(57)【要約】      （修正有）【課題】ピーナッツアレルギー又は他の樹木性堅果に対するアレルギーを有する対象におけるＴリンパ球と免疫学的に相互作用するペプチド、ポリペプチド、及びタンパク質等の分子、並びに、それらをコードする遺伝子配列の提供。【解決手段】Ａｒａ  ｈ１アレルゲンに対するアレルギーを有する対象のＴ細胞と免疫学的に相互作用する特定の配列を持つペプチド。該ペプチドは、Ａｒａ  ｈ１またはその誘導体もしくはホモログに対する、異常な、不適切な、又は望ましくない免疫反応により特徴付けられる状態に対する診断薬剤、治療薬剤、及び予防薬剤の開発において有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含有するリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログを１種または複数種含有する組成物：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ  （配列番号３）
（ｉｖ）  ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｖ）    ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖｉ）  ＥＧＡＬＭＬ  （配列番号６）
（ｖｉｉ）ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｉｘ）  ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｘ）    ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【請求項２】
前記組成物は、１種または複数種のペプチドを含有し、前記ペプチドの各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、前記ペプチドは、１種または複数種の前記Ａｒａ  ｈ１  Ｔ細胞エピトープを有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ペプチドまたはエピトープは、Ａｒａ  ｈ１に対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫反応により特徴付けられる疾患を有する対象から単離されたＴ細胞に提示された場合に、Ｔ細胞の機能を改変することができるが、前記ペプチドは、Ａｒａ  ｈ１特異的ＩｇＥに結合することはできない、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ペプチドは、Ａｒａ  ｈ１に対する、または、Ａｒａ  ｈ１を含有する組成物中に存在するエピトープに対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫応答により特徴付けられる疾患を有する対象における過感受性を減少させることができる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
１種または複数種のペプチドを含有し、その各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、前記ペプチドは、コアエピトープ領域  ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ（配列番号３）と、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種とを共に含有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｉｖ）  ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖ）    ＥＧＡＬＭＬ  （配列番号６）
（ｖｉ）  ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｖｉｉｉ）ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｉｘ）  ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【請求項６】
１種または複数種のペプチドを含有し、その各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、前記ペプチドは、コアエピトープ領域  ＥＧＡＬＭＬ（配列番号６）と、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種とを共に含有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ  （配列番号３）
（ｉｖ）  ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｖ）    ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖｉ）  ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｖｉｉｉ）ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｉｘ）  ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【請求項７】
少なくとも３種のペプチド、少なくとも４種のペプチド、少なくとも５種のペプチド、少なくとも６種のペプチド、少なくとも７種のペプチド、少なくとも８種のペプチド、少なくとも９種のペプチド、または１０種のペプチドを含有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記ペプチドは、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個の長さのアミノ酸である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記ペプチドは、１０〜２５個の長さのアミノ酸である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ペプチドは、１５〜２５個の長さのアミノ酸である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ペプチドは、１５〜２０個の長さのアミノ酸である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ペプチドは、１０〜２０個の長さのアミノ酸である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ペプチドは、以下のリストから選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ） ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶ（配列番号１２）
（ｉｉ）ＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１３）
（ｉｉｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１４）
（ｉｖ）ＷＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１５）
（ｖ） ＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１６）
（ｖｉ）ＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１７）
（ｖｉｉ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１８）
（ｖｉｉｉ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１９）
（ｉｘ）ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２０）
（ｘ） ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２１）
（ｘｉ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２２）
（ｘｉｉ）ＶＥＩＫＥＧＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡ（配列番号２３）
（ｘｉｉｉ）ＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶＶＶ（配列番号２４）
（ｘｉｖ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧ（配列番号２５）
（ｘｖ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２６）
（ｘｖｉ）ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶＲＫ（配列番号２７）
（ｘｖｉｉ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶ（配列番号２８）
（ｘｖｉｉｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２９）
（ｘｉｘ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３０）
（ｘｘ）ＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３１）
（ｘｘｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３２）
（ｘｘｉｉ）ＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３３）
【請求項１４】
配列番号１５、１６、または１７により定義されるペプチドと、配列番号１２〜１４または１８〜３３により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
配列番号２３により定義されるペプチドと、配列番号１２〜２２または２４〜３３により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ペプチドは、以下のリストから選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶ（配列番号１２）
（ｉｉ）ＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１３）
（ｉｉｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１４）
（ｉｖ）ＷＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１５）
（ｖ）ＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１６）
（ｖｉ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１８）
（ｖｉｉ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１９）
（ｖｉｉｉ）ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２０）
（ｉｘ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２１）
（ｘ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２２）
（ｘｉ）ＶＥＩＫＥＧＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡ（配列番号２３）
（ｘｉｉ）ＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶＶＶ（配列番号２４）
（ｘｉｉｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧ（配列番号２５）
（ｘｉｖ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２６）
（ｘｖ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶ（配列番号２８）
（ｘｖｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２９）
（ｘｖｉｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３０）
（ｘｖｉｉｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３２）
（ｘｉｘ）ＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３１）
【請求項１７】
配列番号１５により定義されるペプチドと、配列番号１２〜１４、１６、１８〜２６、または２８〜３２により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
配列番号２３により定義されるペプチドと、配列番号１２〜１６、１８〜２２、２４〜２６または２８〜３２により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ペプチドは、以下のリストから選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１４）
（ｉｉ）ＷＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１５）
（ｉｉｉ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２１）
（ｉｖ）ＶＥＩＫＥＧＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡ（配列番号２３）
（ｖ）ＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶＶＶ（配列番号２４）
（ｖｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２９）
（ｖｉｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３０）
【請求項２０】
配列番号１５により定義されるペプチドと、配列番号１４、２１、２３、２４、２９ま
たは３０により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
配列番号２３により定義されるペプチドと、配列番号１４、１５、２１、２４、２９または３０により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記列挙されたペプチドのうちの３種または４種または５種または６種または７種を含有する、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
配列番号１４、１５、２１、２３、２４、２９および３０により定義されるペプチドを含有する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２４】
配列番号１４、１６、２１、２３、２４、２９および３０により定義されるペプチドを含有する、請求項に記載の組成物。
【請求項２５】
配列番号１４、１５、２２、２３、２４、２９および３０により定義されるペプチドを含有する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２６】
配列番号１４、１５、２１、２３、２４、２９および３２により定義されるペプチドを含有する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２７】
配列番号１４により定義されるペプチドは、以下と置換される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）配列番号１２および１３により定義されるペプチド；
（ｉｉ）配列番号１２により定義されるペプチド；または、
（ｉｉｉ）配列番号１３により定義されるペプチド。
【請求項２８】
配列番号１５により定義されるペプチドは、配列番号１６または１７により定義されるペプチドにより置換される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の組成物：
【請求項２９】
配列番号２１により定義されるペプチドは、以下により定義されるペプチドにより置換される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）配列番号２２により定義されるペプチド；
（ｉｉ）配列番号１８および２０により定義されるペプチド；
（ｉｉｉ）配列番号２０および１９により定義されるペプチド；
（ｉｖ）配列番号１８により定義されるペプチド；
（ｉｖ）配列番号１９により定義されるペプチド；または、
（ｉｖ）配列番号２０により定義されるペプチド。
【請求項３０】
配列番号２９により定義されるペプチドは、以下により定義されるペプチドにより置換される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）配列番号２５、２８および２７により定義されるペプチド；
（ｉｉ）配列番号２５および２６により定義されるペプチド；
（ｉｉｉ）配列番号２５および２８により定義されるペプチド；
（ｉｖ）配列番号２５および２７により定義されるペプチド；
（ｖ）配列番号２５により定義されるペプチド；
（ｖｉ）配列番号２８により定義されるペプチド；
（ｖｉｉ）配列番号２７により定義されるペプチド；または、
（ｖｉｉｉ）配列番号２６により定義されるペプチド。
【請求項３１】
配列番号３０により定義されるペプチドは、以下により定義されるペプチドにより置換される、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）配列番号３２により定義されるペプチド；
（ｉｉ）配列番号３３により定義されるペプチド；または、
（ｉｉｉ）配列番号３１により定義されるペプチド。
【請求項３２】
Ａｒａ  ｈ１以外のアレルゲンのエピトープをさらに含有する、請求項１〜３１のいず
れか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記Ａｒａ  ｈ１以外のアレルゲンは、Ａｒａ  ｈ２である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
請求項１〜３１のいずれか１項に記載のエピトープおよびペプチド、またはその誘導体、ホモログ、もしくはアナログをコードする配列をコードするヌクレオチドの配列、または、請求項１〜３１のいずれか１項に従うエピトープおよびペプチド、またはその誘導体、ホモログ、もしくはアナログをコードする配列に対して相補的なヌクレオチドの配列を含有する、核酸分子。
【請求項３５】
対象における疾患を治療および／または予防するための方法であって、前記疾患は、Ａｒａ  ｈ１に対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫反応、または、Ａｒａ  ｈ１を含有する組成物中に存在するアレルゲンに対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫反応により特徴付けられ、前記方法は、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の組成物の有効量を、しばらくの間、前記望ましくない免疫反応を除去または減少させるために十分な条件下で、前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３６】
哺乳類における疾患の治療のための医薬の製造における、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の組成物の使用であって、前記状態は、Ａｒａ  ｈ１に対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫反応、または、Ａｒａ  ｈ１を含有する組成物中に存在するアレルゲンに対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫反応により特徴付けられる、使用。
【請求項３７】
前記疾患は、ピーナッツまたはＡｒａ  ｈ１を含有する樹木性堅果に対する過感受性である、請求項３５に記載の方法、または請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
前記樹木性堅果は、ヘーゼルナッツ、アーモンド、またはブラジルナッツである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
Ａｒａ  ｈ１に対して脱感作させる、または免疫寛容を誘導する、請求項３５〜３８のいずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項４０】
