(57)【要約】【課題】  表皮角化細胞におけるコーニファイドエンベロープ形成因子発現を亢進させる表皮正常化剤とそれを用いた化粧料を提供する。【解決手段】  セージエキス、カゴソウエキス、マジョラムエキス、ケイガイエキス、レンセンソウエキス、ペパーミントエキス及びスペアミントエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物エキスを含むコーニファイドエンベロープ形成促進剤と、チンピエキス、ローズマリーエキス及びプルーンエキスからなる群より選ばれる少なくとも1種の植物エキスと、を含有する表皮正常化剤を提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
セージエキス、カゴソウエキス、マジョラムエキス、ケイガイエキス、レンセンソウエキス、ペパーミントエキス及びスペアミントエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物エキスを含むコーニファイドエンベロープ形成促進剤と、
チンピエキス、ローズマリーエキス及びプルーンエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物エキスと、を含有する表皮正常化剤。
【請求項２】
請求項１に記載の表皮正常化剤を含有することを特徴とする外用剤。
【請求項３】
請求項１に記載の表皮正常化剤を含有することを特徴とする化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、表皮角化細胞におけるコーニファイドエンベロープ形成因子発現を亢進させる表皮正常化剤、並びに、該表皮正常化剤を含有する外用剤及び化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は表皮、真皮及び皮下組織からなる三層構造の人体最大の臓器であり、外界の刺激から内部の細胞を守るバリア機能と内部の水分を失わないように防ぐ機能とを担う。これらの機能を担う皮膚は水分が重要であり、水分が不足し乾燥状態となるとバリア機能が低下し、その結果、肌荒れやかゆみ、しわや炎症の原因となる。
【０００３】
表皮は、角質層、顆粒層、有棘層及び基底層からなるものであって、最表面に位置する角質層が外界からの刺激を防ぎ、皮膚のバリア機能に重要な役割を果たしている。そして、皮膚のバリア機能は、顆粒層から角質層に移行する際に形成される強靭な不溶化タンパク質膜、すなわちコーニファイドエンベロープと深い関わりがあることが知られている。コーニファイドエンベロープは、細胞間脂質の結晶構造に足場を与えているとも考えられており、コーニファイドエンベロープの形成を促進することが皮膚のバリア機能の発現に重要であるといえる。
【０００４】
コーニファイドエンベロープの形成には、インボルクリンとそれを架橋するトランスグルタミナーゼとが関与する。インボルクリン量が低下すると不完全角化の一因となってバリア機能が大きく低下し、トランスグルタミナーゼ量が減少すると同様に角化が正常に行われず、バリア機能の低下に影響する。
また、加齢にともないインボルクリンやトランスグルタミナーゼの量が減少し皮膚の老化に関係すると推測されているから、インボルクリン及びトランスグルタミナーゼの産生促進により、皮膚の状態がより好ましい状態となると考えられる。
【０００５】
従来、コーニファイドエンベロープ形成促進剤としては、ユーカリが知られている（特許文献１）。インボルクリン産生促進剤としては、マコンブ、サイシンやラフマが知られている（特許文献２、３）。トランスグルタミナーゼ産生促進剤としては、サイシンやラフマが知られている（特許文献３）。チンピエキス、ローズマリーエキス及びプルーンエキス等の植物エキスによって肌荒れ等を改善する方法が知られている（特許文献４〜６）。
しかしながら、これらの植物エキスを用いて皮膚のバリア機能を改善しようとすると、植物エキスの使用量を増やす必要があり、また、使用量を増やしても改善効果が見られないことも多く、そのため、改善効果の向上が課題となっている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００１−２８８０６６号公報
【特許文献２】特開２００９−８４１９５号公報
【特許文献３】特開２００７−１９１４号公報
【特許文献４】特開２００１−８１０３７号公報
【特許文献５】特開平０６−２４９３７号公報
【特許文献６】特開平０９−２９６７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、表皮角化細胞におけるコーニファイドエンベロープ形成因子発現を亢進させる表皮正常化剤とそれを用いた化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、特定の植物エキスの組み合わせにより、コーニファイドエンベロープ形成促進効果が飛躍的に増大することを見出し、この知見に基づき本発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明は、セージエキス、カゴソウエキス、マジョラムエキス、ケイガイエキス、レンセンソウエキス、ペパーミントエキス及びスペアミントエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物エキスを含むコーニファイドエンベロープ形成促進剤と、チンピエキス、ローズマリーエキス及びプルーンエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物エキスと、を含有する表皮正常化剤を提供する。
