(57)【要約】      （修正有）【課題】生細胞内で使用でき、小さいサイズでも油滴（特に細胞内の脂肪球）を高感度に検出でき、さらに、他の組織の蛍光染色を抑制できる油滴染色剤を提供する。【解決手段】式（１）で表される化合物である縮環チオフェン化合物又はその溶媒和物を含有する油滴染色剤。2018039963.tif 000043［式中、nは1又は2を示す。Ar1は置換若しくは非置換（複素）芳香環を示す。Ar2は2価のπ共役ユニットを示す。nが2である場合、2個のAr2は同一でも異なっていてもよい。R1は水素原子、ハロゲン原子、置換若しくは非置換アルキル基等を示す。R2及びR3は同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基等を示す。R2及びR3は結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。R2及び／又はR3はAr2と結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。］【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
縮環チオフェン化合物又はその溶媒和物を含有する油滴染色剤であって、
前記縮環チオフェン化合物は、一般式（１）：
【化１】
2018039963.tif 000041
［式中、nは1又は2を示す。Ar1は置換若しくは非置換（複素）芳香環を示す。Ar2は2価のπ共役ユニットを示す。nが2である場合、2個のAr2は同一でもよいし異なっていてもよい。R1は水素原子、ハロゲン原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基、カルボニル基、イミノ基、又はシアノ基を示す。R2及びR3は同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基を示す。R2及びR3は結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。R2及び／又はR3はAr2と結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。］
で表される化合物である、油滴染色剤。
【請求項２】
前記一般式（１）において、Ar2が置換若しくは非置換アルケニル基、置換若しくは非置換アルキニル基、又は置換若しくは非置換（ヘテロ）アリーレン基である、請求項１に記載の油滴染色剤。
【請求項３】
前記Ar1が置換若しくは非置換芳香環である、請求項１又は２に記載の油滴染色剤。
【請求項４】
前記Ar2が置換若しくは非置換アリーレン基である、請求項１〜３のいずれかに記載の油滴染色剤。
【請求項５】
前記R1が水素原子である、請求項１〜４のいずれかに記載の油滴染色剤。
【請求項６】
前記R2及びR3が置換若しくは非置換アリール基である、請求項１〜５のいずれかに記載の油滴染色剤。
【請求項７】
前記縮環チオフェン化合物又はその水和物若しくは溶媒和物が非極性溶媒中に溶解している、請求項１〜６のいずれかに記載の油滴染色剤。
【請求項８】
ｐＨが5〜11である、請求項７に記載の油滴染色剤。
【請求項９】
脂肪染色剤である、請求項１〜８のいずれかに記載の油滴染色剤。
【請求項１０】
細胞内脂肪球染色剤である、請求項１〜９のいずれかに記載の油滴染色剤。
【請求項１１】
請求項９又は１０に記載の油滴染色剤を用いる、脂肪のバイオイメージング方法。
【請求項１２】
一般式（１）：
【化２】
2018039963.tif 000042
［式中、nは1又は2を示す。Ar1は置換若しくは非置換（複素）芳香環を示す。Ar2は2価のπ共役ユニットを示す。nが2である場合、2個のAr2は同一でもよいし異なっていてもよい。R1は水素原子、ハロゲン原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基、カルボニル基、イミノ基、又はシアノ基を示す。R2及びR3は同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基を示す。R2及びR3は結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。R2及び／又はR3はAr2と結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。ただし、Ar1がベンゼン環であり、R2及びR3がいずれもフェニル基である場合、Ar1がアミジン基で置換された（複素）芳香環である場合を除く。］
で表される縮環チオフェン化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、油滴染色剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生活習慣病由来の動脈硬化症、肥満（特にメタボリックシンドローム）等に関して、脂肪細胞の基礎的な研究が進められている。特に、細胞内の脂肪球の生成過程及び分解過程をリアルタイムに観測することは、脂肪細胞の生成及び分解の挙動を明らかにするうえで非常に重要である。この脂肪球の観測には、通常、細胞内の脂肪球（脂肪滴）を染色する手法が採用されている。このような細胞内脂肪球染色剤としては、9-(ジエチルアミノ)-5H-ベンゾ[a]フェノキサジン-5-オン（Nile Red）が市販されている。
【０００３】
また、蛍光色素としては、特定の構造を有する縮環ホスホール化合物も知られている（例えば、特許文献１参照）。この縮環ホスホール化合物は、生細胞内で使用することができ、細胞内の脂肪球を染色することも可能である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２０１５／１１１６４７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、Nile Redは、脂肪球以外の非特異染色が発生するために小さい脂肪球と脂肪球以外の組織とを判別することは困難であるうえに、一定時間経過後には蛍光強度が低下する。また、特許文献１の縮環ホスホール化合物も、脂肪球以外の組織も染色されてしまうため、形成初期の小さい脂肪球と脂肪球以外の組織とを判別しにくい。このため、従来から知られている蛍光色素は、細胞内の脂肪球を高感度に検出することが困難であり、また、脂肪の生成過程及び分解過程をリアルタイムで可視化することは困難であった。
【０００６】
本発明は、このような課題を解決するためになされたものであり、生細胞内で使用でき、小さいサイズでも油滴（特に細胞内の脂肪球）を高感度に検出でき、さらに、他の組織の蛍光染色を抑制できる油滴染色剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意研究を重ねた結果、特定の構造を有する縮環チオフェン化合物は、生細胞内で使用でき、小さいサイズであっても油滴（特に細胞内の脂肪球）を高感度に検出でき、他の組織の蛍光染色も抑制できることができることを見出した。本発明者らは、このような知見に基づき、さらに研究を重ね本発明を完成した。即ち、本発明は、以下の構成を包含する。
【０００８】
項１．縮環チオフェン化合物又はその溶媒和物を含有する油滴染色剤であって、
前記縮環チオフェン化合物は、一般式（１）：
【０００９】
【化１】
2018039963.tif 000002
［式中、nは1又は2を示す。Ar1は置換若しくは非置換（複素）芳香環を示す。Ar2は2価のπ共役ユニットを示す。nが2である場合、2個のAr2は同一でもよいし異なっていてもよい。R1は水素原子、ハロゲン原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基、カルボニル基、イミノ基、又はシアノ基を示す。R2及びR3は同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基を示す。R2及びR3は結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。R2及び／又はR3はAr2と結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。］
で表される化合物である、油滴染色剤。
【００１０】
項２．前記一般式（１）において、Ar2が置換若しくは非置換アルケニル基、置換若しくは非置換アルキニル基、又は置換若しくは非置換（ヘテロ）アリーレン基である、項１に記載の油滴染色剤。
【００１１】
項３．前記Ar1が置換若しくは非置換芳香環である、項１又は２に記載の油滴染色剤。
【００１２】
項４．前記Ar2が置換若しくは非置換アリーレン基である、項１〜３のいずれかに記載の油滴染色剤。
【００１３】
項５．前記R1が水素原子である、項１〜４のいずれかに記載の油滴染色剤。
【００１４】
項６．前記R2及びR3が置換若しくは非置換アリール基である、項１〜５のいずれかに記載の油滴染色剤。
【００１５】
項７．前記縮環チオフェン化合物又はその溶媒和物が非極性溶媒中に溶解している、項１〜６のいずれかに記載の油滴染色剤。
【００１６】
項８．ｐＨが5〜11である、項７に記載の油滴染色剤。
【００１７】
項９．脂肪染色剤である、項１〜８のいずれかに記載の油滴染色剤。
【００１８】
項１０．細胞内脂肪球染色剤である、項１〜９のいずれかに記載の油滴染色剤。
【００１９】
項１１．項９又は１０に記載の油滴染色剤を用いる、脂肪のバイオイメージング方法。
【００２０】
項１２．一般式（１）：
【００２１】
【化２】
2018039963.tif 000003
