(57)【要約】【課題】角膜上皮幹細胞の保護を介して視覚機能を再活性化することができる眼科組成物を提供すること。【解決手段】（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、視覚機能の再活性化用眼科組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、視覚機能の再活性化用眼科組成物。
【請求項２】
ビタミンＡ類が、パルミチン酸レチノール又は酢酸レチノールである、請求項１に記載の視覚機能の再活性化用眼科組成物。
【請求項３】
ビタミンＥ類が、酢酸トコフェロールである、請求項１又は２に記載の視覚機能の再活性化用眼科組成物。
【請求項４】
（Ａ）成分を２種以上組み合わせて含有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の視覚機能の再活性化用眼科組成物。
【請求項５】
（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、角膜上皮幹細胞に対する酸化ストレス抑制剤。
【請求項６】
（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、角膜組織再生剤。
【請求項７】
（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、角膜上皮幹細胞に対する酸化ストレス予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、視覚機能の再活性化用眼科組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、パソコン、スマートフォン等の普及を背景として、目がすぐに疲れる、しょぼしょぼする、目がかすむ、ピントが合いにくいといった自覚症状を訴える患者が増加している。これらの症状は、特に高齢者で多くみられる特徴がある。このような患者において、ピント調節機能の観点のみからではなく、より効果的にこれらの症状を改善させることが望まれている。
【０００３】
一方、角膜上皮細胞は、紫外線などの光、大気中の酸素、瞬き等による酸素分圧変動等の要因により、酸化ストレスの発生原因に常にさらされている（非特許文献１）。また、角膜細胞の輪部には、角膜上皮細胞の元となる角膜上皮幹細胞が存在している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】日本眼科学会雑誌，１１１巻，３号，ｐｐ．１９３−２０６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上述した各症状を総合的に改善すべく、角膜上皮幹細胞の保護を介して視覚機能を再活性化することができる眼科組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、眼部における上述した各症状を改善させるためには、視覚機能を総合的に向上させることが有効であることを見出した。また、角膜上皮幹細胞を酸化ストレスをはじめとする障害から保護することにより、角膜表面を均一化させることができ、かつ視覚機能を総合的に再活性化できることを見出した。さらに、（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種は、共存させることにより、及び／又は事前に接触させることにより、角膜上皮幹細胞を酸化ストレスなどの外部ダメージから保護できることを見出した。
【０００７】
すなわち、本発明は、例えば、以下の各発明に関する。
［１］
（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、視覚機能の再活性化用眼科組成物。
［２］
ビタミンＡ類が、パルミチン酸レチノール又は酢酸レチノールである、［１］に記載の視覚機能の再活性化用眼科組成物。
［３］
ビタミンＥ類が、酢酸トコフェロールである、［１］又は［２］に記載の視覚機能の再活性化用眼科組成物。
［４］
（Ａ）成分を２種以上組み合わせて含有する、［１］〜［３］のいずれかに記載の視覚機能の再活性化用眼科組成物。
【０００８】
本発明はまた、以下の各発明にも関する。
［２−１］
（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、角膜上皮幹細胞に対する酸化ストレス抑制剤。
［２−２］
（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、角膜組織再生剤。
［２−３］
（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、角膜上皮幹細胞に対する酸化ストレス予防剤。
［２−４］
（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、眼疲労改善用眼科組成物。
［２−５］
（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、目のかすみ改善用眼科組成物。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、角膜上皮幹細胞の保護を介して視覚機能を再活性化することができる眼科組成物の提供が可能となる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明を実施するための形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。本明細書中、「ｗ／ｖ％」は、「ｇ／１００ｍＬ」と同義である。
【００１１】
本発明に係る眼科組成物は、（Ａ）ビタミンＡ類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、ピリドキシン及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、メントール、並びにホウ酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種（「（Ａ）成分」ともいう。）を含有する。本発明に係る眼科組成物は、（Ａ）成分を含むことにより、優れた角膜上皮幹細胞の保護作用を発揮することから、視覚機能の再活性化用途に好適に用いられる。
【００１２】
［（Ａ）成分］
〔ビタミンＡ類〕
ビタミンＡ類は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。ビタミンＡ類の具体例としては、例えば、レチノール（ビタミンＡ１）、３−デヒドロレチノール（ビタミンＡ２）及びこれらの誘導体、並びにこれらの塩が挙げられる。
【００１３】
ビタミンＡ類の誘導体としては、例えば、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノール、酪酸レチノール、プロピオン酸レチノール、オクチル酸レチノール、ラウリル酸レチノール、オレイン酸レチノール及びリノレン酸レチノール等の１価のカルボン酸とのエステルが挙げられる。
【００１４】
