(57)【要約】【課題】安全性が高く、優れた骨吸収抑制作用を有する、新たな骨吸収抑制剤を提供することを課題とする。【解決手段】緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物を有効成分とする骨吸収抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物を有効成分とする骨吸収抑制剤。
【請求項２】
前記抽出物が、水性溶媒の抽出物である、請求項１に記載の骨吸収抑制剤。
【請求項３】
前記抽出物が、ミル目、アオサ目、ヒビミドロ目、イワズタ目、プラシノコックス目、スギノリ目、ウシケノリ目、テングサ目、イギス目、オゴノリ目、及びチノリモ目に属する藻類からなる群より選択される少なくとも一種の藻類の抽出物である、請求項１又は２に記載の骨吸収抑制剤。
【請求項４】
骨疾患の予防又は治療に使用される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の骨吸収抑制剤。
【請求項５】
飲食品である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の骨吸収抑制剤。
【請求項６】
医薬品である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の骨吸収抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、骨吸収抑制剤に関する。具体的には、安全性が高く、骨吸収抑制作用に優れる骨吸収抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
骨組織では、破骨細胞によって古い骨が壊され（骨吸収）、骨芽細胞によって新しい骨が作られる（骨形成）、骨代謝が絶えず行われ、骨の強度や血中のカルシウム濃度を調整している。この骨吸収と骨形成のバランスが崩れて正常な骨代謝が行われなくなると、骨粗鬆症や骨転移等の骨疾患が引き起こされる。骨の再構築（リモデリング）において骨代謝回転の亢進，低下あるいは正常のいずれにおいても，骨吸収が相対的に骨形成を上回る病態では骨量は減少する。例えば、骨粗鬆症では、骨吸収亢進型と骨形成抑制型があり、８割を占める閉経後の女性の病態は骨吸収亢進型である。また、がんの骨転移でも、がんの産生する因子によって破骨細胞の骨吸収が亢進し、骨はがんに増殖場所を提供することになる。
【０００３】
そのような骨代謝の異常を予防又は改善するために、骨形成を促進する薬剤や骨吸収を抑制する薬剤等について、これまでに種々研究されている。骨代謝に寄与する成分の一つとしてフコイダンやコンドロイチン硫酸等の酸性多糖が知られている。例えば、非特許文献１には、軟骨に多い成分であるコンドロイチン硫酸−Ｅが破骨細胞の分化を抑制することが開示されている。しかしながら、自然界で極僅かしか採取できない希少品であるため、大量に調製することが困難である。
【０００４】
非特許文献２には、フコイダンが破骨細胞の分化を抑制し得ることが開示されている。しかしながら、フコイダンは、褐藻にしか含まれておらず、緑藻や紅藻には含まれていない。また、緑藻や紅藻由来の成分が骨吸収抑制に寄与するかについては、一切明らかにされていない。
【０００５】
また、アルギン酸は、褐藻などに含まれる多糖類であり、増粘剤、安定剤、ゲル化剤、保湿剤等として食品分野、化粧品分野、医療分野等において広く利用されている。しかしながら、アルギン酸が骨吸収抑制に寄与することは知られていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｃｏｎｄｒｏｉｔｉｎ  ｓｕｌｆａｔｅ−Ｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｉｃ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＲＡＷ２６４  ｃｅｌｌｓ，  Ｄｅｎｔａｌ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｊｏｕｒｎａｌ，  ２０１０，  ２９，  ４０３−１０
【非特許文献２】Ｆｕｃｏｉｄａｎ，  ａ  Ｓｕｌｆａｔｅｄ  Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，  Ｉｎ  ｈｉｂｉｔｓ  Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ＲＡＮＫＬ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｓｃｉ．，  ２０１４，  １５，  １８８４０−５５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、前記現状に鑑みて、安全性が高く、優れた骨吸収抑制作用を有する、新たな骨吸収抑制剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、前記課題を解決するために鋭意研究を行ったところ、意外にも、緑藻及び／又は紅藻の抽出物が、優れた骨吸収抑制作用を有することを見出した。また、本発明者は、アルギン酸及び／又はその塩が優れた骨吸収抑制作用を有することを見出した。本発明は、これらの知見に基づいて更に検討を重ねることにより完成したものである。
