(57)【要約】  【課題】抗酸化効果を得られる新規手段を提供すること。  【解決手段】ヨモギエキスを含有する抗酸化組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヨモギエキスを乾燥質量換算で０．０５〜０．５質量％含有する抗酸化組成物。
【請求項２】
外用組成物である、請求項１に記載の抗酸化組成物。
【請求項３】
肌用抗酸化組成物である、請求項１又は２に記載の抗酸化組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗酸化組成物等に関する。
【背景技術】
【０００２】
キノンは高反応分子であり、容易に１電子あるいは２電子還元を受ける。キノンやその誘導体の２電子還元は、キノン酸化還元酵素ＮＱＯ１（ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：ｑｕｉｎｏｎｅ  ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ  １、別名：ＤＴ−ｄｉａｐｈｏｒａｓｅ）で触媒され、キノン類に基づくフリーラジカルによる毒性に対して、この２電子還元で細胞保護作用を誘導する。このため、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈキノン還元酵素（ＮＱＯ１）は、抗酸化タンパク質として知られている。
【０００３】
例えば、ＮＱＯ１の効果として、ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  Ｓ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ、ＵＤＰ−ｇｌｕｃｕｒｏｎｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ、ｅｐｏｘｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ、γ−ｇｌｕｔａｍｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅなどの抗酸化／解毒関連遺伝子と協調的に発現して、フリーラジカル損傷、酸化ストレスなどに対して細胞を保護すること、膜結合型ｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ｑを還元型に維持し、膜脂質の過酸化を阻害することが知られている（特許文献１）。
【０００４】
また、ＮＱＯ１の発現には転写因子Ｎｒｆ２が関与しており、ＮＱＯ１遺伝子上流に位置するＡＲＥ（Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔ）にＮｒｆ２が結合することによってＮＱＯ１の発現が誘導される。一般にＮｒｆ２は抗酸化・解毒関連酵素の遺伝子を誘導することが知られているが、老齢ラットの核内におけるＮｒｆ２量は低下しており、その結果としてｇｃｌ（γ−ｇｌｕｔａｍｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｌｉｇａｓｅ）産生量が減少するという報告があり、これらの両報告から、ＮＱＯ１の産生量は老化（加齢）に伴って低下する可能性が考えられる。従って、ＮＱＯ１の発現を増強する素材は、老化に伴うＮＱＯ１量低下をサポートすることに有用であり、アンチエージング／デトックス効果も期待できる（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−２６０７４３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、抗酸化効果を得られる新規手段を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、ヨモギエキスがＮＱＯ１遺伝子の発現を亢進することを見出し、さらに改良を重ねて本発明を完成させるに至った。
【０００８】
本発明は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
ヨモギエキスを乾燥質量換算で０．０５〜０．５質量％含有する抗酸化組成物。
項２．
外用組成物である、項１に記載の抗酸化組成物。
項３．
肌用抗酸化組成物である、項１又は２に記載の抗酸化組成物。
項Ａ．
ヨモギエキスを乾燥質量換算で０．０５〜０．５質量％含有するＮＱＯ１遺伝子発現亢進用組成物。
項Ｂ．
外用組成物である、項Ａに記載の組成物。
項Ｃ．
肌のＮＱＯ１遺伝子発現亢進用組成物である、項Ａ又はＢに記載の組成物。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の抗酸化組成物により、ＮＱＯ１遺伝子の発現が亢進され、体内での抗酸化効果を得ることができる。特に、肌荒れや皮膚炎、紫外線による光老化など、酸化により肌で生じる各症状に好ましく用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ヨモギエキスのＮＱＯ１遺伝子発現亢進効果をＲＴ−ＰＣＲにより検討した結果を示す。