ビタミンＡ類の塩としては、例えば、有機酸塩［例えば、モノカルボン酸塩（酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酪酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩等）、多価カルボン酸塩（フマル酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、マロン酸塩等）、オキシカルボン酸塩（乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩等）、有機スルホン酸塩（メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トシル酸塩等）等］、無機酸塩（例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩等）、有機塩基との塩（例えば、メチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン、トリピリジン、ピコリン等の有機アミンとの塩等）、無機塩基との塩［例えば、アンモニウム塩；アルカリ金属（ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）、アルミニウム等の金属との塩等］が挙げられる。
【００１５】
ビタミンＡ類としては、レチノールの誘導体が好ましく、レチノールと１価のカルボン酸とのエステルがより好ましく、パルミチン酸レチノール及び酢酸レチノールが更に好ましく、パルミチン酸レチノールが更により好ましい。
【００１６】
ビタミンＡ類としては、合成物を使用してもよいし、又は天然物から得られる抽出物（例えば、ビタミンＡ油など）を使用してもよい。ビタミンＡ油とは、レチノールを含有する動物の組織等から得られる脂肪油、若しくはその濃縮物、又はそれらに植物油を適宜添加したものである。ビタミンＡ類として、市販されているものを使用することもできる。ビタミンＡ類は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１７】
本実施形態に係る眼科組成物におけるビタミンＡ類の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、ビタミンＡ類の総含有量が、０．５万〜２０万ＩＵ／１００ｍＬであることが好ましく、１万〜１０万ＩＵ／１００ｍＬであることがより好ましく、１．５万〜６万ＩＵ／１００ｍＬであることが更に好ましく、２万〜５.５万ＩＵ／１００ｍＬであることが更により好ましく、４万〜５．５万ＩＵ／１００ｍＬであることが更によりまた好ましく、４．５万〜５．５万ＩＵ／１００ｍＬであることが特に好ましい。
【００１８】
「ＩＵ」とは、第十七改正日本薬局方ビタミンＡ定量法等に記載の手法により求められる国際単位を意味する。例えば、第十七改正日本薬局方の医薬品各条において、酢酸レチノールの場合、１ｇにつきビタミンＡ２５０万単位以上を含むこと、パルミチン酸レチノールの場合、１ｇにつきビタミンＡ１５０万単位以上を含むことが記載されている。
【００１９】
〔ビタミンＥ類〕
ビタミンＥ類は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。ビタミンＥ類の具体例としては、例えば、トコフェロール、トコトリエノール及びこれらの誘導体、並びにこれらの塩が挙げられる。トコフェロール及びトコトリエノールは、α−、β−、γ−、及びδ−のいずれであってもよく、またｄ体及びｄｌ体のいずれであってもよい。
【００２０】
ビタミンＥ類の誘導体としては、例えば、酢酸トコフェロール、コハク酸トコフェロール、ニコチン酸トコフェロール、リノレン酸トコフェロール等の有機酸とのエステルが挙げられる。
【００２１】
ビタミンＥ類の塩としては、例えば、有機酸塩（乳酸塩、酢酸塩、酪酸塩、トリフルオロ酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トシル酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩等）、無機酸塩（例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩等）、有機塩基との塩（例えば、メチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン、アミノ酸、トリピリジン、ピコリンなどの有機アミンとの塩等）、無機塩基との塩（例えば、アンモニウム塩、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属、アルミニウムなどの金属との塩等）が挙げられる。
【００２２】
ビタミンＥ類としては、ｄ−α−トコフェロール、ｄｌ−α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、ビタミンＥ酢酸エステル（例えば、酢酸トコフェロール）、ビタミンＥニコチン酸エステル、ビタミンＥコハク酸エステル、ビタミンＥリノレン酸エステルが好ましく、酢酸トコフェロール（例えば、酢酸ｄ−α−トコフェロール、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール等）がより好ましい。
【００２３】
ビタミンＥ類は、天然品、合成品のいずれであってもよい。ビタミンＥ類として、市販されているものを使用することもできる。ビタミンＥ類は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２４】
本実施形態に係る眼科組成物におけるビタミンＥ類の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、ビタミンＥ類の総含有量が、０．０００１〜０．５ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．００１〜０．１５ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．０１〜０．１０ｗ／ｖ％であることが更に好ましく、０．０２５〜０．０５ｗ／ｖ％であることが更により好ましい。
【００２５】
〔アミノエチルスルホン酸及びその塩〕
アミノエチルスルホン酸（タウリン）及びその塩は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。
【００２６】
アミノエチルスルホン酸の塩としては、例えば、有機塩基との塩（例えば、メチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン、トリピリジン、ピコリン等の有機アミンとの塩）、無機塩基との塩［例えば、アンモニウム塩、アルカリ金属（ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）、アルミニウム等の金属との塩］が挙げられる。
【００２７】
アミノエチルスルホン酸及びその塩としては、アミノエチルスルホン酸が好ましい。
【００２８】
アミノエチルスルホン酸及びその塩として、市販されているものを使用することもできる。アミノエチルスルホン酸及びその塩は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２９】
