【手続補正書】
【提出日】平成27年3月17日(2015.3.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単為生殖的に活性化された卵母細胞から分化させた、単離されたニューロン幹細胞。
【請求項２】
卵母細胞ドナーと組織適合する、請求項１に記載のニューロン幹細胞。
【請求項３】
一致しているハプロタイプに基づいて集団群と組織適合する、請求項２に記載のニューロン幹細胞。
【請求項４】
ＥＳＣとは異なるパターンの接合性を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のニューロン幹細胞。
【請求項５】
母系ゲノムのみを含有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載のニューロン幹細胞。
【請求項６】
卵母細胞ドナーと組織適合し、ＥＳＣとは異なるパターンの接合性を有し、かつ母系ゲノムのみを含有する、請求項１または３に記載のニューロン幹細胞。
【請求項７】
ヒトに移植可能である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のニューロン幹細胞。
【請求項８】
未分化であるか、部分的に分化させたか、または完全に分化させた、請求項１〜７のいずれか一項に記載のニューロン幹細胞。
【請求項９】
ニューロン細胞に分化させることができる、請求項１〜８のいずれか一項に記載のニューロン幹細胞。
【請求項１０】
ニューロン、グリア細胞、オリゴデンドロサイト、およびアストロサイトからなる群から選択されるニューロン細胞に分化させることができる、請求項９に記載のニューロン幹細胞。
【請求項１１】
分化したニューロン細胞がニューロンである、請求項１０に記載のニューロン幹細胞。
【請求項１２】
ニューロンが、コリン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、グルタミン酸作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、およびセロトニン作動性ニューロンからなる群から選択される、請求項１１に記載のニューロン幹細胞。
【請求項１３】
ニューロンがドーパミン作動性ニューロンである、請求項１２に記載のニューロン幹細胞。
【請求項１４】
ＳＯＸ２、Ｎｅｓｔｉｎ、Ｍｕｓｈａｓｈｉ−１、ＴＵＢＢ３、ＭＡＰ２、ＦＯＸＯ４、ＧＦＡＰ、ＣＤ１１３、およびＣＤ１５からなる群から選択される神経マーカーを発現する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のニューロン幹細胞。
【請求項１５】
単為生殖由来のヒト幹細胞を分化させることによって、ニューロン幹細胞を生成するための方法であって、
（ａ）線維芽細胞のフィーダー層上で単為生殖由来のヒト幹細胞を少なくとも２日間成長させるステップと、
（ｂ）線維芽細胞フィーダー層なしのペトリ皿上で単為生殖由来のヒト幹細胞を少なくとも１日間成長させるステップと、
（ｃ）ニューロン誘導培地中で該細胞を培養するステップと、
（ｄ）（ｃ）からの細胞の単一細胞懸濁液を得るステップと、
（ｅ）線維芽細胞フィーダー層なしのペトリ皿上で、ニューロン増殖培地中でステップ（ｄ）からの単一細胞を培養するステップと
を含む、方法。
【請求項１６】
前記ニューロン誘導培地が、
（ａ）ペニシリン−ストレプトマイシン−アンホテリシン溶液と、
（ｂ）ＤＭＥＭ／Ｆ１２と、
（ｃ）ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液と、
（ｄ）Ｌ−グルタミンと、
（ｅ）Ｎ２サプリメントと、
（ｆ）ｂＦＧＦと
を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ニューロン増殖培地が、
（ａ）ペニシリン−ストレプトマイシン−アンホテリシンと、
（ｂ）ＤＭＥＭ／Ｆ１２と、
（ｃ）ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉと、
（ｄ）ＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）Ｎｅｕｒａｌサプリメントと、
（ｅ）ｂＦＧＦと、
（ｆ）ＥＧＦと
