【手続補正書】
【提出日】平成27年9月17日(2015.9.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
レトロウイルスと一緒に培養した細胞の形質導入効率を上昇させるためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、該細胞および該レトロウイルスを、プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる化合物を含む培養培地中で培養する工程を含む方法。
【請求項２】
必要に応じて、
（ａ）前記細胞が幹細胞または前駆細胞であるか、
（ｂ）前記細胞が、骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、骨格筋、心筋、ニューロン、星状膠細胞、オリゴデンドロサイト、シュワン細胞、網膜細胞、角膜細胞、皮膚細胞、単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球、樹状細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ＮＫ細胞、胃細胞、腸細胞、平滑筋細胞、血管細胞、膀胱細胞、膵アルファ細胞、膵ベータ細胞、膵デルタ細胞、肝細胞、腎細胞、副腎細胞、および肺細胞からなる群から選択されるか、あるいは
（ｃ）前記細胞が造血幹細胞または造血前駆細胞である、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
必要に応じて、
（ａ）前記幹細胞または前駆細胞が、胚性幹細胞および人工多能性幹細胞からなる群から選択されるか、
（ｂ）前記幹細胞または前駆細胞が、間葉幹細胞、造血幹細胞、神経幹細胞、網膜幹細胞、心筋幹細胞、骨格筋幹細胞、脂肪組織由来幹細胞、軟骨形成幹細胞、肝幹細胞、腎幹細胞、および膵幹細胞からなる群から選択されるか、あるいは
（ｃ）前記幹細胞または前駆細胞が造血幹細胞または造血前駆細胞である、
請求項２に記載の方法。
【請求項４】
必要に応じて、
（ａ）前記造血幹細胞または造血前駆細胞の少なくとも約５０％が形質導入されているか、
（ｂ）前記造血幹細胞または造血前駆細胞の少なくとも約７５％が形質導入されているか、あるいは、
（ｃ）前記造血幹細胞または造血前駆細胞の少なくとも約９０％が形質導入されている、
請求項２に記載の方法。
【請求項５】
必要に応じて、
（ａ）プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物が、ＰＧＡ２；ＰＧＢ２；ＰＧＤ２；ＰＧＥ１；ＰＧＥ２；ＰＧＦ２；ＰＧＩ２；ＰＧＨ２；ＰＧＪ２；ならびにその前駆体、代謝産物、誘導体および類似体からなる群から選択されるか、
（ｂ）プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物が、１５ｄ−ＰＧＪ２；デルタ１２−ＰＧＪ２；２−ヒドロキシヘプタデカトリエン酸（ＨＨＴ）；トロンボキサンＡ２；トロンボキサンＢ２；イロプロスト；トレプロスチニル；トラボプロスト；カルボプロスト・トロメタミン；タフルプロスト；ラタノプロスト；ビマトプロスト；イソプロピルウノプロストン；クロプロステノール；エストロファン；スーパーファン；ミソプロストール；ブタプロスト；リノール酸；１３（ｓ）−ＨＯＤＥ；ＬＹ１７１８８３；ミード酸；エイコサトリエン酸；エポキシエイコサトリエン酸；ＯＮＯ−２５９；Ｃａｙ１０３９；ＰＧＥ２受容体アゴニスト；１６，１６−ジメチルＰＧＥ２；１９（Ｒ）−ヒドロキシＰＧＥ２；１６，１６−ジメチルＰＧＥ２ｐ−（ｐ−アセトアミドベンズアミド）フェニルエステル；１１−デオキシ−１６，１６−ジメチルＰＧＥ２；９−デオキシ−９−メチレン−１６，１６−ジメチルＰＧＥ２；９−デオキシ−９−メチレンＰＧＥ２；スルプロストン；ＰＧＥ２セリノールアミド；ＰＧＥ２メチルエステル；１６−フェニルテトラノルＰＧＥ２；１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２；１５（Ｒ）−１５−メチルＰＧＥ２；ＢＩＯ；８−ブロモ−ｃＡＭＰ；フォルスコリン；Ｂａｐｔａ−ＡＭ；フェンジリン；ニカルジピン；ニフェジピン；ピモジド；ストロファンチジン；ラナトシド；Ｌ−Ａｒｇ；ニトロプルシドナトリウム；バナジン酸ナトリウム；ブラジキニン；メベベリン；フルランドレノリド；アテノロール；ピンドロール；ガボキサドール；キヌレン酸；ヒドララジン；チアベンダゾール；ビククリン；ベサミコール；ペルボシド；イミプラミン；クロルプロパミド；１，５−ペンタメチレンテトラゾール；４−アミノピリジン；ジアゾキシド；ベンフォチアミン；１２−メトキシドデセン酸；Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ；ガラミン；ＩＡＡ９４；およびクロロトリアニセンからなる群から選択されるか、あるいは
（ｃ）プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物が、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２からなる群から選択される、
請求項１から４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記細胞およびレトロウイルスをヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤の存在下で培養する工程をさらに含み、前記ＨＤＡＣ阻害剤が、必要に応じて、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、バルプロ酸（ＶＰＡ）、酪酸ナトリウム、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、フェニル酪酸ナトリウム、デプシペプチド、トラポキシン（ＴＰＸ）、環状ヒドロキサム酸含有ペプチド１（ＣＨＡＰｌ）、ＭＳ−２７５、ＬＢＨ５８９、およびＰＸＤ−１０１からなる群から選択される、請求項１から５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記レトロウイルスがレンチウイルスである、
