【事件の表示】
　特許第３２２９２６８号「アラキドン酸を含む真菌油」の請求項１ないし１５に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第３２２９２６８号の請求項１ないし９に係る特許を取り消す。
【理　由】
Ｉ．手続の経緯
　本件特許第３２２９２６８号に係る発明についての出願は、特願平４−５０４６０４号の一部を新たな特許出願としたもので、その出願日は平成４年１月２２日（パリ条約による優先権主張１９９１年１月２４日、米国）であるところ、平成１３年９月７日にその特許の設定登録がなされ、その後、サントリー株式会社及び松本久紀より特許異議申立がなされ、取消理由通知がなされ、その指定期間内である平成１５年４月４日に訂正請求がなされたものである。
　
II．訂正請求
１．訂正の内容
(1)請求項１、請求項６及び請求項９において、真菌油を産生すべき真菌をＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎａ（モルティエレラ　アルピナ）由来のものに限定する。
(2)請求項１〜３及び請求項５において、「ヒト栄養組成物」とあるのを、「調合乳組成物」に限定する。
(3)請求項９〜１１及び請求項１３において、「組成物」とあるのを、「医薬カプセル」と訂正する。
(4)請求項６において、「請求項４記載の」を削除する。
(5)請求項１１において、「請求項９記載の」を「請求項９または１０記載の」と訂正する。
(6)請求項４，請求項７〜８，請求項１２〜１３及び請求項１５を削除する。
　
２．訂正の目的の適否、新規事項の有無及び拡張・変更の存否
　訂正事項(1)は、真菌油を産生すべき真菌をＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎａ（モルティエレラ　アルピナ）由来のものに限定するものであるから特許請求の範囲の減縮に該当する。
　同(2)は、「ヒト栄養組成物」とあるのを、「調合乳組成物」に限定するものであるから特許請求の範囲の減縮に該当する。
　同(3)は、「組成物」とあるのを、「医薬カプセル」と訂正するものであるから、特許請求の範囲の減縮に該当する。
　同(6)は、請求項４，請求項７〜８，請求項１２〜１３及び請求項１５を削除するものであるから特許請求の範囲の減縮に該当する。
　同(4)及び(5)は、同(6)に伴う訂正で明りようでない記載の釈明に該当する。
　そして、上記（1）ないし（6）の訂正は新規事項に該当せず、実質上特許請求の範囲を拡張し、または変更するものではない。
　
３．むすび
　以上のとおりであるから、本件訂正請求は、特許法１２０条の４,２項及び同条３項で準用する１２６条２項及び３項の規定に適合するので、請求のとおり当該訂正を認める。
　
III．特許異議申立
１．本件発明
　上記II．で示したように上記訂正が認められるから、本件の請求項１乃至９に係る発明（以下、「本件発明１乃至９」という。）は、上記訂正に係る訂正明細書の特許請求の範囲の請求項１乃至９に記載された事項により特定される次のとおりのものである。
「【請求項１】少なくとも３０％のトリグリセリド形アラキドン酸（ＡＲＡ）およびＡＲＡの量の１／５を超えない量のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を含む、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎａ（モルティエレラ　アルピナ）由来の未修飾の真菌油（ｆｕｎｇａｌ　ｏｉｌ）を含む、調合乳組成物。
【請求項２】真菌油がＡＲＡの量の１／１０を超えない量のＥＰＡを含む、請求項１記載の調合乳組成物。
【請求項３】真菌油が実質的にＥＰＡを含まない、請求項１または２記載の調合乳組成物。
【請求項４】ヒトの母乳中のＡＲＡ量に匹敵するＡＲＡを含む調合乳である、請求項１〜３のいずれかに記載の調合乳組成物。
【請求項５】少なくとも３０％のトリグリセリド形ＡＲＡおよびＡＲＡの量の１／５を超えない量のＥＰＡを含む、Ｍ．ａｌｐｉｎａ由来の真菌油を、ヒトの母乳中のＡＲＡ量に相当するＡＲＡ含有量を提供するのに十分な量で調合乳に加えることからなる、ＡＲＡ含有トリグリセリドを調合乳に提供する方法。
【請求項６】少なくとも３０％のトリグリセリド形ＡＲＡを含む、Ｍ．ａｌｐｉｎａ由来の真菌油を含む、ヒトに付加的なＡＲＡを提供する医薬カプセルであって、該真菌油がヒトに付加的なＡＲＡを提供するのに有効な量存在する、医薬カプセル。
【請求項７】真菌油がＡＲＡの量の１／１０を超えない量のＥＰＡを含む、請求項６記載の医薬カプセル。
【請求項８】真菌油が実質的にＥＰＡを含まない、請求項６または７記載の医薬カプセル。
【請求項９】ヒトが妊婦または授乳期の母親である、請求項６〜８のいずれかに記載の医薬カプセル。」
　
２．特許異議申立書の理由及び当審が通知した取消理由の概要
（１）特許異議申立人 サントリー株式会社は、下記の甲第１号証乃至甲第５号証を提出し、訂正前の本件請求項１乃至１５に係る発明は、甲第１号証乃至甲第４号証に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたものであるから、当該発明に係る特許は、特許法２９条２項の規定に違反してされたものであり、或いは、本件明細書には記載の不備があるから、本件の請求項１乃至１５に係る特許は、特許法３６条４項並びに同条５項２号及び６項に規定する要件を満たさない明細書に基づいて設定されたものであると主張している。
　　　　　　　　　　　　　　　　　記
甲第１号証：特開平１−１９６２５５号公報
甲第２号証：「Ｃｏｍｍｅｎｔｓ　Ａｇｒｉｃ．＆　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉ　　　　　　ｓｔｒｙ」Ｖｏｌ．２，Ｎｏ．３，ｐ．２１１ー２３５（１９　　　　　　９０）
甲第３号証：「ＪＡＯＣＳ」Ｖｏｌ．６５，ｐ．１４５５ー１４５９（１９　　　　　　８８）
甲第４号証：「ＩＮＦＯＲＭ」Ｖｏｌ．１，ｐ．３０６（１９９０）
甲第５号証：特表平１０−５１２４４４号公報
　
（２）特許異議申立人 松本久紀は、下記の甲第１号証乃至甲第６号証を提出し、訂正前の本件請求項１乃至１５に係る発明は、新規性及び進歩性に関する要件を欠如するものであるから、当該発明に係る特許は、特許法２９条１項及び同条２項の規定に違反してされたものであり、或いは、本件明細書には記載の不備があるから、本件の請求項１乃至１５に係る特許は、特許法３６条４項、５項（３号を除く）、６項に規定する要件を満たさない明細書に基づいて設定されたものであると主張している。
　　　　　　　　　　　　　　　　　記
甲第１号証：特開昭６４−３８００７号公報
甲第２号証：「第一工業株式会社社報」第４６６号、第２頁〜７頁（平成２　　　　　　年７月発行）
甲第３号証：「ビタミン」第６２巻、８号（８月）１９８８、第４３９〜４　　　　　　４５頁
甲第４号証：特開平１?３０４８９２号公報
甲第５号証：特開平１?１９６２５５号公報
甲第６号証：「日本小児科学会雑誌」９４巻、２号、第２２４〜２３４頁（　　　　　　１９９０年）
