【手続補正書】
【提出日】平成27年2月12日(2015.2.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体または薬学的に許容可能なその塩の調製方法であって、約４〜約９のｐＨで修飾型細胞傷害性化合物を修飾型ＣＢＡと反応させることを含む前記方法であり、
（ａ）前記修飾型ＣＢＡが前記ＣＢＡに結合した二官能性架橋剤の残基を含み、そして、前記残基が前記の結合基とチオール反応性基を含み；そして、
（ｂ）前記修飾型細胞傷害性化合物が、チオール基および：
【化１】
2014506892.tif 000001
で表される基を含み、
そしてここで前記修飾型細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化２】
2014506892.tif 000002
【化３】
2014506892.tif 000003
のうちの１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表され、
式中、Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；
Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含むか、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されている；
前記方法。
【請求項２】
結合基を有する細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、イミン含有細胞傷害性化合物、イミン反応性試薬、および前記の結合基を含む二官能性架橋剤と前記のＣＢＡを反応させて前記の複合体を形成することを含み、
ここで当該イミン含有細胞障害性化合物が、以下の式：
【化４】
2014506892.tif 000004
【化５】
2014506892.tif 000005
のうちのいずれか１つ、または薬学的に許容可能なその塩で表され、
式中、Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’および前記の結合基からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含み、そして、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されている；
前記方法。
【請求項３】
結合基を有する細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、
（ａ）細胞傷害性化合物を、前記結合基、前記ＣＢＡと反応する基（チオール基、マレイミド基、ハロアセタミド基またはアミン基など）および前記修飾型細胞傷害性化合物と反応する基を含む二官能性架橋剤と反応させて、前記の結合基、および前記ＣＢＡと反応する前記の基を含む前記二官能性架橋剤の残基に共有結合した第２の修飾型細胞傷害性化合物を形成することであって、
前記修飾型細胞傷害性化合物は、以下の式：
【化６】
2014506892.tif 000006
【化７】
2014506892.tif 000007
のうちの１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表されれ、
式中、
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；
Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含むか、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルもしくは複素環もしくはヘテロアリール環が任意に置換されている、ことと；ならびに、
（ｂ）約４〜約９のｐＨで前記ＣＢＡと反応する前記の基を介して前記ＣＢＡと前記第２修飾型細胞傷害性化合物を反応させて前記複合体を形成すること
を含む、方法。
【請求項４】
以下の式：
【化８】
2014506892.tif 000008
【化９】
2014506892.tif 000009
の前記チオール基を担持するイミン含有細胞傷害性化合物をイミン反応性試薬と反応混合物中で反応させることによって、前記修飾型細胞傷害性化合物を作製する、請求項１または３に記載の方法。
【請求項５】
前記イミン含有細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化１０】
2014506892.tif 000010
または
【化１１】
2014506892.tif 000011
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｌ’、Ｌ’’およびＬ’’’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３Ｍ、スルファート−ＯＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から独立して選択され；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンであり；そして
Ｇが−ＣＨ−または−Ｎ−から選択される、
請求項２または４に記載の方法。
【請求項６】
前記イミン含有細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化１２】
2014506892.tif 000012
または
【化１３】
2014506892.tif 000013
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｗ’は存在しないか、存在するときは、−ＣＲｅＲｅ’−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、−ＳＳ−または−Ｃ（＝Ｏ）−、またはアミノ酸、または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドから選択され；
Ｒｘは存在しないか、存在するときは、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、６〜１０個の炭素原子を担持するアリール、またはＯ、ＮもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を担持する３員〜８員の複素環であり；
ＲｅとＲｅ’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋから選択され、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；好ましくは、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
ｎは１から２４までの整数である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍから選択され；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンであり；
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、およびアミン保護基からなる群より選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され；
ＡとＡ’は−Ｏ−および−Ｓ−から選択され；
Ｗ’は存在しないか、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−または−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｇが−ＣＨ−または−Ｎ−から選択される、
請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記二官能性架橋剤が、
Ｎ‐スクシンイミジル４‐（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（Ｎ‐マレイミドメチル）‐シクロヘキサン‐１‐カルボキシ‐（６‐アミドカプロエート）（ＬＣ‐ＳＭＣＣ）、κ‐マレイミドウンデカノイン酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ‐マレイミド酪酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε‐マレイミドカプロン酸Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ‐（α‐マレイミドアセトキシ）‐スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル‐６‐（β‐マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ‐スクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）‐ブチレート（ＳＭＰＢ）、Ｎ‐（ｐ‐マレイミドフェニル）イソシアネート（ＰＭＰＩ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエート、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（ヨードアセチル）‐アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ‐スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ‐スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）およびＮ‐スクシンイミジル３‐（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、ビス‐マレイミドポリエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、ＢＭ（ＰＥＯ）２、ＢＭ（ＰＥＯ）３、Ｎ‐（β‐マレイミドプロピルオキシ）スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、５‐マレイミド吉草酸ＮＨＳ、ＨＢＶＳ、４‐（４‐Ｎ‐マレイミドフェニル）‐酪酸ヒドラジド塩酸塩（ＭＰＢＨ）、スクシンイミジル‐（４‐ビニルスルホニル）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）、ジチオビス‐マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４‐ビス‐マレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４‐ビスマレイミジル‐２，３‐ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビス‐マレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビス‐マレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、スルフォスクシンイミジル４‐（Ｎ‐マレイミド‐メチル）シクロヘキサン‐１‐カルボキシラート（スルフォ‐ＳＭＣＣ）、スルフォスクシンイミジル（４‐ヨード‐アセチル）アミノベンゾエート（スルフォ‐ＳＩＡＢ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＭＢＳ）、Ｎ‐（γ‐マレイミドブトリルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＧＭＢＳ）、Ｎ‐（ε‐マレイミドカプロイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＥＭＣＳ）、Ｎ‐（κ‐マレイミドウンデカノイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＫＭＵＳ）、スルフォスクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）ブチレート（スルフォ‐ＳＭＰＢ）、ＣＸ１‐１、スルフォ‐Ｍａｌ、ＰＥＧｎ‐Ｍａｌ、Ｎ−スクシンイミジル−４−（４−ニトロピリジル−２−ジチオ）ブタノエート、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、およびＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピジリルジチオ）２−スルフォブタノエート（スルフォ−ＳＰＤＰ）である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、約４〜約９のｐＨで前記ＣＢＡと第２の修飾型細胞傷害性化合物を反応させることを含み、前記の第２修飾型細胞傷害性化合物が、
（ａ）反応性エステルおよびチオール反応性基から選択される反応性基と前記の結合基を含む、前記細胞傷害性化合物に結合した二官能性架橋剤の残基、ならびに、
（ｂ）  
【化１４】
2014506892.tif 000014
で表される基を含み、
ここで当該前記第２修飾型細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化１５】
2014506892.tif 000015
【化１６】
2014506892.tif 000016
のうちのいずれか１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表され、
式中、
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；
Ｘ’は−Ｈ、アミン保護基、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は−Ｈ、オキソ基、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキル、またはそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’、およびそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、ハロゲンまたはそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−ＮＲ５および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され；
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基で前記のアルキルまたはアルケニルが任意に置換されており；フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されることができ、前記の置換基は、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり得る；
前記方法。
【請求項１０】
前記第２の修飾型細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化１７】
2014506892.tif 000017
または
【化１８】
2014506892.tif 000018
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍから選択され；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンであり；
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、およびアミン保護基からなる群より選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され；
ＡとＡ’は−Ｏ−および−Ｓ−から選択され；
Ｗ’は存在しないか、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−または−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｇは−ＣＨ−または−Ｎ−から選択され；
Ｚｓは−Ｈであるか、以下の式：
【化１９】
2014506892.tif 000019
【化２０】
2014506892.tif 000020
のうちのいずれか１つから選択され、
式中、ｑは１から５までの整数であり；好ましくは、ｑは２であり；
ｎは２から６までの整数であり；好ましくは、ｎは４であり；
Ｄは−Ｈまたは−ＳＯ３Ｍであり；
Ｍが−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンである、
請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記複合体が、
【化２１】
2014506892.tif 000021
であって、式中、ｒは１から１０までの整数であり、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、そして、Ｍが−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞結合剤が抗体、単鎖抗体、前記標的細胞に特異的に結合する抗体断片、モノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、または標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体断片、キメラ抗体、前記標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体断片、ドメイン抗体、前記標的細胞に特異的に結合するドメイン抗体断片、リンホカイン、ホルモン、ビタミン、成長因子、コロニー刺激因子または栄養輸送分子である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記イミン反応性試薬が、サルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、様々なアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２、チオスルファート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（Ｈ２Ｓ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、グリケート化ヌクレオチド（例えば、ＧＤＰ‐マンノース）、フルダラビン、またはそれらの混合物からなる群より選択され、式中、ＲｉとＲｉ’はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；ＲｉとＲｉ’は、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである、請求項２、４〜８、１１および１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の方法であって、当該方法は、次の式：
【化２２】
2014506892.tif 000022
の複合体を調製するための方法であり、そして当該方法は、次の式
【化２３】
2014506892.tif 000023
の修飾型細胞傷害性化合物を約４〜約９のｐＨで次の式
【化２４】
2014506892.tif 000024
の修飾型ＣＢＡとそれぞれ反応させることを含み、
式中、ｒは１から１０までの整数であり；
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；好ましくは、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり；そして
Ｍが−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである、
前記方法。
【請求項１５】
請求項２に記載の方法であって、当該方法は次の式：
【化２５】
2014506892.tif 000025
の複合体を調製するための方法であり、そして当該方法は、イミン含有細胞傷害性化合物、イミン反応性試薬、および前記結合基を含む二官能性架橋剤と前記ＣＢＡを反応させて前記複合体を形成することを含み、前記イミン含有細胞傷害性化合物が、
【化２６】
2014506892.tif 000026
であり、前記二官能性架橋剤が、それぞれ、
【化２７】
2014506892.tif 000027
であり、そして、
前記イミン反応性試薬はサルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、様々なアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２、チオスルファート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（Ｈ２Ｓ２Ｏ４または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＨＯＨまたは陽イオンと共に形成される塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、グリケート化ヌクレオチド（例えば、ＧＤＰ‐マンノース）、フルダラビン、またはそれらの混合物から選択され、式中、ＲｉとＲｉ’はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；ＲｉとＲｉ’は、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである、
前記方法。