(57)【要約】【課題】ABCG2遺伝子の発現促進用組成物を提供することを課題とする。【解決手段】柑橘類の抽出物を含有する、ABCG2遺伝子の発現促進用組成物。【選択図】図１
2018039764.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
柑橘類の抽出物を含有する、ABCG2遺伝子の発現促進用組成物。
【請求項２】
柑橘類が、シークワーサー（Citrus depressa）、タチバナ（Citrus tachibana）、コ
ウジ（Citrus leiocarpa）、キシュウ（Citrus kinokuni）、ポンカン又はマンダリンオ
レンジ類（Citrus reticulata）、ユズ（Citrus junos）、ハナユ（Citrus hanayu）、ウンシュウミカン（Citrus unshiu）、ジャバラ（Citrus jabara）、ダイダイ（Citrus aurantium）、ナツミカン（Citrus natsudaidai）、ギリミカン（Citrus tardiva）、ジミカン（Citrus succosa）、コベニミカン（Citrus erythrose）、スンキ（Citrus sunki）、キング（Citrus nobilis）、ダンシータンジェリン（Citrus tangerina）、キヨミ（Citrus unshiu×sinensis）、ライム（Citrus aurantiifolia）、ブンタン（Citrus maxima）、ハッサク（Citrus hassaku）、グレープフルーツ（Citrus paradisi）、バレンシアオ
レンジ（Citrus sinensis Valencia）、イヨカン（Citrus iyo）、カボス（Citrus sphaerocarpa）から選択される１以上である、請求項１に記載のABCG2遺伝子の発現促進用組成物。
【請求項３】
抽出物が、シークワーサー（Citrus depressa）、タチバナ（Citrus tachibana）、コ
ウジ（Citrus leiocarpa）、キシュウ（Citrus kinokuni）、ポンカン又はマンダリンオ
レンジ類（Citrus reticulata）、ユズ（Citrus junos）、ハナユ（Citrus hanayu）、ウンシュウミカン（Citrus unshiu）、ジャバラ（Citrus jabara）、ダイダイ（Citrus aurantium）、ナツミカン（Citrus natsudaidai）、ギリミカン（Citrus tardiva）、ジミカン（Citrus succosa）、コベニミカン（Citrus erythrose）、スンキ（Citrus sunki）、キング（Citrus nobilis）、ダンシータンジェリン（Citrus tangerina）、キヨミ（Citrus unshiu×sinensis）、ライム（Citrus aurantiifolia）、ブンタン（Citrus maxima）、ハッサク（Citrus hassaku）、グレープフルーツ（Citrus paradisi）、バレンシアオレンジ（Citrus sinensis Valencia）、イヨカン（Citrus iyo）、カボス（Citrus sphaerocarpa）から選択される１以上の果実及び／又は葉の水又は有機溶媒抽出物である、請求項１または２に記載のABCG2遺伝子の発現促進用組成物。
【請求項４】
抽出物が、エタノール又は含水エタノール抽出物である、請求項３に記載のABCG2遺伝子の発現促進用組成物。
【請求項５】
抽出物が、固形物あたり３０質量％以上のポリメトキシフラボノイドを含有する、請求項３又は４に記載のABCG2遺伝子の発現促進用組成物。
【請求項６】
抽出物が、固形物あたり２０質量％以上のノビレチン及び／又は１０質量％以上のタンゲレチンを含む、請求項３〜５のいずれかに記載のABCG2遺伝子の発現促進用組成物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載のABCG2遺伝子の発現促進用組成物を有効成分として含有する尿酸排泄促進用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ABCG2遺伝子の発現促進用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ABCG2は、ＡＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃａｓｓｅｔｔｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  Ｇ２の略称であり、抗がん剤耐性を示したヒト乳がん細胞から発見された。抗がん剤などの化学物質のトランスポーターとして良く知られている（特許文献１、２）。ABCG2は、広範な組織分布と広い基質認識性を有することが次第に明らかとなってきた。現在では多様な視点から研究が進められている。ABCG2の生理的役割と遺伝子多型（ＳＮＰ等）に伴う薬物動態変動に加え、近年ABCG2による尿酸輸送と痛風発症に係る事が注目されている（非特許文献１、２）。
