(57)【要約】      （修正有）【課題】ヘモグロビンＥとヘモグロビンＡ０およびヘモグロビンＡ２の分離性能を改良した液体クロマトグラフィ-用充填剤を提供する。【解決手段】架橋ポリマーの表面に、炭素数３〜１０である、アルカン又は置換基を有していてもよい芳香族が酸素を介して結合し、アルカン又は芳香族にポリエーテルが結合し、ポリエーテルの他方の末端にカチオン交換基が結合していることを特徴とする。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
架橋ポリマーの表面に、
炭素数３〜１０である、アルカン又は置換基を有していてもよい芳香族が酸素を介して結合し、
前記アルカン又は前記芳香族にポリエーテルが結合し、
前記ポリエーテルの他方の末端にカチオン交換基が結合していることを特徴とする液体クロマトグラフィー用充填剤。
【請求項２】
前記ポリエーテルが、開環したグリシジル基を含んでなることを特徴とする請求項１に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤。
【請求項３】
前記ポリエーテルが、前記アルカン又は前記芳香族に酸素を介して結合していることを特徴とする請求項２に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤。
【請求項４】
カチオン交換基がスルホン酸基又はカルボン酸基であることを特徴とする請求項１及至３に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤。
【請求項５】
充填剤の粒子径が１から１０μｍである特徴とする請求項１及至４に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤。
【請求項６】
充填剤が測定試料に対して非多孔性である請求項１及至５に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤。
【請求項７】
請求項１及至６に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤を充填して成る液体クロマトグラフィー用カラム。
【請求項８】
請求項７に記載の液体クロマトグラフィー用カラムでタンパク質を分析、定量する方法。
【請求項９】
請求項８に記載のタンパク質がヘモグロビン類であるタンパク質を分析、定量する方法。
【請求項１０】
請求項１及至６記載の液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法であって
架橋性ポリマーの表面に炭素数３〜１０である、アルカン又は置換基を有していてもよい芳香族を酸素を介して導入し、
前記アルカン又は前記芳香族の他方の末端にポリエーテルを導入し、
前記ポリエーテルの他方の末端にカチオン交換基を導入することを特徴とする請求項１及至６に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液体クロマトグラフィーにより血液試料中のヘモグロビン類を測定する充填剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
陽イオン交換液体クロマトグラフィー法を用いたヘモグロビン類の分析は糖尿病、先天性溶血性貧血の一種である血色素異常症（異常ヘモグロビン症，サラセミア症）などの診断方法として広く利用されている。
【０００３】
通常成人のヘモグロビンはα鎖とβ鎖の２種類のグロブリン鎖からなっているヘモグロビンＡ０が９０％以上を占める。そのほかに、胎児性ヘモグロビン（ヘモグロビンＦ）とヘモグロビンＡ２の微量ヘモグロビンが存在する。ヘモグロビンには上記のヘモグロビン類のほかに、ヘモグロビンを構成するグロブリン鎖のアミノ酸の一部が変異により別のアミノ酸に置換され、正常とは異なるグロブリン鎖で構成されたヘモグロビン、異常ヘモグロビンが存在する。
【０００４】
糖尿病の診断では、ヘモグロビンＡ０の安定型糖化成分であるヘモグロビンＡ１ｃが総ヘモグロビン量に占める割合（Ａ１ｃ％）が診断指標として用いられている。また、サラセミア症の診断においては、ヘモグロビンＦとヘモグロビンＡ２が総ヘモグロビン量に占める割合が診断指標（Ｆ％およびＡ２％）として用いられている。