［式中、nは1又は2を示す。Ar1は置換若しくは非置換（複素）芳香環を示す。Ar2は2価のπ共役ユニットを示す。nが2である場合、2個のAr2は同一でもよいし異なっていてもよい。R1は水素原子、ハロゲン原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基、カルボニル基、イミノ基、又はシアノ基を示す。R2及びR3は同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基を示す。R2及びR3は結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。R2及び／又はR3はAr2と結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。ただし、Ar1がベンゼン環であり、R2及びR3がいずれもフェニル基である場合、Ar1がアミジン基で置換された（複素）芳香環である場合を除く。］
で表される縮環チオフェン化合物。
【発明の効果】
【００２２】
本発明によれば、特定の縮環チオフェン化合物又はその溶媒和物は、可視光レーザー光源（例えば波長405 nm）を使用して油滴（特に脂肪球）の染色を行うことが可能であるため、生体へのダメージを大幅に軽減することができ、生体内で使用することが可能である。
【００２３】
また、この特定の縮環チオフェン化合物又はその溶媒和物は、小さいサイズであっても油滴（特に細胞内の脂肪球）を高感度に染色することが可能であり、また、他の組織の蛍光染色も抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】実施例1の油滴染色剤を用いた場合の吸収スペクトル及び蛍光スペクトルである。
【図２】実施例2の油滴染色剤を用いた場合の吸収スペクトル及び蛍光スペクトルである。
【図３】実施例3の油滴染色剤を用いた場合の吸収スペクトル及び蛍光スペクトルである。
【図４】実施例4の油滴染色剤を用いた場合の吸収スペクトル及び蛍光スペクトルである。
【図５】実施例1〜4で得られた化合物1〜4、比較例3のNile Red、比較例4のBODIPYの光安定性の結果を示すグラフである。
【図６】実施例1で得られた化合物1の細胞毒性の結果を示すグラフである。
【図７】実施例2で得られた化合物2の細胞毒性の結果を示すグラフである。
【図８】実施例1（右図）及び比較例1（左図）の油滴染色剤を用いた場合の細胞染色実験の結果を示す写真である。
【図９】実施例1の油滴染色剤を用いた場合の細胞染色実験の結果を示す写真である。
【図１０】実施例1の油滴染色剤を用いた場合の細胞染色実験の結果（蛍光強度）を示す写真である。
【図１１】比較例2及び3の油滴染色剤を用いた場合の細胞染色実験の結果（蛍光強度）を示す写真である。
【図１２】比較例2及び3の油滴染色剤を用いた場合の細胞染色実験の結果（共染色）を示す写真である。
【図１３】実施例1の化合物1、実施例2の化合物2又は比較例3のNile Redを用いた脂肪細胞の染色実験の結果を示す。
【図１４】実施例1の化合物1又は実施例3の化合物3を用いた脂肪細胞の染色実験の結果を示す。
【図１５】実施例2の化合物2を用いた脂肪分解実験の結果を示す写真である。
【図１６】実施例2の化合物2を用いた脂肪分解実験の結果を示すグラフである。
【図１７】比較例2の油滴染色剤を用いた場合の固定細胞染色実験の結果（左図は試験例3、右図は試験例4）を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本明細書において、「（複素）芳香環」は、芳香環又は複素芳香環を意味する。また、本明細書において、「（ヘテロ）アリール基」は、アリール基又はヘテロアリール基を意味する。さらに、本明細書において、「（ヘテロ）アリーレン基」は、アリーレン基又はヘテロアリーレン基を意味する。
【００２６】
１．油滴染色剤
本発明の油滴染色剤は、縮環チオフェン化合物又はその溶媒和物を含有する。
【００２７】
前記縮環チオフェン化合物は、一般式（１）：
【００２８】
【化３】
2018039963.tif 000004
［式中、nは1又は2を示す。Ar1は置換若しくは非置換（複素）芳香環を示す。Ar2は2価のπ共役ユニットを示す。nが2である場合、2個のAr2は同一でもよいし異なっていてもよい。R1は水素原子、ハロゲン原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基、カルボニル基、イミノ基、又はシアノ基を示す。R2及びR3は同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基を示す。R2及びR3は結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。R2及び／又はR3はAr2と結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。］
で表される化合物である。
【００２９】
一般式（１）において、nは1又は2である。可視光レーザー光源でより染色しやすく、小さいサイズでも油滴（特に細胞内の脂肪球）をより高感度に検出でき、他の組織の蛍光染色をより抑制できる観点から、nは1が好ましい。
【００３０】
一般式（１）において、Ar1で示される（複素）芳香環としては、芳香環及び複素芳香環のいずれも採用できる。
【００３１】
Ar1で示される芳香環としては、例えば、単環芳香族炭化水素環としてベンゼン環が挙げられ、多環芳香族炭化水素環としてナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、フルオレン環、ピレン環、トリフェニレン環等が挙げられる。
【００３２】
Ar1で示される芳香環は、置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、後述のハロゲン原子、後述のアルキル基、後述のシクロアルキル基、ハロゲン化アルキル基（トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基等）、後述のアルケニル基、後述のアルキニル基、後述のアリール基、後述のヘテロアリール基、後述のカルボニル基、シアノ基、ニトロ基等が挙げられる。置換基の数は、例えば、０〜６個が好ましく、０〜３個がより好ましい。
【００３３】
Ar1で示される複素芳香環としては、例えば、ピロリジン環、ピロール環、テトラヒドロチオフェン環、チオフェン環、オキソラン環、フラン環、イミダゾール環、ピラゾール環、チアゾール環、オキサゾール環、ピペリジン環、ピリジン環、ピラジン環、インドール環、イソインドール環、ベンゾイミダゾール環、キノリン環、イソキノリン環、キノキサリン環等が挙げられる。
【００３４】
Ar1で示される複素芳香環は、置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、水酸基、後述のハロゲン原子、後述のアルキル基、後述のシクロアルキル基、ハロゲン化アルキル基（トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基等）、後述のアルケニル基、後述のアルキニル基、後述のアリール基、後述のヘテロアリール基、後述のカルボニル基、シアノ基、ニトロ基等が挙げられる。置換基の数は、例えば、０〜６個が好ましく、０〜３個がより好ましい。
【００３５】
なかでも、Ar1としては、吸収極大波長及び蛍光極大波長をより大きくし、耐光性をより向上させ、細胞毒性がより低い観点からは、置換若しくは非置換芳香環が好ましく、置換若しくは非置換多環芳香族炭化水素環がより好ましい。また、一定時間経過後に油滴をより明確に染色することができる観点からは、置換若しくは非置換芳香環が好ましく、置換若しくは非置換単環芳香族炭化水素環がより好ましい。
【００３６】
Ar1が置換若しくは非置換多環芳香族炭化水素環である場合、本発明の油滴染色剤を構成する縮環チオフェン化合物は、一般式（1A）：
【００３７】
【化４】
2018039963.tif 000005
［式中、Ar2、R1、R2、R3及びnは前記に同じである。Ar3は置換若しくは非置換（複素）芳香環示す。］
で表される縮環チオフェン化合物と、
一般式（1B）：
【００３８】
【化５】
2018039963.tif 000006
［式中、Ar2、Ar3、R1、R2、R3及びnは前記に同じである。］
で表される縮環チオフェン化合物のいずれも採用できる。
【００３９】
一般式（1A）及び（1B）において、Ar3で示される（複素）芳香環としては、上記したものを採用することができる。置換基の種類及び数も同様である。
【００４０】
上記した一般式（1A）で表される縮環チオフェン化合物と一般式（1B）で表される縮環チオフェン化合物のなかでも、吸収極大波長及び蛍光極大波長をより大きくし、耐光性をより向上させ、細胞毒性がより低い観点から、一般式（1B）で表される縮環チオフェン化合物が好ましい。
【００４１】
一般式（１）において、Ar2は2価のπ共役ユニットである。このπ共役ユニットとしては、例えば、置換若しくは非置換アルケニル基、置換若しくは非置換アルキニル基、又は置換若しくは非置換（ヘテロ）アリーレン基等が挙げられる。
【００４２】
Ar2で示されるアルケニル基としては、例えば、ビニル基、プロペニル基、イソプロペニル基、アリル基、ブテニル基、イソブテニル基、s-ブテニル基、t-ブテニル基等が挙げられる。
【００４３】
Ar2で示されるアルケニル基は、置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、後述のハロゲン原子、後述のシクロアルキル基、上記アルケニル基、後述のアルキニル基、後述のアリール基、後述のヘテロアリール基、後述のカルボニル基、シアノ基、ニトロ基等が挙げられる。置換基の数は、例えば、０〜６個が好ましく、０〜３個がより好ましい。
【００４４】
Ar2で示されるアルキニル基としては、例えば、エチニル基、1-プロピニル基、プロパルギル基、ブチニル基、イソブチニル基、s-ブチニル基、t-ブチニル基等が挙げられる。
