実施形態において、ＵＳＰＩＯは、約１ｎｍ、約２ｎｍ、約３ｎｍ、約４ｎｍ、約５ｎｍ、約６ｎｍ、約７ｎｍ、約８ｎｍ、約９ｎｍおよび約１０ｎｍからなる群より選択される直径を有する。実施形態において、ＵＳＰＩＯは約１ｎｍと約１５ｎｍの間の直径を有する。実施形態において、ＵＳＰＩＯは１ｎｍと１５ｎｍの間の直径を有する。実施形態において、ＵＳＰＩＯは約１ｎｍと約１０ｎｍの間の直径を有する。実施形態において、ＵＳＰＩＯは１ｎｍと１０ｎｍの間の直径を有する。実施形態において、本明細書に記載されるＵＳＰＩＯのうちのどれでも様々なサイズのＵＳＰＩＯについて上で記載されたように修飾され得る（例えば、両親媒性重合体での被覆、リン脂質でのカプセル化、デキストランでの被覆など、またはそれらの組合せ）。
【０２８３】
前記構造体（例えば、複合体または複合体分子）の実施形態では、Ｃ３ｄ結合部分は（例えば、あらゆる態様または実施形態において、上の抗体組成物と使用法についての節、あらゆる実施例、表、図、または本願における特許請求において）Ｃ３ｄタンパク質、Ｃ３ｄｇタンパク質、および／またはｉＣ３ｂタンパク質（例えば、ヒトＣ３ｄタンパク質、ヒトＣ３ｄｇタンパク質、ヒトｉＣ３ｂタンパク質）に結合する（例えば、特異的に結合する）ことができるあらゆる組成物であり得る。前記構造体（例えば、複合体または複合体分子）の実施形態では、補体診断部分は（例えば、あらゆる態様または実施形態において、上の検出可能部分についての節、あらゆる実施例、表、図、または本願における特許請求において）補体を検出するために使用可能であるあらゆる検出可能因子または検出可能部分であり得、本明細書に記載されるあらゆる検出可能因子または検出可能部分を含む。
補体の検出方法
【０２８４】
第２の態様において、（ａ）有効量の本明細書に記載される抗Ｃ３ｄ抗体複合体を個体に投与すること、（ｂ）前記個体の内部で前記抗Ｃ３ｄ抗体複合体をＣ３タンパク質断片に結合させることによって抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を形成させること、および（ｃ）前記個体の中で前記抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を検出することを含む、個体において補体介在性炎症を検出する方法が提供される。幾つかの実施形態では、Ｃ３タンパク質断片はＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂである。実施形態において、Ｃ３タンパク質断片はＣ３ｄである。実施形態において、Ｃ３タンパク質断片はＣ３ｄｇである。実施形態において、Ｃ３タンパク質断片はｉＣ３ｂである。幾つかの実施形態では、前記検出は蛍光分光法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は磁気共鳴画像法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は蛍光分光法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は蛍光顕微鏡法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は陽電子放射断層撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はコンピューター断層撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＰＥＴ／ＣＴを含む。幾つかの実施形態では、前記検出は単一光子放射コンピューター断層撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＳＰＥＣＴ／ＣＴを含む。幾つかの実施形態では、前記検出は放射線撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＸ線撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は超音波を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は二光子顕微鏡法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は検出可能部分（例えば、本明細書に記載される検出可能部分のうちのいずれか１つ）の存在の検出を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＵＳＰＩＯの検出を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＵＳＰＩＯ凝集体の検出を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は常磁性検出可能部分の検出を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は鉄含有検出可能部分の検出を含む。幾つかの実施形態では、前記補体介在性炎症は眼炎症性疾患、眼変性疾患、または眼自己免疫疾患と関係する。幾つかの実施形態では、前記補体介在性炎症は眼炎症である。幾つかの実施形態では、その眼補体介在性炎症は加齢黄斑変性と関係する。幾つかの実施形態では、その加齢黄斑変性は滲出型加齢黄斑変性である。幾つかの実施形態では、その加齢黄斑変性は非滲出型加齢黄斑変性である。幾つかの実施形態では、前記補体介在性炎症は癌、虚血再灌流傷害、炎症性疾患、移植拒絶（細胞性または抗体介在性）、妊娠関連疾患、有害薬物反応、加齢黄斑変性、糸球体腎炎、または自己免疫もしくは免疫複合体疾患と関係する。幾つかの実施形態では、前記補体介在性炎症は、癌、虚血再灌流傷害、炎症性疾患、移植拒絶（細胞性または抗体介在性）、妊娠関連疾患、有害薬物反応、加齢黄斑変性、糸球体腎炎、または自己免疫もしくは免疫複合体疾患の結果生じる組織損傷と関係する。幾つかの実施形態では、虚血再灌流傷害の結果生じる前記組織損傷は、心筋梗塞、動脈瘤、卒中、出血性ショック、挫傷、多臓器不全、乏血性ショック、腸管虚血、脊髄損傷および外傷性脳損傷からなる群より選択される障害と関係する。幾つかの実施形態では、前記炎症性疾患は火傷、内毒血症、敗血症性ショック、成人呼吸困難症、心肺バイパス、血液透析、アナフィラキシーショック、喘息、血管性浮腫、クローン病、鎌状赤血球貧血、溶連菌感染後糸球体腎炎、膜性腎症、および膵炎からなる群より選択される。幾つかの実施形態では、前記移植拒絶は超急性異種移植片拒絶である。幾つかの実施形態では、前記移植拒絶は細胞介在性である。幾つかの実施形態では、前記移植拒絶は抗体介在性である。幾つかの実施形態では、前記妊娠関連疾患はＨＥＬＬＰ（溶血性貧血、肝逸脱酵素上昇、および血小板低下）、習慣性流産、および子癇前症.からなる群より選択される。幾つかの実施形態では、前記有害薬物反応は薬物アレルギーおよびＩＬ−２誘導性血管漏出症候群からなる群より選択される。幾つかの実施形態では、前記自己免疫もしくは免疫複合体疾患は重症筋無力症、アルツハイマー病、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、骨関節炎、全身性紅斑性狼瘡、狼瘡性腎炎、ＩｇＧ４関連疾患、インスリン依存型真性糖尿病、急性散在性脳脊髄炎、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群、血栓性血小板減少性紫斑病、自己免疫性肝炎、クローン病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、天疱瘡、シェーグレン症候群、高安動脈炎、自己免疫性糸球体腎炎、ＩＩ型膜性増殖性糸球体腎炎、膜性疾患、発作性夜間ヘモグロビン尿症、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑症、ぶどう膜炎、網膜変性疾患、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症、ＡＮＣＡ関連血管炎、溶血性尿毒症症候群、志賀毒素関連溶血性尿毒症症候群、および非典型溶血性尿毒症症候群からなる群より選択される。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患は全身性紅斑性狼瘡である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患は狼瘡性腎炎である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患はリウマチ性関節炎である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患はアルツハイマー病である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患は多発性硬化症である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患は骨関節炎である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患は加齢黄斑変性である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患は糖尿病性黄斑症である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫性糸球体腎炎は免疫グロブリンＡ腎症またはＩ型膜性増殖性糸球体腎炎からなる群より選択される。幾つかの実施形態では、前記個体は哺乳類動物である。幾つかの実施形態では、その哺乳類動物はヒトである。幾つかの実施形態では、前記投与は注射による。幾つかの実施形態では、投与は非経口性、静脈内、皮下、眼内、関節内、または筋肉内の投与である。幾つかの実施形態では、前記個体は前記補体介在性炎症の治療を受けている。幾つかの実施形態では、補体介在性炎症を検出する前記方法は補体介在性炎症の治療法の有効性をモニターする方法である。幾つかの実施形態では、補体介在性炎症を検出する前記方法は補体阻害剤の投与により補体介在性炎症を治療する方法を含む��幾つかの実施形態では、補体介在性炎症を検出する前記方法は補体介在性炎症治療に対するコンパニオン診断である。本明細書において使用される場合、「コンパニオン診断」という用語は疾患状態を階層化し、治療処置を特定し、用量を適合させる、または投与計画を適合させることにより個体の病気または状態に対する特定の治療法を提供するために使用されるアッセイ、または患者の病気または状態のリスクを評価し、且つ、防止処置または予防処置を特定するために使用されるアッセイを指す。幾つかの実施形態では、前記検出方法は（例えば、本明細書において開示される）疾患の治療法または補体介在性炎症の進展をモニターするための複数の検出ステップを含む。
【０２８５】
第３の態様において、（ａ）有効量の本明細書に記載される抗Ｃ３ｄ抗体複合体を個体に投与すること、（ｂ）前記個体の内部で前記抗Ｃ３ｄ抗体複合体をＣ３タンパク質断片に結合させることによって抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を形成させること、および（ｃ）前記個体の中で前記抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を検出することを含む、個体において補体活性化を検出する方法が提供される。幾つかの実施形態では、Ｃ３タンパク質断片はＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂである。実施形態において、Ｃ３タンパク質断片はＣ３ｄである。実施形態において、Ｃ３タンパク質断片はＣ３ｄｇである。実施形態において、Ｃ３タンパク質断片はｉＣ３ｂである。幾つかの実施形態では、前記検出は蛍光分光法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は磁気共鳴画像法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は蛍光分光法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は蛍光顕微鏡法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は陽電子放射断層撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はコンピューター断層撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＰＥＴ／ＣＴを含む。幾つかの実施形態では、前記検出は単一光子放射コンピューター断層撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＳＰＥＣＴ／ＣＴを含む。幾つかの実施形態では、前記検出は放射線撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＸ線撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は超音波を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は二光子顕微鏡法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は検出可能部分（例えば、本明細書に記載される検出可能部分のうちのいずれか１つ）の存在の検出を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＵＳＰＩＯの検出を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＵＳＰＩＯ凝集体の検出を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は常磁性検出可能部分の検出を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は鉄含有検出可能部分の検出を含む。幾つかの実施形態では、前記補体活性化は眼性である。幾つかの実施形態では、その眼性補体活性化は加齢黄斑変性と関係する。幾つかの実施形態では、その加齢黄斑変性は滲出型加齢黄斑変性である。幾つかの実施形態では、その加齢黄斑変性は非滲出型加齢黄斑変性である。幾つかの実施形態では、前記補体活性化は癌、虚血再灌流傷害、炎症性疾患、移植拒絶（細胞性または抗体介在性）、妊娠関連疾患、有害薬物反応、加齢黄斑変性、糸球体腎炎、または自己免疫もしくは免疫複合体疾患と関係する。幾つかの実施形態では、前記補体活性化は、癌、虚血再灌流傷害、炎症性疾患、移植拒絶（細胞性または抗体介在性）、妊娠関連疾患、有害薬物反応、加齢黄斑変性、糸球体腎炎、または自己免疫もしくは免疫複合体疾患の結果生じる組織損傷と関係する。幾つかの実施形態では、前記補体活性化は眼炎症性疾患、眼変性疾患、または眼自己免疫疾患と関係する。幾つかの実施形態では、虚血再灌流傷害の結果生じる前記組織損傷は、心筋梗塞、動脈瘤、卒中、出血性ショック、挫傷、多臓器不全、乏血性ショック、腸管虚血、脊髄損傷および外傷性脳損傷からなる群より選択される障害と関係する。幾つかの実施形態では、前記炎症性疾患は火傷、内毒血症、敗血症性ショック、成人呼吸困難症、心肺バイパス、血液透析、アナフィラキシーショック、喘息、血管性浮腫、クローン病、鎌状赤血球貧血、溶連菌感染後糸球体腎炎、膜性腎症、および膵炎からなる群より選択される。幾つかの実施形態では、前記移植拒絶は超急性異種移植片拒絶である。幾つかの実施形態では、前記妊娠関連疾患はＨＥＬＬＰ（溶血性貧血、肝逸脱酵素上昇、および血小板低下）、習慣性流産、および子癇前症.からなる群より選択される。幾つかの実施形態では、前記有害薬物反応は薬物アレルギーおよびＩＬ−２誘導性血管漏出症候群からなる群より選択される。幾つかの実施形態では、前記自己免疫もしくは免疫複合体疾患は重症筋無力症、アルツハイマー病、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、骨関節炎、全身性紅斑性狼瘡、狼瘡性腎炎、ＩｇＧ４関連疾患、インスリン依存型真性糖尿病、急性散在性脳脊髄炎、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群、血栓性血小板減少性紫斑病、自己免疫性肝炎、クローン病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、天疱瘡、シェーグレン症候群、高安動脈炎、自己免疫性糸球体腎炎、ＩＩ型膜性増殖性糸球体腎炎、膜性疾患、発作性夜間ヘモグロビン尿症、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑症、ぶどう膜炎、網膜変性疾患、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症、ＡＮＣＡ関連血管炎、溶血性尿毒症症候群、志賀毒素関連溶血性尿毒症症候群、および非典型溶血性尿毒症症候群からなる群より選択される。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患は全身性紅斑性狼瘡である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患は狼瘡性腎炎である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患はリウマチ性関節炎である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患はアルツハイマー病である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患は多発性硬化症である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患は骨関節炎である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患は加齢黄斑変性である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫または免疫複合体疾患は糖尿病性黄斑症である。幾つかの実施形態では、前記自己免疫性糸球体腎炎は免疫グロブリンＡ腎症またはＩ型膜性増殖性糸球体腎炎からなる群より選択される。幾つかの実施形態では、前記個体は哺乳類動物である。幾つかの実施形態では、その哺乳類動物はヒトである。幾つかの実施形態では、前記投与は注射による。幾つかの実施形態では、投与は非経口性、静脈内、皮下、眼内、関節内、または筋肉内の投与である。幾つかの実施形態では、前記個体は前記補体活性化関連疾患の治療を受けている。幾つかの実施形態では、補体活性化を検出する前記方法は補体活性化関連疾患の治療法の有効性をモニターする方法である。幾つかの実施形態では、補体活性化を検出する前記方法は補体阻害剤の投与により補体活性化関連疾患を治療する方法を含む。幾つかの実施形態では、補体活性化を検出する前記方法は疾患治療法に対するコンパニオン診断である。幾つかの実施形態では、前記検出方��は（例えば、本明細書において開示される）疾患の治療法または疾患の進展をモニターするための複数の検出ステップを含む。
【０２８６】
第４の態様において、（ａ）有効量の本明細書に記載される抗Ｃ３ｄ抗体複合体を生体試料（例えば、生検試料、組織試料、血液試料、血液画分試料、血清試料、細胞試料、任意により対象または患者に由来する全ての試料）に投与すること、（ｂ）前記生体試料の内部で前記抗Ｃ３ｄ抗体複合体をＣ３タンパク質断片に結合させることによって抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を形成させること、および（ｃ）前記生体試料の中で前記抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を検出することを含む、補体活性化を検出する方法が提供される。幾つかの実施形態では、Ｃ３タンパク質断片はＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂである。実施形態において、Ｃ３タンパク質断片はＣ３ｄである。実施形態において、Ｃ３タンパク質断片はＣ３ｄｇである。実施形態において、Ｃ３タンパク質断片はｉＣ３ｂである。幾つかの実施形態では、前記検出は蛍光分光法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は磁気共鳴画像法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は蛍光分光法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は蛍光顕微鏡法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は陽電子放射断層撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はコンピューター断層撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＰＥＴ／ＣＴを含む。幾つかの実施形態では、前記検出は単一光子放射コンピューター断層撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＳＰＥＣＴ／ＣＴを含む。幾つかの実施形態では、前記検出は放射線撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＸ線撮影を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は超音波を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は二光子顕微鏡法を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＥＬＩＳＡを含む。幾つかの実施形態では、前記検出はインサイチュハイブリダイゼーションを含む。幾つかの実施形態では、前記検出は免疫組織化学を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はウエスタンブロッティングを含む。幾つかの実施形態では、前記検出は検出可能部分（例えば、本明細書に記載される検出可能部分のうちのいずれか１つ）の存在の検出を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＵＳＰＩＯの検出を含む。幾つかの実施形態では、前記検出はＵＳＰＩＯ凝集体の検出を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は常磁性検出可能部分の検出を含む。幾つかの実施形態では、前記検出は鉄含有検出可能部分の検出を含む。幾つかの実施形態では、補体活性化を検出する前記方法はコンパニオン診断であり、個体において補体（例えば、補体活性化または補体介在性炎症）を検出する本明細書に記載される方法のうちのいずれかと任意により組み合わされる。実施形態において、補体活性化を検出する前記方法は組織試料を使用して実施される。実施形態において、補体活性化を検出する前記方法は組織生検試料を使用して実施される。
