(57)【要約】      （修正有）【課題】超ウラン放射性核種に暴露された肝臓および骨などの組織に、超ウラン放射性核種が固定される前にキレートし、汚染された個人からそれらの排泄を高める方法の提供。【解決手段】本発明は、ジエチレントリアミン五酢酸三ナトリウム（ＤＴＰＡ）ジエチルエステル、さらに、ＤＴＰＡジエチルエステルを含む組成物およびそれを使用する方法に関する。【選択図】図１
2018188459.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
図６Ａに示されるものと実質的に同じ粉末ｘ線回折パターン、ならびに／または約７．
６、１２．４，１３．５、１４．０、１５．３、１８．１、１８．７、１８．８、２１．
０、２２．５、２３．４、２４．５，２８．７、および３５．７±０．２度の２シータに
ピークを有する粉末ｘ線回折パターンにより特徴付けられる、６，９−ビス（カルボキシ
メチル）−３−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１１−オキソ−１２−オキサ−３
，６，９−トリアザテトラデカン−１−オイック酸の多形体。
【請求項２】
約１１０℃から約１２１℃の融点を有するとさらに特徴付けられる、請求項１に記載の
多形体。
【請求項３】
６，９−ビス（カルボキシメチル）−３−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１１
−オキソ−１２−オキサ−３，６，９−トリアザテトラデカン−１−オイック酸の多形体
を調製する方法であって、
（ａ）ＤＴＰＡビス無水物、エタノール、およびピリジンを混ぜ合わせて、反応混合物
を形成する工程と、
（ｂ）前記反応混合物を窒素下で約２４時間撹拌する工程と、
（ｃ）前記反応混合物をジクロロメタンに添加して、ジクロロメタン溶液を形成する工
程と、
（ｄ）前記ジクロロメタン溶液を約−２０℃の温度に冷却して、６，９−ビス（カルボ
キシメチル）−３−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１１−オキソ−１２−オキサ
−３，６，９−トリアザテトラデカン−１−オイック酸の多形体の沈殿物を形成する工程
と、
（ｅ）前記ジクロロメタン溶液を濾過して、前記沈殿物を得る工程と、
（ｆ）任意選択的に、前記濾過する工程の間に前記沈殿物をジクロロメタンで洗浄する
工程と、
（ｇ）任意選択的に、前記沈殿物を乾燥させて、前記多形体を得る工程と
を含む方法。
【請求項４】
対象を、前記対象から放射性元素を除去するために処置する方法であって、
治療有効量の請求項１〜３のいずれか１項に記載の多形体を対象に投与する工程を含む
、方法。
【請求項５】
前記投与する工程が、前記対象の全体重の１キログラム当たり約１ｍｇから約２，００
０ｍｇの多形体を前記対象に送達する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記投与する工程が、前記対象の放射性元素への暴露前に行われる、請求項４または５
に記載の方法。
【請求項７】
前記投与する工程が、前記対象の組織、臓器、骨、またはそれらの任意の組合せ中への
放射性元素の取り込みを予防するために行われる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記投与する工程が、前記対象の放射性元素への暴露後に行われる、請求項４から７の
いずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記投与する工程が、前記対象から放射性元素を除去するために行われる、請求項４か
ら８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記放射性元素が、プルトニウム（Ｐｕ）、アメリシウム（Ａｍ）、キュリウム（Ｃｍ
）、またはそれらの任意の組合せの同位元素を含む、請求項４から９のいずれか１項に記
載の方法。
【請求項１１】
前記対象が哺乳類である、請求項４から１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記対象がヒトである、請求項４から１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
図６Ｄに示されるものと実質的に同じ粉末ｘ線回折パターン、ならびに／または約８．
１、１２．０、１３．８、１５．４、１６．０、１６．６、１８．３、１９．３、２１．
４、２２．１、２４．０、２６．５、および２９．２±０．２度の２シータにピークを有
する粉末ｘ線回折パターンにより特徴付けられる、６，９−ビス（カルボキシメチル）−
３−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１１−オキソ−１２−オキサ−３，６，９−
トリアザテトラデカン−１−オイック酸の多形体。
【請求項１４】
約１３３℃から約１４１℃の範囲で融点を有するとさらに特徴付けられる、請求項１３
に記載の多形体。
【請求項１５】
６，９−ビス（カルボキシメチル）−３−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１１
−オキソ−１２−オキサ−３，６，９−トリアザテトラデカン−１−オイック酸の多形体
を調製する方法であって、
（ａ）ＤＴＰＡビス無水物および無水エタノールを混ぜ合わせて、反応混合物を形成す
る工程と、
（ｂ）前記反応混合物を加熱して、撹拌しながら約１．５時間還流させる工程と、
（ｃ）前記反応混合物を濾過して、濾液を形成する工程と、
（ｄ）前記濾液を約２０℃未満の温度に冷却して、６，９−ビス（カルボキシメチル）
−３−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１１−オキソ−１２−オキサ−３，６，９
−トリアザテトラデカン−１−オイック酸の多形体の沈殿物を形成する工程と、
（ｅ）前記濾液を濾過して、前記沈殿物を得る工程と、
（ｆ）任意選択的に、前記沈殿物を冷エタノールで洗浄する工程と、
（ｇ）任意選択的に、前記沈殿物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで洗浄して、濾過
ケーキを形成する工程と、
（ｈ）任意選択的に、前記濾過ケーキをエタノールと混合して、第２のスラリーを形成
する工程と、
（ｉ）任意選択的に、前記第２のスラリーを約７０℃の温度に加熱する工程と、
（ｊ）任意選択的に、前記第２のスラリーを濾過して、第２の濾液を形成する工程と、
（ｋ）任意選択的に、前記第２の濾液を約２０℃未満の温度に冷却して、第２の沈殿物
を形成する工程と、
（ｌ）任意選択的に、前記第２の濾液を濾過して、前記第２の沈殿物を得る工程と、
（ｍ）任意選択的に、前記沈殿物を乾燥させて、前記多形体を得る工程と
を含む方法。
【請求項１６】
対象を、前記対象から放射性元素を除去するために処置する方法であって、
治療有効量の請求項１３から１５のいずれか１項に記載の多形体を対象に投与する工程
を含む、方法。
【請求項１７】
前記投与する工程が、前記対象の全体重の１キログラム当たり約１ｍｇから約２，００
０ｍｇの多形体を前記対象に送達する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記投与する工程が、前記対象の放射性元素への暴露前に行われる、請求項１６または
１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記投与する工程が、前記対象の組織、臓器、骨、またはそれらの任意の組合せ中への
放射性元素の取り込みを予防するために行われる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記投与する工程が、前記対象の放射性元素への暴露後に行われる、請求項１６から１
９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記投与する工程が、前記対象から放射性元素を除去するために行われる、請求項１６
から２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記放射性元素が、プルトニウム（Ｐｕ）、アメリシウム（Ａｍ）、キュリウム（Ｃｍ
）、またはそれらの任意の組合せの同位元素を含む、請求項１６から２１のいずれか１項
に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象が哺乳類である、請求項１６から２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記対象がヒトである、請求項１６から２３のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願データ］
本出願は、２０１２年１１月２６日に出願された米国仮特許出願第６１／７２９，７８
０号の利益およびそれからの優先権を主張し、その開示はその全体が参照により本明細書
に組み込まれる。
【０００２】
［連邦支援の陳述］
本発明は、米国国立衛生研究所により与えられた助成金番号ＨＨＳＮ２７２２０１００
００３０Ｃの下で政府の支援を受けて行われた。米国政府は、本発明に対して一定の権利
を有する。
【０００３】
［発明の分野］
本発明は、ジエチレントリアミン五酢酸三ナトリウム（ＤＴＰＡ）ジエチルエステルに
関する。本発明はさらに、ＤＴＰＡジエチルエステルを含む組成物およびそれを使用する
方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
米国および多くの他の国は、一般市民に対する大量破壊の兵器の使用に関してテロリス
トグループからの増大する脅威に直面している。特に懸念されるのは、これらのグループ
の一部が、核および放射能の兵器を獲得および開発する努力を強めており、核テロの犠牲
者に提供され得る治療の数は限られていることである。現在、アメリシウム、キュリウム
およびプルトニウムに対するキレート剤として米国食品薬品局（ＦＤＡ）により認可され
ている唯一の薬剤は、ジエチレントリアミン五酢酸三ナトリウム（ＤＴＰＡ）のカルシウ
ム塩および亜鉛塩である。超ウラン放射性核種（すなわち、９２以上の原子番号を有する
もの）、例えば、アメリシウム、キュリウムおよびプルトニウムは、放射線飛散デバイス
（ＲＤＤ；「ダーティボム（ｄｉｒｔｙ  ｂｏｍｂｓ）」）に潜在的に組み込むことがで
きる。超ウラン放射性核種に暴露されたものを治療する際の第一目的は、肝臓および骨な
どの組織に固定される前に超ウラン放射性核種にキレートし、汚染された個人からそれら
の排泄を高めることである。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の第１の態様は、図６Ａに示されるものと実質的に同じ粉末ｘ線回折パターン、
ならびに／または約７．６、１２．４，１３．５、１４．０、１５．３、１８．１、１８
．７、１８．８、２１．０、２２．５、２３．４、２４．５，２８．７、および３５．７
±０．２度の２シータにピークを有する粉末ｘ線回折パターンにより特徴付けられる、６
，９−ビス（カルボキシメチル）−３−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１１−オ
キソ−１２−オキサ−３，６，９−トリアザテトラデカン−１−オイック酸の多形体であ
る。
【０００６】
本発明のさらなる態様は、６，９−ビス（カルボキシメチル）−３−（２−エトキシ−
２−オキソエチル）−１１−オキソ−１２−オキサ−３，６，９−トリアザテトラデカン
−１−オイック酸の多形体を調製する方法であって、
（ａ）ＤＴＰＡビス無水物、エタノール、およびピリジンを混ぜ合わせて、反応混合物
を形成する工程と、
（ｂ）反応混合物を窒素下で約２４時間撹拌する工程と、
（ｃ）反応混合物をジクロロメタンに添加して、ジクロロメタン溶液を形成する工程と
、
（ｄ）ジクロロメタン溶液を約−２０℃の温度に冷却して、６，９−ビス（カルボキシ
メチル）−３−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１１−オキソ−１２−オキサ−３
，６，９−トリアザテトラデカン−１−オイック酸の多形体の沈殿物を形成する工程と、
（ｅ）ジクロロメタン溶液を濾過して、沈殿物を得る工程と、
（ｆ）任意選択的に、濾過する工程の間に沈殿物をジクロロメタンで洗浄する工程と、
（ｇ）任意選択的に、沈殿物を乾燥させ、それにより、多形体を得る工程と
を含む方法である。
【０００７】
本発明の別の態様は、図６Ｄに示されるものと実質的に同じ粉末ｘ線回折パターン、な
らびに／または約８．１、１２．０、１３．８、１５．４、１６．０、１６．６、１８．
３、１９．３、２１．４、２２．１、２４．０、２６．５、および２９．２±０．２度の
２シータにピークを有する粉末ｘ線回折パターンにより特徴付けられる、６，９−ビス（
カルボキシメチル）−３−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１１−オキソ−１２−
オキサ−３，６，９−トリアザテトラデカン−１−オイック酸の多形体である。
【０００８】
本発明の別の態様は、６，９−ビス（カルボキシメチル）−３−（２−エトキシ−２−
オキソエチル）−１１−オキソ−１２−オキサ−３，６，９−トリアザテトラデカン−１
−オイック酸の多形体を調製する方法であって、
（ａ）ＤＴＰＡビス無水物および無水エタノールを混ぜ合わせて、反応混合物を形成す
る工程と、
（ｂ）反応混合物を加熱して、撹拌しながら約１．５時間還流させる工程と、
（ｃ）反応混合物を濾過して、濾液を形成する工程と、
（ｄ）濾液を約２０℃未満の温度に冷却して、６，９−ビス（カルボキシメチル）−３
−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１１−オキソ−１２−オキサ−３，６，９−ト
リアザテトラデカン−１−オイック酸の多形体の沈殿物を形成する工程と、
（ｅ）濾液を濾過して、沈殿物を得る工程と、
（ｆ）任意選択的に、沈殿物を冷エタノールで洗浄する工程と、
（ｇ）任意選択的に、沈殿物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで洗浄して、濾過ケー
キを形成する工程と、
（ｈ）任意選択的に、濾過ケーキをエタノールと混合して、第２のスラリーを形成する
工程と、
（ｉ）任意選択的に、第２のスラリーを約７０℃の温度に加熱する工程と、
（ｊ）任意選択的に、第２のスラリーを濾過して、第２の濾液を形成する工程と、
（ｋ）任意選択的に、第２の濾液を約２０℃未満の温度に冷却して、第２の沈殿物を形
成する工程と、
（ｌ）任意選択的に、第２の濾液を濾過して、第２の沈殿物を得る工程と、
（ｍ）任意選択的に、沈殿物を乾燥させ、それにより、多形体を得る工程と
を含む方法である。
【０００９】
本発明のさらなる態様は、対象を処置して、対象から放射性元素および／または非放射
性元素を除去する方法であって、治療有効量の本発明の多形体を対象に投与する工程を含
む方法である。
【００１０】
本発明のこれらのおよび他の態様は、以下の本発明の説明においてより詳細に示される
。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】Ｃ２Ｅ２のための合成スキームを示す図である。
【図２】ロット０５０からのＣ２Ｅ２を含有する投与溶液であって、左から右に２０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬおよび１００ｍｇ／ｍＬのＣ２Ｅ２投与溶液の試料を示す図である。
【図３】Ｃ２Ｅ２調製物についての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）データを示す図である。
【図４】Ｃ２Ｅ２のバッチの両方について得られた熱重量データの比較を示す図である。方法１は点線であり、方法２は実線である。
【図５】誘導結合プラズマ質量分析（ＩＣＰ−ＭＳ）により検出されたＣ２Ｅ２調製物中の金属イオンの濃度のグラフを示す図である。
【図６】Ｃ２Ｅ２調製物、すなわち、Ａ）参照標準；Ｂ）ＭＴＤロット；Ｃ）ロット００５−２；Ｄ）ロット０５０；およびＥ）ＸＲＤパターンＡ〜Ｄの比較についてのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンを示す図である。
【図７】Ａ）参照標準およびＢ）ＭＴＤロットについてＸＲＤパターンのオーバーレイを示す図である。
【図８】Ｃ）ロット００５−２およびＤ）ロット０５０についてＸＲＤパターンのオーバーレイを示す図である。
【図９】Ｃ２Ｅ２調製物の走査電子顕微鏡写真を示す図である。左：Ｃ２Ｅ２  ＭＴＤロット；右：Ｃ２Ｅ２ロット０５０。
【図１０】ロット０５０のＣ２Ｅ２のクロマトグラムを示す図である。
【図１１】水から生成したＣ２Ｅ２結晶のクロマトグラムを示す図である。
【図１２】エタノール中１時間の加熱からのＣ２Ｅ２固体物質のクロマトグラムを示す図である。
【図１３】エタノール中１時間の加熱からのＣ２Ｅ２濾液のクロマトグラムを示す図である。
【図１４】頂端区画から側底区画への２時間にわたるＣ２Ｅ２の累積輸送を示す図である。誤差バーは、９５％信頼区間を表す。
【図１５】Ｃ２Ｅ２の濃度増加におけるフラックスの変化を示す図である。誤差バーは、９５％信頼区間を表す。
【図１６】Ｃ２Ｅ２の濃度増加による見掛け透過係数の変化を示す図である。誤差バーは、９５％の信頼区間を表す。
【図１７】雄スプレーグドーリーラットにおける１日２４１Ａｍクリアランスを示す図である。
【図１８】雌スプレーグドーリーラットにおける１日２４１Ａｍクリアランスを示す図である。
【図１９】汚染７日後の雄および雌のスプレーグドーリーラットにおける総２４１Ａｍ体外除去を示す総体外除去（ｔｏｔａｌ  ｄｅｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）Ｃ２Ｅ２用量応答曲線を示す図である。
【図２０】汚染７日後の雄および雌のスプレーグドーリーラットにおける２４１Ａｍ肝臓負荷量を示す肝臓負荷量Ｃ２Ｅ２用量応答曲線を示す図である。
【図２１】汚染７日後の雄および雌のスプレーグドーリーラットにおける２４１Ａｍ肝臓負荷量を示す骨格負荷量Ｃ２Ｅ２用量応答曲線を示す図である。
【図２２】雄および雌のスプレーグドーリーラットの創傷部位での２４１Ａｍ含有量を示す創傷部位負荷量Ｃ２Ｅ２用量応答曲線を示す図である。
【図２３Ａ】吸入暴露による２４１Ａｍの投与後のイヌにおける１日当たり尿中２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２３Ｂ】吸入暴露による２４１Ａｍの投与後のイヌにおける１日当たり糞中２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２４Ａ】２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後にＣ２Ｅ２の異なる用量を投与されたイヌの累積的尿排泄についての２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２４Ｂ】２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後にＣ２Ｅ２の異なる用量を投与されたイヌの累積的糞排泄についての２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２５Ａ】２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後にＣ２Ｅ２の異なる用量を投与されたイヌのＡ）肝臓中２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２５Ｂ】２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後にＣ２Ｅ２の異なる用量を投与されたイヌのＢ）脾臓中２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２５Ｃ】２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後にＣ２Ｅ２の異なる用量を投与されたイヌのＣ）腎臓中２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２５Ｄ】２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後にＣ２Ｅ２の異なる用量を投与されたイヌのＤ）肺中２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２６Ａ】２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後にＣ２Ｅ２の異なる用量を投与されたイヌのＡ）卵巣中２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２６Ｂ】２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後にＣ２Ｅ２の異なる用量を投与されたイヌのＢ）睾丸中２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２６Ｃ】２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後にＣ２Ｅ２の異なる用量を投与されたイヌのＣ）ＧＩＴ中２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２６Ｄ】２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後にＣ２Ｅ２の異なる用量を投与されたイヌのＤ）ＴＢＬＮ中２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２６Ｅ】２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後にＣ２Ｅ２の異なる用量を投与されたイヌのＥ）軟組織中２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２６Ｆ】２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後にＣ２Ｅ２の異なる用量を投与されたイヌのＦ）総骨含有量中２４１Ａｍの回収放射能の平均パーセントを示す図である。
【図２７】６０、７０および１００ｍｇ／ｍＬで調製した試料中の経時的なＣ２Ｅ２の相対濃度を示す図である。
【図２８Ａ】グラフ中それぞれの列が（左から右に）経時的な正常血漿；熱失活血漿；正常血漿中対照基質、ジルチアゼム；および熱失活血漿中対照基質、ジルチアゼムを表す、Ａ）ラット血漿中Ｃ２Ｅ２の安定性を示す図である。
【図２８Ｂ】グラフ中それぞれの列が（左から右に）経時的な正常血漿；熱失活血漿；正常血漿中対照基質、ジルチアゼム；および熱失活血漿中対照基質、ジルチアゼムを表す、Ｂ）イヌ血漿中Ｃ２Ｅ２の安定性を示す図である。
【図２８Ｃ】グラフ中それぞれの列が（左から右に）経時的な正常血漿；熱失活血漿；正常血漿中対照基質、ジルチアゼム；および熱失活血漿中対照基質、ジルチアゼムを表す、Ｃ）ヒト血漿中Ｃ２Ｅ２の安定性を示す図である。
【図２９】グラフ中それぞれの列が（左から右に）対照、Ｃ２Ｅ２  １日１回（ＯＤ）、Ｃ２Ｅ２  １日２回（ＢＤ）、およびＤＴＰＡを表す、汚染７日後の肝臓、骨格、および注射部位組織中アメリシウム負荷量を示す図である。
【図３０Ａ】Ａ）最初のＣ２Ｅ２用量が投与された場合にアメリシウム汚染２４時間後に開始する全体試験の継続時間にわたるプロファイルを示す、１時間当たり尿中に排泄された初期アメリシウム注射パーセントを示す図である。ゼロ時間における１時間当たり体外除去パーセントは、試験の最初の２４時間にわたる平均時間当たり体外除去を反映する。菱形は、未処置対照群であり、四角は、Ｃ２Ｅ２  ６００ｍｇ／ｋｇのＯＤ群であり、三角は、Ｃ２Ｅ２  ３００ｍｇ／ｋｇのＢＤ群である。
