【事件の表示】
　特許第２９７７６１６号「免疫化学的検査装置」の請求項１ないし２１に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第２９７７６１６号の請求項１ないし２１に係る特許を取り消す。
【理　由】
Ｉ．手続の経緯
　本件特許第２,９７７,６１６号の請求項１ないし２１に係る発明は、平成２年（１９９０年）１２月１８日（パリ条約による優先権主張、１９８９年１２月１８日、米国）に出願され、平成１１年（１９９９年）９月１０日に設定登録された。
　その後、申立人山岡誠司より特許異議の申立てがあり、平成１２年８月１７日付けで取消理由通知がなされ、その指定期間内である平成１３年３月５日に意見書が提出された後、平成１３年６月１８日付けで再度取消理由通知がなされ、その指定期間内である平成１３年１２月２７日に訂正請求がなされるとともに意見書が提出されたものである。
　
II．訂正請求の可否について
　平成１３年１２月２７日付け訂正請求書による訂正請求（以下、「本件訂正請求」という）の可否について、以下検討する。
１．訂正事項
　本件訂正請求は、つぎの訂正事項からなる。
＜訂正事項ａ＞
　　特許請求の範囲の請求項９の「請求項６記載」を、「請求項５記載」と訂正する。
＜訂正事項ｂ＞
　　特許請求の範囲の請求項２１の「請求項１記載」を、「請求項１５記載」と訂正する。
　
２．訂正事項の検討
  請求項９は、標識を間接標識に限定する請求項であるが、請求項６は標識を直接標識に限定する請求項であるため、請求項９において引用される請求項が請求項６であると意味が不明りょうであったものを、訂正事項ａは、試薬が標識を担持することを限定する請求項５を引用する記載に訂正して明りょうなものとするものであり、標識が直接標識または間接標識のいずれであってもよいことは、特許明細書の【００４９】に記載されている。
  また、請求項２１は、第２フィルター素子の記載を含む請求項であるので、請求項２１において引用される請求項が第２フィルター素子の記載を含まない請求項１をであると意味が不明りょうであったものを、訂正事項ｂは、第２フィルター素子の記載を含む請求項１５を引用する記載に訂正して明りょうなものとするものであり、訂正後の請求項２１に記載された検査装置は、特許明細書の【００３１】及び第６図に記載されている。
　そうすると、訂正事項ａ、ｂは、本件明細書又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であって、明りょうでない記載の釈明を目的とするものである。そして、訂正事項ａ、ｂは、実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものでもない。
　
３．訂正事項の検討結果
　以上のとおりであるから、本件訂正請求は、特許法等の一部を改正する法律（平成６年法律第１１６号）附則第６条第１項の規定によりなお従前の例によるとされる特許法第１２０条の４第３項において準用する平成６年法律第１１６号による改正前の特許法第１２６条第１項ただし書き及び第２項の規定に適合するので、当該訂正を認める。
　
III．特許異議の申立てについての判断
１．本件発明１〜２１
  上記II．のように本件訂正請求は認められるから、本件特許の請求項１ないし２１に係る発明は、上記訂正明細書の特許請求の範囲の請求項１ないし２１に記載された次のとおりのものである（以下、それぞれ、「本件発明１」、「本件発明２」、・・・「本件発明２１」という。）。
「【請求項１】基板部材と該基板部材上に配置された配列とからなり；
　該配列が、
　　(ｉ)検査すべき液体試料を受け入れかつ収容するのに充分な多孔度および容量を有する貯蔵パッドと、
　　(ii)該貯蔵パッドに対して遠位的に配置され、貯蔵パッド中に受け入れた試料の実質的な量を吸収するのに充分な多孔度および容量を有する吸上膜と、
　　(iii)該吸上膜と貯蔵パッドの間で、これらと接して配置された少なくとも１つのフィルター域であって、(ａ)貯蔵パッドからフィルター域への液体試料の通過を計量するために該貯蔵パッドの容量に対して充分に小さいパッドの表面に接して横断しており、(ｂ)貯蔵パッドから吸上膜まで試料中の特異的リガンド−レセプター複合体を通過させるが、試料中に含まれる大きい成分の通過を妨害するように作動するフィルター域と、
からなり、
　該吸上膜の少なくとも１つの帯域に配置され、検査指標を規定し、試料中に含まれる特異的リガンド−レセプター複合体と結合して検査指標を形成することができる少なくとも１つの固定化物質を有する
ことを特徴とする免疫化学的検査装置。
　【請求項２】基板部材がプラスチックまたはガラスである請求項１記載の検査装置。
　【請求項３】貯蔵パッドが基板部材を越えて広がっている請求項１記載の検査装置。
　【請求項４】特異的リガンド−レセプター複合体を生成することのできる少なくとも１つの試薬がフィルター域の少なくとも一部分において全体にわたって均等に含浸されている請求項１記載の検査装置。
　【請求項５】試薬が標識を担持する請求項４記載の検査装置。
　【請求項６】標識が直接標識である請求項５記載の検査装置。
　【請求項７】標識が金属ゾル、非金属ゾル、染料ゾル、色指示薬または粒状ラテックスである請求項６記載の検査装置。
　【請求項８】標識が炭素ゾルである請求項７記載の検査装置。
　【請求項９】標識が間接標識である請求項５記載の検査装置。
　【請求項１０】試薬および固定化物質がリガンド結合分子である請求項４記載の検査装置。
　【請求項１１】試薬および固定化物質のうち少なくとも１つがモノクローナル抗体である請求項４記載の検査装置。
　【請求項１２】試薬および固定化物質のうち少なくとも１つがポリクローナル抗体である請求項４記載の検査装置。
　【請求項１３】固定化物質がリガンドである請求項１記載の検査装置。
　【請求項１４】固定化物質が抗原またはハプテンである請求項１３記載の検査装置。
　【請求項１５】フィルター域が、
　貯蔵パッドから第１フィルター域への液体試料の通過を計量するために貯蔵パッドに隣接し、かつ貯蔵パッドの容量に対して充分に小さいパッドの表面に接して横切る基板部材上に配置された少なくとも１つの第１フィルター素子と；
　各第１フィルター素子に隣接し、貯蔵パッドと遠位的に基板部材上に配置された第２フィルターであって、試料中の特異的リガンド−レセプター複合体を通過させるが、試料中に含有されている大きい成分の通過を妨害するように作動する第２フィルター素子と
からなる請求項１記載の検査装置。
　【請求項１６】特異的リガンド−レセプター複合体を生成する少なくとも１つの試薬が第１フィルター素子の少なくとも一部分において全体にわたって均等に含浸されている請求項１５記載の検査装置。
　【請求項１７】パッド、第１フィルター素子、第２フィルター素子、および吸上膜が、各々、微孔性膜物質からなる請求項１６記載の検査装置。
　【請求項１８】微孔性膜がナイロン、セルロース物質、ポリスルホン、ポリ二フッ化ビニリデン、またはポリエステルからなる請求項１７記載の検査装置。
　【請求項１９】特異的リガンド−レセプター複合体の生成または結合を増強するための添加剤が第１フィルター素子中に存在している請求項１記載の検査
装置。
　【請求項２０】該装置を囲んでいる水分不透過性容器を有し、
　該容器は、その中に規定された開口を有し、開口周囲の上部表面が湾曲し、かつ下方に広がり、貯蔵パッドの一部分で終わり、そこで堅く嵌合しているカップ様容器を形成しており、該開口は貯蔵パッドにおける液体試料の通過を受け入れかつ計量するように作動し、さらに該容器は検査指標域の上方に配置された該帯域を肉眼で検査できるようにする手段を有している請求項１記載の検査装置。
　【請求項２１】該装置を囲んでいる水分不透過性容器を含み、
　該容器は、その中に規定された第１の開口を有し、その開口周囲の上部表面が湾曲し、かつ下方に広がって、貯蔵パッドの一部分で終わり、そこで堅く嵌合しているカップ様容器を形成しており、該開口は貯蔵パッドにおける液体試料の通過を受け入れかつ計量し、
　また該容器は第２フィルター素子のすぐ上方に規定される第２の開口を有し、該開口は第２フィルター素子に試料を直接適用し、さらに該容器は検査指標域の上方に配置された該帯域を肉眼で検査するための手段を有する請求項１５記載の検査装置。」
　
２．引用刊行物の記載事項
　平成１２年８月１７日付けで通知した取消理由に引用した刊行物は、次のとおりであって、各引用刊行物には下記の事項が記載されている。
     刊行物１： 特開昭６１−１４５４５９号公報
     刊行物２：　特開平１−２４４３７０号公報
     刊行物３：　特表平１−５０２０５４号公報
     刊行物４：　特表平１−５０３１７４号公報
     刊行物５：　特開昭６４−３２１６９号公報
　
（１）刊行物１
　刊行物１には、下記の事項が記載されている。
（１ａ）シート状分析デバイス（特許請求の範囲第１項、なお、読み易さのために改行してある部分がある。）
「生物学的親和性結合特性を有する被分析物として液体中の成分の検出又は測定をするための分析デバイスであって、
　相前後して配置されかつそれらの末端を介して相互に吸着的接触状態にある数個のシート状ゾーンよりなり、
　デバイスの一方の末端に移動相適用ゾーン（ＭＰＡＺ）、
　そしてもう一方の末端に吸着ゾーン（ＡＺ）、
　ならびにその間に存在する他の吸着ゾーン（そこでは被分析物と生物学的親和性を有する相互作用をなしうる反応成分が、相互に空間的に分離されて存在するように配置されている）を含有しており、
　その際
　ａ）反応成分が、共有結合または吸着によるか、またはＭＰＡＺおよびＡＺ間およびＡＺと接触して存在するゾーン中の生物学的親和性を有する相互作用により固相ゾーン（ＳＰＺ）に固定されるか、またはデバイスにおいて生じる反応において共有結合または吸着によるか、または生物学的親和性を有する相互作用を介してＳＰＺに固定された他の反応体に結合されており、
　ｂ）更なる標識反応成分（接合体）がＭＰＡＺとＳＰＺとの間に未結合状態で位置し、そして
　ｃ）被分析物適用ゾーンがＭＰＡＺであるかまたはＭＰＡＺとＡＺの間のゾーンである
ようにしてなる、分析デバイス。」
（１ｂ）計量要素の機能（特許請求の範囲第３項）
「ＭＰＡＺが計量要素の機能を有しそして後続ゾーンに、毛細管力により制御される液体がAZの端部に達するのに少なくとも充分な液体を放出する特許請求の範囲第１項記載のデバイス。」
（１ｃ）直接に検出される標識（特許請求の範囲第１１項）
「標識剤が直接に検出または測定されるかまたはデバイス中に存在する試薬の添加後に検出または測定される蛍光団であるか、または直接にまたは更なる試薬の添加後に検出または測定される蛍光団が標識剤からデバイス中に存在する試薬の添加により形成される特許請求の範囲第８項記載の方法。」
（１ｄ）１枚または数枚の帯状片と固体支持体（４頁左下欄２行〜１７行）
「シート状診断デバイスは、水性溶液吸収能を有する材料の帯状片１枚または相前後して配置する数枚よりなる。それら帯状片は固体支持体に固定される。それらは特定の診断剤に必要な試薬成分を含有し、また従って作用セクターまたは作用領域となる。帯状片形状デバイスの一方の端に位置する作用セクター（溶媒適用ゾーン）は被分析物溶液と、後者に浸漬することにより、あるいは後者を塗布することにより接触させる。その溶液はすべての作用領域を通過移行する。帯状片を構成する支持体材料の吸収能により生じる液体の流れは、帯状片形状デバイスの他方の端で停止する。被分析物はまた、デバイスの中部領域に適用することができ、ついでデバイスの１端から他端への液体の流れを誘起させることができる。」
（１ｅ）ろ過、吸着および試薬混合機能（４頁右下欄１行〜５頁左上欄２行、なお簡略体漢字を含む語を「ろ過」と書き換えてある。）
「試料をデバイスのクロマトグラフイ・セクションに直接適用する必要はない。それはまた、デバイス上に位置しそして試料から血液細胞を除去する機能を有する吸収性材料に適用することもできる。試料はろ過をうけた後デバイスに達する。このろ過過程で試薬の添加を、後者を乾燥状態でフイルタ中に存在する成分から試薬を溶出することにより、試薬の添加を同時に行うことができる。かかる成分により干渉因子を溶液から除去することができる。すなわち、例えは、オキシダーゼやベルオキシダーゼを標識剤として用いる場合に干渉する、検体中に存在するアスコルビン酸は適当な酸化剤により無害化することができる。更にまた、フイルタは吸着により検体から干渉因子を除去する吸着剤の機能も有しうる。この試験のために検体を調整するための、ろ過、吸着および試薬混合機能は、移動相適用ゾーンまたはその後に位置するゾーンによって遂行させることもできる。」
（１ｆ）溶媒分布、計量要素の機能（５頁左上欄３行〜右上欄３行）
「個々の作用領域における溶媒分布は使用材料の吸着能および寸法に依存する。
　溶媒適用ゾーンは計量要素の機能を有しうる（西独特許第３，０４３，６０８号および・・・号明細書参照）。それは、試験要素の機能に必要とされる様々な試薬を乾燥状態で含有することができる。溶媒適用ゾーンは試験要素の一方の端に位置し、そして単に溶液、例えば試料の溶夜中に浸漬するかまたは水道水で短時間フラッシュするだけで所定量の液体で完全に飽和するところとなり、次いで後続のゾーンへよりゆっくりとそして制御された形でその液体を放出する一片の布帛紙であってもよい。溶媒適用ゾーンは、デバイスの他方の端、すなわち吸収ゾーンの終端まで移動するのに充分な液体を吸収するような寸法を有する。」
（１ｇ）反応成分含有ゾーン（５頁右上欄４行〜１１行）
「溶媒適用ゾーンと吸収ゾーンとの間には、試験の実施のための反応成分が含まれ、そして試験実施のすべての反応段階が行われる作用領域が配設される。試験実施のための反応成分の一部を試料適用ゾーンに収納しておくこともできる。吸収ゾーンは、過剰の、および自由に動きうる試薬成分および信号発生系の反応生成物を吸収する機能を有する。」
（１ｈ）各種作用領域の構成成分（５頁右上欄１２行〜左下欄６行）
「各種作用領域の構成成分としての１枚または２枚以上の帯状片の形の吸収性支持体は、選択に応じて、セルロース、・・・天然物から構成されていてもよい。異なる材料から構成される帯状片の組合せを用いることもできる。適当な吸収性材料は個々の診断デバイスに対して設定された要件に基づいて選択される。」　
（１ｊ）免疫学的反応成分（５頁左下欄７行〜右下欄１１行）
「免疫学的結合特性を有する反応成分、例えば抗原、ハプテンまたは抗体はデバイスの様々な様に取り込むことができる。・・・もう１つの結合点に対する抗体であることができる。
　生物学的親和性を有する１つの結合パートナーは反応の進行過程で結合するようになるか、または、被分析物の検出のために設計された作用領域（固相ゾーン）の支持体材料にすでに結合している。それは固有結合パートナーとも呼ばれる。他の結合パートナー（１種または複数種）は支持体材料中に存在する。それらには標識を施す。」
（１ｋ）複合体の通過（７頁右下欄１８行〜８頁左上欄１４行）
「特異性の異なる２つの結合点が被分析物中に存在する場合には、サンドイッチ式免疫検定の原理に基づく、診断剤のいくつかの態様が考えられる。これらのうち２例について以下説明する、
　固相結合パートナーを固相作用領域の支持材料に共有結合によりまたは吸着により結合する場合、被結合と標識結合パートナーとで形成される二成分複合体は溶媒と共に固相作用領域中に移行しそしてそこで固相結合パートナーと反応して固相に結合した三成分複合体と形成するが、これは最初の結合パートナーの標識を通じて検出することができる。・・・
　固相結合パートナーが診断剤中で未結合の形で存在していて溶媒により移動性となる場合は、生物学的親和性を有する分析物の２反応成分は、被分析物が同時にあるいは順次に両反応成分と反応してそして生成三成分複合体が次に固相作用領域（そこでは前述の如く、それは被分析物のそれから独立した生物学的親和性を有する第２の系を介して固相に結合されるようになる）に移行するように作用領域に収納される。」
（１ｍ）総括表Ｉ、II（８〜９頁）
　「移動相の形の試料または予め希釈した試料を用いる試験アセンブリの例」と題する総括表Ｉにおいて、試験アセンブリの領域Ｉは「被分析物適用ゾーン」であり、「検出ゾーン」である領域Vは、「固相ゾーン（ＳＰＺ）」であり、「吸収ゾーン」である領域VIは「吸着ゾーン（ＡＺ）」であることが図示されている。
　被分析物は「小丸」で示され、試料は領域Ｉに適用されることが、図示されている。
　総括表Ｉの５段目には、領域ＩにＧｌｃ、ＴＭＢが、領域IIにＰＯＤ標識接合体が、領域IIIには抗体１が、領域IVにはＧＯＤが含浸されていることが図示され、一方、領域Vには抗体２が固定化されていることが図示されている。検出領域Ｖでは、ＰＯＤ標識接合体と抗体１との免疫複合体が、固相化抗体２に結合した形で検出されることが図示されている。
