(57)【要約】【課題】ノンエンベロープウイルスに対して即効的な不活性化効果を有し、安全性にも優れたウイルス不活性化組成物を提供する。【解決手段】ウイルス不活性化成分として１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと、ウイルス不活性化成分の効力増強剤として炭酸塩、炭酸水素塩、アルカノールアミンから選ばれた１種以上と、を水に溶解させて成り、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドの配合量が０．０５質量％以上１．０質量％以下であるウイルス不活性化組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス不活性化成分として１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと、
前記ウイルス不活性化成分の効力増強剤として炭酸塩、炭酸水素塩、アルカノールアミンから選ばれた１種以上と、
を水に溶解させて成り、前記１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドの配合量が０．０５質量％以上１．０質量％以下であることを特徴とするウイルス不活性化組成物。
【請求項２】
前記効力増強剤が炭酸水素ナトリウムであり、
前記炭酸水素ナトリウムの配合量が０．００１質量％以上１．０質量％以下であることを特徴とする請求項１に記載のウイルス不活性化組成物。
【請求項３】
前記炭酸水素ナトリウムの配合量が０．００５質量％以上１．０質量％以下であることを特徴とする請求項２に記載のウイルス不活性化組成物。
【請求項４】
前記効力増強剤が炭酸ナトリウムであり、
前記炭酸ナトリウムの配合量が０．０００５質量％以上１．０質量％以下であることを特徴とする請求項１に記載のウイルス不活性化組成物。
【請求項５】
前記炭酸ナトリウムの配合量が０．００５質量％以上１．０質量％以下であることを特徴とする請求項４に記載のウイルス不活性化組成物。
【請求項６】
前記効力増強剤がモノエタノールアミンであり、
前記モノエタノールアミンの配合量が０．００１質量％以上１．０質量％以下であることを特徴とする請求項１に記載のウイルス不活性化組成物。
【請求項７】
前記モノエタノールアミンの配合量が０．１質量％以上１．０質量％以下であることを特徴とする請求項６に記載のウイルス不活性化組成物。
【請求項８】
請求項１乃至請求項７のいずれかに記載のウイルス不活性化組成物をノンエンベロープウイルスに対して接触させるノンエンベロープウイルスの不活性化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス不活性化組成物に関し、特にノロウイルス等のノンエンベロープウイルスに対して不活性化効果を有するウイルス不活性化組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、食品製造及び調理施設、医療施設、教育施設等においてカリシウイルス科のノロウイルスによる食中毒が問題となっている。ノロウイルスの不活性化の方法としては、次亜塩素酸ナトリウム溶液を用いる方法や、熱湯消毒による方法が知られている。しかし、次亜塩素酸による消毒では処理面を漂白したり、悪臭が発生したりするなど使い勝手が悪く、酸性タイプの漂白剤等と混用すると塩素ガスを発生するため安全性の面で十分ではなかった。また、熱湯消毒では、被消毒物との接触によって温度が低下してしまい所望の温度を保持することが困難である。さらに、熱湯によるやけどの危険もある。
【０００３】
ノロウイルスは、ＲＮＡのみを持ったＲＮＡ型ウイルスで、ＲＮＡの周りをカプシドと呼ばれるたんぱく質の殻で覆われており、エンベロープと呼ばれる糖と脂質からなる膜を持っていないノンエンベロープウイルスである。一般的にエンベロープを持っているインフルエンザウイルス等のエンベロープウイルスは、薬剤により簡単にエンベロープが破壊され、宿主細胞のレセプターと結合できなくなるので不活性化できる。
【０００４】
エンベロープイルスを不活性化する方法としては、例えば、特許文献１には、ウイルス不活性化効果を有する１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドを含有する抗ウイルス剤が開示されており、エンベロープイルスの一種であるインフルエンザウイルスに対する不活性化効果が記載されている。
【０００５】
塩化ベンザルコニウムなどのモノ型の第四級アンモニウム塩は、ノンエンベロープウイルスに対して十分な不活性化効果が認められないことが知られている。一方、ジェミニ型第四級アンモニウム塩である１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドは、ノンエンベロープウイルスに対して不活性化効果は認めれられるが、十分な即効性はなかった。特許文献２には、低濃度の１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドとエチレンジアミン四酢酸塩とを含有する殺カリシウイルス剤組成物の、ノンエンベロープウイルスの一種であるノロウイルス、及びノロウイルスの代替ウイルスであるカリシウイルス科のネコカリシウイルスに対する不活性化効果が記載されている。
【０００６】
