(57)【要約】【課題】間質性膀胱炎の鑑別を可能にする指標及びその用途を提供することを課題とする。【解決手段】CXCL9、CXCL10及びCXCL11からなる第１群のCXCケモカインサブファミリーから選択される、いずれかのケモカインの尿中レベルと、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7及びCXCL8からなる第２群のCXCケモカインサブファミリーから選択される、いずれかのケモカインの尿中レベルの比からなる、間質性膀胱炎鑑別用マーカーが提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の第１群のCXCケモカインサブファミリーから選択される、いずれかのケモカインの尿中レベルと、以下の第２群のCXCケモカインサブファミリーから選択される、いずれかのケモカインの尿中レベルの比からなる、間質性膀胱炎鑑別用マーカー：
第１群：CXCL9、CXCL10、CXCL11；
第２群：CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8。
【請求項２】
以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃ１〜Ｃ３は定数をそれぞれ表す）が与える値からなる、請求項１に記載の間質性膀胱炎鑑別用マーカー：
｛Ｃ１×（CXCL9、CXCL10又はCXCL11の尿中レベル）／Ｃ２×（CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7又はCXCL8の尿中レベル）｝×Ｃ３。
【請求項３】
以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃ１〜Ｃ３は定数をそれぞれ表す）が与える値からなる、請求項１に記載の間質性膀胱炎鑑別用マーカー：
｛Ｃ１×（CXCL10の尿中レベル）／Ｃ２×（CXCL1の尿中レベル）｝×Ｃ３。
【請求項４】
以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃ１〜Ｃ３は定数をそれぞれ表す）が与える値からなる、請求項１に記載の間質性膀胱炎鑑別用マーカー：
｛Ｃ１×（CXCL10の尿中レベル）／Ｃ２×（CXCL8の尿中レベル）｝×Ｃ３。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のマーカーの値を指標とした間質性膀胱炎鑑別法。
【請求項６】
以下のステップ（１）及び（２）を含む、請求項５に記載の鑑別法：
（１）尿サンプルを用意し、その発現レベルが前記マーカーの構成要素となるケモカインを測定するステップ；
（２）測定結果から前記マーカーの値を算出し、間質性膀胱炎に罹患しているか否かを判定するステップ。
【請求項７】
以下の（ａ）又は（ｂ）の鑑別に用いる、請求項５又は６に記載の鑑別法：
（ａ）間質性膀胱炎と慢性細菌性膀胱炎との鑑別；
（ｂ）間質性膀胱炎と過活動膀胱との鑑別。
【請求項８】
以下の第１群のCXCケモカインサブファミリーから選択される、いずれかのケモカインの尿中レベルと、以下の第２群のCXCケモカインサブファミリーから選択される、いずれかのケモカインの尿中レベルの比からなる、間質性膀胱炎の治療効果判定用マーカー：
第１群：CXCL9、CXCL10、CXCL11；
第２群：CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8。
【請求項９】
請求項８に記載のマーカーの値を指標とした間質性膀胱炎の治療効果判定法。
【請求項１０】
以下のステップ（ｉ）及び（ｉｉ）を含む、請求項９に記載の判定法：
（ｉ）間質性膀胱炎の治療を受けた患者から採取された尿サンプルを用意し、その発現レベルが前記マーカーの構成要素となるケモカインを測定するステップ；
（ｉｉ）測定結果から前記マーカーの値を算出し、算出した前記マーカー値と、以前の測定から算出した前記マーカー値を比較し、マーカー値の低下が認められ場合に治療効果があると判定するステップ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は疾患マーカー及びその用途に関する。詳しくは、間質性膀胱炎の鑑別を可能にするバイオマーカー及び間質性膀胱炎の鑑別法に関する。また、間質性膀胱炎の治療効果の判定に有用な手段も提供される。