【０２８７】
追加の実施形態
１．  哺乳類補体成分Ｃ３ｄタンパク質またはＣ３ｄｇタンパク質またはｉＣ３ｂタンパク質に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、
ａ．Ｃ３ｄに対する１．１ｎＭまたはそれよりも好適である結合親和性を有する単離抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片；
ｂ．補体タンパク質Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ３ｃまたはＣ３ｆに対するときよりも高い親和性でＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂに結合する単離抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片または単離抗Ｃ３ｄｇ抗体またはその抗原結合断片または単離抗ｉＣ３ｂ抗体またはその抗原結合断片；
ｃ．沈着したＣ３断片に結合する単離抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片または単離抗Ｃ３ｄｇ抗体またはその抗原結合断片または単離抗ｉＣ３ｂ抗体またはその抗原結合断片；
ｄ．少なくとも２種類の種のＣ３ｄタンパク質に結合するに結合する単離抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片；
ｅ．Ｃ３ｄへの結合について補体受容体２（ＣＲ２）と競合する単離抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片；
ｆ．補体活性化を増強することがない単離抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片または単離抗Ｃ３ｄｇ抗体またはその抗原結合断片または単離抗ｉＣ３ｂ抗体またはその抗原結合断片；
ｇ．宿主液性免疫応答を低下させる単離抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片または単離抗Ｃ３ｄｇ抗体またはその抗原結合断片または単離抗ｉＣ３ｂ抗体またはその抗原結合断片；
ｈ．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号１４または配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号１５または配列番号２５であり、且つ、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号１６または２６である軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３または重鎖ＣＤＲ１が配列番号１７または配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号１８または配列番号２８であり、且つ、重鎖ＣＤＲ３が配列番号１９または２９である重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を備える単離抗体またはその抗原結合断片；
ｉ．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号１４または配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号１５または配列番号２５であり、且つ、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号１６または２６である軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３ならびに重鎖ＣＤＲ１が配列番号１７または配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号１８または配列番号２８であり、且つ、重鎖ＣＤＲ３が配列番号１９または２９である重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を備える単離抗体またはその抗原結合断片；
ｊ．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号１５であり、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号１６であり、重鎖ＣＤＲ１が配列番号１７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号１８であり、且つ、重鎖ＣＤＲ３が配列番号１９である単離抗体またはその抗原結合断片；
ｋ．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号２６であり、重鎖ＣＤＲ１が配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号２８であり、且つ、重鎖ＣＤＲ３が配列番号２９である単離抗体またはその抗原結合断片；
ｌ．配列番号１２または配列番号２２と９０％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列または配列番号１３もしくは配列番号２３と９０％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を備える単離抗体またはその抗原結合断片；
ｍ．配列番号１２または配列番号２２と９０％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号１３または配列番号２３と９０％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を備える単離抗体またはその抗原結合断片；
ｎ．配列番号１２と９０％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号１３と９０％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を備える単離抗体またはその抗原結合断片、および
ｏ．配列番号２２と９０％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２３と９０％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を備える単離抗体またはその抗原結合断片
からなる群より選択される前記抗体またはその抗原結合断片。
【０２８８】
２．  前記ＫＤが０．５ｎＭまたはそれよりも良好である、実施形態１に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【０２８９】
３．  前記抗体またはその抗原結合断片が補体タンパク質Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ３ｃまたはＣ３ｆに結合しない、実施形態１に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【０２９０】
４．  前記抗体またはその抗原結合断片が循環している完全型のＣ３、Ｃ３ｂ、または（Ｃ３Ｈ２Ｏ）に結合するときよりも高い親和性で沈着したＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂに結合する、実施形態１に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【０２９１】
５．  前記哺乳類動物がヒトである、実施形態１に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【０２９２】
６．  前記哺乳類動物がオランウータン、チンパンジー、マカク、ゴリラ、キツネザル、またはテナガザルからなる群より選択される非ヒト霊長類動物である、実施形態１に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【０２９３】
７．  前記抗体またはその抗原結合断片が補体活性化を低下させる、実施形態１（ｆ）に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【０２９４】
８．  前記抗体またはその抗原結合断片がモノクローナル抗体または抗体断片、ディアボディ、キメラ化もしくはキメラ抗体または抗体断片、ヒト化抗体または抗体断片、脱免疫化ヒト抗体または抗体断片、完全ヒト抗体または抗体断片、二特異的抗体または抗体断片、一価抗体または抗体断片、単鎖抗体、Ｆｖ、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２からなる群より選択される、実施形態１から７のいずれか一つに記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【０２９５】
９．  前記抗体がモノクローナル抗体である、実施形態８に記載の単離抗体。
【０２９６】
１０．  前記抗体がｉ）ハイブリドーマ細胞株３ｄ−８ｂ／２（ＡＴＣＣ寄託ＰＴＡ−１０９９９）により産生される３ｄｂ８、ｉｉ）ハイブリドーマ細胞株３ｄ−９ａ／２５（ＡＴＣＣ寄託ＰＴＡ−１０９９８）により産生される３ｄ９ａ、およびｉｉｉ）ハイブリドーマ細胞株３ｄ−２９／５／２（ＡＴＣＣ寄託ＰＴＡ−１１０００）により産生される３ｄ２９からなる群より選択される、実施形態９に記載の単離抗体。
【０２９７】
１１．  ３ｄ−８ｂ／２（ＡＴＣＣ寄託ＰＴＡ−１０９９９）、３ｄ−９ａ／２５（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１０９９８）、３ｄ−２９／５／２（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０００）、３ｄ−１１／１４（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０１１）、３ｄ−３１／Ａ６／９（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０２７）、３ｄ−３／２８／４（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０２５）、３ｄ−１５Ａ９（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０１２）、３ｄ−１０／１４／１（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０１０）、および３ｄ−１６／３／３（ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−１１０２６）からなる群より選択されるハイブリドーマ細胞。
【０２９８】
１２．  実施形態１１に記載のハイブリドーマにより産生される単離抗体。
【０２９９】
１３．  実施形態１から１０および実施形態１２のいずれか一つに記載の抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。
【０３００】
１４．  実施形態１３に記載の単離核酸分子を含む発現ベクター。
【０３０１】
１５．  実施形態１４に記載の発現ベクターを含む細胞。
【０３０２】
１６．  抗体またはその抗原結合断片を生産するための方法であって、実施形態１５に記載の細胞によって前記抗体または抗原結合断片を発現させるのに適切な条件下で前記細胞を培養することを含む前記方法。
【０３０３】
１７．  前記細胞または前記細胞が培養されている培地から前記抗体またはその抗原結合断片を単離することをさらに含む、実施形態１６に記載の方法。
【０３０４】
１８．  実施形態１７に記載の方法により生産される前記単離抗体またはその抗原結合断片。
【０３０５】
１９．  実施形態１から１０、１２または１８のいずれか一つに記載の単離抗体またはその抗原結合断片、および薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。
【０３０６】
２０．  ａ．Ｃ３ｄ結合部分、および
ｂ．検出可能部分
を含み、（ａ）と（ｂ）が連結されている構造体。
【０３０７】
２１．  前記Ｃ３ｄ結合部分が実施形態１から１０のいずれか一つ、実施形態１２または１８に記載の抗Ｃ３ｄ抗体またはその抗原結合断片を含む、実施形態２０に記載の構造体。
【０３０８】
２２．  前記検出可能部分が３２Ｐ、蛍光色素、高電子密度試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡにおいて一般に使用されるもの）、ビオチン、ジゴキシゲニン、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体、超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＳＰＩＯナノ粒子凝集体、単結晶型酸化鉄ナノ粒子、単結晶型酸化鉄、他のナノ粒子造影剤、リポソームまたはガドリニウムキレート（「Ｇｄ−キレート」）分子を含む他の送達ベヒクル、ガドリニウム、放射性同位体、放射性核種（例えば、炭素１１、窒素１３、酸素１５、フッ素１８、ルビジウム８２）、フルオロデオキシグルコース（例えば、フッ素１８標識したもの）、あらゆるガンマ線放出放射性核種、陽電子放出放射性核種、放射性標識グルコース、放射性標識水、放射性標識アンモニア、生体コロイド、微小気泡（例えば、アルブミン、ガラクトース、脂質、および／または重合体を含む微小気泡殻；空気、重質ガス、パーフルオロカーボン、窒素、オクタフルオロプロパン、ペルフレキサン脂質マイクロスフィア、ペルフルトレンなどを含む微小気泡ガスコアを含む）、ヨウ素化造影剤（例えば、イオヘキソール、イオジキサノール、イオベルソール、イオパミドール、イオキシラン、イオップロミド、ジアトリゾエート、メトリゾエート、イオキサグラート）、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、金ナノ粒子凝集体、フルオロフォア、二光子フルオロフォア、ハプテン、またはタンパク質を含む、実施形態２０または２１に記載の構造体。
【０３０９】
２３．  哺乳類動物において補体活性化を検出するために有効な量の実施形態２０から２１のいずれか一つに記載の構造体を前記対象に投与することを含む、哺乳類動物における補体活性化の検出方法。
【０３１０】
２４．  虚血再灌流障害の結果生じる組織損傷、炎症性疾患、移植拒絶、妊娠関連疾患、有害薬物反応、および自己免疫もしくは免疫複合体疾患からなる群より選択される疾患を有するか、有する疑いがある哺乳類動物を診断またはモニタリングする方法であって、診断的に有効量の実施形態２０から２２のいずれか一つに記載の構造体を前記哺乳類動物に投与することを含む前記方法。
【０３１１】
２５．  虚血再灌流障害の結果生じる前記組織損傷が、心筋梗塞、動脈瘤、卒中、出血性ショック、挫傷、多臓器不全、乏血性ショック、腸管虚血、脊髄損傷および外傷性脳損傷からなる群より選択される障害と関係する、実施形態２４に記載の方法。
【０３１２】
２６．  前記炎症性疾患が火傷、内毒血症、敗血症性ショック、成人呼吸困難症、心肺バイパス、血液透析、アナフィラキシーショック、喘息、血管性浮腫、クローン病、鎌状赤血球貧血、溶連菌感染後糸球体腎炎、膜性腎症、および膵炎からなる群より選択される、実施形態２４に記載の方法。
【０３１３】
２７．  前記移植拒絶が超急性異種移植片拒絶である、実施形態２４に記載の方法。
【０３１４】
２８．  前記妊娠関連疾患がＨＥＬＬＰ症候群（溶血性貧血、肝逸脱酵素上昇および血小板低下）、習慣性流産、および子癇前症.からなる群より選択される、実施形態２４に記載の方法。
【０３１５】
２９．  前記有害薬物反応が薬物アレルギーおよびＩＬ−２誘導性血管漏出症候群からなる群より選択される、実施形態２４に記載の方法。
【０３１６】
３０．  前記自己免疫もしくは免疫複合体疾患が重症筋無力症、アルツハイマー病、多発性硬化症、視神経脊髄炎、リウマチ性関節炎、ＩｇＧ４介在性／関連疾患、全身性紅斑性狼瘡、狼瘡性腎炎、インスリン依存型真性糖尿病、急性散在性脳脊髄炎、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性肝炎、クローン病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、天疱瘡、シェーグレン症候群、高安動脈炎、自己免疫性糸球体腎炎、ＩＩ型膜性増殖性糸球体腎炎、発作性夜間ヘモグロビン尿症、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑症、ぶどう膜炎、網膜変性疾患、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症、ＡＮＣＡ関連血管炎、溶血性尿毒症症候群、および非典型溶血性尿毒症症候群からなる群より選択される、実施形態２４に記載の方法。
【０３１７】
３１．  前記自己免疫性糸球体腎炎が免疫グロブリンＡ腎症およびＩ型膜性増殖性糸球体腎炎からなる群より選択される、実施形態３０に記載の方法。
【０３１８】
３２．  癌、ウイルス感染症、細菌感染症、寄生生物感染症、および真菌感染症からなる群より選択される疾患を有するか、有する疑いがある哺乳類動物を診断またはモニタリングする方法であって、前記哺乳類動物において補体活性化を検出するのに有効な量の実施形態２０から２２に記載の構造体を前記哺乳類動物に投与することを含む前記方法。
【０３１９】
３３．  前記哺乳類動物がヒトである、実施形態２３から３２のいずれか一つに記載の方法。
【０３２０】
３４．  （ａ）ラベルを備える容器、および
（ｂ）実施形態２０から２２のいずれか一つに記載の構造体を含む組成物
を含む製品であって、前記組成物は補体関連疾患を有する、有する疑いがある、または発症する危険性があるヒトに投与されるものであることが前記ラベルによって示されている、前記製品。
【０３２１】
３５．  検出可能部分ならびに軽鎖ＣＤＲ１が配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号１５であり、且つ、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号１６である軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３または重鎖ＣＤＲ１が配列番号１７または配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号１８であり、且つ、重鎖ＣＤＲ３が配列番号１９または２９である重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を備える抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３２２】
３６．  検出可能部分ならびに軽鎖ＣＤＲ１が配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号１５であり、且つ、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号１６である軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３ならびに重鎖ＣＤＲ１が配列番号１７または配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号１８であり、且つ、重鎖ＣＤＲ３が配列番号１９または２９である重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を備える実施形態３５に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３２３】
