(57)【要約】      （修正有）【課題】ＧＭ−ＣＳＦを産生する標的Ｔ細胞の増殖を抑制、又はそのＧＭ−ＣＳＦ産生能を抑制することで、生体内におけるＧＭ−ＣＳＦ量を低減することのできる薬剤の提供。【解決手段】式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を有効成分として含有するＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。2018009011.tif 000026（Ｒ１はアルドピラノース残基；Ｒ２はＨ又はＯＨ；Ｒ３はＣＨ２、ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２、又はＣＨ＝ＣＨ；Ｒ４はＨ又はＣＨ３；ｘは０〜３５の整数；ｙ及びｚはｙ＋ｚ＝０〜３を満たす整数）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を有効成分として含有するＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
【化１】
2018009011.tif 000021
（式中、Ｒ１はアルドピラノース残基を表し、Ｒ２は水素原子又は水酸基を表し、Ｒ３は−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−、又は−ＣＨ＝ＣＨ−を表し、Ｒ４は水素原子又はＣＨ３を表し、ｘは０〜３５であり、ｙ及びｚは、ｙ＋ｚ＝０〜３を満たす整数を表す。）
【請求項２】
前記Ｒ１が以下の式（ＩＩ）で示される、請求項１に記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
【化２】
2018009011.tif 000022
【請求項３】
前記Ｒ３が−ＣＨ２−、又は−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−を表し、ｘが１０〜３２である、請求項２に記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
【請求項４】
前記Ｒ３が−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−を表す、請求項３に記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
【請求項５】
前記Ｒ２及びＲ４が水素原子を表し、ｘが１１〜２３であり、ｚが０である、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
【請求項６】
ヒトに対して、１回あたり０．０１ｍｇ以上５０ｍｇ以下の前記糖脂質化合物又はその塩が投与されるように用いられる、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
【請求項７】
ヒトに対して、１回あたり０．０１ｍｇ以上５０ｍｇ以下の前記糖脂質化合物又はその塩が経口投与されるように用いられる、請求項６に記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
【請求項８】
以下の一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を有効成分として含有するＧＭ−ＣＳＦ低下剤。
【化３】
2018009011.tif 000023
（式中、Ｒ１はアルドピラノース残基を表し、Ｒ２は水素原子又は水酸基を表し、Ｒ３は−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−、又は−ＣＨ＝ＣＨ−を表し、Ｒ４は水素原子又はＣＨ３を表し、ｘは０〜３５であり、ｙ及びｚは、ｙ＋ｚ＝０〜３を満たす整数を表す。）
【請求項９】
以下の一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を有効成分として含有し、
ヒトに対して、１回あたり０．０１ｍｇ以上５０ｍｇ以下の前記糖脂質化合物又はその塩が投与されるように用いられる、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
【化４】
2018009011.tif 000024
（式中、Ｒ１はアルドピラノース残基を表し、Ｒ２は水素原子又は水酸基を表し、Ｒ３は−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−、又は−ＣＨ＝ＣＨ−を表し、Ｒ４は水素原子又はＣＨ３を表し、ｘは０〜３５であり、ｙ及びｚは、ｙ＋ｚ＝０〜３を満たす整数を表す。）
【請求項１０】
ヒトに対して、１回あたり０．０１ｍｇ以上５０ｍｇ以下の前記糖脂質化合物又はその塩が経口投与されるように用いられる、請求項９に記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
【請求項１１】
前記Ｒ１が以下の式（ＩＩ）で示される、請求項９又は１０に記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
【化５】
2018009011.tif 000025
【請求項１２】
前記Ｒ３が−ＣＨ２−、又は−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−を表し、ｘが１０〜３２である、請求項１１に記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
【請求項１３】
前記Ｒ３が−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−を表す、請求項１２に記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
【請求項１４】
前記Ｒ２及びＲ４が水素原子を表し、ｘが１１〜２３であり、ｚが０である、請求項９〜１３のいずれか一項に記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
【請求項１５】
Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスがＴｈ１に偏向した疾患又はＴｈ１細胞が病態を悪化させる疾患の治療剤又は予防剤である、請求項９〜１４のいずれか一項に記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
【請求項１６】
自己免疫疾患の治療剤又は予防剤である、請求項９〜１５のいずれか一項に記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α−ガラクトセラミドの誘導体を有効成分とするＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤に関する。本発明はまた、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤にも関する。
【背景技術】
【０００２】
ＧＭ−ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ・ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ；顆粒球・マクロファージコロニー刺激細胞）は、顆粒球及びマクロファージの骨髄系前駆細胞に作用して、その分化や成熟を促進する他、造血成長因子として多能性造血幹細胞に作用する等、造血機構にも関与することが知られている糖タンパク質である（非特許文献１）。ＧＭ−ＣＳＦは、主として活性化Ｔ細胞から産生されるが、細菌感染、外傷、自己免疫疾患等で炎症が生じた場合にはマクロファージ、線維芽細胞、内皮細胞など様々な細胞からも産生され、好中球や好酸球の増殖や活性を促進する炎症性サイトカインとしても機能することが知られている（非特許文献１）。ＧＭ−ＣＳＦの発現上昇は、関節炎、乾癬、及び肺疾患等の様々な炎症部位で認められ、炎症誘導に関与することが示唆されている。
【０００３】
ＧＭ−ＣＳＦの炎症惹起作用は、本来は生体防御反応であるが、過剰な反応は病態形成の初発過程にもなり得る。例えば、ＲＡ（慢性関節リウマチ）の関節炎病変局所では、ＧＭ−ＣＳＦが滑膜関節内に存在することが明らかにされており、ＲＡの発症と過剰量のＧＭ−ＣＳＦとの関連性が示唆されている（非特許文献２及び３）。また、ＳＩＲＳ（全身性炎症反応症候群）は、細菌感染、外傷、熱傷によって誘発される致命的な臓器機能不全であるが、その原因は、細菌感染等により血中に放出されたＧＭ−ＣＳＦをはじめとする多量の炎症性サイトカインによる急性炎症反応であることが明らかとなっている。
【０００４】
したがって、ＧＭ−ＣＳＦを抗炎症療法の標的として、その生体内の存在量を低減するか又はその機能を阻害すれば、炎症性疾患を軽減又は治癒できることが期待できる。実際、マウスのｉｎ  ｖｉｖｏ実験では中和抗体によるＧＭ−ＣＳＦの機能阻害実験で、関節炎をはじめとする種々の炎症モデルの炎症性疾患を予防、又は治癒できたことが示されている（非特許文献４及び５）。
【０００５】
また、特許文献１には、関節リウマチ等の炎症性疾患治療用の抗体医薬としてＧＭ−ＣＳＦに対する特異的な抗体及びその機能性フラグメントが開示されている。
【０００６】
特許文献２には、フジ属植物の葉又は／及び蔓の抽出物、イポルルの抽出物、胡麻の抽出物、メカブの抽出物、リシン−バリン−リシンであるトリペプチド又は／及びその誘導体を有効成分とするＧＭ−ＣＳＦ産生抑制剤を配合したアトピー性皮膚炎治療剤、化粧料、食品及び皮膚外用剤が開示されている。また、特許文献３には、キャッツクローの抽出物、イエルバ・マテの抽出物、エゴマの抽出物、センキュウの抽出物、サボテンの抽出物、Ｊｕｓｉｔｉａ  ｇｅｎｄａｒｕｓｓａの抽出物、ハナビラタケの抽出物及びＬ−エルゴチオネインから選ばれる少なくとも一種以上を有効成分として配合するアトピー性皮膚炎治療剤及び食品が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１３−１１６９１２
【特許文献２】特開２００７−２３０９７６
【特許文献３】特開２００７−２３０９７７
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ＪＡ，２００８，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８：５３３−５４４
【非特許文献２】Ａｌｖａｒｏ−Ｇｒａｃｉａ  ＪＭ，ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４６：３３６５−３３７１．
【非特許文献３】Ｘｕ  ＷＤ，ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，８３：８７６−８８２．
【非特許文献４】Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＩＫ，ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ａｎｎ．  Ｒｈｅｕｍ．  Ｄｉｓ．，５６：３６４−３６８．
【非特許文献５】Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＩＫ，ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ１．，６１：３６３９−３６４４．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかし、抗体医薬は、タンパク質を有効成分とすることから経口投与は困難であり、通常は注射で投与される。したがって、経口投与に比べると侵襲性が高く、投与も容易とは言い難い。また、抗体医薬は、従来の低分子医薬と比較すると生産コストが高いという問題がある。特に、抗体医薬は、十分な効果を得る上で他のタンパク質医薬と比較して多量の投与を必要とすることから、治療コストがさらに増大してしまう。
【００１０】
しかし、特許文献２及び３に記載の発明は、有効成分が主に植物の抽出液でクルードな状態であることから、効果の安定性に問題が残る。また、アトピー性皮膚炎等の比較的軽度な皮膚炎症反応に対する経皮薬剤であり、ＲＡやＳＩＲＳのような重篤な炎症疾患への効果は期待できない。
【００１１】
一方、前述のようにＧＭ−ＣＳＦを主に生産している細胞は活性化Ｔ細胞であり、経口投与可能な低分子医薬により生体内のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の増殖を抑制するか、又は当該Ｔ細胞によるＧＭ−ＣＳＦの産生能を抑制することができれば、生体内のＧＭ−ＣＳＦ量を効率的に低減することができ、様々な炎症疾患の効果的な治療薬となり得る。しかし、これまでにＧＭ−ＣＳＦを産生するＴ細胞を標的として、その増殖を抑制する、又はそのＧＭ−ＣＳＦ産生能を抑制することのできる薬剤の報告は知られていない。
【００１２】
本発明は、ＧＭ−ＣＳＦを産生する標的Ｔ細胞の増殖、又はＧＭ−ＣＳＦ産生能を抑制することによって、生体内におけるＧＭＣ−ＳＦ量を低減することのできる低分子化合物を有効成分とする薬剤を開発することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、以前にＮＫＴ細胞を刺激してＩＬ−４産生の選択的な産生を誘導する合成糖脂質リガンドであるαガラクトシルセラミドの誘導体を同定した（特許４０６４３４６号）。当該誘導体は、ＩＬ−４産生を介することによって、Ｔｈ１細胞免疫応答の抑制を制御する活性を持ち、経口又は腹腔内投与により、自己免疫性中枢神経炎症を本態とするＥＡＥ（実験的自己免疫性脳脊髄炎）を予防・治療する効果を有する（Ｍｉｙａｍｏｔｏ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｎａｔｕｒｅ，４１３：５３１−５３４）。前記誘導体をマウスに経口投与すると、当該誘導体によって活性化されたＮＫＴ細胞による選択的なＩＬ−４産生を介したＴｈ１細胞免疫応答の抑制が起こり、ＥＡＥは抑制される。また、前記誘導体は、ヒトＮＫＴ細胞に対して、Ｔｈ２サイトカインの優先的産生を誘導する（Ａｒａｋｉ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１５：２３３７−２３４５）。それ故にαガラクトシルセラミドの誘導体は、ヒトＭＳ（多発性硬化症；Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）の治療薬となることが示唆されている。
【００１４】
前記αガラクトシルセラミドの誘導体（以下、しばしば「本発明の合成糖脂質」と表記する）における新たな薬効を探索するため、健常者を対象とした当該誘導体の経口単回投与試験において末梢血中のＴ細胞亜分画を検証したところ、ＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞分画及びＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ８陽性Ｔ細胞分画が、投与前値に比べて有意に減少する傾向を見出した。さらに、本発明の合成糖脂質をマウスに経口投与したところ、低用量の投与により、リンパ節Ｔ細胞からのＧＭ−ＣＳＦ産生が有意に抑制されることが明らかとなった。