前記脱感作または寛容が、Ｔｈ２アネルギーまたはアポトーシスの誘導により行われる、請求項３９に記載の方法または使用。
【請求項４１】
１種または複数種の薬学的に受容可能な担体および／または希釈物質と共に、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の組成物を含有する医薬組成物。
【請求項４２】
哺乳類における疾患を診断またはモニタリングする方法であって、前記疾患は、Ａｒａ
ｈ１に対する異常な、望ましくない、または不適切な反応により特徴づけられ、前記方法は、請求項１〜３３のいずれか１項に記載のペプチドまたはエピトープを利用して、Ａ
ｒａ  ｈ１反応性Ｔ細胞に対するスクリーニングを行うことを含有する、方法。
【請求項４３】
前記疾患は、ピーナッツまたはＡｒａ  ｈ１を含有する樹木性堅果に対する過感受性である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記樹木性堅果は、ヘーゼルナッツ、アーモンド、またはブラジルナッツである、請求項４３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、ピーナッツアレルギー、または他の樹木類の堅果に対するアレルギーを有する対象のＴリンパ球と免疫学的に相互作用するペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質等の分子、ならびに、それらをコードする遺伝子配列に関する。これらの分子は、好ましくは、Ａｒａ  ｈ１アレルゲンに対するアレルギーを有する対象のＴ細胞と免疫相互作用するものである。本発明の分子は、Ａｒａ  ｈ１またはその誘導体またはそのホモログに対する、異常な、不適切な、または望ましくない免疫応答により特徴付けられる状態に対する、診断剤、治療剤または予防剤の開発に有用である。
【背景技術】
【０００２】
本明細書において、著者により引用される公表文献の書誌的詳細は、本明細書の末尾に、アルファベット順にまとめてある。
【０００３】
本明細書の任意の先行技術に対する参照文献は、当該先行技術が、オーストラリアにおける一般的知識の一部を形成することを何らかの形で示唆するもの、もしくは、オーストラリアにおける一般的知識の一部を形成することに同意するものではなく、またそのように解釈されるべきではない。
【０００４】
ピーナッツアレルギーは、生命を脅かし、治療法が無く、人口のおよそ１％が罹患している疾患である（非特許文献１，２）。ピーナッツアレルギーは、ごく少量のピーナッツタンパク質に曝された際に発生しうる、アナフィラキシーの突然の発現により特徴付けられる（非特許文献３，４）。堅果誘導性アナフィラキシーは、非常に高い頻度で死亡し、または生命が脅かされるものである（非特許文献２，５）。ピーナッツタンパク質は、安全とされている食物内にもしばしば隠れており、偶発的な接触が、ここ５年の間に、患者の５０％までに発生している（非特許文献６）。驚くべきことではないが、堅果アレルギーは、リウマチ性関節炎等の慢性消耗疾患に罹患した者と同様、患者、同じくその介護者に著しく不健全な心理学的状態を引き起こす（非特許文献７，８）。死亡原因としての堅果アレルギーを取り除くための治療が必須であるが、一方で、ピーナッツアレルギー患者が抱える、慢性的な心理学的負担を取り除く必要もある。
【０００５】
現在までのところ、ピーナッツアレルギーに対する免疫療法に対する努力の成果は、非常に限定されたものである。Ｎｅｌｓｏｎらは、ピーナッツに対する寛容が、急速免疫療法プロトコール（ｒｕｓｈ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ）を用いて誘導されうることを示したが、その寛容は、維持投薬の間に、対象達のおよそ半分で消失し、さらには、その注射によって、強化期間と維持期間の両方の間に、対象達の大部分が、アナフィラキシー症状を頻繁に発現させる（非特許文献９）。Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｒらは、実験で同様の結果を得て、能動療法が、高率で全身性のアナフィラキシーを生じさせることを再び示した。その実験でのデータ収集は、ピーナッツ抽出物をプラセボランダム化対象に投与し、その結果、対象が死亡した後で終了し、この条件が危険な性質のものであることを強調することとなった（非特許文献１０）。ピーナッツの全粒粉を用いた近年の経口免疫療法の実験により、脱感作が実現可能であることが証明されたが、しかし、観察された有害反応は、深刻な安全性に関する懸念を強調することとなった（非特許文献１１〜２０）。深刻な症状または喘息の傾向がある児童を除いても、２つの実験においてアナフィラキシーの発現が報告されており、１つの例では、最初の食物チャレンジの間（非特許文献１３）、他方は、アナフィラキシーの経験がこれまでなかった児童の治療の間に発生している（非特許文献１１）。
【０００６】
アレルゲン免疫療法と関連した病的状態を克服するための新規戦略の開発は、成功した免疫療法ならびに、その副作用に対する免疫学的な原理の正確な理解に依存している。アレルゲン免疫療法による病的状態は、ＩｇＥの架橋によるものであり、この作用は長い間、その療法の有効性に必要が無いことが立証されている（非特許文献２１）。また、寛容をもたらすための免疫療法の重大な作用のうちの１つは、主要な特異的Ｔ細胞の表現型を、ＴＨ２から制御性の表現型へと変化させる特性にある。これらの制御性Ｔ細胞は、抗炎症性サイトカインであるＩＬ−１０および／またはＴＧＦβの産生を介して作用する（非特許文献２２〜２４）。
【０００７】
抗体およびリンパ球応答における重要な差異は、抗原の認識において、抗体は分子の三次元構造による立体構造エピトープを認識する一方で、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、短い直鎖状ペプチドを認識するという点である。抗原認識におけるこの差異は、免疫療法（Ｔ細胞エピトープに基づいたペプチド、Ｂ細胞エピトープ変異体、および改変ペプチドリガンドを用いたものを含む）の多くの新規戦略の基盤となっている（非特許文献２５）。そのような方法はすべて、ＩｇＥ架橋およびエフェクター細胞活性化を消失させる改変分子三次元構造、または非存在の分子三次元構造に基づいている。ペプチド免疫療法は、有効性の証明がなされた方法であり、ネコのフケアレルギーおよび蜂毒アレルギーの両方に関して報告されている。３つの異なる研究により、Ｔ細胞エピトープ含有配列を用いて、全身性の副作用が発生することなく、主要な蜂毒アレルゲンである、Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ａ２（ＰＬＡ２）に対する寛容を得ることができることが示されており（非特許文献２６〜２８）、また、いくつかの実験により、主要なネコアレルゲンであるＦｅｌ  ｄ１の構造に基づいたペプチドを用いて、臨床反応の低下を誘導できることが示されている（非特許文献２９〜３４）。最近では、第ＩＩａ相試験により、Ｆｅｌ  ｄ１由来の７種のペプチド混合物（Ｔｏｌｅｒｏｍｕｎｅ  Ｃａｔ（登録商標）、Ｃｉｃａｓｓｉａ  Ｌｔｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ，  ＵＫ）の安全性、耐容性、および有効性の可能性が確認され（非特許文献３５）、第ＩＩｂ相試験が現在、行われている（非特許文献３６）。そのような戦略開発の肝は、Ｔ細胞の表現型変化が誘導されるように、Ｔ細胞エピトープを維持させることである。
【０００８】
ＭＨＣクラスＩＩ分子に直接結合する能力により、ペプチドは、寛容、アネルギーおよび／または応答性Ｔ細胞において抑制性活性の誘導を促進する、炎症誘発および共刺激シグナル伝達を伴わない、非プロフェッショナル（または非成熟）ＡＰＣにより提示されることができる（非特許文献３６）。これにより、ペプチドは、全分子から処理されたペプチドよりも高い頻度で提示されることができ（非特許文献３７）、また、全アレルゲンよりも安全であり、より高い濃度でペプチドを投与することができ、それにより、Ｔ細胞応答をより効率的に再分極させることができる。
【０００９】
重要なことに、主要アレルゲンの優性エピトープに特異的なＴ細胞を標的とすることにより、全アレルゲン抽出物に対する反応を変えることができる（連鎖抑制）。マウスアレルギーモデルにおいて、ペプチド免疫療法に成功した多くの研究報告があり、主要アレルゲンの優性Ｔ細胞エピトープペプチドの投与により、それらペプチドに対する寛容だけではなく、精製アレルゲンおよび全アレルゲン抽出物に対する寛容もまた誘導されたことが示されている（非特許文献３８〜４３）。
【００１０】
それゆえ、主要ピーナッツアレルゲンを特定すること、さらに、これらアレルゲンのＴ細胞エピトープを特定することの両方が求められている。これらエピトープの特定、特徴解析、および分析が、特定診断および免疫療法の開発に重要である。この目的に対し、これまでＡｒａ  ｈ１ピーナッツアレルゲン分子が分析対象であったが、効果的なワクチン開発に必須なＴ細胞コアエピトープ領域の特定はまだ得られていない。さらに、従前の研究では、ＨＬＡ−ＤＲテトラマーの使用に基づいていたということもあり、限定されてい
たため、他のＨＬＡ型により提示されるエピトープが検出されていなかった。集団全体にわたるワクチンの有効性は、検討中のエピトープが、広範な異なるＨＬＡ型全体で提示される必要があり、Ａｒａ  ｈ１分子内のＴ細胞エピトープの特定のみならず、さらには、優性であり、および、群の代表的な多様なＨＬＡ型により効果的に提示される、エピトープの特定が必要となる。
【００１１】
本発明に至る研究の中で、優性である、ＨＬＡ重複（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ）Ａｒａ
ｈ１コアエピトープ領域が特定された。このコアエピトープ領域の群は、特に有効性が高い点でユニークである。あるレベルのＴ細胞反応性を示す能力のみに基づいて特定された、２０ｍｅｒのＡｒａ  ｈ１ペプチドに関する従前の研究とは異なり、本発明の配列は、両方とも、他のＡｒａ  ｈ１ペプチド断片と比較した免疫優性、および、ＨＬＡ型に結合するＨＬＡ重複性がある、コアＴ細胞エピトープ領域の選択されたセットである。さらに、これらエピトープコア領域は、ＨＬＡ−ＤＱ分子により提示される。ＨＬＡ−ＤＱ分子は、ＨＬＡ−ＤＲ分子よりも、混在集団においてより保存されている。従って、ＨＬＡ−ＤＱ上に提示されるペプチドは、より広範な集団をカバーすることができる。コアエピトープ領域のこの特定の群を特定することにより、初めて、Ａｒａ  ｈ１またはその誘導体もしくはホモログに対する、異常で、不適切な、または望ましくない免疫応答、他の樹木性堅果アレルギー、またはたとえばＡｒａ  ｈ１アレルゲンを含有する食物等の組成物に対するアレルギーにより特徴付けられる状態を治療する効果的な方法の開発が促進された。これらエピトープの特定により、相当する診断技術の開発もまた促進された。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Husain et al. J Am Acad Dermatol. 66(1):136-43, 2012
【非特許文献２】Burks, Lancet. 371(9623):1538-46, 2008
【非特許文献３】Hourihane et al., J Allergy Clin Immunol 100: 596-600, 1997
【非特許文献４】Pumphrey, Current Opinion in Allergy & Clinical Immunology. 4(4):285-90, 2004
【非特許文献５】Bock et al. J Allergy Clin Immunol.119(4):1016-8, 2007
【非特許文献６】Sicherer et al., Paediatrics 102: e6, 1998
【非特許文献７】Primeau et al., Clin Exp Allergy30: 1135-43, 2000
【非特許文献８】Kemp et al. Med. J. Aust.188(9):503-4, 2008
【非特許文献９】Nelson et al., J Allergy Clin Immunol 99: 744-51, 1997
【非特許文献１０】Oppenheimer et al., J Allergy Clin Immunol 90: 256-62, 1992
【非特許文献１１】Hofmannet al. J. Allergy Clin. Immunol. 124, 286, 2009
【非特許文献１２】Jones et al. J. Allergy Clin. Immunol. 24, 292, 2009
【非特許文献１３】Clarket al. Allergy 64, 1218, 2009
【非特許文献１４】Varshney et al. J Allergy Clin Immunol.127(3):654-60, 2011
【非特許文献１５】Varshneyet al. J Allergy Clin Immunol. 124(6):1351-2, 2009
【非特許文献１６】Anagnostouet al. Clin Exp Allergy. 41(9):1273-81, 2011
【非特許文献１７】Allen & O'Hehir.Clin Exp Allergy. 41(9):1172-4, 2011
【非特許文献１８】Yu et al. Int Arch Allergy Immunol.159(2):179-182, 2012
【非特許文献１９】Thyagarajan et al. J Allergy Clin Immunol. 126(1):31-2, 2010
【非特許文献２０】Blumchen et al. J Allergy Clin Immunol. 126(1):83-91, 2010
【非特許文献２１】Litwin et al., Int Arch Allergy Appl Immunol 87: 361-61, 998
【非特許文献２２】Akdis & Akdis, J Allergy Clin Immunol. 123:735-46, 2009
【非特許文献２３】Akdis & Akdis, Nature Reviews: Drug Discovery. 8:645-60. 2009
【非特許文献２４】Akdis & Akdis, J Allergy Clin Immunol. 127:18-27, 2011
【非特許文献２５】Rolland et al. Pharmacology & Therapeutics 121:273-284, 2009
【非特許文献２６】Muller et al. J Allergy Clin Immunol. 101: 747-54, 1998
【非特許文献２７】Tarzi et al. Clin Exp Allergy. 36: 465-74, 2006
【非特許文献２８】Fellrath et al. J Allergy Clin Immunol. 111: 854-61, 2003
【非特許文献２９】Norman et al., Am J Respir Crit Care Med 154: 1623-8, 1996
【非特許文献３０】Marcotte et al., J Allergy Clin Immunol 101: 506-13, 1998
【非特許文献３１】Pene et al., J Allergy Clin Immunol 102: 571-8, 1998
【非特許文献３２】Oldfield et al. Lancet 360:47-53, 2002
【非特許文献３３】Alexander et al. Clin Exp Allergy 35: 52-8, 2004
【非特許文献３４】Alexander et al. Allergy 60:1269-74, 2005
【非特許文献３５】Worm et al. J Allergy Clin Immunol. 127: 89-97, 2011
【非特許文献３６】Moldaver & Larche. Allergy. 66: 784-91, 2011
【非特許文献３７】Santambrogio et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 1999, 96:15056-61
【非特許文献３８】Yang et al. Clin Exp Allergy40(4):668-78, 2010
【非特許文献３９】Yoshitomi et al. J Pept Sci. 13(8):499-503, 2007
【非特許文献４０】Marazuela et al. Mol Immunol. 45(2):438-45, 2008
【非特許文献４１】Rupa et al. Allergy. 67(1):74-82, 2012
【非特許文献４２】Hoyne et al. J Exp Med. 178(5):1783-8, 1993
【非特許文献４３】Hall et al. Vaccine. 21(5-6):549-61, 2003
【発明の概要】
【００１３】
本明細書およびそれに続く請求項の全体を通して、他で必要とされない限り、「含有する」「有する」という用語、および、「含有する」「有する」の変化形は、既定の完全体もしくはステップ、または、完全体（複数）もしくはステップ（複数）の群の含有が示唆されるが、任意の他の完全体もしくはステップ、または、完全体もしくはステップの群を除外するものではないことを理解されたい。
【００１４】
本明細書において、「〜由来である」という用語は、特定の完全体または完全体の群が、特定された種由来の起源であるが、必ずしも、当該特定の源から直接得られたものではないことを示すと理解されたい。さらに、本明細書において、単数形は、他で明確に指示されない限り、複数の対象を含む。
【００１５】
他で定義されない限り、本明細書において用いられるすべての技術的用語および科学的用語は、本発明が属する分野における当業者により普遍的に理解されるものと同じ意味を有する。
【００１６】
本明細書には、参考文献一覧の後で提示される、プログラムＰａｔｅｎｔＩｎ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．５を用いて準備されたアミノ酸配列情報を含有する。各アミノ酸配列は、数表示＜２１０＞、次いで、配列識別子（たとえば、＜２１０＞１、＜２１０＞２、等）による配列表において特定されている。配列の長さ、タイプ（タンパク質等）および、各配列の源となった生物は、それぞれ、数表示欄＜２１１＞、＜２１２＞および＜２１３＞に提示される情報により示されている。本明細書において言及されているアミノ酸配列は、「配列番号」の表示、次いで、配列識別子により特定されている（たとえば、配列番号１、配列番号２、等）。本明細書において言及されている配列識別子は、配列表の数表示欄＜４００＞（次いで、配列識別子がある（たとえば、＜４００＞１、＜４００＞２、等）に提示される情報と関連する。すなわち、明細書中に詳述されるように、配列番号１は
、配列表の＜４００＞１と示される配列と関連付けられている。
【００１７】
本発明の１つの態様においては、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログを１種または複数種含有する組成物を目的とする：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ  （配列番号３）
（ｉｖ）  ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｖ）    ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖｉ）  ＥＧＡＬＭＬ  （配列番号６）
（ｖｉｉ）ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｉｘ）  ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｘ）    ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【００１８】
本発明の関連する態様においては、１種または複数種のペプチドを含有する組成物を目的としており、そのペプチドの各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種を含有する：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ  （配列番号３）
（ｉｖ）  ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｖ）    ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖｉ）  ＥＧＡＬＭＬ  （配列番号６）
（ｖｉｉ）ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｉｘ）  ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｘ）    ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【００１９】
本発明の前述の態様の１つの実施態様において、当該ペプチドまたはエピトープは、Ａｒａ  ｈ１に対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫応答により特徴付けられる状態を有する対象から単離されたＴ細胞に対し提示された際に、Ｔ細胞の機能を改変することができるが、それらペプチドは、Ａｒａ  ｈ１特異的ＩｇＥに結合することはできない。
