(57)【要約】【課題】  抗酸化や解毒など、生体にとって重要な役割を果たすグルタチオン−Ｓ−転移酵素の発現を効果的に促進することができ、かつ、安全性が高く、様々な食品や医薬品等に容易に配合することないし日常的に簡便に摂取することができるグルタチオン−Ｓ−転移酵素の発現促進剤および発現促進用食品組成物を提供する。【解決手段】  １−ケストースを有効成分とする、グルタチオン−Ｓ−転移酵素の発現促進剤および発現促進用食品組成物。【選択図】  図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１−ケストースを有効成分とする、グルタチオン−Ｓ−転移酵素の発現促進剤。
【請求項２】
抗酸化剤である、請求項１に記載の発現促進剤。
【請求項３】
不要物質の排出促進剤である、請求項１に記載の発現促進剤。
【請求項４】
１−ケストースを有効成分とする、グルタチオン−Ｓ−転移酵素の発現促進用食品組成物。
【請求項５】
抗酸化用である、請求項４に記載の発現促進用食品組成物。
【請求項６】
不要物質の排出促進用である、請求項４に記載の発現促進用食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１−ケストースを有効成分とする、グルタチオン−Ｓ−転移酵素の発現促進剤および発現促進用食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルタチオン−Ｓ−転移酵素（グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ＧＳＴ）は、ほとんどの真核生物に広く存在する酵素である。哺乳動物のＧＳＴは、特に肝臓に多く存在するが、その他脾臓、腎臓、脳、骨格筋、睾丸、小腸、胎盤、赤血球などの器官にも存在する。ＧＳＴは、グルタチオンとリガンドとの結合（グルタチオン抱合）を触媒する。リガンドとしては、例えば、活性酸素や毒素・薬物・代謝産物などの生体にとって不要な物質が挙げられる。グルタチオン抱合のリガンドが活性酸素であれば還元されて消去され、不要物質であれば、そのグルタチオン抱合体が更なる代謝を受け、最終的に体外へ排出される。すなわち、ＧＳＴは、抗酸化や解毒など、生体にとって重要な役割を果たす酵素であることが知られている。
【０００３】
一方、近年、活性酸素は、その強い酸化力により細胞内のＤＮＡを傷つけるため、癌や心筋梗塞、脳血管障害、アルツハイマー症等の疾患の発症ないし重症化に関与することが報告されている。このことから、ＧＳＴの発現を促進することにより活性酸素の消去を促すことができれば、上記疾患の予防や治療に寄与することが期待される。
【０００４】
また、上述のとおりＧＳＴは、抗酸化機能の他にも、解毒機能を有するため、ＧＳＴの発現を促進することにより発ガン性物質などの生体外への排出を促すことができれば、癌の予防や健康の維持・増進に寄与することが期待される。
【０００５】
そこで、ＧＳＴの発現を促進する物質が研究開発されており、例えば、特許文献１にはイチョウ葉抽出物を有効成分とするＧＳＴ活性化剤が、特許文献２には生体内でのＧＳＴ生成作用を有するセレン含有組成物が、特許文献３にはウコギ科人参抽出物を有効成分とするＧＳＴ発現促進剤が、それぞれ開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平０９−１１０７１３号
【特許文献２】特開２００６−１５１９６５号
【特許文献３】特開２０１０−００１２２３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、特許文献１に記載のイチョウ葉抽出物、特許文献２に記載のセレン含有組成物、特許文献３に記載のウコギ科人参抽出物は、いずれも特有の風味を有すると考えられるため、様々な食品や医薬品等に容易に配合することないし日常的に簡便に摂取することができるものとはいえない。すなわち、上記特許文献を鑑みても、ＧＳＴの発現を効果的に促進することができ、かつ、安全性が高く、様々な食品や医薬品等に容易に配合することないし日常的に簡便に摂取することができる物質は未だ十分に提供されておらず、そのような物質の開発が求められていた。
【０００８】
