(57)【要約】【課題】  本発明の課題は、粉体物性の優れたＬ-カルノシンの結晶及びその製造方法を提供することにある。【解決手段】  本発明によれば、Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液を冷却することにより、又はＬ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液中に塩基が溶解した水溶液を滴下又は添加することにより、該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させ、続いて該水溶液中からＬ−カルノシンの結晶を採取することにより、粉体物性の優れたＬ−カルノシンの結晶を提供することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
結晶の平均幅Ｗが５．０μｍ以上である、Ｌ−カルノシンの結晶。
【請求項２】
結晶の平均長Ｌと平均幅Ｗの比Ｌ/Ｗが、１１．０以下である、請求項１に記載の結晶。
【請求項３】
粗比容が５．４０ｍＬ/ｇ以下である、請求項１又は２に記載の結晶。
【請求項４】
密比容が２．７０ｍＬ/ｇ以下である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の結晶。
【請求項５】
安息角が５８．０度以下である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の結晶。
【請求項６】
Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液を冷却することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程、及び該水溶液中からＬ−カルノシンの結晶を採取する工程を含む、Ｌ−カルノシンの結晶の製造方法。
【請求項７】
中性塩が、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸カリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、及び酢酸ナトリウムからなる群より選ばれる中性塩である、請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液中に、塩基が溶解した水溶液を滴下又は添加することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程、及び該水溶液中からＬ−カルノシンの結晶を採取する工程を含む、Ｌ−カルノシンの結晶の製造方法。
【請求項９】
酸が、塩酸、硫酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、及びリン酸からなる群より選ばれる酸である、請求項８に記載の製造方法。
【請求項１０】
塩基が、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、及びアンモニアからなる群より選ばれる塩基である、請求項８又は９に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、粉体物性の優れたＬ−カルノシンの結晶及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｌ−カルノシンは、β−アラニンとＬ−ヒスチジンからなるジペプチドであり、点眼薬や腎不全改善薬の有効成分として用いられている。
特許文献１では、Ｌ−カルノシンの結晶の製造方法が開示されているが、特許文献１の方法で製造されるＬ−カルノシンの結晶は、長軸（縦軸）方向以外への成長速度が遅いため、製造される結晶は、針状又は細長い柱状である。そのため、「結晶の長さ」と「結晶の幅」の比が大きいことから（図１）、比容積が大きく、流動性が悪いという問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１０−２８５３７７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、粉体物性の優れたＬ−カルノシンの結晶及びその製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、以下の（１）〜（１０）に関する。
