(57)【要約】【課題】被検者の血液検体が、直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定することを可能にする手段を提供することを課題とする。【解決手段】リン脂質濃度の異なる２種類の凝固時間測定試薬を用いて、被検者の血液検体、正常血液検体及びそれら混合して得た混合検体のそれぞれの凝固時間を測定し、これらの凝固時間から第１及び第２の指標値を取得し、これらの指標値に基づいて、該被検者の血液検体の判定を行うことにより、上記の課題を解決する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検者の血液検体の凝固時間である第１凝固時間、正常血液検体の凝固時間である第２凝固時間、及び前記被検者の血液検体と前記正常血液検体とを混合して得た混合検体の凝固時間である第３凝固時間を取得する工程と、
前記被検者の血液検体の凝固時間である第４凝固時間、前記正常血液検体の凝固時間である第５凝固時間、及び前記混合検体の凝固時間である第６凝固時間を取得する工程と、
前記第１凝固時間、前記第２凝固時間及び前記第３凝固時間に基づいて、第１の指標値を取得し、前記第４凝固時間、前記第５凝固時間及び前記第６凝固時間に基づいて、第２の指標値を取得する工程と、
前記第１の指標値と前記第２の指標値とに基づいて、前記被検者の血液検体が、直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定する工程と
を含み、
前記第１凝固時間、前記第２凝固時間及び前記第３凝固時間が、第１の凝固時間測定試薬を用いて測定された凝固時間であり、前記第４凝固時間、前記第５凝固時間及び前記第６凝固時間が、第２の凝固時間測定試薬を用いて測定された凝固時間であり、
前記第１の凝固時間測定試薬がリン脂質を含み、前記第２の凝固時間測定試薬が、前記第１の凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む、
血液検体の判定方法。
【請求項２】
前記第１凝固時間、前記第２凝固時間及び前記第３凝固時間を取得する工程において、
前記第１凝固時間が、前記被検者の血液検体と前記第１の凝固時間測定試薬とを混合して得た第１測定試料を測定することにより取得され、
前記第２凝固時間が、前記正常血液検体と前記第１の凝固時間測定試薬とを混合して得た第２測定試料を測定することにより取得され、
前記第３凝固時間が、前記混合検体と前記第１の凝固時間測定試薬とを混合して得た第３測定試料を測定することにより取得される、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第４凝固時間、前記第５凝固時間及び前記第６凝固時間を取得する工程において、
前記第４凝固時間が、前記被検者の血液検体と前記第２の凝固時間測定試薬とを混合して得た第４測定試料を測定することにより取得され、
前記第５凝固時間が、前記正常血液検体と前記第２の凝固時間測定試薬とを混合して得た第５測定試料を測定することにより取得され、
前記第６凝固時間が、前記混合検体と前記第２の凝固時間測定試薬とを混合して得た６測定試料を測定することにより取得される、
請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１凝固時間、前記第２凝固時間及び前記第３凝固時間を取得する工程において、
前記第１凝固時間が、前記被検者の血液検体と前記第１の凝固時間測定試薬とを混合して得た第１測定試料を測定することにより取得され、
前記第２凝固時間が、前記第１の凝固時間測定試薬による正常血液検体の所定の凝固時間であり、
前記第３凝固時間が、前記混合検体と前記第１の凝固時間測定試薬とを混合して得た第３測定試料を測定することにより取得される、
請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記第４凝固時間、前記第５凝固時間及び前記第６凝固時間を取得する工程において、
前記第４凝固時間が、前記被検者の血液検体と前記第２の凝固時間測定試薬とを混合して得た第４測定試料を測定することにより取得され、
前記第５凝固時間が、前記第２の凝固時間測定試薬による正常血液検体の所定の凝固時間であり、
前記第６凝固時間が、前記混合検体と前記第２の凝固時間測定試薬とを混合して得た第６測定試料を測定することにより取得される、
請求項１又は４に記載の方法。
【請求項６】
前記第１の指標値が、前記第１凝固時間、前記第２凝固時間及び前記第３凝固時間に基づいて、混合試験の結果を定量的に評価するための値であり、前記第２の指標値が、前記第４凝固時間、前記第５凝固時間及び前記第６凝固時間に基づいて、混合試験の結果を定量的に評価するための値である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の判定方法。
【請求項７】
前記第１の指標値が、前記第２凝固時間及び前記第３凝固時間の差と、前記第１凝固時間とから取得される値であり、
前記第２の指標値が、前記第５凝固時間及び前記第６凝固時間の差と、前記第４凝固時間とから取得される値である
請求項１〜６のいずれか１項に記載の判定方法。
【請求項８】
前記第１の指標値が、前記第２凝固時間及び前記第３凝固時間の差と、前記第１凝固時間との比に関する値であり、
前記第２の指標値が、前記第５凝固時間及び前記第６凝固時間の差と、前記第４凝固時間との比に関する値である
請求項１〜７のいずれか１項に記載の判定方法。
【請求項９】
前記第１の指標値が、下記の式(１)により取得され、前記第２の指標値が、下記の式(２)により取得される請求項１〜８のいずれか１項に記載の判定方法。
(第１の指標値)＝[(第３凝固時間)−(第２凝固時間)]／(第１凝固時間)  ・・・式(１)
(第２の指標値)＝[(第６凝固時間)−(第５凝固時間)]／(第４凝固時間)  ・・・式(２)
【請求項１０】
前記判定工程が、前記第１の指標値と第１の閾値とを比較し、前記第２の指標値と第２の閾値とを比較し、それらの比較結果に基づいて、前記被検者の血液検体が、直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定する工程である請求項１〜９のいずれか１項に記載の判定方法。
【請求項１１】
前記第１の指標の値が第１の閾値以上であり、且つ前記第２の指標の値が第２の閾値以上であるとき、前記被検者の血液検体は、直接抗凝固薬を含む血液検体であると判定し、
前記第１の指標の値が第１の閾値より小さいか、又は前記第２の指標の値が第２の閾値より小さいとき、前記被検者の血液検体は、直接抗凝固薬以外の凝固異常の原因を有する血液検体であると判定する請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の指標の値が前記第１の閾値以上であり、且つ前記第２の指標の値が前記第２の閾値より小さいとき、前記被検者の血液検体は、ループスアンチコアグラントを含む血液検体であると判定し、
前記第１の指標の値が前記第１の閾値より小さく、且つ前記第２の指標の値が前記第２の閾値より小さいとき、前記被検者の血液検体は、凝固因子が欠損した血液検体であると判定する請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
血液検体と凝固時間測定試薬とを含む測定試料を調製し、調製された前記測定試料から凝固時間を取得する測定部と、
前記凝固時間に基づいて、血液検体の分析を行う分析部と
を備え、
前記測定部は、
被検者の血液検体と第１の凝固時間測定試薬とから第１測定試料を調製して第１凝固時間を測定し、正常血液検体と前記第１の凝固時間測定試薬とから第２測定試料を調製して第２凝固時間を測定し、前記被検者の血液検体と前記正常血液検体とを混合して得た混合検体と、前記第１の凝固時間測定試薬とから第３測定試料を調製して第３凝固時間を測定し、
前記被検者の血液検体と第２の凝固時間測定試薬とから第４測定試料を調製して第４凝固時間を測定し、前記正常血液検体と前記第２の凝固時間測定試薬とから第５測定試料を調製して第５凝固時間を測定し、前記混合検体と前記第２の凝固時間測定試薬とから第６測定試料を調製して第６凝固時間を測定し、
前記分析部は、
前記第１凝固時間、前記第２凝固時間及び前記第３凝固時間に基づいて、第１の指標値を取得し、前記第４凝固時間、前記第５凝固時間及び前記第６凝固時間に基づいて、第２の指標値を取得し、
前記第１の凝固時間測定試薬がリン脂質を含み、前記第２の凝固時間測定試薬が、前記第１の凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む、
血液検体分析装置。
【請求項１４】
血液検体と凝固時間測定試薬とを含む測定試料を調製し、調製された前記測定試料から凝固時間を取得する測定部と、
前記凝固時間に基づいて、血液検体の分析を行う分析部と
を備え、
前記測定部は、
被検者の血液検体と第１の凝固時間測定試薬とから第１測定試料を調製して第１凝固時間を測定し、前記被検者の血液検体と正常血液検体とを混合して得た混合検体と、前記第１の凝固時間測定試薬とから第３測定試料を調製して第３凝固時間を測定し、
前記被検者の血液検体と第２の凝固時間測定試薬とから第４測定試料を調製して第４凝固時間を測定し、前記混合検体と前記第２の凝固時間測定試薬とから第６測定試料を調製して第６凝固時間を測定し、
前記分析部は、
前記第１凝固時間、前記第３凝固時間、及び前記第１の凝固時間測定試薬による正常血液検体の所定の凝固時間である第２凝固時間に基づいて、第１の指標値を取得し、
前記第４凝固時間、前記第６凝固時間、及び前記第２の凝固時間測定試薬による正常血液検体の所定の凝固時間である第５凝固時間に基づいて、第２の指標値を取得し、
前記第１の凝固時間測定試薬がリン脂質を含み、前記第２の凝固時間測定試薬が、前記第１の凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む、
血液検体分析装置。
【請求項１５】
表示部をさらに備える請求項１３又は１４に記載の血液検体分析装置。
【請求項１６】
前記分析部が、前記第１の指標値及び前記第２の指標値を前記表示部に出力する請求項１５に記載の血液検体分析装置。
【請求項１７】
前記分析部が、前記第１凝固時間、前記第２凝固時間及び前記第３凝固時間をプロットしたグラフを前記表示部に出力する請求項１５又は１６に記載の血液検体分析装置。
【請求項１８】
前記分析部が、前記第１の指標値と第１の閾値とを比較し、前記第２の指標値と第２の閾値とを比較し、比較結果に基づいて、前記被検者の血液検体が、直接抗凝固薬を含む血液検体であるかについての参考情報を前記表示部に出力する請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の血液検体分析装置。
【請求項１９】
前記分析部は、
前記第１の指標の値が第１の閾値以上であり、且つ前記第２の指標の値が第２の閾値以上であるとき、前記被検者の血液検体が、直接抗凝固薬を含む血液検体であるとの参考情報を前記表示部に出力し、
前記第１の指標の値が第１の閾値より小さいか、又は前記第２の指標の値が第２の閾値より小さいとき、前記被検者の血液検体が、直接抗凝固薬以外の凝固異常の原因を有する血液検体であるとの参考情報を前記表示部に出力する
