(57)【要約】      （修正有）【課題】汎用試薬を用いた、安価で簡便なトリプトファンの分析方法を提供する。【解決手段】測定試料に次亜塩素酸ナトリウムを添加して発色させ、吸光度を測定することを特徴とする、トリプトファンの分析方法を提供する。吸光度の測定波長は４８０ｎｍ以上５６０ｎｍ以下とする、赤色の呈色を評価できる波長である。また次亜塩素酸ナトリウムの添加濃度は、１０ｐｐｍ以上１００ｐｐｍ以下であることが好ましい。本分析方法は測定試料がアミノ酸含有飲料などの製品開発や品質管理等に有用である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
測定試料に次亜塩素酸ナトリウムを添加して発色させ、吸光度を測定することを特徴とする、トリプトファンの分析方法。
【請求項２】
吸光度の測定波長が４８０ｎｍ以上５６０ｎｍ以下である、請求項１に記載のトリプトファンの分析方法。
【請求項３】
次亜塩素酸ナトリウムの添加濃度が、１０ｐｐｍ以上１００ｐｐｍ以下である、請求項１又は２に記載のトリプトファンの分析方法。
【請求項４】
測定試料がアミノ酸含有飲料である、請求項１から３のいずれか一項に記載のトリプトファンの分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トリプトファンの分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
トリプトファンは、必須アミノ酸の一つであり、ヒト体内で、概日リズムと関連するセロトニンやメラトニンに代謝される。ヒトの健康維持にとって欠かせ無い物質であり、適量の摂取は精神・神経を落ち着かせるなど、ヒトの健康増進に役立つとされている。
【０００３】
これまで、トリプトファンを分析する方法について、様々な検討がされている。例えば、特開２０１４−１６１２５８号公報（特許文献１）では、所定のＬ−トリプトファン脱水素酵素を用いたＬ−トリプトファンの分析方法が記載されている。また、特開２０１５−２３８５９号公報（特許文献２）では、所定のＬ−トリプトファンオキシダーゼを用いたＬ−トリプトファンの分析方法が記載されている。しかし、これらの分析方法では、特定の酵素が必要となり、費用面等の問題がある。また、ＨＰＬＣ法や、ＬＣ／ＭＳ法、アミノ酸分析装置等による機器分析法等も知られているが、これらの分析方法では、高価な機器が必要となり、安価で簡便に分析できない。したがって、ヒトにとって有益で有用な物質であるトリプトファンを、さらに安価で簡便に分析できる方法が求められていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１４−１６１２５８号公報
【特許文献２】特開２０１５−２３８５９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
このような背景から、本発明では、簡便にできる分析方法として、汎用試薬を用いた呈色反応に着目した。本発明では、呈色反応を利用した、安価で簡便なトリプトファンの分析方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するために、本発明者らは、入手しやすい汎用試薬を利用する呈色反応に注目し、アミノ酸の呈色反応条件について詳細に検討した。そして、その結果として、次亜塩素酸ナトリウムを添加して発色させ、特定の波長の吸光度を測定することで、トリプトファンを分析できることを見出し、本発明を完成させた。
【０００７】
すなわち、本発明は、次の通りとなる。
［１］測定試料に次亜塩素酸ナトリウムを添加して発色させ、吸光度を測定することを特徴とする、トリプトファンの分析方法。
［２］吸光度の測定波長が４８０ｎｍ以上５６０ｎｍ以下である、［１］に記載のトリプトファンの分析方法。
［３］次亜塩素酸ナトリウムの添加濃度が、１０ｐｐｍ以上１００ｐｐｍ以下である、［１］又は［２］に記載のトリプトファンの分析方法。
［４］測定試料がアミノ酸含有飲料である、［１］から［３］のいずれか一項に記載のトリプトファンの分析方法。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、試料中のトリプトファンを正確かつ簡易、簡便に測定することができる。また、本発明は、アミノ酸飲料のような各種のアミノ酸の混合溶液においても、トリプトファンを特異的に分析できる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】実施例４において、トリプトファンの標準溶液を用いて作成した検量線を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明では、測定の対象とする液体の試料に、次亜塩素酸ナトリウムを添加する。次亜塩素酸ナトリウムは、業務用や家庭用の塩素系漂白剤や殺菌剤として市販されており、試薬としても容易に入手可能である。本発明の分析方法における次亜塩素酸ナトリウムの添加濃度は、１０ｐｐｍ以上１００ｐｐｍ以下が好ましく、２０ｐｐｍ以上８０ｐｐｍ以下がより好ましく、３０ｐｐｍ以上６０ｐｐｍ以下がさらに好ましい。次亜塩素酸ナトリウムの添加濃度が低すぎると、発色が不十分で正確な分析ができない。一方、次亜塩素酸ナトリウムの添加濃度が高すぎると、次亜塩素酸ナトリウムの強い酸化力が測定試料そのものに悪影響を及ぼし正確な分析ができなくなり、また、コスト面でも不利である。