（１）結晶の平均幅Ｗが５．０μｍ以上である、Ｌ−カルノシンの結晶。
（２）結晶の平均長Ｌと平均幅Ｗの比Ｌ/Ｗが、１１．０以下である、上記（１）に記載の結晶。
（３）粗比容が５．４０ｍＬ/ｇ以下である、上記（１）又は（２）に記載の結晶。
（４）密比容が２．７０ｍＬ/ｇ以下である、上記（１）〜（３）のいずれか１に記載の結晶。
（５）安息角が５８．０度以下である、上記（１）〜（４）のいずれか１に記載の結晶。
（６）Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液を冷却することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程、及び該水溶液中からＬ−カルノシンの結晶を採取する工程を含む、Ｌ−カルノシンの結晶の製造方法。
（７）中性塩が、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸カリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、及び酢酸ナトリウムからなる群より選ばれる中性塩である、上記（６）に記載の製造方法。
（８）Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液中に、塩基が溶解した水溶液を滴下又は添加することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程、及び該水溶液中からＬ−カルノシンの結晶を採取する工程を含む、Ｌ−カルノシンの結晶の製造方法。
（９）酸が、塩酸、硫酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、及びリン酸からなる群より選ばれる酸である、上記（８）に記載の製造方法。
（１０）塩基が、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、及びアンモニアからなる群より選ばれる塩基である、上記（８）又は（９）に記載の製造方法。
【発明の効果】
【０００６】
本発明により、粉体物性の優れたＬ−カルノシンの結晶及びその製造方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、Ｌ−カルノシンの結晶の模式図を表わす。図の上部（図中の矢印「光学顕微鏡視野」）から光学顕微鏡を用いてＬ−カルノシンの結晶を観察したときの、「結晶の長さ」及び「結晶の幅」の位置関係を表わす。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
１．本発明のＬ−カルノシンの結晶
本明細書においては、光学顕微鏡を用いて結晶を２次元で把握したときに、結晶の長い軸を縦軸といい、縦軸に垂直な軸を横軸という。さらに、結晶の縦軸方向の長さ、横軸方向の長さを、それぞれ、「結晶の長さ」および「結晶の幅」といい、それぞれの平均を、「平均長」、「平均幅」という。また、平均長、平均幅は、それぞれ、「Ｌ」および「Ｗ」ともいう。
【０００９】
結晶の長さ及び結晶の幅は、例えば、各サンプルについて、光学顕微鏡ＤＩＧＩＴＡＬ  ＭＩＣＲＯＳＣＯＰＥ  ＶＨＸ−９００（ＫＥＹＥＮＣＥ社製）を用い、３００倍の測定倍率で測定することができる。例えば、結晶１００個について結晶の長さと結晶の幅を測定し、平均長Ｌ、平均幅Ｗ、及び平均長Ｌと平均幅Ｗの比Ｌ／Ｗを算出する。
結晶がＬ−カルノシンの結晶であることは、例えば、粉末Ｘ線回折による分析によって確認することができる。
【００１０】
粉末Ｘ線回折による分析は、例えば、粉末Ｘ線回折装置（ＸＲＤ）ＵｌｔｉｍａＩＶ（リガク社製）を使用し、Ｘ線源としてＣｕＫαを用い、付属の使用説明書に従って行うことができる。
本発明のＬ−カルノシンの結晶は、結晶の平均幅Ｗが５．０μｍ以上、好ましくは６．０μｍ以上、より好ましくは７．０μｍ以上、最も好ましくは８．０μｍ以上である。
【００１１】
本発明のＬ-カルノシンの結晶は、平均長Ｌと平均幅Ｗの比Ｌ／Ｗが、１１．０以下、好ましくは１０．０以下、より好ましくは９．０以下、最も好ましくは８．０以下である。
Ｌ／Ｗが大きい結晶は、針状や細長い柱状の結晶であり、比容積が大きく、粉体の流動性が悪い。そのため、Ｌ−カルノシンの結晶としてはＬ／Ｗが小さいことが望ましいが、Ｌ／Ｗの下限値としては、１．０以上、好ましくは１．１以上、より好ましくは１．２以上、最も好ましくは１．５以上を挙げることができる。