　総括表Ｉの８段目の領域Vには、被検体成分を固相試薬として用いることも図示されている。
　また、「別個の移動相を有する試験アセンブリの例」と題する総括表IIにおいて、試料は領域IIIに適用されることが、図示されている。
　また、試料適用領域IIIから抗体を被検体とする試料を適用し、抗体検出を行うことが該表の４段目〜５段目図示されており、該表の３段目、４段目の領域Vには、被検体成分を固相試薬として用いることが図示されている。
（１ｎ）実施例（９頁右下欄１１行〜１１頁右上欄末行）
「実施例
　組込まれた色素原基質系によるＨＣＧ検出のための完全に一体化された酵素−免疫化学的デバイス。
１．１．　試薬
　１．１．１．　　ＨＣＧ−ペルオキシダーゼ接合体
　　・・・記載された方法でＧＭＢＳ−ＨＣＧとイミノチオラン−ペルオキシダーゼから接合体を調製した。・・・
１．１．２　抗体
　ＨＣＧに対する抗体を、家兎を免疫することにより得、そして家兎−ＩｇＧに対する抗体をヤギを免疫することにより得た。ＩｇＧ画分・・・免疫吸着により更に精製した。使用した方法は、・・・に記載されている。抗−ＨＣＧ抗体は最終的に前述の接合体希釈緩衝液で希釈した。
　・・・・
１．２．デバイスの調製
　シート状作用領域を次のように調製した：
　移動相適用ゾーンはKalle社製スポンジ布帛を２０×６mmの寸法に切断することにより調製した。これは乾燥状態で圧縮された再生セルロースの合成スポンジである。それを水１mlあたりグルコース５０mgおよびテトラメチルベンジジン塩酸塩０．７５mgで含浸し、そして空気流中で乾燥した。
　前記接合体、抗−HCG抗体およびグルコースオキシダーゼ（それぞれ２５μl／ml、１００μl／mlおよび０．１mg／ml濃度のもの各５μl）を均一の距離で、４５×５mmMN１番紙（Macherey＆Nagel）片に相前後して適用し、そして風乾した。
　５×５mmの寸法のSchleicher＆Schull ５９７番紙片を常法により、固相ゾーンとしての抗−家兎ＩｇＧ−抗体で被覆した。これは臭化シアンで活性化した紙に抗体を結合させることにより行った（・・・参照）。
　２０×５mmのSchleicher＆Schull２６６８／８番紙片を吸収ゾーンとして用いた。
　それら４つの紙片を相前後して、０．５〜１mmオーバーラップさせながら両側粘着テープ（Beiersdor社製 ”Tesband”）によりプラスチックリボンに固定して幅５mmの試験用帯状片を形成した。
１．３．試験の実施
　各例について試験はインキュベーション媒質中のＨＣＧ希釈液２００μｌを布帛に適用することにより行った。
１．４．結果
　試験要素のクロマト展開および自動的呈色は・・・次の値が得られた。
　・・・
　ここで示された試験用帯状片アセンブリはグルコースオキシターゼと抗−ＨＣＧ抗体が同じゾーンに位置していても達成することができる。それだけ短くした試験用帯状片は約１０分後に結果を与える。」
　
（２）刊行物２
　刊行物２には、毛細作用により試験試料が、セルロース、セルロース誘導体、ニトロセルロース、ガラス繊維等のクロマトグラフ物質の一端から他端へ移動し、クロマトグラフ物質内の捕捉部位に固定化されている捕捉試薬を含み、捕捉部位で検出可能なシグナルが生成される試験液体中の免疫学的な特異的結合ペアの一方を定性あるいは定量できる装置と方法（特許請求の範囲第１，１４，１７項）について、下記の事項が記載されている。
（２ａ） 適用パッド、クロマトグラフ物質（４頁右下欄１６行〜５頁左上欄１２行）
「本発明はアッセイ装置および方法を提供するものである。本発明のアッセイ装置は、液体を移動させることのできるクロマトグラフ物質、および適用パッドを使用するものであり、適用パッドはクロマトグラフ物質への試験試料流を制御し、試験試料を濾過し、アッセイ試薬を混合する。アッセイ試薬は適用パッドおよびクロマトグラフ物質内に取り込まれ、分析対象物が存在する場合に検出可能なシグナルを生成する。クロマトグラフ物質上の試薬含有部位の形態を変えることにより、アッセイ結果を定性的および定量的に示すことが可能となる。本発明のアッセイ装置は、抗原と抗体の相補的結合のような結合アッセイを行うように作製することができる。結合アッセイの結果得られる検出可能なシグナルは、ついで器械を使うかまたは視覚で直接観察することにより検出することができる。」
（２ｂ）特異的結合ペア（５頁右下欄５行〜１４行）
「特異的結合ペアが免疫反応物である場合には、たとえば抗体、抗原、ハプテン、またはそれらの複合体であることができ、抗体を用いた場合には、モノクローナルかまたはポリクロ−ナルの抗体、組換えタンパク質かまたは抗体、それらの断片の混合物、および抗体と他の特異的結合ペアの一方との混合物であり得る。そのような抗体の調整方法および特異的結合ペアの一方として用いることへの適合性については当業者によく知られている。」
（２ｃ）標識（６頁右下欄１０行〜７頁右上欄１４行）
「本明細書にいう「標識」とは、特異的結合成分に付着し視覚または器械的手段により検出可能なシグナルを生成することのできるすべての物質をいう。本発明での使用に適した種々の標識としては、色素原、触媒、蛍光化合物、化学発光化合物、放射性標識 コロイド状金属および非金属粒子を含む直接視覚標識、染料粒子、酵素または基質、または有機ポリマーラテックス粒子、リボソームまたは他のシグナル生成物質を含有する小胞などが挙げられる。
　・・・・
　特に好ましい態様において、視覚的に検出可能で色のついた粒子を指示試薬の標識成分として用いることができ、そうすることにより、さらにシグナル生成試薬を用いる必要もなく試料中の分析対象物の存在または濃度を直接色で読み取ることができる。色のついた・・・開示されている。」
（２ｄ）濾過手段（９頁左上欄６行〜１８行）
「さらに他の好ましい態様において、本発明はさらに濾過手段を加えることにより変更を加えることができる。濾過手段は適用パッドの上部かまたは適用パッドとクロマトグラフ物質との間に置かれた別の物質であることもできるし、また適用パッド自身の物質を濾過能を有するように選択することもできる。濾過手段は、試験試料よりサイズがいくらか大きい粒子を除くのに用いることのでさるあらゆるフィルターまたはトラップ装置を含んでいることができる。たとえば濾過手段は、全血の試料から赤血球を除去するために用い、適用パッドに加えられクロマトグラフ物質に運ばれる液体が血漿になるようにすることができる。」
（２ｅ）適用パッドとクロマトグラフ物質との間（９頁右上欄２行〜１６行）
「本発明のさらに好ましい変更には、適用パッドとクロマトグラフ物質との間、または適用パッドの上に重ねて置かれた多孔質物質の層をさらに使用することが含まれる。そのような追加のパッドまたは層は、適用パッドからクロマトグラブ物質への試験試料の流速をコントロールするための手段として働く。そのような流速の制御は、適用パッド中での試験試料と試薬との反応に一層長いインキュべーション期間が望まれるときに好ましい。または、そのような層はさらにアッセイ試薬を含んでいることができ、該試薬は試験試料を加えるまでは適用パッド試薬から隔離されているのが好ましく、また該層は未反応アッセイ試薬がクロマトグラフ物質の方へ移動するのを防ぐことができる。」
（２ｆ）アッセイ成分（１３頁左上欄２行〜１９行）
「試薬の添加は、アッセイを行っている間に適用パッドかまたはクロマトグラフ物質に直接添加して行う。しかしながら、本発明の好ましい態様には、必要なすべてのアッセイ試薬をアッセイ装置に組み込んで、アッセイを行うのに液体試験試料のみを適用パッドと接触させることだけが必要であるようなものが含まれる。従って、１または２以上のアッセイ試薬を適用パッドかまたはクロマトグラフ物質またはその両方に存在させることができる。
　本発明はまた、結合アッセイを行うためのキットをも提供するものである。たとえば本発明のキットは、上述の試薬を包み込んだアッセイ装置、毛管運搬用溶液および／または試験試料前処理試薬からなることができる。当業者に知られた他のアッセイ成分、たとえばバッフアー、安定剤、洗剤、細菌抑制剤などもアッセイ装置および毛管運搬用溶液中に存在させることもできる。」
（２ｇ）ハウジング（１３頁左上欄２０行〜左下欄２行）
「ハウジング
　本発明は装置の周りに非反応性の囲いを任意に有する。ハウジングは、ある量の試験試料および／または毛管運搬用溶液の添加および含有を容易にするために少なくとも適用パッドを囲んでいることが好ましい（第１図参照）。
　本発明の装置は、部分的にまたは完全に非反応性の囲いで覆われていてよい。クロマトグラフ物質を全部覆う必要はないが、好ましくは添加した試験試料が適用パッド中をまず通過することなくクロマトグラフ物質と接触するのを防ぐために適用パッドの充分な部分を覆うべきである。
　関与する特定のアッセイプロトコールおよび装置構築の方法に依存して、ハウジングは取り外し可能または不可能であり、１または２以上の窓を有し、一般に頑丈で不活性で不浸透性の物質からできているであろう。ハウジングは適用パッドおよびクロマトグラフ物質に対して機械的な保護および支持を与えるが、アッセイを妨害しないであろう。窓のサイズは、不透明な物質でできたハウジングがクロマトグラフ物質のある部分を部分的にまたは完全に覆い隠すことができるように変化させることができる。」
（２ｈ）第１図のアッセイ装置（１３頁左下欄３行〜右下欄４行）
「第１図には、本発明のアッセイ装置１０が近端１１および遠端１２を有するものとして上部非反応性囲い５ａおよび下部非反応性囲い５ｂとともに示されている。上部および下部囲い５ａおよび５ｂは、上述のように適用パッド１およびクロマトグラフ物質２を覆っている。適用パッド１はクロマトグラフ物質２の近端１１に位置している。上部囲い５ａは、少なくとも１個の解放または透明窓４ａを含んでいる。窓４ａは、クロマトグラフ物質２およびその上にシグナル生成システムにより生成したシグナルの観察を可能にしている。上部囲い５ａの遠端１２にある任意の窓４ｂは、試験溶液または他のアッセイ試薬が任意のアッセイ完了領域と接触するときに生成される色の観察を可能にしている。適用ポート３は、試験試料および毛管運搬用溶液の適用パッド１への添加も可能にしている。さらに別のオプションとして、上部囲い５ａは試験試料中の分析対象物の定量を容易にするための検量マーク６を含んでいてよい。捕捉部位７は上述したように別の態様を表しており、クロマトグラブ物質の幅を横切る平行な一連の棒として試薬は分布している。」
（２ｉ）指示試薬（実施例１）（１５頁右上欄２行〜４行）
「ついでコロイド金／マウス抗ｈＣＧ抗体指示試薬（実質的に上記（ａ）に記載の方法に従って調製）（２μｌ）を各ストリップの近端に加え、空気乾燥させた。」
（２ｊ）実施例５、免疫複合体（１８頁左上欄１５行〜右下欄１２行）
　Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の１工程イムノクロマトグラフアッセイを、指示試薬であるセレンコロイド／抗ビオチン抗体結合体を加えて乾燥した適用パッドを、抗ＨＢｓＡｇ抗体をその上に点在させて捕捉部位を生成させたニトロセルロースからなるクロマトグラフ物質の近端上に置き、ビオチン／抗ＨＢｓＡｇ抗体を加えて乾燥させた補助パッドを適用パッドの上に積み重ねたものに、ＨＢｓＡｇ試験試料を補助パッドと接触させて、試験を開始した実施例５において、「　試験試料中にＨＢｓＡｇが存在しているとセレンコロイド／抗ビオチン抗体／ビオチン抗ＨＢｓＡｇ抗体／分析対象物複合体が生成され、ストリップ中を移動した。この複合体は抗ＨＢｓＡｇ抗体捕捉部位に固定化され、該部位において「サンドイッチ」免疫複合体の生成したのが暗いシグナルの出現により検出することができた。」（１８頁左下欄１８行〜右下欄４行）と記載されている。
　
（３）刊行物３の記載事項
　上記刊行物３には、先端に標本を採取するための吸着チップを備えた採取具により採取された細胞などの標本中の、例えばハプテン、抗原等の配位子あるいは抗体などの受容体を測定するために、配位子または受容体の一方を被覆させた多孔質の捕捉フィルターに先立ち、アッセイの邪魔をする異質細胞や破片を除去する「予備フィルター」を積層設置した固相拡散免疫アッセイを行う検査装置が記載されている（第７〜８図に関する記載等）。
　
（４）刊行物４の記載事項　
　　刊行物４には、乾燥多孔質キャリアを中空ケーシングに内蔵している分析試験装置であって、前記多孔質キャリアに液状試験試料を付与できるように多孔質キャリアがケーシング外部と直接的又は間接的に連通しており、該装置がさらに湿潤状態において多孔質キャリア内部で自由に移動し得る、検体に対して特異的結合性の標識付き試薬と、キャリア材料上の検出区域の永久的に固定されて、湿潤状態でも移動しない、同検体に対して特異的結合性の無標識試薬とを含んでおり、装置に付与された液状試料が標識付き試薬を吸収した後に検出区域に浸透するように標識付き試薬と検出区域の位置関係が決定されており、該装置が標識付き試薬が検出区域において結合された程度（結合した場合）を観察できるようにする、ケーシングに開口された窓などの手段を含んでいる装置が記載され（特許請求の範囲第１項、第３、６〜８、１１、１２図等）、そのような装置を使用してサンドイッチ法により直接標識を用い尿中のｈＣＧ等の検査をすることが記載されている（１２頁右上欄〜１５頁左下欄）。
　
（５）刊行物５の記載事項
　刊行物５には、試料中の物質の存在の有無または量を決定する方法であって、該物質およびコロイド粒子標識物質と結合し得る固定化試薬を含む少なくとも１つの反応部位を有するクロマトグラフ媒体に該試料を接触させ、クロマトグラフ媒体上でコロイド粒子標識物質をクロマトグラフ的に移動させることにより、コロイド粒子標識物質を該反応部位にクロマトグラフ的に移動させて結合させて、該反応部位でコロイド粒子標識物質を直接観察するコロイド粒子を用いたイムノクロマトグラフ法が記載されている（特許請求の範囲第１項等）。
　
３．本件発明１についての検討
（１）刊行物１記載の発明との対比
　本件発明１と刊行物１の実施例１に記載された試験用帯状片からなるデバイス（以下、「刊行物１記載デバイス」という。）と対比する。
　後者の「デバイス」は前者の「免疫化学的検査装置」に、後者のデバイスの「プラスチックリボン」は前者の「基板部材」に、それぞれ相当する（前記（１ｄ）、（１ｎ）参照）。
　後者のデバイスのプラスチックリボン上に固定される「４つの紙片」（前記（１ｎ）参照）は、刊行物１記載の発明の「移動相適用ゾーン」、「標識反応成分（接合体）」含有ゾーン、「固相ゾーン」および「吸収ゾーン」として作用するものであり（前記（１ａ）参照）、これらのゾーンの配列は、後者の「該基板部材上に配置された配列」に相当する。
　また、後者のデバイスのスポンジ布帛片からなる「移動相適用ゾーン」は、前者の「(ｉ)検査すべき液体試料を受け入れかつ収容するのに充分な多孔度および容量を有する貯蔵パッド」に相当し（前記（１ｂ）、（１ｄ），（１ｆ）、（１ｎ）参照）、後者のデバイスの「吸収ゾーン」は、その上流側の「固相ゾーン」を液体試料の実質的な量が通過する毛管作用を生じなければならないものである以上、前者の「(ii)該貯蔵パッドに対して遠位的に配置され、貯蔵パッド中に受け入れた試料の実質的な量を吸収するのに充分な多孔度および容量を有する吸上膜」に相当する（前記（１ｎ）参照）。
　後者のデバイスの「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンおよび「固相ゾーン」は、前者の「該吸上膜と貯蔵パッドの間で、これらと接して配置された」中間領域に相当するものであり、後者のデバイスの固相ゾーンに固定された「抗−家兎ＩｇＧ−抗体」（前記（１ｎ）参照）は、「検査指標を規定し、試料中に含まれる特異的リガンド−レセプター複合体と結合して検査指標を形成することができる少なくとも１つの固定化物質」に相当する。
　そして、後者のデバイスの「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンは、２０×６ｍｍのスポンジ布帛から成る「移動相適用ゾーン」と、「０．５〜１mmオーバーラップ」させて形成するものである（前記（１ｎ）参照）から、該移動相適用ゾーンの容量に対して充分に小さい移動相適用ゾーンの表面に接して横断しているものである。
　また、後者のデバイスは、使用された試薬類からして総括表Ｉの例の第５段目に記載の試験アセンブリに当たり、その「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンは、刊行物１の総括表Ｉの領域II〜領域IVで示されるものである。そして、前記総括表Ｉの例の検出ゾーンＶでは、固相化された受容体（レセプター）と特異的リガンド−レセプター複合体の典型例である免疫複合体との複合体が結合して検出されることが記載され、しかも、サンドイッチ法における二成分複合体あるいは三成分複合体（総括表Ｉの第７段目の例に記載）が、このゾーンを試料と共に通過して下流の「検出ゾーン」へと通過可能であることが明記されている（前記（１ｋ）、（１ｍ）参照）から、後者のデバイスの「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンは、試料中に含まれる特異的リガンド−レセプター複合体を通過させる領域であると認められる。