【００１５】
本発明は、上述の新たな知見に基づいてなされたもので、以下を提供する。
（１）以下の一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を有効成分として含有するＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
【化１】
2018009011.tif 000002
（式中、Ｒ１はアルドピラノース残基を表し、Ｒ２は水素原子又は水酸基を表し、Ｒ３は−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−、又は−ＣＨ＝ＣＨ−を表し、Ｒ４は水素原子又はＣＨ３を表し、ｘは０〜３５であり、ｙ及びｚは、ｙ＋ｚ＝０〜３を満たす整数を表す。）
（２）前記Ｒ１が以下の式（ＩＩ）で示される、（１）に記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
【化２】
2018009011.tif 000003
（３）前記Ｒ３が−ＣＨ２−、又は−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−を表し、ｘが１０〜３２である、（２）に記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
（４）前記Ｒ３が−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−を表す、（３）に記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
（５）前記Ｒ２及びＲ４が水素原子を表し、ｘが１１〜２３であり、ｚが０である、（１）〜（４）のいずれかに記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
（６）ヒトに対して、１回あたり０．０１ｍｇ以上５０ｍｇ以下の前記糖脂質化合物又はその塩が投与されるように用いられる、（１）〜（５）のいずれかに記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
（７）ヒトに対して、１回あたり０．０１ｍｇ以上５０ｍｇ以下の前記糖脂質化合物又はその塩が経口投与されるように用いられる、（６）に記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤。
（８）上記一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を有効成分として含有するＧＭ−ＣＳＦ低下剤。
【００１６】
本発明はまた、以下の発明を提供する。
（９）以下の一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を有効成分として含有し、
ヒトに対して、１回あたり０．０１ｍｇ以上５０ｍｇ以下の前記糖脂質化合物又はその塩が投与されるように用いられる、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
【化３】
2018009011.tif 000004
（式中、Ｒ１はアルドピラノース残基を表し、Ｒ２は水素原子又は水酸基を表し、Ｒ３は−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−、又は−ＣＨ＝ＣＨ−を表し、Ｒ４は水素原子又はＣＨ３を表し、ｘは０〜３５であり、ｙ及びｚは、ｙ＋ｚ＝０〜３を満たす整数を表す。）
（１０）ヒトに対して、１回あたり０．０１ｍｇ以上５０ｍｇ以下の前記糖脂質化合物又はその塩が経口投与されるように用いられる、（９）に記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
（１１）前記Ｒ１が以下の式（ＩＩ）で示される、（９）又は（１０）に記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
【化４】
2018009011.tif 000005
（１２）前記Ｒ３が−ＣＨ２−、又は−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−を表し、ｘが１０〜３２である、（１１）に記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
（１３）前記Ｒ３が−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−を表す、（１２）に記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
（１４）前記Ｒ２及びＲ４が水素原子を表し、ｘが１１〜２３であり、ｚが０である、（９）〜（１３）のいずれかに記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
（１５）Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスがＴｈ１に偏向した疾患又はＴｈ１細胞が病態を悪化させる疾患の治療剤又は予防剤である、（９）〜（１４）のいずれかに記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
（１６）自己免疫疾患の治療剤又は予防剤である、（９）〜（１５）のいずれかに記載のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、ＧＭ−ＣＳＦを産生するＴ細胞の増殖を抑制、又はそのＧＭ−ＣＳＦ産生能を抑制することができる。その結果、生体内におけるＧＭ−ＣＳＦ量を低減できる。それによって、ＧＭ−ＣＳＦ量の増加に起因する疾患の治療薬となり得る。
【００１８】
本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤、及びＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、ヒトに対して、モデル動物（マウス、ラット、カニクイザル）における試験結果から予測される投与量よりもはるかに少ない投与量でも作用効果を奏する。この作用効果は、経口投与した場合に顕著に奏される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】本発明の合成糖脂質の一つである化合物３１を経口で単回投与した健常被験者より調製した末梢血単核細胞中のＧＭ−ＣＳＦ産生細胞をＦＡＣＳにて分離、同定したサイトグラムを示す図である。Ａの横軸はＡＰＣ−Ｃｙ７−抗ＣＤ３抗体の、また縦軸はＥＣＤ−抗ＣＤ８抗体の蛍光強度をそれぞれ対数スケールで示している。Ｂの横軸はＡＰＣ−Ｃｙ７−抗ＣＤ３抗体の、また縦軸はＰＢ−抗ＣＤ４５ＲＡ抗体の蛍光強度をそれぞれ対数スケールで示している。Ｃ及びＤの横軸はＰＥ−抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体の、また縦図はＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５−抗ＩＦＮ−γ抗体の蛍光強度をそれぞれ対数スケールで示している。
【図２】本発明の合成糖脂質の一つである化合物３１を経口で単回投与した健常被験者より調製した末梢血単核細胞中のＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞の割合の時間的変化を示す図である。図中Ａ〜Ｄは、コホートＡ（０．３ｍｇ投与）、コホートＢ（１ｍｇ投与）、コホートＣ（３ｍｇ投与）及びコホートＤ（１０ｍｇ投与）を示す。また、ｄａｙ−１は、化合物３１投与１日前、ｄａｙ１、ｄａｙ２、ｄａｙ３及びｄａｙ７は、それぞれ化合物３１投与後１日後、２日後、３日後及び７日後を示す。
【図３】本発明の合成糖脂質の一つである化合物３１を経口で単回投与した健常被験者より調製した末梢血単核細胞中のＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合の時間的変化を示す図である。図中Ａ〜Ｄは、コホートＡ（０．３ｍｇ投与）、コホートＢ（１ｍｇ投与）、コホートＣ（３ｍｇ投与）及びコホートＤ（１０ｍｇ投与）を示す。また、ｄａｙ−１は、化合物３１投与１日前、ｄａｙ１、ｄａｙ２、ｄａｙ３及びｄａｙ７は、それぞれ化合物３１投与後１日後、２日後、３日後及び７日後を示す。
【図４】本発明の合成糖脂質の一つである化合物３１を経口で単回投与したマウスのリンパ節細胞培養上清におけるＧＭ−ＣＳＦ量を示す図である。ｄａｙ２及びｄａｙ７は、それぞれ化合物３１投与後２日後及び７日後のマウスから採取したリンパ節細胞の培養上清を示す。ｖｅｈｉｃｌｅは、化合物３１投与に代えて水（マウス飲料水）のみを投与した対照である。
【図５】本発明の合成糖脂質の一つである化合物３１を経口で単回投与（０．３ｍｇ投与）したＭＳ患者より調製した末梢血単核細胞中のＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞の割合の時間的変化を示す図である。また、ｄａｙ−１は、化合物３１投与１日前、ｄａｙ１、ｄａｙ３及びｄａｙ７は、それぞれ化合物３１投与後１日後、３日後及び７日後を示す。
【図６】本発明の合成糖脂質の一つである化合物３１を経口で単回投与（０．３ｍｇ投与）したＭＳ患者より調製した末梢血単核細胞からセルソーティングにより回収したＣＤ４陽性メモリーＴ細胞分画（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−）におけるＩＦＮ−γ発現量の変化を示す図である。また、ｄａｙ−１は、化合物３１投与１日前、ｄａｙ８は、化合物３１投与後８日後を示す。
【図７】本発明の合成糖脂質の一つである化合物３１を経口で単回投与（０．３ｍｇ投与）したＭＳ患者より調製した末梢血単核細胞からセルソーティングにより回収したＣＤ４陽性メモリーＴ細胞分画（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−）におけるＩＬ−４発現量の変化を示す図である。また、ｄａｙ−１は、化合物３１投与１日前、ｄａｙ８は、化合物３１投与後８日後を示す。
【図８】本発明の合成糖脂質の一つである化合物３１を経口で単回投与（０．３ｍｇ投与）したＭＳ患者より調製した末梢血単核細胞からセルソーティングにより回収したＣＤ４陽性メモリーＴ細胞分画（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−）におけるＩＬ−１７発現量の変化を示す図である。また、ｄａｙ−１は、化合物３１投与１日前、ｄａｙ８は、化合物３１投与後８日後を示す。
【図９】本発明の合成糖脂質の一つである化合物３１を経口で単回投与（０．３ｍｇ投与）したＭＳ患者より調製した末梢血単核細胞からセルソーティングにより回収したＣＤ４陽性メモリーＴ細胞分画（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−）におけるＧＭ−ＣＳＦ発現量の変化を示す図である。また、ｄａｙ−１は、化合物３１投与１日前、ｄａｙ８は、化合物３１投与後８日後を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
１．ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤
１−１．概要
本発明の第１の態様は、ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤に関する。
本明細書において「ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤」とは、炎症性サイトカインであるＧＭ−ＣＳＦの産生能を有する活性Ｔ細胞の増殖を抑制する、又はそのＧＭ−ＣＳＦ産生能を抑制する薬剤をいう。本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤は、本発明の合成糖脂質又はその塩を有効成分として含有することを特徴とする。
【００２１】
本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤によれば、ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の増殖を抑制することによって、生体内におけるＧＭ−ＣＳＦ濃度を低減することが可能となる。
【００２２】
１−２．有効成分
前述のように、本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤は、本発明の合成糖脂質又はその塩を有効成分として含有する。
【００２３】
本明細書において「本発明の合成糖脂質」とは、前述のようにαガラクトシルセラミドの誘導体を意味する。また、ここでいう「αガラクトシルセラミドの誘導体」とは、以下の一般式（Ｉ）で示される特許第４０６４３４６号に記載のαガラクトシルセラミド（α−ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｃｅｒａｍｉｄｅ：α−ＧａｌＣｅｒ）の誘導体をいう。
【化５】
2018009011.tif 000006
【００２４】
一般式（Ｉ）中、Ｒ１はアルドピラノース残基を表す。アルドピラノース残基には、例えば、α−Ｄ−グルコシル、α−Ｄ−ガラクトシル、α−Ｄ−マンノシル、β−Ｄ−グルコシル、β−Ｄ−ガラクトシル、β−Ｄ−マンノシル、２−デオキシ−２−アミノ−α−Ｄ−ガラクトシル、２−デオキシ−２−アミノ−β−Ｄ−ガラクトシル、２−デオキシ−２−アセチルアミノ−α−Ｄ−ガラクトシル、２−デオキシ−２−アセチルアミノ−β−Ｄ−ガラクトシル、β−Ｄ−アロピラノシル、β−Ｄ−アルトロピラノシル、β−Ｄ−イドシル等が挙げられる。これらのうち好ましいＲ１はα体である。以下の式（ＩＩ）で示される、α−Ｄ−ガラクトピラノシルである。
【化６】
2018009011.tif 000007
【００２５】
一般式（Ｉ）中、Ｒ２は水素原子（−Ｈ）又は水酸基（−ＯＨ）を表す。好ましくは水素原子である。
【００２６】
一般式（Ｉ）中、Ｒ３は−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−、又は−ＣＨ＝ＣＨ−を表す。−ＣＨ２−、又は−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−はより好ましく、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−はさらに好ましい。
【００２７】
一般式（Ｉ）中、Ｒ４は水素原子（−Ｈ）又はＣＨ３を表す。好ましくは水素原子である。
