(57)【要約】【課題】結晶性化合物には、複数の結晶形、すなわち結晶多形が存在する場合ある。結晶多形が存在する場合、それぞれの結晶形によって、溶解度、溶解速度、または熱、光、湿度等に対する安定性等の物性が異なる。したがって、医薬品の製造において、その適応疾患や剤形に最も適した原薬の結晶形を選択することは、非常に重要な課題である。【解決手段】ＥＰ４受容体に強い拮抗作用を有する三環性スピロ化合物である、化合物Ｉの安定結晶を提供し、ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療剤を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−［４−シアノ−２−（｛［（２’Ｒ，４Ｓ）−６−（イソプロピルカルバモイル）−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−イル］カルボニル｝アミノ）フェニル］ブタン酸の結晶。
【請求項２】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、少なくとも約５．３、１２．４、１３．２、１９．０、１９．３、２１．５、２２．１および２２．９度２θにピークを有する、請求項１記載の結晶。
【請求項３】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、約５．３、６．６、１０．７、１２．４、１３．２、１７．１、１８．４、１９．０、１９．３、１９．７、２０．６、２１．５、２２．１、２２．９、２３．９、２４．３および２５．３度２θにピークを有する、請求項１または２記載の結晶。
【請求項４】
図１に示される粉末Ｘ線回折スペクトルチャートを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の結晶。
【請求項５】
示差走査熱量測定において、オンセット温度が約２２５℃またはピーク温度が約２２６℃である吸熱ピークを有する、請求項１から４のいずれか１項に記載の結晶。
【請求項６】
図２に示される示差走査熱量測定チャートを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の結晶。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか一項に記載の結晶と、薬学的に許容される担体とを含有してなる医薬組成物。
【請求項８】
ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療剤である、請求項７記載の医薬組成物。
【請求項９】
ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患が、骨疾患、がん、全身性肉芽腫、免疫疾患、歯槽膿漏、歯肉炎、歯周病、川崎病、多臓器不全、慢性頭痛、疼痛、血管炎、静脈不全、静脈瘤、動脈瘤、大動脈瘤、痔瘻、尿崩症、新生児動脈管開存症、または胆石症である、請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１０】
がんが、乳がん、卵巣がん、大腸がん、肺がん、前立腺がん、頭頸部がん、リンパ腫、ぶどう膜悪性黒色腫、胸腺腫、中皮腫、食道がん、胃がん、十二指腸がん、肝細胞がん、胆管がん、胆のうがん、膵臓がん、腎細胞がん、腎盂・尿管がん、膀胱がん、陰茎がん、精巣がん、子宮がん、膣がん、外陰がん、皮膚がん、悪性骨腫瘍、軟部肉腫、軟骨肉腫、白血病、骨髄異形成症候群、または多発性骨髄腫である、請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１から６のいずれか一項に記載の結晶を含有する、ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療剤。
【請求項１２】
請求項１から６のいずれか一項に記載の結晶の有効量を哺乳動物に投与することを特徴とするＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療方法。
【請求項１３】
ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療のための請求項１から６のいずれか一項に記載の結晶。
【請求項１４】
ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療剤の製造のための請求項１から６のいずれか一項に記載の結晶の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、４−［４−シアノ−２−（｛［（２’Ｒ，４Ｓ）−６−（イソプロピルカルバモイル）−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−イル］カルボニル｝アミノ）フェニル］ブタン酸（以下、化合物Ｉと略記する場合がある。）の安定な結晶形に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）は、アラキドン酸カスケード中の代謝産物として知られており、細胞保護作用、子宮収縮、疼痛閾値の低下、消化管の蠕動運動促進、覚醒作用、胃酸分泌抑制作用、血圧降下作用、利尿作用等を有していることが知られている。
【０００３】
近年の研究の中で、ＰＧＥ２受容体には、それぞれ役割の異なったサブタイプが存在することがわかってきた。現時点で知られているサブタイプは、大別して４つあり、それぞれＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３、ＥＰ４と呼ばれている（非特許文献１）。
【０００４】
これらのサブタイプのうち、ＥＰ４受容体は、マクロファージからのＭＣＰ−１産生抑制、リンパ球からのＴＮＦ−α、ＩＬ−２、およびＩＦＮ−γ産生抑制、ならびにＩＬ−１０産生増強による抗炎症、血管拡張、血管新生、弾性線維の形成抑制、ＭＭＰ−９発現制御に関与していると考えられている。さらに、ＥＰ４受容体は、骨髄（ミエロイド）由来免疫抑制細胞（Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ｃｅｌｌｓ）、制御性Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞を介したがん免疫制御にも関与していると考えられている。
【０００５】
これらのことより、ＥＰ４受容体に強く結合し、拮抗作用を有する化合物は、ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患、例えば、骨疾患、がん、全身性肉芽腫、免疫疾患、アレルギー、アトピー、喘息、歯槽膿漏、歯肉炎、歯周病、アルツハイマー、川崎病、熱傷、多臓器不全、慢性頭痛、疼痛、血管炎、静脈不全、静脈瘤、動脈瘤、大動脈瘤、痔瘻、尿崩症、ストレス、子宮内膜症、子宮腺筋症、新生児動脈管開存症、胆石症等の疾患の予防および／または治療に有用であると考えられる（非特許文献２−７）。
【０００６】
一方、特許文献１には、プロスタグランジンＥ受容体に関連する疾患、例えば疼痛、炎症、およびがんなどの治療に用いられる化合物として、下記一般式（Ａ）の化合物が使用されることが記載されている。
【０００７】
一般式（Ａ）は、
【０００８】
【化１】
2018123108.tif 000002
【０００９】
（式中、Ａｒ１ａは、場合によってはＲ１ａまたはＲ３ａで置換された、アリールまたはヘテロアリール基であり；
Ｒ１ａは、ＣＮ、ＮＯ２、またはＣＯＮ（Ｒ５ａ）２などであり；
Ｗａは、Ｏ、Ｎ、およびＳから選択された０〜２個のヘテロ原子を含む３〜６員結合基を表し、前記結合基は場合によってＣＯ、Ｓ（Ｏ）ｎａ、Ｃ＝Ｃ、またはアセチレン基を含んでおり；
Ａｒ２ａは、場合によってはＲ３ａで置換された、アリールまたはヘテロアリール基であり；
Ｒ３ａは、ハロゲン、またはＣＮなどであり；
Ｘａは、Ｗａの結合部位に対してＡｒ２ａのオルトに結合したリンカーであり；
Ｑａは、ＣＯＯＨなどである。（基の定義を一部抜粋した。））である。
【００１０】
また、特許文献２には、下記一般式（Ｂ）の化合物がＰＧＥ２受容体、特にＥＰ３および／またはＥＰ４に対して結合し、拮抗作用を有するため、疼痛およびがんなどの疾患の予防および／または治療に有用であることが記載されている。