【００１２】
本発明のＬ−カルノシンの結晶としては、結晶の平均幅Ｗが５．０μｍ以上で、かつ結晶のＬ／Ｗが１１．０以下のＬ−カルノシンの結晶を挙げることができる。
本発明のＬ−カルノシンの結晶は、粗比容が、５．４０ｍＬ/g以下、好ましくは、５．００ｍＬ/ｇ以下、より好ましくは４．５０ｍＬ/ｇ以下、最も好ましくは４．００ｍＬ/ｇ以下である。
【００１３】
粗比容が小さい結晶は、充填性に優れ、各種加工工程におけるハンドリングが容易であり、また輸送面でのコストも低い。そのため、Ｌ−カルノシンの結晶としては、粗比容が小さいことが望ましいが、粗比容の下限値としては、１．００ｍＬ/ｇ以上、好ましくは１．２０ｍＬ/ｇ以上を挙げることができる。
ここで、粗比容とは、容器に粉体を充填してその質量を測定した際、粉体の占める容積を該質量で割った値をいう。
【００１４】
粗比容は、例えば、マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業社製）を用い、付属のマニュアルに従って以下の測定条件で測定することができる。
［粗比容の測定条件］
ふるい：１．１８ｍｍ
ふるい振動幅：０．７〜０．８ｍｍ
結晶容量：１８ｍＬ
本発明のＬ−カルノシンの結晶としては、結晶の平均幅Ｗが５．０μｍ以上で、かつ粗比容が５．４０ｍＬ／ｇ以下のＬ−カルノシンの結晶を挙げることができる。
【００１５】
本発明のＬ−カルノシンの結晶は、密比容が、２．７０ｍＬ/ｇ以下、好ましくは２．６０ｍＬ/ｇ以下、より好ましくは２．５０ｍＬ/ｇ以下、最も好ましくは２．４０ｍＬ/ｇ以下である。
密比容が小さい結晶は、充填性に優れ、輸送面でのコストも低い。そのため、Ｌ−カルノシンの結晶としては、密比容が小さいことが望ましいが、密比容の下限値としては、０．８０ｍＬ/ｇ以上、好ましくは１．００ｍＬ/ｇ以上を挙げることができる。
【００１６】
ここで、密比容とは、容器に粉体を充填してその質量を測定したのちに容器に一定の衝撃を加えた際、粉体の占める容積を該質量で割った値をいう。
密比容は、例えば、マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業社製）を用い、付属のマニュアルに従って以下の測定条件で測定することができる。
［密比容の測定条件］
ふるい：１．１８ｍｍ
ふるい振動幅：０．７〜０．８ｍｍ
タッピング速度：１回／秒
タッピング回数：２００回
スペーサ：３０ｍｍ
本発明のＬ−カルノシンの結晶としては、結晶の平均幅Ｗが５．０μｍ以上で、かつ密比容が２．７０ｍＬ／ｇ以下のＬ−カルノシンの結晶を挙げることができる。
【００１７】
本発明のＬ-カルノシンの結晶は、粗比容と密比容の差が、２．５０ｍＬ/ｇ以下、好ましくは２．００ｍＬ/ｇ以下のＬ−カルノシンの結晶である。
粗比容と密比容の差の下限値としては、０．１０ｍＬ/ｇ以上、好ましくは０．２０ｍＬ/ｇ以上を挙げることができる。
ここで、粗比容と密比容の差とは、粗比容から密比容を引いた際の正の値のことをいう。
【００１８】
本発明のＬ−カルノシンの結晶としては、結晶の平均幅Ｗが５．０μｍ以上で、かつ粗比容と密比容の差が２．５０ｍＬ／ｇ以下のＬ−カルノシンの結晶を挙げることができる。
本発明のＬ-カルノシンの結晶は、安息角が、５８．０度以下、好ましくは５７．０度以下、より好ましくは５６．０度以下、最も好ましくは５５．０度以下のＬ−カルノシンの結晶である。
【００１９】
安息角が大きい結晶は、ホッパーから排出する際、ホッパー底部の傾斜角が安息角の角度よりも大きくなければホッパー底部から完全に排出することができないので、装置が限定され、ハンドリングが煩雑となる。また、安息角が大きい結晶は、流動性が悪い。そのため、Ｌ−カルノシンの結晶としては、安息角が小さいことが望ましいが、安息角の下限としては、３０．０度以上、好ましくは３５．０度以上を挙げることができる。
【００２０】
ここで、安息角とは、粉体を漏斗のようなもので水平な面に静かに落下させた時に粉体で形成される円錐体の母線と水平面のなす角のことをいう。
安息角は、例えば、マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業株式会社社製）を用い、付属のマニュアルに従って以下の測定条件で測定することができる。
［安息角の測定条件］
