【誤訳訂正書】
【提出日】平成27年8月19日(2015.8.19)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
その第１の態様によれば、本発明は、以下のｉ）及びｉｉ）から選択されるアミノ酸配列を含んでなる、免疫グロブリンＧ  Ｆｃ（ＩｇＧ  Ｆｃ）結合ポリペプチドを提供する。
ｉ）Ｘ1−（［スペーサー１］−ＫＦＤＫＥＱＱＮ  ＡＦＹＥＩＬＸ17ＬＰＸ20  ＬＴＥＥＱＲＮＡＦＩ  ＱＫＬＫＤＸ36ＰＳＱＳ  ＡＥＬＬＡＥＡＫＱＬ  Ｘ51ＥＡＱＡ−［スペーサー２］）n−ＣCTERM-1ＸCTERM
式中、互いに独立して、
Ｘ1はＰであるか或いは存在せず、
［スペーサー１］は１〜３個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列であり、
Ｘ17は任意のアミノ酸残基であり、
Ｘ20は任意のアミノ酸残基であり、
Ｘ36はＤ以外の任意のアミノ酸残基であり、
Ｘ51は任意のアミノ酸残基であり、
［スペーサー２］は０〜２０個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列であり、
ＸCTERMはＤであるか或いは存在せず、
ｎは１〜４である。
ｉｉ）ｉ）で定義した配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
プロテインＺにおいて、上記のアミノ酸配列ｉ）におけるポジション１７に対応するアミノ酸ポジションは、ヒスチジン残基が占めている。本発明のポリペプチドにおいて、Ｘ17はＨであってよいが、任意の別のアミノ酸残基によって置換されていてもよい。このポジションでの置換は、化学的に反応性のアミノ酸を回避するという一般的な必要性が動機となり得る。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
本発明によるポリペプチドの一実施形態では、Ｘ17は、Ｈである。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
本発明によるポリペプチドの一実施形態では、Ｘ20は、Ｎ以外の任意のアミノ酸残基である。Ｘ20は、例えば、Ｔであってもよい。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
代替の実施形態では、Ｘ20は、Ｎである。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２０】
本発明によるポリペプチドの一実施形態では、Ｘ36は、Ｅ及びＡから選択される。Ｘ36は、例えば、Ｅであってもよい。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
本発明によるポリペプチドの一実施形態ではＸ51は、Ｎ以外の任意のアミノ酸残基である。Ｘ51は、例えば、Ｄであってもよい。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２２】
代替の実施形態では、Ｘ51は、Ｎである。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
本発明の任意の態様によるＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドは、相互作用のＫD値が、１×１０-6Ｍ以下、例えば、５×１０-8Ｍ以下などの１×１０-7Ｍ以下となるようにＩｇＧ  Ｆｃに結合し得る。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
本発明のポリペプチドは、ＩｇＧ  Ｆｃに都合よく結合するという点で有利である。特に、本発明のポリペプチドは、ヒトＩｇＧ分子のＦｃ部分に結合することができる。本発明のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ヒトＩｇＧのクラス１、２及び４に結合することができるが、クラス３には結合することができない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＩｇＧ  ＦｃのＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインの境界に結合することができる。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
本発明によるＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドの一実施形態では、Ｘ1はＰである。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
本発明によるＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドの一実施形態では、ＸCTERMは、Ｄである。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