【背景技術】
【０００２】
頻尿や尿意切迫感などの下部尿路症状を呈する疾患のなかで、過活動膀胱（overactive bladder; OAB）、慢性細菌性膀胱炎（chronic bacterial cystitis; CBC）、間質性膀胱炎（interstitial cystitis; IC）の鑑別が臨床上問題となる。現在、ICの病態は不明であるが、膀胱の非特異的炎症の程度により、強い炎症でハンナー病変（微小血管の集簇）を認めるものをハンナー型IC（HIC）、炎症が比較的軽く、ハンナー病変は認められないが血管新生を伴うものを非ハンナー型IC（NHIC）と分類している。日本では2015年度より炎症の強いHICが難病に指定されている（非特許文献１）。尚、間質性膀胱炎のマーカーとして、アズール粒子（特許文献１）、ウロプラキン（特許文献２）、TNFSF14遺伝子、CXCL9遺伝子、CXCL10遺伝子、CXCL11遺伝子、CXCR3遺伝子、CCR2遺伝子、AZGP1遺伝子及びOVOL1遺伝子（特許文献３）等が報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際公開第２００５／１１４１９６号パンフレット
【特許文献２】特開２００６−１０６３３号公報
【特許文献３】国際公開第２０１０／０４７３１７号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
外来での尿検査では白血球数（≧5/HPF）により、OAB（白血球数は正常で＜5/HPF）とCBC、或いはOABとICの鑑別はある程度可能であるが、CBCとIC、特にCBCとHICの鑑別は困難であり、IC患者に対して抗生剤投与が漫然と施行されているケースが多く見受けられる。本来であれば、抗生剤の投与前に尿培養を行い、細菌の有無を確認する必要があるが、実臨床においては尿定性検査で白血球が陽性となれば抗生剤が投与されているのが現状である。その理由の一つとして、日本では泌尿器科医のなかでもICの認知度がまだまだ低いことが挙げられる。そこで本発明は、間質性膀胱炎（IC）の特異的な検出（即ち、ICの鑑別）を可能にする指標及びその用途を提供することを課題とする。また、間質性膀胱炎の治療効果の判定に有用な手段を提供することも課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記課題に鑑み本発明者らは、尿中のサイトカイン、ケモカイン及び成長因子に着目し、鋭意検討した。その結果、リンパ球の誘導に関与する特定のケモカインの尿中レベルと、好中球の誘導に関与する特定のケモカインの尿中レベルの比が、ICの鑑別に極めて有用であることが判明した。一方で、当該比がICの治療効果の判定にも有用であることが示された。
【０００６】
以下に示す発明は、主として、本発明者らの鋭意検討によって得られた上記成果に基づく。
［１］以下の第１群のCXCケモカインサブファミリーから選択される、いずれかのケモカインの尿中レベルと、以下の第２群のCXCケモカインサブファミリーから選択される、いずれかのケモカインの尿中レベルの比からなる、間質性膀胱炎鑑別用マーカー：
第１群：CXCL9、CXCL10、CXCL11；
第２群：CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8。
［２］以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃ１〜Ｃ３は定数をそれぞれ表す）が与える値からなる、［１］に記載の間質性膀胱炎鑑別用マーカー：
｛Ｃ１×（CXCL9、CXCL10又はCXCL11の尿中レベル）／Ｃ２×（CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7又はCXCL8の尿中レベル）｝×Ｃ３。