【００２０】
さらなる関連態様において、１種または複数種のペプチドを含有する組成物が開示され、そのペプチドの各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種を含有し、それらペプチドは、Ａｒａ  ｈ１過感受性により特徴付けられる状態を有する対象に投与された場合に、Ａｒａ  ｈ１過感受性を低減することができ、または、Ａｒａ  ｈ１を含有する組成物に対する過感受性を低減させることができる：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ  （配列番号３）
（ｉｖ）  ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｖ）    ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖｉ）  ＥＧＡＬＭＬ  （配列番号６）
（ｖｉｉ）ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｉｘ）  ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｘ）    ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【００２１】
他の態様において、１種または複数種のペプチドを含有する組成物が開示され、そのペプチドの各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、エピトープＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ（配列番号３）と、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種とを共に含有する：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｉｖ）  ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖ）    ＥＧＡＬＭＬ  （配列番号６）
（ｖｉ）  ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｖｉｉｉ）ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｉｘ）  ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【００２２】
さらに他の態様において、１種または複数種のペプチドを含有する組成物が開示され、そのペプチドの各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、エピトープＥＧＡＬＭＬ（配列番号６）と、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種とを共に含有する：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ  （配列番号３）
（ｉｖ）  ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｖ）    ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖｉ）  ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｖｉｉｉ）ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｉｘ）  ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【００２３】
当該組成物が、本発明のコアエピトープ領域が、より大きなペプチドの一部として含まれるよう設計されている限り、任意の所与のペプチドが、１種または複数種のコアエピトープ領域を含有するよう設計されうることを理解されたい。この目的のために、本発明の１つの実施態様において、本組成物の１種または複数種のペプチドは、以下のリストから選択される：
（ｉ） ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶ（配列番号１２）
（ｉｉ）ＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１３）
（ｉｉｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１４）
（ｉｖ）ＷＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１５）
（ｖ） ＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１６）
（ｖｉ）ＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１７）
（ｖｉｉ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１８）
（ｖｉｉｉ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１９）
（ｉｘ）ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２０）
（ｘ） ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２１）
（ｘｉ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２２）
（ｘｉｉ）ＶＥＩＫＥＧＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡ（配列番号２３）
（ｘｉｉｉ）ＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶＶＶ（配列番号２４）
（ｘｉｖ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧ（配列番号２５）
（ｘｖ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２６）
（ｘｖｉ）ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶＲＫ（配列番号２７）
（ｘｖｉｉ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶ（配列番号２８）
（ｘｖｉｉｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２９）
（ｘｉｘ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３０）
（ｘｘ）ＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３１）
（ｘｘｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３２）
（ｘｘｉｉ）ＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３３）
【００２４】
本実施態様のさらなる態様において、当該組成物は、配列番号１５、１６または１７により定義されるペプチドと、配列番号１２〜１４または１８〜３３により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する。
【００２５】
本実施態様のよりさらなる態様において、当該組成物は、配列番号２３により定義されるペプチドと、配列番号１２〜２２または２４〜３３により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】Ａｒａ  ｈ１  ２０ｍｅｒペプチドに対する、ドナーレスポンダー頻度プロファイル。Ａｒａ  ｈ１  ２０ｍｅｒペプチドのＴＣＬ認識に関する、ドナーレスポンダー頻度（ｎ＝１８  ピーナッツアレルギーの対象）
【図２】Ａｒａ  ｈ１  ２０ｍｅｒペプチド５０および５１内の、コアＴ細胞エピトープのマッピング。断片化ペプチドセットに対する、２０ｍｅｒ特異的ＴＣＬ増殖。ペプチド５０（Ａ）および５１（Ｂ）に対する代表的なＴＣＬを示した（複製ウェルの平均ｃｐｍ  ＋ＳＤ）。上のパネルは、２０ｍｅｒの間の重複エピトープを示す（ｎ＝２；３  ＴＣＬ）。下のパネルは、各２０ｍｅｒに特有なエピトープを示す；Ａ）ｎ＝３；６  ＴＣＬ。Ｂ）ｎ＝４；７  ＴＣＬ。代表的なＴＣＬにより認識されたエピトープ配列を太字で示し、全ての特異的なＴＣＬにより認識された「強化エピトープ」に下線を付す。
【図３】候補Ａｒａ  ｈ１ペプチドに応答した好塩基球活性化。箱髭図は、Ａｒａ  ｈ１または、７人のピーナッツアレルギー対象の候補ペプチドに応答した、活性化（ＣＤ６３ｈ１）好塩基球（ＩｇＥｈ１）のパーセンテージを示す。陰性対照は抗原無し（刺激無し）であり、陽性対照は、抗ＩｇＥ、ｆＭＬＰおよびＣＰＥであった。髭は、最小値〜最大値を示す。
【図４】ＰＢＭＣ中のＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を検出するための、代表的なＣＦＳＥベースアッセイ。選択されたＡｒａ  ｈ１  ２０ｍｅｒペプチドを用いた７日間の刺激後の、２６人のピーナッツアレルギー対象由来のＣＦＳＥ標識ＰＢＭＣの増殖。培地のみ（抗原無し）または、粗ピーナッツ抽出物（ＣＰＥ）を、それぞれ、陰性対象および陽性対象として用いた。少なくとも１０，０００の生きたＣＤ４＋Ｔ細胞が、試料毎に分析された。ゲートは、総ＣＤ４＋Ｔ細胞のうちのＣＤ４＋ＣＦＳＥｌｏ（増殖）Ｔ細胞のパーセンテージを、カッコ内の刺激指数（ＳＩ）とともに示す。
【図５】Ｔ細胞エピトープ認識の代表的なＨＬＡクラスＩＩ拘束特異性。ＨＬＡ−ＤＲ（円）、ＨＬＡ−ＤＱ（四角）、またはＨＬＡ−ＤＰ（三角）のｍＡｂｓ（ＡｉおよびＢｉ）の存在下、または、アイソタイプ対照抗体（１０μｇ／ｍｌ）（ＡｉｉおよびＢｉｉ）の存在下での、選択エピトープに対する特異的ＴＣＬの増殖（複製ウェルの平均ｃｐｍ  ＋ＳＤ）。グラフは、ＨＬＡ−ＤＲ拘束エピトープ（４４２〜４５８）に対するサンプルデータ（Ａ）および、ＨＬＡ−ＤＱ拘束エピトープ（５０７〜５２４）に対するサンプルデータ（Ｂ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、一つには、ＨＬＡ縮重Ａｒａ  ｈ１優性Ｔ細胞コアエピトープ領域の特定に基づいて予測される。これら免疫優性コアエピトープ領域の特定により、たとえば、限定されないが、ピーナッツアレルギー等の疾患に対し、これまで利用されてきたものよりも、ずっと効果的な治療用組成物および予防用組成物ならびに治療法の開発が可能となり、診断法も改善される。
【００２８】
従って、本発明の１つの態様は、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種を含有する組成物を目的としている：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ  （配列番号３）
（ｉｖ）  ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｖ）    ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖｉ）  ＥＧＡＬＭＬ  （配列番号６）
（ｖｉｉ）ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｉｘ）  ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｘ）    ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【００２９】
本発明の関連する態様においては、１種または複数種のペプチドを含有する組成物を目的としており、そのペプチドの各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種を含有する：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ  （配列番号３）
（ｉｖ）  ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｖ）    ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖｉ）  ＥＧＡＬＭＬ  （配列番号６）
（ｖｉｉ）ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｉｘ）  ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｘ）    ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【００３０】
本発明の前述の態様の１つの実施態様において、当該ペプチドまたはコアエピトープ領域は、Ａｒａ  ｈ１、または、Ａｒａ  ｈ１を含有する組成物（たとえば、食物）中に存在するアレルゲンに対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫応答により特徴付けられる状態を有する対象から単離されたＴ細胞に対し提示された際に、Ｔ細胞の機能を改変することができるが、それらペプチドは、Ａｒａ  ｈ１特異的ＩｇＥに結合することはできない。
【００３１】
本発明を決して限定するわけではないが、ピーナッツは多くのタンパク質を含有しており、用いられる技術に依って、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上に可視化出来る、明確に区別される多くのバンドがある。高速液体クロマトグラフィーの後では、５３までのバンドが確認される（de Jong et al., Clin Exp Allergy 28: 743-51, 1998）。これらタンパク質のうち
たった２つのみが、標準的な基準を用いて主要なアレルゲンとして分類され、それにより
ピーナッツアレルギーを有する群の５０％を超える範囲でＩｇＥ反応性が発生する；これらタンパク質は、Ａｒａ  ｈ１と、Ａｒａ  ｈ２と名付けられている（Burks et al., Allergy 53: 725-30, 1998）。多くの研究によって、Ａｒａ  ｈ２が、これら２つのアレルゲンのうちでは、より強力なものであると示唆されている（Blanc et al. Clin Exp Allergy. 2009; 39(8):1277-85; Koppelman et al. Clin Exp Allergy. 2004; 34(4):583-90;
Palmer et al. Clin Immunol. 2005; 115(3):302-12）が、Ａｒａ  ｈ１もまた、ピーナッツアレルギーの発症機序において重要な役割を果たしており、多くの研究によって、Ａｒａ  ｈ１およびＡｒａ  ｈ２の両方に対するＩｇＥ反応性と、症状の重篤度との間には、強力な相関関係があることが報告されている（Glaumann et al. Allergy. 2012; 67(2):242-7; Chiang et al. Pediatr Allergy Immunol. 2009; 21(2 Pt 2):e429-38; Asarnoj
et al. Allergy. 2010, 65(9):1189-95; Moverare et al. Int Arch Allergy Immunol 2011; 156(3):282-90; Lin et al. J Microbiol Immunol Infect. 2012; Peeters et al. Clin Exp Allergy. 2007; 37(1):108-15）。Ａｒａ  ｈ１は、ピーナッツ中に最も豊富に存在する主要アレルゲンであり、総ピーナッツタンパク質の１２〜１６％を占める（Koppelman et al. Allergy. 2001; 56(2):132-7）。
【００３２】
さらに、本発明を決して限定するわけではないが、Ａｒａ  ｈ１アレルゲンは、７Ｓ種子貯蔵糖タンパク質またはビシリン（ｖｉｃｉｌｉｎ）である。ピーナッツ中のＡｒａ  ｈ１の濃度は、仁のサイズとともに増加し（４〜１６ｍｇ  抽出Ａｒａ  ｈ１／ピーナッツｇ）、ゆえに、当該タンパク質の発現は、ピーナッツの成熟と関連している（Pomes et
al. 2006, Clin. Exp. Allergy 36(6):824-30）。Ａｒａ  ｈ１は、単量体の遠位端で、疎水性領域を介して共に保持されたホモ三量体であり、ほとんどのＩｇＥ結合エピトープがそこに位置している。６４．５ｋＤの単量体のそれぞれは、２つのコアβバレル（それぞれ、αヘリックスのループドメインと関連している）からなるキュピン（ｃｕｐｉｎ）モチーフを有している。
【００３３】
「Ａｒａ  ｈ１」という言及は、この分子のすべての形態（Ａｒａ  ｈ１の選択的スプライシングから生じ得る任意のアイソフォーム、または、Ａｒａ  ｈ１の機能性変異体もしくは多型体に関する言及を含む）に対する言及として理解されたい。さらに、Ａｒａ  ｈ１遺伝子によりコードされる任意のタンパク質、任意のサブユニットポリペプチド（たとえば、単量体、多量体または融合タンパク質として存在するかに関わらず、作製されうる前駆形態）にまで拡張されると理解されたい。また、たとえば、天然でＡｒａ  ｈ１を含有する製品が、たとえば食物添加物等の製品を製造する目的のために、合成的に製造される場合に発生しうる、Ａｒａ  ｈ１のアナログまたは均等物に対する言及も含む。よって、本発明は、Ａｒａ  ｈ１またはＡｒａ  ｈ１様分子に対する過感受性により特徴付けられる任意の状態（たとえば、ピーナッツアレルギーもしくは樹木性堅果アレルギー、または、たとえば食物等の組成物（Ａｒａ  ｈ１も含有する組成物である）中に存在する抗原に対するアレルギー）の診断および治療における使用のためのエピトープおよび方法を提示する。好ましくは、当該Ａｒａ  ｈ１は、配列番号１１に記述される配列を含有する。
【００３４】
「Ｔ細胞」という言及は、Ｔ細胞受容体を含有する任意の細胞に対する言及として理解されたい。この点に関して、Ｔ細胞受容体は、α、β、γまたはδ鎖のうちの任意の１つ以上を含有しても良い。本発明が、任意の特定のＴ細胞の機能性サブクラスに限定される意図はないが、好ましい実施態様においては、本Ｔ細胞は、Ｔヘルパー細胞であり、さらに好ましくは、Ｔｈ２型の細胞および／またはＴｒｅｇ細胞である。この点に関して、「Ｔ細胞機能を改変する」という言及は、Ｔ細胞が実施することができる任意の１つ以上の機能を改変することに関する言及と理解されたい。たとえば、本機能は、増殖、分化、またはたとえばサイトカインの産生等の、他の形態の細胞の機能的活性であっても良い。１つの実施態様において、本機能的活性は、増殖である。
【００３５】
Ａｒａ  ｈ１に対する、もしくはＡｒａ  ｈ１を含有する組成物に対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫応答により特徴づけられる状態を有する対象から単離されたＴ細胞の「機能を改変する」という用語は、必ずしも、所与の生物学的試料中のすべてのＴ細胞の機能を改変するということを指しておらず、実際のところは、試料中のＴ細胞のほんの一部の機能の改変を示しす可能性が高いということを理解されたい。たとえば、所与のＴ細胞試料中のＴヘルパー細胞のほんの一部が、本ペプチドとの接触に対して機能的に応答しても良い。そのような部分的な応答は、本発明の範囲内にあることを理解されたい。また、対象から誘導されたＴ細胞が、採取されたばかりのＴ細胞であっても良く、または、検証の前にｉｎ  ｖｉｖｏ操作またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ操作の何らかの形態を経たものであっても良いことも理解されたい。たとえば、Ｔ細胞株は、細胞試料から作製されても良く、これらＴ細胞群は、本発明に従い検証される、対象由来Ｔ細胞群を形成する。機能的活性がＴ細胞増殖である限り、好ましくは、Ｔ細胞増殖アッセイが、本明細書に開示されるように実施される。さらに好ましくは、Ｔ細胞機能の改変は、増殖の誘導である。この点に関して、「Ａｒａ  ｈ１反応性」Ｔ細胞という言及は、Ａｒａ  ｈ１  Ｔ細胞エピトープのＨＬＡ提示に対して機能的に応答するＴ細胞に関する言及としてされたい。同様に、「Ａｒａ  ｈ１特異的」ＩｇＥという言及は、Ａｒａ  ｈ１  Ｂ細胞エピトープに向けられるＩｇＥに関する言及として理解されたい。
【００３６】
「異常な、望ましくない、または不適切な」免疫応答という言及は、１種または複数種の免疫細胞の活性化および／または機能が関与する生理学的活性の任意の形態に対する言及として理解されたく、当該活性は、不適切な型のものであるか、または、不適切な程度にまで進行する、という点で不適切なものである。公知の免疫学的原則に従い、発生すべきではないときに発生すること、または、発生すべきときに発生しないことも、異常でありうる。他の例においては、生理学的に正常な応答であるが、必要ではない、および／または、望ましくない場合にも、不適切でありうる（たとえば、無害なアレルゲンに対するＩ型過感受性応答が発生すること）。本発明の主旨において、この免疫応答は、Ａｒａ  ｈ１に向かうものであってもよく、または、Ａｒａ  ｈ１と共に組成物中に存在する異なるアレルゲンに向かうものであっても良い。本発明をいずれの理論または作用機序にも限定するわけではないが、過感受性応答がＡｒａ  ｈ１以外のアレルゲンに向かう場合であっても、そのアレルゲンがＡｒａ  ｈ１を含有する組成物中に存在する場合、Ａｒａ  ｈ１を指向する本発明方法を介した治療は、Ｔｈ２およびＴｒｅｇ機能の有益な改変を誘導し、それにより、関連の無いアレルゲンに対する過感受性さえも減少することが確認された。好ましくは、当該免疫応答は、ピーナツ過感受性である。
