(57)【要約】      （修正有）【課題】親ポリペプチドと比較して、低減又は排除されたエフェクター機能、並びに増加した安定性及び血漿半減期を示す、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドの提供。【解決手段】特定のアミノ酸配列に変異を有する、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、低減したＦｃ媒介エフェクター機能を有する、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む単離されたポリペプチド、ポリペプチドと治療部分とを含むコンジュゲート、及びポリペプチドを含む医薬組成物。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む単離されたポリペプチドであって、前記変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、
（ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；
（ｂ）２３５位にアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）アミノ酸；及び
（ｃ）３２２位にアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）アミノ酸；又は３３１位にアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）アミノ酸
を有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、単離されたポリペプチド。
【請求項２】
２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；及び３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸を有し、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；及び３３１位にグリシン（Ｇ）アミノ酸を有し、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】
２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；２３５位にアラニン（Ａ）アミノ酸；及び３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸を有し、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸
をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項６】
（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；及び／又は
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸
をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸
をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
（ａ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び
（ｂ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸
をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；並びに
（ｂ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸
をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、及び２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；又は、
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸及び２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸；又は、
（ｃ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸及び２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸、及び２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸をさらに有し、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
（ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；
（ｂ）２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；
（ｃ）３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；
（ｄ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；
（ｅ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び、
（ｆ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸
を有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
（ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；
（ｂ）２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；
（ｃ）３３１位にグリシン（Ｇ）アミノ酸；
（ｄ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；
（ｅ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び、
（ｆ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸
を有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
（ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；
（ｂ）２３５位にアラニン（Ａ）アミノ酸；
（ｃ）３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；
（ｄ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；
（ｅ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び、
（ｆ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸
を有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、向上した薬物動態（ＰＫ）特性を有する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
前記ＰＫ特性が、半減期である、請求項１５に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、向上したＦｃＲｎ結合を有する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１８】
前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、非ヒト由来である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１９】
前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、ヒト由来である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
前記非ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインが、げっ歯類、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ又はニワトリに由来する、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２１】
前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、ヒト免疫グロブリンＧクラス１（ＩｇＧ１）Ｆｃドメイン、ヒト免疫グロブリンＧクラス２（ＩｇＧ２）Ｆｃドメイン、ヒト免疫グロブリンＧクラス３（ＩｇＧ３）Ｆｃドメイン、及びヒト免疫グロブリンＧクラス４（ＩｇＧ４）Ｆｃドメインからなる群から選択される、請求項１９に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
前記ポリペプチドが、さらに抗原結合ドメインを含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
前記抗原結合ドメインが、モノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントに由来する、請求項２２に記載のポリペプチド。
【請求項２４】
前記抗原結合ドメインが、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体に由来する、請求項２２に記載のポリペプチド。
【請求項２５】
前記抗原結合ドメインが、以下：
（ａ）一本鎖抗体；
（ｂ）ダイアボディ；
（ｃ）抗体のポリペプチド鎖；
（ｄ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；又は、
（ｅ）Ｆ（ａｂ）フラグメント
を含む、請求項２２に記載のポリペプチド。
【請求項２６】
前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、低減したＦｃ媒介エフェクター機能を有する、請求項１〜２１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項２７】
前記エフェクター機能が、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）である、請求項２６に記載のポリペプチド。
【請求項２８】