請求項１８に記載の血液検体分析装置。
【請求項２０】
前記分析部は、
前記第１の指標の値が前記第１の閾値以上であり、且つ前記第２の指標の値が前記第２の閾値より小さいとき、前記被検者の血液検体が、ループスアンチコアグラントを含む血液検体であるとの参考情報を前記表示部に出力し、
前記第１の指標の値が前記第１の閾値より小さく、且つ前記第２の指標の値が前記第２の閾値より小さいとき、前記被検者の血液検体が、凝固因子が欠損した血液検体であるとの参考情報を前記表示部に出力する
請求項１９に記載の血液検体分析装置。
【請求項２１】
コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されているコンピュータプログラムであって、下記のステップ：
被検者の血液検体の凝固時間である第１凝固時間、正常血液検体の凝固時間である第２凝固時間、及び前記被検者の血液検体と前記正常血液検体とを混合して得た混合検体の凝固時間である第３凝固時間を取得するステップと、
前記被検者の血液検体の凝固時間である第４凝固時間、前記正常血液検体の凝固時間である第５凝固時間、及び前記混合検体の凝固時間である第６凝固時間を取得するステップと、
前記第１凝固時間、前記第２凝固時間及び前記第３凝固時間に基づいて、第１の指標値を取得し、前記第４凝固時間、前記第５凝固時間及び前記第６凝固時間に基づいて、第２の指標値を取得するステップと
を前記コンピュータに実行させ、
前記第１凝固時間、前記第２凝固時間及び前記第３凝固時間が、第１の凝固時間測定試薬を用いて測定された凝固時間であり、前記第４凝固時間、前記第５凝固時間及び前記第６凝固時間が、第２の凝固時間測定試薬を用いて測定された凝固時間であり、
前記第１の凝固時間測定試薬がリン脂質を含み、前記第２の凝固時間測定試薬が、前記第１の凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む、
血液検体の分析のためのコンピュータプログラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液検体の判定方法に関する。また、本発明は、血液検体の分析のための装置及びコンピュータプログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
ループスアンチコアグラント(LA)は、リン脂質依存性の凝固反応を阻害する自己抗体であり、血栓症や妊娠合併症を呈する抗リン脂質抗体症候群の患者において検出される。LAは、リン脂質依存性の凝固反応に必要なリン脂質を阻害するので、LA陽性患者の血液では凝固時間が延長する。一方、ワーファリンなどの抗凝固薬を投与された患者の血液でも凝固時間が延長する。したがって、LA陽性患者の血液検体を正確に検出するためには、LAを含む血液検体と、抗凝固薬を含む血液検体とを判別する必要がある。しかし、通常の凝固検査では、両者を区別することは難しい。
【０００３】
被検者にLA陽性の疑いがある場合、LAの検査として混合試験が行われる。混合試験では、被検者の血漿と正常血漿とを混合し、得られた混合血漿の凝固時間を測定する。被検者がLA陽性患者の場合、混合試験を行っても凝固時間の延長は改善されない。さらに、被検者の血漿、正常血漿及び混合血漿の凝固時間から、Index of Circulating Anticoagulant(ICA)やLupus Ratio(LR)値などの、混合試験の結果を定量的に評価するための指標値を算出し、この指標値に基づいてLAを検出する方法が知られている。また、LAの確認試験では、凝固時間の延長がリン脂質に依存するかを確認する。具体的には、リン脂質の濃度が異なる２種類の凝固時間測定試薬を用いて凝固時間を測定し、各試薬から得られた凝固時間の比に基づいて、リン脂質濃度に依存的な凝固時間の延長を確認して、LAを含む検体を検出する。
【０００４】
例えば、特許文献１には、混合試験とリン脂質依存性の確認試験とを組み合わせて、LAを含む検体と、ワーファリンを含む検体とを判別できたことが記載されている。具体的には、リン脂質の濃度が異なる２種類の凝固時間測定試薬を用いて、混合血漿及び正常血漿の凝固時間を測定し、これらの凝固時間から算出したLR値により、LA陽性患者の血漿と、ワーファリンを投与された患者の血漿とを判別している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許出願第2004/091952号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従来、抗凝固薬としてはワーファリンがよく用いられていたが、近年では、ワーファリンとは異なる作用機序を有する新規な抗凝固薬も用いられている。そのような抗凝固薬は、凝固因子と結合して、該凝固因子が媒介する凝固反応を直接阻害する作用を示す。以下、凝固反応を直接阻害する作用を有する抗凝固薬を「直接抗凝固薬」又は「DAC」ともいう。DACを投与された患者の血液検体でも凝固時間が延長する。しかし、従来法では、DACを含む検体と、LAを含む検体との判別を行うことは困難であった。もし、DACを投与された被検者の血液検体が、誤ってLAを含む検体であると判定された場合、該被検者に過剰な抗凝固療法がなされるおそれがある。過剰な抗凝固療法は、出血リスクを増大する。そのため、DACを含む血液検体と、LAを含む血液検体との判別は臨床的に重要である。
【０００７】
一方で、検査のコストなどを考慮すると、そのような判別は、DACを検出するための特別な試薬などを必要としないことが好ましい。よって、従来の凝固時間測定試薬により、DACを含む血液検体と、LAを含む血液検体との判別を可能にする手段の開発が望まれる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
よって、本発明の第１の態様は、被検者の血液検体の凝固時間である第１凝固時間、正常血液検体の凝固時間である第２凝固時間、及び該被検者の血液検体と該正常血液検体とを混合して得た混合検体の凝固時間である第３凝固時間を取得する工程と、該被検者の血液検体の凝固時間である第４凝固時間、該正常血液検体の凝固時間である第５凝固時間、及び該混合検体の凝固時間である第６凝固時間を取得する工程と、該記第１凝固時間、該第２凝固時間及び該第３凝固時間に基づいて、第１の指標値を取得し、該第４凝固時間、該第５凝固時間及び該第６凝固時間に基づいて、第２の指標値を取得する工程と、該第１の指標値と該第２の指標値とに基づいて、該被検者の血液検体が、直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定する工程とを含む、血液検体の判定方法を提供する。当該方法において、該第１凝固時間、該第２凝固時間及び該第３凝固時間は、第１の凝固時間測定試薬を用いて測定された凝固時間であり、該第４凝固時間、該第５凝固時間及び該第６凝固時間が、第２の凝固時間測定試薬を用いて測定された凝固時間であり、該第１の凝固時間測定試薬はリン脂質を含み、該第２の凝固時間測定試薬は、該第１の凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む。
【０００９】
本発明の第２の態様は、血液検体と凝固時間測定試薬とを含む測定試料を調製し、調製された該測定試料から凝固時間を取得する測定部と、該凝固時間に基づいて、血液検体の分析を行う分析部とを備える血液検体分析装置を提供する。該装置において、該測定部は、被検者の血液検体と第１の凝固時間測定試薬とから第１測定試料を調製して第１凝固時間を測定し、正常血液検体と該第１の凝固時間測定試薬とから第２測定試料を調製して第２凝固時間を測定し、該被検者の血液検体と該正常血液検体とを混合して得た混合検体と、該記第１の凝固時間測定試薬とから第３測定試料を調製して第３凝固時間を測定し、該被検者の血液検体と第２の凝固時間測定試薬とから第４測定試料を調製して第４凝固時間を測定し、該正常血液検体と該第２の凝固時間測定試薬とから第５測定試料を調製して第５凝固時間を測定し、該混合検体と該第２の凝固時間測定試薬とから第６測定試料を調製して第６凝固時間を測定する。また、該分析部は、該第１凝固時間、該第２凝固時間及び該第３凝固時間に基づいて、第１の指標値を取得し、該第４凝固時間、該第５凝固時間及び該第６凝固時間に基づいて、第２の指標値を取得する。ここで、該第１の凝固時間測定試薬はリン脂質を含み、該第２の凝固時間測定試薬は、該第１の凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む。
【００１０】
本発明の第３の態様は、血液検体と凝固時間測定試薬とを含む測定試料を調製し、調製された該測定試料から凝固時間を取得する測定部と、該凝固時間に基づいて、血液検体の分析を行う分析部とを備える血液検体分析装置を提供する。該装置において、該測定部は、被検者の血液検体と第１の凝固時間測定試薬とから第１測定試料を調製して第１凝固時間を測定し、該被検者の血液検体と正常血液検体とを混合して得た混合検体と、該記第１の凝固時間測定試薬とから第３測定試料を調製して第３凝固時間を測定し、該被検者の血液検体と第２の凝固時間測定試薬とから第４測定試料を調製して第４凝固時間を測定し、該混合検体と該第２の凝固時間測定試薬とから第６測定試料を調製して第６凝固時間を測定する。また、該分析部は、該第１凝固時間、該第３凝固時間、及び該第１の凝固時間測定試薬による正常血液検体の所定の凝固時間である第２凝固時間に基づいて、第１の指標値を取得し、該第４凝固時間、該第６凝固時間、及び前記第２の凝固時間測定試薬による正常血液検体の所定の凝固時間である第５凝固時間に基づいて、第２の指標値を取得する。ここで、該第１の凝固時間測定試薬はリン脂質を含み、該第２の凝固時間測定試薬は、該第１の凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む。
【００１１】
本発明の第４の態様は、コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されている、血液検体の分析のためのコンピュータプログラムを提供する。このコンピュータプログラムは、被検者の血液検体の凝固時間である第１凝固時間、正常血液検体の凝固時間である第２凝固時間、及び該被検者の血液検体と該正常血液検体とを混合して得た混合検体の凝固時間である第３凝固時間を取得するステップと、該被検者の血液検体の凝固時間である第４凝固時間、該正常血液検体の凝固時間である第５凝固時間、及び該混合検体の凝固時間である第６凝固時間を取得するステップと、該第１凝固時間、該第２凝固時間及び該第３凝固時間に基づいて、第１の指標値を取得し、該第４凝固時間、該第５凝固時間及び該第６凝固時間に基づいて、第２の指標値を取得するステップとを前記コンピュータに実行させる。ここで、該第１凝固時間、該第２凝固時間及び該第３凝固時間は、第１の凝固時間測定試薬を用いて測定された凝固時間であり、該第４凝固時間、該第５凝固時間及び該第６凝固時間が、第２の凝固時間測定試薬を用いて測定された凝固時間であり、該第１の凝固時間測定試薬はリン脂質を含み、該第２の凝固時間測定試薬が、該第１の凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、DACを含む血液検体(以下、「DAC検体」ともいう)、LAを含む血液検体(以下、「LA検体」ともいう)、凝固因子の欠損した血液検体(以下、「凝固因子欠損検体」ともいう)の判別を可能にする２つの指標値を得ることができる。これらの指標値により、被検者の血液検体がDAC検体であるか否かを判定することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】血液検体分析装置の外観の構成を示す斜視図である。
