【事件の表示】
　特願２０１０−　　５８０１「中性プロテアーゼおよび中性プロテアーゼを使った組織解離用生成物ならびにその製造方法」拒絶査定不服審判事件〔平成２２年　４月１５日出願公開、特開２０１０−　８１９４１〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯　
　本願は，平成１６年６月１８日に出願した特願２００４−１８１３７３号（パリ条約による優先権主張２００３年７月９日，ドイツ）の一部を平成２２年１月１４日に新たな特許出願としたものであって，平成２２年４月１２日付けの拒絶理由通知に対して，同年１１月１０日に意見書が提出され，同年１２月３日付けで拒絶査定がなされ，これに対し，平成２３年５月２日に拒絶査定不服審判の請求がなされたものである。　
　
第２　本願発明　
　本願請求項１に係る発明（以下，「本願発明」という。）は，平成２２年２月１２日付け手続補正により補正された特許請求の範囲の請求項１の記載からみて，次のとおりのものと認める。　
　
「【請求項１】
　独立して調製されたＡ成分および独立して調製されたＢ成分からなる組織解離用二成分キットであって，Ａ成分がクロストリジウム・ヒストリチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）由来の中性プロテアーゼ（ＮＰ）であり，そしてＢ成分がコラゲナーゼまたはコラゲナーゼ酵素調製物である，上記二成分キット。」　
　
第３　引用刊行物記載の事項　
　原査定の拒絶理由に引用され，本願出願前に頒布された刊行物である特開平７−３１３１５９号公報（以下，「刊行物１」という。）には，次の事項が記載されている。　
　なお，下線は当審にて付記したものである。　
　
（刊１−１）　
「【請求項１】  
細胞組織を崩壊し，そしてその中に含まれる細胞又は細胞群を放すための方法であって，前記細胞組織を，クロストリジウム  ヒストリチカムからのクラスIIコラゲナーゼと共に，前記細胞又は細胞群が所望する程度に放されるまでインキュベートし
そして前記細胞組織画分から細胞又は細胞群を分離することを含んで成る方法
　
（刊１−２）　
「【００１８】
本発明はさらに，細胞組織を崩壊し，そしてその中に含まれる細胞又は細胞群を放すための方法にも関し，ここで前記細胞組織を，クロストリジウム  ヒストリチカムからのクラスIIコラゲナーゼと共に，前記細胞又は細胞群が所望する程度に放されるまでインキュベートし
【００１９】
細胞又は細胞群は通常，まわりの細胞外結合組織マトリックスを分解する酵素と共に器官，器官部分又は組織をインキュベートすることによって，組織（たとえば膵臓，肝臓，皮膚，内皮，ヘソの緒，骨，腫瘍組織）から単離される
酵素混合物の組成の他に，この工程における重要な因子は，消化の持続期間，pH値及び温度，並びにたとえば振盪及び金属ボールの添加による機械的影響である。細胞外結合組織マトリックスはしばしば，高い割合のコラーゲンを有するので，コラゲナーゼ及び特にタイプIIコラゲナーゼは，この場合，特定の割合を演ずる (Wolters, Hormone and Metabolic Research 26 (1994),p. 80) 。本発明の方法は好ましくは，膵臓組織から膵島又は膵島細胞を単離するために使用される
【００２０】
さらに，追加の酵素，たとえばプロテイナーゼ
の添加は，消化の質のために好都合である。
　
（刊１−３）　
「【００３４】例３　
クラスIIコラゲナーゼの発現
ＣＨＣ  IIのための遺伝子又はその一部を含むＤＮＡフラグメントを配列決定し，そしてそれらの末端を適切な手段（たとえばＰＣＲを通して）で変性し，そしてそれらはＥ．コリのための発現ベクターに全体として又は組合せで使用される。ｔａｃプロモーターが，プロモーターとして使用される。しかしながら，他の−好ましくは十分に調節できる−プロモーターを使用することもまた可能である。　
【００３５】配列番号９のフラグメントが発現のために使用され得，それは６８８又は７５７位で開始し，そして通常のプロモーターの１つの制御下でもたらされる３７９２−３９００位の領域において終結する。他方，８４７位で開始し，そして非相同シグナルペプチドのための配列をまず供給され，そして次に通常のプロモーターの後ろに配置される，３７９２−３９００位の領域において終結するフラグメントが使用され得る。高いコピー数を有するそれらのベクターは，ベクター，たとえばｐＵＣシリーズのベクターとして適切である。しかしながら，ｐＡＣＹＣ１７７又はｐＡＣＹＣ１８４に由来する低いコピー数を有するベクターもまた，選択された宿主細胞が高いコピー数での発現に耐性でない場合，使用され得る。２５−３７℃の範囲が増殖温度として好ましい。　
