(57)【要約】【課題】依存、他の疾患（依存に関連するか又は関連しない精神症状、例えば、不安、心的外傷後ストレス疾患を含む）、及び神経変性病を治療するための組成物と方法を提供すること。【解決手段】本発明は、特に、唯一の医薬活性物質としてメチラポールを含む医薬として許容される組成物；メチラポールと少なくとも１つの追加の医薬活性物質とを含む組成物；ＨＰＡ軸を標的とする物質自体が新規であるか修飾されている（例えば、血液脳関門を透過するように設計された二重特異的抗体、又は例えば血液脳関門を透過する物質への接合により再設計された既知の化合物）組成物；及び、ＨＰＡ軸を標的とする物質が、副腎でのコルチゾール産生を有意に阻害しないように製剤化された組成物、を特徴とする。例えばこの組成物は、血漿コルチゾール濃度を低下させるには低すぎる用量を含むように製剤化するか、又は皮膚に優先的に影響を与えるように製剤化することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
メチラポールを含んで成る医薬組成物であって、患者に対して経口又は局所投与するために製剤化されている医薬組成物。
【請求項２】
第二の医薬活性物質を更に含んで成る、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
第二の医薬活性物質がＧＡＢＡの発現又は活性を増大させるか、ＧＡＢＡ模倣薬 (mimic)であるか、あるいは前記患者におけるＧＡＢＡ代謝を阻害する、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
メチラポールが、前記患者における血漿コルチゾール濃度を減少させるのに不十分な量の単位剤形で存在している、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
メチラポールが、血液脳関門を透過する活動を促進する物質と接合している、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
脳内のメチラポール濃度を維持するのを助ける流出阻害剤、並びに／あるいはポリエチレングリコール、グリセリン、及びゼラチンのうちの１又は複数を含んで成る賦形剤、を更に含んで成る、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
視床下部・下垂体・副腎皮質（ＨＰＡ）軸を標的とするが、血漿コルチゾールを有意に減少させない第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質とを含んで成る医薬組成物。
【請求項８】
前記第一物質が、コルチコトロピン放出ホルモン（ＣＨＲ）又は副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）の発現又は活性を阻害する物質である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記第一物質がメチラポン（メトピロン（登録商標））、その活性代謝産物、又はケトコナゾール（ニゾラール（登録商標））である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記第二物質がベンゾジアゼピンである、請求項７〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ベンゾジアゼピンがオキサゼパム又はクロルジアゼポキシドである、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記第一物質が、前記患者における血漿コルチゾール濃度を減少させるのに不十分な量の単位剤形で存在している、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記第一物質及び／又は第二物質が、血液脳関門を透過する活動を促進する部分と接合している、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
脳内の前記第一物質及び／又は第二物質の濃度を維持するのを助ける流出阻害剤、並びに／あるいはポリエチレングリコール、グリセリン、及びゼラチンのうちの１又は複数を含んで成る賦形剤、を更に含んで成る、請求項７〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ＨＰＡ軸における異常活性に関連する疾患に罹患している患者を治療する方法であって：
（ａ）治療を必要とする患者を同定し；そして
（ｂ）当該患者に対し、治療上有効量の請求項１又は７に記載の組成物を投与すること、
を含んで成る、方法。
【請求項１６】
前記疾患が、依存、不安、鬱病、又は統合失調症である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
神経変性病に罹患している患者を治療する方法であって：
（ａ）治療を必要とする患者を同定し；そして
（ｂ）当該患者に対し、治療上有効量の請求項１又は７に記載の組成物を投与すること、
を含んで成る、方法。
【請求項１８】
前記神経変性病が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、又は筋萎縮性側索硬化症である、請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の参照
本出願は、２０１０年６月１６日に出願された米国仮特許出願第６１／３５５，４８２号の出願日の利益を主張する。参照による内容の援用が許可されるすべての法域において、米国仮特許出願第６１／３５５，４８２号の全内容は、参照することにより本明細書で援用される。
【０００２】
政府の権利に関する声明
本発明は、国立薬物乱用研究所（National Institute on Drug Abuse）により授与された米国公衆衛生総局基金（United States Public Health Service ｇrant）第ＤＡ０６０１３号の下で政府の支持により行われた。政府は本発明についての一定の権利を有する。
【０００３】
技術分野
本発明は、依存、他の疾患（依存に関連するか又は関連しない精神症状、例えば、不安、心的外傷後ストレス疾患を含む）、及び神経変性病を治療するための組成物と方法とに関する。更に詳しくは本発明は、依存における行動に良い影響を与え、再発リスクを低下させる１又は複数の活性物質を含む医薬組成物を含む。ある実施態様において医薬組成物は、患者に投与した時、血漿コルチゾール濃度を有意に阻害しない用に製剤化され、活性物質は、特に血液脳関門を透過できるように構築される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
発明の要約
薬物のようなある物質への依存、又は賭事のような活動への依存を治療するのに、あるタイプの治療薬を組合せて使用できることを示す研究を、我々は以前行った。これらの以前の研究に基づいて我々は、患者に利益（例えば再発の可能性の低下）をもたらすと思われる併用薬剤療法を記載し、これらの薬剤療法が、ＨＰＡ軸内の活性を弱める（例えば、ＨＰＡ軸内内の活性のキュー誘発性上昇を弱めることにより）であろうという仮説を立てた（例えば、米国特許出願公開第２００９／０２０３６６９号を参照）。既に記載された組成物は、視床下部−下垂体−副腎皮質（ＨＰＡ）軸を標的とする少なくとも１つの活性成分（「第一」活性物質）、及び前頭前皮質を標的とする少なくとも１つの活性成分（「第二」活性物質）を含むものである。例えば、この組成物は、ＣＲＨ、ＡＣＴＨ及び／又はコルチゾールの発現又は活性を低下させる第一活性物質と、前頭前皮質内の活性（例えば、阻害性神経伝達物質ＧＡＢＡにより弱められるキュー誘発性活性）を低下させる第二活性物質とを含むであろう。我々の進行中の研究は、この我々が以前記載した治療法を支持しているが、今回我々は、血漿コルチゾール濃度を有意に低下させない医薬組成物を用いることにより、良好な結果が達成されることを示す研究を行った。我々は更に、単独で又は追加の活性物質と組合せて使用できる、メチラポールを含む医薬組成物を考案し；我々は更に、コルチゾール産生性の副腎以外の組織（例えば脳）の有害な活性を選択的に阻害する医薬活性物質を考案し；そして我々は、本明細書に記載の組成物のみでなく、米国特許出願公開第２００９／０２０３６６９号に既に記載した医薬組成物によっても、追加の症状（例えば神経変性病）を治療できることを示した。
【０００５】
すなわち本発明は、特に、唯一の医薬活性物質としてメチラポールを含む医薬として許容される組成物；メチラポールと少なくとも１つの追加の医薬活性物質とを含む組成物；ＨＰＡ軸を標的とする物質自体が新規であるか修飾されている（例えば、血液脳関門を透過するように設計された二重特異的抗体、又は例えば血液脳関門を透過する物質への接合により再設計された既知の化合物）組成物；及びＨＰＡ軸を標的とする物質が、副腎でのコルチゾール産生を有意に阻害しないように製剤化された組成物、を特徴とする。例えばこの組成物は、血漿コルチゾール濃度を低下させるには低すぎる用量を含むように製剤化するか、又は皮膚に優先的に影響を与えるように製剤化することができる。例えば、ＨＰＡ軸を標的とする物質を、皮膚への塗布用の局所製剤（例えば、ゲル剤、クリーム剤、軟膏、ローション剤、軟膏剤、又は経皮パッチからの放出に適した製剤）に製剤化することができる。本組成物は、皮膚と脳以外に、小腸又は胸腺を標的とするように製剤化することができる。物理的結合を広く示すために我々は「接合している」という用語を使用する；共有結合又はイオン結合により結合される２つの物質は、例えば接合している。
【０００６】
従って本発明は、唯一の活性な医薬として、又は活性物質（例えば２つ又は３つの活性物質）の組合せの１つとして、メチラポールを含む医薬組成物を特徴とする。製剤は以下で詳細に議論するが、我々は、このような組成物が、患者への経口、局所、静脈内、又は皮下投与用に製剤化されることができ、１又は複数の活性物質を、血液脳関門の透過を促進するペプチド系の物質（例えば、抗体）に接合させることができることに注目している。医薬組成物がメチラポールと第二の医薬活性物質とを含む場合、第二の物質は、ＧＡＢＡ（ガンマ−アミノ酪酸）、の発現又は活性を上昇させる物質；ＧＡＢＡ模倣薬；又は患者のＧＡＢＡ代謝を阻害する物質でもよい。いずれの構成においても、メチラポールは、単位剤形で、患者の血漿コルチゾール濃度を低下させるには不充分な量で存在することができる。（後に更に議論される他の実施態様において、メチラポールのような第一物質は、単位剤形で、患者の血漿コルチゾール濃度を低下させるには不充分な量で存在することができる。）。
【０００７】
直前で議論したメチラポール含有組成物と、本発明の態様として本明細書に記載の他の組成物は、単位剤形で調製することができる。このような剤型では、組成物は、適切な量の活性成分を含有する単位用量（例えば、医薬的有効用量）に細分される。単位剤形は、例えばカプセル剤、錠剤、カシェ剤、ロゼンジ剤、ゲルキャップ剤、パッチ剤（例えば経皮パッチ）、例えばエアゾル吸入剤からの排出のために調製される粉末、などの、医薬業界で公知の、基本的に任意の不連続単位でもよい。実際には、単位剤形は一緒にパッケージングされ、治療過程を示す回数で含まれる。
【０００８】
ＨＰＡ軸を標的とする物質（メチラポールを含む）は、血液脳関門を透過する物質の活動を促進する物質又は成分に接合することができる。あるいは、又は更に、医薬組成物は、活性物質がいったん脳に到達した後は、脳内の活性物質（例えばメチラポール）の濃度を維持するのを助ける流出阻害剤を含むことができる。賦形剤は更に後述されるが、本医薬組成物のいずれも、ポリエチレングリコール、グリセリン、及びゼラチンの１又は複数を含むことができることを、我々は指摘する。
【０００９】
本発明はまた、視床下部−下垂体−副腎皮質（ＨＰＡ）軸を標的とするが、血漿コルチゾールを有意に低下させない第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質とを含む、医薬組成物を特徴とする。コルチゾール濃度は当該分野で公知の方法により容易に測定することができ、変動（例えば、２４時間の間に）することが認識されている。従って当業者には理解されるように、コルチゾール濃度（例えば、治療患者対未治療患者中）は、１日のうちの同様の時間に、又は標準条件下で比較しなければならない。本組成物に関連して、早朝（例えば、午前８時頃）に得られた血液試料中の血漿コルチゾール濃度が、治療集団の少なくとももしくは約７０％（例えば、少なくとももしくは約７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％）で、５μｇ／ｄｌ未満（例えば、約５．０、４．５、４．０、３．５、３．０、２．５、又は２．５μｇ／ｄｌ未満）に低下する時、物質は血漿コルチゾールを有意に低下させている。
【００１０】
ＨＰＡ軸を阻害する物質は、コルチコトロピン放出ホルモン（ＣＲＨ）又は副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）の発現又は活性を阻害する物質でもよい。そのような物質は後に詳述されるが、ここでは、「第一」物質がメチラポン（メトピロン（登録商標））、その活性代謝産物（例えば、メチラポール）、又はケトコナゾール（ニゾラール（登録商標））であることを指摘する。同様に、前頭前皮質を標的とする物質は後に詳述され、オキサゼパム及びクロルジアゼポキシドのようなベンゾジアゼピンを含む。
【００１１】
上記組成物において、活性物質は単位剤形で製剤化することができ、ＨＰＡ軸を標的とする物質の有効量は、患者の血漿コルチゾール濃度を低下させるのに不充分な量でもよい。本発明の組成物において、第一物質及び／又は第二物質は、血液脳関門を透過する活動を促進する成分に接合させることができる。あるいは、又は更に、この組成物は、脳内の第一物質及び／又は第二物質の濃度を維持するのを助ける流出阻害剤を含むことができる。有用な賦形剤は、ポリエチレングリコール、グリセリン、及びゼラチンを含む。
【００１２】
本治療法は、ＨＰＡ軸における異常活性に関連する疾患に罹患している患者を治療する方法を含み、この方法は、当該患者に対し、治療上有効量の本明細書に記載の組成物を投与することを含むことができる。本発明は、医薬の調製における組成物の使用と、ＨＰＡ軸における異常活性に関連する疾患（本明細書に記載の具体的な疾患を含む）を治療するための医薬の調製における使用とを含む。上記方法のいずれも、治療の必要な患者を同定する工程を含み、患者はヒト患者でもよい。
【００１３】
治療に適した疾患には、依存、不安、肥満（ある場合には、食物への依存の結果）、鬱病、月経前不機嫌性疾患、統合失調症、及び神経変性病がある。神経変性病は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、又は筋萎縮性側索硬化症でもよい。
【００１４】
本発明の組成物は、特定の細胞機構又は分子機構で機能するものに限定されない。しかし依存に関して、我々は、彼又は彼女の薬剤選択（これは、渇望と再発に至る）について、脱依存を思い起こさせる、ＨＰＡ軸及び交感神経系の調整活性化を発生させる環境キューの能力を阻止することを目的として、薬剤及び薬剤の組合せを選択した。すなわち、この組成物は、ＨＰＡ軸と交感神経系の活性を上昇させる調整刺激の能力を低下させるが、基礎活性を低下もしくは有意に低下させない組成物を含む。我々の副腎摘出データは、オキサゼパムと組合せたメチラポンの作用は、少なくともＧＡＢＡが活性である、おそらく前頭前皮質中の副腎のレベルより上で仲介されることを示唆する。
【００１５】
明細書中に特に別の指定がなければ、我々は、標的分子（例えば、酵素、リガンド、又はリガンドが結合する受容体のような標的）、又は体の標的領域（例えば、脳、皮膚、又は内分泌系の腺もしくは臓器）に、臨床的に有益な方法（例えば、１又は複数の調整された環境キューに患者が曝露された後に、ＨＰＡ又はストレス軸活性化を阻害する）で影響を与える任意の物質(substance)を、広く意味するのに「物質」(agent)という用語を使用する。例えば我々は、メチラポン（メトピロン（登録商標））やオキサゼパムのような化合物を「物質」と呼ぶ。従来の化合物（例えば、小有機分子又は無機分子）を意味するのに、我々はまた「物質」という用語を使用する。「物質」はまた、タンパク質もしくはタンパク質系の分子（例えば、変異リガンド又は抗体）、又は核酸もしくは核酸系の物質（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉを仲介するＲＮＡ分子、及びこれらの送達に有用なベクター）でもよい。例えば我々は、ＣＲＨに結合しその活性を改変（例えば阻害）する抗体（例えば、ヒト又はヒト化抗ＣＲＨ抗体）、又はＣＲＨをコードするＲＮＡと特異的に相互作用し、その翻訳を阻害する核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ）を、ＣＲＨを阻害する「物質」と呼ぶ。ＣＲＨは、標的化できる分子の１つにすぎず；ＡＣＴＨ、コルチゾール（ある実施態様において）、及びＧＡＢＡもまた、ＣＨＲに関して本明細書で議論した種類の物質により、標的化することができる。本発明の方法で有用な物質には、コルチゾール受容体のアンタゴニスト（初期の結果は、依存の動物モデルでコルチコステロンが上昇していることを示す）を含み、依存や本明細書に記載の他の症状を治療する方法は、血漿コルチゾール濃度を抑制することなく、メチラポン、メチラポール、又はＨＰＡ軸を標的とする他の物質を含む、医薬組成物を投与することにより行われることが指摘される。
【００１６】
すでに述べたように、ＨＰＡ軸を標的とする物質（例えば、二重物質又は多重物質医薬組成物中の第一物質）は、血漿コルチゾール濃度を有意に低下させない用量で送達され得る（及び、そのような組成物が処方される場合が、後に議論される）。コルチゾール濃度は、血液試料で容易に測定することができるため、そのような用量を決定するのは当業者の技術能力の範囲内である。今日までの我々のデータは、０．５〜５０．０ｍｇ／ｋｇの第一物質（例えば、メチラポン又はメチラポール）を含む経口投与された組成物は、そのような結果を達成するであろうことを示唆する。循環用量は投与経路や他の事項に依存して変動し、他の用量が適切で有効な場合もあることは、当該分野でよく知られている。すでに述べたように、第一物質はまた、血液脳関門の透過を促進する方法で投与することもでき、脳への化合物の送達を促進する方法及び物質は当該分野で公知であり、後に議論される。