本発明は、このような課題を解決するためになされたものであって、ＧＳＴの発現を効果的に促進することができ、かつ、安全性が高く、様々な食品や医薬品等に容易に配合することないし日常的に簡便に摂取することができるＧＳＴの発現促進剤および発現促進用食品組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、鋭意研究の結果、１−ケストースを摂食することにより、ＧＳＴの発現を効果的に促進できることを見出した。そこで、この知見に基づいて下記の各発明を完成した。
【００１０】
（１）本発明に係るグルタチオン−Ｓ−転移酵素の発現促進剤は、１−ケストースを有効成分とする。
【００１１】
（２）本発明に係るグルタチオン−Ｓ−転移酵素の発現促進剤は、抗酸化剤として用いることができる。
【００１２】
（３）本発明に係るグルタチオン−Ｓ−転移酵素の発現促進剤は、不要物質の排出促進剤として用いることができる。
【００１３】
（４）本発明に係るグルタチオン−Ｓ−転移酵素の発現促進用食品組成物は、１−ケストースを有効成分とする。
【００１４】
（５）本発明に係るグルタチオン−Ｓ−転移酵素の発現促進用食品組成物は、抗酸化用に用いることができる。
【００１５】
（６）本発明に係るグルタチオン−Ｓ−転移酵素の発現促進用食品組成物は、不要物質の排出促進用に用いることができる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明に係るＧＳＴの発現促進剤および発現促進用食品組成物が有効成分とする１−ケストースは、オリゴ糖の一種であり、タマネギやニンニク、大麦、ライ麦などの野菜や穀物にも含まれていて、古来より食経験を有する物質である。また、１−ケストースは、変異原性試験、急性毒性試験、亜慢性毒性試験および慢性毒性試験のいずれにおいても毒性が認められていない。これらのことから、１−ケストースの安全性は極めて高いといえる（食品と開発、Ｖｏｌ．４９、Ｎｏ．１２、第９頁、２０１４年）。
また、１−ケストースは、水溶性が高く、砂糖に似た良好な甘味質を有するため、そのまま、あるいは甘味料等として、日常的に簡便に摂取することができるほか、様々な食品や医薬品等に容易に配合することができる。
したがって、本発明によれば、ＧＳＴの発現を効果的に促進することができ、かつ、安全性も高く、様々な食品や医薬品等に容易に配合することないし日常的に簡便に摂取することができるＧＳＴの発現促進剤および発現促進用食品組成物を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】１−ケストースを摂取させたマウス（ケストース食群）および摂取させなかったマウス（対照群）の飼育期間中の体重変化を示す折れ線グラフである。
【図２】１−ケストースを摂取させたマウス（ケストース食群）および摂取させなかったマウス（対照群）の、飼育期間終了後の肝臓重量を示す棒グラフである。
【図３】左図は、１−ケストースを摂取させたマウス（ケストース食群）および摂取させなかったマウス（対照群）のＧｓｔｐ１遺伝子の相対発現量を示す棒グラフであり、右図は、同群のＧｓｔａ４遺伝子の相対発現量を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明に係るＧＳＴの発現促進剤および発現促進用食品組成物について、詳細に説明する。
本発明に係るＧＳＴの発現促進剤および発現促進用食品組成物は、１−ケストースを有効成分とする。
【００１９】
１−ケストースは、１分子のグルコースと２分子のフルクトースからなる三糖類のオリゴ糖である。１−ケストースは、スクロースを基質として、特開昭５８−２０１９８０号公報に開示されているような酵素による酵素反応を行うことにより得ることができる。具体的には、まず、β−フルクトフラノシダーゼをスクロース溶液に添加し、３７℃〜５０℃で２０時間程度静置することにより酵素反応を行って、１−ケストース含有反応液を得る。この１−ケストース含有反応液を、特開２０００−２３２８７８号公報で開示されているようなクロマト分離法に供することよって、１−ケストースと他の糖（ブドウ糖、果糖、ショ糖、４糖以上のオリゴ糖）とを分離して精製し、高純度１−ケストース溶液を得る。続いて、この高純度１−ケストース溶液を濃縮した後、特公平６−７００７５号公報に開示されているような結晶化法で結晶化することにより、１−ケストースを結晶として得ることができる。
【００２０】
