(57)【要約】      （修正有）【課題】皮膚のバリア機能，完全性，健康および外見の改善に有効な組成物，アンチエイジング剤の提供。【解決手段】極性溶媒中にホホバ（Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の抽出物を含む組成物。【選択図】図３
2018027965.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の構造、強度、粘着性またはその任意の組合せを保持するか、および／または促進し、それにより皮膚バリア機能を保持するかまたは促進するための組成物であって、ホホバ（Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）植物またはその部分の極性溶媒抽出物を活性成分として含み、前記抽出物が細胞対細胞接着を促進するのに有効であることによって特徴付けられる、組成物。
【請求項２】
皮膚バリア機能を保持するかまたは促進することが、皮膚脱水率を保持するかまたは低減すること；皮膚水和値を保持するかまたは促進すること；環境害毒からの防御を保持するかまたは促進すること、ならびにその任意の組合せのうちの少なくとも１つを包含する請求項１記載の組成物。
【請求項３】
皮膚の健康、皮膚の完全性、皮膚の引き締まり、皮膚の伸展性、皮膚の弾性、全体的皮膚外見およびその任意の組合せを保持することまたは改善することのうちの少なくとも１つにおいて有効である請求項１記載の組成物。
【請求項４】
皮膚の健康を改善することが、湿疹、皮膚疾患、尋常性乾癬、扁平苔癬、魚鱗癬、尋常性魚鱗癬および胆道炎の症候を軽減すること；水疱症を防止すること；正常皮膚恒常性を保持すること；皮膚創傷治癒を助長することおよびその任意の組合せのうちの少なくとも１つを包含する請求項３記載の組成物。
【請求項５】
全体的皮膚外見を促進することが、皺および線を含めた加齢および風化皮膚の可視的徴候を防止すること；皮膚表面を平坦にすること；皮膚孔サイズを低減することまたはその任意の組合せのうちの少なくとも１つを包含する請求項３記載の組成物。
【請求項６】
前記皮膚の構造、強度、粘着性またはバリア機能を促進することまたは保持することが、予定閾値と比較して決定される請求項１記載の組成物。
【請求項７】
前記予定閾値が、皮膚への組成物の投与前に測定される値である請求項６記載の組成物。
【請求項８】
前記予定閾値が、健常皮膚を有する個体から得られる平均値である請求項６記載の組成物。
【請求項９】
前記予定閾値が、肌荒れを有する個体から得られる平均値である請求項６記載の組成物。
【請求項１０】
前記極性溶媒が、水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、メタノール、グリセロール、プロパノール、ブタノール、ジプロピレングリコール、ペンチレングリコール、へキシレングリコール、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、蟻酸、酢酸、アセトンおよびその任意の組合せからなる群から選択される請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
前記極性溶媒が水である請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
前記極性溶媒が水、ならびにエタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、メタノール、グリセロールおよびアセトンのうちの少なくとも１つである請求項１０記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、化粧上または製薬上許容可能な希釈剤、担体または賦形剤をさらに含む化粧用または薬学的組成物である請求項１記載の組成物。
【請求項１４】
前記化粧用または薬学的組成物が局所適用のために処方される請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、少なくとも１つの付加的活性成分をさらに含む請求項１記載の組成物。
【請求項１６】
皮膚の構造、強度、粘着性またはその任意の組合せを保持するか、および／または促進し、それにより皮膚バリア機能を保持するかまたは促進するための組成物であって、極性溶媒中のホホバ（Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）植物またはその部分の抽出物を活性成分として含み、前記抽出物が細胞対細胞接着を促進するのに有効であることによって特徴付けられ、
前記抽出物が以下の：
ａ．  ホホバ植物またはその任意の部分を少なくとも１つの極性溶媒と混合するステップ；
ｂ．  液体抽出物を生成するのに十分な時間、前記混合物をインキュベートするステップ；
ｃ．  ホホバ植物またはその部分を取り出し、前記液体抽出物を収集するステップ；
ｄ．  前記液体抽出物を濾過するステップ；そして
ｅ．  前記濾液を収集するステップ
を包含する方法により製造される組成物。
【請求項１７】
前記インキュベーション温度が２０℃〜１２０℃の範囲である請求項１６記載の組成物。
【請求項１８】
ステップ（ｅ）の前記濾液が、１．５μ未満の孔サイズを有するフィルターを通してさらに濾過される請求項１６記載の組成物。
【請求項１９】
前記ホホバ植物部分が、根、茎、葉、種子、果実またはその任意の組合せからなる群から選択される請求項１６記載の組成物。
【請求項２０】
前記植物部分が葉である請求項１６記載の組成物。
【請求項２１】
前記ホホバ植物またはその部分が、新鮮、部分的乾燥または完全乾燥形態からなる群から選択される形態である請求項１６記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スキンケアの分野に、特に皮膚のバリア機能を促進するのに有効であり、皮膚の完全性、構造および強度を改善するために、そして皮膚アンチエイジング剤として有用であるホホバ（Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の抽出物に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は多数の機能を供するが、しかしその主な機能は、保護層またはバリアとしての機能である。陸生動物のための皮膚の最も重要な役割は、乾燥外部環境から水を多く含む内部器官を保護することである。さらに、皮膚は、有害な化学的および物理的力から、ならびに病原体の侵入から内部組織を保護する。
【０００３】
皮膚は、構造的に複雑な厚い膜である。皮膚は、表皮、真皮、皮下組織および付属器構造（表皮付属器）で構成される。皮膚の最も外側の上皮性組織である表皮は、それ自体、数層、すなわち角質層、顆粒層、有棘層および基底層からなる。表皮は、主にケラチノサイトで構成され、定常状態では自己置換性を有する。底層で、ケラチノサイト幹細胞は娘細胞に分裂して、外側に追い出され、これは、連続した上に重なる層を通して分化して、角質層に進入する。次いで、ケラチノサイト細胞は、アポトーシスを経て死滅し、それらの細胞小器官および細胞質は、分化の最終過程の間に消失する。
【０００４】
皮膚の水不透性機能は、角質層（ＳＣ）の上部の最も薄い層（ヒトでは約１０〜２０μ）に存在し、生きている器官の他の成員と比較して約３倍のより高い耐水性を有する。
【０００５】
角質層の水和状態は、そのバリア機能のために、ならびに皮膚の健康な且つ引き締まった外見のために重要である。角質層水和および経皮水分損失（ＴＥＷＬ）は、その特性化のために用いられる２つの重要な指標であって、典型的には逆関係を示す。荒れた皮膚バリア機能の一マーカーとしての高ＴＥＷＬ値は、しばしば、角質層の低水和と相関する。バリア機能崩壊は、とりわけ、石鹸および洗剤による皮膚洗浄に、あるいは皮膚の種々の疾患に起因し得る。例えば、アトピー性皮膚炎では、皮膚バリア崩壊は、電子顕微鏡および浸透試験により確証されており、損傷性アトピー性皮膚炎は高いＴＥＷＬ値を示す。角質層水和および経皮水分損失のこの相互作用のメカニズムは、徹底的に研究されてきたわけではない。しかしながら、荒れた皮膚バリア機能が表皮分化における変化をもたらす、ということが示唆されている。
【０００６】
組織完全性は、細胞−細胞接合部により実施される適正な細胞対細胞接着に大きく依存している。細胞−細胞接合部は、膜貫通型接着タンパク質を含む複合体であり、それらの形態および分布は、組織型によって変わり得る。皮膚において、顕著な接合部は、デスモソーム、密着およびギャップ接合部である。
【０００７】
デスモソームは、隣接細胞を密に連結する細胞間接合部である。タンパク質デスモプラキンは、機能的デスモソームの必須の構成成分であり、これは中間径フィラメントをデスモソームプラークに固定する。
【０００８】
密着接合部（ＴＪ）は、隣接細胞を連結し、分子の傍細胞経路を制御し（「バリア機能」）、尖端部分を細胞膜の外側基底部分から分離する（「フェンス機能」）細胞対細胞接合部である。密着接合部の組成は、表皮におけるそれらのバリア機能のために非常に重要であると思われる。ある種のタンパク質の下方調節ならびに過剰発現は、このバリアをかき乱す。密着接合部に対する損害は、皮膚水分損失、乾燥および感受性皮膚と、そしていくつかの皮膚障害、例えば尋常性乾癬、扁平苔癬、胆道炎、および魚鱗癬、例えば尋常性魚鱗癬と関連づけられる。
【０００９】
ギャップ接合部は、隣接細胞間をイオンおよび小分子に通過させる細胞膜中のタンパク質チャネルの組織化収集物である。ギャップ接合部を作り上げるタンパク質チャネルは、コネキソンと呼ばれる膜貫通タンパク質の２つの六角形アレイからなる。１つのコネキソンは、１つの細胞の膜中に存在する。それは整列し、隣接細胞のコネキソンを繋いで、連続水性経路を形成し、これにより、イオンおよび小分子は自由に（受動的に）１つの細胞から他の細胞に通過し得る。
