(57)【要約】【課題】ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）による感染に対し、ヒトにワクチン接種するための免疫学的組成物を提供する。【解決手段】ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する防御的免疫をヒトに付与するためのワクチンであって、  ＨＩＶポリペプチドまたは断片、またはそれらの誘導体をコードするウイルス・ベクターを含む第１の組成物、および  ＨＩＶポリペプチドまたは断片、またはそれらの誘導体を含む第２の組成物、を含み、  前記第１の組成物が少なくとも１回ヒトに投与され、さらにその後で、前記第２の組成物が少なくとも１回前記ヒトに投与されるワクチン。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト免疫不全ウイルス−１（ＨＩＶ−１）サブタイプＢおよび／またはＥに対してヒト集団を、少なくとも３年間、該集団の少なくとも３分の１のワクチンの有効性で防御免疫するためのワクチンであって、
１）ＨＩＶ−１サブタイプＢまたはＥ ｅｎｖ、ｇｐ４１、ｇａｇおよびｐｏｌ免疫原をコードするウイルス・ベクターを含む、少なくとも１用量の第１の組成物、および
２）合計約６００μｇのＨＩＶ−１サブタイプＢおよびＥのｇｐ１２０ポリペプチド免疫原を含む、少なくとも１用量の第２の組成物、を含み、
ａ）ワクチンの有効性は、ワクチン投与の少なくとも３年後における血漿ＨＩＶウイルス負荷を測定することによって特定され、ワクチン接種後少なくとも３年間、ＨＩＶ−１サブタイプＢおよび／またはＥに感染しない前記集団中のヒトの割合を示し、かつＯ’Ｂｒｉｅｎ−Ｆｌｅｍｉｎｇ法で調整した９５％信頼区間においてコックス比例ハザード法を用いて特定して統計的に有意であり、
ｂ）前記第２の組成物の少なくとも１回の投与の前に、前記第１の組成物が、ヒトにおいて免疫応答の発生をもたらすのに十分な長さの投与間隔で、繰り返し投与され、および
ｃ）前記第２の組成物が、前記第１の組成物と同時投与される、ワクチン。
【請求項２】
前記組成物のうち少なくとも１つが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）のアミノ酸配列に対応したアミノ酸配列を含む、請求項１記載のワクチン。
【請求項３】
前記ＨＳＶのアミノ酸配列が、配列番号７の配列を含む、請求項２記載のワクチン。
【請求項４】
前記第１および第２の組成物の両方の投与が、粘膜、皮内、筋肉内、皮下、皮膚乱切、節内および腫瘍内からなる群より選択される経路を通じて行われる、請求項１記載のワクチン。
【請求項５】
前記第１および第２の組成物が、ヒトの別々の部位に投与される、請求項１記載のワクチン。
【請求項６】
各投与において投与されるウイルス・ベクターの量が約１０7ＣＣＩＤ50と同等であり、各投与において投与されるポリペプチドの総量が約６００μｇである、請求項１記載のワクチン。
【請求項７】
前記ウイルス・ベクターが、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、およびポックスウイルスからなる群より選択される、請求項１記載のワクチン。
【請求項８】
前記ウイルス・ベクターがポックスウイルスである、請求項７記載のワクチン。
【請求項９】
前記ポックスウイルス・ベクターが、ワクシニア、ＮＹＶＡＣ、改変ウイルス・アンカラ（ＭＶＡ）、アビポックス、カナリアポックス、ＡＬＶＡＣ、ＡＬＶＡＣ（２）、鶏痘、およびＴＲＯＶＡＣからなる群より選択される、請求項８記載のワクチン。
【請求項１０】
前記ウイルス・ベクターが、ＮＹＶＡＣ、ＡＬＶＡＣ、およびＡＬＶＡＣ（２）からなる群より選択されるポックスウイルスである、請求項９記載のワクチン。
【請求項１１】
前記ウイルス・ベクターが、ＨＩＶ ｇｐ１２０ ＭＮ １２−４８５、ＨＩＶ ｇｐ１２０ Ａ２４４ １２−４８４、およびＨＩＶ ｇｐ１２０ ＧＮＥ８ １２−４７７からなる群より選択される少なくとも１つのポリペプチドをコードする、請求項１記載のワクチン。
【請求項１２】
前記ウイルス・ベクターが、ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）である、請求項１記載のワクチン。
【請求項１３】
前記ウイルス・ベクターが、配列番号５の核酸配列を含む、請求項１記載のワクチン。
【請求項１４】
前記第２の組成物が、ＡＩＤＳＶＡＸ（登録商標）Ｂ／ＢまたはＡＩＤＳＶＡＸ（登録商標）Ｂ／Ｅである、請求項１記載のワクチン。
【請求項１５】
前記ウイルス・ベクターがＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）であり、前記第２の組成物がＡＩＤＳＶＡＸ（登録商標）Ｂ／Ｅである、請求項１記載のワクチン。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本願は、２００９年９月１７日出願の米国仮特許出願第６１／２４３，５２２号の優先権を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、一般に免疫学の分野に関し、特に、ＨＩＶへの感染および疾病に対し免疫を付与し、宿主に防御を生じる方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）はヒト・レトロウイルスであり、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の病原因子である。ＨＩＶの発見から２０年以上経過したにもかかわらず、疾病を改善する、または感染を予防するのに効果的なワクチンは見出されていない。２００７年の終わりまでに、世界中の３０００万人を超える人々がＨＩＶに感染し、それらの人々のうち２０００万を超える人々がサハラ以南のアフリカに居住している（Report on the Global AIDS Epidemic、Joint United Nations Programme on HIV/AIDS（UNAIDS）、2008）。
【０００４】
将来のウイルス感染に対する耐性の特徴の１つは、ウイルス性の病原菌を認識することができる「中和抗体」の生成である。別の尺度は、感染細胞に対する細胞性免疫である。典型的なウイルス感染では、感染からの回復の先駆けとして、中和抗体および細胞性免疫が生成する。しかしながら、ＨＩＶ−１感染では、中和抗体および細胞性免疫は感染の非常に初期に現れ、ウイルス負荷の一時的な減少のみに関わるとされてきた。中和抗体および細胞性免疫の生成にもかかわらず、ＨＩＶ−１感染におけるウイルス複製は回復し、ＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）が発現する。よって、ＨＩＶ−１感染では、中和抗体および細胞性免疫は防御免疫の正確な尺度ではない。ワクチンがＨＩＶによる新しい感染から防御することを意味する防御免疫は、当業者にとっての主要な未完のゴールである。
【０００５】
幾つかの潜在的なワクチンをヒトに試験してきたが、防御作用は認められなかった。例えばｇｐ１２０をベースとするポリペプチドワクチンなどが、単独ワクチンとして、またはプライム・ブースト法で試験されてきたが（例えばＡＩＤＳＶＡＸ（登録商標）Ｂ／Ｂ、「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅ（ＶａｘＧｅｎ社製））、ＨＩＶ感染に対しては防御を示さなかった（非特許文献１〜３）。動物モデル（例えばサル）を利用した多くの研究も行われた。霊長類のデータは有益であるが、しかしながら、それらはまた、ワクチンに関連した防御を媒介する免疫学的機序についての我々の理解の欠如を目立たせ、有望な候補ワクチンを実験的に試験することを目的とした、ヒトにおける有効性研究を行う必要性を強調することとなっている。
【０００６】
ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）ワクチンは、ＨＩＶ−１ ｅｎｖ遺伝子およびｇａｇ遺伝子の産生物を発現する組み換えカナリアポックス由来のウイルス調製物である。遺伝子は、それぞれワクシニアウイルスＨ６および１３Ｌプロモーターの制御下でＣ６遺伝子座に挿入される。ｇｐ１２０ ｅｎｖ配列はＨＩＶ−９２ＴＨ０２３（サブタイプＥ）株に由来するが、ｇｐ４１のアンカー部分はＨＩＶ−ＬＡＩ（サブタイプＢ）株に由来する。ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ感染細胞は、ｅｎｖおよびｇａｇタンパク質を天然に近い構造で与える（非特許文献４）。さらには、ＭＨＣクラス１経路のＨＩＶ−１タンパク質の細胞内プロセシングは、細胞傷害性Ｔリンパ球の刺激を促進する。タイ国のサブタイプＢに由来するｇａｇの使用についての論理的根拠は、一部には、ウイルス・サブタイプの中でも、サブタイプＢがｇａｇ遺伝子の一部を保存していることにある。したがって、ｖＣＰ１５２１によって誘発されるｇａｇ特異的ＣＴＬは、サブタイプＢではない初代ウイルスのＣＴＬエピトープと交差反応しうる。ＡＶＥＧ支援プライム・ブースト試験（ｖＣＰ２０５単独、またはＣｈｉｒｏｎ ＳＦ２ ｇｐ１２０／ＭＦ５９ブースト）から得られたデータは、一部のワクチン接種者のＣＤ８+ＣＴＬが、サブタイプＥを含む、非サブタイプＢウイルスに感染した標的細胞を認識したことを示した（非特許文献５）。
【０００７】
このデータを考慮して、プライム・ブースト免疫方式を利用して防御を提供するためのいくつかの試みがなされてきた（非特許文献６）。例えば、「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅ（ＶａｘＧｅｎ社製）およびＡＬＶＡＣ−ＨＩＶでは、それぞれ、プライムおよびブースト組成物が使用されており、中和抗体を誘発することが示されている（非特許文献７）。安全性試験の１つにおいて、中和抗体が８４％〜１００％の被験者に観察され、細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）は１６〜２５％の被験者に観察され、リンパ増殖は５５〜９３％の被験者に観察された。別の安全性試験では、中和抗体は３１％〜７１％の被験者に観察され、細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）は約２５％の被験者に観察され、リンパ増殖は５８〜７１％の被験者に観察された。しかしながら、ＨＩＶ感染に対する防御に関しては示されておらず、一部には、このような混合ワクチンの値には疑念が生じる（非特許文献８および９）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】McCarthy, M. Lancet. 362 (9397): 1728 (2003)
【非特許文献２】Nitayaphan, et al. J. Inf. Dis. 190: 702-6 (2004)
【非特許文献３】Pitisuttithum, P. 11th Conf. Retr. Opp. Inf. 2004. 115: Abstract 107
【非特許文献４】Fang, et al., J. Infect. Dis.180 (4): 1122-32 (1999)
【非特許文献５】Ferrari, et al., Proc.Natl.Acad.Sci.USＡ, 94；1396-401 (1997)
【非特許文献６】McNeil, et al.Science.303: 961 (2004)
【非特許文献７】Karnasuta, et al. Vaccine, 23: 2522-2529 (2005)
【非特許文献８】Burton, et al. Science.303: 316 (2004)
【非特許文献９】Letters to the Editor, Science.305: 177-180 (2004)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
今日まで、いずれのワクチンもＨＩＶ感染に対する防御を示していない。よって、当技術分野では、ヒトにＨＩＶに対する防御的免疫を与える組成物および方法が必要とされていることは明らかである。このような組成物および方法が本開示によって提供される。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本明細書に記載の試薬および方法は、以前には実証されていなかったヒト免疫不全ウイルスに対する防御的免疫をヒトに付与するために使用されうる。１つの実施の形態では、
ＨＩＶ免疫原をコードする発現ベクターを含む第１の組成物、および、
ＨＩＶ免疫原に由来する、またはＨＩＶ免疫原を代表するポリペプチドを含む第２の組成物