安息角テーブルユニット（部品番号：ＭＴ−１０２８）に固定した直径４ｃｍのステージ上に結晶を山積させる。安息角テーブルに振動を与えないように回転して、３ヶ所で角度を読み、それらの相加平均値を安息角とする。
ふるい：１．１８ｍｍ
ふるい振動幅：０．７〜０．８ｍｍ
本発明のＬ−カルノシンの結晶としては、結晶の平均幅Ｗが５．０μｍ以上で、かつ安息角が５８．０度以下のＬ−カルノシンの結晶を挙げることができる。
２．本発明の製造方法
２−１．本発明の製造方法１
本発明の製造方法は、Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液を冷却することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程、及び該水溶液中からＬ−カルノシンの結晶を採取する工程を含む、Ｌ−カルノシンの結晶の製造方法である。
【００２１】
Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液に含まれるＬ-カルノシンは、発酵法、酵素法、天然物からの抽出法、化学合成法等のいずれの製造方法によって製造されたものであってもよい。例えば、Ｌ−カルノシンを生産する能力を有する微生物を培養して得られるＬ−カルノシンを含有する培養物（特開２０１３−８１４０５号公報）、又は化学合成法で得られるＬ−カルノシンを含有する水溶液（特開２００５−３０６７８２号公報）から不溶物を除去する等して得られるＬ−カルノシンを挙げることができる。
【００２２】
Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液に、結晶化の障害となる固形物が含まれている場合には、遠心分離、濾過又はセラミックフィルタ等を用いて固形物を除去することができる。
また、Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液に、結晶化の障害となる水溶性の不純物や塩が含まれている場合には、イオン交換樹脂等を充填したカラムに通塔する等により、水溶性の不純物や塩を除去することができる。
【００２３】
また、Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液に、結晶化の障害となる疎水性の不純物が含まれる場合には、合成吸着樹脂や活性炭等を充填したカラムに通塔する等により、疎水性の不純物を除去することができる。
Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液に含まれるＬ-カルノシンの濃度としては、例えば、２００ｇ／Ｌ以上、好ましくは２５０ｇ／Ｌ以上、より好ましくは３００ｇ／Ｌ以上を挙げることができる。
【００２４】
Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液に含まれるＬ-カルノシンの濃度の上記の濃度とするために、例えば、該水溶液を６０〜９０℃に加熱してＬ−カルノシンを溶解することができる。
Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液に含まれる中性塩は、硫酸塩、硝酸塩、塩素塩、及びリン酸塩等の無機酸の塩であってもよいし、酢酸塩及びプロピオン酸塩等の有機酸の塩であってもよい。
【００２５】
また、中性塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、及びカルシウム塩等の金属塩、又はアンモニウム塩を挙げることができ、好ましくは硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸カリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、及び酢酸ナトリウムからなる群より選ばれる中性塩を、より好ましくは硫酸ナトリウム又は硫酸アンモニウムを、最も好ましくは硫酸アンモニウムを挙げることができる。
【００２６】
Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液に含まれる中性塩の濃度としては、０．１〜５ｍｏｌ/Ｌ、好ましくは０．２〜４ｍｏｌ/Ｌ、より好ましくは０．５〜２ｍｏｌ/Ｌを挙げることができる。
Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液を冷却することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程における、冷却温度としては、０〜３５℃、好ましくは５〜３０℃、より好ましくは１０〜２５℃を挙げることができる。
【００２７】
Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液を冷却することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程における、冷却に要する時間としては、３〜１２時間、好ましくは４〜１１時間、より好ましくは５〜１０時間を挙げることができる。
２−１の製造方法においては、Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液を冷却する工程の直前に、又はＬ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液を冷却する工程においてＬ−カルノシンの結晶が析出する前に、種晶を添加してもよい。
【００２８】
種晶としては、例えば、２−１及び後述の２−２の製造方法で取得したＬ−カルノシンの結晶を用いることができる。
種晶は、該水溶液中の濃度が０．００１〜５０ｇ/Ｌ、好ましくは０．０１〜１０ｇ/Ｌ、より好ましくは０．１〜５ｇ/Ｌとなるように添加する。
種晶は、例えば、Ｌ−カルノシン及び中性塩が溶解した水溶液の冷却を開始してから０〜４時間後、好ましくは０〜３時間後に添加することができる。
【００２９】
上記の方法によりＬ−カルノシンの結晶を析出させた後、析出した結晶を１〜４８時間、好ましくは１〜２４時間、最も好ましくは１〜１２時間熟成させることができる。
結晶を熟成させるとは、Ｌ−カルノシンの結晶を析出させる工程を停止して、結晶を成長させることをいう。
結晶を成長させるとは、析出した結晶を元にして、結晶を増大させることをいう。
【００３０】
結晶の熟成は、結晶を成長させることを主な目的として行うが、結晶の成長と同時に、新たな結晶の析出が起こっていてもよい。
Ｌ−カルノシンの結晶を析出させる工程を停止するとは、例えば、冷却を中断することをいう。
結晶を熟成させた後は、Ｌ−カルノシンの結晶を析出させる工程を再開してもよい。
【００３１】
Ｌ−カルノシンの結晶を採取する工程においては、例えば、濾取、加圧濾過、吸引濾過、遠心分離等を行うことができる。さらに結晶への母液の付着を低減し、結晶の品質を向上させるために、結晶を採取した後、適宜、結晶を洗浄することができる。
結晶洗浄に用いる溶液としては、例えば、水、メタノール、エタノール、アセトン、ｎ−プロパノール、及びイソプロピルアルコールからなる群より選ばれる１種類又は複数種類を任意の割合で混合した溶液を用いることができる。
【００３２】
このようにして得られた湿晶を乾燥させることにより、本発明のＬ−カルノシンの結晶を取得することができる。
乾燥条件としては、Ｌ−カルノシンの結晶の形態を保持できるならば特に制限はなく、減圧乾燥、真空乾燥、流動層乾燥、通風乾燥等を適用することができる。
乾燥温度としては、付着水分又は溶液を除去できる範囲であればいずれでもよいが、好ましくは６０℃以下、より好ましくは５０℃以下を挙げることができる。
【００３３】
乾燥時間としては、付着水分又は溶液を除去できる範囲であればいずれでもよいが、好ましくは１〜２４時間、より好ましくは１〜１２時間を挙げることができる。
２−２．本発明の製造方法２
本発明の製造方法は、上記２−１の製造方法の他に、Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液中に、塩基が溶解した水溶液を滴下又は添加することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程、及び該水溶液中からＬ−カルノシンを採取する工程を含む、Ｌ−カルノシンの結晶の製造方法を挙げることができる。
【００３４】
Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液中に含まれるＬ-カルノシンとしては、上記２−１と同様のＬ−カルノシンを用いることができる。
Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液に結晶化の障害となる固形物が含まれている場合、結晶化の障害となる水溶性の不純物や塩が含まれている場合、結晶化の障害となる疎水性の不純物が含まれる場合には、上記２−１と同様の処理を行うことができる。