【図３０Ｂ】Ｂ）最初のＣ２Ｅ２用量が投与された場合にアメリシウム汚染２４時間後に開始する拡大図を示す、１時間当たり尿中に排泄された初期アメリシウム注射パーセントを示す図である。ゼロ時間における１時間当たり体外除去パーセントは、試験の最初の２４時間にわたる平均時間当たり体外除去を反映する。菱形は、未処置対照群であり、四角は、Ｃ２Ｅ２  ６００ｍｇ／ｋｇのＯＤ群であり、三角は、Ｃ２Ｅ２  ３００ｍｇ／ｋｇのＢＤ群である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、これから以下により十分に記載される。本発明は、異なる形態で具体化され
てもよく、本明細書で示される実施形態に限定されると解釈されるべきでない。むしろ、
これらの実施形態は、本開示が徹底的かつ完全であり、本発明の範囲を当業者に十分に伝
えるように提供される。
【００１３】
本明細書で説明に使用される用語は、単に特定の実施形態を説明する目的のためであり
、本発明を限定することは意図されない。説明および添付の特許請求の範囲で使用される
場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈
により明らかに別に示されない限り、同様に複数形を包含することが意図される。
【００１４】
別に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての用語（技術用語および科学用語
を含む）は、本発明が属する当業者により通常理解されるのと同じ意味を有する。通常使
用される辞書に定義されるものなどの用語は、本出願および関連技術の文脈におけるそれ
らの意味と一致している意味を有すると解釈されるべきであり、かつ本明細書で明示的に
そのように定義されない限り、理想的または過度に形式的な意味で解釈されるべきでない
ことがさらに理解される。本明細書で説明に使用される用語は、単に特定の実施形態を説
明する目的のためであり、本発明を限定することは意図されない。
【００１５】
本明細書で言及される特許、特許出願および刊行物のすべては、それらの全体が、その
参考文献が提示される文および／または段落に関連した教示について、参照により組み込
まれる。用語が矛盾する場合、本明細書が統制している。
【００１６】
また本明細書で使用される場合、「および／または」は、関連した列挙項目の１つまた
は複数のあらゆる可能な組合せ、および選択的に（「または」で）解釈される場合の組合
せの欠如を指し、およびそれらを包含する。
【００１７】
文脈により別に示されない限り、本明細書で記載される本発明の実施形態の様々な特徴
は、任意の組合せで使用されてもよいことが特に意図される。例えば、一実施形態に関連
して記載された特徴はまた、本発明の他の実施形態および態様に適用可能であり、それら
と組合せ可能であり得る。
【００１８】
さらに、本発明の実施形態は、一部の実施形態において、本明細書で示される任意の特
徴または特徴の組合せが除外または省略されてもよいことも企図される。例で説明すると
、本明細書で複合体が成分Ａ、ＢおよびＣを含むと記載されている場合、一部の実施形態
において、Ａ、ＢもしくはＣ、またはそれらの組合せのいずれかが省略および否定されて
もよい。
【００１９】
本明細書で使用される場合、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎ
ｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」という移行句（および文法的変形）は、特許請求された発明の記
載された物質または工程「ならびにその基本的および新規な特徴（単数または複数）に実
質的に影響を与えないもの」を包含していると解釈されるべきである。Ｉｎ  ｒｅ  Ｈｅ
ｒｚ，５３７  Ｆ．２ｄ  ５４９，５５１−５２，１９０  Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｑ．４６１，４
６３（ＣＣＰＡ  １９７６）（原文における強調）参照；また、ＭＰＥＰ§２１１１．０
３参照。したがって、本明細書で使用される場合の「から本質的になる」という用語は、
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と等価と解釈されるべきでない。
【００２０】
測定可能な値、例えば、量または濃度などに言及するときに、本明細書で使用される場
合の「約」という用語は、特定された量の±２０％、±１０％、±５％、±１％、±０．
５％、またはさらには±０．１％の変動を包含することが意味される。測定可能な値につ
いて本明細書で与えられる範囲は、その中の任意の他の範囲および／または個別の値を包
含してもよい。
【００２１】
本発明は、化学名６，９−ビス（カルボキシメチル）−３−（２−エトキシ−２−オキ
ソエチル）−１１−オキソ−１２−オキサ−３，６，９−トリアザテトラデカン−１−オ
イック酸（本明細書でＣ２Ｅ２とも称される）を有し、かつ以下の構造：
【化１】
2018188459.tif 000003
を有するＤＴＰＡジエチルエステルの多形体を提供する。本発明の一部の実施形態におい
て、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの多形体は、Ｃ２Ｅ２の他の公知の形態よりも安
定であり得る。安定性は、当業者に知られた方法で測定され得る。例えば、一部の実施形
態において、安定性は、Ｃ２Ｅ２多形体の融点を比較することにより決定される。本発明
の一部の実施形態において、本発明のＣ２Ｅ２多形体は、一部の実施形態において、本発
明のＣ２Ｅ２多形体が他のＣ２Ｅ２多形体の融点よりも高い融点を有するので、他のＣ２
Ｅ２多形体と比較してより安定である。安定性は、保存の間および／または水溶液などの
溶液中の本発明の多形体の安定性を指してもよい。
【００２２】
本発明のある実施形態において、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの多形体は、Ｃ２
Ｅ２の他の知られた形態と比較して製剤化および／または調製するのがより容易であり得
る。例えば、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの多形体は、Ｃ２Ｅ２の他の知られた形
態と比較して改善された溶解度を有し得る。本発明の一部の実施形態において、本発明の
ＤＴＰＡジエチルエステルの多形体は、同じ方法で投与される場合にＣ２Ｅ２の他の知ら
れた形態と比較して対象への送達後のより良好な生物学的利用能を与え得る。
【００２３】
本発明のある実施形態において、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルは、ＤＴＰＡのプ
ロドラッグであってもよい。ＤＴＰＡのプロドラッグは、脱エステル化されて、ＤＴＰＡ
および／またはＣ２Ｅ２の代謝産物、例えば、限定されないが、ＤＴＰＡモノエチルエス
テル（例えば、Ｃ２Ｅ１）を形成し得る。本発明の一部の実施形態において、本発明のＤ
ＴＰＡジエチルエステルは、エステラーゼにより脱エステル化されてＤＴＰＡおよび／ま
たはＣ２Ｅ２の代謝産物を形成し得るＤＴＰＡのプロドラッグであってもよい。代替とし
てまたはさらに、本発明のある実施形態において、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルは
、キレート剤、例えば、限定されないが、放射性元素および／または非放射性元素に対す
るキレート剤であってもよい。
【００２４】
本発明の一部の実施形態によれば、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの多形体は、図
６〜図８のいずれかに示される粉末ｘ線回折パターンに相当する粉末ｘ線回折パターンを
有し得る。本発明の特定の実施形態において、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの多形
体は、図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｃ、および／または図６Ｄの粉末ｘ線回折パターンに相当す
る粉末ｘ線回折パターンを有する。
【００２５】
本発明のある実施形態において、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの多形体は、図６
Ａの粉末ｘ線回折パターンに相当する粉末ｘ線回折パターンを有する。図６Ａに相当する
粉末ｘ線回折パターンを有する多形体は、本明細書で形態Ｉと称される。形態ＩのＤＴＰ
Ａジエチルエステルは、約７．６、１２．４、１３．５、１４．０、１５．３、１８．１
、１８．７、１８．８、２１．０、２２．５、２３．４、２４．５、２８．７、および３
５．７±０．２度の２シータにピークを有する粉末ｘ線回折パターンにより特徴付けられ
得る。
【００２６】
形態ＩのＤＴＰＡジエチルエステルは、約１０．００℃／分の加熱速度で約２５℃から
約３２０℃の範囲にわたる示差走査熱量測定を用いて測定して、約１０９℃から約１２２
℃、またはその中の任意の範囲および／もしくは個別の値の融点により特徴付けられる。
本発明の一部の実施形態において、形態ＩのＤＴＰＡジエチルエステルは、約１０９℃、
１１０℃、１１１℃、１１２℃、１１３℃、１１４℃、１１５℃、１１６℃、１１７℃、
１１８℃、１１９℃、１２０℃、１２１℃、もしくは１２２℃、またはその中の任意の範
囲の融点を有し得る。本発明のある実施形態において、形態ＩのＤＴＰＡジエチルエステ
ルは、約１１１．８℃、１１６．３℃、または１１９．４℃に融点を有し得る。
【００２７】
形態ＩのＤＴＰＡジエチルエステルは、ジクロロメタン中でＤＴＰＡジエチルエステル
を沈殿させることによって得られてもよい。一部の実施形態において、形態ＩのＤＴＰＡ
ジエチルエステルは、約−２０℃の温度で冷却しながらジクロロメタン中でＤＴＰＡジエ
チルエステルを沈殿させることによって得られる。温度は、例えば、１６℃から２４℃の
間、またはその中の任意の他の範囲および／もしくは個別の値であり得る。
【００２８】
本発明の一部の実施形態によれば、形態ＩのＤＴＰＡジエチルエステルを調製する方法
であって、ＤＴＰＡビス無水物、エタノールおよびピリジンを混ぜ合わせて反応混合物を
形成する工程、反応混合物を窒素下で約２４時間、例えば、２０時間から２８時間の間、
またはその中の任意の他の範囲および／もしくは個別の値の時間撹拌する工程、反応混合
物をジクロロメタンに添加してジクロロメタン溶液を形成する工程、ジクロロメタン溶液
を約−２０℃、例えば、１６℃から２４℃の間、またはその中の任意の他の範囲および／
もしくは個別の値などの温度に冷却して本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの多形体の沈
殿物を形成する工程、ジクロロメタン溶液を濾過して沈殿物を得る工程、任意選択的に、
濾過工程の間に沈殿物をジクロロメタンで洗浄する工程、ならびに任意選択的に、沈殿物
を乾燥させ、それにより、形態ＩのＤＴＰＡジエチルエステルを得る工程を含む方法が提
供される。
【００２９】
本発明のある実施形態において、形態ＩのＤＴＰＡジエチルエステルを調製する方法に
おいて冷却工程の間および／または後に形成された多形体は、その後の工程の１つまたは
複数の間および／または後に形成された本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの多形体と同
じおよび／または異なってもよい。したがって、一旦本発明のＤＴＰＡジエチルエステル
の多形体が形成されると、形態ＩのＤＴＰＡジエチルエステルを調製する方法においてそ
の後の工程のそれぞれの後に、同じおよび／または異なる本発明のＤＴＰＡジエチルエス
テルの別の多形体が形成されてもよい。本発明の一部の実施形態において、形態ＩのＤＴ
ＰＡジエチルエステルは、本発明の形態ＩのＤＴＰＡジエチルエステルを調製する方法に
おいて冷却工程の間および／またはその後に得られてもよい。本発明のある実施形態にお
いて、本発明の形態ＩのＤＴＰＡジエチルエステルを調製する方法は、濾過工程の間に沈
殿物をジクロロメタンで洗浄する工程および沈殿物を乾燥させる工程を含み、形態ＩのＤ
ＴＰＡジエチルエステルは、乾燥工程の間および／またはその後に得られてもよい。
【００３０】
本発明の他の実施形態において、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの多形体は、図６
Ｄにおける粉末ｘ線回折パターンに相当する粉末ｘ線回折パターンを有する。図６Ｄに相
当する粉末ｘ線回折パターンを有する多形体は、本明細書で形態ＩＩと称される。形態Ｉ
ＩのＤＴＰＡジエチルエステルは、約８．１、１２．０、１３．８、１５．４、１６．０
、１６．６、１８．３、１９．３、２１．４、２２．１、２４．０、２６．５、および２
９．２±０．２度の２シータにピークを有する粉末ｘ線回折パターンにより特徴付けられ
得る。
【００３１】
形態ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルは、約１０．００℃／分の加熱速度で約２５℃か
ら約３２０℃の範囲にわたる示差走査熱量測定を用いて測定して、約１３２℃から約１４
３℃、またはその中の任意の範囲および／もしくは個別の値の融点により特徴付けられる
。速度は、例えば、８．００℃／分から１２．００℃／分の間またはその中の任意の他の
範囲および／もしくは個別の値であってもよい。本発明の一部の実施形態において、形態
ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルは、約１３２℃、１３３℃、１３４℃、１３５℃、１３
６℃、１３７℃、１３８℃、１３９℃、１４０℃、１４１℃、１４２℃、もしくは１４３
℃、またはその中の任意の範囲の融点を有してもよい。本発明のある実施形態において、
形態ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルは、約１３４．８℃、１３６．４℃、１３９．１℃
、または１４１．６℃に融点を有してもよい。
【００３２】
形態ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルは、ＤＴＰＡジエチルエステルをエタノール中で
沈殿させることにより得られてもよい。一部の実施形態において、形態ＩＩのＤＴＰＡジ
エチルエステルは、約２０℃未満の温度に冷却しながらＤＴＰＡジエチルエステルをエタ
ノール中で沈殿させることにより得られる。温度は、例えば、１６℃から２４℃の間また
はその中の任意の他の範囲および／もしくは個別の値であってもよい。
【００３３】
本発明の一部の実施形態によれば、形態ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルを調製する方
法であって、ＤＴＰＡビス無水物および無水エタノールを混ぜ合わせて反応混合物を形成
する工程、約１．５時間、例えば、１．２時間から１．８時間の間またはその中の任意の
他の範囲および／もしくは個別の値の時間撹拌しながら反応混合物を加熱して還流させる
工程、反応混合物を濾過して濾液を形成する工程、濾液を約２０℃、例えば、１６℃から
２４℃の間、またはその中の任意の他の範囲および／もしくは個別の値未満の温度に冷却
して本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの多形体の沈殿物を形成する工程、濾液を濾過し
て沈殿物を得る工程、ならびに任意選択的に、沈殿物を乾燥させ、それにより形態ＩＩの
ＤＴＰＡジエチルエステルを得る工程を含む方法が提供される。ある実施形態において、
濾過する工程後かつ場合による乾燥させる工程前に、方法は、沈殿物を冷エタノール、次
いでメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）で洗浄して濾過ケーキを形成する工程
、濾過ケーキをエタノールと混合して第２のスラリーを形成する工程、第２のスラリーを
約７０℃、例えば、５６℃から８４℃の間、またはその中の任意の他の範囲および／もし
くは個別の値などの温度に加熱する工程、第２のスラリーを濾過して第２の濾液を形成す
る工程、第２の濾液を約２０℃、例えば、１６℃から２４℃の間またはその中の任意の他
の範囲および／もしくは個別の値などのより低い温度に冷却して本発明のＤＴＰＡジエチ
ルエステルの多形体の第２の沈殿物を形成する工程、第２の濾液を濾過して沈殿物を得る
工程、次いで、任意選択的に、沈殿物を乾燥させ、それにより、形態ＩＩのＤＴＰＡジエ
チルエステルを得る工程をさらに含んでもよい。
【００３４】
本発明のある実施形態において、形態ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルを調製する方法
における第１の冷却工程の間および／または後に形成された多形体は、その後の工程の１
つまたは複数の間および／または後に形成された本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの多
形体と同じおよび／または異なってもよい。したがって、一旦本発明のＤＴＰＡジエチル
エステルの多形体が形成されると、形態ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルを調製する方法
においてその後の工程のそれぞれの後に、同じおよび／または異なる本発明のＤＴＰＡジ
エチルエステルの別の多形体が形成されてもよい。本発明の一部の実施形態において、形
態ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルは、本発明の形態ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルを
調製する方法において第１の冷却工程の間および／または後に得られてもよい。本発明の
ある実施形態において、形態ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルは、本発明の形態ＩＩのＤ
ＴＰＡジエチルエステルを調製する方法において第２の冷却工程の間および／または後に
得られてもよい。本発明の一部の実施形態において、本発明の形態ＩＩのＤＴＰＡジエチ
ルエステルを調製する方法は、第１および／または第２の沈殿物を乾燥させる工程を含み
、形態ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルは、乾燥工程の間および／または後に得られても
よい。
【００３５】
本発明の別の態様によれば、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの多形体を含む医薬組
成物が本明細書で提供される。ある実施形態において、本発明の医薬組成物は、形態Ｉお
よび／または形態ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルを含む。一部の実施形態において、本
発明の医薬組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。薬学的に許容される担体は
、担体に起因するいかなる副作用もＤＴＡＰジエチルエステルの有益な効果を低下させな
いように、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの有効活性と一致する濃度で対象に比較的
非毒性および無害である任意の担体である。
【００３６】
本発明の医薬組成物は、対象の全体重１キログラム当たり本発明のＤＴＰＡジエチルエ
ステル約１ｍｇから約２，０００ｍｇ、またはその中の任意の範囲および／もしくは個別
の値、例えば、限定されないが、対象の全体重１ｋｇ当たり約１０ｍｇから約１，０００
ｍｇ、約１，０００ｍｇから約２，０００ｍｇ、または約２００ｍｇから約６００ｍｇの
単回用量および／または単位で投与するように製剤化されてもよい。本発明のＤＴＰＡジ
エチルエステルは、任意の有効な慣用投与量単位形態、例えば、限定されないが、即時お
よび持続的放出型調製物を用いて、経口的、非経口的、局所的になど、薬学的に許容され
る担体と一緒に投与されてもよい。例示的な医薬組成物には、限定されないが、米国特許
第８，０３０，３５８号および国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１２／６０９８５号に記載された
ものが含まれ、それらのそれぞれの内容は、それらの全体が、製剤および薬剤送達システ
ムならびにこのような製剤およびシステムを調製する方法に関連した内容について参照に
より本明細書に組み込まれる。本発明のある実施形態において、本発明の医薬組成物は、
経口投与に適している。
【００３７】
経口投与の場合、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルは、固体または液体調製物、例え
ば、限定されないが、カプセル剤、丸剤、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、チューインガ
ム剤、メルト剤、散剤、溶液剤、懸濁剤、または乳剤に製剤化されてもよく、医薬組成物
の製造のための当技術分野で知られた方法に従って調製されてもよい。固体単位剤形は、
例えば、界面活性剤、滑沢剤、および不活性充填剤、例えば、ラクトース、スクロース、
リン酸カルシウム、およびトウモロコシデンプンを含有する通常の硬質または軟質シェル
型ゼラチンタイプのものであり得るカプセル剤であってもよい。
【００３８】
本発明の別の実施形態において、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルは、結合剤、例え
ば、アカシア、トウモロコシデンプン、またはゼラチン；投与後の錠剤の分解および溶解
を助けるように意図された崩壊剤、例えば、バレイショデンプン、アルギニン酸、トウモ
ロコシデンプン、およびグアールゴム；錠剤造粒の流れを改善し、ならびに錠剤ダイおよ
びパンチの表面への錠剤材料の付着を防止するように意図された滑沢剤、例えば、タルク
、ステアリン酸、またはステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムもしくはス
テアリン酸亜鉛；染料；着色剤；ならびに錠剤の美的品質を高め、それらを患者により受
け入れ可能にするように意図された香味剤と組み合わせて、慣用の錠剤基剤、例えば、ラ
クトース、スクロース、およびトウモロコシデンプンと一緒に錠剤化されてもよい。経口
液体剤形に使用される好適な添加剤には、薬学的に許容される界面活性剤、懸濁化剤、ま
たは乳化剤の添加とともにまたはそれなしで、水およびアルコール、例えば、エタノール
、ベンジルアルコール、およびポリエチレンアルコールなどの賦形剤が含まれる。様々な
他の材料が、コーティングとして、またはそうでなければ、投与量単位の物理的形態を改
変するために存在してもよい。例えば、錠剤、丸剤またはカプセル剤は、シェラック、糖
または両方でコーティングされてもよい。
【００３９】
分散性粉末および顆粒は、水性懸濁剤の調製に適している。それらは、分散剤または湿
潤剤、懸濁化剤、および／または１種もしくは複数の保存剤との混合で本発明のＤＴＰＡ
ジエチルエステルを提供し得る。好適な分散剤または湿潤剤、および懸濁化剤は、既に上
に述べたもので例示される。さらなる添加剤、例えば、上記甘味剤、香味剤および着色剤
がまた、存在してもよい。
【００４０】
本発明の医薬組成物はまた、水中油型乳剤の形態であってもよい。油相は、液体パラフ
ィンなどの植物油または植物油の混合物であってもよい。好適な乳化剤は、（１）天然に
存在するゴム、例えば、アカシアゴムおよびトラガカントゴム、（２）天然に存在するリ
ン脂質、例えば、大豆およびレシチン、（３）脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導
