(57)【要約】【課題】  ＨＰＬＣの使用を必須としない、新しいアミノ酸分析の手段を提供すること。【解決手段】  式Ｉで表される含フッ素アミノ酸化合物を製造する方法であって、式ＩＩで表される含フッ素チオール化合物と式ＩＩＩで表されるアミノ酸と式ＩＶで表されるオルトフタルアルデヒド化合物を反応させる工程を含む方法、及び該方法によって製造された含フッ素アミノ酸化合物の１種又は２種以上を含む試料を核磁気共鳴測定して、該１種又は２種以上の含フッ素アミノ酸化合物を検出する工程を含む、アミノ酸分析方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式Ｉ：
【化１】
2018039747.tif 000012
（ただし、式Ｉ中、Ｒ１−Ｌ基、Ｒ４基、Ｒ３１基、Ｒ３２基、Ｒ３３基、Ｒ３４基は、それぞれ式ＩＩ、式ＩＩＩ、及び式ＩＶ中の基として以下に示す基である）
で表される含フッ素アミノ酸化合物を製造する方法であって、 
次の式ＩＩ：
Ｒ１−Ｌ−ＳＨ    （式ＩＩ）
（ただし、式ＩＩ中、
Ｒ１基が、以下から選択される基であり：
１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基；
１個以上の水素原子が次の基で置換された、単環式、二環式又は三環式のアリール基：  フッ素原子、又は１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ２のアルキル基（ただし、置換されたアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）；
１個以上の水素原子が次の基で置換された、１個以上のヘテロ原子を環に有する、単環式、二環式又は三環式のヘテロアリール基：  フッ素原子、又は１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ２のアルキル基（ただし、置換されたヘテロアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）、
Ｌ基が、−ＳＨ基とＲ１基との間のリンカー部分であって、単結合、又はＣ１〜Ｃ３のアルカンの２価基であり、Ｌ基が単結合の場合にはＲ１−Ｌ−ＳＨの構造式は、Ｒ１−ＳＨとなる）
で表される含フッ素チオール化合物と、
次の式ＩＩＩ：
Ｈ2Ｎ−Ｒ４    （式ＩＩＩ）
（ただし、式ＩＩＩ中、Ｒ４基は、次の式：
−［ＣkＨ2k-1（Ｒ２）］−ＣＯＯＨ    
で表される基であり、Ｒ４基中、Ｒ２はアミノ酸の側鎖の基を表し、ｋは１〜３の整数である）
で表されるアミノ酸と、
次の式ＩＶ：
【化２】
2018039747.tif 000013
（ただし、式ＩＶ中、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４は、それぞれ独立に、以下から選択される基である：
水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ３のアルキル基、水酸基、カルボン酸基、ニトロ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、シアノ基、ニトロ基、あるいは、例えば、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４の２個以上が一体となって、ベンゼン環構造あるいは複素環構造を形成してもよい）
で表されるオルトフタルアルデヒド化合物を反応させる工程、を含む方法。
【請求項２】
請求項１に記載の製造方法によって製造された含フッ素アミノ酸化合物の１種又は２種以上を含む試料を、核磁気共鳴測定して、該１種又は２種以上の含フッ素アミノ酸化合物を検出する工程、
を含む、アミノ酸分析方法。
【請求項３】
１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基が、
−ＣnＨ2n+1-mＦm 
（ただし、ｎは１以上４以下の整数、ｍは１以上の整数、２ｎ＋１−ｍは０以上の整数である）
である、請求項１〜２の何れかに記載の方法。
【請求項４】
１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基が、
−ＣＦ3、−ＣＨ2−ＣＦ3、又は−Ｃ（ＣＦ3）3である、請求項１〜２の何れかに記載の方法。
【請求項５】
１個以上の水素原子が次の基で置換された、単環式、二環式又は三環式のアリール基：フッ素原子、又は１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ２のアルキル基（ただし、置換されたアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）が、
１個以上の水素原子が、水酸基、メチル基、フッ素原子、−ＣＦ3、−ＣＨ2−ＣＦ3、又は−Ｃ（ＣＦ3）3によって置換された、フェニル基又はナフチル基（ただし、置換されたフェニル基又はナフチル基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）である、請求項１〜４の何れかに記載の方法。
【請求項６】
１個以上の水素原子が次の基で置換された、１個以上のヘテロ原子を環に有する、単環式、二環式又は三環式のヘテロアリール基：  フッ素原子、又は１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ２のアルキル基（ただし、置換されたヘテロアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）が、
１個以上の水素原子が、水酸基、メチル基、フッ素原子、−ＣＦ3、−ＣＨ2−ＣＦ3、又は−Ｃ（ＣＦ3）3によって置換された、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリジダジン、キノリン、イソキノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、インドール、イソインドール、インダゾールの１価基である（ただし、置換されたヘテロアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）、請求項１〜４の何れかに記載の方法。
【請求項７】
Ｒ２基が、以下から選択される基である、請求項１〜６の何れかに記載の方法：