【００１１】
一般式（Ｂ）は、
【００１２】
【化２】
2018123108.tif 000003
【００１３】
（式中、Ｒ１ｂは−ＣＯＯＨなどを表し；
Ａｂは、（ｉ）単結合、（ｉｉ）Ｃ１〜６アルキレン、（ｉｉｉ）Ｃ２〜６アルケニレン、または（ｉｖ）Ｃ２〜６アルキニレンなどを表し；
Ｂｂ環は、Ｃ３〜１２の単環あるいは二環の炭素環、または３〜１２員の単環あるいは二環の複素環を表し；
Ｒ２ｂは、ニトロ、またはシアノなどを表し；
Ｑｂは、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、１〜３個のハロゲン原子によって置換されているＣ１〜６アルキル、シアノ、またはニトロなどを表し；
Ｄｂは、炭素原子、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選ばれる原子１または２員からなる連結鎖であり、その鎖中に二重結合または三重結合を含んでいてもよく、また連結鎖は１〜４個のＲ４０ｂで置換されていてもよく；
Ｒ４０ｂは、オキソまたはハロゲンなどを表し；
Ｒ３ｂは、（１）Ｃ１〜６アルキル、または（２）１〜５個のＲ４２ｂで置換されているかあるいは無置換のＣ３〜１５の単環、二環あるいは三環の炭素環、または３〜１５員の単環、二環あるいは三環の複素環を表し；
Ｒ４２ｂは、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ハロゲン、シアノ、−ＮＲ４６ｂＣＯＲ４７ｂ、またはＣｙｃ１０ｂを表す。（基の定義を一部抜粋した。））である。
【００１４】
さらに、特許文献３には、プロスタグランジンＥ受容体に関連する疾患、例えば疼痛、炎症、およびがんなどの治療に用いられる化合物として、下記一般式（Ｃ）の化合物が使用されることが記載されている。
【００１５】
一般式（Ｃ）は、
【００１６】
【化３】
2018123108.tif 000004
【００１７】
（式中、ＨＥＴｃは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｎｃ、およびＮ（Ｏ）ｍｃから選択される０〜３個のヘテロ原子を有する５〜１２員の単環式または二環式の芳香環系を表し、ｍｃは０または１であり、ｎｃは０、１または２であり；
Ａｃは、１原子または２原子部分であって、−Ｗｃ−または−Ｃ（Ｏ）−などからなる群から選択され、Ｗｃは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｎｃ、またはＮＲ１７ｃであり；
Ｘｃは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｎｃ、およびＮ（Ｏ）ｍｃから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜１０員の単環式または二環式のアリールまたはヘテロアリール基を表し、
Ｙｃは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）ｎｃ、ＮＲ１７ｃ、または結合などを表し；
Ｂｃは、−（Ｃ（Ｒ１８ｃ）２）ｐｃ−Ｙｃ−（Ｃ（Ｒ１８ｃ）２）ｑｃ−であり；
ｐｃおよびｑｃは独立に０〜３であり；
ＺｃはＯＨなどであり；
Ｒ１ｃ、Ｒ２ｃ、およびＲ３ｃは独立に、ハロゲン、−ＣＯ２Ｒ９ｃ、または−ＣＯＮ（Ｒ６ｃ）２などを表す。（基の定義を一部抜粋した。））である。
【００１８】
なお、いずれの先行技術文献においても、化合物Ｉ、およびその結晶について何ら記載も示唆もされていない。
【００１９】
また、特許文献４には化合物Ｉである４−［４−シアノ−２−（｛［（２’Ｒ，４Ｓ）−６−（イソプロピルカルバモイル）−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−イル］カルボニル｝アミノ）フェニル］ブタン酸が、強力なＥＰ４受容体拮抗活性を有することが記載されているが、その結晶形について何ら記載も示唆もされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】国際公開第２０００／０２０３７１号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００３／０１６２５４号パンフレット
【特許文献３】国際公開第１９９９／０４７４９７号パンフレット
【特許文献４】国際公開第２０１６／１１１３４７号パンフレット
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】ジャーナル・オブ・リピッド・メディエーターズ・アンド・セル・シグナリング（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ）、第１２巻、３７９−３９１ページ、１９９５年
【非特許文献２】ファーマコロジカル・レビュー（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ）、第６５巻、１０１０−１０５２ページ、７月、２０１３年
【非特許文献３】第１０５回  米国癌研究会議（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＡＡＣＲ））、要旨番号：ＬＢ−２６５、プレゼンテーション標題：ＯＮＯ−ＡＥ３−２０８  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｇｌｉｏｍａ  ｇｒｏｗｔｈ、プレゼンテーション日時：２０１４年４月８日
【非特許文献４】フェブス・レターズ（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ）、第３６４巻、３３９−３４１ページ、１９９５年
【非特許文献５】キャンサー・サイエンス（Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第１０５巻、１１４２−１１５１ページ、２０１４年
【非特許文献６】キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第７０巻、１６０６−１６１５ページ、２０１０年
【非特許文献７】キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第６２巻、２８−３２ページ、２００２年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
本発明の課題は、ＥＰ４受容体拮抗活性を有する化合物の安定結晶を作成し、ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療薬を提供することである。結晶性化合物は、その結晶形によって、溶解度、溶解速度、または熱、光、湿度等に対する安定性等が異なる。したがって、医薬品の製造において、その適応疾患や剤形に最も適した原薬の結晶形を選択することは、非常に重要な課題である。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明者らは、化合物Ｉの結晶多形について鋭意検討したところ、化合物Ｉの安定な結晶形としてＡ晶を同定した（この新規結晶形を本発明の結晶形と略記する場合がある。）。
【００２４】
すなわち、本発明は、
（１）４−［４−シアノ−２−（｛［（２’Ｒ，４Ｓ）−６−（イソプロピルカルバモイル）−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−イル］カルボニル｝アミノ）フェニル］ブタン酸の結晶、
（２）粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、少なくとも約５．３、１２．４、１３．２、１９．０、１９．３、２１．５、２２．１および２２．９度２θにピークを有する、前記（１）に記載の結晶、
（３）粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、約５．３、６．６、１０．７、１２．４、１３．２、１７．１、１８．４、１９．０、１９．３、１９．７、２０．６、２１．５、２２．１、２２．９、２３．９、２４．３および２５．３度２θにピークを有する、前記（１）または（２）に記載の結晶、
