【手続補正書】
【提出日】平成27年2月13日(2015.2.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、配列番号２の残基６〜２９の核酸配列を含むアプタマー。
【請求項２】
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、配列番号２の核酸配列を含み、配列番号２の残基１〜６または３０〜３２に一塩基置換をさらに含むアプタマー。
【請求項３】
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、配列番号２の核酸配列を含み、図１４７から選択される一塩基置換をさらに含むアプタマー。
【請求項４】
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、配列番号２の核酸配列を含み、６および２９位、７および２８位、または８および２７位に塩基対合相互作用を維持する複数変異をさらに含むアプタマー。
【請求項５】
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、以下の式Ｉに記載の構造：
Ｘ（１）−Ｘ（２）−Ｘ（３）−Ｘ（４）−Ｘ（５）−Ｘ（６）−Ｕ−Ｘ（７）−Ｃ−Ｘ（８）−Ｘ（９）−Ｘ（１０）−Ｘ（１１）−Ｘ（１２）−Ｃ−Ｘ（１４）−Ｃ−Ｘ（１５）−Ｕ−Ｘ（１６）−Ｘ（１７）−Ｘ（１８）−Ｘ（１９）−Ｕ−Ｘ（２０）−Ｃ−Ｘ（２１）−Ｕ−Ｘ（２２）−Ｘ（２３）−Ｘ（２４）
ここで、Ｘ（１）、Ｘ（２）、Ｘ（３）、Ｘ（４）、Ｘ（５），Ｘ（６）、Ｘ（１４）、Ｘ（２２）、Ｘ（２３）およびＸ（２４）はそれぞれＡ、Ｃ、Ｇ、またはＵから独立して選択され、
Ｘ（７）はＡまたはＧであり、
Ｘ（８）、Ｘ（２１）はそれぞれＣまたはＵから独立して選択され、
Ｘ（９）はＧまたはＵであり、
Ｘ（１０）、Ｘ（１１）、Ｘ（１３）、Ｘ（１７）、Ｘ（１８）、Ｘ（１９）はそれぞれＧであり、
Ｘ（１２）はＡ、ＧまたはＵであり、
Ｘ（１５）はＡであり、
Ｘ（１６）はＡ、ＣまたはＧであり、および
Ｘ（２０）はＡまたはＣである、を含むアプタマー。
【請求項６】
Ｘ（１）〜Ｘ（２４）の１つ以上がメチル化ヌクレオチドである請求項５に記載のアプタマー。
【請求項７】
治療有効量の請求項１または５に記載のアプタマーを含む医薬組成物。
【請求項８】
対象におけるＴＦＰＩによって媒介される出血障害を治療する、予防する、その進行を遅延させる、または寛解させるための組成物であって、請求項１または５に記載のアプタマーを含む、組成物。
【請求項９】
対象は哺乳動物である請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記出血障害は、先天性または後天性の凝固因子欠乏症、血友病Ａ、血友病Ｂ、血友病Ｃ、阻害因子を有する血友病ＡまたはＢ、他の因子の欠乏症、α２プラスミン阻害因子の欠乏、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤１の欠乏症、多因子の欠乏症、機能的因子の異常、関節出血、他の部位の特発性出血、出血性卒中、頭蓋内出血、裂傷、外傷と関連する出血、急性外傷性凝固障害、癌と関連する凝固障害、フォンビルブランド病、播種性血管内凝固、肝臓疾患、月経過多、抗凝固剤の使用と関連する血小板減少症および出血からなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
請求項１または５に記載のアプタマーを含むキット。
【請求項１２】
アプタマーは糖位置の化学的置換、ヌクレオチド間結合の化学的置換、および塩基位置の化学的置換から成る群から選択される少なくとも１つの化学的修飾をさらに含み、修飾は糖位置の化学的置換、ヌクレオチド間結合の化学的置換、および塩基位置の化学的置換から成る群から選択される請求項１又は５に記載のアプタマー。
【請求項１３】
高分子量、非免疫原性の化合物はポリエチレングリコールである請求項１２に記載のアプタマー。
【請求項１４】
ヒト組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、アプタマーは以下の一次ヌクレオチド配列を含み、
ｇｇａａｕａｕａｃｕ  ｕｇｇｃｕｃｇｕｕａ  ｇｇｕｇｃｇｕａｕａ  ｕａ
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０から成る群から選択される参照のアプタマーとＴＦＰＩに結合することにおいて競合するアプタマー。
【請求項１５】
アプタマーには少なくとも１つの化学的修飾がある請求項１４に記載のアプタマー。
【請求項１６】
修飾は糖位置の化学的置換、ヌクレオチド間結合の化学的置換、および塩基位置の化学的置換から成る群から選択される請求項１５に記載のアプタマー。
【請求項１７】
修飾は、修飾ヌクレオチドの組込み、ヌクレオチドキャップ、高分子量の非疫原性化合物への結合、親油性化合物への結合、ＣｐＧモチーフの組込み、およびホスホロチオエートまたはジチオリン酸のリン酸骨格への組み込みから成る群から選択される請求項１６に記載のアプタマー。
【請求項１８】
高分子量の非免疫原性化合物はポリエチレングリコールである請求項１７に記載のアプタマー。
【請求項１９】
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、配列番号１または７の一次ヌクレオチド配列との配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％であるアプタマー。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９４】
