(57)【要約】      （修正有）【課題】高脂肪食を摂取したときの腸内細菌叢の崩壊に対し、腸内細菌叢を改善できる細菌叢改善剤を提供。【解決手段】（１）ファーミキューテス属／バクテロイデテス属比、ムシスピリルム属、ルミノコッカス属、アナエロトルンクス属及びオッシロスピラ属から選択される少なくとも一つを減少させる、及び／又は（２）アドレルクルエトジア属、パラバクテロイデス属、アロバクルム属、クロトリジウム属及びアカマンシア属から選択される少なくとも一つの属を増加させるエピガロカテキンガレートを含む高脂肪食摂取時の腸内細菌叢改善剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）ファーミキューテス属（Firmicutes）／バクテロイデテス属（Bacteroidetes）比、ムシスピリルム属（Mucispirillum）、ルミノコッカス属（Ruminococcus）、アナエロトルンクス属（Anaerotruncus）及びオッシロスピラ属（Oscillospira）からなる群から選択される少なくとも一つを減少させる、及び／又は（２）アドレルクルエトジア属（Adlercreutzia、パラバクテロイデス属（Parabacteroides）、アロバクルム属（Allobaculum）、クロトリジウム属（Clostridium）及びアカマンシア属（Akkermansia）からなる群から選択される少なくとも一つの属を増加させることを特徴とするエピガロカテキンガレート（EGCG）を含む高脂肪食摂取時の腸内細菌叢改善剤。
【請求項２】
ファーミキューテス属（Firmicutes）／バクテロイデテス属（Bacteroidetes）比を減少させる、及び／又はクロストリジウム属（Clostridium）及びアカマンシア属（Akkermansia）からなる群から選択される少なくとも一つの属を増加させることを特徴とする請求項１に記載のEGCGを含む高脂肪食摂取時の腸内細菌叢改善剤。
【請求項３】
前記EGCGの純度は、90％以上である請求項１または２に記載のEGCGを含む高脂肪食摂取時の腸内細菌叢改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高脂肪食摂取時の腸内細菌叢改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトを含む動物の腸内で複数種類の腸内細菌が一定のバランスを保ちながら共存しているときの腸内細菌の集合を腸内細菌叢（腸内フローラ）という。腸内細菌叢は個体毎に異なっており、またその個体の健康状態や飲食物によっても変化し得る。腸内細菌叢を改善することで、その個体の健康状態を良好とするための研究開発が行われている（特許文献１，２など）。
一方、日本人の食生活の変化に伴い、脂肪含量の高い高脂肪食が好まれるようになってきている。高脂肪食の摂取に伴う腸内細菌叢の崩壊（dysbiosis）は、肥満だけでなく糖尿病やがんなど、多くの疾病発症に深く関与している。このため、高脂肪食摂取時の腸内細菌叢改善剤が求められることになるが、そのような開発は行われていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１４−７００５８号公報
【特許文献２】特開２０１４−７９８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、上記課題に鑑みてなされたものであり、その目的は、高脂肪食を摂取したときの腸内細菌叢の崩壊に対し、これを改善できる細菌叢改善剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
エピガロカテキンガレート（epigallocatechin gallate：EGCG）には、様々な作用が知られており、例えば脂肪肝抑制作用に関しては、脂質代謝の改善に基づく作用機序が報告されている。しかし、高脂肪食を摂取したときの腸内細菌槽の変化に対するEGCGの影響を調べた報告は見あたらなかった。本発明者は、高脂肪食の摂取による腸内細菌叢の崩壊に対し、EGCGが驚くべき効果を示すことを見出し、基本的には本発明を完成するに至った。
こうして本発明に係るEGCGを含む高脂肪食摂取時の腸内細菌叢改善剤は、ファーミキューテス属（Firmicutes）／バクテロイデテス属（Bacteroidetes）比、ムシスピリルム属（Mucispirillum）、ルミノコッカス属（Ruminococcus）、アナエロトルンクス属（Anaerotruncus）及びオッシロスピラ属（Oscillospira）からなる群から選択される少なくとも一つを減少させる、又はアドレルクルエトジア属（Adlercreutzia）、パラバクテロイデス属（Parabacteroides）、アロバクルム属（Allobaculum）、クロストリジウム属（Clostridium）及びアカマンシア属（Akkermansia）からなる群から選択される少なくとも一つの属を増加させることを特徴とする。
上記発明において、ファーミキューテス属（Firmicutes）／バクテロイデテス属（Bacteroidetes）比を減少させる、又はクロストリジウム属（Clostridium）及びアカマンシア属（Akkermansia）からなる群から選択される少なくとも一つの属を増加させることが好ましい。
【０００６】
