【手続補正書】
【提出日】平成27年10月5日(2015.10.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
精製、凍結乾燥及び再構成の後の第ＶＩＩＩ因子分子の安定性を増大させるための方法であって、第ＶＩＩＩ因子分子の製造全体を通して、本質的にＡ１ドメイン及びＡ２ドメインを含む第一のフラグメント並びに本質的にＡ３ドメイン、Ｃ１ドメイン及びＣ２ドメインを含む第二のフラグメントへの第ＶＩＩＩ因子分子のタンパク質分解切断を防止することを含む、上記方法。
【請求項２】
Ａｒｇ１６４８とＧｌｕ１６４９との間のタンパク質分解切断部位、及びＦＶＩＩＩ分子中に存在する場合はＡｒｇ１３１３とＡｌａ１３１４との間のタンパク質分解切断部位を不活化することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
不活化工程が、少なくともＡｒｇ１６４８を第ＶＩＩＩ因子配列から除去することを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
不活化工程が、少なくともＡｒｇ１３１３〜Ａｒｇ１６４８のアミノ酸配列を第ＶＩＩＩ因子配列から除去することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
第ＶＩＩＩ因子配列の位置７４１〜１６４７におけるアミノ酸から選択される第一のアミノ酸が、第ＶＩＩＩ因子配列の位置１６４９〜１６９０におけるアミノ酸から選択される第二のアミノ酸と融合され、それによりＡｒｇ１６４８とＧｌｕ１６４９との間のタンパク質分解切断部位、及びＦＶＩＩＩ分子中に存在する場合はＡｒｇ１３１３とＡｌａ１３１４との間のタンパク質分解切断部位が不活化される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、ここで
−  アミノ酸７４０がアミノ酸１６５０に融合され、それによりアミノ酸７４１〜１６４９が除去される；
−  アミノ酸７４０がアミノ酸１６９０に融合され、それによりアミノ酸７４１〜１６８９が除去される；
−  アミノ酸７４０がアミノ酸１６６９に融合され、それによりアミノ酸７４１〜１６６
８が除去される；
−  アミノ酸７４３がアミノ酸１６５０に融合され、それによりアミノ酸７４４〜１６４９が除去される；
−  アミノ酸７６４がアミノ酸１６５０に融合され、それによりアミノ酸７６５〜１６４９が除去される；
−  アミノ酸７６４がアミノ酸１６５３に融合され、それによりアミノ酸７６５〜１６５２が除去される；
−  アミノ酸７６４がアミノ酸１６５６に融合され、それによりアミノ酸７６５〜１６５５が除去される；
−  アミノ酸７４５がアミノ酸１６５０に融合され、それによりアミノ酸７４６〜１６４９が除去される；
−  アミノ酸７４５がアミノ酸１６５３に融合され、それによりアミノ酸７４６〜１６５２が除去される；
−  アミノ酸７４５がアミノ酸１６５６に融合され、それによりアミノ酸７４６〜１６５５が除去される；
−  アミノ酸７５７がアミノ酸１６５０に融合され、それによりアミノ酸７５８〜１６４９が除去される；
−  アミノ酸７５７がアミノ酸１６５３に融合され、それによりアミノ酸７５８〜１６５２が除去される；
−  アミノ酸７５７がアミノ酸１６５６に融合され、それによりアミノ酸７５８〜１６５５が除去される；
−  アミノ酸７９３がアミノ酸１６４９に融合され、それによりアミノ酸７９４〜１６４８が除去される；
−  アミノ酸７９３がアミノ酸１６９０に融合され、それによりアミノ酸７９４〜１６８９が除去される；
−  アミノ酸７４７がアミノ酸１６４９に融合され、それによりアミノ酸７４８〜１６４８が除去される；
−  アミノ酸７５１がアミノ酸１６４９に融合され、それによりアミノ酸７５２〜１６４８が除去される；
−  アミノ酸７７６がアミノ酸１６４９に融合され、それによりアミノ酸７７７〜１６４８が除去される；又は
−  アミノ酸７７０がアミノ酸１６６７に融合され、それによりアミノ酸７７１〜１６６６が除去される、
上記方法。      
【請求項７】
除去されたアミノ酸が、１〜５０アミノ酸長を有するペプチドスペーサーで置き換えられる、請求項３〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
不活化工程が、Ａｒｇ１６４８、及び第ＶＩＩＩ因子分子中に存在する場合はＡｒｇ１３１３を異なるアミノ酸と置き換えることを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
水溶液での再構成及び７日間２５℃での貯蔵後の、第ＶＩＩＩ因子分子の活性の損失が１５％未満である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
