(57)【要約】      （修正有）【課題】セリンプロテアーゼから製造されるセリンプロテアーゼ変異体を提供する。【解決手段】単離されたサブチリシン変異体であって、前記サブチリシン変異体が、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、参照セリンプロテアーゼと比較した場合に１箇所以上の置換を有するセリンプロテアーゼ変異体。これらのセリンプロテアーゼ変異体を含む組成物。これらのセリンプロテアーゼ変異体のうちの少なくとも１種を含むクリーニング組成物。【選択図】図２
2018078904.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたサブチリシン変異体であって、
前記サブチリシン変異体が、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつS188D-E271Fのアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、
前記変異体が、親プロテアーゼである、配列番号２で示されるアミノ酸配列を含むバチルス・レンタス（Bacillus lentus）のサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの変異体であり、
前記変異体が、配列番号２のアミノ酸配列に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有し、及び
前記プロテアーゼ変異体のアミノ酸位置が、配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）のサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の、対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、
サブチリシン変異体。
【請求項２】
請求項１に記載の単離されたサブチリシン変異体であって、
前記変異体が、A16S, T22A, S24R, N62E, N76D, E89P, S101A/G, S103G/A, V104L/I, L111V, S128N, P129E, A232V, L148I, A158E, G159D/E, R186H, Y209E, Q236H, Q245R, N248D/R, H249R, N252K/R, 及び T253Rから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを更に含むアミノ酸配列からなり、及び
前記サブチリシン変異体のアミノ酸位置が、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、
サブチリシン変異体。
【請求項３】
請求項１に記載の単離されたサブチリシン変異体であって、
前記変異体が、A1R, Q2A, Q2M, Q2R, Q2S, Q2W, S3R, V4C, V4R, V4S, I8A, S9A, S9F, S9W, R10A, R10H, R10M, R10S, Q12F, Q12R, P14F, P14K, P14Q, A15F, A15R, A16S, H17F, H17M, H17R, N18K, N18R, G20F, G20K, G20R, T22A, T22L, T22Q, T22R, T22V, T22W, T22Y, G23A, G23F, G23S, S24F, S24H, S24L, S24Q, S24R, S24W, G25F, G25R, G25V, V26F, K27F, K27L, K27R, K27V, V28A, V28E, V28N, A29T, V30E, L31F, T33D, T33G, T33S, G34P, I35M, S36F, S36R, S36T, T38F, T38L, T38R, P40H, P40L, P40N, P40R, P40T, P40W, L42I, N43A, N43D, N43F, N43I, N43M, N43R, N43S, N43W, R45T, G46R, A48R, F50C, V51F, V51H, V51W, P52E, P52F, P52N, P55Y, T57R, Q59A, Q59F, Q59R, D60A, D60P, D60Q, N62E, N62Q, G63A, G63D, G63E, G63H, G63I, G63M, G63P, G63Q, G63S, G63T, G63V, H64F, H64T, V68A, V68C, A69N, A69P, A69T, A69W, T71G, I72C, A74C, L75A, L75E, L75F, L75R, N76D, S78I, S78N, S78R, I79Q, I79W, V81R, L82F, L82M, L82R, L82T, L82V, A85M, P86I, P86L, P86W, E89F, E89G, E89H, E89I, E89L, E89P, E89T, E89V, E89W, Y91F, Y91N, A92F, K94N, S99F, S99G, S99M, S99P, S99T, G100I, G100N, G100Q, G100S, S101A, S101D, S101E, S101F, S101G, S101N, S101P, S101T, G102A, G102E, G102H, G102N, G102T, S103A, S103D, S103G, S103N, V104D, V104E, V104I, V104L, S105E, S105Q, S105T, S106A, S106D, S106E, S106F, S106G, S106T, S106V, I107F, I107M, A108G, A108I, Q109M, L111I, L111V, E112L, E112Q, E112V, A114G, G115K, G115R, N116A, N116K, N116L, N117F, G118I, G118R, M119C, H120A, H120F, H120R, V121E, V121F, N123E, N123G, L124S, S128D, S128F, S128H, S128I, S128L, S128M, S128N, S128Q, P129E, S132A, S132E, A138G, S144R, V147L, L148I, A158E, G159C, G159D, G159E, S160D, S166D, S166E, Y167W, M175V, V177C, D181A, Q182R, N183D, N183F, N183I, N183M, N183R, N185E, N185I, N185V, R186H, R186K, Y192H, Y192W, A194E, A194F, A194V, D197F, I198F, I198L, V203C, V203E, T208S, Y209E, Y209F, Y209G, Y209H, Y209L, Y209N, Y209S, Y209T, P210L, P210R, P210V, G211Q, G211R, S212F, S212I, S212M, T213A, Y214F, A215D, A215E, A215F, A215H, A215N, S216A, S216F, L217D, L217E, L217N, N218D, N218E, N218P, T224A, T224G, V227I, A230E, A231C, A231I, A232V, L233C, V234F, K235F, Q236F, Q236H, Q236N, N238K, N238L, N238R, P239F, P239G, P239H, P239K, P239N, P239R, P239S, P239T, S240R, W241R, S242L, S242R, N243F, N243R, V244R, Q245R, I246S, N248D, N248I, N248R, N248V, H249R, H249T, L250I, K251R, K251S, N252F, N252H, N252I, N252K, N252R, T253F, T253I, T253R, A254C, S256N, G258R, T260I, T260V, L262D, L262H, Y263F, S265F, L267M, L267N, L267V, N269I, N269R, A270C, A272F, A272R, A273F, A273I, 及びT274Gから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを更に含むアミノ酸配列からなり、及び
前記サブチリシン変異体のアミノ酸位置が、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、
サブチリシン変異体。
【請求項４】
前記プロテアーゼ変異体が、配列番号２のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列からなり、かつ前記プロテアーゼ変異体の合計正味電荷が前記バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して０、＋１、＋２、＋３、＋４、＋５、−１、−２、−３、−４、又は−５であり、
前記合計正味電荷が、N43D, R45T, N62E, N76D, S101D, P129E, A158E, G159D, G159E, S166D, S188D, A230E, N18R, G20K, G20R, T22R, S24R, N43R, G118R, Q245R, H249R, N269R, 及び E271Fから選択された１以上の置換により得られ、及び
前記プロテアーゼ変異体のアミノ酸位置が、前記プロテアーゼ変異体のアミノ酸配列を配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と整列させることで決定される、前記バチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、
請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロテアーゼ変異体。
【請求項５】
前記プロテアーゼ変異体が、次の特性：ａ）試験方法２による性能指数が、少なくとも１．１である；ｂ）試験方法３による性能指数が、少なくとも１．１である；ｃ）試験方法４による性能指数が、少なくとも１．１である；及び／あるいはｄ）試験方法６による性能指数が、少なくとも１．１である、のうちの１つ以上を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載のプロテアーゼ変異体。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載のサブチリシン変異体をコードするポリヌクレオチド配列からなる、単離された核酸。
【請求項７】
請求項６に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項８】
請求項７に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項９】
バチルスサブチリシンの少なくとも１種のサブチリシン変異体を生産する方法であって、
ａ）請求項１〜５のいずれか一項に記載のサブチリシン変異体を少なくとも１種コードする少なくとも１種の核酸を含む発現ベクターにより、宿主細胞を形質転換させることで、形質転換された宿主細胞を生産する工程、
ｂ）前記形質転換された宿主細胞を、少なくとも１種のサブチリシン変異体を生産するのに好適な条件下で培養して、少なくとも１種のサブチリシン変異体を生産する工程、及び
ｃ）生産された前記サブチリシン変異体を回収する工程
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、米国仮出願特許番号第６１／３３２，１５１号（２０１０年５月６日出願）；同第６１／３３２，００６号（２０１０年５月６日出願）；同第６１／３９２，３６４号（２０１０年１０月１２日出願）並びに同第６１／３９２，１８８号（２０１０年１０月１２日出願）の利益を主張する。これらのすべての特許は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、セリンプロテアーゼ変異体を提供する。具体的には、本発明は、参照セリンプロテアーゼと比較した場合に１箇所以上の置換を有するセリンプロテアーゼ変異体を提供する。加えて、本発明は、これらのセリンプロテアーゼ変異体を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、本発明は、これらのセリンプロテアーゼ変異体のうちの少なくとも１種を含むクリーニング組成物を提供する。
【背景技術】
【０００３】
セリンプロテアーゼは工業用酵素の分野でかねてより知られているが、特定の条件及び用途に好適な改変プロテアーゼが引き続き必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、セリンプロテアーゼ変異体を提供する。具体的には、本発明は、参照セリンプロテアーゼと比較した場合に１箇所以上の置換を有するセリンプロテアーゼ変異体を提供する。加えて、本発明は、これらのセリンプロテアーゼ変異体を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、本発明は、これらのセリンプロテアーゼ変異体のうちの少なくとも１種を含むクリーニング組成物を提供する。
【０００５】
本発明は、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１Ｒ、Ｘ２Ｗ、Ｘ２Ｍ、Ｘ２Ｒ、Ｘ２Ａ、Ｘ２Ｓ、Ｘ３Ｒ、Ｘ４Ｒ、Ｘ４Ｃ、Ｘ４Ｓ、Ｘ８Ａ、Ｘ９Ｆ、Ｘ９Ｗ、Ｘ９Ａ、Ｘ１０Ｓ、Ｘ１０Ｍ、Ｘ１０Ｈ、Ｘ１０Ａ、Ｘ１２Ｒ、Ｘ１２Ｆ、Ｘ１４Ｋ、Ｘ１４Ｆ、Ｘ１４Ｑ、Ｘ１５Ｒ、Ｘ１５Ｆ、Ｘ１６Ｓ、Ｘ１７Ｒ、Ｘ１７Ｍ、Ｘ１７Ｆ、Ｘ１８Ｒ、Ｘ１８Ｋ、Ｘ２０Ｆ、Ｘ２０Ｒ、Ｘ２０Ｋ、Ｘ２２Ｙ、Ｘ２２Ａ、Ｘ２２Ｒ、Ｘ２２Ｖ、Ｘ２２Ｑ、Ｘ２２Ｗ、Ｘ２２Ｌ、Ｘ２３Ｆ、Ｘ２３Ｓ、Ｘ２３Ａ、Ｘ２４Ｗ、Ｘ２４Ｒ、Ｘ２４Ｈ、Ｘ２４Ｆ、Ｘ２４Ｑ、Ｘ２４Ｌ、Ｘ２５Ｖ、Ｘ２５Ｆ、Ｘ２５Ｒ、Ｘ２６Ｆ、Ｘ２７Ｖ、Ｘ２７Ｆ、Ｘ２７Ｌ、Ｘ２７Ｒ、Ｘ２８Ｎ、Ｘ２８Ｅ、Ｘ２８Ａ、Ｘ２９Ｔ、Ｘ３０Ｅ、Ｘ３１Ｆ、Ｘ３３Ｄ、Ｘ３３Ｇ、Ｘ３３Ｓ、Ｘ３４Ｐ、Ｘ３５Ｍ、Ｘ３６Ｆ、Ｘ３６Ｒ、Ｘ３６Ｔ、Ｘ３８Ｌ、Ｘ３８Ｆ、Ｘ３８Ｒ、Ｘ４０Ｌ、Ｘ４０Ｗ、Ｘ４０Ｎ、Ｘ４０Ｒ、Ｘ４０Ｔ、Ｘ４０Ｈ、Ｘ４２Ｉ、Ｘ４３Ｄ、Ｘ４３Ｉ、Ｘ４３Ｒ、Ｘ４３Ｍ、Ｘ４３Ｆ、Ｘ４３Ｗ、Ｘ４３Ｓ、Ｘ４３Ａ、Ｘ４５Ｔ、Ｘ４６Ｒ、Ｘ４８Ｒ、Ｘ５０Ｃ、Ｘ５１Ｈ、Ｘ５１Ｗ、Ｘ５１Ｆ、Ｘ５２Ｆ、Ｘ５２Ｅ、Ｘ５２Ｎ、Ｘ５５Ｙ、Ｘ５７Ｒ、Ｘ５９Ｒ、Ｘ５９Ａ、Ｘ５９Ｆ、Ｘ６０Ａ、Ｘ６０Ｑ、Ｘ６０Ｐ、Ｘ６２Ｅ、Ｘ６２Ｑ、Ｘ６３Ｉ、Ｘ６３Ｖ、Ｘ６３Ｔ、Ｘ６３Ｐ、Ｘ６３Ｄ、Ｘ６３Ｍ、Ｘ６３Ｈ、Ｘ６３Ｑ、Ｘ６３Ｅ、Ｘ６３Ａ、Ｘ６３Ｓ、Ｘ６４Ｆ、Ｘ６４Ｔ、Ｘ６８Ｃ、Ｘ６８Ａ、Ｘ６９Ｎ、Ｘ６９Ｐ、Ｘ６９Ｗ、Ｘ６９Ｔ、Ｘ７１Ｇ、Ｘ７２Ｃ、Ｘ７４Ｃ、Ｘ７５Ｆ、Ｘ７５Ａ、Ｘ７５Ｒ、Ｘ７５Ｅ、Ｘ７６Ｄ、Ｘ７８Ｉ、Ｘ７８Ｒ、Ｘ７８Ｎ、Ｘ７９Ｗ、Ｘ７９Ｑ、Ｘ８１Ｒ、Ｘ８２Ｖ、Ｘ８２Ｔ、Ｘ８２Ｆ、Ｘ８２Ｍ、Ｘ８２Ｒ、Ｘ８５Ｍ、Ｘ８６Ｌ、Ｘ８６Ｉ、Ｘ８６Ｗ、Ｘ８９Ｐ、Ｘ８９Ｔ、Ｘ８９Ｖ、Ｘ８９Ｇ、Ｘ８９Ｗ、Ｘ８９Ｈ、Ｘ８９Ｆ、Ｘ８９Ｌ、Ｘ８９Ｉ、Ｘ９１Ｎ、Ｘ９１Ｆ、Ｘ９２Ｆ、Ｘ９４Ｎ、Ｘ９９Ｇ、Ｘ９９Ｆ、Ｘ９９Ｍ、Ｘ９９Ｔ、Ｘ９９Ｐ、Ｘ１００Ｉ、Ｘ１００Ｓ、Ｘ１００Ｎ、Ｘ１００Ｑ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１０１Ａ、Ｘ１０１Ｇ、Ｘ１０１Ｐ、Ｘ１０１Ｆ、Ｘ１０１Ｅ、Ｘ１０１Ｔ、Ｘ１０１Ｄ、Ｘ１０２Ｈ、Ｘ１０２Ｎ、Ｘ１０２Ｅ、Ｘ１０２Ｔ、Ｘ１０２Ａ、Ｘ１０３Ｇ、Ｘ１０３Ｄ、Ｘ１０３Ｎ、Ｘ１０４Ｄ、Ｘ１０４Ｅ、Ｘ１０４Ｉ、Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０５Ｑ、Ｘ１０５Ｅ、Ｘ１０５Ｔ、Ｘ１０６Ｆ、Ｘ１０６Ｖ、Ｘ１０６Ｇ、Ｘ１０６Ｅ、Ｘ１０６Ｔ、Ｘ１０６Ｄ、Ｘ１０６Ａ、Ｘ１０７Ｆ、Ｘ１０７Ｍ、Ｘ１０８Ｇ、Ｘ１０８Ｉ、Ｘ１０９Ｍ、Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１１１Ｉ、Ｘ１１２Ｖ、Ｘ１１２Ｌ、Ｘ１１２Ｑ、Ｘ１１４Ｇ、Ｘ１１５Ｋ、Ｘ１１５Ｒ、Ｘ１１６Ａ、Ｘ１１６Ｋ、Ｘ１１６Ｌ、Ｘ１１７Ｆ、Ｘ１１８Ｉ、Ｘ１１８Ｒ、Ｘ１１９Ｃ、Ｘ１２０Ｆ、Ｘ１２０Ａ、Ｘ１２０Ｒ、Ｘ１２１Ｅ、Ｘ１２１Ｆ、Ｘ１２３Ｇ、Ｘ１２３Ｅ、Ｘ１２４Ｓ、Ｘ１２８Ｆ、Ｘ１２８Ｈ、Ｘ１２８Ｉ、Ｘ１２８Ｌ、Ｘ１２８Ｑ、Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１２８Ｍ、Ｘ１２８Ｄ、Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１３２Ｅ、Ｘ１３２Ａ、Ｘ１３８Ｇ、Ｘ１４４Ｒ、Ｘ１４７Ｌ、Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１５９Ｃ、Ｘ１６０Ｄ、Ｘ１６６Ｄ、Ｘ１６６Ｅ、Ｘ１６７Ｗ、Ｘ１７５Ｖ、Ｘ１７７Ｃ、Ｘ１８１Ａ、Ｘ１８２Ｒ、Ｘ１８３Ｆ、Ｘ１８３Ｉ、Ｘ１８３Ｄ、Ｘ１８３Ｒ、Ｘ１８３Ｍ、Ｘ１８５Ｅ、Ｘ１８５Ｉ、Ｘ１８５Ｖ、Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１８６Ｋ、Ｘ１８８Ｒ、Ｘ１８８Ｅ、Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１９２Ｈ、Ｘ１９２Ｗ、Ｘ１９４Ｖ、Ｘ１９４Ｆ、Ｘ１９４Ｅ、Ｘ１９７Ｆ、Ｘ１９８Ｌ、Ｘ１９８Ｆ、Ｘ２０３Ｅ、Ｘ２０３Ｃ、Ｘ２０８Ｓ、Ｘ２０９Ｎ、Ｘ２０９Ｆ、Ｘ２０９Ｅ、Ｘ２０９Ｓ、Ｘ２０９Ｈ、Ｘ２０９Ｇ、Ｘ２０９Ｔ、Ｘ２０９Ｌ、Ｘ２１０Ｒ、Ｘ２１０Ｖ、Ｘ２１０Ｌ、Ｘ２１１Ｒ、Ｘ２１１Ｑ、Ｘ２１２Ｉ、Ｘ２１２Ｍ、Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２１３Ａ、Ｘ２１４Ｆ、Ｘ２１５Ｆ、Ｘ２１５Ｎ、Ｘ２１５Ｄ、Ｘ２１５Ｈ、Ｘ２１５Ｅ、Ｘ２１６Ｆ、Ｘ２１６Ａ、Ｘ２１７Ｎ、Ｘ２１７Ｅ、Ｘ２１７Ｄ、Ｘ２１８Ｐ、Ｘ２１８Ｄ、Ｘ２１８Ｅ、Ｘ２２４Ａ、Ｘ２２４Ｇ、Ｘ２２７Ｉ、Ｘ２３０Ｅ、Ｘ２３１Ｉ、Ｘ２３１Ｃ、Ｘ２３３Ｃ、Ｘ２３４Ｆ、Ｘ２３５Ｆ、Ｘ２３６Ｆ、Ｘ２３６Ｎ、Ｘ２３８Ｌ、Ｘ２３８Ｋ、Ｘ２３８Ｒ、Ｘ２３９Ｋ、Ｘ２３９Ｓ、Ｘ２３９Ｔ、Ｘ２３９Ｇ、Ｘ２３９Ｈ、Ｘ２３９Ｒ、Ｘ２３９Ｎ、Ｘ２３９Ｆ、Ｘ２４０Ｒ、Ｘ２４１Ｒ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２４３Ｒ、Ｘ２４３Ｆ、Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２４６Ｓ、Ｘ２４８Ｉ、Ｘ２４８Ｖ、Ｘ２４８Ｒ、Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２４９Ｔ、Ｘ２５０Ｉ、Ｘ２５１Ｓ、Ｘ２５１Ｒ、Ｘ２５２Ｉ、Ｘ２５２Ｆ、Ｘ２５２Ｈ、Ｘ２５２Ｒ、Ｘ２５３Ｆ、Ｘ２５３Ｉ、Ｘ２５３Ｒ、Ｘ２５４Ｃ、Ｘ２５６Ｎ、Ｘ２５８Ｒ、Ｘ２６０Ｖ、Ｘ２６０Ｉ、Ｘ２６２Ｈ、Ｘ２６２Ｄ、Ｘ２６３Ｆ、Ｘ２６５Ｆ、Ｘ２６７Ｎ、Ｘ２６７Ｖ、Ｘ２６７Ｍ、Ｘ２６９Ｉ、Ｘ２６９Ｒ、Ｘ２７０Ｃ、Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２７１Ｖ、Ｘ２７１Ｉ、Ｘ２７１Ｐ、Ｘ２７１Ｈ、Ｘ２７１Ｍ、Ｘ２７１Ｔ、Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２７１Ａ、Ｘ２７２Ｆ、Ｘ２７２Ｒ、Ｘ２７２Ｆ、Ｘ２７３Ｉ、Ｘ２７３Ｆ、及びＸ２７４Ｇから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置が、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンス（B.amyloliquefaciens）のサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０００６】
本発明は、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１６Ｓ、Ｘ１８Ｒ、Ｘ２０Ｒ、Ｘ２２Ａ、Ｘ２４Ｒ、Ｘ４３Ｒ／Ｄ、Ｘ４５Ｔ、Ｘ７６Ｄ、Ｘ１０１Ａ、Ｘ１０３Ｇ、Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１４８Ｉ、Ｘ２３０Ｅ、Ｘ２４２Ｒ、及びＸ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０００７】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１Ｒ、Ｘ２３０Ｅ、Ｘ２７１Ｌ、Ｘ１１５Ｒ、Ｘ２０Ｒ、Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２３５Ｆ、Ｘ２７Ｖ／Ｆ／Ｌ、Ｘ７５Ｅ、Ｘ８２Ｒ、Ｘ１８Ｒ、Ｘ２６９Ｒ、Ｘ４３Ｄ、Ｘ４３Ｒ、Ｘ７６Ｄ、Ｘ４５Ｔ、Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２４Ｒ、Ｘ７８Ｒ、Ｘ９Ａ、Ｘ２２Ｒ、Ｘ１２１Ｅ、Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２８Ｅ、Ｘ３０Ｅ、Ｘ４Ｒ、及びＸ２４１Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０００８】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０８９Ｐ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０８９Ｐ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ０８９Ｐ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ａ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１０１Ａ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１０１Ａ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０３Ｇ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０３Ｇ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１０３Ｇ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１０３Ｇ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０２２Ａ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ２０９Ｅ、及びＸ１８６Ｈ−Ｘ２０９Ｅから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０００９】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０１８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２４１Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ００４Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２２Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０２２Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２４１Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ００９Ａ、Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ２４４Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ２４１Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０１８Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０１８Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２４１Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２４４Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０２０Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２４４Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２４１Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２６９Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、及びＸ０８２Ｒ−Ｘ２７１Ｌから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００１０】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｒ−Ｘ−４３Ｒ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１７４Ｔ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１７２Ｖ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１９４Ｔ、Ｘ００８Ｔ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ２３５Ｆ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０３Ａ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｃ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３９Ｑ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１４１Ｇ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７４Ｉ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１４８Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０１Ｓ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４７Ｈ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０４Ａ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０３Ａ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０４８Ｔ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３９Ｔ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２５３Ａ、Ｘ１４３Ａ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７２Ｐ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２６９Ｃ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００１１】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０３Ａ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０３Ａ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｒ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１７４Ｔ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ００８Ｔ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０１Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３９Ｑ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ２３５Ｆ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１７２Ｖ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１４８Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｃ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１９４Ｔ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１４１Ｇ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７４Ｉ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０１５Ｔ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４７Ｈ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０４Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０４８Ｔ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２５３Ａ、Ｘ１４３Ａ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３９Ｔ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７２Ｐ、及びＸ０２４Ｒ−Ｘ２６９Ｃから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００１２】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、及びＸ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２６９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００１３】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３３Ｉ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７Ｅ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ３８Ｉ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４０Ｐ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ３０Ｓ−Ｘ３１Ｓ−Ｘ３２Ｉ−Ｘ３３Ｑ−Ｘ３４Ｖ−Ｘ３５Ｆ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２７３Ｖ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２２７Ｉから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００１４】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｒ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、及びＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００１５】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２
４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｋ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、及びＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００１６】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００１７】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２０９Ｅ−、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０２２Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１８８Ｄ−、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ１０４Ｌ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００１８】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ００１Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２５Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１６７Ｗ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ１６７Ｗ−Ｘ２３６Ｎ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２０Ｆ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１８５Ｉ−Ｘ２３３Ｃ−Ｘ２３６Ｎ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１６Ｆ−Ｘ２３６Ｎ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０５２Ｎ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２３９Ｓ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０２５Ｒ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２３９Ｓ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２２４Ａ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１２１Ｆ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２３６Ｎ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４４Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１６７Ｗ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１６７Ｗ−Ｘ２１２Ｍ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ１２１Ｆ−Ｘ２５２Ｒ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ２１６Ｆ−Ｘ２３６Ｎ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０５２Ｎ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ０４６Ｒ−Ｘ１２１Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ０５９Ａ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０５２Ｎ−Ｘ０６２Ｑ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１９２Ｗ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０５２Ｎ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０５２Ｎ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１９２Ｗ、Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ２２４Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１４４Ｒ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２３８Ｌ−Ｘ２３９Ｓ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ａ−Ｘ０６２Ｑ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１１Ｑ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０５２Ｎ−Ｘ０５９Ａ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１６７Ｗ−Ｘ２２４Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０５７Ｒ−Ｘ１６７Ｗ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０５９Ａ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ａ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１１Ｑ、Ｘ１１７Ｆ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１２１Ｆ−Ｘ２３３Ｃ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０５７Ｒ−Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０６２Ｑ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１２１Ｆ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ２１２Ｍ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２３６Ｎ、Ｘ０６２Ｑ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ１９４Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０６２Ｑ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０５７Ｒ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１９８Ｌ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ０５９Ａ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１１７Ｆ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２０Ｆ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０４３Ａ−Ｘ０５７Ｒ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１８３Ｄ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３８Ｌ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ０４３Ａ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１１７Ｆ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０９１Ｆ−Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１６７Ｗ、Ｘ１０６Ｇ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ２３８Ｌ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０６２Ｑ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ０５７Ｒ−Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１２１Ｆ−Ｘ１８５Ｉ−Ｘ１９２Ｗ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２３３Ｃ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ１８５Ｉ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３３Ｃ、Ｘ０５２Ｎ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２１６Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ１０５Ｔ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４６Ｒ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１２１Ｆ、Ｘ１０６Ｇ−Ｘ１８５Ｉ−Ｘ２１６Ｆ−Ｘ２３６Ｎ、Ｘ０６２Ｑ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２３６Ｎ−Ｘ２５２Ｒ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ０４３Ａ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２３３Ｃ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ａ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ１９８Ｌ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ２１７Ｅ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３９Ｓ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２０Ｆ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２１６Ｆ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０２２Ｗ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３３Ｃ−Ｘ２３８Ｌ、Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１２０Ｆ−Ｘ２２４Ａ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０４３Ａ−Ｘ０５９Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１６Ｆ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０５７Ｒ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３６Ｎ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ０６２Ｑ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１８５Ｉ、Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１２０Ｆ−Ｘ１６７Ｗ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２３３Ｃ、Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１２Ｍ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０５２Ｎ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２３３Ｃ、Ｘ０８９Ｉ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１８５Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ１１１Ｉ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３９Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２３３Ｃ−Ｘ２３６Ｎ、及びＸ０２３Ａ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ２１２Ｍ−Ｘ２１５Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００１９】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ｓ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２２Ｋ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１９Ｈ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ００１Ｔ−Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０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【００２０】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、及びＸ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００２１】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１１６Ａ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１６Ａ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０３８Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０１４Ｌ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２１５Ｆ、及びＸ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００２２】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１４Ｖ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、及びＸ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００２３】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００２４】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０１７Ｒ−Ｘ０２２Ａ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１７Ｒ−Ｘ０２２Ａ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、及びＸ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００２５】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００２６】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２６Ｆ−Ｘ０５１Ｗ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１０６Ｅ、Ｘ０２６Ｆ−Ｘ０３１Ｆ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１０２Ａ−Ｘ１６０Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ１００Ｓ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ２１８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０３８Ｆ−Ｘ０４８Ｒ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１００Ｓ−Ｘ１８６Ｋ、Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ２１５Ｄ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２５６Ｎ、Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ２１２Ｍ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２６Ｆ−Ｘ０４８Ｒ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１８Ｄ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２１５Ｄ−Ｘ２５０Ｉ−Ｘ２７２Ｆ、Ｘ１２１Ｆ−Ｘ１８５Ｅ−Ｘ２２４Ａ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０３１Ｆ−Ｘ１０２Ａ−Ｘ１２８Ｄ−Ｘ２２４Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１０２Ａ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ２５０Ｉ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０３８Ｆ−Ｘ１２１Ｆ−Ｘ１６０Ｄ−Ｘ２７２Ｆ、Ｘ０２６Ｆ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１５９Ｃ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４８Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ２１７Ｅ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０３８Ｆ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１００Ｓ−Ｘ２１２Ｍ−Ｘ２１５Ｄ、Ｘ１００Ｓ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｄ、Ｘ１０２Ａ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１９４Ｅ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１２８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２７Ｒ−Ｘ１００Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１６０Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１０２Ａ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ１００Ｓ−Ｘ１９４Ｅ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ０４８Ｒ−Ｘ１２８Ｄ−Ｘ１８５Ｅ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１９４Ｅ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２７Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２７Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１９４Ｅ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２５６Ｎ、Ｘ０２７Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ２７２Ｆ、Ｘ０４８Ｒ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８５Ｅ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０２７Ｒ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２６Ｆ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２５６Ｎ−Ｘ２７２Ｆ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２１Ｆ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０５１Ｗ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０２７Ｒ−Ｘ０３８Ｆ−Ｘ１０２Ａ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ０３１Ｆ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２５６Ｎ−Ｘ２７２Ｆ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１６０Ｄ−Ｘ１８６Ｋ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｄ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０３１Ｆ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２６Ｆ−Ｘ１９４Ｅ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２５６Ｎ、及びＸ１０３Ｎ−Ｘ１６０Ｄ−Ｘ２５０Ｉ−Ｘ２５６Ｎから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００２７】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、及びＸ０２２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００２８】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ２１３Ａ、及びＸ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３９Ｇから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００２９】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、及びＸ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００３０】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０８７Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１０９Ｒ−Ｘ２１２Ｐ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２７１Ｖ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１０９Ｒ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１０９Ｒ−Ｘ２１２Ｐ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２７１Ｖ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１０９Ｒ−Ｘ２１２Ｐ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｓ８７Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１２Ｐ−Ｘ２７１Ｖ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１０９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１２Ｐ−Ｘ２７１Ｖ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１０９Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、及びＸ０７６Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１２Ｐ−Ｘ２４５Ｌ−Ｘ２７１Ｖから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００３１】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｓ−Ｘ０８７Ｎ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２７０Ｔ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１７２Ｖ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｓ−Ｘ１４１Ｇ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｓ−Ｘ０８５Ｎ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１３３Ｖ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０３Ｉ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２１Ｍ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ００５Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１７４Ｔ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１３３Ｖ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ００８Ｔ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００５Ｓ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４２Ｐ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１９４Ｔ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｄ−Ｘ１３８Ｖ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０１Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３９Ｑ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ２３５Ｆ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１７２Ｖ、Ｘ０１７Ｙ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１４８Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｃ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１９４Ｔ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１４１Ｇ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７４Ｉ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ００４Ｅ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０１５Ｔ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１５６Ｌ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２４３Ｆ−Ｘ２６９Ｈ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４７Ｈ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２２８Ｔ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１７４Ｖ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３５Ｆ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３５Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１５１Ｖ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０４Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０４８Ｔ、Ｘ０１２Ｈ−Ｘ１０４Ａ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２５３Ａ、Ｘ１４３Ａ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３９Ｔ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１２９Ｈ−Ｘ１８４Ｄ−Ｘ２５３Ｍ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８５Ｖ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７２Ｐ、及びＸ０２４Ｒ−Ｘ２６９Ｃから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００３２】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、及びＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４５Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００３３】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ０２４Ｒ−Ｘ０２７Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００３４】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２２２Ｑ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２２２Ｓ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２２２Ｑ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２２２Ｑ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２２２Ｓ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２２２Ｓ−Ｘ２４５Ｒ、及びＸ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２２２Ｓ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００３５】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｇ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００３６】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２０９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ２７１Ｆ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ６２Ｅ−Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ２２Ａ−Ｘ６２Ｅ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２７１Ｆ、及びＸ１０１Ａ−Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００３７】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２５２Ｋ、及びＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００３８】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２３８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５３Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ７６Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ６２Ｅ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ６２Ｅ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００３９】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ９Ａ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２４Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ９Ａ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２２Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ９Ａ−Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ９Ａ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２０Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ４Ｒ−Ｘ９Ａ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ１Ｒ−Ｘ９Ａ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ１Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２０Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２０Ｒ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ９Ａ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ４Ｒ−Ｘ９Ａ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、及びＸ２２Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００４０】
