(57)【要約】【課題】即効性のあるうつ病の予防又は治療方法の提供。【解決手段】抗ＩＬ−６受容体抗体の有効量を投与することを特徴とするうつ病の予防又は治療方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＩＬ−６受容体抗体の有効量を投与することを特徴とするうつ病の予防又は治療方法。
【請求項２】
前記抗ＩＬ−６受容体抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体である請求項１記載の方法。
【請求項３】
腸内細菌叢の異常を改善するものである請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
抗ＩＬ−６受容体抗体を有効成分とする抗うつ剤。
【請求項５】
前記抗ＩＬ−６受容体抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体である請求項４記載の抗うつ剤。
【請求項６】
腸内細菌叢の異常を改善するものである請求項４又は５記載の抗うつ剤。
【請求項７】
抗ＩＬ−６受容体抗体の有効量を投与することを特徴とする、フィルミクテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）門、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属、ステレラ（Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ）属、ブチリシコッカス（Ｂｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓ）属及びオシロスピラ（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ）属から選択される１以上の門又は属の腸内細菌叢の異常の改善方法。
【請求項８】
抗ＩＬ−６受容体抗体を有効成分とする、フィルミクテス門、スタフィロコッカス属、ステレラ属、ブチリシコッカス属及びオシロスピラ属から選択される１以上の門又は属の腸内細菌叢の異常の改善剤。
【請求項９】
検体中のフィルミクテス門、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）門、スタフィロコッカス属、ステレラ属、ブチリシコッカス属及びオシロスピラ属から選択される１以上の門又は属の腸内細菌を測定することを特徴とするうつ病の補助診断方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、うつ病の予防又は治療方法及びうつ病の補助診断方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
うつ病（大うつ病性障害ともいう）は、国や文化をこえてほぼ普遍的にみられる気分障害である。うつ病の症状は多彩で、抑うつ気分、悲壮感、意欲・興味の低下、罪悪感、低い自尊心、睡眠障害、食欲不振、疲労感、集中力低下などが見られる。世界保健機関（ＷＨＯ）の２０１７年の発表によると、世界で３億人以上がうつ病を患い、その数は今後ますます増加することが予想され、大きな社会問題となっている。
【０００３】
うつ病の治療法の１つとして、抗うつ剤を用いる薬物療法がある。抗うつ剤としては、モノアミン酸化酵素阻害薬、三環系抗うつ薬、四環系抗うつ薬、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）、セロトニン・ノルアドレナリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩ）、ノルアドレナリン作動性・特異的セロトニン作動性抗うつ薬（ＮａＳＳＡ）、トリアゾロピリジン系抗うつ薬（ＳＡＲＩ）、ノアルアドレナリン・ドパミン再取り込み阻害薬（ＮＤＲＩ）、選択的セロトニン再取り込み促進薬（ＳＳＲＥ）等が知られている。
【０００４】
しかしながら、従来の抗うつ剤の効果は即効性ではなく、症状を改善させるためには抗うつ剤を長期間に渡って服用する必要があり、これにより、眠気、めまい、脱力、注意力散漫、便秘、食欲不振、肝機能障害などの副作用、および連続服用による薬物依存症の発症を伴う恐れがあることが知られている。さらに、従来の抗うつ剤に奏功しない患者（治療抵抗性うつ病患者）が約30％存在することが知られている。そのため、即効性のある抗うつ剤、あるいは治療抵抗性うつ病にも抗うつ効果を示す薬剤の開発が求められている。
【０００５】
うつ病の発症には、作用機序は不明であるものの、炎症が関与するとの報告がある（非特許文献１)。炎症性サイトカインの１種であるインターロイキン６（ＩＬ−６）が、うつ病の発症に関与しているとの報告や（非特許文献２）、うつ病患者を対象としたメタ分析において、うつ病患者のＩＬ−６を含む複数の炎症性サイトカイン濃度がうつ病に罹患していない対照者に比して有意に高かったとの報告（非特許文献３）もある。しかしながら、うつ病におけるＩＬ−６の役割については明らかにされていない。
【０００６】
ＩＬ−６は、Ｂ細胞に作用して抗体産生を誘導するＴ細胞由来のサイトカインとして見出された。その後、ＩＬ−６は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、線維芽細胞、単球、内皮細胞、メサンギウム細胞等の様々な細胞により産生され、広く免疫応答、炎症反応、造血反応、急性期応答、細胞増殖、骨代謝等に関与し、炎症反応においては、細胞や組織の状況に応じて炎症性サイトカインとしてあるいは抗炎症性サイトカインとして機能する、多機能サイトカインであることが明らかとなっている。
ＩＬ−６の受容体（ＩＬ−６Ｒ）には、膜結合型ＩＬ−６受容体と、ヒトの血清や尿に存在し、膜結合型受容体の細胞外領域からなる分泌型の可溶性ＩＬ−６受容体がある。膜結合型も分泌型も、ＩＬ−６に対し同程度の親和性を示すことが知られている。これらのＩＬ−６受容体は、単独ではシグナル伝達能を有していないが、ＩＬ−６がＩＬ−６受容体に結合して複合体を形成し、複合体が細胞膜上のシグナル伝達分子である分子量１３０ｋＤａの糖タンパク質ｇｐ１３０と会合して二量体化することで、細胞内にシグナルが伝達される。
【０００７】
これまでに、ＩＬ−６受容体に対する抗体については種々の薬効が知られている。特許文献１には、ＩＬ−６アンタゴニスト、例えば抗ＩＬ−６Ｒ抗体を有効成分とする慢性関節リウマチ治療剤が、特許文献２には、抗ＩＬ−６Ｒ抗体を含むＩＬ−６の産生に起因するプラズマサイトーシス等の治療剤が、特許文献３には、抗ＩＬ−６Ｒ抗体を有効成分とする全身性エリテマトーデスの治療剤が、特許文献４には、ＩＬ−６アンタゴニスト、例えば抗ＩＬ−６Ｒ抗体を有効成分とする炎症性腸疾患の治療剤が、特許文献５には、ＩＬ−６アンタゴニスト、例えば抗ＩＬ−６Ｒ抗体を有効成分とする膵炎の治療剤が、特許文献６には、ＩＬ−６アンタゴニスト、例えば抗ＩＬ−６Ｒ抗体を有効成分とする乾癬の治療剤が、特許文献７には、ＩＬ−６アンタゴニスト、例えば抗ＩＬ−６Ｒ抗体を有効成分とする小児慢性関節炎関連疾患の治療剤が、特許文献８には、ＩＬ−６受容体阻害剤、例えば抗ＩＬ−６Ｒ抗体を有効成分とする移植片対宿主病の治療剤が記載されている。また、特許文献９には、ＩＬ−６阻害剤、例えば抗ＩＬ−６Ｒ抗体を有効成分とする精神疾患治療剤が記載されており、具体的には、抗ＩＬ−６受容体抗体を有効成分とする統合失調症、トゥレット症候群、及び／又は強迫神経症治療剤が開示されている。統合失調症は、主に幻覚、妄想、思考障害等の陽性症状や感情鈍麻等の陰性症状によって特徴付けられ、薬物療法としては抗精神薬が投与されることが一般的な精神疾患である。統合失調症とうつ病は、症状も従来の治療法をも異にする別個の疾患であり、抗ＩＬ−６Ｒ抗体がうつ病に対しどのような効果を示すのかは全く明らかにされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第９６／１１０２０号
【特許文献２】国際公開第９６／１２５０３号
【特許文献３】国際公開第９９／８７０７号
【特許文献４】国際公開第９９／４７１７０号
【特許文献５】国際公開第００／１０６０７号
【特許文献６】国際公開第０２／３４２９２号
【特許文献７】国際公開第０２／０８０９６９号
【特許文献８】国際公開第２００９／０４４７７４号
【特許文献９】国際公開第２０１６／１９５０８８号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Dantzer R, et al., "From inflammation to sickness and depression: when the immune system subjugates the brain", Nat Rev Neurosci, 9(1): 46-56, 2008.
【非特許文献２】Hodes GE, et al., "Integrating Interleukin-6 into depression diagnosis and treatment", Neurobiol Stress, 4: 15-22, 2016.
