【手続補正書】
【提出日】平成26年12月17日(2014.12.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
多能性細胞をフィーダーフリー環境において培養する方法であって、
マウス胚性幹細胞ではない多能性細胞を、以下の作用剤：
ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
を含む培地中のフィーダーフリー環境において、培養の間該細胞の多能性を維持しながら、培養するステップ
を含む方法。
【請求項２】
（Ａ）前記培地が、前記細胞の多能性を維持しながら少なくとも１回の細胞分裂を可能にするために十分な量の前記作用剤を含み、そして／または
該細胞の多能性が少なくとも５回または少なくとも１０回の細胞分裂にわたって維持され、そして／または
該細胞を成長因子およびサイトカインの不在下で、またはＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）の不在下培養し、そして／または
該培地がｂＦＧＦを実質的に含まず、そして／または
（Ｂ）前記Ｒｏｃｋ阻害剤がチアゾビビンまたはＹ２７６３２であり、
前記ＴＧＦβ受容体阻害剤がＡ−８３−０１、ＳＢ４３１５４２、または別のＡＬＫ５阻害剤であり、
前記ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１またはＢＩＯであり、そして／または
前記ＭＥＫ阻害剤がＰＤ９８０５９またはＰＤ０３２９０１である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
マウス胚性幹細胞ではない多能性細胞を成長因子およびサイトカインの不在下で培養するステップを含む、多能性細胞を培養する方法であって、
該方法は、該多能性細胞を、該細胞の多能性を維持しながら少なくとも１回の細胞分裂を可能にするために、
ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
を含む培地中で培養するステップを必要に応じて含む、方法。
【請求項４】
解離したヒト多能性細胞の生存能力を増強する方法であって、
ａ）ヒト多能性細胞を解離させて、解離細胞を得るステップと
ｂ）該解離細胞を、以下の作用剤：
ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
を含む培地と接触させるステップであって、それにより、該解離細胞の生存能力が該作用剤と接触させていない解離細胞の生存能力と比較して増強されるステップと
を含む方法。
【請求項５】
（ｉ）前記解離細胞の生存能力が、前記作用剤と接触させていない解離細胞の生存能力と比較して少なくとも１０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、または少なくとも５００％増強され、そして／または
（ｉｉ）該解離細胞を前記培地中で、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも５回、または少なくとも１０回の継代にわたって、該解離細胞の多能性を維持しながら培養するステップをさらに含み、そして／または
（ｉｉｉ）培養後の該解離細胞の核型が、解離させる前の同じ細胞集団の核型と実質的に同様であり、そして／または
（ｉｖ）前記方法は、該作用剤の存在下で解離させるステップを含み、または
（ｖ）前記多能性細胞を、解離させる前に該作用剤と接触させるステップをさらに含み、そして／または
（ｖｉ）該解離細胞を該培地と接触させるステップが、該解離細胞を該培地中に懸濁させるステップを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
フィーダーフリー環境における非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞の多能性を増大させる方法であって、細胞をフィーダーフリー環境において、
ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
を含む培地と接触させて、該培地と接触させる前の該細胞と比較して能力が増大した細胞を得るステップを含む方法。
【請求項７】
（ｉ）接触させるステップが、前記非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞の前記多能性を増大させるために十分な条件下で該非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞を培養するステップを含み、
該非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞の前記多能性を増大させるために十分な該条件が、該非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞を少なくとも１種の多能性因子と接触させることを好ましくは含み、
該多能性因子が、好ましくは、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、または低分子を含み、
該多能性因子が、好ましくは、外因性転写因子であり、
該外因性転写因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇをコードするポリヌクレオチドを好ましくは含み、
該ポリペプチドが、細胞膜を横切る輸送を可能にするアミノ酸配列を好ましくは含み、
該外因性転写因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリヌクレオチドを好ましくは含み；そして／または
（ｉｉ）該非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞が、胚性幹細胞；多能性細胞；多分化能細胞；非多能性細胞；体細胞；ヒト細胞；もしくは人工多能性幹細胞であり；そして／または
（ｉｉｉ）能力が増大している該非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞が、以下：
ａ）内在性のＯｃｔ４、Ｎａｎｏｇ、ＳＳＥＡ４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４、Ｔｒａ１８１、およびＬｉｎ２８からなる群から選択される少なくとも１種の多能性幹細胞マーカーの発現、
ｂ）多能性幹細胞の形態、
