(57)【要約】【課題】非乾燥状態（例えば水分存在下）であっても接着性に優れた、骨用セメント等の組成物の含有成分として好ましく用いられる変性多糖を提供する。【解決手段】多糖に、リン酸基（ａ１）およびラジカル反応性基（ａ２）が導入された変性多糖。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
多糖に、リン酸基（ａ１）およびラジカル反応性基（ａ２）が導入された変性多糖。
【請求項２】
前記多糖が、プルランまたはその誘導体である請求項１に記載の変性多糖。
【請求項３】
前記ラジカル反応性基（ａ２）が、ヒドロキシアリール基を有する基（ａ２１）である請求項１または２に記載の変性多糖。
【請求項４】
前記ヒドロキシアリール基を有する基（ａ２１）が、下記式（１）に示す基である請求項３に記載の変性多糖。
【化１】
2018199766.tif 000006
［式（１）中、＊は、多糖中の水酸基残基との結合手であり、Ｒ1は、炭素数１〜２０のアルカンジイル基または−（ＣＨ2）n−Ｏ−（ＣＨ2）m−で示される２価の基であり、ｎおよびｍは、それぞれ独立に１〜１０の整数を示し；Ｒ2〜Ｒ6は、それぞれ独立に水素原子、水酸基、アルコキシ基、または置換基を有してもよいアルキル基であり、ただしＲ2〜Ｒ6のうち少なくとも１つは水酸基である。］
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の変性多糖と、酵素と、水とを含有する組成物。
【請求項６】
さらに、過酸化物を含有する請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
さらに、アルカリ金属塩および周期表第２族金属塩から選ばれる少なくとも１種の金属塩を含有する請求項５または６に記載の組成物。
【請求項８】
請求項３または４に記載の変性多糖に含まれるヒドロキシアリール基の酸化カップリングによる架橋構造を有するゲル。
【請求項９】
請求項５〜７のいずれか１項に記載の組成物から形成されたゲル。
【請求項１０】
水分を１０〜９０質量％含有するハイドロゲルである請求項８または９に記載のゲル。
【請求項１１】
請求項８〜１０のいずれか１項に記載のゲルを５０質量％以上含有する成形体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、変性多糖およびその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
骨用セメントは、欠損した骨の補填剤、人工骨と自然骨との接着剤、バルーンカイフォプラスティの充填剤として用いられている。特許文献１には、リン酸基を有する多糖（リン酸化多糖）とカルシウムとを含む骨用セメントが提案されている。
【０００３】
この骨用セメントは、リン酸化多糖のリン酸基とカルシウムとから徐々にヒドロキシアパタイトが生成し、このヒドロキシアパタイトは自然骨と成分が近いことから、自然骨と化学的に結合することができる骨用セメントとして知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２０１１／１０２５３０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明者の検討によれば、特許文献１の骨用セメントは乾燥状態では接着性に優れるものの、非乾燥状態では接着性が弱くなることが明らかになった。
本発明の課題は、非乾燥状態（例えば水分存在下）であっても接着性に優れた、骨用セメント等の組成物、前記組成物の含有成分として好ましく用いられる変性多糖、前記組成物から得られるゲル、前記ゲルから形成される成形体を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は前記課題を解決すべく鋭意検討を行った。その結果、以下の構成を有する変性多糖が前記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明は、例えば以下の［１］〜［１１］である。
【０００７】
［１］多糖に、リン酸基（ａ１）およびラジカル反応性基（ａ２）が導入された変性多糖。
［２］前記多糖が、プルランまたはその誘導体である前記［１］に記載の変性多糖。
［３］前記ラジカル反応性基（ａ２）が、ヒドロキシアリール基を有する基（ａ２１）である前記［１］または［２］に記載の変性多糖。
［４］前記ヒドロキシアリール基を有する基（ａ２１）が、下記式（１）に示す基である前記［３］に記載の変性多糖。
【０００８】
【化１】
2018199766.tif 000002
［式（１）中、＊は、多糖中の水酸基残基との結合手であり、Ｒ1は、炭素数１〜２０のアルカンジイル基または−（ＣＨ2）n−Ｏ−（ＣＨ2）m−で示される２価の基であり、ｎおよびｍは、それぞれ独立に１〜１０の整数を示し；Ｒ2〜Ｒ6は、それぞれ独立に水素原子、水酸基、アルコキシ基、または置換基を有してもよいアルキル基であり、ただしＲ2〜Ｒ6のうち少なくとも１つは水酸基である。］
【０００９】
［５］前記［１］〜［４］のいずれか１項に記載の変性多糖と、酵素と、水とを含有する組成物。
［６］さらに、過酸化物を含有する前記［５］に記載の組成物。
［７］さらに、アルカリ金属塩および周期表第２族金属塩から選ばれる少なくとも１種の金属塩を含有する前記［５］または［６］に記載の組成物。
［８］前記［３］または［４］に記載の変性多糖に含まれるヒドロキシアリール基の酸化カップリングによる架橋構造を有するゲル。
［９］前記［５］〜［７］のいずれか１項に記載の組成物から形成されたゲル。
［１０］水分を１０〜９０質量％含有するハイドロゲルである前記［８］または［９］に記載のゲル。
