(57)【要約】【課題】本発明は、培地への溶出物を少なくすることで、培養した細胞への悪影響を極力減らし、プレートにカバーフィルムを貼ったままでも、細胞等を培養、輸送又は保存することを可能にするプレート用カバーフィルム及び当該フィルムを用いた容器の保護方法を提供することを目的とする。【解決手段】少なくとも一方側の面において、ポリスチレンに対する密着強さが０．１〜２．０Ｎ／２５ｍｍであり、且つ、前記少なくとも一方側の面から酢酸エチルへの溶出量が２５℃において２０ｇ／ｍ２以下であることを特徴とする、プレート用カバーフィルム。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一方側の面においてポリスチレンに対する密着強さが０．１〜２．０Ｎ／２５ｍｍであり、且つ、前記少なくとも一方側の面から酢酸エチルへの溶出量が２５℃において２０ｇ／ｍ２以下であることを特徴とする、プレート用カバーフィルム。
【請求項２】
２０℃における透気度が２００秒／１００ｃｃ以下である、請求項１記載のプレート用カバーフィルム。
【請求項３】
内容物の入った容器を、前記少なくとも一方側の面が前記容器に密着する密着面であり、前記密着面を形成する密着層はスチレン−共役ジエンブロック共重合体及び／又はその水添物を５０重量％以上含むエラストマーからなる請求項１又は２に記載のプレート用カバーフィルムを用いて、保護することを特徴とする、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、培養プレートに好適に用いられるカバーフィルム及び当該フィルムを用いた容器の保護方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生物・バイオテクノロジーの分野において、細胞、スフェロイド、組織等の培養に用いられる培養プレートが広く用いられている。培養プレートを用いる際には、通常、培養プレートのウエルに細胞等の培養物と培地等を加え、ウエルを粘着性フィルムで被覆し、その後、培養プレートを細胞培養器に静置する。ときに、特許文献１では、粘着性フィルムのうちウエルに相当する部位に粘着剤を配置しないようにして、ウエル中の培養液と粘着剤との接触を抑制しようとしている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】登録実用新案第３０６３２４８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、上記従来のプレート用カバーフィルムでは、プレートと被覆のためのフィルムとの接着に粘着剤を介して行うことを前提としており、ウエル中の培養液と粘着剤との接触は避けられないという問題があり、培養液に溶出した粘着剤の一部が細胞等の培養物に悪影響を与えるおそれがあった。
【０００５】
本発明は、培地への溶出物を少なくすることで、培養した細胞への悪影響を極力減らし、プレートにカバーフィルムを貼ったままでも、細胞等を培養、輸送又は保存することを可能にするプレート用カバーフィルム及び当該フィルムを用いた容器の保護方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の要旨は以下の通りである。
［１］
少なくとも一方側の面において、ポリスチレンに対する密着強さが０．１〜２．０Ｎ／２５ｍｍであり、且つ、前記少なくとも一方側の面から酢酸エチルへの溶出量が２５℃において２０ｇ／ｍ２以下であることを特徴とする、プレート用カバーフィルム。
［２］
２０℃における透気度が２００秒／１００ｃｃ以下である、［１］に記載のプレート用カバーフィルム。
［３］
内容物の入った容器を、前記少なくとも一方側の面が前記容器に密着する密着面であり、前記密着面を形成する密着層はスチレン−共役ジエンブロック共重合体及び／又はその水添物を５０重量％以上含むエラストマーからなる［１］又は［２］に記載のプレート用カバーフィルムを用いて、保護することを特徴とする、方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、細胞等を良好な環境下で、培養、輸送又は保存することが可能なプレート用カバーフィルム及び当該フィルムを用いた容器の保護方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】（Ａ）は、本実施形態のプレート用カバーフィルムを培養プレートと共に示す斜視図である。（Ｂ）は、本実施形態のプレート用カバーフィルムの一例における、（Ａ）の線Ｉ−Ｉに沿う面により切断したときの断面図である。（Ｃ）は、本実施形態のプレート用カバーフィルムの別の例における、（Ａ）の線Ｉ−Ｉに沿う面により切断したときの断面図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明を実施するための形態（以下、「本実施形態」という。）について詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではなく、その要旨の範囲内で種々変形して実施することができる。
