(57)【要約】【課題】わかめ由来の成分であって、ＡＭＰＫ活性促進用組成物の有効成分として新規なものを提供する。【解決手段】（１）アルギン酸の分解処理をしたわかめを加水分解し、得られた加水分解物の不溶性画分を分離して回収し、当該回収した不溶性画分を有機溶媒で抽出して得られた抽出物を有効成分とするＡＭＰＫ活性促進用組成物。（２）前記有機溶媒が、炭化水素系溶媒又は低級アルコールである前記（１）に記載のＡＭＰＫ活性促進用組成物。（３）わかめ由来のペプチドを有効成分とするＡＭＰＫ活性促進用組成物。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルギン酸の分解処理をしたわかめを加水分解し、得られた加水分解物の不溶性画分を分離して回収し、当該回収した不溶性画分を有機溶媒で抽出して得られた抽出物を有効成分とするＡＭＰＫ活性促進用組成物。
【請求項２】
前記有機溶媒が、炭化水素系溶媒又は低級アルコールである請求項１に記載のＡＭＰＫ活性促進用組成物。
【請求項３】
わかめ由来のペプチドを有効成分とするＡＭＰＫ活性促進用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＡＭＰＫ活性促進用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
現代の生活は、豊かな食による摂取エネルギーの過多や自動車等の普及による運動量の減少による消費エネルギー量の低下等から、摂取エネルギー量が消費エネルギー量を上回り、エネルギー過剰となりがちである。このため、肥満やそれに伴う生活習慣病が増大し、大きな社会問題になっている。
【０００３】
肥満の改善策の一つとして、運動を行うこと等により、消費エネルギー量を増やすことが挙げられるが、特に肥満者や高齢者等は身体的負担も大きく、日常的な運動を実施することが困難な場合もある。そのため、実際に運動しなくとも、運動と類似の効果が期待できる運動代替手法が望まれる。
【０００４】
ＡＭＰＫ（ＡＭＰ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ）は、生体に広く存在するタンパク質であり、細胞のエネルギー代謝の調節因子として重要な役割を担っている。細胞内のＡＴＰレベルが低下する状況化でＡＭＰＫの活性が上昇することによりＡＴＰの合成が促され、エネルギー消費が促進されることがこれまでの研究から知られている。また近年の研究から、ＡＭＰＫの活性化作用を有する物質は、持久筋力の低下防止・向上にも効果があることが示されており、肥満の予防に限らず筋肉量や筋力の増強による健康増進に有用であると考えられる。
【０００５】
ＡＭＰＫの活性化作用を有する物質としては、糖尿病治療薬であるメトフォルミンが報告されているが、この物質には副作用の問題もあり食品への使用が困難である。そのため、食経験が豊富で安全性が高く、入手が容易な素材でありながらＡＭＰＫの活性化作用を有するものが望まれている。
【０００６】
ここで、太古より広く食され食経験が豊富な海藻であるわかめに由来する成分のいくつかは、安全性に優れ、日常的に長期にわたり服用・摂取が可能なものであるとともに、ある種の生理活性を有することが知られている。例えば、わかめから抽出した蛋白質を蛋白質分解酵素等で処理して得られるペプチドは、アンジオテンシン変換酵素阻害作用があることが知られている（特許文献１〜３）。
【０００７】
このような状況から、わかめ由来の成分であって、ＡＭＰＫ活性促進用組成物の有効成分として新規なものが提供されることが望ましい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００３−１２８６９４号公報
【特許文献２】特開２００２−１３８１００号公報
【特許文献３】特開２００１−０６４２９９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、わかめ由来の成分であって、ＡＭＰＫ活性促進用組成物の有効成分として新規なものを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、上記課題に対して鋭意検討を行った結果、いくつかのわかめ由来の成分にＡＭＰＫ活性促進作用を見出し、この知見に基づいて本発明を成すに至った。
