(57)【要約】【課題】Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅならびにＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓおよびポリオウイルスのうちの１または複数に対する防御のための別の改善された混合ワクチンを提供すること【解決手段】本発明は、１または複数のＧＢＳコンジュゲートと、ａ）細胞性または無細胞の百日咳抗原、ｂ）破傷風トキソイド、ｃ）ジフテリアトキソイドおよびｄ）不活化ポリオウイルス抗原から選択される１または複数の抗原とを含む免疫原性組成物であって、各ＧＢＳコンジュゲートが、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＢ群連鎖球菌の莢膜糖である免疫原性組成物を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、混合ワクチン、すなわち、そのワクチンを投与することにより被験体を１より多い病原体に対して同時に免疫化することができるような、１より多い病原体由来の免疫原の混合物を含有するワクチンの分野にある。特に、本発明は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅの莢膜糖とキャリアタンパク質のコンジュゲートを含有する混合ワクチンに関する。
【背景技術】
【０００２】
単回用量の中に１より多い病原性生物体に由来する抗原を含有するワクチンは、「多価」または「混合」ワクチンとして公知である。ジフテリア、破傷風および百日咳に対する防御のための三価ワクチン（「ＤＴＰ」ワクチン）、または麻疹、流行性耳下腺炎および風疹に対する防御のための三価ワクチン（「ＭＭＲ」ワクチン）を含めた種々の混合ワクチンが、ＥＵおよび米国において、ヒトへの使用について認可されている。混合ワクチンにより、患者に、注射を受ける回数が減るという利点がもたらされ、これにより、コンプライアンスが上昇するという臨床的な利点が生じ得る（例えば、参考文献１の第２９章を参照されたい）。
【０００３】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌、ＧＢＳ）は、２５〜３０％の健康な女性の肛門性器管（ａｎｏｇｅｎｉｔａｌ  ｔｒａｃｔ）にコロニー形成する溶血性、被包性、グラム陽性の微生物である。ＧＢＳは、この細菌を保持する母親から生まれた乳児において新生児感染症を引き起こし、また、新生児敗血症および髄膜炎の主要な原因になっている。この病原体は、同様に、成人における疾患、特に基礎疾患を伴う疾患および高齢者における疾患の重要な原因としてもだんだん認識されてきている。
【０００４】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅに対するコンジュゲートワクチンは、参考文献２〜１０などの文書に記載されている。ＧＢＳ血清型Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＶのそれぞれに対するコンジュゲートワクチンは、ヒトにおいて安全かつ免疫原性であることが示されている［１１］。参考文献１２にも、種々のＧＢＳコンジュゲートを含有するワクチンが開示されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｐａｏｌｅｔｔｉら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（１９９０）２６５：１８２７８〜８３
【非特許文献２】Ｗｅｓｓｅｌｓら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ（１９９０）８６：１４２８〜３３
【非特許文献３】Ｐａｏｌｅｔｔｉら、Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ（１９９２）６０：４００９〜１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅならびにＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓおよびポリオウイルスのうちの１または複数に対する防御のための別の改善された混合ワクチンを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ＧＢＳコンジュゲートと、ａ）細胞性または無細胞の百日咳抗原、ｂ）破傷風トキソイド、ｃ）ジフテリアトキソイドおよびｄ）不活化ポリオウイルス抗原から選択される１または複数の抗原とを含む混合ワクチンの研究に基づく。本発明者らは、これらの混合ワクチンにより、対応する抗原に対する特異的な抗体価が、種々の抗原間の免疫学的干渉をほとんどまたは全く伴わずに惹起されることを見いだした。
【０００８】
したがって、本発明は、１または複数のＧＢＳコンジュゲートと、ａ）細胞性または無細胞の百日咳抗原、ｂ）破傷風トキソイド、ｃ）ジフテリアトキソイドおよびｄ）不活化ポリオウイルス抗原から選択される１または複数の抗原とを含む免疫原性組成物であって、各ＧＢＳコンジュゲートが、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＢ群連鎖球菌の莢膜糖である免疫原性組成物を提供する。
【０００９】
本発明は、患者における免疫応答を上昇させるための方法であって、本発明による免疫原性組成物を患者に投与するステップを含む方法も提供する。
【００１０】
本発明は、本発明による免疫原性組成物を調製するためのプロセスであって、１または複数のＧＢＳコンジュゲートを含む第１の成分と、ａ）細胞性または無細胞の百日咳抗原、ｂ）破傷風トキソイド、ｃ）ジフテリアトキソイドおよびｄ）不活化ポリオウイルス抗原から選択される１または複数の抗原を含む第２の成分とを混合するステップを含むプロセスも提供する。
【００１１】
本発明は、本発明の免疫原性組成物を調製するためのキットであって、１または複数のＧＢＳコンジュゲートを含む第１の成分と、ａ）細胞性または無細胞の百日咳抗原、ｂ）破傷風トキソイド、ｃ）ジフテリアトキソイドおよびｄ）不活化ポリオウイルス抗原から選択される１または複数の抗原を含む第２の成分とを含み、２つの成分が別々の容器に入っているキットも提供する。
【００１２】
ＧＢＳコンジュゲート
莢膜糖
本発明は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅの莢膜糖に基づく。莢膜糖は、ＧＢＳのペプチドグリカン骨格と共有結合で連結し、また、ペプチドグリカン骨格に結合した別の糖であるＢ群抗原とは異なる。
【００１３】
ＧＢＳ莢膜糖は化学的に関連するが、抗原性が全く異なる。すべてのＧＢＳ莢膜糖が以下の三糖コアを共有する：
β−Ｄ−ＧｌｃｐＮＡｃ（１→３）β−Ｄ−Ｇａｌｐ（１→４）β−Ｄ−Ｇｌｃｐ
種々のＧＢＳ血清型は、このコアの修飾のされ方が異なる。血清型ＩａとＩＩＩの差異は、例えば、このコアにおいて、連続した三糖コアを連結するためにＧｌｃＮＡｃ（Ｉａ）またはＧａｌ（ＩＩＩ）のいずれかが使用されることから生じる。血清型ＩａおよびＩｂはどちらも、コア内のＧｌｃＮＡｃに連結した［α−Ｄ−ＮｅｕｐＮＡｃ（２→３）β−Ｄ−Ｇａｌｐ−（１→］二糖を有するが、連結は１→４（Ｉａ）または１→３（Ｉｂ）のいずれかである。
【００１４】
ＧＢＳ関連疾患は、主に血清型Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、およびＶＩＩＩから生じ、その８５％超が５種の血清型：Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩＩおよびＶによって引き起こされる。本発明は、典型的には、これらの４種の血清型のうちの１または複数由来の糖、特に、血清型：Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩのうちの１または複数由来の糖を用いる。これらの４種の血清型のそれぞれの莢膜糖は、（ａ）すべての場合においてガラクトース残基に２→３で連結している末端のＮ−アセチル−ノイラミン酸（ＮｅｕＮＡｃ）残基（一般にシアル酸と呼ばれる）と、（ｂ）三糖コア内部のＮ−アセチル−グルコサミン残基（ＧｌｃＮＡｃ）とを含む。４種の糖のすべてが三糖コア内部のガラクトース残基を含むが、血清型Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩおよびＩＩＩは、各繰り返し単位内に追加的なガラクトース残基も含有する。
【００１５】
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１種のＧＢＳコンジュゲートを含む。例えば、ＧＢＳコンジュゲートは、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲートであってよい。ＧＢＳコンジュゲートは、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲートであってよい。ＧＢＳコンジュゲートは、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲートであってよい。ＧＢＳコンジュゲートは、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖であるコンジュゲートであってよい。ＧＢＳコンジュゲートは、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲートであってよい。
【００１６】
免疫原性組成物は、１より多いＧＢＳコンジュゲートを含んでよい。２種、３種、４種または５種のＧＢＳコンジュゲートを含む本発明の実施形態が下に記載されている。一実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖である。第２の実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖である。第３の実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。第４の実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖である。第５の実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。第６の実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。さらなる実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖である。さらなる実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖である。さらなる実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖である。さらなる実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。
【００１７】
通常、本発明の免疫原性組成物は、３種のＧＢＳコンジュゲートを含む。通常、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖である。代替の実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。さらなる実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。別の実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。さらなる実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートは、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖である。さらなる実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖である。別の実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖である。別の実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。別の実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。別の実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。
【００１８】
同様に、免疫原性組成物は、４種のＧＢＳコンジュゲートを含んでよい。一実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であり、第４のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。一実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であり、第４のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖である。一実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であり、第４のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。一実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であり、第４のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。一実施形態では、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であり、第４のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖である。
【００１９】
同様に、免疫原性組成物は、５種のＧＢＳコンジュゲートを含んでよい。例えば、第１のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であり、第２のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であり、第３のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であり、第４のＧＢＳコンジュゲートはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖であり、第５のＧＢＳコンジュゲートは、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖である。
【００２０】
典型的には、上記の免疫原性組成物は、具体的に記載されているもの以外の任意のＧＢＳコンジュゲート、特に、具体的に記載されているもの以外のＧＢＳ血清型由来の莢膜糖を含むＧＢＳコンジュゲートは含まない。しかし、いくつかの実施形態では、組成物は、他のＧＢＳ血清型由来の莢膜糖を含むＧＢＳコンジュゲートを含めた他のＧＢＳコンジュゲートを含んでよい。例えば、組成物は、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＶＩ由来の莢膜糖であるＧＢＳコンジュゲートを含んでよい。別の可能性では、組成物は、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＶＩＩＩ由来の莢膜糖であるＧＢＳコンジュゲートを含んでよい。
【００２１】
本発明に有用な糖は、それらの天然の形態であってよく、または修飾されていてよい。例えば、糖は、天然の莢膜糖よりも短くてよく、または化学的に修飾されていてよい。特に、本発明において使用される血清型Ｖの莢膜糖は、参考文献１３および１４に記載の通り修飾されていてよい。例えば、参考文献１３および１４に記載の通り実質的に脱シアル化された血清型Ｖの莢膜糖が、本発明において用いるために具体的に想定される。脱シアル化されたＧＢＳ血清型Ｖの莢膜糖は、参考文献１３に記載の通り、精製されたＧＢＳ血清型Ｖの莢膜糖を弱酸性条件下で（例えば、０．１Ｍの硫酸、８０℃で６０分間）処理することによって、またはノイラミニダーゼで処理することによって調製することができる。脱シアル化されたＧＢＳ血清型Ｖの莢膜糖を調製するための好ましい方法は、精製された糖を１Ｍの酢酸を用いて、８１℃＋／−３℃で２時間処理することによる。したがって、本発明に従って使用される糖は、天然に見出されるような実質的に全長の莢膜多糖であってよく、または、天然の長さよりも短くてよい。全長の多糖は、本発明で用いるために、例えば、弱酸中での加水分解によって、加熱によって、サイズ選別クロマトグラフィー（ｓｉｚｉｎｇ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）などによって解重合させて、より短い断片を得ることができる。鎖長は、ウサギにおいてＧＢＳ糖の免疫原性に影響を及ぼすことが報告されている［５］。特に、本発明において使用される血清型ＩＩおよび／またはＩＩＩの莢膜糖は、参考文献１５および１６に記載の通り解重合させることができる。これらの文書には、ＩＩ型およびＩＩＩ型の莢膜糖を、穏やかな脱アミノ切断により部分的に解重合させて、還元末端の２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンノース残基を有する抗原断片にすることが記載されている。簡単に述べると、莢膜糖を０．５ＮのＮａＯＨに溶解させ、７０℃で約１〜４時間加熱する。このインキュベーションの長さによって解重合の程度を制御し、これは、標準の方法によって（例えば、参考文献１５に記載のＨＰＬＣによって）決定することができる。試料を氷水浴内で冷却した後、氷酢酸を加えてｐＨ４にする。次いで、部分的にＮ−脱アシル化された生成物を、５％（ｗｔ／ｖｏｌ）のＮａＮＯ２を４℃で２時間にわたって撹拌しながら加えることによって脱アミノ化する。新たに形成された２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンノース残基の遊離のアルデヒドは、参考文献［１２］に記載の通り、キャリアタンパク質とコンジュゲートするために用いることができる。
【００２２】
破傷風トキソイドキャリアとのコンジュゲートを形成するために、解重合した材料を用いることを含めた、エンド−β−ガラクトシダーゼによる血清型ＩＩＩの莢膜糖の解重合が報告されている［参考文献２＆５〜７］。ＧＢＳ血清型ＩＩＩおよびＶＩＩＩ由来の莢膜多糖のオゾン分解も解重合のために用いられている［１７］。ＭＷ＞３０ｋＤａの糖を用いることが好ましく、実質的に全長の莢膜多糖を用いることができる。血清型Ｉａについては、ＭＷが１５０〜４００ｋＤａ、特に、３００〜３５０ｋＤａの範囲である多糖を用いることが好ましい。典型的には、ＭＷが約３３０ｋＤａである血清型Ｉａの糖を用いる。血清型Ｉｂについては、ＭＷが１５０〜４００ｋＤａ、特に、２５０〜３００ｋＤａの範囲である多糖を用いることが好ましい。典型的には、ＭＷが約２８０ｋＤａである血清型Ｉｂの糖を用いる。血清型ＩＩＩについては、ＭＷが５０〜２００ｋＤａ、特に、１００〜１５０ｋＤａの範囲である多糖を用いることが好ましい。典型的には、ＭＷが約１４０ｋＤａである血清型ＩＩＩ糖を用いる。血清型Ｖについては、ＭＷが５０〜２００ｋＤａ、特に１５０〜２００ｋＤａの範囲である多糖を用いることも好ましい。典型的には、ＭＷが約１８０ｋＤａである血清型Ｖの糖を用いる。これらの分子質量は、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｓｅｒｖｉｃｅから入手可能なものなどのデキストラン標準物質と比較してゲル濾過によって測定することができる［１８］。
【００２３】