（２）一致点、相違点
　そうすると、本件発明１と刊行物１記載デバイスの発明とは、次の点で一致するが、
（一致点）
　基板部材と該基板部材上に配置された配列とからなり；
該配列が、
　(ｉ)検査すべき液体試料を受け入れかつ収容するのに充分な多孔度および容量を有する貯蔵パッドと、
　(ii)該貯蔵パッドに対して遠位的に配置され、貯蔵パッド中に受け入れた試料の実質的な量を吸収するのに充分な多孔度および容量を有する吸上膜と、
　(iii)該吸上膜と貯蔵パッドの間で、これらと接して配置された少なくとも１つの中間領域であって、(ａ)該貯蔵パッドの容量に対して充分に小さいパッドの表面に接して横断しており、(ｂ)貯蔵パッドから吸上膜まで試料中の特異的リガンド−レセプター複合体を通過させる中間領域と、
からなり、
　検査指標を規定し、特異的リガンド−レセプター複合体と結合して検査指標を形成することができる少なくとも１つの固定化物質を有する
ことを特徴とする免疫化学的検査装置」である点。
　
　本件発明１と刊行物１記載デバイスの発明とは、次の点で相違する。
（相違点Ａ１）
　「固定化物質」が、前者では、「該吸上膜の少なくとも１つの帯域」に配置されるのに対して、後者では、「移動相適用ゾーン」と「吸収ゾーン」と間に位置する中間領域の「吸収ゾーン」側に接した「固相ゾーン」に配置される点。
（相違点Ａ２）
  前者では、「貯蔵パッド」と「吸上膜」との間の中間領域が、「試料中に含まれる大きい成分の通過を妨害するように作動するフィルター域」であるのに対して、後者の「移動相適用ゾーン」と「吸収ゾーン」と間の中間領域がこのようなフィルターとしての作動する領域であることが記載されていない点。
（相違点Ａ３）
  前者では、貯蔵パッドと接するフィルター域が、「（ａ）貯蔵パッドと接するフィルター域への液体試料の通過を計量するために該貯蔵パッドの容量に対して十分に小さいパッドの表面に接して横断して」いるものであるのに対し、後者では、貯蔵パッドと接する中間領域である「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンが、貯蔵パッドの容量に対して十分に小さいパッドの表面に接して横断しているものの、中間領域への液体試料の通過を計量するためにそのように接するとは記載されていない点。
　
（３）相違点についての検討
（３−１）相違点Ａ１について
　刊行物１には、「シート状診断デバイス」は、「水性溶液吸収能を有する材料の帯状片」が１枚からなるものでも、数枚からなるものでもよいことが記載されている（前記（１ｄ）参照）し、また、検査すべき液体試料を受け入れ収容するパッドに接した一端から他端へ毛管作用により試料が移動する一片の膜状物であるクロマトグラフ物質中の少なくとも一部の帯域に、検査指標を規定し、試料中に含まれる特異的リガンド−レセプター複合体と結合して検査指標を形成することができる少なくとも１つの固定化物質を固定化して、免疫学的検査を行うことも、刊行物２（前記（２ｊ）参照）および刊行物４にも記載されている事項にすぎない。
　そして、刊行物１記載デバイスにおける「固相ゾーン」も、「吸収ゾーン」の材料と同様に、「水性溶液吸収能を有する材料の帯状片」であるから、該デバイスの「固相ゾーン」となる領域を「吸収ゾーン」を構成する材料中の少なくとも１つの帯域に設けて両ゾーンを１つの膜状片として、本件発明１の「吸上膜」に対応した構成のものとすることは、当業者が必要に応じて適宜設計変更できる範囲内の事項である。
　
（３−２）相違点Ａ２について
  刊行物１では、血液細胞を除去する機能を有する「吸収性材料」を「デバイス」上に設けることだけでなく、試験のために検体を調整するための、「ろ過、吸着および試薬混合機能」は、「移動相適用ゾーン」またはその後に位置する「ゾーン」によって遂行させることができることも記載されている（前記（１ｅ）参照）。
　さらに、刊行物２にも、「さらに他の好ましい態様において、本発明はさらに濾過手段を加えることにより変更を加えることができる。濾過手段は適用パッドの上部かまたは適用パッドとクロマトグラフ物質との間に置かれた別の物質であることもできるし、また適用パッド自身の物質を濾過能を有するように選択することもできる。濾過手段は、試験試料よりサイズがいくらか大きい粒子を除くのに用いることのできるあらゆるフィルターまたはトラップ装置を含んでいることができる。たとえば濾過手段は、全血の試料から赤血球を除去するために用い、適用パッドに加えられクロマトグラフ物質に運ばれる液体が血漿になるようにすることができる。」（前記（２ｄ）参照）と、本件発明の「貯蔵パッド」に相当する「適用パッド」と「吸上膜」としても作用するクロマトグラフ物質との間に、別の物質として濾過手段を設けることが記載されている。
　そうすると、刊行物１、２のこれらの教示に従って、刊行物１記載デバイスの、「移動相適用ゾーン」と「吸収ゾーン」と間に存在する中間領域の「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンを、「試料中に含まれる大きい成分の通過を妨害するように作動するフィルター域」とすることは、当業者が格別の創意を要するような事項ではない。
　
（３−３）相違点Ａ３について
　液体を収容したある領域から、次の領域へ液体を通過させる際の流量は、水を収納した容器に設けた管路から流れ出す水量が管路が太ければ太いほど多いことを考えてみれば明らかなように、両領域が接触する共通領域の大きさによって変わるものである。液体を収納した領域も、次の液体を受け入れ流す領域も、その中を液体が通過する微小な通路を多数有している、多孔質材料であれば、前者から後者へと通過する液体の量は、本件特許明細書の【００３２】にも記載されているように、前者から後者へと液体の通過が可能な、両者が接している共通領域に他ならない。
　そして、刊行物１には、「移動相適用ゾーン」について、計量要素の機能を有するものであることが記載され（前記（１ｂ）参照）、個々の作用領域における溶媒分布は使用材料の吸着能および寸法に依存すること、並びに「移動相適用ゾーン」の別表現である「溶媒適用ゾーン」に関連して、「溶媒適用ゾーンは試験要素の一方の端に位置し、そして単に溶液、例えば試料の溶夜中に浸漬するかまたは水道水で短時間フラッシュするだけで所定量の液体で完全に飽和するところとなり、次いで後続のゾーンへよりゆっくりとそして制御された形でその液体を放出する一片の布帛紙であってもよい。」と後続のゾーンへの液体試料の通過状態を制御するものであることが記載されている（前記（１ｆ）参照）。
　また、刊行物２にも、「本発明のさらに好ましい変更には、適用パッドとクロマトグラフ物質との間、または・・・置かれた多孔質物質の層をさらに使用することが含まれる。そのような追加のパッドまたは層は、適用パッドからクロマトグラフ物質への試験試料の流速をコントロールするための手段として働く。そのような流速の制御は、適用パッド中での試験試料と試薬との反応に一層長いインキュべーション期間が望まれるときに好ましい。」と記載されている（前記（２ｅ）参照）。
　そうすると、刊行物１記載デバイスの「移動相適用ゾーン」と後続の中間領域の「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンとが接する状態について、前者から後者へとゆっくりと試験試料の通過流速が制御された形で通過するように、両者の共通領域について、「貯蔵パッド」に相当する「移動相適用ゾーン」と接する後続の「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンへの液体試料の通過を計量するために、該貯蔵パッドの容量に対して十分に小さいパッドの表面に接して横断しているものにするようなことは、当業者であれば、普通に設計する範囲内の事項である。
　
（４）検討結果
　したがって、本件発明１は、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
４．本件発明２〜本件発明４についての検討
  本件発明２〜本件発明４は、本件発明１を限定したものである。
（１）本件発明２
  本件発明２は、本件発明１の「基板部材」を「プラスチックまたはガラス」に限定するものであるが、刊行物１記載の発明の「デバイス」は、「固体支持体」に固定されるものであり（前記（１ｄ）参照）、刊行物１記載デバイスは、前記の如く「プラスチックリボン」に固定されているものであるから、本件発明２の「基板部材」についての限定は、刊行物１記載デバイスにおける「固体支持体」と実質的な相違点を形成するものではない。
　そうすると、本件発明１についての上記３．における検討結果と同様、本件発明２は、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
（２）本件発明３
  本件発明３は、本件発明１の「貯蔵パッド」を「貯蔵パッドが基板部材を越えて広がっている」ものに限定するものである。
　しかしながら、刊行物４の第１１図には、「貯蔵パッド」に相当する「多孔質試料受容部材６０５」が、「基板部材」に相当する「透明プラスチックシート６０６」を越えて広がっていることが記載されており、刊行物１記載デバイスにおける「移動相適用ゾーン」を基板部材であるプラスチックリボンを越えて広がった大きさのものとする程度のことは、必要に応じて設計しうる事項である。
　そうすると、本件発明３は、本件発明１についての上記３．における検討結果を合わせてみると、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
（３）本件発明４
  本件発明４は、「吸上膜と貯蔵パッドの間で、これらと接して配置された少なくとも１つの」中間領域である「フィルター域」について、「特異的リガンド−レセプター複合体を生成することのできる少なくとも１つの試薬が」、その領域の「少なくとも一部分において全体にわたって均等に含浸されている」という限定がなされているものである。
　刊行物１記載デバイスの「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンは、前記のように、「該吸上膜と貯蔵パッドの間で、これらと接して配置された少なくとも１つの中間領域」に相当するものであり、この領域には「特異的リガンド−レセプター複合体を生成することのできる試薬」である「ＨＣＧ−ペルオキシダーゼ接合体」が、同じく「特異的リガンド−レセプター複合体を生成することのできる試薬」である「抗−ＨＣＧ抗体」と、溶液として間隔を開けて含浸され次いで風乾されているから（前記（１ｎ）参照）、「全体にわたって均一に含浸されている」ものである。
 　そうすると、本件発明４のこの限定は、刊行物１記載デバイスと実質的な相違点を形成するものではないので、本件発明１についての上記３．における検討結果と同様、本件発明４は、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
５．本件発明５〜本件発明９についての検討
  本件発明５〜本件発明９の各発明は、本件発明４を試薬の標識について更に限定したものである。
（１）本件発明５、本件発明９
  本件発明５は、本件発明４のフィルター域に含浸されている「試薬」を「標識を担持する」ものに限定するものであり、本件発明９は、本件発明５の該試薬の標識を更に「間接標識」に限定するものであるが、刊行物１記載の「デバイス」の「標識反応成分（接合体）」である「ＨＣＧ−ペルオキシダーゼ接合体」は、間接標識を担持する試薬である（前記（１ｃ）、（１ｎ）参照）。
　そうすると、本件発明５および本件発明９の試薬の標識についての限定は、刊行物１記載デバイスの「標識反応成分（接合体）」と実質的な相違点を形成するものではないので、本件発明１についての上記３．における検討結果と同様、本件発明５および本件発明９は、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
（２）本件発明６、本件発明７
  本件発明６は、本件発明５の「標識」を「直接標識」に、そして本件発明７は、本件発明６の直接「標識」を更に「金属ゾル、非金属ゾル、染料ゾル、色指示薬または粒状ラテックス」に限定するものであるが、刊行物１記載の「デバイス」の「標識反応成分（接合体）」は、「直接標識」でも「間接標識」でもよいものである（前記（１ｃ）参照）。また、刊行物１記載のデバイスのような免疫クロマトグラフ検査装置の特異的リガンド−レセプター複合体を形成する試薬の直接標識として、金属ゾル、非金属ゾル、染料ゾルや粒状ラテックスは、刊行物２（前記（２ｃ）参照）および刊行物４（特許請求の範囲第２９，３０項、第４頁１２〜１９行等参照）にも記載の如く公知の標識である。
　そうすると、本件発明６および本件発明７は、本件発明１についての上記３．における検討結果を合わせてみると、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
（３）本件発明８
  本件発明８は、本件発明７の標識：「金属ゾル、非金属ゾル、染料ゾル、色指示薬または粒状ラテックス」を更に「炭素ゾル」に限定するものである。
  刊行物１には、「標識」として「炭素ゾル」の記載はない。
　しかしながら、刊行物２には、「非金属ゾル」を免疫クロマトグラフ検査装置の特異的リガンド−レセプター複合体を形成することのできる試薬の直接標識として使用することが記載されており、「色の付いた粒子」が特に好ましいことも記載されている（前記（２ｃ）参照）。
  そして、「炭素」は、いわゆる「カーボンブラック」として知られているように慣用の色の付いた非金属コロイド粒子であるから、他の金属や非金属などコロイド粒子が「金属ゾル」、「非金属ゾル」、「染料ゾル」などとして直接標識に使用されているように、「炭素ゾル」を特異的リガンド−レセプター複合体を形成することのできる試薬の直接標識として使用することに、当業者が格別の困難性を要するものと認められる事項ではない。
　そうすると、本件発明８は、本件発明１についての上記３．における検討結果を合わせてみると、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
６．本件発明１０についての検討
  本件発明１０は、本件発明４の「試薬および固定化物質」を「リガンド結合分子」に限定するものである。
  刊行物１記載デバイスの特異的リガンド−レセプター複合体を形成することのできる試薬である家兎を免疫することにより得た「抗−ＨＣＧ抗体」、および固定化物質であるヤギを免疫することにより得た「抗−家兎ＩｇＧ−抗体」（前記（１ｎ）参照）は、それぞれの抗原物質をリガンドとする「リガンド結合分子」であるから、本件発明１０の「試薬および固定化物質」についての限定は、刊行物１記載デバイスと実質的な相違点を形成するものではない。
　そうすると、本件発明１０は、本件発明４についての上記４．における検討結果と同様、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
７．本件発明１１についての検討
  本件発明１１は、請求項４発明の「試薬および固定化物質」を、そのうち少なくとも１つが「モノクローナル抗体」であるように限定するものである。
  刊行物１記載デバイスの「試薬および固定化物質」が、後記８．のようにポリクローナル抗体であることは記載されているが、「抗体」として「モノクローナル抗体」を使用することは記載されていない。
　しかしながら、「特異的リガンド−レセプター複合体を形成する試薬」あるいは該複合体と結合して検査指標を形成する固定化物質として、「モノクローナル抗体」を使用することも、免疫検査技術の分野では周知慣用の事項であり、刊行物１記載デバイスのような免疫クロマトグラフ検査装置において、該試薬や固定化物質として、「モノクローナル抗体」を使用することも、刊行物２に記載されている（前記（２ｂ）参照）から、本件発明４の「試薬および固定化物質」について、そのうち少なくとも１つが「モノクローナル抗体」であるように限定することは、当業者が格別の創意を要することではない。
　そうすると、本件発明１１は、本件発明４についての上記４．における検討結果を合わせてみると、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
８．本件発明１２についての検討