【００４５】
Ar2で示されるアルキニル基は、置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、後述のハロゲン原子、後述のシクロアルキル基、上記アルケニル基、上記アルキニル基、後述のアリール基、後述のヘテロアリール基、後述のカルボニル基、シアノ基、ニトロ基等が挙げられる。置換基の数は、例えば、０〜６個が好ましく、０〜３個がより好ましい。
【００４６】
Ar2で示されるアリーレン基としては、例えば、フェニレン基、ナフチレン基、アントラセニレン基、フェナントレニレン基、フルオレニレン基、ピレニレン基、トリフェニレニレン基等が挙げられる。
【００４７】
Ar2で示されるアリーレン基は、置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、後述のハロゲン原子、後述のアルキル基、後述のシクロアルキル基、ハロゲン化アルキル基（トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基等）、上記アルケニル基、上記アルキニル基、後述のアリール基、後述のヘテロアリール基、後述のカルボニル基、シアノ基、ニトロ基等が挙げられる。置換基の数は、例えば、０〜６個が好ましく、０〜３個がより好ましい。
【００４８】
Ar2で示されるヘテロアリーレン基としては、例えば、ピロリジレン基、ピロリレン基、テトラヒドロチエニレン基、チエニレン基、オキソラニレン基、フラニレン基、イミダゾレン基、ピラゾレン基、チアゾレン基、オキサゾレン基、ピペリジレン基、ピリジレン基、ピラジレン基、インドリレン基、イソインドリレン基、ベンゾイミダゾリレン基、キノリレン基、イソキノリレン基、キノキサリレン基等が挙げられる。
【００４９】
Ar2で示されるヘテロアリーレン基は、置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、後述のハロゲン原子、後述のアルキル基、後述のシクロアルキル基、ハロゲン化アルキル基（トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基等）、上記アルケニル基、上記アルキニル基、後述のアリール基、後述のヘテロアリール基、後述のカルボニル基、シアノ基、ニトロ基等が挙げられる。置換基の数は、例えば、０〜６個が好ましく、０〜３個がより好ましい。
【００５０】
なかでも、Ar2としては、電子供与性の観点から、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリーレン基が好ましく、置換若しくは非置換アリーレン基がより好ましく、非置換アリーレン基がさらに好ましく、非置換フェニレン基が特に好ましく、p−フェニレン基が最も好ましい。なお、nが2である場合、2個のAr2は同一でもよいし異なっていてもよい。
【００５１】
一般式（１）において、R1で示されるハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【００５２】
一般式（１）において、R1で示されるアルキル基としては、直鎖アルキル基及び分岐鎖アルキル基のいずれも採用でき、例えば、メチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、s-ブチル基、t-ブチル基等のC1-10アルキル基（特にC1-6アルキル基）が挙げられる。
【００５３】
R1で示されるアルキル基は、置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、上記ハロゲン原子、上記アルケニル基、上記アルキニル基、後述のアリール基、後述のヘテロアリール基、後述のカルボニル基、シアノ基、ニトロ基等が挙げられる。置換基の数は、例えば、０〜６個が好ましく、０〜３個がより好ましい。
【００５４】
一般式（１）において、R1で示されるシクロアルキル基としては、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基等のC3-10シクロアルキル基（特にC4-8シクロアルキル基）が挙げられる。
【００５５】
R1で示されるシクロアルキル基は、置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、上記ハロゲン原子、上記アルケニル基、上記アルキニル基、後述のアリール基、後述のヘテロアリール基、後述のカルボニル基、シアノ基、ニトロ基等が挙げられる。置換基の数は、例えば、０〜６個が好ましく、０〜３個がより好ましい。
【００５６】
一般式（１）において、R1で示されるアリール基としては、単環アリール基、縮環アリール基及び多環アリール基のいずれも採用でき、例えば、フェニル基、ナフチル基、アントラセニル基、フェナントレニル基、ビフェニル基、ターフェニル基、フルオレニル基、ピレニル基、トリフェニレニル基等のC6-18アルキル基（特にC6-14アルキル基）が挙げられる。
【００５７】
R1で示されるアリール基は、置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、上記ハロゲン原子、上記アルケニル基、上記アルキニル基、上記アリール基、後述のヘテロアリール基、後述のカルボニル基、シアノ基、ニトロ基等が挙げられる。置換基の数は、例えば、０〜６個が好ましく、０〜３個がより好ましい。
【００５８】
一般式（１）において、R1で示されるヘテロアリール基としては、単環ヘテロアリール基及び多環ヘテロアリール基のいずれも採用でき、例えば、ピロリジル基、ピロリル基、テトラヒドロチエニル基、チエニル基、オキソラニル基、フラニル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、チアゾリル基、オキサゾリル基、ピペリジル基、ピリジル基、ピラジル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾイミダゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、キノキサリル基等が挙げられる。
【００５９】
R1で示されるヘテロアリール基は、置換基を有していてもよい。置換基としては、例えば、上記ハロゲン原子、上記アルケニル基、上記アルキニル基、上記アリール基、上記ヘテロアリール基、後述のカルボニル基、シアノ基、ニトロ基等が挙げられる。置換基の数は、例えば、０〜６個が好ましく、０〜３個がより好ましい。
【００６０】
一般式（１）において、R1で示されるカルボニル基としては、カルボニル基を有する基が採用でき、例えば、置換若しくは非置換アルキルイミノ基、置換若しくは非置換アリールイミノ基、スルホニルイミノ基等が挙げられる。上記アルキルイミノ基及びアリールイミノ基におけるアルキル基及びアリール基の種類、置換基の種類及び数としては、上記したものを採用できる。また、スルホニルイミノ基は、イミノ基の窒素原子に−ＳＯ２Ｒが結合した基であり、Ｒとしては上記置換若しくは非置換アルキル基、上記置換若しくは非置換アリール基等が挙げられる。
【００６１】
なかでも、R1としては、溶解性の観点からは、水素原子が好ましく、光安定性の観点からは、水素原子以外の基（ハロゲン原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基、カルボニル基、イミノ基、又はシアノ基）が好ましい。
【００６２】
一般式（１）において、R2及びR3で示されるアルキル基、シクロアルキル基、アリール基及びヘテロアリール基としては、上記したものが採用できる。置換基の種類及び数も同様である。
【００６３】
なかでも、R2及びR3としては、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基が好ましく、置換若しくは非置換アリール基がより好ましく、非置換アリール基がさらに好ましい。
【００６４】
なお、R2及びR3は結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。つまり、−ＮＲ２Ｒ３で表される基が、
【００６５】
【化６】
2018039963.tif 000007
［式中、Ｒ４は水素原子、上記置換若しくは非置換アルキル基、又は上記置換若しくは非置換アリール基を示す。ｍは同一又は異なって、１〜３の整数を示す。］
等で表される基であってもよい。
【００６６】
また、R2及び／又はR3はAr2と結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。つまり、−（Ａｒ２）ｎ−ＮＲ２Ｒ３で表される基が、
【００６７】
【化７】
2018039963.tif 000008
等であってもよい。
【００６８】
なお、上記一般式（１）で表される化合物において、Ａｒ２において、−ＮＲ２Ｒ３で表される基が結合する置換位置は特に制限されない。例えば、Ａｒ２がフェニレン基である場合には、パラ位に結合しやすい（Ａｒ２が1,4-フェニレン基となりやすい）。
【００６９】
上記のような条件を満たす一般式（１）で表される化合物としては、可視光レーザー光源でより染色しやすく、小さいサイズでも油滴（特に細胞内の脂肪球）をより高感度に検出でき、他の組織の蛍光染色をより抑制できる観点から、一般式（1C）：
【００７０】
【化８】
2018039963.tif 000009
［式中、Ar1、Ar2、R2及びR3は前記に同じである。］
で表される化合物が好ましく、耐光性をより向上させる観点から、一般式（1C1）：
【００７１】
【化９】
2018039963.tif 000010
［式中、Ar1は置換若しくは非置換芳香環を示す。Ar2は置換若しくは非置換アリーレン基を示す。R2a及びR3aは同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換（ヘテロ）アリール基を示す。］
