(57)【要約】【課題】ラクトバチルス菌株の安定性増進のためのプレバイオティックス組成物を提供する。【解決手段】培養用培地と、前記培養用培地に添加される添加剤とを含むラクトバチルス菌株の安定性増進のためのプレバイオティックス組成物であって、前記添加剤は、マルトデキストリン、又はゲンチオオリゴ糖、又はこれらの混合物を含む。【選択図】  図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
培養用培地と、前記培養用培地に添加される添加剤とを含むラクトバチルス菌株の安定性増進のためのプレバイオティックス組成物であって、
前記添加剤は、マルトデキストリンとゲンチオオリゴ糖のうち、いずれか一方又は両方を含むことを特徴とするプレバイオティックス組成物。
【請求項２】
前記添加剤は、前記プレバイオティックス組成物の総重量に対して前記マルトデキストリンを２〜４重量％含み、前記プレバイオティックス組成物の前記総重量に対して前記ゲンチオオリゴ糖を３〜５重量％を含むことを特徴とする請求項１に記載のプレバイオティックス組成物。
【請求項３】
前記添加剤は、前記プレバイオティックス組成物の総重量に対して前記マルトデキストリンを１〜４重量％含み、前記プレバイオティックス組成物の前記総重量に対して前記ゲンチオオリゴ糖を１〜５重量％含むことを特徴とする請求項１に記載のプレバイオティックス組成物。
【請求項４】
前記ラクトバチルス菌株はラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＬＰ５１９３菌株(受託番号：ＫＣＣＭ１１５９８Ｐ)であることを特徴とする請求項１に記載のプレバイオティックス組成物。
【請求項５】
前記培養用培地は、ペプトン（ｐｅｐｔｏｎｅ）、酢酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）、クエン酸アンモニウム（ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）、硫酸マグネシウム（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｓｕｌｆａｔｅ）、硫酸マンガン（ｍａｎｇａｎｅｓｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、リン酸二カリウム（Ｄｉｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、及びトゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）からなる群から選択された１種以上を含むことを特徴とする請求項１に記載のプレバイオティックス組成物。
【請求項６】
前記培養用培地は食品の組成物であり、
前記食品は、発酵乳、チョコレート、アイスクリーム、ビスケット、クリームサンド、牛乳及びキャンデーからなる群の中から選択される食品であることを特徴とする請求項１に記載のプレバイオティックス組成物。
【請求項７】
マルトデキストリンとゲンチオオリゴ糖のうち、いずれか一方又は両方を含む添加剤を培養用培地に添加し、
前記添加剤が添加された前記培養用培地にラクトバチルスプランタルム菌株を投入して培養することを特徴とするラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法。
【請求項８】
前記添加剤には、前記プレバイオティックス組成物の総重量に対して前記マルトデキストリンを２〜４重量％含有させ、前記総重量に対して前記ゲンチオオリゴ糖を３〜５重量％含有させることを特徴とする請求項７に記載のラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法。
【請求項９】
前記添加剤には、前記プレバイオティックス組成物の総重量に対して前記マルトデキストリンを１〜４重量％含み、前記総重量に対して前記ゲンチオオリゴ糖を１〜５重量％含むことを特徴とする請求項７に記載のラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法。
【請求項１０】
前記ラクトバチルス菌株はラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＬＰ５１９３菌株(受託番号：ＫＣＣＭ１１５９８Ｐ)であることを特徴とする請求項７に記載のラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法。
【請求項１１】
前記培養用培地は、ペプトン（ｐｅｐｔｏｎｅ）、酢酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）、クエン酸アンモニウム（ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）、硫酸マグネシウム（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｓｕｌｆａｔｅ）、硫酸マンガン（ｍａｎｇａｎｅｓｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、リン酸二カリウム（Ｄｉｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、及びトゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）からなる群から選択された１種以上を含有させることを特徴とする請求項７に記載のラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法。
【請求項１２】