【０００９】
さらに、本発明は、セージエキスを含むコーニファイドエンベロープ形成促進剤と、
チンピエキス、ローズマリーエキス及びプルーンエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物エキスと、を含有する表皮正常化剤を提供する。
特に、本発明は、セージエキスを含むコーニファイドエンベロープ形成促進剤と、
チンピエキス、ローズマリーエキス及びプルーンエキスからなる植物エキスの混合物と、を含有する表皮正常化剤を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、コーニファイドエンベロープの形成促進効果を相乗効果的に向上させた表皮正常化剤を提供することができ、これによって、皮膚のバリア機能を改善する効果が期待できる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明において、「表皮正常化」とは、コーニファイドエンベロープ形成促進効果をさし、コーニファイドエンベロープ形成促進効果とは、インボルクリン産生促進とトランスグルタミナーゼ産生促進の効果をさす。
本発明の表皮正常化剤は、セージエキス、カゴソウエキス、マジョラムエキス、ケイガイエキス、レンセンソウエキス、ペパーミントエキス及びスペアミントエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物エキスを含むコーニファイドエンベロープ形成促進剤と、チンピエキス、ローズマリーエキス及びプルーンエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物エキスと、を含有する。
これらはいずれも植物エキスあるいはそれらを精製した成分であり、医薬又は民間薬、食品、化粧品の成分として一般的に用いられているものである。
【００１２】
セージエキスとは、シソ科アキギリ属の植物の一種であるセージＳａｌｖｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓの葉から抽出された植物エキスであるが、同属植物を用いることもできる。
カゴソウエキスとは、シソ科ウツボグサ属の植物の一種であるカゴソウＰｒｕｎｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓの花穂から抽出された植物エキスであるが、同属植物を用いることもできる。
マジョラムエキスとは、シソ科ハナハッカ属の植物の一種であるマジョラムＯｒｉｇａｎｕｍ  ｍａｊｏｒａｎａの葉から抽出された植物エキスであるが、同属植物を用いることもできる。
ケイガイエキスとは、シソ科イヌハッカ属の植物の一種であるケイガイＳｃｈｉｚｏｎｅｐｅｔａ  ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａの全草から抽出された植物エキスであるが、同属植物を用いることもできる。
【００１３】
レンセンソウエキスとは、シソ科カキドオシ属の植物の一種であるレンセンソウＧｌｅｃｈｏｍａ  ｈｅｄｅｒａｃｅａの全草から抽出された植物エキスであるが、同属植物を用いることもできる。
ペパーミントエキスとは、シソ科ハッカ属の植物の一種であるペパーミントＭｅｎｔｈａ  ｐｉｐｅｒｉｔａの全草から抽出された植物エキスであるが、同属植物を用いることもできる。
スペアミントエキスとは、シソ科ハッカ属の植物の一種であるスペアミントＭｅｎｔｈａ  ｓｐｉｃａｔａの全草から抽出された植物エキスであるが、同属植物を用いることもできる。
チンピエキスとは、ミカン科ミカン属の植物の一種であるウンシュウミカンＣｉｔｒｕｓ  ｕｎｓｈｉｕの果皮から抽出された植物エキスであるが、同属植物を用いることもできる。
ローズマリーエキスとは、シソ科マンネンロウ属の植物の一種であるローズマリーＲｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓの全草から抽出された植物エキスであるが、同属植物を用いることもできる。
プルーンエキスとは、バラ科スモモ属の植物の一種であるプルーンＰｒｕｎｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａの果実から抽出された植物エキスであるが、同属植物を用いることもできる。
【００１４】
本発明で用いるセージエキス、カゴソウエキス、マジョラムエキス、ケイガイエキス、レンセンソウエキス、ペパーミントエキス、スペアミントエキス、チンピエキス、ローズマリーエキス、プルーンエキスは前記各植物の各種部位あるいはその破砕物から、溶媒抽出、超臨界抽出、植物を酵素等で分解して抽出させる方法により得ることができる。また、市販の各植物エキスを用いてもよい。
【００１５】