【００２８】
一般式（Ｉ）中、ｘは０〜３５の整数であり、好ましくは０〜２６の整数であり、より好ましくは１１〜２６の整数であり、さらに好ましくは１１〜２３の整数であり、特に好ましくは１８〜２３の整数である。
【００２９】
また、一般式（Ｉ）中、ｙ及びｚは、ｙ＋ｚ＝０〜３を満たす整数を表す。好ましくはｚが０であり、かつｙが０〜３である。より好ましくはｚが０であり、かつｙが１〜３である。なお、−（ＣＨ２）ｙ（ＣＨ（ＣＨ３））ｚ−は、（ＣＨ２）と（ＣＨ（ＣＨ３））の順序が記載の順序に従うことを意味するのではなく、単に（ＣＨ２）と（ＣＨ（ＣＨ３））の量的関係を示しているに過ぎない。例えば、ｙ＝２及びｚ＝１の場合には、−（ＣＨ２）ｙ（ＣＨ（ＣＨ３））ｚ−内において（ＣＨ２）が２つ、及び（ＣＨ（ＣＨ３））が１つであることを意味するのであって、２つの（ＣＨ２）と１つの（ＣＨ（ＣＨ３））の並びは問わない。具体的には、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−、又は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−のいずれであってもよい。
【００３０】
本発明の上記一般式（Ｉ）で示す本発明の合成糖脂質の具体例としては、以下の（１）〜（４８）に記載の化合物が挙げられる。（３）〜（９）、（１５）〜（２１）、（２７）〜（３３）及び（３９）〜（４５）の化合物は、本発明の有効成分として、より好ましい。
【００３１】
（１）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−トリアコンタノイルアミノ）−１，３，４−ヘプタントリオール
（２）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ノナコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘプタントリオール
（３）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−オクタコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘプタントリオール、
（４）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ヘプタコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘプタントリオール
（５）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ヘキサコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘプタントリオール
（６）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ペンタコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘプタントリオール
（７）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−テトラコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘプタントリオール
（８）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−トリコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘプタントリオール
（９）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ドコサコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘプタントリオール
（１０）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ヘネイコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘプタントリオール
（１１）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−エイコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘプタントリオール
（１２）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ノナデカノイルアミノ）−１，３，４−ヘプタントリオール
（１３）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−トリアコンタノイルアミノ）−１，３，４−オクタントリオール
（１４）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ノナコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタントリオール
（１５）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−オクタコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタントリオール
（１６）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ヘプタコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタントリオール
（１７）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ヘキサコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタントリオール
（１８）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ペンタコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタントリオール
（１９）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−テトラコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタントリオール
（２０）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−トリコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタントリオール
（２１）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ドコサコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタントリオール、
（２２）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ヘネイコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタントリオール
（２３）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−エイコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタントリオール
（２４）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ノナデカノイルアミノ）−１，３，４−オクタントリオール
（２５）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−トリアコンタノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオール
（２６）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ノナコサノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオール、
（２７）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−オクタコサノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオール
（２８）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ヘプタコサノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオール
（２９）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ヘキサコサノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオール
（３０）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ペンタコサノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオール
（３１）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−テトラコサノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオール
（３２）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−トリコサノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオール
（３３）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ドコサコサノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオール
（３４）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ヘネイコサノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオール
（３５）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−エイコサノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオール
（３６）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ノナデカノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオール
（３７）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−トリアコンタノイルアミノ）−１，３，４−ヘキサントリオール
（３８）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ノナコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘキサントリオール
（３９）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−オクタコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘキサントリオール
（４０）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ヘプタコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘキサントリオール
（４１）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ヘキサコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘキサントリオール
（４２）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ペンタコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘキサントリオール
（４３）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−テトラコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘキサントリオール
（４４）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−トリコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘキサントリオール
（４５）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ドコサコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘキサントリオール
（４６）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ヘネイコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘキサントリオール
（４７）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−エイコサノイルアミノ）−１，３，４−ヘキサントリオール
（４８）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−ノナデカノイルアミノ）−１，３，４−ヘキサントリオール
が挙げられる。
【００３２】
「本発明の合成糖脂質の塩」又は「αガラクトシルセラミドの誘導体の塩」とは、一般式（Ｉ）で示されるαガラクトシルセラミドの誘導体の塩であって、その化合物上の特定の置換基に基づいて塩基又は酸を用いて調製された塩をいう。使用した塩基又は酸により塩基性付加塩と酸付加塩とに分類できる。
【００３３】