【０００５】
陽イオン交換液体クロマトグラフィー法を用いたヘモグロビン類の分析では、陽イオン交換基を有する充填剤との相互作用の違いによって、ヘモグロビンＡ１ｃ、ヘモグロビンＡ０、ヘモグロビンＦおよびヘモグロビンＡ２を分離している。また、充填剤との相互作用の違いが大きい異常ヘモグロビンであるヘモグロビンＳ、ヘモグロビンＣやヘモグロビンＤなども容易に分離し、各成分を正確に測定することが可能である。
【０００６】
特許文献１では非多孔性の親水性ポリマーを用いた陽イオン交換体を用いてヘモグロビンＡ１ｃを高精度に分離できるとしている。また、特許文献２には親水性高分子を架橋重合体表面に被覆することでヘモグロビン分類の分離性能を上げることができるとしている。また、特許文献３では環状構造を有するアクリル系単量体と架橋性アクリル系単量体を含有しかつ、アクリル系単量体のみからなる単量体混合物を重合して得られる架橋ポリマー粒子の表面にイオン交換基を有する重合体層を重合させたカラム充填剤を用いることでヘモグロビン類の分離が改善できるとされており、異常ヘモグロビンＳ、ヘモグロビンＣやヘモグロビンＤの分離実施例も記載されている。
【０００７】
しかしながら、異常ヘモグロビンには、充填剤との相互作用が、ヘモグロビンＡ０やヘモグロビンＡ２と極めて近いものがあり、これらの異常ヘモグロビンが存在した場合、正確なＡ１ｃ％および／またはＡ２％を測定することが困難である。特にヘモグロビンＥは東南アジアなどで出現率が高い異常ヘモグロビンであるにもかかわらず、ヘモグロビンＡ０、ヘモグロビンＡ２と充填剤との相互作用が類似しているため陽イオン交換液体クロマトグラフィー法での分離が困難であり、ヘモグロビンＥ保有者のヘモグロビンＡ１ｃやヘモグロビンＡ２の高精度な測定は困難であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開平０３−２５５３６０号公報
【特許文献２】特開平０３−７３８４８号公報
【特許文献３】特開２０１０−２３６９０８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ヘモグロビンＥとヘモグロビンＡ０およびヘモグロビンＡ２の分離性能を改良した充填剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、鋭意検討を行った結果、ヘモグロビン類の分離性能を改良できる充填剤を見出し、本発明を完成するに至った。
【００１１】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００１２】
本発明は、
炭素数３〜１０である、アルカン又は置換基を有していてもよい芳香族が酸素を介して結合し、
前記アルカン又は前記芳香族にポリエーテルが結合し、
前記ポリエーテルの他方の末端にカチオン交換基が結合していることを特徴とする液体クロマトグラフィー用充填剤に関するものである。
【００１３】
また、前記ポリエーテルは、開環したグリシジル基を含んでいてもよく、その場合、前記アルカン又は前記芳香族に酸素を介して結合していることが好ましい。
【００１４】
さらに、前記カチオン交換基は、スルホン酸基又はカルボン酸基であってもよい。
【００１５】
さらに、本発明の充填剤は、その粒子径が１から１０μｍであることが好ましく、測定試料に対して非多孔性であることが好ましい。
【００１６】
本発明の充填剤は、充填して液体クロマトグラフィー用カラムとして利用することが可能であり、さらに当該カラムでタンパク質を分析、定量する方法、特にヘモグロビン類であるタンパク質を分析、定量する方法に使用することが可能である。
【００１７】
本発明の充填剤は、架橋性ポリマーの表面に炭素数３〜１０である、アルカン又は置換基を有していてもよい芳香族を酸素を介して導入し、前記アルカン又は前記芳香族の他方の末端にポリエーテルを導入し、前記ポリエーテルの他方の末端にカチオン交換基を導入することで製造することが可能である。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の充填剤では、これまで難しかったヘモグロビンＥとヘモグロビンＡ０およびヘモグロビンＡ２の分離が可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】実施例１での健常人検体のクロマトグラム例を示す図である。