【００３５】
Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液に含まれるＬ-カルノシンの濃度としては、例えば、２００ｇ／Ｌ以上、好ましくは２５０ｇ／Ｌ以上、より好ましくは３００ｇ／Ｌ以上を挙げることができる。
Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液に含まれるＬ-カルノシンの濃度の上記の濃度とするために、例えば、該水溶液を６０〜９０℃に加熱してＬ−カルノシンを溶解することができる。
【００３６】
Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液に含まれる酸としては、例えば、塩酸、硫酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、及びリン酸からなる群より選ばれる酸を、好ましくは硫酸又は塩酸を、より好ましくは硫酸を挙げることができる。
Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液のｐＨとしては、ｐＨ２．０〜５．０、好ましくはｐＨ３．０〜５．０を挙げることができる。
【００３７】
Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液中に、塩基が溶解した水溶液を滴下又は添加することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程における、滴下又は添加する塩基が溶解した水溶液に含まれる塩基としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、及びアンモニアからなる群より選ばれる塩基を、好ましくは水酸化ナトリウム又はアンモニアを、より好ましくはアンモニアを挙げることができる。
【００３８】
滴下又は添加する塩基が溶解した水溶液の規定度としては、０．１〜７Ｎ、好ましくは０．２〜６Ｎ、より好ましくは０．５〜５Ｎを挙げることができる。
滴下又は添加する塩基が溶解した水溶液の量としては、Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液の０．１〜７倍等量、好ましくは０．２〜６倍等量、より好ましくは０．３〜５倍等量を挙げることができる。
【００３９】
Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液中に、塩基が溶解した水溶液を滴下又は添加することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程における、該水溶液の温度としては、２０〜７０℃、好ましくは３０〜６０℃を挙げることができる。
Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液中に、塩基が溶解した水溶液を滴下又は添加することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程における、塩基が溶解した水溶液の滴下又は添加に要する時間としては、１〜１２時間、好ましくは２〜１１時間、より好ましくは３〜１０時間を挙げることができる。
【００４０】
２−２の製造方法においては、Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液中に塩基が溶解した水溶液を滴下又は添加することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程の直前に、又はＬ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液中に塩基が溶解した水溶液を滴下又は添加することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させる工程においてＬ−カルノシンの結晶が析出する前に、種晶を添加してもよい。
【００４１】
種晶としては、例えば、上記２−１及び２−２の製造方法で取得したＬ−カルノシンの結晶を用いることができる。
種晶は、該水溶液中の濃度が０．００１〜５０ｇ/Ｌ、好ましくは０．０１〜１０ｇ/Ｌ、より好ましくは０．１〜５ｇ/Ｌとなるように添加する。