塩基性付加塩としては、例えば、ナトリウム塩若しくはカリウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩若しくはマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩若しくはブロカイン塩のような脂肪族アミン塩、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミンのようなアラルキルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、キノリン塩若しくはイソキノリン塩のような複素環芳香族アミン塩、アルギニン塩若しくはリジン塩のような塩基性アミノ酸塩、アンモニウム塩又はテトラメチルアンモニウム塩、テトラエチルアモニウム塩、ベンジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジルトリエチルアンモニウム塩、ベンジルトリブチルアンモニウム塩、メチルトリオクチルアンモニウム塩若しくはテトラブチルアンモニウム塩のような第４級アンモニウム塩が挙げられる。
【００３４】
酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩若しくは過塩素酸塩のような無機酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマール酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩若しくはアスコルビン酸塩のような有機酸塩、メタンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩若しくはｐ−トルエンスルホン酸塩のようなスルホン酸塩又はアスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩のような酸性アミノ酸等が挙げられる。
【００３５】
なお、本明細書において、前記本発明の合成糖脂質の塩は、本発明の合成糖脂質のプロドラッグも包含するものとする。ここでいう「本発明の合成糖脂質のプロドラッグ」とは、生理学的条件下で容易に化学変化を受け、その結果としてＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の増殖又はＧＭ−ＣＳＦ産生能を抑制する活性を提供し得る化合物である。例えば、投与前は、一般式（Ｉ）で示される本発明の合成糖脂質やその塩基性付加塩若しくは酸付加塩とは異なる化合物形態であるが、消化管内で消化酵素等の作用によって一般式（Ｉ）で示される本発明の合成糖脂質に変換される化合物をいう。
【００３６】
１−３．担体・溶媒
ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤は、有効成分である本発明の合成糖脂質又はその塩のみで構成することもできるが、それ以外に製薬上許容される公知慣用の担体及び／又は溶媒を包含してもよい。
【００３７】
「製薬上許容される担体」とは、ヒトをはじめとする動物に対して、副作用等の有害な影響がないか又は非常に小さいことから製剤技術分野においてその使用が認められる物質をいう。例えば、製剤技術分野において通常使用し得る非毒性の賦形剤、結合剤、崩壊剤、充填剤、乳化剤、流動添加調節剤等をいう。
【００３８】
賦形剤としては、例えば、糖（例えば、限定はしないが、グルコース、スクロース、ラクトース、ラフィノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、デキストリン、マルトデキストリン、デンプン及びセルロースを含む）、金属塩（例えば、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム）、クエン酸、酒石酸、グリシン、低、中、高分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プルロニック、カオリン、ケイ酸、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【００３９】
結合剤としては、例えば、デンプン糊、シロップ、グルコース液、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セラック及び／又はポリビニルピロリドン等が挙げられる。
【００４０】
崩壊剤としては、例えば、デンプンや、乳糖、カルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アガー、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、アルギン酸若しくはアルギン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド又はそれらの塩が挙げられる。
【００４１】
充填剤としては、例えば、前記糖及び／又はリン酸カルシウム（例えば、リン酸三カルシウム、若しくはリン酸水素カルシウム）が挙げられる。
【００４２】
乳化剤としては、例えば、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステルが挙げられる。
【００４３】
流動添加調節剤及び滑沢剤としては、例えば、ケイ酸塩、タルク、ステアリン酸塩又はポリエチレングリコールが挙げられる。
【００４４】
本発明の薬学的に許容可能な担体は、上記の他、必要に応じて、等張化剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、可溶化剤、懸濁剤、希釈剤、界面活性剤、安定剤、吸収促進剤（例えば、第４級アンモニウム塩類、ラウリル硫酸ナトリウム）、増量剤、ｐＨ調整剤、保湿剤（例えば、グリセリン、デンプン）、吸着剤（例えば、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸）、崩壊抑制剤（例えば、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油）、コーティング剤、着色剤、保存剤、抗酸化剤、香料、風味剤、甘味剤、緩衝剤、無痛化剤等を含むこともできる。
【００４５】
「製薬上許容される溶媒」とは、ヒトをはじめとする動物に対して、副作用等の有害な影響がないか又は非常に小さいことから製剤技術分野においてその使用が認められ得る溶媒をいう。例えば、製剤技術分野において通常使用し得る非毒性の溶媒であって、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等が挙げられる。これらは、血液と等張に調整されていることが好ましい。
【００４６】
上記担体や溶媒は、主として前記製剤化や投与を容易にし、また剤形及び薬剤効果を維持するために用いられるものであり、必要に応じて適宜使用すればよい。
【００４７】
本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤は、有効成分である本発明の合成糖脂質又はその塩が薬理効果すなわちＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御活性を失わない範囲において、同一及び／又は異なる薬理効果を有する一以上の薬剤を含有することもできる。例えば、本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の増殖抑制又はＧＭ−ＣＳＦの産生能抑制の場合であれば、必要に応じて胃粘膜保護剤を所定量含有することができる。
【００４８】
１−４．製造方法
１−４−１．有効成分である本発明の合成糖脂質の製造方法
本発明の合成糖脂質であるαガラクトシルセラミドの誘導体は、当該分野で公知の種々の方法で製造することができる。例えば、特許第４０６４３４６号に記載の方法に従って製造すればよい。
【００４９】
１−４−２．ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の製造方法
本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤は、本発明の合成糖脂質又はその塩を利用して、当該分野で公知の方法を用いてＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の増殖に起因する疾患の改善、治療を目的とする製剤を調製することができる。製剤化には、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （Ｍｅｒｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．）に記載の方法を用いればよい。
【００５０】
ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の剤形は、その投与方法、及び／又は処方条件に応じて適宜選択される。投与方法については、経口投与及び非経口投与に大別することができる。
【００５１】
経口投与に適した剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、ドロップ剤、舌下剤、トローチ剤、液剤等を挙げることができる。
【００５２】
錠剤は、必要に応じ、当該分野で公知の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶錠、フィルムコーティング錠、二重錠又は多層錠とすることができる。例えば、カプセル剤であれば、粉末化した有効成分を乳糖、澱粉又はその誘導体、セルロース誘導体等の賦形剤と混合してゼラチンカプセルに詰めて調製すればよい。また、錠剤であれば、上記賦形剤の他にカルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸、アラビアゴム等の結合剤と水を加えて混練し、必要により顆粒とした後、さらにタルク、ステアリン酸等の潤滑剤を添加して通常の圧縮打錠機を用いて調製すればよい。経口投与の場合、前記各剤形の形状、大きさについては、いずれも当該分野で公知の範囲内にあればよく、特に限定はしない。
【００５３】
非経口剤に適した剤形としては、例えば、液剤（懸濁剤を含む）、乳剤（クリーム剤）、ゲル剤、軟膏剤（ペースト剤を含む）、硬膏剤、粉剤、又は座剤等が挙げられる。これらは、全身投与、局所投与又は経直腸的投与のように、その投与方法に適した剤形にすることができる。全身投与に適した剤形には、例えば、注射剤としての液剤が挙げられる。注射の場合、有効成分を溶解補助剤と共に滅菌蒸留水又は滅菌生理食塩水に溶解し、アンプルに封入して注射製剤とする。必要により安定化剤、緩衝物質を含有させても良い。局所投与に適した剤形には、例えば、点眼剤又は点鼻剤等としての液剤、乳剤、点鼻剤等としての粉剤、ペースト剤、ゲル剤、軟膏剤、硬膏剤等を挙げることができる。経直腸的投与に適した剤形には、例えば、坐剤を挙げることができる。
【００５４】
一投与単位のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤中には、有効量の有効成分が含有されていることが好ましい。本明細書で使用する場合、「有効量」とは、有効成分がその機能を発揮する上で必要な量、すなわち、本発明では本発明の合成糖脂質又はその塩がＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の増殖又はＧＭ−ＣＳＦの産生能を抑制する上で必要な量であって、かつ投与する被験体に対して有害な副作用をほとんど又は全く付与しない量をいう。この有効量は、被験体の情報、剤型及び投与経路等の様々な条件によって変化し得る。「被験体の情報」とは、疾患の進行度若しくは重症度、全身の健康状態、年齢、体重、性別、食生活、薬剤感受性、併用医薬の有無及び治療に対する耐性等をいう。ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤における有効量の具体例として、ヒト成人男子（体重６０ｋｇ）に対して、本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤を経口によって投与する場合、投与単位あたり０．０１重量％〜１００重量％、好ましくは０．１重量％〜１００重量％の有効成分を含んでいればよい。また、本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤を注射液によって投与する場合、注射液一投与単位あたり０．０１％（ｗ／ｖ）〜２０％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．１％（ｗ／ｖ）〜１０％（ｗ／ｖ）の有効成分を含んでいればよい。錠剤、丸剤又はカプセル剤のような剤型の場合、ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の有効量は、剤数によって調整する分割投与が可能であるため、必ずしも１錠中に有効量を含有する必要はない。
【００５５】
１−５．投与方法
本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の投与対象となる生体は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。
【００５６】
本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の具体的な投与形態には、前述のように経口投与、又は非経口投与がある。非経口投与は、さらに全身投与と局所投与（例えば、皮下投与、経皮投与、経粘膜投与、又は経直腸的投与等）に分けられる。本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の投与方法は、疾患の発症箇所又は進行度等に応じて適宜選択することが可能であり、全身投与又は局所的投与のいずれであってもよい。好ましくは侵襲性の低い経口投与である。また、有効成分を血流等の循環系を介して迅速に行き渡らせる場合には、血管内注射を介した全身投与が、好適である。対象疾患が局部的であれば、局所注射により発症箇所及びその周辺に直接投与する局所的投与も採用できる。注射による医薬組成物の注入部位は特に限定しない。例えば、血管内若しくは心室内のような循環系内や、肝臓内、筋肉内、関節内、骨髄内、髄腔内、経皮、皮下、皮内、腹腔内、鼻腔内、腸内、舌下等の器官若しくは組織内が挙げられる。
【００５７】
具体的な投与量の一例として、例えば、ヒト成人男子（体重６０ｋｇ）に投与する場合、一日当たりのＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の投与量は、通常、０．００１ｍｇ〜５０００ｍｇ／日／人、好ましくは０．０１ｍｇ〜５００ｍｇ／日／人、さらに好ましくは０．０１ｍｇ〜５０ｍｇ／日／人である。後述の実施例に示す通り、有効成分である本発明の合成糖脂質は、低用量でも十分な薬理効果を得ることができる。しかし、ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の大量投与が必要な場合には、患者に対する負担軽減のために数回に分割して投与してもよい。
【００５８】
１−５−２．低用量投与
