(57)【要約】【課題】抗α４β７抗体のための製剤を提供すること。【解決手段】ヒト患者における潰瘍性大腸炎又はクローン病の臨床的な寛解を維持するための組成物であって、該組成物は、ヒトα４β７インテグリンに対して結合特異性を有する抗体の３００ｍｇの用量を含み、該組成物は、ヒト患者に対して４週ごと又は８週ごとに投与され、該抗体は、配列番号８に示す相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９に示すＣＤＲ２及び配列番号１０に示すＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、かつ配列番号１１に示すＣＤＲ１、配列番号１２に示すＣＤＲ２及び配列番号１３に示すＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト患者における潰瘍性大腸炎又はクローン病の臨床的な寛解を維持するための組成物であって、該組成物は、ヒトα４β７インテグリンに対して結合特異性を有する抗体の３００ｍｇの用量を含み、該組成物は、ヒト患者に対して４週ごと又は８週ごとに投与され、該抗体は、配列番号８に示す相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９に示すＣＤＲ２及び配列番号１０に示すＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、かつ配列番号１１に示すＣＤＲ１、配列番号１２に示すＣＤＲ２及び配列番号１３に示すＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、組成物。
【請求項２】
ヒト患者における潰瘍性大腸炎又はクローン病の臨床的な寛解を誘導するための組成物であって、該組成物は、ヒトα４β７インテグリンに対して結合特異性を有する抗体の３００ｍｇの用量を含み、該組成物は、ヒト患者に対して、該抗体の初回用量を投与すること、初回投与の２週間後に該抗体の第２の用量を投与すること、及び、初回投与の６週間後に該抗体の第３の用量を投与することを含む投与計画に従って投与され、該抗体は、配列番号８に示す相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９に示すＣＤＲ２及び配列番号１０に示すＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、かつ配列番号１１に示すＣＤＲ１、配列番号１２に示すＣＤＲ２及び配列番号１３に示すＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、組成物。
【請求項３】
潰瘍性大腸炎が、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
クローン病が、中程度から重度の活動性クローン病である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項５】
ヒト患者が、ＴＮＦα拮抗剤に対して適切な応答を欠いていた、応答を喪失していた、又はそれに対して認容性ではなかった、請求項１〜４いずれかに記載の組成物。
【請求項６】
ヒト患者における潰瘍性大腸炎又はクローン病を治療するための組成物であって、該組成物は、ヒトα４β７インテグリンに対して結合特異性を有する抗体を含み、該抗体は、配列番号８に示す相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９に示すＣＤＲ２及び配列番号１０に示すＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、かつ配列番号１１に示すＣＤＲ１、配列番号１２に示すＣＤＲ２及び配列番号１３に示すＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、ヒト患者は、ＴＮＦα拮抗剤に対して適切な応答を欠いていた、応答を喪失していた、又はそれに対して認容性ではなかった、組成物。
【請求項７】
該抗体が、配列番号２のアミノ酸２０〜１４０の重鎖可変領域配列及び配列番号４のアミノ酸２０〜１３１の軽鎖可変領域配列を含む、請求項１〜６いずれかに記載の組成物。
【請求項８】
該抗体がベドリズマブである、請求項１〜７いずれかに記載の組成物。
【請求項９】
該抗体が、ヒト患者に静脈内投与される、請求項１〜８いずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
該抗体が、ヒト患者に約３０分間の点滴として投与される、請求項９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗α４β７抗体のための製剤に関する。
【０００２】
関連出願
本出願は、２０１２年１月１２日に出願された米国仮特許出願６１／５８５，８５９、２０１１年１０月２４日に出願された米国仮特許出願６１／５５０，５４５及び２０１１年５月２日に出願された米国仮特許出願６１／４８１，５３３の利益を主張する。前述の出願の内容全体は参照によって本明細書に組み入れられる。
【０００３】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩ形式で提出されている、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる配列表を含有する。２０１２年４月３０日に創られた前記ＡＳＣＩＩコピーは、９２５９６６１５.ｔｘｔと名付けられ、１７，０２４バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００４】
バイオテクノロジーの進歩によって組換えＤＮＡを用いて医薬応用のための種々のタンパク質を製造することが可能になっている。タンパク質は、従来の無機及び有機の薬剤よりも大きく、複雑なので（すなわち、複雑な三次元構造に加えて複数の官能基を持つ）、そのようなタンパク質の製剤化は特別な問題を提起する。タンパク質の生物活性を維持するには、製剤はタンパク質のアミノ酸の少なくともコア配列の構造的な整合性を保存しなければならない一方で同時に、タンパク質の複数の官能基が分解するのを保護しなければならない。タンパク質は安定性の欠如に悩まされ得るし、モノクローナル抗体及びポリクローナルの抗体は特に相対的に不安定であり得る（たとえば、Wang, et al., 非特許文献１を参照）。多数の製剤化の選択肢が利用可能であり、１つのアプローチ又はシステムがタンパク質すべてに好適であるわけではない。考慮されるべき幾つかの因子が報告されている（たとえば、 Wang et al.を参照）。
【０００５】
多数の特徴がタンパク質の安定性に影響し得る。実際、精製した抗体の場合でさえ、抗体構造は不均質であり得、それがさらにそのような系の製剤化を複雑にする。さらに、抗体製剤に含まれる賦形剤は好ましくは、潜在的な免疫応答をできるだけ抑える。
【０００６】
抗体の場合、構造的な整合性の保存は一層さらに重要である。タンパク質の分解経路には、化学的不安定性（すなわち、結合形成又は新しい化学実体を生じる切断によるタンパク質の修飾が関与する過程）又は物理的不安定性（すなわち、タンパク質の高次構造における変化）が関与し得る。化学的不安定性は、たとえば、脱アミド化、異性化、加水分解、酸化、断片化、グリカンβ排除又はジスルフィド変換において現れる。物理的不安定性は、たとえば、変性、凝集、沈殿又は吸収の結果生じる。４つの最も一般的なタンパク質分解経路は、タンパク質の断片化、凝集、脱アミド化及び酸化である。治療用タンパク質の化学的な又は物理的な不安定性の結果には、有効な投与量の低下、たとえば、刺激又は免疫反応性による治療の安全性の低下、及び短い保存期間による頻繁な製造が挙げられる。
【０００７】
凍結／乾燥はタンパク質を保存するのに一般的に採用される技法であり；凍結／乾燥は当該タンパク質調製物から水分を取り除くのに役立つ。凍結／乾燥又は凍結乾燥は、乾燥される物質が先ず凍結され、その後真空下にて氷又は凍結した溶媒が昇華によって取り除かれる過程である。凍結乾燥前の製剤に賦形剤を含めて、凍結乾燥工程の間タンパク質を安定化する及び／又は凍結乾燥したタンパク質製剤の安定性を改善することができる（非特許文献２and非特許文献３）。
【０００８】
幾つかの出版物は炎症性大腸疾患を治療する種々の方法を一般に開示しており、炎症性大腸疾患を治療するように設計された剤の投与のための投薬スキームを提供している。たとえば、特許文献１は、粘膜性血管アドレシン及びＭＡｄＣＡＭを発現する細胞に白血球が結合した結果としての消化管への白血球の動員に関連する疾患の治療を開示している。特許文献２は、粘膜組織の白血球浸潤に関連する疾患を治療する方法及びα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒトの又はヒト化された免疫グロブリン又は抗原結合断片の有効量のヒトへの投与を開示している。特許文献２はさらに、種々の用量（たとえば、体重ｋｇ当たり０．１５、約０．５、約１．０、約１．５又は約２．０ｍｇの免疫グロブリン又は断片）及び種々の投与間隔（７、１４、２１、２８及び３０日間）を記載している。しかしながら、前述の特許及び出版物は抗α４β７抗体の特定の製剤又は本明細書で記載され、請求される特定の用量及び投与計画を開示していない。重要なことに、前述の特許は、本明細書で記載され、請求される治療方法（臨床試験データによって支持される）を提供する製剤、用量及び投与計画を開示していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】ＷＯ９６／２４６７３
【特許文献２】ＵＳ２００５／００９５２３８
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】J. Pharm Sci. 96:1-26 (2007)
【非特許文献２】Pikal M., Biopharm. 3(9)26-30 (1990)
【非特許文献３】Arakawa et al. Pharm. Res. 8(3):285-291 (1991)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の抗体製剤は、ＭＡｄＣＡＭを発現している細胞に結合する白血球を阻害するのに有用であり得るので、患者における炎症性大腸疾患の治療に役立つ。従って、これらの化合物の好適な投与量及び投与計画を発見し、安定して好都合な形態にて長い間にわたって抗体製剤の安定した治療上有効な血中レベルを生じる製剤、好ましくは静脈内製剤を開発する緊急のニーズがある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、その不安定性の故に脱アミド化、酸化、異性化及び／又は凝集に敏感になる抗α４β７製剤を製剤化するのに有用な賦形剤としての非還元糖及び少なくとも１つのアミノ酸の特定に関する。製剤は、安定性を改善し、凝集体形成を低減し、その中での抗体の分解を遅らせる。
【００１３】
従って、第１の態様では、本発明は、非還元糖と抗α４β７抗体と少なくとも１つの遊離のアミノ酸の混合物を含む安定な製剤に関するものであり、非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は６００：１を超える。製剤は液体製剤又は乾燥製剤（たとえば、凍結乾燥した）であり得る。製剤はまた緩衝化剤も含有することができる。一部の実施形態では、非還元糖は、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、又はそれらの組み合わせである。
【００１４】
一部の実施形態では、製剤の遊離のアミノ酸はヒスチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸又はそれらの組み合わせである。製剤は、約５０ｍＭ〜約１７５ｍＭの間の遊離のアミノ酸を含むことができる。製剤は、約１００ｍＭ〜約１７５ｍＭの間の遊離のアミノ酸を含むことができる。遊離のアミノ酸と抗体のモル比の比率は少なくとも２５０：１であることができる。
【００１５】
製剤はまた界面活性剤を含有することもできる。界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポリキサマー又はそれらの組み合わせであることができる。
【００１６】
一部の態様では、製剤は抗α４β７抗体の免疫原性をできるだけ抑えることができる。
【００１７】
たとえば、乾燥状態である製剤は、４０℃、相対湿度（ＲＨ）７５％にて少なくとも３ヵ月安定であることができる。
【００１８】
別の態様では、製剤は凍結乾燥され、凍結乾燥前、少なくとも約５％〜約１０％の抗α４β７抗体を含む。製剤は、凍結乾燥前、少なくとも約６％の抗α４β７抗体を含むことができる。凍結乾燥された製剤から製剤を再構成することができる（たとえば、安定な液体製剤を含むように再構成することができる）。
【００１９】
別の態様では、本発明は、非還元糖と抗α４β７抗体と少なくとも１つの遊離のアミノ酸の混合物を含む安定な製剤に関するものであり、非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は６００：１を超え、遊離のアミノ酸と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は２５０：１を超える。
【００２０】
別の態様では、本発明は、非還元糖と抗α４β７抗体と少なくとも１つの遊離のアミノ酸を伴った水溶液を含む安定な液体製剤に関するものであり、非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は６００：１を超える。その上、さらなる態様では、本発明は、少なくとも約４０ｍｇ／ｍｌ〜約８０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体と、少なくとも約５０〜１７５ｍＭの１以上のアミノ酸と、少なくとも約６％〜少なくとも約１０％（ｗ／ｖ）の糖を含む液体製剤に関する。液体製剤は緩衝化剤も含有し得る。一部の実施形態では、液体製剤は金属キレート剤も含む。一部の実施形態では、液体製剤は抗酸化剤も含む。
【００２１】
別の態様では、本発明は、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体と、少なくとも約１０％（ｗ／ｖ）の非還元糖と、少なくとも約１２５ｍＭの１以上のアミノ酸を含む液体製剤に関する。
【００２２】
別の態様では、本発明は、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体と、少なくとも約１０％（ｗ／ｖ）の非還元糖と、少なくとも約１７５ｍＭの１以上のアミノ酸を含む液体製剤に関する。
【００２３】
その上さらに、さらなる態様では、本発明は、非還元糖、抗α４β７抗体、ヒスチジン、アルギニン及びポリソルベート８０の混合物を含む乾燥した、たとえば、凍結乾燥した製剤にも関するものであり、製剤は固体形態であり、非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は６００：１を超える。
【００２４】
その上さらに、さらなる態様では、本発明は、非還元糖、抗α４β７抗体、ヒスチジン、アルギニン及びポリソルベート８０の混合物を含む液体製剤に関する。この態様では、非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は６００：１を超える。さらに、製剤におけるアルギニンと抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は２５０：１を超える。
【００２５】
別の態様では、本発明は、一次乾燥の間、崩壊温度を下回って製品温度を維持することを含む、本明細書で記載される製剤を作製する方法に関する。方法はアニーリング工程を含有することもできる。
【００２６】
態様の１つでは、本発明は炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者を治療する方法に関するものであり、該方法は、炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者に、ヒトα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片は、非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、以下の投与計画：(ａ）静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の初回投与、（ｂ）その後の、初回投与の約２週間後での静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の第２の後続投与、（ｃ）その後の、初回投与の約６週間後での静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の第３の後続投与、（ｄ）その後の、ヒト化抗体の第３の後続投与後、必要に応じて４週ごと又は８週ごとの静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の第４の後続投与に従って患者に投与され、該投与計画が患者の炎症性大腸疾患における臨床な応答及び臨床的な寛解を誘導し；且つさらに、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、以下で示すアミノ酸配列の軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）：軽鎖ＣＤＲ１：配列番号９，ＣＤＲ２：配列番号１０，ＣＤＲ３：配列番号１１；重鎖：ＣＤＲ１：配列番号１２，ＣＤＲ２：配列番号１３，ＣＤＲ３：配列番号１４を含む。
【００２７】
別の態様では、本発明は、炎症性大腸疾患の治療療法のための投与計画に関するものであり、該投与計画は、炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者に、ヒトα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片は、非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、以下の投与計画：(ａ）静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の初回投与、（ｂ）その後の、初回投与の約２週間後での静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の第２の後続投与、（ｃ）その後の、初回投与の約６週間後での静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の第３の後続投与、（ｄ）その後の、ヒト化抗体の第３の後続投与後、必要に応じて４週ごと又は８週ごとの静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の第４の後続投与に従って患者に投与され、該投与計画が患者の炎症性大腸疾患における臨床な応答及び臨床的な寛解を誘導し；且つさらに、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、以下で示すアミノ酸配列の軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）：軽鎖：ＣＤＲ１：配列番号９，ＣＤＲ２：配列番号１０，ＣＤＲ３：配列番号１１；重鎖：ＣＤＲ１：配列番号１２，ＣＤＲ２：配列番号１３，ＣＤＲ３：配列番号１４を含む。
【００２８】
一部の態様では、抗α４β７抗体製剤による治療方法、用量又は投与計画は、抗α４β７抗体の免疫原性をできるだけ抑えることができる。
【００２９】
患者は、免疫調節剤、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）拮抗剤又はそれらの組み合わせの少なくとも１つによる治療との適切な応答を欠いていた、それに対する応答を欠如していた、又はそれに対して認容性ではなかった可能性がある。
【００３０】
炎症性大腸疾患は、クローン病又は潰瘍性大腸炎であり得る。炎症性大腸疾患は、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎であり得る。
【００３１】
投与計画は、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎に苦しむ患者にて結果的に粘膜治癒を生じることができる。
【００３２】
患者は、炎症性大腸疾患のために少なくとも１つのコルチコステロイドで以前治療を受けていた可能性がある。投与計画は、患者によるコルチコステロイドの使用の低減、排除又は低減及び排除を結果的に生じることができる。
【００３３】
一部の態様では、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約１．４ｍｇ／ｍＬの間の濃度での最終投与形態で投与される。ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、約１．２ｍｇ／ｍＬの最終投与形態で投与することができる。ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片は、約３０分で患者に投与することができる。
【００３４】
ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、凍結乾燥した製剤から再構成することができる。
【００３５】
ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を再構成して安定な液体製剤を構成することができる。
【００３６】
一部の態様では、投与計画は、前記治療を受けている患者の脳脊髄液におけるＣＤ４とＣＤ８の比を変えることはない。
【００３７】
患者は６５歳以上の人であることができ、投与計画の調整を必要としない。
【００３８】
即ち、本発明の要旨は、
〔１〕ヒト患者における潰瘍性大腸炎又はクローン病の臨床的な寛解を維持するための組成物であって、該組成物は、ヒトα４β７インテグリンに対して結合特異性を有する抗体の３００ｍｇの用量を含み、該組成物は、ヒト患者に対して４週ごと又は８週ごとに投与され、該抗体は、配列番号８に示す相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９に示すＣＤＲ２及び配列番号１０に示すＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、かつ配列番号１１に示すＣＤＲ１、配列番号１２に示すＣＤＲ２及び配列番号１３に示すＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、組成物、
〔２〕ヒト患者における潰瘍性大腸炎又はクローン病の臨床的な寛解を誘導するための組成物であって、該組成物は、ヒトα４β７インテグリンに対して結合特異性を有する抗体の３００ｍｇの用量を含み、該組成物は、ヒト患者に対して、該抗体の初回用量を投与すること、初回投与の２週間後に該抗体の第２の用量を投与すること、及び、初回投与の６週間後に該抗体の第３の用量を投与することを含む投与計画に従って投与され、該抗体は、配列番号８に示す相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９に示すＣＤＲ２及び配列番号１０に示すＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、かつ配列番号１１に示すＣＤＲ１、配列番号１２に示すＣＤＲ２及び配列番号１３に示すＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、組成物、
〔３〕潰瘍性大腸炎が、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎である、〔１〕又は〔２〕に記載の組成物、
〔４〕クローン病が、中程度から重度の活動性クローン病である、〔１〕又は〔２〕に記載の組成物、
〔５〕ヒト患者が、ＴＮＦα拮抗剤に対して適切な応答を欠いていた、応答を喪失していた、又はそれに対して認容性ではなかった、〔１〕〜〔４〕いずれかに記載の組成物、
〔６〕ヒト患者における潰瘍性大腸炎又はクローン病を治療するための組成物であって、該組成物は、ヒトα４β７インテグリンに対して結合特異性を有する抗体を含み、該抗体は、配列番号８に示す相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号９に示すＣＤＲ２及び配列番号１０に示すＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、かつ配列番号１１に示すＣＤＲ１、配列番号１２に示すＣＤＲ２及び配列番号１３に示すＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、ヒト患者は、ＴＮＦα拮抗剤に対して適切な応答を欠いていた、応答を喪失していた、又はそれに対して認容性ではなかった、組成物、
〔７〕該抗体が、配列番号２のアミノ酸２０〜１４０の重鎖可変領域配列及び配列番号４のアミノ酸２０〜１３１の軽鎖可変領域配列を含む、〔１〕〜〔６〕いずれかに記載の組成物、
〔８〕該抗体がベドリズマブである、〔１〕〜〔７〕いずれかに記載の組成物、
〔９〕該抗体が、ヒト患者に静脈内投与される、〔１〕〜〔８〕いずれかに記載の組成物、
〔１０〕該抗体が、ヒト患者に約３０分間の点滴として投与される、〔９〕に記載の組成物
に関する。
【発明の効果】
【００３９】
本発明により、抗α４β７抗体のための製剤が提供され得る。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１Ａ】ヒト化抗α４β７免疫グロブリンの重鎖をコードするヌクレオチド配列（配列番号１）及び重鎖の推定アミノ酸配列（配列番号２）を示す図である。ヌクレオチド配列は、クローニング部位（小文字）、コザック配列（大文字、配列番号１のヌクレオチド１８〜２３）、及び重鎖の５’末端におけるリーダー配列（小文字、配列番号１のヌクレオチド２４〜８６）を含有する。ヌクレオチド配列のオープンリーディングフレームは、配列番号１のヌクレオチド２４〜１４３３である。
【図１Ｂ】ヒト化抗α４β７免疫グロブリンの重鎖をコードするヌクレオチド配列（配列番号１）及び重鎖の推定アミノ酸配列（配列番号２）を示す図である。ヌクレオチド配列は、クローニング部位（小文字）、コザック配列（大文字、配列番号１のヌクレオチド１８〜２３）、及び重鎖の５’末端におけるリーダー配列（小文字、配列番号１のヌクレオチド２４〜８６）を含有する。ヌクレオチド配列のオープンリーディングフレームは、配列番号１のヌクレオチド２４〜１４３３である。