【００１０】
（プレート用カバーフィルム）
本実施形態のフィルムは、培養プレートに用いられ、特に、ウエルが設けられた培養プレートのウエルの全部又は一部を覆うために好適に用いられる。本実施形態のプレート用カバーフィルムは、培養プレート以外にも、細胞培養や検査に用いられる容器（例えば、ディッシュ、フラスコ等）、薬品瓶等に用いることもできる。
図１（Ａ）に、本実施形態のプレート用カバーフィルムを培養プレートと共に斜視図で示す。
【００１１】
本実施形態のプレート用カバーフィルムは、少なくとも一方側の面において、ポリスチレンに対する密着強さが０．１〜２．０Ｎ／２５ｍｍであり、且つ、上記少なくとも一方側の面から酢酸エチルへの溶出量が２５℃において２０ｇ／ｍ２以下であるものである。
【００１２】
なお、本実施形態のプレート用カバーフィルムは、
少なくとも一方側の面の１０％以上において上記範囲のポリスチレンに対する密着強さ及び上記範囲の酢酸エチルへの溶出量を備えることが好ましく、３０％以上がより好ましく、５０％以上が更に好ましく、全面（１００％）において上記範囲のポリスチレンに対する密着強さを備えることが更に好ましい。
【００１３】
また、本実施形態のプレート用カバーフィルムには、プレート用カバーフィルムの両面において、上記範囲のポリスチレンに対する密着強さ及び上記範囲の酢酸エチルへの溶出量を備えるものも含まれる。
【００１４】
本実施形態のプレート用カバーフィルムには、上記少なくとも一方側の面に接触された状態で離型シートを設けることが好ましい。
以下では、離型シートを更に含む好適形態のプレート用カバーフィルムについて例示説明する。
【００１５】
本実施形態のプレート用カバーフィルムは、１層からなるものであってもよく、複数層が積層されたものであってもよい。
以下では、プレート用カバーフィルムの面のうち培養プレートに貼り付ける側の面を密着面と称し、かかる密着面を形成する層を密着層と称することとする。
【００１６】
図１（Ｂ）に、本実施形態のプレート用カバーフィルムの一例における、（Ａ）の線Ｉ−Ｉに沿う面により切断したときの断面図を示す。
図１（Ｂ）に示す一例のフィルムは、密着層と、密着層の密着面に積層された離型シートとからなるものである。
【００１７】
より具体的には、本実施形態の一例のプレート用カバーフィルムは、密着面において、ポリスチレンに対する密着強さが０．１〜２．０Ｎ／２５ｍｍである。
培養プレートの多くはポリスチレン製であることから、本実施形態のプレート用カバーフィルムは、ポリスチレン製の板、シート又はフィルムとの密着強度を備える必要がある。
密着強さが０．１Ｎ／２５ｍｍ未満であると、内容物が入った培養プレートにプレート用カバーフィルムを密着させて培養プレートに蓋をした状態で運搬する際に、振動、衝撃によりプレート用カバーフィルムが剥がれ易く、また、プレート用カバーフィルム面が横や下になった場合に、プレート用カバーフィルムが容易に剥がれて内容物が漏れ出し易くなる。
密着強さが２．０Ｎ／２５ｍｍを超えると、培養プレートに貼り付けたプレート用カバーフィルムを剥がすのが困難になり、仮に剥がせたとしても内容物が飛び散ってしまう可能性が高い。
なお、ポリスチレンに対する密着強さは、具体的には、後述の実施例に記載の方法で測定することができる。
【００１８】
プレート用カバーフィルムを貼り付ける培養プレートの表面は、メーカーによってはエンボスや凹凸等があり必ずしも平坦ではないため、密着強さは、更に好ましくは０．２Ｎ／２５ｍｍ以上である。
また、使用者は、培養プレートを取り扱う際に、グローブボックス内等でゴム製のグローブをしている場合が多く、剥がし易さの観点からは密着強さは１．５Ｎ／２５ｍｍ以下であることが更に好ましい。
【００１９】
また、本実施形態の一例のプレート用カバーフィルムは、上記密着面から酢酸エチルへの溶出量が２５℃において２０ｇ／ｍ２以下である。
【００２０】
プレート用カバーフィルムの培養プレートに接する面（密着面）から酢酸エチルへの溶出量が２５℃において２０ｇ／ｍ２を超えるものは、溶出物により培地が汚染されやすく、細胞等への影響を無視できなくなる。
ここで、培地や細胞凍結保存液は、水、無機塩、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、更に栄養素としてグルタミン等のアミノ酸やビタミン等を含むが、これらは極微量の配合で調整される成分もあるため、外部から混入する物質は細胞に無視できない影響を与えることがある。