糖は、天然に見出される莢膜糖と比較して化学的に修飾することができる。例えば、糖は、脱Ｏ−アセチル化（部分的にまたは完全に）、脱Ｎ−アセチル化（部分的にまたは完全に）、Ｎ−プロピオン酸化（Ｎ−ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅｄ）（部分的にまたは完全に）などをされてよい。脱アセチル化は、コンジュゲートする前、その間、またはその後に起こり得るが、コンジュゲートする前に起こることが好ましい。特定の糖に応じて、脱アセチル化は免疫原性に影響を及ぼす場合と影響を及ぼさない場合がある。種々の血清型のＧＢＳ糖に対するＯ−アセチル化の関連性は参考文献１９において論じられており、いくつかの実施形態では、７位、８位および／または９位のシアル酸残基のＯ−アセチル化が、コンジュゲートする前、その間およびその後で、例えば、保護／脱保護によって、再アセチル化によってなどで保持される。しかし、典型的には、本発明において使用されるＧＢＳ糖は、７位、８位および／または９位のシアル酸残基のＯ−アセチル化を実質的に有さない。特に、ＧＢＳ糖が、参考文献［１２］に記載の通り塩基抽出によって精製された場合には、Ｏ−アセチル化は一般には失われる（参考文献１９）。脱アセチル化の作用などは、常套的なアッセイによって評価することができる。
【００２４】
莢膜糖は、本明細書の参考文献、例えば、参考文献３および２０などに記載の公知の技法によって精製することができる。典型的なプロセスは、塩基抽出、遠心分離、濾過、ＲＮアーゼ／ＤＮアーゼ処理、プロテアーゼ処理、濃縮、サイズ排除クロマトグラフィー、限外濾過、陰イオン交換クロマトグラフィー、およびさらなる限外濾過を伴う。ＧＢＳ細胞を、細菌の細胞壁を切断して細胞壁成分を遊離させる酵素であるムタノリシン（ｍｕｔａｎｏｌｙｓｉｎ）で処理することも有用である。
【００２５】
代替として、参考文献２１に記載の精製プロセスを用いることができる。このプロセスは、塩基抽出、エタノール／ＣａＣｌ２処理、ＣＴＡＢ沈殿、および再可溶化を伴う。別の代替のプロセスが参考文献２２に記載されている。
【００２６】
しかし、本発明は、天然の供給源から精製された糖に限定されず、糖は、完全な合成または部分的な合成などの他の方法によって得ることができる。
【００２７】
上記の免疫原性組成物は、単位用量あたり任意の適切な量の莢膜糖（複数可）を含んでよい。各用量の中で、個々の糖抗原の量は、一般に、０．１から５０μｇの間（糖の質量として測定する）、特に、１から５０μｇの間または０．５から２５μｇの間、より詳細には、２．５〜７．５μｇ、例えば、約１μｇ、約２．５μｇ、約５μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇまたは約２５μｇになる。各用量の中で、ＧＢＳ莢膜糖の総量は、一般に、≦７０μｇ（糖の質量として測定する）、例えば、≦６０μｇである。特に、総量は、≦４０μｇ（例えば、≦３０μｇ）または≦２０μｇ（例えば、≦１５μｇ）であってよい。これらの総量は、免疫原性組成物が、ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲートとを含む場合に特に有効である。潜在的な毒性を低下させるために、単位用量あたりの莢膜糖（複数可）の総量を最小限にすることが有利であり得る。したがって、本発明では、一般には、≦２０μｇ、例えば、≦１５μｇ、≦７．５μｇまたは≦１．５μｇの総量を使用する。
【００２８】
単位用量あたりの莢膜糖（複数可）の量をさらに最小化することが可能であり得る。特に、莢膜糖（複数可）の適量は、単位用量あたり０．１μｇ〜５μｇであり得る。したがって、典型的には、各ＧＢＳ莢膜糖は、単位用量あたり０．１μｇ〜５μｇ、例えば、０．５μｇ、２．５μｇまたは５μｇの量で存在してよい。例えば、各ＧＢＳ莢膜糖は、単位用量あたり０．５μｇ〜５μｇ、１μｇ〜４μｇ、２μｇ〜３μｇ、または約２．５μｇの量で存在してよい。これらの量は、免疫原性組成物が、ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲートとを含む場合に特に有効である。
【００２９】
免疫原性組成物が１より多いＧＢＳコンジュゲートを含む上記の実施形態では、所与の莢膜糖の質量と他の莢膜糖（複数可）の質量の比率は変動してよい。例えば、免疫原性組成物が、ＧＢＳ血清型Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩの莢膜糖を含む場合、ＧＢＳ血清型Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩの莢膜糖の質量の比率は１：１：１である。
【００３０】
コンジュゲーション
本発明は、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＶ由来の莢膜糖であるＧＢＳコンジュゲートを用いる。本明細書で使用される場合、「コンジュゲート」という用語は、２つの部分が共有結合して単一の構造を形成することによって形成される化合物を指し、第１の部分は抗原、特に多糖であり、第２の部分はキャリアタンパク質などの免疫原性キャリアである。結合は、分子間の共有結合性の化学結合によって、またはジアミノアルカンおよび１または複数のアミノ酸を非排他的に含み、そのうちの１つがキャリアにコンジュゲートさせるための遊離のスルフヒドリル基、カルボキシル基、アミノ基もしくは他の基をもたらす連結基を使用することによって生じさせることができる。本発明の目的に関して、一般に、「コンジュゲート」という用語は、キャリアタンパク質に共有結合で連結した細菌の抗原、特に細菌の糖または多糖を指す。一般に、糖とキャリアの共有結合性コンジュゲーションにより、Ｔ非依存性抗原からＴ依存性抗原に変換されるので、糖の免疫原性が増強され、したがって免疫記憶が刺激される。コンジュゲーションは、小児用ワクチンに特に有用であり［例えば、参考文献２３］、これは周知の技法である［例えば、参考文献２４〜３２に概説されている］。したがって、本発明のプロセスは、精製された糖をキャリア分子とコンジュゲートするさらなるステップを含み得る。
【００３１】
ＧＢＳ糖のコンジュゲーションは、広く報告されている。例えば、参考文献２〜１０３５６７を参照されたい。ＧＢＳ糖をコンジュゲートするための典型的な先行技術のプロセスは、典型的には、精製された糖の、破傷風トキソイド（ＴＴ）またはＣＲＭ１９７などのキャリアタンパク質との還元アミノ化を伴う［３］。還元アミノ化には、キャリアのアミノ酸の側鎖上のアミン基および糖のアルデヒド基が関与する。ＧＢＳ莢膜糖はそれらの天然の形態ではアルデヒド基を含まないので、典型的には、これを生じさせた後に、糖のシアル酸残基の一部（例えば、５％から４０％間、特に、１０％から３０％間、好ましくは約２０％）を酸化することに（例えば、過ヨウ素酸酸化）よってコンジュゲートする［３、３３］。ＧＢＳ血清型Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＶのそれぞれについて、このように調製されたコンジュゲートワクチンはヒトにおいて安全かつ免疫原性であることが示されている［１１］。典型的には、本発明の免疫原性組成物中のコンジュゲートのすべてがこのように調製されたものである。しかし、本発明において脱シアル化された血清型Ｖの莢膜糖を用いる場合には、この糖にアルデヒド基を生じさせた後に、糖のガラクトース残基の一部（例えば、５％から４０％間、特に、１０％から３０％間、好ましくは約２０％）を酸化すること（例えば、過ヨウ素酸酸化）によってコンジュゲートすることができる［２、３３］。代替のコンジュゲーションプロセスは、参考文献３４に記載の通り、糖の−ＮＨ２基（脱Ｎ−アセチル化によるものか、またはアミンの導入後のもの）を、二官能性リンカーと併せて用いることを伴う。いくつかの実施形態では、本発明の免疫原性組成物中のコンジュゲートのうちの１または複数はこのように調製されたものである。別の代替のプロセスが参考文献１５および１６に記載されている。このプロセスでは、穏やかな脱アミノ切断によるＩＩ型またはＩＩＩ型の莢膜糖の解重合に由来する、末端の２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンノース残基の遊離のアルデヒド基を還元アミノ化によるコンジュゲーションのために用いる。いくつかの実施形態では、本発明の免疫原性組成物中のコンジュゲートのうちの１または複数はこのように調製されたものである。コンジュゲートは、別々のプロセスによって調製し、組み合わせて単一の投薬製剤にすることができる。
【００３２】
キャリアタンパク質
本発明は、キャリアタンパク質の使用に関する。多糖はそれ自体で免疫原性であるが、多糖をキャリアタンパク質にコンジュゲートすることにより、免疫原性を改善または増強することができる。したがって、本明細書で使用される場合、「キャリア」という用語は、抗原（例えば、多糖など）にコンジュゲートさせ、動物に投与すると、その動物における免疫応答、特に防御免疫応答を誘導または増強し、抗原、例えば、上記の多糖に特異的に結合する抗体の産生を惹起する免疫原性物質を指す。有用なキャリアタンパク質としては、ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイドなどの、細菌の毒素または類毒素が挙げられる。毒素または類毒素の断片、例えば、破傷風トキソイドの断片Ｃも用いることができる［３５］。
【００３３】
ジフテリア毒素のＣＲＭ１９７変異体［３６〜３８］は、本発明において使用するための特に有用なキャリアである。ジフテリアは、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅによって引き起こされる、急性の、致死的である場合が多い細菌性疾患であり、疾患の臨床症状発現は、循環ジフテリア毒素が存在することに主に起因する。ジフテリアに対する能動免疫化プログラムは、一般に、ジフテリア毒素をホルムアルデヒドにより解毒することによって生成されたジフテリアトキソイドを含有する調製物に基づいている（以下を参照されたい）。交差反応性材料（ＣＲＭ１９７）は、遺伝的に解毒されたジフテリア毒素の調製物である。ＣＲＭ１９７は、ジフテリア毒素（ＤＴ）とは単一のアミノ酸のみが異なり、したがって、ＤＴと高度に交差反応性である（ＣＲＭ＝交差反応性材料）。ジフテリア毒素のこの変異体にはホルムアルデヒドを用いた解毒が必要なく、また、精製された抗原の均一な調製物を、例えば、カザミノ酸および酵母抽出物の培地で成長させたＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ  Ｃ７株（ベータ１９７）の培養物から容易に得ることができる。あるいは、ＣＲＭ１９７は、ＵＳ５，６１４，３８２に従って、組換えによって調製することができる。ＣＲＭ１９７は、いくつかの莢膜多糖抗原に対するキャリアタンパク質としてのヒトへの使用に関して認可されており、ホルムアルデヒド処理によって調製された従来のジフテリアトキソイドに対する潜在的な代替である。下記の通り、ＣＲＭ１９７のキャリアとしての使用は、このキャリアによってもＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅに対する抗体の産生が惹起され得るので、有利であり得る。
【００３４】
他の適切なキャリアタンパク質としては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの外膜タンパク質［３９］、合成ペプチド［４０、４１］、熱ショックタンパク質［４２、４３］、百日咳タンパク質［４４、４５］、サイトカイン［４６］、リンフォカイン［４６］、ホルモン［４６］、増殖因子［４６］、ヒト血清アルブミン（組換え型であることが好ましい）、種々の病原体由来抗原由来の複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質［４７］例えば、Ｎ１９［４８］、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のタンパク質Ｄ［４９、５０］、肺炎球菌の表面タンパク質ＰｓｐＡ［５１］、ニューモリシン［５２］、鉄取り込みタンパク質（ｉｒｏｎ−ｕｐｔａｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）［５３］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａまたは毒素Ｂ［５４］、組換え型のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの細胞外タンパク質（ｅｘｏｐｒｏｔｅｉｎ）Ａ（ｒＥＰＡ）［５５］、ＧＢＳタンパク質（特に、ＧＢＳ６７）［５６］などが挙げられる。
【００３５】
キャリアへの結合は、例えば、キャリアタンパク質のリジン残基の側鎖の−ＮＨ２基、またはアルギニン残基の側鎖の−ＮＨ２基、またはＮ末端の−ＮＨ２基を介することが好ましい。結合は、例えば、システイン残基の側鎖の−ＳＨ基を介してもよい。
【００３６】
例えば、キャリアが抑制される危険性を低下させるために、１より多いキャリアタンパク質を用いることが可能である。したがって、異なるＧＢＳ血清型に対して異なるキャリアタンパク質を用いることができ、例えば、血清型Ｉａの糖をＣＲＭ１９７とコンジュゲートすることができ、その一方で血清型Ｉｂの糖を破傷風トキソイドとコンジュゲートすることができる。特定の糖抗原に対して１より多いキャリアタンパク質を用いることも可能であり、例えば、血清型ＩＩＩの糖を２群にし、その一部をＣＲＭ１９７とコンジュゲートし、その他を破傷風トキソイドとコンジュゲートすることができる。しかし、典型的には、すべての糖に対して同じキャリアタンパク質を用いることが典型的である。
【００３７】
単一のキャリアタンパク質は、１より多い糖抗原を保有してよい［５７、５８］。例えば、単一のキャリアタンパク質を、血清型ＩａおよびＩｂ由来の糖とコンジュゲートすることができる。この目標を実現するために、コンジュゲーション反応の前に異なる糖を混合することができる。しかし、典型的には、各血清群に対してコンジュゲートを別々にし、コンジュゲートした後に異なる糖を混合することが好ましい。別々のコンジュゲートは、同じキャリアに基づいてよい。
【００３８】
典型的には、糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）が１：５（すなわちタンパク質過剰）から５：１（すなわち糖過剰）の間、特に、１：５から２：１の間の比率であるＧＢＳコンジュゲートを用いる。本発明においてキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるＧＢＳコンジュゲートを用いる場合には、糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）は、典型的には、約１：１から１：２の間、特に、約１：１．３である。同様に、本発明においてキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲートを用いる場合には、比率は、典型的には、約１：１から１：２の間、特に、約１：１．３である。本発明においてキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲートを用いる場合には、糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）は、典型的には、約３：１から１：１の間、特に、約２：１である。しかし、糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）が約１：１〜１：５、特に、約１：３．３である、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩも用いることができる。本発明でキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲートを使用する場合には、比率は、一般には、約２：１から１：１の間である。最後に、本発明においてキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖であるコンジュゲートを用いる場合には、比率は、典型的には、約２：１から１：１の間、特に、約１．１：１である。したがって、特に、長い糖鎖では、糖の重量過剰が典型的である。
【００３９】
組成物は、少量の遊離のキャリアを含んでよい［５９］。所与のキャリアタンパク質が本発明の組成物中に遊離の形態およびコンジュゲートさせた形態の両方で存在する場合、コンジュゲートしていない形態は、典型的には、全体として、組成物中のキャリアタンパク質の総量の５％以下であり、例えば、２重量％未満で存在する。
【００４０】
コンジュゲートした後、遊離の糖およびコンジュゲートさせた糖を分離することができる。疎水性クロマトグラフィー、タンジェンシャル限外濾過、ダイアフィルトレーションなどを含めた多くの適切な方法がある［参考文献６０＆６１なども参照されたい］。好ましい方法は参考文献６２に記載されている。
【００４１】
本発明の組成物が解重合したオリゴ糖を含む場合、解重合がコンジュゲーションに先行することが好ましい。
【００４２】
１または複数の抗原
「抗原」とは、抗体の産生および／またはＴ細胞応答を刺激することによって体内の免疫応答、特に防御免疫応答を刺激する化合物、組成物、または物質である。上記の細菌の多糖コンジュゲートは抗原であるが、本明細書で使用される場合には、一般に、「抗原」という用語は、ジフテリアトキソイド（複数可）、破傷風トキソイド（複数可）、百日咳トキソイド（複数可）、細胞性の百日咳抗原（複数可）、無細胞の百日咳抗原（複数可）および下記の不活化ポリオウイルス抗原を含めたポリオウイルス抗原（複数可）を指すために使用される。したがって、この用語は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅに対する防御を主にもたらすコンジュゲート成分（複数可）と、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓおよび／またはポリオウイルスに対する防御をもたらす成分（複数可）とを区別するために使用される。「１または複数の」という用語は、本明細書で使用される場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれより多くを指す。
【００４３】
ジフテリアトキソイド
ジフテリアは、胞子を形成しないグラム陽性好気性菌であるＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅによって引き起こされる。この生物体は、もはや毒性ではないが抗原性は残っており、注射後に特異的な抗毒素抗体の産生を刺激することができるトキソイドが生じるように処理する（例えばホルムアルデヒドを使用して）ことができる、プロファージにコードされるＡＤＰリボシル化外毒素（「ジフテリア毒素」）を発現する。ジフテリアトキソイドは、参考文献６３の第１３章においてより詳細に開示されている。好ましいジフテリアトキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって調製されたものである。ジフテリアトキソイドは、Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅを、ウシ抽出物を補充してもよい成長培地（例えばＦｅｎｔｏｎ培地、またはＬｉｎｇｇｏｕｄ＆Ｆｅｎｔｏｎ培地）で成長させ、その後、ホルムアルデヒド処理し、限外濾過し、沈殿させることによって得ることができる。次いで、トキソイド化した材料を滅菌濾過および／または透析を含むプロセスによって処理することができる。
【００４４】
