(57)【要約】【課題】３０℃を超える程度の比較的高い融点を有し、かつ生体温度付近でゾル−ゲル転移を起こすことのできる非架橋ゼラチンを提供する。【解決手段】非架橋ゼラチンは、５質量％水溶液が以下の特性（ｉ）および（ｉｉ）を示す。（ｉ）パギイ法による融点が３１℃以上である。（ｉｉ）３２℃で３時間以上ゲル状態を維持する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
５質量％水溶液が以下の特性（ｉ）および（ｉｉ）を示す、非架橋ゼラチン。
（ｉ）パギイ法による融点が３１℃以上である。
（ｉｉ）３２℃で３時間以上ゲル状態を維持する。
【請求項２】
前記５質量％水溶液がさらに以下の特性（ｉｉｉ）を示す、請求項１に記載の非架橋ゼラチン。
（ｉｉｉ）３７℃で１５分以上ゲル状態を維持する。
【請求項３】
２質量％水溶液が以下の特性（ｉｖ）および（ｖ）を示す、請求項１または２に記載の非架橋ゼラチン。
（ｉｖ）前記パギイ法による融点が３０℃以上である。
（ｖ）３２℃で１時間以上ゲル状態を維持する。
【請求項４】
前記２質量％水溶液がさらに以下の特性（ｖｉ）を示す、請求項３に記載の非架橋ゼラチン。
（ｖｉ）３７℃で１５分以上ゲル状態を維持する。
【請求項５】
前記非架橋ゼラチンは、腱由来コラーゲンに由来する、請求項１〜４のいずれかに記載の非架橋ゼラチン。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の非架橋ゼラチンを含む、化粧料用または医薬用ゼラチン。
【請求項７】
２種以上のゼラチンを含むゼラチン混合体であって、
請求項１〜５のいずれかに記載の非架橋ゼラチンを少なくとも含む、ゼラチン混合体。
【請求項８】
請求項７に記載のゼラチン混合体を含む、化粧料用または医薬用ゼラチン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非架橋ゼラチン、ゼラチン混合体、およびこれらを含む化粧料用または医薬用ゼラチンに関する。
【背景技術】
【０００２】
ゼラチンは皮膚、骨などの熱抽出物であり、変性コラーゲンを主成分としている。ゼラチンは化学的にコラーゲンとほぼ等価であるため、生体適合性に優れ、生体内で分解および吸収される。このためゼラチン水溶液から作製された成型体が微粒子、フィルム、カプセルなどとして再生医療の分野で広く用いられている。ゼラチン水溶液は低温でゲル化し、加温すると融解する温度可逆性の性質（ゾル−ゲル転移）を有し、この性質を活用したものとしてゼリーが古くから知られる。しかしながら、ゼラチンのゾル−ゲル転移を医薬、化粧料などの分野に応用した事例は、ほとんど知られていない。
【０００３】
特開２０１１−１７２９２５号公報（特許文献１）には、シート状細胞培養物と、該シート状細胞培養物を支持し、常温で高分子ゲル化可能な生体適合性化合物を含有する支持体層とからなる医療用積層体が記載されている。本文献の実施例１では、常温で高分子ゲル化可能な生体適合性化合物としてゼラチンを用い、このゼラチンを４℃で凝固させて積層体を製造し、その後、３７℃に加温してゼラチンを融解させてシート状細胞培養物を得ることが開示されている。
【０００４】
特開２０１４−１００１１０号公報（特許文献２）および大藪らの文献（非特許文献１）には、６０℃の穏やかな温度でブタ皮膚コラーゲン由来のアテロコラーゲンを熱変性させることにより、短いペプチドの含有量を減少させた非分解ゼラチン（ＵＣＧ）が開示されている。このＵＣＧの５質量％水溶液は、通常のゼラチンの５質量％水溶液よりも高い３１℃の融点を有し、２５℃で急速にゲル化し、さらに３７℃で融解するとされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１１−１７２９２５号公報
【特許文献２】特開２０１４−１００１１０号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Y  Oyabu  et  al,  Evaluation  of  gelatin  hydrogel  as  a  potential  carrier  for  cell  transportation,  Journal  of  Bioscience  and  Bioengineering,  118(1),  112-115(2014)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、医薬、化粧料などにゼラチンを応用することを鑑みれば、３７℃前後でゼラチンのゾル−ゲル転移を起こすことが好ましいと考えられる。有効成分の効果の持続性を人体の体温（以下、「生体温度」と記すことがある）付近で獲得するためである。上記特許文献１、２に開示されるゼラチンは、３７℃でただちに融解するため、効果の持続性を獲得する点で改善の余地があると推測される。
【０００８】