前記植物エキスの抽出において、使用可能な抽出溶媒に特に制限はなく、水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどの低級（炭素数１〜４）１価アルコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ブチレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール類、酢酸メチル、酢酸エチルなどのエステル類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類、などの極性溶媒；クロロホルム、四塩化炭素などのハロゲン化炭化水素類、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサンなどの炭化水素類を用いることができ、これらの溶媒の１種を単独で用いてもよいし、２種以上からなる混合溶媒を用いることもできる。これらの溶媒のなかでも特に極性溶媒を好ましく用いることができる。
【００１６】
前記植物エキスの浸漬による抽出方法に特に制限はなく、例えば、植物エキスの原料を、２０〜４０℃の前記溶媒中に、１時間〜７日間浸漬した後にろ過する方法を挙げることができる。
超臨界抽出法に用いる超臨界流体は特に限定されないが、例えば水や二酸化炭素等が挙げられる。
分解による抽出方法に特に制限なく、例えば、果実等を溶媒に入れ、そこに酵素（例えば繊維素分解酵素）、微生物、酸、アルカリなどを添加して１時間〜７日間反応し分解させた後、加熱や中和によって反応停止させ、ろ過する方法を挙げられる。溶媒としては前記抽出溶媒を挙げることができ、中でも水が好適に用いられる。
【００１７】
前記植物エキスの原料は、熱風乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥または凍結乾燥などの乾燥処理を行い、乾燥物を用いるのが好ましく、乾燥粉砕物を用いることがさらに好ましい。また、抽出溶媒に浸漬している間、撹拌していてもよく、静置していてもよい。本発明の植物エキスは、抽出操作を繰り返して高濃度の植物エキスとすることもできる。
これらの各植物エキスは、抽出溶媒又は分解溶媒に溶解した抽出液又は分解液のままで
用いてもよく、濃縮あるいは希釈して用いてもよく、濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理をして乾燥物として用いてもよい。
【００１８】
本発明の表皮正常化剤においては、セージエキス、カゴソウエキス、マジョラムエキス、ケイガイエキス、レンセンソウエキス、ペパーミントエキス及びスペアミントエキスの合計と、チンピエキス、ローズマリーエキス及びプルーンエキスの合計の質量比が、植物エキスの乾燥物に換算して、５０：１〜１：５０となることが好ましく、２０：１〜１：２０となることがより好ましい。質量比がこの範囲であると表皮正常化の効果、すなわちコーニファイドエンベロープ形成促進効果がより優れたものとなる。
本発明の表皮正常化剤は、各植物エキスをそのまま所定量混合して製造することができ、さらに溶媒や、防腐剤等のその他の添加成分を配合してもよい。
【００１９】
溶媒や他の添加成分を配合する場合、本発明の表皮正常化剤における、本発明に係る植物エキスの配合量が、乾燥物換算で、好ましくは、合計０．００００１質量％以上、より好ましくは、合計０．００００２質量％以上、特に好ましくは、合計０．０００２質量％以上とすることが望ましい。
特に、コーニファイドエンベロープ形成促進剤として、セージエキス、カゴソウエキス、マジョラムエキス及びケイガイエキスから選択される植物エキス１種以上を使用する場合には、植物エキスの配合量が、乾燥物換算で、より好ましくは、合計０．００００１質量％以上、特に好ましくは、合計０．０００１質量％以上とすることが望ましい。また、コーニファイドエンベロープ形成促進剤として、レンセンソウエキス、ペパーミントエキス及びスペアミントエキスから選択される植物エキス１種以上を使用する場合には、植物エキスの配合量が、乾燥物換算で、より好ましくは、合計０．０００１質量％以上、特に好ましくは、合計０．００１質量％以上とすることが望ましい。
【００２０】
また、チンピエキス、ローズマリーエキス及びプルーンエキスから選択される植物エキス１種以上の配合量は、乾燥物換算で、コーニファイドエンベロープ形成促進剤としての各種植物エキスの合計量に対し前記質量比となるよう合計量を調整することが好ましく、合計０．００００１質量％以上とすることがより好ましい。
【００２１】
本発明の表皮正常化剤は、皮膚用又は頭髪用の化粧料、薬用外用剤、医薬部外品、医薬品等の各種の外用剤に配合することができる。
外用剤の形態としては、特に制限はなく、例えば、ペースト剤、クリーム、ジェル、軟膏、化粧液、乳液、ボディローション、パウダー、ハップ剤、顆粒又は固形状の浴用剤などを挙げることができる。
このような外用剤における表皮正常化剤の配合量は特に制限はなく、任意の濃度で用いることができるが、本発明に係る植物抽出エキスの合計配合量は、乾燥物換算で０．００００１〜１０質量％であり、より好ましくは、０．００００２〜５質量％、特に好ましくは、０．０００１〜５質量％である。
【００２２】
本発明の外用剤には、前記表皮正常化剤に加え、本発明の効果を損なわない範囲で外用剤用として公知の機能成分、例えば、保湿剤、エモリエント剤、血行促進剤、細胞賦活化剤、抗酸化剤、抗炎症剤、抗菌剤、過酸化物抑制剤など、を配合することができる。
