【手続補正書】
【提出日】平成27年9月4日(2015.9.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
IL-7に対する受容体のα鎖（CD127と称する。）に結合し、ヒトCD127陽性細胞、特にCD127を発現するヒトT細胞（CD127+細胞）に対して細胞傷害活性を示す、抗体又はその機能的断片。
【請求項２】
インターロイキン7 (IL-7)に対してアンタゴニスト特性を更に有し、これによって、IL-7がCD127陽性細胞上のCD127に接近することに拮抗する、請求項１に記載の抗体又はその機能的断片。
【請求項３】
ヒト細胞、特にヒトT細胞によって発現されるCD127に対して発生する、請求項１又は２に記載の抗体又はその機能的断片。
【請求項４】
抗体依存性細胞媒介細胞傷害性(ADCC)、及び、場合により、補体依存性細胞傷害(CDC)を示す、請求項１〜３のうちのいずれかに記載の抗体又はその機能的断片。
【請求項５】
請求項１に記載の抗体又はその機能的断片であって、該抗体又はその機能的断片は、
a) No.I-4531でCNCMに寄託されたハイブリドーマMD707-1により産生される抗体若しくはその機能的断片、又は、
b)該a)の抗体をコードするNo.I-4531でCNCMに寄託されたハイブリドーマMD707-1において発現させたRNAに対応するcDNAと同一の核酸分子により組み換えられた組換え真核細胞によって発現する、抗体若しくはその機能的断片、又は、
c)その可変重鎖(VH)及び／又はその可変軽鎖(VL)において改変されたCDR領域を有する、特に、場合により、VH若しくはVLのうちのいずれか若しくは両方に少なくとも1つの同一のCDR3、CDR2及び／又はCDR1領域を保持する、及び／又は改変されたフレームワーク(FR)及び／又は定常(CH)領域を有する、該a)又はb)に対して改変された抗体であって、該改変された抗体が、そのアミノ酸配列の全長において、該a)又はb)の抗体と、70%を超える同一性、特に、75%を超える、80%を超える、85%を超える、90%を超える、95%を超える若しくは最大99%の同一性を有する、抗体若しくはその機能的断片の群から選択される、
前記抗体又はその機能的断片。
【請求項６】
請求項２に記載の抗体又はその機能的断片であって、該抗体又はその機能的断片は、
a) No.I-4532でCNCMに寄託されたハイブリドーマMD707-3、若しくはNo.I-4533でCNCMに寄託されたハイブリドーマMD707-13により産生される抗体若しくはその機能的断片、又は、
b)該a)の抗体をコードする、No.I-4532でCNCMに寄託されたハイブリドーマMD707-3若しくはNo.I-4533でCNCMに寄託されたハイブリドーマMD707-13において発現させたRNAに対応するcDNAと同一の核酸分子により組み換えられた組換え真核細胞によって発現する、抗体若しくはその機能的断片、並びに、
c)その可変重鎖(VH)及び／又はその可変軽鎖(VL)において改変されたCDR領域を有する、特に、場合により、VH若しくはVLのうちのいずれか若しくは両方に少なくとも1つの同一のCDR3、CDR2及び／又はCDR1領域を保持する、及び／又は改変されたフレームワーク(FR)及び／又は定常(CH)領域を有する、該a)又はb)に対して改変された抗体であって、該改変された抗体が、そのアミノ酸配列の全長において、該a)又はb)の抗体と、70%を超える同一性、特に、75%を超える、80%を超える、85%を超える、90%を超える、95%を超える若しくは最大99%の同一性を有する、抗体若しくはその機能的断片の群から選択される、
前記抗体又はその機能的断片。
【請求項７】
請求項１〜７のうちのいずれかに記載の抗体又はその機能的断片であって、その抗原結合部位が、次に示すポリペプチドのうちの少なくとも1つを含む、前記抗体又はその機能的断片
1) MD707-1
a)可変重鎖において、
(i)配列番号6のアミノ酸配列を有するVHCDR 1、
(ii)配列番号8のアミノ酸配列を有するVHCDR 2、
(iii)配列番号10のアミノ酸配列を有するVHCDR 3、若しくは、
(iv)配列番号2の位置19から位置141のアミノ酸配列を有するVH、及び／又は、
b)可変軽鎖において、