【００１７】
物質が組織（例えば、神経系、皮膚、又は内分泌系の組織）を「標的とする」時、これは、その領域内の細胞の活性又は生物学的プロセスを、患者に利益を付与するように影響を与える。例えば、患者がある物質又は活動に依存している時、利益は、その物質又は活動への患者の関与を低下させることであり得る。例えば患者は、治療の無い場合に予測される程度より、又は治療前の程度より、低い頻度で、その物質を使用するか又はその活動を実施する。すなわち利益は、調整された環境キューが存在する場合でも、再発リスクの低下として特徴付けることができる。この臨床的利益は、患者がその物質又は活動に対する渇望が低下したことを報告してもよいという点で、主観的である。治療は後に更に記載されるが、本発明の化合物及び方法は、断薬を又は治療の無い場合に予測される期間より長い断薬を促進するのに使用できることを、我々はここで述べておく。すなわち依存挙動（例えば、薬物使用）が起きる頻度は低下するであろう。治療に適した他の症状について、利益は、その症状に関連した１又は複数の兆候又は症状の改善であり得る。例えばアルツハイマー病が治療されている場合、利益は、例えば改善した記憶又は他人と会話するための能力により証明される、改善された認知機能であり得る。パーキンソン病、ハンチントン病、又はＡＬＳが治療されている場合、利益は、例えば運動能力の改善又は話し方の改善（又は、患者の運動能力及び／又は話し方の疾患速度の減速）であり得る。
【００１８】
本組成物に含めることができる少なくとも一部の物質（コルチゾール合成インヒビター及びベンゾジアゼピンを含む）は、副作用の可能性を有する。例えば、コルチゾール合成インヒビターは、副腎不全を引き起こす可能性があり、ベンゾジアゼピンは依存と乱用の可能性があるため、これらは依存の治療には問題がある（Chouinary, J. Clin. Psychiatry 65 Suppl. 5:7-12, 2004; Lilja et al., Subst. Use Misuse 36(9-101:1213-1231, 2001; O'Brien, J. Clin. Psychiatry 66 Suppl. 2:28-33, 2005）。本発明に関連してこれらの問題に対処するために、少なくとも一部の実施態様において、低下した用量レベルを含むか、及び／又は通常の投与が引き起こすものとは異なる機構により、又は異なる標的（例えば、副腎皮質ではない組織）に作用することにより、ＨＰＡ軸（又はストレス軸）の活性に影響を与える物質の組合せを含む組成物を、我々は提供する。すなわち一部の実施態様において、本組成物と方法は、単独で投与した時ほとんど又は全く効果が無い用量で物質を投与する。これは、治療効力を維持しながら、毒性の可能性及び不要な副作用を最小にする。我々は、コカイン依存のラットモデルで、メチラポンとオキサゼパムの組合せを、単独で投与した時より効果が小さい用量で投与した時、ラットのコカイン自己投与が、用量比例的に低下したことを証明した（Goeders and Guerin, Pharmacol. Biochem. Behav. 91(1):181-189, 2008）。これらの同じ組合せは、同じ実験中の食物維持された応答に影響を与えなかった。先行技術の組成物と異なり、依存の治療のためにここで記載したものは、循環血漿コルチゾール濃度が有意に低下するように調製物された第一物質（例えば、メチラポン、メチラポール、又はＨＰＡ軸を標的とする他の物質）を有するものを含む。
【００１９】
本発明の１又は複数の実施態様の詳細は、以下の記載で示される。本発明の他の特徴、目的、及び利点は、詳細な説明と特許請求の範囲から明らかであろう。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
詳細な説明
本発明は、種々の組成物と方法とを含み、この組成物は、依存及び本明細書に記載の他の疾患(例えば、不安、鬱病、月経前不機嫌性疾患、統合失調症、及び神経変性病）の治療のための１又は複数の医薬活性物質を含む。我々はまず、本組成物中の活性医薬物質を更に詳細に記載する。
【００２１】
一般に、本組成物に含まれる物質は、現在入手できるが、本明細書に記載のようには現在製剤化されていないか、及び／又は本明細書に記載の症状を治療するために現在は処方されていない物質でもよい。例えば、当該分野で公知で、副腎の機能不全を診断するのに通常使用されるメチラポンは、本組成物中に取り込み、本明細書に記載の治療計画で投与することができる。あるいは１又は複数の物質は、本明細書に記載の教示と、当該分野で容易に入手できる情報に従って、新たに作成することができる。例えば、ＲＮＡｉを仲介するアンチセンスオリゴヌクレオチド又はＲＮＡ分子は、標的（例えば、ＣＲＨ、ＡＣＴＨ、及び交感神経系のβアドレナリン受容体）の配列が発見されれば作成することができる。これらの標的の配列は、ＲＮＡｉを仲介するアンチセンスオリゴヌクレオチドやＲＮＡ分子の製造法と同様に、当業者に公知であるか又は容易に入手できる。他の有用な物質は、あらかじめ入手できるものでも新たに作成されたものでも、本明細書で同定されたリガンド（例えば、ＣＲＨ又はＡＣＴＨ）に選択的に結合する抗体、又は調整された環境キュー（例えば、ＣＲＨ、ＡＣＴＨ、コルチゾール、又はＧＡＢＡの受容体）に応答して活性化される受容体を含む。コルチゾール受容体のような標的が細胞質に局在化される場合、物質は細胞内抗体（intrabody）でもよい。抗体物質がその標的に対して特異性を示し、非標的に結合する親和性より大きな親和性で標的に結合し、患者にとって有効な結果を誘発することを示すために、抗体治療薬の分野で一般的であるように、我々は「選択的に結合する」という用語を使用する。例えば、本組成物に含めるのに適した抗体は、例えばＣＲＨ以外のペプチドホルモンに結合するより大きな（及び好ましくは、はるかに大きな）親和性でＣＲＨに結合するであろう。
【００２２】
この物質は種々の方法で特徴付けることができ、少なくとも２種の活性医薬を含む本発明の組成物は、同じか又は異なるタイプの２種又はそれ以上の物質を含むことができる。例えば、物質は、化合物（例えば、メチラポン及びトピラメート）として；変異リガンド（例えば、その同種の受容体に結合するが、これを活性化もしくは完全に活性化はしないリガンド）又は抗体のような、タンパク質もしくはタンパク質系の分子として；又は、ＲＮＡｉを仲介するアンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはＲＮＡ分子のような、核酸もしくは核酸系の物質として、分類される。すなわち本発明の組成物は、２種又はそれ以上の異なる化合物；２種又はそれ以上の異なるタンパク質もしくはタンパク質系の分子；又は、２種又はそれ以上の異なる核酸もしくは核酸系の物質を含むことができる。あるいは本組成物は、２種の異なるタイプの物質を含むことができる。患者が治療される方法は同様に、２種又はそれ以上の異なる化合物；２種又はそれ以上の異なるタンパク質もしくはタンパク質系の分子；２種又はそれ以上の異なる核酸もしくは核酸系の物質；又はこれらの種々のタイプの物質の任意の組合せ（例えば、タンパク質と核酸）の投与を含むことができる。
【００２３】
第一の態様において本発明は、メチラポールが唯一の活性医薬である組成物を特徴とする（読みやすさを考慮して、活性医薬が１つのみの場合、「唯一の活性物」又は「活性物」と呼び、組成物が１超の活性医薬を含む場合は、単に「活性物」と呼ぶ）。メチラポールはメチラポンの代謝物であり、メチラポンから合成することができる。この種の化学変換についての文献中の先例に基づいて、ある合成反応は、メチラポンのケトン官能基の水素化ホウ素ナトリウムによる還元を利用して、メチラポールのラセミ混合物を生成する必要があると、我々は予測する。いくつかの実施態様において組成物は、メチラポールを唯一の活性物として含有し、そして組成物は、組成物が投与された患者の血漿コルチゾール濃度が低下するように、製剤化される。別の実施態様において組成物は、メチラポールを唯一の活性物として含有し、組成物は、投与後に血漿コルチゾール濃度が低下しないように製剤化される。血漿コルチゾール濃度が維持される場合、メチラポールが副腎以外の組織（例えば脳）に選択的に影響を与えるように、メチラポールは、循環濃度に影響を与えるには低すぎる用量で含まれるか、製剤化されるか、又は適用される。用量や製剤は、後に詳細に議論される。我々は、経口製剤及び局所製剤を作成することができ、特に容易に使用することができることを、ここに記載する。更に、本明細書に記載の活性物のいずれも、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分に接合することができる。あまり便利ではないが、これらの接合体及び他のタンパク質系の治療薬（例えば、後に議論される二重特異的抗体）もまた、静脈内投与又は腹腔内投与用に製剤化することができる。
【００２４】
第二の態様において本発明は、メチラポールが１又は複数の追加の活性医薬と組合わされる組成物を特徴とする。例えばメチラポールは、２種又はそれ以上の活性物の１つとして含めることができる（例えば、メチラポールは、３種の活性物の１つとして含めるか又は投与することができる）。追加の物質（例えば、「第二」物質）は、前頭前皮質又は交感神経系を標的とすることができる。３種の活性物がある場合、第一がメチラポールであり、第二が前頭前皮質を標的とすることができ、第三が交感神経系を標的とすることができる。すなわち本組成物は、メチラポールと、前頭前皮質を標的とする物質；メチラポールと、交感神経系を標的とする物質；又はメチラポール、前頭前皮質を標的とする物質、及び交感神経系を標的とする物質、を含むことができる。これらの物質は、後に議論される。メチラポールと１又は複数の追加の活性物質を含む組成物は、これらが血漿コルチゾール濃度を低下するか又は低下しないように製剤化することができ、これらの結果を達成するのに有用な用量と製剤は、後に議論される。治療の過程で血漿コルチゾール濃度が低下されるかどうかに関係なく、メチラポール及び／又は前頭前皮質を標的とする物質は、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分に接合することができる。
【００２５】
更に明瞭にするために、第一の態様と第二の態様を通して本発明は、血漿コルチゾール濃度が低下するように製剤化された組成物中で、メチラポールが唯一の活性物である組成物；血漿コルチゾール濃度が有意に低下しないように製剤化された組成物中で、メチラポールが唯一の活性物である組成物；血漿コルチゾール濃度が低下するように製剤化された組成物中で、メチラポールが２種又はそれ以上の活性物の１つである組成物；及び血漿コルチゾール濃度が有意に低下しないように製剤化された組成物中で、メチラポールが２種又はそれ以上の活性物の１つである組成物、を含む。
【００２６】
第三の態様において本発明は、ＨＰＡ軸を標的とする物質を、唯一の活性医薬として含む組成物（例えば、医薬組成物）を特徴とし、これらの組成物は、組成物を投与された患者の血漿コルチゾール濃度が低下しないように製剤化することができる。血漿コルチゾール濃度が低下するか否かに無関係に、ＨＰＡ軸を標的とする物質は、血液脳関門の透過を促進するか、又は副腎以外の組織（例えば、皮膚、小腸、胸腺）へのその利用可能性を上昇させるタンパク質又は他の成分に接合することができる。更に詳しくは、これらの組成物中の唯一の活性物は、ＣＲＨ又はＡＣＴＨを阻害する物質でもよい。ＣＲＨを阻害する物質は、ＣＲＨ発現を阻害する物質（例えば核酸）；プレホルモン又はプレプロホルモンからのＣＲＨ生成を阻害する物質；ネガティブフィードバックループへの参加により、ＣＲＨ産生もしくは分泌を阻害する物質（例えばコルチゾール）；ＣＲＨに特異的に結合し阻害する抗体；ＣＲＨ受容体アンタゴニスト（例えば、ＣＲＨ受容体（例えば、ＣＲＨ−１、ＣＲＨ−２ａ、ＣＲＨ−２ｂ、又はＣＲＨ−２ｇ）に結合し、シグナル伝達を阻害するか、又は細胞内で作用して、ＣＲＨ受容体結合に応答して通常生成される第二メッセンジャーを阻害する、変異ＣＲＨ、抗体、及び細胞内抗体を含むタンパク質）；ＣＲＨ又はＣＲＨ受容体の発現、分泌、又は活性を阻害する化合物（例えば、小分子）（例えば、下垂体中の同種の受容体に結合するＣＲＨの能力を阻害する化合物［例えば、ペキサデルフォント（ＢＭＳ−５６２，０８６としてBristol-Myers Squibbにより開発された）及びアンチアラルミン］；及びＣＲＨ代謝を促進する物質、を含む。本発明は、タンパク質もしくは他の成分に接合した時、血液脳関門の透過を促進するこれらの物質、これらを含有する医薬組成物、及び活性物に結合していない（すなわち、活性物に結合していない）が、血液脳関門の透過を促進するか又は脳中での活性物の保持を促進する組成物の一部である物質、を含む医薬組成物を含む。
【００２７】
ＡＣＴＨを阻害する物質は、ＡＣＴＨ発現を阻害する物質（例えば核酸）；ネガティブフィードバックループへの参加により、ＡＣＴＨ産生もしくは分泌を阻害する物質（例えばコルチゾール）；ＡＣＴＨに特異的に結合し阻害する抗体；ＡＣＴＨ受容体アンタゴニスト（例えば、ＡＣＴＨ受容体に結合し、シグナル伝達を阻害するか、又は細胞内で作用して、ＡＣＴＨ受容体に応答して通常生成される第二メッセンジャーを阻害するタンパク質）；ＡＣＴＨ又はＡＣＴＨ受容体の発現、分泌、又は活性を阻害する化合物（例えば、副腎中の同種の受容体に結合するＡＣＴＨの能力を阻害する化合物）；及びＡＣＴＨ代謝を促進する物質、を含む。ネガティブフィードバックの存在のために、ＡＣＴＨ自体を投与することができ、ＡＣＴＨ受容体をフィードバック阻害を開始するか又はダウンレギュレートするのに充分な量を投与することは、ＡＣＴＨを阻害する。これらの物質は、血漿コルチゾールを有意に低下させることのない用量で、投与経路で投与するか、又は製剤化することができる。
【００２８】
更に詳しくは、ＣＲＨを阻害する物質は、［Ｍｅｔｌ８，Ｌｙｓ２３，Ｇｌｕ２７，２９，４０，Ａｌａ３２，４１，Ｌｅｕ３３，３６，３８］ＣＲＦ９−４１（これは、アルファらせんＣＲＦ（９−４１）と略記され、配列 Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Met-Leu-Glu-Met-Ala-Lys-Ala-Glu-Gln-Glu-Ala-Glu-Gln-Ala-Ala-Leu-Asn-Arg-Leu-Leu-Leu-Glu-Glu-Ala（配列番号１）を有する）、及びその生物活性断片もしくは変種を含む（Rivier et al., Science 224:889, 1984）（例えば、ＣＲＦ（８−４１）。ＣＲＨを阻害する別の物質は、［Ｄ−Ｐｈｅｌ２，Ｎｌｃ２１，３８，（αＭｅＬｃｕ３７）］ＣＲＦ（１２−４１）（これは、Ｄ−Ｐｈｃ  ＣＲＦ１２−４１と略記される）、及びその生物活性断片もしくは変種を含む。ＣＲＨを阻害する他の物質は、アストレッシン（astressin）又はアストレッシン−Ｂ；ＣＰ−１５４，５２６；ＮＢ１２７９１４、アンタラミン；ＣＲＡ１０００；ＣＲＡ１００１、及び抗サウバジン−３０を含む。
【００２９】
ＨＰＡ軸を標的とする物質はまた、化合物メチラポンとメチラポール（メチラポンの代謝物）、ケトコナゾール、アミノグルテタミド、サブスタンスＰアンタゴニスト、及びバソプレシンインヒビターを含む。メチラポンは、副腎皮質ステロイドの合成における１１β−水酸化工程を阻害することにより、コルチゾールとコルチコステロン合成を阻害する（それぞれ、ヒトとラット）（Sonino, Agarwal (編), Hormone antagonists中, Walter de Gruyter, Berlin, pp 421-429, 1982; Haleem et al., Brain Res. 458, 339-347, 1988; Haynes, Gilman et al (編), The Pharmacological Basis of Therapeutics, 第８版中, Pergamon Press, New York, pp. 1431-1462, 1990）。我々は、ラットにおいて、コカインの自己投与に対する、コルチコステロン合成インヒビターであるメチラポンとケトコナゾールの作用を調べた。メチラポンで前処理すると、血漿コルチコステロンと進行中のコカイン自己投与を、顕著に用量に比例して低下させることができる（Goeders et al., Brain Res. 722:145-152, 1996も参照）。
【００３０】
ケトコナゾールは、真菌疾患の治療に使用される、広い活性スペクトルを有する経口抗真菌剤である（Sonino, Agarwal (編), Hormone Antagonists中, Walter de Gruyter, Berlin, pp 421-429, 1982; Thienpont et al., Experientia 35:606-607, 1979）。この薬剤はまた、副腎皮質ステロイドの合成における１１β−水酸化と１８−水酸化工程を阻害（Engelhardt et al., Klin. Wochenschr. 63:607-612, 1985) し、糖質コルチコイド受容体アンタゴニストとしても機能し得る（Loose et ah, J. Clin. Invest. 72:404-408, 1983）。更に、臨床治験は、標準的抗鬱病薬療法に抵抗性である高コルチゾール血症性鬱病の治療に、ケトコナゾール（ならびにメチラポン）が有効であることを示唆している（Ghadirian et al., Biol. Psychiatry 37:369-375, 1995; Murphy et al., J. Clin. Psychopharmacol. 11:121-126, 1991; Wolkowitz et al., Am. J. Psychiatry 150:810-812, 1993）。
【００３１】
おそらくは１１−ベータ水酸化酵素を阻害することにより、ＨＰＡ軸を標的とする他の物質は、Zolle et al（J. Med. Chem. 51:7652, 2008）に記載されたエトミデートとその類似体、及びGivner et al.（Nature 203:317, 1964）に記載されたＡＹ−９９４４を含む。これらの物質は、本明細書に記載の組成物と方法で使用することができる。
【００３２】
上記したように、本発明は、それ自体の性質により、他の物質への接合により、又は製剤化の方法により、視床下部（ここではＣＲＨが産生される）や下垂体（ここではＡＣＴＨが産生される）のような標的組織への優先的アクセスを達成する核酸系及びタンパク質系の治療薬を含む。これらの治療薬は、ＨＰＡ軸を標的とする物質として有用なものであり、後に更に議論される。