水溶液での再構成後の第ＶＩＩＩ因子のインビトロ安定性が、前記切断部位の不活化により増大する、請求項２〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
同じ用量及び同じ方法で投与された、ヒト野生型第ＶＩＩＩ因子と比較して、又はＡｓｎ７４５がＰｒｏ１６４０に融合されているＢドメイン欠失ヒト第ＶＩＩＩ因子分子と比較して、第ＶＩＩＩ因子が非静脈内注射後に改善されたバイオアベイラビリティを示し；
好ましくは非静脈内注射後のバイオアベイラビリティが、同じ用量及び同じ方法で投与された、ヒト野生型第ＶＩＩＩ因子と比較して、又はＡｓｎ７４５がＰｒｏ１６４０に融合されているＢドメイン欠失ヒト第ＶＩＩＩ因子分子と比較して、少なくとも２５％増加する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記非静脈内注射が、皮下、経皮又は筋内注射である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
（ｉ）第ＶＩＩＩ因子が、ヒト野生型第ＶＩＩＩ因子と比較して、静脈内投与後に改善された血漿半減期を示し；好ましくは該血漿半減期は、ヒト野生型第ＶＩＩＩ因子と比較して少なくとも４０％改善され、
又は
（ｉｉ）第ＶＩＩＩ因子が、血友病Ａマウスにおいて経時的にトロンビン生成アッセイにおいて決定された場合に、ヒト野生型第ＶＩＩＩ因子と比較して、トロンビンピークレベルが静脈内投与後に５０ｎＭを下回るまでにより長い期間を示し；好ましくは、この期間はヒト野生型第ＶＩＩＩ因子と比較して少なくとも１０時間延長され、
又は
（ｉｉｉ）第ＶＩＩＩ因子が、一段階ＦＶＩＩＩ：Ｃアッセイにより決定された場合に、ヒト血漿中で３７℃にて４日間インキュベートされた後のヒト野生型第ＶＩＩＩ因子と比較して、ヒト血漿中で３７℃にて４日間インキュベートされた後により高い活性を保持し；好ましくは、第ＶＩＩＩ因子の保持された活性は、ヒト血漿中で３７℃にて４日間インキュベートされた後のヒト野生型第ＶＩＩＩ因子の活性と比較して少なくとも１０％高い、
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
（ｉ）Ａｒｇ１６４８とＧｌｕ１６４９との間のタンパク質分解切断部位、及びＡｒｇ１３１３とＡｌａ１３１４との間のタンパク質分解切断部位が不活化されている改変第ＶＩＩＩ因子分子をコードする核酸を提供する工程、
（ｉｉ）宿主細胞を該核酸で形質転換する工程、
（ｉｉｉ）形質転換された宿主細胞を、改変第ＶＩＩＩ因子分子が発現されるような条件下で培養する工程、
（ｉｖ）宿主細胞から、又は細胞培養培地から、改変第ＶＩＩＩ因子分子を回収する工程
を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
出血性障害、好ましくは血友病Ａの処置又は予防における使用のための、単鎖第ＶＩＩＩ因子分子を含む医薬製剤であって、該処置又は予防が、
（ｉ）非静脈内投与、［ここで
該単鎖第ＶＩＩＩ因子分子のバイオアベイラビリティは、同じ用量及び同じ方法で投与される、ヒト野生型第ＶＩＩＩ因子と比較して、又はＡｓｎ７４５がＰｒｏ１６４０に融合されているＢドメイン欠失ヒト第ＶＩＩＩ因子分子と比較して、少なくとも２５％増加する］
又は
（ｉｉ）静脈内投与、［ここで
（ａ）該単鎖第ＶＩＩＩ因子分子の静脈内投与後の血漿半減期は、同じ用量及び同じ方法で投与されたヒト野生型第ＶＩＩＩ因子と比較して少なくとも４０％増加するか、
又は
（ｂ）単鎖第ＶＩＩＩ因子分子は、血友病Ａマウスにおいて経時的にトロンビン生成アッセイにおいて決定されたトロンビンピークレベルが、同じ用量及び同じ方法で投与されたヒト野生型第ＶＩＩＩ因子と比較して静脈内投与後に５０ｎＭを下回るまでに、少なくとも１０時間延長された期間を示す］
によるものである、上記医薬製剤。
【請求項１６】
出血性障害、好ましくは血友病Ａの処置又は予防における使用のための、単鎖第ＶＩＩＩ因子分子を含む医薬製剤であって、ここで単鎖第ＶＩＩＩ因子分子は、ヒト血漿中で３７℃にて４日間インキュベートされた後のヒト野生型第ＶＩＩＩ因子と比較して、ヒト血漿中で３７℃にて４日間インキュベートされた後に、一段階ＦＶＩＩＩ：Ｃアッセイにより決定された場合に少なくとも１０％高い活性を保持する、上記医薬製剤。
【請求項１７】
非静脈内投与による、出血性障害、好ましくは血友病Ａの処置又は予防における使用のための、単鎖第ＶＩＩＩ因子分子を含む医薬液剤であって、ここで同じ用量及び同じ方法で投与された、Ａｓｎ７４５がＰｒｏ１６４０に融合されているＢドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子分子の用量と比較して、血液における同じ止血活性を達成するために、該ＦＶＩＩＩ分子の用量は少なくとも２５％減少され得る、上記医薬液剤。