本発明によるＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドの特定の一実施形態では、Ｘ1はＰであり、ＸCTERMはＤである。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
本発明によるポリペプチドの一実施形態では、アミノ酸配列ｉ）は、添付の図１の配列番号１〜６から選択される。アミノ酸配列ｉ）は、例えば、配列番号１であってよい。容易に分かるように、配列番号１〜２の配列ではｎ＝１であり、配列番号３〜６の配列ではｎ＝２である。配列番号１〜４は、Ｘ1がＰであり、ＸCTERMがＤである実施形態の例であり、一方、配列番号５〜６は、別の実施形態の例であることもまた、これらの配列自体から明白である。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
上記で説明したように、本発明の第１の態様によるポリペプチドの一実施形態では、そのアミノ酸配列におけるＸ1はＰであり、ＸCTERMはＤである。Ｎ及びＣ末端アミノ酸残基のこの設計により、組換えＤＮＡ技術によって、各サブユニットがジペプチドＤＰを介して残りのサブユニットから分離されているサブユニットとして、本発明のポリペプチドのコピーを有する多量体をまず製造することによって、ＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドの生産への好都合なアプローチが可能となる。アミノ酸配列ＤＰは、酸触媒による加水分解に感受性であり、そのため、サブユニット間のジペプチド部位は、多量体中のサブユニットを互いに分離するための切断部位として使用することができる。非限定的な例として、多量体は、２〜６個のサブユニット、例えば、４個のサブユニット又は６個のサブユニットなどを含んでいてもよい。この点において、多量体を構成しているサブユニットは、それら自身が、ｉ）の配列における数字ｎに関して上記で開示されている通り、１〜４個の別個のＩｇＧ  Ｆｃ結合ドメインを含んでいてもよいことを指摘する。ＤＰ配列によって分離されているサブユニット及び単一のＩｇＧ  Ｆｃ結合ドメインは、多量体において同じ構造エレメントを構成（すなわち、ｎ＝１の場合）していてもよいが、また、構築体の異なる構造エレメントを構成（ｎ＝２〜４の場合）していてもよい。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
したがって、本発明の第２の態様において、
・各サブユニットが、Ｘ1がＰであり、ＸCTERMがＤである第１の態様によるポリペプチドである、２つ以上のサブユニット、及び
・その最後の残基としてＤ残基を含むＮ末端リーダーペプチド
を含んでなる多量体ポリペプチドが提供される。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
したがって、切断に適したＤＰジペプチドを提供するために、Ｎ末端リーダーペプチドは、その最後の残基としてＤ残基を含まなければならない。多量体ポリペプチドにおいて、このＤ残基は、第１のサブユニットのＰ1残基と一緒にＤＰジペプチドを形成する。Ｎ末端リーダーペプチドの残部の正確な配列は、Ｄ残基の前にある任意のアミノ酸残基がＤＰジペプチドの切断を妨げない限り、本発明にとって重大ではない。リーダーペプチドの開始は、製造に使用される発現系に依存するはずである。例えば、細胞内発現を使用して、ＭＤのリーダーペプチドを生じさせ、次いでそこからＭを可溶性タンパク質からｉｎ  ｖｉｖｏで除去してもよい。発現によって封入体が形成される場合は、ＭＸＧＤのリーダーペプチド式中、Ｘは任意のアミノ酸又はＧであってよく、又は除外される）が使用されてもよい。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
それらがＤＰ配列を含んでも含まなくても、それらが以前のセクションに記載されている好都合なアプローチに従って調製されてもされなくても、本発明の第１の態様による任意のポリペプチドは、最後から２番目のポジションのシステイン残基ＣCTERM-1（これは実は、ＸCTERMが存在しなければ最後のポジションである）を含む。本発明のポリペプチドのアミノ酸配列中へのこのシステイン残基の組み込みにより、ポリペプチドの別の化合物への非常に用途が広い化学的カップリングが可能となる。このシステイン残基を使用してポリペプチドを直接又は間接的にマトリックスに連結することにより、例えば、モノクローナル抗体の製造のためのプロセスにおける、ＩｇＧ  Ｆｃ含有分子の工業的規模の分離に有用な分離媒体の製造が可能となる。分離媒体又はクロマトグラフィー媒体中の親和性リガンドは、本発明の第１の態様によるＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドである。マトリックスは、有機又は無機材料から作られていてよい。一実施形態では、マトリックスは、架橋された炭水化物材料などの天然高分子、例えば、アガロース、寒天、セルロース、デキストラン、キトサン、コンニャク、カラギーナン、ジェラン、アルギン酸塩などから調製される。天然高分子マトリックスは、逆懸濁ゲル化(S Hjerten(1964), Biochim Biophys Acta 79(2):393-398)などの標準的な方法に従って容易に調製され、任意選択により架橋される。