で表される化合物がより好ましく、
【００７２】
【化１０】
2018039963.tif 000011
等がさらに好ましい。
【００７３】
上記した縮環チオフェン化合物のうち、Ar1がベンゼン環であり、R2及びR3がいずれもフェニル基である化合物、Ar1がアミジン基で置換された（複素）芳香環である化合物以外の化合物は、文献未記載の新規化合物である。つまり、
一般式（1B）：
【００７４】
【化１１】
2018039963.tif 000012
［式中、Ar2、Ar3、R1、R2、R3及びnは前記に同じである。］
で表される縮環チオフェン化合物と、一般式（1C2）：
【００７５】
【化１２】
2018039963.tif 000013
［式中、Ar1及びAr2は前記に同じである。R2b及びR3bは同一又は異なって、水素原子、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換シクロアルキル基、置換若しくは非置換縮環アリール基、置換若しくは非置換多環アリール基、又は置換若しくは非置換ヘテロアリール基を示す。R2b及びR3bは結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。R2b及び／又はR3bはAr2と結合して隣接する窒素原子とともに環を形成してもよい。ただし、Ar1がアミジン基で置換された（複素）芳香環である場合を除く。］
で表される化合物は、いずれも文献未記載の新規化合物である。
【００７６】
また、本発明の油滴染色剤は、上記一般式（１）で表される縮環チオフェン化合物が溶媒和物として含有する場合もあり、いずれも本発明の範囲に包含される。
【００７７】
本発明の油滴染色剤が含有する縮環チオフェン化合物（１）は、縮環チオフェン骨格と、置換若しくは非置換アミノ基とが、2価のπ共役ユニットを介して結合しているため、吸収極大波長が可視光領域（例えば380〜500 nm程度）であり、蛍光極大波長も可視光領域（例えば450〜700 nm程度）である。特に、縮環チオフェン化合物（１）は、吸収極大波長が小さいため、生細胞内で使用した際のダメージを極端に小さくすることができる。なかでも、縮環チオフェン化合物（1B）は、生細胞内で使用した際のダメージをさらに小さくすることが可能である。また、縮環チオフェン化合物（１）は、蛍光極大波長がレーザー顕微鏡が通常備わっているHeNeレーザーの励起波長633 nmと近いことから、蛍光色素としての励起効率が極めて高い。このため、上記化合物（１）は、生細胞内で蛍光色素として使用するのに非常に適している。
【００７８】
しかも、本発明の油滴染色剤が含有する縮環チオフェン化合物（１）は、細胞内の脂肪球を強く蛍光させ、脂肪球以外の組織の蛍光を抑制することができる。従来の油滴染色剤では、脂肪球の蛍光強度を他の組織の蛍光強度の3倍程度にしかできなかったが、本発明の油滴染色剤は、脂肪球以外の組織の蛍光を抑制することにより、脂肪球の蛍光強度を他の組織の蛍光強度の30〜40倍程度に高くすることができる。このため、本発明の油滴染色剤は、小さいサイズでも油滴（特に細胞内の脂肪球）を高感度に検出でき、さらに、他の組織の蛍光染色を抑制できる。しかも、従来の油滴染色剤は、一定時間経過後には蛍光が消える化合物であったが、本発明の油滴染色剤は、一定時間経過後に油滴の蛍光強度をさらに向上させることができる。このため、脂肪の生成過程及び分解過程の脂肪球であっても高感度に検出することができ、脂肪の生成過程及び分解過程をリアルタイムで可視化することができるため、脂肪細胞の生成及び分解の挙動を明らかにするうえで有用である。以上から、縮環チオフェン化合物（１）又はその溶媒和物は、油滴染色剤（特に脂肪染色剤、さらに細胞内脂肪球染色剤）として非常に有用である。この本発明の油滴染色剤を使用することで、脂肪（特に細胞内脂肪球）のみをより高感度にバイオイメージングすることも可能である。
【００７９】
また、上記縮環チオフェン化合物（１）は、後述の製造方法において示されているように、わずか２工程のみで合成することが可能である。このため、より簡便に油滴染色剤を得ることができる。
【００８０】
本発明の油滴染色剤（特に細胞内脂肪球染色剤）は、上記の縮環チオフェン化合物（１）又はその溶媒和物を含有している。その使用形態は特に制限はなく、例えば、有機溶媒中に溶解させて溶液とすることが好ましい。この際、小さいサイズの脂肪球でもより高感度に検出（染色）し、脂肪球以外の組織の蛍光をより抑制する観点から、縮環チオフェン化合物（１）の含有量は、1×10-8〜1×10-4 mol/Lが好ましく、1×10-7〜1×10-5mol/Lがより好ましい。このように、本発明では、縮環チオフェン化合物（１）の含有量を低く抑えることもできることから、生細胞へのダメージをより抑制することができる。
【００８１】
本発明の油滴染色剤を、縮環チオフェン化合物（１）を含有する溶液とする場合、使用し得る有機溶媒としては、特に制限はない。ただし、油滴（特に脂肪球）をより高感度に蛍光しやすい観点から、非極性溶媒が好ましい。
【００８２】
非極性溶媒としては、例えば、ペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン等の脂肪族有機溶媒；ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン等の芳香族溶媒；ジクロロメタン、ジクロロエタン等の脂肪族ハロゲン化炭化水素等が挙げられる。
【００８３】
なお、縮環チオフェン化合物（１）として、R2及びR3が置換若しくは非置換アルキル基である化合物を使用する場合は、極性溶媒（ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、酢酸エチル、N−メチルピロリドン、水等）中であっても脂肪球（特に脂肪球）を高感度に蛍光することができるが、この場合でも、非極性溶媒中のほうが、より高感度に蛍光させることができる。
【００８４】
本発明の油滴染色剤を溶液の形態とする場合、生細胞内で使用しやすく、小さいサイズでも油滴（特に細胞内の脂肪球）をより高感度に検出でき、他の組織の蛍光染色をより抑制できる観点から、pHは5〜11程度が好ましく、6.5〜7.5程度がより好ましい。本発明の油滴染色剤のpHを調整するために、緩衝剤（ヘペス緩衝剤、トリス緩衝剤、トリシン−水酸化ナトリウム緩衝剤、リン酸系緩衝剤、リン酸緩衝生理食塩水等）等を使用することもできる。
【００８５】
２．一般式（１）で表される化合物の製造方法
本発明の油滴染色剤中に含有する縮環チオフェン化合物（１）の製造方法は特に制限されない。例えば、以下の反応式１：
【００８６】
【化１３】
2018039963.tif 000014
［式中、Ar1、Ar2、R2、R3及びnは前記に同じである。Yはボロン酸又はそのエステル基を示す。X1はハロゲン原子を示す。］
にしたがって合成することができる。
【００８７】
反応式１において、Yで示されるボロン酸又はそのエステル基としては、例えば、一般式（５）：
【００８８】
【化１４】
2018039963.tif 000015
［式中、R5及びR6は同一又は異なって、水素原子、又は置換若しくは非置換アルキル基を示す。］
で表される基が挙げられる。
【００８９】
一般式（５）において、R5及びR6で示されるアルキル基としては、上記したものが採用できる。置換基の種類及び数も同様である。
【００９０】
このようなYで示されるボロン酸又はそのエステル基としては、例えば、
【００９１】
【化１５】
2018039963.tif 000016
等が挙げられる。
【００９２】
反応式１において、X1で示されるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子が挙げられ、合成の容易さ、収率等の観点から、塩素原子及び臭素原子が好ましく、臭素原子がより好ましい。
【００９３】
（２−１）化合物（４）の合成
化合物（４）の合成方法は特に制限はなく、例えば鈴木−宮浦カップリング反応に代表される種々のクロスカップリング反応を用いて合成することができる。具体的には、化合物（４）は、パラジウム触媒の存在下、化合物（２）と化合物（３）とを反応させることにより合成することができる。
【００９４】
化合物（２）及び化合物（３）は、公知又は市販品を用いることができるし、公知の方法で合成することもできる。
【００９５】
化合物（３）の使用量は、合成の容易さ、収率等の観点から、化合物（２）1モルに対して0.2〜5モルが好ましく、0.5〜3モルがより好ましい。
【００９６】
パラジウム触媒としては、有機化合物（高分子化合物を含む）等の合成用触媒として公知のパラジウム触媒が挙げられる。本発明においては、鈴木−宮浦カップリング反応に使用されるパラジウム触媒を用いることができる。具体的には、酢酸パラジウム（Pd(OAc)2）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（0）（Pd(PPh3)4）、トリフルオロ酢酸パラジウム、塩化パラジウム、臭化パラジウム、ヨウ化パラジウム、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（0）（Pd2(dba)3）、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（0）、ジクロロ（１，５−シクロオクタジエン）パラジウム（II）、2,5-ノルボルナジエンパラジウムジクロリド等が挙げられる。本工程では、合成の容易さ、収率等の観点から、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（0）（Pd2(dba)3）が好ましい。
【００９７】
パラジウム触媒の使用量は、合成の容易さ、収率等の観点から、化合物（２）1モルに対して、通常0.001〜0.1モルが好ましく、0.005〜0.05モルがより好ましい。