ABCG2は、ＡＴＰ結合部位を一つしか持たないハーフトランスポーターであり、分子間ジスルフィド結合により形成されるホモ二量体として機能している。そして肝臓、腎臓、小腸、脳など多くの組織に発現しており、基質化合物の胆汁中・尿中への排泄促進、消化管吸収の抑制、血液脳関門・胎盤・精巣におけるバリア機能などを担っていることが非特許文献１に記載されている。
またABCG2の輸送基質は、ゲフィチニブなどの抗がん剤、ロスバスタチンなどのＨＭＧＣｏＡ還元酵素阻害薬、シプロフロキサシンなどのニューキノロン系抗菌薬をはじめとする薬物、ステロイドホルモン・薬物の硫酸抱合体や植物エストロゲン、２−ａｍｉｎｏ−１−ｍｅｔｈｙｌ−６−ｐｈｅｎｙｌｉｍｉｄａｚｏ［４，５−ｂ］ｐｙｒｉｄｉｎｅ（ＰｈＩＰ）に代表されるがん原性物質、尿酸などを輸送することが知られている（非特許文献１）。
また、ゲフィチニブ投与に伴う下痢発症リスクの上昇や、ロスバスタチン服用時のＬＤＬコレステロール低下作用の有意な亢進（４２１Ｃを二つ持つヒトでは−５０．２％、４２１Ａを二つ持つヒトでは−５７．０％であり、この違いは一般にスタチン系薬物の服用量を倍量にした際のＬＤＬコレステロールの低下率６％と比較しても大きい）などの薬理作用や毒性に関する知見も増え始めている。また、ABCG2の薬物移送能と遺伝子多型の関係、及び機能低下について研究が進んでいる。
非特許文献２では、ABCG2の機能を欠失させた遺伝子改変動物（ABCG2  ノックアウトマウス）を用いて尿酸排泄について検討を行い、ノックアウトマウスでは、ABCG2の機能が低下した高尿酸血症のヒトと同様、血清尿酸値と腎臓からの尿酸排泄が増加していたことに加えて、腸管からの尿酸排泄が低下していることを記載している。そしてABCG2の尿酸排泄の機能が低下すると、腸管からの尿酸排泄量が低下し、血清尿酸値が上昇し、腎臓からの尿酸排泄量が増加することが記載されている。
腎臓や消化器におけるABCG2遺伝子の活性化が可能になれば、これらの抗がん剤の副作用抑制や抗がん効果の制御が可能となる。さらに、尿酸排泄機能の低下によって発生する高尿酸血症や痛風の治療剤としても利用可能となる。
【０００３】
ところで、尿酸は、ヒトにおいては、核酸・プリン体が代謝された結果、最終代謝産物として排泄される。この尿酸を排泄するための機能の低下や、プリン体産生の過剰によって、血中の尿酸値が７ｍｇ／ｄｌ以上になると、高尿酸血症と定義される。高尿酸血症発症者は増加しており、日本国内には潜在的な患者を含めて５００万人以上いると言われている。
【０００４】
高尿酸血症状態が慢性化すると、関節炎、尿路結石、痛風腎等の病状を発症する危険性が高まる。特に体温が低い足部などにおいて、尿酸が溶解しきれずに尿酸塩として結晶化して関節包内などに付着すると、白血球群のうち、特に好中球が尿酸結晶を攻撃（捕食
活動）を行うことが知られている。好中球による尿酸結晶捕食活動が激化すると、その活動による過大なエネルギーや、尿酸を抱え込んで死亡した好中球の遺骸そのものによる影響などから、血管壁がダメージを受けて大きな炎症を発生する。当然に、当該部位周囲の神経組織をも相当に刺激し、患者は「内側からの激痛」を感じることとなる。これが痛風である。
また、近年の疫学研究により、高尿酸血症は、心・脳血管障害の独立した危険因子であることが示唆されており、メタボリックシンドロームのバイオマーカーとしての重要性が指摘されてきている。以上のことから、血中尿酸値を適正にコントロールすることは、前記の疾患を予防する観点から重要となり、高尿酸血症を改善する医薬品や食品が強く望まれている。
【０００５】
高尿酸血症の要因として、尿酸産生の過剰、尿酸排泄能の低下が挙げられる。痛風の症例における尿酸クリアランス試験の結果によると、被験者の８５％が尿酸排泄能の低下を示すことが明らかとなっており、高尿酸血症のうち排泄低下型の高尿酸血症の占める割合が高いと考えられている。
【０００６】
これまでに、尿酸値低下用薬剤として、尿酸産生抑制剤のアロプリノールや尿酸排泄促進剤のベンズブロマロン等が提供されている。しかし、これらの薬剤は、効果がある反面、肝障害等の副作用を伴うことが多い。
また特許文献３には、ケルセチンを含む食品が、キサンチンオキシダーゼ阻害によって高尿酸血症を改善することが記載されている。
特許文献４には、ハマメリスがキサンチンオキシダーゼを阻害し、高尿酸血症を改善することが記載されている。
特許文献５には、エラグ酸を含む組成物、高尿酸血症のラットにおいて尿酸排泄を促進することが記載されている。
特許文献６には、わさびの水性溶媒抽出物が高尿酸血症のラットにおいて尿酸排泄を促進することが記載されている。
また特許文献７には、沖縄産柑橘類であるシークワーサー果皮抽出物とパパイヤを乳酸菌で発酵させた発酵物が尿酸排泄を促進し、マウス腎臓中の尿酸トランスポーターＵＲＡＴ１の遺伝子発現を抑制し、尿酸の再吸収を抑制することが記載されている。