前記エフェクター機能が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）である、請求項２６に記載のポリペプチド。
【請求項２９】
前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対し低い親和性を有する、請求項１〜２８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項３０】
前記ＦｃγＲが、ヒトＦｃγＲである、請求項２９に記載のポリペプチド。
【請求項３１】
前記ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩからなる群から選択される、請求項２９に記載のポリペプチド。
【請求項３２】
前記ＦｃγＲＩが、ＦｃγＲＩαである、請求項３１に記載のポリペプチド。
【請求項３３】
前記ＦｃγＲＩＩが、ＦｃγＲＩＩａ又はＦｃγＲＩＩｂである、請求項３１に記載のポリペプチド。
【請求項３４】
前記ＦｃγＲＩＩＩが、ＦｃγＲＩＩＩ（１５８Ｖ）又はＦｃγＲＩＩＩ（１５８Ｆ）である、請求項３１に記載のポリペプチド。
【請求項３５】
前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、向上した親和性でＦｃＲｎと結合する、請求項１〜３４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項３６】
前記ポリペプチドが、ｐＨ７．４におけるよりもｐＨ６．０において、ＦｃＲｎに対する高い親和性を有する、請求項３５に記載のポリペプチド。
【請求項３７】
前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、低減した親和性でＣ１ｑと結合する、請求項１〜３６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項３８】
前記ポリペプチドが、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、熱安定性の増加を呈示する、請求項１〜３７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項３９】
前記熱安定性が、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定される、請求項３８に記載のポリペプチド。
【請求項４０】
前記熱安定性の増加が、少なくとも４℃である、請求項３９に記載のポリペプチド。
【請求項４１】
前記熱安定性が、示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）により測定される、請求項３８に記載のポリペプチド。
【請求項４２】
前記ＤＳＦ蛍光プローブが、Ｓｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅである、請求項４１に記載のポリペプチド。
【請求項４３】
前記熱安定性の増加が、少なくとも５℃である、請求項４２に記載のポリペプチド。
【請求項４４】
前記ポリペプチドが、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿アッセイを用いて測定される見かけ溶解度の増加を呈示する、請求項１〜４３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項４５】
前記ポリペプチドが、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、加速安定性アッセイを用いて測定される安定性の増加を呈示する、請求項１〜４４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項４６】
前記加速安定性アッセイが、（ｉ）長期間にわたるポリペプチドのインキュベーション、及び（ｉｉ）高温でのインキュベーションを含む、請求項４５に記載のポリペプチド。
【請求項４７】
前記加速安定性アッセイが、高濃度でのインキュベーションにより実施される、請求項４６に記載のポリペプチド。
【請求項４８】
前記長期間が、少なくとも１ヵ月である、請求項４６に記載のポリペプチド。
【請求項４９】
前記高濃度が、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌである、請求項４７に記載のポリペプチド。
【請求項５０】
前記高温が、少なくとも４０℃である、請求項４６に記載のポリペプチド。
【請求項５１】
前記加速安定性アッセイが、高機能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）又は動的光散乱法（ＤＬＳ）を用いて実施される、請求項４５〜５０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項５２】
請求項１〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする配列を含む、単離された核酸。
【請求項５３】
請求項５２に記載の核酸を含む組成物。
【請求項５４】
請求項５２に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項５５】
請求項５２に記載の核酸、請求項５３に記載の組成物、又は請求項５４に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項５６】
（ａ）請求項５５に記載の細胞を培養するステップ；及び（ｂ）前記ポリペプチドを単離するステップを含む、請求項１〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチドを作製する方法。
【請求項５７】
請求項１〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチドと、担体とを含む組成物。
【請求項５８】
請求項１〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチドを含む診断薬。
【請求項５９】
前記ポリペプチドが標識されている、請求項５８に記載の診断薬。
【請求項６０】
請求項１〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチドと、治療部分とを含むコンジュゲート。
【請求項６１】
請求項１〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチド、又は請求項５２〜５５若しくは５７〜６０のいずれか１項に記載の組成物を含むキット。
【請求項６２】
哺乳動物を治療する方法であって、請求項１〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチド、又は請求項５２〜５５若しくは５７〜６０のいずれか１項に記載の組成物を有効量で、治療が必要な哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項６３】
Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドのＦｃ誘導性エフェクター機能を低減する方法であって、以下：
（ａ）Ｆｃドメインにおける２３４位の前記アミノ酸をフェニルアラニン（Ｆ）で置換するステップ；
（ｂ）Ｆｃドメインにおける２３５位の前記アミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）で置換するステップ；及び
（ｃ）Ｆｃドメインの３２２位の前記アミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）で置換するステップ；又はＦｃドメインの３３１位のアミノ酸をアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）で置換するステップ
を含み、
ここで、前記Ｆｃドメインの前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う方法。
【請求項６４】
前記親ポリペプチドの前記Ｆｃドメインが、
（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸
を有し、
ここで、前記Ｆｃドメインの前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う方法。
【請求項６５】
前記親ポリペプチドの前記Ｆｃドメインが、
（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）；及び／又は
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）；及び／又は
（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）
を有し、
ここで、前記Ｆｃドメインの前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う方法。
【請求項６６】
Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドのＦｃ誘導性エフェクター機能を低減すると共に、その半減期を増加させる方法であって、以下：
（ａ）前記Ｆｃドメインにおける２３４位の前記アミノ酸をフェニルアラニン（Ｆ）で置換するステップ；
（ｂ）前記Ｆｃドメインにおける２３５位の前記アミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）で置換するステップ；及び
（ｃ）前記Ｆｃドメインの３２２位の前記アミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）で置換するステップ；又は前記Ｆｃドメインの３３１位のアミノ酸をアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）で置換するステップ；並びに
（ｄ）２５２位の前記アミノ酸をチロシン（Ｙ）若しくはセリン（Ｓ）若しくはトリプトファン（Ｗ）若しくはトレオニン（Ｔ）で置換するステップ
を含み；
ここで、前記Ｆｃドメインの前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う方法。
【請求項６７】
２５２位の前記アミノ酸がチロシン（Ｙ）で置換され、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
（ａ）２５４位の前記アミノ酸をトレオニン（Ｔ）で置換するステップ；及び、
（ｂ）２５６位の前記アミノ酸をグルタミン酸（Ｅ）若しくはセリン（Ｓ）、若しくはアルギニン（Ｒ）、若しくはグルタミン（Ｑ）で置換するステップ
をさらに含み、
ここで、前記Ｆｃドメインの前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項６６又は６７に記載の方法。
【請求項６９】