［１１］前記［８］〜［１０］のいずれか１項に記載のゲルを５０質量％以上含有する成形体。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、非乾燥状態（例えば水分存在下）であっても接着性に優れた、骨用セメント等の組成物、前記組成物の含有成分として好ましく用いられる変性多糖、前記組成物から得られるゲル、前記ゲルから形成される成形体を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、合成例１で得た変性プルランの1Ｈ  ＮＭＲのチャートである。
【図２】図２は、実施例１で得た変性プルランの1Ｈ  ＮＭＲのチャートである。
【図３】図３は、合成例２で得た変性プルランの1Ｈ  ＮＭＲのチャートである。
【図４】図４は、実施例１および合成例２で得た変性プルランのＨＰＬＣ分析チャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明を実施するための形態について好適態様も含めて説明する。
［変性多糖］
本発明の変性多糖は、多糖に、リン酸基（ａ１）およびラジカル反応性基（ａ２）が導入された化合物である。以下、多糖が前記（ａ１）および／または（ａ２）で変性された化合物を一般的に「変性多糖」といい、多糖が前記（ａ１）および（ａ２）で変性された化合物を「本発明の変性多糖」という。このような変性多糖は、後述する生体硬組織用セメントおよび生体硬組織用接着組成物の接着成分として用いる場合、生体親和性または生体吸収性に優れていることから好ましい。
【００１３】
生体硬組織とは、骨および歯、ならびにこれらを含む組織等の生体組織を意味する。
本発明において「変性」とは、多糖が有するアルコール性水酸基等の官能基に、有機基等の連結基を介さずまたを介して、リン酸基（ａ１）またはラジカル反応性基（ａ２）が結合していることを意味する。前記連結基における有機基としては、例えば、炭化水素基および置換炭化水素基が挙げられる。置換炭化水素基は、炭化水素基において一部がエステル結合、エーテル結合、アミド結合、カルボニル基、ヒドロキシ基等に置き換えられた基である。
【００１４】
例えば、多糖が有するアルコール性水酸基等の官能基に、前記官能基と反応しうる基とラジカル反応性基（ａ２）とを有する化合物を反応させることで、多糖に前記基（ａ２）を導入することができる。また、多糖が有するアルコール性水酸基等の官能基に、前記官能基と反応しうる基とリン酸基（ａ１）とを有する化合物を反応させる、またはリン酸を反応させることで、多糖に前記基（ａ１）を導入することができる。
【００１５】
＜多糖＞
変性前、すなわち前記基（ａ１）および（ａ２）導入前の多糖としては、例えば、デンプン、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲン、セルロース、プルラン、デキストラン、デキストリン、ヒアルロン酸、アルギン酸、キサンタンガム、グアーガム、フルクタン、マンナン、カラギーナン、キチン、キトサン、ペクチンおよびゲランガム等の天然多糖；ならびに前記天然多糖の誘導体（例：エーテル誘導体、エステル誘導体）が挙げられる。
【００１６】
前記誘導体としては、例えば、前記例示の多糖が、リン酸基（ａ１）およびラジカル反応性基（ａ２）以外の基、例えば、メチルエーテル基、エチルエーテル基、ヒドロキシエチルエーテル基、ヒドロキシプロピルエーテル基、カルボキシメチルエーテル基、アセチル基、ステアロキシ基、グリセロール、プロピレングリコール等の置換基を有する誘導体が挙げられる。誘導体は、前記置換基を単独で又は複数の組合せで有してもよい。
【００１７】
前記誘導体としては、具体的には、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアロキシヒドロキシプロピルメチルセルロース、アセチル化ヒアルロン酸、ヒアルロン酸プロピレングリコール、アルギン酸プロピレングリコール、メチルグアーガム、エチルグアーガム、ヒドロキシエチルグアーガム、ヒドロキシプロピルグアーガム、ヒドロキシエチルメチルグアーガム、ヒドロキシプロピルメチルグアーガムが挙げられる。
【００１８】
多糖は、塩であってもよく、例えば、酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩が挙げられる。酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。金属塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等の周期表第２族金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩が挙げられる。例えば、カルボキシ基を有する多糖の金属塩が挙げられる。
【００１９】
多糖の中でも、生体硬組織との接着性や得られるゲルの強度の観点から、また、多糖に後述するヒドロキシアリール基を有する基（ａ２１）を容易に導入しやすいことから、グルコース単位を有する多糖およびその誘導体が好ましく、プルランおよびその誘導体がより好ましい。例えば、後述するヒドロキシアリール基を有する基（ａ２１）が導入された変性プルランおよびその誘導体では、例えばペルオキシダーゼ／過酸化物の触媒系によりゲル化させることができる。
【００２０】
＜リン酸基（ａ１）＞
本発明の変性多糖は、リン酸基（ａ１）を有する。
リン酸基は、例えば−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）2で表され、ｐＨによっては一部又は全部が−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ-）2等の形態をとっていてもよく、また一部又は全部が塩であってもよく、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等の周期表第２族金属塩、アンモニウム塩が挙げられる。
【００２１】