酢酸エチルは、通常培地や細胞凍結保存液の構成成分に含まれないものであるが、本実施形態のプレート用カバーフィルムから溶出し得る物質の量を評価するにあたり、プレート用カバーフィルムに含まれ得る粘着剤や樹脂を構成する成分がより溶出しやすい媒体を用いることが、良好な環境での培養を可能にするか否かを判断するうえで好適であるため、ここでは酢酸エチルを採用するものである。
本実施形態のプレート用カバーフィルムの酢酸エチルへの溶出量は、好ましくは１０ｇ／ｍ２以下であり、更に好ましくは５ｇ／ｍ２以下である。
なお、酢酸エチルへの溶出量は、具体的には、後述の実施例に記載の方法で測定することができる。
【００２１】
次に、本実施形態のプレート用カバーフィルムにおいて、密着面の少なくとも一部において、ポリスチレンに対する密着強さが０．１〜２．０Ｎ／２５ｍｍとし、且つ、上記密着面から酢酸エチルへの溶出量が２５℃において２０ｇ／ｍ２以下とするための好ましい態様を説明する。
【００２２】
すなわち、本実施形態の一例の培養プレート用フィルムでは、培養プレートに接する面（密着面）のＪＩＳ−Ｂ０６０１で定義される算術平均粗さ（Ｒａ）が０．０１〜０．７０μｍであることが好ましい。
また、本実施形態の一例の培養プレート用フィルムでは、培養プレートに接する面（密着面）を形成する密着層のＪＩＳ−Ｋ２１２２で定義される融解熱量（ΔＨ）が１〜４５Ｊ／ｇであることが好ましい。
【００２３】
上記Ｒａ及び／又は上記ΔＨが上記範囲にあると、本実施形態のプレート用カバーフィルムにおいて上記範囲のポリスチレンに対する密着強さ及び上記範囲の酢酸エチルへの溶出量を達成し易い。
【００２４】
密着面の算術平均粗さ（Ｒａ）は、更に好ましくは０．０１〜０．２μｍである。
密着層の融解熱量（ΔＨ）は、更に好ましくは５〜２０Ｊ／ｇである。
【００２５】
密着層は、樹脂からなるものが好ましい。
【００２６】
密着層に用いられる樹脂としては、樹脂の融解熱量（ΔＨ）が５〜２０Ｊ／ｇとなる樹脂が好ましく、また、密度が０．９１ｇ／ｃｍ３以下の低密度ポリエチレン（ベリーローデンシティポリエチレン、ウルトラローデンシティポリエチレンを含む）、エチレン−プロピレン共重合体（ランダム又はブロック共重合体）、エチレン−αオレフィン共重合体（ランダム又はブロック共重合体）、プロピレン−αオレフィン共重合体（ランダム又はブロック共重合体）、エチレン−プロピレン−αオレフィン共重合体（ランダム又はブロック共重合体）、アクリル酸−アクリル酸エステル共重合体、エチレン−スチレンランダム共重合体、ポリイソプレン、天然ゴム、スチレン−ブタジエンブロック共重合体及びその水添物、スチレン−イソプレンブロック共重合体、ポリウレタン、ポリシロキサンが好ましい。
上記樹脂の中でもＪＩＳ  Ｋ６２００で定義されている熱可塑性エラストマーが好ましい。具体的には、ポリオレフィンと通常のゴムとのブレンドからなり、かつ、ブレンド物のゴム相は架橋点がないか又はほとんどないオレフィン系熱可塑性エラストマー（ＴＰＯ）；スチレンと特定のジエンとからなる、少なくとも３ブロックの共重合体であり、かつ、両端の２個のブロック（ハードブロック）はポリスチレンであり、内部ブロック（一つ又は複数のソフトブロック）は、ポリジエン又は水素化ポリジエンからなるスチレン系熱可塑性エラストマー（ＴＰＳ）；ハードブロックはウレタン結合から、ソフトブロックはエーテル、エステル、又はカーボネート結合、若しくはそれらの混合からできており、かつ、交互にハードセグメント及びソフトセグメントからなるブロック共重合体で構成するウレタン系熱可塑性エラストマー（ＴＰＵ）がより好ましい。特にＴＰＳは、ポリスチレン及びそれ以外のプラスチック製容器との密着性に優れるので更に好ましい。
これら樹脂は、１種単独で用いてもよく、２種以上をブレンドして用いてもよい。ブレンドする場合、密着層における上記樹脂の含有量は、好ましくは５０重量％以上、更に好ましくは７５重量％以上である。尚、ブレンドの場合の樹脂の融解熱量（ΔＨ）は、ブレンド物における値をいうものとする。
【００２７】
上記樹脂のメルトフローレート（ＭＦＲ）（２３０℃、２．１２Ｎの条件）は、好ましくは１〜１００ｇ／１０ｍｉｎであり、更に好ましくは２〜５０ｇ／１０ｍｉｎである。なお、ＭＦＲは、２種以上の樹脂のブレンド物や、帯電防止剤、粘着付与剤、流動調整剤等の添加剤を混合したものにおいては、ブレンド物、混合物での値である。
【００２８】
密着層の厚みは、好ましくは１μｍ〜１ｍｍであり、より好ましくは３μｍ〜２００μｍである。密着層の厚みはプレートとの密着性に影響するので、更に好ましくは３０μｍ〜１５０μｍである。
【００２９】
