【手続補正書】
【提出日】平成27年5月21日(2015.5.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（a）SEQ ID NO: 1およびSEQ ID NO: 6（L2）、
（b）SEQ ID NO: 2およびSEQ ID NO: 7（L1）、
（c）SEQ ID NO: 3およびSEQ ID NO: 8（L3）、
（d）SEQ ID NO: 4およびSEQ ID NO: 9（L5）、または
（e）SEQ ID NO: 5およびSEQ ID NO: 10（1D2）
のいずれかに示されるアミノ酸配列における、重鎖相補性決定領域（HCDR）1、HCDR2およびHCDR3を含む重鎖可変領域、ならびに軽鎖相補性決定領域（LCDR）1、LCDR2およびLCDR3を含む軽鎖可変領域を含み、且つTEM8に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
（a）HCDR1、HCDR2およびHCDR3がそれぞれ、SEQ ID NO:1のアミノ酸31〜37、52〜67および100〜106に示されるアミノ酸配列を含み、且つLCDR1、LCDR2およびLCDR3がそれぞれ、SEQ ID NO:6のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜96に示されるアミノ酸配列を含むか；
（b）HCDR1、HCDR2およびHCDR3がそれぞれ、SEQ ID NO:2のアミノ酸31〜35、50〜65および96〜102に示されるアミノ酸配列を含み、且つLCDR1、LCDR2およびLCDR3がそれぞれ、SEQ ID NO:7のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜98に示されるアミノ酸配列を含むか；
（c）HCDR1、HCDR2およびHCDR3がそれぞれ、SEQ ID NO:3のアミノ酸31〜37、52〜69および102〜110に示されるアミノ酸配列を含み、且つLCDR1、LCDR2およびLCDR3がそれぞれ、SEQ ID NO:8のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜96に示されるアミノ酸配列を含むか；
（d）HCDR1、HCDR2およびHCDR3がそれぞれ、SEQ ID NO:4のアミノ酸31〜35、50〜66および99〜106に示されるアミノ酸配列を含み、且つLCDR1、LCDR2およびLCDR3がそれぞれ、SEQ ID NO:9のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜98に示されるアミノ酸配列を含むか；または
（e）HCDR1、HCDR2およびHCDR3がそれぞれ、SEQ ID NO:5のアミノ酸31〜37、52〜67および100〜107に示されるアミノ酸配列を含み、且つLCDR1、LCDR2およびLCDR3がそれぞれ、SEQ ID NO:10のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜98に示されるアミノ酸配列を含む、
請求項1記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３】
重鎖可変領域が、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4もしくはSEQ ID NO:5に示されるアミノ酸配列を含か；または
軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9もしくはSEQ ID NO:10に示されるアミノ酸配列を含む、
請求項1または2記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４】
重鎖可変領域および軽鎖可変領域がそれぞれ、
（a）SEQ ID NO: 1およびSEQ ID NO: 6、
（b）SEQ ID NO: 2およびSEQ ID NO: 7、
（c）SEQ ID NO: 3およびSEQ ID NO: 8、
（d）SEQ ID NO: 4およびSEQ ID NO: 9、または
（e）SEQ ID NO: 5およびSEQ ID NO: 10
のいずれかに示されるアミノ酸配列を含む、請求項1〜3のいずれか一項記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項５】
ヒトフレームワーク領域を含む、請求項1〜4のいずれか一項記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項６】
IgGである、請求項1〜5のいずれか一項記載の抗体。
【請求項７】
中和性である、請求項1〜6のいずれか一項記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項８】
請求項1〜7のいずれか一項記載の抗原結合フラグメント。
【請求項９】
Fv、Fab、F(ab')2、scFVまたはscFV2フラグメントである、請求項8記載の抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
エフェクター分子または検出可能マーカーにコンジュゲートされた、請求項1〜9のいずれか一項記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
エフェクター分子が、抗血管新生剤または化学療法剤である、請求項10記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