を含む、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ペトリ皿がＣＥＬＬｓｔａｒｔで被覆される、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の方法によって生成された、ニューロン幹細胞。
【請求項２０】
神経上皮ロゼットが約１〜２週間で形成する、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
（ａ）線維芽細胞のフィーダー層上で単為生殖的活性化卵母細胞由来のヒト幹細胞を少なくとも２日間成長させるステップと、
（ｂ）線維芽細胞フィーダー層なしのペトリ皿上で単為生殖的活性化卵母細胞由来のヒト幹細胞を少なくとも１日間成長させるステップと、
（ｃ）ニューロン誘導培地中で該細胞を培養するステップと、
（ｄ）（ｃ）からの細胞の単一細胞懸濁液を得るステップと、
（ｅ）線維芽細胞フィーダー層なしのペトリ皿上で、ニューロン増殖培地中でステップ（ｄ）からの単一細胞を培養するステップと
を含む方法を使用して単為生殖的活性化卵母細胞由来のヒト幹細胞から得られた、単離されたニューロン幹細胞。
【請求項２２】
ＳＯＸ２、Ｎｅｓｔｉｎ、Ｍｕｓａｓｈｉ−１、ＴＵＢＢ３、ＭＡＰ２、ＦＯＸＯ４、ＧＦＡＰ、ＣＤ１１３、およびＣＤ１５からなる群から選択される神経マーカーを発現する、請求項２１に記載の細胞。
【請求項２３】
前記ニューロン幹細胞が、ニューロン表現型を少なくとも２７継代の間維持する、請求項２１または２２に記載の細胞。
【請求項２４】
前記ニューロン幹細胞が、ニューロン細胞に分化することができる、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２５】
前記ニューロン細胞が、ニューロン、グリア細胞、アストロサイト、およびオリゴデンドロサイトからなる群から選択される、請求項２４に記載の細胞。
【請求項２６】
前記ニューロン細胞がニューロンである、請求項２５に記載の細胞。
【請求項２７】
ニューロンが、コリン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、グルタミン酸作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、およびセロトニン作動性ニューロンからなる群から選択される、請求項２６に記載の細胞。
【請求項２８】
ニューロンがドーパミン作動性ニューロンである、請求項２７に記載の細胞。
【請求項２９】
前記卵母細胞ドナーと組織適合する、請求項２１〜２８のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３０】
ＥＳＣとは異なるパターンの接合性を有する、請求項２１〜２９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３１】
母系ゲノムのみを含有する、請求項２１〜３０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３２】
前記卵母細胞ドナーと組織適合し、ＥＳＣとは異なるパターンの接合性を有し、かつ母系ゲノムのみを含有する、請求項２１〜２８のいずれか一項に記載のニューロン幹細胞。
【請求項３３】
ヒトに移植可能である、請求項２１〜３２のいずれか一項に記載のニューロン幹細胞。
【請求項３４】
単為生殖由来の卵母細胞から生成されたニューロン幹細胞を含む、神経疾患を治療するための薬学的組成物。
【請求項３５】
前記神経疾患が、てんかん、けいれん、神経毒傷害、低酸素症、無酸素症、虚血、脳卒中、脳血管発作、脳もしくは脊髄損傷、心筋梗塞、身体的外傷、溺水、窒息、周生期仮死、血糖降下イベント、神経変性、アルツハイマー病、老年性認知症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、ダウン症候群、コルサコフ病、統合失調症、ＡＩＤＳ認知症、多発梗塞性認知症、ビンスワンガー認知症、神経損傷、発作、化学毒性、嗜癖、モルヒネ耐性、アヘン耐性、オピオイド耐性、バルビツレート耐性、急性および慢性疼痛、偏頭痛、不安症、大鬱病、躁鬱病、強迫性障害、統合失調症および気分障害、双極性障害、単極性鬱病、気分変調、季節性情動障害、ジストニアまたは他の運動障害、睡眠障害、筋肉弛緩、ならびに尿失禁からなる群から選択される、請求項３４に記載の薬学的組成物。