　
（３）当審が平成１４年９月２０日付取消理由通知書で通知した取消理油は、上記（１）及び（２）に係る理由を全て引用したものである。（なお、（１）の甲第１号証乃至甲第４号証は、刊行物Ａ乃至刊行物Ｄに、（２）の甲第１号証乃至甲第６号証は、刊行物１乃至刊行物６に相当する。）
　
２．当審の判断
Ａ．特許法３６条４項、５項の規定違反について
　当審が通知した、特許法３６条４項違反に係る取消理由は、本件請求項に係る「少なくとも３０％のトリグリセライド形アラキドン酸（ＡＲＡ）を含む未修飾の真菌油」を産生する真菌について記載されていないから、本件明細書の記載に基づいて当業者が本件請求項に係る発明を容易に実施することができないというものである。
　よって検討するに、本件発明１は、「少なくとも３０％のトリグリセリド形アラキドン酸（ＡＲＡ）およびＡＲＡの量の１／５を超えない量のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を含む、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎａ（モルティエレラ　アルピナ）由来の未修飾の真菌油を含む、調合乳組成物。」であるところ、本件明細書には、真菌油に含まれるアラキドン酸量に関して、「この時点で、有機体は典型的に約５〜４０％の複合脂質、すなわちその約１０〜４０％がＡＲＡであり、採取することのできる油を含有する。」（段落【００２８】）、「モルティエレラアルビナの場合、乾燥菌糸体１００ｇ当たり追加の１０ｇ〜３０ｇのトリグリセライドを得ることができる。」（段落【００３５】）、「必要なＡＲＡＳＣＯの特定量はＡＲＡ含有量に依存する。これは油中の脂肪酸の約１０〜約５０％と変えることができる。しかしながら、典型的にはＡＲＡ含有量は約３０％である。」（段落【００３８】）との記載とともに、「表１」には、モルティエレラアルビナが生成する脂肪酸分布が示され、「実施例１」に、ピチウム　インディオサムを培養したところ「合一したフラクションは約３０〜３５％のアラキドン酸を含有し、ＥＰＡが検出されない油を生成した。」こと、及び「実施例２」に、モルティエレラ　アルビナ（ＡＴＣＣ　＃４２４３０）を培養したところ「この油は約２３％のアラキドン酸を含有する」ことについての記載がある。
　しかし、本件明細書には、モルティエレラ　アルピナに属する特定の真菌が「少なくとも３０％のトリグリセリド形アラキドン酸」を含む真菌油を産生することについて具体的に記載されているところはなく、「表１」をみても、アラキドン酸に相当する、２０：４の脂肪酸は、ただの「１３．０」であり、また、実施例において３０％以上生成されているのは、本件発明に係るモルティエレラ　アルピナとは異なる菌種であるピチウム　インディオサムの場合のみである。
　してみれば、本件明細書には、本件の請求項に係る発明で特定するモルティエレラ　アルピナに属する菌を培養することにより、少なくとも３０％のトリグリセリド形アラキドン酸を含む真菌油を得ることについての具体的な開示はなく、当業者が本件請求項に係る発明を容易に実施することができないというべきである。
　そうすると、本件の請求項に係る発明の特許は、特許法３６条４項の規定に違反してされたものである。
　
Ｂ．特許法２９条２項の規定違反について
(1)刊行物の記載内容
　当審において取消理由に引用した刊行物２（「第一工業株式会社社報」第４６６号、第２〜７頁、平成２年７月）には、「微生物によってつくられる高度不飽和脂肪酸」という表題の下に、（ａ）「乳児、老人では生合成系の不飽和化反応を司るΔ６およびΔ５不飽和化酵素の活性が低下するため、これらのＰＵＦＡは不足しがちになる。・・・（略）・・・従って、これらのＰＵＦＡあるいはこれを含有する油脂を医薬品、機能性食品、飼料として利用するための研究開発も世界的規模で進められている。」（２頁右欄）、（ｂ）「２．２．　アラキドン酸の生産　　　アラキドン酸を菌体の構成脂肪酸として含む微生物が存在することは知られていたが、生産性を含めて微生物による生産の可能性が示されたのは、土壌から新たに分離されたＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ属Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ亜属の糸状菌によるものが最初である。筆者らは、これら分離菌の中で、アラキドン酸生産能が高く、菌株の安定性など工業化に適した株としてＭ．ａｌｐｉｎａ　１Ｓ‐４株を選んで、生産条件を検討した。・・・（略）・・・２〜４％濃度を保ちながら培養すると旺盛な生育を示し、４日間の培養で３〜４ｇ／ｌのアラキドン酸生産が可能となった（菌体収量３０ｇ／ｌ；脂質含量４２０ｍｇ／ｇ乾燥菌体；アラキドン酸含量１４７ｍｇ／ｇ乾燥菌体）。γ−リノレン酸の場合と比較すると、菌体収量が低いがアラキドン酸含量が高いことが特徴的であり、菌体中の全脂肪酸中のアラキドン酸含量は３０〜７０％に達する。（図３、表３）培養後の菌体は熱乾燥することで、長期間、酸化に対して安定であり、図４の工程によりアラキドン酸含量の高い微生物油脂の大量生産が可能となっている。」（４頁右欄〜５頁左欄）、（ｃ）「図３　Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎａ　１Ｓ‐４の菌糸中に蓄積した油滴　　油はほとんどがトリグリセリドとして蓄積され、菌体の油脂含量は４０〜５０％に達する。そのうちの３０〜７０％（脂肪酸組成比）がアラキドン酸で占められる。」
（５頁左欄）、（ｄ）「２．３．ジホモ−γ−リノレン酸の生産　　Ｍ．ａｌｐｉｎａ　１Ｓ‐４でアラキドン酸を生産させると０．６ｇ／ｌ程度のジホモ−γ−リノレン酸が副生する。」（５頁右欄）、（ｅ）「Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ属のカビは動物と同じくα−リノレン酸を自ら生成する能力がなく、従ってグルコースからｎ‐３経路を経てＥＰＡを生成することはできない。筆者らは、（1）ｎ‐６経路を経て生成したジホモ−γ−リノレン酸あるいはアラキドン酸をＥＰＡに変換できないか、（2）ｎ‐３経路の適当な前駆体ＰＵＦＡを培地に加えてこれをＥＰＡに変換できないか、について検討した。（1）については、培養温度を低温（６〜２０℃）にすることでＥＰＡが新たに生成蓄積することを発見した。・・・（略）・・・培養温度が低くなる程菌体中の総脂肪酸中に占めるＥＰＡの割合が高くなること（Ｍ．ａｌｐｉｎａ　１Ｓ‐４では６℃で約１５％）も判明した。・・・（略）・・・Ｍ．ａｌｐｉｎａ　１Ｓ‐４の場合、生成したＥＰＡの約７０％はリン脂質の構成脂肪酸として存在した。これは、２８℃で生成するアラキドン酸の大部分がトリグリセリド中に含まれることと対照的であり、」（６頁左欄、右欄）と記載され、さらにその表３には、（ｆ）Ｍ．ａｌｐｉｎａ　１Ｓ‐４が生産する油脂の脂肪酸組成の内、アラキドン酸の比率は、タイプ１の場合２９．８％であり、タイプ２の場合６７．８％であることが示されており、又図４には、（ｇ）菌糸中の油脂をヘキサンで抽出してアラキドン酸を含む油を製造することが示されている。
