(57)【要約】【課題】新規なエストロゲン様作用剤を提供する。【解決手段】カリンの果実から水、エタノール、多価アルコールまたはそれらの２種以上の混合物を用いて抽出されたカリン抽出物を有効成分として含む、エストロゲン様作用剤。カリンの果肉から水、エタノール、多価アルコールまたはそれらの２種以上の混合物を用いて抽出されたカリン抽出物を有効成分として含む、エストロゲン様作用剤。ガロカテキンおよび没食子酸の少なくともいずれかを有効成分として含む、エストロゲン様作用剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カリンの果実から水、エタノール、多価アルコールまたはそれらの２種以上の混合物を用いて抽出されたカリン抽出物を有効成分として含む、エストロゲン様作用剤。
【請求項２】
カリンの果肉から水、エタノール、多価アルコールまたはそれらの２種以上の混合物を用いて抽出されたカリン抽出物を有効成分として含む、エストロゲン様作用剤。
【請求項３】
カリンの果肉から水を用いて抽出されたカリン抽出物を０．０００１〜０．１％（ｗ／ｗ）の固形分濃度で含む、請求項２に記載のエストロゲン様作用剤。
【請求項４】
ガロカテキンおよび没食子酸の少なくともいずれかを有効成分として含む、エストロゲン様作用剤。
【請求項５】
ガロカテキンを０．００００５〜０．００５％（ｗ／ｗ）の濃度で含む、請求項４に記載のエストロゲン様作用剤。
【請求項６】
没食子酸を０．００００１〜０．００１％（ｗ／ｗ）の濃度で含む、請求項４に記載のエストロゲン様作用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カリン抽出物を有効成分として含むエストロゲン様作用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
カリン（Ｐｓｅｕｄｏｃｙｄｏｎｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）はバラ科の植物であり、近年、日本において、カリンに関する様々な研究がなされ、健康食品および化粧品の分野において薬理効果を示す製品が開発されている。
【０００３】
カリン抽出物に関して、たとえば特開平３−１２７７１４号公報（特許文献１）には肌荒れ防止または改善効果があること、特開平３−１８８００８号公報（特許文献２）には皮膚賦活効果やニキビ改善効果があること、特開平８−１１９８４３号公報（特許文献３）にはメラニン産生抑制作用があること、特開２０００−１３６１４６号公報（特許文献４）にはセリンプロテアーゼ活性阻害作用があること、特開２００３−３３５６４８号公報（特許文献５）にはシステインプロテアーゼ活性阻害作用があること、特開平４−１２４１４０号公報（特許文献６）にはアンジオテンシン変換酵素の阻害作用があること、特表２０１２−５３２０９８号公報（特許文献７）には脂肪細胞分化誘導作用があること、特表２００９−０５２３７８５号公報（特許文献８）にはタイプＩプロコラーゲンの生合成促進効果があることがそれぞれ記載されている。
【０００４】
このようにカリンの抽出物は、様々な酵素活性阻害作用や肌荒れ防止・改善作用、皮膚賦活効果、ニキビ改善効果およびメラニン産生抑制作用を有することが知られている。
【０００５】
また、黄雪丹ら、「カリン（Ｐｓｅｕｄｏｃｙｄｏｎｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）ＭｅＯＨ抽出物のエストロゲン様作用」、日本生薬学会年会講演要旨集５９，２３０，２０１２（非特許文献１）には、カリンのＭｅＯＨ（メタノール）抽出物にエストロゲン様作用があることが報告されている。しかしながら、メタノール以外の抽出溶媒を用いたカリンの抽出物およびその成分がエストロゲン様作用を有することについてはこれまで知られていない。一般的に、生薬は用いる抽出溶媒によって抽出できる成分およびその含有量などが異なることが知られている。
【０００６】
ここで、エストロゲンは、卵胞ホルモンまたは女性ホルモンとも呼ばれ、発情ホルモンに特有な生物学的作用をもつ天然物質あるいは合成物質の総称を表す用語として用いられている。一般には、エストロン、エストラジオール、エストリオールが知られており、特にエストラジオールは哺乳類に普通にみられる卵胞ホルモンのうち最も有効なものであり、卵巣、胎盤、睾丸、副腎皮質などで生成される。また、エストロゲンは、ステロイドホルモンの一種であり、その受容体を介して生理作用を示し、その受容体は生殖器や乳腺のみならず全身の細胞に存在し、その働きは多岐に渡っている。
【０００７】
