【手続補正書】
【提出日】平成27年7月14日(2015.7.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
直接的またはリンカーを介して間接的に第一多量体化ドメインに結合したＴＳＧ−６結合モジュール(ＬＭ)を含む第一ポリペプチド；および
直接的またはリンカーを介して間接的に多量体化ドメインに結合したＴＳＧ−６−ＬＭを含む第二ポリペプチドを含み、
第一および第二多量体化ドメインは相互作用して２個以上のＴＳＧ−６結合モジュールを含む多量体を形成し；
第一および第二ポリペプチドはＴＳＧ−６の完全長配列を含まず；そして
ＴＳＧ−６多量体はヒアルロナン(ＨＡ)に少なくとも１０７Ｍ−１の結合定数の結合親和性を有する、
ＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項２】
結合モジュールが第一ポリペプチドおよび第二ポリペプチドのＴＳＧ−６部分のみである、請求項１に記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項３】
第一および第二結合モジュールが同一または異なる、請求項１または２に記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項４】
ＴＳＧ−６−ＬＭが配列番号２０７、３６０、４１７または４１８に示すアミノ酸の配列または配列番号２０７、３６０、４１７または４１８に示すアミノ酸の配列に対して少なくとも８５％アミノ酸配列同一性を含み、ＨＡと特異的に結合するアミノ酸の配列を含む、請求項１〜３のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項５】
ＴＳＧ−６−ＬＭがヘパリンへの結合を減少または除去するために修飾される、請求項１〜４のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項６】
ＴＳＧ−６−ＬＭが配列番号３６０に示すアミノ酸残基２０、３４、４１、５４、５６、７２または８４に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含み、ここで、対応するアミノ酸残基は配列番号３６０に示すＴＳＧ−６−ＬＭに対するアラインメントにより同定される、請求項５に記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項７】
アミノ酸置換がＡｓｐ(Ｄ)、Ｇｌｕ(Ｅ)、Ｓｅｒ(Ｓ)、Ｔｈｒ(Ｔ)、Ａｓｎ(Ｎ)、Ｇｌｎ(Ｑ)、Ａｌａ(Ａ)、Ｖａｌ(Ｖ)、Ｉｌｅ(Ｉ)、Ｌｅｕ(Ｌ)、Ｍｅｔ(Ｍ)、Ｐｈｅ(Ｆ)、Ｔｙｒ(Ｙ)およびＴｒｐ(Ｗ)から選択される非塩基性アミノ酸残基へのものである、請求項６に記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項８】
ＴＳＧ−６−ＬＭが配列番号３６０に示すＴＳＧ−６−ＬＭのアミノ酸置換Ｋ２０Ａ、Ｋ３４ＡまたはＫ４１Ａに対応するアミノ酸置換または他のＴＳＧ−６−ＬＭにおける対応する残基での置換を含む、請求項５〜７のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項９】
ＴＳＧ−６−ＬＭが配列番号３６１または４１６に示すアミノ酸の配列または配列番号３６１または４１６に示すアミノ酸の配列と少なくとも８５％アミノ酸配列同一性を含み、ＨＡと特異的に結合するアミノ酸配列を含む、請求項５〜８のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項１０】
多量体化ドメインが免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)、ロイシンジッパー、相補的疎水性領域、相補的親水性領域、互換性タンパク質−タンパク質相互作用ドメイン、２分子間に分子間ジスルフィド結合を形成する遊離チオール類ならびに安定な多量体を形成する同一または類似サイズの腔内隆起および代償性腔から選択される、請求項１〜９のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項１１】
多量体化ドメインが多量体化をもたらす免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)またはその変異体である、請求項１〜１０のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項１２】
第一および第二ポリペプチドがＴＳＧ−６−ＬＭおよび免疫グロブリンＦｃドメインを含む、請求項１〜１１のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項１３】
配列番号２１２または２１５のアミノ酸２４〜３４９に示すアミノ酸の配列または配列番号２１２または２１５のアミノ酸２４〜３４９に対して少なくとも８５％アミノ酸配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む、請求項１〜１２のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項１４】