ジフテリアトキソイドの量は、国際単位（ＩＵ）で表すことができる。例えば、ＮＩＢＳＣ［６４］により、アンプルあたり１６０ＩＵを含有する「Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ａｄｓｏｒｂｅｄ  Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  １９９９」［６５、６６］が供給されている。ＩＵ系に対する代替として、「Ｌｆ」単位（「凝結単位（ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｎｇ  ｕｎｉｔ）」、「限界凝結量（ｌｉｍｅｓ  ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｎｇ  ｄｏｓｅ）」、または「凝結の限界（ｌｉｍｉｔ  ｏｆ  ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ）」）は、１国際単位の抗毒素と混合した際に、最適に凝結した混合物が生じるトキソイドの量と定義される［６７］。例えば、ＮＩＢＳＣにより、アンプルあたり３００Ｌｆを含有する「Ｄｉｐｔｈｅｒｉａ  Ｔｏｘｏｉｄ、Ｐｌａｉｎ」［６８］、アンプルあたり９００Ｌｆを含有する「Ｔｈｅ  １ｓｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｆｏｒ  Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ｆｏｒ  Ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ」［６９］が供給されている。ＩＵ系とＬｆ系との間の変換は特定のトキソイド調製物に依存する。
【００４５】
Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅの培養にウシの材料を使用する場合、該材料は、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）を伴わない、または他の伝染性海綿状脳症（ＴＳＥ）を伴わない供給源から得るべきである。
【００４６】
本発明の免疫原性組成物中のジフテリアトキソイドは、一般には、投与した際に免疫応答を惹起することができる量で存在する。ジフテリアトキソイドにより、防御免疫応答を惹起することができることが理想的である。本発明の免疫原性組成物中のジフテリアトキソイドの量は、一般には、用量あたり１〜５０Ｌｆである。青年および成人用の追加刺激ワクチン（ｂｏｏｓｔｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅ）は、一般には、４Ｌｆ／ｍｌから８Ｌｆ／ｍｌの間、例えば、０．５ｍｌ用量あたり２．５Ｌｆ、好ましくは４Ｌｆのジフテリアトキソイドを含有する。小児用ワクチンは、一般には、２０から５０Ｌｆ／ｍｌの間、例えば、０．５ｍｌ用量あたり１０Ｌｆまたは２５Ｌｆのジフテリアトキソイドを含有する。
【００４７】
小児用混合ワクチンに関しては、ジフテリアトキソイドと破傷風トキソイドの比は、一般には、１を超え（すなわち、小児用ワクチンでは、通常、ジフテリアトキソイドが過剰である）、一般に、２：１から３：１の間（Ｌｆ単位で測定）、例えば、２．５：１である。対照的に、青年または成人（通常、ジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイドを含む小児用混合ワクチンを少なくとも１回受けている）に投与される追加刺激ワクチンに関しては、ジフテリアトキソイドと破傷風トキソイドの比は、一般には、１を超え（すなわち、追加刺激ワクチンでは、通常、破傷風トキソイドが過剰である）、一般に、１．５：１から２．５：１の間、例えば、２：１である。ジフテリアトキソイドは、一般には、コンジュゲートしていない。
【００４８】
「ジフテリア成分」、言い換えるとＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅに対する防御をもたらす免疫応答を惹起するために使用される免疫原性組成物の一部は、ＣＲＭ１９７、ジフテリアトキソイドまたはこれらの組み合わせの形態で提供され得ることが当業者には理解されよう。
【００４９】
一部の実施形態では、ＣＲＭ１９７がキャリアタンパク質として、すなわち、コンジュゲートの一部として存在する場合、本発明の組成物中のコンジュゲートしていない（「遊離の」）ジフテリアトキソイドの量を減少させることができる。他の実施形態では、ＣＲＭ１９７がキャリアタンパク質として、すなわち、コンジュゲートの一部として存在する場合、ジフテリアトキソイドは存在せず、本発明の組成物中に存在しなくてよいが、それでも免疫原性組成物により、Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａに対する防御をもたらす免疫応答を惹起することができ得る。したがって、免疫原性組成物がコンジュゲートしていないジフテリアトキソイドとコンジュゲートしたジフテリアトキソイドの両方および／またはＣＲＭ１９７を含む場合には、ジフテリアトキソイド／ＣＲＭ１９７の総量は、４Ｌｆ／ｍｌから８Ｌｆ／ｍｌの間の濃度で用量あたり１〜５０Ｌｆ、例えば、２０から５０Ｌｆ／ｍｌの間の濃度で０．５ｍｌ用量あたり２．５Ｌｆまたは０．５ｍｌ用量あたり４Ｌｆ、例えば、０．５ｍｌ用量あたり１０Ｌｆまたは０．５ｍｌ用量あたり２５Ｌｆと同等であってよい。ジフテリアトキソイドが存在しない特定の実施形態では、存在するＣＲＭ１９７の量は、４Ｌｆ／ｍｌから８Ｌｆ／ｍｌの間の濃度で用量あたり１〜５０Ｌｆ、例えば、２０から５０Ｌｆ／ｍｌの間の濃度で０．５ｍｌ用量あたり２．５Ｌｆまたは０．５ｍｌ用量あたり４Ｌｆ、例えば、０．５ｍｌ用量あたり１０Ｌｆまたは０．５ｍｌ用量あたり２５Ｌｆと同等であってよい。
【００５０】
ジフテリアトキソイドを水酸化アルミニウムアジュバントに吸着させることができる。
【００５１】
一般には、ジフテリアトキソイド抗原を含む免疫原性組成物は、いかなる水銀保存剤も実質的に含まない。
【００５２】
破傷風トキソイド
破傷風は、胞子を形成するグラム陽性桿菌であるＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉによって引き起こされる。この生物体は、もはや毒性ではないが抗原性は残っており、注射後に特異的な抗毒素抗体の産生を刺激することができるトキソイドを生じるように処理され得るエンドペプチダーゼ（「破傷風毒素」）を発現する。破傷風トキソイドは、参考文献１の第２７章においてより詳細に開示されている。好ましい破傷風トキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって調製されたものである。破傷風トキソイドは、Ｃ．ｔｅｔａｎｉを成長培地（例えばウシカゼインに由来するＬａｔｈａｍ培地）で成長させ、その後、ホルムアルデヒド処理し、限外濾過し、沈殿させることによって得ることができる。次いで、材料を、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスによって処理することができる。
【００５３】
破傷風トキソイドの量は、国際単位（ＩＵ）で表すことができる。例えば、ＮＩＢＳＣ［７０］により、アンプルあたり４６９ＩＵを含有する「Ｔｅｔａｎｕｓ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ａｄｓｏｒｂｅｄ  Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ２０００」［７１、７２］が供給されている。ＩＵ系に対する代替として、「Ｌｆ」単位が、１国際単位の抗毒素と混合した際に、最適に凝結した混合物が生じるトキソイドの量と定義される［７３］。例えば、ＮＩＢＳＣにより、アンプルあたり１０００ＬＦを含有する「Ｔｈｅ  １ｓｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｔｅｔａｎｕｓ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ｆｏｒ  Ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ」［７４］が供給されている。ＩＵ系とＬｆ系との間の変換は特定のトキソイド調製物に依存する。
【００５４】
Ｃ．ｔｅｔａｎｉの培養にウシの材料を使用する場合、該材料は、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）を伴わない、または他の伝染性海綿状脳症（ＴＳＥ）を伴わない供給源から得るべきである。
【００５５】
本発明の免疫原性組成物中の破傷風トキソイドは、一般には、投与した際に免疫応答を惹起することができる量で存在する。理想的には、破傷風トキソイドにより、防御免疫応答を惹起することができる。本発明の免疫原性組成物中の破傷風トキソイドの量は、一般には、用量あたり１〜２０Ｌｆである。青年および成人用の追加刺激ワクチンは、一般には、０．５ｍｌ用量あたり５Ｌｆの破傷風トキソイドを含有する。小児用ワクチンは、一般には、０．５ｍｌ用量あたり５から１０Ｌｆの間の破傷風トキソイドを含有する。
【００５６】
破傷風トキソイドは、一般には、コンジュゲートしていない。しかし、一部の実施形態では、破傷風トキソイドは、遊離の（コンジュゲートしていない）形態とコンジュゲートした形態の両方で存在し得るか、あるいは主にコンジュゲートした形態で存在してもよく、破傷風トキソイドの８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％超がコンジュゲートした形態で存在してもよいことが当業者には明らかであろう。したがって、本発明の免疫原性組成物中の破傷風トキソイドの量は、コンジュゲートしていない破傷風トキソイド単独、コンジュゲートした破傷風トキソイド単独またはコンジュゲートしていない破傷風トキソイドとコンジュゲートした破傷風トキソイドの合計を指す場合がある。特定の実施形態では、破傷風トキソイドはＧＢＳ莢膜糖にコンジュゲートしていない。特定の実施形態では、破傷風トキソイドは、ヘモフィルスｂ抗原にコンジュゲートしている。特定の実施形態では、破傷風トキソイドは、ＧＢＳ莢膜多糖コンジュゲートの一部として、および非ＧＢＳ抗原とのコンジュゲートの一部として存在してよい。明瞭にするために、一部の場合では、コンジュゲートした形態の破傷風トキソイドは「−ＴＴ」という名称を使用して言及され得る。
【００５７】
破傷風トキソイドを水酸化アルミニウムアジュバントに吸着させることができるが、これは必要であるとは限らない（例えば、使用することができる総破傷風トキソイドの０〜１０％を吸着させる）。
【００５８】
一般には、破傷風トキソイドを含む免疫原性組成物は、いかなる水銀保存剤も実質的に含まない。
【００５９】
百日咳トキソイド
Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓは、百日咳を引き起こす、胞子を形成しないグラム陰性好気性菌である。参考文献１の第２１章においてより詳細に記載されている通り、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓに対するワクチンは、長年利用可能であり、細胞性（ｗＰ）および無細胞（ａＰ）の２つのカテゴリーに入る。細胞性のワクチンは、死滅させ、非活性化した（例えば、ホルマリンおよび／または熱を用いて処理することによって）Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ細胞全体を含むが、無細胞のワクチンは、ネイティブな細菌から精製されたか、または組換え宿主において発現させた後に精製された特定の精製されたＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原を含む。
【００６０】
細胞性の百日咳抗原
本発明は、不活化したＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ細胞の形態の細胞性の百日咳抗原を使用することができる。細胞性の百日咳抗原の調製物は、文書で十分に裏付けられており（例えば、参考文献１の第２１章を参照されたい）、例えば、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓのＩ相培養物を熱により不活化することによって得ることができる。
【００６１】
ｗＰ抗原の量は、国際単位（ＩＵ）で表すことができる。例えば、ＮＩＢＳＣにより、アンプルあたり４６ＩＵを含有する「Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｆｏｒ  Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  Ｖａｃｃｉｎｅ」［７５］が供給されている。各アンプルは、８リットルのＭ／１５Ｓｏｒｅｎｓｅｎバッファ、ｐＨ７．０で希釈した細菌の懸濁物１０リットルを含有した水溶液の２．０ｍｌアリコートの凍結乾燥残留物を含有する（Ｕ．Ｓ．Ｏｐａｃｉｔｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄの観点から１８０不透明度単位と同等である）。ＩＵ系に対する代替として、「ＯＵ」単位（「不透明度単位」）も使用される（例えば、４ＯＵは約１ＩＵである）。
【００６２】
本発明の免疫原性組成物中の細胞性の百日咳抗原は、一般には、投与した際に免疫応答を惹起することができる量で存在する。理想的には、細胞性の百日咳抗原により、防御免疫応答を惹起することができる。本発明の免疫原性組成物中のｗＰ抗原の量は、一般には、少なくとも用量あたり４ＩＵである。
【００６３】
細胞性の百日咳抗原は、リン酸アルミニウムアジュバントに吸着させることもでき、それと混合することもできる。
【００６４】
無細胞の百日咳抗原
本発明では、単一のワクチン中に１より多い無細胞の百日咳（ａＰ）抗原、例えば、以下の周知であり、よく特徴付けられた  Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原のうちの２種または３種を使用することができる：（１）解毒された百日咳毒素（百日咳トキソイド、または「ＰＴ」）；（２）線維状赤血球凝集素（「ＦＨＡ」）；（３）パータクチン（「６９キロダルトンの外膜タンパク質」としても公知である）。最も好ましくは、これらの３種の抗原をすべて使用すべきである。これらの３種の抗原は、改変Ｓｔａｉｎｅｒ−Ｓｃｈｏｌｔｅ液体培地で成長させたＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓの培養物から単離することによって調製することが好ましい。ＰＴおよびＦＨＡは発酵ブロスから単離することができ（例えば、ヒドロキシアパタイトゲルに吸着させることによって）、一方パータクチンは細胞から加熱処理および凝結（例えば、塩化バリウムを使用する）によって抽出することができる。抗原は逐次的なクロマトグラフィーステップおよび／または沈殿ステップで精製することができる。ＰＴおよびＦＨＡは、疎水性クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーによって精製することができる。パータクチンは、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーによって精製することができる。
【００６５】
ＦＨＡおよびパータクチンは、本発明に従って使用する前にホルムアルデヒドを用いて処理することができる。ＰＴは、ホルムアルデヒドおよび／またはグルタルアルデヒドを用いて処理することによって解毒することが好ましい。この化学的な解毒手順に対する代替として、ＰＴは、変異誘発によって酵素活性を低下させた変異体ＰＴであってよいが［７６］、化学的処理によって解毒することが好ましい。
【００６６】
使用することができる別の無細胞の百日咳抗原としては線毛（例えば、凝集原２および３）が挙げられる。
【００６７】
ａＰ抗原（複数可）は、吸着していない状態で使用することができるが、使用する前に１または複数のアルミニウム塩アジュバント（複数可）に吸着させることが好ましい。ａＰ抗原は、水酸化アルミニウムアジュバントに吸着させることが好ましい。
【００６８】
一般には、ａＰ抗原を含む免疫原性組成物は、水銀保存剤（例えば、チメロサール）を実質的に含まない。
【００６９】
無細胞の百日咳抗原は、一般には、本発明の免疫原性組成物中に、投与した際に免疫応答を惹起することができる量で存在する。無細胞の百日咳抗原により、防御免疫応答を惹起することができることが理想的である。無細胞の百日咳抗原の量は、一般には、マイクログラムで表される。ワクチン中のＰＴの濃度は、通常、５から５０μｇ／ｍｌの間である。典型的なＰＴ濃度は、５μｇ／ｍｌ、１６μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌまたは５０μｇ／ｍｌである。ワクチン中のＦＨＡの濃度は、通常、１０から５０μｇ／ｍｌの間である。典型的なＦＨＡ濃度は、１０μｇ／ｍｌ、１６μｇ／ｍｌまたは５０μｇ／ｍｌである。ワクチン中のパータクチンの濃度は、通常、５から１６μｇ／ｍｌの間である。典型的なパータクチン濃度は、５μｇ／ｍｌ、６μｇ／ｍｌまたは１６μｇ／ｍｌである。例えば、青年および成人用の追加刺激ワクチンは、一般には、０．５ｍｌ用量あたり２．５〜８μｇのＰＴ、４から８μｇの間のＦＨＡおよび２．５から８μｇのパータクチンを含有する。一般には、追加刺激ワクチンは、０．５ｍｌ用量あたり４μｇのＰＴ、４μｇのＦＨＡおよび８μｇのパータクチン、より好ましくは５μｇのＰＴ、２．５μｇのＦＨＡおよび２．５μｇのパータクチンを含む。小児用ワクチンは、通常、０．５ｍｌ用量あたり７μｇのＰＴ、１０μｇのＦＨＡおよび１０μｇのパータクチンを含む。
【００７０】
水性成分がＰＴ、ＦＨＡおよびパータクチンのそれぞれを含む場合、それらの重量比は変動してよいが、例えば、約１６：１６：５、約５：１０：６、約２０：２０：３、約２５：２５：８、または約１０：５：３（ＰＴ：ＦＨＡ：ＰＲＮ）であってよい。
【００７１】
不活化ポリオウイルス抗原
灰白髄炎は、ポリオウイルスの３種の型のうちの１種によって引き起こされる可能性がある。この３種の型は類似しており、同一の症状を引き起こすが、これらの抗原性は全く異なり、１種の型に感染することにより他の型の感染に対する防御はもたらされない。したがって、参考文献１の第２４章において説明されている通り、ポリオウイルス１型（例えばＭａｈｏｎｅｙ株）、ポリオウイルス２型（例えばＭＥＦ−１株）、およびポリオウイルス３型（例えばＳａｕｋｅｔｔ株）の３種のポリオウイルス抗原を本発明の免疫原性組成物に使用することが好ましい。
【００７２】
本発明の免疫原性組成物は、不活化ポリオウイルス抗原を含んでよい。
【００７３】
ポリオウイルスは細胞培養物中で成長させることができる。好ましい培養物では、サル腎臓に由来する持続性細胞株であるＶｅｒｏ細胞株を使用する。Ｖｅｒｏ細胞は、マイクロキャリアで都合よく培養することができる。ウイルス感染の前およびその間のＶｅｒｏ細胞の培養は、仔ウシ血清などのウシ由来の材料の使用、およびラクトアルブミン加水分解産物（例えばラクトアルブミンの酵素による分解によって得られる）の使用を伴ってよい。そのようなウシ由来の材料は、ＢＳＥまたは他のＴＳＥを伴わない供給源から得るべきである。ポリオウイルスは動物由来の成分を含まない培地で培養した細胞で成長させることが好ましい。成長させた後、限外濾過、ダイアフィルタレーション、およびクロマトグラフィーなどの技法を使用してビリオンを精製することができる。患者に投与する前に、ポリオウイルスは不活化されていなければならず、これは、ウイルスを本発明の免疫原性組成物に使用する前にホルムアルデヒドを用いて処理することによって達成することができる。
【００７４】
３種のポリオウイルスを個別に成長させ、精製し、不活化させ、その後に組み合わせて本発明において使用するための混合物をもたらすことが好ましい。
【００７５】
混合ポリオウイルスはアルミニウムアジュバントに吸着させることができる。
【００７６】
一般には、ＩＰＶ抗原を含む免疫原性組成物は水銀保存剤（例えば、チメロサール）を実質的に含まない。
【００７７】
ＩＰＶ抗原の量は、一般には、「ＤＵ」単位（「Ｄ抗原単位」［７７］）で表される。本発明の免疫原性組成物中のＩＰＶ抗原は、一般には、投与した際に免疫応答を惹起することができる量で存在する。ＩＰＶ抗原により、防御免疫応答を惹起することができることが理想的である。
【００７８】