本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤は、ヒトに対して、モデル動物（マウス、ラット、カニクイザル）における試験結果から予測される投与量よりもはるかに少ない投与量で作用効果を奏する。したがって、一実施態様として、本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤は、ヒトに対して、１回あたり０．０１ｍｇ以上５０ｍｇ以下の本発明の合成糖脂質（すなわち、一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物）又はその塩が投与されるように用いられてもよい。ここで、投与量として示した「０．０１ｍｇ以上５０ｍｇ以下」は、ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤中の有効成分（すなわち一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩）の量を意味する。当該投与量は、例えば、０．０５ｍｇ以上３０ｍｇであってもよく、０．１ｍｇ以上３０ｍｇ以下であってもよく、０．１５ｍｇ以上２５ｍｇ以下であってもよく、０．１５ｍｇ以上１０ｍｇ以下であってもよく、０．２ｍｇ以上３ｍｇ以下であってもよく、０．２ｍｇ以上１ｍｇ以下であってもよく、０．２ｍｇ以上０．５ｍｇ未満であってもよく、０．２ｍｇ以上０．４ｍｇ以下であってもよい。本実施態様における投与方法としては、上記効果を顕著に奏することから、経口投与であることが好ましい。
【００５９】
他の実施態様として、本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤は、ヒトに対して、１回あたり０．１μｇ／ｋｇ−体重以上１０２０μｇ／ｋｇ−体重以下の本発明の合成糖脂質（すなわち、一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物）又はその塩が投与されるように用いられてもよい。当該投与量は、０．７μｇ／ｋｇ−体重以上６１５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、１．４μｇ／ｋｇ−体重以上６１５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、２μｇ／ｋｇ−体重以上５１５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、２．１μｇ／ｋｇ−体重以上２０５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、２．８μｇ／ｋｇ−体重以上６５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、２．８μｇ／ｋｇ−体重以上２５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、２．８μｇ／ｋｇ−体重以上１５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、４μｇ／ｋｇ−体重以上１０μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよい。ここで、例えば「４μｇ／ｋｇ−体重」とは、体重１ｋｇあたり有効成分が４μｇであることを意味する。本実施態様における投与方法としては、上記効果を顕著に奏することから、経口投与であることが好ましい。
【００６０】
上記各実施態様に係る発明は、一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を１回あたり０．０１ｍｇ〜５０ｍｇの量で、それを必要とするヒト対象に投与するステップを含む、ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の制御方法とみることもできる。投与量は、２μｇ／ｋｇ−体重以上１０２０μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよい。投与方法は、経口投与であることが好ましい。
【００６１】
上記各実施態様において、投与間隔は目的に応じて適宜設定することができる。投与間隔としては、例えば、１日１回投与してもよく、２日に１回投与してもよく、３日に１回投与してもよく、７日（１週間）に１回投与してもよい。経口投与する場合の投与間隔も同様である。
【００６２】
１−６．薬理効果
本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤は、有効成分であるαガラクトシルセラミドの誘導体又はその塩の薬理効果によりＧＭ−ＣＳＦを産生する活性化Ｔ細胞の増殖を抑制し、またＧＭ−ＣＳＦ産生能を抑制することができる。
【００６３】
本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の有効成分であるαガラクトシルセラミドの誘導体又はその塩によるＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御効果及びＧＭ−ＣＳＦ濃度の低減効果は、一過的であり、投与後は時間の経過と共にその効果が徐々に弱まる。したがって、投与量や投与期間を調節することで、その薬理効果を制御することができる。
【００６４】
本発明のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤は、その薬理効果を利用して、生体内におけるＧＭ−ＣＳＦ濃度の増加に起因する疾患、例えば、慢性臓器炎や関節リウマチ等の慢性炎症性疾患の治療に利用することができる。
【００６５】
２．ＧＭ−ＣＳＦ低下剤
２−１．概要及び定義
本発明の第２の態様は、ＧＭ−ＣＳＦ低下剤に関する。
本明細書において「ＧＭ−ＣＳＦ低下剤」とは、生体内におけるＧＭ−ＣＳＦ濃度を低減させる作用を有する薬剤をいう。本発明のＧＭ−ＣＳＦ低下剤は、本発明の合成糖脂質又はその塩を有効成分として含有する。
【００６６】
２−２．有効成分及び担体・溶媒
前述のように、本発明のＧＭ−ＣＳＦ低下剤は、第１態様のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤と同じ本発明の合成糖脂質又はその塩を有効成分として含有する。つまり、本態様のＧＭ−ＣＳＦ低下剤は、第１態様のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤と同じ組成を有する。これは、本態様のＧＭ−ＣＳＦ低下剤がＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤としても機能し、また第１態様のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤が本態様のＧＭ−ＣＳＦ低下剤としても機能し得ることを意味する。
【００６７】
したがって、本態様の有効成分及び担体・溶媒は、第１態様に記載の有効成分及び担体・溶媒と同じでよいことから、ここではその説明を省略する。
【００６８】
２−３．製造方法
２−３−１．有効成分の製造方法
本発明の有効井成分である合成糖脂質（αガラクトシルセラミドの誘導体）は、当該分野で公知の種々の方法で製造することができる。例えば、上述した特許第４０６４３４６号に記載の方法に従って製造すればよい。
【００６９】
２−３−２．ＧＭ−ＣＳＦ低下剤の製造方法
上述のように、本態様の有効成分である本発明の合成糖脂質及び担体・溶媒は、第１態様に記載の有効成分及び担体・溶媒と同じでよいことから、ＧＭ−ＣＳＦ低下剤の製造方法も第１態様に記載の「ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の製造方法」と同じでよい。したがって、ここではその具体的な説明を省略する。
【００７０】
２−４．投与方法
ＧＭ−ＣＳＦ低下剤の投与方法についても、原則として第１態様に記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の投与方法と同じでよい。したがって、ここではその具体的な説明を省略する。
【００７１】
２−４−２．低用量投与
ＧＭ−ＣＳＦ低下剤の低用量投与に関する態様は、原則として第１態様に記載のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤における態様と同じでよい。したがって、ここではその具体的な説明を省略する。
【００７２】
２−５．薬理効果
本発明のＧＭ−ＣＳＦ低下剤によれば、生体内におけるＧＭ−ＣＳＦ濃度を低減することが可能となる。これは、第１態様のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の薬理効果と同じである。つまり、有効成分である本発明の合成糖脂質又はその塩は、ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞に作用してそのＧＭ−ＣＳＦ産生能を抑制する。それによって、生体内におけるＧＭ−ＣＳＦ産生量が減少し、結果的に生体内のＧＭ−ＣＳＦ濃度を低減することができる。したがって、本発明のＧＭ−ＣＳＦ低下剤によるＧＭ−ＣＳＦ濃度の低減は、ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の二次的効果と解することができる。
【００７３】
３．Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤
３−１．概要
本発明の第３の態様は、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤に関する。
本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を有効成分として含有する。一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩は、ＩＦＮ−γ産生の誘導を回避し、ＩＬ−４産生を選択的に誘導する。これにより、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスをＴｈ２が増加する方向に調節することができる。本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、このような作用を介して、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスがＴｈ１に偏向した疾患又はＴｈ１細胞が病態を悪化させる疾患に対する予防効果、抑制効果又は治療効果が得られる。同様に、本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、このような作用を介して、自己免疫疾患に対する予防効果、抑制効果又は治療効果が得られる。
【００７４】
したがって、本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスがＴｈ１に偏向した疾患又はＴｈ１細胞が病態を悪化させる疾患の治療剤又は予防剤としても用いることができる。また、本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、自己免疫疾患の治療剤又は予防剤としても用いることができる。更に本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、選択的ＩＬ−４産生誘導剤としても用いることができる。
【００７５】
Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスがＴｈ１に偏向した疾患とは、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、ぶどう膜炎、シェーグレン症候群等の自己免疫疾患に加え、劇症肝炎、移植片拒絶、細胞内感染病原体による感染症等の主として細胞性免疫による疾患を意味する。自己免疫疾患とは、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、クローン病、尋常性白斑、ベーチェット病、膠原病、Ｉ型糖尿病、ぶどう膜炎、シェーグレン症候群、自己免疫性心筋炎、自己免疫性肝疾患、自己免疫性胃炎、天疱瘡、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ＨＴＬＶ−１関連脊髄症等の疾患を意味する。
【００７６】
３−２．有効成分及び担体・溶媒
前述のように、本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、第１態様のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤と同じ本発明の合成糖脂質又はその塩を有効成分として含有する。つまり、本態様のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、第１態様のＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤と同じ組成を有する。
【００７７】
したがって、本態様の有効成分及び担体・溶媒は、第１態様に記載の有効成分及び担体・溶媒と同じでよいことから、ここではその説明を省略する。
【００７８】
３−３．製造方法
３−３−１．有効成分の製造方法
本発明の有効成分である合成糖脂質（αガラクトシルセラミドの誘導体）は、当該分野で公知の種々の方法で製造することができる。例えば、上述した特許第４０６４３４６号に記載の方法に従って製造すればよい。
【００７９】
３−３−２．Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤の製造方法
上述のように、本態様の有効成分である本発明の合成糖脂質及び担体・溶媒は、第１態様に記載の有効成分及び担体・溶媒と同じでよいことから、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤の製造方法も第１態様に記載の「ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤の製造方法」と同じでよい。したがって、ここではその具体的な説明を省略する。
【００８０】
３−４．投与方法（低用量投与）
本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤の投与対象となる生体は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。
【００８１】