を含む２部構成の組成物が提供される。ここで示すように、第２の組成物の投与の前に第１の組成物が投与され、この第１および第２の組成物の投与により、ヒトがＨＩＶの感染から防御される。典型的な実施の形態では、第１の組成物は、少なくとも１種類のＨＩＶ免疫原をコードする生の弱毒化したウイルス・ベクターを含み、第２の組成物は、ＨＩＶ免疫原をポリペプチドの形態で含む。ある特定の実施の形態では、ヒトにワクチン組成物を投与することによって、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する防御免疫をヒトに付与する方法が提供される。組成物は、本質的に、第１の組成物および第２の組成物からなり、前記第１の組成物は、多重ＨＩＶ抗原をコードした生の弱毒化したアビポックス（例えば、カナリアポックス、ＡＬＶＡＣ）ベクターから本質的になり、前記第２の組成物は、アミノ酸配列がＨＩＶ ｇｐ１２０の少なくとも一部に対応する１つ以上のポリペプチドを含む。一部の実施の形態では、組成物のうち少なくとも１つは、ＨＩＶのものに対応するアミノ酸配列、および単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施の形態では、第１の組成物がヒトに投与され、その後、第１および第２の組成物がヒトに投与される。ある特定の実施の形態では、組成物は筋肉内経路で投与される。この方法を使用することにより、ヒトがＨＩＶによる感染から防御されうることが、初めて見出された。ある特定の実施の形態では、本方法は、ヒト集団にワクチンを投与し、その結果、集団の少なくとも約３分の１がＨＩＶによる感染から防御される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】Ａ２４４ ｒｇｐ１２０／ＨＩＶ−１タンパク質（ｇｄ２４４）の予測アミノ酸配列とＭＮ ｒｇｐ１２０／ＨＩＶ−１タンパク質（M.N. mature）の予測配列との比較。
【図２Ａ】ＡＬＶＡＣ−ＨＴＶ（ｖＣＰ１５２１）ゲノムのマップ。
【図２Ｂ−１】ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）内に含まれる挿入されたＨＩＶのヌクレオチド配列。
【図２Ｂ−２】図２Ｂ−１のＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）内に含まれる挿入されたＨＩＶのヌクレオチド配列の続き。
【図２Ｂ−３】ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）内に含まれる挿入されたＨＩＶのヌクレオチド配列の続き。
【図２Ｂ−４】ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）内に含まれる挿入されたＨＩＶのヌクレオチド配列の続き。
【図３】「ＡＩＤＳＶ ＡＸ」Ｂ／Ｅ ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ プライム・ブーストワクチンの有効性。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、感染性因子または腫瘍細胞などの他の因子に関連する病状を、このような因子に対する免疫応答を刺激することによって治療および／または予防するのに有用な組成物および方法を提供する。一般に、免疫応答は、例えば、免疫原をコードする核酸ベクターの投与後に、これら因子に由来または関連する免疫原の発現を生じる。ある特定の実施の形態では、多重免疫原（同一であっても異なっていてもよい）が利用され、他の実施の形態では、１種類または複数の免疫原（同一であっても異なっていてもよい）の変異体または誘導体（すなわち、それをコードするアミノ酸またはヌクレオチドの置換、削除または追加による）が用いられる。
【００１３】
免疫原は、その免疫原が投与される宿主の免疫応答を誘発または促進する部分（例えば、ポリペプチド、ペプチドまたは核酸）でありうる。免疫応答は、特定の免疫調整剤の頻度、量、または半減期を増大または低減することによって誘発または促進されうる（例えば、サイトカイン、ケモカイン、共刺激分子の発現）。これは、対象とするポリヌクレオチドを含む宿主細胞内に直接的に観察されるか（例えば、組み換えウイルスによる感染後）、または周辺細胞または組織内に観察されうる（例えば、間接的に）。免疫応答は、典型的には、標的抗原に対して生じる。例えば、免疫応答は、免疫原をコードした核酸ベクターを宿主に投与した後に宿主に免疫原の発現を生じうる。免疫応答は、先天性の免疫系または適応性の免疫系のいずれかの細胞に１つ以上の効果（例えば、成熟、増殖、抗原の直接提示または交差提示、遺伝子発現プロファイル）を生じうる。例えば、免疫応答は、例えば、樹枝状細胞、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、および／または顆粒球（例えば、好中球、好塩基球または好酸球）などの先天性の免疫細胞に関連し、それらをもたらし、あるいはそれらから検出されうる。免疫応答はまた、例えば、リンパ球（例えば、Ｔ細胞および／またはＢ細胞）を含む適応性の免疫細胞に関連し、それらをもたらし、あるいはそれらから検出されうる。免疫応答は、例えば、１つ以上の免疫調節物質の発現または活性の存在、不存在、または変化（例えば、増加または減少）を含めた、関与または効果を検出することによって観察されうる。免疫調節物質としては、ホルモン、サイトカイン、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１〜ＩＬ−３５のいずれか）、インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−Ｉ（ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−ε、ＩＦＮ−κ、ＩＦＮ−τ、ＩＦＮ−ζ、ＩＦＮ−ωのいずれか）、ＩＦＮ−ＩＩ（例えば、ＩＦＮ−γ）、ＩＦＮ−ＩＩＩ（ＩＦＮ−λΙ、ＩＦＮ−λ２、ＩＦＮ−λ３））、ケモカイン（例えば、任意のＣＣケモカイン（例えば、ＣＣＬ１〜ＣＣＬ２８のいずれか）、任意のＣＸＣケモカイン（例えば、ＣＸＣＬ１〜ＣＸＣＬ２４のいずれか）、Ｍｉｐ１ａ）、任意のＣケモカイン（例えば、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２）、任意のＣＸ３Ｃケモカイン（例えば、ＣＸ３ＣＬ１））、腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β））、負の調節因子（例えば、ＰＤ−１、ＩＬ−Ｔ）および／または、免疫調節物質の発現に関与する細胞成分のいずれか（例えば、キナーゼ、リパーゼ、ヌクレアーゼ、転写関連因子（例えば、ＩＲＦ−１、ＩＲＦ−７、ＳＴＡＴ− ５、ＮＦＫＢ、ＳＴＡＴ３、ＳＴ ＡＴ１、ＩＲＦ−１０）、および／または、免疫調節物質などによって抑制または誘発された細胞表面マーカー）などが挙げられる。発現の存在、不存在、または変化は、対象とする細胞内またはそれら細胞の近く（例えば、細胞培養上清内、インビトロまたはインビボにおける細胞または組織のすぐ近く、および／または血液または血漿中）で検出される。免疫原の投与は、例えば、抗体反応の増大（例えば、抗体の量、親和性／結合活性の増大）、または細胞応答の増大（例えば、活性化Ｔ細胞の数、Ｔ細胞レセプターの親和性／結合活性の増大、限定はしないが、抗体依存性の細胞毒性（ＡＤＣＣ）、増殖を含めた細胞毒性）を生じさせることによって、免疫原に対する既存の応答を誘発（例えば、新たなまたは前回は不検出の応答を刺激する）、あるいは促進または抑制しうる。ＨＩＶ感染の場合には、免疫（特に防御免疫）に関連した明確な相関性はないが、本明細書に記載の測定値は、本明細書に記載の組成物および方法の有用性の決定に役立ちうる。一部の免疫応答は、ウイルス免疫原の場合には、宿主におけるウイルス負荷の低下、または宿主からのウイルスの排除につながりうる。ある特定の実施の形態では、免疫応答は、防御的であって、免疫応答が、宿主の感染の開始または継続、または宿主内での成長を防ぐことができることを意味する、および／または、宿主から物質（例えば、ＨＩＶなどの原因物質）を排除することによって防御しうる。一部の事例では、宿主からの物質の排除は、ワクチンが治療的であることを意味しうる。一部の実施の形態では、免疫原を含む組成物は、宿主（例えば、ヒト）の集団に投与され、その集団の一部にのみ防御免疫を提供することが決定されうる。したがって、組成物は、集団の一部（例えば、集団の約１／１０、１／４、１／３、１／２、または３／４）を防御すると考えられる。防御される集団の割合が計算され、それによって、その集団における組成物の有効性（例えば、約１０％、２５％、３３％、５０％、または７５％の有効性）が提供されうる。
【００１４】
ＨＩＶに関して、免疫原は、ＨＩＶ単離株のいずれか（例えば、初代または培養されたＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、および／またはＨＩＶ−３単離株、型、またはクレード）から選択されうる。当技術分野で周知のように、ＨＩＶ単離株は、現在、離散遺伝子サブタイプに分類されている。ＨＩＶ−１は少なくとも１０のサブタイプ（Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ１、Ｆ２、Ｇ、Ｈ、ＪおよびＫ）を含むことが知られている（Taylor et al, NEJM, 359(18): 1965-1966 (2008)）。ＨＩＶ−２は少なくとも５つのサブタイプ（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ）を含むことが知られている。サブタイプＢは、世界規模の同性愛の男性および静脈注射薬常用者におけるＨＩＶの蔓延に関連している。大抵のＨＩＶ−１免疫原、実験室用に適合された単離株、試薬およびマップ化エピトープはサブタイプＢに属する。新しいＨＩＶ感染の発生率が高い地域であるサハラ以南のアフリカ、インド、および中国では、ＨＩＶ−１サブタイプＢの感染はごく少数しかみられず、ＨＩＶ−１サブタイプＣが最も一般的な感染サブタイプであるように見える。よって、ある特定の実施の形態では、特定のサブタイプ（例えば、ＨＩＶ−１のサブタイプＢおよび／またはＣ）から免疫原を選択することが好ましいであろう。単一の免疫学的組成物中に複数のＨＩＶサブタイプ（例えば、ＨＩＶ−１サブタイプＢおよびＣ、ＨＩＶ−２サブタイプＡおよびＢ、または、ＨＩＶ−１ 、ＨＩＶ−２、および／またはＨＩＶ−３サブタイプの組合せ）に由来する免疫原を含むことが望ましいであろう。適切なＨＩＶ免疫原としては、ＨＩＶエンベロープ（ｅｎｖ；例えば、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ ０５７８５６、または図１、２および／または配列番号１〜６のいずれかに示す）、ｇａｇ（例えば、ｐ６、ｐ７、ｐ１７、ｐ２４、ＧｅｎＢａｎｋ ＡＡＤ３９４００．１）、ｐｏｌによってコードされたプロテアーゼ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０３３６６）、ｎｅｆ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ ＣＡＡ４１５８５．１；Shugars, et al. J. Virol. Aug. 1993, pp. 4639-4650 (1993)）、ならびに、例えば、Gomez et al. Vaccine, Vol. 25, pp. 1969-1992 (2007)に記載されるそれらの変異体、誘導体、および融合タンパク質が挙げられる。免疫原（例えば、ｅｎｖおよびｐｏｌ）は、必要に応じて組み合わせてもよい。異なるＨＩＶ単離株（例えばＨＩＶ−１ Ａ１ ｅｎｖとＨＩＶ−１ Ａ２ ｅｎｖ）に由来する免疫原（例えば「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｂと「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅ）を併用することもできる。一部の実施の形態では、組成物のうち少なくとも１つは、ＨＩＶのアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列、および単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に対応する少なくとも１種類のアミノ酸配列を含む。一部の実施の形態では、ＨＳＶ抗原は、図１に示す糖タンパクＤ（ｇＤ）リーダー配列でありうる。ある特定の実施の形態では、ＨＳＶアミノ酸配列は、ＫＹＡＬＡＤＡＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＤＬＰＶＬＤＱＬ（配列番号７）、またはそれらの断片または誘導体を含む。一部の実施の形態では、組成物のうち少なくとも１つは配列番号７を含む。一部の実施の形態では、適切な免疫原は、図１に示すポリペプチドｇｄ２４４、またはそれらの断片でありうる。他の実施の形態では、適切な免疫原は図１に示すポリペプチド「M.N. mature」、またはそれらの断片でありうる。適切な株および組合せは、必要に応じて当業者に選択されて差し支えない。
【００１５】
一部の実施の形態では、
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する防御的免疫をヒトに付与する方法であって、