【図２】本明細書でベドリズマブと呼ばれるヒト化免疫グロブリンの軽鎖をコードするヌクレオチド配列（配列番号３）及び軽鎖の推定アミノ酸配列（配列番号４）を示す図である。ヌクレオチド配列は、クローニング部位（小文字）、コザック配列（大文字、配列番号３のヌクレオチド１８〜２３）、及び重鎖の５’末端におけるリーダー配列（小文字、配列番号３のヌクレオチド２４〜８０）を含有する。ヌクレオチド配列のオープンリーディングフレームは、配列番号３のヌクレオチド２４〜７３７である。
【図３】（Ａ）本明細書でベドリズマブと呼ばれるヒト化免疫グロブリンの成熟ヒト化軽鎖（配列番号４のアミノ酸２０〜２３８）と（Ｂ）本明細書でＬＤＰ−０２と呼ばれるヒト化免疫グロブリンの成熟ヒト化軽鎖（配列番号５）（ＬＤＰ−０２に関してはWO 98/06248 and Feagan et al., N. Eng. J. Med. 352:2499-2507 (2005)を参照）のアミノ酸配列の配列比較を示す図である。Ｆｅａｇａｎらは、ＬＤＰ−０２の臨床試験を記載しているが、論文中では彼らはＬＤＰ−０２をＭＬＮ０２と呼ぶ。配列比較は、ベドリズマブとＬＤＰ−０２の軽鎖のアミノ酸配列が成熟軽鎖の１１４位と１１５位で異なることを示す。
【図４】（Ａ）ヒトの一般的なκ軽鎖定常領域（配列番号６）とマウスの一般的なκ軽鎖定常領域（配列番号７）のアミノ酸配列の配列比較を示す図である。アミノ酸残基Ｔｈｒ及びＶａｌ（成熟ベドリズマブ軽鎖の１１４位及び１１５位に存在する）（配列番号４のアミノ酸１３３と１３４）は、ヒトκ軽鎖の定常領域に存在するが、アミノ酸残基Ａｌａ及びＡｓｐ（成熟ＬＤＰ−０２軽鎖の１１４位及び１１５位に存在する）（配列番号５）は、マウスκ軽鎖の定常領域に存在する。
【図５】ベクターｐＬＫＴＯＫ３８Ｄ（ｐＴＯＫ３８ＭＬＮ０２−ＴＶとも呼ばれる）のマップを示す図であり、それは、ＭＬＮ０２のヒト化重鎖及びヒト化軽鎖をコードし、ＣＨＯ細胞におけるベドリズマブの産生に好適である（ｐＬＫＴＯＫ３８を開示している米国特許出願公開番号２００４／００３３５６１Ａ１を参照。ｐＬＫＴＯＫ３８Ｄは、マップで示した制限部位が軽鎖可変領域をコードする配列に隣接するｐＬＫＴＯＫ３８の変異体である）。
【図６Ａ】抗α４β７凍結乾燥製剤の単量体比率の変化、凝集体比率の変化及び主要アイソフォーム比率の変化についての予測モデルを示す図である。モデルは実施例１で提示されるデータの統計的な解析に基づく。中央線は予測モデルの結果を示し、外側の線は予測モデルについての９５％信頼限界を示す。
【図６Ｂ】入力因子がｐＨ、糖：タンパク質のモル比及びアルギニン：タンパク質のモル比である場合の表１〜３の４０℃データの統計的な解析に基づく代替モデルを示す図である。中央線は予測モデルの結果を示し、外側の線は予測モデルについての９５％信頼限界を示す。
【図７】ヒト成熟ＧＭ６０７’ＣＬ抗体のκ軽鎖可変領域（Ａ）及びヒト２１／２８’ＣＬ重鎖可変領域（Ｂ）のアミノ酸配列を示す図である。
【図８】固体及び負荷が乾燥時間に影響を及ぼすことを示すグラフである（線における数は乾燥時間の分数を表す）。
【図９】ベドリズマブは、プラセボ対照に比べて実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）の臨床症状の発症を遅らせなかったことを示すグラフである。ナタリズマブはプラセボ対照に比べてＥＡＥの臨床症状の発症を有意に（ｐ＜０．０５）遅らせた。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
本発明は抗α４β７抗体を含む製剤に関する。製剤は、非還元糖、抗α４β７抗体及び少なくとも１つの遊離のアミノ酸を含む混合物であってもよく、非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は６００の還元糖：１の抗α４β７抗体を超える。製剤は固体形態又は液体形態であり得る。
【００４２】
定義
用語「医薬製剤」は、有効であるべき抗体の生物活性を可能にするような形態で抗α４β７抗体を含有し、製剤が投与される対象に対して受け入れがたいほど毒性である追加の成分を含有しない調製物を指す。
【００４３】
「安定な」製剤は、保存の際、その中の抗体がその物理的な安定性及び／又はその化学的な安定性及び／又はその生物活性を実質的に保持するものである。態様の１つでは、製剤は、保存の際、その生物活性と同様にその物理的な安定性及び化学的な安定性を実質的に保持する。保存期間は一般に製剤の意図される有効期限に基づいて選択される。タンパク質の安定性を測定する種々の分析法が当該技術で利用可能であり、たとえば、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ  Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０（１９９３）にて概説されている。
【００４４】
「脱アミド化された」モノクローナル抗体は、１以上のアスパラギン又はそのグルタミン残基がアスパラギン酸又はイソアスパラギン酸に誘導体化されているものである。
【００４５】
「脱アミド化に感受性」である抗体は、脱アミド化しやすいことが分っている１以上の残基を含むものである。
【００４６】
「酸化に感受性」である抗体は、酸化しやすいことが分っている１以上の残基を含むものである。
【００４７】
「凝集に感受性」である抗体は、特に凍結、加熱、乾燥、再構成及び/又は撹拌の際、他の抗体分子と凝集することが分っているものである。
【００４８】
「断片化に感受性」である抗体は、たとえば、そのヒンジ領域にて２以上の断片に切断されることが分っているものである。
【００４９】
「脱アミド化、酸化、凝集又は断片化を低減する」ことによって、異なるｐＨ又は異なる緩衝液にて製剤化されたモノクローナル抗体に比べて脱アミド化、凝集又は断片化を妨げる又はその量を減らす（たとえば、８０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％又は１０％に）ことを意味するように意図される。
【００５０】
「凝集体」、「ＳＥＣ凝集体」又は「可溶性凝集体」は、共有結合、イオン結合又は疎水性の相互作用を介して一緒に会合してさらに大きなタンパク質体を形成する１を超えて１０以下の抗体タンパク質及び／又は断片である。
【００５１】
「不溶性凝集体」又は「粒子」は、共有結合、イオン結合又は疎水性の相互作用を介して一緒に会合してさらに大きなタンパク質体を形成する１０を超える抗体タンパク質及び／又は断片である。
【００５２】
本明細書で使用されるとき、モノクローナル抗体の「生物活性」は、抗原に結合し、試験管内又は生体内で測定することができる測定可能な生物反応を生じる抗体の能力を指す。そのような活性は拮抗性又は作動性であってもよい。
【００５３】
細胞表面の分子、「α４β７インテグリン」又は「α４β７」は、α４鎖（ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ４）及びβ７（ＩＴＧＢ７）のヘテロダイマーである。各鎖は代替のインテグリン鎖とヘテロダイマーを形成し、α４β１又はαＥβ７を形成することができる。ヒトのα４とβ７の遺伝子（GenBank (National Center for Biotechnology Information, Bethesda, MD）、それぞれＲｅｆＳｅｑ受入番号ＮＭ＿０００８８５及びＮＭ＿０００８８９は、Ｂ及びＴリンパ球、特に記憶ＣＤ４＋リンパ球によって発現される。多数のインテグリンα４β７は通常、休止状態又は活動状態に存在し得る。α４β７のリガンドには、血管細胞接着因子（ＶＣＡＭ）、フィブロネクチン及び粘膜アドレシン（ＭＡｄＣＡＭ、（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１））が挙げられる。
【００５４】
本明細書で使用されるとき、「α４β７複合体に結合特異性」を有するヒト免疫グロブリン又はその抗原結合断片はα４β７に結合するが、α４β１又はαＥβ７には結合しない。
【００５５】
本明細書で使用されるとき、「等張の」製剤は、ヒト血液と実質的に同一の浸透圧を有する。等張の製剤は一般に約２５０〜３５０ｍＯｓｍの浸透圧を有する。等張性は、たとえば、蒸気圧型又は氷凍結型の浸透圧計を用いて測定することができる。
【００５６】
本明細書で使用されるとき、「緩衝化剤」は、その酸／塩基抱合成分の作用によるｐＨの変化に耐性である緩衝液を指す。緩衝化剤は本発明の液体又は固体の製剤に存在し得る。本発明の緩衝化剤は、製剤のｐＨを約５．０〜約７．５に、約５．５〜約７．５、約６．０〜約６．５、又は約６．３のｐＨに調整する。態様の１つでは、５．０〜７．５の範囲にてｐＨを制御するであろう緩衝化剤の例には、酢酸塩、コハク酸塩、グルコン酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、マレイン酸塩、カコジレート、２−［Ｎ−モルフォリノ］エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス［ヒドロキシメチル］メタン（ビス−トリス）、Ｎ−［２−アセトアミド］−２−イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、グリシルグリシン、及び他の有機酸緩衝液が挙げられる。別の態様では、本明細書での緩衝化剤はヒスチジン又はクエン酸塩である。
【００５７】
「ヒスチジン緩衝液」はヒスチジンイオンを含む緩衝液である。ヒスチジン緩衝液の例には塩化ヒスチジン、酢酸ヒスチジン、リン酸ヒスチジン、硫酸ヒスチジンの溶液が挙げられる。ヒスチジン緩衝液又はヒスチジン／ＨＣｌ緩衝液は、ｐＨ約５．５〜約６．５の間、ｐＨ約６．１〜約６．５の間、又はｐＨ約６．３のｐＨを有する。
【００５８】
「糖類」は本明細書では、単糖類、二糖類、三糖類、多糖類、糖アルコール、還元糖、非還元糖などを含む一般式（ＣＨ２Ｏ）ｎを有する化合物及びその誘導体である。態様の１つでは、糖類の例には、グルコース、スクロース、トレハロース、ラクトース、フルクトース、マルトース、デキストラン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、シリトール、ソルビトール、マンニトール、メリビオース、メレジトース、ラフィノース、マンノトリオース、スタキオース、マルトース、ラクツロース、マルツロース、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、イソ−マルツロース等が挙げられる。糖類は凍結保護剤であることができる。別の態様では、糖類は本明細書では非還元性の二糖類、たとえば、スクロースである。
【００５９】
「界面活性剤」は本明細書では、液体の表面張力を低下させる剤を指す。界面活性剤は非イオン性界面活性剤であることができる。態様の１つでは、界面活性剤の例には、ポリソルベート（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、たとえば、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０）；ＴＲＩＴＯＮ（ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、非イオン性界面活性剤、ミシガン州、ミッドランドのダウケミカル社のユニオンカーバイド子会社）；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム；ナトリウムオクチルグリコシド；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−又はステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−又はステアリル−サクロシン；リノレイル−、ミリスチル−、又はセチル−ベタイン；ラウロアミドプロピル−、コカアミドプロピル−、リノレアミドプロピル−、ミリストアミドプロピル−、パルミドプロピル−、又はイソステアルアミドプロピル−ベタイン（たとえば、ラウロアミドプロピル）；ミリストアミドプロピル−、パルミドプロピル−、又はイソステアルアミドプロピル−ジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−又は二ナトリウムメチルオレイル−酒石酸；モノパルミチン酸ソルビタン；及びＭＯＮＡＱＵＡＴシリーズ（ニュージャージー州、パターソンのモナ・インダストリーズ社）；ポリエチルグリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）及びポロキシエチレンとポロキシプロピレングリコールのコポリマー（たとえば、プルロニクス／ポロキサマー、ＰＦ６８等）などが挙げられる。別の態様では、界面活性剤はポリソルベート８０である。
【００６０】
本明細書での用語「抗体」は、最も広義で使用され、ヒトの抗体、ヒト化抗体及び非ヒト種に由来する抗体及び単一機能抗体や２機能抗体のような組換え抗原結合形態を含めて、完全長のモノクローナル抗体、免疫グロブリン、ポリクローナル抗体、たとえば、それぞれ異なる抗原又はエピトープに対する少なくとも２つの完全長の抗体から形成される多重特異性抗体（たとえば、二重特異性抗体）、及びｄＡｂｓ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆａｂ’を含む個々の抗原結合断片を具体的に網羅する。
【００６１】
本明細書で記載される他の賦形剤に対する抗α４β７抗体のモル量及びモル比は、抗体についての約１５０，０００ダルトンという近似分子量の仮定の上で算出される。実際の抗体の分子量は、アミノ酸組成及び転写後修飾によって、たとえば、抗体を発現させる細胞株によって１５０，０００ダルトンとは異なり得る。実際の抗体の分子量は、１５０，０００ダルトンの±５％であり得る。
【００６２】
用語「ヒト抗体」には、ヒトの免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウス（たとえば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ遺伝的に操作されたマウス（カリフォルニア州、フレモントのＡｂｇｅｎｉｘ）、ＨＵＭＡＢ−ＭＯＵＳＥ（登録商標）、ＫＩＲＩＮ  ＴＣ  ＭＯＵＳＥ（商標）導入染色体マウス、ＫＭＭＯＵＳＥ（登録商標）（ニュージャージー州、プリンストンのＭＥＤＡＲＥＸ））に由来する抗体のようなヒトの生殖細胞の免疫グロブリン配列、ヒトファージディスプレイライブラリ、ヒト骨髄腫細胞又はヒトＢ細胞に由来する配列を持つ抗体が含まれる。
【００６３】
用語「モノクローナル抗体」は本明細書で使用されるとき、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、たとえば、一般的に軽微な集団で存在する変異体のようなモノクローナル抗体の産生の間に生じ得る考えられる変異体を除いて、集団を構成する個々の抗体が同一であり、及び／又は同一のエピトープを結合する。通常、異なる決定基（エピトープ）に向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に向けられる。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の集団から得られるような抗体の特徴を指し示すのであって、特定の方法による抗体の調製を必要とするとは解釈されるべきではない。たとえば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製されてもよいし、又は組換えＤＮＡ法（たとえば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）によって作製されてもよい。「モノクローナル抗体」は、たとえば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載された技法を用いてファージ抗体ライブラリから単離されてもよい。
【００６４】
本明細書のモノクローナル抗体は具体的には、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の種に由来する又は特定の抗体のクラス若しくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一である又は相同である一方で、鎖の残りが別の種に由来する又は別の抗体のクラス若しくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一である又は相同である「キメラ」抗体、同様にそのような抗体の断片を、それらが所望の生物活性を呈する限り、含む（米国特許第４，８１６，５６７号; and Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)）。本明細書での当該キメラ抗体は、非ヒト霊長類（たとえば、旧世界のサル、類人猿等）に由来する可変ドメイン抗原結合配列とヒトの定常領域の配列を含む「霊長類化」抗体を含む。
【００６５】
本発明の製剤で調製されるヒト化免疫グロブリンの「抗原結合断片」は、抗α４β７抗体の重鎖及び／又は軽鎖の少なくとも可変領域を含む。たとえば、ベドリズマブの抗原結合断片は配列番号４のヒト化軽鎖配列のアミノ酸残基２０〜１３１を含む。そのような抗原結合断片の例には、当該技術で既知のヒト化免疫グロブリンのＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ及びＦ（ａｂ’）２断片が挙げられる。本発明のヒト化免疫グロブリンの抗原結合断片は、酵素切断又は組換え法によって作出することができる。たとえば、パパイン切断又はペプシン切断を用いてそれぞれＦａｂ断片又はＦ（ａｂ’）２断片を生成することができる。天然の停止部位の上流に１以上の停止コドンを導入した抗体遺伝子を用いて種々の切り詰めた形態で抗体を作出することもできる。たとえば、Ｆ（ａｂ’）２断片の重鎖をコードする組換え構築物を設計して重鎖のＣＨ１ドメインとヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含めることができる。態様の１つでは、抗原結合断片はα４β７インテグリンがそのリガンドの１以上（たとえば、粘膜アドレシンＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ１）、フィブロネクチン）に結合するのを阻害する。
【００６６】
抗体のパパイン消化は、それぞれ単一の抗原結合部位を持つ「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片、及びその名が結晶化し易いその能力を反映する残りの「Ｆｃ」断片を生じる。ペプシン処理によって、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋することが可能であるＦ（ａｂ’）２断片が得られる。
【００６７】
「Ｆｖ」は、非共有結合の会合にて重鎖可変ドメイン１つと軽鎖可変ドメイン１つの二量体から成る抗体断片である。
【００６８】
Ｆａｂ断片はまた、軽鎖の定常ドメインと重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体のヒンジ領域に由来する１以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での２、３の残基の付加によってＦａｂとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは定常領域のシステイン残基が少なくとも１つの遊離のチオール基を持つＦａｂ’についての本明細書での記号表示である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は元々、その間にヒンジシステインを有する一対のＦａｂ’断片として作出された。抗体断片の他の化学的カップリングも知られている。
【００６９】
「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインが単一ポリペプチド鎖に存在する。態様の１つでは、Ｆｖポリペプチドはさらに、ｓｃＦｖが抗原結合の所望の表面を形成するのを可能にするＶＨ及びＶＬドメインの間でのポリペプチドリンカーを含む。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照のこと。
【００７０】
用語「２機能性抗体」は、２つの抗原結合部位を持つ小型の抗体断片を指し、その断片は同一ポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）にて可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）に接続された可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む。同一鎖における２つのドメイン間で対合できるには短すぎるリンカーを用いて、ドメインを強制的に他の鎖の相補性のドメインと対合させ、２つの抗原結合部位を創る。２機能性抗体は、たとえば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）にてさらに完全に記載されている。
【００７１】
「完全長の抗体」は、軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３と共に抗原結合可変領域を含むものである。定常ドメインは天然の配列の定常ドメイン（たとえば、ヒトの天然の配列の定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列の変異体であってもよい。態様の１つでは、完全長の抗体は１以上のエフェクター機能を有する。
【００７２】
「アミノ酸配列の変異体」抗体は本明細書では、主要種抗体とは異なるアミノ酸配列を持つ抗体である。普通、アミノ酸配列の変異体は、主要種抗体との少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％の相同性を持つであろう。アミノ酸配列の変異体は、主要種抗体のアミノ酸の範囲内で又はそれに隣接して特定の位置にて置換、欠失及び／又は付加を持つが、抗原結合活性を保持する。抗体の定常領域の配列における変異は可変領域における変異よりも抗原結合部位に対する影響が少ない。可変領域では、アミノ酸配列の変異体は、主要種抗体と少なくとも約９０％相同性、少なくとも約９５％相同性、少なくとも約９７％相同性、少なくとも約９８％相同性、又は少なくとも約９９％相同性であろう。
【００７３】
「相同性」は、配列を並べ、必要に応じてギャップを導入し、最大比率の相同性を達成した後、同一であるアミノ酸配列変異体における残基の比率として定義される。配列比較の方法及びコンピュータプログラムは当該技術で周知である。
【００７４】
「治療用モノクローナル抗体」は、ヒト対象の治療法に使用される抗体である。本明細書で開示される治療用モノクローナル抗体には抗α４β７抗体が含まれる。
【００７５】
「グリコシル化変異体」抗体は本明細書では、主要種抗体に連結される１以上の糖質部分とは異なる、それに連結される１以上の糖質部分を持つ抗体である。グリコシル化変異体の例には本明細書では、そのＦｃ領域に連結されるＧ０オリゴ糖の代わりにＧ１又はＧ２オリゴ糖を持つ抗体、その１又は２の軽鎖に連結される１又は２の糖質部分を持つ抗体、抗体の１又は２の重鎖に連結される糖質がない抗体、等、及びグリコシル化変化体の組み合わせが挙げられる。
【００７６】
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然の配列のＦｃ領域又はアミノ酸配列変異体のＦｃ領域）に起因するそれらの生物活性を指す。抗体のエフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性の細胞介在性の細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、貪食作用、細胞表面受容体（たとえば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方調節などが挙げられる。
【００７７】
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列によって、完全長の抗体は異なる「クラス」に割り振られる。完全長の抗体には５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、これらの幾つかはさらにサブクラス（アイソタイプ）、たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ及びＩｇＡ２に分けられ得る。抗体の異なるクラスに相当する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、δ、ε、γ及びμと呼ばれる。免疫グロブリンの様々なクラスのサブユニット構造及び三次元構成は周知である。
【００７８】
脊椎動物種に由来する抗体の「軽鎖」はその定常ドメインのアミノ酸配列に基づいたカッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの明瞭に異なる型の１つに割り振られる。
【００７９】
「抗体依存性の細胞介在性の細胞傷害性」及び「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的な細胞傷害性の細胞（たとえば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、その後標的細胞の溶解を引き起こす細胞が介在する反応を指す。ＡＤＣＣに介在する主要な細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血系細胞上でのＦｃＲの発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ９：４５７−９２（１９９１）の４６４ページの表３にて要約されている。当該分子のＡＤＣＣ活性を評価するには、米国特許第５，５００，３６２号又は同第５，８２１，３３７号に記載されたような試験管内のＡＤＣＣアッセイを行ってもよい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代わりに又はさらに、当該分子のＡＤＣＣ活性は、たとえば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）にて開示されたような動物モデルにて生体内で評価されてもよい。
【００８０】