また、特許文献３には、低級アルコール、アルカリ性物質およびカチオン界面活性剤の３成分から成る組成物がノロウイルスに対して不活性効果を有することが開示されており、カチオン界面活性剤として塩化ベンザルコニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン等を用いることが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００８−２１４２６８号公報
【特許文献２】特開２０１０−２１５５９８号公報
【特許文献３】特開２００８−１８９６４５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
特許文献２に記載の殺カリシウイルス剤は、ウイルス懸濁液と１０〜１５分間接触させて培養したときに不活性化効果が認められている。しかし、５分以内の即効的な不活性化効果については記載されておらず、ノンエンベロープウイルスに対してさらに即効的な不活性化効果を有するウイルス不活性化組成物が要望されていた。また、特許文献３の実施例１、２には、エタノール、アルカリ性物質およびカチオン界面活性剤を含む組成物がノロウイルスの代替ウイルスとしてのＦＣＶ、バクテリオファージ（ＭＳ２、φＸ１７４）に対して不活性化効果を示す試験結果が記載されているが、組成物に配合されるアルカリ性物質、カチオン界面活性剤の種類および配合量については何ら記載されておらず、不活性化効果が不明確であった。
【０００９】
本発明は、上記問題点に鑑み、ノンエンベロープウイルスに対して即効的な不活性化効果を有し、安全性にも優れたウイルス不活性化組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記目的を達成するために本発明は、ウイルス不活性化成分として１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと、ウイルス不活性化成分の効力増強剤として炭酸塩、炭酸水素塩、アルカノールアミンから選ばれた１種以上と、を水に溶解させて成り、前記１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドの配合量が０．０５質量％以上１．０質量％以下であることを特徴とするウイルス不活性化組成物である。
【００１１】
また本発明は、上記構成のウイルス不活性化組成物において、前記効力増強剤が炭酸水素ナトリウムであり、前記炭酸水素ナトリウムの配合量が０．００１質量％以上１．０質量％以下であることを特徴としている。
【００１２】
また本発明は、上記構成のウイルス不活性化組成物において、前記炭酸水素ナトリウムの配合量が０．００５質量％以上１．０質量％以下であることを特徴としている。
【００１３】
また本発明は、上記構成のウイルス不活性化組成物において、前記効力増強剤が炭酸ナトリウムであり、前記炭酸ナトリウムの配合量が０．０００５質量％以上１．０質量％以下であることを特徴としている。
【００１４】
また本発明は、上記構成のウイルス不活性化組成物において、前記炭酸ナトリウムの配合量が０．００５質量％以上１．０質量％以下であることを特徴としている。
【００１５】
また本発明は、上記構成のウイルス不活性化組成物において、前記効力増強剤がモノエタノールアミンであり、前記モノエタノールアミンの配合量が０．００１質量％以上１．０質量％以下であることを特徴としている。
【００１６】
また本発明は、上記構成のウイルス不活性化組成物において、前記モノエタノールアミンの配合量が０．１質量％以上１．０質量％以下であるであることを特徴としている。
【００１７】
また本発明は、上記構成のウイルス不活性化組成物をノンエンベロープウイルスに対して接触させるノンエンベロープウイルスの不活性化方法である。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の第１の構成によれば、ウイルス不活性化成分として０．０５質量％以上１．０質量％以下の１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと、ウイルス不活性化成分の効力増強剤として炭酸塩、炭酸水素塩、アルカノールアミンから選ばれた１種以上と、を水に溶解させることにより、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドの配合量を抑えつつ、ノンエンベロープウイルスに対する即効的な不活性化効果と安全性、使用性とを兼ね備えたウイルス不活性化組成物となる。
【００１９】
また、本発明の第２の構成によれば、上記第１の構成のウイルス不活性化組成物において、効力増強剤の中でも特に１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドのウイルス不活性化効果を顕著に増強する炭酸水素ナトリウムを用い、炭酸水素ナトリウムの配合量を０．００１質量％以上１．０質量％以下とすることにより、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドによるウイルス不活性化効果に即効性を付与するとともに、組成物を塗布した後の炭酸水素ナトリウムの残渣を低減可能なウイルス不活性化組成物となる。
【００２０】
また、本発明の第３の構成によれば、上記第２の構成のウイルス不活性化組成物において、炭酸水素ナトリウムの配合量を０．００５質量％以上１．０質量％以下とすることにより、炭酸水素ナトリウムの配合量を１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドによるウイルス不活性化効果の即効性をより一層高めることができる。