【０００９】
即ち、本発明は、下記に掲げる態様の発明を提供する。
項１−１．  緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物を有効成分とする骨吸収抑制剤。
項１−２．  前記抽出物が、水性溶媒の抽出物である、項１−１に記載の骨吸収抑制剤。
項１−３．  前記抽出物が、ミル目、アオサ目、ヒビミドロ目、イワズタ目、プラシノコックス目、スギノリ目、ウシケノリ目、テングサ目、イギス目、オゴノリ目、及びチノリモ目に属する藻類からなる群より選択される少なくとも一種の藻類の抽出物である、項１−１又は１−２に記載の骨吸収抑制剤。
項１−４．  骨疾患の予防又は治療に使用される、項１−１〜１−３のいずれか一項に記載の骨吸収抑制剤。
項１−５．  飲食品である、項１−１〜１−４のいずれか一項に記載の骨吸収抑制剤。
項１−６．  医薬品である、項１−１〜１−４のいずれか一項に記載の骨吸収抑制剤。
項２−１．  アルギン酸及び／又はその塩を有効成分とする骨吸収抑制剤。
項２−２．  骨疾患の予防又は治療に使用される、項２−１に記載の骨吸収抑制剤。
項２−３．  飲食品である、項１〜４のいずれか一項に記載の骨吸収抑制剤。
項２−４．  医薬品である、項１〜４のいずれか一項に記載の骨吸収抑制剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、骨吸収抑制作用が高い骨吸収抑制剤を提供することができる。そのため、骨代謝の改善を効果的に図ることができる。本発明の骨吸収抑制剤は、緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物、あるいはアルギン酸及び／又はその塩を有効成分とするものであるため、安全性が高い。本発明の骨吸収抑制剤は飲食品の形態で摂取することができ、骨代謝の改善や、良好な骨代謝の維持を簡便に行うことができる。また、本発明の骨吸収抑制剤は、骨吸収抑制作用が優れるので、骨粗鬆症、骨転移、関節リウマチ、骨ページェット病、副甲状腺機能亢進症、歯周病等の骨代謝異常による骨疾患の予防又は治療に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、実施例において、コントロール、ミル抽出物、ヒトエグサ抽出物、又はスジアオノリ抽出物をそれぞれ添加して２１日間培養した後の骨吸収窩の様子を示す。
【図２】図２は、実施例において、コントロール、ミル抽出物、ヒトエグサ抽出物、又はスジアオノリ抽出物をそれぞれ添加して２１日間培養した場合の、画像の全面積に対する骨吸収部位の面積の割合を示すグラフである。
【図３】図３は、実施例、比較例、又は参考例において、コントロール、クロハギンナンソウ抽出物、ミル抽出物、フコイダン、又はアルギン酸ナトリウムをそれぞれ添加して２１日間培養した後の骨吸収窩の様子を示す。
【図４】図４は、実施例、比較例、又は参考例において、コントロール、クロハギンナンソウ抽出物、ミル抽出物、フコイダン、又はアルギン酸ナトリウムをそれぞれ添加して２１日間培養した場合の、画像の全面積に対する骨吸収部位の面積の割合を示すグラフである。
【図５】図５は、実施例又は比較例において、コントロール、コンドロイチン硫酸Ｅ，アレンドロン酸、スサビノリ抽出物、又はスジアオノリ抽出物をそれぞれ添加して２１日間培養した後の骨吸収窩の様子を示す。
【図６】図６は、実施例又は比較例において、コントロール、コンドロイチン硫酸Ｅ，アレンドロン酸、スサビノリ抽出物、又はスジアオノリ抽出物のそれぞれを添加して２１日間培養した場合の、画像の全面積に対する骨吸収部位の面積の割合を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
１．緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物を使用する骨吸収抑制剤
本発明の骨吸収抑制剤は、緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物を有効成分とすることを特徴とする。以下、当該骨吸収抑制剤を「骨吸収抑制剤（Ａ）」と表記することもある。以下、本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）について詳述する。
【００１３】
有効成分
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）では、有効成分として、緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物を使用する。
【００１４】
緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物は、抽出原料として緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類を使用し、水性溶媒で抽出処理することで得ることができる。