リン酸基（ａ１）を有する変性多糖は、カルシウムとの接着性に優れている。例えば、リン酸基（ａ１）は、生体硬組織を構成する無機成分であるアパタイトを溶解してカルシウムイオンを放出させる。放出されたカルシウムイオンおよびアパタイト表面に残存するカルシウム原子に対して、変性多糖のリン酸基（ａ１）がキレート結合することにより、変性多糖が生体硬組織に接着すると考えられる。同様に、生体硬組織の補綴修復物である金属またはセラミックスに対しても、変性多糖のリン酸基（ａ１）がキレート結合することで接着性を示す。また、変性多糖のリン酸基（ａ１）とカルシウムとから徐々にヒドロキシアパタイトが生成し、このヒドロキシアパタイトは自然骨と成分が近いことから、自然骨と化学的に結合することができる。
【００２２】
このように、本発明の変性多糖は、リン酸基（ａ１）を有することから、生体硬組織用セメントおよび生体硬組織用接着組成物の接着成分として使用することができる。
リン酸基を有する変性多糖は、例えば、国際公開第２０１１／１０２５３０号の段落［００１９］に記載された、多糖の水酸基をリン酸化する公知の方法により製造することができ、多糖をリン酸水溶液に加え加温および撹拌することで得ることができる。
【００２３】
例えば、多糖とリン酸とを、あるいはラジカル反応性基（ａ２）を有する変性多糖とリン酸とを反応させる。例えば、前記多糖または前記基（ａ２）を有する変性多糖とリン酸とを含む溶液から溶媒を留去し、次いで、残渣を加熱脱水縮合させる。溶媒留去は、例えば、減圧下、通常は０〜１５０℃、好ましくは２０〜８０℃で行う。加熱脱水縮合は、溶媒留去後の残渣を減圧下加温して行い、ここでの加熱温度は、通常は５０〜１５０℃、好ましくは８０〜１３０℃であり、反応時間は、通常は１〜９２時間、好ましくは２〜４８時間である。減圧条件は、例えば７６０ｍｍＨｇ未満、好ましくは１〜５００ｍｍＨｇである。加熱脱水縮合後の生成物を水に溶解させて、エタノール、酢酸エチル、ｎ−ヘキサン等の貧溶媒で再沈殿により精製してもよい。
【００２４】
前記反応において、リン酸は、多糖１００質量部、またはラジカル反応性基（ａ２）を有する変性多糖１００質量部に対して、通常は１０〜１０００質量部、好ましくは５０〜７００質量部、より好ましくは１００〜５００質量部の量で用いることができる。なお、前記反応は、反応速度を調整するために、水酸化ナトリウム等の塩基性化合物でｐＨを調整してもよい。
【００２５】
前記反応は、溶媒中で行うことが好ましい。溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミドが挙げられる。前記反応は、窒素、アルゴン等の不活性ガス雰囲気下で行ってもよい。
【００２６】
＜ラジカル反応性基（ａ２）＞
リン酸基（ａ１）を有する変性多糖は、上述したようにカルシウムを含む生体硬組織との接着性に優れているが、非乾燥状態での、特に水中での接着持続性が低く、また、リン酸基（ａ１）とカルシウムとの結合がイオン結合であることを鑑みると、ｐＨの変化に対して接着力が変化しやすいと考えられる。本発明の変性多糖は、リン酸基（ａ１）に加えてさらにラジカル反応性基（ａ２）を有していることから、水中での接着持続性に優れた接着成分となっている。
【００２７】
本発明においてラジカル反応性基（ａ２）とは、ラジカルにより化学反応を起こす基を意味する。ラジカル反応性基としては、例えば、ヒドロキシアリール基を有する基（ａ２１）、炭素−炭素不飽和二重結合を有する基（ａ２２）が挙げられ、多糖に前記基（ａ２１）を導入することで多糖の水溶性を弱め、保水力を持たせる、非乾燥状態での接着力を維持させるという観点から、前記基（ａ２１）が好ましい。
【００２８】
ヒドロキシアリール基は、後述するようにラジカル反応が可能な基である。ヒドロキシアリール基としては、例えば、ヒドロキシフェニル基、ヒドロキシナフチル基等の炭素数６〜１４のヒドロキシアリール基が挙げられる。ヒドロキシアリール基における水酸基数は通常は１〜３、好ましくは１である。また、ヒドロキシアリール基は、水酸基の他に、アルコキシ基、置換基を有してもよいアルキル基等を有してもよい。
【００２９】
前記基（ａ２１）は、下記式（１）に示す基であることが好ましい。例えば、本発明の変性多糖は、多糖中の水酸基残基に結合している式（１）に示す基を有する。
【００３０】
【化２】
2018199766.tif 000003
式（１）中の各記号について以下に説明する。
【００３１】
＊は、多糖中の水酸基残基（−Ｏ−）との結合手である。多糖がグルコース単位を有する場合、例えば、グルコース単位中のヒドロキシメチル基における水酸基残基と、式（１）に示す基とが結合していることが好ましい。
【００３２】
Ｒ1は、炭素数１〜２０のアルカンジイル基または−（ＣＨ2）n−Ｏ−（ＣＨ2）m−で示される２価の基であり、ｎおよびｍは、それぞれ独立に１〜１０の整数を示す。
アルカンジイル基としては、例えば、メタン−１，１−ジイル基、エタン−１，１−ジイル基、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，１−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，２−ジイル基、ブタン−１，３−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基、ペンタン−１，４−ジイル基、ペンタン−１，５−ジイル基、ヘキサン−１，５−ジイル基、ヘキサン−１，６−ジイル基、ヘプタン−１，７−ジイル基、オクタン−１，８−ジイル基が挙げられる。アルカンジイル基の炭素数は、好ましくは１〜１０、より好ましくは２〜５である。
【００３３】
Ｒ2〜Ｒ6は、それぞれ独立に水素原子、水酸基、アルコキシ基、または置換基を有してもよいアルキル基であり、ただしＲ2〜Ｒ6のうち少なくとも１つは水酸基である。後述するゲル化において酸化カップリングが優位に進み、機械的強度により優れたゲルが得られることから、Ｒ2〜Ｒ6のうち、Ｒ4のみが水酸基であることが好ましい。水酸基に対して少なくとも１つのオルト位置の炭素原子には水素原子が結合していることが好ましい。