前記レトロウイルスが、必要に応じてヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ウイルスである、および／または
前記レトロウイルスが、必要に応じて水疱性口内炎ウイルスＧタンパク質（ＶＳＶ−Ｇ）エンベロープタンパク質でシュードタイピングされている、
請求項１から６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記細胞を、形質導入の前にプロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物の存在下で培養する、請求項１から７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
必要に応じて、
（ａ）前記細胞を、プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物と一緒に少なくとも約２時間にわたって培養するか、
（ｂ）前記細胞を、プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物と一緒に少なくとも約４時間にわたって培養する、
請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞を、形質導入の間、必要に応じて少なくとも約２４時間にわたって、プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物の存在下で培養する、請求項１から８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
請求項９から１０までのいずれか一項に記載の方法であって、請求項９に従属する場合は、前記細胞を、プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物と一緒に少なくとも約４時間にわたって培養し、前記細胞を、形質導入の最初の２４時間の間または形質導入の最初の４８時間の間に、プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物の存在下で培養する、方法。
【請求項１２】
前記レトロウイルスが、
ａ）左側の（５’）レトロウイルスＬＴＲと、
ｂ）目的の遺伝子に作動可能に連結した発現制御配列と、
ｃ）右側の（３’）レトロウイルスＬＴＲと
を含むベクターを含む、請求項１から１１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
必要に応じて、
（Ｉ）前記レトロウイルスが、
ａ）左側の（５’）ＨＩＶ−１  ＬＴＲと、
ｂ）プサイパッケージング配列（Ψ＋）と、
ｃ）ＨＩＶ−１セントラルポリプリントラクト／ＤＮＡフラップ（ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）と、
ｄ）ｒｅｖ応答エレメント（ＲＲＥ）と、
ｅ）目的の遺伝子に作動可能に連結したβ−グロビンプロモーターおよびβ−グロビン遺伝子座制御領域（ＬＣＲ）と、
ｆ）
ｉ）１つまたは複数のインスレーターエレメント、または
ｉｉ）ウサギβ−グロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）
を含む右側の（３’）レトロウイルスＬＴＲと
を含むベクターを含か、
（ＩＩ）前記造血幹細胞または造血前駆細胞が、異常ヘモグロビン症に罹患している患者に投与され、前記異常ヘモグロビン症が、必要に応じてβ−サラセミアまたは鎌状赤血球症であるか、あるいは
（ＩＩＩ）前記レトロウイルスが、
（ａ）左側の（５’）ＨＩＶ−１  ＬＴＲと、
（ｂ）プサイ（Ψ）パッケージングシグナルと、
（ｃ）ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰと、
（ｄ）ＲＲＥと、
（ｅ）ヒトＡＢＣＤ１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮＤプロモーターと、
（ｆ）右側の（３’）ＨＩＶ−１  ＬＴＲと、
（ｇ）ウサギβ−グロビンポリアデニル化配列と
を含むベクターを含む、
請求項４から１２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記レトロウイルスが複製欠損性である、請求項１から１３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法で規定される前記造血幹細胞または造血前駆細胞を含む組成物であって、
前記レトロウイルスが、
（ａ）左側の（５’）ＨＩＶ−１  ＬＴＲと、
（ｂ）プサイ（Ψ）パッケージングシグナルと、
（ｃ）ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰと、
（ｄ）ＲＲＥと、
（ｅ）ヒトＡＢＣＤ１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮＤプロモーターと、
（ｆ）右側の（３’）ＨＩＶ−１  ＬＴＲと、
（ｇ）ウサギβ−グロビンポリアデニル化配列と
を含むベクターを含み、
該組成物が、副腎白質ジストロフィーまたは副腎脊髄神経障害に罹患している患者に投与されることを特徴とする、方法。
【請求項１６】
請求項１３に記載の方法で規定される前記造血幹細胞または造血前駆細胞を含む組成物であって、
前記レトロウイルスが、
ａ）左側の（５’）ＨＩＶ−１  ＬＴＲと、
ｂ）プサイパッケージング配列（Ψ＋）と、
ｃ）ＨＩＶ−１セントラルポリプリントラクト／ＤＮＡフラップ（ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）と、
ｄ）ｒｅｖ応答エレメント（ＲＲＥ）と、
ｅ）目的の遺伝子に作動可能に連結したβ−グロビンプロモーターおよびβ−グロビン遺伝子座制御領域（ＬＣＲ）と、
ｆ）
ｉ）１つまたは複数のインスレーターエレメント、または
ｉｉ）ウサギβ−グロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）
を含む右側の（３’）レトロウイルスＬＴＲと
