(57)【要約】      （修正有）【課題】マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ９）タンパク質（ＭＭＰ９は、ゼラチナーゼ−Ｂとしても公知である）に結合する結合タンパク質、例えば、抗体およびその抗原結合断片を含む組成物および使用方法の提供。【解決手段】配列番号１５のアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、マトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ９）に結合する単離された抗体またはその断片；および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書および図面に記載の分子、組成物、方法またはシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２０１２年２月２９日に出願された米国仮特許出願第６１／６０５，１８１号、２０１３年１月２２日に出願された米国仮特許出願第６１／７５５，４４４号、および２０１２年２月２９日に出願されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２７１６０号の利益を主張し、これらの出願の内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
連邦政府による資金提供を受けた研究の下で成された発明に関する権利についての記載
該当せず
【０００３】
分野
本開示は、細胞外酵素、細胞外マトリックス酵素、プロテアーゼおよび免疫学の分野に入る。
【背景技術】
【０００４】
背景
マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）は、細胞外マトリックスの形成およびリモデリングに関与する細胞外酵素のファミリーに属する。これらの酵素は、亜鉛原子が３つのヒスチジン残基によって配位されている保存された触媒ドメインを含有する。このファミリーのメンバーは２０超が公知であり、コラゲナーゼ、ゼラチナーゼ、ストロメライシン、マトリライシン、エナメリシンおよび膜ＭＭＰを含めたいくつもの群で構成されている。
【０００５】
ＭＭＰ２およびＭＭＰ９は、マトリックスメタロプロテイナーゼのゼラチナーゼ群に属する。大多数のＭＭＰに共通するシグナルペプチド、プロペプチド、触媒ドメイン、亜鉛結合ドメインおよびヘモペキシン（ｈｅａｍｏｐｅｘｉｎ）様ドメインを含有することに加えて、ゼラチナーゼは、複数のフィブロネクチン様ドメインおよびＯ−グリコシル化ドメインも含有する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＭＭＰは、いくつもの疾患に関与する。ＭＭＰの阻害剤については、一部において特異性および有効性に関して、完全に十分であるとはいえない。したがって、特異的かつ有効なＭＭＰ阻害剤が必要とされている。例えば、結腸直腸がん、ＩＢＤ（クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、および分類不能大腸炎を含む）、関節リウマチ（ＲＡ）などのがん、および炎症性疾患および自己免疫疾患の処置については、完全に十分であるとはいえない。したがって、特に、利用可能な治療薬の効果がなかった被験体に対する、そのような疾患に有効な処置が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
要旨
本開示は、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ９）タンパク質（ゼラチナーゼ−Ｂとしても公知である）に結合する結合タンパク質、例えば、抗体およびその抗原結合断片を含む組成物および使用方法を提供する。結合タンパク質は、一般には、抗体またはその断片（例えば、抗原結合断片）であり、一般には、免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖（またはその機能性断片）およびＩｇ軽鎖（またはその機能性断片）を含有する。重鎖は、一般には、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４などのＩｇＧ、またはその改変型である。軽鎖は、一般には、カッパ鎖である。
【０００８】
ＭＭＰ９結合タンパク質、例えば、抗体としては、ＭＭＰ９に特異的に結合し、他の、関連するマトリックスメタロプロテイナーゼには結合しないものが挙げられる。そのようなＭＭＰ９結合タンパク質は、ＭＭＰ９の特異的な調節（例えば、阻害）を、例えば、他のマトリックスメタロプロテイナーゼの活性には直接影響を及ぼすことなく得ることが必要である、またはそれが望ましい適用において使用される。したがって、本開示のある特定の実施形態では、抗ＭＭＰ９抗体またはその断片は、ＭＭＰ９の活性の特異的な阻害剤である。一部の態様では、本明細書に開示されているＭＭＰ９結合タンパク質は、ＭＭＰ９を阻害する一方で、他の、関連するマトリックスメタロプロテイナーゼの正常な機能を可能にするために有用になる。
【０００９】
抗体および断片は、それらのアミノ酸配列またはその一部、ならびに／または種々の機能、例えば、ＭＭＰ９もしくはその特定のエピトープに対する結合特異性、または特定の抗体と結合について競合する能力、ならびに／または活性、例えば、ＭＭＰ９を、例えば、非競合的に阻害する能力に関して記載することができる。
【００１０】
抗体および断片は、医薬組成物の一部であってよく、マトリックスメタロプロテイナーゼ９に結合する抗体およびその断片は、配列番号１５のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する重鎖可変（ＶＨ）領域および薬学的に許容される賦形剤を含む。ＶＨ領域は、配列番号１３および／または配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲをさらに含んでよい。ＶＨ領域は、配列番号３、５、６、７、または８に記載のアミノ酸配列も含んでよい。ＶＨ領域は、配列番号３、５、６、７、または８に記載のアミノ酸配列に対して９５％配列同一性（ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するアミノ酸配列も含んでよい。
【００１１】
別の実施形態では、開示されている、マトリックスメタロプロテイナーゼ９に結合する抗体およびその抗原結合断片を含む医薬組成物は、配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する軽鎖可変（ＶＬ）領域および薬学的に許容される賦形剤を含む。ＶＬ領域は、配列番号１６および／または配列番号１７のアミノ酸配列をさらに含んでよい。ＶＬ領域は、配列番号４、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列も含んでよい。ＶＬ領域は、配列番号４、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、または配列番号１２に記載のアミノ酸配列に対して９５％配列同一性を有するアミノ酸配列も含んでよい。一実施形態では、ＶＨ領域は配列番号７に記載のアミノ酸配列を有し、ＶＬ領域は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する。
【００１２】
別の実施形態では、ＭＭＰ９結合タンパク質は、配列番号１３、１４、１５、３４、３５、３６および４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含むＶＨ領域；ならびに配列番号１６、１７、１８、３７、３８、３９、４２、４３、４４、および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲを有するＶＬ領域を含む。また、ＭＭＰ９結合タンパク質は、配列番号１、３、５、６、７、８、３４、３５、３６、および４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ領域；ならびに配列番号２、４、９、１０、１１、１２、３７、３８、３９、４２、４３、４４、および４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ領域を含んでよい。さらに、ＭＭＰ９結合タンパク質は、配列番号３０、３２、４６、および４７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して９５％配列同一性を有するＶＨ領域；および配列番号３１、３３、４１、４５、および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して９５％配列同一性を有するＶＬ領域を含んでよい。さらに、ＭＭＰ９結合タンパク質は、配列番号３０、３２、４６、および４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ領域；ならびに配列番号３１、３３、４１、４５、および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ領域を含んでよい。
【００１３】
本発明の別の実施形態は、配列番号２７の残基１０４〜１１９、残基１５９〜１６６、または残基１９１〜２０２からなるＭＭＰ９の領域内のアミノ酸残基を含むＭＭＰ９のエピトープに特異的に結合する単離された抗体またはその断片；および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物に関する。一態様では、エピトープは、配列番号２７のＥ１１１、Ｄ１１３、Ｒ１６２、またはＩ１９８を含む。
【００１４】
別の実施形態では、開示されている医薬組成物は、抗炎症剤、免疫療法剤、化学療法剤、抗がん剤、抗線維化剤、またはそれらの組合せからなる群から選択される１種または複数の治療剤をさらに含む。治療剤の例としては、これだけに限定されないが、ナブパクリタキセル、ｍＦＯＬＦＯＸ６、ＦＯＬＦＩＲＩ、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ベバシズマブ、抗リジルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）抗体、抗ジスコイジンドメイン受容体１（ＤＤＲ１）抗体、またはそれらの組合せが挙げられる。
【００１５】
例えば、ＭＭＰ９を非競合的に阻害する作用剤を使用して被験体におけるＭＭＰ９活性を阻害する、および／または被験体における疾患または状態を処置する方法、ならびにそのような方法において使用するための作用剤（例えば、上記の抗ＭＭＰ９抗体および他のＭＭＰ９結合タンパク質のいずれか）も提供される。該方法は、一般に、被験体に、ＭＭＰ９結合タンパク質、例えば、上記のもののいずれかの本明細書において提供されるＭＭＰ９結合抗体またはその断片を、例えば、有効量で投与することによって行われる。抗体または断片は、一般に、ＭＭＰ９に特異的に結合し、それを非競合的に阻害し、したがって、一般には、被験体におけるＭＭＰ９活性が阻害される。一部の場合には、抗体または断片は、ＭＭＰ９の触媒ドメインの外側、例えば、上記のエピトープのうちの１つに結合するものである。一部の場合には、抗体または断片は、ＭＭＰ９以外のＭＭＰタンパク質には実質的に結合せず、かつ／またはＭＭＰ２には実質的に結合しない。さらに、ＭＭＰ９活性を検出またはモニタリングする方法であって、試料をＭＭＰ９結合タンパク質と接触させるステップと、ＭＭＰ９結合タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在するかしないかを評価するステップとを含み、ＭＭＰ９結合タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在しないことにより、試料がＭＭＰ９活性を有さないことが示され、ＭＭＰ９結合タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在することにより、試料がＭＭＰ９活性を有することが示される方法が提供される。ＭＭＰ９活性は、本明細書に開示されているＭＭＰ９結合タンパク質のいずれかを使用することによって検出することができる。
【００１６】
ＭＭＰ−９に関連する疾患または状態を有する、それを必要とする被験体に、被験体におけるＭＭＰ９活性を阻害するために有効な開示されている抗体もしくはその断片または開示されている抗体もしくはその断片を含む医薬組成物を有効量で投与する方法および本明細書で開示されている医薬組成物の使用も提供される。ＭＭＰ９に関連する疾患または状態の例としては、これだけに限定されないが、がん、自己免疫性の疾患もしくは状態、炎症性の疾患もしくは状態、または線維性の疾患もしくは状態が挙げられる。ＭＭＰ９に関連するがんの例としては、これだけに限定されないが、膵がん、食道胃腺癌（ｅｓｏｐｈａｇｏｇａｓｔｒｉｃ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、非小細胞肺がん、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃腺癌、結腸直腸癌、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、結腸直腸がん、結腸直腸腺癌、または肝細胞癌が挙げられる。ＭＭＰ９に関連する自己免疫性の疾患もしくは状態または炎症性の疾患もしくは状態の例は、関節リウマチ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、敗血症、多発性硬化症、筋ジストロフィー、ループス、アレルギー、または喘息である。ＩＢＤの例としては、これだけに限定されないが、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、または分類不能大腸炎が挙げられる。
【００１７】
いくつかの例では、抗体またはその医薬組成物を、約１ｍｇ／ｋｇから約２８ｍｇ／ｋｇまでの用量で投与する。いくつかの例では、抗体またはその医薬組成物を体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇから約１８００ｍｇの間の投与量で投与する。
【００１８】
いくつかの例では、抗体またはその医薬組成物を体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、または約１８００ｍｇの投与量で投与する。いくつかの例では、抗体を１週間、２週間または３週間の間隔、または１週間ごと、２週間ごと、または３週間ごとに１回投与する。いくつかの例では、抗体またはその断片を、静脈内または皮下に投与する。
【００１９】
いくつかの実施形態では、抗体またはその医薬組成物を単独で、単独療法として投与する。他の実施形態では、抗体またはその医薬組成物を、併用療法の一部として、１種または複数の他の治療剤と一緒に投与する。治療剤としては、これだけに限定されないが、抗炎症剤、免疫療法剤、化学療法剤、抗がん剤、抗線維化剤、またはそれらの組合せが挙げられる。１種または複数の他の治療剤は、抗体またはその断片と同時にまたは逐次的に投与することができる。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
配列番号１５のアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、マトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ９）に結合する単離された抗体またはその断片；および
薬学的に許容される賦形剤
を含む医薬組成物。
（項目２）
前記ＶＨ領域が、配列番号１３および／または配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲをさらに含む、項目１に記載の医薬組成物。
（項目３）
配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、マトリックスメタロプロテイナーゼ９に結合する単離された抗体またはその断片；および
薬学的に許容される賦形剤
を含む医薬組成物。
（項目４）
前記ＶＬ領域が、配列番号１６および／または配列番号１７のアミノ酸配列を有するをさらに含む、項目１から３までのいずれかに記載の医薬組成物。
（項目５）
前記ＶＨ領域が、配列番号３、５、６、７、または８に記載のアミノ酸配列を有する、項目１、２および４のいずれかに記載の医薬組成物。
（項目６）
前記ＶＬ領域が、配列番号４、９、１０、１１、または１２に記載のアミノ酸配列を有する、項目１から５までのいずれかに記載の医薬組成物。
（項目７）
前記ＶＨ領域が配列番号７に記載のアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ領域が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、項目６に記載の医薬組成物。
（項目８）
配列番号２７の残基１０４〜１１９、残基１５９〜１６６、または残基１９１〜２０２からなるＭＭＰ９の領域内のアミノ酸残基を含むＭＭＰ９のエピトープに特異的に結合する単離された抗体またはその断片；および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
（項目９）
前記エピトープが配列番号２７のＥ１１１、Ｄ１１３、Ｒ１６２、またはＩ１９８を含む、項目８に記載の医薬組成物。
（項目１０）
前記抗体または断片によりＭＭＰ９の酵素活性が阻害される、項目１から９までのいずれかに記載の医薬組成物。
（項目１１）
前記酵素活性の阻害が非競合的である、項目１０に記載の医薬組成物。
（項目１２）
抗炎症剤、免疫療法剤、化学療法剤、抗がん剤、抗線維化剤、またはそれらの組合せからなる群から選択される１種または複数の治療剤をさらに含む、項目１から１１までのいずれかに記載の医薬組成物。
（項目１３）
前記１種または複数の治療剤が、ナブパクリタキセル、ｍＦＯＬＦＯＸ６、ＦＯＬＦＩＲＩ、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ベバシズマブ、抗リジルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）抗体、抗ジスコイジンドメイン受容体１（ＤＤＲ１）抗体、またはそれらの組合せからなる群から選択される、項目１２に記載の医薬組成物。
（項目１４）
被験体におけるＭＭＰ９活性を阻害する方法であって、ＭＭＰ９に関連する疾患または状態に罹患している該被験体におけるＭＭＰ９活性を阻害するために有効な量で、該被験体に、項目１から１３までのいずれかに記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
（項目１５）
前記ＭＭＰ９に関連する疾患または状態が、がん、自己免疫性の疾患もしくは状態、炎症性の疾患もしくは状態または線維性の疾患もしくは状態である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記ＭＭＰ９に関連するがんが、膵がん、食道胃腺癌、非小細胞肺がん、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃腺癌、結腸直腸癌、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、結腸直腸がん、結腸直腸腺癌、または肝細胞癌である、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記ＭＭＰ９に関連する自己免疫性の疾患もしくは状態または炎症性の疾患もしくは状態が、関節リウマチ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、敗血症、多発性硬化症、筋ジストロフィー、ループス、アレルギー、または喘息である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記ＩＢＤが、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、または分類不能大腸炎である、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記抗体または断片が約１ｍｇ／ｋｇ〜約２８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、項目１５から１８までのいずれかに記載の方法。
（項目２０）
前記抗体または断片が体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇから約１８００ｍｇの間の投与量で投与される、項目１５から１８までのいずれかに記載の方法。
（項目２１）
前記投与量が体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、または約１８００ｍｇである、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記抗体または断片が１週間ごとに１回、２週間ごとに１回、または３週間ごとに１回投与される、項目１５から２１までのいずれかに記載の方法。
（項目２３）
前記抗体または断片が静脈内、皮内、または皮下に投与される、項目１５から２２までのいずれかに記載の方法。
（項目２４）
前記抗体または断片が前記１種または複数の治療剤と同時にまたは逐次的に投与される、項目１２から２３までに記載の方法。
（項目２５）
ＭＭＰ９活性を検出またはモニタリングする方法であって、
試料をＭＭＰ９結合タンパク質と接触させるステップと、
ＭＭＰ９結合タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在するかしないかを評価するステップであって、
該ＭＭＰ９結合タンパク質が配列番号１３、１４、１５、３４、３５、３６および４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲを含むＶＨ領域；ならびに配列番号１６、１７、１８、３７、３８、３９、４２、４３、４４、および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲを有するＶＬ領域を含むステップとを含み、
該ＭＭＰ９結合タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在しないことにより、該試料がＭＭＰ９活性を有さないことが示され、該ＭＭＰ９結合タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在することにより、該試料がＭＭＰ９活性を有することが示される方法。
（項目２６）
前記ＭＭＰ９結合タンパク質が、配列番号１、３、５、６、７、８、３４、３５、３６、および４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ領域；ならびに配列番号２、４、９、１０、１１、１２、３７、３８、３９、４２、４３、４４、および４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ領域を含む、項目２５に記載の方法。（項目２７）
配列番号３４、３５、３６および４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲを含むＶＨ領域；ならびに配列番号３７、３８、３９、４２、４３、４４、および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲを有するＶＬ領域を含むＭＭＰ９結合タンパク質。
（項目２８）
前記ＶＨ領域が配列番号３０、３２、４６、および４７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して９５％配列同一性を有し、前記ＶＬ領域が配列番号３１、３３、４１、４５、および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して９５％配列同一性を有する、項目２７に記載のＭＭＰ９結合タンパク質。
（項目２９）
前記ＶＨ領域が配列番号３０、３２、４６、および４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記ＶＬ領域が配列番号３１、３３、４１、４５、および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、項目２７から２８までのいずれかに記載のＭＭＰ９結合タンパク質。
（項目３０）
試料を項目２７から２９までのいずれかに記載のＭＭＰ９結合タンパク質と接触させることを含む、ＭＭＰ９活性を阻害する方法。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、マウスモノクローナル抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４１）の重鎖可変領域のアミノ酸配列を、重鎖（ＶＨ１〜ＶＨ４）のヒト化変異体のアミノ酸配列と一緒に示し、ヒト化によって生じるフレームワークのアミノ酸配列の差異を示すためにアラインメントした図である。ＣＤＲがイタリック体で示されており、ヒト化変異体において親マウスモノクローナルと比較して異なるアミノ酸に下線が引かれている。
【００２１】
【図２】図２は、マウスモノクローナル抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４１）の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を、この軽鎖（ＶＨ１〜ＶＨ４）のヒト化変異体のアミノ酸配列と一緒に示し、ヒト化によって生じるフレームワークのアミノ酸配列の差異を示すためにアラインメントした図である。ＣＤＲがイタリック体で示されており、ヒト化変異体において親マウスモノクローナルと比較して異なるアミノ酸に下線が引かれている。
【００２２】
【図３】図３は、ＭＭＰ９タンパク質の概略図である。
【００２３】
【図４】図４は、ＡＢ００４１、Ｍ４、およびＭ１２と称される抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列の間の比較を示す図である。
【００２４】
【図５】図５は、実施例４に記載の通りビヒクルで処置したマウス（Ａ）およびＡＢ００４６で処置したマウス（Ｂ）由来の凍結させた結腸の連続切片に対して実施した免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）からの結果を示す画像である。ＤＳＳ誘発大腸炎において観察された炎症および組織破壊が強調されている。ＭＭＰ９発現が浸潤好中球（ＭＰＯシグナルによって示される）およびマクロファージにおいて観察され、基底膜ＩＶ型コラーゲン（図において「ＣｏｌＩＶ」と標識されている）、およびＭＭＰ９基質と共局在した。疾患結腸（Ａ）は、粘膜上皮および粘膜下陰窩（ｓｕｂｍｕｃｏｓａｌ  ｃｒｙｐｔ）の破壊および強い炎症細胞の浸潤を示した。疾患組織（Ａ）においてＭＭＰ２発現の証拠はほとんど観察されなかった。
【００２５】
【図６】図６は、実施例４に記載の通り結腸から取得したホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）切片に対するＭＭＰ９免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）からの代表的な画像を示す。示されているように、上皮細胞のＭＭＰ９発現（矢印）は正常な結腸（−ＤＳＳ）において最小であり、ＤＳＳ投与後に高度に誘導された（＋ＤＳＳ）。
【００２６】
【図７】図７は、実施例４に記載の試験において試験１０日目および１４日目（終了日）に全ての動物群に対して実施した内視鏡評価の結果を示すグラフである。パネルＡは、６日目〜１４日目の平均内視鏡検査スコア（＋／−ＳＥＭ）を示し、矢印はＡＢ００４６投与（または他の処置）の日を示す。パネルＢは、１４日目の各群についての平均内視鏡検査スコア（＋／−ＳＥＭ）を示し、アスタリスクは、疾患の有意な減少を示す（ＡＢ００４６処置群およびＥＮＢＲＥＬ（登録商標）処置群について、１４日目に観察された）。内視鏡検査スコアは、各動物について観察された最も重度の病変を反映する。
【００２７】
【図８】図８は、実施例４に記載の試験終了時に切除した結腸に対して実施した病理組織学的分析の結果を示すグラフである。炎症、浮腫、および壊死の程度を評価し、評価した各パラメータについて各動物からの平均結腸スコアを加算することによって合計スコアを算出した。抗ＭＭＰ９（ＡＢ００４６）処置により、病理組織学的疾患がＥＮＢＲＥＬ（登録商標）と同様の程度まで有意に減少した。
【００２８】
【図９】図９は、実施例４に記載の試験からの結腸のＦＦＰＥ切片に対するＭＭＰ９  ＩＨＣの代表的な画像を示す。ＭＭＰ９発現は、正常な結腸（ＤＳＳなし）において最小であり、ＤＳＳ投与後に高度に誘導された（ビヒクル）。ＡＢ００４６処置群およびＥＮＢＲＥＬ（登録商標）処置群におけるＭＭＰ９発現の減少は、全体的な疾患の低減と相関した。
【００２９】
【図１０】図１０は、実施例４に記載の試験についての体重および下痢の結果を示すグラフである。体重の変化および下痢の発生について、台形則法（ｔｒａｐｅｚｏｉｄａｌ  ｒｕｌｅ  ｍｅｔｈｏｄ）によって曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４６）を用いた処置はＤＳＳ誘発大腸炎に起因する体重減少を防止し、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）処置の効果に匹敵した。下痢の発生は、ＡＢ００４６処置とＥＮＢＲＥＬ（登録商標）処置で同様に低下した。
【００３０】
【図１１Ａ−１】図１１Ａは、ＤＳＳ大腸炎モデルにおいて、抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４６）を用いて処置した後および他の処置後に終末血清試料（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｓｅｒｕｍ  ｓａｍｐｌｅ）に対して実施例４に記載の通り実施した多検体ＥＬＩＳＡ分析の結果を示すグラフである。結果により、ＡＢ００４６処置により疾患誘導性炎症性サイトカインおよび増殖因子が広範に全身的に下方制御されることが明らかになった。
【図１１Ａ−２】図１１Ａは、ＤＳＳ大腸炎モデルにおいて、抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４６）を用いて処置した後および他の処置後に終末血清試料（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｓｅｒｕｍ  ｓａｍｐｌｅ）に対して実施例４に記載の通り実施した多検体ＥＬＩＳＡ分析の結果を示すグラフである。結果により、ＡＢ００４６処置により疾患誘導性炎症性サイトカインおよび増殖因子が広範に全身的に下方制御されることが明らかになった。