本発明は、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｒ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｒ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｒ、及びＸ１０１Ｇ、Ｘ１０３Ａ、Ｘ１０４Ｉ、Ｘ２３２Ｖ、Ｘ２３６Ｈ、Ｘ２４５Ｒ、及びＸ２５２Ｋから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００４１】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１６Ｓ、Ｘ２２Ａ、Ｘ２４Ｒ、Ｘ６２Ｅ、Ｘ７６Ｄ、Ｘ８９Ｐ、Ｘ１０１Ａ／Ｇ、Ｘ１０３Ｇ／Ａ、Ｘ１０４Ｌ／Ｉ、Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１２９Ｅ、Ｘ２３２Ｖ、Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１５９Ｄ／Ｅ、Ｘ１６６Ｄ、Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１８８Ｄ、Ｘ２０９Ｅ、Ｘ２３６Ｈ、Ｘ２３８Ｒ、Ｘ２４５Ｒ、Ｘ２４８Ｄ／Ｒ、Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２５２Ｋ／Ｒ、Ｘ２５３Ｒ、及びＸ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００４２】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＮ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ａ１５８Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ａ１５８Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ａ１５８Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ、Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ、Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｅ０８９Ｐ、Ａ０１６Ｓ−Ｅ０８９Ｐ、Ｎ０６２Ｅ−Ｅ０８９Ｐ、Ｎ０６２Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ１５８Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｐ１２９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｌ１１１Ｖ−Ｅ２７１Ｆ、Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｅ２７１Ｆ、Ｇ１５９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｅ２７１Ｆ、Ｅ０８９Ｐ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１２８Ｎ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０３Ｇ−Ｅ２７１Ｆ、Ｌ１４８Ｉ−Ｅ２７１Ｆ、Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ、Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ｇ１５９Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｇ１５９Ｅ、Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｇ１５９Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｌ１１１Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｐ１２９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｈ２４９Ｒ、Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｌ１４８Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｙ２０９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０３Ｇ−Ｈ２４９Ｒ、Ｅ０８９Ｐ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ、Ｓ１０１Ａ−Ｌ１１１Ｖ、Ａ０１６Ｓ−Ｌ１１１Ｖ、Ｖ１０４Ｌ−Ｌ１１１Ｖ、Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１１１Ｖ、Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１１１Ｖ、Ｅ０８９Ｐ−Ｌ１１１Ｖ、Ａ０１６Ｓ−Ｌ１４８Ｉ、Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１４８Ｉ、Ｔ０２２Ａ−Ｌ１４８Ｉ、Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ、Ｖ１０４Ｌ−Ｌ１４８Ｉ、Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１４８Ｉ、Ｓ１２８Ｎ−Ｌ１４８Ｉ、Ｓ１０１Ａ−Ｌ１４８Ｉ、Ｅ０８９Ｐ−Ｌ１４８Ｉ、Ｌ１１１Ｖ−Ｌ１４８Ｉ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｐ１２９Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｐ１２９Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｐ１２９Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｐ１２９Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ、Ｔ０２２Ａ−Ｒ１８６Ｈ、Ａ０１６Ｓ−Ｒ１８６Ｈ、Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｅ０８９Ｐ−Ｒ１８６Ｈ、Ｐ１２９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｇ１５９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１０３Ｇ−Ｒ１８６Ｈ、Ｖ１０４Ｌ−Ｒ１８６Ｈ、Ｌ１１１Ｖ−Ｒ１８６Ｈ、Ｌ１４８Ｉ−Ｒ１８６Ｈ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ａ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１０１Ａ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１０１Ａ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ｇ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ｇ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１０３Ｇ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１０３Ｇ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１２８Ｎ、Ｓ１０３Ｇ−Ｓ１２８Ｎ、Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１２８Ｎ、Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１８８Ｄ、Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１８８Ｄ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１８８Ｄ、Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１０３Ｇ−Ｓ１８８Ｄ、Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ａ０１６Ｓ−Ｔ０２２Ａ、Ａ０１６Ｓ−Ｖ１０４Ｌ、Ｔ０２２Ａ−Ｖ１０４Ｌ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ、Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ、Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ、Ｅ０８９Ｐ−Ｖ１０４Ｌ、Ｇ１５９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ｙ２０９Ｅ、Ｌ１４８Ｉ−Ｙ２０９Ｅ、Ｐ１２９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｙ２０９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２０９Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｙ２０９Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ｙ２０９Ｅ、及びＲ１８６Ｈ−Ｙ２０９Ｅから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００４３】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＮ０１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｖ２４４Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ２４２Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｖ００４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｓ２４２Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｓ２４２Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ａ００１Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ１１５Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ００９Ａ−Ｓ２１２Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｌ０８２Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ００９Ａ−Ｓ０７８Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｓ０２４Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ、Ａ００１Ｒ−Ｓ００９Ａ、Ｓ２４２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｖ２４４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０１８Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ０１８Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｎ０１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｌ０８２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ２４４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｇ１１５Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｇ０２０Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ０２４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｖ２４４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｗ２４１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｎ０４３Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｔ０２２Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ２１２Ｆ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ１１５Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ２４２Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ０７８Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｖ００４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｎ２６９Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ａ００１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｎ０１８Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、及びＬ０８２Ｒ−Ｅ２７１Ｌから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００４４】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ａ１５８Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ａ１５８Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ａ１５８Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ、Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ、Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｅ０８９Ｐ、Ａ０１６Ｓ−Ｅ０８９Ｐ、Ｎ０６２Ｅ−Ｅ０８９Ｐ、Ｎ０６２Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ１５８Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｐ１２９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｌ１１１Ｖ−Ｅ２７１Ｆ、Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｅ２７１Ｆ、Ｇ１５９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｅ２７１Ｆ、Ｅ０８９Ｐ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１２８Ｎ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０３Ｇ−Ｅ２７１Ｆ、Ｌ１４８Ｉ−Ｅ２７１Ｆ、Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ、Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ｇ１５９Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｇ１５９Ｅ、Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｇ１５９Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｌ１１１Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｐ１２９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｈ２４９Ｒ、Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｌ１４８Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｙ２０９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０３Ｇ−Ｈ２４９Ｒ、Ｅ０８９Ｐ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ、Ｓ１０１Ａ−Ｌ１１１Ｖ、Ａ０１６Ｓ−Ｌ１１１Ｖ、Ｖ１０４Ｌ−Ｌ１１１Ｖ、Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１１１Ｖ、Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１１１Ｖ、Ｅ０８９Ｐ−Ｌ１１１Ｖ、Ａ０１６Ｓ−Ｌ１４８Ｉ、Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１４８Ｉ、Ｔ０２２Ａ−Ｌ１４８Ｉ、Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ、Ｖ１０４Ｌ−Ｌ１４８Ｉ、Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１４８Ｉ、Ｓ１２８Ｎ−Ｌ１４８Ｉ、Ｓ１０１Ａ−Ｌ１４８Ｉ、Ｅ０８９Ｐ−Ｌ１４８Ｉ、Ｌ１１１Ｖ−Ｌ１４８Ｉ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｐ１２９Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｐ１２９Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｐ１２９Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｐ１２９Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ、Ｔ０２２Ａ−Ｒ１８６Ｈ、Ａ０１６Ｓ−Ｒ１８６Ｈ、Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｅ０８９Ｐ−Ｒ１８６Ｈ、Ｐ１２９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｇ１５９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１０３Ｇ−Ｒ１８６Ｈ、Ｖ１０４Ｌ−Ｒ１８６Ｈ、Ｌ１１１Ｖ−Ｒ１８６Ｈ、Ｌ１４８Ｉ−Ｒ１８６Ｈ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ａ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１０１Ａ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１０１Ａ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ｇ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ｇ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１０３Ｇ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１０３Ｇ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１２８Ｎ、Ｓ１０３Ｇ−Ｓ１２８Ｎ、Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１２８Ｎ、Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１８８Ｄ、Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１８８Ｄ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１８８Ｄ、Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１０３Ｇ−Ｓ１８８Ｄ、Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ａ０１６Ｓ−Ｔ０２２Ａ、Ａ０１６Ｓ−Ｖ１０４Ｌ、Ｔ０２２Ａ−Ｖ１０４Ｌ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ、Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ、Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ、Ｅ０８９Ｐ−Ｖ１０４Ｌ、Ｇ１５９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ｙ２０９Ｅ、Ｌ１４８Ｉ−Ｙ２０９Ｅ、Ｐ１２９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｙ２０９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２０９Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｙ２０９Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ｙ２０９Ｅ、Ｒ１８６Ｈ−Ｙ２０９Ｅ、Ｎ０１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｖ２４４Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ２４２Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｖ００４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｓ２４２Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｓ２４２Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ａ００１Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ１１５Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ００９Ａ−Ｓ２１２Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｌ０８２Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ００９Ａ−Ｓ０７８Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｓ０２４Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ、Ａ００１Ｒ−Ｓ００９Ａ、Ｓ２４２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｖ２４４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０１８Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ０１８Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｎ０１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｌ０８２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ２４４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｇ１１５Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｇ０２０Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ０２４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｖ２４４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｗ２４１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｎ０４３Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｔ０２２Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ２１２Ｆ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ１１５Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ２４２Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ０７８Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｖ００４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｎ２６９Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ａ００１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｎ０１８Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、及びＬ０８２Ｒ−Ｅ２７１Ｌから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、この変異体の合計正味電荷が、バチルス・レンタス（Bacillus lentus）のサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷と比較して０、＋１、＋２、＋３、＋４、＋５、−１、−２、−３、−４、又は−５であり、この正味電荷が：Ｎ４３Ｄ、Ｒ４５Ｔ、Ｎ６２Ｅ、Ｎ７６Ｄ、Ｓ１０１Ｄ、Ｐ１２９Ｅ、Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｄ、Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１６６Ｄ、Ｓ１８８Ｄ、Ａ２３０Ｅ、Ｎ１８Ｒ、Ｇ２０Ｋ、Ｇ２０Ｒ、Ｔ２２Ｒ、Ｓ２４Ｒ、Ｎ４３Ｒ、Ｇ１１８Ｒ、Ｑ２４５Ｒ、Ｈ２４９Ｒ、Ｎ２６９Ｒ、Ｅ２７１Ｆ、及びＥ２７１Ｌから選択された１箇所以上の置換により得られ、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置が、配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens���のサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の、対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００４５】
一態様では、上記プロテアーゼ変異体は、
ａ）以下の変異：Ｘ１Ｒ、Ｘ２Ｓ、Ｖ４Ｒ、Ｖ４Ｓ、Ｘ９Ａ、Ｘ１０Ｓ、Ｘ１４Ｋ、Ｘ１６Ｓ、Ｘ２２Ａ、Ｘ２２Ｒ、Ｘ２４Ｒ、Ｘ２５Ｖ、Ｘ２６Ｆ、Ｘ４２Ｉ、Ｘ５２Ｆ、Ｘ５２Ｅ、Ｘ５２Ｎ、Ｘ６２Ｅ、Ｘ６２Ｑ、Ｘ６８Ａ、Ｘ６８Ｃ、Ｘ７１Ｇ、Ｘ７２Ｃ、Ｘ７４Ｃ、Ｘ７５Ａ、Ｘ７５Ｆ、Ｘ７８Ｒ、Ｘ８９Ｐ、Ｘ８９Ｔ、Ｘ８９Ｇ、Ｘ８９Ｈ、Ｘ８９Ｗ、Ｘ９１Ｎ、Ｘ９４Ｎ、Ｘ１００Ｓ、Ｘ１０１Ａ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１０１Ｇ、Ｘ１０１Ｄ、Ｘ１０３Ｇ、Ｘ１０３Ｎ、Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０４Ｉ、Ｘ１０８Ｉ、Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１１２Ｖ、Ｘ１１５Ｋ、Ｘ１１７Ｆ、Ｘ１２１Ｆ、Ｘ１２８Ｄ、Ｘ１２８Ｆ、Ｘ１２８Ｌ、Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１６０Ｄ、Ｘ１６６Ｄ、Ｘ１８５Ｅ、Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１８８Ｅ、Ｘ１８８Ｄ、Ｘ２０３Ｅ、Ｘ２０９Ｓ、Ｘ２０９Ｎ、Ｘ２０９Ｆ、Ｘ２０９Ｔ、Ｘ２０９Ｅ、Ｘ２０９Ｈ、Ｘ２０９Ｇ、Ｘ２１０Ｒ、Ｘ２１２Ｉ、Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２１４Ｆ、Ｘ２１５Ｎ、Ｘ２１５Ｄ、Ｘ２１５Ｅ、Ｘ２１７Ｅ、Ｘ２１７Ｎ、Ｘ２２４Ａ、Ｘ２３０Ｅ、Ｘ２３１Ｉ、Ｘ２３６Ｆ、Ｘ２３８Ｒ、Ｘ２３８Ｋ、Ｘ２３９Ｋ、Ｘ２３９Ｇ、Ｘ２３９Ｒ、Ｘ２４８Ｖ、Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２５０Ｉ、Ｘ２６２Ｄ、Ｘ２６３Ｆ、Ｘ２６５Ｆ、Ｘ２６７Ｖ、Ｘ２６７Ｎ、Ｘ２６９Ｉ、Ｘ２６９Ｒ、Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２７１Ｉ、Ｘ２７１Ｈ及びＸ２７２Ｆのうちの２つ以上を含み、並びに／又は
ｂ）以下の変異の組：Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０２２Ａ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０８９Ｐ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０３Ｇ、Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ２７１Ｆ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ６２Ｅ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ６２Ｅ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５３Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２３８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ７６Ｄ及びＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆのうちの１つ以上を含み、上記変異体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＢ．レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼと比較して０、−１、−２、−３、−４又は−５の正味電荷、好ましくは０、−１、−２又は−３の正味電荷を有する。これらのプロテアーゼ変異体は、イオン強度の低い、又は洗剤濃度の低い水性洗浄液に特に好ましいものであり得る。
【００４６】
一態様では、上記プロテアーゼ変異体は、
ａ）以下の変異：Ｘ４Ｒ、Ｘ１７Ｒ、Ｘ１８Ｒ、Ｘ２０Ｒ、Ｘ２２Ｒ、Ｘ２４Ｒ、Ｘ２４Ｗ、Ｘ２５Ｒ、Ｘ４３Ｒ、Ｘ４３Ａ、Ｘ４６Ｒ、Ｘ５２Ｆ、Ｘ５２Ｎ、Ｘ５７Ｒ、Ｘ５９Ａ、Ｘ６２Ｑ、Ｘ７１Ｇ、Ｘ７５Ｒ、Ｘ７６Ｄ、Ｘ７８Ｒ、Ｘ８２Ｒ、Ｘ８６Ｗ、Ｘ８９Ｐ、Ｘ８９Ｗ、Ｘ８９Ｔ、Ｘ８９Ｉ、Ｘ８９Ｈ、Ｘ８９Ｖ、Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０６Ｖ、Ｘ１０６Ｇ、Ｘ１１５Ｒ、Ｘ１１８Ｉ、Ｘ１２１Ｆ、Ｘ１４４Ｒ、Ｘ１８５Ｉ、Ｘ１９７Ｆ、Ｘ２０９Ｎ、Ｘ２０９Ｓ、Ｘ２１７Ｅ、Ｘ２３１Ｉ、Ｘ２３９Ｒ、Ｘ２３９Ｓ、Ｘ２４１Ｒ、Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４３Ｒ、Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２４８Ｉ、Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２５２Ｒ、Ｘ２５３Ｒ、Ｘ２７１Ｔ、Ｘ２７１Ｖ、Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２７１Ｈ、Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２７１Ｐ、Ｘ１Ｒ、Ｘ９Ａ、Ｘ２１２Ｆ及びＸ２６９Ｒのうちの２つ以上を含み、並びに／又は
ｂ）以下の変異の組：Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ２４４Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０１８Ｒ、Ｘ２４１Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋのうちの１つ以上を含み、上記プロテアーゼ変異体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＢ．レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼと比較して０、＋１、＋２、＋３、＋４又は＋５の合計正味電荷を有し、好ましくは正の合計正味電荷を有し、最も好ましくは＋１、＋２又は＋３の正味電荷を有する。これらのプロテアーゼ変異体は、イオン強度の高い、又は洗剤濃度の高い水性洗浄液に特に好ましいものであり得る。
【００４７】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ１７４Ｔ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｋ２３５Ｆ、Ｙ２０９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０１８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ１１８Ｒ−Ａ１７２Ｖ、Ｇ１１８Ｒ−Ａ１９４Ｔ、Ｉ００８Ｔ−Ｓ０２４Ｒ、Ｋ２３５Ｆ−Ｎ２４３Ｆ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０３Ａ、Ｎ０１８Ｒ−Ｖ１０４Ｉ、Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｃ−Ｔ０３３Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ２３２Ｖ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ２３９Ｑ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１４１Ｇ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ２７４Ｉ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ１０１Ｇ−Ａ２３２Ｖ、Ｔ０３３Ｓ−Ｌ１４８Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ２０１Ｓ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｗ２４１Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ、Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ１１８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２４５Ｒ、Ｐ０８６Ｗ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ２４７Ｈ、Ｓ０２４Ｒ−Ｖ１０４Ａ、Ｓ０７８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ１０１Ｇ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０３Ａ−Ａ２３２Ｖ、Ｔ０３３Ｓ−Ａ０４８Ｔ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ２３９Ｔ、Ｔ０３３Ｓ−Ｔ２５３Ａ、Ｔ１４３Ａ−Ｙ２０９Ａ、Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ２７２Ｐ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ２６９Ｃ、Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ、Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ、Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＳ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００４８】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ｎ０１８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ａ２３２Ｖ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ２３２Ｖ、Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ、Ｎ０１８Ｒ−Ｖ１０４Ｉ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０３Ａ、Ｓ１０１Ｇ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０３Ａ−Ａ２３２Ｖ、Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ、Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ、Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｒ、Ｙ２０９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ１７４Ｔ、Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ、Ｉ００８Ｔ−Ｓ０２４Ｒ、Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ、Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ２０１Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ２３９Ｑ、Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｋ２３５Ｆ−Ｎ２４３Ｆ、Ｇ１１８Ｒ−Ａ１７２Ｖ、Ｔ０３３Ｓ−Ｌ１４８Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｃ−Ｔ０３３Ｓ、Ｇ１１８Ｒ−Ａ１９４Ｔ、Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１４１Ｇ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ２７４Ｉ、Ｐ０８６Ｗ−Ｋ２３５Ｆ、Ａ０１５Ｔ−Ｔ０３３Ｓ、Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ２４７Ｈ、Ｓ０７８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｖ１０４Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ａ０４８Ｔ、Ｇ１１８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｔ２５３Ａ、Ｔ１４３Ａ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ２３９Ｔ、Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ２７２Ｐ、及びＳ０２４Ｒ−Ｒ２６９Ｃから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００４９】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＶ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｓ０７８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、及びＧ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｎ２６９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００５０】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＮ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ａ２３０Ｅ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｌ２３３Ｉ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ａ２３０Ｅ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ａ２３０Ｅ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｋ２７Ｅ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｋ２７Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｔ３８Ｉ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４０Ｐ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｖ３０Ｓ−Ｌ３１Ｓ−Ｄ３２Ｉ−Ｔ３３Ｑ−Ｇ３４Ｖ−Ｉ３５Ｆ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ−Ａ２７３Ｖ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１５３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＧ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｖ２２７Ｉから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００５１】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２５２Ｋ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｒ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、及びＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００５２】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２
４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｋ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、及びＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００５３】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＴ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＳ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００５４】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＶ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｙ２０９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｙ２０９Ｅ−、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１０１Ａ−Ｐ１２９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−、Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１８８Ｄ−、Ｔ０２２Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＶ１０４Ｌ−Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００５５】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＡ００１Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｇ０２５Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｙ１６７Ｗ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０３Ｎ−Ｓ１０６Ｇ−Ｙ１６７Ｗ−Ｑ２３６Ｎ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｈ１２０Ｆ−Ａ１９４Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ２１２Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１４４Ｒ−Ｎ１８５Ｉ−Ｌ２３３Ｃ−Ｑ２３６Ｎ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１６Ｆ−Ｑ２３６Ｎ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１５Ｒ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｐ０５２Ｎ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０３Ｎ−Ｌ１４８Ｉ−Ｔ２１３Ａ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２５Ｒ−Ｅ０８９Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｐ２３９Ｓ−Ａ２７０Ｃ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｌ１４８Ｉ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２５２Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ０２５Ｒ−Ｎ１８３Ｄ−Ｙ１９２Ｗ−Ｐ２３９Ｓ、Ｇ０４６Ｒ−Ａ１９４Ｆ−Ｓ２１２Ｍ、Ｖ１０４Ｌ−Ｌ２１７Ｅ−Ｔ２２４Ａ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２５２Ｒ、Ｇ０２３Ａ−Ｙ０９１Ｆ−Ｖ１２１Ｆ−Ｙ１９２Ｗ−Ｑ２３６Ｎ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｖ２４４Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０９９Ｆ−Ｓ１４４Ｒ−Ｙ１６７Ｗ−Ｎ２５２Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｙ１６７Ｗ−Ｓ２１２Ｍ−Ａ２７０Ｃ、Ｖ１２１Ｆ−Ｎ２５２Ｒ−Ａ２７０Ｃ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０３Ｎ−Ｓ２１６Ｆ−Ｑ２３６Ｎ−Ｎ２５２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２３Ａ−Ｐ０５２Ｎ−Ｙ１９２Ｗ−Ｉ１９８Ｌ−Ｎ２５２Ｒ、Ｇ０２５Ｒ−Ｇ０４６Ｒ−Ｖ１２１Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｖ１０４Ｌ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ、Ｇ０４６Ｒ−Ｑ０５９Ａ−Ｓ１０３Ｎ−Ｇ２１１Ｑ−Ｓ２１２Ｍ、Ｇ０２０Ｒ−Ｐ０５２Ｎ−Ｎ０６２Ｑ−Ｙ０９１Ｆ−Ｙ１９２Ｗ、Ｇ０２３Ａ−Ｐ０５２Ｎ−Ｓ１４４Ｒ−Ｙ１９２Ｗ−Ｓ２１６Ｆ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｓ２４２Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｐ０５２Ｎ−Ｓ１０３Ｎ−Ｎ１１６Ａ−Ｌ１４８Ｉ−Ｙ１９２Ｗ、Ｅ０８９Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１１７Ｆ−Ｔ２２４Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１４４Ｒ−Ｇ２１１Ｑ−Ｎ２３８Ｌ−Ｐ２３９Ｓ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ａ−Ｎ０６２Ｑ−Ａ１９４Ｆ−Ｇ２１１Ｑ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０５２Ｎ−Ｑ０５９Ａ−Ｓ２１６Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ１６７Ｗ−Ｔ２２４Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０５７Ｒ−Ｙ１６７Ｗ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２５Ｒ−Ｓ１０３Ｎ−Ｒ１８６Ｋ−Ａ１９４Ｆ−Ｔ２２４Ａ、Ｓ１０５Ｔ−Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１４４Ｒ−Ｌ１４８Ｉ−Ｓ２１２Ｍ、Ｇ０２０Ｒ−Ｑ０５９Ａ−Ｓ１４４Ｒ−Ｙ１９２Ｗ−Ｔ２２４Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ａ−Ｎ１１７Ｆ−Ａ１９４Ｆ−Ｇ２１１Ｑ、Ｎ１１７Ｆ−Ａ１９４Ｆ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２７０Ｃ、Ｓ０７８Ｒ−Ｙ０９１Ｆ−Ｖ１２１Ｆ−Ｌ２３３Ｃ−Ｎ２５２Ｒ、Ｔ０５７Ｒ−Ｓ０９９Ｆ−Ｓ１０５Ｔ−Ｉ１９８Ｌ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２３Ａ−Ｙ０９１Ｆ−Ｓ１０１Ａ−Ｉ１９８Ｌ−Ｎ２５２Ｒ、Ｎ０６２Ｑ−Ｓ１０３Ｎ−Ｖ１２１Ｆ−Ｓ１４４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｓ２４２Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１７Ｆ−Ｓ２１２Ｍ−Ｓ２１６Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ｔ２１３Ａ−Ｓ２１６Ｆ、Ａ１９４Ｆ−Ｇ２１１Ｑ−Ｑ２３６Ｎ、Ｎ０６２Ｑ−Ｓ１０３Ｎ−Ｎ１１７Ｆ−Ａ１９４Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０６２Ｑ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１０６Ｇ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０５７Ｒ−Ｅ０８９Ｉ−Ｉ１９８Ｌ、Ｇ０４６Ｒ−Ｑ０５９Ａ−Ｓ１０６Ｇ−Ｌ２１７Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ１１７Ｆ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｈ１２０Ｆ−Ｙ１９２Ｗ−Ａ２１５Ｆ−Ｔ２２４Ａ、Ｎ０４３Ａ−Ｔ０５７Ｒ−Ｎ１１７Ｆ−Ｓ１４４Ｒ−Ｎ１８３Ｄ、Ｇ０４６Ｒ−Ｎ１８３Ｄ−Ｎ２３８Ｌ、Ｇ０２５Ｒ−Ｎ０４３Ａ−Ｅ０８９Ｉ−Ｎ１１７Ｆ、Ｓ０７８Ｒ−Ｖ１０４Ｌ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｔ２２４Ａ、Ｙ０９１Ｆ−Ｓ０９９Ｆ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０５Ｔ−Ｙ１６７Ｗ、Ｓ１０６Ｇ−Ｎ１１７Ｆ−Ｎ２３８Ｌ、Ｇ０４６Ｒ−Ｅ０８９Ｉ−Ｙ０９１Ｆ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０６２Ｑ−Ｅ０８９Ｉ−Ｒ１８６Ｋ−Ｓ２１２Ｍ、Ｔ０５７Ｒ−Ｓ０９９Ｆ−Ｖ１２１Ｆ−Ｎ１８５Ｉ−Ｙ１９２Ｗ、Ｇ０４６Ｒ−Ｅ０８９Ｉ−Ｙ１９２Ｗ−Ｌ２３３Ｃ−Ａ２７０Ｃ、Ｅ０８９Ｉ−Ｎ１１７Ｆ−Ｎ１８５Ｉ−Ａ２１５Ｆ−Ｌ２３３Ｃ、Ｐ０５２Ｎ−Ｖ１０４Ｌ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ２１６Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ０９９Ｆ−Ｎ１１６Ａ−Ｒ１８６Ｋ−Ｔ２２４Ａ、Ｇ０２５Ｒ−Ｓ１０５Ｔ−Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１４４Ｒ−Ａ２７０Ｃ、Ｓ１０５Ｔ−Ｇ２１１Ｑ−Ｓ２１６Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ０４６Ｒ−Ｙ０９１Ｆ−Ｖ１２１Ｆ、Ｓ１０６Ｇ−Ｎ１８５Ｉ−Ｓ２１６Ｆ−Ｑ２３６Ｎ、Ｎ０６２Ｑ−Ｓ１０１Ａ−Ｑ２３６Ｎ−Ｎ２５２Ｒ−Ａ２７０Ｃ、Ｇ０２５Ｒ−Ｎ０４３Ａ−Ｙ０９１Ｆ−Ｉ１９８Ｌ−Ａ２７０Ｃ、Ｇ０２０Ｒ−Ｇ０２３