［３］以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃ１〜Ｃ３は定数をそれぞれ表す）が与える値からなる、［１］に記載の間質性膀胱炎鑑別用マーカー：
｛Ｃ１×（CXCL10の尿中レベル）／Ｃ２×（CXCL1の尿中レベル）｝×Ｃ３。
［４］以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃ１〜Ｃ３は定数をそれぞれ表す）が与える値からなる、［１］に記載の間質性膀胱炎鑑別用マーカー：
｛Ｃ１×（CXCL10の尿中レベル）／Ｃ２×（CXCL8の尿中レベル）｝×Ｃ３。
［５］［１］〜［４］のいずれか一項に記載のマーカーの値を指標とした間質性膀胱炎鑑別法。
［６］以下のステップ（１）及び（２）を含む、［５］に記載の鑑別法：
（１）尿サンプルを用意し、その発現レベルが前記マーカーの構成要素となるケモカインを測定するステップ；
（２）測定結果から前記マーカーの値を算出し、間質性膀胱炎に罹患しているか否かを判定するステップ。
［７］以下の（ａ）又は（ｂ）の鑑別に用いる、［５］又は［６］に記載の鑑別法：
（ａ）間質性膀胱炎と慢性細菌性膀胱炎との鑑別；
（ｂ）間質性膀胱炎と過活動膀胱との鑑別。
［８］以下の第１群のCXCケモカインサブファミリーから選択される、いずれかのケモカインの尿中レベルと、以下の第２群のCXCケモカインサブファミリーから選択される、いずれかのケモカインの尿中レベルの比からなる、間質性膀胱炎の治療効果判定用マーカー：
第１群：CXCL9、CXCL10、CXCL11；
第２群：CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8。
［９］［８］に記載のマーカーの値を指標とした間質性膀胱炎の治療効果判定法。
［１０］以下のステップ（ｉ）及び（ｉｉ）を含む、［９］に記載の判定法：
（ｉ）間質性膀胱炎の治療を受けた患者から採取された尿サンプルを用意し、その発現レベルが前記マーカーの構成要素となるケモカインを測定するステップ；
（ｉｉ）測定結果から前記マーカーの値を算出し、算出した前記マーカー値と、以前の測定から算出した前記マーカー値を比較し、マーカー値の低下が認められ場合に治療効果があると判定するステップ。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】尿中成分の測定結果。CXCL1（A）、CXCL8（B）、CXCL10（C）及びVEGF（D）の濃度を、健常者（n=12）、OAB患者（n=16）、CBC患者（n=15）、NHIC患者（n=14）、HIC患者（n=13）の間で比較した。
【図２】尿中成分の測定結果。CXCL1（A）、CXCL8（B）及びCXCL10（C）の濃度を、下部尿路症状を有するOAB患者（n=16）、CBC患者（n=15）、NHIC（n=34）、HIC患者（n=33）の間で比較した。
【図３】尿中成分の測定結果。CXCL10／CXCL１比（A）とCXCL10／CXCL8比（B）を算出し、下部尿路症状を有するOAB患者（n=16）、CBC患者（n=15）、NHIC（n=34）、HIC患者（n=33）の間で比較した。
【図４】ROC曲線による評価。CXCL1単独（A）、CXCL10単独（B）、CXCL10／CXCL1比（C）及びCXCL10／CXCL8比（D）のROC曲線を作成し、比較評価した。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
１．間質性膀胱炎鑑別用マーカー／間質性膀胱炎の治療効果判定用マーカー
本発明の第１の局面は間質性膀胱炎鑑別用マーカー（以下、「鑑別用マーカー」と略称することがある）に関する。「間質性膀胱炎鑑別用マーカー」とは、間質性膀胱炎を鑑別するための指標である。本発明の間質性膀胱炎鑑別用マーカーは、例えば、間質性膀胱炎と慢性細菌性膀胱炎との間の鑑別、及び間質性膀胱炎と過活動膀胱との間の鑑別に有用である。
【０００９】