【００３４】
アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基等の炭素数１〜６のアルコキシ基が挙げられる。
アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基等の炭素数１〜６のアルキル基が挙げられる。アルキル基における１以上の水素原子は置換されていてもよく、置換基としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子、フェニル基、水酸基、アセトキシ基、アルコキシ基、カルボキシ基、シアノ基、ニトロ基が挙げられる。
【００３５】
Ｒ2〜Ｒ6のうち水酸基以外の残りの基は、水素原子またはアルコキシ基であることが好ましく、水素原子であることがより好ましい。
多糖にヒドロキシアリール基を有する基（ａ２１）を導入する方法としては、例えば、アミノ基、アルコール性水酸基およびカルボキシ基等の官能基を有する多糖と、前記官能基と反応しうる官能基（例：カルボキシ基、その酸ハロゲン化物、アミノ基、アルコール性水酸基、エポキシ基、オキセタニル基）およびヒドロキシアリール基を有する化合物とを、反応させる方法が挙げられる。例えば、多糖中の水酸基と、下記式（２１）に示す化合物（以下「化合物（２１）」ともいう）中の−ＣＯＸとを反応させることで、化合物（２１）由来のヒドロキシフェニル基を、エステル結合を介して多糖に導入することができる。
【００３６】
【化３】
2018199766.tif 000004
式（２１）中、Ｒ1〜Ｒ6は式（１）中の同一記号と同義である。Ｘは、−ＯＨまたはハロゲン原子である。ハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子が挙げられ、塩素原子が好ましい。
【００３７】
化合物（２１）としては、例えば、４−ヒドロキシフェニル酢酸、３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸、４−（４−ヒドロキシフェニル）ブタン酸、２−（２，５−ジヒドロキシフェニル）酢酸、およびこれらの酸ハロゲン化物が挙げられる。
【００３８】
例えば、多糖と化合物（２１）とを、あるいはリン酸基（ａ１）を有する変性多糖と化合物（２１）とを反応させる。例えば、前記多糖または前記基（ａ１）を有する変性多糖と化合物（２１）とを含む溶液から溶媒を留去し、次いで、残渣を加熱脱水縮合させる。溶媒留去は、例えば、減圧下、通常は０〜１５０℃、好ましくは２０〜８０℃で行う。加熱脱水縮合は、溶媒留去後の残渣を減圧下加温して行い、ここでの加熱温度は、通常は５０〜１５０℃、好ましくは８０〜１３０℃であり、反応時間は、通常は１〜９２時間、好ましくは２〜４８時間である。減圧条件は、例えば７６０ｍｍＨｇ未満、好ましくは１〜５００ｍｍＨｇである。加熱脱水縮合後の生成物を水に溶解させて、エタノール、酢酸エチル、ｎ−ヘキサン等の貧溶媒で再沈殿により精製してもよい。
【００３９】
前記反応において、化合物（２１）は、多糖１００質量部、またはリン酸基（ａ１）を有する変性多糖１００質量部に対して、通常は１〜１００質量部、好ましくは５〜８０質量部、より好ましくは１０〜６０質量部の量で用いることができる。
【００４０】
前記反応は、溶媒中で行うことが好ましい。溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミドが挙げられる。前記反応は、窒素、アルゴン等の不活性ガス雰囲気下で行ってもよい。
【００４１】
炭素−炭素不飽和二重結合は、好ましくはラジカル重合可能な二重結合であり、例えば、（メタ）アクリロイル基、ビニル基等として変性多糖に含まれていればよく、（メタ）アクリロイル基が好ましく、アクリロイル基がより好ましい。
【００４２】
炭素−炭素不飽和二重結合を有する基（ａ２２）は、下記式（２）に示す基（（メタ）アクリロイル基）であることが好ましい。例えば、本発明の変性多糖は、多糖中の水酸基残基に結合している式（２）に示す基を有する。
【００４３】
【化４】
2018199766.tif 000005
式（２）中、ＲAは水素原子またはメチル基を示す。
【００４４】
＊は、多糖中の水酸基残基（−Ｏ−）との結合手である。多糖がグルコース単位を有する場合、例えば、グルコース単位中のヒドロキシメチル基における水酸基残基と、式（２）に示す基とが結合していることが好ましい。
【００４５】
多糖に炭素−炭素不飽和二重結合を有する基（ａ２２）を導入する方法としては、例えば、アミノ基、アルコール性水酸基およびカルボキシ基等の官能基を有する多糖と、前記官能基と反応しうる官能基（例：カルボキシ基、その酸ハロゲン化物、アミノ基、アルコール性水酸基、エポキシ基、オキセタニル基）および炭素−炭素不飽和二重結合を有する化合物（以下「二重結合含有化合物（３１）」ともいう）とを、反応させる方法が挙げられる。
【００４６】
二重結合含有化合物（３１）としては、多糖が多く有するアルコール性水酸基と反応しうるカルボキシ基またはその酸ハロゲン化物（−ＣＯＸ（Ｘは塩素原子等のハロゲン原子）で表される基）を有する化合物が好ましく、例えば、（メタ）アクリル酸、クロトン酸等の不飽和モノカルボン酸；マレイン酸、フマル酸、シトラコン酸、メサコン酸、イタコン酸等の不飽和ジカルボン酸；前記不飽和ジカルボン酸の無水物；コハク酸モノ〔２−（メタ）アクリロイルオキシエチル〕、フタル酸モノ〔２−（メタ）アクリロイルオキシエチル〕等の多価カルボン酸のモノ〔（メタ）アクリロイルオキシアルキル〕エステル；およびこれらの酸ハロゲン化物、例えば（メタ）アクリル酸クロライドが挙げられる。
【００４７】