ｃ）生殖細胞系列伝達に寄与する能力、
ｄ）奇形腫の形成、
ｅ）出発系統とは異なる系統に分化または分化転換する能力、および
ｆ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける三系統分化
の１つまたは複数によって特徴付けられ；そして／または
（ｉｖ）能力が増大している該非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞が、前記培地と接触させる前の該細胞と比較して少なくとも２倍高いレベルのＯｃｔ４を発現し；または
（ｖ）能力が増大している該非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞が、従来法で培養したｉＰＳＣと比較して少なくとも２倍低いＸｉｓｔ活性を有し；または
（ｖｉ）能力が増大している該非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞が、密集したドーム形のコロニー形態を有し；そして／または
（ｖｉｉ）能力が増大している該非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞が、ＴＧＦβ受容体、アクチビン、およびＭＥＫシグナル伝達経路の外因性の刺激の不在下、および必要に応じてｂＦＧＦ経路の外因性の刺激の不在下で複製し、かつ多能性を維持し；そして／または
（ｖｉｉｉ）前記方法が、能力が増大している該非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞を、フィーダーフリー環境において、ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、およびｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤の存在下で培養して、能力が増大している該非多能性細胞、または不完全に多能性の細胞の該能力を維持しながら少なくとも１回の細胞分裂を可能にするステップをさらに含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
フィーダーフリー環境における細胞集団の再プログラミングの効率を改善する方法であって、
細胞集団を、フィーダーフリー環境において、
ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
と、再プログラミングを誘導するために十分な条件下で接触させるステップであって、それにより、再プログラミングの効率が、該細胞集団を該低分子作用剤と接触させていない場合の再プログラミングの効率と比較して少なくとも１０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも３００％、または少なくとも５００％改善するステップを含み；必要に応じて、
（ａ）再プログラミング前の前記細胞集団が非多能性細胞を含み；または
（ｂ）該再プログラミングの効率を、再プログラミングのために必要とされる時間または再プログラミングされた細胞の数によって測定し；または
（ｃ）該条件が、該細胞集団を、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇをコードするポリヌクレオチドからなる群から選択される少なくとも１種の外因性転写因子と接触させることを含み；そして／または
（ｄ）該条件が、該細胞集団を、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリペプチドまたはＯｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４をコードするポリヌクレオチドと接触させることを含む、方法。
【請求項９】
細胞集団をフィーダーフリー環境において選別して、多能性細胞が富化された細胞集団を得る方法であって、以下：
ａ）フィーダーフリー環境において細胞の混成集団を含む解離細胞の懸濁物を得るステップと、
ｂ）該懸濁物中の該細胞を選別して、１種または複数種の多能性のマーカーを発現している細胞を得、それにより、多能性細胞が富化された富化細胞集団を得るステップと
を含み、
該懸濁物が、好ましくは、ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、およびｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤を含む、方法。
【請求項１０】
（ａ）選別が、磁気ビーズまたはフローサイトメトリーによるものであり；そして／または
（ｂ）前記富化細胞集団を、必要に応じて、可溶性フィブロネクチンと組み合わせて、ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、およびｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤を含む培地中で培養するステップをさらに含み；そして／または
（ｃ）前記懸濁物中の前記細胞の混成集団を、ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、およびｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤と選別前に接触させ；そして／または
（ｄ）該細胞の混成集団が、１種または複数種の多能性のマーカーを発現している細胞を含み、
該１種または複数種の多能性のマーカーが、ＳＳＥＡ４、ＴＲＡ１６０、ＴＲＡ１８１、ＴＲＡ１−８５、ＴＲＡ２−５４、ＧＣＴＭ−２、ＴＧ３４３、ＴＧ３０、ＣＤ９、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ５０、ＣＤ１３３／プロミニン、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ５６、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＯＣＴ４、ＮａｎｏｇまたはＳｏｘ２を必要に応じて含み；そして／または
（ｅ）前記方法が、該細胞の混成集団を１種または複数種の多能性因子と接触させて、再プログラミングを誘導するステップを含み、
接触させるステップが、１種または複数種の多能性因子を該細胞の混成集団内の細胞に導入することを必要に応じて含み、
該多能性因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇをコードするポリヌクレオチドを好ましくは含み、または