【図２】血液検体分析装置の測定部の内部を上側から見た場合の平面図である。
【図３】血液検体分析装置の測定部の構成を示す図である。
【図４】測定装置が備えるランプユニットの構成を示す図である。
【図５Ａ】測定装置が備える検出部の構成を示す図である。
【図５Ｂ】測定装置が備える検出部の構成を示す図である。
【図５Ｃ】測定装置が備える検出部の構成を示す図である。
【図５Ｄ】測定装置が備える検出部の構成を示す図である。
【図６】血液検体分析装置の制御装置のハードウェア構成を示す図である。
【図７Ａ】血液検体分析装置による血液検体の測定処理を示すフローチャートである。
【図７Ｂ】測定データの分析処理及び分析結果の表示処理の手順を示すフローチャートである。
【図８】血液検体分析装置による測定結果を表示する画面の一例を示す図である。
【図９】血液検体分析装置による測定結果を表示する画面の一例を示す図である。
【図１０Ａ】血液検体分析装置による血液検体の分析処理を示すフローチャートである。
【図１０Ｂ】血液検体分析装置による血液検体の分析処理を示すフローチャートである。
【図１１Ａ】リン脂質濃度の低い凝固時間測定試薬を用いた場合のDAC検体、LA検体及び凝固因子欠損検体における第１の指標値(ICA)の分布を示す図である。
【図１１Ｂ】リン脂質濃度の高い凝固時間測定試薬を用いた場合のDAC検体、LA検体及び凝固因子欠損検体における第２の指標値(ICA)の分布を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
[１．血液検体の判定方法]
本実施形態の血液検体の判定方法(以下、「判定方法」ともいう)は、被検者の血液検体が、DAC検体であるかを判定する方法である。上述のように、直接抗凝固薬(DAC)とは、凝固因子と結合して、該凝固因子が媒介する凝固反応を直接阻害する薬剤をいう。経口投与可能な直接抗凝固薬は、直接経口抗凝固薬(DOAC)と呼ばれている。DACとしては、第Xa因子阻害薬及びトロンビン阻害薬が当該技術において公知である。第Xa因子阻害薬は、第Xa因子と直接結合でき、プロトロンビンからトロンビンへの変換を阻害する。第Xa因子阻害薬としては、例えば、リバーロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ベトリキサバン、オタミキサバン、ラザキサバン、ダレキサバン、レタキサバン、エリバキサバン、アンチスタシンなどが挙げられる。トロンビン阻害薬は、トロンビンと直接結合でき、トロンビンが媒介するフィブリノゲン活性化を阻害する。トロンビン阻害薬としては、例えば、ダビガトラン、ビバリルジン、ヒルジン、レピルジン、デシルジン、アルガトロバン、メラガトラン、キシメラガトランなどが挙げられる。
【００１５】
本実施形態の判定方法では、被検者の血液検体、正常血液検体及びそれらを混合して得た混合検体のそれぞれの凝固時間を取得する。本明細書において、「凝固時間を取得する」とは、凝固時間測定試薬を用いて血液検体の凝固時間を実際に測定すること、及び、凝固時間測定試薬を用いて予め測定され、記録された血液検体の凝固時間の値を取得することの両方を意味する。
【００１６】
本実施形態において、上記の血液検体の凝固時間は、第１及び第２の凝固時間のそれぞれを用いて測定された凝固時間である。第１の凝固時間測定試薬は、リン脂質を含む凝固時間測定試薬であり、第２の凝固時間測定試薬は、該第１の凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬である。以下、第１の凝固時間測定試薬を用いて測定された被検者の血液検体の凝固時間を「第１凝固時間」と呼び、該試薬を用いて測定された正常血液検体の凝固時間を「第２凝固時間」と呼び、該試薬を用いて測定された混合検体の凝固時間を「第３凝固時間」と呼ぶ。また、第２の凝固時間測定試薬を用いて測定された被検者の血液検体の凝固時間を「第４凝固時間」と呼び、該試薬を用いて測定された正常血液検体の凝固時間を「第５凝固時間」と呼び、該試薬を用いて測定された混合検体の凝固時間を「第６凝固時間」と呼ぶ。
【００１７】
被検者の血液検体は、被検者から採取した血液(全血)又は該血液から調製した血漿であればよい。それらの中でも血漿が好ましく、血小板除去血漿がより好ましい。血小板は、遠心分離やフィルター分離など公知の手法により除去できる。本実施形態では、被検者の血液検体は、凝固異常の疑いのある血液検体が好ましい。そのような血液検体としては、例えば、通常の凝固検査により凝固時間の延長が認められた血液検体、血栓症患者又は血栓症を有する疑いのある者から得た血液検体などが挙げられる。
【００１８】
正常血液検体は、健常者から採取した血液(全血)又は該血液から調製した血漿であればよい。本実施形態では、正常血漿が好ましい。正常血漿は、医療機関などで調製された正常プール血漿でもよいし、市販の正常血漿でもよい。市販の正常血漿としては、例えばControl N(シスメックス株式会社)、CRYOcheck Pooled Normal Plasma(Precision BioLogic Inc)などが挙げられる。
【００１９】
混合検体は、被検者の血液検体と正常血液検体とを、少なくとも１つの混合比で混合して得られた検体である。被検者の血液検体と正常血液検体との混合比は、適宜決定してよい。混合検体における被検者の血液検体の比率として、例えば、５、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90及び95％(v/v)から少なくとも１つ選択する。本実施形態では、被検者の血液検体の比率が50％(v/v)の混合検体を調製することが好ましい。混合検体の調製は、用手法で行ってもよいし、全自動凝固時間測定装置で行ってもよい。
【００２０】
第１及び第２の凝固時間測定試薬は、当該技術において公知の測定原理に基づく凝固時間を測定するための試薬であればよい。例えば、希釈ラッセル蛇毒時間(dRVVT)、活性化部分トロンボプラスチン時間(APTT)、希釈活性化部分トロンボプラスチン時間(dAPTT)、プロトロンビン時間(PT)、希釈プロトロンビン時間(dPT)、トロンビン時間(TT)及び希釈トロンビン時間(dTT)の少なくとも１種を測定するための試薬が挙げられる。それらの中でも、dRVVT測定試薬、dAPTT測定試薬及びAPTT測定試薬が好ましい。また、市販の凝固時間測定試薬及び試薬キットを用いてもよい。好ましい実施形態では、第１凝固時間測定試薬と第２凝固時間測定試薬は、同じ測定原理に基づく凝固時間を測定するための試薬である。
【００２１】
第１及び第２の凝固時間測定試薬に含まれるリン脂質としては、ホスファチジルエタノールアミン(PE)、ホスファチジルコリン(PC)及びホスファチジルセリン(PS)が挙げられる。第１及び第２の凝固時間測定試薬は、PE、PC及びPSから選択される１種、好ましくは２種、より好ましくは全種のリン脂質を含む。リン脂質は、天然由来リン脂質であってもよいし、合成リン脂質であってもよい。LAに対する感度を向上させる観点からは、合成リン脂質又は純度99％以上に精製された天然由来リン脂質が好ましい。PE、PC及びPSの脂肪酸側鎖は特に限定されないが、例えば、パルミチン酸、オレイン酸、ステアリン酸などが挙げられる。それらの中でもオレイン酸が好ましい。
【００２２】
第１の凝固時間測定試薬におけるリン脂質濃度は、第２の凝固時間測定試薬におけるリン脂質濃度よりも低ければ、特に限定されない。本実施形態では、第１の凝固時間測定試薬におけるリン脂質濃度は、LA検体を測定した場合に、LAによるリン脂質の阻害(凝固時間の延長)が現れる程度の濃度であることが好ましい。この場合、第１の凝固時間測定試薬は、LAのスクリーニング用試薬に相当する。より具体的には、血液検体と第１の凝固時間測定試薬とを体積比１：１で混合する場合、該試薬におけるリン脂質の濃度は、例えば20〜150μg/mLであり、好ましくは30〜70μg/mLである。血液検体と第１の凝固時間測定試薬との混合割合が１：１でない場合は、その混合割合に応じて、該試薬におけるリン脂質の濃度を適宜調整すればよい。
【００２３】
第２の凝固時間測定試薬におけるリン脂質濃度は、第１の凝固時間測定試薬におけるリン脂質濃度よりも高ければ、特に限定されない。本実施形態では、第２の凝固時間測定試薬におけるリン脂質濃度は、LA検体を測定した場合に、LAによるリン脂質の阻害(凝固時間の延長)を抑制又は低減できる程度の濃度であることが好ましい。この場合、第２の凝固時間測定試薬は、LAの確認試験用試薬に相当する。例えば、第２の凝固時間測定試薬におけるリン脂質濃度は、第１の凝固時間測定試薬におけるリン脂質濃度の1.1倍以上100倍以下であってもよい。より具体的には、血液検体と第２の凝固時間測定試薬とを体積比１：１で混合する場合、該試薬におけるリン脂質の濃度は、例えば150〜2000μg/mLであり、好ましくは150〜600μg/mLである。血液検体と第２の凝固時間測定試薬との混合割合が１：１でない場合は、その混合割合に応じて、該試薬におけるリン脂質の濃度を適宜調整すればよい。
【００２４】
第１及び第２の凝固時間測定試薬は、測定する凝固時間の種類に応じて、凝固に必要な成分を含む。本明細書において、凝固に必要な成分とは、インビトロで血液凝固を起こすために必要な成分をいう。そのような成分は当該技術において公知であり、例えば、活性化剤、蛇毒、組織因子などが挙げられる。活性化剤としては、接触因子活性化剤が好ましく、例えば、エラグ酸、カオリン、セライト、シリカなどが挙げられる。エラグ酸は、金属イオンとキレートを形成した状態にあるエラグ酸であってもよい。蛇毒としては、ラッセル蛇毒、テキスタリン蛇毒、エカリン蛇毒などが挙げられる。組織因子としては、ウサギ脳又はヒト胎盤由来の組織因子、組換え型組織因子などが挙げられる。好ましい実施形態では、第１凝固時間測定試薬と第２凝固時間測定試薬は、同じ成分を含む。
【００２５】
第１及び第２の凝固時間測定試薬は、血液凝固を開始させるために、カルシウムイオンを含んでもよい。この場合、第１及び第２の凝固時間測定試薬は、リン脂質、凝固に必要な成分及びカルシウムイオンを含む１液型の試薬であってもよい。あるいは、第１の凝固時間測定試薬は、リン脂質及び凝固に必要な成分を含む第１部分試薬と、カルシウムイオンを含む第２部分試薬とから構成される２液型の試薬であってもよい。同様に、第２の凝固時間測定試薬は、リン脂質及び凝固に必要な成分を含む第３部分試薬と、カルシウムイオンを含む第４部分試薬とから構成されてもよい。本実施形態では、カルシウムイオンを含む１つの部分試薬を、第１の凝固時間測定試薬の第２部分試薬及び第２の凝固時間測定試薬の第３部分試薬として用いてもよい。
