(57)【要約】【課題】新たな外毛根鞘細胞増殖促進用組成物及び育毛用組成物を提供することを課題とする。【解決手段】イソリキリチゲニンを有効成分として含有する外毛根鞘細胞の増殖促進用組成物。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
イソリキリチゲニンを有効成分として含有する外毛根鞘細胞の増殖促進用組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の外毛根鞘細胞の増殖促進用組成物を含有する育毛用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、育毛用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
男性型脱毛症は、男性ホルモンと深くかかわり、遺伝と環境因子により誘発され、男性の半数以上に何らかの症状がみられるといわれている。特に近年のストレス社会や生活形態の乱れからこれらの症状が加速している。女性における美顔、美白、痩身を目的としたエステが流行しているのに対し、男性においては多くのヘアケアーを行う施設があり、育毛などを目的に営業を行っている。一般男性の頭髪に対する関心は増加しており、毛髪を確実に再生する薬剤や方法の出現が期待されている。
【０００３】
脱毛症に対する治療法は、有効成分を含む育毛剤・発毛剤による外用療法や、内服治療及び物理的な刺激等による残存毛包刺激によって毛の再生を促すものと、人工物若しくは本人の他部位の毛髪を毛包ごと移植する、所謂植毛術が主流であった。植毛の研究から、毛髪再生機構が徐々に明らかになってきている。
毛髪を作り出す組織である毛包は、真皮集塊と呼ばれる特殊な間充織と表皮との相互作用によって胎児期の一時期に形成される。真皮集塊を構成する細胞は毛包形成が完了すると毛乳頭となる。毛乳頭は毛髪の伸長・休止の周期である毛周期の進行にも深く関与している。細胞移植により毛包を形成誘導するには、この表皮−毛乳頭（間充織）相互作用を生体内で行わなければならないことが知られている。
そこで、皮膚内に表皮・毛乳頭混合細胞を移植することにより、ヒト毛乳頭細胞が表皮細胞を毛包に分化させ、この毛包から発毛させる方法が提案されている（特許文献１）。また特許文献２には、毛包真皮毛根鞘細胞を、機能を維持した状態で増殖させ、これを移植して発毛させる技術が記載されている。これらによれば、真皮毛根鞘細胞が発毛に大きく貢献することが、十分に理解される。
【０００４】
このような毛髪移植や毛根鞘細胞の研究から、毛根鞘細胞に働きかける成分を配合した発毛剤の研究が行われ、多くの発毛剤や育毛剤の提案がなされている。
特許文献３にはタウリンを有効成分とする、外毛根鞘細胞活性剤及び毛髪はり・こし改善剤が記載されている。特許文献４には、没食子酸誘導体を有効成分とする養育毛組成物が記載されている。この組成物は、外毛根鞘細胞を活性化するほか、発毛、育毛、脱毛防止、育毛促進、白髪改善、毛周期改善、毛髪成長期延長、毛包エネルギー代謝改善、矮小化毛包改善、細毛の太毛化、毛母細胞賦活、毛母細胞増殖促進、肝細胞増殖因子発現促進などの様々な作用効果を有している。特許文献５には、ミツイシコンブのエキスを有効成分とする外毛根鞘細胞増殖促進剤及び毛周期改善剤や育毛剤が記載されている。特許文献６には、杜仲、モウズイカ、霊芝胞子および黒酵母の抽出物を有効成分とする外毛根鞘細胞増殖促進剤並びにテストステロン−５α−レダクターゼ阻害剤が記載されている。特許文献７には、外毛根鞘細胞増殖促進作用を有している脱毛症に対して有効な育毛剤が記載されている。
このように外毛根鞘細胞増殖促進作用や外毛根鞘細胞活性化作用を有する物質は育毛剤としての有用性があると考えられている。
上記特許文献３〜７に記載の物質や組成物以外にも多数の物質に外毛根鞘細胞増殖促進作用や外毛根鞘細胞活性化作用があることが知られている。
また出願人は、プロシアニジンまたはプロシアニジンを含む植物抽出エキスに育毛効果を見いだして特許出願している（特許文献８）。
【０００５】
なお、本発明を得た天然化合物ライブラリーは、フランスGreenpharma社のGreenpharma Natural Compound Library（Greenpharma S.A.S）により販売されている。
【０００６】
植物由来のフラボノイドであるイソリキリチゲニンは様々な植物中に存在することが知られており、これを利用した医療用途の発明が提案されている。特許文献９には、イソリキリチゲニンのサーチュイン活性を利用した緑内障、老人性黄斑病変、中心性網脈絡膜炎、黄斑変性症、黄斑円孔、白内障、眼底出血、網膜中心動脈閉塞症、眼底動脈硬化症、光視症、糖尿病性網膜症、網脈絡膜萎縮、近視による眼底病変、網膜および脈絡膜の血管新生病変、網膜芽細胞腫、悪性黒色腫又はその他の悪性腫瘍、黄斑線維増殖症、網膜中心静脈閉塞症、網膜裂孔，網膜剥離、増殖性網膜症、網膜色素変性症、角膜炎、角膜混濁、角膜ビラン、角膜上皮剥離、角膜潰瘍、モーレンズ角膜潰瘍、角膜内皮細胞変性や脱落、角膜変性症、流行性角結膜炎、霰粒腫、虹彩炎、ぶどう膜炎、自己免疫疾患、網脈絡膜炎、虹彩毛様体炎、眼精疲労、各種疾患による視野狭窄、視神経萎縮、視神経炎、虚血性視神経症、動体視力低下、色覚異常、老眼、近視、遠視、乱視などの眼疾患を治療する薬剤が開示されている。