【００３３】
更に明瞭にするために、第三の態様を通して本発明は、唯一の活性物が、ＨＰＡ軸中のシグナル伝達分子（ＣＲＨ、ＡＣＴＨ、又はコルチゾール）の発現又は活性を阻害するか、そのようなシグナル伝達分子により結合される受容体の発現又は活性を阻害する物質である、組成物を含む。これらの物質の一部は、現在当該分野で公知であるため、我々は、公知の物質（例えば、メチラポン及びケトコナゾール）が、本発明に従って異なって製剤化されること；これらは、血漿コルチゾール濃度を低下させるには低すぎる用量で、及び／又は副腎以外の適切な標的組織にこれらを優先的に送達する（例えば、これらは、局所製剤として製剤化されるか、又は血液脳関門の透過を促進するタンパク質もしくは他の成分に接合されて、その送達を副腎よりも脳に偏らせる）ように製剤化されること、を強調したい。
【００３４】
第４の態様において本発明は、ＨＰＡ軸を標的とする第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質とを、含む組成物（例えば、医薬組成物）を特徴とする。更に、本組成物は、血漿コルチゾール濃度を有意に低下させることが無いように、製剤化することができる。血漿コルチゾール濃度が影響を受けるか否かに無関係に、第一物質と第二物質の片方又は両方は、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分に接合することができる。ＨＰＡ軸を標的とする第一物質は、本明細書に記載したもののいずれでもよい（例えば、メチラポール、本発明の第三の態様に関連して上記した任意の物質、後に更に詳述される任意の核酸もしくは抗体）。
【００３５】
第二の活性物質は、ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）の発現又は活性を上昇させることにより；ＧＡＢＡを模倣することにより；又は、ＧＡＢＡ代謝を阻害することにより、前頭前皮質を標的とすることができる。ＧＡＢＡは、受容体の結合後に、阻害されたニューロンを過分極化する阻害性神経伝達物質である。この結合は、直接又は間接に、塩素チャネル及びカリウムチャネルを開く。活性化されたイオンチャンネル型受容体は、それ自体がイオンチャネルであり、一方、代謝調節型受容体はＧタンパク質結合受容体であり、中間のＧタンパク質を介してイオンチャネルを活性化する。いずれのタイプの受容体も、ＧＡＢＡを模倣する物質により活性化することができ、こうして前頭前皮質を標的とする。不安の管理に広く処方されているベンゾジアゼピン（例えばオキサゼパム）は、ＧＡＢＡ受容体を調節するのに有用なクラスの薬剤である。ベンゾジアゼピンはＧＡＢＡ受容体に結合し、ＧＡＢＡが受容体上のそれ自体の部位に結合した時、塩素チャネルが開く頻度を上昇させることにより、この受容体をより効率的にする、と考えられる。その結果としての、シナプス後ニューロン中の細胞内塩素イオンの上昇は、ニューロンを過分極化し、この励起状態を下げる。バルビツール酸塩は、ＧＡＢＡ受容体上の別の部位に結合することにより同様の作用を示し、前頭前皮質を標的とする物質として有用である。
【００３６】
他の物質は、ＧＡＢＡ合成を上昇させることにより作用することができる。例えば合成酵素であるＬ−グルタミン酸脱炭酸酵素、又はその生物活性断片、又は他のその変異体をコードする核酸は、本明細書に記載の方法により利益を受けやすい患者［例えば、依存を示すか、依存を有すると診断された患者（治療に適した他の患者は後述される）］に投与することができる。前頭前皮質中でＧＡＢＡを直接又は間接に刺激する物質は、ＧＡＢＡの合成、放出、又は活性を、直接又は間接に上昇させることにより行う。活性は、例えばＧＡＢＡと同種の受容体との相互作用を増強することにより増強することができる。この相互作用を増強するためには、種々の方法があり、ＧＡＢＡの濃度を上昇させること、その再摂取を阻止すること、受容体アゴニストを提供すること、又は受容体結合とシグナル伝達の速度を改変することを含む。次にＧＡＢＡ濃度は、ＧＡＢＡ合成を上昇させるか、又はＧＡＢＡ代謝を阻害することにより、上昇させることができる。ＧＡＢＡ濃度は、実際は、ＧＡＢＡを模倣する物質の投与によっても上昇させることができる。間接的刺激に関して、前頭前皮質中のドーパミン作動活性又はノルアドレナリン作動活性を優先的に上昇させる任意の物質（例えば抗鬱病薬）は、前頭前皮質中のＧＡＢＡに間接的に影響を与える（すなわち、刺激する）ことができる。ミルタザピンは、ＧＡＢＡを間接的に刺激するのに使用できる抗鬱病薬の一例であり；アトモキセチンは、同様に使用できる別のタイプの物質の一例である。ガバペンチン（ニューロンチン（登録商標））は、ＧＡＢＡの作用を模倣する物質の一例であり、直接刺激物質には、任意のベンゾジアゼピン（例えば、オキサゼパム（（セラックス（登録商標））又はクロルジアゼポキシド）、ジアゼパム（バリウム（登録商標））又はアルプラゾラム（ザナックス（登録商標））がある。ムシモールやバクロフェンなどの他の有用な物質は、それぞれＧＡＢＡＡA受容体又はＧＡＢＡB受容体を介して、ＧＡＢＡを刺激してもよい。他のＧＡＢＡアゴニスト、類似体、又は模倣物には、プロガビド、プレガバリン、リルゾール、ビガバトリン、バルプロ酸（デパコート（登録商標））、チアガビン（ガビトリル（登録商標））、ラモトリジン（ラミクタール（登録商標））、フェニトイン（ディランチン（登録商標））、カルバマゼピン（テグレトール（登録商標））、及びトピラメート（トパマックス（登録商標））がある。前頭前皮質を標的とするのに有用な他のＧＡＢＡアゴニスト及び化合物には、バルビツール酸塩、カリスプロドール、抱水クロラール、グルテチミド、Ｌ−テアニン、カバ、メタクアロン、神経活性ステロイド、Ｚ軸薬、プロポフォール、スクルキャップ、カノコソウ、ガンマ−ブチロラクトン、ガンマ−ヒドロキシ酪酸、フェニブト、デラムシクラン、ヒペルフォリン、ガバクリン、フェネルジン、バルプロ酸、ビガバトリン、レモンバーム（メリッサ・オフィシナリス（Melissa officinalis））がある。ＧＡＢＡ自体、Ｌ−グルタミン、ピカミロン、又はテタノスパスミンを取り込むこともできる。
【００３７】
ベンゾジアゼピン受容体の発現は、当該分野で公知の方法を使用して評価することができる。例えば、受容体を［3Ｈ］ＰＫ１１１９５で標識することができる（Javaid et al,. , Biol. Psychiatry 36:44-50. 1994を参照；Chesley et al., J. Clin. Psychiatry 51:404-406, 1990も参照）。以下に記載するデータは、ベンゾジアゼピンがラットでのコカイン強化のいくつかの側面を仲介することを、更に示唆する。
【００３８】
第５の態様において本発明は、ＨＰＡ軸を標的とする第一物質と、交感神経系を標的とする第二物質とを、含む組成物（例えば医薬組成物）を特徴とする。更に本組成物は、血漿コルチゾール濃度を有意に低下させることが無いように、製剤化することができる。血漿コルチゾール濃度が影響を受けるか否かに無関係に、第一物質及び／又は第二物質は、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分に接合させることができる。ＨＰＡ軸を標的とする第一物質は、本明細書に記載のもののいずれでもよい（例えば、メチラポール、本発明の第三の態様に関連して記載した任意の物質、又は後に詳述される任意の核酸もしくは抗体）。
【００３９】
交感神経系を阻害する物質は、「ベータ遮断薬」として当該分野で公知のものを含む。例えば、交感神経系の活性を阻害する物質は、ソタロール（ベタペース（登録商標））、イモロール（ブロカドレン（登録商標））、カルテオロール（カルトロール（登録商標））、カルベジロール（コレグ（登録商標））は、ナドロール（コルガード（登録商標））、ナドール／ベンドロフルネタジド（コルジド（登録商標））、プロプラノロール（インデラル（登録商標））、プロプラノロール／ＨＣＴＺ（インデリド（登録商標））、ベタキソロール（ケルロン（登録商標））、ペンブトロール（レバトール（登録商標））、メトプロロール（ロプレッサー（登録商標））、ラベタロール（ノルモジン（登録商標））、アセブトロール（セクトラール（登録商標））、アテノロール／ＨＣＴＺ（テノレティック（登録商標））、アテノロール（テノーミン（登録商標））、チモロール／ ＨＣＴＺ（チモリド（登録商標））、メトプロロール（トプロール（登録商標））、ラベタロール（トランデート（登録商標））、ピンドロール（ビスケン（登録商標））、ビソプロロール（ゼベタ（登録商標））、ビソプロロール／ＨＣＴＺ（ジアック（登録商標））、エスモロール（ブレビブロック（登録商標））、又はこれらの組合せを含む。
【００４０】
第６の態様において本発明は、ＨＰＡ軸を標的とする第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質と、及び交感神経系を標的とする第三物質とを、含む組成物（例えば医薬組成物）を特徴とする。更に本組成物は、血漿コルチゾール濃度を有意に低下させることが無いように、製剤化することができる。血漿コルチゾール濃度が影響を受けるか否かに無関係に、第一物質及び／又は第二物質は、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分に接合させることができる。第一物質、第二物質、及び第三物質は、それぞれ、ＨＰＡ軸を標的とする本明細書に記載の任意の物質、前頭前皮質を標的とする本明細書に記載の任意の物質、及び交感神経系を標的とする本明細書に記載の任意の物質でよい。例えば第一物質は、メチラポール、本発明の第三の態様に関連して上記した任意の物質、又は後に詳述される任意の核酸もしくは抗体でもよい。
【００４１】
一般に、本医薬組成物中に取り込まれる化合物は、ラセミ混合物（例えば、各異性体のほぼ等しい部分）として取り込まれるか、又は精製され、Ｄ型もしくはＬ型として含まれることができる。更に化合物は、より親油性（又はより疎水性）になるように修飾することができ、そのような修飾は、化合物がより容易に血液脳関門を透過することを可能にする。化合物は、リポアミノ酸又はトリグリセリドに接合させて、これらの化合物の各トランスポータータンパク質を介して、脳中への送達を可能にすることができる。化合物（例えば、メチラポン、メチラポール、ケトコナゾール、及びオキサゼパム）はまた、脳への物質の輸送を仲介する受容体に結合するリガンドに、接合させることもできる。例えば、活性物は、トランスフェリン受容体又はインスリン様増殖因子受容体に結合するリガンドに、接合させることができる。あるいは化合物は、そのような受容体に選択的に結合する抗体に、接合させることができる。更にこれらの受容体結合タンパク質又は抗体は、血液脳関門を透過する送達のための化合物を含むリポソームの表面に、結合させることができる。更に、細胞貫通性ペプチド（例えばＨＩＶ−１からのＴＡＴペプチド）も、そこに接合した化合物の摂取を増強するための担体として、使用することができる。
【００４２】
上記したように、本組成物で有用な医薬活性物質は核酸でもよい。これらの核酸は、ＣＲＨ、ＡＣＴＨ、もしくはコルチゾール、又はこれらのリガンドの１つにより結合された受容体（例えば、ＮＲ３Ｃ１）の発現を、直接又は間接に阻害することにより、ＨＰＡ軸を標的とする第一物質として機能することができる。ＣＲＨ、ＡＣＴＨ、もしくはコルチゾール、又はこれらの受容体の発現を直接阻害するために、核酸は、配列特異的相補性により、リガンドもしくは受容体をコードする遺伝子もしくはｍＲＮＡに、特異的に結合することによりＲＮＡｉを仲介する、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はＲＮＡでもよい。ＣＲＨ、ＡＣＴＨ、もしくはコルチゾール、又はこれらのリガンドの１つにより結合される受容体の発現を間接的に阻害するために、核酸は、配列特異的相補性により、リガンドを産生する合成経路中の酵素又は前駆体をコードする遺伝子又はｍＲＮＡに、又は受容体結合により活性化される下流のエフェクターに、特異的に結合することによりＲＮＡｉを仲介する、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はＲＮＡでもよい。同様に核酸は、ＧＡＢＡを上昇させることにより、前頭前皮質を標的とする第二物質として機能することができる。例えば、核酸は、グルタミン酸からＧＡＢＡを生成する反応を触媒するＬ−グルタミン酸脱炭酸酵素の量を、上昇させることができる。
【００４３】
約９〜１０ヌクレオチド又はそれ以上（例えば、１２〜１４、１５〜１７、１８〜２０、２１〜２３、又は２４〜２７ヌクレオチド；ｓｉＲＮＡは一般に２１ヌクレオチドを有する）を有する核酸は、典型的には標的発現を阻害するのに使用され、これらの長さの核酸を本組成物中に含めることができる。長さに無関係に、核酸は、２本鎖又は１本鎖でもよく、転写が所望の場合はセンス鎖又はコード鎖、又は標的（例えば、ＣＲＨ又はＡＣＴＨ）の発現を阻害することが目的の場合は、アンチセンスもしくは非コード鎖を、含むか又は構成することができる。核酸は、標準のヌクレオチド又はヌクレオチド類似体もしくは誘導体（例えば、イノシン、ホスホロチオエート、又はアクリジン置換ヌクレオチド）を使用して合成することができ、これは、相補配列との塩基対合を改変できるか、又はヌクレアーゼに対する耐性の上昇を提供することができる。ある核酸の安定性又は溶解度は、所望であれば、塩基成分、糖成分、又はリン酸塩成分を修飾することにより、修飾することができる（例えば、Toulme (Nature Biotech. 19:17, 2001)、又はFaria et al,. (Nature Biotech. 19:40-44, 2001)による教示）。核酸のデオキシリボースリン酸骨格は、ペプチド核酸（ＰＮＡ：例えばHyrup et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry 4:5-23, 1996）を生成するように修飾することができ、これは、分子の天然の骨格が擬ペプチド骨格により置換され、４種のヌクレオチド塩基のみが保持されている、核酸「模倣物」である。これは、低イオン強度条件下で、ＤＮＡ及びＲＮＡへの特異的ハイブリダイゼーションを可能にする。ＰＮＡは、例えばHyrup et al.（前述）及び Perry-O'Keefe et al,. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:14670-675) により記載されているように、標準的固相ペプチド合成プロトコールを使用して合成することができる。
【００４４】
発現を阻害するために、核酸は、標的化配列のコード領域内で、又は非コード領域（例えば、５’又は３’非翻訳領域）に特異的に結合することができる。例えば、有用なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的化ｍＲＮＡの翻訳開始部位の周りの領域（例えば、目的の標的遺伝子の−１０〜＋１０領域）、又はポリアデニル化シグナル内もしくはその周りの領域に、相補的であり得る。遺伝子発現はまた、制御領域（例えば、プロモーター及び／又はエンハンサー）を標的化して、標的化遺伝子の転写を妨害する三重らせん構造を形成することにより阻害することができる（総説については、Helene, Anticancer Drug Des. 6:569-84, 1991; Helene, Ann. N. Y. Acad. Sci. 660:27-36, 1992; 及び Maher, Bioassays 14:807-15, 1992を参照）。この核酸はまた、いわゆる「スイッチバック」核酸と呼ばれ、これらは、５’−３’、３’−５’が交互に行われる方法で合成され、従ってこれらは、２本鎖の最初の１つの鎖と塩基対合し、次に別の鎖と塩基対合して、２本鎖の１つの鎖上のかなり大きなプリン又はピリミジンストレッチの必要性を排除する。
【００４５】
別の実施態様において、アンチセンス核酸はアノマー核酸でもよく、これは、通常のｂ単位とは反対に、鎖が互いに平行する、相補的ＲＮＡとの特異的２本鎖ハイブリッドを形成する（Gaultier et al., Nucleic Acids Res. 15:6625-6641, 1987; また Tanaka et al., Nucl. Acids Res. 22:3069-3074, 1994を参照）。あるいは、アンチセンス核酸は、２’−ｏ−メチルリボヌクレオチド（Inoue et al., Nucleic Acids Res. 15:6131-6148, 1987）又はキメラＲＮＡ−ＤＮＡ類似体（Inoue et al., FEES Lett. 215:327-330, 1987）を形成することができる。
【００４６】
我々は、核酸が、天然にはインビボで結合していたフランキング核酸配列の一部又はすべてが、もう結合していない時、これを「単離された」と呼び、核酸が、インビボで結合していた、ある量の細胞性物質から分離されている時、これを「精製された」と呼ぶ。例えば、本明細書に記載の治療薬として有用な核酸配列は、少なくとも５０％の純度であり得る（例えば、その組成物の少なくとも又は約６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％が核酸でもよい）。核酸はもちろん合成（単離したり精製したりするより）することができ、核酸構築体を生成する方法、及びこれらを標的細胞に送達する方法は、当該分野で公知である。例えば、核酸は、患者への投与の前に、ベクター（例えば、自律複製性プラスミド又はウイルス）中に取り込むことができ、そのようなベクターは本発明の範囲内である。本発明はまた、センス配向又はアンチセンス配向で本発明の核酸を含む、遺伝子構築体（例えば、核酸を輸送するプラスミド、コスミド、及び他のベクター）を包含する。核酸は、核酸の発現を促進する制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、又は他の発現制御配列、例えばポリアデニル化シグナル）に機能できる形で結合することができる。ベクターは、自律複製するか、又は宿主ゲノム中に組み込むことができ、ウイルスベクター、例えば複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、又はアデノ随伴ウイルス（例えば、米国特許第７，９５５，５９５号に記載されたアデノ随伴ウイルス）でもよい。