【非特許文献３】Dowlati Y, et al., "A meta-analysis of cytokines in major depression", Biol Psychiatry, 67(5):446-57, 2010.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の課題は、即効性がある新たなうつ病の予防又は治療方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
そこで、本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、抗インターロイキン６（ＩＬ−６）受容体抗体が抗うつ効果を示し、その効果が即効性であることを見出した。本発明者は、かかる知見に基づき、さらに検討した結果、該抗うつ効果に、腸内細菌叢異常の改善作用が寄与していることを見出し、本発明を完成した。
【００１２】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔２１〕を提供するものである。
〔１〕抗ＩＬ−６受容体抗体の有効量を投与することを特徴とするうつ病の予防又は治療方法。
〔２〕前記抗ＩＬ−６受容体抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体である〔１〕記載の方法。
〔３〕腸内細菌叢の異常を改善するものである〔１〕又は〔２〕記載の方法。
〔４〕抗ＩＬ−６受容体抗体を有効成分とする抗うつ剤。
〔５〕前記抗ＩＬ−６受容体抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体である〔４〕記載の抗うつ剤。
〔６〕腸内細菌叢の異常を改善するものである〔４〕又は〔５〕記載の抗うつ剤。
〔７〕抗うつ剤の製造のための抗ＩＬ−６受容体抗体の使用。
〔８〕前記抗ＩＬ−６受容体抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体である〔７〕記載の使用。
〔９〕抗うつ剤が腸内細菌叢の異常を改善するものである〔７〕又は〔８〕記載の使用。
〔１０〕うつ病の予防又は治療に使用するための抗ＩＬ−６受容体抗体。
〔１１〕キメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体である〔１０〕記載の抗ＩＬ−６受容体抗体。
〔１２〕腸内細菌叢の異常を改善するものである〔１０〕又は〔１１〕記載の抗ＩＬ−６受容体抗体。
〔１３〕抗ＩＬ−６受容体抗体の有効量を投与することを特徴とする、フィルミクテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）門、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属、ステレラ（Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ）属、ブチリシコッカス（Ｂｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓ）属及びオシロスピラ（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ）属から選択される１以上の門又は属の腸内細菌叢の異常の改善方法。
〔１４〕前記抗ＩＬ−６受容体抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体である〔１３〕記載の方法。
〔１５〕抗ＩＬ−６受容体抗体を有効成分とする、フィルミクテス門、スタフィロコッカス属、ステレラ属、ブチリシコッカス属及びオシロスピラ属から選択される１以上の門又は属の腸内細菌叢の異常の改善剤。
〔１６〕前記抗ＩＬ−６受容体抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体である〔１５〕記載の改善剤。
〔１７〕フィルミクテス門、スタフィロコッカス属、ステレラ属、ブチリシコッカス属及びオシロスピラ属から選択される１以上の門又は属の腸内細菌叢の異常の改善剤の製造のための抗ＩＬ−６受容体抗体の使用。
〔１８〕前記抗ＩＬ−６受容体抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体である〔１７〕記載の使用。
〔１９〕フィルミクテス門、スタフィロコッカス属、ステレラ属、ブチリシコッカス属及びオシロスピラ属から選択される１以上の門又は属の腸内細菌叢の異常の改善に使用するための抗ＩＬ−６受容体抗体。
〔２０〕キメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体である〔１９〕記載の抗ＩＬ−６受容体抗体。
〔２１〕検体中のフィルミクテス門、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）門、スタフィロコッカス属、ステレラ属、ブチリシコッカス属及びオシロスピラ属から選択される１以上の門又は属の腸内細菌を測定することを特徴とするうつ病の補助診断方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、抗ＩＬ−６受容体抗体を投与することでうつ病を予防又は治療することが可能となる。本発明は、特に血中ＩＬ−６濃度の高いうつ病患者に対し、有効な予防又は治療手段となり得る。抗ＩＬ−６受容体抗体の抗うつ効果は、即効性であり、持続性があるため、従来の抗うつ剤でみられるような長期連続投与に伴う患者の身体的負担や医療費増加を軽減することが可能である。本発明によれば、抗ＩＬ−６受容体抗体を投与することで腸内細菌叢の異常を改善することが可能となる。抗ＩＬ−６受容体抗体による抗うつ効果は、この腸内細菌叢の異常の改善によるものと考えられる。また、本発明によれば、腸内細菌叢の異常を指標とすることでうつ病を補助診断することが可能となり、うつ病の鑑別診断に有用な客観的な資料を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】社会的敗北ストレスモデルに対する抗ＩＬ−６受容体抗体の抗うつ効果を示す図である。Ａは抗体を静脈内投与した場合の試験スケジュールを、Ｂ〜Ｆは自発運動量試験（ＬＭＴ）、尾懸垂試験（ＴＳＴ）、強制水泳試験（ＦＳＴ）及びショ糖嗜好性試験（ＳＰＴ）の結果を示し、各数値は、平均±標準誤差（ｎ＝７〜９）である。また、Ｇは抗体を脳室内投与した場合の試験スケジュールを、Ｈ〜ＫはＬＭＴ、ＴＳＴ、ＦＳＴ及びＳＰＴの結果を示し、各数値は、平均±標準誤差（ｎ＝８）である。各グラフ下の「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は社会的敗北ストレスを負荷していないマウスを、「Ｓｔｒｅｓｓ」は社会的敗北ストレスに感受性のマウスを示し、凡例の「Ｃｏｎｔｒｏｌ」はコントロール抗体を投与したマウスを、「ＭＲ１６−１」は抗ＩＬ−６受容体抗体を投与したマウスを示す。＊：Ｐ＜０．０５、＊＊：Ｐ＜０．０１、＊＊＊：Ｐ＜０．００１（コントロール抗体を投与した社会的敗北ストレスに感受性のマウスとの比較）、Ｎ．Ｓ．：有意差なし。
【図２】社会的敗北ストレスモデルに対する抗ＩＬ−６受容体抗体の抗炎症効果を示す図である。Ａは試験スケジュールを、Ｂ〜Ｄは抗体の静脈内投与１日後のＴＮＦ−α、ＩＬ−１β及びＩＬ−６の血清濃度を示し、各数値は、平均±標準誤差（ｎ＝７又は８）である。Ｅ〜Ｇは抗体の静脈内投与後７日後のＴＮＦ−α、ＩＬ−１β及びＩＬ−６の血清濃度を示し、各数値は、平均±標準誤差（ｎ＝１２又は１３）である。＊：Ｐ＜０．０５、＊＊：Ｐ＜０．０１、＊＊＊：Ｐ＜０．００１（コントロール抗体を投与した社会的敗北ストレスに感受性のマウスとの比較）、Ｎ．Ｓ．：有意差なし。
【図３】社会的敗北ストレスモデルの脳領域、具体的には海馬のＣＡ１、ＣＡ３及び歯状回（ＤＧ）、前頭前野（ＰＦＣ）並びに側坐核（ＮＡｃ）におけるシナプスタンパク質に対する抗ＩＬ−６受容体抗体の効果を示す図である。ＡはＰＳＤ−９５タンパク質の発現量を、ＢはＧｌｕＡ１タンパク質の発現量を、コントロール抗体を投与されたコントロールマウスにおける発現量に対する相対値で示し、各数値は、平均±標準誤差（ｎ＝５又は６）である。＊：Ｐ＜０．０５、＊＊：Ｐ＜０．０１、＊＊＊：Ｐ＜０．００１（コントロール抗体を投与した社会的敗北ストレスに感受性のマウスとの比較）、Ｎ．Ｓ．：有意差なし。
【図４】社会的敗北ストレスモデルの脳領域におけるスパイン密度と錐体神経細胞に対する抗ＩＬ−６受容体抗体の効果を示す図である。Ａは海馬のＣＡ１、Ｂは海馬のＣＡ３、Ｃは海馬のＤＧ、Ｄは内側前頭前野（ｍＰＦＣ）の前辺縁皮質（ＰｒＬ）、ＥはｍＰＦＣの下辺縁皮質（ＩＬ）、Ｆは側坐核（ＮＡｃ）のシェル（ｓｈｅｌｌ）、ＧはＮＡｃのコア（ｃｏｒｅ）の、スパイン密度及び錐体神経細胞のゴルジ染色画像を示す。各数値は、平均±標準誤差（ｎ＝６）である。＊＊：Ｐ＜０．０１、＊＊＊：Ｐ＜０．００１（コントロール抗体を投与した社会的敗北ストレスに感受性のマウスとの比較）、Ｎ．Ｓ．：有意差なし。