【００３７】
「ピーナッツ過感受性」とは、ＩｇＥ介在性ピーナッツ過感受性の臨床症状の誘導を意味する。しかしながら、臨床症状が明白ではありうるが、全ての個体が検出可能なレベルのピーナッツ特異的血清ＩｇＥ（Ｋａｌｌｅｓｔａｄ  Ａｌｌｅｒｃｏａｔ  ＥＡＳＴ  Ｓｙｓｔｅｍ  （Ｓａｎｏｆｉ−Ｐａｓｔｅｕｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，  ＵＳＡ）を用いて測定される）を示すわけでははないことを理解されたく、そのような個体も、「ピーナッツ過感受性」を示す個体の定義範囲内に入ることを理解されたい。あるいは、検査は、ＰｈａｒｍａｃｉａまたはＵｎｉＣａｐ  ｓｙｓｔｅｍのいずれかを用いて進めても良い。「Ａｒａ  ｈ１過感受性」という言及は、Ａｒａ  ｈ１タンパク質に対する反応性との関連で、相当する意味を有すると理解されたい。
【００３８】
さらなる関連態様において、１種または複数種のペプチドを含有する組成物が開示され、それら各ペプチドは、６０個までの長さの連続するアミノ酸であり、かつ、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種を含有し、それらペプチドは、当該過感受性により特徴づけられる状態を有する対象に投与された際に、Ａｒａ  ｈ１過感受性を減
少させることができる、または、Ａｒａ  ｈ１を含有する組成物に対する過感受性を減少させることができる：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ  （配列番号３）
（ｉｖ）  ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｖ）    ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖｉ）  ＥＧＡＬＭＬ  （配列番号６）
（ｖｉｉ）ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｉｘ）  ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｘ）    ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【００３９】
Ａｒａ  ｈ１過感受性（および、より一般的なアレルゲン過感受性）の減少は、以下により詳細に検討される。簡便には、個体を、Ａｒａ  ｈ１特異的に、またはピーナッツ、または、より一般的な他のタンパク質に対し、部分的に、もしくは、完全に、のいずれかで脱感作、または寛容化させる形態をとっても良い。
【００４０】
「ペプチド」という言及は、ペプチド、ポリペプチド、もしくはタンパク質、またはその一部に対する言及を含む。ペプチドはグリコシル化されていてもよく、もしくは非グリコシル化であってもよく、および／または、たとえばアミノ酸、脂質、炭水化物または他のペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質等の、タンパク質に融合された、連結された、結合された、または関連づけられた、広範な他の分子を含有しても良い。以下、「ペプチド」という言及には、アミノ酸配列を含有するペプチド、ならびに、たとえばアミノ酸、脂質、炭水化物または他のペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質と関連づけられたペプチドが含まれる。
【００４１】
「誘導体」とは、天然、合成、または組換えされた源（融合タンパク質を含む）由来の断片、部分、部および変異体を含む。部分または断片には、たとえば、対象ペプチドの活性領域が含まれる。誘導体は、アミノ酸の挿入、欠失、または置換から誘導されても良い。アミノ酸挿入誘導体には、アミノ末端融合物および／またはカルボキシ末端融合物が含まれ、ならびに、１つの、または複数のアミノ酸の配列内挿入が含まれる。挿入アミノ酸配列変異体は、１種または複数種のアミノ酸残基が、タンパク質中の既定の部位に導入されているものであり、ランダム挿入もまた、得られた産物の適切なスクリーニングを行うことで可能である。欠失変異体は、配列から１種または複数種のアミノ酸の除去により特徴付けられる。
【００４２】
置換型のアミノ酸変異体は、配列中の少なくとも１つの残基が除去され、異なる残基がその場所に挿入されているものである。置換型アミノ酸変異体の例は、保存型アミノ酸置換である。保存型アミノ酸置換は通常、以下の群内の置換を含む：グリシンおよびアラニン；バリン、イソロイシンおよびロイシン；アスパラギン酸およびグルタミン酸；アスパラギンおよびグルタミン；セリンおよびスレオニン；リシンおよびアルギニン；ならびに、フェニルアラニンおよびチロシン。アミノ酸配列への追加には、他のペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質との融合を含む。
【００４３】
本ペプチドの化学的および機能的な均等物は、これら分子の機能的活性のうちの任意の１つ以上を示す分子と理解されたく、および、たとえば、天然物スクリーニング等のスクリーニング過程を介して特定された、または化学的に合成された等の、任意の源から誘導されても良い。
【００４４】
ホモログには、たとえば、他の樹木性堅果由来のペプチド等の、ピーナッツ以外の種から誘導されたペプチドを含む。
【００４５】
本明細書において企図されるアナログには、限定されないが、側鎖への修飾、ペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質合成中の非天然型アミノ酸および／またはその誘導体の組み込み、ならびに、架橋の使用、ならびに、タンパク質生分子またはそのアナログに対し構造的制約を与える他の方法の使用が含まれる。変異体には、改変された機能的活性を示す分子（たとえば、１種または複数種のＴ細胞エピトープを発現しているが、Ｂ細胞反応性を欠落しているＡｒａ  ｈ１ペプチド等）が含まれる。
【００４６】
本発明により企図される側鎖修飾の例には、たとえば、アルデヒドとの反応、次いでＮａＢＨ４を用いた還元による還元的アルカリ化；メチルアセチミデートを用いたアミジン化；無水酢酸を用いたアシル化；シアン酸塩を用いたアミノ基のカルバモイル化；２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を用いたアミノ基のトリニトロベンジル化；無水コハク酸およびテトラヒドロフタル酸無水物を用いたアミノ基のアシル化；ならびに、ピリドキサル−５−リン酸塩を用いたリシンのピリドキシル化次いで、ＮａＢＨ４を用いた還元、等のアミノ基の修飾が挙げられる。
【００４７】
アルギニン残基のグアニジン基は、たとえば２，３−ブタンジオン、フェニルグリオキサルおよびグリオキサル等の試薬との複素環凝縮産物の形成により修飾されても良い。
【００４８】
カルボキシル基は、Ｏ−アシルイソ尿素形成、次いで、たとえば、対応するアミド等への誘導体化を介したカルボジイミド活性化により修飾されても良い。
【００４９】
スルフヒドリル基は、たとえば、ヨード酢酸またはヨードアセトアミドとのカルボキシメチル化；システイン酸に対する過ギ酸酸化；他のチオール化合物と混合されたジスルフィドの形成；マレイミド、無水マレイン酸、または他の置換マレイミドとの反応；４−クロロ水銀安息香酸、４−クロロ水銀フェニルスルホン酸、塩化フェニル水銀、２−クロロ水銀−４−ニトロフェノール、および他の水銀物質を用いた水銀誘導体の形成；アルカリｐＨでのシアン酸塩を用いたカルバモイル化等の方法により修飾されても良い。
【００５０】
トリプトファン残基は、たとえば、Ｎ−ブロモスクシンイミドを用いた酸化、または２−ヒドロキシ−５−ニトロベンジル臭化物またはスルフェニルハロゲン化物を用いたインドール環のアルキル化等により、修飾されても良い。他方で、チロシン残基は、テトラニトロメタンを用いた窒化により、３−ニトロチロシン誘導体を形成するよう改変されてもよい。
【００５１】
ヒスチジン残基のイミダゾール環の修飾は、ヨード酢酸誘導体を用いたアルキル化、またはジエチルピロカーボネートを用いたＮ−カルボエトキシ化により行われても良い。
【００５２】
タンパク質合成の間の非天然アミノ酸および誘導体の組み込みの例としては、限定されないが、ノルロイシン、４−アミノ酪酸、４−アミノ−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンタン酸、６−アミノヘキサン酸、ｔ−ブチルグリシン、ノルバリン、フェニルグリシン、オルニチン、サルコシン、４−アミノ−３−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン酸、２−チエニルアラニン、および／または、アミノ酸のＤ−異性体の使用が挙げられる。本明細書で企図される非天然アミノ酸のリストを表１に示す。
【００５３】
【表１】
2018184447.tif 000002
【００５４】
2018184447.tif 000003
【００５５】
2018184447.tif 000004
【００５６】
2018184447.tif 000005
【００５７】
2018184447.tif 000006
【００５８】
架橋剤を、たとえばホモ二価性架橋物質（たとえば、（ＣＨ２）ｎスペーサー群（ｎ＝１〜ｎ＝６）を有する二価性イミドエステル類、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル類）、およびヘテロ二価性試薬（通常、たとえばＮ−ヒドロキシスクシンイミド等のアミノ反応性部分および他の群特異的反応部分を含有する）を用いて、３Ｄ構造を安定化させるために用いても良い。
【００５９】
様々な目的（たとえば、溶解度を増加させる、治療効果もしくは予防効果を増強させる、安定性を増強させる、または、タンパク溶解性の分解に対する抵抗性を増加させる、等）に対して、本発明のペプチドの構造を改変することが可能である。免疫原性を調節するために、および／または、アレルギー誘発性を減少させるために、改変ペプチドは、たとえばアミノ酸置換、欠失、または付加等により、アミノ酸配列が改変されて製造されてもよい。同様の成分を本発明ペプチドに添加して、同じ結果を生じることができる。
【００６０】
たとえば、ペプチドがＴ細胞アネルギーを誘導するための活性を示すよう、改変されても良い。この例においては、Ｔ細胞受容体に対する必須結合残基を、公知の技術（たとえば、各残基の置換とＴ細胞反応性の有無の測定等）を用いて決定することができる。１つの例において、Ｔ細胞受容体との相互作用に必須であると示されている残基は、その存在によりＴ細胞反応性またはＴ細胞の機能が変化すると知られている他の、好ましくは類似のアミノ酸残基と、当該必須アミノ酸を置き換えること（保存的置換）により改変されても良い。さらに、Ｔ細胞受容体相互作用に必須ではないアミノ酸残基は、その組み込みによりＴ細胞の反応性またはＴ細胞の機能が変化するが、たとえば、関連ＭＨＣタンパク質への結合は消失しない他のアミノ酸と置き換えることにより改変されても良い。さらに他の例において、正常なＴ細胞結合を示すが、ＩｇＥ結合は消失した変異ペプチドを作製しても良い。
【００６１】
例示的な保存的置換を、以下の表２に詳述する：
【００６２】
【表２】
2018184447.tif 000007
【００６３】
そのような改変により、本明細書に定義される本ペプチドの「変異体」の範囲内にある分子が産生される。「変異体」は、変異を受けていない対応するペプチドにより示されるものとは明白に異なる１種または複数種の構造特性または機能活性を示すペプチドに対する言及と理解されたい。本発明のペプチドはまた、天然型対立遺伝子変異から生じた１種または複数種の多形を組み込むように改変されても良く、Ｄ−アミノ酸、非天然型アミノ酸またはアミノ酸アナログをペプチド内で置換し、本発明の範囲内にある改変ペプチドを製造しても良い。ペプチドはまた、公知の技術を用いて、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）との結合により改変されても良い。レポーター基もまた、精製を容易にするため、および、本発明のペプチドの溶解度を潜在的に上昇させるために付加されても良い。他の周知の改変のタイプ（特異的エンドプロテアーゼ開裂部位の挿入、官能基の付加、または、疎水性残基と、疎水性の低い残基の置換、ならびに、本発明のペプチドをコードするＤＮＡの部位特異的な突然変異誘導を含む）を、様々な目的に有用な改変を導入するために用
いても良い。上述の本発明のペプチドに対する様々な改変は、例示の目的で言及されており、有効でありうる様々な改変の示唆であることのみが意図されている。
【００６４】
上述のように、本発明により、Ｔ細胞との相互作用の能力のすべて、または一部を保持しているが、抗体反応性は部分的に、もしくは完全に阻害され、消失し、または下方制御されているペプチドが開示される。当業者周知の方法である、任意の適切な方法により抗体反応性の下方制御を生じさせることができる。たとえば、Ｂ細胞エピトープがその直鎖状アミノ酸配列により定義される場合において、天然型配列とは明らかに異なる変異型の直鎖状配列とするために、１種または複数種のアミノ酸残基を付加、欠失、または置換しても良い。さらに、あるいは、エピトープが立体構造エピトープにより定義されうる場合においては、ペプチドの２°構造、または、ホモ二量体またはヘテロ二量体が存在している場合には、ペプチドの３°構造を破壊することにより、その立体構造を破壊しようとしてもよい。これは、たとえば、２°および／または３°構造を安定化させることが知られているジスルフィド結合等の結合の形成を破壊することにより行うことができる。上述のＴ細胞エピトープに関しては、これらエピトープ領域は、Ｂ細胞エピトープ領域を含有しない。
【００６５】
配列番号１〜１０に定義されるエピトープは、Ａｒａ  ｈ１のＴ細胞コアエピトープ領域であり、特に、ＨＬＡ−ＤＱによる提示において、ＨＬＡ重複を示すことが確認されており、このことは、効果的な治療レジームの開発の点から非常に重要である。本発明の組成物は、列挙されたコアエピトープ領域のうちの１つを含有してもよいこと、または、これらコアエピトープ領域のうちの２以上を含有してもよいことを理解されたい。
【００６６】
１つの実施態様において、当該組成物は、任意の２つのエピトープ領域、３つのエピトープ領域、４つのエピトープ領域、５つのエピトープ領域、６つのエピトープ領域、７つのエピトープ領域、８つのエピトープ領域、９つのエピトープ領域、または１０のエピトープ領域を含有する。
【００６７】
他の実施態様において、１種または複数種のペプチドを含有する組成物が開示され、そのペプチドの各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、エピトープ  ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ（配列番号３）と、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種とを含有する：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｉｖ）  ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖ）    ＥＧＡＬＭＬ  （配列番号６）
（ｖｉ）  ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｖｉｉｉ）ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｉｘ）  ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【００６８】
さらに他の実施態様において、１種または複数種のペプチドを含有する組成物が開示され、そのペプチドの各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、エピトープ  ＥＧＡＬＭＬ（配列番号６）と、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１
Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種とを含有する：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ  （配列番号３）
（ｉｖ）  ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｖ）    ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖｉ）  ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｖｉｉｉ）ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｉｘ）  ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【００６９】
これらの態様に従い、他の実施態様においては、当該組成物は、少なくとも３種のペプチド、少なくとも４種のペプチド、少なくとも５種のペプチド、少なくとも６種のペプチド、少なくとも７種のペプチド、少なくとも８種のペプチド、少なくとも９種のペプチド、または少なくとも１０個のペプチドを含有する。
【００７０】
上に詳述のように、本発明の組成物は、ＨＬＡ縮重、Ａｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域を含有する。これらのコアエピトープ領域は、単体として投与されてもよく、または、たとえばより長いペプチドまたは非ペプチド構造等の、より大きな構造の一部を形成しても良い。当業者には理解されるであろうように、エピトープ領域は、時折、免疫応答を誘導するには、それ自体では小さすぎる場合がある。ハプテンは、このタイプのエピトープの例である。本発明のコアエピトープ領域は、それゆえ、必要なレベルの免疫原性を得るために、任意のタンパク質性の担体分子、または非タンパク質性の担体分子と共に製剤化されても良い。
【００７１】
１つの実施態様において、本コアエピトープ領域は、３０個までの長さの連続したアミノ酸の、より大きなペプチドの一部を形成する。本ペプチドは、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個の長さのアミノ酸であっても良い。好ましくは、本ペプチドは、１２〜２５個の長さのアミノ酸、１５〜２５個の長さのアミノ酸、１５〜２０個の長さのアミノ酸、または、１０〜２０個の長さのアミノ酸である。
【００７２】
組成物が、本発明のコアエピトープ領域を、より大きなペプチドの一部として含むよう設計されている限り、任意の所与のペプチドは、１種または複数種のコアエピトープ領域を含有するように設計されても良いことを理解されたい。この目的に対し、本発明の１つの実施態様において、本組成物の１種または複数種のペプチドは、以下のリストから選択される：
（ｉ） ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶ（配列番号１２）
（ｉｉ）ＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１３）
（ｉｉｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１４）
（ｉｖ）ＷＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１５）
（ｖ） ＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１６）
（ｖｉ）ＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１７）
（ｖｉｉ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１８）
（ｖｉｉｉ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１９）
（ｉｘ）ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２０）
（ｘ） ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２１）
（ｘｉ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２２）
（ｘｉｉ）ＶＥＩＫＥＧＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡ（配列番号２３）
（ｘｉｉｉ）ＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶＶＶ（配列番号２４）
（ｘｉｖ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧ（配列番号２５）
（ｘｖ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２６）