離型シートは、ポリプロピレン（ＰＰ）、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）、ポリ（４−メチル−１−ペンテン）、環状ポリオレフィン（ＣＯＣ）等のポリオレフィン系樹脂、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）、ポリトリメチレンテレフタレート（ＰＴＴ）、ポリシクロヘキサンジメチレンテレフタレート（ＰＣＴ）等のポリエステル系樹脂、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリオキシメチレン（ＰＯＭ）、ポリアミド（ＰＡ）等の樹脂、紙、木、不織布、織布等のシート又はフィルム；金属又はその箔；これらにシリコーンコートやフッ素コート、粗面化処理等を行ったもの等が挙げられ、取扱い性の観点から、ポリエステル系樹脂やポリスチレン（ＰＳ）製のシート又はフィルムが好ましい。
【００３０】
離型シートのプレート用カバーフィルムの密着層に接する面のＪＩＳ−Ｂ０６０１で定義される算術平均粗さ（Ｒａ）は０．７０μｍ以下であることが好ましい。
フィルムの密着層は、いわゆるエラストマーと呼ばれる樹脂又は樹脂組成物であり柔軟であるので、フィルムを輸送や保存する際の温度、湿度、時間等の条件によっては、フィルムの密着面に離型シートの密着層に接する面の凹凸が転写されてしまうことがある。離型シートの密着層に接する面のＲａが０．７０μｍより大きい場合、上記プレート用カバーフィルムの培養プレートに接する面（密着面）のＲａが好ましい範囲から外れてしまう可能性がある。
【００３１】
本実施形態のプレート用カバーフィルムは、離型シートを取り外した状態において、ＪＩＳ−Ｐ８１１７に準拠してガーレー式デンソメーターで測定した２０℃における透気度が２００秒／１００ｃｃ以下であることが好ましい。
透気度が２００秒／１００ｃｃを超えるものは、常温で生きた細胞を培養及び輸送・保存する場合において、ウエル内の酸素濃度が低下して細胞が死滅してしまうことが懸念される。
９６ウエルよりも更にウエル数の多いマイクロプレートに対しては、更にガス透過性に優れたフィルムがより好ましく、透気度で１００秒／１００ｃｃ以下、より好ましくは６０秒／１００ｃｃ以下である。透気度が６０秒／１００ｃｃ程度のフィルムの酸素透過度は、およそ１０７ｃｃ／ｍ２・ｄａｙ・ａｔｍに相当する。
透気度は、また、好ましくは０．１秒／１００ｃｃ以上である。
透気度が０．１秒／１００ｃｃ未満である場合、通気性が良く、温度、湿度、保存期間等の条件によっては培地の成分がプレート用カバーフィルムを通してウエルから揮散して細胞が死滅してしまうことが懸念される。透気度は、更に好ましくは１０秒／１００ｃｃ以上である。
【００３２】
本実施形態において、プレート用カバーフィルムに上記透気度を備えさせるためには、（ｉ）密着層、基材層等にポリウレタンやポリシロキサン等の通気性の良い材料を利用する、（ｉｉ）無機材や溶剤等を分散させて調製した層からそれらを取り除いて通気性を持たせた、いわゆる微多孔膜を利用する、（ｉｉｉ）プレート用カバーフィルムに有孔加工を施す、ことが挙げられるが、コスト及び内部の視認性から、有孔加工が好ましい。
【００３３】
本実施形態のプレート用カバーフィルムには、上述のとおり、有孔加工により複数の孔が設けられていてもよい。
孔は、プレート用カバーフィルムの面内に均一に施されていることが好ましい。なお、孔の形状は、特に限定されることなく、丸、四角、楕円状、スリット状等であってもよい。
孔の直径は、０．１〜５００μｍであることが、孔−孔の間隔（以下、「孔のピッチ」と呼ぶ）は、０．１〜６．５ｍｍであることが、上記透気度を達成する上で、好ましい。更に、孔の直径は、０．５〜１００μｍがより好ましく、１〜３０μｍが更に好ましい。また、孔ピッチは、９６ウエルよりも更にウエル数の多いマイクロプレートを想定して、より好ましくは０．３〜４ｍｍ、更に好ましくは０．５〜３ｍｍである。
なお、孔の直径とは、開口部の内接円の直径である。
孔の直径や孔のピッチは培養する細胞に好適な環境となるように適宜調整されてよく、縦横それぞれ等間隔でウエルが設けられた９６ウエル培養プレートでウエル１個に対して少なくとも１個の孔を設ける場合、例えば、隣接する２つのウエルの中心間の距離Ｄ１（例えば、９．２ｍｍ）（図１参照）の半分（例えば、４．６ｍｍ）を孔のピッチとして有孔加工を施してもよく、また、縦横に１列ずれた２つのウエルの中心間の距離Ｄ２（例えば、１３ｍｍ）（図１参照）の半分（例えば、６．５ｍｍ）を孔のピッチとして有孔加工を施してもよい。
このような小さな孔の有孔加工には、特開２０１４−２３７８１０号公報で開示されているように、ロール表面に螺旋状の突起刃が設けられた２本のロール間に有孔加工を施したいシートを通して、微小で且つ均一ピッチに孔を設けることができる手法が好ましく適用される。
【００３４】
本実施形態のプレート用カバーフィルムには、ＥＯＧガス滅菌、紫外線滅菌、電子線滅菌、γ線滅菌等による滅菌処理を施してもよい。
【００３５】
