【手続補正書】
【提出日】平成27年6月8日(2015.6.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）少なくとも一部が機能的分泌性ポリペプチドをコードする少なくとも１つのｍＲＮＡ分子と、（ｂ）脂質ナノ粒子を含む移送ビヒクルと、を含む、組成物であって、前記分泌性ポリペプチドの欠陥または欠乏を有する対象の治療方法における使用のための組成物。
【請求項２】
前記ｍＲＮＡ分子は、リソソーム貯蔵障害を有する個体において異常に欠乏している酵素をコードする、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
前記ｍＲＮＡ分子によってコードされる前記ポリペプチドは、エリスロポエチン、α−ガラクトシダーゼポリペプチド、ＬＤＬ受容体、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、α−Ｌ−イズロニダーゼ、イズロン酸スルファターゼ、ヘパリン−Ｎ−スルファターゼ、α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、ガラクトース６−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、リソソーム酸リパーゼまたはアリールスルファターゼ−Ａポリペプチドである、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
前記ｍＲＮＡ分子は、未修飾であるか、または
前記ｍＲＮＡ分子は、
前記ｍＲＮＡ分子に安定性を付与する少なくとも１つの修飾；
その未修飾対応物と比較して、前記ｍＲＮＡ分子の安定性を向上させる少なくとも１つの修飾であって、必要に応じて前記修飾が修飾されたヌクレオチドを含み、必要に応じて前記修飾されたヌクレオチドが偽ウリジンである、修飾；
前記ｍＲＮＡ分子の５’非翻訳領域の修飾であって、必要に応じて前記修飾は、Ｃａｐ１構造の包含を含む、修飾；または
前記ＲＮＡ分子の３’非翻訳領域の修飾であって、必要に応じて前記修飾は、ポリＡ尾部の包含を含む、修飾、
を含む；および／または
前記ｍＲＮＡ分子は、少なくとも３０ｋＤａのものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
標的細胞の細胞内コンパートメントへの前記ｍＲＮＡ分子の移動を促進するための作用物質をさらに含み、
必要に応じて前記標的細胞は、肝細胞、上皮細胞、造血細胞、上皮細胞、内皮細胞、肺細胞、骨細胞、幹細胞、間葉細胞、神経細胞、心臓細胞、含脂肪細胞、血管平滑筋細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、β細胞、下垂体細胞、滑膜ライニング細胞、卵巣細胞、精巣細胞、線維芽細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、網状赤血球、白血球、顆粒球、および腫瘍細胞からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
前記脂質ナノ粒子は、
１つ以上のカチオン性脂質；
１つ以上の非カチオン性脂質；
１つ以上のコレステロールベースの脂質；および／または
１つ以上のＰＥＧ修飾脂質
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
前記脂質ナノ粒子は、
Ｃ１２−２００；
ＤＬｉｎＫＣ２ＤＭＡ、ＣＨＯＬ、ＤＯＰＥ、およびＤＭＧ−ＰＥＧ−２０００；または
Ｃ１２−２００、ＤＯＰＥ、ＣＨＯＬ、およびＤＭＧＰＥＧ２Ｋ
を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
前記脂質ナノ粒子は、切断可能な脂質を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
前記組成物は、凍結乾燥される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
前記組成物は、凍結乾燥された再構成組成物である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
前記組成物は、静脈内または肺への送達のためのものである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
前記組成物は、週２回、週１回、１０日毎に、２週間毎に、または３週間毎に前記対象に投与するためのものである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
前記移送ビヒクルの寸法が、約２５〜２５０ｎｍの範囲内である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