【図２】ヨモギエキスのＦＬＧ遺伝子発現亢進効果をＲＴ−ＰＣＲにより検討した結果を示す。
【図３】ヨモギエキスのＬＯＲ遺伝子発現亢進効果をＲＴ−ＰＣＲにより検討した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明の各実施形態について、さらに詳細に説明する。
【００１２】
本発明に包含される抗酸化組成物は、ヨモギエキスを含有する。
【００１３】
本発明に用いるヨモギエキスは、キク科ヨモギ属の多年草であるヨモギの抽出物を指す。具体的には、ヨモギ(Artemisia  vulgaris L. もしくはArtemisia princeps)、ヤマヨモギ (Artemisia  montana)、オトコヨモギ(Artemisia  japonica Thun.)、シロヨモギ(Artemisia  stelleriana)、イヌヨモギ (Artemisia  keiskeana)、ヒメヨモギ(Artemisia  lavandulaefolia)、ヒトツバヨモギ(Artemisia-monophylla)、ミヤマオトコヨモギ(Artemisia  pedunculosa)、タカネヨモギ(Artemisia  sinanensis)、ヨモギナ(Artemisia  lactiflora)、ニガヨモギ(Artemisia  absinthium L.)、カワラニンジン(Artemisia  api-acea)、カワラヨモギ(Artemisia  capillaris Thunb.)、クソニンジン(Artemisia  annua L.)およびハマヨモギ(Artemisia  hukudo Makino)等が例示される。
【００１４】
ヨモギエキスの抽出溶媒は、水および／または水性溶媒を用いることが好ましい。水性溶媒としては、例えば、エチルアルコール、プロピレングリコール、１、３―ブチレングリコール、イソプレングリコール、ブチルアルコール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン、エチレングリコール、ポリエチレングリコールが挙げられる。このうち、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールが好ましい。抽出溶媒としては、水が好ましいが、抽出液の防腐性を向上させるため、水と水性溶媒の混合溶媒を使用することもできる。混合溶媒を用いる場合は、混合溶媒中の水性有機溶媒の濃度は、５％(v／v)以上でかつ５０％(v／v)以下が好ましく、５％(v／v)以上でかつ３０％(v／v)以下がより好ましく、１０％(v／v)以上でかつ３０％(v／v)以下がさらに好ましい。
【００１５】
抽出に用いるヨモギは、通常、全草又は地上部を用いる。収穫後、直ちに抽出に供しても良いが、通常、乾燥させた後に供することが好ましい。また、ヨモギの乾燥方法としては、自然乾燥、天日乾燥、熱風乾燥など手段は問わない。さらに、抽出効率を高めるため、抽出に供する前に、植物体を切断若しくは破砕処理することが好ましい。なお、ヨモギは単独の植物種のみを用いても良いし、複数の植物種を混合して用いても良い。
【００１６】
抽出は、通常行われる方法を用いることができる。抽出回数は１回若しくは数回に分けて行なうことができるが、２〜３回繰返して抽出することが好ましい。数回繰返す場合は、各々の抽出液は合一して用いることもできる。１回の抽出に使用する抽出溶媒の量は、「抽出時にヨモギの全てが浸漬可能な量」より多いことが好ましく、溶質濃度を高くするため、可能な限り少ない量に設定することが好ましい。よって、「抽出時にヨモギの全てが浸漬可能な量」より多く且つできるだけ少量が好ましい。例えば、抽出時に攪拌などの機械力を与えない場合は、被抽出物が全て浸漬する程度の量でも十分であるが、攪拌しながら抽出する場合は、（被抽出物の破砕等の処理の有無や破砕の程度によっても異なるが、）被抽出物の２〜５倍容量の溶媒を使用することが好ましい。
【００１７】
ヨモギエキスとしては、植物体から抽出したもの（あるいはそれを乾燥したもの）をそのまま使用することもできるが、ヨモギ抽出物にはアレルギーを引き起こす成分が含まれる恐れがあるため、精製処理を行うことが好ましい。また、ヨモギの抽出物には、抗炎症、抗かゆみ作用を有する多糖類が含まれることも知られている。これらの多糖類を高濃度で得る目的で精製を行うことも好ましい。特に、ヨモギ水抽出液（あるいはその濃縮液）をエタノールもしくはエタノールと水の混合溶液を加えて不溶部を回収して用いることが好ましい。つまり、ヨモギ水抽出物のエタノール不溶部を用いることが好ましい。精製法としては、より具体的には、例えば、ヨモギ抽出液を減圧濃縮した濃縮液もしくは乾燥物（好ましくは噴霧乾燥物）に、エタノールもしくはエタノールと水の混合溶液を添加して沈澱を生じさせ、これを濾別することで沈澱精製物を得る方法などが挙げられる。更に、前記で得られた沈殿精製物を水に再溶解し、透析処理、濃縮処理などを行って、特定の分子量を有する多糖類を多く含有する精製ヨモギ抽出物としても良い。ヨモギエキスは、例えば、溶液、軟ペースト、乾燥物（特に粉末、顆粒など）等の形態として得られうる。好ましくは、乾燥物である。