【図５】社会的敗北ストレスモデルの腸内細菌叢に対する抗ＩＬ−６受容体抗体の効果を示す図である。Ａは腸内細菌叢の門レベルの内訳を、Ｂ〜Ｄはそれぞれ、フィルミクテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）門の細菌量、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）門の細菌量、フィルミクテス門とバクテロイデス門の細菌量の比（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ／Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）をコントロールマウスに対する相対量で示す。各数値は、平均±標準誤差（ｎ＝５）である。＊：Ｐ＜０．０５（コントロール抗体を投与した社会的敗北ストレスに感受性のマウスとの比較）、Ｎ．Ｓ．：有意差なし。
【図６】社会的敗北ストレスモデルの腸内細菌叢に対する抗ＩＬ−６受容体抗体の効果を示す図である。Ａは腸内細菌叢の属レベルの内訳を、Ｂ〜Ｅはそれぞれ、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属の細菌量、ステレラ（Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ）属の細菌量、ブチリシコッカス（Ｂｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓ）属の細菌量、オシロスピラ（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ）属の細菌量をコントロールマウスに対する相対量で示す。各数値は、平均±標準誤差（ｎ＝５）である。＊：Ｐ＜０．０５、＊＊：Ｐ＜０．０１（コントロール抗体を投与した社会的敗北ストレスに感受性のマウスとの比較）、Ｎ．Ｓ．：有意差なし。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本明細書において「抗体」とは、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する、少なくとも１つの抗原認識部位を介して、ポリペプチド等の標的に特異的に結合可能な免疫グロブリン分子を指す。「特異的に結合する」とは、当該技術分野において周知の用語であり、抗体の、抗原やエピトープに対する特異的な結合を決定するための方法も周知である。例えば、抗原のあるエピトープに特異的に結合する抗体は、他のエピトープ又は他の抗原に結合するよりも、より大きな親和性、結合活性で、より迅速に、及び／又はより長時間持続して、該エピトープに結合可能であると理解される。
本明細書において「抗体」には「抗原結合性断片」が包含される。「抗原結合性断片」とは、抗体の機能的、構造的断片であって、該抗体が結合可能な抗原に対する結合性を保持している断片を指す。抗原結合性断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、１本鎖（ＳｃＦｖ）、二重特異性抗体、それらの修飾体等が挙げられるが、これらに限定されない。
抗体のクラスは特に限定されず、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤあるいはＩｇＥ等のいずれのアイソタイプを有する抗体をも包含する。精製の容易性等を考慮すると好ましくはＩｇＧであり、より好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２である。
【００１６】
本明細書において「インターロイキン６（ＩＬ−６）受容体」は、ＩＬ−６をリガンドとする受容体を指す。ＩＬ−６受容体には、細胞膜上に発現している膜結合型ＩＬ−６受容体及び分泌型の可溶性ＩＬ−６受容体があり、分泌型は、膜結合型の細胞内領域及び膜貫通領域を除く細胞外領域から構成されている。ＩＬ−６受容体がＩＬ−６と結合して複合体を形成し、複合体が細胞膜上のｇｐ１３０と会合して二量体化することで、細胞内にシグナルが伝達される。
【００１７】
本明細書において「抗ＩＬ−６受容体抗体」は、ＩＬ−６受容体に結合する抗体を指す。本発明で用いられる抗ＩＬ−６受容体抗体は、膜結合型ＩＬ−６受容体及び可溶性ＩＬ−６受容体のどちらにも結合する抗体であってもよいし、膜結合型ＩＬ−６受容体にのみ結合し、可溶性ＩＬ−６受容体には結合しない抗体であってもよい。また、抗ＩＬ−６受容体抗体は、１種を単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１８】
本発明で用いられる抗ＩＬ−６受容体抗体は、モノクローナル抗体であってもポリクローナル抗体であってもよく、好ましくはモノクローナル抗体である。これらの抗体は、当該技術分野において公知の方法より作製することができる。
【００１９】
ポリクローナル抗体であれば、マウス等の動物の体内に免疫原及び必要に応じてアジュバントを複数回、皮下及び腹腔内等の適当な経路で注射することによって、動物の体内に生成せしめ、免疫した動物から抗体を含有する抗血清を単離し、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、又はラジオイムノアッセイ等の当該技術分野においてよく知られる方法を用いて、所望の特異性を有する抗体をスクリーニングして得ることができる。免疫原としては、ＩＬ−６受容体、その部分ペプチド、これらの安定発現細胞等を用いることができる。例えば、ヒトＩＬ−６受容体としては、欧州特許出願公開第３２５４７４号明細書に開示された遺伝子配列又はアミノ酸配列を、マウスＩＬ−６受容体としては、特開平３−１５５７９５に開示された遺伝子配列又はアミノ酸配列を利用することができる。
【００２０】
一方、モノクローナル抗体であれば、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６（５５１７）：４９５−４９７，１９７５により最初に記述されたハイブリドーマ法を使用して実質的に均質な抗体の母集団から得ることができる。具体的には、免疫した動物から脾臓細胞を採取し、ミエローマ細胞と融合させ、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作製することにより得ることができる。ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、又はラジオイムノアッセイ等の当該技術分野においてよく知られる方法を用いて、目的とするタンパク質を認識する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を選択する。所望の抗体を分泌するハイブリドーマをクローニングし、適切な条件下で培養し、分泌された抗体を回収し、当該技術分野においてよく知られる方法、例えばイオン交換カラム、アフィニティークロマトグラフィー等を用いて精製することができる。免疫原としては、上述のものを用いることができる。
【００２１】
モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ法によって作製することもできる。
抗体又はそれに含まれる可変領域等の各領域をコードする核酸は、当業者に公知の方法で取得し、その塩基配列を決定することができる。例えば、当該核酸は、文献記載の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することのできるオリゴヌクレオチドプローブ、あるいはプライマーを使用し、ハイブリダイゼーションにより、あるいはポリメラーゼチェインリアクション（ＰＣＲ）により単離され得る。上記のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、こうした方法におけるＤＮＡの供給源として使用することが出来る。なお、「核酸」とは、その化学構造及び取得経路に特に制限はなく、例えば、ｇＤＮＡ、ｃＤＮＡ、化学合成ＤＮＡ及びｍＲＮＡ等を含むものである。
単離したＤＮＡは、発現ベクター中に導入される。次いでこれを、適当な宿主細胞にトランスフェクションすることで、該組換え宿主細胞中でモノクローナル抗体又はそれに含まれる領域を発現させることができる。
【００２２】
ここで、「発現ベクター」は、ＤＮＡ（通常は二本鎖である）の断片をいい、該ＤＮＡは、その中に外来のＤＮＡの断片を挿入せしめることができる。外来のＤＮＡは、異種ＤＮＡとして定義され、対象宿主細胞においては天然では見出されないＤＮＡである。ベクターは、外来ＤＮＡまたは異種ＤＮＡを適切な宿主細胞に導入するために使用される。一旦、宿主細胞中に入ると、ベクターは、宿主染色体ＤＮＡとは独立に複製することが可能であり、そしてベクター及びその挿入された外来ＤＮＡのいくつかのコピーが生成され得る。さらに、ベクターは外来ＤＮＡのポリペプチドへの翻訳を可能にするのに不可欠なエレメントを含む。従って、外来ＤＮＡによってコードされるポリペプチドの多くの分子を迅速に生合成することができる。
【００２３】
このようなベクターは、適切な宿主中でＤＮＡ配列がコードするタンパク質を発現するように、適切な制御配列とそれが機能するように（即ち、外来ＤＮＡがコードするタンパク質を発現できるように）連結せしめられたＤＮＡ配列を含有するＤＮＡ構築物を意味している。そうした制御配列としては、転写させるためのプロモーター、そうした転写を制御するための任意のオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードしている配列、エンハンサー、ポリアデニル化配列、及び転写や翻訳の終了を制御する配列等が挙げられる。更にベクターは、当業者に公知の各種の配列、例えば、制限酵素切断部位、薬剤耐性遺伝子等のマーカー遺伝子（選択遺伝子）、シグナル配列、リーダー配列等を必要に応じて適宜含むことができる。これらの各種配列又は要素は、外来ＤＮＡの種類、使用する宿主細胞、培養培地等の条件に応じて、当業者が適宜選択して使用することができる。