【００１５】
抽出原料として使用される緑藻綱に属する藻類の種類については、特に制限されないが、例えば、ミル等のミル目；スジアオノリ等のアオサ目；ヒトエグサ等のヒビミドロ目；ウミブドウ、センナリヅタ等のイワズタ目；ブラシノコックス等のブラシノコックス目；等に属する藻類が挙げられる。抽出原料として、これらの緑藻綱に属する藻類の１種を単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１６】
抽出原料として使用される紅藻綱に属する藻類の種類については、特に制限されないが、例えば、クロハギンナンソウ、ムカデノリ等のスギノリ目；スサビノリ等のウシケノリ目；ウミゾウメン等のウミゾウメン目；テングサ、ヒラクサ等のテングサ目；エゴノリ等のイギス目；オゴノリ等のオゴノリ目；チノリモ等のチノリモ目；ダルス等のダルス目；等に属する藻類が挙げられる。抽出原料として、これらの紅藻綱に属する藻類の１種を単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１７】
これらの抽出原料の中でも、より一層効果的に骨吸収抑制作用を発揮させるという観点から、好ましくは、ミル目、アオサ目、ヒビミドロ目、イワズタ目、プラシノコックス目、スギノリ目、ウシケノリ目、テングサ目、イギス目、オゴノリ目、又はチノリモ目に属する藻類；より好ましくは、ミル目、アオサ目、ヒビミドロ目、スギノリ目、又はウシケノリ目に属する藻類；更に好ましくは、ミル、スジアオノリ、ヒトエグサ、スサビノリ、クロハギンナンソウ；特に好ましくは、スサビノリ、スジアオノリが挙げられる。
なお、本明細書における藻類の名称、分類は、吉田・鈴木・吉永２０１５．日本産海藻目録（２０１５年改訂版）に準拠する。
【００１８】
抽出原料として使用される緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻類綱に属する藻類は、いずれの産地由来のものであってもよく、いずれの時期に収穫されたものであってもよい。
【００１９】
抽出原料として使用される緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の部位については、特に制限されず、全藻であってもよく、また緑藻綱及び／又は紅藻綱に属する藻類の先端部、基部、縁辺部、中帯部、葉状部、茎状部、付着器等の一部であってもよい。これらの抽出対象部位の中でも、少なくとも食用として使用される葉状部を含んでいることが望ましい。
【００２０】
抽出原料として使用される緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類は、生のまま使用してもよく、その粉砕物又は細切物であってもよい。また、脱水又は乾燥させた緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類を、必要に応じて粉砕又は細切したものであってもよい。
【００２１】
抽出溶媒として使用される水性溶媒は、緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類に含まれる水溶性成分を抽出可能であることを限度として特に制限されないが、水、又は含水アルコールが挙げられ、好ましくは水が挙げられる。含水アルコールとしては、水と低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）の混合物が挙げられる。
【００２２】
抽出処理の手法については、藻類の酸性多糖抽出物の製造に使用される一般的な抽出手法であれば特に限定されないが、例えば、浸漬法、パーコレーション法等が挙げられる。また、抽出処理は複数回繰り返して行ってもよく、複数回の抽出処理で得られた抽出物を合わせて有効成分として使用してもよい。
【００２３】
抽出処理後に得られた抽出液を、必要に応じてろ過または遠心分離によって固形物を除去することにより、緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物が回収できる。本発明の骨吸収抑制剤では、抽出処理により得られた液状の抽出物をそのまま使用してもよいが、必要に応じて、一部又は全ての溶媒を除去して濃縮物若しくは乾燥物として使用してもよい。
【００２４】
また、本発明で使用される緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物は、抽出処理後に得られた抽出液、その濃縮物若しくは乾燥物を更に精製処理に供したものであってもよい。精製処理としては、カラムクロマトグラフィー、脱塩、活性炭処理、再結晶法、分配精製等が挙げられる。これらの処理は、同一処理を複数回繰り返して実施してもよいし、２以上の異なる処理を組み合わせて実施してもよい。なかでも、より一層優れた骨吸収抑制効果を奏する抽出物を効率良く得るために、イオン交換樹脂処理による精製処理に供することが好ましい。イオン交換樹脂処理としては、例えば、得られた抽出液又はその濃縮液を、陰イオン交換樹脂を充填したカラムに供した後に、塩化ナトリウム溶液等を用いて濃度勾配法により、陰イオン交換樹脂に吸着した成分を溶出させて回収する方法が挙げられる。