該多能性因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを好ましくは含み；そして／または
（ｆ）該多能性細胞が人工多能性細胞であり；そして／または
（ｇ）該富化細胞集団が、１種または複数種の多能性のマーカーを発現している細胞に関して少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、または少なくとも５００％富化されている、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を得る方法であって、以下：
ａ）細胞集団を処理して再プログラミングを誘導するステップと、
ｂ）該細胞集団を含む解離細胞の懸濁物を調製するステップと、
ｃ）該懸濁物中の該細胞を選別して、１種または複数種の多能性のマーカーを発現している選別細胞を得るステップと、
ｄ）１種または複数種の多能性のマーカーを発現している該選別細胞を培養するステップと
を含み、ここで、ｉＰＳＣが得られ、
該細胞集団を、ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、およびｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤と好ましくは接触させる、方法。
【請求項１２】
（ａ）前記細胞集団を処理して再プログラミングを誘導するステップが、該細胞集団を、１種または複数種の多能性因子と接触させるステップを含み、
該多能性因子が、好ましくは、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇをコードするポリヌクレオチド；またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、
該細胞集団を処理して再プログラミングを誘導するステップが、好ましくは、該細胞集団を、ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、およびｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤と接触させるステップをさらに含み；または
（ｂ）前記懸濁物が、ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、およびｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤を含み；そして／または
（ｃ）選別するステップが、前記細胞をフローサイトメトリーまたは磁気ビーズを使用して選別するステップを含み；そして／または
（ｄ）細胞を選別して、２種、３種、４種、またはそれより多くの多能性のマーカーを発現している細胞が得られ；そして／または
（ｅ）前記１種または複数種の多能性のマーカーが、ＳＳＥＡ４、ＴＲＡ１６０、ＴＲＡ１８１、ＴＲＡ１−８５、ＴＲＡ２−５４、ＧＣＴＭ−２、ＴＧ３４３、ＴＧ３０、ＣＤ９、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ５０、ＣＤ１３３／プロミニン、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ５６、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＯＣＴ４、ＮａｎｏｇまたはＳｏｘ２を含み；そして／または
（ｆ）該１種または複数種の多能性のマーカーが、ＳＳＥＡ４、ＣＤ３０、およびＴＲＡ１６０またはＴＲＡ１８１であり；そして／または
（ｇ）培養するステップが、該細胞を、
ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
を含む培地中で培養するステップを含み、
該細胞を、好ましくは、フィーダーフリー環境において培養し；そして／または
（ｈ）該細胞をフィーダーフリー環境において処理し、懸濁させ、選別し、培養し；そして／または
（ｉ）人工多能性幹細胞が約２〜２２日間または約４〜約１８日間に得られ；そして／または
（ｊ）人工多能性幹細胞が、該細胞集団を処理して再プログラミングを誘導した後約４〜約２２日間以内、約６〜約１８日間以内、または約１０〜約１６日間以内に得られる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
多能性細胞を細胞集団から枯渇させる方法であって、以下：
ａ）多能性細胞を有する細胞の混成集団を含む解離細胞の懸濁物を得るステップと、
ｂ）該懸濁物中の該細胞を選別して、１種または複数種の多能性のマーカーを発現している細胞を除去し、それにより、多能性細胞を細胞集団から枯渇させるステップと
を含み、必要に応じて、
（Ｉ）該細胞の混成集団が多分化能細胞または体細胞を含み；
（ＩＩ）該懸濁物中の該細胞の混成集団を、
ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
を含む培地中で、該懸濁物を得る前に培養し；
（ＩＩＩ）該懸濁物が、
ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
を含み；または
（ＩＶ）選別するステップが、該細胞をフローサイトメトリーまたは磁気ビーズを使用して選別するステップを含む、方法。
【請求項１４】
ゲノム安定性を有する多能性細胞を得る方法であって、
細胞を、フィーダーフリー環境において、ｃ−ｍｙｃの不在下、ゲノム安定性を有する多能性細胞を得るために十分な条件下で、
ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
と接触させるステップ
を含む方法。
【請求項１５】
（ａ）前記細胞が、
胚性幹細胞、
多能性細胞、
多分化能細胞、
非多能性細胞、および
体細胞
からなる群から選択され；そして／または
（ｂ）前記接触させる細胞が非多能性細胞を含み；そして／または
（ｃ）前記条件が、前記細胞を少なくとも１種の多能性因子と接触させることを含み、
前記多能性因子が、好ましくは、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇをコードするポリヌクレオチドからなる群から選択される外因性転写因子であり、  該多能性因子が、好ましくは、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリヌクレオチドを含み；そして／または