二重結合含有化合物（３１）としては、その他、（メタ）アクリル酸グリシジル、（メタ）アクリル酸２−メチルグリシジル、（メタ）アクリル酸３，４−エポキシブチル、（メタ）アクリル酸６，７−エポキシヘプチル、（メタ）アクリル酸３，４−エポキシシクロへキシルメチル等のエポキシ基含有（メタ）アクリレート；ｏ，ｍ又はｐ−ビニルフェニルグリシジルエーテル、ｏ，ｍ又はｐ−イソプロペニルフェニルグリシジルエーテル、ｏ，ｍ又はｐ−ビニルベンジルグリシジルエーテル、ｏ，ｍ又はｐ−イソプロペニルベンジルグリシジルエーテル等のエポキシ基含有ビニル化合物；３−（（メタ）アクリロイルオキシメチル）オキセタン、３−（（メタ）アクリロイルオキシメチル）−２−メチルオキセタン、３−（（メタ）アクリロイルオキシメチル）−３−エチルオキセタン、３−（（メタ）アクリロイルオキシメチル）−２−フェニルオキセタン等のオキセタニル基含有（メタ）アクリレート；３−（ｐ−ビニルフェニルオキシメチル）−３−メチルオキセタン、３−（ｐ−イソプロペニルフェニルオキシメチル）−３−メチルオキセタン等のオキセタニル基含有ビニル化合物；（メタ）アクリル酸２−ヒドロキシエチル、（メタ）アクリル酸３−ヒドロキシプロピル、（メタ）アクリル酸４−ヒドロキシブチル等の（メタ）アクリル酸ヒドロキシアルキルが挙げられる。
【００４８】
例えば、塩基性化合物の存在下又は非存在下に、多糖と二重結合含有化合物（３１）とを、あるいはリン酸基（ａ１）を有する変性多糖と二重結合含有化合物（３１）とを反応させる。前記反応の反応温度は、通常は−１０〜５０℃、好ましくは−５〜３０℃であり、反応時間は、通常は１〜４８時間である。
【００４９】
塩基性化合物としては、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン、ピペリジンが挙げられる。
前記反応において、二重結合含有化合物（３１）は、多糖１００質量部、またはリン酸基（ａ１）を有する変性多糖１００質量部に対して、通常は０．１〜５０質量部、好ましくは０．３〜２０質量部、より好ましくは０．５〜１０質量部の量で用いることができる。
【００５０】
前記反応は、溶媒中で行うことが好ましい。溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミドが挙げられる。前記反応は、窒素、アルゴン等の不活性ガス雰囲気下で行ってもよい。
【００５１】
＜好適態様＞
本発明の変性多糖としては、多糖にリン酸基（ａ１）およびヒドロキシアリール基を有する基（ａ２１）が導入された変性多糖が好ましく、グルコース単位を有する多糖またはその誘導体に前記基が導入された変性多糖がより好ましく、プルランまたはその誘導体に前記基が導入された変性多糖が特に好ましい。
【００５２】
本発明の変性多糖は、多糖にリン酸基（ａ１）が導入されている。変性多糖における前記基（ａ１）による置換度（ＤＳP）は、通常は０．１〜９００であり、好ましくは１０〜５００、さらに好ましくは１００〜３００である。また、本発明の変性多糖に含まれるリン原子の含有割合は、通常は０．１〜２５質量％、好ましくは１〜２０質量％である。
【００５３】
本発明の変性多糖は、多糖にラジカル反応性基（ａ２）が導入されている。変性多糖における前記基（ａ２）による置換度（ＤＳR）、好ましくはヒドロキシアリール基を有する基（ａ２１）による置換度（ＤＳAr）は、通常は０．１〜４０であり、好ましくは０．５〜２０、より好ましくは１〜１５である。
【００５４】
リン原子の含有割合は、原子吸光分析法による元素分析より求めることができ、置換度（ＤＳP）は、31Ｐ  ＮＭＲより求めることができ、また置換度（ＤＳR）は、1Ｈ  ＮＭＲより求めることができる。変性多糖の置換度とは、変性多糖の構成単糖１００単位あたりに導入されている基（例：前記基（ａ１）または（ａ２））の平均数を示す。変性多糖はこのような置換度を有することにより、変性多糖のゲル化速度が向上する。
【００５５】
変性多糖の前記置換度は、例えば、前述した反応の反応時間、反応温度、各反応成分の濃度を変えることによって制御することができる。例えば、反応時間を短くする、反応温度を下げる、各反応成分の濃度を低くすることで、前記置換度を低くすることができる。
【００５６】
本発明の変性多糖の絶対分子量測定による数平均分子量は、通常は１，０００〜１０，０００，０００、好ましくは３，０００〜１，０００，０００、より好ましくは５，０００〜５００，０００である。
【００５７】
［組成物］
本発明の組成物は、上述した本発明の変性多糖と、酵素と、水とを含有し、好ましくはさらに過酸化物を含有する。前記組成物の一実施態様は、変性多糖を含み、過酸化物および酵素のいずれかを含むが両方は含まない第１の溶液と、前述の過酸化物および酵素のうち第１の溶液中で含まれない方を含む第２の溶液とを有する。
【００５８】
本発明の組成物は、上述した本発明の変性多糖を含有する。前記組成物において、本発明の変性多糖の含有割合は、通常は８質量％以上９０質量％未満、好ましくは３０〜８０質量％である。変性多糖は単独で又は２種以上用いることができる。
【００５９】
本発明の組成物は、酵素を含有する。酵素は、ラジカル反応性基（ａ２）、好ましくはヒドロキシアリール基を有する基（ａ２１）の架橋反応を直接的または間接的に触媒しうる酵素が好ましい。
【００６０】
酵素としては、例えば、ラッカーゼ、チロシナーゼ等のフェノールオキシダーゼ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼが挙げられる。ラッカーゼおよびチロシナーゼは、ゲルの構成要素とならない他の薬品を一切加える必要がないので、ゲル化の際に機能発現物質が変性するおそれが全くない点で優れる。ペルオキシダーゼは、過酸化水素等の過酸化物と併用することで瞬時にゲル化させることができる。ラッカーゼ、チロシナーゼ等の銅酵素類の起源は、例えばウルシ、キノコ（ツチカブリ、マッシュルーム）、カビ（Polyporus vericolor）が挙げられる。カタラーゼ、ペルオキシダーゼの起源は、例えば、ウシ肝臓、ウマ血球、ヒト血球、M. lysodeikticus、西洋ワサビ（ホースラディッシュ）、大豆、ダイコン、カブ、甲状腺、牛乳、腸、白血球、赤血球、酵母、Caldariomyces fumago、Steptococcus faecalisが挙げられる。これらの中でも、チロシナーゼとしてはマッシュルーム由来、ペルオキシダーゼとしては西洋ワサビ由来のものが好ましい。