用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載するのに使用される。態様の１つでは、ＦｃＲは天然配列のヒトＦｃＲである。別の態様では、ＦｃＲはＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマ受容体）であり、対立遺伝子変異体及びこれら受容体の選択的にスプライスされた形態を含むＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩのサブクラスを含む。ＦｃγＲＩＩ受容体には、主としてその細胞質ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性型受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害型受容体」）が挙げられる。活性型受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンを基にした活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害型受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンを基にした阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７)における概説を参照）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）；並びにｄｅ  Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．  Ｍｅｄ．１２６：３３−４１（１９９５）にて概説されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは本明細書では用語「ＦｃＲ」によって包含される。用語はまた、母体ＩｇＧの胎児への移行に関与する新生児受容体、ＦｃＲｎも含む（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）。
【００８１】
用語「超可変領域」は本明細書で使用されるとき、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は一般に「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」（たとえば、軽鎖可変領域における残基２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７（Ｌ３）及び重鎖可変領域における残基３１−３５（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）及び９５−１０２（Ｈ３）；Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）に由来するアミノ酸残基及び／又は「超可変ループ」（たとえば、軽鎖可変領域における残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）及び９１−９６（Ｌ３）及び重鎖可変領域における残基２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）及び９６−１０１（Ｈ３）；Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）に由来する残基を含む。「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」の残基は、本明細書で定義されるような超可変領域の残基以外のそれら可変ドメインの残基である。超可変領域又はそのＣＤＲ１つの抗体鎖又は別の鎖又は別のタンパク質に移して得られる（複合）抗体又は結合タンパク質に抗原結合特異性を付与する。
【００８２】
非ヒト（たとえば、齧歯類）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最少限の配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの部分については、ヒト化抗体はヒト免疫グロブリン（レシピエント）であり、レシピエントの超可変領域に由来する残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有する、たとえば、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類のような非ヒト種の超可変領域に由来する残基（ドナー抗体）で置き換えられる。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（ＦＲ）の残基が相当する非ヒトの残基で置き換えられる。さらに、ヒト化抗体はレシピエント抗体又はドナー抗体に見られない残基を含み得る。これらの修飾を行って抗体の性能をさらに改良する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、通常２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、超可変ループのすべて又は実質的にすべては非ヒト免疫グロブリンのそれに相当し、ＦＲのすべて又は実質的にすべてはヒト免疫グロブリンのそれである。ヒト化抗体は任意で、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常ヒト免疫グロブリンのそれを含むであろう。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。
【００８３】
「親和性成熟」抗体は、それらの変化を持たない親抗体に比べて抗原への抗体の親和性を改善する、その１以上の超可変領域における１以上の変化をもつものである。態様の１つでは、親和性成熟抗体は、標的抗原についてナノモル又はさらにピコモルの親和性を有するであろう。親和性成熟抗体は、当該技術で既知の手順によって作出される。Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９−７８３（１９９２）はＶＨとＶＬの入れ替えによる親和性成熟を記載している。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基の無作為変異誘発はＢａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ、９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９（１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）によって記載されている。
【００８４】
「単離された」抗体は、その天然環境の成分から特定され、分離されている及び／又は回収されているものである。特定の実施形態では、抗体は、（１）ローリー法で測定されるときタンパク質の９５重量％を超えて、或いは９９重量％を超えて、（２）スピンキャップシークエネータの使用によって少なくとも１５残基のＮ末端又内部のアミノ酸配列を得るのに十分な程度に、又は（３）クマシーブルー染色又は銀染色を用いて還元条件下若しくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均質性まで精製されるであろう。単離された抗体には、抗体の天然環境の成分の少なくとも１つが存在しないので、組換え細胞内のその場での抗体が含まれる。しかしながら、普通、単離された抗体は少なくとも１回の精製工程で調製されるであろう。
【００８５】
「治療」は治療療法及び予防的な又は防御的な対策の双方を指す。治療を必要とするものには、すでに疾患のあるものと同様に疾患又はその再発が防がれるべきものが含まれる。従って、本明細書で治療される患者は、疾患を有すると診断されていてもよく、又は疾患に罹りやすい若しくは感受性であってもよい。用語「患者」及び「対象」は本明細書では相互交換可能に使用される。
【００８６】
製剤化される抗体は実質的に純粋であり、望ましくは実質的に均質である（混入するタンパク質等を含まない）。「実質的に純粋な」抗体は、組成物におけるタンパク質の総重量に基づいて少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５又は９７重量％の抗体を含む組成物を意味する。「実質的に均質な」抗体は、タンパク質の総重量に基づいて少なくとも約９９重量％のタンパク質が特異抗体、たとえば、抗α４β７抗体であるタンパク質を含む組成物を意味する。
【００８７】
「臨床的な寛解」は、潰瘍性大腸炎の対象に関して本明細書で使用されるとき、完全なＭａｙｏスコア２点以下であり及び１点を超える個々のサブスコアがないことを指す。クローン病の「臨床的な寛解」は１５０点以下のＣＤＡＩスコアを指す。
【００８８】
「臨床的な応答」は、潰瘍性大腸炎の対象に関して本明細書で使用されるとき、１点以上の直腸出血サブスコアの低下又は１点以下の絶対直腸出血スコアを伴った、完全Ｍａｙｏスコアの３点以上又はベースラインからの３０％の低下（外来では完全Ｍａｙｏスコアを実施しなかったのであれば、部分Ｍａｙｏスコアの２点以上又はベースラインからの２５％以上）を指す。「臨床的な応答」は、クローン病の対象に関して本明細書で使用されるとき、ベースライン（０週）からのＣＤＡＩスコアでの７０点以上の低下を指す。
【００８９】
「粘膜治癒」は、潰瘍性大腸炎の対象に関して本明細書で使用されるとき、１点以下の内視鏡サブスコアを指す。
【００９０】
本明細書で使用されるとき、「治療の失敗」は潰瘍性大腸炎又はクローン病の治療について疾患の悪化、救急療法の必要性、又は外科的介入を指す。救急療法は、新しい又は未解決の潰瘍性大腸炎又はクローン病の症状を治療するのに必要とされる新しい投薬又はベースライン投薬の用量に増加である（慢性下痢を制御するための下痢止め剤以外）。
【００９１】
製剤
本明細書で記載されるように、抗α４β７抗体は、（モルベースで）過剰の非還元糖を伴った乾燥した、たとえば、凍結乾燥した製剤である場合、高度に安定であることが発見されている。特に、非還元糖と抗α４β７抗体の比（モル：モル）が６００：１を超える凍結乾燥製剤は少なくとも２年間安定であることが本明細書で示される。
【００９２】
本発明は、第１の態様にて安定な抗α４β７抗体製剤を提供する。態様の１つでは、製剤は、緩衝液と少なくとも１つの安定剤と抗α４β７抗体を含む。態様の１つでは、乾燥製剤は１以上の非還元糖と抗α４β７抗体を含み、非還元糖と抗α４β７抗体の比（モル：モル）は６００：１を超える。製剤はまた１以上の遊離のアミノ酸も含む。１以上のアミノ酸は緩衝剤として作用することができる。態様の１つでは、１以上のアミノ酸は安定剤として作用することができる。製剤は任意でさらに少なくとも１つの界面活性剤を含み得る。一実施形態では、製剤は乾燥している、たとえば、凍結乾燥される。製剤における抗体は完全長の抗体であってもよいし、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、又はＦ（ａｂ’）２のようなその抗原結合断片であってもよい。
【００９３】
製剤は所望の非還元糖を含有することができる。態様の１つでは、製剤に含めることができる非還元糖には、たとえば、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マルチトール、ラクチトール、イソマルツロース、パラチニト及びそれらの組み合わせが挙げられる。別の態様では、非還元糖は、スクロース、トレハロース、マンニトール及びソルビトールである。製剤における非還元糖の絶対量は重要ではないが、非還元糖と抗α４β７抗体の比（モル：モル）は４００：１を超える。別の態様では、非還元糖と抗α４β７抗体の比（モル：モル）は、少なくとも約６００：１；少なくとも約６２５：１；少なくとも約６５０：１；少なくとも約６７５：１、少なくとも約７００：１；少なくとも約７５０：１、少なくとも約８００：１、少なくとも約１０００：１、少なくとも約１２００：１、少なくとも約１４００：１、少なくとも約１５００：１、少なくとも約１６００：１、少なくとも約１７００：１、少なくとも約１８００：１、少なくとも約１９００：１、又は少なくとも約２０００：１である。一般に、たとえば、凍結乾燥及び／又は乾燥及び再構成の際に生じる凝集体形成のような可溶性の凝集体形成を低減する量で非還元糖が存在することが望ましい。約７３０：１よりも高い非還元糖と抗α４β７抗体の比（モル：モル）は、凍結乾燥状態にてやや減った可溶性凝集体形成を生じ得る。糖：タンパク質の重量比は１．５：１（ｗ／ｗ）より大きくすることができる。別の態様では、液体（たとえば、乾燥前又は再構成後）製剤における非還元糖の濃度は、約１０ｍＭ〜約１Ｍ、たとえば、約６０ｍＭ〜約６００ｍＭ、約１００ｍＭ〜４５０ｍＭ、約２００ｍＭ〜約３５０ｍＭ、約２５０ｍＭ〜約３２５ｍＭ、及び約２７５ｍＭ〜約３００ｍＭの範囲内である。態様の１つでは、乾燥（たとえば、凍結乾燥）製剤における非還元糖の量は、約４０％〜約７０％（乾燥製剤のｗ／ｗ）の範囲内である。別の態様では、乾燥（たとえば、凍結乾燥）製剤における非還元糖の量は、約４０％〜約６０％、約４５％〜約５５％又は約５１％（ｗ／ｗ）の範囲内である。他の態様では、乾燥製剤にてタンパク質の量が約３１％（乾燥製剤のｗ／ｗ）である又は非還元糖とタンパク質の１．６：１の質量比を超える場合、乾燥（たとえば、凍結乾燥）製剤における非還元糖の量は、約５１％（乾燥製剤のｗ／ｗ）を超える。その上さらに別の態様では、スクロースは製剤で使用するための非還元糖である。
【００９４】
製剤は、所望の遊離のアミノ酸を含有することができ、それはＬ−形態、Ｄ−形態又はこれらの形態の所望の混合物であることができる。態様の１つでは、製剤に含まれ得る遊離のアミノ酸には、たとえば、ヒスチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸、セリン、リジン、トリプトファン、バリン、システイン、及びそれらの組み合わせが挙げられる。一部のアミノ酸は、製造、乾燥、凍結乾燥及び／又は保存の間での分解に対して、たとえば、水素結合、塩架橋、抗酸化特性又は疎水性相互作用を介して、又はタンパク質表面からの排除によってタンパク質を安定化することができる。アミノ酸は、等張性調節因子として作用することができ、又は製剤の粘度を下げるように作用することができる。別の態様では、ヒスチジンやアルギニンのような遊離のアミノ酸は低温保護剤及び凍結保護剤として作用することができ、製剤の成分として凍結乾燥された場合、結晶化しない。グルタミン酸やヒスチジンのような遊離のアミノ酸は、単独で又は組み合わせで、５〜７．５の範囲のｐＨにて水溶液において緩衝化剤として作用することができる。その上さらに別の態様では、製剤は、ヒスチジン、又はヒスチジン及びアルギニンを含有する。その上さらにさらなる態様では、液体製剤のための遊離のアミノ酸の濃度は、約１０ｍＭ〜約０．５Ｍ、たとえば、約１５ｍＭ〜約３００ｍＭ、約２０ｍＭ〜約２００ｍＭ、又は約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約５０ｍＭ又は約１２５ｍＭの範囲内である。その上さらにさらなる態様では、乾燥（たとえば、凍結乾燥）製剤におけるヒスチジンの量は、約１％〜約１０％（乾燥製剤のｗ／ｗ）又は約３％〜約６％（ｗ／ｗ）の範囲内である。一部の実施形態では、タンパク質の量が乾燥製剤にて約３１％（乾燥製剤のｗ／ｗ）である又はヒスチジンとタンパク質の約０．１５：１の質量比を超える場合、乾燥（たとえば、凍結乾燥）製剤におけるヒスチジンの量は、約４％（乾燥製剤のｗ／ｗ）を超える。その上さらに別の態様では、乾燥（たとえば、凍結乾燥）製剤におけるアルギニンの量は、約４％〜約２０％（乾燥製剤のｗ／ｗ）又は約１０〜約１５％（ｗ／ｗ）の範囲内である。一部の実施形態では、タンパク質の量が乾燥製剤にて約３１％（乾燥製剤のｗ／ｗ）である又はアルギニンとタンパク質の約０．４：１の質量比を超える場合、乾燥（たとえば、凍結乾燥）製剤におけるアルギニンの量は、約１３％（乾燥製剤のｗ／ｗ）を超える。ヒスチジンとアルギニンのようなアミノ酸の組み合わせの実施形態では、総アミノ酸と抗体のモル比は少なくとも２００：１、約２００：１〜約５００：１、又は少なくとも４００：１であることができる。
【００９５】
製剤は任意でさらに、少なくとも１つの界面活性剤を含有することができる。態様の１つでは、製剤に含めることができる例となる界面活性剤には、たとえば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー（プルロニック（登録商標）及びそれらの組み合わせが挙げられる。存在する場合、界面活性剤は一般に、たとえば、ビン詰め、凍結、乾燥、凍結乾燥及び／又は再構成の間、抗体の不溶性の凝集体の形成を低減する量で含められる。たとえば、乾燥前（たとえば、凍結乾燥）製剤又は再構成後の製剤における界面活性剤の濃度は一般に約０．０００１％〜約１．０％、約０．０１％〜約０．１％、たとえば、約０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８、％又は０．０９％（ｗ／ｖ）、０．０５％〜０．０７％又は０．０６％（ｗ／ｖ）である。乾燥（たとえば、凍結乾燥）製剤における界面活性剤の量は一般に、約０．０１％〜約３．０％（ｗ／ｗ）、約０．１０％〜約１．０％、たとえば、約０．１５％、０．２０％、０．２５％、０．３０％、０．３５％、０．４０％、又は０．５０％（ｗ／ｗ）である。別の態様では、界面活性剤：抗体のモル比は約１：１である。非還元糖と抗α４β７抗体の比（モル：モル）が約６００：１を超えるという条件で抗α４β７抗体は製剤にて所望の量で存在することができる。しかしながら、製剤は高濃度の抗α４β７抗体を含有することができる。たとえば、液体製剤は、少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約３０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約４０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約６０ｍｌ／ｍｌ、少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ〜約８０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体、約６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体を含むことができる。乾燥製剤（たとえば、凍結乾燥した）は重量で、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、又は約３１％又は約３２％の抗α４β７抗体を含有することができる。
【００９６】
所望であれば、製剤はさらに他の薬学上許容可能な賦形剤と同様に金属キレート剤及び／又は抗酸化剤を含むことができる。好適な金属キレート剤には、たとえば、メチルアミン、エチレンジアミン、デスフェロキサミン、トリエンチン、ヒスチジン、リンゴ酸塩、ホスホネート化合物、たとえば、エチドロン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ）等が挙げられる。好適な抗酸化剤には、たとえば、クエン酸、尿酸、アスコルビン酸、リポ酸、グルタチオン、トコフェロール、カロテン、リコペン、システイン等が挙げられる。
【００９７】
製剤は液体又は固体であることができる。液体製剤は、水又は、水・アルコール混合物のような水性／有機性混合物のような好適な水性溶媒にて調製される水溶液又は水性懸濁液であることができる。液体製剤は、約５．５〜約７．５の間、約６．０〜約７．０の間、約６．０〜約６．５の間、たとえば、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４又は６．５のｐＨを有することができる。液体製剤は室温、冷蔵（たとえば、２〜８℃）又は冷凍（たとえば、−２０℃又は−８０℃）で保存することができる。固体製剤は好適な方法で調製することができ、たとえば、凍結保護剤の添加によってケーキ又は粉末の形態であることができる。固体製剤は、経口送達用の球形又は経皮送達用のフィルムとして、たとえば、凍結乾燥、スプレー乾燥、フィルム（たとえば、経皮送達用）における風乾、液体エマルジョンとの混合及び乾燥によって、本明細書で記載されるように液体製剤を乾燥させることによって調製される。製剤が固体製剤である場合、製剤は、わずか約５％、わずか約４．５％、わずか約４％、わずか約３．５％、わずか約３％、わずか約２．５％、わずか約２％、わずか約１．５％、わずか約１％の水分を含むことができ、又は実質的に無水である。固体製剤は溶解することができ、すなわち、好適な媒体で再構成し、投与に好適な液体になることができる。固体製剤を再構成するのに好適な溶媒には、水、等張の生理食塩水、緩衝液、たとえば、リン酸緩衝化生理食塩水、リンガー（乳酸加又はデキストロース）溶液、必須無機質媒体、アルコール／水溶液、デキストロース溶液等が挙げられる。溶媒の量は、乾燥の前の量よりも高い、同じ又は低い治療用タンパク質の濃度を生じ得る。態様の１つでは、再構成された抗α４β７抗体の濃度は乾燥前の液体製剤と同じ濃度である。
【００９８】
製剤は無菌であり得るが、これは、製剤の調製の前又は後でヒト対象への投与に好適な無菌医薬製剤を生成するための当業者に既知の手順に従って達成することができる。製剤は、たとえば、乾燥前及び／又は再構成後、小さな孔を介した濾過によって、無菌処理を介して又は紫外線照射への暴露によって、液体として無菌化することができる。フィルターの孔サイズは微生物を濾過するには０．１μｍ〜０．２μｍであり、ウイルス粒子を濾過するには１０〜２０ｎｍであることができる。代わりに又はさらに、乾燥製剤は、たとえば、γ線照射に暴露することによって無菌化することができる。態様の１つでは、抗α４β７抗体液体製剤は乾燥前の濾過によって無菌化される。
【００９９】
態様の１つでは、製剤は保存に際して安定である。別の態様では、製剤は乾燥状態での保存の際、安定である。安定性は、製剤化の前後、同様に言及した温度で保存した後に、製剤における抗体の物理的安定性、化学的安定性及び／又は生物学的安定性を評価することによって調べることができる。液体製剤又は再構成した乾燥粉末の物理的な及び／又は化学的な安定性は、凝集体形成の評価（たとえば、サイズ排除（又はゲル濾過）クロマトグラフィ（ＳＥＣ）、マトリクス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析法（ＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ−ＭＳ）、分析用超遠心、光散乱法（光相関分光法、動的光散乱法（（ＤＬＳ）又は多角レーザー光散乱法（ＭＡＬＬＳ））、フローベースの顕微鏡画像化、電子インピーダンス（コールター）計数法、光不明瞭化又は他の液体粒子計数方式、（濁度を測定することによる、密度勾配遠心による及び／又は視覚検査による）；カチオン交換クロマトグラフィ（Vlasak and Ionescu, Curr. Pharm. Biotechnol. 9:468-481 (2008) and Harris et al. J. Chromatogr. B Biomed. Sci. Appl. 752:233-245 (2001)も参照）、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、たとえば、キャピラリ―法又はキャピラリ―ゾーン電気泳動を用いて電荷不均質性を評価することによる；アミノ末端又はカルボキシ末端の配列解析；質量分光測定解析；断片化した、無傷の及び多量体（たとえば、二量体、三量体等）の抗体を比較するためのＳＤＳ−ＰＡＧＥ又はＳＥＣ解析；ペプチドマップ（たとえば、トリプシン又はＬＹＳ等）；抗体の生物活性又は抗原結合機能を評価することを含む種々の異なる方法（たとえば、Analytical Techniques for Biopharmaceutical Development, Rodriguez-Diaz et al. eds. Informa Healthcare (2005)を参照）にて定性的に及び／又は定量的に評価することができる。生物活性又は抗原結合機能、たとえば、抗α４β７抗体のＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）への結合又はα４β７インテグリンを発現している細胞のＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）、たとえば、不動化ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）への結合の阻害は、技量のある医師に利用可能な種々の技法を用いて評価することができる（たとえば、 Soler et al., J. Pharmacol. Exper. Ther. 330:864-875 (2009)を参照）。
【０１００】
固体状態の製剤の安定性は、たとえば、Ｘ線粉末回析法（ＸＲＰＤ）によって結晶構造を特定すること；フーリエ変換赤外線分光法（ＦＴＩＲ）を用いて固体状態にて、抗体構造を評価すること；示差走査熱量法（ＤＳＣ、たとえば、変性を評価するため）を用いて凍結乾燥固体にて熱転移（融解、ガラス転移等）を測定することのような直接試験、及びＫａｒｌ  Ｆｉｓｈｅｒ試験によって水分含量を測定し、加水分解を介した化学的不安定性の可能性を推定することのような間接試験を含む種々の異なる方法によって定性的に及び／又は定量的に評価することもできる。乾燥製剤の水分の測定は、製剤がどのように化学的な又は物理的な分解を受けるかを示し、水分が高いほうが分解はさらに進む。
【０１０１】
安定性は、選択した温度にて選択した時間で測定することができる。態様の１つでは、（たとえば、凍結乾燥した）製剤は、約４０℃、７５％ＲＨにて少なくとも約２〜４週間、少なくとも約２ヵ月間、少なくとも約３ヵ月間、少なくとも約６ヵ月間、少なくとも約９ヵ月間、少なくとも約１２ヵ月間、又は少なくとも約１８ヵ月間安定である。別の態様では、製剤（液体又は乾燥（たとえば、凍結乾燥した））は、約５℃及び／又は２５℃及び６０％ＲＨにて少なくとも約３ヵ月間、少なくとも約６ヵ月間、少なくとも約９ヵ月間、少なくとも約１２ヵ月間、少なくとも約１８ヵ月間、少なくとも約２４ヵ月間、少なくとも約３０ヵ月間、少なくとも約３６ヵ月間、又は少なくとも約４８ヵ月間安定である。別の態様では、製剤（液体又は乾燥（たとえば、凍結乾燥した））は、約−２０℃にて少なくとも約３ヵ月間、少なくとも約６ヵ月間、少なくとも約９ヵ月間、少なくとも約１２ヵ月間、少なくとも約１８ヵ月間、少なくとも約２４ヵ月間、少なくとも約３０ヵ月間、少なくとも約３６ヵ月間、少なくとも約４２ヵ月間、又は少なくとも約４８ヵ月間安定である。さらに、液体製剤は、一部の実施形態では、凍結（たとえば、−８０℃への）及び融解の後、たとえば、１、２又は３回の凍結融解の後、安定であり得る。
【０１０２】
不安定性には、凝集（たとえば、（疎水性の又は電荷の相互作用が原因となる）非共有結合性の可溶性凝集）、共有結合性の可溶性凝集（たとえば、ジスルフィド結合の再構成／置き換え）、不溶性の凝集（液体／空気及び液体固体の界面でのタンパク質の変性が原因となる）、脱アミド化（たとえば、Ａｓｎの脱アミド化）、酸化（たとえば、Ｍｅｔの酸化）、異性化（たとえば、Ａｓｐの異性化）、変性、クリッピング／加水分解／断片化（たとえば、ヒンジ領域の断片化）、スクシンイミドの形成、Ｎ末端の伸長、Ｃ末端のプロセッシング、グリコシル化の差異等のいずれか１以上が関与し得る。