【００９８】
本工程では、必要に応じて配位子化合物を使用することもできる。使用できる配位子化合物としては、特に制限されず、例えば、トリフェニルホスフィン、トリメトキシホスフィン、トリエチルホスフィン、トリイソプロピルホスフィン、トリ(t-ブチル)ホスフィン、トリ(n-ブチル)ホスフィン、トリイソプロポキシホスフィン、トリシクロペンチルホスフィン、トリシクロヘキシルホスフィン、トリメシチルホスフィン、トリフェノキシホスフィン、ジ(t-ブチル)メチルホスフィン、メチルジフェニルホスフィン、ジメチルフェニルホスフィン、トリエチルアミン、ピリジン、2,2’-ビピリジル、4,4’-(t-ブチル)ビピリジル、1,1’-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン、1,1’-ビス(t-ブチル)フェロセン、ジフェニルホスフィノメタン、1,2-ビス(ジフェニルホスフィノ)エタン、1,3-ビス(ジフェニルホスフィノ)プロパン、1,5-ビス(ジフェニルホスフィノ)ペンタン、1,2-ビス(ジペンタフルオロフェニルホスフィノ)エタン、1,2-ビス(ジシクロヘキシルホスフィノ)エタン、1,3-(ジシクロヘキシルホスフィノ)プロパン、1,2-ビス(ジ-t-ブチルホスフィノ)エタン、1,3-ビス(ジ-t-ブチルホスフィノ)プロパン、1,2-ビス(ジフェニルホスフィノ)ベンゼン、1,5-シクロオクタジエン、2-(ジシクロヘキシルホスフィノ-2’,6’-ジメトキシ-1,1’-ビフェニル（S-Phos）、2-(ジシクロヘキシルホスフィノ-2’,4’,6’-トリ-イソプロピル-1,1’-ビフェニル（X-Phos）、ビス(2-ジフェニルホスフィノフェニル)エーテル（DPEPhos）等が挙げられる。これらの配位子化合物は、溶媒和物を使用することもできる。これらは単独で用いることもでき、２種以上を組合せて用いることもできる。なかでも、本工程では、収率及び合成の容易さの観点から、2-(ジシクロヘキシルホスフィノ-2’,6’-ジメトキシ-1,1’-ビフェニル（S-Phos）が好ましい。
【００９９】
配位子化合物の使用量は、合成の容易さ、収率等の観点から、パラジウム触媒１モルに対して、0.5〜5モルが好ましく、1〜3モルがより好ましい。
【０１００】
本工程では、必要に応じて、塩基を使用することもできる。塩基としては、塩化アンモニウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ナトリウムメトキシド、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、リン酸カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸カルシウム等が挙げられ、本工程では、収率及び合成の容易さの観点から、リン酸カリウムが好ましい。
【０１０１】
塩基を使用する場合の使用量は、合成の容易さ、収率等の観点から、化合物（２）1モルに対して、0.5〜5モルが好ましく、1〜3モルがより好ましい。  反応は通常反応溶媒の存在下で行うことができる。使用できる反応溶媒としては、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン（THF）、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン（DME）、ジグライム、シクロペンチルメチルエーテル（CPME）、t-ブチルメチルエーテル（TBME）等のエーテル；ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素；ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素等の脂肪族ハロゲン化炭化水素；N,N−ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、1,3−ジメチル−2−イミダゾリジノン、N−メチルピロリドン等のアミド等が挙げられる。なかでも、合成の容易さ、収率等の観点から、芳香族炭化水素が好ましく、トルエンがより好ましい。
【０１０２】
反応雰囲気は、通常、不活性ガス雰囲気を採用し得る。例えば、アルゴンガス雰囲気、窒素ガス雰囲気等を採用し得る。
【０１０３】
反応温度は、加熱下、常温下及び冷却下のいずれでも行うことができ、合成の容易さ、収率等の観点から、0〜150℃が好ましく、50〜100℃がより好ましい。反応時間は特に制限されず、反応が十分に進行する時間とすることが好ましい。
【０１０４】
反応終了後は、必要に応じて常法にしたがって精製処理をすることもできる。また、精製処理を施さずに次の工程を行うこともできる。
【０１０５】
（２−２）化合物（１）の合成
本工程では、化合物（４）に対して、酸化剤を用いて酸化することで、化合物（１）を合成することができる。
【０１０６】
酸化剤としては、例えば、例えば、塩素；過酸化水素；過酢酸、過安息香酸、m-クロロ過安息香酸（m-CPBA）等の過酸；t-ブチルペルオキシド等のペルオキシド；メタ過ヨウ素酸ナトリウム等の過ハロゲン酸塩等が挙げられる。これらは単独で用いることもできるし、２種以上を組合せて用いることもできる。なかでも、本工程では、合成の容易さ、収率等の観点から、過酸が好ましく、m-クロロ過安息香酸（m-CPBA）がより好ましい。
【０１０７】
酸化剤の使用量は、通常、合成の容易さ、収率等の観点から、化合物（４）1モルに対して、0.5〜5モルが好ましく、1〜3モルがより好ましい。
【０１０８】
反応は通常反応溶媒の存在下で行うことができる。使用できる反応溶媒としては、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン（THF）、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン（DME）、ジグライム、シクロペンチルメチルエーテル（CPME）、t-ブチルメチルエーテル（TBME）等のエーテル；ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素；ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素等の脂肪族ハロゲン化炭化水素；N,N−ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、1,3−ジメチル−2−イミダゾリジノン、N−メチルピロリドン等のアミド等が挙げられる。なかでも、合成の容易さ、収率等の観点から、脂肪族ハロゲン化炭化水素が好ましく、ジクロロメタンがより好ましい。
【０１０９】
反応雰囲気は、通常、不活性ガス雰囲気を採用し得る。例えば、アルゴンガス雰囲気、窒素ガス雰囲気等を採用し得る。
【０１１０】
反応温度は、加熱下、常温下及び冷却下のいずれでも行うことができ、合成の容易さ、収率等の観点から、-50〜100℃が好ましく、0〜50℃がより好ましい。反応時間は特に制限されず、反応が十分に進行する時間とすることが好ましい。
【０１１１】
反応終了後は、必要に応じて常法にしたがって精製処理をすることで、化合物（１）を得ることができる。
【０１１２】
また、縮環チオフェン化合物（1B）を製造しようとする場合、例えば、以下の反応式２：
【０１１３】
【化１６】
2018039963.tif 000017
［式中、Ar2、Ar3、R2、R3及びnは前記に同じである。OTfはトリフルオロメタンスルホニルオキシ基を示す。X2はハロゲン原子を示す。］
にしたがって合成することもできる。
【０１１４】
反応式２において、X2で示されるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子が挙げられ、合成の容易さ、収率等の観点から、塩素原子及び臭素原子が好ましく、臭素原子がより好ましい。
【０１１５】
（２−３）化合物（８）の合成
化合物（８）の合成方法は特に制限はなく、例えば、化合物（６）と化合物（７）とを、パラジウム触媒及び銅触媒の存在下に反応させることにより合成することができる。
【０１１６】
化合物（６）及び化合物（７）は、公知又は市販品を用いることができるし、公知の方法で合成することもできる。
【０１１７】
化合物（７）の使用量は、合成の容易さ、収率等の観点から、化合物（６）1モルに対して0.2〜5モルが好ましく、0.5〜2モルがより好ましい。
【０１１８】
パラジウム触媒としては、有機化合物（高分子化合物を含む）等の合成用触媒として公知のパラジウム触媒が挙げられる。本発明においては、上記したパラジウム触媒を用いることができる。本工程では、合成の容易さ、収率等の観点から、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（0）（Pd(PPh3)4）が好ましい。
【０１１９】
パラジウム触媒の使用量は、合成の容易さ、収率等の観点から、化合物（６）1モルに対して、通常0.005〜0.2モルが好ましく、0.01〜0.1モルがより好ましい。
【０１２０】
銅触媒としては、例えば、ヨウ化銅、臭化銅等のハロゲン化銅が挙げられ、合成の容易さ、収率等の観点から、ヨウ化銅が好ましい。
【０１２１】
銅触媒の使用量は、合成の容易さ、収率等の観点から、化合物（６）1モルに対して、通常0.005〜0.2モルが好ましく、0.01〜0.1モルがより好ましい。
【０１２２】