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｙ１９２Ｗ−Ｌ２３３Ｃ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ａ−Ｓ１０５Ｔ−Ｓ１０６Ｇ−Ｉ１９８Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｅ０８９Ｉ−Ｌ２１７Ｅ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ０９１Ｆ−Ｉ１９８Ｌ−Ａ２１５Ｆ−Ｐ２３９Ｓ、Ｇ０４６Ｒ−Ｅ０８９Ｉ−Ｓ０９９Ｆ−Ｒ１８６Ｋ−Ｓ２１２Ｍ、Ｖ１０４Ｌ−Ｈ１２０Ｆ−Ｒ１８６Ｋ−Ｓ２１６Ｆ−Ｎ２５２Ｒ、Ｔ０２２Ｗ−Ａ１９４Ｆ−Ｔ２１３Ａ−Ｌ２３３Ｃ−Ｎ２３８Ｌ、Ｓ０９９Ｆ−Ｓ１０５Ｔ−Ｓ１０６Ｇ−Ａ１９４Ｆ−Ｓ２１２Ｍ、Ｅ０８９Ｉ−Ｓ１０５Ｔ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｓ２１６Ｆ、Ｇ０２５Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｈ１２０Ｆ−Ｔ２２４Ａ−Ａ２７０Ｃ、Ｎ０４３Ａ−Ｑ０５９Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ２１６Ｆ−Ｔ２２４Ａ、Ｔ０５７Ｒ−Ｎ１８３Ｄ−Ｑ２３６Ｎ、Ｇ０２５Ｒ−Ｎ０６２Ｑ−Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１４４Ｒ−Ｎ１８５Ｉ、Ｓ１０３Ｎ−Ｈ１２０Ｆ−Ｙ１６７Ｗ−Ｉ１９８Ｌ−Ｌ２３３Ｃ、Ｔ０２２Ｗ−Ｅ０８９Ｉ−Ｓ２１６Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０６Ｇ−Ｎ１１６Ａ−Ｓ２１２Ｍ−Ｔ２２４Ａ、Ｇ０２０Ｒ−Ｐ０５２Ｎ−Ｓ１０１Ａ−Ｉ１９８Ｌ−Ｌ２３３Ｃ、Ｅ０８９Ｉ−Ｙ０９１Ｆ−Ｎ１８５Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２７０Ｃ、Ｌ１１１Ｉ−Ａ２１５Ｆ−Ｐ２３９Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｒ１８６Ｋ−Ｌ２３３Ｃ−Ｑ２３６Ｎ、及びＧ０２３Ａ−Ｓ１０３Ｎ−Ｓ１０６Ｇ−Ｓ２１２Ｍ−Ａ２１５Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００５６】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ｓ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｇ２１１Ｑ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ２２Ｋ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ａ２３２Ｖ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１１６Ａ−Ｇ２１１Ｑ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｒ０４５Ｔ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｉ１９８Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１１６Ａ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２１５Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｖ１０４Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｖ１０４Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２１５Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｒ０１９Ｈ−Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｉ１９８Ｌ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｉ１９８Ｌ−Ａ２１５Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｉ１９８Ｌ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ａ００１Ｔ−Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｒ０４５Ｔ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０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【００５７】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＮ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｓ２４２Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、及びＮ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００５８】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ１１６Ａ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１６Ａ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ、Ｎ０４３Ｒ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０３８Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｔ２１３Ａ、Ｐ０１４Ｌ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２１５Ｆ、及びＧ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００５９】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＮ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１１４Ｖ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、及びＮ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００６０】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＴ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＮ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００６１】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＨ０１７Ｒ−Ｔ０２２Ａ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｈ０１７Ｒ−Ｔ０２２Ａ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｇ１０２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、及びＴ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００６２】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｖ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＳ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｖ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００６３】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＶ０２６Ｆ−Ｖ０５１Ｗ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１０６Ｅ、Ｖ０２６Ｆ−Ｌ０３１Ｆ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｓ１６０Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ１００Ｓ−Ｎ１１６Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ２１８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０２２Ｌ−Ｔ０３８Ｆ−Ａ０４８Ｒ−Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１００Ｓ−Ｒ１８６Ｋ、Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ｎ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１４４Ｒ−Ａ２１５Ｄ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１０５Ｔ−Ｔ２１３Ａ−Ｌ２１７Ｅ−Ｓ２５６Ｎ、Ｎ０４３Ｗ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ２１２Ｍ−Ｎ２４３Ｆ、Ｖ０２６Ｆ−Ａ０４８Ｒ−Ｓ１０５Ｔ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２１８Ｄ−Ｔ２２４Ａ、Ｓ０２４Ｆ−Ｓ１０１Ｄ−Ｇ１１８Ｒ−Ａ２１５Ｄ−Ｌ２５０Ｉ−Ａ２７２Ｆ、Ｖ１２１Ｆ−Ｎ１８５Ｅ−Ｔ２２４Ａ−Ｐ２３９Ｇ、Ｔ０２２Ｌ−Ｌ０３１Ｆ−Ｇ１０２Ａ−Ｓ１２８Ｄ−Ｔ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１４４Ｒ−Ｌ２５０Ｉ、Ｔ０２２Ｌ−Ｔ０３８Ｆ−Ｖ１２１Ｆ−Ｓ１６０Ｄ−Ａ２７２Ｆ、Ｖ０２６Ｆ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１５９Ｃ−Ｒ１８６Ｋ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｆ−Ａ０４８Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１６６Ｄ−Ｌ２１７Ｅ、Ｇ０２３Ａ−Ｔ０３８Ｆ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１００Ｓ−Ｓ２１２Ｍ−Ａ２１５Ｄ、Ｇ１００Ｓ−Ｎ１１６Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ０７８Ｎ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｄ、Ｇ１０２Ａ−Ｓ１０３Ｎ−Ｓ１０５Ｔ−Ａ１９４Ｅ、Ｔ０２２Ｌ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１２８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｋ０２７Ｒ−Ｇ１００Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１６０Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｆ−Ｇ１０２Ａ−Ｒ１８６Ｋ−Ｔ２１３Ａ−Ｌ２１７Ｅ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ１０５Ｔ−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２１６Ｆ、Ｇ０２３Ａ−Ｇ１００Ｓ−Ａ１９４Ｅ−Ｓ２１２Ｍ、Ａ０４８Ｒ−Ｓ１２８Ｄ−Ｎ１８５Ｅ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１９４Ｅ、Ｇ０２０Ｋ−Ｋ０２７Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｔ０２２Ｌ−Ｇ０２３Ａ−Ｋ０２７Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ２１６Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１９４Ｅ−Ｐ２３９Ｇ、Ｔ０２２Ｌ−Ｓ０７８Ｎ−Ｎ１１６Ｌ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ２５６Ｎ、Ｋ０２７Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ｎ−Ｓ１０５Ｔ−Ａ２７２Ｆ、Ａ０４８Ｒ−Ｓ０７８Ｎ−Ｎ１１６Ｌ−Ｎ１８５Ｅ−Ｌ２１７Ｅ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｋ０２７Ｒ−Ｎ０６２Ｅ、Ｓ０２４Ｆ−Ｓ１０３Ｎ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ、Ｖ０２６Ｆ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ２５６Ｎ−Ａ２７２Ｆ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０４３Ｗ−Ｖ１０４Ｌ−Ｖ１２１Ｆ−Ｐ１２９Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ０７８Ｎ−Ｎ１１６Ｌ−Ｔ２２４Ａ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｖ０５１Ｗ−Ａ１５８Ｅ、Ｋ０２７Ｒ−Ｔ０３８Ｆ−Ｇ１０２Ａ−Ｎ１１６Ｌ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１４４Ｒ−Ｓ２１２Ｍ、Ｌ０３１Ｆ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ２５６Ｎ−Ａ２７２Ｆ、Ｔ０２２Ｌ−Ｔ０３３Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１６０Ｄ−Ｒ１８６Ｋ、Ｓ０２４Ｆ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｒ１８６Ｋ−Ｔ２１３Ａ、Ｎ０４３Ｗ−Ｓ１０５Ｔ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｄ−Ｓ２１６Ｆ、Ｌ０３１Ｆ−Ｓ１０５Ｔ−Ｒ１８６Ｋ−Ｓ１８８Ｄ、Ｖ０２６Ｆ−Ａ１９４Ｅ−Ｔ２１３Ａ−Ｓ２５６Ｎ、及びＳ１０３Ｎ−Ｓ１６０Ｄ−Ｌ２５０Ｉ−Ｓ２５６Ｎから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００６４】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＴ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、及びＴ０２２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００６５】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｐ２３９Ｇ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｔ２１３Ａ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｔ２１３Ａ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｐ２３９Ｇ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ−Ｐ２３９Ｇ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０４３Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１１８Ｒ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ１１６Ｌ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｔ２１３Ａ、及びＧ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１１８Ｒ−Ｔ２１３Ａ−Ｐ２３９Ｇから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００６６】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ０２４Ｆ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｔ２１３Ａ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ、Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、及びＴ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００６７】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ０８７Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ１０９Ｒ−Ｓ２１２Ｐ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｅ２７１Ｖ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ１０９Ｒ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ１０９Ｒ−Ｓ２１２Ｐ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｅ２７１Ｖ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ１０９Ｒ−Ｓ２１２Ｐ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ８７Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ２１２Ｐ−Ｅ２７１Ｖ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ１０９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ２１２Ｐ−Ｅ２７１Ｖ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ１０９Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、及びＮ０７６Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ２１２Ｐ−Ｑ２４５Ｌ−Ｅ２７１Ｖから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００６８】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｓ−Ｓ０８７Ｎ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ａ２７０Ｔ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｙ２０９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ａ１７２Ｖ−Ｙ２０９Ａ、Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｓ−Ｓ１４１Ｇ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｓ−Ｓ０８５Ｎ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ａ１３３Ｖ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｖ２０３Ｉ、Ｓ０７８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｌ０２１Ｍ−Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ、Ｔ０３３Ｓ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｐ００５Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ１７４Ｔ、Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ａ１３３Ｖ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ、Ｉ００８Ｔ−Ｓ０２４Ｒ、Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｗ２４１Ｒ、Ｐ００５Ｓ−Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｓ２４２Ｐ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ａ１９４Ｔ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｎ２４３Ｆ、Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｄ−Ａ１３８Ｖ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ２０１Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ２３９Ｑ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−、Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｋ２３５Ｆ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｇ１１８Ｒ−Ａ１７２Ｖ、Ｈ０１７Ｙ−Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ、Ｔ０３３Ｓ−Ｌ１４８Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｃ−Ｔ０３３Ｓ、Ｇ１１８Ｒ−Ａ１９４Ｔ、Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ、Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１４１Ｇ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ２７４Ｉ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ、Ｐ０８６Ｗ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｖ００４Ｅ−Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ、Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ａ０１５Ｔ−Ｔ０３３Ｓ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ−Ｓ１５６Ｌ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｎ２４３Ｆ−Ｒ２６９Ｈ、Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ２４７Ｈ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ａ２２８Ｔ、Ｓ０７８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ａ１７４Ｖ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｋ２３５Ｆ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｋ２３５Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ａ１５１Ｖ、Ｓ０２４Ｒ−Ｖ１０４Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ａ０４８Ｔ、Ｑ０１２Ｈ−Ｖ１０４Ａ−Ｇ１１８Ｒ、Ｇ１１８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｔ２５３Ａ、Ｔ１４３Ａ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ２３９Ｔ、Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ１２９Ｈ−Ｎ１８４Ｄ−Ｔ２５３Ｍ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ０８５Ｖ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ２７２Ｐ、及びＳ０２４Ｒ−Ｒ２６９Ｃから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００６９】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｒ−Ｓ０８７Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｖ１５０Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０８７Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｖ１５０Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０８７Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｖ１５０Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ０８７Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｖ１５０Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０８７Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０８７Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０８７Ｄ−Ｖ１５０Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｖ１５０Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０８７Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｖ１５０Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０８７Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｖ１５０Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０８７Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｖ１５０Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０８７Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｖ１５０Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ０８７Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｖ１５０Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０８７Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｖ１５０Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｖ１５０Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０８７Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｖ１５０Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０８７Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｖ１５０Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０８７Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０８７Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｖ１５０Ｌ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｖ１５０Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｖ１５０Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０８７Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｓ２４２Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｖ１５０Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０８７Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０８７Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、及びＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｖ１５０Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｓ２４２Ｒ−Ｑ２４５Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００７０】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＳ０２４Ｒ−Ｋ０２７Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００７１】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｍ２２２Ｑ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｍ２２２Ｓ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｍ２２２Ｑ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｍ２２２Ｑ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｍ２２２Ｓ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｍ２２２Ｓ−Ｑ２４５Ｒ、及びＮ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｍ２２２Ｓ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００７２】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｇ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＳ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００７３】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ、Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ、Ｔ２２Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｇ１５９Ｅ、Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ、Ｔ２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｅ２７１Ｆ−Ｙ２０９Ｅ、Ｔ２２Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１１１Ｖ、Ｎ６２Ｅ−Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１２８Ｎ、Ｔ２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１２８Ｎ、Ｔ２２Ａ−Ｎ６２Ｅ−Ｌ１１１Ｖ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ、Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ、Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ−Ｙ２０９Ｅ、Ｔ２２Ａ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｅ２７１Ｆ、及びＳ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００７４】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ、Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２５２Ｋ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２５２Ｋ、及びＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００７５】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２３８Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ２４８Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｔ２５３Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｓ２４Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｎ７６Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＮ６２Ｅ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００７６】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＡ１Ｒ、Ａ２３０Ｅ、Ｅ２７１Ｌ、Ｇ１１５Ｒ、Ｇ２０Ｒ、Ｈ２４９Ｒ、Ｋ２３５Ｆ、Ｋ２７Ｖ／Ｆ／Ｌ、Ｌ７５Ｅ、Ｌ８２Ｒ、Ｎ１８Ｒ、Ｎ２６９Ｒ、Ｎ４３Ｄ、Ｎ４３Ｒ、Ｎ７６Ｄ、Ｒ４５Ｔ、Ｓ２１２Ｆ、Ｓ２４２Ｒ、Ｓ２４Ｒ、Ｓ７８Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｔ２２Ｒ、Ｖ１２１Ｅ、Ｖ２４４Ｒ、Ｖ２８Ｅ、Ｖ３０Ｅ、Ｖ４Ｒ、Ｗ２４１Ｒ、Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ２０Ｒ−Ｔ２２Ｒ−Ｎ４３Ｒ、Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ２０Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ９Ａ−Ｔ２２Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ９Ａ−Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ９Ａ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ２０Ｒ−Ｔ２２Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ２４Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ９Ａ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ、Ｓ９Ａ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ９Ａ−Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ、Ｇ２０Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｔ２２Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ９Ａ−Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ２０Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ、Ｓ９Ａ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ９Ａ−Ｔ２２Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ７８Ｒ、Ｓ９Ａ−Ｇ２０Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ、Ｓ９Ａ−Ｔ２２Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｖ４Ｒ−Ｓ９Ａ−Ｔ２２Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ２０Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ、Ａ１Ｒ−Ｓ９Ａ−Ｎ４３Ｒ、Ｇ２０Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ９Ａ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ、Ｇ２０Ｒ−Ｔ２２Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ、Ａ１Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ、Ｓ９Ａ−Ｇ２０Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ９Ａ−Ｇ２０Ｒ−Ｔ２２Ｒ−Ｓ７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ９Ａ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ９Ａ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ４Ｒ−Ｓ９Ａ−Ｔ２２Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、及びＴ２２Ｒ−Ｓ２４Ｒ−Ｎ４３Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００７７】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｒ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｒ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｒ、Ｓ１０１Ｇ、Ｓ１０３Ａ、Ｖ１０４Ｉ、Ａ２３２Ｖ、Ｑ２３６Ｈ、及びＱ２４５Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００７８】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＡ１６Ｓ、Ｔ２２Ａ、Ｓ２４Ｒ、Ｎ６２Ｅ、Ｎ７６Ｄ、Ｅ８９Ｐ、Ｓ１０１Ａ／Ｇ、Ｓ１０３Ｇ／Ａ、Ｖ１０４Ｌ／Ｉ、Ｌ１１１Ｖ、Ｓ１２８Ｎ、Ｐ１２９Ｅ、Ａ２３２Ｖ、Ｌ１４８Ｉ、Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｄ／Ｅ、Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１８８Ｄ、Ｙ２０９Ｅ、Ｑ２３６Ｈ、Ｑ２４５Ｒ、Ｎ２４８Ｄ／Ｒ、Ｈ２４９Ｒ、Ｎ２５２Ｋ／Ｒ、Ｔ２５３Ｒ、及びＥ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００７９】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＡ１Ｒ、Ｑ２Ｓ、Ｑ２Ｍ、Ｑ２Ａ、Ｑ２Ｒ、Ｑ２Ｗ、Ｓ３Ｒ、Ｖ４Ｒ、Ｖ４Ｓ、Ｖ４Ｃ、Ｉ８Ａ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｗ、Ｒ１０Ｓ、Ｒ１０Ａ、Ｒ１０Ｈ、Ｒ１０Ｍ、Ｑ１２Ｆ、Ｑ１２Ｒ、Ｐ１４Ｋ、Ｐ１４Ｆ、Ｐ１４Ｑ、Ａ１５Ｒ、Ａ１５Ｆ、Ａ１６Ｓ、Ｈ１７Ｒ、Ｈ１７Ｍ、Ｈ１７Ｆ、Ｎ１８Ｒ、Ｎ１８Ｋ、Ｇ２０Ｆ、Ｇ２０Ｋ、Ｇ２０Ｒ、Ｔ２２Ａ、Ｔ２２Ｒ、Ｔ２２Ｙ、Ｔ２２Ｖ、Ｔ２２Ｑ、Ｔ２２Ｌ、Ｔ２２Ｗ、Ｇ２３Ａ、Ｇ２３Ｓ、Ｇ２３Ｆ、Ｓ２４Ｒ、Ｓ２４Ｆ、Ｓ２４Ｗ、Ｓ２４Ｑ、Ｓ２４Ｈ、Ｓ２４Ｌ、Ｇ２５Ｖ、Ｇ２５Ｆ、Ｇ２５Ｒ、Ｖ２６Ｆ、Ｋ２７Ｌ、Ｋ２７Ｆ、Ｋ２７Ｒ、Ｋ２７Ｖ、Ｖ２８Ａ、Ｖ２８Ｎ、Ｖ２８Ｅ、Ａ２９Ｔ、Ｖ３０Ｅ、Ｌ３１Ｆ、Ｔ３３Ｓ、Ｔ３３Ｇ、Ｔ３３Ｄ、Ｇ３４Ｐ、Ｉ３５Ｍ、Ｓ３６Ｔ、Ｓ３６Ｆ、Ｓ３６Ｒ、Ｔ３８Ｌ、Ｔ３８Ｆ、Ｔ３８Ｒ、Ｐ４０Ｎ、Ｐ４０Ｌ、Ｐ４０Ｔ、Ｐ４０Ｗ、Ｐ４０Ｈ、Ｐ４０Ｒ、Ｌ４２Ｉ、Ｎ４３Ａ、Ｎ４３Ｆ、Ｎ４３Ｉ、Ｎ４３Ｓ、Ｎ４３Ｒ、Ｎ４３Ｍ、Ｎ４３Ｗ、Ｎ４３Ｄ、Ｒ４５Ｔ、Ｇ４６Ｒ、Ａ４８Ｒ、Ｆ５０Ｃ、Ｖ５１Ｗ、Ｖ５１Ｆ、Ｖ５１Ｈ、Ｐ５２Ｆ、Ｐ５２Ｅ、Ｐ５２Ｎ、Ｐ５５Ｙ、Ｔ５７Ｒ、Ｑ５９Ａ、Ｑ５９Ｆ、Ｑ５９Ｒ、Ｄ６０Ｐ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ａ、Ｎ６２Ｅ、Ｎ６２Ｑ、Ｇ６３Ｖ、Ｇ６３Ｍ、Ｇ６３Ｔ、Ｇ６３Ｉ、Ｇ６３Ａ、Ｇ６３Ｓ、Ｇ６３Ｈ、Ｇ６３Ｑ、Ｇ６３Ｄ、Ｇ６３Ｅ、Ｇ６３Ｐ、Ｈ６４Ｆ、Ｈ６４Ｔ、Ｖ６８Ａ、Ｖ６８Ｃ、Ａ６９Ｎ、Ａ６９Ｔ、Ａ６９Ｐ、Ａ６９Ｗ、Ｔ７１Ｇ、Ｔ７１Ｇ、Ｉ７２Ｃ、Ａ７４Ｃ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｆ、Ｌ７５Ｅ、Ｌ７５Ｒ、Ｎ７６Ｄ、Ｓ７８Ｒ、Ｓ７８Ｎ、Ｓ７８Ｉ、Ｓ７８Ｒ、Ｉ７９Ｗ、Ｉ７９Ｑ、Ｖ８１Ｒ、Ｌ８２Ｆ、Ｌ８２Ｔ、Ｌ８２Ｖ、Ｌ８２Ｒ、Ｌ８２Ｍ、Ａ８５Ｍ、Ｐ８６Ｗ、Ｐ８６Ｌ、Ｐ８６Ｉ、Ｅ８９Ｐ、Ｅ８９Ｔ、Ｅ８９Ｇ、Ｅ８９Ｈ、Ｅ８９Ｗ、Ｅ８９Ｌ、Ｅ８９Ｖ、Ｅ８９Ｗ、Ｅ８９Ｆ、Ｅ８９Ｉ、Ｙ９１Ｎ、Ｙ９１Ｆ、Ａ９２Ｆ、Ｋ９４Ｎ、Ｓ９９Ｆ、Ｓ９９Ｔ、Ｓ９９Ｐ、Ｓ９９Ｇ、Ｓ９９Ｍ、Ｇ１００Ｓ、Ｇ１００Ｎ、Ｇ１００Ｑ、Ｇ１００Ｉ、Ｓ１０１Ａ、Ｓ１０１Ｎ、Ｓ１０１Ｇ、Ｓ１０１Ｄ、Ｓ１０１Ｔ、Ｓ１０１Ｄ、Ｓ１０１Ｅ、Ｓ１０１Ｐ、Ｓ１０１Ｆ、Ｇ１０２Ａ、Ｇ１０２Ｔ、Ｇ１０２Ｎ、Ｇ１０２Ｈ、Ｇ１０２Ｅ、Ｓ１０３Ｇ、Ｓ１０３Ｎ、Ｓ１０３Ｄ、Ｓ１０３Ａ、Ｖ１０４Ｌ、Ｖ１０４Ｉ、Ｖ１０４Ｅ、Ｖ１０４Ｄ、Ｓ１０５Ｔ、Ｓ１０５Ｅ、Ｓ１０５Ｑ、Ｓ１０６Ｇ、Ｓ１０６Ｔ、Ｓ１０６Ｅ、Ｓ１０６Ｄ、Ｓ１０６Ａ、Ｓ１０６Ｖ、Ｓ１０６Ｆ、Ｉ１０７Ｍ、Ｉ１０７Ｆ、Ａ１０８Ｉ、Ａ１０８Ｇ、Ｑ１０９Ｍ、Ｌ１１１Ｖ、Ｌ１１１Ｉ、Ｅ１１２Ｖ、Ｅ１１２Ｌ、Ｅ１１２Ｑ、Ａ１１４Ｇ、Ｇ１１５Ｋ、Ｇ１１５Ｒ、Ｎ１１６Ｋ、Ｎ１１６Ａ、Ｎ１１６Ｌ、Ｎ１１７Ｆ、Ｇ１１８Ｒ、Ｇ１１８Ｉ、Ｍ１１９Ｃ、Ｈ１２０Ａ、Ｈ１２０Ｆ、Ｈ１２０Ｒ、Ｖ１２１Ｆ、Ｖ１２１Ｆ、Ｖ１２１Ｅ、Ｎ１２３Ｇ、Ｎ１２３Ｅ、Ｌ１２４Ｓ、Ｓ１２８Ｄ、Ｓ１２８Ｆ、Ｓ１２８Ｌ、Ｓ１２８Ｎ、Ｓ１２８Ｈ、Ｓ１２８Ｍ、Ｓ１２８Ｉ、Ｓ１２８Ｑ、Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１３２Ａ、Ｓ１３２Ｅ、Ａ１３８Ｇ、Ｓ１４４Ｒ、Ｖ１４７Ｌ、Ｌ１４８Ｉ、Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｄ、Ｇ１５９Ｅ、Ｇ１５９Ｃ、Ｓ１６０Ｄ、Ｓ１６６Ｄ、Ｓ１６６Ｅ、Ｙ１６７Ｗ、Ｍ１７５Ｖ、Ｖ１７７Ｃ、Ｄ１８１Ａ、Ｑ１８２Ｒ、Ｎ１８３Ｉ、Ｎ１８３Ｄ、Ｎ１８３Ｍ、Ｎ１８３Ｒ、Ｎ１８３Ｆ、Ｎ１８３Ｒ、Ｎ１８５Ｅ、Ｎ１８５Ｖ、Ｎ１８５Ｉ、Ｒ１８６Ｈ、Ｒ１８６Ｋ、Ｓ１８８Ｅ、Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１８８Ｒ、Ｙ１９２Ｈ、Ｙ１９２Ｗ、Ａ１９４Ｅ、Ａ１９４Ｖ、Ａ１９４Ｆ、Ｄ１９７Ｆ、Ｄ１９７Ｆ、Ｉ１９８Ｌ、Ｉ１９８Ｆ、Ｖ２０３Ｅ、Ｖ２０３Ｃ、Ｔ２０８Ｓ、Ｙ２０９Ｓ、Ｙ２０９Ｎ、Ｙ２０９Ｆ、Ｙ２０９Ｔ、Ｙ２０９Ｅ、Ｙ２０９Ｈ、Ｙ２０９Ｇ、Ｙ２０９Ｌ、Ｐ２１０Ｒ、Ｐ２１０Ｖ、Ｐ２１０Ｌ、Ｇ２１１Ｑ、Ｇ２１１Ｒ、Ｓ２１２Ｉ、Ｓ２１２Ｍ、Ｓ２１２Ｆ、Ｔ２１３Ａ、Ｙ２１４Ｆ、Ａ２１５Ｎ、Ａ２１５Ｄ、Ａ２１５Ｅ、Ａ２１５Ｈ、Ａ２１５Ｆ、Ｓ２１６Ｆ、Ｓ２１６Ａ、Ｌ２１７Ｅ、Ｌ２１７Ｎ、Ｌ２１７Ｄ、Ｎ２１８Ｄ、Ｎ２１８Ｐ、Ｎ２１８Ｅ、Ｔ２２４Ａ、Ｔ２２４Ｇ、Ｖ２２７Ｉ、Ａ２３０Ｅ、Ａ２３１Ｉ、Ａ２３１Ｃ、Ａ２３２Ｖ、Ｌ２３３Ｃ、Ｖ２３４Ｆ、Ｋ２３５Ｆ、Ｑ２３６Ｆ、Ｑ２３６Ｎ、Ｑ２３６Ｈ、Ｎ２３８Ｒ、Ｎ２３８Ｋ、Ｎ２３８Ｌ、Ｐ２３９Ｋ、Ｐ２３９Ｇ、Ｐ２３９Ｒ、Ｐ２３９Ｒ、Ｐ２３９Ｈ、Ｐ２３９Ｔ、Ｐ２３９Ｎ、Ｐ２３９Ｓ、Ｐ２３９Ｆ、Ｓ２４０Ｒ、Ｗ２４１Ｒ、Ｓ２４２Ｌ、Ｓ２４２Ｒ、Ｎ２４３Ｆ、Ｎ２４３Ｒ、Ｖ２４４Ｒ、Ｑ２４５Ｒ、Ｉ２４６Ｓ、Ｎ２４８Ｄ、Ｎ２４８Ｖ、Ｎ２４８Ｉ、Ｎ２４８Ｒ、Ｈ２４９Ｒ、Ｈ２４９Ｔ、Ｌ２５０Ｉ、Ｋ２５１Ｒ、Ｋ２５１Ｓ、Ｎ２５２Ｉ、Ｎ２５２Ｆ、Ｎ２５２Ｒ、Ｎ２５２Ｋ、Ｎ２５２Ｈ、Ｔ２５３Ｉ、Ｔ２５３Ｒ、Ｔ２５３Ｆ、Ａ２５４Ｃ、Ｓ２５６Ｎ、Ｇ２５８Ｒ、Ｔ２６０Ｖ、Ｔ２６０Ｉ、Ｌ２６２Ｄ、Ｌ２６２Ｈ、Ｙ２６３Ｆ、Ｓ２６５Ｆ、Ｌ２６７Ｖ、Ｌ２６７Ｎ、Ｌ２６７Ｍ、Ｎ２６９Ｉ、Ｎ２６９Ｒ、Ａ２７０Ｃ、Ｅ２７１Ｉ、Ｅ２７１Ｈ、Ｅ２７１Ｖ、Ｅ２７１Ｈ、Ｅ２７１Ｍ、Ｅ２７１Ｌ、Ｅ２７１Ｐ、Ｅ２７１Ａ、Ｅ２７１Ｆ、Ｅ２７１Ｔ、Ａ２７２Ｆ、Ａ２７２Ｆ、Ａ２７２Ｒ、Ａ２７３Ｆ、Ａ２７３Ｉ、及びＴ２７４Ｇから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【００８０】
本発明はまた、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼのプロテアーゼ変異体であって、このバチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼが、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなり、かつこのプロテアーゼ変異体は、配列番号２のアミノ酸配列とは、アミノ酸位置１、２、３、４、８、９、１０、１２、１４、１５、１６、１７、１８、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３３、３４、３５、３６、３８、４０、４２、４３、４５、４６、４８、５０、５１、５２、５５、５７、５９、６０、６２、６３、６４、６８、６９、７１、７２、７４、７５、７６、７８、７９、８１、８２、８５、８６、８９、９１、９２、９４、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１１、１１２、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２３、１２４、１２８、１２９、１３２、１３８、４４、１４７、１４８、１５８、１５９、１６０、１６６、１６７、１７５、１７７、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８８、１９２、１９４、１９７、１９８、２０３、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２２４、２２７、２３０、２３１、２３３、２３４、２３５、２３６、２３６、２３８、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４６、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６３、２６５、２６７、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、及び２７４から選択されるアミノ酸位置での２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５箇所以下の変異により異なるアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置が、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされ、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置が、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列を配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と整列させることで決定される、バチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、プロテアーゼ変異体を提供する。
【００８１】
本発明はまた、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼのプロテアーゼ変異体であって、このバチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼが、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなり、かつこのプロテアーゼ変異体は、配列番号２のアミノ酸配列とは、Ａ１Ｒ、Ｑ２Ｓ、Ｑ２Ｍ、Ｑ２Ａ、Ｑ２Ｒ、Ｑ２Ｗ、Ｓ３Ｒ、Ｖ４Ｒ、Ｖ４Ｓ、Ｖ４Ｃ、Ｉ８Ａ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｆ、Ｓ９Ｗ、Ｒ１０Ｓ、Ｒ１０Ａ、Ｒ１０Ｈ、Ｒ１０Ｍ、Ｑ１２Ｆ、Ｑ１２Ｒ、Ｐ１４Ｋ、Ｐ１４Ｆ、Ｐ１４Ｑ、Ａ１５Ｒ、Ａ１５Ｆ、Ａ１６Ｓ、Ｈ１７Ｒ、Ｈ１７Ｍ、Ｈ１７Ｆ、Ｎ１８Ｒ、Ｎ１８Ｋ、Ｇ２０Ｆ、Ｇ２０Ｋ、Ｇ２０Ｒ、Ｔ２２Ａ、Ｔ２２Ｒ、Ｔ２２Ｙ、Ｔ２２Ｖ、Ｔ２２Ｑ、Ｔ２２Ｌ、Ｔ２２Ｗ、Ｇ２３Ａ、Ｇ２３Ｓ、Ｇ２３Ｆ、Ｓ２４Ｒ、Ｓ２４Ｆ、Ｓ２４Ｗ、Ｓ２４Ｑ、Ｓ２４Ｈ、Ｓ２４Ｌ、Ｇ２５Ｖ、Ｇ２５Ｆ、Ｇ２５Ｒ、Ｖ２６Ｆ、Ｋ２７Ｌ、Ｋ２７Ｆ、Ｋ２７Ｒ、Ｋ２７Ｖ、Ｖ２８Ａ、Ｖ２８Ｎ、Ｖ２８Ｅ、Ａ２９Ｔ、Ｖ３０Ｅ、Ｌ３１Ｆ、Ｔ３３Ｓ、Ｔ３３Ｇ、Ｔ３３Ｄ、Ｇ３４Ｐ、Ｉ３５Ｍ、Ｓ３６Ｔ、Ｓ３６Ｆ、Ｓ３６Ｒ、Ｔ３８Ｌ、Ｔ３８Ｆ、Ｔ３８Ｒ、Ｐ４０Ｎ、Ｐ４０Ｌ、Ｐ４０Ｔ、Ｐ４０Ｗ、Ｐ４０Ｈ、Ｐ４０Ｒ、Ｌ４２Ｉ、Ｎ４３Ａ、Ｎ４３Ｆ、Ｎ４３Ｉ、Ｎ４３Ｓ、Ｎ４３Ｒ、Ｎ４３Ｍ、Ｎ４３Ｗ、Ｎ４３Ｄ、Ｒ４５Ｔ、Ｇ４６Ｒ、Ａ４８Ｒ、Ｆ５０Ｃ、Ｖ５１Ｗ、Ｖ５１Ｆ、Ｖ５１Ｈ、Ｐ５２Ｆ、Ｐ５２Ｅ、Ｐ５２Ｎ、Ｐ５５Ｙ、Ｔ５７Ｒ、Ｑ５９Ａ、Ｑ５９Ｆ、Ｑ５９Ｒ、Ｄ６０Ｐ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ａ、Ｎ６２Ｅ、Ｎ６２Ｑ、Ｇ６３Ｖ、Ｇ６３Ｍ、Ｇ６３Ｔ、Ｇ６３Ｉ、Ｇ６３Ａ、Ｇ６３Ｓ、Ｇ６３Ｈ、Ｇ６３Ｑ、Ｇ６３Ｄ、Ｇ６３Ｅ、Ｇ６３Ｐ、Ｈ６４Ｆ、Ｈ６４Ｔ、Ｖ６８Ａ、Ｖ６８Ｃ、Ａ６９Ｎ、Ａ６９Ｔ、Ａ６９Ｐ、Ａ６９Ｗ、Ｔ７１Ｇ、Ｔ７１Ｇ、Ｉ７２Ｃ、Ａ７４Ｃ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｆ、Ｌ７５Ｅ、Ｌ７５Ｒ、Ｎ７６Ｄ、Ｓ７８Ｒ、Ｓ７８Ｎ、Ｓ７８Ｉ、Ｓ７８Ｒ、Ｉ７９Ｗ、Ｉ７９Ｑ、Ｖ８１Ｒ、Ｌ８２Ｆ、Ｌ８２Ｔ、Ｌ８２Ｖ、Ｌ８２Ｒ、Ｌ８２Ｍ、Ａ８５Ｍ、Ｐ８６Ｗ、Ｐ８６Ｌ、Ｐ８６Ｉ、Ｅ８９Ｐ、Ｅ８９Ｔ、Ｅ８９Ｇ、Ｅ８９Ｈ、Ｅ８９Ｗ、Ｅ８９Ｌ、Ｅ８９Ｖ、Ｅ８９Ｗ、Ｅ８９Ｆ、Ｅ８９Ｉ、Ｙ９１Ｎ、Ｙ９１Ｆ、Ａ９２Ｆ、Ｋ９４Ｎ、Ｓ９９Ｆ、Ｓ９９Ｔ、Ｓ９９Ｐ、Ｓ９９Ｇ、Ｓ９９Ｍ、Ｇ１００Ｓ、Ｇ１００Ｎ、Ｇ１００Ｑ、Ｇ１００Ｉ、Ｓ１０１Ａ、Ｓ１０１Ｎ、Ｓ１０１Ｇ、Ｓ１０１Ｄ、Ｓ１０１Ｔ、Ｓ１０１Ｄ、Ｓ１０１Ｅ、Ｓ１０１Ｐ、Ｓ１０１Ｆ、Ｇ１０２Ａ、Ｇ１０２Ｔ、Ｇ１０２Ｎ、Ｇ１０２Ｈ、Ｇ１０２Ｅ、Ｓ１０３Ｇ、Ｓ１０３Ｎ、Ｓ１０３Ｄ、Ｓ１０３Ａ、Ｖ１０４Ｌ、Ｖ１０４Ｉ、Ｖ１０４Ｅ、Ｖ１０４Ｄ、Ｓ１０５Ｔ、Ｓ１０５Ｅ、Ｓ１０５Ｑ、Ｓ１０６Ｇ、Ｓ１０６Ｔ、Ｓ１０６Ｅ、Ｓ１０６Ｄ、Ｓ１０６Ａ、Ｓ１０６Ｖ、Ｓ１０６Ｆ、Ｉ１０７Ｍ、Ｉ１０７Ｆ、Ａ１０８Ｉ、Ａ１０８Ｇ、Ｑ１０９Ｍ、Ｌ１１１Ｖ、Ｌ１１１Ｉ、Ｅ１１２Ｖ、Ｅ１１２Ｌ、Ｅ１１２Ｑ、Ａ１１４Ｇ、Ｇ１１５Ｋ、Ｇ１１５Ｒ、Ｎ１１６Ｋ、Ｎ１１６Ａ、Ｎ１１６Ｌ、Ｎ１１７Ｆ、Ｇ１１８Ｒ、Ｇ１１８Ｉ、Ｍ１１９Ｃ、Ｈ１２０Ａ、Ｈ１２０Ｆ、Ｈ１２０Ｒ、Ｖ１２１Ｆ、Ｖ１２１Ｆ、Ｖ１２１Ｅ、Ｎ１２３Ｇ、Ｎ１２３Ｅ、Ｌ１２４Ｓ、Ｓ１２８Ｄ、Ｓ１２８Ｆ、Ｓ１２８Ｌ、Ｓ１２８Ｎ、Ｓ１２８Ｈ、Ｓ１２８Ｍ、Ｓ１２８Ｉ、Ｓ１２８Ｑ、Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１３２Ａ、Ｓ１３２Ｅ、Ａ１３８Ｇ、Ｓ１４４Ｒ、Ｖ１４７Ｌ、Ｌ１４８Ｉ、Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｄ、Ｇ１５９Ｅ、Ｇ１５９Ｃ、Ｓ１６０Ｄ、Ｓ１６６Ｄ、Ｓ１６６Ｅ、Ｙ１６７Ｗ、Ｍ１７５Ｖ、Ｖ１７７Ｃ、Ｄ１８１Ａ、Ｑ１８２Ｒ、Ｎ１８３Ｉ、Ｎ１８３Ｄ、Ｎ１８３Ｍ、Ｎ１８３Ｒ、Ｎ１８３Ｆ、Ｎ１８３Ｒ、Ｎ１８５Ｅ、Ｎ１８５Ｖ、Ｎ１８５Ｉ、Ｒ１８６Ｈ、Ｒ１８６Ｋ、Ｓ１８８Ｅ、Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１８８Ｒ、Ｙ１９２Ｈ、Ｙ１９２Ｗ、Ａ１９４Ｅ、Ａ１９４Ｖ、Ａ１９４Ｆ、Ｄ１９７Ｆ、Ｄ１９７Ｆ、Ｉ１９８Ｌ、Ｉ１９８Ｆ、Ｖ２０３Ｅ、Ｖ２０３Ｃ、Ｔ２０８Ｓ、Ｙ２０９Ｓ、Ｙ２０９Ｎ、Ｙ２０９Ｆ、Ｙ２０９Ｔ、Ｙ２０９Ｅ、Ｙ２０９Ｈ、Ｙ２０９Ｇ、Ｙ２０９Ｌ、Ｐ２１０Ｒ、Ｐ２１０Ｖ、Ｐ２１０Ｌ、Ｇ２１１Ｑ、Ｇ２１１Ｒ、Ｓ２１２Ｉ、Ｓ２１２Ｍ、Ｓ２１２Ｆ、Ｔ２１３Ａ、Ｙ２１４Ｆ、Ａ２１５Ｎ、Ａ２１５Ｄ、Ａ２１５Ｅ、Ａ２１５Ｈ、Ａ２１５Ｆ、Ｓ２１６Ｆ、Ｓ２１６Ａ、Ｌ２１７Ｅ、Ｌ２１７Ｎ、Ｌ２１７Ｄ、Ｎ２１８Ｄ、Ｎ２１８Ｐ、Ｎ２１８Ｅ、Ｔ２２４Ａ、Ｔ２２４Ｇ、Ｖ２２７Ｉ、Ａ２３０Ｅ、Ａ２３１Ｉ、Ａ２３１Ｃ、Ａ２３２Ｖ、Ｌ２３３Ｃ、Ｖ２３４Ｆ、Ｋ２３５Ｆ、Ｑ２３６Ｆ、Ｑ２３６Ｎ、Ｑ２３６Ｈ、Ｎ２３８Ｒ、Ｎ２３８Ｋ、Ｎ２３８Ｌ、Ｐ２３９Ｋ、Ｐ２３９Ｇ、Ｐ２３９Ｒ、Ｐ２３９Ｒ、Ｐ２３９Ｈ、Ｐ２３９Ｔ、Ｐ２３９Ｎ、Ｐ２３９Ｓ、Ｐ２３９Ｆ、Ｓ２４０Ｒ、Ｗ２４１Ｒ、Ｓ２４２Ｌ、Ｓ２４２Ｒ、Ｎ２４３Ｆ、Ｎ２４３Ｒ、Ｖ２４４Ｒ、Ｑ２４５Ｒ、Ｉ２４６Ｓ、Ｎ２４８Ｄ、Ｎ２４８Ｖ、Ｎ２４８Ｉ、Ｎ２４８Ｒ、Ｈ２４９Ｒ、Ｈ２４９Ｔ、Ｌ２５０Ｉ、Ｋ２５１Ｒ、Ｋ２５１Ｓ、Ｎ２５２Ｉ、Ｎ２５２Ｆ、Ｎ２５２Ｒ、Ｎ２５２Ｋ、Ｎ２５２Ｈ、Ｔ２５３Ｉ、Ｔ２５３Ｒ、Ｔ２５３Ｆ、Ａ２５４Ｃ、Ｓ２５６Ｎ、Ｇ２５８Ｒ、Ｔ２６０Ｖ、Ｔ２６０Ｉ、Ｌ２６２Ｄ、Ｌ２６２Ｈ、Ｙ２６３Ｆ、Ｓ２６５Ｆ、Ｌ２６７Ｖ、Ｌ２６７Ｎ、Ｌ２６７Ｍ、Ｎ２６９Ｉ、Ｎ２６９Ｒ、Ａ２７０Ｃ、Ｅ２７１Ｉ、Ｅ２７１Ｈ、Ｅ２７１Ｖ、Ｅ２７１Ｈ、Ｅ２７１Ｍ、Ｅ２７１Ｌ、Ｅ２７１Ｐ、Ｅ２７１Ａ、Ｅ２７１Ｆ、Ｅ２７１Ｔ、Ａ２７２Ｆ、Ａ２７２Ｆ、Ａ２７２Ｒ、Ａ２７３Ｆ、Ａ２７３Ｉ、及びＴ２７４Ｇからなる群から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５箇所以下の変異により異なるアミノ酸配列からなり、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置が、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列を配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と整列させることで決定される、バチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、プロテアーゼ変異体を提供する。
【００８２】
本発明はまた、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼのプロテアーゼ変異体であって、このバチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼが配列番号２で示されるアミノ酸配列からなり、このプロテアーゼ変異体は、配列番号２のアミノ酸配列とは、Ａ１Ｒ、Ｑ２Ｓ、Ｖ４Ｒ、Ｖ４Ｓ、Ｓ９Ａ、Ｒ１０Ｓ、Ｐ１４Ｋ、Ａ１６Ｓ、Ｈ１７Ｒ、Ｎ１８Ｒ、Ｇ２０Ｒ、Ｔ２２Ａ、Ｔ２２Ｒ、Ｓ２４Ｒ、Ｓ２４Ｗ、Ｇ２５Ｒ、Ｇ２５Ｖ、Ｖ２６Ｆ、Ｌ４２Ｉ、Ｎ４３Ｒ、Ｎ４３Ａ、Ｇ４６Ｒ、Ｐ５２Ｆ、Ｐ５２Ｅ、Ｐ５２Ｎ、Ｔ５７Ｒ、Ｑ５９Ａ、Ｎ６２Ｅ、Ｎ６２Ｑ、Ｖ６８Ａ、Ｖ６８Ｃ、Ｔ７１Ｇ、Ｉ７２Ｃ、Ａ７４Ｃ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｆ、Ｌ７５Ｒ、Ｎ７６Ｄ、Ｓ７８Ｒ、Ｌ８２Ｒ、Ｐ８６Ｗ、Ｅ８９Ｐ、Ｅ８９Ｔ、Ｅ８９Ｇ、Ｅ８９Ｈ、Ｅ８９Ｉ、Ｅ８９Ｖ、Ｅ８９Ｗ、Ｙ９１Ｎ、Ｋ９４Ｎ、Ｇ１００Ｓ、Ｓ１０１Ａ、Ｓ１０１Ｎ、Ｓ１０１Ｇ、Ｓ１０１Ｄ、Ｓ１０３Ｇ、Ｓ１０３Ｎ、Ｖ１０４Ｌ、Ｖ１０４Ｉ、Ｓ１０６Ｖ、Ｓ１０６Ｇ、Ａ１０８Ｉ、Ｌ１１１Ｖ、Ｅ１１２Ｖ、Ｇ１１５Ｋ、Ｇ１１５Ｒ、Ｎ１１７Ｆ、Ｇ１１８Ｉ、Ｖ１２１Ｆ、Ｓ１２８Ｄ、Ｓ１２８Ｆ、Ｓ１２８Ｌ、Ｓ１２８Ｎ、Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１４４Ｒ、Ｌ１４８Ｉ、Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１６０Ｄ、Ｓ１６６Ｄ、Ｎ１８５Ｅ、Ｎ１８５Ｉ、Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１８８Ｅ、Ｓ１８８Ｄ、Ｄ１９７Ｆ、Ｖ２０３Ｅ、Ｙ２０９Ｓ、Ｙ２０９Ｎ、Ｙ２０９Ｆ、Ｙ２０９Ｔ、Ｙ２０９Ｅ、Ｙ２０９Ｈ、Ｙ２０９Ｇ、Ｐ２１０Ｒ、Ｓ２１２Ｉ、Ｓ２１２Ｆ、Ｙ２１４Ｆ、Ａ２１５Ｎ、Ａ２１５Ｄ、Ａ２１５Ｅ、Ｌ２１７Ｅ、Ｌ２１７Ｎ、Ｔ２２４Ａ、Ａ２３０Ｅ、Ａ２３１Ｉ、Ｑ２３６Ｆ、Ｎ２３８Ｒ、Ｎ２３８Ｋ、Ｐ２３９Ｋ、Ｐ２３９Ｇ、Ｐ２３９Ｒ、Ｐ２３９Ｓ、Ｗ２４１Ｒ、Ｓ２４２Ｒ、Ｓ２４２Ｌ、Ｎ２４３Ｒ、Ｖ２４４Ｒ、Ｎ２４８Ｉ、Ｎ２４８Ｖ、Ｈ２４９Ｒ、Ｌ２５０Ｉ、Ｎ２５２Ｒ、Ｔ２５３Ｒ、Ｌ２６２Ｄ、Ｙ２６３Ｆ、Ｓ２６５Ｆ、Ｌ２６７Ｖ、Ｌ２６７Ｎ、Ｎ２６９Ｉ、Ｎ２６９Ｒ、Ｅ２７１Ｆ、Ｅ２７１Ｉ、Ｅ２７１Ｈ、Ｅ２７１Ｐ、Ｅ２７１Ｔ、Ｅ２７１Ｖ、Ｅ２７１Ｌ及びＡ２７２Ｆからなる群から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５箇所以下の変異により異なるアミノ酸配列からなり、かつ任意選択で、Ｓ１０３Ａ、Ｇ１５９Ｄ、Ｑ２３６Ｈ、Ｑ２４５Ｒ、Ｎ２４８Ｄ及びＮ２５２Ｋからなる群から選択される少なくとも１つの変異を含み、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置は、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列を配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と整列させることで決定される、バチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、プロテアーゼ変異体を提供する。
【００８３】
本発明はまた、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼのプロテアーゼ変異体であって、このバチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼが配列番号２で示されるアミノ酸配列からなり、このプロテアーゼ変異体は、配列番号２のアミノ酸配列とは、Ａ１６Ｓ、Ｔ２２Ａ、Ｓ２４Ｒ、Ｎ６２Ｅ、Ｎ７６Ｄ、Ｅ８９Ｐ、Ｓ１０１Ａ／Ｇ、Ｓ１０３Ｇ／Ａ、Ｖ１０４Ｌ／Ｉ、Ｌ１１１Ｖ、Ｓ１２８Ｎ、Ｐ１２９Ｅ、Ａ２３２Ｖ、Ｌ１４８Ｉ、Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｄ／Ｅ、Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１８８Ｄ、Ｙ２０９Ｅ、Ｑ２３６Ｈ、Ｑ２４５Ｒ、Ｎ２４８Ｄ／Ｒ、Ｈ２４９Ｒ、Ｎ２５２Ｋ／Ｒ、Ｔ２５３Ｒ、及びＥ２７１Ｆからなる群から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５箇所以下の変異により異なるアミノ酸配列からなり、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置は、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列を配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と整列させることで決定される、バチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、プロテアーゼ変異体を提供する。
【００８４】