【００１１】
本発明では、試料に次亜塩素酸ナトリウムを添加後、発色した試料の吸光度を測定する。試料に次亜塩素酸ナトリウムを添加すると、速やかに赤色に発色するので、その発色（呈色）の度合いを、吸光度で評価する。吸光度は、例えば市販の分光光度計で測定可能である。吸光度の測定波長は、赤色の呈色を評価できる波長であれば良く、例えば４８０ｎｍ以上５６０ｎｍ以下の範囲にあることが好ましく、５４０ｎｍが特に好ましい。
【００１２】
本発明は、トリプトファンのみを含有する液体を分析対象とできるだけでなく、トリプトファンを含む各種アミノ酸の混合溶液も分析対象とできる。この場合、他のアミノ酸の干渉を受けることなく、各種アミノ酸の混合溶液から、トリプトファンの濃度を正確に分析できる。したがって、本発明の分析方法は、各種アミノ酸を含有する飲料等を対象にして、トリプトファンを分析する場合に特に有用であり、アミノ酸含有製品の新規開発や品質管理等に活用できるものである。
【実施例】
【００１３】
以下、実施例に基づいて、本発明をより具体的に説明する。なお、この実施例は、本発明を限定するものではない。
【００１４】
［実施例１］
表１に示したアミノ酸の混合溶液に、次亜塩素酸ナトリウムを１６ｐｐｍになるように添加し反応させた。添加前（反応前）、添加後（反応後）のそれぞれの混合溶液のアミノ酸濃度をアミノ酸分析装置（高速アミノ酸分析計Ｌ−８９００、日立ハイテクサイエンス社製）により測定した。具体的には、測定試料を０．０２Ｎの塩酸を用いて適宜希釈し、ニンヒドリンを用いたポストカラム誘導体化法によりアミノ酸濃度を測定した。反応後のアミノ酸残量を算出した結果、表１に示すように、トリプトファンが特異的に半減していることが判明した。したがって、アミノ酸の混合溶液中で、トリプトファンのみが特異的に次亜塩素酸ナトリウムと反応することが示唆された。
【００１５】
【表１】
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【００１６】
［実施例２］
表２に示したアミノ酸の混合溶液（濃度は、トリプトファンが１０．９ｍｇ／１００ｍＬ、アスパラギン酸が０．５ｍｇ／１００ｍＬ、メチオニンが１．９ｍｇ／１００ｍＬ、ヒスチジンが１０ｍｇ／１００ｍＬ、チロシンが３．５ｍｇ／１００ｍＬ）を用意した。これらの混合溶液に、次亜塩素酸ナトリウムを３０ｐｐｍになるように添加し、５４０ｎｍの吸光度を測定した。結果、表２に示すように、トリプトファンが含まれるアミノ酸混合溶液では５４０ｎｍの吸光度が認められたものの、トリプトファンが含まれないアミノ酸混合溶液では５４０ｎｍの吸光度が認められなかった。なお、吸光度の測定時、トリプトファンが含まれるアミノ酸混合溶液は、全て赤色に着色していた。したがって、アミノ酸の混合溶液中で、トリプトファンのみが特異的に次亜塩素酸ナトリウムと反応し、赤色を呈することが判明した。
【００１７】
【表２】
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【００１８】
［実施例３］
アミノ酸の混合溶液（濃度は、トリプトファンが１０．９ｍｇ／１００ｍＬ、アスパラギン酸が０．５ｍｇ／１００ｍＬ、メチオニンが１．９ｍｇ／１００ｍＬ）を用意した。これらの混合溶液に、次亜塩素酸ナトリウムを３０ｐｐｍになるように添加し、４２０ｎｍから、２０ｎｍ刻みで、６００ｎｍまでの吸光度をそれぞれ測定した。結果、表３に示すように、４８０ｎｍ以上５６０ｎｍ以下の範囲で０．２０以上の十分な吸光度が得られた。したがって、本発明の分析方法では、この吸光度の範囲で特に精度良く測定できることが示された。
【００１９】
【表３】
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【００２０】
［実施例４］
トリプトファンの標準溶液を4段階の濃度（０．０１、０．０３、０．１、０．３ｍｇ／ｍＬ）で用意し、それぞれに次亜塩素酸ナトリウムを３０ｐｐｍの濃度になるように添加した後、５４０ｎｍの波長の吸光度を測定して、検量線を作成した（図１）。一方、トリプトファン濃度が０．１０９ｍｇ／ｍＬである市販のアミノ酸飲料に、次亜塩素酸ナトリウムを６０ｐｐｍの濃度になるように添加した後、５４０ｎｍの波長の吸光度を測定して、標準溶液での検量線から、市販のアミノ酸飲料中のトリプトファン量を算出した結果、０．１０ｍｇ／ｍＬとなった。この値は市販アミノ酸飲料中のトリプトファン濃度である０．１０９ｍｇ／ｍＬに極めて近い値となった、したがって、測定試料に次亜塩素酸ナトリウムを添加して発色させ、吸光度を測定することで、トリプトファンを正確かつ簡易、簡便に測定できることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００２１】
本発明によれば、安価に入手できる汎用試薬である次亜塩素酸ナトリウムを用いて、試料中のトリプトファンを正確かつ簡易、簡便に測定することができる。特に、本発明は、アミノ酸飲料のような各種のアミノ酸の混合溶液においても、トリプトファンを特異的に分析することができるので、アミノ酸含有製品の開発や品質管理等に有用である。
【図１】
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