近年、特開２０１２−１５８５７４号公報（特許文献９）および特開２００７−１９１４５２号公報（特許文献１０）に開示されているように、ホルモンであるエストロゲンよりも安全なエストロゲン様作用を有する植物の抽出物を用いて女性ホルモンバランスを調整することにより、それぞれ、骨粗鬆症、婦人科疾患などの予防・治療、皮膚の老化防止を試みる提案がなされている。一般的には、大豆のイソフラボンが女性ホルモン様物質として知られており、イソフラボンを単独で高含有する健康食品および化粧品の開発が行われている。
【０００８】
しかし、優れた物質として特定成分のみを大量摂取することは化学合成医薬品と同様の副作用が生じる可能性があり得る。また、これ以外に植物由来のエストロゲン様物質は幾つか存在し、女性ホルモンバランスを調整することにより、それぞれ骨粗鬆症、婦人科疾患などの予防・治療、皮膚の老化防止を試みる提案がなされている。しかしながら、安定して十分な効果を得られるかが懸念されている。
【０００９】
上述した特許文献に記載の抽出物においては、安定して十分な効果を得られるものがないのが現状であり、これまでもエストロゲン様作用を有する数多くの植物の抽出物などが報告されてきたが、メタノール以外の抽出溶媒を用いたカリン抽出物およびその成分についてはエストロゲン様作用に関する報告例はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開平３−１２７７１４号公報
【特許文献２】特開平３−１８８００８号公報
【特許文献３】特開平８−１１９８４３号公報
【特許文献４】特開２０００−１３６１４６号公報
【特許文献５】特開２００３−３３５６４８号公報
【特許文献６】特開平４−１２４１４０号公報
【特許文献７】特表２０１２−５３２０９８号公報
【特許文献８】特表２００９−０５２３７８５号公報
【特許文献９】特開２０１２−１５８５７４号公報
【特許文献１０】特開２００７−１９１４５２号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】黄雪丹ら、「カリン（Ｐｓｅｕｄｏｃｙｄｏｎｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）ＭｅＯＨ抽出物のエストロゲン様作用」、日本生薬学会年会講演要旨集５９，２３０，２０１２
【非特許文献２】大久保智子ら、「ヒト乳がん由来ＭＣＦ−７細胞を用いた食品添加物等の内分泌かく乱作用の検索とＢＨＡ、ＯＰＰを中心とした機構の解析」、薬学雑誌、１２３（６）４４３−４５２（２００３）
【非特許文献３】Ｋｅ  Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇａｌｌｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ＭＣＦ−７  Ｃｅｌｌｓ」，Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２８，２０１４，ｐ３８７−３９３
【非特許文献４】Ｙｕｋｉｈｉｒｏ  Ｋｕｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  （−）−Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ａｎｄ  （−）−Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  Ｇａｌｌａｔｅ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｈｅｒｅｇｕｌｉｎ  β１−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ／Ｉｎｖａｓａｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＭＣＦ−７  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ」，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３２（５）８９９−９０４（２００９）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、上記課題を解決するためになされたものであり、その目的とするところは、新規なエストロゲン様作用剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明のエストロゲン様作用剤は、カリンの果実から水、エタノール、多価アルコールまたはそれらの２種以上の混合物を用いて抽出されたカリン抽出物を有効成分として含むことを特徴とする（以下、前記カリン抽出物を含むエストロゲン様作用剤を「第１のエストロゲン様作用剤」と呼称する。）。