本発明はまた、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼのプロテアーゼ変異体であって、このバチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼが配列番号２で示されるアミノ酸配列からなり、このプロテアーゼ変異体は、配列番号２のアミノ酸配列とは、Ｇ２０Ｋ、Ｇ２０Ｒ、Ｇ２３Ａ、Ｓ２４Ｆ、Ｓ２４Ｒ、Ｎ４３Ｒ、Ｎ４３Ｗ、Ｒ４５Ｔ、Ｎ６２Ｅ、Ｎ７６Ｄ、Ｓ１０１Ａ、Ｎ１１６Ａ、Ｎ１１６Ｌ、Ｇ１１８Ｒ、Ｓ１２８Ｉ、Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１６６Ｄ、Ｓ１８８Ｄ、Ｔ２１３Ａ、Ａ２１５Ｆ、Ｌ２１７Ｅ、Ｐ２３９Ｇ、及びＮ２６９Ｒからなる群から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５箇所以下の変異により異なるアミノ酸配列からなり、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置は、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列を配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と整列させることで決定される、バチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、プロテアーゼ変異体を提供する。
【００８５】
本発明はまた、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼのプロテアーゼ変異体であって、このバチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼが配列番号２で示されるアミノ酸配列からなり、このプロテアーゼ変異体は、配列番号２のアミノ酸配列とは、Ａ１Ｒ、Ａ２３０Ｅ、Ｅ２７１Ｌ、Ｇ１１５Ｒ、Ｇ２０Ｒ、Ｈ２４９Ｒ、Ｋ２３５Ｆ、Ｋ２７Ｖ／Ｆ／Ｌ、Ｌ７５Ｅ、Ｌ８２Ｒ、Ｎ１８Ｒ、Ｎ２６９Ｒ、Ｎ４３Ｄ、Ｎ４３Ｒ、Ｎ７６Ｄ、Ｒ４５Ｔ、Ｓ２１２Ｆ、Ｓ２４２Ｒ、Ｓ２４Ｒ、Ｓ７８Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｔ２２Ｒ、Ｖ１２１Ｅ、Ｖ２４４Ｒ、Ｖ２８Ｅ、Ｖ３０Ｅ、Ｖ４Ｒ、及びＷ２４１Ｒからなる群から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５箇所以下の変異により異なるアミノ酸配列からなり、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置は、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列を配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と整列させることで決定される、バチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、プロテアーゼ変異体を提供する。
【００８６】
本発明はまた、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼのプロテアーゼ変異体であって、このバチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼが配列番号２で示されるアミノ酸配列からなり、このプロテアーゼ変異体は、配列番号２のアミノ酸配列とは、Ａ１Ｒ、Ａ２３０Ｅ、Ｅ２７１Ｌ、Ｇ１１５Ｒ、Ｇ２０Ｒ、Ｈ２４９Ｒ、Ｋ２３５Ｆ、Ｋ２７Ｖ／Ｆ／Ｌ、Ｌ７５Ｅ、Ｌ８２Ｒ、Ｎ１８Ｒ、Ｎ２６９Ｒ、Ｎ４３Ｄ、Ｎ４３Ｒ、Ｎ７６Ｄ、Ｒ４５Ｔ、Ｓ２１２Ｆ、Ｓ２４２Ｒ、Ｓ２４Ｒ、Ｓ７８Ｒ、Ｓ９Ａ、Ｔ２２Ｒ、Ｖ１２１Ｅ、Ｖ２４４Ｒ、Ｖ２８Ｅ、Ｖ３０Ｅ、Ｖ４Ｒ、及びＷ２４１Ｒからなる群から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５箇所以下の変異により異なるアミノ酸配列からなり、かつ任意選択で、Ｓ１０３Ａ、Ｇ１５９Ｄ、Ｑ２３６Ｈ、Ｑ２４５Ｒ、Ｎ２４８Ｄ及びＮ２５２Ｋからなる群から選択される少なくとも１つの変異を含み、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置は、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列を配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と整列させることで決定される、バチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、プロテアーゼ変異体を提供する。
【００８７】
本発明はまた、配列番号２のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列からなるプロテアーゼ変異体であって、このプロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して０、＋１、＋２、＋３、＋４、＋５、−１、−２、−３、−４、又は−５であり、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置は、プロテアーゼ変異体のアミノ酸配列を配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と整列させることで決定される、バチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、プロテアーゼ変異体を提供する。場合によっては、プロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して０である。場合によっては、プロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して−５である。場合によっては、プロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して−４である。場合によっては、プロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して−３である。場合によっては、プロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して−２である。場合によっては、プロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して−１である。場合によっては、プロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して＋１である。場合によっては、プロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して＋２である。場合によっては、プロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して+３である。場合によっては、プロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して＋４である。場合によっては、プロテアーゼ変異体の合計正味電荷は、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷に対して＋５である。場合によっては、プロテアーゼ変異体の合計正味電荷は０とは異なる（すなわち、プロテアーゼの合計正味電荷は中性ではない）。
【００８８】
本発明はまた、次の特性：ａ）試験方法２による性能指数が、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．１〜約１０、１．１〜約８、又は更には１．１〜約５である；ｂ）試験方法３による性能指数が、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．１〜約１０、１．１〜約８、又は更には１．１〜約５である；ｃ）試験方法４による性能指数が、少なくとも１．０、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０〜約１０、１．０〜約８、又は更には１．０〜約５である；及び／あるいはｄ）試験方法６による性能指数が、少なくとも１．０、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０〜約１０、１．０〜約８、又は更には１．０〜約５である、のうちの１つ以上を有するプロテアーゼ変異体を提供する。
【００８９】
本発明はまた、本明細書で提供されるサブチリシン変異体をコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離された核酸を提供する。本発明は更に、本明細書で提供されるサブチリシン変異体をコードする核酸配列を含む、発現ベクターを提供する。一部の更なる実施形態では、発現ベクター中の核酸は制御可能なようにプロモーターに連結されている。本発明はまた、本明細書で提供される発現ベクターを含む、宿主細胞を提供する。一部の実施形態では、宿主細胞はバチルス宿主細胞である。一部の更なる実施形態では、宿主細胞は、Ｂ．サブチリス（B.subtilis）宿主細胞である。
【００９０】
本発明はまた、少なくとも１種のサブチリシン変異体を生産する方法であって、サブチリシン変異体を少なくとも１種コードする少なくとも１種の核酸を含む発現ベクターにより、宿主細胞を形質転換させることで、形質転換された宿主細胞を生産する工程；及び形質転換された宿主細胞を、少なくとも１種のサブチリシン変異体を生産するのに好適な条件下で培養して、少なくとも１種のサブチリシン変異体を生産する工程、を含む、方法を提供する。一部の実施形態では、この方法は、生産されたサブチリシン変異体を回収する工程を更に含む。一部の更なる実施形態では、発現ベクター中の核酸は制御可能なようにプロモーターに連結されている。一部の更なる実施形態では、発現ベクター中の核酸は制御可能なようにプロモーターに連結されている。本発明はまた、本明細書で提供される発現ベクターを含む、宿主細胞を提供する。一部の実施形態では、宿主細胞はバチルス宿主細胞である。一部の更なる実施形態では、宿主細胞は、Ｂ．サブチリス宿主細胞である。
【００９１】
本発明のプロテアーゼ変異体はまた、本明細書で提供される少なくとも１種のサブチリシン変異体を含む、布地ケア製品及びホームケア製品に使用することができる。一部の実施形態では、布地ケア製品及びホームケア製品はクリーニング組成物である。一部の更なる実施形態では、クリーニング組成物は、粒状、粉末、固形、バー状、液体、錠剤型、ゲル又はペースト組成物である。一部の追加の実施形態では、クリーニング組成物は洗剤組成物である。一部の更なる追加の実施形態では、クリーニング組成物は、冷水用洗剤組成物、低ｐＨ用洗剤組成物、又はコンパクト洗剤組成物である。一部の追加の実施形態では、クリーニング組成物は、洗濯洗剤組成物、食器用洗剤組成物及び／又は硬質表面クリーニング組成物である。一部の実施形態では、食器用洗剤組成物は、食器手洗い用洗剤組成物又は自動食器洗浄機用洗剤組成物である。一部の追加の実施形態では、布地ケア製品及びホームケア製品は、更に漂白剤を少なくとも１種含む。一部の更なる追加の実施形態では、クリーニング組成物はリン酸塩を含まない一方、他の実施形態では、クリーニング組成物はリン酸塩を含有する。一部の更なる実施形態では、布地ケア製品及びホームケア製品は、少なくとも１種の追加の酵素を更に含む。一部の更なる実施形態では、少なくとも１種の追加の酵素は、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、ペルヒドロラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ、及びアミラーゼ、又はこれらの任意の組み合わせから選択される。一部の実施形態では、布地ケア製品及びホームケア製品は、冷水用プロテアーゼではない少なくとも１種のサブチリシン変異体を含む。
【００９２】
本発明はまた、サブチリシン変異体を少なくとも１種含むクリーニング組成物を提供する。一部の実施形態では、クリーニング組成物は、粒状、粉末、固形、バー状、錠剤型、ゲル又はペースト組成物である。一部の更なる実施形態では、クリーニング組成物は洗剤組成物である。一部の更なる追加の実施形態では、クリーニング組成物は、冷水用洗剤組成物、低ｐＨ用洗剤組成物、及び／又はコンパクト洗剤組成物である。一部の追加の実施形態では、クリーニング組成物は、洗濯洗剤組成物、食器用洗剤組成物、及び／又は硬質表面クリーニング組成物である。一部の更なる実施形態では、食器用洗剤は食器手洗い用洗剤組成物又は自動食器洗浄機用洗剤組成物である。一部の更なる実施形態では、クリーニング組成物は洗濯洗剤組成物である。一部の更なる実施形態では、クリーニング組成物は、更に漂白剤を少なくとも１種含む。一部の追加の実施形態では、クリーニング組成物はリン酸塩を含まない一方、他の実施例ではクリーニング組成物はリン酸塩を含有する。一部の更なる実施形態では、クリーニング組成物は、少なくとも１種の追加の酵素を更に含む。更なる一部の追加の実施形態では、クリーニング組成物の少なくとも１種の追加の酵素は、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、ペルヒドロラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ、及びアミラーゼ、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。一部の実施形態では、クリーニング組成物は、冷水用プロテアーゼではないサブチリシン変異体を少なくとも１種含む。このような組成物は布地ケア製品及びホームケア製品である場合があり、又はこのような組成物は布地ケア製品及びホームケア製品ではない場合もある。
【００９３】
本発明はまた、表面又は物品を、本明細書で提供されるサブチリシン変異体を少なくとも１種含むクリーニング組成物と接触させる工程を含む、クリーニング方法を提供する。一部の実施形態では、クリーニング方法は、表面又は物品を、本明細書で提供される少なくとも１種のクリーニング組成物と接触させる工程を含む。一部の実施形態では、方法は、表面又は物品をそれぞれクリーニング組成物と接触させた後に、表面又は物品をすすぐ工程を更に含む。一部の実施形態では、物品は食器である一方、他の実施形態では物品は布地である。一部の実施形態では、方法は更に、表面又は物品をクリーニング組成物と接触させた後に、表面又は物品をすすぐ工程を更に含む。一部の追加の実施形態では、方法は、表面又は物品をすすぐ工程の後に、表面又は物品を乾燥させる工程を更に含む。一部の実施形態では、クリーニング組成物は、冷水用プロテアーゼではないサブチリシン変異体を少なくとも１種含む。
【００９４】
本発明は、本明細書で提供されるクリーニング組成物、及びクリーニングする必要のある表面又は物品を用意する工程；並びに、表面又は物品の表面を洗浄するのに好適な条件下で、クリーニング組成物を表面又は物品と接触させて、表面又は物品を洗浄する工程を含む、表面又は物品のクリーニング方法を提供する。一部の実施形態では、本発明の方法は、洗浄した表面又は物品をすすいで、表面又は物品をすすがれた状態にする工程を更に含む。一部の更なる実施形態では、方法は、すすいだ表面又は物品を乾燥させる工程を更に含む。一部の実施形態では、クリーニング組成物は、冷水用プロテアーゼではないサブチリシン変異体を少なくとも１種含む。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】ＢＰＮ’（配列番号１）及びＧＧ３６（配列番号２）が挙げられる成熟型の参照プロテアーゼのアライメント。各種冷水プロテアーゼ変異体が挙げられる、本明細書に記載の各種プロテアーゼ変異体の各アミノ酸位置は、図１に示されるように、プロテアーゼ変異体のアミノ酸配列を、バチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンプロテアーゼＢＰＮ’（配列番号１）と整列させることで決定される、バチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる。したがって、本明細書において別段の記載のない限り、置換位置はＢＰＮ’との関係で与えられる。
【図２】ｐＨＰＬＴ−ＧＧ３６のプラスミドマップ。
【図３】ｐＲＡ６８のプラスミドマップ。
【図４】ｐＲＡ９６のプラスミドマップ。
【発明を実施するための形態】
【００９６】
本発明は、セリンプロテアーゼ変異体を提供する。具体的には、本発明は、参照セリンプロテアーゼと比較した場合に１箇所以上の置換を有するセリンプロテアーゼ変異体を提供する。加えて、本発明は、これらのセリンプロテアーゼ変異体を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、本発明は、これらのセリンプロテアーゼ変異体のうちの少なくとも１種を含むクリーニング組成物を提供する。
【００９７】
定義
別途記載のない限り、本発明の実施には、当該技術分野の範囲内のものである分子生物学、タンパク質工学、微生物学、及び組み換えＤＮＡに一般的に使用される従来の技術を包含する。このような技術は当業者に既知のものであり、当業者に広く知られている数多くの文献及び参考文献に記載されている。本明細書で引用されるすべての特許、特許出願、論文及び刊行物は、参照により明示的に本案件に組み込まれる。
【００９８】
本明細書において別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術及び科学用語は、本発明の属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同様の意味を持つ。多くの専門用語辞典が当業者に既知である。本発明の実施において、本願に記載されているものと類似した又は等価な任意の方法及び部材の使用が見出されるが、一部の好適な方法及び材料が本明細書に記載される。したがって、以降で定義される用語は、総じて本明細書を参照することでより詳しく説明される。同様に、本明細書で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」には、文脈で明示されない限り、対象物が複数個ある場合も含まれる。数量範囲には、範囲を定義する数値も包含する。別途記載のない限り、核酸は左から右に向かって５’から３’配向になるよう；アミノ酸配列は、左から右に向かってアミノ基からカルボキシ基という配向になるようにそれぞれ記載される。本発明は記載される特定の方法論、プロトコール、及び試薬に制限されるものではなく、これらは当業者により使用される文脈に応じて変動し得ることが理解されるであろう。
【００９９】
本発明の実施には、別途記載のない限り、タンパク質精製、分子生物学、微生物学、組み換えＤＮＡ技術、及びタンパク質の配列決定に関する、従来技術が採用される。これらの各々は当該技術分野の範囲内のものである。
【０１００】
加えて、本明細書で提供される見出しは本発明の様々な態様又は実施形態を制限するものではなく、総じて本明細書において参照として用いられ得るものである。したがって、以降で定義される用語は、総じて本明細書を参照することでより詳しく定義される。それでもなお、本発明に対する理解を容易にさせる目的で、数多くの用語を以下に定義する。
【０１０１】
本明細書で使用するとき、用語「プロテアーゼ」及び「プロテイナーゼ」は、他のタンパク質を分解する能力を有する酵素タンパク質を指す。プロテアーゼは、ペプチド鎖又はポリペプチド鎖中のアミノ酸を連結しタンパク質を形成するペプチド結合を加水分解することにより、タンパク質の異化作用を開始する、「タンパク質分解」を行なうことができる。プロテアーゼの、タンパク質消化酵素としてのこのような活性は、「タンパク質分解活性」と呼ばれる。タンパク質分解活性の測定には多くの周知の手順が存在する（例えば、Ｋａｌｉｓｚ，「Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，」Ｉｎ：Ｆｉｅｃｈｔｅｒ（ｅｄ．）Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ／Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，（１９８８）を参照されたい）。例えば、タンパク質分解活性は、各プロテアーゼが市販の基質を加水分解する能力を解析する、比較アッセイにより確認することができる。プロテアーゼ活性又はタンパク質分解活性の解析に有用な代表的な基質としては、限定するものではないが、ジメチルカゼイン（Ｓｉｇｍａ  Ｃ−９８０１）、ウシコラーゲン（Ｓｉｇｍａ  Ｃ−９８７９）、ウシエラスチン（Ｓｉｇｍａ  Ｅ−１６２５）、及びウシケラチン（ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ９０２１１１）が挙げられる。これらの基質を用いる比色分析が当該技術分野において周知である（例えば、いずれも参照により本案件に組み込まれる国際公開第９９／３４０１１号及び米国特許第６，３７６，４５０号を参照されたい）。同様に、ｐＮＡアッセイ（例えば、Ｄｅｌ  Ｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９９：３１６〜３２０（１９７９）を参照されたい）も、勾配溶離時に回収される画分に含まれる活性な酵素の濃度を測定するという用途が見出されている。このアッセイは、可溶性の合成基質、スクシニル−アラニン−アラニン−プロリン−フェニルアラニン−ｐ−ニトロアニリド（ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡ）を酵素が加水分解した際に放出されるｐ−ニトロアニリンの放出速度を測定する。加水分解反応により黄色味が生じる速度を分光光度計で４１０ｎｍにて測定する。この速度は活性酵素濃度に比例する。加えて、２８０ナノメートル（ｎｍ）での吸光度測定を使用して、総タンパク質濃度を測定することもできる。活性酵素／総タンパク質比は酵素の純度も与える。
【０１０２】
本明細書で使用するとき、「サブチリシン」は、ペプチダーゼデータベースのＭＥＲＯＰＳ（Ｒａｗｌｉｎｇｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＥＲＯＰＳ：ｔｈｅ  ｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ｄａｔａｂａｓｅ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３４  Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ，Ｄ２７０〜２７２（２００６）を参照されたい）に記載されるようなＳ８セリンプロテアーゼファミリーの任意のメンバーを指す。ＭＥＲＯＰＳに記載されるペプチダーゼファミリーＳ８には、セリンエンドペプチダーゼのサブチリシン及びその相同体が包含される（Ｒａｗｌｉｎｇｓ  ａｎｄ  Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２９０：２０５〜２１８（１９９３））。サブチラーゼファミリーとしても既知であるファミリーＳ８は、セリンペプチダーゼファミリーのうち２番目に大きいファミリーである。現在では、Ｓ８ファミリーのうちのいくつかのメンバーの立体構造が決定されている。典型的なＳ８タンパク質の構造は、２層のヘリックス鎖に挟まれた７本鎖のβシート構造の三層から構成される。サブチリシン（Ｓ０８．００１）は、ＳＢ属（ＳＢ）の構造型である。構造が異なるのにも関わらず、サブチリシン及びキモトリプシン（Ｓ０１．００１）の活性部位が重なることは、この類似性が分岐進化ではなく収束進化の結果であることを示唆する。
【０１０３】
本明細書で使用するとき、用語「プロテアーゼ変異体（protease variant）」、「変異体プロテアーゼ（variant protease）」、「変異体セリンプロテアーゼ（variant serine protease）」、「セリンプロテアーゼ変異体（serine protease variant）」、「サブチリシン変異体（subtilisin variant）」、「変異プロテアーゼ（mutant protease）」は、参照プロテアーゼ（野生型サブチリシンプロテアーゼであり得る）と類似するが、特に機能的に類似するが、配列を、野生型のプロテアーゼ、又は変異体プロテアーゼ体が誘導される開始参照プロテアーゼ（すなわち、「親」プロテアーゼ）の配列と異なるものにするような変異をアミノ酸配列中にもつプロテアーゼを参照する際に使用される。一部の実施形態では、本発明は「ＧＧ３６変異体」（又は「ＧＧ３６サブチリシン変異体」）を提供し、この変異体は、配列番号２で示される成熟型のＧＧ３６配列中に変異が存在するものである。しかしながら、参照プロテアーゼが任意の特定のアミノ酸配列に制限されることは意図しない。加えて、この用語は、親プロテアーゼの変異体を包含することを意図し、この場合、親プロテアーゼの配列は、配列番号２のアミノ酸配列に対し少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一性を有する。
【０１０４】
本明細書で使用するとき、用語「冷水用プロテアーゼ変異体」は、親プロテアーゼのプロテアーゼ変異体を意味し、Ｂ．レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼは配列番号２のアミノ酸配列を有し、上記プロテアーゼ変異体は、次の特性：ａ）試験方法２による性能指数が少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．１〜約１０、１．１〜約８、又は更には１．１〜約５である；ｂ）試験方法３による性能指数が少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．１〜約１０、１．１〜約８、又は更には１．１〜約５である；ｃ）試験方法４による性能指数が少なくとも１．０、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０〜約１０、１．０〜約８、又は更には１．０〜約５である；及び／又はｄ）試験方法６による性能指数が少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０〜約１０、１．０〜約８、又は更には１．０〜約５である、のうち１つ以上を有する。試験方法２、試験方法３、試験方法４、及び試験方法６は、以下の実施例１の表題「試験方法」の節で明記される。加えて、この用語は、親プロテアーゼの変異体を包含することを意図し、この場合、親プロテアーゼの配列は、配列番号２のアミノ酸配列に対し少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一性を有する。
【０１０５】
本発明の一部の実施形態では、親プロテアーゼ（すなわち、「参照」又は「開始」プロテアーゼ）は市販のプロテアーゼであり、限定するものではないが、例えば、商品名ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）、ＰＯＬＡＲＺＹＭＥ（登録商標）、ＫＡＮＮＡＳＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＩＮＡＳＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＩＮＡＳＥ  ＵＬＴＲＡ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ  ＵＬＴＲＡ（登録商標）、ＯＶＯＺＹＭＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）；ＭＡＸＡＣＡＬ（登録商標）、ＰＲＯＰＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）、ＦＮ３（登録商標）、ＦＮ４（登録商標）及びＰＵＲＡＦＥＣＴ  ＯＸＰ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＡＳＴ（商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）ＰＲＩＭＥ、ＰＵＲＡＭＡＸ（登録商標）（Ｄａｎｉｓｃｏ  ＵＳ，Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）；並びにＨｅｎｋｅｌ／  Ｋｅｍｉｒａから市販されるいわゆるＢＬＡＰ（米国特許第５，３５２，６０４号の図２９で示される、次の変異Ｓ９９Ｄ＋Ｓ１０１Ｒ＋Ｓ１０３Ａ＋Ｖ１０４Ｉ＋Ｇ１５９Ｓを有する、以降ＢＬＡＰとして参照される配列）及びＢＬＡＰ  Ｘ（Ｓ３Ｔ＋Ｖ４Ｉ＋Ｖ２０５Ｉを有するＢＬＡＰ）で販売されているプロテアーゼが挙げられる。
【０１０６】
本明細書で使用するとき、用語「ポリペプチド変異体」は、少なくとも１つのアミノ酸残基が親又は参照ポリペプチド（限定するものではないが野生型ポリペプチドが挙げられる）のアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を指す。
【０１０７】
本明細書で使用するとき、「バチルス（Bacillus）属」としては、当業者に既知の「バチルス（Bacillus）属」のすべての種を包含し、限定するものではないが、例えば、Ｂ．サブチリス（b. subtilis）、Ｂ．リケニフォルミス（B. licheniformis）、Ｂ．レンタス（B. lentus）、Ｂ．ブレビス（B. brevis）、Ｂ．ステアロサーモフィルス（B. stearothermophilus）、Ｂ．アルカロフィルス（B. alkalophilus）、Ｂ．アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）、Ｂ．クラウシイ（B. clausii）、Ｂ．ハロドュランス（B. halodurans）、Ｂ．メガテリウム（B. megaterium）、Ｂ．コアギュランス（B. coagulans）、Ｂ．サーキュランス（B. circulans）、Ｂ．ロータス（B. lautus）、及びＢ．チューリンゲンシス（B. thuringiensis）が挙げられる。バチルス属は分類上の再編成を受け続けるものと認識される。したがって、属には、限定するものではないが、現在では「ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス（Geobacillus stearothermophilus）」と呼ばれるＢ．ステアロサーモフィルス（B. stearothermophilus）などの生物が挙げられる、再分類された種も包含することを意図する。酸素の存在下での耐性内生胞子の生産は、バチルス属の定義される特徴であると考慮されるが、この特徴は、近年では名称アリシクロバチルス（Alicyclobacillus）、アンフィバチルス（Amphibacillus）、アネウリニバチルス（Aneurinibacillus）、アノキシバチルス（Anoxybacillus）、ブレビバチルス（Brevibacillus）、フィロバチルス（Filobacillus）、グラシリバチルス（Gracilibacillus）、ハロバチルス（Halobacillus）、パエニバチルス（Paenibacillus）、サリバチルス（Salibacillus）、サーモバチルス（Thermobacillus）、ウレイバチルス（Ureibacillus）、及びビルジバチルス（Virgibacillus）に対しても適用される。
【０１０８】
本明細書で互換的に使用される用語「ポリヌクレオチド」及び「核酸」は、ヌクレオチドモノマーが鎖状に共有結合している任意の長さのポリマーを指す。ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）、デオキシリボヌクレオチドからなるポリヌクレオチド、及びＲＮＡ（リボ核酸）、リボヌクレオチドのポリマーは、異なる生物学的機能を有するポリヌクレオチド又は核酸の例である。ポリヌクレオチド又は核酸としては、限定するものではないが、単鎖、二本鎖、又は三本鎖ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド形成体、又はプリン塩基及びピリミジン塩基からなるポリマー、又は他の天然の、化学的に改変された、生物学的に改変された、非天然の又は誘導体化されたヌクレオチド塩基が挙げられる。次のものはポリヌクレオチドの非限定例である：遺伝子、遺伝子断片、染色体断片、発現配列タグ（ＥＳＴ）、エキソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、リボザイム、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、組み換えポリヌクレオチド、分枝状ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ、及びプライマー。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びヌクレオチド類似体などの改変されたヌクレオチド、ウラシル、他の糖、並びにフルオロリボース及びチオエートなどの結合基、並びに分岐ヌクレオチドからなる。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、非ヌクレオチド成分により割り込まれる。
【０１０９】
本明細書で使用するとき、用語「変異」は、開始アミノ酸又は核酸配列に生じた変化を指す。この用語には、置換、挿入及び欠失が包含されることを意図する。
【０１１０】
本明細書で使用するとき、用語「ベクター」は、核酸又はポリヌクレオチドを、標的細胞又は組織に、導入又は移行するために使用される核酸コンストラクト又はポリヌクレオチドコンストラクトを指す。ベクターは、典型的には、外来ＤＮＡを他の細胞又は組織に導入する際に使用される。概してベクターは、導入遺伝子であるＤＮＡ配列と、ベクターの「骨格」として機能するより長いポリヌクレオチド配列と、からなる。典型的には、ベクターは、挿入された導入遺伝子などの遺伝子情報を、標的細胞又は組織で挿入断片が単離、複製、又は発現されるよう、標的細胞又は組織に移動させるよう機能する。ベクターとしては、プラスミド、クローニングベクター、バクテリオファージ、ウイルス（例えば、ウイルスベクター）、コスミド、発現ベクター、シャトルベクター、カセット、及びこれに類するものなどが挙げられる。典型的には、ベクターには複製起点、マルチクローニング部位、及び選択マーカーが挙げられる。ベクターを標的細胞に挿入するプロセスは、一般に形質移入と呼ばれる。ウイルスベクターによる細胞の形質移入は、一般に形質導入と呼ばれる。一部の実施形態では、本発明には、ＤＮＡ配列を好適なホストで発現させるよう機能し得る好適な配列（例えば、分泌型のシグナルペプチド配列など）に制御可能なように連結される、変異体プロテアーゼ（例えば、前駆型又は成熟型プロテアーゼ変異体）をコードするＤＮＡ配列を含むベクターが包含される。
【０１１１】
本明細書で使用するとき、用語「発現カセット」、「発現プラスミド」又は「発現ベクター」は、対象とする核酸（例えば、外来核酸又は導入遺伝子）を標的細胞で発現させるにあたり組み換え的に又は合成的に生成される核酸コンストラクト又はベクターを指す。典型的には、対象とする核酸は、対象とするタンパク質を発現する。発現ベクター又は発現カセットは、典型的には外来核酸の発現を駆動又は促進するプロモーターヌクレオチド配列を含む。また、典型的には発現ベクター又はカセットは、標的細胞で特定の核酸を転写させる任意の他の特異的な核酸配列を包含する。組み換え型発現カセットは、プラスミド、染色体、ミトコンドリアＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ウイルス、又は核酸断に組み込むことができる。一部の発現ベクターは宿主細胞に異種性のＤＮＡ断片を組み込み、発現させすることができる。多くの原核生物発現ベクター及び真核生物発現ベクターが市販されている。適切な発現ベクターは、当業者の知識の範囲内で選択される。発現ベクターに組み込まれた核酸配列からタンパク質を発現させるのに適切な発現ベクターの選択は、当業者の知識の範囲内のものである。
【０１１２】
ＤＮＡコンストラクトは、標的細胞又は組織に導入することのできる、人工的に構築された核酸断片である。一般的には、ＤＮＡコンストラクトは、対象とするタンパク質をコードするヌクレオチド配列からなる、ベクターにサブクローニングされたＤＮＡの挿入断片を含む。ベクターは、バクテリア中での増殖に関係するバクテリア由来の耐性遺伝子、並びに対象とするタンパク質を微生物で発現させるためのプロモーターを含有し得る。ＤＮＡはＰＣＲによりインビトロで生成されるか、あるいは当業者に既知である任意の他の好適な技術により生成される。一部の実施形態では、ＤＮＡコンストラクトは対象とする核酸配列を含む。一部の実施形態では、配列は、制御要素（例えば、プロモーターなど）のような追加の要素に、制御可能なように連結される。ＤＮＡコンストラクトは、更に選択マーカーを含んでもよく、及びホメオボックスに隣接する組み込み配列を更に含んでもよい。コンストラクトは、他の相同性ではない配列を末端に組み込んで含んでもよい（例えば、スタッファー配列（stuffer sequences）又は隣接配列）。一部の実施形態では、配列末端は、ＤＮＡコンストラクトが閉環を形成するよう閉じられる。当業者に周知である技術を用いＤＮＡコンストラクトに組み込まれる、対象とする核酸配列は、野生型、変異体、又は改変型核酸であり得る。一部の実施形態では、ＤＮＡコンストラクトは、宿主細胞染色体と相同性である核酸配列を１種以上含む。他の実施形態においては、ＤＮＡコンストラクトは、非相同的なヌクレオチド配列を１種以上含む。ＤＮＡコンストラクトをインビトロで組み立ててから、これを、例えば：１）非相同配列を宿主細胞の所望の標的配列に挿入する工程；及び／又は２）宿主細胞の染色体領域に変異を導入する工程（すなわち、非相同配列により内在性配列を置き換える工程）；３）標的遺伝子を欠失させる工程；及び／又は４）複製プラスミドを宿主に導入する工程；に使用することもできる。「ＤＮＡコンストラクト」は、本明細書において「発現カセット」と互換可能に使用される。
【０１１３】
本明細書で使用するとき、「プラスミド」は、染色体ＤＮＡとは独立して複製することのできる染色体外のＤＮＡ分子を指す。プラスミドは二本鎖（ｄｓ）であり、及び環状であってもよく、典型的にはクローニングベクターとして使用される。
【０１１４】
本明細書で使用するとき、核酸配列を細胞に導入する文脈において、用語「導入」は、核酸配列を細胞に移入させるのに好適な任意の方法を指す。導入に関する方法としては、限定するものではないが、プロトプラストの融合、形質移入、形質転換、電気穿孔法、接合、及び形質導入が挙げられる（例えば、Ｆｅｒｒａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，」ｉｎ  Ｈａｒｄｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，ｐｐ．５７〜７２［１９８９］を参照されたい）。
【０１１５】
形質転換は、遺伝子材料（例えば、ＤＮＡ）の取り込み、遺伝的組み込み、及び発現により生じる細胞の遺伝的な変更を指す。
【０１１６】
本明細書で使用するとき、核酸は、他の核酸配列と機能的に関係があるよう配置された場合、他の核酸配列に「操作可能に連結」される。例えば、プロモーターがコード配列の転写に影響を与える場合、プロモーター又はエンハンサーは、ヌクレオチドコード配列に制御可能なように連結される。コード配列の翻訳が促進されるように配置される場合、リボソーム結合部位は、コード配列に制御可能なように連結されてもよい。通常、「操作可能なように連結された」ＤＮＡ配列は連続的な配列である。しかしながら、エンハンサーは隣する必要はない。都合の良い制限部位にてライゲーションすることにより、連結は達成される。このような部位が存在しない場合には、従来技術に従い合成オリゴヌクレオチドアダプタ又はリンカーを使用してもよい。
【０１１７】
本明細書で使用するとき、用語「遺伝子」は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡセグメント）を指し、コード領域の前及び後に続く領域、並びにそれぞれのコード配列（エキソン）の間に存在する介在配列（イントロン）を包含する。
【０１１８】
本明細書で使用するとき、「組み換え」が細胞に関し使用される場合、典型的には、非相同な核酸配列の導入により細胞が改質されていることを、あるいはそのように改質された細胞からその細胞が誘導されていることを意味する。例えば、組み換え細胞は、同一形態のものがネイティブ（非組み換え）形態の細胞では見られない遺伝子を含む場合があり、又は組み換え細胞は、ネイティブな遺伝子（ネイティブ形態の細胞で見られる遺伝子）ではあるが、改変されており細胞に再導入された遺伝子を含んでもよい。組み換え細胞は、細胞から核酸を移動させることなく改変された、細胞内在性の核酸を含む場合もあり、このような改変としては、遺伝子置換、部位特異的変異導入、及び当業者に既知の関連技術により得られる改変が挙げられる。組み換えＤＮＡ技術には、インビトロでの組み換えＤＮＡ生産技術、並びに組み換えＤＮＡを発現又は増殖することのできる細胞に組み換えＤＮＡを導入することによる組み換えポリペプチドの生産が包含される。ポリヌクレオチド又は核酸に関し、「組み換え（Recombination）」、「組換する（recombining）」及び「組み換えられた（recombined）」は、概して、２つ以上の核酸若しくはポリヌクレオチド鎖若しくは断片を組み立て、又は組み合わせることで、新しいポリヌクレオチド又は核酸を生成することを指す。組み換えポリヌクレオチド又は核酸は、しばしばキメラ体と呼ばれる。核酸又はポリペプチドは、人工的なもの又は設計されたものである場合、あるいは人工的な又は設計されたタンパク質又は核酸から誘導される場合「組み換え体」である。
【０１１９】
本明細書で使用するとき、用語核酸又は遺伝子「増幅」は、増幅させた核酸又は遺伝子が、開始時にゲノム中に存在していたコピー数よりもより多くのコピー数で存在するように、特異的なＤＮＡ配列を不均一に複製させるプロセスを指す。一部の実施形態では、薬剤（例えば、阻害可能な酵素に関する阻害剤）の存在下で増殖させることによる細胞選別の結果、薬剤の存在下での増殖に必要とされる遺伝子産物をコードする内在性遺伝子が増幅されるか、あるいは核酸又は遺伝子産物又は両方をコードする外因性の（すなわち、導入）配列が増幅されることになる。
【０１２０】
「増幅」は、核酸複製の特殊例であり、テンプレート特異性を包含する。非特異的なテンプレート複製（すなわち、複製はテンプレートに依存するものの、特定のテンプレートによるものではない）と対照的である。ここでは、テンプレート特異性は、複製の忠実度（すなわち、適切なポリヌクレオチド配列が合成された度合い）及びヌクレオチド（リボ又はデオキシリボヌクレオチド）特異性により識別される。テンプレート特異性は、しばしば「標的」特異性に関し記載される。標的配列は、探索され他の核酸から選別されるという観点から、「標的」である。主にこの選別のために増幅技術が設計されてきた。
【０１２１】
本明細書で使用するとき、用語「プライマー」は、制限酵素による消化断片の精製物として天然由来で生じ、又は合成的に生成され、かつ核酸鎖に対して相補的であるプライマー伸長産物の合成が誘導される条件（すなわち、ヌクレオチド及びＤＮＡポリメラーゼなどの誘導剤の存在下で、かつ好適な温度及びｐＨ）下に置かれた場合に、合成の開始点として機能することができるオリゴヌクレオチド（ヌクレオチド残基のポリマー）を指す。好ましくは、プライマーは増幅効率を最大にするために単鎖であるが、あるいは、二本鎖であってもよい。二本鎖の場合、プライマーは、伸長産物の調製に使用する前に、その鎖が単離されるように最初に処理する。一部の実施形態では、プライマーはオリゴデオキシリボヌクレオチドである。プライマーは、誘導剤の存在下で伸長産物の合成を開始するのに十分な程度長くなければならない。プライマーの正確な長さは、温度、プライマー源、及び使用方法などの様々な要因により異なる。
【０１２２】
本明細書で使用するとき、用語「プローブ」は、制限酵素による消化断片の精製物として天然に生じる、又は組み換え的に若しくはＰＣＲ増幅により合成的に生産された、オリゴヌクレオチドを指し、通常、対象とする他のオリゴヌクレオチドとハイブリッド形成することができる。プローブは一本鎖であっても二本鎖であってもよい。プローブは、特定の遺伝子配列の検出、識別、及び単離に有用である。本発明で使用される任意のプローブを、限定するものではないが酵素（例えば、ＥＬＩＳＡ、並びに酵素を用いる組織化学アッセイ）、蛍光、放射活性、及び発光系などの任意の検出系で検出され得るように、任意の「リポーター分子」により標識することが想到される。本発明は、任意の特定の検出系又は標識に制限されることを意図しない。
【０１２３】
本明細書で使用するとき、用語「標的」は、ポリメラーゼ連鎖反応に関し使用する場合、ポリメラーゼ連鎖反応に使用されるプライマーにより結合される核酸領域を指す。したがって、「標的」は他の核酸配列から探索され、選別される。ヌクレオチド「断片」は、標的とする核酸配列内部の核酸領域である。
【０１２４】
本明細書で使用するとき、用語「ポリメラーゼ連鎖反応」（ＰＣＲ）は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，６８３，２０２号、及び同第４，９６５，１８８号の方法を指し、クローニング又は精製せずにゲノムＤＮＡ混合物中の標的配列断片の濃度を上昇させる方法を包含する。この標的配列の増幅プロセスは当業者に周知である。
【０１２５】
本明細書で使用するとき、用語「増幅剤」は、プライマー、核酸テンプレート、及び増幅酵素を除く、増幅に必要とされる試薬を指す（例えば、デオキシリボヌクレオチド三リン酸、緩衝液など）。通常、増幅剤は他の反応成分と共に反応容器（試験管、マイクロウェルなど）に配置され、収容される。
【０１２６】
本明細書で使用するとき、用語「制限エンドヌクレアーゼ」又は「制限酵素」は、制限部位として既知であるヌクレオチドに特異的な配列に又はその配列近傍に存在する二本鎖又は一本鎖ＤＮＡを切断することのできる酵素（例えば、細菌性酵素）を指す。制限部位を含むヌクレオチド配列は、所定の制限エンドヌクレアーゼすなわち制限酵素により認識及び切断され、しばしばＤＮＡ断片の挿入部位になる。制限部位は、発現ベクター又はＤＮＡコンストラクト中に設計することができる。
【０１２７】
「相同組み換え」は、２つのＤＮＡ分子間、又は同一の若しくはほとんど同一のヌクレオチド配列が対となった染色体間で生じる、ＤＮＡ断片の交換を指す。一部の実施形態では、染色体の組み込みは相同組み換えである。
【０１２８】
核酸又はポリヌクレオチドが、ネイティブな状態にせよ又は当業者に既知の手法により操作された場合にせよ、転写及び／又は翻訳されてポリペプチド又はそれらの断片を生産できるのであれば、核酸又はポリヌクレオチドは、ポリペプチドを「コードする」と言われる。このような核酸のアンチセンス鎖も、同様に配列をコードすると言われる。
【０１２９】
当該技術分野において既知であるように、ＲＮＡポリメラーゼによりＤＮＡ配列を転写してＲＮＡ配列を生産することができるが、逆転写酵素によりＲＮＡ配列を逆転写してＤＮＡ配列を生産することもできる。
【０１３０】
「宿主株」又は「宿主細胞」は、対象とするＤＮＡ配列を含む発現ベクターにとって好適な宿主を指す。対象とするＤＮＡ配列は、対象とするタンパク質を宿主株又は宿主細胞で発現することができる。
【０１３１】
「タンパク質」又は「ポリペプチド」は、アミノ酸残基のポリマー配列からなる。用語「タンパク質」及び「ポリペプチド」は、本明細書で互換可能に使用される。ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｊｏｉｎｔ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（ＪＣＢＮ）に従い定義されるようなアミノ酸の一文字表記及び三文字表記を本開示を通して使用する。単独の文字Ｘは、２０個のアミノ酸のいずれかを指す。遺伝子暗号の縮重に起因し、ポリペプチドは１種以上のヌクレオチド配列によりコードされる場合があることも理解されたい。変異は、親アミノ酸の１文字表記、続いて３桁又は２桁の数字による位置番号、次に変異アミノ酸の１文字表記により記載される。例えば、位置８７でグリシン（Ｇ）がセリン（Ｓ）に置き換わる変異が生じている場合、「Ｇ０８７Ｓ」又は「Ｇ８７Ｓ」と表される。複数の変異は、「−」を変異の間に挿入することで示される。位置８７及び９０での変異は、「Ｇ０８７Ｓ−Ａ０９０Ｙ」又は「Ｇ８７Ｓ−Ａ９０Ｙ」又は「Ｇ８７Ｓ＋Ａ９０Ｙ」又は「Ｇ０８７Ｓ＋Ａ０９０Ｙ」のいずれかで表される。欠失に関しては、１文字表記「Ｚ」が使用される。親配列に対する挿入に関し、「Ｚ」は位置番号の左側に存在する。欠失に関し、１文字表記「Ｚ」は、位置番号の右側に存在する。挿入に関し、位置番号は、アミノ酸を挿入する前のものであり、各アミノ酸に対し０．０１が加えられる。例えば、３つのアミノ酸、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）及びチロシン（Ｙ）の挿入が位置８７と８８の間で生じた場合、「Ｚ０８７．０１Ａ−Ｚ０８７．０２Ｓ−Ｚ０８７．０３Ｙ」と記載される。したがって、上記のすべての変異に加えて位置１００で欠失が生じた場合には「Ｇ０８７Ｓ−Ｚ０８７．０１Ａ−Ｚ０８７．０２Ｓ−Ｚ０８７．０３Ｙ−Ａ０９０Ｙ−Ａ１００Ｚ」と記載される。
【０１３２】
「プロ配列」又は「プロペプチド配列」は、シグナルペプチド配列と成熟プロテアーゼ配列の間に存在し、プロテアーゼの分泌に必要とされるアミノ酸配列を指す。プロ配列又はプロペプチド配列の開裂により、活性な成熟型プロテアーゼが生じる。
【０１３３】
用語「シグナル配列」又は「シグナルペプチド」は、成熟型又は前駆型タンパク質の分泌又は直接的な輸送に参加し得るアミノ酸残基の配列を指す。シグナル配列は、通常、前駆型又は成熟型タンパク質配列に対しＮ端末に位置する。シグナル配列は内在性のものであっても外来性であってもよい。外来性シグナル配列の一実施例は、バチルス・レンタス（Bacillus lentus）（ＡＴＣＣ  ２１５３６）由来のサブチリシンのシグナル配列の残部に融合させた、バチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）のサブチリシン由来の、シグナル配列の７個のアミノ酸残基を包含する。シグナル配列は通常では成熟タンパク質には含まれない。シグナル配列は、典型的には、タンパク質の輸送後にシグナルペプチダーゼによりタンパク質から切断される。
【０１３４】
用語「ハイブリッド型シグナル配列（hybrid signal sequence）」は、発現させる遺伝子に関するシグナル配列と融合させた発現宿主から配列の一部が得られる、シグナル配列を指す。一部の実施形態では、合成配列が用いられる。
【０１３５】
用語、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドの「成熟」形態は、シグナルペプチド配列及びプロペプチド配列を含まない、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドの機能形態を指す。
【０１３６】
用語「前駆体」タンパク質又はペプチドは、タンパク質のアミノ末端又はカルボニル末端に制御可能なように連結されたプロ配列を有している、成熟型タンパク質を指す。前駆体は、プロ配列のアミノ末端に、制御可能なように連結された「シグナル」配列を有する場合もある。前駆体は、翻訳後活性に関与する追加のポリヌクレオチド（例えば、前駆体からこのポリヌクレオチドが切断されると、成熟型のタンパク質又はペプチドが得られる）を有する場合もある。
【０１３７】
アミノ酸配列又は核酸配列に関して、用語「野生型」は、アミノ酸配列又は核酸配列がネイティブであるか、又は天然に生じた配列であることを意味する。本明細書で使用するとき、用語「天然に生じた」は、自然に見出される（すなわち、組み換え法により操作を受けていない）任意のものを指す（例えば、タンパク質、アミノ酸、又は核酸配列）。
【０１３８】
本明細書で使用するとき、用語「天然に生じたものではない」は、自然界に見出すことのない任意のものを指す（例えば、研究室で製造される組み換え核酸）。
【０１３９】
本明細書でアミノ酸残基の位置に関して使用するとき、用語「対応する（「corresponding to」又は「corresponds to」又は「corresponds」）」は、タンパク質又はペプチド中の数え上げられた位置のアミノ酸残基、あるいはタンパク質又はペプチド中の数え上げられた残基に対して類似、相同、又は等価であるアミノ酸残基を指す。本明細書で使用するとき、用語「対応する領域」は、概して、関連するタンパク質又は参照タンパク質に従っての類似の位置を指す。
【０１４０】
用語「から誘導される」及び「から得られる」は、対象とする生物株により生産されるあるいは生産され得るプロテアーゼだけでなく、このような株から単離されるＤＮＡ配列によりコードされるプロテアーゼ、及びこのようなＤＮＡ配列を含有している宿主生物で生産されるプロテアーゼも指す。更にこれらの用語は、合成ＤＮＡ配列及び／又はｃＤＮＡ由来のＤＮＡ配列によりコードされ、かつ対象とするプロテアーゼと同一の特徴を有する、プロテアーゼを指す。例示すると、「バチルスから誘導されるプロテアーゼ」は、バチルスにより天然に生産された、タンパク質分解活性を有する酵素、並びにバチルス供給源により生産されるが、遺伝子工学技術の使用を介して、セリンプロテアーゼをコードする核酸でバチルスではない生物を形質転換することにより生産される、セリンプロテアーゼ様の酵素を指す。
【０１４１】
２つの核酸又はポリペプチド配列の文脈において、用語「同一」は、以下の配列比較又は解析アルゴリズムのうちの１つを用いて評価する際に、最も一致するようにアライメントしたときに、２つの配列中の残基が同じのものであることを指す。
【０１４２】
本明細書で使用するとき、用語「相同の遺伝子」は、互いに対応し、かつ同一であるか又は互いに非常に類似している、異なるが通常は関連する種由来の遺伝子のペアを指す。用語は、種分化（すなわち、新種の発生）により分離される遺伝子（例えば、オルソロガス遺伝子）、並びに遺伝子複製により分離されている遺伝子（例えば、パラロガス遺伝子）を包含する。
【０１４３】
本明細書で使用するとき、用語「相同性」は、配列の類似性又は同一性を指し、同一性を指す方が好ましい。相同性は、当該技術分野において既知の標準的な技術を用いて判定することができる（例えば、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２［１９８１］；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３［１９７０＼；Ｐｅａｒｓｏｎ及びＬｉｐｍａｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４［１９８８］；Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡなどのソフトウェアプログラム；並びにＤｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１２：３８７〜３９５［１９８４］を参照されたい）。有用なアルゴリズムの一例はＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、累進ペアワイズアライメントを用いて、関連する配列群から複数の配列アライメントを作成する。このアルゴリズムは、アライメントを作成するために使用されるクラスタの関係性を示す、樹形図をプロットすることもできる。ＰＩＬＥＵＰは、Ｆｅｎｇ及びＤｏｏｌｉｔｔｌｅの累進アライメント法を単純化したものを使用する（Ｆｅｎｇ及びＤｏｏｌｉｔｔｌｅ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１〜３６０［１９８７］を参照されたい）。この方法は、Ｈｉｇｇｉｎｓ及びＳｈａｒｐにより記載されるものと類似のものである（Ｈｉｇｇｉｎｓ及びＳｈａｒｐ、ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１〜１５３［１９８９］を参照されたい）。有用なＰＩＬＥＵＰパラメーターは、デフォルトのギャップ・ウェイト：３．００、デフォルトのギャップ長・ウェイト：０．１０、及びウェイト化されたエンド・ギャップを含む。有用なアルゴリズムの他の例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ，により記載されるＢＬＡＳＴアルゴリズムである（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０［１９９０］；並びにＫａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３〜５７８７［１９９３］を参照されたい）。特に有用なＢＬＡＳＴプログラムはＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２プログラムである（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：４６０〜４８０［１９９６］を参照されたい）。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２は、いくつかの検索パラメーターを用いるものであり、このパラメーターのほとんどにデフォルト値を設定する。調節可能なパラメーターは、以下の値に設定する：ｏｖｅｒｌａｐ  ｓｐａｎ＝１、ｏｖｅｒｌａｐ  ｆｒａｃｔｉｏｎ＝０．１２５、ｗｏｒｄ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ（Ｔ）＝１１。ＨＳＰ  Ｓ及びＨＳＰ  Ｓ２パラメーターは、動的な値であり、検索される対象となる配列に対し、特定のデータベースの特定の配列及び組成物の組成に基づきプログラム自体によって制定される。しかしながら、値は感度が上昇するよう調整することができる。
【０１４４】
参照配列と対象とする試験配列との配列同一性は、当業者により用意に判定することができる。ポリヌクレオチド又はポリペプチド配列により共有される同一性は、配列をアライメントし、当該技術分野において既知の方法により同一性を判定することによって分子間での配列情報を直接比較することにより、判定される。配列類似性を判定するのに好適なアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムである（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３〜４１０［１９９０］を参照されたい）。ＢＬＡＳＴ解析を実行するためのソフトウェアは、米国国立生物工学情報センター（the National Center for Biotechnology Information）により公開されている。このアルゴリズムは、まず始めに、データベース配列中の同じ長さのワードとアライメントさせた場合に、クエリー配列中の、何らかの正に値付けされた閾値スコアＴと一致するか又は基準を満たす長さＷの短い配列を同定することで、ＨＳＰ（high scoring sequence pairs）を同定することを包含する。これらの最初に隣接するワードは、ヒットすると、それらのワードを含有しているより長いＨＳＰを発見するための開始点として機能する。ワードのヒットは、累積アライメントスコアが増加し得る限り、比較される２つの配列の各々の両方向に向かって進められる。ヒットするワードの延長は、累積アライメントスコアが、得られる最大の値から、数量Ｘだけ落ち込んだ場合、累積スコアが０以下になった場合、又はいずれかの配列が末端に達した場合に停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、Ｔ、及びＸは、アライメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴプログラムは、ワード長（Ｗ）１１、ＢＬＯＳＵＭ６２スコア行列（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ及びＨｅｎｉｋｏｆｆ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５［１９９２］を参照されたい）：アライメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ’５、Ｎ’−４、及び両方のストランドの比較をデフォルトとして使用する。
【０１４５】
次いで、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、類似する２つの配列間の統計解析を実行する（例えば、上掲Ｋａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌを参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の測定法のうちの１つは、偶然に生じ得る２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致による見込みを識別する、最小合計類似度（smallest sum probability）（Ｐ（Ｎ））である。例えば、試験核酸をセリンプロテアーゼの核酸と比較した際の最小合計類似度が、約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、及び最も好ましくは約０．００１未満である場合、核酸は本発明のセリンプロテアーゼ核酸と類似していると考えられる。セリンプロテアーゼポリペプチドをコードする試験核酸は、最小合計類似度の比較結果が約０．５未満、及びより好ましくは約０．２未満である場合に、特定のセリンプロテアーゼ核酸と類似していると考えられる。
【０１４６】
２つ以上の核酸又はポリペプチド配列についての文脈において、「同一性（percent identical又はpercent identity）」は、２つ以上の配列を最も一致するように比較及びアライメントし、配列比較アルゴリズムを用いて又は目視検査を用いて判定したときに、２つ以上の配列が、同一であるか、あるいは核酸残基又はアミノ酸残基と、表記される割合で同一であることを指すものである。参照（すなわち、クエリー）アミノ酸配列に対する、対象とするアミノ酸配列の、「配列同一性」又は「同一性（％）」又は「配列同一性（％）」又は「アミノ酸配列同一性」は、対象とするアミノ酸配列が、配列を最適にアライメントした際の比較長さにわたってクエリーアミノ酸配列に対して表記される割合（すなわち、アミノ酸とアミノ酸を並べたときの同一度）だけ同一であることを意味する。したがって、２つのアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性８０％又は同一性８０％は、最適にアライメントした２つのアミノ酸配列中のアミノ酸残基のうち８０％が同一であることを意味する。
【０１４７】
参照（すなわち、クエリー）核酸配列に対する、対象とする核酸配列の、「配列同一性」又は「同一性（％）」又は「配列同一性（％）」又は「核酸配列同一性（％）」は、対象とする核酸配列が、配列を最適にアライメントした際の比較長さにわたってクエリー配列に対して表記される割合（すなわち、ヌクレオチドとヌクレオチドを並べたときの同一度）だけ同一であることを意味する。したがって、２つの核酸配列に関しヌクレオチド配列の同一性が８０％であるか又は同一性が８０％であるとは、最適にアライメントした２つの核酸配列中のヌクレオチド残基のうち８０％が同一であることを意味する。
【０１４８】
一部の実施形態では、クエリー配列に対する対象とする配列の「配列同一性又は配列同一性（％）」、又は「同一性（％）」は、２つの配列を最適にアライメントし、比較長さにわたって、２つの最適にアライメントした配列を比較することで、算出することができる。最適なアライメントにおいて両方の配列の残基が一致している位置の数は、一致する位置の数を求めて一致する位置の数を比較長さ（別途記載のない限り、クエリー配列の長さである）のうちの位置の合計数で除することで決定される。得られる数に１００を乗じることで、クエリー配列に対する対象とする配列の配列同一性を算出する。