【０１０３】
安定な製剤は、抗α４β７抗体の低い免疫原性に寄与することができる。免疫原性の抗α４β７抗体は、ヒト対象又は患者においてヒト／抗ヒト抗体（ＨＡＨＡ）反応を招き得る。抗α４β７抗体に対してＨＡＨＡ反応を発症する患者は、治療の際、有害事象（たとえば、部位注入反応）を有することができ、又は抗α４β７抗体を迅速に排除することができ、治療により計画されたのよりも低い用量を生じる。抗α４β７抗体治療の早期試験の報告（Feagen et al. (2005) N. Engl. J. Med. 352:2499-2507）は、治療した患者の４４％にて８週までにヒト抗ヒト抗体が発生することを示した。この試験における抗体は液体として保存され、ポリソルベートを含有しなかった。
【０１０４】
一部の実施形態では、製剤は、あまり安定ではない製剤のＨＡＨＡの結果に比べて、ＨＡＨＡ陰性の患者の比率を患者の少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％まで増やすことができる。
【０１０５】
一部の実施形態では、抗α４β７抗体製剤は、≧５０％の主要な荷電アイソフォーム、≧５５％の主要な荷電アイソフォーム、又は６５〜７０％の主要な荷電アイソフォームを有する。他の態様では、安定な抗α４β７抗体製剤は、≦４５％の酸性荷電アイソフォーム、≦４０％の酸性荷電アイソフォーム、≦３０％の酸性荷電アイソフォーム又は２２〜２８％の酸性荷電アイソフォームを有する。さらに他の態様では、安定な抗α４β７抗体製剤は、≦２５％の塩基性アイソフォーム、≦２０％の塩基性アイソフォーム、≦１５％の塩基性アイソフォーム、約５％の塩基性アイソフォーム又は約１０％の塩基性アイソフォームを有する。態様の１つでは、安定な抗α４β７抗体製剤は、たとえば、ＣＥＸによって測定されると、≧５５％の主要アイソフォーム、≦３０％の酸性アイソフォーム及び／又は≦２０％の塩基性アイソフォームを有する。別の態様では、たとえば、ｃＩＥＦによって測定されると、≧５０％の主要アイソフォーム、≦４５％の酸性アイソフォーム及び／又は≦１０％の塩基性アイソフォームを有する。
【０１０６】
一部の態様では、抗α４β７抗体乾燥固体製剤は、≦１０％の水分、≦５％の水分又は＜２．５％の水分を有する。再構成に必要とされる時間は、≦６０分、≦５０分又は≦４０分又は≦３０分又は≦２０分である。
【０１０７】
液体製剤又は再構成後の乾燥製剤における単量体含量及び／又は凝集体含量（たとえば、二量体、三量体、四量体、五量体、オリゴマー及びさらに高次の凝集体として）は、ＳＥＣ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ、分析用超遠心、光散乱法（ＤＬＳ又はＭＡＬＬＳ）、又はナノスケールの測定、たとえば、ナノ粒子追跡解析ＮＴＡ（英国、ウィルトシャーのＮａｎｏＳｉｇｈｔ社）によって測定することができる。凝集体の解像、性状分析及び定量は、たとえば、さらに長いカラムによって又は当初の分析用ＳＥＣカラムに沿って第２以上のＳＥＣカラムを連続連結することによってＳＥＣカラム分離の長さを増すこと、光散乱によって単量体のＳＥＣ定量を補完することを含む多数の方法にて、又はＮＴＡを用いることによって達成することができる。
【０１０８】
一実施形態では、抗α４β７抗体製剤は、≧９０％の単量体抗体、≧９５％の単量体抗体、又は９７〜９９％の単量体抗体を有する。別の実施形態では、抗α４β７抗体製剤における物質の大半は、≦２０ｎｍ、≦１５ｎｍ、≦１０ｎｍ、又は約５〜約７ｎｍの平均半径を有する。態様の１つでは、抗α４β７抗体製剤はタンパク質解析によって≧８０％量の重鎖と軽鎖を有する。態様の１つでは、≧９０％の重鎖と軽鎖がある。別の態様では、抗α４β７抗体製剤は≦１０％の凝集体、≦５％の凝集体、≦２．５％の凝集体、≦１．５％の凝集体、≦１％の凝集体又は≦０．５％の凝集体を有する。別の態様では、抗α４β７抗体製剤は≧９６％の単量体及び／又は≦２．５％の凝集体を有する。さらに別の態様では、抗α４β７抗体製剤は≧９９％の単量体及び／又は≦１％の凝集体を有する。
【０１０９】
たとえば、再構成した製剤における凝集体又は溶解されない賦形剤の粒度は、光不明瞭化法（たとえば、Ｈａｃｈ  Ｕｌｔｒａ  Ａｎａｌｙｔｉｃｓ（オレゴン州、グランパス）による液体粒子計数方式（ＨＩＡＣ）、顕微鏡、コールターカウンタ、又はＢｒｉｇｈｔｗｅｌｌ（カナダ、オタワ）によるマイクロ流体工学画像化（ＭＦＩ）のようなデジタル（フローベース）顕微鏡画像化に基づく方式、又は流体画像化法（メイン州、ヤーマス）によるＦＬＯＷＣＡＭ（登録商標）画像粒子アナライザによって測定することができる。態様の１つでは、抗α４β７抗体調製物における粒度は、約３０μｍ、約２５μｍ、約１０μｍ、約５μｍ、約２μｍ、又は１μｍ以下である。粒子の量は抗体製剤ではできるだけ抑えるべきである。態様の１つでは、抗α４β７抗体製剤は、１回用量にて≧１０μｍの６０００未満の粒子及び≧２５μｍの６００未満の粒子を有する（米国薬局方Ｃｈｐ．７８８、光不明瞭化計数法；顕微鏡定量法によるそれらの量の半分）。さらに別の態様では、抗α４β７抗体製剤、たとえば、再構成された製剤の用量におけるＭＦＩ測定法によるミリリットル当たりの粒子の量は、ｍｌ当たり２〜１０μｍの粒子が約５００〜約２０００又は約１０００〜約３０００、ｍｌ当たり≧１０μｍの粒子が約５０〜約３５０、及びｍｌ当たり≧２５μｍの粒子が約０〜約５０である。
【０１１０】
一実施形態では、抗α４β７抗体製剤は、参照標準の抗α４β７抗体の約６０％〜約１４０％の結合親和性を有する。態様の１つでは、本明細書で記載される製剤における抗α４β７抗体は、参照標準の約８０％〜約１２０％の値で、たとえば、細胞（ＷＯ９８／０６２４８又は米国特許第７，１４７，８５１号）上のα４β７に結合する。別の実施形態では、抗α４β７抗体製剤は、α４β７インテグリンを発現している細胞のＭＡｄＣＡＭ、たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１、たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−Ｉｇキメラ（参照標準試料でもある米国特許出願番号２００７０１２２４０４を参照）への結合を少なくとも５０％又は少なくとも６０％阻害する能力を有する。
【０１１１】
上記で言及したように、製剤の凍結は本明細書では具体的に企図される。従って、凍結融解に際する安定性について製剤を調べることができる。その結果、液体製剤における抗体は製剤の凍結融解に際して安定であり得るし、たとえば、抗体は１、２、３、４、５回以上の凍結融解の後、安定であることができる。
【０１１２】
一部の実施形態では、製剤は、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗α４β７抗体と、緩衝化剤（たとえば、ヒスチジン）と、少なくとも９％（ｗ／ｗ）の非還元糖（たとえば、スクロース、トレハロース又はマンニトール）を含む液体製剤である。一実施形態では、製剤は、約５０〜約８０ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体と、緩衝化剤（たとえば、ヒスチジン）、遊離のアミノ酸（たとえば、アルギニン）と、少なくとも９％又は１０％（ｗ／ｗ）の非還元糖（たとえば、スクロース、トレハロース又はマンニトール）を含む。
【０１１３】
別の実施形態では、製剤は、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体と、緩衝化剤（たとえば、ヒスチジン）と、遊離のアミノ酸（たとえば、アルギニン）と、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の非還元糖（たとえば、スクロース、トレハロース又はマンニトール）を含む。そのような実施形態では、緩衝液濃度は約１５〜約７５ｍＭ、約２５〜約６５ｍＭ又は約５０ｍＭである。遊離のアミノ酸の濃度は約５０〜約２５０ｍＭ、約７５〜約２００ｍＭ、約１００〜約１５０ｍＭ又は約１２０ｍＭである。
【０１１４】
一実施形態では、製剤は、非還元糖と、抗α４β７抗体と、ヒスチジンと、アルギニンと、ポリソルベート８０の混合物を含む乾燥した固体の製剤（たとえば、凍結乾燥した製剤）であり、非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は６００：１を超える。
【０１１５】
別の実施形態では、製剤は、非還元糖と、抗α４β７抗体と、ヒスチジンと、アルギニンと、ポリソルベート８０の混合物を含む乾燥した固体の非晶性製剤（たとえば、凍結乾燥した製剤）であり、非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は６００：１を超える。
【０１１６】
一実施形態では、製剤は、非還元糖と、抗α４β７抗体と、ヒスチジンと、アルギニン及と、ポリソルベート８０を含む凍結乾燥した製剤であり、非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は６００：１を超える。
【０１１７】
一実施形態では、製剤は、非還元糖と、抗α４β７抗体と、ヒスチジンと、アルギニンと、ポリソルベート８０を含む凍結乾燥した製剤であり、製剤における非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は６００：１を超え、製剤におけるアルギニンと抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）は２５０：１を超える。
【０１１８】
一実施形態では、製剤は液体製剤であり、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体と、少なくとも１０％（ｗ／ｖ）の非還元糖と、少なくとも約１２５ｍＭの1以上の遊離のアミノ酸を含む。
【０１１９】
一実施形態では、製剤は液体製剤であり、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体と、少なくとも１０％（ｗ／ｖ）の非還元糖と、少なくとも約１７５ｍＭの1以上の遊離のアミノ酸を含む。
【０１２０】
一実施形態では、製剤は液体製剤であり、約６０ｍｇ／ｍｌ〜約８０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体と、緩衝化剤と、少なくとも約１０％（ｗ／ｗ）の糖を含む。
【０１２１】
一実施形態では、製剤は液体製剤であり、約６０ｍｇ／ｍｌ〜約８０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体と、ヒスチジンと、少なくとも約１０％（ｗ／ｗ）のスクロースを含む。
【０１２２】
一実施形態では、製剤は凍結乾燥され、バイアル１つにて単一用量として保存される。バイアルは望ましくは、それを必要とする対象に投与されるまで約２〜８℃で保存される。バイアルは（たとえば、６０ｍｇ／ｍｌ用量について）、たとえば、２０又は５０ｃｃであり得る。バイアルは、少なくとも約１２０ｍｇ、少なくとも約１８０ｍｇ、少なくとも約２４０ｍｇ、少なくとも約３００ｍｇ、少なくとも約３６０ｍｇ、少なくとも約５４０ｍｇ、又は少なくとも約９００ｍｇの抗α４β７抗体を含有し得る。態様の一つでは、バイアルは約300ｍｇの抗α４β７抗体を含む。
【０１２３】
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２１版，Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ，Ｒ．Ｅｄ．（２００５）に記載されたような１以上他の薬学上許容可能なキャリア、賦形剤又は安定剤は、それらが製剤の所望の特徴に有害に影響しないという条件で製剤に含められ得る。許容可能なキャリア、賦形剤又は安定剤は、採用される投与量及び濃度にてレシピエントに非毒性であり、それらには、追加の緩衝化剤；共溶媒；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；ＥＤＴＡのようなキレート剤；金属錯体（たとえば、Ｚｎ／タンパク質錯体）；ポリエステルのような生分解性ポリマー；及び／又はナトリウムのような塩形成の対イオンが挙げられる。
【０１２４】
α４β７抗体
製剤での使用に好適な抗α４β７抗体には、たとえば、完全なヒト抗体、マウス抗体、ウサギ抗体等のような所望の供給源からの抗体、及びたとえば、キメラ抗体、ヒト化抗体等のような所望の操作された抗体が含まれる。たとえば、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２断片のような、これらの種類の抗体のいずれかの抗原結合断片も製剤での使用に好適である。
【０１２５】
抗α４β７抗体は、α４鎖上のエピトープ（たとえば、ヒト化ＭＡｂ２１．６(Bendig et al., U.S. Pat. No. 5,840,299)）、β７鎖上のエピトープ（ＦＩＢ５０４又はヒト化誘導体（たとえば、Ｆｏｎｇらの米国特許第７，５２８，２３６号））、又はα４鎖とβ７鎖の会合によって形成される組み合わせエピトープに結合することができる。態様の１つでは、抗体はα４β７複合体上の組み合わせエピトープを結合するが、鎖が互いに会合しない限り、α４鎖又はβ７鎖上のエピトープを結合しない。α４インテグリンのβ７インテグリンとの会合は、エピトープを一緒に含む両鎖上に存在する残基を近接させることによって、又は一方の鎖、たとえば、α４インテグリン鎖又はβ７インテグリン鎖の上で、適当なインテグリンの相手の非存在下又はインテグリン活性化の非存在下では抗体結合にアクセスできない抗体結合部位を立体的に暴露することによって、組み合わせエピトープを創り出すことができる。別の態様では、抗α４β７抗体は、α４インテグリン鎖及びβ７インテグリン鎖の双方を結合するのでα４β７インテグリン複合体に対して特異的である。そのような抗体は、α４β７を結合することができるが、たとえば、α４β１を結合することはできず、及び／又はαＥβ７を結合することはできない。別の態様では、抗α４β７抗体は、Ａｃｔ−１抗体（Lazarovits, A. I. et al., J. Immunol., 133(4): 1857-1862 (1984), Schweighoffer et al., J. Immunol., 151(2): 717-729, 1993; Bednarczyk et al., J. Biol. Chem., 269(11): 8348-8354, 1994）と同じ又は実質的に同じエピトープに結合する。マウスのＡｃｔ−１モノクローナル抗体を産生するマウスのＡＣＴ−１ハイブリドーマ細胞株は、２００１年８月２２日のブタペスト条約の規定のもとで、米国０２１３９マサチューセッツ州、ケンブリッジ、Ｌａｎｄｓｄｏｗｎｅ通り４０のＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社の利益となるように、米国２０１１０−２２０９バージニア州、マナッサスのブルバード大学１０８０１のアメリカンタイプカルチャーコレクションに受入番号ＰＴＡ−３６６３で寄託された。別の態様では、抗α４β７抗体は、米国特許出願公開番号２０１０／０２５４９７５で提供されたＣＤＲを用いたヒト抗体又はα４β７結合タンパク質である。
【０１２６】
態様の１つでは、抗α４β７抗体は、そのリガンド（たとえば、粘膜アドレシン、たとえば、ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ１）、フィブロネクチン及び／又は血管アドレシン（ＶＣＡＭ））の１以上へのα４β７の結合を阻害する。霊長類のＭＡｄＣＡＭはＰＣＴ公開ＷＯ９６／２４６７３に記載されており、その教示全体が参照によって本明細書に組み入れられる。別の態様では、抗α４β７抗体は、ＶＣＡＭの結合を阻害することなく、ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ１）及び／又はフィブロネクチンへのα４β７の結合を阻害する。
【０１２７】
態様の１つでは、製剤で使用するための抗α４β７抗体は、マウスＡｃｔ−１抗体のヒト化型である。ヒト化抗体を調製する好適な方法は当該技術で周知である。一般に、ヒト化抗α４β７抗体は、マウスＡｃｔ−１抗体の３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲｓ、ＣＤＲ１、配列番号：８、ＣＤＲ２、配列番号：９及びＣＤＲ３、配列番号：１０）を含有する重鎖と好適なヒト重鎖フレームワーク領域を含有し；且つマウスＡｃｔ−１抗体の３つのＣＤＲｓ（ＣＤＲ１、配列番号：１１、ＣＤＲ２、配列番号：１２及びＣＤＲ３、配列番号：１３））を含有する軽鎖と好適なヒト軽鎖フレームワーク領域を含有するであろう。ヒト化Ａｃｔ−１抗体は、アミノ酸置換を伴って又は伴わずにコンセンサスフレームワーク領域を含む好適なヒトフレームワーク領域を含有することができる。たとえば、フレームワークアミノ酸の１以上をマウスＡｃｔ−１抗体における相当する位置でのアミノ酸のような別のアミノ酸で置き換えることができる。ヒトの定常領域又はその一部は、存在するならば、対立遺伝子変異体を含めてヒト抗体のκ又はλ軽鎖及び／又はγ（たとえば、γ１、γ２、γ３、γ４）、μ又はε重鎖に由来することができる。特定の定常領域（たとえば、ＩｇＧ１）、その変異体又は一部はエフェクター機能を誂えるように選択することができる。たとえば、変異のある定常領域（変異体）を融合タンパク質に組み入れてＦｃ受容体への結合及び／又は補体を固定する能力をできるだけ抑えることができる（see e.g., Winter et al., GB 2,209,757 B; Morrison et al., WO 89/07142; Morgan et al., WO 94/29351, Dec. 22, 1994）。Ａｃｔ−１抗体のヒト化型は、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／０６２４８及びＷＯ０７／６１６７９に記載されたが、そのそれぞれの教示全体が参照によって本明細書に組み入れられる。
【０１２８】
別の態様では、製剤で使用するための抗α４β７ヒト化抗体は、配列番号２のアミノ酸２０〜１４０を含む重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸２０〜１３１又は配列番号５のアミノ酸２１〜１３２を含む軽鎖可変領域を含む。所望であれば、好適なヒト定常領域が存在することができる。たとえば、ヒト化抗α４β７抗体は配列番号２のアミノ酸２０〜４７０を含む重鎖及び配列番号５のアミノ酸２１〜２３９を含む軽鎖を含むことができる。別の例では、ヒト化抗α４β７抗体は配列番号２のアミノ酸２０〜４７０を含む重鎖及び配列番号４のアミノ酸２０〜２３８を含む軽鎖を含むことができる。図４はヒト抗体とマウス抗体の一般的な軽鎖を比較する配列比較を示す。配列比較によって、２つのマウス残基がヒト残基に入れ替わったベドリズマブ（たとえば、化学アブストラクトサービス（ＣＡＳ、米国化学会）登録番号９４３６０９−６６−３）のヒト化軽鎖はＬＤＰ−０２の軽鎖（図３）よりもヒト型であることを説明する。加えて、ＬＤＰ−０２は、幾分疎水性で自由度の高いアラニン１１４と、やや親水性でヒドロキシル含有のスレオニン１１４及び疎水性で内向きの可能性があるバリン１１５残基を持つベドリズマブにて置き換えられる親水性部位（アスパラギン酸１１５）とを有する。
【０１２９】
抗体配列に対するさらなる置換は、たとえば、重鎖及び軽鎖のフレームワーク領域に対する変異であることができ、たとえば、配列番号１４の残基２におけるイソロイシンのバリンへの変異；配列番号１４の残基４におけるメチオニンのバリンへの変異；配列番号１５の残基２４におけるアラニンのグリシンへの変異；配列番号１５の残基３８におけるアラニンのリジンへの変異；配列番号１５の残基４０におけるアラニンのアルギニンへの変異；配列番号１５の残基４８におけるメチオニンのイソロイシンへの変異；配列番号１５の残基６９におけるイソロイシンのロイシンへの変異；配列番号１５の残基７１におけるアルギニンのバリンへの変異；配列番号１５の残基７３におけるスレオニンのイソロイシンへの変異；又はそれらの組み合わせ；重鎖ＣＤＲｓのマウスＡｃｔ−１抗体のＣＤＲｓ（ＣＤＲ１、配列番号：８、ＣＤＲ２、配列番号：９及びＣＤＲ３、配列番号：１０）による置換、及び軽鎖ＣＤＲｓのマウスＡｃｔ−１抗体の軽鎖ＣＤＲｓ（ＣＤＲ１、配列番号：１１、ＣＤＲ２、配列番号：１２及びＣＤＲ３、配列番号：１３）による置換であることができる。
【０１３０】
一部の実施形態では、製剤で使用するための抗α４β７ヒト化抗体は、配列番号２のアミノ酸２０〜１４０に対して約９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸２０〜１３１又は配列番号５のアミノ酸２１〜１３２に対して約９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。アミノ酸の配列同一性は、初期設定パラメータを用いる、たとえば、Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ方式（ウィスコンシン州、マジソンのＤＮＡＳＴＡＲ社）のような好適な配列比較アルゴリズムを用いて決定することができる。実施形態では、製剤で使用するための抗α４β７抗体は、ベドリズマブ（ＣＡＳ、米国化学会、登録番号９４３６０９−６６−３）である。
【０１３１】
他のα４β７抗体も本明細書で記載される製剤及び投与計画に使用され得る。たとえば、その全体が参照によって本明細書に組み入れられるＵＳ２０１０／０２５４９７５（Ａｍｇｅｎ社）に記載されたα４β７抗体は個体における炎症性大腸疾患を治療する製剤及び方法での使用に好適である。
【０１３２】
抗α４β７抗体は、生細胞、たとえば、培養中の細胞にて各鎖をコードする核酸配列を発現させることによって作出することができる。種々の宿主／発現ベクター系を利用して本発明の抗体分子を発現させ得る。そのような宿主／発現ベクター系は、当該コーディング配列が作られ、その後精製される媒体を表すが、適当なヌクレオチドコーディング配列で形質転換された又は形質移入された場合その場で抗α４β７抗体を発現し得る細胞を表すものではない。これらには、たとえば、抗体コーディング配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ又はコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（たとえば、大腸菌、枯草菌）；抗体コーディング配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（たとえば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ，Ｐｉｃｈｉａ）のような微生物；抗体コーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（たとえば、バキュロウイルス）を感染させた昆虫細胞系；抗体コーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（たとえば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）を感染させた又は抗体コーディング配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター（たとえば、Ｔｉプラスミド）で形質転換した植物細胞系；又は哺乳類細胞のゲノムに由来する（たとえば、メタロチオネインプロモータ）又は哺乳類ウイルスに由来する（たとえば、アデノウイルス後期プロモータ；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモータ）プロモータを含有する組換え発現構築物を抱く哺乳類細胞系（たとえば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、３Ｔ３、ＮＳ０）が挙げられるが、これらに限定されない。たとえば、ヒトのサイトメガロウイルスに由来する主要中早期遺伝子プロモータエレメントのようなベクターを併せたチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）のような哺乳類細胞は、抗体の有効な発現系である（Foecking et al., Gene 45:101 (1986); Cockett et al., Bio/Technology 8:2 (1990)）。
【０１３３】
細菌の系では、発現される抗体分子の用途によって多数の発現ベクターが有利に選択され得る。たとえば、抗体分子の医薬組成物を生成するために大量のそのようなタンパク質が製造されるべきであるなら、精製しやすい融合タンパク質生成物を高レベルで発現することを指向するベクターが望ましくてもよい。そのようなベクターには、融合タンパク質が産生されるように抗体コーディング配列をｌａｃＺコーディング領域と共にフレーム内でベクターに個々に連結し得る大腸菌発現ベクターｐＵＲ２７８（Ruther et al., EMBO J. 2:1791 (1983)）；ｐＩＮベクター（Inouye & Inouye, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109 (1985); Van Heeke & Schuster, J. Biol. Chem. 24:5503-5509 (1989)）等が挙げられるが、これらに限定されない。ｐＧＥＸベクターを使用してグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）による融合タンパク質として外来ポリペプチドも発現させ得る。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、マトリクスグルタチオン／アガロースビーズへの吸着及び結合、その後の遊離のグルタチオンの存在下での溶出によって容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローニングした標的遺伝子がＧＳＴ部分から解放できるようにトロンビン又は因子Ｘａプロテアーゼ切断部位を含むように設計される。
【０１３４】
昆虫系では、外来遺伝子を発現するベクターとしてＡｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が使用される。ウイルスはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞の中で増殖する。抗体コーディング配列を個々にウイルスの非必須領域（たとえば、ポリヘドリン遺伝子）にクローニングし、ＡｃＮＰＶプロモータ（たとえば、ポリヘドリンプロモータ）の制御下に置く。
【０１３５】