２５６位の前記アミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）で置換され、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
２３４位の前記アミノ酸がフェニルアラニン（Ｆ）で置換され；２３５位の前記アミノ酸がグルタミン（Ｑ）で置換され；３２２位の前記アミノ酸がグルタミン（Ｑ）で置換され、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項６３〜６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７１】
２３４位の前記アミノ酸がフェニルアラニン（Ｆ）で置換され；２３５位の前記アミノ酸がグルタミン（Ｑ）で置換され；３３１位の前記アミノ酸がグリシン（Ｇ）で置換され、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項６３〜７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７２】
２３４位の前記アミノ酸がフェニルアラニン（Ｆ）で置換され；２３５位の前記アミノ酸がアラニン（Ａ）で置換され；３２２位の前記アミノ酸がグルタミン（Ｑ）で置換され、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項６３〜７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
前記エフェクター機能が、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）である、請求項６３〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７４】
前記エフェクター機能が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）である、請求項６３〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７５】
前記ポリペプチドが、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、熱安定性の増加を呈示する、請求項６３〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７６】
前記熱安定性が、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記熱安定性の増加が、少なくとも４℃である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
前記熱安定性が、ＤＳＦ蛍光プローブを用いた示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）により測定される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７９】
前記ＤＳＦ蛍光プローブが、Ｓｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅである、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記熱安定性の増加が、少なくとも５℃である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
前記ポリペプチドが、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿アッセイを用いて測定される見かけ溶解度の増加を呈示する、請求項６３〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
前記ポリペプチドが、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、加速安定性アッセイを用いて測定される安定性の増加を呈示する、請求項６３〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８３】
前記加速安定性アッセイが、（ｉ）長期間にわたるポリペプチドのインキュベーション、及び（ｉｉ）高温でのインキュベーションを含む、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記加速安定性アッセイが、高濃度でのインキュベーションにより実施される、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記長期間が、少なくとも１ヵ月である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８６】
前記高濃度が、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌである、請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
前記高温が、少なくとも４０℃である、請求項８３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、望ましい安定性を維持しながら、低減されたエフェクター機能及び延長された半減期をもたらす突然変異を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃを含む分子、特に、限定するものではないが、免疫グロブリン（例えば、抗体）などのポリペプチドに関する。本開示はまた、このようなポリペプチド、発現ベクター、宿主ベクター、宿主細胞をコードする核酸、並びに、治療及び診断組成物、製剤及びキットなど、これらを作製及び使用する方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
抗体は、可変（Ｆｖ）領域及び定常（Ｆｃ）領域と呼ばれる２つの異なる領域から構成される。抗体のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体及びＣ１ｑなどのいくつかのリガンドと相互作用して、エフェクター機能と呼ばれる一連の機能的能力を付与する。Ｆｃ受容体は、抗体と免疫系の細胞アーム（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｒｍ）との間の連絡を媒介する（Ｒａｇｈａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１２：１８１−２２０（１９９６）；Ｒａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：２７５−２９０，（２００１））。
【０００３】
Ｆｃ／ＦｃγＲ複合体の形成は、典型的に、これらの細胞内にシグナル伝達イベント、並びにこれに続く免疫応答、例えば、炎症メディエータの放出、Ｂ細胞活性化、エンドサイトーシス、食作用、及び細胞傷害性攻撃を引き起こす。ＦｃγＲｓを発現する非特異的細胞傷害性細胞が、標的細胞に結合した抗体を認識した後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）と呼ばれる（Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：７３９−７６６（２０００）；Ｒａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：２７５−２９０（２００１））。
【０００４】
ヒトＦｃγＲは、３つの異なるクラス：ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）に分けられる。ＩｇＧ分子は、ＦｃγＲに対する差異的アイソタイプ特異性を呈示する。ＩｇＧ３分子は、全てのＦｃγＲアイソフォームに強力に結合する。血液において最も一般的なアイソフォームであるＩｇＧ１は、ＦｃγＲＩＩＡ／βアイソフォームに対する親和性は低いものの、全てのＦｃγＲに結合する。ＩｇＧ４は、ＦｃγＲＩに対する中程度の結合物質であり、ＦｃγＲＩＩＢに対する弱い結合物質である。最後に、ＩｇＧ２は、ＦｃγＲＩＩＡの１つの対立遺伝子形態（ＦｃγＲＩＩＡ−Ｈ１３１に弱く結合するにすぎない（Ｓｉｂｅｒｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．１０６：１１１−１１８（２００６））。全てのＦｃγＲへの結合に直接関与しているものとして、ＣＨ２領域のＮ末端部分のアミノ酸残基（２３４〜２３８）の短い連続区間。また、残基２６８、２９７、３２７及び３２９も、ＦｃγＲのサブセットとの結合に影響を与えることができ、ＣＨ２及びＣＨ３領域に位置する複数の残基も、ＦｃγＲ結合に寄与している（Ｃａｎｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１４８３−９１（１９９１），Ｃｈａｐｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８８：９０３６−４０（１９９１），Ｇｅｒｇｅｌｙ  ｅｔ  ａｌ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．４：３２７５−８３（１９９０））。
【０００５】
分子のＦｃ領域の重なり部位は、補体により媒介される細胞非依存性細胞傷害性機能の活性化を制御する。従って、補体タンパク質Ｃ１ｑとのＦｃ結合は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）と呼ばれるプロセスを媒介する（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：７７−９４（１９９５））。
【０００６】
場合によっては、エフェクター機能を低減又は排除することが有利である。こうした場合、補体又はエフェクター細胞をわずかしかリクルートしない抗体又はＦｃドメイン含有フラグメントの使用が有益である（例えば、以下の文献を参照のこと：Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００：１６−２６（２０００）；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４（２００１）；米国特許第６，１９４，５５１号明細書；米国特許第５，８８５，５７３号明細書；ＰＣＴ公開国際公開第０４／０２９２０７号パンフレット；及び米国特許第２０１１／００５９０７８号明細書）。
【０００７】