【００１０】
いくつかの合成化合物、ならびに植物抽出物は、皮膚バリア機能に影響を及ぼすことが示されている。例えば、米国特許第８，１０１，２１４号は、各薬草単独を抽出することにより得られる抽出物と比較して、皮膚ケラチノサイトの分化を促進し、減損皮膚バリア機能を回復させ、そして皮膚潤い補給を増大するに際してすぐれている植物抽出物の比率でいくつかの漢方薬草の薬草抽出物複合体を開示する。
【００１１】
米国特許第８，１６８，１９７号は、乾燥皮膚症候を軽減するための皮膚外用組成物を、ならびに皮膚潤い補給化粧品用のその使用を開示するが、これは、主構成成分としてゴマノハグサ（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ  ｂｕｅｒｇｅｒｉａｎａ  Ｍｉｑ．）の抽出物を含有し、さらに、サルノコシカケ科のブクリョウ（Ｐｏｒｉａ  ｃｏｃｏｓ  Ｗｏｌｆ）の抽出物を含有する。組成物は、活性成分としてゴマノハグサ抽出物およびブクリョウ抽出物を含有するが、これらは、水、エタノール、メタノール、ヘキサン、酢酸エチルまたはブタノールを用いて、各々別々に抽出することにより調製される。
【００１２】
米国特許出願公告２００４０１５６８１８号は、インドセンダン種子細胞ブロスおよび１つ以上の付加的植物性成分またはザクロ果実抽出物、そして任意に、皮膚脆弱性の低減、皮膚バリア修復および／または機能の改善、ならびに皮膚潤い補給の改善に特に有用である１つ以上の付加的植物性成分の配合物を含む組成物を開示する。
【００１３】
国際（ＰＣＴ）特許出願公告ＷＯ  ２００８／１４８６９４は、４〜１０単糖単位からなり、少なくとも１つのフルクトース残基を有するガラクト−オリゴ糖を含む潤い補給化粧品組成物を開示する。このガラクト−オリゴ糖は、唇形（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）科フロラに属する植物から得られる。この植物からの抽出物は、粘着性を伴わずに皮膚潤い補給作用の改善を、そして多価アルコールとの相乗潤い補給作用を示した。
【００１４】
国際（ＰＣＴ）特許出願公告第２００９／１０６９３４号は、アクアポリン−３、フィブロネクチンおよびエンベロープタンパク質であるフィラグリンおよびインボルクリンの発現の刺激を伴うメカニズムのため、皮膚バリア保護および潤い補給剤として有用なネム科のＡｎｇｉｃｏ−Ｂｒａｎｃｏ（Ｐｉｐｔａｄｅｎｉａ  ｃｏｌｕｂｒｉｎａ）抽出物を開示する。本発明はさらに、具体的皮膚変化、例えば皮膚乾燥、ひび割れ、鱗屑形成、剥離または皮膚バリア崩壊を伴う任意の障害の顔または身体処置のための抽出物を含む化粧品用および皮膚科学的処方物に関する。
【００１５】
市場ですでに入手可能な、皮膚バリア機能を促進するのに有用な植物抽出物ベースの製品の例の一覧としては、ＰｈｙｔｏＣｅｌｌＴｅｃ  Ａｌｐ  Ｒｏｓｅ（Ｍｉｂｅｌｌｅ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）およびＰｈｙｔｏｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄ  ＩＩ（Ｂａｒｎｅｔ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，  Ｕ．Ｓ．Ａ．）が挙げられる。
【００１６】
皮膚バリア機能を改善するために試みている製品および技術の継続的に増大中の一覧は、普遍的に有用な溶液は未だ入手可能でない、ということを示している。
【００１７】
ホホバ（Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）は、アリゾナ州、カリフォルニア州およびメキシコのソノラ砂漠およびモハベ砂漠に自生する灌木である。それは、ナデシコ目に属するホホバ科の唯一の種である。それは、ゴートナッツ、ディアナッツ、ピッグナッツ、ワイルドヘーゼル、キニンナッツ、コーヒーベリーおよびグレイボックスブッシュとしても知られている。ホホバは、その油のために商業的に育てられる。ホホバ油は、鯨油およびその誘導体、例えばセチルアルコールの代替物として用いられる。１９７１年に米国への鯨油の輸入が禁止されたことが、ホホバ油は、多くの点で、化粧品およびその他の産業における適用に関して優れている、という発見につながった。ホホバ油は殺真菌剤でもあり、うどん粉病を制御するために用いられ得る。オレストラと同様に、ホホバ油は食用であるが、しかしノンカロリー且つ非消化性である。ホホバ・バイオディーゼルは、石油ディーゼルの代用品として役立ち得る安価で、持続可能な燃料として探求されてきた。
【００１８】
ホホバの親水性抽出物の使用は、ホホバ粗挽き粉、特に油抽出後に留保される粗挽き粉を利用する皮膚の漂白および剥離に関してのみ、従来開示されている。粗挽き粉は、１つ以上のヒドロキシ酸と組み合わせた機械的剥離剤として主に用いられる（米国特許第６，８９０，５６６号、第７，０２５，９５７号、第７，０２９，７０９号、第７，０９７，８６６号）。
【００１９】
本明細書中に上記したように、バリア機能の促進およびその後の皮膚完全性保持は、皮膚の外見および健康を改善するために、例えば種々の皮膚障害を処置し、および／または軽減するために重要である。皮膚のバリア機能を促進するのに有効な組成物および方法、特に、有害作用を有さないことが既知である植物由来組成物を有することは、非常に望ましく、そして有益である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
本発明は、ホホバ植物抽出物に関し、特に皮膚の構造、強度および粘着性を改善するのに、そして皮膚のバリア機能を促進するのに有用である植物の空中部分の抽出物に関する。
【００２１】
本発明は、一部は、極性溶媒中、特に水中のホホバの葉部の抽出は、皮膚バリア機能の保持および／または促進に有効な抽出物を生じる、という予期せぬ発見に基づいている。特に、本発明の抽出物は、デスモプラキンＩ、デスモプラキンＩＩおよびサイトケラチン５コード遺伝子、ならびにいくつかの他のケラチンコード遺伝子の発現を有意に増強した。いかなる特定の理論または作用機序にも縛られることなく考えると、皮膚完全性の促進は、したがって、機能的デスモソームの一必須構成成分であるデスモプラキンの、そして簡単な且つ層化上皮組織の適正な分化に不可欠であることが知られているいくつかの型のケラチン、例えばサイトケラチン５、サイトケラチン２Ａおよびサイトケラチン１の存在のためであり得る。したがって、本発明の抽出物は、皮膚完全性を保持するために、そして皮膚バリア機能を保存し、および／または促進するために用いられ得る。
【００２２】
したがって、一態様によれば、本発明は、皮膚の構造、強度、粘着性またはその任意の組合せを保持するか、および／または促進するための方法であって、極性溶媒中のホホバ（Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）植物またはその任意の部分の抽出物を活性成分として含む組成物を被験体の皮膚に投与し、それにより皮膚バリア機能を保持するかまたは促進することを包含する方法を提供する。
【００２３】
ある実施形態によれば、組成物は、唯一の活性成分としてホホバ抽出物を含む。他の実施形態によれば、組成物は、少なくとも１つの付加的活性成分をさらに含む。
【００２４】
ある実施形態によれば、皮膚バリア機能を保持するかまたは促進することは、皮膚脱水率を保持するかまたは低減すること；皮膚水和値を保持するかまたは促進すること；環境害毒からの防御を保持するかまたは促進すること、ならびにその任意の組合せのうちの少なくとも１つを包含する。
【００２５】
本発明の他の実施形態によれば、本発明の方法は、皮膚の健康、皮膚の完全性、皮膚の引き締まり、皮膚の伸展性、皮膚の弾性、全体的皮膚外見の美化およびその任意の組合せを改善することのうちの少なくとも１つにおいて有効である。各々の可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００２６】
ある実施形態によれば、皮膚の健康を改善することとしては、湿疹および／または皮膚疾患、特に尋常性乾癬、扁平苔癬、胆道炎および魚鱗癬、例えば尋常性魚鱗癬、魚鱗癬の症候を軽減すること；水疱症（例えば尋常性天疱瘡）を防止すること；正常皮膚恒常性を保持すること；皮膚創傷治癒を助長すること；およびその任意の組合せが挙げられるが、これらに限定されない。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００２７】
皮膚の水和／脱水値は、当業者に既知であるような任意の方法により測定され得る。いくつかの実施形態によれば、予定閾値は、本発明の抽出物を投与する前に測定される値である。他の実施形態によれば、予定閾値は、健常皮膚を有する個体から得られる平均値である。さらなる実施形態によれば、予定閾値は、肌荒れを有する個体から得られる平均値である。
【００２８】
皮膚パラメーターは、当業者に既知であるような任意の方法により測定され得る。皮膚バリア機能の状態を確定するための一般方法は、経皮水分損失（ＴＥＷＬ）値を測定することにより皮膚脱水を検査すること、および／または皮膚の潤い補給指数（％または随意の単位）を測定することにより皮膚水和を検査することを包含する。
【００２９】
ある実施形態によれば、ホホバ植物またはその部分を抽出する極性溶媒は、水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、メタノール、グリセロール、プロパノール、ブタノール、ジプロピレングリコール、ペンチレングリコール、へキシレングリコール、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、蟻酸、酢酸およびアセトン、またはその任意の組合せからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００３０】