(i)配列番号12のアミノ酸配列を有するVLCDR 1、
(ii)配列番号14のアミノ酸配列を有するVLCDR 2、
(iii)配列番号16のアミノ酸配列を有するVLCDR 3、若しくは、
(iv)配列番号4の位置21から位置133のアミノ酸配列を有するVL、
2) MD707-3
a)可変重鎖において、
(i)配列番号22のアミノ酸配列を有するVHCDR 1、
(ii)配列番号24のアミノ酸配列を有するVHCDR 2、
(iii)配列番号26のアミノ酸配列を有するVHCDR 3、若しくは、
(iv)配列番号18の位置19から位置141のアミノ酸配列を有するVH、及び／又は、
b)可変軽鎖において、
(i)配列番号28のアミノ酸配列を有するVLCDR 1、
(ii)配列番号30のアミノ酸配列を有するVLCDR 2、
(iii)配列番号32のアミノ酸配列を有するVLCDR 3、若しくは、
(iv)配列番号20の位置21から位置133のアミノ酸配列を有するVL、
3) MD707-13
a)可変重鎖において、
(i)配列番号38のアミノ酸配列を有するVHCDR 1、
(ii)配列番号40のアミノ酸配列を有するVHCDR 2、
(iii)配列番号42のアミノ酸配列を有するVHCDR 3、若しくは、
(iv)配列番号34の位置22から位置135のアミノ酸配列を有するVH、及び／又は、
b)可変軽鎖において、
(i)配列番号44のアミノ酸配列を有するVLCDR 1、
(ii)配列番号46のアミノ酸配列を有するVLCDR 2、
(iii)配列番号48のアミノ酸配列を有するVLCDR 3、若しくは、
(iv)配列番号36の位置22から位置129のアミノ酸配列を有するVL。
【請求項８】
ヒト化モノクローナル抗体若しくはキメラモノクローナル抗体及び／又は脱免疫抗体である、請求項１〜８のうちのいずれかに記載の抗体。
【請求項９】
標準的な定義及び数体系に従って、ヒト抗体において対応する位置を有するヒトアミノ酸残基が、請求項１〜８のうちのいずれかに記載の抗体の定常領域中に存在するアミノ酸残基で置換されることにより誘導されるヒト化抗体であり、その置換レベルが、該定常領域において1%〜20%、特に1％〜18％の残基である、抗体又はその機能的断片。
【請求項１０】
請求項１〜９のうちのいずれかに記載の抗体を含むキメラ分子であって、該モノクローナル抗体が機能的に異なる分子に結合し、該キメラ分子が、融合キメラタンパク質、又は、PEGポリマー若しくは標識化抗体などの、化学基若しくは分子との共有結合から生じた結合体のいずれかである、前記キメラ分子。
【請求項１１】
請求項１〜１０のうちのいずれかに記載の抗体を含む組成物若しくは化合物の集合体、又は請求項１１に記載のキメラ分子であって、該組成物若しくは化合物の集合体又はキメラ分子が、
a) CD127+細胞に対して、特にヒトCD127+ T細胞に対して細胞傷害活性を有し、ヒトIL-7に対してアンタゴニスト特性も有する抗体、又は、
b) CD127+細胞に対して細胞傷害活性を有する抗体若しくはその機能的断片の集団、及びヒトIL-7に対してアンタゴニスト特性を有する抗体若しくはその機能的断片の集団であって、これらの抗体の集団が、抗体の混合物中で組み合わされるか、又は分離され、併用投与若しくは連続投与のために製剤される集団を含む、
前記組成物若しくは化合物の集合体又はキメラ分子。
【請求項１２】
請求項１〜９のうちのいずれかに記載の抗体をコードする核酸分子。
【請求項１３】
次に示す群から選択される、請求項１２に記載の核酸:
1) MD707-1
i.配列番号1の配列を有するVH領域をコードするポリヌクレオチド、又は位置55から位置423のその断片、
ii.配列番号3の配列を有するVL領域をコードするポリヌクレオチド、又は位置61から位置399のその断片、
iii.配列番号5の配列を有するVHCDR1領域をコードするポリヌクレオチド、
iv.配列番号7の配列を有するVHCDR2領域をコードするポリヌクレオチド、
v.配列番号9の配列を有するVHCDR3領域をコードするポリヌクレオチド、
vi.配列番号11の配列を有するVLCDR1領域をコードするポリヌクレオチド、
vii.配列番号13の配列を有するVLCDR2領域をコードするポリヌクレオチド、