前記培養は３５〜３８℃で１２〜３６時間の間に行うことを特徴とする請求項７に記載のラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はラクトバチルス菌株の安定性増進のためのプレバイオティックス組成物に関するもので、具体的に培養用培地に含まれる添加剤として、マルトデキストリン単独、又はゲンチオオリゴ糖単独、又はこれらの混合物を所定量含む場合、菌株の耐酸性及び耐熱性を増進させることができるので、食品におけるラクトバチルス菌株の生存率を向上させることによって消費者を満足させることができる乳酸菌食品を提供することができる。
【背景技術】
【０００２】
人間は紀元前から乳酸菌を食品として用いた。乳酸菌は栄養が豊かで多様な生理活性物質を含んでいる。乳酸菌は整腸作用を助けて下痢や便秘を予防し、有害細菌の成長を抑制して腸癌、老化を防止し、ビタミンを生成して発育を促進し、コレステロールを調節して生活習慣病を予防し、免疫力を増強する効果がある。
【０００３】
現在国内で使用する乳酸菌は大部分が外国から輸入されたもので、動物の腸内、原乳などから分離した動物性乳酸菌である。韓国人は西洋人とは違い、植物性食品を主食とするから、腸内環境が異なり、腸の長さが長い。したがって、動物性乳酸菌より野菜、果物などの植物、キムチなどの果菜類を発酵した食品から分離した植物性乳酸菌を取ることが効果面でより適切である。
【０００４】
通常は、乳酸菌の摂取時、体内胃液と腸液によって乳酸菌細胞が損傷され、これは乳酸菌の腸内到達率が減少する結果に繋がる。したがって、このような乳酸菌の腸内到達率を高めようと微細カプセル化などの多様な研究が進められているが、実際産業に適用されるためには多くの追加研究が必要な実情である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】大韓民国公開特許第２０１６−１１４８００号（２０１６．１０．０６）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明の発明者らは、乳酸菌のうち伝統のキムチから分離された韓国人の腸に適応している有用なラクトバチルスプランタルム菌株に対し多様な食品又は原料の製造時に発生し得る熱に対する安定性を付与するとともに体内摂取時に胃酸などの苛酷な環境で耐性を有するなどの安定性増進のためのプレバイオティックス組成物を研究したところ、マルトデキストリンとゲンチオオリゴ糖を所定量含む場合、前記菌株の耐酸性と耐熱性を増進させることができることが分かり本発明を完成するに至った。
【０００７】
したがって、本発明は、培養用培地と、前記培養用培地に添加される添加剤を含むラクトバチルス菌株の安定性増進のためのプレバイオティックス組成物において、前記添加剤はマルトデキストリン、又はゲンチオオリゴ糖、又はこれらの混合物を含むことを特徴とするプレバイオティックス組成物を提供することにその目的がある。
【０００８】
また、前記プレバイオティックス組成物をラクトバチルスプランタルム菌株が含まれた培地に投入して培養する段階を含むことを特徴とする、ラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法を提供することにその他の目的がある。
【０００９】
本発明の目的は以上で言及した目的に制限されない。本発明の目的は以下の説明でより明らかになり、特許請求範囲に記載された手段及びその組合せによって実現可能であろう。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は前記目的を達成するために以下のような構成を含む。
【００１１】
本発明は、培養用培地と、前記培養用培地に添加される添加剤とを含むラクトバチルス菌株の安定性増進のためのプレバイオティックス組成物であって、前記添加剤は、マルトデキストリン、又はゲンチオオリゴ糖、又はこれらの混合物を含むことを特徴とする、プレバイオティックス組成物を提供する。
本発明は、前記添加剤は、前記プレバイオティックス組成物の総重量に対して前記マルトデキストリンを２〜４重量％含み、前記プレバイオティックス組成物の前記総重量に対して前記ゲンチオオリゴ糖を３〜５重量％を含むことを特徴とするプレバイオティックス組成物である。
また、本発明は、前記添加剤は、前記プレバイオティックス組成物の総重量に対して前記マルトデキストリンを１〜４重量％含み、前記プレバイオティックス組成物の前記総重量に対して前記ゲンチオオリゴ糖を１〜５重量％含むことを特徴とするプレバイオティックス組成物である。
本発明は、前記ラクトバチルス菌株はラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＬＰ５１９３菌株(受託番号：ＫＣＣＭ１１５９８Ｐ)であることを特徴とするプレバイオティックス組成物である。
本発明は、前記培養用培地は、ペプトン（ｐｅｐｔｏｎｅ）、酢酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）、クエン酸アンモニウム（ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）、硫酸マグネシウム（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｓｕｌｆａｔｅ）、硫酸マンガン（ｍａｎｇａｎｅｓｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、リン酸二カリウム（Ｄｉｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、及びトゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）からなる群から選択された１種以上を含むことを特徴とするプレバイオティックス組成物である。