【図１１Ｂ−１】図１１Ｂは、同じ試験からの追加の血清マーカーのデータを示すグラフである。
【図１１Ｂ−２】図１１Ｂは、同じ試験からの追加の血清マーカーのデータを示すグラフである。
【図１１Ｂ−３】図１１Ｂは、同じ試験からの追加の血清マーカーのデータを示すグラフである。
【図１１Ｂ−４】図１１Ｂは、同じ試験からの追加の血清マーカーのデータを示すグラフである。
【００３１】
【図１２Ａ】図１２Ａは、実施例４に記載の試験における、ＤＳＳ大腸炎モデルにおける抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４７）処置による内視鏡的疾患の低減を示すグラフである。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、実施例４に記載の試験における、ＤＳＳ大腸炎モデルにおける抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４７）処置による組織学的疾患の低減を示すグラフである。
【００３２】
【図１３】図１３は、実施例５に記載の予防的処置試験において、示されている日に全ての動物群に対して実施した内視鏡評価の結果を示すグラフである。パネルＡは、６日目〜１４日目の平均内視鏡検査スコア（＋／−ＳＥＭ）を示し、矢印はＡＢ００４６投与（または他の処置）の日を示す。パネルＢは、各群についての１０日目の平均内視鏡検査スコア（＋／−ＳＥＭ）を示し、アスタリスクは、疾患の有意な低減を示す（ＡＢ００４６処置群およびＥＮＢＲＥＬ（登録商標）処置群について、１４日目に観察された）。内視鏡スコアは、各動物について観察された最も重度の病変を反映する。
【００３３】
【図１４】図１４は、実施例５に記載の試験終了時に切除した結腸に対して実施した病理組織学的分析の結果を示すグラフである。炎症、浮腫、および壊死の程度を評価し、評価した各パラメータについて各動物からの平均結腸スコアを加算することによって合計スコアを算出した。
【００３４】
【図１５】図１５は、実施例５に記載の試験についての体重および下痢の結果を示すグラフである。体重の変化および下痢の発生について、台形則法によって曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４６）を用いた予防的処置は下痢の発生を防止した。
【００３５】
【図１６】図１６は、実施例６に記載の試験における、確立された結腸直腸腫瘍形成モデル（ＨＣＴ１１６）における原発腫瘍の成長の減少を示すグラフである。左側のパネルは、腫瘍体積の変化の減少を示し、右側のパネルは、処置の開始後３２日目の最終の腫瘍重量の減少を示す（マンホイットニー検定から得られたｐ値を伴い、棒は群の平均±ＳＥＭを示す）。
【００３６】
【図１７Ａ−１】図１７Ａは、実施例７に記載の試験によりもたらされた臨床スコアおよび下肢スコアを示すグラフである。関節リウマチのマウスＣＩＡモデルおよびラットＣＩＡモデルのマウス代理抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４６）および抗ヒトＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４１）の有効性が示されている。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１７Ａ−２】図１７Ａは、実施例７に記載の試験によりもたらされた臨床スコアおよび下肢スコアを示すグラフである。関節リウマチのマウスＣＩＡモデルおよびラットＣＩＡモデルのマウス代理抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４６）および抗ヒトＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４１）の有効性が示されている。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、同じ試験からの抗ＭＭＰ９抗体価を示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【００３７】
【図１８Ａ】図１８Ａは、実施例７に記載のラットＣＩＡ試験における試験終了時の炎症性サイトカインの血清中レベルを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１８Ｂ】図１８Ｂは、実施例７に記載のマウスＣＩＡ試験における試験終了時の血清中炎症性サイトカインのレベルを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【００３８】
【図１９Ａ−１】図１９Ａは、実施例７に記載のラットＣＩＡ試験における追加の血清マーカーを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１９Ａ−２】図１９Ａは、実施例７に記載のラットＣＩＡ試験における追加の血清マーカーを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１９Ａ−３】図１９Ａは、実施例７に記載のラットＣＩＡ試験における追加の血清マーカーを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１９Ａ−４】図１９Ａは、実施例７に記載のラットＣＩＡ試験における追加の血清マーカーを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１９Ａ−５】図１９Ａは、実施例７に記載のラットＣＩＡ試験における追加の血清マーカーを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１９Ａ−６】図１９Ａは、実施例７に記載のラットＣＩＡ試験における追加の血清マーカーを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１９Ａ−７】図１９Ａは、実施例７に記載のラットＣＩＡ試験における追加の血清マーカーを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１９Ｂ−１】図１９Ｂは、実施例７に記載のマウスＣＩＡ試験における追加の血清マーカーを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１９Ｂ−２】図１９Ｂは、実施例７に記載のマウスＣＩＡ試験における追加の血清マーカーを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１９Ｂ−３】図１９Ｂは、実施例７に記載のマウスＣＩＡ試験における追加の血清マーカーを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１９Ｂ−４】図１９Ｂは、実施例７に記載のマウスＣＩＡ試験における追加の血清マーカーを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【図１９Ｂ−５】図１９Ｂは、実施例７に記載のマウスＣＩＡ試験における追加の血清マーカーを示すグラフである。ＭＴＸ＝メトトレキセート；Ｎｏｎ  Ｄｉｓ．＝非疾患。
【００３９】
【図２０】図２０は、実施例８に記載のＬＰＳ敗血症ラットモデルにおける、抗ＭＭＰ９抗体投与後の死亡および体温低下の防止を示すグラフである。各グラフの下の線は、ＡＣ−１処置群を示し、２つの上の線は、ＬＰＳを受けていない群（左側のパネルのひし形；右側のパネルの丸）および抗ＭＭＰ９処置群（左側のパネルの四角および右側のパネルの三角形）を示す。
【００４０】
【図２１】図２１は、ＡＢ００４１で処置したラット、マリマスタットで処置したラット、および対照で処置したラットについての毎日の筋骨格症候群（ＭＳＳ）スコアの平均±標準偏差を示すグラフである。
【００４１】
【図２２】図２２は、ＡＢ００４１で処置したラットにおいて、１日目、７日目、１０日目、１４日目、１７日目、２１日目、２４日目、および２８日目にＥＬＩＳＡによって測定されたＡＢ００４１の血清中レベル（血清中力価）を示すグラフである。データは、平均値±標準偏差として示されている。
【００４２】
【図２３Ａ−Ｂ】図２３は、結腸直腸がんのマウス異種移植モデルにおける、示されている処置後の腫瘍体積の変化（図２３Ａ、２３Ｃ、２３Ｅ）および重量の変化（図２３Ｂ、２３Ｄ、２３Ｆ）を示すグラフである。
【図２３Ｃ−Ｄ】図２３は、結腸直腸がんのマウス異種移植モデルにおける、示されている処置後の腫瘍体積の変化（図２３Ａ、２３Ｃ、２３Ｅ）および重量の変化（図２３Ｂ、２３Ｄ、２３Ｆ）を示すグラフである。
【図２３Ｅ−Ｆ】図２３は、結腸直腸がんのマウス異種移植モデルにおける、示されている処置後の腫瘍体積の変化（図２３Ａ、２３Ｃ、２３Ｅ）および重量の変化（図２３Ｂ、２３Ｄ、２３Ｆ）を示すグラフである。
【００４３】
【図２４】図２４は、結腸直腸がんのマウス異種移植モデルにおける、示されている処置後の腫瘍体積の変化（図２４Ａ）および重量の変化（図２４Ｂ）を示すグラフである。
【００４４】
【図２５Ａ−Ｂ】図２５は、結腸直腸がんのマウス異種移植モデルにおける、対照による処置および抗ＭＭＰ９による処置後の血清タンパク質のレベルを示すグラフである。
【図２５Ｃ−Ｄ】図２５は、結腸直腸がんのマウス異種移植モデルにおける、対照による処置および抗ＭＭＰ９による処置後の血清タンパク質のレベルを示すグラフである。
【００４５】
【図２６】図２６は、示されている処置後の関節リウマチのラットＣＩＡモデルにおける足の厚さ、足首の直径、および体重の変化を示すグラフである。
【００４６】
【図２７】図２７は、関節リウマチのラットＣＩＡモデルにおける、示されている処置後の、免疫組織化学的検査によって測定されたＴＮＦ−アルファスコアおよびＣＤ６８スコアを示すグラフである。
【００４７】
【図２８−１】図２８は、ラットＣＩＡ試験における、試験終了時の炎症性サイトカインの血清中レベルを示すグラフである。
【図２８−２】図２８は、ラットＣＩＡ試験における、試験終了時の炎症性サイトカインの血清中レベルを示すグラフである。
【図２８−３】図２８は、ラットＣＩＡ試験における、試験終了時の炎症性サイトカインの血清中レベルを示すグラフである。
【図２８−４】図２８は、ラットＣＩＡ試験における、試験終了時の炎症性サイトカインの血清中レベルを示すグラフである。
【００４８】
【図２９】図２９は、関節リウマチのマウスＣＩＡモデルにおける、示されている処置後の足の厚さ、足首の直径、および体重の変化を示すグラフである。
【００４９】
【図３０】図３０は、腫瘍上皮に関連するＭＭＰ９タンパク質のＩＨＣ分析からの結果を示すグラフである。
【００５０】
【図３１】図３１は、腫瘍上皮に関連するＭＭＰ９  ｍＲＮＡのＣＩＳＨ分析からの結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
詳細な説明
本開示の実施には、別段の指定のない限り、細胞生物学、毒性学、分子生物学、生化学、細胞培養、免疫学、腫瘍学、組換えＤＮＡの分野および当技術分野の技術の範囲内の関連する分野における標準の方法および従来の技法が使用される。そのような技法は、文献に記載されており、それにより、当業者が利用可能である。例えば、Ａｌｂｅｒｔｓ，  Ｂ．ら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ」、第５版、Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ、２００８年；Ｖｏｅｔ，  Ｄ．ら、「Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：  Ｌｉｆｅ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｌｅｖｅｌ」、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｈｏｂｏｋｅｎ、ＮＪ、２００８年；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．ら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、第３版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、２００１年；  Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｆ．ら、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８７年および定期的更新版；  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，  Ｒ．Ｉ．、「Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」、第４版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｓｏｍｅｒｓｅｔ、ＮＪ、２０００年；および「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」シリーズ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡを参照されたい。例えば、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、（Ｒ．  Ｃｏｉｃｏ、シリーズ編集者）、Ｗｉｌｅｙ、２０１０年８月に最新更新されたものも参照されたい。
【００５２】
特定のＭＭＰの異常な活性が腫瘍の成長、転移、炎症、自己免疫、および血管疾患において役割を果たす。例えば、Ｈｕら（２００７年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ６巻：４８０〜４９８頁を参照されたい。ＭＭＰ９の１つの注目すべき供給源は腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）であり、これは、複合体同時活性化ループにおいて、原発腫瘍細胞とのパラ分泌相互作用を介して転移および浸潤を支持する。この、細胞浸潤のための物理的関門のタンパク質分解による破壊と、成長および血管新生を活性化する因子の遊離との組合せにより、腫瘍の増大の道が開かれ、それに付随して、新血管形成が生じて腫瘍の増生が支持される。
【００５３】
ＭＭＰ９は、ＲＡＳ／ＲＡＦ、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ＮＦｋＢ、およびＷＮＴ／ベータカテニンなどの発がんシグナル伝達経路の標的であり、インテグリンおよび受容体チロシンキナーゼ機能を調節することにより、これらの経路の上流の調節因子として機能する。ＭＭＰ９は、多種多様な腫瘍型において上昇しており、ＭＭＰ９レベルは、胃がん、肺がん、および結腸直腸がんを含めた多くのがんにおける予後不良と相関する。ＭＰ９は、化学療法抵抗性にも関係づけられ、いくつかの腫瘍抑制因子が失われると上方制御される。ＭＭＰ９は多くの多様な腫瘍型において上方制御され、がん性細胞の原発性成長および遠位への浸潤を促進し得る。
【００５４】
特定の治療的状況において１種または複数のＭＭＰの活性を阻害することが望ましい場合がある。しかし、特定の他のＭＭＰ、例えばＭＭＰ２の活性は、多くの場合、正常な機能のために必要であり、かつ／または疾患を防止する。大多数のＭＭＰ阻害剤は保存された触媒ドメインを標的とし、結果として、いくつもの異なるＭＭＰを阻害するので、利用可能なＭＭＰ阻害剤を使用することにより、必須な、病原として関連しないＭＭＰが阻害されることに起因する副作用が引き起こされている。
【００５５】
特定のＭＭＰに特異的な阻害剤を開発すること、またはＭＭＰを選択することに伴う難題は、酵素活性を阻害するためには、一般に、阻害剤が触媒ドメインを標的とすることが必要であるという事実に関連する。ＭＭＰ触媒ドメインの相同性により、阻害剤が２種以上のＭＭＰと反応することになり得る。提供される実施形態としては、治療的試薬、例えば、単一のＭＭＰの触媒活性を特異的に阻害する、または複数のＭＭＰ、例えば、ＭＭＰ９を選択し、特定の他のＭＭＰや任意の他のＭＭＰとは反応しないまたはそれを阻害しない抗体およびその抗原結合断片を含めた作用剤が挙げられる。提供される実施形態としては、がん、および自己免疫性疾患および炎症性疾患を含めた種々の疾患を処置するための方法およびその使用も挙げられる。
ＭＭＰ９結合タンパク質
【００５６】
ＭＭＰ９により、基底膜コラーゲンおよび他の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）構成成分が分解される。Ｋｅｓｓｅｎｂｒｏｃｋ  Ｋら、「Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ：  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ」、Ｃｅｌｌ（２０１０年）；１４１巻（１号）：５２〜６７頁。マトリックス分解は、関節炎、がん、および潰瘍性大腸炎を含めた複数の疾患における病理に寄与する。Ｒｏｙ  Ｒら、「Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ  ａｓ  ｎｏｖｅｌ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ａｎｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒ」、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  （２００９年）；２７巻（３１号）：５２８７〜９７頁。炎症およびがんの動物モデルでは、マリマスタットなどの広範囲にわたるマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤が効果的である（Ｗａｔｓｏｎ  ＳＡら、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｕｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｂｙ  ｍａｒｉｍａｓｔａｔ  ｉｎ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ：  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｗｉｔｈ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ＣＥＡ」、Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  （１９９９年）；８１巻（１号）：１９〜２３頁；Ｓｙｋｅｓ  ＡＰら、「Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ  ｏｎ  ｃｏｌｏｎｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｔｒｉｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ」、Ａｌｉｍｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  （１９９９年）；１３巻（１１号）：１５３５〜４２頁）。しかし、そのような汎阻害剤により、一般には、ヒトでは、マリマスタットの効果的な用量レベルまたはその付近で、集合的に筋骨格症候群（ＭＳＳ）と称される手、腕、および肩の関節の凝り、炎症、および疼痛を含めた筋骨格の副作用が引き起こされる恐れがある。Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ＪＴ．  「Ｔｈｅ  ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  ｏｆ  ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｉｎｄｅｘ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ  （２００６年）；６９巻（３号）：６７７〜８７頁；Ｔｉｅｒｎｅｙ  ＧＭら  「Ａ  ｐｉｌｏｔ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｍａｒｉｍａｓｔａｔ  ｉｎ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ」、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  （１９９９年）；３５巻（４号）：５６３〜８頁；Ｗｏｊｔｏｗｉｃｚ−Ｐｒａｇａ  Ｓら、「Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  Ｍａｒｉｍａｓｔａｔ、ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｏｒａｌｌｙ  ｔｏ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ」、Ｊ  Ｃ��ｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  （１９９８年）；１６巻（６号）：２１５０〜６頁。症状は用量依存性かつ時間依存性であり、汎ＭＭＰ阻害剤を用いた処置を休止したすぐ後には可逆的である。Ｗｏｊｔｏｗｉｃｚ−Ｐｒａｇａ  Ｓ、１９９８年；Ｎｅｍｕｎａｉｔｉｓ  Ｊら、「Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｍａｒｉｍａｓｔａｔ  ｏｎ  ｓｅｒｕｍ  ｔｕｍｏｒ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｃａｎｃｅｒ：  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｔｏｌｅｒａｂｌｅ  ｄｏｓｅ  ｆｏｒ  ｌｏｎｇｅｒ−ｔｅｒｍ  ｓｔｕｄｉｅｓ」、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  （１９９８年）；４巻（５号）：１１０１〜９頁；Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ  ＪＷら、「Ｄｕｐｕｙｔｒｅｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｆｒｏｚｅｎ  ｓｈｏｕｌｄｅｒ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ａ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ａｎｄ  ｊｏｉｎｔ  ｓｕｒｇｅｒｙ．  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｖｏｌｕｍｅ  （１９９８年）；８０巻（５号）：９０７〜８頁。マリマスタットおよび他の同じクラスの汎ＭＭＰ阻害剤は亜鉛キレート化剤である。Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ＪＴ、２００６年。ホモ接合性ＭＭＰ９ノックアウトマウスは、ＭＳＳ様症状もＭＳＳ様組織変化も示さない。Ｖｕ  ＴＨら、「ＭＭＰ−９／ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ  Ｂ  ｉｓ  ａ  ｋｅｙ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｇｒｏｗｔｈ  ｐｌａｔｅ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ  ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ」、Ｃｅｌｌ  （１９９８年）；９３巻（３号）：４１１〜２２頁。
【００５７】
本開示は、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ９）タンパク質（ＭＭＰ９は、ゼラチナーゼ−Ｂとしても公知である）に結合する結合タンパク質、例えば、抗体およびその断片（例えば、抗原結合断片）、例えば、配列番号２７または配列番号２８に記載のアミノ酸配列を有するヒトＭＭＰ９などのヒトＭＭＰ９を提供する。本開示の結合タンパク質は、一般には、免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖（またはその機能性断片）およびＩｇ軽鎖（またはその機能性断片）を含む。
【００５８】
本開示は、さらに、ＭＭＰ９に特異的に結合し、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１２、およびＭＭＰ１３などの他のマトリックスメタロプロテイナーゼには結合しないＭＭＰ９結合タンパク質を提供する。したがって、そのような特異的なＭＭＰ９結合タンパク質は、一般に、非ＭＭＰ９マトリックスメタロプロテイナーゼとは有意にまたは検出可能に交差反応しない。ＭＭＰ９に特異的に結合するＭＭＰ９結合タンパク質は、例えば、他のマトリックスメタロプロテイナーゼの活性には直接影響を及ぼすことなく、ＭＭＰ９の特異的な調節（例えば、阻害）を得ることが必要である、またはそれが望ましい適用において使用される。
【００５９】
本開示のある特定の実施形態では、抗ＭＭＰ９抗体は、ＭＭＰ９の活性の阻害剤であり、ＭＭＰ９の特異的な阻害剤であってよい。具体的には、本明細書に開示されているＭＭＰ９結合タンパク質は、ＭＭＰ９の阻害に有用である一方で、他の、関連するマトリックスメタロプロテイナーゼの正常な機能を可能にする。「ＭＭＰの阻害剤」または「ＭＭＰ９活性の阻害剤」とは、これだけに限定されないが、酵素的プロセシング（ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ）、ＭＭＰ９のその基質に対する作用の阻害（例えば、基質の結合、基質の切断などを阻害することによる）などを含め、直接的に、または間接的にＭＭＰ９の活性を阻害する抗体またはその抗原結合断片であってよい。
【００６０】
いくつかの実施形態では、本明細書の実施例において実証されている通り、汎ＭＭＰ阻害剤、例えばマリマスタットなどの小分子汎阻害剤などを使用して処置することにより、歩行、姿勢および動く意欲に対する実質的な影響を含めた、筋骨格症候群（ＭＳＳ）などの筋骨格疾患の症状が生じるが、ＭＭＰ９の特異的な阻害、例えば、本出願における抗体またはその抗原結合断片などでは、そのような症状は引き起こされず、ＭＳＳは誘導されない。
【００６１】
本開示は、ヒトＭＭＰ９、カニクイザルＭＭＰ９、およびラットＭＭＰ９などの非マウスＭＭＰ９に特異的に結合するＭＭＰ９結合タンパク質も提供する。
【００６２】
本開示は、非競合的な阻害剤としての機能を果たすＭＭＰ９結合タンパク質（例えば、抗ＭＭＰ９抗体およびその機能性断片）も提供する。「非競合的な阻害剤」とは、酵素の基質結合部位から離れた部位に結合する、したがって、酵素がその基質と結合するか否かにかかわらず酵素に結合し、阻害活性に影響を及ぼすことができる阻害剤を指す。そのような非競合的な阻害剤により、例えば、基質濃度に実質的に非依存性であり得る阻害のレベルをもたらすことができる。
【００６３】
本開示のＭＭＰ９結合タンパク質（例えば、抗体およびその機能性断片）は、ＭＭＰ９、特にヒトＭＭＰ９に結合し、本明細書に開示されている重鎖ポリペプチドに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ超のアミノ酸配列同一性を有する重鎖ポリペプチド（またはその機能性断片）を有するものを包含する。一部の例では、本開示のＭＭＰ９結合タンパク質（例えば、抗体およびその機能性断片）は、ＭＭＰ９、特にヒトＭＭＰ９に結合し、本明細書に開示されている重鎖ポリペプチドに対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ超のアミノ酸配列同一性を有する重鎖ポリペプチド（またはその機能性断片）を有するものを包含する。
【００６４】
本開示のＭＭＰ９結合タンパク質（例えば、抗体およびその機能性断片）は、ＭＭＰ９、特にヒトＭＭＰ９に結合し、本明細書に開示されている重鎖ポリペプチドに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ超のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖ポリペプチド（ｌｉｇｈｔ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）（またはその機能性断片）を有するものを包含する。
【００６５】
本開示のＭＭＰ９結合タンパク質（例えば、抗体およびその機能性断片）は、ＭＭＰ９、特にヒトＭＭＰ９に結合し、本明細書に開示されている重鎖ポリペプチドの相補性決定領域（「ＣＤＲ」）を有する重鎖ポリペプチド（またはその機能性断片）および軽鎖ポリペプチド（またはその機能性断片）のＣＤＲを有するものを包含する。
【００６６】
「相同性」または「同一性」または「類似性」とは、本明細書において核酸およびポリペプチドに関して使用される場合、それぞれ、アミノ酸配列または核酸配列のアラインメントに基づいた２つのポリペプチド間または２つの核酸分子間の関係を指す。相同性および同一性は、それぞれ比較するためにアラインメントすることができる各配列内の位置を比較することによって決定することができる。比較する配列内の同等の位置が同じ塩基またはアミノ酸によって占有されていれば、それらの分子はその位置において同一であり、同等の部位が同じまたは類似したアミノ酸残基（例えば、立体的本質および／または電子的本質が類似している）によって占有されていれば、その分子は、その位置において相同である（類似した）と称することができる。相同性／類似性または同一性の百分率としての表示とは、比較される配列によって共有される位置における同一のまたは類似したアミノ酸の数の関数を指す。２つの配列の比較において、残基（アミノ酸または核酸）が存在しないことまたは余分の残基が存在することによっても、同一性および相同性／類似性が低下する。
【００６７】
