【手続補正書】
【提出日】平成27年7月6日(2015.7.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリメラーゼ活性を機能的に破壊する内部欠失を有する突然変異ＨＢＶポリメラーゼドメインを含んでなる変異型ポリペプチドであって、前記内部欠失が、少なくとも４個のアミノ酸残基、多くて３０個のアミノ酸残基の欠失であり、かつ、前記内部欠失が天然ＨＢＶポリメラーゼのポリメラーゼドメインに天然に存在するＹＭＤＤモチーフを少なくとも含んでなる、変異型ポリペプチド。
【請求項２】
前記突然変異ポリメラーゼドメインが、少なくとも２０３番のＴｙｒ残基、２０４番のＭｅｔ残基、２０５番のＡｓｐ残基および２０６番のＡｓｐ残基を欠くこと以外は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項１に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項３】
前記突然変異ポリメラーゼドメインが、少なくとも２０３番のＴｙｒ残基、２０４番のＭｅｔ残基、２０５番のＡｓｐ残基、２０６番のＡｓｐ残基、２０７番のＶａｌ残基、２０８番のＶａｌ残基および２０９番のＬｅｕ残基を欠くこと以外は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項２に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項４】
前記突然変異ポリメラーゼドメインが、配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含んでなる、請求項３に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項５】
前記突然変異ポリメラーゼドメインが、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項４に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項６】
天然ＨＢＶポリメラーゼにより天然に示されるＲＮアーゼＨ活性を機能的に破壊する１以上のアミノ酸残基の突然変異を含んでなる突然変異ＲＮアーゼＨドメインをさらに含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項７】
前記突然変異ＲＮアーゼＨドメインに含まれる１以上の突然変異が、
・配列番号３の、およそ３９番のＧｌｕ残基（Ｅ）からおよそ４６番のＡｌａ（Ａ）残基に及ぶ部分を少なくとも含む、少なくとも８個のアミノ酸、多くて６０個のアミノ酸の欠失；
・配列番号３の１０番のＡｓｐ（Ｄ）残基の、Ａｓｐ（Ｄ）以外のアミノ酸残基での置換；
・配列番号３の９０番のＶａｌ（Ｖ）残基の、Ｖａｌ（Ｖ）以外のアミノ酸での置換；
・配列番号３の９７番のＴｈｒ（Ｔ）またはＡｌａ（Ａ）残基の、Ｔｈｒ（Ｔ）またはＡｌａ（Ａ）以外のアミノ酸での置換；
・配列番号３の９８番のＡｓｐ（Ｄ）残基の、Ａｓｐ（Ｄ）以外のアミノ酸での置換；および
・それらの任意の組合せ
からなる群から選択される、請求項６に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項８】
配列番号３の前記１０番、９０番、９７番または９８番の置換残基が、Ｈｉｓ（Ｈ）残基またはＴｙｒ（Ｙ）残基に置き換わっている、請求項７に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項９】
前記配列番号３の１０番の残基がＨｉｓ（Ｈ）残基で置換され、前記配列番号３の９０番の残基がＴｙｒ（Ｙ）残基で置換され、前記配列番号３の９７番の残基がＴｙｒ（Ｙ）残基で置換され、かつ／または前記配列番号３の９８番の残基がＨｉｓ（Ｈ）残基で置換されている、請求項８に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項１０】
前記突然変異ＲＮアーゼＨドメインに含まれる欠失が、配列番号３のおよそ３９番のＧｌｕ残基（Ｅ）からおよそ６３番のＬｅｕ（Ｌ）残基に及ぶ少なくとも２５個のアミノ酸の部分、より好ましくは、配列番号３のおよそ３１番のＸａａ残基からおよそ６３番のＬｅｕ（Ｌ）残基に及ぶ少なくとも３３個のアミノ酸の部分を含んでなる、請求項７〜９のいずれか一項に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項１１】
前記突然変異ＲＮアーゼＨドメインが、（ａ）３１番の残基Ｘａａからおよそ６３番のＬｅｕ（Ｌ）残基に及ぶ３３個のアミノ酸残基の部分を欠き、かつ、（ｂ）１０番のＡｓｐ（Ｄ）残基の、Ｈｉｓ（Ｈ）残基での置換（Ｄ６８９Ｈ）；（ｃ）９０番のＶａｌ（Ｖ）残基の、Ｔｙｒ（Ｙ）残基での置換（Ｖ７６９Ｙ）；（ｄ）９７番の残基の、Ｔｙｒ（Ｙ）残基での置換（Ｔ／Ａ７７６Ｙ）および（ｅ）９８番のＡｓｐ（Ｄ）残基の、Ｈｉｓ（Ｈ）残基での置換（Ｄ７７７Ｈ）を含んでなること以外は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項１０に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項１２】
配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含んでなる突然変異ＲＮアーゼＨドメインを含んでなる、請求項１１に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項１３】