　同じく引用した刊行物３（「ビタミン」第６２巻、８号（８月）１９８８、第４３９〜４４５頁）には、(ｈ)「７．高度不飽和脂肪酸：Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎａ　を、ゴマ油、あるいはアマニ油の添加培地で生育せしめ、ジホモ−γ−リノレイン酸、アラキドン酸、さらにエイコサペンタエン酸を得る。」（４４０頁右欄下から２２〜１８行）、(ｉ)「これらＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ亜属糸状菌の多くは、菌体の脂質含量が高く、高度不飽和脂肪酸生産菌として優れた性質を有していた。特に土壌から分離したＭ．ａｌｐｉｎａやＭ．ｅｌｏｎｇａｔａのアラキドン酸生産能が高く、グルコースを主炭素源として培養すると１ｇ／ｌ程度のアラキドン酸を生産し、菌体内全脂肪酸に占めるアラキドン酸含量も２０〜５０％に達した。・・・（略）・・・アラキドン酸の生産量は３〜４ｇ／ｌにも達し、得られた菌体の脂質含量は、約５００ｍｇ／ｇ乾燥菌体、また脂質の全脂肪酸中のアラキドン酸量は約６０％に達した。また菌体中では、アラキドン酸は約６０％が中性脂質の構成分として、約３０％がリン脂質の構成成分として存在することも明らかになっている。」（４４４頁左欄１２〜２７行）、及び(ｊ)「以上、アラキドン酸、ジホモ−γ−リノレン酸及びＥＰＡの微生物による生産について述べた。これらの高度不飽和脂肪酸はプロスタグランジンの前駆体としても注目され、医薬品や食品添加物としての用途開発が進められている。」（４４５頁左欄１６〜２０行）と記載されている。
　同じく引用した刊行物５（特開平１−１９６２５５号公報）には、「高度不飽和脂肪酸成分添加人工乳」に関し、(ｋ)「１．エイコサジエン酸、ビスホモ−γ−リノレン酸、アラキドン酸もしくはエイコサペンタエン酸、前記脂肪酸のエステル、前記脂肪酸を含有する油脂、前記油脂の加水分解物、又は前記油脂分解物のエステル化物をそれぞれ単独で又は混合して、又は、さらにそれらにγ−リノレン酸、該脂肪酸のエステル該脂肪酸を含有する油脂、該油脂の加水分解物、又は該油脂分解物のエステル化物を加えて、添加した人工乳。」（特許請求の範囲の項）、(ｌ)「本発明は粉末ミルク又は液体ミルク等の人工乳中に欠けている又は不足している微量脂肪酸成分を強化した人工乳に関する。」（１頁左下欄下から３〜１行）、(ｍ)「従って天然母乳と人工乳を比較した場合、人工乳にはγ−リノレン酸、エイコサジエン酸、ビスホモγ−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸等の微量脂肪酸が不足している。従って本発明においては、粉子等、人工乳の製造行程において又は製品に上記のごとき脂肪酸を添加することにより、天然母乳に近い微量脂肪酸組成を有する人工乳を得る。」（２頁左下欄下から２行〜同頁右下欄６行）、（ｎ）「乾燥製品に対してγ−リノレン酸０．０２〜０．０３％、エイコサジエン酸０．０５〜０．０８％、ビスホモγ−リノレン酸０．０６〜０．０８％、アラキドン酸０．２〜０．３％、エイコサペンタエン酸０．０１〜０．０３％添加する。」（２頁右下欄下から５行〜１行）
、（ｏ）「上記の不飽和脂肪酸の高い生産能を有するモルティエレラ属微生物を使用して、発酵法、酵素法等により添加物を調製することができる。例えば、モルティエレラ属微生物を培養し、その培養菌体を、所望により乾燥した後、有機溶剤で抽出し、この抽出物を蒸発乾固することにより得られる脂質は前記の不飽和脂肪酸を高比率で含んでおり、この脂質を本発明の原料脂質として使用することができる。」（３頁右上欄２〜１０行）と記載されているとともに、ヒト母乳及び２種類の市販粉ミルクの脂肪酸組成を示す表には、(ｐ)母乳のアラキドン酸量が０．３ｍｇ／ｍｌであるのに対して、市販粉ミルクのアラキドン酸が痕跡（ｔｒ）程度であり、他方、母乳中のエイコサペンタエン酸が痕跡（ｔｒ）であるのに対して、粉乳中のエイコサペンタエン酸量が痕跡（ｔｒ）又は０であることが示されている。
　
２．対比・判断
（本件発明１について）
　上記刊行物２の(ａ)ないし(ｇ)の記載からみて、刊行物２には、モルティエレラ アルピナ　１Ｓ‐４を培養するとアラキドン酸、ジホモ−γ−リノレイン酸、及びエイコサペンタエン酸を含む油脂が得られ、このうちアラキドン酸含量は菌体内全脂肪酸の２０〜７０％に達すること、アラキドン酸はその大部分がトリグリセリドとして菌体中に蓄積されること、培養後のモルティエレラ アルピナ　１Ｓ‐４の菌糸をヘキサンで抽出してアラキドン酸含有油を製造すること、そしてこれらを未修飾で使用する（更に加水分解等の処理に付すことについて言及がない）こと、及びＰＵＦＡ（高度不飽和脂肪酸）あるいはこれを含有する油脂を医薬品、機能性食品、飼料として利用するための研究開発が世界的規模で進められていることが記載されているものと認める。
　本件発明１と刊行物２に記載された発明とを対比すると、両者は、少なくとも３０％のトリグリセライド形アラキドン酸（ＡＲＡ）を含むＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎａ由来の真菌油の利用技術である点で共通し、（イ）前者は、該真菌油を配合して調合乳組成物とするのに対して、後者には、該真菌油を調合乳組成物に利用することについて言及する記載がない点、（ロ）前者は、真菌油がアラキドン酸（ＡＲＡ）の量の１／５を超えない量のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を含むのに対して、後者では、真菌油がアラキドン酸含量に対してどの程度の割合でエイコサペンタエン酸を含むのか不明である点で、両者は相違する。
　上記相違点について検討する。
　相違点（イ）について
　刊行物５にも記載されているように粉末ミルク等の人工乳に欠けている又は不足しているアラキドン酸等の微量脂肪酸成分を人工乳に添加することによって、天然母乳に近い微量脂肪酸組成を有する人工乳を製造するという技術思想は、本件特許の出願時当業者において周知であったと認められ、加えて、アラキドン酸等の微量脂肪酸成分を人工乳に添加して天然母乳に近い微量脂肪酸組成を有する人工乳を製造する場合、モルティエレラ属微生物が産生する不飽和脂肪酸を高比率で含む脂質を原料脂質として使用することが刊行物５に記載されていることからすれば、天然母乳に近い微量脂肪酸組成を有する人工乳を得る目的で、刊行物２に記載の少なくとも３０％のトリグリセライド形アラキドン酸（ＡＲＡ）を含むＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎａ（モルティエレラ　アルビナ）１Ｓ‐４株由来の未修飾の真菌油を市販の調合乳等に配合して調合乳組成物を製造することは、当業者において容易に想到し得ることである。
　相違点（ロ）について　