ある典型的実施形態によれば、極性溶媒は水である。他の実施形態によれば、抽出物は、水および少なくとも１つの付加的極性溶媒を用いて得られる。ある実施形態によれば、抽出媒質は、３０〜９０％の水および１０〜７０％の極性溶媒を含む。
【００３１】
ある実施形態によれば、抽出物は、生ホホバ植物部分、例えば根、茎、葉、種子、果実またはその任意の組合せのうちの任意の１つから得られる。いくつかの実施形態によれば、抽出物は、ホホバ植物の空中部分から得られる。一般に典型的な実施形態によれば、抽出物は、葉および茎から得られる。ある実施形態によれば、葉は緑色〜褐色である。他の実施形態によれば、茎は、直径１〜５ｍｍ、典型的には約２ｍｍである。ホホバ植物は雌雄異株であり、植物部分は、雌植物から、ならびに雄植物から、そして発生の任意の時機に採取され得る。
【００３２】
ある実施形態によれば、新鮮なホホバ植物部分は、抽出のために採取される。他の実施形態によれば、植物部分は、抽出前に部分的にまたは完全に乾燥される。
【００３３】
ある実施形態によれば、当該植物またはその部分は、摘み取られると、抽出溶媒に付加される。他の実施形態によれば、当該植物またはその部分は、小片に切られた後、溶媒が付加される。さらに付加的実施形態によれば、当該植物またはその部分は、粉砕された後、溶媒が付加される。
【００３４】
ホホバ植物材料は、乾燥されるかまたは切断されるかという選択肢は別にして、本発明の教示により抽出される前に、いかなる加工処理にも付されない、ということは明白に理解されるべきである。したがって、本発明の教示に従って用いられるホホバ植物部分は、本明細書中で以下に定義されるように、「生植物材料」として言及される。
【００３５】
ある実施形態によれば、組成物は、組成物の総重量に関して０．００３％〜３０％（重量対重量（ｗ／ｗ））の濃度で、ホホバ抽出物を含む。いくつかの実施形態によれば、ホホバ抽出物は、０．３％〜１０％の範囲である。典型的実施形態によれば、組成物内のホホバ抽出物の濃度は、組成物の総重量に関して１％〜３％（ｗ／ｗ）である。
【００３６】
ある実施形態によれば、組成物は、化粧上または製薬上許容可能な希釈剤、担体または賦形剤をさらに含む化粧用または薬学的組成物である。
【００３７】
いくつかの実施形態によれば、化粧用または薬学的組成物は、化粧品および／または皮膚科学分野で有用な添加物、例えば、脂肪、乳化剤および補助乳化剤、親水性または親油性ゲル化剤、防腐剤、溶媒、芳香剤、充填剤、親水性および親油性充填剤、染料、中和剤、透過増強剤およびポリマーをさらに含む。これらの種々の添加物の量は、当業者に既知であるような化粧用および皮膚科学的調製物中に慣用的に用いられる量である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００３８】
ある典型的実施形態によれば、少なくとも１つの添加物は、アスコルビン酸、その誘導体および対応する塩、グリセリン、クエン酸、酢酸、亜硫酸塩、フェノキシエタノール、ＥＤＴＡ、リンゴ酸ジエチル、ｔ−ブチルヒドロキノン、アミノグアニジン、ニコチン酸／ナイアシン、ニコチンアミド、塩化第一スズ、グルコースオキシダーゼ、ポリビニルポリピロリドン、リン酸、および化粧上／製薬上許容可能な塩からなる群から選択されるが、これらに限定されない。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００３９】
付加的実施形態によれば、化粧用または薬学的組成物は、少なくとも１つの付加的植物抽出物および／または微細藻類抽出物をさらに含む。
【００４０】
ある一般に典型的な実施形態によれば、組成物は、ホホバの水抽出物、ならびに短期および長期潤い補給効果を有する作用物質、例えばヒアルロン酸塩（これらに限定されない）；ラジカル掃去剤および／または抗酸化剤、例えばトコフェロール、Ｃｏ−Ｑ１０、アスコルビン酸およびその誘導体およびカロテノイド（これらに限定されない）；ＵＶフィルター、例えばアボベンゾン（ブチルメトキシジベンゾイルメタン）、二酸化チタン、酸化亜鉛およびカロテノイド（これらに限定されない）；ならびに抗皺剤、例えばオオマツユキソウ（Ｌｅｕｃｏｊｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）抽出物（これに限定されない）からなる群から選択される少なくとも１つの付加的活性成分を含む。
【００４１】
ある実施形態によれば、組成物は、局所投与用である。任意の局所処方物は、抽出物活性を保持する限り、当該技術分野で既知であるように用いられ得る。ある実施形態によれば、組成物は、水溶液、クリーム、ローション、乳濁液、例えば油中水型または水中油型乳濁液、マイクロエマルジョンまたはナノエマルジョン、ゲル、漿液および乳液からなる群から選択される形態で投与される。
【００４２】
付加的実施形態によれば、組成物は、以下の：
（ａ）  ホホバ植物またはその任意の部分を少なくとも１つの極性溶媒と混合するステップ；
（ｂ）  液体抽出物を生成するのに十分な時間、前記混合物をインキュベートするステップ；
（ｃ）  ホホバ植物またはその部分を除去し、前記液体抽出物を収集するステップ；
（ｄ）  前記液体抽出物を濾過するステップ；そして
（ｅ）  前記濾液を収集するステップ
を包含する方法により製造されるホホバ抽出物を含む。
【００４３】
ある実施形態によれば、前記混合物をインキュベートすることは、１０分〜２４時間、典型的には４０分〜１２時間、さらに典型的には４０分〜２時間の期間中のインキュベーションを包含する。
【００４４】
付加的実施形態によれば、前記インキュベーション温度は、２０〜１２０℃、典型的には６０〜１２０℃、さらに典型的には８０〜１１０℃の範囲である。
【００４５】
ある実施形態によれば、ステップ（ｃ）は、ホホバ植物部分を除去するための遠心分離を包含する。他の実施形態によれば、ステップ（ｄ）は、篩を通して液体抽出物を濾過することを包含する。さらに付加的な実施形態によれば、当該方法は、１．５μｍ未満の孔サイズを有するフィルターを通してステップ（ｅ）の濾液を濾過することをさらに包含する。
【００４６】
本発明のその他の目的、特徴および利点は、以下の記載および図面から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】対照（図１Ａ）および処理（図１Ｂ）ケラチノサイトにおける検査遺伝子の発現を示す。膜上の遺伝子パターンは、表１に示したものと同様である。
【図２】ホホバ抽出物での処理の２４時間後のケラチノサイトにおけるＲＮＡの質および量制御を示す。図２Ａ：対照：ＲＮＡ濃度：２．４５μｇ／μｌ；ＲＮＡ量：３６．７５μｇ。図２Ｂ：０．０３％ホホバ抽出物で処理した培養：ＲＮＡ濃度：１．９７μｇ／μｌ；ＲＮＡ量：２９．５５μｇ。
【図３】皮膚軽減に及ぼす３％ホホバ抽出物を含む組成物の可視的作用を実証する。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
本発明は、皮膚の構造、強度および粘着性を改善し、それにより皮膚のバリア機能を促進するのに有用なホホバ植物の抽出物を開示する。本発明の抽出物は、少なくとも１つの極性溶媒中に、特に水中に含浸される植物の部分から製造される。
【００４９】
予期に反して、本発明は、ここに、ホホバの水性および／または付加的極性溶媒抽出物が、皮膚の構造およびバリア機能を保持し、および／または促進するのに非常に有効である、ということを示す。任意の特定の理論または作用機序に縛られることなく考えると、この改善は、皮膚管理系における重要構成成分の活性化のためであり得る。特に、本発明の抽出物は、適正なバリア機能の機序に関与する主要遺伝子、とりわけ、デスモプラキンＩおよびＩＩ、シンデカン１、インボルクリンおよびフィブロネクチンをコードする遺伝子、ならびにケラチノサイト分化に関与する遺伝子、例えばサイトケラチン５、サイトケラチン２Ｅ／Ａおよびサイトケラチン１およびサイトケラチン１０をコードする遺伝子の発現を有意に増強した。
【００５０】
したがって、本発明の抽出物の有意の利点は、適正な皮膚の構造およびバリア機能に寄与する皮膚組織の固有の機序を活性化するその能力である。皮膚の構造およびバリア機能を保持すること、および／または促進することは、皮膚の健康および若々しい外見に及ぼす陽性作用を有する多数のパラメーターに影響を与える。
【００５１】
したがって、一態様によれば、本発明は、皮膚バリア機能を保持するか、および／または促進するための方法であって、極性溶媒中のホホバまたはその任意の部分の抽出物を含む組成物を皮膚に投与し、それにより皮膚バリア機能を保持するかまたは促進することを包含する方法を提供する。
【００５２】
本明細書中で用いる場合、「生ホホバ植物材料」または「生植物材料」という用語は、少なくとも１つの極性溶媒で抽出するために採取される、新鮮なまたは乾燥したホホバ植物の任意の部分を指す。任意に、生材料は、小片に切断され、寸断されまたは粉砕された後、溶媒に付加される。少なくとも１つの極性溶媒での抽出前に、超臨界ＣＯ２（ＳＣＣＯ２）抽出、加水分解、油留分除去またはその任意の組合せに付されたホホバ植物材料を当該用語は含まない、ということは明白に理解されるべきである。
【００５３】
本発明のある実施形態によれば、生植物材料は、ホホバ植物の空中部分を包含する。
【００５４】
本明細書中で用いる場合、「空中部分」という用語は、ホホバ植物に言及する場合、地面より上にあるすべての植物部分、例えば茎、葉、種子、果実、芽等を指す。ある一般に典型的な実施形態によれば、本発明の抽出物は、ホホバの茎および／または葉から調製される。ある実施形態によれば、当該植物の生植物材料は種子を含まない。
【００５５】
ホホバは、雌雄異株型の植物であり、すなわち、雄器官および雌器官が異なる植物体上に配置される。本発明の抽出物はすべての型の植物体から製造され、そして植物部分は、任意の発育段階で抽出のために採取され得る。