また、１−ケストースは市販のフラクトオリゴ糖に含まれているため、これをそのまま、あるいは、フラクトオリゴ糖から上述の方法により１−ケストースを分離精製して用いてもよい。すなわち、本発明の１−ケストースとして、１−ケストースを含有するオリゴ糖などの１−ケストース含有組成物を用いてもよい。１−ケストース含有組成物を用いる場合、１−ケストースの純度は８０％以上であることが好ましく、８５％以上であることがより好ましく、９０％以上であることがさらに好ましい。なお、本発明において、１−ケストースの「純度」とは、糖の総質量を１００とした場合の、１−ケストースの質量％をいう。
【００２１】
本発明の発現促進剤は、そのまま、あるいは医薬品や食品添加剤、サプリメントなどの形態で、ヒトまたは動物に経口摂取させることにより使用することができる。その他、１−ケストースを経腸栄養剤に添加して、これを、胃や小腸などの消化管に挿入したチューブを経由して経腸栄養法により投与する方法により使用してもよい。
【００２２】
本発明の発現促進剤を医薬品やサプリメントの形態で用いる場合、その剤型は、例えば、散剤、錠剤、糖衣剤、カプセル剤、顆粒剤、ドライシロップ剤、液剤、シロップ剤、ドロップ剤、ドリンク剤等の固形または液状の剤型にすることができる。
【００２３】
上記各剤型の医薬品やサプリメントは、当業者に公知の方法で製造することができる。例えば、散剤であれば、１−ケストース８００ｇおよび乳糖２００ｇをよく混合した後、９０％エタノール３００ｍＬを添加して湿潤させる。続いて、湿潤粉末を造粒した後、６０℃で１６時間通風乾燥し、その後、整粒して、適当な細かさの散剤１０００ｇ（１−ケストース含有量８００ｍｇ／１ｇ）を得ることができる。また、錠剤であれば、１−ケストース３００ｇ、粉末還元水飴３８０ｇ、コメデンプン１８０ｇおよびデキストリン１００ｇをよく混合した後、９０％エタノール３００ｍＬを添加して湿潤させる。続いて、湿潤粉末を押し出し造粒した後、６０℃で１６時間通風乾燥して顆粒を得る。その後、この顆粒を８５０μｍの篩を用いて整粒し、続いて顆粒４７０ｇにショ糖脂肪酸エステル５０ｇを添加して混合した後、ロータリー打錠機（６Ｂ−２、菊水製作所製）を用いて打錠し、直径８ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤５０００錠（１−ケストース含有量６０ｍｇ／１錠）を得ることができる。
【００２４】
また、本発明の発現促進用食品組成物は、そのまま、飲食物としてヒトまたは動物に摂取させることにより使用することができる。その他、各種の飲食物の通常の製造過程で、添加して使用することもできる。１−ケストースの甘味度は３０で、その味質・物性・加工性はショ糖に近いことから、各種飲食物の製造過程において、砂糖の一部または全部を１−ケストースに置き換えるなどして、砂糖と同様に扱って各種飲食物を製造することができる。また、本発明の発現促進用食品組成物を動物に摂取させる場合は、動物飼料に添加して用いてもよい。
【００２５】
本発明の発現促進剤や発現促進用食品組成物をヒトや動物に対して用いる場合の有効成分の摂取量（投与量）としては、例えば、１日あたり０．０４ｇ／ｋｇ体重以上を挙げることができる。係る摂取量は、１日１回に限らず、複数回に分割して摂取してもよい。
【００２６】
グルタチオン−Ｓ−転移酵素（グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ＧＳＴ）は、２つのドメインをもつサブユニットを、ホモ、あるいは極めて構造がよく似たヘテロで構成された２量体であり、生体内では細胞質に存在する可溶性タンパク質である。ＧＳＴは、一次構造と基質特異性を基にα、μ、π、σ、θ、δ、ε、Ω、ζ、λ、Ｔ等といった多くのクラスに分類される。例えば、ラットでは少なくとも１８、ヒトでは少なくとも１６のサブユニットが報告されている（平塚明、「肝薬物代謝の最近の進歩 ５．グルタチオン Ｓ−トランスフェラーゼ」、肝臓、第４２巻、第６号、ｐ．３０３−３０４）。
【００２７】
ＧＳＴの表記は、例えば、「ＧＳＴ Ａ １−１」であれば、α（Ａ）クラスで最初に発見されたサブユニット１がホモで構成されたものというように、クラスをギリシャ文字またはローマ字の大文字で、構成サブユニット（発見された順）をアラビア数字で、それぞれ表記する。ＧＳＴの前には、生物種（ヒトはｈ、ラットはｒ、マウスはｍなど）がローマ字の小文字で記載される場合もある（宮本徹、「グルタチオンＳ−転移酵素の構造と機能」、東京農大農学集報、２０１３年、第５７巻、第４号、ｐ．２４７−２６０）。