特定のサブクラスのヒト免疫グロブリンは、補体又はエフェクター細胞、例えば、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４をわずかにしかリクルートしないが、全てのエフェクター機能が欠如した天然の免疫グロブリンは知られていない。従って、別の手法は、エフェクター機能を担うＦｃ領域の残基を改変するか、又は突然変異させることである。例えば、以下の文献を参照されたい：ＰＣＴ公開：国際公開第２００６０７６５９４号パンフレット；国際公開第１９９９５８５７２号パンフレット；国際公開第２００６０４７３５０号パンフレット、及び国際公開第２００６０５３３０１号パンフレット；米国特許第２００６−０１３４７０９号明細書；米国特許第５，６２４、８２１号明細書；米国特許第６，１９４，５５１号明細書；及び第５，８８５，５７３号明細書；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：２６１３−２６２４（１９９９）；Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５−１９３３（２０００）；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００：１６−２６（２０００）；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４（２００１）。
【０００８】
エフェクター機能の低減又は排除について考慮すべきことは、他の重要な抗体特性が攪乱されないことである。従って、Ｆｃ変異体の改変は、抗体の安定性、溶解性、及び構造的統合性、並びにＦｃＲｎやタンパク質Ａ及びＧなどの他の重要なＦｃリガンドと相互作用する能力を維持しながら、ＦｃγＲ及び／又はＣ１ｑとの結合のみを除去するように実施すべきである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第６，１９４，５５１号明細書
【特許文献２】米国特許第５，８８５，５７３号明細書
【特許文献３】国際公開第０４／０２９２０７号パンフレット
【特許文献４】米国特許第２０１１／００５９０７８号明細書
【特許文献５】国際公開第２００６０７６５９４号パンフレット
【特許文献６】国際公開第１９９９５８５７２号パンフレット
【特許文献７】国際公開第２００６０４７３５０号パンフレット、
【特許文献８】国際公開第２００６０５３３０１号パンフレット
【特許文献９】米国特許第２００６−０１３４７０９号明細書
【特許文献１０】米国特許第５，６２４、８２１号明細書
【特許文献１１】米国特許第６，１９４，５５１号明細書
【特許文献１２】米国特許第５，８８５，５７３号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｒａｇｈａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１２：１８１−２２０（１９９６）
【非特許文献２】Ｒａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：２７５−２９０，（２００１））
【非特許文献３】Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：７３９−７６６（２０００）；
【非特許文献４】Ｓｉｂｅｒｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．１０６：１１１−１１８（２００６）
【非特許文献５】Ｃａｎｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１４８３−９１（１９９１），
【非特許文献６】Ｃｈａｐｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８８：９０３６−４０（１９９１），
【非特許文献７】Ｇｅｒｇｅｌｙ  ｅｔ  ａｌ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．４：３２７５−８３（１９９０））
【非特許文献８】Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：７７−９４（１９９５））。
【非特許文献９】Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００：１６−２６（２０００）
【非特許文献１０】Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４（２００１）
【非特許文献１１】Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：２６１３−２６２４（１９９９）
【非特許文献１２】Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５−１９３３（２０００）
【非特許文献１３】Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００：１６−２６（２０００）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本開示は、安定性、例えば、熱安定性を維持しながら、要望される特性、例えば、低減したエフェクター機能、及び向上した血漿半減期をもたらすアミノ酸置換を有する変異型Ｆｃドメインを含む組換えポリペプチドに関する。ある態様において、本開示のポリペプチドは、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含み、この変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインは、（ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；（ｂ）２３５位にアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）アミノ酸；（ｃ）３２２位にアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）アミノ酸；又は３３１位にアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）アミノ酸を含み（有し）、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。
【００１２】
別の態様において、ポリペプチドは、２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；及び３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。ある態様では、ポリペプチドは、２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；及び３３１位にグリシン（Ｇ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。ある態様では、ポリペプチドは、２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；２３５位にアラニン（Ａ）アミノ酸；及び３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。
【００１３】
ある態様において、ポリペプチドはさらに、（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。
【００１４】
別の態様において、ポリペプチドはさらに、（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；及び／又は（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。別の態様では、ポリペプチドは、（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。ある態様では、ポリペプチドは、（ａ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び（ｂ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。
【００１５】
ある態様において、ポリペプチドはさらに（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；並びに（ｂ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。
【００１６】
ある態様において、ポリペプチドはさらに（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、及び２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；又は、（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸及び２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸；（ｃ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸及び２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。ある態様では、ポリペプチドは、２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸、及び２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。
【００１７】
一態様において、ポリペプチドは、（ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；（ｂ）２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；（ｃ）３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；（ｄ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；（ｅ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び（ｆ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。一態様において、ポリペプチドは、（ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；（ｂ）２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；（ｃ）３３１位にグリシン（Ｇ）アミノ酸；（ｄ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；（ｅ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び（ｆ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。別の態様では、ポリペプチドは、（ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；（ｂ）２３５位にアラニン（Ａ）アミノ酸；（ｃ）３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；（ｄ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；（ｅ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び（ｆ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。