　本件明細書の段落００１３に記載の「本発明の利点にはその製造しやすさ、高純度および検出できる量のＥＰＡの不存在が含まれる。」、段落００１４に記載の「本明細書において、『実質的に含まない』なる用語はＥＰＡが油中のＡＲＡ量の約１／５以下で存在することを意味する。」、段落００１６に記載の「有意な量のＥＰＡを生成しない種を使用するのが好ましい。このような好ましい種には・・・・・モルティエレラ　アルビナが含まれる。」等を参酌すると、本件発明１で特定する「真菌油がアラキドン酸（ＡＲＡ）の量の１／５を超えない量のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を含む」は、真菌油がエイコサペンタエン酸を実質的に含まない態様を包含していることは明らかである。
　そこで相違点（ロ）について検討するに、エイコサペンタエン酸は母乳中に痕跡（ｔｒ）しか含まれていないこと、及び人工乳中のエイコサペンタエン酸量は痕跡（ｔｒ）又は０であることが刊行物５に記載されており、かかる記載から、天然母乳に近い微量脂肪酸組成を有する人工乳を製造するにあたっては、エイコサペンタエン酸は添加する必要のない脂肪酸成分であるか、あるいは添加するとしても上記「痕跡」に相当する量でよいことは、当業者なら直ちに理解できることである。
　そして、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎａ（モルティエレラ　アルビナ）１Ｓ‐４株をある特定の条件下、具体的にはグルコース単独培地でかつ高温（２０〜３０℃）の条件下で培養することにより、アラキドン酸を高比率で含むがエイコサペンタエン酸を実質的に含まない真菌油を製造できることが刊行物２に記載されていることから、刊行物２に記載の少なくとも３０％のトリグリセライド形アラキドン酸（ＡＲＡ）を含むＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎａ（モルティエレラ　アルビナ）１Ｓ‐４株由来の未修飾の真菌油を配合して調合乳組成物を製造するにあたり、使用する真菌油をエイコサペンタエン酸を実質的に含まないものとすることは当業者において容易になし得ることである。
　また、本件発明１は、請求項１に記載の構成を採用したことにより、当業者の予測を越える格別の効果を奏するものではない。
　したがって、本件発明１は、刊行物２及び刊行物５に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたといえる。
　
（本件発明２及び３について）
　本件発明２で特定する「真菌油がＡＲＡの量の１／１０を超えない量のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を含む」は、真菌油がエイコサペンタエン酸を実質的に含まない態様を包含することから、本件発明２及び３は、本件発明１についての判断と同じ理由により、刊行物２及び刊行物５に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたといえる。
　
（本件発明４及び５について）
　先にも記載したとおり、刊行物５には、粉末ミルク等の人工乳に欠けている又は不足しているアラキドン酸等の微量脂肪酸成分を人工乳に添加することによって、天然母乳に近い微量脂肪酸組成を有する人工乳を製造するという技術思想が開示され、かつヒト母乳に実際に含まれているアラキドン酸量が数値でもって具体的に記載されていることから、かかる記載に基づいて、ヒトの母乳中のＡＲＡ量に匹敵するＡＲＡを含む調合乳とすることは、当業者が容易になし得ることであり、本件発明４は、本件発明１についての判断と同じ理由により、刊行物２及び刊行物５に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたといえる。
　また、本件発明５は、本件発明４の「調合乳組成物」という「もの」の発明を「方法」の発明で表現したものであるから、本件発明５は、本件発明４についての判断と同じ理由により、刊行物２及び刊行物５に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたといえる。
　
（本件発明６について）
　本件発明６と刊行物２に記載された発明とを対比するに、両者は、少なくとも３０％のトリグリセライド形ＡＲＡを含む、Ｍ．ａｌｐｉｎａ由来の真菌油の利用技術である点で共通し、前者は、該真菌油の用途を「該真菌油がヒトに付加的なＡＲＡを提供するのに有効な量存在する医薬カプセル」に限定しているのに対して、後者には、該真菌油を「該真菌油がヒトに付加的なＡＲＡを提供するのに有効な量存在する医薬カプセル」として使用することについて記載されていない点で、両者は相違する。
　上記相違点について検討する。
　微生物によってつくられる高度不飽和脂肪酸を含有する油脂を医薬品として利用するための研究開発が進められている旨刊行物２に記載されていること、及び微生物が生産するアラキドン酸、ジホモ−γ−リノレン酸及びＥＰＡの高度不飽和脂肪酸はプロスタグランジンの前駆体としても注目され、医薬品としての用途開発が進められている旨刊行物３に記載されていることからすれば、刊行物２に記載の少なくとも３０％のトリグリセライド形ＡＲＡを含むＭ．ａｌｐｉｎａ由来の真菌油を医薬品としての用途に利用することは当業者ならば容易に想到し得ることであり、その際「医薬品」の剤形を、医薬としては極めて普通の形態である「カプセル」にすることは当業者にとって格別困難なことではない。
　そうすると、本件発明６は、刊行物２、３及び刊行物５に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたといえる。
　
（本件発明７及び８について）
　「真菌油が実質的にＥＰＡを含まない」ことに関しては、本件発明１における判断と同じ理由、及び「医薬カプセル」については、本件発明６における判断と同じ理由が、本件発明８についても当てはまるので、結局本件発明８は、刊行物２、３及び刊行物５に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたといえる。
　また、本件発明７は、「真菌油が実質的にＥＰＡを含まない」場合も包含するのであるから、本件発明８と同様に、刊行物２、３及び刊行物５に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたといえる。
　
（本件発明９について）
　胎児や乳児の栄養要求を考慮して妊婦や授乳期の母親に栄養補給を行う必要があることは当業者の技術常識であることから、請求項６に記載の医薬カプセルの投与対象を妊婦または授乳期の母親とすることは、当業者において何ら困難なことではない。
　本件発明９は、刊行物２、３及び刊行物５に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたといえる。
　
IV．むすび
　以上のとおりであるから、本件請求項１ないし９に係る特許は、特許法２９条２項の規定に違反してされたものであるから同法１１３条２号の規定に該当する、或いは、同法３６条４項の規定に違反してされたものであるから同法１１３条４号の規定に該当するから取り消されるべきものである。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１５年６月１０日（２００３．６．１０）
