【手続補正書】
【提出日】平成27年4月24日(2015.4.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルスを精製する方法であって、前記方法は、
ウイルスおよび液体担体を含むウイルス標品とゲル浸透クロマトグラフィーカラムを接触させることであって、前記ウイルスが前記ゲル浸透クロマトグラフィーカラム上で保持される、ことと、
少なくとも１つの賦形剤、二価陽イオン、および、リン酸緩衝食塩水を含む溶出緩衝液により前記ゲル浸透クロマトグラフィーカラムから前記ウイルスを回収することとであって、前記少なくとも１つの賦形剤が、ヒスチジンまたはスクロースを含む、ことと
を含む、方法。
【請求項２】
前記液体担体が溶出緩衝液である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つの賦形剤が、マンニトールまたはソルビトールの１以上を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記二価陽イオンがＭｇ２＋であり、任意に、Ｍｇ２＋が塩化マグネシウムとして存在する、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記リン酸緩衝食塩水が、１以上のリン酸塩および１以上の塩化物塩の組み合わせを含む、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記１以上のリン酸塩が、リン酸二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、または、それらの組み合わせを含み、前記１以上の塩化物塩が、塩化ナトリウム、塩化カリウム、または、それらの組み合わせを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記溶出緩衝液が非イオン性界面活性剤をさらに含み、任意に、前記非イオン性界面活性剤がポリソルベート８０である、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記溶出緩衝液が、マンニトール、ヒスチジン、ソルビトール、ポリソルベート８０、および、ＭｇＣｌ２を含むか、または、スクロース、ポリソルベート８０、および、ＭｇＣｌ２を含み、前記リン酸緩衝食塩水が、リン酸二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、塩化ナトリウムおよび塩化カリウムを含むか、または、リン酸二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、塩化ナトリウム、および、塩化カリウムを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記溶出緩衝液中で前記ウイルスを保存することをさらに含む、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記ウイルスが腫瘍退縮ウイルスであるか、または、前記ウイルスが非エンベロープウイルスであり、任意にレオウイルスであり、任意に哺乳動物レオウイルスであり、任意にヒトレオウイルスであり、任意に血清型３ウイルスであり、任意に血清型３ウイルスのＤｅａｒｉｎｇ株である、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記ウイルスが組み換えまたは再集合レオウイルスであり、任意に、前記ウイルスがレオウイルスであり、前記レオウイルスがＩＤＡＣ＃１９０９０７−０１である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
装置であって、前記装置は、
ゲル浸透クロマトグラフィーカラムと、
溶出緩衝液と
を含み、
前記溶出緩衝液が、少なくとも１つの賦形剤、二価陽イオン、および、リン酸緩衝食塩水を含み、
前記少なくとも１つの賦形剤が、ヒスチジンまたはスクロースを含む、
装置。
【請求項１３】
前記ゲル浸透クロマトグラフィーカラムが前記緩衝液で平衡化される、請求項１２に記載の装置。
【請求項１４】
ウイルスおよび液体担体を含むウイルス標品をさらに含む、請求項１２または１３に記載の装置。
【請求項１５】
（ａ）溶出緩衝液が、少なくとも１つの賦形剤と、二価陽イオンと、非イオン性界面活性剤と、リン酸緩衝食塩水とを含み、前記少なくとも１つの賦形剤が、ヒスチジンまたはスクロースを含むか、
（ｂ）溶出緩衝液が、スクロースと、ＭｇＣｌ２と、ポリソルベート８０と、リン酸緩衝食塩水とを含むか、または、
（ｃ）溶出緩衝液が、マンニトールと、ヒスチジンと、ソルビトールと、ＭｇＣｌ２と、ポリソルベート８０と、リン酸緩衝食塩水とを含むかであり、
前記溶出緩衝液がゲル浸透クロマトグラフィー溶出緩衝液である、
溶出緩衝液。
【請求項１６】
ゲル浸透クロマトグラフィーカラムからのウイルス回収率を向上させる方法であって、前記方法は、
ウイルスおよび液体担体を含むウイルス標品とゲル浸透クロマトグラフィーカラムを接触させることであって、前記ウイルスが前記ゲル浸透クロマトグラフィーカラム上で保持される、ことと、
少なくとも１つの賦形剤、二価陽イオン、および、リン酸緩衝食塩水を含む溶出緩衝液により前記ゲル浸透クロマトグラフィーカラムから前記ウイルスを回収することであって、前記少なくとも１つの賦形剤が、ヒスチジンまたはスクロースである、ことと
を含む、方法。
【請求項１７】
前記ウイルス回収率が、リン酸緩衝食塩水で溶出されるウイルスの回収率よりも少なくとも約２０％高いか、または、
前記ウイルス回収率が、リン酸緩衝食塩水で溶出されるウイルスの回収率よりも少なくとも約２５％高いか、または、
前記ウイルス回収率が、リン酸緩衝食塩水で溶出されるウイルスの回収率よりも少なくとも約３０％高いか、または、
前記ウイルス回収率が、リン酸緩衝食塩水で溶出されるウイルスの回収率よりも少なくとも約３５％高いかである、
請求項１６に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
ゲル浸透クロマトグラフィーを用いてウイルスを精製するための溶出緩衝液および方法が本明細書中で提供される。本方法は、例えばウイルス製造中のゲル浸透クロマトグラフィーカラムからのウイルス回収率を向上させることにおいて有用である。
実施形態において、本発明は、例えば、下記の項目を提供する。
（項目１）