【０１４９】
「最適なアライメント」又は「最適にアライメントされた」は、最も高い同一性のスコアを与える、２つ（又は２つ以上）の配列のアライメントを指す。例えば、２つのタンパク質配列の最適なアライメントは、各配列中の同一のアミノ酸残基が最多数アライメントされるように、配列を手作業でアライメントさせることで、あるいはソフトウェアプログラム又は本明細書に記載の若しくは当該技術分野において既知の手順を用いることで、達成することができる。例えば、２つの核酸配列の最適なアライメントは、各配列中の同一のヌクレオチド残基が最多数アライメントされるように、配列を手作業でアライメントさせることで、あるいはソフトウェアプログラム又は本明細書に記載の若しくは当該技術分野において既知の手順を用いることで、達成することができる。
【０１５０】
一部の実施形態では、２つのポリペプチド配列は、配列対に関し可能性のある最も高い類似性スコアが得られるように、定義されたアミノ酸置換行列、ギャップ開始ペナルティ（ギャップオープンペナルティとも呼ばれる）、及びギャップ伸長ペナルティなどの定義されたパラメーターを用いてアライメントされたときに、「最適にアライメントされた」とみなされる。ＢＬＯＳＵＭ６２スコア行列（上掲のＨｅｎｉｋｏｆｆ及びＨｅｎｉｋｏｆｆを参照されたい）は、多くの場合、ポリペプチド配列アライメントアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰ）でデフォルトのスコア置換行列として使用される。アライメントされた配列のうちの一方に導入された単独のアミノ酸ギャップに対し、ギャップ開始ペナルティが課せられ、ギャップの各残基位置に対しギャップ伸長ペナルティが課せられる。採用される例示的なアライメントパラメーターは：ＢＬＯＳＵＭ６２スコア行列、ギャップ開始ペナルティ＝１１、及びギャップ伸長ペナルティ＝１である。アライメントスコアは、アラインメントが開始及び終了する（例えば、アライメント・ウインドウ）各配列のアミノ酸位置によって、及び、最も高い類似性スコアが得られるように、配列の他方又は両方に１つ以上のギャップを挿入することによっても、決定される。
【０１５１】
２つ以上の配列間の最適なアライメントは、目視検査により手動で、又は限定するものではないが、例えば、アミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰプログラム、及び核酸配列用のＢＬＡＳＴＮプログラムなどのように、コンピュータを用いることで決定することができる（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９〜３４０２（１９９７）を参照されたい；ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）ｗｅｂｓｉｔｅも参照されたい）。
【０１５２】
対象とするポリペプチドは、対象とするポリペプチドが、参照ポリペプチドのアミノ酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は少なくとも約９９．５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる場合、参照ポリペプチドと「実質的に同一」であるものとして参照される。２つのこのようなポリペプチド間の同一性（％）は、最適にアラインメントされた２つのポリペプチド配列を目視確認することにより、又は標準的なパラメーターを用いるソフトウェアプログラム又はアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴ，ＡＬＩＧＮ，ＣＬＵＳＴＡＬ）を使用することで、手入力で判定することができる。２つのポリペプチドが実質的に同一であることの１つの指標としては、第１ポリペプチドが、第２ポリペプチドと免疫的に交差反応性であることが挙げられる。通常、保存的なアミノ酸置換により異なるポリペプチドは、免疫学的に交差反応性である。したがって、例えば、２つのペプチドが、保存的なアミノ酸置換のみ、又は１つ以上の保存的なアミノ酸置換のみで異なっている場合、このポリペプチドは第２ポリペプチドと実質的に同一である。
【０１５３】
対象とする核酸は、対象とする核酸が、参照核酸のヌクレオチド配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は少なくとも約９９．５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなる場合、参照核酸と「実質的に同一」であるものとして参照される。２つのこのような核酸間の同一性（％）は、最適にアラインメントされた２つの核酸配列を目視確認することにより、又は標準的なパラメーターを用いるソフトウェアプログラム又はアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、ＣＬＵＳＴＡＬ）を使用することで、手入力で判定することができる。厳密な条件下（例えば、中程度に厳密〜非常に厳密という範囲）で、２つの核酸分子が互いにハイブリッド形成することは、核酸配列が実質的に同一であることの１つの指標になる。
【０１５４】
核酸又はポリヌクレオチドは、他の成分、例えば、限定するものではないが、他のタンパク質、核酸、細胞などから、ある程度又は完全に分離された場合に「単離」されたことになる。同様に、ポリペプチド、タンパク質又はペプチドは、他の成分、例えば、限定するものではないが、他のタンパク質、核酸、細胞などから、ある程度又は完全に分離された場合に「単離」されたことになる。単離された種は、組成物中の他の種よりもモルベースで豊富に含まれる。例えば、単離された種は、存在するすべての高分子種のうちの少なくとも約５０％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は又は約１００％（モルベースで）を構成し得る。好ましくは、対象種は、本質的に均一に精製される（すなわち、従来の検出手法により組成物への他種の混入が検出されることはない）。純度及び均一度は、タンパク質又は核酸試料をアガロース又はポリアクリルアミドゲル電気泳動後に染色により可視化するなどの、当業者に周知である数多くの手法を用い測定することができる。必要に応じて、高解像度の技術、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）又は同様の手法を用いて材料を精製することができる。
【０１５５】
核酸又はポリペプチドに使用される場合、用語「精製した」は、概して、当業者に周知の解析技術により測定した場合に、核酸又はポリペプチドが他の成分を本質的に含まないことを意味する（例えば、精製ポリペプチド又はポリヌクレオチドは、電気泳動ゲルで、クロマトグラフィーによる溶出で、及び／又は密度勾配遠心分離にかけた媒質中で、別個のバンドを形成する）。例えば、電気泳動ゲルで本質的に１本のバンドのみが生じる核酸又はポリペプチドは、「精製されている」。精製された核酸又はポリペプチドとは、純度が少なくとも約５０％のものであり、一般的には、純度が少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約９９．５％、約９９．６％、約９９．７％、又は約９９．８％以上（例えば、モルベースの重量％で）のものである。これに関連し、本発明は、本発明の１種以上のポリペプチド又はポリヌクレオチドなどの、本発明に関する１種以上の分子について組成物を濃縮する方法を提供する。精製又は濃縮技術の適用後に分子の濃度が実質的に上昇している場合、この組成物はその分子について濃縮されている。本発明の、実質的に純粋なポリペプチド又はポリヌクレオチド（例えば、それぞれ、本発明の変異体プロテアーゼをコードする実質的に純粋な変異体プロテアーゼ又はポリヌクレオチド）は、典型的には、特定の組成物中で、すべての高分子種の少なくとも約５５％、約６０％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８、約９９％、又は約９９．５％以上（モルベースで）を構成する。
【０１５６】
これに関連し、本発明は、本発明に関する１種以上のポリペプチド（例えば、本発明に関する１種以上の変異体プロテアーゼ）、あるいは本発明に関する１種以上の核酸（例えば、本発明に関する１種以上の変異体プロテアーゼをコードする１種以上の核酸）などといった、本発明に関する１種以上の分子について組成物を濃縮する方法を提供する。精製又は濃縮技術の適用後に分子の濃度が実質的に上昇している場合、この組成物はその分子について濃縮されている。実質的に純粋なポリペプチド又はポリヌクレオチドは、典型的には、特定の組成物中で、すべての高分子種の少なくとも約５５％、約６０％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８、約９９％、又は約９９．５％以上（モルベースで）を構成する。
【０１５７】
本明細書で使用するとき、用語「コンビナトリアルな変異導入」又は「コンビナトリアル」は、参照核酸配列の核酸変異体に関するライブラリを作成する方法を指す。これらのライブラリでは、変異体は所定の変異の組から選択された１つ以上の変異を含有している。この方法は、所定の変異の組のメンバーではないランダム変異を導入する手段も提供する。このような手法のうちのいくつかのものは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，５８２，９１４号に記載されている。このようなコンビナトリアルな変異導入法のうち一部のものには、市販のキット（例えば、ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ（登録商標）多部位特異的変異導入キット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ＰＣＲ融合／伸長ＰＣＲ）に組み込まれる方法が挙げられ、及び／又は包含される。
【０１５８】
本明細書で使用するとき、変異体プロテアーゼと関連させて使用される「改良された特性を有する」は、対応する参照プロテアーゼ（例えば、野生型又は天然に生じるプロテアーゼ）と比較した場合に、変異体プロテアーゼが改良されていること、すなわち洗浄性能若しくはクリーニング性能が強化されていること、及び／又は場合により洗浄又はクリーニング性能は保持されたまま安定性が改良されていること若しくは強化されていることを意味する。変異体プロテアーゼの特性の改良には、洗浄又はクリーニング性能の改良及び／又は安定性の改良が含まれ得る。一部の実施形態では、本発明は、次の特性：参照プロテアーゼ（例えば、野生型サブチリシンなどの野生型プロテアーゼ）と比較した場合に、手洗い性能の改良、食器手洗い又は手動洗浄性能の改良、自動食器洗浄性能の改良、洗濯性能の改良、及び／又は安定性の改良のうち１つ以上を呈する、本発明の変異体プロテアーゼを提供する。
【０１５９】
本明細書で使用するとき、用語「機能アッセイ」は、タンパク質活性の指標を提供するアッセイを指す。一部の実施形態では、この用語は、タンパク質が通常の性能で機能できるかに関して解析されるアッセイ系を指す。例えば、酵素の場合、機能アッセイは反応触媒時の酵素の効力を判定することを包含する。
【０１６０】
本明細書で使用するとき、用語「標的特性」は、開始遺伝子から変更されることになる特性を指す。本発明が、任意の特定の標的特性に制限されることは意図しない。しかしながら、一部の実施形態では、標的特性は遺伝子産物の安定性（例えば、変性、タンパク質分解性又は他の分解要因に対する抵抗性）である一方、他の実施形態では、生産宿主による生産レベルが変更される。
【０１６１】
本明細書で使用するとき、用語「特性」又はそれらの文法的に等価な表現は、核酸に関する文脈において、選別又は検出が可能な核酸の任意の特性若しくは属性を指す。これらの特性としては、限定するものではないが、ポリペプチドに対する結合性に影響する特性、特定の核酸を含む細胞に与えられた特性、遺伝子の転写に影響を与える特性（例えば、プロモーター強度、プロモーター認識、プロモーター制御、エンハンサー機能）、ＲＮＡのプロセシング（例えば、ＲＮＡスプライシング、ＲＮＡ安定性、ＲＮＡ認識、及び転写後修飾）に影響を与える特性、翻訳に影響を与える特性（例えば、強度、制御、リボソームタンパク質に対するｍＲＮＡの結合、翻訳後修飾）が挙げられる。例えば、核酸の、転写因子、ポリメラーゼ、制御因子などの結合部位を変更させることで、所望の特性を生成すること、又は所望されない特性を確認することができる。
【０１６２】
本明細書で使用するとき、用語「特性」又はそれらの文法的に等価な表現は、ポリペプチドに関する文脈において、選別又は検出が可能なポリペプチドの任意の特性若しくは属性を指す。これらの特性としては、限定するものではないが、酸化安定性、基質特異性、触媒活性、酵素活性、熱安定性、アルカリ安定性、ｐＨ活性プロファイル、タンパク質分解耐性、ＫＭ、ｋｃａｔ、ｋｃａｔ／ｋＭ比、タンパク質フォールディング、免疫応答の誘導、リガンドに対する結合能、受容体に対する結合能、分泌され得るか否か、細胞の表面に提示され得るか否か、多量体化し得るか否か、シグナル伝達し得るか否か、細胞の増殖を阻害し得るか否か、アポトーシスを誘導し得るか否か、リン酸化又はグリコシル化により改変され得るか否か、及び／又は病気を処置し得るか否かなどが挙げられる。
【０１６３】
本明細書で使用するとき、用語「スクリーニング」は、当該技術分野で通常使用される意味を有する。スクリーニングプロセスの一実施例では、変異核酸、又はこの核酸にコードされているポリペプチド変異体が提供され、変異核酸又はポリペプチド変異体の特性はそれぞれ評価され、又は測定される。変異核酸又はポリペプチド変異体の特性は、測定後にそれぞれ対応する前駆体（親）核酸又は対応する親ポリペプチドの特性と比較することもできる。
【０１６４】
開始材料の特性に応じて、特性の変更された核酸又はタンパク質を得る際のスクリーニング手順は当事者には明白であろう。このような変異核酸の生成により、開始材料の改変が促進されることが意図される。したがって、当事者は、本発明が、スクリーニングされる任意の特定の特性に制限されるものではなく、以下の特性に関する記載は、例示目的のみで掲載されるものであることを認識する。任意の特定の特性に関するスクリーニング方法は、一般的に当該技術分野で記載されているものである。例えば、ある方法では、変異の前後の結合性、ｐＨ、特異性などを測定することができる。変化は変更を示す。好ましくは、スクリーニングは、複数の試料を同時にスクリーニングする、例えば、限定するものではないが、チップを利用するアッセイ、ファージディスプレイ、並びに複数の基質及び／又は指示薬を包含する、高スループットな方式で実施される。
【０１６５】
本明細書で使用するとき、一部の実施形態では、スクリーニングプロセスは、対象とする変異体を変異体集団から濃縮する選別工程を一工程以上包含する。これらの実施形態の例としては、宿主生物に増殖優位性を与える変異体の選別、並びにファージディスプレイ又は任意の他のディスプレイ法が挙げられる。ディスプレイ法では、変異体の結合特性又は触媒特性に基づき、変異体を変異体集団から捕捉することができる。一部の実施形態では、変異体ライブラリはストレス（例えば、熱、プロテアーゼ、変性など）にさらされ、続いてインタクトなままの変異体がスクリーニングにより識別され、又は選別により濃縮される。この用語は、選別に関する任意の好適な手段を包含することを意図するものである。実際のところ、本発明は、任意の特定のスクリーニング方法に制限されることを意図しない。
【０１６６】
用語「改変核酸配列」及び「改変遺伝子」は、天然に生じる（すなわち、野生型）核酸配列に欠失、挿入又は中断を包含する核酸配列を指すために、本明細書において互換的に使用される。一部の実施形態では、改変された核酸配列による発現産物は、切断型タンパク質である（例えば、改変が配列の欠失又は中断であった場合）。一部の実施形態では、切断型タンパク質は生物活性を保持している。代替的な実施形態では、改変された核酸配列の発現産物は、伸長されているタンパク質である（例えば、改変が核酸配列の挿入を含む場合）。一部の実施形態では、核酸配列にヌクレオチドを挿入することで切断型タンパク質が得られる（例えば、挿入により停止コドンが形成される場合）。したがって、核酸配列を挿入することにより、切断型タンパク質又は伸長型タンパク質のいずれかが発現産物として生じる可能性がある。
【０１６７】
核酸配列「変異」は、典型的には、核酸配列変異の発現産物が、野生型タンパク質と比較してアミノ酸配列が変更されているタンパク質になるよう、宿主細胞の野生型配列中の少なくとも１つのコドンが変更されている核酸配列を指す。発現産物の機能的能力は変更されてもよい（例えば、酵素活性が増強されるなど）。
【０１６８】
本明細書で使用するとき、語句「基質特異性の変更」は、酵素の基質特異性に生じる変化を指す。一部の実施形態では、基質特異性の変化は、酵素への変異導入、又は反応条件の変更により生じる、特定の基質に対するｋｃａｔ及び／又はＫｍの変化として定義される。酵素の基質特異性は、異なる基質に対して示す触媒効率を比較することで判定される。概して、対象とする基質に対するｋｃａｔ／Ｋｍ比がより大きい変異酵素を生産することが所望されることからこれらの判定が変異体酵素の触媒効率を評価する特定の用途で見られる。しかしながら、本発明は、特定の基質組成物又は基質特異性に制限されることを意図しない。
【０１６９】
本明細書で使用するとき、「表面特性」は、静電荷、並びにタンパク質の表面により示される疎水性及び親水性などの特性に関して使用される。
【０１７０】
本明細書で使用するとき、用語「正味電荷」は、分子中に存在するすべての電荷の合計として定義される。親タンパク質分子の「正味電荷を変化」させることで、親分子とは異なる正味電荷を有する変異体が得られる（すなわち、変異体は親分子と同一ではない正味電荷を有する）。例えば、中性のアミノ酸を負に帯電しているアミノ酸により置換するか、又は正に帯電しているアミノ酸を中性のアミノ酸により置換することで、親分子に対して正味電荷が−１になる。正に帯電しているアミノ酸を負に帯電しているアミノ酸により置換することで、親分子に対して正味電荷が−２になる。中性のアミノ酸を正に帯電しているアミノ酸により置換するか、又は負に帯電しているアミノ酸を中性のアミノ酸により置換することで、親分子に対して正味電荷が＋１になる。負に帯電しているアミノ酸を正に帯電しているアミノ酸により置換することで、親分子に対して正味電荷が＋２になる。親タンパク質の正味電荷は、帯電しているアミノ酸の欠失及び／又は挿入によっても変更され得る。
【０１７１】
用語「熱的に安定な」及び「熱安定」及び「熱安定性」は、変更された温度に曝露する際、タンパク質分解、加水分解、クリーニング、又は本発明の他のプロセスで一般的に適用される条件下で、所定の時間にわたって所定の温度に曝露した後でも、プロテアーゼが所定の酵素活性を保持していることを意味する。「変更された温度」には、温度の上昇又は減少を包含する。一部の実施形態では、プロテアーゼは、例えば、変更された温度に少なくとも約６０分、約１２０分、約１８０分、約２４０分、約３００分などの所定の時間にわたって曝露した後に、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９２％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％のタンパク質分解活性を保持する。
【０１７２】
酸化安定性、キレート化安定性、熱安定性及び／又はｐＨ安定性のプロテアーゼに関する文脈において、用語「安定性の増加」は、他のプロテアーゼ（例えば、サブチリシンプロテアーゼ）及び／又は野生型酵素と比較した場合に、一定時間経過後のタンパク質分解活性がより高く維持されていることを意味する。
【０１７３】
酸化安定性、キレート化安定性、熱安定性及び／又はｐＨ安定性のプロテアーゼに関する文脈において、用語「安定性の減少」は、他のプロテアーゼ（例えば、サブチリシンプロテアーゼ）及び／又は野生型酵素と比較した場合に、一定時間経過後のタンパク質分解活性がより低く維持されていることを意味する。
【０１７４】
用語「クリーニング活性」は、タンパク質分解、加水分解、クリーニング、又は他の本発明のプロセス時に一般的に適用される条件下で、変異体プロテアーゼ又は参照プロテアーゼにより得られるクリーニング性能を指す。一部の実施形態では、物品又は表面上の、１種以上の様々な酵素反応性の染み（例えば、食物、草類、血液、インク、牛乳、油及び／又は卵タンパク質など）をクリーニングする、様々なアッセイを用いることで、変異体プロテアーゼ又は参照プロテアーゼのクリーニング性能を判定することもできる。プロテアーゼ変異体又は参照プロテアーゼのクリーニング性能は、物品又は表面上の染みを標準的な洗浄条件に晒し、及び染みが除去される程度を、様々なクロマトグラフィー、分光光度法、又はその他の定量法を用い評価することで判定できる。例示的なクリーニングアッセイ及び方法は当該技術分野において既知であり、かつ限定するものではないが、例えば、国際公開第９９／３４０１１号及び米国特許第６，６０５，４５８号（いずれも本明細書に参照により組み込まれる）に記載のもの、並びに本発明の以下に提供される実施例に包含されるクリーニングアッセイ及び方法が挙げられる。
【０１７５】
用語、変異体プロテアーゼ又は参照プロテアーゼの「クリーニングに有効な量」は、特定のクリーニング組成物中で、所望される程度の酵素活性を達成するプロテアーゼ量を意味する。このような有効量は、当業者により容易に確認され、及び使用される具体的なプロテアーゼ、クリーニング用途、クリーニング組成物の具体的な組成、及び必要とされる組成物が液体又は乾燥形態（例えば、顆粒型、錠剤型、バー型）のいずれであるのか、などの多くの要因に基づくものである。
【０１７６】
用語「クリーニング助剤」は、クリーニング組成物に含まれる、本発明の変異体プロテアーゼ以外の任意の液体、固体、又はガス状の成分を指す。一部の実施形態では、本発明のクリーニング組成物は、１種以上のクリーニング助剤を含む。各クリーニング助剤は、典型的には、クリーニング組成物の具体的な種類及び形態（例えば、液体、顆粒、粉末、バー、ペースト、スプレー、錠剤、ゲル、フォーム、又はその他の組成物）に基づいて選択される。好ましくは、各クリーニング助剤は、組成物に使用されるプロテアーゼ酵素と適合性がある。
【０１７７】
用語「性能が増感された」は、クリーニング活性の文脈において、標準的な洗浄サイクル及び／又は複数回洗浄サイクル後に通常の評価により判定された場合に、卵、牛乳、草類、インク、油、及び／又は血液などの特定の酵素反応性の染みの酵素によるクリーニング活性が増加又は増強されていることを指す。
【０１７８】
用語「性能が減感された」は、クリーニング活性の文脈において、標準的な洗浄サイクル後に通常の評価により判定された場合に、卵、牛乳、草類又は血液などの特定の酵素反応性の染みの酵素によるクリーニング活性が減少又は低下していることを指す。
【０１７９】
本発明の変異体プロテアーゼのクリーニング活性に関する文脈において、用語「匹敵する性能」は、比較又は参照プロテアーゼ（例えば、市販のプロテアーゼ）例えば、限定するものではないが、ＯＰＴＩＭＡＳＥ（商標）プロテアーゼ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（商標）プロテアーゼ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（商標）プロテアーゼ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）、ＢＰＮ’変異体（例えば、米国再発行特許第３４，６０６号を参照されたい）、ＲＥＬＡＳＥ（商標）、ＤＵＲＡＺＹＭＥ（商標）、ＥＶＥＲＬＡＳＥ（商標）、ＫＡＮＮＡＳＥ（商標）プロテアーゼ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）、ＭＡＸＡＣＡＬ（商標）、ＭＡＸＡＰＥＭ（商標）、ＰＲＯＰＥＲＡＳＥ（商標）プロテアーゼ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ；同様に米国再発行特許第３４，６０６号及び米国特許第５，７００，６７６号；同第５，９５５，３４０号；同第６，３１２，９３６号；及び同第６，４８２，６２８号を参照されたい）、並びにＢ．レンタス変異体プロテアーゼ（例えば、国際公開第９２／２１７６０号、国際公開第９５／２３２２１号、及び／又は国際公開第９７／０７７７０号に記載のもの）などのクリーニング活性の少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％の性能を指す。クリーニング性能は、標準的な洗浄サイクル条件後に、通常の分光光度法による又は解析論的な手法を用いて測定する場合、草類、血液、インク、油、及び／又は牛乳などの酵素反応性の染みを対象とする様々なクリーニングアッセイにおいて、本発明の変異体プロテアーゼを参照サブチリシンプロテアーゼと比較することで判定することができる。
【０１８０】
本明細書で使用するとき、用語「消費者製品」は、布地ケア製品及びホームケア製品を意味する。本明細書で使用するとき、用語「布地ケア製品及びホームケア製品」又は「布地及び家事ケア製品」は、非生物表面のケア及びクリーニングに関するすべてのクリーニング系、並びに布地コンディショナー製品（具体的には、布地のケア及び維持用に設計された製品）及び他の製品、並びにエアケア製品、例えば：エアフレッシュナー及び香料送達系などのエアケア製品、カーケア、ペットケア、家畜ケア、パーソナルケア、ジュエリーケア、食器洗浄、布地コンディショニング（柔軟化及び／又はフレッシュニングなど）、洗濯洗剤、洗濯助剤及びすすぎ助剤及び／又はケア剤、前処理クリーニング組成物、硬質表面クリーニング及び／又はトリートメント剤、例えば、床及び便器用クリーナー、ガラスクリーナー及び／又はトリートメント剤、タイルクリーナー及び／又はトリートメント剤、セラミッククリーナー及び／又はトリートメント剤、並びに消費者若しくは組織用の他のクリーニング剤などの、販売される形態で使用すること、すなわち消費することが一般的に意図される、布地、硬質表面及び任意の他の表面を処理するための製品が挙げられる。一部の実施形態では、布地ケア製品及びホームケア製品は、創部及び／又は皮膚への使用に好適である。「布地ケア製品及びホームケア製品」としては、消費者製品及び施設用品が挙げられる。
【０１８１】
本明細書で使用するとき、用語「非布地ケア製品及びホームケア製品」は、他の組成物に添加することで、布地ケア製品及びホームケア製品などの最終製品を調製し得る組成物を指す。
【０１８２】
本明細書で使用するとき、用語「業者用クリーニング組成物」は、限定するものではないが学校、病院、工場、商店、企業、建造物、飲食店、総合オフィスビル、加工及び／又は製造プラント、動物病院、畜産場、大牧場などの業者による使用に好適な製品を指す。
【０１８３】
本明細書で使用するとき、用語「クリーニング及び／又はトリートメント組成物」は、別途記載のない限り、物品のクリーニング及び／又はトリートメントに好適な組成物などが挙げられる、布地ケア製品及びホームケア製品に属する組成物である。このような製品としては、限定するものではないが、布地、硬質面並びに布地ケア及びホームケアの領域の任意の他の表面処理用の製品（例えば、エアフレッシュナー及び香り送達系などの空気ケア、車ケア、食器洗浄、布地コンディショニング（柔軟化及び／又はフレッシュニングが挙げられる）、洗濯洗浄、洗濯時及びすすぎ時添加剤及び／又はケア剤、硬質表面洗浄及び／又は処理剤、（床及び便器クリーナー）、顆粒又は粉末形態の多目的又は「強力」洗浄剤、特にクリーニング用洗剤、液体、ゲル、又はペースト形態の多目的洗浄剤、特にいわゆる強力液体型、おしゃれ着用液体洗剤、食器手洗い用洗剤又は中性食器洗浄剤、特に高起泡型のもの、食洗機用食器洗浄剤（家庭用及び業務用の、様々な錠剤型、粒剤型、液剤型及びすすぎ助剤型洗浄剤）：車又はカーペット洗浄剤、便器クリーナーを含む風呂場クリーナー、並びにクリーニング助剤（漂白剤及び「染み抜きスティック」又は前処理型、又は乾燥機用シートなどの、基材に負担をかける製品（substrate-laden product））が挙げられる。
【０１８４】
実際に、本明細書で使用するとき、本発明の「クリーニング組成物」又は「クリーニング配合物」は、クリーニングされる対象物、物品、又は表面、例えば、限定するものではないが、布地、布製物品、食器類、食卓用食器類、ガラス製品、コンタクトレンズ、他の固体基材、毛髪（シャンプー）（人又は動物の毛を包含する）、皮膚（石鹸又は／及びクリーム）、歯（マウスウォッシュ、歯磨き粉）、物品又は物体表面（例えば、テーブル、卓上、壁、家具、床、天井、非食器類、非食卓用食器類などの硬質表面）、フィルタ、膜（例えば、限定するものではないが、限外濾過膜などの濾過膜）などから化合物（例えば、望ましくない化合物）を除去又は消去するのに有用な本発明の任意の組成物を指す。クリーニング組成物は、その組成が、組成物に使用されるプロテアーゼ及び他の酵素と適合し得るものであれば、所望されるクリーニング組成物の具体的な種類及び製品形態（例えば、液体組成物、ゲル組成物、顆粒組成物、スプレー組成物、又はその他の組成物）に即して選択される任意の成分及び／又は添加化合物を包含する。クリーニング組成物の成分の具体的な選別は、クリーニングされる表面、物体、物品、又は布地を考慮することにより、及び使用時のクリーニング条件に所望される組成物の形態を考慮することにより、容易に行われる。
【０１８５】
クリーニング組成物及びクリーニング配合物は、任意の物体、物品、及び／又は表面をクリーニング、漂白、消毒、及び／又は殺菌するのに好適な任意の組成からなる。このような組成物及び配合物としては、限定するものではないが、例えば、クリーニング又は洗剤組成物（例えば、液体、錠剤、ゲル、顆粒、及び／又は固体洗濯洗浄又は洗剤組成物及びおしゃれ着用洗剤組成物など）；硬質表面クリーニング組成物及び配合物（例えば、ガラス、木、セラミック及び金属製のカウンター及び窓）；カーペットクリーナー；オーブンクリーナー；布地フレッシュナー；布地柔軟剤；及び繊維製品、洗濯用洗浄性能増進クリーニング又は洗剤組成物、洗濯用添加型クリーニング組成物、及び洗濯物の染み抜き用クリーニング組成物；食器手洗い用又は食器手動洗浄用組成物（例えば、食器「手洗い」用又は食器「手動」洗浄用の洗剤）及び食器自動洗浄用組成物（例えば、「食器自動洗浄機用の洗剤」）を包含する食器洗浄用組成物が挙げられる。
【０１８６】
本明細書で使用するとき、クリーニング組成物又はクリーニング配合物としては、別途記載のない限り、顆粒型又は粉末型汎用又は強力洗浄剤、特に、クリーニング洗剤；液体型、顆粒型、ゲル型、固形、錠剤型又はペースト型汎用洗浄剤、特にいわゆる強力液体（ＨＤＬ）洗剤又は強力粉末洗剤（ＨＤＤ）型；液体リネン洗剤；高起泡型のものを含む食器手洗い又は食器手洗浄剤；食器手洗い又は食器手洗浄、食器自動洗浄、又は家事用及び業務用の様々な錠剤型、粉末型、固形、顆粒型、液体型、ゲル型及びすすぎ助剤型の食器類若しくは食卓用食器類洗浄剤；抗菌手洗浄型のもの、クリーニングバー、マウスウォッシュ、義歯クリーナー、カーシャンプー、カーペットシャンプー、風呂場クリーナーなどの液体クリーニング及び消毒剤；人間及び他の動物用毛髪用シャンプー及び／又は毛髪リンス；シャワージェル及びバブルバス及び金属クリーナー；加えて漂白添加剤及び「染み抜き剤」又は前処理型ののクリーニング助剤；が挙げられる。一部の実施形態では、顆粒状組成物は「コンパクト」形態であり；一部の実施形態では、液体組成物は「濃縮された」形態である。
【０１８７】
本明細書で使用するとき、「布地クリーニング組成物」としては、洗濯用助剤組成物などの手洗い用及び自動洗濯機用洗剤組成物、並びに染みの付いた布地（例えば、衣類、下着、及び他の繊維製品）の浸け置き及び／又は前処理に使用するのに好適な組成物が挙げられる。
【０１８８】
本明細書で使用するとき、「非布地クリーニング組成物」としては、限定するものではないが、例えば、食器手洗い用若しくは食器手動洗浄用又は自動食器洗浄機用洗剤組成物、口腔洗浄用組成物、義歯洗浄用組成物、及びパーソナルクレンジング組成物などの、非織物（すなわち、非布地）表面用のクリーニング組成物が挙げられる。
【０１８９】
本明細書で使用するとき、用語「布地及び／若しくは硬質表面洗浄及び／又は処理組成物」は、別途記載のない限り、顆粒又は粉末状の多目的すなわち「強力」洗浄剤、特にクリーニング用洗剤、液体、ゲル、又はペースト形態の多目的洗浄剤、特にいわゆる強力液体型、おしゃれ着用液体洗剤、食器手洗い用洗浄剤又は中性食器洗浄剤、特に高起泡型のもの、家庭用及び業務用の各種の錠剤型、粒剤型、液剤型、及びすすぎ補助剤型を含む食洗機用洗剤、液体洗浄剤及び殺菌剤、車又はカーペット洗浄剤、便器クリーナーを含む浴室クリーナー、液体、固体、及び／又は乾燥機用シート形態であり得る柔軟化及び／又はフレッシュニングを含む布地コンディショニング製品、並びにクリーニング助剤（漂白剤及び「染み抜きスティック」又は前処理型、又は乾燥機用シート（dryer added sheet）などの、基材に負担をかける製品（substrate-laden product））が挙げられる洗浄及び処理組成物の部分集合である。適用可能であるこのような製品のすべては、標準形態又は濃縮形態であり得、又は特定の態様では、このような製品は、更には非水性であり得る程度に高濃縮された形態であり得る。
【０１９０】
本明細書で使用するとき、用語「洗剤組成物」又は「洗剤配合物」は、特定の布地及び／又は非布地製の物体又は物品などの汚れた又は泥のついた物体のための、洗浄媒質に使用することが意図される、組成物を参照する際に使用される。本発明のこのような組成物は、任意の特定の洗剤組成物又は洗剤配合物に限定されない。実際に、一部の実施形態では、本発明の洗剤は少なくとも１種の本発明の変異体プロテアーゼに加え、界面活性剤、転移酵素、加水分解酵素、酸化還元酵素、ビルダー（例えば、ビルダー塩など）、漂白剤、漂白活性化剤、ブルーイング剤、蛍光染料、ケーキング防止剤、マスキング剤、酵素活性化剤、抗酸化物質、及び／又は可溶化剤を１種以上含有する。場合によっては、ビルダー塩はケイ酸塩とリン酸塩の混合物であり、好ましくはケイ酸塩（例えば、メタケイ酸ナトリウム）をリン酸塩（例えば、トリポリリン酸ナトリウム）よりも多く含む。例えば、限定するものではないが、クリーニング組成物又は洗剤組成物などの、本発明の一部の組成物は、リン酸塩（例えば、リン酸塩又はリン酸塩ビルダー）を含まない。
【０１９１】
本明細書で使用するとき、用語「漂白」は、充分な時間にわたる並びに／あるいは適切なｐＨ下での並びに／あるいは増白（すなわち、ホワイトニング）及び／又は物質のクリーニングに効果的な温度条件下での物質（例えば、布地、洗濯物、パルプなど）又は表面の処理を指す。漂白に好適な化学物質の例としては、限定するものではないが、例えば、ＣｌＯ２、Ｈ２Ｏ２、過酸、ＮＯ２、などが挙げられる。
【０１９２】
本明細書で使用するとき、プロテアーゼ（例えば、変異体プロテアーゼ）の「洗浄性能」は、変異体プロテアーゼが、組成に変異体プロテアーゼを加えていない洗剤と比較して、追加のクリーニング性能を洗剤に提供するよう、洗浄に貢献することを指す。洗浄性能は、関連する洗浄条件下で比較される。一部の試験系では、洗剤組成物、泡濃度、水硬度、洗浄機構、時間、ｐＨ、及び／又は温度などの他の関連する要因を、特定の市場区分における典型的な家事用途の条件（例えば、食器手洗い又は食器手動洗浄、食器自動洗浄、食器クリーニング、食卓用食器類クリーニング、及び布地クリーニングなど）に限定されるような様式に調節することもできる。
【０１９３】
本明細書で使用するとき、用語「関連する洗浄条件」は、実際に、食器手洗い、自動食器洗浄、又は洗濯洗剤市場区分に含まれる家事で使用される、特に、洗浄温度、時間、洗浄機構、泡濃度、洗剤及び水硬度の型などの条件を意味する。
【０１９４】
用語「改良された洗浄性能」は、関連する洗浄条件下で、染み除去において、より良好な仕上がり結果が得られること、あるいは対応する野生型又は開始親プロテアーゼと比較して同様の仕上がり結果を得るにあたり必要とされる変異体プロテアーゼが重量ベースでより少量になることを意味して使用される。
【０１９５】
本明細書で使用するとき、用語「消毒」は、表面から汚染物を除去すること、並びに物品表面上に存在する微生物を抑制又は殺傷することを指す。本発明は、任意の特定の表面、物品、又は除去される汚染物若しくは微生物に限定されることを意図しない。
【０１９６】
本明細書では、「コンパクト」形態のクリーニング組成物は、最も密度により反映されるものであり、組成の点で言えば無機充填剤の量が反映される。無機充填剤塩は、粉末形態の洗剤組成物において一般的な成分である。一般的な洗剤組成物では、充填剤塩は、典型的には組成物の合計量の約１７〜約３５重量％相当の量で存在する。対照的に、コンパクト組成物では、充填剤塩は、組成物の合計量の約１５重量％以下の量で存在する。一部の実施形態では、充填剤塩は、組成物の約１０重量％以下、より好ましくは約５％重量以下の量で存在する。一部の実施形態では、無機充填剤塩は、硫酸及び塩酸の、アルカリ塩及びアルカリ土類金属塩から選択される。一部の実施形態では、充填剤塩は硫酸ナトリウムである。
【０１９７】
所定のアミノ酸配列中のアミノ酸残基の位置は、典型的には、本明細書において、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’アミノ酸配列の、対応するアミノ酸残基の位置に対して割り振られた番号を使用して、番号付けされる。したがって、配列番号１の、Ｂ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列は、参照配列として提供される。本明細書に記載される変異体プロテアーゼのアミノ酸配列などの、所与のアミノ酸配列を、本明細書に記載されるような整列アルゴリズムを使用してＢＰＮ’配列（配列番号１）と整列させることができ、及びサブチリシンＢＰＮ’配列中の対応するアミノ酸残基を参照することで、ＢＰＮ’配列中のアミノ酸残基と整列させた（好ましくは部分的に整列させた）所与のアミノ酸配列中のアミノ酸残基を都合よく番号付けすることができる。あるいは、サブチリシンの変異体プロテアーゼの配列のアミノ酸残基の位置が、ＧＧ３６アミノ酸配列（配列番号２）中のアミノ酸残基の位置に実際に割り振られた番号を使用して番号付けされ、整列時のＢＰＮ’配列の対応するアミノ酸位置は参照されない場合、サブチリシンの変異体プロテアーゼは、配列番号２で示されるプロテアーゼＧＧ３６のプロテアーゼ変異体として記載することができる。
【０１９８】
概して、本明細書で使用する命名法、並びに以下に記載される細胞培養、分子遺伝学、分子生物学、核酸化学、及びタンパク質化学的な実験手順の多くは周知のものであり、当業者により一般的に採用される。組み換え核酸の製造及び操作法、核酸合成法、細胞培養法、及び導入遺伝子の組み込み法（例えば、形質移入、電気穿孔法）は当業者に既知のものであり、様々な一般的な文献に記載されている。オリゴヌクレオチドの合成工程及び精製工程は、典型的には本明細書に従って実施される。概して技術及び手順は、当業者に周知の従来法、並びに本文書を通して提供される様々な一般参照に従って実施される。それらの手順は当業者に周知のものであると考えることができ、読み手には便宜のため提供される。
【０１９９】
本発明のポリペプチド
本発明は、総じて「本発明のポリペプチド」として参照することのできる新規ポリペプチドを提供する。本発明のポリペプチドとしては、単離された変異体プロテアーゼのポリペプチド、変異体プロテアーゼの組み換えポリペプチド、実質的に純粋な変異体プロテアーゼのポリペプチド又は非天然に生じる変異体プロテアーゼのポリペプチドが包含され、例えば、酵素活性（例えば、タンパク質分解活性）を有する変異体サブチリシンのポリペプチドが包含される。一部の実施形態では、本発明のポリペプチドは、クリーニング用途に有用であり、クリーニングされる必要のある物品又は表面（例えば、物品表面）のクリーニング方法に有用なクリーニング組成物に組み込むことができる。
【０２００】
一部の実施形態では、本発明の変異体プロテアーゼには、「変異体サブチリシン」が含まれる。一部の実施形態では、本発明は、「バチルス種（Bacillus sp.）の変異体プロテアーゼ」を提供する。一部の実施形態では、本発明は、「バチルス種のサブチリシン変異体」を提供する。
【０２０１】
一部の実施形態では、本発明は、タンパク質分解活性を有する、単離された変異体プロテアーゼ、変異体プロテアーゼの組み換え体、実質的に純粋な変異体プロテアーゼ、又は非天然に生じる変異体プロテアーゼであり、ポリペプチドは、本明細書で提供される変異体プロテアーゼをコードするアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、又は１００％の配列同一性を有するポリペプチド配列からなる。
【０２０２】
上記のように、本発明の変異体プロテアーゼのポリペプチドは酵素活性（例えば、タンパク質分解活性など）を有し、ひいては、例えば、限定するものではないが、食器類、食卓用食器類、布地、及び硬質表面を有する物品（例えば、テーブル、卓上、壁、家具、床、天井などの硬質表面）などのクリーニングに関する方法などといった、クリーニング用途に有用である。例示的なクリーニング組成物は、以下に記載される本発明の変異体プロテアーゼのポリペプチドを１種以上含む。本発明の変異体プロテアーゼのポリペプチドの酵素活性（例えば、プロテアーゼ活性）は、当業者に周知の手順を用い、容易に判定することができる。以下に記載される実施例は、酵素活性、クリーニング性能、及び／又は洗浄性能を評価するための方法を記載する。染み除去（例えばタンパク質性の染みなどの除去）、硬質表面のクリーニング、又は洗濯物、食器類又は食卓用食器類のクリーニング時の本発明の変異体プロテアーゼの性能は、当業者に周知の手法を用い、及び／又は実施例に記載される手法を用い容易に測定することができる。
【０２０３】
本発明のポリペプチドには、１箇所以上での保存的又は非保存的なアミノ酸の挿入、欠失、及び／又は置換などといった様々な変更を、例えば、ポリペプチドの酵素活性を実質的に変えないような場所ならばどこにでも加えることができる。同様に、本発明の核酸には、特定のコドンが同一の又は異なるアミノ酸をコードするように、１箇所以上で、１つ以上のコドンに含まれる１つ以上の核酸を置換して、サイレントな変化（例えば、コードされるアミノ酸が変異核酸により変更されなかった場合、ヌクレオチド配列中の変異はアミノ酸配列中にサイレント変異を生じる）を生じさせるよう、あるいは配列中の１つ以上の核酸（又はコドン）を１箇所以上で欠失させて、配列中に１つ以上の核酸（又はコドン）を付加又は挿入して、及び／又は配列中の１つ以上の核酸（又はコドン）を切断又は１箇所以上でトランケーションさせて、サイレントではない変化を生じさせるよう、複数の変化を加えることもできる。核酸配列における多くのこのような変更は、得られる配列にコードされる変異体プロテアーゼの酵素活性を、元の核酸配列によりコードされている変異体プロテアーゼのものと比較して実質的に変化させなくてよい。同様に、発現系（例えば、細菌による発現系）で最適な発現をもたらすコドンが１つ以上包含されるように、必要に応じて、上記１つ以上のコドンには同一のアミノ酸をコードさせたまま、本発明の核酸を改変させてもよい。
【０２０４】
一部の実施形態では、本発明は、所望の酵素活性（例えば、プロテアーゼ活性又はクリーニング性能活性）を有する変異体プロテアーゼポリペプチドに属するポリペプチドを提供し、ポリペプチドは本明細書に記載されるアミノ酸置換を有する配列からなり、かつ保存的及び非保存的置換などのような更なるアミノ酸置換も１箇所以上に含み、ポリペプチドは所望の酵素活性（例えば、クリーニング活性又は変異体プロテアーゼの性能に反映されるようなプロテアーゼ活性又はサブチリシン活性）を示し、維持し、又はおよそ維持する。本発明に従うアミノ酸置換には、限定するものではないが、１箇所以上での非保存的置換及び／又は１箇所以上での保存的なアミノ酸置換が包含され得る。保存的なアミノ酸残基置換は、典型的には、アミノ酸残基の機能分類に含まれるアミノ酸を、同様の機能分類（同一のアミノ酸残基は、機能的に相同であるとみなされ、すなわち算出された機能的相同性％で保存されている）に属する残基と交換することを包含する。保存的なアミノ酸置換は、典型的には、機能的に類似するアミノ酸によるアミノ酸置換をアミノ酸配列中に包含する。例えば、アラニン、グリシン、セリン、及びトレオニンは機能的に類似するものであり、ひいては互いに保存的なアミノ酸置換を提供し得る。アスパラギン酸及びグルタミン酸は、互いに保存的な置換を提供し得る。アスパラギン及びグルタミンは、互いに保存的な置換を提供し得る。アルギニン、リシン、及びヒスチジンは、互いに保存的な置換を提供し得る。イソロイシン、ロイシン、メチオニン、及びバリンは、互いに保存的な置換を提供し得る。フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンは、互いに保存的な置換を提供し得る。
【０２０５】
他の保存的なアミノ酸置換基も想定され得る。例えば、アミノ酸は、機能類似性又は化学構造若しくは組成（例えば、酸性、塩基性、脂肪族、芳香族、イオウ含有）により分類することができる。例えば、脂肪族基には、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）が包含される。互いに保存的な置換であるとみなされるアミノ酸を含有する他の基には：芳香族：フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；イオウ含有：メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）；塩基性：アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）、ヒスチジン（Ｈ）；酸性：アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；非極性無電荷残基、システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）、及びプロリン（Ｐ）；親水性の無電荷残基：セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）、及びグルタミン（Ｑ）が包含される。アミノ酸のその他の分類も当業者に周知であり、様々な一般的な文献に記載されている。上記の置換基と共に、本明細書においてポリペプチド配列を列挙することで、保存的に置換されたすべてのポリペプチド配列の一覧を提供する。
【０２０６】
上記の部類のアミノ酸残基には、同様に好適であり、あるいは好適であり得るより保存的な置換が存在する。より保存的な置換のための保存的な基としては：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、及びアスパラギン−グルタミンが挙げられる。したがって、例えば一部の実施形態では、本発明は、タンパク質分解活性を有する、単離された、又は変異体プロテアーゼの組み換えポリペプチド（例えば、サブチリシン変異体）を提供し、上記変異体プロテアーゼのポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９．５％の配列相同性を有するアミノ酸配列からなる。本発明の変異体プロテアーゼにおける、他のアミノ酸によるアミノ酸の保存的な置換は、変異体プロテアーゼの酵素活性又はクリーニング性能活性を有意に変更させることを見込むものではない。得られるプロテアーゼの酵素活性又はクリーニング性能活性は、標準的なアッセイ及び本明細書に記載されるアッセイを用い、容易に測定することができる。
【０２０７】
本発明の、ポリペプチド配列が保存的に置換された変異体（例えば、本発明の変異体プロテアーゼ）は、同様の保存的な置換基の保存的に選択されたアミノ酸による、割合の低い置換を、しばしば、ポリペプチド配列のアミノ酸のうちの約２５％、約２０％、約１５％、約１４％、約１３％、約１２％、約１１％、約１０％、約９％、約８％、約７％、又は約６％未満が、又はポリペプチド配列のアミノ酸のうちの約５％、約４％、約３％、約２％、又は約１％未満の置換を含有する。
【０２０８】
本明細書内の他の箇所で詳細に記載されるように、及び本明細書で提供される実施例に記載されるように、本発明のポリペプチドは、既知のサブチリシンを含む既知のプロテアーゼに匹敵し得るクリーニング能力を有し得る。例示的な既知のサブチリシンプロテアーゼとしては、限定するものではないが、例えば、Ｂ．レンタスのサブチリシンＧＧ３６、Ｂ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’、Ｂ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’−Ｙ２１７Ｌ、及びＢ．クラウシイＰＢ９２が挙げられる。Ｂ．レンタスのサブチリシンＧＧ３６の成熟タンパク質のアミノ酸配列は：
ＡＱＳＶＰＷＧＩＳＲＶＱＡＰＡＡＨＮＲＧＬＴＧＳＧＶＫＶＡＶＬＤＴＧＩＳＴＨＰＤＬＮＩＲＧＧＡＳＦＶＰＧＥＰＳＴＱＤＧＮＧＨＧＴＨＶＡＧＴＩＡＡＬＮＮＳＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＥＬＹＡＶＫＶＬＧＡＳＧＳＧＳＶＳＳＩＡＱＧＬＥＷＡＧＮＮＧＭＨＶＡＮＬＳＬＧＳＰＳＰＳＡＴＬＥＱＡＶＮＳＡＴＳＲＧＶＬＶＶＡＡＳＧＮＳＧＡＧＳＩＳＹＰＡＲＹＡＮＡＭＡＶＧＡＴＤＱＮＮＮＲＡＳＦＳＱＹＧＡＧＬＤＩＶＡＰＧＶＮＶＱＳＴＹＰＧＳＴＹＡＳＬＮＧＴＳＭＡＴＰＨＶＡＧＡＡＡＬＶＫＱＫＮＰＳＷＳＮＶＱＩＲＮＨＬＫＮＴＡＴＳＬＧＳＴＮＬＹＧＳＧＬＶＮＡＥＡＡＴＲ（配列番号２）である。
【０２０９】
Ｂ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’の成熟タンパク質のアミノ酸配列は：
ＡＱＳＶＰＹＧＶＳＱＩＫＡＰＡＬＨＳＱＧＹＴＧＳＮＶＫＶＡＶＩＤＳＧＩＤＳＳＨＰＤＬＫＶＡＧＧＡＳＭＶＰＳＥＴＮＰＦＱＤＮＮＳＨＧＴＨＶＡＧＴＶＡＡＬＮＮＳＩＧＶＬＧＶＡＰＳＡＳＬＹＡＶＫＶＬＧＡＤＧＳＧＱＹＳＷＩＩＮＧＩＥＷＡＩＡＮＮＭＤＶＩＮＭＳＬＧＧＰＳＧＳＡＡＬＫＡＡＶＤＫＡＶＡＳＧＶＶＶＶＡＡＡＧＮＥＧＴＳＧＳＳＳＴＶＧＹＰＧＫＹＰＳＶＩＡＶＧＡＶＤＳＳＮＱＲＡＳＦＳＳＶＧＰＥＬＤＶＭＡＰＧＶＳＩＱＳＴＬＰＧＮＫＹＧＡＹＮＧＴＳＭＡＳＰＨＶＡＧＡＡＡＬＩＬＳＫＨＰＮＷＴＮＴＱＶＲＳＳＬＥＮＴＴＴＫＬＧＤＳＦＹＹＧＫＧＬＩＮＶＱＡＡＡＱ（配列番号１）である。
【０２１０】
本発明は、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１Ｒ、Ｘ２Ｗ、Ｘ２Ｍ、Ｘ２Ｒ、Ｘ２Ａ、Ｘ２Ｓ、Ｘ３Ｒ、Ｘ４Ｒ、Ｘ４Ｃ、Ｘ４Ｓ、Ｘ８Ａ、Ｘ９Ｆ、Ｘ９Ｗ、Ｘ９Ａ、Ｘ１０Ｓ、Ｘ１０Ｍ、Ｘ１０Ｈ、Ｘ１０Ａ、Ｘ１２Ｒ、Ｘ１２Ｆ、Ｘ１４Ｋ、Ｘ１４Ｆ、Ｘ１４Ｑ、Ｘ１５Ｒ、Ｘ１５Ｆ、Ｘ１６Ｓ、Ｘ１７Ｒ、Ｘ１７Ｍ、Ｘ１７Ｆ、Ｘ１８Ｒ、Ｘ１８Ｋ、Ｘ２０Ｆ、Ｘ２０Ｒ、Ｘ２０Ｋ、Ｘ２２Ｙ、Ｘ２２Ａ、Ｘ２２Ｒ、Ｘ２２Ｖ、Ｘ２２Ｑ、Ｘ２２Ｗ、Ｘ２２Ｌ、Ｘ２３Ｆ、Ｘ２３Ｓ、Ｘ２３Ａ、Ｘ２４Ｗ、Ｘ２４Ｒ、Ｘ２４Ｈ、Ｘ２４Ｆ、Ｘ２４Ｑ、Ｘ２４Ｌ、Ｘ２５Ｖ、Ｘ２５Ｆ、Ｘ２５Ｒ、Ｘ２６Ｆ、Ｘ２７Ｖ、Ｘ２７Ｆ、Ｘ２７Ｌ、Ｘ２７Ｒ、Ｘ２８Ｎ、Ｘ２８Ｅ、Ｘ２８Ａ、Ｘ２９Ｔ、Ｘ３０Ｅ、Ｘ３１Ｆ、Ｘ３３Ｄ、Ｘ３３Ｇ、Ｘ３３Ｓ、Ｘ３４Ｐ、Ｘ３５Ｍ、Ｘ３６Ｆ、Ｘ３６Ｒ、Ｘ３６Ｔ、Ｘ３８Ｌ、Ｘ３８Ｆ、Ｘ３８Ｒ、Ｘ４０Ｌ、Ｘ４０Ｗ、Ｘ４０Ｎ、Ｘ４０Ｒ、Ｘ４０Ｔ、Ｘ４０Ｈ、Ｘ４２Ｉ、Ｘ４３Ｄ、Ｘ４３Ｉ、Ｘ４３Ｒ、Ｘ４３Ｍ、Ｘ４３Ｆ、Ｘ４３Ｗ、Ｘ４３Ｓ、Ｘ４３Ａ、Ｘ４５Ｔ、Ｘ４６Ｒ、Ｘ４８Ｒ、Ｘ５０Ｃ、Ｘ５１Ｈ、Ｘ５１Ｗ、Ｘ５１Ｆ、Ｘ５２Ｆ、Ｘ５２Ｅ、Ｘ５２Ｎ、Ｘ５５Ｙ、Ｘ５７Ｒ、Ｘ５９Ｒ、Ｘ５９Ａ、Ｘ５９Ｆ、Ｘ６０Ａ、Ｘ６０Ｑ、Ｘ６０Ｐ、Ｘ６２Ｅ、Ｘ６２Ｑ、Ｘ６３Ｉ、Ｘ６３Ｖ、Ｘ６３Ｔ、Ｘ６３Ｐ、Ｘ６３Ｄ、Ｘ６３Ｍ、Ｘ６３Ｈ、Ｘ６３Ｑ、Ｘ６３Ｅ、Ｘ６３Ａ、Ｘ６３Ｓ、Ｘ６４Ｆ、Ｘ６４Ｔ、Ｘ６８Ｃ、Ｘ６８Ａ、Ｘ６９Ｎ、Ｘ６９Ｐ、Ｘ６９Ｗ、Ｘ６９Ｔ、Ｘ７１Ｇ、Ｘ７２Ｃ、Ｘ７４Ｃ、Ｘ７５Ｆ、Ｘ７５Ａ、Ｘ７５Ｒ、Ｘ７５Ｅ、Ｘ７６Ｄ、Ｘ７８Ｉ、Ｘ７８Ｒ、Ｘ７８Ｎ、Ｘ７９Ｗ、Ｘ７９Ｑ、Ｘ８１Ｒ、Ｘ８２Ｖ、Ｘ８２Ｔ、Ｘ８２Ｆ、Ｘ８２Ｍ、Ｘ８２Ｒ、Ｘ８５Ｍ、Ｘ８６Ｌ、Ｘ８６Ｉ、Ｘ８６Ｗ、Ｘ８９Ｐ、Ｘ８９Ｔ、Ｘ８９Ｖ、Ｘ８９Ｇ、Ｘ８９Ｗ、Ｘ８９Ｈ、Ｘ８９Ｆ、Ｘ８９Ｌ、Ｘ８９Ｉ、Ｘ９１Ｎ、Ｘ９１Ｆ、Ｘ９２Ｆ、Ｘ９４Ｎ、Ｘ９９Ｇ、Ｘ９９Ｆ、Ｘ９９Ｍ、Ｘ９９Ｔ、Ｘ９９Ｐ、Ｘ１００Ｉ、Ｘ１００Ｓ、Ｘ１００Ｎ、Ｘ１００Ｑ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１０１Ａ、Ｘ１０１Ｇ、Ｘ１０１Ｐ、Ｘ１０１Ｆ、Ｘ１０１Ｅ、Ｘ１０１Ｔ、Ｘ１０１Ｄ、Ｘ１０２Ｈ、Ｘ１０２Ｎ、Ｘ１０２Ｅ、Ｘ１０２Ｔ、Ｘ１０２Ａ、Ｘ１０３Ｇ、Ｘ１０３Ｄ、Ｘ１０３Ｎ、Ｘ１０４Ｄ、Ｘ１０４Ｅ、Ｘ１０４Ｉ、Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０５Ｑ、Ｘ１０５Ｅ、Ｘ１０５Ｔ、Ｘ１０６Ｆ、Ｘ１０６Ｖ、Ｘ１０６Ｇ、Ｘ１０６Ｅ、Ｘ１０６Ｔ、Ｘ１０６Ｄ、Ｘ１０６Ａ、Ｘ１０７Ｆ、Ｘ１０７Ｍ、Ｘ１０８Ｇ、Ｘ１０８Ｉ、Ｘ１０９Ｍ、Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１１１Ｉ、Ｘ１１２Ｖ、Ｘ１１２Ｌ、Ｘ１１２Ｑ、Ｘ１１４Ｇ、Ｘ１１５Ｋ、Ｘ１１５Ｒ、Ｘ１１６Ａ、Ｘ１１６Ｋ、Ｘ１１６Ｌ、Ｘ１１７Ｆ、Ｘ１１８Ｉ、Ｘ１１８Ｒ、Ｘ１１９Ｃ、Ｘ１２０Ｆ、Ｘ１２０Ａ、Ｘ１２０Ｒ、Ｘ１２１Ｅ、Ｘ１２１Ｆ、Ｘ１２３Ｇ、Ｘ１２３Ｅ、Ｘ１２４Ｓ、Ｘ１２８Ｆ、Ｘ１２８Ｈ、Ｘ１２８Ｉ、Ｘ１２８Ｌ、Ｘ１２８Ｑ、Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１２８Ｍ、Ｘ１２８Ｄ、Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１３２Ｅ、Ｘ１３２Ａ、Ｘ１３８Ｇ、Ｘ１４４Ｒ、Ｘ１４７Ｌ、Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１５９Ｃ、Ｘ１６０Ｄ、Ｘ１６６Ｄ、Ｘ１６６Ｅ、Ｘ１６７Ｗ、Ｘ１７５Ｖ、Ｘ１７７Ｃ、Ｘ１８１Ａ、Ｘ１８２Ｒ、Ｘ１８３Ｆ、Ｘ１８３Ｉ、Ｘ１８３Ｄ、Ｘ１８３Ｒ、Ｘ１８３Ｍ、Ｘ１８５Ｅ、Ｘ１８５Ｉ、Ｘ１８５Ｖ、Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１８６Ｋ、Ｘ１８８Ｒ、Ｘ１８８Ｅ、Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１９２Ｈ、Ｘ１９２Ｗ、Ｘ１９４Ｖ、Ｘ１９４Ｆ、Ｘ１９４Ｅ、Ｘ１９７Ｆ、Ｘ１９８Ｌ、Ｘ１９８Ｆ、Ｘ２０３Ｅ、Ｘ２０３Ｃ、Ｘ２０８Ｓ、Ｘ２０９Ｎ、Ｘ２０９Ｆ、Ｘ２０９Ｅ、Ｘ２０９Ｓ、Ｘ２０９Ｈ、Ｘ２０９Ｇ、Ｘ２０９Ｔ、Ｘ２０９Ｌ、Ｘ２１０Ｒ、Ｘ２１０Ｖ、Ｘ２１０Ｌ、Ｘ２１１Ｒ、Ｘ２１１Ｑ、Ｘ２１２Ｉ、Ｘ２１２Ｍ、Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２１３Ａ、Ｘ２１４Ｆ、Ｘ２１５Ｆ、Ｘ２１５Ｎ、Ｘ２１５Ｄ、Ｘ２１５Ｈ、Ｘ２１５Ｅ、Ｘ２１６Ｆ、Ｘ２１６Ａ、Ｘ２１７Ｎ、Ｘ２１７Ｅ、Ｘ２１７Ｄ、Ｘ２１８Ｐ、Ｘ２１８Ｄ、Ｘ２１８Ｅ、Ｘ２２４Ａ、Ｘ２２４Ｇ、Ｘ２２７Ｉ、Ｘ２３０Ｅ、Ｘ２３１Ｉ、Ｘ２３１Ｃ、Ｘ２３３Ｃ、Ｘ２３４Ｆ、Ｘ２３５Ｆ、Ｘ２３６Ｆ、Ｘ２３６Ｎ、Ｘ２３８Ｌ、Ｘ２３８Ｋ、Ｘ２３８Ｒ、Ｘ２３９Ｋ、Ｘ２３９Ｓ、Ｘ２３９Ｔ、Ｘ２３９Ｇ、Ｘ２３９Ｈ、Ｘ２３９Ｒ、Ｘ２３９Ｎ、Ｘ２３９Ｆ、Ｘ２４０Ｒ、Ｘ２４１Ｒ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２４３Ｒ、Ｘ２４３Ｆ、Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２４６Ｓ、Ｘ２４８Ｉ、Ｘ２４８Ｖ、Ｘ２４８Ｒ、Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２４９Ｔ、Ｘ２５０Ｉ、Ｘ２５１Ｓ、Ｘ２５１Ｒ、Ｘ２５２Ｉ、Ｘ２５２Ｆ、Ｘ２５２Ｈ、Ｘ２５２Ｒ、Ｘ２５３Ｆ、Ｘ２５３Ｉ、Ｘ２５３Ｒ、Ｘ２５４Ｃ、Ｘ２５６Ｎ、Ｘ２５８Ｒ、Ｘ２６０Ｖ、Ｘ２６０Ｉ、Ｘ２６２Ｈ、Ｘ２６２Ｄ、Ｘ２６３Ｆ、Ｘ２６５Ｆ、Ｘ２６７Ｎ、Ｘ２６７Ｖ、Ｘ２６７Ｍ、Ｘ２６９Ｉ、Ｘ２６９Ｒ、Ｘ２７０Ｃ、Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２７１Ｖ、Ｘ２７１Ｉ、Ｘ２７１Ｐ、Ｘ２７１Ｈ、Ｘ２７１Ｍ、Ｘ２７１Ｔ、Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２７１Ａ、Ｘ２７２Ｆ、Ｘ２７２Ｒ、Ｘ２７２Ｆ、Ｘ２７３Ｉ、Ｘ２７３Ｆ、及びＸ２７４Ｇから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２１１】
本発明は更に、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１６Ｓ、Ｘ１８Ｒ、Ｘ２０Ｒ、Ｘ２２Ａ、Ｘ２４Ｒ、Ｘ４３Ｒ／Ｄ、Ｘ４５Ｔ、Ｘ７６Ｄ、Ｘ１０１Ａ、Ｘ１０３Ｇ、Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１４８Ｉ、Ｘ２３０Ｅ、Ｘ２４２Ｒ、及びＸ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２１２】
本発明はまた、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１Ｒ、Ｘ２３０Ｅ、Ｘ２７１Ｌ、Ｘ１１５Ｒ、Ｘ２０Ｒ、Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２３５Ｆ、Ｘ２７Ｖ／Ｆ／Ｌ、Ｘ７５Ｅ、Ｘ８２Ｒ、Ｘ１８Ｒ、Ｘ２６９Ｒ、Ｘ４３Ｄ、Ｘ４３Ｒ、Ｘ７６Ｄ、Ｘ４５Ｔ、Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２４Ｒ、Ｘ７８Ｒ、Ｘ９Ａ、Ｘ２２Ｒ、Ｘ１２１Ｅ、Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２８Ｅ、Ｘ３０Ｅ、Ｘ４Ｒ、及びＸ２４１Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、サブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２１３】
本発明は更に、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０８９Ｐ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０８９Ｐ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ０８９Ｐ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１４８Ｉ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ａ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１０１Ａ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１０１Ａ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０３Ｇ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０３Ｇ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１０３Ｇ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１０３Ｇ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０２２Ａ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１１１Ｖ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１０３Ｇ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ２０９Ｅ、及びＸ１８６Ｈ−Ｘ２０９Ｅから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２１４】