【００６１】
本発明では、変性多糖に含まれるラジカル反応性基（ａ２）の架橋反応を効率的に進める観点から、過酸化物を用い、酵素としてペルオキシダーゼおよびカタラーゼから選ばれる１種以上を少なくとも用いることが好ましく、過酸化物を用い、酵素としてペルオキシダーゼを少なくとも用いることがより好ましい。
酵素は単独で又は２種以上用いることができる。
【００６２】
本発明の組成物において、酵素の量は、０．０１Ｕ／ｍＬ以上が好ましく、１Ｕ／ｍＬ以上がより好ましく；１，０００Ｕ／ｍＬ以下が好ましく、５００Ｕ／ｍＬ以下がより好ましい。なお、Ｕとは酵素活性の単位を示し、至適条件下で、温度３０℃で毎分１マイクロモルの基質を変化させることができる酵素量である。
【００６３】
本発明の組成物は、好ましくは過酸化物を含有する。過酸化物としては、例えば、過酸化水素が挙げられる。前記組成物において、過酸化物の量は、本発明の変性多糖中のラジカル反応性基（ａ２）１モル、好ましくはフェノール性水酸基１モルに対して、通常は０．０１〜１０００モル、好ましくは０．１〜５００モル、より好ましくは０．５〜２００モルである。前記フェノール性水酸基は、例えば、前記基（ａ２１）におけるヒドロキシアリール基に含まれるフェノール性水酸基である。
【００６４】
本発明の組成物は、アルカリ金属塩および周期表第２族金属塩から選ばれる少なくとも１種の金属塩をさらに含有することが好ましい。ただし、金属塩からは、前述した変性多糖を除く。金属塩を用いることで、例えば、変性多糖のリン酸基（ａ１）と金属イオンがキレート結合することにより、ゲルの機械的強度を上げることができる。
【００６５】
アルカリ金属塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩が挙げられる。周期表第２族金属としては、例えば、マグネシウム塩、カルシウム塩、ストロンチウム塩、バリウム塩が挙げられる。金属塩としては、アルカリ金属および周期表第２属金属のハロゲン化物、水酸化物が好ましく、例えば、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、塩化バリウム、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウムが挙げられる。
【００６６】
これらの中でも、本発明の組成物を生体硬組織用セメントおよび生体硬組織用接着組成物などとして用いる場合は、カルシウム塩が好ましい。
金属塩は単独で又は２種以上用いることができる。
金属塩は、水に溶解または分散した形態で使用することができる。
【００６７】
本発明の組成物中の金属塩の含有量は、本発明の変性多糖１００質量部に対して、通常は０．１〜３０質量部、好ましくは０．５〜２０質量部、より好ましくは１〜１０質量部である。含有量が前記下限値以上であると、得られるゲルの機械的強度の観点から好ましい。含有量が前記上限値以下であると、本発明の組成物を用いる際の流動性が不足しないことから好ましい。
【００６８】
本発明の組成物は、水を含有する。
本発明の組成物の水の含有割合は、通常は１０〜９０質量％である。このような態様であると、得られるゲルの機械的強度が優れる傾向にある。
【００６９】
本発明の組成物は、前記変性多糖以外の多糖をさらに含有してもよい。この多糖としては、例えば、［変性多糖］の欄に記載した多糖が挙げられる。多糖は単独で又は２種以上用いることができる。
【００７０】
本発明の組成物は、フィラーをさらに含有してもよい。フィラーとしては、リン酸三カルシウム、リン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム、水酸アパタイト、硫酸バリウム、シリカ、アルミナ、ジルコニア、チタニア等が挙げられる。これらの中でも硫酸バリウムは造影剤として用いることができる。フィラーは単独で又は２種以上用いることができる。
【００７１】
本発明の組成物は、その他、リン酸、ポリリン酸、ｐＨ調整剤、紫外線吸収剤、増粘剤、着色剤およびフィラーから選ばれる１種または２種以上を含有してもよく、ゲルの用途に応じた機能発現物質を含有してもよい。これにより、得られるゲル中に機能発現物質を含ませることができる。機能発現物質としては、例えば、薬剤、細胞が挙げられる。
【００７２】
本発明の組成物は、下記ゲル（硬化物）の原料組成物として好適に用いることができる。本発明の組成物から形成されたゲルは、強度が高く、また、骨、歯等の生体硬組織；チタン、ステンレス等の金属；セラミックス；ガラスに対して、高い接着性を示す。さらに、前記ゲルは、非乾燥状態（例えば水分存在下）であっても接着性に優れている。
【００７３】
したがって、本発明の組成物は、例えば、骨用セメント、歯科用セメント等の生体硬組織用セメントとして好適である。前記セメントは、硬化性を有し、例えば、骨または歯の欠損部や空隙部、低密度部の修復または充填用材料である。
【００７４】
一例を挙げれば、本発明の組成物は、脊椎圧迫骨折によって潰れた椎体を、バルーンにより骨折前の形に近づけ椎体を安定させ、またセメント注入用の空間を形成し、前記空間に骨用セメントを注入するバルーンカイフォプラスティ（ＢＫＰ）治療法における前記骨用セメント（充填用材料）として有用である。
【００７５】
また、本発明の組成物は、骨と骨の固定、骨と固定用スクリュー等の医療器具との固定、人工関節と周囲の骨との固定、脊椎骨折の固定および四肢骨折の固定のための接着剤や、歯科における詰め物および被せ物等の補綴修復物の歯科用合着剤としても好ましい。このように本発明の組成物は、生体硬組織用接着組成物として有用である。
【００７６】
