【手続補正書】
【提出日】平成27年8月10日(2015.8.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞培養系であって、前記細胞培養系は、
少なくとも０．３ｍＭのアルブミンを含む細胞培養培地と、
ラミニンおよびカドヘリンを含む基質と
を含み、前記ラミニンが完全なタンパク質またはタンパク質断片である、細胞培養系。
【請求項２】
前記アルブミンがヒト血清アルブミンである、請求項１に記載の系。
【請求項３】
前記ラミニンがラミニン−５２１またはラミニン−５１１である、請求項１に記載の系
。
【請求項４】
前記カドヘリンがＥ−カドヘリンである、請求項１に記載の系。
【請求項５】
前記ラミニンがラミニン−５２１であり、前記カドヘリンがＥ−カドヘリンである、請求
項１に記載の系。
【請求項６】
ラミニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１である、請求項５
に記載の系。
【請求項７】
前記基質および前記培地が、いかなる分化阻害剤も、フィーダー細胞も、分化誘導物質も
、アポトーシス阻害剤も含有しない、請求項１に記載の系。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
下記は、本明細書において開示される例示的な実施形態を限定する目的ではなく、本明
細書において開示される例示的な実施形態を例証する目的のために提示される図面の簡単
な説明である。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ラミニンおよびカドヘリンを含む細胞培養基質であって、前記ラミニンが完全なタンパク
質またはタンパク質断片である、細胞培養基質。
（項目２）
前記ラミニンが、ラミニン−５２１またはラミニン−５１１である、項目１に記載の基
質。
（項目３）
前記ラミニンが、有効な組換えラミニンである、項目１に記載の基質。
（項目４）
前記カドヘリンが、Ｅ−カドヘリンである、項目１に記載の基質。
（項目５）
前記ラミニン対前記カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１である、項目１に記載
の基質。
（項目６）
前記ラミニン対前記カドヘリンの重量比が約５：１〜約１０：１である、項目１に記載
の基質。
（項目７）
前記ラミニンがラミニン−５２１であり、前記カドヘリンがＥ−カドヘリンである、請求
項１に記載の基質。
（項目８）
ラミニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１である、項目７に
記載の基質。
（項目９）
ラミニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１０：１である、項目７に
記載の基質。
（項目１０）
細胞培養系であって、前記細胞培養系は、
少なくとも０．３ｍＭのアルブミンを含む細胞培養培地と、
ラミニンおよびカドヘリンを含む基質と
を含み、前記ラミニンが完全なタンパク質またはタンパク質断片である、細胞培養系。
（項目１１）
前記細胞培養培地が、少なくとも０．３ｍＭのアルブミン濃度に達するように追加のアル
ブミンが添加されたｍＴｅＳＲ１培地である、項目１０に記載の系。
（項目１２）
前記細胞培養培地が、約０．３９ｍＭのアルブミンを有するｍＴｅＳＲ１培地である、請
求項１０に記載の系。
（項目１３）
前記アルブミンがヒト血清アルブミンである、項目１０に記載の系。
（項目１４）
前記ヒト血清アルブミンが組換えヒト血清アルブミンである、項目１３に記載の系。
（項目１５）
前記ラミニンがラミニン−５２１またはラミニン−５１１である、項目１０に記載の系
。
（項目１６）
前記ラミニンが有効な組換えラミニンである、項目１０に記載の系。
（項目１７）
前記カドヘリンがＥ−カドヘリンである、項目１０に記載の系。
（項目１８）
前記ラミニン対前記カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１である、項目１０に記
載の系。
（項目１９）
前記ラミニン対前記カドヘリンの重量比が約５：１〜約１０：１である、項目１０に記
載の系。
（項目２０）
前記ラミニンがラミニン−５２１であり、前記カドヘリンがＥ−カドヘリンである、請求
項１０に記載の系。