混合ワクチンは、通常、用量あたりポリオウイルス型あたり１〜１００ＤＵ、例えば、約４０ＤＵのポリオウイルス１型、約８ＤＵのポリオウイルス２型、および約３２ＤＵのポリオウイルス３型を含むが、これらよりも低い用量［７８、７９］、例えば、１型については１０〜２０ＤＵ、２型については２〜４ＤＵ、および３型については８〜２０ＤＵを使用することが可能である。本発明の混合ワクチンは、「低用量」のポリオウイルスを含むことが好ましい。ポリオウイルス１型に関しては、これは、組成物中のウイルスの濃度が≦２０ＤＵ／ｍｌ、例えば、＜１８ＤＵ／ｍｌ、＜１６ＤＵ／ｍｌ、＜１４ＤＵ／ｍｌ、＜１２ＤＵ／ｍｌ、＜１０ＤＵ／ｍｌなどであることを意味する。ポリオウイルス２型に関しては、これは、組成物中のウイルスの濃度が、≦４ＤＵ／ｍｌ、例えば、＜３ＤＵ／ｍｌ、＜２ＤＵ／ｍｌ、＜１ＤＵ／ｍｌ、＜０．５ＤＵ／ｍｌなどであることを意味する。ポリオウイルス３型に関しては、これは、組成物中のウイルスの濃度が≦１６ＤＵ／ｍｌ、例えば、＜１４ＤＵ／ｍｌ、＜１２ＤＵ／ｍｌ、＜１０ＤＵ／ｍｌ、＜８ＤＵ／ｍｌ、＜６ＤＵ／ｍｌなどであることを意味する。ポリオウイルス１型、２型および３型の３種すべてが存在する場合、３種の抗原は、それぞれ、５：１：４のＤＵ比で、または任意の他の適切な比、例えば、Ｓａｂｉｎ株を使用する場合には１５：３２：４５の比で存在してよい［８０］。低用量のＳａｂｉｎ株由来の抗原が特に有用であり、１型≦１０ＤＵ、２型≦２０ＤＵ、および３型≦３０ＤＵ（単位用量、一般には０．５ｍｌあたり）である。
【００７９】
ＩＰＶ成分を使用し、ポリオウイルスをＶｅｒｏ細胞で成長させる場合、ワクチン組成物は、１０ｎｇ／ｍｌ未満、好ましくは≦１ｎｇ／ｍｌ、例えば、≦５００ｐｇ／ｍｌまたは≦５０ｐｇ／ｍｌのＶｅｒｏ細胞ＤＮＡ、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ未満の≧５０塩基対長のＶｅｒｏ細胞ＤＮＡを含有することが好ましい。
【００８０】
本発明の特定の免疫原性組成物
特に想定される本発明の免疫原性組成物は、以下を含む：
−  （ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、および（ｉｖ）ジフテリアトキソイド。
【００８１】
−  （ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、および（ｉｖ）破傷風トキソイド。
【００８２】
−  （ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、および（ｉｖ）ジフテリアトキソイドおよび（ｖ）破傷風トキソイド。
【００８３】
−  （ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｖ）ジフテリアトキソイド、（ｖ）破傷風トキソイド、（ｖｉ）細胞性の百日咳抗原。
【００８４】
−  （ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｖ）ジフテリアトキソイド、（ｖ）破傷風トキソイド、（ｖｉ）無細胞の百日咳抗原。
【００８５】
−  （ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｖ）ジフテリアトキソイド、（ｖ）破傷風トキソイド、（ｖｉ）解毒された百日咳毒素、（ｖｉｉ）線維状赤血球凝集素、および（ｖｉｉｉ）パータクチン。
【００８６】
−  （ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｖ）ジフテリアトキソイド、（ｖ）破傷風トキソイド、（ｖｉ）無細胞の百日咳抗原および（ｖｉｉ）不活化ポリオウイルス抗原。
【００８７】
−  （ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｖ）ジフテリアトキソイド、（ｖ）破傷風トキソイド、（ｖｉ）解毒された百日咳毒素、（ｖｉｉ）線維状赤血球凝集素、（ｖｉｉｉ）パータクチンおよび（ｉｘ）不活化ポリオウイルス抗原。
【００８８】
−  （ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｖ）ジフテリアトキソイド、（ｖ）破傷風トキソイド、（ｖｉ）解毒された百日咳毒素、（ｖｉｉ）線維状赤血球凝集素、（ｖｉｉｉ）パータクチン、（ｉｘ）ポリオウイルス１型株由来の抗原、（ｘ）ポリオウイルス２型株由来の抗原および（ｘｉ）ポリオウイルス３型株由来の抗原。
【００８９】
−  （ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート、（ｉｖ）ジフテリアトキソイド、（ｖ）破傷風トキソイド、（ｖｉ）無細胞の百日咳抗原、（ｖｉｉ）ポリオウイルス１型株由来の抗原、（ｖｉｉｉ）ポリオウイルス２型株由来の抗原および（ｉｘ）ポリオウイルス３型株由来の抗原。
【００９０】
一般には、ＧＢＳ血清型Ｉａ莢膜糖由来の莢膜糖を含むＧＢＳコンジュゲート中のキャリアタンパク質、ＧＢＳ血清型Ｉｂ莢膜糖を含むＧＢＳコンジュゲート中のキャリアタンパク質およびＧＢＳ血清型ＩＩＩ莢膜糖を含むＧＢＳコンジュゲート中のキャリア部分はＣＲＭ１９７である。
【００９１】
本発明の別の例示的な免疫原性組成物は、以下を含む：
（ａ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｂ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｃ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；および（ｄ）ジフテリアトキソイド、特にジフテリア毒素をホルムアルデヒドで処理することによって調製されたジフテリアトキソイド、特にジフテリアトキソイドをＧＢＳ莢膜多糖にコンジュゲートさせていないジフテリアトキソイドを含む組成物。
【００９２】
（ａ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｂ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｃ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；および（ｄ）破傷風トキソイド、特にＧＢＳ莢膜多糖にコンジュゲートさせていない破傷風トキソイドを含む組成物。
【００９３】
（ａ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｂ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｃ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；（ｄ）ジフテリアトキソイド、特にジフテリア毒素をホルムアルデヒドで処理することによって調製されたジフテリアトキソイド、特にジフテリアトキソイドをＧＢＳ莢膜多糖にコンジュゲートさせていないジフテリアトキソイド、および（ｅ）破傷風トキソイド、特にＧＢＳ莢膜多糖にコンジュゲートさせていない破傷風トキソイドを含む組成物。
【００９４】
（ａ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｂ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｃ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；（ｄ）ジフテリアトキソイド、特にジフテリア毒素をホルムアルデヒドで処理することによって調製されたジフテリアトキソイド、特にジフテリアトキソイドをＧＢＳ莢膜多糖にコンジュゲートさせていないジフテリアトキソイド、（ｅ）破傷風トキソイド、特にＧＢＳ莢膜多糖にコンジュゲートさせていない破傷風トキソイド；および（ｆ）細胞性の百日咳抗原または無細胞の百日咳抗原を含む組成物。
【００９５】
（ａ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｂ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｃ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；（ｄ）ジフテリアトキソイド、特にジフテリア毒素をホルムアルデヒドで処理することによって調製されたジフテリアトキソイド、特にジフテリアトキソイドをＧＢＳ莢膜多糖にコンジュゲートさせていないジフテリアトキソイド；（ｅ）破傷風トキソイド、特にＧＢＳ莢膜多糖にコンジュゲートさせていない破傷風トキソイド；（ｆ）解毒された百日咳毒素；（ｇ）線維状赤血球凝集素；（ｈ）パータクチンおよび必要に応じて（ｉ）不活化ポリオウイルス抗原を含む組成物。
【００９６】
（ａ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｂ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｃ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｄ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；およびｅ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；（ｆ）ジフテリアトキソイド、特にジフテリア毒素をホルムアルデヒドで処理することによって調製されたジフテリアトキソイド、特にジフテリアトキソイドをＧＢＳ莢膜多糖にコンジュゲートさせていないジフテリアトキソイド、および／または（ｇ）破傷風トキソイド、特にＧＢＳ莢膜多糖にコンジュゲートさせていない破傷風トキソイド；必要に応じて（ｈ）細胞性の百日咳抗原または無細胞の百日咳抗原；必要に応じて（ｉ）解毒された百日咳毒素；必要に応じて（ｊ）線維状赤血球凝集素；必要に応じて（ｋ）パータクチンおよび必要に応じて（ｌ）不活化ポリオウイルス抗原を含む組成物。
【００９７】
（ａ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｂ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｃ）ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｄ）ＣＲＭ１９７または破傷風トキソイドにコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；およびｅ）ＣＲＭ１９７または破傷風トキソイドにコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；（ｆ）ジフテリアトキソイド、特にジフテリア毒素をホルムアルデヒドで処理することによって調製されたジフテリアトキソイド、特にジフテリアトキソイドをＧＢＳ莢膜多糖にコンジュゲートさせていないジフテリアトキソイド、および／または（ｇ）破傷風トキソイド、特にＧＢＳ莢膜多糖にコンジュゲートさせていない破傷風トキソイド；必要に応じて（ｈ）細胞性の百日咳抗原または無細胞の百日咳抗原；必要に応じて（ｉ）解毒された百日咳毒素；必要に応じて（ｊ）線維状赤血球凝集素；必要に応じて（ｋ）パータクチンおよび必要に応じて（ｌ）不活化ポリオウイルス抗原を含む組成物。
【００９８】
薬学的方法および使用
本発明の免疫原性組成物は、薬学的に許容されるキャリアをさらに含んでよい。典型的な「薬学的に許容されるキャリア」としては、それ自体は、組成物を受け取る個体に対して有害な、抗体の産生を誘導しない任意のキャリアが挙げられる。適切なキャリアは、典型的には、大きな、ゆっくりと代謝される高分子、例えば、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合体のアミノ酸、アミノ酸共重合体、スクロース［８１］、トレハロース［８２］、ラクトース、および脂質凝集物（例えば、油滴またはリポソーム）である。そのようなキャリアは当業者に周知である。ワクチンは、例えば、水、食塩水、グリセロールなどの希釈剤も含有してよい。さらに、補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝物質などが存在してよい。滅菌の、発熱物質を含まないリン酸緩衝生理食塩水が典型的なキャリアである。薬学的に許容される賦形剤の詳細な論述は、参考文献８３において入手可能である。
【００９９】
本発明の組成物は、水性形態（すなわち、溶液または懸濁物）または乾燥した形態（例えば、凍結乾燥したもの）であってよい。乾燥ワクチンを用いる場合には、注射する前に液体媒体中に再構成する。コンジュゲートワクチンの凍結乾燥は当技術分野で公知であり、例えば、Ｍｅｎｊｕｇａｔｅ（商標）製品が凍結乾燥した形態で提示される。本発明の免疫原性組成物が１より多いＧＢＳ血清型由来の莢膜糖を含むコンジュゲートを含む場合、コンジュゲートを別々に調製し、混合し、次いで凍結乾燥することが典型的である。このように、本明細書に記載のコンジュゲートを２種、３種または４種などを含む凍結乾燥した組成物を調製することができる。
【０１００】
凍結乾燥の間、コンジュゲートを安定化するために、例えば安定剤のような非活性成分を凍結乾燥の前に添加することができる。含めるために好ましい安定剤は、ラクトース、スクロースおよびマンニトール、ならびにそれらの混合物、例えば、ラクトース／スクロース混合物、スクロース／マンニトール混合物などである。したがって、凍結乾燥した材料を水により再構成することによって得られる最終的なワクチンは、ラクトースおよび／またはスクロースを含有する。凍結乾燥したワクチンを調製する際には非結晶性賦形剤および／または非結晶性バッファを使用することが好ましい［８４］。
【０１０１】
糖アルコール（例えば、マンニトール）および／または二糖（例えば、スクロースまたはトレハロース）を、例えば、１ｍｇ／ｍｌから３０ｍｇ／ｍｌの間（例えば、約２５ｍｇ／ｍｌ）で組成物に含めることが好ましい場合がある。スクロースの使用は、ＧＢＳコンジュゲートワクチンの安定剤として推奨されている（参考文献８５）。しかし、本発明の安定剤はマンニトールであることが典型的である。乾燥ワクチンを、注射する前に液体媒体中に再構成する場合、残留するマンニトールの濃度は、典型的には、約２〜２０ｍｇ／ｍｌ、例えば、３．７５ｍｇ／ｍｌ、７．５ｍｇ／ｍｌまたは１５ｍｇ／ｍｌになる。
【０１０２】
組成物はバイアルで提示されてもよく、または組成物は充填済み注射器で提示されてもよい。注射器は、針を伴って、または伴わずに供給することができる。注射器は、組成物の単回用量を含み、一方バイアルは、単回用量または複数回用量を含むことができる。
【０１０３】
本発明の組成物は、０．５ｍｌの単位用量で患者に投与されることが好ましい。０．５ｍｌ用量への言及は、通常の分散、例えば、０．５ｍｌ±０．０５ｍｌを包含するものと理解されよう。複数回投薬の状況では、複数の投薬量を抽出し、単一の容器内に一緒に、例えば、１０用量の複数回投薬用の容器に５ｍｌ（または１０％過充填で５．５ｍｌ）を包装する。
【０１０４】
本発明の水性組成物は、他のワクチンを凍結乾燥した形態から再構成するためにも適している。本発明の組成物がそのような即時の再構成のために用いるものである場合、本発明は、バイアル２つを含み得るキット、または、充填済み注射器１つとバイアル１つを含み、注射する前に注射器の内容物を用いてバイアルの内容物を再活性化することができるキットを提供する。
【０１０５】
ワクチンは、使用する時間／点で２つの成分を一緒に混合することによってワクチンを即時調製することができる形態で調製することもできる。そのような２成分の実施形態は、例えば、水性材料と凍結乾燥した材料を混合することによる液体／液体混合および液体／固体混合を含む。
【０１０６】
したがって、本発明のために有用なキットは、１または複数のＧＢＳコンジュゲートを含む第１の成分；およびａ）細胞性または無細胞の百日咳抗原、ｂ）破傷風トキソイド、ｃ）ジフテリアトキソイドおよびｄ）不活化ポリオウイルス抗原から選択される１または複数の抗原を含む第２の成分を含み、２つの成分は別々の容器に入っている（例えば、バイアルおよび／または注射器）。第１の成分中のＧＢＳコンジュゲートは、凍結乾燥されていてよい。一部の実施形態では、第１の成分はアジュバントを含まない。第２の成分は水性抗原を含んでよい。一部の実施形態では、第２の成分は、アジュバント、例えば、アルミニウム塩アジュバントを含む。
【０１０７】
本発明のために有用な別のキットは、抗原を含まない第１の成分を含んでよく、したがって、最終的な免疫原性組成物中の抗原性成分はすべて、第２の成分に由来する。例えば、キットは、（ｉ）１または複数のＧＢＳコンジュゲートおよび（ｉｉ）ａ）細胞性または無細胞の百日咳抗原、ｂ）破傷風トキソイド、ｃ）ジフテリアトキソイドおよびｄ）不活化ポリオウイルス抗原から選択される１または複数の抗原を含む水性抗原を含む第１の成分と、水性アジュバントを含む第２の成分とを含んでよい。本発明の免疫原性組成物は、第１の成分と第２の成分を混合することによって調製することができる。
【０１０８】
本発明は、本発明の免疫原性組成物を調製するためのプロセスであって、１または複数のＧＢＳコンジュゲートを含む第１の成分と、ａ）細胞性または無細胞の百日咳抗原、ｂ）破傷風トキソイド、ｃ）ジフテリアトキソイドおよびｄ）不活化ポリオウイルス抗原から選択される１または複数の抗原を含む第２の成分とを混合するステップを含むプロセスも提供する。第１の成分中のＧＢＳコンジュゲートは、凍結乾燥されていてよい。第２の成分は水性抗原を含んでよい。該プロセスは、第１の成分中の凍結乾燥されたＧＢＳコンジュゲートを、第２の成分の水性抗原を用いて再構成するさらなるステップを含んでよい。第１の成分はアジュバントを含まなくてもよい。第２の成分は、アジュバント、例えば、アルミニウム塩アジュバントを含んでよい。
【０１０９】
本発明の組成物は、単位用量形態または複数回用量形態に包装することができる。複数回用量形態には充填済み注射器よりもバイアルの方が好ましい。有効な投与体積は常套的に確立することができるが、組成物の典型的なヒト用量は、例えば、筋肉内注射するためには、体積０．５ｍｌである。
【０１１０】
組成物のｐＨは、６から８の間であることが好ましく、約７であることが好ましい。安定なｐＨは、バッファを用いることによって維持することができる。患者に投与される水性組成物のｐＨは、５．０から７．５の間、より一般には、最適な安定性のために５．０から６．０の間であってよく、ジフテリアトキソイドおよび／または破傷風トキソイドが存在する場合には、ｐＨは６．０から７．０の間であることが理想的である。
【０１１１】
典型的には、本発明の免疫原性組成物はリン酸二水素カリウムバッファを含む。リン酸二水素カリウムバッファは、約１〜１０ｍＭ、例えば、１．２５ｍＭ、２．５ｍＭまたは５．０ｍＭのリン酸二水素カリウムを含んでよい。組成物が、水酸化アルミニウム塩を含む場合、ヒスチジンバッファを用いることが好ましい［８６］。組成物は、滅菌で有り得、かつ／または発熱物質を含まない可能性がある。本発明の組成物は、ヒトに対して等張性であり得る。
【０１１２】
本発明の組成物は免疫原性であり、ワクチン組成物であることがより好ましい。本発明によるワクチンは、予防的（すなわち、感染を予防するためのもの）または治療的（すなわち、感染を処置するためのもの）のいずれかであり得るが、典型的には、予防的である。予防的なワクチンでは、患者が抗体を生じたとしても免疫系が感染を撃退することができるまでに遅れまたは遅延があり得るので、疾患に対する完全な防御は保証されない。したがって、また、疑いを回避するために、予防的なワクチンという用語は、将来の感染の影響を、例えば、そのような感染の重症度または持続時間を軽減することによって緩和するワクチンを指す場合もある。
【０１１３】
「感染に対する防御」および／または「防御免疫をもたらす」という用語は、被験体の免疫系が、免疫応答を誘発し、感染に抵抗するための初回刺激を受けている（例えばワクチン接種によって）ことを意味する。特に、誘発される免疫応答により、細菌の種々の株などのいくつもの病原体に対する感染症に抵抗することができる。したがって、ワクチン接種された被験体は、感染するが、その感染に対して対照の被験体よりも良好に抵抗することができる。ワクチンとして用いる免疫原性組成物は、免疫学的有効量の抗原（複数可）、ならびに必要に応じて、任意の他の成分を含む。「免疫学的有効量」とは、その量を個体に単回用量または一連のものの一部として投与することが、処置または予防に有効であることを意味する。一般に、所望の結果は、病原体に対して被験体を防御することができる、またはそれに寄与する抗原（例えば、病原体）特異的な免疫応答が生じることである。この量は、処置される個体の健康および身体の状態、処置される個体の年齢、分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、抗体を合成する個体の免疫系の能力、所望の防御の程度、ワクチンの処方、処置にあたる医師による医学的な状況に関する評価、および他の関連因子に応じて変動する。常套的な試行によって決定することができる量は比較的広範囲に入ることが予想される。