【図２】実施例１での異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）のクロマトグラム例を示す図である。
【図３】実施例２での健常人検体のクロマトグラム例を示す図である。
【図４】実施例２での異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）のクロマトグラム例を示す図である。
【図５】実施例３での健常人検体のクロマトグラム例を示す図である。
【図６】実施例３での異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）のクロマトグラム例を示す図である。
【図７】実施例４での健常人検体のクロマトグラム例を示す図である。
【図８】実施例４での異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）のクロマトグラム例を示す図である。
【図９】実施例５での健常人検体のクロマトグラム例を示す図である。
【図１０】実施例５での異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）のクロマトグラム例を示す図である。
【図１１】比較例１での健常人検体のクロマトグラム例を示す図である。
【図１２】比較例１での異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）のクロマトグラム例を示す図である。
【図１３】比較例２での健常人検体のクロマトグラム例を示す図である。
【図１４】比較例２での異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）のクロマトグラム例を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下に本発明を詳細に説明する。
【００２１】
本発明で使用される架橋ポリマー粒子は特に限定されず、公知の架橋ポリマーを使用することができるが、ビニルアルコール類、親水性メタクリ酸類、アクリルエステル類より選ばれる親水性単量体を懸濁重合法、分散重合法またはシード重合法などで重合したポリマー粒子をあげることができる。
【００２２】
本発明において、炭素数３〜１０である、アルカン又は置換基を有していてもよい芳香族としては、プロパン、ブタン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、２−エチル−ヘキサン、ノナン、デカン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、シクロオクタン、１、４−ジメチルシクロヘキサン、ベンゼン、１、２−ジメチルベンゼン、１、３−ジメチルベンゼン、１、４−ジメチルベンゼン、１、２−ジエチルベンゼン、１、３−ジエチルベンゼン、１、４−ジエチルベンゼン等を挙げることができ、炭素数６〜１０である、アルカン又は置換基を有していてもよい芳香族であることが好ましい。
【００２３】
また、前記ポリエーテルは、開環したグリシジル基を含んでいることが好ましく、前記アルカン又は前記芳香族と酸素を介して結合していることがより好ましい。グリシジル基のエーテル基部分は直接カチオン交換基と結合していても良いが、炭素数３〜５のアルキル直鎖を介してカチオン交換基と結合している方が好ましい。
【００２４】
本発明において、カチオン交換基は特に制限はないが、スルホン酸基又はカルボン酸基であることが好ましい。
【００２５】
次に、本発明の充填剤の製造方法について詳細に説明する。
【００２６】
本発明の充填剤は、架橋性ポリマーの表面に炭素数３〜１０である、アルカン又は置換基を有していてもよい芳香族を酸素を介して導入し、前記アルカン又は前記芳香族の他方の末端にポリエーテルを導入し、前記ポリエーテルの他方の末端にカチオン交換基を導入することで製造することができる。
【００２７】