【００２１】
また、本発明の第４の構成によれば、上記第１の構成のウイルス不活性化組成物において、効力増強剤の中でも特に１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドのウイルス不活性化効果を顕著に増強する炭酸ナトリウムを用い、炭酸ナトリウムの配合量を０．０００５質量％以上１．０質量％以下とすることにより、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドによるウイルス不活性化効果に即効性を付与するとともに、組成物を塗布した後の炭酸ナトリウムの残渣を低減可能なウイルス不活性化組成物となる。
【００２２】
また、本発明の第５の構成によれば、上記第４の構成のウイルス不活性化組成物において、炭酸ナトリウムの配合量を０．００５質量％以上１．０質量％以下とすることにより、炭酸水素ナトリウムの配合量を１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドによるウイルス不活性化効果の即効性をより一層高めることができる。
【００２３】
また、本発明の第６の構成によれば、上記第１の構成のウイルス不活性化組成物において、効力増強剤の中でも特に１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドのウイルス不活性化効果を顕著に増強するモノエタノールアミンを用い、モノエタノールアミンの配合量を０．００１質量％以上１．０質量％以下とすることにより、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドによるウイルス不活性化効果に即効性を付与することができ、且つ、モノエタノールアミン特有の臭気や皮膚に対する刺激を実用上問題のない範囲とすることができる。
【００２４】
また、本発明の第７の構成によれば、上記第６の構成のウイルス不活性化組成物において、モノエタノールアミンの配合量を０．１質量％以上１．０質量％以下とすることにより、モノエタノールアミンの配合量を１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドによるウイルス不活性化効果の即効性をより一層高めることができる。
【００２５】
また、本発明の第８の構成によれば、上記第１乃至第７のいずれかの構成のウイルス不活性化組成物をノンエンベロープウイルスに対して接触させることにより、薬剤感受性が低く不活性化が困難なノンエンベロープウイルスの効果的な不活性化方法となる。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、本発明のウイルス不活性化組成物について詳細に説明する。本発明のウイルス不活性化組成物は、ウイルス不活性化成分として１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと、ウイルス不活性化成分の効力増強剤として炭酸塩、炭酸水素塩、およびアルカノールアミンから選ばれた１種以上と、を水に混合して水溶液としたものである。
【００２７】
１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドは、下記の化学式（１）で表されるジェミニ型第四級アンモニウム塩であり、水に対する溶解度が２０℃で５８９ｇ／１００ｇである。
【化１】
2018127401.tif 000002
【００２８】
本発明のウイルス不活性化組成物における１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドの配合量が少なすぎると十分なウイルス不活性化効果が得られない。一方、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドの配合量が多すぎるとウイルス不活性化効果の向上が見られない上に、皮膚刺激等が発生するおそれがある。そこで、コストや皮膚刺激等を考慮しつつ十分なウイルス不活性化効果を維持するためには、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドの配合量を０．０５質量％以上１．０質量％以下の範囲とすることが好ましい。更に、０．０５質量％以上０．５質量％以下の範囲とするとより好ましい。
【００２９】
本発明のウイルス不活性化組成物には、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドのウイルス不活性化効果を向上させる効力増強剤として炭酸塩、炭酸水素塩、およびアルカノールアミンから選ばれた１種以上が配合される。従来、アルカリ性物質がある程度のウイルス不活性化効果を有することは知られていたが、炭酸塩、炭酸水素塩、アルカノールアミンが１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドのウイルス不活性化効果を顕著に高めることは、本発明者らによって初めて発見された知見である。
【００３０】