  本件発明１２は、本件発明４の「試薬および固定化物質」を、そのうち少なくとも１つが「ポリクローナル抗体」であるように限定するものである。
 刊行物１記載デバイスの特異的リガンド−レセプター複合体を形成することのできる試薬である「抗−ＨＣＧ抗体」は家兎を免疫することにより得たものであり、固定化物質である「抗−家兎ＩｇＧ−抗体」は、ヤギを免疫することにより得たものである（前記（１ｎ）参照）ので、それらは「ポリクローナル抗体」であるから、本件発明１２の「試薬および固定化物質」について、そのうち少なくとも１つが「ポリクローナル抗体」であるように限定することは、刊行物１記載デバイスと実質的な相違点を形成するものではない。
　そうすると、本件発明１２は、本件発明４についての上記４．における検討結果と同様、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
９．本件発明１３〜本件発明１４についての検討
  本件発明１３は、本件発明１の「固定化物質」を「リガンド」に限定するものであり、 本件発明１４は、請求項１発明の「固定化物質」をさらに「抗原またはハプテン」に限定するものである。
　刊行物１記載の「デバイス」の「反応成分」には、「リガンド」である「抗原」、「ハプテン」などがあり（前記（１ｊ）参照）、刊行物１の総括表には受容体に結合する被検体成分を固定化試薬として用いる免疫測定や、抗体を間接的検出することが記載されている（前記（１ｍ）参照）。
　そうすると、刊行物１記載の総括表Ｉ,IIに記載の「固定化物質」を抗原やハプテンなどであり得る「リガンド」にした試験アセンブリの例に従い、「固定化物質」が抗体である刊行物１記載デバイスを、各領域に含浸あるいは固定化する試薬物質を変更して、「固定化物質」を「リガンド」あるいは「抗原またはハプテン」にした配列を有する免疫検査装置に変更することは、当業者が必要に応じて適宜なし得ることである。
　そうすると、本件発明１３および本件発明１４は、本件発明１についての上記３．における検討結果を合わせてみると、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
１０．本件発明１５〜本件発明１９についての検討
　本件発明１５〜本件発明１９は、本件発明１のフィルター域について限定したものである。
（１）本件発明１５
  本件発明１５は、本件発明１の「フィルター域」を貯蔵パッドに隣接する「少なくとも１つの第１フィルター素子」及び各第１フィルター素子に隣接する「第２フィルター素子」からなるものに限定し、本件発明１の「フィルター域」の作動状態（ａ）を「第１フィルター素子」が分担し、作動状態（ｂ）を「第２フィルター素子」が分担するように限定するものである。
　刊行物１記載デバイスの「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンをフィルター域とする点については、上記３．（３）（ハ）で検討したとおりであるところ、該「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンは、「ＨＣＧ−ペルオキシダーゼ接合体」、「抗−HCG抗体」及び「グルコースオキシダーゼ」を間隔を設けて別々に含むものであり（前記（１ｎ）参照）、総括表Ｉの５段目の例の領域II〜IVに相当するものである。そして、総括表Ｉの図では連続した１枚の帯状片に存在するように記載されている領域II〜VIであっても、刊行物１には「各種作用領域の構成成分としての１枚または２枚以上の帯状片の形を取ることができるものであることが記載され（前記（１ｄ）参照）、実施例においても領域II〜VIが３つの片で構成されているから、領域II〜IVを構成する「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンを２つの片に分けて、「移動相適用ゾーン」に隣接した「第１フィルター素子」と、第１フィルター素子に隣接した「第２フィルター素子」とで構成するようなことは、異なる反応成分を含浸させる際の効率化などの点から、当業者が必要に応じて適宜なし得る設計変更である。
　その際、本件発明１の「フィルター域」の作動状態（ａ）は、「貯蔵パッド」に相当する「移動相適用ゾーン」に隣接する領域をなす「第１フィルター素子」でなければ分担できない作動状態であり、作動状態（ｂ）の濾過機能は、「移動相適用ゾーン」の後に位置する「ゾーン」によって遂行できるものである（前記（１ｈ）、（２ｅ）参照）から、「第２フィルター素子」には本件発明１の作動状態（ｂ）を分担させるように構成することは、普通の構成である。
　そうすると、本件発明１５は、本件発明１についての上記３．における検討結果を合わせてみると、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
（２）本件発明１６
  本件発明１６は、本件発明１５の「第１フィルター素子」の少なくとも一部分において、「特異的リガンド−レセプター複合体を生成する少なくとも１つの試薬」が「全体にわたって均等に含浸されている」ように限定するものである。
　刊行物１発明の実施例の「デバイス」の「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンが、刊行物１の総括表１の領域II〜IVに当たることは、本件発明１５についての上記（１）でも述べたとおりであり、フィルター域とした「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンを２つの片からなるものにするにあたり、刊行物１の総括表１の領域IIの「特異的リガンド−レセプター複合体を生成する少なくとも１つの試薬」を含有する領域である「ＨＣＧ−ペルオキシダーゼ接合体」を含む領域を、「第１フィルター素子」とすることに、格別の創意が必要なものでもない。しかも、「ＨＣＧ−ペルオキシダーゼ接合体」が「全体にわたって均等に含浸されている」ものであることは、本件発明４についての上記４．（３）において検討したとおりである。
　そうすると、本件発明１６は、本件発明１および本件発明１５についての上記３．、１０．（１）における検討結果を合わせてみると、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
（３）本件発明１７
  本件発明１７は、本件発明１６の「検査装置」において、「パッド、第１フィルター素子、第２フィルター素子、および吸上膜」が、各々、「微孔性膜物質」からなるように限定するものである。
　刊行物１記載デバイスは、「移動相適用ゾーン」が「再生セルロースの合成スポンジ」で、その他のゾーンは「紙」で構成されており（前記（１ｎ）参照）、それらはいずれも「微孔性膜物質」である。そして、その「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンを２片に分けたとしても、「微孔性膜物質」であることには変わりはない。
　そうすると、本件発明１７の「パッド、第１フィルター素子、第２フィルター素子、および吸上膜」についての限定は、本件発明１６と実質的な相違点を形成するものではないので、本件発明１７は、本件発明１６についての上記（２）における検討結果と同様、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
（４）本件発明１８
  本件発明１８は、本件発明１７の「微孔性膜」を「ナイロン、セルロース物質、ポリスルホン、ポリ二フッ化ビニリデン、またはポリエステルからなる」ものに限定するものである。
　しかしながら、刊行物１記載デバイスの「再生セルロースの合成スポンジ」、「紙」は、いずれも「セルロース物質」であるから、本件発明１８の「微孔性膜」についての限定は、本件発明１７と実質的な相違点を形成するものではない。
　そうすると、本件発明１８は、本件発明１７についての上記（３）における検討結果と同様、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
（５）請求項１９発明
  本件発明１９は、本件発明１の「第１フィルター素子」中に「特異的リガンド−レセプター複合体の生成または結合を増強するための添加剤」を存在させるように限定するものである。このような添加剤の例として本件明細書では、「緩衝液」、「洗剤」および「凝固防止剤」を挙げている（段落【００４０】参照）。
　刊行物１記載デバイスには、そのような添加剤については記載されていない（相違点Ｄ）。
  しかしながら、刊行物２には、「バッファー」、「安定剤」、「洗剤」等の免疫学的検査に使用される補助的成分を、刊行物１記載デバイスと同様の免疫クロマトグラフアッセイ装置に存在させることが記載されている（前記（２ｆ）参照）から、刊行物１記載デバイスで、フィルター域とされた「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンの「移動相適用ゾーン」に隣接する側の「第１フィルター素子」領域に、「ＨＣＧ−ペルオキシダーゼ接合体」に加えて「バッファー」、「安定剤」、「洗剤」等のような特異的リガンド−レセプター複合体の生成または結合を増強するための添加剤を存在させるようなことは、当業者が格別の創意を要することではない。
　そうすると、本件発明１９は、本件発明１および本件発明１５についての上記３．、１０．（１）における検討結果を合わせてみると、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
１１．本件発明２０についての検討
  本件発明２０は、本件発明１の「免疫化学的検査装置」をそれを囲んでいる「水分不透過性容器」を含むように限定するものであって、その「水分不透過性容器」は、（イ）「その中に規定された開口を有し、開口周囲の上部表面が湾曲し、かつ下方に広がり、貯蔵パッドの一部分で終わり、そこで堅く嵌合しているカップ様容器を形成しており、該開口は貯蔵パッドにおける液体試料の通過を受け入れかつ計量するように作動」する「開口部」を有すると共に、（ロ）さらに該容器は、「検査指標域の上方に配置された該帯域を肉眼で検査できるようにする手段」を有しているものである。
　刊行物１には、「デバイス」をこのような「水分不透過性容器」で取り囲むことは記載されていない。
  しかしながら、刊行物２の免疫クロマトグラフ検査装置は、「適用パッド１」及び「クロマトグラフ物質２」の周りに「ハウジング」を有している（前記（２ｈ）、（２ｉ）参照）し、刊行物４の免疫分析試験装置も多孔質固相材料試験片を不透湿性固体材料で形成した「中空ケーシング」で取り囲んでいるものである（第１１、１２図参照）。しかも、それらの「水分不透過性容器」には、当然のことではあるが、試験試料および／または毛管運搬用溶液が添加および含有される「適用パッド」や「多孔質試料受容部材６０５」に試験試料および／または毛管運搬用溶液を供給可能とするために、それらの上に円筒カップ状の液体収納空間のある「適用ポート３」や「開口部６０１」という「開口部」を有するものである。
　そして、刊行物４の第６、７図には、中空ケーシングに設けられた開口部分を「一体容器２０２」としてその内部容積を利用して、試料溶液の計量を行うことも記載されている（９頁左下欄１４〜１９行）し、刊行物２の「適用ポート３」も、その内部空間容積を利用して液体の計量は可能なものと認められる。また、開口周囲の上部表面が湾曲し、かつ下方に広がって、最後は狭まった液体案内路を有する、本件特許の図４〜６に見られる「じょうご」の形状は、限られた領域に液体を円滑に供給するための慣用の形状である。
　そうすると、刊行物１記載デバイスをそれを取り囲む「水分不透過性容器」に含まれたものとすることには何らの困難性もない上、その場合に必要となる試料溶液供給用の開口部を、刊行物２記載の如く一定容積の液体が収容できるカップ様容器の開口部とし、その形状を慣用の「じょうご」形状に倣ったものとして、供給案内される液体試料を「貯蔵パッド」に相当する「移動相適用ゾーン」内へ確実に案内し、それ以外には漏れたりしないよう、その開口部の下端が「移動相適用ゾーン」の一部分で終わり、そこで堅く嵌合しているカップ様容器のものとするようなことは、液体試料の受け入れのために、当業者が容易に設計しうる範囲内の事項にすぎない。
  また、刊行物２の第１図記載装置の「ハウジング」は、「窓４ａ」を有している。この「窓４ａ」は、「クロマトグラフ物質２およびその上にシグナル生成システムにより生成したシグナルの観察を可能にしている」ものであり（前記（２ｉ）参照）、「検査指標域の上方に配置された該帯域を肉眼で検査できるようにする手段」ということができる。また、刊行物４の第１１，１２図記載の装置にも、試験区域に対応して試験結果の観察できる「開口部６０３」が設けられているから、刊行物１記載デバイスをそれを取り囲む「水分不透過性容器」に含まれたものとした場合に、上記（ロ）の手段を「水分不透過性容器」を設けることも、当業者が格別の創意を要することではない。
 　そうすると、本件発明２０は、本件発明１についての上記３．における検討結果を合わせてみると、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
１２．本件発明２１についての検討
  本件発明２１は、本件発明１５の「免疫化学的検査装置」を囲んでいる「水分不透過性容器」を含むように限定するものであって、その「水分不透過性容器」は、（イ’）開口として、（ｉ）「その中に規定された第１の開口を有し、その開口周囲の上部表面が湾曲し、かつ下方に広がって、貯蔵パッドの一部分で終わり、そこで堅く嵌合しているカップ様容器を形成しており、該開口は貯蔵パッドにおける液体試料の通過を受け入れかつ計量」する「第１の開口」と、（ii）「第２フィルター素子のすぐ上方に規定される第２の開口を有し、該開口は第２フィルター素子に試料を直接適用」する「第２の開口」を有すると共に、（ロ）さらに該容器は、「検査指標域の上方に配置された該帯域を肉眼で検査できるようにする手段」を有しているものである。
　刊行物１記載デバイスには、「デバイス」をこのような「水分不透過性容器」で取り囲むことは記載されていない。
  しかしながら、刊行物１記載のデバイスを、液体試料を供給するための開口と「検査指標域の上方に配置された該帯域を肉眼で検査できるようにする手段」を有する「水分不透過性容器」に取り囲ませることについては、前記１１．で検討したとおりである。そして、開口が２つある点についても、刊行物１には、総括表IIに記載された例の如く、領域Ｉと領域IIIの２箇所から移動相あるいは試料液体を供給する形式のデバイスも記載されており、そのような形式のデバイスに刊行物１記載のデバイスを設計変更することにも格別困難性は認められない。しかも、刊行物１の総括表Ｉの第５段目の例と総括表IIの第１段目の例をみれば、「フィルター域」たる「標識反応成分（接合体）」含有ゾーンが２つの帯状片であれば、「第２の開口」を設ける箇所が「第２フィルター素子」のすぐ上になることが、直ちに理解できる事項にすぎない。
　また、「第１の開口」および「検査指標域の上方に配置された該帯域を肉眼で検査できるようにする手段」については、本件発明２０についての前記１１で検討したとおりである。
　そうすると、本件発明２１は、本件発明１および本件発明１５についての上記３．、１０．（１）における検討結果を合わせてみると、刊行物１、２および４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
１３．なお、特許権者は、平成１３年３月５日付け特許異議意見書において、本件発明と刊行物１記載の発明との相違点として、本件発明では、検査装置が十分に機能的な１つの完全なユニットであるが、刊行物１のものは単一のユニットではなく、この特徴は、効率的な製造のために重要なことであるとの主張も行っているが、刊行物１には、「本発明に記載されているような一体化された乾燥化学試験エレメントは試験実施を簡素化しまた試験時間を短縮する。」（３頁左下欄１１〜１３行）、「本発明はすべての試薬成分を含有し、そして作用シーケンスに必要なすべての成分のみならず、作用シーケンス自体をも一体化された形で含み、・・・検出できるようにしたシート状診断デバイスに関する。」（４頁左上欄１３行〜右上欄４行）と、刊行物１に記載のものが、単一の検査装置として使用できるデバイスであることが明記されており、検査装置の製造という点からも、本件発明１〜２１の装置が刊行物１，２および４と比較して、格別の創意工夫がなされているものとも認められない。
　
IV．むすび
　以上のとおりであるから、請求項１ないし２１に係る発明は、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　したがって、請求項１ないし２１に係る発明の特許は、拒絶の査定をしなければならない特許出願に対してされたものと認める。