本明細書で使用される場合、「同一性」とは、配列をアラインメントして配列マッチングを最大にした場合、すなわち、ギャップおよび挿入を考慮に入れた場合に、２つ以上の配列内の対応する位置にある同一のヌクレオチドまたはアミノ酸残基の百分率を意味する。配列は、一般に、指定の領域、例えば、少なくとも約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５またはそれ超のアミノ酸長またはヌクレオチド長の領域にわたって、および参照アミノ酸またはヌクレオチドの全長に至ってよい領域にわたって一致が最大になるようにアラインメントされる。配列比較のために、一般には、１つの配列が、試験配列が比較される参照配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列および参照配列をコンピュータプログラムにインプットし、必要であれば部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。次いで、配列比較アルゴリズムにより、試験配列（複数可）について、指定されたプログラムパラメータに基づいて参照配列と比較してパーセント配列同一性を算出する。
【００６８】
パーセント配列同一性を決定するために適したアルゴリズムの例はＢＬＡＳＴアルゴリズムおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらは、それぞれＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５巻：４０３〜４１０頁およびＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９７７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５巻：３３８９〜３４０２頁に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）を通じて公的に入手可能である。別の例示的なアルゴリズムとしては、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｃｌｕｓｔａｌｗ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌにおいて入手可能なＣｌｕｓｔａｌＷ（Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｄ．ら（１９９４年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２２巻：４６７３〜４６８０頁）が挙げられる。
【００６９】
同一でない残基の位置は保存的アミノ酸置換によって異なり得る。保存的アミノ酸置換とは、類似した側鎖を有する残基の互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンであり、脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群はセリンおよびトレオニンであり、アミドを含有する側鎖を有するアミノ酸の群はアスパラギンおよびグルタミンであり、芳香族側鎖を有するアミノ酸の群はフェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンであり、塩基性側鎖を有するアミノ酸の群はリシン、アルギニン、およびヒスチジンであり、硫黄を含有する側鎖を有するアミノ酸の群は、システインおよびメチオニンである。
【００７０】
２つの核酸の間の配列同一性を、２つの分子の、ストリンジェントな条件下での互いとのハイブリダイゼーションに関して記載することもできる。ハイブリダイゼーション条件は当技術分野における標準の方法に従って選択される（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（１９８９年）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．を参照されたい）。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例は、５０℃以上、０．１×ＳＳＣ（１５ｍＭの塩化ナトリウム／１．５ｍＭのクエン酸ナトリウム）でのハイブリダイゼーションである。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の別の例は、溶液：５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハート液、１０％デキストラン硫酸、および２０ｍｇ／ｍｌの変性せん断サケ精子ＤＮＡ中、４２℃で一晩インキュベートし、その後、フィルターを０．１×ＳＳＣ中、約６５℃で洗浄することである。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、少なくとも上記の代表的な条件と同様にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件であり、条件は、上記の特定のストリンジェントな条件と少なくとも約８０％同様にストリンジェント、一般には、少なくとも９０％同様にストリンジェントであれば、少なくとも同様にストリンジェントであるとみなされる。
【００７１】
したがって、本開示は、例えば、本明細書に記載の重鎖可変領域のアミノ酸配列（例えば、配列番号１または配列番号５〜８）に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ超のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域ポリペプチド、および本明細書に記載の軽鎖ポリペプチド（例えば、配列番号２または配列番号９〜１２）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ超のアミノ酸配列同一性を有する可変軽鎖ポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００７２】
本開示の抗ＭＭＰ９抗体の例を、以下により詳細に記載する。
抗体
【００７３】
ＭＭＰ９結合タンパク質は、ＭＭＰ９に特異的に結合するものなどの抗体およびその機能性断片を含む。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、抗原エピトープに特異的に結合するペプチド配列（例えば、可変領域の配列）を含む、単離された、または組換え型のポリペプチド結合作用剤を意味する。この用語は、その最も広範な意味で使用され、特にモノクローナル抗体（全長のモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ナノボディ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ならびに、所望の生物活性を示す限りは、これだけに限定されないが、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦａｂ２を含めた抗体断片を包含する。「ヒト抗体」という用語は、可能な非ヒトＣＤＲ領域以外はヒト起源の配列を含有する抗体を指し、また、免疫グロブリン分子の完全な構造が存在することを意味するものではなく、抗体が、ヒトにおいて最小の免疫原性作用を有する（すなわち、それ自体に対する抗体の産生を誘導しない）ことのみを意味する。
【００７４】
「抗体断片」とは、全長の抗体の一部、例えば、全長の抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。そのような抗体断片は、本明細書では、「機能性断片」または「抗原結合断片」とも称することができる。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖抗体（Ｚａｐａｔａら（１９９５年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  ８巻（１０号）：１０５７〜１０６２頁）；単鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と称される、それぞれが単一の抗原結合部位を有する２つの同一の抗原結合断片、および残りの、容易に結晶化することができることが名称に反映された「Ｆｃ」断片が生じる。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、なお抗原と架橋することができるＦ（ａｂ’）２断片がもたらされる。
【００７５】
「Ｆｖ」とは、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含有する最小の抗体断片である。この領域は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインが密接に非共有結合で会合した二量体からなる。この立体配置では、各可変ドメインの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）が相互作用してＶＨ−ＶＬ二量体の表面上に抗原結合部位が確定される。集合的に、６つのＣＤＲにより抗原との結合の特異性が抗体に付与される。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な６つのＣＤＲのうちの３つしか含まない単離されたＶＨ領域またはＶＬ領域）でさえ、抗原を認識し、それに結合することができるが、一般に親和性はＦｖ断片全体よりも低い。
【００７６】
「Ｆａｂ」断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域に加えて、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ断片は、抗体のパパイン消化後に最初に観察された。Ｆａｂ’断片は、Ｆ（ａｂ’）断片が重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインを含めたいくつかの追加の残基を含有するという点でＦａｂ断片とは異なる。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域の近くでジスルフィド結合によってつながった２つのＦａｂ断片を含有し、また、抗体のペプシン消化後に最初に観察された。Ｆａｂ’−ＳＨとは、本明細書では、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離型のチオール基を担持するＦａｂ’断片に対する名称である。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。
【００７７】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと称される２つの明白に異なる種類の一方に割り当てることができる。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭに割り当てることができ、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。
【００７８】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。いくつかの実施形態では、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これにより、ｓＦｖが抗原と結合するための所望の構造を形成することが可能になる。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻（ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２６９〜３１５頁（１９９４年）を参照されたい。
【００７９】
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、この断片は、同じポリペプチド鎖内で接続した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）（ＶＨ−ＶＬ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間の対合が可能になるには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインを別の鎖の相補的なドメインと対合させ、それにより、２つの抗原結合部位を作製する。ダイアボディは、さらに、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０巻：６４４４〜６４４８頁に記載されている。
【００８０】
「単離された」抗体とは、その天然の環境の構成成分から同定され、分離および／または回収された抗体である。その天然の環境の構成成分は、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性溶質または非タンパク質性溶質を含み得る。いくつかの実施形態では、単離された抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって決定したところ、抗体の９５重量％超、例えば、９９重量％超まで、（２）例えば、スピニングカップシークエネーターを使用することによって少なくとも１５残基のＮ末端または内部のアミノ酸配列を得るために十分な程度まで、または（３）クーマシーブルー（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ  ｂｌｕｅ）または銀染色による検出を用いた、還元条件下または非還元条件下でのゲル電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって均一になるまで、精製される。組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕ抗体は、抗体の天然の環境の少なくとも１つの構成成分が存在しないので、「単離された抗体」という用語に包含される。ある特定の実施形態では、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
【００８１】
本明細書で使用される場合、「免疫反応性の」とは、他のペプチド／タンパク質に対して交差反応性であっても、アミノ酸残基の配列（「結合部位」または「エピトープ」）に特異的であって、ヒトへの使用のために投与するために製剤化されるレベルにおいて毒性でない抗体またはその断片を指す。「エピトープ」とは、抗体またはその抗原結合断片との結合相互作用を形成することができる抗原の部分を指す。エピトープは、直鎖ペプチド配列（すなわち、「連続的」）であってもよく、連続していないアミノ酸配列で構成されてもよい（すなわち、「立体構造」または「不連続」）。「優先的に結合する」という用語は、結合作用剤が、結合部位に、無関係のアミノ酸配列に結合するよりも大きな親和性で結合することを意味する。
【００８２】
抗ＭＭＰ９抗体は、重鎖および軽鎖のＣＤＲに関して記載することができる。本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域において見出される連続していない抗原結合部位を意味するものとする。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２５２巻：６６０９〜６６１６頁（１９７７年）；Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９９１年）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年）；およびＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２６２巻：７３２〜７４５頁（１９９６年）によって記載されており、定義は、互いに比較した場合にアミノ酸残基のオーバーラップまたはサブセットを含む。それにもかかわらず、いずれの定義を適用して抗体または移植抗体またはその変異体のＣＤＲについて言及することも、本明細書において定義され、使用されるこの用語の範囲内であるものとする。上で引用された参考文献のそれぞれによって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基は以下の表１Ａに比較として記載されている。
【表１Ａ】
2018150343.tif 000002
【００８３】
本明細書で使用される場合、「フレームワーク」という用語は、抗体可変領域に関して使用される場合、抗体の可変領域内のＣＤＲ領域の外側の全てのアミノ酸残基を意味するものとする。可変領域フレームワークは、一般に、長さが約１００アミノ酸から約１２０アミノ酸の間の不連続なアミノ酸配列であるが、ＣＤＲの外側のアミノ酸のみを指すものとする。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」という用語は、ＣＤＲによって分離されているフレームワークの各ドメインを意味するものとする。
【００８４】
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体である。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられているヒト免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）（レシピエント抗体）を包含する。したがって、非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有するキメラ免疫グロブリンである。非ヒト配列は、主に可変領域、特に相補性決定領域（ＣＤＲ）に位置する。いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が対応する非ヒト残基で置き換えられている。ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも移入されたＣＤＲやフレームワーク配列にも見出されない残基も含んでよい。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、一般には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＣＤＲの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲに対応し、フレームワーク領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域に対応する。本開示の目的に関して、ヒト化抗体は、免疫グロブリン断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または他の抗体の抗原結合部分配列も含んでよい。
【００８５】
ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、一般には、ヒト免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）も含んでよい。例えば、Ｊｏｎｅｓら（１９８６年）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８年）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２９頁；およびＰｒｅｓｔａ（１９９２年）Ｃｕｒｒ．
Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ２巻：５９３〜５９６頁を参照されたい。
【００８６】
非ヒト抗体をヒト化するための方法は当技術分野で公知である。一般に、ヒト化抗体には、非ヒトである供給源から１つまたは複数のアミノ酸残基が導入されている。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「移入」または「ドナー」残基と称され、一般には、「移入」または「ドナー」可変ドメインから得られる。例えば、ヒト化は、基本的にＷｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法に従って、げっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列で対応するヒト抗体の配列を置換することによって実施することができる。例えば、Ｊｏｎｅｓら、上記；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、上記およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９巻：１５３４〜１５３６頁を参照されたい。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、実質的にインタクトなヒト可変ドメイン未満が非ヒト種由来の対応する配列で置換されているキメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）を包含する。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、いくつかのＣＤＲ残基、および必要に応じていくつかのフレームワーク領域残基がげっ歯類抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体）の類似の部位由来の残基で置換されているヒト抗体である。
【００８７】
ヒト抗体は、例えば、ファージディスプレイライブラリーを使用することによっても産生することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ、２２７巻：３８１頁；Ｍａｒｋｓら（１９９１年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２巻：５８１頁。ヒトモノクローナル抗体を調製するための他の方法は、Ｃｏｌｅら（１９８５年）「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ、７７頁およびＢｏｅｒｎｅｒら（１９９１年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７巻：８６〜９５頁に記載されている。
【００８８】
ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を、内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的に、または完全に不活性化されたトランスジェニック動物（例えば、マウス）に導入することによって作製することができる。免疫学的に攻撃するとヒト抗体産生が観察され、これはヒトにおいて見られるものと、遺伝子再構成、集合、および抗体レパートリーを含めたあらゆる点でよく似ている。この手法は、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号、および以下の科学的刊行物に記載されている：Ｍａｒｋｓら（１９９２年）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０巻：７７９〜７８３頁（１９９２年）；Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４年）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８巻：８５６〜８５９頁；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９９４年）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８巻：８１２〜８１３頁；Ｆｉｓｈｗａｌｄら（１９９６年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４巻：８４５〜８５１頁；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ（１９９６年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４巻：８２６頁；およびＬｏｎｂｅｒｇら（１９９５年）Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３巻：６５〜９３頁。
【００８９】
抗体は、上記の公知の選択方法および／または変異誘発方法を使用して親和性成熟させることができる。いくつかの実施形態では、親和性成熟した抗体は、成熟抗体を調製する出発抗体（一般にマウス、ウサギ、ニワトリ、ヒト化またはヒト）の親和性よりも５倍以上、１０倍以上、２０倍以上、または３０倍以上の親和性を有する。
【００９０】
抗体は二重特異性抗体であってもよい。二重特異性抗体はモノクローナルであり、少なくとも２種の異なる抗原に対して結合特異性を有するヒト抗体またはヒト化抗体であってよい。この場合、２つの異なる結合特異性は、２つの異なるＭＭＰ、または単一のＭＭＰ（例えば、ＭＭＰ９）上の２つの異なるエピトープに対するものであってよい。
【００９１】
本明細書に開示されている抗体は、免疫コンジュゲートであってもよい。そのような免疫コンジュゲートは、第２の分子、例えば、レポーターにコンジュゲートした抗体（例えば、ＭＭＰ９に対する）を含む。免疫コンジュゲートは、細胞傷害性薬剤、例えば、化学療法剤、毒素（例えば、細菌起源、真菌起源、植物起源、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはその断片）、または放射性同位元素（すなわち、放射性コンジュゲート（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ））とコンジュゲートした抗体も含んでよい。
【００９２】
特定のポリペプチドまたはエピトープに「特異的に結合する」または「特異的な」抗体とは、抗体と標的抗原またはエピトープの選択的結合を指し、これらの用語および特異的な結合を決定するための方法は当技術分野においてよく理解されている。抗体は、標的抗原またはエピトープと、他の物質よりも大きな親和性、アビディティで、より容易に、かつ／またはより長い持続時間で結合する場合に、特定の標的抗原またはエピトープに対する「特異的な結合」を示す。いくつかの実施形態では、ポリペプチドまたはエピトープに特異的に結合する抗体とは、他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープのいずれにも実質的に結合することなく特定のポリペプチドまたはエピトープに結合する抗体である。いくつかの実施形態では、提供される抗体は、ヒトＭＭＰ９に、約４℃、２５℃、３７℃または４２℃の温度で測定して、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂの形態、または抗体の他の形態で、１００ｎＭ以下、必要に応じて１０ｎＭ未満、必要に応じて１ｎＭ未満、必要に応じて０．５ｎＭ未満、必要に応じて０．１ｎＭ未満、必要に応じて０．０１ｎＭ未満、または必要に応じて０．００５ｎＭ未満、特定の例では、０．１ｎＭから０．２ｎＭまでの間、または０．１ｐＭから１０ｐＭの間、例えば、０．４ｐＭから９ｐＭの間、例えば、０．４ｐＭから８．８ｐＭの間の解離定数（Ｋｄ）で特異的に結合する。
【００９３】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、ＭＭＰ９の１つまたは複数のプロセシング部位（例えば、タンパク質分解的切断の部位）に結合し、それにより、プロ酵素またはプレプロ酵素がプロセシングされて触媒として活性な酵素になることを有効に遮断し、したがって、ＭＭＰ９のタンパク質分解活性を低下させる。
【００９４】
ある特定の実施形態では、本開示による抗体は、ＭＭＰ９に、別のＭＭＰに対するその結合親和性よりも少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２５倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍大きな親和性で結合する。結合親和性は、当技術分野で公知の任意の方法によって測定することができ、例えば、会合速度（ｏｎ−ｒａｔｅ）、解離速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）、解離定数（Ｋｄ）、平衡定数（Ｋｅｑ）または当技術分野における任意の用語として表すことができる。
【００９５】
ある特定の実施形態では、本開示による抗体は、ＭＭＰ９の酵素（すなわち、触媒）活性を阻害する抗体、例えば、ＭＭＰ９の触媒活性の非競合的な阻害剤である。ある特定の実施形態では、本開示による抗体は、ＭＭＰ９の触媒ドメイン内に結合する。さらなる実施形態では、本開示による抗体は、ＭＭＰ９の触媒ドメインの外側に結合する。
【００９６】
本明細書に記載の抗ＭＭＰ９抗体またはその抗原結合断片の任意の１つまたは複数と、ＭＭＰ９との結合について競合する抗体またはその抗原結合断片も提供される。したがって、本開示は、例えば、配列番号１または配列番号５〜８のいずれかの重鎖ポリペプチド、配列番号２または配列番号９〜１２の軽鎖ポリペプチド、またはそれらの組合せを有する抗体との結合について競合する抗ＭＭＰ９抗体およびその機能性断片を意図している。一実施形態では、抗ＭＭＰ９抗体またはその機能性断片は、本明細書においてＡＢ００４１と記載されている抗体と、ヒトＭＭＰ９との結合について競合する。
【００９７】
本明細書に記載の抗体の任意の１つまたは複数と同じエピトープ、例えば、ＭＭＰ９エピトープに結合する抗体およびその断片も提供される。ＭＭＰ９のエピトープに特異的に結合する抗体および断片も提供され、エピトープは、ＭＭＰ９の特定の領域またはＭＭＰ９の複数の領域内のアミノ酸残基を含む。そのような領域は、例えば、ＭＭＰ９の構造ループおよび／または他の構造ドメイン、例えば、本明細書に記載の例示的な抗体と結合するために重要であることが示されているものを含んでよい。一般には、領域は、全長のＭＭＰ９配列、例えば、配列番号２７におけるアミノ酸残基の位置に従って定義される。一部の例では、エピトープは、配列番号２７のアミノ酸残基１０４〜２０２を含有する。一例では、エピトープは、配列番号２７の残基１０４〜１１９、残基１５９〜１６６、または残基１９１〜２０２である領域内のアミノ酸残基（すなわち、１つまたは複数のアミノ酸残基）を含有する。一部の態様では、エピトープは、配列番号２７の残基１０４〜１１９であるＭＭＰ９の領域内のアミノ酸残基（すなわち、１つまたは複数のアミノ酸残基）、配列番号２７の残基１５９〜１６６であるＭＭＰ９の領域内のアミノ酸残基、および配列番号２７の残基１９１〜２０２であるＭＭＰ９の領域内のアミノ酸残基を含む。一部の場合には、エピトープは、配列番号２７のＥ１１１、Ｄ１１３、Ｒ１６２、またはＩ１９８を含む。一部の場合には、エピトープは配列番号２７のＲ１６２を含む。一部の場合には、エピトープは、配列番号２７のＥ１１１、Ｄ１１３、Ｒ１６２、およびＩ１９８を含む。
ＭＭＰ９配列
【００９８】
ヒトＭＭＰ９タンパク質のアミノ酸配列は以下の通りである：
【化１】
2018150343.tif 000003
【００９９】
タンパク質ドメインは、図３に概略的に示されており、また、以下に示されている：