本実施形態に係る眼科組成物におけるアミノエチルスルホン酸及びその塩の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、アミノエチルスルホン酸及びその塩の総含有量が、０．００１〜１０ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０１〜５ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．１〜２ｗ／ｖ％であることが更に好ましく、０．２〜１．５ｗ／ｖ％であることが更により好ましく、０．５〜１ｗ／ｖ％であることが更によりまた好ましく、０．８〜１．０ｗ／ｖ％であることが特に好ましい。
【００３０】
〔ピリドキシン及びその塩〕
ピリドキシン（ビタミンＢ６）及びその塩は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。
【００３１】
ピリドキシンの塩としては、例えば、有機酸塩（例えば、乳酸塩、酢酸塩、酪酸塩、トリフルオロ酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トシル酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩等）、無機酸塩（例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩等）が挙げられる。
【００３２】
ピリドキシン及びその塩としては、ピリドキシン及びその無機酸塩が好ましく、塩酸ピリドキシンがより好ましい。
【００３３】
ピリドキシン及びその塩として、市販されているものを使用することもできる。ピリドキシン及びその塩は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００３４】
本実施形態に係る眼科組成物におけるピリドキシン及びその塩の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、ピリドキシン及びその塩の総含有量が、０．００１〜１．０ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０１〜０．５ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．０２〜０．２ｗ／ｖ％であることが更に好ましく、０．０５〜０．１ｗ／ｖ％であることが更により好ましい。
【００３５】
〔コンドロイチン硫酸及びその塩〕
コンドロイチン硫酸及びその塩は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。コンドロイチン硫酸は、Ｄ−グルクロン酸とＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンの２つ糖が反復する糖鎖に硫酸が結合した構造を有するグリコサミノグリカンの一種である。
【００３６】
コンドロイチン硫酸の塩としては、例えば、有機塩基との塩（例えば、メチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン、トリピリジン、ピコリン等の有機アミンとの塩）、無機塩基との塩［例えば、アンモニウム塩、アルカリ金属（ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）、アルミニウム等の金属との塩］が挙げられる。
【００３７】
コンドロイチン硫酸及びその塩としては、コンドロイチン硫酸の無機塩基との塩が好ましく、コンドロイチン硫酸のアルカリ金属塩がより好ましく、コンドロイチン硫酸のナトリウム塩及びカリウム塩が更に好ましく、コンドロイチン硫酸のナトリウム塩（コンドロイチン硫酸ナトリウム）が更により好ましい。
【００３８】
コンドロイチン硫酸及びその塩は、その由来については特に制限されるものではなく、例えば、哺乳動物や魚の軟骨（例えば、サケやサメの軟骨等）等の動物から得られたものであってもよく、微生物から得られたものであってもよく、合成品であってもよい。コンドロイチン硫酸及びその塩として、市販されているものを使用することもできる。コンドロイチン硫酸及びその塩は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００３９】
本実施形態に係る眼科組成物におけるコンドロイチン硫酸及びその塩の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、コンドロイチン硫酸及びその塩の総含有量が、０．００５〜５ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０１〜３ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．０２〜２ｗ／ｖ％であることが更に好ましく、０．０５〜１ｗ／ｖ％であることが更により好ましく、０．１〜０．５ｗ／ｖ％であることが特に好ましい。
【００４０】
〔ネオスチグミン及びその塩〕
ネオスチグミン及びその塩は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。ネオスチグミンの塩としては、例えば、メチル硫酸ネオスチグミンが挙げられる。ネオスチグミン及びその塩としては、メチル硫酸ネオスチグミンが好ましい。
【００４１】
ネオスチグミン及びその塩として、市販されているものを使用することもできる。ネオスチグミン及びその塩は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００４２】
本実施形態に係る水性組成物におけるネオスチグミン及びその塩の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、ネオスチグミン及びその塩の総含有量が、０．００００５〜０．０５ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０００１〜０．０１ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．０００５〜０．００５ｗ／ｖ％であることが更に好ましく、０．００１〜０．００５ｗ／ｖ％であることが更により好ましい。
【００４３】
〔メントール〕
メントールは、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。メントールは、ｄ体、ｌ体、ｄｌ体のいずれであってもよいが、ｌ−メントールが好ましい。
【００４４】
メントールとして、メントールを含有する精油を使用してもよい。このような精油としては、例えば、例えば、ハッカ油、クールミント油、スペアミント油、ペパーミント油が挙げられる。メントールとして、市販されているものを使用することもできる。メントールは、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００４５】
本実施形態に係る眼科組成物におけるメントールの含有量は、眼科組成物の総量を基準として、０．００００１〜０．５ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０００１〜０．２５ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．０００５〜０．１ｗ／ｖ％であることがさらに好ましく、０．００１〜０．０８ｗ／ｖ％であることが更に好ましい。なお、メントールを含む精油を使用する場合は、当該精油の配合割合は、配合される精油中のメントール含有量が上記配合割合を満たすように設定される。
【００４６】
〔ホウ酸及びその塩〕