検出可能マーカーが、蛍光、酵素、重金属または放射性マーカーである、請求項10記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
化学療法剤が毒素である、請求項11記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
毒素が、メイタンシノイド毒素またはオーリスタチン毒素である、請求項13記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１５】
メイタンシノイド毒素がDM1であるか；または
オーリスタチン毒素がモノメチルオーリスタチンE（MMAE）もしくはモノメチルオーリスタチンF（MMAF）である、
請求項14記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１６】
単離されたモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントが、切断可能リンカーによりエフェクター分子にコンジュゲートされた、請求項10〜15のいずれか一項記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１７】
有効量の請求項1〜16のいずれか一項記載の抗体または抗原結合フラグメントおよび薬学的に許容される担体を含む、組成物。
【請求項１８】
請求項1〜16のいずれか一項記載の抗体または抗原結合フラグメントをコードする、単離された核酸分子。
【請求項１９】
請求項18記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項２０】
請求項18記載の核酸分子を含む、宿主細胞。
【請求項２１】
腫瘍を有する対象を処置するための医薬の製造における、治療有効量の請求項1〜16のいずれか一項記載の抗体または抗原結合フラグメントの使用であって、該医薬が免疫複合体の形成に十分な条件下で対象に投与され、免疫複合体の形成が対象の腫瘍を処置する、前記使用。
【請求項２２】
腫瘍を有する対象が、対象におけるTEM8を発現する内皮細胞の検出により選択された、請求項21記載の使用。
【請求項２３】
医薬が治療有効量の抗血管新生剤または化学療法剤と併用される、請求項21または22記載の使用。
【請求項２４】
抗血管新生剤がベバシズマブを含む、請求項23記載の使用。
【請求項２５】
腫瘍が、乳癌、結腸直腸癌、肺癌または皮膚癌である、請求項21〜24のいずれか一項記載の使用。
【請求項２６】
腫瘍の処置が腫瘍量の減少を含む、請求項21〜25のいずれか一項記載の使用。
【請求項２７】
単離されたモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントが化学療法剤にコンジュゲートされた、請求項21〜26のいずれか一項記載の使用。
【請求項２８】
化学療法剤が、メイタンシノイド毒素またはオーリスタチン毒素である、請求項27記載の使用。
【請求項２９】
対象由来の内皮細胞と有効量の請求項1〜16のいずれか一項記載の抗体または抗原結合フラグメントとを、免疫複合体の形成に十分な条件下でインビトロで接触させる工程；および
対象由来の内皮細胞において免疫複合体を検出する工程であって、対象由来の内皮細胞における免疫複合体の存在が、対象におけるTEM8を発現する内皮細胞を検出する、工程
を含む、対象におけるTEM8を発現する内皮細胞を検出するインビトロの方法。
【請求項３０】
対象のTEM8を発現する内皮細胞の存在の検出が対象における病理学的な血管新生を検出する、請求項29記載の方法。
【請求項３１】
内皮細胞が対象由来の生物学的サンプル中に存在する、請求項29記載の方法。
【請求項３２】
細胞に対する炭疽防御抗原の結合を低減させるための医薬の製造における、有効量の請求項1〜16のいずれか一項記載の抗体または抗原結合フラグメントの使用であって、該医薬が免疫複合体の形成に十分な条件下で細胞と接触され、免疫複合体の形成が細胞に対する炭疽防御抗原の結合を低減させる、前記使用。
【請求項３３】
有効量のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントと細胞との接触が、治療有効量のモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントの対象への投与を含む、請求項32記載の使用。
【請求項３４】
対象において病理学的な血管新生を検出するか、対象において腫瘍を処置するか、または細胞に対する炭疽防御抗原の結合を低減させるためのキットであって、請求項1〜16のいずれか一項記載の抗体または抗原結合フラグメントを含む容器；および該キットを使用するための指示を含む、キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
[本発明1001]
モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントに共有結合により連結されたエフェクター分子または検出可能マーカーを含むコンジュゲートであって、前記モノクローナル抗体が重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が重鎖相補性決定領域（H-CDR）1、H-CDR2およびH-CDR3を含み、軽鎖可変領域が軽鎖相補性決定領域（L-CDR）1、L-CDR2およびL-CDR3を含み、H-CDR1、H-CDR2およびH-CDR3がそれぞれ：
（a）SEQ ID NO:1のアミノ酸31〜37、52〜67および100〜106に示されるアミノ酸配列（L2）；
（b）SEQ ID NO:2のアミノ酸残基31〜35、50〜65および96〜102に示されるアミノ酸配列（L1）；