間質性膀胱炎（以下、ICと略称する）とは膀胱の非特異的慢性炎症を呈する疾患であり、ハンナー型IC（以下、HICと略称する）と非ハンナー型IC（以下、NHICと略称する）に大別される。一方、慢性細菌性膀胱炎（以下、CBCと略称する）とは細菌により誘発される膀胱の慢性炎症を呈する疾患である。また、過活動膀胱（overactive bladder; OAB）とは尿意切迫感を必須の症状とする症状症候群であり、病態のひとつに膀胱の炎症が示唆されている。上述の通り、現状、CBCとIC、特にCBCとHICの鑑別が困難である。本発明はこのような状況を打開する手段を提供するものであり、その臨床上の意義は極めて大きい。
【００１０】
本発明の鑑別用マーカーは、リンパ球の誘導に関与するケモカインである、CXCL9、CXCL10又はCXCL11（これらをまとめて第１群のCXCケモカインサブファミリーと呼ぶ）の尿中レベルと、好中球の誘導に関与するケモカインである、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7又はCXCL8（これらをまとめて第２群のCXCケモカインサブファミリーと呼ぶ）の尿中レベルの比から構成される。より具体的には、以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃ１〜Ｃ３は定数をそれぞれ表す）が与える値からなる。尚、このような比を鑑別用マーカーとすることにより、被検者の腎機能による影響（Cr補正）を受けることなく鑑別が可能になるという利点が得られる。
｛Ｃ１×（CXCL9、CXCL10又はCXCL11の尿中レベル）／Ｃ２×（CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7又はCXCL8の尿中レベル）｝×Ｃ３。
【００１１】
上記の式においてＣ１〜Ｃ３は定数である。定数Ｃ１〜Ｃ３は特に限定されないが、計算を容易にするため、好ましくは定数Ｃ１〜Ｃ３を正又は負の整数（例えば、１、２、３等）とする。典型的には、Ｃ１〜Ｃ３を全て１とする。
【００１２】
好ましい鑑別用マーカーとして、以下の（１）又は（２）の計算式（式中の／は除算を、Ｃ１〜Ｃ３は定数をそれぞれ表す）が与える値が挙げられる。
（１）｛Ｃ１×（CXCL10の尿中レベル）／Ｃ２×（CXCL1の尿中レベル）｝×Ｃ３
（２）｛Ｃ１×（CXCL10の尿中レベル）／Ｃ２×（CXCL8の尿中レベル）｝×Ｃ３
【００１３】
尚、生体中に存在するケモカインではなく、生体から採取された（即ち分離された）尿検体中のケモカインの量（尿中レベル）が本発明の鑑別用マーカーに用いられる。
【００１４】
本発明の間質性膀胱炎鑑別用マーカーである、第１群のCXCケモカインサブファミリーの尿中レベルと、第２群のCXCケモカインサブファミリーの尿中レベルの比は、間質性膀胱炎に対する治療後の効果判定にも利用し得る。即ち、本発明は間質性膀胱炎の治療効果判定用マーカー（以下、「治療効果判定用マーカー」と略称することがある）も提供する。
【００１５】
２．間質性膀胱炎の鑑別法
本発明の第２の局面は、本発明の鑑別用マーカーの典型的な用途として、間質性膀胱炎の鑑別法を提供する。本発明の鑑別法によれば、例えば、頻尿や尿意切迫感などの下部尿路症状を呈する場合において、罹患している疾患に関して、「間質性膀胱炎である」又は「間質性膀胱炎以外の疾患である」との判定結果を得ることができる。換言すれば、本発明の鑑別法は、間質性膀胱炎を発症しているか否かの識別（発症していない者又は発症している者の特定・抽出）を可能とする。本発明の鑑別法は以下の（ａ）又は（ｂ）の鑑別に特に有用である。
（ａ）間質性膀胱炎と慢性細菌性膀胱炎との鑑別
（ｂ）間質性膀胱炎と過活動膀胱との鑑別
尚、本発明の鑑別用マーカーによれば鑑別のための情報（判断材料）が提供される。この点に注目すれば、本発明の方法を、間質性膀胱炎の鑑別を補助する方法として捉えることも可能である。
【００１６】
典型的には、本発明の鑑別法では以下のステップ（１）及び（２）を実施する。
（１）尿サンプルを用意し、その発現レベルが鑑別用マーカーの構成要素となるケモカインを測定するステップ
（２）測定結果から鑑別用マーカーの値を算出し、間質性膀胱炎に罹患しているか否かを判定するステップ
【００１７】
ステップ（１）