　よって、特許法等の一部を改正する法律（平成６年法律第１１６号）附則第１４条の規定に基づく、特許法等の一部を改正する法律の施行に伴う経過措置を定める政令（平成７年政令第２０５号）第４条第２項の規定により、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１４年６月７日（２００２．６．７）
【訂正の要旨】
訂正の要旨
＜訂正事項ａ＞
　特許請求の範囲の請求項９の「請求項６記載」を、「請求項５記載」と訂正する。
＜訂正事項ｂ＞
　特許請求の範囲の請求項２１の「請求項１記載」を、「請求項１５記載」と訂正する。
（５４）【発明の名称】
免疫化学的検査装置
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項１】　基板部材と該基板部材上に配置された配列とからなり；
　該配列が、
　（ｉ）検査すべき液体試料を受け入れかつ収容するのに充分な多孔度および容量を有する貯蔵パッドと、
　（ｉｉ）該貯蔵パッドに対して遠位的に配置され、貯蔵パッド中に受け入れた試料の実質的な量を吸収するのに充分な多孔度および容量を有する吸上膜と、
　（ｉｉｉ）該吸上膜と貯蔵パッドの間で、これらと接して配置された少なくとも１つのフィルター域であって、（ａ）貯蔵パッドからフィルター域への液体試料の通過を計量するために該貯蔵パッドの容量に対して充分に小さいパッドの表面に接して横断しており、（ｂ）貯蔵パッドから吸上膜まで試料中の特異的リガンド−レセプター複合体を通過させるが、試料中に含まれる大きい成分の通過を妨害するように作動するフィルター域と、
からなり、
　該吸上膜の少なくとも１つの帯域に配置され、検査指標を規定し、試料中に含まれる特異的リガンド−レセプター複合体と結合して検査指標を形成することができる少なくとも１つの固定化物質を有する
ことを特徴とする免疫化学的検査装置。
　【請求項２】　基板部材がプラスチックまたはガラスである請求項１記載の検査装置。
　【請求項３】　貯蔵パッドが基板部材を越えて広がっている請求項１記載の検査装置。
　【請求項４】　特異的リガンド−レセプター複合体を生成することのできる少なくとも１つの試薬がフィルター域の少なくとも一部分において全体にわたって均等に含浸されている請求項１記載の検査装置。
　【請求項５】　試薬が標識を担持する請求項４記載の検査装置。
　【請求項６】　標識が直接標識である請求項５記載の検査装置。
　【請求項７】　標識が金属ゾル、非金属ゾル、染料ゾル、色指示薬または粒状ラテックスである請求項６記載の検査装置。
　【請求項８】　標識が炭素ゾルである請求項７記載の検査装置。
　【請求項９】　標識が間接標識である請求項５記載の検査装置。
　【請求項１０】　試薬および固定化物質がリガンド結合分子である請求項４記載の検査装置。
　【請求項１１】　試薬および固定化物質のうち少なくとも１つがモノクローナル抗体である請求項４記載の検査装置。
　【請求項１２】　試薬および固定化物質のうち少なくとも１つがポリクローナル抗体である請求項４記載の検査装置。
　【請求項１３】　固定化物質がリガンドである請求項１記載の検査装置。
　【請求項１４】　固定化物質が抗原またはハプテンである請求項１３記載の検査装置。
　【請求項１５】　フィルター域が、
　貯蔵パッドから第１フィルター域への液体試料の通過を計量するために貯蔵パッドに隣接し、かつ貯蔵パッドの容量に対して充分に小さいパッドの表面に接して横切る基板部材上に配置された少なくとも１つの第１フィルター素子と；
　各第１フィルター素子に隣接し、貯蔵パッドと遠位的に基板部材上に配置された第２フィルターであって、試料中の特異的リガンド−レセプター複合体を通過させるが、試料中に含有されている大きい成分の通過を妨害するように作動する第２フィルター素子と
からなる請求項１記載の検査装置。
　【請求項１６】　特異的リガンド−レセプター複合体を生成する少なくとも１つの試薬が第１フィルター素子の少なくとも一部分において全体にわたって均等に含浸されている請求項１５記載の検査装置。
　【請求項１７】　パッド、第１フィルター素子、第２フィルター素子、および吸上膜が、各々、微孔性膜物質からなる請求項１６記載の検査装置。
　【請求項１８】　微孔性膜がナイロン、セルロース物質、ポリスルホン、ポリ二フッ化ビニリデン、またはポリエステルからなる請求項１７記載の検査装置。
　【請求項１９】　特異的リガンド−レセプター複合体の生成または結合を増強するための添加剤が第１フィルター素子中に存在している請求項１記載の検査装置。
　【請求項２０】　該装置を囲んでいる水分不透過性容器を有し、
　該容器は、その中に規定された開口を有し、開口周囲の上部表面が湾曲し、かつ下方に広がり、貯蔵パッドの一部分で終わり、そこで堅く嵌合しているカップ様容器を形成しており、該開口は貯蔵パッドにおける液体試料の通過を受け入れかつ計量するように作動し、さらに該容器は検査指標域の上方に配置された該帯域を肉眼で検査できるようにする手段を有している請求項１記載の検査装置。
　【請求項２１】　該装置を囲んでいる水分不透過性容器を含み、
　該容器は、その中に規定された第１の開口を有し、その開口周囲の上部表面が湾曲し、かつ下方に広がって、貯蔵パッドの一部分で終わり、そこで堅く嵌合しているカップ様容器を形成しており、該開口は貯蔵パッドにおける液体試料の通過を受け入れかつ計量し、
　また該容器は第２フィルター素子のすぐ上方に規定される第２の開口を有し、該開口は第２フィルター素子に試料を直接適用し、さらに該容器は検査指標域の上方に配置された該帯域を肉眼で検査するための手段を有する請求項１５記載の検査装置。
【発明の詳細な説明】
　【０００１】
　【産業上の利用分野】
　本発明は、免疫学的検査装置、免疫化学的標識およびこれを含有する水性懸濁液、ならびに該免疫化学的標識の製造方法に関する。
　【０００２】
　【従来の技術および発明が解決しようとする課題】
　免疫化学の使用によって生物学的液体試料中の分析物の存在を検出する種々の方法が開示されている。いわゆる“サンドイッチ”法では、例えば、抗原のような標的分析物を、標識化抗体（ｌａｂｅｌｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ）と固体支持体上に固定化された抗体との間に“挟む″。この検査法は、結合された抗原−標識化抗体複合体の存在およびその量を観察することによって行われる。競合免疫学的検査法では、固体表面に結合した抗体を、未知の量の抗原分析物を含有する試料および同じタイプの標識化抗原（ｌａｂｅｌｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎ）と接触させる。次いで、固体表面上に結合した標識化抗原の量を測定することによって、試料中の抗原分析物の量を間接的に測定する。
　【０００３】
　これらの方法および以下に説明する他の方法は、抗体および抗原の両方を検出することができるので、該方法は、一般的に、免疫化学的リガンド−レセプター検査法または単に免疫学的検査法と呼ばれている。
　【０００４】
　サンドイッチまたは競合のいずれかのタイプの固相免疫学的検査装置によって、血液または尿のような生物学的液体試料中の分析物の高感度の検出が行われる。固相免疫学的検査装置は、リガンド−レセプター対のうちの１つの部材、通常、抗体、抗原またはハプテンを結合している固体支持体と一体化されている。初期の一般的な固体支持体の形態は、放射免疫学的検査法および酵素免疫学的検査法の分野から周知であるポリスチレン製のプレート、管またはビーズであった。さらに近年は、ナイロン、ニトロセルロース、酢酸セルロース、ガラス繊維および他の多孔性ポリマーのような多くの多孔性物質が固体支持体として用いられている。
　【０００５】
　抗原、ハプテンまたは抗体のような免疫化学的成分の固相担体として多孔性物質を用いる多くの自蔵式免疫学的検査装置が開示されている。これらの装置は通常、ディップスティック（ｄｉｐｓｔｉｃｋ）、フロースルー（ｆｌｏｗ−ｔｈｒｏｕｇｈ）またはマイグレートリィ（ｍｉｇｒａｔｏｒｙ）の形態である。
　【０００６】
　家庭用妊娠および排卵検出装置によって代表されるディップスティック検査法のより一般的な形態では、抗体のような免疫化学的成分を固相に結合させる。該検査装置を、未知の抗原分析物を含有すると推測される試料中にインキュベーションのために“浸漬”する。次いで、インキュベーションと同時またはその後に酵素−標識化抗体を添加する。次に、装置を洗浄し、次いで、酵素に対する基質を含有する第２溶液中に差し込む。酵素−標識は、存在する場合は、基質と相互作用し合い、その結果、着色された生成物の形成が生じ、該生成物は、固相上に沈殿物として堆積するかまたは基質溶液中で明白な変色を生じる。バックスター（Ｂａｘｔｅｒ）らの欧州特許出願公開ＥＰ−Ａ０１２５１１８号には、このようなサンドイッチ型ディップスティック免疫学的検査法が開示されている。カリ（Ｋａｌｉ）らの欧州特許出願公開ＥＰ−Ａ０２８２１９２号には、競合型検査法において使用するためのディップスティック装置が開示されている。
　【０００７】
　フロースルー型免疫学的検査装置は、ディップスティック検査法に関連する広範なインキュベーションおよび煩わしい洗浄工程の必要性を取り除くために設計された。バルカーズ（Ｖａｌｋｉｒｓ）らの米国特許第４，６３２，９０１号には、多孔性膜またはフィルターに結合する抗体（標的抗原分析物に対して特異的）からなり、これに液体試料を加える装置が開示されている。該液体が膜を通って流れると、標的分析物が抗体と結合する。試料の添加に次いで、標識化抗体を添加する。標識化抗体の肉眼による検出によって、試料中の標的抗原分析物の存在がわかる。
　【０００８】
　コロム（Ｋｏｒｏｍ）らの欧州特許出願公開ＥＰ−Ａ０２９９３５９号には、標識化抗体が試薬運搬系として作用する膜と一体化したフロースルー装置における変形が開示されている。
　【０００９】
　ディップスティックおよびフロースルー型免疫学的検査装置について必要とされる多数の添加および洗浄工程によって、最低限度に訓練された人員および家庭ユーザーが間違った検査結果を得る可能性が増大される。
　【００１０】
　マイグレーション型検査法では、検査を行うのに必要とされる試薬を膜にしみ込ませる。分析物検出ゾーンが設置されており、該ゾーンにおいて標識化分析物が結合され、検査表示が判断される。例えば、トム（Ｔｏｍ）らの米国特許第４，３６６，２４１号およびズク（Ｚｕｋ）の欧州特許出願公開ＥＰ−Ａ０１４３５７４号参照。
　【００１１】
　しかし、検出ゾーンヘの標識化分析物の通過を遮断する、試料中における望ましくない固体成分の存在または形成によってしばしばマイグレーション型検査法の感度が減衰する。マイグレーション検査装置が必要以上に多い液体試料で溢れる場合も、検査感度は衰える。
　【００１２】
　通常、マイグレーション検査装置は、該装置の内部で、着色した標識に付着させた試薬を一体化しており、したがって他の物質を添加せずに検査結果を肉眼で検出することができる。例えば、バーンスタイン（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ）の米国特許第４，７７０，８５３号、メイ（Ｍａｙ）らの国際出願公開ＷＯ８８／０８５３４号、およびチン（Ｃｈｉｎｇ）らの欧州特許出願公開ＥＰ−Ａ０２９９４２８号参照。
　【００１３】
　このような標識としては、米国特許第４，３１３，７３４号においてロイバーリング（Ｌｅｕｖｅｒｉｎｇ）よって開示されたような金ゾル粒子、グリブナウ（Ｇｒｉｂｎａｕ）らの米国特許第４，３７３，３２９号およびメイ（Ｍａｙ）らの国際出願公開ＷＯ８８／０８５３４号によって開示されたような染料ゾル粒子、上記メイの国際出願公開ＷＯ８８／０８５３４号、スナイダー（Ｓｎｙｄｅｒ）の欧州特許出願公開ＥＰ−Ａ０２８０５５９号および０２８１３２７号によって開示された着色されたようなラテックス、およびキャンベル（Ｃａｍｐｂｅｌｌ）らの米国特許第４，７０３，０１７号によるリポソーム中に被包された染料が挙げられる。これらの着色された標識は、一般に、適切である固定化方法によって限定されている。さらに、これらは、比較的多量のリガンド分子を必要とし、高価な試薬を含むことができ、したがって費用が増す。
　【００１４】
　【課題を解決するための手段】
　本発明は、免疫化学的リガンド−レセプター反応、および特別に選択し、処理し、配置した濾過材（ｆｉｌｔｅｒ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ）の使用による生物学的液体試料中における分析物の存在の検出装置を提供するものである。
　【００１５】
　本発明の特徴は、以下の説明および添付の図面から明らかである。
　【００１６】
　図１は、代表的な一方向性検査装置の断面図であり；
　図２は、他の一方向性検査装置の断面図であり；
　図３は、代表的な二方向性検査装置の断面図であり；
　図４は、単一の開口を有するプラスチック製容器中に入れた図２で示すような検査装置（部分的に隠れ線（ｐｈａｎｔｏｍ　ｌｉｎｅｓ）で示す）の斜視図であり；
　図５は、多方向性検査装置の平面図であり；
　図６は、２つの開口を有するプラスチック製容器に入れた図２で示すような検査装置（部分的に隠れ線で示す）の斜視図である。
　【００１７】
　図１に関し、貯蔵パッド１０、フィルター素子１２、および検査指標域１８において規定された固定化物質を含む吸上膜１６が基板２０上に配置されている。貯蔵パッド１０は、検査される液体試料を受け入れかつ収容するのに充分な多孔度および容量を有している。フィルター素子１２は、貯蔵パッド１０の容量に対して相対的に小さい貯蔵パッド１０の表面に隣接し、かつ接して横切り、該貯蔵パッド１０からフィルター素子１２ヘエマージする（ｅｍｅｒｇｉｎｇ）液体試料の通過を計量することができる。
　【００１８】
　吸上膜１６の規定された帯域１８に、フィルター素子１２を通過する試料中に含まれる如何なる特異的リガンドレセプター複合体をも結合するのに使用可能である固定化物質が配置されている。
　【００１９】
　この具体例において、特異的リガンドレセプター複合体を生成するのに使用可能な試薬を試料に添加し、ここで反応して複合体が形成され（適当な分析物を含有していると思われる）、次いで、該試料を貯蔵パッド１０と接触させる。該試料は、フィルター素子１２を介して移動し、ここで試料中に存在し得る不必要な成分がトラップされ、吸上膜１６内に移動する。標識化分析物は、存在する場合、検査指標域１８と結合して、肉眼で検出可能な信号を生じる。
　【００２０】
　図２に示す具体例では、貯蔵パッド１０、フィルター素子１２および吸上膜１６に加えて、第２フィルター素子１４が基板２０の上に配置されている。貯蔵パッド１０は、検査する液体試料を受け入れ、かつ収容するのに充分な多孔度および容量を有している。第１フィルター素子１２は、貯蔵パッド１０の容量に対して相対的に小さい貯蔵パッドの表面に隣接し、かつ接して横切り、該貯蔵パッド１０から第１フィルター素子１２ヘエマージする液体試料の通過が計量される。この具体例では、特異的リガンドレセプター複合体を生成する試薬が第１フィルター素子１２の全体にわたって均等に含浸されている。液体試料が貯蔵パッド１０からエマージすると、第１フィルター素子１２に含浸されている試薬と接触し、ここで反応して特異的リガンドレセプター複合体または複合体（複数）を形成する（試料は、適当な分析物および分析物（複数）を含有していると思われる）。試薬運搬系として第１フィルター素子を使用することによって、分離試薬添加工程の必要性が取り除かれる。
　【００２１】
　第１フィルター素子１２と隣接し、貯蔵パッド１０と遠位的である第２フィルター素子１４は、液体試料中に含まれるかまたはその中で形成される特異的リガンドレセプター複合体を通過させるが、その中に含まれる、最初の試料中に存在するか、またはその後、例えば、第１フィルター素子１２において形成された大きい成分の通過を妨害するように作動する。
　【００２２】
　吸上膜１６は、第２フィルター素子１４に隣接し、かつ第１フィルター素子１２と遠位的である。吸上膜１６は、第１フィルター素子１２および第２フィルター素子１４を通過した後、貯蔵パッド１０中に受け入れられた試料の実質的な量を吸収するのに充分な多孔度および容量を有している。
　【００２３】
　吸上膜１６の規定された帯域１８中に固定化物質が配置されており、該固定化物質は、第１フィルター素子１２および第２フィルター素子１４を通過する試料中で形成されるかまたはその中に含まれている如何なる特異的リガンドレセプター複合体を結合するように作動する。
　【００２４】