本発明のウイルス不活性化組成物に配合される炭酸塩としては、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸アンモニウム等が挙げられる。炭酸水素塩としては、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素アンモニウム等が挙げられる。アルカノールアミンとしては、モノエタノールアミン、モノイソプロパノールアミン、ジエチルエタノールアミン、β−アミノアルカノール、ジエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン、２−（メチルアミノ）エタノール、トリエタノールアミン、トリイソプロパノールアミン等が挙げられる。上記の化合物の中でも、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、モノエタノールアミンが特に好適に使用できる。これらの効力増強剤はそれぞれ単独で配合しても良いし、所定の配合比で混合して配合しても良い。
【００３１】
本発明のウイルス不活性化組成物における効力増強剤の配合量は、特に限定されないものの、配合量が少なすぎる場合は１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドのウイルス不活性化効果が十分に増強されない可能性がある。一方、配合量が多すぎても１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドのウイルス不活性化効果の効率的な向上が見られない。
【００３２】
また、効力増強剤として炭酸塩、炭酸水素塩を用いる場合、配合量が多すぎると組成物を塗布した後に固形物の残渣が残ってしまう。また、効力増強剤としてアルカノールアミンを用いる場合、特有の臭気や皮膚に対する刺激により使用感が悪くなる。従って、炭酸塩、炭酸水素塩、およびアルカノールアミンの配合量は、乾燥時の残渣や臭気等を考慮すると１．０質量％以下が好ましい。
【００３３】
具体的には、後述の実施例において示すように、炭酸水素ナトリウムの配合量は組成物全体に対して０．００１質量％以上１．０質量％以下が好ましく、０．００５質量％以上１．０質量％以下が特に好ましい。また、炭酸ナトリウムの配合量は組成物全体に対して０．０００５質量％以上１．０質量％以下が好ましく、０．００５質量％以上１．０質量％以下が特に好ましい。また、モノエタノールアミンの配合量は組成物全体に対して０．００１質量％以上１．０質量％以下が好ましく、０．１質量％以上１．０質量％以下が特に好ましい。
【００３４】
本発明のウイルス不活性化組成物には、目的に応じて界面活性剤を配合することができる。界面活性剤には泡を発生する性質（泡立ち性）があり、泡立ち性に優れた界面活性剤を使用することで、本発明のウイルス不活性化組成物をトリガースプレー等で壁面にスプレーしたときの液ダレを抑制するとともに塗布領域も視認しやすくなる。
【００３５】
本発明のウイルス不活性化組成物に配合される界面活性剤の種類は特に限定されるものではなく、ノニオン系界面活性剤、カチオン界面活性剤及び両性界面活性剤が挙げられる。本発明のウイルス不活性化組成物中における界面活性剤の配合量は、特に限定されないものの、０．１重量％以上１０重量％以下であることが好ましい。
【００３６】
ノニオン界面活性剤の例としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレン高級脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、脂肪酸アルカノールアミド、アルキルアミンオキシドなどが挙げられる。
【００３７】
カチオン界面活性剤の例としては、ラウリルトリメチルアンモニウムクロリド、塩化ベンザルコニウム等の第４級アンモニウム塩が挙げられる。
【００３８】
両性界面活性剤の例としては、ベタイン型界面活性剤が挙げられる。具体的には、ラウリル−Ｎ，Ｎ−ジメチル酢酸ベタイン、ラウリルアミドプロピル−Ｎ，Ｎ−ジメチル酢酸ベタイン、ヤシアルキルアミドプロピル−Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドロキシプロピルスルホベタイン等が挙げられる。
【００３９】
本発明のウイルス不活性化組成物は、水系タイプであり、溶媒としては主に水が用いられる。水としては、イオン交換水や逆浸透膜水等の精製水や、通常の水道水や工業用水、海洋深層水等が挙げられる。また必要に応じて、エタノール等の低級アルコール、各種グリコールやグリコールエーテル等の溶剤を用いることができる。
【００４０】
更に、本発明のウイルス不活性化組成物には、その他の成分として、必要に応じて、無機抗菌剤、有機抗菌剤、防藻剤、防錆剤、キレート剤、香料、消臭成分等を、本発明の効果を損なわない範囲で配合することにより、抗菌効果、防藻効果、防錆効果、洗浄効果、芳香性、消臭性等を付与するようにしてもよい。
【００４１】
こうして得られた本発明のウイルス不活性化組成物を、ウイルス感染者が触れた場所、ウイルス感染者の嘔吐物を処理した場所や衣服等に直接塗布あるいはスプレーすることで、ウイルスを不活性化し、二次感染を防ぐことができる。そして、本発明のウイルス不活性化組成物は、次亜塩素酸を配合しないことから、安全に、かつ簡単に施用できるので極めて実用性が高いものである。
【００４２】
また、本発明のウイルス不活性化組成物は、インフルエンザウイルス等のエンベロープウイルスに加えて、ノロウイルス等のノンエンベロープウイルスに対しても高い不活性化効果を有する。従って、従来のウイルス除去剤では不活性化が困難であったノロウイルスの不活性化に好適に使用することができる。