哺乳類宿主細胞では、多数のウイルスに基づく発現系が利用され得る。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合では、当該抗体コーディング配列をアデノウイルスの転写／翻訳制御複合体、たとえば、後期プロモータ及び三分節リーダー配列に連結し得る。次いで、試験管内又は生体内の組換えによってこのキメラ遺伝子をアデノウイルスのゲノムに挿入し得る。ウイルスゲノムの非必須領域（たとえば、領域Ｅ１又はＥ３）における挿入は、感染宿主にて生存可能で、抗体分子を発現することが可能である組換えウイルスを生じる（たとえば、Logan & Shenk, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:355-359 (1984)を参照）。挿入された抗体コーディング配列の効率的な翻訳には特定の開始シグナルも必要とされ得る。これらのシグナルにはＡＴＧ開始コドン及び隣接配列が含まれる。さらに、開始コドンは所望のコーディング配列のリーディングフレームと同調して挿入物全体の翻訳を確保しなければならない。これらの外因性の翻訳制御シグナル及び開始コドンは種々の起源であってもよく、天然及び合成の双方であり得る。発現の効率は適当な転写エンハンサエレメント、転写終結因子等を含むことによって高められ得る（Bittner et al., Methods in Enzymol. 153:51-544 (1987)を参照）。
【０１３６】
加えて、挿入された配列の発現を調節し、遺伝子産物を所望の特定の方式で修飾し、プロセッシングする宿主細胞株を選択し得る。タンパク質産物のそのような修飾（たとえば、グリコシル化）及びプロセッシング（たとえば、切断）はタンパク質の機能にとって重要であり得る。様々な宿主細胞がタンパク質及び遺伝子産物の翻訳後のプロセッシング及び修飾について特徴及び特定のメカニズムを有する。適当な細胞株又は宿主系を選択して発現される外来タンパク質の正しい修飾及びプロセッシングを確保する。この目的で、一次転写物の適切なプロセッシング、遺伝子産物のグリコシル化及びリン酸化について細胞機構を持つ真核宿主細胞が使用され得る。そのような哺乳類宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＮＳ０、ＨｅＬａ、ＶＥＲＹ、幼若ハムスター腎臓（ＢＨＫ）、サル腎臓（ＣＯＳ）、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、ＷＩ３８、ヒト肝細胞癌細胞（たとえば、ＨｅｐＧ２）、たとえば、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０及びＴ４７Ｄのような乳癌細胞株、並びにたとえば、ＣＲＬ７０３０及びＨｓ５７８Ｂｓｔのような正常乳腺細胞株が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３７】
様々な細胞種のグリコシル化機構は別の細胞種とは異なるグリコシル化組成を持つ抗体を作出することができ、又は細菌と同様にグリコシル化のない抗体を作出することができる。態様の１つでは、抗α４β７抗体の産生用の細胞種は、ＮＳ０細胞又はＣＨＯ細胞のような哺乳類細胞である。態様の１つでは、哺乳類細胞は、細胞のメカニズムに関与する酵素の欠失を含むことができ、当該外因性遺伝子は、たとえば、形質転換又は形質移入によって細胞に導入されるための構築物又はベクターにて置き換え酵素に操作可能に連結され得る。外因性遺伝子を伴った構築物又はベクターは、構築物又はベクターを招き入れる細胞に対して構築物又はベクターによってコードされるポリペプチドの産生を促す選択優位性を付与する。一実施形態では、ＣＨＯ細胞は、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子の欠失又は不活化を含むＤＧ４４細胞（Chasin and Urlaub (1980) PNAS USA 77:4216）である。別の実施形態では、ＣＨＯ細胞は、グルタミンシンターゼ酵素の欠失又は不活化を含むＣＨＯＫ１細胞である（たとえば、米国特許第５，１２２，４６４号又は同第５，８２７，７３９号を参照）。
【０１３８】
固体製剤
本発明の固体製剤は一般に液体製剤を乾燥することによって調製される。任意の好適な乾燥方法、たとえば、凍結乾燥又はスプレー乾燥を使用することができる。凍結乾燥には普通、製剤を保存する、出荷する及び流通させるのに使用されるであろう容器（たとえば、バイアル）にて液体製剤を乾燥させることが関与する（たとえば、Gatlin and Nail in Protein Purification Process Engineering, ed. Roger G. Harrison, Marcel Dekker Inc., 317-367 (1994)を参照）。製剤がいったん凍結されると、大気圧が下げられ、温度は、たとえば、昇華を介して凍結溶媒を除けるように調整される。凍結乾燥過程のこの工程は、一次乾燥と呼ばれることもある。所望であれば、次いで温度を上げて乾燥製剤に依然として結合する溶媒を蒸発によって除くことができる。凍結乾燥過程のこの工程は、二次乾燥と呼ばれることもある。製剤が所望の乾燥程度に達すると、乾燥過程を終了し、容器を密封する。最終的な固体製剤を「凍結乾燥製剤」又は「ケーキ」と呼ぶこともある。凍結乾燥過程は好適な機器を用いて実施することができる。好適な凍結乾燥機器は多数の商業的供給源から入手可能である（たとえば、ニューヨーク州、ストーンリッジのＳＰ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。
【０１３９】
種々の好適な装置を用いて液体製剤を乾燥して固体（たとえば、凍結乾燥した）製剤を製造することができる。一般に、凍結乾燥製剤は、その上に乾燥される液体製剤のバイアルが置かれる棚を含有する密閉チャンバーを用いて当業者によって調製される。棚の温度は冷却速度や加熱速度と同様に、チャンバー内部の圧のように制御することができる。本明細書で議論される種々の工程パラメータがこの種の装置を用いて実施される工程を指すことが理解されるであろう。当業者は本明細書で記載されるパラメータを所望であれば、他の種の乾燥装置に容易に適合させることができる。
【０１４０】
一次乾燥及び二次乾燥のために好適な温度及び真空の量は当業者によって容易に決定され得る。一般に、製剤は約−３０℃以下、たとえば、−４０℃又は−５０℃の温度で凍結される。冷却の速度は、マトリクスにおける氷結晶の量及びサイズに影響を及ぼし得る。一次乾燥は一般に凍結温度よりも約１０℃、約２０℃、約３０℃、約４０℃、又は約５０℃温かい温度で実施される。態様の１つでは、一次乾燥の条件は、製剤のガラス転移温度又は崩壊温度を下回って抗α４β７抗体を維持するように設定することができる。崩壊温度を上回ると、非晶性の凍結マトリクスが流れ（崩壊し）、タンパク質分子が硬い固体マトリクスに囲まれないかもしれない、タンパク質分子が崩壊マトリクスにて安定でないかもしれない結果となる。また、崩壊が起きるとすると、製剤は完全に乾燥しにくい可能性がある。製剤における結果的に多い水分量は、高い比率のタンパク質分解を招き得るし、品質が許容不能なレベルに低下する前に凍結乾燥製品を保存できる時間量が低下し得る。態様の１つでは、棚の温度及びチャンバーの圧は、一次乾燥の間、崩壊温度を下回る温度で製品を維持するように選択される。凍結製剤のガラス転移温度は、当該技術で既知の方法によって、たとえば、示差走査熱量法（ＤＳＣ）によって測定することができる。崩壊温度は、当該技術で既知の方法によって、たとえば、凍結乾燥顕微鏡、光学コヒーレンス断層撮影によって測定することができる。非還元糖とタンパク質の比（モル：モル）及び他の製剤成分の量はガラス転移温度及び崩壊温度に影響するであろう。一部の実施形態では、α４β７抗体製剤のガラス転移温度は、約−３５℃〜約−１０℃、約−３５℃〜約−２５℃、又は約−３５℃〜約−２９℃である。別の実施形態では、α４β７抗体製剤のガラス転移温度は、約−２９℃である。一部の実施形態では、α４β７抗体製剤のガラス転移温度は、約−３０℃、約−３１℃、約−３２℃、約−３３℃、約−３４℃、約−３５℃又は約−３６℃である。一部の実施形態では、α４β７抗体製剤の崩壊温度は、約−３０℃〜約０℃、約−２８℃〜約−２５℃、又は約−２０℃〜約−１０℃である。別の実施形態では、α４β７抗体製剤の崩壊温度は、約−２６℃である。特定の理論に束縛されるのを望まないで、上昇速度が速ければ速いほど、製品の崩壊温度は高くなる。一次乾燥工程は、溶媒の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％以上を取り除くことができる。態様の１つでは、一次乾燥工程は、抗α４β７抗体製剤から８０％を超える溶媒を取り除く。
【０１４１】
一次乾燥は棚の温度及び圧力に依存する。一次乾燥の条件は、異なる工程パラメータのもとでの凍結乾燥によって経験的に決定することができる。一次乾燥はまた製品温度に基づいて数学的にモデル化され得る。Ｒｐ及びＫνの知識と合せた質量と熱転移の方程式（Milton, et al. (1997) PDA J of Pharm Sci & Tech, 51: 7-16）によって、棚の温度と圧力及びＲｐ値で捕捉される製剤の変数のような工程の入力変数を含む入力変数の組み合わせ及び相互作用を理解するのが可能になる。これらのモデルは、崩壊温度と機器の容量による製品温度の限界に基づく効率的な工程で使用されるパラメータを決定するのに役立つ。
【数１】
2018150388.tif 000002
【数２】
2018150388.tif 000003
【０１４２】
方程式１は、容器（Ａｐ）の内側断面積に対する一次乾燥中の昇華速度（ｄｍ／ｄｔ）、氷の蒸気圧（Ｐ０）、チャンバーの圧力（Ｐｃ）及びケーキとストッパーについての面積を標準化した質量転移抵抗（Ｒｐ）に関する。昇華界面におけるＰ０は方程式２から決定することができ、Ｐ０は昇華界面での生成物氷の温度に関係し、それは、製品温度（Ｔｐ）からの近似であり、バイアルの底にて熱電対によって測定することができ、又は他の変数が決定される際の上記方程式に由来することができる。方程式３は、棚からバイアルへの熱転移速度に関係し、Ａνはバイアルの面積であり、Ｋνはバイアルの熱転移係数であり、Ｔｓは棚の温度であり、Ｔｐは製品温度である。方程式４は熱と質量の転移の方程式を結合し、ΔＨｓは昇華の熱である。
【０１４３】
一次乾燥についての方程式から分るように、棚の温度（Ｔｓ）、製品の温度（Ｔｐ）、チャンバーの圧力（Ｐｃ）、ケーキの質量転移抵抗（Ｒｐ）及び熱転移係数（Ｋν）は昇華速度に影響を及ぼすことができる。
【０１４４】
凍結後及び一次乾燥前の任意の工程はアニーリングである。この工程では、凍結乾燥機の棚温度を、短時間、たとえば、約２〜６時間、約３〜５時間、又は約４時間、製剤のガラス転移温度を上回って高め、次いで棚温度を製剤のガラス転移温度を下回って再び下げる。アニーリングを用いて充填剤を結晶化し、さらに大きなさらに均一な氷結晶を形成する。アニーリング工程は、アニーリングせずに乾燥させたケーキよりもアニーリングして乾燥させたケーキの方が大きな表面積を有するので再構成の時間に影響することができる。α４β７抗体製剤のアニーリング工程は約−３０℃〜約−１０℃、又は約−２５℃〜約−１５℃であることができる。態様の１つでは、α４β７抗体製剤のためのアニーリング温度は約−２０℃である。
【０１４５】
二次乾燥は一般に液体製剤の凍結温度を上回る温度で実施される。たとえば、二次乾燥は約１０℃、約２０℃、約３０℃、約４０℃又は約５０℃で実施することができる。態様の１つでは、二次乾燥の温度は常温、たとえば、２０〜３０℃である。二次乾燥の時間は水分量が＜５％に減るのに十分であるべきである。
【０１４６】
別の態様では、凍結乾燥サイクルには、約−４５℃での凍結と、約−２０℃でのアニーリングと、約−４５℃での再凍結と、約−２４℃及び１５０ミリトールでの一次乾燥と、約２７℃及び１５０ミリトールでの二次乾燥が含まれる。
【０１４７】
Ｒｐは、凍結ＤＰの固形分によって及びケーキの孔構造に影響を及ぼすＤＰの熱履歴（凍結、アニーリング及び再凍結の段階）によって影響される。熱履歴はまた、二次乾燥段階にも影響することができ、さらに大きな表面積は水の脱離に役立つことができる（Pikal, et al. (1990) Int. J. Pharm., 60: 203-217）。一次及び二次の凍結乾燥段階の間で制御する有用な工程パラメータは、乾燥サイクルの各段階の間での棚温度及びチャンバーの圧力であり得る。
【０１４８】
規模を大きくするには、凍結乾燥機の負荷及び固形含量が乾燥サイクルに影響し得る。一次乾燥の時間は製剤における固形含量によって影響され得る。高い固形含量では、たとえば、固体全体（賦形剤及び／又はタンパク質）の濃度が、乾燥時間が決定される製剤からの１０ｗ／ｖ％を超える、又は１５ｗ／ｖ％を超える、たとえば、５０〜１００％の変異で変化する場合、乾燥時間が影響され得る。たとえば、高い固体含量の製剤は低い固体含量の製剤よりも長い乾燥時間を有し得る。一部の実施形態では、凍結乾燥機容量の利用率は約２５〜約１００％の範囲に及ぶことができる。容量の高い負荷％では、容量の低い負荷％に比べて一次乾燥時間は２倍まで増加し得る。固体含量が高まるにつれて、異なる負荷％での一次乾燥時間の間の差異が高まる。一実施形態では、固形含量は、２０〜２５％未満であり、負荷は２５〜１００％である。
【０１４９】
バイアルのサイズは凍結乾燥の間、棚及び真空にさらされる表面積に基づいて選択することができる。乾燥時間はケーキの高さに直接比例するので、バイアルのサイズは理に適ったケーキの高さであると判定されるものに基づいて選択され得る。体積に比べて大きな直径を持つバイアルは凍結乾燥サイクルの間、効率的な熱移転のために棚との大量の接触を提供することができる。液体の体積が多い希釈抗体溶液は乾燥にさらに多くの時間を必要とするであろう。大きなバイアルほど保存し、輸送するのに高価であり、上部空間と製剤の高い比を有し、高い比率の製剤を長期保存の間、水分の分解効果にさらし得るので、バイアルのサイズと製剤の体積のバランスを取る必要がある。３００ｍｇ用量については、抗α４β７抗体製剤は、凍結乾燥の前、３ｍｌ、５ｍｌ、６ｍｌ、１０ｍｌ、２０ｍｌ、５０ｍｌ又は１００ｍｌの体積を有することができる。態様の１つでは、バイアルのサイズは３００ｍｇ用量における６０ｍｇ／ｍｌ溶液について２０ｍｌである。
【０１５０】
凍結乾燥の後、バイアルは真空下で密封される、たとえば、栓で塞がれる。或いは、密封に先立って、容器の中に気体、たとえば、乾燥空気又は窒素を入れることができる。酸化が懸念される場合、凍結乾燥チャンバーに気体を入れることができ、凍結乾燥製品の酸化を遅らす又は妨げる気体を含むことができる。態様の１つでは、気体は含酸素ではない気体、たとえば、窒素又は不活性気体、たとえば、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン又はキセノンである。別の態様では、気体は窒素又はアルゴンである。
【０１５１】
一部の実施形態では、凍結乾燥前の抗α４β７抗体製剤の体積は、投与前の再構成された溶液の体積と同じである。たとえば、凍結前約５．５ｍｌである製剤は、乾燥固体の体積を考慮する量の液体、たとえば、水又は生理食塩水を加えることによって約５．５ｍｌの体積に再構成することができる。他の実施形態では、再構成される溶液の体積とは異なる体積で抗α４β７抗体製剤を凍結乾燥することが望ましい。たとえば、抗α４β７抗体製剤を、たとえば、０．２５×、０．５×、又は０．７５×希釈溶液として凍結乾燥し、凍結乾燥前よりも７５％、半分、又は２５％少ない液体を加えることによって１×に再構成することができる。実施形態では、３００ｍｇ用量を５％スクロースにて３０ｍｇ／ｍｌ抗体溶液として凍結乾燥し、１０％スクロースにて６０ｍｇ／ｍｌ抗体溶液に再構成することができる。或いは、凍結乾燥した抗α４β７抗体製剤を凍結前の製剤よりもさらに希釈した溶液に再構成することができる。
【０１５２】
抗体製剤による治療
態様の１つでは、本発明は、たとえば、ヒトにおける疾患又は障害を治療するのに有効な量で本明細書に記載される抗α４β７抗体製剤を対象に投与することを含む、対象にて疾患又は障害を治療する方法を提供する。ヒト対象は、成人（たとえば、１８歳以上）、若者又は小児であり得る。ヒト対象は６５歳以上のヒトであり得る。代替の治療用投与計画とは対照的に、６５歳以上のヒト対象は本明細書で記載される投与計画の修正を必要とせず、本明細書に記載される従来の抗α４β７抗体製剤が投与され得る。
【０１５３】
対象は、免疫調節因子ＴＮＦ−α拮抗剤又はその組み合わせとの適切な応答を欠いていた、それに対する応答を欠如していた、又はそれによる治療に対して認容性ではなかった可能性がある。患者は、炎症性大腸疾患に対して少なくとも１つのコルチコステロイド（たとえば、プレドニゾロン）による治療を以前受けていた可能性がある。コルチコステロイドに対する不適正な応答は、毎日経口で２週間又は静脈内で１週間のプレドニゾロン３０ｍｇと同等の用量を含む少なくとも１回の４週間誘導計画の経験にもかかわらず、持続して活動性の疾患の兆候及び症状を指す。コルチコステロイドに対する応答の欠如は、毎日経口のプレドニゾロン１０ｍｇと同等の用量を下回るコルチコステロイドを徐々に減らす試みに２回失敗したことを指す。コルチコステロイドの非認容性には、クッシング症候群、骨減少症／骨粗鬆症、高血糖症、不眠症及び／又は感染の既往が挙げられる。
【０１５４】
免疫調節剤は、たとえば、経口のアザチオプリン、６−メルカプトプリン又はメソトレキセートであり得る。免疫調節剤に対する不適正な応答は、少なくとも１回の経口のアザチオプリン（≧１．５ｍｇ／ｋｇ）、６−メルカプトプリン（≧０．７５ｇ／ｋｇ）又はメソトレキセート（≧１２．５ｇ／ｋｇ）８週間の計画の経験にもかかわらず、持続して活動性の疾患の兆候及び症状を指す。免疫調節剤の非認容性には、嘔吐／吐き気、腹痛、膵炎、ＬＦＴの異常、リンパ球減少症、ＴＰＭＴ遺伝子変異及び／又は感染が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５５】
態様の１つでは、患者は、ＴＮＦ−α拮抗剤治療に対する適切な応答を欠いていた、それに対する応答を欠如していた、又はそれに対して認容性ではなかった可能性がある。ＴＮＦ−α拮抗剤は、たとえば、ＴＮＦ−αの生物活性を阻害する、好ましくはＴＮＦ−αを結合する剤、たとえば、モノクローナル抗体、たとえば、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（インフリキシマブ）、ＨＵＭＩＲＡ（アダリムマブ）、ＣＩＭＺＩＡ（セルトリズマブペコール）、ＳＩＭＰＯＮＩ（ゴリムマブ）であり、又はＥＮＢＲＥＬ（エタネルセプト）のような循環受容体融合タンパク質である。ＴＮＦ−α拮抗剤に対する不適正な応答は、インフリキシマブ５ｍｇ／ｋｇＩＶの少なくとも２週間離して２用量；８０ｍｇアダリムマブの１回皮下投与、その後少なくとも２週間離して４０ｍｇの単回投与；又は４００ｍｇのセルトリズマブペコールの皮下投与、少なくとも２週間離して２用量の少なくとも１回の４週間誘導計画の経験にもかかわらず、持続して活動性の疾患の兆候及び症状を指す。ＴＮＦ−α拮抗剤に対する応答の欠如は、前の臨床的利益に続く維持投与の間での症状の再発を指す。ＴＮＦ−α拮抗剤の非認容性には、点滴関連の反応、脱髄、鬱血性心不全及び／又は感染が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５６】
寛解の維持の喪失は、潰瘍性大腸炎患者について本明細書で使用されるとき、Ｍａｙｏスコアで少なくとも３点及び改変Ｂａｒｏｎスコアで少なくとも２点の上昇を指す。
【０１５７】
別の態様では、本発明は、（１）試験管内及び／又は生体内でα４β７インテグリンを結合することができ、（２）α４β７インテグリンの活性又は機能、たとえば、（ａ）結合機能（たとえば、α４β７インテグリンのＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ１）、フィブロネクチン及び／又はＶＣＡＭ−１に結合する能力）及び／又は（ｂ）組織における白血球の動員及び／又は蓄積を含む白血球の浸潤（たとえば、腸管粘膜組織へのリンパ球の移動を阻害する能力）を調節することができる抗α４β７抗体製剤を提供する。一実施形態では、製剤中の抗体は、α４β７インテグリンを結合することができ、そのリガンド（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ１）、ＶＣＡＭ−１、フィブロネクチン）の１以上へのα４β７インテグリンの結合を阻害することができ、それによって組織への白血球の浸潤（組織における白血球の動員及び／又は蓄積を含む）を阻害する。別の実施形態では、製剤中の抗体は、α４β７インテグリンを結合することができ、そのリガンド（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ１）、ＶＣＡＭ−１、フィブロネクチン）の１以上へのα４β７インテグリンの結合を選択的に阻害することができ、それによって組織への白血球の浸潤（組織における白血球の動員及び／又は蓄積を含む）を阻害する。そのような抗α４β７抗体製剤は、試験管内及び／又は生体内で消化管関連の組織、リンパ系臓器又は白血球（特にＴ細胞又はＢ細胞のようなリンパ球）を含む粘膜組織にて血管内皮細胞へのα４β７インテグリンを持つ細胞の細胞接着を阻害することができる。さらに別の実施形態では、本発明の抗α４β７抗体製剤は、α４β７のＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ１）及び／又はフィブロネクチンとの相互作用を阻害することができる。その上さらに別の実施形態では、本発明の抗α４β７抗体製剤は、たとえば、α４β７のＶＣＡＭとの相互作用を阻害することなく選択的にα４β７のＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ１）及び／又はフィブロネクチンとの相互作用を阻害することができる。
【０１５８】
本発明の抗α４β７抗体製剤を用いて、α４β７インテグリンの結合機能及び／又は白血球（たとえば、リンパ球、単球）の浸潤機能を調節する（たとえば、阻害する（低減する又は妨げる）ことができる。たとえば、白血球（たとえば、リンパ球、単球）の組織、特に分子ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ１）を発現している組織への浸潤（組織における白血球の動員及び／又は蓄積を含む）に関連する疾患の治療における方法に従って、リガンド（すなわち、１以上のリガンド）へのα４β７インテグリンの結合を阻害するヒト化免疫グロブリンを投与することができる。
【０１５９】
そのような疾患を治療するために、有効量の本発明の抗α４β７抗体製剤が個体（たとえば、ヒト又は他の霊長類のような哺乳類）に投与される。たとえば、消化管（消化管関連の内皮細胞を含む）、他の粘膜組織又は分子ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ１）を発現している組織（たとえば、小腸及び大腸の固有層の小静脈のような消化管関連の組織、及び乳腺（たとえば、授乳している乳腺）に関連する疾患を含む炎症性疾患を本方法に従って治療することができる。同様に、ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ１）を発現している細胞への白血球の結合の結果としての組織への白血球の浸潤に関連する疾患を有する個体を本発明に従って治療することができる。
【０１６０】
一実施形態では、従って治療することができる疾患には、たとえば、潰瘍性大腸炎、クローン病、回腸炎、セリアック病、非熱帯性スプルー、血清陰性の関節症に関連する腸疾患、顕微鏡的又はコラーゲン性の大腸炎、好中球性胃腸炎、又は直腸結腸切除後に生じる回腸嚢炎、及び回腸肛門吻合のような炎症性大腸疾患（ＩＢＤ）が挙げられる。好ましくは、炎症性大腸疾患はクローン病又は潰瘍性大腸炎である。潰瘍性大腸炎は、中程度から重度の活動性潰瘍性大腸炎であり得る。治療は、中程度から重度の活動性潰瘍性大腸炎で苦しんでいる患者にて粘膜治癒を生じ得る。治療はまた患者によるコルチコステロイドの使用の低減、排除又は低減と排除も生じ得る。
【０１６１】
膵炎及びインスリン依存性の糖尿病は本発明の製剤を用いて治療することができる他の疾患である。ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ１）は、ＢＡＬＢ／ｃ及びＳＪＬマウスと同様にＮＯＤ（非肥満糖尿病）に由来する膵外分泌腺における一部の血管によって発現されることが報告されている。ＭＡｄＣＡＭの発現は報告によれば、ＮＯＤマウスの膵臓の炎症を起こした島における内皮細胞上に誘導され、ＭＡｄＣＡＭは、膵島炎の早期段階でＮＯＤの島内皮によって発現される優勢なアドレシンであった（Hanninen, A., et al., J. Clin. Invest., 92: 2509-2515 (1993)）。抗ＭＡｄＣＡＭ抗体又は抗α４β７抗体によるＮＯＤマウスの処理は、糖尿病の発症を妨げた（Yang et al., Diabetes, 46:1542-1547 (1997)）。さらに、島内でのα４β７を発現するリンパ球の蓄積が認められ、ＭＡｄＣＡＭ−１が炎症を起こした島の血管への（Hanninen, A., et al., J. Clin. Invest., 92: 2509-2515 (1993)）又はマントル細胞リンパ腫における消化管への（Geissmann et al., Am. J. Pathol., 153:1701-1705 (1998)）α４β７を介したリンパ腫細胞の結合に関与するとみなされた。
【０１６２】
本発明の製剤を用いて治療することができる粘膜組織に関連する炎症性疾患の例には、胆嚢炎、胆管炎（Adams and Eksteen Nature Reviews 6:244-251 (2006) Grant et al., Hepatology33:1065-1072 (2001)）、たとえば、原発性硬化性胆管炎、たとえば、腸のベーチェット病、又は胆管周囲炎（胆管及び肝臓の周囲の組織）、及び移植片対宿主病（たとえば、消化管にて（たとえば、骨髄移植後）（Petrovic et al. Blood103:1542-1547 (2004)）が挙げられる。クローン病で見られるように、炎症は粘膜表面を越えて広がることが多いので、たとえば、サルコイドーシス、慢性胃炎、たとえば、自己免疫性胃炎（Katakai et al., Int. Immunol., 14:167-175 (2002)）及び他の特発性の状態のような慢性の炎症性疾患は治療を受け入れることができる。
【０１６３】
本発明は、粘膜組織への白血球の浸潤を阻害する方法に関する。本発明はまた癌（たとえば、リンパ腫のようなα４β７陽性腫瘍）を治療する方法にも関する。本発明の製剤を用いて治療することができる粘膜組織に関連する炎症性疾患の他の例には、乳腺炎（乳腺）及び過敏性腸症候群が挙げられる。
【０１６４】