図１（Ｃ）に、本実施形態のプレート用カバーフィルムの別の例における、（Ａ）の線Ｉ−Ｉに沿う面により切断したときの断面図を示す。
図１（Ｃ）に示す別の例のフィルムは、密着層と、密着層の密着面に積層された離型シートと、密着層の密着面とは反対側の面に積層された基材層とからなるものである。
【００３６】
本実施形態の別の例のプレート用カバーフィルムにおける密着層及び離型シートは、前述の本実施形態の一例のプレート用カバーフィルムにおける密着層及び離型シートと同様としてよい。
【００３７】
基材層に用いられる樹脂としては、ポリプロピレン（ＰＰ）、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）、ポリ（４−メチル−１−ペンテン）、環状ポリオレフィン（ＣＯＣ）等のポリオレフィン系樹脂、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）、ポリトリメチレンテレフタレート（ＰＴＴ）、ポリシクロヘキサンジメチレンテレフタレート（ＰＣＴ）等のポリエステル系樹脂、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリオキシメチレン（ＰＯＭ）、ポリアミド（ＰＡ）、ポリウレタン、ポリシロキサン等の樹脂、紙、木、不織布、織布等のシート又はフィルム；金属又はその箔；等が挙げられ、特に、ウエル内の観察を可能とし、コシを備え、透明性の高い、ポリエステル系樹脂やポリスチレン（ＰＳ）製のシート又はフィルムが好ましい。
【００３８】
基材層の厚みは、１μｍ〜１ｍｍが好ましく、より好ましくは５μｍ〜０．５ｍｍである。
【００３９】
本実施形態のプレート用カバーフィルムは、前述の密着層、基材層及び離型シート以外にその他の層を有するものであってもよい。
【００４０】
本実施形態で用いられる培養プレートとしては、その上面に１つ又は複数（例えば、６、２４、９６、３８４等）のウエルが設けられた培養プレートとしてよい。
培養プレートでは、上面のうちのウエルの開口部以外の部分が、同一平面上に位置していることが、培養プレートと本実施形態のフィルムとの接着性を高める観点から、好ましい。
【００４１】
本実施形態のプレート用カバーフィルムの平面視形状としては、特に限定されることなく、円形、楕円形、矩形等が挙げられ、通常、矩形としてよい。矩形は、角に丸みを帯びていてもよい。
【００４２】
培養プレートの少なくとも上面及びウエル表面を形成する材料としては、樹脂組成物であることが好ましく、樹脂と必要に応じて他の添加剤とを含むことが好ましい。
樹脂としては、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリブテン、ポリカーボネート、ポリ（４−メチル−１−ペンテン）等が挙げられる。
【００４３】
（フィルムを用いて内容物の入った容器を保護する方法）
本実施形態のプレート用カバーフィルムは、内容物の入った容器を、少なくとも一方側の面が前記容器に密着する密着面であり、前記密着面を形成する密着層はスチレン−共役ジエンブロック共重合体及び／又はその水添物を５０重量％以上含むエラストマーからなる本実施形態のプレート用カバーフィルムを用いて、保護することを特徴とする、方法に、用いることができる。
【００４４】
本実施形態の容器としては、例えば、本実施形態のプレート用カバーフィルムを好適に用いることができる上述の培養プレート、ディッシュ、フラスコ等が挙げられる。特に、９６ウエル培養プレートや９６ウエルよりも更にウエル数の多いマイクロプレート等の多孔プレートに対して、本実施形態の方法は好適に用いられる。
本実施形態の容器の内容物としては、例えば、培養液、細胞凍結保存液、細胞、スフェロイド、組織等が挙げられる。
【００４５】
本実施形態のプレート用カバーフィルムの密着層を構成するエラストマーは、スチレン−共役ジエンブロック共重合体及び／又はその水添物を５０重量％以上含み、密着性の観点から、好ましくは７０重量％以上、更に好ましくは７５重量％以上である。
【００４６】
本実施形態のプレート用カバーフィルムは、密着面の１０％以上において、０．１〜２．０Ｎ／２５ｍｍのポリスチレンに対する密着強さ及び２５℃において２０ｇ／ｍ２以下である酢酸エチルへの溶出量を備えることが好ましく、３０％以上がより好ましく、５０％以上が更に好ましく、全面（１００％）において上記範囲のポリスチレンに対する密着強さを備えることが更に好ましい。
【００４７】
また、本実施形態のプレート用カバーフィルムには、フィルムの両面において、上記範囲のポリスチレンに対する密着強さ及び上記範囲の酢酸エチルへの溶出量を備えるものも含まれる。
【００４８】
本実施形態のプレート用カバーフィルムは、１層からなるものであってもよく、複数層が積層されたものであってもよい。
【００４９】