これらの食品由来の成分は、尿酸産生抑制剤のアロプリノールや尿酸排泄促進剤のベンズブロマロンに比して安全性が高いことが予想されるが、具体的な製品は未だ提供されていない。
【０００７】
近年、シークワーサーのポリメトキシフラボノイドには様々な薬効が存在することが知られてきた。その作用は、痒み・炎症の抑制（特許文献８）、メタボリックシンドロームの予防・治療（特許文献９）、キサンチンオキシダーゼの阻害（特許文献１０）、筋萎縮の抑制（特許文献１１）、血圧・血糖上昇抑制（特許文献１２）、癌の予防・治療（特許文献１３）など多岐に渡っている。またポリメトキシフラボノイドのうちポリメトキシフラボンであるノビレチン及びタンゲレチンを柑橘類から熱水抽出し、アルカリ処理して高濃度のポリメトキシフラボンを含む水不溶性抽出物として得る方法が提案されている（特許文献１４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２００９／０７２２６７号
【特許文献２】国際公開第２０１０／１５０５２５号
【特許文献３】特開２００２−１４５８７５号公報
【特許文献４】特開２００３−１７４８５７号公報
【特許文献５】特開２００６−２７３７６２号公報
【特許文献６】特開２００７−２１７３６６号公報
【特許文献７】特開２０１６−１５５８２５号公報
【特許文献８】国際公開第２００７／０９７２８６号
【特許文献９】国際公開第２０１０／１３４３７３号
【特許文献１０】国際公開第２０１１／１０８０５９号
【特許文献１１】国際公開第２０１３／０９９９８２号
【特許文献１２】特開２００１−２４０５３９号公報
【特許文献１３】特開２０１３−１５９５７８号公報
【特許文献１４】特許第５７３５１８４号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】高田龍平、松尾洋孝、生化学  第８３巻  第１２号、１１３１〜１１３５、２０１１年
【非特許文献２】東京薬科大学・防衛医科大学・東京大学の連名による２０１２年４月２付  プレスリリース
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明者は、上記のような背景技術を基に研究を行い、シークワーサーをはじめとする柑橘類の果汁及び果皮又は葉に含有されているポリメトキシフラボノイドについて、ABCG2遺伝子の発現促進作用の探索を行ったところ、ノビレチン及び／又はタンゲレチンを高濃度に含む組成物がABCG2遺伝子の発現を促進し、さらに強い尿酸排泄促進作用を示すことを見いだし、本発明をなした。
【００１１】
すなわち、本発明の課題は、ABCG2遺伝子の発現促進用組成物及びこれを用いた尿酸排泄促進用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の主な構成は以下の通りである。
１．柑橘類の抽出物を含有する、ABCG2遺伝子の発現促進用組成物。
２．柑橘類が、シークワーサー（Citrus depressa）、タチバナ（Citrus tachibana）、
コウジ（Citrus leiocarpa）、キシュウ（Citrus kinokuni）、ポンカン又はマンダリン
オレンジ類（Citrus reticulata）、ユズ（Citrus junos）、ハナユ（Citrus hanayu）、ウンシュウミカン（Citrus unshiu）、ジャバラ（Citrus jabara）、ダイダイ（Citrus aurantium）、ナツミカン（Citrus natsudaidai）、ギリミカン（Citrus tardiva）、ジミカン（Citrus succosa）、コベニミカン（Citrus erythrose）、スンキ（Citrus sunki）、キング（Citrus nobilis）、ダンシータンジェリン（Citrus tangerina）、キヨミ（Citrus unshiu×sinensis）、ライム（Citrus aurantiifolia）、ブンタン（Citrus maxima）、ハッサク（Citrus hassaku）、グレープフルーツ（Citrus paradisi）、バレンシアオレンジ（Citrus sinensis Valencia）、イヨカン（Citrus iyo）、カボス（Citrus sphaerocarpa）から選択される１以上である、１に記載のABCG2遺伝子の発現促進用組成物。
３．抽出物が、シークワーサー（Citrus depressa）、タチバナ（Citrus tachibana）、
コウジ（Citrus leiocarpa）、キシュウ（Citrus kinokuni）、マンダリンオレンジ類（Citrus reticulata）、ユズ（Citrus junos）、ハナユ（Citrus hanayu）、ウンシュウミ
カン（Citrus unshiu）、ジャバラ（Citrus jabara）、ダイダイ（Citrus aurantium）、ナツミカン（Citrus natsudaidai）、ギリミカン（Citrus tardiva）、ジミカン（Citrus