Ｌ−カルノシン及び酸が溶解した水溶液中に塩基が溶解した水溶液を滴下又は添加することにより該水溶液中にＬ−カルノシンの結晶を析出させた後、アルコール溶液又はケトン溶液を添加又は滴下することにより、又は該水溶液を冷却することにより、Ｌ−カルノシンの結晶の析出及び成長を促進することができる。
【００４２】
添加又は滴下するアルコール溶液としては、好ましくはＣ１〜Ｃ６のアルコールを、より好ましくは、Ｃ１〜Ｃ３のアルコールを、さらに好ましくは、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール及びイソプロピルアルコールからなる群より選ばれるアルコールを、よりさらに好ましくは、メタノール又はエタノールを、最も好ましくはメタノールを挙げることができる。
【００４３】
添加又は滴下するケトン溶液としては、アセトン、メチルエチルケトン、及びジエチルケトンからなる群より選ばれるケトンを、好ましくはアセトンを挙げることができる。
アルコール溶液及びケトン溶液は、複数種のアルコール及びケトンの混合物、又はアルコール及びケトンと他の有機溶媒もしくは水との混合物であってもよい。
アルコール溶液がアルコールと水の混合物である場合、又はケトン溶液がケトンと水の混合物である場合、含水量としては、４０重量％以下、好ましくは２０重量％以下、さらに好ましくは１０重量％以下、最も好ましくは５重量％以下を挙げることができる。
【００４４】
アルコール溶液又はケトン溶液を添加又は滴下するときの温度としては、２５〜９０℃、好ましくは４０〜８０℃、より好ましくは５０〜７０℃を挙げることができる。
添加又は滴下するアルコール溶液又はケトン溶液の量としては、塩基が溶解した水溶液を滴下又は添加した後の水溶液の、０．１〜３倍量、好ましくは０．２〜２倍量を挙げることができる。
【００４５】
該水溶液を冷却する場合の冷却温度としては、０〜３５℃、好ましくは５〜３０℃、より好ましくは１０〜２５℃を挙げることができる。
アルコール溶液又はケトン溶液を添加又は滴下する方法と、該水溶液を冷却する方法は、適宜組み合わせて行うこともできる。
上記の方法によりＬ−カルノシンの結晶を析出及び成長させた後、該結晶を１〜４８時間、好ましくは１〜２４時間、最も好ましくは１〜１２時間熟成させることができる。
【００４６】
結晶の熟成については、上記２−１と同様である。
析出させた結晶を採取する方法については、上記２−１と同様である。
以下に実施例を示すが、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
［比較例］
特許文献１の実施例１に従い、粗Ｌ−カルノシン９１ｇを２９８ｍＬの脱イオン水に溶解させ、６０℃に昇温した。その後、該水溶液の温度を５０〜６５℃に保って１７０ｈＰａの条件下で減圧濃縮することにより１３０ｍＬの水分を蒸発させたところ、該水溶液中に結晶が析出した。その後、該結晶スラリーを６０℃に保ったまま１時間撹拌し、結晶を熟成させた。
【００４７】
続いて、該結晶スラリーを６０℃に保ったまま、撹拌しながら７０ｍＬのメタノールを３０分かけて該結晶スラリー中に滴下し、その後さらに１時間撹拌し、結晶を熟成させた。
続いて、該結晶スラリーを１００分かけて２０℃まで冷却し、さらに１時間撹拌して結晶を熟成させた。
【００４８】
その後、該結晶スラリーを遠心分離することで結晶を濾別し、３０℃で３時間減圧乾燥を行い、Ｌ−カルノシンの結晶を得た。
［実施例１］
Ｌ−カルノシンの結晶の製造−１
脱イオン水に硫酸ナトリウム（和光純薬工業社製）７９．５ｇを加えて溶解させ、２ｍｏｌ/Ｌの硫酸ナトリウム水溶液２８０ｍＬを調製した。続いて、該硫酸ナトリウム水溶液に粗Ｌ−カルノシン１００ｇを加えて７０℃に昇温し、粗Ｌ−カルノシンを溶解させた。
【００４９】
該水溶液に２ｍｏｌ/Ｌの硫酸ナトリウム水溶液をさらに２０ｍＬ添加した後、撹拌しながら８時間かけて該水溶液を２５℃まで冷却したところ、結晶が析出した。
その後、該結晶スラリーを遠心分離することで結晶を濾別し、３０℃で３時間減圧乾燥を行い、８２．２ｇの結晶を得た。
粉末Ｘ線回折の結果より、得られた結晶はＬ−カルノシンの結晶であることがわかった。
［実施例２］
Ｌ−カルノシンの結晶の製造−２