（４）図１に示される粉末Ｘ線回折スペクトルチャートを特徴とする、前記（１）から（３）のいずれか１つに記載の結晶、
（５）示差走査熱量測定において、オンセット温度が約２２５℃またはピーク温度が約２２６℃である吸熱ピークを有する、前記（１）から（４）のいずれか１つに記載の結晶、
（６）図２に示される示差走査熱量測定チャートを特徴とする、前記（１）から（５）のいずれか１つに記載の結晶、
（７）前記（１）から（６）のいずれか１つに記載の結晶と、薬学的に許容される担体とを含有してなる医薬組成物、
（８）ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療剤である、前記（７）記載の医薬組成物、
（９）ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患が、骨疾患、がん、全身性肉芽腫、免疫疾患、歯槽膿漏、歯肉炎、歯周病、川崎病、多臓器不全、慢性頭痛、疼痛、血管炎、静脈不全、静脈瘤、動脈瘤、大動脈瘤、痔瘻、尿崩症、新生児動脈管開存症、または胆石症である、前記（８）記載の医薬組成物、
（１０）がんが、乳がん、卵巣がん、大腸がん、肺がん、前立腺がん、頭頸部がん、リンパ腫、ぶどう膜悪性黒色腫、胸腺腫、中皮腫、食道がん、胃がん、十二指腸がん、肝細胞がん、胆管がん、胆のうがん、膵臓がん、腎細胞がん、腎盂・尿管がん、膀胱がん、陰茎がん、精巣がん、子宮がん、膣がん、外陰がん、皮膚がん、悪性骨腫瘍、軟部肉腫、軟骨肉腫、白血病、骨髄異形成症候群、または多発性骨髄腫である、前記（９）記載の医薬組成物、
（１１）前記（１）から（６）のいずれか１つに記載の結晶を含有する、ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療剤、
（１２）前記（１）から（６）のいずれか１つに記載の結晶の有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療方法、
（１３）ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療のための、前記（１）から（６）のいずれか１つに記載の結晶、
（１４）ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療剤の製造のための、前記（１）から（６）のいずれか１つに記載の結晶の使用等に関する。
【発明の効果】
【００２５】
化合物Ｉの本発明の結晶形は、ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療剤として有用である。また、本発明の結晶形は、医薬品の原薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、化合物ＩのＡ晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートを示す。
【図２】図２は、化合物ＩのＡ晶の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）チャートを示す。
【図３】図３は、マウス大腸がん細胞株ＣＴ２６の同種移植モデルにおける化合物Ｉの抗腫瘍効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明において、化合物Ｉは、以下の構造：
【００２８】
【化４】
2018123108.tif 000005
【００２９】
で示される化合物である。
【００３０】
本発明において、化合物Ｉの新たな結晶形として、Ａ晶を同定した。結晶形の相違は、特に、粉末Ｘ線回折スペクトルまたは／および示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって区別される。
【００３１】
化合物ＩのＡ晶は、以下の（ａ）および（ｂ）の少なくとも一つの物理化学データによって特徴づけられる。好ましくは、（ａ）および（ｂ）の両方の物理化学データによって特徴づけられる。（ａ）以下の図１に示される粉末Ｘ線回折スペクトルチャート、以下の表１に示される回折角（２θ）、または粉末Ｘ線回折スペクトルにおける、少なくとも約５．３、１２．４、１３．２、１９．０、１９．３、２１．５、２２．１および２２．９度２θのピーク、（ｂ）以下の図２に示されるＤＳＣチャート、またはＤＳＣにおけるオンセット温度が約２２５℃および／またはピーク温度が約２２６℃である吸熱ピーク、である。
【００３２】
本発明において、化合物Ｉの本発明の結晶形は、本明細書に記載された物理化学データによって特定されるものであるが、各スペクトルデータは、その性質上多少変わり得るものであるから、厳密に解されるべきではない。
【００３３】
例えば、粉末Ｘ線回折スペクトルデータは、その性質上、結晶の同一性の認定においては、回折角（２θ）や全体的なパターンが重要であり、相対強度は結晶成長の方向、粒子の大きさ、測定条件によって多少変わり得る。
【００３４】
また、ＤＳＣデータにおいても、結晶の同一性の認定においては、全体的なパターンが重要であり、測定条件によって多少変わり得る。
【００３５】
したがって、本発明の結晶形において、粉末Ｘ線回折スペクトルまたはＤＳＣとパターンがそれぞれ全体的に類似するものは、本発明の結晶形に含まれるものである。
【００３６】
本明細書中、粉末Ｘ線回折パターンにおける回折角（２θ（度））及びＤＳＣ分析における吸熱ピークのオンセット温度（℃）または／およびピーク温度（℃）の記載は、当該データ測定法において通常許容される誤差範囲を含むことを意味し、おおよその回折角、吸熱ピークのオンセット値、およびピーク値であることを意味する。例えば、粉末Ｘ線回折における回折角（２θ（度））の「約」は、ある態様としては±０．２度であり、さらに別の態様としては、±０．１度である。ＤＳＣ分析における吸熱ピークのオンセット温度およびピーク温度の「約」は、ある態様としては±２℃であり、さらに別の態様としては、±１℃である。また、最初の数字の前の「約」は、そのあとの数字にもかかる。例えば、約５．３、１２．４、１３．２、１９．０、１９．３、２１．５、２２．１および２２．９度２θは、約５．３、約１２．４、約１３．２、約１９．０、約１９．３、約２１．５、約２２．１および約２２．９度２θを意味する。
【００３７】
本発明の一実施形態において、化合物Ｉの結晶形は実質的に純粋である。「実質的に純粋である」への言及は、特定の結晶形が、存在する化合物のうちの少なくとも５０％を占めることを意味する。また、別の一実施形態において、各結晶形は、存在する化合物Ｉのうちの少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または約９４％〜９８％を占める。
【００３８】
本発明において、本発明の結晶形は、例えば以下に示す方法、これらに準ずる方法または実施例に従って製造することが出来る。なお、再結晶を行う際、種晶は、使用しても、または使用しなくてもよい。
【００３９】
化合物ＩのＡ晶は、例えば、本明細書中の参考例の方法で製造した化合物Ｉを加熱下、または常温化にて溶媒に溶解させ、その後冷却することにより得ることができる。溶媒としては、単一溶媒（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトニトリル等）、有機溶媒（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル等）の混合溶媒、または有機溶媒と水との混合溶媒を用いることができる。
［毒性］
化合物ＩのＡ晶の毒性は十分に低いものであり、医薬品として安全に使用することができる。
［医薬品への適用］
化合物ＩのＡ晶は、ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の予防および／または治療に適している。
【００４０】
化合物ＩのＡ晶は、ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患を予防および／または治療するために使用されうる。かかる疾患としては、例えば、骨疾患、がん、全身性肉芽腫、免疫疾患、アレルギー、アトピー、喘息、歯槽膿漏、歯肉炎、歯周病、アルツハイマー、川崎病、熱傷、多臓器不全、慢性頭痛、疼痛、血管炎、静脈不全、静脈瘤、動脈瘤、大動脈瘤、痔瘻、尿崩症、ストレス、子宮内膜症、子宮腺筋症、新生児動脈管開存症、または胆石症等が挙げられる。