本発明は、前記培養用培地は食品の組成物であり、前記食品は、発酵乳、チョコレート、アイスクリーム、ビスケット、クリームサンド、牛乳及びキャンデーからなる群の中から選択される食品であることを特徴とするプレバイオティックス組成物である。
本発明は、マルトデキストリンとゲンチオオリゴ糖のうち、いずれか一方又は両方を含む添加剤を培養用培地に添加し、前記添加剤が添加された前記培養用培地にラクトバチルスプランタルム菌株を投入して培養することを特徴とするラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法である。
本発明は、前記添加剤には、前記プレバイオティックス組成物の総重量に対して前記マルトデキストリンを２〜４重量％含有させ、前記総重量に対して前記ゲンチオオリゴ糖を３〜５重量％含有させることを特徴とするラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法である。
本発明は、前記添加剤には、前記プレバイオティックス組成物の総重量に対して前記マルトデキストリンを１〜４重量％含み、前記総重量に対して前記ゲンチオオリゴ糖を１〜５重量％含むことを特徴とするラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法である。
本発明は、前記ラクトバチルス菌株はラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＬＰ５１９３菌株(受託番号：ＫＣＣＭ１１５９８Ｐ)であることを特徴とするラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法である。
前記培養用培地は、ペプトン（ｐｅｐｔｏｎｅ）、酢酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）、クエン酸アンモニウム（ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）、硫酸マグネシウム（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｓｕｌｆａｔｅ）、硫酸マンガン（ｍａｎｇａｎｅｓｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、リン酸二カリウム（Ｄｉｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、及びトゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）からなる群から選択された１種以上を含有させることを特徴とするラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法である。
また、本発明は、前記培養は３５〜３８℃で１２〜３６時間の間に行うことを特徴とするラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法である。
【００１２】
前記培養用培地は、ペプトン（ｐｅｐｔｏｎｅ）、酢酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）、クエン酸アンモニウム（ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）、硫酸マグネシウム（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｓｕｌｆａｔｅ）、硫酸マンガン（ｍａｎｇａｎｅｓｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、リン酸二カリウム（Ｄｉｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、及びトゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）からなる群から選択された１種以上を含むことが好ましい。これは菌株成長に役立つ要素である。
【００１３】
また、前記培養用培地は食品組成物としても良い。食品内にマルトデキストリン、又はゲンチオオリゴ糖、又はこれらの混合物を含む添加剤を添加することによってラクトバチルス菌株の耐熱性及び耐酸性を向上させることができる。
【００１４】
前記食品は、発酵乳、チョコレート、アイスクリーム、ビスケット、クリームサンド、牛乳及びキャンデーからなる群から選択されるものであるが、必ずしもこれに制限されるものではない。
【００１５】
また、前記ラクトバチルス菌株はラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＬＰ５１９３菌株であり、これは耐酸性及び耐胆汁性に特に優れるので、食品と一緒に取る場合、腸内到達率が高い利点がある。
【００１６】
好ましくは、前記ラクトバチルス菌株はキムチから分離されたラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＬＰ５１９３（受託番号ＫＣＣＭ１１５９８Ｐ）である。この菌株は耐酸性及び耐胆汁性に特に優れており腸内到達率が高い特性を有するので、食品に適用するのに相応しい。
【００１７】
また、本発明は、マルトデキストリンとゲンチオオリゴ糖のうち、いずれか一方又は両方を含む添加剤を培養用培地に添加し、前記添加剤が添加された前記培養用培地にラクトバチルスプランタルム菌株を投入して培養することを特徴とするラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法である。