配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含んでなる、請求項３〜１１のいずれか一項に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項１４】
配列番号５に示されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項１３に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項１５】
１以上の付加的ポリペプチドまたはペプチドと組み合わせて使用される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項１６】
前記１以上の付加的ポリペプチドまたはペプチドが、ＨＢｃ、ＨＢｓ、Ｘタンパク質およびその免疫原性断片からなる群から選択されるＨＢＶポリペプチドまたはペプチドである、請求項１５に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項１７】
前記付加的ＨＢＶポリペプチドまたはペプチドが、Ｙ０７５８７分離株などの遺伝子型Ｄ  ＨＢＶに由来する、請求項１６に記載の変異型ポリペプチド。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の変異型ポリペプチドと、ＨＢＶコアポリペプチドとを含んでなる、融合タンパク質。
【請求項１９】
前記ＨＢＶコアポリペプチドがＣ末端切断されている、特に、残基１４８または１４９で切断されている、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
前記ＨＢＶコアポリペプチドが前記変異型ポリメラーゼポリペプチドのＮ末端とインフレームで融合されている、請求項１８または１９に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
配列番号６に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含んでなる、請求項２０に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
配列番号６に示されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項２１に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の変異型ポリペプチドと、１以上のＨＢｓＡｇ免疫原性ドメイン、または１以上のＨＢｓＡｇ免疫原性ドメインをさらに含んでなる請求項１８〜２２のいずれか一項に記載の融合タンパク質とを含んでなる、融合タンパク質。
【請求項２４】
そのＮ末端に、変異型ポリペプチドに融合されたコアポリペプチドと、突然変異ポリメラーゼドメインにおける内部欠失の代わりに、および／または突然変異ＲＮアーゼＨドメインにおける欠失の代わりに融合された１または２つのＨｂｓＡｇ免疫原性ドメインとを含んでなる、請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
配列番号７〜９のいずれかに示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含んでなる、請求項２４に記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
配列番号８に示されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項２５に記載の融合タンパク質。
【請求項２７】
シグナルペプチドおよびトランスメンブランペプチドとインフレームで融合されている、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の変異型ポリペプチドおよび請求項１８〜２６のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
配列番号１０〜１２のいずれかに示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含んでなる、請求項２７に記載の変異型ポリペプチドおよび融合タンパク質。
【請求項２９】
請求項１〜１７および２７〜２８のいずれか一項に記載の変異型ポリペプチドまたは請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の融合タンパク質をコードする、核酸分子。
【請求項３０】
・配列番号１または２に示されるアミノ酸配列を有するポリメラーゼドメインを含んでなる変異型ポリペプチドをコードする核酸分子；
・配列番号３または４に示されるアミノ酸配列を有するＲＮアーゼＨドメインを含んでなる変異型ポリペプチドをコードする核酸分子；
・配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含んでなる変異型ポリペプチドをコードする核酸分子；または
・配列番号６〜１２のいずれかに示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を示すアミノ酸配列を含んでなる融合タンパク質をコードする核酸分子
からなる群から選択される、請求項２９に記載の核酸分子。
【請求項３１】
配列番号１３〜１７のいずれかに示されるヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を示すヌクレオチド配列を含んでなる、請求項２９に記載の核酸分子。