【００３６】発現プラスミドにより形質転換されたＥ．コリ株を，３０℃〜３７℃で一晩，最少培地において又はＬＢ培地において，抗生物質による選択下で培養した（たとえば５mlの培養物として）。その一晩の培養物をより多量の容積中に接種し（たとえば１ｌ），そしてさらなる増殖を可能にする。その容積がバイオコスを得るためにすでに使用される場合，それはＩＰＴＧにより０．２〜２のＯＤ550 で誘発され，そして細胞は，ＯＤ及び／又は形成する酵素活性のさらなる上昇が存在しなくなるまで，さらに増殖される。この時点で，それを遠心分離し，そしてバイオマスを，
コラゲナーゼを精製するために使用する
コラゲナーゼをそれから精製する
　
（刊１−４）　
「【００３７】例４　
ブタ膵臓からの膵島の単離
新たに殺害されたブタからの膵臓を用意し，そして氷冷却されたＨＢＳＳ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ）中で，さらなる加工まで冷却する。Ｂｒａｕｎｕｌｅを膵臓管中に挿入し，そしてそこで固定し，膵臓の水密性をＨＢＳＳ緩衝液を用いて試験する。
精製された組合せタイプIIコラゲナーゼのみ又はクロストリジウム  ヒストリチカムからの精製された天然又は組換え中性プロテアーゼと組合して含む，ＨＢＳＳ緩衝液＋Ｃａ
2+
における酵素溶液を注入する
【００３８】消化を氷冷却されたＨＢＳＳ／１０％ＦＣＳ（ウシ胎児血清）の添加により停止し，そしてその懸濁液を，粗い粒子を分離するために篩（メッシュサイズ３００μｍ）を通して濾過する。濾液に存在する膵島を，２５０mlのＮａｌｇｏｎｅ丸底フラスコにおいて１００ｇで１０分間，遠心分離する。上清液をデカントし，そして膵島を含むペレットを５０mlのＦＣＳに再懸濁する。　
【００３９】
膵島を手動により行なわれる密度グラジエントによりさらに精製できる。
膵臓のサイズ，純度及び収率を，あらゆる画分において顕微鏡的に又は像分析の助けにより決定する
　
（刊１−５）　
「【発明の名称】クロストリジウム  ヒストリチカムからの
組換え
　
（刊１−６）　
「【０００１】本発明は，クロストリジウム  ヒストリチカムからの
組換え
　
第４　刊行物１記載の発明　
　刊行物１には，「例４　ブタ膵臓からの膵島の単離」の項に，「精製された
組合せ
　ここで，刊行物１は，「クロストリジウム  ヒストリチカムからの
組換え
組合せ
組換え
　また，刊行物１には，コラゲナーゼは，膵臓組織から膵島又は膵島細胞を単離するために使用され，プロテイナーゼ等の追加の酵素の添加が，消化の質のために好都合であることも記載されている（摘示（刊１−２））。　
　そうすると，上記「精製された
組合せ
組換え
組換え
　したがって，刊行物１には次の発明（以下，「引用発明」という。）が記載されていると認められる。　
「精製された組換えタイプIIコラゲナーゼを，クロストリジウム  ヒストリチカムからの精製された天然又は組換え中性プロテアーゼと組合して含む，ＨＢＳＳ緩衝液＋Ｃａ2+における酵素溶液。」　
　
第５　対比　
　本願発明と引用発明を対比する。　
　
１　Ｂ成分（コラゲナーゼ）について　
　引用発明の「組換えタイプIIコラゲナーゼ」は，本願発明の「コラゲナーゼまたはコラゲナーゼ酵素調製物」，すなわち，Ｂ成分に相当する。　
　引用発明の「精製された組換えタイプIIコラゲナーゼ」（摘示（刊１−４））は，（刊１−３）に記載されるとおり，クラスIIコラゲナーゼの遺伝子を大腸菌に組み込んで発現させたタンパク質が，「精製」されて使用されるものである。「精製」は，「多成分系における少量ないし微量の不純物成分を分離，除去することにより主成分物質の純度を高めること，またはその操作。物質の究極の特性を調べたり，純物質の性質を利用した新材料や新試剤を得ることを目的として精製を行う。」という意味であり（化学大辞典１９９６年発行第１版第１２３６頁参照），「組換えタイプIIコラゲナーゼ」の純物質を得るに際し，「独立して調製」されないことは考え難いから，引用発明の「精製された」なる用語と，本願発明の「独立して調製された」なる用語は，技術的に異なるものではない。　