されたエステルまたは部分エステル、例えば、モノオレイン酸ソルビタン、ならびに（４
）前記部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソル
ビタンモノオレエートであってもよい。乳剤はまた、甘味剤および香味剤を含有してもよ
い。
【００４１】
油性懸濁剤は、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルを、例えば、ラッカセイ油、オリー
ブ油、ゴマ油、またはココナッツ油などの植物油；または液体パラフィンなどの鉱油中に
懸濁させることにより製剤化されてもよい。油性懸濁剤は、増粘剤、例えば、蜜ろう、硬
質パラフィン、またはセチルアルコールなどを含有してもよい。懸濁剤はまた、１種また
は複数の保存剤、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｎ−プロピル；１種また
は複数の着色剤；１種または複数の香味剤；および１種または複数の甘味剤、例えば、ス
クロースまたはサッカリンを含有してもよい。
【００４２】
シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコ
ール、ソルビトール、またはスクロースなどと製剤化されてもよい。このような製剤はま
た、粘滑剤、ならびに保存剤、香味剤および着色剤を含有してもよい。
【００４３】
本発明のＤＴＰＡジエチルエステルはまた、薬学的に許容される界面活性剤、例えば、
石鹸または洗浄剤、懸濁化剤、例えば、ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒド
ロキシプロピルメチルセルロース、もしくはカルボキシメチルセルロース、または乳化剤
および他の医薬アジュバントの添加とともにまたはそれなしで、滅菌の液体または液体の
混合物、例えば、水、生理食塩水、水性デキストロースおよび関連糖溶液；アルコール、
例えば、エタノール、イソプロパノール、もしくはヘキサデシルアルコール；グリコール
類、例えば、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコール；グリセロールケタ
ール、例えば、２，２−ジメチル−１，１−ジオキソラン−４−メタノール、エーテル類
、例えば、ポリ（エチレングリコール）４００；油；脂肪酸；脂肪酸エステルまたはグリ
セリド；またはアセチル化脂肪酸グリセリドであってもよい医薬担体と一緒に生理学的に
許容される賦形剤中のＤＴＰＡジエチルエステルの注射可能投与量として、非経口的に、
すなわち、皮下的に、静脈内的に、筋内的に、または腹腔内的に投与されてもよい。
【００４４】
本発明の非経口製剤中に使用されてもよい油の実例となるものは、石油、動物、植物、
または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、ゴマ油、綿実油、トウモロコシ
油、オリーブ油、ペトロラタム、および鉱油である。好適な脂肪酸には、オレイン酸、ス
テアリン酸、およびイソステアリン酸が含まれる。好適な脂肪酸エステルは、例えば、オ
レイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルである。好適な石鹸には、脂肪アルカリ
金属、アンモニア、およびトリエタノールアミンの塩が含まれ、好適な洗浄剤には、カチ
オン性洗浄剤、例えば、ジメチルジアルキルアンモニウムハライド、アルキルピリジニウ
ムハライド、およびアルキルアミン酢酸塩；アニオン性洗浄剤、例えば、アルキル、アリ
ール、およびオレフィンのスルホン酸塩、アルキル、オレフィン、エーテル、およびモノ
グリセリドの硫酸塩、ならびにスルホコハク酸塩；非イオン性洗浄剤、例えば、脂肪アミ
ン酸化物、脂肪酸アルカノールアミド、およびポリオキシエチレンポリプロピレンコポリ
マー；ならびに両性洗浄剤、例えば、アルキル−ベータ−アミノプロピオン酸塩、および
２−アルキルイミダゾリン第四級アンモニウム塩、ならびに混合物が含まれる。
【００４５】
本発明の非経口組成物は、溶液中に約０．５重量％から約９０重量％以上の本発明のＤ
ＴＰＡジエチルエステルを含有してもよい。保存剤および緩衝剤がまた有利に使用され得
る。注射の部位における刺激を最小限にし、またはなくすために、このような組成物は、
約１２から約１７の親水性親油性バランス（ＨＬＢ）を有する非イオン性界面活性剤を含
有してもよい。このような製剤中の界面活性剤の量は、約５重量％から約１５重量％の範
囲である。界面活性剤は、上記ＨＬＢを有する単一の成分であり得るか、または所望のＨ
ＬＢを有する２種以上の成分の混合物であり得る。
【００４６】
非経口製剤中に使用される界面活性剤の実例となるものは、ポリエチレンソルビタン脂
肪酸エステルのクラス、例えば、モノオレイン酸ソルビタン、およびエチレンオキシドと
、プロピレンオキシドとプロピレングリコールとの縮合により形成された疎水性塩基との
高分子量付加体である。
【００４７】
本発明の医薬組成物は、滅菌の注射可能な水性懸濁剤の形態であってもよい。このよう
な懸濁剤は、適切な分散剤または湿潤剤、および懸濁化剤、例えば、カルボキシメチルセ
ルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、アル
ギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴム；レシ
チンなどの天然に存在するリン脂質、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例え
ば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮
合生成物、例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、エチレンオキシドと脂肪酸お
よびヘキシトール由来の部分エステルとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソル
ビトールモノオレエート、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物由
来の部分エステルとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエー
トであってもよい分散剤または湿潤剤を用いて公知の方法に従って製剤化されてもよい。
【００４８】
滅菌の注射可能な調製物はまた、非毒性の非経口的に許容される賦形剤または溶媒中の
滅菌の注射可能な溶液剤または懸濁剤であってもよい。用いられてもよい賦形剤および溶
媒は、例えば、水、リンゲル液、および等張性塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌
固定油が溶媒または懸濁化媒体として慣用的に用いられる。このために、合成モノまたは
ジグリセリドを含めた任意の無刺激性固定油が用いられてもよい。さらに、オレイン酸な
どの脂肪酸が、注射物質の調製物に使用されてもよい。
【００４９】
本発明のさらなる態様は、対象から放射性元素および／または非放射性元素を除去する
方法であって、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルおよび／または組成物を投与する工程
を含む方法を提供する。本明細書で使用される場合の「放射性元素」は、微粒子放射線、
例えば、限定されないが、アルファ粒子、ベータ粒子、オージェ電子（Ａｕｇｅｒ  ｅｌ
ｅｃｔｒｏｎ）などを放出する化学元素、またはホトン、例えば、限定されないが、ｘ線
、ガンマ線などを放出する化学元素を指す。放射性元素は、その元素形態でまたは化合物
の一部として存在してもよい。放射性元素は、１から１０３の原子番号を有し得る。本発
明のある実施形態において、放射性元素は、アクチニド系列（すなわち、８９〜１０３の
原子番号を有する）の元素であってもよい。特定の実施形態において、放射性元素は、プ
ルトニウム（Ｐｕ）、アメリシウム（Ａｍ）、またはキュリウム（Ｃｍ）の同位体である
。本明細書で使用される場合の「非放射性元素」は、放射性元素でなく、かつ１から１０
３の原子番号を有する化学元素を指す。ある実施形態において、非放射性元素は、重金属
および／または対象に対して有害および／または毒性の用量で対象に存在する元素である
。例示的な非放射性元素には、限定されないが、鉛、水銀、プルトニウム、バナジウム、
タングステン、カドミウム、砒素、亜鉛、銅、マンガン、セレン、クロム、モリブデン、
アルミニウム、ビスマス、金、ガリウム、リチウム、銀、コバルト、鉄、ニッケル、セレ
ン、タリウム、およびそれらの任意の組合せが含まれる。
【００５０】
本明細書で使用される場合の「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」、「投与（
ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」という用語、およびそれらの文法的変形は、対象への
送達の任意の様式を指す。本発明のＤＴＰＡジエチルエステルは、限定されないが、経口
的に（口腔を介した投与を包含する）、非経口的に、吸入スプレーによる、局所的に、経
皮的に、直腸的に、鼻腔的に、舌下に、頬側に、経膣的に、または埋め込み型貯蔵器を介
して、を含めた任意の適切な経路によって対象に投与されてもよい。本明細書で使用され
る場合の「非経口の」という用語は、皮下、静脈内、筋内、関節内、滑膜内、胸骨内、髄
腔内、肝内、病巣内および頭蓋内の注射または注入技術を包含する。本発明のある実施形
態において、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルおよび／または組成物は、経口投与され
る。
【００５１】
本発明の別の態様は、対象を処置する方法であって、本発明のＤＴＰＡジエチルエステ
ルおよび／または組成物を投与する工程を含む方法を提供する。本明細書で使用される場
合、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語およびその文法的変形は、１種または
複数の症状（単数または複数）および／または状態（単数または複数）の発症および／ま
たは進行を予防、遅延、および／または軽減し、１種または複数の症状（単数または複数
）および／または状態（単数または複数）の重症度を軽減すること、などを含めて、対象
に利益を与える任意の種類の処置を指す。当業者は、本発明の方法による処置により与え
られた利益が、症状（単数または複数）および／または状態（単数または複数）の治癒も
しくは完全な予防（例えば、対象の組織、例えば、骨および／または臓器などへの放射性
元素の検出可能な取り込みがない）および／または撲滅を暗示することが必ずしも意味さ
れないことを理解する。症状および／または状態は、放射性元素に対象の暴露後に生じる
ものを包含し得る。
【００５２】
本発明の一部の実施形態において、放射性元素に暴露された対象を処置する方法であっ
て、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルおよび／または組成物を投与する工程を含む方法
が提供される。したがって、本発明の一部の実施形態において、放射性元素に暴露された
対象から放射性元素を除去するための方法が提供される。当業者は、対象からの放射性元
素の除去が、部分的または完全であってもよいことを理解する。
【００５３】
本発明の他の実施形態において、放射性元素への暴露前に対象を処置する方法であって
、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルおよび／または組成物を投与する工程を含む方法が
提供される。本発明のさらなる態様において、対象における放射性元素の取り込みを予防
する方法であって、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルおよび／または組成物を投与する
工程を含む方法が提供される。
【００５４】
「暴露する（ｅｘｐｏｓｅ）」、「暴露（ｅｘｐｏｓｕｒｅ）」、およびそれらの文法
的変形は、本明細書で使用される場合、対象の身体が、１年以内に約１００ミリレム以上
の放射線を吸収し得るように、放射性元素からの電離放射線（例えば、アルファ粒子およ
び／またはベータ粒子）と接触し得る（例えば、暴露の知られたおよび／または認識され
た脅威）および／またはそれと接触している、および／またはそれに汚染される（例えば
、対象は、放射性元素を内在化しおよび／または取り込んでしまっている）対象を指す。
したがって、対象は、１年以内に約１００ミリレム、５００ミリレム、１レム、５レム、
１０レム、３０レム、５０レム、１００レム、２５０レム、５００レム、１，０００レム
以上の吸収放射線量を受け得る。本発明の一部の実施形態において、対象は、放射性元素
で汚染されている（例えば、対象は、放射性元素を内在化しおよび／または取り込んでし
まっている）。電離放射線への暴露は、慢性（月（単数または複数）および／または１年
などの長期間にわたって起こる）および／または急性（分（単数または複数）、時間（単
数または複数）および／または日（単数または複数）などの短期間に起こる）であり得る
。
【００５５】
本発明は、獣医学と医学の両方の利用で用途を見出す。本発明の好適な対象には、限定
されないが、鳥類および哺乳類が含まれる。本明細書で使用される場合の「鳥類」という
用語は、限定されないが、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、ウズラ、七面鳥、キジ、走鳥類
（例えば、ダチョウ）、オウム、インコ、金剛インコ、オカメインコ、カナリア、フィン
チ、および卵内鳥類が含まれる。本明細書で使用される場合の「哺乳類」という用語には
、限定されないが、霊長類（例えば、類人猿およびヒト）、非ヒト霊長類（例えば、サル
、ヒヒ、チンパンジー、ゴリラ）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、有蹄動物、ブタ、ウマ、ネコ、
イヌ、ウサギ、ひれ足類、齧歯類（例えば、ラット、ハムスター、およびマウス）、およ
び子宮内哺乳類が含まれる。本発明の一部の実施形態において、対象は哺乳類であり、あ
る実施形態において、対象はヒトである。ヒト対象は、胎児、新生児、幼児、若年、青年
、成人および老年の対象、ならびに妊娠している対象を含む、すべての年齢の男性と女性
の両方を含む。
【００５６】
本発明の特定の実施形態において、対象は、本発明の方法を「必要としており」、例え
ば、対象は放射性元素に暴露されており、対象は放射性元素に暴露されると考えられ、お
よび／または対象は放射性元素に暴露されてしまっていると考えられる。本発明のＤＴＰ
Ａジエチルエステル、組成物、および／または方法は、約１０歳またはそれより若い小児
、例えば、約５歳もしくは１歳またはそれより若い小児に特に好適であり得る。本発明は
また、老年者に特に好適であり得る。
【００５７】
投与の工程は、放射性元素またはその脅威への暴露前、間、および／または後に行われ
てもよい。投与の工程は、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルおよび／または組成物の１
または複数の用量、例えば、ＤＴＰＡジエチルエステルおよび／または組成物の１、２、
３、４、５、６，７、８、またはそれを超える用量を送達するように行われてもよい。例
示的な投与レジメンは、限定されないが、１日または複数の日（単数または複数）、週（
単数または複数）、月（単数または複数）および／または年（単数または複数）の間、１
日１回、１日２回、１日おき、１週１回などを伴う。本発明のある実施形態において、投
与の工程は、対象から放射性元素を除去するために行われる。本発明の一部の実施形態に
おいて、投与の工程は、対象の組織および／または臓器における放射性元素の取り込みを
予防するために行われる。本発明の特定の実施形態において、投与の工程は、治療有効量
の形態Ｉおよび／または形態ＩＩのＤＴＰＡジエチルエステルを対象に送達するために行
われる。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、対象において治療的に有用
な応答を引き起こす本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの量を指す。当業者は、いくらか
の利益が対象に与えられる限り、治療効果は完全または治癒的である必要はないことを理
解する。本発明の特定の実施形態において、治療有効量の本発明のＤＴＰＡジエチルエス
テルは、対象からの放射性元素の検出可能な排泄または除去をもたらす。放射性元素の排
泄または除去の検出は、対象の尿、糞、他の体液、および肺からの呼気ガス中の放射性元
素の量を測定することにより行われてもよい。対象から除去された放射性元素の量を定量
化するために使用される方法および機器は、当業者に公知であり、限定されないが、例え
ば、ガンマ線シンチレーションカウンタ、液体シンチレーションカウンタ、フローシンチ
レーションアナライザ、アルファ線分光計、ガスプロポーショナルカウンタ、電離箱、ガ
イガーミュラーカウンタなどの放射線検出装置を用いて、除去された放射性元素の量を定
量化することを含む。
【００５９】
放射性元素は、身体において非常に有害で、放射性毒であることが当業者により理解さ
れている。「除去する（ｒｅｍｏｖｅ）」、「除去すること（ｒｅｍｏｖｉｎｇ）」、「
除去（ｒｅｍｏｖａｌ）」、およびそれらの文法的変形は、本明細書で使用される場合、
放射性元素で汚染され得るおよび／またはそれで汚染されている対象から放射性元素の一
部またはすべてを除去することを指し、対象から放射性元素の検出可能または非検出可能
な量を除去することを包含し得る。対象から放射性元素の一部またはすべてを除去するこ
と（放射性元素の検出可能または非検出可能な量を除去することを含む）は、一般に対象
の医学的状態を改善する。例えば、本発明の一部の実施形態において、対象に存在する放
射性元素の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０
％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０
％、９５％、またはそれ以上が、本発明の方法によって除去される。放射性元素への対象
の暴露レベルを定量化する方法は、当技術分野で公知であり、限定されないが、対象が暴
露された領域における放射性元素の量を定量化すること、放射性元素のどれだけ多くが対
象により吸収または吸入されたかを推定することにより定量化すること、全身放射能計測
機器を用いて定量化すること、対象の身体から放出されたｘ線の外部測定を用いて定量化
すること、生理学的基礎薬動力学モデルを用いて定量化すること、および尿、糞、または
組織の試料のラジオアッセイを用いて定量化することを包含する。
【００６０】
本発明の一部の実施形態によれば、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルおよび／または
組成物の対象への投与は、対象が放射性元素を除去する処置を投与されなかった場合に対
象から除去される放射性元素の対応する量ならびに／または対象が放射性元素を除去する
ために異なる処置および／もしくは異なる投与様式（例えば、ＤＴＰＡの非経口投与）を
投与された場合に対象から除去される放射性元素の対応する量と比較して、全体として対
象からならびに／または対象の特定の組織および／もしくは臓器（例えば、肝臓、腎臓、
骨、筋肉など）から除去される放射性元素の量の増加を与え得る。「増加する（ｉｎｃｒ
ｅａｓｅ）」は、除去の量に関して本明細書で使用される場合、約１％以上、例えば、限
定されないが、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１
５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２，２３，２４、２５、２６、２７、２８
、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、
４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５
５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８
、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、
８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９
５、９６、９７、９８、９９、１００％、またはそれ以上だけ除去される放射性元素の量
の改善を指す。
【００６１】
本発明のＤＴＰＡジエチルエステルおよび／または組成物の投与レジメンは、暴露レベ
ルおよび／または対象に基づいて調整されてもよい。本発明の一部の実施形態において、
対象に投与される本発明のＤＴＰＡジエチルエステルの量は、限定されないが、ＤＴＰＡ
ジエチルエステルの特定の多形形態、用いられる投与量単位、投与様式、処置期間、処置
される患者の年齢および／もしくは性別、ならびに／または処置される状態の性質および
程度などの考慮事項に応じて変わり得る。
【００６２】
本発明の一部の実施形態において、本発明のＤＴＰＡジエチルエステルおよび／または
組成物は、１日当たり対象の全体重１キログラム当たり約１ｍｇから約２，０００ｍｇの
ＤＰＴＡ、ＤＴＰＡ代謝産物、および／または本発明のＤＴＰＡジエチルエステルを送達
するように設計される。投与期間は、日（単数または複数）、週（単数または複数）、月
（単数または複数）、および／または年（単数または複数）であってもよい。本発明のあ
る実施形態において、ＤＴＰＡジエチルエステルおよび／または組成物は、放射性元素の
検出可能な量および／またはある期間に対象から除去される放射性元素の検出可能な量が
なくなるまで投与される。
【００６３】
本発明のＤＴＰＡジエチルエステルおよび／または組成物は、単独でまたは他の治療お
よび／もしくは治療剤と組み合わせて使用されてもよい。本発明のＤＴＰＡジエチルエス
テルおよび／または組成物は、別の治療および／または治療剤の投与の前、間、および／
または後に投与されてもよい。本発明の一部の実施形態において、本発明のＤＴＰＡジエ
チルエステルおよび／または組成物は、キレート剤、例えば、限定されないが、ＤＴＰＡ
の非経口投与後などに、フォローアップ治療として使用されてもよい。
【００６４】
本発明は、以下の非限定的な実施例でより詳細に説明される。
【実施例１】
【００６５】
Ｃ２Ｅ２を調製するための方法１
Ｃ２Ｅ２（６，９−ビス（カルボキシメチル）−３−（２−エトキシ−２−オキソエチ
ル）−１１−オキソ−１２−オキサ−３，６，９−トリアザテトラデカン−１−オイック
酸としても知られている）を調製するための方法１における第１の工程は、ＤＴＰＡビス
無水物を準備する工程を含む。ＤＴＰＡビス無水物は、市販されており、商業的供給業者
、例えば、ＴＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａ  ｏｆ  Ｐｏｒｔｌａｎｄ、Ｏｒｅｇｏｎから入手さ
れてもよいか、または以下の通りに調製されてもよい。
【００６６】
ビス無水物の調製
［工程１］ＤＴＰＡ（３．９３ｇ、１０ｍｍｏｌ）および無水酢酸（５．７２ｇ、５６
．９ｍｍｏｌ）を６．２ｍＬのピリジンに添加し、６５〜７０℃に１４時間加熱還流した
。この材料をブヒナー漏斗に通して濾過し、ジエチルエーテルですすぎ洗いした。オフホ
ワイトの粉末（ＤＴＰＡ−ＢＡ、１）を集め、デシケータ中で乾燥させた。1HNMR (400MH
z, DMSO) δ 3.65 (8H, s), 3.44 (2H, d), 2.74 (4H, t), 2.59 (4H, t).