　使用する際に、液体試料は図２に示した装置の貯蔵パッド１０に供給される。該試料は、第１フィルター素子１２を介して移動し、ここで標的分析物は、試料中に存在する場合は、標識化試薬と結合する。該試料は、第２フィルター素子１４を介して移動し続け、ここで試料中に存在する不必要な成分がトラップされ、吸上膜１６の中に移動する。次に、標識化分析物は、存在する場合は、検査指標域１８と結合して、肉眼で検出可能な信号を生じる。
　【００２５】
　他方、免疫状態検査（ｉｍｍｕｎｓｔａｔｕｓ　ａｓｓａｙｓ）は、図２に示す装置の第２フィルター素子１４に試料を供給することによって行うことができる。次に、緩衝溶液が貯蔵パッド１０に供給され、該溶液が第１フィルター素子１２を介して移動し、そこで標識化試薬が再構成される。該溶液と試薬が第２フィルター素子１４を介して移動し、ここで標的分析物は、存在する場合は、標識化試薬と結合し、吸上膜１６の中に移動する。次に、標識化分析物は、存在する場合は、検査指標域１８と結合して、肉眼で検出可能な信号を生じる。
　【００２６】
　図３に関しては、共通貯蔵パッド１１０、第１フィルター素子１１２Ａおよび１１２Ｂ、第２フィルター素子１１４Ａおよび１１４Ｂ、ならびに規定された検査指標域１１８Ａおよび１１８Ｂ中に配置された固定化物質を含有する吸上膜１１６Ａおよび１１６Ｂが基板１２０上に配置されている。共通貯蔵パッド１１０は、検査される液体試料を受け入れかつ収容するのに充分な多孔度および容量を有している。第１フィルター素子１１２Ａおよび１１２Ｂは、パッド１１０の容量に対して相対的に小さい共通貯蔵パッド１１０の表面に隣接し、かつ接して横切り、該貯蔵パッド１１０から第１フィルター素子１１２Ａおよび１１２Ｂまでの液体試料の通過が計量される。特異的リガンドレセプター複合体を生成する試薬が第１フィルター素子１１２Ａおよび１１２Ｂの全体にわたって均等に含浸されている。第２フィルター素子１１４Ａおよび１１４Ｂは、各々、第１フィルター素子１１２Ａおよび１１２Ｂに隣接し、かつ共通貯蔵パッド１１０と遠位的であり、液体試料中で形成された特異的リガンドレセプター複合体を通過させるが、その中に含まれる大きい成分の通過を妨害するように作動する。吸上膜１１６Ａおよび１１６Ｂは、共通貯蔵パッド１１０中に受け入れられた試料の実質的な量を吸収するのに充分な多孔度および容量を有している。帯域１１８Ａおよび１１８Ａにおける固定化物質は、形成された如何なる特異的リガンドレセプター複合体と結合するのにも使用することができる。
　【００２７】
　使用する際に、液体試料は共通貯蔵パッド１１０に供給され、該試料は第１フィルター素子１１２Ａおよび１１２Ｂを介して移動し、ここで標的分析物が、試料中に存在する場合は、そこに含浸されている標識化試薬と結合し、第２フィルター素子１１４Ａおよび１１４Ｂを介して移動し続け、ここで液体試料中の望ましくない成分がトラップされ、吸上膜１１６Ａおよび１１６Ｂ中に移動する。標的標識化分析物は、存在する場合は、検査指標域１１８Ａおよび１１８Ｂと結合する。したがって、図３の具体例は、単一の試料を用いる場合、２つの分析物を同時にかつ独立して検査するかまたは同一分析物に関して２つの平行検査をすることができる。
　【００２８】
　図４に関しては、図２に示すような検査装置がケーシング２２２に囲まれている。ケーシング２２２は、貯蔵パッド２１０のすぐ上方にある穴部２２４および検査指標域２１８および検査指標制御域２２８のすぐ上方にある観察窓２２６を有している。窓２２６は、簡単な開口であるか、または帯域２１８および２２８を保護するが肉眼で検査することができる透明な物質からなっていてよい。液体試料は、開口２２４を介して添加され、貯蔵パッド２１０によって吸収される。次に、適当な標識化試薬を担持している第１フィルター素子２１２を介して移動し、第２フィルター素子２１４を介し、ここで試料中の不必要な成分がトラップされ、吸上膜２１６中に移動し、ここで標識化分析物が、存在する場合は、検査指標域２１８と結合する。未結合の標識化試料は、検査指標制御域２２８と結合する。両指標域２１８および２２８は、観察窓２２６を介して肉眼で見ることができる。
　【００２９】
　図５に関しては、プラスチックのような水分耐性物質によって製造された基板３２０が、仕切り３２２によって、複数の等価領域３１１Ａ、３１１Ｂ、３１１Ｃ、３１１Ｄ、３１１Ｅおよび３１１Ｆに分割されている。各領域は、仕切り３２２間で、基板３２０中に全て配置された第１フィルター素子３１２、第２フィルター素子３１４、および吸上膜３１６からなっている。各第１フィルター素子３１２中に同一または異なっている試薬を設置することができ、同一分析物に関する平行試験または同一試料について複数の異なる検査を行うことができる。各吸上膜３１６は、対応する吸上膜と結合している第１フィルター素子中における試薬に対して適切でありかつ規定された検査指標域３１８中に設置された固定化物質を含有する。試料が設置された共通貯蔵パッド３１０は、複数の領域に対して中央に設置されている。
　【００３０】
　使用する際に、貯蔵パッド３１０に置かれた液体試料は、同時に、第１フィルター素子３１２を介して移動し、ここで標的分析物が、存在する場合は、標識化抗体と結合する。次に、該試料は、第２フィルター素子３１４を通過し、吸上膜３１６中に至り、ここで標識化標的分析物が、存在する場合は、検査指標域３１８中の対応する固定化物質と結合して、肉眼で検出可能な信号を生じる。
　【００３１】
　図６に示す具体例は、免疫状態検査において用いることができる。図２で示すような検査装置がケーシング５２２に囲まれている。ケーシング５２２は、貯蔵パッド５１０のすぐ上方にある第１の開口５２４、第２フィルター素子のすぐ上方にある第２の開口５３０、ならびに検査指標域５１８および検査指標制御域５２８のすぐ上方にある観察窓５２６を有している。窓５２６は、簡単な開口であってもよく、または帯域５１８および５２８を保護するが肉眼で検査することができる透明な物質からなっていてよい。使用する際に、試料（例えば、血清）は、第２の開口５３０を介して第２フィルター素子５１４に直接供給される。次いで、緩衝溶液が第１の開口５２４を介して貯蔵パッド５１０に供給され、該溶液は第１フィルター素子５１２を介して移動し、そこで標識化試薬が再構成される。該溶液と試薬は、第２フィルター素子５１４を介して移動し、ここで標的分析物が、存在する場合は、標識化試薬と結合し、吸上膜５１６まで移動する。次いで、標識化分析物は、存在する場合は、検査指標域５１８と結合して、肉眼で検出可能な信号を生じる。未結合の標識化試薬は、検査指標制御域５２８と結合する。両指標域５１８および５２８は、観察窓５２６を介して肉眼で観察される。
　【００３２】
　配置に関係なく、フィルター素子およびパッドは、試料の通過に関する共通領域を規定するように接触しているか、またはお互いに重なりあっている。吸上膜が高い面積：厚さ比を有しているが、それに接しているフィルター素子が比較的低い面積：厚さ比を有している場合が好都合であることがわかった。充分な共通領域を確保するために、吸上膜と重ね合わせて接しているフィルター素子を配置することが好都合である。
　【００３３】
　検査指標域の前方に少なくとも１つのフィルター素子を一体化することによって、前記マイグレーション型検査法と比較して、感度の増大が達成される。フィルターは、固有の疎水性を減少させるために処理しておくのが好ましく、該フィルターは、液体試料中の不必要な成分をトラップし、かつ標識化分析物の通過を妨害しない。したがって、検査指標域と結合する分析物の量が比例して多くなり、さらに正確な検査の結果が達成される。
　【００３４】
　さらに、適当な組織（ｔｅｘｔｕｒｅ）および孔の大きさを有する膜を選択することによって、第２フィルター素子は制御された細胞溶解システムとして作用することができる。例えば、全血試料で行われる免疫状態検査において、全血細胞の完全性を維持するが血清が透過移動する膜を第２フィルター素子として選択することが好都合である。これは、検査指標域中への拡散による血液細胞溶解に関連する褪色を防止する。
　【００３５】
　免疫状態検査を行うために該装置を使用する場合、この付加的フィルター素子は、直接試料を受け入れるのに使用することもできる。一般に、これらの検査は、フィルター上に直接スポットした全血または血清の試料について行われる。この後、貯蔵パッドに緩衝溶液が供給される。代表的な緩衝溶液としては、リン酸緩衝溶液、食塩水、トリス（Ｔｒｉｓ）−ＨＣｌ、および水が挙げられるが、これらに限定されるものではない。このタイプで検出され得る抗体の例としては、後天免疫欠乏症候群（Ａｃｑｕｉｒｅｄ　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、風疹、肝炎、およびライム（Ｌｙｍｅｓ）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
　【００３６】
　検査感度衰退の他の原因、すなわち、試料の溢流は、装置中に貯蔵パッドを一体化することによって回避される。すなわち、貯蔵パッドは、多量の試料を保持することができ、次いで、該試料は、次の帯域における有効な共通領域の結果として、装置を介して計量される。この本発明の態様は、例えば、装置に供給する試料の量の測定を必要とせずに装置を尿の流れの中に置くことができるという点で家庭での使用に特に適している。
　【００３７】
　貯蔵パッド、第１フィルター素子、第２フィルター素子、および吸上膜は、いくつかの濾過材から成形される。貯蔵パッドに使用するための代表的なフィルター物質としては、０．４５〜６０μｍの範囲の大きさの孔を有しているセルロース、ポリエステル、ポリウレタンおよび繊維ガラスのような低タンパク結合物質が挙げられるが、これらに限定されるものではない。第１フィルター素子に使用するための代表的な物質としては、０．４５〜６０μｍの範囲の大きさの孔を有しているセルロース物質［例えば、ワットマンペーパー（Ｗｈａｔｍａｎ　ｐａｐｅｒ）ＥＴ３１］または繊維ガラスが挙げられるが、これらに限定されるものではない。第２フィルター素子に使用するための代表的な物質は、疎水性物質であり、０．４５〜６０μｍの範囲の大きさの孔を有するポリウレタン、ポリアセテート、セルロース、繊維ガラス、およびナイロンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。吸上膜に使用するための代表的な物質としては、ナイロン、セルロース、ポリスルホン、ポリ二フッ化ビニリデン、酢酸セルロース、ポリウレタン、繊維ガラス、およびニトロセルロースが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
　【００３８】
　パッドおよび膜を含む配列全体を、装置に対して支持およびユニティを与える固体材料に装着する。この支持体は、全検査内容物を含むのに適当でありすつ検査ユーザーに好都合である大きさに切ったガラスまたはプラスチックの薄いシートから構成されている。
　【００３９】
　本発明の他の態様では、１以上の特定のタイプの標識化試薬および同数の対応するタイプの固定化試薬の存在によって単一の液体試料中の複数の分析物を検出することができる。該装置は、１つの第１フィルター素子の全体にわたって含浸される複数の標識化試薬および吸上膜上のいくつかの検査指標域において規定された複数の対応する固定化物質を一方向的に供給することができる。二方向性または多方向性の装置では、１組以上の第１フィルター素子、第２フィルター素子および吸上膜のような成分の組が共通貯蔵器と結合している。
　【００４０】
　各々の場合、第１フィルター素子と一体化している試薬は、液体試料との接触によって再構築させるために、該素子上または中で乾燥または凍結乾燥される。生成されて結合されたリガンドレセプター複合体の特異性を増強するかまたは該複合体の数を増大し、したがって、検査装置の感度を増大させるのに有用な他の試薬は、試薬を含有しているフィルターパッドまたは２つのフィルターパッドのうち最初のフィルターパッド中に含有されてもよい。これらの補助試薬としては、緩衝液、洗剤および凝固防止剤が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
　【００４１】
　第１ゾーンに隣接し、かつ第２フィルター素子と遠位的である吸上膜上で制御として作用する追加の検査指標域を含むことによって、該検査装置に、液体試料が全装置の全体にわたって移動したか否かを示す内部モニターが設置される。検査指標制御域は、一般に、分析物に添加されたかまたは第１フィルター素子と一体化した標識化試薬に対する固定化抗体（例えば、抗−イムノグロブリン）を使用する。図２の態様に関して、例えば、液体試料は、第１フィルター素子を介して移動し、ここで標識化試薬を再構築し、吸上膜まで運搬する。標的分析物と結合していない標識化試薬は、制御検査指標域と結合し、試験の完了の指標が肉眼で検出される。
　【００４２】
　一方向性、二方向性、または多方向性として構成されている検査装置全体を液体不透過性プラスチック中に入れてもよい。この容器は、通常、試料を受け入れるために、貯蔵フィルターの上方に開口を有している。検査結果を観察するために、容器全体が透明であるか、または分析物検出ゾーン上の一部分が透明であってよい。プラスチックに入れた装置は、家庭用診断装置において使用するために特に有用かつ好都合であるが、処理紙のような他の物質を用いることもできる。
　【００４３】
　さらに、開口周囲の上方の表面は、カップ様容器を形成するように湾曲して下方に広がり、貯蔵パッドの一部分で終わっており、かつ強く嵌合している。この方法では、装置中に導入された試料の量が計量され、該試料は、装置の如何なる成分をも迂回できない。
　【００４４】
　本発明は、競合検査またはサンドイッチ検査のいずれについても使用することができる。競合検査では、標識化抗原（標的抗原と同一である）は、分離して、または第１フィルター素子の一部分としてさらに含有される。この標識化抗原は、検出ゾーン上での結合に関して、試料からの抗原と競合する。
　【００４５】
　本発明の診断装置および方法は、如何なるリガンド−レセプター反応においても使用することができ、抗体、抗原、およびハプテンのような免疫化学的成分を有する反応に関して特に適している。抗原またはハプテンのようなリガンド含有分子の検出が望まれるこれらの検査において、標識化試薬および検査指標域において固定化された物質は両方とも、リガンド結合分子である。特に、該リガンドが抗原である場合、標識化試薬と固定化試薬は両方とも抗体である。
　【００４６】
　抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれであってもよく、この生成方法は当技術分野において周知である。最大の結合を達成するために、第１フィルター素子において標識化モノクローナル抗体を、そして検査指標域においてポリクローナル抗体を使用するのが好ましい。しかし、モノクローナル−ポリクローナル抗体の如何なる組み合わせも用いることができる。家庭用妊娠および排卵予測装置の場合、抗体は、各々、ヒト絨毛性ゴナドトロピンおよび黄体化ホルモンから得られ、装置中に入れられる。
　【００４７】
　抗体のようなリガンド結合分子の検出が望まれるこれらの場合には、試薬として標識したマウス抗ヒトイムノグロブリンＧを用い、上記のように、第１フィルター素子中に一体化することができ、標的抗体に特異的な抗原が検査指標域中に固定化される。任意の天然または合成抗原ならびに抗原活性を有するポリペプチド鎖を使用することができる。装置上に固定化することができる抗原の例としては、風疹、ライムズ（Ｌｙｍｅｓ）、後天免疫欠乏症候群、肝炎、トキソプラスマ症、サイトメガロウイルス、およびエプスタイン−バーウイルスが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
　【００４８】
　単一の試料における１以上の抗体の同時検出が望まれる検査法では、同一の標識化抗ヒトイムノグロブリン（試薬）が、試料中に存在する全てのヒト抗体を認識し、これと結合するので、吸上膜上の異なった指標域における各標的抗体が抗原と一緒になることが唯一必要である。
　【００４９】
　該装置において使用される標識は、直接または間接のいずれであってもよい。直接標識は、検査結果を肉眼で観察するために、追加の工程を必要としない点で好ましい。直接標識の例としては、金属ゾル、染料ゾル、粒子状ラテックス、色指示薬、リポソームに含有されている着色物質、および炭素ゾルのような非金属ゾルが挙げられるが、これらに限定されるものできない。
　【００５０】
　さらに、本発明は、前記装置において使用するのに特に適切であるが、他の免疫学的検査においてもよく使用することができる免疫化学的標識、特に、免疫学的リガンドまたはリガンド結合分子が微粒子状カーボンブラックの表面に直接的または間接的に結合される免疫化学的標識を提供するものである。
　【００５１】