ステップ（１）では被検者由来の尿サンプルを用意し、その発現レベルが鑑別用マーカーの構成要素となるケモカインを測定する。例えば、鑑別用マーカーとして、「CXCL10の尿中レベルとCXCL1の尿中レベルの比」を用いる場合にはCXCL10とCXCL1が測定対象となる。同様に、鑑別用マーカーとして、「CXCL10の尿中レベルとCXCL8の尿中レベルの比」を用いる場合にはCXCL10とCXCL8が測定対象となる。本明細書において「ケモカインを測定する」とは尿サンプル中の当該ケモカインのレベル、即ち含有量（濃度）を明らかにすることと同義である。被検者は、典型的には、頻尿や尿意切迫感などの下部尿路症状を訴える患者である。但し、それ以外の者を被検者にすることも可能である。尚、ステップ（１）で用意する尿サンプルは、本発明の実施に先立って被検者から採取される。従って、本発明は採尿のステップを含むものではない。
【００１８】
各ケモカインの尿中レベル（即ち尿中のタンパク質濃度）の測定方法は特に限定されないが、好ましくは免疫学的手法を利用する。免疫学的手法によれば迅速に且つ感度よく尿中レベルを測定できる。また、操作も簡便である。免疫学的手法による尿中レベルの測定では測定対象のケモカインに特異的結合性を有する物質が使用される。当該物質としては通常は抗ケモカイン抗体が用いられるが、測定対象のケモカインに特異的結合性を有し、その結合量を測定可能な物質であれば抗ケモカイン抗体に限らず使用することができる。
【００１９】
測定法として、蛍光免疫測定法（FIA法）、酵素免疫測定法（EIA法）、放射免疫測定法（RIA法）、ウエスタンブロット法を例示することができる。好ましい測定法としては、FIA法及びEIA法（ELISA法を含む）を挙げることができる。これらの方法によれば高感度、迅速且つ簡便に検出可能である。FIA法では蛍光標識した抗体を用い、蛍光をシグナルとして抗原抗体複合体（免疫複合体）を検出する。一方、EIA法では酵素標識した抗体を用い、酵素反応に基づく発色ないし発光をシグナルとして免疫複合体を検出する。各測定法は標準的なプロトコールで実施することができるが、当業者であれば、検出目的に合わせて、条件や手順の一部を改良することは容易である。
【００２０】
ELISA法は検出感度が高いことや特異性が高いこと、定量性に優れること、操作が簡便であること、多検体の同時処理に適することなど、多くの利点を有する。尚、各ケモカイン用のELISAキットが各社（例えばR&D Systems社、RayBiotech社、ITSI-Bioscience社）から販売されている。
【００２１】
ステップ（２）
ステップ（２）では、測定結果から鑑別用マーカーの値を算出し、間質性膀胱炎に罹患しているか否かを判定する。好ましい一態様では、判定結果が、間質性膀胱炎と慢性細菌性膀胱炎との鑑別（即ち、罹患している疾患が間質性膀胱炎と慢性細菌性膀胱炎のいずれであるかの判別）、又は間質性膀胱炎と過活動膀胱との鑑別（即ち、罹患している疾患が間質性膀胱炎と過活動膀胱のいずれであるかの判別）に用いられる。後述の実施例に示した実験の結果を踏まえると、鑑別用マーカーとして、「CXCL10の尿中レベルとCXCL1の尿中レベルの比」を用いる場合には、判定結果をHICとOABあるいはCBCの鑑別に用いることが特に有効であり、鑑別用マーカーとして「CXCL10の尿中レベルとCXCL8の尿中レベルの比」を用いる場合には、判定結果をHICとOABあるいはCBCの鑑別又はNHICとCBCの鑑別に用いることが特に有効であるといえる。
【００２２】
このステップでは、まず、測定結果から鑑別用マーカーの値を算出する。例えば、鑑別用マーカーとして、「CXCL10の尿中レベルとCXCL1の尿中レベルの比」を用いる場合には、以下の計算式から鑑別用マーカーの値を求める。
｛Ｃ１×（CXCL10の尿中レベル）／Ｃ２×（CXCL1の尿中レベル）｝×Ｃ３
【００２３】
算出した鑑別用マーカー値に基づき、例えば、以下のような定性的な判定を行う。
（定性的判定の例）