さらに、高い融点を有するゼラチンとして、ゼラチン乾燥体に対して紫外線を照射するなどの加工処理を行なうことにより、ゼラチンの分子間または分子内を架橋した架橋ゼラチンが公知である。しかしながら架橋ゼラチンは、４０℃を超える温度でも融解しないものが多い。したがって、３０℃を超える程度の比較的高い融点を有し、かつ生体温度付近でゾル−ゲル転移を起こすことのできるゼラチンが要求されている。
【０００９】
本発明は、上記実情に鑑みなされ、３０℃を超える程度の比較的高い融点を有し、かつ生体温度付近でゾル−ゲル転移を起こすことができる非架橋ゼラチン、これを含む化粧料用または医薬用ゼラチンおよびゼラチン混合体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明に係る非架橋ゼラチンは、５質量％水溶液が以下の特性（ｉ）および（ｉｉ）を示す。
（ｉ）パギイ法による融点が３１℃以上である。
（ｉｉ）３２℃で３時間以上ゲル状態を維持する。
【００１１】
上記非架橋ゼラチンは、上記５質量％水溶液がさらに以下の特性（ｉｉｉ）を示すことが好ましい。
（ｉｉｉ）３７℃で１５分以上ゲル状態を維持する。
【００１２】
上記非架橋ゼラチンは、２質量％水溶液が以下の特性（ｉｖ）および（ｖ）を示すことが好ましい。
（ｉｖ）前記パギイ法による融点が３０℃以上である。
（ｖ）３２℃で１時間以上ゲル状態を維持する。
【００１３】
上記非架橋ゼラチンは、上記２質量％水溶液がさらに以下の特性（ｖｉ）を示すことがさらに好ましい。
（ｖｉ）３７℃で１５分以上ゲル状態を維持する。
【００１４】
上記非架橋ゼラチンは、腱由来コラーゲンに由来することが好ましい。
本発明に係る化粧料用または医薬用ゼラチンは、上記非架橋ゼラチンを含むことが好ましい。
【００１５】
本発明に係るゼラチン混合体は、２種以上のゼラチンを含むゼラチン混合体であって、上記非架橋ゼラチンを少なくとも含むことが好ましい。
【００１６】
本発明に係る化粧料用または医薬用ゼラチンは、上記ゼラチン混合体を含むことがさらに好ましい。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、３０℃を超える程度の比較的高い融点を有し、かつ生体温度付近でゾル−ゲル転移を起こすことができる非架橋ゼラチン、これを含む化粧料用または医薬用ゼラチンおよびゼラチン混合体を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】非架橋ゼラチンが体表（腰）においてゲル状態を維持する時間を説明する図面代用写真である。
【図２】非架橋ゼラチンが体表（手の甲）においてゲル状態を維持する時間を説明する図面代用写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明に係る非架橋ゼラチン、これを含む化粧料用または医薬用ゼラチン、ならびにゼラチン混合体について、それぞれ詳細に説明する。
【００２０】
本明細書において「非架橋ゼラチン」とは、ＪＩＳ  Ｋ  ６５０３：２００１（にかわ及びゼラチン）に基づき測定した水分率が１５質量％以下であるゼラチン乾燥体またはその水溶液（ゲル状態）に対し紫外線を照射するなどの種々の加工処理を行なうことにより、分子間または分子内を架橋した所謂「架橋ゼラチン」ではないゼラチンをいう。さらに本明細書において「非架橋ゼラチン」、「化粧料用ゼラチン」、「医薬用ゼラチン」および「ゼラチン混合体」の用語は、ゲル状態にあるときのほか、ゼラチンが溶解している水溶液の状態にあるときを含めて用いる場合がある。本明細書において「Ｘ〜Ｙ」という形式の表記は、範囲の上限下限（すなわちＸ以上Ｙ以下）を意味しており、Ｘにおいて単位の記載がなく、Ｙにおいてのみ単位が記載されている場合、Ｘの単位とＹの単位とは同じである。
【００２１】
＜非架橋ゼラチン＞
（５質量％水溶液）
本発明に係る非架橋ゼラチンは、５質量％水溶液が以下の特性（ｉ）および（ｉｉ）を示す。
（ｉ）パギイ法による融点が３１℃以上である。
（ｉｉ）３２℃で３時間以上ゲル状態を維持する。
【００２２】
非架橋ゼラチンは、上記５質量％水溶液がさらに以下の特性（ｉｉｉ）を示すことが好ましい。
（ｉｉｉ）３７℃で１５分以上ゲル状態を維持する。
【００２３】
加えて非架橋ゼラチンは、５質量％水溶液の融点が３１℃以上４０℃以下であることがさらに好ましい。非架橋ゼラチンは、５質量％水溶液が３２〜４２℃の温水中で融解することがよりさらに好ましい。非架橋ゼラチンの５質量％水溶液の３２℃でのゲル状態は、溶媒成分が気化しない環境下であれば、１週間程度維持される。
【００２４】
これらの特徴により非架橋ゼラチンは、３０℃を超える程度の比較的高い融点を有し、かつ生体温度付近でゾル−ゲル転移を起こすことができる。
【００２５】
ここで、本発明において「ゲル状態を維持する」とは、ゲル形状が目視において崩れないで維持される状態のことをいう。したがって、非架橋ゼラチンに含まれる水分が一部蒸発するなどしても、その形状が維持される限り、「ゲル状態を維持する」ことに含まれる。さらに、「ゲル状態を維持する」ことを脱する臨界点、すなわちゲル状態を維持しなくなったと判断される臨界点は、その形状が崩れることが目視において確認された時点をいうものとする。よって、後述する実施例６などのように、非架橋ゼラチンの形状が目視においてその一部でも崩れたことが確認された場合、もはや「ゲル状態を維持する」とはいえない。