【００２５】
緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物は、更に粉末化や乳化等の処理に供して、所望の形状に調整してもよい。
【００２６】
緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物には、緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類に由来する水溶性成分が含まれている。緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物に含まれる水溶性成分として、具体的には、酸性多糖が挙げられる。限定的な解釈を望むものではないが、緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物に含まれる酸性多糖、好ましくは硫酸基を有する硫酸化多糖が、骨吸収抑制効果に寄与していると考えられる。緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物に含まれる酸性多糖の種類については、抽出原料として使用される緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の種類に応じて異なるが、例えば、ラムナン硫酸、キシロアラビノガラクタン硫酸、アラビナン硫酸、アラビノラムナン硫酸、グルクロノキシロラムナン硫酸、グルクロノキシロガラクタン硫酸、カラゲナン（ラムダλ、イオタι、カッパκ）、ポルフィラン、フノラン、アガロペクチン等が挙げられる。具体的には、酸性多糖として、例えば、ミルの抽出物の場合は、キシロアラビノガラクタン硫酸、アラビナン硫酸；スジアオノリの抽出物の場合は、アラビノラムナン硫酸；ヒトエグサの抽出物の場合はラムナン硫酸；スサビノリの抽出物の場合はポルフィラン；クロハギンナンソウの抽出物の場合はカラゲナンが含まれている。
【００２７】
添加成分
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）は、前述した緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物以外に、本発明の効果を損なわない範囲で、剤型に応じて、他の添加成分を含有していてもよい。本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）に含有され得る添加成分としては、例えば、水、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、高級アルコール類、エステル類、植物抽出エキス類、水溶性高分子、界面活性剤、アルコール、多価アルコール、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、防腐剤、香料、粉体、増粘剤、色素、キレート剤等が挙げられる。これらの添加成分は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。また、これらの添加成分の含有量については、使用する添加成分の種類や本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）の剤型等に応じて適宜設定される。
【００２８】
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）は、骨吸収を抑制する他の薬理成分を含んでいてもよい。骨吸収を抑制する他の薬理成分としては、例えば、エストロゲン、カルシトニン、エストロゲン受容体調節薬ＳＥＲＭ、ビスホスホネート等が挙げられる。また、本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）は、ビタミンＤ３、ビタミンＫ等の骨形成を促進する成分を更に含んでいてもよい。
【００２９】
他の添加成分として、例えば、本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）として経口用固形製剤を調製する際には、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、着色剤等、常法で用いられているものが挙げられる。そのような担体の例として、賦形剤としては、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット、デキストリン、デンプン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デキストラン、プルラン、無水ケイ酸、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム等が挙げられる。結合剤としては、結晶セルロース、白糖、マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム、デキストラン、プルラン、水、エタノール等が挙げられる。崩壊剤としては、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デキストリン、結晶セルロース等が挙げられる。滑沢剤としては、ステアリン酸およびその金属塩、タルク、ホウ酸、脂肪酸ナトリウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、無水ケイ酸等が挙げられる。矯味矯臭剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