【０１１４】
本発明の組成物は、様々な形態で調製することができる。例えば、組成物は、注射剤として、液剤または懸濁物のいずれかとして調製することができる。組成物は、肺への投与のために、例えば、微細な粉末または噴霧剤を用いて吸入器（ｉｎｈａｌｅｒ）として調製することができる。組成物は、坐薬または膣坐薬として調製することができる。組成物は、鼻、耳または眼に投与するために、例えば、噴霧剤、滴剤（ｄｒｏｐ）、ゲル剤または散剤として調製することができる［例えば、参考文献８７＆８８］。肺炎球菌の糖［８９、９０］、Ｈｉｂ糖［９１］、ＭｅｎＣ糖［９２］、およびＨｉｂ糖とＭｅｎＣ糖のコンジュゲートの混合物［９３］の鼻投与での成功が報告されている。
【０１１５】
本発明の組成物は、特に、複数回用量形式で包装する場合には、抗菌薬を含んでよい。
【０１１６】
本発明の組成物は、洗浄剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ８０などのＴｗｅｅｎ（ポリソルベート）を含んでよい。洗浄剤は、一般に、低レベルで、例えば、＜０．０１％で存在する。
【０１１７】
本発明の組成物は、張度を与えるためにナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含んでよい。１０±２ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌの濃度が典型的である。いくつかの実施形態では、４〜１０ｍｇ／ｍｌ、例えば、９．０ｍｇ／ｍｌ、７．０ｍｇ／ｍｌ、６．７５ｍｇ／ｍｌまたは４．５ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌの濃度を用いることができる。
【０１１８】
一般に、組成物の質量オスモル濃度は、２００ｍＯｓｍ／ｋｇから４００ｍＯｓｍ／ｋｇの間、好ましくは２４０〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇであり、２８０〜３２０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲内であることがより好ましい。質量オスモル濃度はワクチン接種によって引き起こされる疼痛には影響しないことが以前報告されているが［９４］、それにかかわらず質量オスモル濃度をこの範囲内に保つことが好ましい。
【０１１９】
本発明の組成物は、一般に、バッファを含む。リン酸バッファが典型的である。
【０１２０】
本発明の組成物は、他の免疫調節剤と併せて投与することができる。特に、組成物は、１または複数のアジュバントを含んでよい。そのようなアジュバントとしては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：
Ａ．無機質を含有する組成物
本発明においてアジュバントとして用いるのに適した、無機質を含有する組成物としては、無機塩、例えば、アルミニウム塩およびカルシウム塩（またはそれらの混合物）が挙げられる。カルシウム塩としては、リン酸カルシウム（例えば、参考文献９５に開示されている「ＣＡＰ」粒子）が挙げられる。アルミニウム塩としては、水酸化物、リン酸塩、硫酸塩などが挙げられ、塩は任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、非晶質など）を取る。これらの塩への吸着が好ましい。無機質を含有する組成物は、金属塩の粒子として処方することもできる［９６］。
【０１２１】
水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして公知のアジュバントを用いることができる。これらの名称は慣習的であるが、どちらも、存在する実際の化合物についての正確な記載ではないので、利便性のためだけに使用される（例えば、参考文献９７の第９章を参照されたい）。本発明では、アジュバントとして一般に使用される任意の「水酸化物」アジュバントまたは「ホスフェート」アジュバントを用いることができる。「水酸化アルミニウム」として公知のアジュバントは、典型的には、オキシ水酸化アルミニウム塩であり、これは、通常、少なくとも部分的に結晶である。「リン酸アルミニウム」として公知のアジュバントは、典型的には、アルミニウムヒドロキシホスフェートであり、多くの場合、少量の硫酸塩も含有する（すなわち、アルミニウムヒドロキシホスフェートサルフェート（ａｌｕｍｉｎｉｕｍ  ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｕｌｆａｔｅ））。これらは、沈殿により得ることができ、沈殿の間の反応条件および濃度は、塩中のヒドロキシルのホスフェートによる置換の程度に影響する。
【０１２２】
繊維状の形態（例えば透過型電子顕微鏡写真で観察されるような）は、水酸化アルミニウムアジュバントに典型的である。水酸化アルミニウムアジュバントのｐＩは、典型的に約１１であり、すなわち、アジュバント自体は生理的なｐＨにおいて正の表面電荷を有する。ｐＨ７．４でＡｌ＋＋＋１ｍｇあたり１．８〜２．６ｍｇのタンパク質の吸着能力が、水酸化アルミニウムアジュバントについて報告されている。
【０１２３】
リン酸アルミニウムアジュバントは、一般に、０．３から１．２の間、好ましくは０．８から１．２の間、より好ましくは０．９５±０．１のＰＯ４／Ａｌモル比（ｍｏｌａｒ
ｒａｔｉｏ）を有する。リン酸アルミニウムは、特にヒドロキシリン酸塩については一般に非晶質である。典型的なアジュバントは、０．８４〜０．９２のＰＯ４／Ａｌモル比を有する非晶質アルミニウムヒドロキシホスフェートであり、０．６ｍｇ  Ａｌ３＋／ｍｌで含まれる。リン酸アルミニウムは、一般に、粒子状（例えば、透過型電子顕微鏡写真で観察されるようなプレート状の形態）である。粒子の典型的な直径は、任意の抗原が吸着した後に０．５〜２０μｍ（例えば、約５〜１０μｍ）の範囲である。ｐＨ７．４でＡｌ＋＋＋１ｍｇあたり０．７から１．５ｍｇの間のタンパク質の吸着能力が、リン酸アルミニウムアジュバントについて報告されている。
【０１２４】
リン酸アルミニウムのゼロ電荷点（ＰＺＣ）は、ヒドロキシルのホスフェートによる置換の程度と反比例し、この置換の程度は、沈殿により塩を調製するために用いる反応条件および反応物の濃度に依存して変動し得る。ＰＺＣは、溶液中の遊離ホスフェートイオンの濃度を変化させること（より多いホスフェート＝より酸性側のＰＺＣ）、またはヒスチジンバッファのようなバッファを加えること（ＰＺＣをより塩基性にする）によっても変更される。本発明に従って使用されるリン酸アルミニウムは、通常、４．０から７．０の間、より好ましくは５．０から６．５の間、例えば、約５．７のＰＺＣを有する。
【０１２５】
本発明の組成物を調製するために用いるアルミニウム塩の懸濁物は、バッファ（例えば、リン酸バッファまたはヒスチジンバッファまたはトリスバッファ）を含有してよいが、これは必ずしも必要ではない。懸濁物は、滅菌であり、そして発熱物質を含まないことが好ましい。懸濁物は、例えば、１．０ｍＭから２０ｍＭの間、好ましくは５ｍＭから１５ｍＭの間、およびより好ましくは約１０ｍＭの濃度で存在する遊離の水性ホスフェートイオンを含んでよい。懸濁物は、塩化ナトリウムも含んでよい。
【０１２６】
本発明では、水酸化アルミニウムとリン酸アルミニウムの両方の混合物を用いることができる。この場合、リン酸アルミニウムが水酸化アルミニウムよりも多く、例えば、少なくとも２：１、例えば、≧５：１、≧６：１、≧７：１、≧８：１、≧９：１などの重量比で存在してよい。
【０１２７】
患者に投与するための組成物中のＡｌ＋＋＋の濃度は、１０ｍｇ／ｍｌ未満、例えば、≦５ｍｇ／ｍｌ、≦４ｍｇ／ｍｌ、≦３ｍｇ／ｍｌ、≦２ｍｇ／ｍｌ、≦１ｍｇ／ｍｌなどであることが好ましい。好ましい範囲は、０．３ｍｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍｌの間である。最大０．８５ｍｇ／用量が好ましい。
【０１２８】
典型的なアジュバントであるリン酸アルミニウムアジュバントは、０．８４から０．９２の間のＰＯ４／Ａｌモル比を有する非晶質のアルミニウムヒドロキシホスフェートであり、０．６ｍｇ  Ａｌ３＋／ｍｌで含まれる。低用量のリン酸アルミニウム、例えば、用量あたりコンジュゲートあたり５０μｇから１００μｇの間のＡｌ３＋を用いた吸着を用いることができる。
【０１２９】
Ｂ．サポニン処方物［参考文献９７の第２２章］
サポニン処方物も、本発明においてアジュバントとして用いることができる。サポニンは、広範囲の植物種の樹皮、葉、茎、根、さらには花において見出されるステロール配糖体およびトリテルペノイド配糖体の不均一な群である。Ｑｕｉｌｌａｉａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの木の樹皮から単離されたサポニンがアジュバントとして広く研究されている。サポニンは、Ｓｍｉｌａｘ  ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ）、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ  ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライダルベール（ｂｒｉｄｅｓ  ｖｅｉｌ））、およびＳａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（カスミソウ）から、商業的に得ることもできる。サポニンアジュバント処方物としては、ＱＳ２１などの精製された処方物、ならびにＩＳＣＯＭなどの脂質処方物が挙げられる。
【０１３０】
サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製されてきた。これらの技法を用いて特異的に精製された画分が同定されており、それらとしては、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃが挙げられる。サポニンはＱＳ２１であることが好ましい。ＱＳ２１の生成方法は参考文献９８に開示されている。サポニン処方物は、コレステロールなどのステロールも含んでよい［９９］。
【０１３１】
サポニンとコレステロールの組み合わせを用いて、免疫賦活複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる独特の粒子を形成することができる［参考文献９７の第２３章］。ＩＳＣＯＭは、典型的には、リン脂質、例えば、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンも含む。任意の公知のサポニンをＩＳＣＯＭに用いることができる。ＩＳＣＯＭは、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡおよびＱＨＣのうちの１または複数を含むことが好ましい。ＩＳＣＯＭは、参考文献９９〜１０１にさらに記載されている。必要に応じて、ＩＳＣＯＭは、追加的な洗浄剤（複数可）を欠いてよい［１０２］。
【０１３２】
サポニンに基づくアジュバントの開発についての総説は、参考文献１０３＆１０４に見出すことができる。
【０１３３】
Ｃ．ビロソームおよびウイルス様粒子
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）も、本発明においてアジュバントとして用いることができる。これらの構造は、一般に、必要に応じてリン脂質と組み合わされ、またはリン脂質と一緒に処方される、ウイルス由来の１または複数のタンパク質を含有する。これらは、一般に、非病原性、非複製的であり、概して、いかなる天然のウイルスのゲノムも含有しない。ウイルスタンパク質を、組換え生成することができ、またはウイルス全体から単離することができる。ビロソームまたはＶＬＰにおいて用いるのに適したこれらのウイルスタンパク質としては、インフルエンザウイルス（例えば、ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス（例えば、コアタンパク質またはカプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビスウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＨＩＶ、ＲＮＡ−ファージ、Ｑβ−ファージ（例えば、コートタンパク質）、ＧＡ−ファージ、ｆｒ−ファージ、ＡＰ２０５ファージ、およびＴｙ（例えば、レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１）に由来するタンパク質が挙げられる。ＶＬＰは、参考文献１０５〜１１０においてさらに論じられている。ビロソームは、例えば、参考文献１１１においてさらに論じられている。
【０１３４】
Ｄ．細菌誘導体または微生物誘導体
本発明において用いるのに適したアジュバントは、細菌誘導体または微生物誘導体、例えば、免疫賦活性オリゴヌクレオチドおよびＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒された誘導体を含む。
【０１３５】
本発明においてアジュバントとして用いるのに適した免疫賦活性オリゴヌクレオチドとしては、ＣｐＧモチーフを含有するヌクレオチド配列（リン酸結合によってグアノシンと連結した、メチル化されていないシトシンを含有するジヌクレオチド配列）が挙げられる。パリンドローム配列またはポリ（ｄＧ）配列を含有する二本鎖ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドも、免疫賦活性であることが示されている。
【０１３６】
ＣｐＧは、ヌクレオチドの修飾／類似体、例えば、ホスホロチオエート修飾を含んでよく、また、二本鎖または一本鎖であってよい。参考文献１１２、１１３および１１４には、可能性のある類似体の置換、例えば、グアノシンの、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンによる置き換えが開示されている。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献１１５〜１２０においてさらに論じられている。
【０１３７】
ＣｐＧ配列、例えば、ＧＴＣＧＴＴモチーフまたはＴＴＣＧＴＴモチーフは、ＴＬＲ９に向けられ得る［１２１］。ＣｐＧ配列は、ＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮなどの、Ｔｈ１免疫応答の誘導に特異的であってよく、または、ＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮなどのＢ細胞応答誘導により特異的であってよい。ＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮは、参考文献１２２〜１２４において論じられている。ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮであることが好ましい。
【０１３８】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、受容体を認識するために５’末端を利用できるように構築することが好ましい。必要に応じて、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列を、それらの３’末端で結合させて、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成することができる。例えば、参考文献１２１＆１２５〜１２７を参照されたい。
【０１３９】
細菌性のＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒された誘導体を、本発明においてアジュバントとして用いることができる。タンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ（「ＣＴ」）、または百日咳（「ＰＴ」）に由来することが好ましい。解毒されたＡＤＰ−リボシル化毒素の、粘膜アジュバントとしての使用は、参考文献１２８に記載されており、非経口的なアジュバントとしての使用は参考文献１２９に記載されている。毒素または類毒素は、ＡサブユニットおよびＢサブユニットの両方を含むホロ毒素の形態であることが好ましい。Ａサブユニットは、解毒性変異を含有することが好ましく、Ｂサブユニットは変異していないことが好ましい。アジュバントは、解毒されたＬＴ変異体、例えば、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴ−Ｇ１９２であることが好ましい。ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒された誘導体、特にＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２の、アジュバントとしての使用は、参考文献１３０〜１３７に見出すことができる。アミノ酸置換についての数値での参照は、その全体が参照により具体的に本明細書に組み込まれる参考文献１３８に記載のＡＤＰ−リボシル化毒素のＡサブユニットとＢサブユニットのアラインメントに基づくことが好ましい。
【０１４０】
Ｅ．ヒト免疫調節物質
本発明においてアジュバントとして用いるのに適したヒト免疫調節物質としては、サイトカイン、例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２［１３９］など）［１４０］、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子が挙げられる。
【０１４１】
Ｆ．生体接着剤（ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅ）および粘膜接着剤（ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅ）
生体接着剤および粘膜接着剤も、本発明においてアジュバントとして用いることができる。適切な生体接着剤としては、エステル化されたヒアルロン酸ミクロスフェア［１４１］または粘膜接着剤、例えば、ポリ（アクリル酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖およびカルボキシメチルセルロースの架橋した誘導体が挙げられる。キトサンおよびそれらの誘導体も、本発明においてアジュバントとして用いることができる［１４２］。
【０１４２】
Ｇ．微小粒子
微小粒子も、本発明においてアジュバントとして用いることができる。ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）を用いて、生分解性かつ無毒性の材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ酸無水物、ポリカプロラクトンなど）から形成された微小粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、最も好ましくは直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）が好ましく、必要に応じて、それを、負に荷電した表面を有するように処理する（例えば、ＳＤＳを用いて）または正に荷電した表面を有するように処理する（例えば、ＣＴＡＢなどの陽イオン洗浄剤を用いて）。
【０１４３】
Ｈ．リポソーム（参考文献９７の第１３章＆第１４章）
アジュバントとして用いるのに適したリポソーム処方物の例は、参考文献１４３〜１４５に記載されている。