前記移送ビヒクルの寸法が、２５０ｎｍ未満、１７５ｎｍ未満、１５０ｎｍ未満、１２５ｎｍ未満、１００ｎｍ未満、７５ｎｍ未満、５０ｎｍ未満、２５ｎｍ未満または１０ｎｍ未満であり、必要に応じて前記脂質ナノ粒子は、約１００ｎｍ未満の寸法を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
前記ポリペプチドが、投与後１時間を超えて、４時間を超えて、６時間を超えて、１２時間を超えて、２４時間を超えて、４８時間を超えて、または７２時間を超えて、少なくとも治療レベルで発現され、必要に応じて、分泌されるタンパク質のレベルが、投与後３日目、４日目、５日目、または１週間目以上で検出可能である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１６】
対象への前記組成物の投与後、前記ｍＲＮＡ分子は、生体内で翻訳されて、前記機能的分泌性ポリペプチドを生成し、前記機能的分泌性ポリペプチドは、投与後少なくとも１週間にわたって血清中で検出可能なレベルで存在する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１７】
組成物の投与が、経口、直腸、膣内、経粘膜、腸、筋肉内、皮下、髄内、鞘内、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内および眼内からなる群より選択される投与経路によって達成される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１８】
前記ｍＲＮＡが、標的細胞に生体内で送達され、必要に応じて、
（ｉ）前記標的細胞は、肝細胞、上皮細胞、造血細胞、上皮細胞、内皮細胞、肺細胞、骨細胞、幹細胞、間葉細胞、神経細胞、心臓細胞、含脂肪細胞、血管平滑筋細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、β細胞、下垂体細胞、滑膜ライニング細胞、卵巣細胞、精巣細胞、線維芽細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、網状赤血球、白血球、顆粒球、および腫瘍細胞からなる群から選択される；
（ｉｉ）前記標的細胞は、目的とするタンパク質または酵素を欠乏している；ならびに／あるいは
（ｉｉｉ）前記組成物は、１つ以上の標的細胞に対する前記組成物の親和性を高めることができる標的化リガンドを含み、必要に応じて前記標的化リガンドが、アポリポタンパク質Ｂまたはアポリポタンパク質Ｅからなる群より選択され、そして前記１つ以上の標的細胞が、低密度のリポタンパク質受容体を発現する、
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１９】
対象の治療方法における使用のための、外因性タンパク質をコードするｍＲＮＡを含む組成物であって、前記対象が、前記外因性タンパク質の欠陥または欠乏を有するか、または前記外因性タンパク質の標的化および／または生物学的標的の不活性化が必要であり、ここで前記組成物は、肺送達により前記対象に投与され、その結果、前記組成物の投与が、前記対象の肺細胞における前記ｍＲＮＡによってコードされる前記外因性タンパク質の生体内での発現をもたらし、前記肺送達は、気管内または噴霧での投与によって達成される、組成物。
【請求項２０】
前記ｍＲＮＡは、
（ｉ）リポソーム内にカプセル化されており、必要に応じて、前記リポソームは、１つ以上のカチオン性脂質、１つ以上の非カチオン性脂質、１つ以上のコレステロールベースの脂質および１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む；または
（ｉｉ）ポリマーで複合されている、
請求項１９に記載の使用のための組成物。
【請求項２１】
前記ｍＲＮＡが、天然に存在しないヌクレオチドを含み、必要に応じて、前記天然に存在しないヌクレオチドは、偽ウリジンである、請求項１９に記載の使用のための組成物。
【請求項２２】
前記ｍＲＮＡによってコードされる前記外因性タンパク質は、酵素、ホルモン、受容体または抗体である、請求項１９に記載の使用のための組成物。
【請求項２３】
前記外因性タンパク質が、
（ｉ）発現後に前記肺細胞の細胞質ゾル内に滞留される；または
（ｉｉ）発現後に細胞外に分泌され、必要に応じて、前記外因性タンパク質が、全身的に分布する、
請求項１９に記載の使用のための組成物。
【請求項２４】
前記ｍＲＮＡによってコードされる前記外因性タンパク質の生体内での発現が、投与の少なくとも６時間後に検出可能である、請求項１９に記載の使用のための組成物。
【請求項２５】
ファブリー病の治療において使用するための、ヒトα−ガラクトシダーゼ（ｈＧＬＡ）タンパク質をコードするｍＲＮＡを含む組成物であって、前記ｍＲＮＡは、血清ｈＧＬＡタンパク質レベルが少なくとも７２時間にわたって、治療前のベースライン血清ｈＧＬＡレベルと比較して増大するように静脈内または肺投与によって投与される、組成物。
