【手続補正書】
【提出日】平成27年11月4日(2015.11.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
3種類またはそれ以上の異なる単離されたペプチドを含む、単離ペプチドの混合物であって、各単離ペプチドが、L-K-K-D-D-N-I-A-A-A-X11-V-L-R-G-X16-X17-K-D-G-X21-F-A-X24-X25 (SEQ ID NO: 1)の配列を含み、ここで、X11はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X16はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X17はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X21はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにX25はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である、混合物。
【請求項２】
SEQ ID NO:1の配列によって規定される全ての可能なペプチドを含む、請求項1記載の混合物。
【請求項３】
SEQ ID NO:3〜146から選択される配列を有する異なる単離ペプチドを含む、請求項1記載の混合物。
【請求項４】
各単離ペプチドが、
天然VlsE配列または非VlsEボレリア（Borrelia）抗原である、付加的なN末端ペプチド配列；または
天然VlsE配列または非VlsEボレリア抗原である、付加的なC末端ペプチド配列
を含む、請求項1記載の混合物。
【請求項５】
付加的なN末端ペプチド配列が、n1-n2-S-P-n5-n6-P（SEQ ID NO:149）の配列もしくはその断片であり、ここで、n1はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、n2はEおよびDからなる群より選択されるアミノ酸であり、n5はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにn6はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であるか；または
付加的なC末端ペプチド配列が、
（i）V-c2-E-G-c5-Q-Q-E-G-A-Q-Q-P-S-C (SEQ ID NO: 150)の配列もしくはその断片であり、ここで、c2はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc5はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸であるか、または
（ii）A-V-c3-E-G-c6-Q-Q-E-G-A-Q-Q-P-S (SEQ ID NO: 151)の配列もしくはその断片であり、ここで、c3はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc6はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸である、
請求項4記載の混合物。
【請求項６】
各単離ペプチドがリガンドにコンジュゲートされているか、または1つもしくは複数の単離ペプチドがビオチン化されている、請求項1〜5のいずれか一項記載の混合物。
【請求項７】
1つもしくは複数の単離ペプチドが、
（i）ストレプトアビジン、重合ストレプトアビジン、アビジン、もしくはニュートラアビジン；
（ii）血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（KLH）、および免疫グロブリンFcドメインから選択される担体タンパク質；
（iii）デンドリマー；
（iv）多重抗原性ペプチド系（MAPS）の部分；または
（v）コロイド粒子、ナノ粒子、コロイドナノ粒子、コアシェル構造粒子、もしくは中空ナノスフェア
に、任意で末端のアミノ酸結合残基を介して、コンジュゲートされている、請求項1〜5のいずれか一項記載の混合物。
【請求項８】
各単離ペプチドが、固体支持体に、任意で末端のアミノ酸結合残基を介して、固定化されている、請求項1〜5のいずれか一項記載の混合物。
【請求項９】
固体支持体が、ビーズ、ラテラルフローイムノアッセイ装置中の流路、マイクロタイタープレート中のウェル、またはローター中の流路である、請求項8記載の混合物。
【請求項１０】
以下の工程を含む、試料中でボレリア抗原のエピトープに対する抗体を検出する方法：
試料を請求項1〜9のいずれか一項記載の単離ペプチドの混合物と接触させる工程；および
該混合物中の1つまたは複数の単離ペプチドを含む抗体-ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、ボレリア抗原のエピトープに対する抗体が該試料中に存在することを表す、工程。
【請求項１１】
ボレリア抗原が、ボレリア・ブルグドルフェリ（Borrelia burgdorferi）種、ボレリア・アフゼリ（Borrelia afzelli）種、またはボレリア・ガリニ（Borrelia garinii）種に由来する、請求項10記載の混合物。
【請求項１２】
以下の工程を含む、対象においてライム病を診断するための方法：
対象由来の試料を請求項1〜9のいずれか一項記載の単離ペプチドの混合物と接触させる工程；および
該混合物中の1つまたは複数の単離ペプチドを含む抗体-ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、対象がライム病を有することを表す、工程。
【請求項１３】
検出工程が、（i）ELISAアッセイを実施すること、（ii）ラテラルフローアッセイを行うこと、（iii）凝集アッセイを実施すること、（iv）ウエスタンブロット、スロットブロット、もしくはドットブロットを実施すること、または（v）分析用ローターを通じて試料を流すことを含む、請求項10〜12のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