アミノ酸番号  特徴
１〜１９  シグナルペプチド
３８〜９８  ペプチドグリカン結合ドメイン
Ｒ９８／Ｃ９９  システインスイッチ活性ポケット
１１２〜４４５  Ｚｎ依存性メタロプロテイナーゼドメイン
２２３〜２７１  フィブロネクチンＩＩ型ドメイン（ゼラチン結合ドメイン）
２８１〜３２９  フィブロネクチンＩＩ型ドメイン（ゼラチン結合ドメイン）
３４０〜３８８  フィブロネクチンＩＩ型ドメイン（ゼラチン結合ドメイン）
４００〜４１１  Ｚｎ結合領域
５２１〜５６５  ヘモペキシン様ドメイン
５６７〜６０８  ヘモペキシン様ドメイン
６１３〜６５９  ヘモペキシン様ドメイン
６６１〜７０４  ヘモペキシン様ドメイン
【０１００】
成熟全長ヒトＭＭＰ９のアミノ酸配列（シグナルペプチドを伴わない配列番号２７のプロポリペプチドのアミノ酸配列である）は：
【化２】
2018150343.tif 000004
である。
【０１０１】
シグナルペプチドのアミノ酸配列はＭＳＬＷＱＰＬＶＬＶＬＬＶＬＧＣＣＦＡ（配列番号２９）である。
【０１０２】
ミュータントＭＭＰ９ポリペプチドを含めた、ＭＭＰ９ポリペプチドも提供される。そのようなペプチドは、例えば、本明細書において提供される抗体および断片を生成および選択することにおいて有用である。例示的なポリペプチドとしては、配列番号２７の残基１１１〜１９８を含有するアミノ酸配列を有するポリペプチド、および配列番号２７の残基１１１〜１９８を含有するアミノ酸配列を有し、配列番号２７の残基１１１、１１３、１６２、もしくは１９８にアミノ酸置換を有する、またはそのような残基全てにアミノ酸置換を有するポリペプチドが挙げられる。そのようなポリペプチドは、例えば、本明細書に記載のものなどの、そのような残基を含有するエピトープおよび／またはＭＭＰ９のそのような残基が結合のために重要であるエピトープに結合する抗体を選択することにおいて使用が見出される。
【０１０３】
本開示は、ＭＭＰ９、例えば、ヒトＭＭＰ９の任意の部分に結合するＭＭＰ９結合タンパク質を意図しており、他のＭＭＰと比較してＭＭＰ９に優先的に結合するＭＭＰ９結合タンパク質が特に興味深い。
【０１０４】
抗ＭＭＰ９抗体およびその機能性断片は、当技術分野で周知の方法に従って生成することができる。例示的な抗ＭＭＰ９抗体が以下に提供される。
マウスモノクローナル抗ＭＭＰ９抗体
【０１０５】
ヒトＭＭＰ９に対するマウスモノクローナル抗体を同様に得た。この抗体は、マウスＩｇＧ２ｂ重鎖およびマウスカッパ軽鎖を含有し、ＡＢ００４１と称される。
【０１０６】
ＡＢ００４１重鎖のアミノ酸配列は以下の通りである：
【化３】
2018150343.tif 000005
【０１０７】
シグナル配列に下線が引かれており、ＩｇＧ２ｂ定常領域の配列がイタリック体で示されている。
【０１０８】
ＡＢ００４１軽鎖のアミノ酸配列は以下の通りである：
【化４】
2018150343.tif 000006
【０１０９】
シグナル配列に下線が引かれており、カッパ定常領域の配列がイタリック体で示されている。
【０１１０】
以下のアミノ酸配列は、ＡＢ００４１のＩｇＧ２ｂ重鎖の可変領域のフレームワーク領域および相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む（ＣＤＲに下線が引かれている）：
【化５】
2018150343.tif 000007
【０１１１】
以下のアミノ酸配列は、ＡＢ００４１のカッパ軽鎖の可変領域のフレームワーク領域および相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む（ＣＤＲに下線が引かれている）：
【化６】
2018150343.tif 000008
【０１１２】
他の例示的なマウス抗ヒトＭＭＰ９抗体（例えば、Ｍ４およびＭ１２）が本明細書に記載されている。例示的な抗マウスＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４６）が本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、そのような抗マウス抗体の、本明細書において提供されるＭＭＰ９−阻害方法、例えば、処置方法を試験し、評価するための代理抗体としての使用が提供される。
重鎖変異体
【０１１３】
ＡＢ００４１重鎖および軽鎖の可変領域のアミノ酸配列を、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のフレームワーク領域の配列を変更することによって、別々に改変した。これらの配列変更の効果は、ヒトＴ細胞エピトープの抗体を枯渇させ、それにより、ヒトにおけるその免疫原性を低下させるまたは無効にすることであった（Ａｎｔｉｔｏｐｅ、Ｂａｂｒａｈａｍ、ＵＫ）。
【０１１４】
ヒンジドメインを安定化するＳ２４１Ｐアミノ酸変化（Ａｎｇａｌら（１９９３年）Ｍｏｌｅｃ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３０巻：１０５〜１０８頁）を含有するヒトＩｇＧ４重鎖バックグラウンドで、４種の重鎖変異体を構築し、ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３およびＶＨ４と名付けた。それらのフレームワーク領域およびＣＤＲのアミノ酸配列は、以下の通りである：
【化７】
2018150343.tif 000009
【０１１５】
図１に、ヒト化重鎖の可変領域のアミノ酸配列のアラインメントが示され、４種の変異体の間のフレームワーク領域内のアミノ酸配列の差異が示されている。
軽鎖変異体
【０１１６】
ヒトカッパ鎖バックグラウンドで、４種の軽鎖変異体を構築し、Ｖｋ１、Ｖｋ２、Ｖｋ３およびＶｋ４と名付けた。それらのフレームワーク領域およびＣＤＲのアミノ酸配列は以下の通りである：
【化８】
2018150343.tif 000010
【０１１７】
図２に、ヒト化軽鎖の可変領域のアミノ酸配列のアラインメントが示され、４種の変異体の間のフレームワーク領域内のアミノ酸配列の差異が示されている。
【０１１８】
ヒト化重鎖および軽鎖を、可能性のある対組合せの全てに組み合わせて、いくつもの機能的なヒト化抗ＭＭＰ９抗体を生成する。例えば、配列番号３、５、６、７、および８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を有する抗体；配列番号４、９、１０、１１、および１２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変（ＶＬ）領域を有する抗体；および配列番号３、５、６、７、および８のいずれかに記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変（ＶＨ）領域および配列番号４、９、１０、１１、および１２のいずれかに記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変（ＶＬ）領域を有する抗体、ならびにそのような抗体とＭＭＰ９との結合について競合する抗体、およびそのような抗体に対して少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれ超の配列同一性を有する抗体が提供される。一例では、抗体は、配列番号７に対して少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれ超の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＨ領域および配列番号１２と少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれ超の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＬ領域、または配列番号７のＶＨ領域および配列番号１２のＶＬ領域を有する。
【０１１９】
本明細書に開示されている重鎖可変領域の配列に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の相同性を有する追加の重鎖可変領域アミノ酸配列も提供される。さらに、本明細書に開示されている軽鎖可変領域の配列に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の相同性を有する追加の軽鎖可変領域アミノ酸配列も提供される。
【０１２０】
本明細書に開示されている重鎖可変領域の配列に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の配列同一性を有する追加の重鎖可変領域アミノ酸配列も提供される。さらに、本明細書に開示されている軽鎖可変領域の配列に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の配列同一性を有する追加の軽鎖可変領域アミノ酸配列も提供される。
相補性決定領域（ＣＤＲ）
【０１２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されている例示的な提供される抗ＭＭＰ９抗体の重鎖のＣＤＲは以下のアミノ酸配列を有する：
ＣＤＲ１：ＧＦＳＬＬＳＹＧＶＨ（配列番号１３）
ＣＤＲ２：ＶＩＷＴＧＧＴＴＮＹＮＳＡＬＭＳ（配列番号１４）
ＣＤＲ３：ＹＹＹＧＭＤＹ（配列番号１５）
【０１２２】
したがって、提供される抗ＭＭＰ９抗体としては、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１領域を有する抗体、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２領域を有する抗体、および配列番号１５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３領域を有する抗体、およびＭＭＰ９上のそのような抗体と同じエピトープとの結合について競合する、またはそれに結合する抗体が挙げられる。一部の場合には、抗体は、配列番号１５に記載の配列を有するＶＨ  ＣＤＲを含有する。一部の場合には、抗体は、配列番号１３および１４に記載の配列を有するＶＨ  ＣＤＲを含有する。一部の場合には、抗体は、配列番号１３および１５に記載の配列を有するＶＨ  ＣＤＲを含有する。一部の場合には、抗体は、配列番号１４および１５に記載の配列を有するＶＨ  ＣＤＲを含有する。一部の場合には、抗体は、配列番号１３、１４および１５に記載の配列を有するＶＨ  ＣＤＲを含有する。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されている例示的な抗ＭＭＰ９抗体の軽鎖のＣＤＲは以下のアミノ酸配列を有する：
ＣＤＲ１：ＫＡＳＱＤＶＲＮＴＶＡ（配列番号１６）
ＣＤＲ２：ＳＳＳＹＲＮＴ（配列番号１７）
ＣＤＲ３：ＱＱＨＹＩＴＰＹＴ（配列番号１８）
【０１２４】
したがって、提供される抗ＭＭＰ９抗体としては、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１領域を有する抗体、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２領域を有する抗体、および配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３領域を有する抗体、およびＭＭＰ９上のそのような抗体と同じエピトープとの結合について競合する、またはそれに結合する抗体が挙げられる。一部の場合には、抗体は、配列番号１８に記載の配列を有するＶＬ  ＣＤＲを含有する。一部の場合には、抗体は、配列番号１６および１７に記載の配列を有するＶＬ  ＣＤＲを含有する。一部の場合には、抗体は、配列番号１６および１８に記載の配列を有するＶＬ  ＣＤＲを含有する。一部の場合には、抗体は、配列番号１７および１８に記載の配列を有するＶＬ  ＣＤＲを含有する。一部の場合には、抗体は、配列番号１６、１７および１８に記載の配列を有するＶＬ  ＣＤＲを含有する。
【０１２５】
例示的なヒト化変異体抗ＭＭＰ９抗体ＡＢ００４５（ヒト化、改変ＩｇＧ４（Ｓ２４１Ｐ））は、ヒト化ＡＢ００４１重鎖変異体ＶＨ３（配列番号７
【化９】
2018150343.tif 000011
に記載の配列を有する）およびヒト化ＡＢ００４１軽鎖変異体ＶＨ４（Ｖｋ４（配列番号１２
【化１０】
2018150343.tif 000012
に記載の配列を有する）に記載の軽鎖配列を有する）を含有する。
【０１２６】
ＡＢ００４５抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖で構成される１３１２アミノ酸長を含有し、理論的ｐＩは約７．９０であり、吸光係数は１ｇ／Ｌについて２８０ｎｍにおいて約１．５０ＡＵ／ｃｍであり、分子量は約１４４ｋＤａであり、密度は製剤緩衝液中約１ｇ／ｍＬ（製品濃度５０〜１００ｍｇ／ｍＬ）である。
【０１２７】
ＡＢ００４５抗体の重鎖は、配列番号４９（
【化１１】
2018150343.tif 000013
（シグナル配列に下線が引かれており、定常領域の配列がイタリック体で示されている））に記載の配列を有し、ＡＢ００４５抗体の軽鎖は配列番号５０（
【化１２】
2018150343.tif 000014
（シグナル配列に下線が引かれており、定常領域の配列がイタリック体で示されている））に記載の配列を有する。
【０１２８】
抗体は、Ｍ４と称される、ハイブリドーマによって産生された抗体、すなわち、重鎖（ＩｇＧ２ｂ）配列：
【化１３】
2018150343.tif 000015
（配列番号３０）（シグナルペプチドが、下線が引かれたテキストで記載されており、可変領域がプレーンテキストで記載されており、定常領域がイタリック体で記載されている）、および軽鎖（カッパ）配列：
【化１４】
2018150343.tif 000016
（シグナルペプチドが、下線が引かれたテキストで記載されており、可変領域がプレーンテキストで記載されており、定常領域がイタリック体で記載されている）（配列番号３１）を含有する抗体をさらに含む。Ｍ４抗体は、アミノ酸配列：
【化１５】
2018150343.tif 000017
（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３（それぞれ配列番号３４、３５、および３６）下線が引かれている）（配列番号３２）を有する可変重鎖およびアミノ酸配列
【化１６】
2018150343.tif 000018
（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３（それぞれ配列番号３７、３８、および３９）、下線が引かれている）（配列番号３３）を有する可変軽鎖を有する。
【０１２９】
抗体は、Ｍ１２と称される、ハイブリドーマによって産生された抗体、すなわち、配列：
【化１７】
2018150343.tif 000019
（シグナルペプチドが、下線が引かれたテキストで記載されており、可変領域がプレーンテキストで記載されており、定常領域がイタリック体で記載されている）（配列番号４０）を有するカッパ鎖のみを有する抗体をさらに含む。Ｍ１２抗体は、アミノ酸配列
【化１８】
2018150343.tif 000020
（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３（それぞれ配列番号４２、４３、および４４）、下線が引かれている）（配列番号４１）を有する可変軽鎖を有する。
【０１３０】
抗体は、アミノ酸配列
【化１９】
2018150343.tif 000021
（配列番号４５）（シグナルペプチドが、下線が引かれたテキストで記載されており、可変領域がプレーンテキストで記載されており、定常領域がイタリック体で記載されている）を有するカッパ軽鎖およびアミノ酸配列
【化２０】
2018150343.tif 000022
（配列番号４６）（シグナルペプチドが、下線が引かれたテキストで記載されており、可変領域がプレーンテキストで記載されており、定常領域がイタリック体で記載されている）を有するＩｇＧ１重鎖を有するＡＢ００４６と称されるマウス抗体をさらに含む。
【０１３１】
以下のアミノ酸配列は、ＡＢ００４６のＩｇＧ１重鎖の可変領域のフレームワーク領域および相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む（ＣＤＲに下線が引かれている）：
【０１３２】
【化２１】
2018150343.tif 000023
【０１３３】
以下のアミノ酸配列は、ＡＢ００４６のカッパ軽鎖の可変領域のフレームワーク領域および相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む（ＣＤＲに下線が引かれている）：
【０１３４】
【化２２】
2018150343.tif 000024
【０１３５】
現在提供される方法、組成物、および組合せと共に使用するための抗体は、種々の例示されている重鎖および軽鎖、重鎖可変領域および軽鎖可変領域、およびＣＤＲの任意の組合せを含有するものを含めた抗体および抗体断片を含めた本明細書に記載の抗体のいずれを含んでもよい。
抗ＭＭＰ９抗体をコードする核酸
【０１３６】
本開示は、抗ＭＭＰ９抗体およびその機能性断片をコードする核酸を提供する。したがって、本開示は、本明細書に記載の抗体または抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチド（核酸）、そのようなポリヌクレオチドを含有するベクター、ならびにそのようなポリヌクレオチドをポリペプチドへと転写し、翻訳するための宿主細胞および発現系を提供する。
【０１３７】
本開示は、上記の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むプラスミド、ベクター、転写カセットもしくは発現カセットの形態の構築物も意図している。
【０１３８】
本開示は、上記の１つまたは複数の構築物を含む組換え宿主細胞、ならびに本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を産生する方法も提供し、該方法は、組換え宿主細胞において重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドをコードする核酸を発現させること（同じ宿主細胞において、または異なる宿主細胞において、同じ構築物から、または異なる構築物から）を含む。発現は、核酸を含有する組換え宿主細胞を適切な条件下で培養することによって達成することができる。発現によって産生した後、抗体または抗原結合断片を、任意の適切な技法を使用して単離し、かつ／または精製し、次いで適切に使用することができる。
【０１３９】
種々の異なる宿主細胞においてポリペプチドをクローニングし、発現させるための系が周知である。適切な宿主細胞としては、細菌、哺乳動物の細胞、酵母およびバキュロウイルス系が挙げられる。異種ポリペプチドを発現させるために当技術分野において利用可能な哺乳動物の細胞系としては、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、ＮＳＯマウスメラノーマ細胞およびその他の多くの細胞が挙げられる。一般的な細菌宿主はＥ．ｃｏｌｉである。
【０１４０】
作動可能に連結したプロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子および／または適宜他の配列を含めた適切な調節配列を含有する適切なベクターを選択または構築することができる。ベクターは、適宜、プラスミド、ウイルス性の例えばファージまたはファージミドであってよい。さらなる詳細については、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ：第２版、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９年、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい。例えば核酸構築物の調製、変異誘発、配列決定、ＤＮＡの細胞への導入および遺伝子発現、ならびにタンパク質の分析において核酸を操作するための多くの公知の技法およびプロトコールは、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２版、Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９２年に詳しく記載されている。ＳａｍｂｒｏｏｋらおよびＡｕｓｕｂｅｌらの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４１】
対象のポリペプチドをコードする核酸は、宿主細胞のゲノムに組み込むか、あるいは安定なまたは一過性のエピソームエレメントとして維持することができる。
【０１４２】
多種多様な発現制御配列−作動可能に連結したＤＮＡ配列の発現を制御する配列−のいずれも、ＤＮＡ配列を発現させるためにこれらのベクターに使用することができる。例えば、対象のポリペプチドをコードする核酸は、プロモーターに作動可能に連結させ得、組換えＭＭＰ９タンパク質またはその一部を産生する方法において使用するための発現構築物中に提供することができる。
【０１４３】
本明細書に開示されている抗体鎖をコードする核酸を分子生物学における標準の知識および手順を使用して合成することができることは、当業者には知られている。
【０１４４】
本明細書に開示されている重鎖および軽鎖のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の例は、以下の通りである：
【化２３】
2018150343.tif 000025
【化２４】
2018150343.tif 000026
【０１４５】
可変領域内のＣＤＲおよびフレームワーク領域の近位（ｊｕｘｔａｐｏｓｉｔｉｏｎ）、フレームワーク領域の構造および重鎖定常領域および軽鎖定常領域の構造を含めた抗体の構造は当技術分野で周知であるので、抗ＭＭＰ−９抗体をコードする関連する核酸を得ることは、十分に当技術分野の技術の範囲内である。したがって、本明細書に開示されているヌクレオチド配列のいずれかに対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％および少なくとも９９％の相同性を有する核酸配列を含むポリヌクレオチドも提供される。したがって、本明細書に開示されているヌクレオチド配列のいずれかに対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％および少なくとも９９％同一性を有する核酸配列を含むポリヌクレオチドも提供される。一例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２１に対して少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれ超の配列同一性を有するか、または配列番号２１を含むもしくは配列番号２１であり、かつ／または配列番号２６に対して少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれ超の配列同一性を有する、または配列番号２６を含むもしくは配列番号２６である。
医薬組成物
【０１４６】
ＭＭＰ９結合タンパク質、ならびにＭＭＰ９結合タンパク質をコードする核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）は、例えば、薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤と組み合わせた医薬組成物として提供することができる。そのような医薬組成物は、例えば、被験体にｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで投与するため、および、被験体を、例えば本明細書において提供される処置方法または診断方法のいずれにおいてもＭＭＰ９結合タンパク質を使用して診断し、かつ／または処置するために有用である。
【０１４７】
薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤は、投与される患者に生理的に許容され、一緒に投与される抗体またはペプチドの治療的性質を保持する。薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤およびそれらの製剤は、一般に、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版、Ａ．  Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ  １９９０年）に記載されている。１つの例示的な医薬キャリアは生理食塩水である。キャリアまたは賦形剤のそれぞれは、製剤の他の成分と適合し、患者に対して実質的に傷害性ではないという意味で「薬学的に許容される」。
【０１４８】
医薬組成物は、全身的または局所的な特定の投与経路と適合するように製剤化することができる。したがって、医薬組成物は、種々の経路によって投与するために適したキャリア、希釈剤、または賦形剤を含む。
【０１４９】
医薬組成物は、薬学的に許容される添加剤を含んでよい。添加剤の例としては、これだけに限定されないが、マンニトール、ソルビトール、グルコース、キシリトール、トレハロース、ソルボース、スクロース、ガラクトース、デキストラン、ブドウ糖、フルクトース、ラクトースならびにそれらの混合物などの糖が挙げられる。薬学的に許容される添加剤は、ブドウ糖などの薬学的に許容されるキャリアおよび／または賦形剤と組み合わせることができる。添加剤は、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０などの界面活性物質も包含する。
【０１５０】
製剤および送達方法は、一般に、処置される部位および疾患に応じて適合させる。例示的な製剤としては、これだけに限定されないが、非経口投与、例えば、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、もしくは皮下投与、または経口投与に適した製剤が挙げられる。
【０１５１】
非経口的送達用の医薬組成物としては、例えば、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、ハンクス液、リンゲル液、ブドウ糖／食塩水、およびグルコース溶液が挙げられる。製剤は、生理的条件に近づけるための補助的な物質、例えば、緩衝剤、張度調整剤、湿潤剤、界面活性剤などを含有してよい。添加剤は、殺菌剤または安定剤などの追加の活性成分も含んでよい。例えば、液剤は、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレートまたはオレイン酸トリエタノールアミンを含有してよい。追加の非経口的な製剤および方法は、Ｂａｉ（１９９７年）Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．８０巻：６５〜７５頁；Ｗａｒｒｅｎ（１９９７年）Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｓｃｉ．  １５２巻：３１〜３８頁；およびＴｏｎｅｇａｗａ（１９９７年）Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １８６巻：５０７〜５１５頁に記載されている。非経口的調製物は、ガラス製またはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数回投薬バイアルに封入することができる。
【０１５２】
静脈内投与、皮内投与または皮下投与用の医薬組成物は滅菌した希釈剤、例えば、水、食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、グルタチオンまたは亜硫酸水素ナトリウム；キレート化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩、および張度を調整するための作用剤、例えば、塩化ナトリウムまたはブドウ糖を含んでよい。
【０１５３】
注射用の医薬組成物としては、滅菌注射用溶液または分散液を即時調製するための水性液剤（水溶性の場合）または分散製剤および滅菌粉剤を含む。静脈内投与に関して、適切なキャリアとしては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｅｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）など）、およびそれらの適切な混合物を含有する溶媒または分散媒であってよい。流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散製剤の場合では必要な粒度を維持することによって、および界面活性物質を使用することによって維持することができる。抗細菌剤および抗真菌剤としては、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸およびチメロサールが挙げられる。等張化剤、例えば、糖、マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトールなどの多価アルコール、および塩化ナトリウムを組成物に含めることができる。生じた溶液は、そのまま使用するために包装することもでき、凍結乾燥させることもできる。凍結乾燥した調製物は、後で投与する前に滅菌溶液と組み合わせることができる。
【０１５４】
薬学的に許容されるキャリアは、吸収またはクリアランスを安定化する、増加させるまたは遅延させる化合物を含有してよい。そのような化合物としては、例えば、炭水化物、例えば、グルコース、スクロース、またはデキストラン；低分子量のタンパク質；ペプチドのクリアランスまたは加水分解を減少させる組成物；または賦形剤または他の安定剤および／もしくは緩衝剤が挙げられる。吸収を遅延させる作用剤としては、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンが挙げられる。医薬組成物の吸収を安定化するため、または増加もしくは減少させるために、リポソームキャリアを含めた界面活性剤も用いることができる。化合物を消化から保護するために、組成物と複合体化させて（ｃｏｍｐｌｅｘｅｄ）、酸性および酵素による加水分解に対して抵抗性にすることもできるか、または化合物をリポソームなどの適切に抵抗性のキャリアに複合体化させることもできる。化合物を消化から保護する手段は当技術分野で公知である（例えば、Ｆｉｘ（１９９６年）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．  １３巻：１７６０〜１７６４頁；Ｓａｍａｎｅｎ（１９９６年）Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ４８巻：１１９〜１３５頁；および治療剤を経口送達するための脂質組成物が記載されている米国特許第５，３９１，３７７号を参照されたい）。