公知の機能成分として、より具体的には、グリセリン、尿素、アミノ酸、ヒアルロン酸類などの保湿剤；スクワラン、マカデミアナッツ油、オリーブ油、ホホバ油、シリコン油などのエモリエント剤；ビタミンＥ類、トウガラシチンキなどの血行促進剤；核酸などの細胞賦活化剤、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ジブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、酢酸トコフェロールなどの抗酸化剤；グリチルリチン、アラントインなどの抗炎症剤；ヒノキチオール、塩化ベンザルコニウム、クロルヘキシジン塩、パラヒドロキシ安息香酸エステルなどの抗菌剤；スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）などの過酸
化物抑制剤など、種々の機能成分を配合することができ、イチョウエキス、胎盤抽出物、乳酸菌培養抽出物などの植物・動物・微生物由来の各種抽出物なども制限なく添加して使用することができる。
【００２３】
また、本発明の表皮正常化剤を含有する外用剤には、本発明の効果を損なわない範囲で、その剤型化のために界面活性剤、油脂類などの基材成分や、必要に応じて増粘剤、防腐剤、等張化剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、キレート剤、香料、着色料などの種々の添加物を併用することができる。
【００２４】
外用剤の剤型化に使用可能な界面活性剤に特に制限はなく、例えば、高級アルコールのアルキレンオキシド付加物、高級アルキルアミンのアルキレンオキシド付加物、高級脂肪酸のアルキレンオキシド付加物、高級脂肪酸アミドのアルキレンオキシド付加物、多価アルコールの脂肪酸エステル、硬化ひまし油のアルキレンオキシド付加物、ポリエチレングリコールソルビタンアルキルエステル、ステロール等のアルキレンオキシド付加物などの非イオン界面活性剤；アルキル硫酸ナトリウム、アルキロイルメチルタウリンナトリウム、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル硫酸ナトリウムなどの陰イオン界面活性剤；塩化アルキルピリジニウム、塩化ジステアリルジメリルアンモニウムなどの陽イオン界面活性剤；アミノプロピオン酸ナトリウム、アルキルポリアミノエチルグリシンなどの両性界面活性剤などを用いることができる。これらの界面活性剤は１種を用いることができ、２種以上を用いることもできる。
【００２５】
外用剤の剤型化に使用可能な基材成分に特に制限はなく、例えば、オリーブ油、ツバキ油、アボカド油、マカデミアナッツ油、杏仁油、ホホバ油、スクワラン、スクワレン、馬油など、公知の油脂類を用いることができる。
【００２６】
外用剤に使用可能な増粘剤にも特に制限はなく、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルアクリルアミド、ポリエチレングリコール、及びこれらの各種誘導体；ヒドロキシアルキルセルロースなどのセルロース類及びその誘導体；デキストラン、ゼラチン、アラビアガム、トラガントガムなどのガム類；カルボキシビニルポリマーなどの水溶性高分子を用いることができる。
【００２７】
防腐剤に特に制限はなく、例えば、パラヒドロキシ安息香酸エステル、パラオキシ安息香酸塩とその誘導体、フェノキシエタノール、ヒノキチオール、塩化ベンザルコニウム、クロルヘキシジン塩などを用いることができる。
【００２８】
等張化剤に特に制限はなく、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムなどの無機塩類を用いることができる。
【００２９】
紫外線吸収剤に特に制限はなく、例えば、パラアミノ安息香酸、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、ベンゾトリアゾール系紫外線吸収剤などを用いることができる。
【００３０】
キレート剤に特に制限はなく、例えば、エチレンジアミン四酢酸、フィチン酸、クエン酸及びこれらの水溶性塩などを用いることができる。
【実施例】
【００３１】
以下に、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら制限されるものではない。
１．植物エキスの製造
実施例及び比較例においては、以下に示す製造例にて得られた植物エキスを使用した。
【００３２】
製造例１  セージエキス
セージを５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０容量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しセージエキス２．８ｇを得た。
【００３３】
製造例２  カゴソウエキス
カゴソウを５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０容量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しカゴソウエキス３．１ｇを得た。
【００３４】
製造例３  マジョラムエキス
マジョラムを５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０容量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しマジョラムエキス３．４ｇを得た。
【００３５】
製造例４  ケイガイエキス