【００４３】
また、本発明のウイルス不活性化組成物は、ウイルス不活性化成分として１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと、効力増強剤として炭酸塩、炭酸水素塩、およびアルカノールアミンから選ばれた１種以上と、を水に配合するだけの、非常に単純な組成である。そして、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイド、および効力増強剤として用いられる炭酸塩、炭酸水素塩、アルカノールアミンはいずれも安全性の高い化合物である。そのため、製造が簡便なうえ、多くのウイルス不活性化剤で問題となる皮膚への刺激性も小さく、安全性が極めて高いものである。
【００４４】
なお、本発明は上述した実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。以下、実施例により本発明の効果について更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に制約されるものではない。
【実施例１】
【００４５】
[試験液の調製]
１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイド（ハイジェニアＳ−１００、タマ化学工業社製）、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム（いずれも和光純薬工業社製）、モノエタノールアミン（日本触媒社製）を表１に示す配合割合（質量％）で配合し、イオン交換水を加えて１００質量％として試験液（本発明１〜９）を得た。
【００４６】
表１の化合物に、さらに塩化ベンザルコニウム（カチオンＦ２−５０Ｒ、日油社製）、塩化ジデシルジメチルアンモニウム（リポガード２１０−８０Ｅ、ライオン・スペシャリティ・ケミカルズ社製）を加え、表２に示す配合割合（質量％）で配合し、イオン交換水を加えて１００質量％として試験液（比較例１〜１０）を得た。
【実施例２】
【００４７】
［ウイルス不活性化効果の確認試験（Feline calicivirus）］
（試験ウイルス液の調製）
ＭＥＭ培地（ナカライテスク社製）に牛胎仔血清を１０％加えた細胞増殖培地を用いてＣＲＦＫ細胞（ＪＲＢＣ細胞バンク）を組織培養シャーレ内に単層培養した。単層培養シャーレ内から細胞増殖培地を除去し、ネコカリシウイルス（Feline calicivirus F-9 ATCC VR-782）を接種した。次に、ＭＥＭ培地に牛胎仔血清を２％加えた細胞維持培地を加えて３７±１℃の炭酸ガスインキュベーター（ＣＯ2濃度５％）内で１〜５日間培養した。ネコカリシウイルスはノンエンベロープウイルスの一種であり、細胞培養できないノロウイルスの代替ウイルスとして広く使用されている。
【００４８】
培養後、倒立位相差顕微鏡を用いて細胞の形態を観察し、細胞に形態変化（細胞変性効果）が起こっていることを確認した。次に、培養液を１０００ｒｐｍ／分で３分間遠心分離し、得られた上澄み液をウイルス浮遊液とした。ウイルス浮遊液と、フィルター滅菌した２０％ウシ血清アルブミン水溶液を１：３で混合したものを試験ウイルス液とした。試験ウイルス液には負荷として１５％のウシ血清アルブミンが含まれている。
【００４９】
実施例１で調製した本発明、比較例の試験液０．９ｍＬに、試験ウイルス液０．１ｍＬを添加混合し、作用液とした。一定時間後に作用液をＭＥＭ培地で１０００倍希釈し、１０倍希釈系列を作製した。なお、精製水に試験ウイルス液を添加したものを対照として同様の操作を行った。
【００５０】
（ウイルス感染価の測定）
細胞増殖培地を用い、使用細胞を組織培養用マイクロプレート（９６穴）内で単層培養した後、細胞増殖培地を除去して細胞維持培地を０．１ｍＬずつ加えた。次に、作用液の１０倍希釈系列０．１ｍＬをそれぞれ４穴ずつに接種し、３７±１℃の炭酸ガスインキュベーター（ＣＯ2濃度５％）内で４〜７日間培養した。培養後、倒立位相差顕微鏡を用いて細胞の形態変化（細胞変性効果）の有無を観察し、Ｒｅｅｄ−Ｍｕｅｎｃｈ法により５０％細胞培養感染量（ＴＣＩＤ50）を算出して作用液１ｍＬ当たりの感染価に換算し、対照とした精製水の感染価を用いてウイルス除去率を算出した。
【００５１】
評価基準は、作用液を１分作用させたときのウイルス除去率が９９％以上であるものを◎、１分作用させたときのウイルス除去率が７５％以上９９％未満、５分作用させたときのウイルス除去率が９９％以上であるものを○、１分作用させたときのウイルス除去率が７５％未満であるものを×とした。ウイルス除去効果を試験液の配合と併せて表１、表２に示す。
【００５２】
【表１】
2018127401.tif 000003
【００５３】
【表２】
2018127401.tif 000004
【００５４】
表１に示すように、０．１質量％、０．５質量％の１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと０．００１〜０．１質量％の炭酸水素ナトリウムとを配合した本発明１〜４、０．１質量％、０．５質量％の１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと０．０００５、０．００５質量％の炭酸ナトリウムとを配合した本発明５、６、および０．０５質量％〜０．５質量％の１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと０．００１〜１質量％のモノエタノールアミンとを配合した本発明７〜９では、いずれもネコカリシウイルスに対して５分後のウイルス除去率が９９％以上となり、短時間（５分間）の処理でネコカリシウイルスがほぼ完全に不活性化した。