本工程では、必要に応じて塩基を使用することもできる。本工程で使用できる塩基としては、例えば、リン酸リチウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム等のリン酸アルカリ金属塩；水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化セシウム、水酸化バリウム等の金属水酸化物；炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム等の炭酸金属塩；トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン等のアミン等が挙げられる。これらは単独で用いることもでき、2種以上を組合せて用いることもできる。なかでも、本工程では、合成の容易さ、収率等の観点から、アミンが好ましく、ジイソプロピルアミンがより好ましい。
【０１２３】
塩基を使用する場合、塩基の使用量は、通常、化合物（６）に対して、0.5〜5モルが好ましく、1〜3モルがより好ましい。なお、塩基が液体である場合は、過剰量が好ましい。
【０１２４】
反応は通常反応溶媒の存在下で行うことができる。使用できる反応溶媒としては、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン（THF）、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン（DME）、ジグライム、シクロペンチルメチルエーテル（CPME）、t-ブチルメチルエーテル（TBME）等のエーテル；ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素；ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素等の脂肪族ハロゲン化炭化水素；N,N−ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、1,3−ジメチル−2−イミダゾリジノン、N−メチルピロリドン等のアミド等が挙げられる。なかでも、合成の容易さ、収率等の観点から、芳香族炭化水素が好ましく、トルエンがより好ましい。
【０１２５】
反応雰囲気は、通常、不活性ガス雰囲気を採用し得る。例えば、アルゴンガス雰囲気、窒素ガス雰囲気等を採用し得る。
【０１２６】
反応温度は、加熱下、常温下及び冷却下のいずれでも行うことができ、合成の容易さ、収率等の観点から、0〜100℃が好ましく、20〜80℃がより好ましい。反応時間は特に制限されず、反応が十分に進行する時間とすることが好ましい。
【０１２７】
反応終了後は、必要に応じて常法にしたがって精製処理をすることもできる。また、精製処理を施さずに次の工程を行うこともできる。
【０１２８】
（２−４）化合物（９）の合成
化合物（９）の合成方法は特に制限はなく、例えば、化合物（８）と硫黄化合物とを反応させることにより合成することができる。
【０１２９】
硫黄化合物としては、例えば、硫黄、硫化ナトリウム等が挙げられる。また、これらの硫黄化合物は、水和物又は溶媒和物であってもよい。これらの硫黄化合物は、単独で用いることもでき、2種以上を組合せて用いることもできる。
【０１３０】
硫黄化合物の使用量は、合成の容易さ、収率等の観点から、化合物（８）1モルに対して、通常1〜5モルが好ましく、2〜3モルがより好ましい。
【０１３１】
反応は通常反応溶媒の存在下で行うことができる。使用できる反応溶媒としては、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン（THF）、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン（DME）、ジグライム、シクロペンチルメチルエーテル（CPME）、t-ブチルメチルエーテル（TBME）等のエーテル；ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素；ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素等の脂肪族ハロゲン化炭化水素；N,N−ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、1,3−ジメチル−2−イミダゾリジノン、N−メチルピロリドン等のアミド等が挙げられる。なかでも、合成の容易さ、収率等の観点から、アミドが好ましく、N−メチルピロリドンがより好ましい。
【０１３２】
反応雰囲気は、通常、不活性ガス雰囲気を採用し得る。例えば、アルゴンガス雰囲気、窒素ガス雰囲気等を採用し得る。
【０１３３】
反応温度は、加熱下、常温下及び冷却下のいずれでも行うことができ、合成の容易さ、収率等の観点から、0〜150℃が好ましく、50〜100℃がより好ましい。反応時間は特に制限されず、反応が十分に進行する時間とすることが好ましい。
【０１３４】
反応終了後は、必要に応じて常法にしたがって精製処理をすることもできる。また、精製処理を施さずに次の工程を行うこともできる。
【０１３５】
（２−５）化合物（１Ｂ）の合成
この工程は、上記した（２−２）と同様に行うことができる。好ましい条件も上記した（２−２）を採用できる。
【０１３６】
反応終了後は、必要に応じて常法にしたがって精製処理をすることで、化合物（１Ｂ）を得ることができる。
【実施例】
【０１３７】
実施例に基づいて、本発明を具体的に説明するが、本発明は、これらのみに限定されるものではない。
【０１３８】
本実施例において、融点は、Stanford Research Systems OptiMelt MPA 100を用いて測定した。1H NMRスペクトル及び13C {1H} NMRスペクトルは、JEOL AL-400分光計（1H：400MHz、13C：100MHz）又はJEOL A-600分光計（13C：150MHz）を用いて、溶媒としてCDCl3、アセトン-d6、又はDMSO-d6中で測定した。化学シフトはδppmで表記し、1H NMR測定はCHCl3(7.26ppm)、CH2Cl2 (5.30ppm)、アセトン(2.05ppm)及びDMSO (2.50ppm)のシグナルを内部標準として用い、13C NMR測定はCDCl3 (77.16ppm)、CD2Cl2 (53.84ppm)及びDMSO-d6(39.52ppm)のシグナルを内部標準として用いた。マススペクトルはBruker micrOTOF Focusによる大気圧化学イオン化（APCI）法又はThermo Fisher Scientific Exactiveによるエレクトロスプレーイオン化（ESI）法により測定した。薄層クロマトグラフィー（TLC）は、シリカゲル60F254（Merck）を0.25mmの厚さで塗布した板を用いて行った。カラムクロマトグラフィーは、PSQ100B（富士シリシア化学（株））又はシリカゲル60（関東化学（株））を用いて行った。分取リサイクルHPLCには、シリカゲルカラム（YMC-Actus SIL、YMCテクノス（株））を備えたLC-Forte/R（YMCテクノス（株））を用いて行った。無水THF及びCH2Cl2は関東化学（株）から購入し、有機溶媒精製装置（Glass Contour）で精製した。特に制限のない限り、全ての反応は窒素雰囲気下で行った。2-[4-(N,N-ジフェニルアミノ)フェニル]ベンゾ[b]チオフェン-S,S-ジオキシド（化合物1）は既報（Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 4539-4543）にしたがい合成した。また、1-ブロモナフタレン-2-イルトリフラートは既報（J. Org. Chem. 2000, 65, 6944-6950）にしたがい合成した。
【０１３９】
実施例1：2-[4-(N,N-ジフェニルアミノ)フェニル]ベンゾ[b]チオフェン-S,S-ジオキシド（化合物1）
【０１４０】
【化１７】
2018039963.tif 000018
既報（Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 4539-4543）にしたがい、2-[4-(N,N-ジフェニルアミノ)フェニル]ベンゾ[b]チオフェン-S,S-ジオキシド（化合物1）を得た。得られた化合物1を実施例1の油滴染色剤とした。
【０１４１】
合成例1：1-ブロモ-2-(4-N,N-ジフェニルアミノフェニルエチニル)ナフタレン（化合物2-1）
【０１４２】
【化１８】
2018039963.tif 000019
［式中、OTfはトリフルオロメタンスルホニルオキシ基を示す。Phはフェニル基を示す。以下同様である。］
1-ブロモナフタレン-2-イルトリフラート（3.55g, 10.0mmol）、4-(N,N-ジフェニルアミノ)フェニルアセチレン（2.96g, 11.0mmol）、トルエン（20mL）、及びジイソプロピルアミン（iPr2NH; 10mL）の溶液に、20分間バブリングすることにより脱気した。テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)（Pd(PPh3)4; 0.578g, 0.50mmol）、及びCuI（0.095g, 0.50mmol）を添加した後、混合物を40℃で16時間撹拌した。ろ過して無機塩を除去し、トルエン（30mL）で洗浄し、全ての揮発性物質を減圧下に蒸発させた。混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（5/1 ヘキサン/CH2Cl2, Rf= 0.48）で単離し、得られた粗生成物をエタノール（20mL）による再結晶により精製し、化合物2-1（1-ブロモ-2-(4-N,N-ジフェニルアミノフェニルエチニル)ナフタレン）を淡黄色粉末として得た（2.11 g, 4.45mmol, 44%）。
【０１４３】
【数１】
2018039963.tif 000020
【０１４４】
合成例2：化合物2-2
【０１４５】
【化１９】
2018039963.tif 000021