ＨＩＶポリペプチドまたは断片、またはそれらの誘導体をコードしたウイルス・ベクターを含む第１の組成物を少なくとも単回用量でヒトに投与し、
その後、ＨＩＶポリペプチドまたは断片、またはそれらの誘導体を含む第２の組成物を少なくとも単回用量でヒトに投与する、
各工程を有してなり、
それによって、ＨＩＶに対する防御免疫応答が生じる、
方法が提供される。一部の実施の形態では、
第１の組成物および第２の組成物から本質的になるワクチンをヒトに投与することによって、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する防御免疫をヒトに付与する方法であって、
前記第１の組成物が、少なくとも１種類のＨＩＶ ｇｐ１２０または断片、またはそれらの誘導体、および、随意的に、少なくとも１種類の追加のＨＩＶポリペプチドまたは断片、またはそれらの誘導体をコードした生の弱毒化ウイルス・ベクターから本質的になり、
前記第２の組成物が、少なくとも１種類のＨＩＶ ｇｐ１２０ ポリペプチドまたは断片またはそれらの誘導体、および、随意的に、少なくとも１種類の追加のＨＩＶポリペプチドまたは断片またはそれらの誘導体から本質的になり；
本方法が、
前記第１の組成物をヒトに投与し、
その後、前記第２の組成物の単独投与；前記第１および第２の組成物を、随意的に単回用量として別々にまたは一緒に投与；少なくとも１回の追加用量の前記第１の組成物の投与に続いて、少なくとも単回用量の前記第２の組成物の投与；前記第２の組成物の投与に続いて、 少なくとも１回の追加用量び前記第１の組成物の投与、随意的に、続いて、少なくとも１回の追加用量の前記第１および／または第２の組成物の投与；からなる群より選択される少なくとも１種類の組成物または組成物の組合せをヒトに投与する、
各工程を有してなり、
それによって、ヒトにおけるＨＩＶに対する防御免疫応答が誘発される、
方法が提供される。一部の実施の形態では、組成物は一緒に（例えば、実質的に一度に（例えば、同時に）宿主の同一または異なる部位に）または別々に（例えば、時間または宿主の投与部位）、投与される。
【００１６】
ある特定の実施の形態では、組成物のうち少なくとも１つは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を含む（例えば、図１に示す糖タンパクＤ（ｇＤ））リーダー配列）。ある特定の実施の形態では、ＨＳＶアミノ酸配列は、例えば、ＫＹＡＬＡＤＡＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＤＬＰＶＬＤＱＬ（配列番号７）、またはそれらの断片を含みうる。一部の実施の形態では、ＨＳＶアミノ酸配列は、図１に示すポリペプチド「M.N. mature」（配列番号３）またはそれらの断片のものでありうる。一部の実施の形態では、ＨＳＶアミノ酸配列は、図１に示すポリペプチドｇｄ２４４（配列番号４）またはそれらの断片のものであってもよい。一部の実施の形態では、ｇｐ１２０アミノ酸配列は、配列番号５でありうる。一部の実施の形態では、組成物のうち少なくとも１つは、配列番号３、４、５、または７のうち１つ以上のポリペプチドを含みうる。「ポリペプチドを含む」とは、ポリペプチド自体、および／または、発現ベクター内に含まれる核酸によってコードされたものの両方を意味する。本明細書で言及されるポリペプチドの変異および誘導体は、当業者に決定されるように、適切でありうる。
【００１７】
一部の実施の形態では、第１の組成物は、第２の組成物の少なくとも１回の投与の前に反復投与され、ここで、投与の時間間隔は、前記ヒトの体内における免疫応答の進行を可能にするのに十分な長さである。一部の実施の形態では、本明細書に記載の方法は、ヒトの集団にワクチンを投与する工程を含み、それによって、集団の少なくとも約３分の１がＨＩＶによる感染から防御される。一部の実施の形態では、第１の組成物は、第２の組成物の少なくとも１回の投与の前に反復投与され、ここで、投与の時間間隔は、前記ヒトの体内における免疫応答の進行を可能にするのに十分な長さである。ある特定の実施の形態では、第１の組成物および第２の組成物のいずれかまたは両方の投与は、粘膜、皮内、筋肉内、皮下、皮膚乱切、節内、または腫瘍内からなる群より選択される経路を経る。組成物の投与用量は変化しうるが、一部の実施の形態では、各回に投与されるウイルス・ベクターの量は約１０7ＣＣＩＤ50に等しく、各回に投与されるポリペプチドの総量は約６００μｇである。一部の実施の形態では、ウイルス・ベクターは、ワクシニア、ＮＹＶＡＣ、改変ウイルス・アンカラ（ＭＶＡ）、アビポックス、カナリアポックス、ＡＬＶＡＣ、ＡＬＶＡＣ（２）、鶏痘ウイルス、またはＴＲＯＶＡＣなどのポックスウイルス・ベクターでありうる。一部の実施の形態では、ウイルス・ベクターは、ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰＩ５２１）でありうる。ウイルス・ベクターは、例えば、配列番号１または５の核酸配列を含みうる。第２の組成物は、「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｂまたは「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅでありうる。一部の実施の形態では、ウイルス・ベクターはＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）であって差し支えなく、第２の組成物は「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅでありうる。
【００１８】
ある特定の実施の形態では、ＨＩＶポリペプチドまたはＨＩＶ ｇｐ１２０は、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、およびＨＩＶ−３からなる群より選択されるＨＩＶウイルスに由来し、ここで、第１および第２の組成物は、同一または異なるＨＩＶポリペプチドおよび／またはｇｐ１２０を含む。ＨＩＶ−１は、例えば、ＨＩＶ−１サブタイプＡ１、ＨＩＶ−１サブタイプＡ２、ＨＩＶ−１サブタイプＡ３、ＨＩＶ−１サブタイプＡ４、ＨＩＶ−１サブタイプＢ、ＨＩＶ−１サブタイプＣ、ＨＩＶ−１サブタイプＤ、 ＨＩＶ−１サブタイプＥ、ＨＩＶ−１サブタイプＦ１、ＨＩＶ−１サブタイプＦ２、ＨＩＶサブタイプＧ、 ＨＩＶ−１サブタイプＨ、ＨＩＶ−１サブタイプＪおよびＨＩＶ−１サブタイプＫでありうる。ＨＩＶ−２は、例えば、ＨＩＶ−２サブタイプＡ、ＨＩＶ−２サブタイプＢ、ＨＩＶ−２サブタイプＣ。ＨＩＶ−２サブタイプＤ、およびＨＩＶ−２サブタイプＥでありうる。ウイルス・ベクターは、例えば、ＨＩＶ ｇｐ１２０ ＭＮ １２−４８５、ＨＩＶ ｇｐ１２０ Ａ２４４ １２−４８４、およびＨＩＶ ｇｐ１２０ ＧＮＥ８ １２−４７７からなる群より選択される少なくとも１種類のポリペプチドをコードしうる。
【００１９】
複数のＨＩＶ免疫原が用いられる場合には、少なくとも１種類の追加のＨＩＶ免疫原は、例えば、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｎｅｔ、それらの変異体、およびそれらの誘導体でありうる。よって、一部の実施の形態では、前記第１または第２の組成物は、追加的に、ｇａｇ、ｐｏｌによってコードされたプロテアーゼ成分、ｎｅｆ、それらの変異体、およびそれらの誘導体からなる群より選択される、少なくとも１種類の追加のＨＩＶ免疫原を含む。
【００２０】
本発明の好ましい実施の形態では、ベクターを用いて、ポリペプチドをコードした核酸配列を細胞に移す。ベクターは、核酸配列を宿主細胞に移動するのに用いられるいずれかの分子である。ある特定の事例では、発現ベクターが用いられる。発現ベクターは、宿主細胞の形質転換に適した核酸分子であり、移された核酸配列の発現を導くおよび／または制御する核酸配列を含む。発現は、限定はしないが、転写、翻訳、および、イントロンが存在する場合にはスプライシングなどのプロセスを含む。発現ベクターは、典型的には、ポリペプチドをコードした異種核酸配列に動作可能に連結した１つ以上のフランキング配列を含む。本明細書では、動作可能に連結とは、プロモーターまたはエンハンサーがコード配列の転写に影響を与えるなど、ポリヌクレオチド要素間の連結が機能的な関係にあることをいう。フランキング配列は、例えば、同種（すなわち、宿主細胞として同一の種および／または株に由来）、異種（すなわち、宿主細胞の種または株以外の種に由来）、ハイブリッド（すなわち、２つ以上の起源に由来するフランキング配列の組合せ）、または合成物でありうる。
【００２１】
ある特定の実施の形態では、フランキング配列は、標的細胞において遺伝子を高頻度で発現する転写調節領域であることが好ましい。転写制御領域は、例えば、プロモーター、エンハンサー、サイレンサー、抑制エレメント、またはそれらの組合せを含みうる。転写制御領域は、構造的、組織特異性、細胞型特異性（すなわち、その領域は、組織または細胞の１つの型における転写が別の型に比べて高レベルである）、または制御可能（すなわち、テトラサイクリンなどの化合物との相互作用に対し反応性）のいずれかでありうる。転写調節領域の起源は、細胞におけるフランキング配列が、その細胞内に核酸の転写を生じることによって機能することを条件に、原核生物または真核生物、脊椎動物または無脊椎動物、または植物のいずれかであって差し支えない。本発明の実施にはさまざまな転写制御領域が用いられうる。
【００２２】
一部の実施の形態では、例えばそれらの断片および／または変異体を含む本明細書に記載のベクターに取り込まれるか、該ベクターによって発現されるポリペプチド、ペプチド、またはポリヌクレオチドの誘導体が用いられうる。誘導体は、例えば、参照配列（例えば、親配列）からのアミノ酸またはヌクレオチドの置換、削除、または、参照配列（例えば、親配列）へのアミノ酸またはヌクレオチドの置追加の結果として生じる。ポリペプチドまたはタンパク質の誘導体とは、例えば、典型的には、参照するポリペプチドまたはペプチドに関連して変化したアミノ酸配列のことをいう。ポリペプチドの誘導体は、典型的には、ポリペプチドの活性の少なくとも１つを保持する。誘導体は、典型的には、参照配列と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％。９５％または９９％の同一性を有する。ポリペプチドおよびペプチドに関して、誘導体は、「保守的な」変化を有してもよく、ここで、置換アミノ酸は同様の構造的または化学的特性を有する。誘導体はまた、「非保守的な」変化を有していてもよい。典型的な適切な保守的アミノ酸置換としては、例えば、表１に示すものなどが挙げられる：
【００２３】
【表１】
2018039832.tif 000002
【００２４】
他のアミノ酸置換は非保守的とみなされうる。誘導体は、アミノ酸またはヌクレオチドの削除および／または追加／挿入、またはそれらの一部の組合せを含んでいてもよい。誘導体の所望の活性を失わずに、どのアミノ酸残基またはヌクレオチドが置換、挿入、または削除されうるかを決定する指針は、当業者に利用可能ないずれかの方法を使用して特定することができる。
【００２５】
誘導体とは、化学修飾されたポリヌクレオチドまたはポリペプチドのことをいう。ポリヌクレオチドの化学修飾は、例えば、アルキル、アシル、ヒドロキシル、またはアミノ基による水素の置換を含みうる。ポリヌクレオチド誘導体は、天然分子の生物学的または免疫学的機能のうち少なくとも１つを保持しているポリペプチドをコードしうる。ポリペプチド誘導体は、グリコシル化、ＰＥＧ化、ビオチン化、または、それが由来するポリペプチドの生物学的または免疫学的機能のうち少なくとも１つを保持する同様のプロセスによって改質されたものである。
【００２６】
ポリペプチド配列に適用される「パーセント同一」および「％同一」という用語は、標準化アルゴリズムを用いて整列させた少なくとも２つのポリペプチド配列間で一致する残基の割合のことをいう。ポリペプチド配列アラインメントの方法は周知である。一部のアラインメント方法は、保守的アミノ酸置換を考慮に入れている。これらの保守的な置換は、先に詳細に説明したように、一般に、置換部位における電荷および疎水性を保ち、したがって、ポリペプチドの構造（および機能）を保持する。パーセント同一は、例えば、特定の配列番号によって定義されるなど、定義されたポリペプチド配列の全長にわたり測定されて差し支えなく、または全長より短い長さについて測定されてもよく、例えば、より大きい、定義されたポリペプチド配列から得られた断片の長さにわたり測定されて差し支えなく、例えば、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７０または少なくとも１５０の連続した残基の断片にわたり測定されうる。これらの長さは典型例に過ぎず、本明細書、表、図、または配列表に示す配列によって支持されるいずれかの断片長が、パーセント同一を測定する長さの説明に用いられうることが理解されよう。パーセント同一は、全体的（グローバル）または局所的（ローカル）に測定することができる。グローバルアラインメントのための当技術分野で知られているアラインメントアルゴリズムの例は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムなど、各配列において各残基を整列させるものである。ローカルアラインメントアルゴリズムは、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムなど、より大きい配列内に同様の配列モチーフの領域を含む、似ていない配列に有用である。