【００５５】
特に、０．１質量％、０．５質量％の１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと０．００５〜０．１質量％の炭酸水素ナトリウムとを配合した本発明１〜３、０．１質量％の１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと０．００５質量％の炭酸ナトリウムとを配合した本発明５、および０．１質量％の１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと０．１質量％のモノエタノールアミンとを配合した本発明７では、１分後のウイルス除去率が９９％以上となった。本発明３と本発明４、本発明５と本発明６、本発明７と本発明８の比較より、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウムの配合量を０．００５質量％以上、モノエタノールアミンの配合量を０．１質量％以上とすることで、より一層即効的なウイルス不活性化効果が得られることが確認された。
【００５６】
これに対し、表２に示すように、０．０１質量％の１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと、０．５質量％の炭酸水素ナトリウムとを配合した比較例１では１分後のウイルス除去率が０％となり、ウイルス不活性化効果が認められなかった。
【００５７】
また、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドに代えて、同じ第四級アンモニウム塩である０．１質量％の塩化ベンザルコニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウムと０．１質量％の炭酸水素ナトリウムとを配合した比較例２、３では、それぞれ１分後のウイルス除去率が０％となり、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムと塩化ベンザルコニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウムとの相乗効果によるウイルス不活性化効果は認められなかった。
【００５８】
一方、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、モノエタノールアミンをそれぞれ単独で配合した比較例４〜６では、いずれも１分後のウイルス除去率が７０％未満であり、ウイルス不活性化効果が十分ではなかった。また、０．１質量％、０．５質量％の１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドを単独で配合した比較例７、８では、それぞれ１分後のウイルス除去率が６０％、６５％となり、ウイルス不活性化効果が十分ではなかった。
【００５９】
さらに、０．１質量％の塩化ベンザルコニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウムのみを配合した比較例９、１０では、１分後のウイルス除去率が０％となり、ウイルス不活性化効果が認められなかった。
【００６０】
表１、表２の結果から、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドは、単独では即効性のある十分なウイルス不活性化効果は認められなかったが、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、またはモノエタノールアミンと併せて配合した場合に即効的なウイルス不活性化効果が得られることが確認された。
【００６１】
以上の結果より、炭酸塩である炭酸ナトリウム、炭酸水素塩である炭酸水素ナトリウム、アルカノールアミンであるモノエタノールアミンは、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドと共に配合することで、１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドのウイルス不活性化効果を増強する効力増強剤として特異的に作用することが確認された。
【００６２】
なお、ここでは本発明のウイルス不活性化組成物によるエンベロープウイルスに対する不活性化効果は示していないが、エンベロープウイルスはノンエンベロープウイルスに比べて薬剤に対する感受性が高いため、本発明のウイルス不活性化組成物がエンベロープウイルスに対しても即効的な不活性効果を有するのはもちろんである。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明は、ウイルス不活性化成分である１，４−ビス（３，３′−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイドの配合量を抑えつつ、ノンエンベロープウイルスに対する即効的なウイルス不活性化効果、安全性、使用性を兼ね備えたウイルス不活性化組成物であり、特にウイルスで汚染された場所に直接スプレー等により塗布されるウイルス不活性化剤として好適に用いられる。