本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤の具体的な投与形態には、前述のように経口投与、又は非経口投与がある。非経口投与は、さらに全身投与と局所投与（例えば、皮下投与、経皮投与、経粘膜投与、又は経直腸的投与等）に分けられる。本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤の投与方法は、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスの調節が必要な箇所、自己免疫疾患等の発症箇所又は進行度等に応じて適宜選択することが可能であり、全身投与又は局所的投与のいずれであってもよい。好ましくは侵襲性の低い経口投与である。また、有効成分を血流等の循環系を介して迅速に行き渡らせる場合には、血管内注射を介した全身投与が、好適である。対象疾患等が局部的であれば、局所注射により発症箇所及びその周辺に直接投与する局所的投与も採用できる。注射による医薬組成物の注入部位は特に限定しない。例えば、血管内若しくは心室内のような循環系内や、肝臓内、筋肉内、関節内、骨髄内、髄腔内、経皮、皮下、皮内、腹腔内、鼻腔内、腸内、舌下等の器官若しくは組織内が挙げられる。
【００８２】
本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、ヒトに対して、モデル動物（マウス、ラット、カニクイザル）における試験結果から予測される投与量よりもはるかに少ない投与量で作用効果を奏する。したがって、一実施態様として、本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、ヒトに対して、１回あたり０．０１ｍｇ以上５０ｍｇ以下の本発明の合成糖脂質（すなわち、一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物）又はその塩が投与されるように用いられてもよい。ここで、投与量として示した「０．０１ｍｇ以上５０ｍｇ以下」は、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤中の有効成分（すなわち一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩）の量を意味する。当該投与量は、例えば、０．０５ｍｇ以上３０ｍｇであってもよく、０．１ｍｇ以上３０ｍｇ以下であってもよく、０．１５ｍｇ以上２５ｍｇ以下であってもよく、０．１５ｍｇ以上１０ｍｇ以下であってもよく、０．２ｍｇ以上３ｍｇ以下であってもよく、０．２ｍｇ以上１ｍｇ以下であってもよく、０．２ｍｇ以上０．５ｍｇ未満であってもよく、０．２ｍｇ以上０．４ｍｇ以下であってもよい。本実施態様における投与方法としては、上記効果を顕著に奏することから、経口投与であることが好ましい。
【００８３】
他の実施態様として、本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、ヒトに対して、１回あたり０．１μｇ／ｋｇ−体重以上１０２０μｇ／ｋｇ−体重以下の本発明の合成糖脂質（すなわち、一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物）又はその塩が投与されるように用いられてもよい。当該投与量は、０．７μｇ／ｋｇ−体重以上６１５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、１．４μｇ／ｋｇ−体重以上６１５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、２μｇ／ｋｇ−体重以上５１５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、２．１μｇ／ｋｇ−体重以上２０５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、２．８μｇ／ｋｇ−体重以上６５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、２．８μｇ／ｋｇ−体重以上２５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、２．８μｇ／ｋｇ−体重以上１５μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよく、４μｇ／ｋｇ−体重以上１０μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよい。ここで、例えば「４μｇ／ｋｇ−体重」とは、体重１ｋｇあたり有効成分が４μｇであることを意味する。本実施態様における投与方法としては、上記効果を顕著に奏することから、経口投与であることが好ましい。
【００８４】
上記各実施態様に係る発明は、一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を１回あたり０．０１ｍｇ〜５０ｍｇの量で、それを必要とするヒト対象に投与するステップを含む、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスの調節方法とみることもできる。また、上記各実施態様に係る発明は、一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を１回あたり０．０１ｍｇ〜５０ｍｇの量で、それを必要とするヒト対象に投与するステップを含む、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスがＴｈ１に偏向した疾患又はＴｈ１細胞が病態を悪化させる疾患の治療方法、又は予防方法とみることもできる。更に上記各実施態様に係る発明は、一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を１回あたり０．０１ｍｇ〜５０ｍｇの量で、それを必要とするヒト対象に投与するステップを含む、自己免疫疾患の治療方法、又は予防方法とみることもできる。投与量は、２μｇ／ｋｇ−体重以上１０２０μｇ／ｋｇ−体重以下であってもよい。投与方法は、経口投与であることが好ましい。
【００８５】
上記各実施態様において、投与間隔は目的に応じて適宜設定することができる。投与間隔としては、例えば、１日１回投与してもよく、２日に１回投与してもよく、３日に１回投与してもよく、７日（１週間）に１回投与してもよい。
【００８６】
３−５．薬理効果
本発明のＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤は、ヒトに投与することにより、ＩＦＮ−γ産生の誘導を回避し、ＩＬ−４産生を選択的に誘導する。これにより、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスが、Ｔｈ２が増加する方向に変化し、Ｔｈ１細胞免疫応答の抑制が起こり、自己免疫疾患の治療効果又は予防効果、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスがＴｈ１に偏向した疾患又はＴｈ１細胞が病態を悪化させる疾患の治療効果又は予防効果を発揮する。
【実施例】
【００８７】
＜実施例１：本発明の合成糖脂質によるＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の抑制＞
（目的）
本発明の合成糖脂質の投与によるＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の抑制効果を検証した。
【００８８】
（方法）
（１）健常被験者への本発明の合成糖脂質の投与
【表１】
2018009011.tif 000008
【００８９】
上記表１に示すインフォームドコンセントを得た各３名の健常者からなる４つのコホート（Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤコホート）の被験者に本発明の合成糖脂質の一つである第１態様に記載の化合物３１、すなわち以下の式（ＩＩＩ）で示される、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトシル）−２−（Ｎ−テトラコサノイルアミノ）−１，３，４−ノナントリオールを経口で単回投与した。
【化７】
2018009011.tif 000009
【００９０】
投与量は、Ａコホートが一人当たり０．３ｍｇ、Ｂコホートが一人当たり１ｍｇ、Ｃコホートが一人当たり３ｍｇ、及びＤコホートが一人当たり１０ｍｇとした。
【００９１】
（２）末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の調製
続いて、密度勾配遠心法を用いて各被験者の末梢血からＴ細胞亜分画を調製した。まず、１０  ｍＬヘパリンナトリウム含有真空採血管２本を用いて、化合物３１投与して２４時間後（１日目）、４８時間後（２日目）、７２時間後（３日目）及び１６８時間後（７日目）に、各被験者の静脈より計２０ｍＬの血液を採取した。なお、化合物３１投与前の対照用として、投与１日前にも各被験者の静脈より同様に２０ｍＬの血液を採取しておいた。
【００９２】
次に、１５ｍＬコニカルチューブ４本のそれぞれにＦｉｃｏｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス）を４ｍＬ入れ、その上に、Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）で２倍に希釈した血液を１０ｍＬずつ静かに重層した。その後、常温で、１８００ｒｐｍ、３０分間遠心し、密度勾配遠心を行った。遠心後、血漿や血小板を含む上清を廃棄し、上清層とＦｉｃｏｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ層の境界層に存在するリンパ球を新しい５０ｍＬコニカルチューブに回収した。そこにＰＢＳを加え、５０ｍＬコニカルチューブを満たした後、常温にて１８００ｒｐｍで５分間遠心した。上清を吸引除去し、ＰＢＳを加え、ピペッティングした後、径４０μｍのＢＤファルコン  セルストレイナー（ＢＤ）を通しながら新しい１５ｍＬコニカルチューブに移した後、１５００ｒｐｍで５分間遠心した。上清を再び吸引除去した後、ＡＩＭ−Ｖ培養液（ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を１ｍＬ加えて単細胞浮遊液を調製した後、血球計算盤にて細胞数を計測した。ＢＤファルコン９６ｗｅｌｌ  ｆｌａｔ  ｂｏｔｔｏｍプレート（ＢＤ）の４ウェルに５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞を含む前記単細胞浮遊液を蒔いた。各ウェルにＰＭＡ（シグマ）、イオノマイシン（シグマ）、及びモネンシン（シグマ）を、最終濃度がそれぞれ５０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、及び２μＭとなるように加えて細胞を刺激した。続いて、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで４時間培養した後、４ウェル分の細胞をそれぞれ一本のＢＤ製フローサイトメトリーチューブに回収した。常温で１５００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を吸引除去し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を回収した。
【００９３】
（３）抗体染色及びフローサイトメトリー
回収したＰＢＭＣを以下の方法で抗体染色した。まず、２×１０６ｃｅｌｌｓのＰＢＭＣに０．５％ＢＳＡ／２ｍＭ  ＥＤＴＡ−２Ｎａ含有ＰＢＳ８μＬ，ＡＰＣ−Ｃｙ７−抗ＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）０．５μＬ，ＥＣＤ−抗ＣＤ８抗体（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）０．５μＬ，ＰＢ−抗ＣＤ４５ＲＡ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）１μＬからなる溶液１０μＬを加え、ボルテックスにより十分に混合した後、氷上に１０分間置いた。なお、ＣＤ３はＴ細胞の検出マーカーであり、ＣＤ３＋細胞は、Ｔ細胞であることを示す。またＣＤ４５ＲＡはナイーブＴ細胞の検出マーカーであり、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞はナイーブＴ細胞であることを、またＣＤ４５ＲＡ−細胞はメモリーＴ細胞であることを示す。さらに、ＣＤ８−細胞は、ＣＤ４＋細胞であることを示す。０．５％ＢＳＡ／２ｍＭ  ＥＤＴＡ−２Ｎａ含有ＰＢＳを１ｍＬ加えて、１５００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を吸引除去した。次に、ＢＤ  ＦＩＸバッファー（ＢＤ）１００μＬを１滴ずつボルテックスしながら加えた後、氷上に２０分間置いた。再び、ＭＡＣＳ  ｂｕｆｆｅｒを１ｍＬ加えて、１５００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を吸引除去した。続いて、０．１％サポニンを１ｍＬ加えて、室温遮光下に２分間置いた。
【００９４】
続いて、２５０μＬ（Ｉ群）と７５０μＬ（ＩＩ群）に分注して、２２００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を吸引除去した。
【００９５】
Ｉ群には、０．１％サポニン７μＬ，ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５−抗ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ１抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）１μＬ，Ａｌｅｘａ４８８−抗ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ１抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）１μＬ，ＡＰＣ−抗ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ１抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）１μＬ，ＰＥ−抗ｒａｔ  ＩｇＧ１抗体（ＢＤ）１μＬからなる溶液１１μＬを加え、ボルテックスにより十分に混合した後、氷上に１０分間置いた。０．１％サポニンを１ｍＬ加えて、２２００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を吸引除去した。ＭＡＣＳ  ｂｕｆｆｅｒを３００μＬ加えた後、２２００ｒｐｍで、５分間遠心を行った。０．５％ＢＳＡ／２ｍＭ  ＥＤＴＡ−２Ｎａ含有ＰＢＳ  ３５０μＬを加え、ＢＤファルコン  セルストレイナー（ＢＤ）を通した。得られた細胞を「対照用リンパ球細胞」とした。
【００９６】