【請求項２６】
前記ｍＲＮＡは、配列番号４を含む、請求項２５に記載の使用のための組成物。
【請求項２７】
前記ｍＲＮＡが、リポソーム内にカプセル化され、必要に応じて、前記リポソームは、１つ以上のカチオン性脂質、１つ以上の非カチオン性脂質、１つ以上のコレステロールベースの脂質および１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項２５に記載の使用のための組成物。
【請求項２８】
前記ｍＲＮＡが、天然に存在しないヌクレオチドを含み、必要に応じて、前記天然に存在しないヌクレオチドが、偽ウリジンである、請求項２５に記載の使用のための組成物。
【請求項２９】
前記ｈＧＬＡタンパク質が、
（ｉ）発現後に細胞外に分泌される；
（ｉｉ）全身的に分布する；および／または
（ｉｉｉ）投与の少なくとも６時間後に検出可能である、
請求項２５に記載の使用のための組成物。
【請求項３０】
前記ｍＲＮＡの投与が、前記ヒト対象において治療前のグロボトリアオシルセラミド（Ｇｂ３）レベルと比較して、Ｇｂ３レベルの低下をもたらす、請求項２５に記載の使用のための組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
（ａ）少なくとも一部が機能的分泌性ポリペプチドをコードする少なくとも１つのｍＲＮＡ分子と、（ｂ）脂質ナノ粒子を含む移送ビヒクルと、を含む、組成物。
（項目２）
前記ｍＲＮＡは、リソソーム貯蔵障害を有する個体において異常に欠乏している酵素をコードする、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記ｍＲＮＡは、機能的エリスロポエチンまたは機能的α−ガラクトシダーゼポリペプチドをコードする、項目１に記載の組成物。
（項目４）
前記ＲＮＡ分子は、前記ＲＮＡ分子に安定性を付与する少なくとも１つの修飾を含む、項目１に記載の組成物。
（項目５）
前記ＲＮＡ分子は、前記ＲＮＡ分子の５’非翻訳領域の修飾を含む、項目１に記載の組成物。
（項目６）
前記修飾は、Ｃａｐ１構造の包含を含む、項目５に記載の組成物。
（項目７）
前記ＲＮＡ分子は、前記ＲＮＡ分子の３’非翻訳領域の修飾を含む、項目１に記載の組成物。
（項目８）
前記修飾は、ポリＡ尾部の包含を含む、項目７に記載の組成物。
（項目９）
標的細胞の細胞内コンパートメントへの前記ＲＮＡ分子の移動を促進するための作用物質をさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
前記脂質ナノ粒子は、１つ以上のカチオン性脂質を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
前記脂質ナノ粒子は、１つ以上の非カチオン性脂質を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１２）
前記脂質ナノ粒子は、１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１３）
前記脂質ナノ粒子は、Ｃ１２−２００を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１４）
前記脂質ナノ粒子は、ＤＬｉｎＫＣ２ＤＭＡ、ＣＨＯＬ、ＤＯＰＥ、およびＤＭＧ−ＰＥＧ−２０００を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１５）
前記脂質ナノ粒子は、Ｃ１２−２００、ＤＯＰＥ、ＣＨＯＬ、およびＤＭＧＰＥＧ２Ｋを含む、項目１に記載の組成物。
（項目１６）
前記脂質ナノ粒子は、切断可能な脂質を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１７）
前記組成物は、凍結乾燥される、項目１に記載の組成物。
（項目１８）
前記組成物は、凍結乾燥された再構成組成物である、項目１に記載の組成物。
（項目１９）
前記標的細胞は、肝細胞、上皮細胞、造血細胞、上皮細胞、内皮細胞、肺細胞、骨細胞、幹細胞、間葉細胞、神経細胞、心臓細胞、含脂肪細胞、血管平滑筋細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、β細胞、下垂体細胞、滑膜ライニング細胞、卵巣細胞、精巣細胞、線維芽細胞
、Ｂ細胞、Ｔ細胞、網状赤血球、白血球、顆粒球、および腫瘍細胞からなる群から選択される、項目１０に記載の組成物。
（項目２０）
機能的ポリペプチドが欠乏している対象を治療する方法であって、（ａ）少なくとも一部が前記機能的分泌性ポリペプチドをコードする少なくとも１つのｍＲＮＡと、（ｂ）脂質ナノ粒子を含む移送ビヒクルと、を含む組成物を投与することを含み、前記組成物の投与後、前記ｍＲＮＡは、標的細胞内で発現されて、前記機能的分泌性ポリペプチドを産生する、方法。