【００３０】
本発明の骨吸収抑制剤を飲食品とする場合は、他の添加成分として、食品素材、前述の担体等の他、糖類、糖アルコール類、塩類、油脂類、アミノ酸類、有機酸類、ビタミン類、カルシウム類、果汁、野菜汁、香料、アルコール類、グリセリン等が挙げられる。
【００３１】
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）における緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物の含有量としては、特に限定されず、剤型や製品形態、用法等に応じて適宜設計することができるが、例えば、抽出物の乾燥重量で５〜８０質量％、好ましくは３０〜８０質量％、より好ましくは５０〜８０質量％が挙げられる。
【００３２】
剤型
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）の剤型については、特に限定されず、固体状、半固体状、又は液体状のいずれであってもよく、当該骨吸収抑制剤の種類や用途に応じて適宜設定すればよい。
【００３３】
投与方法
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）は、経口、経腸、皮下、注射等、任意の投与形態で使用できるが、投与が容易であり、かつ効果が高い点で、経口投与が好ましい。
【００３４】
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）の摂取量については、特に限定されず、製品形態、用途等に応じて適宜設定されるが、例えば、経口摂取量としては、緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物の乾燥重量換算で、成人一日あたり、好ましくは５０〜５００ｍｇ、より好ましくは２００〜５００ｍｇである。本発明の骨吸収抑制剤は、一日あたりの量が上述の範囲となるように、１回又は数回に分けて投与してもよい。
【００３５】
製品形態
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）の製品形態については、特に限定されず、投与形態に応じて適宜選択すればよい。例えば、本発明の骨吸収抑制剤の投与形態が経口投与である場合は、経口投与が可能であることを限度として特に限定されないが、具体的には、飲食品及び内服用医薬品が挙げられる。
【００３６】
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）を飲食品の製品形態にする場合、本発明の有効成分である緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物をそのまま又は他の食品素材や添加成分と組み合わせて所望の形態に調製すればよい。このような飲食品としては、一般の飲食品の他、特定保健用食品、機能性表示食品、栄養補助食品、病者用食品等が挙げられる。これらの飲食品の形態としては、特に制限されないが、具体的には、カプセル剤（ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤）、錠剤、顆粒剤、粉剤、ゼリー剤、トロミ剤等のサプリメント；栄養ドリンク、果汁飲料、炭酸飲料、乳酸飲料等の飲料；団子、アイス、シャーベット、グミ、キャンディー等の嗜好品等が挙げられる。これらの飲食品の中でも、好ましくはサプリメント、より好ましくは錠剤、ゼリー剤、トロミ剤が挙げられる。
【００３７】
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）が飲食品である場合、本発明の有効成分である緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物の含有量としては、特に限定されず、摂取量と製品形態に応じて適宜設計することができるが、例えば、前記抽出物の乾燥重量で５〜５０質量％、好ましくは２０〜５０質量％が挙げられる。
【００３８】
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）を内服用の医薬品の製品形態にする場合、本発明の有効成分である緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物を、そのまま又は他の添加成分と組み合わせて所望の形態に調製すればよい。このような内服用の医薬品としては、具体的には、カプセル剤（ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤）、錠剤、顆粒剤、粉剤、ゼリー剤、シロップ剤、トロミ剤等が挙げられる。これらの内服用の医薬品の中でも、好ましくはカプセル剤、錠剤、顆粒剤、粉剤、トロミ剤が挙げられる。