（ｘｖｉ）ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶＲＫ（配列番号２７）
（ｘｖｉｉ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶ（配列番号２８）
（ｘｖｉｉｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２９）
（ｘｉｘ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３０）
（ｘｘ）ＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３１）
（ｘｘｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３２）
（ｘｘｉｉ）ＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３３）
【００７３】
本実施態様のさらなる態様において、当該組成物は、配列番号１５、１６、または１７により定義されるペプチドと、配列番号１２〜１４または１８〜３３により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する。
【００７４】
本実施態様のよりさらなる態様において、当該組成物は、配列番号２３により定義されるペプチドと、配列番号１２〜２２または２４〜３３により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する。
【００７５】
さらに他の態様において、本組成物の１種または複数種のペプチドは、以下のリストから選択される：
（ｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶ（配列番号１２）
（ｉｉ）ＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１３）
（ｉｉｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１４）
（ｉｖ）ＷＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１５）
（ｖ）ＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１６）
（ｖｉ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１８）
（ｖｉｉ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１９）
（ｖｉｉｉ）ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号５）
（ｉｘ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２１）
（ｘ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２２）
（ｘｉ）ＶＥＩＫＥＧＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡ（配列番号２３）
（ｘｉｉ）ＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶＶＶ（配列番号２４）
（ｘｉｉｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧ（配列番号２５）
（ｘｉｖ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２６）
（ｘｖ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶ（配列番号２８）
（ｘｖｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２９）
（ｘｖｉｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３０）
（ｘｖｉｉｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３２）
（ｘｉｘ）ＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３１）
【００７６】
本実施態様のさらなる態様において、当該組成物は、配列番号１５または１６により定義されるペプチドと、配列番号１２〜１４、１８〜２６、または２８〜３２により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する。
【００７７】
本実施態様のよりさらなる態様において、当該組成物は、配列番号２３により定義されるペプチドと、配列番号１２〜１６、１８〜２２、２４〜２６または２８〜３２により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する。
【００７８】
さらに他の実施態様において、本組成物の当該１種または複数種のペプチドは、以下のリストから選択される：
（ｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１４）
（ｉｉ）ＷＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１５）
（ｉｉｉ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２１）
（ｉｖ）ＶＥＩＫＥＧＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡ（配列番号２３）
（ｖ）ＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶＶＶ（配列番号２４）
（ｖｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２９）
（ｖｉｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３０）
【００７９】
本実施態様のさらなる態様において、当該組成物は、配列番号１５により定義されるペプチドと、配列番号１４、２１、２３、２４、２９または３０により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する。
【００８０】
本実施態様のよりさらなる態様において、当該組成物は、配列番号２３により定義されるペプチドと、配列番号１４、１５、２１、２４、２９または３０により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する。
【００８１】
さらに他の実施態様において、本組成物は、配列番号１４、１５、２１、２３、２４、２９および３０により定義されるペプチドを含有する。
【００８２】
さらに他の実施態様において、本組成物は、配列番号１４、１６、２１、２３、２４、２９および３０により定義されるペプチドを含有する。
【００８３】
さらに他の実施態様において、本組成物は、配列番号１４、１５、２２、２３、２４、２９および３０により定義されるペプチドを含有する。
【００８４】
さらに他の実施態様において、本組成物は、配列番号１４、１５、２１、２３、２４、２９および３２により定義されるペプチドを含有する。
【００８５】
本発明との関連において、配列番号１４により定義されるぺプチドの使用に対して言及が為される場合、このペプチドは、以下により置換されてもよい：
（ｉ）配列番号１２および１３により定義されるペプチド；
（ｉｉ）配列番号１２により定義されるペプチド；または、
（ｉｉｉ）配列番号１３により定義されるペプチド。
【００８６】
配列番号１５により定義されるペプチドの使用に対して言及が為される場合において、このペプチドは、配列番号１６または１７により定義されるペプチドにより置換されても良い。
【００８７】
配列番号２１により定義されるペプチドの使用に対して言及が為される場合において、このペプチドは、以下により定義されるペプチドにより置換されてもよい：
（ｉ）配列番号２２により定義されるペプチド；
（ｉｉ）配列番号１８および２０により定義されるペプチド；
（ｉｉｉ）配列番号２０および１９により定義されるペプチド；
（ｉｖ）配列番号１８により定義されるペプチド；
（ｉｖ）配列番号１９により定義されるペプチド；または、
（ｉｖ）配列番号２０により定義されるペプチド。
【００８８】
配列番号２９により定義されるペプチドの使用に対して言及が為される場合において、このペプチドは、以下により定義されるペプチドにより置換されてもよい：
（ｉ）配列番号２５、２８および２７により定義されるペプチド；
（ｉｉ）配列番号２５および２６により定義されるペプチド；
（ｉｉｉ）配列番号２５および２８により定義されるペプチド；
（ｉｖ）配列番号２５および２７により定義されるペプチド；
（ｖ）配列番号２５により定義されるペプチド；
（ｖｉ）配列番号２８により定義されるペプチド；
（ｖｉｉ）配列番号２７により定義されるペプチド；または、
（ｖｉｉｉ）配列番号２６により定義されるペプチド。
【００８９】
配列番号３０により定義されるペプチドの使用に対して言及が為される場合において、このペプチドは、以下により定義されるペプチドにより置換されてもよい：
（ｉ）配列番号３２により定義されるペプチド；
（ｉｉ）配列番号３３により定義されるペプチド；または、
（ｉｉｉ）配列番号３１により定義されるペプチド。
【００９０】
これら実施態様のさらなる態様において、当該組成物は、列挙されたペプチドのうちの３または４または５または６つを含有する。
【００９１】
さらに他の実施態様において、当該組成物は、７つすべてのペプチドを含有する。
【００９２】
本発明のペプチドは、組換え法、または化学的合成法により調製されても良い。本発明の好ましい態様に従い、ピーナッツ過感受性を伴う個体由来のＴ細胞と優先的に、免疫反応する組換えペプチドまたはその変異体が開示され、それらは、本発明のペプチド配列をコードするベクターで形質転換された宿主細胞の発現により発現される。ペプチドは他のペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質と融合されていてもよい。あるいは、ペプチドは、たとえばＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相合成法等、化学的合成技術により調製されても良い。さらに、上述の配列の合成ペプチドは好ましい実施態様を提示しているが、本発明はまた、天然型ペプチドまたはその断片の、生物学的に純粋な調製物にまでわたる。「生物学的に純粋」とは、少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、または好ましくは少なくとも約８０％、および、よりさらに好ましくは少なくとも約９０％またはそれ以上（重量、活性または他の適切な手段により測定される）を含有する調製物を意味する。
【００９３】
ゆえに、本発明は、以下に定義される、他のアミノ酸（天然型であっても無くても良い）または他の化学種と同時に、Ａｒａ  ｈ１のＴ細胞コアエピトープ領域を少なくとも１つ含有するペプチドを包含するものと理解されたい。本発明の好ましい態様において、そのようなペプチドは、Ａｒａ  ｈ１のエピトープ（エピトープは、Ｔ細胞コアエピトープ領域である）を１種または複数種含有してもよい。Ａｒａ  ｈ１のエピトープを１種または複数種有するペプチドが、治療効果を増すためには望ましい。
【００９４】
他の態様において、本発明により、以下に定義されるエピトープおよびペプチド、またはその誘導体、ホモログ、もしくはアナログをコードするヌクレオチド配列、または、コードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含有する核酸分子が提示される。
【００９５】
「ペプチド」という言及には、１種または複数種のＴ細胞エピトープを有するペプチドに対する言及が含まれることを理解されたい。本ペプチドをコードする核酸分子は、好ましくは、たとえばｃＤＮＡまたはゲノム配列等のデオキシリボ核酸の配列である。ゲノム配列は、エクソンとイントロンを含有しても良い。ゲノム配列はまた、プロモーター領域または他の制御領域を含有しても良い。
【００９６】
核酸分子は、原核細胞（たとえば、大腸菌）または真核細胞（たとえば、酵母細胞、真菌細胞、昆虫細胞、哺乳類細胞または植物細胞）で発現することができる発現ベクターにライゲートされていてもよい。核酸分子は、たとえばシグナルペプチド等の他の実体をコードする核酸分子とライゲートされていてもよく、融合されていてもよく、または別様に
関連付けられていても良い。また、３´末端部分、または５´末端部分、または３´と５´の両末端部分のいずれかに当該核酸分子を融合された、連結された、または別様に関連付けられた、追加のヌクレオチド配列情報を含有しても良い。核酸分子はまた、たとえば発現ベクター等のベクターの一部であっても良い。後者の実施態様により、本発明により包含される形態の本ペプチドの組換え体の産生が容易となる。
【００９７】
そのような核酸は、適切なベクターへの挿入および適切な細胞株へのトランスフェクションによる、Ａｒａ  ｈ１のＴ細胞エピトープ、またはそれらを含有するタンパク質の組換え体の産生に有用でありうる。
【００９８】
組換え技術によるペプチドの産生において、本発明によるペプチドをコードする配列を有する核酸、または当該核酸配列の機能的均等物を用いて形質転換された宿主細胞が、特定の関連細胞に適切な培地中で培養される。次いで、ペプチドが細胞培養培地、宿主細胞、またはその両方から、当分野公知の技術（たとえば、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、限外ろ過、エレクトロフォレーシス、または当該ペプチドに特異的な抗体を用いた免疫学的精製）を用いて精製されても良い。
【００９９】
Ａｒａ  ｈ１をコードする核酸、または、Ａｒａ  ｈ１のＴ細胞コアエピトープ領域を含有するペプチドをコードする核酸は、細菌細胞（たとえば大腸菌）、昆虫細胞、酵母または哺乳類細胞（たとえば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ））中で発現されても良い。適切な発現ベクター、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御要素は、Ｓａｍｂｒｕｃｋ  ｅｔ  ａｌ  （１９８９）に参照される。他の適切な発現ベクター、プロモーター、エンハンサー、および他の発現要素は、当分野の当業者に周知である。酵母における適切な発現ベクターの例は、Ｙｅｐ  Ｓｅｃ  １(Balderi et al., 1987, Embo J., 6:229-234)；ｐＭＦａ（Kurjan and Herskowitz., 1982, Cell., 30:933-943); JRY88 (Schultz et al., 1987, Gene., 54:113-123)および、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒ
ｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）が挙げられる。これらのベクターは、バキュロウイルス発現システムおよび哺乳類発現システムとして自由に入手できる。たとえば、昆虫細胞における発現のためのバキュロウイルスシステムは市販されており（ＰａｒＭｉｎｇｅｎ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）、哺乳類細胞における発現のためのｐＭｓｇベクターも市販されている（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，  ＮＪ）。
【０１００】
大腸菌における発現のための、適切な発現ベクターとしては、とりわけ、ｐＴｒｃ(Amann et al., 1998, Gene., 69:301-315)、ｐＧｅｘ  （Ａｍｒａｄ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎ，  Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ，  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）；ｐＭａｌ（Ｎ．Ｅ．Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｅｙ，ＭＡ）；ｐＲｉｔ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）；ｐＥｔ−１１ｄ（Ｎｏｖａｇｅｎ，  Ｍａｄｄｉｓｏｎ，ＷＩ）(Jameel et al., 1990, J. Virol., 64:3963-3966)および、ｐＳｅｍ(Knapp et al., 1990, Bio Techniques., 8:280-281)が挙げられる。たとえば、ｐＴＲＣの使用およびｐＥｔ−１１ｄの使用により、融合されていないタンパク質の発現がもたらされる。ｐＭａｌ、ｐＲｉｔ５、ｐＳｅｍおよびｐＧｅｘの使用により、マルトースＥ結合タンパク質（ｐＭａｌ）、プロテインＡ（ｐＲｉｔ５）、切断型ガラクトシダーゼ（ＰＳＥＭ）またはグルタチオンＳ  トランスフェラーゼ（ｐＧｅｘ）に融合されたアレルゲンの発現がもたらされる。Ａｒａ  ｈ１のＴ細胞エピトープまたはそれを含有するペプチドが融合タンパク質として発現される場合には、担体タンパク質と、当該ペプチドの間の融合ジャンクションに、酵素開裂部位を導入すると特に都合がよい。次いで、本発明のペプチドは、酵素部位での酵素開裂を介して融合タンパク質から回収され、タンパク質およびペプチド精製のための標準的な方法を用いて生化学的に精製されても良い。また、異なるベクターは、異なるプロモーター領域を有しており、それにより、構成的発現もしくは誘導性発現または温度誘導が
可能となる。さらに、組換え発現されたタンパク質を分解する改変能力を有する異なる大腸菌宿主において組換えペプチドを発現させてもよい。あるいは、大腸菌により優先的に利用されるコドンを用いるために、核酸配列を改変することも有益であり、そのような核酸改変は、発現されたタンパク質のアミノ酸配列に影響を与えないものである。
【０１０１】
宿主細胞を、たとえばリン酸カルシウム沈殿共沈殿もしくは塩化カルシウム共沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラン介在トランスフェクションまたはエレクトロポレーション等の標準的な技術を用いて形質転換させ、本発明の核酸を発現させてもよい。宿主細胞を形質転換するための適切な方法は、Sambruck et al. (1989)および他の実験テキストに見いだされる。本発明の核酸配列は、標準の技法を用いて、化学的に合成することもできる。
【０１０２】
本発明のペプチドの組換え産生に加え、核酸は、実験目的または精製目的のプローブとして利用されても良い。
【０１０３】
本明細書に開示されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞エピトープの特定および合成により、ピーナッツ関連免疫疾患に関する使用のための診断プロトコールおよび予防／治療処置プロトコールの幅広い開発が促進される。また、その開発の中で用いられる試薬の開発も促進される。従って、本発明は、患者の治療および／または予防処置における、当該ペプチドまたはその機能性誘導体、ホモログもしくはアナログの使用にまで拡張されることを理解されたい。そのような治療方法としては、限定されないが、以下が挙げられる：
（ｉ）Ａｒａ  ｈ１またはＡｒａ  ｈ１様分子に対する脱感作または免疫学的寛容の導入の手段としての、患者に対する本ペプチドまたはその変異体の投与。これは、たとえば、Ｔｈ２アネルギーまたはアポトーシスに向かわせるＡｒａ  ｈ１を導入することにより達成される。そのような結果は、Ｔ細胞エピトープ反応性は維持しているが、自然に、または変異の結果として、ＩｇＥ結合が出来なくなったペプチドの使用を含む、多くの技術の内の任意の１つにより達成されうる。あるいは、寛容を導入するための特定のレジメンに従った、所与のペプチドの特定の濃度の投与に基づいた脱感作／治療プロトコールを使用しても良い。そのような技術により、Ａｒａ  ｈ１過感受性を排除し、またはＡｒａ  ｈ１過感受性またはＡｒａ  ｈ１を含有する組成物に存在するアレルゲンに対する感受性（たとえば、ピーナッツアレルギー）の重篤度を減少しうる。本明細書における、Ａｒａ  ｈ１感受性の治療に対する言及は、たとえ、当該感受性がＡｒａ  ｈ１以外のアレルゲンに対するものであったとしても、Ａｒａ  ｈ１を含有する組成物（たとえば、通常、ピーナッツ）に対する感受性により特徴付けられる状態の治療の範囲内を包含し、理解されたい。
【０１０４】
好ましくは、そのような治療レジメンは、関連する個体のＴ細胞応答またはＢおよびＴ細胞応答の両方を改変することができるものである。本明細書において、ピーナッツ過感受性に罹患している個体のアレルギー応答の改変は、標準的な臨床手順により測定される、非応答性の誘導、またはＡｒａ  ｈ１分子に対する症状の縮小のいずれかとして定義されても良い（Varney et al. 1991 British Medical Journal 302:265-269）。症状の減少としては、治療レジメンが完了した後の、個体における、Ａｒａ  ｈ１に対するアレルギー反応の任意の減少が挙げられる。この減少は、主観的であっても良く、または、たとえば、当業者公知の標準的な皮膚テストの使用等により、臨床的に測定されてもよい。