ＴＳＧ−６−ＬＭ多量体が配列番号２１１、２１４または２１７に示すヌクレオチドの配列または配列番号２１１、２１４または２１７に示すヌクレオチドに対して少なくとも８５％配列同一性を示すヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸の配列を含む、請求項１〜１３のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体をコードする核酸分子であって、
該核酸分子は直接的またはリンカーを介して間接的に多量体化ドメインに結合したＴＳＧ−６−ＬＭを含む融合ポリペプチドをコードし、
多量体化ドメインがそれ自体と相互作用して安定なタンパク質−タンパク質相互作用を形成するポリペプチドであり、それによりコードされるタンパク質が少なくとも２個のＴＳＧ−６結合モジュールを含む多量体を形成するものである、
核酸分子。
【請求項１６】
配列番号２１１、２１４または２１７に示すヌクレオチドの配列または配列番号２１１、２１４または２１７に示すヌクレオチドに対して少なくとも８５％配列同一性を示すヌクレオチドの配列を含む、請求項１５に記載の核酸分子。
【請求項１７】
請求項１５または１６の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１８】
請求項１５または１６の核酸分子を含む、単離細胞または細胞培養。
【請求項１９】
請求項１５または１６の核酸分子を細胞に導入し、
細胞により融合ポリペプチドを発現させる条件下で細胞を培養し；そして
所望によりＴＳＧ−６−ＬＭ多量体を回収する
ことを含む、ＴＳＧ−６−ＬＭ多量体の製造方法。
【請求項２０】
請求項１〜１７のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体を含む第一組成物；および
抗ヒアルロナン剤を含む第二組成物
を含む、キットまたは組み合わせ。
【請求項２１】
さらにＨＡＢＰまたはＴＳＧ−６−ＬＭ多量体の検出のための試薬を含む、請求項２０に記載のキットまたは組み合わせ。
【請求項２２】
抗ヒアルロナン剤がヒアルロナン分解酵素またはヒアルロナン合成を阻害する薬剤である、請求項２０または２１に記載のキットまたは組み合わせ。
【請求項２３】
抗ヒアルロナン剤がヒアルロニダーゼであるヒアルロナン分解酵素である、請求項２２に記載のキットまたは組み合わせ。
【請求項２４】
ヒアルロナン分解酵素がＰＨ２０ヒアルロニダーゼまたはＣ末端グリコシルホスファチジルイノシトール(ＧＰＩ)付着部位もしくはＧＰＩ付着部位の一部を欠くその切断型である、請求項２３に記載のキットまたは組み合わせ。
【請求項２５】
ＰＨ２０またはその切断型が配列番号４〜９、４７、４８、１５０〜１７０および１８３〜１８９のいずれかに示すアミノ酸の配列または配列番号４〜９、４７、４８、１５０〜１７０および１８３〜１８９のいずれかと少なくとも８５％配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む、請求項２４に記載のキットまたは組み合わせ。
【請求項２６】
抗ヒアルロナン剤がポリマーへのコンジュゲーションにより修飾されているヒアルロナン分解酵素である、請求項２０〜２５のいずれかに記載のキットまたは組み合わせ。
【請求項２７】
ポリマーがＰＥＧであり、ヒアルロナン分解酵素はペグ化されている、請求項２６に記載のキットまたは組み合わせ。
【請求項２８】
腫瘍または癌を有する対象から予め得た組織または体液サンプルを請求項１〜１４のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭ多量体と接触させ；そして
ＴＳＧ−６−ＬＭ多量体のサンプルへの結合を検出し、それによりサンプル中のヒアルロナンの量を決定し、サンプル中のヒアルロナンの量が予定した閾値以上であるとき、対象を抗ヒアルロナン剤での処置のために選択する
ことを含む、抗ヒアルロナン剤での腫瘍の処置のために対象を選択する方法。
【請求項２９】
予定した閾値が高ＨＡである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
予定した閾値が少なくともまたは最低０.０２５μg  ＨＡ／mlのサンプル、０.０３０μg／ml、０.０３５μg／ml、０.０４０μg／ml、０.０４５μg／ml、０.０５０μg／ml、０.０５５μg／ml、０.０６０μg／ml、０.０６５μg／ml、０.０７０μg／ml、０.０８μg／ml、０.０９μg／ml、０.１μg／ml、０.２μg／ml、０.３μg／ml以上であるか；または
サンプルが腫瘍組織サンプルであり、予定された閾値が少なくとも＋２(ＨＡ＋２)または少なくとも＋３(ＨＡ＋３)のＨＡスコアであるか；または
サンプルが腫瘍組織サンプルであり、予定した閾値が、少なくとも腫瘍(細胞および間質)対腫瘍組織の全染色のパーセントで少なくとも１０％、１０％〜２５％または２５％を超える、