（c）SEQ ID NO:3のアミノ酸残基31〜37、52〜69および102〜110に示されるアミノ酸配列（L3）；
（d）SEQ ID NO:4のアミノ酸残基31〜35、50〜66および99〜106に示されるアミノ酸配列（L5）；または
（e）SEQ ID NO:5のアミノ酸残基31〜37、52〜67および100〜107に示されるアミノ酸配列（1D2）
を含み、かつ前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが腫瘍内皮細胞マーカー8に特異的に結合して中和する、コンジュゲート。
[本発明1002]
重鎖可変領域が、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4またはSEQ ID NO:5に示されるアミノ酸配列を含む、本発明1001のコンジュゲート。
[本発明1003]
（a）重鎖可変領域がSEQ ID NO:1のアミノ酸31〜37、52〜67および100〜106に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:6のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜96に示されるアミノ酸配列を含むか；
（b）重鎖可変領域がSEQ ID NO:2のアミノ酸31〜35、50〜65および96〜102に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:7のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜98に示されるアミノ酸配列を含むか；
（c）重鎖可変領域がSEQ ID NO:3のアミノ酸31〜37、52〜69および102〜110に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:8のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜96に示されるアミノ酸配列を含むか；
（d）重鎖可変領域がSEQ ID NO:4のアミノ酸31〜35、50〜66および99〜106に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:9のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜98に示されるアミノ酸配列を含むか；または
（e）重鎖可変領域がSEQ ID NO:5のアミノ酸31〜37、52〜67および100〜107に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:10のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜98に示されるアミノ酸配列を含む、
本発明1001のコンジュゲート。
[本発明1004]
（a）重鎖可変領域がSEQ ID NO:1に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:6に示されるアミノ酸配列を含むか；
（b）重鎖可変領域がSEQ ID NO:2に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:7に示されるアミノ酸配列を含むか；
（c）重鎖可変領域がSEQ ID NO:3に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:8に示されるアミノ酸配列を含むか；
（d）重鎖可変領域がSEQ ID NO:4に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:9に示されるアミノ酸配列を含むか；または
（e）重鎖可変領域がSEQ ID NO:5に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:10に示されるアミノ酸配列を含む、
本発明1001のコンジュゲート。
[本発明1005]
モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントがヒトフレームワーク領域を含む、本発明1001〜1004のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1006]
抗体がIgGである、本発明1001〜1004のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1007]
モノクローナル抗体の抗原結合フラグメントを含む、本発明1001〜1005のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1008]
抗原結合フラグメントがFv、Fab、F(ab')2、scFVまたはscFV2フラグメントである、本発明1007のコンジュゲート。
[本発明1009]
エフェクター分子が化学療法剤である、本発明1001〜1008のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1010]
化学療法剤が5-フルオロウラシルまたはイリノテカンである、本発明1009のコンジュゲート。
[本発明1011]
エフェクター分子が抗血管新生剤である、本発明1001〜1008のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1012]
エフェクター分子が毒素である、本発明1001〜1008のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1013]