−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＯＨ、−ＣＨ2−ＳＨ、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ3、−ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＣＨ（ＣＨ3）−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ4−ＯＨ、−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ4−Ｏ−Ｃ6Ｈ4−ＯＨ、−ＣＨ2−ＣＯＯＨ、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨ、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ2、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ2、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−Ｓ−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ（ＮＨ）ＣＯ2Ｈ、
【化３】
2018039747.tif 000014
、
【化４】
2018039747.tif 000015
。
【請求項８】
請求項１に記載の、  次の式Ｉ：
【化５】
2018039747.tif 000016
（ただし、式Ｉ中、Ｒ１−Ｌ基、Ｒ４基、Ｒ３１基、Ｒ３２基、Ｒ３３基、Ｒ３４基は、それぞれ式ＩＩ、式ＩＩＩ、及び式ＩＶ中の基として、請求項１に示される基である）
で表される含フッ素アミノ酸化合物。
【請求項９】
請求項８に記載の含フッ素アミノ酸化合物からなる、19Ｆ核磁気共鳴測定マーカー。
【請求項１０】
請求項１に記載の、次の式ＩＩ：
Ｒ１−Ｌ−ＳＨ    （式ＩＩ）
（ただし、式ＩＩ中、Ｒ１基、Ｌ基は、それぞれ式ＩＩ中の基として、請求項１に示される基である）
で表される含フッ素チオール化合物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の含フッ素チオール化合物からなる、19Ｆ核磁気共鳴測定マーカー化用修飾剤。
【請求項１２】
請求項１０に記載の含フッ素チオール化合物を、オルトフタルアルデヒド及びアミノ酸と反応させて、含フッ素アミノ酸化合物を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミノ酸分析法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液や食品などの生物由来試料に含まれるアミノ酸含有量の分布は、汎用的な生体分子マーカーの１つである。アミノ酸含有量の分布の分析は、疾患や疾患リスクの診断、食品の品質管理、生化学研究などに広く使用されている。
【０００３】
アミノ酸分析（アミノ酸含有量分布の分析）は、通常、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて行われる（例えば、特許文献１）。この手法には、大別して、アミノ酸を蛍光性の化合物等で化学修飾（誘導体化）して、その後にＨＰＬＣによる分離と検出を行う方法（プレカラム法）と、ＨＰＬＣによるアミノ酸の分離の後に、蛍光性の化合物等で化学修飾（誘導体化）して検出する方法（ポストカラム法）がある。
【０００４】
ＨＰＬＣを用いたアミノ酸分析では、「誘導体化」、「分離」及び「検出」の工程が、逐次的に連続して行われるために、結果として、ＨＰＬＣを用いたアミノ酸分析では、１つの試料の分析に少なくとも１時間以上の時間を要することが通常である。特に、分離の工程では、アミノ側鎖の化学的性質に依存するカラム担体との親和性の違いによる保持時間の遅延によって分離が行われるために、例えば３０〜５０分などの大きなタイムロスを生じる。また、アミノ酸分析のＨＰＬＣとして逆相ＨＰＬＣが広く使用されているが、この逆相ＨＰＬＣを用いる場合には、アセトニトリルやメタノールなどの劇物指定の有機溶媒を移動相として流路に多量に使用することが必須であるので、保管や廃棄処理に要する負担が大きい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００３−０８３９４６号公開特許公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このように、劇物指定の有機溶媒の多量の使用を回避し、ＨＰＬＣを使用することなく、短時間で分析結果を得ることができる、新しいアミノ酸分析の手段が、求められていた。
【０００７】
したがって、本発明の目的は、ＨＰＬＣの使用を必須としない、新しいアミノ酸分析の手段を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、アミノ酸分析技術について、鋭意研究してきたところ、ＨＰＬＣによるアミノ酸分析のために使用されているオルトフタルアルデヒド法（ＯＰＡ法）によるアミノ酸の蛍光誘導体化反応において、通常使用されるメルカプトエタノール（ＭＥ）に代えて、特定のフッ素含有チオールを用いてアミノ酸の誘導体化を行ったところ、このアミノ酸誘導体に対してＮＭＲスペクトル測定を行うと、フッ素原子のＮＭＲ信号が近傍に位置するアミノ酸側鎖の化学的性質に応じてケミカルシフトが変化して、結果としてアミノ酸分析ができることを見いだして、本発明に到達した。
【０００９】
したがって、本発明は次の（１）以下を含む。
（１）
次の式Ｉ：
【化１】
2018039747.tif 000002
（ただし、式Ｉ中、Ｒ１−Ｌ基、Ｒ４基、Ｒ３１基、Ｒ３２基、Ｒ３３基、Ｒ３４基は、それぞれ式ＩＩ、式ＩＩＩ、及び式ＩＶ中の基として以下に示す基である）
で表される含フッ素アミノ酸化合物を製造する方法であって、
次の式ＩＩ：
Ｒ１−Ｌ−ＳＨ    （式ＩＩ）
（ただし、式ＩＩ中、
Ｒ１基が、以下から選択される基であり：
１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基；
１個以上の水素原子が次の基で置換された、単環式、二環式又は三環式のアリール基：  フッ素原子、又は１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ２のアルキル基（ただし、置換されたアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）；