【００１４】
また本発明のエストロゲン様作用剤は、カリンの果肉から水、エタノール、多価アルコールまたはそれらの２種以上の混合物を用いて抽出されたカリン抽出物を有効成分として含むことを特徴とする。この場合、本発明のエストロゲン様作用剤は、カリンの果肉から水を用いて抽出されたカリン抽出物を０．０００１〜０．１％（ｗ／ｗ）の固形分濃度で含むことが好ましい。
【００１５】
本発明はまた、ガロカテキンおよび没食子酸の少なくともいずれかを有効成分として含む、エストロゲン様作用剤についても提供する（以下、ガロカテキンおよび没食子酸の少なくともいずれかを含むエストロゲン様作用剤を「第２のエストロゲン様作用剤」と呼称する。）。この場合、本発明のエストロゲン様作用剤は、ガロカテキンを０．００００５〜０．００５％（ｗ／ｗ）の濃度で含むことが好ましく、没食子酸を０．００００１〜０．００１％（ｗ／ｗ）の濃度で含むことが好ましい。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、低濃度でエストロゲン様作用を示す、エストロゲン様作用剤、化粧品および皮膚外用剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
（第１のエストロゲン様作用剤）
本発明の第１のエストロゲン様作用剤は、バラ科の植物であるカリン（Ｐｓｅｕｄｏｃｙｄｏｎｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の果実から水、エタノール、多価アルコールまたはそれらの２種以上の混合物を用いて抽出されたカリン抽出物を有効成分として含む。ここで、「果実」は、果肉に種子を含んだ状態を指すが、より高いエストロゲン様作用を示すことから、本発明の第１のエストロゲン様作用剤においては、カリンの果肉（種子を含まない）から水、エタノール、多価アルコールまたはそれらの２種以上の混合物を用いて抽出されたカリン抽出物を有効成分として含むことが好ましい。
【００１８】
抽出は、採取したカリンの果実または果肉をそのままあるいは乾燥後、必要に応じて切断、粉砕した後に行う。抽出方法も特に制限されるものではなく、常法に従い、室温または加温下にて抽出すればよく、加圧下にて抽出してもよい。
【００１９】
本発明において、抽出溶媒としては、水、エタノール、多価アルコールまたはそれらの２種以上の混合物が用いられる。多価アルコールは、エチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジエチレングリコール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−ペンタンジオール、プロパンジオール、オクタンジオール、グリセリン、ポリグリセリンなどが挙げられる。多価アルコールは含水多価アルコールであってもよい。なお、混合物は、２種以上の多価アルコールの混合物であっても勿論よい。
【００２０】
本発明の第１のエストロゲン様作用剤において、カリン抽出物の固形分濃度は特に制限されないが、より顕著にエストロゲン様作用を奏することから、カリンの果肉から水を用いて抽出されたカリン抽出物である場合には、固形分濃度は０．０００１〜０．１％（ｗ／ｗ）の範囲内であることが好ましい。
【００２１】
本発明の第１のエストロゲン様作用剤において、カリン抽出物は、抽出後に、カリン抽出物および抽出溶媒を含む液を芳香族系合成吸着樹脂で処理したものであってもよい。芳香族系合成吸着樹脂としては、たとえば、スチレン−ベンゼン系の樹脂が挙げられ、ダイヤイオン（登録商標）ＨＰ−２０（三菱化学株式会社製）、ダイヤイオン（登録商標）ＨＰ−２１（三菱化学株式会社製）などの市販品を好適に用いることができる。
【００２２】
上記芳香族系合成吸着樹脂を用いてカリン抽出物および抽出溶媒を含む液を処理する方法は、特に制限されないが、たとえば、カリン抽出物および抽出溶媒を含む液を芳香族系合成吸着樹脂に接触させて、カリン抽出物を芳香族系合成吸着樹脂に吸着させ、芳香族系合成吸着樹脂に吸着させたカリン抽出物を溶出させる方法などが挙げられる。具体的に、カリン抽出物および抽出溶媒を含む液中のカリン抽出物を芳香族系合成吸着樹脂に吸着させるには、芳香族系合成吸着樹脂を充填したカラムに１〜９９％、好ましくは１０〜９０％、より好ましくは１０〜４０％のメタノール水溶液を十分に通液した後、カリン抽出物および抽出溶媒を含む液を通液させればよい。また、樹脂に吸着させたカリン抽出物を溶出させるには、吸着したときに用いたメタノール濃度よりもメタノール濃度が高い２〜１００％、好ましくは５０〜１００％メタノール水溶液をカラムに通液させればよい。