その病因がα４β７とのＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）の相互作用を利用する疾患又は病原体は、本明細書で記載される製剤における抗α４β７抗体によって治療することができる。そのような疾患の例にはたとえば、ヒト免疫不全ウイルス（たとえば、ＷＯ２００８／１４０６０２を参照）が原因で起きる免疫不全障害が挙げられる。
【０１６５】
本発明の製剤は、α４β７がそのリガンドに結合するのを阻害するのに有効な量で投与される。治療法については、有効な量は、所望の治療（予防を含む）効果を達成するのに十分であろう（たとえば、α４β７インテグリンが介在する結合及び／又はシグナル伝達を低減し又は妨げ、それによって白血球の接着及び浸潤及び／又は関連する細胞性の応答を阻害するのに十分な量）。有効な量、たとえば、α４β７インテグリンの飽和、たとえば、中和を維持するのに十分な力価の抗α４β７抗体は、炎症性大腸疾患において臨床的な応答又は寛解を誘導することができる。本発明の製剤は単位用量又は複数回用量で投与することができる。投与量は当該技術で既知の方法によって決定することができ、たとえば、個体の年齢、感受性、認容性及び全体的な健康状態に左右され得る。投与様式の例には、たとえば、鼻内又は吸入又は経皮の投与のような局所経路、たとえば、補給チューブや座薬を介した経腸経路、及びたとえば、静脈内、筋肉内、皮下、動脈内、腹腔内又は硝子体内の投与のような非経口経路が挙げられる。抗体の好適な投与量は、治療当たり約０．１ｍｇ／体重ｋｇ〜約１０．０ｍｇ／体重ｋｇ、たとえば、約２ｍｇ／ｋｇ〜約７ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇ、又は約３．５〜約５ｍｇ／ｋｇであり得る。特定の実施形態では、投与される用量は、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、又は約１０ｍｇ／ｋｇである。
【０１６６】
たとえば、抗α４β７抗体の再構成された抗体の希釈（たとえば、生理食塩水又は５％デキストロース点滴系にて）の後の最終投与形態は、投与のための約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌであることができる。最終投与形態は、１．０ｍｇ／ｍｌ〜約１．４ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約１．３ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約１．２ｍｇ／ｍｌ、約１．０〜約１．１ｍｇ／ｍｌ、約１．１ｍｇ／ｍｌ〜約１．４ｍｇ／ｍｌ、約１．１ｍｇ／ｍｌ〜約１．３ｍｇ／ｍｌ、約１．１ｍｇ／ｍｌ〜約１．２ｍｇ／ｍｌ、約１．２ｍｇ／ｍｌ〜約１．４ｍｇ／ｍｌ、約１．２ｍｇ／ｍｌ〜約１．３ｍｇ／ｍｌ又は約１．３ｍｇ／ｍｌ〜約１．４ｍｇ／ｍｌの間の濃度であり得る。最終投与形態は、約０．６ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、１．１ｍｇ／ｍｌ、約１．２ｍｇ／ｍｌ、約１．３ｍｇ／ｍｌ、約１．４ｍｇ／ｍｌ、約１．５ｍｇ／ｍｌ、約１．６ｍｇ／ｍｌ、約１．８ｍｇ／ｍｌ又は約２．０ｍｇ／ｍｌの濃度であり得る。一実施形態では、総用量は１８０ｍｇである。別の実施形態では、総用量は３００ｍｇである。３００ｍｇの抗α４β７抗体の用量を投与のために２５０ｍｌの生理食塩水又は５％のデキストロース溶液にて希釈することができる。
【０１６７】
一部の態様では、投与計画は２つの相、誘導相及び維持相を有する。誘導相では、たとえば、抗体又はその抗原結合断片に対する免疫寛容を誘導すること又は臨床な応答を誘導すること及び炎症性大腸疾患の症状を改善することのような特定の目的に好適な有効量の抗体又はその抗原結合断片を迅速に提供するような方法で、抗体又はその抗原結合断片が投与される。患者は、初めて抗α４β７抗体によって治療される場合、抗α４β７抗体療法以来、たとえば、３ヵ月を超えて、４ヵ月を超えて、６ヵ月を超えて、９ヵ月を超えて、１年を超えて、１８ヵ月を超えて又は２年を超えて長い間治療を受けていない場合、又は抗α４β７抗体の維持相の間に、炎症性大腸疾患の症状の再発、たとえば、疾患の寛解からの再発があれば、誘導相の治療を受けることができる。一部の実施形態では、誘導相の計画は、維持計画の間で維持される平均定常状態のトラフ血清濃度よりも高い平均トラフ血清濃度、たとえば、次の用量の直前の濃度を生じる。
【０１６８】
維持相では、抗体又はその抗原結合断片は、誘導療法で達成された安定した抗体又はその抗原結合断片のレベルによる応答を継続するような方法で投与される。維持計画は症状の再発又は炎症性大腸疾患の再発を防ぐことができる。維持計画は、たとえば、単純な投与計画又は治療のための外来訪問が頻繁ではないなどのような患者に利便性を提供することができる。一部の実施形態では、維持計画には、低用量、少ない投与、自己投与及び前述の組み合わせから成る群から選択される戦略による、たとえば、本明細書で記載される製剤中の抗α４β７抗体又はその抗原結合断片の投与が含まれる。
【０１６９】
一実施形態では、たとえば、治療法の誘導相の間、投与計画は、ヒト患者における炎症性大腸疾患の寛解を誘導するために本明細書で記載される製剤における有効量の抗α４β７抗体又は抗原結合断片を提供する。一部の実施形態では、有効量の抗α４β７抗体は、誘導相の終了までに約５μｇ／ｍｌ〜約６０μｇ／ｍｌ、約１５μｇ／ｍｌ〜約４５μｇ／ｍｌ、約２０μｇ／ｍｌ〜約３０μｇ／ｍｌ、又は約２５μｇ／ｍｌ〜約３５μｇ／ｍｌの抗α４β７抗体の平均トラフ血清濃度を達成するのに十分である。誘導相の持続時間は、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、又は約８週間の治療であり得る。一部の実施形態では、誘導計画は、たとえば、本明細書で記載される製剤における抗α４β７抗体又はその抗原結合断片の高用量、頻繁な投与、及び高用量と頻繁な投与の組み合わせから成る群から選択される戦略を利用することができる。誘導投与は、１回又は１回を超える複数投与、たとえば、少なくとも２回投与であり得る。誘導相の間、用量は１日１回、２日に１回、週に２回、週に１回、１０日に１回、２週間に１回又は３週間に１回投与することができる。一部の実施形態では、誘導用量は、治療の最初の２週間以内に抗α４β７抗体によって投与される。一実施形態では、誘導投与は、治療の開始（０日目）で１回及び治療の開始後約２週間で１回であり得る。別の実施形態では、誘導相の持続時間は６週間である。別の実施形態では、誘導相の持続時間は６週間であり、最初の２週間に複数の誘導用量が投与される。
【０１７０】
一部の実施形態では、たとえば、重度の炎症性大腸疾患の患者（たとえば、抗ＴＮＦ−α療法が上手く行かなかった患者）の治療を開始する場合、誘導相は、軽度又は中程度の患者よりも長い持続時間を有する必要がある。一部の実施形態では、重度の患者の誘導相は、少なくとも６週間、少なくとも８週間、少なくとも１０週間、少なくとも１２週間、又は少なくとも１４週間の持続時間を有することができる。一実施形態では、重度疾患の患者のための誘導投与計画は、０週目での投与（治療の開始）、２週目の投与及び６週目の投与を含むことができる。別の実施形態では、重度疾患の患者のための誘導投与計画は、０週目での投与（治療の開始）、２週目の投与、６週目の投与及び１０週目の投与を含むことができる。
【０１７１】
一実施形態では、たとえば、治療法の維持相の間、投与計画は、平均定常状態トラフ血清濃度、たとえば、約５〜約２５μｇ／ｍＬ、約７〜約２０μｇ／ｍＬ、約５〜約１０μｇ／ｍＬ、約１０〜約２０μｇ／ｍＬ、約１５〜約２５μｇ／ｍＬ又は約９〜約１３μｇ／ｍＬの抗α４β７抗体の次の投与直前のプラトー濃度を維持する。別の実施形態では、投与計画は、たとえば、治療法の維持相の間、約２０〜約３０μｇ／ｍＬ、約２０〜約５５μｇ／ｍＬ、約３０〜約４５μｇ／ｍＬ、約４５〜約５５μｇ／ｍＬ又は約３５〜約４０μｇ／ｍＬの抗α４β７抗体の平均定常状態トラフ血清濃度を維持する。
【０１７２】
用量は、１週当たり1回、２週ごとに１回、３週ごとに１回、４週ごとに１回、６週ごとに１回、８週ごとに１回、又は１０週ごとに１回投与することができる。さらに高い又は頻繁な用量、たとえば、１週当たり1回、２週ごとに１回、３週ごとに１回、４週ごとに１回は、活動性疾患の寛解を誘導するために又は新しい患者を治療するために、たとえば、抗α４β７抗体に対して寛容を誘導するために有用であり得る。頻繁ではない用量、たとえば、４週ごとに１回、５週ごとに１回、６週ごとに１回、８週ごとに１回、又は１０週ごとに１回の用量は、予防療法のために、たとえば、慢性疾患の患者で寛解を維持するために有用であり得る。態様の１つでは、治療計画は、約０日目、約２週目、約６週目及びその後４又は８週ごとの治療である。一実施形態では、維持投薬計画には８週ごとの投与が含まれる。８週ごとに１回の投与の維持投薬計画を受けている患者が１以上の疾患の症状の再来を経験する、たとえば、再発する実施形態では、投与回数を、たとえば、４週ごとに１回に上げることができる。
【０１７３】
投薬は約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間又は約４０分間で患者に投与することができる。
【０１７４】
投与計画は患者の炎症性大腸疾患において臨床的な応答及び臨床的な寛解を誘導するために最適化することができる。一部の実施形態では、投与計画は治療を受けている患者の脳脊髄液にてＣＤ４とＣＤ８の比を変えない。
【０１７５】
一部の態様では、長く続く臨床的な寛解、たとえば、治療の開始後６ヵ月又は１年以内で担当医との少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回の外来を介して持続する臨床的な寛解は最適化された投与計画によって達成され得る。
【０１７６】
一部の態様では、長く続く臨床的な応答、たとえば、治療の開始後少なくとも６ヵ月、少なくとも９ヵ月、少なくとも１年持続する臨床的な応答は最適化された投与計画によって達成され得る。
【０１７７】
一実施形態では、投与計画は、３００ｍｇの初回投与、初回投与の約２週間後の３００ｍｇの第２の後続投与、初回投与の約６週間後の３００ｍｇの第３の後続投与、その後、第３の後続投与後４週ごと又は８週ごとの第４の後続投与を含む。
【０１７８】
一部の実施形態では、治療の方法、用量又は投与計画は、患者が抗α４β７抗体に対するＨＡＨＡ反応を発生する可能性を低減する。たとえば、抗α４β７抗体に反応性である抗体によって測定されるようなＨＡＨＡの発生は、抗α４β７抗体のクリアランスを高めることができ、たとえば、抗α４β７抗体の血清濃度を下げることができ、たとえば、α４β７インテグリンに結合した抗α４β７抗体の数を減らすので、治療効果を下げてしまう。一部の実施形態では、ＨＡＨＡを防ぐために、その後に維持計画が続く誘導計画によって患者を治療することができる。一部の実施形態では、誘導計画と維持計画の間には休止期間はない。一部の実施形態では、誘導計画は複数用量の抗α４β７抗体を患者に投与することを含む。ＨＡＨＡを防ぐために、抗α４β７抗体による治療法を開始する場合、高い初回投与、たとえば、少なくとも１．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ又は約２〜約６ｍｇ／ｋｇ、又は頻繁な初回投与、たとえば、ほぼ１週間当たり１回、ほぼ２週ごとに１回又はほぼ３週ごとに１回の標準用量で患者を治療することができる。一部の実施形態では、治療方法は、患者の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％をＨＡＨＡ陰性として維持する。他の実施形態では、治療方法は、少なくとも６週間、少なくとも１０週間、少なくとも１５週間、少なくとも６ヵ月間、少なくとも１年間、少なくとも２年間、又は治療法の持続期間について患者をＨＡＨＡ陰性として維持する。一部の実施形態では、患者又はＨＡＨＡを発生している患者の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％又は少なくとも６０％は抗α４β７抗体の低力価、たとえば、≦１２５を維持する。実施形態では、治療方法は、患者の少なくとも７０％を抗α４β７抗体による治療法を開始した後少なくとも１２週間、ＨＡＨＡ陰性として維持する。
【０１７９】
製剤は、単独で又は別の剤と併用して個体（たとえば、ヒト）に投与され得る。本発明の製剤は、追加の剤の投与の前、それと共に、又はその後投与することができる。一実施形態では、α４β７インテグリンのそのリガンドへの結合を阻害する１を超える製剤が投与される。そのような実施形態では、剤、たとえば、抗ＭＡｄＣＡＭ又は抗ＶＣＡＭ−１モノクローナル抗体のようなモノクローナル抗体を投与することができる。別の実施形態では、追加の剤はα４β７経路とは異なる経路における白血球の内皮リガンドへの結合を阻害する。そのような剤は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体９（ＣＣＲ９）を発現するリンパ球の胸腺が発現するケモカイン（ＴＥＣＫ又はＣＣＬ２５）又はＬＦＡ−１の細胞内接着分子（ＩＣＡＭ）への結合を阻害する剤への結合を阻害することができる。たとえば、抗ＴＥＣＫ抗体又は抗ＣＣＲ９抗体又はＰＣＴ公開ＷＯ０３／０９９７７３又はＷＯ０４／０４６０９２で開示された阻害剤のような小分子ＣＣＲ９阻害剤、又は抗ＩＣＡＭ−１抗体、又はＩＣＡＭの発現を妨げるオリゴヌクレオチドが、本発明の製剤に加えて投与される。さらに別の実施形態では、追加の有効成分（たとえば、たとえば、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、５−アミノサリチル酸含有抗炎症剤のような抗炎症性化合物、別の非ステロイド性抗炎症性化合物、ステロイド性抗炎症性化合物、又はＩＢＤの制御のために一般に投与される抗生剤（たとえば、シプロフロキサシン、メトロニダゾール）、又は他の生物剤（たとえば、ＴＮＦα拮抗剤））を本発明の製剤と併用して投与することができる。
【０１８０】
実施形態では、一緒に投与される薬剤の用量は、抗α４β７抗体を含む製剤による治療期間の間、経時的に減らすことができる。たとえば、抗α４β７抗体製剤による治療の開始時、又はその前にステロイド（たとえば、プレドニゾン、プレドニゾロン）で治療されていた患者は、抗α４β７抗体製剤による治療の早ければ６週間で開始するステロイドの用量を減らす投薬計画を受けることになる。ステロイドの用量は、当初の薬量漸減の４〜８週以内で約２５％、抗α４β７抗体製剤による治療の間の薬量漸減の約８〜１２週で５０％及び約１２〜１６週で７５％減らされるであろう。態様の１つでは、抗α４β７抗体製剤による治療の約１６〜２４週までにステロイド投与は排除することができる。別の例では、抗α４β７抗体製剤による治療の開始時、又はその前に６−メルカプトプリンのような抗炎症性化合物で治療されていた患者は、上記で言及したようにステロイド投与についての薬量漸減計画に類似する抗炎症性化合物の用量を低下させる投薬計画を受けることになる。
【０１８１】
一実施形態では、方法は有効量の本発明の製剤を患者に投与することを含む。製剤が固体、たとえば、乾燥状態であるならば、投与の過程は製剤を液体状態に変換する工程を含むことができる。態様の１つでは、注射、たとえば、静脈内、筋肉内又は皮下の注射で使用するために、たとえば、上述のような液体によって乾燥製剤を再構成することができる。別の態様では、固体の又は乾燥した製剤を、たとえば、貼付剤、クリーム、エアゾール又は座薬にて局所に投与することができる。
【０１８２】
本発明は、分子ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）を発現している組織の白血球浸潤に関連する疾患を治療する方法にも関する。方法は、それを必要とする患者に有効量の本発明の抗α４β７抗体製剤を投与することを含む。実施形態では、疾患は移植片対宿主病である。一部の実施形態では、疾患は、分子ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）を発現している消化管関連の内皮へのα４β７インテグリンを発現している白血球の結合の結果としての組織の白血球浸潤に関連する疾患である。他の実施形態では、疾患は胃炎（たとえば、好中球性胃炎又は自己免疫性胃炎）、膵炎、又はインスリン依存性糖尿病である。さらに他の実施形態では、疾患は、胆嚢炎、胆管炎又は胆管周囲炎である。
【０１８３】
本発明はまた、患者において炎症性大腸疾患を治療する方法にも関する。一実施形態では、方法は有効量の本発明の抗α４β７抗体製剤を患者に投与することを含む。一部の実施形態では、炎症性大腸疾患は潰瘍性大腸炎又はクローン病である。他の実施形態では、炎症性大腸疾患はセリアック病、血清陰性の関節症に関連する腸疾患、顕微鏡的又はコラーゲン性の大腸炎、胃腸炎（たとえば、好中球性胃腸炎）、又は回腸嚢炎である。
【０１８４】
一部の実施形態では、抗α４β７抗体による治療はＣＤ４：ＣＤ８リンパ球の比を変えない。ＣＤ４：ＣＤ８の比は血液、リンパ節吸引液及び脳脊髄液（ＣＳＦ）にて測定することができる。健常な個体におけるＣＳＦのＣＤ４＋：ＣＤ８＋のリンパ球の比は通常約１以上である（Svenningsson et al., J. Neuroimmunol. 1995;63:39-46; Svenningsson et al., Ann Neurol. 1993; 34:155-161）。免疫調節剤はＣＤ４：ＣＤ８の比を１未満に変化させることができる。
【０１８５】
製造物品
別の態様では、本発明は、本発明の医薬製剤を含有し、使用のための指示書を提供する製造物品である。製造物品は容器を含む。好適な容器には、たとえば、ビン、バイアル（たとえば、二重チャンバーバイアル、針付き又は針なしの液体製剤のバイアル、針付き又は針なしの再構成液のバイアル付き又はなしの固体製剤のバイアル）、シリンジ（たとえば、二重チャンバーシリンジ、事前負荷したシリンジ）及び試験管が挙げられる。容器は、たとえば、ガラス、金属又はプラスチックのような種々の物質から形成され得る。容器は、製剤とその上の又はそれに関連するラベルを保持し、容器は使用のための指示を示し得る。別の実施形態では、製剤は自己投与のために調製され、及び／又は自己投与のための指示書を含有することができる。態様の１つでは、製剤を保持する容器は単回使用バイアルであり得る。別の態様では、製剤を保持する容器は複数回使用バイアルであってもよく、それは再構成された製剤の１を超える部分を用いて製剤の反復投与（たとえば、２〜６回の投与）を可能にする。製造物品はさらに、他の緩衝液、希釈液、充填剤、針、シリンジ、前の項で言及した使用のための指示書を伴った添付文書を含む、商業的な見地及びユーザーの見地から望ましい他の物質を含み得る。
【０１８６】
臨床的な及び質的な解析
別の態様では、本発明は医薬製剤が製品の質的基準を満たすことを判定する方法である。方法は、製剤を調べ、外見を評価すること、再構成時間を確定すること、凍結乾燥製剤の水分含量を確定すること、凍結乾燥製剤における凝集体を測定すること、断片化を測定すること、酸化／脱アミド化を測定すること、任意で生物活性及び効能を測定することを含む凍結乾燥した医薬製剤（たとえば、ヒト化抗α４β７抗体）の評価を含み、所定の基準の達成は製品が臨床用途に適応されることを明示する。
【０１８７】
許容できる質的レベルには、≦５．０％の水分、≦４０分の再構成時間、ｐＨ６．３±０．３の再構成液、５４．０〜６６．０ｍｇ／ｍｌの抗体濃度、≧５５．０％のＣＥＸによる主要アイソフォーム、≧９６．０％のＳＥＣによる単量体、≦２．５％の高分子量（凝集体）、≧９０％のＳＤＳ−ＰＡＧＥによるＨ＋Ｌ鎖、６０〜１４０％の参照標準接着が挙げられる。
【０１８８】
以下の実施例を参照することによって本発明はさらに完全に理解されるであろう。しかしながら、それらは本発明の範囲を限定するとして解釈されるべきではない。文献及び特許の引用はすべて参照によって本明細書に組み入れられる。
【０１８９】
製剤を作製するための開発プロトコール
Ａ．抗α４β７抗体溶液
【０１９０】
凍結した高濃度の抗α４β７抗体調製物（ベドリズマブ、５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、０．０６％のポリソルベート８０、ｐＨ６．３）のビンを室温にて１６〜２４時間融解する。溶解したビンをステンレススチールの配合容器にプールし、混合する。次いで調製物を希釈緩衝液Ａ（５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、０．０６％のポリソルベート８０、ｐＨ６．３）によって８０ｍｇ／ｍｌのベドリズマブに希釈し、混合する。次いでスクロースを含有する希釈緩衝液Ｂ（５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、４０％のスクロース、０．０６％のポリソルベート８０、ｐＨ６．３）で調製物を希釈することによってスクロースを加える。この工程は、抗α４β７抗体調製物を６０ｍｇ／ｍｌのベドリズマブ、５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、１０％のスクロース、０．０６％のポリソルベート８０、ｐＨ６．３の液体製剤に希釈する。
【０１９１】
Ｂ．凍結乾燥
５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、０．０６％のポリソルベート８０、１０％のスクロース、ｐＨ６．３における６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体製剤をバイアル当たり５．５２ｍｌでストッパー付きの２０ｍｌガラスバイアルに充填し、凍結乾燥位置に置く。凍結乾燥機にて約２０℃に設定した棚にバイアルを装着する。バイアルをすべて装着し、ドアを閉めた後、棚温度を約−４５℃に下げて溶液を凍結する。この温度で３時間の後、アニーリングのために棚の温度を−２０℃に上げる。４時間アニーリングした後、棚の温度を約−４５℃に下げて溶液を再び凍結する。この温度でバイアルを平衡化した後、チャンバーから空気を排出する。圧力が１５０ミリトールになると、棚温度を一次乾燥温度、約−２４℃に徐々に上げる。一次乾燥は結晶氷すべてがバイアルから昇華するまで進行する。次いで二次乾燥のために水分が凍結乾燥製剤のほぼ２．５％未満になるまで棚温度を１６時間２７℃に上げる。二次乾燥が完了すると、常圧に達するまで窒素気体をチャンバーに充填し戻す。バイアルを栓で塞ぎ、凍結乾燥機から取り出す。
【０１９２】
Ｃ．凍結乾燥した抗α４β７抗体の保存及び使用
抗α４β７抗体の凍結したバイアルを−７０℃、−２０℃、２〜８℃又は２５℃にて所望の時間保存する。使える状態である場合、バイアルを室温に平衡化する。次いで、２１Ｇの針を用いて注射用水（「ＷＦＩ」）を含有するシリンジでバイアルの内容物を再構成する。ＷＦＩの量は再構成した抗体溶液の最終体積が凍結乾燥前の溶液の体積と同一であるように決定する。５．５２ｍｌの凍結前の体積については、４．８ｍｌのＷＦＩを加える。バイアルを穏やかに回転させ、次いで１０〜３０分間保持して製剤を再構成させ、次いでシリンジを用いて抗体溶液を取り出し、患者へのＩＶバッグ又はＩＶ点滴に添加する。
【実施例】
【０１９３】
例示
実施例１
凍結乾燥した製剤にて％糖及びアミノ酸を変化させることについての比較データ
実験アプローチの設計を行って糖（スクロース及びマンニトール）とタンパク質のモル比、アルギニンとタンパク質のモル比、及びヒスチジン緩衝液のモル量を変える効果を調べた。ヒスチジン及びアルギニンは凍結乾燥工程の間結晶化しないことが知られており、この点でこれらは低温保護剤又は凍結保護剤となっている。１．５ｍｌの製剤を５ｍｌのバイアルに充填し、凍結乾燥し、−３０℃、１５０ミリトールで一次乾燥し、２０℃、１５０ミリトールで二次乾燥した。様々な保存条件の後、１．５ｍｌに再構成した凍結乾燥製剤の安定性を表１〜３（２つの実験の６０ｍｇ／ｍｌの結果を編集する）に示す。図６Ａは、４０℃で保存し、ｐＨ及び糖とアルギニンのモル比を変化させた場合の単量体比率、凝集体比率及び主要アイソフォーム比率における変化についての予測モデルを示す。製剤の安定性は、低ｐＨで（糖＋アルギニン）とタンパク質のモル比が高い場合最良だった。調べたヒスチジンのモル量では、ヒスチジンは製剤の安定性に影響しなかった。製剤はすべて保存中１〜２％の水分を有した。
【０１９４】
【表１】
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【０１９５】
【表２】
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【０１９６】
【表３】
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【０１９７】
図６Ａは、表１〜３からの４０℃のデータの統計的解析に基づいた予測モデルを示す。ＳＥＣ解析による４０℃での月当たりの単量体比率の変化についてのモデルは−３．１０＋（０．３８６）＊ｐＨ＋０．０００５１６＊（（糖のモル＋アルギニンのモル）／タンパク質のモル）である。ＳＥＣ解析による４０℃での月当たりの凝集体比率の変化についてのモデルは２．４３−（０．２６３）＊ｐＨ−０．０００７８７＊（（糖のモル＋アルギニンのモル）／タンパク質のモル）である。ＣＥＸ解析による４０℃での月当たりの主要アイソフォーム比率の変化についてのモデルは−２．５４＋（０．１０９）＊ｐＨ−０．００１３０＊（（糖のモル＋アルギニンのモル）／タンパク質のモル）である。中央線は予測モデルについての結果を示し、外側の線は予測モデルについての９５％信頼限界を示す。
【０１９８】
図６Ｂは、入力因子がｐＨ、糖：タンパク質のモル比及びアルギニン：タンパク質のモル比である場合の表１〜３に４０℃でのデータの統計的な解析に基づく代替モデルを示す。ＳＥＣ解析による４０℃での月当たりの単量体比率の変化についてのモデルは−３．０２＋（０．３７０）＊ｐＨ＋０．０００４８２＊（（糖のモル）／（タンパク質のモル））＋０．０００６５７＊（アルギニンのモル／タンパク質のモル）である。ＳＥＣ解析による４０℃での月当たりの凝集体比率の変化についてのモデルは２．３５−（０．２４４）＊ｐＨ−０．０００７２７＊（（糖のモル）／（タンパク質のモル））−０．００１０２＊（アルギニンのモル／タンパク質のモル）である。ＣＥＸ解析による４０℃での月当たりの主要アイソフォーム比率の変化についてのモデルは−２．９２＋（０．２１０）＊ｐＨ＋０．００１６４＊（（糖のモル）／（タンパク質のモル））−０．０００２２０＊（アルギニンのモル／タンパク質のモル）である。中央線は予測モデルについての結果を示し、外側の線は予測モデルについての９５％信頼限界を示す。
【０１９９】
実施例２
安定性のデータ