【００４７】
更に、存在する場合は制御配列は、核酸の構成性又は組織特異的発現（例えば、皮膚又は脳内での発現）を指令することができる。適切な神経特異的プロモーターには、特に限定されないが、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）（Olivia et al., Genomics 10:157-165, 1991; ジーンバンク（GenBank）受け入れ番号Ｘ５１９５６）、及びヒト神経繊維軽鎖プロモーター（ＮＥＦＬ）（Rogaev et al., Hum. Mol. Genet. 1:781, 1992; ジーンバンク（GenBank）受け入れ番号Ｌ０４１４７）がある。グリア特異的プロモーターには、特に限定されないが、グリア繊維性酸性タンパク（ＧＦＡＰ）プロモーター (Morii et al., Biochem. Biophys Res. Commun. 175:185-191, 1991；ジーンバンク（GenBank）受け入れ番号Ｍ６５２１０）、Ｓ１００プロモーター (Morii et al., Biochem. Biophys Res. Commun. 175:185-191, 1991; ジーンバンク（GenBank）受け入れ番号Ｍ６５２１０）、及びグルタミンシンターゼプロモーター（Van den et al., Biochem. Biophys. Acta. 2:249-251, 1991；ジーンバンク（GenBank）受け入れ番号Ｘ５９８３４）がある。視床下部での発現には、核酸構築体はＣＲＨプロモーターを含むことができ、下垂体前葉での発現には、核酸構築体はＡＣＴＨプロモーターを含むことができる。各プロモーターの任意のいずれの部分も、組織特異的発現を指令するのに充分な限り、使用することができる。
【００４８】
特定の組織で発現される核酸を作成する代わりに、核酸（アンチセンス核酸を含む）は、ＨＰＡ軸、前頭前皮質及び／又は交感神経系内の選択された細胞を標的とするように、修飾することができる。例えば、アンチセンス核酸は、細胞表面受容体、又は標的の細胞タイプに結合した他の成分、に特異的に結合する抗体又は他のタンパク質（例えば受容体リガンド）に連結することができる。同様に核酸は、細胞膜（例えば、Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:6553-6556, 1989; Lemaitre et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:648-652, 1987; 及びＷＯ８８／０９８１０号を参照）、又は他の血液脳関門（例えば、ＷＯ８９／１０１３４号を参照）を透過するのを促進する物質を含むことができる。更に核酸は、挿入物質（intercalating agent）を用いて修飾することができる（Zon, Pharm. Res. 5:539-549, 1988）。アンチセンス核酸はまた、本明細書に記載のベクターを使用して、細胞に送達することができる。アンチセンス核酸の充分な細胞内濃度を達成するために、強いプロモーターを有するベクターで、これらを発現させることができる（例えば、強いｐｏｌ II又はｐｏｌ IIIプロモーター）。
【００４９】
本明細書に記載のように、抗体はまた、本組成物中に医薬活性物質として取り込むことができ、本発明は、これらの抗体をコードする核酸を包含する。これらの核酸は、少なくとも２つの方法で有用である；これらは、発現系（ここから抗体が採取され、投与用に、本明細書に記載の１又は複数の組成物で調製される）で抗体を産生するのに使用することができ、又はこれらは、製剤化して患者に直接投与することができ、次にこれらの患者で抗体が産生されるであろう。
【００５０】
我々は、目的とする標的（例えば、ＣＲＨ、ＡＣＴＨ、ＣＲＨ受容体、ＡＣＴＨ受容体、又はＧＡＢＡ受容体）に選択的に結合する、免疫グロブリン遺伝子によりコードされるタンパク質、ならびに標的結合断片及びこれらの他の変種（例えば、１本鎖抗体、ヒト化抗体、又はＦａｂ断片）を、広く示すのに、「抗体」という用語を使用する。すなわち本組成物は、免疫グロブリンＧクラス（ＩｇＧ）の４量体抗体を含むことができ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥ抗体も使用することができる。標的結合断片又は抗原結合断片は、（ｉ）Ｆａｂ断片（すなわち、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨＩドメインからなる１価の断片）；（ii）Ｆ（ａｂ’）2断片（ヒンジ領域でジスルフィド結合により連結される２つのＦａｂ断片を含有する２価の断片）；（iii）ＶＨ及びＣＨＩドメインからなるＦｄ断片；（iv）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ward et al,. , Nature 341:544-546. 1989）；又は（vi）単離されたＣＤＲ、でもよい。抗体の正確な構造は変化するが、必要なことは、本発明に従ってその活性を増強する場合又は阻害する場合でも、その抗体が投与される患者に臨床的利益を与えるような方法で、本明細書に記載の標的に抗体が特異的に結合し、その標的を改変することである。例えば抗体は、ＣＲＨ又はＡＣＴＨに特異的に結合し、その活性／機能を阻害できることができる。
【００５１】
抗体は、ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体でも、キメラ、ヒト化、ＣＤＲ移植、又はヒト抗体でもよく；血液脳関門を透過する二重特異的抗体は、脳を標的とするのに特に有用である。一般に、抗体の産生法は当該分野で公知である。例えばヒトモノクローナル抗体は、マウスの免疫グロブリン遺伝子よりヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスで、作成することができる。（目的の抗原で免疫後に）これらのマウスから得られる脾臓細胞は、ヒトタンパク質からのエピトープに対する特異的親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを、産生するのに使用することができる（例えば、ＷＯ９１／００９０６号、ＷＯ９１／１０７４１号、ＷＯ９２／０３９１８号、ＷＯ９２／０３９１７号； Lonberg et al., Nature 368:856-859, 1994; Green et al., Nature Genet. 7:13-21, 1994; Morrison et al,. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855, 1994; Bruggeman et al., Immunol. 7:33-40, 1993; Tuaillon et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:3720- 3724, 1993; and Bruggeman et al., Eur. J. Immunol 21:1323-1326, 1991を参照）。また、欧州特許出願第１２５，０２３号、１８４，１８７号、１７１，４９６号、及び１７３，４９４号；またＷＯ８６／０１５３３号；米国特許第４，８１６，５６７号；Better et al., Science 240:1041-1043, 1988; Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-3443, 1987; Liu et al., J. Immunol. 139:3521-3526, 1987; Sun et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:214-218, 1987; Nishimura et al., Cancer Res. 47:999-1005, 1987; Wood et al., Nature 314:446-449, 1985; Shaw et al., J. Natl. Cancer Inst. 80:1553-1559, 1988; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851, 1984; Neuberger et al., Nature 312:604, 1984; and Takeda et al., Nature 314:452, 1984を参照）。
【００５２】
二重特異的抗体については、抗体の第一の部分は、本明細書に記載のような標的（例えば、ＣＲＨ、ＡＣＴＨ、ＣＲＨ受容体、ＡＣＴＨ受容体、又はＧＡＢＡ受容体）に特異的に結合し、抗体の第二の部分は、血液脳関門で発現されるタンパク質（例えば、通常は脳へ鉄を取り込む分子チャネルを活性化するトランスフェリン受容体）に特異的に結合することができる。タンパク質（例えばトランスフェリン受容体）に結合後、抗体は脳内に輸送され、そこで、例えばＣＲＨ、ＡＣＴＨ、ＣＲＨ受容体、ＡＣＴＨ受容体、又はＧＡＢＡ受容体に対して作用することができる。第一の標的に対する抗体の親和性は、第二の標的（トランスフェリン受容体のような血液脳関門特異的標的）に対する抗体の親和性より大きくても良く、第二の標的に対する抗体の親和性は好ましくは、血液脳関門を透過後、血管から抗体が放出されるのに充分に低い。ある実施態様において、トランスフェリン受容体に結合する抗体の部分は、Yu et al（Science Trans. Med. Vol. 3, Issue 84, 84ra44, 2011）が記載した抗体のトランスフェリン受容体結合部分と、同じか又は実質的に同じでもよい。
【００５３】
ヒト合成抗体ライブラリーは、所望であれば、目的の標的（例えば、ＣＲＨ受容体もしくはＡＣＴＨ受容体、又は血液脳関門で発現されるタンパク質）に対する選択と分類について使用することができる。陽性クローンは、ＥＬＩＳＡとＤＮＡ配列決定により同定することができ、抗体は、必要に応じて、完全長ＩｇＧに再形成することができる。親和性成熟は、組換えＣＤＲ突然変異誘発を用いて行うことができる。次に抗体は、インビトロで、これらの標的（例えば、ＣＲＨ受容体又はＡＣＴＨ受容体）の活性又は機能を阻害する能力について、スクリーニングすることができ、これらの親和性は、標準的結合アッセイ（例えば、競合ＥＬＩＳＡ）により評価することができる。親和性は、例えば１又は複数のＣＤＲ中でアラニン置換することにより変化させることができる。個々の半抗体は、精製し、混合し、二重特異的抗体は、通常の手段により精製することができる。
【００５４】
抗体を含む本発明のタンパク質を、エクスビボ（例えば、本発明のタンパク質は、本明細書に記載のような発現系から精製することができる）又はインビボ（例えば、生物全体中）で、発現するために、発現ベクターを使用することができる。
【００５５】
本明細書に記載の活性医薬は、患者への投与のために、様々に製剤化することができる；ＨＰＡ軸、前頭前皮質、及び／又は交感神経系を標的とする、１又は複数の物質を含む医薬組成物は、依存及び本明細書に記載の他の症状の、リスク又は重症度を低下させるために、治療的有効量で患者に投与することができる。治療的有効量は、本明細書に記載の依存及び他の症状の、少なくとも１つの兆候又は症状を改善するのに充分な、物質又は物質の組合せの量を意味する。組成物は、物質自体の物理的混合により第一物質と第二物質とを含有することができるか、又はパッケージングの共有により、これらの物質を組合せることができる（例えば、第一の活性物質を含む錠剤と、第二の活性物質を含む錠剤とを、場合により組成物を投与すべき日又は週、又は１日の時間を示す印を付けた、単一のディスペンサー、例えば、ブリスターパック又は同様のディスペンサー器具中で組合せることができる）。パック又はディスペンサーは、例えば金属又はプラスチック箔を含むことができ、投与のための説明書を添付してもよい。こうして包装される組成物は、その使用説明書を有する「キット」又は「二重包装製剤」と呼ばれる。治療薬はまた、単一の製剤（例えば、錠剤又はカプセル剤）内で組合せることもできる。
【００５６】
本発明に関連する有用な物質の多くは、他の理由で患者を治療するためにすでに使用されている。情報を与えることが可能な場合、これは、現在処方されている組成物中の物質の有効量を決定するのを助けるのに使用することができる。本明細書に記載の依存又は他の症状について、患者を治療するために使用される用量は、すでに患者を治療するために使用される用量と同じでもよい。この用量はまた、すでに処方されている用量と異なっていてもよい。例えば、本明細書に記載の併用療法に関連して必要な有効用量は、すでに安全で有効であると証明されている用量より少ないこともある。
【００５７】
毒性と治療有効性は、必要に応じて、細胞培養物又は実験動物で、標準的薬理学的方法により決定することができる。例えば、げっ歯類や非ヒト霊長類のような実験動物は、ＬＤ50（集団の５０％に対して致死的な用量）及びＥＤ50（集団の５０％で治療的に有効な用量）を決定するために使用することができる。毒性と治療有効性との用量比は、治療指数であり、これは、ＬＤ50：ＥＤ50比で表される。典型的には、大きい治療指数を示す化合物が好ましい。
【００５８】
細胞培養アッセイと動物実験で得られたデータは、ヒトでの使用用量の範囲を調整するのに使用することができる。そのような化合物の用量は、好ましくは、ほとんど又は全く毒性の無いＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。用量は、使用される剤型と使用される投与経路に依存して、この範囲内で変動し得る。本発明の方法で使用される任意の化合物について、治療的有効用量量は、最初は細胞培養アッセイ（例えば、核酸、核酸系の物質、又は抗体のようなタンパク質が、阻害（又は刺激）することを目的とするリガンド又は受容体の発現又は活性を、阻害（又は刺激）するかどうかを決定するために計画されるアッセイ）から推定することができる。
【００５９】
細胞培養で決定されたようなＩＣ50（症状の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するための用量を、動物モデルで製剤化することができる。そのような情報は、ヒトでの有用な用量（例えば治療的有効量）を、より正確に決定するために使用することができる。血漿中濃度は、例えば高速液体クロマトグラフィーにより測定することができる。
【００６０】
薬物依存の治療の最大の関心事の１つは、高い再発率である。この現象は、回復中の動物で試験することができ、これは、薬物摂取への再発傾向の、広く見なされた前臨床モデルであり、回復の動物モデルは、本明細書に記載の物質の有効用量を更に測定し規定するのに、使用することができる。例えば、動物に、薬物摂取が維持されるまで薬物を自己投与するように教え、次に長い減衰又は断薬期間を付す。減衰の基準を満足したら、又は規定の断薬期間後、薬物輸液の供給に以前関連した操作に応答して回復する特定の刺激の能力が、薬物希求の尺度と見なされる。この薬物希求行動の回復は、ラットやサルで薬物自体のプライミング注入により（Stewart, J. Psychiatr. Neurosci. 25:125-136, 2000）、又はラットで短時間の間欠的電気食物ショックへの曝露により（Shaham et al., Brain Res. Rev. 33:13-33, 2000; Stewart, J. Psychiatr. Neurosci. 25:125-136, 2000)、誘発することができる。自己投与薬物への急性の再曝露（de Wit, Exp. Clin. Psychopharmacol. 4:5-10, 1996）、及びストレスへの曝露（Shiftman and Wills, Coping and Substance Abuse, Academic Press, Orlando, 1985; Lamon and Alonzo, Addict. Behav. 22:195-205, 1997; Brady and Sonne, Ale. Res. Health 23:263-271, 1999; Sinha, Psychopharmacol. 158:343-359. 2001; 及びSinha et al., Psychopharmacol. 142:343-351, 1999）、又は単にストレス関連イメージの提示（Sinha et al., Psychopharmacol. 158:343-359, 2000）もまた、ヒトで薬物希求の再発を誘発する強力な事象として同定されている。
【００６１】
我々は、他の挙動に非特異的衰弱性作用を発生させずに、コカイン自己投与を減少させるメチラポンとオキサゼパムのそれぞれの用量を見いだした。次に我々は、コカイン自己投与に影響を与えなくなるか、又は他の観察可能な挙動に影響を与えなくなる、それぞれの薬剤の用量（無効量）を見つけるまで、用量を半分に減らした。次に我々は、２つの薬剤の無効量を組合せて、コカイン自己投与を減らした。これは、２つの薬剤が異なる機構によりその効果を発生するが、その効果は付加的であることを示唆する。すなわち我々は、異なる機構によりＨＰＡ軸に影響を与える薬剤を組合せることは、コカインという利益に対して付加的効果を生み出すことができると結論した。更に、これらの薬剤が単独で投与されると効果が無い濃度でこれらの薬剤を組合せることにより、これらの化合物に関連する毒性の副作用（例えば、メチラポンによる血漿コルチゾールの過度の低下と、ベンゾジアゼピンの乱用傾向）の可能性を最小にすることができる。従って本発明の組成物は、治療薬の組合せを含み、その薬剤の１つ又は両方は、薬剤を単独で投与した時に効果を達成するのに必要な用量より少ない用量で存在し、用量は付加的なことがある。
【００６２】
本組成物中の少なくとも１つの物質の用量は、その物質が典型的に処方される用量より少なくても良い。例えば本組成物が、現在不安の治療で使用されているベンゾジアゼピンを含む場合、依存、依存に関連するか又は関連しない他の精神疾患、又は神経変性病の治療のために、患者に投与される化合物の量は、不安の治療のために医師が典型的に処方している量より、少なくても良い。ある場合には、本組成物中の両方の物質の用量が、これらの物質の従来の用量より少なくても良い。
【００６３】