１個以上の水素原子が次の基で置換された、１個以上のヘテロ原子を環に有する、単環式、二環式又は三環式のヘテロアリール基：  フッ素原子、又は１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ２のアルキル基（ただし、置換されたヘテロアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）、
Ｌ基が、−ＳＨ基とＲ１基との間のリンカー部分であって、単結合、又はＣ１〜Ｃ３のアルカンの２価基であり、Ｌ基が単結合の場合にはＲ１−Ｌ−ＳＨの構造式は、Ｒ１−ＳＨとなる）
で表される含フッ素チオール化合物と、
次の式ＩＩＩ：
Ｈ2Ｎ−Ｒ４    （式ＩＩＩ）
（ただし、式ＩＩＩ中、Ｒ４基は、次の式：
−［ＣkＨ2k-1（Ｒ２）］−ＣＯＯＨ    
で表される基であり、Ｒ４基中、Ｒ２はアミノ酸の側鎖の基を表し、ｋは１〜３の整数である）
で表されるアミノ酸と、
次の式ＩＶ：
【化２】
2018039747.tif 000003
（ただし、式ＩＶ中、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４は、それぞれ独立に、以下から選択される基である：
水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ３のアルキル基、水酸基、カルボン酸基、ニトロ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、シアノ基、ニトロ基、あるいは、例えば、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４の２個以上が一体となって、ベンゼン環構造あるいは複素環構造を形成してもよい）
で表されるオルトフタルアルデヒド化合物を反応させる工程、を含む方法。
（２）
（１）に記載の製造方法によって製造された含フッ素アミノ酸化合物の１種又は２種以上を含む試料を、核磁気共鳴測定して、該１種又は２種以上の含フッ素アミノ酸化合物を検出する工程、
を含む、アミノ酸分析方法。
（３）
１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基が、
−ＣnＨ2n+1-mＦm 
（ただし、ｎは１以上４以下の整数、ｍは１以上の整数、２ｎ＋１−ｍは０以上の整数である）
である、（１）〜（２）の何れかに記載の方法。
（４）
１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基が、
−ＣＦ3、−ＣＨ2−ＣＦ3、又は−Ｃ（ＣＦ3）3である、（１）〜（２）の何れかに記載の方法。
（５）
１個以上の水素原子が次の基で置換された、単環式、二環式又は三環式のアリール基：フッ素原子、又は１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ２のアルキル基（ただし、置換されたアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）が、
１個以上の水素原子が、水酸基、メチル基、フッ素原子、−ＣＦ3、−ＣＨ2−ＣＦ3、又は−Ｃ（ＣＦ3）3によって置換された、フェニル基又はナフチル基（ただし、置換されたフェニル基又はナフチル基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）である、（１）〜（４）の何れかに記載の方法。
（６）
１個以上の水素原子が次の基で置換された、１個以上のヘテロ原子を環に有する、単環式、二環式又は三環式のヘテロアリール基：  フッ素原子、又は１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ２のアルキル基（ただし、置換されたヘテロアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）が、
１個以上の水素原子が、水酸基、メチル基、フッ素原子、−ＣＦ3、−ＣＨ2−ＣＦ3、又は−Ｃ（ＣＦ3）3によって置換された、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリジダジン、キノリン、イソキノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、インドール、イソインドール、インダゾールの１価基である（ただし、置換されたヘテロアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）、（１）〜（４）の何れかに記載の方法。
（７）
Ｒ２基が、以下から選択される基である、（１）〜（６）の何れかに記載の方法：
−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＯＨ、−ＣＨ2−ＳＨ、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ3、−ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＣＨ（ＣＨ3）−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ4−ＯＨ、−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ4−Ｏ−Ｃ6Ｈ4−ＯＨ、−ＣＨ2−ＣＯＯＨ、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨ、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ2、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ2、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−Ｓ−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ（ＮＨ）ＣＯ2Ｈ、
【化３】
2018039747.tif 000004
、
【化４】
2018039747.tif 000005
。
（８）
（１）に記載の、  次の式Ｉ：
【化５】
2018039747.tif 000006
（ただし、式Ｉ中、Ｒ１−Ｌ基、Ｒ４基、Ｒ３１基、Ｒ３２基、Ｒ３３基、Ｒ３４基は、それぞれ式ＩＩ、式ＩＩＩ、及び式ＩＶ中の基として、（１）に示される基である）