また、本発明は、前記添加剤には、前記プレバイオティックス組成物の総重量に対して前記マルトデキストリンを２〜４重量％含有させ、前記総重量に対して前記ゲンチオオリゴ糖を３〜５重量％含有させることを特徴とするラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法である。
また、本発明は、前記添加剤には、前記プレバイオティックス組成物の総重量に対して前記マルトデキストリンを１〜４重量％含み、前記総重量に対して前記ゲンチオオリゴ糖を１〜５重量％含むことを特徴とするラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法である。
また、本発明は、前記ラクトバチルス菌株はラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＬＰ５１９３菌株(受託番号：ＫＣＣＭ１１５９８Ｐ)であることを特徴とするラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法である。
また、本発明は、前記培養用培地は、ペプトン（ｐｅｐｔｏｎｅ）、酢酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）、クエン酸アンモニウム（ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）、硫酸マグネシウム（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｓｕｌｆａｔｅ）、硫酸マンガン（ｍａｎｇａｎｅｓｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、リン酸二カリウム（Ｄｉｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、及びトゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）からなる群から選択された１種以上を含有させることを特徴とするラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法である。
また、本発明はプレバイオティックス組成物を、ラクトバチルスプランタルム菌株を含む培地に投入して培養する段階を含むことを特徴とする、ラクトバチルスプランタルム菌株の安定性増進方法を提供する。また、前記培養は３５〜３８℃で１２〜３６時間の間に行うことが好ましい。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によるラクトバチルス菌株をマルトデキストリン、ゲンチオオリゴ糖又はこれらの混合物を添加した組成物内で培養する場合、菌株の耐酸性及び耐熱性を向上させることで、乳酸菌が添加された食品の製造及び流通における菌株の生存率が非常に高くなると予想され、この食品の摂取時にも胃酸に対する高い安定性によって腸内到達率が高くなると予想される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】選定したプレバイオティックス（マルトデキストリン、ゲンチオオリゴ糖）の濃度による耐酸性増進結果を示すグラフである。
【図２】選定したプレバイオティックス（マルトデキストリン、ゲンチオオリゴ糖）の濃度による耐熱性増進結果を示すグラフである。
【図３】選定したプレバイオティックス混合物（マルトデキストリンとゲンチオオリゴ糖の混合物）の濃度による耐酸性増進結果を示すグラフである。
【図４】選定したプレバイオティックス混合物（マルトデキストリンとゲンチオオリゴ糖の混合物）の濃度による耐熱性増進結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下、実施例に基づいて本発明を詳細に説明する。本発明の実施例は発明の要旨を変更しない限り多様な形態に変更可能である。しかし、本発明の権利範囲が以下の実施例に限定されるものではない。
【００２１】
本発明の要旨をあいまいにするおそれがあると判断された場合、公知の構成及び機能についての説明は省略する。本明細書で、“含む”とは特別な記載がない限り他の構成要素をさらに含むことができることを意味する。
【００２２】
また、本発明で、酸とはｐＨ２．５の条件を人為的に構成した環境を意味し、熱とは恒温水槽あるいは恒温培養器で５０℃に維持される環境を意味する。
【００２３】
実験例１：プレバイオティックス資化能力
【００２４】
（１）培養用培地の製造
【００２５】
ラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌株のプレバイオティックス資化能力を評価するために、糖（Ｓｕｇａｒ）及び糖含有成分を変更した最少培地を製造した。使用されたプレバイオティックスは全９種で、マルトデキストリン、フラクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、ゲンチオオリゴ糖、キシリトール、アラビアガム、ラクツロース、ソルビトールであり、グルコースは陽性対照群として用いられた。
【００２６】