【請求項３２】
請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の核酸分子を含んでなる、ベクター。
【請求項３３】
高等真核細胞または生物における発現のためのプラスミドまたはウイルスベクターである、請求項３２に記載のベクター。
【請求項３４】
レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、麻疹ウイルス、泡沫状ウイルス、アルファウイルス、または水疱性口内炎ウイルスに由来するウイルスベクターである、請求項３３に記載のベクター。
【請求項３５】
ヒトまたはチンパンジーアデノウイルスに由来する複製欠陥アデノウイルスベクターである、請求項３４に記載のベクター。
【請求項３６】
前記核酸分子がアデノウイルスＥｌ領域に挿入され、ＣＭＶプロモーターの制御下に置かれている、請求項３５に記載のベクター。
【請求項３７】
カナリア痘ウイルス、鶏痘ウイルスまたはワクシニアウイルスに由来するポックスウイルスベクターである、請求項３４に記載のベクター。
【請求項３８】
前記ワクシニアウイルスがコペンハーゲン株、ワイエス株および改変アンカラ（ＭＶＡ）株である、請求項３７に記載のベクター。
【請求項３９】
前記核酸分子がＭＶＡベクターの欠失ＩＩＩに挿入され、かつ、ワクシニア７．５ＫプロモーターまたはｐＨ５Ｒプロモーターの制御下に置かれている、請求項３８に記載のベクター。
【請求項４０】
・Ｅｌ領域の代わりに挿入された、ＣＭＶプロモーターなどのプロモーターの制御下に置かれ、かつ、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含んでなる変異型ポリペプチドまたは配列番号６もしくは配列番号８に示されるアミノ酸配列を含んでなる融合タンパク質をコードする核酸分子を含んでなる、欠陥Ａｄベクター；
・Ｅｌ領域の代わりに挿入された、ＣＭＶプロモーターなどのプロモーターの制御下に置かれ、かつ、配列番号１３、配列番号１４または配列番号１５に示されるヌクレオチド配列を含んでなる核酸分子を含んでなる、複製欠陥Ａｄベクター；
・Ｅｌ領域の代わりに挿入された、ＣＭＶプロモーターなどのプロモーターの制御下に置かれ、かつ、配列番号１６または配列番号１７に示されるヌクレオチド配列を含んでなる核酸分子を含んでなる複製欠陥Ａｄベクター、特に、欠陥ＡｄＣｈ３；
・７．５ＫプロモーターまたはｐＨ５Ｒプロモーターなどのワクシニアプロモーターの制御下に置かれ、かつ、配列番号５もしくは配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含んでなる変異型ポリペプチド、または配列番号６、配列番号８もしくは配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含んでなる融合タンパク質をコードする核酸分子を含んでなる、ＭＶＡベクター；および
・７．５ＫプロモーターまたはｐＨ５Ｒプロモーターなどのワクシニアプロモーターの制御下に置かれ、かつ、配列番号１３、配列番号１４または配列番号１５に示されるヌクレオチド配列を含んでなる、核酸分子を含んでなる、ＭＶＡベクター
からなる群から選択される、請求項３４〜３９のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項４１】
感染性ウイルス粒子の形態である、請求項３４〜４０のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項４２】
請求項４１に記載のベクターを製造する方法であって、前記ウイルスベクターを好適な細胞株に導入する工程、前記感染性ウイルス粒子の生産を可能とするのに好適な条件下で前記細胞株を培養する工程、生産された感染性ウイルス粒子を前記細胞株の培養物から回収する工程、および所望により前記ウイルス粒子を精製する工程を含んでなる、方法。
【請求項４３】
請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の核酸分子または請求項３２〜４１のいずれか一項に記載のベクターを含んでなる、宿主細胞。
【請求項４４】
請求項１〜１７および２７〜２８のいずれか一項に記載の変異型ポリペプチド、または請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の融合タンパク質の組換え生産のための方法であって、請求項３２〜４１のいずれか一項に記載のベクターを好適な宿主細胞に導入してトランスフェクト宿主細胞または感染宿主細胞を作出する工程、前記トランスフェクト宿主細胞または感染宿主細胞をその宿主細胞の増殖に好適な条件下で培養する工程、前記細胞培養物を回収する工程、および所望により生産された変異型ポリペプチドまたは融合タンパク質を精製する工程を含んでなる、方法。
【請求項４５】
請求項１〜１７および２７〜２８のいずれか一項に記載の変異型ポリメラーゼポリペプチド、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項３２〜４１のいずれか一項に記載のベクター、請求項４３に記載の宿主細胞、またはそれらの任意の組合せを少なくとも含んでなる、組成物。
【請求項４６】
薬学上許容可能なビヒクルをさらに含んでなる、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
筋肉内投与、皮下投与、皮内投与または乱刺用に処方される、請求項４５または４６に記載の組成物。
【請求項４８】