３７．  軽鎖ＣＤＲ１が配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号１５であり、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号１６であり、重鎖ＣＤＲ１が配列番号１７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号１８であり、且つ、重鎖ＣＤＲ３が配列番号１９である、実施形態３６に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３２４】
３８．  軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２５であり、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号２６であり、重鎖ＣＤＲ１が配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号２８であり、且つ、重鎖ＣＤＲ３が配列番号２９である、実施形態３６に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３２５】
３９．検出可能部分および配列番号１２または配列番号２２と９０％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列または配列番号１３もしくは配列番号２３と９０％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を備える抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３２６】
４０．  配列番号１２または配列番号２２と９０％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号１３または配列番号２３と９０％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を備える実施形態３９に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３２７】
４１．  配列番号１２と９０％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号１３と９０％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を備える実施形態４０に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３２８】
４２．  配列番号２２と９０％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２３と９０％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を備える実施形態４０に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３２９】
４３．  モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、キメラ化もしくはキメラ抗体またはその抗原結合断片、ヒト化抗体またはその抗原結合断片、脱免疫化ヒト抗体またはその抗原結合断片、完全ヒト抗体またはその抗原結合断片、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ディアボディまたはその抗原結合断片、ミニボディまたはその抗原結合断片、トリアボディまたはその抗原結合断片、ドメイン抗体またはその抗原結合断片、ラクダ科動物抗体またはその抗原結合断片、ヒトコブラクダ抗体またはその抗原結合断片、またはファージディスプレイ抗体またはその抗原結合断片、または反復性抗原アレイまたはその抗原結合断片によって特定される抗体またはその抗原結合断片を含む実施形態３５から４２のいずれか一つに記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３３０】
４４．  ヒト化抗体またはその抗原結合断片を含む実施形態３５から４３のいずれか一つに記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３３１】
４５．  モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む実施形態３５から４４のいずれか一つに記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３３２】
４６．  前記抗体またはその抗原結合断片が非切断型Ｃ３よりも少なくとも１０倍高い親和性でｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇに優先的に結合する、実施形態３５から４５のいずれか一つに記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３３３】
４７．  前記抗体またはその抗原結合断片が非切断型Ｃ３よりも少なくとも１００倍高い親和性でｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄまたはＣ３ｄｇに優先的に結合する、実施形態３５から４６のいずれか一つに記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３３４】
４８．  前記検出可能部分が３２Ｐ、蛍光色素、高電子密度試薬、酵素、ビオチン、ジゴキシゲニン、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体、超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＳＰＩＯナノ粒子凝集体、標準超常磁性酸化鉄（「ＳＳＰＩＯ」）、ＳＳＰＩＯナノ粒子凝集体、多分散性超常磁性酸化鉄（「ＰＳＰＩＯ」）、ＰＳＰＩＯナノ粒子凝集体、単結晶型ＳＰＩＯ、単結晶型ＳＰＩＯ凝集体、単結晶型酸化鉄ナノ粒子、単結晶型酸化鉄、別のナノ粒子造影剤、リポソームまたはガドリニウムキレート（「Ｇｄ−キレート」）分子を含む他の送達ベヒクル、ガドリニウム、放射性同位体、放射性核種、炭素１１、窒素１３、酸素１５、フッ素１８、ルビジウム８２、フルオロデオキシグルコース、ガンマ線放出放射性核種、陽電子放出放射性核種、放射性標識グルコース、放射性標識水、放射性標識アンモニア、生体コロイド、微小気泡、ヨウ素化造影剤、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、金ナノ粒子凝集体、フルオロフォア、二光子フルオロフォア、ハプテン、タンパク質、および蛍光性部分からなる群より選択される、実施形態３５から４７のいずれか一つに記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３３５】
４９．  前記蛍光性部分がフルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、およびフルオレセイン誘導体からなる群より選択される、実施形態４８に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３３６】
５０．  前記検出可能部分が常磁性部分である、実施形態３５から４８のいずれか一つに記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３３７】
５１．  前記常磁性部分が極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子またはその凝集体である、実施形態５０に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３３８】
５２．  前記常磁性部分が極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体である、実施形態５１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３３９】
５３．  前記極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体の直径が約１０ｎｍと約１５０ｎｍの間である、実施形態５２に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３４０】
５４．  前記極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体の直径が約６５ｎｍと約８５ｎｍの間である、実施形態５２に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３４１】
５５．  前記極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体の直径が約７５ｎｍである、実施形態５２に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３４２】
５６．  前記極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体の直径が約１５０ｎｍである、実施形態５２に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３４３】
５７．  前記極小超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子凝集体がデキストランで被覆される、両親媒性重合体で被覆される、またはリン脂質でカプセル化される、実施形態５２に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３４４】
５８．  前記リン脂質がＰＥＧ化される、実施形態５７に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３４５】
５９．  前記ＰＥＧ化リン脂質がアミン官能化またはカルボン酸官能化される、実施形態５８に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３４６】
６０．  前記ＰＥＧ化アミン官能化リン脂質が１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ＰＥＧ２０００である、実施形態５９に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３４７】
６１．  前記抗体またはその抗原結合断片がリシンアミノ酸を介して前記検出可能部分に複合体化される、実施形態３５から６０のいずれか一つに記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３４８】
６２．  前記抗体またはその抗原結合断片がリシン側鎖を介して前記検出可能部分に複合体化される、実施形態６１に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３４９】
６３．  前記抗体またはその抗原結合断片がシステインアミノ酸、グルタミン酸アミノ酸、アスパラギン酸アミノ酸、またはアルギニンアミノ酸を介して前記検出可能部分に複合体化される、実施形態３５から６０のいずれか一つに記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３５０】
６４．  前記抗体またはその抗原結合断片がシステイン側鎖、グルタミン酸側鎖、アスパラギン酸側鎖、またはアルギニン側鎖を介して前記検出可能部分に複合体化される、実施形態６３に記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３５１】
６５．  前記抗体またはその抗原結合断片が、ａ）４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α（２−ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド、１，４−ビス−マレイミドブタン、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、４−［ｐ−アジドサリチルアミド］ブチルアミン、またはｐ−アジドフェニルグリオキサール一水和物を介して、またはｂ）チオール化抗体またはその抗原結合断片と前記検出可能部分のマレオイル活性化アミン、ＥＤＣ／ＮＨＳ活性化抗体またはその抗原結合断片と前記検出可能部分のアミン、または前記検出可能部分のＥＤＣ／ＮＨＳ活性化カルボン酸と前記抗体またはその抗原結合断片のアミンを含む反応を介して前記検出可能部分に複合体化される、実施形態３５から６０のいずれか一つに記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【０３５２】
６６．（ａ）有効量の実施形態３５から６５のいずれか一つに記載の抗Ｃ３ｄ抗体複合体を個体に投与すること、（ｂ）前記個体の内部で前記抗Ｃ３ｄ抗体複合体をＣ３タンパク質断片に結合させることによって抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を形成させること、および（ｃ）前記個体の中で前記抗Ｃ３ｄ抗体複合体−Ｃ３タンパク質断片複合体を検出することを含む、前記個体における補体介在性炎症の検出方法。
【０３５３】
６７．  前記Ｃ３タンパク質断片がＣ３ｄまたはＣ３ｄｇまたはｉＣ３ｂである、実施形態６６に記載の方法。
【０３５４】
６８．  前記検出が蛍光分光法を含む、実施形態６６から６７のいずれか一つに記載の方法。
【０３５５】
６９．  前記検出が磁気共鳴画像法、コンピューター断層撮影、陽電子放射断層撮影、単一光子放射コンピューター断層撮影、超音波検査、または放射線撮影を含む、実施形態６６から６７のいずれか一つに記載の方法。
【０３５６】
７０．  前記補体介在性炎症が眼炎症である、実施形態６６から６９のいずれか一つに記載の方法。
【０３５７】
７１．  前記眼補体介在性炎症が加齢黄斑変性と関係する、実施形態７０に記載の方法。
【０３５８】
７２．  前記加齢黄斑変性が滲出型加齢黄斑変性である、実施形態７１に記載の方法。
【０３５９】
７３．  前記加齢黄斑変性が非滲出型加齢黄斑変性である、実施形態７１に記載の方法。
【０３６０】
７４．  前記補体介在性炎症が、癌、虚血再灌流傷害、炎症性疾患、移植拒絶（細胞性または抗体介在性）、妊娠関連疾患、有害薬物反応、加齢黄斑変性、糸球体腎炎、または自己免疫もしくは免疫複合体疾患の結果生じる組織損傷と関係する、実施形態６６から７０のいずれか一つに記載の方法。
【０３６１】
７５．  虚血再灌流傷害の結果生じる前記組織損傷が、心筋梗塞、動脈瘤、卒中、出血性ショック、挫傷、多臓器不全、乏血性ショック、腸管虚血、脊髄損傷および外傷性脳損傷からなる群より選択される障害と関係する、実施形態７４に記載の方法。
【０３６２】
７６．  前記炎症性疾患が火傷、内毒血症、敗血症性ショック、成人呼吸困難症、心肺バイパス、血液透析、アナフィラキシーショック、喘息、血管性浮腫、クローン病、鎌状赤血球貧血、溶連菌感染後糸球体腎炎、膜性腎症、および膵炎からなる群より選択される、実施形態７４に記載の方法。
【０３６３】
７７．  前記移植拒絶が超急性異種移植片拒絶である、実施形態７４に記載の方法。
【０３６４】
７８．  前記妊娠関連疾患がＨＥＬＬＰ（溶血性貧血、肝逸脱酵素上昇、および血小板低下）、習慣性流産、および子癇前症.からなる群より選択される、実施形態７４に記載の方法。
【０３６５】
７９．  前記有害薬物反応が薬物アレルギーおよびＩＬ−２誘導性血管漏出症候群からなる群より選択される、実施形態７４に記載の方法。
【０３６６】
８０．  前記自己免疫もしくは免疫複合体疾患が重症筋無力症、アルツハイマー病、多発性硬化症、視神経脊髄炎、リウマチ性関節炎、骨関節炎、全身性紅斑性狼瘡、狼瘡性腎炎、ＩｇＧ４関連疾患、インスリン依存型真性糖尿病、急性散在性脳脊髄炎、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群、血栓性血小板減少性紫斑病、自己免疫性肝炎、クローン病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、天疱瘡、シェーグレン症候群、高安動脈炎、自己免疫性糸球体腎炎、ＩＩ型膜性増殖性糸球体腎炎、膜性疾患、発作性夜間ヘモグロビン尿症、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑症、ぶどう膜炎、網膜変性疾患、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症、ＡＮＣＡ関連血管炎、溶血性尿毒症症候群、志賀毒素関連溶血性尿毒症症候群、および非典型溶血性尿毒症症候群からなる群より選択される、実施形態７４に記載の方法。
【０３６７】
８１．  前記自己免疫性糸球体腎炎が免疫グロブリンＡ腎症またはＩ型膜性増殖性糸球体腎炎からなる群より選択される、実施形態８０に記載の方法。
【０３６８】
８２．  前記個体が哺乳類動物である、実施形態６６から８１のいずれか一つに記載の方法。
【０３６９】
８３．  前記哺乳類動物がヒトである、実施形態８２に記載の方法。
【０３７０】
８４．  前記投与が注射による、実施形態６６から８３のいずれか一つに記載の方法。
【０３７１】
８５．  前記注射が非経口性、静脈内、皮下、眼内、関節内、または筋肉内の注射である、実施形態８４に記載の方法。
【０３７２】
別途定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は本開示が関係する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。相容れない場合は本文書が、定義を含み、優先される。本明細書に記載されるものと類似または等価の方法および材料を本開示の方法および組成物の実施または試験に使用することもできるが、例となる方法および材料が以下に記載される。本明細書において言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参照文献は全体の参照により援用される。
【０３７３】
本開示、例えば、補体関連疾患の治療、または予防、または検出、またはモニタリングのための組成物および方法の他の特徴と利点は明細書、実施例、および特許請求の範囲から明らかである。
【実施例】
【０３７４】
［実施例１］
炎症を起こした組織の補体Ｃ３断片であるｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇおよびＣ３ｄによる共有結合性修飾により、治療薬または診断薬が向かうことができる独特の「フラッグ」または「ターゲット」が提供されることが益々明らかになっている。本明細書は腎臓と網膜を含む様々な組織において組織に結合したＣ３断片を非侵襲的に検出するための分子イメージングプローブとしての用途を有するモノクローナル抗体について記載する。広範なインビトロ分析およびインビボ分析の後に、本明細書に記載される一部のｍＡｂが補体活性化インビボ部位を特定するために使用され得ることを全体として示す独特の特徴をこれらのｍＡｂが有することが示された。それらの抗体はこの能力により、結合した診断モジュールをこれらの部位に向かわせることができる。例えば、それらの抗体は炎症部位に造影剤を向かわせることもでき、次にそれらの部位はＭＲＩ、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）、超音波、および／または光学的イメージング装置によって検出され得る。抗体が、重要な抗原結合部位のヌクレオチド配列および得られるタンパク質配列を含み、本明細書に記載される。これらの配列を使用して作製されたＳｃＦｖが元々記載されているモノクローナル抗体と競合することを示し、それらの相互関係を示すデータも含まれる。
【０３７５】
補体系の活性化中にＣ３タンパク質が切断され、Ｃ３活性化断片が教諭結合により近くの組織に固定される。組織に結合したＣ３断片はこの過程の恒久的な標識であり、組織炎症のバイオマーカーとして一般に使用される。これらの断片は標的化治療薬および診断薬のためのアドレス指定可能な結合リガンドとして利用されている。我々はヒトＣ３ｄ（補体活性化中に産生される最終的Ｃ３分解断片）に対する新規のマウスモノクローナル抗体を作製した。我々は、これらの抗体のうちのいずれかが完全型Ｃ３上に存在または露出していないＣ３ｄ上のエピトープに結合するか決定するためにそれらの抗体をスクリーニングした。それらの抗体のうちの３つ（クローン３ｄ８ｂ、３ｄ９ａおよび３ｄ２９）は溶液状のｉＣ３ｂ断片、Ｃ３ｄｇ断片およびＣ３ｄ断片に優先的に結合したが、完全型Ｃ３またはＣ３ｂには結合しない。同じ３種類のクローンは全身注入されると組織に結合したＣ３活性化断片にも結合した。我々は、腎臓と網膜の疾患のマウスモデルを使用して全身注入の後に糸球体、腎臓尿細管間質、および眼の内部のＣ３断片沈着部位に蓄積した抗体を確認した。我々は眼の内部で結合した抗体を検出するために光学的イメージングを用い、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）のモデルにおける網膜病変内部での抗体の蓄積を観察した。我々の結果は、これらの抗体を利用する撮像方法により組織炎症の検出とモニタリングの高感度の手段が提供され得ることを示す。