【００５６】
ある実施形態によれば、本発明の抽出物は、ホホバ雌植物またはその部分から製造される。他の実施形態によれば、本発明の抽出物は、ホホバ雄植物またはその部分から製造される。ある典型的実施形態によれば、抽出物は、雌および雄植物またはその部分の組合せから製造される。
【００５７】
ある実施形態によれば、新鮮なホホバ植物部分が抽出のために採取される。他の実施形態によれば、植物部分は、抽出前に部分的にまたは完全に乾燥される。
【００５８】
当業者に既知であるような任意の方法を用いて、抽出前に植物材料を乾燥し得る。例えば、植物材料は、オーブン乾燥され、日光乾燥され、または周囲条件下で暗所で乾燥され得る。本明細書中で用いる場合、「部分的に乾燥されたという用語は、約５％〜８０％の初期含水量を含む植物材料を指す。典型的には、部分的乾燥材料は、約１０％以下の水分を含有する。「完全に乾燥された」という用語は、植物材料に関して用いられる場合、乾燥条件下でのさらなるインキュベーション時にさらなる重量損失が検出され得ない状態を指す。
【００５９】
乾燥状態とは関係なく、ホホバ植物の部分は、全体として抽出のために採取され、種々のサイズの小片に切断され、あるいは粉末に粉砕された後、抽出溶媒中に入れられる。
【００６０】
当該植物またはその部分は、次に、極性溶媒中に入れられる。「極性溶媒」という用語は、本明細書中で用いる場合、約５以上の誘電率を有する溶媒を指す。ある実施形態によれば、本発明の抽出物は、溶媒として水を用いて調製される。他の実施形態によれば、抽出のために用いられる溶媒は、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、メタノール、グリセロール、プロパノール、ブタノール、ジプロピレングリコール、ペンチレングリコール、へキシレングリコール、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、蟻酸、酢酸およびアセトンからなる群から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。さらなる付加的実施形態によれば、抽出は、少なくとも２つの極性溶媒の組合せで実施される。ある実施形態によれば、抽出は、水および少なくとも１つの付加的極性溶媒で実施される。
【００６１】
極性溶媒（単数または複数）内の植物部分のインキュベーション時間は、用いられる植物部分、それらのサイズおよび乾燥状態によって変更され得る。ある実施形態によれば、インキュベーション時間は１０分〜２４時間の範囲である。
【００６２】
溶媒中へのホホバ植物材料からの極性物質の抽出は、任意に、加熱すること、超音波、マイクロ波を適用すること、ならびに当該技術分野で既知であるようなその他の方法により増強され得る。極性溶媒（単数または複数）を用いて極性物質を抽出することは本発明の抽出物を製造するために一般に用いられる方法であるが、しかし当該技術分野で既知であるような任意の他の方法、例えば植物部分の冷圧により抽出される極性物質も、本発明の範囲内に包含される、ということは明白に理解されるべきである。
【００６３】
哺乳動物における皮膚バリア機能に関連した変数としては、経皮水分損失、角質層水分量、皮膚表面ｐＨおよび皮膚温度が挙げられる。
【００６４】
水は、皮膚の機能のための中心的重要性を有し、皮膚最上層における水の比率は、その外見に有意に影響を及ぼす。表皮の生きている層におけるすべての輸送およびその他の生理学的機能を保持することのほかに、水は、角質層（ｓｔｒａｔｕｍ  ｃｏｒｎｅｕｍ）においても多大な重要性を有する。角質層中に存在する酵素は、ある程度の水和およびｐＨ値でのみ、それらの活性を適切に発揮し得る。不十分な含水量および酵素活性は、皮膚の乾燥した鱗状の外見を生じ、これは、脆く、感受性になり、そして痒みを生じる傾向がある。要するに、皮膚の外見は不健康で、微細な線および皺を有する。
【００６５】
皮膚の含水量を保持すること、および乾燥皮膚を防止することは、皮膚の細胞内分子および結合組織にさらなる損害そして皮膚を通してのさらなる水分損失をもたらす皮膚の保護バリアへの外的攻撃により引き起こされる損害を低減するために、皮膚組織の完全性および／またはその回復能力を保持することにより主に達成され得る。
【００６６】
当該技術分野で既知であるような皮膚バリア機能を査定するための任意の方法は、本発明の教示に従って用いられ得る。皮膚のバリア機能を特性化するための技法は、水分含量および皮膚表面を通しての損失を測定するための多数の非侵襲性方法を包含する。これらの測定の１つは、コルネオメトリーとして既知の方法を用いる皮膚水和度（ＨＹＤＲ）の確定である。この技法は、誘電性媒質としてのその行動に起因する皮膚の静電容量を確定し、１０〜２０μｍ厚の角質層を査定する。それは皮膚の含水量の測定値であるが、しかしそれはバリア機能の間接的測定値に過ぎない。それにもかかわらず、それは、損傷、代謝現象または局所療法に応答した種々の生理学的条件下でのＨＹＤＲの程度に関連し得る。ヒト皮膚評価のために報告される値は、試験される身体部位によって異なる。にもかかわらず、ヒト被験者の一群における個々のまたは平均のＨＹＤＲスコアの変化は、皮膚の健康の一指標として役立ち得るし、典型的には、値が高いほど、より望ましいとみなされる。
【００６７】
別の方法は、感知できない水分損失に対する皮膚バリアの完全性の査定である。この技法は、表皮表面を通しての経皮水分損失（ＴＥＷＬ）を測定することにより実施される。ＴＥＷＬ値は、皮膚を通した水分損失率の測定値（ｇ／ｈ・ｍ２）であり、水分を保持する皮膚の能力の概算値である。当該方法は、皮膚表面上１０ｍｍの層で確立される水蒸気密度勾配の測定値に基づいている。それは、皮膚の水バリア機能の潜在的損害の程度の指標である。皮膚を通した水分損失は普通は表皮を通した受動的拡散により起こるため、ＴＥＷＬ値が高いほど水分損失が大きいことを示し、刺激曝露またはアトピー性皮膚炎中に起こり得るような角質層のバリア機能の損害増大と一致する。
【００６８】
本明細書中に以下で例示するように、本発明のホホバ抽出物を含む組成物を前腕の皮膚に適用すると、ＴＥＷＬ値の有意の低減を生じる、ということを、本発明はここに示す。したがって、本発明の組成物は皮膚バリア機能を促進するのに有効である、ということが明白に実証される。
【００６９】
皮膚の構造、強度およびバリア機能に及ぼす本発明の組成物の作用は、皮膚の生体力学的特性を調べることによりさらに確定され得る。流動学的評価は、活性作用物質の局所適用により誘導される変動の非侵襲性ｉｎ  ｖｉｖｏ測定のための当業者に既知の一般に好ましい方法である。皮膚は、２つの流動学的特質を有する：すなわち、高弾力性を有する粘−弾性特性と、帯域によって変動する自然張力である。皮膚における張力線により形成される網目構造は、ランガー網目構造と呼ばれる。結合組織の流動学的特性は、基本的にはコラーゲンおよびエラスチン繊維の三次元網目構造であるその構造に由来する。当該方法は、表在性皮膚層の生物学的伸展性および弾性における変動の評価を可能にし、典型的には、キュートメーターを用いて実施される。原則として、皮膚は、規定時間長の間、一定真空圧により、消息子の開口部中に吸い込まれる。皮膚が消息子中に入り込む深さは、摩擦および機械的引っ張りを排除するために消息子の開口部の開口時に配置される２つの光学プリズムにより測定される。得られた結果に基づいて、以下の生体力学的パラメーターが分析され得る：張力、引き締まり、調子（残留伸びが減少する場合、皮膚はより緊張する）、ならびに柔軟性（即時伸長が増大する場合、皮膚はより柔軟性である）。
【００７０】
皮膚強度、特に角質層の強度およびバリア機能は、タップ・ストリッピング・プロトコールを用いてさらに評価され得る。この検定の原理によれば、パッチは、有志に迅速に（数秒の範囲で）適用される。次いで、パッチは徐々に取り外され、除去ＳＣの量を定量するために分析される。分析は、除去ＳＣ重量、タンパク質量および／または可視画像処理によるものであり得る（Ｄｒｅｈｅｒ，  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８．  Ａｃｔａ  Ｄｅｒｍ  Ｖｅｎｅｒｅｏｌ  ７８：１８６−１８９）。
【００７１】
本明細書中で以下に例示されるように、本発明の組成物は、非刺激性であり、皮膚により高度に耐容可能である。さらに、組成物は、有意の平滑およびテンソル作用を提示した。いかなる特定の理論または作用機序にも縛られることなく考えると、これらの平滑およびアンチエイジング作用は、皮膚バリア機能を増大する組成物の能力に起因し得る。
【００７２】
創傷治癒は、多細胞接着分子発現により間接的に調節される過程である。細胞接着分子の非存在により創傷治癒は遅らせられる、ということは既知である。したがって、創傷の治癒は、細胞接着タンパク質の刺激を立証し得る。本発明の組成物は、したがって、細胞単層培養における創傷の治癒に、あるいは多孔性膜を横断して移動する細胞の能力に寄与し得る。創傷治癒の進行は、スクラッチ検定により査定され得る。この検定は、ネイティブ細胞またはトランスフェクト化細胞に関して実施されて、細胞移動に及ぼす特定のタンパク質過剰発現（またはノックダウン）の効果を試験する。
【００７３】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏスクラッチ検定は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞移動を測定するための、容易で、低経費且つ十分に開発済みの方法である。基本ステップは、細胞単一層において「スクラッチ」を作成すること、スクラッチ付近への細胞移動の間の開始時および一定間隔で画像を獲得すること、そして細胞の移動速度を定量するために本発明の組成物を用いた場合と用いない場合に得られる画像を比較することを包含する。他の方法と比較して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏスクラッチ検定は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの創傷治癒中の細胞移動、模擬細胞移動に及ぼす細胞−マトリクスおよび細胞−細胞相互作用の作用に関する試験に特に適しているし、所望により、細胞内事象をモニタリングするための移動中の生細胞の画像処理と比較可能である。均質細胞集団の移動をモニタリングするほかに、この方法は、さらにまた、スクラッチの前縁における個々の細胞の移動を測定するために適合されている。
