【手続補正書】
【提出日】平成27年11月4日(2015.11.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種以上のリソソーム酵素の酵素活性をアッセイするための方法であって、
（ａ）試料を第１の溶液に接触させて、１種以上のリソソーム酵素を含む溶液を準備することと、
（ｂ）前記酵素を含む前記溶液に、分析すべき各リソソーム酵素に対する酵素基質を添加し、前記試料中に存在している各リソソーム酵素に対する酵素生成物を含む溶液をもたらすのに十分な時間、酵素反応溶液中で前記酵素と共に前記基質をインキュベートすることであって、前記酵素反応溶液が、
（ｉ）硫酸イオンの沈殿に有効な１種以上の金属陽イオン、
（ｉｉ）リン酸イオンの沈殿に有効な１種以上の金属陽イオン、
（ｉｉｉ）マルターゼグルコアミラーゼ阻害剤、
（ｉｖ）ベータ−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ阻害剤、および
（ｖ）１種以上の界面活性剤
を含むことと、
（ｃ）任意に、前記酵素反応をクエンチすることと、
（ｄ）前記酵素生成物の量を決定することと
を含む方法。
【請求項２】
基質添加前に、基質添加後に、または基質添加と同時に、分析すべき各リソソーム酵素に対する内部標準を添加することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記試料が、血液または組織試料である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記試料が、乾燥血液スポットである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記酵素生成物の量を決定することが、質量分析により各生成物対その内部標準の比を決定することを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記質量分析が、タンデム質量分析である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記生成物の量を決定することが、タンデム質量分析を含み、ここで、前記生成物およびそれらの内部標準の親イオンが生成され、分離され、衝突誘起解離に供されて、生成物のフラグメントイオンおよび内部標準のフラグメントイオンがもたらされる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記生成物の量を決定することが、前記生成物のフラグメントイオンおよび内部標準のフラグメントイオンのピーク強度を比較して、前記生成物の量を算出することを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記生成物の量を使用して、乾燥血液試料が１つ以上のリソソーム酵素欠損に伴う状態を処置するための候補に由来するかどうかを決定することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記１種以上のリソソーム酵素が、
（ａ）α−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、
（ｂ）α−ガラクトシダーゼ（ＧＬＡ）、
（ｃ）α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、
（ｄ）β−グルコセレブロシダーゼ（ＡＢＧ）、
（ｅ）β−ガラクトセレブロシダーゼ（ＧＡＬＣ）、
（ｆ）スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）、
（ｇ）イズロン酸２−スルファターゼ（ＩＤ２Ｓ）、
（ｈ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−スルファターゼ（ＧＡＬ６Ｓ）、および
（ｉ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−スルファターゼ（ＧＡＬ４Ｓ）
からなる群から選択される酵素を含む、請求項１〜８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記酵素生成物の量を決定することが、前記酵素生成物を含む前記溶液を、液体クロマトグラフィーまたはフローインジェクションによって質量分析計に導くことを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
前記酵素反応溶液が緩衝剤をさらに含む、請求項１〜８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
（ａ）硫酸イオンの沈殿に有効な１種以上の金属陽イオン、
（ｂ）リン酸イオンの沈殿に有効な１種以上の金属陽イオン、
（ｃ）マルターゼグルコアミラーゼ阻害剤、
（ｄ）ベータ−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ阻害剤、および
（ｅ）１種以上の界面活性剤
を含む水性組成物。
【請求項１４】
緩衝剤をさらに含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記緩衝剤が、リン酸塩、カルボン酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、および硫酸モノエステルの緩衝剤からなる群から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記１種以上の界面活性剤が、陽イオン性、陰イオン性、中性、および非イオン性界面活性剤からなる群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１７】
硫酸イオンを結合するのに有効な前記金属陽イオンが、Ｂａ2+、Ｃｅ3+、Ｈｇ+、Ｐｂ2+、Ｒａ2+、Ｓｒ2+、Ｂｉ3+、Ｃｄ2+、Ｃａ2+、およびＭｇ2+からなる群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１８】
リン酸イオンを結合するのに有効な前記金属陽イオンが、Ｂａ2+、Ｃｅ3+、Ｈｇ+、Ｐｂ2+、Ｒａ2+、Ｓｒ2+、Ｂｉ3+、Ｃｄ2+、Ｃａ2+、およびＭｇ2+である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１９】