【００２６】
本発明において、非架橋ゼラチンを５質量％水溶液とするときの溶媒には、ＪＩＳ  Ｋ  ６５０３：２００１（にかわ及びゼラチン）に記載されている電気伝導度が２μＳ／ｃｍ（２５℃）以下の蒸留水またはイオン交換水を用いることができる。所謂純水、超純水も上記蒸留水または上記イオン交換水に該当する。上記蒸留水または上記イオン交換水を用いることにより、非架橋ゼラチンを後述する化粧料用または医薬用として用いることが容易となる。
【００２７】
非架橋ゼラチンにおいて５質量％水溶液の融点は、「パギイ法（写真用ゼラチン試験法、第１０版（２００６年版）」に準拠することで測定することができる。ただし、上記パギイ（ＰＡＧＩ）法では１０質量％水溶液を用いてゼラチンの融点を測定するが、本明細書ではこれを５質量％水溶液とし、そのゼラチンの融点を測定する。融点測定時の非架橋ゼラチンを５質量％水溶液とするときの溶媒としては、上記イオン交換水を用いる。
【００２８】
したがって、非架橋ゼラチンは、その融点が上記パギイ（ＰＡＧＩ）法で測定されるため、融点以下の温度では必ずゲル状態にあり、融点温度を超えても直ちにすべてが融解することはなく、融点よりもより高温の温度になるまでゲル状態を維持することとなる。
【００２９】
（２質量％水溶液）
本発明に係る非架橋ゼラチンは、２質量％水溶液が以下の特性（ｉｖ）および（ｖ）を示すことが好ましい。
（ｉｖ）パギイ法による融点が３０℃以上である。
（ｖ）３２℃で１時間以上ゲル状態を維持する。
【００３０】
非架橋ゼラチンは、上記２質量％水溶液がさらに以下の特性（ｖｉ）を示すことがさらに好ましい。
（ｖｉ）３７℃で１５分以上ゲル状態を維持する。
【００３１】
加えて非架橋ゼラチンは、２質量％水溶液の融点が３０℃以上４０℃以下であることが好ましい。非架橋ゼラチンは、２質量％水溶液が３２〜４２℃の温水中で融解することがさらに好ましい。非架橋ゼラチンの２質量％水溶液の３２℃でのゲル状態は、溶媒成分が気化しない環境下であれば１週間程度維持される。
【００３２】
本発明において、非架橋ゼラチンを２質量％水溶液とするときの溶媒にも、上記蒸留水またはイオン交換水を用いることが好ましい。さらに非架橋ゼラチンの２質量％水溶液の融点も、上述のように上記パギイ（ＰＡＧＩ）法に準拠しつつ、２質量％水溶液として融点を測定すればよい。融点測定時の非架橋ゼラチンを２質量％水溶液とするときの溶媒にも、上述したイオン交換水を用いる。
【００３３】
ここで本発明に係る非架橋ゼラチンは、上述のように、種々の加工処理を行なうことにより、分子間または分子内を架橋した架橋ゼラチンではないゼラチンである。架橋ゼラチンは、紫外線処理、架橋剤による処理、熱処理などにより架橋に寄与する化学的な変化が分子間または分子内に生じている。紫外線処理では、紫外線が芳香族アミノ酸などに作用し、不対電子をもつ高分子ラジカルが発生することにより、分子間反応が生じる。架橋剤による処理では、たとえばグルタルアルデヒド架橋を挙げることができ、この場合、隣接するリジン残基間においてグルタルアルデヒドを介した結合が生じる。熱処理では側鎖のカルボキシル基とアミノ基との間で脱水縮合反応が生じる。
【００３４】
したがって本発明の非架橋ゼラチンは、種々の加工処理によって上述したような反応または結合が生じることにより、分子間または分子内が架橋された架橋ゼラチンを除外したゼラチンのうち、上述した融点など種々の特徴を備えるゼラチンを対象とする。
【００３５】
（非架橋ゼラチンの由来）
本発明に係る非架橋ゼラチンは、腱由来コラーゲンに由来することが好ましい。たとえば牛、豚、鶏、ダチョウなどの動物の腱由来コラーゲンに由来することが好ましい。上述した（ｉ）〜（ｖｉ）の特性を得やすいからである。
【００３６】
さらに、コラーゲンの種類としては、アテロコラーゲン、酸抽出コラーゲン、アルカリ処理コラーゲンなどを用いることができる。好ましくはアテロコラーゲンを用いる。アテロコラーゲンは、たとえばペプシン、キモシン、カテプシンＤ、レニンなどのタンパク質分解酵素を加え、Ｎ末端またはＣ末端に存在するテロペプチドを消化することにより調製されたコラーゲンであり、粘性が低く、取扱いが容易である。よって非架橋ゼラチンは、腱由来のアテロコラーゲンを原料として用いることがさらに好ましい。
【００３７】
（化学修飾）