本組成物中の化合物の量は変動し得る。例えば、患者は、約１〜１０００ｍｇのある第一物質と、１〜１０００ｍｇのある第二物質とを、所定の間隔で投与されてもよい。例えば、患者は、数時間毎（例えば、約２、４、６、８、１２、又は２４時間毎）に、数日毎（例えば、１日１回、１日置きに１回、３日毎に１回）に、又は数週毎（例えば週に１回）に治療することができる。例えば、患者は、約、又は最大約５〜５００ｍｇ（例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３５、４５、５０、１００、２００、２５０、３００、４００、４５０、又は５００）の第一物質と、約、又は最大約５〜５００ｍｇ（例えば、５、１０、２５、３５、４５、５０、１００、２００、２５０、３００、４００、４５０、又は５００）の第二物質を、１日に１〜４回投与されてもよい。これらの物質の量は同じか又は異なってよい（例えば、第一物質の第二物質に対する比率は、約１：１、１．５：１、２：１、２．５：１、４：１、５：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、又は５０：１でもよい）。例えば組成物は、同じ量の、メチラポンとオキサゼパム；メチラポールとオキサゼパム；ケトコナゾールとアルプラゾラム；ケトコナゾールとオキサゼパム；メチラポンとアルプラゾラム；メチラポールとアルプラゾラム；ムスシモールとＣＰ−１５４，５２６；又は、ムスシモールとメチラポンを含むことができる。あるいは、本明細書に記載の物質のこれらの組合せ及び他の組合せは、量が異なるか、又は、上記した方法の各投与で異なってよい。例えば組成物は、約２５０ｍｇのメチラポンと約５ｍｇのオキサゼパムを含むことができ、患者は、これらの量を１日に１回〜４回、投与されるか、又は服用するように指示されてよい。他の製剤も意図される。例えば組成物は、１００〜２５０ｍｇのメチラポン又はメチラポールと、５〜６０（例えば、１０）ｍｇのオキサゼパムを含むことができ、患者は、これらの量を１日に１回〜４回（例えば、１日１回〜６時間毎に１回）投与されるか、又は服用するように指示されてよい。用量はまた、患者の体重に従う投与量で表わしてもよい。すなわち第一物質は、例えば約５〜２０ｍｇ／ｋｇで投与し、第二物質は、例えば約０．１〜０．５ｍｇ／ｋｇで投与することができる。
【００６４】
本発明で使用される医薬組成物は、１又は複数の医薬として許容される担体又は賦形剤を使用して、任意の通常の方法で製剤化することができる。すなわち、化合物とその医薬として許容される塩及び溶媒和物とを含む物質は、そのまま投与する場合も、又は血液脳関門の透過を促進するために本明細書に記載のように接合される場合も、経口投与又は非経口投与（例えば、局所投与）による投与用に、製剤化することができる。医薬組成物が局所投与用に製剤化される場合、これは、皮膚又は他のアクセスできる体の組織への投与用に製剤化される。例えば、組成物は、舌の下もしくは上で溶解するように、又は吸入用（例えばエアゾル剤として）に、製剤化することができる。
【００６５】
経口投与用に、医薬組成物は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えば、乳糖、微結晶性セルロース、又はリン酸水素カルシウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、又はシリカ）、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン、又はデンプングリコール酸ナトリウム）、又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）のような、医薬として許容される賦形剤を用いて、通常の手段により調製される錠剤又はカプセル剤の形を取ることができる。錠剤はまた、ポリエチレングリコール、グリセリン、及び/又はゼラチンを含むことができる。錠剤は、当該分野で公知の方法によってコーティングすることができる。経口投与用の液体調製物は、例えば、液剤、シロップ剤、又は懸濁剤の形を取ることができるか、又は、これらは、使用前に水又は他の適当なビヒクルで復元するための乾燥製品として、提供することができる。このような液体調製物は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、又は水素化食用脂）、乳化剤（例えば、レシチン又はアカシア）、非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、又は分別植物油）、及び保存剤（例えば、メチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシ安息香酸、又はソルビン酸）などの、薬学的に許容される添加剤を用いて、通常の手段により調製される。調製物はまた適宜、緩衝塩、香料、着色剤、及び甘味剤を含むことができる。
【００６６】
経口又は非経口（例えば、局所）投与のために製剤化する場合も、本発明の組成物は、活性物質の制御放出を与えるように、適切に製剤化することができる。
【００６７】
化合物（例えば、有機小分子）、核酸、抗体などタンパク質系の活性物（例えば、抗体）、及び接合体を含む物質、ならびにこれらの組み合わせは、注射による非経口投与のために処方することができる（例えば、ボーラス注射、又は埋め込み器具からの注入を含む持続注入）。注射用製剤は、保存剤を加えた単位剤形（例えば、アンプル又は多回投与容器内）で提供することができる。組成物は、懸濁剤、液剤、又は油性もしくは水性ビヒクル中のエマルション、のような形態をとることができ、例えば、懸濁剤、安定剤、及び/又は分散剤などの配合剤を含有することができる。あるいは、有効成分は、使用前に適切なビヒクル（例えば、発熱物質を含まない無菌水）で復元するための、粉末形態であってもよい。
【００６８】
上記したように、物質はまた、デポー製剤として製剤化することができる。このような長時間作用型製剤は、移植（例えば、皮下又は筋肉内）によって、又は筋肉内注射により投与することができる。従って、例えば物質は、適切なポリマー性もしくは疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）、又はイオン交換樹脂を用いて、又は難溶性誘導体として、例えば難溶性塩として、製剤化することができる。
【００６９】
脳への直接送達のための製剤もまた、本発明の範囲内である。すなわち、本明細書に記載される組成物は、脳内、脳室内もしくは髄腔内注射用、又は薬物ポンプから脳への注入用の、無菌溶液として製剤化することができる。この投与経路では、明らかにリスクと不便さがあるが、患者は医師と相談して、例えば自分の症状が重症で、選択肢が少なくて（又は無い）、脳への直接投与により成功の確率が上がる場合、この方法で治療されることを選択することができる。
【００７０】
組成物はまた、脳の近傍に化合物を保持するのを助けるための、流出阻害剤を含むことができる。脳に入るいくつかの化合物は治療レベルに到達せず、ＡＢＣ排出輸送機構を介して脳の外に輸送され、Ｐ−糖タンパク質（Ｐｇｐ）が血液脳関門における主要な流出経路となる場合がある。すなわち、Ｐｇｐのインヒビター又は他のトランスポーターの包含、又は同時投与は、脳内の薬物蓄積を増強することができる。血液脳関門の整合性もまた、一過性に操作して、全身循環から脳への、本明細書に記載の物質の通過を促進することができる。例えば、組成物は、マンニトール又はブラジキニン含むことができるか、又はこれらの物質を、治療計画の一部として個別に（例えば、動脈内投与により）投与することができる。血液脳関門はまた、関門を局所的に破壊する集束超音波を使用して一過性に開くことができる。
【００７１】
本明細書に記載の種々の組成物は、種々の物質（食事が過剰な時の食物）又は活動に対する依存を治療するために；不用意に又は依存に関連しているか又は関連していない、他の症状又は疾患（例えば、鬱病、不安、心的外傷後ストレス疾患のような心理的症状）を治療するために；更年期疾患や月経周期に関連する重篤な症状を治療するために；及び、神経変性病を治療するために、使用することができる。従って本発明は、患者を治療する方法と、本明細書に記載の症状を治療するための方法と薬剤の調製における、本明細書に記載の組成物の使用とを、特徴とする。我々は、特定の疾患及び障害（例えば、心的外傷後ストレス障害）に参照することがあるが、治療に適した本明細書に記載の任意の症状（例えば依存）を参照するために、「障害」という用語を使用する。
【００７２】
本明細書に記載の組成物は、ＨＰＡ軸、前頭前皮質の異常活性に関連する疾患に罹患している患者、より一般的には、脳の機能に影響を与える疾患、特にストレスに関連する疾患、又はコルチゾールのようなストレス誘導性の物質の体内での産生に関連する疾患、に罹患している患者、を治療するために、使用することができる。すなわち、本発明は第７の態様において、物質又は活動に対する依存でもよい依存に罹患している患者を治療する方法を特徴とする。この物質は、化学物質でも、また、患者が無制限に過度に食べ物を消費する場合、食べ物でもよい。患者は、アルコール／エタノール、化学刺激物質、処方（又は処方された）疼痛寛解剤、又は天然の植物起源の薬剤（例えば、マリファナ又はタバコ中の物質、例えばニコチン）に対する依存を有するか、又は有すると診断される。化学刺激物質は、コカイン、アンフェタミン、メタンフェタミン、結晶性メチルアンフェタミン塩酸塩、メチルフェニデート、又は関連する刺激物質でもよい。特定の薬剤の類似体が中毒性である場合、それらの類似体に対する依存もまた治療することができる。薬剤はまた、バルビツール酸塩（例えば、チアミル（スリタール（登録商標））、チオペンタール（ペントタール（登録商標））、アモバルビタール（アミタ（登録商標））、ペントバルビタール（ネンブタール（登録商標））、セコバルビタール（セコナール（登録商標））、ツイナール（アモバルビタール／セコバルビタール配合剤）、ブタルビタール（フィオリーナ（登録商標））、ブタバルビタール（ブチソル（登録商標））、タルブタール（ロツセート（登録商標））、アプロバルビタール（アルレート（登録商標））、フェノバルビタール（ルミナール（登録商標））、及びメホバルビタール（メバレル（登録商標））、又はアヘン（例えば、ヘロイン、コデイン、ヒドロコドン、及び関連するオピオイド薬）でもよい。多くの処方薬は、乱用されやすく、そのような薬剤（ペルコダン又はペルコセットのような疼痛管理のために処方されている薬剤）に依存している患者は、本明細書に記載のように治療することができる。上記したように、患者が依存的に食べ物に関連する場合、問題の物質はまた、食べ物でもよい。そのような患者は、過食症又は肥満のような関連症状に罹患していることがある。メタドンにより治療される患者はまた、本明細書に記載の組成物による治療の候補である。本組成物は、そのような患者がメタドンの使用を減らすか又は止めることを助けることができる。依存挙動をする患者はまた、同定し、治療することができる。これらの患者は、賭事や性的活動への依存に罹患していることがある。
【００７３】
依存は、メチラポールが唯一の活性医薬である（本発明の第一の態様として上記のように特徴付けられる）組成物の有効量を、患者に投与することにより、治療される。この場合、患者は、コカイン以外の物質への依存に罹患していることがある。血漿コルチゾールレベルが低下するように、組成物を製剤化し及び／又は投与することができるが、方法はこれに限定されない。血漿コルチゾールレベルを低下させない製剤と投与処方を、使用することもできる。依存の治療において、メチラポールが唯一の活性物であり、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分（例えば、抗体、例えば血液脳関門の血管系に発現された受容体に結合する抗体）に接合している組成物を、投与することができる。他の実施態様において、依存は、メチラポールを第一の活性医薬として含み、前頭前皮質及び／又は交感神経系を標的とする１又は複数の追加の医薬活性物（本発明の第二の態様として上記で特徴付けられた）を含む、組成物の有効量を、患者に投与することにより、治療することができる。メチラポールと、１又は複数の追加の活性物質とを含む組成物は、血漿コルチゾール濃度を低下させるか又は低下させないように、製剤化することができ、これらの組成物を用いて患者を治療する方法は、ある場合にはコルチゾール濃度を維持し、他の場合には低下させる。別の実施態様において依存は、ＨＰＡを標的とする物質を唯一の活性医薬として含有する組成物の有効量を、患者に投与することにより、治療することができる。本発明の第三の態様の記載で上記したように、これらの組成物は、これらの組成物が投与される患者で血漿コルチゾール濃度が維持されるように、製剤化することができ、血液脳関門の透過を促進するか、又は副腎以外の組織への利用可能性を上昇させるタンパク質又は他の成分に、活性物を接合させることにより、その結果を促進することができる。これらの組成物はまた、血液脳関門の透過を促進するか、又は脳内での活性物の保持を促進する物質を含むだけでもよい。別の実施態様において依存は、ＨＰＡ軸を標的とする第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質とを、含む組成物の有効量を、患者に投与することにより、治療することができる。
【００７４】
本発明の第４の態様において、これらの組成物は、血漿コルチゾール濃度が影響を受けるか否かに無関係に、血漿コルチゾール濃度を有意に低下させることが無いように、製剤化され、そして、第一物質と第二物質の片方又は両方は、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分に接合できる。これらの組成物はまた、血液脳関門の透過を促進するか、又は脳内での活性物の保持を改善する物質のみを、含むことも可能である。依存に関連して有効に投与される他の組成物は、本発明の第５及び第６の態様を構成するとして、上記したものである。すなわち、第一物質がＨＰＡ軸を標的とし、第二物質が交感神経系を標的とする組成物、又はＨＰＡ軸を標的とする第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質と、及び交感神経系を標的とする第三物質とを、含有する組成物の有効量を投与することができる。他の実施態様と同様に、ＨＰＡ軸を標的とする物質、又は前頭前皮質を標的とする物質は、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分に接合させることができる。これらの組成物はまた、血液脳関門の透過を促進するか、又は脳内の活性物の保持を改善する物質を含むのみであってもよい。
【００７５】
依存を治療するための本明細書に記載のいずれの方法も、本組成物の投与のみでなく、精神療法、すなわち個人が、環境キューに対して調整された応答で対処するのを、助ける別の形の精神的指示を、含むことができる。最終的に、断薬が維持されると、これらの要因は乱用物質と対応しなくなって、その特性を失い、時間とともに、医薬療法が減少し、中止されるであろう。
【００７６】
第８の態様において、本発明は、精神疾患と見なされるものを含み、ＨＰＡ軸（ストレス軸）及び前頭前皮質を含む疾患を含む、他の疾患を治療する方法を特徴とする。治療することができる疾患は、不安（これは、特に限定されないが、パニック障害、社会不安障害、全般性不安、急性ストレス障害に伴う不安）を含む。障害はまた、不安に関連しても関連しなくても、強迫性障害（ＯＣＤ）や心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）でもよい。鬱病に罹患していると診断された患者も、治療することができる。鬱病は、必ずという訳ではないが、大鬱病性障害、気分変調症、双極性鬱病、病状に関連した鬱病、及び物質の乱用に関連した鬱病でもよい。治療できる別の障害は統合失調症であり、患者は統合失調症の負の症状、及び／又は統合失調症に伴う認知機能障害を示すことがある。また治療に適しているのは、閉経と月経前症候群（月経前不快気分障害を含む）に関連した重篤な症状がある。
【００７７】
上記段落に記載した疾患は、メチラポールが唯一の活性医薬である（本発明の第一の態様として上記で特徴付けられた）組成物の有効量を、患者に投与することにより治療することができる。血漿コルチゾールレベルが低下するように、組成物を製剤化し及び／又は投与することができるが、方法はこれに限定されない。血漿コルチゾールレベルを低下させない製剤と投与処方を、使用することもできる。直前に記載した障害（例えばＰＴＳＤ）の治療において、例えばメチラポールが唯一の活性物であり、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分（例えば、抗体、例えば血液脳関門の血管系に発現された受容体に結合する抗体）に結合している組成物を、投与することができる。他の実施態様において、メチラポールを第一の活性医薬として含み、前頭前皮質及び／又は交感神経系を標的とする１又は複数の追加の医薬活性物（本発明の第二の態様として上記で特徴付けられた）を含む、組成物の有効量を、患者に投与することにより、直前に記載した障害を治療することができる。メチラポールと、１又は複数の追加の活性物質を含む組成物は、血漿コルチゾール濃度を低下させるか又は低下させないように、製剤化することができ、これらの組成物を用いて患者を治療する方法は、ある場合にはコルチゾール濃度を維持し、他の場合には低下させる。別の実施態様において、直前に記載した障害は、ＨＰＡを標的とする物質を唯一の活性医薬として含有する組成物の有効量を、患者に投与することにより、治療することができる。本発明の第三の態様の記載で上記したように、これらの組成物は、これらの組成物が投与される患者で血漿コルチゾール濃度が維持されるように、製剤化することができ、血液脳関門の透過を促進するか、又は副腎以外の組織への利用可能性を上昇させるタンパク質又は他の成分に、活性物を接合させることにより、その結果を促進することができる。これらの組成物はまた、血液脳関門の透過を促進するか、又は脳内での活性物の保持を促進する物質を含むだけでもよい。別の実施態様において、疾患は、ＨＰＡ軸を標的とする第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質とを、含む組成物の有効量を、患者に投与することにより、治療することができる。
【００７８】