本実施形態の容器を保護する方法としては、例えばハンドローラー等を用いて、内容物の入った容器の開口部を覆うように、フィルムの密着面を容器に貼り付けることにより、行うことができる。
【実施例】
【００５０】
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明は下記の実施例に何ら限定されるものではない。
【００５１】
実施例及び比較例で使用した材料は以下の通りである。
【００５２】
（１）密着層用樹脂
・エラストマー１：三菱化学株式会社製ゼラス（登録商標）ＭＣ７１９
ＭＦＲ（２３０℃；２１．２Ｎ）＝３ｇ／１０ｍｉｎ、密度＝０．８９ｇ／ｃｍ３、融点＝１５７℃、ΔＨ＝１５Ｊ／ｇ
・エラストマー２：三菱化学株式会社製ゼラス７０５５
ＭＦＲ（２３０℃；２１．２Ｎ）＝７ｇ／１０ｍｉｎ、密度＝０．８９ｇ／ｃｍ３、融点＝１６４℃、ΔＨ＝６１Ｊ／ｇ
・エラストマー３：旭化成株式会社製タフテック（登録商標）Ｈ１２２１Ｗ
ＭＦＲ（２３０℃；２１．２Ｎ）＝４．５ｇ／１０ｍｉｎ、密度＝０．８９ｇ／ｃｍ３、融点＝１１６℃、ΔＨ＝０．５Ｊ／ｇ
・エラストマー４：旭化成株式会社製タフテックＬ５２１Ｗ
ＭＦＲ（２３０℃；２１．２Ｎ）＝１５ｇ／１０ｍｉｎ、密度＝０．８９ｇ／ｃｍ３、融点＝１０３℃、ΔＨ＝０．８Ｊ／ｇ
・ＰＰ：日本ポリプロ株式会社製ウィンテック（登録商標）ＷＦＸ４Ｍ
ＭＦＲ（２３０℃；２１．２Ｎ）＝７ｇ／１０ｍｉｎ、密度＝０．９ｇ／ｃｍ３、融点＝１２５℃、ΔＨ＝７２Ｊ／ｇ
（２）基材層用フィルム
・ＰＥＴ１
厚みが５０μｍで貼り合わせ面にコロナ処理が施された東レ株式会社製ポリエチレンテレフタレートフィルム：ルミラー（登録商標）Ｔ６０
（３）離型シート
・離型シート１
厚みが７５μｍで貼り合わせ面にシリコーン加工が施された東レフィルム加工株式会社製ポリエチレンテレフタレートフィルム；セラピール（登録商標）ＭＦＡ。下記で示す方法で測定したＲａは０．０１９μｍ。
・離型シート２
マット加工が施された厚みが７５μｍの東レ株式会社ポリエチレンテレフタレートフィルム；ルミマット（登録商標）＃３００トレス。下記で示す方法で測定したＲａが０．７５μｍ。
（４）粘着剤
アクリル酸エステル樹脂を主成分とするエマルジョンタイプの粘着剤である綜研化学株式会社製ＳＫダイン（登録商標）Ｅ−４１０５
（５）培養プレート
・住友ベークライト株式会社製ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅ（登録商標）９６Ｕ  ＭＳ−９０９６Ｕ（９６ウエルプレート）
【００５３】
実施例及び比較例で用いた分析方法及び評価方法は以下の通りである。
【００５４】
（Ａ）ポリスチレンに対する密着強さ
後述の実施例及び比較例で作製した培養プレート用フィルムについて、下記の条件でポリスチレンに対する密着強さ（Ｎ／２５ｍｍ）を測定した。
・ポリスチレン：厚みが５０μｍの旭化成株式会社製ＯＰＳフィルムＧＭＣＯ
・測定機：株式会社オリエンテック製テンシロン万能試験機ＲＴＣ−１２１０Ａ
・測定環境：２３℃、５０％ＲＨ
・試験片サイズ：２５ｍｍ幅×１００ｍｍ長さ
・測定条件：９０°剥離（剥離速度５０ｍｍ／ｍｉｎ）
・前処理：ポリスチレンフィルムの表面を清浄なガーゼで拭いた後、プレート用カバーフィルムの貼り付け面を重ね、０．１ＭＰａの圧力を掛けて貼り付けた後、３０分調湿して用いた。
【００５５】
（Ｂ）酢酸エチルへの溶出量
後述の実施例及び比較例で作製した培養プレート用フィルムについて、下記の条件で密着面から酢酸エチルへの溶出量（ｇ／ｍ２）を測定した。
内径８０ｍｍの東京硝子器械株式会社製ガラスシャーレの重量を、エーアンドデイ株式会社製電子天秤ＨＭ−２００型にて測定し記録した後、和光純薬工業株式会社製酢酸エチル（純度９９．９％）４０ｍＬを入れてプレート用カバーフィルムを被せ、更に同口径のガラスシャーレで蓋をして固定した。その後、２５℃において、ヤマト科学株式会社製振とう器ＭＫ１６１で６０ｒｐｍの速度で６０分間振とうしてから蓋及びプレート用カバーフィルムを剥がし、液の入ったシャーレをヤマト科学株式会社製逆風定温恒温器ＤＫ−４００にて８０℃×６０分間乾燥させた。次に恒温器から取り出したガラスシャーレの重量を前記電子天秤にて測定し、予め測定しておいたガラスシャーレ単体との重量差を求め、出た値をガラスシャーレの口径から平米換算して溶出量を求めた。
【００５６】
（Ｃ）算術平均粗さ（Ｒａ）
後述の実施例及び比較例で作製した培養プレート用フィルムについて、ＪＩＳ−Ｂ０６０１に準拠して下記の条件で密着面の算術平均粗さ（Ｒａ）（μｍ）を測定した。
・測定機：株式会社東京精密計測社製  ＡＣＣＲＥＴＥＣＨ  ＳＵＲＦＣＯＭ  １４００Ｄ−３ＤＦ
・測定環境：２０℃±１℃、６０％ＲＨ
・触針：先端２μｍ、θ＝６０°
【００５７】
（Ｄ）融解熱量（ΔＨ）