本発明に係る非架橋ゼラチンは、その側鎖となる原子団が化学修飾されているアミノ酸残基を含んでいてもよい。たとえば、非架橋ゼラチンの側鎖のカルボキシル基およびアミノ基が化学修飾されていてもよく、さらにペプチド鎖中のプロリンが化学修飾されていてもよい。カルボキシル基の化学修飾としては、たとえばアンモニア、アミン、グリシンメチルエステルなどによるアミド化が挙げられる。アミノ基の化学修飾としては、たとえばサクシニル化、フタル化、フマリル化、アセチル化などが挙げられる。プロリンは、たとえばゼラチンにプロリル４−ヒドロキシラーゼを作用させることにより、そのγ位の炭素原子にヒドロキシル基が導入されて水酸化される。これらの化学修飾に用いられる官能基のうち、アミノ基とカルボキシル基はコラーゲンの立体構造上、らせんの外側に向いているため、このらせん構造の部分回復現象であるゼラチンのゲル化現象がこれらの官能基修飾によって阻害されにくい。その結果、本発明に係る非架橋ゼラチンは、３０℃を超える程度の比較的高い融点を有するという効果を損なわずに、その他の種々のゼラチン物性を変えることが可能である。
【００３８】
プロリンの水酸化は、コラーゲンのらせん構造内の水素結合に寄与し、ゲル化を安定化させる。好ましい化学修飾体としては、導入される側鎖が生体内代謝物質であり、水溶性を高める効果を持つサクシニル化が挙げられる。化学修飾の度合いは、非架橋ゼラチンの物性が所望のものとなるように適宜、調整することが好ましい。サクシニル化は、ゼラチンに存在するアミノ基全体のうちの８０％以下であれば、非架橋ゼラチンの融点をほとんど変化させないで、その水溶性を向上させることができる。より好ましいサクシニル化の割合は、ゼラチンに存在するアミノ基全体のうちの４０〜７０％である。カルボキシル基およびアミノ基の化学修飾、ならびにプロリンの水酸化は従来公知の方法により行なうことができる。
【００３９】
（作用）
以上より、本発明に係る非架橋ゼラチンは、３０℃を超える程度の比較的高い融点を有し、かつ生体温度付近でゾル−ゲル転移を起こすことができる。したがって、たとえば後述する化粧料用または医薬用ゼラチンなどとして、所望の化粧料、または医薬を非架橋ゼラチンに配合し、生体に適用することにより、該化粧料の有効成分、該医薬の有効成分の効果を長時間にわたって持続的に生体に付与することが可能となる。
【００４０】
＜非架橋ゼラチンの製造方法＞
本発明に係る非架橋ゼラチンは、牛、豚、鶏、ダチョウなどの動物から抽出されたコラーゲンを熱分解により調製することにより得ることができる。非架橋ゼラチンの製造には、上記のとおり上記動物の腱由来コラーゲンを用いることが好ましく、コラーゲンの種類としては、上記のとおりアテロコラーゲンを用いることが好ましく、もって腱由来のアテロコラーゲンを用いることがさらに好ましい。
【００４１】
上記コラーゲンを熱分解により調製する方法は、具体的には以下のとおりである。まず上記動物から塩酸、硫酸、硝酸、酢酸などの酸により抽出されたコラーゲンを、０．１〜１０質量％の濃度になるように上記イオン交換水を加え、特定のｐＨに調整する。コラーゲンの濃度は、０．１５〜５質量％とすることが好ましく、０．２〜３質量％とすることがさらに好ましい。ｐＨは、たとえば２〜９、好ましくは３〜８、より好ましくは４〜８に調整する。続いて、上記コラーゲンが溶解した水溶液をたとえば４０〜８０℃の温度範囲で５分間〜２４時間保持することで熱変性させる。熱変性温度は、好ましくは４５〜７０℃であり、より好ましくは５０〜６０℃である。熱変性時間は、熱変性温度が低ければ長時間とし、熱変性温度が高ければ短時間とする反比例の関係に基づいて適宜調整することが好ましい。熱変性時間としては、たとえば１５分〜１５時間とすることができる。
【００４２】
最後に、熱変性させたコラーゲンの水溶液、すなわちゼラチンの水溶液を乾燥させることにより、本発明の非架橋ゼラチンを得ることができる。乾燥の方法としては、従来公知の方法を用いることができる。たとえば通風乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥などを挙げることができる。さらに得られたゼラチンに対し、上述のように従来公知の方法を用いてその側鎖を化学修飾することができる。
【００４３】
＜化粧料用または医薬用ゼラチン＞
本発明に係る化粧料用または医薬用ゼラチンは、上記非架橋ゼラチンを含むことが好ましい。化粧料用または医薬用ゼラチンは、上述した特徴を有する非架橋ゼラチンを含むため、所望の化粧料または医薬を非架橋ゼラチンに配合し、生体に適用した場合に、該化粧料の有効成分、該医薬の有効成分の効果を長時間にわたって持続的に生体に付与することが可能となる。
【００４４】
たとえば、本発明では、化粧料用ゼラチンとして、香料、美白剤、紫外線吸収剤、アミノ酸類、補酵素、ビタミン類、保湿剤、血行促進剤、しわ防止剤、肌荒れ防止剤、アンチエイジング剤、活性酸素除去剤、抗酸化剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、着色料、防腐剤、抗菌剤などの成分を非架橋ゼラチンに配合することにより、フレグランス、美白、日焼け止め、肌修復、保湿、酸化防止、抗菌などの効果を生体に長時間にわたって付与することができる。さらに医薬用ゼラチンとして、ＮＳＡＩＤ、ステロイド、抗生物質、抗ヒスタミン剤、消炎剤、抗菌性物質、鎮痛剤、精神安定剤、育毛剤、毛髪栄養剤、などの医薬を非架橋ゼラチンに配合することにより、抗炎症、抗アレルギー、除菌、鎮痒、精神安定、育毛などの効果を生体に長時間にわたって付与することができる。