代替の実施形態では、マトリックスは、架橋された合成ポリマーなどの合成ポリマー又はコポリマー、例えば、スチレン又はスチレン誘導体、ジビニルベンゼン、アクリルアミド、アクリル酸エステル、メタクリル酸エステル、ビニルエステル、ビニルアミドなどから調製される。そのような合成ポリマーマトリックスは、標準的な方法に従って容易に調製され、任意選択により架橋される。マトリックスへの直接カップリングの非限定的な例として、ＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドは、ＣCTERM-1を介してマレイミドアガロース、ヨードアセチルセファロース又はアガロース、例えば、ＰｉｅｒｃｅのＳｕｌｆｏＬｉｎｋ（登録商標）に結合してもよい。間接的なカップリングの非限定的な例として、ＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドは、ＣCTERM-1を介してリンカーポリマーに結合し、中間体ＩｇＧ  Ｆｃ結合組成物を形成してもよい。次いで、この中間体組成物は次に、ＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチド又はリンカーポリマーのいずれかにおける反応基を介してマトリックスに連結してもよい。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
したがって、その別の態様において、本発明は、システイン残基ＣCTERM-1を介して非ペプチド、非核酸リンカーポリマーに共有結合している、第１の態様による少なくとも１つのＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドを含んでなるＩｇＧ  Ｆｃ結合組成物を提供する。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
関連する一態様において、本発明は、そのようなＩｇＧ  Ｆｃ結合組成物を製造する方法を提供する。この方法は、
・第１の態様による少なくとも１つのＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドを用意し、
・前記ポリペプチド中に存在するシステイン残基ＣCTERM-1を介して前記ポリペプチドを非ペプチド、非核酸リンカーポリマーに連結する
ことを含んでなる。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４５】
ＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドがＰ1及びＤCTERMアミノ酸残基を含むケースにおいて、この製造方法の第１段階における用意は、サブユニットが酸触媒による加水分解での切断を行いやすいＤＰ配列によって分離されている、多量体中のサブユニットとしてそのようなポリペプチドを生産する方法の上記の記述に従って行ってよい。言い換えると、本発明のこの実施形態では、クロマトグラフィー媒体において親和性リガンドとして使用するための組成物は、ｉ）サブユニットとして個々のＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドを含む多量体（単量体、二量体、三量体又は四量体のいずれであっても）を発現させること、ｉｉ）酸触媒による加水分解によって前記多量体をその構成サブユニットに切断すること、ｉｉｉ）得られたサブユニット（すなわち、本発明によるＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチド）を、ＣCTERM-1残基を介してリンカーポリマーに連結することによって調製されてよい。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
本明細書において使用される「ＩｇＧ  Ｆｃ結合」及び「ＩｇＧ  Ｆｃに対する結合親和性」という用語は、例えばＢｉａｃｏｒｅ機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でなど、表面プラズモン共鳴技術の使用によって試験することができるポリペプチドの特性を指す。例えば、以下の実施例において記載されているように、ＩｇＧ  Ｆｃ結合親和性は、ＩｇＧ  Ｆｃ、又はＩｇＧ  Ｆｃの断片を機器のセンサーチップ上に固定し、試験しようとするポリペプチドを含有する試料を、チップ上を通過させる実験において試験することができる。代替として、試験しようとするポリペプチドを、機器のセンサーチップ上に固定し、ＩｇＧ  Ｆｃ、又はその断片を含有する試料を、チップ上を通過させる。次いで、当業者は、そのような実験によって得られた結果を解釈して、ＩｇＧ  Ｆｃに対するポリペプチドの結合親和性の少なくとも定性的な測定を確定してもよい。例えば、相互作用についてのＫD値を決定するために、定量的測定が所望される場合、表面プラズモン共鳴法もまた使用されてもよい。結合値は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ２０００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において定義することができる。