【化２】
2018188459.tif 000004
【００６７】
ＤＴＰＡビス無水物が得られると直ぐに、工程２に従ってＣ２Ｅ２を調製する。
【００６８】
Ｃ２Ｅ２の調製
［工程２］ＤＴＰＡ−ＢＡ（１）を用いて、ＤＴＰＡ−ＢＡ（１）をエタノールと反応
させることによってＣ２Ｅ２（２）を生成させる。ＤＴＰＡ−ＢＡ（１．０２ｇ、２．８
ｍｍｏｌ）、エタノール（０．３８ｇ、８．２ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．６７ｇ、
８．４ｍｍｏｌ）を窒素下で２４時間撹拌した。生成物をジクロロメタン（ＤＣＭ）（２
００ｍＬ）中−２０℃で沈殿させ、ＤＣＭで洗浄しながら濾過し、真空オーブン中で乾燥
させて、オフホワイトの粉末を得た（収率−８１．３±１３．３、ｎ＝４）。1HNMR (400
MHz, DMSO) δ 4.07 (4H, q), 3.53 (4H, s), 3.45 (2H, s), 3.43 (4H, s), 2.89 (4H, 
d), 2.84 (4H, d), 1.19 (6H, t). 元素分析: 予測値- C, 48.10; H, 6.95; N, 9.35; O,
35.60; 実測値- C, 47.59; H, 7.22; N, 8.67; O, 36.29.Ｃ２Ｅ２の合成も、２ｇスケ
ールで首尾よく調製された。
【化３】
2018188459.tif 000005
【００６９】
Ｃ２Ｅ２を調製するための方法２
Ｃ２Ｅ２を調製するための方法２によって、図１の合成スキームに従って１．５ｋｇス
ケールでＣ２Ｅ２を製造した。ＤＴＰＡ（１）からのビス無水物２の合成は、欧州出願第
ＥＰ１３６１３４Ａ１号（２００３）、国際公開第ＷＯ２００７／１４２８０４Ａ２号、
およびＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ａ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ，２００４，１０，
３２５２−３２６０に記載されており、これらのそれぞれの内容は、それらの全体が、こ
の段落に関連した教示について、参照により本明細書に組み込まれる。それぞれの場合、
五酢酸を無水酢酸およびピリジンでＭｅＣＮの存在下で又は非存在下で処理し、実測され
た収率範囲は９５〜９７％であった。次いで、ビス無水物をエタノールとの反応によりＣ
２Ｅ２に変換する。この変換を用いて、８００ｇおよび１．５ｋｇのＣ２Ｅ２を調製した
。
【００７０】
ビス無水物の調製（２）：ジエチレントリアミン五酢酸（２０２９ｇ、５．１６モル）
を撹拌しながらアセトニトリル（１１００ｍＬ）に溶解させた。無水酢酸（１４５０ｍＬ
、１５．３モル）およびピリジン（１６６０ｍｌ、２０．５モル）を添加し、この反応物
を６０℃に４時間加熱した。この反応混合物を２２℃に冷却し、ｔ−ブチルメチルエーテ
ル（ＭＴＢＥ）（８００ｍＬ）を添加した。この反応混合物を濾過し、得られた固体をＭ
ＴＢＥ（３０００ｍＬ）で洗浄した。固体を真空オーブン中４０℃で乾燥させた。収量：
１７９２ｇ、９７％。
【００７１】
Ｃ２Ｅ２の調製：ビス無水物（１７９２ｇ、５．０２モル）を無水エタノール（９００
０ｍＬ）中でスラリー化し、撹拌しながら１．５時間加熱還流した。この加熱反応混合物
をセライトに通して濾過し、２０℃未満に冷却した。得られたスラリーを濾過し、冷エタ
ノール（２８００ｍＬ）、続いてメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（３５０
０ｍＬ）で洗浄した。セライトケーキをエタノール（８００ｍＬ）中でスラリー化し、７
０℃に加熱し、濾過した。冷却後、得られたスラリーを濾過し、エタノールおよびＭＴＢ
Ｅで洗浄した。合わせた単離固体を真空オーブン中室温で乾燥させた。収量：１４８８ｇ
、６６％。
【００７２】
Ｃ２Ｅ２の１．５ｋｇロットについての分析の証明書を以下に与える。Ｃ２Ｅ２は発色
団をまったくもたないので、蒸発光散乱検出（ＥＬＳＤ）または荷電エアロゾル検出（Ｃ
ＡＤ）のいずれかを備えた逆相ＨＰＬＣ法を、Ｃ２Ｅ２および不純物の分析のために開発
および適格化した。
【００７３】
Ｃ２Ｅ２についての分析の証明書
構造：
【化４】
2018188459.tif 000006
物質：                    Ｃ２Ｅ２
ロット番号：    ０２０ＷＪＬ０５０
バッチサイズ：  １．７２ｋｇ
外観：                    白色固体
同一性：                  １Ｈ  ＮＭＲにより決定。データは構造と一致している。
クロマトグラフィー純度：  逆相ＨＰＬＣ−ＥＬＳＤにより９７．５％（面積％）
未確定個別不純物（面積％、二重の平均）：
ＲＲＴ０．３３            ０．３３％
ＲＲＴ１．０８            １．３９％
ＲＲＴ１．２８            ０．７７％
合計不純物：              ２．４９％
ＫＦによる水分：          ０．１７％
ＤＳＣ：                  実測１４１．６℃を中心とした単一吸熱
【００７４】
多形体：
複数のＣ２Ｅ２多形体の可能性が、Ｃ２Ｅ２投与溶液の分析の間に生じた。Ｃ２Ｅ２投
与溶液は、方法２を用いて得られたロット０５０のＣ２Ｅ２で調製した。多形体の調査は
、バルク粉末の物理化学的特性に影響を与えるので重要である。準安定結晶性固体は、高
い化学ポテンシャルを有し、不安定である。物理化学的特性、粒径および表面積の差は、
溶解速度の変化のために薬剤の生物学的利用能を変更し得る。以下の研究の目標は、最も
安定な多形形態を同定することであったが、他のいずれの多形体も準安定であり、保存の
間に変化し得るからである。この相変化は、溶液からの沈殿または保存の間の不安定性を
もたらし得る。
【００７５】
投与溶液の分析：投与からの試料を分析用に受け入れ、４℃で保存する前に漏れおよび
標識を検査した。この製剤試料（０、２０、６０、および１００ｍｇ／ｍＬ）を０．４０
ｍｇ／ｍＬの期待濃度に希釈し、ＨＰＬＣ−ＣＡＤにより分析した。
【００７６】
分析のための調製の間に、６０および１００ｍｇ／ｍＬ溶液は、図２に見られるように
、製剤から沈殿した目に見える固体を有した。溶液が指示量のＣ２Ｅ２を含有するかのよ
うに、希釈試料を調製し、分析した。以下の表１に示す結果は、濃度に関連した明らかな
傾向のない不十分な回収パーセントを示す。２０および１００ｍｇ／ｍＬの溶液は両方と
も、回収８５〜１１５％の許容範囲に入らない。６０ｍｇ／ｍＬ溶液は、技術的に推奨調
製範囲内であるが、その製剤は固体沈殿物を含有した。
【００７７】
【表１】
2018188459.tif 000007
【００７８】
水中安定性試験：方法２を用いて、投与製剤のためのＣ２Ｅ２を調製した。具体的には
、ロット０５０および００５−２を、方法２を用いて調製したが、参照標準およびＭＴＤ
ロットは、方法１を用いて調製した。投与製剤については、方法２を用いて調製したＣ２
Ｅ２と一緒に脱イオン水（１８／１９室のタップからのＤＩ水（ＤＩ  ｗａｔｅｒ  ｔａ
ｐ  ｉｎ  ｒｏｏｍ  １８／１９））を用いた。この投与製剤を、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水を用
いて調製したＣ２Ｅ２製剤と比較した。各試料のｐＨを記録し、値を以下の表２に記載す
る。
【００７９】
【表２】
2018188459.tif 000008
【００８０】
ビヒクルのｐＨは、ほぼ２単位だけ異なる。バッチ０５０の種々の１００ｍｇ／ｍＬ調
製物のｐＨは０．３ｐＨ単位だけ異なるが、濃度は、試料中で沈殿した物質の量のために
等しくないように見える。方法１を用いて作製した種々のＣ２Ｅ２調製物のｐＨ値は、２
．３５から２．６０の範囲である。これらの差は小さいが、実に、ロット０５０およびロ
ット００５−２のＣ２Ｅ２は、ＭＴＤロットおよび参照標準（参照標準は、ＭＴＤロット
からの精製Ｃ２Ｅ２である）のものよりもわずかに高い溶液ｐＨを有するように見える。
いかなる特定の理論にも拘束されることを望まないが、これは、参照標準およびＭＴＤロ
ット中の不純物の存在のためであり得る。
【００８１】
通常でない溶液を再現するために、Ｃ２Ｅ２（ロット００５−２およびロット０５０；
ＭＴＤロット；ならびに参照標準）の１ｍＬ試料をＭｉｌｌｉ−Ｑ水中１００ｍｇ／ｍＬ
の濃度で作製した。一連の試料を、室温、冷蔵庫（４℃）および−２０°の冷凍庫で保存
した。様々な時点におけるこれらの溶液の観察は、２４時間以内に、保存温度に関わらず
、参照物質は、微粉末として沈殿し始めることを示す。ロット０５０も、３日後に溶液か
ら、しかしわずかに塊状の物質として出てき始める。４℃での保存は、ロット０５０の沈
殿に悪影響を及ぼす。８日後、参照標準およびロット０５０の両方は、４℃および室温で
検出された固体の有意な量を有し、結晶が形成し始めた。凍結および解凍は、不当な沈殿
を引き起こさない。比較的あまり純粋でない２つの調製物（ＭＴＤロットおよびロット０
０５−２）は、溶液から出てこない。いかなる特定の理論にも拘束されることを望まない
が、これは、より多くの不純物が溶解度を増加させるためのようである。
【００８２】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）：Ｃ２Ｅ２の試料（約５ｍｇ）をクリンプし、加熱速度１
０．００℃／分で２５℃から３２０℃の範囲にわたってＤＳＣにより評価した。試料をま
た、加熱速度１０℃／分および冷却速度５℃／分で２５から１５０℃に３回サイクルさせ
た。ＤＳＣ分析の結果を図３に示す。ＭＴＤロットおよび参照標準の両方は、１２０℃に
近い融点を示す。ロット０５０は、約１４０℃の融点を有する。ロット０５０の場合の投
与製剤から濾過された物質も、約１４０℃の融点を有し、投与調製物に用いたＣ２Ｅ２が
、溶液から出てくるものと同じ組成を有することを示唆する。融点の差は、恐らくは異な
る溶媒和物の存在による多形体の存在を示唆する。
【００８３】
興味あることに、Ｃ２Ｅ２の不純なバッチ（ロット００５−２）は、１つは１２０℃の
近く、他は１４０℃の近くである２つの融点を有する。当初第２のピークは、ＭＳおよび
ＨＰＬＣにより検出されたＣ２Ｅ３のためと推測されたが、いかなる特定の理論にも拘束
されることを望まないが、それは今や、２つのピークは、存在する２種類のＣ２Ｅ２を示
すように思われる。これらのピークの両方ともは、広がっており、恐らくは不純物（ＮＭ
Ｒ／ＨＰＬＣ／ＭＳにより検出されたＣ２Ｅ３など）の結果である。
【００８４】
Ｃ２Ｅ２は、１５０℃を超える温度で燃え始める。２つの融点を有する物質（ロット０
０５−２）の混合バッチを２５から１５０℃にゆっくりとサイクルするとき、一方の融点
から別の融点へのシフトは見られない。事実、１つの加熱サイクル後に、他のピークは見
られなかったが、燃焼は吸熱で見られなかった。いかなる特定の理論にも拘束されること
を望まないが、より低い温度からより高い温度へのシフトが起こると予測されていたが、
サイクリング条件が理想的でなかったようである。
【００８５】
競合熟成実験（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  ｒｉｐｅｎｉｎｇ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ）
：短時間の競合熟成実験を行って、より安定な融点を決定した。ロット０５０および参照
標準のそれぞれ５０ｍｇを５００μＬの水中で合わせ、室温で一晩撹拌した。撹拌後、残
存している固体を液体から濾過し、乾燥させ、ＤＳＣにより分析した。競合成熟実験は、
２種の物質の撹拌混合物から回収された固体物質が１４０℃の単一融点のみを有すること
を示した。いかなる特定の理論にも拘束されることを望まないが、より高い温度の有利に
働くことは、より高い融点を有する物質がより安定な化合物であることを示唆する。
【００８６】
熱重量分析：熱重量分析（ＴＧＡ）である、第２の熱分析方法を用いて、化合物を特徴
付けした。ＴＧＡにより、温度の関数として熱的に誘導された重量損失が測定され、した
がって、化合物の脱溶媒和または分解を研究するために使用することができる。この情報
は、脱溶媒和過程が重量変化を伴うので、ＤＳＣデータと組み合わせて有用であるが、固
−液または固−固相転移は、変化を伴わず、したがって、ＴＧＡサーモグラム上に存在し
ない。両合成方法からの固体をＴＧＡ上に置き、以下の方法を用いて加熱した。初期温度
を２５℃に設定し、温度を１０℃／分で１００℃に上昇させた。等温段階を１００℃で５
分間導入し、水損失のすべてが起こったことを確実にし、次いで、温度を１０℃／分で１
７０℃にさらに上昇させた（図４）。
【００８７】
最初に、ＴＧＡデータにより、関連温度でいずれの化合物についてもＴＧＡサーモグラ
ム上で観察された有意な重量変化は存在しなかったので、ＤＳＣで観察された吸熱は融点
であり、これは、分解または脱溶媒和よりもむしろ相変化を示している。ロット０５０は
、表面水の存在のためであり得る徐々の重量損失を示す。ＭＴＤロットは、１１６〜１２
３℃で０．５％の減少は別として重量の有意な損失を有しない。いかなる特定の理論にも
拘束されることを望まないが、化学量論的重量損失が見られないという事実のために、こ
れが水和物または溶媒和物の存在に起因する可能性は低い。小さい重量損失は、多形体が
溶融し始めるにつれて放出される不純物であり得る。多形体は両方とも、急速な重量損失
により見られるようにほぼ１７０℃で分解し始める。
【００８８】
元素分析：元素分析は、参照標準およびロット０５０の試料で行った。分析に要求した
元素は、Ｃ、Ｈ、Ｎ、およびＯであった。Ｃ２Ｅ２元素分析の結果を表３に示す。参照標
準は、合計して全重量の９８．９２％になり、非常に小さいレベルの汚染を示す。他方で
、ロット０５０の試料は、説明されていない１．９３重量パーセントを有する。したがっ
て、溶媒が合成ロット間に見られる差の主要因である可能性は低い。
【００８９】
【表３】
2018188459.tif 000009
【００９０】
ＩＰＣ／ＭＳ：Ｃ２Ｅ２における差の可能性として金属キレートを排除するために、各
調製物をＩＣＰ−ＭＳにより分析した。Ｃ２Ｅ２（参照標準およびロット０５０）の希釈
液を水中で１１０ｍｇ／ｍＬの濃度に作製した。結果を図５に示す。２種類のＣ２Ｅ２試
料間に注目すべき差は存在しない。ナトリウムは、１１０ｍｇ／ｍＬのＣ２Ｅ２について
２から３μｇ／ｍＬ間の、検出された最も高い濃度を有する。他の元素（マグネシウム、
カリウム、鉄および亜鉛）は、５００ｎｇ／ｍＬ未満の濃度で存在し、２種の試料間でほ
とんど等しい。この少量の金属は、恐らくは用いた水またはガラス器のためであり、ＤＳ
Ｃで見られる融点の明確な差に起因していないようである。
【００９１】
Ｘ線粉末回折：Ｃ２Ｅ２（参照標準、ＭＴＤロット、ロット０５０およびロット００５
−２）の試料をグラクソスミスクライン（ＧＳＫ）のＫ  ＳｕｅｄａによってＸ線粉末回
折で分析した。Ｃ２Ｅ２試料の分析は、Ｋ  Ｓｕｅｄａが行い、結果は図６〜図８に示す
。４つのスペクトルのすべてを図６に示す。参照標準とＭＴＤロットとのオーバーレイは
、ほんのわずかな差の同じ結晶構造を示し（図７）、ロット０５０およびロット００５−
２の結晶構造とは明確に異なる。ロット０５０およびロット００５−２は、互いに異なる
（ＨＰＬＣおよびＤＳＣデータを確認して）（図８）。ロット００５−２は、参照標準お
よびＭＴＤロットに、より近くに似ており、いかなる特定の理論にも拘束されることを望
まないが、結晶の混合物であり得る。
【００９２】
いかなる特定の理論にも拘束されることを望まないが、Ｃ２Ｅ２試料間の差は、溶媒和
またはキレート化のためでなく、最もありそうなのは多形の場合である。ロット０５０は
、その固相でより安定（より高い融点）であるように見える。
【００９３】
走査電子顕微鏡法：２つの多形体の存在の最終確認は、走査電子顕微鏡法を用いて得た
。粉末化試料を５ｎｍ厚コーティングでスパッタコーティングし、画像化した。Ｃ２Ｅ２
のＭＴＤロットは、図９に示すようにはっきりと異なる結晶形態を所有するロット０５０
の拡散状晶癖（ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ  ｈａｂｉｔ）と対照的に、事実上うろこ状である。
【００９４】
いかなる特定の理論にも拘束されることを望まないが、上で検討したデータは、Ｃ２Ｅ
２が少なくとも２つの多形形態を有することを示唆する。より高い融点およびより低い溶
解度（冷蔵庫中で保存の間に析出することとして観察された）は、ロット０５０で見られ
る多形体が最も安定であることを示唆する。
【００９５】
Ｃ２Ｅ２の再結晶研究：ロット０５０は、エタノールならびに恐らく少量のＣ２Ｅ３お
よびＣ２Ｅ１であるＡＰＩ関連物質の、既知不純物を有する。この物質のクロマトグラム
を図１０に示す。１１．８６分のＲＴを有する小ピークは、この注入で５．２％の近似面
積を有する。検出されたＣ２Ｅ１（ＲＴ約４．５分）は存在せず、２．５分でのピークは
、注入死容積と一致する。
【００９６】
Ｃ２Ｅ２の溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）を水中で調製し、数週間放置後に透明な立方晶系
結晶を生成した。少量のこれらの結晶を水に溶解させ、ＨＰＬＣにより分析した。得られ
たクロマトグラムを図１１に示す。Ｃ２Ｅ３（ＲＴ１１．８）のピーク面積は、約２．６
％にわずかに減少したが、Ｃ２Ｅ１のピークは、５．７％に増加した。
【００９７】
エタノールからのＣ２Ｅ２の再結晶も、可能な経路と特定して、純度を改善した。した
がって、Ｃ２Ｅ２のほんの一部をすべての物質が溶解するまでエタノール（２００プルー
フ）中で加熱した。バイアルを冷却し、Ｃ２Ｅ２がゆっくり沈殿した。エタノールの加熱
および冷却から得られた物質は、事実上白色で粉末状の、個別の目に見える結晶というよ
りはむしろ微結晶の結晶であった。図１２および図１３は、エタノール中１時間の加熱（
エタノール中Ｃ２Ｅ２の溶解は遅い）からの固体および液体物質のクロマトグラムを示す
。
【００９８】
この実験から回収した固体物質は、Ｃ２Ｅ３（８．８％）およびＣ２Ｅ１（４．３％）
のパーセント増加を示し、「精製」のこの経路が、参照標準品質物質をもたらすようでは
ないことを示唆する。Ｃ２Ｅ３（ＲＴ１１．８）に富む一方で濾液は相当量のＣ２Ｅ２も
含有する。この残留物質は、所望の純度でＣ２Ｅ２を生成しない一方で相当量のＣ２Ｅ２
が犠牲にされることを示唆する。
【００９９】
いかなる特定の理論にも拘束されることを望まないが、この研究は、Ｃ２Ｅ２の再結晶
が、一見したところ簡単でありながら、存在するＣ２Ｅ３を減少させる一方でより大量の
さらなる不純物を導入するようであることを示す。Ｃ２Ｅ２は溶液中で比較的安定である
が、熱または水分を加えることは、エステル化または脱エステル化をもたらし、Ｃ２Ｅ３
またはＣ２Ｅ１、およびＤＴＰＡを生成させるようである。
【０１００】
水溶解度
予備試験：Ｃ２Ｅ２の少量の試料（０．１ｇ、ＪＨ０１２Ｂ）を量り分け、２５ｍＬの
メスシリンダーに入れた。増加する容量の蒸留水を以下のチャートに従って添加した。
【０１０１】