【００１８】
ある態様において、ポリペプチドは、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、向上した薬物動態（ＰＫ）特性を有する。ある態様では、ＰＫ特性は半減期である。特定の態様では、ポリペプチドは、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、向上したＦｃＲｎ結合を有する。ある態様では、ＩｇＧ  Ｆｃドメインは非ヒト由来である。別の態様では、ＩｇＧ  Ｆｃドメインはヒト由来である。具体的態様では、非ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインは、げっ歯類、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ又はニワトリに由来する。
【００１９】
ある態様において、ＩｇＧ  Ｆｃドメインは、ヒト免疫グロブリンＧクラス１（ＩｇＧ１）Ｆｃドメイン、ヒト免疫グロブリンＧクラス２（ＩｇＧ２）Ｆｃドメイン、ヒト免疫グロブリンＧクラス３（ＩｇＧ３）Ｆｃドメイン、及びヒト免疫グロブリンＧクラス４（ＩｇＧ４）Ｆｃドメインからなる群から選択される。ある態様では、ポリペプチドは、さらに抗原結合ドメインを含む。ある態様では、抗原結合ドメインは、モノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントに由来する。ある態様では、抗原結合ドメインは、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体に由来する。ある態様では、抗原結合ドメインは、（ａ）一本鎖抗体；（ｂ）ダイアボディ；（ｃ）抗体のポリペプチド鎖；（ｄ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；又は（ｅ）Ｆ（ａｂ）フラグメントを含む。
【００２０】
ある態様において、ポリペプチドは、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、低減したＦｃ媒介エフェクター機能を有する。ある態様では、エフェクター機能は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）である。他の態様では、エフェクター機能は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）である。ある態様では、ポリペプチドは、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対し低い親和性を有する。ある態様では、ＦｃγＲは、ヒトＦｃγＲである。ある態様では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩからなる群から選択される。ある態様では、ＦｃγＲＩは、ＦｃγＲＩαである。別の態様では、ＦｃγＲＩＩは、ＦｃγＲＩＩａ又はＦｃγＲＩＩｂである。また別の態様では、ＦｃγＲＩＩＩは、ＦｃγＲＩＩＩ（１５８Ｖ）又はＦｃγＲＩＩＩ（１５８Ｆ）である。
【００２１】
ある態様において、ポリペプチドは、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して向上した親和性で、ＦｃＲｎと結合する。ある態様では、ポリペプチドは、ｐＨ７．４よりｐＨ６．０で、ＦｃＲｎに対する高い親和性を有する。ある態様では、ポリペプチドは、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して低減した親和性で、Ｃ１ｑと結合する。
【００２２】
ある態様において、ポリペプチドは、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、熱安定性の増加を呈示する。ある態様では、熱安定性の増加は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定される。特定の態様では、熱安定性の増加は、少なくとも４℃である。ある態様では、熱安定性は、示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）により測定する。具体的態様では、ＤＳＦ蛍光プローブは、Ｓｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅである。ある態様では、熱安定性の増加は少なくとも５℃である。
【００２３】
ある態様において、ポリペプチドは、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿アッセイを用いて測定される見かけ溶解度の増加を呈示する。ある態様では、ポリペプチドは、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、加速安定性アッセイを用いて測定される安定性の増加を呈示する。ある態様では、加速安定性アッセイは、（ｉ）長期間にわたるポリペプチドのインキュベーション、及び（ｉｉ）高温でのインキュベーションを含む。ある態様では、加速安定性アッセイは、高濃度でのインキュベーションを含む。ある態様では、長期間は少なくとも１ヵ月である。特定の態様では、高濃度は少なくとも２５ｍｇ／ｍｌである。特定の態様では、高温は少なくとも４０℃である。ある態様では、加速安定性アッセイは、高機能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）又は動的光散乱法（ＤＬＳ）を用いて実施される。
【００２４】
本開示は、本開示のポリペプチドをコードする配列を含む、単離された核酸も提供する。また、本開示のポリペプチドをコードする配列を含む核酸を含有する組成物、発現ベクター、及び宿主細胞も提供される。宿主細胞は、本開示のポリペプチドをコードする配列を含む単離された核酸、本開示のポリペプチドをコードする配列を含む核酸を含有する組成物、又は本開示のポリペプチドをコードする配列を含む核酸を含有する発現ベクターを含むことができる。
【００２５】
本開示は、（ａ）本開示のポリペプチドをコードする配列を含む核酸を含有する宿主細胞を培養するステップ；及び（ｂ）ポリペプチドを単離するステップを含む、本開示のポリペプチドを作製する方法も提供する。本開示はまた、本開示のポリペプチドと担体を含む組成物も提供する。
【００２６】
本開示は、本開示のポリペプチドを含む診断薬も提供する。ある態様では、ポリペプチドを標識する。本開示はまた、本開示のポリペプチド及び治療部分を含むコンジュゲートも提供する。また本開示は、（ａ）本開示のポリペプチド、（ｂ）本開示のポリペプチドをコードする配列を含む、単離された核酸、（ｃ）本開示のポリペプチドをコードする配列を有する核酸を含む組成物、発現ベクター、若しくは宿主細胞、（ｄ）本開示のポリペプチドと担体を含む組成物、（ｅ）ある態様では、標識することができる、本開示のポリペプチドを含む診断薬、又は（ｆ）本開示のポリペプチド及び治療部分を含むコンジュゲートを含むキットも提供する。
【００２７】
本開示は、哺乳動物を治療する方法も提供し、この方法は、有効量の（ａ）本開示のポリペプチド、（ｂ）本開示のポリペプチドをコードする配列を含む、単離された核酸、（ｃ）本開示のポリペプチドをコードする配列を有する核酸を含む組成物、発現ベクター、若しくは宿主細胞、（ｄ）本開示のポリペプチドと担体を含む組成物、（ｅ）ある態様では、標識することができる本開示のポリペプチドを含む診断薬、又は（ｆ）本開示のポリペプチド及び治療部分を含むコンジュゲートを、治療が必要な哺乳動物に投与することを含む。
【００２８】
本開示は、Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドのＦｃ誘導性エフェクター機能を低減する方法も提供し、この方法は、（ａ）Ｆｃドメインにおける２３４位のアミノ酸をフェニルアラニン（Ｆ）で置換するステップ；（ｂ）Ｆｃドメインにおける２３５位のアミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）で置換するステップ；（ｃ）Ｆｃドメインの３２２位のアミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）で置換するステップ；又はＦｃドメインの３３１位のアミノ酸をアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）で置換するステップを含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。上記方法のある態様において、親ポリペプチドのＦｃドメインは、（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸を含み、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。上記方法の別の態様では、親ポリペプチドのＦｃドメインは、（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）；及び／又は（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）；及び／又は（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）を含み；ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。
【００２９】