【００４１】
化合物ＩのＡ晶は、好ましくはがんの予防および／または治療に適している。
【００４２】
がんとしては、例えば、乳がん、卵巣がん、大腸がん、肺がん、前立腺がん、頭頸部がん、リンパ腫、ぶどう膜悪性黒色腫、胸腺腫、中皮腫、食道がん、胃がん、十二指腸がん、肝細胞がん、胆管がん、胆のうがん、膵臓がん、腎細胞がん、腎盂・尿管がん、膀胱がん、陰茎がん、精巣がん、子宮がん、膣がん、外陰がん、皮膚がん、悪性骨腫瘍、軟部肉腫、軟骨肉腫、白血病、骨髄異形成症候群、または多発性骨髄腫などが挙げられる。
【００４３】
化合物ＩのＡ晶は、
１）その化合物の予防および／または治療効果の補完および／または増強、
２）その化合物の動態・吸収改善、投与量の低減、および／または
３）その化合物の副作用の軽減のために他の薬剤と組み合わせて、併用剤として投与してもよい。
【００４４】
化合物ＩのＡ晶と他の薬剤の併用剤は、１つの製剤中に両成分を配合した配合剤の形態で投与してもよく、また別々の製剤にして投与する形態をとってもよい。この別々の製剤にして投与する場合には、同時投与および時間差による投与が含まれる。また、時間差による投与は、化合物ＩのＡ晶を先に投与し、他の薬剤を後に投与してもよいし、他の薬剤を先に投与し、化合物ＩのＡ晶を後に投与してもよい。それぞれの投与方法は同じでも異なっていてもよい。
【００４５】
上記併用剤により、予防および／または治療効果を奏する疾患は特に限定されず、化合物ＩのＡ晶の、予防および／または治療効果を補完および／または増強する疾患であればよい。
【００４６】
化合物ＩのＡ晶の大動脈瘤に対する予防および／または治療効果の補完および／または増強のための他の薬剤としては、例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、降圧剤、およびテトラサイクリン系抗生物質などが挙げられる。
【００４７】
ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤としては、例えば、プラバスタチン（ナトリウム）、シンバスタチン、フルバスタチン（ナトリウム）、セリバスタチン（ナトリウム）、イタバスタチン、アトルバスタチン（カルシウム水和物）、ロバスタチン、ピタバスタチン（カルシウム）などが挙げられる。
【００４８】
降圧剤としては、例えば、カルシウム拮抗薬、アンギオテンシンＩＩ拮抗薬、アンギオテンシン変換酵素阻害薬、ホスホジエステラーゼ４阻害薬、利尿薬、プロスタグランジン類、アルドステロン拮抗薬、交感神経抑制薬などが挙げられる。
【００４９】
カルシウム拮抗薬としては、例えば、ニフェジピン、塩酸ベニジピン、塩酸ジルチアゼム、塩酸ベラパミル、ニソルジピン、ニトレンジピン、塩酸ベプリジル、ベシル酸アムロジピン、塩酸ロメリジン、塩酸エホニジピンなどが挙げられる。
【００５０】
アンギオテンシンＩＩ拮抗薬としては、例えば、ロサルタン（カリウム）、カンデサルタン（シレキセチル）、バルサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン（メドキソミル）、テルミサルタンなどが挙げられる。
【００５１】
アンギオテンシン変換酵素阻害薬としては、例えば、アラセプリル、塩酸イミダプリル、塩酸キナプリル、塩酸テモカプリル、塩酸デラプリル、塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、トランドラプリル、ペリンドプリル、エルブミン、マレイン酸エナラプリル、リシノプリルなどが挙げられる。
【００５２】
ホスホジエステラーゼ４阻害薬としては、例えば、シロミラスト、ロフルミラスト、アロフィリン、アチゾラム、シパムフィリン、ロリプラムなどが挙げられる。
【００５３】
利尿薬としては、例えば、アセタゾラミド、アミノフィリン、イソソルビド、ジクロルフェナミド、スピロノラクトン、トリクロルメチアジド、フロセミド、マンニトール、メタゾラミド、メフルシドなどが挙げられる。
【００５４】
アルドステロン拮抗薬としては、例えば、ドロスピレノン、メルチラポン、カンレノ酸カリウム、カンレノン、エプレレノンなどが挙げられる。
【００５５】
交感神経抑制薬としては、例えば、ドキサゾシン（メシル酸塩）、プラゾシン（塩酸塩）、ウラピジル、ブナゾシン（塩酸塩）、テラゾシン（塩酸塩）、メチルドパ、塩酸クロニジン、レセルピンなどが挙げられる。
【００５６】
テトラサイクリン系抗生物質としては、例えば、ドキシサイクリンなどが挙げられる。
【００５７】
化合物ＩのＡ晶のがんに対する予防および／または治療効果の補完および／または増強のための他の薬剤としては、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物性製剤、ホルモン剤、白金化合物、トポイソメラーゼ阻害剤、キナーゼ阻害剤、抗ＣＤ２０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、プロテアソーム阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、および免疫調整薬などが挙げられる。
【００５８】
アルキル化剤としては、例えば、シクロホスファミド、イホスファミド、ダカルバジン、テモゾロミド、塩酸ニムスチン、ラニムスチン、ベンダムスチン、チオテパ、およびカルボコンなどが挙げられる。
【００５９】
代謝拮抗剤としては、例えば、メトトレキサート、ペメトレキセド、フルオロウラシル、テガフール、テガフール・ウラシル、テガフール・ギメスタット・オタスタットカリウム、ドキシフルリジン、カペシタビン、シタラビン、塩酸ゲムシタビン、フルダラビン、ネララビン、カルモフール、および塩酸プロカルバジンなどが挙げられる。
【００６０】
抗癌性抗生物質としては、例えば、マイトマイシンＣ、塩酸ドキソルビシン、塩酸アクラルビシン、塩酸ピラルビシン、エピルビシン、クロモマイシンＡ３、ブレオマイシン、硫酸ペプロマイシン、およびテラルビシンなどが挙げられる。
【００６１】
植物性製剤としては、例えば、塩酸イリノテカン、エトポシド、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンデシン、酒石酸ビノレルビン、ドセタキセル水和物、エリブリンメシル酸塩、およびパクリタキセルなどが挙げられる。
【００６２】
ホルモン剤としては、例えば、リン酸エストラムスチンナトリウム、フルタミド、ビカルタミド、酢酸ゴセレリン、酢酸リュープロレリン、クエン酸タモキシフェン、クエン酸トレミフェン、アナストロゾール、レトロゾール、エキセメスタン、メピチオスタン、酢酸メドロキシプロゲステロン、エピチオスタノール、ホスフェストロール、塩酸ファドロゾール水和物、アビラテロン、フルベストラント、およびアミノグルテチミドなどが挙げられる。
【００６３】
白金化合物としては、例えば、カルボプラチン、シスプラチン、ネダプラチン、およびオキサリプラチンなどが挙げられる。
【００６４】
トポイソメラーゼ阻害剤の例としては、例えば、トポテカンおよびソブゾキサンなどが挙げられる。
【００６５】
キナーゼ阻害剤としては、例えば、ＥＧＦＲ阻害剤であるエルロチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ＨＥＲ２阻害剤であるラパチニブ、ＢＣＲ−ＡＢＬ阻害剤であるイマチニブ、ＡＬＫ阻害剤であるクリゾチニブ、マルチキナーゼ阻害剤であるレゴラフェニブ、およびダサチニブなどが挙げられる。
【００６６】
抗ＣＤ２０抗体としては、例えば、リツキシマブ、イブリツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、およびオクレリズマブなどが挙げられる。
【００６７】
抗ＨＥＲ２抗体としては、例えば、トラスツズマブ、トラスツズマブ・エムタンシン、およびペルツズマブなどが挙げられる。
【００６８】
抗ＥＧＦＲ抗体としては、例えば、セツキシマブおよびパニツムマブなどが挙げられる。
【００６９】
抗ＶＥＧＦ抗体としては、例えば、ベバシズマブなどが挙げられる。
【００７０】
プロテアソーム阻害剤としては、例えば、ボルテゾミブなどが挙げられる。
【００７１】