（ｄ）前記Ｒｏｃｋ阻害剤がチアゾビビンまたはＹ２７６３２であり；そして／または
（ｅ）前記ＴＧＦβ受容体阻害剤がＡ−８３−０１、ＳＢ４３１５４２、または別のＡＬＫ５阻害剤であり；そして／または
（ｆ）前記ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１またはＢＩＯであり；そして／または
（ｇ）前記ＭＥＫ阻害剤がＰＤ９８０５９またはＰＤ０３２９０１であり；そして／または
（ｈ）該ＴＧＦβ受容体阻害剤が好ましくは、ＳＢ４３１５４２であり、該ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１であり、該ＭＥＫ阻害剤がＰＤ０３２５９０１であり、該Ｒｏｃｋ阻害剤がチアゾビビンである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
多能性細胞を培養して、該細胞のゲノム安定性を維持する方法であって、
多能性細胞を、培養の間、該多能性細胞のゲノム安定性を維持しながら、該多能性細胞のゲノム安定性を維持する少なくとも１種の作用剤を含む培地中のフィーダーフリー環境において培養するステップ
を含み、該作用剤は、
ｉ）ＴＧＦβ受容体阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
からなる群から選択される、方法。
【請求項１７】
（ａ）前記Ｒｏｃｋ阻害剤がチアゾビビンまたはＹ２７６３２であり；
（ｂ）前記作用剤がチアゾビビンであり；
（ｃ）前記ＴＧＦβ受容体阻害剤がＡ−８３−０１、ＳＢ４３１５４２、または別のＡＬＫ５阻害剤であり；
（ｄ）前記ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１またはＢＩＯであり；
（ｅ）前記ＭＥＫ阻害剤がＰＤ９８０５９またはＰＤ０３２９０１であり；
（ｆ）該ＴＧＦβ受容体阻害剤がＳＢ４３１５４２であり、該ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１であり、該ＭＥＫ阻害剤がＰＤ０３２５９０１であり、該Ｒｏｃｋ阻害剤がチアゾビビンであり；そして／または
（ｇ）前記多能性細胞を、前記培地中で少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも５回、少なくとも１０回、または少なくとも１５回の継代にわたって、該多能性細胞のゲノム安定性を維持しながら培養する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記多能性細胞がヒト胚性幹細胞またはヒト人工多能性幹細胞である、請求項１、３、１３、または１６のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
本発明のいくつかの実施形態では、多能性細胞を、培地中で少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも５回、少なくとも１０回、または少なくとも１５回の継代にわたって、多能性細胞のゲノム安定性を維持しながら培養する。
本発明の好ましい実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
多能性細胞をフィーダーフリー環境において培養する方法であって、
マウス胚性幹細胞ではない多能性細胞を、
ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
からなる群から選択される作用剤であって、該細胞の多能性を維持する作用剤を少なくとも１種含む培地中のフィーダーフリー環境において培養し、培養している間、該細胞の多能性を維持するステップ
を含む方法。
（項目２）
前記培地が、前記細胞の多能性を維持しながら少なくとも１回の細胞分裂を可能にするために十分な量の前記作用剤を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記培地が、前記細胞の多能性を維持する作用剤を少なくとも２種含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記培地が、前記細胞の多能性を維持する作用剤を少なくとも３種含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記細胞の多能性を維持する前記作用剤がＲｏｃｋ阻害剤を含む、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記Ｒｏｃｋ阻害剤がチアゾビビンまたはＹ２７６３２である、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記細胞の多能性を維持する前記作用剤がＴＦＧβ阻害剤を含む、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記ＴＦＧβ阻害剤がＡ−８３−０１またはＳＢ４３１５４２である、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記細胞の多能性を維持する前記作用剤がＧＳＫ３阻害剤を含む、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１またはＢＩＯである、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記細胞の多能性を維持する前記作用剤がＭＥＫ阻害剤を含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記ＭＥＫ阻害剤がＰＤ９８０５９またはＰＤ０３２９０１である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記培地が、ＴＦＧβ阻害剤、ＧＳＫ３阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、およびＲｏｃｋ阻害剤を含む、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記ＴＦＧβ阻害剤がＳＢ４３１５４２であり、前記ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１であり、前記ＭＥＫ阻害剤がＰＤ０３２５９０１であり、前記Ｒｏｃｋ阻害剤がチアゾビビンである、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記細胞の多能性が少なくとも５回の細胞分裂にわたって維持される、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記細胞の多能性が少なくとも１０回の細胞分裂にわたって維持される、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記細胞を成長因子およびサイトカインの不在下で培養する、項目１に記載の方法。