viii.配列番号15の配列を有するVLCDR3領域をコードするポリヌクレオチド、
2) MD707-3
i.配列番号17の配列を有するVH領域をコードするポリヌクレオチド、又は位置55から位置423のその断片、
ii.配列番号19の配列を有するVL領域をコードするポリヌクレオチド、又は位置61から位置399のその断片、
iii.配列番号21の配列を有するVHCDR1領域をコードするポリヌクレオチド、
iv.配列番号23の配列を有するVHCDR2領域をコードするポリヌクレオチド、
v.配列番号25の配列を有するVHCDR3領域をコードするポリヌクレオチド、
vi.配列番号27の配列を有するVLCDR1領域をコードするポリヌクレオチド、
vii.配列番号29の配列を有するVLCDR2領域をコードするポリヌクレオチド、
viii.配列番号31の配列を有するVLCDR3領域をコードするポリヌクレオチド、
3) MD707-13
i.配列番号33の配列を有するVH領域をコードするポリヌクレオチド、又は位置64から位置405のその断片、
ii.配列番号35の配列を有するVL領域をコードするポリヌクレオチド、又は位置67から位置387のその断片、
iii.配列番号37の配列を有するVHCDR1領域をコードするポリヌクレオチド、
iv.配列番号39の配列を有するVHCDR2領域をコードするポリヌクレオチド、
v.配列番号41の配列を有するVHCDR3領域をコードするポリヌクレオチド、
vi.配列番号43の配列を有するVLCDR1領域をコードするポリヌクレオチド、
vii.配列番号45の配列を有するVLCDR2領域をコードするポリヌクレオチド、
viii.配列番号47の配列を有するVLCDR3領域をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１４】
配列番号47の配列を有するVLCDR3領域をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１５】
ポリヌクレオチドであって、該ポリヌクレオチドは、配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45及び／又は配列番号47の配列に対して修飾されたヌクレオチドを有し、
a)それぞれ、配列番号2のアミノ酸配列若しくは位置19から位置141のその断片、配列番号4のアミノ酸配列若しくは位置21から位置133のその断片、配列番号6、配列番号8、配列番号10、配列番号12、配列番号14、配列番号16、配列番号18のアミノ酸配列若しくは位置19から位置141のその断片、配列番号20のアミノ酸配列若しくは位置21から位置133のその断片、配列番号22、配列番号24、配列番号26、配列番号28、配列番号30、配列番号32、配列番号34のアミノ酸配列若しくは位置22から位置135のその断片、配列番号36のアミノ酸配列若しくは位置22から位置129のその断片、配列番号38、配列番号40、配列番号42、配列番号44、配列番号46及び／又は配列番号48のアミノ酸配列を有するポリペプチドのいずれかをコードし、及び／又は、
b)配列番号1の配列若しくは位置55から位置423のその断片、配列番号3の配列若しくは位置61から位置399のその断片、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17の配列若しくは位置55から位置423のその断片、配列番号19の配列若しくは位置61から位置399のその断片、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33の配列若しくは位置64から位置405のその断片、配列番号35の配列若しくは位置67から位置387のその断片、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45及び／又は配列番号47の配列を有するポリヌクレオチドのうちの1つと、これらの全長に対して、少なくとも85%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%、及び最も好ましくは少なくとも98%若しくは少なくとも99%の同一性を有するか、又は、