【００２６】
カルシウムイオンは、カルシウム塩又はその水溶液により、凝固時間測定試薬中に供給されることが好ましい。カルシウム塩としては、例えば、塩化カルシウムなどが挙げられる。第１及び第２の凝固時間測定試薬におけるカルシウムイオンの含有量としては、凝固を生じさせるのに十分な量であればよく、例えば、塩化カルシウムの濃度で表して、通常２mmol/L以上40 mmol/L以下、好ましくは４mmol/L以上30 mmol/L以下である。凝固時間測定試薬が２液型の試薬である場合、カルシウムイオンを含む部分試薬は、カルシウム塩の水溶液であることが好ましい。なお、本明細書では、「mmol/L」を「mM」とも表す。
【００２７】
第１及び第２の凝固時間測定試薬が、凝固に必要な成分としてラッセル蛇毒を含む試薬である場合、これらの試薬は、カルシウムイオンを含まなくてもよい。ラッセル蛇毒は、第Ｘ因子を直接活性化して血液凝固を惹起するからである。
【００２８】
ラッセル蛇毒による血液凝固は、上述のとおり、第Ｘ因子が直接活性化されることで惹起されるので、外因系凝固経路の第VII因子及び接触因子、並びに内因系凝固経路の第VIII因子を介さない。そのため、dRVVTは、接触因子異常や第VIII因子欠損などの影響を受けず、LAに対する感度が高いことが知られている。本実施形態では、第１の凝固時間測定試薬が、ラッセル蛇毒及びリン脂質を含む試薬(dRVVT測定試薬)であり、第２の凝固時間測定試薬が、ラッセル蛇毒、及び第１の凝固時間測定試薬よりも高い濃度のリン脂質を含む試薬であることが好ましい。
【００２９】
本実施形態では、第１及び第２の凝固時間測定試薬を用いて、第１〜第６凝固時間を実際に測定することにより、これらの凝固時間を取得することが好ましい。各凝固時間の測定は、上記の各血液検体と、第１又は第２の凝固時間測定試薬とを混合して調製される測定試料について行う。具体的には、第１凝固時間は、被検者の血液検体と第１の凝固時間測定試薬とを混合して得た第１測定試料を測定することにより取得され、第２凝固時間は、正常血液検体と第１の凝固時間測定試薬とを混合して得た第２測定試料を測定することにより取得され、第３凝固時間は、混合検体と第１の凝固時間測定試薬とを混合して得た第３測定試料を測定することにより取得される。また、第４凝固時間は、被検者の血液検体と第２の凝固時間測定試薬とを混合して得た第４測定試料を測定することにより取得され、第５凝固時間は、正常血液検体と第２の凝固時間測定試薬とを混合して得た第５測定試料を測定することにより取得され、第６凝固時間は、混合検体と第２の凝固時間測定試薬とを混合して得た第６測定試料を測定することにより取得される。
【００３０】
血液検体と凝固時間測定試薬との反応条件は、該試薬の種類に応じて適宜決定できる。例えば、第１又は第２の凝固時間測定試薬が２液型の試薬である場合、血液検体と第１又は第３部分試薬との反応時間は、通常１分以上10分以下であり、好ましくは３分以上５分以下である。温度条件は、通常25℃以上45℃以下であり、好ましくは35℃以上38℃以下である。測定試料の調製は、用手法で行ってもよいし、全自動測定装置で行ってもよい。そのような装置としては、例えば、CS-5100(シスメックス株式会社)、CS-2400(シスメックス株式会社)、CS-2000i(シスメックス株式会社)などが挙げられる。
【００３１】
凝固時間の測定は、測定試料の調製後、すみやかに行う。具体的には、第１又は第２の凝固時間測定試薬が２液型の試薬である場合、血液検体と第１又は第３部分試薬との混合物に、カルシウムイオンを含む第２又は第４部分試薬を添加した時点から、凝固時間の測定を開始する。第１又は第２の凝固時間測定試薬が、カルシウムイオン又は蛇毒を含む１液型の試薬の場合は、該試薬を血液検体に添加した時点から凝固時間の測定を開始する。
【００３２】
凝固時間の測定は、用手法で行ってもよいし、上記の全自動凝固時間測定装置で行ってもよい。好ましくは、全自動凝固時間測定装置で測定を行う。この装置により凝固時間を測定する場合は、測定試料に光を照射して、得られた光学的情報に基づいて凝固時間が算出される。照射する光は、凝固時間の測定に通常用いられる光であればよく、例えば、波長が660 nm近傍である光が挙げられる。光源は特に限定されないが、例えば、発光ダイオード、ハロゲンランプなどが挙げられる。光源から測定試料に光を照射することにより、該測定試料から散乱光及び透過光が生じる。本実施形態では、光量に関する光学的情報として、例えば、散乱光量又は透過光量に関する情報が挙げられ、散乱光強度、透過度、吸光度などが好ましい。
【００３３】
本実施形態では、第１〜第６凝固時間は、同時に測定してもよいし、逐次測定してもよい。第１〜第６凝固時間を逐次測定する場合、測定の順序は特に限定されない。
【００３４】
別の実施形態では、第２凝固時間は、第１の凝固時間測定試薬による所定の凝固時間であってもよい。また、第５凝固時間は、第２の凝固時間測定試薬による所定の凝固時間であってもよい。すなわち、第２凝固時間として、第１の凝固時間測定試薬を用いて予め測定され、記録された正常血液検体の凝固時間を用いてもよいし、第５凝固時間として、第２の凝固時間測定試薬を用いて予め測定され、記録された正常血液検体の凝固時間を用いてもよい。これにより、第２及び第５測定試料の調製及び測定を省くことができる。第１及び第２の凝固時間測定試薬が市販の試薬又は試薬キットである場合、それらに添付された説明書に記載の正常血液検体の凝固時間を、第２及び第５凝固時間として用いてもよい。
【００３５】
よって、別の実施形態では、第１凝固時間は、被検者の血液検体と第１の凝固時間測定試薬とを混合して得た第１測定試料を測定することにより取得され、第２凝固時間は、第１の凝固時間測定試薬による正常血液検体の所定の凝固時間であり、第３凝固時間は、混合検体と第１の凝固時間測定試薬とを混合して得た第３測定試料を測定することにより取得される。また、第４凝固時間は、被検者の血液検体と第２の凝固時間測定試薬とを混合して得た第４測定試料を測定することにより取得され、第５凝固時間は、第２の凝固時間測定試薬による正常血液検体の所定の凝固時間であり、第６凝固時間は、混合検体と第２の凝固時間測定試薬とを混合して得た第６測定試料を測定することにより取得される。この別の実施形態では、第２及び第５凝固時間として、予め測定され記録された正常血液検体の凝固時間を用いること以外は、上述のとおりである。
【００３６】
本実施形態の判定方法では、第１凝固時間、第２凝固時間及び第３凝固時間に基づいて、第１の指標値を取得し、４凝固時間、第５凝固時間及び第６凝固時間に基づいて、第２の指標値を取得する。本実施形態において、第１及び第２の指標値は、被検者の血液検体、正常血液検体及びそれら混合検体の凝固時間に基づいて、混合試験の結果を定量的に評価するための値であることが好ましい。
【００３７】
LAの検査では、混合試験の結果を定量的に評価するためのICAなどの指標値は、リン脂質濃度の低いスクリーニング用試薬を用いて測定した凝固時間から取得することが推奨されている。一方、当該技術分野では、リン脂質濃度の高い確認試験用試薬を用いて測定した凝固時間から指標値を取得することは、行われていない。これは、リン脂質濃度が高い試薬は、LAによる凝固時間の延長を抑制するので、取得される指標値からは有用な情報が得られないからである。しかし、本発明者は、リン脂質濃度の異なる２種類の凝固時間測定試薬を用いて、被検血漿、正常血漿及びそれらの混合血漿の凝固時間を測定し、２種類の指標値を取得することを試みた。そして、２種類の指標値により、DAC検体、LA検体及び凝固因子欠損検体を区別できることを見出した。
【００３８】
本実施形態において、第１及び第２の指標値は、同じ算出法により得られる値であってもよいし、異なる算出法により得られる値であってもよい。好ましくは、第１及び第２の指標値は、同じ算出法により得られる値である。例えば、第１の指標値は、第２凝固時間及び第３凝固時間の差と、第１凝固時間とから取得される値であり、第２の指標値が、第５凝固時間及び第６凝固時間の差と、第４凝固時間とから取得される値であってもよい。
【００３９】
第２凝固時間及び第３凝固時間の差は、下記のいずれかの式で算出される。
(第２凝固時間及び第３凝固時間の差)＝(第２凝固時間)−(第３凝固時間)、又は
(第２凝固時間及び第３凝固時間の差)＝(第３凝固時間)−(第２凝固時間)
【００４０】
同様に、第５凝固時間及び第６凝固時間の差は、下記のいずれかの式で算出される。
(第５凝固時間及び第６凝固時間の差)＝(第５凝固時間)−(第６凝固時間)、又は
(第５凝固時間及び第６凝固時間の差)＝(第６凝固時間)−(第５凝固時間)
【００４１】
本実施形態では、上記の式から算出された値に定数を乗じた値を、差として取得してもよい。
【００４２】
第２凝固時間及び第３凝固時間の差と、第１凝固時間とから取得される値としては、例えば、該差の値と第１凝固時間の値との積又は比などが挙げられる。同様に、第５凝固時間及び第６凝固時間の差と、第４凝固時間とから取得される値としては、例えば、該差の値と第４凝固時間の値との積又は比などが挙げられる
【００４３】
好ましい実施形態では、第１の指標値は、第２凝固時間及び第３凝固時間の差と、第１凝固時間との比に関する値であり、第２の指標値が、第５凝固時間及び第６凝固時間の差と、第４凝固時間との比に関する値である。比に関する値には、比の値そのものだけではなく、該比の値から算出される値も含まれる。
【００４４】
第１の指標値としての比の値は、下記のいずれかの式で算出される値である。
(比の値)＝(第２凝固時間及び第３凝固時間の差)／(第１凝固時間)、又は
(比の値)＝(第１凝固時間)／(第２凝固時間及び第３凝固時間の差)
【００４５】
同様に、第２の指標値としての比の値は、下記のいずれかの式で算出される値である。
(比の値)＝(第５凝固時間及び第６凝固時間の差)／(第４凝固時間)、又は
(比の値)＝(第５凝固時間)／(第５凝固時間及び第６凝固時間の差)
【００４６】
比の値から算出される値としては、例えば、該比の値に定数を乗じた値、該比の値に定数を足した値、該比の値から定数を引いた値、該比の値の逆数、及びこれらの計算を組み合わせて得られる値などが挙げられる。
【００４７】
本実施形態では、第１の指標値は、下記の式(１)により取得される比の値であり、第２の指標値は、下記の式(２)により取得される比の値であることが好ましい。
(第１の指標値)＝[(第３凝固時間)−(第２凝固時間)]／(第１凝固時間)  ・・・式(１)
(第２の指標値)＝[(第６凝固時間)−(第５凝固時間)]／(第４凝固時間)  ・・・式(２)
【００４８】
本実施形態では、上記の式(１)及び(２)から算出された値を100倍して得られる比率(％)を、第１及び第２の指標値として取得してもよい。この場合、得られる比率は、後述のICAに当たる。
【００４９】