【訂正の要旨】
審決（決定）の【理由】欄参照。
（５４）【発明の名称】
アラキドン酸を含む真菌油
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項１】　少なくとも３０％のトリグリセリド形アラキドン酸（ＡＲＡ）およびＡＲＡの量の１／５を超えない量のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を含む、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎａ（モルティエレラ　アルピナ）由来の未修飾の真菌油（ｆｕｎｇａｌｏｉｌ）を含む、調合乳組成物。
　【請求項２】　真菌油がＡＲＡの量の１／１０を超えない量のＥＰＡを含む、請求項１記載の調合乳組成物。
　【請求項３】　真菌油が実質的にＥＰＡを含まない、請求項１または２記載の調合乳組成物。
　【請求項４】　ヒトの母乳中のＡＲＡ量に匹敵するＡＲＡを含む調合乳である、請求項１〜３のいずれかに記載の調合乳組成物。
　【請求項５】　少なくとも３０％のトリグリセリド形ＡＲＡおよびＡＲＡの量の１／５を超えない量のＥＰＡを含む、Ｍ．ａｌｐｉｎａ由来の真菌油を、ヒトの母乳中のＡＲＡ量に相当するＡＲＡ含有量を提供するのに十分な量で調合乳に加えることからなる、ＡＲＡ含有トリグリセリドを調合乳に提供する方法。
　【請求項６】　少なくとも３０％のトリグリセリド形ＡＲＡを含む、Ｍ．ａｌｐｉｎａ由来の真菌油を含む、ヒトに付加的なＡＲＡを提供する医薬カプセルであって、該真菌油がヒトに付加的なＡＲＡを提供するのに有効な量存在する、医薬カプセル。
　【請求項７】　真菌油がＡＲＡの量の１／１０を超えない量のＥＰＡを含む、請求項６記載の医薬カプセル。
　【請求項８】　真菌油が実質的にＥＰＡを含まない、請求項６または７記載の医薬カプセル。
　【請求項９】　ヒトが妊婦または授乳期の母親である、請求項６〜８のいずれかに記載の医薬カプセル。
【発明の詳細な説明】
　【０００１】
　【発明の属する技術分野】
　本発明は、アラキドン酸の製造法、アラキドン酸を含有する組成物およびその使用に関する。
　【０００２】
　【従来の技術】
　アラキドン酸（ＡＲＡ）はオメガ−６群の長鎖多不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）（５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸、２０：４）である。ＡＲＡはヒトの体内に最も豊富に存在するＣ２０ＰＵＦＡである。それは特に器官、筋肉および血液組織に存在し、主として血液、肝臓、筋肉および他の主要な器官系中のリン脂質と関連づけられる構造脂質として主要な役割を果たしている。その構造脂質としての主要な役割の他に、ＡＲＡはまたプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、ブロスタサイクリンＩ２（ＰＧＩ２）、トロンボキサンＡ２（ＴｘＡ２）、ロイコトリエンＢ４（ＬＴＢ４）およびＣ４（ＬＴＣ４）のような幾つかの循環エイコセノイドの直接プレカーサーである。これらのエイコセノイドはリポタンバク質代謝、血液レオロジー、血管の調子、白血球機能および血小板活性化において調節作用を示す。
　【０００３】
　ヒトの代謝において重要であるにも拘わらず、ＡＲＡはヒトの体内で新たに合成できない。ＡＲＡは必須脂肪酸のリノレン酸（ＬＯＡ）の延長および不飽和化により合成される。このプロセスはヒトの体内に低レベルで存在する酵素である酵素△６−デサチュラーゼの存在を必要とする〔Ｂｕｒｒｅら、Ｌｉｐｉｄｓ，２５，３５４〜３５６（１９９０年）〕。したがって、日々の食事においてＡＲＡを摂取する必要があり、また幼児期のような体が非常に早く成長する時期には特に重要である。
　【０００４】
　生まれて１年の間に幼児は体重が２倍または３倍になる。その結果、高レベルの食事によるＡＲＡが必要とされる。この増加した需要を満たすべく、ヒトの母乳は高レベルのＡＲＡを含有する〔Ｓａｎｄｅｒｓら、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．，３１，８０５〜８１３（１９７８年）〕。ＡＲＡは母乳に最も多く存在するＣ２０ＰＵＦＡである。赤ん坊を母乳で育てる、特に菜食主義の母親の多くは補助的に食事からＡＲＡを摂取している。しかしながら、多くの母親は赤ん坊を母乳で育てないで、すなわち幼児の急速な成長の全期間の間母乳を与えないで代わりに調合乳（ｉｎｆａｎｔ　ｆｏｒｍｕｌａ）を利用している。
　【０００５】
　本発明者らに知られている市販の調合乳でＡＲＡを含有するものはない。Ｃｌａｎｄｉｎｉｎらの米国特許第４，６７０，２８５号（参考文献として本明細書に組込まれる）にはＡＲＡを含む脂肪酸についての幼児の必要量が開示されている。Ｃｌａｎｄｉｎｉｎらはこれらの脂肪酸を与えるために調合乳の脂肪成分として卵黄、魚油または赤血球リン脂質および植物油のブレンドを提案している。しかしながら、魚油は多量のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を含有する。ＥＰＡは幼児の体内でのＡＲＡ合成を抑制することが知られている〔Ｃａｒｌｓｏｎら、ＩＮＦＯＲＭ，１，３０６（１９９０年）〕。したがって、追加的なＥＰＡを与えることなくＡＲＡを与えることが望ましい。さらに、卵黄は比較的低濃度のＡＲＡを含有するため、Ｃｌａｎｄｉｎｉｎらの混合物は経済的に実行可能ではない。
　【０００６】
　ＡＲＡは植物油でなく動物油に存在するため、その商業規模での製造は望ましいがあてにならない目的となっている。Ｓｈｉｎｍｅｎらは、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，３１，１１〜１６（１９８９年）で従来の撹拌されたタンク発酵を利用する単離した菌類、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎａ（モルティエレラアルピナ）によるＡＲＡの製造を報告している（Ｓｈｉｎｍｅｎらの日本特許第１，２１５，２４５号参照）。培養後、有機体は採取、乾燥され、これらの脂質は真菌バイオマス（ｆｕｎｇａｌ　ｂｉｏｍａｓｓ）から有機溶媒で抽出され、そして脂質は化学的に（共有結合的に）変性される。例えば、脂質混合物は補助食として使用する前に加水分解またはエチルエステルに変換され、次いでシクロデキストリンと混合される。Ｓｈｉｎｍｅｎらは非変性微生物油の投与を開示または示唆していない。
　【０００７】
　紅藻類のＰｒｏｐｈｙｒｉｄｉｕｍ　ｃｒｕｅｎｔｕｍは他の中で大量に成育することができ、４０％までのＡＲＡを含有する脂質を有する〔Ａｈｅｒｎら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．２５，１０５７〜１０７０（１９８３年）〕。不運にも、ＡＲＡは主に母乳に存在しない複合極性脂質のガラクト脂質と関連づけられる。したがって、生成する使用可能なＡＲＡの総量はバイオマスの１％フラクションであり、またＡＲＡの形態はさらに変性することなく調合乳への添加剤として使用するのに適していない。