【０３７６】
３ｄ  ｓｃＦｖおよび３ｄ  ｓｃＦｖ補体阻害剤の構築と発現、３ｄ  ２９ｓｃＦｖおよび３ｄ８ｂｓｃＦｖの精製
ＨｙｐｅｒＦｌａｓｋ細胞培養容器中で３ｄｓｃＦｖ  ＣＨＯ細胞の陽性クローンを培養および増幅した。上清を回収および濾過し、続いてＨｉｓＰｕｒカラムに負荷した。洗浄および溶出条件を調節した後にほぼ９０％純度でｓｃＦｖを精製した。図１９を参照のこと。
【０３７７】
３ｄ８ｂｓｃＦｖおよび３ｄ２９  ｓｃＦｖのブロックテスト
３ｄ抗原でプレートを（１０ｎｇ／ウェル）４℃で一晩被覆した。プレートをＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液により室温で１時間ブロックした。洗浄後、３ｄｓｃＦｖの段階希釈物を抗原プレートと共に４℃で一晩インキュベートした。５回の洗浄の後に３ｄｍＡｂの段階希釈物をプレート上において室温で２時間インキュベートし、続いて５回洗浄した。抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ−ＨＲＰを二次Ａｂとして使用した。５回の洗浄の後に各ウェルにＴＭＢ溶液を添加し、５〜１０分間インキュベートし、等体積の停止溶液（２ＭのＨ２ＳＯ４）を添加し、４５０ｎＭにおける光学密度を読んだ。図２０および２１を参照のこと。
【０３７８】
３ｄｓｃＦｖ−Ｃｒｒｙクローン化と陽性クローンの選択
３ｄ８ｂｓｃＦｖとＣｒｒｙを別個に増幅するためにプライマーを設計した。３ｄ８ｂ用の３’プライマーはＣｒｒｙ用の５’プライマーと同じ２５ｂｐの配列を有する。２つの断片を重ね合わせた後に３ｄ８ｂ用の３’プライマーとＣｒｒｙ用の５’プライマーを使用して３ｄｓｃＦｖＣｒｒｙ融合遺伝子を増幅した。３ｄ８ｂｓｃＦｖ−Ｃｒｒｙ融合遺伝子をｐＥＥ１４．１ベクターのＨｉｎｄＩＩＩ部位とＥｃｏｒＩ部位にクローン化した。図２２を参照のこと。
【０３７９】
形質移入と陽性クローンの選択
正しい配列によりＰＥＥ１４．１／３ｄ８ｂｓｃＦｖ−Ｃｒｒｙの配列を解析した。ＰＥＥ１４．１／３ｄ８ｂｓｃＦｖ−Ｃｒｒｙ−１をＣＨＯ細胞に形質移入した。形質移入から４８時間後にＣＨＯ／ＰＥＥ１４．１／３ｄ８ｂｓｃＦｖ−ＣｒｒｙをＭＳＸ選択培地に移し、３〜４週間の培養の後に細胞クローンを２４ウェルに移し、続いてドットブロットによりクローン選択を行った。図２３を参照のこと。ＮＣ膜に５μｌの培養上清を負荷し、続いて２％のＢＳＡと室温で１時間のブロッキングを行った。１：１０００希釈抗６×Ｈｉｓ  ＨＲＰ、４℃で一晩。ＣＨＯ上清のＡ６を陰性対照として使用した。結果に基づいてＢ１とＤ４をさらに培養および選択するための陽性クローンとして選択した。図２３を参照のこと。
【０３８０】
３ｄ８ｂｓｃＦｖ−ＦＨのクローン化とシーケンシング
３ｄ８ｂｓｃＦｖとＦＨを別個に増幅するためにプライマーを設計した。３ｄ８ｂ用の３’プライマーはＦＨ用の５’プライマーと同じ２５ｂｐの配列を有する。２つの断片を重ね合わせた後に３ｄ８ｂ用の３’プライマーとＦＨ用の５’プライマーを使用して３ｄｓｃＦｖ−ＦＨ融合遺伝子を増幅した。３ｄ８ｂｓｃＦｖ−ＦＨ融合遺伝子をｐＥＥ１４．１ベクターのＨｉｎｄＩＩＩ部位とＥｃｏｒＩ部位にクローン化した。正しい配列によりｐＥＥ３ｄ８ｂＦＨ−５を確認した。そのプラスミドをさらなる選択のためにＣＨＯ細胞に形質移入した。
【０３８１】
［実施例２］
継続中の案件は、視覚的検出手段、放射線的検出手段および他の検出手段のための様々なレポーター部分を有する抗体の生体分布、薬物動態、およびタギング方法をさらに定義する。我々は、前記抗体はＰＥＴによる検出のために放射性標識され得ること、および、それらの放射性標識抗体はそれらの免疫反応性を９５％よりも高く保持することを確認している。それらの標識抗体の親和定数は、
クローン  Ｋｄ
２９      ０．４３ｎＭ
９ａ      ０．６２ｎＭ
８ｂ      ０．３８ｎＭ
であった。
【０３８２】
収集されたデータより、それらの抗体がＭＲＩ造影剤（例えば、酸化鉄ナノ粒子）の表面にうまく複合体化され得ること、および光学的イメージング方法を用いて蛍光標識抗体が網膜内で検出され得ることが示される。
【０３８３】
補体系は自然免疫系の重要な武器であり、侵入してくる病原体に対する重要な防御を提供する（Ｒｉｃｋｌｉｎ，  Ｄ．，  Ｈａｊｉｓｈｅｎｇａｌｌｉｓ，  Ｇ．，  Ｙａｎｇ，  Ｋ．，  ａｎｄ  Ｌａｍｂｒｉｓ，  Ｊ．Ｄ．  ２０１０．  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ：  ａ  ｋｅｙ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ  ａｎｄ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１：７８５−７９７）。補体活性化は多数の自己免疫疾患および炎症性疾患の発病の原因でもある（Ｗａｌｐｏｒｔ，  Ｍ．Ｊ．  ２００１．  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ．  Ｓｅｃｏｎｄ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｐａｒｔｓ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３４４：１１４０−１１４４）。補体活性化の最中にＣ３タンパク質は幾つかの異なる部位においてタンパク質分解性切断を受ける（図１０）。切断断片はＣ３上のチオエステル部位と受容体面上のヒドロキシル基との間の共有結合を介して近くの組織に固定される（Ｓｅｒｋｏｖａ，  Ｎ．Ｊ．，  Ｒｅｎｎｅｒ，  Ｂ．，  Ｌａｒｓｅｎ，  Ｂ．Ａ．，  Ｓｔｏｌｄｔ，  Ｃ．Ｒ．，  Ｈａｓｅｂｒｏｏｃｋ，  Ｋ．Ｍ．，  Ｂｒａｄｓｈａｗ−Ｐｉｅｒｃｅ，  Ｅ．Ｌ．，  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．，  ａｎｄ  Ｔｈｕｒｍａｎ，  Ｊ．Ｍ．  ２０１０．  Ｒｅｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｉｒｏｎ  ｏｘｉｄｅ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＭＲ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  ２５５：５１７−５２６、Ｌａｗ，  Ｓ．Ｋ．，  ａｎｄ  Ｄｏｄｄｓ，  Ａ．Ｗ．  １９９７．  Ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｔｈｉｏｅｓｔｅｒ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｏｖａｌｅｎｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｃ３  ａｎｄ  Ｃ４．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ  ６：２６３−２７４）。したがって、組織面上でのＣ３断片の沈着は組織炎症の恒久的な標識を構成する。この理由のため、組織に結合したＣ３断片は免疫活性化のバイオマーカーとして一般に使用される。例えば、Ｃ３断片について腎臓生検試料が日常的に免疫染色され、糸球体Ｃ３断片の検出が高感度であり、且つ、しっかりとした疾患活動度の指標として役立つ（Ｓｃｈｕｌｚｅ，  Ｍ．，  Ｐｒｕｃｈｎｏ，  Ｃ．Ｊ．，  Ｂｕｒｎｓ，  Ｍ．，  Ｂａｋｅｒ，  Ｐ．Ｊ．，  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｒ．Ｊ．，  ａｎｄ  Ｃｏｕｓｅｒ，  Ｗ．Ｇ．  １９９３．  Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  Ｃ３ｃ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎｄｉｃａｔｅｓ  ｏｎｇｏｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｅ  ｄｅｐｏｓｉｔ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ．  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １４２：１７９−１８７）。
【０３８４】
組織に結合したＣ３断片は局所的な炎症を反映するので、それらの断片は標的化治療薬および診断薬のためのアドレス指定可能な結合リガンドとしても利用されている（Ｓｅｒｋｏｖａ，  Ｎ．Ｊ．，  Ｒｅｎｎｅｒ，  Ｂ．，  Ｌａｒｓｅｎ，  Ｂ．Ａ．，  Ｓｔｏｌｄｔ，  Ｃ．Ｒ．，  Ｈａｓｅｂｒｏｏｃｋ，  Ｋ．Ｍ．，  Ｂｒａｄｓｈａｗ−Ｐｉｅｒｃｅ，  Ｅ．Ｌ．，  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．，  ａｎｄ  Ｔｈｕｒｍａｎ，  Ｊ．Ｍ．  ２０１０．  Ｒｅｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｉｒｏｎ  ｏｘｉｄｅ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＭＲ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  ２５５：５１７−５２６、Ａｔｋｉｎｓｏｎ，  Ｃ．，  Ｓｏｎｇ，  Ｈ．，  Ｌｕ，  Ｂ．，  Ｑｉａｏ，  Ｆ．，  Ｂｕｒｎｓ，  Ｔ．Ａ．，  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．，  Ｔｓｏｋｏｓ，  Ｇ．Ｃ．，  ａｎｄ  Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  Ｓ．  ２００５．  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｃ３ｄ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎｊｕｒｙ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ａｐｐａｒｅｎｔ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１５：２４４４−２４５３、Ｓａｒｇｓｙａｎ，  Ｓ．Ａ．，  Ｓｅｒｋｏｖａ，  Ｎ．Ｊ．，  Ｒｅｎｎｅｒ，  Ｂ．，  Ｈａｓｅｂｒｏｏｃｋ，  Ｋ．Ｍ．，  Ｌａｒｓｅｎ，  Ｂ．，  Ｓｔｏｌｄｔ，  Ｃ．，  ＭｃＦａｎｎ，  Ｋ．，  Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ，  Ｍ．Ｃ．，  ａｎｄ  Ｔｈｕｒｍａｎ，  Ｊ．Ｍ．  ２０１２．  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ３  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｂｙ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｕｐｕｓ  ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  ８１：１５２−１５９、Ｒｏｈｒｅｒ，  Ｂ．，  Ｌｏｎｇ，  Ｑ．，  Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，  Ｂ．，  Ｗｉｌｓｏｎ，  Ｒ．Ｂ．，  Ｈｕａｎｇ，  Ｙ．，  Ｑｉａｏ，  Ｆ．，  Ｔａｎｇ，  Ｐ．Ｈ．，  Ｋｕｎｃｈｉｔｈａｐａｕｔｈａｍ，  Ｋ．，  Ｇｉｌｋｅｓｏｎ，  Ｇ．Ｓ．，  ａｎｄ  Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  Ｓ．  ２００９．  Ａ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ５０：３０５６−３０６４、Ｒｏｈｒｅｒ，  Ｂ．，  Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，  Ｂ．，  Ｂａｎｄｙｏｐａｄｈｙａｙ，  Ｍ．，  ａｎｄ  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．  ２０１２．  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｈｕｍａｎ  ＣＲ２−Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  Ｍｏｕｓｅ  Ｌａｓｅｒ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｏｃｕｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ）。これらの標的化薬剤は血漿中の完全型Ｃ３と組織に結合したＣ��断片を区別することができるタンパク質である組換え型の補体受容体−２（ＣＲ２）を用いている。このアプローチの理論的根拠は全身投与された薬剤がそれらのｉＣ３ｂ断片およびＣ３ｄ断片との親和性により炎症部位に送達され得ることである。治療薬を分子標的に向かわせることにより、その薬の全身的な副作用を最低限にしながら高い程度の局所的活性を達成することができる（Ｗｅｂｂ，  Ｓ．  ２０１１．  Ｐｈａｒｍａ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ  ｓｕｒｇｅｓ  ｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２９：２９７−２９８）。我々はＣＲ２標的化造影剤を使用して組織に結合したＣ３断片と腎臓疾患活動度を磁気共鳴画像法により検出してもいる（Ｓｅｒｋｏｖａ，  Ｎ．Ｊ．，  Ｒｅｎｎｅｒ，  Ｂ．，  Ｌａｒｓｅｎ，  Ｂ．Ａ．，  Ｓｔｏｌｄｔ，  Ｃ．Ｒ．，  Ｈａｓｅｂｒｏｏｃｋ，  Ｋ．Ｍ．，  Ｂｒａｄｓｈａｗ−Ｐｉｅｒｃｅ，  Ｅ．Ｌ．，  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．，  ａｎｄ  Ｔｈｕｒｍａｎ，  Ｊ．Ｍ．  ２０１０．  Ｒｅｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｉｒｏｎ  ｏｘｉｄｅ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＭＲ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  ２５５：５１７−５２６、Ｓａｒｇｓｙａｎ，  Ｓ．Ａ．，  Ｓｅｒｋｏｖａ，  Ｎ．Ｊ．，  Ｒｅｎｎｅｒ，  Ｂ．，  Ｈａｓｅｂｒｏｏｃｋ，  Ｋ．Ｍ．，  Ｌａｒｓｅｎ，  Ｂ．，  Ｓｔｏｌｄｔ，  Ｃ．，  ＭｃＦａｎｎ，  Ｋ．，  Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ，  Ｍ．Ｃ．，  ａｎｄ  Ｔｈｕｒｍａｎ，  Ｊ．Ｍ．  ２０１２．  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ３  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｂｙ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｕｐｕｓ  ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  ８１：１５２−１５９）。ＣＲ２標的化薬剤は切断型のＣ３に特異的であるが、比較的に低い親和性でこれらの断片に結合し得る［報告されている値は生理的イオン強度において１μＭから１０μＭの範囲である（Ｇｕｔｈｒｉｄｇｅ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｒａｋｓｔａｎｇ，  Ｊ．Ｋ．，  Ｙｏｕｎｇ，  Ｋ．Ａ．，  Ｈｉｎｓｈｅｌｗｏｏｄ，  Ｊ．，  Ａｓｌａｍ，  Ｍ．，  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，  Ａ．，  Ｇｉｐｓｏｎ，  Ｍ．Ｇ．，  Ｓａｒｒｉａｓ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｍｏｏｒｅ，  Ｗ．Ｔ．，  Ｍｅａｇｈｅｒ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２００１．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｐａｉｒ  ｏｆ  ｓｈｏｒｔ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ／ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｐｅａｔ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ２  （ＣＲ２／ＣＤ２１）  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄ  Ｃ３ｄｇ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４０：５９３１−５９４１、Ｉｓｅｎｍａｎ，  Ｄ．Ｅ．，  Ｌｅｕｎｇ，  Ｅ．，  Ｍａｃｋａｙ，  Ｊ．Ｄ．，  Ｂａｇｂｙ，  Ｓ．，  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｅｌｓｅｎ，  Ｊ．Ｍ．  ２０１０．  Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｅｓ  ｒｅｖｅａｌ  ｔｈａｔ  ｔｈｅ  ｓｔａｐｈｙ��ｏｃｏｃｃａｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｅｖａｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｓｂｉ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２  （ＣＲ２）  ｓｈａｒｅ  ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ  ｏｎ  Ｃ３ｄ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓｙ  ｒｅｇａｒｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ＣＲ２／Ｃ３ｄ  ｃｏｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８４：１９４６−１９５５）。切断型のＣ３上のエピトープに対する高親和性標的化ベクターであればさらに高い効率で炎症部位に治療薬と診断薬を送達する可能性があり得る。
【０３８５】
したがって、組織に結合したＣ３断片に対するよく特徴解析されたモノクローナル抗体は多くの生体医学用途を有する。それらの抗体は新しい治療薬および診断薬のインビボ送達ベヒクルとして使用され得る。それらの抗体はＣ３断片の生物学的機能を調節する可能性もあり得る。例えば、それらの抗体はＣ３断片のＣＲ１〜４との相互作用またはＣ３に結合する他のタンパク質、例えば、補体阻害剤Ｈ因子との相互作用を妨げ得る。そのような抗体は特異的なＣ３断片（例えば、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、およびＣ３ｄ）の特定およびそれらの相対量の定量にとっても有用であり得る。しかしながら、標準的方法によるそのような抗体の作製には幾つかの障壁がある。それらの抗体はＣＲ２のように（１〜２ｍｇ／ｍＬの濃度で循環する）完全型Ｃ３上に露出していない切断されたＣ３のエピトープを認識しなくてはならない。しかしながら、Ｃ３ｄ（および、同様にｉＣ３ｂとＣ３ｄｇも）の内部領域は活性化中のＣ３の立体構造変化により露出するので（Ｊａｎｓｓｅｎ，  Ｂ．Ｊ．，  Ｃｈｒｉｓｔｏｄｏｕｌｉｄｏｕ，  Ａ．，  ＭｃＣａｒｔｈｙ，  Ａ．，  Ｌａｍｂｒｉｓ，  Ｊ．Ｄ．，  ａｎｄ  Ｇｒｏｓ，  Ｐ．  ２００６．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｃ３ｂ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｔｈａｔ  ｕｎｄｅｒｌｉｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４４４：２１３−２１６）、このエピトープ認識は実現可能である。別の難点は、ハイブリドーマの作製とクローン化の標準的方法によってそれらのハイブリドーマ細胞が血清含有培地中のＣ３およびＣ３断片、またはそれらの培養物中において使用されるマクロファージなどの細胞によって合成されるＣ３に曝露されることがあり得ることである。培地中のＣ３は陽性ハイブリドーマクローンをマスクすること、またはＢ細胞受容体の架橋を介してそのようなクローンの成長に影響を及ぼすことがあり得る。