また、Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドのＦｃ誘導性エフェクター機能を低減すると共に、その半減期を増加させる方法も提供され、この方法は、（ａ）Ｆｃドメインにおける２３４位のアミノ酸をフェニルアラニン（Ｆ）で置換するステップ；（ｂ）Ｆｃドメインにおける２３５位のアミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）で置換するステップ；並びに（ｃ）Ｆｃドメインの３２２位のアミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）で置換するステップ；又はＦｃドメインの３３１位のアミノ酸をアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）で置換するステップ；並びに（ｄ）２５２位のアミノ酸をチロシン（Ｙ）若しくはセリン（Ｓ）若しくはトリプトファン（Ｗ）若しくはトレオニン（Ｔ）で置換するステップを含み；ここで、Ｆｃドメインのアミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。上記方法のある態様において、２５２位のアミノ酸をチロシン（Ｙ）で置換するが、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。上記方法のある態様において、（ａ）２５４位のアミノ酸をトレオニン（Ｔ）で置換することができ；及び（ｂ）２５６位のアミノ酸をグルタミン酸（Ｅ）若しくはセリン（Ｓ）、若しくはアルギニン（Ｒ）、若しくはグルタミン（Ｑ）で置換することができ、ここで、Ｆｃドメインのアミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。上記方法の別の態様では、２５６位のアミノ酸をグルタミン酸（Ｅ）で置換するが、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。上記方法のある態様において、２３４位のアミノ酸をフェニルアラニン（Ｆ）で置換し；２３５位のアミノ酸をグルタミン（Ｑ）で置換し；３２２位のアミノ酸をグルタミン（Ｑ）で置換するが、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。ある態様では、２３４位のアミノ酸をフェニルアラニン（Ｆ）で置換し；２３５位のアミノ酸をグルタミン（Ｑ）で置換し；３３１位のアミノ酸をグリシン（Ｇ）で置換するが、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。上記方法のある態様では、２３４位のアミノ酸をフェニルアラニン（Ｆ）で置換し；２３５位のアミノ酸をアラニン（Ａ）で置換し；３２２位のアミノ酸をグルタミン（Ｑ）で置換するが、ここで、アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。上記方法の別の態様では、エフェクター機能は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）である。上記方法のある態様では、エフェクター機能は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）である。上記方法の別の態様では、ポリペプチドは、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、熱安定性の増加を呈示する。上記方法のある態様において、熱安定性は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定する。上記方法のある態様において、熱安定性の増加は、少なくとも４℃である。上記方法の特定の態様において、熱安定性は、ＤＳＦ蛍光プ��ーブを用いた示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）により測定する。上記方法のある態様では、ＤＳＦ蛍光プローブは、Ｓｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅである。上記方法のある態様では、熱安定性の増加は少なくとも５℃である。上記方法のある態様において、ポリペプチドは、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿アッセイを用いて測定される見かけ溶解度の増加を呈示する。上記方法の別の態様では、ポリペプチドは、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、加速安定性アッセイを用いて測定される安定性の増加を呈示する。上記方法のある態様では、加速安定性アッセイは、（ｉ）長期間にわたるポリペプチドのインキュベーション、及び（ｉｉ）高温でのインキュベーションを含む。上記方法のある態様では、加速安定性アッセイは、高濃度でのインキュベーションを含む。上記方法のある態様では、長期間は、少なくとも１ヵ月である。上記方法のある態様では、高濃度は、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌである。上記方法の特定の態様では、高温は、少なくとも４０℃である。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】野生型（Ｗｔ）Ｆｃドメインを含むＡｂ４抗体、及びＹＴＥ及びＦＥＳ−ＹＴＥ変異型Ｆｃドメインを含むＡｂ４抗体の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。抗体のＦａｂ領域、並びにＣＨ２及びＣＨ３領域に対応する変性ピークの位置を示す。
【図２】ＦＱＧ−ＹＴＥ、ＦＱＱ−ＹＴＥ、ＦＡＱ−ＹＴＥ変異型Ｆｃドメインを含むＡｂ４抗体の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。抗体のＦａｂ領域、並びにＣＨ２及びＣＨ３領域に対応する変性ピークの位置を示す。
【図３】細胞傷害アッセイで測定したＡＤＣＣを示す。抗体サンプルは、野生型（ＷＴ）Ｆｃドメインを含むＡｂ３、及びＦＱＱ−ＹＴＥ、ＦＡＱ−ＹＴＥ、ＹＴＥ、又はＦＥＳ−ＹＴＥ変異型Ｆｃドメインを含むＡｂ３抗体に対応する。負の対照も用いた。
【図４】細胞傷害アッセイで測定したＣＤＣを示す。抗体サンプルは、野生型（ＷＴ）Ｆｃドメインを含むＡｂ３、及びＦＱＱ−ＹＴＥ、ＦＱＧ−ＹＴＥ、ＦＡＱ−ＹＴＥ、ＹＴＥ、又はＦＥＳ−ＹＴＥ変異型Ｆｃドメインを含むＡｂ３抗体に対応する。負の対照も用いた。
【図５】等電点泳動（ＩＥＦ）ゲルを示す。抗体サンプルは、野生型（ＷＴ）Ｆｃドメインを含むＡｂ４、及びＹＴＥ、ＦＥＳ−ＹＴＥ、ＦＥ−ＹＴＥ、ＦＡＱ−ＹＴＥ、ＦＱＧ−ＹＴＥ、又はＦＱＱ−ＹＴＥ変異型Ｆｃドメインを含むＡｂ４抗体に対応する。ＩｇＧ４対照も含まれる。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本開示は、安定性、例えば、熱安定性を維持しながら、所望の特性、例えば、低減したエフェクター機能、及び向上した血漿半減期をもたらすアミノ酸置換を有する変異型Ｆｃドメインを含む組換えポリペプチドに関する。本開示は、特に、野生型ＩｇＧに対して、１つ又は複数のアミノ酸修飾を含む、ＩｇＧ  Ｆｃドメイン（例えば、ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメイン）、又はＦｃＲｎ（好ましくは、Ｆｃ若しくはヒンジ−Ｆｃドメイン）に結合するそのフラグメントを含むポリペプチド、より具体的には免疫グロブリンに関し、ここで、このような修飾は、エフェクター機能を低減又は除去する。
【００３２】
ある態様では、本開示は、特に、ヒト又はヒト化ＩｇＧ、並びにヒトＩｇＧ  ＦｃドメインのＦｃＲｎ結合部分を含む他の生体活性分子の修飾に関し、これは、治療、予防及び診断に特定の用途を有する。ある態様では、ポリペプチドは、エフェクター機能を除去する修飾、並びにポリペプチドの血漿半減期を増大する修飾を含む、ＩｇＧ  Ｆｃドメイン、又はＦｃＲｎ（好ましくは、Ｆｃ若しくはヒンジ−Ｆｃドメイン）に結合するそのフラグメントを含む。
定義
「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」の実体という用語は、１つ又は複数の実体を指し；例えば、「１つのポリペプチド配列」は、１つ又は複数のポリペプチド配列を表すと理解される。このように、「１つの（ａ）（又は１つの（ａｎ））」、「１つ又は複数の」、及び「少なくとも１つの」という用語は、本明細書において置換え可能に用いることができる。さらに、本明細書で用いる「及び／又は」は、２つの明示した特徴又は構成要素の各々のいずれか若しくは両方の具体的開示として理解すべきである。従って、本明細書において「Ａ及び／又はＢ」というフレーズで用いられる場合、用語「及び／又は」は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」のようなフレーズで用いられる場合、用語「及び／又は」は、以下のケースの各々を包含することが意図される：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。
【００３３】
特に定義しない限り、本明細書で用いる全ての技術及び科学用語は、本開示が関連する分野の当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ−Ｓｈｏｗ，２ｎｄ  ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；及びＯｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  Ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓは、当業者に、本開示に用いられる用語の多くについての一般的辞書を提供する。
【００３４】
単位、接頭辞、及び符号は、Ｓｙｓｔｅｍｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｅ  Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）で認められる形態で表示する。数値範囲は、範囲を示す数値も含まれる。特に記載のない限り、アミノ酸配列は、アミノからカルボキシ配向で、左から右へと表記する。本明細書に記載する見出しは、様々な態様を限定するものではなく、これらの態様は、本明細書全体を参照することにより、表現され得る。従って、すぐ下に定義する用語は、本明細書全体を参照することにより、さらに詳細に定義される。
【００３５】
本明細書において「含む」という表現で態様が記載される場合には、「〜からなる」及び／又は「ほぼ〜からなる」という用語で記載される他の類似した態様も提供されることは理解されよう。
【００３６】
アミノ酸は、その一般に公知の３文字記号か、又はＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される１文字記号のいずれかにより、本明細書中で記述される。ヌクレオチドも同様に、一般に受け入れられた１文字コードにより記述される。
【００３７】
本明細書で用いる「ポリペプチド」という用語は、アミド結合（ペプチド結合としても知られる）により線状に連結したモノマー（アミノ酸）から構成される分子を指す。用語「ポリペプチド」は、２つ以上のアミノ酸のいずれかの鎖又は複数の鎖を指し、特定の長さの産物を指すわけではない。本明細書で用いる「タンパク質」は、１つ又は複数のポリペプチドからなる分子を含むことが意図され、ある態様では、アミド結合以外の結合により結合することができる。他方で、タンパク質は、単一のポリペプチド鎖であってもよい。後者の場合、単一ポリペプチド鎖は、ある態様では、互いに融合してタンパク質を形成する２つ以上のポリペプチドサブユニットを含んでもよい。「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語はまた、限定するわけではないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質分解切断、又は非天然アミノ酸による修飾などの発現後修飾の産物も指す。ポリペプチド又はタンパク質は、天然の生物学的供給源から誘導するか、又は組換え技術により生成することもできるが、必ずしも指定された核酸配列から翻訳されるわけではない。これは、化学的合成など、あらゆる方法で作製することができる。