試料が、（i）ヒト、イヌ、もしくはウマの対象、または（ii）体液に由来する、請求項10〜12のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
請求項1〜9のいずれか一項記載の単離ペプチドの混合物と、該混合物中の1つまたは複数の単離ペプチドのエピトープを認識する抗体に結合することができる標識試薬とを含む、キット。
【請求項１６】
標識試薬が、
（i）検出可能な標識にコンジュゲートされた抗ヒト、抗イヌ、もしくは抗ウマIgG／IgM抗体；または
（ii）検出可能な標識にコンジュゲートされたプロテインAおよび／もしくはプロテインG
である、請求項15記載のキット。
【請求項１７】
検出可能な標識がコロイド金粒子である、請求項16記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
[本発明1001]
2015504420.tif 000001
の配列を含む、単離されたペプチドであって、ここで、X11はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X16はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X17はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X21はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにX25はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である、単離されたペプチド。
[本発明1002]
付加的なN末端ペプチド配列を含む、単離されたペプチドであって、付加的なN末端ペプチド配列が天然VlsE配列または非VlsEボレリア（Borrelia）抗原である、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1003]
付加的なN末端ペプチド配列がn1-n2-S-P-n5-n6-P（SEQ ID NO:149）の配列またはその断片である、単離されたペプチドであって、ここで、n1はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、n2はEおよびDからなる群より選択されるアミノ酸であり、n5はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにn6はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である、本発明1002の単離されたペプチド。
[本発明1004]
付加的なC末端ペプチド配列を含む、単離されたペプチドであって、付加的なC末端ペプチド配列が天然VlsE配列または非VlsEボレリア抗原である、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1005]
付加的なC末端ペプチド配列が
2015504420.tif 000002
の配列またはその断片である、単離されたペプチドであって、ここで、c2はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc5はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸である、本発明1004の単離されたペプチド。
[本発明1006]
付加的なC末端ペプチド配列が
2015504420.tif 000003
の配列またはその断片である、単離されたペプチドであって、ここで、c3はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc6はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸である、本発明1004の単離されたペプチド。
[本発明1007]
少なくとも30個、35個、40個、または45個のアミノ酸を含む、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1008]
リガンドにコンジュゲートされている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1009]
ビオチン化されている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1010]
ストレプトアビジンにコンジュゲートされている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1011]
固体支持体に付着しているかまたは固定化されている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1012]
ビーズ、ラテラルフローイムノアッセイ装置中の流路、マイクロタイタープレート中のウェル、またはローター中の流路に付着しているかまたは固定化されている、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1013]
SEQ ID NO:3〜146からなる群より選択される配列を含む、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1014]
2015504420.tif 000004