N-メチルピロリドン（NMP; 1mL）中の合成例1で得た1-ブロモ-2-(4-N,N-ジフェニルアミノフェニルエチニル)ナフタレン（化合物2-1; 50.2mg, 0.106mmol）の溶液に、Na2S・9H2O（57.6mg, 0.240mmol）を添加した。混合物を80℃で5時間撹拌し、次いで、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、ろ過した。減圧下に溶媒を除去した後、混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（4/1 ヘキサン/CHCl3, Rf= 0.33）に供し、化合物2-2を淡黄色固体として得た（37.5mg, 0.0877mmol, 83%）。
【０１４６】
【数２】
2018039963.tif 000022
【０１４７】
実施例2：化合物2
【０１４８】
【化２０】
2018039963.tif 000023
CH2Cl2（5mL）中の合成例2で得た化合物2-2（22.9mg, 0.0536mmol）の溶液に、30 %の水を含むメタクロロ過安息香酸（m-CPBA; 34.2mg, 0.139mmol）を添加した。混合物を室温で17時間撹拌し、次いで、CH2Cl2で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、ろ過した。減圧下に溶媒を除去した後、混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（1/1 ヘキサン/CHCl3, Rf= 0.23）に供し、さらに、分取ゲル浸透クロマトグラフィー（GPC; CHCl3）に供し、化合物2を橙色固体として得た（14.2mg, 0.0309mmol, 58%）。得られた化合物2を実施例2の油滴染色剤とした。
【０１４９】
【数３】
2018039963.tif 000024
【０１５０】
合成例3：化合物3-1
【０１５１】
【化２１】
2018039963.tif 000025
［式中、Bocはtert−ブトキシカルボニル基を示す。以下同様である。］
トルエン（20mL）及び水（5mL）中の2-ベンゾチエニルボロン酸（0.779g, 4.38mmol）の溶液に、tert-ブチル(4-ブロモフェニル)カルバメート（1.08g, 3.97mmol）、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)クロロホルム錯体（Pd2(dba)3・CHCl3; 29mg, 0.028mmol）、2-(ジシクロヘキシルホスフィノ-2’,6’-ジメトキシ-1,1’-ビフェニル（S-Phos; 23mg, 0.056mmol）、及びK3PO4（1.39g, 6.55mmol）を添加した。混合物を80℃で6時間撹拌し、次いで、トルエンで抽出した。減圧下に溶媒を除去した後、混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（2/1 ヘキサン/CH2Cl2）に供し、さらに、メタノールからの再結晶により精製し、化合物3-1を無色結晶として得た（0.232g, 0.713mmol, 16%）。
【０１５２】
【数４】
2018039963.tif 000026
【０１５３】
合成例4：化合物3-2
【０１５４】
【化２２】
2018039963.tif 000027
CH2Cl2（10mL）中の合成例3で得た化合物3-1（0.200g, 0.615mmol）の溶液に、30 %の水を含むメタクロロ過安息香酸（m-CPBA; 0.344g, 1.54mmol）を添加した。混合物を0℃で3時間撹拌した。減圧下に溶媒を除去した後、混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（CH2Cl2）に供し、さらに、メタノールからの再結晶により精製し、化合物3-2を黄緑色固体として得た（0.167g, 0.467mmol, 76%）。
【０１５５】
【数５】
2018039963.tif 000028
【０１５６】
合成例5：化合物3-3
【０１５７】
【化２３】
2018039963.tif 000029
CH2Cl2（10mL）中の合成例4で得た化合物3-2（97.0mg, 0.271mmol）の溶液に、トリフルオロ酢酸（TFA; 2mL）を添加した。混合物を室温で2時間撹拌した。反応をNaHCO3水溶液でクエンチし、次いで、有機層を水で洗浄した。減圧下に溶媒を除去した後、混合物をヘキサンからの再結晶により精製し、化合物3-3を黄色固体として得たことを1H NMR及び13C{1H} NMRにより確認した（61.0mg, 0.237mmol, 87%）。
【０１５８】
実施例3：2-[4-(N,N-ジエチルアミノ)フェニル]ベンゾ(b)チオフェン-S,S-ジオキシド（化合物3）
【０１５９】
【化２４】
2018039963.tif 000030
［式中、Etはエチル基を示す。以下同様である。］
合成例5で得た2-[4-アミノフェニル]ベンゾ(b)チオフェン-S,S-ジオキシド（化合物3-3; 38mg, 0.15mmol）のジメチルホルムアミド（DMF）溶液（1.7mL）を撹拌しながらヨードエタン（28μL, 0.35mmol）と炭酸カリウム（227mg, 1.64mmol）を加えた。溶液の撹拌を続けながら70℃で17時間加熱した。薄層クロマトグラフィー及び1H NMRスペクトルによる反応確認のための溶液を再度反応系に戻すためと、反応をさらに進行させるために、さらにDMF（1.8mL）、ヨードエタン（332μL, 4.15mmol）、炭酸カリウム（205mg, 1.48mmol）を加え、74時間加熱した。反応溶液をジクロロメタンで濾過し、ジクロロメタンと水により抽出した後、有機相を飽和食塩水で洗浄した。得られた有機相を無水硫酸ナトリウムで脱水、濾過し、減圧下でジクロロメタンを留去した。得られた粗生成物を少量のジクロロメタンに溶解させ、カラムクロマトグラフィー（PSQ 100B, n-ヘキサン/CH2Cl2 = 2: 1 (TEA 1-2%), then CH2Cl2）で分離し、得られた画分をゲル浸透クロマトグラフィー（酢酸エチル(TEA 1%)）で精製することで、目的化合物3を黄色の固体として得た（18.8mg, 0.060mmol, 収率41%）。
【０１６０】
【数６】
2018039963.tif 000031
【０１６１】
合成例6：化合物4-1
【０１６２】
【化２５】
2018039963.tif 000032
トルエン（5 mL）及び水（1.5 mL）中の2-ブロモベンゾチオフェン（0.249 g, 1.17 mmol）の溶液に、4-(9-カルバゾリル)フェニルボロン酸（0.343 g, 1.19 mmol）、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)クロロホルム錯体（Pd2(dba)3・CHCl3; 13 mg, 0.012 mmol）、2-(ジシクロヘキシルホスフィノ-2’,6’-ジメトキシ-1,1’-ビフェニル（S-Phos; 9.4 mg, 0.023 mmol）、及びK3PO4（0.373 g, 1.76 mmol）を添加した。混合物を60℃で7時間撹拌し、次いで、クロロホルムで抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、ろ過した。減圧下に溶媒を除去した後、混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（CHCl3, Rf= 0.75）に供し、さらに、トルエンからの再結晶により精製し、化合物4-1を白色固体として得た（0.203 g, 0.541 mmol, 46%）。
【０１６３】
【数７】
2018039963.tif 000033
【０１６４】
実施例4：化合物4
【０１６５】
【化２６】
2018039963.tif 000034
CH2Cl2（20 mL）中の合成例6で得た化合物4-1（49.6 mg, 0.132 mmol）の溶液に、30 %の水を含むメタクロロ過安息香酸（m-CPBA; 98.6 mg, 0.400 mmol）を添加した。混合物を室温で14時間撹拌し、次いで、CH2Cl2で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、ろ過した。減圧下に溶媒を除去した後、混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（CH2Cl2, Rf= 0.63）に供し、さらに、分取ゲル浸透クロマトグラフィー（GPC; CHCl3）に供し、化合物4を緑がかった黄色固体として得た（40.3 mg, 0.0989 mmol, 75%）。
【０１６６】
【数８】
2018039963.tif 000035
【０１６７】
比較例1
WO2015/111647号の化合物7bと同様の方法で合成した
【０１６８】
【化２７】
2018039963.tif 000036
（C-Naphox-488）を比較例1の油滴染色剤とした。
【０１６９】
比較例2
市販のベンゾホスホール：
【０１７０】
【化２８】
2018039963.tif 000037
を比較例2の油滴染色剤とした。
【０１７１】
比較例3
市販のNile Red：
【０１７２】
【化２９】
2018039963.tif 000038
を比較例3の油滴染色剤とした。
【０１７３】
比較例4
市販のBODIPY493/503：
【０１７４】
【化３０】
2018039963.tif 000039
を比較例4の油滴染色剤とした。
【０１７５】
試験例1：光物理特性