【００１８】
本発明の抗酸化組成物には、上記の成分に加え必要に応じて、本発明の効果を損なわない範囲内で通常化粧品や医薬部外品に用いられる成分を適宜配合することができる。例えば、界面活性剤や高分子化合物、油脂類、アルコール類、保湿剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、防腐剤、キレート剤、アミノ酸類、糖類、ビタミン類、動植物抽出物、着色剤、無機粉末および有機粉末などの粉末剤などの成分を用途に応じ適宜配合することができる。以下に配合可能な成分の具体的な例を列挙する。本発明の抗酸化組成物は、化粧品組成物や医薬部外品組成物、医薬組成物等として好ましく用いることができる。また、特に外用組成物として、好ましく用いることができる。
【００１９】
界面活性剤としては、特に限定されるものではないが、アニオン界面活性剤；カチオン界面活性剤；イミダゾリン系両性界面活性剤、ベタイン系界面活性剤などの両性界面活性剤；ソルビタン系界面活性剤、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アルキルグリコシド、ツィーン系界面活性剤、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンプロピレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油誘導体、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、プルロニック型界面活性剤、アルカノールアミドなどのノニオン界面活性剤が挙げられる。
【００２０】
高分子化合物としては、特に限定されるものではないが、平均分子量が数百〜２万程度のポリエチレングリコール；セルロース系高分子；アルギン酸系高分子；澱粉系高分子；アクリル系高分子；ビニル系高分子などの非天然系高分子や、カラギーナン、ペクチン、カンテン、澱粉、アラビアガム、グアーガム、アルゲコロイドなどの植物系高分子、コラーゲン及びその誘導体、カゼイン、ゼラチンなどの動物系高分子、キサンタンガム、ジェランガムなどの微生物系高分子などの天然系高分子などが挙げられる。
【００２１】
油脂類としては、特に限定されるものではないが、植物油；動物油；流動パラフィン、スクワラン、ワセリンなどの炭化水素油；鎖状ポリシロキサン、環状ポリシロキサン、メチルトリメチコン、シリコーン樹脂、変性ポリシロキサンなどのシリコーン；ラウリン酸、ステアリン酸、オレイン酸などの高級脂肪酸；ミツロウ、ラノリン及びその誘導体などのロウ類；モノアルキル脂肪酸エステル類；多価アルコール脂肪酸エステル類；硬化油などが挙げられる。
【００２２】
アルコール類としては、エチルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコール；ラウリルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、バチルアルコールなどの高級アルコール；エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール；ジプロピレングリコール、ジグリセリン、ポリグリセリンなどの多価アルコール重合体；ソルビトール、マルチトール、マンニトール、エリトリトールなどの糖アルコール；ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロールなどのその他のアルコール、などが挙げられる。
【００２３】
保湿剤としては、低分子量のポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸塩、コラーゲン類、植物抽出物等が挙げられる。
【００２４】
本発明の抗酸化組成物の剤型は任意であり、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水−油二層系、水−油−粉末三層系、ローション、ジェル、ムースなどの剤型を取ることが出来る。また、本発明を外用組成物に使用した場合は、例えば、化粧水、乳液、クリーム、美容液、メイクアップベースローション、メイクアップベースクリーム、リキッドファンデーション、日焼け止めなどとして使用できる。このような剤型には、常法により調製することができる。
【００２５】
本発明に係る抗酸化組成物は、ヨモギエキスを含有することにより、ＮＱＯ１遺伝子の発現を亢進させることができ、ひいては抗酸化効果を奏する。
【００２６】
当該組成物におけるヨモギエキスの含有量は、０．０５〜０．５質量％であることが好ましく、０．０５より大きく０．４質量％以下であることがより好ましく、０．０６〜０．３質量％であることがさらに好ましく、０．０７〜０．２質量％であることがよりさらに好ましい。なお、当該含有量は、ヨモギエキスが乾燥した際の質量と組成物全体の質量を基にした値である。言い換えれば、ヨモギエキス乾燥質量換算の値である。