【０１０５】
少なくとも１つのＴ細胞エピトープを有する本発明のペプチドに個体を曝露させることにより、適切なＴ細胞亜群を寛容化またはアネルギー化させてもよく、それにより、それらはＡｒａ  ｈ１に応答しなくなり、そのような曝露での免疫応答刺激を引き起こさなくなる。好ましくは、本発明のペプチドは、免疫学的に主要なＴ細胞エピトープを維持しているが、ＩｇＥ結合は消失している。さらに、問題のアレルゲンがＡｒａ  ｈ１ではなく、Ａｒａ  ｈ１と同じ組成物中に存在する異なるアレルゲン（たとえば、別のピーナッツ
アレルゲン）に対するものであったとしても、Ａｒａ  ｈ１を用いた免疫化により、当該アレルゲンに対する過感受性の程度が減少するよう作用する、バイスタンダー抑制効果を導入しうる。
【０１０６】
本発明のペプチドの投与により、天然型Ａｒａ  ｈ１アレルゲンに曝露された場合と比較して、サイトカインの分泌プロファイルが改変されうる。また、この曝露によって、通常であればアレルギー反応に関与するＴ細胞亜群を、アレルゲンに通常曝露されている部位（複数含む）から、治療剤の投与が為されている部位（複数含む）へと移動させうる。このＴ細胞亜群の再分布により、アレルゲンに通常曝露されている部位で、通常、免疫応答を刺激している個体の免疫応答の活性を改善または減少させ、アレルギー症状が減少する。
【０１０７】
Ｂ細胞応答の改変は、たとえば、上述のようにＴ細胞により産生されるサイトカインプロファイルを改変することにより、達成されうる。具体的には、Ｔ細胞誘導性のＩＬ−４およびＩＬ−１３を減少させることにより、ＩｇＥの合成が減少する。
【０１０８】
（ｉｉ）本発明のペプチドは、生物学的試料または患者由来のＡｒａ  ｈ１指向性Ｔ細胞を除去する、吸着剤の特性において用いられても良い。
【０１０９】
従って、本発明の他の態様において、Ａｒａ  ｈ１またはＡｒａ  ｈ１を含有する組成物中のアレルゲンに対する、異常な、望ましくない、または不適切な免疫応答により特徴付けられる、対象における状態を治療および／または予防するための方法が開示され、当該方法には、しばらくの間、上述の組成物の有効量を、当該Ａｒａ  ｈ１または他のアレルゲンを指向する当該対象のＴ細胞の存在もしくは機能を除去または減少させるのに十分な条件下で、当該対象に投与することが含まれる。
【０１１０】
好ましくは、当該状態は、Ａｒａ  ｈ１もしくはＡｒａ  ｈ１様分子を含有するピーナッツ、または樹木性堅果（たとえば、ヘーゼルナッツ、アーモンドまたはブラジルナッツ等）に対する過感受性である。
【０１１１】
１つの実施態様において、当該方法により、Ａｒａ  ｈ１または当該組成物の他のアレルゲンに対する脱感作、または免疫学的寛容が誘導される。
【０１１２】
他の実施態様において、当該脱感作または寛容は、Ｔｈ２アネルギーまたはアポトーシスを誘導することにより達成される。
【０１１３】
さらに他の実施態様において、当該脱感作または寛容は、Ａｒａ  ｈ１特異的Ｔｒｅｇ細胞を誘導することにより達成される。
【０１１４】
「有効量」とは、少なくとも部分的に所望される免疫応答を獲得するために、または、治療される特定の状態の発生を遅延させるために、または進行を阻害するために、または発生もしくは進行を完全に停止させるために、必要な量を意味する。当該量は、治療される個人の健康状態および物理的状態、治療される個体の分類群、所望される防御の程度、組成物の剤型、医学的状況の評価、および他の関連因子により変化する。当該量は、日常的な検査を介して決定することができる、比較的広範な範囲となることが予測される。
【０１１５】
また、本発明の組成物は、Ａｒａ  ｈ１エピトープを排他的に含有しても良く、または、たとえば様々なＡｒａ  ｈ２エピトープ等の、治療効果を得るために有用な他のエピトープまたは分子を含有しても良いことを理解されたい。
【０１１６】
治療または予防の対象は、通常、たとえば限定されないが、ヒト、霊長類、家畜動物（たとえば、ヒツジ、ウシ、ウマ、ロバ、ブタ等）、ペット動物（たとえば、イヌ、ネコ等）、実験動物（たとえば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット、ハムスター等）、捕獲野生動物（たとえば、キツネ、シカ等）の、哺乳類である。好ましくは、当該哺乳類はヒトまたは霊長類である。最も好ましくは、当該哺乳類は、ヒトである。
【０１１７】
本明細書において、「治療」および「予防」という言及は、最も広い内容で参酌されるべきである。「治療」という用語は、必ずしも、対象が完全回復するまで治療されるということを意味していない。同様に「予防」は、必ずしも、対象が最後まで疾患状態にならないことを意味しない。従って、治療および予防には、特定の状態の症状を改善すること、または、特定の状態を発現することを阻害すること、もしくは特定の状態を発現するリスクを減少させることが含まれる。「予防」という用語は、特定の状態の重篤度または発生を減少させるものとみなされても良い。「治療」もまた、現存する状態の重篤度を減少させても良い。
【０１１８】
医薬組成物の形態での本発明のペプチド（本明細書において「薬剤」と呼称される）の投与は、任意の簡便な手段により行われても良い。特定の場合に依存する量で投与された際に、医薬組成物の薬剤は治療活性を示すことが企図される。たとえば、選択されたヒトまたは動物、および薬剤に依存して、変動しうる。広範位の投与量が適用でき得る。患者を考慮して、たとえば、約０．１ｍｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ体重／日の薬剤が、投与されても良い。投与レジメンは、最適な治療応答を得るために調節されても良い。たとえば、いくつかに分割された用量を毎日、毎週、毎月、または他の適切な間隔で投与されてもよく、または、用量は、急を要する状況により、指示されるように、比例的に減少させてもよい。
【０１１９】
薬剤は、たとえば経口、静脈内（水溶性の場合）、腹腔内、筋肉内、皮下、皮内、鼻内、舌下、または座薬の経路、または移植（たとえば、徐放性分子を使用する）等の、簡便な方法で投与されてもよい。薬剤は、薬学的に受容可能な非毒性の塩（たとえば、酸付加塩、または金属複合体（たとえば、亜鉛、鉄等との複合体）（それらは、本発明の目的の塩とみなされる）の形態で投与されてもよい。そのような酸付加塩の事例は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩等がある。活性成分が錠剤の形態で投与される場合、当該錠剤は、たとえばトラガカント、コーンスターチ、またはゼラチン等の結合物質；たとえばアルギン酸等の崩壊剤；たとえばステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤を含有してもよい。
【０１２０】
これらの方法に従い、本発明に定義される薬剤は、１種または複数種の他の化合物または分子と共に投与されてもよい。「共に投与される」とは、同じ製剤中で、もしくは２つの異なる製剤中で、同じ経路または異なる経路で、同時に投与されること、または、同じ経路もしくは異なる経路で連続的に投与されること、を意味する。「連続的な」投与とは、２つのタイプの分子の投与の間が、秒、分、時、または日単位の時間差であることを意味する。これらの分子は、任意の順で投与されてもよい。
【０１２１】
本発明の他の態様において、本発明は、哺乳類における疾患（Ａｒａ  ｈ１に対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫応答により特徴付けられる疾患）の治療のための医薬品の製造における、以下に定義される組成物の使用が企図される。
【０１２２】
好ましくは、当該疾患は、ピーナッツまたはＡｒａ  ｈ１またはＡｒａ  ｈ１様分子を含有する樹木性堅果（たとえば、ヘーゼルナッツ等）に対する過感受性である。
【０１２３】
さらに他の実施態様において、本発明は、１種または複数種の薬学的に受容可能な担体および／または希釈物質と共に、以下に定義される組成物を含有する医薬組成物が企図される。当該組成物は、活性成分と呼称される。
【０１２４】
注射用に適した剤型は、滅菌水性溶液（水溶性の場合）または分散液、および、滅菌注射溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられ、または、局所適用のための、クリームの形態もしくは他の適切な形態であっても良い。それは製造および保存条件下で安定でなくてはならず、および、たとえば細菌や真菌等の微生物が混入しないよう保存されなくてはならない。担体は、溶媒または分散培地であってもよく、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール等）、それらの適切な混合物および植物油が含まれる。たとえば、レシチン等のコーティングの使用、分散液の場合には必要とされる粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用により、適当な流動性が維持されていても良い。微生物作用の阻害は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等の様々な抗細菌剤および抗真菌剤により行われても良い。多くの場合、たとえば、糖類または塩化ナトリウム等の等張剤を含むことが好ましい。注射用組成物の吸収延長は、たとえば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン等の、吸収遅延剤の組成物中で用いることにより行われても良い。
【０１２５】
滅菌注射溶液は、必要に応じて、上述の他の様々な成分と共に、適切な溶媒中で、必要とされる量で活性成分を組み込み、類でろ過滅菌を行うことにより調製される。通常、分散液は、基本的な分散培地および上述の必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクルへ、様々な滅菌活性成分を組み込むことにより調製される。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の場合には、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥技術であり、それにより、活性成分と、前もって滅菌ろ過されたそれらの溶液由来の任意の望ましい追加成分が組み合わさったものが作製される。
【０１２６】
活性成分が、適切に保護されている場合、それらは、たとえば、不活性な希釈物質または吸収可能な食用担体とともに経口投与されてもよく、または、硬殻ゼラチンカプセルまたは軟殻カプセル中に包埋されてもよく、または、錠剤に圧縮されてもよく、または、食事に直接混ぜられても良い。経口治療投与の場合には、活性成分は、賦形剤と共に組み込まれ、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ、ウエハー等の形態で用いられても良い。そのような組成物および調製物は、少なくとも１％重量の活性成分を含有するべきである。組成物および調製物のパーセンテージは、もちろん変化してもよく、便宜上、約５〜約８０単位重量％の間であってもよい。そのような治療的に有用な組成物中の活性成分の量は、適切な用量が得られるような量である。本発明の好ましい組成物または調製物は、経口投与単位の形態が、約０．１μｇ〜２０００ｍｇの間の活性成分を含有するよう調製される。
【０１２７】
錠剤、トローチ、丸薬、カプセル等はまた、以下の成分も含有してもよい：たとえばゴム、アカシア、コーンスターチまたはゼラチン等の結合物質；たとえばリン酸二カルシウム等の賦形剤；たとえばコーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸等の崩壊剤；たとえばステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤；たとえばスクロース、ラクトースまたはサッカリン等の甘味剤を添加しても良く、または、たとえばペパーミント、ウィンターグリーン油、またはチェリー香味料等の香味剤がある。投与単位形態がカプセルである場合、上述のタイプの物質に加え、液体の担体を含有しても良い。様々な他の物質が、コーティングとして存在してもよく、または、投与単位の物理的形態を改変するために存在しても良い。たとえば、錠剤、丸薬またはカプセルは、セラック、糖類等でコートされていてもよい。シロップまたはエリキシル剤は、活性成分、甘味剤としてスクロース、保存剤としてメチルパラベンおよびプロピルパラベン、色素、ならびに、たとえばチェリーフレー
バーまたはオレンジフレーバー等の香味料を含有しても良い。もちろん、任意の投与単位形態の調製に用いられる任意の物質は、薬学的に純粋でなくてはならず、および、用いられる量で実質的に非毒性でなくてはならない。さらに、活性成分（複数含む）は、徐放調製物および徐放製剤に組み込まれても良い。
【０１２８】
医薬組成物はまた、たとえば、標的細胞をトランスフェクトすることができるベクター等の遺伝分子を含有してもよく、そこで、ベクターが、調節剤をコードする核酸分子を伝達する。ベクターは、たとえば、ウイルスベクターであっても良い。
【０１２９】
投与経路としては、限定されないが、呼吸器内（たとえば、エアロゾルを介して鼻内または口腔内）、気管内、鼻咽頭内、静脈内、腹腔内、皮下、頭蓋内、皮内、筋肉内、眼内、髄腔内、大脳内、鼻内、点滴、経口、直腸内、ＩＶドリップパッチを介して、インプラント、および舌下が挙げられる。好ましくは、投与の当該経路は、皮下、皮内、または鼻内である。
【０１３０】
本発明のさらに他の態様は、本発明の方法において用いられる場合の、上記に定義される組成物に関する。
【０１３１】
さらに他の態様において、本発明は、診断応用における、本発明のエピトープおよびペプチドの使用にまで拡張されることを理解されたい。当該診断応用としては、限定されないが、以下が挙げられる：
（ｉ）Ａｒａ  ｈ１に対する対象細胞の反応性を測定すること。これは、たとえば、Ａｒａ  ｈ１に対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫応答により特徴付けられる状態を診断および／またはモニタリングすることに関する使用である。ペプチドは、分画されていない、もしくは分画された、もしくは連続細胞株として誘導された、のいずれかの末梢血由来の細胞または、組織生検由来の細胞と共に固形支持体に結合されてもよく、または、溶液に添加されてもよい。次いで、対象ペプチドに対する反応性は、たとえばＨ３チミジンの取り込み等の標準的な増殖アッセイ、たとえば表面マーカー、サイトカイン等の分子発現または分子分泌の測定、または当分野公知の細胞活性の他の標準的なアッセイにより測定されてもよい。
（ｉｉ）対象由来のＴ細胞試料を利用する、Ｔ細胞増殖アッセイと共に、ペプチドを含有するＴ細胞エピトープを使用することにより、たとえば、Ｔ細胞応答性群の同定が促進される。
【０１３２】
Ａｒａ  ｈ１を検出する方法は、たとえば、定量的にまたは定性的にＡｒａ  ｈ１のレベルを検出するために用いても良い。しかしながら、これらの方法はまた、Ａｒａ  ｈ１における変異または多型（たとえば、Ａｒａ  ｈ１に対するＴ細胞の反応性消失をもたらしうる変異）をスクリーニングするために用いても良い。これらの方法は、Ａｒａ  ｈ１関連過感受性に罹患している個体の治療処置または予防処置における使用に適したペプチド分子のスクリーニング目的に用いられても良い。
【０１３３】
従って、本発明のさらなる別の態様においては、哺乳類における疾患（Ａｒａ  ｈ１に対する異常な、望ましくない、または不適切な反応により特徴付けられる疾患）を診断またはモニタリングする方法を目的としており、当該方法には、上記に定義されるペプチドまたはエピトープを利用する、Ａｒａ  ｈ１反応性Ｔ細胞のスクリーニングが含まれる。
【０１３４】
好ましくは、当該状態は、ピーナッツまたはＡｒａ  ｈ１またはＡｒａ  ｈ１様分子を含有する樹木性堅果（たとえば、ヘーゼルナッツ、アーモンドまたはブラジルナッツ等）に対する過感受性である。
【０１３５】
他の実施態様において、本発明により、上記に定義される診断技術における使用のためのキットが開示される。
【０１３６】
本発明を、以下の非限定的な実施例を参照しながら、さらに説明する。
【実施例】
【０１３７】
対象
ピーナッツアレルギーの成人を、オーストラリア、メルボルンのＴｈｅ  Ａｌｆｒｅｄ
Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎｉｃから採用した（表４）。すべての対象は、ＩｇＥ介在性ピーナッツアレルギーの臨床症状を有しており、ピーナッツ特異的ＩｇＥのＣＡＰスコアは、＞１（＞０．４９  ｋＵＡ／１；Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＣＡＰ  Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，  Ｕｐｐｓａｌａ，  Ｓｗｅｄｅｎ）であった。Ｔ細胞株（ＴＣＬ）の作製に用いた対象は、Ｖｉｃｔｏｒｉａｎ  ＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎおよびＩｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅにより遺伝子型（ＨＬＡ−ＤＲＢ１、−ＤＱＢ１および−ＤＰＢ１、エクソン２）の決定がなされた（表５）。実験は、Ｔｈｅ  Ａｌｆｒｅｄ  ａｎｄ  Ｍｏｎａｓｈ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓにより承認され、各対象より、インフォームドコンセントを得た。
【０１３８】
抗原
粗ピーナッツ抽出物（ＣＰＥ）を、市販の無塩でドライローストされたピーナッツから、Prickett et al. 2011 supra; de Leon et al. Clin Exp Allergy. 2003; 33(9):1273-80に記述されるように調製した。Ａｒａ  ｈ１およびＡｒａ  ｈ１は、Prickett et al. 2011（上述）に記述されるように、液体クロマトグラフィーによりＣＰＥから富化した。エンドトキシン含有量は、ＣＰＥ、Ａｒａ  ｈ１およびＡｒａ  ｈ１のそれぞれに対して、１．７、４．０および、７８．０ＥＵ／ｍｇであった（Ｅｎｄｐｏｉｎｔ  Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ  ＬＡＬ  ａｓｓａｙ，  Ｌｏｎｚａ，  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，  ＵＳＡ）。Ａｒａ  ｈ１ペプチド（Ｍｉｍｏｔｏｐｅｓ，  Ｖｉｃｔｏｒｉａ，  Ａｕｓｔｒａｌｉａ  ａｎｄ  ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ  ＵＳＡ  Ｉｎｃ，  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，
ＵＳＡ；表６）は、１０％ジメチルスルホキシド／ＰＢＳにて２ｍｇ／ｍｌで再構成し（２０ｍｅｒであり、断片化ペプチドセット）、または、ＰＢＳ単独で２ｍｇ／ｍｌで溶解して再構成した（カスタム合成コアエピトープペプチド）。全ての抗原は、Eusebius et al. Int Arch Allergy Immunol. 2002; 127(3):234-44に記述されるように、マイトジ
ェンでもなく、毒性も無いことを確認した。
Ａｒａ  ｈ１特異的ＣＤ４+Ｔ細胞株（ＴＣＬ）
【０１３９】
Ａｒａ  ｈ１特異的オリゴクローナルＴＣＬを、Prickett et al. 2011（上述）に記述されるように、５，６−カルボキシフルオロセイン二酢酸スクシンイミジル（ＣＦＳＥ）をベースにした方法（Mannering et al. J Immunol Methods. 2005; 298(1-2):83-92）を用いて、駆動抗原としてＣＰＥ（１００ｐｇ／ｍＬ）、Ａｒａ  ｈ１（１０ｇｇ／ｍＬ）、またはＡｒａ  ｈ１配列全体にわたる２０ｍｅｒペプチド（１１アミノ酸（ａａ）重複（最後のペプチドについては１７ａａの重複）；表６；１０ｐｇ／ｍＬ／ペプチド）と共に、ピーナッツアレルギーの対象の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から作製した。すべてのＴＣＬは、個々のＡｒａ  ｈ１  ２０ｍｅｒ（１０ｐｇ／ｍＬ）ならびに、ＣＰＥ（１００ｐｇ／ｍＬ）に対する特異性（増殖）に対して検証し、および／または、Ａｒａ  ｈ１（１０ｐｇ／ｍＬ）コアエピトープ配列を、Prickett et al. 2011（上述）に記述されるように、２０ｍｅｒの、Ｎ末端またはＣ末端から切断されたペプチドセットを用いて、選択された２０ｍｅｒ内でマッピングした。
【０１４０】
Ｔ細胞アッセイ