【００２３】
本発明におけるカリン抽出物は、低濃度でエストロゲン様作用を示すと考えられる。本発明におけるカリン抽出物は、そのまま用いることもできるが、通例、各種の担体などとともに組成物として用いられ、化粧品、皮膚外用剤（医薬品、医薬部外品）として提供できる。本発明はこのように、本発明の第１のエストロゲン様作用剤を含む化粧品、皮膚外用剤についても提供する。本発明の化粧品、皮膚外用剤において、その剤形も制限されるものではなく、皮膚に適用可能な剤形であればよく、液剤、軟膏剤、硬膏剤、乳液、ローション剤、パック剤などが例示される。その配合量は、通常、製剤中０．００００１％（ｗ／ｗ）以上、好ましくは０．０００１〜１０％（ｗ／ｗ）である。また、本発明の第１のエストロゲン様作用剤は、他の効果をもつ原料、たとえば保湿剤、美白剤、紫外線防御剤などと併用することが可能である。
【００２４】
（第２のエストロゲン様作用剤）
上述の第１のエストロゲン様作用剤において有効成分として含まれるカリン抽出物には、その成分としてガロカテキン、没食子酸が含まれると考えられる。しかしながら、たとえば大久保智子ら、「ヒト乳がん由来ＭＣＦ−７細胞を用いた食品添加物等の内分泌かく乱作用の検索とＢＨＡ、ＯＰＰを中心とした機構の解析」、薬学雑誌、１２３（６）４４３−４５２（２００３）（非特許文献２）の第４４７頁のＴａｂｌｅ  ２には、エストロゲン様作用を示さない化学物質（Ｎｏｎｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）として、カテキン（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）、没食子酸（Ｇａｌｌｉｃ  ａｃｉｄ）が挙げられている。また、Ｋｅ  Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇａｌｌｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ＭＣＦ−７  Ｃｅｌｌｓ」，Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２８，２０１４，ｐ３８７−３９３（非特許文献３）のＦＩＧＵＲＥ  １には、没食子酸（Ｇａｌｌｉｃ  ａｃｉｄ：ＧＡ）がヒト由来乳癌細胞由来ＭＣＦ−７細胞の増殖を顕著に阻害したことが記載されている。さらにＹｕｋｉｈｉｒｏ  Ｋｕｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  （−）−Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ａｎｄ  （−）−Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  Ｇａｌｌａｔｅ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｈｅｒｅｇｕｌｉｎ  β１−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ／Ｉｎｖａｓａｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＭＣＦ−７  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ」，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３２（５）８９９−９０４（２００９）（非特許文献４）のＦｉｇ．１には、エピガロカテキン（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ：ＥＧＣ）がヒト由来乳癌細胞由来ＭＣＦ−７細胞の細胞生存率を低下させたことが記載されている。
【００２５】
このように従来、ガロカテキン、没食子酸は、エストロゲン様作用を示さないと考えられていた。しかしながら、後述する実施例で立証するように、本発明者らは、従来の知見に反し、ガロカテキン、没食子酸がエストロゲン様作用を示すことを見出した。すなわち、本発明の第２のエストロゲン様作用剤は、ガロカテキンおよび没食子酸の少なくともいずれかを有効成分として含むことを特徴とする。
【００２６】