【請求項３６】
かかる治療を必要とする患者に移植するための、請求項３４または３５に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
ニューロン分化培地中でニューロン幹細胞を培養するステップを含む、ニューロン幹細胞を分化させる方法。
【請求項３８】
前記ニューロン分化培地が、
（ａ）ペニシリン−ストレプトマイシン−アンホテリシンと、
（ｂ）ＤＭＥＭ／Ｆ１２と、
（ｃ）ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉと、
（ｄ）ＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）Ｎｅｕｒａｌサプリメントと
を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ニューロン幹細胞を、ニューロン、グリア細胞、オリゴデンドロサイト、およびアストロサイトからなる群から選択されるニューロン細胞に分化させる、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
分化したニューロン細胞がニューロンである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ニューロンが、コリン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、グルタミン酸作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、およびセロトニン作動性ニューロンからなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
ニューロンがドーパミン作動性ニューロンである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
請求項３７〜４２のいずれか一項に記載の方法によって生成された、分化した細胞。
【請求項４４】
単為生殖的に活性化された卵母細胞から分化させる、請求項３７〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
単為生殖由来のヒト幹細胞を分化させることによってニューロン幹細胞を生成するための方法であって、
（ａ）フィーダーを含まない条件でのヒト多能性幹細胞の培養と、
（ｂ）ニューロン誘導培地への該細胞の曝露と、
（ｃ）部分的に分化した細胞の機械的単離と、
（ｄ）該細胞の成熟までのさらなる増大および維持と
を含む、方法。
【請求項４６】
前記ニューロン誘導培地が、
（ａ）ペニシリン−ストレプトマイシン−アンホテリシン溶液と、
（ｂ）ＤＭＥＭ／Ｆ１２と、
（ｃ）ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液と、
（ｄ）Ｌ−グルタミンと、
（ｅ）Ｎ２サプリメントと、
（ｆ）ｂＦＧＦと
を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
フィーダーを含まない条件が、ＣＥＬＬｓｔａｒｔ、Ｍａｔｒｉｇｅｌ、ラミニン、ゼラチン、フィブロネクチンを含むがこれらに限定されないＥＣＭ基質を用いる、請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項４８】
請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の方法によって生成されるニューロン幹細胞。
【請求項４９】
神経上皮ロゼットが１〜２週間後に形成する、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
（ａ）フィーダーを含まない条件でのヒト多能性幹細胞の培養と、
（ｂ）ニューロン誘導培地への該細胞の曝露と、
（ｃ）部分的に分化した細胞の機械的単離と、
（ｄ）該細胞の成熟までのさらなる増大および維持と
を含む方法を使用して単為生殖由来のヒト幹細胞から得られた、単離されたニューロン幹細胞。
【請求項５１】
ＳＯＸＢ１−ファミリーＮＥＳ、ＭＳＨ−１、ＣＸＣＲ４、ＣＣＮＤ１、ＬＨＸ２、ＰＡＸ６、およびＧＡＰ４３からなる群から選択される神経幹細胞マーカーを発現する、請求項５０に記載の細胞。