ケイガイを５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０容量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しケイガイエキス４．１ｇを得た。
【００３６】
製造例５  レンセンソウエキス
レンセンソウを５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０容量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しレンセンソウエキス３．５ｇを得た。
【００３７】
製造例６  ペパーミントエキス
ペパーミントを５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０容量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しペパーミントエキス２．８ｇを得た。
【００３８】
製造例７  スペアミントエキス
スペアミントを５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０容量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しスペアミントエキス４．６ｇを得た。
【００３９】
製造例８  チンピエキス
チンピを５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０容量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しチンピエキス４．２ｇを得た。
【００４０】
製造例９  ローズマリーエキス
ローズマリーを５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０容量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しローズマリーエキス４．３ｇを得た。
【００４１】
製造例１０  プルーンエキス
プルーンを５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０容量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しプルーンエキス２．３ｇを得た。
【００４２】
製造例１１  ユーカリエキス
ユーカリを５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０容量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しユーカリエキス２．４ｇを得た。
【００４３】
２．コーニファイドエンベロープ形成促進効果の評価
（１）サンプル調製方法
セージエキス、カゴソウエキス、マジョラムエキス、ケイガイエキス、レンセンソウエキス、ペパーミントエキス、スペアミントエキス、チンピエキス、ローズマリーエキス、プルーンエキスについては５０容量％エタノールを用いて１０ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬの溶液を調製した後、０．２２μｍメンブランフィルターで滅菌濾過した。これらの溶液を、培地量に対して最終エタノール濃度が０．５容量％となるように添加し、１００μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬのエキス添加培地とした。
また、同様に比較としてユーカリエキスを使用した。
【００４４】
（２）細胞の培養
細胞はヒト不死化表皮正常角化細胞（ＰＨＫ１６−０ｂ、医薬基盤研究所）を使用した。サブコンフルエント状態のＰＨＫ１６−０ｂ細胞をトリプシン処理で剥離し、２４ウェルプレートの各ウェルに３００，０００ｃｅｌｌｓずつ播種してＭＣＤＢ１５３培地（Ｓｉｇｍａ社製）で２４時間、３７℃、５％ＣＯ2条件下で培養した。その後、表１、及び表２に記載の濃度に調整したセージエキス、カゴソウエキス、マジョラムエキス、ケイガイエキス、レンセンソウエキス、ペパーミントエキス、スペアミントエキス、チンピエキス、ローズマリーエキス、プルーンエキスを適宜添加したＭＣＤＢ培地を加えて２４時間培養した。試料の代わりに最終濃度が０．５容量％エタノール水溶液を陰性対照とした。
２４時間後、培地を除去し、２００μＬのＩＳＯＧＥＮII（ニッポンジーン社製）を添加し細胞溶解させ、細胞を回収してＲＮＡを抽出した。抽出方法は、ニッポンジーン社が提示する標準的な方法に従った。精製したＲＮＡ濃度は、分光光度計を用いて測定した。
【００４５】
（３）ＲＮＡ発現量の測定
（３−１）インボルクリン産生促進効果
Ｏｎｅ  Ｓｔｅｐ  ＳＹＢＲ  ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ  ＲＴ−ＰＣＲ  ＫｉｔII（タカラバイオ社製）を用いて、タカラバイオ社が提示する標準的な手法に従い測定サンプルを調製した。これらのサンプルは、Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｃｙｃｌｅｒ  Ｄｉｃｅ  Ｒｅａｌ