カットオフ値よりも鑑別用マーカー値が高いときに「間質性膀胱炎である」又は「間質性膀胱炎である可能性が高い」と判定し、カットオフ値よりも鑑別用マーカー値が低いときに「間質性膀胱炎以外の疾患（慢性細菌性膀胱炎又は過活動膀胱）である」又は「間質性膀胱炎以外の疾患（慢性細菌性膀胱炎又は過活動膀胱）である可能性が高い」と判定する。カットオフ値よりも鑑別用マーカー値が低いときに「間質性膀胱炎ではなく、特定の疾患（慢性細菌性膀胱炎又は過活動膀胱）である」又は「間質性膀胱炎ではなく、特定の疾患（慢性細菌性膀胱炎又は過活動膀胱）である可能性が高い」との判定を行うこともできる。判定に用いるカットオフ値は、例えば、ROC曲線（Receiver Operator Characteristic Curve）を用いて設定することができる。ROC曲線を用いる場合、典型的には、(感度＋特異度−1)を計算して、その最大値となるポイント（Youden index）をカットオフ値に設定する。「CXCL10の尿中レベルとCXCL1の尿中レベルの比」におけるカットオフ値の具体例として1.15（Youden index）を挙げることができる。当該カットオフ値を採用した場合、後述の実施例に示した検討では感度69％、特異度80％という、高い診断効率が得られた。同様に、「CXCL10の尿中レベルとCXCL8の尿中レベルの比」におけるカットオフ値の具体例として3.38（Youden index）を挙げることができる。当該カットオフ値を採用した場合、後述の実施例に示した検討では感度55％、特異度90％という、高い診断効率が得られた。尚、ROC曲線を用いたカットオフ値の設定については、例えば、Akobeng AK: Understanding diagnostic tests 3: Receiver operating characteristic curves. Acta Paediatr 96:644-647, 2007を参考にすることができる。
【００２４】
判定は定性的なものに限られない。即ち、半定量的又は定量的な判定を下すことにしてもよい。定量的判定の場合、例えば、以下に示すようにマーカー値の範囲毎に「罹患している疾患が間質性膀胱炎である可能性（％）」を予め設定しておき、測定値から「罹患している疾患が間質性膀胱炎である可能性（％）」を判定する。
マーカー値＜ａ：間質性膀胱炎である可能性は８０％より大きい
ａ≦マーカー値＜ｂ：間質性膀胱炎である可能性は２０％〜８０％
ｂ＜マーカー値：間質性膀胱炎である可能性は２０％未満
この例では３段階に区分したが、区分数は任意に設定できる。区分数の例は２〜１０、好ましくは２〜５である。また、基準値（上記の例ではａ、ｂ）は、鑑別の対象、要求される感度、特異度、精度（信頼度）などを考慮しつつ予備実験を通して設定すればよい。
【００２５】
尚、ステップ（２）の判定は、その判定基準から明らかな通り、医師や検査技師など専門知識を有する者の判断によらずとも自動的／機械的に行うことができる。
【００２６】
３．間質性膀胱炎の治療効果判定法
本発明の第３の局面は、本発明の治療効果判定用マーカーを利用した、間質性膀胱炎の治療効果判定法を提供する。本発明の判定法による判定結果は、治療方針の作成、改訂、見直しなどに有用な情報となる。従って、本発明を利用すれば、より適切な治療を提供することが可能となる。本発明の判定法では以下のステップ（ｉ）及び（ｉｉ）を実施する。尚、特に言及しない事項については上記鑑別法と同様である。
（ｉ）間質性膀胱炎の治療を受けた患者から採取された尿サンプルを用意し、その発現レベルが治療効果判定用マーカーの構成要素となるケモカインを測定するステップ
（ｉｉ）測定結果から治療効果判定用マーカーの値を算出し、算出した治療効果判定用マーカー値と、以前の測定から算出した治療効果判定用マーカー値を比較し、マーカー値の低下が認められ場合に治療効果があると判定するステップ
【００２７】
ステップ（ｉ）では、まず、間質性膀胱炎の治療を受けた患者から採取された尿サンプルを用意する。そして、その発現レベルがマーカーの構成要素となるケモカインを測定する。好ましい態様では、マーカーとして、「CXCL10の尿中レベルとCXCL1の尿中レベルの比」、又は「CXCL10の尿中レベルとCXCL8の尿中レベルの比」を用いる。尚、ステップ（ｉ）における測定の操作は、上記鑑別法のステップ（１）に準じて行えばよい。