で表される含フッ素アミノ酸化合物。
（９）
（８）に記載の含フッ素アミノ酸化合物からなる、19Ｆ核磁気共鳴測定マーカー。
（１０）
（１）に記載の、次の式ＩＩ：
Ｒ１−Ｌ−ＳＨ    （式ＩＩ）
（ただし、式ＩＩ中、Ｒ１基、Ｌ基は、それぞれ式ＩＩ中の基として、（１）に示される基である）
で表される含フッ素チオール化合物。
（１１）
（１０）に記載の含フッ素チオール化合物からなる、19Ｆ核磁気共鳴測定マーカー化用修飾剤。
（１２）
（１０）に記載の含フッ素チオール化合物を、オルトフタルアルデヒド及びアミノ酸と反応させて、含フッ素アミノ酸化合物を製造する方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、ＨＰＬＣの使用を必須としない、新しいアミノ酸分析の手段を提供する。本発明によれば、劇物指定の有機溶媒の多量の使用を回避できる。本発明によれば、アミノ酸分析において、アミノ酸の分離の工程を行うことなく、短時間で、アミノ酸分析の結果を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１Ａ】図１Ａは構造式に示された含フッ素チオールにより得られたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図１Ｂ】図１Ｂは構造式に示された含フッ素チオールにより得られたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図１Ｃ】図１Ｃは構造式に示された含フッ素チオールにより得られたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図１Ｄ】図１Ｄは構造式に示された含フッ素チオールにより得られたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図２Ａ】図２Ａは構造式に示された含フッ素チオールにより得られたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図２Ｂ】図２Ｂは構造式に示された含フッ素チオールにより得られたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図２Ｃ】図２Ｃは構造式に示された含フッ素チオールにより得られたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図３Ａ】図３Ａは構造式に示された含フッ素チオールにより得られたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図３Ｂ】図３Ｂは構造式に示された含フッ素チオールにより得られたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図４Ａ】図４Ａは構造式に示されたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図４Ｂ】図４Ｂは構造式に示されたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図５】図５は構造式に示された含フッ素チオールにより得られたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図６】図６は構造式に示された含フッ素チオールにより得られたテアニンＯＰＡ誘導体化合物の19F NMRスペクトルである。
【図７】図７はＯＰＡ、含フッ素チオール及びα−アミノ酸からの式Ｖの含フッ素アミノ酸化合物の合成を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
具体的な実施の形態をあげて、以下に本発明を詳細に説明する。本発明は、以下にあげる具体的な実施の形態に限定されるものではない。
【００１３】
［アミノ酸分析の方法］
本発明によるアミノ酸分析の方法は、試料中のアミノ酸から、次の式Ｉ：
【化６】
2018039747.tif 000007
の含フッ素アミノ酸化合物を製造して、核磁気共鳴によって19Ｆケミカルシフトを測定することによって、行うことができる。上記式Ｉ中のＲ１基、Ｌ基、Ｒ４基、Ｒ３１基、Ｒ３２基、Ｒ３３基、Ｒ３４基は、後述する式ＩＩで表される含フッ素チオール化合物、式ＩＩＩで表されるアミノ酸、式ＩＶで表されるオルトフタルアルデヒド化合物の中の基に由来する。以下で含フッ素アミノ酸化合物を含フッ素アミノ酸誘導体ということがある。
【００１４】
［含フッ素アミノ酸化合物の製造］
本発明において、含フッ素アミノ酸化合物の製造は、次の式ＩＩ：
Ｒ１−Ｌ−ＳＨ    （式ＩＩ）
で表される含フッ素チオール化合物と、次の式ＩＩＩ：
Ｈ2Ｎ−Ｒ４    （式ＩＩＩ）
（ただし、式ＩＩＩ中、Ｒ４基は、次の式：
−［ＣkＨ2k-1（Ｒ２）］−ＣＯＯＨ    
で表される基であり、Ｒ４基中、Ｒ２はアミノ酸の側鎖の基を表し、ｋは１〜３の整数である）
で表されるアミノ酸と、次の式ＩＶ：
【化７】
2018039747.tif 000008
で表されるオルトフタルアルデヒド化合物を反応させることによって行われる。
【００１５】
［含フッ素チオール化合物］
本発明における含フッ素チオール化合物は、次の式ＩＩ：
Ｒ１−Ｌ−ＳＨ    （式ＩＩ）
で表される。
【００１６】
［Ｒ１基］
式ＩＩにおいて、Ｒ１基は、以下から選択される基とすることができる：
１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基；
１個以上の水素原子が次の基で置換された、単環式、二環式又は三環式のアリール基：  フッ素原子、又は１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ２のアルキル基（ただし、置換されたアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）；
１個以上の水素原子が次の基で置換された、１個以上のヘテロ原子を環に有する、単環式、二環式又は三環式のヘテロアリール基：  フッ素原子、又は１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ２のアルキル基（ただし、置換されたヘテロアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）。