【００４５】
このように本発明において、化粧料用ゼラチンは化粧品に用いるゼラチンが含まれ、医薬用ゼラチンは、薬事法でいう医薬品、医薬部外品に用いるゼラチンが含まれる。
【００４６】
＜ゼラチン混合体＞
本発明に係るゼラチン混合体は、２種以上のゼラチンを含むゼラチン混合体であって、上記非架橋ゼラチンを少なくとも含む。たとえば、上述した特徴を有する少なくとも１種の非架橋ゼラチンと、少なくとも１種の従来公知のゼラチンとを含んだゼラチン混合体とすることができる。さらに、ゼラチン混合体に含まれる各ゼラチンの配合量を用途に応じて適宜調整することが好ましい。これにより、所望の水溶液濃度で所望の融点を有し、かつ所望の時間にわたってゲル化状態を維持することができるゼラチン混合体を提供することができ、非架橋ゼラチンの用途をさらに拡大することができる。
【００４７】
たとえば、上記非架橋ゼラチンと従来公知のゼラチン（商品名：「ＧＬＳ２５０」、新田ゼラチン株式会社製）とを、１：１の比率（質量換算）で配合したゼラチン混合体は、その２質量％水溶液の融点が２６．９℃であり、かつ３７℃で１５分以内に融解し、ゲル状態を維持しなくなる特性を有する。さらに、上記非架橋ゼラチンと他の従来公知のゼラチン（商品名：「Ｇ１８９０」、シグマ−アルドリッチ社製）とを、１：１の比率（質量換算）で配合したゼラチン混合体は、その５質量％水溶液の融点が３２．６℃であり、かつ３７℃で２４時間以上ゲル状態を維持する特性を有する。このように、本発明に係るゼラチン混合体は、所定の水溶液濃度で様々な融点を有し、様々な時間にわたってゲル化状態を維持する特性を有するゼラチンとして、そのバリエーションを多数揃えることができる。
【００４８】
さらに、上記非架橋ゼラチンのゲルを従来公知のゼラチンのゲルで包接すること、または従来公知のゼラチンのゲルを上記非架橋ゼラチンのゲルで包接することにより、２つの融点を備えたゼラチン混合体のゲルを作製することもできる。これによりゼラチン混合体は、その部分によって融解する温度および時間が異なるゼラチンとして新たな用途を提供することができる。たとえば、半減期の短い薬剤を内包させた医薬用ゼラチン、効果が短い化粧料用成分を内包させた化粧料用ゼラチンなどの用途を提供することができる。
【実施例】
【００４９】
以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５０】
＜実施例１＞
豚腱由来アテロコラーゲン（日本国産）を１Ｎ塩酸を用いて０．３質量％でｐＨ３．０の水溶液に調製し、５０℃で１時間、加熱処理した。その後、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ７．０に調整し、凍結乾燥することにより非架橋ゼラチンを得た。
【００５１】
実施例１の非架橋ゼラチンは、５質量％水溶液のパギイ法による融点が、３４．７℃であった。３２℃でゲルを維持する時間は、２４時間以上であった。
【００５２】
＜実施例２＞
豚腱由来アテロコラーゲン（日本国産）を１Ｎ塩酸を用いて０．３質量％でｐＨ３．０の水溶液に調製し、６０℃で１時間、加熱処理した。その後、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ７．０に調整し、凍結乾燥することにより非架橋ゼラチンを得た。
【００５３】
実施例２の非架橋ゼラチンは、５質量％水溶液のパギイ法による融点が、３３．０℃であった。３２℃でゲルを維持する時間は、２４時間以上であった。
【００５４】
＜実施例３＞
豚腱由来アテロコラーゲン（日本国産）を１Ｎ塩酸を用いて０．３質量％でｐＨ７．０の水溶液に調製し、６０℃で１時間、加熱処理した。その後、凍結乾燥することにより非架橋ゼラチンを得た。
【００５５】
実施例３の非架橋ゼラチンは、５質量％水溶液のパギイ法による融点が、３５．７℃あった。３２℃でゲルを維持する時間は、２４時間以上であった。
【００５６】
＜実施例４＞
ダチョウ皮膚由来アテロコラーゲン（日本国産）を用いること以外、実施例２と同様の方法により非架橋ゼラチンを得た。
【００５７】
実施例４の非架橋ゼラチンは、５質量％水溶液のパギイ法による融点が、３２．５℃であった。３２℃でゲルを維持する時間は、２４時間以上であった。
【００５８】
＜比較例＞
比較例には、以下のような架橋ゼラチンを用いた。すなわち、牛骨アルカリ処理ゼラチン（新田ゼラチン株式会社製）を純水に溶解させ、５質量％ゼラチン溶液１０ｍｌに対し、２５質量％グルタルアルデヒド水溶液（ナカライテスク株式会社製）を２０μｌ添加した。次に、４℃で１２時間架橋反応を行なった。その後、１００ｍＭグリシン溶液に室温で１時間浸漬し、さらに室温で３０分間純水で洗浄することを５回繰り返すことにより、架橋ゼラチンを得た。
【００５９】
比較例の架橋ゼラチンは、４５℃で１時間以上加温してもゲル状態を維持していた。