を含むベクターを含み、
該組成物が、異常ヘモグロビン症に罹患している患者に投与されることを特徴とする、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
種々の実施形態では、レトロウイルスは複製欠損性である。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
レトロウイルスと一緒に培養した細胞の形質導入効率を上昇させるための方法であって、該細胞および該レトロウイルスを、プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる化合物を含む培養培地中で培養する工程を含む方法。
（項目２）
前記細胞が幹細胞または前駆細胞である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記幹細胞または前駆細胞が、胚性幹細胞および人工多能性幹細胞からなる群から選択される、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記幹細胞または前駆細胞が、間葉幹細胞、造血幹細胞、神経幹細胞、網膜幹細胞、心筋幹細胞、骨格筋幹細胞、脂肪組織由来幹細胞、軟骨形成幹細胞、肝幹細胞、腎幹細胞、および膵幹細胞からなる群から選択される、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記幹細胞または前駆細胞が造血幹細胞または造血前駆細胞である、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記細胞が、骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、骨格筋、心筋、ニューロン、星状膠細胞、オリゴデンドロサイト、シュワン細胞、網膜細胞、角膜細胞、皮膚細胞、単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球、樹状細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ＮＫ細胞、胃細胞、腸細胞、平滑筋細胞、血管細胞、膀胱細胞、膵アルファ細胞、膵ベータ細胞、膵デルタ細胞、肝細胞、腎細胞、副腎細胞、および肺細胞からなる群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記細胞が造血幹細胞または造血前駆細胞である、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞の少なくとも約５０％が形質導入されている、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞の少なくとも約７５％が形質導入されている、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞の少なくとも約９０％が形質導入されている、項目７に記載の方法。
（項目１１）
プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物が、ＰＧＡ２；ＰＧＢ２；ＰＧＤ２；ＰＧＥ１；ＰＧＥ２；ＰＧＦ２；ＰＧＩ２；ＰＧＨ２；ＰＧＪ２；ならびにその前駆体、代謝産物、誘導体および類似体からなる群から選択される、項目１から１０までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物が、１５ｄ−ＰＧＪ２；デルタ１２−ＰＧＪ２；２−ヒドロキシヘプタデカトリエン酸（ＨＨＴ）；トロンボキサンＡ２；トロンボキサンＢ２；イロプロスト；トレプロスチニル；トラボプロスト；カルボプロスト・トロメタミン；タフルプロスト；ラタノプロスト；ビマトプロスト；イソプロピルウノプロストン；クロプロステノール；エストロファン；スーパーファン；ミソプロストール；ブタプロスト；リノール酸；１３（ｓ）−ＨＯＤＥ；ＬＹ１７１８８３；ミード酸；エイコサトリエン酸；エポキシエイコサトリエン酸；ＯＮＯ−２５９；Ｃａｙ１０３９；ＰＧＥ２受容体アゴニスト；１６，１６−ジメチルＰＧＥ２；１９（Ｒ）−ヒドロキシＰＧＥ２；１６，１６−ジメチルＰＧＥ２ｐ−（ｐ−アセトアミドベンズアミド）フェニルエステル；１１−デオキシ−１６，１６−ジメチルＰＧＥ２；９−デオキシ−９−メチレン−１６，１６−ジメチルＰＧＥ２；９−デオキシ−９−メチレンＰＧＥ２；スルプロストン；ＰＧＥ２セリノールアミド；ＰＧＥ２メチルエステル；１６−フェニルテトラノルＰＧＥ２；１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２；１５（Ｒ）−１５−メチルＰＧＥ２；ＢＩＯ；８−ブロモ−ｃＡＭＰ；フォルスコリン；Ｂａｐｔａ−ＡＭ；フェンジリン；ニカルジピン；ニフェジピン；ピモジド；ストロファンチジン；ラナトシド；Ｌ−Ａｒｇ；ニトロプルシドナトリウム；バナジン酸ナトリウム；ブラジキニン；メベベリン；フルランドレノリド；アテノロール；ピンドロール；ガボキサドール；キヌレン酸；ヒドララジン；チアベンダゾール；ビククリン；ベサミコール；ペルボシド；イミプラミン；クロルプロパミド；１，５−ペンタメチレンテトラゾール；４−アミノピリジン；ジアゾキシド；ベンフォチアミン；１２−メトキシドデセン酸；Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ；ガラミン；ＩＡＡ９４；およびクロロトリアニセンからなる群から選択される、項目１から１０までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物が、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２からなる群から選択される、項目１から１０までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記細胞およびレトロウイルスをヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤の存在下で培養する工程をさらに含む、項目１から１３までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