　免疫学的標識は、図式的に、Ｃ〜ＬまたはＣ〜Ｘ：Ｌ［ここで、Ｃは、微粒子状カーボンブラックであり、“〜”は、吸着結合を表しており、Ｌはリガンド−またはリガンド結合ユニットを含有する成分であり、Ｘは結合剤であり、“：”は、共有結合を表す］で示される。
　【００５２】
　Ｌは、リガンド−またはリガンド結合ユニットのみで構成されていてよく、この場合、炭素上に直接吸着される。他方、リガンド−またはリガンド結合ユニットは、共有的または免疫学的な架橋基（本明細書では、“＊”で示す）と結合することができる。例えば、リガンド−またはリガンド結合ユニットは、グルタルアルデヒドのような結合剤と共有的に結合することができ、次に、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のようなタンパク様の架橋基と共有的に結合し、次いで、炭素上に吸着される。同様に、アビジンまたはストレプトアビジンは、ビオチンを介してリガンド−またはリガンド結合分子と結合することができ、アビジンまたはストレプトアビジンは炭素粒子上に吸着される。他方、リガンド−またはリガンド結合ユニットとして作用する第１抗体（１°Ａｂ）は、第２抗体（２°Ａｂ）と免疫学的に結合し、該第２抗体は、炭素粒子に吸着される。具体的なＣ〜Ｌの代表的な構造としては、以下のものが挙げられる：
　　Ｃ〜｛リガンド｝、
　　Ｃ〜｛リガンド結合分子｝、
　　Ｃ〜｛タンパク：Ｘ：リガンド｝、
　　Ｃ〜｛タンパク：Ｘ：リガンド結合分子｝、
　　Ｃ〜｛２°Ａｂ＊１°Ａｂ｝、および
　　Ｃ〜｛タンパク：Ｘ：２°Ａｂ＊１°Ａｂ｝。
　【００５３】
　第２に、結合剤Ｙが炭素粒子上に吸着されかつリガンド−またはリガンド結合ユニットと共有的に結合して、一般式：Ｃ〜Ｙ：Ｌで示される標識を形成する。該結合剤Ｙは、以下にさらに詳細に説明するような単一の種類の分子Ｙ’であるか、または、結合剤：タンパク：結合剤のような成分であってよい：
　　Ｃ〜Ｙ’：｛リガンド｝、
　　Ｃ〜Ｙ’：｛リガンド結合分子｝、
　　Ｃ〜Ｙ’：タンパク：Ｘ：｛リガンド｝、および
　　Ｃ〜Ｙ’：タンパク：Ｘ：｛リガンド結合分子｝。
　【００５４】
　これら２つの具体例の間の主な相違点は、第１の具体例では、リガンド、リガンド結合分子、またはタンパク（例えば、抗体、ウシ血清アルブミン、またはアビジン）は、炭素粒子上に吸着されるが、第２の具体例では、結合剤として作用する特定のクラスの有機化合物の一つが炭素粒子上に吸着され、かつリガンド、リガンド結合分子またはタンパクと共有的に結合するということである。
　【００５５】
　前記炭素ゾルは、多くの方法によって製造することができる。リガンドおよびリガンド結合分子は、炭素粒子の懸濁液に単に添加され、Ｃ〜｛リガンド｝およびＣ〜｛リガンド結合分子｝構造物を生成することができる。リガンドまたはリガンド結合分子が間接的に結合している場合、｛タンパク：Ｘ：リガンド｝、｛タンパク：Ｘ：リガンド結合分子｝、｛２°Ａｂ＊１°Ａｂ｝、または｛タンパク：Ｘ：２°Ａｂ＊１°Ａｂ｝のような完全な炭素粒子不含構造物が生成され、次いで、吸着のために炭素粒子の懸濁液に添加することができる。他方、まず、炭素粒子不含構造物の末端部を炭素粒子上に吸着させ、次いで、残存する炭素粒子不含構造物を化学的に導入することができる。例えば、ウシ血清アルブミン、アビジン、またはストレプトアビジンのようなタンパクは、炭素粒子上に吸着され、次いで、例えば、ウシ血清アルブミンに対してはグルタルアルデヒドを、またはアビジンもしくはストレプトアビジンに対してはビオチンを用いて、リガンドまたはリガンド結合分子に結合させることができる。同様に、２°抗体を炭素粒子上に吸着させ、次いで、１°抗体を免疫学的に結合させることができる。
　【００５６】
　ハプテン、抗原、もしくは抗体のようなリガンドおよびリガンド結合分子を共有的に結合するためまたはタンパク架橋基を共有的に結合するために好適な結合試薬Ｙ’としては、例えば、マレイミド、スクシンイミド、フェニルアジド、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、フェニルイソチオシアナート、４，４’−ジイソチオシアノスチルベン−２，２’−ジスルホン酸、４−Ｎ，Ｎ−ジチメルアミノアゾベンゼン−４’−イソチオシアナート、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミンイソチオシアナートのようなイミド、アジド、イソチオシアナート、イミドエステルおよびジアルデヒドが挙げられる。
　【００５７】
　第１の具体例の場合のように、リガンド（またはリガンド結合分子）、架橋タンパク、および結合剤を反応させることによって生成される完全な炭素粒子不含構造物は、微粒子状カーボンブラックの表面上に吸着されることができる。他方、まず、結合試薬だけを微粒子状カーボンブラック上に吸着させ、次いで、リガンド、リガンド結合分子、および／または架橋タンパクと共有的に結合させることができる。
　【００５８】
　上記方法において、一般的に、微粒子状カーボンブラックの水性懸濁液に、例えばポリアルキレングリコールまたはポリサッカリドのような懸濁補助剤を添加することが望ましい。以下に説明するように、次に、免疫学的リガンドまたはリガンド結合分子を微粒子状カーボンブラックに結合した後、保護剤として同様の物質を添加する。この段階で添加された量は、比較的少量であり、一般的には炭素粒子の懸濁液中で単に助長するだけに充分な量である。
　【００５９】
　次いで、結合試薬を、同時にまたは逐次、（ｉ）免疫学的リガンドおよびリガンド結合分子と共有的に結合し、かつ（ｉｉ）微粒子状カーボンブラック上で吸着させる。個々の結合試薬に因るが、結合反応は、一般に、約７．０〜約９．５のｐＨで、数時間行われる。
　【００６０】
　種々の市販の入手可能な微粒子状カーボンブラックとしては、モナーク（Ｍｏｎａｒｃｈ）１，０００、１２０もしくは８８０、バルカン（Ｖｕｌｃａｎ）ＸＣ７２もしくはＸＣ７２Ｒ、またはリーガル（Ｒｅｇａｌ）２５０Ｒもしくは５００Ｒのようなものを使用することができる。如何なる個々の原料の妥当性も、緩衝液中で物質をホモジネートし、光学密度を測定することによって容易に決定することができる。
　【００６１】
　好ましくは、共有的または受動的に結合したリガンドまたはリガンド結合分子を有する微粒子状カーボンブラックをポリアルキレングリコールまたはポリサッカリド保護剤で処理して、疎水性を最小にし、分散性を最大にする。このようなコーティングに適している物質は、約１００〜約２０，０００、好ましくは約５，０００〜約１２，０００の分子量を有しているポリエチレングリコール、および約１０，０００〜約５００，０００、好ましくは約１０，０００〜約５０，０００の分子量を有しているデキストランのような保護ポリサッカリド類である。このコーティングは、ポリエチレングリコールまたはデキストランの０．５〜５重量／容量％水溶液と、結合したカーボンブラックを接触させることによって容易に達成することができる。
　【００６２】
　また、他の具体例では、免疫化学的標識は、約０．０１〜約０．５％の範囲の濃度の、少なくとも１つの生物学的に許容されるイオンまたはノニオン界面活性剤、例えば、長鎖アルキル・トリメチルアンモニウム塩、デオキシコール酸ナトリウム、トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）、トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）などで処理される。同一または異なるタイプの洗剤によるこのような処理を数回行うことができるが、その後、免疫化学的標識を洗浄して、過剰量の洗剤を除去する。
　【００６３】
　次いで、得られた免疫化学的標識を水性媒質中に懸濁させることができる。このような免疫化学的標識の水性懸濁液は、本発明または他の構造を有する免疫学的検査装置の作成に特に有用である。好ましくは、水性懸濁液は、標識化免疫学的リガンドまたは分子結合リガンドが安定であるｐＫａ、例えば約６〜約９の範囲内、好ましくは約６．５〜約８．５の範囲内のｐＫａを提供するために、少なくとも１つの緩衝液を含んでいる。
　【００６４】
　以下に実施例を挙げて、本発明の特徴を詳細に説明するが、本発明の範囲を限定するものではない。
　【００６５】
　
感度測定
　感度は、以下の実施例において、２５ｍＩＵ／ｍｌ、５０ｍＩＵ／ｍｌ、７５ｍＩＵ／ｍｌおよび１００ｍＩＵ／ｍｌの濃度のヒト絨毛性ゴナドトロピンの標準的な溶液を製造することによって決定される。該標準的試料（０．１５〜０．２０ｍｌ）を検査装置に入れ、与えられたヒト絨毛性ゴナドトロピンの濃度を検出することができる該装置の能力によって感度を決定する。
　【００６６】
　【実施例】
　実施例１
Ａ．標識の調製
　蒸留水７５０ｍｌに金ゾル粒子を溶解し、次いで沸騰させた。金酸（ｈｙｄｒｏａｕｒｉｃ　ａｃｉｄ）（７０〜７５ｍｇ）を添加し、５分間沸騰させ続けた。該金溶液に、蒸留水１０ｍｌに溶解したクエン酸ナトリウム（８０ｍｇ）を注ぎ、該溶液をさらに５分間沸騰させた。該溶液を室温に冷却した後、このｐＨを、ヒト絨毛性ゴナドトロピンホルモンに対して作られたモノクローナル抗体の等電点（ゲル電気泳動を用いて測定した）付近の範囲に調節した。この溶液に該モノクローナル抗体２０ｍｇを添加し、室温で２時間撹拌した。ウシ血清アルブミン７５０ｍｇを添加し、該溶液を室温で約１２時間撹拌し続けた。ＧＳＡローター中、１０，０００ＲＰＭで２０分間遠心分離し、上澄み液を廃棄し、得られたペレットをリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．４）中１％ウシ血清アルブミン３０ｍｌに懸濁することによってコロイド状金−モノクローナル抗体コンジュゲート体を回収した。次いで、該懸濁液を、ソーバル（Ｓｏｒｖａｌｌ）ＳＳ−３４　ローター中、１６，０００ＲＰＭで１５分間回転した。再度、上澄み液を廃棄し、ペレットを１％ウシ血清アルブミン１５ｍｌに懸濁した。短時間の音波処理の後、懸濁液を０．２μｍフィルターを介して濾過した。
　【００６７】
Ｂ．装置の製造
　予め活性化した孔径５μｍのナイロン膜［ポール・イムノダイン（Ｐａｌｌ　Ｉｍｍｕ−ｎｏｄｙｎｅ）］の試料を１８０ｍｍ×２５ｍｍの大きさに切断し、芯膜として薄いプラスチック製プレート（１００ｍｍ×１８０ｍｍ）の底部に付けた。カマグ・リノマット（Ｃａｍａｇ　Ｌｉｎｏｍａｔ）ＩＶを用いて底部から約１．５ｃｍの線形に０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．６）および５％スクロースに３ｍｇ／ｍｌのヒツジ抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）抗体を溶解した溶液３６μｌをスプレイすることによって、該膜上に固定化抗体の検査指標域を規定した。スプレイの後、膜を３７℃で３０分間乾燥させ、次いで、０．１Ｍリン酸緩衝液に２％無脂肪粉ミルク［カーネーション（Ｃａｒｎａｔｉｏｎ）］および２％スクロースを溶解した溶液で処理した。次いで、該膜を０．１リン酸ナトリウム中２％スクロースで洗浄し、さらに乾燥するために室温で約１２時間放置した。次の工程まで、基板および吸上膜をデシケーター中に貯蔵することができる。
　【００６８】
　２つのセルロース膜［ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）ＥＴ３１］を、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）、０．１％ウシ血清アルブミン、０．５％無脂肪粉ミルク、２％スクロース、および０．０５％アジ化ナトリウムの溶液で予め処理し、室温で３０分間インキュベートした。
　【００６９】
　予め処理した２つのセルロース膜を、室温で１時間、減圧デシケーター中で乾燥することによって、第２フィルター素子および貯蔵パッドを調製した。
　【００７０】
　０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．６）および５％スクロースにコロイド状金−モノクローナル抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体コンジュゲート体を溶解した溶液中、室温で３０分間、５ｍｍ×１８０ｍｍの長方形のセルロース膜片［シュライヒャー・アンド・シュール（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ　＆　Ｓｃｈｕｅｌｌ）］をインキュベートすることによって、第１フィルター素子を調製した。次いで、該膜をガラスプレート上に置き、凍結乾燥器中、一定の減圧下、３６℃で加熱乾燥し、使用するまでデシケーター中で貯蔵乾燥した。
　【００７１】
　第２フィルター素子に接して第１フィルター素子を付け、吸上膜に接してプラスチック製基板に第２フィルター素子を付けた。最後に、第１フィルター素子に接して貯蔵パッドを付けた。次いで、該プラスチック製プレートを、各々、貯蔵パッド、第１フィルター素子、第２フィルター素子および吸上膜の線形配列を含むように、長さ１００ｍｍおよび幅７．５ｍｍの複数の小片に切断した。
　【００７２】
　実施例２
　吸上膜のために用いた物質が孔径１２μｍを有するセルロース膜（シュライヒャー・アンド・シュール）である以外は、実施例１Ｂと同じ方法を行った。抗体で線形にスプレイした後、膜をデシケーター中に２４時間放置して、抗体−膜結合を確実に最大にした。次いで、膜を、ｐＨ８．５〜９．０の範囲の０．１Ｍホウ酸緩衝液中１％ウシ血清アルブミン、０．５％無脂肪粉ミルク、５％トレハロース、０．０５％トゥイーン　２０、および０．０５％アジ化ナトリウムを含むブロッキング緩衝液中でインキュベートした。ブロックされた膜を減圧デシケーター中で再度１時間乾燥し、検査装置に入れるまで、通常のデシケーター中に貯蔵した。
　【００７３】
　実施例３
　実施例１Ｂの方法にしたがって小片を調製した。
　【００７４】
　貯蔵パッドに尿の流れを与えると、約３分後に、検査指標域に検出可能な信号が現れ始めた。検査感度は約５０ｍＩＵ／ｍｌであった。
　【００７５】
　実施例４
　第１フィルター素子および貯蔵パッドを省略した以外は実施例１Ｂの方法に従って小片を製造した。実施例１に従って調製したコロイド状金−モノクローナル抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体コンジュゲート体１０μｌを含む雌性の尿１００μｌを入れた管の中に、該小片を差し込んだ。液体が小片に沿って移動すると、約２分で、検査指標域中に検出可能な信号が現れ、液体が小片の端部に達するまでの時間（約４分）に強くなっていった。存在するヒト絨毛性ゴナドトロピンに対するこの検査方法の感度は、２５ｍＩＵ／ｍｌであった。
　【００７６】
　実施例５
　以下のとおり、標識した抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体で第１フィルター素子を処理した以外は、実施例１Ｂの方法に実質的に従って、試験小片を調製した。市販の入手可能な、粒径０．１〜０．３μｍの範囲の着色されたポリスチレンラテックス粒子の１０％懸濁液（０．１ｍｌ）を、マイクロヒュージ（ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ）遠心分離によって、蒸留水で３回洗浄した。最終ペレットを、ウシ血清アルブミン１ｍｇを含有する０．１Ｍグリシン・塩酸塩緩衝液２ｍｌに懸濁した。ロッカー（ｒｏｃｋｅｒ）上で、室温で約１２時間のインキュベーションの後、該ラテックス懸濁液を０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）で３回洗浄して、過剰量のウシ血清アルブミンを除去した。得られた懸濁液を同一のリン酸緩衝液で２ｍｌにし、２５％グルタルアルデヒドを添加して、最終濃度を１％にした。この試料を室温で３時間インキュベートし、同一の緩衝液でさらに３回洗浄した。ラテックス懸濁液２ｍｌに、抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体１００マイクログラムを添加し、室温でさらに３時間インキュベートした。次いで、グリシンを添加して、最終濃度を２％にした。さらに１時間インキュベートした後、ラテックス懸濁液を同一の緩衝液で３回洗浄し、２％ウシ血清アルブミンを含有する同一の緩衝液中に懸濁した。該懸濁液を短時間音波処理し、次いで、使用するまで４℃で貯蔵した。
　【００７７】
　実施例６