本発明はまた、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０１８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２４１Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ００４Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２２Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０２２Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２４１Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ００９Ａ、Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ２４４Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ２４１Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０１８Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０１８Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０８２Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２４１Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２４４Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０８２Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ０２０Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２４４Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２４１Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２６９Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、及びＸ０８２Ｒ−Ｘ２７１Ｌから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２１５】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｒ−Ｘ−４３Ｒ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１７４Ｔ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１７２Ｖ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１９４Ｔ、Ｘ００８Ｔ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ２３５Ｆ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０３Ａ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｃ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３９Ｑ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１４１Ｇ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７４Ｉ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１４８Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０１Ｓ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４７Ｈ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０４Ａ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０３Ａ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０４８Ｔ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３９Ｔ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２５３Ａ、Ｘ１４３Ａ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７２Ｐ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２６９Ｃ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２１６】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０３Ａ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０３Ａ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｒ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１７４Ｔ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ００８Ｔ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０１Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３９Ｑ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ２３５Ｆ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１７２Ｖ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１４８Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｃ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１９４Ｔ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１４１Ｇ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７４Ｉ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０１５Ｔ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４７Ｈ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０４Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０４８Ｔ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２５３Ａ、Ｘ１４３Ａ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３９Ｔ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７２Ｐ、及びＸ０２４Ｒ−Ｘ２６９Ｃから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２１７】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００１Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ００９Ａ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、及びＸ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ２６９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２１８】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３３Ｉ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７Ｅ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ３８Ｉ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４０Ｐ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ３０Ｓ−Ｘ３１Ｓ−Ｘ３２Ｉ−Ｘ３３Ｑ−Ｘ３４Ｖ−Ｘ３５Ｆ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２７３Ｖ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２３０Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２２７Ｉから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２１９】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｒ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、及びＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２２０】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２
４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｋ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、及びＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２２１】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２２２】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２０９Ｅ−、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ０２２Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０８９Ｐ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１６Ｓ−Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１８８Ｄ−、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８６Ｈ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ１０４Ｌ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２２３】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ００１Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ００４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２５Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１６７Ｗ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ１６７Ｗ−Ｘ２３６Ｎ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２０Ｆ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１８５Ｉ−Ｘ２３３Ｃ−Ｘ２３６Ｎ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２１６Ｆ−Ｘ２３６Ｎ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１５Ｒ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０５２Ｎ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２３９Ｓ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０２５Ｒ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２３９Ｓ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２２４Ａ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１２１Ｆ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２３６Ｎ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４４Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１６７Ｗ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１６７Ｗ−Ｘ２１２Ｍ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ１２１Ｆ−Ｘ２５２Ｒ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ２１６Ｆ−Ｘ２３６Ｎ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０５２Ｎ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ０４６Ｒ−Ｘ１２１Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ０５９Ａ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０５２Ｎ−Ｘ０６２Ｑ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１９２Ｗ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０５２Ｎ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０５２Ｎ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ１９２Ｗ、Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ２２４Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１４４Ｒ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２３８Ｌ−Ｘ２３９Ｓ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ａ−Ｘ０６２Ｑ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１１Ｑ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０５２Ｎ−Ｘ０５９Ａ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１６７Ｗ−Ｘ２２４Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０５７Ｒ−Ｘ１６７Ｗ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１４８Ｉ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０５９Ａ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ａ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１１Ｑ、Ｘ１１７Ｆ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１２１Ｆ−Ｘ２３３Ｃ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０５７Ｒ−Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０６２Ｑ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１２１Ｆ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ２１２Ｍ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２３６Ｎ、Ｘ０６２Ｑ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ１９４Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０６２Ｑ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０５７Ｒ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１９８Ｌ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ０５９Ａ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１１７Ｆ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１２０Ｆ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０４３Ａ−Ｘ０５７Ｒ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１８３Ｄ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３８Ｌ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ０４３Ａ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１１７Ｆ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０９１Ｆ−Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１６７Ｗ、Ｘ１０６Ｇ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ２３８Ｌ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０６２Ｑ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ０５７Ｒ−Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１２１Ｆ−Ｘ１８５Ｉ−Ｘ１９２Ｗ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２３３Ｃ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１１７Ｆ−Ｘ１８５Ｉ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３３Ｃ、Ｘ０５２Ｎ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２１６Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ１０５Ｔ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４６Ｒ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１２１Ｆ、Ｘ１０６Ｇ−Ｘ１８５Ｉ−Ｘ２１６Ｆ−Ｘ２３６Ｎ、Ｘ０６２Ｑ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２３６Ｎ−Ｘ２５２Ｒ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ０４３Ａ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１９２Ｗ−Ｘ２３３Ｃ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ａ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ１９８Ｌ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ２１７Ｅ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３９Ｓ、Ｘ０４６Ｒ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２０Ｆ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２１６Ｆ−Ｘ２５２Ｒ、Ｘ０２２Ｗ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３３Ｃ−Ｘ２３８Ｌ、Ｘ０９９Ｆ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ１９４Ｆ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ０８９Ｉ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１２０Ｆ−Ｘ２２４Ａ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ０４３Ａ−Ｘ０５９Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１６Ｆ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０５７Ｒ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３６Ｎ、Ｘ０２５Ｒ−Ｘ０６２Ｑ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ１８５Ｉ、Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１２０Ｆ−Ｘ１６７Ｗ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２３３Ｃ、Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０８９Ｉ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１２Ｍ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０５２Ｎ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２３３Ｃ、Ｘ０８９Ｉ−Ｘ０９１Ｆ−Ｘ１８５Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２７０Ｃ、Ｘ１１１Ｉ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３９Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２３３Ｃ−Ｘ２３６Ｎ、及びＸ０２３Ａ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１０６Ｇ−Ｘ２１２Ｍ−Ｘ２１５Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２２４】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ｓ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２２Ｋ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１９Ｈ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ２２Ｗ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２２Ｗ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１９８Ｌ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ００１Ｔ−Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１１Ｑ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４５Ｔ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０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【０２２５】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、及びＸ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２２６】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１１６Ａ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１６Ａ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１１６Ａ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０３８Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０１４Ｌ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２１５Ｆ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１５Ｆ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ２１５Ｆ、及びＸ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０４５Ｔ−Ｘ１１６Ａ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２２７】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１４Ｖ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、及びＸ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２２８】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２２９】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０１７Ｒ−Ｘ０２２Ａ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０１７Ｒ−Ｘ０２２Ａ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、及びＸ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２３０】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ１０１Ｓ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｖ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２３１】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２６Ｆ−Ｘ０５１Ｗ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１０６Ｅ、Ｘ０２６Ｆ−Ｘ０３１Ｆ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１０２Ａ−Ｘ１６０Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ１００Ｓ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ２１８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０３８Ｆ−Ｘ０４８Ｒ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１００Ｓ−Ｘ１８６Ｋ、Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ２１５Ｄ、Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２５６Ｎ、Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ２１２Ｍ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２６Ｆ−Ｘ０４８Ｒ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１８Ｄ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２１５Ｄ−Ｘ２５０Ｉ−Ｘ２７２Ｆ、Ｘ１２１Ｆ−Ｘ１８５Ｅ−Ｘ２２４Ａ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０３１Ｆ−Ｘ１０２Ａ−Ｘ１２８Ｄ−Ｘ２２４Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１０２Ａ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ２５０Ｉ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０３８Ｆ−Ｘ１２１Ｆ−Ｘ１６０Ｄ−Ｘ２７２Ｆ、Ｘ０２６Ｆ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１５９Ｃ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４８Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ２１７Ｅ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０３８Ｆ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１００Ｓ−Ｘ２１２Ｍ−Ｘ２１５Ｄ、Ｘ１００Ｓ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｄ、Ｘ１０２Ａ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１９４Ｅ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１２８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２７Ｒ−Ｘ１００Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１６０Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１０２Ａ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ１００Ｓ−Ｘ１９４Ｅ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ０４８Ｒ−Ｘ１２８Ｄ−Ｘ１８５Ｅ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１９４Ｅ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２７Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１６６Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２７Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１９４Ｅ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ２５６Ｎ、Ｘ０２７Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ２７２Ｆ、Ｘ０４８Ｒ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８５Ｅ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０２７Ｒ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１０３Ｎ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２６Ｆ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２５６Ｎ−Ｘ２７２Ｆ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２１Ｆ−Ｘ１２９Ｅ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２２４Ａ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０５１Ｗ−Ｘ１５８Ｅ、Ｘ０２７Ｒ−Ｘ０３８Ｆ−Ｘ１０２Ａ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ０７８Ｎ−Ｘ１４４Ｒ−Ｘ２１２Ｍ、Ｘ０３１Ｆ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２５６Ｎ−Ｘ２７２Ｆ、Ｘ０２２Ｌ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１６０Ｄ−Ｘ１８６Ｋ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２１５Ｄ−Ｘ２１６Ｆ、Ｘ０３１Ｆ−Ｘ１０５Ｔ−Ｘ１８６Ｋ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２６Ｆ−Ｘ１９４Ｅ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２５６Ｎ、及びＸ１０３Ｎ−Ｘ１６０Ｄ−Ｘ２５０Ｉ−Ｘ２５６Ｎから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２３２】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、及びＸ０２２Ａ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２３３】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３９Ｇ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ２１３Ａ、及びＸ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２１３Ａ−Ｘ２３９Ｇから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２３４】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ２１３Ａ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１２９Ｅ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ０２３Ａ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０２０Ｋ−Ｘ０２３Ａ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０４３Ｗ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ０２４Ｆ−Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ、Ｘ０６２Ｅ−Ｘ１１６Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、及びＸ０２２Ａ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２３５】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０８７Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１０９Ｒ−Ｘ２１２Ｐ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２７１Ｖ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１０９Ｒ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１０９Ｒ−Ｘ２１２Ｐ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２７１Ｖ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１０９Ｒ−Ｘ２１２Ｐ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｓ８７Ｒ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１２Ｐ−Ｘ２７１Ｖ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１０９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１２Ｐ−Ｘ２７１Ｖ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１０９Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、及びＸ０７６Ｄ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２１２Ｐ−Ｘ２４５Ｌ−Ｘ２７１Ｖから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２３６】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｓ−Ｘ０８７Ｎ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２７０Ｔ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１７２Ｖ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｓ−Ｘ１４１Ｇ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｓ−Ｘ０８５Ｎ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１３３Ｖ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０３Ｉ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２１Ｍ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ００５Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１７４Ｔ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１３３Ｖ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ００８Ｔ−Ｘ０２４Ｒ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ００５Ｓ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４２Ｐ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１９４Ｔ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｄ−Ｘ１３８Ｖ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８６Ｒ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０１Ｓ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３９Ｑ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ２３５Ｆ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１７２Ｖ、Ｘ０１７Ｙ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１４８Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｃ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ１９４Ｔ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１４１Ｇ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７４Ｉ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ００４Ｅ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０７８Ｒ、Ｘ０８６Ｗ−Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０１５Ｔ−Ｘ０３３Ｓ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１５６Ｌ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２４３Ｆ−Ｘ２６９Ｈ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２４７Ｈ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２２８Ｔ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１７４Ｖ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２３５Ｆ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３５Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１５１Ｖ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０４Ａ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ０４８Ｔ、Ｘ０１２Ｈ−Ｘ１０４Ａ−Ｘ１１８Ｒ、Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２５３Ａ、Ｘ１４３Ａ−Ｘ２０９Ａ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０３３Ｓ−Ｘ２３９Ｔ、Ｘ２０９Ａ−Ｘ２４３Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０３３Ｓ−Ｘ１２９Ｈ−Ｘ１８４Ｄ−Ｘ２５３Ｍ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８５Ｖ−Ｘ０８６Ｗ−Ｘ１１８Ｒ−Ｘ２３５Ｆ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ２７２Ｐ、及びＸ０２４Ｒ−Ｘ２６９Ｃから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２３７】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２０Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２０Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２０Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７８Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０２２Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０４３Ｄ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０１８Ｒ−Ｘ０２４Ｒ−Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０４３Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２６９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０８７Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、及びＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５０Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４２Ｒ−Ｘ２４５Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２３８】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ０２４Ｒ−Ｘ０２７Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２３９】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２２２Ｑ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２２２Ｓ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２２２Ｑ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２２２Ｑ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２２２Ｓ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２２２Ｓ−Ｘ２４５Ｒ、及びＸ０７６Ｄ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２２２Ｓ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２４０】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ−Ｘ２７１Ｇ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８３Ｄ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２９Ｑ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２１７Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ０２４Ｒ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１２８Ｌ−Ｘ１３０Ａ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ１８８Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２４１】
本発明は更に、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２０９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１２８Ｎ−Ｘ２７１Ｆ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ６２Ｅ−Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１１１Ｖ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ２２Ａ−Ｘ６２Ｅ−Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１２８Ｎ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０１Ａ−Ｘ１０３Ｇ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２０９Ｅ、Ｘ２２Ａ−Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ａ−Ｘ２７１Ｆ、及びＸ１０１Ａ−Ｘ２０９Ｅ−Ｘ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２４２】
本発明は更に、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５２Ｋ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２５２Ｋ、及びＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｌ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２３６Ｈ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２４３】
本発明は更に、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２３８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２５３Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ７６Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５８Ｅ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２２Ａ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆ、Ｘ６２Ｅ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２４９Ｒ、及びＸ６２Ｅ−Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ−Ｘ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２４４】
本発明は更に、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２７１Ｌ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ−Ｘ２４１Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ９Ａ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２４Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ９Ａ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２２Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ９Ａ−Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ９Ａ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ７８Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２０Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ４Ｒ−Ｘ９Ａ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ１Ｒ−Ｘ９Ａ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ１１５Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ２０Ｒ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ１Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２０Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２０Ｒ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ７８Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、Ｘ９Ａ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４４Ｒ、Ｘ９Ａ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒ−Ｘ２４２Ｒ、Ｘ４Ｒ−Ｘ９Ａ−Ｘ２２Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ２１２Ｆ、及びＸ２２Ｒ−Ｘ２４Ｒ−Ｘ４３Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２４５】
本発明は更に、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｒ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｄ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｄ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｒ、Ｘ１０１Ｇ−Ｘ１０３Ａ−Ｘ１０４Ｉ−Ｘ１５９Ｒ−Ｘ２３２Ｖ−Ｘ２４５Ｒ−Ｘ２４８Ｒ、及びＸ１０１Ｇ、Ｘ１０３Ａ、Ｘ１０４Ｉ、Ｘ２３２Ｖ、Ｘ２３６Ｈ、Ｘ２４５Ｒ、及びＸ２５２Ｋから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２４６】
本発明は更に、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＸ１６Ｓ、Ｘ２２Ａ、Ｘ２４Ｒ、Ｘ６２Ｅ、Ｘ７６Ｄ、Ｘ８９Ｐ、Ｘ１０１Ａ／Ｇ、Ｘ１０３Ｇ／Ａ、Ｘ１０４Ｌ／Ｉ、Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１２９Ｅ、Ｘ２３２Ｖ、Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１５９Ｄ／Ｅ、Ｘ１６６Ｄ、Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１８８Ｄ、Ｘ２０９Ｅ、Ｘ２３６Ｈ、Ｘ２３８Ｒ、Ｘ２４５Ｒ、Ｘ２４８Ｄ／Ｒ、Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２５２Ｋ／Ｒ、Ｘ２５３Ｒ、及びＸ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２４７】
本発明は更に、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＮ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ａ１５８Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ａ１５８Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ａ１５８Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ、Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ、Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｅ０８９Ｐ、Ａ０１６Ｓ−Ｅ０８９Ｐ、Ｎ０６２Ｅ−Ｅ０８９Ｐ、Ｎ０６２Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ１５８Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｐ１２９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｌ１１１Ｖ−Ｅ２７１Ｆ、Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｅ２７１Ｆ、Ｇ１５９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｅ２７１Ｆ、Ｅ０８９Ｐ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１２８Ｎ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０３Ｇ−Ｅ２７１Ｆ、Ｌ１４８Ｉ−Ｅ２７１Ｆ、Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ、Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ｇ１５９Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｇ１５９Ｅ、Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｇ１５９Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｌ１１１Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｐ１２９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｈ２４９Ｒ、Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｌ１４８Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｙ２０９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０３Ｇ−Ｈ２４９Ｒ、Ｅ０８９Ｐ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ、Ｓ１０１Ａ−Ｌ１１１Ｖ、Ａ０１６Ｓ−Ｌ１１１Ｖ、Ｖ１０４Ｌ−Ｌ１１１Ｖ、Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１１１Ｖ、Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１１１Ｖ、Ｅ０８９Ｐ−Ｌ１１１Ｖ、Ａ０１６Ｓ−Ｌ１４８Ｉ、Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１４８Ｉ、Ｔ０２２Ａ−Ｌ１４８Ｉ、Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ、Ｖ１０４Ｌ−Ｌ１４８Ｉ、Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１４８Ｉ、Ｓ１２８Ｎ−Ｌ１４８Ｉ、Ｓ１０１Ａ−Ｌ１４８Ｉ、Ｅ０８９Ｐ−Ｌ１４８Ｉ、Ｌ１１１Ｖ−Ｌ１４８Ｉ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｐ１２９Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｐ１２９Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｐ１２９Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｐ１２９Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ、Ｔ０２２Ａ−Ｒ１８６Ｈ、Ａ０１６Ｓ−Ｒ１８６Ｈ、Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｅ０８９Ｐ−Ｒ１８６Ｈ、Ｐ１２９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｇ１５９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１０３Ｇ−Ｒ１８６Ｈ、Ｖ１０４Ｌ−Ｒ１８６Ｈ、Ｌ１１１Ｖ−Ｒ１８６Ｈ、Ｌ１４８Ｉ−Ｒ１８６Ｈ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ａ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１０１Ａ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１０１Ａ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ｇ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ｇ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１０３Ｇ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１０３Ｇ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１２８Ｎ、Ｓ１０３Ｇ−Ｓ１２８Ｎ、Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１２８Ｎ、Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１８８Ｄ、Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１８８Ｄ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１８８Ｄ、Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１０３Ｇ−Ｓ１８８Ｄ、Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ａ０１６Ｓ−Ｔ０２２Ａ、Ａ０１６Ｓ−Ｖ１０４Ｌ、Ｔ０２２Ａ−Ｖ１０４Ｌ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ、Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ、Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ、Ｅ０８９Ｐ−Ｖ１０４Ｌ、Ｇ１５９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ｙ２０９Ｅ、Ｌ１４８Ｉ−Ｙ２０９Ｅ、Ｐ１２９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｙ２０９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２０９Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｙ２０９Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ｙ２０９Ｅ、及びＲ１８６Ｈ−Ｙ２０９Ｅから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２４８】
