【手続補正書】
【提出日】平成27年11月5日(2015.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
封入体からタンパク質を製造するための方法であり、
封入体を含むタンパク質調製物を提供すること、
封入体分散液を調製すること、および
前記封入体分散液を圧力容器内で高圧に曝露し、それによって、前記封入体タンパク質を脱凝集およびリフォールディングすることを含む、前記方法。
【請求項２】
前記封入体分散液が、非変性である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記封入体分散液が、高圧の不在下で封入体を可溶化するのに十分なカオトロープおよび／または界面活性剤を含まない、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記圧力容器の体積が、約５Ｌ以上である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記圧力容器の体積が、約１０Ｌ以上である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記圧力容器の体積が、約５０Ｌ以上である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記タンパク質が、産業用酵素または治療用タンパク質である、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記タンパク質が、１００ｍｇ／ｍＬ未満の溶解限度を有し、および／または、１つ以上のジスルフィド結合を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記治療用タンパク質が、ヒト用または獣医用治療のためのタンパク質である、請求項７また請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記治療用タンパク質が、モノクローナル抗体であり、または、モノクローナル抗体配列を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記治療用タンパク質が、抗原結合領域または抗体Ｆｃ領域を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記治療用タンパク質が、インターロイキンまたはインターフェロンである、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記高圧が、約１０００バールから約５，０００バールである、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記タンパク質が、脱凝集およびリフォールディングのために圧力窓内で高圧に曝露される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記タンパク質調製物が、約２時間から約３０時間加圧される、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記分散液中の封入体粒子の大部分が、１時間あたり約１０ｃｍ以下の沈降速度を有する、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記封入体粒子の大部分が、１時間あたり５ｃｍ以下の沈降速度を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記封入体粒子の大部分が、１時間あたり１ｃｍ以下の沈降速度を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記封入体粒子の大部分が、質量で、１０μｍ以下のサイズを有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記封入体粒子の大部分が、質量で、５μｍ以下のサイズを有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記封入体粒子の大部分が、質量で、３μｍ以下のサイズを有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記封入体粒子の大部分が、質量で、約２．２μｍ以下のサイズを有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記封入体粒子が、本質的に、約５μｍ未満のサイズを伴う粒子から成る、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
前記封入体粒子が、本質的に、約２．２μｍ以下のサイズを伴う粒子から成る、請求項１６に記載の方法。
【請求項２５】
分散前の前記封入体製剤が、相当な数の約２０μｍより大きい封入体粒子を含む、請求項１〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
分散前の前記封入体調製物が、約３０μｍより大きい封入体粒子を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
分散前の前記封入体調製物が、約５０μｍより大きい封入体粒子を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
封入体のサイズが、コールターパーティクルカウンターによって定義された、請求項１〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
前記封入体分散液が、機械的せん断によって調製された、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
前記封入体分散液が、高圧均質化によって作られた、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記分散液の化学的性質が非変性界面活性剤、緩衝剤、塩、リフォールディング併用剤、増粘剤、または選択的排除性化合物の１つ以上を加えることで調節される、請求項１〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記粒子のゼータ電位が、±１０の範囲外になるよう調節される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記粒子のゼータ電位が、±２０の範囲外になるよう調節される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記粒子のゼータ電位が、±３０の範囲外になるよう調節される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