最少培地の組成は、培地１Ｌ当たりペプトン（ｐｅｐｔｏｎｅ）５ｇ、酢酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）３ｇ、クエン酸アンモニウム（ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）２ｇ、硫酸マグネシウム（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｓｕｌｆａｔｅ）０．１ｇ、硫酸マンガン（ｍａｎｇａｎｅｓｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）０．０５ｇ、リン酸二カリウム（Ｄｉｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）２ｇ、トゥイーン８０（Ｔｗｅｅｎ８０：Polyoxyethylene Sorbitan Monooleate：ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、CAS番号：9005-65-6）１ｇを添加して製造した。糖成分添加培地は、９種のプレバイオティックスをそれぞれ５０重量％となるように糖溶液に調整して前記培地と一緒に１２１℃で１５分間高圧滅菌処理した。それぞれの糖成分添加培地０．４ｍｌと前記培地９．６ｍｌを混合して最終的に１０ｍｌの２重量％糖成分添加液体培地を製造した。
【００２７】
（２）培養条件
【００２８】
凍結保存中のラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌株のバイアルからＭＲＳ培地（ａｇａｒ）に接種し、３７℃で２４時間培養して活性化させた後、ＭＲＳ  ｂｒｏｔｈ培地で同じ条件で培養して種菌培養液を製造した。培養が終了した種菌培養液を遠心分離機（１１５００ｒｐｍ、５ｍｉｎ）で集菌し、上澄液を除去した後、９種のプレバイオティックスが種類別に２重量％添加された液体培地にそれぞれ１％ずつ接種した。それから、３７℃のインキュベーターで２４時間培養した。培養が完了した後、１ｍｌずつ採取し、滅菌希釈液を用いて多段希釈を行い、平板培養によって生菌数を測定した。９種のプレバイオティックス資化能力を陽性対照群であるグルコースの資化能力と比較して評価した。
【００２９】
（３）資化能力評価
【００３０】
２４時間培養を行った結果、９種のプレバイオティックスのうちラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌株が優れた資化能力を有するプレバイオティックスを選定した。９種のプレバイオティックス資化能力は下記の表１に示した。
【００３１】
【表１】
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【００３２】
前記表１に示したように、キシリトールとアラビアガムを除いた残りの７種のプレバイオティックスは共に資化性が高いことが判明し、特にマルトデキストリン、ソルビトール、ガラクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、ゲンチオオリゴ糖の資化性が数段優れていることが判明した。
【００３３】
実験例２：プレバイオティックスによる耐酸性増進評価
【００３４】
ついで、９種のプレバイオティックスによってラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌株の耐酸性が向上するかを確認した。耐酸性測定培地は０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ）を６Ｎ  ＨＣｌでｐＨ２．５に調整した後、１２１℃で１５分間オートクレーブ（ａｕｔｏｃｌａｖｅ）処理して使った。前記製造された９種のプレバイオティックス５０重量％溶液０．４ｍｌとｐＨ２．５に調整されたバッファー（ｂｕｆｆｅｒ）９．６ｍｌを混合して総１０ｍｌの耐酸培地を製造した。
【００３５】
ＭＲＳ培地で培養したラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌株を耐酸培地に接種するために、遠心分離機（１０，０００ｒｐｍ、５ｍｉｎ）で集菌した後、滅菌生理食塩水（ｓａｌｉｎｅ）で１回洗浄した。上澄液は除去し、ラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌体を回収して１０ｍｌ耐酸培地に接種した後、恒温水槽（３７℃、１００ｒｐｍ）に入れて２時間反応させた。反応が終わった後、１ｍｌを採取し、滅菌希釈液による多段希釈によって生菌数を測定した。２時間反応前後の生菌数の測定結果は下記の表２に示した。
【００３６】
【表２】
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【００３７】
前記表２に示したように、９種のプレバイオティックスのうちラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌株の耐酸性増進効果が一番高い処理群はマルトデキストリン、ゲンチオオリゴ糖及びイソマルトオリゴ糖処理群であった。
【００３８】
実験例３：プレバイオティックスの耐熱性増進評価
【００３９】
９種のプレバイオティックスによるラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌株の耐熱性増進効果を測定した。耐熱性測定培地は０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ）を１２１℃で１５分間オートクレーブ（ａｕｔｏｃｌａｖｅ）処理して使った。前記製造された９種のプレバイオティックス溶液０．４ｍｌと加圧滅菌されたバッファー（ｂｕｆｆｅｒ）９．６ｍｌを混合して総１０ｍｌの耐熱培地を製造した。
【００４０】