【０３８６】
我々はこれらの難点を克服するための新規の方法を用い、マウスとカニクイザルの両方のＣ３ｄと交差反応するヒトＣ３ｄに対する９種類のマウスモノクローナル抗体を開発した。これらの高親和性抗体のうちの３つは切断型のＣ３を完全型Ｃ３タンパク質と区別する。さらに、我々の研究により、これらの抗体は循環血液中の高レベルの完全型Ｃ３にも関わらずインビボで補体活性化組織部位を標的化するために使用され得ることが示される。我々は本明細書においてＣ３ｄに対するこれらのモノクローナル抗体を開発するために我々が用いた方法とこれらの試薬がインビボで組織に結合したＣ３ｄを標的とする証拠を報告する。
【０３８７】
［実施例３］
組換えヒトＣ３ｄに対するマウスｍＡｂの開発
補体活性化中にＣ３はチオエステル結合を露出させる立体構造変化を受ける（Ｓｅｒｋｏｖａ，  Ｎ．Ｊ．，  Ｒｅｎｎｅｒ，  Ｂ．，  Ｌａｒｓｅｎ，  Ｂ．Ａ．，  Ｓｔｏｌｄｔ，  Ｃ．Ｒ．，  Ｈａｓｅｂｒｏｏｃｋ，  Ｋ．Ｍ．，  Ｂｒａｄｓｈａｗ−Ｐｉｅｒｃｅ，  Ｅ．Ｌ．，  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．，  ａｎｄ  Ｔｈｕｒｍａｎ，  Ｊ．Ｍ．  ２０１０．  Ｒｅｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｉｒｏｎ  ｏｘｉｄｅ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＭＲ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  ２５５：５１７−５２６、Ｊａｎｓｓｅｎ，  Ｂ．Ｊ．，  Ｃｈｒｉｓｔｏｄｏｕｌｉｄｏｕ，  Ａ．，  ＭｃＣａｒｔｈｙ，  Ａ．，  Ｌａｍｂｒｉｓ，  Ｊ．Ｄ．，  ａｎｄ  Ｇｒｏｓ，  Ｐ．  ２００６．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｃ３ｂ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｔｈａｔ  ｕｎｄｅｒｌｉｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４４４：２１３−２１６）。Ｃ３のチオエステルドメイン（ＴＥＤ）はＣ３のＣ３ｂへの変換中に回転し、その分子の表面上でＴＥＤの方向を変える（Ｊａｎｓｓｅｎ，  Ｂ．Ｊ．，  Ｃｈｒｉｓｔｏｄｏｕｌｉｄｏｕ，  Ａ．，  ＭｃＣａｒｔｈｙ，  Ａ．，  Ｌａｍｂｒｉｓ，  Ｊ．Ｄ．，  ａｎｄ  Ｇｒｏｓ，  Ｐ．  ２００６．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｃ３ｂ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｔｈａｔ  ｕｎｄｅｒｌｉｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４４４：２１３−２１６）。Ｃ３ｂのこの領域はｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、および最終的にＣ３ｄを産生するその後の切断の間に露出されたままである（図１０）。Ｃ３のこの領域上のエピトープに対するｍＡｂを作製するため、我々は組換えヒトＣ３ｄ（Ｇｕｔｈｒｉｄｇｅ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｒａｋｓｔａｎｇ，  Ｊ．Ｋ．，  Ｙｏｕｎｇ，  Ｋ．Ａ．，  Ｈｉｎｓｈｅｌｗｏｏｄ，  Ｊ．，  Ａｓｌａｍ，  Ｍ．，  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，  Ａ．，  Ｇｉｐｓｏｎ，  Ｍ．Ｇ．，  Ｓａｒｒｉａｓ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｍｏｏｒｅ，  Ｗ．Ｔ．，  Ｍｅａｇｈｅｒ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２００１．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｐａｉｒ  ｏｆ  ｓｈｏｒｔ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ／ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｐｅａｔ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ２  （ＣＲ２／ＣＤ２１）  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄ  Ｃ３ｄｇ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４０：５９３１−５９４１）を作製し、Ｃ３遺伝子の標的欠失を担持するマウスを免疫した［Ｃ３−／−マウス；（Ｗｅｓｓｅｌｓ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｂｕｔｋｏ，  Ｐ．，  Ｍａ，  Ｍ．，  Ｗａｒｒｅｎ，  Ｈ．Ｂ．，  Ｌａｇｅ，  Ａ．Ｌ．，  ａｎｄ  Ｃａｒｒｏｌｌ，  Ｍ．Ｃ．  １９９５．  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｇｒｏｕｐ  Ｂ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｃ３  ｏｒ  Ｃ４  ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ  ａｎ  ｅｓｓ��ｎｔｉａｌ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｂｏｔｈ  ｉｎｎａｔｅ  ａｎｄ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９２：１１４９０−１１４９４）］。Ｃ３−／−マウスは欠損した液性免疫を有するが（Ｗｅｓｓｅｌｓ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｂｕｔｋｏ，  Ｐ．，  Ｍａ，  Ｍ．，  Ｗａｒｒｅｎ，  Ｈ．Ｂ．，  Ｌａｇｅ，  Ａ．Ｌ．，  ａｎｄ  Ｃａｒｒｏｌｌ，  Ｍ．Ｃ．  １９９５．  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｇｒｏｕｐ  Ｂ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｃ３  ｏｒ  Ｃ４  ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ  ａｎ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｂｏｔｈ  ｉｎｎａｔｅ  ａｎｄ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９２：１１４９０−１１４９４）、それらのマウスはＣ３ｄ免疫原に対する強い抗体応答を発達させた（データを示さず）。
【０３８８】
Ｃ３ｄに対する高抗体タイターを有するマウスの脾臓細胞を使用して２つの融合を実施したが、どちらの融合もどのような反応性クローンも産生することに失敗した。所望のハイブリドーマ細胞はＣ３ｄに特異的であったので、我々は、どのようなクローンも作製することができなかった理由はＣ３断片が組織培養培地中の血清によりまたは反応性細胞のＢ細胞受容体に結合したクローニング過程中に使用されたマクロファージから産生したことであると仮説を立てた。これにより細胞のアポトーシスが誘導されるかまたはスクリーニングＥＬＩＳＡアッセイによるスクリーニングが干渉を受ける可能性があり得た。それ故、ハイブリドーマ細胞が無血清培地処方物中で培養される第３の融合を実施した。マクロファージは副補体経路のタンパク質のうちの全てを合成し、且つ、Ｃ３断片を産生する能力を有してもいるので（Ｓｔｒｕｎｋ，  Ｒ．Ｃ．，  Ｋｕｎｋｅ，  Ｋ．Ｓ．，  ａｎｄ  Ｇｉｃｌａｓ，  Ｐ．Ｃ．  １９８３．  Ｈｕｍａｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｐｒｏｄｕｃｅ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  Ｃ３  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４９：１６９−１７４）、Ｃ３−／−マウスの腹膜潅流によりクローン化中に使用されるフィーダー細胞を得た。単細胞クローンを作製し、ＥＬＩＳＡによりＣ３ｄに対するスクリーニングを行い、強い反応性を有する９種類のクローンを特定した（図１１Ａ）。
【０３８９】
それらの抗体がＣ３ｄと反応し、且つ、免疫原中の汚染混入物質と反応しないことを確認するため、組換えＣ３ｄがポリクローナル抗Ｃ３ｄ捕捉抗体により捕捉されるサンドウィッチＥＬＩＳＡを用いてＣ３ｄに対してそれらの抗体を試験した（表２）。マウスＣ３ｄに対するそれらのクローンの反応性を試験するため、我々は組換えマウスＣ３ｄを使用する間接的ＥＬＩＳＡおよびサンドウィッチＥＬＩＳＡを実施した。我々は第２の構造体である精製ヒトＣ３ｄに由来する組換えヒトＣ３ｄと組換えカニクイザルＣ３ｄに対するそれらの抗体の結合を試験するための直接的ＥＬＩＳＡも実施した。それら９種類のクローン全てがこれらの標的の全てに対して強い反応性を示した（表２）。
【０３９０】
［実施例４］
Ｃ３活性化断片に対するクローン３ｄ８ｂ、３ｄ９、および３ｄ２９の特異度
Ｃ３とＣ３ｄのウエスタンブロット分析を変性条件下で実施し、それらのブロットを前記９種類の抗Ｃ３ｄクローンを用いて調べた。変性Ｃ３ｄで認識されるエピトープが変性型の完全型Ｃ３α鎖でも露出されていることが期待されるが、このアッセイではそれらの抗体は差示的なＣ３とＣ３ｄの認識を示した（図１１Ｂ）。それらの抗体はウエスタンブロット分析により３種類の別個の結合パターンを示した：Ｃ３への結合を有しないＣ３ｄへの強い結合（第Ｉ群）、Ｃ３とＣ３ｄへの強い結合（第ＩＩ群）、または両方のタンパク質への弱い結合（第ＩＩＩ群）。クローン３ｄ１１はウエスタンブロット分析によりそれらのＣ３断片の全てを認識した（図１１Ｃ）。
【０３９１】
それらの抗体の天然型の前記の異なるＣ３断片への結合を試験するため、前記の様々なＣ３断片の混合物を含む活性化血漿を使用して免疫沈殿反応を実施した（図１１Ｄ）。第Ｉ群の抗体（クローン３ｄ８ｂ、３ｄ９、および３ｄ２９）はｉＣ３ｂ断片とＣ３ｄｇ断片をプルダウンした。クローン１１（第ＩＩ群）はＣ３ｄをプルダウンした。クローン１６（第ＩＩＩ群）はＣ３、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇおよびＣ３ｄをプルダウンした。
【０３９２】
クローン３ｄ８ｂ、３ｄ９および３ｄ２９のＣ３ｄに対する親和性を表面プラズモン共鳴により試験した（図１２）。測定された親和性は、３ｄ２９がＫＤ＝１．０６ｎＭ、３ｄ９ａがＫＤ＝０．３６７ｎＭ、３ｄ８ｂがＫＤ＝０．４６５ｎＭであった。
【０３９３】
［実施例５］
表面結合Ｃ３転換酵素活性に対する抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂの効果
副経路Ｃ３転換酵素はＢ因子断片Ｂｂおよび流体相タンパク質プロペルジン（Ｐ）と複合したＣ３ｂから構成される。Ｃ３ｂＢｂＰの分離が自然に起こるが（Ｔ１／２、約５〜１０分）、流体相補体調節因子Ｈ因子が大いにこの過程を促進する。この後者の反応は細胞と組織の補体介在性損傷からの防御およびＣ３ホメオスタシスの維持に重要な役割を果たす。Ｃ３腎炎因子（Ｃ３Ｎｅｆ）と呼ばれるある特定の抗Ｃ３自己抗体は副経路Ｃ３転換酵素を安定化し、その酵素をＨ因子に対して耐性とすることによって非制御的補体活性化を可能にする（Ｄａｈａ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｆｅａｒｏｎ，  Ｄ．Ｔ．，  ａｎｄ  Ａｕｓｔｅｎ，  Ｋ．Ｆ．  １９７６．  Ｃ３  ｎｅｐｈｒｉｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  （Ｃ３ＮｅＦ）：  ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｌｕｉｄ  ｐｈａｓｅ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ−ｂｏｕｎｄ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１６：１−７）。前記抗Ｃ３ｄ抗体がＣ３Ｎｅｆ様活性を有するかどうか評価するため、我々はまずヒツジ赤血球上で予め構築されたＣ３ｂＢｂＰ複合体をそれらの抗Ｃ３ｄ抗体または緩衝液のみと共に様々な時間の間インキュベートした。次に我々は残っている転換酵素の溶血活性を定量した（図１３Ａ）。第Ｉ群クローン（３ｄ８ｂ、３ｄ９ａおよび３ｄ２９）も第ＩＩ群クローン３ｄ３１も赤血球の溶解に何の効果も有しなかった。これらの試料のインキュベーション期間中の自然な転換酵素分離に起因する溶血活性の喪失は対照細胞のものと同等であった。対照的に、第ＩＩＩ群クローン（３ｄ３、３ｄ１５、３ｄ１６）は転換酵素を安定化し、直後（図１３Ａ）および２時間のインキュベーションの後（図１３Ｂ）により大規模な赤血球の溶解を引き起こした。全ての事例において、溶血は予備構築ステップにおいてＢ因子の存在に絶対的に依存し（図１３ＣおよびＤ）、したがって副経路Ｃ３転換酵素が第ＩＩＩ群の効果を介在することが確認された。ＥＧＴＡがカルシウムキレート剤として含まれることによってその過程における他の補体活性化経路の関与が排除された。
【０３９４】
我々はＨ因子活性に対する抗Ｃ３ｄ抗体の影響も検討した。Ｈ因子はＣ３転換酵素の分解を促進することにより（Ｗｅｉｌｅｒ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｄａｈａ，  Ｍ．Ｒ．，  Ａｕｓｔｅｎ，  Ｋ．Ｆ．，  ａｎｄ  Ｆｅａｒｏｎ，  Ｄ．Ｔ．  １９７６．  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｅｔａ１Ｈ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ７３：３２６８−３２７２）、またはＣ３ｂの第Ｉ因子介在性切断（不活化）の補因子として機能することにより（Ｐａｎｇｂｕｒｎ，  Ｍ．Ｋ．，  Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，  Ｒ．Ｄ．，  ａｎｄ  Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ，  Ｈ．Ｊ．  １９７７．  Ｈｕｍａｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ３ｂ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ：  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ａｂｓｏｌｕｔｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｅｒｕｍ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｅｔａ１Ｈ  ｆｏｒ  ｃｌｅａｖａｇｅ  ｏｆ  Ｃ３ｂ  ａｎｄ  Ｃ４ｂ  ｉｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １４６：２５７−２７０）副経路活性化を制限する副経路調節性タンパク質である。前記抗Ｃ３ｄ抗体のそれぞれを含む反応においてＨ因子の添加により赤血球の溶解が阻害された。これは、それらの抗体のうちのいずれもＣ３ｂの表面上のＨ因子結合部位をブロックしなかったことを表す（図１３Ｅ）。これは、ＦＨの第Ｉ因子補因子活性とＣ３ｂＢｂ分解促進活性を保持するＦＨのアミノ末端側の４つのＳＣＲ（ＣＦＨ１〜４）に対するＣ３ｂ上の結合部位が（Ｃ３ｄ切断産物に近似する）ＴＥＤドメインの外側にあることを示す最近のデータ（Ｗｕ，  Ｊ．，  Ｗｕ，  Ｙ．Ｑ．，  Ｒｉｃｋｌｉｎ，  Ｄ．，  Ｊａｎｓｓｅｎ，  Ｂ．Ｊ．，  Ｌａｍｂｒｉｓ，  Ｊ．Ｄ．，  ａｎｄ  Ｇｒｏｓ，  Ｐ．  ２００９．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｃ３ｂ−ｆａｃｔｏｒ  Ｈ  ａｎｄ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｈｏｓｔ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ．  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：７２８−７３３）と一致する。
【０３９５】
最後に、正常ヒト血清とウサギ赤血球を使用する副経路溶血アッセイにおいて前記抗体を試験した。このアッセイは活性化因子面上で副経路活性を測定するための標準的アッセイである。反応混合物に高濃度でクローン３ｄ８ｂ、３ｄ９ａおよび３ｄ２９を添加したときでさえ、それらのクローンは赤血球の溶解を増加させなかった。逆に、高濃度のクローン１６の添加は溶血を増加させた。
【０３９６】
［実施例６］
ＣＲ２によるＣ３ｄの結合に対する抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂの効果
Ｃ３ｄはＣＲ２のリガンドであり、ＣＲ２はＢ細胞および濾胞樹状細胞上で発現する。Ｂ細胞上のＣＲ２によるＣ３ｄの認識によりＢ細胞受容体によるＢ細胞活性化の閾値が低下する（Ｌｙｕｂｃｈｅｎｋｏ，  Ｔ．，  ｄａｌ  Ｐｏｒｔｏ，  Ｊ．，  Ｃａｍｂｉｅｒ，  Ｊ．Ｃ．，  ａｎｄ  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．  ２００５．  Ｃｏｌｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ２  （ＣＲ２／ＣＤ２１）  ｕｓｉｎｇ  ｉｔｓ  ｎａｔｕｒａｌ  ｌｉｇａｎｄ  Ｃ３ｄｇ：  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７４：３２６４−３２７２）。結果としてＣＲ２によるシグナル伝達は液性免疫応答と自己免疫の発達において重要である。我々はＣ３ｄに対する前記ｍＡｂがこの相互作用を妨げるか試験した（図１５）。我々はインビトロＣＲ２−Ｃ３ｄ結合アッセイを用いて、クローン３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、３ｄ１１、３ｄ２９、および３ｄ３１がＣ３ｄとの結合によりＣＲ２を妨げることを見出した。第１群抗体の用量反応曲線は高濃度の３ｄ８ｂによるＣＲ２のほぼ完全な阻害を示した（図１５Ｂ）。クローン３ｄ９ａおよび３ｄ２９は高濃度で添加されるとＣＲ２による結合の約８０％の阻害を達成した（図１３Ｃ〜Ｄ）。これらの結果はそれらの抗体が免疫調節機能を有し得る可能性を提起する。
【０３９７】
［実施例７］
表面結合Ｃ３活性化断片への抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂのインビトロでの結合
活性化面に結合したナイーブＣ３断片に結合する前記ｍＡｂの能力を評価するため、血清とのインキュベーションによりザイモサン粒子をＣ３断片によりオプソニン化した（Ｔｈｕｒｍａｎ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｋｒａｕｓ，  Ｄ．Ｍ．，  Ｇｉｒａｒｄｉ，  Ｇ．，  Ｈｏｕｒｃａｄｅ，  Ｄ．，  Ｋａｎｇ，  Ｈ．Ｊ．，  Ｒｏｙｅｒ，  Ｐ．Ａ．，  Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，  Ｌ．Ｍ．，  Ｇｉｃｌａｓ，  Ｐ．Ｃ．，  Ｓａｌｍｏｎ，  Ｊ．，  Ｇｉｌｋｅｓｏｎ，  Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２００５．  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｅｇｎａｎｃｙ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４２：８７−９７）。次にそれらの粒子をそれらの抗体と共にインキュベートし、結合した抗体をフローサイトメトリーにより検出した（図１６Ａ）。クローン８ｂ、９ａおよび２９はオプソニン化ザイモサン粒子に結合し、一方、他のクローンは結合しなかった。組織中のＣ３沈着物へのこれらの抗体の結合を試験するため、Ｈ因子欠損マウスの腎臓から切片を作製した。これらのマウスのこれらの糸球体は糸球体腎炎を特徴とし、大量のＣ３活性化断片ｉＣ３ｂおよびＣ３ｄｇ／Ｃ３ｄの沈着物を有する（Ｐａｉｘａｏ−Ｃａｖａｌｃａｎｔｅ，  Ｄ．，  Ｈａｎｓｏｎ，  Ｓ．，  Ｂｏｔｔｏ，  Ｍ．，  Ｃｏｏｋ，  Ｈ．Ｔ．，  ａｎｄ  Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ，  Ｍ．Ｃ．  ２００９．  Ｆａｃｔｏｒ  Ｈ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  ＧＢＭ  ｂｏｕｎｄ  ｉＣ３ｂ  ｂｙ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  Ｃ３  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｆｌｕｉｄ  ｐｈａｓｅ．  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４６：１９４２−１９５０、Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ，  Ｍ．Ｃ．，  Ｃｏｏｋ，  Ｈ．Ｔ．，  Ｗａｒｒｅｎ，  Ｊ．，  Ｂｙｇｒａｖｅ，  Ａ．Ｅ．，  Ｍｏｓｓ，  Ｊ．，  Ｗａｌｐｏｒｔ，  Ｍ．Ｊ．，  ａｎｄ  Ｂｏｔｔｏ，  Ｍ．  ２００２．  Ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｃ３  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｃａｕｓｅｓ  ｍｅｍｂｒａｎｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ  Ｈ．  Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ３１：４２４−４２８）。クローン８ｂ、９ａ、および２９はＣ３に対するポリクローナル抗体を使用して得られたパターンと区別がつかないパターンでアセトン固定切片に結合した（図１６Ｂ）。