　【０００８】
　Ｓｕｚｕｋｉらの米国特許第４，８７０，０１１号にはモルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属の菌からＴ−リノレン酸のような脂質を得るための方法が開示されている。ｒ−リノレン酸は菌の含まれた脂質混合物から精製される。
　【０００９】
　ＭｉｌｕｐａのＤＥ３６０３０００Ａ１には高級多不飽和酸脂肪混合物および調合乳の脂肪成分としてのその使用が開示されている。脂肪混合物はＡＲＡおよびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）をそれぞれ２．５：１の比で多量に含有し、またコレステロールも多量に含有する。脂肪酸源の例としてはある種のマクロ藻類、魚油、牛および豚の臓器脂肪または高精製卵黄油が挙げられる。ＤＨＡおよびＡＲＡの源は褐藻類および紅藻類のマクロ藻類であると言われている。油源として微生物の何れかを使用することについては示唆されていない。藻および魚の油もまた典型的には、ＡＲＡの生体内での合成を抑制するＥＰＡを含有する。さらに、高精製卵黄油は経済的なＡＲＡ源ではない。その上、従来の調合乳に補足するための、ＡＲＡが濃縮された添加剤については開示されていない。
　【００１０】
　【発明が解決しようとする課題】
　したがって、好ましくはＥＰＡの生産を伴うことのない、経済的で商業的に実行可能なＡＲＡの製造法が必要とされる。本発明の目的はこの必要性を満たすことである。
　【００１１】
　さらに、本発明の目的は、調合乳中のＡＲＡ量がヒトの母乳中の量とほぼ等しくなるように調合乳に使用される添加剤およびその添加剤源を提供することである。
　【００１２】
　本発明の別の目的は腸内、腸管外または皮内生成物において使用されるＡＲＡ含有真菌油を提供することである。
　【００１３】
　【課題を解決するための手段】
　本発明はアラキドン酸を含有する真菌油（ＡＲＡＳＣＯ）の製造および使用、並びにこのような油を含有する組成物に関する。該油は単細胞油と呼ぶことができる。菌は油生成条件下で培養され、採取され、次いで油が抽出され、回収される。油はさらに変性することなく直接使用してＡＲＡを新生児、妊娠しているかまたは乳飲み子の母親、あるいはＡＲＡ不足による病状を示す人達のようなＡＲＡを必要とする人達に補給することができる。本発明の利点にはその製造のしやすさ、高純度および検出できる量のＥＰＡの不存在が含まれている。
　【００１４】
　本発明によれば、経済的なアラキドン酸（ＡＲＡ）源が得られる。１つの態様において、本発明は実質的にエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を含まずに、アラキドン酸を含有する真菌油（ＡＲＡＳＣＯ）の製造法に関する。本明細書において、「実質的に含まない」なる用語はＥＰＡが油中のＡＲＡ量の約１／５以下で存在することを意味する。この油、すなわち単細胞油は非変性の形態で投与することができる。本明細書において、「非変性」なる用語は脂肪酸の化学的性質または油それ自体が共有結合的に変化されていないことを意味する。したがって、例えば油の摂取後に転換できるＡＲＡＳＣＯまたはＡＲＡの一時的な変形は本発明の範囲内である。
　【００１５】
　【表１】
　【００１６】
　以前にその脂肪酸が特性決定された菌種の殆んどはＡＲＡを生成しないことがわかっている〔Ｗｅｅｔｅ，Ｊ．Ｄ．のＦｕｎｇａｌ　Ｌｉｐｉｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｎ．（１９７４年）〕。ＡＲＡを生成するこれらの種のうち、以前に特性決定されたすべてのピチウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ）種を含む多くはＡＲＡの他に有意な量のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を生成する。表１にＰ．ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ（ピチウムインシディオサム）の脂肪酸分布および他の菌種の脂肪酸分布を示す。予想外に、Ｐ．ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍはＥＰＡの生成を伴うことなくＡＲＡを生成することがわかった。魚油の場合と同様に、食事での補給においてＥＰＡのレベルが高いと、食事のリノレン酸（ＬＯＡ）からＡＲＡを生成する能力が抑制される。したがって、ＡＲＡおよびＥＰＡの両方を生成する菌種を本発明の方法において利用することができるが、有意な量のＥＰＡを生成しない種を使用するのが好ましい。このような好ましい種にはピチウムインシディオサムおよびモルティエレラアルピナが含まれる。これらの種は何れも商業的に入手することができ、またＲｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭａｒｙｌａｎｄのＡｍｅｎｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅにそれぞれ受入れ番号２８２５１および４２４３０で保管されている。この開示全体を通して、特に断りがなければピチウムインシディオサムは、代表的な菌種である。
　【００１７】
　本発明の態様が克服する重要な問題の１つは、食事の増大したレベルのＥＰＡの存在により生じる幼児の体内でのＡＲＡ生合成の抑制である。この問題はヒトの母乳に存在するものと実質的に同様のレベルで調合乳に使用されるＡＲＡを提供することにより解決される。典型的には、ヒトの母乳中のＡＲＡ：ＥＰＡの比は約２０：１である。本発明は特に、食事のＥＰＡの負作用を克服するのに充分な鼻のＡＲＡを与える微生物油を包含する。好ましくは、ＡＲＡを含有する油の使用は少なくとも約５：１のＡＲＡ：ＥＰＡ比をもたらす。より好ましくはその比は少なくとも約１０：１であり、最も好ましくは少なくとも約２０：１である。最終生成物中のＡＲＡ量がＥＰＡ量に関してより高いと、より望ましい結果が得られる。
　【００１８】
　本発明の方法において、菌はＡＲＡ含有油を生成するのに適した培養条件下で培養される。一般に菌培養技術は当業者に良く知られており、またこれらの技術は本発明の方法に応用することができる。例えば、接種量の菌の培養は振とうフラスコ中での液内培養により行うことができる。フラスコに増殖培地を入れ、菌糸体を接種し、そして往復振とう機上で約３〜４日間増殖する。
　【００１９】