【０１５５】
本発明の組成物は、本明細書において提供される他の治療用部分またはイメージング／診断用部分と組み合わせることができる。治療用部分および／またはイメージング用部分は、別々の組成物として、またはＭＭＰ９結合タンパク質上に存在するコンジュゲートした部分として提供することができる。
【０１５６】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与用の製剤は、一般に、無菌である。一実施形態では、医薬組成物は、発熱物質を含まず、したがってヒト患者への投与が許容されるように製剤化される。
【０１５７】
種々の他の医薬組成物およびそれらを調製および使用するための技法は、本開示を考慮すると当業者に公知である。適切な薬理学的組成物および関連する管理技法の詳細な一覧については、本明細書における詳細な教示を参照することができ、これは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  ２００３年）などのテキストによってさらに補充することができる。
【０１５８】
医薬組成物は、処置を必要としている患者／被験体の身体特性、投与経路などに基づいて製剤化することができる。そのような医薬組成物は、病院および診療所に配布するために適切なラベルを伴う適切な医薬用パッケージに包装することができ、ラベルは、被験体における本明細書に記載の障害の処置を表示するためのものである。医薬品は、単一単位として包装することもでき、複数の単位として包装することもできる。本発明の医薬組成物の投与量および投与についての指示を医薬用パッケージおよび下記のキットに含めることができる。
使用方法
【０１５９】
本開示の抗ＭＭＰ９抗体およびその断片を含めたＭＭＰ９結合タンパク質は、例えば、治療方法および診断方法、例えば、試料中のＭＭＰ９を検出する方法、処置の方法（例えば、血管新生を阻害する方法など）、ならびに診断および予後判定の方法において使用することができる。したがって、診断方法および治療方法ならびに抗ＭＭＰ９抗体の使用が提供される。使用方法の例は下に記載されている。
処置の方法
【０１６０】
本明細書では、がんおよび炎症性疾患および自己免疫疾患および関連する状態を含めたＭＭＰ９の発現および／または活性に関連する疾患および障害の処置の方法を含めた処置の方法、ならびにそのような方法における、提供される抗体および組成物の使用が提供される。疾患および障害としては、これだけに限定されないが、がん、例えば、腫瘍（例えば、原発性腫瘍または転移性腫瘍）、例えば、ＭＭＰ９を発現する組織において発現するまたは配置されるもの、例えば、結腸直腸がんおよび他のがん、例えば、胃腺癌、結腸直腸腺癌、肝細胞癌、および他の腫瘍型、ならびに炎症性の疾患および状態ならびに自己免疫性の疾患および状態、例えば、ＵＣ、クローン病を含めたＩＢＤ、膠原性大腸炎、関節リウマチ、および炎症およびＭＭＰ９媒介性組織破壊に関連する他の障害が挙げられる。
【０１６１】
一部の場合には、疾患または状態は、進行性の膵臓腺癌または食道胃腺癌、非小細胞肺がん、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃腺癌、結腸直腸癌、膵臓腺癌、頭頸部扁平上皮癌、または肝細胞癌である。
【０１６２】
実施例において実証されている通り、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）およびＭＭＰ９の発現は、特に、炎症性疾患を含めた種々の疾患病理および腫瘍学に関連づけられる。ＭＭＰ９は、基底膜および他の構造タンパク質の破壊的なリモデリングを通じて、かつ／または増殖因子およびサイトカイン、例えば、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦ、ＴＮＦα、ＩＬ−６、およびＩＬ−１βの血管透過性および生物学的利用能を増大させることによって疾患を促進し得る。ＭＭＰ９は、ＥＣＭにより隔離されたＶＥＧＦおよびＦＧＦ−２、ならびに膜につながれたＥＧＦの生物学的利用能を調節する。実施例に記載の通り、本明細書に記載の抗体を使用してＭＭＰ９を特異的に阻害することは、がんおよび炎症性疾患、例えば、関節リウマチ、原発性結腸直腸がんおよび転移性結腸直腸がん、ならびに潰瘍性大腸炎（ＵＣ）の認められたマウスモデルのモデルにおいて効果的であった。
【０１６３】
本明細書で使用される場合、「処置する（ｔｒｅａｔ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、本明細書に記載の疾患または障害に関連する１つまたは複数の症状の発生を停滞もしくは延期させること、または現存する制御されていないまたは望ましくない症状を改善すること、さらなる症状を予防すること、または症状の根底にある代謝的原因を改善もしくは予防することを意味する。したがって、この用語は、疾患もしくは症状を有する、またはそのような疾患もしくは症状が発生する潜在性がある哺乳動物の被験体に有益な結果が付与されたことを示す。応答は、患者が、特に、これだけに限定することなく、生存の延長を含めた、疾病の徴候または症状の部分的もしくは完全な緩和、または低減を経験したときに達成される。予測無増悪生存時間は、再発の数、疾患の病期、および他の因子を含めた予後因子に応じて、数か月から数年の単位で測定することができる。
【０１６４】
そのような方法と併せて使用するための医薬組成物、例えば、本明細書に記載の抗体またはその断片のいずれかを含有する医薬組成物も提供される。組成物は、任意の適切な経路によって局所的または全身的に投与するために適したものであってよい。
【０１６５】
一般に、ＭＭＰ９結合タンパク質は、治療有効量、例えば、被験体における腫瘍の成長の阻害に影響を及ぼす量、転移を阻害する量、ＭＭＰ９活性を阻害する量、またはがん、炎症性の疾患もしくは状態、または自己免疫性の疾患もしくは状態などの特定の疾患または状態を処置する量で投与される。
【０１６６】
本明細書で使用される場合、別段の指定がない限り、「治療有効量」または「有効量」という用語は、被験体に投与されると（単独で、または別の治療剤と組み合わせてのいずれかで、場合により指定の通り）疾患の状態または疾患の進行を予防または改善するために有効である、または症状の改善、例えば、関連性のある医学的状態の処置、治癒、予防もしくは改善、またはそのような状態の処置、治癒、予防または改善の割合の増大をもたらす作用剤または化合物または組成物の量を指す。単独で投与される個々の活性成分に適用する場合、治療有効用量とは、その成分単独を指す。組合せに適用する場合、治療有効用量とは、組み合わせて投与されるか、段階的に投与されるか、または同時に投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす、活性成分を組み合わせた量を指す。一例では、抗ＭＭＰ９抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ投与を使用する場合、正常な投与量は、投与経路に応じて、１日当たり哺乳動物の体重１ｋｇ当たり約１０ｎｇから約１００ｍｇもしくはそれ超に至るまで、好ましくは１日当たり１ｋｇ当たり約１μｇ〜１日当たり１ｋｇ当たり５０ｍｇ、必要に応じて１日当たり１ｋｇ当たり約１００μｇ〜１日当たり１ｋｇ当たり２０ｍｇ、１日当たり１ｋｇ当たり５００μｇ〜１日当たり１ｋｇ当たり１０ｍｇ、または１日当たり１ｋｇ当たり１ｍｇ〜１日当たり１ｋｇ当たり１０ｍｇの範囲であり得る。
【０１６７】
いくつかの例では、抗体またはその断片を、例えば、約１ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇまでの用量で静脈内投与する。いくつかの例では、抗体または断片を、例えば、約２ｍｇ／ｋｇ〜約２８ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与する。いくつかの例では、抗体または断片を、例えば、約４ｍｇ／ｋｇ〜約２８ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与する。他の例では、抗体または断片を、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１４ｍｇ／ｋｇ、例えば、約２ｍｇ／ｋｇから約１４ｍｇ／ｋｇまでの用量で、ｑ１４ｄ、１４日ごとに１回静脈内投与する。いくつかの実施形態では、有効投与量を７日〜２８日ごとに１回投与する。一実施形態では、有効投与量を７日ごとに１回投与する。別の実施形態では、有効投与量を２８日ごとに１回投与する。
【０１６８】
一実施形態では、抗体またはその断片を、例えば、約１ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇまでの用量で皮下投与する。他の実施形態では、皮下投与量は、１４日ごとに１回、約１ｍｇ／ｋｇから約２８ｍｇ／ｋｇまで、例えば、約２ｍｇ／ｋｇから約２８ｍｇ／ｋｇまでにわたる。他の例では、抗体または断片を１４日ごとに１回、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１４ｍｇ／ｋｇ、例えば、約２ｍｇ／ｋｇから約１４ｍｇ／ｋｇまでの用量で皮下投与する。いくつかの実施形態では、有効投与量を７日〜２８日ごとに１回投与する。一実施形態では、有効投与量を７日ごとに１回投与する。別の実施形態では、有効投与量を２８日ごとに１回投与する。
【０１６９】
いくつかの例では、抗体を、例えば、静脈内に、体重１ｋｇ当たり５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０ｍｇ、５７０ｍｇ、６００ｍｇ、６２５ｍｇ、６５０ｍｇ、６７５ｍｇ、７００ｍｇ、７２５ｍｇ、７５０ｍｇ、７７５ｍｇ、８００ｍｇ、８２５ｍｇ、８５０ｍｇ、８７５ｍｇ、９００ｍｇ、９２５ｍｇ、９５０ｍｇ、９７５ｍｇ、または１０００ｍｇの用量で投与する。他の例では、抗体を、例えば、静脈内に、１１００ｍｇ／Ｋｇ、１２００ｍｇ／Ｋｇ、１３００ｍｇ／Ｋｇ、１４００ｍｇ／Ｋｇ、１５００ｍｇ／Ｋｇ、１６００ｍｇ／Ｋｇ、１７００ｍｇ／Ｋｇ、または１８００ｍｇ／Ｋｇの投与量で投与する。いくつかの例では、抗体を、例えば、静脈内に、体重１ｋｇ当たり１００ｍｇ、２００ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、１２００ｍｇ、または１８００ｍｇの用量で投与し、いくつかの例では、１３３ｍｇ／Ｋｇ、２６７ｍｇ／Ｋｇ、４００ｍｇ／Ｋｇ、６００ｍｇ／Ｋｇまたは１２００ｍｇ／Ｋｇの投与量で投与する。いくつかの例では、抗体を１週間、２週間または３週間の間隔、または１週間ごと、２週間ごと、または３週間ごとに１回投与する。いくつかの例では、適切な投与量は、０．９％塩化ナトリウムを使用して作製する。
【０１７０】
選択された投与レジメンは、ＭＭＰ９結合タンパク質の活性、投与経路、投与の時間、使用されている特定の化合物の排出速度、処置の持続時間、使用する特定の組成物と組み合わせて使用する他の薬物、化合物および／または材料、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、全体的な健康ならびに以前の病歴、ならびに同様に医学の分野で周知の因子を含めた種々の因子に依存する。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、標的媒介性体内動態（ｔａｒｇｅｔ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ）を示す抗体についての薬物動態モデルに基づいて投与量を決定する。可溶性受容体標的を対象とする抗体について観察される比較的線形の薬物動態とは対照的に、組織に基づく標的受容体を対象とする抗体では、非線形薬物動態が頻繁に実証される。Ｍａｇｅｒ，  Ｄ．  Ｅ．（２００６年）、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  ５８巻（１２〜１３号）：１３２６〜１３５６頁。非線形体内動態についての基礎は、抗体と標的の高親和性結合および結合の程度（用量と比較して）に関し、したがって、相互作用が抗体の薬物動態特性に反映される。Ｍａｇｅｒ，  Ｄ．  Ｅ．およびＷ．  Ｊ．  Ｊｕｓｋｏ（２００１年）、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎ  ２８巻（６号）：５０７〜５３２頁。抗体−受容体複合体の受容体媒介性エンドサイトーシス（内部移行）が標的媒介性薬物体内動態に含まれる。Ｗａｎｇ，  Ｗ．、Ｅ．
Ｑ．  Ｗａｎｇら（２００８年）、Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  ８４巻（５号）：５４８〜５５８頁。
【０１７２】
薬物（抗体）の不在下で標的媒介性体内動態を有する抗体についての薬物動態モデルでは、標的受容体は一定の速度で合成され、一次プロセスによって排除される。結果として、標的受容体は、薬物（抗体）の不在下では定常状態の濃度で存在する。薬物を体に加える場合、薬物を標的受容体と２分子反応で相互作用させること、あまりよく灌流されない組織に分布させること、または一次プロセスによって排除することができる。低薬物濃度で、薬物は、高親和性結合に起因して受容体上を優勢に移動する。体に進入する薬物の量が利用可能な受容体の塊に結合するために十分になるに従い、薬物は、組織内外に分布し、排除される。薬物濃度が低下し、薬物が組織と平衡化するに従い、新しく合成された受容体に結合する追加のレザバーがもたらされる。
【０１７３】
当技術分野における通常の技術を有する臨床医は、必要な医薬組成物の有効量（ＥＤ５０）を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師または獣医師は、医薬組成物に使用する本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を達成するために必要なレベルよりも低いレベルで開始し、投与量を所望の効果が達成されるまで徐々に上昇させることができる。
【０１７４】
一部の場合には、処置の方法は、作用剤、例えば、抗ＭＭＰ９抗体またはそれを含有する組成物を非経口投与、例えば、静脈内投与、動脈内投与、皮内投与、筋肉内投与、もしくは皮下投与すること、または経口投与することを含む。
【０１７５】
本明細書で使用される場合、「被験体」という用語は、哺乳動物の被験体を意味する。例示的な被験体としては、これだけに限定されないが、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ヤギおよびヒツジが挙げられる。いくつかの実施形態では、被験体は、がん、炎症性の疾患もしくは状態、または自己免疫性の疾患もしくは状態を有し、下記の通り本発明の作用剤を用いて処置することができる。ある特定の実施形態では、被験体は、がん、炎症性の疾患もしくは状態、または自己免疫性の疾患もしくは状態を有するヒトであり、下記の通り本発明の作用剤を用いて処置することができる。
【０１７６】
必要であれば、処置のために、方法は、追加の療法、例えば、がんの場合では、ＭＭＰ９結合タンパク質に加えて、がんの外科的除去および／または抗がん剤の投与または処置をさらに含んでよい。そのような抗がん剤の投与または処置は、本明細書に開示されている組成物の投与と同時であっても逐次的であってもよい。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、抗体を単独で、単独療法として投与する。他の実施形態では、抗体を、併用療法の一部として、１種または複数の他の治療剤と一緒に投与する。治療剤としては、これだけに限定されないが、炎症、自己免疫疾患、線維性疾患、またはがんを処置するために適した作用剤が挙げられる。治療剤は、化学療法剤、免疫療法剤、抗がん剤、抗炎症剤、または抗線維化剤であってよい。併用療法では、本出願の抗体を、それを必要とする患者の処置において、一次的なまたは第一線の作用剤として使用することもでき、二次的なまたは追加の作用剤として使用することもできる。炎症性疾患、線維性疾患または自己免疫疾患、例えば、ＩＢＤ、ＵＣ、クローン病、がん、または関節リウマチを処置するための一部の態様では、抗体を単独で、または、アポトーシスシグナル調節キナーゼ、脾臓チロシンキナーゼ、ホスファチジルイノシチド３−キナーゼ、またはＪａｎｕｓキナーゼ、またはリジルオキシダーゼ、ＬＯＸＬ２などのリジルオキシダーゼ様（ＬＯＸＬ）タンパク質、および／またはＤＤＲ１などのジスコイジンドメイン受容体（ＤＤＲ）などのキナーゼの活性を阻害または調節する他の治療剤と一緒に投与する。例として、ＬＯＸＬ２およびＤＤＲ１の活性を阻害または調節する治療剤は、ＬＯＸＬ２および／またはＤＤＲ１に特異的に結合する抗体である。一態様では、ＵＳ２００９／０１０４２０１、ＵＳ２００９／００５３２２４およびＵＳ２０１１−０２００６０６に記載の抗ＬＯＸＬ２抗体および米国仮出願第６１／７０５，０４４号に記載の抗ＤＤＲ１抗体が併用療法において使用されている；これらの文書は全て、参照により本明細書に組み込まれる。がんを有する患者を処置するための他の態様では、抗体を単独で、または、１種または複数の化学療法剤または抗悪性腫瘍剤、例えば、ゲムシタビン、ナブパクリタキセル、ｍＦＯＬＦＯＸ６、フォリン酸、フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびオキサリプラチンからなるｍＦＯＬＦＯＸ６、フォリン酸、フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびイリノテカンからなるＦＯＬＦＩＲＩ、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセドおよび／またはベバシズマブと組み合わせて投与する。膵臓腺癌に対するものでは、抗体を単独で２週間の間隔で、またはゲムシタビンおよび／もしくはナブパクリタキセルの２８日サイクルの化学療法と一緒に投与する。一例では、食道胃腺癌に対して、抗体を単独で２週間の間隔で、または２８日サイクルで投与されるｍＦＯＬＦＯＸ６の２８日サイクルの化学療法と一緒に投与する。一例では、非小細胞肺がんに対して、抗体を単独で３週間の間隔で、またはカルボプラチンおよびパクリタキセルの２１日サイクルの化学療法と一緒に、またはペメトレキセドおよび／もしくはベバシズマブと一緒に投与する。一例では、結腸直腸がんに対して、抗体を単独で２週間の間隔で、またはＦＯＬＦＩＲＩの１４日サイクルの化学療法と一緒に投与する。併用処置では、化学療法は、公知の投与量および手順で施行することができる。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、抗体、例えばＡＢ００４５を、進行性の膵臓腺癌または食道胃腺癌、非小細胞肺がん、潰瘍性大腸炎、結腸直腸がん、クローン病、または関節リウマチを有する患者の処置において使用する。そのような実施形態の一部の態様では、患者に、抗体を、体重１ｋｇ当たり１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇ、または１８００ｍｇの投与量で、１週間、２週間または３週間の間隔で静脈内投与する。一部の態様では、適切な投与量は、０．９％塩化ナトリウムを使用して作製する。一部の態様では、患者は、抗体、例えばＡＢ００４５を、単独療法としてまたは他の治療剤との併用療法の一部として受ける。
【０１７９】
ＵＣ、がん、例えば、結腸直腸がん、膵がん、胃がん、クローン病、炎症性の疾患もしくは障害または線維性の疾患もしくは障害、または関節リウマチを処置するためのいくつかの実施形態では、抗体、例えばＡＢ００４５を、単独でまたはＬＯＸＬ２（リジルオキシダーゼ様２）および／もしくはＤＤＲ１（ジスコイジンドメイン受容体１）に対する抗体を含めた他の免疫療法剤と一緒に投与する。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、膵臓腺癌に対して、抗体を、単独で２週間の間隔で、またはゲムシタビンおよび／もしくはナブパクリタキセルの２８日サイクルの化学療法と一緒に投与する。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、食道胃腺癌に対して、抗体を、単独で２週間の間隔で、または２８日サイクルで投与されるｍＦＯＬＦＯＸ６の２８日サイクルの化学療法と一緒に投与する。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、非小細胞肺がんに対して、抗体を、単独で３週間の間隔で、またはカルボプラチンおよびパクリタキセルの２１日サイクルの化学療法と一緒に、またはペメトレキセドおよび／もしくはベバシズマブと一緒に投与する。
【０１８３】
一例では、結腸直腸がんに対して、抗体を、単独で２週間の間隔で、またはＦＯＬＦＩＲＩの１４日サイクルの化学療法と一緒に投与する。併用処置の一部の態様では、化学療法剤または免疫療法剤を、公知の投与量および手順を用いて投与する。
【０１８４】
一部の態様では、ＭＭＰ９抗体の投与量を調整し、体重１ｋｇ当たり１３３ｍｇ、２６７ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇまたは１２００ｍｇで投与することができる。各治療サイクルの後に、患者をＭＭＰ９抗体、ＭＭＰ９、または他の適切なバイオマーカーのレベルについてモニタリングする。
【０１８５】
併用療法における作用剤は、上記の適切な経路によって、同時に（同じ組成物中で、もしくは別々に）、または逐次的に、任意の順序で投与することができる。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、処置方法は、有効性または活性、例えば、薬力学的活性をモニタリングするためのステップを含めた、処置をモニタリングするためのステップを含む。いくつかの例では、そのような方法は、該方法および組成物を使用して処置されている被験体から得た生物学的試験試料中の、処置の効力を示すサイトカインおよび他の炎症性マーカーなどのマーカーの存在、非存在、レベル、および／または発現を検出または測定することを含む。試料は、一般には、血液試料または血清試料であるが、本明細書に記載の他の生体試料を含んでよい。そのような方法において使用するためのマーカーとしては、組織メタロプロテイナーゼ阻害物質１（ＴＩＭＰ−１）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−アルファ）、マクロファージ炎症性タンパク質−２（ＭＩＰ−２）、インターロイキン−１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ）、ＣＸＣＬ１０、リンホタクチン、マクロファージ炎症性タンパク質−１ベータ（ＭＩＰ−１ベータ）、オンコスタチン−Ｍ（ＯＳＭ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、単球走化性タンパク質３（ＭＣＰ−３）、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）、単球走化性タンパク質−５（ＭＣＰ−５）、インターロイキン−１アルファ（ＩＬ−１アルファ）、マクロファージコロニー刺激因子−１（Ｍ−ＣＳＦ−１）、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）、成長調節アルファタンパク質（ＫＣ／ＧＲＯ）、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ（Ａｐｏ  Ａ−Ｉ）、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、顆粒球走化性タンパク質−２（ＧＣＰ−２）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）、フォン・ヴィルブランド因子（ｖＷＦ）、および幹細胞因子（ＳＣＦ）遺伝子産物が挙げられる。いくつかの実施形態では、マーカーは、例えば、疾患がＵＣなどのＩＢＤである場合、ＫＣ／ＧＲＯ、ＬＩＦ、ＣＸＣＬ１０、ＭＰＯ、ＭＩＰ−２、およびＭＣＰ−５遺伝子産物の中から選択される。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、各処置サイクルの後に、患者をＭＭＰ９抗体、ＭＭＰ９、または他の適切なバイオマーカーのレベルについてモニタリングする。
【０１８８】
提供される方法としては、利用可能な処置および治療レジメンと比較して改善された安全性プロファイルおよび／またはそのような疾患および状態の処置における持続的な長期有効性をもたらす方法が挙げられる。
炎症性の疾患および状態ならびに自己免疫性の疾患および状態
【０１８９】
いくつかの実施形態では、該方法および組成物、例えば、抗体およびその断片は、炎症性疾患および自己免疫疾患を、例えば、そのような疾患または状態を有する被験体におけるＭＭＰ９を阻害することによって処置することに使用される。炎症性疾患および自己免疫疾患としては、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（クローン病、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、および分類不能大腸炎を含む）、膠原性大腸炎、関節リウマチ、敗血症、多発性硬化症、筋ジストロフィー、ループス、アレルギー、敗血症、および喘息が挙げられる。
【０１９０】
実施例に記載の通り、ＭＭＰ９および他のＭＭＰは炎症性疾患および自己免疫疾患に関与する。
【０１９１】
マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ９）は、ＲＡ患者の血清、滑液、および滑膜において誘導され、また、ＭＭＰ９／ＴＩＭＰ−１比がタンパク質分解活性の上昇に有利になるように変更される。ＭＭＰ９は、疾患媒介性破骨細胞および活性化された単球／マクロファージ系列の細胞から分泌される。抗体誘発性関節炎疾患表現型に対する抵抗性がＭＭＰ９ノックアウトマウス系統において観察される。ＭＭＰ９は、ＭＭＰ８などのコラゲナーゼの切断活性によって生じた、ほどけたＩＩ型コラーゲンを分解し、それにより、関節軟骨の破壊に寄与する。
【０１９２】
しかし、他のＭＭＰの重要な役割を考慮すると、そのような疾患を処置するためには、特異的なＭＭＰ９阻害剤が必要である。本明細書の実施例において示されているように、本発明の抗体は、認められた動物モデルを使用して、ＩＢＤ、関節リウマチ（ＲＡ）、および敗血症を含めた種々の炎症性疾患および自己免疫疾患において有効であることが実証された。したがって、いくつかの実施形態では、該方法、組成物、および使用により、炎症性疾患および自己免疫疾患を有する被験体を処置する。いくつかの実施形態では、阻害剤、方法、および使用により、他のＭＭＰを阻害することなく、例えば、ＭＭＰ２を阻害することなく、またはそのような他のＭＭＰを実質的な程度に阻害することなく、ＭＭＰ９を阻害する。一実施形態では、該方法により、そのような疾患または状態を有する被験体における組織傷害、全身性炎症、および／または局所的炎症を防止または減少し、いくつかの例では、組織傷害および炎症の両方を該方法によって処置する。別の実施形態では、該方法には、マリマスタットなどの汎ＭＭＰ阻害剤を用いて観察されるものと比較して毒性の低下および／または筋骨格症候群（ＭＳＳ）または類似した症状の誘導の低下が伴う。いくつかの例では、被験体が、炎症性疾患に対する別の療法、例えば、ＴＮＦ−アンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、例えば、インフリキシマブに対して不十分な応答を有する、すなわち、ＴＮＦ−アンタゴニスト不応疾患を有する。したがって、提供される方法としては、そのような被験体の炎症を処置することにおいて有効な方法が挙げられる。
炎症性腸疾患
【０１９３】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）としては、クローン病、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、および分類不能大腸炎が挙げられる。潰瘍性大腸炎（ＵＣ）は、２つの主要なＩＢＤのうちの１つであり、結腸のびまん性粘膜炎症、および関連する潰瘍形成を特徴とする。ＵＣの慢性経過は、間欠的な疾患増悪、その後の寛解の期間を含む。多くの患者が、抗ＴＮＦα標的化治療薬などの作用剤に対する応答が不十分であり、疾患に関連する症状を被り続ける。ＵＣの患者では、８〜１０年の疾患活動性後に結腸がんのリスクが有意に上昇する。
【０１９４】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）治療薬により、疾患部位への炎症細胞の動員および接近を予防すること、疾患部位における細胞の活性化を予防すること、および／または細胞活性化の下流の影響を阻害することによって疾患を調節することができる。
【０１９５】
ＵＣの薬理学的処置は、一般に、疾患の重症度および疾患の場所または程度に基づいて「厳密に（ｂｙ  ｌｉｎｅ）」進行する。疾患の重症度は、患者の症状、内視鏡所見、および検査結果に基づいて軽度、中程度または重度と特徴付けられ、臨床試験の状況では、多くの場合、表１Ｂに示されているＭａｙｏスコアによって定義される。
【表１Ｂ】
2018150343.tif 000027
【０１９６】
実施例に記載の通り、証拠により、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）および他の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の病理におけるＭＭＰ９の役割が裏付けられる。大腸炎のＴＮＢＳモデルおよびＤＳＳモデルにおいて広範囲にわたるＭＭＰ阻害剤が効果的である（ＮａｉｔｏおよびＹｏｓｈｉｋａｗａ  ２００５年；ＭｅｄｉｎａおよびＲａｄｏｍｓｋｉ  ２００６年）。ＭＭＰ９およびＭＭＰ２は、類似した基質特異性を有する２つの最も密接に関連するＭＭＰであるが、ＭＭＰ９タンパク質および活性は、ＩＢＤおよび前臨床的な大腸炎の動物モデルにおいて大きな程度で誘導され、また、ヒトＵＣにおける進行性疾患をより強力に誘導し、それに関連する。ＭＭＰ２は、より遍在的に発現され、その役割は、非疾患組織の恒常性のために重要である。ＭＭＰ９の欠如により、マウスデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発モデルにおける大腸炎が防止されるが、ＭＭＰ２は結腸に対して保護的な機能を果たす。ＤＳＳモデルにおける好中球およびリンパ球の蓄積はＭＭＰ９依存性であり、上皮細胞由来のＭＭＰ９が組織傷害に寄与するという証拠が存在する。
【０１９７】