【０１４４】
Ｉ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル処方物
本発明において用いるのに適したアジュバントは、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル［１４６］を含む。そのような処方物としては、さらに、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤［１４７］ならびに少なくとも１つの追加的な非イオン性界面活性剤、例えば、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤［１４８］が挙げられる。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群より選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ラウレス９）、ポリオキシエチレン−９−ステアリル（ｓｔｅｏｒｙｌ）エーテル、ポリオキシエチレン（ｐｏｌｙｏｘｙｔｈｅｙｌｅｎｅ）−８−ステアリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【０１４５】
Ｊ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）
ＰＣＰＰ処方物は、例えば、参考文献１４９および１５０に記載されている。
【０１４６】
Ｋ．ムラミルペプチド
本発明においてアジュバントとして用いるのに適したムラミルペプチドの例としては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル（ｎｏｒｍｕｒａｍｙｌ）−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）が挙げられる。
【０１４７】
Ｌ．イミダゾキノロン（Ｉｍｉｄａｚｏｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）化合物
本発明においてアジュバントとして用いるのに適したイミダゾキノロン化合物の例としては、イミキモド（Ｉｍｉｑｕａｍｏｄ）およびその同族化合物「レシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）３Ｍ」）が挙げられ、参考文献１５１および１５２にさらに記載されている。
【０１４８】
Ｍ．チオセミカルバゾン化合物
すべてが本発明においてアジュバントとして用いるのに適したチオセミカルバゾン化合物、ならびに化合物を処方、製造、およびスクリーニングする方法の例としては、参考文献１５３に記載のものが挙げられる。チオセミカルバゾンは、ヒト末梢血単核細胞を、ＴＮＦ−αなどのサイトカイン産生について刺激することにおいて特に有効である。
【０１４９】
Ｎ．トリプタントリン化合物
すべてが本発明においてアジュバントとして用いるのに適したトリプタントリン化合物、ならびに化合物を処方、製造、およびスクリーニングする方法の例としては、参考文献１５４に記載のものが挙げられる。トリプタントリン化合物は、ヒト末梢血単核細胞を、ＴＮＦ−αなどのサイトカイン産生について刺激することにおいて特に有効である。
【０１５０】
本発明は、上記で同定したアジュバントの１または複数の態様の組み合わせも含んでよい。
【０１５１】
免疫賦活剤としての機能を果たす他の物質は、参考文献９７の第７章に開示されている。
【０１５２】
アルミニウム塩アジュバントの使用が特に好ましく、一般に、抗原はそのような塩に吸着される。本発明の組成物では、いくつかの抗原は水酸化アルミニウムに吸着させるが、他の抗原はリン酸アルミニウムと会合させることが可能である。しかし、一般には、単一の塩、例えば、水酸化物またはリン酸塩を用いるがその両方は用いないことが好ましい。すべてのコンジュゲートが吸着する必要はない、すなわち、一部またはすべてが溶液中で遊離していてよい。
【０１５３】
処置方法
本発明は、哺乳動物における免疫応答を上昇させるための方法であって、本発明の薬学的組成物を哺乳動物に投与する工程を含む方法も提供する。免疫応答は、防御的であることが好ましく、抗体を伴うことが好ましい。この方法により、追加免疫応答を生じさせることができる。本発明の組成物は、０．５ｍｌ用量で患者に投与されることが好ましい（上記で検討された通り）。
【０１５４】
哺乳動物はヒトであることが好ましい。ワクチンが予防的に使用するためのものである場合、ヒトは、小児（例えば、よちよち歩きの小児（ｔｏｄｄｌｅｒ）または乳児、特に新生児）またはティーンエイジャーであることが好ましく、ワクチンが治療的に使用するためのものである場合、ヒトは、成人であることが好ましい。例えば、安全性、投与量、免疫原性などを評価するために小児のために意図されたワクチンを成人に投与することもできる。処置するために好ましいヒトのクラスは、妊娠可能な年齢の女性（例えば、ティーンエイジャー以上）である。別の好ましいクラスは妊婦である。高齢の患者（例えば、５０歳超、６０歳超、７０歳超、８０歳超または９０歳超など、特に、６５歳超の高齢の患者）、特に、ＧＢＳ感染の危険性が増す可能性があるナーシングホームで生活している高齢の患者（［１５５］）は、処置するために好ましい別のヒトのクラスである。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、患者は、ジフテリアトキソイドまたはその誘導体を用いて予備免疫化されている。他の実施形態では、患者は、破傷風トキソイドまたはその誘導体を用いて予備免疫化されている。
【０１５６】
本発明は、医薬品として使用するための本発明の組成物も提供する。医薬品は、哺乳動物における免疫応答を生じさせることができること（すなわち、免疫原性組成物である）が好ましく、ワクチンであることがより好ましい。
【０１５７】
本発明は、哺乳動物における免疫応答を上昇させるための医薬品の製造における本発明の組成物の使用も提供する。
【０１５８】
これらの使用および方法は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅならびにＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓおよびポリオウイルスのうちの１または複数によって引き起こされる疾患を予防および／または処置するためのものであることが好ましい。Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅによって引き起こされる疾患は、新生児敗血症または菌血症、新生児肺炎、新生児髄膜炎、子宮内膜炎、骨髄炎、化膿性関節炎などであってよい。Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａによりジフテリアが引き起こされる可能性があり、Ｃ．ｔｅｔａｎｉにより破傷風が引き起こされる可能性があり、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓにより百日咳が引き起こされる可能性があり、ポリオウイルスによりポリオが引き起こされる可能性がある。
【０１５９】
疾患が予防される被験体は、本発明の免疫原性組成物を受ける被験体と同じでなくてよい。例えば、子を保護するために、女性（妊娠前または妊娠中の）に免疫原性組成物を投与することができる（いわゆる「母体免疫化」［１５６〜１５８］）。妊婦を免疫化することにより、抗体に媒介される免疫が受動母体免疫を通じて乳児にもたらされる。受動免疫は、母体の抗体が胎盤を通じて胎児に移行すると自然に起こる。乳児は、能動的に獲得した免疫は何も有さずに生まれてくるので、受動免疫が乳児にとって特に重要である。本発明の組成物を妊婦に投与することにより、その女性における免疫が増強され、また、抗体が胎盤を通じて新生児に渡され、それにより、受動母体免疫が乳児に付与される。しかし、乳児における受動免疫は単に一過性のものであり、生後の最初の数週間、または数カ月で減少し始める。受動免疫は単に一過性のものであるので、受動免疫が減少する前に、乳児における能動免疫を誘導するために乳児が本発明の組成物の投与を受けることが重要であり得る。生後の乳児に２回目の免疫原性組成物を投与することにより、乳児における能動免疫が誘導され、妊娠中の母親から渡された免疫が延長される。
【０１６０】
本明細書で使用される場合、乳児は、１歳未満（例えば、生後１日未満、生後１週間、生後２週間、生後３週間、生後４週間、生後２カ月、生後３カ月、生後４カ月、生後５カ月、生後６カ月、生後７カ月、生後８カ月、生後９カ月、生後１０カ月、生後１１カ月、生後１２カ月未満）の個体である。
【０１６１】
妊婦には、妊娠中のいかなる時点においても本発明の組成物を投与することができる。例えば、妊娠の第１三半期、第２三半期または第３三半期の女性に組成物を投与することができる。一部の実施形態では、妊娠の最後の６〜１２週間（例えば、妊娠２８週、妊娠２９週、妊娠３０週、妊娠３１週、妊娠３２週、妊娠３３週、妊娠３４週、妊娠３５週、妊娠３６週、妊娠３７週、妊娠３８週、妊娠３９週）の女性に組成物を投与する。特に、乳児を出産する少なくとも４週間前の妊婦に本発明の組成物を投与する。一部の実施形態では、妊娠３２週から３６週の間の妊婦に１用量レジメンを投与する。他の実施形態では、妊婦に２用量レジメンを投与し、その場合、第１の用量をおよそ妊娠３２週に投与し、第２の用量をおよそ妊娠３６週に投与する。
【０１６２】
乳児には、生後１年間、および所望であればその後のいかなる時点においても組成物を投与することができる。一般に、組成物は、乳児に、生後１年間で１回、２回、３回、４回またはそれ以上投与される。例えば、本発明の組成物は、乳児に、誕生時、生後２週間、生後４週間、生後６週間、生後２カ月、生後３カ月、生後４カ月、生後６カ月、生後９カ月、および生後１２カ月から選択される１つまたは複数のときに投与することができる。特に、本発明の組成物は、乳児に、母体の抗体が非防御的な力価まで低下する前の時点で投与される。その後の投与は、任意の所望のスケジュールで行うことができる。
【０１６３】
一実施形態では、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅならびにＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓおよびポリオウイルスのうちの１または複数によって引き起こされる疾患から乳児を保護する方法であって、（ａ）前記乳児を有する妊娠中の女性に本発明の組成物を投与するステップと、（ｂ）必要に応じて、妊娠から生まれた乳児に本発明の組成物を投与するステップとを含む方法が提供される。
【０１６４】
したがって、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅによって引き起こされる疾患ならびにジフテリア、破傷風、百日咳およびポリオのうちの１または複数から乳児を保護する方法であって、（ａ）前記乳児を有する妊娠中の女性に本発明の組成物を投与するステップと、（ｂ）必要に応じて、妊娠から生まれた乳児に本発明の組成物を投与するステップとを含む方法も提供される。
【０１６５】
本発明の好ましい組成物は、各抗原性成分に対する抗体保有率（ｓｅｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）の基準よりも優れている患者における抗体価を、ヒト被験体の許容できる百分率で付与することができる。関連する抗体価が、宿主が抗原に対して抗体陽転すると考えられる抗体価を超える抗原は周知であり、そのような力価は、ＷＨＯなどの組織により公開されている。被験体の統計的に有意な試料の８０％超、より好ましくは９０％超、さらに好ましくは９３％超、最も好ましくは９６〜１００％が抗体陽転することが好ましい。
【０１６６】
本発明の組成物は、一般に、患者に直接投与される。直接的な送達は、非経口的な注射（例えば、皮下に、腹腔内に、静脈内に、筋肉内に、もしくは組織の間質腔へ）、または直腸投与、経口投与、膣への投与、局所投与、経皮投与、鼻腔内投与、眼への投与、耳への投与、肺への投与は他の粘膜投与によって達成することができる。大腿または上腕への筋肉内投与が好ましい。注射は、針（例えば、皮下針）を介してよいが、その代わりに無針注射を用いることができる。典型的な筋肉内用量は０．５ｍｌである。
【０１６７】
本発明は、全身免疫および／または粘膜免疫を惹起するために用いることができる。
【０１６８】
本発明の免疫原性組成物は、単回用量または複数回用量で投与することができる。本発明では、単回用量の投与が好ましい。あるいは、別の１つの単位用量の後に第１の単位用量が続くことが有効であり得る。一般には、第２（または第３、第４、第５など）の単位用量は、第１の単位用量と同一である。一般には、本発明の免疫原性組成物は、３つの単位用量で投与される。一般には、本発明の免疫原性組成物は、筋肉内に、例えば、大腿または上腕への筋肉内投与によって投与される。
【０１６９】
複数回用量は、一次免疫化スケジュールおよび／または追加免疫化スケジュールで用いることができる。一次用量スケジュールの後に、追加免疫用量スケジュールを続けることができる。初回刺激用量の間（例えば、４〜１６週の間）、および初回刺激（ｐｒｉｍｉｎｇ）と追加刺激（ｂｏｏｓｔｉｎｇ）との間の適切なタイミングは、常套的に決定することができる。
【０１７０】
十分な効力を有するために、典型的な一次免疫化スケジュール（特に小児に関して）は、１より多い用量を投与することを伴ってよい。例えば、用量は、０カ月および６カ月の時点（時間０が第１の用量になる）；０カ月、１カ月、２カ月および６カ月の時点；０日目、２１日目の時点、次いで６カ月から１２カ月の間に第３の用量；２カ月、４カ月および６カ月の時点；３カ月、４カ月および５カ月の時点；６週間、１０週間および１４週間の時点；２カ月、３カ月および４カ月の時点；または０カ月、１カ月、２カ月、６カ月および１２カ月の時点のものであってよい。小児用組成物は、例えば、生後２年目の小児に対する追加刺激用量としても使用することができる。
【０１７１】
組成物は、例えば、生後２年目の小児に対する追加刺激用量としても使用することができる。本発明の青年用の追加刺激ワクチン組成物は、１０歳以上の人に単回用量で投与される。本発明の免疫原性組成物は、以前にジフテリアと破傷風の両方に対して、好ましくは百日咳に対してもワクチン接種された患者に追加刺激ワクチンとして投与することができる。これらの患者は、一般的な集団とは、以前のワクチンに対する免疫記憶応答を有することで区別することができる。患者は、直近のジフテリアおよび／または破傷風ワクチンを、本発明のワクチンを受ける少なくとも５年前に受けていてよい。ワクチンを受ける患者は、４歳から６５歳の間、例えば、１１〜６４歳、１０〜１８歳などであってよい。
【０１７２】
任意の適切な投与経路を使用することができる。例えば、組成物は、筋肉内に、腹腔内に、皮下に、経皮的に、または皮内に投与することができる。所望であれば、組成物は、口腔内、鼻腔内、膣内、および直腸内などの粘膜内経路によって投与することができる。妊婦および乳児への投与は、同じ経路によるものであっても異なる経路によるものであってもよい。本発明の組成物は、筋肉内注射によって、例えば、腕または脚に投与することができる。
【０１７３】
本発明によって生成されるワクチンは、患者に、別個のワクチンと同時に、例えば、ＰＲＥＶＮＡＲ（商標）などの肺炎球菌コンジュゲートワクチンと同時に、インフルエンザワクチンと同時に、ロタウイルスワクチンと同時に、ＭＭＲワクチンと同時になどで投与することができる。
【０１７４】
本発明の組成物がアルミニウムに基づくアジュバントを含む場合、貯蔵している間に成分の沈降が起こり得る。したがって、患者に投与する前に組成物を振とうするべきである。振とうされた組成物は、混濁した白色の懸濁物である。
【０１７５】
一般
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、Ｘから独占的になり、または、追加的な何か、例えば、Ｘ＋Ｙを含んでよい。
【０１７６】
「からなる」という用語は、「のみからなる」を意味する。「Ｘからなる」組成物は、他の構成要素はいかなるものも含んではならないかもしれない。「Ｘから本質的になる」組成物は、他の活性成分はいかなるものも含んではならないかもしれない。「から本質的になる」という用語は、組成物、方法または構造が、追加的な成分、ステップおよび／または部分を含み得るが、それは追加的な成分、ステップおよび／または部分が特許請求された組成物、方法または構造の基本的な特性および新規の特性を実質的に変更しない場合のみであることを意味する。
【０１７７】
「約」という用語は、数値ｘとの関連では、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０１７８】
「実質的に」という単語により、「完全に」は排除されず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくてよい。必要な場合、「実質的に」という単語を本発明の定義から除くことができる。
【０１７９】
糖環（ｓｕｇｅｒ  ｒｉｎｇ）は、開いた形態および閉じた形態で存在できること、ならびに、本明細書の構造式において閉じた形態が示されていても、開いた形態も本発明に包含されることが理解されよう。同様に、糖は、ピラノース型およびフラノース型で存在できること、ならびに、本明細書の構造式においてピラノース型が示されていても、フラノース型も包含されることが理解される。糖の異なるアノマー形態も包含される。
【０１８０】
具体的に記述されていない限り、２つまたはそれより多くの成分を混合するステップを含むプロセスは、いかなる特定の混合の順序も必要としない。したがって、成分を任意の順序で混合することができる。３つの成分が存在する場合には、２つの成分を互いに組み合わせることができ、次いでその組み合わせ物を、第３の成分と組み合わせることができるなどである。
【０１８１】
抗体は、一般に、それらの標的に特異的である。したがって、抗体は、標的に対して、無関連の対照タンパク質、例えば、ウシ血清アルブミンに対する親和性よりも高い親和性を有する。
【０１８２】
「約」という用語は、数値ｘとの関連では、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０１８３】
成分がアジュバントに「吸着している」と記載されている場合、その抗原の少なくとも５０％（重量で）、例えば、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上が吸着していることが好ましい。成分が完全に吸着している場合には、遠心分離した後に組成物の上清中では全く検出できない。
【０１８４】
具体的に規定されていない限り、２つまたはそれより多くの成分を混合するステップを含むプロセスは、いかなる特定の混合の順序も必要としない。したがって、成分を任意の順序で混合することができる。３つの成分が存在する場合には、２つの成分を互いに組み合わせることができ、次いでその組み合わせ物を、第３の成分と組み合わせることができるなどである。
【０１８５】
コンジュゲートの量は、一般に、キャリアの選択に起因する変動を回避するために糖の質量に関して示されている（すなわち、全体としてのコンジュゲートの用量（キャリア＋糖）は明示されている用量よりも多い）。
【０１８６】
本発明で使用される亜リン酸含有基は、周囲環境のｐＨ、例えばそれらが溶解している溶媒のｐＨに応じて、いくつものプロトン化された形態および脱プロトン化された形態で存在してよい。したがって、本明細書では特定の形態が例示されている場合があるが、別段の指定のない限り、これらの例示は、ただ単に代表的なものであり、特定のプロトン化された形態または脱プロトン化された形態に限定するものではないことが意図されている。例えば、リン酸基の場合は、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２として例示されているが、定義には、酸性条件下で存在し得るプロトン化された形態の−［ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ２）（ＯＨ）］＋および−［ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ２）２］２＋ならびに塩基性条件下で存在し得る脱プロトン化された形態の−［ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）（Ｏ）］−および［ＯＰ（Ｏ）（Ｏ）２］２−が包含される。本発明は、そのような形態のすべてを包含する。