ＩＩ群には、０．１％サポニン７μＬ，ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５−抗ＩＦＮ−γ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ），Ａｌｅｘａ４８８−抗ＩＬ−１７抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）３μＬ，ＡＰＣ−抗ＩＬ−４抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）１μＬからなる溶液１２μＬを加え、ボルテックスにより十分に混合した後、氷上に１０分間置いた。０．１％サポニンを２０μＬ加えて総量３２μＬとした後、１０μＬを取り出して、ＰＥ−抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）５μＬを加えて１５μＬとした後、ボルテックスにより十分に混合した後、氷上に１０分間置いた。０．１％サポニンを１ｍＬ加えて、２２００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を吸引除去した。続いて０．５％ＢＳＡ／２ｍＭ  ＥＤＴＡ−２Ｎａ含有ＰＢＳを３００μＬ加えた後、２２００ｒｐｍで、５分間遠心を行い、０．５％ＢＳＡ／２μＭ  ＥＤＴＡ・２Ｎａ含有ＰＢＳ  ３５０μＬを加え、ＢＤファルコン  セルストレイナー（ＢＤ）を通した。得られた細胞を「リンパ球細胞」とした。
【００９７】
抗体染色した各リンパ球細胞の蛍光標識に基づいて、ＦＡＣＳ  ＡｒｉａＩＩ（ＢＤ）により各細胞を分離、同定した。図１にＦＡＣＳで得られたサイトグラムを示す。各抗体の蛍光強度に基づいてＡ〜Ｄのサイトグラムを４つの区画（１〜４）に分画している。Ａ２区画はＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞区画であり、Ａ４区画はＣＤ３＋ＣＤ８−細胞区画である。
【００９８】
Ａ２区画内のＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞をＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５−抗ＩＦＮ−γ抗体及びＰＥ−抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体の蛍光に基づいてＦＡＣＳで再分画したサイトグラムがＣであり、Ｃ２／Ｃ４区画の細胞が目的のＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ８陽性Ｔ細胞分画となる。
【００９９】
一方、Ａ４区画内のＣＤ３＋ＣＤ８−細胞をＡＰＣ−Ｃｙ７−抗ＣＤ３抗体及びＰＢ−抗ＣＤ４５ＲＡ抗体の蛍光に基づいてＦＡＣＳで再分画したサイトグラムがＢであり、ＣＤ３＋ＣＤ８−ＣＤ４５ＲＡ−のＢ４区画がＣＤ４陽性メモリーＴ細胞分画となる。この分画をさらにＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５−抗ＩＦＮ−γ抗体及びＰＥ−抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体の蛍光に基づいてＦＡＣＳで再分画したサイトグラムがＤであり、Ｄ２／Ｄ４区画の細胞が目的のＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞分画となる。
【０１００】
ＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞分画及びＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ８陽性Ｔ細胞分画のそれぞれに含まれる細胞について、測定したＰＢＭＣにおける存在比率（％）を算出した。
【０１０１】
（結果）
図２にＰＢＭＣ中のＧＭ−ＣＳＦ産生  ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞の存在比率の結果を、また図３にＰＢＭＣ中のＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在比率の結果を示す。
【０１０２】
図２及び３におけるＡ〜Ｄは、各コホートを構成する３名の被験者のＰＢＭＣ中のＣＤ４陽性メモリーＴ細胞率の平均値（図２）及びＣＤ８陽性Ｔ細胞率の平均値（図３）を示す。
【０１０３】
図２では、いずれのコホートも化合物３１投与前値（ｄａｙ−１）と比較して、化合物３１投与後はＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞率は減少しており、化合物３１の投与によりＣＤ４陽性メモリーＴ細胞の増殖が抑制、又はそのＧＭ−ＣＳＦ産生能を抑制されていることが示された。また、Ａコホートの結果から、化合物３１は低用量でもＣＤ４陽性メモリーＴ細胞の抑制効果が高いことが明らかとなった。
【０１０４】
化合物３１の投与量が多い（Ｃ及びＤコホート）場合には、化合物３１投与１日後にはＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞の増殖が促進されたが、その効果は一過的でいずれも翌日には強く抑制されることも判明した。
【０１０５】
化合物３１を単回投与した場合には、いずれのコホートも化合物３１投与後４８時間（Ｄａｙ２）〜７２時間（Ｄａｙ３）で抑制効果がピークとなり、その後はＣＤ４陽性メモリーＴ細胞が徐々に回復過程に入ることも明らかとなった。これは、化合物３１のＣＤ４陽性メモリーＴ細胞の抑制効果が数日は持続するが、永続的ではないことを示唆しており、化合物３１の効果を投与量や投与期間によって、ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞の抑制を制御できることを示唆している。
【０１０６】
一方、図３でも基本的な傾向は、図２と同様であった。すなわち、いずれのコホートも化合物３１投与前値（ｄａｙ−１）と比較して、化合物３１投与後はＣＤ８陽性Ｔ細胞率が減少した。また、化合物３１の投与量が多い場合には、化合物３１投与１日後にはＣＤ８陽性Ｔ細胞の増殖が、投与１日後に一過的に促進された（Ｃコホート）。さらに、化合物３１を単回投与した場合には、Ｂ〜Ｄコホートでは化合物３１投与後４８時間（Ｄａｙ２）〜７２時間（Ｄａｙ３）で抑制効果がピークとなり、徐々に回復過程に入ることも明らかとなった。ただし、投与量の最も少ないＡコホートでは、投与７日後にも抑制効果が強まっていた。
【０１０７】
＜実施例２：マウスＴ細胞ＧＭ−ＣＳＦ産生に対する化合物３１の影響＞
（目的）
実施例１の健常被験者で見られた結果がマウスでも再現できることを検証した。なお、マウスでは末梢血を解析することが困難なため、リンパ節細胞のＧＭ−ＣＳＦ産生能として、化合物３１を投与したマウスのリンパ節細胞培養上清におけるＧＭ−ＣＳＦ量を解析した。
【０１０８】
（方法）
（１）マウスへの本発明の合成糖脂質の投与
８週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウス（メス）に、ゾンデを用いて化合物３１を経口投与した。投与量は、マウス飲料水２００μＬに化合物３１  １５μｇ／ｋｇ（低用量）、又は化合物３１  １ｍｇ／ｋｇ（高用量）を溶解したものを用いた。コントロールとして、マウス飲料水２００μＬのみを投与した。
【０１０９】
（２）リンパ節細胞の調製
化合物３１を経口投与した２日後、及び７日後にマウスを頸椎脱臼により安楽死させ、腋窩、及び鼠径リンパ節を採取した。採取したリンパ節を、径４０μｍのＢＤファルコン  セルストレイナー（ＢＤ）上で破砕し、ＰＢＳを加えて５０ｍＬコニカルチューブに回収し、１５００ｒｐｍで５分間遠心した後、上清を吸引除去した。
【０１１０】
回収した細胞に１０００μＬの１０％  ＦＢＳ（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ；ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）含有ＲＰＭＩ培養液（ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を加えて懸濁し、単細胞浮遊液とした後、血球計算盤にて細胞数を計測した。
【０１１１】
（３）抗体刺激及び培養上清中のＧＭ−ＣＳＦの検出
投与後のマウスからリンパ節採取する前日に、抗ＣＤ３モノクローナル抗体（自作）及び、抗ＣＤ２８抗体（ＢＤ）をＰＢＳで１μｇ／ｍＬに調整し、ＢＤファルコン９６ｗｅｌｌ  ｆｌａｔ  ｂｏｔｔｏｍプレート（ＢＤ）の各ウェルに５０μＬずつ入れて、４℃で保存し、プレートを抗ＣＤ３／ＣＤ２８抗体でコーティングした。調製した単細胞浮遊液を５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで、前記プレートに蒔いた後、５％ＣＯ２インキュベーターで３７℃にて４８時間培養して抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体による刺激を行った。
【０１１２】
上清を回収し、ＥＬＩＳＡキット（ＯｐｔＥＩＡ  Ｍｏｕｓｅ  ＧＭ−ＣＳＦ  ＥＬＩＳＡ  ｓｅｔ；ＢＤ）を用いて、添付文書に従い、培養上清中に含まれるＧＭ−ＣＳの濃度を測定した。
【０１１３】
（結果）
図４に結果を示す。化合物３１の低用量投与（１５μｇ／ｋｇ）では、リンパ節Ｔ細胞からのＧＭ−ＣＳＦ産生が有意に抑制されることが判明した。一方、高用量群（１ｍｇ／ｋｇ）では化合物３１の投与後２日目には抑制効果は見られなかったが、投与後７日目には観察された。このように化合物３１の効果が生じ始める時期が投与量によって異なるものの、最終的にはリンパ節Ｔ細胞からのＧＭ−ＣＳＦ産生が有意に抑制されることが示された。これは、ヒトの末梢血を用いた実施例１及び２の結果と同様の傾向がマウスでも再現できたことを示唆している。また、化合物３１投与によりリンパ節Ｔ細胞の培養上清中のＧＭ−ＣＳＦ量が減じたことから、生体内におけるＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の抑制は、生体内のＧＭ−ＣＳＦ濃度を低減する効果をもたらすことが立証された。
【０１１４】
＜実施例３：ＭＳ患者におけるＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の抑制＞
（目的）
多発性硬化症を発症した患者（ＭＳ患者）における本発明の合成糖脂質の投与によるＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞の抑制効果を検証した。
【０１１５】
（方法）
（１）ＭＳ患者への本発明の合成糖脂質の投与
【表２】
2018009011.tif 000010
【０１１６】
上記表２に示すインフォームドコンセントを得た２名のＭＳ患者（被験者）に本発明の合成糖脂質の一つである第１態様に記載の化合物３１を経口で単回投与した。なお、投与量は、一人当たり０．３ｍｇとした。
【０１１７】
（２）末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の調製
続いて、密度勾配遠心法を用いて各被験者の末梢血からＴ細胞亜分画を調製した。まず、１０ｍＬヘパリンナトリウム含有真空採血管２本を用いて、化合物３１投与して２４時間後（１日目）、４８時間後（２日目）、７２時間後（３日目）、１６８時間後（７日目）及び１９２時間後（８日目）に、各被験者の静脈より計２０ｍＬずつの血液を採取した。なお、化合物３１投与前の対照用として、投与１日前にも各被験者の静脈より同様に２０ｍＬの血液を採取しておいた。
【０１１８】
以下、実施例１と同様の操作により、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を回収した。
【０１１９】
（３）抗体染色及びフローサイトメトリー
回収したＰＢＭＣを以下の方法で抗体染色した。まず、２×１０６ｃｅｌｌｓのＰＢＭＣに０．５％ＢＳＡ／２ｍＭ  ＥＤＴＡ−２Ｎａ含有ＰＢＳ８μＬ，ＡＰＣ−Ｃｙ７−抗ＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）０．５μＬ，ＥＣＤ−抗ＣＤ８抗体（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）０．５μＬ，ＰＢ−抗ＣＤ４５ＲＡ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）１μＬからなる溶液１０μＬを加え、ボルテックスにより十分に混合した後、氷上に１０分間置いた。なお、ＣＤ３はＴ細胞の検出マーカーであり、ＣＤ３＋細胞は、Ｔ細胞であることを示す。またＣＤ４５ＲＡはナイーブＴ細胞の検出マーカーであり、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞はナイーブＴ細胞であることを、またＣＤ４５ＲＡ−細胞はメモリーＴ細胞であることを示す。さらに、ＣＤ８−細胞は、ＣＤ４＋細胞であることを示す。０．５％ＢＳＡ／２ｍＭ  ＥＤＴＡ−２Ｎａ含有ＰＢＳを１ｍＬ加えて、１５００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を吸引除去した。次に、ＢＤ  ＦＩＸバッファー（ＢＤ）１００μＬを１滴ずつボルテックスしながら加えた後、氷上に２０分間置いた。再び、ＭＡＣＳ  ｂｕｆｆｅｒを１ｍＬ加えて、１５００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を吸引除去した。続いて、０．１％サポニンを１ｍＬ加えて、室温遮光下に２分間置いた。
【０１２０】
続いて、２５０μＬ（Ｉ群）と７５０μＬ（ＩＩ群）に分注して、２２００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を吸引除去した。
【０１２１】
Ｉ群には、０．１％サポニン７μＬ，ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５−抗ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ１抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）１μＬ，Ａｌｅｘａ４８８−抗ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ１抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）１μＬ，ＡＰＣ−抗ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ１抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）１μＬ，ＰＥ−抗ｒａｔ  ＩｇＧ１抗体（ＢＤ）１μＬからなる溶液１１μＬを加え、ボルテックスにより十分に混合した後、氷上に１０分間置いた。０．１％サポニンを１ｍＬ加えて、２２００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を吸引除去した。ＭＡＣＳ  ｂｕｆｆｅｒを３００μＬ加えた後、２２００ｒｐｍで、５分間遠心を行った。０．５％ＢＳＡ／２ｍＭ  ＥＤＴＡ−２Ｎａ含有ＰＢＳ  ３５０μＬを加え、ＢＤファルコン  セルストレイナー（ＢＤ）を通した。得られた細胞を「対照用リンパ球細胞」とした。