全ての培養は、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシン、および５％の熱不活化ヒトＡＢ血清（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，  ＵＳＡ））を含有するＲＰＭＩ−１６４０（ｃＲＰＭＩ）中で行われた。抗原誘導性ＴＣＬ増殖は、Prickett et al. 2011（上述）に記述されるように、３Ｈチミジン（３Ｈ−ＴｄＲ）取り込みアッセイにより分析された。刺激指数（ＳＩ；ｃｐｍ抗原刺激Ｔ細胞／ｃｐｍ無刺激Ｔ細胞）＞２．５を、陽性とみなし、すべての陽性応答が、２超のアッセイで確認された。ＴＣＬによるＨＬＡ拘束性エピトープ認識は、Prickett et al. 2011（上述）に記述されるように、エピトープ提示をブロックする、ＨＬＡ−ＤＲ（Ｌ２４３）、ＨＬＡ−ＤＱ（ＳＶＰ−Ｌ３）、または、ＨＬＡ−ＤＰ（Ｂ７／２１）に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を用いて評価した。全ＰＢＭＣ内のペプチド誘導性ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の検出を行うために、ＣＦＳＥで標識したＰＢＭＣの７日間培養物を、ＴＣＬ作製に関してPrickett et al. 2011（上述）に記述されるように、設定した。少なくとも１０，０００のＣＤ４＋Ｔ細胞を、試料毎に分析し、抗原有りのＣＤ４＋ＣＳＦＥｌｏ（増殖した）のパーセンテージ／抗原無しのＣＤ４＋ＣＳＦＥｌｏ（バックグラウンド）のパーセンテージとして、ＳＩを算出した。本アッセイの特異的応答に対する検出閾値は、３人の対象の様々なＳＩ値にわたり、増殖ＣＤ４＋細胞からのペプチド特異的ＴＣＬ増殖により評価した。特異的ＴＣＬは、３人全ての対象において１．１という低いＳＩを有する分裂Ｔ細胞から作製され（データは示さず）、ＳＩ＞１．１を陽性として指定した。
【０１４１】
好塩基球活性化テスト
好塩基球活性を、フローサイトメトリーにより検出されるＣＤ６３の上方調節により評価した（Drew et al. J Immunol. 2004; 173(9):5872-9に記述される）。陽性対照は、ウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体（７．５ｕｇ／ｍＬ；ＤＡＫＯ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）、Ｎ−ホルミル−メチオニン−ロイシン−フェニルアラニン（ｆＭＬＰ）（０．４ｕｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ）およびＣＰＥであった。ＣＰＥ、Ａｒａ  ｈ１およびペプチドは、３−ｌｏｇ濃度範囲にわたり検証された（５、０．５および０．０５ｕｇ／ｍＬ）。
【０１４２】
結果
ピーナッツアレルギー対象により認識される主要ＣＤ４Ｔ細胞エピトープを有するＡｒａ
ｈ１  ２０ｍｅｒペプチドの選択
ＣＰＥ、Ａｒａ  ｈ１、または、Ａｒａ  ｈ１の２０ｍｅｒペプチドのプール（集合的に、Ａｒａ  ｈ１配列全体にわたる）を用いて刺激されたＣＦＳＥ標識ＰＢＭＣの７日間培養物から抗原特異的（増殖）ＣＤ４＋ＣＳＦＥｌｏＴ細胞を単離および増殖させることにより、ＨＬＡが多様な１８人のピーナッツアレルギー対象（表４および表５）から、総計１４５個のＡｒａ  ｈ１特異的Ｔ細胞株（ＴＣＬ）を作製した（表６）。各対象により認識された（ＳＩ＞２．５）２０ｍｅｒのペプチド（複数含む）を表７に示し、図１にデータを要約する。一部の対象については、ＣＰＥまたはＡｒａ  ｈ１刺激によりほとんどのＴＣＬが生成されたが、他の対象については、ペプチドプールにより生成された。ＴＣＬが異なる抗原調製物（ＣＰＥ、Ａｒａ  ｈ１、またはペプチドプール）を用いて所与の対象から作製された場合、ＴＣＬ  ２０ｍｅｒの特異性は同等であった。全体として、抗原調製物により生じたＴＣＬ  ２０ｍｅｒの特異性に、バイアスは無かった。
【０１４３】
１４５個のＴＣＬは、Ａｒａ  ｈ１配列全体にわたるエピトープを集合的に認識しており、６９個の２０ｍｅｒのうちたった４つのみが、いずれのＴＣＬも刺激できなかった。１４個の２０ｍｅｒ（２３、２４、２６、３８、４０、４４〜５１および５７）はそれぞれ、４人（２２％）またはそれ以上の対象により認識されており、ペプチド５０および５１は、最も多いレスポンダーを有していた（６人の対象；３３％）（図１）。主要Ｔ細胞エピトープを有する２０ｍｅｒを選択するために、レスポンダー頻度に加えて、多くの因子（ＴＣＬ応答の強さ、対象ごとの特異的ＴＣＬの数、特異的ＴＣＬ応答の再現性、およ
びＰＢＭＣにおける標的特異的Ｔ細胞の活性を含む）を検討した。これらのパラメータに基づいて、１４個の２０ｍｅｒのうちの９つ（ペプチド２３、２４、４０、４６、４７、４９、５０、５１、および５７）を、引き続く分析に選択した。これらの９つの２０ｍｅｒは、本コホート中の１８人の対象のうち１６人（８９％）により集合的に認識されており、特異的ＴＣＬの応答において、大体が強く、一定した増殖応答を誘導した（大部分が５を超えるＳＩであり、多くが、かなり高いものであった）（表７）。さらに、これら２０ｍｅｒのそれぞれが多くのレスポンダー由来の複数のＴＣＬにより認識されており、これは、対象のＴ細胞レパートリーの中での、これらのペプチドに特異的なＴ細胞の出現率を反映している。より広いコホートにおける認識を評価するために、さらに２１人のピーナッツアレルギーの対象由来のＰＢＭＣを、各ペプチド（表１の上のパネルおよび、図４）を用いて７日間刺激した後、全ＰＢＭＣにおけるＣＤ４+Ｔ細胞増殖に関して、ＣＦＳ
Ｅアッセイによりスクリーニングした。このアッセイにより、全ＰＢＭＣ内の、ペプチド特異的なＣＤ４+Ｔ細胞応答に対する感度が高く、正確なスクリーニングがもたらされる
。２１人すべての対象は、富化Ａｒａ  ｈ１およびＡｒａｈ１の組み合わせ、またはＣＰＥに対するＰＢＭＣ  Ｔ細胞増殖を示した。これらの２０ｍｅｒは、１９人により（対象のうちの９０％）集合的に認識され、２０ｍｅｒごとに８〜１２人（３８〜６０％）のレスポンダーであった。ＴＣＬ作製に用いた最初のコホート由来の４人の対象の分析により、ＴＣＬにより認識されるものに加え、他の２０ｍｅｒに特異的なＴ細胞もまた有していることが確認された（表１、下のパネル）。全体として、９人の２０ｍｅｒの選択パネルのＴ細胞認識は、分析された３９人の対象のうちの３５人（９０％）において確認された。
【０１４４】
選択されたＡｒａ  ｈ１  ２０ｍｅｒペプチド内のコアＴ細胞エピトープのマッピング
最小限の長さのペプチドとすることにより、臨床投与の間に、炎症細胞上の細胞結合型ＩｇＥに架橋するリスクが減少し、および、医薬製造が容易となる。各選択された２０ｍｅｒ内の最小限のＴ細胞刺激性配列（コアエピトープ）は、異なる対象由来の反応性ＴＣＬの、断片化ペプチドセットに対する増殖を検証することにより決定された（たとえば、図２および表２）。最大限のＴ細胞増殖を誘導するために必要とされる残基の数は、別々のＴＣＬおよび／または対象の間で、６〜１９個のアミノ酸と変動しており（表２）、このことは、ＣＤ４+Ｔ細胞エピトープに関する従前の報告と一致する（Hemmer et al. Int
Immunol. 2000; 12(3):375-83; Suri et al. Curr Opin Immunol. 2006; 18(1):70-7）
。最適エピトープ認識に必要とされる隣接残基の数における変動のために（Suri et al. 2006、上記）、ＴＣＬは、もし共通コア配列を含有するペプチドが認識を誘導した場合、当該同じエピトープを認識すると考えられていた。この基準に基づいて、５〜１２個のアミノ酸に変動する共通のコア（下線を引いた配列、表２）を有する、１０種の異なるＣＤ４+Ｔ細胞エピトープが特定された（強化エピトープ、表２）。「強化エピトープ」配列
は、最も広い、起こりうる認識を得るために検証されたすべての特異的ＴＣＬの最大刺激に必要とされる残基を包含するように選択された。
【０１４５】
少なくとも１つのエピトープが、９つの２０ｍｅｒのそれぞれの内で見いだされ、２０ｍｅｒ５０および５１はそれぞれ、２つの明白に異なるが重複するＴ細胞エピトープを有しており：１つは各２０ｍｅｒに対して特有のものであり（（４４２〜４５８）および（４５２〜４７０））、および、他方は重複配列内であった（（４５１〜４６１）、表２および図２）。１つのＴＣＬが２０ｍｅｒのいずれかの内にある両エピトープに対して反応することは無く、このことから、これらエピトープの特性がさらに確認された（データは示さず）。ＨＬＡ−エピトープ予測アルゴリズム（Singh et al. Bioinformatics. 2001;
17(12):1236-7; Vita et al. Nucleic Acids Res. 2010; 38(Database issue):D854-62
）もまた、我々の最小刺激性配列のそれぞれの内にある強力なＨＬＡクラスＩＩ（ＨＬＡ−ＩＩ）結合モチーフを１つ以上、明らかにした。データは、Ｐｒｏｐｒｅｄ (Singh et
al. 2001、上述)ＨＬＡ−ＤＲ結合アルゴリズムに対して示す（表８）。このアルゴリズ
ムはペプチド４０の内にあるＨＬＡ−ＤＲエピトープは予測しなかったが、Ｉｍｍｕｎｅ
Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（ＩＥＤＢ）および、Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（Vita et al. 2010、上述)のアルゴリズムは、最も強くＨＬＡ−ＤＰおよび／
またはＤＱ分子に結合する、このペプチドの内にあるエピトープを予測した。
【０１４６】
最後に、不必要な配列の重複を避け、治療に要するペプチド数を最小限とするために、強化エピトープのうちの６つ（３つの重複エピトープ対を含有する）を、３つの２０ａａ（アミノ酸）以下の単一のペプチドへと組み合わせた（（２０６〜２２５）、（４０９〜４２７）および（４５１〜４７０）；グレーの陰影、表２）。組み合わせエピトープペプチドは、残りの４つの強化エピトープ（（３５３−３７１）、（４３６−４５２）、（４４２−４５８）および（５０７−５２４））と共に効果的にエピトープのいずれかに特異的なＴＣＬを刺激し（データは示さず）、さらなる特徴解析のための７つの候補ペプチドのパネルをもたらした（アスタリスクを参照、表２）。ＣＦＳＥをベースにした、我々のコホート由来の９人の対象のスクリーニングにより、これらペプチドはそれぞれ、ピーナッツアレルギーの対象の全ＰＢＭＣ中のＡｒａ  ｈ１特異的Ｔ細胞の検出可能な集団を直接標的とすることができたことが確認された（表９）。
【０１４７】
Ａｒａ  ｈ１Ｔ細胞エピトープのＨＬＡクラスＩＩ拘束特異性の決定
ピーナッツアレルギーとＨＬＡ−ＩＩの関連性は明らかにされておらず（Shreffler et
al. Ann Allergy Asthma Immunol 2006; 96(6):865-9）、それゆえ、治療のために選択
されたペプチドは、広範な適用可能性のために、多様なＨＬＡ−ＩＩ分子に結合するものでなくてはならない。各エピトープを提示するＨＬＡ−ＩＩ型を決定するために、抗ＨＬＡ−ＤＲ、ＤＰ、またはＤＱのｍＡｂを用いて、Ｔ細胞に対する個々のエピトープ提示を阻害した。検証した各ＴＣＬに対して、エピトープ認識は、用量依存性に１種または複数種のＨＬＡ−ｍＡｂにより阻害され（例えば図５）、同じｍＡｂがＣＰＥの認識も阻害し（データは示さず）、このことから、自然処理されたエピトープと合成されたエピトープの提示が一致していることが示された。エピトープごとに、少なくとも２人の対象および／またはＴＣＬが検証された（表３）。上述のＨＬＡ−ＩＩアルゴリズムの予測と一致して（Singh et al. 2001、上述; Vita et al. 2010、上述）、抗ＨＬＡ−ＤＲは、１つ（
３５３〜３７１）以外のすべてのエピトープ認識を阻害し、その１つは検証された両方の対象において抗ＨＬＡ−ＤＱにより阻害された。エピトープ（４３６−４５２）および（５０７−５２４）に対しては、一部のＴＣＬについては抗ＨＬＡ−ＤＲにより認識が阻害されたが、他については抗ＨＬＡ−ＤＱにより阻害されたことから、これらエピトープに関するＨＬＡ結合の重複性が確認された。
【０１４８】
認識が１つのＨＬＡ−ｍＡｂにより阻害されたエピトープのＨＬＡ結合の縮重を評価するために、そのエピトープに特異的なＴＣＬを有する少なくとも２人の対象の各ＨＬＡ対立遺伝子を比較した（表５および表３）。ＨＬＡ−ＤＲ拘束性エピトープまたはＨＬＡ−ＤＱ拘束性エピトープをそれぞれ認識する対象の間に共通のＨＬＡ−ＤＲＢ１、または、ＨＬＡ−ＤＱＢ１対立遺伝子が無いことで、各エピトープは、少なくとも２つの異なるＨＬＡ分子上に提示されることが確認された。ＨＬＡ結合アルゴリズムによりさらにこれらのデータが支持され、複数のＨＬＡ分子に結合することが予測されたモチーフを各エピトープが含有していた（Singh et al. 2001、上述; Vita et al. 2010、上述）（表８）。
【０１４９】
好塩基球活性化に対する、候補ペプチドの検証
全アレルゲンに対する安全な代替法を開発するためには、ペプチドは、細胞結合型ＩｇＥに結合および架橋してはならない。ペプチドに対する好塩基球の反応性が、本研究のために採用された７人のピーナッツアレルギーの対象から得た新鮮な血液中で評価された（表４）（図３）。７人すべての対象が、濃度範囲にわたって、ＣＰＥに対する高レベルの好塩基球活性化を示した。Ａｒａ  ｈ１に対する反応は、最も低い用量では対象間で異な
っていたが、最も高い濃度では全ての対象において高い活性化が誘導された。しかしながら、候補ペプチドは、検証されたいずれの濃度でも、活性化を誘導しなかった。１人の対象が、ペプチド（４０９〜４２７）に対して非常に低いレベルの反応性（８％）を示したが、これは、活性化陽性の閾値を下回るものであり（Boumiza et al. Clin Mol Allergy.
2005; 3:9）、この対象において、Ａｒａ  ｈ１（８０〜９０％）またはＣＰＥ（７４〜７６％）により誘導された活性化と比較して無視できるほど低いものであった。
【０１５０】
当業者であれば、本明細書に記述される発明が、具体的に記述されるもの以外の改変および修飾が可能であることが理解されるであろう。本発明には、そのような改変および修飾のすべてが含有される。また、本発明は、本明細書において個々に、もしくは集合的に言及される、または示唆されたすべてのステップ、特性、組成物および化合物、ならびに、当該ステップまたは当該特性の任意の２つ以上の任意の組み合わせ、および全ての組み合わせを含む。
【０１５１】
【表３】
2018184447.tif 000008
【０１５２】
上のパネルは、新たなピーナッツアレルギードナーのコホートを示し；下のパネルは、ＴＣＬ作製に用いたピーナッツアレルギードナーのコホート由来の４人の対象を示す。ＣＰＥは粗ピーナッツ抽出物；＋ｖｅは陽性；ｎｔは検証せず（検証時、ペプチドストックが利用できなかった）；グレーは刺激指数が＞１．１  ＜２．５；黒は、刺激指数が＞２．５。
＊抗原無しのバックグラウンドの増殖は、総ＣＤ４＋Ｔ細胞中のＣＤ４＋ＣＦＳＥｌｏＴ細胞の％。∧は、富化Ａｒａ  ｈ１とＡｒａ  ｈ１（それぞれ、１０１．ｔｇ／ｍＬ）
の組み合わせが、これら対象に対し、ＣＰＥの代わりに用いられた。
【０１５３】
【表４】
2018184447.tif 000009
【０１５４】
グレーの陰影は、さらなる分析のために１つのペプチドに結合された、重複強化エピトープ対を示す。
＊治療剤として提案される、７つの候補ペプチド
【０１５５】
【表５】
2018184447.tif 000010
【０１５６】
ｎｔ＝検証せず（ＴＣＬが利用できなかった）；グレーの陰影は、さらなる分析のために１つのペプチドに結合された、重複エピトープ対を示す。
【０１５７】
【表６】
2018184447.tif 000011
【０１５８】
ＴＣＬは、Ｔ細胞株；２０ｍｅｒ  ＣＦＳＥは、選択されたＡｒａ  ｈ１  ２０ｍｅｒに対するＴ細胞反応性のスクリーニング；Ｃｏｒｅ  ＣＦ  ＳＥは、候補Ａｒａ  ｈ１ペプチドに対するＴ細胞反応性のスクリーニング；ＢＡＴは、好塩基球活性化検証；ｎａは、データが入手できず；ＳＰＴは、皮膚プリックテスト（この対象に対して、ＲＡＳＴは利用できなかった）。
【０１５９】
【表７】
2018184447.tif 000012
【０１６０】
すべてのＨＬＡは、対立遺伝子用語体系（http://hla.alleles.org/announcement.html、および、http://www.ebi.ac.uldimgt/h1a/）に対する最近の変更に準拠する。Ｉ∨が続く対立遺伝子は、エクソン２において共通配列を共有する対立遺伝子の群を表す（http://hla.alleles.org/alleles/p_groups.html）。
【０１６１】
【表８】
2018184447.tif 000013
【０１６２】
【表９】
2018184447.tif 000014
【０１６３】
ＴＣＬは、Ｔ細胞株。陽性刺激指数のみを示している（ＳＩ＞２．５）。所与の２０ｍｅｒに特異的なＴＣＬを複数有する対象については、最も高いＳＩを示している。１０を超えるＳＩは、最も近い整数に対し四捨五入を行っている。暗灰色は、ＳＩ＞２．５  ＜５．０；黒は、ＳＩ＞５．０。
【０１６４】
【表１０】
2018184447.tif 000015
【０１６５】
表８  選択されたＡｒａ  ｈ１  ２０ｍｅｒにおける、予測ＨＬＡ−ＤＲ結合モチーフ
ＨＬＡ−ＤＲ結合モチーフ（灰色の陰影）は、ＰｒｏＰｒｅｄアルゴリズム（http:www.immuneepitope.org、２０１２年１月３０日にアクセスした）を用いて予測された。予測主要アンカー残基は、太字とし下線を付す。ペプチド４０（３５２〜３７１）は、このペプチドに対するＨＬＡ−ＤＲ結合モチーフがこのアルゴリズムでは予測されなかったため
、示していない。
【０１６６】
【表１１】
2018184447.tif 000016
【０１６７】
ＣＰＥは、粗ピーナッツ抽出物；ｖｅは陽性；グレーは刺激指数＞１．１  ＜２．５；黒は、刺激指数＞２．５。
＊抗原無しのバックグラウンドの増殖は、総ＣＤ４＋Ｔ細胞中のＣＤ４＋ＣＦＳＥｌｏＴ細胞の％。
∧は、富化Ａｒａ  ｈ１とＡｒａ  ｈ１（それぞれ、１０１．ｔｇ／ｍＬ）の組み合わせが、これら対象に対し、ＣＰＥの代わりに用いられた。
【０１６８】
参考文献一覧
Akdis and Akdis. J Allergy Clin Immunol 2011; 127(1):18-27; quiz 8-9.
Akdis et al., Allergy 55: 522-530, 2000
Akdis et al., Trends Immunol 22: 175-8, 2001
Alexander et al. Allergy. 2005; 60(10):1269-74.
Alexander et al. Clin Exp Allergy. 2005; 35(1):52-8.
Allen and O’Hehir. Clin Exp Allergy. 2011; 41(9):1172-4.
Allergen Nomenclature, International Union of Immunological Societies (IUIS) Allergen Nomenclature Sub-committee. Available at: http://www.allergen.org/Allergen.aspx. Accessed April 22nd, 2012.
Amann et al., 1998, Gene., 69:301-315
Anagnostou et al. Clin Exp Allergy. 2011; 41(9):1273-81.
Asarnoj et al. Allergy. 2010, 65(9):1189-95
Asarnoj et al. Allergy. 65(9):1189-95, 2010.
Avery et al. Pediatr Allergy Immunol 2003; 14(5):378-82.
Balderi et al., 1987, Embo J., 6:229-234)
Bateman et al. Clin Exp Allergy. 2008; 38(11):1760-8.
Blanc et al. Clin Exp Allergy. 2009; 39(8):1277-85
Bock et al. J Allergy Clin Immunol. 2007; 119(4):1016-8.
Boumiza et al. Clin Mol Allergy. 2005; 3:9.
Burks AW. Lancet. 2008; 371(9623):1538-46.
Burks et al. Eur J Biochem. 1997; 245(2):334-9.
Burks et al., Allergy 53: 725-30, 1998
Busse et al. N Engl J Med. 2002; 347(19):1535-6.
Campbell et al. J Exp Med. 2009; 206(7):1535-47.
Chiang et al. Pediatr Allergy Immunol. 2009; 21(2 Pt 2):e429-38
de Jong et al., Clin Exp Allergy 28: 743-51, 1998
de Leon et al. Clin Exp Allergy. 2003; 33(9):1273-80.
de Leon et al. Expert Reviews in MolecularMedicine. 2007; 9(1):1-18.
DeLong et al. J Allergy Clin Immunol. 2011; 127(5):1211-8 e3.
Drew et al. J Immunol. 2004; 173(9):5872-9.
Eusebius et al. Int Arch Allergy Immunol. 2002; 127(3):234-44.
Glaumann et al. Allergy. 2012; 67(2):242-7
Hall et al. Vaccine. 2003; 21(5-6):549-61.