【００２７】
なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。
【実施例】
【００２８】
以下、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の例に限定されるものではない。なお、以下特に断りのない限り「％」は「質量％」を示す。但し、ＣＯ２５％との記載の％はモル濃度を示す。
【００２９】
ヨモギエキス
ヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ  Ｌ．）乾燥物３００ｋｇに１０倍量の水を加え加熱抽出した。この抽出を２回繰り返し、抽出液を濾過して合一し、減圧下、溶媒を留去して濃縮した後、噴霧乾燥した。この抽出乾燥物にエタノールを撹拌しながら加え、析出する沈澱を濾取した。沈澱物を合し、水に溶解させた後、噴霧乾燥させ褐色粉末状物質を得た（収率約１３％）。以下、当該褐色粉末状物質をヨモギエキスとして検討に用いた。
【００３０】
実施例：ＮＱＯ１（ＮＡＤ（Ｐ）Ｈキノン還元酵素）遺伝子の発現の検討
表皮ケラチノサイトを用いて、ＲＴ−ＰＣＲにより、ＮＱＯ１遺伝子の発現について検討した。具体的には、次のようにして行った。
【００３１】
２４穴ウェルプレートにヒト表皮ケラチノサイトを播種し、コンフルエントになるまで３７℃、ＣＯ２５％インキュベーター内で２日間培養した。２日後、増殖用培地を除去してＰＢＳで洗浄し、乾燥物として０．０１％又は０．１％のヨモギエキスを含む評価用培地に交換した。ヨモギエキスを含まない培地も用意し、当該培地を用いたものをコントロールとした。２４時間後、ヒト表皮ケラチノサイトを回収してＲＮＡを抽出し、これを用いてＲＴ−ＰＣＲにより遺伝子発現量の評価を行った。なお、ヒト表皮ケラチノサイトからのＲＮＡ抽出は、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（キアゲン）を用いて行った。また、トータルＲＮＡ濃度は、ＮＡＮＯＤＲＯＰ  ２０００  Ｓｐｅｃｔｒｉｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）を用いて測定した。
【００３２】
ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ  ＲＴ  ｒｅａｇｅｎｔ  Ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ）を用いて、約５００ｎｇのＴｏｔａｌ  ＲＮＡから鋳型ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を作成した。そして、ＳＹＢＲ  Ｐｒｉ  ｍｉｘ  Ｅｘ  ＴａｑＴＭ  ＩＩ（Ｔａｋａｒａ）  １０μｌにプライマー（２００ｎＭ）とＲＮａｓｅ  ｆｒｅｅ水を加え、１８μｌの混合液を調製し、２μｌのｃＤＮＡを加えることにより、Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ測定サンプルを各プライマーごとに調製した。内在性コントロールとしてはβ−ａｃｔｉｎを用いた。そして、ＶｉｉＡ７  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｆａｓｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）による相対定量法で、ターゲット遺伝子（ＮＱＯ１遺伝子）の発現定量を行なった。コントロールにおける遺伝子発現を１とし、それに対する遺伝子発現の割合を算出した。結果を図１に示す。なお、ヒト表皮ケラチノサイトにおいてヨモギエキス０．３％以下では細胞毒性がないことを確認しており、本評価においてはヨモギエキスによる毒性はないものと考えられる。
【００３３】
参考例：ＦＬＧ（フィラグリン）遺伝子及びＬＯＲ（ロリクリン）遺伝子の発現の検討
皮膚バリア機能との関連することが知られるＦＬＧ（フィラグリン）遺伝子及びＬＯＲ（ロリクリン）遺伝子についても、上記と同様にして発現を検討した。但し、当該検討では、乾燥物として０．０１％、０．０３％、０．０５％、０．０７％、又は０．１％のヨモギエキスを含む評価用培地を使用した。結果を図２（ＦＬＧ遺伝子）及び図３（ＬＯＲ遺伝子）に示す。
【００３４】
図１〜３から分かるように、ヨモギエキスを用いて各遺伝子の発現を亢進させることができるが、遺伝子の種類によって亢進することができるヨモギエキス濃度は変化し得、特にＮＱＯ１遺伝子は組成物中の濃度が０．０１質量％のときには発現亢進は起こらず、０．１質量％のときに発現亢進が起こることが分かった。このことから、ＮＱＯ１遺伝子発現を亢進させるヨモギエキス濃度は０．０１質量％よりも大きいことが分かった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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