【００１１】
すなわち、本発明は、下記の（１）〜（３）からなっている。
（１）アルギン酸の分解処理をしたわかめを加水分解し、得られた加水分解物の不溶性画分を分離して回収し、当該回収した不溶性画分を有機溶媒で抽出して得られた抽出物を有効成分とするＡＭＰＫ活性促進用組成物。
（２）前記有機溶媒が、炭化水素系溶媒又は低級アルコールである上記（１）に記載のＡＭＰＫ活性促進用組成物。
（３）わかめ由来のペプチドを有効成分とするＡＭＰＫ活性促進用組成物。
【発明の効果】
【００１２】
本発明のＡＭＰＫ活性促進用組成物は、ＡＭＰＫ活性化作用を有する。
本発明のＡＭＰＫ活性促進用組成物は、日常的に長期間にわたり摂取しても安全性に全く問題は無い。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明で言うところのわかめとは、分類学的にはコンブ目チガイソ科ワカメ属に属する海藻類である。わかめの種類としては、ワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）、ヒロメ（Ｕ．ｕｎｄａｒｉｏｉｄｅｓ）、アオワカメ（Ｕ．ｐｅｔｅｒｓｅｎｉａｎａ）があり、本発明ではいずれも好ましく用いられる。また、わかめの部位に特に制限はなく、葉、芽かぶ等のいずれを用いても良い。また、わかめの形態としては、例えば乾燥わかめ（例えば乾燥カットわかめ、素干しわかめ等）、ボイル塩蔵わかめ、塩蔵わかめ、生わかめ等のいずれでもよく、葉の厚さや色あるいは原料産地等も問わない。
【００１４】
本発明で用いられる抽出物は、少なくともアルギン酸の分解処理をしたわかめを加水分解し、得られた加水分解物の不溶性画分を分離して回収し、当該回収した不溶性画分を有機溶媒で抽出する工程により得られたものである。
【００１５】
上記工程では、先ず、原料のわかめに含まれるアルギン酸を分解する。アルギン酸を分解する方法に特に制限はないが、例えばわかめをアルギン酸リアーゼで処理する方法が好ましい。アルギン酸の分解処理後は、これを遠心分離処理して上清を廃棄し沈殿物を回収することにより、分解したアルギン酸を除去することが好ましい。
【００１６】
次に、アルギン酸の分解処理をしたわかめに含まれる蛋白質を加水分解する。加水分解の方法に特に制限はないが、例えば蛋白質分解酵素を添加し、蛋白質の分解を行うことが好ましい。蛋白質分解酵素としては、例えば、プロテアーゼ、トリプシン、パンクレアチン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン等が挙げられ、中でもプロテアーゼが好ましく用いられる。
【００１７】
上記のアルギン酸リアーゼ及び蛋白質分解酵素を使用する場合、酵素使用量、処理の温度及びｐＨは常識的に許容される範囲内の条件であれば良いが、その酵素の至適使用量、至適温度、至適ｐＨで行うことが反応時間の短縮や酵素の安定性上望ましい。
【００１８】
加水分解後、得られた加水分解物の不溶性画分を分離して回収する。その方法に特に制限はないが、例えば該加水分解物を遠心分離処理して上清を廃棄し沈殿物を回収する方法が挙げられる。回収した不溶性画分は、自体公知の方法により乾燥することが好ましい。
【００１９】
次に、回収した不溶性画分を有機溶媒で抽出し、抽出物を得る。有機溶媒としては、例えば炭化水素系溶媒又は低級アルコールを用いることが好ましい。
【００２０】
炭化水素系溶媒としては、例えば、ペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、ヘプタン、オクタン、イソオクタン、ベンゼン、トルエン、エチルベンゼン、プロピルベンゼン、ｏ−キシレン、ｍ−キシレン及びｐ−キシレンから選ばれる１種以上が挙げられ、好ましくはヘキサンである。
【００２１】
低級アルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール及びブタノールから選ばれる１種以上が挙げられ、好ましくはエタノールである。なお、これら低級アルコールは、水が含まれているものであっても良い（以下、水が含まれているものを「含水低級アルコール」という）。含水低級アルコール中の低級アルコール濃度（ｖ／ｖ）は、２０〜９５容量％が好ましく、５０〜９５容量％がより好ましい。