c)配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45及び／又は配列番号47の配列を有するポリヌクレオチドの断片であり、それぞれ、配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号8、配列番号10、配列番号12、配列番号14、配列番号16、配列番号18、配列番号20、配列番号22、配列番号24、配列番号26、配列番号28、配列番号30、配列番号32、配列番号34、配列番号36、配列番号38、配列番号40、配列番号42、配列番号44、配列番号46及び／又は配列番号48のアミノ酸配列を有するポリペプチドの機能的断片をコードする、
前記ポリヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項１２〜１４のうちのいずれかに記載のポリヌクレオチドのクローニング及び／又は発現のためのベクター、特に、哺乳動物細胞におけるクローニング及び／又は発現に適したプラスミド。
【請求項１７】
請求項１２〜１４のうちのいずれかに記載のポリヌクレオチドにより組み換えられた細胞又は細胞系、特に、哺乳動物細胞若しくは細胞系。
【請求項１８】
請求項１〜１１のうちのいずれかに記載の抗体若しくはその機能的断片又はキメラ分子とともに医薬用ビヒクルを含み、必要に応じて、別の有効成分を更に含む、医薬組成物。
【請求項１９】
ヒト患者に投与する場合、CD127+細胞の生存若しくは増殖、特にCD8+及びCD4+メモリーT細胞を制御するのに適した製剤中に、有効成分として、請求項１〜１１のうちのいずれかに記載の抗体若しくはその機能的断片又はキメラ分子、又は請求項１８に記載の医薬組成物を含む、組成物。
【請求項２０】
特にアレルギー又は自己免疫に関与する細胞上で免疫調節治療効果を有する、付加的な化合物を更に含む、請求項１８又は１９に記載の組成物。
【請求項２１】
併用して有効成分としてか又はその必要のある患者の追加治療法に使用される、請求項１〜１１のうちのいずれかに記載の抗体若しくはその機能的断片又はキメラ分子。
【請求項２２】
臓器若しくは組織移植拒絶の予防、又は自己免疫疾患若しくはアレルギー性疾患の治療、又はCD127+細胞に関連する乳癌などの癌の治療、又はセザールリンパ腫などのリンパ腫の治療、又はIL7-R/TSLPシグナル伝達経路の獲得型突然変異による急性リンパ芽球性白血病の治療のためにヒト患者において使用される、請求項１〜１１のうちのいずれかに記載の抗体若しくはその機能的断片又はキメラ分子、請求項１９に記載の医薬組成物若しくは請求項１８に記載の組成物。
【請求項２３】
請求項１〜１０のうちのいずれかに記載の抗体又はその機能的断片を製造する方法であって、該方法は、
a)動物、特にヒトIL-7受容体のヒトα鎖を有する哺乳動物を免疫した後にハイブリドーマを得ること、及び、必要に応じて、同じ免疫原により該動物を増強させ、免疫化に応答する動物から脾臓又はリンパ節細胞を回収し、該細胞を髄腫細胞と融合させモノクローナル抗体を単離することと、
b)抗体の回収が可能な条件下で、EB66鳥類細胞などの低いフコシル化能を提示するか又はフコシル化能を提示しない細胞の組換え形態において、該抗体をコードする遺伝子を発現させることと、
c)該ヒトIL-7受容体のα鎖に対して所望の結合親和性を有する抗体を回収することと、を含む、
前記方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１５】
抗ヒトCD127 Mabのヌクレオチド及びアミノ酸配列
RACE PCR法を用いて、MD707クローンのVH及びVL領域の配列決定をした。簡潔には、全RNAを抽出し、逆転写し、得られたcDNAを、dATP及びターミナルトランスフェラーゼ酵素を用いて、分子の3'末端でポリアデニル化した。第１の35サイクルのPCR反応を、オリゴdTアンカープライマー及びHerculase酵素（Stratagene社製）を用いて行った。第２の35サイクルのPCRを、入れ子PCRアンカープライマーを用いて行った。次いで、得られたPCR産物を大腸菌でTAクローニングし、アンピシリンにおいて選択した後、得られたコロニーを、制限酵素プロファイリングによってスクリーニングし、挿入されたcDNAの配列決定をした。ヌクレオチド配列及び推定アミノ酸配列を図6及び配列表に示す。