　よって，引用発明の「精製された組換えタイプIIコラゲナーゼ」は，本願発明の「独立して調製されたＢ成分」に相当する。　
（当審注：「クラスII」と「タイプII」とは刊行物１において同義である。）　
　
２　Ａ成分（中性プロテアーゼ）について　
　本願発明の「（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）」は「クロストリジウム・ヒストリチカム」の英語表記であり，「（ＮＰ）」は「中性プロテアーゼ」の英語表記であるＮｅｕｔｒａｌ　Ｐｒｏｔｅａｓｅの省略形である。　
　そして，「精製された」については，上記「１　Ｂ成分（コラゲナーゼ）について」で検討したとおりであるから，刊行物１に記載の「クロストリジウム  ヒストリチカムからの精製された天然又は組換え中性プロテアーゼ」は，本願発明の，クロストリジウム・ヒストリチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）由来の精製された中性プロテアーゼ（ＮＰ），すなわち，「独立して調製されたＡ成分」に相当する。　
　
３　組織解離用二成分キットについて　
　本願発明の「組織解離」は，例えば明細書に「＜実施例１＞　中性プロテアーゼ活性を調節すると，長時間冷蔵後のブタの
島細胞単離
ランゲルハンス島の単離
膵島（ランゲルハンス島）の単離
　刊行物１には，「【００１８】本発明はさらに，細胞組織を崩壊し，そしてその中に含まれる細胞又は細胞群を放すための方法にも関し，ここで前記細胞組織を，クロストリジウム  ヒストリチカムからのクラスIIコラゲナーゼと共に，前記細胞又は細胞群が所望する程度に放されるまでインキュベートし，・・・そして前記細胞組織画分から細胞又は細胞群を分離することを含んで成る細胞組織画分からの細胞又は細胞群の分離」と記載されており（摘示（刊１−２），（刊１−１）），引用発明の酵素溶液を用いた「例４」では，「ブタ膵臓からの膵島の単離」が行われている（摘示（刊１−４））。そして，プロテイナーゼ等の追加の酵素の添加が，消化の質のために好都合であることも記載されている（摘示（刊１−２））。　
　したがって，引用発明における「酵素溶液」は，細胞組織の単離のためのコラゲナーゼ（Ｂ成分）と中性プロテアーゼ（Ａ成分）を含む物，すなわち，組織解離用の成分一式である二成分を含む物である。　
　また，本願発明において，Ａ成分およびＢ成分を調製するための緩衝液組成は特定されていない。　
　そうすると，引用発明の「酵素溶液」は，本願発明の「組織解離用二成分キット」とは，組織解離用の成分一式である二成分を含む物である点で共通する。　
　
４　小括　　
　したがって，両発明は，次の（一致点）及び（相違点）を有する。　
　
（一致点）　
「独立して調製されたＡ成分および独立して調製されたＢ成分からなる組織解離用の成分一式である二成分を含む物であって，Ａ成分がクロストリジウム・ヒストリチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）由来の中性プロテアーゼ（ＮＰ）であり，そしてＢ成分がコラゲナーゼまたはコラゲナーゼ酵素調製物である，上記成分一式である二成分を含む物。」　
　
（相違点）　
　本願発明では，成分一式である二成分を含む物が，「キット」であるのに対し，引用発明では，そのような特定がない点。　
　
第６　判断　
　そこで，以下に前記相違点について検討する。　
　
１　キットについて　
　刊行物１には，「精製された組合せタイプIIコラゲナーゼのみ又はクロストリジウム  ヒストリチカムからの精製された天然又は組換え中性プロテアーゼと組合して含む，ＨＢＳＳ緩衝液＋Ｃａ2+における酵素溶液を注入する。」（摘示（刊１−４））と記載されており，上記「第５　対比」で検討したとおり，これは，Ａ成分と，Ｂ成分とが，それぞれ精製されたものとして準備され，それらを組み合して含む酵素溶液を，膵臓からの膵島単離の処理に用いることを意味していることが，当業者には明らかである。　
　特に，刊行物１における一方のＢ成分（コラゲナーゼ）は，クラスIIコラゲナーゼの遺伝子を大腸菌に組み込んで発現させたタンパク質を精製して使用するものである（摘示（刊１−３））から，もう一方のＡ成分（中性プロテアーゼ）は当然，Ｂ成分に含まれていたものではなく，別途用意したものである。　