前記マルターゼグルコアミラーゼ阻害剤が、アカルボースである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ベータ−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ阻害剤が、２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコノ−１，５−ラクトンである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２１】
約２〜約９のｐＨを有する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２２】
リソソーム酵素に対する１種以上の基質をさらに含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２３】
前記基質が、
（ａ）α−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、
（ｂ）α−ガラクトシダーゼ（ＧＬＡ）、
（ｃ）α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、
（ｄ）β−グルコセレブロシダーゼ（ＡＢＧ）、
（ｅ）β−ガラクトセレブロシダーゼ（ＧＡＬＣ）、
（ｆ）スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）、
（ｇ）イズロン酸２−スルファターゼ（ＩＤ２Ｓ）、
（ｈ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−スルファターゼ（ＧＡＬ６Ｓ）、および
（ｉ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−スルファターゼ（ＧＡＬ４Ｓ）
からなる群から選択されるリソソーム酵素に対する基質である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
リソソーム酵素に対する１種以上の内部標準をさらに含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
前記内部標準が、
（ａ）α−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、
（ｂ）α−ガラクトシダーゼ（ＧＬＡ）、
（ｃ）α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、
（ｄ）β−グルコセレブロシダーゼ（ＡＢＧ）、
（ｅ）β−ガラクトセレブロシダーゼ（ＧＡＬＣ）、
（ｆ）スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）、
（ｇ）イズロン酸２−スルファターゼ（ＩＤ２Ｓ）、
（ｈ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−スルファターゼ（ＧＡＬ６Ｓ）、および
（ｉ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−スルファターゼ（ＧＡＬ４Ｓ）
からなる群から選択されるリソソーム酵素に対する内部標準である、請求項２４に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３６】
例示的な態様が例示され、かつ記載されるが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更がここではなされ得ることが理解されよう。独占的所有権または権利を主張する本発明の態様は、以下の通り定義される。
以下に、出願当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］  １種以上のリソソーム酵素の酵素活性をアッセイするための方法であって、
（ａ）試料を第１の溶液に接触させて、１種以上のリソソーム酵素を含む溶液を準備することと、
（ｂ）前記酵素を含む前記溶液に、分析すべき各リソソーム酵素に対する酵素基質を添加し、前記試料中に存在している各リソソーム酵素に対する酵素生成物を含む溶液をもたらすのに十分な時間、酵素反応溶液中で前記酵素と共に前記基質をインキュベートすることであって、前記酵素反応溶液が、
（ｉ）硫酸イオンの沈殿に有効な１種以上の金属陽イオン、
（ｉｉ）リン酸イオンの沈殿に有効な１種以上の金属陽イオン、
（ｉｉｉ）マルターゼグルコアミラーゼ阻害剤、
（ｉｖ）ベータ−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ阻害剤、および
（ｖ）１種以上の界面活性剤
を含むことと、
（ｃ）任意に、前記酵素反応をクエンチすることと、
（ｄ）前記酵素生成物の量を決定することと
を含む方法。
［２］  基質添加前に、基質添加後に、または基質添加と同時に、分析すべき各リソソーム酵素に対する内部標準を添加することをさらに含む、［１］に記載の方法。
［３］  前記試料が、血液または組織試料である、［１］に記載の方法。
［４］  前記試料が、乾燥血液スポットである、［１］に記載の方法。
［５］  前記酵素生成物の量を決定することが、質量分析により各生成物対その内部標準の比を決定することを含む、［２］に記載の方法。
［６］  前記質量分析が、タンデム質量分析である、［５］に記載の方法。
［７］  前記生成物の量を決定することが、タンデム質量分析を含み、ここで、前記生成物およびそれらの内部標準の親イオンが生成され、分離され、衝突誘起解離に供されて、生成物のフラグメントイオンおよび内部標準のフラグメントイオンがもたらされる、［６］に記載の方法。
［８］  前記生成物の量を決定することが、前記生成物のフラグメントイオンおよび内部標準のフラグメントイオンのピーク強度を比較して、前記生成物の量を算出することを含む、［７］に記載の方法。
［９］  前記生成物の量を使用して、乾燥血液試料が１つ以上のリソソーム酵素欠損に伴う状態を処置するための候補に由来するかどうかを決定することをさらに含む、［１］に記載の方法。
［１０］  前記１種以上のリソソーム酵素が、
（ａ）α−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、
（ｂ）α−ガラクトシダーゼ（ＧＬＡ）、
（ｃ）α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、