【０３９８】
［実施例８］
補体活性化組織部位への抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂのインビボ標的化
次に我々は前記抗体がインビボで注入されると組織に結合したＣ３断片に結合するかどうか判定しようとした。内在性ＩｇＧの糸球体沈着物を有しないｆＨ−／−マウス（Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ，  Ｍ．Ｃ．，  Ｃｏｏｋ，  Ｈ．Ｔ．，  Ｗａｒｒｅｎ，  Ｊ．，  Ｂｙｇｒａｖｅ，  Ａ．Ｅ．，  Ｍｏｓｓ，  Ｊ．，  Ｗａｌｐｏｒｔ，  Ｍ．Ｊ．，  ａｎｄ  Ｂｏｔｔｏ，  Ｍ．  ２００２．  Ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｃ３  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｃａｕｓｅｓ  ｍｅｍｂｒａｎｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ  Ｈ．  Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ３１：４２４−４２８）にそれらの抗体を静脈内注射した。２４時間後に腎臓を収集し、ＩｇＧについて免疫染色した（図１６Ａ）。クローン８ｂ、９ａおよび２９はＣ３断片のパターンと区別がつかないパターンで糸球体基底膜に沿って容易に検出され、静脈内注射の後に糸球体毛細管璧中のＣ３沈着物にそれらのクローンが結合したことを示した。我々がＩｇＧの内在性沈着物を検出していないことを確認するため、クローン３ｄ２９をビオチン標識し、ｆＨ−／−マウスに注入した。ストレプトアビジン−ＦＩＴＣを使用してその抗体の糸球体への結合を検出した。
【０３９９】
Ｃ３断片は通常は野生型マウスの尿細管基底膜に沿って沈着する（Ｔｈｕｒｍａｎ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｌｊｕｂａｎｏｖｉｃ，  Ｄ．，  Ｅｄｅｌｓｔｅｉｎ，  Ｃ．Ｌ．，  Ｇｉｌｋｅｓｏｎ，  Ｇ．Ｓ．，  ａｎｄ  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．  ２００３．  Ｌａｃｋ  ｏｆ  ａ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｎａｌ  ｆａｉｌｕｒｅ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７０：１５１７−１５２３）。ｆＨ−／−マウスでは尿細管Ｃ３沈着物が見られず、これはおそらくはこれらのマウスの流体相でほとんどのＣ３が消費されるためである（Ｇｕｔｈｒｉｄｇｅ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｒａｋｓｔａｎｇ，  Ｊ．Ｋ．，  Ｙｏｕｎｇ，  Ｋ．Ａ．，  Ｈｉｎｓｈｅｌｗｏｏｄ，  Ｊ．，  Ａｓｌａｍ，  Ｍ．，  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，  Ａ．，  Ｇｉｐｓｏｎ，  Ｍ．Ｇ．，  Ｓａｒｒｉａｓ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｍｏｏｒｅ，  Ｗ．Ｔ．，  Ｍｅａｇｈｅｒ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２００１．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｐａｉｒ  ｏｆ  ｓｈｏｒｔ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ／ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｐｅａｔ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ２  （ＣＲ２／ＣＤ２１）  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄ  Ｃ３ｄｇ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４０：５９３１−５９４１）。ＩｇＧはそれらの抗Ｃ３ｄ抗体を注入したｆＨ−／−マウスの尿細管基底膜に沿って検出されなかった。しかしながら、ビオチン標識３ｄ２９が野生型マウスに注入されると、尿細管基底膜に沿って検出され、Ｃ３沈着物と共に共局在した。これらの結果により、３ｄ８ｂ、３ｄ９ａおよび３ｄ２９が腎炎マウスの糸球体および非処理野生型マウスの尿細管間質におけるＣ３活性化断片の組織沈着物を標的とし、結合することが示される。
【０４００】
［実施例９］
眼の補体活性化部位を標的とする抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂのインビボイメージング
前記標的化抗体をインビボで視覚化することができるか試験するため、我々は光学的イメージング処理することができる系である眼に視点を変えた。補体活性化は加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の病理に関与する。補体成分は、Ｃ３（Ｈａｇｅｍａｎ，  Ｇ．Ｓ．，  Ｌｕｔｈｅｒｔ，  Ｐ．Ｊ．，  Ｖｉｃｔｏｒ  Ｃｈｏｎｇ，  Ｎ．Ｈ．，  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｌ．Ｖ．，  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｄ．Ｈ．，  ａｎｄ  Ｍｕｌｌｉｎｓ，  Ｒ．Ｆ．  ２００１．  Ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ  ｔｈａｔ  ｃｏｎｓｉｄｅｒｓ  ｄｒｕｓｅｎ  ａｓ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ａｔ  ｔｈｅ  ＲＰＥ−Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ｉｎ  ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２０：７０５−７３２）、アナフィラトキシンＣ３ａおよびＣ５ａ（Ｎｏｚａｋｉ，  Ｍ．，  Ｒａｉｓｌｅｒ，  Ｂ．Ｊ．，  Ｓａｋｕｒａｉ，  Ｅ．，  Ｓａｒｍａ，  Ｊ．Ｖ．，  Ｂａｒｎｕｍ，  Ｓ．Ｒ．，  Ｌａｍｂｒｉｓ，  Ｊ．Ｄ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｙ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｋ．，  Ａｍｂａｔｉ，  Ｂ．Ｋ．，  Ｂａｆｆｉ，  Ｊ．Ｚ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２００６．  Ｄｒｕｓｅｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  Ｃ３ａ  ａｎｄ  Ｃ５ａ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０３：２３２８−２３３３）ならびに膜侵襲複合体成分（Ｈａｇｅｍａｎ，  Ｇ．Ｓ．，  Ｌｕｔｈｅｒｔ，  Ｐ．Ｊ．，  Ｖｉｃｔｏｒ  Ｃｈｏｎｇ，  Ｎ．Ｈ．，  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｌ．Ｖ．，  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｄ．Ｈ．，  ａｎｄ  Ｍｕｌｌｉｎｓ，  Ｒ．Ｆ．  ２００１．  Ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ  ｔｈａｔ  ｃｏｎｓｉｄｅｒｓ  ｄｒｕｓｅｎ  ａｓ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ａｔ  ｔｈｅ  ＲＰＥ−Ｂｒｕｃｈ’ｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ｉｎ  ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２０：７０５−７３２）を含み、ＡＭＤの病理学的構造体（例えば、晶洞、ブルッフ膜）中に存在することが分かっており、補体遺伝子の単一多型がＡＭＤの危険因子を装う（Ｌｅｖｅｚｉｅｌ，  Ｎ．，  Ｔｉｌｌｅｕｌ，  Ｊ．，  Ｐｕｃｈｅ，  Ｎ．，  Ｚｅｒｂｉｂ，  Ｊ．，  Ｌａｌｏｕｍ，  Ｆ．，  Ｑｕｅｒｑｕｅｓ，  Ｇ．，  ａｎｄ  Ｓｏｕｉｅｄ，  Ｅ．Ｈ．  ２０１１．  Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｉｃａ  ２２６：８７−１０２）。ＡＭＤは網膜色素上皮（ＲＰＥ）の萎縮とそれに続く光受容体の喪失か、または脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）とそれに続く光受容体の喪失のどちらかに由来する視力喪失という結果になる（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５）。レーザー光凝固術を用いて血液網膜関門に損傷を与えることによりマウス���後者の過程を模倣することができ、その損傷が補体依存的に網膜下腔への脈絡膜血管の内殖を引き起こす（Ｒｏｈｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９；  Ｒｏｈｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。同様に、損傷部位において補体沈着が起こることが示されている（Ｎｏｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６；  Ｒｏｈｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）。我々は全身的ＣＲ２標的化戦略を用いて、このように引き起こされた補体阻害（ＣＲ２−ｆＨ）がＣＮＶを改善し得ることを示した（Ｒｏｈｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９；  Ｒｏｈｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２）。
【０４０１】
ここで我々はレーザー損傷マウスのＲＰＥ／脈絡膜において補体活性化部位を直接的に画像化することができるか、抗Ｃ３ｄ  ｍＡｂを使用して試験した。まず、我々はいずれの抗体が伸展された眼のＣＮＶ病変部位におけるＣ３ｄエピトープを認識するか試験した。インビボイメージングに蛍光標識抗体が将来必要とされるので、ＦＩＴＣ標識抗体だけを試験した。それらのＦＩＴＣ標識ｍＡｂのうち、クローン２９が軽く固定した組織（４％パラホルムアルデヒド）のＣＮＶ病変部に対して最良の結合を示した（図１８Ａ）。補体Ｂ因子ノックアウトマウス（ｆＢ−／−）はその病変に応答したＲＰＥ／脈絡膜中のＣ３の増加を示さず、且つ、有意なＣＮＶの発症に失敗するので（Ｒｏｈｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）、ｆＢ−／−マウスをＦＩＴＣ標識ｍＡｂ結合の陰性対照として使用した（図１８Ｂ）。３ｄ２９による結合の特異度を確認するためにアイソタイプ対照抗体（ＨＢ５）も試験した（図１８Ｃ）。
【０４０２】
インビボイメージング用にＣＮＶ病変部を作製し、その病変部内でのＣ３発現のピークに対応することが以前に示されている時点である（Ｒｏｈｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）ＣＮＶ誘導後の３日目にＦＩＴＣ標識３ｄ２９またはＨＢ５静脈内注射した。眼底撮像を用いて注射から６時間、２４時間、および４８時間の後に動物を画像撮影した。ＣＮＶ病変部は明視野像中に脱色部分として容易に分かる（図１８Ｄ、Ｆ）。早期の時点では（６時間および２４時間）、両方の抗体が病変部に増強されているが、区別がつかない蛍光を作り出した。４８時間までに、３ｄ２９ｍＡｂ注入マウスにおいて示される点状のパターン（図１８Ｇ、Ｇ’）と比較して、対照抗体では拡散したバックグラウンド蛍光が検出される（図１８Ｅ、Ｅ’）。これらの結果は、従来のイメージング技術を用いて生体の眼において視覚化され得るほど充分に高い濃度で３ｄ２９がＣＮＶ病変マウスの後極におけるＲＰＥ／脈絡膜組織Ｃ３活性化断片沈着物に保持されることを表す。
【０４０３】
［実施例１０］
分析
この報告は天然型立体構造の完全型Ｃ３に結合しないＣ３活性化断片Ｃ３ｄに対する３種類のモノクローナル抗体（第Ｉ群抗体３ｄ８ｂ、３ｄ９ａおよび３ｄ２９）の開発について記載する。これらの抗体は補体活性化中に作製されるか、または露出されるｉＣ３ｂおよびＣ３ｄ上のエピトープを認識する抗体である。これらの抗体の作製に成功するため、我々はハイブリドーマ融合の標準的方法に幾つかの改変を行った。ハイブリドーマ細胞を無血清条件下で培養し、Ｃ３−／−マウス由来のマクロファージをクローン化処理中のフィーダー細胞として使用した。このアプローチによりマウスとカニクイザルのＣ３ｄとも反応するヒトＣ３ｄに対する９種類のｍＡｂの作製が可能になった。
【０４０４】
それら９種類の抗体のうちの３つがＳＤＳ変性Ｃ３ｄへの強い結合を示したが、変性Ｃ３への結合をほとんど示さなかった。同じ３種類の抗体が完全型Ｃ３も含む混合物からｉＣ３ｂとＣ３ｄｇをプルダウンしたが、それらの抗体は完全型Ｃ３タンパク質をプルダウンしなかった。これらの３種類のクローンはインビトロでオプソニン化ザイモサン粒子の表面上のＣ３断片にも結合し、表面結合型Ｃ３断片に結合する能力を示した。ある特定の抗Ｃ３抗体はＣ３転換酵素を安定化し、補体活性化を効果的に増幅することが知られている。組織に結合したＣ３断片を標的とするそれら３種類のクローンは幾つかの異なるインビトロアッセイを用いても全く活性化活性を有しなかった。しかしながら、その他のクローンのうちの１つ（クローン３ｄ１６）は副経路活性化アッセイにおけるウサギ赤血球の溶解を増加し、且つ、他の第ＩＩＩ群抗体と共にヒツジ赤血球上で予め構築されたＣ３転換酵素を安定化した。ここに記載される抗体のうちのいずれもＣ３転換酵素のＨ因子介在性分離を防止しなかった。
【０４０５】
糸球体腎炎を有するマウスにクローン３ｄ８ｂ、３ｄ９ａ、または３ｄ２９を注入すると、それらの抗体は糸球体内のＣ３沈着物の部位に蓄積し、この位置における組織に結合したｉＣ３ｂとＣ３ｄを標的とするためにそれらの抗体を使用することができることを示した。野生型マウスに注入されると、これらの抗体は（基線でＣ３断片の沈着を有する）尿細管基底膜に沿って沈着したＣ３断片に結合した。Ｃ３断片はｆＨ−／−マウスの循環血液中に存在し、且つ、野生型マウスは高循環レベルの完全型Ｃ３を有するので、循環性Ｃ３断片およびＣ３断片の存在下であってもクローン８ｂ、９ａおよび２９が組織に結合したｉＣ３ｂ活性化断片およびＣ３ｄ活性化断片に優先的に結合することがこの実験により検証された。
【０４０６】
これらの抗体のＣ３ｄに対する高親和性とＣ３ｄ沈着部位に薬剤をインビボで送達する能力はそれらの抗体を診断薬および治療薬の開発にとって非常に重要なツールとする可能性がある。糸球体Ｃ３沈着の検出は糸球体腎炎の正確な診断にとって重要であり、腎臓生検組織がＣ３について日常的に染色される。我々は糸球体Ｃ３の非侵襲的検出のためのＭＲＩベースの方法を開発しており、これらの高親和性抗体はこの方法の感度を改善し得る。本研究において我々は、従来の蛍光撮像を用いて生きている動物内でＦＩＴＣ標識３ｄ２９が視覚化されることを示した。これにより、我々はＣＮＶを有するマウスのＲＰＥ／脈絡膜内で非侵襲的にＣ３ｄ沈着物を検出することが可能になる。最後に、標的化補体阻害剤も炎症性疾患の治療にとって非常に有望であることを示している（Ａｔｋｉｎｓｏｎ，  Ｃ．，  Ｓｏｎｇ，  Ｈ．，  Ｌｕ，  Ｂ．，  Ｑｉａｏ，  Ｆ．，  Ｂｕｒｎｓ，  Ｔ．Ａ．，  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．，  Ｔｓｏｋｏｓ，  Ｇ．Ｃ．，  ａｎｄ  Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  Ｓ．  ２００５．  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｃ３ｄ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎｊｕｒｙ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ａｐｐａｒｅｎｔ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１５：２４４４−２４５３；  Ｓｅｋｉｎｅ，  Ｈ．，  Ｋｉｎｓｅｒ，  Ｔ．Ｔ．，  Ｑｉａｏ，  Ｆ．，  Ｍａｒｔｉｎｅｚ，  Ｅ．，  Ｐａｕｌｌｉｎｇ，  Ｅ．，  Ｒｕｉｚ，  Ｐ．，  Ｇｉｌｋｅｓｏｎ，  Ｇ．Ｓ．，  ａｎｄ  Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  Ｓ．  ２０１１．  Ｔｈｅ  ｂｅｎｅｆｉｔ  ｏｆ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ｆｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｎａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ＭＲＬ／ｌｐｒ  ｍｉｃｅ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ６３：１０７６−１０８５；  Ｓｏｎｇ，  Ｈ．，  Ｈｅ，  Ｃ．，  Ｋｎａａｋ，  Ｃ．，  Ｇｕｔｈｒｉｄｇｅ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．，  ａｎｄ  Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  Ｓ．  ２００３．  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｔｏ  ｓｉｔｅｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１１：１８７５−１８８５）。これらの抗体は組織炎症部位への新規治療薬の送達のための高親和性標的化ベクターを提供し得る。
【０４０７】
組織に結合したｉＣ３ｂとＣ３ｄｇ／Ｃ３ｄを有する部位へ診断薬および治療薬をインビボで向かわせるそれらの抗体の能力に加えて、これらの抗体は補体の生物学的機能の調節にも有用であり得る。クローン３ｄ８ｂ、３ｄ９ａおよび３ｄ２９はＣＲ２によるＣ３ｄの結合を妨げた。適応免疫応答におけるＣ３ｄ−ＣＲ２シグナル伝達の重要な役割を考慮すると、これらの抗体は補体系の外側で免疫調節性活性を有し得る。
【０４０８】