ＨＤＡＣ阻害剤としては、例えば、ボリノスタットなどが挙げられる。
【００７２】
免疫チェックポイント阻害薬としては、例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（登録商標））、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ヒト抗ヒトＰＤ−１モノクローナル（中和）抗体（例えば、ニボルマブ（オプジーボ（登録商標））、ＲＥＧＮ−２８１０）、ヒト化抗ヒトＰＤ−１モノクローナル（中和）抗体（例えば、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））、ＰＤＲ−００１、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＡＭＰ−５１４（ＭＥＤＩ０６８０））、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ（ＲＧ７４４６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、Ａｖｅｌｕｍａｂ（ＰＦ−０６８３４６３５、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ−９３６５５９）、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、ＰＤ−Ｌ１融合タンパク質、ＰＤ−Ｌ２融合タンパク質（例えば、ＡＭＰ−２２４）、抗Ｔｉｍ−３抗体（例えば、ＭＢＧ４５３）、抗ＬＡＧ−３抗体（例えば、ＢＭＳ−９８６０１６、ＬＡＧ５２５）、抗ＫＩＲ抗体（例えば、Ｌｉｒｉｌｕｍａｂ）などが挙げられる。
【００７３】
免疫調整薬としては、例えば、サリドマイド、レナリドミド、およびポマリドミドなどが挙げられる。
【００７４】
化合物ＩのＡ晶の、疼痛に対する予防および／または治療効果の補完および／または増強のための他の薬剤としては、例えば、Ｎ型カルシウムチャネル阻害剤、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）阻害剤、およびカンナビノイド−２受容体刺激剤などが挙げられる。
【００７５】
Ｎ型カルシウムチャネル阻害剤としては、例えば、シルニジピンなどが挙げられる。
【００７６】
一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）阻害剤としては、例えば、Ｄ−アルギニンおよびＮＧ―モノメチル―Ｌ−アルギニンなどが挙げられる。
【００７７】
化合物ＩのＡ晶と他の薬剤の質量比は特に限定されない。
【００７８】
他の薬剤は、任意の２種以上を組み合わせて投与してもよい。
【００７９】
また、化合物ＩのＡ晶の、予防および／または治療効果を補完および／または増強する他の薬剤には、上記したメカニズムに基づいて、現在までに見出されているものだけでなく今後見出されるものも含まれる。
【００８０】
前記他の薬物の投与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選択することができる。また、化合物ＩのＡ晶と他の薬剤の配合比は、投与対象の年齢及び体重、投与方法、投与時間、対象疾患、症状、組み合わせ等により適宜選択することができる。例えば、化合物ＩのＡ晶１質量部に対し、他の薬剤を０．０１乃至１００質量部用いればよい。他の薬剤は任意の２種以上を適宜の割合で組み合わせて投与してもよい。また、前記他の薬物には、現在までに見出されているものだけでなく今後見出されるものも含まれる。
【００８１】
化合物ＩのＡ晶、または化合物ＩのＡ晶と他の薬剤の併用剤を上記の目的で用いるには、通常、薬学的に許容される担体とともに適当な医薬組成物として製剤化したうえで、全身的または局所的に、経口または非経口の形で投与される。
【００８２】
化合物Ｉは、薬学的有効量で哺乳動物（好ましくはヒト、より好ましくは患者）へ投与される。
【００８３】
化合物ＩのＡ晶の投与量は年令、体重、症状、望まれる治療効果、投与の経路、治療の期間等に依存するため、必然的に変動が生じる。一般的に、患者一人当たり、一回につき、０．１ｍｇから１０００ｍｇの範囲で一日１回から数回経口投与されるか、または患者一人当たり、一回につき、０．０１ｍｇから１００ｍｇの範囲で一日１回から数回非経口投与されるか、または一日１時間から２４時間の範囲で静脈内に持続投与される。
【００８４】
もちろん前記したように、投与量は、種々の条件によって変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、また範囲を越えて必要な場合もある。
【００８５】
化合物ＩのＡ晶、または化合物ＩのＡ晶と他の薬剤の併用剤を投与する際には、経口投与のための内服用固形剤若しくは内服用液剤、経口投与における徐放性製剤、放出制御製剤、または非経口投与のための注射剤、外用剤、吸入剤若しくは坐剤等として用いられる。
【００８６】
本発明の結晶形は、上記医薬品の原薬として使用される。
【実施例】
【００８７】
以下、実施例によって本発明を詳述するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００８８】
クロマトグラフィーによる分離の箇所およびＴＬＣに示されているカッコ内の溶媒は、使用した溶出溶媒または展開溶媒を示し、割合は体積比を表す。
【００８９】
本発明において、シリカゲルカラムクロマトグラフィーには、富士シリシア化学社製クロマトレックス（登録商標）、山善ハイフラッシュカラム（商品名）等を使用し、精製装置としては、例えば、山善社製中圧分取クロマトグラフＷ−ｐｒｅｐ  ２ＸＹ（商品名）を使用した。
【００９０】
ＮＭＲデータは特に記載しない限り、1Ｈ−ＮＭＲのデータである。
【００９１】
ＮＭＲの箇所に示されているカッコ内は測定に使用した溶媒を示す。
【００９２】
本明細書中に用いた化合物名は、一般的にＩＵＰＡＣの規則に準じて命名を行なうコンピュータプログラム、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社のＡＣＤ／Ｎａｍｅ（登録商標）を用いるか、または、ＩＵＰＡＣ命名法に準じて命名したものである。
参考例１：４−メチレンクロマン
【００９３】
【化５】
2018123108.tif 000006
【００９４】
窒素気流下、メチルトリフェニルホスホニウム  ブロミド（４３５ｇ）のテトラヒドロフラン（以下、ＴＨＦと略す。）（１５００ｍＬ）溶液にリチウムビストリメチルシリルアミドのＴＨＦ（１．３ｍｏｌ／Ｌ、９３１ｍＬ）溶液を氷冷下、滴下した後、室温で１時間撹拌した。４−クロマノン（１５０ｇ）のＴＨＦ（１８０ｍＬ）溶液を−５℃で滴下した後、室温で１時間撹拌した。反応混合物に氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた後、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製することにより、以下の物性値を有する標題化合物（７５．９ｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ  ０．６２（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  2.59-2.75, 4.18-4.31, 4.89, 5.51, 6.79-6.94, 7.12-7.20, 7.56。
参考例２：エチル  （２’Ｒ，４Ｓ）−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−カルボキレート
【００９５】
【化６】
2018123108.tif 000007
【００９６】