ＭＭＰ９はヒトＵＣ組織において、健康な結腸陰窩（ＩＶ型コラーゲン染色の明確なリングによりインタクトな基底膜が特徴づけられる）ではなく、組織が乱されたＩＶ型コラーゲンの領域において検出され、これにより、基底膜の完全性の損失が示される。ＭＭＰ９は、ＩＶ型コラーゲンおよび他のＥＣＭ構成成分を分解し、それにより炎症細胞の浸潤を可能にする。大腸炎では、粘膜におけるＭＭＰ９活性により、陰窩の下にある基底膜の分解、および粘膜損傷および粘膜下組織の管腔内細菌への曝露がもたらされ得る。血管周囲の基底膜のＭＭＰ９による分解により、疾患部位への白血球の血管外遊走が促進され得る。細胞外マトリックスにおけるＭＭＰ９活性により、疾患の進行に寄与するＴＮＦα、ＩＬ−６、およびＩＬ１−Ｂなどの炎症性サイトカインが活性化し、放出され得る。
【０１９８】
利用可能なＵＣ療法は、完全に満足すべきものになっていない。例えば、種々の処置は、一般に、疾患の重症度、場所および／または程度に基づいて施される。重症度の低い疾患に対しては、処置は、５’−アミノサリチル酸（５’−ＡＳＡ）浣腸、コルチコステロイド浣腸および経口５’−ＡＳＡ調製物を含む。より重症度が高い疾患の患者、および／または第一選択療法に応答しない患者は、一般に、経口コルチコステロイドのコースを用いて処置される。被験体がステロイドを絶つことを補助するため、および寛解を維持するために、アザチオプリンおよび６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）などの免疫調節物質を使用する。抗ＴＮＦα療法、例えば、キメラ抗体Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（インフリキシマブ）が、より重症度が高い疾患の患者に、およびコルチコステロイドに対して不応性またはそれに依存性である患者において一般に使用される。インフリキシマブ処置では、一般に、長期にわたってステロイドを用いない寛解を誘導し維持することができない。８週までに寛解が達成され、５４週を通して寛解のままであるのは患者の２０％のみであり、大多数の患者は、３０週までに再発する。コルチコステロイドを完全に用いない長期寛解が達成されるのは患者の２６％のみであった。寛解の代わりに、応答の低ストリンジェントなエンドポイントを評価した場合（症状の完全ではない低減を示す）、患者のおよそ６０％が３０週または５４週にわたってこの軽減の程度を維持できない。
【０１９９】
シクロスポリンは、劇症ＵＣで入院した患者の外科手術の必要性を遅らせる助けとなっているが、維持療法としてのその有効性は確立されていない。結腸全摘除術と回腸嚢肛門吻合術（ＩＰＡＡ）の二段階からなる外科手術が治癒的である。しかし、結腸全摘除術は、多くの患者にとって、生涯にわたる頻繁な便通、性機能障害の高リスク、ならびに直腸出血を伴うまたは伴わない下痢、テネスムス、切迫、疼痛、失禁および発熱を生じる炎症性Ｊ嚢（ｉｎｆｌａｍｅｄ  Ｊ  ｐｏｕｃｈ）−回腸嚢炎の発生の５０％リスクが付される望ましくない転帰である。さらに、ＩＰＡＡ外科手術の後には女性不妊症のリスクが高度に上昇する。
【０２００】
本明細書における実施例において実証されている通り、本発明の特異的な抗ＭＭＰ９抗体は、一般に認められたＵＣ動物モデルにおいて有効であり、組織破壊および異常な組織リモデリングを有効に防止すること、ならびに局所的および全身的な炎症促進性因子の下方制御が実証された。該抗体は、ＵＣの処置について検討されている作用剤を評価するために使用されるよく確立された前臨床モデルであるマウスにおけるＤＳＳ誘発性大腸炎の処置において、多数のエンドポイントに対してロバストな有効性を有した。したがって、いくつかの実施形態では、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病、または分類不能大腸炎などの炎症性腸疾患の被験体を処置するために該方法および組成物を使用する。いくつかの実施形態では、該方法および抗体により、ＭＭＰ２などの他のＭＭＰが阻害されることなく、ＭＭＰ９が阻害される。
【０２０１】
いくつかの例では、該方法および組成物により、基底膜の破壊、粘膜損傷、管腔内細菌への粘膜下組織の曝露、炎症、サイトカイン活性化および白血球血管外遊走が防止される。いくつかの実施形態では、被験体は、中程度〜重度のＵＣを有し、例えば、重度のＵＣを有する。いくつかの実施形態では、被験体はステロイド依存性ＵＣを有する。一部の態様では、該処置方法は、コルチコステロイド処置に取って代わる、またはそれに対する代替として施行される。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、被験体は、他のＵＣ療法、例えば、ＴＮＦ（例えば、ＴＮＦ−アルファ）アンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体（例えば、インフリキシマブおよび／またはアダリムマブ）に応答しなかった、すなわち、ＴＮＦアンタゴニスト不応性の患者である。例えば、いくつかの実施形態では、被験体は、インフリキシマブ療法または他のＴＮＦ−アルファターゲティング処置では長期寛解が達成できなかった患者である。他の場合では、被験体は、別のＵＣ療法、例えば、経口または直腸適用の処置、例えば、浣腸、坐剤および泡沫剤）、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）、経口および直腸適用のコルチコステロイド、免疫抑制剤、例えば、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトトレキセート、および／またはシクロスポリンに応答しなかった。一部の態様では、該方法により、このような処置と比較して安全性プロトコールが改善された処置がもたらされる、または有効性がより持続的で長期にわたる処置がもたらされる。
【０２０３】
一部の場合には、該方法により、他のＭＭＰまたは特定の他のＭＭＰ、例えば、ＭＭＰ２が影響を受けることなく、ＭＭＰ９が阻害される。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、ＵＣに関連して、処置に対する「応答」は、Ｍａｙｏスコアが少なくとも３点および３０％低下し、同時に直腸出血サブスコアが少なくとも１点低下する、または絶対的な直腸出血サブスコアが０〜１である場合に達成される。いくつかの実施形態では、「寛解」とは、Ｍａｙｏスコアが２以下であり、個々のサブスコアが１より大きくないことと定義される。いくつかの実施形態では、「粘膜治癒」とは、内視鏡サブスコアが１以下であると定義される。いくつかの実施形態では、「ステロイド節約」とは、ステロイドで開始した患者に対して、進行中のステロイド使用の非存在下での寛解と定義される。いくつかの実施形態では、生活の質がエンドポイントであり、これは、ＩＢＤ−ＱｏＬまたはＳＦ−３６などの検証された生活の質の尺度などの公知の方法を使用して評価される。
【０２０５】
クローン病（ＣＤ）は、瘻孔形成、膿瘍、または狭窄などの合併症への進行を伴う再発および寛解エピソードによって定義される、胃腸管の慢性炎症性障害である。腸管外での顕在化、例えば、ぶどう膜炎、関節炎、皮膚病変、および腎結石が患者の４０％超で起こる。軽度〜中程度のクローン病（Ｃｒｏｈｎ’ｓ）に対する処置パラダイムは、シプロフロキサシンおよびフラジールなどの抗生物質、５−ＡＳＡ、ブデソニド、または全身性コルチコステロイドであるが、全身性ステロイド薬の長期の副作用により、それらの有用性が著しく抑えられる。これらの第一選択療法が働かない軽度〜中程度の疾患を有する患者は、多くの場合、アザチオプリンを受け１年の時点で寛解のままである。アザチオプリンがうまくいかない患者または重症度がより高い疾患を有する患者に対しては、インフリキシマブなどの作用剤を用いたＴＮＦα遮断が最後の選択肢として残る。外科的切除が治癒的であるＵＣとは対照的に、そのような療法は、クローン病患者には、２つの理由で難しい：１）疾患が胃腸管全体を通して拡散し、隔離された疾患（例えば、回腸末端部）の例では、切除は切除部位における再発疾患が頻繁に伴う、２）この疾患は経壁であるので、外科的切除により、患者が将来狭窄および／または瘻孔が発生するリスクにさらされる。
【０２０６】
アザチオプリンおよびインフリキシマブを使用した併用療法は、いずれの療法単独よりも、２６週における寛解および粘膜治癒の誘導について優れている可能性があるが、そのような作用剤を同時に使用することにより、感染および悪性腫瘍（肝脾のＴ細胞リンパ腫）のリスクが増加し、これによりそれらの有用性が限定される。ＵＣと同様に、応答、寛解、粘膜治癒、ステロイド節約および生活の質は全て重要なエンドポイントであるが、ＣＤでは、一般に、クローン病活動性指標（ＣＤＡＩ）が検証された選り抜きの転帰手段（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）であり、表１Ｃに記載されている：
【表１Ｃ】
2018150343.tif 000028
【０２０７】
いくつかの実施形態では、被験体は、中程度〜重度のＣＤを有し、例えば、重度のＣＤを有する。いくつかの実施形態では、被験体はステロイド依存性ＣＤを有する。一部の態様では、処置方法は、コルチコステロイド処置に取って代わる、またはそれに対する代替として施行される。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、被験体は、他のＣＤ療法、例えば、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体（例えば、インフリキシマブおよび／またはアダリムマブ）に応答しなかった、すなわち、ＴＮＦアンタゴニスト不応性の患者である。例えば、いくつかの実施形態では、被験体は、インフリキシマブ療法または他のＴＮＦ−アルファターゲティング処置で長期寛解が達成できなかった患者である。他の場合では、被験体は、別のＣＤ療法に応答しなかった。一部の態様では、該方法により、このような処置と比較して安全性プロトコールが改善された処置がもたらされる、または有効性がより持続的で長期にわたる処置がもたらされる。
がん
【０２０９】
いくつかの実施形態では、該方法および組成物、例えば、抗体およびその断片はがんおよび腫瘍ならびに関連する疾患および状態の処置において使用される。例示的ながんとしては、結腸直腸がん、胃腺癌、結腸直腸腺癌、および肝細胞癌が挙げられる。ＴＮＦαは悪性腫瘍のサーベイランスにおいて重要な役割を果たし、したがって、抗ＴＮＦα作用剤を用いると、腫瘍形成が増加するリスクがある。本願の実施例において本明細書で実証されている通り、抗ＭＭＰ９モノクローナル抗体療法は、結腸直腸の腫瘍形成を防止することにより、抗ＴＮＦ−アルファ療法とさらに区別される。ＭＭＰ９は細胞の浸潤、転移、血管新生、および脈管形成において役割を果たす。炎症性疾患における知見と同様に、ＩＨＣ分析により、ＭＭＰ９およびＭＭＰ２が結腸直腸がんを含めたヒトの腫瘍組織において別個の染色パターンを有し、ＭＭＰ−９について、より一貫した腫瘍に関連する陽性が観察されることが示される。
ＭＭＰ９の検出方法
【０２１０】
本開示は、被験体におけるＭＭＰ９を検出する方法、例えば、ＭＭＰ９を発現している腫瘍もしくは腫瘍に関連する組織、または自己免疫疾患または炎症性疾患などの本明細書に記載の疾患に関連する組織もしくは体液もしくは他の生体試料を検出するための、方法も意図している。したがって、ＭＭＰ９活性を有する腫瘍を診断する、モニタリングする、病期分類するまたは検出する方法が提供される。
【０２１１】
被験体（例えば、ＭＭＰ９発現と関連する腫瘍を有する疑いがある、もしくはそれを有することが分かっている個体、または本明細書に記載の炎症性疾患または自己免疫疾患などの別の疾患または状態を有する疑いがある、もしくはそれを有することが分かっている個体）由来の試料（例えば、試験生体試料）を、ＭＭＰ９の存在、非存在、発現、および／またはレベルについて分析することができる。例えば、そのような試料を収集し、本明細書に記載の抗体または断片などのＭＭＰ９結合タンパク質と試料中の物質（例えば、タンパク質）との結合が存在するかしないかを検出することによって分析することができる。いくつかの例では、該方法は、検出された結合の量を対照試料との結合の量と比較すること、またはＭＭＰ９の検出レベルをＭＭＰ９の対照レベルと比較することをさらに含む。一部の場合には、該方法により、本明細書に記載の疾患または状態の存在、非存在、または重症度が示される。
【０２１２】
この分析は、本明細書に記載のＭＭＰ９結合タンパク質を使用した処置を開始する前に実施することができ、がん処置の進行のモニタリングの一部として行うこともできる。いくつかの実施形態では、検出アッセイを実施し、例えば、診断アッセイの結果に基づいて被験体の処置を開始、変更、または中止することによって行われる処置の方法が提供される。そのような診断分析は、これだけに限定されないが、組織、そのような組織から単離された細胞などを含めた任意の試料を使用して実施することができる。一部の場合には、該方法を、血液、血漿、血清、全血、唾液、尿、または精液などの液体試料に対して実施する。組織試料としては、例えば、ホルマリン固定したまたは凍結させた組織切片が挙げられる。
【０２１３】
ＭＭＰ９を検出および分析するための任意の適切な方法を使用することができる。当技術分野で公知の種々の診断アッセイ技法、例えば、競合結合アッセイ、直接または間接サンドイッチアッセイおよび不均一相または均一相のいずれかで行われる免疫沈降アッセイが、そのような目的に適し得る。
【０２１４】
検出方法において使用するためのＭＭＰ９結合タンパク質は、検出可能部分を用いて標識することができる。検出可能部分により、直接的に、または間接的に、検出可能なシグナルが生じる。例えば、検出可能部分は、例えば、放射性同位元素、例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、もしくは１２５Ｉ、蛍光化合物もしくは化学発光化合物、例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、シアニン、フォトシアン、ローダミン、もしくはルシフェリン、または酵素、例えば、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたは西洋ワサビペルオキシダーゼなどの本明細書に記載のもののいずれであってもよい。
【０２１５】
検出は、ＭＭＰ９結合タンパク質とＭＭＰ９との結合に適した条件下で試料を接触させ、ＭＭＰ９結合タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在すること（例えば、レベル）または存在しないことを評価することによって達成することができる。参照試料のレベルと比較した試料中のＭＭＰ９のレベルにより、ＭＭＰ９活性を有する腫瘍または腫瘍に関連する組織が存在することが示され得る。参照試料は、被験体から以前に取得した試料であっても別の個体由来の試料であってもよい。
【０２１６】
一部の態様では、ＭＭＰ９  ｍＲＮＡを、例えば、ハイブリダイゼーションによって、例えば、発色ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）によって検出する。一部の態様では、高レベルの炎症細胞由来のＭＭＰ９が、他の検出方法による所望の細胞型におけるシグナル、例えばＩＨＣによる、例えば腫瘍上皮におけるシグナルを不明瞭にする場合に、そのような検出方法を使用する。
【０２１７】
本発明の種々の態様が、以下のいくつかの実施例を介してさらに記載され、例示されており、これはいずれも本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【０２１８】
（実施例１）
免疫原性
結果により、ＡＢ００４５とＡＢ００４１が同等の結合性および阻害性を有すること、およびＡＢ００４６が、例えば、ヒト疾患のマウスモデルにおいて関連するマウス代理抗体としての機能を果たし得ることが確認された。
【０２１９】
キメラＭＭＰ９抗体ＡＢ００４１およびヒト化ＭＭＰ９抗体ＡＢ００４５の潜在的な臨床的免疫原性を評価した。ｅｘ  ｖｉｖｏにおけるヒトＴ細胞活性化アッセイ、ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（Ａｎｔｉｔｏｐｅ，Ｌｔｄ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を使用した。ＥｐｉＳｃｒｅｅｎアッセイにおけるＴ細胞活性化は、患者における抗体／タンパク質治療応答と相関している。種々のＨＬＡハプロタイプを示す２０人の健康なドナーにおけるＣＤ４＋Ｔ細胞の応答を検査した。結果により、ＡＢ００４５抗体では、いずれのドナーにおいても応答が誘導されなかったこと、および、ＡＢ００４１により、ドナーの２０％において２．２９＋／−０．３６（平均値＋／−標準偏差）の大きさで応答が誘導されたことが示された。ＫＬＨの陽性対照により、ドナーの９５％において、６．３４＋／−２．７７（平均値＋／−標準偏差）の大きさで応答が誘導された。結果により、ＡＢ００４５抗体は免疫原性ではなさそうであることが示された。
（実施例２）
疾患結腸試料および健康な結腸試料におけるＭＭＰ９発現
【０２２０】
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）のヒト患者および健康な個体由来の生検試料を、ＭＭＰ９特異的抗体を使用した免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）によって検査した。ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ、好中球マーカー；Ｗｉｒｔｚ  ２００７年）、ＩＶ型コラーゲン（ＣＯＬＩＶ、基底膜）およびＣＤ３１（内皮細胞）に対する抗体を使用して、疾患の重症度および組織基盤を評価した。ＴＩＭＰ１およびＭＭＰ２の染色パターンも検査した。ＰＭＫ２（マクロファージマーカー）も評価した。
【０２２１】
健康な試料では、粘膜固有層および粘膜下領域内の移動している組織球、好中球およびリンパ球の小サブセットにおいてのみ、ＭＭＰ９免疫反応性が検出された。対照的に、７つのＵＣ試料全てにおいて、より強く、かつ疾患に関連するシグナルが検出された。この試料の中で、５つは急速凍結方法により調製したものであり、２つはホルマリン固定し、パラフィン包埋したものであった。
【０２２２】
膿瘍が生じた陰窩および壊死陰窩ならびに好中球性浸潤物を含有する陰窩炎領域を含めた急性疾患領域においてＭＭＰ９シグナルの増加が検出された。粘膜固有層内に広範囲にわたる炎症性浸潤物（大部分は組織球）において、より分散したＭＭＰ９シグナルが明らかであった。ＭＭＰ９タンパク質は組織球、好中球、および顆粒球に局在しており、疾患陰窩および血管構造の基底膜に関連する細胞外マトリックス（ＥＣＭ）においても検出された。さらに、陰窩膿瘍、潰瘍形成の領域において、ならびに管腔および陰窩の上皮細胞においてＭＭＰ９免疫反応性が観察された。多くの場合、ＭＭＰ９と共発現するＴＩＭＰ１タンパク質も、疾患陰窩および炎症性浸潤物に関連したが、ＭＭＰ９よりも程度が低かった。少数のリンパ球を例外として、ＵＣ試料においてＭＭＰ２タンパク質は検出されなかった。
【０２２３】
膿瘍が生じた陰窩および壊死陰窩ならびに好中球性浸潤物を含有する陰窩炎の領域を含めた急性疾患の領域において、ならびに疾患領域内の上皮細胞において、強いＭＭＰ９発現が観察された。ＭＭＰ９発現は、粘膜固有層内の広範囲にわたる炎症性浸潤物においても明らかであり、主に組織球および好中球に局在した。ＩＶ型コラーゲン染色の明確なリングにより健康な陰窩のインタクトな基底膜が特徴づけられるが、組織が乱されたＩＶ型コラーゲンにより、疾患陰窩における基底膜の完全性の損失が示される。ＭＭＰ９染色が基底膜破壊の領域と共局在化した。ＴＩＭＰ１タンパク質も疾患陰窩および炎症性浸潤物に関連したが、ＭＭＰ９よりも程度が低かった。クローン病試料では、ＭＭＰ９シグナルは疾患領域にも関連した。ＭＭＰ９は肉芽腫、間質性組織球において検出され、血管基底膜およびＥＣＭのＩＶ型コラーゲンと共局在化した。さらに、ＭＭＰはリンパ球および管腔の上皮細胞において検出された。いくつかのＭＭＰ２反応性が観察されたが、あまり顕著ではなかった。
【０２２４】
ＭＭＰ９シグナルは、健康な結腸陰窩では検出されなかったが、基底膜の完全性の損失を示す組織が乱されたＩＶ型コラーゲンを有する領域では強かった。これにより、潰瘍性大腸炎の病理におけるＭＭＰ９の役割が示される。
【０２２５】
治療用抗ＴＮＦ−アルファ抗体であるＲｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（インフリキシマブ）を用いて積極的に処置されているＵＣ患者由来の結腸組織においてＭＭＰ９発現を評価し、これにより評価された他のＵＣ患者の結腸組織と同様の染色パターンが実証された。この観察は、この試験では、抗ＴＮＦ−アルファ療法ではＵＣにおけるＭＭＰ９の誘導が防止されなかったという結論と一致する。
【０２２６】
ＩＨＣ分析により、ヒト化変異体抗ＭＭＰ９抗体ＡＢ００４５が、ＵＣ患者の結腸組織において、検証されたＩＨＣ抗ＭＭＰ９抗体を用いて観察されたものと同様の染色パターンでＭＭＰ９に結合したことが確認された。
（実施例３）
正常組織におけるＭＭＰ９発現
【０２２７】
ヒト、ラット、およびカニクイザルの正常な健康な組織におけるＭＭＰ９タンパク質のレベルをＩＨＣによって分析した。リンパ節、骨格筋、前立腺、腎臓、肝臓、肺、胃、食道、心臓、結腸、小腸、脳、卵巣、膵臓、胎盤、皮膚、脊髄、脾臓、骨格筋、睾丸、甲状腺、および子宮の細胞型由来の２２のヒト急速凍結組織を３人の個体から得た。ＩＨＣを、ＩＨＣにおいてうまく機能した２つの異なる抗ＭＭＰ９抗体：ウサギモノクローナル抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ７６００３）およびウサギポリクローナル抗体（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号ＨＰＡ００１２３８）を使用して行った。どちらの抗体を使用しても同様の染色パターンが検出された。ヒト胸腺、扁桃、および骨髄においてもＭＭＰ９が検出された。健康なカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ、１個体の動物）およびラット（スプラーグドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）系統、２個体の動物）由来のいくつかの急速凍結組織に対して追加の特徴付けを行った。
【０２２８】
心臓、骨格筋、前立腺、腎臓、末梢神経、小脳、大脳、唾液腺、尿管、および子宮頸部ではＭＭＰ９は検出されなかった。試験した残りの臓器では、マクロファージ、組織球、リンパ球、肥満細胞、および好中球などの免疫細胞の細胞質染色でＭＭＰ９が検出された。検査したヒト組織、カニクイザル組織、およびラット組織の全てにおいて同様のＭＭＰ９タンパク質の発現のパターンが検出された。分析した組織では、カニクイザルリンパ節、胸腺および扁桃において検出されたＭＭＰ９陽性炎症細胞が少なかった。全ての種において、ＭＭＰ９染色は細胞外マトリックスに分泌または局在化されず、細胞内にあった。
（実施例４）
ＵＣのマウスモデルにおける抗ＭＭＰ９抗体
【０２２９】
大腸炎のデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発モデルは、炎症性腸疾患の治療薬を評価するための一般に認められたモデルである。このモデルでは、ＤＳＳをマウスまたはラットに経口投与することにより、結腸粘膜を損傷させる。ＤＳＳを受けた動物では血性下痢が発生し、体重が減少する。このモデルにおいて観察される炎症および組織分解は粘膜に限られ、一般に、結腸全体が影響を受ける。ＤＳＳ誘発大腸炎は、ヒトＵＣにおいて認められるものと同じ炎症−異形成−腺癌疾患進行を特徴とする。このモデルにおいて観察される疾患の局在化および病理は、同様の炎症細胞の浸潤、潰瘍形成、および陰窩膿瘍を含め、ヒト潰瘍性大腸炎（ＵＣ）とよく似ていると考えられる。ＵＣを処置するために承認されている薬物、例えば、ステロイド、メトロニダゾール、５−アミノサルチル酸（ａｍｉｎｏｃａｌｉｃｙｌａｔｅ）、シクロスポリン、および抗ＴＮＦα免疫療法は、ＤＳＳモデルで疾患の重症度を低下させることにおいて有効性が実証されている。
【０２３０】
ＤＳＳ大腸炎モデル（１４日の処置モデル）においてＡＢ００４６を使用した。以下の実験計画に従って、飲料水中３％ＤＳＳに５日間経口曝露させた後に処置を開始した：３％ＤＳＳを用いた疾患の誘発を０日目に開始して５日目まで行い、処置を６日目に開始し（１群〜５群の動物に対する処置の詳細は以下の表２に示されている）；動物を１４日目に屠殺した。エタネルセプト（商品名ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）の下で販売されている）をこのモデルにおける抗ＴＮＦα療法の治療効果についての参照化合物として使用した。アイソタイプ（ＩｇＧ１）がマッチした無関連の抗体であるＡＣ−１を対照として使用した。
【表２】
2018150343.tif 000029
【０２３１】
疾患の過程を、ビデオ内視鏡検査（６日目、１０日目、および１４日目）、動物の体重測定、便の硬さの観察、および結腸の試験後病理組織検査分析によって評価した。
【０２３２】
試験開始の１４日後（ＤＳＳ中止の９日後）に疾患の程度を評価するため、およびこのモデルにおけるＭＭＰ９の発現を確認するために、ＤＳＳ処置した結腸からの急速凍結組織切片において免疫組織化学的検査を実施した。図５に結果が示されている。示されているように、疾患領域は組織、結腸上皮境界および陰窩構造の破壊、ならびに炎症細胞の浸潤を示した。ＭＭＰ９についての強い染色が疾患結腸の粘膜固有層において観察され、浸潤好中球（ＭＰＯ  ＩＨＣ）およびマクロファージと関連した。ＭＭＰ９免疫反応性は、陰窩および血管構造の周辺の基底膜ＩＶ型コラーゲン染色の領域にも共局在化し、これは、この既知のＥＣＭタンパク質基質の活性な分解が疾患の進行の一因となったことを示唆していた。ＭＭＰ２発現は強力には誘導されなかった。図６に示されている通り、ＤＳＳに曝露させた動物の結腸上皮細胞におけるＭＭＰ９の発現も観察された。
【０２３３】
下部結腸のビデオ内視鏡検査を、小動物内視鏡を使用して盲検式で実施し、大腸炎を、潰瘍形成、脆弱性、および組織に存在する血管分布の程度に基づいて１〜４のスケールで視覚的にスコア化した。各マウスに、検査した結腸の長さ全体を通して観察された最も重度の損傷に対応する単一のスコアを割り当てた。図７に結果が示されている。示されているように、試験終了時（１４日目）に、ＡＢ００４６で処置した動物では、ビヒクル群およびＡＣ−１アイソタイプ対照群と比較して平均内視鏡検査スコアに有意な改善が示された。ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）処置によっても内視鏡検査スコアに有意な改善がもたらされ、これは１０日目に著しく、１４日目では程度が低かった。
【０２３４】
試験終了時に、組織学的検査のために、各動物から大部分の遠位結腸を切除し、ホルマリン固定し、次いで、パラフィンに包埋し、切片作製した。スライドをヘマトキシリン・エオシンで染色し、正式認可を受けた獣医病理学者により、処置群に関して盲検で検査した。組織を、炎症、浮腫、および粘膜壊死について、各パラメータについて１〜４のスコアリングスケールによってスコア化した。３つの個々のパラメータスコア平均値（炎症、浮腫および壊死）を合計することによって合計病理スコアを算出した。図８に結果が示されている。
【０２３５】
図８に示されている通り、組織学的評価により、ＤＳＳ投与により、無処置の対照動物と比較して、実質的な炎症細胞の浸潤（主に好中球で構成され、それよりも少数のマクロファージが伴う）、浮腫、および粘膜組織壊死が誘導されたことが決定された。粘膜壊死は不定に存在し、表面上皮および陰窩の部分的または完全な損失を特徴とし、多くの場合、周辺の粘膜表面のおよそ２５％が影響を受けた。ＡＢ００４６またはＥＮＢＲＥＬ（登録商標）のいずれかを用いた治療的処置により、疾患病理の３つの態様全てが、ビヒクル処置と比較して有意に低下した。抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４６）の有効性はビヒクルと比較して有意であり、また、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）によって達成されたものと同様であった。
【０２３６】
平均病理組織検査スコアおよび平均内視鏡検査スコアが反映されるように選択された各試験群からの３つの結腸の免疫組織学的分析により、抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４６）処置後に、これらの組織において明白な疾患の低減と相関したＭＭＰ９発現の減少が明らかになり（図９参照）、これにより、ＭＭＰ９の阻害によって代償的な誘導はもたらされなかったことが示される。一般に、ＭＭＰ９タンパク質が存在することは、疾患領域とよく相関した。ＭＭＰ９の減少はＥＮＢＲＥＬ（登録商標）処置にも伴ったが、それにもかかわらず、有意な量のＭＭＰ９タンパク質が検出された。この結果により、ＭＭＰ９の減少が全体的な疾患の低減と相関することが実証される。
【０２３７】
試験のコースの間、体重および下痢の発生を毎日記録した。台形則法を用いて曲線下面積（ＡＵＣ）を算出することによって、体重の変化の評価を実施した。便の硬さについての同様のＡＵＣの算出を、下痢の発生スコア１００および下痢の欠如スコア０を割り当てることによって実施した。図１０に結果が示されている。示されているように、抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４６）処置により、体重減少がＡＣ−１アイソタイプ対照またはビヒクルと比較して有意に防止された。ＡＢ００４６処置により、下痢の発生も約３０％低下し、これは、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）処置の効果と同様であったが、効果はいずれの療法についても統計的有意には到達しなかった。
【０２３８】
ＤＳＳモデルでは、参照化合物の投与では、内視鏡的疾患および組織学的疾患の５０％超の低減はめったになく、典型的な応答は２５〜３０％の範囲内に入る。この状況において、ＡＢ００４６を用いた有効性の程度を考察した。組織学的疾患の低減について統計的有意性に到達することにおけるＡＢ００４６の有効性、および評価した全てのパラメータ間の相関がこの試験において特に注目すべきでものあった。（限られた投薬および最初に投薬した際の組織−シンクの影響（ｔｉｓｓｕｅ−ｓｉｎｋ  ｅｆｆｅｃｔ）の証拠を考慮すると）抗体投薬レジメンでは最適な治療レベルが達成されなかったが、有効性は観察された。
【０２３９】