本発明は更に、バチルスサブチリシンのサブチリシン変異体を含むポリペプチドであって、このサブチリシン変異体は、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＮ０１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｖ２４４Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ２４２Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｖ００４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｓ２４２Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｓ２４２Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ａ００１Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ１１５Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ００９Ａ−Ｓ２１２Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｌ０８２Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ００９Ａ−Ｓ０７８Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｓ０２４Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ、Ａ００１Ｒ−Ｓ００９Ａ、Ｓ２４２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｖ２４４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０１８Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ０１８Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｎ０１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｌ０８２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ２４４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｇ１１５Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｇ０２０Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ０２４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｖ２４４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｗ２４１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｎ０４３Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｔ０２２Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ２１２Ｆ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ１１５Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ２４２Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ０７８Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｖ００４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｎ２６９Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ａ００１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｎ０１８Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、及びＬ０８２Ｒ−Ｅ２７１Ｌから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、ポリペプチドを提供する。
【０２４９】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ａ１５８Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ａ１５８Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ａ１５８Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ、Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ、Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｅ０８９Ｐ、Ａ０１６Ｓ−Ｅ０８９Ｐ、Ｎ０６２Ｅ−Ｅ０８９Ｐ、Ｎ０６２Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ１５８Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｐ１２９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｌ１１１Ｖ−Ｅ２７１Ｆ、Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｅ２７１Ｆ、Ｇ１５９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｅ２７１Ｆ、Ｅ０８９Ｐ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１２８Ｎ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０３Ｇ−Ｅ２７１Ｆ、Ｌ１４８Ｉ−Ｅ２７１Ｆ、Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ、Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ｇ１５９Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ｇ１５９Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｇ１５９Ｅ、Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｇ１５９Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｌ１１１Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｐ１２９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｈ２４９Ｒ、Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｌ１４８Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｙ２０９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０３Ｇ−Ｈ２４９Ｒ、Ｅ０８９Ｐ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｌ１１１Ｖ、Ｓ１０１Ａ−Ｌ１１１Ｖ、Ａ０１６Ｓ−Ｌ１１１Ｖ、Ｖ１０４Ｌ−Ｌ１１１Ｖ、Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１１１Ｖ、Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１１１Ｖ、Ｅ０８９Ｐ−Ｌ１１１Ｖ、Ａ０１６Ｓ−Ｌ１４８Ｉ、Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１４８Ｉ、Ｔ０２２Ａ−Ｌ１４８Ｉ、Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ、Ｖ１０４Ｌ−Ｌ１４８Ｉ、Ｓ１０３Ｇ−Ｌ１４８Ｉ、Ｓ１２８Ｎ−Ｌ１４８Ｉ、Ｓ１０１Ａ−Ｌ１４８Ｉ、Ｅ０８９Ｐ−Ｌ１４８Ｉ、Ｌ１１１Ｖ−Ｌ１４８Ｉ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｐ１２９Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｐ１２９Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｐ１２９Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ｐ１２９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｐ１２９Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ、Ｔ０２２Ａ−Ｒ１８６Ｈ、Ａ０１６Ｓ−Ｒ１８６Ｈ、Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｅ０８９Ｐ−Ｒ１８６Ｈ、Ｐ１２９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｇ１５９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１０３Ｇ−Ｒ１８６Ｈ、Ｖ１０４Ｌ−Ｒ１８６Ｈ、Ｌ１１１Ｖ−Ｒ１８６Ｈ、Ｌ１４８Ｉ−Ｒ１８６Ｈ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ａ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１０１Ａ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１０１Ａ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ｇ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ｇ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１０３Ｇ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１０３Ｇ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１２８Ｎ、Ｓ１０３Ｇ−Ｓ１２８Ｎ、Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１２８Ｎ、Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１８８Ｄ、Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１８８Ｄ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１８８Ｄ、Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１０３Ｇ−Ｓ１８８Ｄ、Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ａ０１６Ｓ−Ｔ０２２Ａ、Ａ０１６Ｓ−Ｖ１０４Ｌ、Ｔ０２２Ａ−Ｖ１０４Ｌ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ、Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ、Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｌ、Ｅ０８９Ｐ−Ｖ１０４Ｌ、Ｇ１５９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｌ１１１Ｖ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１０１Ａ−Ｙ２０９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１２８Ｎ−Ｙ２０９Ｅ、Ｌ１４８Ｉ−Ｙ２０９Ｅ、Ｐ１２９Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｔ０２２Ａ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１０３Ｇ−Ｙ２０９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２０９Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｙ２０９Ｅ、Ｅ０８９Ｐ−Ｙ２０９Ｅ、Ｒ１８６Ｈ−Ｙ２０９Ｅ、Ｎ０１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｖ２４４Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ２４２Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｖ００４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｔ０２２Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｓ２４２Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｓ２４２Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ａ００１Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ１１５Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ００９Ａ−Ｓ２１２Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｌ０８２Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ００９Ａ−Ｓ０７８Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｓ０２４Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ、Ａ００１Ｒ−Ｓ００９Ａ、Ｓ２４２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｖ２４４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０１８Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ０１８Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｎ０１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｌ０８２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｌ０８２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ２１２Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ１１５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｗ２４１Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ２４４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｇ１１５Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｌ０８２Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１５Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｇ０２０Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ０２４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｖ２４４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｗ２４１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｎ０４３Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｔ０２２Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ２１２Ｆ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ１１５Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ２４２Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ０７８Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｖ００４Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｎ２６９Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ａ００１Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｎ０１８Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、及びＬ０８２Ｒ−Ｅ２７１Ｌから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、この変異体の合計正味電荷が、バチルス・レンタスのサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷と比較して０、＋１、＋２、＋３、＋４、＋５、−１、−２、−３、−４、又は−５であり、この正味電荷が：Ｎ４３Ｄ、Ｒ４５Ｔ、Ｎ６２Ｅ、Ｎ７６Ｄ、Ｓ１０１Ｄ、Ｐ１２９Ｅ、Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｄ、Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１６６Ｄ、Ｓ１８８Ｄ、Ａ２３０Ｅ、Ｎ１８Ｒ、Ｇ２０Ｋ、Ｇ２０Ｒ、Ｔ２２Ｒ、Ｓ２４Ｒ、Ｎ４３Ｒ、Ｇ１１８Ｒ、Ｑ２４５Ｒ、Ｈ２４９Ｒ、Ｎ２６９Ｒ、Ｅ２７１Ｆ、及びＥ２７１Ｌから選択された１箇所以上の置換により得られ、このプロテアーゼ変異体のアミノ酸位置が、配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の、対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２５０】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ１７４Ｔ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｋ２３５Ｆ、Ｙ２０９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０１８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ１１８Ｒ−Ａ１７２Ｖ、Ｇ１１８Ｒ−Ａ１９４Ｔ、Ｉ００８Ｔ−Ｓ０２４Ｒ、Ｋ２３５Ｆ−Ｎ２４３Ｆ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０３Ａ、Ｎ０１８Ｒ−Ｖ１０４Ｉ、Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｃ−Ｔ０３３Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ２３２Ｖ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ２３９Ｑ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１４１Ｇ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ２７４Ｉ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ１０１Ｇ−Ａ２３２Ｖ、Ｔ０３３Ｓ−Ｌ１４８Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ２０１Ｓ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｗ２４１Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ、Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ１１８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２４５Ｒ、Ｐ０８６Ｗ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ２４７Ｈ、Ｓ０２４Ｒ−Ｖ１０４Ａ、Ｓ０７８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ１０１Ｇ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０３Ａ−Ａ２３２Ｖ、Ｔ０３３Ｓ−Ａ０４８Ｔ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ２３９Ｔ、Ｔ０３３Ｓ−Ｔ２５３Ａ、Ｔ１４３Ａ−Ｙ２０９Ａ、Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ２７２Ｐ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ２６９Ｃ、Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ、Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ、Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＳ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２５１】
本発明は更に、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ｎ０１８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ａ２３２Ｖ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ２３２Ｖ、Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ、Ｎ０１８Ｒ−Ｖ１０４Ｉ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０３Ａ、Ｓ１０１Ｇ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０３Ａ−Ａ２３２Ｖ、Ｎ０７６Ｄ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ、Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ、Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｒ、Ｙ２０９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ１７４Ｔ、Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ、Ｉ００８Ｔ−Ｓ０２４Ｒ、Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ、Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ２０１Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ２３９Ｑ、Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｋ２３５Ｆ−Ｎ２４３Ｆ、Ｇ１１８Ｒ−Ａ１７２Ｖ、Ｔ０３３Ｓ−Ｌ１４８Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｃ−Ｔ０３３Ｓ、Ｇ１１８Ｒ−Ａ１９４Ｔ、Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１４１Ｇ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ２７４Ｉ、Ｐ０８６Ｗ−Ｋ２３５Ｆ、Ａ０１５Ｔ−Ｔ０３３Ｓ、Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ２４７Ｈ、Ｓ０７８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｖ１０４Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ａ０４８Ｔ、Ｇ１１８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｔ２５３Ａ、Ｔ１４３Ａ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ２３９Ｔ、Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ２７２Ｐ、及びＳ０２４Ｒ−Ｒ２６９Ｃから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２５２】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＶ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ａ００１Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｖ２４４Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｓ０７８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０７８Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ００９Ａ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１２Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、及びＧ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｎ２６９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２５３】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＮ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ａ２３０Ｅ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｌ２３３Ｉ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ａ２３０Ｅ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ａ２３０Ｅ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｋ２７Ｅ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｋ２７Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｔ３８Ｉ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４０Ｐ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｖ３０Ｓ−Ｌ３１Ｓ−Ｄ３２Ｉ−Ｔ３３Ｑ−Ｇ３４Ｖ−Ｉ３５Ｆ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ２４２Ｒ−Ａ２７３Ｖ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ、Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｓ２４２Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｒ０４５Ｔ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１５３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ａ２３０Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＧ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｖ２２７Ｉから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２５４】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２３６Ｈ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２５２Ｋ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｒ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、及びＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２５５】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２
４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｋ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、及びＳ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２５６】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＴ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＳ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２５７】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＶ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｙ２０９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｙ２０９Ｅ−、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｙ２０９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ｇ１５９Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｙ２０９Ｅ、Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ｇ１５９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｅ０８９Ｐ−Ｓ１０１Ａ−Ｐ１２９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−、Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｌ１１１Ｖ−Ｐ１２９Ｅ、Ａ０１６Ｓ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｌ１１１Ｖ−Ｓ１８８Ｄ−、Ｔ０２２Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＶ１０４Ｌ−Ｌ１４８Ｉ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２５８】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＡ００１Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｖ００４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｅ２７１Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｇ０２５Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｙ１６７Ｗ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０３Ｎ−Ｓ１０６Ｇ−Ｙ１６７Ｗ−Ｑ２３６Ｎ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｈ１２０Ｆ−Ａ１９４Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ２１２Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１４４Ｒ−Ｎ１８５Ｉ−Ｌ２３３Ｃ−Ｑ２３６Ｎ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ２１６Ｆ−Ｑ２３６Ｎ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１５Ｒ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｐ０５２Ｎ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０３Ｎ−Ｌ１４８Ｉ−Ｔ２１３Ａ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２５Ｒ−Ｅ０８９Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｐ２３９Ｓ−Ａ２７０Ｃ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｌ１４８Ｉ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２５２Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ０２５Ｒ−Ｎ１８３Ｄ−Ｙ１９２Ｗ−Ｐ２３９Ｓ、Ｇ０４６Ｒ−Ａ１９４Ｆ−Ｓ２１２Ｍ、Ｖ１０４Ｌ−Ｌ２１７Ｅ−Ｔ２２４Ａ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２５２Ｒ、Ｇ０２３Ａ−Ｙ０９１Ｆ−Ｖ１２１Ｆ−Ｙ１９２Ｗ−Ｑ２３６Ｎ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｖ２４４Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０９９Ｆ−Ｓ１４４Ｒ−Ｙ１６７Ｗ−Ｎ２５２Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｙ１６７Ｗ−Ｓ２１２Ｍ−Ａ２７０Ｃ、Ｖ１２１Ｆ−Ｎ２５２Ｒ−Ａ２７０Ｃ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０３Ｎ−Ｓ２１６Ｆ−Ｑ２３６Ｎ−Ｎ２５２Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２３Ａ−Ｐ０５２Ｎ−Ｙ１９２Ｗ−Ｉ１９８Ｌ−Ｎ２５２Ｒ、Ｇ０２５Ｒ−Ｇ０４６Ｒ−Ｖ１２１Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｖ１０４Ｌ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ、Ｇ０４６Ｒ−Ｑ０５９Ａ−Ｓ１０３Ｎ−Ｇ２１１Ｑ−Ｓ２１２Ｍ、Ｇ０２０Ｒ−Ｐ０５２Ｎ−Ｎ０６２Ｑ−Ｙ０９１Ｆ−Ｙ１９２Ｗ、Ｇ０２３Ａ−Ｐ０５２Ｎ−Ｓ１４４Ｒ−Ｙ１９２Ｗ−Ｓ２１６Ｆ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｓ２４２Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｐ０５２Ｎ−Ｓ１０３Ｎ−Ｎ１１６Ａ−Ｌ１４８Ｉ−Ｙ１９２Ｗ、Ｅ０８９Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１１７Ｆ−Ｔ２２４Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１４４Ｒ−Ｇ２１１Ｑ−Ｎ２３８Ｌ−Ｐ２３９Ｓ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ａ−Ｎ０６２Ｑ−Ａ１９４Ｆ−Ｇ２１１Ｑ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０５２Ｎ−Ｑ０５９Ａ−Ｓ２１６Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ１６７Ｗ−Ｔ２２４Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０５７Ｒ−Ｙ１６７Ｗ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２５Ｒ−Ｓ１０３Ｎ−Ｒ１８６Ｋ−Ａ１９４Ｆ−Ｔ２２４Ａ、Ｓ１０５Ｔ−Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１４４Ｒ−Ｌ１４８Ｉ−Ｓ２１２Ｍ、Ｇ０２０Ｒ−Ｑ０５９Ａ−Ｓ１４４Ｒ−Ｙ１９２Ｗ−Ｔ２２４Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ａ−Ｎ１１７Ｆ−Ａ１９４Ｆ−Ｇ２１１Ｑ、Ｎ１１７Ｆ−Ａ１９４Ｆ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２７０Ｃ、Ｓ０７８Ｒ−Ｙ０９１Ｆ−Ｖ１２１Ｆ−Ｌ２３３Ｃ−Ｎ２５２Ｒ、Ｔ０５７Ｒ−Ｓ０９９Ｆ−Ｓ１０５Ｔ−Ｉ１９８Ｌ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２３Ａ−Ｙ０９１Ｆ−Ｓ１０１Ａ−Ｉ１９８Ｌ−Ｎ２５２Ｒ、Ｎ０６２Ｑ−Ｓ１０３Ｎ−Ｖ１２１Ｆ−Ｓ１４４Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｓ２４２Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１７Ｆ−Ｓ２１２Ｍ−Ｓ２１６Ｆ、Ｖ１０４Ｌ−Ｔ２１３Ａ−Ｓ２１６Ｆ、Ａ１９４Ｆ−Ｇ２１１Ｑ−Ｑ２３６Ｎ、Ｎ０６２Ｑ−Ｓ１０３Ｎ−Ｎ１１７Ｆ−Ａ１９４Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０６２Ｑ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１０６Ｇ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０５７Ｒ−Ｅ０８９Ｉ−Ｉ１９８Ｌ、Ｇ０４６Ｒ−Ｑ０５９Ａ−Ｓ１０６Ｇ−Ｌ２１７Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ１１７Ｆ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｈ１２０Ｆ−Ｙ１９２Ｗ−Ａ２１５Ｆ−Ｔ２２４Ａ、Ｎ０４３Ａ−Ｔ０５７Ｒ−Ｎ１１７Ｆ−Ｓ１４４Ｒ−Ｎ１８３Ｄ、Ｇ０４６Ｒ−Ｎ１８３Ｄ−Ｎ２３８Ｌ、Ｇ０２５Ｒ−Ｎ０４３Ａ−Ｅ０８９Ｉ−Ｎ１１７Ｆ、Ｓ０７８Ｒ−Ｖ１０４Ｌ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｔ２２４Ａ、Ｙ０９１Ｆ−Ｓ０９９Ｆ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０５Ｔ−Ｙ１６７Ｗ、Ｓ１０６Ｇ−Ｎ１１７Ｆ−Ｎ２３８Ｌ、Ｇ０４６Ｒ−Ｅ０８９Ｉ−Ｙ０９１Ｆ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０６２Ｑ−Ｅ０８９Ｉ−Ｒ１８６Ｋ−Ｓ２１２Ｍ、Ｔ０５７Ｒ−Ｓ０９９Ｆ−Ｖ１２１Ｆ−Ｎ１８５Ｉ−Ｙ１９２Ｗ、Ｇ０４６Ｒ−Ｅ０８９Ｉ−Ｙ１９２Ｗ−Ｌ２３３Ｃ−Ａ２７０Ｃ、Ｅ０８９Ｉ−Ｎ１１７Ｆ−Ｎ１８５Ｉ−Ａ２１５Ｆ−Ｌ２３３Ｃ、Ｐ０５２Ｎ−Ｖ１０４Ｌ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ２１６Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ０９９Ｆ−Ｎ１１６Ａ−Ｒ１８６Ｋ−Ｔ２２４Ａ、Ｇ０２５Ｒ−Ｓ１０５Ｔ−Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１４４Ｒ−Ａ２７０Ｃ、Ｓ１０５Ｔ−Ｇ２１１Ｑ−Ｓ２１６Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ０４６Ｒ−Ｙ０９１Ｆ−Ｖ１２１Ｆ、Ｓ１０６Ｇ−Ｎ１８５Ｉ−Ｓ２１６Ｆ−Ｑ２３６Ｎ、Ｎ０６２Ｑ−Ｓ１０１Ａ−Ｑ２３６Ｎ−Ｎ２５２Ｒ−Ａ２７０Ｃ、Ｇ０２５Ｒ−Ｎ０４３Ａ−Ｙ０９１Ｆ−Ｉ１９８Ｌ−Ａ２７０Ｃ、Ｇ０２０Ｒ−Ｇ０２３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｙ１９２Ｗ−Ｌ２３３Ｃ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ａ−Ｓ１０５Ｔ−Ｓ１０６Ｇ−Ｉ１９８Ｌ、Ｇ０２０Ｒ−Ｅ０８９Ｉ−Ｌ２１７Ｅ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ０９１Ｆ−Ｉ１９８Ｌ−Ａ２１５Ｆ−Ｐ２３９Ｓ、Ｇ０４６Ｒ−Ｅ０８９Ｉ−Ｓ０９９Ｆ−Ｒ１８６Ｋ−Ｓ２１２Ｍ、Ｖ１０４Ｌ−Ｈ１２０Ｆ−Ｒ１８６Ｋ−Ｓ２１６Ｆ−Ｎ２５２Ｒ、Ｔ０２２Ｗ−Ａ１９４Ｆ−Ｔ２１３Ａ−Ｌ２３３Ｃ−Ｎ２３８Ｌ、Ｓ０９９Ｆ−Ｓ１０５Ｔ−Ｓ１０６Ｇ−Ａ１９４Ｆ−Ｓ２１２Ｍ、Ｅ０８９Ｉ−Ｓ１０５Ｔ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｓ２１６Ｆ、Ｇ０２５Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｈ１２０Ｆ−Ｔ２２４Ａ−Ａ２７０Ｃ、Ｎ０４３Ａ−Ｑ０５９Ａ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ２１６Ｆ−Ｔ２２４Ａ、Ｔ０５７Ｒ−Ｎ１８３Ｄ−Ｑ２３６Ｎ、Ｇ０２５Ｒ−Ｎ０６２Ｑ−Ｓ１２８Ｎ−Ｓ１４４Ｒ−Ｎ１８５Ｉ、Ｓ１０３Ｎ−Ｈ１２０Ｆ−Ｙ１６７Ｗ−Ｉ１９８Ｌ−Ｌ２３３Ｃ、Ｔ０２２Ｗ−Ｅ０８９Ｉ−Ｓ２１６Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０６Ｇ−Ｎ１１６Ａ−Ｓ２１２Ｍ−Ｔ２２４Ａ、Ｇ０２０Ｒ−Ｐ０５２Ｎ−Ｓ１０１Ａ−Ｉ１９８Ｌ−Ｌ２３３Ｃ、Ｅ０８９Ｉ−Ｙ０９１Ｆ−Ｎ１８５Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２７０Ｃ、Ｌ１１１Ｉ−Ａ２１５Ｆ−Ｐ２３９Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｒ１８６Ｋ−Ｌ２３３Ｃ−Ｑ２３６Ｎ、及びＧ０２３Ａ−Ｓ１０３Ｎ−Ｓ１０６Ｇ−Ｓ２１２Ｍ−Ａ２１５Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２５９】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ｓ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｇ２１１Ｑ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ２２Ｋ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ａ２３２Ｖ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１１６Ａ−Ｇ２１１Ｑ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｒ０４５Ｔ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｉ１９８Ｌ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１１６Ａ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２１５Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｖ１０４Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｖ１０４Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２１５Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｒ０１９Ｈ−Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｉ１９８Ｌ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｉ１９８Ｌ−Ａ２１５Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ、Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ２２Ｗ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｉ１９８Ｌ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ａ００１Ｔ−Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ２１１Ｑ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｒ０４５Ｔ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０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【０２６０】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＮ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｔ０２２Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ０７８Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｓ２４２Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｄ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ｈ２４９Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、及びＮ０１８Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ｓ２４２Ｒ−Ｈ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２６１】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ１１６Ａ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１６Ａ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１１６Ａ、Ｎ０４３Ｒ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｔ０３８Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｔ２１３Ａ、Ｐ０１４Ｌ−Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｓ１０１Ａ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ａ２１５Ｆ、Ｇ０２０Ｒ−Ｎ１１６Ａ−Ａ２１５Ｆ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ１１６Ａ−Ｎ２６９Ｒ、Ｇ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ａ２１５Ｆ、及びＧ０２０Ｒ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｒ０４５Ｔ−Ｎ１１６Ａ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２６２】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＮ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１１４Ｖ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、及びＮ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２６３】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＴ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＮ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２６４】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＨ０１７Ｒ−Ｔ０２２Ａ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｈ０１７Ｒ−Ｔ０２２Ａ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｇ１０２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、及びＴ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２６５】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｖ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ｇ−Ｖ１０４Ｖ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、及びＳ１０１Ｓ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｖ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２６６】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＶ０２６Ｆ−Ｖ０５１Ｗ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１０６Ｅ、Ｖ０２６Ｆ−Ｌ０３１Ｆ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｓ１６０Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ１００Ｓ−Ｎ１１６Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ２１８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０２２Ｌ−Ｔ０３８Ｆ−Ａ０４８Ｒ−Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１００Ｓ−Ｒ１８６Ｋ、Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ｎ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１４４Ｒ−Ａ２１５Ｄ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１０５Ｔ−Ｔ２１３Ａ−Ｌ２１７Ｅ−Ｓ２５６Ｎ、Ｎ０４３Ｗ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ２１２Ｍ−Ｎ２４３Ｆ、Ｖ０２６Ｆ−Ａ０４８Ｒ−Ｓ１０５Ｔ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２１８Ｄ−Ｔ２２４Ａ、Ｓ０２４Ｆ−Ｓ１０１Ｄ−Ｇ１１８Ｒ−Ａ２１５Ｄ−Ｌ２５０Ｉ−Ａ２７２Ｆ、Ｖ１２１Ｆ−Ｎ１８５Ｅ−Ｔ２２４Ａ−Ｐ２３９Ｇ、Ｔ０２２Ｌ−Ｌ０３１Ｆ−Ｇ１０２Ａ−Ｓ１２８Ｄ−Ｔ２２４Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１４４Ｒ−Ｌ２５０Ｉ、Ｔ０２２Ｌ−Ｔ０３８Ｆ−Ｖ１２１Ｆ−Ｓ１６０Ｄ−Ａ２７２Ｆ、Ｖ０２６Ｆ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１５９Ｃ−Ｒ１８６Ｋ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｆ−Ａ０４８Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１６６Ｄ−Ｌ２１７Ｅ、Ｇ０２３Ａ−Ｔ０３８Ｆ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１００Ｓ−Ｓ２１２Ｍ−Ａ２１５Ｄ、Ｇ１００Ｓ−Ｎ１１６Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ０７８Ｎ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｄ、Ｇ１０２Ａ−Ｓ１０３Ｎ−Ｓ１０５Ｔ−Ａ１９４Ｅ、Ｔ０２２Ｌ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１２８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｋ０２７Ｒ−Ｇ１００Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１６０Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｆ−Ｇ１０２Ａ−Ｒ１８６Ｋ−Ｔ２１３Ａ−Ｌ２１７Ｅ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ１０５Ｔ−Ｓ１８８Ｄ−Ｓ２１６Ｆ、Ｇ０２３Ａ−Ｇ１００Ｓ−Ａ１９４Ｅ−Ｓ２１２Ｍ、Ａ０４８Ｒ−Ｓ１２８Ｄ−Ｎ１８５Ｅ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１９４Ｅ、Ｇ０２０Ｋ−Ｋ０２７Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｔ０２２Ｌ−Ｇ０２３Ａ−Ｋ０２７Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ２１６Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１９４Ｅ−Ｐ２３９Ｇ、Ｔ０２２Ｌ−Ｓ０７８Ｎ−Ｎ１１６Ｌ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ２５６Ｎ、Ｋ０２７Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ｎ−Ｓ１０５Ｔ−Ａ２７２Ｆ、Ａ０４８Ｒ−Ｓ０７８Ｎ−Ｎ１１６Ｌ−Ｎ１８５Ｅ−Ｌ２１７Ｅ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｋ０２７Ｒ−Ｎ０６２Ｅ、Ｓ０２４Ｆ−Ｓ１０３Ｎ−Ｖ１０４Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ、Ｖ０２６Ｆ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ２５６Ｎ−Ａ２７２Ｆ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０４３Ｗ−Ｖ１０４Ｌ−Ｖ１２１Ｆ−Ｐ１２９Ｅ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ０７８Ｎ−Ｎ１１６Ｌ−Ｔ２２４Ａ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｖ０５１Ｗ−Ａ１５８Ｅ、Ｋ０２７Ｒ−Ｔ０３８Ｆ−Ｇ１０２Ａ−Ｎ１１６Ｌ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ０７８Ｎ−Ｓ１４４Ｒ−Ｓ２１２Ｍ、Ｌ０３１Ｆ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ２５６Ｎ−Ａ２７２Ｆ、Ｔ０２２Ｌ−Ｔ０３３Ｓ−Ｖ１０４Ｌ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１６０Ｄ−Ｒ１８６Ｋ、Ｓ０２４Ｆ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｒ１８６Ｋ−Ｔ２１３Ａ、Ｎ０４３Ｗ−Ｓ１０５Ｔ−Ｔ２１３Ａ−Ａ２１５Ｄ−Ｓ２１６Ｆ、Ｌ０３１Ｆ−Ｓ１０５Ｔ−Ｒ１８６Ｋ−Ｓ１８８Ｄ、Ｖ０２６Ｆ−Ａ１９４Ｅ−Ｔ２１３Ａ−Ｓ２５６Ｎ、及びＳ１０３Ｎ−Ｓ１６０Ｄ−Ｌ２５０Ｉ−Ｓ２５６Ｎから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２６７】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＴ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、及びＴ０２２Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２６８】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｐ２３９Ｇ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｔ２１３Ａ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｔ２１３Ａ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｐ２３９Ｇ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ−Ｐ２３９Ｇ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０４３Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１１８Ｒ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１１８Ｒ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ１１６Ｌ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｔ２１３Ａ、及びＧ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１１８Ｒ−Ｔ２１３Ａ−Ｐ２３９Ｇから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２６９】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＧ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ０２４Ｆ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｔ２１３Ａ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ、Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、及びＴ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２７０】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ０８７Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ１０９Ｒ−Ｓ２１２Ｐ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｅ２７１Ｖ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ１０９Ｒ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ１０９Ｒ−Ｓ２１２Ｐ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｅ２７１Ｖ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ１０９Ｒ−Ｓ２１２Ｐ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ８７Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ２１２Ｐ−Ｅ２７１Ｖ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ１０９Ｒ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ２１２Ｐ−Ｅ２７１Ｖ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｑ１０９Ｒ−Ｑ２４５Ｒ、及びＮ０７６Ｄ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ２１２Ｐ−Ｑ２４５Ｌ−Ｅ２７１Ｖから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２７１】