Ｔｉｍｅ  ＳｙｓｔｅｍII（タカラバイオ社製）を用いて、タカラバイオ社が提示する標準的な方法に従い、リアルタイム定量ＰＣＲを行った。インボルクリン遺伝子のｍＲＮＡ発現量は、ハウスキーピング遺伝子にＧＡＰＤＨを用いて、相対発現量を計算し、陰性対照の場合のインボルクリンｍＲＮＡ量を１００として示した。
【００４６】
（３−２）トランスグルタミナーゼ産生促進効果
前項のインボルクリン遺伝子の代わりに、トランスグルタミナーゼ遺伝子を測定し、相対発現量を計算した。
インボルクリンｍＲＮＡ発現量比を表１に、トランスグルタミナーゼｍＲＮＡ発現量比を表２に示す。
【００４７】
【表１】
2018127407.tif 000002
【表２】
2018127407.tif 000003
【００４８】
【表３】
2018127407.tif 000004
【表４】
2018127407.tif 000005
【００４９】
表１中のインボルクリン産生促進成分の濃度（μｇ／ｍＬ）は培地全体量に対する割合を表す。表１の結果が示すように、本発明の表皮正常化剤を用いた場合は、ヒト不死化表皮正常角化細胞におけるインボルクリン産生に対し、優れた産生促進効果をもたらすことが確認された。
表２中のトランスグルタミナーゼ産生促進成分の濃度（μｇ／ｍＬ）は培地全体量に対する割合を表す。表２の実施例の結果が示すように、本発明の表皮正常化剤を用いた場合は、ヒト不死化表皮正常角化細胞におけるトランスグルタミナーゼ産生に対し、優れた産生促進効果をもたらすことが確認された。
すなわち、本発明の表皮正常化剤は、インボルクリン産生促進効果とトランスグルタミナーゼ促進効果とを兼ね備えるものであり、ヒト不死化表皮正常角化細胞において、コーニファイドエンベロープ形成を顕著に促進するものである。
【００５０】
３．外用剤
以下に本発明の植物エキスを配合した皮膚外用剤を例示する。
実施例２５〜３９及び比較例３３〜４６（化粧水）
（成分）
（成分Ａ）                            （質量％）
（１）ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油          １．５
（２）１，３−ブチレングリコール        ５．０
（３）ジプロピレングリコール            ５．０
（４）メチルパラベン                    ０．２
（成分Ｂ）
（５）各植物抽出エキス１                表３〜６記載の量
（６）各植物抽出エキス２                表３〜６記載の量
（７）ヒアルロン酸ナトリウム液（１％）  ５．０
（８）精製水                              残量
全量  １００
【００５１】
（製法）
１．成分Ａ（１）〜（４）を７０℃にて混合溶解した。
２．成分Ｂ（５）〜（８）を室温にて混合溶解した。
３．成分Ａを室温まで冷却し、成分Ｂを少しずつ加え均一に混合して化粧水を得た。
【００５２】
（評価）
前記の皮膚外用剤（化粧水）について、それぞれ３０〜５０歳代の皮膚の乾燥を訴える男女２名ずつの（２８群×２処方）計１１２名に対して評価をおこなった。化粧水については、１日に２回（朝、夜）顔面へ適宜使用し、顔面片側には実施例２５〜３９又は比較例３４〜４６の化粧水を、他方側に比較例３３の化粧水を使用し、これを１ヶ月続けるモニター試験を行った。それぞれの比較例と比べて下記の基準にて評価を行った。総スコアの結果を表３〜６に示す。
【００５３】
なお、評価期間中、モニター試験対象者には、化粧水のみ本発明の化粧水使用をお願いしたが、これ以外の化粧料については、通常使用しているものをそのまま使用していただいた。なお、使用期間中に皮膚の異常を訴えたものはいなかった。
＋３：比較例３３よりも非常に潤いを感じられた
＋２：比較例３３よりもかなり潤いを感じられた
＋１：比較例３３よりもやや潤いを感じられた
０：差がない
−１：比較例３３のほうがやや潤いを感じられた
−２：比較例３３のほうがかなり潤いを感じられた
−３：比較例３３のほうが非常に潤いを感じられた
【００５４】
【表５】
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【００５５】
【表６】
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【００５６】
【表７】
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【００５７】
【表８】
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【００５８】
本発明のコーニファイドエンベロープ形成促進剤とチンピエキス、ローズマリーエキス及びカゴソウエキスからなる群より選ばれる１種以上を配合した実施例２５〜３９の外用剤では、皮膚の乾燥の改善が認められた。一方、比較例３４〜４５の外用剤では、変化が見られなかった。また、比較例４６の外用剤は、植物エキスを増量したものであるが、皮膚の乾燥に対する改善効果は、陰性対照である比較例３３よりも劣るものであった。
【産業上の利用可能性】
【００５９】
本発明の表皮正常化剤は、優れた表皮正常化作用を有しており、肌表皮バリア機能を正常にし、肌表皮の水分保持改善効果、肌荒れ防止効果を目的とした化粧料を始めとする各種外用剤への利用が可能となる。
また、本発明の外用剤は、優れた表皮正常化作用を有しており、肌表皮バリア機能を正常にし、肌表皮の水分保持改善や肌荒れ防止を図ることができる。