【００２７】
上述のように、本開示は、組み換えベクターを含む組成物、ベクター自体、およびその利用方法に関する。「ベクター」は、ポリヌクレオチドまたは対象を別の部分（例えば、宿主細胞）に運搬、導入、または移動するのに用いられるいずれかの部分（例えば、ウイルスまたはプラスミド）である。ある特定の事例では、 発現ベクターが用いられる。発現ベクターは、ポリペプチド、ペプチド、またはポリヌクレオチドをコードする対象のポリヌクレオチドを含み、かつ、対象とするポリヌクレオチドの発現を導くおよび／または制御する他のポリヌクレオチドも含む、核酸分子である。発現には、限定はしないが、転写、翻訳、および／またはスプライシング（例えば、イントロンが存在する場合）などのプロセスが含まれる。
【００２８】
用いられるウイルス・ベクターとしては、例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、およびポックスウイルス・ベクターが挙げられる。これらウイルス・ベクターの多くは、当技術分野で利用可能である。本明細書に記載のベクターは、当業者に幅広く利用可能な標準的な組み換え技術を使用して構成されうる。これらの技術は、一般的な分子生物学の参照文献から得ることができる。例えば、Molecular Cloning：A laboratory Manual (Sambrook, et al. 1 89, Cold Spring Harbor Laboratory Press)、Gene Expression Technology (Methods in Enzymology, Vol. 185, edited by D. Goeddel, 1991. Academic Press, San Diego, CA)、およびPCH Protocols：A Guide to Methods and Applications (Innis, et al. 1990. Academic Press, San Diego, CA)参照。
【００２９】
適切なレトロウイルス・ベクターとしては、レンチウイルスの誘導体、ならびにマウスまたは鳥のレトロウイルスの誘導体が挙げられる。典型的な、適切なレトロウイルス・ベクターとしては、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳癌ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＨＩＶおよびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）が挙げられる。多くのレトロウイルス・ベクターは、複数の外因性ポリヌクレオチドを取り込むことができる。組み換えレトロウイルスは欠損があるため、感染性のベクター粒子を産生するためには支援を必要とする。この支援は、例えば、レトロウイルス構造遺伝子をコードするヘルパー細胞株によって提供することができる。適切なヘルパー細胞株としては、とりわけ、Ψ２、ＰＡ３１７およびＰＡ１２が挙げられる。これらの細胞株を使用して産生したベクタービリオンを、次に、ＮＩＨ ３Ｔ３細胞などの組織細胞株の感染に使用し、大量のキメラレトロウイルスビリオンの産生させることができる。レトロウイルス・ベクターは、従来の方法（すなわち、注入）によって、または標的細胞の近接部位に「プロデューサー細胞株」を移植することによって投与することができる（Culver, K., et al., 1994, Hum. Gene Ther., 5 (3): 343-79; Culver, K., et al., Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 59: 685-90；Oidflekl, E., 1993. Hum. Gene Ther., 4 (1): 39-69）。プロデューサー細胞株は、ウイルス・ベクターを産生し、さらに標的細胞の近傍にウイルス粒子を放出するように操作される。放出ウイルス粒子の一部は標的細胞と接触し、それら細胞を感染させ、免疫原をコードする核酸を標的細胞に送達する。標的細胞への感染に続き、ベクターから、対象とするポリヌクレオチドの発現が起こる。
【００３０】
アデノウイルス・ベクターは、真核細胞への遺伝子導入（Rosenfeld, M., et al., 1991, Science, 252 (5004): 431-4；Crystal, R., et al., 1994, Nat. Genet., 8 (1): 42-51）、真核生物遺伝子発現の研究（Levrero, M., et al., 1991, Gene, 101 (2): 195-202）、ワクチン発現（Graham, F. and Prevec, L., 1992, Biotechnology, 20: 363-90）、および動物モデル（Stratford-Pemcaudet, L., et al., 1992, Bone Marrow Transplant, 9 (Suppl. 1): 151 -2; Rich, et al., 1993, Hum. Gene Ther., 4 (4): 461-76）に特に有用であることが証明されている。組み換えＡｄをインビボで異なる組織に投与するための実験経路としては、とりわけ、気道内注入（Rosenfeld, M, et al., 1992, Cell, 68 (1): 143-55）筋肉内への注入（Quantin, B., et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 89 (7): 2581-4）、末梢静脈内への注入（Herz, J., and Gerard, R., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 90 (7): 2 12-6）および／または脳への定位接種（Le Gal La Salle, G., et al., 1993, Science, 259 (5097): 988-90）が挙げられる。
【００３１】
アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）は、宿主細胞のゲノム組み込みにおける、高レベルの感染性、幅広い宿主域および特異性を実証している（Hermonat, P., et al., 1984. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81 (20): 6466-70）。また、単純ヘルペスウイルスタイプ−１（ＨＳＶ−１）は、その神経向性特性の理由から、特に神経系への使用にとって、さらに別の魅力的なベクター系である（Gelier, A., et al., 1991, Trends Neurosci., 14 (10): 428-32；Glorioso, et al., 1995, Mol. Biotechnol., 4 (1): 87-99；Glorioso, et al., 1995, Annu. Rev. Microbiol., 49: 675-710）。
【００３２】
アルファウイルスは、宿主における免疫原の発現に使用されうる。アルファウイルス属の適切な種類としては、とりわけ、シンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）、ロスリバーウイルスおよびベネズエラ、西部および東部ウマ脳炎ウイルスが挙げられる。アルファウイルス・ベクターを利用する発現系は、例えば、米国特許第５，０９１ ，３０９号；同第５，２１７，８７９号；同第５，７３９，０２６号；同第５，７６６，６０２号；同第５，８４３，７２３号；同第６，０１５，６９４号；同第６，１５６，５５８号；同第６，１９０，６６６号；同第６，２４２，２５９号；および同第６，３２９，２０１号の各明細書；国際出願第９２／１０５７８号パンフレット；Xioag et al., Science, Vol. 243, 1989, 1188- 1191；Liliestrom, et al., Bio/Technology, 9: 1356-1361, 1991に記載されている。よって、発現系としてのアルファウイルスの使用は当業者にとって周知である。
【００３３】
ポックスウイルスは別の有用な発現ベクターである（Smith, et al., 1983, Gene, 25 (1): 21-8；Moss, et al., 1992, Biotechnology, 20: 345-62；Moss, et al., 1992, Curr. Top. Microbiol. Immunol., 158: 25-38；Moss, et al., 1991. Science, 252: 1662-1667）。最も頻繁に用いられるポックスウイルス・ベクターは、とりわけ、ＮＹＶＡＣおよびＭＶＡなどのワクシニアおよびそれに由来する誘導体、および鶏痘ウイルス、カナリアポックス、ＡＬＶＡＣ、およびＡＬＶＡＣ（２）などのアビポックス属の仲間を含む。
【００３４】
典型的な適切なベクターは、既知のまたは潜在的な毒性因子をコードするゲノムの６つの非必須領域を削除することによる、ワクシニアウイルスのコペンハーゲンワクチン株に由来するＮＹＶＡＣ（ｖＰ８６６）である（例えば、米国特許第５，３６４，７７３号および同第５，４９４，８０７号の各明細書参照のこと）。削除した遺伝子座は、外来遺伝子の挿入のための受容者の遺伝子座として、改変されている。削除領域は、チミジンキナーゼ遺伝子（ＴＫ：Ｊ２Ｒ）；出血性領域（ｕ；Ｂ１３Ｒ＋Ｂ１４Ｒ）；Ａ型の封入体領域（ＡＴＩ；Ａ２６Ｌ）；ヘマグルチニン遺伝子（ＨＡ；Ａ５６Ｒ）；宿主域遺伝子領域（Ｃ７Ｌ−Ｋ１Ｌ）；および、大型のサブユニット、リボヌクレオチド還元酵素（ＭＬ）である。ＮＹＶＡＣは、毒性および宿主域に関連する遺伝子産物をコードする１８のオープン・リーディング・フレームの特異的欠失によって作出した、遺伝子操作されたワクシニアウイルス株である。ＮＹＶＡＣは、ＴＡの発現に有用であることが示されている（例えば、米国特許第６，２６５，１８９号明細書参照）。ＮＹＶＡＣ（ｖＰ８６６）、ｖＰ９９４、ｖＣＰ２０５、ｖＣＰ１４３３、ｐｌａｃＺＨ６Ｈ４Ｌリバース、ｐＭＰＣ６Ｈ６Ｋ３Ｅ３およびｐＣ３Ｈ６ＦＨＶＢもまた、ブダペスト条約の条件下、それぞれ、受託番号：ＶＲ−２５５９、ＶＲ−２５５８、ＶＲ−２５５７、ＶＲ−２５５６、ＡＴＣＣ−９７９１３、ＡＴＣＣ−９７９１２、およびＡＴＣＣ−９７９１４としてＡＴＣＣに寄託されている。
【００３５】
別の適切なウイルスは、ワクシニアウイルス（ＣＶＡ）のアンカラ株のニワトリ胚線維芽細胞において、５１６の連続的継代によって生じた改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）ウイルスである（Mayr, A., et al., Infection 3, 6-14 (1975)参照）。得られたＭＶＡは、さまざまな動物モデルにおいて、顕著に無毒性であったことが示され（Mayr, A. & Damter, K. (1978) Dev. Biol. Stand. 41: 225.34）、天然痘ワクチンとして臨床試験において試験された（Mayr et al., Zbl. Bakt. Hyg. I, Abt. Org. B 167, 375-390 (1987)；Stickl et al., Dtsch. Med. Wschr. 99, 2386-2392 (1974)）。ＭＶＡはまた、両方の組み換え遺伝子発現研究用のウイルス・ベクターとして、および組み換えワクチンとして使用するために遺伝子操作されてきた（Sutter, G. et al., (1994), Vaccine 12: 1032-40；Blanchard et al., 1998, J Gen Virol 79, 1 159-1167；Carroll & Moss, 1997, Virology 238, 198-211；Altenberger, 米国特許第５，１８５，１４６号明細書；Ambrosini et al., 1999, J Neurosci Res 55(5), 569）、改変ウイルス・アンカラ（ＭＶＡ）は、例えば、米国特許第５，１８５，１４６号および同第６，４４０，４２２号の各明細書：Sutter, et al. (B. Dev. Biol. Stand. Basel, Karger 84：195- 200 (1995))；Antome, et al. (Virology 244：365-396, 1998)：Sutter et al. (Proc. Natl. Acad. Set. USA 89：10847-10851, 1992)；Meyer et al. (J. Gen. Virol. 72: 1031-1038, 1991)；Mahnel, et al. (Berlin Munch. Tierarztl, Wochenschr, 107: 253-256, 1994）；Mayr et al. (Zbl. Bakt. Hyg. I, Abt. Org. B 167: 375-390 (1987)；および、Stickl et al. (Dtsch. med. Wschr. 99: 2386-2392 (1974))に記載されている。典型的なＭＶＡは、受託番号ＶＲ−１５０８およびＶＲ−１５６６の下、ＡＴＴＣから入手可能である。
