【手続補正書】
【提出日】平成27年8月20日(2015.8.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２３】
結論
結論として、本発明者らの結果は、リソソーム酵素によるAPPプロセッシングに対する制御の思いもよらないメカニズムを示す。本発明者らは、Neu1の機能喪失の下流のアミロイド生成過程を説明する２ヒットモデルを提案する：異常にプロセッシングされる、過剰にシアリル化されたAPPの蓄積、及びこれに続く、過剰なLEXを介してのAPP最終生成物の放出。このシナリオにおいて、増加したLEXを伴う活性化されたミクログリアは、APPを開裂して毒性のAβペプチドを生成するであろう活性なリソソーム酵素を細胞外に放出することによるフィードフォワード病原カスケードと連携する。アミロイド生成経路におけるNeu1の位置付け、及びLEXの中心的制御因子としてのその役割は、ADにおけるプラークの沈着及びアミロイドの生成を治療し／遅らせる新規な可能性ある療法標的のために開発されるであろう。
明細書の開示の概要
〔項１〕
癌を有する対象のための予後を決定する方法において、
ａ）異なるリソソームシアリダーゼ活性マーカーからの２以上の値を含むリソソームシアリダーゼ活性プロファイル、NEU1基質シアリル化活性プロファイル、又はNEU1レベル活性プロファイル；
を含んで成る対象プロファイルであって前記対象からの腫瘍サンプルからのものを提供し；
ｂ）異なるリソソームシアリダーゼ活性マーカーからの２以上の値を含むリソソームシアリダーゼ活性プロファイル、NEU1基質シアリル化活性プロファイル、又はNEU1レベル活性プロファイル；
を含んで成る対応する参照プロファイルであって対照サンプルからのものを提供し、
ここで、前記対象プロファイル及び前記参照プロファイルは、リソソームシアリダーゼ活性、NEU1基質シアリル化活性、又はNEU1レベル活性を示す１又は複数の値を含んで成り；そして
ｃ）前記対象のリソソームシアリダーゼ活性プロファイル及び前記参照リソソームシアリダーゼ活性プロファイルを比較して、癌を有する前記対象について予後を決定する、ここで、前記参照のリソソームシアリダーゼ活性、NEU1基質シアリル化活性、又はNEU1レベル活性に比べて前記対象の低いリソソームシアリダーゼ活性、高いNEU1基質シアリル化活性、又は高いNEU1レベル活性が、前記対象の浸潤癌（invasive cancer）の予測をもたらす；
段階を含んで成る方法。
〔項２〕
対象における癌を診断する方法において、
ａ）異なるリソソームシアリダーゼ活性マーカーからの２以上の値を含むリソソームシアリダーゼ活性プロファイル、NEU1基質シアリル化活性プロファイル、又はNEU1レベル活性プロファイル；
を含んで成る対象プロファイルであって前記対象からの腫瘍サンプルからのものを提供し；
ｂ）異なるリソソームシアリダーゼ活性マーカーからの２以上の値を含むNEU1活性プロファイル、NEU1基質シアリル化活性プロファイル、又はNEU1レベル活性プロファイル；
を含んで成る対応する参照プロファイルであって対照サンプルからのものを提供し、
ここで、前記対象プロファイル及び前記参照プロファイルは、リソソームシアリダーゼ活性、NEU1基質シアリル化活性、又はNEU1レベル活性を示す１又は複数の値を含んで成り；そして
ｃ）前記対象のリソソームシアリダーゼ活性プロファイル及び前記参照リソソームシアリダーゼ活性プロファイルを比較して、前記対象について診断を決定する、ここで、前記参照のリソソームシアリダーゼ活性、NEU1基質シアリル化活性、又はNEU1レベル活性に比べて前記対象のリソソームシアリダーゼ活性が低い場合、NEU1基質シアリル化活性が高い場合、又はNEU1レベル活性が高い場合、前記対象が癌を有すると診断する；
を含んで成る方法。
〔項３〕
癌を有する対象におけるリソソーム作用性（lysosomotropic）化学療法剤療法について予後を決定する方法において、
ａ）前記対象からの腫瘍サンプルからの対象リソソームシアリダーゼ活性プロファイルを提供し；
ｂ）対照サンプルからの参照リソソームシアリダーゼ活性プロファイルを提供し、ここで、前記対象リソソームシアリダーゼ活性プロファイル及び前記参照リソソームシアリダーゼ活性プロファイルは、リソソームシアリダーゼ活性を示す１又は複数の値を含んで成り；そして