【００２４】
該ベクターは、プラスミド、ファージ粒子、あるいは単純に宿主ゲノムへの挿入体等の任意の形態が可能である。一旦、適切な宿主の中に形質転換で導入されると、該ベクターは宿主のゲノムとは独立して複製及び機能するものであり得る。又は、該ベクターは宿主ゲノムの中に組み込まれるものであってもよい。
【００２５】
こうして取得された抗体又はそれに含まれる各領域をコードする核酸は、目的に応じて、当業者に公知の手段により適宜所望のペプチド又はアミノ酸をコードするように改変することができる。この様にＤＮＡを遺伝子的に改変又は修飾する技術は、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｊ．，ｅｄ．，Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ，１９９１において総説が収載されており、例えば、位置指定変異導入法（部位特異的変異導入法）、カセット変異誘発法及びＰＣＲ変異生成法を挙げることができる。
【００２６】
ここで、核酸の「改変」とは、得られたオリジナルの核酸において、アミノ酸残基をコードする少なくとも一つのコドンにおける、塩基の挿入、欠失または置換を意味する。例えば、オリジナルのアミノ酸残基をコードするコドンを、別のアミノ酸残基をコードするコドンにより置換することによりポリペプチドを構成するアミノ酸配列自体を改変する方法がある。または、アミノ酸自体は変更せずに、その宿主細胞にあったコドン（至適コドン）を使用するように、核酸を改変することも出来る。このように至適コドンに改変することによって、宿主細胞内におけるポリペプチドの発現効率等の向上を図ることができる。
【００２７】
宿主細胞としては当業者に公知の任意の細胞を使用することができるが、例えば、代表的な宿主細胞としては、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）等の原核細胞、及び、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、ヒト由来細胞などの哺乳動物細胞、酵母、昆虫細胞等の真核細胞を挙げることができる。
【００２８】
このような宿主細胞における発現等により得られた抗体分子は、一般に分泌されたポリペプチドとして培養培地から回収されるが、それが分泌シグナルを持たずに産生された場合には宿主細胞溶解物から回収することができる。
【００２９】
抗体分子の精製操作は当業者に公知の任意の方法を適宜組み合わせて行うことができる。例えば、遠心分離、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、イオン交換カラム上での分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンセファロースクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン樹脂クロマトグラフィー（ポリアスパラギン酸カラム等）、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿、及びアフィニティークロマトグラフィーによって好適に精製される。
【００３０】
また、本発明で用いられる抗ＩＬ−６受容体抗体には、天然型抗体、遺伝子組換技術を用いて製造され得るキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体産生トランスジェニック動物等を用いて製造され得るヒト抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【００３１】
キメラ抗体は、非ヒト動物、例えばマウスの抗体の重鎖、軽鎖の可変領域とヒト抗体の重鎖、軽鎖の定常領域からなる。この様な抗体は、例えば、マウス抗体の可変領域をコードするＤＮＡをヒト抗体の定常領域をコードするＤＮＡと連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることにより得ることができる。
【００３２】
ヒト化抗体は、非ヒト動物、例えばマウスの抗体の重鎖、軽鎖のＣＤＲをヒト抗体のＣＤＲへ移植した抗体である。ヒト化抗体は、再構成（ｒｅｓｈａｐｅｄ）ヒト抗体とも称され、その一般的な遺伝子組換え手法も知られている。具体的には、例えばマウス抗体のＣＤＲとヒト抗体のフレームワーク領域（ＦＲ）を連結するように設計したＤＮＡ配列を、末端部にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドからＰＣＲ法により合成する。得られたＤＮＡをヒト抗体定常領域をコードするＤＮＡと連結し、次いで発現ベクターに組み込んで、これを宿主に導入し産生させることにより得られる（欧州特許出願公開第２３９４００号、国際公開第９６／０２５７６号）。ＣＤＲを介して連結されるヒト抗体のＦＲは、ＣＤＲが良好な抗原結合部位を形成するものが選択される。必要に応じ、再構成ヒト抗体のＣＤＲが適切な抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域のＦＲのアミノ酸を置換してもよい（Ｓａｔｏ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５３（４）：８５１−８５６，１９９３）。
【００３３】
ヒト抗体は、例えば、ヒトリンパ球をｉｎ  ｖｉｔｒｏで所望の抗原または所望の抗原を発現する細胞で感作し、感作リンパ球をヒトミエローマ細胞と融合させ、抗原への結合活性を有する所望のヒト抗体をスクリーニングして得ることができる（特公平１−５９８７８号）。また、ヒト抗体遺伝子の全てのレパートリーを有するトランスジェニック動物を所望の抗原で免疫することで所望のヒト抗体を取得することもできる（国際公開第９３／１２２２７号、国際公開第９２／０３９１８号、国際公開第９４／０２６０２号、国際公開第９４／２５５８５号、国際公開第９６／３４０９６号、国際公開第９６／３３７３５号）。さらに、ヒト抗体ライブラリーを用いて、パンニングによりヒト抗体を取得する技術も知られている。例えば、ヒト抗体の可変領域を一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）としてファージディスプレイ法によりファージの表面に発現させ、抗原に結合するファージを選択することができる。選択されたファージの遺伝子を解析すれば、抗原に結合するヒト抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を決定することができる。抗原に結合するｓｃＦｖのＤＮＡ配列が明らかになれば、当該配列を組み込んだ適当な発現ベクターを作製し、ヒト抗体を取得することができる。これらの方法は既に周知であり、国際公開第９２／０１０４７号、国際公開第９２／２０７９１号、国際公開第９３／０６２１３号、国際公開第９３／１１２３６号、国際公開第９３／１９１７２号、国際公開第９５／０１４３８号、国際公開第９５／１５３８８を参考にすることができる。さらには、チェイン・シャッフリング法（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）によって高親和性（ｎＭのオーダーの範囲）のヒト抗体を作出することができる（Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．，１０（７）：７７９−７８３，１９９２）。極めて大きいファージライブラリーを構築するための手法として、組合せ感染（ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）及びインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，２１（９）：２２６５−２２６６，１９９３）なども知られている。
【００３４】
本発明で用いられる抗ＩＬ−６受容体抗体には、糖鎖付加等の修飾が加えられたものも含まれる。かかる抗体としては、例えば、Ｆｃ領域に１以上のＮ−結合型糖鎖が結合し、該Ｎ−結合型糖鎖の還元末端のＮ−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない抗体が挙げられる。
【００３５】
本発明で用いられる抗ＩＬ−６受容体抗体の例としては、これらに限定されるものではないが、ＭＲ１６−１抗体（Ｔａｍｕｒａ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９０（２４）：１１９２４−１１９２８，１９９３）、ＰＭ−１抗体（Ｈｉｒａｔａ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４３（９）：２９００−２９０６，１９８９）、ＡＵＫ１２−２０抗体、ＡＵＫ６４−７抗体又はＡＵＫ１４６−１５抗体（国際公開第９２／１９７５９号）、トシリズマブ（ｔｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ）、ＳＡ２３７などが挙げられる。このうち、ヒトＩＬ−６受容体に対する好ましいモノクローナル抗体としては、ＰＭ−１抗体又はトシリズマブが挙げられ、マウスＩＬ−６受容体に対する好ましいモノクローナル抗体としては、ＭＲ１６−１抗体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、ＭＲ１６−１抗体のヒト化抗体も好適に用いられる。