【００３６】
ＡＬＶＡＧ系の組み換えウイルス（すなわち、ＡＬＶＡＣ−１およびＡＬＶＡＣ−２）は、本発明の実施における使用に適している（例えば、米国特許第５，７５６，１０３号明細書参照）。ＡＬＶＡＣ（２）は、ＡＬＶＡＣ（２）ゲノムがワクシニア・プロモーターの制御下で、ワクシニアＥ３ＬおよびＫ３Ｌ遺伝子を含む以外は、ＡＬＶＡＣ（１）と同一である（米国特許第６，１３０，０６６号明細書；Beattie et al., 1995a, 1995b, 1991；Chang et al., 1992; Davies et al., 1993）。ＡＬＶＡＣ（１）およびＡＬＶＡＣ（２） は、両方とも、ＴＡなどの外来ＤＮＡ配列の発現に有用であることが実証されている（Tartaglia et al., 1993 a,b；米国特許第５，８３３，９７５号明細書）。ＡＬＶＡＣは、ブダペスト条約の条件下、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）（米国２０１１０−２２０９バージニア州マナッサス、ユニバーシティ・ブールバード１０８０１所在）に、ＡＴＣＣ受託番号ＶＲ−２５４７として寄託されている。ワクシニアウイルス宿主域遺伝子（例えば、Ｃ１８Ｌ、Ｃ１７Ｌ、Ｃ７Ｌ、ＫＩＬ、Ｅ３Ｌ、Ｂ４Ｒ、Ｂ２３Ｒ、およびＢ２４Ｒ）もカナリアポックスにおいて発現可能であることが示されている（例えば、米国特許第７，４７３，５３６号明細書）。
【００３７】
別の有用なポックスウイルス・ベクターはＴＲＯＶＡＣである。ＴＲＯＶＡＣとは、１日齢の鶏のワクチン接種が許可された鶏痘ウイルスのＦＰ−１ワクチン株に由来するプラーク−クローン化単離株であった、弱毒化した鶏痘ウイルスのことをいう。ＴＲＯＶＡＣも同じように、ブダペスト条約条件下、受託番号２５５３としてＡＴＣＣに寄託されている。
【００３８】
「非ウイルス性」のプラスミド・ベクターも使用に適している。「裸のＤＮＡ」の免疫付与のために、免疫原発現のための発現カセットを含むプラスミドＤＮＡ分子が使用されうる。好ましいプラスミド・ベクターは、細菌、昆虫、および／または哺乳動物の宿主細胞に適合性である。これらのベクターとしては、例えば、ＰＣＲ−ＩＩ、ｐＣＲ３、およびｐｃＤＮＡ３．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製（米国カリフォルニア州サンディエゴ所在））、ｐＢＳＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社製（米国カリフォルニア州ラ・ホーヤ所在））、ｐＥＴ１５（Ｎｏｖａｇｅｎ社製（米国ウィスコンシン州マディソン所在））、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社製（米国ニュージャージー州ピスカタウェイ所在））、ｐＥＧＦＰ−Ｎ２（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製（米国カリフォルニア州パロ・アルト所在））、ｐＥＴＬ（ＢｌｕｅＢａｃＩＩ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、ｐＤＳＲ−アルファ（国際出願第９０／１４３６３号パンフレット）およびｐＦａｓｔＢａｃＤｕａｌ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社製（米国ニューヨーク州グランドアイランド所在））ならびに、 Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（登録商標）プラスミド誘導体（高コピー数のＣＯＬＥ１系ファージミド、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製（米国カリフォルニア州ラ・ホーヤ所在））、Ｔａｑ−増幅したＰＣＲ産生物をクローニングするために設計されたＰＣＲクローニングプラスミド（例えば、ＴＯＰＯ（商標）ＴＡクローニング（登録商標）キット、ＰＣＲ２．１（登録商標）プラスミド誘導体、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製（米国カリフォルニア州カールズバッド所在））が挙げられる。
【００３９】
細菌ベクターもまた使用に適しうる。これらのベクターとしては、例えば、サルモネラ・シゲラ（Shigella, Salmonella）（例えば、Darji, et al. Cell, 91: 765-775 (1997)；Woo, et al., Vaccine, 19: 2945-2954 (2001)）、コレラ菌（Vibrio cholerae）、乳酸桿菌（Lactobacillus）、カルメット・ゲラン桿菌（Baciile calmette guerin（ＢＣＧ））、および連鎖球菌（Streptococcus）（例えば、国際出願第８８／６６２６号パンフレット、国際出願第９０／０５９４号パンフレット、国際出願第９１／３３１５７号パンフレット、国際出願第９２／１７９６号パンフレット、および国際出願第９２／２１３７６号パンフレット）が挙げられる。多くの他の非ウイルスプラスミド発現ベクターおよび系が当技術分野で知られており、本発明に使用することができる。
【００４０】
使用されうる核酸の送達または形質転換技術としては、とりわけ、ＤＮＡ−リガンド複合体、アデノウイルス−リガンド−ＤＮＡ複合体、ＤＮＡの直接注入、ＣａＰＯ4沈殿、遺伝子銃法、エレクトロポレーション、およびコロイド分散系が挙げられる。コロイド分散系としては、巨大分子錯体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズが挙げられ、脂質系としては、水中油型エマルション、ミセル、混合ミセル、およびリポソームが挙げられる。本発明の好ましいコロイド系は、インビトロおよびインビボにおける送達ビヒクルとして有用な人工膜小胞であるリポソームである。ＲＮＡ、ＤＮＡおよび完全なままのビリオンは、内部の水に封入され、細胞を生物学的に活性な形態で送達することができる（Fraley, R., et al., Trends Biochem. 6: 77 (1981)）。リポソーム組成物は、通常は、リン脂質、特に相転移温度が高いリン脂質と、ステロイド、特にコレステロールとの組合せである。他のリン脂質または他の脂質も使用して差し支えない。リポソームの物理的特性は、ｐＨ、イオン強度、および二価陽イオンの存在に依存する。リポソームの産生に有用な脂質の例としては、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴ糖脂質、セレブロシド、およびガングリオシドなどのホスファチジル化合物が挙げられる。特に有用なのは、脂質部分が１４〜１８個の炭素原子、特に１６〜１８個の炭素原子を含み、飽和している、ジアシルホスファチジルグリセロールである。例証するリン脂質は、卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルフォスファチジルコリンおよびジステアロイルホスファチジルコリンを含む。
【００４１】
核酸をベースとした免疫付与の効率を改善するための戦略も使用して差し支えなく、例えば、以下のものが挙げられる：自己複製ウイルスレプリコンの使用（Caley, et al. Vaccine, 17: 3124-2135 (1999)；Dubeasky, et al. Mol. Med. 6: 723-732（2000）；Leitner, et al. Cancer Res. 60: 51-55 (2000)）、コドン最適化（Liu, et al. Mol. Ther., 1: 497-500 (2000)；Dubensky, 上記参照；Huang, et al. J. Virol. 75: 4947-4951 (2001)）、インビボにおける エレクトロポレーション（Widera, et al. J. Immunol. 164: 4635-3640 (2000)）、ＣｐＧ刺激モチーフの取り込み（Gurunathan, et al. Ann. Rev. Immunol. 18: 927-974 (2000)；Leitner, 上記参照）、標的とするエンドサイトーシスまたはユビキチンのプロセシング経路のための配列（Thomson, et al. J. Virol. 72：2246-2252（1998）；Velders, et al. J. Immunol. 166：5366- 5373（2001 ））、および／またはプライム・ブースト投与計画（Gurunathan, 上記参照；Sullivan, et al. Nature, 408：605-609 (2000)；Hanke, et al. Vaccine, 16: 439-445 (1998)；Amara, et al. Science, 292: 69-74 (2001)）。他の方法は当技術分野で知られており、それらの一部は以下に記載される。
【００４２】
他の実施の形態では、組成物または組み換えベクター内に、「同時刺激」成分として機能する１つ以上のポリペプチドまたはペプチドをコードする追加のポリペプチド、ペプチドまたはポリヌクレオチドを併用するまたは含むことが有利であろう。これらの共刺激成分は、本発明の組成物内に、例えば、細胞表面タンパク質、サイトカインまたはケモカインを含みうる。共刺激成分は、組成物内に、例えば、ポリペプチドまたはペプチドとして、またはポリペプチドまたはペプチドをコードするポリヌクレオチドとして含まれうる。適切な共刺激分子としては、例えば、次のものが挙げられる：ＣＤ２８の仲間に属するものを結合するポリペプチド（すなわち、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ；Hutloff, et al. Nature 1999, 397: 263-265；Peach, et al. J Exp Med 1994, 180: 2049-2058）、例えばＣＤ２８結合ポリペプチドＢ７．１（ＣＤ８０：Schwartz, 1992；Chen et al, 1992；Ellis, et al. J. Immunol., 156 (8): 2700-9）およびＢ７．２（ＣＤ８６；Ellis, et al. Immunol, 156 (8): 2700-9）など；インテグリンの仲間に属するものを結合するポリペプチド（すなわち、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＡＭの仲間（すなわち、ＩＣＡＭ− １ 、−２または−３）に属するものを含む；Sedwiek, et al. J Immunol 1999, 162: 1367-1375；Wulfing, et al. Science 1998, 282: 2266-2269；Lub, et al. Immunol Today 1995, 16: 479-483）；ＣＤ２の仲間に属するものを結合するポリペプチド（すなわち、ＣＤ２、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＣＤｗ１５０または「ＳＬＡＭ」；Aversa, et al. J Immunol 1997, 158: 4036-4044）、例えばＣＤ５８（ＬＰＡ−３；ＣＤ２リガンド；Davis, et al. Immunol Today 1996, 17: 177-187）またはＳＬＡＭリガンド（Sayos, et al. Nature 1998, 395: 462-469）など；熱安定性の抗原を結合するポリペプチド（ＨＳＡまたはＣＤ２４；Zhou., et ai Eur J Immunol 1997, 27；2524-2528）；ＴＮＦレセプター（ＴＮＦＲ）の仲間に属するものを結合するポリペプチド（すなわち、４−１ＢＢ（ＣＤ １３７；Vinay, et al. Semin Immunol 1998, 10: 481-489））、ＯＸ４０（ＣＤ１３４；Weinberg, et al. Semin Immunol 1998, 10: 471-480；Higgins, et al. J Immunol 1999, 162: 486-493）、およびＣＤ２７（Lens, et al. Semin Immunol 1998, 10: 491-499））、例えば４−ＩＢＢＬ（４−ＩＢＢリガンド；Vinay, et al. Semin Immunol 1998, 10: 481-48；DeBenedette, et al. J Immunol 1997, 158: 551-559）、ＴＮＦＲ関連因子−１（ＴＲＡＦ−１；４−ＩＢＢリガンド；Saoulli, et al. J Exp Med 1998, 187: 1849-1862；Arch, et al. Mol Cell Biol 1998, 18: 558-565）、ＴＲＡＦ−２（４−ＩＢＢおよびＯＸ４０リガンド；Saoulli, et al. J Exp Med 1998, 187: 1849-1862；Oshima, et al. Int Immunol 1998, 10: 517-526；Kawamata, et al. J Biol Chem 1998, 273: 5808-5814）、ＴＲＡＦ−３（４−１ＢＢおよびＯＸ４０リガンド；Arch, et al. Mol Cell Biol 1998, I8: 558-565；Jang, et al. Biochem Biophys Res Commun 1998, 242: 613-620；Kawamata S, et al. J Biol Chem 1998, 273: 5808-5814）、ＯＸ４０Ｌ（ＯＸ４０リガンド；Gramaglia, et al. J Immunol 1998, 161: 6510-6517）、ＴＲＡＦ−５（ＯＸ４０リガンド；Arch, et al. Mol Cell Biol 1998, 18: 558-565；Kawamata, et al. J Biol Chem 1998, 273：5808-5814）、ＣＤ７０（ＣＤ２７リガンド；Couderc, et al. Cancer Gene Ther., 5(3): 163-75）、およびＣＤ１５４（ＣＤ４０リガンドまたは「ＣＤ４０Ｌ」；Gurunathan, et al. J. Immunol., 1998, 161: 4563-4571；Sine, et al. Hum. Gene Ther., 2001, 12: 1091-1102）。他の共刺激分子もまた本発明の実施に適切でありうる。