【００２２】
有機溶媒の使用量としては、上記不溶性画分（乾燥質量換算）１ｇに対して１〜１００ｍＬが好ましく、抽出時間としては、１分間〜２４時間が好ましく、１０分間〜１０時間がより好ましい。このときの抽出温度としては、０℃〜溶媒沸点が好ましく、５〜８０℃がより好ましく、５〜５０℃が更に好ましく、１０〜４０℃がより一層好ましい。
【００２３】
上記不溶性画分を有機溶媒で抽出する抽出手段は、不溶性画分と有機溶媒とを接触させるもの（例えば、浸漬等）であれば特に制限はないが、抽出時間を短縮する観点から、当該接触と共に超音波照射、マイクロ波照射、攪拌等の手段を用いることができる。
【００２４】
こうして得られた抽出物は、自体公知の方法により溶媒の不溶性画分を除去して濃縮及び乾燥し、粉末化することが好ましい。より具体的には、遠心分離処理して上清を回収し、これをエバポレーターにより濃縮し、更に噴霧乾燥、凍結乾燥、真空乾燥等により乾燥し、粉末化することができる。
【００２５】
本発明で用いられるわかめ由来のペプチドは、わかめから分離した蛋白質を蛋白質分解酵素で処理して得られる処理物から分取することにより得られる。
【００２６】
わかめから蛋白質を分離する方法に特に制限はないが、例えば、わかめをアルギン酸リアーゼで処理し、これを遠心分離処理して上清を廃棄し沈殿物を回収することにより、粘質多糖類を除去し、蛋白質を分離する方法が挙げられる。
【００２７】
蛋白質分解酵素による処理では、わかめから分離した蛋白質に蛋白質分解酵素を添加し、蛋白質の分解を行う。蛋白質分解酵素としては、例えば、プロテアーゼ、トリプシン、パンクレアチン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン等が挙げられ、中でもプロテアーゼが好ましく用いられる。
【００２８】
上記のアルギン酸リアーゼ及び蛋白質分解酵素による酵素使用量、処理の温度及びｐＨは常識的に許容される範囲内の条件であれば良いが、その酵素の至適使用量、至適温度、至適ｐＨで行うことが反応時間の短縮や酵素の安定性上望ましい。
【００２９】
蛋白質分解酵素による処理により得られる処理物からペプチドを分取する方法に特に制限はないが、例えば、該処理物を遠心分離し、未分解の蛋白質を除去して上清を得た後、該上清を限外濾過膜で処理し、分子量１万以下のペプチドを得る方法が挙げられる。
【００３０】
本発明のＡＭＰＫ活性促進用組成物は、前述のわかめ由来成分（上記抽出物又はわかめ由来のペプチド）を有効成分としてそのまま用いるか、あるいは製薬学的に許容される添加物、食品素材、食品原料、さらに必要に応じて食品添加物等を適宜混合し、常法に従い、例えば、ＡＭＰＫ活性の促進を目的とする医薬品、医薬部外品又は飲食品（健康食品又は特定保健用食品を含む）として製造される。該医薬品又は医薬部外品としては、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、マイクロカプセル、ソフトカプセル、ハードカプセル、シロップ剤、エリキシル剤、注射剤、点滴等経口的又は非経口的形態の製剤が挙げられる。該飲食品としては、例えば、固形食品、クリーム状又はジャム様の半固形食品、ゲル状食品、飲料等あらゆる食品形態をとることが可能である。具体的には、例えば、清涼飲料、サプリメント、クッキー、プリン、ゼリー菓子、キャンディ、ドロップ、チューインガム、チョコレート、ヨーグルト、アイスクリーム、マーガリン、ショートニング、マヨネーズ又はドレッシング等が挙げられる。
【００３１】