ホウ酸及びその塩は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。
【００４７】
ホウ酸の塩としては、例えば、ホウ酸ナトリウム、テトラホウ酸カリウム、メタホウ酸カリウム、ホウ酸アンモニウム、ホウ砂（四ホウ酸ナトリウム）が挙げられる。
【００４８】
ホウ酸及びその塩としては、ホウ酸とホウ酸の塩の組み合わせが好ましく、ホウ酸とホウ砂の組み合わせがより好ましい。
【００４９】
ホウ酸とホウ砂を組み合わせる場合の配合比としては、ホウ酸１質量部に対して、ホウ砂が０．００１〜４質量部であることが好ましく、０．００５〜２質量部であることがより好ましく、０．０１〜１質量部であることが更に好ましい。
【００５０】
ホウ酸及びその塩として、市販されているものを使用することもできる。ホウ酸及びその塩は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００５１】
本実施形態に係る眼科組成物におけるホウ酸及びその塩の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、ホウ酸及びその塩の総含有量が、０．０１〜１０ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０５〜５ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．１〜３ｗ／ｖ％であることが更に好ましく、０．２〜２ｗ／ｖ％であることが更により好ましい。
【００５２】
〔（Ａ）成分の組み合わせ〕
本実施形態に係る眼科組成物は、上述した（Ａ）成分を２種以上組み合わせて含むものであってもよい。これにより、角膜上皮幹細胞の保護効果が相乗的に向上するため、視覚機能を再活性化するという本発明による効果がより顕著に発揮される。（Ａ）成分の組み合わせの具体例としては、これに限られるものではないが、ビタミンＡ類（特に、パルミチン酸レチノール）とアミノエチルスルホン酸及びその塩（特に、アミノエチルスルホン酸）との組み合わせ、ビタミンＡ類（特に、パルミチン酸レチノール）とホウ酸及びその塩（特に、ホウ酸とホウ砂の組み合わせ）との組み合わせ、ビタミンＡ類（特に、パルミチン酸レチノール）とメントール（特に、ｌ−メントール）との組み合わせ、ネオスチグミン及びその塩（特に、メチル硫酸ネオスチグミン）とホウ酸及びその塩（特に、ホウ酸とホウ砂の組み合わせ）との組み合わせ、ネオスチグミン及びその塩（特に、メチル硫酸ネオスチグミン）とメントール（特に、ｌ−メントール）との組み合わせを挙げることができる。
【００５３】
ビタミンＡ類とアミノエチルスルホン酸及びその塩とを組み合わせる場合、角膜上皮幹細胞の保護効果が相乗的に向上するという観点から、ビタミンＡ類の総含有量１万ＩＵに対するアミノエチルスルホン酸及びその塩の総含有量（質量）は、０．００００５〜２０ｇ／１万ＩＵであることが好ましく、０．０００１〜１０ｇ／１万ＩＵであることがより好ましく、０．０００５〜５ｇ／１万ＩＵであることが更に好ましく、０．００１〜１ｇ／１万ＩＵであることが更により好ましく、０．００５〜０．８ｇ／１万ＩＵが更によりまた好ましく、０．０１〜０．５ｇ／１万ＩＵであることが特に好ましく、０．０５〜０．３ｇ／１万ＩＵであることが特により好ましく、０．１５〜０．２３ｇ／１万ＩＵであることが最も好ましい。
【００５４】
同様の観点から、ビタミンＡ類の総含有量１質量部に対するアミノエチルスルホン酸及びその塩の総含有量としては、０．００５〜３５００質量部であってよく、０．０１〜１８００質量部であることが好ましく、０．０２〜１０００質量部であることがより好ましい。
【００５５】
ビタミンＡ類とホウ酸及びその塩とを組み合わせる場合、本発明による効果がより一層向上するという観点から、ビタミンＡ類の総含有量１万ＩＵに対するホウ酸及びその塩の総含有量（質量）は、０．０００１〜５０ｇ／１万ＩＵであることが好ましく、０．０００５〜１０ｇ／１万ＩＵであることがより好ましく、０．００１〜５ｇ／１万ＩＵであることが更に好ましく、０．００５〜２ｇ／１万ＩＵであることが更により好ましく、０．０１〜１ｇ／１万ＩＵであることが特に好ましく、０．０２〜０．５ｇ／１万ＩＵが特により好ましい。
【００５６】
同様の観点から、ビタミンＡ類の総含有量１質量部に対するホウ酸及びその塩の総含有量としては、０．０１〜１００００質量部であってよく、０．０５〜５０００質量部であることが好ましく、０．１〜１０００質量部であることがより好ましく、０．５〜５００質量部であることが更に好ましく、１〜１００質量部であることが更により好ましく、５〜５０質量部であることが特に好ましい。
【００５７】
ビタミンＡ類とメントールとを組み合わせる場合、本発明による効果がより一層向上するという観点から、ビタミンＡ類の総含有量１万ＩＵに対するメントールの総含有量（質量）は、０．００００１〜１ｇ／１万ＩＵであることが好ましく、０．０００００５〜０．５ｇ／１万ＩＵであることがより好ましく、０．００００１〜０．１ｇ／１万ＩＵであることが更に好ましく、０．００００５〜０．０５ｇ／１万ＩＵであることが更により好ましく、０．０００１〜０．０１ｇ／１万ＩＵであることが特に好ましい。
【００５８】
同様の観点から、ビタミンＡ類の総含有量１質量部に対するメントールの総含有量としては、０．０００１〜１０００質量部であってよく、０．０００５〜１００質量部であることが好ましく、０．００１〜５０質量部であることがより好ましく、０．００５〜２０質量部であることが更に好ましく、０．０１〜５質量部であることが更により好ましい。
【００５９】
ネオスチグミン及びその塩とホウ酸及びその塩とを組み合わせる場合、本発明による効果がより一層向上するという観点から、ネオスチグミン及びその塩の総含有量１質量部に対するホウ酸及びその塩の総含有量としては、０．５〜５００００質量部であってよく、１〜１００００質量部であることが好ましく、５〜５０００質量部であることがより好ましく、１０〜１０００質量部であることが更に好ましく、２０〜５００質量部であることが更により好ましい。
【００６０】
ネオスチグミン及びその塩とメントールとを組み合わせる場合、本発明による効果がより一層向上するという観点から、ネオスチグミン及びその塩の総含有量１質量部に対するメントールの総含有量としては、０．００１〜５０００質量部であってよく、０．００５〜１０００質量部であることが好ましく、０．０１〜５００質量部であることがより好ましく、０．０５〜１００質量部であることが更に好ましく、０．１〜５０質量部であることが更により好ましく、０．２〜２０質量部であることが特に好ましい。
【００６１】
［（Ｂ）成分］
本実施形態に係る眼科組成物は、（Ｂ）非イオン界面活性剤（「（Ｂ）成分」ともいう。）を含むものであってもよい。
【００６２】
非イオン界面活性剤は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。非イオン界面活性剤の具体例としては、例えば、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー付加物、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルが挙げられる。
【００６３】