【００４３】
１つ以上のサイトカインもまた、ポリペプチドまたは本発明の組成物内に含まれる核酸によってコードされたものとしての適切な共刺激成分または「アジュバント」でありうる（Parmiani et al. Immunol Lett 2000 Sep 15: 74(1): 41-4；Berzofsky, et al. Nature Immunol. 1: 209-219）。適切なサイトカインとしては、例えば、以下のものが挙げられる：インターロイキン−２（ＩＬ−２）（Rosenberg, et al. Nature Med. 4: 321-327 (1998)）、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１２（Pardoll, 1992；Harries, et al. J. Gene Med. 2000 Jul-Aug; 2(4): 243-9；Rao, et al. J. Immunol 156: 3357-3365 (1996)参照）。ｌＬ−１５（Xin, et al. Vaccine, 17: 858-866, 1999）、ＩＬ−１６（Cruikshank, et al. J. Leuk Biol. 67(6): 757-66, 2000）、ＩＬ−１８（J. Cancer Res. Clin. Oncol. 2001 , 127(12): 718-726）、ＧＭ−ＣＳＦ（ＣＳＦ（Disis, et al. Blood, 88：202-210 (1996)）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、またはインターフェロン−γ（ＩＮＦ−γ）。他のサイトカインは本発明の実施に適切でありうる。
【００４４】
ケモカインを利用してもよい。例えば、腫瘍自己抗原と融合するＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）およびＣＣＬ７（ＭＣＰ−３）を含む融合タンパク質は、抗腫瘍免疫を誘発することが示されている（Biragyn, et al. Nature Biotech. 1999, 17: 253-258）。ケモカインＣＣＬ３（ＭＩＰ−１α）およびＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）（Boyer, et al. Vaccine, 1999, 17 (Supp. 2): S53-S64）も本発明の実施に使用して差し支えない。他の適切なケモカインは当技術分野で知られている。
【００４５】
抑制または負の調節因子の免疫機構が遮断されると、免疫応答を促進する結果となることも、当技術分野で知られている。例えば、抗ＣＴＬＡ−４（Shrikant, et al. Immunity, 1996, 14: 145-155；Sutmuller, et al. J. Exp. Med., 2001, 194: 823-832）、抗ＣＤ２５（Sutmuller, 上記参照）、抗ＣＤ４（Matsui, et al. J. Immunol., 1999, 163: 184- 193）、融合タンパク質ＩＬ１３Ｒａ２−Ｆｃ（Terabe, et al. Nature Immunol., 2000, 1: 515-520）、およびそれらの組合せ（すなわち、抗ＣＴＬＡ−４および抗ＣＤ２５、Sutmuller, 上記参照）を使用した治療は、本発明の実施に適しているであろう抗腫瘍免疫応答を上方制御することを示している。
【００４６】
免疫原は、免疫応答を上昇させるために１つ以上のアジュバントと組み合わせて投与してもよい。アジュバントは、免疫原に対する免疫応答を刺激または促進するために含まれうる。適切なアジュバントの非限定的な例としては、とりわけ、微生物起源（ムラミルジペプチド（ＭＤＰ））のゲルタイプのもの（すなわち、水酸化／リン酸アルミニウム（「アルム・アジュバント」）、リン酸カルシウム）、細菌外毒素（コレラ毒素（ＣＴ）、天然のコレラ毒素サブユニットＢ（ＣＴＢ）、大腸菌不安定毒素（ＬＴ）、百日咳毒素（ＰＴ）、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、ＢＣＧ配列、破傷風トキソイド、例えば、大腸菌（E. coli）、サルモネラ・ミネソタ（Salmonella Minnesota）、サルモネラ・チフィムリウム（Salmonella typhimurium）、または赤痢菌（Shigella exseri）のモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、微粒子アジュバント（生分解性のポリマーミクロスフェア）、免疫賦活性複合体（ＩＳＣＯＭ））、油エマルションおよび界面活性剤系アジュバント（フロイント不完全アジュバント（ＦＪＡ）、マイクロ流動化エマルション（ＭＦ５９、ＳＡＦ）、サポニン（ＱＳ−２））、合成物（ムラミルペプチド誘導体（ムラブチド、トレオニル−ＭＤＰ）、非イオン性ブロック共重合体（Ｌ１２１）、ポリホスファゼン（ＰＣＣＰ）、合成ポリヌクレオチド（ポリＡ：Ｕ、ポリＩ：Ｃ）、サリドマイド誘導体（ＣＣ−４４０７／ＡＣＴＩＭＩＤ））、ＲＨ３−リガンド、またはポリ乳酸−グリコール酸（ＰＬＧＡ）ミクロスフィアが挙げられる。これら毒素の断片、同族体、誘導体、および融合体も、アジュバント活性を保持するかぎりにおいて、適切である。アジュバントの適切な突然変異体または変異体は、例えば、国際出願第９５／１７２１１号パンフレット（ＡＲＧ−７−Ｌｙｓ ＣＴ突然変異体）、国際出願第９６／６６２７号パンフレット（Ａｒｇ−１９２−ＧＩｙ ＬＴ突然変異体）、および国際出願第９５／３４３２３号パンフレット（Ａｒｇ−ＭｙｓおよびＧｌｕ−１２９−Ｇｌｙ ＰＴ突然変異体）に記載されている。本発明の方法および組成物に使用できる追加のＬＴ突然変異体としては、例えば、Ｓｅｒ−６３−Ｌｙｓ、Ａｌａ−６９−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−１１０−Ａｓｐ、およびＧｌｕ−１１２−Ａｓｐ突然変異体が挙げられる。他の適切なアジュバントも当技術分野で周知である。
【００４７】
一例として、アルム・アジュバントなどの金属塩アジュバントも、アジュバント活性を有する安全な賦形剤を提供することが当技術分野でよく知られている。これらアジュバントの作用機構は、抗原が投与に注入部位に最長で３週間留まるように抗原の貯留が形成されること、および、抗原が存在する細胞に、より容易に取り込まれる抗原／金属塩複合体が形成されることに関係すると考えられている。アルミニウムに加えて、抗原の吸収の目的で、亜鉛、カルシウム、セリウム、クロム、鉄、およびベリリウムの塩を含めた他の金属塩が用いられている。アルミニウムの水酸化物およびリン酸塩が最も一般的である。アルミニウム塩、抗原、および追加の免疫賦活剤を含む配合物または組成物が当技術分野で知られている。免疫賦活剤の例は、３−Ｏ−脱アシル化（3-de-O-acylated）モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）である。
【００４８】
これらの成分は、単独でまたは他の物質と組み合わせて使用して差し支えなく、例えば、ＣＤ８０、ＩＣＡＭ−１およびＬＦＡ−３（「ＴＲＩＣＯＭ」）の組合せが抗癌性の免疫応答を促進しうることが示されている（Hodge, et al. Cancer Res. 59: 5800-5807(1999)）。他の有効な組合せとしては、例えば、ＩＬ−１２＋ＧＭ−ＣＳＦ（Aiders, et al. J. Immunol., 158: 3947-3958 (1997)；Iwasaki, et al., J. Immunol. 158: 4591-4601 (1997)）、ＩＬ−１２＋ＧＭ−ＣＳＦ＋ＴＮＦ−α（Ahlers, et al. Int. Immunol. 13: 897- 908 (2001)）、ＣＤ８０＋ＩＬ−１２（Fruend, et al. Int. J. Cancer, 85: 508-517 (2000)；Rao, et al., 上記参照）、およびＣＤ８６＋ＧＭ−ＣＳＦ＋ＩＬ−１２（Iwasaki, 上記参照）が挙げられる。当業者は、本発明の実施に有用な追加の組合せを想起するであろう。加えて、当業者は、これらの機構を調節するために使用されうる追加の試薬または方法についても想起するであろう。これらの試薬および方法、ならびに当業者に既知の他のものは、本発明の実施に使用して差し支えない。
【００４９】
本明細書で提供される組成物および方法と組み合わせて用いられうる他の物質としては、例えば、プロテアーゼ阻害剤、ＨＩＶ侵入阻害剤、逆転写酵素阻害剤、および／または抗レトロウイルスヌクレオシド類似体を含めた抗ＨＩＶ薬が挙げられる。適切な化合物としては、例えば、Ａｇｅｎｅｒａｓｅ（アンプレナビル）、コンビビル（レトロビル／エピビル）、クリキシバン（インジナビル）、エムトリバ（エムトリシタビン）、エピビル（３ｔｃ／ラミブジン）、エプジコム、フォートベイス／インビラーゼ（サクイナビル）、フゼオン（エンフビルチド）、ハイビッド（ｄｄｃ／ザルシタビン）、カレトラ（ロピナビル）、レクシヴァ（ホスアンプレナビル）、ノービア（リトナビル）、レスクリプター（デラビルジン）、レトロビル／ＡＺＴ（ジドブジン）、レイアタッツ（アタザナビル、ＢＭＳ−２３２６３２）、ススチバ（エファビレンツ）、トリジビル（アバカビル／ジドブジン／ラミブジン）、ツルバダ（エムトリシタビン／テノフォビルＤＦ）、ヴァイデックス（ｄｄＩ／ジダノシン）、ヴァイデックスＥＣ（ｄｄＩ／ジダノシン））、ビラセプト（ネビラピン）、ビリアード（テノホビルジソプロキシルフマル酸塩）、ゼリット（ｄ４Ｔ／スタブジン）、およびザイアジェン（アバカビル）などが挙げられる。他の適切な物質は当業者には周知である。これらの物質は、本明細書に記載の組成物の投与および／または方法の使用の前、中、または後に使用して差し支えない。
【００５０】
本発明の組成物の宿主への投与は、当業者に基地の様々な技術のいずれかを用いて達成されうる。組成物は、ヒトおよび他の哺乳動物を含めた患者に投与するための薬剤（すなわち、「医薬組成物」）を製造するために、医薬品の従来の方法に従って加工されて差し支えない。医薬組成物は、例えば、所定の量のＤＮＡ、ウイルス・ベクター粒子、ポリペプチド、ペプチド、または他の薬物候補を含む投与単位の形態で製造されることが好ましい。ヒトまたは他の哺乳動物に適した日用量は、患者の病状および他の要因に応じて大きく変化しうるが、これもまた、日常的な方法を用いて決定することができる。組成物は、治療効果を引き出すような形態および治療効果を引き出すのに十分な量で患者に投与される。この用途にとっての有効量は、例えば、ワクチン投与計画に関する特定の組成物、投与方法、病気の段階および重症度、患者の全体的な健康状態、および処方する医師の判断など、様々な要因に応じて決定される。本発明の組成物を用いて宿主に免疫を付与する、あるいは障害または疾患を治療するための投与計画は、疾患の種類、年齢、体重、性別、患者の医学的状態、病状の重症度、投与経路、および使用する特定の化合物を含めた、さまざまな要因に基づく。よって、投与計画は大幅に変化しうるが、標準的な方法を用いて日常的に決定することができる。
【００５１】