本発明はさらに、組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーを提供し、アプタマーは、配列番号４、１、２、３、５、６、７、８、９、および１０からなる群から選択される一次核酸配列を含む。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、配列番号２の残基６〜２９の核酸配列を含むアプタマー。
（項目２）
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、配列番号２の核酸配列を含み、配列番号２の残基１〜６または３０〜３２に一塩基置換をさらに含むアプタマー。
（項目３）
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、配列番号２の核酸配列を含み、図１４７から選択される一塩基置換をさらに含むアプタマー。
（項目４）
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、配列番号２の核酸配列を含み、６および２９位、７および２８位、または８および２７位に塩基対合相互作用を維持する複数変異をさらに含むアプタマー。
（項目５）
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、以下の式Ｉに記載の構造：
Ｘ（１）−Ｘ（２）−Ｘ（３）−Ｘ（４）−Ｘ（５）−Ｘ（６）−Ｕ−Ｘ（７）−Ｃ−Ｘ（８）−Ｘ（９）−Ｘ（１０）−Ｘ（１１）−Ｘ（１２）−Ｃ−Ｘ（１４）−Ｃ−Ｘ（１５）−Ｕ−Ｘ（１６）−Ｘ（１７）−Ｘ（１８）−Ｘ（１９）−Ｕ−Ｘ（２０）−Ｃ−Ｘ（２１）−Ｕ−Ｘ（２２）−Ｘ（２３）−Ｘ（２４）
ここで、Ｘ（１）、Ｘ（２）、Ｘ（３）、Ｘ（４）、Ｘ（５），Ｘ（６）、Ｘ（１４）、Ｘ（２２）、Ｘ（２３）およびＸ（２４）はそれぞれＡ、Ｃ、Ｇ、またはＵから独立して選択され、
Ｘ（７）はＡまたはＧであり、
Ｘ（８）、Ｘ（２１）はそれぞれＣまたはＵから独立して選択され、
Ｘ（９）はＧまたはＵであり、
Ｘ（１０）、Ｘ（１１）、Ｘ（１３）、Ｘ（１７）、Ｘ（１８）、Ｘ（１９）はそれぞれＧであり、
Ｘ（１２）はＡ、ＧまたはＵであり、
Ｘ（１５）はＡであり、
Ｘ（１６）はＡ、ＣまたはＧであり、および
Ｘ（２０）はＡまたはＣである、を含むアプタマー。
（項目６）
Ｘ（１）〜Ｘ（２４）の１つ以上がメチル化ヌクレオチドである項目５に記載のアプタマー。
（項目７）
治療有効量の項目１または５に記載のアプタマーを含む医薬組成物。
（項目８）
項目１または５に記載の組成物を対象に投与することを含む、ＴＦＰＩによって媒介される出血障害を治療する、予防する、その進行を遅延させる、または寛解させる方法。
（項目９）
対象は哺乳動物である項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記出血障害は、先天性または後天性の凝固因子欠乏症、血友病Ａ、血友病Ｂ、血友病Ｃ、阻害因子を有する血友病ＡまたはＢ、他の因子の欠乏症、α２プラスミン阻害因子の欠乏、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤１の欠乏症、多因子の欠乏症、機能的因子の異常、関節出血、他の部位の特発性出血、出血性卒中、頭蓋内出血、裂傷、外傷と関連する出血、急性外傷性凝固障害、癌と関連する凝固障害、フォンビルブランド病、播種性血管内凝固、肝臓疾患、月経過多、抗凝固剤の使用と関連する血小板減少症および出血からなる群から選択される、項目８に記載の方法。
（項目１１）
項目１または５に記載のアプタマーを含むキット。
（項目１２）
アプタマーは糖位置の化学的置換、ヌクレオチド間結合の化学的置換、および塩基位置の化学的置換から成る群から選択される少なくとも１つの化学的修飾をさらに含み、修飾は糖位置の化学的置換、ヌクレオチド間結合の化学的置換、および塩基位置の化学的置換から成る群から選択される項目１又は５に記載のアプタマー。
（項目１３）
高分子量、非免疫原性の化合物はポリエチレングリコールである項目１２に記載のアプタマー。
（項目１４）
ヒト組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、アプタマーは以下の一次ヌクレオチド配列を含み、
ｇｇａａｕａｕａｃｕ  ｕｇｇｃｕｃｇｕｕａ  ｇｇｕｇｃｇｕａｕａ  ｕａ
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０から成る群から選択される参照のアプタマーとＴＦＰＩに結合することにおいて競合するアプタマー。
（項目１５）
アプタマーには少なくとも１つの化学的修飾がある項目１４に記載のアプタマー。
（項目１６）
修飾は糖位置の化学的置換、ヌクレオチド間結合の化学的置換、および塩基位置の化学的置換から成る群から選択される項目１５に記載のアプタマー。
（項目１７）
修飾は、修飾ヌクレオチドの組込み、ヌクレオチドキャップ、高分子量の非疫原性化合物への結合、親油性化合物への結合、ＣｐＧモチーフの組込み、およびホスホロチオエートまたはジチオリン酸のリン酸骨格への組み込みから成る群から選択される項目１６に記載のアプタマー。
（項目１８）
高分子量の非免疫原性化合物はポリエチレングリコールである項目１７に記載のアプタマー。
（項目１９）
組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）に結合するアプタマーであって、配列番号１または７の一次ヌクレオチド配列との配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％であるアプタマー。