【請求項５２】
前記ニューロン幹細胞が、ニューロン表現型を少なくとも３０継代の間維持する、請求項５０または５１に記載の細胞。
【請求項５３】
前記ニューロン幹細胞が、ニューロン細胞に分化することができる、請求項５０〜５２のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５４】
前記ニューロン細胞が、ニューロン、アストロサイト、およびオリゴデンドロサイトからなる群から選択される、請求項５３に記載の細胞。
【請求項５５】
単為生殖由来の卵母細胞から得られたニューロン幹細胞を含む、神経疾患を治療するための薬学的組成物。
【請求項５６】
前記神経疾患が、てんかん、けいれん、神経毒傷害、虚血、脳卒中、脳血管発作、脳もしくは脊髄損傷、身体的外傷、アルツハイマー病、老年性認知症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、統合失調症、神経損傷、偏頭痛、不安症、大鬱病、躁鬱病、強迫性障害、統合失調症および気分障害、双極性障害、単極性鬱病、ジストニアまたは他の運動障害、睡眠障害、筋肉弛緩からなる群から選択される、請求項５５に記載の薬学的組成物。
【請求項５７】
かかる治療を必要とする患者に移植するための、請求項５５または５６に記載の薬学的組成物。
【請求項５８】
ニューロン分化培地中でニューロン幹細胞を培養するステップを含む、ニューロン幹細胞を分化させる方法。
【請求項５９】
前記ニューロン分化培地が、
（ａ）ペニシリン−ストレプトマイシン−アンホテリシンと、
（ｂ）ＤＭＥＭ／Ｆ１２と、
（ｃ）ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉと、
（ｄ）ＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）Ｎｅｕｒａｌサプリメントと
を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記ニューロン幹細胞を、ニューロン、オリゴデンドロサイト、およびアストロサイトからなる群から選択されるニューロン細胞に分化させる、請求項５８または５９に記載の方法。
【請求項６１】
請求項５８〜６０のいずれか一項に記載の方法によって生成された、分化した細胞。
【請求項６２】
単為生殖的に活性化された卵母細胞から分化させる、請求項５８〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
一実施形態において、本発明は、ニューロン分化培地中でニューロン幹細胞を培養するステップを含む、ニューロン幹細胞を分化させる方法を提供する。一態様において、ニューロン分化培地は、（ａ）ペニシリン−ストレプトマイシン−アンホテリシンと、（ｂ）ＤＭＥＭ／Ｆ１２と、（ｃ）ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉと、（ｄ）ＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）Ｎｅｕｒａｌサプリメントとを含む。追加の態様において、ニューロン幹細胞は、ニューロン、オリゴデンドロサイト、およびアストロサイトからなる群から選択されるニューロン細胞に分化させられる。一態様において、分化したニューロン細胞はニューロンである。さらなる態様において、ニューロンは、コリン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、グルタミン酸作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、およびセロトニン作動性ニューロンからなる群から選択される。本発明は、この方法によって生成された、分化した細胞も提供する。一態様において、細胞は、単為生殖的に活性化された卵母細胞から分化させられる。
[本発明1001]
単為生殖的に活性化された卵母細胞から分化させた、単離されたニューロン幹細胞。
[本発明1002]
卵母細胞ドナーと組織適合する、本発明1001のニューロン幹細胞。
[本発明1003]
一致しているハプロタイプに基づいて集団群と組織適合する、本発明1002のニューロン幹細胞。
[本発明1004]
ＥＳＣとは異なるパターンの接合性を有する、本発明1001のニューロン幹細胞。