【００１７】
［フルオロアルキル基］
上記Ｒ１基について、好適な実施の態様において、１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基は、次の式：
−ＣnＨ2n+1-mＦm 
（ただし、ｎは１以上４以下の整数、ｍは１以上の整数、２ｎ＋１−ｍは０以上の整数である）
で表されるフルオロアルキル基とすることができる。
【００１８】
好ましいフルオロアルキル基としては、例えば、−ＣＦ3、−ＣＨ2−ＣＦ3、−Ｃ（ＣＦ3）3を挙げることができ、特に−ＣＦ3、又は−Ｃ（ＣＦ3）3が好ましい。
【００１９】
［フルオロアリール基］
上記Ｒ１基について、好適な実施の態様において、１個以上の水素原子が次の基で置換された、単環式、二環式又は三環式のアリール基：  フッ素原子、又は１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ２のアルキル基（ただし、置換されたアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）としては、
例えば、１個以上の水素原子が、フッ素原子、水酸基、メチル基、エチル基、−ＣＦ3、−ＣＨ2−ＣＦ3、又は−Ｃ（ＣＦ3）3で置換された、フェニル基又はナフチル基（ただし、置換されたアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）を使用することができ、
例えば、１〜３個の水素原子が、水酸基、−ＣＦ3、−ＣＨ2−ＣＦ3、又は−Ｃ（ＣＦ3）3で置換された、フェニル基又はナフチル基（ただし、置換されたアリール基は、少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）を使用することができる。
【００２０】
［フルオロヘテロアリール基］
上記Ｒ１基について、好適な実施の態様において、１個以上の水素原子が次の基で置換された、１個以上のヘテロ原子を環に有する、単環式、二環式又は三環式のヘテロアリール基：  フッ素原子、又は１個以上の水素原子がフッ素原子で置換されたＣ１〜Ｃ４のアルキル基、水酸基、Ｃ１〜Ｃ２のアルキル基（ただし、置換されたヘテロアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）としては、
例えば、１個以上の水素原子が、フッ素原子、水酸基、メチル基、エチル基、−ＣＦ3、−ＣＨ2−ＣＦ3、又は−Ｃ（ＣＦ3）3で置換された、単環式又は二環式のヘテロアリール基（ただし、置換されたヘテロアリール基は、少なくとも１個のフッ素原子又は少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）を使用することができ、
例えば、１〜３個の水素原子が、水酸基、−ＣＦ3、−ＣＨ2−ＣＦ3、又は−Ｃ（ＣＦ3）3で置換された、単環式又は二環式のヘテロアリール基（ただし、置換されたヘテロアリール基は、少なくとも１個のフルオロアルキル基を含む）を使用することができる。
【００２１】
［ヘテロアリール基］
単環式、二環式又は三環式のヘテロアリール基のヘテロ原子としては、例えば、窒素原子（Ｎ）、硫黄原子（Ｓ）をあげることができる。好適な実施の態様において、単環式、二環式又は三環式のヘテロアリール基として、例えば、窒素原子をヘテロ原子として有する単環式又は二環式のヘテロアリール基をあげることができ、例えば、以下のアリールの１価基をあげることができる：イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、フラン、チオフェン、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリジダジン、トリアジン、オキサゾール、チアゾール、キノリン、イソキノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、インドール、イソインドール、インダゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾトリアゾール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン。
【００２２】
［Ｌ基］
式ＩＩにおいて、Ｌ基は、−ＳＨ基とＲ１基との間のリンカー部分であって、単結合、又はＣ１〜Ｃ３のアルカンの２価基とすることができる。好適な実施の態様において、Ｌ基は、例えば、単結合、メチレン基、エチレン基とすることができる。Ｌ基が単結合である場合とは、Ｒ１−Ｌ−ＳＨの構造式が、Ｒ１−ＳＨとなる場合である。
【００２３】
［アミノ酸］
本発明におけるアミノ酸として、次の式ＩＩＩ：
Ｈ2Ｎ−Ｒ４    （式ＩＩＩ）
（ただし、式ＩＩＩ中、Ｒ４基は、次の式：
−［ＣkＨ2k-1（Ｒ２）］−ＣＯＯＨ    
で表される基であり、Ｒ４基中、Ｒ２はアミノ酸の側鎖の基を表し、ｋは１〜３の整数である）
で表されるアミノ酸を使用できる。このアミノ酸として、天然又は非天然のアミノ酸を使用できる。アミノ酸は、それぞれの側鎖であるＲ２基の化学構造に対応して、それぞれ異なった含フッ素アミノ酸化合物（式Ｉ）を生成して、その構造に応じた19Ｆケミカルシフトを生じる。
【００２４】
［Ｒ４基］
Ｒ４基において、ｋが１である場合には、式ＩＩＩのアミノ酸は、α−アミノ酸を表し、ｋが２である場合には、式ＩＩＩのアミノ酸は、β−アミノ酸を表し、ｋが３である場合には、式ＩＩＩのアミノ酸は、γ−アミノ酸を表す。α−アミノ酸としては、例えば、タンパク質を構成する天然のアミノ酸、タンパク質を構成しない天然のアミノ酸、非天然のアミノ酸をあげることができる。α−アミノ酸としては、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、ヒドロキシリシン、ホスホセリン、サイロキシン、オルニチン、テアニン、イボテン酸をあげることができる。β−アミノ酸としては、例えば、β−アラニン、シトルリンをあげることができる。γ−アミノ酸としては、例えば、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）をあげることができる。これらのアミノ酸は、それが検出の対象であるから、その構造に制限はなく、上記例示したアミノ酸に限られるものではない。
【００２５】
［Ｒ２基］
式ＩＩＩのＲ４基において、Ｒ２基は、アミノ酸の側鎖である基であって、それが検出の対象であるから、その構造に制限はない。典型的な側鎖として、Ｒ２基は、例えば、以下の基とすることができる：