（ｄ）β−グルコセレブロシダーゼ（ＡＢＧ）、
（ｅ）β−ガラクトセレブロシダーゼ（ＧＡＬＣ）、
（ｆ）スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）、
（ｇ）イズロン酸２−スルファターゼ（ＩＤ２Ｓ）、
（ｈ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−スルファターゼ（ＧＡＬ６Ｓ）、および
（ｉ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−スルファターゼ（ＧＡＬ４Ｓ）
からなる群から選択される酵素を含む、［１］〜［８］の何れか一に記載の方法。
［１１］  前記１種以上のリソソーム酵素が、
（ａ）α−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、
（ｂ）α−ガラクトシダーゼ（ＧＬＡ）、
（ｃ）α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、
（ｄ）β−グルコセレブロシダーゼ（ＡＢＧ）、
（ｅ）β−ガラクトセレブロシダーゼ（ＧＡＬＣ）、
（ｆ）スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）、
（ｇ）イズロン酸２−スルファターゼ（ＩＤ２Ｓ）、
（ｈ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−スルファターゼ（ＧＡＬ６Ｓ）、および
（ｉ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−スルファターゼ（ＧＡＬ４Ｓ）
を含む、［１］〜［８］の何れか一に記載の方法。
［１２］  前記酵素生成物の量を決定することが、前記酵素生成物を含む前記溶液を、液体クロマトグラフィーによって質量分析計に導くことを含む、［５］に記載の方法。
［１３］  前記酵素生成物の量を決定することが、前記酵素生成物を含む前記溶液を、フローインジェクションによって質量分析計に導くことを含む、［５］に記載の方法。
［１４］  前記酵素反応溶液が緩衝剤をさらに含む、［１］〜［８］の何れか一に記載の方法。
［１５］  （ａ）硫酸イオンの沈殿に有効な１種以上の金属陽イオン、
（ｂ）リン酸イオンの沈殿に有効な１種以上の金属陽イオン、
（ｃ）マルターゼグルコアミラーゼ阻害剤、
（ｄ）ベータ−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ阻害剤、および
（ｅ）１種以上の界面活性剤
を含む水性組成物。
［１６］  緩衝剤をさらに含む、［１５］に記載の組成物。
［１７］  前記緩衝剤が、リン酸塩、カルボン酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、および硫酸モノエステルの緩衝剤からなる群から選択される、［１６］に記載の組成物。
［１８］  前記１種以上の界面活性剤が、陽イオン性、陰イオン性、中性、および非イオン性界面活性剤からなる群から選択される、［１５］に記載の組成物。
［１９］  硫酸イオンを結合するのに有効な前記金属陽イオンが、Ｂａ2+、Ｃｅ3+、Ｈｇ+、Ｐｂ2+、Ｒａ2+、Ｓｒ2+、Ｂｉ3+、Ｃｄ2+、Ｃａ2+、およびＭｇ2+からなる群から選択される、［１５］に記載の組成物。
［２０］  リン酸イオンを結合するのに有効な前記金属陽イオンが、Ｂａ2+、Ｃｅ3+、Ｈｇ+、Ｐｂ2+、Ｒａ2+、Ｓｒ2+、Ｂｉ3+、Ｃｄ2+、Ｃａ2+、およびＭｇ2+である、［１５］に記載の組成物。
［２１］  前記マルターゼグルコアミラーゼ阻害剤が、アカルボースである、［１５］に記載の組成物。
［２２］  前記ベータ−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ阻害剤が、２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコノ−１，５−ラクトンである、［１５］に記載の組成物。
［２３］  約２〜約９のｐＨを有する、［１５］に記載の組成物。
［２４］  リソソーム酵素に対する１種以上の基質をさらに含む、［１５］に記載の組成物。
［２５］  前記基質が、
（ａ）α−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、
（ｂ）α−ガラクトシダーゼ（ＧＬＡ）、
（ｃ）α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、
（ｄ）β−グルコセレブロシダーゼ（ＡＢＧ）、
（ｅ）β−ガラクトセレブロシダーゼ（ＧＡＬＣ）、
（ｆ）スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）、
（ｇ）イズロン酸２−スルファターゼ（ＩＤ２Ｓ）、
（ｈ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−スルファターゼ（ＧＡＬ６Ｓ）、および
（ｉ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−スルファターゼ（ＧＡＬ４Ｓ）
からなる群から選択されるリソソーム酵素に対する基質である、［２４］に記載の組成物。
［２６］  リソソーム酵素に対する１種以上の内部標準をさらに含む、［２４］に記載の組成物。
［２７］  前記内部標準が、
（ａ）α−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、
（ｂ）α−ガラクトシダーゼ（ＧＬＡ）、
（ｃ）α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、
（ｄ）β−グルコセレブロシダーゼ（ＡＢＧ）、
（ｅ）β−ガラクトセレブロシダーゼ（ＧＡＬＣ）、
（ｆ）スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）、
（ｇ）イズロン酸２−スルファターゼ（ＩＤ２Ｓ）、
（ｈ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−スルファターゼ（ＧＡＬ６Ｓ）、および
（ｉ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−スルファターゼ（ＧＡＬ４Ｓ）
からなる群から選択されるリソソーム酵素に対する内部標準である、［２６］に記載の組成物。