【表４】
2018188459.tif 000010
【０１０２】
指示量の水のそれぞれの添加後、混合物を１０分間撹拌し、試料の溶解部分があるか目
視で検査した。予備試験は、Ｃ２Ｅ２が１０分後に１０ｍＬの水に可溶性であることを示
した。したがって、近似溶解度は１０〜５０ｇ／Ｌである。
【０１０３】
ＡＤＭＥ
代謝安定性：Ｃａｃｏ−２細胞は、輸送体、排出タンパク質および第ＩＩ相酵素を発現
するヒト結腸上皮癌細胞株であり、細胞透過性を薬剤吸収と相関させるために用いること
ができる。見掛け透過係数の決定に加えて、輸送の間のＣ２Ｅ２代謝の推定を得ることが
できる。これらの予備研究の目的は、さらなる研究を行うことができる線形濃度範囲を決
定するために、Ｃ２Ｅ２濃度（２５、５０および１００μＭ）の範囲を評価することであ
った。
【０１０４】
Ｃａｃｏ−２細胞（継代＃３９）を、５％ＣＯ２一定湿度環境において３７℃で７５ｃ
ｍ２Ｔ−フラスコ中で培養した。培地を１週に３回置き換え、単層を継代＃４１に継代培
養した。細胞をプレーティングする場合、０．５ｍＬの１２０，０００個細胞／ｍＬ懸濁
液を第１の各頂端（ａｐｉｃａｌ）（ＡＰ）区画に添加し、次いで、１．５ｍＬの細胞培
地をＴｒａｎｓｗｅｌｌｓ（登録商標）の側底（ＢＬ）区画に入れた。週に２〜３回培地
を変えてＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）プレート上で２１〜２４日後、Ｃａｃｏ−２輸
送研究を行った。
【０１０５】
輸送実験前に、輸送培地を３７℃に加温した。輸送培地は、カルシウムおよびマグネシ
ウムを含むハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）（１×）５００ｍＬからなり、１Ｍ  ＨＥ
ＰＥＳ緩衝液（５ｍＬ）およびＨＢＳＳ中１．２５Ｍ  Ｄ−グルコース溶液（１０ｍＬ）
を添加した。細胞培地をＴｒａｎｓｗｅｌｌｓ（登録商標）から取り出して、実験に使用
し、各ウェルを温かい輸送培地で２回洗浄した。次いで、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌｓ（登録商
標）を輸送培地と一緒に３０分間予備インキュベートした。最終的に、電圧抵抗計および
チョップスティック型電極を用いて、各Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）についての経上
皮抵抗（ＴＥＥＲ）値を測定した。ＴＥＥＲ値は、３００〜７５０の範囲であるべきであ
り、可能な限り変わるべきでない。投与溶液を、温かい（３７℃）輸送培地中で調製した
。予備インキュベートした輸送培地をＴｒａｎｓｗｅｌｌｓ（登録商標）から取り出し、
１．５ｍＬの新鮮３７℃輸送培地をピペットで取って受容体区画（ａｃｃｅｐｔｏｒ  ｃ
ｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）に入れた。ゼロ時間で、０．５ｍＬの用量をピペットで取って供
与体区画（ｄｏｎｏｒ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）に入れた。次いで、Ｔｒａｎｓｗｅｌ
ｌｓ（登録商標）を３７℃のインキュベータに実験の継続時間置いた。各時点（２０、４
０、６０および１２０分）で、輸送培地を集め、アセトニトリルで希釈した。１．５ｍＬ
の新鮮予熱輸送培地が入っている新たな受容体区画に、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）
を移した。次いで、Ｃ２Ｅ２の濃度をＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより決定した。投与溶液の濃度
も、ゼロ時点で供与体区画における濃度を決定するために測定した。これらの予備研究の
間、頂端区画から側底区画への輸送を調査した。
【０１０６】
Ｃ２Ｅ２は、試験したすべての濃度で側底受け区画（ｒｅｃｅｉｖｅｒ  ｃｏｍｐａｒ
ｔｍｅｎｔ）において検出した。膜を通過した用量のパーセントは、図１４に示すように
３つの濃度すべてについて同様であった。用量の１８〜２２％を、受け区画（ｒｅｃｅｉ
ｖｉｎｇ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）において検出した。いずれの株も統計的には異なら
なかったが、１００μＭのプレートは、最低パーセントの輸送を示した。
【０１０７】
これらの実験の目標の一つは、これらの用量において線形応答があるかどうか決定する
ことであった。図１５は、各濃度について計算したフラックスを示す。フラックスは単位
時間当たり膜を通って移動する物質の質量の尺度であるので、用量応答が線形である場合
、濃度が高ければ高いほど、より高いフラックスを示すはずである。これらの実験におい
て、最高の用量レベルが最低のフラックスを有した。いかなる特定の理論にも拘束される
ことを望まないが、これは、濃度がもはや線形範囲にないからであり得、あるいは、それ
は、１００μＭの試料を別個の実験で行ったので、質量分析計でのこのデータの処理のた
めであり得る。すべての試料濃度からのデータは、データが同じように処理されることを
確保するために組み合わせおよび再処理されるべきである。
【０１０８】
図１６は、Ｃ２Ｅ２の用量増加に伴う見掛け透過係数の減少を示す。Ｃ２Ｅ２が受動拡
散により吸収された場合、その透過係数は一定であるはずである。したがって、この減少
は、いくつかの理由のためであり得る。吸収は仲介された輸送であり得、Ｃ２Ｅ２の増加
する濃度では、Ｃａｃｏ−２細胞中への頂端取り込みまたは側底排出のいずれかが飽和に
なる。あるいは、ｐ−ｇｐが頂端膜上にＣ２Ｅ２を排出し、それにより吸収を制限し得る
。側底から頂端側へのＣ２Ｅ２の輸送の測定、およびＣ２Ｅ２の輸送に対するｐ−ｇｐ阻
害剤の効果の評価などのさらなる実験が、濃度増加に伴うＰａｐｐの減少の原因を決定す
るために必要である。
【０１０９】
Ｃａｃｏ−２実験で決定した見掛け透過係数とヒトに吸収された用量パーセントとの関
係は、Ｓｈｉｙｉｎ  Ｙｅｅ（Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１９９７  Ｊｕｎ；１４（６）；
７６３−６）に記載されており、その内容はその全体がこの段落に関連した教示について
参照により本明細書に組み込まれる。Ｓｈｉｙｉｎ  Ｙｅｅのデータに基づくと、実測さ
れた見掛け透過係数４．８８×１０−６ｃｍ／秒は、溶解およびＧＩ代謝が制限因子でな
いことを条件として、Ｃ２Ｅ２がヒトに中程度に（２０〜７０％）吸収されることを示唆
する。
【０１１０】
効力
ラットにおけるＣ２Ｅ２単回用量体外除去の要約：この研究は、２４１Ａｍ汚染ラット
におけるＣ２Ｅ２の単回強制経口投与用量の効力を評価することであった。２００μＬの
アリコートを硝酸２４１Ａｍの原液（５ｍＬの１Ｍ  ＨＮＯ３中０．１ｍＣｉ）から抜き
取り、蒸発乾固させ、濃ＨＮＯ３（１５Ｍ、５ｍＬ）に溶解させ、次いで、蒸発乾固させ
、希ＨＮＯ３（０．１Ｍ、８ｍＬ）に溶解させて、注射液を形成した。ＩＭ注射（０．１
μＬ）により２５０ｎＣｉの硝酸２４１Ａｍで４匹の雌スプレーグドーリーラットの群を
汚染し、次いで、滅菌水中１０％ｗ／ｗ溶液を用いて自由給餌条件下で２００、６００、
または１０００ｍｇ／ｋｇ（用量体積は、それぞれ、２００、６００、および１０００ｍ
ｇ／ｋｇ用量について２、６、および１０ｍＬ／ｋｇであった）で強制経口投与によりＣ
２Ｅ２の単回用量を投与した。研究の断食要素については、動物を、処置２４時間前、次
いで薬剤投与後２時間断食させた。餌および水を自由摂取とした対照群は、未処置であっ
たか、または１４ｍｇ／ｋｇ（標的用量体積０．７ｍＬ／ｋｇおよび濃度２０ｍｇ／ｍＬ
）でＤＴＰＡのカルシウム塩（Ｃａ−ＤＴＰＡ）のＩＶ用量を投与した。処置は、汚染１
日後に投与した。すべての動物を汚染７日後に安楽死させ、以下の組織、すなわち、同側
および反対側後肢筋組織ならびに注射部位からの生皮（ｐｅｌｔ）に加えて、肝臓、両腎
臓、両大腿骨を集めた。尿および糞を、汚染時から安楽死を通して集めた。ケージ洗浄物
も研究の最後に集め、総尿収集の一部とみなした。注射液の２つのアリコート（１００μ
Ｌ）を取り出し、放射能自動検出を用いて２４１Ａｍガンマ放射能を決定した。これらの
標準の平均が、すべての動物に用いた注射用量である。組織および試料のすべてを同様に
計数した。アメリシウム含有量は、注射用量のパーセントとして表した。この研究におけ
るすべての群にわたる放射能の全体回収は、およそ９０％であった。表４は、未処置対照
の安楽死の時点における、およびＣａ−ＤＴＰＡまたはＣ２Ｅ２の単回用量後の総体外除
去および残留肝臓負荷量を示す。ＤＴＰＡおよびＣ２Ｅ２の両方により増強された２４１
Ａｍの排泄が生じた主要経路は、尿クリアランスによっていた。結果は、給餌状態が総２
４１Ａｍクリラランスに影響を与えなかったことを示唆する。２４１Ａｍの糞クリアラン
スは、給餌状態によって変更されず、研究の最後での２群間の同様の肝臓負荷量と一致す
る観察結果であった。この研究は、Ｃ２Ｅ２が雌ラットにおける総体外除去を増加させ、
用量依存的に２４１Ａｍ肝臓負荷量を減少させることを実証した。ＤＴＰＡと同様に、Ｃ
２Ｅ２による体外除去増強が、尿クリアランスの増強によって生じた。
【０１１１】
【表５】
2018188459.tif 000011
【０１１２】
この研究の全詳細は、以下の通りである。雄および雌のスプレーグドーリーラット（ｎ
＝４／性別／用量）に、自由および断食条件下で２４１Ａｍ（ＮＯ３）３（２５０ｎＣｉ
）で筋内汚染２４時間後に強制経口投与によりジエチレントリアミン五酢酸ジエチルエス
テル（Ｃ２Ｅ２）の単回経口用量を投与した。動物は、２００、６００、または１０００
ｍｇ／ｋｇのＣ２Ｅ２の単回経口名目用量を受けた。未処置動物および汚染２４時間後に
Ｃａ−ＤＴＰＡの静脈内用量（１３．３ｍｇ／ｋｇ）で処置した動物が、対照としての役
割を果たし、自由条件のみを対照動物に用いた。総放射性核種体外除去および放射性核種
組織負荷量を汚染７日後に評価した。
【０１１３】
Ｃ２Ｅ２処置後の雄および雌の両方のラットでＣ２Ｅ２用量依存性アメリシウム体外除
去が観察され、６００ｍｇ／ｋｇ以上の用量でＣ２Ｅ２処置の恩恵は明らかであった。１
０００ｍｇ／ｋｇで、単回Ｃ２Ｅ２経口用量は、効力の点で、Ｃａ−ＤＴＰＡの静脈内用
量（１３．３ｍｇ／ｋｇ）と同等であるが、等価性分析は行わなかった。調査した効果の
中でも、本研究は、ラット性別がアメリシウム体外除去および組織負荷量に有意に影響す
るが、Ｃ２Ｅ２用量の投与前の断食はそうでないことを確立した。この決定は、統計分析
のために組み合わせた自由および断食群からのデータをもたらし、雄および雌の群は依然
として別個の分析を必要とした。従来の単回用量毒物学研究（ＵＮＣ−１１．２４０−Ｒ
ＭＴＤ）と一致して、Ｃ２Ｅ２関連臨床徴候は、７日の期間にわたって観察されなかった
。
【０１１４】
主要組織におけるアメリシウムの量を減少させ、かつ身体から除去されるアメリシウム
の量を増加させることによって、単回経口Ｃ２Ｅ２用量は、汚染のラット創傷モデルにお
けるアメリシウム汚染を有効に処置することができる。Ｃ２Ｅ２効力は、その種について
の最大耐性単回用量（２０００ｍｇ／ｋｇ）よりも相当に下回った用量で実証されている
。
【０１１５】
導入および目的：この研究の目的は、Ｃ２Ｅ２の単回経口用量後の２４１Ａｍの組織負
荷量および体外除去に対する餌、性別、および用量の効果を調査することであった。この
研究のために選択した汚染と処置の間の遅延時間は２４時間であった。これは、大量の死
傷者状況において経口投与された薬剤の現実的な処置遅延時間を反映している。この研究
から得られた結果は、ラットにおける投与レジメン薬理学研究を設計するために使用する
。
【０１１６】
材料および方法：この研究は、Ｃｈａｐｅｌ  Ｈｉｌｌ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ  ＵＮＣ−
１００８６−Ｅ７ＳＤにおいてノースカロライナ大学の下で行った。
【０１１７】
試験品および対照品：ＭＴＤロットからのＣ２Ｅ２である、試験品を９８％純粋である
と文書化し、純度の修正は用量液の調製の際に行わなかった。試験品を室温で保存した。
対照品（Ｃａ−ＤＴＰＡ；Ｈａｍｅｌｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を室温で保
存した。配置の記録を研究ファイルに保持した。
【０１１８】
試験品および対照品の製剤化：試験品を投与のそれぞれの日に滅菌水（Ｈｏｓｐｉｒａ
Ｉｎｃ．）に溶解させて、１０％ｗ／ｗ溶液を得た。対照品（Ｃａ−ＤＴＰＡ）を投与
の日に０．９％生理食塩水（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）に希釈した。
投与溶液の分析は行わなかった。
【０１１９】
放射性核種調製：２４１Ａｍ注射液を調製した。２４１Ａｍ（ＮＯ３）３原液（１Ｍ  
ＨＮＯ３中０．１ｍＣｉ／ｍＬ）の２００μＬアリコートを取り出し、２０ｍＬのガラス
製バイアル内に入れた。このアリコートを撹拌油浴中で蒸発乾固させた。濃硝酸（１５Ｍ
、約５ｍＬ）を乾燥硝酸アメリシウムに添加し、得られた溶液を蒸発乾固させた。注射液
を形成するために、希硝酸（０．１Ｍ、８ｍＬ）を乾燥２０ｍＬバイアルに加え、次いで
、この溶液を１０ｍＬ注射バイアル中に濾過し、使用まで、蓋をし、しっかり保存した。
【０１２０】
試験系：ナイーブな、および頚静脈カテーテルを挿入された雄および雌のスプレーグド
ーリーラットを、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｒａｌｅｉ
ｇｈ，ＮＣ）から購入した。それらが実験室に到着後間もなく、動物を発送用段ボールか
ら取り出し、調べた。疾患または物理的異常の証拠は特定されなかった。汚染時に、動物
は、２６０〜３１０ｇの雄および２１０〜３２０ｇの雌であった。すべての動物の動態を
研究記録に文書化した。
【０１２１】
割り当て：体重を２４１Ａｍ投与前に測定した。研究下に置いた動物の個別の体重は、
１つの例外（体重が平均の−２０．５％の雌）とともに、それぞれの性別について平均体
重の±２０％以内であった。予備研究観察に基づいて研究に適切とみなした動物を、試験
品または対照品群に割り当てた。スペース制限のために動物を無作為化しなかった。
【０１２２】
識別：受け取り後、各動物に一時的な識別番号およびケージ配置を割り当てた。汚染直
後に、動物にケージ番号および配置ならびに試験施設により割り当てられた独自の番号を
割り当てた（表５）。
【０１２３】
動物飼育：動物を代謝ケージ（Ｔｅｃｈｎｉｐｌａｓｔ  ＵＳＡ）に個別に収容した。
環境パラメータを記録し、研究ファイルに収録した。収容領域における温度（所望範囲６
８±３°Ｆ）、湿度（およそ３０から７０％）、電光（１２時間明／暗サイクル；０７０
０〜１９００時間）、および換気（１時間当たり２０〜３０回換気）をモニターして、条
件を可能な最大限で維持することを確実にした。部屋衛生設備および開閉室ドアは、一時
的に作り出された可動域を有してもよい。Ｃｈａｐｅｌ  Ｈｉｌｌ、ＮＣ都市水道水から
の飲料水および標準的な齧歯動物餌（Ｌａｂｄｉｅｔ、Ｐｒｏｌａｂ  ＲＭＨ  ３０００
）を、指示された場合を除いて自由に与えた。
【０１２４】
実験群：個別動物番号割り当ておよび実験群を表５に示す。
【０１２５】
【表６】
2018188459.tif 000012
【０１２６】
アメリシウム汚染：雄および雌のスプレーグドーリーラットを、イソフルラン麻酔下、
右後肢への筋内注射（０．１ｍＬ、０．１Ｍ  ＨＮＯ３）により２４１Ａｍ（ＮＯ３）３
（０．２５μＣｉ）で汚染した。注射直後に、体重を記録し（０日目体重）、動物を個別
の代謝ゲージに入れた。
【０１２７】
断食：汚染およそ８時間後−かつ試験品投与１６時間前−に、断食群に割り当てたラッ
トは、それらの代謝ゲージから餌チャンバを取り出し、それらの収容チャンバから容器に
入っていないすべての餌を集めることによって制限される餌摂取とした。餌チャンバを強
制経口投与処置１時間後に交換し、餌の摂取を回復した。他の時間すべてにおいて、すべ
ての動物は、餌は自由摂取とした。
【０１２８】
試験品の投与：試験群に割り当てた雄および雌のスプレーグドーリーラットはそれぞれ
、汚染２４時間後に水中１０％ｗ／ｗ溶液を用いて、０、２００、６００、または１００
０ｍｇ／ｋｇのＣ２Ｅ２の単回強制経口投与用量を受けた。一部の動物では、放射性核種
の広がりを減少させるための投与の間に短時間暴露イソフルラン（気化器により５％）を
必要とした。これらの群の用量体積は、２〜１０ｍＬ／ｋｇの範囲であった。用量は、０
日目体重（汚染直後）に基づいた。各ラットに投与した投与溶液の質量を記録した。
【０１２９】
対照品の投与：イソフルラン麻酔下、４匹の雄および４匹の雌スプレーグドーリーラッ
トはそれぞれ、０．９％滅菌生理食塩水の０．６７ｍＬ／ｋｇ、続いて、０．２ｍＬのフ
ラッシュを用いて、汚染２４時間後に頚静脈カテーテルを介してＣａ−ＤＴＰＡ液の単回
静脈内用量（１３．３ｍｇ／ｋｇ）を受けた。投与されたＣａ−ＤＴＰＡ投与溶液の質量
を記録した。用量は、０日目体重（汚染直後に記録した）に基づいた。
【０１３０】
安楽死：イソフルラン過量摂取による予定された安楽死および開胸を、汚染７日後に行
った。
【０１３１】
生存率検査：すべての動物を、羅患率、死亡率、および全体的外観について少なくとも
１日１回観察した。
【０１３２】
排泄物：排泄された尿および糞を毎日集め、一晩乾燥させ、２０ｍＬのシンチレーショ
ンバイアルに移し、秤量し、２４１Ａｍガンマ放射能の検出のためにガンマカウンタ（Ｗ
ｉｚａｒｄ２  ２４８０、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）内に置いた。
【０１３３】
体重：各ラットを汚染時（０日目）に体重を量り、終末体重（７日目）を剖検時に取っ
た。
【０１３４】
餌消費：餌消費は、目視検査により毎日モニターして、十分量の給餌が必ずあるように
した。動物は、指示された場合を除いて、それらに利用できる給餌の連続的供給を受けた
。
【０１３５】
死後：予定された動物を剖検室に運び、イソフルラン過量摂取により安楽死させ、続い
て、開胸し、それらの終末体重を記録し、選択した組織を取り出し、秤量し、２４１Ａｍ
ガンマ放射能の検出のためにガンマカウンタ（Ｗｉｚａｒｄ２  ２４８０、Ｐｅｒｋｉｎ
Ｅｌｍｅｒ）内に置いた。
【０１３６】
試料分析：動物に投与した２４１Ａｍの総量は、ガンマカウンタ（ｗｉｚａｒｄシリー
ズ、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を使用して注射液の二重アリコート（１００μＬ）中２
４１Ａｍにより放出された５９．７ｋｅＶホトンを定量化することによって決定した。４
０〜８０ｋｅＶの計数ウィンドウおよび６０秒計数時間を取得のために用い、各読み出し
を取得時のバックグラウンドについて補正した。実験の組織および試料のすべてを、同じ
ガンマカウンタおよびプロトコルを用いて計数した。すべての試料について、２４１Ａｍ