窒素気流下、参考例１で製造した化合物（７５．９ｇ）のジクロロメタン（２５００ｍＬ）溶液にジクロロ（ｐ−シメン）ルテニウム（ＩＩ）ダイマー（１５．８ｇ）、（Ｓ,Ｓ）−２，６−ビス（４−イソプロピル−２−オキサゾリン−２−イル）ピリジン（１５．６ｇ）を加えた。ジアゾ酢酸エチル（１３％ジクロロメタン含有、１３４ｇ）のジクロロメタン（１５０ｍＬ）溶液を室温でゆっくりと滴下した後、１時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンで抽出し、得られた有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製することにより、以下の物性値を有する標題化合物（９１．２ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  1.26, 1.54-1.67, 2.07-2.22, 4.05-4.21, 4.27, 6.68, 6.78-6.89, 7.04-7.12。
参考例３：（２’Ｒ，４Ｓ）−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−カルボン酸
【００９７】
【化７】
2018123108.tif 000008
【００９８】
参考例２で製造した化合物（９１．２ｇ）のメタノール（４００ｍＬ）及び１，２−ジメトキシエタン（４００ｍＬ）溶液に、水酸化リチウム一水和物（２９．６ｇ）の水（１６０ｍＬ）溶液を加え、室温で一晩撹拌した。反応混合物に１０％クエン酸水溶液を加えた後、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をジクロロメタンで再結晶することにより、以下の物性値を有する標題化合物（５５．２ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  1.59-1.67, 1.68-1.76, 2.15, 2.21-2.29, 4.12-4.23, 4.25-4.36, 6.70, 6.80-6.92, 7.06-7.16；
ＨＰＬＣ保持時間：６．９分（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＩＣ  ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ  ヘキサン：酢酸エチル：ギ酸＝９７：３：１）。
参考例４：メチル  （２’Ｒ，４Ｓ）−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−カルボキレート
【００９９】
【化８】
2018123108.tif 000009
【０１００】
窒素気流下、参考例３で製造した化合物（４０．０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦと略す。）（２００ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（２８．５ｇ）を加えた後、ヨードメタン（３１．９ｇ）を滴下し、室温で一晩撹拌した。反応混合物を氷水に注ぎ、ヘキサン−酢酸エチル混合溶液で抽出した。得られた有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮することにより、以下の物性値を有する標題化合物（４０．１ｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ  ０．３０（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  1.57-1.69, 2.09-2.22, 3.71, 4.07-4.17, 4.27, 6.68, 6.78-6.90, 7.04-7.14。
参考例５：メチル  （２’Ｒ，４Ｓ）−６−ヨード−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−カルボキレート
【０１０１】
【化９】
2018123108.tif 000010
【０１０２】
窒素気流下、参考例４で製造した化合物（４０．１ｇ）のメタノール（３２０ｍＬ）溶液に氷冷下、１,３−ジヨード−５,５−ジメチルヒダントイン（３５．６ｇ）、濃硫酸３滴を加えた後、そのまま１．５時間、室温で２．５時間撹拌した。反応混合物をヘキサン−酢酸エチル混合溶液で希釈後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、水層をヘキサン−酢酸エチル混合溶液で抽出した。得られた有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮することにより、以下の物性値を有する標題化合物（６３．８ｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ  ０．３３（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  1.60, 2.06-2.19, 3.71, 4.09, 4.20-4.31, 6.59, 6.93, 7.36。
参考例６：（２’Ｒ，４Ｓ）−６−ヨード−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−カルボン酸
【０１０３】
【化１０】
2018123108.tif 000011
【０１０４】
参考例５で製造した化合物（１５．０ｇ）のメタノール（６０ｍＬ）及び１，２−ジメトキシエタン（６０ｍＬ）溶液に、水酸化ナトリウム水溶液（２ｍｏｌ／Ｌ、４４ｍＬ）を加え、室温で１．５時間撹拌した。反応混合物に塩酸を加えた後、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮することにより、以下の物性値を有する標題化合物（１４．４ｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ  ０．４２（ジクロロメタン：メタノール＝９：１）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  1.57-1.74, 2.11, 2.16-2.25, 4.10-4.20, 4.23-4.33, 6.59, 6.94, 7.37。
参考例７：エチル  ４−（４−ホルミル−２−ニトロフェニル）ブタノエート
【０１０５】
【化１１】
2018123108.tif 000012
【０１０６】
窒素気流下，亜鉛粉末（９９．２ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（以下、ＤＭＡと略す。）（７００ｍＬ）溶液にヨウ素（２６．０ｇ）を加え、１０分間撹拌した。４−ブロモ酪酸エチル（２００ｇ）を滴下後、８０℃で２時間撹拌することで亜鉛試薬を調製した。窒素気流下、３−ニトロ−４−ブロモベンズアルデヒド（１００ｇ）のＴＨＦ（５００ｍＬ）溶液に２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’,６’−ジメトキシビフェニル（７．１４ｇ）、酢酸パラジウム（１．９６ｇ）を加えた後、氷冷下で調製した亜鉛試薬（５００ｍＬ）を滴下し、室温で３０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液、水を加えた後、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製することにより、以下の物性値を有する標題化合物（９１．２ｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ  ０．６１（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  1.27, 1.97-2.09, 2.42, 3.01, 4.15, 7.57, 8.04, 8.38, 10.03。
参考例８：エチル  ４−（４−シアノ−２−ニトロフェニル）ブタノエート
【０１０７】
【化１２】
2018123108.tif 000013
【０１０８】
参考例７で製造した化合物（９２．０ｇ）のＤＭＦ（３５０ｍＬ）溶液にヒドロキシルアミン塩酸塩（２６．０ｇ）を加え、５０℃で１時間撹拌した。塩化アセチル（３０ｍＬ）を加え、９０℃で２時間撹拌した。反応混合物に水を加えた後、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製することにより、以下の物性値を有する標題化合物（８１．０ｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ  ０．６５（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  1.27, 1.92-2.10, 2.37-2.45, 2.91-3.06, 4.15, 7.55, 7.81, 8.21。