内視鏡エンドポイント、病理組織学的エンドポイント、および体重エンドポイントを用いて観察された有効性と一致して、確立された疾患の処置モデルからの終末血清試料の多検体酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）分析により、抗ＭＭＰ９（ＡＢ００４６）処置により、ＤＳＳモデルにおいて上方制御されたＵＣにおける炎症過程の多くの公知のメディエーターおよびマーカーの全身的な減少がもたらされることが明らかになった。図１１Ａに示されている通り、これらのメディエーターは、好中球化学誘引因子ＫＣ／ＧＲＯ、単球および活性化Ｔ細胞化学誘引分子ＣＸＣＬ１０（ＵＣにおける治療標的）、好中球マーカーＭＰＯ、ＩＬ−６クラス炎症性サイトカインＬＩＦ、好中球化学誘引物質ＭＩＰ−２、および単球化学誘引分子ＭＣＰ−５（ヒトＭＣＰ−１と相同性を有するマウス因子）を含んだ。ＡＢ００４６による全身的な疾患に関連するサイトカインの減少の傾向が観察された。図１１Ｂに示されている通り、ＩＬ−１７Ａ（ＡＢ００４６処置群の平均値において減少の傾向が観察された）およびＴＮＦα（群間で差を評価するためにはシグナルが少なすぎた）を含めたいくつかのサイトカインは、定量化または検出のレベル付近またはそれよりも低かった。ＡＢ００４６処置ではＩＬ−６の減少も観察されたが、非特異的な活性が実証された抗体であるＡＣ−１アイソタイプ対照とは区別されなかった。血清中ＭＭＰ−９レベルは誘導されなかった（すなわち、ＤＳＳなし群とビヒクル群との間で差はなく、ＭＭＰ９血清中レベルの測定値に関して薬物抗体による干渉を排除することはできなかった）。抗ＭＭＰ９抗体（ＡＢ００４６）で処置した動物において観察されたＭＣＰ−５レベルの低下に加えて、ＭＣＰ−１およびＭＣＰ−３の疾患に関連する増加も、この処置により、エオタキシンと同様に低下した。
【０２４０】
追加のマウスＤＳＳ大腸炎処置試験を、独立したハイブリドーマによって生成された抗ＭＭＰ９抗体であるＡＢ００４７を使用して行った。図１２Ａに示されている通り、結果により、内視鏡的疾患の低減について、抗ＭＭＰ９  ＡＢ００４７およびＥＮＢＲＥＬ（登録商標）と同様の傾向が実証された。また、図１２Ｂに示されている通り、ＡＢ００４７処置により、病理組織学的所見において、ＡＢ００４６を用いた試験と同様の傾向がもたらされた。
（実施例５）
大腸炎のマウスＤＳＳモデルにおける抗ＭＭＰ９抗体
【０２４１】
予防的な状況におけるＡＢ００４６の有効性を評価し、参照作用剤プレドニゾロンと比較した。表３に処置群が示されている。１日目に、示されている投薬スケジュールを用いて、示されている処置を与えた。３％ＤＳＳを用いた疾患の誘発を０日目に上記の通り開始した。動物を１４日目に屠殺した。
【表３】
2018150343.tif 000030
【０２４２】
図１３に示されている通り、１０日目の内視鏡評価においてＡＢ００４６予防的処置の有効性が観察された。
【０２４３】
図１４に示されている通り、試験終了時に、予防的抗ＭＭＰ９（ＡＢ００４６）処置により、炎症、浮腫、および壊死、したがって病理合計スコアが低下した。図１５に示されている通り、ＡＢ００４６の予防的投与により下痢の発生が低下した。
（実施例６）
結腸直腸がんの同所性モデルにおける抗ＭＭＰ９抗体
【０２４４】
結腸直腸がんの異種移植マウスモデルにおいてＡＢ００４６とＡＢ００４１のカクテルを使用して特異的なＭＭＰ９阻害の有効性をさらに示した。ヒト結腸直腸がん細胞系（ＨＣＴ−１１６；ＫＲＡＳ  Ｇ１３Ｄミュータント）に由来する皮下腫瘍の断片を、ヌードマウスの結腸に外科的に埋め込み、処置を開始する前に約１００ｍｍ３まで成長させた。図１６に示されている通り、抗体カクテルにより、腫瘍体積の変化が減少し、処置の開始後３２日目の最終の腫瘍重量が減少した（図１６）。また、抗体カクテルにより、転移の発生頻度が低下した（データは示していない）。この結果により、抗体カクテルを使用したＭＭＰ９の阻害により、原発腫瘍の成長のどちらも有意に減少したことが示される。
（実施例７）
関節リウマチモデルにおける抗ＭＭＰ９抗体
【０２４５】
抗ＭＭＰ９抗体ＡＢ００４１は、確立された疾患の、アジュバント誘発関節炎およびコラーゲン誘発関節炎（ＡＩＡ、ＣＩＡ）ラット関節リウマチモデルの両方における炎症および関節損傷の両方の処置において効果的であった。結果が図１７Ａに示されている。抗ＭＭＰ９モノクローナル抗体ＡＢ００４１を使用して処置することにより、関節炎の臨床スコアが、治療モデル（確立された疾患における処置）において、確立された療法であるＥＮＢＲＥＬ（登録商標）およびメトトレキセート（ＭＴＸ）を用いて観察されたものと同様の程度まで低下した。目的の関節の測定値および疾患の病理組織学的評価（炎症および関節破壊の多数のパラメータの合計スコア、５０ｍｇ／ｋｇ群）について同様の所見が観察された。図１７Ａに示されている通り、５０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇ、週２回（全部で４回の投薬）の用量のＡＢ００４１で関節炎の臨床スコアの低下が観察された。
【０２４６】
図１７Ｂに示されている通り、ラットＣＩＡにおいて、曝露を確認するために試験終了時（ＥＯＳ）に抗体価を取得し、また、処置の１０日目にも取得した。ＡＢ００４６は２ｍｇ／ｋｇの用量レベルでは血清において検出不可能であった。
【０２４７】
ＡＢ００４１処置は、同様にヒト炎症性腸疾患において特徴付けられた疾患駆動因子（ｄｒｉｖｅｒ）であるＴＮＦα、ＩＬ−６、およびＩＬ−１７Ａなどの重要な炎症性サイトカインの血清中レベルを低下させることにおいても効果的であった。図１８Ａに結果が示されている。図１９Ａにはこの試験において観察された追加の血清マーカーが示されている。
【０２４８】
関節リウマチのＣＩＡマウスモデルにおいて、マウス代理抗体ＡＢ００４６を使用して、抗ＭＭＰ−９処置の臨床的および病理組織学的疾患の低減ならびに全身的な抗炎症効果について同様の結果が観察された。サイトカインの結果が図１８Ｂ示されており、図１９Ｂにはこの試験において観察された追加の血清マーカーが示されている。
（実施例８）
ＬＰＳ誘発敗血症モデルにおける抗ＭＭＰ９抗体
【０２４９】
全身的な炎症性疾患の別のモデルにおいて、抗ＭＭＰ９抗体ＡＢ００４１処置により、ラット敗血症モデル（Ａｒａｇｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｉｌｒｏｙ、ＣＡ）におけるリポ多糖（ＬＰＳ）誘発の動物の死亡が防止され、ＡＢ００４１で処置した動物の７０％が４日後に生存し、それと比較してアイソタイプ対照処置群では２０％が生存した。図２０に結果が示されている。
（実施例９）
筋骨格症候群（ＭＳＳ）試験
【０２５０】
ＡＢ００４１の安全性について、Ｌｅｗｉｓラットにおいて２８日試験で汎ＭＭＰ阻害剤であるマリマスタットと比較して評価した。
【０２５１】
マリマスタットなどの小分子汎ＭＭＰ阻害剤を臨床的投与することにより、疼痛および肩関節の非可動性、関節痛、手の拘縮、および患者の生活の質の低下を特徴とする障害である筋骨格症候群（ＭＳＳ）が生じることが示されている。汎ＭＭＰ阻害剤を用いて処置したラットは、ＭＳＳ（後足で静止する能力が損なわれること、移動することができないこと、および高いステッピング歩行（ｈｉｇｈ−ｓｔｅｐｐｉｎｇ  ｇａｉｔ）を含めた症状を伴う）も示し、この障害についてのモデル系として使用される。これらの動物の関節は、ヒト疾患において観察される病理組織像と類似した滑膜過形成および細胞充実性の増加を示す。この筋骨格症候群（ＭＳＳ）のラットモデル（Ｒｅｎｋｉｅｗｉｃｚ  Ｒら、「Ｂｒｏａｄ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｍａｒｉｍａｓｔａｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌ  ｓｉｄｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ．」  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ（２００３年）；４８巻（６号）：１７４２〜９頁に記載されている）を使用して、マリマスタット処置をＭＳＳの誘発についての陽性対照として使用した。
【０２５２】
群当たりラット６匹に、５０ｍｇ／ｋｇのＡＢ００４１またはビヒクルＡ（１０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ６．５、１４０ｍＭの塩化ナトリウム、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）のいずれかを週２回静脈内投与した。さらに、群当たりラット６匹を、外科的に埋め込んだ皮下Ａｌｚｅｔポンプ（Ａｌｚｅｔ、Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ、ＣＡ）を通じてマリマスタットまたはビヒクルＭ（５０％ＤＭＳＯ／５０％水）を１時間当たり２．５μｌの速度で２８日間にわたって送達して処置した。マリマスタット放出速度は１日当たり１ｋｇ当たり６．８〜５．７ｍｇであった。
【０２５３】
動物を、移動することに対する抵抗および後足の使用の回避などのＭＳＳの徴候について毎日観察し、スコア化した。以下のシステムを使用して静止姿勢、歩行および移動する意欲をスコア化した：静止姿勢を０（正常）、１（１本の足で静止）または２（１本の足でも２本の足でも静止していない）としてスコア化した。歩行を、０（正常）、１（後足の片方の使用回避）または２（後足の両方の使用回避）のいずれかとしてスコア化した。刺激に際して移動する意欲を０（正常に移動する）、１（移動することに対していくらか抵抗）、２（移動することに対して中程度に抵抗）または３（移動することに対して非常に抵抗）のいずれかとしてスコア化した。さらに、体重を週２回記録した。
【０２５４】
各動物について、総スコアを歩行スコア、静止姿勢スコアおよび移動する意欲スコアの合計として算出した。群当たりの平均総スコアを、１日当たり群当たりの個々の動物全てからの総スコアの平均として算出した。
【０２５５】
投与の１日前および１日後、７日後、１０日後、１４日後、１７日後、２１日後、２４日後、２８日後に、血清を全てのラットから収集した。血清を１０，０００×ｇで１０分遠心分離し、−２０℃で保管するために収集した。血清を多検体血清タンパク質分析に供した（ＲｏｄｅｎｔＭＡＰｖ２．０、ＩＤＥＸＸ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）。
【０２５６】
ラットから組織および肢を採取し、ヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）を使用した病理組織学的分析のために１０％中性緩衝ホルマリン中に固定した。
【０２５７】
標準の等級付けシステムを使用して、顕微鏡レベルの変化をビヒクル群と比較した：０（変化なし）、１（最小の変化）、２（軽度の変化）、３（中程度の変化）、および４（重度の変化）。
【０２５８】
ラット血清中のＡＢ００４１のレベルを間接結合ＥＬＩＳＡによって測定した。ＥＬＩＳＡプレートを、５０ｍＭのホウ酸ナトリウム中２μｇ／ｍｌのＡＢ００４１を用いて４℃で一晩コーティングした。プレートを、リン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４（ＰＢＳ）中５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いてブロッキングし、ＰＢＳ中０．０５％のＴｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）で洗浄した。標準曲線を、ＡＢ００４１をＰＢＳＴ中に段階希釈して、３，０００ｎｇ／ｍｌから１．５ｎｇ／ｍｌまでにわたる一組を生成することによって調製した。血清試料をＰＢＳＴ中少なくとも１：１００に希釈し、次いで、予めコーティングしたＥＬＩＳＡプレートに加えた。１時間インキュベートした後、プレートを洗浄し、ポリクローナルヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ検出抗体（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｆａｉｒ  Ｌａｗｎ、ＮＪ）をプレートに０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ中１：１０，０００の希釈度で加えた。プレートを洗浄し、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を２分間にわたって加えることによってシグナルを検出した。１Ｍの塩酸（ＨＣｌ）を加えることによって反応を停止させ、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。血清中のＡＢ００４１レベルを、ＳｏｆｔＭａｘソフトウェアパッケージ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）において４−パラメータカーブフィッティングを使用して逆算した。
結果
【０２５９】
いずれの処置群においても体重減少の徴候は観察されず、全ての動物で試験全体を通して体重が増加し続けた。
【０２６０】
各群についての毎日のＭＳＳスコアの平均値±標準偏差が図２１に要約されている。ＡＢ００４１で処置したラットでは試験全体を通してＭＳＳの徴候は得点されなかった。試験の１２日目に、マリマスタットで処置したラット５匹で、片方の後足の使用の回避を伴うわずかな跛行（歩行スコア＝１）が示された。ＡＢ００４１、ビヒクルＡ、またはビヒクルＭを用いて処置した動物のいずれにおいても症状は検出されなかった。１３日目に、ビヒクルＭ群の動物４匹がわずかな跛行（歩行スコア＝１）を示し、これは、包埋したポンプの重さに起因したものである可能性があった。１８日目に、マリマスタットで処置したラットでは毎日の総スコアの平均が４．０を上回ったが、ビヒクルＭで処置したラットではスコアが低かった。２５日目まで、マリマスタット群についての平均スコアは５．８であり、ＡＢ００４１群についての平均スコアは、ゼロのままであった。マリマスタット群とビヒクルＭ群との間の１日当たりの総スコアの平均値の差は、Ａｌｚｅｔポンプを埋め込んだ後１４日目以降、統計的に有意であり（ｐ＜０．０５）、２０日目から２８日目の試験終結まではｐ値＜０．０００１であった。ＡＢ００４１を用いて処置したラットも、ビヒクルＡを用いて処置したラットも、試験の過程中、いかなる筋骨格疾患の症状も示さなかった。
【０２６１】
図２２は、ＡＢ００４１で処置したラットにおいて、１日目、７日目、１０日目、１４日目、１７日目、２１日目、２４日目、および２８日目にＥＬＩＳＡによって測定されたＡＢ００４１の血清中レベル（血清中力価）を示す。定常状態のレベルの平均値は、０日目から２８日目まで、２〜４ｍｇ／ｍｌにわたり、これにより、ラットが試験の過程中、抗体に曝露されたことが示された。
【０２６２】
ＡＢ００４１処置の効果を、血清化学検査パネルおよび病理組織学的分析により、ビヒクルＡ処置と比較して評価した。血清化学検査パネルは、アルカリホスファターゼ、血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼおよびオキサロ酢酸トランスアミナーゼ、クレアチンホスホキナーゼ、アルブミン、総タンパク質、グロブリン、総ビリルビン、血中尿素窒素、クレアチニン、コレステロール、グルコース、カルシウム、リン、炭酸水素塩、塩化物、カリウム、およびナトリウムを含有した。両群で、血清化学検査パネルのレベルは同様であり、正常範囲内にあり、同様であった（データは示していない）。これにより、ＡＢ００４１処置では正常な恒常性に対するいかなる実質的な撹乱も生じなかったことが示される。
【０２６３】
さらに、ＡＢ００４１群およびビヒクルＡ群由来の主要臓器に対して病理組織学的分析を実施した。心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、リンパ節、胃、腸、皮膚、筋肉、および胸骨由来の組織を収集し、Ｈ＆Ｅを用いて染色し、顕微鏡法で検査した。ＡＢ００４１群やビヒクルＡ群において処置に関連する異常は観察されなかった（データは示していない）。
【０２６４】
さらに、ＡＢ００４１で処置したラットおよびマリマスタットで処置したラット由来の肢を、軟部組織変化について、ならびに骨および関節変化について評価した。線維症および滑膜炎がマリマスタット群では観察されたが、ＡＢ００４１群では確認されなかった。マリマスタットで処置したラットでは、線維症は軽度〜重度にわたり、一般に、足首（ａｎｋｌｅ）および手首（ｗｒｉｓｔ）において観察された。また、滑膜炎がマリマスタットで処置したラットの大多数の関節において見出され、軽度であり、滑膜細胞増殖、滑液の増加、および炎症細胞の浸潤を特徴とした。
【０２６５】
両群のラット由来の後部膝関節のＨ＆Ｅ染色で同様の結果が観察された。滑膜炎や線維症はＡＢ００４１で処置したラットでは観察されなかったが、マリマスタットで処置したラットでは線維増殖の病理組織学的証拠が認められた。この所見は、ＡＢ００４１処置群のラットにおいてＭＳＳ臨床症状がないことと一致する。
【０２６６】
したがって、Ｌｅｗｉｓラットを処置することにより、全ての動物において、歩行、姿勢および移動する意欲に対する実質的な影響を含めたＭＳＳの特徴的な徴候を含めた複数の筋骨格疾患の症状が生じ、これは最初の処置の１２日後に始まった。対照的に、Ｌｅｗｉｓラットを、ＡＢ００４１を用いて、またはビヒクル単独で処置することでは、ＭＳＳのいかなる臨床的症状、身体的症状、組織学的症状も誘導されなかった。ＡＢ００４１群やビヒクル群における血清生化学パラメータおよび組織学的パラメータにおいて注目すべき差や異常は検出されなかった。ＡＢ００４１処置群にＭＳＳ症状がないことは、血清中力価分析により、ＡＢ００４１への曝露は試験期間全体を通して高いままであることが示されたので、薬物の生物学的利用能が不十分であることに起因するものではなかった。マリマスタットによる汎ＭＭＰ阻害に反して、ＡＢ００４１によるＭＭＰ９の特異的な阻害では、ＭＳＳは誘発されなかった。
（実施例１０）
同所性異種移植モデルにおける抗ＭＭＰ９抗体
【０２６７】
ＡＢ００４１およびＡＢ００４６の活性を、実施例６に記載の同所性異種移植マウスＣＲＣモデルにおいて検査した。異種移植モデルの免疫組織化学的分析により、ＭＭＰ９が間質炎症細胞および腫瘍上皮細胞に存在することが示された。
【０２６８】
試験Ｉ（移植後１７日）、試験ＩＩ（移植後１４日）、および試験ＩＩＩ（移植後１４日）において、処置前に腫瘍を約７０ｍｍ３まで成長させた。試験Ｉでは、群当たりマウス１５匹を、ビヒクル、対照ＩｇＧ  ＡＣ−１（ＡＣ−１）、ＡＢ００４１（ｈ）、またはＡＢ００４１とＡＢ００４６の１：１混合物（ｍ＋ｈ）のいずれかを用いて処置した。ＡＣ−１群、ｈ群、およびｍ＋ｈ群では、マウスに、各抗体を週２回、１５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。ｍ＋ｈ群では、処置の１日目に、マウスにＡＢ００４６を５０ｍｇ／ｋｇで前投与した。ビヒクル群では、マウスに、週２回ビヒクルを腹腔内投与した。
【０２６９】
試験ＩＩでは、群当たりマウス１５匹を、ビヒクル、ＡＣ−１、ＡＢ００４１（ｈ）、ＡＢ００４１とＡＢ００４６の１：１混合物（ｍ＋ｈ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、または５−ＦＵおよびＡＢ００４１とＡＢ００４６の１：１混合物の組合せ（５−ＦＵ＋ｍ＋ｈ）のいずれかを用いて処置した。ＡＣ−１群、ｈ群、ｍ＋ｈ群、および５−ＦＵ＋ｍ＋ｈ群では、マウスに、各抗体を週２回、１５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。ｍ＋ｈ群および５−ＦＵ＋ｍ＋ｈ群では、処置の１日目に、マウスにＡＢ００４６を５０ｍｇ／ｋｇで前投与した。５−ＦＵ群および５−ＦＵ＋ｍ＋ｈ群では、マウスに、週２回、５−ＦＵを２０ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。ビヒクル群では、マウスに、週２回ビヒクルを腹腔内投与した。
【０２７０】
試験ＩＩＩでは、群当たり５匹の、試験ＩＩのマウスと比較して平均で２０％体重が重いマウスを、ビヒクルまたはＡＢ００４１とＡＢ００４６の１：１混合物（ｍ＋ｈ）のいずれかを用いて処置した。マウスに、試験ＩＩに記載の通り投与した。
【０２７１】
試験の間にＡＢ００４１およびＡＢ００４６の力価を測定した。原発腫瘍サイズおよび体重を週に１回、それぞれカリパスおよび電子はかりを使用して測定した。カリパスに基づくサイズ推定値を、触診した腫瘍の直交する小さい方の寸法（Ｗ）および大きい方の寸法（Ｌ）を測定することによって得た。おおよその腫瘍体積（ｍｍ３）を式（Ｗ２×Ｌ）／２によって算出した。ノンパラメトリックなマンホイットニー順位和検定を使用してｐ値を決定した（＊＝０．０５〜０．０１、＊＊＝０．０１〜０．００１、＊＊＊≦０．００１）。ＲｏｄｅｎｔＭＡＰ分析のために、偽発見率（ＦＤＲ）分析を使用して、ｑ値も決定した。最大の許容できる偽発見率を０．０５に設定した。正規化された腫瘍体積を以下の通り算出した：各測定時点における個々のマウスの腫瘍体積をその「０日目」の腫瘍体積（すなわち、処置開始時の腫瘍体積）に対して正規化し、次いで、群内の各マウスからのこれらの正規化された値を平均して、群の正規化された体積の平均値を各時点について出した。
【０２７２】
最大の腫瘍量が観察された試験終了時に、血清、原発結腸腫瘍および転移を伴う任意の臓器を収集し、検査した。
【０２７３】
ヒトＭＭＰ９を標的とする抗体とマウスＭＭＰ９を標的とする抗体の１：１混合物を用いて処置することにより、実施例６におけるものと同様の有効性がもたらされた（図１６および図２３）。試験ＩＩでは、ｍ＋ｈ群における処置の効力は５−ＦＵ群における処置の効力に匹敵した（図２３Ｃ、図２３Ｄ）。５−ＦＵは、代謝拮抗薬として機能し、抗新生物的活性を有するピリミジン類似体である。
【０２７４】
試験Ｉでは、ｈＭＭＰ９単独の阻害の効果は、腫瘍の成長を制限することにおいて、ＭＭＰ９を阻害すること（ｍ＋ｈ）による阻害と同様であった（図２４）。表４および表５には、試験Ｉおよび試験ＩＩについて測定した腫瘍の体積および重量についてのマンホイットニーｐ値が要約されている。
【表４】
2018150343.tif 000031
【表５】
2018150343.tif 000032
【０２７５】
対照群と比較して、ｈＭＭＰ９およびｍＭＭＰ９の複合阻害により、試験Ｉにおける転移の発生率が低下した。また、腫瘍由来のＭＭＰ９のみを阻害することの有効性は低かった。この結果は、遠隔転移を生じる浸潤プロセスにおいて間質ＭＭＰ９の役割が大きいこと（腫瘍由来のＭＭＰ９に対して）と一致する。
【０２７６】
試験ＩＩＩでは、２つの群における正規化された腫瘍体積間の差は有意であった（図２３Ｅおよび図２３Ｆ）。ビヒクル群対ｍ＋ｈ群のｐ値は移植の３６日後または処置の２１日後に０．０３６２であった。
【０２７７】
試験Ｉにおけるビヒクルで処置したマウス由来の腫瘍の免疫組織化学的（ＩＨＣ）分析により、腫瘍細胞により産生されるＭＭＰ９のレベルが常在マクロファージ、線維芽細胞および内皮細胞などの間質性供給源由来のＭＭＰ９よりも低いことが実証された。異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｐｈ）モデル腫瘍におけるＭＭＰ９発現のパターンは、ヒトＣＲＣのものと同様であった。ＭＭＰ９の腫瘍細胞による発現は不均一であり、発現レベルは腫瘍塊の所与の領域内で広範に変動し得た。
【０２７８】
試験Ｉにおいて、腫瘍切片のＨ＆Ｅ染色および壊死組織の百分率についての視覚的評価では、対照と、抗ＭＭＰ９で処置した動物において壊死の程度にいかなる有意差も示されなかった。腫瘍を最終の重量によって別々の群にビニングし（ｂｉｎｎｅｄ）、次いで、分析した場合、最終の重量が０．４ｇ以下の腫瘍（対照腫瘍全てのおよそ１１％およびＭＭＰ９抗体で処置した腫瘍全ての７％）について、抗ＭＭＰ９処置群において壊死が増加するわずかな傾向があった（対照群に対して）が、この差では統計的有意性に達しなかった（ｐ＝０．１４６；マンホイットニー分析）。
【０２７９】
実施例６に記載の試験について追加の血清分析を行った。５８の検体のパネルにおける血清タンパク質をＲｏｄｅｎｔＭＡＰによって評価した。有意性をマンホイットニー検定、その後偽発見率分析によって評価してｑ値を得た。図２５に示されている通り、Ｃ反応性タンパク質（炎症のマーカー）、ＣＸＣＬ２／ＭＩＰ−２（好中球誘引物質および活性化因子）、ＶＥＧＦ−Ａ、およびＣＣＬ７／ＭＣＰ−３（大部分の白血球型を活性化し、単球からのＭＭＰ９の放出を刺激するケモカイン）、Ｔ−リンパ球、およびＮＫ細胞が、抗ＭＭＰ９（ｍ＋ｈ）群においてビヒクル群と比較して有意に減少した。
【０２８０】
試験Ｉおよび試験ＩＩの最後に収集した血清においてＡＢ００４１（抗ｈＭＭＰ９抗体）およびＡＢ００４６（抗ｍＭＭＰ９抗体）の力価を測定した。平均で、ＡＢ００４１およびＡＢ００４６の終末血清中濃度は１００μｇ／ｍＬ〜３００μｇ／ｍＬにわたった（データは示していない）。
【０２８１】
これらの試験の結果により、マウス異種移植モデルにおいてヒト特異的モノクローナル抗体およびマウス特異的モノクローナル抗体のカクテルを用いてＭＭＰ９をターゲティングすることにより、４つの独立した試験において原発腫瘍の成長が低下し、転移の発生率も低下したことが実証される。
【０２８２】
抗ヒト−ＭＭＰ９抗体を単独で用いた処置により、抗ヒト−ＭＭＰ９および抗マウス−ＭＭＰ９抗体の両方を用いた処置と同様の腫瘍の成長の低下がもたらされた。これは、この異種移植モデルにおいて、腫瘍由来のヒトＭＭＰ９（間質由来のマウスＭＭＰ９ではなく）が腫瘍細胞の増殖のより優勢な駆動因子であることを示唆している。抗ヒトＭＭＰ９と抗マウスＭＭＰ９のカクテルを用いて処置したマウスにおけるマウス血清タンパク質レベルの変化（ビヒクルを用いて処置したマウスと比較した）により、血管新生因子ＶＥＧＦおよび炎症性因子Ｃ反応性タンパク質、ＣＸＣＬ２、およびＣＣＬ７が、抗ＭＭＰ９で処置したマウスにおいてビヒクルを用いて処置したマウスと比較して有意に減少したことが実証され、これは炎症および血管新生におけるＭＭＰ９の役割と一致した。また、腫瘍上皮由来のＭＭＰ９は原発腫瘍の増生に関与し、間質ＭＭＰ９をターゲティングすることにより、転移の発生率に対する有効性が増大する。
（実施例１１）
抗ＭＭＰ９抗体を使用した治療的処置
【０２８３】
ＡＢ００４５を、進行性膵臓または食道胃腺癌、非小細胞肺がん、潰瘍性大腸炎、クローン病、または関節リウマチを有する患者の処置において使用する。患者に、抗体を体重１ｋｇ当たり１００ｍｇ、２００ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、１２００ｍｇ、または１８００ｍｇの投与量で、１週間、２週間または３週間の間隔で静脈内投与する。適切な投与量は、０．９％塩化ナトリウムを使用して作製する。患者は、ＡＢ００４５を単独療法としてまたは他の治療剤との併用療法の一部として受ける。
【０２８４】
ＵＣ、クローン病、または関節リウマチを処置するために、ＡＢ００４５を単独で、またはＬＯＸＬ２（リジルオキシダーゼ様２）に対する抗体および／もしくはＤＤＲ１（ジスコイジンドメイン受容体１）に対する抗体を含めた他の免疫療法剤と一緒に投与する。
【０２８５】
膵臓腺癌に対して、抗体を、単独で２週間の間隔で、またはゲムシタビンおよび／もしくはナブパクリタキセルの２８日サイクルの化学療法と一緒に投与する。
【０２８６】
食道胃腺癌に対して、抗体を、単独で２週間の間隔で、または２８日サイクルで投与されるｍＦＯＬＦＯＸ６の２８日サイクルの化学療法と一緒に投与する。
【０２８７】
非小細胞肺がんに対して、抗体を、単独で３週間の間隔で、またはカルボプラチンおよびパクリタキセルの２１日サイクルの化学療法と一緒に、またはペメトレキセドおよび／もしくはベバシズマブと一緒に投与する。
【０２８８】
併用処置では、化学療法を公知の投与量および手順を用いて投与する。
【０２８９】
ＭＭＰ９抗体の投与量は、調整し、体重１ｋｇ当たり１３３ｍｇ、２６７ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇまたは１２００ｍｇで投与することができる。各治療サイクルの後に、患者をＭＭＰ９抗体、ＭＭＰ９、または他の適切なバイオマーカーのレベルについてモニタリングする。
（実施例１２）
関節リウマチモデルにおける抗ＭＭＰ９抗体
【０２９０】
実施例７により、ラットおよびマウスにおける関節リウマチの処置におけるＡＢ００４１の有効性が示された。この実施例は、ビヒクル、２ｍｇ／Ｋｇ、１０ｍｇ／Ｋｇ、または５０ｍｇ／ＫｇのＡＢ００４１（ラットモデルにおいて）またはＡＢ００４６（マウスモデルにおいて）、１０ｍｇ／ＫｇのＥｎｂｒｅｌ、または０．５ｍｇ／Ｋｇのメトトレキセート（ＭＴＸ）のいずれかを用いて処置した実施例７の動物に関する追加の特徴付けを提供する。
【０２９１】
実施例７において行った表６の臨床的なスコア化に加えて、処置した動物の足の腫脹、足首の直径および体重を測定した。測定を、無作為化する前に週に１回、およびその後週に３回行った。図２６（ラット）および図２９（マウス）に示されているように、ラットにおけるＡＢ００４１の投与およびマウスにおけるＡＢ００４６の投与では、全ての用量において、臨床疾患の定性的測定値および定量的測定値の有意な逆転／軽減がもたらされた。結果により、ＡＢ００４１またはＡＢ００４６を５０ｍｇ／ｋｇで用いた処置により、軟部組織疾患、関節損傷および破壊の全ての尺度が減少したことも示された。抗ＭＭＰ９抗体の有効性はＥｎｂｒｅｌおよびメトトレキセート（ＭＴＸ）を用いて観察された有効性に匹敵した。
【表６】
2018150343.tif 000033
【０２９２】
さらに、後肢を、軟部組織変化（浮腫、組織／血管壊死、炎症細胞浸潤、および線維増殖）ならびに軟骨および骨の変化（軟骨びらん、骨びらん、骨膜性骨形成、滑膜炎、パンヌス形成、および関節破壊）について顕微鏡法で検査した。標準の重症度スコアを使用した：０＝有意な変化なし、１＝最小、２＝軽度、３＝中程度および４＝重度。重症度スコアは各肢における全体的な変化に基づいた。
【０２９３】
免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）分析を実施して、ＭＭＰ９、ＴＮＦ−アルファ、ＣＤ６８、およびカテプシンＫのレベルを評価した。抗ＴＮＦ−アルファ染色および抗ＣＤ６８のスコア化を、０が非疾患関節のレベルであり４がビヒクルで処置した肢において観察された最も高い発現である０〜４にわたる定性的なスケールで行った。抗ＴＮＦ−アルファスコア化については、肢の前部から足根中足骨関節の領域全体をスコア化した。抗ＣＤ６８染色を、肢当たり３〜４枚の、距骨によって形成される関節の滑膜の画像を使用して評価し、各膜のスコアを平均し、値を全体的な炎症スコアとして割り当てた。ＩＨＣからの結果により、軟骨損傷および骨びらんの前部ならびにパンヌス組織を含めた活性な疾患範囲の領域におけるＭＭＰ９発現が示された。また、ＭＭＰ９を発現している細胞が破骨細胞および単球／マクロファージ系列の細胞と同定された。
【０２９４】