ＩｇＧ  Ｆｃを、測定のセンサーチップ上に固定し、その親和性を決定しようとするポリペプチドの試料を連続希釈によって調製し、順不同で注入する。次いで、ＫD値を結果から、例えば、機器製造業者によって提供されるＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ４．１ソフトウェアの１：１  Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルを使用して計算することができる。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
したがって、本発明にはまた、上記のＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチドが、さらなるアミノ酸残基がいずれかの末端に付加されたＩｇＧ  Ｆｃ結合ドメインとして存在する、ポリペプチド及び組成物が含まれる。これらのさらなるアミノ酸残基は、ポリペプチドによるＩｇＧ  Ｆｃの結合において役割を果たし得るが、例えば、ポリペプチドの生産、精製、ｉｎ  ｖｉｖｏ及び／若しくはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの安定化、カップリング又は検出のうちの１つ以上に関連する別の目的も同じ程度に十分に果たす。そのようなさらなるアミノ酸残基は、化学的カップリングの目的で付加された１つ以上のアミノ酸残基を含んでいてもよい。そのようなさらなるアミノ酸残基は、タグに特異的な抗体との相互作用のための、Ｈｉｓ6タグ又は「ｍｙｃ」（ｃ−ｍｙｃ）タグ又は「ＦＬＡＧ」タグなどの、ポリペプチドの精製又は検出のための「タグ」を提供してもよい。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６５】
【図１】本明細書において記載されているポリペプチドについてのアミノ酸配列情報を示す表である。配列番号１〜６は、本発明によるポリペプチドの非限定的な例であり、一方、配列番号７〜９は、例示及び／又は比較の目的で開示されている。
【図２】５Ｍリン酸による処理後のＨｉｓ6−Ｚ０５４９４の試料のＨＰＬＣ／ＭＳＤ分析のクロマトグラムである。Ｉで表すピークは、切断された（７０５２Ｄａ）、切断されていない（９１７９Ｄａ）及び変化した（７２６８Ｄａ）Ｈｉｓ6−Ｚ０５４９４分子に相当する。
【図３】２Ｍ塩酸による５０℃で１時間の処理後のＨｉｓ6−Ｚ０５４９４の試料のＨＰＬＣ／ＭＳＤ分析のクロマトグラムである。Ｉで表すピークは、切断された（７０５２Ｄａ）、切断されていない（９１７９Ｄａ）及び変化した（７２６８Ｄａ）Ｈｉｓ6−Ｚ０５４９４  分子に相当する。ＩＩで表すピークは、ヘキサヒスチジンタグ（２１４５Ｄａ）に相当する。
【図４】６Ｍリン酸による５０℃で１時間の処理後のＨｉｓ6−Ｚ０５４９４の試料のＨＰＬＣ／ＭＳＤ分析のクロマトグラムである。Ｉで表すピークは、切断された（７０５２Ｄａ）及び切断されていない（９１７９Ｄａ）Ｈｉｓ6−Ｚ０５４９４分子に相当する。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６６】
実施例１
ＤＰジペプチド配列の切断
ＨＥＲ２結合Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）分子Ｚ０５４９４（図１の配列番号８）を、Ｚ０２８９１（図１の配列番号７）から出発して、Ｚ０２８９１のポジション３７におけるアスパラギン酸をグルタミン酸に置き換えることによって構築した。次いで、Ｚ０５４９４を、例示の目的で本明細書において記載されている実験において使用した。突然変異した遺伝子を、Ｔ７プロモーターを含有し、ヘキサヒスチジン(Ｈｉｓ6)テールに続いて酸切断を可能にするＤＰジペプチド配列をコードする発現ベクター中に挿入した。配列番号９のアミノ酸配列（図１）を有し、Ｈｉｓ6−Ｚ０５４９４で表した発現されたタンパク質を、可溶性生成物として回収し、開始メチオニンを除去した。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６７】
発現の後、細胞を加熱することによって溶解し、可溶性Ｈｉｓ6−Ｚ０５４９４生成物を、ＩＭＡＣ続いて逆相クロマトグラフィーによって精製した。このタンパク質を、バイアル中に１ｍｇ量及び５ｍｇ量に等分し、凍結乾燥した。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６８】
１２Ｍ、１０Ｍ、８Ｍ、６Ｍ、４Ｍ、２Ｍ及び０．２Ｍの希釈系列を、以下の７種の酸のそれぞれについて調製した：リン酸（Ｈ3ＰＯ4）、酢酸（ＣＨ3ＣＯＯＨ）、ギ酸（ＨＣＯＯＨ）、硫酸（Ｈ2ＳＯ4）、塩酸（ＨＣｌ）、硝酸（ＨＮＯ2）及びトリフルオロ酢酸（ＣＦ3ＣＯ2Ｈ）。凍結乾燥したＨｉｓ6−Ｚ０５４９４を、脱イオン水中に、４ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで希釈した。すべて２５μｌのＨｉｓ6−Ｚ０５４９４を含有している、１種の酸当たり７個のエッペンドルフチューブを調製した。２５μｌの酸を、エッペンドルフチューブに添加し、３７℃で１７時間３０分（終夜）インキュベートさせておいた。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