参考例９：エチル  ４−（２−アミノ−４−シアノフェニル）ブタノエート
【０１０９】
【化１３】
2018123108.tif 000014
【０１１０】
参考例８で製造した化合物（１７．０ｇ）のエタノール（８０ｍＬ）溶液に、パラジウム炭素（５０％ｗｅｔ、８．０ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で９時間撹拌した。反応混合物をセライト（商品名）でろ過後、ろ液を濃縮することにより、以下の物性値を有する標題化合物（１２．０ｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ  ０．５６（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  1.28, 1.79-1.95, 2.38-2.45, 2.50-2.60, 4.09-4.30, 6.89, 6.93-6.98, 7.04-7.10。
参考例１０：エチル  ４−［４−シアノ−２−（｛［（２’Ｒ，４Ｓ）−６−ヨード−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−イル］カルボニル｝アミノ）フェニル］ブタノエート
【０１１１】
【化１４】
2018123108.tif 000015
【０１１２】
参考例６で製造した化合物（１４．４ｇ）、および参考例９で製造した化合物（１０．０ｇ）のＤＭＡ（９０ｍＬ）溶液に４−メチルモルホリン（２４．０ｍＬ）、４−ジメチルアミノピリジン（５．３３ｇ）、プロピルホスホン酸無水物環状トリマー（以下、Ｔ３Ｐと略す。）（１．７ｍｏｌ／Ｌ、４６．５ｍＬ）を加え、室温で一晩撹拌した。反応混合物に酢酸エチル、水、塩酸水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をヘキサン−酢酸エチル混合溶液で洗浄することにより、以下の物性値を有する標題化合物（１９．３ｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ  ０．４２（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  1.20, 1.61, 1.66-1.79, 1.83, 2.18-2.28, 2.39-2.49, 2.60, 3.66, 3.90, 4.00-4.12, 4.26, 6.58, 7.05, 7.15-7.22, 7.26-7.31, 7.33, 8.72, 9.39。
参考例１１：（２’Ｒ，４Ｓ）−２’−｛［５−シアノ−２−（４−エトキシ−４−オキソブチル）フェニル］カルバモイル｝−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−６−カルボン酸
【０１１３】
【化１５】
2018123108.tif 000016
【０１１４】
参考例１０で製造した化合物（７．４０ｇ）のＤＭＦ（６０ｍＬ）溶液に酢酸ナトリウム（３．３５ｇ）、［１,１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン]パラジウム（ＩＩ)ジクロリド  ジクロロメタン錯体（５５５ｍｇ）を加え、一酸化炭素雰囲気下、８０℃で６時間撹拌した。反応混合物に炭酸カリウム水溶液を加え、しばらく撹拌した後、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、水を加え、セライト（商品名）でろ過した。ろ液に塩酸水溶液を加えた後、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善自動精製装置）によって精製することにより、以下の物性値を有する標題化合物（６．１４ｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ  ０．４８（ジクロロメタン：酢酸エチル：メタノール＝８：４：１）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  1.08, 1.65-1.80, 1.83-1.92, 2.25-2.36, 2.37-2.49, 2.55-2.66, 2.71, 3.55, 3.79, 4.12-4.23, 4.37, 6.88, 7.15 - 7.22, 7.27-7.32, 7.61, 7.83, 8.73, 9.40。
【０１１５】
参考例１２：エチル  ４−［４−シアノ−２−（｛［（２’Ｒ，４Ｓ）−６−（イソプロピルカルバモイル）−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−イル］カルボニル｝アミノ）フェニル］ブタノエート
2018123108.tif 000017
【０１１６】
参考例６で製造した化合物の代わりに参考例１１で製造した化合物（５０ｍｇ）を用いて、参考例９で製造した化合物の代わりにイソプロピルアミン（６３ｍｇ）を用いて、参考例１０と同様の操作を行って、以下の物性値を有する標題化合物（５４ｍｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ  ０．２７（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ 1.07, 1.26, 1.66-1.80, 1.86, 2.25-2.32, 2.37-2.45, 2.56-2.75, 3.46-3.59, 3.70-3.83, 4.07-4.38, 5.82, 6.83, 7.17-7.23, 7.26-7.45, 8.74, 9.39。
参考例１３：４−［４−シアノ−２−（｛［（２’Ｒ，４Ｓ）−６−（イソプロピルカルバモイル）−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−イル］カルボニル｝アミノ）フェニル］ブタン酸
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【０１１７】
参考例１２で製造した化合物（５４ｍｇ）を用いて、メタノールの代わりにエタノールを用いて、参考例６と同様の操作を行って、以下の物性値を有する化合物Ｉ（３８ｍｇ）を得た。
ＴＬＣ：Ｒｆ  ０．７４（酢酸エチル：メタノール＝１９：１）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  1.27, 1.34-1.92, 2.01-2.30, 2.38-2.80, 3.50-3.61, 4.18-4.43, 4.54, 6.00, 6.81, 7.15-7.31, 7.94, 8.87, 9.93。
結晶化実験例：
実施例１：
４−［４−シアノ−２−（｛［（２’Ｒ，４Ｓ）−６−（イソプロピルカルバモイル）−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−イル］カルボニル｝アミノ）フェニル］ブタン酸のＡ晶
参考例１３の方法で製造した化合物Ｉ（４．００ｇ）をメタノール／水（９／１）１６８ｍＬに懸濁させ、６５℃にて溶解させた。加熱を止め、徐々に温度を下げながら撹拌し、室温で１５時間撹拌した。析出した白色粉末を濾取し、６０℃にて１０時間、室温にて１５時間減圧乾燥し、本発明の結晶（Ａ晶）３．０６ｇ（回収率７７％）を白色粉末として得た。
【０１１８】
下記の条件で測定した本発明の結晶の粉末Ｘ線回析スペクトルチャートを図１に、ＤＳＣチャートを図２にそれぞれ示す。
（１）粉末Ｘ線回折スペクトル
装置：リガク製  ＳｍａｒｔＬａｂ
ターゲット：Ｃｕ
電圧：４５ｋＶ
電流：２００ｍＡ
走査速度：１０度／ｍｉｎ
Ｃｕ−Ｋα線を使用した粉末Ｘ線回折スペクトル法で得られた回折角（２θ）（度）および相対強度（％）の結果を表１に示す。
【０１１９】
【表１】
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【０１２０】
（２）示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