【００７４】
皮膚バリア機能に及ぼす本発明の抽出物の影響は、さらにまた、当業者に既知であるような任意の方法により、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで評価され得る。例えば、再構築ヒト皮膚の経皮電気抵抗性（ＴＥＥＲ）は、細胞層の緊密性を査定するために測定され得る。ＴＥＥＲは、皮膚バリアの機能性の直接的測定値である；それは、それ自体の厚みにより、ならびにそれ自体の構造により与えられる組織の広範な抵抗性すべてを反映する。それは、外側化合物の進入を阻む二層脂質構造の、密な接合レベルでの、細胞間接触の一体性を反映する。ＴＥＥＲは、経皮水分損失の測定値であるｉｎ  ｖｉｖｏで測定されるＴＥＷＬと逆比例する；ＴＥＷＬが高いほど、バリア機能に対する損害は大きく、一方、ＴＥＥＲが高いほど、バリア機能に対する損害は低い。ＴＥＥＲ測定値に関しては、検査済みの再構築皮膚が、少量の生理学的緩衝液（ＰＢＳ）とともにチャンバー中に挿入され、付加容量の緩衝液が組織の上面に適用される。上部電極を含有するチャンバー蓋が挿入され、抵抗が測定される。ＴＥＥＲ値（典型的には、処理および非処理組織の値）は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ−ＥＲＳ  Ｖｏｌｔ／ｏｈｍ−メーターを用いて確定される。ＴＥＥＲは、典型的には、ＴＥＥＲ５０、すなわちＴＥＥＲが５０％低減される時間として示される。
【００７５】
付加的方法は、免疫組織化学染色を用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ皮膚モデル／再構成ヒト表皮の形態学的分析により、フィラグリンおよび／またはデスモグレイン１および／またはクラウジン１の発現を定量することを用いる。再構成ヒト表皮またはｅｘ  ｖｉｖｏ皮膚生検／経皮は、例えばフランツ型核酸細胞を用いて、またはチャンバーシステムを用いて、参照分子／染料の進入動力学を確定するために用いられ得る。再構成ヒト表皮は、トランスグルタミナーゼ活性検定のためにも用いられ得る。さらに、皮膚試料中の重要遺伝子の発現プロフィルも、皮膚のバリア状態の指標として役立ち得る。
【００７６】
細胞−細胞接着は、形態形成中の重要な一過程である。それは、隣接細胞間の緊密な接触を保証し、これは細胞分離のために、そして異なる組織の形態学的および機能的分化のために必要である。細胞−細胞接着は、健常組織の恒常性に不可欠な役割を果たし、皮膚組織の完全性を保持するのに特定の有意の役割を果たす。
【００７７】
皮膚の外層における主要な構造材料は、ケラチンと呼ばれる繊維性構造タンパク質の一ファミリーを含む。ケラチン単量体は、集合して束となり、中間フィラメントを形成し、これは強靭で且つ不溶性であり、爬虫類、鳥類、両生類および哺乳類に見出される強力な非石灰化組織を形成する。
【００７８】
本明細書中に以下で例示するように、本発明の抽出物は、細胞対細胞接着に、そしてケラチノサイト分化に関与するポリペプチドをコードするいくつかの主要遺伝子の発現を増強する、ということを本発明はここに示す。任意の特定の理論または作用機序に縛られることなく考えると、皮膚バリア機能の保持および／または促進は、これらの遺伝子の発現に起因する。
【００７９】
デスモプラキンは、ＤＳＰ遺伝子により（ヒトにおいて）コードされる高分子量（約３３２ｋＤａ）ホモ二量体タンパク質である。デスモプラキンは、中間フィラメントをデスモソームプラークに固定する機能的デスモソームの必須の一構成成分である。デスモプラキンのＮ末端は、デスモソーム中のその配置のために必要とされ、プラコフィリン１およびプラコグロビンのＮ末端領域と相互作用する。Ｎ末端は、スペクトリン反復と呼ばれる反復ドメインから作られる「プラキンドメイン」と呼ばれる領域にさらに細分される。プラキンドメインの部分の結晶構造は解明されているが、一方、全プラキンドメインは、Ｘ船小角散乱を用いて明らかにされており、これは、スペクトリン反復が線形配向で観察されることを考慮すれば予期せぬ結果である非線形構造を明示した。デスモプラキンのＣ末端は、中間フィラメントと結合する。デスモプラキンの中央領域では、コイルド・コイルド・ロッドドメインがそのホモ二量体化に関与する。この遺伝子における突然変異は、いくつかの心筋症および角皮症、ならびに自己免疫疾患腫瘍随伴性天疱瘡の原因である。デスモプラキンは、プラコグロビン、ビメンチン、ケラチン１デスミン、ＰＫＰ１およびＰＫＰ２と相互作用することが示されている。
【００８０】
ケラチン５（ＩＩ型細胞骨格５ケラチン（Ｋ５；ＣＫ５；ＫＲＴ５）としても既知）およびケラチン２Ａ（ケラチン２Ｅまたはケラチン２としても既知）は、ＩＩ型サイトケラチンである。ＩＩ型サイトケラチンは、単純な且つ層化上皮組織の分化中に共発現されるヘテロ型ケラチン鎖の対で整列される塩基性または中性タンパク質からなる。ＩＩ型サイトケラチン遺伝子は、染色体１２ｑ１２−ｑ１３の領域でクラスター化される。
【００８１】
ヒトでは、ケラチン５は、ＫＲＴ５遺伝子によりコードされ、具体的には、ファミリー成員ＫＲＴ１４を有する表皮の基底層中で発現されて、ケラチン中間フィラメントを生成する。これらのフィラメントは強力な網目構造に集合して、ケラチノサイト付着を生じて、表皮を皮膚の下にある層に固定する。ケラチン中間フィラメントの網目構造は、皮膚に強度および回復力を提供し、摩擦およびその他の毎日の物理的応力により損害されることから皮膚を防御する。
【００８２】
ケラチン５は、メラニンと呼ばれる色素を産生する細胞内構造であるメラノソームを運搬するに際しても一役を果たし得る、ということが示唆されている。ケラチノサイトへのこれらの構造の運搬は、正常皮膚配色（色素沈着）のために重要である。
【００８３】
ケラチン２Ａは、ヒトにおいて、ＫＲＴ２Ａ遺伝子によりコードされる。それは特に、ほとんどの身体部位からの正常成人表皮組織の上部有棘層および顆粒基底上層で発現される。
【００８４】
ケラチン１も、ケラチンファミリーの一成員である。それは、具体的には、ファミリー成員ケラチン１０を有する表皮の有棘および顆粒層中で発現される。ケラチン１における突然変異は、掌および足裏に影響が及ぶ水疱性先天性魚鱗癬様紅斑症の変異体と関連付けられてきた。ケラチン１０（Ｉ型細胞骨格ケラチン１０、サイトケラチン−１０（ＣＫ−１０）またはケラチン−１０（Ｋ１０）としても既知である）は、ヒトにおいて、ＫＲＴ１０遺伝子によりコードされる。ケラチン−１０は、中間フィラメント（ＩＦ）タンパク質の上科に属するＩ型（酸性）サイトケラチン・ファミリーの一成員である。
【００８５】
シンデカン１は、ヒトにおいて、ＳＤＣ１遺伝子によりコードされるタンパク質である。この遺伝子によりコードされるタンパク質は、膜貫通型（Ｉ型）ヘパラン硫酸プロテオグリカンであり、シンデカンプロテオグリカン・ファミリーの一成員である。シンデカンは、細胞結合、細胞シグナル伝達および細胞骨格組織化を媒介し、シンデカン受容体はＨＩＶ−１ｔａｔタンパク質の内部移行のために必要とされる。シンデカン−１タンパク質は、内在性膜タンパク質として機能し、細胞増殖、細胞移動、および細胞外マトリクスタンパク質に関するその受容体を介しての細胞−マトリクス相互作用に関与する。変更されたシンデカン−１発現は、いくつかの異なる腫瘍型において検出されている。いくつかの転写変異体がこの遺伝子に関して存在し得るが、今日までに全長性が記載されているのは２つだけである。これら２つは、この遺伝子の主要変異体を代表するものであって、ともに同一タンパク質をコードする。
【００８６】
細胞マトリクス接着調節（ＣＭＡＲ）遺伝子は、コラーゲンとの細胞接着に影響を及ぼし、これにより、おそらくは腫瘍抑制に関与するシグナル伝達分子であることが示唆されている。
【００８７】
インボルクリンは、ヒトにおいて、ＩＶＬ遺伝子によりコードされるタンパク質である。この遺伝子は、カルパクチンＩ軽鎖、トリコヒアリン、プロフィラグリン、ロリクリンおよびカルシクリンの間で、１ｑ２１にマッピングされる。インボルクリンは、表皮およびその他の重層扁平上皮のケラチノサイト中に存在する高反応性、可溶性のトランスグルタミナーゼ基質タンパク質である。それは先ず細胞サイトゾル中に現れるが、しかし最終的には、トランスグルタミナーゼにより膜タンパク質と架橋するようになり、したがって、形質膜下の不溶性エンベロープの形成に役立ち、角質化エンベロープの集合中にグルタミル供与体として機能する。インボルクリンは、有棘層中で合成され、それを非常に安定にするトランスグルタミナーゼ酵素により顆粒層中で架橋される。したがって、それは、細胞に構造支持を提供し、それによって細胞を微生物による侵襲に抵抗性にする。
【００８８】