【００３６】
本発明で用いられる抗ＩＬ−６受容体抗体は、後記実施例に示すように、うつ病のモデルである社会的敗北ストレスモデルにおいて、うつ症状の評価系として汎用されている行動試験で投与１日後から顕著な症状改善作用を示し、投与７日後においても改善作用を維持することができる。したがって、抗ＩＬ−６受容体抗体は、即効性、持続性に優れた抗うつ効果を有し、うつ病の予防又は治療に有用である。一実施形態において、抗ＩＬ−６受容体抗体は、うつ病の症状である抑うつ気分、悲壮感、意欲・興味の低下、罪悪感、低い自尊心、睡眠障害、食欲不振、疲労感、集中力低下等の予防又は治療に使用することができる。別の実施形態において、抗ＩＬ−６受容体抗体は、抗うつ剤の有効成分として使用することができる。
本明細書において、うつ病又はうつ症状の予防には、うつ病又はうつ症状の発症を抑えることおよび遅延させることが含まれ、またうつ病又はうつ症状の最初の発症の予防だけではなく、治療後のうつ病又はうつ症状の再発に対する予防も包含される。本明細書において、うつ病又はうつ症状の治療には、うつ病又はうつ症状を治癒すること、改善すること及び進行を抑えることが包含される。
【００３７】
社会的敗北ストレスモデルは、うつ病モデルの１種で、動物を攻撃的な動物と同じケージに入れ、精神的緊張、不安、恐怖といった社会的ストレスを与えて作製される。社会的敗北ストレスモデルの作製に用いられる動物は、特に限定されないが、マウス、ラット等が挙げられ、好ましくはマウスである。ストレスに感受性の動物では、社会的回避（引きこもり）や快感喪失反応がみられ、行動試験においてうつ症状に類似した行動変化を示す。行動試験としては、尾懸垂試験（ＴＳＴ）、強制水泳試験（ＦＳＴ）、ショ糖嗜好性試験（ＳＰＴ）等が挙げられ、これらは抗うつ剤のスクリーニングにも用いられている。以下に、マウスを例にして、各試験を説明する。
ＴＳＴでは、マウスの尾を持ち上げて逆さに吊るし、試験期間中の無動時間を測定する。マウスが完全に静止した状態を無動と判断する。うつ状態のマウスでは、無動時間が長くなり、抗うつ剤を投与すると無動時間が減少する。
ＦＳＴでは、尾が底に届かない程度の深さまで水を入れた円筒形の容器にマウスを入れ、試験期間中の遊泳時間と無動時間を計測する。うつ状態のマウスでは、無動時間が長く、移動距離も短くなり、抗うつ剤を投与すると無動時間が減少する。
ＳＰＴでは、ショ糖溶液の入ったボトル及び水の入ったボトルを同時にマウスに与え、ショ糖溶液を飲んだ割合をショ糖嗜好性として算出する。通常のマウスはショ糖溶液を好んで飲むが、うつ状態のマウスではショ糖溶液を飲む割合が少なくなる。抗うつ剤を投与すると、ショ糖嗜好性が高くなる。
【００３８】
本発明で用いられる抗ＩＬ−６受容体抗体は、後記実施例に示すように、うつ病のモデルである社会的敗北ストレスモデルにおいて、腸内細菌叢の異常の改善作用を示す。したがって、抗ＩＬ−６受容体抗体は、腸内細菌叢の異常の改善に有用であり、腸内細菌叢の異常の改善剤の有効成分として使用することができる。腸内細菌叢の異常としては、これらに限定されるものではないが、対照レベルに比したフィルミクテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）門の細菌の量の低下、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属及びステレラ（Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ）属から選択される１以上の属の細菌の量の増加、ブチリシコッカス（Ｂｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓ）属及びオシロスピラ（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ）属から選択される１以上の属の細菌の量の低下等が挙げられる。対照レベルとしては、例えば、標準量、健常者における量等が挙げられる。
本明細書において、腸内細菌叢の異常の改善には、腸内細菌叢の異常を対照レベルにまで正常化すること、対照レベルに近づけること、及び腸内細菌叢の異常の悪化を防止することが包含される。
【００３９】
本発明で用いられる抗ＩＬ−６受容体抗体は、当該技術分野においてよく知られる薬学的に許容しうる担体とともに、混合、溶解、乳化、カプセル封入、凍結乾燥等により医薬組成物の形態に製剤化すればよい。
【００４０】
経口投与用には、抗ＩＬ−６受容体抗体を、水、生理食塩水のような希釈剤に有効量溶解させた液剤、有効量を固体や顆粒として含んでいるカプセル剤、顆粒剤、散剤又は錠剤、適当な分散媒中に有効量を懸濁させた懸濁液剤、有効量を溶解させた溶液を適当な分散媒中に分散させ乳化させた乳剤等の剤型に製剤化することができる。
【００４１】
非経口投与用には、抗ＩＬ−６受容体抗体を、薬学的に許容しうる溶媒、賦形剤、結合剤、安定化剤、分散剤等とともに、注射用溶液、懸濁液、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、吸入剤、坐剤等の剤形に製剤化することができる。注射用の処方においては、抗ＩＬ−６受容体抗体を水性溶液、好ましくはハンクス溶液、リンゲル溶液、又は生理的食塩緩衝液等の生理学的に適合性の緩衝液中に溶解することができる。さらに、抗ＩＬ−６受容体抗体は、油性又は水性のベヒクル中で、懸濁液、溶液、又は乳濁液等の形状をとることができる。あるいは、抗ＩＬ−６受容体抗体を粉体の形態で製造し、使用前に滅菌水等を用いて水溶液又は懸濁液を調製してもよい。吸入による投与用には、抗ＩＬ−６受容体抗体を粉末化し、ラクトース又はデンプン等の適当な基剤とともに粉末混合物とすることができる。坐剤処方は、抗ＩＬ−６受容体抗体をカカオバター等の慣用の坐剤基剤と混合することにより製造することができる。さらに、抗ＩＬ−６受容体抗体は、ポリマーマトリクス等に封入して、持続放出用製剤として処方することができる。
【００４２】
これらの剤型のうち、好ましい態様は非経口投与製剤であり、より好ましい態様は注射剤又は坐剤である。注射剤の場合、例えば、静脈内、経皮、皮内、腹腔内、又は筋内投与することができ、静脈内投与が好ましい。
【００４３】
抗ＩＬ−６受容体抗体の投与対象は、哺乳動物、好ましくはヒトであり、具体的には、例えば、うつ病を発症している患者、うつ病を発症していた患者、抑うつ気分、悲壮感、意欲・興味の低下、罪悪感、低い自尊心、睡眠障害、食欲不振、疲労感、集中力低下等の症状があり、うつ病の発症が疑われる患者、腸内細菌叢の異常を有する患者が挙げられ、うつ病患者が特に好ましい。
【００４４】
抗ＩＬ−６受容体抗体の投与量は、所望の抗うつ効果又は腸内細菌叢の異常の改善効果が得られる量であればよく、剤型、投与経路、患者の症状、体重、年令等に応じて適宜設定すればよい。例えば、成人１日あたりの投与量は、抗ＩＬ−６受容体抗体として、０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇが好ましく、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇがさらに好ましく、１日あたりの投与量を１回に投与してもよく、数回、例えば２〜４回に分けて投与してもよい。
【００４５】
本発明のうつ病の予防又は治療方法は、他のうつ病治療方法と併用してもよい。うつ病治療方法としては、認知行動療法、読書療法、対人関係療法等の心理療法、他の抗うつ剤や他の薬剤を投与する薬物療法、運動療法、電気痙攣療法、高照度光照射療法等が挙げられる。他の抗うつ剤としては、モノアミン酸化酵素阻害薬、アミトリプチリン、イミプラミン、クロミプラミン、トリミプラミン、ノルトリプチリン、アモキサピン、ドスレピン、ロフェプラミン等の三環系抗うつ薬、マプロチリン、ミアンセリン、セチプチリン等の四環系抗うつ薬、フルボキサミン、パロキセチン、セルトラリン、シタロプラム、エスシタロプラム等の選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）、ミルナシプラン、ベンラファキシン、デュロキセチン、ネファゾドン等のセロトニン・ノルアドレナリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩ）、ミルタザピン等のノルアドレナリン作動性・特異的セロトニン作動性抗うつ薬（ＮａＳＳＡ）、トラゾドン等のトリアゾロピリジン系抗うつ薬（ＳＡＲＩ）、ブプロピオン等のノアルアドレナリン・ドパミン再取り込み阻害薬（ＮＤＲＩ）、チアネプチン等の選択的セロトニン再取り込み促進薬（ＳＳＲＥ）等が挙げられる。他の薬剤としては、炭酸リチウム、甲状腺ホルモン、抗てんかん薬、アリピプラゾール等の非定型抗精神病薬等が挙げられる。
【００４６】