上記医薬品、医薬部外品又は飲食品の製造に用いられる添加物、食品素材、食品原料又は食品添加物としては、例えば、賦形剤（乳糖、デキストリン、コーンスターチ、結晶セルロース等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル等）、崩壊剤（カルボキシメチルセルロースカルシウム、無水リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム等）、結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、ラビアガム液等）、溶解補助剤（アラビアガム、ポリソルベート８０等）、甘味料（砂糖、果糖、ブドウ糖液糖、ハチミツ、アスパルテーム等）、着色料（β−カロテン、食用タール色素、リボフラビン等）、保存料（ソルビン酸、パラオキシ安息香酸メチル、亜硫酸ナトリウム等）、増粘剤（アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム等）、酸化防止剤（ＢＨＴ、ＢＨＡ、アスコルビン酸、トコフェロール等）、香料（ハッカ、ストロベリー香料等）、酸味料（クエン酸、乳糖、ＤＬ−リンゴ酸等）、調味料（ＤＬ−アラニン、５´−イノシン酸ナトリウム、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム等）、乳化剤（グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル等）、ｐＨ調整剤（クエン酸、クエン酸三ナトリウム等）、ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸類等が挙げられる。
【００３２】
本発明のＡＭＰＫ活性促進用組成物を医薬品、又は医薬部外品として使用する場合、上記した添加物、食品素材、食品原料又は食品添加物の他に、薬剤学的又は食品衛生学的に許容される他の素材を常法により適宜添加混合してもよい。このようなものとしては特に限定されず、例えば、コーティング剤、吸収促進剤、安定化剤、漢方薬（生薬エキス）等が挙げられる。
【００３３】
ここで、ＡＭＰＫは、セリン／スレオニンキナーゼに属し、その１７２番目のスレオニンがリン酸化されることによって活性化されることが知られている。活性化されたＡＭＰＫは糖代謝や脂質代謝系の主要な酵素群をリン酸化し、脂肪酸のベータ酸化や糖取り込み等を促進する。また、筋肉組織では、ＡＭＰＫの活性化により糖輸送担体であるＧＬＵＴ−４の膜移行が促進され、脂肪酸のベータ酸化や糖取り込み等を促進する。従って、本発明のＡＭＰＫ活性促進用組成物は、ＡＭＰＫを活性化することにより、肥満、高血糖、高脂血症、糖尿病、動脈硬化症等の生活習慣病並びにこれらに関連する疾患及び状態の、予防及び／又は治療のために用いることができる。また、本発明のＡＭＰＫ活性促進用組成物は、脂質代謝促進剤、糖質代謝促進剤、脂肪蓄積抑制剤、運動代替剤等としても用いることができる。
【００３４】
本発明のＡＭＰＫ活性促進用組成物を経口的に摂取する場合、摂取量は、摂取する対象の性別、年齢等によって異なるが、例えば、成人１日当たりの用量は、有効成分である上記抽出物又はわかめ由来のペプチドの乾燥物換算量で０．０１〜１００ｍｇ／体重１ｋｇ、好ましくは０．０５〜２０ｍｇ／体重１ｋｇの範囲である。この用量を、一日のうち１回で摂取しても良いし、又は数回に分けて摂取してもよい。但し、実際の用量は、目的や摂取者の状況（性別、年齢、健康状態等）を考慮して決められるべきである。
【００３５】
以下、実施例をもって本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００３６】
［わかめ由来成分（ヘキサン抽出物）の製造］
乾燥わかめ１００ｇに２Ｌの０．１Ｍクエン酸緩衝液を加えｐＨを７．０に調整し、これにアルギン酸リアーゼ（商品名：アルギン酸リアーゼＳ；ナガセケムテックス社製）１００Ｕを加えた後、４５℃で４時間処理した。その後、得られた処理物を３０００×ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄し沈殿物を得た。この沈殿物を水１．５ｋｇに懸濁及び分散させた後、１００００Ｕのプロテアーゼ（商品名：プロテアーゼＳ「アマノ」；天野エンザイム社製）を加え、ｐＨを８．０に調整した後、７０℃にて１８時間処理した。その後３０００×ｇで５分間遠心分離し、沈殿物を回収した。この沈殿物を乾燥し、得られた乾燥物のうち１ｇに１０ｍＬのヘキサンを加えた混合物を３０分間超音波処理し、３０００×ｇ、２０℃で１０分間遠心分離して上清を回収した。この上清を脱脂綿でろ過後収集し、ロータリーエバポレーターを用いて、４０℃、２７０Ｔｏｒｒの条件で１時間濃縮した。得られた濃縮液を真空低温乾燥器（型式：ＤＰ−４１；ヤマト科学社製）を用いて、２０℃で１２時間、１００Ｔｏｒｒの条件で真空乾燥し、わかめ由来成分（ヘキサン抽出物）３５．３ｍｇを得た。得られた抽出物に２．５ｍＬのＤＭＳＯを加え、後述のＡＭＰＫ活性試験用サンプルとした。