５０ｍｇ／ｋｇのＡＢ００４１を用いて処置したラットにおいてＣＤ６８およびＴＮＦ−アルファを定量化した。ＩＨＣによる結果により、この群におけるＣＤ６８およびＴＮＦ−アルファの両方ともビヒクルで処置した群と比較して有意に減少したことが明らかになった（図２７）。結果により、骨および軟骨分解性細胞型（破骨細胞および単球／マクロファージ系列の細胞）ならびに炎症および関節炎の全身的なメディエーター（ＴＮＦ−アルファ）の減少が示されている。
【０２９５】
さらに、終末血清試料の血清パネル分析を、ＥＬＩＳＡを使用して特徴付けた。図１８Ａおよび図２８（ラット）ならびに図１８Ｂおよび図１９Ｂ（マウス）に要約されている結果により、炎症および疾患の進行のメディエーターの一貫した減少が示された。図２８に示されている通り、ラットにおけるＡＢ００４１処置により、内在性ＭＭＰ９阻害物質の組織メタロプロテイナーゼ阻害物質（ＴＩＭＰ）−１、白血球マイトジェンの顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、好中球誘引物質および活性化因子のマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−２、ナチュラルキラー細胞および単球化学誘引物質のＭＩＰ−１β、造血幹細胞分化誘導因子（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｏｒ）のマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）−１、ＩＬ−６ファミリーサイトカインのオンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、化学誘引物質のＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン（ＣＸＣＬ）１０および単球化学誘引物質タンパク質（ＭＣＰ）−５、ナチュラルキラーおよびＴ細胞活性化因子のＩＬ−１２ｐ７０、ならびに免疫系修飾物質のインターフェロン（ＩＮＦ）−γ、ＩＬ−１２、およびＩＬ−７の統計的に有意な減少がもたらされた。Ｅｎｂｒｅｌで処置したラットでは血清マーカーの減少は観察されなかったが、メトトレキセート処置により、これらのマーカーの一貫した増加がもたらされた。図１９Ｂに示されている通り、マウスにおけるＡＢ００４６処置により、好中球誘引物質および／または活性化因子のＫＣ／ＧＲＯ、ＭＩＰ−２、およびＧＣＰ−２；ＮＫおよびＴ細胞誘引物質のリンホタクチン；単球化学誘引物質のＭＣＰ−１およびＭＣＰ−３；リンパ球および樹状細胞化学誘引物質のＣＸＣＬ−１０；ＩＬ−６様サイトカインのＯＳＭ；顆粒球活性化因子のＭＩＰ−１βおよびＭＩＰ−１γ；ならびにアポリポタンパク質（Ａｐｏ）Ａ−１の統計的に有意な減少がもたらされた。ＡＢ００４６の力価を終末血清試料において測定した。さらに、１０ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンにより、測定可能な薬物レベルがもたらされた。
【０２９６】
これらのデータにより、ラットＣＩＡ処置モデルにおける阻害性の抗ＭＭＰ９モノクローナル抗体を用いた処置により、関節の炎症の臨床的知見および客観的測定値の軽減および逆転、関節の炎症および破壊の病理組織学的顕在化の減少、ならびに疾患媒介性細胞型および因子の減少がもたらされたことが示されている。治療効果は参照化合物であるＥｎｂｒｅｌおよびメトトレキセートに匹敵した。広範な全身的な抗炎症効果が抗ＭＭＰ９処置では観察されたが、Ｅｎｂｒｅｌまたはメトトレキセートのいずれの投与でも観察されなかった。
（実施例１３）
ヒト腫瘍におけるＭＭＰ９の発現
【０２９７】
ＭＭＰ９およびＭＭＰ２のタンパク質レベルおよびｍＲＮＡレベルを、免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）によって、および発色ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによって検査した。ヒト肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃腺癌、結腸直腸腺癌、膵臓腺癌、肝細胞癌、および頭頸部の扁平上皮癌由来の組織を特徴付けた。
【０２９８】
ＩＨＣ分析において、試料を、２つの別個のＭＭＰ９特異的抗体：ポリクローナル抗体Ｓｉｇｍａ  ＨＰＡ００１２３８およびモノクローナル抗体Ａｂｃａｍ（ａｂ７６００３）を使用して染色した。所与の腫瘍試料についてのＭＭＰ９陽性腫瘍上皮の百分率を視覚的評価によってスコア化した。ＩＨＣ分析のために使用する抗ＭＭＰ９抗体の特異性を、免疫ブロットにおいてＭＭＰのパネルに対して試験することによって評価した。いずれの抗体も、ＭＭＰ９以外の試験したＭＭＰのいずれに対しても、いかなる注目すべき交差反応性も示さなかった。
【０２９９】
調査した全ての腫瘍において、組織球（組織−常在マクロファージ）、好中球、内皮細胞、および線維芽細胞のサブセットにおいて、ならびに非新生物性上皮および腫瘍上皮においてＭＭＰ９免疫反応性が認められた。分泌されたＭＭＰ９タンパク質は細胞外マトリックスにおいても見出され、一般に、腫瘍内の炎症性浸潤物と関連した。ＭＭＰ９発現の検出は、多くの場合、がん試料全てにわたる壊死領域に関連した。
【０３００】
腫瘍全体に分散し、腫瘍微小環境の反応性平滑筋、内皮細胞、小動脈の平滑筋、および非新生物性上皮に存在する組織球のサブセットにおいてＭＭＰ２シグナルが検出された。大部分の腫瘍上皮がＭＭＰ２について陽性であったが、染色パターンがＭＭＰ９について観察されたものよりも拡散していた。ＭＭＰ２発現は、より不均一なＭＭＰ９の発現と比較して組織（新生物性および非新生物性）にわたってより広範に存在した。
【０３０１】
図３０には、この試験において観察されたＭＭＰ９陽性腫瘍上皮の百分率が要約されている。間質ＭＭＰ９陽性も全ての試料中に存在したが、スコア化しなかった。各「陽性（ｐｏｓｉｔｉｖｉｔｙ）」カテゴリーに入る所与の腫瘍型についての試料の百分率が図３０のｘ軸上に示されている。分析により、ＭＭＰ９陽性の程度および供給源に関して、各がん型に特徴的な腫瘍の型およびパターン全てにわたって発現が示された。
【０３０２】
ＣＩＳＨ分析により、免疫細胞（特にマクロファージおよび好中球）ならびに内皮細胞などの他の間質構成物のサブセットによる腫瘍上皮細胞におけるＭＭＰ９  ｍＲＮＡが検出された。ＣＩＳＨ分析の結果により、ＭＭＰ９  ｍＲＮＡがマクロファージ／組織球、好中球、および腫瘍上皮細胞に存在したことが示された。また、ＭＭＰ９  ｍＲＮＡの発現は腫瘍型内および腫瘍型の間で変動した。分析した全ての腫瘍において、ＭＭＰ９  ｍＲＮＡを発現している細胞型は組織球、好中球、および腫瘍細胞のサブセットを含んだ。ＩＨＣ分析における不均一性と同様に、ＭＭＰ９  ｍＲＮＡの発現のレベルは変動した。
【０３０３】
図３１には、腫瘍上皮に関連するＭＭＰ９  ｍＲＮＡのＣＩＳＨ分析が要約されている。各「陽性」カテゴリーに入る所与の腫瘍型についての組織試料の百分率がｘ軸上に示されている。分析により、ＭＭＰ９陽性の程度および供給源に関して、各がん型に特徴的な腫瘍の型およびパターン全てにわたって発現が明らかになった。
【０３０４】
ＣＩＳＨおよびＩＨＣ分析からの結果により、腫瘍上皮におけるＭＭＰ９の発現が示される。いくつかの試料では、ＣＩＳＨにより、タンパク質シグナルが検出されなかった場合にＭＭＰ９  ｍＲＮＡが検出された。腫瘍由来のＭＭＰ９は炎症細胞由来のＭＭＰ９よりも豊富ではないことが多いので、ＣＩＳＨ分析は、腫瘍上皮由来のＭＭＰ９のＩＨＣシグナルを不明瞭にする、高レベルの炎症細胞由来のＭＭＰ９を有する試料においてＭＭＰ９発現を検出するために適している。
【図１】
2018150343.tif 000034
【図２】
2018150343.tif 000035
【図３】
2018150343.tif 000036
【図４】
2018150343.tif 000037
【図５】
2018150343.tif 000038
【図６】
2018150343.tif 000039
【図７】
2018150343.tif 000040
【図８】
2018150343.tif 000041
【図９】
2018150343.tif 000042
【図１０】
2018150343.tif 000043
【図１１Ａ−１】
2018150343.tif 000044
【図１１Ａ−２】
2018150343.tif 000045
【図１１Ｂ−１】
2018150343.tif 000046
【図１１Ｂ−２】
2018150343.tif 000047
【図１１Ｂ−３】
2018150343.tif 000048
【図１１Ｂ−４】
2018150343.tif 000049
【図１２Ａ】
2018150343.tif 000050
【図１２Ｂ】
2018150343.tif 000051
【図１３】
2018150343.tif 000052
【図１４】
2018150343.tif 000053
【図１５】
2018150343.tif 000054
【図１６】
2018150343.tif 000055
【図１７Ａ−１】
2018150343.tif 000056
【図１７Ａ−２】
2018150343.tif 000057
【図１７Ｂ】
2018150343.tif 000058
【図１８Ａ】
2018150343.tif 000059
【図１８Ｂ】
2018150343.tif 000060
【図１９Ａ−１】
2018150343.tif 000061
【図１９Ａ−２】
2018150343.tif 000062
【図１９Ａ−３】
2018150343.tif 000063
【図１９Ａ−４】
2018150343.tif 000064
【図１９Ａ−５】
2018150343.tif 000065
【図１９Ａ−６】
2018150343.tif 000066
【図１９Ａ−７】
2018150343.tif 000067
【図１９Ｂ−１】
2018150343.tif 000068
【図１９Ｂ−２】
2018150343.tif 000069
【図１９Ｂ−３】
2018150343.tif 000070
【図１９Ｂ−４】
2018150343.tif 000071
【図１９Ｂ−５】
2018150343.tif 000072
【図２０】
2018150343.tif 000073
【図２１】
2018150343.tif 000074
【図２２】
2018150343.tif 000075
【図２３Ａ−Ｂ】
2018150343.tif 000076
【図２３Ｃ−Ｄ】
2018150343.tif 000077
【図２３Ｅ−Ｆ】
2018150343.tif 000078
【図２４】
2018150343.tif 000079
【図２５Ａ−Ｂ】
2018150343.tif 000080
【図２５Ｃ−Ｄ】
2018150343.tif 000081
【図２６】
2018150343.tif 000082
【図２７】
2018150343.tif 000083
【図２８−１】
2018150343.tif 000084
【図２８−２】
2018150343.tif 000085
【図２８−３】
2018150343.tif 000086
【図２８−４】
2018150343.tif 000087
【図２９】
2018150343.tif 000088
【図３０】
2018150343.tif 000089
【図３１】
2018150343.tif 000090
【配列表】
2018150343000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年7月27日(2018.7.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体におけるがんの処置における使用のための医薬組成物であって、
該医薬組成物は、ヒトマトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ９）に結合するＭＭＰ９活性阻害抗体またはその抗原結合断片を含み、ここで、ヒトＭＭＰ９に結合する該抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）配列番号４７に示される３つのＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号４８に示される３つのＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは
（ｂ）配列番号３、５、６、７および８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号４、９、１０、１１および１２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン
を含み、
ここで、該がんは、膵がん、膵臓腺癌、食道胃腺癌、非小細胞肺がん、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃がん、胃腺癌、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、結腸直腸がん、結腸直腸腺癌、および結腸直腸癌からなる群から選択され、
該医薬組成物は、該被験体におけるＭＭＰ９活性を阻害するために有効な量で投与されることを特徴とする、
医薬組成物。
【請求項２】
前記（ａ）のＶＨドメインが、配列番号４７の残基２６〜３５を含むＣＤＲ１、配列番号４７の残基５０〜６６を含むＣＤＲ２、配列番号４７の残基９９〜１０６を含むＣＤＲ３を含み、前記（ａ）のＶＬドメインが、配列番号４８の残基２４〜３４を含むＣＤＲ１、配列番号４８の残基５０〜５６を含むＣＤＲ２、配列番号４８の残基８９〜９７を含むＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３】
前記（ｂ）のＶＨドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を含む、前記（ｂ）のＶＬドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項４】
前記（ｂ）のＶＨドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記（ｂ）のＶＬドメインが、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項５】
前記ＭＭＰ９活性の阻害が非競合的である、請求項１から４までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項６】
ヒトＭＭＰ９に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、１日に体重１ｋｇ当たり約１０ｎｇ〜約１００ｍｇの用量で投与されることを特徴とする、請求項１から５までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項７】
前記医薬組成物が、１週間ごとに１回、２週間ごとに１回または３週間ごとに１回投与されることを特徴とする、請求項１から６までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項８】
化学療法剤、抗がん剤、またはそれらの組合せからなる群から選択される１種または複数の治療剤をさらに含む、請求項１から７までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項９】
前記医薬組成物が、化学療法剤、抗がん剤、またはそれらの組合せからなる群から選択される１種または複数の治療剤と同時にまたは逐次的に投与されることを特徴とする、請求項１から８までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１０】
前記１種または複数の治療剤が、ナブパクリタキセル、ｍＦＯＬＦＯＸ６、ＦＯＬＦＩＲＩ、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ベバシズマブ、抗リジルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）抗体、抗ジスコイジンドメイン受容体１（ＤＤＲ１）抗体、またはそれらの組合せからなる群から選択される、請求項８または９に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１１】
静脈内投与、動脈内投与、皮内投与、筋肉内投与、皮下投与、または経口投与される、請求項１から１０までのいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１２】
被験体における自己免疫の疾患もしくは状態または炎症性の疾患もしくは状態の処置における使用のための医薬組成物であって、
該医薬組成物は、ヒトマトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ９）に結合するＭＭＰ９活性阻害抗体またはその抗原結合断片を含み、ここで、ヒトＭＭＰ９に結合する該抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）配列番号４７に示される３つのＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号４８に示される３つのＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは
（ｂ）配列番号３、５、６、７および８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号４、９、１０、１１および１２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン
を含み、
ここで、該自己免疫の疾患もしくは状態または炎症性の疾患もしくは状態は、関節リウマチ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の炎症状態、および敗血症からなる群から選択され、
該医薬組成物は、該被験体におけるＭＭＰ９活性を阻害するために有効な量で投与されることを特徴とする、
医薬組成物。
【請求項１３】
前記（ａ）のＶＨドメインが、配列番号４７の残基２６〜３５を含むＣＤＲ１、配列番号４７の残基５０〜６６を含むＣＤＲ２、配列番号４７の残基９９〜１０６を含むＣＤＲ３を含み、前記（ａ）のＶＬドメインが、配列番号４８の残基２４〜３４を含むＣＤＲ１、配列番号４８の残基５０〜５６を含むＣＤＲ２、配列番号４８の残基８９〜９７を含むＣＤＲ３を含む、請求項１２に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１４】
前記（ｂ）のＶＨドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を含む、前記（ｂ）のＶＬドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１５】
前記（ｂ）のＶＨドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記（ｂ）のＶＬドメインが、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１６】
前記ＩＢＤが、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、分類不能大腸炎または膠原性大腸炎である、請求項１２から１５までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１７】
前記ＭＭＰ９活性の阻害が非競合的である、請求項１２から１６までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１８】
ヒトＭＭＰ９に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、１日に体重１ｋｇ当たり約１０ｎｇ〜約１００ｍｇの用量で投与されることを特徴とする、請求項１２から１７までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１９】
前記医薬組成物が、１週間ごとに１回、２週間ごとに１回または３週間ごとに１回投与されることを特徴とする、請求項１２から１８までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２０】
抗炎症剤、免疫療法剤、またはそれらの組合せからなる群から選択される１種または複数の治療剤をさらに含む、請求項１２から１９までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２１】
前記医薬組成物が、抗炎症剤、免疫療法剤、またはそれらの組合せからなる群から選択される１種または複数の治療剤と同時にまたは逐次的に投与されることを特徴とする、請求項１２から２０までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２２】
静脈内投与、動脈内投与、皮内投与、筋肉内投与、皮下投与、または経口投与される、請求項１２から２１までのいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２３】
被験体における筋骨格症候群における線維症状の処置における使用のための医薬組成物であって、
該医薬組成物は、ヒトマトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ９）に結合するＭＭＰ９活性阻害抗体またはその抗原結合断片を含み、ここで、ヒトＭＭＰ９に結合する該抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）配列番号４７に示される３つのＣＤＲを含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号４８に示される３つのＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは
（ｂ）配列番号３、５、６、７および８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号４、９、１０、１１および１２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン
を含み、
該医薬組成物は、該被験体におけるＭＭＰ９活性を阻害するために有効な量で投与されることを特徴とする、
医薬組成物。
【請求項２４】
前記（ａ）のＶＨドメインが、配列番号４７の残基２６〜３５を含むＣＤＲ１、配列番号４７の残基５０〜６６を含むＣＤＲ２、配列番号４７の残基９９〜１０６を含むＣＤＲ３を含み、前記（ａ）のＶＬドメインが、配列番号４８の残基２４〜３４を含むＣＤＲ１、配列番号４８の残基５０〜５６を含むＣＤＲ２、配列番号４８の残基８９〜９７を含むＣＤＲ３を含む、請求項２３に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２５】
前記（ｂ）のＶＨドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を含む、前記（ｂ）のＶＬドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２６】
前記（ｂ）のＶＨドメインが、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記（ｂ）のＶＬドメインが、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２７】
前記酵素活性の阻害が非競合的である、請求項２３から２６までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２８】
ヒトＭＭＰ９に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、１日に体重１ｋｇ当たり約１０ｎｇ〜約１００ｍｇの用量で投与されることを特徴とする、請求項２３から２７までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２９】
前記医薬組成物が、１週間ごとに１回、２週間ごとに１回または３週間ごとに１回投与されることを特徴とする、請求項２３から２８までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３０】
１種または複数の抗線維化剤をさらに含む、請求項２３から２９までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３１】
前記医薬組成物が、１種または複数の抗線維化剤と同時にまたは逐次的に投与されることを特徴とする、請求項２３から３０までのいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３２】
前記１種または複数の抗線維化剤が、抗リジルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）抗体、抗ジスコイジンドメイン受容体１（ＤＤＲ１）抗体、またはそれらの組合せからなる群から選択される、請求項３０または３１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３３】
静脈内投与、動脈内投与、皮内投与、筋肉内投与、皮下投与、または経口投与される、請求項２３から３２までのいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項３４】
インビトロでＭＭＰ９活性を検出またはモニタリングする方法であって、
試料をＭＭＰ９に対して選択的に結合するタンパク質と接触させるステップであって、該試料は、膵がん、膵臓腺癌、食道胃腺癌、非小細胞肺がん、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃がん、胃腺癌、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、結腸直腸がん、結腸直腸腺癌、および結腸直腸癌からなる群から選択されるがんを有する被験体由来の試料であるステップと、
該タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在するかしないかを評価するステップであって、
該タンパク質は、配列番号３、５、６、７および８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ領域、および配列番号４、９、１０、１１および１２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ領域を含む、
ステップとを含み、
該タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在しないことにより、該試料がＭＭＰ９活性を有さないことが示され、該タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在することにより、該試料がＭＭＰ９活性を有することが示される方法。
【請求項３５】
前記タンパク質が、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ領域、および配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ領域を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
インビトロでＭＭＰ９活性を検出またはモニタリングする方法であって、
試料をＭＭＰ９に対して選択的に結合するタンパク質と接触させるステップであって、該試料は、関節リウマチ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の炎症状態、および敗血症からなる群から選択される自己免疫の疾患もしくは状態または炎症性の疾患もしくは状態を有する被験体由来の試料であるステップと、
該タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在するかしないかを評価するステップであって、
該タンパク質は、配列番号３、５、６、７および８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ領域、および配列番号４、９、１０、１１および１２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ領域を含む、
ステップとを含み、
該タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在しないことにより、該試料がＭＭＰ９活性を有さないことが示され、該タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在することにより、該試料がＭＭＰ９活性を有することが示される方法。
【請求項３７】
前記タンパク質が、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ領域、および配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ領域を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
インビトロでＭＭＰ９活性を検出またはモニタリングする方法であって、
試料をＭＭＰ９に対して選択的に結合するタンパク質と接触させるステップであって、該試料は、筋骨格症候群における線維症状を有する被験体由来の試料であるステップと、
該タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在するかしないかを評価するステップであって、
該タンパク質は、配列番号３、５、６、７および８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ領域、および配列番号４、９、１０、１１および１２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ領域を含む、
ステップとを含み、
該タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在しないことにより、該試料がＭＭＰ９活性を有さないことが示され、該タンパク質−ＭＭＰ９複合体が存在することにより、該試料がＭＭＰ９活性を有することが示される方法。
【請求項３９】
前記タンパク質が、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ領域、および配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ領域を含む、請求項３８に記載の方法。