succosa）、コベニミカン（Citrus erythrose）、スンキ（Citrus sunki）、キング（Citrus nobilis）、ダンシータンジェリン（Citrus tangerina）、キヨミ（Citrus unshiu×sinensis）、ライム（Citrus aurantiifolia）、ブンタン（Citrus maxima）、ハッサク（Citrus hassaku）、グレープフルーツ（Citrus paradisi）、バレンシアオレンジ（Citrus sinensis Valencia）、イヨカン（Citrus iyo）、カボス（Citrus sphaerocarpa）から選択される１以上の果実及び／又は葉の水又は有機溶媒抽出物である、１または２に記載のABCG2遺伝子の発現促進用組成物。
４．抽出物が、エタノール又は含水エタノール抽出物である、３に記載のABCG2遺伝子の発現促進用組成物。
５．抽出物が、固形物あたり３０質量％以上のポリメトキシフラボノイドを含有する、３又は４に記載のABCG2遺伝子の発現促進用組成物。
６．抽出物が、固形物あたり２０質量％以上のノビレチン及び／又は１０質量％以上のタンゲレチンを含む、３〜５のいずれかに記載のABCG2遺伝子の発現促進用組成物。
７．１〜６のいずれかに記載のABCG2遺伝子の発現促進用組成物を有効成分とする尿酸排泄促進用組成物。
【発明の効果】
【００１３】
本発明により新たなABCG2遺伝子の発現促進用組成物が提供される。また、尿酸排泄促進用組成物が提供される。本発明により得られた組成物は、抗がん剤の副作用低減や、ABCG2遺伝子の発現低下や、機能不全に伴う疾患中でも高尿酸血症や痛風などの予防治療剤及びこれらの疾患の改善用飲食品組成物とすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の組成物を投与した高尿酸血症モデルラットの腎臓における尿酸トラスポーターABCG2遺伝子の発現を確認した試験結果を示すグラフである。
【図２】本発明の組成物を投与した高尿酸血症モデルラットの尿中尿酸量を測定した試験結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、柑橘類の抽出物を含有する、ABCG2遺伝子の発現促進用組成物及び尿酸排泄促進用組成物に係る発明である。本発明に使用する柑橘類としては、ノビレチン及び／又はタンゲレチンを含むことが明らかとなっているものであれば使用可能である。例えば、ミカン科に属するシークワーサー（Citrus depressa）、タチバナ（Citrus tachibana）、コウライタチバナ（Citrus nipponokoreana）、コウジ（Citrus leiocarpa）、キシュウ（Citrus kinokuni）、マンダリンオレンジ類（Citrus reticulata）、ユズ（Citrus junos）、ハナユ（Citrus hanayu）、ウンシュウミカン（Citrus unshiu）、ジャバラ（Citrus jabara）、ダイダイ（Citrus aurantium）、ナツミカン（Citrus natsudaidai）、ギリミカン（Citrus tardiva）、ジミカン（Citrus succosa）、コベニミカン（Citrus erythrose）、スンキ（Citrus sunki）、キング（Citrus nobilis）、ダンシータンジェリン（Citrus tangerina）、キヨミ（Citrus unshiu×sinensis）、ライム（Citrus aurantiifolia）、ブンタン（Citrus maxima）、ハッサク（Citrus hassaku）、グレープフルーツ（Citrus paradisi）、バレンシアオレンジ（Citrus sinensis Valencia）、イヨカン（Citrus iyo）、カボス（Citrus sphaerocarpa）等が挙げられる。なかでもシークワーサーは、ノビレチン及び／又はタンゲレチンの供給源としてしばしば利用されている。
シークワーサー（シークワッシャーあるいはシークヮーサーともいう）は、学名をCitrus depressaとする、ミカン科ミカン属の植物であって、琉球諸島及び台湾に自生する柑橘類である。果実は、ヒラミレモンの別名があり、沖縄県全域において広く食されている。
タチバナは、日本に古くから野生していた日本固有のミカン科ミカン属の柑橘であり、学名をCitrus tachibanaとする、ミカン科ミカン属の植物である。
コウライタチバナは、学名をCitrus nipponokoreanaとする。萩市と韓国の済州島にのみ自生するミカン科ミカン属の柑橘類で、果皮をマーマーレードに利用する。
コウジ（「甘子」または「柑子」）は、学名をCitrus leiocarpaとする、ミカン科ミカン属の常緑小高木で柑橘類の一種で「ウスカワ（薄皮）ミカン」とも言われる。
キシュウは、キシュウミカン（紀州蜜柑）とも呼ばれ、学名をCitrus kinokuniとする、ミカン科ミカン属の柑橘類の一種であり、西日本では小ミカンと呼ばれる。