脱イオン水に硫酸アンモニウム（和光純薬工業社製）７４．０ｇを加えて溶解させ、２ｍｏｌ/Ｌの硫酸アンモニウム水溶液２８０ｍＬを調製した。続いて、該硫酸アンモニウム水溶液に粗Ｌ−カルノシン１００ｇを加えて７０℃に昇温し、粗Ｌ−カルノシンを溶解させた。
【００５０】
続いて、撹拌しながら該水溶液を５時間かけて２５℃まで冷却する工程の途中で粗Ｌ−カルノシン０．０５ｇを種晶として該水溶液中に添加したところ、結晶が析出した。
その後、該結晶スラリーを遠心分離することで結晶を濾別し、３０℃で３時間減圧乾燥を行い、４６．６ｇの結晶を得た。
粉末Ｘ線回折の結果より、得られた結晶はＬ−カルノシンの結晶であることがわかった。
［実施例３］
Ｌ−カルノシンの結晶の製造−３
５０ｍＬの１ｍｏｌ/Ｌ硫酸アンモニウム水溶液に粗Ｌ−カルノシン１８ｇを加えて７０℃に昇温し、粗Ｌ−カルノシンを溶解させた。
【００５１】
その後、撹拌しながら１０時間かけて該水溶液を２５℃まで冷却したところ、結晶が析出した。
該結晶スラリーを遠心分離することで結晶を濾別し、１０℃に冷却した４０ｍＬの２０％メタノールで結晶を洗浄した。得られた湿晶について２５℃で３時間、続いて４０℃で３時間減圧乾燥を行った。
【００５２】
粉末Ｘ線回折の結果より、得られた結晶はＬ−カルノシンの結晶であることがわかった。
［実施例４］
Ｌ−カルノシンの結晶の製造−４
５０ｍＬの２ｍｏｌ/Ｌ硫酸アンモニウム水溶液に粗Ｌ−カルノシン１８ｇを加えて７７℃に昇温し、粗Ｌ−カルノシンを溶解させた。
【００５３】
その後、撹拌しながら１０時間かけて該水溶液を２５℃まで冷却したところ、結晶が析出した。
該結晶スラリーを遠心分離することで結晶を濾別し、１０℃に冷却した４０ｍＬの２０％メタノールで結晶を洗浄した。得られた湿晶について２５℃で３時間、続いて４０℃で３時間減圧乾燥を行った。
【００５４】
粉末Ｘ線回折の結果より、得られた結晶はＬ−カルノシンの結晶であることがわかった。
［実施例５］
Ｌ−カルノシンの結晶の製造−５
粗Ｌ−カルノシン４５．２ｇに３０ｍＬの脱イオン水を加えて混合した後、５．８ｍＬの硫酸（和光純薬工業社製）を滴下し、脱イオン水で６０ｍＬに調整した。このとき、粗Ｌ−カルノシンはすべて溶解し、該水溶液のｐＨは４．６であった。
【００５５】
続いて、該水溶液を６０℃に保ったまま、撹拌しながら２０ｍＬの５ｍｏｌ/Ｌのアンモニア水を３時間かけて滴下したところ、結晶が析出した。さらに該結晶スラリーを６０℃に保ったまま、２０ｍＬのメタノールを１００分かけて滴下し、その後２５℃まで冷却した。
その後、該結晶スラリーを遠心分離することで結晶を濾別し、３０℃で６時間減圧乾燥を行った。
【００５６】
粉末Ｘ線回折の結果より、得られた結晶はＬ−カルノシンの結晶であることがわかった。
［実施例６］
粉体物性の測定−１
比較例及び実施例１〜３で取得したＬ−カルノシンの結晶について、安息角を測定した結果を表１に示す。
【００５７】
【表１】
2018203690.tif 000002
【００５８】
その結果、実施例１〜３で取得した本発明のＬ−カルノシンの結晶は、比較例で取得したＬ-カルノシンの結晶と比べて安息角が小さかった。
［実施例７］
粉体物性の測定−２
比較例及び実施例１〜５で取得したＬ-カルノシンの結晶について、粗比容と密比容を測定した結果を表２に示す。
【００５９】
【表２】
2018203690.tif 000003
【００６０】
その結果、実施例１〜５で取得した本発明のＬ−カルノシンの結晶は、比較例で取得したＬ-カルノシンの結晶と比べて、粗比容、密比容、及び粗比容と密比容の差（表２中の「比容積差」）のいずれも小さかった。
［実施例８］
粉体物性の測定−３
比較例及び実施例１〜５で取得したＬ-カルノシンの結晶について、結晶の平均長Ｌ、平均幅Ｗ、及び平均長Ｌと平均幅Ｗの比Ｌ/Ｗを測定した結果を表３に示す。
【００６１】
【表３】
2018203690.tif 000004
【００６２】
その結果、実施例１〜５で取得した本発明のＬ−カルノシンの結晶は、比較例で取得したＬ−カルノシンの結晶と比べてＷが大きく、Ｌ／Ｗが小さかった。
以上より、本発明のＬ−カルノシンの結晶は、従来のＬ−カルノシンの結晶と比較して流動性が良く、粉体物性に優れていることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明により、粉体物性の優れたＬ−カルノシンの結晶及びその製造方法が提供される。
【図１】
2018203690.tif 000005