【００３７】
［わかめ由来成分（エタノール抽出物）の製造］
乾燥わかめ１００ｇに２Ｌの０．１Ｍクエン酸緩衝液を加えｐＨを７．０に調整し、これにアルギン酸リアーゼ（商品名：アルギン酸リアーゼＳ；ナガセケムテックス社製）１００Ｕを加えた後、４５℃で４時間処理した。その後、得られた処理物を３０００×ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄し沈殿物を得た。この沈殿物を水１．５ｋｇに懸濁及び分散させた後、１００００Ｕのプロテアーゼ（商品名：プロテアーゼＳ「アマノ」；天野エンザイム社製）を加え、ｐＨを８．０に調整した後、７０℃にて１８時間処理した。その後３０００×ｇで５分間遠心分離し、沈殿物を回収した。この沈殿物を乾燥し、得られた乾燥物のうち１ｇに１０ｍＬの１００％エタノールを加えた混合物を３０分間超音波処理し、３０００×ｇ、２０℃で１０分間遠心分離して上清を回収した。この上清を脱脂綿でろ過後収集し、ロータリーエバポレーターを用いて、４０℃、１３０Ｔｏｒｒの条件で１時間濃縮した。得られた濃縮液を真空低温乾燥器（型式：ＤＰ−４１；ヤマト科学社製）を用いて、２０℃で１２時間、１００Ｔｏｒｒの条件で真空乾燥し、わかめ由来成分（エタノール抽出物）１２０ｍｇを得た。得られた抽出物に４ｍＬのＤＭＳＯを加え、後述のＡＭＰＫ活性試験用サンプルとした。
【００３８】
［わかめ由来ペプチドの製造］
乾燥わかめ１００ｇに２Ｌの０．１Ｍクエン酸緩衝液を加えｐＨを７．０に調整し、これにアルギン酸リアーゼ（商品名：アルギン酸リアーゼＳ；ナガセケムテックス社製）１００Ｕを加えた後、４５℃で４時間処理した。その後、得られた処理物を３０００×ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄し沈殿物を得た。この沈殿物を水１．５ｋｇに懸濁及び分散させた後、１００００Ｕのプロテアーゼ（商品名：プロテアーゼＳ「アマノ」；天野エンザイム社製）を加え、ｐＨを８．０に調製した後、７０℃にて１８時間処理した。その後３０００×ｇで５分間、遠心分離し上清を回収した。回収した上清は、限外濾過膜（商品名：Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−ＭＣ；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）で限外濾過し、透過液を回収した後、凍結乾燥機（型式：ＲＬＥ ＩＩ−１０３；共和真空技術社製）を用いて、−２０℃で１２時間、真空度２０Ｐａの条件下で凍結乾燥し、粉末状のわかめ由来ペプチド１０ｇを得た。このわかめ由来ペプチドのうち１０ｍｇに１ｍＬのＰＢＳを加え、後述のＡＭＰＫ活性試験用サンプルとした。
【００３９】
［ＡＭＰＫ活性試験］
マウス筋細胞株（Ｃ２Ｃ１２）を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように６ｗｅｌｌプレートに播種し、ＤＭＥＭ（＋１０％ＦＢＳ、＋１％抗菌剤）２ｍＬ/ｗｅｌｌを含む培養液中で３７℃、５％ＣＯ２／９５％ａｉｒの条件下で３日間培養した。その後、培養液をＤＭＥＭ（＋２％Ｃａｌｆ‐Ｓｅｒｕｍ、＋１％抗菌剤）に置換し、さらに５日間毎日培養液を交換しながら培養した。培養液を除去後、ＤＭＥＭ（−ＦＢＳ）を加えさらに２４時間培養を行った。培地を除去した後、上述した試験用サンプルを用いて（１）濃度５０μｇ／ｍＬでわかめ由来成分（ヘキサン抽出物）を含有する培地、（２）濃度５０μｇ／ｍＬでわかめ由来成分（エタノール抽出物）を含有する培地、（３）濃度１００μｇ／ｍＬでわかめ由来ペプチドを含有する培地をそれぞれ調製して各ｗｅｌｌに添加し、２４時間培養した。上記試験用サンプルの調製に用いたＰＢＳ又はＤＭＳＯのみを含有する培地を各ｗｅｌｌに添加したものをコントロールとし、同様に培養した。
【００４０】