実施例１〜４における５質量％水溶液の融点は、上述のように上記パギイ（ＰＡＧＩ）法に準拠して測定した。各試料において所定の濃度の水溶液とするときの溶媒には、上述したＪＩＳ  Ｋ  ６５０３：２００１に記載されているイオン交換水を用いた。「ゲル状態を維持する」と判断される基準についても上述のとおりとした。
【００６０】
＜実施例５＞
（非架橋ゼラチンの準備）
実施例５においては、上記実施例３の非架橋ゼラチンを準備した。
【００６１】
さらに、比較例として市販のゼラチンであるＧ１８９０（シグマ−アルドリッチ社製）とＧＬＳ２５０（新田ゼラチン株式会社製）とを準備した。
【００６２】
（融点およびゲル状態維持時間の測定）
実施例５では、実施例３の非架橋ゼラチンを用いて下記濃度を有する水溶液を市販のビーカー中でそれぞれ調製し、パギイ法で用いる融点測定管に注ぎ込みこれらを氷中に入れて３０分間冷却することにより、試料Ｎｏ．１、２のゲルを作製した。さらに、市販のゼラチンを用いて下記濃度を有する水溶液を市販のビーカー中でそれぞれ調製し、パギイ法で用いる融点測定管に注ぎ込みこれらを氷中に入れて３０分間冷却することにより、試料Ｎｏ．３〜６のゲルを作製した。これにより試料Ｎｏ．１〜６のゲルに対し、その融点をそれぞれ測定した。続いて、試料Ｎｏ．１〜６の水溶液２ｍｌを、直径３５ｍｍのディッシュにそれぞれ添加し、４℃で２時間静置し、その後室温で１時間保持することにより、２８℃、３２℃および３７℃においてゲル状態を維持する時間の評価に用いるゲルを準備した。
【００６３】
試料Ｎｏ．１〜６においても、これらのゲルの融点は上述のように上記パギイ（ＰＡＧＩ）法に準拠して測定した。各試料の水溶液の溶媒にはイオン交換水を用いた。「ゲル状態を維持する」と判断される基準についても上記と同じとした。試料Ｎｏ．１〜６のゼラチンの種別とそのゲルの融点は、以下のとおりである。
【００６４】
試料Ｎｏ．１：  非架橋ゼラチン  ５質量％水溶液、融点  ３５．７℃
試料Ｎｏ．２：  非架橋ゼラチン  ２質量％水溶液、融点  ３０．５℃
試料Ｎｏ．３：  Ｇ１８９０  ５質量％水溶液、融点  ２９．５℃
試料Ｎｏ．４：  Ｇ１８９０  ２質量％水溶液、融点  ２４．１℃
試料Ｎｏ．５：  ＧＬＳ２５０  ５質量％水溶液、融点  ２７．２℃
試料Ｎｏ．６：  ＧＬＳ２５０  ２質量％水溶液、融点  ２２．９℃。
【００６５】
２８℃、３２℃および３７℃における試料Ｎｏ．１〜６のゲルのゲル状態を維持する時間を、以下の表１〜６に示す。試料Ｎｏ．１の結果が表１に対応し、試料Ｎｏ．２の結果が表２に対応し、試料Ｎｏ．３の結果が表３に対応し、試料Ｎｏ．４の結果が表４に対応し、試料Ｎｏ．５の結果が表５に対応し、試料Ｎｏ．６の結果が表６に対応する。表１〜６において「Ｙ」は、ゲル状態を維持することを示し、「Ｎ」は、ゲル状態が維持されないで融解したことを示す。「−」は、融解後であるので観察しなかったことを意味する。表２に示すように、試料Ｎｏ．２の２８℃でのゲル状態を維持する時間が２４時間以上であったことから、表１において試料Ｎｏ．１の２８℃でのゲル状態を維持する時間については試験しなかった。
【００６６】
【表１】
2018002657.tif 000003
【００６７】
【表２】
2018002657.tif 000004
【００６８】
【表３】
2018002657.tif 000005
【００６９】
【表４】
2018002657.tif 000006
【００７０】
【表５】
2018002657.tif 000007
【００７１】
【表６】
2018002657.tif 000008
【００７２】
（評価）
以上より、本実施例の非架橋ゼラチンは、５質量％水溶液が以下の特性（ｉ）〜（ｉｉｉ）を示すことが分かる。
（ｉ）融点が３１℃以上である。
（ｉｉ）３２℃で３時間以上ゲル状態を維持する。
（ｉｉｉ）３７℃で１５分以上ゲル状態を維持する。
【００７３】
さらに本実施例の非架橋ゼラチンは、２質量％水溶液が以下の特性（ｉｖ）〜（ｖｉ）を示すことが分かる。
（ｉｖ）融点が３０℃以上である。
（ｖ）３２℃で１時間以上ゲル状態を維持する。
（ｖｉ）３７℃で１５分以上ゲル状態を維持する。
【００７４】
一方で、Ｇ１８９０は、５質量％水溶液が２８℃で２４時間、ゲル状態を維持したが、５質量％水溶液の３２℃の条件において３時間以内に融解し、３７℃で１５分以内に融解した。Ｇ１８９０の２質量％水溶液は、２８℃および３２℃の条件において１時間以内に融解し、３７℃で１５分以内に融解した。ＧＬＳ２５０も、５質量％水溶液が２８℃で２４時間、ゲル状態を維持したが、５質量％水溶液の３２℃の条件において１時間以内に融解し、３７℃で１５分以内に融解した。さらに２質量％水溶液のすべての温度の条件において１５分以内に融解した。
【００７５】
したがって、非架橋ゼラチンは、従来のゼラチンよりも高い融点を有し、かつ生体温度付近でゾル−ゲル転移を起こすことができる。
【００７６】
＜実施例６＞
（体表でのゲル状態維持時間の測定）
実施例６では、実施例３の非架橋ゼラチンの５質量％水溶液を調製し、これらを４℃に冷却することにより、試料Ｎｏ．７、９のゲルを作製した。比較例としてＧ１８９０を調製することにより、５質量％水溶液とした試料Ｎｏ．８、１０のゲルを作製した。