（項目１８）
前記細胞をＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）の不在下で培養する、項目１または１７に記載の方法。
（項目１９）
前記培地がｂＦＧＦを実質的に含まない、項目１または１７に記載の方法。
（項目２０）
前記多能性細胞がヒト胚性幹細胞またはヒト人工多能性幹細胞である、項目１に記載の方法。
（項目２１）
マウス胚性幹細胞ではない多能性細胞を成長因子およびサイトカインの不在下で培養するステップを含む、多能性細胞を培養する方法。
（項目２２）
前記多能性細胞を、該細胞の多能性を維持しながら少なくとも１回の細胞分裂を可能にするために、
ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
からなる群から選択される作用剤であって、該細胞の多能性を維持する作用剤を少なくとも１種含む培地中で培養するステップを含む、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記多能性細胞がヒト胚性幹細胞またはヒト人工多能性幹細胞である、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記培地が、少なくとも２種、少なくとも３種、または４種の作用剤を含む、項目２１に記載の方法。
（項目２５）
解離したヒト多能性細胞を得る方法であって、
ａ）ヒト多能性細胞を解離させて、解離細胞を得るステップと
ｂ）該解離細胞を、
ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
からなる群から選択される作用剤であって、単細胞の生存能力を増強する作用剤を少なくとも１種含む培地と接触させるステップであって、それにより、該解離細胞の生存能力が該作用剤と接触させていない解離細胞の生存能力と比較して増強されるステップと
を含む方法。
（項目２６）
前記解離細胞の生存能力が、前記作用剤と接触させていない解離細胞の生存能力と比較して少なくとも１０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、または少なくとも５００％増強される、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記解離細胞を前記培地中で、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも５回、または少なくとも１０回の継代にわたって、該解離細胞の多能性を維持しながら培養するステップをさらに含む、項目２５に記載の方法。
（項目２８）
培養後の前記解離細胞の核型が、解離させる前の同じ細胞集団の核型と実質的に同様である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記作用剤の存在下で解離させるステップを含む、項目２５に記載の方法。
（項目３０）
前記多能性細胞を、解離させる前に前記作用剤と接触させるステップをさらに含む、項目２５に記載の方法。
（項目３１）
前記解離細胞を前記培地と接触させるステップが、該解離細胞を該培地中に懸濁させるステップを含む、項目２５に記載の方法。
（項目３２）
フィーダーフリー環境における細胞の能力を増大させる方法であって、細胞をフィーダーフリー環境において、
ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
からなる群から選択される低分子作用剤であって、少なくとも１種の低分子作用剤を含む培地と接触させて、該培地と接触させる前の該細胞と比較して能力が増大した細胞を得るステップを含む方法。
（項目３３）
接触させるステップが、前記細胞の前記能力を増大させるために十分な条件下で該細胞を培養するステップを含む、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記細胞が、
胚性幹細胞、
多能性細胞、
多分化能細胞、
非多能性細胞、および
体細胞
からなる群から選択される、項目３２に記載の方法。
（項目３５）
前記細胞がヒト細胞である、項目３２に記載の方法。
（項目３６）
前記細胞が人工多能性幹細胞である、項目３２に記載の方法。
（項目３７）
前記細胞の前記能力を増大させるために十分な前記条件が、該細胞を少なくとも１種の多能性因子と接触させることを含む、項目３３に記載の方法。
（項目３８）
前記多能性因子が、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、または低分子を含む、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記多能性因子が外因性転写因子である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記外因性転写因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇをコードするポリヌクレオチドを含む、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記ポリペプチドが、細胞膜を横切る輸送を可能にするアミノ酸配列を含む、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記外因性転写因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリヌクレオチドを含む、項目３９に記載の方法。
（項目４３）
能力が増大している前記細胞が、以下：
ａ）内在性のＯｃｔ４、Ｎａｎｏｇ、ＳＳＥＡ４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４、Ｔｒａ１８１、およびＬｉｎ２８からなる群から選択される少なくとも１種の多能性幹細胞マーカーの発現、
ｂ）多能性幹細胞の形態、