非イオン界面活性剤のより具体的な例として、例えば、モノラウリル酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート２０）、モノオレイン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート８０）、ＰＯＥソルビタンモノステアレート（ポリソルベート６０）及びＰＯＥソルビタントリステアレート（ポリソルベート６５）等のＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル、ＰＯＥ硬化ヒマシ油５、ＰＯＥ硬化ヒマシ油１０、ＰＯＥ硬化ヒマシ油２０、ＰＯＥ硬化ヒマシ油４０、ＰＯＥ硬化ヒマシ油５０、ＰＯＥ硬化ヒマシ油６０及びＰＯＥ硬化ヒマシ油１００等のＰＯＥ硬化ヒマシ油、ＰＯＥヒマシ油３、ＰＯＥヒマシ油１０、ＰＯＥヒマシ油２０、ＰＯＥヒマシ油３５、ＰＯＥヒマシ油４０、ＰＯＥヒマシ油５０及びＰＯＥヒマシ油６０等のＰＯＥヒマシ油、ポロクサマー４０７、ポロクサマー２３５、ポロクサマー１８８、ポロクサマー４０３、ポロクサマー２３７及びポロクサマー１２４等のＰＯＥ・ＰＯＰブロックコポリマー類、モノステアリン酸ポリエチレングリコール（２Ｅ．Ｏ．）、モノステアリン酸ポリエチレングリコール（４Ｅ．Ｏ．）、モノステアリン酸ポリエチレングリコール（９Ｅ．Ｏ．）、モノステアリン酸ポリエチレングリコール（１０Ｅ．Ｏ．）、モノステアリン酸ポリエチレングリコール（２３Ｅ．Ｏ．）、モノステアリン酸ポリエチレングリコール（２５Ｅ．Ｏ．）、モノステアリン酸ポリエチレングリコール（３２Ｅ．Ｏ．）、モノステアリン酸ポリエチレングリコール（４０Ｅ．Ｏ．、ステアリン酸ポリオキシル４０）、モノステアリン酸ポリエチレングリコール（４５Ｅ．Ｏ．）、モノステアリン酸ポリエチレングリコール（５５Ｅ．Ｏ．）、モノステアリン酸ポリエチレングリコール（７５Ｅ．Ｏ．）及びモノステアリン酸ポリエチレングリコール（１４０Ｅ．Ｏ．）等のモノステアリン酸ポリエチレングリコール、ＰＯＥ（９）ラウリルエーテル等のＰＯＥアルキルエーテル類、ＰＯＥ（２０）ＰＯＰ（４）セチルエーテル等のＰＯＥ−ＰＯＰアルキルエーテル類、並びにＰＯＥ（１０）ノニルフェニルエーテル等のＰＯＥアルキルフェニルエーテル類が挙げられる。なお、上記例示した化合物において、ＰＯＥはポリオキシエチレン、ＰＯＰはポリオキシプロピレン、及び括弧内の数字は付加モル数を示す。
【００６４】
非イオン界面活性剤として、市販されているものを使用することもできる。非イオン界面活性剤は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００６５】
本実施形態に係る眼科組成物における非イオン界面活性剤の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、非イオン界面活性剤の総含有量が、０．０００１〜５ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０００５〜３ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．００１〜２ｗ／ｖ％であることが更に好ましく、０．００５〜１ｗ／ｖ％であることが更により好ましく、０．０１〜０．８ｗ／ｖ％であることが特に好ましい。
【００６６】
本実施形態に係る眼科組成物のｐＨは、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容される範囲内であれば特に限定されるものではない。本実施形態に係る眼科組成物のｐＨとしては、例えば、４．０〜９．５であってよく、４．０〜９．０であることが好ましく、４．５〜９．０であることがより好ましく、４．５〜８．５であることが更に好ましく、５．０〜８．５であることが更により好ましい。
【００６７】
本実施形態に係る眼科組成物は、必要に応じて、生体に許容される範囲内の浸透圧比に調節することができる。適切な浸透圧比は、眼科組成物の用途、製剤形態、使用方法等に応じて適宜設定され得るが、例えば、０．４〜５．０とすることができ、０．６〜３．０とすることが好ましく、０．８〜２．２とすることがより好ましく、０．８〜２．０とすることが更に好ましい。浸透圧比は、第十七改正日本薬局方に基づき、２８６ｍＯｓｍ（０．９ｗ／ｖ％塩化ナトリウム水溶液の浸透圧）に対する試料の浸透圧の比とし、浸透圧は日本薬局方記載の浸透圧測定法（凝固点降下法）を参考にして測定する。なお、浸透圧比測定用標準液（０．９ｗ／ｖ％塩化ナトリウム水溶液）は、塩化ナトリウム（日本薬局方標準試薬）を５００〜６５０℃で４０〜５０分間乾燥した後、デシケーター（シリカゲル）中で放冷し、その０．９００ｇを正確に量り、精製水に溶かし正確に１００ｍＬとして調製するか、市販の浸透圧比測定用標準液（０．９ｗ／ｖ％塩化ナトリウム水溶液）を用いることができる。
【００６８】
本実施形態に係る眼科組成物の粘度は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容される範囲内であれば、特に限定されるものではない。本実施形態に係る眼科組成物の粘度としては、例えば、回転粘度計（ＲＥ５５０型粘度計、東機産業社製、ローター；１°３４‘×Ｒ２４）で測定した２０℃における粘度が１〜１００００ｍＰａ・ｓであることが好ましく、１〜８０００ｍＰａ・ｓであることがより好ましく、１〜１０００ｍＰａ・ｓであることが更に好ましく、１〜１００ｍＰａ・ｓであることが更により好ましく、１〜２０ｍＰａ・ｓであることが特に好ましい。
【００６９】
本実施形態に係る眼科組成物は、本発明の効果を損なわない範囲であれば、上記成分の他に種々の薬理活性成分及び生理活性成分から選択される成分を組み合わせて適当量含有していてもよい。当該成分は特に制限されず、例えば、一般用医薬品製造販売承認基準２０１２年版（一般社団法人  レギュラトリーサイエンス学会  監修）に記載された眼科用薬における有効成分が例示できる。眼科用薬において用いられる成分として、具体的には、例えば、次のような成分が挙げられる。
抗アレルギー剤：例えば、クロモグリク酸ナトリウム、トラニラスト、ペミロラストカリウム、アシタザノラスト等。
抗ヒスタミン剤：例えば、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸ジフェンヒドラミン等。
サルファ剤：例えば、スルファメトキサゾール、スルファメトキサゾールナトリウム、スルフイソキサゾール、スルフイソミジンナトリウム等。
ステロイド剤：例えば、プロピオン酸フルチカゾン、フランカルボン酸フルチカゾン、フランカルボン酸モメタゾン、プロピオン酸ベクロメタゾン、フルニソリド等。
局所麻酔剤：例えば、リドカイン、プロカイン等。
水溶性ビタミン（（Ａ）成分に該当するものを除く。）：例えば、シアノコバラミン、フラビンアデニンジヌクレオチドナトリウム、パンテノール等。
その他：例えば、レバミピド等。
【００７０】
本実施形態に係る眼科組成物には、本発明の効果を損なわない範囲であれば、その用途及び製剤形態に応じて、常法に従い、様々な添加物を適宜選択し、１種又はそれ以上を併用して適当量含有させてもよい。このような添加物として、例えば、医薬品添加物事典２０１６（日本医薬品添加剤協会編集）に記載された各種添加物が例示できる。代表的な成分として次の添加物が挙げられる。
担体：例えば、水、含水エタノール等の水性溶媒。
キレート剤：例えば、エチレンジアミン二酢酸（ＥＤＤＡ）、エチレンジアミン三酢酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）等。