ｃ）前記対象のリソソームシアリダーゼ活性プロファイル及び前記参照リソソームシアリダーゼ活性プロファイルを比較して、対象におけるリソソーム作用性化学療法剤療法について予後を決定する、ここで、前記参照のリソソームシアリダーゼ活性に比べて前記対象の低いリソソームシアリダーゼ活性が、前記癌が前記リソソーム作用性化学療法剤に対して耐性であるとの予測をもたらす；
段階を含んで成る方法。
〔項４〕
前記対照サンプルが、前記対象からの前記腫瘍に隣接する正常組織である、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
〔項５〕
リソソームシアリダーゼ活性を表わす前記１又は複数の値が、LAMP-1蛋白質のレベルを含む、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
〔項６〕
リソソームシアリダーゼ活性を示す前記１又は複数の値が、LAMP-1及びMUC-1蛋白質のレベルを含む、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
〔項７〕
リソソームシアリダーゼ活性を示す前記１又は複数の値が、LAMP-1シアリル化のレベルを含む、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
〔項８〕
リソソームシアリダーゼ活性を示す前記１又は複数の値が、MUC-1シアリル化のレベルを含む、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
〔項９〕
リソソームシアリダーゼ活性を示す前記１又は複数の値が、LAMP-1及びMUC-1シアリル化のレベルを含む、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
〔項１０〕
リソソームシアリダーゼ活性を示す前記１又は複数の値が、LAMP-1のレベル、MUC-1蛋白質のレベル、LAMP-1シアリル化のレベル及びMUC-シアリル化のレベルを含む、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
〔項１１〕
リソソームシアリダーゼ活性を示す前記１又は複数の値が、MUC-1蛋白質のレベルを含む、項１に記載の方法。
〔項１２〕
前記癌が、横紋筋肉腫、乳癌、結腸癌、膵臓癌、急性リンパ芽球白血病、又はユーイング肉腫（Ewing's sarcoma）である、項１〜11のいずれか１項に記載の方法。
〔項１３〕
対象におけるアルツハイマー病に関連する認知症の診断方法において、
ａ）前記対象からの脳脊髄液のサンプルの対象リソソームエキソサイトーシス活性プロファイルを提供し；
ｂ）脳脊髄液の対照サンプルの参照リソソームエキソサイトーシス活性プロファイルを提供し、ここで、対象リソソームエキソサイトーシス活性プロファイル及び参照リソソームエキソサイトーシス活性プロファイルはリソソームエキソサイトーシス活性を表わす１又は複数の値を含んで成り；そして
ｃ）前記対象のリソソームエキソサイトーシス活性プロファイル及び前記参照リソソームエキソサイトーシス活性プロファイルを比較する、ここで、対象が、参照リソソームエキソサイトーシス活性に比べて高いリソソームエキソサイトーシス活性を有する場合、当該対象はアルツハイマー病に関連する認知症を有すると診断される；
を含んで成る方法。
〔項１４〕
前記対象のリソソームエキソサイトーシス活性プロファイル及び前記参照リソソームエキソサイトーシス活性プロファイルが、
（ａ）リソソームシアリダーゼ活性プロファイル、ここで前記対象リソソームシアリダーゼ活性プロファイル及び前記対応する参照リソソームシアリダーゼ活性プロファイルは、リソソームシアリダーゼ活性を示す１又は複数の値を含んで成る、又は
（ｂ）シアリル化活性プロファイル、ここで対象シアリル化活性プロファイル及び対応する参照シアリル化活性プロファイルは、シアリル化活性を示す１又は複数の値を含んで成る、
を含んで成る、項13に記載の方法。
〔項１５〕
リソソームエキソサイトーシス活性を示す前記１又は複数の値が、LAMP-1シアリル化のレベルを含んで成る、項13に記載の方法。
〔項１６〕