本実施形態では、第１及び第２の指標値として、公知の定量化指標を用いてもよい。公知の定量化指標としては、例えば、ICA及びPercent Correction (PC)などが挙げられる。なお、ICA自体は、Pengo V.ら、Update of the guidelines for lupus anticoagulant detection. Journal of Thrombosis and Haemostasis 2009; 7: 1737-1740に開示され、PC自体は、Chang S-H.ら、"Percent Correction" Formula for Evaluation of Mixing Studies., Am J Clin Pathol 2002;117:62-73に開示されている。以下に、ICA及びPCについて説明する。
【００５０】
ICAは、ロスナー・インデックス(Rosner Index)とも呼ばれ、LA検体の判定に用いられる指標である。ICAは、下記の式により算出される。
【００５１】
ICA ＝ [(Ｅ−Ｂ)／Ａ]×100
(式中、Ａ：被検血漿の凝固時間、Ｂ：正常血漿の凝固時間、Ｅ：被検血漿の比率が50％(v/v)の混合血漿の凝固時間)
【００５２】
PCは、下記のとおり、混合検体における被検血漿の比率に応じて算出式が異なる。
【００５３】
PC(9:1) ＝ [(Ａ−Ｃ)／(Ａ−Ｂ)]×100
PC(8:2) ＝ [(Ａ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)]×100
PC(5:5) ＝ [(Ａ−Ｅ)／(Ａ−Ｂ)]×100
PC(2:8) ＝ [(Ａ−Ｆ)／(Ａ−Ｂ)]×100
PC(1:9) ＝ [(Ａ−Ｇ)／(Ａ−Ｂ)]×100
(式中、Ａ：被検血漿の凝固時間、Ｂ：正常血漿の凝固時間、Ｃ：被検血漿の比率が10％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｄ：被検血漿の比率が20％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｅ：被検血漿の比率が50％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｆ：被検血漿の比率が80％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｇ：被検血漿の比率が90％(v/v)の混合血漿の凝固時間)
【００５４】
本実施形態の方法では、第１の指標値と第２の指標値とに基づいて、被検者の血液検体が、DACを含む血液検体であるかを判定する。好ましい実施形態では、第１の指標値と第１の閾値とを比較し、第２の指標値と第２の閾値とを比較し、それらの比較結果に基づいて判定する。第１の閾値と第２の閾値は、同じ値であってもよいし、異なる値であってもよい。第１及び第２の指標値が、同じ算出法により得られる値である場合、第１の閾値と第２の閾値は、同じ値であることが好ましい。
【００５５】
例えば、式(１)で算出される第１の指標値については、DAC検体及びLA検体は、凝固因子欠損検体よりも高い傾向にある。また、式(２)で算出される第２の指標値については、DAC検体は、LA検体及び凝固因子欠損検体よりも高い傾向にある。よって、第１の指標の値が第１の閾値以上であり、且つ第２の指標の値が第２の閾値以上であるとき、被検者の血液検体は、DACを含む血液検体であると判定してもよい。また、第１の指標の値が第１の閾値より小さいか、又は第２の指標の値が第２の閾値より小さいとき、被検者の血液検体は、DAC以外の凝固異常の原因を有する血液検体であると判定してもよい。DAC以外の凝固異常の原因としては、例えば、LA及び凝固因子欠損が挙げられる。
【００５６】
本実施形態では、被検者の血液検体が、DAC以外の凝固異常の原因を有する血液検体であると判定された場合、第１及び第２の指標値に基づいて、該被検者の血液検体が、LAを含む血液検体であるか又は凝固因子が欠損した血液検体であるかを判定することもできる。一例として、第１及び第２の指標値が、それぞれ式(１)及び(２)で算出された値である場合の判定の手順を示す。第１の指標値が第１の閾値以上であり、且つ第２の指標値が第２の閾値より小さいとき、被検者の血液検体は、LAを含む血液検体であると判定してもよい。また、第１の指標値が第１の閾値より小さく、且つ第２の指標値が第２の閾値より小さいとき、被検者の血液検体は、凝固因子が欠損した血液検体であると判定してもよい。なお、第１の指標値が第１の閾値より小さく、且つ第２の指標値が第２の閾値以上であるとき、被検者の血液検体は、DAC、LA及び凝固因子欠損以外の凝固異常の原因を有すると判定してもよい。
【００５７】
本実施形態では、第１の閾値及び第２の閾値の数値自体は特に限定されない。例えば、DACを投与された患者、LA陽性患者及び凝固因子欠損患者の血液検体の凝固時間に関するデータの蓄積により、第１及び第２の閾値を経験的に設定できる。あるいは、DACを投与された患者の血液検体の群、LA陽性患者の血液検体の群、及び凝固因子欠損患者の血液検体の群のそれぞれから、第１の指標値及び第２の指標値を取得し、取得した値に基づいて、これらの群を明確に区別可能な値を、第１及び第２の閾値として設定できる。閾値の算出には、ROC解析などの統計学的手法を用いてもよい。
【００５８】
[２．血液検体分析装置及びコンピュータプログラム]
以下に、本実施形態の血液検体分析装置の一例を、図面を参照して説明する。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されない。以下、血液検体分析装置を、単に「分析装置」ともいう。図１に示されるように、血液検体分析装置１０は、測定試料の調製及び光学的測定を行う測定装置５０と、測定装置５０により取得された測定データを分析すると共に測定装置５０に指示を与える制御装置４０とを備える。測定装置５０は、測定試料からの光量に関する光学的情報を取得する測定部２０と、測定部２０の前方に配置された検体搬送部３０とを備える。
【００５９】
本実施形態では、測定部２０と検体搬送部３０とが一体となって分析装置１０の一部を構成している。さらなる実施形態では、検体搬送部３０は、分析装置１０と別体としてもよい。例えば、複数の分析装置を含む大規模なシステムにおいて、検体搬送部を各分析装置に設けずに、大型の搬送ラインに複数の分析装置が接続された形態を採用してもよい。
【００６０】
測定部２０には、蓋２０ａ及び２０ｂと、カバー２０ｃと、電源ボタン２０ｄが設けられている。ユーザは、蓋２０ａを開けて、試薬テーブル１１及び１２(図２参照)に設置されている試薬容器１０３を新たな試薬容器１０３と交換したり、また、別の試薬容器１０３を新たに追加したりすることができる。試薬容器１０３には、収容する試薬の種類と、試薬に付与されたシリアルナンバーからなる試薬ＩＤとを含むバーコードが印刷されたバーコードラベル１０３ａが貼付されている。
【００６１】
ユーザは、蓋２０ｂを開けて、ランプユニット２７(図２参照)を交換できる。また、ユーザは、カバー２０ｃを開けて、ピアサ１７ａ(図２参照)を交換できる。検体搬送部３０は、検体ラック１０２に支持された検体容器１０１を、ピアサ１７ａによる吸引位置まで搬送する。検体容器１０１は、ゴム製の蓋１０１ａにより密封されている。
【００６２】
血液検体分析装置１０を使用する場合、ユーザは、まず、測定部２０の電源ボタン２０ｄを押して測定部２０を起動させ、制御装置４０の電源ボタン４３９を押して制御装置４０を起動させる。制御装置４０が起動すると、表示部４１にログオン画面が表示される。ユーザは、ログオン画面にユーザ名及びパスワードを入力して制御装置４０にログオンし、血液検体分析装置１０の使用を開始する。
【００６３】
測定装置５０の構成について説明する。図２に示されるように、測定部２０は、試薬テーブル１１及び１２と、キュベットテーブル１３と、バーコードリーダ１４と、キュベット供給部１５と、キャッチャ１６と、検体分注アーム１７と、試薬分注アーム１８と、緊急検体セット部１９と、光ファイバ２１と、検出部２２と、キュベット移送部２３と、加温部２４と、廃棄口２５と、流体部２６と、ランプユニット２７とを備える。本実施形態において、測定部２０は、血液検体から測定試料を調製する測定試料調製部としての機能と、調製した測定試料から光学的情報を取得する光学的情報取得部としての機能とを有する。
【００６４】
(測定試料調製部)
試薬テーブル１１及び１２とキュベットテーブル１３は、それぞれ、円環形状を有し、回転可能に構成されている。試薬テーブル１１及び１２は試薬収納部に相当し、ここには試薬容器１０３が載せ置かれる。試薬テーブル１１及び１２に載せ置かれた試薬容器１０３のバーコードは、バーコードリーダ１４により読み取られる。バーコードから読み取られた情報(試薬の種類、試薬ID)は、制御装置４０に入力され、ハードディスク４３４(図６参照)に格納される。
【００６５】
本実施形態の装置では、試薬テーブル１１及び／又は１２には、第１の凝固時間測定試薬の第１部分試薬及び第２部分試薬(塩化カルシウム水溶液)、第２の凝固時間測定試薬の第３部分試薬及び第４部分試薬(塩化カルシウム水溶液)などがそれぞれ収容された試薬容器１０３が載せ置かれる。この例では、第１及び第２の凝固時間測定試薬は２液型の試薬であるが、これらは１液型の試薬であってもよい。
【００６６】
キュベットテーブル１３には、キュベット１０４を支持可能な複数の孔からなる支持部１３ａが形成されている。ユーザによってキュベット供給部１５に投入された新しいキュベット１０４は、キュベット供給部１５により順次移送され、キャッチャ１６によりキュベットテーブル１３の支持部１３ａに設置される。
【００６７】
検体分注アーム１７と試薬分注アーム１８には、それぞれ、上下移動及び回転移動できるようステッピングモータが接続されている。検体分注アーム１７の先端には、検体容器１０１の蓋１０１ａを穿刺できるよう先端が鋭利に形成されたピアサ１７ａが設置されている。試薬分注アーム１８の先端にはピペット１８ａが設置されている。ピペット１８ａの先端は、ピアサ１７ａと異なり平坦に形成されている。また、ピペット１８ａには、静電容量式の液面検知センサ２１３(図３参照)が接続されている。
【００６８】
検体搬送部３０(図１参照)によって検体容器１０１が所定位置に搬送されると、ピアサ１７ａが、検体分注アーム１７の回転移動により検体容器１０１の真上に位置付けられる。そして、検体分注アーム１７が下方向に移動され、ピアサ１７ａが検体容器１０１の蓋１０１ａを貫通し、検体容器１０１に収容されている血液検体が、ピアサ１７ａにより吸引される。緊急を要する血液検体が緊急検体セット部１９にセットされている場合、ピアサ１７ａは、検体搬送部３から供給される検体に割り込んで、緊急を要する血液検体を吸引する。ピアサ１７ａにより吸引された血液検体は、キュベットテーブル１３上の空のキュベット１０４に吐出される。
【００６９】
血液検体が吐出されたキュベット１０４は、キュベット移送部２３のキャッチャ２３ａにより、キュベットテーブル１３の支持部１３ａから、加温部２４の支持部２４ａに移送される。加温部２４は、支持部２４ａに設置されたキュベット１０４に収容されている血液検体を、所定の温度(例えば37℃)で一定時間加温する。加温部２４による血液検体の加温が終了すると、このキュベット１０４は、キャッチャ２３ａによって再び把持される。そして、このキュベット１０４は、キャッチャ２３ａにより把持されたまま所定位置に位置付けられ、この状態で、ピペット１８ａにより吸引された試薬がキュベット１０４内に吐出される。