【００３９】
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）が内服用の医薬品である場合、本発明の有効成分である緑藻綱に属する藻類及び／又は紅藻綱に属する藻類の抽出物の含有量としては、特に限定されず、摂取量と製品形態に応じて適宜設計することができるが、例えば、抽出物の乾燥重量で３０〜８０質量％、好ましくは５０〜８０質量％が挙げられる。
【００４０】
また、本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）が医薬品である場合、他の製品形態としては、例えば、ひざ、関節等の局所投与用、又は全身投与用の注射剤等が挙げられる。
【００４１】
用途
本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）は、骨吸収を抑制し得るので、骨吸収の抑制により症状が改善され得る疾患の治療又は予防目的で使用することができる。骨吸収の抑制により症状が改善され得る疾患としては、特に限定されず、例えば、骨粗鬆症、骨ページェット病、副甲状腺機能亢進症等の骨代謝異常による骨疾患、及び罹患者の多い関節リウマチ、歯周病等が挙げられる。また、骨粗鬆症は、骨吸収が亢進することによって発症している骨吸収亢進型と、骨形成が抑制されていることによって発症している骨形成抑制型に大別されるが、本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）は、骨吸収亢進型の骨粗鬆症の予防又は治療に卓越した効果を奏することができる。
【００４２】
また、骨吸収が亢進することによって骨代謝異常が生じることがあり、この傾向は高齢者で多く認められている。従って、本発明の骨吸収抑制剤（Ａ）は、骨吸収が亢進している骨代謝異常の改善に使用でき、特に骨吸収が亢進している高齢者の骨代謝異常の改善に好適に使用できる。
【００４３】
更に、がんの骨転移が認められるがん患者では、骨吸収が亢進していることが多く認められている。そのため、本発明では、がんの骨転移の予防目的で使用することもできる。
【００４４】
２．アルギン酸及び／又はその塩を使用した骨吸収抑制剤
本発明の骨吸収抑制剤は、アルギン酸及び／又はその塩を有効成分とすることを特徴とする。以下、当該骨吸収抑制剤を「骨吸収抑制剤（Ｂ）」と表記することもある。以下、本発明の骨吸収抑制剤（Ｂ）について詳述する。
【００４５】
有効成分
アルギン酸とは、Ｄ−マンヌロン酸とＬ−グルロン酸の２種のウロン酸が直鎖状に重合した高分子多糖である。
アルギン酸の塩としては、可食性のもの、又は薬学的に許容されるものであることを限度として、特に制限されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩；モノエタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩等のアミン塩；アルギニン、リジン、ヒスチジン、オルニチン等の塩基性アミノ酸塩等が挙げられる。これらの塩の中でも、好ましくはアルカリ金属塩、更に好ましくはナトリウム塩が挙げられる。これらの塩は、１種単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
本発明における有効成分として、アルギン酸、アルギン酸塩の双方を使用することができるが、アルギン酸塩が好ましい。
【００４６】
本発明におけるアルギン酸及び／又はその塩は、精製物であってもよいし、粗精製物であってもよい。粗精製物としては、例えば、アルギン酸及び／又はその塩を含む原料の抽出物等が挙げられる。アルギン酸及び／又はその塩を含む抽出原料としては、海藻、好ましくは褐藻綱に属する藻類が挙げられる。また、アルギン酸及び／又はその塩は、市販品であってもよい。
【００４７】
褐藻綱に属する藻類としては、例えば、ガゴメコンブ、マコンブ、オニコンブ、リシリコンブ、ワカメ、アラメ、カジメ、クロメ、マクロシスティス、レッソニア等のコンブ目；モズク、オキナワモズク等のナガマツモ目；ヒジキ、アカモク、ダービリア、アスコフィラム等のヒバマタ目；カヤモノリ、ハバノリ等のカヤモノリ目；ムチモ目；ウスバオオギ目；クロガシラ目；アミジグサ目；チロプテリス目；アスコセイラ目；等に属する藻類が挙げられ、なかでも、アルギン酸及び／又はその塩をより多く得られる点で、好ましくはコンブ目、又はヒバマタ目の藻類、より好ましくは、マクロシスティス、レッソニア、カジメ、マコンブ、ダービリア、又はアスコフィラムが挙げられる。
【００４８】
抽出原料からアルギン酸及び／又はその塩を抽出する方法としては、特に限定されず公知の方法を用いればよく、例えば、抽出原料を水性溶媒で抽出処理し、必要に応じて抽出物を精製する方法が挙げられる。抽出処理、精製処理としては、前述の骨吸収抑制剤（Ａ）における抽出処理、精製処理と同様の方法が挙げられる。
【００４９】
添加成分
本発明の骨吸収抑制剤（Ｂ）は、前述したアルギン酸及び／又はその塩以外に、本発明の効果を損なわない範囲で、剤型に応じて、他の添加成分を含有していてもよい。本発明の骨吸収抑制剤（Ｂ）に含有され得る他の添加成分としては、前述の骨吸収抑制剤（Ａ）における他の添加成分と同様のものが挙げられる。