約５×１０８、約１０９、約５×１０９、約１０１０、約５×ｌ０１０ｖｐまたは約１０１１ｖｐのアデノウイルスベクターの用量を含んでなる、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４９】
約５×ｌ０６、約１０７、約５×１０７、約１０８、または約５×１０８ｐｆｕのＭＶＡベクターの用量を含んでなる、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５０】
ＨＢＶ感染またはＨＢＶ関連疾患および病態の治療または予防に使用するための医薬組成物であって、請求項１〜１７および２７〜２８のいずれか一項に記載の変異型ポリペプチド、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項３２〜４１のいずれか一項に記載のベクター、請求項４３に記載の宿主細胞、または請求項４５〜４９のいずれか一項に記載の組成物を含んでなる、医薬組成物。
【請求項５１】
慢性ＨＢＶ感染の治療に使用するための医薬組成物であって、請求項１〜１７および２７〜２８のいずれか一項に記載の変異型ポリペプチド、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項３２〜４１のいずれか一項に記載のベクター、請求項４３に記載の宿主細胞、または請求項４５〜４９のいずれか一項に記載の組成物を含んでなる、医薬組成物。
【請求項５２】
治療される生物における免疫応答の惹起または刺激に使用するための医薬組成物であって、請求項１〜１７および２７〜２８のいずれか一項に記載の変異型ポリペプチド、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項３２〜４１のいずれか一項に記載のベクター、請求項４３に記載の宿主細胞、または請求項４５〜４９のいずれか一項に記載の組成物を含んでなる、医薬組成物。
【請求項５３】
前記惹起または刺激される免疫応答が特異的および／または非特異的、体液性および／または細胞性である、請求項５２に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記免疫応答が、ＨＢＶポリペプチド／エピトープに対するＴ細胞応答ＣＤ４＋媒介性またはＣＤ８＋媒介性またはその両方のものである、請求項５３に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記使用が治療上有効な量の前記変異型ポリメラーゼポリペプチド、融合タンパク質、核酸分子、ベクターまたは組成物の１以上の投与を含んでなる、請求項５０〜５４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
前記ベクターがＭＶＡベクターであり、前記使用がおよそ１週間の間隔をあけた３回の皮下投与を含んでなる、請求項５０〜５４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
前記ベクターがアデノウイルスベクターであり、前記使用が１回または２回の筋肉内投与または皮下投与を含んでなる、請求項５０〜５４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
前記使用が標準治療と組み合わせて実施される、請求項５０〜５７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
前記使用がプライムブースト法に従って実施される、請求項５０〜５８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６０】
プライミングがＭＶＡベクターで実施され、ブースティングがＡｄベクターで実施される、請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
前記ＭＶＡベクターおよび／またはＡｄベクターが配列番号８に示される融合タンパク質をコードする、請求項６０に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
３日から３か月までの異なる期間離したＭＶＡベクターの少なくとも３回の皮下投与と、その後のアデノウイルスベクターの筋肉内または皮下ブーストを含んでなる、請求項６０または６１に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
プライミングがプラスミドＤＮＡベクターで実施され、ブースティングがＭＶＡベクターで実施される、請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
前記プラスミドおよび／またはＡｄベクターが配列番号８に示される融合タンパク質をコードする、請求項６３に記載の医薬組成物。
【請求項６５】
２週間から３か月までの異なる期間離したＤＮＡベクターの少なくとも３回の筋肉内投与と、ＭＶＡベクターの少なくとも１回の皮下ブーストとを含んでなる、請求項６３または６４に記載の医薬組成物。
【請求項６６】
請求項１〜１７および２７〜２８のいずれか一項に記載の変異型ポリメラーゼポリペプチド、請求項１８〜２８のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項３２〜４１のいずれか一項に記載のベクター、請求項４３に記載の宿主細胞、または請求項４５〜４９のいずれか一項に記載の組成物からなる群から選択される複数の有効薬を含んでなる、被験体におけるＨＢＶ感染の治療または免疫応答の惹起に使用するための、パーツキット。