【手続補正書】
【提出日】平成27年2月2日(2015.2.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ブタジエンを生産するためのプロセスであって、
（ａ）クロチルアルコールを生産する非天然微生物を、十分な量の栄養および培地中で発酵培養する工程；および、
（ｂ）上記非天然微生物の培養により生産されたクロチルアルコールをブタジエンへ変換する工程、を含む、
ことを特徴とするプロセス。
【請求項２】
上記工程（ｂ）は、触媒存在下における化学的脱水によって行われる、
ことを特徴とする請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
上記非天然微生物は、クロチルアルコール経路を含み、上記クロチルアルコール経路は、クロチルアルコールを生産するために十分な量にて発現するクロチルアルコール経路酵素をコードしている、少なくとも１つの外因性の核酸を含み、
上記クロチルアルコール経路は、
アセチル‐ＣｏＡ：アセチル‐ＣｏＡアシルトランスフェラーゼ；アセトアセチル‐ＣｏＡレダクターゼ；３‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド生成）；クロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）；クロトニル‐ＣｏＡヒドロラーゼ、クロトニル‐ＣｏＡシンテターゼ、またはクロトニル‐ＣｏＡトランスフェラーゼ；クロトン酸レダクターゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルコール生成）；グルタコニル‐ＣｏＡデカルボキシラーゼ；グルタリル‐ＣｏＡデヒドロゲナーゼ；３‐アミノブチリル‐ＣｏＡデアミナーゼ；または４‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼを含む、
ことを特徴とする請求項１に記載のプロセス。
【請求項４】
上記微生物は、２つの外因性の核酸を含み、
上記２つの外因性の核酸は、それぞれクロチルアルコール経路酵素をコードしていることを特徴とする請求項３に記載のプロセス。
【請求項５】
上記微生物は、３つの外因性の核酸を含み、
上記３つの外因性の核酸は、それぞれクロチルアルコール経路酵素をコードしていることを特徴とする請求項３に記載のプロセス。
【請求項６】
上記微生物は、４つの外因性の核酸を含み、
上記４つの外因性の核酸は、それぞれクロチルアルコール経路酵素をコードしていることを特徴とする請求項３に記載のプロセス。
【請求項７】
上記クロチルアルコール経路は、
アセチル‐ＣｏＡ：アセチル‐ＣｏＡアシルトランスフェラーゼ；アセトアセチル‐ＣｏＡレダクターゼ；３‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド生成）；およびクロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
アセチル‐ＣｏＡ：アセチル‐ＣｏＡアシルトランスフェラーゼ；アセトアセチル‐ＣｏＡレダクターゼ；３‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；およびクロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
アセチル‐ＣｏＡ：アセチル‐ＣｏＡアシルトランスフェラーゼ；アセトアセチル‐ＣｏＡレダクターゼ；３‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；クロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）；クロトニル‐ＣｏＡヒドロラーゼ、クロトニル‐ＣｏＡシンテターゼ、またはクロトニル‐ＣｏＡトランスフェラーゼ；およびクロトン酸レダクターゼを含む群、
グルタコニル‐ＣｏＡデカルボキシラーゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド生成）；およびクロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
グルタコニル‐ＣｏＡデカルボキシラーゼ；およびクロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
グルタコニル‐ＣｏＡデカルボキシラーゼ；クロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）；クロトニル‐ＣｏＡヒドロラーゼ、クロトニル‐ＣｏＡシンテターゼ、またはクロトニル‐ＣｏＡトランスフェラーゼ；およびクロトン酸レダクターゼを含む群、
グルタリル‐ＣｏＡデヒドロゲナーゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド生成）；およびクロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
グルタリル‐ＣｏＡデヒドロゲナーゼ；およびクロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
グルタリル‐ＣｏＡデヒドロゲナーゼ；クロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）；クロトニル‐ＣｏＡヒドロラーゼ、クロトニル‐ＣｏＡシンテターゼ、またはクロトニル‐ＣｏＡトランスフェラーゼ；およびクロトン酸レダクターゼを含む群、
３‐アミノブチリル‐ＣｏＡデアミナーゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド生成）；およびクロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
３‐アミノブチリル‐ＣｏＡデアミナーゼ；およびクロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
３‐アミノブチリル‐ＣｏＡデアミナーゼ；クロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）；クロトニル‐ＣｏＡヒドロラーゼ、クロトニル‐ＣｏＡシンテターゼ、またはクロトニル‐ＣｏＡトランスフェラーゼ；およびクロトン酸レダクターゼを含む群、
４‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド生成）；およびクロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
４‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；およびクロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
および、４‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；クロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）；クロトニル‐ＣｏＡヒドロラーゼ、クロトニル‐ＣｏＡシンテターゼ、またはクロトニル‐ＣｏＡトランスフェラーゼ；およびクロトン酸レダクターゼを含む群、