選択的排除性化合物が、凝集を阻止する濃度で加えられる、請求項３１〜３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記選択的排除性化合物が、スクロース、ヘキシレングリコール、糖、グリセロールの１つ以上である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記封入体分散液が、凍結／解凍に供される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記封入体分散液が、少なくとも１週間保管された後、高圧処理に供せられる、請求項３６または請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
タンパク質の見かけ濃度が、高圧処理の間、タンパク質溶解限度未満に保たれる、請求項１〜３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
タンパク質の見かけ濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ未満である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
タンパク質の見かけ濃度が、約３０ｍｇ／ｍＬ未満である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
タンパク質の見かけ濃度が、約１０ｍｇ／ｍＬ以下である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
タンパク質の見かけ濃度が、約５ｍｇ／ｍＬ以下である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
封入体タンパク質が、プロテアーゼ切断部位を有する融合タンパク質であり、プロテアーゼ切断に十分なプロテアーゼと一緒に高圧に供せられる、請求項１〜４３のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
前記融合タンパク質が、前記プロテアーゼを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記プロテアーゼが、ペスチウィルスプロテアーゼである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記圧力容器の水平軸が垂直軸の少なくとも２倍である、請求項１〜４６のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
封入体からタンパク質を製造するための方法であり、
封入体を含むタンパク質調製物を提供すること、
前記封入体の分散液を、垂直軸よりも少なくとも２倍はある水平軸を有する圧力容器内で高圧に曝露し、それによって、前記封入体タンパク質を脱凝集およびリフォールディングすることを含む、前記方法。
【請求項４９】
１０Ｌを超える圧力容器内でのタンパク質リフォールディングのための方法であり、
（ａ）封入体調製物として、封入体を含むタンパク質調製物を提供すること；
（ｂ）高圧処理中の沈降速度が１時間あたり５ｃｍ未満になるように機械的せん断によって封入体の直径を縮小すること；
（ｃ）ｐＨ、イオン強度および誘電率の１つ以上に基づいてリフォールディング溶液の化学的性質を選択すること；
（ｄ）前記封入体タンパク質調製物を圧力容器内で高圧に曝露することを含む、前記方法。
【請求項５０】
前記圧力容器の体積が、約１００〜約１０００Ｌである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記タンパク質が、治療用タンパク質または産業用酵素である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
前記高圧が、約１０００バール超〜約５，０００バールである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５３】
前記封入体粒子の直径が、高圧曝露のために使用される溶液内で、沈降速度が１時間あたり１ｃｍ以下である粒子まで縮小または維持される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５４】
前記機械的せん断が、高圧均質化、微細流動装置、または固定オリフィスもしくは定圧処理機によって生成される、請求項４９〜５３のいずれかに記載の方法。
【請求項５５】
溶液の化学的性質が界面活性剤または増粘剤の添加によって調節される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５６】
前記タンパク質の見かけ濃度が、高圧処理の間、タンパク質溶解限度未満に保たれる、請求項４９に記載の方法。
【請求項５７】
前記圧力容器が、水平に搭載され、この場合、圧力容器の水平軸が垂直軸の少なくとも２倍である、請求項４９〜５６のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
機械的せん断前の封入体調製物が、５〜５００マイクロメータの範囲である概直径を有する粒子を少なくとも１０％含む、請求項４９〜５７のいずれかに記載の方法。
【請求項５９】
機械的せん断後の前記タンパク質調製物が、本質的に、５μｍ未満の概直径を有する粒子から成る、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
さらに、リフォールドしたタンパク質を精製することを含む、請求項４９〜５９のいずれかに記載の方法。
【請求項６１】
さらに、皮下、筋肉内、または静脈内投与のために、前記タンパク質を製剤化することを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記タンパク質が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で決定される通り、実質的にクロマトグラフィー上で純粋である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記封入体タンパク質が、ＨＩＳ−タグ、マルトース結合タンパク質、チオレドキシン、グルタチオン−ｓ−トランスフェラーゼ、ＤｓｂＡ、ｇｐｈＤ、ＦＬＡＧ、カルモジュリン結合タンパク質、ｓｔｒｅｐタグＩＩ、ペスチウィルスプロテアーゼ、ＨＡ−タグ、Ｓｏｆタグ１、Ｓｏｆタグ３、ｃ−ｍｙｃ、Ｔ７−タグ、Ｓ−タグ、ＮｕｓＡ、キチン結合領域、キシナラーゼ１０Ａ、タバコエッチ病ウィルスおよびユビキチンから選択される融合パートナーを１つ以上伴う融合タンパク質として発現される、請求項４９〜６０のいずれかに記載の方法。
【請求項６４】
前記融合タンパク質が、プロテアーゼを含む、請求項６３に記載の方法。