【手続補正書】
【提出日】平成27年6月12日(2015.6.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
野生型PYR/PYL受容体ポリペプチドと比較して、リガンド結合ポケットおよび／または2型プロテインホスファターゼ（PP2C）結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO:1に示されるPYR1における位置V83に相当する位置に変異を含み、かつアブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合する変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸。
【請求項２】
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換V83F/L/Pに相当するアミノ酸置換を含む、請求項1記載の単離された核酸。
【請求項３】
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P/G/R/A/W/I/K/V/M、I84Q/E/P/H/K、L87F、A89W、M158T/C/V/I、F159V/A、T162F、L166Y/F、またはK170Wに相当する1種以上のアミノ酸置換をさらに含む、請求項1または2記載の単離された核酸。
【請求項４】
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P/G、I84Q、A89W、M158T/C、F159V、またはK170Wに相当する1種以上のアミノ酸置換を含む、請求項3記載の単離された核酸。
【請求項５】
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、
(i)SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P、V83F、およびF159Vに相当するアミノ酸置換、
(ii)SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P、V83F、M158I、およびF159Vに相当するアミノ酸置換、または
(iii)SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換V83F、M158I、F159V、およびK170Wに相当するアミノ酸置換
を含む、請求項1〜4のいずれか一項記載の単離された核酸。
【請求項６】
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、アブシジン酸の非存在下でホスファターゼアッセイにおいてPP2Cの活性を有意に阻害する、請求項1〜5のいずれか一項記載の単離された核酸。
【請求項７】
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、アブシジン酸の非存在下で野生型PYR/PYL受容体ポリペプチドと接触させたPP2CのPP2C活性のレベルと比較して、アブシジン酸の非存在下でPP2Cの活性を少なくとも50％阻害する、請求項6記載の単離された核酸。
【請求項８】
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1〜155のいずれかと少なくとも70%の配列同一性を有する配列を含む、請求項1〜7のいずれか一項記載の単離された核酸。
【請求項９】
請求項1〜8のいずれか一項記載のポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含む発現カセットであって、植物への該発現カセットの導入が、アブシジン酸の非存在下で2型プロテインホスファターゼ（PP2C）に結合するPYR/PYL受容体を有する植物をもたらす、発現カセット。
【請求項１０】
プロモーターが
(i)前記ポリヌクレオチドと異種である、
(ii)誘導性である、
(iii)ストレス誘導性である、または
(iv)組織特異的である、
請求項9記載の発現カセット。
【請求項１１】
請求項9または10記載の発現カセットを含む発現ベクター。
【請求項１２】
アブシジン酸の非存在下で有意に阻害されたPP2C活性を有する、請求項9または10記載の発現カセットを含む植物。
【請求項１３】
請求項12記載の植物に由来する植物細胞、種子、花、葉、果実、加工食品、または食品成分。
【請求項１４】
アブシジン酸の非存在下で有意に阻害された2型プロテインホスファターゼ（PP2C）活性を有する植物を作製する方法であって、
請求項9または10記載の発現カセットを複数の植物へ導入する工程；および
前記複数の植物から、前記ポリヌクレオチドを発現する植物を選択する工程
を含む、方法。
【請求項１５】
増強されたストレス耐性を有する植物を作製する方法であって、
野生型PYR/PYL受容体ポリペプチドと比較して、リガンド結合ポケットおよび／または2型プロテインホスファターゼ（PP2C）結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO:1に示されるPYR1における位置V83に相当する位置に変異を含み、かつアブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合する変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含む発現カセットを複数の植物へ導入する工程；および
前記複数の植物から、前記ポリヌクレオチドを発現する植物を選択する工程
を含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明の方法による植物における変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドの発現のため、いくつかの態様において、変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、異種プロモーターに機能的に連結される。いくつかの態様において、プロモーターは誘導性プロモーターである。いくつかの態様において、プロモーターは、ストレス誘導性プロモーター、例えば、干ばつ誘導性プロモーターおよび／または塩分誘導性プロモーターである。いくつかの態様において、プロモーターはRD29Aである。いくつかの態様において、プロモーターは組織特異的である。
[本発明1001]
野生型PYR/PYL受容体ポリペプチドと比較して、リガンド結合ポケットおよび／または2型プロテインホスファターゼ（PP2C）結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含み、アブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合する変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸。
[本発明1002]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、リガンド結合ポケットにおける1種以上のアミノ酸置換を含む、本発明1001の単離された核酸。
[本発明1003]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P/G/R/A/W/I/K/V/M、V83F/L/P、L87F、A89W、またはF159V/Aに相当する1種以上のアミノ酸置換を含む、本発明1002の単離された核酸。