炭素数３〜１０である、アルカン又は置換基を有していてもよい芳香族を酸素を介して導入するとは、２個以上の水酸基を有する単量体、具体例として１，３−プロパンジオール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、トリプロピレングリコール、１，４−ブタンジオール、３−メチル−１，３−ブタンジオール、１，５−ペンタンジオール、１，２−ヘキサンジオール、２，５−ジメチル−２，５−ヘキサンジオール、１，６−ヘキサンジオール、２−エチル−１，３−ヘキサンジオール、ベンゼンジメタノール、１，３−ベンゼンジメタノール、１，４−ベンゼンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、１，７−ヘプタンジオール、１，２−オクタンジオール、１，８−オクタンジオール、１，９−ノナンジオール、１，１０−デカンジオール、ジプロピレングリコール、２−エチルー１，３−ヘキサンジオールなどを架橋ポリマー粒子の表面と反応させて、水酸基部分でエーテル結合させればよい。
【００２８】
架橋ポリマー粒子の表面に酸素を介して導入する方法としては、架橋ポリマー粒子のエポキシ基と三フッ化ホウ素ジエチルエーテルなどの酸性触媒下で反応させることで前記単量体を粒子表面に固定化する方法や、架橋ポリマー粒子が水酸基を有している場合には２−クロロメチルオキシラン、グリセロールトリグリシジルエーテルなどのエポキシ化合物と架橋ポリマー粒子を水酸化ナトリウム水溶液中で反応させることで架橋ポリマー粒子にエポキシ基を導入し、その後、前記単量体を酸性触媒下で反応させることで粒子表面に固定化することもできる。
【００２９】
前記アルカン又は前記芳香族の他方の末端にポリエーテルを導入するとは、前記単量体のポリマー粒子表面と結合していない方の水酸基に、アリルグリシジルエーテルなどのエポキシ化合物をアルカリ触媒中で反応させること等が挙げられる。
【００３０】
前記ポリエーテルの他方の末端にイオン交換基を導入する方法として、末端の水酸基を有している場合には、モノハロゲンアルキルカルボン酸、モノハロゲンアルキルスルホン酸などを反応させカルボキシアルキル基、アルキルスルホン酸を導入する方法がある。具体的にはモノクロロ酢酸をアルカリ触媒中で反応させることでカルボキシメチル基を導入することができる。前記ポリエーテルの他方の末端がアリル基である場合には、亜硫酸ナトリウム水溶液中に酸素ガスを吹き込み反応させスルホン酸基を導入することができる。
【００３１】
また、２−クロロメチルオキシラン、グリセロールトリグリシジルエーテルなどのエポキシ化合物を水酸化ナトリウム水溶液中で反応させることで末端をエポキシ化した後、硫酸ナトリウムやタウリン、グリコール酸などの相当する陽イオン交換基を化合物と反応させることでイオン交換基を導入することも可能である。
【実施例】
【００３２】
以下、実施例により本発明を詳しく説明するが、本発明は本実施例により限定されるものではない。
【００３３】
（実施例１）
グリシジルメタクリレート３５０ｇとエチレングリコールジメタクリレート７０ｇ、メチルメタクリレート３０ｇ及びｔ−ブチルパーピバレート１０ｇの混合液を硫酸ナトリウム４０ｇとポリビニルアルコール２００ｇを溶かした水溶液中で撹拌し、反応温度６０℃で１２時間架橋重合反応を行い粒子径３．２μｍの非多孔性の架橋ポリマー粒子を得た。
【００３４】
この架橋ポリマー粒子２０ｇ、１，４−シクロヘキサンジメタノール２０ｇを１，４−ジオキサン２００ｇ中に分散させ三フッ化ホウ素ジエチルエーテル１ｍＬを加え７０℃
で１６時間反応させた。反応後、ゲルを１，４−ジオキサンおよび水で洗浄し、洗浄後風乾させサクションドライ状態とした。サクションドライゲル１５ｇを４２％水酸化ナトリウム水溶液中に分散させ液温を４０℃に保ちながらアリルグリシジルエーテルを滴下した。得られたポリマー粒子は再び水洗したのち亜硫酸ナトリウム水溶液中に分散させ酸素ガスを吹き込み１６時間反応させた。
【００３５】
得られた液体クロマトグラフィー用充填剤を内径４．６ｍｍ、長さ３．５ｃｍのカラムに充填し、ヘモグロビン測定用カラムとした。
【００３６】
溶離液として以下の２液を使用し、ヘモグロビンを分離した。
Ａ液：２０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ５．５）
Ｂ液：２００ｍＭ塩化ナトリウム含有２０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ５．５）