基剤：例えば、オクチルドデカノール、酸化チタン、臭化カリウム、プラスチベース等。
ｐＨ調節剤：例えば、塩酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、トリエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン等。
安定化剤：例えば、ナトリウムホルムアルデヒドスルホキシレート（ロンガリット）、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、モノステアリン酸アルミニウム、モノステアリン酸グリセリン、シクロデキストリン、モノエタノールアミン等。
陰イオン界面活性剤：例えば、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩、Ｎ−アシルタウリン塩等。
緩衝剤：、リン酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、トリス緩衝剤、アスパラギン酸、アスパラギン酸塩、イプシロン−アミノカプロン酸等。
両性界面活性剤：例えば、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン等。
防腐剤、殺菌剤又は抗菌剤：例えば、塩化亜鉛、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン、安息香酸ナトリウム、エタノール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン、クロロブタノール、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル、硫酸オキシキノリン、フェネチルアルコール、ベンジルアルコール、ビグアニド化合物（具体的には、塩酸ポリヘキサニド等）、グローキル（ローディア社製  商品名）等。
等張化剤：例えば、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、酢酸カリウム、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、グリセリン、プロピレングリコール等。
糖類：例えば、グルコース、シクロデキストリン等。
糖アルコール類：例えば、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、グリセリン等。これらはｄ体、ｌ体又はｄｌ体のいずれでもよい。
【００７１】
本実施形態に係る眼科組成物が水を含有する場合、水の含有量としては、本発明による効果をより顕著に奏する観点から、例えば、眼科組成物の総量を基準として、水の含有量が、８０ｗ／ｖ％以上１００ｗ／ｖ％未満であることが好ましく、８５ｗ／ｖ％以上９９．５ｗ／ｖ％以下であることがより好ましく、９０ｗ／ｖ％以上９９．２ｗ／ｖ％以下であることが更に好ましい。
【００７２】
本実施形態に係る眼科組成物に使用される水は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであればよい。このような水として、例えば、蒸留水、常水、精製水、滅菌精製水、注射用水及び注射用蒸留水等を挙げることができる。それらの定義は第十七改正日本薬局方に基づく。
【００７３】
本実施形態に係る眼科組成物は、所望量の（Ａ）成分、及び必要に応じて他の成分を所望の濃度となるように添加及び混和することにより調製することができる。例えば、精製水でそれらの成分を溶解又は分散させ、所定のｐＨ及び浸透圧に調整し、濾過滅菌等により滅菌処理することで調製できる。
【００７４】
本実施形態に係る眼科組成物は、目的に応じて種々の製剤形態をとることができる。製剤形態として、例えば、液剤、ゲル剤、半固形剤（軟膏等）等が挙げられる。
【００７５】
本実施形態に係る眼科組成物は、例えば、点眼剤（点眼液又は点眼薬ともいう。また、点眼剤にはコンタクトレンズ装用中に点眼可能な点眼剤を含む。）、人工涙液、洗眼剤（洗眼液又は洗眼薬ともいう。また、洗眼剤にはコンタクトレンズ装用中に洗眼可能な洗眼剤を含む。）、コンタクトレンズ用組成物［コンタクトレンズ装着液、コンタクトレンズケア用組成物（コンタクトレンズ消毒剤、コンタクトレンズ用保存剤、コンタクトレンズ用洗浄剤、コンタクトレンズ用洗浄保存剤）等］として用いることができる。なお、「コンタクトレンズ」は、ハードコンタクトレンズ、ソフトコンタクトレンズ（イオン性及び非イオン性の双方を包含し、シリコーンハイドロゲルコンタクトレンズ及び非シリコーンハイドロゲルコンタクトレンズの双方を包含する）を含む。
【００７６】
本実施形態に係る眼科組成物は、本発明による効果をより顕著に発揮できることから、点眼剤（コンタクトレンズ装用中に点眼可能な点眼剤を含む。）であることが好ましい。本実施形態に係る眼科組成物が点眼剤である場合、その用法・用量としては、効果を奏し、副作用の少ない用法・用量であれば特に限定されないが、例えば成人（１５歳以上）及び７歳以上の小児の場合、１回１〜３滴、１〜２滴、又は２〜３滴を１日５〜６回点眼して用いる方法を例示できる。
【００７７】
本実施形態に係る眼科組成物は、任意の容器に収容して提供される。本実施形態に係る眼科組成物を収容する容器については特に制限されず、例えば、ガラス製であってもよく、またプラスチック製であってもよい。好ましくはプラスチック製である。プラスチックとしては、例えば、ポリエチレンテレフタレート、ポリアリレート、ポリエチレンナフタレート、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリイミド及びこれらを構成するモノマーの共重合体、並びにこれら２種以上を混合したものが挙げられる。好ましくは、ポリエチレンテレフタレートである。また、本実施形態に係る眼科組成物を収容する容器は、容器内部を視認できる透明容器であってもよく、容器内部の視認が困難な不透明容器であってもよい。好ましくは透明容器である。ここで、「透明容器」とは、無色透明容器及び有色透明容器の双方が含まれる。
【００７８】
本実施形態に係る眼科組成物を収容する容器には、ノズルが装着されてもよい。ノズルの材質については特に制限されず、例えば、ガラス製であってもよく、またプラスチック製であってもよい。好ましくはプラスチック製である。プラスチックとしては、例えば、ポリブチレンテレフタレート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレンナフタレート及びこれらを構成するモノマーの共重合体、並びにこれら２種以上を混合したものが挙げられる。好ましくは、ポリエチレンである。
【００７９】
本実施形態に係る眼科組成物を収容する容器は、複数回の使用量が収容されるマルチドーズ型であってもよく、単回の使用量が収容されるユニットドーズ型であってもよい。
【００８０】
本実施形態に係る眼科組成物は、内容積が４〜３０ｍＬである容器に充填されてなることが好ましく、内容積が５〜２０ｍＬである容器に充填されてなることがより好ましく、内容積が６〜１６ｍＬである容器に充填されてなることが更に好ましく、内容積が１０〜１５ｍＬである容器に充填されてなることが更により好ましい。
【００８１】