含有量は、初期用量のパーセントとして表した。注射部位と反対の下肢からの大腿骨を、
総骨格２４１Ａｍ負荷量を推定するために２０倍で基準化した。
【０１３７】
統計：統計分析は、最終体外除去パラメータ−総体外除去、肝臓負荷量、創傷保持率お
よび推定骨格負荷量について行った。Ｃ２Ｅ２で処置した動物のすべてを、ＡＮＯＶＡに
より分析して、性別、用量および給餌状態の効果を評価した。非寄与効果をモデルから取
り除き、対照データ（未処置およびＣａ−ＤＴＰＡ処置群）をその後の分析のために含め
た。ＡＮＯＶＡを実行し、最小二乗平均をこのモデルで群のすべてについて計算した。平
均の比較を、ｐ＜０．０５を有意とみなして、多重比較のためのテューキー−クレーマー
調整を用いて行った。
【０１３８】
結果
動物：雄および雌のラットの汚染およびその後の処置は、６月９日から８月２４日の間
に９つのコホートで行われた。８月２日に開始したコホートの３匹の雄ラットは、強制経
口投与処置の間に実験者の誤りの結果として死に、これらの失われた動物を置き換えるた
めに追加の動物を８月２４日のコホートに加えた。いくつかの困難を雌ラットに投与する
際に経験した。具体的には、５匹の雌ラットで強制経口投与の間に投与液を口内に認めた
。投与液が口に含まれたままの２例では、実測体積を問題にはならないとみなし、副作用
が認められず、これらのラットを分析に維持した。しかしながら、３匹のラットにおいて
口からの用量のいくらかの損失が生じ、短時間の呼吸困難を認めたので用量の部分吸引が
行われた場合がある。これらの動物における投与の副作用は投与１時間後に認められず、
それらは研究の生存中の部分を終了したが、これらの動物はデータ分析から除いた。
【０１３９】
臨床観察：雄のラットまたは雌のラットについて有害なＣ２Ｅ２暴露関連臨床観察は、
いずれの用量群においても確認できなかった。個別の動物臨床観察データを、研究ファイ
ルに日常ケージ観察シートでの１日ごとの排泄物データと一緒に含めた。
【０１４０】
体重：体重を、すべての動物について汚染時および安楽死時に記録した。研究の間の平
均体重および体重の変化パーセントを表６および表７に示す。有意な差が、雄および雌の
両動物における異なる群間に認められたが、これらは、研究の結果に影響することは予想
されない。１匹の雌動物（平均の−２０．５％体重）は、理想体重範囲（性別について平
均体重の２０％）の外側であるにもかかわらず、研究に含めた。
【０１４１】
【表７】
2018188459.tif 000013
【０１４２】
【表８】
2018188459.tif 000014
【０１４３】
２４１Ａｍ排泄のデータ分析：６４匹のラットが研究を終了し、これらのうちで６１匹
のラット（３２匹の雄および２９匹の雌）をデータ分析に含めた。３匹の断食雌ラット（
１×６００ｍｇ／ｋｇ；２×１０００ｍｇ／ｋｇ）を、それらが完全な用量を受けなかっ
たのでデータセットから除いた。
【０１４４】
２４１Ａｍ体外除去に対する餌の影響：雄（図１７）および雌（図１８）のラットから
の排尿排糞日量中のアメリシウム含有量は、Ｃ２Ｅ２用量の効力が、それらのＣ２Ｅ２処
置前のラットの断食によって変化しなかったことを示す。
【０１４５】
Ｃ２Ｅ２で処置されたラットのすべてについて汚染７日後で達成された総体外除去の分
析は、性別（Ｆ（１，４４）＝１７．５４、ｐ＜０．００１）およびＣ２Ｅ２用量（Ｆ（
２，４４）＝４０．７１、ｐ＜０．００１）について有意な効果を示したが、処置時の給
餌状態（Ｆ（１，４４）＝１．５１、ｐ＝０．２３）については示さず、図１７および図
１８における観察を裏付けた。効果間の相互作用は有意とみなされず、したがって、その
後の分析について自由群と断食群とを組み合わせた。統計分析は、１日ごとのデータには
適用しなかった。
【０１４６】
２４１Ａｍ体外除去に対する性別の効果：雄ラットにおけるアメリシウム体外除去は、
雌ラットにおけるものよりも研究の７日間にわたって有意に大きかった（Ｆ（１，６０）
＝２１．３７、ｐ＜０．００１；図１９）。性別間の実測差は、異なる処置群のすべて（
未処置、３つのＣ２Ｅ２用量およびＣａ−ＤＴＰＡ）にわたって一致しており、いずれの
個別の処置レベルにおいても統計的に有意でない。
【０１４７】
２４１Ａｍ体外除去に対するＣ２Ｅ２用量の効果：Ｃ２Ｅ２は、雄および雌のラットに
おいて用量依存的にアメリシウムの排泄を増強した。雄ラットにおいて、総体外除去は、
６００ｍｇ／ｋｇ以上の用量で未処置対照と比較して有意に増加し（ｐ＜０．００１）、
６００ｍｇ／ｋｇから１０００ｍｇ／ｋｇに用量を増加させることも、体外除去を有意に
増加させた（ｐ＜０．０５）。同様の傾向が、有意に増強した体外除去（ｐ＜０．００１
）を生じさせる６００ｍｇ／ｋｇを超える用量の雌ラットで観察され、１０００ｍｇ／ｋ
ｇ用量は、６００ｍｇ／ｋｇ用量よりもより有効であるように見えるが、これは統計的有
意に達しなかった。
【０１４８】
２４１Ａｍ組織負荷量のデータ分析：研究を終了した６４匹のラットすべてから組織お
よび臓器を集め、これらのうちで６１匹のラット（３２匹の雄および２９匹の雌）をデー
タ分析に含めた。３匹の断食雌ラット（１×６００ｍｇ／ｋｇ；２×１０００ｍｇ／ｋｇ
）を、それらが完全な用量を受けなかったのでデータセットから除いた。
【０１４９】
２４１Ａｍ組織負荷量に対する餌の効果：筋内汚染１日後に２００、６００、または１
０００ｍｇ／ｋｇのＣ２Ｅ２で処置した動物において汚染７日後に、肝臓、創傷部位組織
におけるアメリシウム負荷量を決定し、および骨格負荷量を推定した。組織のすべてにつ
いて、餌を自由摂取としたラットとＣ２Ｅ２処置前に一晩断食したラットとの間にアメリ
シウム負荷量の差は認められなかった（肝臓、Ｆ（１，４４）＝０．０２、ｐ＝０．８８
；創傷、Ｆ（１，４４）＝０．８４、ｐ＝０．３７；骨格、Ｆ（１，４４）＝０．０２、
ｐ＝０．８８）。対照的に、これらの動物において、性別は重要な要因であり、雄ラット
は、雌ラットよりも低い保持率を有した（肝臓、Ｆ（１，４４）＝７２．９７、ｐ＜０．
００１；創傷、Ｆ（１，４４）＝１２．８７、ｐ＜０．０１；骨格、Ｆ（１，４４）＝４
８．２９、ｐ＜０．００１）。実にＣ２Ｅ２用量も、組織負荷量に影響した（肝臓、Ｆ（
２，４４）＝８．５２、ｐ＜０．０１；創傷、Ｆ（２，４４）＝１０．０３、ｐ＜０．０
０１；骨格、Ｆ（１，４４）＝４．７９、ｐ＜０．０５）。効果間の相互作用は、有意と
みなさず、その後の分析について、自由群と断食群を組み合わせた。
【０１５０】
２４１Ａｍ組織負荷量に対する性別の効果：研究における動物すべてについて、雌ラッ
トにおけるよりも雄ラットにおいてより低い肝臓および創傷部位のアメリシウム負荷量を
認めた（肝臓、Ｆ（１，６０）＝９１．２４、ｐ＜０．００１）および創傷、Ｆ（１，６
０）＝１８．５９、ｐ＜０．００１）。雌ラットにおける創傷部位でのより高い平均アメ
リシウム保持率の傾向はすべての群にわたって認められたが（図２０）、それは単に２０
０ｍｇ／ｋｇのＣ２Ｅ２用量において統計的有意に達しただけであった（ｐ＜０．０５）
。Ｃａ−ＤＴＰＡおよびＣ２Ｅ２は、雌ラット肝臓と比較して雄ラット肝臓におけるアメ
リシウム負荷量を減少させ（１４ｍｇ／ｋｇのＣａ−ＤＴＰＡ、ｐ＜０．０５；２００お
よび６００ｍｇ／ｋｇのＣ２Ｅ２、ｐ＜０．００１；ならびに１０００ｍｇ／ｋｇのＣ２
Ｅ２、ｐ＜０．０５）、未処置ラットにおけるアメリシウム負荷量は、性別間で有意には
異ならなかった（ｐ＝０．４２）。肝臓および創傷部位とは対照的に、推定骨格負荷量は
、雄ラットにおけるよりも雌ラットで低かった（Ｆ（１，６０）＝５８．５１、ｐ＜０．
００１）。Ｃａ−ＤＴＰＡ群において、推定骨格負荷量は、他の群すべてについて性別に
より有意には影響されず（ｐ＝１．００）、雌アメリシウム骨格負荷量の推定値は、同等
の雄におけるよりも低かった（未処置および２００ｍｇ／ｋｇのＣ２Ｅ２、ｐ＜０．００
１；６００および１０００ｍｇ／ｋｇのＣ２Ｅ２、ｐ＜０．０５）。
【０１５１】
２４１Ａｍ組織負荷量に対するＣ２Ｅ２用量の効果：雄および雌の両方のラットにおい
て、Ｃ２Ｅ２は、肝臓、骨格、および創傷部位におけるアメリシウム負荷量を減少させた
。雄ラットにおいて、肝臓負荷量は、２００ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０５）および１０００
ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．００１）の用量での未処置対照と比較して有意に減少した。６００
ｍｇ／ｋｇのＣ２Ｅ２用量後の肝臓負荷用量は、統計的有意（ｐ＝０．０５６）に達しな
かったが、それはＣ２Ｅ２処置が肝臓負荷量を減少させる傾向と一致している。２４１Ａ
ｍ肝臓負荷量における用量依存性減少が、雌ラットで認められた。１０００ｍｇ／ｋｇ用
量において、１０００ｍｇ／ｋｇ用量後の負荷量の減少のみが、未処置対照と比較して統
計的に有意であった（ｐ＜０．０１）。雄ラットにおける推定骨格アメリシウム負荷量は
、６００ｍｇ／ｋｇ以上の用量で未処置対照動物と比較して有意な減少とともにＣ２Ｅ２
用量依存的に減少した。雌ラットにおける骨格負荷量は、すべての群について雄ラットに
おけるよりも低く、Ｃ２Ｅ２処置によって有意には変化しなかった（図２１）。全体のＣ
２Ｅ２用量は、アメリシウムの創傷部位保持率に対して有意な効果であったが（Ｆ（３，
５２）＝７．９２、ｐ＜０．０１）、この効果は、いずれの単回Ｃ２Ｅ２用量での未処置
対照と比較して組織負荷量の有意な変化に相当しなかった（図２２）。雌ラットにおいて
、Ｃ２Ｅ２用量の増加に伴う負荷量減少の傾向が存在し得、Ｃ２Ｅ２は、雄ラットにおけ
る骨格負荷量に対して効果を有しないように見えた。
【０１５２】
結論として、Ｃ２Ｅ２の単回経口用量は、主要な手段−体外除去、肝臓負荷量および骨
格負荷量に基づく結果において有意な改善を引き起こすことができる。Ｃ２Ｅ２効力は、
餌に無関係であるが、それは性別に依存しており、この依存性は、未処置およびＣａ−Ｄ
ＴＰＡ処置動物間に見られた性別間の差と一致しており、直接のＣ２Ｅ２効果よりはむし
ろアメリシウムの生物動力学の性別差のためである。
【０１５３】
イヌにおける効力研究：イヌに、０日目に鼻のみの吸入によって２４１Ａｍ（３μＣｉ
／動物の標的）を投与した。暴露１日後に、動物はＣ２Ｅ２の３つの異なる経口用量（１
０、３００、５００ｍｇ／ｋｇ）の１つを受けた。群１は対照であり、非摂動生物動力学
の決定に用いた。Ｃ２Ｅ２投与１４日後に、動物を鎮静させて、安楽死させた。予備的尿
排泄および肝臓保持率データを得た（表８）。これらの結果は、汚染されたイヌに経口投
与されたＣ２Ｅ２が、放射性核種の尿排泄を増強し、肝臓負荷量を減少させることができ
ることを実証した。
【０１５４】
【表９】
2018188459.tif 000015
【０１５５】
毒性学
イヌにおける１０日間の反復用量研究：１０日間の１日強制経口投与用量を介してイヌ
に投与した場合、試験品Ｃ２Ｅ２の毒性を評価し、トキシコキネティクスを決定するため
に、探索的研究を行った。２匹のビーグル犬／性別の群に、０、６０、２００、４００、
または６００ｍｇ／ｋｇの用量レベルで強制経口投与を介してＣ２Ｅ２を投与した。ビヒ
クルは逆浸透水であり、用量体積は８ｍＬ／ｋｇであった。毒性の評価は、死亡率、臨床
観察、体重、餌消費、臨床病理学、肉眼的病理学、臓器重量、選択組織の組織病理学、お
よび血漿必須微量元素分析に基づいた。Ｃ２Ｅ２、Ｃ２Ｅ１、ＤＴＰＡおよびＣ２Ｅ３の
トキシコキネティクス評価のために、血液試料を１日目および１０日目に集めた。Ｃ２Ｅ
３は、用いたＣ２Ｅ２ロット中の不純物であると考えられる。
【０１５６】
６００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた１匹の雄および４００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた１匹の雄
の、２匹の動物を瀕死状態のために早期に犠牲にした。これらの動物は、それらのそれぞ
れの用量群において他の動物よりも特により高い血漿Ｃ２Ｅ２濃度を有した。臨床病理学
所見、および肝細胞変性／壊死の顕微鏡的証拠に基づいて、これらの動物の瀕死状態は、
主として試験品関連肝臓毒性のためであった。
【０１５７】
≧２００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた動物は、２つのタイプの試験品関連臨床観察を実証し
た。これらの観察は、典型的には用量投与直後の嘔吐（ｖｏｍｉｔｕｓ／ｅｍｅｓｉｓ）
、および典型的には用量投与の１時間以内に起こった糞異常（無形成、液体、または粘液
状）からなった。臨床観察は、翌朝までに消散した。用量依存性体重減少は、≧２００ｍ
ｇ／ｋｇ／日を与えた雄および≧４００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた雌に生じた。血漿中の必
須微量元素（Ｃｒ、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｇ、Ｍｎ、Ｍｏ、Ｓｅ、およびＺｎ）の試験品
関連枯渇は、６００ｍｇ／ｋｇ／日までの反復用量で１０日間のＣ２Ｅ２の経口投与後の
イヌで観察されなかった。肝臓毒性と一致する臨床的化学変化が、≧４００ｍｇ／ｋｇ／
日の用量で観察された。早期に犠牲にされた動物では、これらの変化は、６００ｍｇ／ｋ
ｇ／日を与え、かつ２日目に犠牲にした雄における顕著に増加したアスパラギン酸アミノ
トランスフェエラーゼ（ＡＳＴ）およびアラニンアミノトラスフェラーゼ（ＡＬＴ）活性
、ならびに４００ｍｇ／ｋｇ／日を与え、かつ６日目に犠牲にした雄における顕著に増加
したＡＬＴ活性を含んだ。１１日目に予定された剖検まで生存した動物では、軽度から中
程度に増加したＡＳＴ活性が、６００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた雄および雌で６日目、≧４
００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた雄および６００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた雌で１１日目に観察
された。軽度から顕著に増加したＡＬＴ活性が、≧４００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた動物で
投与期の６日目および１１日目に観察された。
【０１５８】
試験品関連の絶対的および相対的肝臓／胆嚢重量の減少が、６００ｍｇ／ｋｇ／日を与
えた雌で生じ、最小の肝細胞変性／壊死と相関しているようである。早期に犠牲にされた
雄の両方ともは、軽度（４００ｍｇ／ｋｇ／日）または重度（６００ｍｇ／ｋｇ／日）の
肝細胞変性／壊死を示した（６００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた動物における肝臓の赤色から
黄褐色の変色に相関した）。さらに、４００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた動物の肝臓は、軽度
の小葉中心性鬱血／出血、最小の茶色顆粒状色素、および最小の混合炎症を示した。両方
の動物は、最小（４００ｍｇ／ｋｇ／日）または軽度（６００ｍｇ／ｋｇ／日）の尿細管
細胞変性／壊死を示した。４００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた動物の腎臓は、最小の好塩基性
尿細管を示した。これらの動物における追加的な顕微鏡的所見は、腸管、胃、リンパ節、
前立腺、胸腺、脾臓、および腸管関連リンパ系組織の様々な部分で認められた。
【０１５９】
終末犠牲において、試験品関連の顕微鏡的所見が、肝臓、腎臓、および腸管の様々な部
分で存在した。肝細胞変性／壊死および混合細胞炎症が、≧２００ｍｇ／ｋｇ／日を与え
た雄で生じた。雌において、肝細胞変性／壊死が、６００ｍｇ／ｋｇ／日で存在し、混合
細胞炎症が≧４００ｍｇ／ｋｇ／日で存在した。６００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた雌は両方
とも、小葉中心性鬱血／出血を有し、数匹の雄および雌は、予定されない死で記載された
ものと同様の色素の蓄積を有した。６００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた雄は、肝実質内に単一
の血栓性血管を有した。最小の重症度および臨床病理学パラメータにおける相関差の欠如
に基づいて、２００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた雄の肝臓所見は、有害とみなされず、４００
または６００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた雄および６００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた雌における
他の顕微鏡的肝臓所見のすべては、有害とみなされた。
【０１６０】
腎臓において、尿細管細胞変性／壊死が、６００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた１匹の雌およ
び４００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた１匹の雌で存在した。しかしながら、この所見は、終末
犠牲において雄に存在しなかったが、早期に犠牲にされた雄の両方に認められた。所見の
重症度のために、これらは有害とみなされた。腸管の様々な部分における試験品関連所見
には、≧２００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた１匹または複数の動物の陰窩／腺膿瘍、好中球の
浸潤物、鬱血、および／またはＧＡＬＴのリンパ球の枯渇／壊死が含まれた。これらの所
見は、最小限の重症度の、および恐らくはストレスに関連した、散発性であったので、そ
れらは有害とみなされなかった。
【０１６１】
Ｃ２Ｅ２への暴露は、６０から６００ｍｇ／ｋｇ／日のＣ２Ｅ２用量レベルの増加に伴
って増加した。平均ＣｍａｘおよびＡＵＣ０−２４値の増加は、一貫しては用量比例でな
かった。性差は、一般にＣ２Ｅ２平均ＣｍａｘおよびＡＵＣ０−２４値において２倍未満
であった。イヌにおいてＣ２Ｅ２の複数回投与後にＣ２Ｅ２の蓄積は観察されなかった。
Ｃ２Ｅ２のものと比較したＣ２Ｅ１、ＤＴＰＡ、およびＣ２Ｅ３のＡＵＣ０−２４値の比
率は、Ｃ２Ｅ１、ＤＴＰＡ、およびＣ２Ｅ３の全身暴露が、Ｃ２Ｅ２に対して非常に低か
った（＜１％）ことを示した。
【０１６２】
６０、２００，４００、および６００ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルで１０日間の強制経
口投与による純血種ビーグル犬へのＣ２Ｅ２の連日投与は、体重減少および健康の衰えの
ために６００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた１匹の雄および４００ｍｇ／ｋｇ／日を与えた１匹