毒素がメイタンシノイド毒素である、本発明1012のコンジュゲート。
[本発明1014]
メイタンシノイド毒素がDM1である、本発明1013のコンジュゲート。
[本発明1015]
毒素がオーリスタチン毒素である、本発明1012のコンジュゲート。
[本発明1016]
オーリスタチン毒素がモノメチルオーリスタチンE（MMAE）またはモノメチルオーリスタチンF（MMAF）である、本発明1015のコンジュゲート。
[本発明1017]
検出可能マーカーを含む、本発明1001〜1008のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1018]
検出可能マーカーが蛍光、酵素、重金属または放射性マーカーである、本発明1017のコンジュゲート。
[本発明1019]
単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、リンカーによりエフェクター分子または検出可能マーカーにコンジュゲートされている、本発明1001〜1018のいずれかのコンジュゲート。
[本発明1020]
リンカーが切断可能リンカーである、本発明1019のコンジュゲート。
[本発明1021]
リンカーがカテプシン切断可能リンカーである、本発明1020のコンジュゲート。
[本発明1022]
有効量の本発明1001〜1021のいずれかのコンジュゲートおよび薬学的に許容される担体を含む、組成物。
[本発明1023]
腫瘍を有する対象を選択する工程；および
治療有効量の本発明1022の組成物を、免疫複合体の形成に十分な条件下で対象に投与する工程であって、免疫複合体の形成が対象の腫瘍を処置する、工程
を含む、腫瘍を有する対象を処置する方法。
[本発明1024]
治療有効量の追加の剤を対象に投与する工程をさらに含む、本発明1023の方法。
[本発明1025]
追加の剤が抗血管新生剤である、本発明1024の方法。
[本発明1026]
追加の剤が化学療法剤である、本発明1024の方法。
[本発明1027]
対象由来の内皮細胞と有効量の本発明1022の組成物とを、免疫複合体の形成に十分な条件下で接触させる工程；および
対象由来の内皮細胞において免疫複合体の存在を検出する工程であって、対象由来の内皮細胞における免疫複合体の存在が、対象におけるTEM8を発現する内皮細胞の存在を示す、工程
を含む、対象におけるTEM8を発現する内皮細胞の存在を検出する方法。
[本発明1028]
接触させる工程がインビボである、本発明1027の方法。
[本発明1029]
接触させる工程がインビトロである、本発明1027の方法。
[本発明1030]
対象におけるTEM8を発現する内皮細胞の存在の検出が、対象における病理学的な血管新生を検出する、本発明1027の方法。
[本発明1031]
内皮細胞が、対象由来の生物学的サンプル中に存在する、本発明1027の方法。
[本発明1032]
TEM8を発現する内皮細胞が癌腫の中に存在する、本発明1027の方法。
[本発明1033]
腫瘍を有する対象を選択する工程；
有効量の化学療法剤、抗血管新生剤またはそれらの組み合わせを対象に投与する工程；および
腫瘍内皮細胞マーカー8に特異的に結合して中和する治療有効量のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを、免疫複合体の形成に十分な条件下で対象に投与する工程であって、免疫複合体の形成が対象の腫瘍を処置する、工程
を含む、腫瘍を有する対象を処置する方法であって、
前記モノクローナル抗体が重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が重鎖相補性決定領域（H-CDR）1、H-CDR2およびH-CDR3を含み、軽鎖可変領域が軽鎖相補性決定領域（L-CDR）1、L-CDR2およびL-CDR3を含み、かつH-CDR1、H-CDR2およびH-CDR3がそれぞれ：
（a）SEQ ID NO:1のアミノ酸31〜37、52〜67および100〜106に示されるアミノ酸配列（L2）；
（b）SEQ ID NO:2のアミノ酸残基31〜35、50〜65および96〜102に示されるアミノ酸配列（L1）；
（c）SEQ ID NO:3のアミノ酸残基31〜37、52〜69および102〜110に示されるアミノ酸配列（L3）；
（d）SEQ ID NO:4のアミノ酸残基31〜35、50〜66および99〜106に示されるアミノ酸配列（L5）；または
（e）SEQ ID NO:5のアミノ酸残基31〜37、52〜67および100〜107に示されるアミノ酸配列（1D2）
を含む、方法。
[本発明1034]
化学療法剤が5-フルオロウラシルもしくはイリノテカンまたは両方を含む、本発明1026または本発明1033の方法。
[本発明1035]
腫瘍が肺がん、結腸直腸がん、乳がんまたは皮膚がんである、本発明1023または本発明1033の方法。
[本発明1036]
腫瘍が癌腫である、本発明1023または本発明1033の方法。
[本発明1037]
腫瘍の処置が、腫瘍量の減少を含む、本発明1023または本発明1033の方法。
[本発明1038]
腫瘍内皮マーカー8（TEM8）に特異的に結合して中和する有効量のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞とを、免疫複合体の形成に十分な条件下で接触させる工程であって、免疫複合体の形成が細胞に対する炭疽防御抗原の結合を低減させる工程
を含む、細胞に対する炭疽防御抗原の結合を低減させる方法であって、