我々はＣ３ｄ上の正確なエピトープを特定するために一団のＣ３ｄ突然変異体に対してそれらの抗体をスクリーニングした。それらの抗体は複雑なエピトープを認識し得る。同様に、ＥＬＩＳＡでスクリーニングされると前記９種類のクローンの全てが全ての形状のＣ３を認識した。これはおそらくＣ３とＣ３ｂのＥＬＩＳＡプレートへの接着が他の場合であれば隠されていただろう標的エピトープの露出を引き起こしたからである。これらの抗体の結合部位を検出するための可能な方法には共結晶構造試験（Ｗｕ，  Ｊ．，  Ｗｕ，  Ｙ．Ｑ．，  Ｒｉｃｋｌｉｎ，  Ｄ．，  Ｊａｎｓｓｅｎ，  Ｂ．Ｊ．，  Ｌａｍｂｒｉｓ，  Ｊ．Ｄ．，  ａｎｄ  Ｇｒｏｓ，  Ｐ．  ２００９．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｃ３ｂ−ｆａｃｔｏｒ  Ｈ  ａｎｄ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｈｏｓｔ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ．  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：７２８−７３３）または核磁気共鳴（Ｋｏｖａｃｓ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｈａｎｎａｎ，  Ｊ．Ｐ．，  Ｅｉｓｅｎｍｅｓｓｅｒ，  Ｅ．Ｚ．，  ａｎｄ  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．  ２００９．  Ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃ３ｄ  ｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｏｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２  （ＣＲ２／ＣＤ２１）  ｕｓｉｎｇ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｈｉｆｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８４：９５１３−９５２０）が含まれる。それらの抗体によって阻止されるＣ３分子の相互作用を予想し得るので、各抗体の結合部位の特定はそれらの抗体の生物学的機能の予測に役立つことがあり得る。
【０４０９】
結論として、我々はＣ３活性化断片に対するｍＡｂの作製に成功した。それらの抗体のうちの３つが活性化型のＣ３（ｉＣ３ｂおよびＣ３ｄｇ／Ｃ３ｄ）を認識するが、天然型状態の完全型Ｃ３に結合しない。我々は、完全型Ｃ３の高循環レベルにも関わらずこれらの抗体が組織に結合したＣ３断片をインビボで標的とすることに成功し得ることを示した。組織に結合したＣ３活性化断片に特異的な抗体は組織炎症部位への治療薬および診断薬の標的化送達に使用され得る。これらの抗体を検出する放射線学的方法は組織炎症の検出とモニタリングのための重要な新しいツールを提供できるだろう。我々はＣＮＶを有する生きている動物内で蛍光標識抗体が検出されることを示した。今では治療用補体阻害剤の臨床使用が認可されているので（Ｒｏｔｈｅｒ，  Ｒ．Ｐ．，  Ｒｏｌｌｉｎｓ，  Ｓ．Ａ．，  Ｍｏｊｃｉｋ，  Ｃ．Ｆ．，  Ｂｒｏｄｓｋｙ，  Ｒ．Ａ．，  ａｎｄ  Ｂｅｌｌ，  Ｌ．  ２００７．  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐａｒｏｘｙｓｍａｌ  ｎｏｃｔｕｒｎａｌ  ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｕｒｉａ．  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２５：１２５６−１２６４）、組織内で補体活性化を検出する非侵襲的方法が特に重要になる。
【０４１０】
［実施例１１］
実験方法
組換えヒトＣ３ｄ
抗体作製用の免疫原として組換えヒトＣ３ｄを使用した。組換えヒトＣ３ｄはＥＬＩＳＡ結合試験とウエスタンブロット分析における標的抗原としても使用された。大腸菌内でｐＧＥＸ発現システム（ＧＥヘルスケア社）を以前に記載したように使用してＣ３ｄを作製した（Ｈａｎｎａｎ，  Ｊ．Ｐ．，  Ｙｏｕｎｇ，  Ｋ．Ａ．，  Ｇｕｔｈｒｉｄｇｅ，  Ｊ．Ｍ．，  Ａｓｏｋａｎ，  Ｒ．，  Ｓｚａｋｏｎｙｉ，  Ｇ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｘ．Ｓ．，  ａｎｄ  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．  ２００５．  Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ２  （ＣＲ２／ＣＤ２１）−Ｃ３ｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｃｈａｒｇｅｄ  ＳＣＲ１  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｆｏｒ  Ｃ３ｄ．  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３４６：８４５−８５８）。簡単に説明すると、ルリア・ベルターニ（ＬＢ）ブロス中で１リットルまでアンピシリン耐性コロニーを拡大した。培養物を０．３のＡ６００が達成されるまで３７℃で培養した。培養物を０．３ｍＭのイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトシドにより３０℃で一晩誘導した後に遠心分離により回収した。回収された沈殿物をグルタチオンＳ−トランスフェラーゼカラム緩衝液（５０ｍＭのトリスＨＣｌ、ｐＨ８．０、２５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ）に再懸濁し、超音波処理により溶解した。溶菌液を遠心分離により清澄化し、ＧＳｔｒａｐカラム（ＧＥバイオサイエンス社）にアプライした。５０単位のトロンビンを４℃で一晩使用して消化することによりそのカラムからＣ３ｄを切断し、それを後にサイズ排除クロマトグラフィーにより精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いてＣ３ｄの純度を検証した。第２の形状の組換えヒトＣ３ｄも以前に記載したように作製した（Ｋｕｌｉｋ，  Ｌ．，  Ｍａｒｃｈｂａｎｋ，  Ｋ．Ｊ．，  Ｌｙｕｂｃｈｅｎｋｏ，  Ｔ．，  Ｋｕｈｎ，  Ｋ．Ａ．，  Ｌｉｕｂｃｈｅｎｋｏ，  Ｇ．Ａ．，  Ｈａｌｕｓｚｃｚａｋ，  Ｃ．，  Ｇｉｐｓｏｎ，  Ｍ．Ｇ．，  Ｂｏａｃｋｌｅ，  Ｓ．Ａ．，  ａｎｄ  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．  ２００７．  Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｈｙｐｏ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｐｒｅｍａｔｕｒｅｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ＣＲ２／ＣＤ２１  ｄｕｒｉｎｇ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３７：６２３−６３３）。
【０４１１】
組換えマウスＣ３ｄ
ＢａｍＨ  Ｉ制限部位を含むフォワードプライマー（５’ｃｇｃｇｇａｔｃｃｇｃｇｇｃｔｇｔｇｇａｃｇｇｇｇａｇ３’）（配列番号５３）とＥｃｏＲ  Ｉ制限部位を含むリバースプライマー（５’ｃｃｇｇａａｔｔｃｃｇｇｔｃａｔｃａａｃｇｇｃｔｇｇｇｇａｇｇｔｇ３’）（配列番号５４）を使用してマウスｃＤＮＡからマウスＣ３ｄをクローン化した。増幅断片はｐＧＥＸベクターに挿入され、且つ、ヒトＣ３ｄと同じ方法で作製された。ＥＬＩＳＡ結合試験の標的抗原としてマウスＣ３ｄを使用した。
【０４１２】
組換えＣＲ２  ＳＣＲ１〜２
野生型ＣＲ２の残基１〜１３３を含み、且つ、最初の２つのＳＣＲモジュールを包含する組換えマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグ化ＣＲ２  ＳＣＲ１〜２（ＭＢＰ−ＣＲ２）を以前に記載されたように大腸菌において発現させた（Ｓｚａｋｏｎｙｉ，  Ｇ．，  Ｋｌｅｉｎ，  Ｍ．Ｇ．，  Ｈａｎｎａｎ，  Ｊ．Ｐ．，  Ｙｏｕｎｇ，  Ｋ．Ａ．，  Ｍａ，  Ｒ．Ｚ．，  Ａｓｏｋａｎ，  Ｒ．，  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．，  ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，  Ｘ．Ｓ．  ２００６．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｍａｊｏｒ  ｅｎｖｅｌｏｐｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ．  Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １３：９９６−１００１；  Ｙｏｕｎｇ，  Ｋ．Ａ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｘ．Ｓ．，  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．，  ａｎｄ  Ｈａｎｎａｎ，  Ｊ．Ｐ．  ２００７．  Ｉｓｏｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｇｐ３５０／２２０  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｏｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ２  （ＣＲ２／ＣＤ２１）．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８２：３６６１４−３６６２５；  Ｙｏｕｎｇ，  Ｋ．Ａ．，  Ｈｅｒｂｅｒｔ，  Ａ．Ｐ．，  Ｂａｒｌｏｗ，  Ｐ．Ｎ．，  Ｈｏｌｅｒｓ，  Ｖ．Ｍ．，  ａｎｄ  Ｈａｎｎａｎ，  Ｊ．Ｐ．  ２００８．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ２  （ＣＲ２／ＣＤ２１）  ａｎｄ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｇｐ３５０．  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８２：１１２１７−１１２２７）。簡単に説明すると、ＭＢＰ−ＣＲ２ＳＣＲ１−２で形質転換された大腸菌ＢＬ２１株のコロニーをＬＢ培地中で４リットルまで拡大し、０．３のＡ６００が得られるまで３７℃で培養した。次に培養物を０．３ｍＭのＩＰＴＧにより２０℃で一晩誘導した後に遠心分離により回収した。結果生じた細胞沈殿物を２０ｍＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ７．４）、０．２ＭのＮａＣｌ、および１ｍＭのＥＤＴＡを含むカラム緩衝液に再懸濁した後に超音波処理により溶解した。結果生じた溶菌液を遠心分離により清澄化し、組換えＭＢＰ−ＣＲ２を最初に連続的なアミロース親和性クロマトグラフィーとサイズ排除クロマトグラフィーのステップにより精製した。最後にその組換えＭＢＰ−ＣＲ２を、ＧＳＴタグ化Ｃ３ｄをＧＳＴｒａｐカラム（ＧＥバイオサイエンス社）に結合させることにより作製したＣ３ｄ−親和性カラムにアプライし、ＮａＣｌの直線的濃度勾配により溶出した。次に結果生じたタンパク質を濃縮し、ＰＢＳ（１．６ｍＭのＭｇＣｌ２、０．９ｍＭのＫＣｌ、０．５ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、４５．６ｍＭのＮａＣｌ、２．７ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４）に緩衝液交換し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより純度検定した。
【０４１３】
精製補体タンパク質
市販の精製補体タンパク質（Ｃ３、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂおよびＣ３ｄ；全てＣｏｍｐ  Ｔｅｃｈ社より）を使用して結合試験も実施した。
【０４１４】
［実施例１２］
検出可能部分および抗体、またはそれらの抗原結合断片への複合体化
直径が３０ｎｍのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）被覆アミン基（番号ＳＨＡ−３０−０５）またはカルボン酸基（番号ＳＨＰ−３０−１０）反応性−部位含有ＳＰＩＯのナノ粒子をＯｃｅａｎ  Ｎａｎｏ  Ｔｅｃｈ社から購入した。アミン含有ＳＰＩＯをここでＮＨ２−ＳＰＩＯと名付け、カルボン酸含有ＳＰＩＯをここでＣＯＯＨ−ＳＰＩＯと名付ける。精製Ｃ３ｄタンパク質を調製した。キメラ分子ＣＲ２−Ｆｃ（マウスＩｇＧ１由来のＦｃ、ｉＣ３ｂとＣ３ｄに結合する）、マウス抗体Ｃ３ｄ２９（アイソタイプＩｇＧ２ａ、Ｃ３ｄに結合する）およびマウス抗体１７１（非特異的対照として使用される。アイソタイプＩｇＧ１）を以前に記載されたプロトコルに従って各ハイブリドーマ株から精製した。複合体化化学薬品１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジミド塩酸塩（ＥＤＣ；番号２２９８０）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ；番号２４５００）、塩酸ヒドロキシルアミン（ヒドロキシルアミンＨＣｌ；番号２６１０３）、およびＮ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ；番号２６１０２）をＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社から購入した。Ｎ−マレオイル−β−アラニンはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社（番号３９４８１５）に、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社（番号１００１０−０２３）に、ＰＤ−ミニトラップＧ−２５カラムはＧＥヘルスケア社（番号２８−９１８０−０７）に由来した。マウスＩｇＧの全てのアイソタイプに結合する抗マウス−ＩｇＧ−フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）二次抗体をＪａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ社（番号１１５−０９５−１６４）から購入した。懸濁液状のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を購入し、ＣＨＯ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、番号１２６５１）と１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、番号１５１４０）中、３７℃と５％ＣＯ２で維持した。接着性ＣＨＯ細胞は…に由来し、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、番号２１０６３）、１０％ウシ胎児血清（ＨｙＣｌｏｎｅ社）および１％ペニシリン／ストレプトマイシン中において３７℃および５％ＣＯ２で維持した。ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイキットをＰｉｅｒｃｅ社（番号２３２２７）から、塩酸をＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社（番号Ａ１４４ＳＩ−２１２）から、過酸化水素をＳｉｇｍａ社（番号Ｈ−１００９）から、チオシアン酸カリウムをＳｉｇｍａ社（番号Ｐ−３０４８）から、パラホルムアルデヒドをＳｉｇｍａ社（ＰＦＡ；番号１５８１２７）から、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドをＳｉｇｍａ社（ＤＭＦ；番号Ｄ−８６５４）から、９６ウェルプレートをＣｏｓｔａｒ社（番号３６９０）から、６ウェルプレートをＣｒｏｎｉｎｇ社（番号）から、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）をＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社（ＢＰ１６００−１００）から、１−Ｓｔｅｐ  ＵｌｔｒａＴＭＢ基質をＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社（番号３４０２８）から、通常マウス血清をＶａｌｌｅｙ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社（番号ＡＳ３０５４Ｃ５７ＢＬ）から購入した。
【０４１５】
ＳＰＩＯの複合体化
３つの複合体化反応を用意した：１）チオール化タンパク質結合マレオイル活性化ＮＨ２−ＳＰＩＯ（これ以降「マレオイル」複合体化方法と呼ぶ）；２）ＥＤＣ／ＮＨＳ活性化タンパク質結合ＮＨ２−ＳＰＩＯ（これ以降「ＥＤＣ／ＮＨＳ／ＮＨ２」複合体化方法と呼ぶ）、および３）ＥＤＣ／ＮＨＳ活性化ＣＯＯＨ−ＳＰＩＯ結合タンパク質（これ以降「ＥＤＣ／ＮＨＳ」複合体化方法と呼ぶ）。マレオイル方法についてはＰＢＳ中の２００μｇのタンパク質をＤＭＦ中の８ｍｇ／ｍｌのＳＡＴＡの５μｌと３０分間反応させ、次にヒドロキシルアミンＨＣｌを５０ｍＭの終濃度で添加し、１時間反応させた。それらのタンパク質を製造業者のプロトコルに従ってＰＤ−ミニトラップカラムに通して精製した。それらの精製タンパク質を直ぐに１００μｇのＦｅ３＋を含有するＮＨ２−ＳＰＩＯと反応させ、それぞれ０．１ｎｍｏｌｅのＮ−マレオイル−β−アラニンとＥＤＣにより５５℃で１０分間活性化した。ＥＤＣ／ＮＨＳ／ＮＨ２方法については２００μｇの各タンパク質をそれぞれ０．４ｎｍｏｌｅのＥＤＣ／ＮＨＳ混合物により室温で１５分間活性化し、次に１００μｇのＦｅ３＋を含有するＮＨ２−ＳＰＩＯに添加した。ＥＤＣ／ＮＨＳ方法については２５０μｇのＦｅ３＋を含有するＣＯＯＨ−ＳＰＩＯをそれぞれ０．８ｎｍｏｌｅのＥＤＣ／ＮＨＳにより室温で１５分間活性化し、５００μｇのタンパク質に添加した。３種類の方法全てについて、一定に混合しながらそれらのタンパク質と各ＳＰＩＯを室温で２時間反応させた。次にそれらのＳＰＩＯをＰＢＳで３回洗浄し、わずかな時間（３〜１０秒）の超音波処理（モデルＷ−３８０、Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｓ社）の後にＰＢＳに再懸濁した。複合体化ＳＰＩＯを４℃で保存した。
【０４１６】
［実施例１３］
動物モデル
マウスモデルおよび動物モデル
Ｃ３ｄに対するモノクローナル抗体を作製するためにＣ３遺伝子の標的欠失を有するマウスを組換えヒトＣ３ｄで免疫した。これらのマウスは以前に記載されたように作製された（Ｗｅｓｓｅｌｓ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｂｕｔｋｏ，  Ｐ．，  Ｍａ，  Ｍ．，  Ｗａｒｒｅｎ，  Ｈ．Ｂ．，  Ｌａｇｅ，  Ａ．Ｌ．，  ａｎｄ  Ｃａｒｒｏｌｌ，  Ｍ．Ｃ．  １９９５．  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｇｒｏｕｐ  Ｂ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｃ３  ｏｒ  Ｃ４  ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ  ａｎ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｂｏｔｈ  ｉｎｎａｔｅ  ａｎｄ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９２：１１４９０−１１４９４）。幾つかのインビボ実験のためにＣ５７ＢＬ／６野生型マウスを使用し、マウス補体タンパク質を必要とするインビトロアッセイのためにこれらのマウスから血清を採取した。Ｈ因子遺伝子の遺伝子標的欠失を有するマウスは以前に記載されたように作製された（Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ，  Ｍ．Ｃ．，  Ｃｏｏｋ，  Ｈ．Ｔ．，  Ｗａｒｒｅｎ，  Ｊ．，  Ｂｙｇｒａｖｅ，  Ａ．Ｅ．，  Ｍｏｓｓ，  Ｊ．，  Ｗａｌｐｏｒｔ，  Ｍ．Ｊ．，  ａｎｄ  Ｂｏｔｔｏ，  Ｍ．  ２００２．  Ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｃ３  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｃａｕｓｅｓ  ｍｅｍｂｒａｎｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ  Ｈ．  Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ３１：４２４−４２８）。これらのマウスに由来する腎臓切片を使用して組織に結合したＣ３断片への抗Ｃ３ｄ抗体の結合をインビトロで試験し、ｆＨ−／−マウスに精製した抗Ｃ３ｄ抗体を注入して組織に結合したＣ３断片へのそれらの抗体の結合をインビボで試験した。補体Ｂ因子遺伝子の遺伝子標的欠失を有するマウスをＣＮＶ病変部へのＦＩＴＣ標識抗Ｃ３ｄ抗体の結合の陰性対照として使用した（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，  Ｍ．，  Ｆｕｋｕｄａ，  Ｗ．，  Ｃｉｒｃｏｌｏ，  Ａ．，  Ｇｏｅｌｌｎｅｒ，  Ｊ．，  Ｓｔｒａｕｓｓ−Ｓｃｈｏｅｎｂｅｒｇｅｒ，  Ｊ．，  Ｗａｎｇ，  Ｘ．，  Ｆｕｊｉｔａ，  Ｓ．，  Ｈｉｄｖｅｇｉ，  Ｔ．，  Ｃｈａｐｌｉｎ，  Ｄ．Ｄ．，  ａｎｄ  Ｃｏｌｔｅｎ，  Ｈ．Ｒ．  １９９７．  Ａｂｒｏｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ｂｙ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ｆａｃｔｏｒ  Ｂ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９４：８７２０−８７２５）。