ｃ）生殖細胞系列伝達に寄与する能力、
ｄ）奇形腫の形成、
ｅ）出発系統とは異なる系統に分化または分化転換する能力、および
ｆ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける三系統分化
の１つまたは複数によって特徴付けられる、項目３２に記載の方法。
（項目４４）
能力が増大している前記細胞が、前記培地と接触させる前の該細胞と比較して少なくとも２倍高いレベルのＯｃｔ４を発現する、項目３２に記載の方法。
（項目４５）
能力が増大している前記細胞が、従来法で培養したｉＰＳＣと比較して少なくとも２倍低いＸｉｓｔ活性を有する、項目３２に記載の方法。
（項目４６）
能力が増大している前記細胞が、密集したドーム形のコロニー形態を有する、項目３２に記載の方法。
（項目４７）
能力が増大している前記細胞が、ＴＦＧβ、アクチビン、およびＭＥＫシグナル伝達経路の外因性の刺激の不在下、および必要に応じてｂＦＧＦ経路の外因性の刺激の不在下で複製し、かつ多能性を維持する、項目３２に記載の方法。
（項目４８）
能力が増大している前記細胞を、フィーダーフリー環境において、ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、またはｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤のうちの少なくとも１種の存在下で培養して、該細胞の該能力を維持しながら少なくとも１回の細胞分裂を可能にするステップをさらに含む、項目３２に記載の方法。
（項目４９）
項目３２から４８までのいずれかに記載のプロセスによって作製された、能力が増大している細胞。
（項目５０）
フィーダーフリー環境における細胞集団の再プログラミングの効率を改善する方法であって、
細胞集団を、フィーダーフリー環境において、
ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
からなる群から選択される少なくとも１種の低分子作用剤と、再プログラミングを誘導するために十分な条件下で接触させるステップであって、それにより、再プログラミングの効率が、該細胞集団を該低分子作用剤と接触させていない場合の再プログラミングの効率と比較して少なくとも１０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも３００％、または少なくとも５００％改善するステップを含む方法。
（項目５１）
再プログラミング前の前記細胞集団が非多能性細胞を含む、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記再プログラミングの効率を、再プログラミングのために必要とされる時間または再プログラミングされた細胞の数によって測定する、項目５０に記載の方法。
（項目５３）
前記条件が、前記細胞集団を、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇをコードするポリヌクレオチドからなる群から選択される少なくとも１種の外因性転写因子と接触させることを含む、項目５０に記載の方法。
（項目５４）
前記条件が、前記細胞集団を、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリペプチドまたはＯｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４をコードするポリヌクレオチドと接触させることを含む、項目５０に記載の方法。
（項目５５）
細胞集団をフィーダーフリー環境において選別して、多能性細胞が富化された細胞集団を得る方法であって、以下：
ａ）フィーダーフリー環境において細胞の混成集団を含む解離細胞の懸濁物を得るステップと、
ｂ）該懸濁物中の該細胞を選別して、１種または複数種の多能性のマーカーを発現している細胞を得、それにより、多能性細胞が富化された富化細胞集団を得るステップと
を含む方法。
（項目５６）
前記懸濁物が、ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、またはｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤のうちの少なくとも１種を含む、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
選別が、磁気ビーズまたはフローサイトメトリーによるものである、項目５５に記載の方法。
（項目５８）
選別が、磁気ビーズによるものである、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
選別が、フローサイトメトリーによるものである、項目５７に記載の方法。
（項目６０）
前記富化細胞集団を、ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、またはｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤のうちの少なくとも１種を、必要に応じて、可溶性フィブロネクチンと組み合わせて含む培地中で培養するステップをさらに含む、項目５５に記載の方法。
（項目６１）
前記懸濁物中の前記細胞の混成集団を、ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、またはｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤のうちの少なくとも１種と選別前に接触させる、項目５５に記載の方法。
（項目６２）
前記細胞の混成集団が、１種または複数種の多能性のマーカーを発現している細胞を含む、項目５５に記載の方法。
（項目６３）
前記１種または複数種の多能性のマーカーが、ＳＳＥＡ４、ＴＲＡ１６０、ＴＲＡ１８１、ＴＲＡ１−８５、ＴＲＡ２−５４、ＧＣＴＭ−２、ＴＧ３４３、ＴＧ３０、ＣＤ９、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ５０、ＣＤ１３３／プロミニン、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ５６、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＯＣＴ４、ＮａｎｏｇまたはＳｏｘ２を含む、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記多能性のマーカーが、ＳＳＥＡ４、ＴＲＡ１８１、ＴＲＡ１６０、およびＣＤ３０からなる群から選択される、項目６２に記載の方法。