本発明に係る眼科組成物は、（Ａ）成分を共存させることにより、及び／又は事前に接触させることにより、角膜上皮幹細胞を酸化ストレスなどの外部ダメージから保護できる。これにより、角膜表面を均一化させることができ、かつ視覚機能を総合的に再活性化できる。したがって、本発明に係る眼科組成物は、目の疲れ（眼疲労）、目のかすみ等の改善用としても好適である。また、本発明に係る眼科組成物は、角膜上皮幹細胞に対する酸化ストレス抑制剤として、更には角膜組織再生剤として好適に使用できる。
【００８２】
本発明に係る眼科組成物は、角膜上皮幹細胞の保護を介して視覚機能を再活性化するものであるため、特に年齢に伴う目の衰えを感じやすい高齢者用として好適である。ここで、高齢者とは、一般的に年齢に伴う目の衰えを感じやすい６０歳以上のヒトを指す。
【００８３】
本発明に係る眼科組成物は、角膜上皮幹細胞と事前に接触させることにより、（Ａ）成分が外液（涙液等）に存在していなくても、角膜上皮幹細胞を酸化ストレスなどの外部ダメージから保護することができる。したがって、眼部に酸化ストレスを生じることが予想されるときに予防的に使用してもよい。すなわち、本発明に係る眼科組成物は、角膜上皮幹細胞に対する酸化ストレス予防剤としても好適に使用できる。
【実施例】
【００８４】
以下、実施例等に基づいて本発明をより具体的に説明する。ただし、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。なお、各表中の各成分の含有量は、特に指定がない限りｇ／１００ｍＬである。
【００８５】
〔試験例１：角膜上皮幹細胞に対する酸化ストレス試験（１）〕
表１に示す組成で、常法に従い、各水性組成物を調製し、試験溶液とした。
【００８６】
マウス角膜上皮幹細胞（ＴＫＥ２）を、培養プレート（９６ｗｅｌｌ、日本コーニング社製）に播種し、３７℃、５％ＣＯ２、湿度９０％の条件下でコンフルエントになるまで培養した。培養培地には、ＫＳＦＭ（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  ｓｅｒｕｍ−ｆｒｅｅ  ｍｅｄｉｕｍ（Ｂｏｖｉｎｅ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｅｘｔｒａｃｔ，ＥＧＦ含有），Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）培地を用いた。
【００８７】
各ウェルから培養培地を吸引除去し、各試験溶液をそれぞれ１００μＬずつ各ウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で６時間インキュベートした。次に、各ウェルに、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（ｔ−ＢＯＯＨ）を、１０００μＭ／ｗｅｌｌとなるように添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で４時間インキュベートした後に、各ウェルの生細胞数を測定した。
【００８８】
生細胞数の測定は、各ウェルに細胞数測定試薬Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＤＯＪＩＮＤＯ社製）を添加し、１時間、３７℃、５％ＣＯ２で培養を行った後、４５０ｎｍの吸光度を測定することによって行った。コントロールの生細胞数を１００％としたときの各試験溶液に対して測定された生細胞数の割合を細胞生存率（％）とした。なお、コントロールは、ｔ−ＢＯＯＨを添加しなかったこと以外は、比較例１−１と同様に処理したものである。
【００８９】
次いで、下記（式１）に従い、対応する比較試験溶液の細胞生存率を１００％としたときの各試験溶液の細胞生存率の割合（細胞生存率割合（％））を算出した。
（式１）細胞生存率割合（％）＝各試験溶液の細胞生存率／対応する比較試験溶液の細胞生存率×１００
なお、実施例１−１〜実施例１−５の試験溶液に対応する比較試験溶液は、比較例１−１の試験溶液である。結果を表１に併せて示す。
【００９０】
【表１】
2018203728.tif 000002
【００９１】
パルミチン酸レチノール、アミノエチルスルホン酸又は酢酸トコフェロールを添加することにより、角膜上皮幹細胞の細胞生存率が向上した。
【００９２】
〔試験例２：角膜上皮幹細胞に対する酸化ストレス試験（２）〕
表２に示す組成で、常法に従い、各水性組成物を調製し、試験溶液とした。
【００９３】
マウス角膜上皮幹細胞（ＴＫＥ２）を、培養プレート（９６ｗｅｌｌ、日本コーニング社製）に播種し、３７℃、５％ＣＯ２、湿度９０％の条件下でコンフルエントになるまで培養した。培養培地には、ＫＳＦＭ（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  ｓｅｒｕｍ−ｆｒｅｅ  ｍｅｄｉｕｍ（Ｂｏｖｉｎｅ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｅｘｔｒａｃｔ，ＥＧＦ含有），Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）培地を用いた。
【００９４】
各ウェルから培養培地を吸引除去し、各試験溶液をそれぞれ１００μＬずつ各ウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で６時間インキュベートした。その後、各ウェルから各試験溶液を吸引除去し、ＰＢＳ緩衝液で細胞を洗浄した。次に各ウェルに培養培地で希釈したｔ−ＢＯＯＨを添加した（１０００μＭ／ｗｅｌｌ）。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で４時間インキュベートした後に、各ウェルの生細胞数を測定した。
【００９５】
生細胞数の測定は、各ウェルに細胞数測定試薬Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＤＯＪＩＮＤＯ社製）を添加し、１時間、３７℃、５％ＣＯ２で培養を行った後、４５０ｎｍの吸光度を測定することによって行った。コントロールの生細胞数を１００％としたときの各試験溶液に対して測定された生細胞数の割合を細胞生存率（％）とした。なお、コントロールは、ｔ−ＢＯＯＨを添加しなかったこと以外は、比較例２−１と同様に処理したものである。
【００９６】
次いで、上記（式１）に従い、対応する比較試験溶液の細胞生存率を１００％としたときの各試験溶液の細胞生存率の割合（細胞生存率割合（％））を算出した。なお、実施例２−１〜実施例２−３の試験溶液に対応する比較試験溶液は、比較例２−１の試験溶液である。結果を表２に併せて示す。
【００９７】
【表２】
2018203728.tif 000003
【００９８】
パルミチン酸レチノール又はアミノエチルスルホン酸を添加することにより、角膜上皮幹細胞の細胞生存率が向上した。また、パルミチン酸レチノール及びアミノエチルスルホン酸を共存させることにより、角膜上皮幹細胞の細胞生存率が相乗的に向上した。試験例２では、角膜上皮幹細胞に対し活性酸素種（ｔ−ＢＯＯＨ）を添加する際には、試験溶液は洗浄されており、パルミチン酸レチノール及びアミノエチルスルホン酸等の成分は存在していない。すなわち、パルミチン酸レチノール及びアミノエチルスルホン酸は、角膜上皮幹細胞と事前に接触することにより、角膜上皮幹細胞を活性酸素種から保護する作用を奏していることが示された。また、洗浄ありでも細胞保護効果が認められることから、パルミチン酸レチノール及びアミノエチルスルホン酸は、少なくとも一部において、活性酸素種を除去する作用とは異なる作用によって、角膜上皮幹細胞を保護していることを示している。