本発明で用いられる抗ＩＬ−６受容体抗体による抗うつ効果は、後記実施例に示すように、腸内細菌叢の異常の改善によるものと考えられる。うつ病モデルである社会的敗北ストレスモデルでは、腸内細菌叢の異常が認められており、腸内細菌叢の異常を指標とすることで、うつ病の補助診断が可能となる。腸内細菌叢の異常としては、これらに限定されるものではないが、対照レベルに比したフィルミクテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）門の細菌の量の低下、フィルミクテス門の細菌とバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）門の細菌の量比（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ／Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）の低下、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属及びステレラ（Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ）属から選択される１以上の属の細菌の量の増加、ブチリシコッカス（Ｂｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓ）属及びオシロスピラ（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ）属から選択される１以上の属の細菌の量の低下等が挙げられる。対照レベルとしては、例えば、標準量、標準比、健常者における量、健常者における比等が挙げられる。
【００４７】
本発明のうつ病の補助診断方法においては、検体中のフィルミクテス門の細菌の量及び／又はフィルミクテス門の細菌とバクテロイデス門の細菌の量比を測定し、測定結果を対照レベル（例えば、標準量、標準比、健常者における量、健常者における比）と比較すればよい。測定結果が対照レベルよりも低い場合、被験者はうつ病を発症していると判断できる。一方、測定結果が対照レベル以上である場合、被験者はうつ病を発症していないと判断できる。別の実施形態においては、検体中のスタフィロコッカス属、ステレラ属、ブチリシコッカス属及びオシロスピラ属から選択される１以上の属の細菌の量を測定し、測定結果を対照レベル（例えば、標準量、健常者における量）と比較すればよい。スタフィロコッカス属及びステレラ属から選択される１以上の属の細菌の測定結果が対照レベルよりも高い場合、被験者はうつ病を発症していると判断できる。一方、測定結果が対照レベル以下である場合、被験者はうつ病を発症していないと判断できる。あるいは、ブチリシコッカス属及びオシロスピラ属から選択される１以上の属の細菌の測定結果が対照レベルよりも低い場合、被験者はうつ病を発症していると判断できる。一方、測定結果が対照レベル以上である場合、被験者はうつ病を発症していないと判断できる。このように、本発明のうつ病の補助診断方法は、うつ病の鑑別診断に資する客観的な資料を提供することができ、より的確なうつ病の診断が可能となる。ここで、被験者は、上述したうつ症状を有するか、その疑いがあるか、またはその危険性がある哺乳動物、好ましくはヒトが挙げられる。
【００４８】
腸内細菌量の測定を含む腸内細菌叢の解析は、培養法、リアルタイムＰＣＲ法、メタゲノム解析法、ＤＧＧＥ／ＴＧＧＥ法、ＦＩＳＨ法、１６Ｓ  ｒＤＮＡクローンライブラリー法、Ｔ−ＲＦＬＰ法等、当該技術分野で公知の方法に従って行えばよい。用いられる検体としては、被験者由来の生体試料、例えば腸液、糞便等の消化管内容物が挙げられるが、糞便が被験者に対する負担が少なく好ましい。
例えば、リアルタイムＰＣＲ法は、検体より抽出したＤＮＡを鋳型として、１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子を標的とした菌門、菌属又は菌種特異的プライマーを用いたＰＣＲを行い、その増幅産物量をリアルタイムＰＣＲ装置にて検出する方法であり、数種類までの菌の解析に適している。メタゲノム解析法は、検体より抽出したＤＮＡを鋳型として１６Ｓ  ｒＲＮＡの可変領域を増幅し、シーケンスにより塩基配列を取得し、得られた塩基配列について１６Ｓ  ｒＲＮＡデータベースに対し相同性検索を行い、腸内細菌叢の組成を特定する方法であり、腸内細菌叢の網羅的な解析が可能である。
【００４９】
文脈上明白に他の意味を示す場合を除き、本明細書及び請求の範囲において、単数形で表される各態様は、技術的に矛盾しない限り、複数形であってもよいことが理解され、逆もまた真である。
【００５０】
本明細書に引用される特許文献及び非特許文献は、参照により、それらのすべての開示が本明細書に援用される。
【実施例】
【００５１】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はいろいろな態様により実施することができ、実施例に限定されるものとして解釈されてはならない。当業者は、本発明の様々な修正及び変更を、本発明の精神又は範囲を変更させることなく実施できる。
【００５２】
実施例１  社会的敗北ストレスモデルの作製
（１）使用動物
８週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（体重２０〜２５ｇ、日本エスエルシー株式会社）及び１４週齢の雄のＣＤ１マウス（体重４０〜２５ｇ、日本エスエルシー株式会社）及び１４週齢の雄のＣＤ１マウス（体重４０〜４５ｇ、日本エスエルシー株式会社）を実験に用いた。マウスは、温度制御下、１２時間の明暗サイクル（明期７：００−１９：００）下で、水と餌を自由に摂取できるようにして飼育した。
【００５３】
（２）社会的敗北ストレスモデルの作製
社会的敗北ストレスモデルは、既報の方法（Ｚｈａｎｇ  ＪＣ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２３２（２３）：４３２５−４３３５，２０１５）に準じて作製した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、攻撃性の強いＣＤ１マウスに１日あたり１０分間暴露し、社会的敗北ストレスを負荷した。ストレス負荷後、居住ＣＤ１マウスを、有孔プレキシガラスの仕切りで２つに区切った飼育ケージの一方に、侵入Ｃ５７ＢＬ／６マウスをもう一方に入れ、１日の残りの時間を視覚的、嗅覚的及び聴覚的コンタクトが可能な状況で飼育した。これを１０日間続けた（ｄａｙ１〜１０）。最後のストレス負荷から２４時間後、全マウスは単独飼育した。
最後のストレス負荷の次の日（ｄａｙ１１）に、社会行動試験を実施した。この試験では、オープンフィールド（４２×４２ｃｍ）を相互作用ゾーンと両端のコーナーゾーンに分け、相互作用ゾーンにプラスチックメッシュ製の標的ボックス（１０×４．５ｃｍ）を設置した。試験マウス（Ｃ５７ＢＬ／６マウス）は、標的ボックスに社会的標的（ＣＤ１マウス）がいない状態でオープンフィールドを２．５分間自由に探索させた。その後、新たなＣＤ１マウスを相互作用ゾーンの標的ボックスに入れ、試験マウスをオープンフィールドに戻し、２．５分間観察を行った。社会的標的なしの２．５分間と社会的標的ありの２．５分間で、試験マウスが相互作用ゾーンに滞在した時間をそれぞれ測定した。
相互作用ゾーンに滞在した時間が有意に短く、コーナーゾーンに滞在した時間が有意に長いマウスを、社会的敗北ストレスに感受性のマウスとした。約７０％のマウスが感受性であった。感受性マウスを次の試験に用いた。
【００５４】
実施例２  社会的敗北ストレスモデルにおける抗ＩＬ−６受容体抗体の抗うつ効果
（１）ラット抗マウスＩＬ−６受容体モノクローナル抗体（ＭＲ１６−１）の投与
ラット抗マウスＩＬ−６受容体モノクローナル抗体（ＭＲ１６−１）は、既報の方法（Ｏｋａｚａｋｉ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ，８４（３）：２３１−２４０，２００２）により作製されたもので、中外製薬株式会社より供与を受けた。試験１２日目（ｄａｙ１２）に、実施例１で作製した社会的敗北ストレスに感受性のマウス又は社会的敗北ストレスを負荷していない（コントロール）マウスに対し、ＭＲ１６−１を静脈内投与（ｉ．ｖ．：２ｍｇ／０．２ｍｌ／マウス）又は脳室内投与（ｉ．ｃ．ｖ．：０．０２ｍｇ／２μｌ／マウス）した。抗体のコントロールとしては、ラットＩｇＧアイソタイプコントロール（ｃｌｏｎｅ４３４１４、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）を用いた。
【００５５】
（２）行動試験
以下の通りに、行動試験を実施した。
自発運動量試験（ＬＭＴ）：１２日目（ｄａｙ１２）の抗体投与の６０分後に、試験マウスを実験ケージ（長さ×幅×高さ：５６０×５６０×３３０ｍｍ）に入れ、マウスの自発運動量を行動解析装置ＳＣＡＮＥＴ  ＭＶ−４０（有限会社メルクエスト）でカウントし、累積運動量を６０分間記録した。
尾懸垂試験（ＴＳＴ）：１３日目（ｄａｙ１３）に、試験マウスを飼育ケージから取り出し、粘着テープの小片を尾の先端から約２ｃｍのところに張り付けた。テープには穴が１つ開けてあり、その穴をフックにかけてマウスをぶら下げた。マウスがぶらさがったまま完全に静止した状態を無動と判断し、各マウスの無動時間を１０分間記録した。
強制水泳試験（ＦＳＴ）：１４日目（ｄａｙ１４）に、試験マウスを、１５ｃｍの高さまで水を入れて２３±１℃に維持したシリンダー（直径：２３ｃｍ、高さ：３１ｃｍ）に入れた。ＳＣＡＮＥＴ  ＭＶ−４０の自動強制水泳装置で試験を行った。試験は６分間行い、装置の分析ソフトウェアを用いて、全時間から遊泳時間を差し引いて累積無動時間を算出した。
ショ糖嗜好性試験（ＳＰＴ）：１５及び１８日目（ｄａｙ１５及び１８）に試験を行った。まず、試験前の４８時間に、試験マウスに対し１％ショ糖溶液を与えた。次いで、４時間水と餌を与えず、その後、水が入ったボトルと１％ショ糖溶液が入ったボトルを用いて１時間にわたってマウスの嗜好性を調べた。各ボトルは、試験期間前後に重さを測定し、ショ糖溶液を飲んだ割合をショ糖嗜好性（％）として算出した。