また、本発明の組成物は、変形性関節症の治療に用いられる関節腔内の潤滑剤や、損傷被覆材として用いることができる。変形性関節症は膝、肩、股、腰、足首、手首、指などの体の各関節に発生しうるが、本発明の組成物はいずれの関節にも適用しうる。
【００７７】
本発明の組成物は、各成分を混合し、水溶液温度（架橋温度）が、通常は４〜５０℃、好ましくは１０〜４５℃、より好ましくは２０〜４０℃、反応時間が、通常は１分〜４８時間、好ましくは５分〜３０時間の条件で、硬化させることができる。
【００７８】
［ゲル］
本発明のゲルは、上述した本発明の組成物から形成される。また、一実施態様において、本発明のゲルは、上述した本発明の変性多糖に好ましく含まれるヒドロキシアリール基の酸化カップリングによる架橋構造を有し、すなわち前記変性多糖の架橋体を含有する。酸化カップリングの詳細は、後述する。
【００７９】
一実施態様において、前記ゲルは、水分を通常は１０〜９０質量％含有するハイドロゲルである。前記ハイドロゲルは、前記変性多糖の架橋体を通常は９０〜１０質量％含有する。前記ハイドロゲルは、機械的強度および柔軟性に優れる。
【００８０】
本発明のハイドロゲルは、後述するように変性多糖と酵素とを水中で混合して、変性多糖を架橋することにより得ることができる。また、前記ハイドロゲルを適宜乾燥するなどして水分を除去することにより、キセロゲルを得ることができる。あるいは、本発明のゲルは、例えば、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（２０１５）２６２４−２６３０に記載のように、変性多糖とともにエオシンＹ、メチレンブルー、ローズベンガル等の光増感剤を用い、光照射を行うことでゲル化させて得ることもできる。
【００８１】
本発明の組成物を用いることにより、ゲルを形成することができる。例えば、一実施態様において、変性多糖と過酸化水素等の過酸化物と酵素とを水中で混合して、変性多糖を架橋して、ハイドロゲルを形成する。ここでは、例えば、変性多糖中のヒドロキシアリール基が酸化され、前記基同士の酸化カップリング（架橋）が起こり、ゲル化が進行すると推測される。酸化カップリングについてさらに詳述すると、例えば、変性多糖のヒドロキシアリール基を酵素の存在下で過酸化物と反応させると、フェノール性水酸基において水素原子が引き抜かれてフリーラジカル種となり、これが異性化してオルト位置の炭素上に不対電子が存在するフリーラジカル種となり、次に２つのフリーラジカル種が結合して、続いてエノール化することにより、架橋構造が形成されるものと考えられる。
【００８２】
本発明のハイドロゲルの製造方法の一実施態様は、例えば、変性多糖と、酵素と、必要な場合は過酸化物および金属塩とを水中で混合して、変性多糖を架橋させて、ハイドロゲルを製造する。変性多糖、酵素、過酸化物および金属塩は、それぞれの水溶液として用いてもよい。
【００８３】
本発明のハイドロゲルの製造方法の別の一実施態様は、例えば、（１）変性多糖を含み、過酸化物および酵素のいずれかを含むが両方は含まない第１の溶液を用意し、（２）前述の過酸化物および酵素のうち第１の溶液中で含まれない方を含む第２の溶液を用意し、（３）第１の溶液と第２の溶液とを混合して変性多糖を架橋させて、ハイドロゲルを製造する。具体的には、変性多糖、酵素および水を含む第１の溶液と、過酸化物および水を含む第２の溶液とを混合して、変性多糖を架橋させる。ここで、例えば、所望の形状のキャビティーを有する金型を用意し、第１の溶液と第２の溶液とを前記キャビティー中で混合して反応させることにより、前記形状を有するハイドロゲルを形成することができる。
【００８４】
ハイドロゲル形成時の水溶液温度（架橋温度）は、通常は４〜５０℃、好ましくは１０〜４５℃、より好ましくは２０〜４０℃であり、反応時間は、通常は１分〜４８時間、好ましくは５分〜３０時間である。ハイドロゲル形成は、加圧下、常圧（大気圧）下および減圧下のいずれで行ってもよいが、常圧下が好ましい。本発明の組成物を用いることにより、室温程度の温和な条件で、ハイドロゲルを形成することができる。
本発明のゲルおよびハイドロゲルは、例えば、軟骨および骨等の生体組織の一部が損なわれた場合の、人工軟骨および人口骨等として好適に用いることができる。
【００８５】
［成形体］
本発明の成形体は、上述したゲルを含有する。例えば、本発明のゲルが、所望の形状に成形された成形体である。前記成形体において、ゲルの量は、通常は５０質量％以上、好ましくは６０質量％以上、さらに好ましくは７０質量％以上である。
【００８６】
成形体の一用途として、医療用器具が挙げられる。医療用器具は、前記成形体を有する。前記医療用器具は、機械的強度および柔軟性に優れる前記成形体を有することから、医療用器具の中でも特にインプラント材料に好適に用いることができる。インプラント材料としては、例えば、軟骨および骨等の生体組織の一部が損なわれた場合に用いられるインプラント材料が挙げられる。
【実施例】
【００８７】
以下、本発明を実施例に基づいて更に具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。以下の実施例等の記載において、特に言及しない限り、「部」は「質量部」を示す。
【００８８】
［合成例１］ヒドロキシフェニル基変性プルラン（Ｐ１）
１００ｍｌナス型フラスコに、プルラン（ＣＡＳ番号：９０５７−０２−７、東京化成工業株式会社製）８．１ｇを入れ、蒸留水４０ｇを加え溶解させ、ここに、３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸１．３８ｇを加え撹拌し、均一液とした。この液を６０℃で加温しながら減圧留去し、残渣を得た。この残渣の入ったナス型フラスコを４００ｍｍＨｇで減圧しつつ１２０℃で２４時間加温した。
【００８９】
反応終了後、反応残渣に蒸留水８０ｇを加え溶解させ、この水溶液をエタノール３００ｍｌで再沈殿した。沈殿物を吸引濾過し、得られた沈殿物を６０℃で加温しながら減圧して溶媒分を留去し、ヒドロキシフェニル基変性プルラン（Ｐ１）を得た。