前記モノクローナル抗体が重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が重鎖相補性決定領域（H-CDR）1、H-CDR2およびH-CDR3を含み、軽鎖可変領域が軽鎖相補性決定領域（L-CDR）1、L-CDR2およびL-CDR2を含み、かつH-CDR1、H-CDR2およびH-CDR3がそれぞれ：
（a）SEQ ID NO:1のアミノ酸31〜37、52〜67および100〜106に示されるアミノ酸配列（L2）；
（b）SEQ ID NO:2のアミノ酸残基31〜35、50〜65および96〜102に示されるアミノ酸配列（L1）；
（c）SEQ ID NO:3のアミノ酸残基31〜37、52〜69および102〜110に示されるアミノ酸配列（L3）；
（d）SEQ ID NO:4のアミノ酸残基31〜35、50〜66および99〜106に示されるアミノ酸配列（L5）；または
（e）SEQ ID NO:5のアミノ酸残基31〜37、52〜67および100〜107に示されるアミノ酸配列（1D2）
を含む、方法。
[本発明1039]
重鎖可変領域がSEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4またはSEQ ID NO:5に示されるアミノ酸配列を含む、本発明1033または本発明1038の方法。
[本発明1040]
（a）重鎖可変領域がSEQ ID NO:1のアミノ酸31〜37、52〜67および100〜106に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:6のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜96に示されるアミノ酸配列を含むか；
（b）重鎖可変領域がSEQ ID NO:2のアミノ酸31〜35、50〜65および96〜102に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:7のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜98に示されるアミノ酸配列を含むか；
（c）重鎖可変領域がSEQ ID NO:3のアミノ酸31〜37、52〜69および102〜110に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:8のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜96に示されるアミノ酸配列を含むか；
（d）重鎖可変領域がSEQ ID NO:4のアミノ酸31〜35、50〜66および99〜106に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:9のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜98に示されるアミノ酸配列を含むか；または
（e）重鎖可変領域がSEQ ID NO:5のアミノ酸31〜37、52〜67および100〜107に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:10のアミノ酸23〜33、49〜55および88〜98に示されるアミノ酸配列を含む、
本発明1033または本発明1038の方法。
[本発明1041]
（a）重鎖可変領域がSEQ ID NO:1に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:6に示されるアミノ酸配列を含むか；
（b）重鎖可変領域がSEQ ID NO:2に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:7に示されるアミノ酸配列を含むか；
（c）重鎖可変領域がSEQ ID NO:3に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:8に示されるアミノ酸配列を含むか；
（d）重鎖可変領域がSEQ ID NO:4に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:9に示されるアミノ酸配列を含むか；または
（e）重鎖可変領域がSEQ ID NO:5に示されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域がSEQ ID NO:10に示されるアミノ酸配列を含む、
本発明1033または本発明1038の方法。
[本発明1042]
モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントがヒトフレームワーク領域を含む、本発明1033〜1051のいずれかの方法。
[本発明1043]
モノクローナル抗体がIgGである、本発明1033〜1051のいずれかの方法。
[本発明1044]
抗原結合フラグメントがFv、Fab、F(ab')2、scFVまたはscFV2フラグメントである、本発明1033〜1052のいずれかの方法。
[本発明1045]
有効量のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞とを接触させる工程が、対象に対する治療有効量のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントの投与を含む、本発明1038の方法。
[本発明1046]
対象において病理学的な血管新生を検出するか、対象において腫瘍を処置するか、または細胞に対する炭疽防御抗原の結合を低減させるキットであって、本発明1001〜1021のいずれかのコンジュゲートまたは本発明1022の組成物を含む容器；および該キットを使用するための指示を含む、キット。
前述のおよび本願開示の特徴および利点は、添付図面を参照しつつ進められる以下の詳細な説明からより明確になるであろう。