の配列からの少なくとも30個、35個、40個、または45個の連続したアミノ酸を含む、単離されたペプチドであって、ここで、n1はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、n2はEおよびDからなる群より選択されるアミノ酸であり、n5はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、n6はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、X18はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X23はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X28はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X31はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、X32はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、c35はQおよびRからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにc38はVおよびAからなる群より選択されるアミノ酸である、本発明1001の単離されたペプチド。
[本発明1015]
第一の単離されたペプチドと第二の単離されたペプチドとを含む、単離されたペプチドの混合物であって、第一の単離されたペプチドが第二の単離されたペプチドとは異なり、第一および第二の単離されたペプチドが、
2015504420.tif 000005
の配列を各々含み、ここで、X11はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X16はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X17はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X21はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにX25はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である、混合物。
[本発明1016]
3種類またはそれ以上の異なる単離されたペプチドを含む、単離されたペプチドの混合物であって、単離されたペプチドの各々が、
2015504420.tif 000006
の配列を含み、ここで、X11はVおよびLからなる群より選択されるアミノ酸であり、X16はLおよびIからなる群より選択されるアミノ酸であり、X17はAおよびVからなる群より選択されるアミノ酸であり、X21はR、D、およびNからなる群より選択されるアミノ酸であり、X24はI、W、およびYからなる群より選択されるアミノ酸であり、ならびにX25はKおよびRからなる群より選択されるアミノ酸である、混合物。
[本発明1017]
単離されたペプチドの各々がリガンドにコンジュゲートされている、本発明1015または1016の混合物。
[本発明1018]
単離されたペプチドのうちの1種類または複数種類がビオチン化されている、本発明1015または1016の混合物。
[本発明1019]
単離されたペプチドのうちの1種類または複数種類がストレプトアビジンにコンジュゲートされている、本発明1015または1016の混合物。
[本発明1020]
単離されたペプチドの各々が固体支持体に固定化されている、本発明1015または1016の混合物。
[本発明1021]
以下の工程を含む、試料中の、ボレリア抗原のエピトープに対する抗体を検出するための方法：
試料を本発明1001の単離されたペプチドと接触させる工程；および
該単離されたペプチドを含む抗体-ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、ボレリア抗原のエピトープに対する抗体が該試料中に存在することを表す、工程。
[本発明1022]
ボレリア抗原が、ボレリア・ブルグドルフェリ（Borrelia burgdorferi）種、ボレリア・アフゼリ（Borrelia afzelli）種、またはボレリア・ガリニ（Borrelia garinii）種に由来する、本発明1021の方法。
[本発明1023]
単離されたペプチドが固体支持体に固定化されている、本発明1021の方法。
[本発明1024]
固体支持体が、ビーズ、ラテラルフローアッセイ装置中の流路、マイクロタイタープレート中のウェル、またはローター中の流路である、本発明1023の方法。
[本発明1025]
検出する工程が、（i）ELISAアッセイを実施すること、（ii）ラテラルフローアッセイを行うこと、（iii）凝集アッセイを実施すること、（iv）ウエスタンブロット、スロットブロット、もしくはドットブロットを実施すること、または（v）分析用ローターを通じて試料を流すことを含む、本発明1021の方法。
[本発明1026]
試料がヒト、イヌ、またはウマの対象に由来する、本発明1021の方法。
[本発明1027]
試料が血液、血清、脳脊髄液、尿、または唾液の試料である、本発明1021の方法。
[本発明1028]
試料を、2種類またはそれ以上の本発明1001の単離されたペプチドと接触させる工程を含む、本発明1021の方法。
[本発明1029]
以下の工程を含む、対象においてライム病を診断するための方法：
対象由来の試料を本発明1001の単離されたペプチドと接触させる工程；および
該ペプチドを含む抗体-ペプチド複合体の形成を検出する工程であって、該複合体の形成が、対象がライム病を有することを表す、工程。
[本発明1030]
1種類または複数種類の本発明1001の単離されたペプチドと、該1種類または複数種類の単離されたペプチドのエピトープを認識する抗体に結合することができる標識試薬とを含む、キット。
[本発明1031]
前記1種類または複数種類の単離されたペプチドが固体支持体に付着している、本発明1030のキット。
[本発明1032]
前記1種類または複数種類の単離されたペプチドが、ビーズ、チューブもしくはウェル、ラテラルフローアッセイ装置、または分析用ローターに付着している、本発明1030のキット。
[本発明1033]
標識試薬が、検出可能な標識にコンジュゲートされた抗ヒトIgG抗体または抗イヌIgG抗体である、本発明1030のキット。
[本発明1034]
検出可能な標識がコロイド金粒子である、本発明1033のキット。
本発明のさらなる局面および態様は、以下の詳細な説明から明白になるであろう。