本発明の第２のエストロゲン様作用剤において、ガロカテキンの濃度は特に制限されないが、より顕著にエストロゲン様作用を奏することから、０．００００５〜０．００５％（ｗ／ｗ）の範囲内であることが好ましい。
【００２７】
また本発明の第２のエストロゲン様作用剤において、没食子酸の濃度についても特に制限されるものではないが、より顕著にエストロゲン様作用を奏することから、０．００００１〜０．００１％（ｗ／ｗ）の範囲内であることが好ましい。
【００２８】
本発明の第２のエストロゲン様作用剤において、有効成分であるガロカテキンおよび没食子酸の少なくともいずれかは、上述した第１のエストロゲン様作用剤におけるカリン抽出物と同様にそのまま用いることもできるが、通例、各種の担体などとともに組成物として用いられ、化粧品、皮膚外用剤（医薬品、医薬部外品）として提供できる。本発明はこのように、本発明の第２のエストロゲン様作用剤を含む化粧品、皮膚外用剤についても提供する。この場合も、上述した本発明の第１のエストロゲン様作用剤を用いた化粧品、皮膚外用剤と同様に、その剤形も制限されるものではなく、皮膚に適用可能な剤形であればよく、他の効果をもつ原料、たとえば保湿剤、美白剤、紫外線防御剤などと併用してもよい。
【００２９】
以下に実施例を挙げて、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３０】
＜実施例１＞
採取したカリンの果実から選別された品質良好なカリン果実を果肉と種子の部分に分けた後、日蔭で乾燥させた。次に、カリンの果肉に、質量比で３０倍量の精製水（抽出溶媒）を加えた後、８０〜９０℃で５０分間加熱した。常温まで冷却した、カリン抽出物および抽出溶媒を含む液を、濾過布を用いて濾過した後、水を完全に除去して粉末固体状態のカリン抽出物（カリン果肉からの水抽出物）を得た（収率：１５〜４５％）。１％  ＦＢＳ（チャコール・デキストラン処理）、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウムおよび１ｍＭ  非必須アミノ酸を含有するＤＭＥＭ（ダルベッコ・フォークト変法イーグル最小必須培地）、フェノールレッド除去）を用い、固形分濃度がそれぞれ０．０００１％（ｗ／ｗ）、０．０００５％（ｗ／ｗ）、０．００１％（ｗ／ｗ）、０．００５％（ｗ／ｗ）、０．０１％（ｗ／ｗ）のサンプルを調製し、後述するエストロゲン様作用の測定に供した。
【００３１】
＜実施例２＞
採取したカリンの果実から選別された品質良好なカリン果実をそのまま日蔭で乾燥させた。次に、カリンの果実（種子を含む）に、質量比で３０倍量の精製水（抽出溶媒）を加えた後、８０〜９０℃で５０分間加熱した。常温まで冷却した、カリン抽出物および抽出溶媒を含む液を、濾過布を用いて濾過した後、水を完全に除去して粉末固体状態のカリン抽出物（カリン果実からの水抽出物）を得た（収率：１５〜１７％）。１％  ＦＢＳ（チャコール・デキストラン処理）、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウムおよび１ｍＭ  非必須アミノ酸を含有するＤＭＥＭを用い、固形分濃度がそれぞれ０．０００５％（ｗ／ｗ）、０．００１％（ｗ／ｗ）、０．００５％（ｗ／ｗ）、０．０１％（ｗ／ｗ）、０．０５％（ｗ／ｗ）のサンプルを調製し、後述するエストロゲン様作用の測定に供した。
【００３２】
＜実施例３＞
採取したカリンの果実から選別された品質良好なカリン果実をそのまま日蔭で乾燥させた。次に、カリンの果実（種子を含む）に、質量比で１００倍量のエタノール（抽出溶媒）を加えた後、７０〜８０℃で３０分間加熱した。常温まで冷却した、カリン抽出物および抽出溶媒を含む液を、濾過布を用いて濾過した後、残留分を回収し、上述の操作をもう一度繰り返して、濾過布を用いて濾過した後、濾液を混合し、エタノールを完全に除去して粉末固体状態のカリン抽出物（カリン果実からのエタノール抽出物）を得た（収率：２０〜４５％）。１％  ＦＢＳ（チャコール・デキストラン処理）、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウムおよび１ｍＭ  非必須アミノ酸を含有するＤＭＥＭを用い、固形分濃度がそれぞれ０．０００１％（ｗ／ｗ）、０．０００５％（ｗ／ｗ）、０．００１％（ｗ／ｗ）、０．００５％（ｗ／ｗ）、０．０１％（ｗ／ｗ）のサンプルを調製し、後述するエストロゲン様作用の測定に供した。
【００３３】
＜実施例４＞