本発明の第４の態様において、これらの組成物は、血漿コルチゾール濃度が影響を受けるか否かに無関係に、血漿コルチゾール濃度を有意に低下させることが無いように、製剤化され、そして、第一物質と第二物質の片方又は両方は、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分に接合できる。これらの組成物はまた、血液脳関門の透過を促進するか、又は脳内での活性物の保持を改善する物質のみを、含むことも可能である。依存に関連して通常投与される他の組成物は、本発明の第５及び第６の態様を構成するとして、上記したものである。すなわち、第一物質がＨＰＡ軸を標的とし、第二物質が交感神経系を標的とする組成物、又はＨＰＡ軸を標的とする第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質と、及び交感神経系を標的とする第三物質とを、含有する組成物の有効量を投与することができる。他の実施態様と同様に、ＨＰＡ軸を標的とする物質、又は前頭前皮質を標的とする物質は、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分に接合させることができる。これらの組成物はまた、血液脳関門の透過を促進するか、又は脳内の活性物の保持を改善する物質を含むのみであってもよい。
【００７９】
第９の態様において、本発明は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、及び筋萎縮性側索硬化症を含む神経変性病を、治療する方法と特徴とする。これらの障害は、メチラポールが唯一の活性医薬である（本発明の第一の態様として上記で特徴付けられた）組成物の有効量を、患者に投与することにより治療することができる。血漿コルチゾールレベルが低下するように、組成物を製剤化し及び／又は投与することができるが、方法はこれに限定されない。血漿コルチゾールレベルを低下させない製剤と投与処方を、使用することもできる。神経変性病の治療において、例えばメチラポールが唯一の活性物であり、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分（例えば、抗体、例えば血液脳関門の血管系に発現された受容体に結合する抗体）に接合している組成物を、投与することができる。他の実施態様において、メチラポールを第一の活性医薬として含み、前頭前皮質及び／又は交感神経系を標的とする１又は複数の追加の医薬活性物（本発明の第二の態様として上記で特徴付けられた）を含む組成物の有効量を、患者に投与することにより、神経変性病を治療することができる。メチラポールと１又は複数の追加の活性物質とを含む組成物は、血漿コルチゾール濃度を低下させるか又は低下させないように、製剤化することができ、これらの組成物を用いて患者を治療する方法は、ある場合にはコルチゾール濃度を維持し、他の場合には低下させる。別の実施態様において、神経変性病は、ＨＰＡを標的とする物質を唯一の活性医薬として含有する組成物の有効量を、患者に投与することにより、治療することができる。本発明の第三の態様の記載で上記したように、これらの組成物は、これらの組成物が投与される患者で血漿コルチゾール濃度が維持されるように、製剤化することができ、そしてこの結果は、血液脳関門の透過を促進するか、又は副腎以外の組織への利用可能性を上昇させるタンパク質又は他の成分に、活性物を接合させることにより、促進することができる。これらの組成物はまた、血液脳関門の透過を促進するか、又は脳内での活性物の保持を促進する物質を含むだけでもよい。別の実施態様において、依存は、ＨＰＡ軸を標的とする第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質とを、含む組成物の有効量を、患者に投与することにより、治療することができる。
【００８０】
本発明の第４の態様において、これらの組成物は、血漿コルチゾール濃度が影響を受けるか否かに無関係に、血漿コルチゾール濃度を有意に低下させることが無いように、製剤化され、そして第一物質と第二物質の片方又は両方は、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分に接合できる。これらの組成物はまた、血液脳関門の透過を促進するか、又は脳内での活性物の保持を改善する物質のみを、含むことも可能である。依存又は他の精神疾患の治療と異なり、本発明は、ＨＰＡ軸を標的とする第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質とを含む組成物（ここで、第一物質と第二物質のいずれも他の成分に接合しなくてもよい）を用いて、神経変性病を治療する方法と特徴とする。更に、第一物質と第二物質とを含む組成物は、血液脳関門の透過に影響を与え、副腎以外の任意の他の組織に活性物を選択的に指令する物質を、含まないことがある。神経変性病に関連して有用に投与される他の組成物は、本発明の第５及び第６の態様を構成するとして、上記したものである。すなわち、第一物質がＨＰＡ軸を標的とし、第二物質が交感神経系を標的とする組成物、又はＨＰＡ軸を標的とする第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質と、及び交感神経系を標的とする第三物質とを、含有する組成物の有効量を投与することができる。他の実施態様と同様に、ＨＰＡ軸を標的とする物質、又は前頭前皮質を標的とする物質は、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分に接合させることができ、これらの組成物はまた、血液脳関門の透過を促進するか、又は脳内の活性物の保持を改善する物質を含むのみであってもよい。しかし本発明は、神経変性病の治療において、ＨＰＡ軸を標的とする第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質（そのいずれも他の成分に接合していなくてもよい）とを含む組成物を包含する。更に、第一物質と第二物質とを含む組成物は、血液脳関門の透過に影響を与える物質、又は副腎以外の任意の他の組織に活性物を選択的に指令する物質を、含まなくてもよい。
【００８１】
第１０の態様において、本発明は、腎疾患もしくは機能不全、肝疾患（例えば、肝硬変）、及びうっ血性心不全により引き起こされる体液うっ滞を含む、体液うっ滞を引き起こす症状を治療する方法を特徴とする。これらの疾患は、メチラポールが唯一の活性医薬である組成物（本発明の第一の態様として特徴付けられた）の有効量を、患者に投与することにより治療することができる。この組成物は、血漿コルチゾール濃度が低下するように、製剤化及び／又は投与することができるが、方法はこれに限定されない。血漿コルチゾールレベルを低下させない製剤と投与処方も、使用することができる。体液うっ滞を引き起こす障害の治療において、例えばメチラポールが唯一の活性物であり、血液脳関門の透過を促進するタンパク質又は他の成分（例えば、抗体、例えば血液脳関門の血管系に発現された受容体に結合する抗体）に接合している、組成物を投与することができる。他の実施態様において、メチラポールを第一の活性医薬として含み、前頭前皮質及び／又は交感神経系を標的とする１又は複数の追加の医薬活性物（本発明の第二の態様として上記で特徴付けられた）を含む組成物の有効量を、患者に投与することにより、体液うっ滞を引き起こす障害を治療することができる。メチラポールと１又は複数の追加の活性物質を含む組成物は、血漿コルチゾール濃度を低下させるか又は低下させないように、製剤化することができ、これらの組成物を用いて患者を治療する方法は、ある場合にはコルチゾール濃度は維持され、他の場合には低下している。
【００８２】
本明細書に記載のいずれの治療法も、種々の工程を含むことができ、その１つは、治療の必要な患者の同定を構成することができる。医師は、依存及び／又は本明細書に記載の別の症状に罹患している疑いのある患者を、調べて診断することができる。選択的に行われる診断後、医師は、組成物（例えば、ＨＰＡ軸を標的とする第一物質と、前頭前皮質を標的とする第二物質とを含む医薬組成物）の治療的有効量を処方することができる。任意の哺乳動物（例えば、イヌ又はネコのような家畜化されたペット）を治療できるが、我々は、ほとんどの場合に、患者はヒト患者であると予測する。
【００８３】
治療の成功は、客観的な尺度（例えば、薬剤自己投与の頻度もしくは重症度の低下、又は他の依存性活動の低下）、健康の全体的改善（例えば、血圧、腎機能、肝機能、又は血球数の改善）、及び／又は主観的な尺度（例えば、物質もしくは活動に対する渇望の低下、又は健康感の改善（例えば、不安の低下又は改善された気分）の患者の報告）を含む、種々の方法で評価することができる。
【実施例１】
【００８４】
ラットにおける副腎摘出後のコカイン自己投与に対するメチラポンとオキサゼパムの作用
【００８５】
我々は、基本的にコルチコステロン（ＣＯＲＴ）の産生を排除する両側性副腎摘出（ＡＤＸ）は、食物維持応答に影響を与えることなく、静脈内コカイン自己投与（ＳＡ）の獲得を無効にすることを見いだした。自己投与のこの抑制は、ラットに飲料水にＣＯＲＴを加えることにより、部分的に逆転することができる。更に我々は、ＡＤＸが進行中のコカイン自己投与を約２５％低下させるが、これを排除することはなく、これは、作製体がその獲得のために必要であるが、コカイン自己投与の維持は必要ではないことを示唆することを、見いだした。別の実験では、ＣＯＲＴの合成を阻止するメチラポン（ＭＥＴ）で前処理すると、進行中のコカイン自己投与の、用量に比例する低下を引き起こした。ベンゾジアゼピンの１つであるオキサゼパム（ＯＸ）はまた、単独で供給されても又はＭＥＴと組合せて供給されても、進行中のコカイン自己投与を用量依存的に低下させた。この組合せは、これらが単独で効果が無く、血漿ＣＯＲＴに対して効果が無かった用量で、有効であった。後述されるこの試験は、ＭＥＴとＯＸが、ＡＤＸ後にまだコカイン自己投与を低下させるかどうかを調べるために計画された。もしそうなら、ＣＯＲＴの副腎ベースの産生とは別の機構が、この作用に関与しているはずである。
【００８６】
被験体：オスのウィスターラットを、ＡＡＬＡＣに認可された動物飼育施設に収容し、自由に餌を食べた時の体重の８５〜９０％で維持させた。これらのラットは、実験の開始から、逆転した１２時間の明期、１２時間の暗期のサイクルに置いた。
【００８７】
カテーテル手術：留置頸静脈カテーテル（内径０．０１２インチ×外径０．０２５インチ、シリコーンチューブ）を、各ラットにペントバルビタール麻酔（５０ｍｇ／ｋｇ腹腔内）下で埋め込み、硝酸アトロピン（１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内）で前処理した。手術の直前に、ラットに無菌のペニシリンＧプロカイン懸濁物（７５，０００単位、筋肉内）を注入し、５〜７日間で回復させた。
【００８８】
副腎摘出術：動物をペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ腹腔内）で麻酔し、硝酸メチルアトロピン（１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内）で前処理した。切開して副腎をさがし、取り出した。動物に無菌のペニシリンＧプロカイン懸濁物（７５，０００単位、筋肉内）を注入し、７日間、手術から回復させた。ＡＤＸ後、ラットに、０．９％食塩水と１．０％ショ糖を含有する飲料水を与えた。シャム群の動物に同じ手術を行ったが、副腎は取り出さなかった。これらに、水道水を飲ませ続けた。
【００８９】
装置：音減衰オペラント調整チャンバー（Med-Associates,Inc.）に２つの応答レバーを取り付け、各レバーの直接上に刺激ライトを取り付けた。食物ペレットディスペンサーをレバーの間に置いた。各チャンバーはまた、薬物を送るためのモーター駆動シリンジポンプを有し、チャンバー内で比較的自由な動きをさせるための、釣り合わせたスイベル器具を有した。ＩＢＭ互換性のパソコンとインターフェースシステムを使用して、操作をプログラムし、実験データを集めた。
【００９０】
コカイン補給と食物補給の交互スケジュール：カテーテル手術からの回復後、食物補給とコカイン自己投与の、複数回の交互スケジュールで応答するように、ラットを訓練した。ラットを、各ビンの間に１分間のタイムアウトを有する２時間の行動セッション中の時間に、１回に１５分間（ビン）、いずれかの補給物へアクセスできるようにさせた。個々の補給物が、与えられるのに４回の応答（ＦＲ４）を完了する必要があった。各食物試験の後に、３５秒のタイムアウトを入れ、コカインの各注入（０．２５／ｍｇ／ｋｇ／注入）を５．６秒間にわたって行い、次に２０秒間のタイムアウトを入れた。食物維持応答を、薬剤と副腎摘出の非特異的作用の可能性に対する対照として使用した。２週間毎に食塩水置換と食物枯渇調査を行い、動物がコカインの有無を区別できることを証明した。両方の補給物に対する応答がＦＲ４で安定化後、動物をビヒクル（ＶＥＨ）、ＭＥＴ５０、０Ｘ５、ＯＸ１０、ＭＥＴ５０／ＯＸ５、及びＭＥＴ５０／ＯＸ１０（ｍｇ／ｋｇ）で試験した。次に動物の副腎摘出を行った。１週間の回復後、これらを、再度コカイン補給と食物補給へアクセスできるようにした。両方の補給物について応答が再度安定化後、動物を再度同じ用量のＭＥＴとＯＸで試験した。
【００９１】
ホルモン測定：行動検査セッションの最後に、血漿ＣＯＲＴと副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）の測定のために、埋め込みカテーテルを介して血液を採取した。冷却遠心分離機で遠心分離するまで、試料を氷上で維持し、血漿を採取し、測定するまで凍結させた。次に、血漿ＣＯＲＴとＡＣＴＨ（ｎｇ／ｍｌ）をラジオイムノアッセイにより測定した。
【００９２】
結果：メチラポンとオキサゼパムは、副腎摘出前の値と比較すると、副腎摘出後のコカイン自己投与を阻止するのに、有効であり、おそらくより有効であった。副腎摘出自体は自己投与を１５％低下させ、メチラポンとオキサゼパムからの低下と組合せは、これを１６〜７４％低下させた。食物の自己投与に対する効果は、副腎摘出後に基本的に変化は無かったが、これらの組合せは、副腎摘出後に、より大きな効果を有するようであった。コルチコステロンは、副腎摘出前は、いずれの用量のメチラポンとオキサゼパムでも変化せず、副腎摘出後は、実質的に排除された。ＡＣＴＨは、副腎摘出前はいずれの用量のメチラポンとオキサゼパムでも変化しなかったが、副腎摘出後は、副腎からのネガティブフィードバックの喪失のために、非常に高かった。
【００９３】
我々は、コカイン自己投与に対するメチラポンとオキサゼパムの作用は、血漿コルチコステロンに依存しないと、結論した。ラットは、副腎摘出後、メチラポンとオキサゼパムの作用に対して、より感受性であると思われる。これらのデータは、コカイン自己投与の維持に対するこれらの薬剤の作用には、ＨＰＡ軸にはおそらく依存しない機構がある、はずであることを示唆する。
【実施例２】
【００９４】
ラットにおけるメタンフェタミン希求に対するメチラポンとオキサゼパムの組合せの効果
【００９５】
我々は、低用量のメチラポン（コルチコステロン合成インヒビター）とオキサゼパム（ベンゾジアゼピン受容体アゴニスト）との組合せが、ラットにおける、静脈内コカイン自己投与と、消失したコカイン希求のキュー誘発性回復とを減少させることを、以前報告した。本試験は、メチラポンとオキサゼパムの組合せがまた、ラットにおけるメタンフェタミン自己投与に関連するキュー反応性を阻止するかどうかを、調べるために計画した。オスの成体ラットに頸静脈カテーテルを埋め込み、毎日２時間のセッションで、メタンフェタミン（０．０６ｍｇ／ｋｇ／注入）を自己投与するように訓練した。この訓練中、メタンフェタミン送達を、トーンの発生及び光点灯と、対にした。自己投与の安定なベースラインがいったん観察されたら、ラットを強制断薬とし、ラットをホームケージに１４日間維持した。１５日目のキュー反応性試験中、ラットをオペラントチャンバーに入れ、応答により、調整補給物（すなわち、以前、メタンフェタミン自己投与と対になっていたハウスライトとトーン）のみが提供され、メタンフェタミンは送られなかった。応答に依存する調整補給物の提供は、ビヒクル前処理後のメタンフェタミン希求（すなわち、レバー押し）を確実に維持した。オキサゼパム（ＯＸ）とメチラポン（ＭＥＴ）の組合せ（５ｍｇ／ｋｇのオキサゼパムと２５ｍｇ／ｋｇのメチラポン、又は１０ｍｇ／ｋｇのオキサゼパムと５０ｍｇ／ｋｇのメチラポン、腹腔内）による前処理は、メタンフェタミン希求を、用量に比例して低下させた。これらのデータは、オキサゼパムとメチラポンの組合せが、メタンフェタミン希求を刺激する環境キューの能力を阻止するのに、有効であることを示唆する。
【００９６】
被験体：オスのウィスターラット（ｎ＝２６）を、自由に餌を食べた時の体重の８５〜９０％で維持し、水は自由に飲めるようにした。各ラットに留置頸静脈カテーテルを埋め込み、手術後、少なくとも５日間回復させた。カテーテルの開通性は、毎週試験した。
【００９７】
装置：行動実験は、標準のプレキシガラス（登録商標）とステンレス製の音減衰オペラント調整チャンバー（Med-Associates,Inc.）中で行った。各実験チャンバーに、チャンバーの１つの壁上に２つの応答レバーを取り付け、各レバーの直接上に刺激ライトを配置した。チャンバーにはまた、ハウスライトと、各メタンフェタミン注入と対になった「キュー」を発生するために使用されるトーン発生器とを、取り付けた。
【００９８】
自己投与訓練：１日２時間のセッション中に、固定比４（ＦＲ４）の補給スケジュールで、応答レバー（すなわち、「活性」レバー）の１つを押すことにより、メタンフェタミンを自己投与できるように、ラットを訓練した。各セッションの開始時に、活性レバーの上の刺激ライトを点灯させて、メタンフェタミンの利用可能性を示した。まず、活性レバーを１回押すことにより（固定比１、すなわちＦＲ１）、メタンフェタミンが静脈内注入（５．６秒間で、２００μｌの０．９％ヘパリン添加ＮａＣｌ中で０．０６ｍｇ／ｋｇ／注入を送達した）され、同時にハウスライトの点灯とトーンキューを発生させた。すなわちキューは、調整された（すなわち二次的）補給物となった。各注入後に、２０秒間のタイムアウト時間（ＴＯ）があった。活性レバーの上の刺激ライトは、注入時とタイムアウト時間中は暗くなり、タイムアウトが終了すると、再度点灯した。活性レバーに対する応答の変動が２日間続けて２０％未満であった時は、応答比をＦＲ１からＦＲ２に変化させた。この行動基準が再度満たされた時、応答要求をＦＲ２からＦＲ４に変化させた。少なくとも１０日後に、ＦＲ４補給スケジュールで、安定なベースライン応答（３日間連続のセッションで１０％未満の変動）が達成された。不活性化レバーに対する応答は、いつもプログラムされていない結果を与えた。