マンダリンオレンジ類は、学名をCitrus reticulataとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。果皮が薄く手でむくことができるのが特徴である。この類にはポンカンやデコポン（シラヌイ）、タンジェリン、ダンシータンジェリン、地中海オレンジなどが含まれる。
ユズは、学名をCitrus junosとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。ホンユズとも呼ばれる。
ハナユ（ハナユズ）は、小形で、早熟性で一才ユズとも呼ばれ、学名をCitrus hanayuとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。
ウンシュウミカン（温州蜜柑）は、学名をCitrus unshiuとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。様々な栽培品種があり、食用として利用される。
ジャバラは、学名をCitrus jabaraとする、ミカン科ミカン属の柑橘類の一種で自然交雑種である。和歌山県東牟婁郡北山村が原産地で、酸味や苦味が強くフラボノイドを多く含むことが知られている。
ダイダイ（橙）は、学名をCitrus aurantiumとする、ミカン科ミカン属の常緑樹で別名をビターオレンジとする柑橘類である。
ナツミカン（夏蜜柑）は、学名をCitrus natsudaidaiとする、ミカン科ミカン属の柑橘類であり、ナツカン（夏柑）、ナツダイダイ（夏橙）とも呼ばれる柑橘類である。
ギリミカンは、学名をCitrus tardivaとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。
ジミカンは、学名をCitrus succosaとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。
コベニミカンは、学名をCitrus erythroseとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。
スンキは、学名をCitrus sunkiとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。
キングは、学名をCitrus nobilisとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。
キヨミは、ミカン科ミカン属の柑橘類であって、温州ミカン（宮川早生 Citrus unshiu）と外国産のトロビタオレンジ（Citrus sinensis）を交配させたものである。品種名の「清見」は、育成地（静岡県静岡市）の近くにある清見潟（きよみがた）・清見寺（せいけんじ）に由来する。
ライムは、学名をCitrus aurantiifoliaとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。インドからミャンマー、マレーシア一帯の熱帯地域を原産とする低木であり、日本国内でも生産されている。果実としてはライムの木の実である。
ブンタンは、学名をCitrus maximaとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。標準和名はザボン（朱欒、香欒）。ボンタンとも呼ばれ、日本国内で広く生産される。
ハッサクは、学名をCitrus hassakuとする、日本原産のミカン科ミカン属の柑橘類である。日本国内で広く生産される。
グレープフルーツは、学名をCitrus paradisiとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。主として亜熱帯を原産とし、日本国内で広く輸入販売されている。
バレンシアオレンジは、学名をCitrus sinensis Valenciaとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。米国で開発されたスイートオレンジとして、広く世界中に流通している。
イヨカンは、学名をCitrus iyoとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。わが国の代表的な柑橘であり、主として愛媛県で栽培されている。
カボスは、学名をCitrus sphaerocarpaとする、ミカン科ミカン属の柑橘類である。カボスはユズの近縁種で、主として大分県で生産され、わが国で広く流通している果実である。酸味に富むとともに独特の香りを有しており、刺身や焼き魚等の薬味として、あるいは鍋料理のポン酢や、酢の物等の調理に用いられる。
本発明はこれらの柑橘類に由来するノビレチン及び／又はタンゲレチンを含有する組成物を利用することができる。また上記に例示した柑橘類であっても、ノビレチン及び／又はタンゲレチンを含むものであれば本発明の組成物の原料として利用可能である。
【００１６】