[本発明1005]
母系ゲノムのみを含有する、本発明1001のニューロン幹細胞。
[本発明1006]
卵母細胞ドナーと組織適合し、ＥＳＣとは異なるパターンの接合性を有し、かつ母系ゲノムのみを含有する、本発明1001のニューロン幹細胞。
[本発明1007]
ヒトに移植可能である、本発明1001のニューロン幹細胞。
[本発明1008]
未分化であるか、部分的に分化させたか、または完全に分化させた、本発明1001のニューロン幹細胞。
[本発明1009]
ニューロン細胞に分化させることができる、本発明1001のニューロン幹細胞。
[本発明1010]
ニューロン、グリア細胞、オリゴデンドロサイト、およびアストロサイトからなる群から選択される分化したニューロン細胞であることができる、本発明1009のニューロン幹細胞。
[本発明1011]
ニューロンである、本発明1010の分化したニューロン細胞。
[本発明1012]
コリン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、グルタミン酸作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、およびセロトニン作動性ニューロンからなる群から選択される、本発明1011のニューロン。
[本発明1013]
ドーパミン作動性ニューロンである、本発明1012のニューロン。
[本発明1014]
ＳＯＸ2、Ｎｅｓｔｉｎ、Ｍｕｓｈａｓｈｉ−1、ＴＵＢＢ3、ＭＡＰ2、ＦＯＸＯ4、ＧＦＡＰ、ＣＤ113、およびＣＤ15からなる群から選択される神経マーカーを発現する、本発明1001のニューロン幹細胞。
[本発明1015]
単為生殖由来のヒト幹細胞を分化させることによって、ニューロン幹細胞を生成するための方法であって、
（ａ）線維芽細胞のフィーダー層上で単為生殖由来のヒト幹細胞を少なくとも2日間成長させるステップと、
（ｂ）線維芽細胞フィーダー層なしのペトリ皿上で単為生殖由来のヒト幹細胞を少なくとも1日間成長させるステップと、
（ｃ）ニューロン誘導培地中で該細胞を培養するステップと、
（ｄ）（ｃ）からの細胞の単一細胞懸濁液を得るステップと、
（ｅ）線維芽細胞フィーダー層なしのペトリ皿上で、ニューロン増殖培地中でステップ（ｄ）からの単一細胞を培養するステップと
を含む、方法。
[本発明1016]
前記ニューロン誘導培地が、
（ａ）ペニシリン−ストレプトマイシン−アンホテリシン溶液と、
（ｂ）ＤＭＥＭ／Ｆ12と、
（ｃ）ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液と、
（ｄ）Ｌ−グルタミンと、
（ｅ）Ｎ2サプリメントと、
（ｆ）ｂＦＧＦと
を含む、本発明1015の方法。
[本発明1017]
前記ニューロン増殖培地が、
（ａ）ペニシリン−ストレプトマイシン−アンホテリシンと、
（ｂ）ＤＭＥＭ／Ｆ12と、
（ｃ）ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉと、
（ｄ）ＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）Ｎｅｕｒａｌサプリメントと、
（ｅ）ｂＦＧＦと、
（ｆ）ＥＧＦと
を含む、本発明1015の方法。
[本発明1018]
前記ペトリ皿がＣＥＬＬｓｔａｒｔで被覆される、本発明1015の方法。
[本発明1019]
本発明1015の方法によって生成された、ニューロン幹細胞。
[本発明1020]
神経上皮ロゼットが約1〜2週間で形成する、本発明1015の方法。
[本発明1021]
（ａ）線維芽細胞のフィーダー層上で単為生殖由来のヒト幹細胞を少なくとも2日間成長させるステップと、
（ｂ）線維芽細胞フィーダー層なしのペトリ皿上で単為生殖由来のヒト幹細胞を少なくとも1日間成長させるステップと、
（ｃ）ニューロン誘導培地中で該細胞を培養するステップと、
（ｄ）（ｃ）からの細胞の単一細胞懸濁液を得るステップと、
（ｅ）線維芽細胞フィーダー層なしのペトリ皿上で、ニューロン増殖培地中でステップ（ｄ）からの単一細胞を培養するステップと
を含む方法を使用して単為生殖由来のヒト幹細胞から得られた、単離されたニューロン幹細胞。
[本発明1022]
ＳＯＸ2、Ｎｅｓｔｉｎ、Ｍｕｓａｓｈｉ−1、ＴＵＢＢ3、ＭＡＰ2、ＦＯＸＯ4、ＧＦＡＰ、ＣＤ113、およびＣＤ15からなる群から選択される神経マーカーを発現する、本発明1021の細胞。