記ＨＤＡＣ阻害剤が、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、バルプロ酸（ＶＰＡ）、酪酸ナトリウム、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、フェニル酪酸ナトリウム、デプシペプチド、トラポキシン（ＴＰＸ）、環状ヒドロキサム酸含有ペプチド１（ＣＨＡＰｌ）、ＭＳ−２７５、ＬＢＨ５８９、およびＰＸＤ−１０１からなる群から選択される、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記レトロウイルスがレンチウイルスである、項目１から１５までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ウイルスである、項目１から１６までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記レトロウイルスが水疱性口内炎ウイルスＧタンパク質（ＶＳＶ−Ｇ）エンベロープタンパク質でシュードタイピングされている、項目１から１７までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記細胞を、形質導入の前にプロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物の存在下で培養する、項目１から１８までのいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記細胞を、プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物と一緒に少なくとも約２時間にわたって培養する、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記細胞を、プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物と一緒に少なくとも約４時間にわたって培養する、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
前記細胞を、形質導入の間にプロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物の存在下で培養する、項目１から１９までのいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記細胞を、プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物の存在下で少なくとも約２４時間にわたって培養する、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記細胞を、形質導入の最初の２４時間の間に、プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物の存在下で培養する、項目２１から２３までのいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記細胞を、形質導入の最初の４８時間の間に、プロスタグランジンＥＰ受容体シグナル伝達を増加させる前記化合物の存在下で培養する、項目２１から２４までのいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記レトロウイルスが、
ａ）左側の（５’）レトロウイルスＬＴＲと、
ｂ）目的の遺伝子に作動可能に連結した発現制御配列と、
ｃ）右側の（３’）レトロウイルスＬＴＲと
を含むベクターを含む、項目１から２５までのいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記レトロウイルスが、
ａ）左側の（５’）ＨＩＶ−１  ＬＴＲと、
ｂ）プサイパッケージング配列（Ψ＋）と、
ｃ）ＨＩＶ−１セントラルポリプリントラクト／ＤＮＡフラップ（ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）と、
ｄ）ｒｅｖ応答エレメント（ＲＲＥ）と、
ｅ）目的の遺伝子に作動可能に連結したβ−グロビンプロモーターおよびβ−グロビン遺伝子座制御領域（ＬＣＲ）と、
ｆ）
ｉ）１つまたは複数のインスレーターエレメント、または
ｉｉ）ウサギβ−グロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）
を含む右側の（３’）レトロウイルスＬＴＲと
を含むベクターを含む、項目８から２６までのいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞を異常ヘモグロビン症に罹患している患者に投与する、項目８から２６までのいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記異常ヘモグロビン症がβ−サラセミアまたは鎌状赤血球症である、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記レトロウイルスが、
（ａ）左側の（５’）ＨＩＶ−１  ＬＴＲと、
（ｂ）プサイ（Ψ）パッケージングシグナルと、
（ｃ）ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰと、
（ｄ）ＲＲＥと、
（ｅ）ヒトＡＢＣＤ１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したＭＮＤプロモーターと、
（ｆ）右側の（３’）ＨＩＶ−１  ＬＴＲと、
（ｇ）ウサギβ−グロビンポリアデニル化配列と
を含むベクターを含む、項目８から２６までのいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記レトロウイルスが複製欠損性である、項目１から３０までのいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記造血幹細胞または造血前駆細胞を副腎白質ジストロフィーまたは副腎脊髄神経障害に罹患している患者に投与する、項目３０に記載の方法。