【００５０】
本発明の骨吸収抑制剤（Ｂ）におけるアルギン酸及び／又はその塩の含有量としては、特に限定されず、剤型や製品形態、用法等に応じて適宜設計することができるが、例えば、５〜８０質量％、好ましくは５０〜８０質量％、より好ましくは７０〜８０質量％が挙げられる。
【００５１】
剤型
本発明の骨吸収抑制剤（Ｂ）の剤型については、特に限定されず、前述の骨吸収抑制剤（Ａ）における剤型と同様のものが挙げられる。
【００５２】
投与方法
本発明の骨吸収抑制剤（Ｂ）の投与方法については、特に限定されず、前述の骨吸収抑制剤（Ａ）における投与方法と同様の方法が挙げられる。
【００５３】
本発明の骨吸収抑制剤（Ｂ）の摂取量については、特に限定されず、製品形態、用法等に応じて適宜設定されるが、例えば、経口摂取量としては、アルギン酸及び／又はその塩換算で、成人一日あたり、好ましくは５０〜２００ｍｇ、より好ましくは１００〜２００ｍｇが挙げられる。本発明の骨吸収抑制剤は、一日あたりの量が上述の範囲となるように、１回又は数回に分けて投与してもよい。
【００５４】
製品形態
本発明の骨吸収抑制剤（Ｂ）の製品形態については、特に限定されず、前述の骨吸収抑制剤（Ａ）における製品形態と同様の形態が挙げられる。
【００５５】
本発明の骨吸収抑制剤（Ｂ）が飲食品である場合、有効成分であるアルギン酸及び／又はその塩の含有量としては、特に限定されず、摂取量と製品形態に応じて適宜設計することができるが、例えば、５〜５０質量％、好ましくは２５〜５０質量％が挙げられる。
【００５６】
本発明の骨吸収抑制剤（Ｂ）が内服用の医薬品である場合、有効成分であるアルギン酸及び／又はその塩の含有量としては、特に限定されず、摂取量と製品形態に応じて適宜設計することができるが、例えば、３０〜７０質量％、好ましくは５０〜７０質量％が挙げられる。
【００５７】
用途
本発明の骨吸収抑制剤（Ｂ）は、骨吸収を抑制し得るので、骨吸収の抑制により症状が改善され得る疾患の治療又は予防目的で使用することができ、前述の骨吸収抑制剤（Ａ）における用途と同様の用途に適用できる。
【００５８】
このように本発明の骨吸収抑制剤は、骨吸収抑制作用に優れる。そのため、本発明の骨吸収抑制剤は、骨代謝改善用途に使用することができる。また、本発明の骨吸収抑制剤は、骨疾患の予防又は治療に使用することができる。
【実施例】
【００５９】
次に、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明は、これらの例によってなんら限定されるものではない。
【００６０】
調製例１
＜海藻由来の抽出物の調製＞
下記に示す原料海藻の乾燥体を、粉砕機で０．０１〜０．１ｍｍ程度の大きさに粉砕した。得られた粉砕乾燥体に５倍量のエタノールを添加し、室温にて３０分間撹拌した。これを吸引ろ過機（ろ紙Ｎｏ．５Ｃ）でろ過した後、得られた残渣に２０倍量の純水を加え、１００℃で３０分加熱処理した。次いで、冷却後、遠心分離（８，０００×Ｇ）して、遠心上清をロータリーエバポレーターで濃縮し、得られた濃縮液に、得られた濃縮液に４倍量のアセトンを加え、濃縮液中の沈殿物を純水に溶解し、得られた溶液を純水中で一晩透析した。透析後の溶液を、イオン交換樹脂（三菱化学ＤＩＡＩＯＮ  ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ  ＳＡ１０Ａ）を充填したカラムに供して吸着させた後、０．１Ｍ、０．２Ｍ、０．５Ｍ、１．０Ｍ、１．５Ｍ、及び２．０Ｍ  ＮａＣｌ溶液を順にカラムに流し、吸着成分を溶出させた。各濃度のＮａＣｌ溶液により得られた溶出画分をそれぞれ透析し、ガラス繊維ろ紙（ＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ａ）にてろ過後、凍結乾燥して、粉末状の溶出画分を得た。得られた溶出画分のうち、１．０Ｍ、１．５Ｍ及び２．０Ｍ  ＮａＣｌ溶出画分を海藻由来の抽出物とした。
【００６１】
＜原料海藻＞
ミル（Ｃｏｄｉｕｍ  ｆｒａｇｉｌｅ）（株式会社海の研究舎より購入）
スジアオノリ（Ｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａ）（株式会社海の研究舎および三島食品より購入）
ヒトエグサ（Ｍｏｎｏｓｔｒｏｍａ  ｎｉｔｉｄｕｍ）（株式会社海の研究舎より購入）
クロハギンナンソウ（Ｃｈｏｎｄｒｕｓ  ｙｅｎｄｏｉ）（有限会社川上海産物店より購入）
スサビノリ（Ｐｙｒｏｐｉａ  ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ）（海苔）（新富津漁協より購入）
【００６２】
実施例、比較例
調製例１で得られた海藻由来の抽出物、又は表１に示す市販の試料を骨吸収アッセイに供し、骨吸収作用を評価した。骨吸収アッセイ及び骨吸収作用の評価は下記の方法で行った。各実施例、比較例に用いた試料を表１に示す。
【００６３】
＜骨吸収（ＰＩＴ）アッセイ法＞