（項目６５）
前記細胞の混成集団を１種または複数種の多能性因子と接触させて、再プログラミングを誘導するステップを含む、項目５５に記載の方法。
（項目６６）
接触させるステップが、１種または複数種の多能性因子を前記細胞の混成集団内の細胞に導入することを含む、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
前記多能性因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇをコードするポリヌクレオチドを含む、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
前記多能性因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、項目６６に記載の方法。
（項目６９）
前記多能性細胞が人工多能性細胞である、項目５５に記載の方法。
（項目７０）
前記富化細胞集団が、１種または複数種の多能性のマーカーを発現している細胞に関して少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、または少なくとも５００％富化されている、項目５５に記載の方法。
（項目７１）
人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を得る方法であって、以下：
ａ）細胞集団を処理して再プログラミングを誘導するステップと、
ｂ）該細胞集団を含む解離細胞の懸濁物を調製するステップと、
ｃ）該懸濁物中の該細胞を選別して、１種または複数種の多能性のマーカーを発現している選別細胞を得るステップと、
ｄ）１種または複数種の多能性のマーカーを発現している該選別細胞を培養するステップと
を含み、ここで、ｉＰＳＣが得られる方法。
（項目７２）
前記細胞集団を、ｉ）ＴＧＦβ阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、またはｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤のうちの少なくとも１種と接触させる、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
前記細胞集団を処理して再プログラミングを誘導するステップが、該細胞集団を、１種または複数種の多能性因子と接触させるステップを含む、項目７１に記載の方法。
（項目７４）
前記多能性因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇをコードするポリヌクレオチドを含む、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
前記多能性因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、項目７３に記載の方法。
（項目７６）
前記細胞集団を処理して再プログラミングを誘導するステップが、該細胞集団を、ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、またはｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤のうちの少なくとも１種と接触させるステップをさらに含む、項目７３に記載の方法。
（項目７７）
前記懸濁物が、ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、またはｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤のうちの少なくとも１種を含む、項目７１に記載の方法。
（項目７８）
選別するステップが、前記細胞をフローサイトメトリーまたは磁気ビーズを使用して選別するステップを含む、項目７１に記載の方法。
（項目７９）
細胞を選別して、２種、３種、４種、またはそれより多くの多能性のマーカーを発現している細胞を得る、項目７１に記載の方法。
（項目８０）
前記１種または複数種の多能性のマーカーが、ＳＳＥＡ４、ＴＲＡ１６０、ＴＲＡ１８１、ＴＲＡ１−８５、ＴＲＡ２−５４、ＧＣＴＭ−２、ＴＧ３４３、ＴＧ３０、ＣＤ９、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ５０、ＣＤ１３３／プロミニン、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ５６、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＯＣＴ４、ＮａｎｏｇまたはＳｏｘ２を含む、項目７１に記載の方法。
（項目８１）
前記１種または複数種の多能性のマーカーが、ＳＳＥＡ４、ＴＲＡ１６０、ＴＲＡ１８１、およびＣＤ３０からなる群から選択される、項目７１に記載の方法。
（項目８２）
前記１種または複数種の多能性のマーカーが、ＳＳＥＡ４、ＣＤ３０、およびＴＲＡ１６０またはＴＲＡ１８１である、項目７１に記載の方法。
（項目８３）
培養するステップが、前記細胞を、
ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
からなる群から選択される少なくとも１種の低分子作用剤を含む培地中で培養するステップを含む、項目７１に記載の方法。
（項目８４）
前記細胞をフィーダーフリー環境において培養する、項目８３に記載の方法。
（項目８５）
前記細胞をフィーダーフリー環境において処理し、懸濁させ、選別し、培養する、項目７１に記載の方法。
（項目８６）
人工多能性幹細胞が約２〜２２日間に得られる、項目７１に記載の方法。
（項目８７）
人工多能性幹細胞が約４〜約１８日間に得られる、項目７１に記載の方法。
（項目８８）
人工多能性幹細胞が、前記細胞集団を処理して再プログラミングを誘導した後約４〜約２２日間以内に得られる、項目７１に記載の方法。
（項目８９）
人工多能性幹細胞が、前記細胞集団を処理して再プログラミングを誘導した後約６〜約１８日間以内に得られる、項目７１に記載の方法。
（項目９０）
人工多能性幹細胞が、前記細胞集団を処理して再プログラミングを誘導した後約１０〜約１６日間以内に得られる、項目７１に記載の方法。
（項目９１）
項目７１から９０までのいずれかに記載の方法によって得られる人工多能性幹細胞。