フィブロネクチンは、インテグリンと呼ばれる膜貫通受容体タンパク質と結合する細胞外マトリクスの高分子量（〜４４０ｋＤａ）糖タンパク質である。インテグリンのほかに、フィブロネクチンは、細胞外マトリクス構成成分、例えばコラーゲン、フィブリンおよびヘパラン硫酸プロテオグリカン（例えばシンデカン）も結合する。フィブロネクチンは、一対のジスルフィド結合により連結される２つのほぼ同一の単量体からなるタンパク質二量体として存在する。フィブロネクチンタンパク質は単一遺伝子から生成されるが、しかしそのプレｍＲＮＡの交互スプライシングによりいくつかの愛想フォームが作成される。脊椎動物では、２つの型のフィブロネクチンが存在する：すなわち、可溶性血漿フィブロネクチン（以前は、「寒冷不溶性グロブリン」またはＣＩｇと呼ばれていた；結晶の主要タンパク質構成成分（３００μｇ／ｍｌ）で、肝細胞により肝臓中で産生される）と、不溶性細胞フィブロネクチン（細胞外マトリクスの主要構成成分）である。それは、種々の細胞、主に繊維芽細胞により、可溶性タンパク質二量体として分泌され、次いで、複雑な細胞媒介性過程で、不溶性マトリクスに集合される。フィブロネクチンは、細胞接着、増殖、移動および分化において主要な役割を果たし、創傷治癒および胚発生のような過程のために重要である。フィブロネクチン発現変更、分解および組織化は、癌および繊維症を含めて多数の病変と関連付けられている。
【００８９】
本発明の組成物は、当業者に既知であるような任意の化粧品的および／または薬学的、典型的には皮膚科学的に適した形態で処方される。ある実施形態によれば、処方物は、ローション、ゲルまたはクリームの形態、軟膏または油基剤、ならびに噴霧可能液体形態である。本発明の組成物のためのその他の適切な化粧品形態としては、例えば乳濁液、ムーズ、リップバーム、リップグロス、ローション、マスク、軟膏、ポマード、溶液、漿液またはスプレーが挙げられる。
【００９０】
本明細書中に記載されるような活性作用物質としてのホホバ抽出物のほかに、本発明の組成物は、製薬的または化粧品的に用いられ得る調製物への活性化合物の加工処理を助長する助剤を含む適切な製薬上または化粧品的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含有し得る。処方および投与のための技法に関するさらなる詳細は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ´ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．；  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．）の最新版に提供されている。本発明のホホバ抽出物を含有する組成物は、当該技術分野で既知である方法で、例えば慣用的混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、水簸、乳化、カプセル封入、閉じ込めまたは凍結乾燥法により、製造され得る。
【００９１】
ある実施形態によれば、本発明の組成物は、１つ以上の相溶性の、化粧品的または製薬上許容可能な添加物、例えば脂肪、乳化剤および共乳化剤、親水性または親油性ゲル化剤、着色剤、芳香剤、エモリエント、保湿剤、防腐剤、ビタミン、キレート剤、増粘剤、充填剤、溶媒、親水性および親油性充填剤、染料、中和剤、透過増強剤ポリマー等、ならびにその他の植物性物質、例えばアロエ、カモミール等（これらに限定されない）をさらに含む。
【００９２】
ある実施形態によれば、添加物は、アスコルビン酸、その誘導体および対応する塩、グリセリン、クエン酸、酢酸、亜硫酸塩、フェノキシエタノール、ＥＤＴＡ、リンゴ酸ジエチル、ｔ−ブチルヒドロキノン、アミノグアニジン、ニコチン酸／ナイアシン、ニコチンアミド、塩化第一スズ、グルコースオキシダーゼ、ポリビニルポリピロリドン、リン酸、および化粧上／製薬上許容可能な塩からなる群から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００９３】
ある典型的実施形態によれば、組成物は局所的に適用される。
【００９４】
ホホバ抽出物を含む組成物の、ならびに適用レジメンの有効な用量または量を、当業者は確定し得る。有効用量およびレジメンは、例えば、ＴＥＷＬを測定することにより、または本明細書中に記載されるような、そして当業者に既知であるような任意の他の方法により、測定され得るような皮膚の皮膚バリア機能を保持または促進するために必要とされるものを指す。
【００９５】
ある実施形態によれば、本発明の組成物は、組成物の総重量に関して０．００３％〜３０％（重量対重量（ｗ／ｗ））の濃度で、ホホバ抽出物を含む。いくつかの実施形態によれば、ホホバ抽出物は、０．３％〜１０％の範囲である。典型的実施形態によれば、組成物内のホホバ抽出物の濃度は、組成物の総重量に関して１％〜３％（ｗ／ｗ）である。
【００９６】
抽出物用量は、処置を必要とする個体に関連したある因子、例えば個体の特定の状態の重症度、個体の全身健康状態、個体の年齢、体重および性別、食餌、投与回数および頻度、薬剤組合せ（単数または複数）、反応感受性、処置に対する耐容性／応答によって、開業医により決定される。一般的指針として、長期作用性化粧品組成物は、特定処方物の半減期およびクリアランス率によって、１日１回、２〜４日毎に、毎週、あるいは２週間毎に１回、投与され得る。これらの投与量レベルの変動は、当業者に周知であるように、最適化のための標準経験的ルーチンを用いて調整され得る。特定投与量および送達方法に関する指針は、文献中に提供されており、一般的に当該技術分野における開業医に利用可能である。
【００９７】
さらなる付加的態様によれば、本発明は、皮膚の構造、強度、粘着性またはその任意の組合せを保持するか、および／または促進し、それにより前記皮膚バリア機能を保持するかまたは促進するのに有効な組成物であって、ホホバ抽出物を含み、当該抽出物が、以下の：
（ａ）  ホホバ植物またはその任意の部分を少なくとも１つの極性溶媒と混合するステップ；
（ｂ）  液体抽出物を生成するのに十分な時間、前記混合物をインキュベートするステップ；
（ｃ）  ホホバ植物またはその部分を除去し、前記液体抽出物を収集するステップ；
（ｄ）  前記液体抽出物を濾過するステップ；そして
（ｅ）  前記濾液を収集するステップ
により産生される抽出物を含む組成物を提供する。
【００９８】
ある実施形態によれば、前記混合物をインキュベートすることは、１０分〜２４時間、典型的には４０分〜１２時間、さらに典型的には４０分〜２時間の期間中のインキュベーションを包含する。付加的実施形態によれば、インキュベーション温度は、２０〜１２０℃、典型的には６０〜１２０℃、さらに典型的には８０〜１１０℃の範囲である。
【００９９】
ある実施形態によれば、ステップ（ｃ）は、ホホバ植物部分を除去するための遠心分離を包含する。他の実施形態によれば、ステップ（ｄ）は、篩を通して液体抽出物を濾過することを包含する。さらに付加的な実施形態によれば、当該方法は、１．５μ未満の孔サイズを有するフィルターを通してステップ（ｅ）の濾液を濾過することをさらに包含する。
【０１００】
本発明のいくつかの実施形態をさらに詳細に例証するために、以下の実施例を提示する。しかしながら、それらは、いかなる点でも、本発明の広範な範囲を限定するよう意図されるべきでない。本発明の範囲を逸脱しない限り、当業者は、本明細書中に開示される原理の多数の変更および修正を容易になし得る。
【０１０１】
実施例
実施例１：  ホホバ抽出物の製造
生き生きした、汚染されていないホホバ植物は、暗緑色〜褐色を有する。したがって、抽出のために採取された植物部分を、それらの色に関して検査した。斑点、特に白色斑点を示す明黄色の葉または植物部分を除去した。次に、植物部分を、部分的にまたは完全に乾燥させた。乾燥植物部分を、１：２〜１：５の比率で、典型的には１：２の比率（植物部分：水）で、室温で水に付加した。混合物を１００℃で２時間の間加熱して、一晩放置冷却した。４５００ｒｐｍで３０分間、遠心分離（Ｓｉｇｍａ  Ｌａｂｏｒｚｅｎｔｒｉｆｕｇｅｎ  ３−１０  ３６４５  ｇ）により固体を除去した。上清を収集し、１．２ミクロンフィルターを通して、次いで０．４５ミクロンフィルターを通して、最後に０．２２ミクロンフィルターを通して濾過し、濾液を収集した。濾液に、１％アスコルビン酸、１％および５０％グリセリンを付加して、最終組成物を生成した。
【０１０２】
組成物明細は、以下の通りであった：乾燥重量：３６〜４１ｍｇ／ｇ；ｐＨ  ４〜４．３、トロロックス当量（ＴＡＡ）  １２０ｍＭ。ポリフェノール値：２２２００ｍｇ／Ｌ；没食子酸当量（ＧＡＥ）、透明溶液、褐色化。
【０１０３】
実施例２：  ケラチノサイト遺伝子発現プロフィルに及ぼすホホバ抽出物の作用
０．０３％でホホバ抽出物を用いて、ｃＤＮＡアレイ遺伝子発現試験を実施した（ｈＢＡ１５ｍ−ＮＨＥＫ  バッチ１５／１０／０７、１：２の葉：水比率で、本明細書中の実施例１に上記したように調製；フェノール含量  ７６１７．７ｍｇ／Ｌ  没食子酸当量；トロロックス当量  １０８．６ｍＭ；防腐剤付加せず）。供給源抽出物の希釈を、検定媒質（下記参照）を用いて実行した。
【０１０４】
材料および方法
【０１０５】
生物学的モデル
細胞型：    正常ヒト表皮ケラチノサイト（ＮＨＥＫ）
Ｋ０７４（第３継代で使用）
培養条件：  ３７℃、５％ＣＯ２
培地：      ケラチノサイト−ＳＦＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ１７００５−０３４）；表皮増殖因子（ＥＧＦ）０．２５ｎｇ／ｍｌ、下垂体抽出物（ＰＥ）２５μｇ／ｍｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ３７０００１５）、ゲンタマイシン２５μｇ／ｍｌ（Ｓｉｇｍａ  Ｇ１３９７）を補足。
検定培地：  ケラチノサイト−ＳＦＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ１７００５−０３４）；ゲンタマイシン２５μｇ／ｍｌ（Ｓｉｇｍａ  Ｇ１３９７）を補足。
【０１０６】
予備的細胞傷害性検定
プレートフォーマット：  ９６ウェル
細胞／ウェル：          ２００００ＮＨＥＫ、ケラチノサイト−ＳＦＭ−ＥＧＦ−ＰＥ培地
複製：                  ６
濃度範囲：              表２参照
細胞／化合物接触：      ２４時間
評価パラメーター：      ＭＴＴ還元検定および顕微鏡（対物×１０）による形態学的観察