[本発明1023]
前記ニューロン幹細胞が、ニューロン表現型を少なくとも27継代の間維持する、本発明1021の細胞。
[本発明1024]
前記ニューロン幹細胞が、ニューロン細胞に分化することができる、本発明1021の細胞。
[本発明1025]
前記ニューロン細胞が、ニューロン、グリア細胞、アストロサイト、およびオリゴデンドロサイトからなる群から選択される、本発明1024の細胞。
[本発明1026]
ニューロンである、本発明1025の分化したニューロン細胞。
[本発明1027]
コリン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、グルタミン酸作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、およびセロトニン作動性ニューロンからなる群から選択される、本発明1026のニューロン。
[本発明1028]
ドーパミン作動性ニューロンである、本発明1027のニューロン。
[本発明1029]
前記卵母細胞ドナーと組織適合する、本発明1021の細胞。
[本発明1030]
ＥＳＣとは異なるパターンの接合性を有する、本発明1021の細胞。
[本発明1031]
母系ゲノムのみを含有する、本発明1021の細胞。
[本発明1032]
前記卵母細胞ドナーと組織適合し、ＥＳＣとは異なるパターンの接合性を有し、かつ母系ゲノムのみを含有する、本発明1021のニューロン幹細胞。
[本発明1033]
ヒトに移植可能である、本発明1021のニューロン幹細胞。
[本発明1034]
単為生殖由来の卵母細胞から生成されたニューロン幹細胞を使用して、神経疾患を治療する方法。
[本発明1035]
前記神経疾患が、てんかん、けいれん、神経毒傷害、低酸素症、無酸素症、虚血、脳卒中、脳血管発作、脳もしくは脊髄損傷、心筋梗塞、身体的外傷、溺水、窒息、周生期仮死、血糖降下イベント、神経変性、アルツハイマー病、老年性認知症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、ダウン症候群、コルサコフ病、統合失調症、ＡＩＤＳ認知症、多発梗塞性認知症、ビンスワンガー認知症、神経損傷、発作、化学毒性、嗜癖、モルヒネ耐性、アヘン耐性、オピオイド耐性、バルビツレート耐性、急性および慢性疼痛、偏頭痛、不安症、大鬱病、躁鬱病、強迫性障害、統合失調症および気分障害、双極性障害、単極性鬱病、気分変調、季節性情動障害、ジストニアまたは他の運動障害、睡眠障害、筋肉弛緩、ならびに尿失禁からなる群から選択される、本発明1034の方法。
[本発明1036]
前記ニューロン幹細胞が、かかる治療を必要とする患者に移植される、本発明1034の方法。
[本発明1037]
ニューロン分化培地中でニューロン幹細胞を培養するステップを含む、ニューロン幹細胞を分化させる方法。
[本発明1038]
前記ニューロン分化培地が、
（ａ）ペニシリン−ストレプトマイシン−アンホテリシンと、
（ｂ）ＤＭＥＭ／Ｆ12と、
（ｃ）ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉと、
（ｄ）ＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）Ｎｅｕｒａｌサプリメントと
を含む、本発明1037の方法。
[本発明1039]
前記ニューロン幹細胞を、ニューロン、グリア細胞、オリゴデンドロサイト、およびアストロサイトからなる群から選択されるニューロン細胞に分化させる、本発明1037の方法。
[本発明1040]
ニューロンである、本発明1039の分化したニューロン細胞。
[本発明1041]
コリン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、グルタミン酸作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、およびセロトニン作動性ニューロンからなる群から選択される、本発明1040のニューロン。
[本発明1042]
ドーパミン作動性ニューロンである、本発明1041のニューロン。
[本発明1043]
本発明1037の方法によって生成された、分化した細胞。
[本発明1044]
単為生殖的に活性化された卵母細胞から分化させた、本発明1037の細胞。
[本発明1045]