　第１フィルター素子および貯蔵パッドを省略した以外、実施例１Ｂの方法に従って、小片を調製した。次いで、該試験小片を、雌性の尿１００μｌに入れた実施例５の方法に従って標識した抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体５μｌを含有する試験管に差し込んだ。液体が小片に沿って移動すると、約２分で、検査指標域に検出可能な信号が現れ、この信号は、液体が小片の端部に達する時間（約４分）まで強くなっていった。このヒト絨毛性ゴナドトロピンに対する該検査法の感度は、２５ｍＩＵ／ｍｌであった。
　【００７８】
　実施例７
　４０ｍＭ塩化ナトリウムおよび２％デキストラン９，４００を含有する２０ｍＭトリス−塩酸塩緩衝液（ｐＨ６．８）２ｍｌ中で、バルカンＸＣ７２炭素粒子１０ｍｇをホモジナイズした。室温で２時間のインキュベーションの後、該溶液に、トリス−塩酸塩緩衝液１ｍｌにフルオレセインイソチオシアナート５ｍｇを溶解した溶液を添加した。該混合物を短時間音波処理し、室温で約１２時間インキュベートした。インキュベーションの後、該炭素溶液に０．１Ｍ塩化ナトリウム中０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．６）の２０ｍｌを添加し、次いで、４℃、１５，０００ＲＰＭで遠心分離した。この工程を３回繰り返し、得られたペレットをリン酸緩衝液２０ｍｌ中に懸濁した。短時間の音波処理の後、該懸濁液に、ヒト絨毛性ゴナドトロピンに対して作られたモノクローナル抗体３ｍｇを添加し、該混合物を室温で６時間インキュベートした。次いで、該混合物を１５，０００ＲＰＭで３回遠心分離して、未反応の抗体を除去した。最終ペレットを、１％ウシ血清アルブミン、５％スクロース、０．１Ｍ塩化ナトリウム、および０．０５％アジ化ナトリウムを含有する０．１Ｍヘペス（Ｈｅｐｅｓ）緩衝液（ｐＨ７．５）２０ｍｌ中に懸濁した。最終濃度が０．０２５％に達するまで、セチルトリメチルアンモニウム臭化物を添加した。次いで、これを３０分間インキュベートし、１５，０００ＲＰＭで遠心分離した。得られたペレットを、１％ウシ血清アルブミン、５％スクロース、０．１Ｍ塩化ナトリウム、および０．０５％アジ化ナトリウムを含有する０．１Ｍヘペス緩衝液（ｐＨ７．５）２０ｍｌ中に懸濁させ、短時間音波処理し、デオキシ酸ナトリウムで希釈して、最終濃度を０．１％にし、その後、室温で３０分間インキュベートし、再度遠心分離した。該ペレットを再度、１％ウシ血清アルブミン、５％スクロース、０．１Ｍ塩化ナトリウム、および０．０５％アジ化ナトリウムを含有する０．１Ｍヘペス緩衝液（ｐＨ７．５）２０ｍｌ中で懸濁し、短時間音波処理した。
　【００７９】
　貯蔵パッドを省略した以外は実施例１Ｂに従って調製した試験小片の第１フィルター素子上に、コロイド状金の代わりに、この炭素ゾルを導入した。この試験小片を減圧乾燥器中で約１時間乾燥し、使用するまで、室温でデシケーター中に貯蔵した。
　【００８０】
　ヒト絨毛性ゴナドトロピンまたは黄体化ホルモン検査を行うために、尿試料１００μｌを培養管に入れ、次いで、この管の中に小片を差し込んだ。尿試料と接触すると、炭素粒子−抗体コンジュゲート体がすぐに溶解し、吸上膜に向かって移動した。陽性試験は、指標において濃縮されたカーボンブラック粒子の非常に濃い色と一致した。検出限界は、ヒト絨毛性ゴナドトロピンおよび黄体化ホルモンの両検査において、約２５ｍＩＵ／ｍｌであった。
　【００８１】
　実施例８
　第１フィルター素子および貯蔵パッドを省略した以外は、実施例１Ｂの方法に従って、小片を調製した。次いで、該試験小片を、完全に混合した炭素ゾル標識化抗体（５μｌ）およびヒト絨毛性ゴナドトロピン含有尿試料（１００μｌ）を含有する試験管中に差し込んだ。約１分後、検出可能な信号が現れ始めた。この検査の感度は約２５ｍＩＵ／ｍｌと測定された。
　【００８２】
　実施例９
　ヒト絨毛性ゴナドトロピンまたは黄体ホルモンに対するモノクローナル抗体でコーティングした炭素ゾル試薬（管当たり５μｌ）を凍結乾燥した。該管は、使用するまで、室温でデシケーター中に貯蔵することができる。
　【００８３】
　ヒト絨毛性ゴナドトロピンまたは黄体化ホルモンを導入するために、尿試料１００μｌを、乾燥または凍結乾燥した炭素ゾルを含有している培養管中に散布した。炭素試薬は、尿試料との接触によってすぐに溶液になった。第１フィルター素子および貯蔵パッドを有していない以外は実施例１Ｂに従って試験小片を製造し、これに指標としてヒツジ抗−全ヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体（小片当たり３μｇ）のラインをスプレイし、次いで管の中に差し込んだ。移動する試料混合物が指標に達すると、尿試料がヒト絨毛性ゴナドトロピンまたは黄体化ホルモンを含有している場合は、黒いバンドが現れ始める。乾燥または凍結乾燥した炭素試薬を用いる検査の感度は、両方の場合、約２５ｍＩＵ／ｍｌであった。乾燥または凍結乾燥した炭素試薬は活性のままであり、室温で１年にわたって貯蔵した後、同じ感度を示す。
　【００８４】
　実施例１０
　第１フィルター素子および貯蔵パッドを削除した以外は、実施例１Ｂに従って、吸上膜上の線形スプレイとして１ｍｇ／ｍｌの抗チロキシン抗体を用いて、検査装置を作成した。
　【００８５】
　チロキシンに結合した炭素ゾル（実施例２１参照）５μと血清１００μｌの混合物中への挿入によって（競合検査）、約２分で、対照バンドが現れ始めた。約６０ｎｇ／ｍｌよりも高い血清試料中のチロキシン（未標識化）のレベルでは、バンドの形成が生じなかった（５９ｎｇ／ｍｌでかすかなバンドが現れた）。これに対して、血清試料中、チロキシンの非存在下で対照バンドと同じ強さのバンドを生じるためには、１０ｎｇ／ｍｌ以下のチロキシンが必要である。
　【００８６】
　実施例１１
　第１フィルター素子および貯蔵パッドを削除し、吸上膜上での線形スプレイとして市販の入手可能な２ｍｇ／ｍｌのライムズ（Ｌｙｍｅｓ）抗原［ＯＥＭコンセプツ（ＯＥＭ　Ｃｏｎｃｅｐｔｓ）］を用いて、実施例１Ｂに従って検査装置を作成した。
　【００８７】
　装置の貯蔵端部を、ヒト血清１００μｌと、フルオレセインイソチオシアナート−コンジュゲートヤギ抗ヒトイムノグロブリンＧで標識した炭素粒子（実施例２１参照）５μｌの混合液中に浸漬すると、試料が血清陽性である場合は、約４分で検出可能な信号が現れる。
　【００８８】
　実施例１２
　実施例１１に従って検査装置を作成した。ヒト血清１０μｌを第２フィルター素子上にスポットした。該装置を、２０ｍＭ四酢酸エチレンジアミンにフルオレセインイソチオシアナート−コンジュゲートヤギ抗ヒトイムノグロブリンＧで標識した炭素粒子（５μｌ）を入れた懸濁液１００μｌを含有する管の中に差し込んだ。試料が血清陽性である場合は、５分で検出可能な信号が現れる。
　【００８９】
　実施例１３
　２ｍｇ／ｍｌの風疹抗原［ビラル・アンチゲンズ・インコーポレイテッド（Ｖｉｒａｌ　Ａｎｔｉｇｅｎｓ，Ｉｎｃ．）］を芯膜上に線形スプレイした以外は、実施例１１に従って検査装置を作成した。
　【００９０】
　貯蔵パッドが、ヒト血清１００μｌ、およびフルオレセインイソチオシアナートコンジュゲートヤギ抗ヒトイムノグロブリンＧで標識した炭素粒子（実施例２１参照）５μｌと接触すると、試料が血清陽性である場合は、約２分で検出可能な信号が現れる。
　【００９１】
　実施例１４
　実施例１３に従って検査装置を作成した。次に、血清１０μｌを第２フィルター素子上にスポットし、該装置を、２０ｍＭ四酢酸エチレンジアミンにフルオレセインイソチオシアナートコンジュゲートヤギ抗ヒトイムノグロブリンＧで標識した炭素粒子（実施例２１参照）を入れた懸濁液１００μｌを含んでいる管に差し込んだ。
　【００９２】
　試料が血清陽性である場合は、約３分で検出可能な信号が現れる。
　【００９３】
　実施例１５
　実施例１１に従って検査装置を作成し、ライム抗原のラインと平行に該ラインから約７ｍｍ離れて、風疹抗原を線形スプレイした。
　【００９４】
　風疹血清陽性試料（１０μｌ）を第２フィルター素子上にスポットした。該装置を、２０ｍＭ四酢酸エチレンジアミンにフルオレセインイソチオシアナートコンジュゲートヤギ抗ヒトイムノグロブリンＧで標識した炭素粒子（実施例２１参照）（１０μｌ）を入れた懸濁液１００μｌを含んでいる管中に差し込んだ。
　【００９５】
　風疹抗原のラインに沿って、約５分で検出可能な信号が現れた。
　【００９６】
　実施例１６
　風疹およびライム血清陽性試料（２０μｌ）を膜上にスポットした以外は実施例１５の方法に従った。約５分で２つの検出可能な信号が現れた。
　【００９７】
　実施例１７
　炭素ゾル調製用の種々の炭素材料および同調製用の緩衝液の安定性は、以下の方法で容易に測定することができる。
　【００９８】
　Ａ．種々のカーボンブラック［モナルク１，０００、モナルク８８０、モナルク１２０、リーガル２５０Ｒ、リーガル５００Ｒ、バルカンＸＣ７２ＲおよびバルカンＸＣ７２；全て、カボット（Ｃａｂｏｔ）から入手］５ｍｇと２％ポリエチレングリコール（６，０００〜８，０００）１００μｌの混合物を５分間研磨し、ヒト絨毛性ゴナドトロピンに対して作られたモノクローナル抗体２ｍｇを含有しているリン酸食塩緩衝液で１０ｍｌに希釈した。該モノクローナル抗体溶液に炭素粒子を分散させるために短時間音波処理をした後、撹拌しながら、混合物を室温で６時間インキュベートした。インキュベーションの後に、試料を遠心分離によって３回洗浄し、過剰量の抗体を除去した。各遠心分離は、リン酸緩衝溶液１０ｍｌを用いて１５，０００ＲＰＭで２０分間行った。最終ペレットを３％リン酸緩衝溶液１０ｍｌに懸濁し、短時間音波処理して、炭素粒子を完全に分散した。
　【００９９】
　ヒト絨毛性ゴナドトロピン検査に関して、炭素ゾル２０μｌおよび尿試料２００μｌを分散し、培養管（１０×７５ｍｍ）中でよく混合した。次いで、該混合物を、ヒツジ抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体で線形スプレイし、リン酸緩衝溶液（ｐＨ７．４）中１％ウシ血清アルブミンでブロックした、幅５ｍｍおよび高さ１００ｍｍの大きさのワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）ペーパー（３１ＥＴ）の小片に移動させた。
　【０１００】
　バルカンＸＣ７２は、２００ｍＩＵ／ｍｌヒト絨毛性ゴナドトロピンで最良の信号対ノイズの割合を得ると思われる。バルカンＸＣ７２Ｒについて同様な結果が得られるが、陽性の信号がわずかに低い。
　【０１０１】
　Ｂ．ホモジナイゼーションによって、同一のカーボンブラック５ｍｇを、塩化ナトリウム４０ｍｍおよび２％（ｗ／ｖ）デキストラン９，４００を含有する２０ｍＭトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ６．８）２ｍｌに懸濁した。室温で２時間インキュベートした後、このホモジナイズした炭素懸濁液に３％ウシ血清アルブミン溶液１ｍｌを添加した。該混合物を短時間音波処理し、室温でさらに約１２時間インキュベートした。インキュベーションの後、該混合物５μｌを蒸留水１ｍｌを含んでいるキューベット中に分散させた。各試料について、７００ｎｍでの吸光度を測定した。結果を下記表１に示す。
　【０１０２】
　【表１】
　【０１０３】
　Ｃ．バルカンＸＣ７２カーボンブラックを種々のｐＨを有する数種類の緩衝溶液中に懸濁させる。バルカンＸＣ７２炭素粒子５ｍｇを、２％デキストラン９，４００を含有する種々の緩衝溶液２ｍｌ中でホモジナイズし、室温で２時間インキュベートした。インキュベーションの後、各ホモジネート物５μｌを蒸留水１ｍｌに添加した。該混合物に、同一の緩衝液中３％ウシ血清アルブミン１ｍｌを添加し、次いで、音波処理し、室温で約１２時間インキュベートした。インキュベーションの後に、該混合物５μｌを蒸留水１ｍｌに懸濁し、７００ｎｍでの吸光度を測定した。結果を下記表２に示す。
　【０１０４】
　【表２】
　【０１０５】
　上記表２からわかるように、約６．８〜８のｐＨ値を有する緩衝溶液は、炭素粒子の分散について特に良好である。
　【０１０６】
　実施例１８
　撹拌しながら、０．３Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ９．０）１ｍｌに抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体１ｍｇを入れた混合物に、フルオレセインイソチオシアナート５０μｇを添加した。１時間撹拌し続け、次いで、混合物をセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−２５カラムに通して、未反応イソチオシアナートおよび他の不必要な物質を除去した。抗体：イソチオシアナートの割合は、約１：３であった。カーボンブラック（バルカン７２）１ｍｇの水性懸濁液に抗体結合体０．５ｍｇを添加した。混合物を音波処理し、室温で１２時間インキュベートし、３回遠心分離した。最終ペレットを、実施例１２に記載のような緩衝液に懸濁し、使用するまで４℃で貯蔵した。
　【０１０７】
　抗黄体化ホルモン、ヤギ抗ヒトイムノグロブリンＧ、およびイムノグロブリンＭ抗体を用いて、同様の生成物を得ることができる。
　【０１０８】
　実施例１９
　カーボンブラック（バルカン７２）５ｍｇの水性懸濁液１０ｍｌにヤギ抗マウス抗血清２００μｌを添加した。該混合物を音波処理し、室温で約１２時間インキュベートした。次いで、抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体１ｍｇを添加し、この混合物を室温で２時間インキュベートし、３回遠心分離した。最終ペレツトを、実施例１２に記載のような緩衝液に懸濁し、使用するまで４℃で貯蔵した。
　【０１０９】
　実施例２０
　リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）１０ｍｌにカーボンブラック５ｍｇを入れた懸濁液にアビジン２ｍｇを添加した。室温で２時間インキュベートした後、ＰＢＳ中３％ウシ血清アルブミン５ｍｌを添加した。２時間放置した後、ＰＢＳ中１％ウシ血清アルブミンに入れたビオチン化抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン０．５ｍｇを添加した。さらに１時間インキュベートした後、混合物を３回遠心分離した。最終ペレットを、実施例１２に記載のような緩衝液に懸濁し、次いで、短時間音波処理し、使用するまで４℃で貯蔵した。
　【０１１０】
　実施例２１
　バルカンＸＣ７２炭素粒子１０ｍｇを、４０ｍＭ塩化ナトリウムおよび２％デキストラン９，４００を含有する２０ｍＭトリス−塩酸塩緩衝液（ｐＨ６．８）２ｍｌ中でホモジナイズした。室温で２時間インキュベートした後、該溶液に、トリス−塩酸塩緩衝液１ｍｌにフルオレセインイソチオシアナート５ｍｇを溶解した溶液を添加した。混合物を短時間音波処理し、室温で約１２時間インキュベートした。インキュベーションの後、該炭素溶液に、０．１Ｍ塩化ナトリウムに入れた０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．６）２０ｍｌを添加し、次いで、４℃、１５，０００ＲＰＭで遠心分離した。この工程を３回繰り返し、得られたペレットをリン酸緩衝液２０ｍｌに懸濁した。
　【０１１１】
　上記懸濁液２ｍｌにウシ血清アルブミン２ｍｇを添加し、該混合物を６時間インキュベートし、次いで、３回遠心分離した。過剰量のグルタルアルデヒド（１％）を添加し、室温で３時間インキュベートした後、遠心分離によって除去した。充分量のジメチルホルムアミドを添加し、この混合物を室温で３回インキュベートした。最終ペレットを、実施例１２に記載のような緩衝液中で懸濁し、次いで、短時間音波処理し、使用するまで４℃で貯蔵した。
【図面の簡単な説明】
　【図１】　代表的な一方向性検査装置の断面図である。
　【図２】　第２の代表的な具体的な一方向性検査装置の断面図である。
　【図３】　代表的な二方向性検査装置の断面図である。
　【図４】　単一の穴部を有するプラスチック製容器中に入れた図２で示したような検査装置（部分的に隠れ線で示した）の斜視図である。
　【図５】　多方向性検査装置の平面図である。
　【図６】　２つの穴部を有するプラスチック製容器に入れた図２で示したような検査装置（部分的に隠れ線で示した）の斜視図である。
　【符号の説明】
　１０、１１０、２１０、３１０、５１０…貯蔵パッド、
　１２、１４、１１２Ａ、１１２Ｂ、１１４Ａ、１１４Ｂ、３１２、３１４、５１２、５１４…フィルター素子、
　１６、１１６Ａ、１１６Ｂ、２１６、３１６、５１６…吸上膜、
　１８、１１８Ａ、１１８Ｂ、２１８、３１８、５１８…検査指標域、
　２０、３２０…基板、
　２２２、５２２…ケーシング、
　２２４、５２４、５３０…穴部、
　２２６…窓
　２２８、５２８…検査指標制御域。