指示された保存条件（２４ヵ月まで５℃及び２５℃／６０％ＲＨ）で保存した後の安定性について製剤の３つの一次安定性バッチ（バッチＡ、Ｂ及びＣ）を調べた。３つのバッチはすべて、凍結された同一の液体製剤：６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体、５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、１０％のスクロース、０．０６％のポリソルベート８０、ｐＨ６．３を含有する。バッチＡについては、３．５ｍｌの溶液を２０ｍｌのバイアルに充填し、凍結乾燥し、バッチＢ及びＣについては５．５２ｍｌの溶液を２０ｍｌのバイアルに充填し、凍結乾燥した。
【０２００】
別の試験では、６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体、５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、１０％のスクロース、０．０６％のポリソルベート８０、ｐＨ６．３の単一薬剤製剤をそれぞれ３．５ｍｌ及び９．５ｍｌの２つの体積で凍結乾燥し、安定性試料についてバッチＲ及びＳを得て、それを３８ヵ月にわたって解析した。ブランクはＮＴ（試験せず）である。
【０２０１】
データ（表４〜１９）は、５℃で３８ヵ月まで及び２５℃／６０％ＲＨで３０カ月まで保存した場合、抗体製剤は安定のままであることを示した。製品はすべて３８ヵ月の時点にわたって仕様の範囲内のままであったことによると考えられる。
【０２０２】
【表４】
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【０２０３】
【表５】
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【０２０４】
【表６】
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【０２０５】
【表７】
2018150388.tif 000010
【０２０６】
【表８】
2018150388.tif 000011
【０２０７】
【表９】
2018150388.tif 000012
【０２０８】
【表１０】
2018150388.tif 000013
【０２０９】
【表１１】
2018150388.tif 000014
【０２１０】
【表１２】
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【０２１１】
【表１３】
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【０２１２】
【表１４】
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【０２１３】
【表１５】
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【０２１４】
【表１６】
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【０２１５】
【表１７】
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【０２１６】
【表１８】
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【０２１７】
【表１９】
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【０２１８】
カチオン交換クロマトグラフィ（ＣＥＸ）
高速液体クロマトグラフィ方式にて弱カチオン交換カラムでリン酸塩／塩化ナトリウムの勾配を用いて抗α４β７抗体製剤における荷電種を分離し、抗体種の電荷組成を測定する。主要アイソフォームの前に酸性アイソフォームが溶出し、主要アイソフォームの後に塩基性アイソフォームが溶出する。
【０２１９】
ＣＥＸアッセイを用いて生成したベドリズマブのバッチすべてについての安定性データを表３、６〜８及び１４〜１６に提示する。表は、これらの保存条件では、５５％を下回って主要アイソフォーム比率を低下させる傾向はなかったことを示している。
【０２２０】
サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）
分析用ＳＥＣカラム（ペンシルベニア州、キングオブプラシャのＴｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＬＬＣ）を用いてＳＥＣを行う。移動相はリン酸緩衝化生理食塩水溶液であり、吸収は２８０ｎｍでモニターする。
【０２２１】
ＳＥＣアッセイを用いて生成した安定性データを表１、２、４、５、１２及び１３に提示する。表は、列記した保存条件のいずれも９６．０％を下回って単量体比率を低下させなかったことを示している。同様に、列記した保存条件のすべてにてバッチすべてについて凝集体比率は≦２．５％のままだった。
【０２２２】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥアッセイ
還元条件では４〜２０％及び非還元条件では４〜１２％にてＩｎｖｉｔｏｒｇｅｎ（カリフォルニア州、カールスバッド）のトリス／グリシンゲルを用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行う。再構成した抗体製剤を液体製剤緩衝液で希釈し、次いで、１０％の２−メルカプトエタノールと共に（還元試料緩衝液）又は２−メルカプトエタノールを含まずに（非還元試料緩衝液）トリス／グリシンＳＤＳ試料緩衝液（２Ｘ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１：２に希釈する。試料を手短に加熱し、分子量マーカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と対比させて負荷する。メーカーの指示書に従ってコロイド状のクマシーブルー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によってゲルを染色する。濃度測定法によってタンパク質バンドを解析し、還元ゲルでは重鎖及び軽鎖の％を特定し、非還元ゲルではＩｇＧの％を特定する。
【０２２３】
還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥアッセイを用いて生成した安定性データを表９及び１７に提示する。安定性のロットについて列記した保存条件すべてにて重鎖＋軽鎖（Ｈ＋Ｌ）の比率に顕著な変化は認められなかった。バンドのパターンは参照標準に類似し、％（Ｈ＋Ｌ）は≧９０％のレベルのままだった。
【０２２４】
結合有効性
ＰＢＳ、０．０１％アジ化ナトリウム中１％ＢＳＡに浮遊させたＨｕＴ７８細胞（ヒトＴ細胞リンパ腫細胞、バージニア州、マナッサスのアメリカンタイプカルチャーコレクション）を連続希釈した一次試験抗体と接触させる。氷上でインキュベートした後、細胞を洗浄し、蛍光標識した二次抗体で処理する。さらに洗浄した後、細胞を固定し、フローサイトメトリー（ニュージャージー州、フランクリンレイクスのＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）による解析のためにＦＡＣＳ試薬に浮遊させる。また、米国特許第７，１４７，８５１号も参照のこと。
【０２２５】
参照標準に比べてベドリズマブの結合有効性を測定し、％参照標準及びＥＣ５０として報告した。安定性データを表１０及び１８に提示する。％参照標準に関するデータは、変動を示したが、保存条件すべてにて仕様限界の範囲内に止まった。ベドリズマブの評価されたロットは、列記された保存条件で結合有効性を低下させる傾向を示さなかった。
【０２２６】
Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｃｈｅｒによる水分
電量Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｃｈｅｒ水分決定法のために製剤をメタノールで滴定する。水分データを表１１及び１９に提示する。列記した保存条件すべてにてベドリズマブの評価したロットはすべて５％未満の水分を有した。
【０２２７】
キャピラリ等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）
ｉＣＥ２８０全カラム検出ｃＩＥＦシステム（オンタリオ州、トロントのＣｏｎｖｅｒｇｅｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてｃＩＥＦを行う。両性電解質はメーカーによって推奨されるように選択することができ、市販の両性電解質の組み合わせであり得る。有用な組み合わせは、３〜１０及び５〜８のＰＨＡＲＭＡＬＹＴＥ（商標）（ニュージャージー州、ピスカタウエイのＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）である。
【０２２８】
実施例３：凍結乾燥工程の規模拡大のモデル化
凍結乾燥機における負荷及び製剤の固形分を操作しつつ、品質作り込みを用いた。負荷は３３〜１００％変化した。負荷にて標的製剤の０．５×、１．０×及び１．５×である製剤を含むことによって製剤の固形分は９〜２７％変化した。これらの製剤は類似のＴｇを有した。さらに多い固形物比率と共に、一次乾燥時間が増加した。加えて、さらに多い固形分にてさらに大きなＲｐのために製品温度が上昇した。負荷はまた乾燥の双方の段階に影響を有する（図８）。
【０２２９】
実施例４：非臨床的な安全性試験
アカゲザルＥＡＥにおけるＣＮＳの免疫監視機構に対するナタリズマブとベドリズマブの効果を比較するように試験を設計した。プラセボ対照を８匹の動物に週１回投与した。３０ｍｇ／ｋｇのナタリズマブを週１回７匹の動物に投与した。３０ｍｇ／ｋｇのベドリズマブを週１回７匹の動物に投与した。ＥＡＥの臨床症状を観察し：フローサイトメトリーによってＣＳＦにおける白血球サブセットの頻度と比率を測定し；ＭＲＩを用いて脳におけるＴ２の総病変量を測定し；組織病理法を用いて脳の病変量と脱髄を測定した。
【０２３０】
ベドリズマブはプラセボ対照と比べてＥＡＥの臨床症状の発症を遅らせなかった。それはＥＡＥの発症を抑制しなかったし、臨床スコアの大きさも抑えなかった。ナタリズマブはプラセボ対照と比べてＥＡＥの臨床症状の発症を有意に遅らせた（ｐ＜０．０５）。それはＥＡＥの発症及び臨床スコアの大きさを抑えた（図９）。
【０２３１】
ベドリズマブは、白血球、Ｔリンパ球（ヘルパーＴリンパ球、細胞傷害性Ｔリンパ球）、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー細胞、又は単球によるＣＳＦの浸潤を抑えなかった。これに対してナタリズマブはＣＳＦの浸潤を阻害した。
【０２３２】
ベドリズマブは、ＭＲＩを介したＴ２の増大及びＭＴＲの低下によって検出されるような脳の病変の蓄積を阻害しなかった。ナタリズマブは１匹の動物を除いてすべてで病変形成を妨げた。脳の浸潤及び脱髄における有意な(ｐ＜０．０５）阻害は組織学によって測定した。
【０２３３】
生体内で投与されたベドリズマブと生体外で加えられた分析用の抗α４β７モノクローナル抗体の間での競合結合アッセイによって示されるように、検討中、α４β７インテグリンはベドリズマブによって飽和された。分析用の抗α４β７ｍＡｂは、ベドリズマブを投与された動物にて記憶ヘルパーＴ細胞に結合しない。従って、ＣＮＳにおけるベドリズマブの効果の欠如はα４β７インテグリンの消化管指向性の生物学によるものである。
【０２３４】
要約すると、ベドリズマブ（α４β７拮抗剤）はＥＡＥを阻害しない。対照的にナタリズマブ（α４β１とα４β７の拮抗剤）はＥＡＥを阻害する。α４β１インテグリンはＥＡＥにおけるＣＮＳの浸潤に介在する。従って、ベドリズマブは、α４β１インテグリンに拮抗せず、アカゲザルのＥＡＥにおけるＣＮＳの免疫監視機構を損傷しないので、ナタリズマブよりも患者がＰＭＬに罹りやすくなるリスクが低い可能性がある。
【０２３５】
実施例５：ベドリズマブによるフェーズＩ臨床試験
４９人の健常な対象を無作為化し、試験薬物を単回投与した：３９人の対象がベドリズマブ(５ｍｇ／ｍｌの抗体、２０ｍＭのクエン酸塩／クエン酸、１２５ｍＭの塩化ナトリウム、０．０５％のポリソルベート８０、ｐＨ６．０（−７０℃で長期、−２０℃で３ヵ月保存された））の投与を受け、１０人の対象がプラセボの投与を受けた。ベドリズマブの投与を受けた３９人のうち、８人はそれぞれ０．２、２．０、６．０及び１０．０ｍｇ／ｋｇ、７人は０．５ｍｇ／ｋｇのベドリズマブの投与を受けた。４９人全員が試験を完了した。
【０２３６】
人口統計的な又はベースラインの特徴についてベドリズマブのコホートには顕著な差異はなかった。平均年齢は３５．４〜５１．０歳であり；個々の対象は２１歳から６３歳に及んだ。
【０２３７】
ＰＫの結果
０．２〜１０．０ｍｇ／ｋｇの３０分間の静脈内点滴としてベドリズマブを投与した。Ｃｍａｘ及び血清薬剤濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）の値は用量の増加と共に増加した。用量補正したＣｍａｘがコホートを横切ってほぼ同一であるということは、このパラメータの用量比例性を示した。ゼロから無限大までの血清薬剤濃度値下の用量標準化面積（ＡＵＣ０−∞）が２．０ｍｇ／ｋｇまで用量が増加するのに伴って増加したということは、この試験で投与された用量の低範囲にわたる用量の増加に伴ってＡＵＣ０−∞における非線形の増加があったことを示している。その後、ＡＵＣ０−∞が用量に比例して増加したということは、２．０〜１０．０ｍｇ／ｋｇの用量範囲にわたってＡＵＣ０−∞の線形性を示している。ＡＵＣ０−∞における増加は０．２ｍｇ／ｋｇ用量と比較して１０．０ｍｇ／ｋｇ用量で期待されるものよりも約２〜４倍高かった。
【０２３８】
同様に、クリアランスの推定、分布容積、及び最終半減期は０．２〜２．０ｍｇ／ｋｇの用量範囲にわたって用量依存性であった。用量が増えるにつれて、クリアランスは低下し、分布容積は増加し、その結果最終半減期は延長した。しかしながら、２から１０．０ｍｇ／ｋｇまででは、これらのパラメータの明瞭な変化がなかったが、それは低濃度でのベドリズマブの迅速な排泄過程の飽和を示唆している。さらに遅い線形の排泄過程は、さらに高い用量でのベドリズマブのクリアランスの大きな分画の主な要因である可能性が高い。
【０２３９】
ベドリズマブに対してＨＡＨＡを発生した一部の対象では、各用量レベルの範囲内でＨＡＨＡ陰性の対象に比べてベドリズマブの速いクリアランスが認められた。
【０２４０】
【表２０−１】
2018150388.tif 000023
【表２０−２】
2018150388.tif 000024
【０２４１】
Ｃｍａｘに達した後、ベドリズマブの血清濃度は、濃度がほぼ１〜１０ｍｇ／ｌに達するまで一般に単一指数関数的に低下した。その後、濃度は非線形的に低下すると思われた。
【０２４２】
Ｃｍａｘ及びＡＵＣの値は用量の上昇に伴った上昇した。利用可能なデータについては、用量補正したＣｍａｘがコホートを横断してほぼ同一であったということは、このパラメータの用量比例性を示している。用量標準化面積ＡＵＣ０−∞が２．０ｍｇ／ｋｇまで用量が増加するのに伴って増加したということは、この試験で投与された用量の低範囲にわたる用量の増加に伴ったＡＵＣ０−∞における非線形の増加があったことを示している。その後、ＡＵＣ０−∞が用量に比例して増加したということは、２．０〜１０．０ｍｇ／ｋｇの用量範囲にわたってＡＵＣ０−∞の線形性を示している。ＡＵＣ０−∞における増加は０．２ｍｇ／ｋｇ用量と比較して１０．０ｍｇ／ｋｇ用量で期待されるものよりも約２〜４倍高かった。
【０２４３】
ＰＤの結果
コホートによる０．２〜１０．０ｍｇ／ｋｇのベドリズマブの３０分間の静脈内点滴に続くベドリズマブのＰＤのパラメータをＡｃｔ−１及びＭＡｄＣＡＭについてそれぞれ表２１及び表２２に要約する。
【０２４４】
【表２１】
2018150388.tif 000025
【０２４５】
【表２２】
2018150388.tif 000026
【０２４６】
ベドリズマブは、ベドリズマブが血清にて測定可能であるすべての時点でＰＤパラメータ、Ａｃｔ−１及びＭＡｄＣＡＭ−１−Ｆｃをほぼ最大に阻害した。ベドリズマブの濃度がいったんアッセイの検出限界を下回って低下すると、Ａｃｔ−１及びＭＡｄＣＡＭ−１−Ｆｃの阻害はほぼベースラインのレベルまで回復した。
【０２４７】
ベドリズマブに対するＨＡＨＡを発生した一部の対象では、各用量レベルでＨＡＨＡ陰性の対象に比べてα４β７受容体の飽和の速い喪失が認められた。
【０２４８】
安全性の結果
ベドリズマブは一般に安全であり、１０．０ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶ投与で上手く認容された。試験中、死亡、重篤な有害事象（ＳＡＥ）又は試験の中断を招くＡＥは生じなかった。
【０２４９】
免疫原性／ヒト抗ヒト抗体（ＨＡＨＡ）の形成
プラセボ群で１人（１０％）及び併用ベドリズマブ投与群で２１人の対象（５４％）が試験の一部の時点で陽性ＨＡＨＡを有した。陽性ＨＡＨＡ試料は投与コホートすべてに認められたが、＞１２５のＨＡＨＡ力価は２つのベドリズマブ最低用量群のみで見られた。ＨＡＨＡ形成の用量依存性の抑制は以前ベドリズマブで認められていた。ＨＡＨＡ陽性である２２人のベドリズマブで治療した対象のうち１９人は現在中和ＨＡＨＡを有した。
【０２５０】
【表２３】
2018150388.tif 000027
【０２５１】
プラセボ群で１人及びベドリズマブ群で１１人の対象が持続してＨＡＨＡ陽性だった。
【０２５２】
【表２４】
2018150388.tif 000028
【０２５３】
結論
このフェーズＩ試験はＣＨＯ細胞に由来するベドリズマブのＰＫ／ＰＤ及び当初の安全性特性を特徴付けた。この試験の結果を用いて炎症性大腸疾患のフェーズ３の重要な試験のための用量選択を支援した。
【０２５４】
ベドリズマブは、Ｃｍａｘパラメータについて調べた用量範囲にわたって用量比例性を示したが、ＡＵＣ０−inf、ＣＬ、Ｖｚ及びｔ１／２における用量依存性の変化が０．２〜２．０ｍｇ／ｋｇで認められたということは、ベドリズマブの非線形のＰＫ挙動を示唆している。２．０ｍｇ／ｋｇより大きな用量レベルでは、これらのパラメータにさらなる変化は認められず、それは、低濃度でのベドリズマブの迅速な排泄過程の飽和を示唆している。さらに遅い線形の排泄過程は、さらに高い用量でのベドリズマブのクリアランスの大きな分画の主な要因である可能性が高い。
【０２５５】
ベドリズマブは、ベドリズマブが血清で測定可能である時点すべてにおいて最大レベル又は最大に近いレベルでＰＤパラメータ、Ａｃｔ−１及びＭＡｄＣＡＭ−１−Ｆｃを阻害した。ベドリズマブがいったんアッセイの検出限界を下回って低下すると、Ａｃｔ−１及びＭＡｄＣＡＭ−１−Ｆｃの阻害はほぼベースラインのレベルまで回復した。
【０２５６】
ベドリズマブに対するＨＡＨＡを発生した一部の対象では、各用量レベルの範囲内でＨＡＨＡ陰性対象に比べてベドリズマブの速いクリアランス及びα４β７受容体飽和の速い喪失が認められた。
【０２５７】
ベドリズマブは上手く認容された。試験中、死亡、ＳＡＥ又は試験薬剤投与の中断を招くＡＥは生じなかったし、用量／毒性の関係も認められなかった。全身性の日和見感染（ＰＭＬを含む）又は悪性腫瘍も報告されなかった。
【０２５８】
非特異的なα４拮抗剤とは異なって、ベドリズマブはリンパ球増加症又は循環する好酸球、好塩基球、単球の平均増加に関係することなく、又はリンパ球の枯渇の証拠もなかった。
【０２５９】
ベドリズマブはＨＡＨＡの形成を誘発したが、最高の力価（＞１２５）は２つの最低用量群でしか見られず、それは免疫原性における用量依存性の低下の以前の所見を支持する知見である。これらのデータは高い用量のベドリズマブの投与が臨床的に有意なＨＡＨＡの形成をできるだけ抑えることを示している。
【０２６０】
結論的には、ベドリズマブは一般に安全であり、健常対象に０．２〜１０.０ ｍｇ／ｋｇの単回用量で投与した際、上手く認容された。
【０２６１】
実施例６：ＣＤ４：ＣＤ８の比に対するベドリズマブの効果の判定
１０％スクロースの凍結乾燥製剤から再構成され、０．９％の生理食塩水の点滴系に希釈されたベドリズマブの単回４５０ｍｇ用量にて１８〜４５歳の健常対象を処理した。ベドリズマブの単回４５０ｍｇ投与前（ベースライン）及び５週間後に腰椎穿刺によって脳脊髄液を採取した。各対象は彼ら自身対照として役立った。
【０２６２】
ナタリズマブで治療したＭＳ患者が、たった１回の投与の後、ＣＳＦのＣＤ４＋：ＣＤ８＋リンパ球の比に対する影響及び脳の病変数の減少を実証したことを示した以前の試験（Stuve et al. Arch Neurol. 2006; 63: 1383-1387; Stuve et al. Ann Neurol. 2006;59:743-747. Miller et al. N Engl J Med. 2003;348(1):15-23）に基づいて、またベドリズマブの５週での４５０ｍｇ用量が、標的を飽和するのに十分であり、４週ごとの３００ｍｇのフェーズ３の投与計画に関連する推定定常状態トラフレベルを超える血清濃度を提供するので５週の時点を選択した。
【０２６３】
免疫的な表現型決定のために各対象からおよそ１５ｍｌのＣＳＦを得た。以下の基準：試料当たり≦１０のＲＢＣ／μｌ（末梢血の混入をできるだけ抑えるために）；陰性のＣＳＦ培養結果；各フローサイトメトリー試料における適正なＴリンパ球数；及びベドリズマブに対する血清抗体が検出されないことを満たせばＣＳＦ試料を解析に含めた。
【０２６４】
５週目の中央値（３４．８０μｇ／ｍｌ）及び個々の対象の血清ベドリズマブ濃度（２４．９〜４７．９μｇ／ｍｌの範囲）は、フェーズ３の投与計画についての推定される定常状態のトラフ濃度（約２４μｇ／ｍｌ）よりも高かった。高い程度（＞９０％）のα４β７受容体の飽和がＭＡｄＣＡＭ−１−Ｆｃによって測定されたように５週目で認められたということは、終点評価の時点での標的のベドリズマブの飽和を示している。
【０２６５】
ベドリズマブはどのＣＳＦ試料にも検出されなかった（検出限界＝０．１２５μｇ／ｍｌ）
【０２６６】
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋のＴリンパ球の数及び比に対する効果
ベドリズマブはＣＤ４＋及びＣＤ８＋の比を有意に低下させなかった（表２５）。投与後＜１のＣＤ４＋及びＣＤ８＋の比を有する対象はいなかった（ｐ＜０．０００１、片側ｔ検定）。ベドリズマブはＣＳＦにてＣＤ４＋及びＣＤ８＋のＴリンパ球の数を有意に減らさなかった。加えて、ＣＳＦの％ＣＤ４＋及び％ＣＤ８＋のＴリンパ球に有意な変化はなかった（表２６）。また、末梢血ＷＢＣ、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋の記憶Ｔリンパ球における有意な変化も認められなかった（表２７）。
【０２６７】
【表２５】
2018150388.tif 000029
【０２６８】
【表２６】
2018150388.tif 000030
【０２６９】
【表２７】
2018150388.tif 000031
【０２７０】
要約
ベドリズマブは、４５０ｍｇの単回投与後の健常志願者におけるＣＳＦのＣＤ４＋及びＣＤ８＋の細胞数又はＣＤ４＋及びＣＤ８＋の比に影響を及ぼさなかった。投与後、ＣＳＦのＣＤ４＋：ＣＤ８＋の比が１未満に低下した対象はいなかった。ベドリズマブはＣＳＦでは検出されなかった。加えて、末梢血における総ＷＢＣ又は記憶Ｔリンパ球のＣＤ４＋及びＣＤ８＋のサブセットでの変化は認められなかった。血液における標的（α４β７）の飽和は終点評価の時点で対象全員にて生じた。ＣＳＦのＣＤ４＋及びＣＤ８＋のリンパ球のレベル及び比は文献で報告された以前のものに類似していた。
【０２７１】
これらの結果は、サルの生理的なＣＮＳの免疫監視機構及び病理的なＣＮＳの炎症の双方にベドリズマブが影響を欠くことに一致している（実施例４を参照）。
【０２７２】
実施例７：ＩＢＤの治療に関するベドリズマブによる長期臨床経験
フェーズ２の非盲検安全性延長試験を完了してベドリズマブの長期の薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）、安全性及び有効性を評価した。患者は１８歳〜７５歳であり、潰瘍性大腸炎患者における以前のＰＫ／ＰＤ安全性試験に以前加わったことがあるか、又は３６ヵ月のスクリーニング内で内視鏡で、及び／又は組織病理学的に及び／又は放射線検査で確認された少なくとも２ヵ月間のＩＢＤの症状を有していた。
【０２７３】
患者はすべて、２ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇのベドリズマブ（５ｍｇ／ｍＬの抗体、２０ｍＭのクエン酸塩／クエン酸、１２５ｍＭの塩化ナトリウム、０．０５％のポリソルベート８０、ｐＨ６．０（長期には−７０℃で３ヵ月までは−２０℃で保存）を１、１５及び４３日目、その後、合計７８週まで８週ごとに受け取った。患者は、治療を受けたことがない潰瘍性大腸炎若しくはクローン病の患者、又は以前の臨床試験に加わったことがある潰瘍性大腸炎患者であった。
【０２７４】
有効性／生活の質（ＱＯＬ）、部分Ｍａｙｏスコア（ＰＭＳ）、クローン病活動性指数（ＣＤＡＩ）及び炎症性大腸疾患アンケート（ＩＢＤＱ）を用いて試験の結果を評価した。
【０２７５】
ＰＫの結果
平均の点滴前のベドリズマブ濃度は用量比例性であり、固定したままであり、試験全体を通して検出可能だった。
【０２７６】
ＰＤの結果
すべての用量レベルで試験全体を通して受容体（％ＡＣＴ−１＋［ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ高］及び％ＭＡＤＣＡＭ＋［ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ高］はほぼ完全に阻害された。
【０２７７】
部分Ｍａｙｏスコア
ベースラインの平均ＰＭＳは、潰瘍性大腸炎を繰り返す患者（２．３）よりも治療したことがない潰瘍性大腸炎患者の方が（５．４）高かった。４３日目までに、ＰＭＳは、繰り返し患者及び治療したことがない潰瘍性大腸炎患者の双方で顕著な低下を示した。１５５日目までに、２群の平均スコアは類似した。平均ＰＭＳは２６７日目までの間、低下し続け、その後、平らになった。
【０２７８】
クローン病活動性指標
ＣＤ患者のＣＤＡＩはベースラインの２９４．６から４３日目で２３７．７まで低下し、１５５日目までの間低下し続けた（１５６．１）。
【０２７９】
ＩＢＤＱ
潰瘍性大腸炎を繰り返す患者はベースラインで最高平均値のＩＢＤＱスコアを有した。４３日目までに３つの疾患群すべてで増加した。平均ＩＢＤＱスコアは３つの疾患群すべてで経時的に増加し続け、クローン病患者では１５５日目に、治療したことがない潰瘍性大腸炎患者及び潰瘍性大腸炎を繰り返す患者では４９１日目に最高に達した。
【０２８０】
Ｃ−反応性タンパク質
潰瘍性大腸炎を繰り返す患者及びクローン病患者は１５５日目までの間低下する平均ＣＲＰレベルを示し、その後平らになった。治療したことがない潰瘍性大腸炎患者は、潰瘍性大腸炎を繰り返す患者よりもベースラインで低い平均ＣＲＰレベルを有した（２．２８対７．０９）。治療したことがない潰瘍性大腸炎患者の平均ＣＲＰレベルは、評価された時点すべてで相対的に一定のままだった。