実施例1〜4で得られた化合物1〜4のUV/vis吸収スペクトルは、Shimadzu UV-3150分光計及びUV-1800分光計により、解像度0.2 nmで測定した。一方、実施例1〜4で得られた化合物1〜4の蛍光スペクトルは、Hitachi F-4500分光計及びHoriba FluoMax-4により、解像度1 nmで測定した。絶対蛍光量子収率は、Hamamatsu photonics PMA-11及びC11347で測定した。なお、サンプルは、スペクトルグレードの溶媒（トルエン、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド又はメタノール）中に10-5 Mの濃度で溶解させたサンプル溶液を、1 cm四方の石英キュベット中に投入して使用した。結果を表１及び図１〜４に示す。なお、図１〜４において、実線は吸収スペクトル、破線は蛍光スペクトルである。
【０１７６】
【表１】
2018039963.tif 000040
【０１７７】
次に、実施例1〜4で得られた化合物1〜4、比較例3のNile Red、比較例4のBODIPYの光安定性について評価した。具体的には、各サンプルを1 cm四方の石英キュベット中で、大豆油及び10%のトルエン中に、2.5×10-5 Mとなるように投入し、325 nmカットオフフィルターを備えた300 Wキセノンランプ（Asahi spectra, MAX-302）で光照射し、光照射直後、光照射5分後、光照射10分後、光照射30分後に吸収強度を測定し、各サンプルの光照射直後を100%とし、吸収強度の維持率を評価した。全てのデータは、3回測定を行い、その平均値を示している。結果を図５に示す。なお、図５において、btoは実施例1、ntoは実施例2、btoEtは実施例3、czは実施例4、nileredは比較例3、bodipyは比較例4を示す。
【０１７８】
試験例2：細胞染色実験
HeLa細胞（RIKEN Cell Bank, Japan）及び3T3-L1細胞（JCRB cell bank, Japan）を、5%CO2/95%空気のインキュベーター中で37℃で10%ウシ胎児血清（FBS, Gibco）及び1%抗生物質−抗真菌溶液（AA, Sigma）を含むダルベッコ改変イーグル培地（DMEM, Sigma）中で培養した。3T3-L1脂肪細胞分化を始めるために、細胞が95%まで密集成長した後、培養培地を分化カクテル（TaKaRa, 10μg/mLのインスリン、2.5μMのデキサメタゾン、及び0.5μMの3-イソブチル-メチルキサンチンを含む）に変えた。3日後、培地を10μg/mLのインスリンを補ったDMEMで置換した。培養培地は、2日ごとに変えた。
【０１７９】
生細胞中での実施例1の化合物1及び実施例2の化合物2の細胞毒性を評価するため、3T3-L1細胞を96ウェルプレートに播種し、様々な濃度（1μM、5μM、10μM又は20μM）の化合物1を含むDMEM中、37℃で24時間培養し、MTTアッセイを行った。次に、各ウェルにMTT試薬（最終濃度は0.5 mg/mL）を添加し、各ウェルの吸収をSpectraMaxi3（Molcular Devices）により、波長535 nmで測定した。結果は、染色されていない細胞の比率を表しており、細胞生存率を示している。12回行った試験の平均値を示している。結果を図６〜７に示す。
【０１８０】
イメージングの前に、3T3-L1細胞を8ウェルプレートで培養し、上記した分化カクテルの工程を行った。3T3-L1細胞（0日）及び含脂肪細胞（分化から3〜8日）の培養培地を10%FBS、10 mM HEPES、1% DMSO、及び2μMの実施例1の化合物1、実施例2の化合物2又は比較例3のNile Redを含むDMEMに変え、さらに、37℃で2時間培養した。共焦点顕微鏡LSM 780（Zeiss）を用いて、405 nmレーザーを用いて、416〜689 nmの範囲の蛍光イメージを記録した。結果を図８〜１４に示す。
【０１８１】
その結果、本発明の油滴染色剤（化合物1; BTO1）を用いた場合は、細胞内の脂肪球のみを選択的に染色することができ、他の組織はほとんど蛍光していない。それに対して、比較例1のC-Naphox-488を用いた場合は、脂肪球も染色することができるものの、他の組織も蛍光しているため、脂肪球のみを検出することは困難である。このため、本発明の油滴染色剤を使用することにより、小さいサイズの脂肪球でも他の組織と判別できることが示唆される。
【０１８２】
また、図１０の結果は、BTO1（実施例1; 化合物1）を用いて、(a)が明視野像、(b)が蛍光イメージ、(c)が(a)及び(b)の統合イメージ、下図が(b)中の白矢印に沿った蛍光強度プロファイルである。この結果、脂肪球の蛍光強度は約42000程度であり、脂肪球以外の組織の蛍光強度は約1200程度であることから、脂肪球を他の組織の約35倍もの明るさで蛍光させることが可能であり、小さいサイズであっても脂肪球のみを検出できることが示唆される。
【０１８３】
一方、比較例2及び3についても同様に測定した結果を図１１に示す。その結果、ベンゾホスホール（比較例2）を用いた場合は、脂肪球の蛍光強度は約45000程度であり、脂肪球以外の組織の蛍光強度は約4000程度であることから、脂肪球を他の組織の約11.25倍の明るさで蛍光させ、Nile Red（比較例3）を用いた場合は、脂肪球の蛍光強度は約32000程度であり、脂肪球以外の組織の蛍光強度は約10000程度であることから、脂肪球を他の組織の約3.2倍の明るさで蛍光させることは可能であるものの、BTO1（実施例1; 化合物1）ほど高感度に脂肪球は検出できていない。この結果は、図１２の結果からも理解できる。
【０１８４】
さらに、図１３の結果からは、実施例1の化合物1、及び実施例2の化合物2を採用した場合は、時間が経過するとともにS/N比が増大し、蛍光がより強くなることから、脂肪の生成過程及び分解過程の脂肪球であっても高感度に検出することができ、脂肪の生成過程及び分解過程をリアルタイムで可視化することができるため、脂肪細胞の生成及び分解の挙動を明らかにするうえで有用であることが理解できる。それに対して、比較例3のNile Redにおいては、時間の経過とともに蛍光が小さくなるとともに視野全体にも蛍光が認められるようになるため、長時間にわたって油滴を観測するのには不向きである。
【０１８５】
また、図１４の結果からは、化合物3と比較しても、化合物1は、蛍光強度をより維持できていることが理解できる。このことから、化合物1は、特に分解されにくく、水性の細胞質中に染み出しにくいことが理解できる。
【０１８６】
試験例3：脂肪分解実験
脂肪細胞に対して、ホルスコリンを添加すると、脂肪細胞が分解することが知られている（J. Bio. Chem., 2012, 287, 11164）。脂肪細胞の分解と蛍光強度との関係を評価するため、脂肪分解実験を行った。
【０１８７】
まず、上記試験例2と同様に、3T3-L1細胞を13日間培養して脂肪細胞を生成させた。次に、得られた含脂肪細胞に対して、500 nMの実施例2で得た化合物2、10μMのホルスコリン、2%ウシ血清アルブミン（BSA）を添加した。ホルスコリンを添加してから一定時間経過後の蛍光強度を測定した。結果を図１５〜１６に示す。
【０１８８】
この結果、ホルスコリンの添加から5.5時間経過後には脂肪細胞が著しく小さくなっていることが確認でき、それにともなって、蛍光強度が低下していることから、このことからも、本発明の油滴染色剤は、脂肪細胞のみを選択的に染色させられることが理解できる。
【０１８９】
試験例3：固定細胞染色実験（その1）
3T3-L1細胞を4%ホルムアルデヒド緩衝溶液中で10分間固定した。固定後、細胞を上記緩衝溶液で2回洗浄し、次いで細胞を37℃で30分間DMEM中で比較例2の油滴染色剤をインキュベートし、DMEMで3回洗い流した。プレートを20μLのDMEMで満たした後、GaAsPマルチチャンネルスペクトル検出器を備えた共焦点顕微鏡LSM 780（Zeiss）を用いて、405 nmレーザーで蛍光イメージを記録した。結果を図１７に示す。
【０１９０】
その結果、図１７からも、C-Naphox-488を用いた場合は、脂肪球も染色することができるものの、他の組織も蛍光しているため、脂肪球のみを検出することは困難であることが理解できる。
【０１９１】
試験例4：固定細胞染色実験（その2）
3T3-L1細胞を、5%CO2/95%空気のインキュベーター中で37℃で10%ウシ胎児血清（FBS, Gibco）及び1%抗生物質−抗真菌溶液（AA, Sigma）を含むダルベッコ改変イーグル培地（DMEM, Sigma）中で培養した。イメージングの前に、細胞（5×104）を8ウェルプレートに播種した。イメージングのために、インキュベーション培地を細胞から除去し、次いで細胞を37℃で30分間DMEM中で比較例2の油滴染色剤をインキュベートし、4%ホルムアルデヒド緩衝溶液中で10分間固定した。その後、DMEMで2回洗い流した。プレートを20μLのDMEMで満たした後、GaAsPマルチチャンネルスペクトル検出器を備えた共焦点顕微鏡LSM 780（Zeiss）を用いて、405 nmレーザーで蛍光イメージを記録した。結果を図１７に示す。
【０１９２】
その結果、図１７からも、C-Naphox-488を用いた場合は、脂肪球も染色することができるものの、他の組織も蛍光しているため、脂肪球のみを検出することは困難であることが理解できる。
【図１】
2018039963.tif 000044
【図２】
2018039963.tif 000045
【図３】
2018039963.tif 000046
【図４】
2018039963.tif 000047
【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2018039963.tif 000052
【図１０】
2018039963.tif 000053
【図１１】
2018039963.tif 000054
【図１２】
2018039963.tif 000055
【図１３】
2018039963.tif 000056
【図１４】
2018039963.tif 000057
【図１５】
2018039963.tif 000058
【図１６】
2018039963.tif 000059
【図１７】
2018039963.tif 000060