【０１８７】
化合物を組成物の一部として身体に投与する場合には、その化合物は、その代わりに、適切なプロドラッグで置き換えることができる。
【０１８８】
動物（特に、ウシ）材料を細胞の培養に使用する場合、当該材料は、伝染性海綿状脳症（ＴＳＥ）を伴わない、特に牛海綿状脳症（ＢＳＥ）を伴わない供給源から得るべきである。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する。
（項目１）
１または複数のＧＢＳコンジュゲートと、ａ）細胞性または無細胞の百日咳抗原、ｂ）破傷風トキソイド、ｃ）ジフテリアトキソイドおよびｄ）不活化ポリオウイルス抗原から選択される１または複数の抗原とを含む免疫原性組成物であって、各ＧＢＳコンジュゲートが、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＢ群連鎖球菌の莢膜糖である、免疫原性組成物。
（項目２）
前記ＧＢＳコンジュゲートが、ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；および／またはｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲートを含む、項目１に記載の免疫原性組成物。
（項目３）
ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｖ）ジフテリアトキソイドとを含む、項目１または２に記載の免疫原性組成物。
（項目４）
ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｖ）破傷風トキソイドとを含む、項目１または２に記載の免疫原性組成物。
（項目５）
ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｖ）ジフテリアトキソイドと、ｖ）破傷風トキソイドとを含む、項目１または２に記載の免疫原性組成物。
（項目６）
ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｖ）ジフテリアトキソイドと、ｖ）破傷風トキソイドと、ｖｉ）無細胞の百日咳抗原とを含む、項目１または２に記載の免疫原性組成物。
（項目７）
ｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｉｉ）キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲートと、ｉｖ）ジフテリアトキソイドと、ｖ）破傷風トキソイドと、ｖｉ）無細胞の百日咳抗原と、ｖｉｉ）不活化ポリオウイルス抗原とを含む、項目１または２に記載の免疫原性組成物。
（項目８）
ＧＢＳ莢膜糖の総量が≦７０μｇである、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目９）
各ＧＢＳ莢膜糖が単位用量あたり０．１〜３０μｇの量で存在する、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目１０）
単位用量あたりの前記ＧＢＳ血清型Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩの莢膜糖の量が、２０μｇ、２０μｇおよび２０μｇ；１０μｇ、１０μｇおよび１０μｇ；ならびに５μｇ、５μｇおよび５μｇからなる群より選択される、項目２から９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目１１）
前記ＧＢＳ血清型Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩの莢膜糖の質量比が１：１：１である、項目２から１０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目１２）
キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉａ由来の莢膜糖である前記コンジュゲートが、約１：１から１：２の間の糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）を有し、キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｉｂ由来の莢膜糖である前記コンジュゲートが、約１：１から１：２の間の糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）を有し、かつ／またはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩＩ由来の莢膜糖である前記コンジュゲートが、約３：１から１：１の間の糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）を有する、項目２から１１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目１３）
ＧＢＳ血清型Ｉａ莢膜糖由来の莢膜糖を含む前記ＧＢＳコンジュゲート中の前記キャリアタンパク質、ＧＢＳ血清型Ｉｂ莢膜糖を含む前記ＧＢＳコンジュゲート中の前記キャリアタンパク質および／またはＧＢＳ血清型ＩＩＩ莢膜糖を含む前記ＧＢＳコンジュゲート中の前記キャリアタンパク質が、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドまたはＣＲＭ１９７である、項目２から１２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目１４）
ＧＢＳ血清型Ｉａ莢膜糖由来の莢膜糖を含む前記ＧＢＳコンジュゲート中の前記キャリアタンパク質、ＧＢＳ血清型Ｉｂ莢膜糖を含む前記ＧＢＳコンジュゲート中の前記キャリアタンパク質およびＧＢＳ血清型ＩＩＩ莢膜糖を含む前記ＧＢＳコンジュゲート中の前記キャリアタンパク質が、ＣＲＭ１９７である、項目１３に記載の免疫原性組成物。
（項目１５）
キャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型ＩＩ由来の莢膜糖であるコンジュゲート；および／またはキャリアタンパク質にコンジュゲートさせたＧＢＳ血清型Ｖ由来の莢膜糖であるコンジュゲートをさらに含む、項目２から１４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目１６）
ＧＢＳ血清型ＩＩ莢膜糖を含む前記ＧＢＳコンジュゲート中の前記キャリアタンパク質および／またはＧＢＳ血清型Ｖ莢膜糖を含む前記ＧＢＳコンジュゲート中の前記キャリアタンパク質がジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドまたはＣＲＭ１９７である、項目１５に記載の免疫原性組成物。
（項目１７）
ＧＢＳ血清型ＩＩ莢膜糖を含む前記ＧＢＳコンジュゲート中の前記キャリアタンパク質および／またはＧＢＳ血清型Ｖ莢膜糖を含む前記ＧＢＳコンジュゲート中の前記キャリアタンパク質がＣＲＭ１９７である、項目１６に記載の免疫原性組成物。
（項目１８）
前記無細胞の百日咳抗原が、解毒された百日咳毒素、線維状赤血球凝集素およびパータクチンを含む、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目１９）
不活化百日咳毒素、線維状赤血球凝集素およびパータクチンが１６：１６：５の比（重量により測定）で存在する、項目１８に記載の免疫原性組成物。
（項目２０）
前記不活化ポリオウイルス抗原が、ポリオウイルス１型株、ポリオウイルス２型株およびポリオウイルス３型株のそれぞれに由来する抗原を含む、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目２１）
前記不活化ポリオウイルス抗原が５：１：４の１型：２型：３型比（Ｄ抗原単位により測定）で存在する、項目２０に記載の免疫原性組成物。
（項目２２）
前記ジフテリアトキソイドが、４Ｌｆ／ｍｌから８Ｌｆ／ｍｌの間、例えば、０．５ｍｌ用量あたり４Ｌｆの濃度で存在する、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目２３）
前記ジフテリアトキソイドが、２０から５０Ｌｆ／ｍｌの間、例えば、０．５ｍｌ用量あたり２５Ｌｆの濃度で存在する、項目１から２１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目２４）
破傷風トキソイドが、０．５ｍｌ用量あたり約５Ｌｆの濃度で存在する、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目２５）
破傷風トキソイドが、０．５ｍｌ用量あたり５から１０Ｌｆの間の濃度で存在する、項目１から２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目２６）
ジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイドを含み、これらが、１を超える、例えば、２．５：１など、２：１から３：１の間（Ｌｆ単位で測定）のジフテリアトキソイド：破傷風トキソイド比で存在する、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目２７）
破傷風トキソイドおよびジフテリアトキソイドを含み、これらが、１を超える、例えば、２：１など、１．５：１から２．５：１の間（Ｌｆ単位で測定）の破傷風トキソイド：ジフテリアトキソイド比で存在する、項目１から２５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目２８）
アジュバントを含有する、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目２９）
アルミニウム塩アジュバントを含有する、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目３０）
注射可能な液剤または懸濁物である、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目３１）
凍結乾燥されている、項目１から２９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目３２）
前記コンジュゲートを安定化するためにマンニトールを含む、項目３１に記載の免疫原性組成物。
（項目３３）
リン酸二水素カリウムバッファを含む、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目３４）
塩化ナトリウムを含む、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目３５）
保存剤を含まない、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目３６）
ワクチンである、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目３７）
ヒトに投与するためのものである、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目３８）
医薬品として用いるためのものである、前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
（項目３９）
患者における免疫応答を上昇させるための方法であって、前記項目のいずれか一項に記載の組成物を前記患者に投与するステップを含む、方法。
（項目４０）
前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を調製するためのプロセスであって、１または複数のＧＢＳコンジュゲートを含む第１の成分と、ａ）細胞性または無細胞の百日咳抗原、ｂ）破傷風トキソイド、ｃ）ジフテリアトキソイドおよびｄ）不活化ポリオウイルス抗原から選択される１または複数の抗原を含む第２の成分とを混合するステップを含む、プロセス。
（項目４１）
前記第１の成分中の前記ＧＢＳコンジュゲートが凍結乾燥されている、項目４０に記載のプロセス。
（項目４２）
前記第２の成分が水性抗原を含む、項目４０または項目４１に記載のプロセス。
（項目４３）
前記第１の成分中の凍結乾燥された前記ＧＢＳコンジュゲートを、前記第２の成分の前記水性抗原を用いて再構成するさらなるステップを含む、項目４２に記載のプロセス。
（項目４４）
前記第１の成分がアジュバントを含まない、項目４０から４３のいずれか一項に記載のプロセス。
（項目４５）
前記第２の成分が、アジュバント、例えば、アルミニウム塩アジュバントを含む、項目４０から４４のいずれかに記載のプロセス。
（項目４６）
前記項目のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を調製するためのキットであって、前記キットは、１または複数のＧＢＳコンジュゲートを含む第１の成分と、ａ）細胞性または無細胞の百日咳抗原、ｂ）破傷風トキソイド、ｃ）ジフテリアトキソイドおよびｄ）不活化ポリオウイルス抗原から選択される１または複数の抗原を含む第２の成分とを含み、前記２つの成分が別々の容器に入っている、キット。
（項目４７）
前記第１の成分中の前記ＧＢＳコンジュゲートが凍結乾燥されている、項目４６に記載のキット。
（項目４８）
前記第２の成分が水性抗原を含む、項目４６または４７に記載のキット。
（項目４９）
前記第１の成分がアジュバントを含まない、項目４６から４８のいずれか一項に記載のキット。
（項目５０）
前記第２の成分が、アジュバント、例えば、アルミニウム塩アジュバントを含む、項目４６から４９のいずれかに記載のキット。
【図面の簡単な説明】
【０１８９】
【図１−１】図１は、表１に記載のマウス群における（Ａ）ＧＢＳ  Ｉａに対するＩｇＧ力価、（Ｂ）ＧＢＳ  Ｉｂに対するＩｇＧ力価および（Ｃ）ＧＢＳ  ＩＩＩに対するＩｇＧ力価を示す。群５および群６のすべてのマウスについて血清をプールした。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。上の棒および下の棒は、９５％信頼区間を示す。
【図１−２】図１は、表１に記載のマウス群における（Ａ）ＧＢＳ  Ｉａに対するＩｇＧ力価、（Ｂ）ＧＢＳ  Ｉｂに対するＩｇＧ力価および（Ｃ）ＧＢＳ  ＩＩＩに対するＩｇＧ力価を示す。群５および群６のすべてのマウスについて血清をプールした。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。上の棒および下の棒は、９５％信頼区間を示す。
【図２−１】図２は、表１に記載のマウス群における（Ａ）ジフテリアトキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｂ）破傷風トキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｃ）百日咳トキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｄ）百日咳ＦＨＡに対するＩｇＧ力価および（Ｅ）百日咳６９Ｋに対するＩｇＧ力価を示す。統計的有意性が＊（ｐ＜０．０５）によって示されている。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。上の棒および下の棒は、９５％信頼区間を示す。
【図２−２】図２は、表１に記載のマウス群における（Ａ）ジフテリアトキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｂ）破傷風トキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｃ）百日咳トキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｄ）百日咳ＦＨＡに対するＩｇＧ力価および（Ｅ）百日咳６９Ｋに対するＩｇＧ力価を示す。統計的有意性が＊（ｐ＜０．０５）によって示されている。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。上の棒および下の棒は、９５％信頼区間を示す。
【図２−３】図２は、表１に記載のマウス群における（Ａ）ジフテリアトキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｂ）破傷風トキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｃ）百日咳トキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｄ）百日咳ＦＨＡに対するＩｇＧ力価および（Ｅ）百日咳６９Ｋに対するＩｇＧ力価を示す。統計的有意性が＊（ｐ＜０．０５）によって示されている。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。上の棒および下の棒は、９５％信頼区間を示す。
【図３】図３は、表１に記載のマウス群における（Ａ）ＧＢＳ  Ｉａに対するＯＰＫ力価、（Ｂ）ＧＢＳ  Ｉｂに対するＯＰＫ力価および（Ｃ）ＧＢＳ  ＩＩＩに対するＯＰＫ力価を示す。各実験（実験は２回繰り返した）のために各群のすべてのマウスから血清をプールした（群５および群６以外）。群５および群６のそれぞれについて両方の実験からの血清をプールした。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。
【図４】図４は、表３に記載のマウス群における（Ａ）ＧＢＳ  Ｉａに対するＩｇＧ力価、（Ｂ）ＧＢＳ  Ｉｂに対するＩｇＧ力価および（Ｃ）ＧＢＳ  ＩＩＩに対するＩｇＧ力価を示す。統計的有意性が＊（ｐ＜０．０５）によって示されている。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。上の棒および下の棒は、９５％信頼区間を示す。
【図５−１】図５は、表３に記載のマウス群における（Ａ）ジフテリアトキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｂ）破傷風トキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｃ）百日咳トキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｄ）百日咳ＦＨＡに対するＩｇＧ力価および（Ｅ）百日咳６９Ｋに対するＩｇＧ力価を示す。統計的有意性が＊＊（Ｐ＜０．０１）および＊（ｐ＜０．０５）によって示されている。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。上の棒および下の棒は、９５％信頼区間を示す。
【図５−２】図５は、表３に記載のマウス群における（Ａ）ジフテリアトキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｂ）破傷風トキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｃ）百日咳トキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｄ）百日咳ＦＨＡに対するＩｇＧ力価および（Ｅ）百日咳６９Ｋに対するＩｇＧ力価を示す。統計的有意性が＊＊（Ｐ＜０．０１）および＊（ｐ＜０．０５）によって示されている。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。上の棒および下の棒は、９５％信頼区間を示す。