【００２８】
本発明が対象とするＧＳＴは、いずれのサブユニットからなるものであってもよく、動物、植物、菌類、細菌等いずれの生物に由来するものでもよいが、好ましくは動物由来のＧＳＴを挙げることができる。
【００２９】
本発明において、「ＧＳＴの発現を促進する」とは、生体のいずれかの細胞ないし組織・器官において、ＧＳＴ遺伝子の転写量を大きくすること、ＧＳＴタンパク質の量を大きくすること、または、ＧＳＴタンパク質の活性を大きくすることをいう。
【００３０】
本発明において、ＧＳＴの発現が促進されたか否かは、当業者に公知の方法により確認することができる。具体的には、例えば、後述する実施例に示すように、リアルタイムＰＣＲ法によりＧＳＴ遺伝子の転写量を確認する方法を挙げることができる。
すなわち、従来、ＧＳＴが存在していることが知られている組織（血液、肝臓など）の一部を試料として採取し、本発明の発現促進剤または発現促進用食品組成物を摂取した場合としていない場合とで、当該試料におけるＧＳＴのメッセンジャーＲＮＡの含有量を比較する。前者の方がメッセンジャーＲＮＡの含有量が大きければ、本発明の発現促進剤または発現促進用食品組成物により、ＧＳＴの発現が促進されたと判断することができる。
【００３１】
また、ＧＳＴの発現が促進されたか否かを確認する他の方法としては、例えば、上記試料において、特許文献２の段落[0024]に記載のようなウエスタンブロット法により、ＧＳＴタンパク質の量を確認する方法を挙げることができる。
すなわち、Sodium dodecyl sulfateとポリアクリルアミドゲルを利用した電気泳動（SDS-PAGE）により試料中のタンパク質をペプチド鎖長に応じて分離した後、ゲルにメンブレンを密着させ、分離したタンパク質を電圧をかけてゲルからメンブレン（ニトロセルロース膜など）に移す。このメンブレンに、ＧＳＴ特異的抗体（一次抗体）を結合させ、洗浄した後、アルカリファリフォスファターゼなどの酵素で標識した二次抗体を反応させる。その後、標識酵素の活性を利用した化学発光法もしくは発色法により検出する。検出強度（発光強度もしくは発色強度）は、ＧＳＴタンパク質の量に比例するため、前者の試料の方が検出強度が大きければ、本発明の発現促進剤または発現促進用食品組成物により、ＧＳＴの発現が促進されたと判断することができる。
【００３２】
また、ＧＳＴの発現が促進されたか否かを確認する他の方法としては、例えば、上記試料において、特許文献２の段落[0022]-[0023]に記載のように、ＧＳＴタンパク質の活性値を確認する方法を挙げることができる。
すなわち、上記試料を０．２Ｍスクロース／１０ｍＭリン酸緩衝液中で破砕して上清を得る。この上清と、１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ６．５)、１ｍＭの1-chrolo-2,4-dinitrobenzene（ＣＤＮＢ）および１ｍＭの還元型グルタチオン（ＧＳＨ）とを含む反応溶液を調製し、３０℃における３４０ｎｍの吸光度を１５秒毎に３分間測定する。
ＣＤＮＢ は、ＧＳＴの基質でありＧＳＨと反応する。この反応によって生成するグルタチオン抱合体は ３４０ｎｍの吸収をもつため、前者の試料の方が吸光度が大きければ、本発明の発現促進剤または発現促進用食品組成物により、ＧＳＴの発現が促進されたと判断することができる。
【００３３】
上述のとおり、ＧＳＴは、強力な酸化力をもつ活性酸素や過酸化物を、グルタチオン抱合して還元することにより消去する（宮本徹、「グルタチオンＳ−転移酵素の構造と機能」、東京農大農学集報、２０１３年、第５７巻、第４号、ｐ．２４７−２６０；平塚明、「肝薬物代謝の最近の進歩 ５．グルタチオン Ｓ−トランスフェラーゼ」、肝臓、第４２巻、第６号、ｐ．３０２−３０８）。すなわち、ＧＳＴの発現を促進することにより、生体内の酸化ストレスを軽減できることから、ＧＳＴの発現促進剤や発現促進用食品組成物は、生体の酸化を予防ないし軽減する用途に用いることができる。従って、本発明の発現促進剤や発現促進用食品組成物は、抗酸化剤や抗酸化用食品組成物として用いることができる。
【００３４】