ＨＰＬＣ／ＭＳＤによる分析は、弱酸である酢酸及びギ酸は、５〜６Ｍの濃度でごく少量のタンパク質を切断し、より低い濃度では全く切断しないことを示した。５Ｍリン酸は、弱酸全般の結果の例外であり、大量のＨｉｓ6−Ｚ０５４９４分子を切断した。図２は、５Ｍリン酸で処理した試料のＨＰＬＣ／ＭＳＤ分析の図であり、主な成分は、切断された分子であることが観察される。しかしながら、少量の切断されていない分子及び変化した切断された分子もまた、試料において検出された。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７１】
硝酸は、切断実験には強力すぎ、タンパク質を不規則に切断した。トリフルオロ酢酸は、切断部位ではタンパク質を切断せず、解釈困難な結果をもたらした。硫酸及び塩酸は、同様の結果を示した。より低い濃度、すなわち、およそ約１〜３Ｍの酸において、タンパク質の大部分が切断された。ＨＰＬＣ／ＭＳＤ分析の結果は、Ｈｉｓ6−Ｚ０５４９４分子は切断されたが、成果は完璧には程遠いものであり、切断実験が最適ではなかったことを示したことを裏付ける。ほとんどすべてのケースにおいて、＋２１６Ｄａの余分の質量を有する大量の切断された分子が検出された。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７２】
リン酸及び塩酸による結果は最も有望であり、さらなる実験を、これらの２つの酸を用いて実施した。ＨＣｌについて７Ｍ、６Ｍ及び４Ｍの濃度及びＨ3ＰＯ4について１２Ｍ、１０Ｍ及び８Ｍの濃度の希釈系列を作製した。異なる緩衝液（２Ｍ  ＮａＨ2ＰＯ4、ｐＨ７．４）を使用して、Ｔｒｉｓ緩衝液がＨｉｓ6−Ｚ０５４９４分子の変化をもたらすことができたかどうかを決定した。切断を、１００℃、８０℃及び５０℃で行い、適切な濃度のＮａＯＨ及び１２５μｌの２ＭのＮａＨ2ＰＯ4、ｐＨ７．４の添加によってｐＨを増加させることによって１時間、２時間、４時間、６時間及び８時間後に停止した。試料を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにおいて分析し、ＨＰＬＣ／ＭＳＤ装置に注入した。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７３】
質量分析は、１００℃及び８０℃の温度は化学的切断には明らかに高すぎ、両方の酸で全体的に断片化されたタンパク質を生じたことを裏付けた。５０℃で実施された切断は、より良好な結果をもたらしたが、高濃度のＮａＨ2ＰＯ4を緩衝液として使用した場合、リン酸塩が沈殿したことから質量分析の成果に影響を及ぼしたことを裏付けた。試料中の高濃度のリン酸塩は、＋７９Ｄａの余分の質量を有する切断されたＨｉｓ6−Ｚ０５４９４分子において高度の変化をもたらした。７２６９Ｄａの質量、すなわち、＋２１６Ｄａの余分の質量を有する切断されたＨｉｓ6−Ｚ０５４９４分子もまた検出された。塩酸による最適の切断結果は、２Ｍ及び３Ｍの濃度で１〜３時間で達成された。リン酸では、最適の切断は、５〜６Ｍの酸を使用して１〜４時間で達成された。図３及び４は、それぞれ、塩酸及びリン酸による最適の結果についての図を示す。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７５】
実施例２
本発明によるＩｇＧ  Ｆｃ結合組成物の調製における設計検討
ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）リンカーに、それらのそれぞれのＣCTERM-1残基を介して「テール−テール（ｔａｉｌ−ｔｏ−ｔａｉｌ）」で連結されている、ｎ＝１である２つのＩｇＧ  Ｆｃ結合ポリペプチド、すなわち、２つの単一のドメインを有する２つのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）に結合するための、本発明によるＩｇＧ  Ｆｃ結合組成物におけるポリマーリンカーの最適な長さを評価するために、パイロット実験を実施する。最適なリンカーは、立体障害なく２つのｍＡｂを結合することを可能にするために十分に長いが、両方のＩｇＧ  Ｆｃ結合ドメインが同じｍＡｂに結合するのを可能にするのに十分な程は長くない。ホモ二官能性でチオール反応性のＰＥＧ（ビス−マレイミド−ｄＰＥＧ）は、Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ  Ｌｔｄから購入することができる。カタログは、３個又は１１個のいずれかのエチレングリコール単位を有する変形を含むが、別の代替物が、要求に応じて利用可能である。適した長さのリンカーは、ＰＥＧによって接続された２つのＩｇＧ  Ｆｃ結合ドメインが同じ抗体に優先的に結合しないが、２つの別々の抗体に結合する場合に見出された。それにより、抗体及びＰＥＧコンジュゲートＩｇＧ  Ｆｃ結合ドメインのネットワークが可能となる。