　増殖培地の組成は変えることができるが、通常は炭素および窒素源を含有する。好ましい炭素源はグルコースであり、その量は増殖培地１ｌあたり約１０〜１００ｇのグルコースである。典型的には、約１５ｇ／ｌが振とうフラスコ培養に使用される。その量は最終培養物の所望の密度に応じて変えることができる。使用することのできる他の炭素源には糠みつ、高フルクトースコーンシロップ、加水分解されたスターチまたは発酵プロセスで使用される低コストの従来の炭素源が含まれる。さらに、ラクトースをピチウムインシディオサム用の炭素源として与えることができる。したがって、ラクトースを多量に含み、非常に低コストの炭素源である乳清透過物を基質として使用することができる。当業者は容易にこれらの炭素源の適当な量を決定することができる。通常、培養過程の間に追加の炭素を加える必要がある。これは有機体がたくさんの炭素を使用するので、それをすべてバッチ式で加えることは実行できないためである。
　【００２０】
　窒素は典型的に酵母抽出物の形態で、増殖培地１ｌあたり約２〜約１５ｇの抽出物の濃度で与えられる。好ましくは、１ｌあたり約４ｇが与えられる。ペプトン、トリプトン、コーン浸漬溶液などの他の窒素源を使用することができる。これらの源の添加量は当業者により容易に決定される。窒素はバッチ式で、すなわち培養前に一度ですべてを加えることができる。
　【００２１】
　典型的には約２５〜３０℃の適当な温度での３〜４日間の培養後、接種物として使用するのに十分な量の菌が従来の撹拌タンク発酵器（ＳＴＦ）の中で増殖された。このような発酵器は当業者に知られており、商業的に入手しうる。発酵はバッチ式、供給−バッチ式または連続発酵式で行うことができる。好ましくは、ＳＴＦはＲｕｓｈｔｏｎ型タービン羽根車を備えている。
　【００２２】
　発酵系は、所望の炭素および窒素源を加えることにより調製される。例えば、１．５ｌ発酵系は水道水１ｌあたり約５０ｇのグルコースおよび約１５ｇの酵母抽出物を混合することにより調製することができる。前記したように、他の炭素源、窒素源またはこれらの混合物を使用することができる。
　【００２３】
　養分溶液を含有する反応器は例えば接種する前に加熱することにより滅菌する必要がある。約３０℃に冷却した後、接種物を加え、培養を開始することができる。ガス交換は空気の散布により行われる。空気の散布速度は変えることができるが、好ましくは約０．５〜約４．ＯＶＶＭ（１分あたりの、発酵系容量あたりの空気容量）。好ましくは、溶解した酸素レベルは溶液の空気飽和値の約１０％〜約５０％に維持される。したがって、培養の間に散布速度の調整が必要である。撹拌することが望ましい。撹拌は羽根車により行われる。羽根先の撹拌スピードは好ましくは約５０ｃｍ／秒〜約５００ｃｍ／秒の範囲内に設定され、より好ましくは約１００〜２００ｃｍ／秒である。
　【００２４】
　一般に、接種量は変えることができる。典型的には、約２〜約１０容量％の接種物を使用できる。好ましくは、発酵系種装置の中で約５容量％の接種物を使用できる。
　【００２５】
　養分レベルは監視する必要がある。グルコースレベルが５ｇ／ｌ以下に低下した場合、追加のグルコースを加える必要がある。典型的な培養サイクルは１ｌあたり約１００ｇのグルコースおよび約１５ｇの酵母抽出物を使用する。菌による油の生成を促進するため、培養過程中に窒素を減らすことが望ましい。このことはモルティエレラアルピナを生成有機体として使用する場合、特にそうである。
　【００２６】
　時折り、培養物は過剰量の泡を生成する。場合によっては、当業者に知られているような消泡剤、例えばＭａｚｕ３１０（登録商標）を加えて泡を防止することができる。
　【００２７】
　培養温度は変えることができる。しかしながら、ＡＲＡおよびＥＰＡの両方を生成する菌はより高温で培養されると、ＥＰＡを少なく、またＡＲＡを多く生成する傾向がある。例えば、モルティエレラアルピナは１８℃以下で培養されると、ＥＰＡを生成し始める。したがって、ＡＲＡの優先的な生成をひき起こすようなレベルに温度を維持することが好ましい。好適な温度は典型的に約２５℃〜約３０℃である。
　【００２８】
　好ましくは、所望のバイオマス密度が達成されるまで培養は継続される。望ましいバイオマスは約２５ｇ／ｌの有機体である。このようなバイオマスは典型的に接種後４８〜７２時間内に達成される。この時点で、有機体は典型的に約５〜４０％の複合脂質、すなわちその約１０〜４０％がＡＲＡであり、採取することのできる油を含有する。
　【００２９】
　採取は例えばろ過、遠心分離またはスプレー乾燥のような適当な方法により行うことができる。より低コストであるために、ろ過が好ましい。
　【００３０】
　採取後、菌糸体ケーキ（ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｃａｋｅ）を抽出することができる。菌糸体ケーキは採取後に得られるバイオマスの収集に関連する。ケーキはゆるめたり、圧縮したりすることができ、またはぼろぼろにくずしたり、堅めることができる。場合によっては、抽出前に真空乾燥または凍結乾燥を行うことによって、ケーキの残留水を除去することができる。これを行う場合、ＡＲＡ含有油を抽出するのに非極性溶媒を使用することが好ましい。何れの非極性溶媒も好適であるが、ヘキサンが好ましい。
　【００３１】
　別法として、湿ったケーキ（典型的には約３０〜５０％の固形分を含有する）はぼろぼろにくずし、エタノールまたはイソプロピルアルコールのような極性溶媒を使用して直接、またはＣＯ２またはＮＯのような溶媒を用いた超臨界流動抽出により抽出することができる。好ましくは、ケーキは抽出前にぼろぼろにくずされる。有利には、本発明は超臨界流動抽出技術の経済的な使用を可能にする〔ＭｃＨｕｇｈら、Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ　Ｆｌｕｉｄ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ（１９８６年）〕。このような技術は当業者に知られており、例えばコーヒー豆からカフェインを取り除くのに応用されている。湿潤および乾燥抽出からの収量は同程度であるが、湿潤抽出は一般により経済的な方法である。
　【００３２】
　水性抽出の好ましい方法は菌糸体バイオマスを極性溶媒のイソプロピルアルコールと適当な反応容器中で混合することを含む。このような反応容器は知られている。バイオマス１部あたり３〜６部の溶媒を使用することが望ましい。最も好ましくは、脂質抽出物中のＡＲＡの酸化を防止するため、混合は窒素下で、または抗酸化剤の存在下で行われる。本明細書で使用される「脂質抽出物」、「油」、「脂質合成物」および「真菌油（ｆｕｎｇａｌ　ｏｉｌ）」なる用語は交換可能に使用される。
　【００３３】
　抽出後、混合物をろ過して脂質抽出物を含有する溶媒からバイオマスを取り除くことができる。この時点で、バイオマスを回収し、補助食として使用することができる。本明細書で使用される「補助食」なる用語は動物に与えることのできる穀類などのような典型的な食料と混合される食料または添加剤を意味する。
　【００３４】
　溶媒は脂質抽出物から分離され、また適当な収集器中に蒸発させることにより再使用のために回収することができ、そして「粗製油」と呼ばれるものが残留する。イソプロピルアルコールの溶媒としての使用は、蒸発により自然に生成した水／イソプロピルアルコール共沸混合物が除去されるため、粗製油から残留水を取り除く。