（項目２１）
ラミニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１である、項目２０
に記載の系。
（項目２２）
ラミニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１０：１である、項目２０
に記載の系。
（項目２３）
前記基質および前記培地が、いかなる分化阻害剤も、フィーダー細胞も、分化誘導物質も
、アポトーシス阻害剤も含有しない、項目１０に記載の系。
（項目２４）
前記ラミニンがラミニン−５２１であり、前記カドヘリンがＥ−カドヘリンであり、ラミ
ニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１であり、前記細胞培養培
地が、約０．３９ｍＭのアルブミンを有するｍＴｅＳＲ１培地である、項目１０に記載
の系。
（項目２５）
細胞培養系であって、前記細胞培養系は、
ｍＴｅＳＲ１細胞培養培地と、
ラミニンおよびカドヘリンを含む基質と
を含み、前記ラミニンが完全なタンパク質またはタンパク質断片である、細胞培養系。
（項目２６）
少なくとも０．３ｍＭの最終アルブミン濃度に達するように追加のアルブミンが添加され
ている、項目２５に記載の系。
（項目２７）
約０．３９ｍＭの最終アルブミン濃度に達するように追加のアルブミンが添加されている
、項目２５に記載の系。
（項目２８）
前記ラミニンがラミニン−５２１またはラミニン−５１１である、項目２５に記載の系
。
（項目２９）
前記ラミニンが有効な組換えラミニンである、項目２５に記載の系。
（項目３０）
前記カドヘリンが、Ｅ−カドヘリンである、項目２５に記載の系。
（項目３１）
前記ラミニン対前記カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１である、項目２５に記
載の系。
（項目３２）
前記ラミニン対前記カドヘリンの重量比が約５：１〜約１０：１である、項目２５に記
載の系。
（項目３３）
前記ラミニンがラミニン−５２１であり、前記カドヘリンがＥ−カドヘリンである、請求
項２５に記載の系。
（項目３４）
ラミニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１である、項目３３
に記載の系。
（項目３５）
ラミニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１０：１である、項目３３
に記載の系。
（項目３６）
前記基質および前記培地が、いかなる分化阻害剤も、フィーダー細胞も、分化誘導物質も
、アポトーシス阻害剤も含有しない、項目２５に記載の系。
（項目３７）
前記ラミニンがラミニン−５２１であり、前記カドヘリンがＥ−カドヘリンであり、ラミ
ニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１であり、前記ｍＴｅＳＲ
１培地が約０．３９ｍＭのアルブミンを含有する、項目２５に記載の系。
（項目３８）
幹細胞を維持するための方法であって、
ラミニンおよびカドヘリンを含む基質上に幹細胞をプレーティングするステップであっ
て、前記ラミニンが完全なタンパク質またはタンパク質断片であるステップと、
前記幹細胞を少なくとも０．３ｍＭのアルブミンを含む細胞培養培地に曝露するステッ
プと
を含む方法。
（項目３９）
前記細胞培養培地が、少なくとも０．３ｍＭのアルブミン濃度に達するように追加のアル
ブミンが添加されたｍＴｅＳＲ１培地である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記細胞培養培地が、約０．３９ｍＭのアルブミンを有するｍＴｅＳＲ１培地である、請
求項３８に記載の方法。
（項目４１）
前記アルブミンがヒト血清アルブミンである、項目３８に記載の方法。
（項目４２）
前記ヒト血清アルブミンが組換えヒト血清アルブミンである、項目３８に記載の方法。
（項目４３）
前記ラミニンがラミニン−５２１またはラミニン−５１１である、項目３８に記載の方
法。
（項目４４）
前記ラミニンが有効な組換えラミニンである、項目３８に記載の方法。
（項目４５）
前記カドヘリンがＥ−カドヘリンである、項目３８に記載の方法。
（項目４６）
前記ラミニン対前記カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１である、項目３８に記