特許文献１０にはカチオンチャネルの一過性受容器電位（ＴＲＰ）を活性化する活性化剤とこれを利用したＴＲＰＡ１チャネルの活性低下に起因して生ずる症状や疾患、例えば酸素感知機構が低下することによって起こる呼吸不全の予防、改善又は治療剤が記載されている。特許文献１１には、イソリキリチゲニンを含むカルコン誘導体を利用したＴＮＦ−αやＩＬ−６など炎症性サイトカインの産生抑制剤が記載されている。
本発明者は、これらの先行技術に基づき、上記の天然化合物ライブラリーから外毛根鞘細胞増殖促進作用や外毛根鞘細胞活性作用を有する物質の探索を行い、有用な物質を見出し、本発明を完成した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２００５／０５３７６３号
【特許文献２】国際公開第２００７／０３７４８６号
【特許文献３】特開２００２−９７１１６号公報
【特許文献４】特開２００３−３２１３３０号公報
【特許文献５】特開２００６−０２８１１８号公報
【特許文献６】特開２００７−００８８８５号公報
【特許文献７】特開２０１３−１６３６６１号公報
【特許文献８】特開２００２−０３７７１５号公報
【特許文献９】特開２００６−２９８８７６号公報
【特許文献１０】特開２０１４−０２４８１０号公報
【特許文献１１】特開２００８−１０６０１１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らは、天然化合物ライブラリーの中から、育毛剤として有用な化合物を探索する過程で、従来育毛剤や発毛剤として全く注目されていない化合物であるイソリキリチゲニンに強い外毛根鞘細胞の増殖促進効果を見いだし、本発明をなした。
すなわち本発明は、イソリキリチゲニンを有効成分とする毛乳頭細胞の外毛根鞘細胞の増殖促進剤及び育毛剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、次の構成からなる。
（１）イソリキリチゲニンを有効成分として含有する外毛根鞘細胞の増殖促進用組成物。
（２）（１）記載の外毛根鞘細胞の増殖促進用組成物を含有する育毛用組成物。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、新たな外毛根鞘細胞の増殖促進用組成物が提供される。また外毛根鞘細胞が増加することによって、発毛が促進されるため育毛剤として使用が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】イソリキリチゲニンが外毛根鞘細胞の増殖促進効果を示すことを確認した試験のグラフである。
【図２】ミノキシジルが外毛根鞘細胞の増殖促進効果を示さないことを確認したグラフである。
【図３】Ｄ−パンテノールが外毛根鞘細胞の増殖促進効果を示さないことを確認した試験のグラフである。
【図４】アスチルビンが外毛根鞘細胞の増殖促進効果を示さないことを確認した試験のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本願は、イソリキリチゲニンを有効成分として含有する外毛根鞘細胞の増殖促進用組成物及びその利用に関する発明である。
本発明の有効成分であるイソリキリチゲニン（Ｉｓｏｌｉｑｕｉｒｉｔｉｇｅｎｉｎ）  は、下記の化学式１で表されるフラボノイド化合物である。
【００１３】
【化１】
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【００１４】
イソリキリチゲニンは、ダリヤ・ヒマワリ・アカシア・キバナオウギ・フレミンジア・ウラルカンゾウなどの植物に含有されており、これらの植物を原料として抽出、精製することができる。抽出精製する場合には、公知の溶媒抽出やクロマトグラフィーなどの方法で精製できる。また下記に示す試験例で明らかなように、イソリキリチゲニンは４μｇ／ｍｌという低濃度で外毛根鞘細胞の増殖を促進するため、植物の抽出物をそのまま、或いは濃縮物を外毛根鞘細胞の増殖促進用組成物として使用することができる。
なお組成物中のイソリキリチゲニン量は、高速液体クロマトグラフィー等を用いた公知の分析方法で測定することができる。
【００１５】
イソリキリチゲニンは、化学合成によって調製することもできる。具体的には特開２０１６−１３９８５号に開示された方法が公知である。
すなわち、実例を示すと下記のとおりである。
４−メトキシケイヒ酸１０ｇをジメチルホルムアミド０．２５ｍＬを含む無水塩化メチレン５０ｍＬに溶解し、室温にてオキザリルクロリド９．６ｍＬを発泡に注意しながら１０分かけて滴下する。そのまま、室温にて２時間撹拌の後、溶媒を減圧下で除去する。得られた残渣に、１，３−ジメトキシベンゼン７．４ｍＬと無水エーテル２００ｍＬを加え、氷浴中で、粉末にした触媒無水三塩化アルミニュウム２２．４ｇを１５分かけてゆっくりと加える。そのまま室温にて一晩放置した後、内容物を氷上（５００ｇ）にあけ、６Ｍ塩酸を１０ｍＬ加え、氷が溶解した後、酢酸エチル（３００ｍＬ）で４回抽出する。抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で濃縮し、残渣をエーテル−ヘキサン混液で結晶化することにより、１４．２ｇの目的物の結晶を得た。上記目的生成物３ｇを塩化メチレン６０ｍＬに溶解し０℃にて１ＭＢＢｒ３塩化メチレン溶液を滴下する。室温まで昇温し、そのまま２日間撹拌する。セニエット塩３４ｇを含む氷冷水７００ｍＬとメタノール３５０ｍＬを加え，室温で一晩撹拌する。得られた黄色溶液を酢酸エチルで２回抽出し、１Ｍセニエット塩−飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濃縮する。残渣をエーテル−ヘキサンで結晶化し、イソリキリチゲニン１．９５ｇを得る。またその母液を濃縮後再度エーテル−ヘキサンで結晶化することにより０．５９ｇのイソリキリチゲニンを得る。