また、上述のとおり、ＧＳＴは、毒素・薬物・代謝産物などの生体にとって不要な物質をグルタチオン抱合し、腎臓での更なる代謝等を経て最終的に体外へ排出されることを促す（宮本徹、「グルタチオンＳ−転移酵素の構造と機能」、東京農大農学集報、２０１３年、第５７巻、第４号、ｐ．２４７−２６０；平塚明、「肝薬物代謝の最近の進歩 ５．グルタチオン Ｓ−トランスフェラーゼ」、肝臓、第４２巻、第６号、ｐ．３０２−３０８）。すなわち、ＧＳＴの発現を促進することにより、生体にとって不要な物質の解毒ないし排出を促進できることから、ＧＳＴの発現促進剤や発現促進用食品組成物は、当該不要物質の排出を促進する用途に用いることができる。従って、本発明の発現促進剤や発現促進用食品組成物は、不要物質の排出促進剤や排出促進用食品組成物として用いることができる。
【００３５】
以下、本発明に係るＧＳＴの発現促進剤および発現促進用食品組成物について、各実施例に基づいて説明する。なお、本発明の技術的範囲は、これらの実施例によって示される特徴に限定されない。
【実施例】
【００３６】
本実施例においては、所定の純度で１−ケストースを含有する組成物を、「１−ケストース」という。また、本実施例において、各群の平均値の間の有意差はＴ検定により検定し、危険率５％未満を有意とみなした。
【００３７】
＜実施例１＞１−ケストース摂取時の遺伝子発現量の検討
（１）１−ケストースを経口摂取させたマウスの飼育
マウスの標準精製飼料「ＡＩＮ−９３Ｇ」（日本クレア社）の配合において、コーンスターチの一部を１−ケストース（純度９９％；物産フードサイエンス社）に置換することにより、１−ケストースを５質量％となるように配合した飼料を日本クレア社に委託して調製し、これをケストース配合飼料とした。ＡＩＮ−９３Ｇの配合を以下に示す。
《ＡＩＮ−９３Ｇの配合（単位は質量％）》コーンスターチ  ３９．７４８６％、ミルクカゼイン  ２０％、アルファ化コーンスターチ  １３．２％、グラニュー糖  １０％、精製大豆油  ７％、セルロースパウダー  ５％、ミネラルミックス  ３．５％、ビタミンミックス  １％、Ｌ−シスチン  ０．３％、重酒石酸コリン  ０．２５％、第３ブチルヒドロキノン  ０．００１４％。
【００３８】
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（中部科学資材社）を１０匹ずつ２つの群に分け、一方をケストース食群、他方を対照群とした。対照群にはＡＩＮ−９３Ｇを、ケストース食群にはケストース配合飼料をそれぞれ自由摂取させながら、１０週間飼育した。飼育条件は温度２３±１℃、明期１２時間（８：００〜２０：００）および暗期１２時間（２０：００〜８：００）とした。
【００３９】
飼育期間中は、一週間経過毎に体重を測定し、各群毎に平均値および標準偏差を求めて有意差検定を行った。その結果を図１に示す。また、飼育期間終了後に各群のマウスを解剖して肝臓を摘出し、その重量を測定して、各群毎に平均値および標準偏差を求めて有意差検定を行った。その結果を図２に示す。
図１および図２に示すように、ケストース食群と対照群とで、体重および肝臓重量に有意な差は見られなかった。 
【００４０】
（２）ＤＮＡマイクロアレイによる候補遺伝子の選定
本実施例１（１）のマウス肝臓から、摂食量および体重増加量が平均的であった個体のものを、各群毎に５個体分ずつ選んだ。それらの肝臓組織からNucleo Spin RNAキット（タカラバイオ社）を用いて総ＲＮＡを抽出して、各群毎に、等量ずつ混合した。この総ＲＮＡを鋳型として、逆転写酵素ArrayScriptおよびT7 Oligo dT Primerを用いてｃＤＮＡを合成した。次に、dNTP mix、DNA ligase、DNA PolymeraseおよびRnase Hを用いて２本鎖ｃＤＮＡを合成した（以上、Ambion社）。得られた２本鎖ｃＤＮＡをMin Elute PCR Purification Kit（QIAGEN社）を用いて精製した後、Massage Amp-Biotin Kit（Ambion社）によりビオチン標識し、Rneasy MinElute Cleanup Kit（QIAGEN社）で精製してビオチン標識ｃＤＮＡを得た。続いて、３０ｍＭの酢酸マグネシウムおよび１００ｍＭの酢酸カリウムを含む４０ｍＭのトリス−酢酸緩衝液（ｐＨ８．１）中で、９４℃で３５分間加熱することにより断片化反応を行い、断片化ビオチン標識ｃＤＮＡを得た。