リソソームエキソサイトーシス活性を示す前記１又は複数の値が、MUC-1シアリル化のレベルを含んで成る、項13に記載の方法。
〔項１７〕
リソソームエキソサイトーシス活性を示す前記１又は複数の値が、LAMP-1及びMUC-1シアリル化のレベルを含んで成る、項13に記載の方法。
〔項１８〕
リソソームエキソサイトーシス活性を示す前記１又は複数の値が、アミロイド前駆体蛋白質のシアリル化のレベルを含んで成る、項13に記載の方法。
〔項１９〕
リソソームエキソサイトーシス活性を示す前記１又は複数の値が、LAMP-1、MUC-1、アミロイド前駆体蛋白質、カテプシンＢ、カテプシンＤ、フィブリノーゲン、トランスチレチン（transthyretin）、β−２ミクログロブリン又は免疫グロブリン重鎖を含む１又は複数の蛋白質のシアリル化のレベルを含んで成る、項13に記載の方法。
〔項２０〕
リソソームエキソサイトーシス活性を示す前記１又は複数の値が、LAMP-1蛋白質のレベルを含んで成る、項13に記載の方法。
〔項２１〕
リソソームエキソサイトーシス活性を示す前記１又は複数の値が、MUC-1蛋白質のレベルを含んで成る、項13に記載の方法。
〔項２２〕
リソソームエキソサイトーシス活性を示す前記１又は複数の値が、アミロイド前駆体蛋白質のレベルを含んで成る、項13に記載の方法。
〔項２３〕
リソソームエキソサイトーシス活性を示す前記１又は複数の値が、LAMP-1及びMUC-1蛋白質のレベルを含んで成る、項13に記載の方法。
〔項２４〕
リソソームエキソサイトーシス活性を示す前記１又は複数の値が、LAMP-1蛋白質のレベル、MUC-1蛋白質のレベル、LAMP-1シアリル化のレベル及びMUC-1シアリル化のレベルを含んで成る、項13に記載の方法。
〔項２５〕
リソソームエキソサイトーシス活性を示す前記１又は複数の値が、LAMP-1、MUC-1、アミロイド前駆体蛋白質、カテプシンＢ、カテプシンＤ、フィブリノーゲン、ヘキソスアミニダーゼβ、マンノシダーゼα、トランスチレチン（Transthyretin）、β−２ミクログロブリン又は免疫グロブリン重鎖を含む１又は複数の蛋白質のレベルを含んで成る、項13に記載の方法。
〔項２６〕
癌を有する対象の治療方法において、それを必要とする対象に、療法的有効量の、配列番号：２に対して少なくとも85％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、シアリダーゼ活性を有するニューラミニダーゼ−１（Neuraminidase 1）（NEU1）ポリペプチドを投与することを含んで成る方法。
〔項２７〕
アルツハイマー病に関連する認知症を有する対象の治療方法において、それを必要とする対象に、療法的有効量の、配列番号：２に対して少なくとも85％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、シアリダーゼ活性を有するニューラミニダーゼ−１（Neuraminidase 1）（NEU1）ポリペプチドを投与することを含んで成る方法。
〔項２８〕
配列番号：４に対して少なくとも85％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、NEU1酵素活性を増強する保護蛋白質／カテプシンＡ（PPCA）ポリペプチドを投与することを更に含んで成る、項26又は27のいずれか１項に記載の方法。
〔項２９〕
前記NEU1ポリペプチド及びPPCAポリペプチドが別々に又は同時に投与される、項28に記載の方法。
〔項３０〕
前記NEU1ポリペプチドの投与が、配列番号：１に対して少なくとも85％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んで成るウイルスベクターの投与を含んで成る、項29に記載の方法。
〔項３１〕
リソソームシアリダーゼ活性プロファイルの生成方法において、
（ａ）対象からの腫瘍からのサンプルを得；そして
（ｂ）LAMP-1蛋白質のレベル又はLAMP-1シアリル化のレベルについて測定する；
ことを含んで成る方法。
〔項３２〕
１又は複数の追加のリソソームシアリダーゼ活性マーカーを測定することを含んで成る、項31に記載の方法。
〔項３３〕
前記１又は複数の追加のリソソームシアリダーゼ活性マーカーが、NEU1基質を含んで成る、項32に記載の方法。