【００１６】
イソリキリチゲニンを、外毛根鞘細胞の増殖促進用組成物として使用するとき、所望の濃度に水又は緩衝液に希釈して用いることができる。また育毛剤とする場合は、直接頭部に外用剤として散布又は塗布すれば良い。
イソリキリチゲニンを含有する組成物又はイソリキリチゲニンを含有する製剤は、製剤上の常套手段により調製することができる。医薬あるいは化粧料用無毒性担体としては、例えば、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、アルブミン、水、生理食塩水、油脂等を配合して、所望の濃度に調整すれば良い。また、必要に応じて、安定化剤、潤滑剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤等の慣用の添加剤を適宜添加し、外用剤として調製することができる。
投与回数は、１日当たり１〜３回投与することで、外用剤の投与部位で育毛効果を促進することができる。また投与部位で外毛根鞘細胞が増加し、毛髪の寿命（ライフサイクル）が延長する。
【００１７】
イソリキリチゲニンはその他の毛母細胞増殖促進物質と併用することが可能である。両者を併用することで、外毛根鞘細胞の増殖が相乗的に増加する。
【実施例】
【００１８】
以下に、試験例を示して本発明を具体的に説明する。
・試験例（外毛根鞘細胞の増殖促進試験）
＜試験方法＞
出願人保有の天然化合物ライブラリーで陽性を示した物質について、当該化合物のヒト外毛根鞘細胞の増殖効果ＷＳＴ−８アッセイにより評価を行った。このアッセイ系で細胞の増加効果を確認した。以下にイソリキリチゲニンの試験成績を示す。
ヒト外毛根鞘細胞（ＯＲＳｃ，ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓより入手）の増殖能を、ＷＳＴ−８アッセイ｛Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＣＣＫ−８），同仁化学｝
で評価した。
すなわち、１０％ＦＢＳを含むＭｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＳＣＭ，ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で３．３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌに懸濁したヒト外毛根鞘細胞（ＯＲＳｃ）を、９６穴平底型カルチャープレート（Ｆａｌｃｏｎ（登録商標）９６Ｗｅｌｌ  Ｃｌｅａｒ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ，Ｃｏｒｎｉｎｇ）に１００μｌ播種し、３７℃、５％ＣＯ２の条件で培養した。
培養２４時間後、希釈したイソリキリチゲニン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、比較対照として育毛効果が確認されているミノキシジル（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｄ−パンテノール（東京化成工業）、アスチルビン（Ａｓｔｉｌｂｉｎ：ナカライテスク）それぞれを含有するＭＳＣＭに置換し、７２時間培養を行った。
その後、ＷＳＴ−８溶液１０μｌを添加してインキュベーター内で３時間発色させた後、マイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ１９０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて吸光度（測定波長４５０ｎｍ、参照波長６５０ｎｍ）を測定した。
ＷＳＴ−８は、細胞内脱水素酵素により還元され水溶性のホルマザンを生成するため、この吸光度の測定値は細胞数と相関する。データは平均値±標準偏差で示し、ｔ検定にて統計学的検討を行った（ｎ＝６；＊  ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１，＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【００１９】
＜試験結果＞
外毛根鞘細胞への、イソリキリチゲニンの増殖効果を図１に示した（結果はコントロールを１００とする相対値で示した）。
また毛母細胞に増殖効果を示すミノキシジル、育毛製品の有効成分で知られるＤ−パンテノールおよびアスチルビンの効果を図２、図３、図４に示した（結果はコントロールを１００とする相対値で示した）。
図から明らかなように、イソリキリチゲニンは強い外毛根鞘細胞増殖効果を示したが、育毛効果の確認されているミノキシジル、Ｄ−パンテノールには、外毛根鞘細胞増殖促進効果が認められなかった。またアスチルビンは低濃度では、わずかに増殖促進効果が確認できたが、濃度が上昇すると抑制的に作用することがわかった。
本試験から、本発明のイソリキリチゲニンを含有する組成物は、外毛根鞘細胞を増加させ、育毛作用を示すことがわかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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