から選択される経路を含むことを特徴とする請求項３に記載のプロセス。
【請求項８】
上記少なくとも１つの外因性の核酸は、異種性の核酸であることを特徴とする請求項３に記載のプロセス。
【請求項９】
上記非天然微生物は、実質的に嫌気性である培養媒体中に存在することを特徴とする請求項３に記載のプロセス。
【請求項１０】
クロチルアルコール経路を含む非天然微生物であって、
上記クロチルアルコール経路は、クロチルアルコールを生産するために十分な量にて発現するクロチルアルコール経路酵素をコードしている、少なくとも１つの外因性の核酸を含み、
上記クロチルアルコール経路は、
アセチル‐ＣｏＡ；アセチル‐ＣｏＡアシルトランスフェラーゼ；アセトアセチル‐ＣｏＡレダクターゼ；３‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド生成）；クロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）；クロトニル‐ＣｏＡヒドロラーゼ、クロトニル‐ＣｏＡシンテターゼ、またはクロトニル‐ＣｏＡトランスフェラーゼ；クロトン酸レダクターゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルコール生成）；グルタコニル‐ＣｏＡデカルボキシラーゼ；グルタリル‐ＣｏＡデヒドロゲナーゼ；３‐アミノブチリル‐ＣｏＡデアミナーゼ；または、４‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼを含む、
ことを特徴とする非天然微生物。
【請求項１１】
上記微生物は、２つの外因性の核酸を含み、
上記２つの外因性の核酸は、それぞれクロチルアルコール経路酵素をコードしていることを特徴とする請求項１０に記載の微生物。
【請求項１２】
上記微生物は、３つの外因性の核酸を含み、
上記３つの外因性の核酸は、それぞれクロチルアルコール経路酵素をコードしていることを特徴とする請求項１０に記載の微生物。
【請求項１３】
上記微生物は、４つの外因性の核酸を含み、
上記４つの外因性の核酸は、それぞれクロチルアルコール経路酵素をコードしていることを特徴とする請求項１０に記載の微生物。
【請求項１４】
上記クロチルアルコール経路は、
アセチル‐ＣｏＡ：アセチル‐ＣｏＡアシルトランスフェラーゼ；アセトアセチル‐ＣｏＡレダクターゼ；３‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド生成）：およびクロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
アセチル‐ＣｏＡ：アセチル‐ＣｏＡアシルトランスフェラーゼ；アセトアセチル‐ＣｏＡレダクターゼ；３‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；およびクロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
アセチル‐ＣｏＡ：アセチル‐ＣｏＡアシルトランスフェラーゼ；アセトアセチル‐ＣｏＡレダクターゼ；３‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；クロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）；クロトニル‐ＣｏＡヒドロラーゼ、クロトニル‐ＣｏＡシンテターゼ、またはクロトニル‐ＣｏＡトランスフェラーゼ；およびクロトン酸レダクターゼを含む群、
グルタコニル‐ＣｏＡデカルボキシラーゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド生成）；およびクロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
グルタコニル‐ＣｏＡデカルボキシラーゼ；およびクロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
グルタコニル‐ＣｏＡデカルボキシラーゼ；クロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）；クロトニル‐ＣｏＡヒドロラーゼ、クロトニル‐ＣｏＡシンテターゼ、またはクロトニル‐ＣｏＡトランスフェラーゼ；およびクロトン酸レダクターゼを含む群、
グルタリル‐ＣｏＡデヒドロゲナーゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド生成）；およびクロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
グルタリル‐ＣｏＡデヒドロゲナーゼおよびクロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルコ
ール生成）を含む群、
グルタリル‐ＣｏＡデヒドロゲナーゼ；クロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）；クロトニル‐ＣｏＡヒドロラーゼ、クロトニル‐ＣｏＡシンテターゼ、またはクロトニル‐ＣｏＡトランスフェラーゼ；およびクロトン酸レダクターゼを含む群、
３‐アミノブチリル‐ＣｏＡデアミナーゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド生成）；およびクロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
３‐アミノブチリル‐ＣｏＡデアミナーゼおよびクロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
３‐アミノブチリル‐ＣｏＡデアミナーゼ；クロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）；クロトニル‐ＣｏＡヒドロラーゼ、クロトニル‐ＣｏＡシンテターゼ、またはクロトニル‐ＣｏＡトランスフェラーゼ；およびクロトン酸レダクターゼを含む群、
４‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；クロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド生成）；およびクロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
４‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼおよびクロトニル‐ＣｏＡレダクターゼ（アルコール生成）を含む群、
および、４‐ヒドロキシブチリル‐ＣｏＡデヒドラターゼ；クロトンアルデヒドレダクターゼ（アルコール生成）；クロトニル‐ＣｏＡヒドロラーゼ、クロトニル‐ＣｏＡシンテターゼ、またはクロトニル‐ＣｏＡトランスフェラーゼ；およびクロトン酸レダクターゼを含む群、
から選択される経路を含むことを特徴とする請求項１０に記載の微生物。
【請求項１５】
上記少なくとも１つの外因性の核酸は、異種性の核酸であることを特徴とする請求項１０に記載の微生物。
【請求項１６】
上記非天然微生物は、実質的に嫌気性である培養媒体中に存在することを特徴とする請求項１０に記載の微生物。