後述の実施例及び比較例で作製した培養プレート用フィルムについて、ＪＩＳ−Ｋ２１２２に準拠して下記の条件で密着層の融解熱量（ΔＨ）（Ｊ／ｇ）を測定した。
・試験片：密着層から、カッター等を利用してサンプル２．５ｍｇを採取し、測定に用いた。
・測定装置：ティー・エイ・インスツルメント・ジャパン株式会社製示差走査熱量計ＤＳＣＱ−１００
・測定条件：−６０℃から１０℃／ｍｉｎで昇温し、１８０℃にて２分間保持し、１０℃／ｍｉｎで−６０℃まで冷却した後、再び１０℃／ｍｉｎで１８０℃まで昇温し、その時の融解熱量を求めた。
【００５８】
（Ｅ）耐漏れ性
後述の実施例及び比較例で作製した培養プレート用フィルムについて、下記の条件で耐漏れ性を評価した。
・評価方法：培養プレートの各ウエルに精製水１００μＬを入れ、ハンドローラーを用いて０．１ＭＰａの圧力でプレート用カバーフィルムを貼り付けた後、プレートを水平に持ち、手で振って液漏れの有無を肉眼で確認した（評価１）。液漏れのない検体は更に、日本フリーザー株式会社製フリーズ超低温槽ＣＬＮ−３２ＵＷ型を用いて、−８０℃下で５日間保存し剥離状況を肉眼で確認した（評価２）。
・評価基準
◎：評価２でも剥がれがなかった
○：評価１で液漏れは発生していなかった
△：評価１でプレート用カバーフィルムが一部剥離し液漏れが発生していた
×：プレート用カバーフィルムが剥がれ、液漏れが発生
【００５９】
（Ｆ）剥がし易さ
後述の実施例及び比較例で作製した培養プレート用フィルムについて、下記の条件で剥がし易さを評価した。
・評価方法：培養プレートの各ウエルに精製水１００μＬを入れ、ハンドローラーを用いて０．１ＭＰａの圧力でプレート用カバーフィルムを貼り付けた後、川西工業株式会社製ニトリル極薄手袋を装着した状態でカバーフィルムを剥がし、剥離状況を確認した。
・評価基準：
○：液の飛散なしにプレートからプレート用カバーフィルムが剥がせた
△：剥がせたが力が掛かり、液が飛散した
×：剥がせなかった
【００６０】
（Ｇ）培地への溶出性
後述の実施例及び比較例で作製した培養プレート用フィルムについて、下記の条件で培地への溶出性を評価した。
・培地：極東製薬工業株式会社製凍結保存用培地ＦＭ−１
組成（１Ｌ中）
イーグルＭＥＭ培地：９．４ｇ
メチルセルロース：２．０ｇ
ジメチルスルホキシド：２００ｍＬ
Ｌ−グルタミン：０．３ｇ
炭酸水素ナトリウム：１．０ｇ
純水：８００ｍＬ
・評価方法：培養プレートの各ウエルに１００μＬの培養液を入れた後、ハンドローラーを用いて０．１ＭＰａの圧力でプレート用カバーフィルムを貼り付けた。その後、プレート用カバーフィルム貼付面に培養液が付着するよう振とうし、２５℃下で７日間静置した。期間経過後、プレート用カバーフィルムを貼ったまま検体注入針を差し、ウエル中の培養液の成分を株式会社島津製作所製液体クロマトグラフ質量分析計ＬＣＭＳ−８０６０により分析した。
・評価基準
◎：溶出物の総量が１０μｇ／１００μＬ未満
○：溶出物の総量が１０μｇ／１００μＬ以上、５０μｇ／１００μＬ未満
△：溶出物の総量が５０μｇ／１００μＬ以上、１００μｇ／１００μＬ未満
×：溶出物の総量が１００μｇ／１００μＬ以上
【００６１】
（Ｈ）孔の直径及び孔のピッチ
後述の実施例及び比較例で作製した有孔加工を施した培養プレート用フィルムについて、その孔の直径（μｍ）及び孔のピッチ（ｍｍ）をキーエンス製デジタルマイクロスコープＶＨＸ−１０００及びその測定ソフトを使用して測定した。測定倍率は、孔の直径や孔のピッチに応じて適宜選択した。
【００６２】
（Ｉ）透気度
後述の実施例及び比較例で作製した培養プレート用フィルムについて、その透気度（秒／１００ｃｃ）を安田精機製作所製デンソメーターでＪＩＳ−Ｐ８１１７に準拠して２０℃で測定した。
【００６３】
（Ｊ）細胞塊のサイズ及び細胞の生存率
後述の実施例及び比較例で作製した培養プレート用フィルムを用いて細胞培養を行い、キーエンス製デジタルマイクロスコープＶＨＸ−１０００にて、細胞塊のサイズ及び細胞の生存率を算出した。
【００６４】
その他の諸元は表１に記載の通りとした。
【００６５】
（試験例Ａ）
シリンダー径（Ｄ）が９０ｍｍでＬ／Ｄ＝３５の押出機を用いてエラストマー１を熱溶融し、幅１０００ｍｍのＴ−ダイから樹脂温２８０℃、厚みが８０μｍになるように押出し、密着層を得た。密着層の片面に、表面温度が１５℃のキャスティングロールとゴム製バックアップロールとの間で、離型シート１を積層させて、積層体を引き取った。
次に、積層体の密着層の表面にポリウレタン系接着剤を用いて基材層を貼り合わせ、これを７９ｍｍ×１２０ｍｍに断裁した（実施例１）
一方、基材層の片面に粘着剤を乾燥後塗布量が２２ｇ／ｍ２になるようにバーコーターで塗布して、８５℃で３分乾燥し、室温で５分放置した。その後、基材層のもう一方の面に離型シート１を重ね合わせ、これを７９ｍｍ×１２０ｍｍに断裁した（比較例１）。