単為生殖由来のヒト幹細胞を分化させることによってニューロン幹細胞を生成するための方法であって、
（ａ）フィーダーを含まない条件でのヒト多能性幹細胞の培養と、
（ｂ）ニューロン誘導培地への該細胞の曝露と、
（ｃ）部分的に分化した細胞の機械的単離と、
（ｄ）該細胞の成熟までのさらなる増大および維持と
を含む、方法。
[本発明1046]
前記ニューロン誘導培地が、
（ａ）ペニシリン−ストレプトマイシン−アンホテリシン溶液と、
（ｂ）ＤＭＥＭ／Ｆ12と、
（ｃ）ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液と、
（ｄ）Ｌ−グルタミンと、
（ｅ）Ｎ2サプリメントと、
（ｆ）ｂＦＧＦと
を含む、本発明1045の方法。
[本発明1047]
前記ニューロン増殖培地が、
（ａ）ペニシリン−ストレプトマイシン−アンホテリシンと、
（ｂ）ＤＭＥＭ／Ｆ12と、
（ｃ）ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉと、
（ｄ）ＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）Ｎｅｕｒａｌサプリメントと、
（ｅ）ｂＦＧＦと、
（ｆ）ＥＧＦと
を含む、本発明1045の方法。
[本発明1048]
フィーダーを含まない条件が、ＣＥＬＬｓｔａｒｔ、Ｍａｔｒｉｇｅｌ、ラミニン、ゼラチン、フィブロネクチンを含むがこれらに限定されないＥＣＭ基質を用いる、本発明1045の方法。
[本発明1049]
本発明1045のニューロン幹細胞。
[本発明1050]
神経上皮ロゼットが1〜2週間後に形成する、本発明1045の方法。
[本発明1051]
（ａ）フィーダーを含まない条件でのヒト多能性幹細胞の培養と、
（ｂ）ニューロン誘導培地への該細胞の曝露と、
（ｃ）部分的に分化した細胞の機械的単離と、
（ｄ）該細胞の成熟までのさらなる増大および維持と
を含む方法を使用して単為生殖由来のヒト幹細胞から得られた、単離されたニューロン幹細胞。
[本発明1052]
ＳＯＸＢ1−ファミリーＮＥＳ、ＭＳＨ−1、ＣＸＣＲ4、ＣＣＮＤ1、ＬＨＸ2、ＰＡＸ6、およびＧＡＰ43からなる群から選択される神経幹細胞マーカーを発現する、本発明1051の細胞。
[本発明1053]
前記ニューロン幹細胞が、ニューロン表現型を少なくとも30継代の間維持する、本発明1051の細胞。
[本発明1054]
前記ニューロン幹細胞が、ニューロン細胞に分化することができる、本発明1051の細胞。
[本発明1055]
前記ニューロン細胞が、ニューロン、アストロサイト、およびオリゴデンドロサイトからなる群から選択される、本発明1054の細胞。
[本発明1056]
単為生殖由来の卵母細胞から得られたニューロン幹細胞を使用して、神経疾患を治療する方法。
[本発明1057]
前記神経疾患が、てんかん、けいれん、神経毒傷害、虚血、脳卒中、脳血管発作、脳もしくは脊髄損傷、身体的外傷、アルツハイマー病、老年性認知症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、統合失調症、神経損傷、偏頭痛、不安症、大鬱病、躁鬱病、強迫性障害、統合失調症および気分障害、双極性障害、単極性鬱病、ジストニアまたは他の運動障害、睡眠障害、筋肉弛緩からなる群から選択される、本発明1056の方法。
[本発明1058]
前記ニューロン幹細胞が、かかる治療を必要とする患者に移植される、本発明1056の方法。
[本発明1059]
ニューロン分化培地中でニューロン幹細胞を培養するステップを含む、ニューロン幹細胞を分化させる方法。
[本発明1060]
前記ニューロン分化培地が、
（ａ）ペニシリン−ストレプトマイシン−アンホテリシンと、
（ｂ）ＤＭＥＭ／Ｆ12と、
（ｃ）ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）−Ｉと、
（ｄ）ＳｔｅｍＰｒｏ（登録商標）Ｎｅｕｒａｌサプリメントと
を含む、本発明1059の方法。
[本発明1061]
前記ニューロン幹細胞を、ニューロン、オリゴデンドロサイト、およびアストロサイトからなる群から選択されるニューロン細胞に分化させる、本発明1059の方法。
[本発明1062]
本発明1059の分化した細胞。
[本発明1063]
単為生殖的に活性化された卵母細胞から分化させた、本発明1059の細胞。