本発明のABCG2遺伝子の発現促進用組成物及び尿酸排泄促進用組成物は、柑橘類の抽出物、またはポリメトキシフラボノイドを有効成分として含有する。ポリメトキシフラボノイドとしては、シークワーサーや柑橘類の果実又は葉の抽出物に含まれるポリメトキシフラボノイドが挙げられる。柑橘類の果実又は葉の抽出物中に含まれるポリメトキシフラボノイドは、主に下記式（１）で表される構造を有し、具体的には、ノビレチン、タンゲレチン、５−デメチルノビレチン、８−デメトキシノビレチン（シネンセチン）、６−デメトキシタンゲレチン、６−デメトキシノビレチン、シトロミチン、５，６，７，８，４−ペンタメトキシフラバノン等が挙げられる。これらの中では、ノビレチン及びタンゲレチンが好ましい。下記化学式（１）において、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、各々ノビレチンでは、Ｒ＝ＯＭｅ、Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝Ｍｅ、Ｒ４＝ＯＭｅであり、タンゲレチンでは、Ｒ＝ＯＭｅ、Ｒ１＝Ｈ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝Ｍｅ、Ｒ４＝ＯＭｅである（ただし、Ｍｅはメチル基、ＯＭｅはメトキシ基、Ｈは水素を表す）。
ポリメトキシフラボノイドは、一種でもよく、任意の２種以上の混合物であってもよい。
【００１７】
【化１】
2018039764.tif 000003
式（１）
【００１８】
ポリメトキシフラボノイドは、シークワーサーをはじめとする柑橘類、なかでもシークワーサーやポンカン、バレンシアオレンジに多く含まれており、これを利用すると効率が良く好ましい。またその他のポリメトキシフラボノイドを含有する植物の果実、葉、根、茎等から抽出しても良い。あるいは、化学合成により製造しても良い。
ポリメトキシフラボノイドを含む抽出物は、柑橘類の果実又は果皮又は葉から水又は溶媒抽出することができる。例えばシークワーサー抽出物は、シークワーサーの果実及び／又は葉から、熱水及び／又は有機溶媒を用いて抽出することにより製造することができる。有機溶媒は含水物であってもよい。その他の柑橘類も同様である。
【００１９】
柑橘類の果実及び／又は葉は、全体であってもよく、その一部であってもよい。例えば、果実は、果肉又は果皮であってもよい。さらに、果実及び／又は葉は、そのまま用いてもよく、破砕物であってもよい。また、果実及び／又は葉は、果実及び／又は葉、もしくはそれらの一部の搾汁残渣であってもよい。果実の皮にはポリメトキシフラボノイドが多く含まれるため原料として好ましい。また資源の有効利用の面からも好ましい。
【００２０】
有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、もしくはこれらの有機溶媒の含水物、又はこれらの有機溶媒及びその含水物のいずれかを組み合わせたもの等が挙げられる。これらの中ではエタノールが好ましい。エタノールの含水率は、特に制限されないが、好ましくは０〜９０質量％、より好ましくは０〜４０質量％である。
【００２１】
有機溶媒抽出において、果実及び／又は葉等に対する有機溶媒の量は、特に制限されないが、果実及び／又は葉等：有機溶媒の比（重量比）は好ましくは１：１〜１：１００、より好ましくは１：１〜１：２０である。
【００２２】
抽出の方法は、特に制限はないが、通常、柑橘類果実及び／又は葉等に熱水又は有機溶媒を加えて、好ましくは５分〜３時間撹拌抽出した後、ろ過又は遠心分離等の固液分離手段により液相を採取する。また、得られた抽出液は、脱色等を目的として活性炭処理してもよい。
【００２３】
抽出液は、さらにポリメトキシフラボノイドを特異的に吸着する多孔性吸着樹脂等を用いた吸着クロマトグラフィによってポリメトキシフラボノイドを濃縮することができる。
得られる回収物は、減圧濃縮、凍結乾燥によって溶媒を除去する。かくして得られるポリメトキシフラボノイドを含む抽出物は、固形物あたり３０質量％以上のポリメトキシフラボノイドを含有する。また、固形物あたり２０質量％以上のノビレチン及び／又は１０質量％以上のタンゲレチンを含有する。
特許文献１４には、
（１−１）柑橘類を熱水で処理することにより熱水処理物を得る工程
（１−２）前記熱水処理物を乾燥することにより乾燥物を得る工程
（１−３）前記乾燥物をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程
（２）柑橘類をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程
（３）前記ノビレチン及びタンゲレチン溶解物を濃縮及び／又は乾燥することにより、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を得る工程
（４）前記ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を希アルカリで処理することにより、不溶性成分としてノビレチン及びタンゲレチン含有物を得る工程からなるポリメトキシフラボンを含む組成物の製造工程が開示されており、このような工程を採用しても良い。