の雄の早期犠牲をもたらした。早期犠牲のために、４００および６００ｍｇ／ｋｇ／日の
用量レベルは、最大耐性用量を超えた。肝臓および腎臓は、≧４００ｍｇ／ｋｇ／日での
毒性の標的臓器として特定された。これらの所見に基づいて、無毒性量（ＮＯＡＦＬ）は
、２００ｍｇ／ｋｇ／日である。１０日間の投与後に、２００ｍｇ／ｋｇ／日のＣ２Ｅ２
の投与は、それぞれ、雄および雌について、５９，４５０および７１，９５０ｎｇ／ｍＬ
の平均Ｃ２Ｅ２  Ｃｍａｘ値、および１５０，７２７および１８３，７６０ｎｇ・時間／
ｍＬのＣ２Ｅ２  ＡＵＣ０−２４値に相当した。
【実施例２】
【０１６３】
方法２を用いて得たロット０５０のＣ２Ｅ２の効力を、吸入（ＩＮＨ）を介したアメリ
シウム−２４１（２４１Ａｍ）の硝酸錯体を投与された雄および雌のビーグル犬で評価し
た。Ｃ２Ｅ２を、２４１Ａｍ吸入暴露２４時間後に投与した。動物をモニターし、尿およ
び糞を毎日集めた。ケージを毎日すすぎ洗いした。動物を１４日後に安楽死させ、組織を
集めた。組織を処理し、２４１Ａｍ含有量を分析した。キレート処理による、およびそれ
なしの２４１Ａｍの生存中測定および生物動力学を記載する。
【０１６４】
１６匹の雄および雌のビーグル犬は、順応のために１４日間の隔離期間を受けた。隔離
から解放されると直ぐに、動物の体重を量り、その体重を用いて動物を研究に無作為化し
た。イヌは、研究開始時に１３．３±２．２月齢であり、８．９±１．２ｋｇの体重であ
った。無作為化後、動物を代謝ケージに、０時点で２４１Ａｍ（ＩＩＩ）−硝酸塩の放射
性核種吸入投与前におよそ２４時間順応させ、続いて、吸入暴露２４時後にビヒクル（水
）または１００、３００、もしくは５００ｍｇ／ｋｇのＣ２Ｅ２を強制経口投与した。動
物は、生存期の期間代謝ケージに置いた。
【０１６５】
動物を２４１Ａｍ投与１４日後に安楽死させた。完全剖検を行い、肝臓、脾臓、腎臓、
肺および気管、筋肉試料（右および左の大腿四頭筋）、ＧＩ管（胃および食道、腸の上部
および下部）、生殖腺、２つの大腿骨、腰椎（Ｌ１〜Ｌ４）、足および尾、ＴＢＬＮ、な
らびに全軟組織残部を集めた。脳および眼を頭蓋骨から取り出し、軟組織残部と合わせた
。骨格を脱肉し、すべての骨試料を分析用に集めた。生皮は、２４１Ａｍ含有量について
分析しなかった。
【０１６６】
尿、糞、ケージすすぎ洗い液、およびすべての組織試料を、熱および化学処理により処
理した。試料をガンマパルス高分析により分析した。
【０１６７】
治療用Ｃ２Ｅ２を、比較的に可溶性の硝酸塩として２４１Ａｍに対する吸入により暴露
されたビーグル犬における体外除去効力について首尾よく評価した。対照と比較した、尿
および糞排泄プロファイルならびに組織負荷量により、放射性核種投与２４時間後に投与
した場合に、３つの治療用量レベルが２４１Ａｍを体外除去することが確認された。軟組
織および骨中の２４１Ａｍの含有量も、体外除去治療の結果として有意に減少した。
【０１６８】
研究のために、原料（ｓｔｏｃｋ）Ｃ２Ｅ２（Ｌ／Ｎ：０２０ＷＪＬ０５０）を白色粉
末として得、２〜８℃で保存した。Ｃ２Ｅ２を量り分け、ＤＩ水であるビヒクルに溶解さ
せた。溶液を、投与のそれぞれの日に２０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、および１００ｍ
ｇ／ｍＬで調製した。この処方物を、アルミ箔で容器を包むことにより光から保護した。
処方物を秤量し、調製するときに、金属を含まないスパチュラ、ガラス器、および撹拌棒
を使用した。
【０１６９】
アメリシウム−２４１をエネルギー省から得、それを処理し、硝酸錯体として原液とし
て処方した。硝酸錯体の２０ｍＣｉのアリコートを中温ホットプレート上での乾燥のため
に採取した。１００ミリリットルの０．２５Ｍ硝酸を添加した。ｐＨは、０．７４である
と測定された。アリコートを集め、ガンマパルス高分析により分析した。処方物の最終濃
度は、２０１．１μＣｉ／ｍＬであった。
【０１７０】
８匹の雄および８匹の雌のビーグル犬を、研究割当のためにＣｏｖａｎｃｅ  Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓから発注した。１６匹の動物を、体重層化および無作為化により４つの
研究群の１つに割り当てた。イヌは、研究開始時に１３．３±２．２月齢であり、８．８
±１．２ｋｇの体重であった。研究動物を、２４１Ａｍ投与前にそれらの代謝ケージに２
４時間調整した。観察を行って、動物が餌および水の場所を分かっており、および正常量
の尿および糞を排泄していることを確実にした。動物を、耳入れ墨によって研究群に関し
て独特に識別した。さらに、各ケージには、研究特有のＩＤをその上に有する色分けされ
たケージカードが入っていた。
【０１７１】
暴露の朝に、動物を断食させ、筋内投与によりアセプロマジン（０．０５ｍｇ／ｋｇ）
で鎮静させた。イヌをイソフルラン（５％）で麻酔した。ラテックス製マスクを鼻口部の
上に取り付けて、イヌの外部汚染を最小限にした。ラテックスで覆われた鼻口部を、酸素
とイソフルランの混合物が連続的に流れている暴露プレナムの中に入れ、モニターした。
箱中の酸素は、４５〜５５％に維持し、イソフルランを必要に応じて供給して（酸素中２
〜３％）、麻酔されたままのイヌを確保した。１０ｐｓｉで操作されるＨｏｓｐｉｔｅｃ
ネブライザを用いて硝酸２４１Ａｍ溶液からエアロゾルを発生させた。エアロゾルを７０
〜８０℃で稼動する管炉を通過させて、エアロゾルを乾燥させ、存在する酸の量を最小限
にした。
【０１７２】
排気流は、１２．２Ｌ／分であった。フィルタ試料について０．４９Ｌ／分およびカス
ケードインパクタ試料について１．９５Ｌ／分の流量でＰａｌｌｆｌｅｘ（登録商標）Ｆ
ｉｂｅｒＦｉｌｍ（商標）フィルタ上でエアロゾルを集めた。フィルタを、５ｍＬの７Ｎ
ＨＮＯ３を有する２０ｍＬバイアル中に入れ、３０秒間ボルテックスした。フィルタを
取り出し、別の２０ｍＬバイアルに個々に入れた。５０μＬのアリコートを元のバイアル
から取り出した。フィルタおよびアリコートを、２４１Ａｍについて個別に分析し、フィ
ルタ上に集めた量を決定した。エアロゾル濃度は、１１５５±２２３ｎＣｉ／Ｌであると
決定された。粒径は、１．７２の幾何学的標準偏差（ＧＳＤ）を有して０．６３μｍＡＭ
ＡＤ（空気力学的放射能中央径）であると決定された。動物を８分間暴露した。各暴露の
最後に、動物を暴露箱から取り出し、移送箱に入れ、それらの代謝ケージに戻した。気道
における標的沈着放射能は、３μＣｉであった。
【０１７３】
放射性核種投与２４時間後に、動物に表９で概略したように強制経口投与により試験品
（またはビヒクル）を投与した。動物は、アメリシウム暴露に続いて１日目に単回用量の
試験品（またはビヒクル）を受けた。動物を手作業で抑制し、およそ所定の大きさに作っ
た給餌用チューブを食道に挿入した。治療剤をチューブに通して送達して（３３〜５２ｍ
Ｌ）、Ｃ２Ｅ２の所望の質量標準投与量を得た。対照イヌに４５ｍＬのＤＩ水を投与した
。１ｍＬの水を給餌用チューブに通してフラッシュして、試験品の完全送達を確保した。
用量投与毎の後に、動物をその代謝ケージに戻した。研究予定を表９に示す。
【０１７４】
【表１０】
2018188459.tif 000016
【０１７５】
安楽死を確認後、各イヌは完全剖検を受けた。集めた組織には以下が含まれた。肝臓、
脾臓、腎臓、肺および気管、筋肉試料（右および左の大腿四頭筋）、内容物を加えたＧＩ
管（胃および食道、腸の上部および下部）、生殖腺、２つの大腿骨、腰椎（Ｌ１〜Ｌ４）
、足および尾、気管気管支リンパ節（ＴＢＬＮ）、ならびに全軟組織残部。脳および眼を
頭蓋骨から取り出し、軟組織残部と合わせた。骨格を脱肉し、すべての骨試料を分析用に
集めた。２４１Ａｍについて分析しなかった生皮を除いて、組織試料のすべてを、およそ
所定の大きさに作られ、かつ標識された試料容器に入れた。
【０１７６】
生体試料およびケージすすぎ洗い液試料のすべて（生皮を除く）を、ガンマパルス高分
析により分析した。組織に応じた分析前に、試料特異的方法で試料を熱および化学的に処
理した。試料を調製後、それらを２０ｍＬの液体シンチレーションバイアルに入れ、ガン
マカウンタ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、２４８０  Ｗｉｚａｒｄ２  ガンマカウンタ）
で計数した。
【０１７７】
無作為化のために集めた体重および暴露データの平均および標準偏差をＭｉｃｒｏｓｏ
ｆｔ  Ｅｘｃｅｌを用いて行った。統計分析は、回収用量のパターンを評価するために用
いた一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）により行った。各試料のタイプについて、未処置対
照と処置群の間の差を、基礎となっている動物間分散のＡＮＯＶＡの合併推定値に基づく
個別のＦ検定で評価した。性別間の全体差の有意な（ｐ＜０．０５）証拠を伴う性別にわ
たるパターン応答の差の有意な統計的証拠（ｐ＞０．０５）の非存在により、処置に関係
なく、性別間の応答における一定のシフトの証拠が与えられる。
【０１７８】
研究の生存中の部分は、何事もなく遂行された。大部分の動物は、研究に関係した異常
または有害な効果を有さず、これは、Ｃ２Ｅ２用量投与からの嘔吐を含んだ。しかしなが
ら、高レベルＣ２Ｅ２用量群（Ａｎｉｍａｌ  ４００４）からの１匹の動物は、強制経口
投与後にケージパンに泡状嘔吐を有したことが留意された。したがって、この動物におけ
る用量保持率の信頼性は確証できなかった。
【０１７９】
表１０は、この研究における４つの実験群について回収した２４１Ａｍの総放射能を要
約する。群４は、残りの群よりも少ない物質を回収したが、これは、主として合計で１０
００ｎＣｉ未満を受けた単独異常値（４００３）のためであった。この動物における低放
射能の理由は、知られていない。すべての記録は、試料の処理に関する問題がないこと、
研究上で嘔吐がないこと、エアロゾル濃度は的確であったこと、および動物は暴露の間に
覚醒しなかったことを示す。唯一の注目すべき所見は、このイヌが６．５ｋｇだけしか体
重がなかったこと、および研究で最小の動物であったことであるが、これだけでは、受け
た低放射能の主な原因とならない。この動物を群平均から除く場合、群平均は１９４０に
増加し、これは、群１の動物の平均と同様である。この研究の場合、動物は、平均で２２
２０ｎＣｉ±６１０の総沈着放射能を受けた。創傷またはＩＶ研究と違って、吸入暴露に
関して部分的回収は計算することができないが、その理由は、気道への２４１Ａｍの実送
達放射能が、生理学的測定値または放射化学測定のデータと一緒のエアロゾル濃度データ
に基づいて再構成され得るだけであるからである。推定沈着放射能は等式：
沈着放射能＝エアロゾル濃度（ＡＣ）＊毎分呼吸量（ＲＭＶ）＊沈着率（ＤＦ）＊暴露
期間（ＥＤ）
（ここで、ＡＣ＝イヌのエアロゾル濃度（ｎＣｉ／Ｌ）；ＲＭＶ＝０．４９９＊体重∧（
０．８０９）；ＤＦ＝１０％；ＥＤ＝８分）
により与えられる。
【０１８０】
研究についての推定送達放射能は、雌について２７７０ｎＣｉおよび雄について２５８
０ｎＣｉであった。送達放射能は、所望の放射能よりもおよそ１１パーセント低かったが
、これは、暴露操作の不確実性の十分に範囲内である。肺の実質領域についての沈着率は
、エアロゾル特性（粒径およびσｇ）および呼吸パターンに基づいて可変であり、推定１
０％から変わり得る。
【０１８１】
【表１１】
2018188459.tif 000017
【０１８２】
図２３Ａおよび図２３Ｂは、すべての研究群についての２４１Ａｍの排尿排糞日量を示
す。統計分析は、１日ごとの収集物に対しては行わなかった。結果を総回収２４１Ａｍ放
射能の分率として表す。Ｃ２Ｅ２用量群のすべては、未処置対照と比較して尿排泄の用量
依存性増加を示した。用量群の尿排泄は、研究の期間を通して維持された。糞排泄は、排
泄のレベルが対照レベルに戻った、暴露後の最初の３日間を通して、用量群すべてについ
て中程度に増加した。
【０１８３】
図２４Ａおよび図２４Ｂならびに表１１は、すべての実験群についての累積的尿および
累積的糞排泄を示す。Ｃ２Ｅ２の用量のすべてによる処置は、未処置対照群と比較して尿
排泄における累積的放射能の統計的に有意な増加をもたらした。５００ｍｇ／ｋｇ用量は
、１００および３００ｍｇ／ｋｇ用量群と比較して、２４１Ａｍのより高い尿排泄をもた
らした。Ｃ２Ｅ２の中および高用量による処置は、未処置対照群と比較して糞排泄におけ
る累積的放射能の統計的に有意な増加をもたらした。累積的糞排泄は、Ｃ２Ｅ２の用量増
加とともに増加するように見えたが、応答は単調ではなく、すなわち、排泄された２４１
Ａｍの最大量は、中用量群で生じた。それにもかかわらず、糞中で排泄された２４１Ａｍ
の量は、中および高用量処置群について、対照群についてよりも統計的に大きく、低用量
群について上昇した（しかし、統計的に有意に異ならない）。
【０１８４】
【表１２】
2018188459.tif 000018
【０１８５】
分析した様々な組織中の２４１Ａｍの終末含有量は、図２５Ａ〜図２５Ｄおよび図２６
Ａ〜図２６Ｆですべての実験群についてグラフで、ならびに表１２および表１３で数値的
に示す。すべての結果は、総回収２４１Ａｍ放射能のパーセントとして表す。図２５Ａ〜
図２５Ｄは、各投与群について肝臓、脾臓、腎臓、および肺の組織含有量を示す。３つの
Ｃ２Ｅ２群のすべては、肝臓、腎臓、および肺負荷量において統計的に有意に減少した。
中および高用量群間の残りの脾臓および腎臓負荷量において用量応答は少ししか認められ
なかった。
【０１８６】
【表１３】
2018188459.tif 000019
【０１８７】
【表１４】
2018188459.tif 000020
【０１８８】
図２６Ａ〜図２６Ｆは、対照と比較した、各投与群の卵巣、睾丸、ＧＩＴ、ＴＢＬＮ、
軟組織、および全骨についての終末組織含有量を示す。卵巣において、すべての用量群に
ついての２４１Ａｍ含有量は、未処置対照群と比較して減少した。睾丸において、すべて
の処置群は、未処置対照と比較して２４１Ａｍ含有量の統計的に有意な減少を示した。卵
巣および睾丸について示された用量依存性パターンは存在しなかった。これは、組織中に
存在する少量の２４１Ａｍに起因し得る。ＧＩＴ（内容物を含む）および軟組織の２４１
Ａｍ含有量は両方とも、対照と比較して統計的に有意な、しかし用量依存性でない組織減
少を示した。２４１Ａｍ含有量の約５０％および４０％の減少が、それぞれ、ＴＢＬＮお
よび全骨含有量について観察された。２４１Ａｍの終末含有量の用量依存性減少の示唆も
あったが、その傾向は強いものではなかった。
【０１８９】
表１４は、未処置対照群と比較した組織含有量減少パーセントを示し、表１５は、未処
置対照群と比較した尿増強または糞減少のパーセントである。高用量群は、未処置対照と
比較して、肝臓および脾臓において＞６５％の減少、腎臓、肺、ＧＩＴ、生殖腺、および
軟組織負荷量において＞５０％の減少、ならびにＴＢＬＮおよび全骨含有量において＞３
０％の減少を示した。中用量処置群は、脾臓、腎臓、および生殖腺負荷量において＞６０
％の減少、肝臓、肺、ＧＩＴ、軟組織および全骨において＞４５％の減少、ならびにＴＢ
ＬＮにおいて＞３０％の減少を示した。低処置群は、脾臓、腎臓、ＧＩＴ、生殖腺、軟組
織、および全骨負荷量において＞４０％の減少、ならびに肝臓、肺、およびＴＢＬＮ負荷
量において＞２０％の減少を示した。
【０１９０】
【表１５】
2018188459.tif 000021
【０１９１】
【表１６】
2018188459.tif 000022
【０１９２】
排尿量は、未処置対照と比較して、低および中用量群について８００％、ならびに高用
量群について１３００％を上回って増加した。排糞量は、低および高用量群について１１
０％、ならびに中用量群について１５０％を上回って増加した。
【０１９３】
対照と比較した尿排泄プロファイルおよび組織負荷量により、３つの治療用量レベルが
、放射性核種投与２４時間後において投与された場合に、および多くの場合に用量依存的
に２４１Ａｍを体外除去することが確認された。高用量群のＣ２Ｅ２は、低用量群よりも
効率的に２４１Ａｍを体外除去した。将来の用量投与は、投与されるＣ２Ｅ２のより高い
レベルに重点を置くが、いかなる特定の理論にも拘束されることを望まないが、用量依存
性効力の中程度の増加は、ＤＴＰＡ治療で多く行われるように、Ｃ２Ｅ２の複数投与によ
って有効に補償され得ることが推測される。
【実施例３】
【０１９４】
方法２を用いて得たロット０５０のＣ２Ｅ２の溶解度は、初期に１００ｍｇ／ｍＬであ
ると決定された。しかしながら、この濃度で調製した投与溶液は、時間とともに沈殿を示
した。この研究の目的は、初期の過飽和およびその後の沈殿の背後の過程を理解し、およ
びＣ２Ｅ２の溶解度を決定することであった。
【０１９５】
沈殿研究は、沈殿が起こらない濃度を推定するために行った。最初に、Ｃ２Ｅ２の１２
の試料を、１０ｍｇ／ｍＬの刻みでｐＨ３．０の緩衝液中４０〜１５０ｍｇ／ｍＬの範囲
の濃度で調製した。この溶液を沈殿が生じるまでそのまま撹拌した。
【０１９６】
ｐＨ３．０の緩衝液中６０、７０および１００ｍｇ／ｍＬのＣ２Ｅ２の３つの試料を調
製し、室温で撹拌した。０．０８３、５、１、２，４、６、２０、２４および４４時間の
時点で、０．５ｍＬの試料を、抜き取り、１４，０００×ｇで遠心分離にかけ、上清の濃
度をＨＰＬＣ−ＣＡＤで測定した。各時点で、上清のｐＨも測定した。
【０１９７】
２４時間後、沈殿は、９０ｍｇ／ｍＬを超えるＣ２Ｅ２濃度を有する溶液で観察された
。沈殿は、撹拌しながら２４時間後に４８時間撹拌なしで室温にて放置したままにした６
０ｍｇ／ｍＬを超える濃度でＣ２Ｅ２を有する溶液で観察された。ｐＨ３．０でのＣ２Ｅ
２の溶解度は、６０から７０ｍｇ／ｍＬである。研究の第２部で、決定した溶解度の直ぐ
上および下の濃度でのＣ２Ｅ２、およびより高い濃度での第３の試料を調製して、Ｃ２Ｅ
２沈殿がより低い平衡溶解度をもたらすかどうか試験した。得られた濃度時間プロファイ
ルを図２７に示す。６０および７０ｍｇ／ｍＬ溶液で調製したＣ２Ｅ２の溶液は、６時間
後に安定であり、７０ｍｇ／ｍＬの試料は、６０ｍｇ／ｍｌ溶液よりも高い濃度で安定で
あった。７０ｍｇ／ｍｌの一部の沈殿は、研究の終了前に観察され、したがって、７０ｍ
ｇ／ｍＬ溶液について四角記号による線で示された濃度は、平衡溶解度である。１００ｍ
ｇ／ｍｌ溶液の濃度の場合、Ｃ２Ｅ２は、２０時間過飽和溶液中でそのままであり、次い
で、２０〜２４時間に溶液から突然析出し、最終溶解度は、６０から７０ｍｇ／ｍＬのＣ
２Ｅ２溶液の範囲にあった。濃度の突然の変化は、別の多形体の形成を示す可能性がある
。遠心分離された固体を、上清から分離し、ＤＳＣによる分析を行う。
【０１９８】
投与溶液の観察に基づいて、一定量の時間後に沈殿がＣ２Ｅ２溶液で起こり、Ｃ２Ｅ２
のより低い測定溶解度を伴った。
【実施例４】
【０１９９】
血漿中エステラーゼによるＣ２Ｅ２の代謝は、Ｃ２Ｅ２中のエステルプロ部分の消失を
もたらし得る。血漿中Ｃ２Ｅ２の生体外分解は、存在する場合、Ｃ２Ｅ２効力データの解
釈、ならびにＰＫおよびＴＫ研究からのデータの分析に意味合いを有し、血液試料を集め
られた後の化合物の継続代謝は、ＰＫパラメータの不正確な計算をもたらす。したがって