【００２８】
続くステップ（ｉｉ）では、測定結果からマーカーの値を算出し、算出したマーカー値（判定時マーカー値）と、以前の測定から算出したマーカー値（対照マーカー値）を比較することで治療効果を判定する。比較の結果、判定時マーカー値が対照マーカー値よりも低い場合、即ち、治療経過に伴ってマーカー値の低下が認められた場合に「治療効果がある」と判定する。このように本発明の判定法では、少なくとも２つの異なる時点で測定を実施し、測定結果から算出したマーカー値を比較することで治療効果を判定する。「以前の測定」は、（ａ）治療開始前の時点、又は（ｂ）治療開始後且つ判定時よりも前の時点（即ち、治療開始時から判定時の間の任意の時点）である。「以前の測定」を複数の時点で実施し、その結果から算出したマーカー値（対照マーカー値）と判定時マーカー値を比較することにすれば、治療効果や病態の経時的な変動ないし変化を評価することもできる。尚、ステップ（ｉｉ）におけるマーカー値の算出法は、上記鑑別法のステップ（２）に準ずる。
【実施例】
【００２９】
＜間質性膀胱炎（IC）鑑別用バイオマーカーの探索＞
間質性膀胱炎（IC）を特異的に診断できる尿中バイオマーカーを同定することを目指し、以下の検討を行った。
１．方法
予備実験として、健常者（n=12）、OAB患者（n=16）、CBC患者（n=15）、NHIC患者（n=14）、HIC患者（n=13）を対象として、41種類の尿中炎症性サイトカイン、ケモカイン、成長因子を比較検討した。その結果、HICとNHIC患者では健常者と比較して、VEGFが有意に上昇していた（図１Ｄ）。また、CBCとHIC患者では健常者あるいはOAB患者と比較して、CXCL1とCXCL8が有意に上昇していた（図１Ａ，Ｂ）。更に、HIC患者では健常者あるいはOAB患者と比較して、CXCL10が有意に上昇していた（図１Ｃ）。
【００３０】
これら結果の解釈として、VEGFは血管新生を促進、CXCL10は血管新生を抑制するため、IC患者でVEGFが有意に上昇していたと推測された。しかしながら、VEGFに関して、IC患者とCBC患者の間に有意差は認められなかった。一方、CXCL10にはリンパ球（ヘルパーT細胞）を誘導、CXCL１とCXCL8には好中球を誘導する作用があるため、膀胱の炎症が強いCBCとHIC患者、特にHIC患者で有意に上昇していたと推測された。
【００３１】
そこで、次の検討として、ICを特異的に診断できる尿中バイオマーカーを同定するため、下部尿路症状を有するOAB患者（n=16）、CBC患者（n=15）、NHIC（n=34）、HIC患者（n=33）を対象にした。尿中ケモカインのCXCL1、CXCL8、CXCL10をそれぞれ単独で用いた場合と、リンパ球／好中球の比を表すCXCX10／CXCL1比あるいはCXCX10／CXCL8比を用いた場合の診断効率について、ROC曲線を用いて比較検討した。
【００３２】
２．結果
CXCL1に関して、CBC、NHIC、HIC患者はOAB患者より有意に上昇していた（図２Ａ）。CXCL8に関して、CBC患者及びHIC患者はOAB患者あるいはNHIC患者より有意に上昇していた（図２Ｂ）。CXCL10に関して、HIC患者はOAB患者、CBC患者あるいはNHIC患者より有意に上昇していた（図２Ｃ）。CXCL10／CXCL1比に関して、HIC患者はOAB患者、CBC患者あるいはNHIC患者と比較して有意に上昇していた（図３Ａ）。CXCL10／CXCL8比に関して、HIC患者はOAB患者あるいはCBC患者と比較して有意に上昇していた。一方、NHIC患者もCBC患者と比較して有意に上昇していた（図３Ｂ）。
【００３３】
CXCL1、CXCL8及びCXCL10単独のROC曲線下面積（AUC: area under the curve）はそれぞれ0.63（図４Ａ）、0.50（ROC曲線作成不可）及び0.73（図４Ｂ）であった。CXCL10／CXCL1比のAUC、CXCL10／CXCL8比のAUCはそれぞれ0.78（図４Ｃ）、0.73（図４Ｄ）であった。CXCL10／CXCL1比のカットオフ値1.15（Youden index）を用いることによって、感度69％、特異度80％で下部尿路症状を有する患者のなかでICを診断することが可能となった。同様に、CXCL10／CXCL8比のカットオフ値3.38（Youden index）を用いると、感度55％、特異度90％でICの診断が可能となった。