　そして，成分一式を含む物をキット化することは，試験試薬の当業界においては常套手段であって，引用発明において，成分一式を含む物を一つに梱包してキットとすることは，当業者が容易に想到し得たものである。　
　また，「組み合して含む酵素溶液」とする直前の状態は，別々の物として精製された物，あるいは別々の製品として存在していた物であって，そのような態様を，本願発明では，キットとして認識したに過ぎないともいえる。　
　
２　効果について　
　本願明細書の段落【００１４】には，「本発明の生成物ならびに本発明による組織解離への中性プロテアーゼの使用では，組織の細胞または細胞集合体を単離するために，中性プロテアーゼをコラゲナーゼ酵素調製物に個別に添加するか，またはコラゲナーゼもしくはコラゲナーゼＩおよびＩＩに個別に添加することにより，コラゲナーゼ酵素調製物中に含まれていないクロストリジウム・ヒストリチカムの
中性プロテアーゼ（ＮＰ）を個別に使用するので，細胞の収量，生存性および完全性に関して単離結果の改善が達成される
中性プロテアーゼはコラゲナーゼ調製物中に含まれていないので，より高度な酵素安定性が達成される
　また，段落【００１５】には，「種，臓器の状態および臓器の位置に応じた消化による作用の証明は，特に有利である。
驚いたことに，中性プロテアーゼの添加に変更を加えるだけで，島細胞換算収量，生存性，島細胞または島細胞集合体の完全性に関して，単離結果を有意に改善することができた
中性プロテアーゼ量の方が重要である。なぜなら，この酵素はその量が多すぎても少なすぎても，細胞を劣化させる作用を持ち，組織解離が不完全に終わるため，単離される島細胞および島細胞集合体の収量が低下するからである
中性プロテアーゼを個別に用量調整できるようにするには，他のタンパク質分解活性（例えば中性プロテアーゼの活性）を少量しか含んでいない精製または部分精製コラゲナーゼを使用することも重要である
　そして，実施例として，中性プロテアーゼの量を調製することにより，膵島単離における収量，生存性，完全性に改善が見られたことが示されている。　
　これに対し，引用発明においても，成分一式のＡ成分とＢ成分は，それぞれ別途用意されたものであり，また，「組み合して含む酵素溶液」とする直前の状態は，別々の物として精製された物，あるいは別々の製品として存在していた物であるから，そもそも劣化し合うことはないし，
酵素安定性が達成
中性プロテアーゼを個別に用量調整できる
　したがって，上記段落【００１４】及び【００１５】の，「
中性プロテアーゼ（ＮＰ）を個別に使用する
中性プロテアーゼはコラゲナーゼ調製物中に含まれていない
細胞の収量，生存性および完全性に関して単離結果の改善
より高度な酵素安定性
中性プロテアーゼを個別に用量調整できるようにする
　
　なお，審判請求人は，本願発明について，（１）両酵素成分を混合直前まで混合しないでおくことによって酵素活性の低下の問題を回避でき，良好な細胞単離結果が得られること，（２）両酵素成分が別々に提供されるため，各実施例に示すように，組織の種類や状態に応じて両酵素成分の量比を自在に調節して最適化することが可能であること，を主張している。　
　しかしながら，当該（１）及び（２）の，「両酵素成分を混合直前まで混合しないでおく」，あるいは「両酵素成分が別々に提供される」ことに起因する効果は，引用発明と比較した顕著な効果とはいえず，引用発明から自明な効果であることは，上記「２　効果について」で検討したとおりである。
　そして，（２）の各実施例に示された両酵素成分の量比の最適化条件についても，別の商品（Ａ成分とＢ成分が予め混合された既製品であるリベラーゼ）との比較効果であって，引用発明との比較効果でないことから，本願発明の効果の顕著性を検討する上で参酌できない。　
　
第７　むすび　
 　以上のとおり，本願発明は，刊行物１に記載された発明に基いて，当業者が容易に発明をすることができたものであるから，特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。 
 　したがって，その他の請求項に係る発明についての判断を示すまでもなく本願は拒絶すべきものである。 
 　よって，結論のとおり審決する。