装置：メトラー・トレド製  ＤＳＣ８２２ｅ  示差走査熱量分析装置
試料量：１．２０ｍｇ
試料セル：アルミニウムスタンダード４０μＬ
窒素ガス流量：４０ｍＬ／ｍｉｎ
昇温速度：１０℃／ｍｉｎ（２５〜２５０℃）
ＤＳＣチャートにおいて、１つの吸熱ピークが観察された。これがＡ晶の融解によるものである。
吸熱ピーク：オンセット温度２２４．９℃、ピーク温度２２６．３℃
薬理実験例：
薬理実験例１：プロスタノイドレセプターサブタイプ発現細胞を用いたＥＰ４受容体拮抗活性測定実験
ニシガキ（Ｎｉｓｈｉｇａｋｉ）らの方法（非特許文献４）に準じて、ラットＥＰ４レセプターサブタイプをそれぞれ発現したＣＨＯ細胞を調製し実験に供した。サブコンフルエントとなるまで培養した細胞を剥離し，１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるようにアッセイミディアム（ａｓｓａｙ  ｍｅｄｉｕｍ）（ＭＥＭ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  １ｍｍｏｌ／Ｌ  ＩＢＭＸ，１％ＨＳＡ）に懸濁した。細胞懸濁液（２５μＬ）を終濃度１０ｎｍｏｌ／ＬのＰＧＥ２単独、またはこれと試験化合物を共に含む溶液（２５μＬ）を添加して反応を開始し、室温で３０分間反応した後、ｃＡＭＰアッセイキット（ａｓｓａｙ  ｋｉｔ）（ＣＩＳＢＩＯ社製）に記載されている方法に準じ、細胞内のｃＡＭＰ量を定量した。
【０１２１】
なお、試験化合物のアンタゴニスト作用（ＩＣ５０値）は、ＰＧＥ２単独でサブマキシマル（ｓｕｂｍａｘｉｍａｌ）なｃＡＭＰ産生作用を示す濃度である１０ｎＭの反応に対する抑制率として算出し、ＩＣ５０値を求めた。
【０１２２】
その結果、化合物ＩのＩＣ５０は７．８ｎＭであり、強力なＥＰ４受容体拮抗活性を有することが分かった。
薬理実験例２：マウス大腸がん細胞株ＣＴ２６の同種移植モデルにおける抗腫瘍効果
マウス大腸がん細胞株であるＣＴ２６の同種移植モデルにて、本発明化合物の抗腫瘍効果を評価した。ＣＴ２６は、１０ｖｏｌ％の非働化済ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ；ＦＢＳ）、１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのＰｅｎｉｃｉｌｌｉｎおよび１００μｇ／ｍＬのＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎを含むＲＰＭＩ−１６４０培地でＣＯ２インキュベーター内にて培養した。移植当日、培養上清を取り除き、ＣＴ２６をリン酸緩衝液（以下、ＰＢＳと略す。）で洗浄したのち、回収した。回収したＣＴ２６をハンクス緩衝液に懸濁し、移植用細胞とした。麻酔下で雌性Ｂａｌｂ／Ｃマウス（日本チャールスリバー株式会社）の右側背部に、３０万個の移植用細胞を皮下移植した。１０ｍｇ／ｋｇの本発明化合物を、移植当日に１回の経口投与を行い、移植日以降に１日２回の経口投与を行った。なお、対照群には蒸留水を本発明化合物投与群と同じ期間投与した。腫瘍体積（ｍｍ３）は、電子ノギスを用いて、腫瘍の短径および長径を測定し、以下の数式１および数式２にて相対腫瘍体積を算出した。
【０１２３】
【数１】
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【０１２４】
【数２】
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【０１２５】
その結果、化合物Ｉは腫瘍増殖の抑制作用を有しており、その相対腫瘍体積は、図３に示すとおりであった。
【０１２６】
薬理実験例３：薬物動態試験（肝ミクロソーム安定性試験）
（１）被験物質溶液の調製
化合物ＩのＤＭＳＯ溶液（１０ｍｍｏｌ／Ｌ；５μＬ）を５０％アセトニトリル水溶液（１９５μＬ）で希釈して、２５０μｍｏｌ／Ｌの化合物Ｉ溶液を調製した。
（２）標準サンプル（反応開始直後のサンプル）調製
ウォーターバスであらかじめ３７℃に加温した反応用容器に、ＮＡＤＰＨ−Ｃｏ−Ｆａｃｔｏｒ（ＢＤ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）および１ｍｇ／ｍＬヒト肝ミクロソームを含む０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）２４５μＬを添加して、５分間プレインキュベーションした。そこに先の被験物質溶液５μＬを添加して、反応を開始した（最終濃度１μｍｏｌ／Ｌ）。反応開始直後に反応溶液２０μＬを採取して、この溶液をアセトニトリル（内部標準物質カンデサルタン含有）１８０μＬに添加して反応を停止した。この反応が停止した溶液（２０μＬ；反応開始直後のサンプル溶液）を除蛋白用フィルタープレート上で５０％アセトニトリル（１８０μＬ）と撹拌した後、吸引ろ過して、ろ液を標準サンプルとした。
（３）反応サンプル（反応６０分後のサンプル）調製
先の反応溶液を３７℃で６０分間インキュベーションした後、この反応溶液２０μＬを採取して、アセトニトリル（内部標準物質カンデサルタン含有）１８０μＬに添加して、反応を停止した。この反応が停止した溶液（２０μＬ；６０分間反応させたサンプル溶液）を除蛋白用フィルタープレート上で５０％アセトニトリル（１８０μＬ）と撹拌した後、吸引ろ過して、ろ液を反応サンプルとした。
（４）評価方法
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳで得られたピーク面積を用いて、標準サンプルの被験物質量（Ｘ）および反応サンプルの被験物質量（Ｙ）から、次式に従い、被験物質の残存率（％）を算出した。
【０１２７】
残存率（％）＝（Ｙ／Ｘ）×１００
Ｘ：標準サンプルの被験物質量（Ｒａｔｉｏ＝被験物質のピーク面積／内部標準物質のピーク面積）
Ｙ：反応サンプルの被験物質量（Ｒａｔｉｏ＝被験物質のピーク面積／内部標準物質のピーク面積）
（５）結果
化合物Ｉの残存率は１００％であり、ヒト肝ミクロソームに対する安定性は非常に良好であることが分かった。
化学的安定性試験：
ジェットミルで粉砕した化合物ＩのＡ晶を用いて、各種保管条件下における安定性について検討を行った。保存後、ＨＰＬＣで−２０℃保存サンプルの面積百分率に対する各条件下保存サンプルの残存率（％）を算出した。また粉末Ｘ線回折スペクトルを用いてピークをサンプルと比較した。外観を目視で観察し、サンプルと比較した。
＜保存条件およびサンプリングタイム＞
５℃：２か月
４０℃：２か月
６０℃：１か月
２５℃−６０％ＲＨ（開封）：２か月
４０℃−７５％ＲＨ（開封）：２か月
２５００Ｌｕｘ：２０Ｄ（遮光、透明）：１か月
＜Ａ晶＞
いずれの条件においても、残存率は９９．９％〜１００．０％であった。また、粉末Ｘ線回折スペクトルを用いた検討において、ピーク数の増加は認められず、目視による外観変化も認められなかった。したがって、化合物ＩのＡ晶は化学的安定性に優れた結晶形であることが分かった。
［製剤例］
本発明に用いられる代表的な製剤例を以下に示す。
製剤例１
以下の各成分を常法により混合した後打錠して、一錠中に１０ｍｇの活性成分を含有する錠剤１万錠を得ることができる。
・４−［４−シアノ−２−（｛［（２’Ｒ，４Ｓ）−６−（イソプロピルカルバモイル）−２，３−ジヒドロスピロ［クロメン−４，１’−シクロプロパン］−２’−イル］カルボニル｝アミノ）フェニル］ブタン酸のＡ晶                ……１００ｇ
・カルボキシメチルセルロースカルシウム（崩壊剤）        ……  ２０ｇ
・ステアリン酸マグネシウム（潤滑剤）                    ……  １０ｇ
・微結晶セルロース                                      ……８７０ｇ
【産業上の利用可能性】
【０１２８】
化合物ＩのＡ晶の毒性は十分に低く、医薬品として安全に使用することができ、ＥＰ４受容体の活性化に起因する疾患の治療剤として有用である。また本発明の結晶形は、医薬品の原薬として有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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