培養液を除去後、ＰＢＳにて細胞を洗浄し細胞を回収した。１００μＬのＲＩＰＡ Ｂｕｆｆｅｒ (Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製)を添加し、超音波破砕機にてホモジナイズを行った。１４０００ｒｐｍ、４℃の条件下で１５分遠心後、上清を回収した。上清のタンパク質濃度を、Ｐｉｅｒｃｅ ６６０ｎｍ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ (商品名；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製)により測定し、タンパク質含有量が２０μｇになるように電気泳動用サンプルを調製し、当該泳動用サンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥ（１０％ゲル）に供した。
【００４１】
ＰＶＤＦ膜に転写後、ＡＭＰＫ抗体（商品名：Ｆ６ Ｍｏｕｓｅ ｍＡＢ Ｃｅｌl；Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）又はＰ−ＡＭＰＫ抗体（商品名：Ｔｈｒ１７２ Ｒａｂｂｉｔ ｍＡＢ；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）を１次抗体とし、Ａｎｔｉ−ＡＭＰＫ（商品名：Ｇｏａｔ  ａｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  ＩＲＤｙｅ  ８００ＣＷ ；ＬＩ−ＣＯＲ社製）又はＡｎｔｉ−ｐＡＭＰＫ (商品名：Ｄｏｎｋｅｙ ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ Ｊａｃｋｓｏｎ；ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏ社製)を２次抗体とし、ＡＭＰＫ又はリン酸化されたＡＭＰＫを検出した。ＡＭＰＫ活性化の度合いは、検出されたバンドの強度を画像解析ソフトウェアＩｍａｇｅＪ（アメリカ国立衛生研究所；ｈｔｔｐ：／／ｒｓｂｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ）を用いて数値化し、コントロールのＡＭＰＫリン酸度を１００とし、それに対する相対値として示した。結果を表１に示す。
【００４２】
【表１】
2018188404.tif 000002
【００４３】
表１の結果から、わかめ由来成分（ヘキサン抽出物）、わかめ由来成分（エタノール抽出物）及びわかめ由来ペプチドは、強いＡＭＰＫ活性化作用を有することがわかる。
【００４４】
［プロダクト・バイ・プロセスクレームについての不可能・非実際的事情の説明］
本願請求項１及び２は、製造方法によって物を特定するいわゆるプロダクト・バイ・プロセスクレームであるが、これら請求項に係る発明は、物の構造又は特性を特定することについて下記の通り不可能・非実際的事情が存在する。
即ち、天然物であるわかめは、水溶性多糖類であるアルギン酸やフコイダンをはじめとする炭水化物の他、蛋白質、脂質、ビタミン、ミネラル等の無機質等、多種多様の成分を含むことが知られているが、その全ては解明されていない。
そして、本願請求項１及び２に係る発明は、わかめを出発原料とし、アルギン酸の分解処理、加水分解処理による不溶性画分の回収及び有機溶媒による抽出処理を経て得られる組成物を有効成分とするものである。本願出願時における技術常識によれば、この一連の工程により得られる組成物は、フコイダンや加水分解処理では分解されない難消化性蛋白質等の高分子成分等が何種類にもわたり含まれることは推測できるものの、特にこれらの高分子成分は構造が未だ不明なものが多いことから、本願出願時においては、これら成分を分析する手法が確立しておらず、その分析は極めて困難である。また、上記組成物には、分析機器の検出限界未満の量の微量成分が含まれ、その微量成分がＡＭＰＫ活性促進作用を有していることも想定される。
以上のことから、本願請求項１及び２に係る発明は、本願出願時において物の構造又は特性を直接特定する作業を行うことが不可能であるか、又は著しく過大な経済的支出や時間を要するためおよそ実際的でない事情に該当すると考えられる。