骨吸収作用の測定は、Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｃｅｌｌ社より破骨細胞培養キットＯＳＣ１１ないしＯＳＣ１２を用い、ラット破骨前駆細胞によって行った。具体的には、まず、凍結保存された破骨前駆細胞をすばやく解凍し、洗浄用メディウムで懸濁、遠心した（２００×Ｇ）。上清を除去した後、細胞に分化培養用メディウム（血清、Ｍ−ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）、ＲＡＮＫＬ（１５ｎｇ／ｍｌ）を含むα−ＭＥＭ）を加えて、４×１０4ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ（１００μｌ）となるように９６ｗｅｌｌオステオアッセイプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製３９８８または３９８９）に播種した。その後、５％ＣＯ2存在下の３７℃インキュベータで培養し、播種後３日目に培養用メディウムを交換するとともに、ＰＢＳに溶解した試料（表１に記載の有効成分）を培養用メディウム中１００μｇ／ｍｌ（アレンドロン酸ナトリウム三水和物は１０μｇ／ｍｌ）となるように添加し、それ以降３日毎に、同様に培養用メディウムを交換し、各試料を添加する処理を行った。播種して２１日間の培養後、プレートの培養液を取り除き、５％次亜塩素酸ナトリウム（ＮａＣｌＯ）液を１００μｌ加え室温にて５分間置いた。ＮａＣｌＯ液を除き、１５０μｌの純水を加えて洗浄する工程を２回繰り返し、３時間以上風乾してから、顕微鏡下で骨吸収窩すなわち骨（合成骨表面）の溶けた部分（ＰＩＴ）を観察・撮影した。なお、使用したオステオアッセイプレートは、骨の構造を模した合成表面であり、無機結晶性リン酸カルシウムがコーティングされている。各試料の代わりにＰＢＳ（Ｃａ2+，Ｍｇ2+フリーリン酸緩衝生理食塩水）を添加した場合をコントロールとした。
【００６４】
＜骨吸収作用の算出とグラフ化＞
Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアにより、撮影した画像内の骨吸収を起こしている面積を計算しグラフ化した。具体的には、ＪＰＥＧ方式で保存した各画像を、Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを用いて、画像の全面積に対する骨吸収部位の面積の割合をスコア化し、コントロールとともにグラフに表した。
【００６５】
【表１】
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【００６６】
ＰＩＴアッセイを用いた実験を繰り返し行った。その結果を図１〜６に示す。図１、３及び５は、各種試料を添加して２１日間培養した後のオステオアッセイプレートセルの表面の様子を示す。図の白い部分は骨吸収窩（生体での骨溶解に相当）である。図２、４及び６は、それぞれ図１、３及び５の画像の全面積に対する骨吸収窩（骨吸収部位）の面積の割合を示すグラフである。図１及び図２から、緑藻（ミル、スジアオノリ、ヒトエグサ）の抽出物を添加した場合、コントロールと比較して、骨吸収が抑制されることが認められた。
【００６７】
また、図３及び４にみられるように、紅藻クロハギンナンソウ、及び緑藻ミルの抽出物は、コントロールと比較して、非常に高い骨吸収抑制作用を示した。
【００６８】
また、図５及び６にみられるように、紅藻スサビノリ、及び緑藻スジアオノリの抽出物は、コントロールと比較して、非常に高い骨吸収抑制作用を示した。また、これらの抽出物は、１０分の１量のアレンドロン酸（ボナロン）の骨吸収抑制効果と同等の効果を示した。アレンドロン酸（ボナロン）は、臨床で広く使用されている骨粗鬆症治療薬である。また、これらの抽出物は、コンドロイチン硫酸Ｅと比べて高い骨吸収抑制作用を示した。
【００６９】
本実験例における骨吸収アッセイには、初代培養のラット破骨前駆細胞のみを使用し、骨芽細胞（破骨細胞分化誘導物質ＲＡＮＫＬおよび破骨細胞形成抑制因子ＯＣＩＦを産生）を共存させず、分化誘導剤としてＲＡＮＫＬを添加した系を用いた。また、本アッセイでは象牙片を用いず、オステオアッセイプレートを用いた。用いたオステオアッセイプレートには、無機リン酸カルシウムのみがコーティングされているので、象牙片のようにコラーゲンや酸性多糖の豊富な健康な骨のモデルではなく、加齢により弾力を維持する成分が減少しているモデルと考えられる。従って、本実験例から、緑藻綱に属する藻類及び紅藻綱に属する藻類の抽出物は、加齢により弾力を維持する成分が減少している骨組織の状態において、極めて高く骨吸収を抑制し得ることがわかった。骨吸収亢進の代表的な疾患である骨粗鬆症の患者の８０％以上が閉経後の女性であるといわれている。この治療薬として用いられてきたエストロゲン製剤は、副作用として女性器発がんのリスクを高め、また優れた骨吸収抑制剤であるビスホスホネート製剤は、消化器粘膜に障害を起こすリスクがある。本発明の骨吸収抑制剤は、前述のようなリスクは低いと想定され、骨吸収亢進による疾患に広く適用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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