一般に、組み換えウイルスは、組成物において、１接種あたり約１０4〜約１０9ｐｆｕの用量で投与され；しばしば、約１０4ｐｆｕ〜約１０6ｐｆｕの用量で投与され、または実施例に示すように、１０7〜１０3ｐｆｕの用量で投与される。約１０4ｐｆｕ〜約１０10ｐｆｕなどの比較的高い用量、例えば、約１０5ｐｆｕ〜約１０9ｐｆｕ、または約１０6ｐｆｕ〜約１０8ｐｆｕ、または、約１０7ｐｆｕなどを用いることもできる。一般的に用いられる別の尺度は、細胞培養感染量（ＣＣＩＤ50）であり；投与に適したＣＣＩＤ50の範囲は、約１０1、約１０2、約１０3、約１０4、約１０5、約１０6、約１０7、約１０8、約１０9、約１０10ＣＣＩＤ50を含む。通常、プラスミドまたは裸のＤＮＡの適切な用量は、約１μｇ〜約１００ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇであるが、０．１〜１ｍｇまたは１〜１０μｇなどの低い濃度で使用してもよい。ポリペプチド組成物（例えば「ＡＩＤＳＶＡＸ」組成物）にとって、適量は１〜１０００μｇでありうる。用量範囲内にある可能性のあるサブ範囲を限定するわけではないが、特定の実施の形態は、５、１０、２０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、および１０００μｇの量を採用してもよい。ポリペプチドの典型的な例となる用量は、例えば、約５０〜２５０μｇ、約２５０〜５００μｇ、５００〜７５０μｇ、または約１０００μｇでありうる。低用量での投与では、典型的には、約１００μｇ以下の用量で使用して差し支えない。高用量での投与では、典型的には、３０μｇ以上の用量で使用して差し支えない。１回量におけるポリペプチドの量に言及すると、その量は、単一のポリペプチドの量のことを指すか、もしくは、複数のポリペプチドが投与される場合には、すべてのポリペプチドの総量（例えば、２つのポリペプチドそれぞれ３００μｇの場合の全用量は６００μｇ）のことを指すことが理解されるべきである。本明細書に記載の「ＡＩＤＳＶＡＸ」組成物は、典型的には２００μｇまたは６００μｇの全用量で投与されるが、必ずしもこの限りではない（例えば、組み換えＭＮおよびＧＮＥ８ ｇｐ１２０、または組み換えＭＮおよびＡ２４４ ｇｐ１２０）。「用量／投与量」とは、単回用量または複数回用量で投与されることを指し、投与されるすべての用量の合計を含む。これら組成物の実際の投与量は、ワクチン技術の分野における当業者によって容易に決定されうる。
【００５２】
医薬組成物は、従来の薬学的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルを含む投与単位製剤で、経口、非経口、吸入噴霧、直腸、節内、または局所的に投与されうる。本明細書では「薬学的に許容される担体」または「生理的に許容される担体」とは、医薬組成物としての核酸、ポリペプチド、またはペプチドの送達を達成または促進するのに適した１種類以上の配合材料のことをいう。「医薬組成物」は、治療的に有効な量の核酸またはポリペプチドを含む組成物である。「有効量」および「治療的に有効な量」という用語は、それぞれ、所望の治療効果（例えば、免疫応答の誘発または増進）を観察するのに用いられる核酸またはポリペプチドの量のことを指す。
【００５３】
滅菌した注入用の水性または油性懸濁液などの注入可能な調剤は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して既知の方法に従って配合されうる。注入可能な調剤は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶剤における滅菌した注入可能な溶液または懸濁液であって差し支えない。使用するのに適したビヒクルおよび溶媒としては、とりわけ、水、リンゲル液、および塩化ナトリウムの等張液が挙げられる。例えば、ポックスウイルスなどのウイルス・ベクターは、ラクトグルタメートなどの適切な安定化剤を使用して、または使用せずに、また、凍結乾燥した培地を使用して、または使用せずに、０．４％ ＮａＣｌまたはＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液中で調製されうる。加えて、滅菌した固定油も溶剤または懸濁媒体として従前から用いられている。この目的のため、無菌性の固定油を使用して差し支えなく、例えば、合成したモノグリセリドまたはジグリセリドが挙げられる。さらには、オレイン酸などの脂肪酸も注入物質の調製のための用途が見出されている。
【００５４】
医薬組成物は、幾つかの形態のいずれかで、幾つかの経路のいずれかによって投与される。組成物は、非経口経路（例えば、皮内、筋肉内、皮下、皮膚乱切）で投与されて、宿主に免疫応答を誘発する。あるいは、組成物は、例えば、リンパ節（例えば、節内）または腫瘤（例えば、腫瘍内）などの組織または器官に直接投与されてもよい。投与可能な組成物の好ましい実施の形態は、例えば、核酸、ウイルス粒子、またはポリペプチドを、懸濁液、シロップ、またはエリキシル剤などの液体調剤中に含む。好ましい注入可能な調剤は、滅菌した懸濁液またはエマルションなど、例えば、非経口、皮下、皮内、筋肉内または静脈内投与に適した核酸またはポリペプチドを含む。例えば、裸のＤＮＡ分子および／または組み換えポックスウイルスは、滅菌水、生理食塩水、グルコースなどの適切な担体、希釈剤、または賦形剤とは別に、またはそれらと混合して一緒に投与されて差し支えない。組成物はまた、例えば、等張の緩衝生理食塩溶液中で再構成するための凍結乾燥形態で提供されてもよい。加えて、組成物は、他の抗ウイルス化合物、他の抗癌剤化合物、および／またはこれら物質の悪影響を低減または緩和する化合物と同時に投与するか、または連続的に投与することができる。
【００５５】
先に述べたように、本明細書に記載の組成物は、単一の活性薬剤として投与されうるが、これらを、１種類以上の他の組成物または物質（すなわち、他の免疫原、共刺激分子、アジュバント）と組み合わせて使用することもできる。組み合わせて投与する場合には、個々の成分は、同時にまたは別の時間に分かれて投与される組成物として調合することができ、あるいは、成分は、単一の組成物として合わせることもできる。１つの実施の形態では、
宿主に第１の形態の免疫原を投与し、その後、第２の形態の免疫原を投与する方法であって、
第１の形態と第２の形態が異なっており、
第２の形態の投与前の第１の形態の投与が、第２の形態単独での投与と比較して、第２の形態の投与の結果生じる免疫応答を増進する、
方法が提供される。宿主に投与するための組成物も提供される。例えば、
第１の部分の組成物が第１の形態の免疫原を含み、第２の部分の組成物が第２の形態の免疫原を含む、２部構成の免疫学的組成物であって、
前記第１および第２の部分が互いに一緒にまたは別々に投与され、それによって、第１の形態の投与が、第２の形態単独での投与と比較して、第２の形態に対する免疫応答を増進する、組成物が提供される。免疫原は、同一であっても異なっていてもよく、感染性因子または他の免疫原起源に由来することが好ましい。複数の免疫原は、単一または複数の組成物として、または、単一または複数の組み換えベクターに、一緒にまたは別々に投与されてもよい。例えば、免疫原をコードするウイルス・ベクターが最初に投与され、次に、第２の形態の免疫原（例えば、ポリペプチド）のが１回以上、投与されてもよい。異なる形態とは、送達形態（例えば、ウイルス・ベクター、ポリペプチド）および各形態を代表する免疫原のいずれかまたは両方が異なっていてもよい。しかしながら、その形態は、特定の標的（例えば、ＨＩＶ−１）に対する免疫応答を誘発または増強することが好ましい。例えば、本明細書に示すように、ウイルス抗原（例えば、ＨＩＶ ｇｐ１２０）をコードするウイルス・ベクターが、ヒトに投与されうる。これに次いで、ウイルス・ベクターが同一または同様のウイルス抗原（例えば、ＨＩＶ ｇｐ１２０）を表すポリペプチドとともに投与されて差し支えない。プライム・ブースト用途（例えば、ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶおよび［ＡＩＤＳＶＡＸ］）では、ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶは、典型的には、１０7ＣＣＩＤ50用量（「プライム」用量）で投与され、その後、同一または異なる用量で、適切な用量（例えば、合計６００μｇの「ブースト」用量）のポリペプチド（例えば「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／ＢまたはＢ／Ｂ）とともに再投与される。ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶは、ＨＩＶ−１ ｅｎｖ（ｖＣＰ１５２１のクレードＥおよびｖＣＰ２０５のクレードＢ）、ｇａｇ（クレードＢ）、および配列をコードするプロテアーゼ（クレードＢ）に由来する遺伝子産物を発現する、生の弱毒化した、組み換えカナリアポックスウイルス（ＡＬＶＡＣ（１））の調製物である（図２ＡおよびＢ）。典型的な非限定的プライム・ブーストの組合せとしては、組合せにおけるｇｐ１２０免疫原が由来するＨＩＶクレードが同一である、ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ２０５）と「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｂ、またはＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２３）と「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅが挙げられる。典型的には、プライム用量およびブースト用量は、両方とも、同一経路で（例えば、筋肉内、皮内）投与されるが、投与経路は異なっていてもよい。典型的には、プライム用量およびブースト用量は、身体の異なる部位に投与されるが、身体の同一の部位に投与されてもよい。「〜とともに」とは、２つの形態が、特定のプロトコルに応じて、別々の組成物として、単一の組成物の一部として、身体の別々の部位に、または身体の同一の部位に、投与されることを意味しうる。当業者は、これらの典型的な投与計画のバリエーションを作成しうる。
【００５６】
本発明の組成物を含むキットも提供される。キットには、適切な担体、希釈剤または賦形剤を含む別の容器を含めることができる。キットには、同時にまたは連続的に投与するための追加の成分を含めることもできる。１つの実施の形態では、このようなキットは、第１の形態の免疫原および第２の形態の免疫原を含みうる。追加で、キットには、材料の混合または組合せおよび／または投与についての使用説明書を含めることもできる。キットは、例えば、１つ以上のＰＣＲプライマ、ハイブリダイゼーションプローブ、および／またはバイオチップなどの、スクリーニングアッセイを行うための試薬を提供してもよい。
【００５７】
例証として示す以下の実施例から、本発明および多くの利点についてさらによく理解できるであろう。
【実施例】
【００５８】
実施例１
免疫学的組成物
Ａ．第１の組成物：ウイルス・ベクター
ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶは、配列をコードし、ニワトリ胚線維芽細胞内で培養された、ＨＩＶ−１ ｅｎｖ（ｖＣＰ１５２１のクレードＥおよびｖＣＰ２０５のクレードＢ）、ｇｐ４１の膜貫通アンカー部分（クレードＢ：ＬＡＩ）、ｇａｇ（クレードＢ：ＬＡＩ）、およびプロテアーゼ（クレードＢ：ＬＡＩ）に由来する遺伝子産物を発現する生の弱毒化した組み換えカナリアポックスウイルス（ＡＬＶＡＣ（１））の調製物である。これらのベクターは、標準的方法を用いてＡＬＶＡＣ（１）ゲノムのＣ６挿入部位にＨＩＶ−１遺伝子産物をコードした遺伝子を共挿入することによって生成される（図２Ａ）。ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）内に含まれるＨＩＶ−１配列が、図２Ｂならびに配列番号５および６に示されている。これらの配列は、１）ワクシニアウイルスＨ６プロモーターの制御下、ｇｐ４１のＨＩＶ−１膜貫通アンカー配列をコードする配列に連結したＨＩＶ−１のＴＨ０２３株の細胞外エンベロープｇｐ１２０部分をコードするｅｎｖ遺伝子領域（２８アミノ酸）；および、２）同一のワクシニアウイルスプロモーターＩ３Ｌの制御下、Ｇａｇタンパク質全体をコードするｇａｇ遺伝子、およびプロテアーゼ機能をコードするのに十分な、ＨＩＶ−１のＬＡＩ株のｐｏｌ配列の一部、を含む。
【００５９】
ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶは、始原ニワトリ胚繊維芽細胞のＡＬＶＡＣ−ＨＩＶワーキングシードロットの植菌およびローラーボトルでの培養によって産生させた。ウイルス増幅の後、感染細胞は播種され、超音波処理によって破壊され、細胞残屑が遠心分離によって除去される。等量の安定化剤（ラクトグルタメート）を上清と混ぜ、その懸濁液を４．５μｍの膜を通じてろ過した。清澄させた懸濁液をバイアルに満たし、≦−３５℃で保管した。このステップでは、生物学的物質は清澄させた採取物である。ワクチン製造の最終段階は、滅菌条件下、清澄させた採取物を凍結乾燥した培地と混ぜ合わせることを必要とする。この混合物（最終的なバルク生成物）を調製し、次に、容器に充填して凍結乾燥させた。
【００６０】