−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＯＨ、−ＣＨ2−ＳＨ、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ3、−ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＣＨ（ＣＨ3）−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ4−ＯＨ、−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ4−Ｏ−Ｃ6Ｈ4−ＯＨ、−ＣＨ2−ＣＯＯＨ、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨ、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ2、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ2、−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−Ｓ−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ（ＮＨ）ＣＯ2Ｈ、
【化８】
2018039747.tif 000009
、
【化９】
2018039747.tif 000010
。
【００２６】
［オルトフタルアルデヒド化合物］
本発明において、式ＩＶで表されるオルトフタルアルデヒド化合物を使用できる。式ＩＶ中、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４は、それぞれ独立に、例えば、以下から選択される基とすることができる：
水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ３のアルキル基、水酸基、カルボン酸基、ニトロ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、シアノ基、ニトロ基、あるいは、例えば、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４の２個以上が一体となって、ベンゼン環構造あるいは複素環構造を形成してもよい。
好適な実施の態様において、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４は、それぞれ独立に、水素原子又はメチル基とすることができる。
【００２７】
好適な実施の態様において、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４の２個以上が一体となって、環構造を形成してもよく、例えば、Ｒ３２、Ｒ３３が一体となって芳香環を形成してもよく、例えば、Ｒ３２、Ｒ３３が一体となって芳香環を形成して、式ＩＶの環構造をナフタレン環、アントラセン環やピレン環としてもよい。
【００２８】
好適な実施の態様において、オルトフタルアルデヒド化合物として、例えば、オルトフタルアルデヒド（ＯＰＡ）を使用できる。
【００２９】
［合成反応］
含フッ素アミノ酸化合物の合成の反応は、実施例に示すように、反応させるオルトフタルアルデヒド化合物、アミノ酸、含フッ素チオール化合物を、例えば、大気圧下、室温にて、溶媒中で混合することによって短時間、例えば２０秒〜１２０秒の時間で、進行させることができる。
【００３０】
［複数種類のアミノ酸の混合試料］
含フッ素アミノ酸化合物の合成の反応にあたって、複数種類のアミノ酸の混合試料と、オルトフタルアルデヒド化合物、含フッ素チオール化合物を用いて合成反応を進行させて、複数種類の含フッ素アミノ酸化合物の混合試料を得ることができる。
【００３１】
［核磁気共鳴測定］
含フッ素アミノ酸化合物は、そのＲ２基の構造に応じて19Ｆケミカルシフトが変化しており、これを核磁気共鳴法によって検出することができる。このために使用可能な手段、条件、装置等としては、公知の手段、条件、装置等を使用することができる。
【００３２】
核磁気共鳴法（ＮＭＲ法）による測定によって得られるＮＭＲ信号は、物質透過性が高いために、着色した試料や若干の濁りのある試料等でも検出ができる。また、検出核種が19Ｆであるために、生体分子由来のバックグラウンド信号が低い。
【００３３】
［複数種類の含フッ素アミノ酸化合物の混合試料］
核磁気共鳴法（ＮＭＲ法）による測定を行う試料中に、複数の含フッ素アミノ酸化合物が含まれている場合には、これらの含フッ素アミノ酸化合物をそれぞれ分離する必要はなく、複数の種類の含フッ素アミノ酸化合物の混合した試料を同時に測定して、それぞれの含フッ素アミノ酸化合物の含有量を測定して、その含有量の比率を求めることができる。ただし、所望により、複数の種類の含フッ素アミノ酸化合物を、それぞれ分離した後に、測定することもできる。
【００３４】
［アミノ酸分析］
本発明によれば、複数種類のアミノ酸の混合試料に対して、オルトフタルアルデヒド化合物、含フッ素チオール化合物を用いて合成反応を進行させて、複数種類の含フッ素アミノ酸化合物の混合試料を得て、これに対してＮＭＲ測定を行って、混合試料中に含まれる含フッ素アミノ酸化合物の含有量を測定することによって、複数種類のアミノ酸の混合試料中に含まれていた各アミノ酸の含有量と含有量の比率を求めることができる。
【００３５】
本発明のアミノ酸分析によれば、分析の対象となる複数種類のアミノ酸の混合試料として、生体由来の試料を使用することができ、着色した試料や若干の濁りのある試料等を使用することができる。
【００３６】
本発明によれば、上記のアミノ酸分析は、合成反応の作業時間として例えば５分間、ＮＭＲ測定の作業時間として例えば２分間としても、十分な精度の測定が可能であり、工程全体に要する時間は、例えば７分間程度とすることができる。従来のＨＰＬＣを使用したアミノ酸分析においては、ＨＰＬＣによる分離と検出の工程だけでも６０分程度を要していたので、本発明によれば、アミノ酸分析の所要時間を、約１／１０へと短縮できたことになる。加えて、従来のＨＰＬＣを使用したアミノ酸分析においては、少なくとも分析あたり数十ｍＬ程度を必要としていた、アセトニトリルやメタノールなどの劇物指定の有機溶媒の使用量を、本発明ではほぼゼロにすることができた。
【００３７】