【００７０】
ピペット１８ａによる試薬の分注では、まず、試薬テーブル１１及び１２が回転され、測定項目に対応する試薬を収容する試薬容器１０３が、ピペット１８ａによる吸引位置に搬送される。そして、原点位置を検知するためのセンサに基づいて、ピペット１８ａの上下方向の位置が原点位置に位置付けられた後、液面検知センサ２１３によりピペット１８ａの下端が試薬の液面に接触するまで、ピペット１８ａが下降される。ピペット１８ａの下端が試薬の液面に接触すると、必要な量の試薬を吸引できる程度に、さらにピペット１８ａが下降される。そして、ピペット１８ａの下降が停止され、ピペット１８ａにより試薬が吸引される。ピペット１８ａにより吸引された試薬は、キャッチャ２３ａによって把持されたキュベット１０４に吐出される。そして、キャッチャ２３ａの振動機能により、キュベット１０４内の血液検体と試薬が攪拌される。これにより、測定試料の調製が行われる。その後、測定試料を収容するキュベット１０４は、キャッチャ２３ａにより、検出部２２の支持部２２ａに移送される。
【００７１】
(光学的情報取得部)
ランプユニット２７は、検出部２２による光学的信号の検出に用いられる複数種類の波長の光を供給する。図４を参照して、ランプユニット２７の構成の一例を説明する。ランプユニット２７は光源に相当し、ハロゲンランプ２７ａと、ランプケース２７ｂと、集光レンズ２７ｃ〜２７ｅと、円盤形状のフィルター部２７ｆと、モータ２７ｇと、光透過型のセンサ２７ｈと、光ファイバカプラ２７ｉとを備える。
【００７２】
図２を参照して、ランプユニット２７からの光は、光ファイバ２１を介して、検出部２２に供給される。検出部２２には、穴状の支持部２２ａが複数設けられており、各支持部２２ａには、キュベット１０４が挿入可能となっている。各支持部２２ａには、それぞれ、光ファイバ２１の端部が装着され、支持部２２ａに支持されたキュベット１０４に光ファイバ２１からの光が照射可能となっている。検出部２２は、光ファイバ２１を介して、ランプユニット２７から供給される光をキュベット１０４に照射し、キュベット１０４を透過する光(又はキュベット１０４からの散乱光)の光量を検出する。
【００７３】
図５Ａ〜Ｄを参照して、検出部２２に配された複数の支持部２２ａのうちの一つの構成の例を示すが、他の支持部２２ａも同様の構成を有する。図５Ａを参照して、検出部２２には、光ファイバ２１の先端が挿入される円形の穴２２ｂが形成される。さらに、検出部２２には、穴２２ｂを支持部２２ａに連通させる円形の連通孔２２ｃが形成されている。穴２２ｂの径は、連通孔２２ｃの径よりも大きい。穴２２ｂの端部には、光ファイバ２１からの光を集光するレンズ２２ｄが配置されている。さらに、支持部２２ａ内壁面には、連通孔２２ｃに対向する位置に孔２２ｆが形成される。この孔２２ｆの奥に、光検出器２２ｇが配置されている。光検出器２２ｇは受光部に相当し、受光光量に応じた電気信号を出力する。レンズ２２ｄを透過した光は、連通孔２２ｃ、支持部２２ａ及び孔２２ｆを介して、光検出器２２ｇの受光面に集光される。光ファイバ２１は、端部が穴２２ｂに挿入された状態で、板ばね２２ｅによって抜け止めされる。
【００７４】
図５Ｂを参照して、支持部２２ａにキュベット１０４が支持されると、レンズ２２ｄによって集光された光は、キュベット１０４およびキュベット１０４に収容された試料を透過して、光検出器２２ｇに入射する。試料において血液凝固反応が進むと、試料の濁度が上昇する。これに伴い、試料を透過する光の光量(透過光量)が減少し、光検出器２２ｇの検出信号のレベルが低下する。
【００７５】
図５Ｃを参照して、散乱光を用いる場合の検出部２２の構成を説明する。支持部２２ａの内側面において、連通孔２２ｃと同じ高さの位置に、孔２２ｈが設けられる。この孔２２ｈの奥に、光検出器２２ｉが配置される。支持部２２ａにキュベット１０４が挿入され、光ファイバ２１から光が出射されると、キュベット１０４内の測定試料によって散乱された光が、孔２２ｈを介して光検出器２２ｉに照射される。この例では、光検出器２２ｉからの検出信号は、測定試料による散乱光の強度を示す。また、図５Ｄに示されるように、測定試料を透過する透過光と、測定試料により散乱される散乱光との両方を検出できるようにしてもよい。
【００７６】
上記のように、検出部２２は、ランプユニット２７から供給される光をキュベット１０４に照射し、測定試料からの光学的情報を取得する。取得された光学的情報は、制御装置４０に送信される。制御装置４０は、光学的情報に基づいて分析を行い、分析結果を表示部４１に表示する。
【００７７】
測定終了後、不要となったキュベット１０４は、キュベットテーブル１３により搬送され、キャッチャ１６により廃棄口２５に廃棄される。なお、測定動作の際に、ピアサ１７ａとピペット１８ａは、流体部２６から供給される洗浄液などの液体により、適宜洗浄される。
【００７８】
測定装置５０のハードウェア構成について説明する。図３に示されるように、測定部２０は、制御部２００と、ステッピングモータ部２１１と、ロータリーエンコーダ部２１２と、液面検知センサ２１３と、センサ部２１４と、機構部２１５と、光学的情報取得部２１６と、バーコードリーダ１４とを含む。制御部２００は、測定部２０及び検体搬送部３０における各機構の動作制御を行う機能を有する。
【００７９】
図３を参照して、制御部２００は、ＣＰＵ２０１と、メモリ２０２と、通信インターフェイス２０３と、Ｉ／Ｏインターフェイス２０４を含んでいる。ＣＰＵ２０１は、メモリ２０２に記憶されているコンピュータプログラムを実行する。メモリ２０２は、ＲＯＭ、ＲＡＭ、ハードディスクなどからなる。また、ＣＰＵ２０１は、通信インターフェイス２０３を介して、検体搬送部３０を駆動させると共に、制御装置４０との間で指示信号及びデータの送受信を行う。また、ＣＰＵ２０１は、Ｉ／Ｏインターフェイス２０４を介して、測定部２０内の各部を制御すると共に、各部から出力された信号を受信する。
【００８０】
ステッピングモータ部２１１は、試薬テーブル１１及び１２と、キュベットテーブル１３と、キャッチャ１６と、検体分注アーム１７と、試薬分注アーム１８と、キュベット移送部２３を、それぞれ駆動するためのステッピングモータを含んでいる。ロータリーエンコーダ部２１２は、ステッピングモータ部２１１に含まれる各ステッピングモータの回転変位量に応じたパルス信号を出力するロータリーエンコーダを含んでいる。
【００８１】
液面検知センサ２１３は、試薬分注アーム１８の先端に設置されたピペット１８ａに接続されており、ピペット１８ａの下端が試薬の液面に接触したことを検知する。センサ部２１４は、ピペット１８ａの上下方向の位置が原点位置に位置付けられたことを検知するセンサと、電源ボタン２０ｄが押されたことを検知するセンサを含んでいる。機構部２１５は、キュベット供給部１５と、緊急検体セット部１９と、加温部２４と、流体部２６を駆動するための機構と、ピアサ１７ａとピペット１８ａによる分注動作が可能となるようピアサ１７ａとピペット１８ａに圧力を供給する空圧源を含んでいる。光学的情報取得部２１６は、図２を参照して、少なくとも、ランプユニット２７と、光ファイバ２１と、検出部２２とを含む。
【００８２】
制御装置４０の構成について説明する。図１に示されるように、制御装置４０は、表示部４１と、入力部４２と、コンピュータ本体４３とから構成されている。制御装置４０は、測定部２０から光学的情報を受信する。そして、制御装置４０のプロセッサは、光学的情報に基づいて第１〜第６の凝固時間を算出する。制御装置４０のプロセッサは、第１、第２及び第３凝固時間に基づく値として、第１の指標を算出し、第４、第５及び第６凝固時間に基づく値として、第２の指標を算出する。また、制御装置４０のプロセッサは、血液検体の分析のためのコンピュータプログラムを実行する。制御装置４０は、血液検体の判定のための装置としても機能する。表示部４１は、コンピュータ本体４３で得られた分析結果を表示する。
【００８３】
図６に示されるように、制御装置４０のコンピュータ本体４３は、ＣＰＵ４３１と、ＲＯＭ４３２と、ＲＡＭ４３３と、ハードディスク４３４と、読出装置４３５と、入出力インターフェイス４３６と、通信インターフェイス４３７と、画像出力インターフェイス４３８と、電源ボタン４３９とを備える。ＣＰＵ４３１、ＲＯＭ４３２、ＲＡＭ４３３、ハードディスク４３４、読出装置４３５、入出力インターフェイス４３６、通信インターフェイス４３７、画像出力インターフェイス４３８及び電源ボタン４３９は、バス４４０によって通信可能に接続されている。
【００８４】
ＣＰＵ４３１は、ＲＯＭ４３２に記憶されているコンピュータプログラム及びＲＡＭ４３３にロードされたコンピュータプログラムを実行する。ＣＰＵ４３１が、血液検体の分析のためのコンピュータプログラムを実行することにより、制御装置４０が、血液検体の判定のための装置として機能する。
【００８５】
ＲＯＭ４３２は、マスクＲＯＭ、ＰＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭなどによって構成されている。ＲＯＭ４３２には、ＣＰＵ４３１によって実行されるコンピュータプログラム及びこれに用いるデータが記録されている。
【００８６】
ＲＡＭ４３３は、ＳＲＡＭ、ＤＲＡＭなどによって構成されている。ＲＡＭ４３３は、ＲＯＭ４３２及びハードディスク４３４に記録されているコンピュータプログラムの読み出しに用いられる。また、ＲＡＭ４３３は、これらのコンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ４３１の作業領域としても利用される。
【００８７】
ハードディスク４３４は、オペレーティングシステム、ＣＰＵ４３１に実行させるためのアプリケーションプログラム(血液検体の分析のためのコンピュータプログラム)などのコンピュータプログラム、当該コンピュータプログラムの実行に用いるデータ、及び制御装置４０の設定内容がインストールされている。
【００８８】
読出装置４３５は、フレキシブルディスクドライブ、ＣＤ−ＲＯＭドライブ、ＤＶＤ−ＲＯＭドライブなどによって構成されている。読出装置４３５は、ＣＤ、ＤＶＤなどの可搬型記録媒体４４１に記録されたコンピュータプログラムまたはデータを読み出すことができる。
【００８９】
入出力インターフェイス４３６は、例えば、ＵＳＢ、ＩＥＥＥ１３９４、ＲＳ−２３２Ｃなどのシリアルインターフェイスと、ＳＣＳＩ、ＩＤＥ、インターフェイスなどのパラレルインターフェイスと、Ｄ／Ａ変換器、Ａ／Ｄ変換器などからなるアナログインターフェイスとから構成されている。入出力インターフェイス４３６には、キーボード、マウスなどの入力部４２が接続されている。ユーザは入力部４２を介して指示を入力し、入出力インターフェイス４３６は、入力部４２を介して入力された信号を受け付ける。
【００９０】
通信インターフェイス４３７は、例えば、Ethernet(登録商標)インターフェイスなどである。制御装置４０は、通信インターフェイス４３７により、プリンタへの印刷データの送信が可能である。通信インターフェイス４３７は測定部２０に接続されており、ＣＰＵ４３１は、通信インターフェイス４３７を介して、測定部２０との間で指示信号及びデータの送受信を行う。
【００９１】