【００９９】
〔試験例３：角膜上皮幹細胞に対する酸化ストレス試験（３）〕
表３に示す組成で、常法に従い、各水性組成物を調製し、試験溶液とした。
【０１００】
細胞生存率（洗浄あり）は、試験例２と同様の方法で求めた。次いで、上記（式１）に従い、対応する比較試験溶液の細胞生存率を１００％としたときの各試験溶液の細胞生存率の割合（細胞生存率割合（％））を算出した。なお、実施例３−１〜実施例３−３の試験溶液に対応する比較試験溶液は、比較例３−１の試験溶液である。結果を表３に併せて示す。
【０１０１】
【表３】
2018203728.tif 000004
【０１０２】
試験例２と同様、酢酸トコフェロール又は塩酸ピリドキシンを添加することにより、角膜上皮幹細胞の細胞生存率が向上した。すなわち、酢酸トコフェロール又は塩酸ピリドキシンは、試験例２と同様に、角膜上皮幹細胞と事前に接触することにより、角膜上皮幹細胞を活性酸素種から保護する作用を奏していることが示された。また、洗浄ありでも細胞保護効果が認められることから、酢酸トコフェロール及び塩酸ピリドキシンは、少なくとも一部において、活性酸素種を除去する作用とは異なる作用によって、角膜上皮幹細胞を保護していることを示している。
【０１０３】
〔試験例４：角膜上皮幹細胞に対する酸化ストレス試験（４）〕
表４に示す組成で、常法に従い、各水性組成物を調製し、試験溶液とした。
【０１０４】
細胞生存率（洗浄なし）は、試験例１と同様の方法で求めた。細胞生存率（洗浄あり）は、試験例２と同様の方法で求めた。次いで、上記（式１）に従い、対応する比較試験溶液の細胞生存率を１００％としたときの各試験溶液の細胞生存率の割合（細胞生存率割合（％））を算出した。なお、試験処方１−２〜試験処方１−９の試験溶液に対応する比較試験溶液は、試験処方１−１の試験溶液である。結果を表４に併せて示す。
【０１０５】
【表４】
2018203728.tif 000005
【０１０６】
コンドロイチン硫酸ナトリウム、メチル硫酸ネオスチグミン、ｌ−メントール又はホウ酸及びホウ砂の組み合わせを添加することにより、角膜上皮幹細胞の細胞生存率が向上した。コンドロイチン硫酸ナトリウム、メチル硫酸ネオスチグミン、ｌ−メントール、並びにホウ酸及びホウ砂の組み合わせのいずれの場合においても、洗浄ありでも細胞保護効果が認められることから、角膜上皮幹細胞と事前に接触することにより、角膜上皮幹細胞を活性酸素種から保護する作用を奏していること、及び少なくとも一部において、活性酸素種を除去する作用とは異なる作用によって、角膜上皮幹細胞を保護していることが示された。
【０１０７】
〔参考例：非幹細胞に対する酸化ストレス試験〕
表５に示す組成で、常法に従い、各水性組成物を調製し、試験溶液とした。
【０１０８】
細胞生存率（洗浄あり）は、マウス角膜上皮幹細胞（ＴＫＥ２）に代えて角膜上皮細胞（ＨＥＣＴ）を使用したこと以外は、試験例２と同様の方法で求めた。なお、培養培地はＤＭＥＭ／Ｆ１２（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ社製）にＦＣＳ（ＤＳファーマ社製）を５％、ＤＭＳＯ（和光純薬社製）を０．５％、ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ＥＧＦ（Ｒ＆Ｄ社製）を１０ｎｇ／ｍＬ、ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｈｕｍａｎ（ＳＩＧＭＡ社製）を５μｇ／ｍＬとなるように添加したものを用いた。
【０１０９】
次いで、上記（式１）に従い、対応する比較試験溶液の細胞生存率を１００％としたときの各試験溶液の細胞生存率の割合（細胞生存率割合（％））を算出した。なお、参考処方２及び３の試験溶液に対応する比較試験溶液は、参考処方１の試験溶液である。結果を表５に併せて示す。
【０１１０】
【表５】
2018203728.tif 000006
【０１１１】
角膜上皮幹細胞に代えて角膜上皮細胞を使用した場合には、パルミチン酸レチノールの添加による細胞保護効果は認められなかった。
【０１１２】
〔試験例５：角膜上皮幹細胞に対する酸化ストレス試験（５）〕
表６に示す組成で、常法に従い、各水性組成物を調製し、試験溶液とした。
【０１１３】
細胞生存率（洗浄なし）は、試験例１と同様の方法で求めた。細胞生存率（洗浄あり）は、試験例２と同様の方法で求めた。次いで、上記（式１）に従い、対応する比較試験溶液の細胞生存率を１００％としたときの各試験溶液の細胞生存率の割合（細胞生存率割合（％））を算出した。なお、実施例４−１〜実施例４−４の試験溶液に対応する比較試験溶液は、比較例４−１の試験溶液である。結果を表６に併せて示す。
【０１１４】
【表６】
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【０１１５】
パルミチン酸レチノールとホウ酸／ホウ砂、パルミチン酸レチノールとｌ−メントール、メチル硫酸ネオスチグミンとホウ酸／ホウ砂、メチル硫酸ネオスチグミンとｌ−メントールを組み合わせて添加することにより、角膜上皮幹細胞の細胞生存率が向上することが確認された。
【０１１６】
〔製剤例〕
下記表７〜表１２に記載の処方で、処方例１〜５９が調製される。処方例１〜５９を、ポリエチレンテレフタレート製の容器に充填し、低密度ポリエチレン製のノズルを装着したものを製剤例１〜５９とした。処方例１〜５９を、ポリエチレンテレフタレート製の容器に充填し、キャップ装着時（保存時）において、内容液と接液する可能性のある壁面の全部がポリブチレンテレフタレート製のノズルを装着したものを製剤例６０〜１１８とした。処方例１〜５９を、ポリエチレンテレフタレート製の容器に充填し、内容液と接液する可能性のある壁面の一部がポリエチレンテレフタレート製のノズルを装着したものを製剤例１１９〜１７７とした。処方例１〜５９を、ポリエチレンテレフタレート製の容器に充填し、内容液と接液する可能性のある壁面の一部がポリエチレンナフタレート製のノズルを装着したものを製剤例１７８〜２３６とした。なお、下記表７〜表１２における各成分量の単位は、ｗ／ｖ％である。また、表７〜１２中、パルミチン酸レチノール（レチノールパルミチン酸エステル）は、１００ｍＬあたりの配合量を示す。
【０１１７】
【表７】
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【０１１８】
【表８】
2018203728.tif 000009
【０１１９】
【表９】
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【０１２０】
【表１０】
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【０１２１】
【表１１】
2018203728.tif 000012
【０１２２】
【表１２】
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【０１２３】
〔製剤例２〕
下記表１３に記載の処方で、処方例６０〜６４が調製される。処方例６０〜６４を、ポリエチレンテレフタレート製の容器に充填し、低密度ポリエチレン製のノズルを装着したものを製剤例２３７〜２４１とした。なお、下記表１３における各成分量の単位は、ｗ／ｖ％である。
【０１２４】
【表１３】
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