ウイルスおよび液体担体を含むウイルス標品とゲル浸透クロマトグラフィーカラムを接触させることと（ここで、前記ウイルスはゲル浸透クロマトグラフィーカラム上で保持される。）；
少なくとも１つの賦形剤、二価陽イオンおよびリン酸緩衝食塩水を含む溶出緩衝液により前記ゲル浸透クロマトグラフィーカラムから前記ウイルスを回収することと（前記少なくとも１つの賦形剤は、ヒスチジンまたはスクロースを含む。）、
を含む、ウイルスを精製する方法。
（項目２）
前記液体担体が溶出緩衝液である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記少なくとも１つの賦形剤が、マンニトールまたはソルビトールの１以上を含む、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記二価陽イオンがＭｇ２＋である、項目１から３の何れかに記載の方法。
（項目５）
Ｍｇ２＋が塩化マグネシウムとして存在する、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記リン酸緩衝食塩水が、１以上のリン酸塩および１以上の塩化物塩の組み合わせを含む、項目１から５の何れかに記載の方法。
（項目７）
前記１以上のリン酸塩がリン酸二ナトリウムを含む、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記１以上のリン酸塩がリン酸二水素カリウムを含む、項目６または７に記載の方法。
（項目９）
前記１以上の塩化物塩が塩化ナトリウムを含む、項目６に記載の方法。
（項目１０）
前記１以上の塩化物塩が塩化カリウムを含む、項目６または９に記載の方法。
（項目１１）
前記溶出緩衝液が、非イオン性界面活性剤をさらに含む、項目１から１０の何れかに記載の方法。
（項目１２）
前記非イオン性界面活性剤がポリソルベート８０である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記溶出緩衝液が、マンニトール、ヒスチジン、ソルビトール、ポリソルベート８０およびＭｇＣｌ２を含み、前記リン酸緩衝食塩水が、リン酸二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、塩化ナトリウムおよび塩化カリウムを含む、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記溶出緩衝液が、スクロース、ポリソルベート８０およびＭｇＣｌ２を含み、前記リン酸緩衝食塩水がリン酸二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、塩化ナトリウムおよび塩化カリウムを含む、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記溶出緩衝液中で前記ウイルスを保存することをさらに含む、項目１から１４の何れかに記載の方法。
（項目１６）
前記ウイルスが腫瘍退縮ウイルスである、項目１から１５の何れかに記載の方法。
（項目１７）
前記ウイルスが非エンベロープウイルスである、項目１から１５の何れかに記載の方法。
（項目１８）
前記ウイルスがレオウイルスである、項目１から１７の何れかに記載の方法。
（項目１９）
前記レオウイルスが哺乳動物レオウイルスである、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記哺乳動物レオウイルスがヒトレオウイルスである、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記ヒトレオウイルスが血清型３ウイルスである、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記血清型３ウイルスがＤｅａｒｉｎｇ株である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記レオウイルスが組み換えまたは再集合レオウイルスである、項目１８に記載の方法。
（項目２４）
前記レオウイルスがＩＤＡＣ＃１９０９０７−０１である、項目１８に記載の方法。
（項目２５）
ゲル浸透クロマトグラフィーカラムと、
溶出緩衝液と、を含み、
前記溶出緩衝液が、少なくとも１つの賦形剤、二価陽イオンおよびリン酸緩衝食塩水を含み、
前記少なくとも１つの賦形剤がヒスチジンまたはスクロースを含む、装置。
（項目２６）
前記ゲル浸透クロマトグラフィーカラムが前記緩衝液で平衡化される、項目２５に記載の装置。
（項目２７）
ウイルスおよび液体担体を含むウイルス標品をさらに含む、項目２５または２６に記載の装置。
（項目２８）
少なくとも１つの賦形剤と；
二価陽イオンと；
非イオン性界面活性剤と；
リン酸緩衝食塩水と、
を含む溶出緩衝液であって、
前記少なくとも１つの賦形剤がヒスチジンまたはスクロースを含み、
ゲル浸透クロマトグラフィー溶出緩衝液である、溶出緩衝液。
（項目２９）
スクロースと；
ＭｇＣｌ２と；
ポリソルベート８０と；
リン酸緩衝食塩水と、
を含む溶出緩衝液であって、
ゲル浸透クロマトグラフィー溶出緩衝液である、
溶出緩衝液。
（項目３０）
マンニトールと；
ヒスチジンと；
ソルビトールと；
ＭｇＣｌ２と；
ポリソルベート８０と；
リン酸緩衝食塩水と、
を含む溶出緩衝液であって、
ゲル浸透クロマトグラフィー溶出緩衝液である、溶出緩衝液。
（項目３１）
ウイルスおよび液体担体を含むウイルス標品とゲル浸透クロマトグラフィーカラムを接触させることと（ここで、前記ウイルスはゲル浸透クロマトグラフィーカラム上で保持される。）；
少なくとも１つの賦形剤、二価陽イオンおよびリン酸緩衝食塩水を含む溶出緩衝液により前記ゲル浸透クロマトグラフィーカラムから前記ウイルスを回収することと（前記少なくとも１つの賦形剤はヒスチジンまたはスクロースを含む。）、
を含み、
ウイルス回収率が、リン酸緩衝食塩水で溶出されるウイルスの回収率よりも少なくとも約２０％高い、ゲル浸透クロマトグラフィーカラムからのウイルス回収率を向上させる方法。
（項目３２）
前記ウイルス回収率が、リン酸緩衝食塩水で溶出されるウイルスの回収率よりも少なくとも約２５％高い、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記ウイルス回収率が、リン酸緩衝食塩水で溶出されるウイルスの回収率よりも少なくとも約３０％高い、項目３１に記載の方法。
（項目３４）
前記ウイルス回収率が、リン酸緩衝食塩水で溶出されるウイルスの回収率よりも少なくとも約３５％高い、項目３１に記載の方法。