（項目９２）
多能性細胞を細胞集団から枯渇させる方法であって、以下：
ａ）多能性細胞を有する細胞の混成集団を含む解離細胞の懸濁物を得るステップと、
ｂ）該懸濁物中の該細胞を選別して、１種または複数種の多能性のマーカーを発現している細胞を除去し、それにより、多能性細胞を細胞集団から枯渇させるステップと
を含む方法。
（項目９３）
前記細胞の混成集団が多分化能細胞または体細胞を含む、項目９２に記載の方法。
（項目９４）
前記懸濁物中の前記細胞の混成集団を、
ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
からなる群から選択される少なくとも１種の低分子作用剤を含む培地中で、該懸濁物を得る前に培養する、項目９２に記載の方法。
（項目９５）
前記懸濁物が、
ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
からなる群から選択される少なくとも１種の低分子作用剤を含む、項目９２に記載の方法。
（項目９６）
選別するステップが、前記細胞をフローサイトメトリーまたは磁気ビーズを使用して選別するステップを含む、項目９２に記載の方法。
（項目９７）
ゲノム安定性を有する多能性細胞を得る方法であって、
細胞を、フィーダーフリー環境において、ｃ−ｍｙｃの不在下、ゲノム安定性を有する多能性細胞を得るために十分な条件下で、
ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
からなる群から選択される少なくとも１種の低分子作用剤と接触させるステップ
を含む方法。
（項目９８）
前記細胞が、
胚性幹細胞、
多能性細胞、
多分化能細胞、
非多能性細胞、および
体細胞
からなる群から選択される、項目９７に記載の方法。
（項目９９）
前記接触させる細胞が非多能性細胞を含む、項目９７に記載の方法。
（項目１００）
前記条件が、前記細胞を少なくとも１種の多能性因子と接触させることを含む、項目９７に記載の方法。
（項目１０１）
前記多能性因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇポリペプチド、またはＯｃｔ４、Ｓｏｘ、Ｋｌｆ、Ｍｙｃ、Ｌｉｎ２８、もしくはＮａｎｏｇをコードするポリヌクレオチドからなる群から選択される外因性転写因子である、項目１００に記載の方法。
（項目１０２）
前記多能性因子がＯｃｔ４、Ｓｏｘ２、およびＫｌｆ４ポリヌクレオチドを含む、項目１０１に記載の方法。
（項目１０３）
前記低分子作用剤がＲｏｃｋ阻害剤を含む、項目９７に記載の方法。
（項目１０４）
前記Ｒｏｃｋ阻害剤がチアゾビビンまたはＹ２７６３２である、項目１０３に記載の方法。
（項目１０５）
前記低分子作用剤がＴＦＧβ阻害剤を含む、項目９７に記載の方法。
（項目１０６）
前記ＴＦＧβ阻害剤がＡ−８３−０１またはＳＢ４３１５４２である、項目１０５に記載の方法。
（項目１０７）
低分子作用剤がＧＳＫ３阻害剤を含む、項目９７に記載の方法。
（項目１０８）
前記ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１またはＢＩＯである、項目１０７に記載の方法。
（項目１０９）
低分子作用剤がＭＥＫ阻害剤を含む、項目９７に記載の方法。
（項目１１０）
前記ＭＥＫ阻害剤がＰＤ９８０５９またはＰＤ０３２９０１である、項目１０９に記載の方法。
（項目１１１）
低分子作用剤がＴＦＧβ阻害剤、ＧＳＫ３阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、およびＲｏｃｋ阻害剤を含む、項目９７に記載の方法。
（項目１１２）
前記ＴＦＧβ阻害剤がＳＢ４３１５４２であり、前記ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１であり、前記ＭＥＫ阻害剤がＰＤ０３２５９０１であり、前記Ｒｏｃｋ阻害剤がチアゾビビンである、項目１１１に記載の方法。
（項目１１３）
多能性細胞を培養して、該細胞のゲノム安定性を維持する方法であって、
多能性細胞を、
ｉ）ＴＦＧβ阻害剤、
ｉｉ）ＧＳＫ３阻害剤、
ｉｉｉ）ＭＥＫ阻害剤、および
ｉｖ）Ｒｏｃｋ阻害剤
からなる群から選択される作用剤であって、該多能性細胞のゲノム安定性を維持する作用剤を少なくとも１種含む培地中のフィーダーフリー環境において培養し、培養している間、該多能性細胞のゲノム安定性を維持するステップ
を含む方法。
（項目１１４）
前記培地が、少なくとも２種、少なくとも３種、または４種の作用剤を含む、項目１１３に記載の方法。
（項目１１５）
前記作用剤がＲｏｃｋ阻害剤を含む、項目１１３に記載の方法。
（項目１１６）
前記Ｒｏｃｋ阻害剤がチアゾビビンまたはＹ２７６３２である、項目１１５に記載の方法。
（項目１１７）
前記作用剤がチアゾビビンを含む、項目１１３に記載の方法。
（項目１１８）
前記作用剤がＴＦＧβ阻害剤を含む、項目１１７に記載の方法。
（項目１１９）
前記ＴＦＧβ阻害剤がＡ−８３−０１またはＳＢ４３１５４２である、項目１１８に記載の方法。
（項目１２０）
作用剤がＧＳＫ３阻害剤を含む、項目１１３に記載の方法。
（項目１２１）
前記ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１またはＢＩＯである、項目１２０に記載の方法。
（項目１２２）
作用剤がＭＥＫ阻害剤を含む、項目１１３に記載の方法。
（項目１２３）
前記ＭＥＫ阻害剤がＰＤ９８０５９またはＰＤ０３２９０１である、項目１２２に記載の方法。
（項目１２４）
前記作用剤がＴＦＧβ阻害剤、ＧＳＫ３阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、およびＲｏｃｋ阻害剤を含む、項目１１３に記載の方法。
（項目１２５）
前記ＴＦＧβ阻害剤がＳＢ４３１５４２であり、前記ＧＳＫ３阻害剤がＣＨＩＲ９９０２１であり、前記ＭＥＫ阻害剤がＰＤ０３２５９０１であり、前記Ｒｏｃｋ阻害剤がチアゾビビンである、項目１２４に記載の方法。
（項目１２６）
前記多能性細胞を、前記培地中で少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも５回、少なくとも１０回、または少なくとも１５回の継代にわたって、該多能性細胞のゲノム安定性を維持しながら培養する、項目１１３に記載の方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2014501108000001.app