Hemmer et al. Int Immunol. 2000; 12(3):375-83.
Higgins et al. J Allergy Clin Immunol. 1994; 93(5):891-9.
Hofmann et al. J Allergy Clin Immunol. 2009; 124(2):286-91.
Hourihane et al., J Allergy Clin Immunol 100: 596-600, 1997
Hoyne et al. J Exp Med. 1993; 178(5):1783-8.
Husain and Schwartz. J Am Acad Dermatol. 2012; 66(1):136-43.
Jameel et al., 1990, J. Virol., 64:3963-3966
Jones et al. J Allergy Clin Immunol2009; 124(2):292-300.
Kammerer et al. J Allergy Clin Immunol. 1997; 100(1):96-103.
Kay and Larche. Springer Semin Immunopathol. 2004; 25(3-4):391-9.
Kemp and Hu. Med J Aust. 2008; 188(9):503-4.
Knapp et al., 1990, Bio Techniques., 8:280-281
Koppelman et al. Allergy. 2001; 56(2):132-7
Koppelman et al. Clin Exp Allergy. 2004; 34(4):583-90
Kurjan and Herskowitz., 1982, Cell., 30:933-943
Larche M. Clin Exp Allergy. 2008; 38(11):1709-11.
Lin et al. J Microbiol Immunol Infect. 2012
Lin et al. J Microbiol Immunol Infect. 2012.
Litwin et al., Int Arch Allergy Appl Immunol 87: 361-61, 998
Maguire et al., Clin Immunol 93: 222-31, 1999
Mannering et al. J Immunol Methods. 2005; 298(1-2):83-92.
Marazuela et al. Mol Immunol. 2008; 45(2):438-45.
Marcotte et al., J Allergy Clin Immunol 101: 506-13, 1998
Middleton et al. New allele frequency database: http://www.allelefrequencies.net. Tissue Antigens. 2003; 61(5):403-7.
Moverare et al. Int Arch Allergy Immunol 2011; 156(3):282-90
Muller et al. J Allergy Clin Immunol 1998; 101(6 Pt 1):747-54.
Muller et al., J Allergy Clin Immunol 101: 747-754, 1998
Nelson et al. J Allergy Clin Immunol 1997; 99(6 Pt 1):744-51.
Norman et al., Am J Respir Crit Care Med 154: 1623-8, 1996
Oldfield et al. Lancet. 2002; 360(9326):47-53.
Oppenheimer et al. J Allergy Clin Immunol 1992; 90(2):256-62.
Palmer and Burks. Curr Opin Allergy Clin Immunol 2006; 6(3):202-6.
Palmer et al. Clin Immunol. 2005; 115(3):302-12
Peeters et al. Clin Exp Allergy. 2007; 37(1):108-15
Pene et al., J Allergy Clin Immunol 102: 571-8, 1998
Pomes et al. 2006, Clin. Exp. Allergy 36(6):824-30
Prickett et al. J Allergy Clin Immunol. 2011; 127(3):608-15 el-5.
Primeau et al., Clin Exp Allergy 30: 1135-43, 2000
Pumphrey R. Current Opinion in Allergy & Clinical Immunology. 2004; 4(4):285-90.Robinson, Br Med Bull 56: 956-968, 2000
Rolland et al. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2010; In press.
Rolland et al. Pharmacol Ther. 2009; 121(3):273-84.
Ruiter et al. Int Arch Allergy Immunol. 2007; 143(2):119-26.
Rupa and Mine. Allergy. 2012; 67(1):74- 82.
Sabatos-Peyton et al. Curr Opin Immunol 2010; 22(5):609-15.
Sampson et al,. N Engl J Med 327: 380-4, 1992
Sampson et al. J Allergy Clin Immunol. 2006; 117(6):1440- 5.
Schultz et al., 1987, Gene., 54:113-123
Shek et al. J Allergy Clin Immunol. 2010; 126(2):324-31 e7.
Shreffler et al. Ann Allergy Asthma Immunol 2006; 96(6):865-9.
Shreffler et al. J Allergy Clin Immunol. 2004; 113(4):776-82.
Sicher et al., J Allergy Clin Immunol 103: 559-562, 1999
Sicherer et al. J Allergy Clin Immunol. 2010; 125(6):1322-6.
Sicherer et al., Paediatrics 102: e6, 1998
Singh et al. Bioinformatics. 2001; 17(12):1236-7.
Suri et al. Curr Opin Immunol. 2006; 18(1):70-7.
Thyagarajan et al. J Allergy Clin Immunol 2010; 126(1):31-2.
van Boxtel et al. J Agric Food Chem. 2008; 56(6):2223-30.
van Neerven et al. J Immunol 1994; 152(8):4203-10.
Varney et al. 1991 British Medical Journal 302:265-269
Varshney et al. J Allergy Clin Immunol 2009; 124(6):1351-2.
Varshney et al. J Allergy Clin Immunol 2011; 127(3):654-60.
Verhoef et al. Int Immunol. 1993; 5(12):1589- 97.
Vita et al. Nucleic Acids Res. 2010; 38(Database issue):D854-62.
Yang et al. Clin Exp Allergy. 2010; 40(4):668-78.
Yoshitomi et al. J Pept Sci. 2007; 13(8):499-503.
Yun and Katelaris. Intern Med J. 2009; 39(7):475-8.
【図１】
2018184447.tif 000017
【図２】
2018184447.tif 000018
【図３】
2018184447.tif 000019
【図４】
2018184447.tif 000020
【図５】
2018184447.tif 000021
【配列表】
2018184447000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年8月22日(2018.8.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含有するリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログを１種または複数種含有する組成物：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ  （配列番号３）
（ｉｖ）  ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｖ）    ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖｉ）  ＥＧＡＬＭＬ  （配列番号６）
（ｖｉｉ）ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｉｘ）  ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｘ）    ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【請求項２】
前記組成物は、１種または複数種のペプチドを含有し、前記ペプチドの各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、前記ペプチドは、１種または複数種の前記Ａｒａ  ｈ１  Ｔ細胞エピトープを有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ペプチドまたはエピトープは、Ａｒａ  ｈ１に対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫反応により特徴付けられる疾患を有する対象から単離されたＴ細胞に提示された場合に、Ｔ細胞の機能を改変することができるが、前記ペプチドは、Ａｒａ  ｈ１特異的ＩｇＥに結合することはできない、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ペプチドは、Ａｒａ  ｈ１に対する、または、Ａｒａ  ｈ１を含有する組成物中に存在するエピトープに対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫応答により特徴付けられる疾患を有する対象における過感受性を減少させることができる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
１種または複数種のペプチドを含有し、その各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、前記ペプチドは、コアエピトープ領域  ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ（配列番号３）と、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種とを共に含有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｉｖ）  ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖ）    ＥＧＡＬＭＬ  （配列番号６）
（ｖｉ）  ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｖｉｉｉ）ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｉｘ）  ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）；または
１種または複数種のペプチドを含有し、その各々は、６０個までの長さの連続したアミノ酸であり、かつ、前記ペプチドは、コアエピトープ領域  ＥＧＡＬＭＬ（配列番号６）と、以下からなるリストから選択されるＡｒａ  ｈ１  Ｔ細胞コアエピトープ領域、またはその機能性誘導体もしくはそのホモログの１種または複数種とを共に含有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）    ＦＱＮＬＱＮＨＲ  （配列番号１）
（ｉｉ）  ＩＶＱＩＥＡ  （配列番号２）
（ｉｉｉ）ＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫ  （配列番号３）
（ｉｖ）  ＦＧＫＬＦＥＶＫ  （配列番号４）
（ｖ）    ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ  （配列番号５）
（ｖｉ）  ＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶ  （配列番号７）
（ｖｉｉ）ＩＶＶＶＮ  （配列番号８）
（ｖｉｉｉ）ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬ  （配列番号９）
（ｉｘ）  ＩＭＰＡＡＨＰ  （配列番号１０）
【請求項６】
少なくとも３種のペプチド、少なくとも４種のペプチド、少なくとも５種のペプチド、少なくとも６種のペプチド、少なくとも７種のペプチド、少なくとも８種のペプチド、少なくとも９種のペプチド、または１０種のペプチドを含有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記ペプチドは、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個の長さのアミノ酸である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物；または
前記ペプチドは、１０〜２５個の長さのアミノ酸である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物；または
前記ペプチドは、１５〜２５個の長さのアミノ酸である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物；または
前記ペプチドは、１５〜２０個の長さのアミノ酸である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物；または
前記ペプチドは、１０〜２０個の長さのアミノ酸である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記ペプチドは、以下のリストから選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ） ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶ（配列番号１２）
（ｉｉ）ＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１３）
（ｉｉｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１４）
（ｉｖ）ＷＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１５）
（ｖ） ＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１６）
（ｖｉ）ＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１７）
（ｖｉｉ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１８）
（ｖｉｉｉ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１９）
（ｉｘ）ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２０）
（ｘ） ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２１）
（ｘｉ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２２）
（ｘｉｉ）ＶＥＩＫＥＧＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡ（配列番号２３）
（ｘｉｉｉ）ＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶＶＶ（配列番号２４）
（ｘｉｖ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧ（配列番号２５）
（ｘｖ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２６）
（ｘｖｉ）ＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶＲＫ（配列番号２７）
（ｘｖｉｉ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶ（配列番号２８）
（ｘｖｉｉｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２９）
（ｘｉｘ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３０）
（ｘｘ）ＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３１）
（ｘｘｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３２）
（ｘｘｉｉ）ＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３３）；または
前記ペプチドは、以下のリストから選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶ（配列番号１２）
（ｉｉ）ＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１３）
（ｉｉｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１４）
（ｉｖ）ＷＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１５）
（ｖ）ＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１６）
（ｖｉ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１８）
（ｖｉｉ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱ（配列番号１９）
（ｖｉｉｉ）ＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２０）
（ｉｘ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２１）
（ｘ）ＳＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２２）
（ｘｉ）ＶＥＩＫＥＧＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡ（配列番号２３）
（ｘｉｉ）ＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶＶＶ（配列番号２４）
（ｘｉｉｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧ（配列番号２５）
（ｘｉｖ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２６）
（ｘｖ）ＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶ（配列番号２８）
（ｘｖｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２９）
（ｘｖｉｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３０）
（ｘｖｉｉｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３２）
（ｘｉｘ）ＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳＥ（配列番号３１）；または
前記ペプチドは、以下のリストから選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）ＦＱＮＬＱＮＨＲＩＶＱＩＥＡＫＰＮＴＬＶ（配列番号１４）
（ｉｉ）ＷＳＴＲＳＳＥＮＮＥＧＶＩＶＫＶＳＫＥ（配列番号１５）
（ｉｉｉ）ＮＮＦＧＫＬＦＥＶＫＰＤＫＫＮＰＱＬＱ（配列番号２１）
（ｉｖ）ＶＥＩＫＥＧＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡ（配列番号２３）
（ｖ）ＡＬＭＬＰＨＦＮＳＫＡＭＶＩＶＶＶ（配列番号２４）
（ｖｉ）ＫＡＭＶＩＶＶＶＮＫＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶ（配列番号２９）
（ｖｉｉ）ＧＤＶＦＩＭＰＡＡＨＰＶＡＩＮＡＳＳ（配列番号３０）
【請求項９】
配列番号１５、１６、または１７により定義されるペプチドと、配列番号１２〜１４または１８〜３３により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する、請求項８に記載の組成物；または
配列番号２３により定義されるペプチドと、配列番号１２〜２２または２４〜３３により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する、請求項８に記載の組成物；または
配列番号１５により定義されるペプチドと、配列番号１２〜１４、１６、１８〜２６、または２８〜３２により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する、請求項８に記載の組成物；または
配列番号２３により定義されるペプチドと、配列番号１２〜１６、１８〜２２、２４〜２６または２８〜３２により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する、請求項８に記載の組成物；または
配列番号１５により定義されるペプチドと、配列番号１４、２１、２３、２４、２９または３０により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する、請求項８に記載の組成物；または
配列番号２３により定義されるペプチドと、配列番号１４、１５、２１、２４、２９または３０により定義されるペプチドの１種または複数種とを共に含有する、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記列挙されたペプチドのうちの３種または４種または５種または６種または７種を含有する、請求項８または９に記載の組成物。
【請求項１１】
配列番号１４、１５、２１、２３、２４、２９および３０により定義されるペプチドを含有する、請求項８に記載の組成物；または
配列番号１４、１６、２１、２３、２４、２９および３０により定義されるペプチドを含有する、請求項８に記載の組成物；または
配列番号１４、１５、２２、２３、２４、２９および３０により定義されるペプチドを含有する、請求項８に記載の組成物；または
配列番号１４、１５、２１、２３、２４、２９および３２により定義されるペプチドを含有する、請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
配列番号１４により定義されるペプチドは、以下により定義されるペプチドにより置換される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）配列番号１２および１３により定義されるペプチド；
（ｉｉ）配列番号１２により定義されるペプチド；もしくは、
（ｉｉｉ）配列番号１３により定義されるペプチド；または
配列番号１５により定義されるペプチドは、配列番号１６または１７により定義されるペプチドにより置換される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物；または
配列番号２１により定義されるペプチドは、以下により定義されるペプチドにより置換される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）配列番号２２により定義されるペプチド；
（ｉｉ）配列番号１８および２０により定義されるペプチド；
（ｉｉｉ）配列番号２０および１９により定義されるペプチド；
（ｉｖ）配列番号１８により定義されるペプチド；
（ｖ）配列番号１９により定義されるペプチド；もしくは、
（ｖｉ）配列番号２０により定義されるペプチド；または
配列番号２９により定義されるペプチドは、以下により定義されるペプチドにより置換される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）配列番号２５、２８および２７により定義されるペプチド；
（ｉｉ）配列番号２５および２６により定義されるペプチド；
（ｉｉｉ）配列番号２５および２８により定義されるペプチド；
（ｉｖ）配列番号２５および２７により定義されるペプチド；
（ｖ）配列番号２５により定義されるペプチド；
（ｖｉ）配列番号２８により定義されるペプチド；
（ｖｉｉ）配列番号２７により定義されるペプチド；もしくは、
（ｖｉｉｉ）配列番号２６により定義されるペプチド；または
配列番号３０により定義されるペプチドは、以下により定義されるペプチドにより置換される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物：
（ｉ）配列番号３２により定義されるペプチド；
（ｉｉ）配列番号３３により定義されるペプチド；もしくは、
（ｉｉｉ）配列番号３１により定義されるペプチド。
【請求項１３】
Ａｒａ  ｈ１以外のアレルゲンのエピトープをさらに含有する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記Ａｒａ  ｈ１以外のアレルゲンは、Ａｒａ  ｈ２である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のエピトープおよびペプチド、またはその誘導体、ホモログ、もしくはアナログをコードする配列をコードするヌクレオチドの配列、または、請求項１〜３１のいずれか１項に従うエピトープおよびペプチド、またはその誘導体、ホモログ、もしくはアナログをコードする配列に対して相補的なヌクレオチドの配列を含有する、核酸分子。
【請求項１６】
哺乳類における疾患の治療のための医薬の製造における、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物の使用であって、前記状態は、Ａｒａ  ｈ１に対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫反応、または、Ａｒａ  ｈ１を含有する組成物中に存在するアレルゲンに対する異常な、望ましくない、または不適切な免疫反応により特徴付けられる、使用。
【請求項１７】
前記疾患は、ピーナッツまたはＡｒａ  ｈ１を含有する樹木性堅果に対する過感受性である、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記樹木性堅果は、ヘーゼルナッツ、アーモンド、またはブラジルナッツである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ａｒａ  ｈ１に対して脱感作させる、または免疫寛容を誘導する、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
前記脱感作または寛容が、Ｔｈ２アネルギーまたはアポトーシスの誘導により行われる、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
１種または複数種の薬学的に受容可能な担体および／または希釈物質と共に、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物を含有する医薬組成物。
【請求項２２】
哺乳類における疾患の有無を試験するインビトロの方法であって、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のペプチドまたはエピトープを利用して、Ａｒａ  ｈ１反応性Ｔ細胞に対するスクリーニングを行うステップを含み、
前記疾患は、Ａｒａ  ｈ１に対する異常な、望ましくない、または不適切な反応により特徴づけられ、かつ
前記スクリーニングにおけるＡｒａ  ｈ１反応性Ｔ細胞の検出強度を基準値と比較して、基準値よりも強い場合には前記哺乳類が前記疾患を有していると決定する方法。
【請求項２３】
前記疾患は、ピーナッツまたはＡｒａ  ｈ１を含有する樹木性堅果に対する過感受性である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記樹木性堅果は、ヘーゼルナッツ、アーモンド、またはブラジルナッツである、請求項２３に記載の方法。
【外国語明細書】
2018184447000001.pdf
2018184447000002.pdf
2018184447000003.pdf
2018184447000004.pdf