実施例１で得られたカリン抽出物（カリン果肉からの水抽出物）をダイヤイオン（登録商標）ＨＰ−２０（三菱化学株式会社製）と３０％メタノール水溶液を用いて吸着および脱着を行い、ポリフェノール類を含む溶出液を得た（ポリフェノール画分）。溶出液から溶媒を除去した後、真空乾燥して粉末固体状態の抽出物を収得した（収率：４〜９％）。１％  ＦＢＳ（チャコール・デキストラン処理）、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウムおよび１ｍＭ  非必須アミノ酸を含有するＤＭＥＭを用い、固形分濃度がそれぞれ０．００１４％（ｗ／ｗ）、０．００７１％（ｗ／ｗ）、０．０１４％（ｗ／ｗ）、０．０７１％（ｗ／ｗ）のサンプルを調製し、後述するエストロゲン様作用の測定に供した。
【００３４】
＜実施例５＞
実施例１で得られたカリン抽出物（カリン果肉からの水抽出物）をダイヤイオン（登録商標）ＨＰ−２０（三菱化学株式会社製）と５０％メタノール水溶液を用いて吸着および脱着を行い、ポリフェノール類を含む溶出液を得た（ポリフェノール画分）。溶出液から溶媒を除去した後、真空乾燥して粉末固体状態の抽出物を収得した（収率：５〜１０％）。１％  ＦＢＳ（チャコール・デキストラン処理）、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウムおよび１ｍＭ  非必須アミノ酸を含有するＤＭＥＭを用い、固形分濃度がそれぞれ０．００１１％（ｗ／ｗ）、０．００５６％（ｗ／ｗ）、０．０１１％（ｗ／ｗ）のサンプルを調製し、後述するエストロゲン様作用の測定に供した。
【００３５】
＜実施例６＞
ガロカテキン（（−）−Ｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ、和光純薬工業（株）製）を、１％  ＦＢＳ（チャコール・デキストラン処理）、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウムおよび１ｍＭ  非必須アミノ酸を含有するＤＭＥＭを用い、濃度がそれぞれ０．０００５％（ｗ／ｗ）、０．００１％（ｗ／ｗ）、０．００５％（ｗ／ｗ）のサンプルを調製し、後述するエストロゲン様作用の測定に供した。
【００３６】
＜実施例７＞
没食子酸一水和物（没食子酸一水和物、和光純薬工業（株）製）を、１％  ＦＢＳ（チャコール・デキストラン処理）、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウムおよび１ｍＭ  非必須アミノ酸を含有するＤＭＥＭを用い、濃度がそれぞれ０．０００１％（ｗ／ｗ）、０．０００５％（ｗ／ｗ）、０．００１％（ｗ／ｗ）のサンプルを調製し、後述するエストロゲン様作用の測定に供した。
【００３７】
＜参考例＞
１７β−エストラジオール（β−Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ、ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ社製）を、１％  ＦＢＳ（チャコール・デキストラン処理）、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウムおよび１ｍＭ  非必須アミノ酸を含有するＤＭＥＭを用い、濃度が０．０００２７％（ｗ／ｗ）のサンプルを調製し、後述するエストロゲン様作用の測定に供した。
【００３８】
（試験例）
〔エストロゲン様作用の測定〕
エストロゲン様作用は、ヒト由来乳癌細胞由来ＭＣＦ−７細胞（ＪＣＲＢ０１３４、ヒューマンサイエンス研究資源バンクより入手）を１％  ＦＢＳ（チャコール・デキストラン処理）、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウムおよび１ｍＭ  非必須アミノ酸を含有するＤＭＥＭを用いて、１×１０５個／ｍｌの細胞密度で浮遊させた細胞懸濁培地１００μｌを９６穴培養プレートに播種した。２４時間培養後、実施例１〜７、参考例で調製した各サンプル１００μｌを９６穴培養プレートに添加した。６日間培養後、ＭＴＴ還元法にて得られた着色溶液を分光光度計で吸光度を測定し、生細胞数の測定を行った。エストロゲン様作用は、以下のように算出した。
【００３９】
エストロゲン様作用（％）＝Ａ／Ｂ×１００
（Ａ：サンプル添加の場合の吸光度、Ｂ：サンプル無添加の場合の吸光度）
（結果）
結果を表１に示す。
【００４０】
【表１】
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【００４１】
表１に示すようにカリン果肉・果実からの水抽出物、エタノール抽出物およびその成分である没食子酸、ガロカテキンは濃度依存的に高いエストロゲン様作用活性を有することが明らかとなった。