、この研究の目的は、血漿中のＣ２Ｅ２の安定性を決定することであった。
【０２００】
研究前に、９７５μＬの血漿（ラット、ビーグル犬、およびヒト）をエッペンドルフチ
ューブ中で３７℃に予熱し、試験化合物（Ｃ２Ｅ２）をＤＩ水中で調製した（１０ｍｇ／
ｍＬ）。Ｃ２Ｅ２は、方法２を用いて得たロット０５０からであった。研究を開始するた
めに、２５μＬのＣ２Ｅ２溶液を予熱された血漿に添加し、短時間ボルテックスして、混
合した。０、１５、３０、６０および１２０分の時点で、１００μＬの血漿試料を採取し
、等容量の冷アセトニトリルを添加し、混合して、血漿タンパク質を沈殿させた。試料を
４℃および１４，０００×ｇで１０分間遠心分離にかけて、沈殿タンパク質を除去し、上
清を集め、Ｃ２Ｅ２濃度をＨＰＬＣ−ＣＡＤにより決定した。すべての条件を三重に反復
した。ジルチアゼムを陽性対照化合物として用い、熱不活化血漿を陰性対照として用いた
。
【０２０１】
ＨＰＬＣ検出方法：Ｃｏｒｏｎａ  Ｕｌｔｒａ荷電アニオン検出器（ＣＡＤ）（Ｔｈｅ
ｒｍｏ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を備えた卓越したＨＰＬＣ
（株式会社島津製作所、京都、日本国）で、Ｃ２Ｅ２分析を行った。４０℃および０．２
５ｍＬ／分の流量でＡｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８カラム（２５０×２．１ｍｍ２内径、および
５μｍ粒径（Ｇｒａｃｅ））によって、逆相勾配分離を用いた。移動相は、０．１％トリ
フルオロ酢酸を含む水（Ａ）およびアセトニトリル／イソプロパノール２：１（Ｂ）から
構成される。移動相は、１４分かけて９４：６から７５：２５の線形勾配に従い、次いで
、勾配は、０．５分間増加して、０：１００の流れを３．５分間達成し、続いて、９４：
６で系を６分間再平衡化する。ＣＡＤ分析は、３５．１ｐｓｉで窒素流によって２５℃で
行う。ジルチアゼムの場合、勾配移動相は、２つの主要な成分、すなわち、移動相Ａ、ｏ
−ＰＡで５．０にｐＨ調整された水性ＴＥＡ（０．２％、ｖ／ｖ）、および移動相Ｂ、Ａ
ＣＮからなる。勾配は、０．０１〜３４．９９分：２２％Ｂ；３５．００〜４４．９９分
：３３％Ｂ；４５．００〜６０．００分：３８％Ｂである。流量は、１．０ｍＬ／分であ
り、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ＯＤＳカラム（１５０ｍｍ  ４．６ｍｍ内径、お
よび５．０μｍ粒子）を用い、注入容量は、１０μＬであり、カラムオーブン温度は２５
℃に維持する。ジルチアゼムは、２４０ｎｍでＵＶにより検出する。定量限界は、０．３
５μｇ／ｍＬである。（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｔｕｔｉｃａｌ  Ａｎ
ａｌｙｓｉｓ  ２０１２；２（３）；２２６−２３７）。
【０２０２】
研究からの予備的結果を図２８Ａ〜図２８Ｃに要約する。一部の変動が見られたが、陽
性対照（ジルチアゼム）の強固な代謝がすべての種で観察された。試験したすべての種に
おいて、Ｃ２Ｅ２代謝は、最小であったか、または少なくとも２時間検出されず、およそ
９０％のＣ２Ｅ２が、ヒト血漿中で２時間後に残存する。Ｃ２Ｅ２は代謝を受けないので
、熱不活化は、ジルチアゼム陽性対照の代謝を防止しなかったという観察は、研究の結論
を変更しない。
【実施例５】
【０２０３】
予備的ＰＫ／ＰＤモデリングは、Ｃ２Ｅ２効力がＡＵＣと相関することを予測した。い
かなる特定の理論にも拘束されることを望まないが、毒性がＡＵＣよりはむしろＣｍａｘ
と関連することを毒性学研究が示す場合、用量を分割し、それをより頻繁に投与すること
は、治療ウィンドウを増加させ得る。ＤＴＰＡジエチルエステルの単回対複数回１日用量
の利点を評価するために、体外除去研究を２４１Ａｍで汚染されたラットで行った。
【０２０４】
動物研究を、Ｃｈａｐｅｌ  Ｈｉｌｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  
ＣａｒｅおよびＵｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにおいてノースカロライナ大学により承認さ
れたプロトコルに従って行った。１６匹の雄スプレーグドーリーラットを、イソフルラン
麻酔下で、右後肢に筋内注射（０．１ｍＬ、０．１Ｍ  ＨＮＯ３）により２４１Ａｍ（Ｎ
Ｏ３）３（０．２５μＣｉ）で汚染した。注射直後、体重を記録し（０日目体重）、動物
を個別の代謝ケージに置いた。この１６匹のラットを４群に割り当てた。未処置対照、１
日１回で６００ｍｇ／ｋｇのＣ２Ｅ２の５日間の１日強制経口投与用量、１日２回で３０
０ｍｇ／ｋｇのＣ２Ｅ２の５日間の強制経口投与処置、または頚静脈カテーテルを介した
Ｚｎ−ＤＴＰＡ溶液（１３．３ｍｇ／ｋｇ）の５日静脈内用量。Ｃ２Ｅ２は、方法２を用
いて得たロット０５０からであった。用いたＣ２Ｅ２投与溶液は、水中１０％ｗ／ｗ溶液
であった。すべての動物を、羅患率、死亡率、および全体的外観について少なくとも１日
１回観察した。排泄された尿および糞を、最初の用量の２、４、８、１０、１２、１４、
１８、２０および２４時間後に、および研究の残りについて毎日集めた。試料を２０ｍＬ
のシンチレーションバイアルに移し、秤量し、２４１Ａｍガンマ放射能の検出のためにガ
ンマカウンタ（Ｗｉｚａｒｄ２  ２４８０、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）内に置いた。さ
らに、剖検後、選択した組織を取り出し、秤量し、２４１Ａｍガンマ放射能の検出のため
にガンマカウンタ（Ｗｉｚａｒｄ２  ２４８０、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）内に置いた
。動物に投与された２４１Ａｍの総量は、ガンマカウンタ（ｗｉｚａｒｄシリーズ、Ｐｅ
ｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を用いて注射液の二重アリコート（１００μＬ）中２４１Ａｍに
より放出される５９．７ｋｅＶのホトンを定量化することにより決定した。４０〜８０ｋ
ｅＶの計数ウィンドウおよび６０秒計数時間を取得のために用い、各読み出しは、取得時
のバックグラウンドについて補正した。実験の組織および試料のすべてを、同じガンマカ
ウンタおよびプロトコルを用いて計数した。試料のすべてについて、２４１Ａｍ含有量は
、初期用量のパーセントとして表した。注射部位の反対の肢からの大腿骨を、総骨格２４
１Ａｍ負荷量を推定するために２０倍で基準化した。
【０２０５】
１６匹の雄ラットのすべてが研究を終了した。予備的分析は、アメリシウムの排泄が、
未処置対照と比較してすべての処置群で有意に増強し、Ｃ２Ｅ２投与量を分割し、それを
１日２回与えることは、総体外除去を有意には変更しなかったことを示す。表１６は、各
群の総体外除去を示し、図２９は、主要標的組織におけるアメリシウム負荷量を示す。
【０２０６】
【表１７】
2018188459.tif 000023
【０２０７】
総体外除去および組織負荷量の調査に加えて、経時的な尿中アメリシウム体外除去のプ
ロファイルを得た。図３０Ａおよび図３０Ｂは、Ｃ２Ｅ２で１日１回および２回の処置後
の尿体外除去のプロファイルを示す。第２のＣ２Ｅ２用量後の体外除去の増加は、図３０
Ｂで明らかに見ることができる。ほぼ１４時間での１日２回投与群における第２のピーク
は、２時間での第１のものよりも大きな尿排泄をもたらし、これは、第１の用量からの一
部の残留Ｃ２Ｅ２のためであり得る。しかしながら、時刻および動物の活動も、尿がこの
研究では手作業で圧出されなかったので、プロファイルに影響し得る。研究の過程にわた
って、１日１回（ＯＤ）および１日２回（ＢＤ）群は、排尿日量の極めて同様のプロファ
イルをもたらし、いかなる特定の理論に拘束されることを望まないが、薬剤ＡＵＣがラッ
トにおける効力の最良の指標であるという仮説と一致する。
【０２０８】
データの予備的分析は、Ｃ２Ｅ２用量を２つのより小さな用量に分割することが効力を
減少させず、したがって、Ｃ２Ｅ２の治療ウィンドウを潜在的に増加させ得ることを示唆
する。研究の雌上肢が終了すると直ぐに、完全分析を行う。
【実施例６】
【０２０９】
この研究の目的は、外因性哺乳類代謝活性化系（Ｓ９）の存在下または非存在下で、Ｃ
２Ｅ２が、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）試験株Ｔ
Ａ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１５３５、およびＴＡ１５３７のヒスチジン遺伝子座、および
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ））株ＷＰ２ｕｖｒＡのトリ
プトファン遺伝子座で復帰突然変異を誘発するその能力について評価することであった。
【０２１０】
Ｓ９とともにまたはそれなしで、５．００、１６．０、５０．０、１６０、５００、１
６００、および５０００μｇ／プレートの用量レベルで５つの試験株すべての初期突然変
異原性アッセイにおいて、Ｃ２Ｅ２を評価した。Ｃ２Ｅ２は、方法２を用いて得たロット
０５０からであった。Ｃ２Ｅ２を細胞培養グレード水ビヒクル中で調製し、透明な無色溶
液を形成した。同時ビヒクル対照と比較して、復帰突然変異株コロニーの平均数の減少が
、Ｓ９なしの条件下でＴＡ１００、ＴＡ１５３５、ＴＡ１５３７およびＷＰ２ｕｖｒＡに
おける５０００μｇ／プレートレベル、ならびにＳ９とともにの条件下でＴＡ１５３５、
ＴＡ１５３７およびＷＰ２ｕｖｒＡにおける≧５００μｇ／プレートで認められた。バッ
クグラウンド菌叢増殖の増強が、Ｓ９なしの試験でＴＡ１５３７の５０００μｇ／プレー
トで観察された。復帰突然変異株コロニーの数およびバックグラウンドの菌叢増殖の増強
の減少は、Ｃ２Ｅ２処置関連毒性を示す。Ｓ９なしのＴＡ１５３７におけるバックグラウ
ンド菌叢の増強を除いて、Ｓ９とともにまたはそれなしで、すべての株における他のバッ
クグラウンドの菌叢のすべては正常であり、突然変異原性事象を発現するために、処置の
間に適切な細菌増殖があることを示していた。Ｓ９代謝活性化の非存在または存在下でい
ずれかの株に関してもいずれの用量レベルでも復帰突然変異株コロニーの数の関連する増
加は観察されなかった。
【０２１１】
ビヒクルおよび陽性対照の値はすべて、許容できる範囲内であり、正当な研究のための
すべての基準を満していた。
【０２１２】
これらの結果は、Ｓ９とともにまたはそれなしで、かつこのプロトコルの条件下で、５
０００μｇ／プレートまで試験した細菌復帰突然変異アッセイにおいて、Ｃ２Ｅ２が負で
あることを示す。
【実施例７】
【０２１３】
このインビトロアッセイの目的は、外因性代謝活性化系とともにまたはそれなしで、培
養チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において染色体異常を誘発する、Ｃ２Ｅ２
の能力を評価することであった。
【０２１４】
Ｃ２Ｅ２を細胞培養グレード水（ＣＣＧＷ）中で調製し、無色透明の溶液を形成した。
Ｃ２Ｅ２は、方法２を用いて得たロット０５０からであった。その後の原液は、ビヒクル
中の連続希釈により調製し、すべての処理剤は、１０％の体積で１０ｍＬの培養物中に投
与した。ビヒクル対照培養物は、培養物当たり１００μＬ／ｍＬで処理した。処理期間は
、代謝活性化とともにもしくはそれなしで３時間、または代謝活性化なしでおよそ２０時
間であった。
【０２１５】
初期染色体異常アッセイ（Ｂ１試験）において、６．９２、９．８９、１４．１、２０
．２、２８．８、４１．２、５８．８、８４．０、１２０、１７２、２４５、３５０、お
よび５００μｇ／ｍＬのＣ２Ｅ２濃度を、Ｓ９なしで３時間および２０時間の試験ならび
にＳ９代謝活性化とともに３時間の試験で、二重の培養物において試験した。すべての培
養物を、すべての試験条件下で、処理の開始からおよそ２０時間で収穫した。培養終了時
に、生存細胞を計数し、異常分析のための用量レベルの選択を支援するべく、細胞毒性の
測定のために、集団倍加を計算した。全般的細胞健康およびコンフルエンスのための培養
物の目視観察を、終了前に行った。
【０２１６】
Ｓ９代謝活性化とともにまたはそれなしで３時間の処理試験において関連細胞毒性は観
察されず、２４５、３５０および５００μｇ／ｍＬの用量レベルを各３時間試験条件につ
いて異常分析のために選択した。Ｓ９代謝活性化とともにまたはそれなしの条件下で３時
間試験のいずれかにおいて調べたいずれの用量レベルでも染色体異常に関して細胞の数の
統計的に有意なまたは生物学的に関連した増加は観察されなかった。
【０２１７】
Ｓ９なしで２０時間の試験において、細胞毒性において処理関連の減少傾向は、集団倍
加計算で示された。２０．２、１７２および５００μｇ／ｍＬの処理レベルを異常分析の
ために選択し、ビヒクル対照の減少パーセントとして集団倍加により測定された、１８％
から５１％の細胞毒性を示す。しかしながら、１７２および５００μｇ／ｍＬの用量レベ
ルから調製したスライドは、分析のための適切な分裂中期細胞が非存在であった。この理
由は、決定されておらず、結果が再現可能であるかどうか、および細胞毒性を測定する代
替方法が必要であるかどうかを決定するために試験を反復した。
【０２１８】
Ｓ９なしで２０時間試験を、初期Ｂ１試験と同じ用量レベルで反復した（Ｂ２試験）。
Ｂ２試験の結果は、初期Ｂ１試験を再現し、集団倍加により測定された同じ細胞毒性プロ
ファイル、培養終了時の多数の分裂細胞の同じ目視観察、および染色体分析に適切である
と推定される用量レベルでの調製スライド（２４５および５００μｇ／ｍＬ）上の中期細
胞の非存在の同様の結果、を示した。これらの結果に基づいて、分裂指数をＢ１試験スラ
イドから読み出して、細胞毒性を再評価した。分裂指数に基づいて、６．９２、９．８９
および１４．１μｇ／ｍＬの用量レベルを異常分析のために選択した。１４．１μｇ／ｍ
Ｌの用量レベルは、同時ビヒクル対照と比較して分裂指数の５３％減少をもたらした。染
色体分析は、いずれの用量レベルでも異常に関して細胞の数の生物学的に関連したまたは
統計的に有意な増加は観察されないことを示した。
【０２１９】
すべての試験条件下で、ビヒクル対照培養物は、染色体異常を有する細胞のヒストリカ
ルコントロール範囲内であり、陽性対照培養物は、ビヒクル対照培養物と比較して染色体
異常を有する細胞の有意な増加を示した。
【０２２０】
Ｃ２Ｅ２は、細胞毒性限界用量レベルおよびこのアッセイについて５００μｇ／ｍＬの
限界用量まで試験した場合、Ｓ９とともにまたはそれなしの条件下で染色体異常の誘発に
対して負であると決定された。
【実施例８】
【０２２１】
この研究の目的は、スプレーグドーリーラットの骨髄中で多染色性赤血球（ＰＣＥ）の
小核を検出することにより、インビボ染色体異常誘発活性および／または分裂装置の破壊
についてＣ２Ｅ２を評価することであった。
【０２２２】
Ｃ２Ｅ２を細胞培養グレード水ビヒクル中で製剤化し、すべての処置群の用量体積は、
２０ｍＬ／ｋｇであった。Ｃ２Ｅ２は、方法２を用いて得たロット０５０からであった。
【０２２３】
雄ラットに、ビヒクル対照、または５００、１０００、もしくは２０００ｍｇ／ｋｇ／
日のＣ２Ｅ２を、およそ２４時間離して２日間、１日１回投与した。２０００ｍｇ／ｋｇ
の高用量は、ＩＣＨ  Ｓ２（Ｒ１）指針により推奨されたこのアッセイについての限界用
量である。動物の陽性対照群は、投与の２日目に単一の６０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファ
ミド処置を受けた。毒性徴候および／または死亡率について少なくとも１日２回、動物を
観察した。すべての群で最後の処置およそ２４時間後に骨髄を摘出し、動物当たり少なく
とも２０００ＰＣＥを小核の頻度について分析した。動物当たり少なくとも５００個の赤
血球をスコアリングしながら、観察されたＰＣＥおよび正色素性赤血球（ＮＣＥ）の数を
スコアリングすることによって細胞毒性を評価した。
【０２２４】
２０００ｍｇ／ｋｇ／日群の１匹の動物は、２日目に可聴呼吸および活動低下挙動を認
めた。いずれの他のＣ２Ｅ２処置動物においても臨床毒性の他の有害な徴候は観察されな
かった。処置関連骨髄細胞毒性の非存在を示すビヒクル対照値と比較して、Ｃ２Ｅ２処置
群のＰＣＥ：ＮＣＥ比に統計的に有意な減少はなかった。調べたいずれのＣ２Ｅ２用量レ
ベルでも小核ＰＣＥにおける統計的に有意なまたは処置関連の増加は存在しなかった。
【０２２５】
このプロトコルの条件下で、Ｃ２Ｅ２は、５００、１０００、または２０００ｍｇ／ｋ
ｇ／日で２連続日間に１日１回経口投与した場合、ラット骨髄において小核を誘発するこ
とについて負であることが示された。
【０２２６】
上記は、本発明の例証となるものであるが、それを限定するものと解釈されるべきでな
い。本発明は、以下の特許請求の範囲により定義され、その請求項の均等物はその中に包
含される。本明細書で引用される刊行物、特許出願、特許、特許公開、および他の参考文
献のすべては、それらの全体が、その参考文献が提示されている文および／または段落に
関連した教示について、参照により組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
2018188459.tif 000031
【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２５Ｄ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２６Ｄ】
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【図２６Ｅ】
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【図２６Ｆ】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２８Ｃ】
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【図２９】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年7月27日(2018.7.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象を、前記対象から放射性元素を除去するために処置する方法であって、
治療有効量の、図６Ｄに示されるものと実質的に同じ粉末ｘ線回折パターン、ならびに／または約８．１、１２．０、１３．８、１５．４、１６．０、１６．６、１８．３、１９．３、２１．４、２２．１、２４．０、２６．５、および２９．２±０．２度の２シータにピークを有する粉末ｘ線回折パターンにより特徴付けられる、６，９−ビス（カルボキシメチル）−３−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１１−オキソ−１２−オキサ−３，６，９−トリアザテトラデカン−１−オイック酸の多形体を対象に投与する工程
を含む、方法。