【００３４】
３．考察
以前にIC患者と健常者の膀胱生検組織を比較検討した結果では、IC患者でリンパ球（CD3陽性細胞）の有意な上昇が認められた。一方、CBC患者では膀胱内で好中球が有意に上昇することが以前報告されている。本検討では膀胱内のリンパ球と好中球の比に着目して、下部尿路症状を有する患者におけるICの尿中バイオマーカーを比較検討した。その結果、CXCL1、CXCL8、CXCL10を単独で用いるよりもCXCL10／CXCL1比又はCXCL10／CXCL8比を用いた方が診断効率を高めることが出来た。
【００３５】
膀胱内のリンパ球／好中球の比を反映する尿中CXCL10／CXCL8比やCXCL10／CXCL１比を用いることによって、下部尿路症状を有する患者の中でIC患者を効率的に鑑別することが可能となる。リンパ球を反映するCXCサブファミリー分子としてCXCL9、CXCL10及びCXCL11が知られており、好中球を反映するCXCサブファミリー分子としてCXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7及びCXCL8が知られている。この点を踏まえて上記検討の結果を考察すれば、リンパ球／好中球比を表すことになる、前者の分子と後者の分子の比、即ち、（CXCL9、CXCL10又はCXCL11）／（CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL7又はCXCL8）の値も、CXCL10／CXCL1比やCXCL10／CXCL8比と同様に、ICの鑑別用マーカーとして有用といえる。
【００３６】
＜バイオマーカーの治療効果判定への応用＞
ICの鑑別に有用であることが明らかとなった上記バイオマーカーの更なる有用性を見出すべく、治療介入後のバイオマーカー値の変動に注目して検討した。その結果、NHIC典型症例では膀胱水圧拡張前、6ヶ月後、12ヶ月後の「CXCL10の尿中レベルとCXCL1の尿中レベルの比」「CXCL10の尿中レベルとCXCL8の尿中レベルの比」がそれぞれ「3.43、0.28、1.51」「4.77、0.12、1.74」であった。同様に、HIC典型症例では膀胱電気焼灼術前、6ヶ月後、12ヶ月後の「CXCL10の尿中レベルとCXCL1の尿中レベルの比」「CXCL10の尿中レベルとCXCL8の尿中レベルの比」がそれぞれ「2.99、0.37、0.99」「4.23、0.63、0.64」であり、治療介入によってバイオマーカー値は低下した。この結果は、当該バイオマーカーがICの鑑別のみならず、ICの治療効果の判定にも有用であることを示す。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明のバイオマーカーはICの特異的な検出（即ち、ICの鑑別）を可能にする。本発明のバイオマーカーによれば尿検査で鑑別結果を得ることができるため、簡便であり、患者の負担も少ない。一方、本発明のバイオマーカーはICの治療効果の判定にも有用である。本発明のバイオマーカーを利用した判定結果は、治療方針の作成、改訂、見直しなどに有用な情報となる。本発明は、頻尿や尿意切迫感などの下部尿路症状を呈する病態の適切な診断、及びそれに基づく最適な治療方針の決定に貢献する。
【００３８】
この発明は、上記発明の実施の形態及び実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲の記載を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。本明細書の中で明示した論文、公開特許公報、及び特許公報などの内容は、その全ての内容を援用によって引用することとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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