【００３８】
「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物は、天然に見出されない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物は、それらがもはや天然にみいだされる形態ではない程度まで精製されたものを含む。ある態様では、単離された抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物は、実質的に純粋である。
【００３９】
「組換え」ポリペプチド又はタンパク質は、組換えＤＮＡ技術により生成されたポリペプチド又はタンパク質を指す。宿主細胞において発現した、組換え生成のポリペプチド又はタンパク質は、任意の好適な技術により分離、分画、又は部分的若しくは実質的に精製された天然若しくは組換えポリペプチドと同様に、本開示の目的のために単離されたものとみなされる。
【００４０】
また、ポリペプチドの断片、変異体、又は誘導体、及びこれらの任意の組合せも本開示に含まれる。本開示のポリペプチド及びタンパク質について述べるとき、「断片」という用語は、参照ポリペプチド又はタンパク質の特性の少なくとも一部を保持する任意のポリペプチド又はタンパク質を包含する。ポリペプチドの断片は、タンパク質分解断片、及び欠失断片を含む。
【００４１】
本明細書で用いる「変異体（バリアント）」と言う用語は、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって親ポリペプチド配列のものとは異なるポリペプチド配列を指す。親ポリペプチドは、天然のポリペプチド、すなわち「野生型」（ＷＴ）ポリペプチドであってもよいし、又は野生型ポリペプチドの修飾された形態であってもよい。変異型ポリペプチドという用語は、ポリペプチド自体、ポリペプチドを含む組成物、又はこれをコードするアミノ配列を指す場合もある。好ましくは、変異型ポリペプチド（例えば、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチド）は、親ポリペプチドと比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾、例えば、親ポリペプチドと比較して約１〜約１０のアミノ酸修飾、好ましくは、約１〜約６のアミノ酸修飾を有する。本明細書において変異型ポリペプチド配列は、一般に、親ポリペプチド配列と少なくとも９０％の配列同一性、極めて一般的には、少なくとも約９５％の配列同一性を有する。
【００４２】
本開示のポリペプチド又はタンパク質の変異体は、前述のような断片、さらには、アミノ酸置換、欠失、若しくは挿入により改変されたアミノ酸配列を含むポリペプチド又はタンパク質を包含する。変異体は、天然又は非天然のものであってよい。非天然の変異体は、当分野では公知の突然変異誘発技術を用いて生成することができる。変異型ポリペプチドは、保存的又は非保存的アミノ酸置換、欠失若しくは付加を含み得る。
【００４３】
ポリペプチド又はタンパク質に用いられる場合、「誘導体」という用語は、天然のポリペプチド又はタンパク質に見出されない別の特徴を呈するように改変されたポリペプチド又はタンパク質を指す。変異型Ｆｃドメインの「誘導体」の一例は、第２のポリペプチド若しくは別の分子（例えば、ＰＥＧ、発色団、若しくは蛍光団）又は原子（例えば、放射性同位元素）との融合物若しくはコンジュゲートである。
【００４４】
本明細書で用いる「ポリヌクレオチド」又は「ヌクレオチド」という用語は、単一の核酸及び複数の核酸を包含することを意図し、単離された核酸分子又は構築物、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）若しくはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。特定の態様では、ポリヌクレオチドは、従来のリン酸ジエステル結合又は特殊な結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）に存在するようなアミド結合）を含む。
【００４５】
「核酸」という用語は、ポリヌクレオチドに存在するいずれか１つ又は複数の核酸セグメント、例えばＤＮＡ若しくはＲＮＡを指す。核酸又はポリヌクレオチドに用いられる場合、「単離された」という用語は、その天然の環境から取り出された核酸分子、ＤＮＡ若しくはＲＮＡを指し、例えば、ベクターに含まれる変異型Ｆｃドメインを含むポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチドは、本開示の目的のために単離されたとみなされる。単離されたポリヌクレオチドの別の例としては、異種宿主細胞に維持されているか、又は溶液中の他のポリヌクレオチドから（部分的若しくは実質的に）精製された組換えポリヌクレオチドが挙げられる。単離されたＲＮＡ分子としては、本開示のポリヌクレオチドのｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＲＮＡ転写物がある。本開示の単離されたポリヌクレオチド又は核酸は、合成により生成されたこのような分子をさらに含む。さらに、ポリヌクレオチド又は核酸は、プロモータ、エンハンサー、リボソーム結合部位、又は転写終結シグナルなどの調節エレメントを含み得る。
【００４６】
本明細書で用いる「宿主細胞」という用語は、組換え核酸を保有するか、又は保有することができる細胞若しくは細胞の集団を指す。宿主細胞は、原核細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））であってよく、あるいは、宿主細胞は、真核細胞、例えば、真菌細胞（例：サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｉｖｉｓｉａｅ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、若しくはシゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）などの酵母細胞）、及び昆虫細胞（例：Ｓｆ−９）又は哺乳動物細胞（例：ＨＥＫ２９３Ｆ、ＣＨＯ、ＣＯＳ−７、ＮＩＨ−３Ｔ３）であってよい。
【００４７】
本開示はまた、１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドも包含する。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基を、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換したものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当分野において定義されており、そのようなものとして、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電性極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。従って、ポリペプチド中のアミノ酸を同じ側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸で置換する場合、この置換は、保存的であるとみなされる。別の態様では、アミノ酸の鎖は、側鎖ファミリーメンバーの順序及び／又は組成が異なる、構造的に類似した鎖で保存的に置換することもできる。
【００４８】
２つのポリヌクレオチド又はポリペプチド配列同士の「配列同一性（％）」という用語は、２つの配列の最適なアラインメントに導入しなければならない付加又は欠失（すなわちギャップ）を考慮に入れて、比較ウィンドウにわたって配列が共有する同一の一致した位置の数を指す。一致した位置は、同じヌクレオチド又はアミノ酸が、対象及び参照配列の両方に提示される任意の位置である。ギャップはヌクレオチド又はアミノ酸ではないため、対象配列に提示されるギャップは計数しない。同様に、対象配列のヌクレオチド又はアミノ酸は計数し、参照配列からのヌクレオチド又はアミノ酸は計数しないため、参照配列に提示されるギャップは計数しない。
【００４９】
配列同一性の割合（％）は、次のようにして算出する：２つの鎖に同一のアミノ酸残基又は核酸塩基が存在する位置の数を決定して、一致した位置の数を取得し、一致した位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で割り、その商に１００を掛けることにより、配列同一性の割合を得る。２つの配列同士の配列の比較及び配列同一性（％）の決定は、オンライン使用及びダウンロードの両方で容易に入手可能なソフトウエアを用いて達成することができる。好適なソフトウエアプログラムは、様々な供給源から、タンパク質及びヌクレオチド配列の両方のアラインメント用の好適なソフトウエアプログラムを入手することができる。配列同一性（％）を決定する１つの好適なプログラムは、ｂｌ２ｓｅｑであり、これは、米国政府の国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なプログラムのＢＬＡＳＴスイートの一部である。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮ又はＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを用いて、２つの配列の比較を実施する。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するのに用いられるのに対し、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するのに用いられる。他の好適なプログラムは、例えば、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、又はＭａｔｃｈｅｒであり、これらは、バイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳスイートの一部であり、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）（ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ）から入手することも可能である。
【００５０】