非感染のＣＥＦ細胞またはＡＬＶＡＣ（１）親ウイルスまたはＡＬＶＡＣ−ＨＩＶのいずれかに感染した細胞に由来する、放射性同位体でラベル付けした溶解物を利用して、免疫沈降分析を行った。ＨＩＶ−血清陽性個体（抗ＨＩＶ）由来のヒト血清を使用して免疫沈降を実施した。抗ＨＩＶを用いた結果は、ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ感染ＣＥＦ細胞において５５ｋＤａの前駆体Ｇａｇポリペプチドであるｇｐ１２０、および中間体、ならびに主要なカプシドタンパク質ｐ２４を含む完全にプロセシングされた状態のｇａｇの発現を実証したが、ＡＬＶＡＣ親ウイルスに感染した細胞からは発現しなかった。
【００６１】
ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）に関して、ヒト抗ＨＩＶ抗体を用いたＦＡＣＳ（蛍光活性化セルソーター）走査分析は、感染ＨｅＬａ細胞の表面にｇｐ１２０の発現を実証したが、親ウイルスでは見られなかった。挿入した配列およびＡＬＶＡＣ配列のＰＣＲ増幅を行った。アガロースゲル電気泳動法、続いてエチジウムブロマイド染色法を実施して、ＤＮＡ分析を行い、分子の大きさに従って増幅した断片を識別した。ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）感染細胞由来のウイルスＤＮＡに限定解析を行い、ｇｐ１２０ＴＭおよびｇａｇの発現カセットの挿入が適切であることを確認した。ワーキングシードロット上に配列することにより、挿入した遺伝子のヌクレオチド配列を確認した（継代６）。
【００６２】
ＣＥＦ上での幾つかの継代の後、イムノプラーク・アッセイによってＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）の遺伝的安定性を確認した。イムノプラーク分析は、モノクローナル抗体よるウイルス・プラークにおけるＥｎｖおよびＧａｇの発現を検出することからなる。７継代（すなわち、生産ロットレベル）後および１０継代（すなわち、生産ロットレベルを超えた継代）後に分析を行った。
【００６３】
注入用の凍結乾燥したワクチンとしてＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）を製剤化し、単回用量用に１．０ｍＬの滅菌した塩化ナトリウム溶液（ＮａＣｌ，０．４％）で再構成した。０．４％ＮａＣｌ、１．０ｍＬで再構成後のワクチン組成物は、ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）；≧１０6.0ＣＣＩＤ50および賦形剤（１０ｍＭのＴＲＩＳ−ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ９，０．２５ｍＬ；安定化剤（ラクトグルタメート）、０．２５ｍＬ；フリーズドライした溶剤、０．５０ｍＬ；およびＮａＣｌ、４ｍｇ）を含んでいた。凍結乾燥物（lyophilisate）の外観は均質で白からベージュ色；残留水分は≦３％；再構成時間３分間；再構成後の外観は透明〜乳白色の溶液、粒子またはフィラメントの存在の可能性のある無色；ｐＨ７．０〜８．０；オスモル濃度 ３５０〜７００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ；ＢＳＡ含量 ≦５０ｎｇ／用量；細菌内毒素含量 ≦１０ＩＵ／用量であった。ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）を凍結せずに２〜８℃で保存し、再構成から２時間以内に投与した。再構成の前に、バイアルを室温になるようにした。緩徐注入による投与用に、凍結乾燥したＡＬＶＡＣ−ＨＩＶを含んだバイアルに希釈液１．０ｍＬの０．４％ＮａＣｌを入れて再構成した（例えば、２５ゲージ、５／８インチ針を使用）。バイアルを約３分間静置し、次に、穏やかに撹拌した。次いでバイアルを逆さまにして内容物をシリンジに引き込んだ。
【００６４】
Ｂ．第２の組成物：ポリペプチド
組み換えｇｐ１２０は、約１２０，０００ダルトンの見かけの分子量を有するエンベロープ糖タンパクである。分子量の約５０％は、タンパク質の広範囲に及ぶグリコシル化から構成される。「ＡＩＤＳＶＡＸ」ワクチンは、チャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞発現を使用して、組み換えＤＮＡ法によって産生したＨＩＶ−１に由来するｇｐ１２０タンパク質の極めて高純度の混合物である。米国に循環するウイルスの分子疫学的分析は、ｇｐ１２０の主要な中和エピトープに多型性が生じることを立証している。ＭＮ ｒｇｐ１２０／ＨＩＶ−１のフェーズＩおよびフェーズＩＩにおけるブレイクスルー感染症の臨床試験の分析は、ほとんどが、ウイルスの中和にとって重要なエピトープにおいて（特に、Ｖ２、Ｖ３およびＣ４ドメイン）ＭＮ ｒｇｐ１２０／ＨｌＶ−１とは異なるアミノ酸置換を含んでいたことを明らかにした。さまざまな米国株の試験後、部位におけるアミノ酸配列が、ＭＮとは異なる中和抗体の標的になることが知られており、主要な中和エピトープにおいてＭＮを相補する一般的な多型性を有していたＧＮＥ８を選択した。よって、典型的なポリペプチド組成物は、「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｂ（ＶａｘＧｅｎ社製）であり、これは、ＨＩＶ−１タイプＢエピトープである、ＭＮ組み換え糖タンパク（ｒｇｐ）１２０（ＭＮ ｇｐ１２０のアミノ酸１２−４８５）とＧＮＥ８ ｒｐｇ１２０（ＧＮＥ８ ｇｐ１２０のアミノ酸１２−４７７）を１：１の比で含む二価のポリペプチドワクチンを含んでいる。サブタイプＢおよびＥが普及している場合（例えば、タイ国）に使用する別の典型的なポリペプチド組成物は「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅであり、これは、サブタイプＢの抗原ＭＮ ｒｇｐ１２０（上述のもの）とサブタイプＥの抗原Ａ２４４（ＣＭ２４４）組み換え糖タンパク１２０（Ａ２４４ ｇｐ１２０のアミノ酸１２−４８４） を１：１の比で含む。サブタイプＥの抗原は、タイ北部のチェンマイから単離したＨＩＶ−１のＡ２４４（ＣＭ２４４）株に由来し、バンコクにおける静脈注射薬常用者（ＩＶＤＵ）に付随する感染の約７５％を示し、Ａ２４４ ｒｇｐ１２０／ＨｌＶ−１は、初代マクロファージまたはＮＳＩウイルス型に由来しＧＮＥ８ ｒｇｐ１２０／ＨＩＶ−１と同様に、ＣＤ４細胞と結合するためにケモカインレセプターＣＣＲ５を必要とする。
【００６５】
「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｂおよび「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅでは、ＭＮ、ＧＮＥ８、またはＡ２４４株のｇｐ１２０は、それぞれ、単純ヘルペスウイルスのタイプＩｇＤタンパク質の２７のアミノ酸を有するアミノ末端融合タンパク質として表される。ｇＤ配列はｇｐ１２０の発現を促進し、一般的免疫親和性の精製プロセスに使用することができるエピトープを提供する。使用される各ＨＩＶ−１単離株の成熟した天然のｇｐ１２０と同等のアミノ酸残基は；ＭＮ単離株では１２〜４８５、ＧＮＥ８単離株では１２〜４７７、Ａ２４４単離株では３２〜４８４である。
【００６６】
組み換えｇｐ１２０ポリペプチドは、遺伝子操作したＧＨＯ細胞株において産生される。ＣＨＯ細胞はｒｇｐ１２０／ＨＩＶ−１分子を培地に分泌し、タンパク質はイムノアフィニティークロマトグラフィーを含めたｇｐ１２０用の一般的精製プロセスによって精製される。「ＡＩＤＳＶＡＸ」二価ワクチンは、使い捨てのガラスのバイアルに入った滅菌懸濁液として供給される。各バイアルは、それぞれ、合計０．６ｍｇの水酸化アルミニウム・ゲル・アジュバントに吸着された、１ｍＬの公称含有量（３００μＬ）のｒｇｐ１２０／ＨＩＶ−１タンパク質を含んでいる。
【００６７】
実施例２
臨床試験デザインおよび結果
「プライム」組成物としてＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰＩ５２１）を、「ブースト」組成物として「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅを使用するプライム・ブースト免疫法を、フォーマルフェーズ０１臨床試験において試験した。本明細書に記載の臨床試験は、タイ国で行われた、地域密着型の、無作為化した（ワクチン；プラセボ＝１：１）、多施設の、二重盲検、プラセボを対照とした臨床試験であった。本研究の主な目的は、健康なタイの成人において、ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）ワクチンおよび「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅワクチンの接種がＨＩＶの感染を防げるか否かを判定することであった。よって、臨床試験中のＨＩＶ感染を発現する志願者における感染率ならびに血漿ウイルス負荷およびＣＤ４+Ｔ細胞の数を評価した。本研究の統計的仮定のため、１６，０００人が研究に参加することが必要とされた。２４週間の間（０、４、１２、２４週）、各個人に筋肉内ワクチン接種（例えば三角筋）が行われた。ワクチン接種後、６か月ごとに３年間、血漿中のＨＩＶの存在について志願者を試験した。
【００６８】
上記実施例１Ａに記載の「第１の組成物」（ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ）を、０、１、３、および６カ月（０、４、１２および２４週）の時点でプライム用量として最初に患者に投与した。その後、「第２の組成物」（「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅ）を、３カ月および６カ月（ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶについては１２週および２４週）の時点でブースト用量として投与した。ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶの用量は約１０7ＣＣＩＤ50を含んでいた。「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅの用量は約６００μｇのポリペプチド（ＢおよびＥを各３００μｇ）を含んでいた。ワクチン志願者を３年間、追跡調査した（Rerks-Ngram, 2009, NEJM 361; 2209）。臨床試験デザインを以下に示す表２にまとめた：
【００６９】
【表２】
2018039832.tif 000003
【００７０】
図３に示すように、２部構成の組成物がプライム・ブースト法で用いられ、３１．２％の有効性（例えば、集団の約３分の１）でヒトに成功裏にワクチン接種された。プラセボを投与された集団では、試験期間にわたり、７４人がＨＩＶ感染を示したが、ＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ／「ＡＩＤＳＶＡＸ」Ｂ／Ｅの２部構成の組成物（「ワクチン」）を投与された集団では、試験期間にわたり、５１人のＨＩＶ感染を示した。２つの群のＨＩＶ感染者数の差異は統計的に有意であった（ｐ＝０．０３９）。ワクチン接種後にＨＩＶに感染した患者では、ウイルス負荷(viral load)の設定値（set-point）および平均ＣＤ４+Ｔ細胞数のいずれも、ワクチン接種後３０カ月の時点でプラセボとの有意な差異はなかった。これは、プラセボと比較してヒトにおけるＨＩＶ感染のリスクの低減を示した初めてのワクチンである。観察されたワクチンの有効性は、コックス比例ハザード法で、３１．２％であった（ｐ＝０．０３８５、Ｏ’Ｂｒｉｅｎ−Ｆｌｅｍｉｎｇ法で調整、９５％ＣＩ１．１、５２．１）。よって、これは、ヒトをＨＩＶによる感染から防御することができる、安全で有効なワクチンの初めての実証である。
【００７１】
特定の範囲に関する言及は、すべての個別の値を含み、その範囲内のサブ範囲は、それぞれが本明細書に個別に記載されているものとして含まれることが理解されるべきである。本明細書で引用されるすべての参考文献は、参照することによってその全体が本明細書に取り込まれる。本発明は好ましい実施の形態の観点から記載されているが、当業者にとって、変形および変更が生じうることも理解されよう。したがって、添付の特許請求の範囲に記載の発明は、その範囲内に含まれる等価物のすべてに及ぶことが意図されている。
【参照文献】
【００７２】
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【図１】
2018039832.tif 000004
【図２Ａ】
2018039832.tif 000005
【図２Ｂ−１】
2018039832.tif 000006
【図２Ｂ−２】
2018039832.tif 000007
【図２Ｂ−３】
2018039832.tif 000008
【図２Ｂ−４】
2018039832.tif 000009
【図３】
2018039832.tif 000010
【配列表】
2018039832000001.app