【０１２２】
ＩＩ群には、０．１％サポニン７μＬ，ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５−抗ＩＦＮ−γ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ），Ａｌｅｘａ４８８−抗ＩＬ−１７抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）３μＬ，ＡＰＣ−抗ＩＬ−４抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）１μＬからなる溶液１２μＬを加え、ボルテックスにより十分に混合した後、氷上に１０分間置いた。０．１％サポニンを２０μＬ加えて総量３２μＬとした後、１０μＬを取り出して、ＰＥ−抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）５μＬを加えて１５μＬとした後、ボルテックスにより十分に混合した後、氷上に１０分間置いた。０．１％サポニンを１ｍＬ加えて、２２００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を吸引除去した。続いて０．５％ＢＳＡ／２ｍＭ  ＥＤＴＡ−２Ｎａ含有ＰＢＳを３００μＬ加えた後、２２００ｒｐｍで、５分間遠心を行い、０．５％ＢＳＡ／２μＭ  ＥＤＴＡ・２Ｎａ含有ＰＢＳ  ３５０μＬを加え、ＢＤファルコン  セルストレイナー（ＢＤ）を通した。得られた細胞を「リンパ球細胞」とした。
【０１２３】
抗体染色した各リンパ球細胞の蛍光標識に基づいて、ＦＡＣＳ  ＡｒｉａＩＩ（ＢＤ）により各細胞を分離、同定した。図１にＦＡＣＳで得られたサイトグラムを示す。各抗体の蛍光強度に基づいてＡ〜Ｄのサイトグラムを４つの区画（１〜４）に分画している。Ａ２区画はＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞区画であり、Ａ４区画はＣＤ３＋ＣＤ８−細胞区画である。
【０１２４】
Ａ４区画内のＣＤ３＋ＣＤ８−細胞をＡＰＣ−Ｃｙ７−抗ＣＤ３抗体及びＰＢ−抗ＣＤ４５ＲＡ抗体の蛍光に基づいてＦＡＣＳで再分画したサイトグラムがＢであり、ＣＤ３＋ＣＤ８−ＣＤ４５ＲＡ−のＢ４区画がＣＤ４陽性メモリーＴ細胞分画となる。この分画をさらにＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５−抗ＩＦＮ−γ抗体及びＰＥ−抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体の蛍光に基づいてＦＡＣＳで再分画したサイトグラムがＤであり、Ｄ２／Ｄ４区画の細胞が目的のＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞分画となる。
【０１２５】
ＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞分画及びＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ８陽性Ｔ細胞分画のそれぞれに含まれる細胞について、測定したＰＢＭＣにおける存在比率（％）を算出した。
【０１２６】
（結果）
表３及び図５にＰＢＭＣ中のＧＭ−ＣＳＦ産生  ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞の存在比率の結果を示す。図５では、化合物３１投与前値（ｄａｙ−１）と比較して、化合物３１投与後はＧＭ−ＣＳＦ産生ＣＤ４陽性メモリーＴ細胞率が減少しており、化合物３１の投与により、ＭＳ患者においてもＣＤ４陽性メモリーＴ細胞の増殖が抑制、又はそのＧＭ−ＣＳＦ産生能を抑制されていることが示された。
【表３】
2018009011.tif 000011
【０１２７】
＜実施例４：ＭＳ患者におけるＴ細胞の活性制御＞
（目的）
多発性硬化症を発症した患者（ＭＳ患者）における本発明の合成糖脂質の投与によるＴ細胞の活性制御効果を検証した。
【０１２８】
（方法）
（１）ソーティング及び染色
回収したＰＢＭＣを以下の方法で抗体染色した。まず、６×１０６ｃｅｌｌｓのＰＢＭＣにＭＡＣＳ  ｂｕｆｆｅｒ  ２０μＬ，ＡＰＣ−Ｃｙ７−抗ＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）０．２５μＬ，ＰＢ−抗ＣＤ４抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）１μＬ，ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５−抗ＣＤ４５ＲＡ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）１μＬ，ＰＣ７−抗ＣＤ５６抗体（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）１μＬからなる溶液１０μＬを加え、ボルテックスにより十分に混合した後、氷上に２０分間置いた。なお、ＣＤ５６はＮＫ活性を持つ細胞の検出マーカーであり、ＣＤ３−ＣＤ５６−細胞は抗原提示細胞（ＡＰＣ）であることを示す。ＭＡＣＳ  ｂｕｆｆｅｒを１ｍＬ加えて、１５００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を吸引除去した。沈殿をＭＡＣＳ  ｂｕｆｆｅｒ  ５００μＬに再懸濁させた後、ろ過して、フローサイトメトリー分析に供した。
ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−を示す細胞区画に含まれる細胞、及びＣＤ３−ＣＤ５６−の細胞区画に含まれる細胞それぞれをソーティングして回収した。なお、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−を示す細胞区画の細胞がＣＤ４陽性メモリーＴ細胞（ｍＣＤ４Ｔ）分画となる。同様に、ＣＤ３−ＣＤ５６−の細胞区画の細胞が抗原提示細胞（ＡＰＣ）分画となる。
【０１２９】
（２）細胞準備
上記ソーティングにより得られたｍＣＤ４Ｔ及びＡＰＣを、ＲＰＭＩ１６４０（ＧＩＢＣＯ）５００ｍＬ、グルタミン（２００ｍＭ，Ｗａｋｏ）５ｍＬ、Ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ（１０，０００Ｕ／ｍＬ，ＧＩＢＣＯ社）５ｍＬ、２−Ｍｅｒｃａｐｔｏ  ｅｔｈａｎｏｌ（ＧＩＢＣＯ）０．５ｍＬ、及び１０％（ｖ／ｖ）Ｃｅｌｌ  ｅｃｔ  ＦＥＴＡＬ  ＢＯＶＩＮＥ  ＳＥＲＵＭ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）５０ｍＬからなる培地に再懸濁し、細胞数を計数した。なお、ＡＰＣについては、放射線照射（３０Ｇｙ）による処理を行った。
【０１３０】
（３）培養
表４に示した培養条件Ａ又はＢに記載の割合となるように（２）で準備した細胞を及び各添加物を９６ｗｅｌｌ平底プレート（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，品番：ＢＤ３０７２）に添加し（各５０μＬ／ｗｅｌｌ）、５％ＣＯ２インキュベーターで３７℃にて６時間培養した。表４中、ＯＶＡとはオボアルブミンを意味し、ＭＢＰとはミエリン塩基性タンパクを意味する。
【表４】
2018009011.tif 000012
【０１３１】
（４）ＥＬＩＳＡ
培養後、培養上清を回収し、ＥＬＩＳＡ法によってＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−１７及びＧＭ−ＣＳＦを測定した。ＥＬＩＳＡ法に用いた抗体は、抗ＩＦＮ−γ抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，品番：５５５１４２，使用時の希釈倍率：２０倍）、抗ＩＬ−４抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，品番：５５５１９４，使用時の希釈倍率：４倍）、抗ＩＬ−１７抗体（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ，品番：ＤＹ３１７，使用時の希釈倍率：４倍）及び抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，品番：５５５１２６，使用時の希釈倍率：４倍）である。
【０１３２】
（結果）
表５及び図６〜９に結果を示す。図６〜９は、化合物３１投与１日前（ｄａｙ−１）と投与１９２時間後（ｄａｙ８）の時点における各種サイトカインの発現量を示すグラフである。図６〜９に示されるように、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−１７、ＧＭ−ＣＳＦの発現量が変化した。具体的には、化合物３１の投与により、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１７及びＧＭ−ＣＳＦの発現量が低下し、ＩＬ−４の発現量が増加した。すなわち、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスが変化し、Ｔｈ２優位な状態になったことが明らかとなった。また、培養条件Ａ（ＯＶＡ刺激）と培養条件Ｂ（ＭＢＰ刺激）との間に違いは見られなかったため、このサイトカイン発現の様相の変化は、ＭＢＰ特異的なもののみではなく、Ｔ細胞全体における変化であると考えられる。
【表５】
2018009011.tif 000013
【０１３３】
＜実施例５：化合物の体内動態における種差の影響＞
（目的）
マウス、ラット、サル及びヒトにおいて、化合物３１を経口投与した場合の体内動態の経時変化を比較した。
【０１３４】
（方法）
絶食条件下の雄性マウス、雄性ラット及び雄性カニクイザルに対して、１４Ｃで標識された化合物３１を所定の投与量で単回経口投与した後、一定時間経過後の血中濃度を測定し、最高血中濃度Ｃｍａｘ、最高血中濃度に達した時間Ｔｍａｘ、半減期ｔ１／２、曲線下面積ＡＵＣ０−∞、平均滞留時間ＭＲＴ０−∞、バイオアベイラビリティＢＡ等のパラメータを算出した。１４Ｃで標識していない化合物３１を用いたこと以外は同様にして、ヒト（健常被験者）の血中濃度を測定し、上記各パラメータを算出した。
【０１３５】
（結果）
結果を表６〜表９に示す。表６は、マウス（投与量５ｍｇ／ｋｇ）、ラット（投与量１０ｍｇ／ｋｇ）及びカニクイザル（投与量１０ｍｇ／ｋｇ）に単回経口投与したときの血中濃度の経時変化を示す。表７は、表６に示された血中濃度を基に算出されたパラメータを示す。表８は、ヒト（投与量０．３、１、３、１０、３０ｍｇ）に経口投与したときの血中濃度の経時変化を示す。表９は、表８に示された血中濃度を基に算出されたパラメータを示す。表中、「Ｎ．Ｄ．」は未検出を意味する。
【表６】
2018009011.tif 000014
【表７】
2018009011.tif 000015
【表８】
2018009011.tif 000016
【表９】
2018009011.tif 000017
【０１３６】
ここで、ヒトの体重を６０ｋｇと仮定して、投与量が同じになるように補正して、マウス、ラット及びカニクイザルとヒトとのＡＵＣ０−∞の値を比較した。以下の式により種差（倍）を計算した結果を、表１０に示す。表１０に示すように、化合物３１は、マウス、ラット及びカニクイザルと比較して、ヒトにおいて極めて低い投与量で高い血中濃度を示した。具体的には、ヒトのＡＵＣ０−∞は、マウスのＡＵＣ０−∞の２．７２〜８．９４倍、ラットのＡＵＣ０−∞の４．７７〜１５．７倍、カニクイザルのＡＵＣ０−∞の６．６９〜２２．０倍であった。
【数１】
2018009011.tif 000018
【表１０】
2018009011.tif 000019
【０１３７】
＜実施例６：ＭＳ患者における化合物の体内動態＞
（目的）
ＭＳ患者において、化合物３１を経口投与した場合の体内動態の経時変化を比較した。
【０１３８】
（方法）
実施例５と同様にして、インフォームドコンセントを得た２名のＭＳ患者（被験者）に１４Ｃで標識された化合物３１を経口単回投与し、所定の時間経過後に採血することにより、当該化合物の血中濃度を測定し、各パラメータを算出した。
【０１３９】
結果を表１１に示す。表中、「Ｎ．Ｃ．」は未計算を意味する。化合物３１のＭＳ患者における体内動態は、健常人における体内動態と比較すると、血中濃度が低かった。しかしながら、実施例３のデータと同様、実施例６においても、化合物３１の薬理効果が観察された。
【表１１】
2018009011.tif 000020
【図１】
2018009011.tif 000027
【図２】
2018009011.tif 000028
【図３】
2018009011.tif 000029
【図４】
2018009011.tif 000030
【図５】
2018009011.tif 000031
【図６】
2018009011.tif 000032
【図７】
2018009011.tif 000033
【図８】
2018009011.tif 000034
【図９】
2018009011.tif 000035
【手続補正書】
【提出日】平成29年9月15日(2017.9.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）で示される糖脂質化合物又はその塩を有効成分として含有し、
ヒトに対して、１回あたり０．０１ｍｇ以上３０ｍｇ以下の前記糖脂質化合物又はその塩が投与されるように用いられる、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、クローン病、尋常性白斑、ベーチェット病、膠原病、Ｉ型糖尿病、ぶどう膜炎、シェーグレン症候群、自己免疫性心筋炎、自己免疫性肝疾患、自己免疫性胃炎、天疱瘡、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ＨＴＬＶ−１関連脊髄症、劇症肝炎、移植片拒絶、又は、細胞内感染病原体による感染症の治療剤又は予防剤。
【化１】
2018009011.tif 000036
（式中、Ｒ１は式（ＩＩ）で示されるアルドピラノース残基を表し、Ｒ２は水素原子を表し、Ｒ３は−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−を表し、Ｒ４は水素原子を表し、ｘは１８〜２３であり、ｚが０であり、ｙが１〜３である。）
【化２】
2018009011.tif 000037
【請求項２】
ヒトに対して、１回あたり０．０１ｍｇ以上３０ｍｇ以下の前記糖脂質化合物又はその塩が経口投与されるように用いられる、請求項１に記載の治療剤又は予防剤。