画像出力インターフェイス４３８は、ＬＣＤ、ＣＲＴなどで構成される表示部４１に接続されている。画像出力インターフェイス４３８は、画像データに応じた映像信号を表示部４１に出力し、表示部４１は、画像出力インターフェイス４３８から出力された映像信号に基づいて画像を表示する。
【００９２】
本実施形態の血液検体分析装置では、制御装置４０は、検出部２２によって検出された光学的情報(例えば透過光強度)に基づいて、第１〜第６凝固時間を取得し、取得した凝固時間に基づいて、第１及び第２の指標値を取得する分析部として機能する。
【００９３】
(血液検体分析装置の処理手順)
図３を参照して、測定動作の際、測定部２０のＣＰＵ２０１は、検出部２２(図２参照)から出力された検出信号をデジタル化したデータ(光学的情報)を、メモリ２０２に一時格納する。メモリ２０２の記憶領域は、支持部２２ａ毎にエリア分割される。各エリアには、対応する支持部２２ａに支持されたキュベット１０４に対して所定波長の光を照射したときに取得されるデータ(光学的情報)が、順次格納される。こうして、所定の測定時間にわたって順次、データがメモリ２０２に格納される。測定時間が経過すると、ＣＰＵ２０１は、メモリ２０２に対するデータの格納を中止し、格納したデータを、通信インターフェイス２０３を介して制御装置４０に送信する。制御装置４０は、受信したデータを処理して分析を行い、分析結果を表示部４１に表示する。
【００９４】
測定部２０における処理は、主として測定部２０のＣＰＵ２０１の制御の下で行われ、制御装置４０における処理は、主として制御装置４０のＣＰＵ４３１の制御の下で行われる。しかし、本実施形態はこの例に限定されない。測定部２０における処理を、制御装置４０のＣＰＵ４３１の制御の下で行ってもよい。図７Ａを参照して、測定処理が開始されると、測定部２０は、上記のように、検体搬送部３０により搬送された検体容器１０１から被検者の血液検体(血漿)を吸引し、これを、キュベットテーブル１３上の空のキュベット１０４に分注する。また、測定部２０は、試薬収容部に収容された正常血液検体が入った試薬容器１０３から正常血液検体(血漿)を吸引し、これを、キュベットテーブル１３上の空のキュベット１０４に分注する。ここで、被検者の血液検体と正常血液検体との混合検体は、ユーザが用手法によって予め調製して、検体容器１０１に収容してもよい。あるいは、混合検体は、測定部２０により調製してもよい。測定部２０による混合検体の調製は、例えば、次のとおりである。測定部２０は、正常血液検体が収容された試薬容器１０３から所定量の正常血液検体(血漿)を吸引して、これを空のキュベット１０４に分注する。そして、測定部２０は、被検者の血液検体が収容された検体容器１０１から所定量の血液検体(血漿)を吸引し、これを、正常血液検体が入っているキュベット１０４に分注して攪拌することにより、混合検体を調製する。本実施形態では、第１及び第２の凝固時間測定試薬の２種類を用いるので、被検者の血液検体、正常血液検体及び混合検体のそれぞれが入ったキュベット１０４を２本ずつ用意する。
【００９５】
次いで、測定部２０は、被検者の血液検体、正常血液検体及び混合検体のそれぞれが入っているキュベット１０４を加温部２４に移送して、キュベット１０４内の検体を所定温度(例えば37℃)に加温する。そして、測定部２０は、各血液検体が入っているキュベット１０４に第１の凝固時間測定試薬(第１部分試薬及び第２部分試薬)を添加して、第１〜第３測定試料を調製する。また、測定部２０は、各血液検体が入っている別のキュベット１０４に第２の凝固時間測定試薬(第３部分試薬及び第４部分試薬)を添加して、第４〜第６測定試料を調製する(ステップＳ１１)。
【００９６】
測定部２０は、キュベット１０４に塩化カルシウム水溶液を含む部分試薬を添加した時点から凝固時間の測定を開始する。第１及び第２の凝固時間測定試薬がいずれも、カルシウムイオン又は蛇毒を含む１液型の試薬の場合は、該試薬を添加した時点から凝固時間の測定を開始する。その後、測定部２０は、試薬が添加されたキュベット１０４を検出部２２に移送し、キュベット１０４に光を照射して測定試料を測定する(ステップＳ１２)。この測定では、波長660 nmの光に基づくデータ(散乱光量又は透過光量)が、測定時間の間、順次、メモリ２０２に格納される。このとき、データは、試薬添加時点からの経過時間に対応付けられた状態でメモリ２０２に格納される。そして、測定時間が経過すると、測定部２０は、測定を中止し、メモリ２０２に格納された測定結果(データ)を制御装置４０に送信する(ステップＳ１３)。
【００９７】
上記のとおり、正常血液検体の凝固時間は、第１及び第２の凝固時間測定試薬を用いて予め測定され、記録された所定の値であってもよい。よって、別の実施形態では、測定部２０は、正常血液検体の凝固時間を測定しなくてもよい。この場合、第２及び第５凝固時間としての所定の値を、ハードディスク４３４に予め記憶させる。
【００９８】
制御装置４０が測定部２０から測定結果(データ)を受信すると(ステップＳ２１：ＹＥＳ）、制御装置４０は、受信した測定結果に対して分析処理を実行する(ステップＳ２２)。すなわち、制御装置４０は、第１の凝固時間測定試薬を添加した測定試料について、第１〜第３凝固時間及び第１の指標値の算出を行い、第２の凝固時間測定試薬を添加した測定試料について、第４〜第６凝固時間及び第２の指標値の算出を行う。分析処理(ステップＳ２２)を行った後、制御装置４０は、分析結果の表示処理を実行する(ステップＳ２３)。
【００９９】
上記の分析処理及び表示処理について、図７Ｂを参照して説明する。ステップＳ３１において、制御装置４０のＣＰＵ４３１は、測定部２０から受信したデータ(散乱光量又は透過光量)に基づいて、光学的情報(散乱光強度、又は透過度もしくは吸光度)を取得する。ステップＳ３２において、ＣＰＵ４３１は、取得した光学的情報から、ハードディスク４３４に記憶された凝固時間を算出するための式にしたがって、第１〜第６凝固時間を算出し、算出された値をハードディスク４３４に記憶する。ステップＳ３３において、ＣＰＵ４３１は、第１〜第３凝固時間の値から、ハードディスク４３４に記憶された第１の指標値を算出するための式にしたがって、第１の指標値を算出する。同様に、ＣＰＵ４３１は、第４〜第６凝固時間の値から、ハードディスク４３４に記憶された第２の指標値を算出するための式にしたがって、第２の指標値を算出する。そして、ＣＰＵ４３１は、算出された第１及び第２の指標値をハードディスク４３４に記憶する。ステップＳ３４において、ＣＰＵ４３１は、分析結果として、少なくとも第１及び第２の指標値を表示部４１に表示させる。ＣＰＵ４３１は、第１〜第６凝固時間をさらに表示部４１に表示させてもよい。また、ＣＰＵ４３１は、第１〜第３凝固時間をプロットしたグラフを表示部４１に表示させてもよい。該グラフは、横軸が、各血液検体における被検者の血液検体の割合(v/v%)であり、縦軸が凝固時間(秒)であるグラフが好ましい。
【０１００】
分析結果を表示する画面の一例として、図８を参照して、各検体の凝固時間を測定した結果を表示する画面について説明する。図８に示される画面には、ラック番号及び位置、検体番号、測定の開始時刻及び終了時刻、第１の凝固時間測定試薬による凝固時間(LA1 1-1 sec)、第２の凝固時間測定試薬による凝固時間(LA2 1-1 sec)が表示されているが、これに限定されない。図８において、検体番号に「1-1」が付されている検体は、被検者の血液検体の比率が50％(v/v)の混合検体である。本実施形態では、この画面において、第１及び第２の指標値を表示してもよい。ユーザは、画面に表示された第１及び第２の指標値を、被検者の血液検体がDAC検体であるかの判定に用いることができる。
【０１０１】
あるいは、第１及び第２の指標値は、別の画面に表示してもよい。例えば、図８に示される画面において、ユーザが、入力部４２を介して所定の血液検体を選択したときに、図９に示すような画面に第１及び第２の指標値が表示されてもよい。図９を参照して、画面Ｄ１は、検体番号を表示する領域Ｄ１１と、測定項目名を表示する領域Ｄ１２と、測定日時を表示するための領域Ｄ１３と、検体コメントを表示する領域Ｄ１４と、凝固時間及び混合比を表示する領域Ｄ１５と、参考情報を表示する領域Ｄ１６と、凝固時間をプロットしたグラフを表示する領域Ｄ１７とを含む。図９において、領域Ｄ１５には、混合比、LAのスクリーニング用試薬(第１の凝固時間測定試薬)及び確認試験用試薬(第２の凝固時間測定試薬)による凝固時間が表示されている。混合比の欄において、「0/1」は正常血液検体を意味し、「1/2」は被検血漿率が50％(v/v)の混合検体を意味し、「1/1」は被検者の血液検体を意味する。図９において、領域Ｄ１６には、第１及び第２の指標値としてICAの値が表示されている。本実施形態では、領域Ｄ１７には、第１の凝固時間測定試薬による凝固時間をプロットしたグラフが表示されることが好ましい。当該技術分野では、クロスミキシング試験は、通常、リン脂質濃度の低いスクリーニング用試薬を用いて行われるからである。
【０１０２】
本実施形態の装置は、取得した第１及び第２の指標値に基づいて、被検者の血液検体が、DACを含む血液検体であるかを判定し、その判定結果を参考情報として出力してもよい。図１０Ａを参照して、制御装置による判定のフローを以下に説明する。図１０Ａは、被検者の血液検体、正常血液検体及びそれらを体積比１：１で混合して得た混合検体の測定の結果から、血液検体の判定を行う場合の処理のフローを示す。ここでは、第１及び第２の指標値として、それぞれ上記の式(１)及び(２)で算出される値を取得し、取得した値と、第１及び第２の閾値とを比較して血液検体の判定を行なう場合を例として説明する。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されるものではない。本実施形態の方法について述べたことを参照して、混合検体の混合比、指標値の種類は適宜変更できる。
【０１０３】
ステップＳ１０１において、制御装置４０のＣＰＵ４３１は、測定部２０から受信したデータ(散乱光量又は透過光量)に基づいて、光学的情報(散乱光強度、又は透過度もしくは吸光度)を取得する。ステップＳ１０２において、算出部４０３は、ＣＰＵ４３１が取得した光学的情報から、ハードディスク４３４に記憶された凝固時間を算出するための式にしたがって、第１〜第６凝固時間を算出する。ステップＳ１０３において、ＣＰＵ４３１は、第１〜第３凝固時間から、ハードディスク４３４に記憶された式(１)にしたがって、第１の指標値を算出する。また、ＣＰＵ４３１は、第４〜第６凝固時間から、ハードディスク４３４に記憶された式(２)にしたがって、第２の指標値を算出する。
【０１０４】
ステップＳ１０４において、ＣＰＵ４３１は、算出した第１の指標値と、ハードディスク４３４に記憶された第１の閾値とを比較する。第１の指標値が第１の閾値よりも低くないとき(すなわち、第１の指標値が第１の閾値より高いか又は第１の閾値と同じであるとき)、処理はステップＳ１０５に進行する。ステップＳ１０５において、ＣＰＵ４３１は、算出した第２の指標値と、ハードディスク４３４に記憶された第２の閾値とを比較する。第２の指標値が第２の閾値よりも低くないとき(すなわち、第２の指標値が第２の閾値より高いか又は第２の閾値と同じであるとき)、処理はステップＳ１０６に進行する。ステップＳ１０６において、ＣＰＵ４３１は、被検者の血液検体が、DACを含む検体であるとの判定結果を画像出力インターフェイス４３８に送信する。