【００９０】
ヒドロキシフェニル基変性プルラン（Ｐ１）の、ヒドロキシフェニル基置換度（ＤＳAr）を1Ｈ  ＮＭＲ（重溶媒はＤ2Ｏ）で算出したところ、２．３であった。ヒドロキシフェニル基変性プルラン（Ｐ１）の1Ｈ  ＮＭＲのチャートを図１に示す。1Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、装置名「ＪＮＭ−ＥＣＸ４００Ｐ」（日本電子製）を用いて測定した。
【００９１】
［実施例１］変性多糖（Ａ１）
１００ｍｌナス型フラスコに、ヒドロキシフェニル基変性プルラン（Ｐ１）１ｇを入れ、蒸留水１０ｇを加え溶解させ、ここに、０．８５Ｍリン酸水溶液（ｐＨ＝５．５）２８．７ｇを加え攪拌し、均一液とした。この液を６０℃で加温しながら減圧留去し、残渣を得た。この残渣の入ったナス型フラスコを４００ｍｍＨｇで減圧しつつ１２０℃で２４時間加温した。
【００９２】
反応終了後、反応残渣に蒸留水３０ｇを加え溶解させ、この水溶液をエタノール１００ｍｌで再沈殿した。蒸留水への溶解、再沈殿を２回行った後、沈殿物を吸引濾過し、得られた沈殿物を６０℃で加温しながら減圧して溶媒分を留去し、白色固体を得た。ＨＰＬＣ分析により、得られた白色固体は、リン酸基とヒドロキシフェニル基を有するプルラン（変性多糖（Ａ１））であった。ＨＰＬＣ分析のチャートを図４（ａ）に示す。ＨＰＬＣは、装置名「Ａｃｑｕｉｔｙ」（日本ウォーターズ社製）を用いて以下の条件にて測定した。
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：３７℃
カラムの種類： 商品名「Ｐｒｅｓｔｏ  ＦＦ−Ｃ１８」（Ｉｍｔａｋｔ社製）
展開液：０〜３分間は５０ｍＭのギ酸水溶液、３〜１８分間は前記ギ酸水溶液からアセトニトリルへのグラジエント溶離、１８〜２０分間はアセトニトリル。
【００９３】
変性多糖（Ａ１）の、ヒドロキシフェニル基置換度（ＤＳAr）を1Ｈ  ＮＭＲ（重溶媒はＤ2Ｏ）で算出したところ、１．４であった。変性多糖（Ａ１）の1Ｈ  ＮＭＲのチャートを図２に示す。
また、31Ｐ  ＮＭＲ（重溶媒はＤ2Ｏ、装置名「ＪＮＭ−ＥＣＸ４００Ｐ」（日本電子製））を測定した。31Ｐ  ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ、４００ＭＨｚ）σ（ｐｐｍ）：１．３７（５価リン酸エステル）
【００９４】
［合成例２］リン酸変性プルラン（Ｐ２）
１００ｍｌナス型フラスコに、プルラン（ＣＡＳ番号：９０５７−０２−７、東京化成工業株式会社製）２ｇを入れ、蒸留水２０ｇを加え溶解させ、ここに、０．８５Ｍリン酸水溶液（ｐＨ＝５．５）５７ｇを加え撹拌し、均一液とした。この液を６０℃で加温しながら減圧留去し、残渣を得た。この残渣の入ったナス型フラスコを４００ｍｍＨｇで減圧しつつ１２０℃で２４時間加温した。
【００９５】
反応終了後、反応残渣に蒸留水７０ｇを加え溶解させ、この水溶液をエタノール１００ｍｌで再沈殿した。蒸留水への溶解、再沈殿を２回行った後、沈殿物を吸引濾過し、得られた沈殿物を６０℃で加温しながら減圧して溶媒分を留去し、白色固体を得た。ＨＰＬＣ分析により、得られた白色固体は、リン酸基を有するプルラン（リン酸変性プルラン（Ｐ２））であった。ＨＰＬＣ分析のチャートを図４（ｂ）に示す。
【００９６】
リン酸変性プルラン（Ｐ２）の1Ｈ  ＮＭＲのチャートを図３に示す。
また、31Ｐ  ＮＭＲ（重溶媒はＤ2Ｏ、装置名「ＪＮＭ−ＥＣＸ４００Ｐ」（日本電子製））を測定した。31Ｐ  ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ、４００ＭＨｚ）σ（ｐｐｍ）：１．７５（５価リン酸エステル）
【００９７】
［実施例２］組成物およびゲルの製造、ならびにその評価
エッペンチューブに、前記変性多糖（Ａ１）５０ｍｇを入れ、さらに、塩化カルシウム水溶液（濃度：５質量％）２５ｍｇを入れ、内容物をミクロスパーテルで５分間混錬した。次いで、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（和光純薬製、商品コード「１６９−１０７９１」、ＨＲＰと略す）水溶液（濃度：１５０Ｕ／ｍｌ）５μｌ（約５ｍｇ）と、過酸化水素水（濃度：４．２質量％）５μｌ（約５ｍｇ）とを加え、混合し、組成物を製造した。
【００９８】
２枚のホウケイ酸ガラス基板を、面積６．２５ｃｍ2の組成物の塗膜を介して貼り合わせ、２３℃２４時間にて放置し、２枚のホウケイ酸ガラス基板を前記組成物からなるゲル状接着物で接着した。
【００９９】
次いで、前記接着物で接着された２枚のガラス基板を蒸留水中に２３℃１２時間放置し、次いで、一方のホウケイ酸ガラスを剥がし、接着物の状態を目視で観察したところ、接着物はホウケイ酸ガラスに残存していた。
【０１００】
［比較例１］組成物およびゲルの製造、ならびにその評価
エッペンチューブに、前記リン酸変性プルラン（Ｐ２）５０ｍｇを入れ、さらに、塩化カルシウム水溶液（濃度：５質量％）２５ｍｇを入れ、内容物をミクロスパーテルで５分間混錬し組成物を製造した。
【０１０１】
２枚のホウケイ酸ガラス基板を、面積６．２５ｃｍ2の組成物の塗膜を介して貼り合わせ、２３℃２４時間にて放置し、２枚のホウケイ酸ガラス基板を前記組成物からなるゲル状接着物で接着した。
【０１０２】
次いで、前記接着物で接着された２枚のガラス基板を蒸留水中に２３℃１２時間放置し、次いで、一方のホウケイ酸ガラスを剥がし、接着物の状態を目視で観察したところ、接着物はホウケイ酸ガラスに残存せず、剥がれていることを確認した。すなわち、２枚のガラス基板のいずれにも接着物は残存していなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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