[本発明1004]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P/G、V83F、A89W、またはF159Vに相当する1種以上のアミノ酸置換を含む、本発明1003の単離された核酸。
[本発明1005]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、PP2C結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含む、本発明1001の単離された核酸。
[本発明1006]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P/G/R/A/W/I/K/V/M、I84Q/E/P/H/K、L87F、A89W、M158T/C/V/I、F159V/A、T162F、L166Y/F、またはK170Wに相当する1種以上のアミノ酸置換を含む、本発明1005の単離された核酸。
[本発明1007]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P/G、I84Q、A89W、M158T/C、F159V、またはK170Wに相当する1種以上のアミノ酸置換を含む、本発明1006の単離された核酸。
[本発明1008]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、リガンド結合ポケットにおける1種以上のアミノ酸置換およびPP2C結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含む、本発明1001の単離された核酸。
[本発明1009]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P、V83F、およびF159Vに相当するアミノ酸置換を含む、本発明1001の単離された核酸。
[本発明1010]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P、V83F、M158I、およびF159Vに相当するアミノ酸置換を含む、本発明1001の単離された核酸。
[本発明1011]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P、A89W、M158I、およびF159Vに相当するアミノ酸置換を含む、本発明1001の単離された核酸。
[本発明1012]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換V83F、M158I、F159V、およびK170Wに相当するアミノ酸置換を含む、本発明1001の単離された核酸。
[本発明1013]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、アブシジン酸の非存在下でホスファターゼアッセイにおいてPP2Cの活性を有意に阻害する、本発明1001の単離された核酸。
[本発明1014]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、アブシジン酸の非存在下で野生型PYR/PYL受容体ポリペプチドと接触させたPP2CのPP2C活性のレベルと比較して、アブシジン酸の非存在下でPP2Cの活性を少なくとも50％阻害する、本発明1013の単離された核酸。
[本発明1015]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1〜155のいずれかと実質的に同一である、本発明1001〜1014のいずれかの単離された核酸。
[本発明1016]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:120〜155のいずれかである、本発明1001の単離された核酸。
[本発明1017]
PP2CがHAB1である、本発明1001の単離された核酸。
[本発明1018]
本発明1001〜1017のいずれかのポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含む発現カセットであって、植物への該発現カセットの導入が、アブシジン酸の非存在下で2型プロテインホスファターゼ（PP2C）に結合するPYR/PYL受容体を有する植物をもたらす、発現カセット。
[本発明1019]
プロモーターが前記ポリヌクレオチドと異種である、本発明1018の発現カセット。
[本発明1020]
プロモーターが誘導性である、本発明1018の発現カセット。
[本発明1021]
プロモーターがストレス誘導性プロモーターである、本発明1020の発現カセット。
[本発明1022]
プロモーターが組織特異的である、本発明1018の発現カセット。
[本発明1023]
植物への発現カセットの導入が、該発現カセットを欠く植物と比較して、アブシジン酸の非存在下で有意に阻害されたPP2C活性を有する植物をもたらす、本発明1018の発現カセット。
[本発明1024]
本発明1018〜1023のいずれかの発現カセットを含む発現ベクター。
[本発明1025]
アブシジン酸の非存在下で有意に阻害されたPP2C活性を有する、本発明1018〜1023のいずれかの発現カセットを含む植物。
[本発明1026]
本発明1025の植物に由来する植物細胞。
[本発明1027]
本発明1025の植物に由来する種子、花、葉、果実、加工食品、または食品成分。
[本発明1028]
アブシジン酸の非存在下で有意に阻害された2型プロテインホスファターゼ（PP2C）活性を有する植物を作製する方法であって、
本発明1018〜1023のいずれかの発現カセットを複数の植物へ導入する工程；および
前記複数の植物から、前記ポリヌクレオチドを発現する植物を選択する工程
を含む、方法。
[本発明1029]
増強されたストレス耐性を有する植物を作製する方法であって、
野生型PYR/PYL受容体ポリペプチドと比較して、リガンド結合ポケットおよび／または2型プロテインホスファターゼ（PP2C）結合界面における1種以上のアミノ酸置換を含み、アブシジン酸の非存在下でPP2Cに結合する変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含む発現カセットを複数の植物へ導入する工程；および
前記複数の植物から、前記ポリヌクレオチドを発現する植物を選択する工程
を含む、方法。
[本発明1030]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P/G/R/A/W/I/K/V/M、V83F/L/P、I84Q/E/P/H/K、L87F、A89W、M158T/C/V/I、F159V/A、T162F、L166Y/F、またはK170Wに相当する1種以上のアミノ酸置換を含む、本発明1029の方法。
[本発明1031]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P、V83F、およびF159Vに相当するアミノ酸置換を含む、本発明1030の方法。
[本発明1032]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1に示されるPYR1におけるアミノ酸置換H60P、V83F、M158I、およびF159Vに相当するアミノ酸置換を含む、本発明1030の方法。
[本発明1033]
変異型PYR/PYL受容体ポリペプチドが、SEQ ID NO:1〜155のいずれかと実質的に同一である、本発明1029の方法。
[本発明1034]
プロモーターが誘導性プロモーターである、本発明1029の方法。
[本発明1035]
プロモーターがストレス誘導性プロモーターである、本発明1034の方法。
[本発明1036]
プロモーターが組織特異的である、本発明1029の方法。