【００５６】
（３）統計分析
データは、平均±標準誤差で示した。分析は、ＰＡＳＷ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ２０（ＳＰＳＳ）を用いて行った。群間の比較は、一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）の後、事後ＬＳＤ検定（ｐｏｓｔ−ｈｏｃ  ＬＳＤ  ｔｅｓｔ）又は二元配置分散分析（ｔｗｏ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）を行った。事後比較は、対応のないｔ検定（ｕｎｐａｉｒｅｄ  ｔ−ｔｅｓｔ）を用いて行った。Ｐ値が０．０５未満を統計学的に優位とみなした。
【００５７】
（４）結果
社会的敗北ストレスに感受性のマウスでＭＲ１６−１を静脈内投与されたグループ、感受性マウスでコントロール抗体を静脈内投与されたグループ、コントロールマウスでＭＲ１６−１を静脈内投与されたグループ及びコントロールマウスでコントロール抗体を静脈内投与されたグループの４群について、上記（２）の各試験の試験スケジュール及び試験結果を、図１Ａ〜Ｆに示す。
これらの４群間で、自発運動量には有意な差は認められなかった（図１Ｂ）。
尾懸垂試験及び強制水泳試験では、社会的敗北ストレスに感受性のマウスにおいて、コントロールマウスに比して無動時間の有意な延長が認められたが、ＭＲ１６−１投与により無動時間の延長は有意に抑制された（図１Ｃ及びＤ）。
ショ糖嗜好性試験では、社会的敗北ストレスに感受性のマウスにおいて、コントロールマウスに比してショ糖嗜好性の有意な減少が認められたが、ＭＲ１６−１投与によりショ糖嗜好性の減少は有意に軽減された（図１Ｅ及びＦ）。
これらの結果より、ＭＲ１６−１の静脈内投与は、うつ病のモデルである社会的敗北ストレスモデルのマウスに対し抗うつ効果を示し、その効果は速やかかつ維持されるものであることが示唆された。
一方、社会的敗北ストレスに感受性のマウスでＭＲ１６−１を脳室内投与されたグループ、感受性マウスでコントロール抗体を脳室内投与されたグループ、コントロールマウスでＭＲ１６−１を脳室内投与されたグループ及びコントロールマウスでコントロール抗体を脳室内投与されたグループの４群について、上記（２）の各試験の試験スケジュール及び試験結果を、図１Ｇ〜Ｋに示す。
これらの４群間で、自発運動量には有意な差は認められなかった（図１Ｈ）。
尾懸垂試験及び強制水泳試験では、社会的敗北ストレスに感受性のマウスにおいて、コントロールマウスに比して無動時間の有意な延長が認められたが、ＭＲ１６−１を投与しても無動時間の延長は抑制されなかった（図１Ｉ及びＪ）。
ショ糖嗜好性試験では、社会的敗北ストレスに感受性のマウスにおいて、コントロールマウスに比してショ糖嗜好性の有意な減少が認められたが、ＭＲ１６−１を投与してもショ糖嗜好性の減少は軽減されなかった（図１Ｋ）。
これらの結果より、ＭＲ１６−１の脳室内投与は、社会的敗北ストレスモデルのマウスに対し抗うつ効果を示さないことが示唆された。
以上より、末梢のＩＬ−６増加がうつ病の発症で重要な役割を担っており、ＭＲ１６−１は、末梢のＩＬ−６受容体をブロックして即効性及び持続性のある抗うつ効果を示すと考えられる。
【００５８】
実施例３  社会的敗北ストレスモデルの血清における抗ＩＬ−６受容体抗体の抗炎症効果
（１）炎症性サイトカインの測定
実施例１で作製した社会的敗北ストレスに感受性のマウス又はコントロールマウスから、１２日目（ｄａｙ１２）の抗体の静脈内投与の１及び７日後（ｄａｙ１３及び１９）に、心臓穿刺により血液サンプルを採取した。血液サンプルを２，０００ｇで２０分間遠心分離して血清サンプルを得た。血清サンプルをＥＬＩＳＡ希釈液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で１０倍に希釈した。Ｒｅａｄｙ−ＳＥＴ−Ｇｏ  ＥＬＩＳＡキット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用い、製造業者の説明書に従って、血清中の腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、ＩＬ−１β及びＩＬ−６の濃度を測定した。得られたデータは、実施例２（３）と同様に統計分析した。
【００５９】
（２）結果
試験スケジュール及び測定結果を図２Ａ〜Ｇに示す。
抗体投与１日後では、社会的敗北ストレスに感受性のマウスにおいて、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β及びＩＬ−６の全ての濃度がコントロールマウスに比して有意に上昇したが、ＭＲ１６−１投与により各炎症性サイトカインの濃度はコントロールマウスと同程度まで抑制された（図２Ｂ〜Ｄ）。抗体投与７日後でも、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１βについて同様の傾向が認められた（図２Ｅ及びＦ）。
すなわち、うつ病のモデルである社会的敗北ストレスモデルでは、末梢のＩＬ−６濃度が上昇するが、ＭＲ１６−１は速やかにＩＬ−６濃度を減少させた。ＭＲ１６−１の効果は即効性があり、特にＩＬ−６濃度が高いうつ病患者に有効であることが示唆された。
【００６０】
実施例４  社会的敗北ストレスモデルにおける抗ＩＬ−６受容体抗体のシナプスタンパク質に対する効果
（１）ウエスタンブロット
マウスの脳中のシナプス形成のマーカーである、シナプス後肥厚部タンパク質９５（ＰＳＤ−９５）及びα−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−４−イソキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡ）受容体１（ＧｌｕＡ１）の濃度をウエスタンブロットにより測定した。具体的には、抗体の静脈内投与の７日後（ｄａｙ１９）に、マウスの海馬のＣＡ１、ＣＡ３及び歯状回（ＤＧ）、前頭前野（ＰＦＣ）及び側坐核（ＮＡｃ）の脳サンプルを採取した。各サンプルをＬａｅｍｍｌｉ  ｌｙｓｉｓバッファー中でホモジナイズした。ＤＣプロテインアッセイキット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて、タンパク質の一部（１０μｇ）をはかりとり、同容量の溶液（１２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、２０％グリセロール、０．１％ブロモフェノールブルー、１０％β−メルカプトエタノール、４％ドデシル硫酸ナトリウム）と共に９５℃で５分間インキュベートし、１０％ミニプロティアンＴＧＸＴＭプレキャストゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）にアプライしてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。タンパク質を、ミニトランスブロットセル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いてＰＶＤＦメンブレンにトランスファーした。ブロットをＴＢＳＴ（ＴＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０）中２％ＢＳＡにより室温で１時間ブロッキングし、一次抗体である抗ＰＳＤ−９５抗体（１μｇ／ｍｌ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と４℃にて一晩反応させた。ブロットをＴＢＳＴにて３回洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗ウサギ抗体（１：５０００）と室温で１時間インキュベートした。ブロットをＴＢＳＴで３回洗浄後、ＥＣＬ  Ｐｌｕｓウェスタンブロッティング検出システム（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス）を用いてバンドを検出した。次いで、ブロットをストリッピングバッファー（２％  ＳＤＳ、１００ｍＭ  β−メルカプトエタノール、６２．５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８））中で６０℃で３０分間インキュベートし、その後、ＴＢＳＴで３回洗浄した。ブロットをブロッキング液にて１時間ブロッキングし、一次抗体である抗ＧｌｕＡ１抗体（１μｇ／ｍｌ、Ａｂｃａｍ）又は抗β−アクチン抗体とインキュベートした。二次抗体との反応及びバンドの検出は、ＰＳＤ−９５の場合と同様に行った。ルミノイメージアナライザーＬＡＳ−３０００  ｍｉｎｉ（富士フイルム株式会社）によりイメージを取得し、免疫反応性バンドを定量した。各バンドの濃度は、β−アクチンのバンド濃度で補正し、コントロール抗体を投与したコントロールマウスにおける発現量を１００とした場合の相対値（％）で示した。得られたデータは、実施例２（３）と同様に統計分析した。
【００６１】
（２）結果
測定結果を図３Ａ及びＢに示す。