【００４１】
断片化ビオチン標識ｃＤＮＡを、酸化ストレス・アンチエイジングチップ 「ジェノパール（登録商標） ＲＯＳＭ−ＪＸ（マウス版；２１９遺伝子搭載）」（三菱レイヨン社）へハイブリダイズさせた。この反応は、ハイブリダイゼーション用バッファー中で６５℃にて１６時間行った。その後、Biochip Reader MB-M3C（横河電機社）を用いて蛍光シグナルの検出を行った。蛍光シグナルの測定値が１００以上を示した遺伝子を陽性として抽出し、それらについて、「対照群の測定値」に対する「ケストース食群の測定値」の比（発現比：ケストース食群の測定値／対照群の測定値）を求めた。発現比が１．５倍以上であった遺伝子を、１−ケストースの摂食により発現が促進される候補遺伝子として抽出した。
【００４２】
その結果、候補遺伝子として、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼのクラスπのサブユニット１（Glutathione S-transferase pi 1；Ｇｓｔｐ１）（発現比２．１３倍）およびグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼのクラスαのサブユニット４（Glutathione S-transferase alpha 4；Ｇｓｔａ４）（発現比１．５０倍）の２遺伝子が抽出された。そこで、これらの遺伝子について、リアルタイムＰＣＲ法により発現量の定量的解析を行うこととした。
【００４３】
（３）リアルタイムＰＣＲ法による遺伝子発現量の定量的解析
本実施例１（１）のマウス肝臓から、Nucleo Spin RNAキット（タカラバイオ社）を用いて総ＲＮＡを抽出した。この総ＲＮＡから、ReverTra Ace qPCRRT Master Mix（東洋紡社）を用いて逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを作成した。このｃＤＮＡを鋳型として、下記の遺伝子特異的プライマー、リアルタイムＰＣＲ試薬「THUNDERBIED SYBR qPCR Mix（東洋紡社）」およびリアルタイムＰＣＲ装置「Thermal Cycler Dice Real Time System（タカラバイオ社）」を用いてリアルタイムＰＣＲを行った。内部標準遺伝子としてβ−Ａｃｔｉｎ遺伝子の発現量を同様に測定し、Ｇｓｔｐ１遺伝子およびＧｓｔａ４遺伝子の発現量は、β−Ａｃｔｉｎ遺伝子の発現量に対する比率（相対発現量）として算出した。相対発現量は、各群ごとに平均値および標準偏差を算出して有意差検定を行い、棒グラフに表した。その結果を図３に示す。
【００４４】
なお、遺伝子特異的プライマーの配列を以下に示す。
《Ｇｓｔｐ１遺伝子》
フォワードプライマー；CGGCAAATATGTCACCCTCATCTA（配列番号１）
リバースプライマー；TCTGGGACAGCAGGGTCTCA（配列番号２）
《Ｇｓｔａ４遺伝子》
フォワードプライマー；TGACACAGACCAGGGCCATC（配列番号３）
リバースプライマー；ATCAGGTCCTGGGTGCCATC（配列番号４）
《β−Ａｃｔｉｎ遺伝子》
フォワードプライマー；CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC（配列番号５）
リバースプライマー；ATGGAGCCACCGATCCACA（配列番号６）
【００４５】
図３に示すように、Ｇｓｔｐ１遺伝子の相対発現量は、対照群では約３であったのに対して、ケストース食群では約７．５であり、両群間には有意差があった。また、Ｇｓｔａ４遺伝子の相対発現量は、対照群では約１であったのに対して、ケストース食群では約４．３であり、両群間には有意差があった。すなわち、ケストース食群では、対照群と比較して、Ｇｓｔｐ１遺伝子の発現量が約２．５倍、Ｇｓｔａ４遺伝子の発現量が約４倍、大きいことが明らかになった。
この結果から、１−ケストースの摂食により、ＧＳＴの発現が促進されることが明らかになった。
【図１】
2018100235.tif 000003
【図２】
2018100235.tif 000004
【図３】
2018100235.tif 000005
【配列表】
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