［複数の種類の含フッ素チオール化合物の使用］
合成反応に使用する含フッ素チオール化合物を、異なる含フッ素チオール化合物へと変更すれば、同一のアミノ酸混合試料からも、異なった含フッ素アミノ酸化合物混合試料を得ることができ、ＮＭＲ測定によって出現する19Ｆのピークも、異なった位置になる。そこで、複数の種類の含フッ素チオール化合物を使用することによって、同一のアミノ酸混合試料から、異なった位置に19Ｆのピークを有するＮＭＲ測定結果を得て、これを対比することによって、アミノ酸混合試料中に含まれていた各アミノ酸の含有量と含有量の比率を、より高精度で求めることができる。したがって、複数の種類の含フッ素チオール化合物を、組み合わせて使用すれば、１種類の含フッ素チオール化合物による使用だけでは、分離しにくい位置に19Ｆのピークを有するアミノ酸混合物であっても、より有利にアミノ酸分析を行うことができる。
【００３８】
［19Ｆ核磁気共鳴測定マーカー］
本発明の含フッ素アミノ酸化合物は、19Ｆ核磁気共鳴測定マーカー、19Ｆ核磁気共鳴測定用アミノ酸分析マーカーとして使用できる。また、本発明の含フッ素チオール化合物は、19Ｆ核磁気共鳴測定マーカー化用修飾剤、19Ｆ核磁気共鳴測定マーカー化用アミノ酸修飾剤として使用できる。
【実施例】
【００３９】
以下に実施例をあげて、本発明を詳細に説明する。本発明は、以下に例示する実施例に限定されるものではない。
【００４０】
［実施例１］
［様々なフッ素含有チオールを用いたアミノ酸標準混合液の検出］
［ＯＰＡ反応］
50 mMホウ酸ナトリウム緩衝液（50 μL）にアミノ酸標準混合液H型（Wako）（17種類のアミノ酸混合液（各1 mM））（50 μL）、後述する含フッ素チオールのエタノール溶液（100 mM, 50 μL）およびオルトフタルアルデヒド（OPA）のエタノール溶液（100 mM, 25 μL）を添加し、室温で１分反応させた。
【００４１】
［使用した含フッ素チオール］
上記操作において、含フッ素チオールとして、以下の化合物を使用した。これらの含フッ素チオールの構造式を、図１Ａ〜図３Ｂの左側に示す。図１Ａ〜図３Ｂの中央に記載された構造式、すなわち各含フッ素チオールの構造式のそれぞれ右側に記載された構造式は、それぞれの含フッ素チオールが反応して形成されたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の一般構造式である。アミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の構造式中のＲ基は、アミノ酸の側鎖であり、それぞれのアミノ酸に対応して異なるものとなる。
2-(trifluoromethyl)benzenethiol  （図１Ａの左側の構造式）
3-(trifluoromethyl)benzenethiol  （図１Ｂの左側の構造式）
4-t(rifluoromethyl)benzenethiol  （図１Ｃの左側の構造式）
3,5-bis(trifluoromethyl)benzenethiol  （図１Ｄの左側の構造式）
2-(trifluoromethyl)phenylmethanethiol  （図２Ａの左側の構造式）
3-(trifluoromethyl)phenylmethanethiol  （図２Ｂの左側の構造式）
4-(trifluoromethyl)phenylmethanethiol  （図２Ｃの左側の構造式）
2-Mercapto-5-(trifluoromethyl)pyridine  （図３Ａの左側の構造式）
2-Mercapto-6-(trifluoromethyl)-4-pyrimidinol  （図３Ｂの左側の構造式）
【００４２】
［19F NMR測定］
OPA反応後の反応液に50 mMホウ酸ナトリウム緩衝液（250 μL）、トリフルオロ酢酸（5 mM, 25 μL（ケミカルシフトの内部標準））、重水（50 μL（溶媒シグナルロックのため））を添加し、NMR試料管に移した後、NMR装置（Bruker Avance III 500 MHz NMR system）にて19F NMRスペクトル（積算回数NT = 1024）を測定した。
【００４３】
［測定結果］
測定の結果、得られたスペクトルを、図１Ａ〜図３Ｂの右側のグラフとして示す。上述の通り、各図において、左側から順に、使用した含フッ素チオールの構造式（各図左側）、含フッ素チオールが反応して形成されたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の一般構造式（各図中央）、19F NMRスペクトル（各図右側）を示している。
【００４４】
［実施例２］
［様々なフッ素含有チオールを用いたアミノ酸標準混合液の検出］
［OPA反応］
50 mMホウ酸ナトリウム緩衝液（50 μL）に各アミノ酸溶液（1 mM, 50 μL）、含フッ素チオールのエタノール溶液（100 mM, 50 μL）およびオルトフタルアルデヒド（OPA）のエタノール溶液（100 mM, 25 μL）を添加し、室温で１分反応させた。
【００４５】
［使用した含フッ素チオール］
上記操作において、含フッ素チオールとして、以下の化合物を使用した。それぞれの含フッ素チオールが反応して形成されたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の一般構造式を、図４Ａ及び図４Ｂへそれぞれ示す。
3-(trifluoromethyl)benzenethiol  （図４Ａ）
4-(trifluoromethyl)benzenethiol  （図４Ｂ）
【００４６】
［19F NMR測定］
OPA反応後の反応液に50 mMホウ酸ナトリウム緩衝液（250 μL）、トリフルオロ酢酸（5 mM, 25 μL（ケミカルシフトの内部標準））、重水（50 μL（溶媒シグナルロックのため））を添加し、NMR試料管に移した後、NMR装置（Bruker Avance III 500 MHz NMR system）にて19F NMRスペクトル（積算回数NT = 1024）を測定した。
【００４７】
［測定結果］
測定の結果、得られたスペクトルを、図４Ａ〜図４Ｂのグラフとして示す。上述の通り、各図において、上段側から順に、含フッ素チオールが反応して形成されたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の一般構造式（各図上段右側）、アミノ酸標準混合液（Ｈ型）の19F NMRスペクトル（各図中段）、各アミノ酸溶液の19F NMRスペクトル（各図下段のAlaからValまで）を示している。