〔項３４〕
脳脊髄液からリソソームエキソサイトーシス活性プロファイルを生成する方法において、
（ａ）対象から脳脊髄液のサンプルを得；そして
（ｂ）リソソームエキソサイトーシス活性について測定する；
ことを含んで成る方法。
〔項３５〕
前記リソソームエキソサイトーシス活性についての測定が、LAMP-1蛋白質のレベル又はLAMP-1シアリル化のレベルについての測定を含んで成る、項34に記載の方法。
〔項３６〕
前記リソソームエキソサイトーシス活性についての測定が、LAMP-1、MUC-1、アミロイド前駆体蛋白質、カテプシンＢ、カテプシンＤ、フィブリノーゲン、ヘキソスアミニダーゼβ、マンノシダーゼα、トランスチレチン（Transthyretin）、β−２ミクログロブリン又は免疫グロブリン重鎖を含む１又は複数の蛋白質についての測定を含んでなる、項34に記載の方法。
〔項３７〕
得られる活性値の観点で、リソソームシアリダーゼ活性プロファイルを集合することを含んで成る、項31〜33のいずれか１項に記載の方法。
〔項３８〕
得られる活性値の観点で、リソソームエキソサイトーシス活性プロファイルを集合することを含んで成る、項34〜36のいずれか１項に記載の方法。
〔項３９〕
対象がヒトである、項１〜38のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
療法的有効量の化合物を対象に投与することを含んでなる、必要とする対象における神経変性疾患又は当該神経変性疾患に関連する１若しくは複数の症状の治療又は予防の方法において使用するための、リソソームエキソサイトーシス活性を低下させることができる化合物。
【請求項２】
前記化合物が、対象におけるリソソームシアリダーゼ活性を増加させることにより前記リソソームエキソサイトーシス活性を低下させる、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項３】
前記化合物が、保護蛋白質／カテプシンＡ（PPCA）又はその活性変異体若しくは断片を含んでなる、請求項１又は２に記載の使用のための化合物。
【請求項４】
前記PPCAが、配列番号４に対して少なくとも85％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項３に記載の使用のための化合物。
【請求項５】
前記化合物が、ノイラミニダーゼ１（neuraminidase 1；NEU 1）、又はその活性変異体若しくは断片である、請求項１又は２に記載の使用のための化合物。
【請求項６】
前記NEU 1が、配列番号２に対して少なくとも85％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項５に記載の使用のための化合物。
【請求項７】
前記対象が哺乳類である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項８】
前記対象がヒトである、請求項７に記載の使用んための化合物。
【請求項９】
前記神経変性疾患がアルツハイマー病である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項１０】
前記アルツハイマー病に関連する症状が、記憶、判断、視空間能力（visuospatial avility）、言語機能、及び挙動の継続又は悪化の１又は複数を含む、請求項９に記載の使用のための化合物。
【請求項１１】
前記化合物が前記対象に、アルツハイマー病を治療するための１複数の追加の薬物と一緒に又は逐次的に投与される、請求項１〜10のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項１２】
アルツハイマー病を治療するための前記の追加の薬物が、ドメペジル（domepezil）、ガランタミン（galantamine）、メマンチン（memantine）、リバスチグミン（rivastigmine）又はタクリン（tacrine）である、請求項11に記載の使用のための化合物。
【請求項１３】
アルツハイマー病に関連する認知症の治療又は予防において使用するための、PPCA又はその活性変異体もしくは断片、NEU 1又はその活性変異体若しくは断片、或いはPPCAとNEU 1との組み合わせ。