【図５−３】図５は、表３に記載のマウス群における（Ａ）ジフテリアトキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｂ）破傷風トキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｃ）百日咳トキソイドに対するＩｇＧ力価、（Ｄ）百日咳ＦＨＡに対するＩｇＧ力価および（Ｅ）百日咳６９Ｋに対するＩｇＧ力価を示す。統計的有意性が＊＊（Ｐ＜０．０１）および＊（ｐ＜０．０５）によって示されている。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。上の棒および下の棒は、９５％信頼区間を示す。
【図６−１】図６は、表３に記載のマウス群における（Ａ）ＧＢＳ  Ｉａに対するＯＰＫ力価、（Ｂ）ＧＢＳ  Ｉｂに対するＯＰＫ力価および（Ｃ）ＧＢＳ  ＩＩＩに対するＯＰＫ力価を示す。各実験のために各群のすべてのマウスから血清をプールした。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。
【図６−２】図６は、表３に記載のマウス群における（Ａ）ＧＢＳ  Ｉａに対するＯＰＫ力価、（Ｂ）ＧＢＳ  Ｉｂに対するＯＰＫ力価および（Ｃ）ＧＢＳ  ＩＩＩに対するＯＰＫ力価を示す。各実験のために各群のすべてのマウスから血清をプールした。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。
【図７−１】図７は、表５に記載のマウス群における（Ａ）ＧＢＳ  Ｉａに対するＩｇＧ力価、（Ｂ）ＧＢＳ  Ｉｂに対するＩｇＧ力価および（Ｃ）ＧＢＳ  ＩＩＩに対するＩｇＧ力価を示す。群５、群６および群７について血清をプールした。統計的有意性が＊（ｐ＜０．０１）によって示されている。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。上の棒および下の棒は、９５％信頼区間を示す。
【図７−２】図７は、表５に記載のマウス群における（Ａ）ＧＢＳ  Ｉａに対するＩｇＧ力価、（Ｂ）ＧＢＳ  Ｉｂに対するＩｇＧ力価および（Ｃ）ＧＢＳ  ＩＩＩに対するＩｇＧ力価を示す。群５、群６および群７について血清をプールした。統計的有意性が＊（ｐ＜０．０１）によって示されている。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。上の棒および下の棒は、９５％信頼区間を示す。
【図８】図８は、表５に記載のマウス群における（Ａ）破傷風トキソイドに対するＩｇＧ力価、および（Ｂ）ジフテリアトキソイドに対するＩｇＧ力価を示す。統計的有意性が＊（ｐ＜０．０５）によって示されている。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。上の棒および下の棒は、９５％信頼区間を示す。
【図９−１】図９は、表５に記載のマウス群における（Ａ）ＧＢＳ  Ｉａに対するＯＰＫ力価、（Ｂ）ＧＢＳ  Ｉｂに対するＯＰＫ力価および（Ｃ）ＧＢＳ  ＩＩＩに対するＯＰＫ力価を示す。各実験のために各群のすべてのマウスから血清をプールした。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。
【図９−２】図９は、表５に記載のマウス群における（Ａ）ＧＢＳ  Ｉａに対するＯＰＫ力価、（Ｂ）ＧＢＳ  Ｉｂに対するＯＰＫ力価および（Ｃ）ＧＢＳ  ＩＩＩに対するＯＰＫ力価を示す。各実験のために各群のすべてのマウスから血清をプールした。中央の棒によりＧＭＴ力価が示されている。
【発明を実施するための形態】
【０１９０】
材料および方法
ワクチン
以下の実験において使用するＧＢＳ三価ワクチンは、それぞれＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせた３種の主要な血清型：Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩに由来する莢膜多糖で構成される。ＴｄａＰ（Ｈ４）ワクチンは、水酸化アルミニウムでアジュバント化（ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ）され、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイドおよび無細胞の百日咳抗原（ＰＴ、ＦＨＡおよび６９Ｋ）を含有する。
【０１９１】
ＴｄａＰ（Ｈ４）−ＩＰＶワクチンは、水酸化アルミニウムでアジュバント化され、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、無細胞の百日咳抗原（ＰＴ、ＦＨＡおよび６９Ｋ）およびポリオ抗原（ＩＰＶ１、ＩＰＶ２およびＩＰＶ３）を含有する。
【０１９２】
市販の破傷風および破傷風／ジフテリア液体ワクチンを使用した。
【０１９３】
ＥＬＩＳＡ
免疫化されたマウス由来の血清中のＧＢＳ多糖Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩに対するＩｇＧ力価を、参考文献１５９において説明されている通り、ＥＬＩＳＡによって測定した。一般に、ＥＬＩＳＡによるＩｇＧ  Ａｂ力価とＯＰＫ力価の間には良好な相関が存在する。
【０１９４】
オプソニン作用性死滅（ＯＰＫ）アッセイ
防御はオプソニン作用性死滅によってもたらされる可能性があるので、血清抗体のオプソニン化活性を測定することはワクチン活性の有用な指標である。このオプソニン作用性死滅アッセイでは、補体の存在下でエフェクター細胞による死滅のためにＧＢＳをオプソニン化する血清抗体の能力を測定する。ＧＢＳ多糖Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩに対して免疫化されたマウスにおいて惹起された抗体の機能活性を測定するためのＯＰＫアッセイを、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、ＣＣＬ−２４０）から入手した前骨髄球性白血病細胞株であるＨＬ−６０を使用して実施した。血清型Ｉａ分離株、血清型Ｉｂ分離株および血清型ＩＩＩ分離株の死滅を測定するために、それぞれＧＢＳ５１５株、ＧＢＳ  Ｈ３６ｂ株およびＧＢＳ  ＣＯＨ１株を使用した。陰性対照反応を、熱失活させた補体の存在下で、または抗体もしくはエフェクター細胞の不在下で、または免疫前の血清またはプラセボ血清を使用してのいずれかで実施した。反応物をトリプチケースソイ寒天プレートに蒔き、細菌数を決定した。死滅の百分率を（Ｔ０における平均ＣＦＵ−Ｔ６０における平均ＣＦＵ）／（Ｔ０における平均ＣＦＵ）として算出した。ＯＰＫ力価を、細菌の５０％死滅を生じる逆数血清希釈度として表した。ＯＰＫアッセイは、参考文献１６０に記載されている死滅に基づくオプソニン作用アッセイ（ｋＯＰＡ）プロトコールに従って実施した。
【０１９５】
ルミネックスに基づく多重アッセイ
破傷風抗原、ジフテリア抗原および百日咳抗原に関するＩｇＧを定量化するために、ルミネックスに基づく多重アッセイを使用した。ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、破傷風トキソイド（ＴＴ）、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳ＦＨＡおよび百日咳６９Ｋ抗原をそれぞれミクロスフェア（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）に共有結合によりコンジュゲートさせた。マウス血清試料を分析して各抗原に特異的な抗体価を評価した。実験は２連で実施し、２連の値を平均した。参照血清を、ＴｄａＰ抗原＋ミョウバンを用いて免疫化したＣＤ１マウス由来の血清をプールすることによって調製した。
【０１９６】
試験１：ＴｄａＰおよびＴｄＡＰ−ＩＰＶ中に再構成されたＧＢＳ
この試験では、（ｉ）ミョウバンでアジュバント化された、破傷風抗原、ジフテリア抗原および無細胞の百日咳抗原を含有する液体ワクチン（ＴｄａＰ）および（ｉｉ）ミョウバンでアジュバント化された、破傷風抗原、ジフテリア抗原、無細胞の百日咳抗原およびポリオ抗原を含有する液体ワクチン（ＴｄａＰ−ＩＰＶ）を用いて再構成した、凍結乾燥ＧＢＳ三価ワクチン（ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＩａ多糖、Ｉｂ多糖、ＩＩＩ多糖）の免疫原性を調査した。
【０１９７】
免疫化プロトコールは表１に報告されており、これを２回繰り返した。各実験において、雌ＣＤ１マウス８匹の６つの群を、０日目および２１日目に、２用量の表１に示されているワクチンを腹腔内に用いて免疫化し、０日目および３５日目に採血した。
【０１９８】
【表１】
2018002743.tif 000002
【０１９９】
免疫化されたマウス由来の血清を、各ＧＢＳ血清型特異的抗原（Ｉａ型、Ｉｂ型、およびＩＩＩ型）に対するＩｇＧ抗体の存在についてＥＬＩＳＡによって分析した。破傷風トキソイド（ＴＴ）に対する抗体、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）に対する抗体および無細胞の百日咳抗原（ＰＴ、ＦＨＡおよび６９Ｋ）に対する抗体をルミネックスアッセイによって定量化した。ＧＢＳ抗原に対する抗体の機能活性を、オプソニン作用性死滅（ＯＰＫ）アッセイによって評価した。
【０２００】
図１および図２には、試験１において試験されたマウスの６つの群の種々の抗原に対するＩｇＧ力価が示されている（２つの実験からの８＋８マウスからの統合結果）。ＧＭＴ力価が以下の表２に示されている。
【０２０１】
【表２】
2018002743.tif 000003
【０２０２】
全体的に、すべてのワクチン処方物により、対照と同等の免疫原性がもたらされ、有意な免疫学的干渉は観察されなかった。ＧＢＳ  Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩに対する２回目の免疫化後のＩｇＧ力価に関して、血清型のいずれのワクチン群の間にもＩｇ応答にマン−ホイットニーのＵ検定によって有意差は検出されず、これにより、干渉が存在しないことが示された。ＤＴ、ＴＴ、ＰＴ、ＦＨＡおよび６９Ｋに対する２回目の免疫化後のＩｇＧ力価に関しては、ＧＢＳ＋ＴＤａＰにより、ＧＢＳ＋ＴＤａＰ＋ＩＰＶよりも約２倍高いＧＭＴ力価が惹起され（マン−ホイットニーのＵ検定によりＰ＜０．０５）、これにより、すべてのＴＤａＰ抗原に対してＩＰＶの軽微な負の影響があることが示唆された。さらに、ＴＴに関しては、ワクチンＴＤａＰ＋ＩＰＶにより、ＴＤａＰ＋ＩＰＶ＋ＧＢＳよりも２倍高い力価がもたらされ（Ｕ検定、Ｐ＜０．０２６）、これにより、ＩＰＶの存在下でＴＴに対してＧＢＳの軽微な負の影響があることが示唆された。
【０２０３】
図３には、試験１において試験された動物の６つの群の、ＧＢＳ  Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩに対するＯＰＫ力価が示されている。示されている通り、ＧＢＳ  Ｉａ、ＩｂまたはＩＩＩに対するＯＰＫ力価の主要な差異（アッセイおよび生物学的変動性の範囲内で）はいずれのワクチン処方物についても検出されなかった。
【０２０４】
試験２：ＴｄａＰ中に再構成されたＧＢＳ
この試験では、ミョウバンでアジュバント化された、破傷風抗原、ジフテリア抗原および無細胞の百日咳抗原（ＴｄａＰ）を含有する液体ワクチンを用いて再構成した、凍結乾燥ＧＢＳ三価ワクチン（ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＩａ多糖、Ｉｂ多糖、ＩＩＩ多糖）の種々の量での免疫原性を調査した。
【０２０５】
雌ＣＤ１マウス１６匹の群８つを、０日目、２１日目および３５日目に、３用量のワクチンを皮下に用いて免疫化し、０日目、３５日目（２回目後（ｐｏｓｔ−２））および４９日目（３回目後（ｐｏｓｔ−３））に採血した。免疫化プロトコールが表３に報告されている。
【０２０６】
【表３】
2018002743.tif 000004
【０２０７】
図４および図５には、試験２において試験されたマウスの群についての３回免疫化した後の全群についての種々の抗原に対するＩｇＧ力価が示されている。ＧＭＴ力価が以下の表４に示されている。
【０２０８】
【表４】
2018002743.tif 000005
【０２０９】
ＧＢＳ  Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩに対する３回目の免疫化の後のＩｇＧ力価に関しては、まず、群７のマウス２匹がおそらくワクチンを間違って受けたことが観察された（３種の抗原すべてに対してＩｇＧ力価が高く、これは同様のプラセボ群では以前に観察されたことがない）。第２に、ＴｄａＰを用いて再構成した群では、ＴｄａＰを伴わないＧＢＳワクチンと比較して３種のＧＢＳ抗原すべてに対してＩｇＧ力価が低い傾向が観察された（この場合の一部で２〜４倍のＧＭＴ、Ｐ＜０．０５）。すべての血清型に対する２回目後のＩｇＧ力価についても同じ傾向が観察された。
【０２１０】
それぞれＤＴ、ＴＴ、ＰＴ、ＦＨＡおよび６９Ｋに対する３回目の免疫化の後のＩｇＧ力価に関しては、群のいずれの間でもＩｇＧ応答に有意差はマン−ホイットニー検定によって検出されず、これにより、干渉が完全に存在しないことが示された。ＤＴおよびＴＴについて用量反応は観察されなかったが、百日咳ＰＴ、ＦＨＡおよび６９Ｋ抗原の高用量について、低用量と比較してわずかに高い力価が観察された。
【０２１１】
１μｇ（高、Ｌ）および０．２５μｇ（低、Ｌ）ワクチン用量のＧＢＳに対する応答を比較した群５および群６におけるＧＢＳ  Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩに対するＩｇＧ力価の場合、ＧＢＳ  ＩａおよびＩｂに対する個々の応答の変動性はＧＢＳ  ＩＩＩに対するものよりも高かった。血清型のいずれについても低用量と高用量の間で有意差は観察されなかったが、すべての血清型について３回目後では２回目後と比較して非応答者の数が少なく、応答が有意に高いことが検出された（マン−ホイットニーのＵ検定）。
【０２１２】
図６には、試験２において試験されたマウスの７つの群のＧＢＳ  Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩに対するＯＰＫ力価が示されている。ＴｄａＰと一緒に処方されたＧＢＳワクチンではＧＢＳ単独と比較して力価がわずかに低い傾向がある。
【０２１３】
試験３：破傷風液体ワクチン中に再構成されたＧＢＳおよび破傷風／ジフテリア液体ワクチン中に再構成されたＧＢＳ
この試験では、ミョウバンでアジュバント化された、（ｉ）破傷風抗原または（ｉｉ）破傷風およびジフテリア抗原を含有する液体ワクチンを用いて再構成した、凍結乾燥ＧＢＳ三価ワクチン（ＣＲＭ１９７にコンジュゲートさせたＩａ多糖、Ｉｂ多糖、ＩＩＩ多糖）の免疫原性を調査した。
【０２１４】
免疫化プロトコールが表５に報告されており、これを２回繰り返した。
【０２１５】
各プロトコールにおいて、雌ＣＤ１マウス８匹の群７つを、０日目および２１日目に、表５に示されている２用量のワクチンを皮下に用いて免疫化し、０日目および３５日目に採血した。
【０２１６】
【表５】
2018002743.tif 000006
【０２１７】
図７および図８には、試験３において試験されたマウスのすべての群についての種々の抗原に対するＩｇＧ力価が示されている（２つの実験からの８＋８マウスからの統合結果）。ＧＭＴ力価が以下の表６に示されている。
【０２１８】
【表６】
2018002743.tif 000007
【０２１９】
ＥＬＩＳＡによって測定されたＧＢＳ  Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩに対するＩｇＧ力価について、マン−ホイットニー検定では、ＧＢＳ単独で構成されたワクチン（群３）でＧＢＳとそれに加えて破傷風トキソイドを含有するワクチンよりも有意に高い力価がもたらされた血清型Ｉａ以外は、ワクチン群間でいかなる有意差も示されなかった。ＯＰＫアッセイでは、ＧＢＳ  Ｉａ、ＩｂまたはＩＩＩに対するＯＰＫ力価の主要な差異（アッセイおよび生物学的変動性の範囲内で）はいずれのワクチン処方物についても検出されなかった。
【０２２０】
ＴＴに対するＩｇＧ力価は、ＧＢＳワクチンおよびＴＴを含有する群において、ＴＴ単独と比較して有意に低かったが（Ｐ＝０．０３）、ＧＭＴ力価の差異は２倍未満であった。ＤＴに対するＩｇＧ応答に関しては、予測通り、ＣＲＭ１９７（解毒されたＤＴ）の影響により、ＧＢＳワクチンを含有する群において高かった。
【０２２１】
図９には、試験３において試験されたマウスのすべての群由来の血清におけるＧＢＳ  Ｉａ、ＩｂおよびＩＩＩに対するＯＰＫ力価が示されている。示されている通り、ＧＢＳ  Ｉａ、ＩｂまたはＩＩＩに対するＯＰＫ力価の主要な差異（アッセイおよび生物学的変動性の範囲内で）はいずれのワクチン処方物についても検出されなかった。
【０２２２】
結論
調査したワクチン処方物の免疫原性に関して以下の観察がなされた：
−  ＧＢＳ三価、ジフテリア、破傷風および百日咳ワクチンにより、調査した処方物すべてについて、処方物を用いて免疫化されたマウスにおいて対応する抗原に対する特異的な抗体価が惹起された。
【０２２３】
−  ＧＢＳと破傷風／ジフテリア／百日咳／ポリオワクチンの組み合わせとの間の免疫学的干渉を試験１（２つのワクチン用量を用いた腹腔内免疫化）および試験２（２つのワクチン用量および３つのワクチン用量を用いた皮下免疫化）において調査した。試験１では、ＧＢＳ抗原、ジフテリア抗原、破傷風抗原および百日咳抗原に対するＩｇＧおよび機能性抗体の応答は、それらを単独で使用するか組み合わせて使用するかに関係なく同等であり、干渉は観察されなかった。試験２では、ＧＭＴ力価の差異は決して４倍を超えないにもかかわらず、ＴｄａＰ中に再構成された３種のＧＢＳ抗原すべてに対するＩｇＧ力価がＧＢＳ単独と比較して低い傾向が観察された。
【０２２４】
−  ＧＢＳと破傷風または破傷風／ジフテリアワクチンとの間の免疫学的干渉を試験３において調査した。マン−ホイットニー検定では、ＧＢＳ単独で構成されたワクチンにより、ＧＢＳとそれに加えて破傷風トキソイドを含有するワクチンよりも有意に高い力価がもたらされた血清型Ｉａ以外は、ワクチン群のいずれの間でもＧＢＳ応答に有意差は示されなかった。同じ試験により、ＧＢＳワクチンのＴＴに対するわずかな干渉が明らかになった（ＴＴ単独と比較して、ＧＢＳワクチンを含有する群において、ＧＭＴの差異が２倍、ＴＴに対するＩｇＧ力価の差異についてＰ＝０．０３）。ＤＴに対するＩｇＧ応答に関しては、予測通り、ＣＲＭ１９７（解毒されたＤＴ）の影響により、ＧＢＳワクチンを含有する群において高かった。
【０２２５】
結論として、調査したワクチンのいずれの間にも強力な干渉の証拠はなかった。
【０２２６】
本発明は、例としてのみ記載されており、本発明の範囲および精神の範囲内に依然としてありながら改変を行うことができることが理解される。
【０２２７】
【化１】
2018002743.tif 000008
【０２２８】
【化２】
2018002743.tif 000009
【０２２９】
【化３】
2018002743.tif 000010
【０２３０】
【化４】
2018002743.tif 000011
【図１−１】
2018002743.tif 000012
【図１−２】
2018002743.tif 000013
【図２−１】
2018002743.tif 000014
【図２−２】
2018002743.tif 000015
【図２−３】
2018002743.tif 000016
【図３】
2018002743.tif 000017
【図４】
2018002743.tif 000018
【図５−１】
2018002743.tif 000019
【図５−２】
2018002743.tif 000020
【図５−３】
2018002743.tif 000021
【図６−１】
2018002743.tif 000022
【図６−２】
2018002743.tif 000023
【図７−１】
2018002743.tif 000024
【図７−２】
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【図８】
2018002743.tif 000026
【図９−１】
2018002743.tif 000027
【図９−２】
2018002743.tif 000028
【外国語明細書】
2018002743000001.pdf