社会的敗北ストレスに感受性のマウスでは、コントロールマウスに比して、ＰＳＤ−９５のタンパク質濃度が海馬（ＣＡ３及びＤＧ）及び前頭前野（ＰＦＣ）で有意に減少する一方、側坐核（ＮＡｃ）では有意に上昇したが、これらの濃度変化は、ＭＲ１６−１の投与により抑制された（図３Ａ）。また、社会的敗北ストレスに感受性のマウスでは、コントロールマウスに比して、ＧｌｕＡ１のタンパク質濃度が海馬（ＣＡ３及びＤＧ）及び前頭前野（ＰＦＣ）で有意に減少する一方、側坐核（ＮＡｃ）では有意に上昇したが、これらの濃度変化も、ＭＲ１６−１の投与により抑制された（図３Ｂ）。
よって、ＭＲ１６−１は脳のシナプスタンパク質の濃度変化を正常化して抗うつ効果を示すことが示唆された。
【００６２】
実施例５  社会的敗北ストレスモデルにおける抗ＩＬ−６受容体抗体の樹状突起スパインに対する効果
（１）ゴルジ染色による樹状突起スパインの染色
ゴルジ染色は、ＦＤ  Ｒａｐｉｄ  ＧｏｌｇｉＳｔａｉｎＴＭ  Ｋｉｔ（ＦＤ  ＮｅｕｒｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用い、製造業者のプロトコールに従って行った。抗体の静脈内投与の７日後（ｄａｙ１９）に、マウスにペントバルビタールナトリウムで深く麻酔をかけ、頭蓋から脳を摘出し、蒸留水で洗浄した。脳は、溶液Ａと溶液Ｂを等量ずつ混合した浸透液に浸し、１晩暗所で静置し、浸透液を交換して２週間、暗所で保存した。脳を溶液Ｃに移し、１晩暗所で静置し、溶液を交換して４℃で２週間、暗所で保存した。その後、クライオスタット  Ｌｅｉｃａ  ＣＭ３０５０  Ｓ（ライカマイクロシステムズ）上で、チャンバー温度を−２０℃に設定し、１００μｍ厚の冠状切片を作製した。各切片を溶液Ｃ中で生理食塩水コーティング顕微鏡スライドにマウントした。余分な溶液を取り除いた後、切片は室温で自然乾燥させた。乾燥切片は、製造業者のプロトコールに従い処理した。海馬のＣＡ１、ＣＡ３及びＤＧ、内側前頭前野（ｍＰＦＣ）の前辺縁皮質（ＰｒＬ）及び下辺縁皮質（ＩＬ）並びにＮＡｃのシェル（ｓｈｅｌｌ）及びコア（ｃｏｒｅ）の樹状突起の画像を、ＢＺ−９０００  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ＩＩ顕微鏡（株式会社キーエンス）で１００倍の対物レンズを用いて取得した。スパインは、既報の方法（Ｚｈａｎｇ  ＪＣ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，１８（４）：ｐｙｕ０７７，２０１５）に従い、起点が一次樹状突起からはじまっているＣＡ１、ＣＡ３、ＤＧ、ｍＰＦＣ  ＰｒＬ、ｍＰＦＣ  ＩＬ、ＮＡｃ  ｓｈｅｌｌ及びＮＡｃ  ｃｏｒｅの樹状突起に沿ってカウントした。スパイン密度の測定では、各画像化されたニューロンから、５０〜１００μｍの二次樹状突起を含む評価可能な全領域を用いた。相対スパイン密度は、単一ニューロンからの複数の樹状突起分枝上のスパインをカウントし、１０μｍあたりの平均スパイン数を算出した。スパインの数の測定では、樹状突起軸に垂直になっているスパインのみをカウントした。６匹のマウス、１匹あたり３切片、１切片あたり３ニューロンを分析した。各個体の各領域の個の平均値を算出し、それをまとめて各領域の平均値を算出した。得られたデータは、実施例２（３）と同様に統計分析した。
【００６３】
（２）結果
結果を図４Ａ〜Ｇに示す。
社会的敗北ストレスに感受性のマウスでは、スパイン密度がコントロールマウスに比して、海馬のＣＡ３及びＤＧ、ｍＰＦＣ  Ｐｒｌ及びｍＰＦＣ  ＩＬで有意に減少する一方、ＮＡｃ  ｓｈｅｌｌ及びＮＡｃ  ｃｏｒｅでは有意に増加したが、ＭＲ１６−１の投与により、ＣＡ３及びＤＧ、ｍＰＦＣ  Ｐｒｌ及びｍＰＦＣ  ＩＬでのスパイン密度減少並びにＮＡｃ  ｓｈｅｌｌ及びＮＡｃ  ｃｏｒｅでのスパイン密度増加が有意に抑制された（図４Ａ〜Ｇ）。
これらの結果より、ＭＲ１６−１が脳領域におけるスパイン密度の変化を正常化することで抗うつ効果を奏することが示唆された。これは、抗うつ剤治療がスパイン密度の変化をブロック又は改善し得るとの従来の知見に合致するものである。
【００６４】
実施例６  社会的敗北ストレスモデルにおける抗ＩＬ−６受容体抗体の腸内細菌叢に対する効果
（１）糞便サンプルの１６Ｓ  ｒＲＮＡ分析
抗体の静脈内投与の７日後（ｄａｙ１９）に、マウスから糞便サンプルを採取し、１．５ｍＬチューブに入れ、ドライアイス上で急速冷凍し、−８０℃で保存した。糞便サンプルの１６Ｓ  ｒＲＮＡ分析は、タカラバイオ株式会社に委託した。ＰｏｗｅｒＬｙｚｅｒ  Ｐｏｗｅｒｓｏｉｌ  ＤＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＭＯ  ＢＩＯ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）によりＤＮＡを抽出した。該ＤＮＡを鋳型にし、５’末端にシークエンス用のＩｌｌｕｍｉｎａアダプター配列（下線部）を付加した５１５Ｆプライマー（5'-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGGTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3'：配列番号１)及び８０６Ｒプライマー（5'-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGGGACTACHVGGGTWTCTAAT-3'：配列番号２）を用いて、細菌１６Ｓ  ｒＲＮＡのＶ４超可変領域を増幅した。その後、イルミナ株式会社のＭｉＳｅｑ  １６Ｓ  Ｍｅｔａｇｅｎｏｍｉｃ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎプロトコールに修正を加え、増幅産物を精製し、サンプルを区別するインデックスをＰＣＲにより付加し、シークエンスを行った。
シークエンスデータをまとめ、ＭＯＴＨＵＲソフトウェア環境下で、サンプルごとに振り分けた。低クオリティの配列、パイロシークエンスエラー及びキメラ配列を取り除いた後、ＣＤ−ＨＩＴ−ＯＴＵ  パイプラインを用い、配列を同一性が９７％以上のＯｐｅｒａｔｉｏｎａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ  Ｕｎｉｔ（ＯＴＵ）にクラスタリングした。各サンプルについて、４未満のリードしかないＯＴＵは、シークエンスによるアーティファクトの可能性があるので除外した。サンプル間の配列数の違いは、Ｄａｉｓｙｃｈｏｐｐｅｒを用い、サンプルあたりの最小の配列数にあわせて配列をランダムにリサンプルすることで補正した。各ＯＴＵについて、Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔ（ＲＤＰ）  Ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒを用いて、門レベルあるいは属レベルでどの細菌に該当するのかを調べた。
【００６５】
（２）結果
結果を図５Ａ〜Ｄ及び図６Ａ〜Ｅに示す。
細菌の門レベルで解析したところ、社会的敗北ストレスに感受性のマウスでは、コントロールマウスに比して、フィルミクテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）門の細菌が有意に減少し、フィルミクテス門とバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）門の細菌の比（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ／Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）が有意に減少した。マウス及びヒトの主要腸内細菌であるフィルミクテス門とバクテロイデス門の細菌の比の増加又は減少は、腸内細菌叢の異常のサインと考えられている。ＭＲ１６−１の投与により、フィルミクテス門の細菌の減少及びフィルミクテス門とバクテロイデス門の細菌の比の減少は有意に抑制され、コントロールマウスと同程度にまで改善した（図５Ａ〜Ｄ）。
細菌の属レベルで解析したところ、社会的敗北ストレスに感受性のマウスでは、コントロールマウスに比して、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属の細菌が有意に増加し、ブチリシコッカス（Ｂｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓ）属の細菌及びオシロスピラ（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ）属の細菌が有意に減少し、ステレラ（Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ）属の細菌が増加する傾向がみられたが、ＭＲ１６−１の投与により、ステレラ属の細菌の増加、オシロスピラ属の細菌の減少が有意に抑制され、スタフィロコッカス属の細菌の増加及びブチリシコッカス属の細菌の減少が抑制される傾向がみられた（図６Ａ〜Ｅ）。
これらの結果より、うつ病のモデルである社会的敗北ストレスモデルでは、門レベル及び属レベルでの腸内細菌叢の異常がみられたが、ＭＲ１６−１は、腸内細菌叢の異常を改善することで抗うつ効果を奏することが示唆された。正確な機序は明らかではないが、ＭＲ１６−１は、末梢のＩＬ−６受容体をブロックし、腸内細菌による免疫調節を介して、抗うつ効果を奏していると考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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