【０１０７】
培養および処置
正常ヒト表皮ケラチノサイト（ＮＨＥＫ）細胞を、集密になるまで培地中で１２ウェルプレート中に播種し、次いで、検定培地中でプレート化した。次に、ホホバ抽出物を試験ウェルに付加し、３７℃で５％ＣＯ２で２４時間、細胞を培養した。検定培地単独中で培養した細胞を、対照として用いた。各条件（試験／対照）を、ｎ＝３で実施した。
【０１０８】
インキュベーション終了時に、細胞をＰＢＳ溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １４１９００９４）中で洗浄した；３００μｌのＴｒｉＲｅａｇｅｎｔを付加し、細胞を−８０℃で直ちに凍結させた。
【０１０９】
ミニチップによる示差的発現の解析
遺伝子発現の試験用に提供され、スクリーニング目的のために特定的に適合される標準ミニチップを用いて、遺伝子発現の解析を実施した（ＢＩＯａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓ（フランス）製造）。
【０１１０】
ＢＩＯａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓ・スポッティング装置（非接触型スポッター、ｐｉｅｚｚｏ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｐｉｅｚｏｒｒａｙ，  ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）および当該ｃＤＮＡ特異的マーカーを用いて、これらのナイロンチップ（＜３ｃｍ２）に斑点を付した。一般に用いられるフォーマットの最小化を可能にする特許技術および費用効果的解析を用いて、解析を実行した。それは、逆転写のための鋳型としてのｍＲＮＡおよび３３Ｐ標識（最適感受性）の使用を基礎にした。この実験において調べた遺伝子の説明概要を、本明細書中の下記の表１に示す。
【０１１１】
ＴｒｉＲｅａｇｅｎｔを用いて、各培養のｍＲＮＡを抽出した（標準プロトコール）。［３３Ｐ］−ｄＡＴＰおよびオリゴｄＴの直接逆転写により、多重ｃＤＮＡ３３Ｐ標識化標的を調製した。ＲＮＡ質制御を、図２に示す。
【０１１２】
これらの標識化ｃＤＮＡ標的を、ミニチップに共有結合された特定のｃＤＮＡプローブとハイブリダイズさせた。広範に洗浄後、そのプローブとハイブリダイズされた相対量の各特異的標的を、放射性同位体測定システム（ＰｈｏｓｐｈｏｒＩｍａｇｉｎｇ）により明示した。
【０１１３】
「サイクロン」放射性同位体測定システム（ＰｈｏｓｐｈｏｒＩｍａｇｅｒ）（Ｐａｃｋａｒｄ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ；７２時間露出）および画像解析ソフトウェアＩｍａｇｅＱｕａｎｔ  ＴＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、スポット放射能の直接定量により、解析を実施した。
【表１】
2018027965.tif 000003
【０１１４】
定量的ＲＴ−ＰＣＲ
逆転写
供給元の助言に従ってＴｒｉ−ｒｅａｇｅｎｔを用いて、各試料から総ＲＮＡを抽出した。
無ＤＮＡ系（Ａｍｂｉｏｎ  ｒｅｆ  １９０６）を用いて、ＤＮＡの潜在的汚染痕跡を除去した。
オリゴ（ｄＴ）およびＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の存在下で、ｍＲＮＡの逆転写をおこなった。
【０１１５】
実時間ＰＣＲ解析
供給元推奨のプロトコールに従って、ライトサイクラー（ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ）（登録商標）系（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．）を用いて、三重反復試験でＰＣＲ反応を実施した。この系は、試験プライマーの解析条件を確定後、迅速かつ強力なＰＣＲ反応を可能にする。それは、以下の２つの構成成分からなる：
サーモサイクラー：迅速ＰＣＲ適用のために最適化される；反応混合物内の非常に迅速な熱伝導を可能にする。
蛍光光度計：  インターカレート染料ＳＹＢＲグリーンＩの定常蛍光測定を可能にする；伸長周期中に二本鎖ＤＮＡと特異的に結合する染料（検出波長：５２１ｎｍ）。
【０１１６】
上記のミニチップ検定において発現上昇を示す候補遺伝子の定量的解析のために、実時間（ＲＴ）ＰＣＲを用いた。２３ｋＤａ高塩基性タンパク質（６０Ｓリボソームタンパク質Ｌ１３Ａとも呼ばれる（ＲＰＬ１３Ａ、寄託番号ＮＭ＿００２４２３））を、内部標準対照として用い、その増幅は、４８３ｂｐの断片を生じた。３つの遺伝子を検査した：サイトケラチン５、デスモプラキンおよびサーチュイン１。
【０１１７】
定量的ＰＣＲデータ管理
増幅ＤＮＡ中への蛍光染料の組み入れを、ＰＣＲ周期中、継続的に測定した。結果を、「蛍光強度」対「ＰＣＲ周期」プロットとして描いて、各マーカーに関する相対発現（ＲＥ）値の評価を可能にした。
【０１１８】
ＲＥ算定のために選択される値は、蛍光曲線の「出力点」である。考慮マーカーに関して、最高は周期数であり、最低はｍＲＮＡ量である。
【０１１９】
ＲＥ値を、次式に従って任意単位（ＡＵ）で表した：
（１／２周期数）×１０６
【０１２０】
データ管理
マイクロソフト・エクセル（登録商標）ソフトウェアで、生データを解析した。
平均の標準誤差（ｓｅｍ）を以下のように算定した：平均＝Ｓｄ／√ｎ。
生存度のパーセンテージ（％）を、以下のように測定した：
（ＯＤ試料／ＯＤ対照）×１００
【０１２１】
結果
細胞傷害性予備検定
表２は、ケラチノサイト培養の生存度に及ぼすホホバ抽出物の作用を要約する。
【表２】
2018027965.tif 000004
【０１２２】
ミニチップによる遺伝子発現の解析
すべての試験遺伝子を伴うミニチップ設計は、本明細書中の上記の表１に示されている。図１は、０．０３％ホホバ抽出物で２４時間処理されたケラチノサイト（図１Ｂ）と比較した場合の対照ケラチノサイト（図１Ａ）における試験遺伝子の発現を示す。
【０１２３】
定量的ＲＴ−ＰＣＲによる遺伝子発現の解析
遺伝子発現の以下の分類を用いた：
【表３】
2018027965.tif 000005
【０１２４】
刺激されるべき遺伝子を以下に示す：
サイトケラチン５（Ｋ５；ＣＫ５）、ＩＩ型細胞骨格５ケラチン（ＫＲＴ５）とも呼ばれる；５８ｋＤａサイトケラチン：２２９％相対発現（＝刺激）；
デスモプラキンＩおよびＩＩ（ＤＳＰ；ＤＰＩおよびＤＰＩＩ）：１８５％相対発現（＝中等度刺激）；
サイトケラチン２Ｅ／Ａ（Ｋ２Ｅ；ＣＫ２Ｅ）、ＩＩ型細胞骨格２表皮ケラチン（ＫＲＴ２Ｅ；ＫＲＴ２Ａ）；（ジーメンスの表皮性魚鱗癬水疱症）：１６０％相対発現（＝中等度刺激）；
サイトケラチン１（Ｋ１；ＣＫ１）、ＩＩ型細胞骨格１１ケラチン（ＫＲＴ１１）とも呼ばれる；６７ｋＤａ  サイトケラチン；毛アルファタンパク質：１５６％相対発現（＝中等度刺激）；
シンデカン−１（ＳＹＮＤ１；ＳＤＣ１）、ＣＤ１３８抗原とも呼ばれる：１６０％相対発現（＝中等度刺激）；
細胞マトリクス接着調節因子（ＣＭＡＲ；ＣＡＲ）：１４６％相対発現（＝中等度刺激）；
サイトケラチン１０（Ｋ１０）、Ｉ型細胞骨格１０ケラチンとも呼ばれる：１４６％相対発現（＝中等度刺激）；
インボルクリン：１５４％相対発現（＝中等度刺激）；
フィブロネクチン（ＦＮ）：１４６％相対発現（＝中等度刺激）。
【０１２５】
実施例３：ホホバ抽出物の毒性査定
４８時間の閉塞パッチ下で、健常成人有志の背部皮膚への抽出物の単一回適用により、ホホバ抽出物に対する皮膚耐容性を測定した。
【０１２６】
試験域に皮膚科学的病変を有さない、そして口頭での試験要件を順守し得る年齢１８〜７０歳の男女の有志２４名が、試験に参加した。本明細書中の上記実施例１に記載したように製造したホホバ抽出物（葉：水の比  １：２、フェノール含量  １３，１１０ｍｇ／Ｌ  没食子酸当量；トロロックス当量  ９２．５ｍＭ）を、２倍希釈した。０．０２ｍｌを、パッチ下で、各有志の背部の皮膚に適用した。肉眼的な刺激痕跡、瘢痕、または結果の読みを妨げ得る任意の以上を有さない表面に生成物を適用するために、試験直前に接触帯域の検査を実行した。陰性対照として、無含有パッチを並行して適用した。
【０１２７】
４８時間後、パッチを除去し、紅斑；乾燥／落屑；水腫および小胞に関して皮膚科学者が当該域を予定尺度により査定した。
【０１２８】
上記実験条件下で、２４名の健常有志において、４８時間の閉塞パッチ下で、５０％に希釈した０．０２ｍｌのホホバ抽出物の単一回適用後、当該抽出物は、その一次皮膚耐容性に関して非刺激性であると明確に示された。
【０１２９】
実施例４：経皮水分損失（ＴＥＷＬ）測定
１１名の健常女性有志（年齢４３〜６７歳）に関して、二重盲検検定で経皮水分損失（ＴＥＷＬ）を検査した。初回適用（Ｄ０）前、ならびにＴｅｗａｍｅｔｅｒ（登録商標）（Ｃｏｕｒａｇｅ  ＆  Ｋｈａｚａｋａ）を用いた適用の２８日後（Ｄ２８）に、有志の前腕でＴＥＷＬを測定した。各前腕で２回の測定を行って、平均を算定した。ＴＥＷＬ変動（パーセンテージ）を、Ｄ０とＤ２８の間で算定した。ＴＥＷＬの減少は、皮膚バリア機能の改善を表す。
【０１３０】
各有志は、検定物質（５％のホホバ抽出物を含有するゲル；その明細は、本明細書中の下記の表３に示される）およびプラセボ（ホホバ抽出物を有さず、グリセリンおよび水に置き換えた同一ゲル）を用いた。各物質を、無作為化パターンで異なる前腕に適用した。
【表４】
2018027965.tif 000006
【０１３１】
２８日間の試験中、毎日、１日２回（午前中および夕方に）、意図された区域に有志自身が、検定およびプラセボ物質を適用した。適用前に当該区域を清浄にした；当該物質が完全に浸透するまで、物質を擦り込んだ；必要に応じて定量した。
【０１３２】
実施した２回のＴＥＷＬ測定の平均を、実験値として保持した。Ｄ０およびＤ２８間のＴＥＷＬ変動を、表４に示す（％で）：