またノビレチン及び／又はタンゲレチンを含む柑橘類の抽出物は、健康食品やサプリメントの原料として市販されており、これを用いることもできる。シークワーサーの抽出物としては、「ビレチン」（商品名：アークレイ株式会社製）を例示することができる。
【００２４】
本発明のABCG2遺伝子の発現促進用組成物及び尿酸排泄促進組成物は、そのままあるいは各種賦形剤を添加して製剤化する。製剤としては顆粒剤、錠剤、カプセル剤を例示することができる。
また組成物をそのまま、あるいは製剤化したものを飲食品に添加して用いることもできる。
なお製剤化に当たっては、本発明の組成物の目的を阻害しない範囲で使用することができる。具体的には、シクロデキストリン、へミセルロース、リグニン、グアーガム、コンニャクマンナン、イサゴール、アルギン酸、寒天、カラギーナン、キチン、カルボキシメチルセルロース、ポリデキストロースなどの食物繊維や増粘剤、食用油、カルシウム、鉄、ナトリウム、亜鉛、銅、カリウム、リン、マグネシウム、ヨウ素、マンガン、セレンなどのミネラル；ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ナイアシン、葉酸、パントテン酸などの脂溶性又は水溶性のビタミン群、リセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、リン脂質、アラビアガム、キサンタンガム、トラガカントガム、ローカストビーンガムなどの乳化剤や分散剤、増量剤、賦形剤、保存料・酸化防止剤、風味調整剤や香料、塩化ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、グリシン、コハク酸、乳酸ナトリウムなどの呈味料、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸、アジピン酸、フマル酸、リンゴ酸などの酸味料、マルチトール、アスパルテームなどの低カロリー甘味料、着色剤などである。
本発明の組成物には、必要に応じて甘味料や酸味料、香料などを添加することもできる。
また、本発明の尿酸排泄促進用組成物は、ノビレチン及び／又はタンゲレチンとして１０〜５００ｍｇ、好ましくは５０〜３００ｍｇ、特に好ましくは１００〜２００ｍｇを含有するように配合する。
【実施例】
【００２５】
以下に本発明の組成物を用いた試験例を示し、本発明を説明する。
１．ABCG2遺伝子発現促進試験
（１）試験試料の調製
バレンシアオレンジ、マンダリンオレンジ、ダイダイの果皮混合物を特許第５７３５１８４号公報に開示されている方法で抽出した抽出物を試験試料とした。
すなわち、上記果皮混合物５００ｇをよく洗浄し、１８００ｍＬの約７０℃の蒸留水を加えて約７０℃の湯浴中に入れ、３時間加熱処理した。得られた加熱処理物を、保留粒子径３μｍのろ紙（ADVANTEC社製、No.131）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、残渣を得た。残渣を圧搾機にかけて搾汁した。
搾汁後の搾汁残渣３００ｇ（湿重量）を秤量し、ドライヤー（パナソニック社製、品番
EH5101P ターボドライ）を用いて、約６０℃で３０分間乾燥させ、乾燥果皮１５０ｇを得た。ここに、搾汁残渣の重量の２倍容の３０％（ｖ／ｖ）エタノールを加えて、室温で、３日間エタノール抽出を行った。保留粒子径３μｍのろ紙（ADVANTEC社製、No.131）を敷いたブフナーロートを用いて吸引ろ過し、ろ液３２００ｍｇを得た。得られたろ液をロータリーエバポレータで濃縮し、濃縮液を得た。
濃縮液を１０倍容の１％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液を加えてスターラーで１日間、室温にて撹拌した。得られた不溶性成分を、２倍容の水で洗浄した。残った不溶性成分を５〜１０倍容の１００％（ｖ／ｖ）エタノールで溶出させた。次いでエタノール溶出成分を、ブフナーロートを用いて沈殿物をろ別した。得られたろ液の濃縮乾固物６６．３ｍｇ中のノビレチンとタンゲレチンとの含有量は、ＨＰＬＣで測定した。ノビレチン及びタンゲレチン含有率は約７７重量％であった。なお、回収率（％）は、シークワーサーの搾り粕５００ｇに含まれるノビレチン及びタンゲレチンの含有量を５００ｍｇと想定して求めた。得られた抽出物をポリメトキシフラボノイド含量が３０％程度になるようにデキストリンで希釈した抽出物をＨＰＬＣ法で測定したとき、固形物重量あたりノビレチン２１．３質量％、タンゲレチン１０．７質量％含有していた。
【００２６】
（２）試験方法
１）動物試験投与用試料調製方法
試験試料４２２．５５ｍｇを秤量し、メノウ乳鉢と乳棒で粉砕した。これにカルボキシメチルセルロースナトリウム（関東化学株式会社製）０．５Ｗ／Ｖ％水溶液を加えて３０ｍＬにメスアップしたものを投与試料とした。
【００２７】
２）試験動物