載の方法。
（項目４７）
前記ラミニン対前記カドヘリンの重量比が約５：１〜約１０：１である、項目３８に記
載の方法。
（項目４８）
前記ラミニンがラミニン−５２１であり、前記カドヘリンがＥ−カドヘリンである、請求
項３８に記載の方法。
（項目４９）
ラミニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１である、項目４８
に記載の方法。
（項目５０）
ラミニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１０：１である、項目４８
に記載の方法。
（項目５１）
前記基質および前記培地が、いかなる分化阻害剤も、フィーダー細胞も、分化誘導物質も
、アポトーシス阻害剤も含有しない、項目３８に記載の方法。
（項目５２）
前記ラミニンがラミニン−５２１であり、前記カドヘリンがＥ−カドヘリンであり、ラミ
ニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１であり、前記細胞培養培
地が、約０．３９ｍＭのアルブミンを有するｍＴｅＳＲ１培地である、項目３８に記載
の方法。
（項目５３）
前記幹細胞が、２００細胞／ｍｍ２または２００細胞／ｍｍ２未満の密度でプレーティン
グされる、項目３８に記載の方法。
（項目５４）
前記幹細胞が、２００細胞／ｍｍ２または２００細胞／ｍｍ２より高い密度でプレーティ
ングされる、項目３８に記載の方法。
（項目５５）
前記幹細胞が、いずれの２つの幹細胞も互いに接触しないようにプレーティングされる、
項目３８に記載の方法。
（項目５６）
幹細胞を維持するための方法であって、
ラミニンおよびカドヘリンを含む基質上で幹細胞をプレーティングするステップであっ
て、前記ラミニンが完全なタンパク質またはタンパク質断片であるステップと、
前記幹細胞をｍＴｅＳＲ１細胞培養培地に曝露するステップと
を含む方法。
（項目５７）
少なくとも０．３ｍＭの最終アルブミン濃度に達するように追加のアルブミンが添加され
ている、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
約０．３９ｍＭの最終アルブミン濃度に達するように追加のアルブミンが添加されている
、項目５６に記載の方法。
（項目５９）
前記ラミニンがラミニン−５２１またはラミニン−５１１である、項目５６に記載の方
法。
（項目６０）
前記ラミニンが有効な組換えラミニンである、項目５６に記載の方法。
（項目６１）
前記カドヘリンがＥ−カドヘリンである、項目５６に記載の方法。
（項目６２）
前記ラミニン対前記カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１である、項目５６に記
載の方法。
（項目６３）
前記ラミニン対前記カドヘリンの重量比が約５：１〜約１０：１である、項目５６に記
載の方法。
（項目６４）
前記ラミニンがラミニン−５２１であり、前記カドヘリンがＥ−カドヘリンである、請求
項５６に記載の方法。
（項目６５）
ラミニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１である、項目６４
に記載の方法。
（項目６６）
ラミニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１０：１である、項目６４
に記載の方法。
（項目６７）
前記基質および前記培地が、いかなる分化阻害剤も、フィーダー細胞も、分化誘導物質も
、アポトーシス阻害剤も含有しない、項目５６に記載の方法。
（項目６８）
前記ラミニンがラミニン−５２１であり、前記カドヘリンがＥ−カドヘリンであり、ラミ
ニン−５２１対Ｅ−カドヘリンの重量比が約５：１〜約１５：１であり、前記ｍＴｅＳＲ
１培地が、約０．３９ｍＭのアルブミンを含有する、項目５６に記載の方法。
（項目６９）
前記幹細胞が、２００細胞／ｍｍ２または２００細胞／ｍｍ２未満の密度でプレーティン
グされる、項目５６に記載の方法。
（項目７０）
前記幹細胞が、２００細胞／ｍｍ２または２００細胞／ｍｍ２より高い密度でプレーティ
ングされる、項目５６に記載の方法。
（項目７１）
前記幹細胞が、いずれの２つの幹細胞も互いに接触しないようにプレーティングされる、
項目５６に記載の方法。