【００９９】
断薬：ＦＲ４スケジュール下で安定な応答の基準が満たされた時、強制断薬を始めた。最後の自己投与の直後に、ラットをホームケージに入れ、メタンフェタミン又は薬物と対になったキューへのアクセスができないようにして、そこに１４日間維持した。
【０１００】
キュー反応性試験：１５日目に、キュー反応性試験を行った。試験セッションの開始３０分前に、ビヒクル、又はオキサゼパムとメチラポンの２つの用量組合せの１つ（５ｍｇ／ｋｇオキサゼパムと２５ｍｇ／ｋｇメチラポン、又は１０ｍｇ／ｋｇオキサゼパムと５０ｍｇ／ｋｇメチラポン、腹腔内）を用いて、ラットを処理した。次にこれらを実験チャンバーに入れ、活性レバー刺激ライトを点灯した。両方のレバーへの応答を記録したが、不活性なレバーへの応答は、プログラムされた結果を与えなかった。活性レバーへの応答後、トーンとハウスライトへ調整キューを５．６秒間与え、刺激ライトを２０秒間暗くした（通常の自己投与中のように）。しかし、メタンフェタミンは注入されなかった。各ラットを、ビヒクルと５ｍｇ／ｋｇオキサゼパム及び２５ｍｇ／ｋｇメチラポン、又はビヒクルと１０ｍｇ／ｋｇオキサゼパム及び５０ｍｇ／ｋｇメチラポンの交互スケジュールで、最大４回まで試験した。
【０１０１】
血漿採取アッセイ：３つの時点（安定なＦＲ４自己投与応答の最後のセッションの直後、強制断薬の最後の日（１４日目）、キュー反応性試験セッションの直後）で、留置頸動脈カテーテルを介して又は尾の切断により、血液試料を採取し、血漿コルチコステロンの変動を測定した。コルチコステロン試料を遠心分離し、血漿を採取し、直ちに−２０℃で凍結した。血漿試料をラジオイムノアッセイで分析し、ガンマカウンターで読んだ。
【０１０２】
結果：オキサゼパムとメチラポンの両方の組合せとも、活性レバー応答を有意に低下させた。すべての３つの時点で、血漿コルチコステロンは、群間で有意な差はなかった。ＦＲ４は安定な自己投与応答の最後の日であり、ＡＢＳＴは強制断薬の最後の日であり、ＣＵＥ−Ｒはキュー反応性試験日である。
【０１０３】
キュー反応性試験日の活性レバーに対する応答の数は、ビヒクルとＯｘ５／Ｍｅｔ２５間で有意（ｐ＜０．０５）であり、ビヒクルとＯｘ１０／Ｍｅｔ５０間で有意（ｐ＜０．００１）であったが、Ｏｘ５／Ｍｅｔ２５とＯｘ１０／Ｍｅｔ５０間では有意ではなかった（ｐ＞０．０５、片側ＡＮＯＶＡ）。安定なＦＲ４応答の最後の日の血漿コルチコステロンは、すべての群間で有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。強制断薬の最後の日の血漿コルチコステロンは、すべての群間で有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。キュー反応性試験日のコルチコステロンは、すべての群間で有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。
【０１０４】
上記結果に基づき、我々は、オキサゼパムとメチラポンとの組合せ（５ｍｇ／ｋｇオキサゼパムと２５ｍｇ／ｋｇメチラポン、又は１０ｍｇ／ｋｇオキサゼパム及び５０ｍｇ／ｋｇメチラポン、腹腔内）で前処理すると、メタンフェタミン希求の用量比例的減衰が得られると、結論した。実験のすべての時点で、コルチコステロン濃度はビヒクルと比較して有意に変化しなかった。これらのデータは、オキサゼパムとメチラポンの組合せが、血漿コルチコステロンを変化させることなく、メタンフェタミン希求を刺激する環境キューの能力を阻止するのに、有用であることを示唆する。
【実施例３】
【０１０５】
ラットにおける、静脈内ニコチン自己投与に対するメチラポンとオキサゼパムの組合せの作用
【０１０６】
ここに記載する試験は、ラットにおける、ニコチン自己投与に対するメチラポンとオキサゼパムの組合せの作用を試験するために、計画した。固定比と累進比率の補給スケジュールの両方を使用して、１時間の自己投与セッションで、静脈内（ＩＶ）自己投与ニコチン（０．０３ｍｇ／ｋｇ／注入）に対して訓練したラットで、メチラポン（２５又は５０ｍｇ／ｋｇ）とオキサゼパム（５又は１０ｍｇ／ｋｇ）のいくつかの用量組合せを、試験した。低用量のメチラポンとオキサゼパムの組合せの投与は、両方の補給スケジュール下のラットで、静脈内ニコチン自己投与を減少させた。バレニクリンもまた、固定比率スケジュールを使用して試験し、バレニクリンで観察された薬物摂取の減少は、試験した組み合わせの最低用量で見られるものに匹敵した。この試験の結果は、ヒトでの禁煙のためのメチラポンとオキサゼパムの組み合わせの可能性を、示唆する。
【０１０７】
α４β２ニコチンアセチルコリン受容体部分アゴニストであるバレニクリン（Keating and Lyseng-Williamson, Pharmacoeconomics 28(3):231-254, 2010）は、ブプロピオン（Cahill et al., Drug Safety 32(2):119-135, 2009; Gonzales et al,. JAMA 296(1):47-55. 2006; Jorenby et al,. JAMA 296(1):56-63. 2006）、又はニコチン置換療法（Aubin et al., Thorax 63(8):717-724, 2008; Cahill et al., Drug Safety 32(2):119-135, 2009）と比較して、禁煙の効力を上昇させたが、１年後の禁煙率はわずかに１４％であった（Nides et al., Arch. Intern. Med. 166(15):1561-1568. 2006）。これらのデータは、ニコチン依存の治療のための安全で有効な薬物療法の開発、の必要性が継続していることを示唆する。
【０１０８】
動物：ウィスター由来のオスラット（２５０〜３００ｇ）をHarlan Laboratories（Livermore, CA）から購入し、２匹のグループで収容し、温度調節環境下で１２時間：１２時間の光サイクルで維持した。試験の前に、１週間の馴化期間中、動物に食物と水は自由に摂取できるようにして、数日間毎日、扱いのストレスに対して鈍感になるように扱かった。データ解析に含めた各ラットはすべての処理を受けて、薬剤効果の信頼できる推定値を得て、動物間の変動の影響を小さくした。動物は、現在のＮＩＨ指針、すべての該当する地方の、州の、及び連邦政府の規制及び指針に従って取り扱い、収容し、屠殺した。
【０１０９】
薬物治療：０．９％食塩水に５％のアルカムルス（Ａｌｋａｍｕｌｓ）ＥＬ−６２０を含む懸濁物として、メチラポン（２５又は５０ｍｇ／ｋｇ、Sigma-Aldrich）とオキサゼパム（５又は１０ｍｇ／ｋｇ、Sigma-Aldrich）のいくつかの用量組合せの１つ、又はビヒクルを、ラットに腹腔内投与した。バレニクリン塩酸（Ontario Chemicals）を１ｍｇ／ｋｇ（遊離塩基として表される）で陽性対照として使用し、皮下投与した。ニコチン水素酒石酸（Sigma-Aldrich）を、０．３ｍｇ／ｍｌ（遊離塩基として表される）で等張食塩水に溶解し、ｐＨ７．０に調整し、希釈して、０．０３ｍｇ／ｋｇ／注入を投与した。ニコチン自己投与セッションの３０分前に、１ｍｇ／ｋｇの容量で、すべての試験化合物を投与した。固定比試験で試験した用量は、５０ｍｇ／ｋｇメチラポン：１０ｍｇ／ｋｇオキサゼパム；５０ｍｇ／ｋｇメチラポン：５ｍｇ／ｋｇオキサゼパム；２５ｍｇ／ｋｇメチラポン：５ｍｇ／ｋｇオキサゼパム；及び、１ｍｇ／ｋｇバレニクリンである。最も低い用量の組合せ（すなわち、２５ｍｇ／ｋｇメチラポン：５ｍｇ／ｋｇオキサゼパム）は、累進比率実験で試験した。我々は、コカイン自己投与のラットモデルでこの薬剤組合せを用いた我々の以前のデータに基づき、これらの用量を選択した（Goeders and Guerin, Pharmacol. Biochem. Behav. 91(1):181-189, 2008）。
【０１１０】
装置：食物訓練とニコチン自己投与は、８個の標準コールボーン（Coulbourn）（登録商標）オペラント調整チャンバー中で行った。各チャンバーを、音減衰チャンバー中に入れた。オペラントチャンバーには、床の２ｃｍ上に２つのレバーと、チャンバーの裏の壁上の右のレバー（活性レバー）の２ｃｍ上にキューライトとを、取り付けた。食物訓練のために、食物ホッパーを裏壁の中間のいずれかのレバーの左／右から２ｃｍに置いた。静脈内注入は、音減衰チャンバーの外に収容したモーター駆動注入ポンプ（Razel）を介して、１秒間隔で、０．１ｍｌの容量で送った。
【０１１１】
食物訓練：既に記載したように、レバー押しを確立した（Hyttia et al., Psychopharmacology (Berl.) 125(3):248-254, 1996）。まず、ラットを、自由に餌を食べた時の体重の約８５％で維持されるように、１日１５グラムの食物に制限した。食物制限の２日目が過ぎた後、ラットを、ペレットの各供給後に１秒間のタイムアウト時間（ＴＯ−１ｓ）を有する、固定比１（ＦＲ１）の食物補給のスケジュール（すなわち、各レバー押し後に、１つの食物ペレットが送られる）下で応答するように訓練し、応答要件は、徐々にＦＲ１、ＴＯ−２０ｓ補給スケジュールまで上昇させた。訓練セッションは１日２回行い、各セッションを３０分間続けた。ラットが、ＦＲ１、ＴＯ−２０ｓ補給スケジュールに応答して、一定したベースライン応答（３回の連続セッションにわたって２０％未満の変動）を得たら、ラットを自由な食物摂取に戻し、静脈内頸動脈カテーテルの外科的埋め込みの準備をした。
【０１１２】
手術：ラットを、イソフルラン−酸素混合物（１〜３％イソフルラン）で麻酔し、シラスチック頸動脈カテーテルを外頸静脈に挿入し、ラットの背中に取り付けたポリエチレンアセンブリーまで、皮下を通した。カテーテルアセンブリーは、ガイドカニューレに直角に取り付けた１３ｃｍ長さのシラスチックチューブ（内径０．３１ｍｍ；外径０．６４ｍｍ）からなった。カニューレを歯科用セメントベースに埋め込み、２×２ｃｍ平方の耐久性メッシュで固定した。カテーテルを皮下を通し、ラットの背中から頚静脈に送り、ここに挿入し、非吸収性の絹縫合糸で固定した。手術が無事完了後、ラットに、ベースライン自己投与セッションを開始する前に、回復するために５日間を与えた。この回復期間中、ラットに食物を自由に与え、血液凝固と感染とを防ぐために、カテーテルラインを毎日フラッシュした。
【０１１３】
ニコチン自己投与：手術から無事回復後、再度、自由に餌を食べた時の８５％までラットの食物を減らし、安定な応答が達成されるまで、Ｆ１、ＴＯ−２０の補給スケジュール下で、１週間に５日間行った１時間のベースラインセッション中に、ニコチン（０．０３ｍｇ／ｋｇ／注入、静脈内）を自己投与するように、安定な応答が達成されるまで、訓練した。ここで安定な応答とは、２回の連続実験にわたって２０％未満の変動として定義される。ニコチンについて安定な応答が達成された後、メチラポンとオキサゼパムの種々の用量組合せ又はビヒクルを、被験者間ラテン方格法（ＬＳＤ）を使用して試験した。用量の試験後、次に用量を試験する前に、ラットに、安定なベースライン応答を再確立させた。メチラポンとオキサゼパムを用いるＬＳＤ用量試験後、安定な応答が達成されるまで、ラットをベースライン条件下で少なくとも５日間流し、次に陽性対照バレニクリン（１ｍｇ／ｋｇ、皮下投与）を試験した。バレニクリン試験の完了後、安定な応答が達成されるまで、ラットを再度、ベースライン条件下で少なくとも５日間流した。次に、同じラットを、累進比（ＰＲ）補給スケジュールを使用して試験し、各ニコチン注入により、以後の注入を得るのに必要なレバーを押す回数を累進的に上昇させた。レバー押しの増加は以下の通りである：１、２、４、６、９、１２、１５、２０、２５、３２、４０、５０、６２、７７、９５などで、これは式（（５×ｃ０．２ｎ）−５）を最も近い整数まで丸めて得られ、ｎは比の数列の位置である。ＰＲ試験について、ＰＲ１日目に、半数のラットをメチラポンとオキサゼパムで試験し、他の半数はビヒクルで試験した。ＰＲ１日目後、再度安定な応答が観察されるまで、ラットを、０．０３ｍｇ／ｋｇ／注入でベースライン条件（ＦＲ１、ＴＯ−２０）下で流した。次に、第一のＰＲセッションでビヒクルを投与されて薬物治療を受けたラットと、第一のＰＲセッションでメチラポンとオキサゼパムを投与されて薬物治療を受けたラットとで、第二のＰＲ実験を行った。カテーテルの開通性を確保し、血液凝固を防ぎ、感染リスクを低下させるために、各試験セッションの前後でカテーテルをフラッシュした。１匹のラットは、試験中カテーテルの調子が悪かったため、除き、示したデータは、すべての試験物質で試験を完了した８匹のラットの応答を示す。
【０１１４】
データ編集、処理、解析：データは、複数のオペラントチャンバーから、オンラインで同時に採った。ＬＳＤニコチン自己投与実験からのデータは、ニコチン補給応答の平均累積数として報告した。ＰＲ試験からの結果は、補給応答と中止点の平均数として、報告した。一般に、まずデータについて、分散の均一性の検定を行った。スコアが、分散の均一性の仮定に反しない場合は、適切な分散分析（ＡＮＯＶＡ）を行った。試験データは、ＰＣ互換コンピューター上でスタットビュー（StatView）統計パッケージを使用して解析した。すべての用量応答曲線の解析のために、繰り返し測定ＡＮＯＶＡを行った。適宜、対応のあるｔ検定を使用して、追跡解析を行った。
【０１１５】
結果：対照条件（ビヒクル処理）下で、ＦＲ１−ＴＯ−２０ｓ補給スケジュール下で、１時間の試験セッションで、ラットに平均１５．０＋１．５回のニコチン注入を行った。メチラポン：オキサゼパムの組合せを用いて処理すると、ニコチン自己投与が用量比例的に減少し、用量比２５：５ｍｇ／ｋｇ、５０：５ｍｇ／ｋｇ、及び５０：１０ｍｇ／ｋｇで、ニコチン注入がそれぞれ７．１±１．６回、５．３±１．３回、及び３．±１．０回に低下した。
【０１１６】
処理群のＡＮＯＶＡは、ニコチン摂取に対するメチラポン：オキサゼパムの作用が、ビヒクルに対して有意であることを示した［Ｆ（３，２１）＝１６．９７０，ｐ＜０．０００１］。メチラポンとオキサゼパムの各用量組合せの追跡解析（すなわち、対応あるｔ検定）は、すべての用量組合せについての結果が、ビヒクルで得られたものとは有意に異なることを証明した（メチラポン：オキサゼパム、２５：５ｍｇ／ｋｇ、ｐ＝０．００９１；５０：５ｍｇ／ｋｇ、ｐ＝０．００８；５０：１０ｍｇ／ｋｇ、ｐ＝＜０．０００１）。各処理日内のすべてのラットの平均値を使用する順序効果の解析は、有意な知見を与えなかった。
【０１１７】
バレニクリン処理は、ニコチン注入を１５．４±１．０回から７．７±１．２回まで低下させることがわかった。これらのデータのＡＮＯＶＡは、１時間の自己投与セッション中のニコチン注入回数の低下は、統計的に有意であることを証明した［Ｆ（１，７）＝４７．０４２，ｐ＜０．０００３）］。バレニクリンの結果をメチラポン：オキサゼパムで見られた結果と比較すると、試験したすべての用量で、メチラポン：オキサゼパム組合せは、ニコチン自己投与を減らすのに、バレニクリンより有効であった。
【０１１８】
メチラポン：オキサゼパムの最低用量組合せ（２５：５ｍｇ／ｋｇ）を、累進比スケジュールで試験した。メチラポン：オキサゼパムによる前処理は、ニコチン注入を６．１±０．５回から２．８±０．６回に低下させた。中止点は、ビヒクルで１２．６±１．６回のレバー押しから、メチラポン：オキサゼパムによる３．９±０．９回まで減少した。累進比データのＡＮＯＶＡは、２５：５ｍｇ／ｋｇのメチラポン：オキサゼパムによる前処理が、ニコチン注入の総回数［Ｆ（１，７）＝１５．９９７，ｐ＜０．００５５）］、及び中止点［Ｆ（１，７）＝１９．５３３，ｐ＜０．００３５］を有意に低下させることを証明した。累進比スケジュールで、バレニクリンは試験しなかった。
【０１１９】
本発明のいくつかの実施態様を説明した。しかし、本発明の精神と範囲を逸脱することなく、種々の修飾が可能であることを理解されたい。従って、他の実施態様は、以下の特許請求の範囲内である。
【実施例４】
【０１２０】
コカイン渇望とコカイン摂取に対するメチラポンとオキサゼパムの組合せの作用：二重盲検ランダム化プラセボ対照パイロット試験
この試験は、４５名のコカイン依存者における、コルチゾール合成インヒビターであるメチラポンとベンゾジアゼピンであるオキサゼパムの組合せの、安全性と有効性を評価するために計画した。被験者は、６週間の治療のために、総１日用量が５００ｍｇメチラポン／２０ｍｇオキサゼパム（低用量）、総１日用量が１５００ｍｇメチラポン／２０ｍｇオキサゼパム（高用量）、又はプラセボに、ランダムに分類した。結果の尺度は、すべての来院で、尿中のコカイン代謝物ＢＥの定量的測定により決定される、コカイン渇望と関連するコカインの使用の低下である。ランダム化された被験者のうちで、４９％が試験を完了した。メチラポンとオキサゼパムの組合せは、充分許容され、コカイン渇望とコカイン使用を低下させる傾向があり、ベースラインスコアについて調整すると、いくつかの時点で有意な低下があった。
【０１２１】
我々の試験（臨床治験、ｇｏｖ：ＮＣＴ００５６７８１４号を参照）は、メチラポンとオキサゼパムの組合せが、地域ベースの環境で、コカイン依存者のコカイン渇望と使用とを低下させるかどうかを評価した。この前向き１施設ランダム化プラセボ対照二重盲検試験は、シュレベポートのルイジアナ州立大学ヘルスサイエンシーズセンター（Louisiana State University Health Sciences Center in Shreveport、LSUHSC-S）の心理薬理学研究部（Psychopharmacology Research Unit）で行われた。被験者は、５００ｍｇメチラポン／２０ｍｇオキサゼパムの低総１日用量、１５００ｍｇメチラポン／２０ｍｇオキサゼパムの高総１日用量、又はプラセボに、ランダムに分類した。毎週０日目と３日目に来院（来院１〜１２）した６週間の治療期間後に、７週目の０日目の試験の最後の来院（来院１３）と、治療の終了の７〜１４日後の追跡来院（来院１４）があった。薬剤とプラセボは、１日２回投与用に用量を２回分に分けた。
【０１２２】
ミニ国際神経精神科インタビュー（MINI Sheehan et al., J. Clin. Psychiatry 59 (Suppl. 20):22-33; 質問 34-57）を使用して、コカイン依存性についての精神疾患の診断と統計マニュアル（ＤＳＭ−ＩＶ）の基準を満たす、４５名の被験者を試験に登録した。被験者を、試験に参加した順序を基準に、治療群にランダムに分類した。
【０１２３】