請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
予定した閾値が少なくとも＋３(ＨＡ＋３)(高レベル)のＨＡスコアである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
抗ヒアルロナン剤で処置するまたは処置されている対象からの組織または体液サンプルとヒアルロナン結合タンパク質を接触させ(ＨＡＢＰ)分子(ここで、ＨＡＢＰは動物軟骨から調製または単離したものではない)；
ヒアルロナン結合タンパク質のサンプルへの結合を検出し、それによりサンプル中のヒアルロナンの量を決定することを含み、抗ヒアルロナン剤での処置前または直前の抗ヒアルロナン剤の投与前と比較したヒアルロナンの減少は、処置が有効であることを示す、
対象の抗ヒアルロナン剤での処置効果を予測する方法。
【請求項３３】
抗ヒアルロナン剤がヒアルロナン分解酵素またはヒアルロナン合成を阻害する薬物である、請求項２８〜３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
抗ヒアルロナン剤がヒアルロニダーゼであるヒアルロナン分解酵素である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
抗ヒアルロナン剤が可溶性ＰＨ２０ヒアルロニダーゼまたはＧＰＩ付着部位の全てまたは一部を欠くヒトＰＨ２０ヒアルロニダーゼの切断型である、請求項２８〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
抗ヒアルロナン剤がＰＨ２０ヒアルロニダーゼまたはＧＰＩ付着部位の全てまたは一部を欠くその切断型である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＰＨ２０またはその切断型が配列番号４〜９、４７、４８、１５０〜１７０および１８３〜１８９のいずれかに示すアミノ酸の配列または配列番号４〜９、４７、４８、１５０〜１７０および１８３〜１８９のいずれかと少なくとも８５％配列同一性を示すアミノ酸の配列である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
抗ヒアルロナン剤がポリマーへの結合により修飾されているヒアルロナン分解酵素である、請求項２８〜３７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
ポリマーがＰＥＧであり、ヒアルロナン分解酵素がペグ化されている、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
サンプルを得た対象が腫瘍または癌を有する、請求項２８〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
対象から予め得た組織または体液サンプルを請求項１〜１４のいずれかに記載のＴＳＧ−６−ＬＭと接触させ；そして
ＴＳＧ−６−ＬＭの結合を検出し、それによりサンプル中のヒアルロナンの量を決定し、ヒアルロナンの量が予め決定したレベルを超えるかまたはヒアルロナンレベルの参照サンプルを超えるならば、対象をヒアルロナン関連疾患または状態を有すると診断することを含む、
ヒアルロナン関連疾患または状態の診断方法。
【請求項４２】
ヒアルロナン関連疾患または状態が腫瘍または癌である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
予定されたまたは参照レベルが健常または正常組織または対照対象の体液サンプルに存在するヒアルロナンの中央レベルである、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４４】
予定した閾値レベルが０.０１５μg  ＨＡ／mlサンプルより多い；または
サンプルが腫瘍または組織サンプルであり、予定した閾値がＨＡ＋１、ＨＡ＋２またはＨＡ＋３のＨＡスコアである、
請求項４０〜４３のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
サンプルが間質組織サンプルである；または
サンプルが血液、血清、尿、汗、精液、唾液、脳脊髄液またはリンパ液サンプルである体液サンプルである、
請求項２８〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
サンプルが腫瘍からの間質組織サンプルである、請求項２８〜４５のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
腫瘍が乳癌、膵癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、非小細胞性肺癌、上皮内癌(ＩＳＣ)、扁平上皮細胞癌(ＳＣＣ)、甲状腺癌、頚部癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、脳の癌、膀胱癌、胃癌、肝細胞腫、黒色腫、神経膠腫、網膜芽細胞腫、中皮腫、骨髄腫、リンパ腫および白血病から選択される癌である、請求項４６に記載の方法。