図２から、異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）において、ヘモグロビンＦ、Ａ０、Ａ２およびＥが良く分離していることがわかる。
【００３７】
（実施例２）
グリシジルメタクリレート３５０ｇとエチレングリコールジメタクリレート７０ｇ、メチルメタクリレート３０ｇ及びｔ−ブチルパーピバレート１０ｇの混合液を硫酸ナトリウム４０ｇとポリビニルアルコール２００ｇを溶かした水溶液中で撹拌し、反応温度６０℃で１２時間架橋重合反応を行い粒子径３．２μｍの非多孔性の架橋ポリマー粒子を得た。
【００３８】
この架橋ポリマー粒子２０ｇ、１，４−ベンゼンジメタノール２０ｇを１，４−ジオキサン２００ｇ中に分散させ三フッ化ホウ素ジエチルエーテル１ｍＬを加え７０℃で１６時間反応させた。反応後、ゲルを１，４−ジオキサンおよび水で洗浄し、洗浄後風乾させサクションドライ状態とした。サクションドライゲル１５ｇを４２％水酸化ナトリウム水溶液中に分散させ液温を４０℃に保ちながらアリルグリシジルエーテルを滴下した。得られたポリマー粒子は再び水洗したのち亜硫酸ナトリウム水溶液中に分散させ酸素ガスを吹き込み１６時間反応させた。
【００３９】
得られた液体クロマトグラフィー用充填剤を実施例１と同一形状のカラムに充填し、実施例１と同様の方法にてヘモグロビン分離を行った。
【００４０】
図４から、異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）において、ヘモグロビンＦ、Ａ０、Ａ２およびＥが良く分離していることがわかる。
【００４１】
（実施例３）
スチレン３０ｇ及びエチレンヘキシルチオグリコール酸エステル２．４ｍＬの混合液をイオン交換水中で撹拌分散させ、７０℃に昇温した。昇温一時間後に硫酸カリウム１．２ｇ水溶液を加え、さらに２０時間反応させ、平均粒子径０．８μｍのシード粒子液を得た。
【００４２】
シード粒子液１．５ｇを８％ポリビニルアルコール水３００ｇ中に分散させ室温にて撹拌し、シード粒子分散液を得た。
【００４３】
グリシジルメタクリレート１８ｇ、エチレングリコールジメタクリレート４２ｇ、２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）０．６ｇを混合したモノマー混合液とした。ドデシル硫酸ナトリウム０．５ｇをイオン交換水２００ｇにとかした水溶液とモノマー混合液を混ぜ、ホモジナイザーを用いて乳化液を作製した。乳化液を上記シード粒子分散液に加えゆっくりと室温下で撹拌した。６時間後、液温を７０℃へ昇温し反応させ架橋ポリマー粒子を得た。反応後、１，４−ジオキサンで洗浄しスチレンシードを除去した。得られた架橋ポリマー粒子の粒子径は２．７μｍであった。
【００４４】
架橋ポリマー粒子２０ｇ、１，４−ベンゼンジメタノール２０ｇを１，４−ジオキサン２００ｇ中に分散させ三フッ化ホウ素ジエチルエーテル１ｍＬを加え７０℃で１６時間反応させた。反応後、ゲルを１，４−ジオキサンおよび水で洗浄し、洗浄後風乾させサクションドライ状態とした。サクションドライゲル１５ｇを４２％水酸化ナトリウム水溶液中に分散させ液温を４０℃に保ちながらアリルグリシジルエーテルを滴下した。得られたポリマー粒子は再び水洗したのち亜硫酸ナトリウム水溶液中に分散させ酸素ガスを吹き込み１６時間反応させた。
【００４５】
得られた液体クロマトグラフィー用充填剤を実施例１と同一形状のカラムに充填し、実施例１と同様の方法にてヘモグロビン分離を行った。
【００４６】
図６から、異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）において、ヘモグロビンＦ、Ａ０、Ａ２およびＥが良く分離していることがわかる。
【００４７】
（実施例４）
実施例１で使用した架橋ポリマー粒子２０ｇ、ジプロピレングリコール２０ｇを１，４−ジオキサン２００ｇ中に分散させ三フッ化ホウ素ジエチルエーテル１ｍＬを加え７０℃で１６時間反応させた。反応後、ゲルを１，４−ジオキサンおよび水で洗浄し、洗浄後風乾させサクションドライ状態とした。サクションドライゲル１５ｇを４２％水酸化ナトリウム水溶液中に分散させ液温を４０℃に保ちながらアリルグリシジルエーテルを滴下した。得られたポリマー粒子は再び水洗したのち亜硫酸ナトリウム水溶液中に分散させ酸素ガスを吹き込み１６時間反応させた。
【００４８】