被験者は、１８才〜６５才の男性と女性で、コカイン依存の治療を求め、書面でインフォームドコンセントを提供でき、１４日間のスクリーニング期間中、ベンゾイルエクゴニン（ＢＥ）の尿検査結果が陽性であった者である。除外基準は、初回のインタビューで精神科医が判定した、コカイン依存以外の顕著なＤＳＭ−ＩＶ軸Ｉ疾患であり、コカインが主要な選択薬である限り、依存の基準を満足しない他の精神活性物質の乱用と、医学的解毒を必要としないアルコール依存とは認めた。他の排除基準は、肝酵素＞正常の２倍、試験期間前又は試験期間中の血清コルチゾール＜３μｇ／ｄｌ、スクリーニング時又は過去において肝炎か又はステロイドによる慢性治療を必要とする疾患の病歴、有意に異常なＥＣＧ、妊娠、又は試験の薬物療法を妨害する可能性のある同時薬物（例えば、他のベンゾジアゼピン）の使用である。
【０１２４】
６週間の治療期間中、被験者には、食事時に中身を知らされていないカプセル剤を１日２回服用するように指示した。１日の総量は、５００ｍｇメチラポン／２０ｍｇオキサゼパム、１５００ｍｇメチラポン／２０ｍｇオキサゼパム（これは、１週目は低用量で開始し、残りの５週間は高用量に上げた）、又はプラセボ（乳糖）である。交互作用を避けるためと、薬単独の作用のみを分離するために、心理社会的サポートは与えなかった。
【０１２５】
コカイン渇望は、コカイン渇望アンケート（ＣＣＱ）の２つのバージョンを使用して評価した。これは、７ポイントのリカート型（Likert-type）スケールに基づいて、各項目への同意レベルを推定することを被験者に求める、自己評価、自己実施アンケートである。ＣＣＱの項目は、コカインを使用したい気持ち、使用からの良好な結果の期待、離脱症状もしくは悲観的な気持ちからの解放の期待、コカインを使用する目的、及び使用に対する抑制の欠如について、被験者の現在の状態を評価するものである（Tiffany et al., Drug Alcohol Depend. 34:19-28, 1993）。ＣＣＱ−Ｎｏｗは、４５の質問からなる。ＣＣＱ−Ｂｒｉｅｆは、ＣＣＱ−Ｎｏｗの４５の質問のうちの１０を抽出している。ＣＣＱ−Ｎｏｗは、来院１と試験の最後の来院１３で行い、ＣＣＱ−Ｂｒｉｅｆは、他のすべての来院時に行った。ＣＣＱ−Ｂｒｉｅｆでは、欠けているデータは無かった。ＣＣＱ−Ｎｏｗのいくつかの場合で、ある被験者について、解析から記録を止めるより、その被験者についてその来院時の使用できる質問の答の平均を採用することにより、全スコアを得た。
【０１２６】
コカインの使用は、すべての来院時に、コカインの代謝物である尿中のベンゾイルエクゴニン（ＢＥ）の定量により決定された。すべての来院で評価した他の有効性尺度は、尿の薬物スクリーニング（ニコチン製品を使用した被験者のコチニン濃度を含む）により測定した同時の薬物使用、及び自ら報告したコカインとアルコールの使用を含んだ。ハミルトン不安症（Hamilton Anxiety、ＨＡＭ−Ａ）とハミルトン鬱病（Hamilton Depression、ＨＡＭ−Ｄ）スケールを、来院１、２、３、５、７、９、及び１１、試験の最後の来院１３、及び追跡来院１４で調べた。
【０１２７】
主要な有効性変数は、高用量群と低用量群を合わせた群（「プール群」）についての有効性評価データ中の、第一回目の投与（来院２）から最後の投与（来院１２）への、ＣＣＱ−Ｂｒｉｅｆの平均変化を、最終観察の引き延ばし補完法（last observation carried forward、ＬＯＣＦ）を用いて、プラセボ被験者と比較したものである。主要な有効性の解析は、治療、時間、ベースラインを共変量として有する治療による時間、についての因子を有する、繰り返し測定モデルに基づいた。試験の試験的性質のために、複数の終点についての調整はしなかった。有効性解析はまた、上記モデルを使用して、プラセボ群に対して、個体治療群を比較することにより行った。
【０１２８】
安全性の主要な解析群には、ランダム化計画に従って、試験薬物を少なくとも一回服用したすべての被験者を含めた。有害事象は、規制活動の医学辞書（Dictionary for Regulatory Activities、ＭｅｄＤＲＡバージョン１０．０）を使用してコード化した。治療群別の要約統計量（すなわち、ｎ、平均、標準偏差、中央値、最小値、及び最大値）は、連続変数について計算した。カテゴリー変数（ｎ、及びパーセント）は、表形式でまとめた。臨床的に関連する事象の特別試験以外に、推測的試験は計画しなかった。
【０１２９】
試験結果の解釈を助けるために、２つの事後の解析を行った。第一に、有効性評価可能集団と有効性評価不可能集団のベースライン特性を解析して、高率の脱落が、患者集団のひずみを発生させていないかどうかを調べた。第二に、ＣＣＱ−Ｂｒｉｅｆの変化中の観察されたプラセボ応答と、有効性可能データセットのサイズを使用して、検出力分析を行い、予測的に規定した主要な終点を統計的に達成可能であるかどうかを調べた。
【０１３０】
全体で、ランダム化した被験者の４９％が、試験を完了した。最も多い中止（７２％）は、追跡ができなかった被験者の結果である。有害事象による被験者の脱落は、下記の安全性欄に記載されている。ランダム化した４５名の被験者のうちで、２６名は有効性を評価することができた。有効性評価可能なデータセットは、低用量群、高用量群、及びプラセボ群で、ほぼ同数の被験者（それぞれ、９名、８名、及び９名）を含んだ。
【０１３１】
コカイン渇望は、この試験の主要な予測的に規定した終点である。被験者は、試験への参加の順序に基づいてランダム化し、医学的パラメータや科学的パラメータには基づいていないため、群間でベースラインの差がある可能性があった。試験終了後のデータ解析中に、来院１でＣＣＱ−Ｎｏｗにより測定した渇望のベースライン値が、低用量群（３．５５）と高用量（３．５５）群に比較して、プラセボ群（４．１３）で少し高いことがわかった。これらの渇望値は、ＣＣＱ−Ｎｏｗ結果に基づく、同様の集団中の以前の試験の値に匹敵した（Tiffany et al., Drug Alcohol Depend. 34:19-28, 1993）。群間の差は、来院２で再度見られ、ＣＣＱ−Ｂｒｉｅｆ値も、低用量群（２．３）及び高用量群（２．４）よりプラセボ群（３．５）で高かった。
【０１３２】
試験の最初の週に、渇望の急激な変化が見られたが、これは薬物に関連しているとは考えられず、治療への参加のプラセボ効果を示しているようである。この作用は、プラセボ追加を使用することにより小さくなったかも知れないが、こうすると、治験が長引き、被験者をとどめておくことが更に困難であったであろう。
【０１３３】
来院６後に、プラセボと比較して、プール群と高用量群について、ＣＣＱ−Ｂｒｉｅｆの初期投与から、平均が変化する傾向があった。これらの差は、いくつかの時点で、統計的に有意になった。プール群については、来院３と来院７〜１１のすべての来院で、プラセボと比較して統計的に有意であった（来院３でｐ＜０．０１、来院７〜１１でｐ≦０．０４、繰り返し測定モデルから得られたカイ自乗検定）。高用量群については、来院３、７、９、及び１１で、プラセボと比較して統計的に有意であった（来院３、７、９、及び１１で、それぞれｐ≦０．０１、０．０２、０．０１、及び０．０１、繰り返し測定モデルから得られたカイ自乗検定）。
【０１３４】
主要な有効性変数（来院２〜来院１２へのＣＣＱ−Ｂｒｉｅｆの変化）は、プール群についてプラセボと比較して、統計的に有意ではなかった。中止した患者の数が多いことにより、この小さなパイロット試験の有効性評価可能データセットは、充分な統計的解析力がないため、これは予測された結果である。
【０１３５】
尿中のコカイン代謝物であるＢＥの測定により得られたコカイン使用の減少は、この試験の第二の終点であった。スクリーニング時には、すべての被験者は尿試料中のコカインが陽性であり、ランダムに治療群に割り当てられた。渇望測定値と同様に、来院１で、コカイン使用で群間の差が見られ、７名のプラセボ被験者（７８％）が尿検査コカインが陽性であったのに対して、低用量群では５名の被験者（５６％）、高用量群では３名の被験者（３８％）が陽性であった。しかし、これらの群は、以後の数回の来院では同等のコカイン使用率を示し、これらの差はおそらく、群内の固有の不均衡というより、この集団内でのコカイン使用の変動を反映していることを示唆する。
【０１３６】
試験終了時の来院１３では、プール群の尿薬物スクリーニングのコカインが陽性であった被験者の数（４名の被験者；２４％）は、プラセボ群（７名の被験者；７８％；Ｐ＝０．０２、フィッシャーの正確度検定）より有意に低かった。来院１２と１３では、高用量群で尿薬物スクリーニングのコカインが陽性であった被験者の数は、プラセボ群より有意に低かった（来院１２と１３について、それぞれＰ＝０．０２と０．０１、フィッシャーの正確度検定）。更に、来院８後のすべての来院では、尿薬物スクリーニングのコカインが陽性であったプール群の被験者のパーセントは、プラセボ群より小さかった。来院３〜１２で、尿試料のコカインが陽性であった被験者１人当たりの来院の平均数は、プラセボ群（７．１）と比較して、高用量群（３．９；ｐ＜０．０５；順位和検定）とプール群（４．５；ｐ＝０．０４；順位和検定）で、有意に低かった。
【０１３７】
来院２後は、尿中の平均ＢＥ量は、低用量群と高用量群で、スクリーニング時から一貫して低下する傾向があり、一方、代謝物の量は、プラセボ群で時々上昇した。高用量群での低下は、プラセボ群よりいつも数値が大きく、これらの差は、来院１と来院６で統計的に有意であった（ｐ＜０．０５；順位和検定）。
【０１３８】
治療群中のＨＡＭ−Ａ又はＨＡＭ−Ｄで、統計的に有意な差は観察されなかったが、高用量群では、試験の終了に向かって低下する傾向が現れた。自己報告されたアルコール又はタバコ消費量では、群間で差は観察されず、アルコール、ニコチン代謝物、又は他の乱用薬物についての薬物スクリーニングの結果に、差は見られなかった。しかし、不安と鬱病のベースライン評価値は低く、被験者は低い割合のアルコール消費を報告し、喫煙率では、群間で大きな変動が報告された。従って、試験の期間中、群間の有意差の欠如は、統計的に意味がなかった。
【０１３９】
全体として、臨床試験で使用される用量のメチラポンとオキサゼパムの投与は、充分許容され、重症の有害事象と有害事象による中止の割合は小さかった。この試験は非常に小さく、この数の少なさと被験者の中止率の高さにより、安全性データの解釈は制限されるが、安全性の変化傾向や予想外の知見はなかった。２名の被験者が、有害事象により試験を中止した。１名は、来院１１で低血清コルチゾールのために中止したが、低コルチゾールの兆候や症状は示さなかった；血清コルチゾール＜３μｇ／ｄｌは、予測的に中止の理由として規定された。２人目の被験者は、来院３で刺激性と吐き気のために中止した。注目すべきは、２人の被験者が、試験に参加している期間中、コカインを使用し続けたことである。すべての４５名の被験者は、試験期間中に少なくとも１回の有害事象を報告した。プール群の１０９の事象中６のみが、おそらく又は明らかに試験薬物に関連すると見なされた。
【０１４０】
血清コルチゾールとＡＣＴＨ濃度の変化は、メチラポンの公知の作用である。血清コルチゾールの低下傾向（プラセボと比較して高用量群で）と、血清ＡＣＴＨの上昇（プラセボと比較して低用量群と高用量群で）が見られた。８名の被験者は、試験中のある時点で、標準範囲の下限より低い血清コルチゾール濃度を有した。しかし、同時に起きた有害事象を調べた結果は、低コルチゾールの兆候又は症状と一致する有害事象は示さなかった。８名の被験者中の５名は試験を完了し、早期に中止した１名は、最悪状態後に正常なコルチゾール濃度を有し、早期に中止した２名は、最後の入手できた血清コルチゾール濃度は低かった（１名の被験者は来院５、１名の被験者は試験の最後の来院１３）。これらの被験者の両方とも追跡できなくなり、以後の来院の要請でも戻ってこなかった。
【０１４１】
高い中止率（２３名は、試験の完了前に中止し、これらの２３名のうちの１８名は追跡ができなかった）のために、この試験では、安全性の評価は少し複雑であった。このことは、一般的な耐性と、被験者が、報告されていない有害事象のために中止した可能性と、についての懸念を抱かせるが、この研究でこのことを示唆するものは何もなかった。高率の中止は、試験集団の特性に関連している可能性が高い。
【０１４２】
コカイン依存被験者でのメチラポンとオキサゼパムの組合せの、臨床的有効性と安全性についてのこのパイロット試験では、治療の終了時に、プラセボ群に比較して、高用量群でコカイン使用が有意に低く、メチラポン／オキサゼパム組合せの有効性の可能性を支持している。高用量の組合せはまた、ＣＣＱ−Ｂｒｉｅｆにより測定すると、試験中に、渇望が低下する傾向も示した。組合せの両方の用量は、充分許容されるようであった。これらのデータは、コカイン依存の動物モデルで見られた結果（Goeders et al., Pharmacol. Biochem. Behav. 91:181-189, 2008）と一致し、この薬剤組合せのさらなる調査を支持している。
【０１４３】
この試験の主要な予測的に規定された終点は、来院２から来院１２へのＣＣＱ−Ｂｒｉｅｆの変化であった。コカイン依存の治療試験の主要な尺度としては、典型的には尿ベンゾイルエクゴニンにより確認される自己報告されたコカイン使用のような、コカイン使用の尺度が選択される（Anderson, Drug Alcohol Depend. 104:133-139, 2009）が、薬剤使用を刺激するためのストレスに関連した環境キューの能力と、再発とを低下させる、メチラポン／オキサゼパム組合せの提唱された作用機序は、渇望を中間状態として含む可能性があるため、主要な終点としてＣＣＱ−Ｂｒｉｅｆが妥当な選択であると考えられた。しかし、渇望は仮想物であるため、メチラポン／オキサゼパム組合せに対する応答をより完全に評価するための、実際のコカイン使用の尺度として、尿ベンゾイルエクゴニンも測定された。ＣＣＱ−Ｂｒｉｅｆデータの事後解析は、これが意味のある終点であるためには、有効性について評価可能な被験者の数が少なすぎることを示した。観察された薬物の効果とプラセボ効果を考慮すると、８０％の解析力を達成するのに、１群当たり１５名の被験者が必要であった。試験を完了するのに１群当たりわずかに８〜９名の被験者では、群間の有意差の欠如は、有益ではない。我々の研究の目的に一致して、全体的データ中の傾向と特定の時点の効果とを調べて、薬剤組合せの活性に対する見通しを得た。
【０１４４】
試料サイズは小さいが、いくつかの尺度により、コカイン使用と渇望の有意な低下が観察された。来院７〜来院１１のすべての来院で、プール群ではプラセボと比較して、コカイン渇望は有意に低下し、一方、高用量群では、ベースライン評価値について調整すると、来院７、９、及び１１で、プラセボと比較した統計的有意性が得られた。同様に、コカイン陽性尿を有したメチラポン／オキサゼパムで治療した被験者の数は、いくつかの時点で有意に低下していた。更に、第２週〜６週までのコカインが陽性の尿試料を有する被験者１名当たりの、来院の平均総数は、プラセボ群と比較して、高用量群とプール群の両方で、有意に低かった。
【０１４５】
これらの統計的に有意な結果は、用量応答の方向に向かっており、主に高用量群で有意な応答が得られた。データセット全体を通して同様の傾向が見られ、経時的に渇望とコカイン使用の両方の低下と、尿中ＢＥ濃度の低下の傾向があった。これらの知見は、低下が統計的に有意ではなかった時点でも、有意な結果が、データの全体の傾向の一部であることを証明する。有効性データは全体として、コカイン使用と渇望に対する、メチラポン／オキサゼパム薬剤組合せの意味のある効果を支持している。
【０１４６】
コカイン使用と渇望の両方で、群間のベースラインの差が見られた。高用量被験者より多くのプラセボ被験者が、ベースラインで、薬剤スクリーニングのコカインが陽性であり、渇望のベースライン値は、高用量群よりプラセボ群で高かった。これらのベースラインの差は統計解析で取り上げられ、群間の不均衡は、薬剤治療群での低下したコカイン使用と渇望の統計的知見を妨害しない。しかし、この差が、高用量群で観察された治療的利益に寄与した可能性もある。もし高用量被験者が重症度の低い疾患（渇望の減少とコカイン使用の減少）を有したなら、彼らはプラセボ効果をより受けやすく、薬剤からの認識可能な治療利益を受けたかも知れない。この可能性は完全には否定できないが、この試験では、精神社会的支持は提供せず、プラセボ効果は無視できると予測されたことに、注意されたい。この問題は、後の試験（我々は、この試験が後の試験を支持すると考える）で、メチラポン／オキサゼパム薬剤組合せを試験することによってのみ、充分に対処されるであろう。
【０１４７】
治療群中のＨＡＭ−Ａ又はＨＡＭ−Ｄで、統計的に有意な差は観察されなかったが、高用量群では、試験の終了に向かって低下する傾向が現れた。不安と鬱病のこれらの尺度についてのベースライン評価が低いことを考慮すると、群間に差が無いことは驚くべきことではない。他の薬剤の使用（特にアルコールとニコチン）に対する組合せ治療の効果の解析もまた、この試験の使用パターンにより制限される可能性がある。アルコール消費は、すべての治療群で試験期間中低かった（すなわち、１日当たり約１回の摂取）。高用量群は、プラセボ群と比較して、ベースラインで１日当たりはるかに少ない平均数のタバコ（すなわち、プラセボの約６０％）を消費し、群全体では、１日当たりに吸われたタバコの数には、大きな変動があった。
【実施例５】
【０１４８】
ラットにおけるコカイン自己投与に対するメチラポールの作用
メチラポールが動物モデルにおけるコカイン自己投与を低下させる可能性を調べるために、我々は以下の実験を行った。オスの成体ウィスターラットを、交互に変化する１５分間中に、食物補給とコカイン自己投与の２時間の複数の交互スケジュール（固定比４）下で、応答するように訓練した。試験前に、ラットを、複数回の食塩水置換と食物枯渇調査に曝露した。試験の日に、行動セッションの開始３０分前に、メチラポール（２５、５０、１００、及び１５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）又はビヒクルを用いて、ラットを前処理した。被験体をまず訓練し、０．２５ｍｇ／ｋｇ／注入のコカイン、次に０．１２５と０．５ｍｇ／ｋｇ／注入のコカインを用いて試験した。コカイン自己投与は、すべての用量のコカインで用量依存性に低下した。食物維持応答は、最も高い用量のメチラポール以外では、有意に影響を受けなかった。これらのデータは、メチラポールがメチラポンの効果においてある役割を果たすという仮説を支持し、メチラポールがコカイン依存の治療において有用であることを示唆する。