EGCGとは、緑茶ポリフェノールの主要成分であるフェノール性の抗酸化物質である。本発明において、EGCGの由来は問われないが、茶を含む各種の植物から抽出・精製することもできるし、合成したものを用いることもできる。EGCGの純度は問われないが、好ましくは70％以上、更に好ましくは90％以上のものを用いる。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、高脂肪食を摂取したときの腸内細菌叢の崩壊に対し、細菌叢を改善できる細菌叢改善剤を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】便中の細菌叢を主成分分析で調べたときの結果を示すグラフである。縦軸は第１主成分（PC1）を、横軸は第２主成分（PC2)を意味する。
【図２】各群における細菌（属）の種類をパーセンテージで示した棒グラフである。各棒において、上から順に主として、Verrucomicrobia, Proteobacteria, Firmicutes, Dererribacteres, Bacteroidetes, Actinobacteriaを意味する。
【図３】腸内細菌叢を調べたときの各細菌（属）、菌比を３群で比較した結果を示す棒グラフである。(c)Firmicutes／Bacteroidetes比、(d)Adlercreutzia、(e)Parabacteroides、(f)Mucispirillum、(g)Ruminococcusの結果を示す。
【図４】腸内細菌叢を調べたときの各細菌（属）を３群で比較した結果を示す棒グラフである。(h)Anaerotruncus、(i)Oscillospira、(j)Allobaculum、(k)Clostridium、(l)Akkermansiaの結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
次に、本発明の実施形態について、図表を参照しつつ説明するが、本発明の技術的範囲は、これらの実施形態によって限定されるものではなく、発明の要旨を変更することなく様々な形態で実施できる。
＜試験方法＞
１．EGCGの製造
EGCGは、公知の方法（例えば、特開２００１−９７９６８に記載の方法）を参考にして抽出・精製した。EGCGの濃度（乾物換算値）は、94％(w/w)であった。
２．EGCGの効果確認試験
6週齢C57BL/6雄性マウス30匹を普通食群（CE-2：Control）、高脂肪食群（HFD32：HFD）、カテキン添加高脂肪食群（HDF32+0.32%EGCG：HFD-EGCG）の3群に分け8週間飼育した（各群について、n=10）。EGCGとして、茶抽出物を用いた。EGCGの純度は90％であった。
【００１０】
試験終了後、糞便・尿を採取し、イソフルラン吸入麻酔下において、開腹後、下大静脈から採血した。各臓器（盲腸・大腸・肝臓・精巣周囲細胞を含む）を採取し、各臓器の重量を測定した。大腸については粘膜を剥離し、盲腸については内容物を採取した。また、肝臓については、組織染色前処理及びRNA測定前処理を行った。
その後、便中の腸内細菌叢をtRFLP（制限酵素断片長多型）または15s-rDNAメタゲノム解析、血中の胆汁酸プロファイル、盲腸内容物中の短鎖脂肪酸、便メタボローム解析（CE-TOFMS）、尿中及び血中EGCG代謝産物、肝臓組織標本のHE染色による脂肪蓄積の評価、一般生化学的検査（TC,TG,NESA,AST,ALT,γ-GTP,HDL-C,LDL-C,BS,HbAlc,TP）を行った。なお、血清中胆汁酸は、LC-MS/MSにて測定した。
【００１１】
＜試験結果＞
結果を表１，図１〜図４に示した。
【００１２】
【表１】
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【００１３】
HFD群ではControl群と比較して、Adlercreutzia属が有意に減少し、4属（Mucispirillum、Ruminococcus、Anaerotruncus、Oscillospira）が有意に増加した。このように、HFDの摂取によって、腸内細菌槽が大きく変動し、腸内細菌叢が崩壊したことが分かった。
一方、HFD-EGCG群ではHFD群と比較して、肝臓における脂肪蓄積の抑制や中性脂肪の低下が観察された（データは示さず）。EGCGの腸内細菌叢への影響に関しては、HFD群において上昇したFirmicutes / Bacteroidetes比はHFD-EGCG群において有意に低下した。またHFD-EGCG群ではHFD群と比較して、Adlercreutzia属の上昇をはじめとして、9属（Parabacteroides、Allobaculum、Clostridium、Akkermansiaでは有意に増加し、Mucispirillum、Ruminococcus、Anaerotruncus、Oscillospiraでは有意に減少した）の存在比が有意性を持って変動した。さらにEGCG摂取に伴い、肥満抑制に寄与すると考えられているAkkermansia属の存在比が上昇することを見出した。
【００１４】
血中胆汁酸組成への影響に関しては、HFD-EGCG群ではHFD群と比較して、ミセル化形成能の低い遊離胆汁酸が増加した。
この結果、EGCGの摂取によって、HFD群で発生した腸内細菌叢の崩壊が、改善されることが分かった。
このように本実施形態によれば、高脂肪食を摂取したときの腸内細菌叢の崩壊に対し、細菌叢を改善できる細菌叢改善剤を提供できた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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