【００７７】
試料Ｎｏ．７、８のゲルを健康な成人（３１歳、男性）の腰（体表温度、３７℃付近）に同時に付着させ、安定性（ゲル状態を維持する時間）を評価した。その結果を図１に示す。さらに、試料Ｎｏ．９、１０のゲルを健康な成人（３１歳、男性）の手の甲（体表温度、３２℃付近）に付着させ、安定性（ゲル状態を維持する時間）を評価した。その結果を図２に示す。
【００７８】
（評価）
図１は、試料Ｎｏ．７のゲルおよび試料Ｎｏ．８のゲルを腰に付着させた場合のゲル状態を維持する時間を説明している図面代用写真である。図１において左右方向に並ぶ扁平な円盤状のものが、それぞれ試料Ｎｏ．７のゲルおよび試料Ｎｏ．８のゲルである。上下方向は、腰に付着させてからの経過時間（実施時間）を表している。図１に示すように、試料Ｎｏ．７のゲルは、生体の腰（体表温度、３７℃付近）において３０分以上安定的にゲル状態を維持した。その一方で、試料Ｎｏ．８のゲルは、腰において直ちにその形状が崩れ始め、２分経過時点では完全に融解して腰から溶け落ちた。
【００７９】
図２は、試料Ｎｏ．９のゲルおよび試料Ｎｏ．１０のゲルを手の甲に付着させた場合のゲル状態を維持する時間を説明している図面代用写真である。図２において左右方向に並ぶ扁平な円盤状のものが、それぞれ試料Ｎｏ．９のゲルおよび試料Ｎｏ．１０のゲルである。上下方向は、手の甲に付着させてからの経過時間（実施時間）を表している。図２に示すように、試料Ｎｏ．９のゲルは、生体の手の甲（体表温度、３２℃付近）において３０分以上安定的にゲル状態を維持した。その一方で、試料Ｎｏ．１０のゲルは、手の甲において徐々にその形状が崩れ始め、２５分経過後に手の甲を傾けると崩れ落ちた。付言すると、図２の下部に示すように試料Ｎｏ．９のゲルは、３０分経過後にゲル状態を維持したまま、手の甲からゲルの一部を残すことなく剥がすことができた。さらに、試料Ｎｏ．９のゲルが付着した手を４０℃の温水に浸けると数秒で融解し、容易に除去することができた。
【００８０】
したがって、非架橋ゼラチンは、所望の化粧料または医薬を配合して生体に適用した場合、該化粧料の有効成分または該医薬の有効成分の効果を３０分以上にわたって持続的に生体に付与することができる。さらに、４０℃の温水で容易に除去することもできる。もって、徐放性製剤の基剤、賦形剤などとしての活用を見込むことができる。
【００８１】
＜実施例７＞
（体表での非架橋ゼラチンによる成分保持）
実施例７では、実施例３の非架橋ゼラチンの５質量％水溶液を調製し、この水溶液に対し５質量％となる量で化粧料としての香料（商品名：「オーデアロマ  ラベンダーＢ」、一丸ファルコス株式会社製）を配合し、これを４℃に冷却することにより、試料Ｎｏ．１１、１２のゲルを作製した。試料Ｎｏ．１１のゲルに上記香料を配合したものを健康な成人（３１歳、男性）の手の甲（体表温度、３２℃付近）に付着させ、その香りが保持される時間を官能評価した。比較例では、上記非架橋ゼラチンに配合することなく、上記香料を同じ人物の手の甲に直接付した。その結果を表７に示す。
【００８２】
さらに、試料Ｎｏ．１２のゲルに上記香料を配合したものを健康な成人（３１歳、男性）の頭皮（体表温度、３７℃付近）に付着させ、その香りが保持される時間を官能評価した。比較例では、上記非架橋ゼラチンに配合することなく、上記香料を同じ人物の頭皮に直接付した。その結果を表８に示す。表７、８において「Ａ」は十分に香りを感じる評価であることを示し、「Ｂ」は香りを感じる評価であることを示し、「Ｃ」はかすかに香りを感じる評価であることを示し、「Ｄ」は全く香りを感じない評価であることを示す。
【００８３】
【表７】
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【００８４】
【表８】
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【００８５】
（評価）
以上より、試料Ｎｏ．１１（実施例）のゲルは、生体の手の甲（体表温度、３２℃付近）において５時間以上安定的に香料の香りを保持した。試料Ｎｏ．１２（実施例）のゲルは、生体の頭皮（体表温度、３７℃付近）において５時間以上安定的に香料の香りを保持した。さらに、試料Ｎｏ．１２のゲルが付着した頭皮を４０℃の温水で洗い流すと、ゲルは数秒で融解したので、容易に除去することができた。その一方で、手の甲に上記香料を直接付した例および頭皮に上記香料を直接付した例では、１時間経過時点ですでに、かすかに香りを感じる程度まで香料の効果が低下していた。
【００８６】
したがって、非架橋ゼラチンは、所望の化粧料または医薬を配合して生体に適用した場合、該化粧料の有効成分または該医薬の有効成分の効果を長時間（たとえば５時間）にわたって持続的に生体上で保持することができる。さらに、４０℃の温水で容易に除去することもできる。もって、効果が持続する化粧料の基剤、添加剤などとしての活用を見込むことができる。
【００８７】
＜実施例８＞