ＭＲＳ培地で培養したラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌株を耐熱培地に接種するために、遠心分離機（１０，０００ｒｐｍ、５ｍｉｎ）で集菌した後、滅菌生理食塩水（ｓａｌｉｎｅ）で１回洗浄した。上澄液は除去し、ラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌体を１０ｍｌ耐熱培地に混合して５０℃に維持される恒温水槽に入れ、１００ｒｐｍで撹拌させながら１時間反応させた。反応が終わった後、１ｍｌを採取し、滅菌希釈液を用いた多段希釈によって生菌数を測定した。１時間反応後の耐熱性増進結果は下記の表３に示した。
【００４１】
【表３】
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【００４２】
表３に示したように、９種のプレバイオティックスのうちラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌株の耐熱性増進効果が一番高い処理群はマルトデキストリン、ゲンチオオリゴ糖及びアラビアガム処理群であった。
【００４３】
したがって、前記の耐酸性結果と比較したとき、耐酸性と耐熱性で共に生存率が向上したプレバイオティックスはマルトデキストリンとゲンチオオリゴ糖の２種であり、これを最適のプレバイオティックスと選定した。
【００４４】
実験例４：選定プレバイオティックスにおける最適濃度確立
【００４５】
前記表２及び表３に基づいて、プレバイオティックス資化能と耐酸性及び耐熱性に優れたプレバイオティックス２種であるマルトデキストリンとゲンチオオリゴ糖を選定した。
【００４６】
ついで、一番高い増進効果を示す濃度を確立するために、２種のプレバイオティックス５０重量％溶液を０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー（Ｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ）にそれぞれ１、２、３、４、５、６重量％となるように添加して製造した。
【００４７】
ＭＲＳ培地で培養したラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌株を濃度別培地に接種するために、遠心分離機（１０，０００ｒｐｍ、５ｍｉｎ）で集菌した後、滅菌生理食塩水（ｓａｌｉｎｅ）で１回洗浄した。上澄液は除去し、ラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌体を各１０ｍｌの濃度別培地に混合して３７℃に維持される恒温水槽に入れ、１００ｒｐｍで撹拌させながら、耐酸性の場合は２時間、耐熱性の場合は１時間反応させた。反応が終わった後、１ｍｌを採取し、滅菌希釈液を用いた多段希釈によって生菌数を測定した。２時間反応後の耐酸性増進結果は下記の表４及び図１に示した。また、１時間反応後の耐熱性増進結果は下記の表５及び図２に示した。
【００４８】
【表４】
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【００４９】
前記表４及び図１によって、マルトデキストリンの場合は２〜４重量％、ゲンチオオリゴ糖の場合は３〜５重量％を添加した時、一番高い耐酸性増進が確認された。
【００５０】
【表５】
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【００５１】
前記表５及び図２によって、マルトデキストリンは２〜４重量％、ゲンチオオリゴ糖は３〜５重量％を添加した時、一番高い耐熱性増進が確認された。
【００５２】
実験例５：選定プレバイオティックス混合時におけるシナジー効果
【００５３】
選定された２種のプレバイオティックスを混合して添加したとき、耐酸性及び耐熱性が相乗的に増進するかを確認した。前記と同様な方法でラクトバチルスプランタルムＬＬＰ５１９３菌株の種菌培養液を製造した後、遠心分離で菌体を回収した。回収した菌体は下記の表６に示した含量でマルトデキストリンとゲンチオオリゴ糖が添加された０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー（ｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ）に接種し、前記と同様な方法で耐酸性及び耐熱性を測定した。２種のプレバイオティックスを混合添加した後、それぞれの結果は表６、図３及び図４に示した。
【００５４】
【表６】
2018082700.tif 000008
【００５５】
前記表６、図３及び図４を見ると、マルトデキストリンとゲンチオオリゴ糖を混合添加する場合、耐酸性は未添加に比べて最大で７６ｌｏｇ％以上増加し、耐熱性は最大で５０ｌｏｇ％以上増加したことが確認された。
【００５６】
さらに、それぞれを単独で添加した場合に比べ、耐酸性の場合は最大で２１ｌｏｇ％以上増加し、耐熱性の場合は最大で１３ｌｏｇ％増加したことを確認することができた。
【００５７】
したがって、ラクトバチルスプランタルム菌株にマルトデキストリンとゲンチオオリゴ糖をそれぞれ２〜４重量％、３〜５重量％添加して培養する場合、より好ましくは混合して使用する場合、耐酸性と耐熱性が顕著に増加することが確認された。これを用いて多様な食品又は原料製造時に発生する熱に対して安定性を付与するとともに体内摂取時において、胃酸などの環境に耐性を付与するのに役立つことが期待される。
【００５８】
以上で本発明について詳細に説明した。ただ、本発明の権利範囲はこれに限定されず、以下の特許請求範囲によって決定される。
【受託番号】
【００５９】
寄託機関名：韓国微生物保存センター（国外）
受託番号：ＫＣＣＭ１１５９８Ｐ
受託日付：２０１４．１１．０３
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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