得られた液体クロマトグラフィー用充填剤を実施例１と同一形状のカラムに充填し、実施例１と同様の方法にてヘモグロビン分離を行った。
【００４９】
図８から、異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）において、ヘモグロビンＦ、Ａ０、Ａ２およびＥが良く分離していることがわかる。
【００５０】
（実施例５）
実施例１で使用した架橋ポリマー粒子２０ｇ、２−エチルー１，３−ヘキサンジオール２０ｇを１，４−ジオキサン２００ｇ中に分散させ三フッ化ホウ素ジエチルエーテル１ｍＬを加え７０℃で１６時間反応させた。反応後、ゲルを１，４−ジオキサンおよび水で洗浄し、洗浄後風乾させサクションドライ状態とした。サクションドライゲル１５ｇを４２％水酸化ナトリウム水溶液中に分散させ液温を４０℃に保ちながらアリルグリシジルエーテルを滴下した。得られたポリマー粒子は再び水洗したのち亜硫酸ナトリウム水溶液中に分散させ酸素ガスを吹き込み１６時間反応させた。
【００５１】
得られた液体クロマトグラフィー用充填剤を実施例１と同一形状のカラムに充填し、実施例１と同様の方法にてヘモグロビン分離を行った。
【００５２】
図１０から、異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）において、ヘモグロビンＦ、Ａ０、Ａ２およびＥが良く分離していることがわかる。
【００５３】
（比較例１）
実施例１で使用した架橋ポリマー粒子２０ｇ、エチレングリコール２０ｇを１，４−ジオキサン２００ｇ中に分散させ三フッ化ホウ素ジエチルエーテル１ｍＬを加え７０℃で１６時間反応させた。反応後、ゲルを１，４−ジオキサンおよび水で洗浄し、洗浄後風乾させサクションドライ状態とした。サクションドライゲル１５ｇを４２％水酸化ナトリウム水溶液中に分散させ液温を４０℃に保ちながらアリルグリシジルエーテルを滴下した。得られたポリマー粒子は再び水洗したのち亜硫酸ナトリウム水溶液中に分散させ酸素ガスを吹き込み１６時間反応させた。
【００５４】
得られた液体クロマトグラフィー用充填剤を実施例１と同一形状のカラムに充填し、実施例１と同様の方法にてヘモグロビン分離を行った。
【００５５】
図１１から、ヘモグロビンＡ０、Ａ２の分離が悪いことがわかり、図１２から、異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）において、ヘモグロビンＡ０、Ａ２、Ｅの分離が悪いことがわかる。
【００５６】
（比較例２）
グリシジルメタクリレート１８ｇ、エチレングリコールジメタクリレート３２ｇ、ジビニルベンゼン１０ｇと２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）０．６ｇを混合したモノマー混合液とした。ドデシル硫酸ナトリウム０．５ｇをイオン交換水２００ｇにとかした水溶液とモノマー混合液を混ぜ、ホモジナイザーを用いて乳化液を作製した。
【００５７】
上記、乳化液を実施例２で作製したシード粒子分散液に加えゆっくりと室温下で撹拌した。６時間後、液温を７０℃へ昇温し反応させ架橋ポリマー粒子を得た。架橋ポリマー粒子径は３．２μｍであった。
【００５８】
架橋ポリマー粒子２０ｇ、エチレングリコール２０ｇを１，４−ジオキサン２００ｇ中に分散させ三フッ化ホウ素ジエチルエーテル１ｍＬを加え７０℃で１６時間反応させた。反応後、ゲルを１，４−ジオキサンおよび水で洗浄し、洗浄後風乾させサクションドライ状態とした。サクションドライゲル１５ｇを４２％水酸化ナトリウム水溶液中に分散させ液温を４０℃に保ちながらアリルグリシジルエーテルを滴下した。得られたポリマー粒子は再び水洗したのち亜硫酸ナトリウム水溶液中に分散させ酸素ガスを吹き込み１６時間反応させた。
【００５９】
得られた液体クロマトグラフィー用充填剤を実施例１と同一形状のカラムに充填し、実施例１と同様の方法にてヘモグロビン分離を行った。
【００６０】
図１４から、異常ヘモグロビン症（ヘモグロビンＡＥ）において、ヘモグロビンＡ０、Ａ２、ＥおよびヘモグロビンＡ２とＥの分離が悪いことがわかる。
【図１】
2018017560.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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