【０２８１】
他の安全性の結果
試験の間、全身性の日和見感染（ＰＭＬを含む）は報告されなかった。患者１人が単一時点でＪＣウイルス血症陽性であったが、他の時点ではすべてＪＣＶ陰性だった。７２人の患者のうち３人（４％）が陽性のＨＡＨＡ成績（これらのうち２人は一時的に陽性）を有した。試験は、肝臓毒性、リンパ球増加症、又はリンパ球減少症、又は他の薬剤関連の臨床検査値の変化の証拠を示さなかった。
【０２８２】
結論
７８週まで８週ごとに１回、２．０又は６．０ｍｇ／ｋｇで投与されたベドリズマブは、標的受容体の飽和を達成し、疾患の活動性の長く続く平均的な低下と改善されたＩＢＤＱを伴い、一般に安全で上手く認容され、許容可能な免疫原性を示した。
【０２８３】
実施例８：中程度から重度の活動性クローン病患者における応答及び寛解の誘導
無作為二重盲検プラセボ対照多施設試験を完了して、６週目（０及び２週目での２回の投与の後）及び１０週目（３回投与後）にてＴＮＦα拮抗剤で失敗した患者において３００ｍｇ用量（凍結乾燥した５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、０．０６％のポリソルベート８０、１０％スクロース、ｐＨ６．３における６０ｍｇ／ｍｌの抗体の製剤から再構成した）でのベドリズマブの誘導効果を評価した。試験は４１６人の患者から成り、そのうち７５％はＴＮＦα拮抗剤で失敗した患者であり、２５％はＴＮＦαの投薬経験がなかった。人口統計学及び付随するＩＢＤの投薬は治療群全体にわたって均衡を取った。ベースラインの疾患の特徴もベースラインの疾患の活動性を除いて治療群全体にわたって均衡を取った。
【０２８４】
試験で指定された一次終点は、ＴＮＦα拮抗剤で失敗した集団では６週目の寛解（％）であった。評価される（順次試験手順）鍵となる二次終点は、集団全体での６週目の寛解（％）、ＴＮＦα拮抗剤で失敗した集団及び集団全体での１０週目の寛解（％）（Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法を用いて）、ＴＮＦα拮抗剤で失敗した集団及び集団全体での６週と１０週での持続した寛解（％）（Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法を用いて）、及びＴＮＦα拮抗剤で失敗した集団での６週目の向上した応答（％）であった。
【０２８５】
【表２８】
2018150388.tif 000032
【０２８６】
【表２９】
2018150388.tif 000033
【０２８７】
【表３０】
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【０２８８】
【表３１】
2018150388.tif 000035
【０２８９】
試験は、ＴＮＦα拮抗剤で失敗した患者が寛解の誘導に３回の投与を必要とすることを示した。ＴＮＦα拮抗剤で失敗した患者における寛解率は６週目と１０週目の間で増加したが、ベドリズマブ群（プラセボではない）についてのみだった。ＴＮＦα拮抗剤の投与経験がない患者についての寛解率は６週目と１０週目の間では実質的に増加しなかった。疾患の重症度の程度が高いＴＮＦα拮抗剤で失敗した患者のうち、４３％はＴＮＦα拮抗剤に決して応答しなかったし、４５％は応答を喪失した。
【０２９０】
実施例９：中程度から重度の活動性クローン病における応答及び寛解の誘導及び維持
中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎患者における応答と寛解の誘導と維持を評価するために２つの無作為二重盲検多施設試験を含む単回試験を設計した。人口統計的な及びベースラインの疾患の特徴は治療群すべてにわたって同等だった。
【０２９１】
静脈内投与を用いた誘導試験を、５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、０．０６％のポリソルベート８０、１０％スクロース、ｐＨ６．３における６０ｍｇ／ｍｌの抗体の凍結乾燥製剤から再構成した３００ｍｇ用量にて、ベドリズマブの２回投与後６週間での終点でベドリズマブに対するプラセボと比較した。
【０２９２】
誘導試験と同じ製剤及び経路を用いた維持試験をベドリズマブに対するプラセボと比較したが、ベドリズマブは４週ごとに投与し、ベドリズマブに対するプラセボは８週ごとに投与した。各患者は１８〜８０歳であり、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸であると診断され、過去５年間にわたって従来の治療法（たとえば、コルチコステロイド）の少なくとも１つに対して不適切な応答、応答の喪失又は非認容性を示したが、ＩＢＤに対する従来の治療法の治療投与を受けていてもよい。この試験の終点は５２週であり、誘導応答者の集団を解析した。試験の双方のフェーズはその一次終点、すなわち、誘導における臨床的な応答及び維持での臨床的な寛解を満たした。
【０２９３】
血液試料を採取して試験中のベドリズマブの濃度を測定した。誘導相の終了時でのベドリズマブの平均血清濃度は２０〜３０μｇ／ｍＬだった。３００ｍｇ用量投与の３０分間ＩＶ点滴の後の定常状態でのベドリズマブの平均トラフ血清濃度はｑ８ｗｋｓ投薬計画では９〜１３μｇ／ｍＬの間であり、ｑ４ｗｋｓ投薬計画では３５〜４０μｇ／ｍＬの間であった。点滴終了時のベドリズマブの中央値血漿濃度は、ｑ８ｗｋｓ（８週）投薬計画では９８〜１０１μｇ／ｍＬの間であり、ｑ４ｗｋｓ（４週）投薬計画では１２９及び１３７μｇ／ｍＬ前後であった。
【０２９４】
誘導試験及び維持試験の応答の要約を表３２〜３５に提供する。ベドリズマブで治療した患者の有意に大きな集団がプラセボに比べて６週間で臨床的な応答、寛解及び粘膜治癒を達成した（表３２）。誘導相の包括解析集団の３９％は過去の抗ＴＮＦ−α療法で失敗を有した。臨床的な応答及び寛解の比率は、過去の抗ＴＮＦ−α療法での失敗がある患者及び抗ＴＮＦ−αに暴露されていない患者の双方でベドリズマブの方がプラセボより高かった。６週間までの間での予備的な解析では、有害事象（ＡＥ）、重篤なＡＥ及び試験の中止を招く有害事象の比率はベドリズマブ群よりプラセボ群で高かった。プラセボ患者よりも有意に高いベドリズマブ患者の集団が、５２週での臨床的な寛解、粘膜治癒、及びコルチコステロイドなしの寛解、及び長く続く応答と寛解を達成した（表３３）。維持試験の集団の３２％は過去の抗ＴＮＦ−α療法で失敗を有した。臨床的な寛解及び長く続く応答の比率は、ＴＮＦで失敗した患者及びＴＮＦ経験のない患者の双方でプラセボよりもベドリズマブの方が高かった。０〜５２週での安全性の集団（Ｎ＝８９５）では、有害事象（ＡＥ）、重篤なＡＥ及び重篤な感染は、ベドリズマブ群とプラセボ群の間で類似していた。日和見感染又は腸内感染の比率の上昇はベドリズマブ群では認められなかった。
【０２９５】
【表３２】
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【０２９６】
【表３３】
2018150388.tif 000037
【０２９７】
【表３４】
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【０２９８】
【表３５】
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【０２９９】
実施例１０：中程度から重度の活動性のクローン病患者における応答と寛解の誘導と維持
中程度から重度の活動性のクローン病患者における応答と寛解の誘導と維持を評価するために２つの無作為二重盲検多施設試験を含む単回試験を設計した。人口統計的な及びベースラインの疾患の特徴は治療群すべてにわたって同等だった。
【０３００】
静脈内投与を用いた誘導試験を、５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、０．０６％のポリソルベート８０、１０％スクロース、ｐＨ６．３における６０ｍｇ／ｍｌの抗体の凍結乾燥製剤から再構成した３００ｍｇ用量にて、ベドリズマブの２回投与後６週間での終点でベドリズマブに対するプラセボと比較した。
【０３０１】
誘導試験と同じ製剤及び経路を用いた維持試験をベドリズマブに対するプラセボと比較したが、ベドリズマブは４週ごとに投与し、ベドリズマブに対するプラセボは８週ごとに投与した。この試験の終点は５２週であり、誘導応答者の集団を解析した。
【０３０２】
驚くべきことに、この試験は、Ｑ４週及びＱ８週の群ではよく似た結果が得られることを示した。誘導試験及び維持試験の応答の要約を表３６〜３９に提供する。プラセボに比べてベドリズマブで治療した患者の有意に大きな集団が臨床的な寛解及び高い応答を達成した（表３６）。臨床的な寛解及び高い応答の比率は、過去にＴＮＦで失敗したもの及び過去にＴＮＦ暴露のないもの双方でプラセボよりもベドリズマブ患者において高かった。有害事象（ＡＥ）、重篤なＡＥ及び重篤な感染の比率はベドリズマブ群及びプラセボ群の双方で類似していた。日和見感染又は腸内感染の比率の上昇はベドリズマブ群では認められなかった。
【０３０３】
【表３６】
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【０３０４】
【表３７】
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【０３０５】
【表３８】
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【０３０６】
【表３９】
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【０３０７】
【表４０】
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【０３０８】
本発明はその好まれる実施形態を参照して特に示され、記載されてきたが、添付のクレームに包含される本発明の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細において種々の変更がその中で為され得ることが当業者によって理解されるであろう。
【０３０９】
本発明の態様として、以下のものが挙げられる。
［１］安定な製剤であって、非還元糖と抗α４β７抗体と少なくとも1つの遊離のアミノ酸の混合物を含み、前記製剤は固体形態であり、非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）が６００：１を超える安定な製剤。
［２］前記製剤がさらに緩衝化剤を含む［１］に記載の製剤。
［３］前記非還元糖が、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース及びそれらの組み合わせから成る群から選択される［１］に記載の製剤。
［４］前記遊離のアミノ酸が、ヒスチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸及びそれらの組み合わせから成る群から選択される［１］に記載の製剤。
［５］前記製剤がさらに界面活性剤を含む［１］に記載の製剤。
［６］前記界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー及びそれらの組み合わせから成る群から選択される［５］に記載の製剤。
［７］前記製剤が凍結乾燥され、凍結乾燥前に少なくとも約５％〜約１０％の抗α４β７抗体を含む［１］に記載の製剤。
［８］前記製剤が、凍結乾燥前に少なくとも約６％の抗α４β７抗体を含む［１］に記載の製剤。
［９］前記製剤が、約１００ｍＭ〜約１７５ｍＭの間の遊離のアミノ酸を含む［１］に記載の製剤。
［１０］前記製剤が液体製剤である［１］に記載の製剤。
［１１］前記製剤が乾燥製剤である［１］に記載の製剤。
［１２］前記製剤が４０℃、７５％ＲＨにて少なくとも３ヵ月安定である［１］に記載の製剤。
［１３］安定な液体製剤であって、水溶液中にて非還元糖と抗α４β７抗体と少なくとも1つの遊離のアミノ酸を含み、非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）が６００：１を超える安定な液体製剤。
［１４］前記製剤がさらに緩衝化剤を含む［１３］に記載の液体製剤。
［１５］前記非還元糖が、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース及びそれらの組み合わせから成る群から選択される［１３］に記載の液体製剤。
［１６］前記遊離のアミノ酸が、ヒスチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸及びそれらの組み合わせから成る群から選択される［１３］に記載の液体製剤。
［１７］前記製剤がさらに界面活性剤を含む［１３］に記載の液体製剤。
［１８］前記界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー及びそれらの組み合わせから成る群から選択される［１７］に記載の液体製剤。
［１９］前記製剤が約５．５〜約７．５の間のｐＨを有する［１３］に記載の液体製剤。
［２０］前記製剤が約６．０〜約６．５の間のｐＨを有する［１３］に記載の液体製剤。
［２１］前記製剤が、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌ〜約８０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体を含む［１３］に記載の液体製剤。
［２２］前記製剤が、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体を含む［１３］に記載の液体製剤。
［２３］安定な製剤であって、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌ〜約８０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体と緩衝化剤と少なくとも約１０％（ｗ／ｗ）の糖を含み、前記製剤が液体製剤である安定な製剤。
［２４］前記緩衝化剤がヒスチジン緩衝液である［２３］に記載の製剤。
［２５］前記糖がスクロースである［２３］に記載の製剤。
［２６］安定な製剤であって、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体と少なくとも約１０％（ｗ／ｗ）の非還元糖を含み、前記製剤が凍結乾燥される安定な製剤。
［２７］前記製剤がポリソルベート８０をさらに含む［２６］に記載の製剤。
［２８］前記非還元糖がスクロースである［２６］に記載の製剤。
［２９］安定な製剤であって、非還元糖と抗α４β７抗体とヒスチジンとアルギニンとポリソルベート８０の混合物を含み、前記製剤は固体形態であり、非還元糖と抗α４β７抗体のモル比（モル：モル）が６００：１を超える安定な製剤。
［３０］前記製剤がさらに金属キレート剤を含む［１３］〜［２５］のいずれかに記載の製剤。
［３１］前記製剤がさらに抗酸化剤を含む［１３］〜［２５］のいずれかに記載の製剤。
［３２］前記抗体がベドリズマブである［１］〜［３１］のいずれかに記載の製剤。
［３３］［１］〜［３２］のいずれか１項に記載の製剤を作製する方法であって、前記方法が一次乾燥の間、崩壊温度を下回る製品温度を維持することを含む方法。
［３４］さらにアニーリング工程を含む［３３］に記載の方法。
［３５］品質について凍結乾燥した製剤を判定する方法であって、外見について製剤を検査することと、再構成の時間を確定することと、水分含量を確定することと、存在する凝集体の比率を確定することと、存在する断片の比率を確定することと、酸化／脱アミド化レベルを確定することを含む方法。
［３６］製剤の生物活性及び効能を確定することをさらに含む［３５］に記載の方法。
［３７］炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者を治療する方法であって、前記方法が、
ヒトα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者に投与する工程を含み、
ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が以下の投与計画：
（ａ）静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の初回投与、
（ｂ）その後の、初回投与の約２週間後での静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の第２の後続投与、
（ｃ）その後の、初回投与の約６週間後での静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の第３の後続投与、
（ｄ）その後の、ヒト化抗体の第３の後続投与後、必要に応じて４週ごと又は８週ごとの静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の第４の後続投与に従って患者に投与され、
前記投与計画が患者の炎症性大腸疾患における臨床的な応答及び臨床的な寛解を誘導し；
さらに、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片が、非ヒト起源の抗原結合領域とヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、ＣＤＲｓ：軽鎖ＣＤＲ１：配列番号９，ＣＤＲ２：配列番号１０，ＣＤＲ３：配列番号１１；重鎖ＣＤＲ１：配列番号１２，ＣＤＲ２：配列番号１３，ＣＤＲ３：配列番号１４を含む方法。
［３８］患者が、免疫調節剤、腫瘍壊死因子α拮抗剤又はそれらの組み合わせの少なくとも1つに対して適切な応答を欠いていた、応答を喪失していた、又はそれによる治療に認容性ではなかった［３７］に記載の方法。
［３９］炎症性大腸疾患がクローン病又は潰瘍性大腸炎である［３７］に記載の方法。
［４０］炎症性大腸疾患が潰瘍性大腸炎である［３９］に記載の方法。
［４１］炎症性大腸疾患が中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎である［３９］に記載の方法。
［４２］投与計画が、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎で苦しむ患者にて粘膜治癒を生じる［４１］に記載の方法。
［４３］投与計画が、患者によるコルチコステロイドの使用の軽減、排除又は軽減と排除を生じる［３７］に記載の方法。
［４４］患者が、炎症性大腸疾患のために少なくとも１種のコルチコステロイドによる治療を以前受けていた［３７］に記載の方法。
［４５］ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約１．４ｍｇ／ｍｌの濃度での最終投与形態で投与される［３７］に記載の方法。
［４６］ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が、約１．２ｍｇ／ｍｌの濃度での最終投与形態で投与される［４５］に記載の方法。
［４７］ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が、約３０分間で患者に投与される［３７］に記載の方法。
［４８］ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が、凍結乾燥した製剤から再構成される［４５］に記載の方法。
［４９］ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が再構成されて安定な液体製剤を構成する［４５］に記載の方法。
［５０］投与計画が、前記治療を受けている患者の脳脊髄液におけるＣＤ４とＣＤ８の比を変化させない［３７］に記載の方法。
［５１］炎症性大腸疾患の治療療法についての投与計画であって、方法が、ヒトα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を炎症性大腸疾患で苦しむ患者に投与する工程を含み、
ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が以下の投与計画：
（ａ）静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の初回投与、
（ｂ）その後の、初回投与の約２週間後での静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の第２の後続投与、
（ｃ）その後の、初回投与の約６週間後での静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の第３の後続投与、
（ｄ）その後の、ヒト化抗体の第３の後続投与後、必要に応じて４週ごと又は８週ごとの静脈内点滴としての３００ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の第４の後続投与；に従って患者に投与され、
前記投与計画が患者の炎症性大腸疾患における臨床的な応答及び臨床的な寛解を誘導し；
さらに、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片が、非ヒト起源の抗原結合領域とヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、以下で示す相補性決定領域（ＣＤＲｓ）：軽鎖ＣＤＲ１：配列番号９，ＣＤＲ２：配列番号１０，ＣＤＲ３：配列番号１１；重鎖ＣＤＲ１：配列番号１２，ＣＤＲ２：配列番号１３，ＣＤＲ３：配列番号１４を含む、投与計画。
［５２］患者が、免疫調節剤、腫瘍壊死因子α拮抗剤又はそれらの組み合わせの少なくとも1つに対して適切な応答を欠いていた、応答を喪失していた、又はそれによる治療に認容性ではなかった［５１］に記載の投与計画。
［５３］炎症性大腸疾患がクローン病又は潰瘍性大腸炎である［５１］に記載の投与計画。
［５４］炎症性大腸疾患が潰瘍性大腸炎である［５２］に記載の投与計画。
［５５］炎症性大腸疾患が中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎である［５４］に記載の投与計画。
［５６］投与計画が、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎で苦しむ患者にて粘膜治癒を生じる［５５］に記載の投与計画。
［５７］投与計画が、患者によるコルチコステロイドの使用の軽減、排除又は軽減と排除を生じる［５１］に記載の投与計画。
［５８］患者が、炎症性大腸疾患のために少なくとも１種のコルチコステロイドによる治療を以前受けていた［５１］に記載の投与計画。
［５９］ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約１．４ｍｇ／ｍｌの濃度での最終投与形態で投与される［５１］に記載の投与計画。
［６０］ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が、約１．２ｍｇ／ｍｌの濃度での最終投与形態で投与される［５９］に記載の投与計画。
［６１］ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が、約３０分間で患者に投与される［５１］に記載の投与計画。
［６２］ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が、凍結乾燥した製剤から再構成される［６１］に記載の方法。
［６３］ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が再構成されて安定な液体製剤を構成する［６１］に記載の投与計画。
［６４］投与計画が、前記治療を受けている患者の脳脊髄液におけるＣＤ４とＣＤ８の比を変化させない［５１］に記載の投与計画。
［６５］患者が６５歳以上の人であり、さらに患者が投与計画の調整を必要としない［５１］に記載の方法。
［６６］患者が６５歳以上の人であり、さらに患者が投与計画の調整を必要としない［５１］に記載の投与計画。
［６７］遊離のアミノ酸と抗体のモル比が少なくとも２５０：１である［１］に記載の製剤。
［６８］遊離のアミノ酸と抗体のモル比が少なくとも２５０：１である［１３］に記載の製剤。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
2018150388.tif 000049
【図５】
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【図６Ａ】
2018150388.tif 000051
【図６Ｂ】
2018150388.tif 000052
【図７】
2018150388.tif 000053
【図８】
2018150388.tif 000054
【図９】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年8月7日(2018.8.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト患者におけるクローン病の臨床的な応答を達成するための組成物であって、該組成物は、ヒトα４β７インテグリンに対して結合特異性を有する抗体を含み、該ヒト患者は、ＴＮＦα拮抗剤に対して適切な応答を欠いていた、応答を喪失していた、又はそれに対して認容性ではなかったものであり、該組成物は、３００ｍｇの該抗体の第１の投与、該第１の投与の２週間後の３００ｍｇの該抗体の第２の投与及び該第１の投与の６週間後の３００ｍｇの該抗体の第３の投与により、ヒト患者に対して静脈内投与されることを特徴とし、該抗体は、配列番号２のアミノ酸２０〜１４０の重鎖可変領域配列及び配列番号４のアミノ酸配列２０〜１３１の軽鎖可変領域配列を含む、組成物。
【請求項２】
該抗体の重鎖は、配列番号２のアミノ酸２０〜４７０を含み、該抗体の軽鎖は、配列番号４のアミノ酸２０〜２３８を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
各投与は、約３０分間の点滴として静脈内投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
クローン病が、中程度から重度の活動性クローン病である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
ヒト患者におけるクローン病の臨床的な応答を達成するための組成物であって、該組成物は、ベドリズマブを含み、該ヒト患者は、ＴＮＦα拮抗剤に対して適切な応答を欠いていた、応答を喪失していた、又はそれに対して認容性ではなかったものであり、該組成物は、３００ｍｇのベドリズマブの第１の投与、該第１の投与の２週間後の３００ｍｇのベドリズマブの第２の投与及び該第１の投与の６週間後の３００ｍｇのベドリズマブの第３の投与により、ヒト患者に対して静脈内投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項６】
クローン病が、中程度から重度の活動性クローン病である、請求項５に記載の組成物。