【表５】
2018027965.tif 000007
【０１３３】
女性有志１１名が２８日間１日２回適用した５％ホホバ抽出物を含む検定物質は、ＴＥＷＬの１２％減少を伴う統計学的に有意の皮膚バリア機能改善を示したが、一方、プラセボゲルに関するＴＥＷＬ変動は、有意ではなかった。
【０１３４】
実施例５：皮膚粘着性および外見に及ぼすホホバ抽出物の作用
デルマトップ（登録商標）（ＥＯＴＥＣＨ−フランス）を用いて、ｉｎ  ｖｉｖｏでの皮膚軽減パラメーターを調べることにより、ホホバ抽出物のアンチエイジング作用を査定した。皮膚軽減パラメーターは、平均の肌理の粗さ（Ｒａ）；最大振幅（Ｒｔ）；および平均軽減（Ｒｚ）を包含した。
【０１３５】
検定は、干渉縞投影による画像から位相画像を算定することを基礎にした。次に、この画像は、各点の高さの確定を可能にする。取得ソフトウェアにより２Ｄおよび３Ｄ測定地を得て、当該帯域に沿って分布する５０の縦プロフィルに関する皮膚軽減のパラメーターを獲得できる。自動整復システムにより、測定帯域の精確な再同定が可能になる。
【０１３６】
この試験には、健常女性有志（年齢４６〜６４歳）２６名が参加した。適用レジメンは、上記の実施例４に記載したものと同じであった。検定物質は、３％のホホバ抽出物を含有するゲル（ＩＢＲＧａｐｔｕｒｅ（登録商標）と呼ばれる；明細は、下記の表５に示される）およびプラセボ（ホホバ抽出物を含有しない同一ゲル。活性ゲル中の抽出物が寄与するレベルに対応する割合で、代わりに水、グリセリンおよびナトリウムメタビスルファイトを含有し、適切なＦＤ＆Ｃ着色剤を付加して、活性物質の最終色と釣り合わせた）であった。
【表６】
2018027965.tif 000008
【０１３７】
試験パラメーターは、以下の通りであった：
（１）Ｒａ：平均の肌理の粗さ（μｍ）：このパラメーターの減少は平滑作用を特徴づける；（２）Ｒｚ：平均軽減（μｍ）：すべてのｐｉｃｋｓ対谷高の平均；（３）軽減振幅（μｍ）：５つの最大ｐｉｃｋｓ対谷高の平均。
【０１３８】
これらのパラメーター（ＲｔおよびＲｚ）のうちの１つの減少は、物質のテンソル作用を特徴づける。
【０１３９】
全パラメーターを、物質適用の前（Ｄ０）および後（Ｄ２８）に測定した。結果の合成を、以下の表６に示す。皮膚に及ぼす視覚的作用を、図３に示す。
【表７】
2018027965.tif 000009
【０１４０】
これらの試験条件下で、２８日の使用後、ホホバ抽出物を含有する検定物質は、以下を誘導した：
平均で−２．１μｍという平均の肌理の粗さの有意の減少、すなわち−６％；
６５％の被験者に観察された平滑作用；
平均で−８．６μｍという平均軽減（Ｒｚ）の有意の減少、すなわち−８％；
平均で−１８．０μｍという軽減増幅（Ｒｔ）の有意の減少、すなわち−９％；ならびに
６５％〜７３％の被験者で観察されたテンソル作用。
【０１４１】
要するに、平均の肌理の粗さの有意の減少が観察されたが、これは、活性物質の有意の平滑作用を示している。平均軽減の有意の減少および軽減増幅の有意の減少が見出され、活性物質の有意のテンソル作用を生じる。
【０１４２】
実施例６：細胞粘着性に及ぼすホホバ抽出物の作用
角質層粘着性に及ぼすホホバ抽出物（本明細書中の上記の実施例５に記載されたＩＢＲＧａｐｔｕｒｅ（登録商標））の作用を、前腕からＤ−Ｓｑｕａｍ（登録商標）で取り出された皮膚試料の分析により評価する。Ｄ−Ｓｑｕａｍ（登録商標）の適用中に加えられる圧力は、ＱＤｅｒｍ（登録商標）を用いて制御される。
【０１４３】
ＱｕａｎｔｉＳｑｕａｍ（登録商標）ソフトウェアとともに皮膚画像アナライザー（登録商標）（Ｓ．Ｉ．Ａ（登録商標））を用いて、試料解析を実施する：剥離表面を標準化方法（３５°）で照明して、コンピューターに連結したデジタルカメラで観察する。試験区域は、１ｃｍ２である。
【０１４４】
得られたデジタル化画像をグレイレベルで解析して、除去鱗屑が占める表面積（ｍｍ２）および落屑指数（占有表面積と細胞層の厚みとの間の比率）を確定する。
【０１４５】
非常に近い帯域を前腕上で限定する。第一試料を第一帯域（ｔ０）上でＤＳｑｕａｍ（登録商標）を用いて採取して、鱗屑の基本量を限定する。他の試料は、検定物質ＩＢＲＧａｐｔｕｒｅ（登録商標）の適用直後（ｔ１）および種々の動力学で（ｔｉ）、採取する。
【０１４６】
ｔ１およびｔ０間の差は、当該物質適用により除去される鱗屑の量についての情報を提供する。
【０１４７】
（ｔｉ−ｔ０）および（ｔ１−ｔ０）間の差は、検定物質のための角質層粘着性についての情報を提供する：適用の２時間後に試料採取された鱗屑が適用直後より少ない場合、それは、当該物質が、角質細胞間の粘着性を増強し、したがってこれは皮膚上に残留した、ということを意味する。
【０１４８】
具体的実施形態についての前記の説明は、本発明の一般的性質を十分に明示しているので、一般概念から逸脱しない限り、過度の実験を伴わずにこのような具体的実施形態を容易に修正し、および／または種々の用途のために適合し得るし、したがって、このような適合および修正は、開示される実施形態の等価物の意味および範囲内に含まれるべきであり、そのように意図される。本明細書中で用いられる語法および用語は、説明のためであって、限定するものではない、と理解されるべきである。種々の開示機能を実行するための手段、材料およびステップは、本発明を逸脱しない限り、種々の代替的形態をとり得る。
【０１４９】
本願は以下の発明をも包含する。
（１）
皮膚の構造、強度、粘着性またはその任意の組合せを保持するか、および／または促進するための方法であって、極性溶媒中のホホバ（Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）植物またはその部分の抽出物を活性成分として含む組成物を被験体の皮膚に投与し、それにより皮膚バリア機能を保持するかまたは促進することを包含する方法。
（２）
皮膚バリア機能を保持するかまたは促進することが、皮膚脱水率を保持するかまたは低減すること；皮膚水和値を保持するかまたは促進すること；環境害毒からの防御を保持するかまたは促進すること、ならびにその任意の組合せのうちの少なくとも１つを包含する（１）記載の方法。
（３）
皮膚の健康、皮膚の完全性、皮膚の引き締まり、皮膚の伸展性、皮膚の弾性、全体的皮膚外見およびその任意の組合せを保持することまたは改善することのうちの少なくとも１つにおいて有効である（１）記載の方法。
（４）
皮膚の健康を改善することが、湿疹、皮膚疾患、尋常性乾癬、扁平苔癬、魚鱗癬、尋常性魚鱗癬および胆道炎の症候を軽減すること；水疱症を防止すること；正常皮膚恒常性を保持すること；皮膚創傷治癒を助長することおよびその任意の組合せのうちの少なくとも１つを包含する（３）記載の方法。
（５）
全体的皮膚外見を促進することが、皺および線を含めた加齢および風化皮膚の可視的徴候を防止すること；皮膚表面を平坦にすること；皮膚孔サイズを低減することまたはその任意の組合せのうちの少なくとも１つを包含する（３）記載の方法。
（６）
前記皮膚の構造、強度、粘着性またはバリア機能を促進することまたは保持することが、予定閾値と比較して決定される(１)記載の方法。
（７）
前記予定閾値が、皮膚への組成物の投与前に測定される値である（６）記載の方法。
（８）
前記予定閾値が、健常皮膚を有する個体から得られる平均値である（６）記載の方法。
（９）
前記予定閾値が、肌荒れを有する個体から得られる平均値である（６）記載の方法。
（１０）
前記極性溶媒が、水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、メタノール、グリセロール、プロパノール、ブタノール、ジプロピレングリコール、ペンチレングリコール、へキシレングリコール、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、蟻酸、酢酸、アセトンおよびその任意の組合せからなる群から選択される（１）記載の方法。
（１１）
前記極性溶媒が水である（１０）記載の方法。
（１２）
前記極性溶媒が水、ならびにエタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、メタノール、グリセロールおよびアセトンのうちの少なくとも１つである（１０）記載の方法。
（１３）
前記組成物が、化粧上または製薬上許容可能な希釈剤、担体または賦形剤をさらに含む化粧用または薬学的組成物である（１）記載の方法。
（１４）
前記化粧用または薬学的組成物が局所適用のために処方される（１３）記載の方法。
（１５）
前記組成物が、少なくとも１つの付加的活性成分をさらに含む（１）記載の方法。
（１６）
前記ホホバの抽出物が以下の：
ａ．  ホホバ植物またはその任意の部分を少なくとも１つの極性溶媒と混合するステップ；
ｂ．  液体抽出物を生成するのに十分な時間、前記混合物をインキュベートするステップ；
ｃ．  ホホバ植物またはその部分を取り出し、前記液体抽出物を収集するステップ；
ｄ．  前記液体抽出物を濾過するステップ；そして
ｅ．  前記濾液を収集するステップ
を包含する方法により製造される（１）記載の方法。
（１７）
前記インキュベーション温度が２０℃〜１２０℃の範囲である請求項１６記載の方法。
（１８）
ステップ（ｅ）の前記濾液が、１．５μ未満の孔サイズを有するフィルターを通してさらに濾過される（１６）記載の方法。
（１９）
前記ホホバ植物部分が、根、茎、葉、種子、果実またはその任意の組合せからなる群から選択される（１６）記載の方法。
（２０）
前記植物部分が葉である（１６）記載の方法。
（２１）
前記ホホバ植物またはその部分が、新鮮、部分的乾燥または完全乾燥形態からなる群から選択される形態である（１６）記載の方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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