実施例８では、実施例３の非架橋ゼラチンの５質量％水溶液を調製し、これを４０℃で１０分間維持した。この水溶液１ｍＬを健康な成人（３１歳、男性）の手の甲（体表温度、３２℃付近）に垂らした。比較例では、Ｇ１８９０の５質量％水溶液、ＧＬＳ２５０の５質量％水溶液をそれぞれ作製し、実施例と同じ方法で手の甲に垂らした。
【００８８】
その結果、非架橋ゼラチンの５質量％水溶液は、手の甲に垂らして約１０秒経過後にゲル化し、その後は手を傾けてもゲルが剥がれることがなかった。その一方で、Ｇ１８９０の５質量％水溶液、ＧＬＳ２５０の５質量％水溶液はいずれも、手の甲に垂らして１０秒経過以降もゲル化せず、手を傾けると溶液が流れ落ちた。
【００８９】
したがって、非架橋ゼラチンは、適用する直前に所望の化粧料または医薬を配合し、生体に適用するといった用途としても活用することができる。
【００９０】
＜実施例９＞
＜ゼラチン混合体の融点およびゲル状態維持時間の測定＞
実施例９では、実施例１の非架橋ゼラチンと、従来公知のゼラチン（Ｇ１８９０およびＧＬＳ２５０）とを、下記の配合比率で混合するとともに、所定の濃度の水溶液に調製することにより、以下の試料Ｎｏ．１３〜２０のゼラチン混合体を作製した。これらの試料の融点、ならびに２８℃、３２℃および３７℃におけるゲル状態を維持する時間をそれぞれ測定した。ゼラチンの融点の測定方法、各試料の水溶液の溶媒、「ゲル状態を維持する」と判断される基準については実施例３と同じである。試料Ｎｏ．１３〜２０のゼラチン混合体を構成するゼラチンの種別、その配合比率および融点は、以下のとおりである。
【００９１】
試料Ｎｏ．１３：  非架橋ゼラチン：２０質量％、Ｇ１８９０：８０質量％からなるゼラチン混合体の５質量％水溶液、融点３０．５℃
試料Ｎｏ．１４：  非架橋ゼラチン：５０質量％、Ｇ１８９０：５０質量％からなるゼラチン混合体の５質量％水溶液、融点３２．６℃
試料Ｎｏ．１５：  非架橋ゼラチン：８０質量％、Ｇ１８９０：２０質量％からなるゼラチン混合体の５質量％水溶液、融点３４．６℃
試料Ｎｏ．１６：  非架橋ゼラチン：２０質量％、ＧＬＳ２５０：８０質量％からなるゼラチン混合体の２質量％水溶液、融点２４．３℃
試料Ｎｏ．１７：  非架橋ゼラチン：５０質量％、ＧＬＳ２５０：５０質量％からなるゼラチン混合体の２質量％水溶液、融点２６．９℃
試料Ｎｏ．１８：  非架橋ゼラチン：８０質量％、ＧＬＳ２５０：２０質量％からなるゼラチン混合体の２質量％水溶液、融点２８．９℃
試料Ｎｏ．１９：  非架橋ゼラチン：３３質量％、Ｇ１８９０：３３質量％、ＧＬＳ２５０：３３質量％からなるゼラチン混合体の５質量％水溶液、融点３１．１℃
試料Ｎｏ．２０：  非架橋ゼラチン：３３質量％、Ｇ１８９０：３３質量％、ＧＬＳ２５０：３３質量％からなるゼラチン混合体の２質量％水溶液、融点２５．８℃。
【００９２】
２８℃、３２℃および３７℃における試料Ｎｏ．１３〜２０のゲルのゲル状態を維持する時間を、以下の表９〜１６に示す。試料Ｎｏ．１３の結果が表９に対応し、試料Ｎｏ．１４の結果が表１０に対応し、試料Ｎｏ．１５の結果が表１１に対応し、試料Ｎｏ．１６の結果が表１２に対応し、試料Ｎｏ．１７の結果が表１３に対応し、試料Ｎｏ．１８の結果が表１４に対応し、試料Ｎｏ．１９の結果が表１５に対応し、試料Ｎｏ．２０の結果が表１６に対応する。これらの表において「Ｙ」、「Ｎ」および「−」の意味は、表１〜６における意味と同じである。
【００９３】
【表９】
2018002657.tif 000011
【００９４】
【表１０】
2018002657.tif 000012
【００９５】
【表１１】
2018002657.tif 000013
【００９６】
【表１２】
2018002657.tif 000014
【００９７】
【表１３】
2018002657.tif 000015
【００９８】
【表１４】
2018002657.tif 000016
【００９９】
【表１５】
2018002657.tif 000017
【０１００】
【表１６】
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【０１０１】
以上より、ゼラチン混合体として、その融点およびゲル状態を維持する時間において様々なバリエーションを有するゼラチンを提供できることがわかる。
【０１０２】
以上のように本発明の実施の形態および実施例について説明を行なったが、上述の各実施の形態および実施例の構成を適宜組み合わせることも当初から予定している。
【０１０３】
今回開示された実施の形態および実施例はすべての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は上述した説明ではなくて特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。
【図１】
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【図２】
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