本発明はまた、単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつＳ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｓ−Ｓ０８７Ｎ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ａ２７０Ｔ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｙ２０９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ａ１７２Ｖ−Ｙ２０９Ａ、Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｓ−Ｓ１４１Ｇ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｓ−Ｓ０８５Ｎ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ａ１３３Ｖ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｗ２４１Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｇ１５９Ｄ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｖ２０３Ｉ、Ｓ０７８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｌ０２１Ｍ−Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ、Ｔ０３３Ｓ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｐ００５Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ１７４Ｔ、Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ａ１３３Ｖ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ、Ｉ００８Ｔ−Ｓ０２４Ｒ、Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｗ２４１Ｒ、Ｐ００５Ｓ−Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｓ２４２Ｐ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ａ１９４Ｔ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ−Ｎ２４３Ｆ、Ｐ０８６Ｗ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｄ−Ａ１３８Ｖ−Ｙ２０９Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ０８６Ｒ−Ｇ１１８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ２０１Ｓ、Ｓ０２４Ｒ−Ｐ２３９Ｑ、Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−、Ｓ０７８Ｒ−Ｐ０８６Ｗ、Ｋ２３５Ｆ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｇ１１８Ｒ−Ａ１７２Ｖ、Ｈ０１７Ｙ−Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ、Ｔ０３３Ｓ−Ｌ１４８Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ、Ｔ０３３Ｓ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｃ−Ｔ０３３Ｓ、Ｇ１１８Ｒ−Ａ１９４Ｔ、Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ、Ｇ１１８Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｇ１１８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１４１Ｇ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ２７４Ｉ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｙ２０９Ａ、Ｐ０８６Ｗ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｖ００４Ｅ−Ｔ０３３Ｓ−Ｓ０７８Ｒ、Ｐ０８６Ｗ−Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ａ０１５Ｔ−Ｔ０３３Ｓ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ０８６Ｗ−Ｓ１５６Ｌ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｇ１１８Ｒ−Ｎ２４３Ｆ−Ｒ２６９Ｈ、Ｙ２０９Ａ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｒ２４７Ｈ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ａ２２８Ｔ、Ｓ０７８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ａ１７４Ｖ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｋ２３５Ｆ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｋ２３５Ｆ−Ｗ２４１Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ａ１５１Ｖ、Ｓ０２４Ｒ−Ｖ１０４Ａ、Ｔ０３３Ｓ−Ａ０４８Ｔ、Ｑ０１２Ｈ−Ｖ１０４Ａ−Ｇ１１８Ｒ、Ｇ１１８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｔ２５３Ａ、Ｔ１４３Ａ−Ｙ２０９Ａ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｎ２４３Ｆ、Ｔ０３３Ｓ−Ｐ２３９Ｔ、Ｙ２０９Ａ−Ｎ２４３Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ｔ０３３Ｓ−Ｐ１２９Ｈ−Ｎ１８４Ｄ−Ｔ２５３Ｍ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ０８５Ｖ−Ｐ０８６Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｋ２３５Ｆ、Ｓ０２４Ｒ−Ａ２７２Ｐ、及びＳ０２４Ｒ−Ｒ２６９Ｃから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、このサブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号１で示されるＢ．アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列と対応させて番号付けされる、サブチリシン変異体を提供する。
【０２７２】
本発明はまた、単離されたプロテアーゼ変異体であって、次の変異：Ｘ１Ｒ、Ｘ２Ｓ、Ｘ４Ｒ、Ｘ４Ｓ、Ｘ９Ａ、Ｘ１０Ｓ、Ｘ１４Ｋ、Ｘ１６Ｓ、Ｘ１７Ｒ、Ｘ１８Ｒ、Ｘ２０Ｒ、Ｘ２２Ａ、Ｘ２２Ｒ、Ｘ２４Ｒ、Ｘ２４Ｗ、Ｘ２５Ｒ、Ｘ２５Ｖ、Ｘ２６Ｆ、Ｘ４２Ｉ、Ｘ４３Ｒ、Ｘ４３Ａ、Ｘ４６Ｒ、Ｘ５２Ｆ、Ｘ５２Ｅ、Ｘ５２Ｎ、Ｘ５７Ｒ、Ｘ５９Ａ、Ｘ６２Ｅ、Ｘ６２Ｑ、Ｘ６８Ａ、Ｘ６８Ｃ、Ｘ７１Ｇ、Ｘ７２Ｃ、Ｘ７４Ｃ、Ｘ７５Ａ、Ｘ７５Ｆ、Ｘ７５Ｒ、Ｘ７６Ｄ、Ｘ７８Ｒ、Ｘ８２Ｒ、Ｘ８６Ｗ、Ｘ８９Ｐ、Ｘ８９Ｔ、Ｘ８９Ｇ、Ｘ８９Ｈ、Ｘ８９Ｉ、Ｘ８９Ｖ、Ｘ８９Ｗ、Ｘ９１Ｎ、Ｘ９４Ｎ、Ｘ１００Ｓ、Ｘ１０１Ａ、Ｘ１０１Ｎ、Ｘ１０１Ｇ、Ｘ１０１Ｄ、Ｘ１０３Ｇ、Ｘ１０３Ｎ、Ｘ１０４Ｌ、Ｘ１０４Ｉ、Ｘ１０６Ｖ、Ｘ１０６Ｇ、Ｘ１０８Ｉ、Ｘ１１１Ｖ、Ｘ１１２Ｖ、Ｘ１１５Ｋ、Ｘ１１５Ｒ、Ｘ１１７Ｆ、Ｘ１１８Ｉ、Ｘ１２１Ｆ、Ｘ１２８Ｄ、Ｘ１２８Ｆ、Ｘ１２８Ｌ、Ｘ１２８Ｎ、Ｘ１２９Ｅ、Ｘ１４４Ｒ、Ｘ１４８Ｉ、Ｘ１５８Ｅ、Ｘ１５９Ｅ、Ｘ１６０Ｄ、Ｘ１６６Ｄ、Ｘ１８５Ｅ、Ｘ１８５Ｉ、Ｘ１８６Ｈ、Ｘ１８８Ｅ、Ｘ１８８Ｄ、Ｘ１９７Ｆ、Ｘ２０３Ｅ、Ｘ２０９Ｓ、Ｘ２０９Ｎ、Ｘ２０９Ｆ、Ｘ２０９Ｔ、Ｘ２０９Ｅ、Ｘ２０９Ｈ、Ｘ２０９Ｇ、Ｘ２１０Ｒ、Ｘ２１２Ｉ、Ｘ２１２Ｆ、Ｘ２１４Ｆ、Ｘ２１５Ｎ、Ｘ２１５Ｄ、Ｘ２１５Ｅ、Ｘ２１７Ｅ、Ｘ２１７Ｎ、Ｘ２２４Ａ、Ｘ２３０Ｅ、Ｘ２３１Ｉ、Ｘ２３６Ｆ、Ｘ２３８Ｒ、Ｘ２３８Ｋ、Ｘ２３９Ｋ、Ｘ２３９Ｇ、Ｘ２３９Ｒ、Ｘ２３９Ｓ、Ｘ２４１Ｒ、Ｘ２４２Ｒ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４３Ｒ、Ｘ２４４Ｒ、Ｘ２４８Ｉ、Ｘ２４８Ｖ、Ｘ２４９Ｒ、Ｘ２５０Ｉ、Ｘ２５２Ｒ、Ｘ２５３Ｒ、Ｘ２６２Ｄ、Ｘ２６３Ｆ、Ｘ２６５Ｆ、Ｘ２６７Ｖ、Ｘ２６７Ｎ、Ｘ２６９Ｉ、Ｘ２６９Ｒ、Ｘ２７１Ｆ、Ｘ２７１Ｉ、Ｘ２７１Ｈ、Ｘ２７１Ｐ、Ｘ２７１Ｔ、Ｘ２７１Ｖ、Ｘ２７１Ｌ及びＸ２７２Ｆのうちの１つ以上、好ましくは２つ以上、又は好ましくは３つ以上の変異を含み、かつ任意選択で、次の変異：Ｘ１０３Ａ、Ｘ１５９Ｄ、Ｘ２３６Ｈ、Ｘ２４５Ｒ、Ｘ２４８Ｄ及びＸ２５２Ｋのうちの１つ以上を含む、単離されたプロテアーゼ変異体を提供する。
【０２７３】
本発明は、単離されたプロテアーゼ変異体であって、次の変異の組：
ａ）Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０４３Ｗ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ１００Ｓ−Ｎ１１６Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１６６Ｄ−Ｎ２４３Ｆ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｔ２１３Ａ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ、Ｎ０４３Ｗ−Ｓ１０１Ｄ−Ｓ２１２Ｍ−Ｎ２４３Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ、Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｔ２１３Ａ、Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ０２４Ｆ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｑ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｌ−Ｐ１２９Ｑ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｎ１８３Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｄ−Ｓ１０３Ｎ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１４４Ｒ−Ａ２１５Ｄ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１３０Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｎ０４３Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１２８Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２４８Ｄ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ａ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｔ０２２Ｌ−Ｔ０３８Ｆ−Ａ０４８Ｒ−Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１００Ｓ−Ｒ１８６Ｋ、Ｔ０３３Ｓ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ２１８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ−Ｎ２４３Ｆ、Ｖ０２６Ｆ−Ａ０４８Ｒ−Ｓ１０５Ｔ−Ｔ２１３Ａ−Ｎ２１８Ｄ−Ｔ２２４Ａ、Ｖ０２６Ｆ−Ｌ０３１Ｆ−Ｓ０７８Ｎ−Ｇ１０２Ａ−Ｓ１６０Ｄ、Ｖ０２６Ｆ−Ｖ０５１Ｗ−Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１０６Ｅ、Ｖ１０４Ｌ−Ｓ１０５Ｔ−Ｔ２１３Ａ−Ｌ２１７Ｅ−Ｓ２５６Ｎ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ａ０１６Ｓ−Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ａ０１６Ｓ−Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ、Ｇ０２０Ｋ−Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｇ０２０Ｋ−Ｎ０４３Ｗ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２０Ｋ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ、Ｇ０２３Ａ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ−Ｓ１８８Ｄ−Ｐ２３９Ｇ、Ｇ０２３Ａ−Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｇ１１８Ｒ、Ｈ０１７Ｒ−Ｔ０２２Ａ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｄ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｇ１５９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｒ１８６Ｈ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０６２Ｅ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ、Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｍ２２２Ｑ−Ｑ２４５Ｒ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｎ１１６Ｌ−Ｐ２３９Ｇ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ０６２Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｔ２１３Ａ、Ｓ０２４Ｆ−Ｎ１１６Ｌ、Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０４３Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ｌ２１７Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｇ１５９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｌ１４８Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｎ２３８Ｒ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｐ１２９Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ１５８Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ０２４Ｒ−Ｓ１０１Ｇ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ｓ１２８Ｎ−Ｐ１２９Ｅ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｉ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ−Ｅ２７１Ｆ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１０３Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｓ１８８Ｄ−Ａ２３２Ｖ−Ｑ２４５Ｒ−Ｎ２４８Ｄ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−Ｅ２７１Ｆ、Ｓ１０１Ａ−Ｓ１２８Ｎ−Ａ１５８Ｅ−Ｙ２０９Ｅ−Ｈ２４９Ｒ、Ｓ１０１Ａ−Ｖ１０４Ｌ−Ａ１５８Ｅ−Ｒ１８６Ｈ−
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−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ｇ２１１Ｑ−Ａ２１５Ｆ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−Ｓ０２４Ｒ−Ｎ０７６Ｄ−Ｓ１０１Ａ−Ｎ１８３Ｄ−Ｇ２１１Ｑ−Ｈ２４９Ｒ、Ｎ０１８Ｒ−Ｔ０２２Ｗ−
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銈볯銼볯馼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯鞼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯邼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯邼볯鞼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯邼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯鞼볯銈볯銼볯馼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯鞼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯鞼볯銈볯醼볯邼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯邼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯閼볯銈볯銼볯銼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯銼볯銼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯銼볯钼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯鞼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯邼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯鞼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯邼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯ꮼ裢꺼볯钼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯㲐牢ਾ볯颼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯銼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯醼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯鞼볯銈볯醼볯鞼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯鎼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯鞼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯醼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼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邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯銈볯銼볯颼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯㲨牢ਾ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯颼볯꒼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯颼볯꒼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼裢ꆼ볯鞼볯뚼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯馼볯ꆼ裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢놼볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢겼볯鎼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼裢뒼볯隼볯ꮼ胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뚼볯閼볯겼裢뎼볯钼볯늼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢늼볯钼볯뒼裢ꆼ볯鎼볯ꖼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢Ꞽ볯醼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銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯銼볯랼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼胣뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯醼볯銈볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯閼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼戼㹲颼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯钼볯꒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼胣뢼볯钼볯꒼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯邼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯膀볯邼볯邼볯銈볯銼볯랼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯鎼볯뚼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯钼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯邼볯ꦼ胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯銼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯鞼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯醼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯閼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯钼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯鞼볯겼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯꒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯鎼볯뚼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯馼볯궼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯Ꞽ胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꖼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯钼볯꒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯钼볯뒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯鎼볯뚼胣뢼볯醼戼㹲颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯鎼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯銼볯膀볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼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鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯銼볯랼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯钼볯꒼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼胣뢼볯钼볯꒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯邼볯ꦼ胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯颼볯ꦼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꆼ戼㹲銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯钼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯鎼볯膀볯邼볯邼볯銈볯銼볯랼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯钼볯뒼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯邼볯ꦼ胣뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯醼볯ꚼ裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯銼볯늼裢뢼볯鞼볯꒼裢뢼볯馼볯겼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯钼볯꒼裢뢼볯鞼볯늼裢뢼볯邼볯Ꞽ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼裢뢼볯隼볯늼裢뢼볯鞼볯뎼胣뢼볯銼볯늼裢뢼볯銼볯랼裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꆼ裢뢼볯邼볯ꦼ裢뢼볯醼볯ꆼ裢뢼볯颼볯꒼裢뢼볯醼볯놼裢뢼볯鎼볯뚼裢뢼볯钼볯늼胣뢼볯醼볯늼裢뢼볯銼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銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯銼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯鞼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯鞼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯鞼볯銈볯銼볯馼볯銈볯銼볯馼볯膀迥뎁볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯鞼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯讁苣뢁諦閁苣讂苣龃菣뢅뷧鮏臣蒵臣袐苣鮁苣ꮐ苣ꊂ菣躃藩超裥讁苣ꪁ苣膀臣꺁苣隃菣ꪃ苣뎃ꓥ낕뷤꺁苣龃菣뢅뷤꺽臣膀藩鞈闧랏볯ꞁꓧ閁苣讂볯躼苣龃菣ꪃ苣閃苣랂苣뎃苣꺁苣隃菣ꪃ苣뎃볯낼볯馀臣ꊂ菣躃藩超裥ꢁ꿥鲿臣鮁臣ꪕ迥颻臣閁苣讂胣뢠藩銂迦鮾臣讂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯鎼볯隼胣㲑䐯噉ਾ†鳦몙飦꾁胣邃菣ꮃ苣떂菣膃菣랂菣覤闧鎽苣뎂菣覃臣讂ꃦ뢅臣芁臣ꚁ胣鎁臣떂菣膃菣랂菣覤闧鎽臣膀苣뎃菣꾂돨蚈꟨뮴胦銂鳦馁苣邈蛧讞臣芁苣膀臣ꒁ볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯膀볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯銼볯鎼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯隼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯醼볯隼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯銼볯閼볯膀迥뎁볯邼볯邼볯銈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銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯銼볯랼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢꺼볯颼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢꺼볯钼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢꺼볯钼볯꒼裢늼볯钼볯뒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢꺼볯隼볯늼胣꺼볯钼볯꒼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯鞼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣뎼볯銼볯늼裢늼볯钼볯뒼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢꺼볯隼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯邼볯ꆼ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢Ꞽ볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뚼볯邼볯ꦼ胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢겼볯颼볯ꦼ裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ戼㹲銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢Ꞽ볯銼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢ꢼ볯钼볯늼胣뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢ꢼ볯钼볯늼裢꺼볯隼볯늼胣뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢Ꞽ볯銼볯늼裢꺼볯钼볯늼裢늼볯钼볯뒼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢Ꞽ볯銼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢Ꞽ볯銼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯钼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯颼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯鎼볯膀볯邼볯邼볯銈볯銼볯랼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣뎼볯銼볯늼裢꺼볯钼볯늼裢늼볯钼볯뒼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯邼볯ꆼ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뎼볯邼볯ꆼ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣ꮼ볯銼볯늼裢늼볯钼볯뒼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯鞼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢꺼볯隼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢늼볯钼볯뒼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢Ꞽ볯銼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뚼볯邼볯ꦼ胣뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢Ꞽ볯銼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯颼볯꒼裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢ꦼ볯馼볯겼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯钼볯꒼裢뎼볯鞼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢꺼볯隼볯늼裢늼볯鞼볯뎼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯邼볯ꆼ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯鎼볯뚼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隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯閼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯膀볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯醼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯鞼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯銈볯銼볯鞼볯膀볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯隼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯醼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯閼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯钼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀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벂ꓥ낕뷤銂迦鮾臣讂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯鎼볯銼胣㲑䐯噉ਾ†鳦몙飦꾁胣邃菣ꮃ苣떂菣膃菣랂菣覤闧鎽苣뎂菣覃臣讂ꃦ뢅臣芁臣ꚁ胣뾂菣醃苣ꪳ裥ꎧ듦Ꞁ苣覜臣膀臣ꒁ볯醼볯膀볯銼볯膀볯銼볯膀볯銼볯膀볯銼볯膀볯銼볯膀볯鎼볯膀볯钼볯膀볯钼볯膀볯钼볯膀볯颼볯膀볯馼볯膀볯馼볯膀볯馼볯膀볯醼볯뎼胣늼볯邼볯膀볯醼볯ꢼ胣늼볯邼볯膀볯醼볯ꚼ胣놼볯銼볯膀볯醼볯ꮼ胣낼볯钼볯膀볯醼볯놼胣ꆼ볯閼볯膀볯醼볯ꚼ胣ꆼ볯隼볯膀볯醼볯늼胣ꢼ볯鞼볯膀볯醼볯ꚼ胣꺼볯颼볯膀볯醼볯ꮼ胣Ꞽ볯邼볯膀볯銼볯ꮼ胣Ꞽ볯邼볯膀볯銼볯ꆼ胣뒼볯銼볯膀볯銼볯림胣뒼볯銼볯膀볯銼볯놼胣뒼볯銼볯膀볯銼볯랼胣Ꞽ볯鎼볯膀볯銼볯뎼胣Ꞽ볯鎼볯膀볯銼볯늼胣뎼볯钼볯膀볯銼볯랼胣뎼볯钼볯膀볯銼볯ꢼ胣뎼볯钼볯膀볯銼볯뚼胣Ꞽ볯閼볯膀볯銼볯늼胣뚼볯隼볯膀볯銼볯겼胣ꮼ볯鞼볯膀볯銼볯늼胣ꮼ볯鞼볯膀볯銼볯ꆼ胣뚼볯颼볯膀볯銼볯ꖼ胣ꆼ볯馼볯膀볯鎼볯ꖼ胣겼볯醼볯膀볯鎼볯뎼胣뒼볯鎼볯膀볯鎼볯꒼胣Ꞽ볯钼볯膀볯鎼볯궼胣뎼볯隼볯膀볯鎼볯ꚼ胣뎼볯隼볯膀볯鎼볯겼胣뒼볯颼볯膀볯鎼볯늼胣낼볯邼볯膀볯钼볯겼胣낼볯邼볯膀볯钼볯랼胣낼볯邼볯膀볯钼볯늼胣겼볯銼볯膀볯钼볯ꆼ胣꺼볯鎼볯膀볯钼볯ꦼ胣꺼볯鎼볯膀볯钼볯늼胣꺼볯鎼볯膀볯钼볯랼胣꺼볯鎼볯膀볯钼볯뒼胣Ꞽ볯隼볯膀볯钼볯늼胣ꚼ볯邼볯膀볯閼볯랼胣뚼볯醼볯膀볯閼볯ꢼ胣낼볯銼볯膀볯閼볯ꖼ胣낼볯銼볯膀볯閼볯림胣뒼볯鞼볯膀볯閼볯ꆼ胣놼볯馼볯膀볯閼볯늼胣꒼볯邼볯膀볯隼볯놼胣꒼볯邼볯膀볯隼볯ꖼ胣꺼볯銼볯膀볯隼볯뚼胣Ꞽ볯鎼볯膀볯隼볯뒼胣Ꞽ볯鎼볯膀볯隼볯ꆼ胣Ꞽ볯鎼볯膀볯隼볯ꢼ胣Ꞽ볯鎼볯膀볯隼볯꒼胣Ꞽ볯鎼볯膀볯隼볯낼胣ꢼ볯钼볯膀볯隼볯뒼胣뚼볯颼볯膀볯隼볯ꎼ胣ꆼ볯馼볯膀볯隼볯뒼胣ꆼ볯馼볯膀볯隼볯랼胣뒼볯醼볯膀볯鞼볯Ꞽ胣ꦼ볯銼볯膀볯鞼볯ꎼ胣겼볯閼볯膀볯鞼볯ꚼ胣겼볯閼볯膀볯鞼볯늼胣꺼볯隼볯膀볯鞼볯늼胣뎼볯颼볯膀볯鞼볯ꦼ胣뎼볯颼볯膀볯鞼볯랼胣ꦼ볯馼볯膀볯颼볯늼胣겼볯銼볯膀볯颼볯뒼胣겼볯銼볯膀볯颼볯늼胣겼볯銼볯膀볯颼볯궼胣낼볯隼볯膀볯颼볯겼胣낼볯隼볯膀볯颼볯낼胣ꖼ볯馼볯膀볯颼볯Ꞽ胣ꖼ볯馼볯膀볯颼볯랼胣ꖼ볯馼볯膀볯颼볯뚼胣ꖼ볯馼볯膀볯颼볯ꚼ胣ꖼ볯馼볯膀볯馼볯꺼胣림볯醼볯膀볯馼볯ꚼ胣ꮼ볯钼볯膀볯馼볯ꚼ胣뎼볯馼볯膀볯馼볯낼胣뎼볯馼볯膀볯馼볯궼胣Ꞽ볯邼볯뎼胣Ꞽ볯邼볯꺼胣Ꞽ볯邼볯놼胣Ꞽ볯邼볯ꦼ胣뎼볯邼볯ꆼ胣뎼볯邼볯꺼胣뎼볯邼볯Ꞽ胣뎼볯邼볯꒼胣뎼볯邼볯뒼胣뎼볯邼볯꒼胣뎼볯邼볯ꖼ胣뎼볯邼볯낼胣뎼볯邼볯ꚼ胣Ꞽ볯邼볯ꆼ胣Ꞽ볯邼볯뒼胣Ꞽ볯邼볯꺼胣Ꞽ볯邼볯ꢼ胣Ꞽ볯邼볯ꖼ胣뎼볯邼볯Ꞽ胣뎼볯邼볯꺼胣뎼볯邼볯꒼胣뎼볯邼볯ꆼ胣뚼볯邼볯겼胣뚼볯邼볯ꦼ胣뚼볯邼볯ꖼ胣뚼볯邼볯꒼胣뎼볯邼볯뒼胣뎼볯邼볯ꖼ胣뎼볯邼볯놼胣뎼볯邼볯Ꞽ胣뎼볯邼볯뒼胣뎼볯邼볯ꖼ胣뎼볯邼볯꒼胣뎼볯邼볯ꆼ胣뎼볯邼볯뚼胣뎼볯邼볯ꚼ胣ꦼ볯邼볯궼胣ꦼ볯邼볯ꚼ胣ꆼ볯邼볯ꦼ胣ꆼ볯邼볯Ꞽ胣놼볯邼볯궼胣겼볯醼볯뚼胣겼볯醼볯ꦼ胣ꖼ볯醼볯뚼胣ꖼ볯醼볯겼胣ꖼ볯醼볯놼胣ꆼ볯醼볯Ꞽ胣Ꞽ볯醼볯ꮼ胣Ꞽ볯醼볯늼胣꺼볯醼볯ꮼ胣꺼볯醼볯ꆼ胣꺼볯醼볯겼胣꺼볯醼볯ꚼ胣Ꞽ볯醼볯늼胣Ꞽ볯醼볯ꦼ胣궼볯醼볯ꎼ胣ꢼ볯銼볯ꆼ胣ꢼ볯銼볯ꚼ胣ꢼ볯銼볯늼胣뚼볯銼볯ꚼ胣뚼볯銼볯ꚼ胣뚼볯銼볯ꖼ胣꺼볯銼볯Ꞽ胣꺼볯銼볯ꖼ胣겼볯銼볯뎼胣뎼볯銼볯꒼胣뎼볯銼볯ꚼ胣뎼볯銼볯겼胣뎼볯銼볯꺼胣뎼볯銼볯ꢼ胣뎼볯銼볯궼胣뎼볯銼볯ꦼ胣뎼볯銼볯놼胣낼볯銼볯ꖼ胣뎼볯鎼볯ꆼ胣뎼볯鎼볯ꖼ胣ꆼ볯鎼볯Ꞽ胣뎼볯钼볯늼胣뚼볯钼볯겼胣겼볯钼볯ꦼ胣ꆼ볯閼볯ꖼ胣Ꞽ볯閼볯꒼胣Ꞽ볯閼볯ꖼ胣Ꞽ볯閼볯ꎼ胣뎼볯隼볯꒼胣뎼볯隼볯꒼胣뎼볯隼볯ꖼ胣림볯隼볯랼胣궼볯鞼볯뚼胣뚼볯鞼볯ꎼ胣꒼볯颼볯ꆼ胣놼볯颼볯늼胣꺼볯颼볯ꦼ胣꺼볯颼볯꒼胣꺼볯颼볯궼胣꺼볯颼볯늼胣꺼볯颼볯ꚼ胣꺼볯颼볯늼胣꺼볯颼볯ꖼ胣꺼볯颼볯뚼胣꺼볯颼볯ꦼ胣늼볯颼볯ꢼ胣늼볯颼볯ꮼ胣뎼볯颼볯ꖼ胣뎼볯颼볯꒼胣뎼볯颼볯늼胣림볯馼볯ꢼ胣림볯馼볯랼胣ꆼ볯馼볯ꖼ胣ꆼ볯馼볯뚼胣ꆼ볯馼볯ꚼ胣꒼볯馼볯ꚼ胣꒼볯馼볯ꚼ胣ꦼ볯馼볯겼胣ꦼ볯馼볯ꚼ胣뚼볯邼볯ꖼ胣뚼볯邼볯ꎼ胣뒼볯邼볯뎼胣림볯邼볯뎼胣림볯邼볯꺼胣림볯邼볯ꚼ胣림볯邼볯뒼胣림볯邼볯ꖼ胣림볯邼볯ꢼ胣림볯邼볯Ꞽ胣림볯邼볯겼胣낼볯醼볯늼胣낼볯醼볯뚼胣낼볯醼볯겼胣Ꞽ볯醼볯놼胣Ꞽ볯醼볯늼胣뎼볯醼볯ꦼ胣뎼볯醼볯궼胣뎼볯醼볯ꚼ胣뒼볯醼볯ꆼ胣림볯醼볯ꚼ胣ꆼ볯醼볯꺼胣ꆼ볯醼볯꒼胣ꆼ볯醼볯ꖼ胣ꆼ볯醼볯ꢼ胣ꆼ볯醼볯ꚼ胣뎼볯醼볯ꚼ胣뎼볯醼볯ꆼ胣겼볯醼볯ꖼ胣겼볯醼볯꺼胣겼볯醼볯꒼胣꺼볯醼볯꒼胣꺼볯醼볯낼胣꺼볯醼볯ꖼ胣뒼볯銼볯ꆼ胣뒼볯銼볯Ꞽ胣뚼볯銼볯ꦼ胣ꆼ볯鎼볯ꖼ胣ꆼ볯鎼볯ꦼ胣ꆼ볯鎼볯ꎼ胣ꆼ볯鎼볯뚼胣겼볯鎼볯ꎼ胣뚼볯鎼볯ꚼ胣ꮼ볯鎼볯ꚼ胣놼볯鎼볯ꚼ胣놼볯鎼볯꺼胣놼볯鎼볯ꢼ胣꺼볯鎼볯늼胣꺼볯鎼볯ꮼ胣꺼볯鎼볯겼胣낼볯鎼볯ꮼ胣낼볯鎼볯Ꞽ胣낼볯鎼볯늼胣낼볯鎼볯늼胣낼볯鎼볯ꢼ胣낼볯鎼볯뒼胣낼볯鎼볯꺼胣낼볯鎼볯뎼胣낼볯鎼볯ꚼ胣뎼볯钼볯늼胣랼볯钼볯늼胣뎼볯钼볯겼胣뎼볯钼볯늼胣꺼볯钼볯ꚼ胣꺼볯钼볯늼胣뚼볯钼볯늼胣놼볯钼볯늼胣ꦼ볯钼볯뎼胣꺼볯钼볯꒼胣꺼볯钼볯뚼胣꺼볯钼볯ꦼ胣꺼볯钼볯늼胣ꢼ볯钼볯늼胣ꢼ볯钼볯뒼胣겼볯閼볯ꦼ胣ꮼ볯閼볯늼胣ꮼ볯閼볯뎼胣꺼볯閼볯ꦼ胣꺼볯閼볯ꚼ胣꺼볯閼볯늼胣꺼볯閼볯ꮼ胣꺼볯閼볯ꢼ胣뒼볯閼볯ꦼ胣뒼볯閼볯늼胣뒼볯閼볯ꚼ胣ꆼ볯閼볯ꎼ胣뎼볯閼볯꺼胣Ꞽ볯閼볯늼胣뒼볯隼볯뚼胣뒼볯隼볯ꦼ胣겼볯隼볯꒼胣겼볯隼볯ꢼ胣림볯隼볯ꚼ胣뎼볯隼볯ꚼ胣겼볯隼볯뚼胣겼볯隼볯꺼胣겼볯隼볯궼胣꺼볯隼볯ꦼ胣꺼볯隼볯늼胣ꆼ볯鞼볯ꎼ胣ꖼ볯鞼볯ꦼ胣ꖼ볯鞼볯ꢼ胣ꖼ볯鞼볯뚼胣ꖼ볯鞼볯ꢼ胣ꖼ볯鞼볯궼胣ꖼ볯鞼볯겼胣ꖼ볯鞼볯낼胣ꖼ볯鞼볯ꆼ胣ꖼ볯鞼볯ꚼ胣ꖼ볯鞼볯뒼胣ꆼ볯鞼볯ꚼ胣ꆼ볯鞼볯ꚼ胣ꆼ볯鞼볯늼胣ꆼ볯鞼볯ꚼ胣ꆼ볯鞼볯ꦼ胣誏臣뒼볯鞼볯Ꞽ臣覂臩麊臣貂苣ꊂ菣躃藩꺽迦꺁뗧뾁郥辂臣銂郥肂苣龃菣뢅藩鞈臣覂臣誂胣鎁臣떂菣膃菣랂菣覤闧鎽臣ꊂ菣躃藩趽뷧꾁胣超裥ꪕ迥醼臣몤臣貂苣ꊼ볯ꊂ菣궃菣놂菣ꆂ苣ꢂ菣릂臣떂菣膃菣랂菣ꊼ볯꺼胢꺁苣龃菣뢅藩鞈臣뺯뿥閁臣ꚁ闧랏믤醁臣貂苣膀ꃦ뢅苣邏뻤馁苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯馼볯醀⼼䥄㹖 겜駧躘臣뺁臣膀菣膃菣릂菣것菣뾂苣꺁苣隃菣ꪃ苣뎃볯Ꞽ볯隼菣궃菣ꊂ菣벂臣邃菣ꮃ苣떂菣膃菣랂菣鞃菣蚃苣벃苣覤闧鎽苣뎂菣覃臣讂ꃦ뢅臣芁臣ꚁ胣鎁臣邃菣ꮃ苣뮃菣뎃苣릂臣떂菣膃菣랂菣Ꞽ볯鎼볯鞃菣蚃苣벃苣꾁胣超裥ꪕ迥銼臣몤臣貂苣ꊂ菣躃藩超裥讁苣ꪁ苣膀臣ꒁ臣꺁菣궃菣ꊂ菣벂ꓥ낕뷤꾁胣超裥ꪕ迥銼臣ꊂ菣躃藩超裥ꢁ臣膀苣龃菣뢅뷤꺽볯膀볯膀볯膀볯膀볯膀볯膀볯邼胣醼볯膀볯钼胣醼볯膀볯隼胣醼볯膀볯颼胣銼볯膀볯銼胣銼볯膀볯钼胣銼볯膀볯隼胣銼볯膀볯颼胣銼볯膀볯邼胣鎼볯膀볯鎼胣鎼볯膀볯閼胣鎼볯膀볯颼胣钼볯膀볯銼胣钼볯膀볯閼胣钼볯膀볯颼胣閼볯膀볯醼胣閼볯膀볯閼胣閼볯膀볯馼胣隼볯膀볯銼胣隼볯膀볯钼胣隼볯膀볯馼胣鞼볯膀볯銼胣鞼볯膀볯閼胣鞼볯膀볯颼胣鞼볯膀볯醼胣颼볯膀볯閼胣颼볯膀볯馼胣馼볯膀볯銼胣馼볯膀볯馼胣醼볯邼胣醼볯醼胣醼볯銼胣醼볯鎼胣醼볯钼胣醼볯閼胣醼볯隼胣醼볯鞼胣醼볯颼胣醼볯馼胣醼볯醼胣醼볯銼胣醼볯钼胣醼볯閼胣醼볯隼胣醼볯鞼胣醼볯颼胣醼볯馼胣醼볯邼胣醼볯醼胣醼볯鎼胣醼볯钼胣醼볯颼胣醼볯馼胣醼볯銼胣醼볯颼胣钼볯膀볯钼볯膀볯钼볯膀볯閼볯膀볯閼볯膀볯隼볯膀볯隼볯膀볯隼볯膀볯鞼볯膀볯鞼볯膀볯颼볯膀볯颼볯膀볯颼볯膀볯颼볯膀볯颼볯膀볯颼볯膀볯馼볯膀볯馼볯膀볯馼볯膀볯馼볯膀볯邼볯膀볯邼볯膀볯邼볯膀볯醼볯膀볯醼볯膀볯醼볯膀볯醼볯膀볯醼볯膀볯醼볯膀볯醼볯膀볯醼볯膀볯醼볯膀볯銼볯膀볯銼볯膀볯鎼볯膀볯鎼볯膀볯鎼볯膀볯鎼볯膀볯鎼볯膀볯鎼볯膀볯鎼볯膀볯鎼볯膀볯鎼볯膀볯鎼볯膀볯钼볯膀볯钼볯膀볯钼볯膀볯钼볯膀볯钼볯膀볯钼볯膀볯钼볯膀볯钼볯膀볯閼볯膀볯閼볯膀볯閼볯膀볯閼볯膀볯閼볯膀볯閼볯膀볯閼볯膀볯隼볯膀볯隼볯膀볯隼볯膀볯隼볯膀볯隼볯膀볯隼볯膀볯鞼볯膀볯鞼볯膀볯鞼볯膀볯鞼볯膀迥뎁볯鞼볯讁苣뢁諦閁苣讂苣龃菣뢅뷤꺽臣꺁볯膀볯膀볯膀볯膀볯膀볯膀볯膀볯膀볯邼胣醼볯膀볯銼胣醼볯膀볯钼胣醼볯膀볯隼胣醼볯膀볯颼胣醼볯膀볯邼胣銼볯膀볯銼胣銼볯膀볯钼迥꾁볯閼껧肉믤许臣覤闧ꮁ苣誂闧ꪁ苣ꊂ菣躃藩超裥讁苣ꪁ苣膀臣꺁苣隃菣ꪃ苣뎃ꓥ낕뷤꺁苣龃菣뢅뷤꺽臣膀藩鞈闧랏볯ꞁꓧ閁苣讂볯躼苣龃菣ꪃ苣閃苣랂苣뎃苣꺁苣隃菣ꪃ苣뎃볯낼볯馀臣ꊂ菣躃藩超裥ꢁ꿥鲿臣鮁臣ꪕ迥颻臣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銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯鞼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯ꮼ裢꺼볯钼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯钼볯늼裢늼볯钼볯뒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢꺼볯隼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯銼볯랼裢뎼볯鞼볯늼裢뎼볯邼볯ꆼ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꆼ볯鎼볯뚼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢꺼볯钼볯늼裢늼볯钼볯뒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣뎼볯銼볯늼裢꺼볯钼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯鞼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯钼볯꒼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯鞼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢꺼볯隼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢꺼볯醼볯ꆼ裢Ꞽ볯醼볯놼裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯钼볯늼裢늼볯钼볯뒼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯鞼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢놼볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯閼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢ꢼ볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯閼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯馼볯銈볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯颼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯鎼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯銼볯랼裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯銼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯ꆼ裢ꦼ볯馼볯겼裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꢼ볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뎼볯銼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼胣뎼볯鞼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼裢꺼볯隼볯늼胣뎼볯銼볯늼裢꺼볯钼볯늼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯鞼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢Ꞽ볯銼볯늼裢꺼볯钼볯꒼裢꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯醼볯늼裢뒼볯銼볯銈볯邼볯钼볯銈볯邼볯隼볯銈볯醼볯隼볯銈볯銼볯鎼볯銈볯銼볯馼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯钼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯钼볯膀볯邼볯邼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯邼볯閼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯鎼볯銈볯邼볯隼볯銈볯邼볯颼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯邼볯銼볯銈볯醼볯醼볯銈볯醼볯鎼볯銈볯醼볯钼볯銈볯銼볯醼볯銈볯銼볯閼볯銈볯銼볯銼볯銈볯銼볯閼볯膀볯邼볯邼볯銈볯銼볯랼裢뎼볯鞼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢뒼볯醼볯ꆼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뎼볯鞼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢ꆼ볯醼볯ꚼ裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣Ꞽ볯銼볯늼裢뒼볯銼볯랼裢뎼볯鞼볯늼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯邼볯ꆼ裢뚼볯邼볯ꦼ裢꺼볯醼볯ꆼ裢꺼볯颼볯꒼裢ꆼ볯鎼볯뚼裢놼볯钼볯늼胣꺼볯鞼볯꒼裢뎼볯邼볯Ꞽ裢뎼볯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莽뷯薽뷯莽뷯袼볯膽뷯銽뷯颽†볯莽뷯薽뷯莽뷯貼볯辽뷯钽뷯躽볯궼볯覼胣꒼뷯辽뷯薽뷯袼볯覽뷯躽뷯颽볯ꎼ뷯銽뷯躼볯뎼뷯躽뷯馽뷯膽뷯薽볯ꎼ볯覼胣궼뷯躽뷯膽뷯钽뷯袼볯辽뷯鎽뷯躽뷯辽†볯辽볯貼볯钽볯겼뷯閽뷯鎽볯궼볯覼胣랼뷯躽뷯薽뷯鎽뷯膽뷯貽볯랼뷯躽뷯薽뷯鎽뷯膽뷯貽†볯Ꞽ볯ꮼ뷯鎽뷯薽뷯貼볯薽뷯趽뷯躽뷯覼胣ꊼ볯뎼볯袼볯㲢牢ਾ볯뎼볯₦ꎼ뷯躼볯ꚼ뷯辽뷯袽뷯趽†볯膽뷯讽볯꺼볯覼胣ꢼ뷯躽뷯鎽뷯膽뷯袼볯閽뷯钽뷯趽뷯躽†볯薽뷯銽뷯莽뷯薽뷯覽뷯膽뷯₌ꎼ뷯銽뷯躼볯뎼뷯貽뷯ₔ겼뷯讽뷯₅ꎼ뷯钽뷯貼볯뒼볯膀볯袽뷯貽뷯₌ꎼ뷯薽뷯覽뷯膽뷯鎽볯뎼뷯薽뷯貽†볯袽뷯趽뷯莽뷯貽뷯貼볯躽뷯躼볯겼뷯躽뷯辽뷯貼볯ꮼ볯膀볯钽뷯邽뷯躽볯뎼뷯薽뷯膽뷯貼볯辽뷯钽뷯蚽뷯薽뷯蒽볯ꦼ볯覼胣ꎼ뷯膽뷯覽뷯躽뷯袼볯貽뷯銽뷯膽뷯钽볯뎼뷯貽뷯芽뷯莽뷯貼볯薽뷯趽뷯躽뷯覼胣ꦼ뷯蒽뷯鎽뷯銽뷯膽뷯₌몼뷯辽뷯覽뷯薽볯ꦼ뷯蒽뷯鎽뷯銽뷯膽뷯₌몼뷯辽뷯覽뷯薽†볯钽뷯躼볯Ꞽ뷯膽뷯鎽볯ꖼ뷯鎽뷯颽볯떼볯覼胣ꪼ뷯躽뷯芽뷯躽뷯貽뷯閽뷯銽볯ꪼ뷯躽뷯芽뷯躽뷯貽뷯閽뷯銽볯ꊼ뷯鎽뷯貽볯뎼뷯覽뷯骽뷯銽뷯膽뷯蒽볯膀볯辽뷯隽뷯馽볯뎼뷯貽뷯膽뷯貼볯銽뷯鎽뷯薽뷯鎽볯ꊼ뷯貽뷯覽뷯趽볯膀볯뚼†볯覽뷯趽뷯袼볯뚼†볯覽뷯趽뷯貼볯薽뷯螽뷯趽뷯貼볯钽뷯貽뷯覼胣ꦼ뷯躽뷯鎽뷯薽뷯袼볯躽뷯辽뷯邽뷯莽볯ꖼ뷯貽뷯鎽뷯薽뷯薽†볯辽뷯钽볯떼볯覼胣뒼뷯薽뷯趽뷯袽뷯鎽볯뒼뷯薽뷯趽뷯袽뷯鎽볯뚼뷯覽뷯鎽뷯螽뷯薽뷯銈볯鎽뷯貼뷯袽뷯₅꺼뷯钽뷯薽뷯貽뷯躽뷯鎽볯膀볯覽뷯膽†볯邽뷯莽뷯膽뷯钽뷯袼볯覽뷯膽†볯邽뷯莽뷯膽뷯钽뷯ₙꎼ뷯薽뷯覽뷯膽뷯鎽볯ꊼ뷯鎽뷯貽볯뎼뷯覽뷯骽뷯銽뷯膽뷯蒽볯膀볯辽뷯ₗꎼ뷯銽뷯覽뷯螽볯꒼뷯鞽†볯辽뷯躽뷯躽뷯貼볯膽뷯銽뷯貼볯ꮼ볯膀볯躽뷯莽뷯薽뷯袼볯躽뷯莽뷯薽뷯₍ꦼ뷯薽뷯覽뷯膽볯ꊼ뷯銽뷯薽뷯辽뷯膽볯뎼뷯膽뷯躽볯膀볯貽뷯讽뷯₁ꎼ뷯薽뷯覽뷯₅ꆼ볯袼볯貽뷯讽뷯₁ꎼ뷯薽뷯覽뷯₅ꆼ볯貼볯閽뷯袽뷯貼볯鞽뷯钽뷯薽뷯貽뷯躽뷯覼胣Ꞽ뷯鎽뷯銈볯銽뷯莽뷯蒽뷯鎽볯Ꞽ뷯鎽뷯銈볯銽뷯莽뷯蒽뷯鎽볯꺼볯貼볯薽뷯蚽뷯貼뷯袽뷯₅꺼뷯钽뷯薽뷯貽뷯躽뷯鎽볯膀볯辽뷯ₗꎼ뷯銽뷯覽뷯螽볯꒼뷯鞽†볯辽뷯躽뷯躽뷯₇ꎼ뷯銽뷯躼볯궼뷯蒽뷯膽뷯蒽볯궼볯覼胣궼뷯钽뷯貽뷯銽裢뒼뷯貽뷯蒽뷯袼볯薽뷯钽뷯薽뷯銈볯辽뷯薽뷯辽†볯躽뷯貼볯辽뷯閽뷯芽뷯鎽볯꾼볯覼胣늼볯袼볯薽뷯讽뷯钽뷯銈볯薽뷯莽뷯覽뷯薽뷯貼볯貽뷯閽뷯袽볯떼볯覼胣誏臣궼뷯莽뷯辽뷯辽뷯钽볯궼뷯莽뷯辽뷯辽뷯钽볯ꦼ뷯莽볯貼볯薽뷯趽뷯躽뷯貼볯ꆼ볯芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯馼볯醀⼼䥄㹖 겜飦내鯦ꞁ뷤ꢔ臣讂臣趁胣肸菩꺁꣨覼臣꾁볯膡臣낕胥ꢡ꣨銂迦鮾臣讂鯧蒚臣銆ꃩ꺁郥膡臣貀볯趀臣몤臣貂苣袼뻤袁臣膀胣邼볯醼胣꾁胣醼胣ꢁ郥颧臣芁苣膀臣ꪁ苣ꆁ胣ꆼ볯邼볯ꎼ胣꾁胣ꆼ볯ꎼ胣ꢁ郥颧臣芁苣覼胣肸菩꺁룤Ꞧ臣꾁胣銆ꃩ꺁胣邼胣꾁꣨覼臣貂臣蒁胣ꂊ臣ꚁ胣겜飦내鯦ꞁ뷤ꢔ臣讂臣趁胣貀볯趀臣뮻蓦꺁苣龃菣뢅苣螌臣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯馼볯醀⼼䥄㹖 겜飦내鯦ꞁ迦鮾臣貂苣膀뻤몤臣貂臣鞴觥蒵裦ꦉ臣誁臣ꚁ胣떅듧莿뫥꾁胣蒵裦ꦉ臣袐꣨趇蟩ꮁ鿥ꖁ臣钴닧ꪁ藩ꂴ뿦ꚺ臣鞁臣ꢡ迧閁苣膀臣ꒁ裥钀꣨覼臣ꪁ臣邙苣膀듦ꒉ裦蚈臣蒵裦ꦉ臣袐꣨趇蟩ꮁ鿥ꖁ臣ꢡ迧閁苣讂胣겜飦내鯦ꞁ闧風臣貂귨ꖈ臣貂苣ꢔꫨ꾁믤许臣辄釥銂賦ꒁ볯ચ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯閼볯鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉邀ꇨ銼裢醼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㠱㜰㤸㐰琮晩㸢〲㠱㜰㤸㐰琮晩ꃂ〰〰㐰⼼㹡⼼䥄㹖ਊ㰠牢ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㠱㜰㤸㐰琮晩㸢〲㠱㜰㤸㐰琮晩ꃂ〰〰㔰⼼㹡⼼䥄㹖 㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯馼볯醀⼼䥄㹖 袼룤風ꇨ꺁뛧趁볯㲉牢ਾ䐼噉邀ꇨ銼裢銼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㠱㜰㤸㐰琮晩㸢〲㠱㜰㤸㐰琮晩ꃂ〰〰㘰⼼㹡⼼䥄㹖ਊ㰠牢ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㠱㜰㤸㐰琮晩㸢〲㠱㜰㤸㐰琮晩ꃂ〰〰㜰⼼㹡⼼䥄㹖 㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯馼볯醀⼼䥄㹖 鞌苣ꆃ菣ꮂ볯꺼볯覼迥뎁ꗨꢃ菣궃菣醃볯랼볯覼臣랼諥늶뷤鞴뿦袼볯꒼볯覼듦ꒉ臣ꊖ臣ꚁ臣膀뫤膂꣨辇臣龁뛦鎽듦ꒉ볯겂菣릂鏧薆볯銂胣馼볯莄臣Ꚃ苣벃苣벃菣릂臣銼駦鎖臣辂臣ꎁ臣超뷧馁苣鎁臣ꞁ胣芸단꺁듦ꒉ룤ꮁ귥ꢜ臣讂藩ꂴ臣ꂊ蛧趸듦Ꞁ賥銂껥붖臣讂胣꺼볯誏臣랼볯꺁蟨開ꏩꢙ듦蒵ꧦ袼볯꒼볯覼铧鞴觥銂諥놆룤뮴胦隌臣讂臣膂臣ꒂ菣궂菣馃菣袃駦鎖臣颼駦鎖臣芁苣芀룤뮴胦隌軧銂귦몢臣ꒈ껥馁苣龁苣ꮁ胣ꪜ諥놆迥뎁諥놆듦ꒉ臣ꦁ臣覂苣膀듦ꒉ苣뚺꟨閁臣ꚁ볯蚈믤薆臣ꊂ菣뮂苣馁苣芀藩ꂴ듦Ꞁ臣ꆼ볯낼볯ꊂ菣뮂苣ꮁ苣誂ꧨ鎨臣讂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯閼볯隼胣㲑䐯噉ਾ†諥놆룤뮴胦隌臣龁듦ꒉ臣떅듧뮴胦꺁ꧨ鎨臣ꊖ臣ꚁ臣膀듦ꒉ臣貸蟩馨뫦뚺뛦꾁諥놆룤뮴胦隌꿦늶臣覂ꫨ붣臣龁胣肉鳦閁苣讂鷦뚻苣肺臣馁苣蚁胣ꦁ裥ꪁ냦겡뫥袼뻤袁臣膀볯螽뷯螽迥꾁볯銼뷯邽뷯袼볯邼볯躼볯邽뷯趽迥꾁볯邼볯躼볯邽뷯趽볯覼迥뎁럧鶡觥銂듦ꒉ뫦늶臣ꂊ臣龁胣뚓苣鲃菣蚃菣꾂苣ꮁ臣醁苣讁迥ꊻ臣鮁苣讁臣ꚁ뫦늶苣랷郥馁苣芀믤许臣ꢡ臣겜飦내鯦ꞁ뷤ꢔ臣貂苣芸단꺁듦ꒉ迥뎁ꧨ鎨鷦뚻臣肸菩ꮁ臣蒁臣꺁菦놠苣邏뻤馁苣芀룤ꢃ臣龮꣩ꞁ臣膀뿨ꂊ臣誏臣込迥꾁믤꺁룥ꦲ臣鞴觥貁믤许臣龮雦设臣뾽铧閁苣讂臣ꢁ臣讦蟥閁苣讂胣㲂牢ਾਠ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯閼볯鞼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉邀ꇨ鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㠱㜰㤸㐰琮晩㸢〲㠱㜰㤸㐰琮晩ꃂ〰〰㠰⼼㹡⼼䥄㹖ਊ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯閼볯颼胣㲑䐯噉ਾ†룤ꢃ臣뒛臣讂껥붖뻤ꞁ臣膀믤许臣뚺뛦꺁뷤ꢔ臣讦蟥閁苣讂볯ચ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯閼볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉邀ꇨ钼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㠱㜰㤸㐰琮晩㸢〲㠱㜰㤸㐰琮晩ꃂ〰〰㤰⼼㹡⼼䥄㹖ਊ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯邼胣㲑䐯噉ਾ†ꇨꎼ臣膀룥난臣鞴뿦ꮁꗥꦁ臣膀鳦몙飦ꮁ뻥ꎁ臣붣胩閁苣龁ꇩ銲黥鞴뿦鞴觥蒵裦ꦉ苣邏뻤馁苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯邼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣ꢡ볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰〸㠷〹⸴楴≦㈾㄰〸㠷〹⸴楴쉦゠〰㄰㰰愯㰾䐯噉ਾ㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯邼볯醀⼼䥄㹖 㰠畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲑猯灵‾ꦃ菣肃菣낂菣閃菣뎂菣ꪃ菣벃臣膀菣ꪃ苣膃菣뎃苣궂苣覃룤階臣螤闦꺁菣ꪃ菣讃菣ꊂ苣蚃菣袃臥階臣銂鳦馁苣膀菣ꪃ菣讃菣ꊂ苣蚃菣袃苣ꦃ菣袃賥鶃菣ꢂ菣것菣ꪂ苣랂菣뎂菣ꪃ菣벃臣芁苣芀菣ꪃ苣膃菣뎃苣궂苣覃룤階臣蚈귥辇臣蒴볯邼볯邼臣芁苣膀菣ꪃ藩뢅菣讃菣ꮁ꿥馁苣鶃菣ꢂ菣것菣ꪂ苣랂菣꺁蟩辇꿦꾁듧钼볯骼볯邼臣芁苣膀苣膃菣뎃苣궂苣覃跥趽볯邼胥鎽臣誂苣ꦃ菣袃苧꾁볯讀믤许臣芁苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯邼볯醀⼼䥄㹖 㰠畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲒猯灵‾銈볯ꢼ臣ꒁ臣銼볯讀臣ꢂ菣궂苣ꮃ鿥銂鳦馁苣鶃菣ꢂ菣것菣ꒂ菣뎃볯궼볯鶼볯邼볯覼胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯钼胣㲑䐯噉ਾ†猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰鎼⼼畳㹰†룤ꪦꫥꞀ苣ꪃ菣릂듦蒵菣ꪃ菣벃臣膀裢꺼볯ꮁ臣趁볯钼胥꺁苣袃苣랂菣몟胣誏臣銈볯ꢼ臣ꒁ臣醼볯讀臣鞃菣鶃苣랂菣몟苣覜臣讂菣ꪃ苣膃菣뎃苣龃菣袼볯랼볯隼볯邼볯ꞁ臣讂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯閼胣㲑䐯噉ਾ†猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰钼⼼畳㹰†곦꺁꟦ꂀ苣覜臣讂迥蚀胦鞃菣蚃苣벃苣醊裥ꒉ胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯隼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉邀賥醼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㠱㜰㤸㐰琮晩㸢〲㠱㜰㤸㐰琮晩ꃂ〰〰ㄱ⼼㹡⼼䥄㹖ਊ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯鞼胣㲑䐯噉ਾ†猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰閼⼼畳㹰†苣袃苣랂菣隌菣ꪂ菣Ꞃ菣늉ꫨ鎟雦ꮁ臣蒁臣꾁뇧붛觧놨곧鞼볯銼볯颼볯钼볯馼볯ꊼ볯覼迥ꮁ꣨낿臣貂臣蒁苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯邼볯醀⼼䥄㹖 ꢡ볯궸胣붣鏥ꮁ럦ꂊ臣龁듦Ꞁ苣뎃菣꾂돨꺁觥袐볯薼볯ꢁ臣ꚁꇨ閁苣讂蛥뒰铧鞃菣蚃苣벃苣袼鳦몙飦꺁苣꺁볯銂駩趁胣馁臣ꚁ臣떅듧莿뫥꾁藩ꂴ軥邝雦꺁觥袐볯薼볯ꢁ臣ꚁꇨ閁苣讂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯馼胣㲑䐯噉ਾ†ꇨ꒼臣膀ꃩꢃ藥ꮡ볥ꪇ该鞴뗦薣뷧袼듦ꒉ뗧邈觧鞼胣馼볯膀迥뎁觥뒁藥ꮡ볥鞴뗦薣뷧袼듦ꒉ뗧邈觧醼볯鲀볯醼볯ꮁꗥꦁ臣蚡닧讞듦꾿듦ꒉ뗧邈觧銂迦鮾臣讂胣ꚩ꣩鞁臣Ꞽ볯鎼볯鞃菣蚃苣벃苣覤闧鎽胣誏臣込迥꾁鳦몙飦꺁蛥뒰铧鞃菣蚃苣벃苣覤闧鎽苣鎁苣覂臣超郥ꦉ臣ꖈ胥ꮁ諥袁苣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣ꢡ볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰〸㠷〹⸴楴≦㈾㄰〸㠷〹⸴楴쉦゠〰㄰㰲愯㰾䐯噉ਾ 戼㹲㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰〸㠷〹⸴楴≦㈾㄰〸㠷〹⸴楴쉦゠〰㄰㰳愯㰾䐯噉ਾ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯醼胣㲑䐯噉ਾ†ꇨ꒼臣誁臣ꚁ胣貕鷩뮴胦ꒉ裦蚈臣膀駩骮臣讂苣꺁臣꾁臣蒁臣ꊼ볯뎼볯袼뻤袁臣膀볯떼볯ꖼ볯뎼볯겼볯뮙賩蚕꣦覼볯膀볯袽뷯貽뷯₌ꎼ뷯薽뷯覽뷯膽뷯鎽胣뎼뷯薽뷯膽뷯膀볯閽뷯钽뷯趽뷯躽胣誏臣ꎼ뷯膽뷯覽뷯躽뷯袼뻤袁臣膀볯늼볯ꖼ볯ꆼ볯ꖼ볯袼駧늌闥馨볯覼臣馌臣覂苣讂胣뮻蓦꺁ꗥꦁ臣鮾뗧莅臣覂뻥讂臣ꢁ臣ꞁ臣讂胣벂苣ꦃ苣袃臣ꦼ뷯蒽뷯鎽뷯銽뷯膽뷯₌몼뷯辽뷯覽뷯薽臣ꦁ臣鮾뗧莅臣覂뻥讂臣ꢁ臣ꞁ臣讂胣꾂苣뎃藩誏臣꾂苣뎃藩誃菣ꪃ苣ꂃ臣膀볯閽뷯螽뷯閽뷯骽뷯膽뷯薽뷯ꪁ臣꺁뻤ꚵ藥讁苣鞾苣鎁臣貁臣趁苣芀臩궂藩誃菣ꪃ苣ꂃ胣궂藩誃菣ꪃ苣ꂃ胣趇苧뢅菣袃菣Ꚃ菣誏臣뮂苣궂苧뢅菣袃菣Ꚃ菣꾁胣뎼뷯貽뷯膽뷯ꪁ臣꺁뻤ꚵ藥讁苣鞾苣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