　【００３５】
　粗製油はさらに処理することなく使用できるが、またさらに精製することができる。植物性生成物からのレシチンの製造において使用される方法のような、当業者に知られている方法をこの追加の精製工程で使用することができる。このような方法はＡＲＡ含有脂質またはＡＲＡそれ自体を化学的にまたは共有結合的に変性しない。収量は変わるが、典型的には乾燥菌糸体１００ｇあたり約５ｇのＡＲＡ含有リン脂質である。モルティエレラアルピナの場合、乾燥菌糸体１００ｇあたり追加の１０〜３０ｇのトリグリセリドを得ることができる。精製油または精製生成物をヒトに投与するため使用することができる。これらは何れも本明細書で使用されるＡＲＡＳＣＯの定義に包含される。
　【００３６】
　最も好ましい本発明の目的は、調合乳中のＡＲＡの濃度がヒトの母乳中のＡＲＡの濃度とほぼ等しくなるように調合乳に使用される添加剤を提供することである。表２に、ＡＲＡＳＣＯと母乳、ＡＲＡＳＣＯの欠乏したおよびそれを含有する調合乳との脂肪酸組成の比較を示す。
　【００３７】
　【表２】
　【００３８】
　ＡＲＡＳＣＯにより補足される調合乳中に存在するＡＲＡの量はヒトの母乳中のＡＲＡ量にほぼ等しい。さらに、調合乳の総脂肪酸組成はＡＲＡＳＣＯの添加によって有意に変化されなかった。典型的には、調合乳１ｌあたり約５０〜約１０００ｍｇのＡＲＡＳＣＯを使用することができる。必要なＡＲＡＳＣＯの特定量はＡＲＡ含有量に依存する。これは油中の脂肪酸の約１０〜約５０％と変えることができる。しかしながら、典型的にはＡＲＡ含有量は約３０％である。ＡＲＡ含有量が約３０％である場合、特に好ましい補足量は調合乳１ｌ当たり約６００〜７００ｍｇのＡＲＡＳＣＯである。このような量は５０部の調合乳の油に対してほんの一部のＡＲＡＳＣＯでＳｉｍｉｌａｃ（登録商標；Ｒｏｓｓ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）のような調合乳の前から存在する脂肪成分を希釈する。好ましくは、ＡＲＡＳＣＯは実質的にＥＰＡを含まない。
　【００３９】
　ピチウムインシディオサムが上記の方法において使用される場合、抽出されるＡＲＡ含有油は主としてリン脂質である。モルティエレラアルピナが本法において使用される場合、ＡＲＡ含有油は主としてトリグリセリドである。何れの形態のＡＲＡＳＣＯも調合乳への添加剤として有用である。前者は調合乳にＡＲＡだけでなく乳化剤、すなわち一般に市販の調合乳に加えられるホスファチジルコリンもまた与える。モルティエレラアルピナからの油はより経済的に生成すると考えられる。
　【００４０】
　本発明のＡＲＡ含有油は調合乳用添加剤としての使用の他に多くの用途を有する。当業者に知られているように、ＡＲＡ欠乏を伴う多くの病状、例えば消耗症〔Ｖａｊｒｅｓｗａｒｉら、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ３９，７７９〜７８２（１９９０年）〕またはアトピー性疾患〔Ｍｅｌｎｉｋ，Ｂ．Ｍｏｎａｔｓｓｃｈｒ．Ｋｉｎｄｅｒｈｅｉｌｔａ，１３８，１６２〜１６６（１９９０年）〕がある。本発明の一態様において、これらの症状は薬学的に有効量の本発明の油を投与することにより治療される。油は健康を管理する人の選択に応じて経腸的に、局所的にまたは非経口的に投与することができる。
　【００４１】
　当業者に知られているようなカプセル封入は経腸的投与の有効な方法である。真菌油を含有するカプセルはＡＲＡの食事での補給を必要とするか、または望んでいる人達に投与することができる。このような方法は妊娠している女性、または乳飲み子の母親にＡＲＡを投与するのに特に有効である。
　【００４２】
　病状に伴うＡＲＡ欠乏を克服するためにＡＲＡＳＣＯが投与される場合、薬学的に有効量を投与する必要がある。この量は当業者によりさらに実験することなく決定されうる。
　【００４３】
　本発明の別の態様はＡＲＡＳＣＯを含有する化粧品用組成物を包含する。化粧品用組成物とは化粧品として適用される化合物を意味する。このような組成物の好ましい例はしわ用クリーム（ｗｒｉｎｋｌｅ　ｃｒｅａｍ）である。このような化粧品用組成物は皮膚の状態を維持するのを助けるための、ＡＲＡを皮膚に局所的に塗布する有効な手段を提供する。
　【００４４】
　本発明を一般的に記載したが、次の非限定的な実施例を用いて本発明をさらに詳しく説明する。
　【００４５】
　【実施例】
〔実施例１〕ピチウムインシディオサム脂質の製造および調合乳への添加
８０ｌ（総容積）の発酵器の中で、５１ｌの水道水、１．２ｋｇのグルコース、２４０ｇの酵母抽出物および１５ｍｌのＭａｚｕ２１０Ｓ（登録商標）消泡剤を混合した。発酵器を１２１℃で４５分間滅菌した。滅菌工程中に、さらに５ｌの凝縮水を加えた。ｐＨを６．２に調整し、次いで約１ｌのピチウムインシディオサム（ＡＴＣＣ＃２８２５１）の接種物（細胞密度５〜１０ｇ／ｌ）を加えた。撹拌速度を１２５ＲＰＭ（羽根先のスピード２５０ｃｍ／秒）に調整し、そして通風速度を１ＳＣＭＦ（標準立方フィート／分）に設定した。操作開始後２４時間に、通風速度を３ＳＣＦＭまで増加させた。２８時間に、さらに２ｌの５０％グルコースシロッブ（１ｋｇグルコース）を加えた。５０時間に発酵器から採取し、湿潤重量で１ｌあたり約２．２ｋｇ（乾燥重量で約１５ｇ）を収量した。採取したバイオマスを凍結乾燥する前に吸引ろ過により絞り出して高い固形分のケーキ（５０％固形分）とした。乾燥したバイオマスを乳鉢および乳棒を用いて粉砕し、そして２時間連続撹拌しながら室温で乾燥バイオマス２００ｇあたり１ｌのヘキサンを用いて抽出した。次に、混合物をろ過し、ろ液を蒸発させて乾燥バイオマス１００ｇをたり約５〜６ｇの粗製油を得た。バイオマスを１時間室温で乾燥バイオマス２０ｇあたり１ｌのエタノールを用いて再び抽出し、ろ過し、そして溶媒を蒸発させて乾燥バイオマス１００ｇあたり追加の２２ｇの粗製油を得た。第２のフラクションは主としてリン脂質であるが、第１のフラクションはリン脂質およびトリグリセリドの混合物を含んでいた。
　【００４６】
　合一したフラクションは約３０〜３５％のアラキドン酸を含有し、ＥＰＡが検出されない油を生成した。この油を市販の調合乳製品Ｓｉｍｉｌａｃ（登録商標；ＲｏｓｓＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）に調製溶媒１ｌあたり６００ｍｇの補足量で滴加した。
　【００４７】
〔実施例２〕モルティエレラアルピナ脂質の製造および調合乳への添加
モルティエレラアルピナ（ＡＴＣＣ＃４２４３０）を１ｌの水道水および２０ｇのポテトデキストロース培地を含有する２ｌの振とうフラスコ中で増殖した。フラスコを一定のオービタル撹拌下に置き、７日間２５℃に保持した。遠心分離による採取後、バィオマスを凍結乾燥して約８ｇの脂質に富んだ菌糸体を得た。実施例１のようにしてヘキサンを用いて菌糸体を抽出して約２．４ｇの粗製油を得た。この油は約２３％のアラキドン酸を含有し、市販の調合乳Ｓｉｍｉｌａｃ（登録商標）に１０００ｍｇ／ｌの濃度で滴加した。