【０４１７】
ＣＮＶ病変部を誘導するため、３か月齢のマウスに麻酔を行い（キシラジンとケタミン、それぞれ２０ｍｇ／ｋｇと８０ｍｇ／ｋｇ）、瞳孔を広げた（２．５％フェニレフリンＨＣｌと１％硫酸アトロピン）。アルゴンレーザー光凝固（５３２ｎｍ、１００μｍのスポットサイズ、０．１秒の期間、１００ｍＷ）を用い、手で持てるサイズのカバーグラスをコンタクトレンズとして使用して視神経の周りにそれぞれの眼に４か所のレーザースポットを作製した（Ｒｏｈｒｅｒｅｔａｌ．，  ２００９）。尾静脈注射のために熱により静脈を血管拡張し、２５Ｇの針を挿入し、１００μＬの体積を注入した。投与および処置スケジュールが結果のセクションに概説されている。このＣＮＶモデルと眼底撮像は眼科および視力研究における動物利用のＡＲＶＯ声明に従って実施され、大学動物実験委員会により認可された。
【０４１８】
免疫プロトコルとハイブリドーマ作製
Ｃ３ｄを標的として使用するＥＬＩＳＡにより免疫に対する液性免疫応答を評価した。前記マウスは６０〜１００μｇのタンパク質の３回の注射（最初の注射は完全フロイントアジュバント中であり、２回目の注射は不完全フロイントアジュバントを使用した）の後に高タイターの抗Ｃ３ｄ抗体を発生させた。次にそれらのマウスに１００μｇのＣ３ｄを腹腔内注射し、２４時間後にＳｐ２／０ハイブリドーマ細胞への融合のために脾臓を回収した（Ｋｕｌｉｋ，  Ｌ．，  Ｆｌｅｍｉｎｇ，  Ｓ．Ｄ．，  Ｍｏｒａｔｚ，  Ｃ．，  Ｒｅｕｔｅｒ，  Ｊ．Ｗ．，  Ｎｏｖｉｋｏｖ，  Ａ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｋ．，  Ａｎｄｒｅｗｓ，  Ｋ．Ａ．，  Ｍａｒｋａｒｙａｎ，  Ａ．，  Ｑｕｉｇｇ，  Ｒ．Ｊ．，  Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ，  Ｇ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２００９．  Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｎａｔｕｒａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ  ａｎｎｅｘｉｎ  ＩＶ  ａｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｔｏ  ｄｅｖｅｌｏｐ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ−ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｉｎｊｕｒｙ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８２：５３６３−５３７３）。クローン化処理中に抗Ｃ３ｄハイブリドーマのＣ３ｄへの曝露を防ぐため、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、セントルイス、ミズーリ州）を添加した無血清培地中でそれらの細胞を培養し、Ｃ３−／−マウス由来の腹腔マクロファージをこの過程中のフィーダー細胞として使用した。単細胞クローンを作製し、Ｃ３ｄに対するそれらのクローンの特異度を以下に記載するようにＥＬＩＳＡにより確認した。
【０４１９】
［実施例１４］
アッセイ
Ｃ３ｄ  ＥＬＩＳＡ
Ｃ３ｄに対する抗体の反応性を評価するため、幾つかの異なる起源に由来する精製型のＣ３活性化断片を使用してＥＬＩＳＡを実施した（上の試薬セクションを参照のこと）。３０〜５０ｎｇのＣ３断片をＥＬＩＳＡプレートに４℃で一晩はり付けることにより直接ＥＬＩＳＡを実施した。それらのプレートをＰＢＳ中の１％ウシ血清アルブミンにより室温で２時間ブロックした。次に結合した抗体をＨＲＰ複合体化抗マウスＩｇＧ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社、ソロン、オハイオ州）により検出した。Ｃ３ｄを捕捉するためにそれらのＥＬＩＳＡプレートに対してポリクローナル抗ヒトＣ３ｄ抗体（Ｄａｋｏ  ＵＳＡ社、カーピンテリア、カリフォルニア州）をインキュベートさせることによってサンドウィッチＥＬＩＳＡを実施した。次に捕捉されたＣ３ｄへのそれらの抗体の結合を上記のように検出した。
【０４２０】
Ｃ３ｄ−ＣＲ２／抗Ｃ３ｄモノクローナル抗体競合アッセイ
プレートを５０ｍＭの炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．８）中に５μｇ／ｍｌの濃度の野生型Ｃ３ｄと共に４℃で一晩インキュベートした。被覆後にｐＨ７．４のＰＢＳ中に１％のＢＳＡを利用してプレートを室温で１時間ブロックした。次にＰＢＳ−ツイーン２０（０．０５％）を使用したプレートを３回洗浄した。１０μｇ／ｍｌの組換え野生型ＭＢＰ−ＣＲ２をＣ３ｄ被覆ウェルのうちの半分に添加して陽性対照として作用させた。それらのＣ３ｄ被覆ウェルの残りの半分に次の抗Ｃ３ｄモノクローナル抗体：３ｄ８Ｂ、３ｄ３１、３ｄ１５、３ｄ９ａ、３ｄ１１、３ｄ１６、３ｄ１０、３ｄ３および３ｄ２９のうちの１つをＰＢＳ中に１．６２５〜２６μｇ／ｍｌの濃度でさらに含む１０μｇ／ｍｌの組換え野生型ＭＢＰ−ＣＲ２を添加した。１時間のインキュベーション期間の後にそれらのプレートを洗浄し、次にそれらのプレートを市販のＨＲＰ複合体化抗ＭＢＰ  ＭＢＰ−ＣＲ２（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ社）と共に製造業者の指示に従ってインキュベートした。１時間後にプレートに結合したＣ３ｄへのＭＢＰ−ＣＲ２ＳＣＲ１〜２の結合を２，２’−アジノビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ）により検出した。
【０４２１】
ウエスタンブロット分析とプルダウン試験
変性条件下で１０％ビス−トリスポリアクリルアミドゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カールスバッド、カリフォルニア州）を用いる電気泳動により１μｇの精製補体タンパク質を展開し、次にそのタンパク質をニトロセルロース膜に転写することによりウエスタンブロット分析を実施した。次に、その膜を２５μｇの各抗体と室温で１時間インキュベートすることによりＣ３断片を検出し、結合した抗体をＨＲＰ複合体化抗マウスＩｇＧにより検出した。
【０４２２】
補体アッセイ
ザイモサン活性化アッセイ
以前に記載されたようにザイモサン粒子を補体充足マウス血清と共にインキュベートすることによりそれらの粒子をマウスＣ３断片でオプソニン化した（Ｔｈｕｒｍａｎ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｋｒａｕｓ，  Ｄ．Ｍ．，  Ｇｉｒａｒｄｉ，  Ｇ．，  Ｈｏｕｒｃａｄｅ，  Ｄ．，  Ｋａｎｇ，  Ｈ．Ｊ．，  Ｒｏｙｅｒ，  Ｐ．Ａ．，  Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，  Ｌ．Ｍ．，  Ｇｉｃｌａｓ，  Ｐ．Ｃ．，  Ｓａｌｍｏｎ，  Ｊ．，  Ｇｉｌｋｅｓｏｎ，  Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２００５．  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｅｇｎａｎｃｙ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４２：８７−９７）。それらの粒子を２μｇの精製抗Ｃ３ｄ抗体と共にインキュベートし、結合した抗体をＦＩＴＣ複合体化抗マウスＩｇＧ（ＭＰ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社）により検出した。それらの試料をフローサイトメトリーにより分析し、陽性対照［ポリクローナル抗マウスＣ３（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社）で検出されたＣ３沈着］または陰性対照（血清未添加）と比較した。
【０４２３】
副経路溶血アッセイ
このアッセイを以前に記載されたように実施した（Ｔｈｕｒｍａｎ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｋｒａｕｓ，  Ｄ．Ｍ．，  Ｇｉｒａｒｄｉ，  Ｇ．，  Ｈｏｕｒｃａｄｅ，  Ｄ．，  Ｋａｎｇ，  Ｈ．Ｊ．，  Ｒｏｙｅｒ，  Ｐ．Ａ．，  Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，  Ｌ．Ｍ．，  Ｇｉｃｌａｓ，  Ｐ．Ｃ．，  Ｓａｌｍｏｎ，  Ｊ．，  Ｇｉｌｋｅｓｏｎ，  Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２００５．  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｅｇｎａｎｃｙ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４２：８７−９７）。簡単に説明すると、ウサギ赤血球（コロラド血清会社、デンバー、コロラド州）を洗浄し、次に１．１％のＮａＣｌ、０．００２５％のＮａ−５，５ジエチルバルビツレート（ｐＨ７．３５）、８ｍＭのＥＧＴＡ、２ｍＭのＭｇＣｌ２からなる溶液（ＧＶＢ／Ｍｇ／ＥＧＴＡ）中に再懸濁した。５０μｌのこの懸濁液をヒト血清（５〜１００μｌ）に添加し、最終体積を１５０μｌまでにするために緩衝溶液を添加した。血清を含まない緩衝液中の赤血球を陰性対照として使用し、１００μｌの蒸留水に添加した赤血球を陽性対照（完全溶解）として使用した。細胞を懸濁状態に保つために時々撹拌しながら試料を３７°Ｃで３０分間インキュベートした。１．５ｍｌの冷ＰＢＳを添加して反応を停止し、それらの試料を１０００×ｇで５分間遠心分離した。分光光度計（Ｂｉｏｒａｄ社、ハーキュリーズ、カリフォルニア州）を使用して各上清の光学密度を４１５ｎｍで読んだ。我々は約５０％の赤血球の溶解を引き起こす血清の濃度を決定した。次に、０〜４０μｇの各抗体を用いてそれらの反応を繰り返した。各反応の溶解率（％）を血清のみと比較し、溶解の変化をパーセンテージとして報告した。
【０４２４】
緩衝液
ＤＧＶＢ２＋：１ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１５ｍＭのＣａＣｌ２、７１ｍＭのＮａＣｌ、０．１％（重量／体積）のゼラチン、２．５％（重量／体積）のブドウ糖、および２．４７ｍＭのナトリウム５’，５”−ジエチルバルビツレート（ｐＨ７．３５）；Ｍｇ２＋  ＥＧＴＡ緩衝液：１０ｍＭのＮａ２ＥＧＴＡ、７ｍＭのＭｇＣｌ２、５９ｍＭのＮａＣｌ、０．０８３％（重量／体積）のゼラチン、２．０７５％（重量／体積）のブドウ糖および２．０５ｍＭのナトリウム５’，５”−ジエチルバルビツレート（ｐＨ７．３〜７．６）；１０ｍＭ  ＥＤＴＡ緩衝液：１０ｍＭのＮａ２ＥＤＴＡ、１２８ｍＭのＮａＣｌ、０．１％（重量／体積）のゼラチン、および４．４５ｍＭのナトリウム５’，５”−ジエチルバルビツレート（ｐＨ７．３５）；４０ｍＭ  ＥＤＴＡ緩衝液：４０ｍＭのＮａ２ＥＤＴＡ、８５ｍＭのＮａＣｌ、０．１％（重量／体積）のゼラチン、および２．９６ｍＭのナトリウム５’，５”−ジエチルバルビツレート（ｐＨ７．３５）。
【０４２５】
細胞結合型Ｃ３ｂの調製
Ｃｏｍｐ  Ｔｅｃｈ社から得たＡｂ感作性ヒツジ赤血球（ＥＡ細胞、５ｍｌ、５×１０８／ｍｌ）を２回洗浄し、５ｍｌのＤＧＶＢ２＋緩衝液に再懸濁し、５ｍｌのＤＧＶＢ２＋中の３７．５μｇのヒトＣ１と混合し、３０°で１５分間インキュベートした。結果生じた細胞（ＥＡＣ１）を２回洗浄し、５ｍｌのＤＧＶＢ２＋に再懸濁し、５ｍｌのＤＧＶＢ２＋に懸濁された５０μｇのヒトＣ４と混合し、３０°で１５分間インキュベートした。これらの細胞（ＥＡＣ１、４）を２回洗浄し、５ｍｌのＤＧＶＢ２＋に懸濁し、５ｍｌのＤＧＶＢ２＋に懸濁された２５０μｇのヒトＣ３および５μｇのヒトＣ２と混合し、３０°で３０分間インキュベートした。結果生じた細胞（ＥＡＣ１、４、２、３）を洗浄し、５ｍｌの１０ｍＭ  ＥＤＴＡ緩衝液に再懸濁し、３７℃で２時間インキュベートして活性古典的経路転換酵素を分離させた。結果生じたＣ３ｂ被覆細胞を５ｍｌの１０ｍＭ  ＥＤＴＡ緩衝液中で２回洗浄し、５ｍｌの１０ｍＭのＭｇ２＋  ＥＧＴＡ緩衝液中で２回洗浄し、１×１０８／ｍｌの終濃度まで１０ｍＭのＭｇ２＋  ＥＧＴＡ緩衝液中に再懸濁した。それらの細胞を４℃で保存し、一週間以内に使用した。
【０４２６】
細胞結合型Ｃ３ｂＢｂＰ複合体の活性に対する抗Ｃ３  ｍＡｂの効果
記載したようにＣ３ｂ被覆ヒツジ赤血球を調製した（Ｈｏｕｒｃａｄｅ，  Ｄ．Ｅ．，  Ｗａｇｎｅｒ，  Ｌ．Ｍ．，  ａｎｄ  Ｏｇｌｅｓｂｙ，  Ｔ．Ｊ．  １９９５．  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｈｏｒｔ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｒｅｐｅａｔｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ  Ｂ  ｂｙ  ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７０：１９７１６−１９７２２；  Ｗｈａｌｅｙ，  Ｋ．  １９８５．  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ．  Ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔｓ．  Ｋ．  Ｗｈａｌｅｙ，  ｅｄｉｔｏｒ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ．  ７７−１３９）。１００ｕＬのＣ３ｂ被覆ヒツジ赤血球、５０ｕＬの精製Ｄ因子（Ｍｇ２＋  ＥＧＴＡ緩衝液中に５ｎｇ）、５０ｕＬのプロペルジン（Ｐ；Ｍｇ２＋  ＥＧＴＡ緩衝液中に４５ｎｇ）、および５０ｕＬのＢ因子（Ｍｇ２＋  ＥＧＴＡ緩衝液中に３〜５ｎｇ）を一緒に混合し、３０℃で３０分間インキュベートした。幾つかの事例では、Ｂ因子を５０ｍｌのＭｇ２＋  ＥＧＴＡ緩衝液により置き換えた。試料を４℃まで冷却し、１５０ｕＬの４０ｍＭ  ＥＤＴＡ緩衝液（４０ｍＭのＮａ２ＥＤＴＡ、８５ｍＭのＮａＣｌ、０．１％（重量／体積）のゼラチン、および２．９６ｍＭのナトリウム５’，５”−ジエチルバルビツレート、ｐＨ７．３５）で処理し、幾つかの事例では１ｕｇのマウス抗ヒトＣ３ｄ  ｍＡｂを含有するその緩衝液で処理した。次に試料を３０℃で０〜３時間インキュベートして自然にＣ３ｂＢｂＰを分離させた。幾つかの事例では、Ｈ因子依存的転換酵素分解促進を評価するために４００ｕｇのＨ因子を添加して、または添加せずにこのインキュベーションを３０分間行った。次に１５０ｕＬの４０ｍＭ  ＥＤＴＡ緩衝液中の１／２０希釈モルモット血清（コロラド血清社、デンバー、コロラド州）を全ての試料に添加し、続いて３７℃で６０分間インキュベートすることにより機能的転換酵素を定量した。その他の試料は細胞が４５０ｕｌの蒸留水のみで処理される細胞溶解対照と細胞が４５０ｕｌのＤＧＶＢ２＋緩衝液のみで処理される陰性対照を含んだ。次に全ての試料を遠心分離し、上清のＯＤ４１４を決定した。溶血活性レベルをＺ値として表現した。その表現Ｚ＝−ｌｎ（１−ｙ）から赤血球当たりの平均溶解部位数が計算され、式中、ｙは溶解した細胞の割合である。それぞれの決定値は二重の点の平均であった。全ての補体タンパク質はヒト起源であり、Ｃｏｍｐ  Ｔｅｃｈ社（タイラー、テキサス州）から購入した。
【０４２７】
免疫蛍光顕微鏡法
免疫蛍光顕微鏡法のためにＯＣＴ化合物（Ｓａｋｕｒａ  Ｆｉｎｅｔｅｋ，Ｕ．Ｓ．Ａ．社）の中で腎臓の矢状切片を瞬間凍結した。５μｍの切片をクライオスタットで切り出し、使用するまで−８０℃で保存した。スライドをアセトンで後固定し、マウスＣ３またはマウスＩｇＧに対する抗体で染色した。次にそれらのスライドをヘマトキシリン（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）で対比染色し、オリンパスＢＸ５１顕微鏡を使用して検視した。組織染色に使用するときに２μｇ／ｍＬの濃度でそれらの抗Ｃ３ｄ抗体を使用した。
【０４２８】
ＲＰＥ／脈絡膜の免疫蛍光顕微鏡法については伸展調製物をＦＩＴＣ標識抗体と共にインキュベートした。簡単に説明すると、眼を収集し、４％のパラホルムアルデヒド中に４℃で３０分間浸漬固定し、その後に前眼房、レンズ、および網膜を取り外した。眼杯をブロッキング溶液（トリス緩衝生理食塩水中の３％のウシ血清アルブミン、１０％の通常ヤギ血清、および０．４％のトリトン−Ｘ）中で１時間インキュベートし、続いてブロッキング溶液中で抗Ｃ３ｄ抗体（１ｍｇ／ｍＬ溶液の１：１００）と４℃で一晩インキュベートした。徹底的な洗浄の後に構造を緩める４か所の切断を用いて眼杯を伸展させ、カバーグラスをフルオロマウント（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ社、バーミングハム、アラバマ州）と共に適用し、スライドを共焦点顕微鏡法（Ｌｅｉｃａ  ＴＣＳ  ＳＰ２  ＡＯＢＳ、Ｌｅｉｃａ社、バノックバーン、イリノイ州）により調査した。
【０４２９】
眼底撮像
３００Ｗキセノン光源と３チップＣＣＤカメラを有する特注の光学系に基づくマイクロンＩＩＩ網膜イメージング顕微鏡（Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、プレザントン、カリフォルニア州）を使用し、線形／診断モードにおいて３０フレーム／秒で操作して眼底撮像を実施した。撮像のためにマウスに麻酔を行い、上に記載したように瞳孔を広げ、撮影用架台に固定した。一滴のメチルセルロースを介してマウスの角膜とその光学系のレンズとの間の光学的接触を確立した。ＣＮＶ病変部に焦点を当てるために明視野画像撮影を用いて眼底写真を得て、その後にモードをＦＩＴＣ蛍光画像撮影（４９０ｎｍでの励起）に切り換える。ＪＰＥＧイメージをＰｈｏｔｏｓｈｏｐにエクスポートして写真を組み立て、個々の病変部の画像を抽出した。個々の病変部の画像化を改善するため、対照画像と実験画像について同一のパラメーターを使用するコントラスト増強を適用した。
【０４３０】
本明細書に記載される実施例と実施形態は例示目的のみであり、それらを考慮して様々な改変または変更が当業者に示唆され、且つ、本願の精神と範囲、および添付の特許請求の範囲の範囲に含まれるものであることが理解される。本明細書において引用される全ての刊行物、特許、および特許出願はここに全ての目的のために全体の参照により援用される。
【表２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図６−３】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図７−３】
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【図８】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１４】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【配列表】
2018104436000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年2月16日(2018.2.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
検出可能部分、ならびに
軽鎖ＣＤＲ１が配列番号１４であり、軽鎖ＣＤＲ２が配列番号１５であり、且つ、軽鎖ＣＤＲ３が配列番号１６である軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３、または
重鎖ＣＤＲ１が配列番号１７または配列番号２７であり、重鎖ＣＤＲ２が配列番号１８であり、重鎖ＣＤＲ３が配列番号１９または２９である重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３
を備える抗Ｃ３ｄ抗体複合体。
【外国語明細書】
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