（項目２１）
前記ｍＲＮＡは、機能的エリスロポエチン、α−ガラクトシダーゼ、ＬＤＬ受容体、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、α−Ｌ−イズロニダーゼ、イズロン酸スルファターゼ、ヘパリン−Ｎ−スルファターゼ、α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、ガラクトース６−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、リソソーム酸リパーゼまたはアリールスルファターゼ−Ａポリペプチド、および（ｂ）移送ビヒクルをコードし、前記組成物の投与後、前記ｍＲＮＡは、標的細胞内で発現されて、機能的分泌性ポリペプチドを産生する、項目２１に記載の方法。
（項目２２）
前記機能的分泌性ポリペプチドは、リソソーム貯蔵障害を有する個体において異常に欠乏している酵素である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記ｍＲＮＡ分子は、前記ｍＲＮＡ分子に安定性を付与する少なくとも１つの修飾を含む、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記ｍＲＮＡ分子は、前記ｍＲＮＡ分子の５’非翻訳領域の修飾を含む、項目２１に記載の方法。
（項目２５）
前記修飾は、Ｃａｐ１構造の包含を含む、項目２５に記載の方法。
（項目２６）
前記ｍＲＮＡ分子は、前記ｍＲＮＡ分子の３’非翻訳領域の修飾を含む、項目２１に記載の方法。
（項目２７）
前記修飾は、ポリＡ尾部の包含を含む、項目２７に記載の方法。
（項目２８）
前記標的細胞の細胞内コンパートメントへの前記ｍＲＮＡ分子の移動を促進するための作用物質をさらに含む、項目２１に記載の方法。
（項目２９）
前記脂質ナノ粒子は、１つ以上のカチオン性脂質を含む、項目２１に記載の方法。
（項目３０）
前記脂質ナノ粒子は、１つ以上の非カチオン性脂質を含む、項目２１に記載の方法。
（項目３１）
前記脂質ナノ粒子は、１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む、項目２１に記載の方法。
（項目３２）
前記脂質ナノ粒子は、Ｃ１２−２００を含む、項目２１に記載の方法。
（項目３３）
前記脂質ナノ粒子は、ＤＬｉｎＫＣ２ＤＭＡ、ＣＨＯＬ、ＤＯＰＥ、およびＤＭＧ−ＰＥＧ−２０００を含む、項目２１に記載の方法。
（項目３４）
前記脂質ナノ粒子は、Ｃ１２−２００、ＤＯＰＥ、ＣＨＯＬ、およびＤＭＧＰＥＧ２Ｋを含む、項目２１に記載の方法。
（項目３５）
前記脂質ナノ粒子は、切断可能な脂質を含む、項目２１に記載の方法。
（項目３６）
前記組成物は、凍結乾燥される、項目２１に記載の方法。
（項目３７）
前記組成物は、凍結乾燥された再構成組成物である、項目２１に記載の方法。
（項目３８）
前記標的細胞は、肝細胞、上皮細胞、造血細胞、上皮細胞、内皮細胞、肺細胞、骨細胞、幹細胞、間葉細胞、神経細胞、心臓細胞、含脂肪細胞、血管平滑筋細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、β細胞、下垂体細胞、滑膜ライニング細胞、卵巣細胞、精巣細胞、線維芽細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、網状赤血球、白血球、顆粒球、および腫瘍細胞からなる群から選択される、項目２１に記載の方法。
（項目３９）
機能的分泌性ポリペプチドが欠乏している対象を治療する方法であって、（ａ）少なくとも一部が前記機能的分泌性ポリペプチドをコードする少なくとも１つのｍＲＮＡと、（ｂ）脂質ナノ粒子を含む移送ビヒクルと、を含む組成物を投与することを含み、前記組成物の投与後、前記ｍＲＮＡは、標的細胞内で翻訳されて、投与の１時間を超えた後に少なくとも最小治療レベルで前記標的細胞内に前記機能的ポリペプチドを産生する、方法。
（項目４０）
標的細胞内で機能的分泌性ポリペプチドを産生する方法であって、（ａ）少なくとも一部が前記機能的分泌性ポリペプチドをコードする少なくとも１つのｍＲＮＡと、（ｂ）脂質ナノ粒子を含む移送ビヒクルと、を含む組成物を投与することを含み、前記組成物の投与後、前記ｍＲＮＡは、標的細胞内で翻訳されて、投与の１時間を超えた後に少なくとも最小治療レベルで機能的分泌性ポリペプチドを産生する、方法。
上で論じられる特徴および多くの他の特徴ならびに本発明の付随する利点は、添付の実施例と併せて、本発明の以下の詳細な説明を参照することにより、より良好に理解されるであろう。本明細書に記載の様々な実施形態は相補的であり、本明細書に包含される教示を考慮して、当業者によって理解される様式でともに合わせられるか、または使用されてもよい。