【００４８】
［実施例３］
［様々なフッ素含有チオールを用いたアミノ酸標準混合液の検出］
［OPA反応］
50 mMホウ酸ナトリウム緩衝液（50 μL）にアミノ酸標準混合液H型（Wako）（17種類のアミノ酸混合液（各1 mM））（50 μL）、2,2,2-Trifluoroethanethiolのエタノール溶液（100 mM, 50 μL）およびオルトフタルアルデヒド（OPA）のエタノール溶液（100 mM, 25 μL）を添加し、室温で１分反応させた。
【００４９】
［使用した含フッ素チオール］
上記操作において、含フッ素チオールとして、以下の化合物を使用した。含フッ素チオールの構造式を、図５の左側に示す。図５の中央に記載された構造式、すなわち各含フッ素チオールの構造式の右側に記載された構造式は、含フッ素チオールが反応して形成されたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の一般構造式である。アミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の構造式中のＲ基は、アミノ酸の側鎖であり、それぞれのアミノ酸に対応して異なるものとなる。
2,2,2-Trifluoroethanethiol  （図５の左側の構造式）
【００５０】
［19F NMR測定］
OPA反応後の反応液に50 mMホウ酸ナトリウム緩衝液（250 μL）、トリフルオロ酢酸（5 mM, 25 μL（ケミカルシフトの内部標準））、重水（50 μL（溶媒シグナルロックのため））を添加し、NMR試料管に移した後、NMR装置（Bruker Avance III 500 MHz NMR system）にて19F NMRスペクトル（積算回数NT = 1024）を測定した。
【００５１】
［測定結果］
測定の結果、2,2,2-Trifluoroethanethiolを用いたアミノ酸OPA誘導体の19F NMRスペクトルを得た。得られたスペクトルを、図５の右側のグラフとして示す。上述の通り、図５において、左側から順に、使用した含フッ素チオールの構造式（図５左側）、含フッ素チオールが反応して形成されたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の一般構造式（図５中央）、19F NMRスペクトル（図５右側）を示している。
【００５２】
［実施例４］
［3-(trifluoromethyl)benzenethiol用いた有用アミノ酸（テアニン）の検出］
［OPA反応］
50 mMホウ酸ナトリウム緩衝液（50 μL）にテアニンの水溶液（1 mM, 50 μL）、含フッ素チオールのエタノール溶液（100 mM, 50 μL）およびオルトフタルアルデヒド（OPA）のエタノール溶液（100 mM, 25 μL）を添加し、室温で１分反応させた。
【００５３】
［使用した有用アミノ酸］
有用アミノ酸としてテアニンを使用した。テアニンの構造式を以下に示す。
【化１０】
2018039747.tif 000011
【００５４】
［使用した含フッ素チオール］
上記操作において、含フッ素チオールとして、以下の化合物を使用した。含フッ素チオールの構造式を、図６の左側に示す。図６の中央に記載された構造式、すなわち各含フッ素チオールの構造式の右側に記載された構造式は、含フッ素チオールが反応して形成されたアミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の一般構造式である。アミノ酸ＯＰＡ誘導体化合物の構造式中のＲ基は、アミノ酸の側鎖であり、それぞれのアミノ酸に対応して異なるものとなる。
3-(trifluoromethyl)benzenethiol  （図６の左側の構造式）
【００５５】
［19F NMR測定］
OPA反応後の反応液に50 mMホウ酸ナトリウム緩衝液（250 μL）、トリフルオロ酢酸（5 mM, 25 μL（ケミカルシフトの内部標準））、重水（50 μL（溶媒シグナルロックのため））を添加し、NMR試料管に移した後、NMR装置（Bruker Avance III 500 MHz NMR system）にて19F NMRスペクトル（積算回数NT = 1024）を測定した。
【００５６】
［測定結果］
測定の結果、3-(trifluoromethyl)benzenethiolを用いたテアニン−OPA誘導体の19F NMRスペクトルを得た。得られたスペクトルを、図６の右側のグラフとして示す。上述の通り、図６において、左側から順に、使用した含フッ素チオールである3-(trifluoromethyl)benzenethiolの構造式（図６左側）、3-(trifluoromethyl)benzenethiolが反応して形成されたテアニン−ＯＰＡ誘導体化合物の一般構造式（図６中央）、19F NMRスペクトル（図６右側）を示している。
【００５７】
［含フッ素アミノ酸化合物（含フッ素アミノ酸誘導体）の合成反応のスキーム］
実施例において行った含フッ素アミノ酸化合物（含フッ素アミノ酸誘導体）の合成反応を説明するスキームを、図７にスキーム１として示す。図７に示すスキーム１では、ＯＰＡ及びα−アミノ酸から、式Ｖの含フッ素アミノ酸化合物が合成されている。ただし、本発明はこのスキーム１に限定されるものではない。
【産業上の利用可能性】
【００５８】
本発明によれば、劇物指定の有機溶媒の多量の使用を回避し、ＨＰＬＣを使用することなく、短時間で、アミノ酸分析の分析結果を得ることができる。本発明は産業上有用な発明である。
【図１Ａ】
2018039747.tif 000017
【図１Ｂ】
2018039747.tif 000018
【図１Ｃ】
2018039747.tif 000019
【図１Ｄ】
2018039747.tif 000020
【図２Ａ】
2018039747.tif 000021
【図２Ｂ】
2018039747.tif 000022
【図２Ｃ】
2018039747.tif 000023
【図３Ａ】
2018039747.tif 000024
【図３Ｂ】
2018039747.tif 000025
【図４Ａ】
2018039747.tif 000026
【図４Ｂ】
2018039747.tif 000027
【図５】
2018039747.tif 000028
【図６】
2018039747.tif 000029
【図７】
2018039747.tif 000030