【０１０５】
ステップＳ１０４において、第１の指標値が第１の閾値よりも低いとき、処理はステップＳ１０５に進行する。また、ステップＳ１０５において、第２の指標値が第２の閾値よりも低いとき、処理はステップＳ１０７に進行する。ステップＳ１０７において、ＣＰＵ４３１は、被検者の血液検体が、DAC以外の凝固異常の原因を有する血液検体であるとの判定結果を画像出力インターフェイス４３８に送信する。
【０１０６】
ステップＳ１０８において、画像出力インターフェイス４３８は、判定結果を出力し、表示部４１に表示させたり、プリンタに印刷させたりする。あるいは、判定結果を音声で出力してもよい。判定結果に関する参考情報は、「DACを含む疑い」などの文字情報でもよい。フラグのような標識でもよい。これにより、判定結果を、被検者の血液検体についての参考情報としてユーザに提供できる。さらに、参考情報として、第１及び第２の閾値を表示してもよい。なお、血液検体の判定は、本実施形態の分析装置による判定結果だけでなく、他の検査結果などの情報も考慮して行われることが望ましい。よって、本実施形態の分析装置による判定結果及び所定の閾値が参考情報であることを示すために、「(参考)」と表示してもよい。
【０１０７】
さらなる実施形態では、制御装置４０は、被検者の血液検体が、DAC以外の凝固異常の原因を有する血液検体であると判定した場合、第１及び第２の指標値に基づいて、該被検者の血液検体が、LAを含む血液検体であるか又は凝固因子が欠損した血液検体であるかを判定することもできる。図１０Ｂを参照して、制御装置による判定のフローを以下に説明する。
【０１０８】
図１０Ｂに示されるステップ２０１、ステップ２０２及びステップ２０３については、図１０Ａのステップ１０１、ステップ１０２及びステップ１０３について述べたことと同様である。ステップＳ２０４において、ＣＰＵ４３１は、算出した第１の指標値と、ハードディスク４３４に記憶された第１の閾値とを比較する。第１の指標値が第１の閾値よりも低くないとき(すなわち、第１の指標値が第１の閾値より高いか又は第１の閾値と同じであるとき)、処理はステップＳ２０５に進行する。ステップＳ２０５において、ＣＰＵ４３１は、算出した第２の指標値と、ハードディスク４３４に記憶された第２の閾値とを比較する。第２の指標値が第２の閾値よりも低くないとき(すなわち、第２の指標値が第２の閾値より高いか又は第２の閾値と同じであるとき)、処理はステップＳ２０６に進行する。ステップＳ２０６において、ＣＰＵ４３１は、被検者の血液検体が、DACを含む検体であるとの判定結果を画像出力インターフェイス４３８に送信する。
【０１０９】
ステップＳ２０５において、第２の指標値が第２の閾値よりも低いとき、処理はステップＳ２０７に進行する。ステップＳ２０７において、ＣＰＵ４３１は、被検者の血液検体が、LAを含む血液検体であるとの判定結果を画像出力インターフェイス４３８に送信する。
【０１１０】
ステップＳ２０４において、第１の指標値が第１の閾値よりも低いとき、処理はステップＳ２０８に進行する。ステップＳ２０８において、ＣＰＵ４３１は、算出した第２の指標値と、ハードディスク４３４に記憶された第２の閾値とを比較する。第２の指標値が第２の閾値よりも低いとき、処理はステップＳ２０９に進行する。ステップＳ２０９において、ＣＰＵ４３１は、被検者の血液検体が、凝固因子の欠損した血液検体であるとの判定結果を画像出力インターフェイス４３８に送信する。
【０１１１】
ステップＳ２０８において、第２の指標値が第２の閾値よりも低くないとき(すなわち、第２の指標値が第２の閾値より高いか又は第２の閾値と同じであるとき)、処理はステップＳ２１０に進行する。ステップＳ２１０において、ＣＰＵ４３１は、被検者の血液検体が、その他の凝固異常の原因を有する血液検体であるとの判定結果を画像出力インターフェイス４３８に送信する。
【０１１２】
ステップＳ２１１については、ステップＳ１０８について述べたことと同様である。表示部４１の画面には、判定結果を「DACを含む疑い」、「LAを含む疑い」、「凝固因子欠損の疑い」などの文字で表示してもよい。
【０１１３】
以下に、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【０１１４】
実施例１
リン脂質濃度の異なる２種類の凝固時間測定試薬を用いて混合試験を行い、２種類の指標値を得ることにより、DACを含む血液検体と、LAなどの別の凝固異常の原因を有する血液検体とを区別できるかを検討した。
【０１１５】
(１) 試薬及び検体
(1.1) 凝固時間測定試薬
凝固時間測定試薬として、LA1 Screening Reagent(Lot No. 549855AA、Siemens社：以下、「第１試薬」という)及びLA2 Confirm Reagent(Lot No. 548732A、Siemens社：以下、「第２試薬」という)を用いた。第１試薬は、dRVVT測定に基づくLAのスクリーニング用試薬であり、ラッセル蛇毒及びリン脂質を含む。第２試薬は、dRVVT測定に基づくLAの確認試験用試薬であり、ラッセル蛇毒を含み且つ第１試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む。
【０１１６】
(1.2) 血液検体
被検者の血液検体として、表１に示すLA含有血漿(13検体)、表２に示すリバーロキサバン含有血漿(10検体：以下、「DAC含有血漿」ともいう)、及び、表３に示す凝固因子(第II因子、第Ｖ因子、第VII因子又は第Ｘ因子)の欠損血漿を用いた。この実施例では、凝固因子の欠損の程度が異なる検体を得るため、各凝固因子の欠損血漿と正常血漿とを種々の比率で混合して、凝固因子の割合が20%、10％、５%、2.5%及び１%未満の血漿を調製した(20検体：以下、「凝固因子欠損血漿」ともいう)。なお、各凝固因子の割合が１%未満の血漿は、表３に示す血漿そのものである。これらの血漿を総称して、以下、「被検血漿」ともいう。また、正常血液検体として、正常血漿であるControl N(Lot No. 503197A：シスメックス株式会社)を用いた。
【０１１７】
【表１】
2018205284.tif 000002
【０１１８】
【表２】
2018205284.tif 000003
【０１１９】
【表３】
2018205284.tif 000004
【０１２０】
(２) 凝固時間の測定
被検血漿(100μL)を37℃で４分間加温した後、第１試薬(100μL)を混合して、第１凝固時間を測定した。正常血漿(100μL)を37℃で４分間加温した後、第１試薬(100μL)を混合して、第２凝固時間を測定した。正常血漿(50μL)と被検血漿(50μL)とを混合し、得られた混合血漿を37℃で４分間加温した。そして、混合血漿に第１試薬(100μL)を混合して、第３凝固時間を測定した。第１試薬に代えて第２試薬を用いたこと以外は上記と同様にして、被検血漿から第４凝固時間を測定し、正常血漿から第５凝固時間を測定し、混合血漿から第６凝固時間を測定した。凝固時間の測定は、全自動凝固時間測定装置CS-5100(シスメックス株式会社)により行った。
【０１２１】
(３) 指標値の取得
各検体について測定した凝固時間から、以下の式(３)及び(４)にしたがって、第１及び第２の指標値を取得した。なお、第１の指標値は、LA検出のための混合試験の定量化指標として知られるICA(Index of Circulating Anticoagulant)である。
【０１２２】
(第１の指標値)＝[(Ｃ−Ｂ)／Ａ]×100  ・・・式(３)
(第２の指標値)＝[(Ｆ−Ｅ)／Ｄ]×100  ・・・式(４)
(式中、Ａ：第１凝固時間、Ｂ：第２凝固時間、Ｃ：被検血漿の比率が50％(v/v)の混合血漿の第３凝固時間、Ｄ：第４凝固時間、Ｅ：第５凝固時間、及び、Ｆ：被検血漿の比率が50％(v/v)の混合血漿の第６凝固時間)
【０１２３】
(４) 結果
第２凝固時間は37.2秒であり、第５凝固時間は34.4秒であった。被検血漿の測定結果の一例として、一部の検体の凝固時間(第１、第３、第４及び第６凝固時間)、並びに第１及び第２の指標値を表４に示す。LA群、DAC群及び凝固因子欠損群における第１及び第２の指標値を、それぞれ図１１Ａ及びＢに示す。
【０１２４】
【表４】
2018205284.tif 000005
【０１２５】
図１１Ａに示されるように、第１の指標値は、LA群及びDAC群では高い傾向にあり、凝固因子欠損群では低い傾向にあることが分かった。図１１Ｂに示されるように、第２の指標値は、DAC群では高い傾向にあり、LA群及び凝固因子欠損群では低い傾向にあることが分かった。これらことから、DAC群、LA群及び凝固因子欠損群のそれぞれにおいて、第１及び第２の指標値の大きさに特徴があることが示された。例えば、DAC群は、第１及び第２の指標値の両方が高い傾向にあることが分かった。よって、リン脂質濃度の異なる２種類の凝固時間測定試薬を用いて混合試験を行い、２種類の指標値を得ることにより、被検者の血液検体が、DACを含む血液検体であるかを判定できることが示唆される。
【０１２６】
第１及び第２の指標値を用いることで、凝固異常の原因の鑑別が可能であるか否かを検討した。具体的には、表５に示すマトリックスに基づいて上記の被検血漿を分類し、分類結果について感度及び特異度を算出した。第１及び第２の指標値のカットオフ値(閾値)をいずれも12.0とした。結果を表６に示す。
【０１２７】
【表５】
2018205284.tif 000006
【０１２８】
【表６】
2018205284.tif 000007
【０１２９】
このように、第１及び第２の指標値をそれぞれ閾値と比較し、その比較結果に基づいて、凝固異常の疑いのある血液検体が、DACを含む血液検体、LAを含む血液検体及び凝固因子欠損の血液検体のいずれであるかを高い精度で判定できることが示された。
【符号の説明】
【０１３０】
１０    血液検体分析装置
１１、１２    試薬テーブル
２０    測定部
２２ｇ、２２ｉ    光検出器
２７    ランプユニット
３０    検体搬送部
４０    制御装置
４１    表示部
４２    入力部
４３    コンピュータ本体
５０    測定装置
【図１】
2018205284.tif 000008
【図２】
2018205284.tif 000009
【図３】
2018205284.tif 000010
【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
2018205284.tif 000013
【図５Ｃ】
2018205284.tif 000014
【図５Ｄ】
2018205284.tif 000015
【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
2018205284.tif 000019
【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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