７週齢の雄性ウィスター系ラット（SLC）を１群８匹として、試験群、無処置群、対照群の３群に群分けし、予備飼育を１週間行った。
【００２８】
３）飼育条件
温度２２±３℃、湿度５０±２０％、換気回数１３〜１７回／時間（ＨＥＰＡフィルターろ過オールフレッシュ方式）、照明時間８：００〜２０：００（明／暗１２時間）の飼育室内で飼育した。ラットはステンレス製２連ケージに個別収容し、無処置群には飼料（日本クレア株式会社製  ＣＥ−２粉末）を自由に与え、試験群、対照群には高尿酸誘導飼料を自由に与えた。また飲料水も自由摂取させた。
なお高尿酸誘導飼料はＣＥ−２粉末にリボ核酸（酵母由来）を２．５Ｗ／Ｗ％及びオキソ酸カリウム１Ｗ／Ｗ％を粉混合したものを用いた。この飼料はラットの高尿酸血症モデルのために汎用されている。
【００２９】
４）試験試料の投与方法
試験群には、１日１回、７日間連続で、１）で調製した試験試料を、経口ゾンデを用いて、胃内に体重当たり１０ｍＬ／ｋｇ強制投与した。対照群には、カルボキシメチルセルロースナトリウム０．５Ｗ／Ｖ％水溶液を同様に投与した。
【００３０】
５）尿酸排泄関連遺伝子の変化測定
試験の最終日に動物より腎臓を摘出した。この腎臓をRNAlater（Ambion Thermo Fisher Scientific社）中に入れ使用まで−８０℃保存した。ＲＮＡの抽出にはRNeasy Plus Universal Mini Kit（QIAGEN社）を用いた。
前記の凍結していた腎臓を解凍し、３０ｍｇ程度に切断しQIAzolLysisReagentを入れたマイクロチューブに入れた。ハンディマイクロホモジナイザー（マイクロテック社）を用いて腎臓をホモジナイズし、その後の操作は試薬に添付されたプロトコールに従った。
【００３１】
抽出したＲＮＡの濃度をNanoDrop 2000c（Thermo Fisher Scientific社）を用いて測定し、ＲＮａｓｅ Ｆｒｅｅ水でＲＮＡ濃度を２００ｎｇ／μＬに調製した。これをPrime Script RT reagent Kit（タカラバイオ社）を用いて逆転写し、ｃＤＮＡを調製した。０．２ｍＬのPCRチューブに下記の表１のとおり反応液を調製しPCR Thermal Cycler Dice（タカラバイオ社）を用いて反応させた。反応時間は３７℃、１５分間とし、反応停止は８５℃、５秒とした。
【００３２】
【表１】
2018039764.tif 000004
【００３３】
ABCG2の発現量解析はＲＮＡ Ｆｒｅｅの精製水で１０倍に希釈したｃＤＮＡを用いて、SYBR Premix Ex Taq II（タカラバイオ社）及びLight Cycler 480（Roche社）によりＰＣＲを行った。ＰＣＲ反応液の組成を下記表２に示す。
【００３４】
【表２】
2018039764.tif 000005
【００３５】
なおＰＣＲに用いたプライマーの配列は次のとおりである。
Forward primer：ctgacccttccatcctcttc
Reverse primer：cgaggctggtgaatggagaa
【００３６】
Ｃｐ値はAbs Quant／2nd Derivative Max法で算出し、発現
量の比較にはＥメソッド法を用いた。なおABCG2遺伝子の発現量はＧＡＰＤＨに対する相対比として求めた
【００３７】
（３）結果
ABCG2遺伝子の対照群の発現量に対する相対発現量（対照群の発現量を１とした時の相対値比較）を下記表３及び図１に示す。
【００３８】
【表３】
2018039764.tif 000006
【００３９】
試験群は有意にABCG2遺伝子の発現量を増加させていた。
【００４０】
２．尿酸排泄量の測定
前記のABCG2試験において使用した動物を対象とした。
投与６日目に採尿ケージにラットを移し、７日目の２４時間尿を採取した。採取した尿は尿酸値の測定まで−２０℃で冷凍保存した。尿酸の測定はQuantic Chrom Uric Acid Assay Kit（フナコシ株式会社）を用いて測定し、１時間当たりの尿酸排泄量を求めた。
【００４１】
（３）試験結果
尿中の１時間当たりの排泄量を下記表４及び図２に示す。
【００４２】
【表４】
2018039764.tif 000007
【００４３】
試験群は、有意に１時間当たりの尿酸排泄量が増加していた。
以上の試験の結果、ノビレチン２１．３質量％、タンゲレチン１０．７質量％を含有する組成物を１日１回７日間連続投与したところ、試験品を投与した高尿酸血症モデル動物において、顕著に尿酸排泄量を増加させることがわかった。またこの作用は、尿酸排泄に関与する尿酸トランスポーターABCG2遺伝子の活性化に由来しているものと考えられた。
すなわち、ノビレチン及び／又はタンゲレチンを含む柑橘類抽出物は、ABCG2の活性化に有用であり、さらに尿酸排泄促進作用を有するため、高尿酸血症の治療や予防に有用であるということができる。
【図１】
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【図２】
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