上記、本発明のプレート用カバーフィルムである実施例１と従来品を模した粘着剤を使用した比較例１の評価結果を表１にまとめて示した。
【００６６】
【表１】
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表１において、実施例１は耐漏れ性、剥がし易さ、低溶出性全てにおいて優れていた。一方、比較例１は粘着剤（ΔＨ≒０Ｊ／ｇ）が溶出して低溶出性が著しく劣っていたほか、実施例１に比べ、低温での耐漏れ性と剥がし易さで劣っていた。
【００６７】
（試験例Ｂ）
実施例２は密着層としてＰＰとエラストマー３を重量比で５０：５０に二軸押出機にて溶融ブレンドした組成物を利用したもの、実施例３は密着層としてＰＰとエラストマー４を重量比で２５：７５に二軸押出機にて溶融ブレンドした組成物を利用したもの、比較例２は密着層としてエラストマー２を利用した外は試験例Ａの実施例１と同様な操作を繰り返した。
また、離型シート１を離型シート２に換えたこと以外は実施例３と同様な操作を繰り返した（比較例３）。
実施例２、３、比較例２、３の評価結果をまとめて表２に示した。
【００６８】
【表２】
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【００６９】
本発明のプレート用カバーフィルムである実施例２、実施例３については、評価が良好であった。
一方、比較例２は、ΔＨが６１Ｊ／ｇと高く、ポリスチレンとの密着性が弱く、従って耐漏れ性に劣っていた。
また、比較例３は、Ｒａが０．７５μｍと大きく、比較例２と同様に、耐漏れ性に劣っていた。
【００７０】
（試験例Ｃ）
特開２０１４−２３７８１０号公報を参考にして、ロール直径が５５ｍｍで長さが５５ｍｍの金属製ロールに刃幅１０μｍでピッチ２ｍｍの螺旋状の刃を彫刻した２本のロール間に試験例Ａの実施例１のプレート用フィルムを通して、直径が１０μｍでピッチが２ｍｍの孔を設けた（実施例４）。当該プレート用カバーフィルムの透気度は２００秒／１００ｃｃであった。
試験例Ａの比較例１のプレート用カバーフィルム、培養プレートとセットで販売されている蓋（従来例）もこの試験例にて使用した。
培地として、シグマアルドリッチジャパン株式会社製ＤＭＥＭにコスモバイオ株式会社製ウシ胎児血清（ＦＢＳ）１０％と抗生物質とを添加したものを用い、複数の培養プレートにヒト線繊維芽細胞を播種して、室温にて２日間放置した。
準備した細胞培養中の培養プレートを３つの群に分けて、その内の１つには実施例４のプレート用カバーフィルムで蓋をし、もう１群には比較例１のプレート用カバーフィルムで培養プレートに蓋をした。上記２群は、室温に調整した搬送用容器に入れて２４時間放置した。残りの１群には、従来例の蓋で蓋をして、ＣＯ２インキュベーターにて２４時間細胞培養を行った（コントロール条件）。
これら３つの群の細胞塊（スフェロイド）を上記マイクロスコープで観察したところ、従来例の蓋で蓋をしたもの及び実施例４のプレート用カバーフィルムで蓋をしたものは、同様にスフェロイドの直径が７００μｍであったが、比較例１のプレート用カバーフィルムで蓋をしたものは、スフェロイドの直径が７５０μｍであった。従来例及び実施例４と比較して比較例１においてスフェロイドの凝集力が弱い結果となった。
また、細胞の生存率についても、従来例の蓋で蓋をしたものが９７．６％であるのに対し、実施例４のプレート用カバーフィルムで蓋をしたものは９７．５％であった。実施例４では、若干細胞の呼吸が苦しい環境となるように見受けられたが、従来例と比較して遜色ない生存率を示した。また、実施例４のプレート用カバーフィルムで蓋をしたものについては、更に１日保存した後培養プレートから取り出したスフェロイドであっても問題なく臓器を作製することができた。
【００７１】
以上のことから、本発明のプレート用カバーフィルムは、プレートにカバーフィルムを貼ったままでもウエル内の培養環境を維持することができ、培養、輸送、保存まで一連の工程に利用可能であることが分かった。
【産業上の利用可能性】
【００７２】
本発明によれば、培地への溶出物を少なくすることで、培養した細胞への悪影響を極力減らし、プレートにカバーフィルムを貼ったままでも、細胞等を培養、輸送又は保存することが可能となる。更には、本発明によれば、フィルムの通気性を高めることで、細胞等をより良好な環境下で培養等することが可能となる。
本発明のプレート用カバーフィルムは、ウエルで、細胞、スフェロイド、組織、臓器等を培養、輸送又は保存している培養プレートを覆うために好適に用いられる。
なお、本発明のプレート用カバーフィルムは、培養プレートのみならずディッシュ（シャーレ）やフラスコにも利用することができる。
【図１】
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