ポリヌクレオチド又はポリペプチド参照配列とアラインメントする単一のポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド対象配列内の様々な領域は、各々固有の配列同一性（％）を有しうる。配列同一性の割合の値は、少数第２位で四捨五入することに留意する。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は、８０．１に丸め、また８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は、８０．２に丸める。また、長さの値は常に整数であることに留意する。
【００５１】
当業者であれば、配列同一性（％）の計算のための配列アラインメントの生成は、一次配列データによってのみ駆動されるバイナリ配列−配列比較に限定されない。配列アラインメントは、多重配列アラインメントから得ることができる。多重配列アラインメントを生成するのに好適な１プログラムは、ＣｌｕｓｔａｌＷ２であり、ｗｗｗ．ｃｌｕｓｔａｌ．ｏｒｇから入手することができる。別の好適なプログラムは、ＭＵＳＣＬＥであり、ｗｗｗ．ｄｒｉｖｅ５．ｃｏｍ／ｍｕｓｃｌｅ／から入手することができる。あるいは、ＣｌｕｓｔａｌＷ２及びＭＵＳＣＬＥは、例えば、ＥＢＩからも入手可能である。
【００５２】
また、配列アラインメントは、配列データを、構造データ（例えば、結晶学的タンパク質構造）、機能データ（例えば、突然変異の位置）、又は系統発生学的データなどの異種情報源からのデータと統合することにより、生成することができることも理解されよう。多重配列アラインメントを生成するために異種データを統合する好適なプログラムは、Ｔ−Ｃｏｆｆｅｅであり、これは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇから入手することができ、それ以外にも、例えば、ＥＢＩからも入手可能である。また、配列同一性（％）を計算するのに用いられる最終アラインメントは、自動又は手動のいずれで管理してもよいことは理解されよう。
【００５３】
「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内での少なくとも１つの抗原認識部位を介して、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、又はこれらの組合せなどの標的を認識して、標的に特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で用いる場合、「抗体」という用語は、以下のものを包含する：インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、抗体フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）突然変異体、少なくとも２つのインタクトな抗体から作製された二重特異性抗体などの多重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ある抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、並びに抗体が所望の生体活性を呈示する限りにおいて、抗原認識部位を含むいずれか他の修飾免疫グロブリン分子。抗体は、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれるその重鎖定常ドメインの同一性に基づき、免疫グロブリンの５つの主要クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ、又はそのサブクラス（アイソタイプ）のいずれのものであってもよい。免疫グロブリンの様々なクラスは、それぞれ異なる公知のサブユニット構造及び３次元配置を有する。抗体は、裸であってもよいし、又は毒素、放射性同位元素などの他の分子に結合させてもよい。本明細書で置換え可能に用いられる「抗体」又は「免疫グロブリン」は、一般に置換え可能に用いられ、全抗体及び任意の抗原結合フラグメント又は一本鎖を含む。
【００５４】
本明細書で用いる場合、「ＩｇＧ」という用語は、認識された免疫グロブリンγ遺伝子によって実質的にコードされる抗体のクラスに属するポリペプチドを指す。ヒトにおいて、このクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む。マウスでは、このクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３を含む。
【００５５】
「抗体結合フラグメント」という用語は、インタクトな抗体の一部を指し、また、インタクトな抗体の抗原決定可変領域を指す。当分野では、抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントによって実施され得る。抗体フラグメントの例として、限定するわけではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメント、直鎖状抗体、一本鎖抗体、並びに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【００５６】
「モノクローナル抗体」という用語は、単一の抗原決定基、又はエピトープの高度に特異的認識及び結合に関与する均質抗体集団を指す。これは、典型的に様々な抗原決定基に向かう様々な抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的である。用語「モノクローナル抗体」は、インタクトな完全長のモノクローナル抗体と、抗体フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）突然変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含むいずれか他の修飾免疫グロブリン分子の両方を包含する。さらに、「モノクローナル抗体」は、限定するわけではないが、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、及びトランスジェニック動物によるものなど、任意の数の方法で作製した抗体を指す。
【００５７】
「ヒト抗体」という用語は、ヒトにより産生される抗体、又は当分野では公知の任意の技術を用いて作製される、人により産生される抗体と一致するアミノ酸配列を有する抗体を指す。ヒト抗体の定義は、インタクトな抗体若しくは完全長抗体、そのフラグメント、並びに／又は少なくとも１つのヒト重鎖及び／若しくは軽鎖ポリペプチドを含む抗体、例えば、マウス軽鎖及びヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト（例えば、マウス）免疫グロブリンに由来する抗体を指し、これは、最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含むように改変されている。
【００５８】
「キメラ抗体」という用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が、２つ以上の種に由来する抗体を指す。典型的に、軽鎖及び重鎖両方の可変領域は、要望される特異性、親和性、及び能力を有する哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）の１つの種に由来する抗体の可変領域に相当するのに対し、定常領域は、その種における免疫応答の誘発を回避するために、別の種（通常、ヒト）に由来する抗体の配列と相同的である。
【００５９】
「Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックス」という用語は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）に記載のヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の番号付けシステムを指す。本願で言及する全てのアミノ酸位置は、ＥＵインデックス位置を指す。例えば、「Ｌ２３４」及び「ＥＵ  Ｌ２３４」はいずれも、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスに従い、２３４位のアミノ酸ロイシンを指す。
【００６０】
本明細書で用いる「Ｆｃドメイン」及び「ＩｇＧ  Ｆｃドメイン」という用語は、ＩｇＧ分子のパパイン消化により得られる結晶性フラグメントと相関する、免疫グロブリンの一部、例えば、ＩｇＧ分子を指す。Ｆｃ領域は、ジスルフィド結合により連結されたＩｇＧ分子の２つの重鎖のＣ末端半分を含む。これには、抗原結合活性はないが、炭水化物部分と、補体及びＦｃＲｎ受容体（以下を参照）などのＦｃ受容体に対する結合部位を有する。例えば、Ｆｃドメインは、第２定常ドメインＣＨ２全体（ＩｇＧ１のＥＵ位置２３１〜３４０の残基、例えば、表２を参照）及び第３定常ドメインＣＨ３（ヒトＩｇＧ１のＥＵ位置３４１〜４４７の残基、例えば、表３を参照）を含有する。
【００６１】
Ｆｃは、分離した上記領域、又は抗体、抗体フラグメント、又はＦｃ融合タンパク質に関連する上記領域を指す。限定するものではないが、ＥＵ位置２７０、２７２、３１２、３１５、３５６、及び３５８などのＦｃドメインにおけるいくつかの位置で多形性が認められているため、本出願に提示した配列と当分野で公知の配列との間に若干の差が存在し得る。従って、「野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン」又は「ＷＴ  ＩｇＧ  Ｆｃドメイン」は、天然に存在する任意のＩｇＧ  Ｆｃドメイン（すなわち、任意の対立遺伝子）を指す。Ｍｙｒｉａｄ  Ｆｃ突然変異体、Ｆｃフラグメント、Ｆｃ変異体、及びＦｃ誘導体は、以下の文献に記載されている：米国特許第５，６２４，８２１号明細書；米国特許第５，８８５，５７３号明細書；米国特許第５，６７７，４２５号明細書；米国特許第６，１６５，７４５号明細書；米国特許第６，２７７，３７５号明細書；米国特許第５，８６９，０４６号明細書；米国特許第６，１２１，０２２号明細書；米国特許第５，６２４，８２１号明細書；米国特許第５，６４８，２６０号明細書；米国特許第６，５２８，６２４号明細書；米国特許第６，１９４，５５１号明細書；米国特許第６，７３７，０５６号明細書；米国特許第７，１２２，６３７号明細書；米国特許第７，１８３，３８７号明細書；米国特許第７，３３２，５８１号明細書；米国特許第７，３３５，７４２号明細書；米国特許第７，３７１，８２６号明細書；米国特許第６，８２１，５０５号明細書；米国特許第６，１８０，３７７号明細書；米国特許第７，３１７，０９１号明細書；米国特許第７，３５５，００８号明細書；米国特許第２００４／０００２５８７号明細書；並びにＰＣＴ公開番号：国際公開第９９／０５８５７２号パンフレット、国際公開第２０１１／０６９１６４号パンフレット及び国際公開第２０１２／００６６３５号パンフレット。
【００６２】
ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４の重鎖の配列は、いくつかの配列データベース、例えば、それぞれ受諾番号Ｐ０１８５７（ＩＧＨＧ１＿ＨＵＭＡＮ）、Ｐ０１８５９（ＩＧＨＧ２＿ＨＵＭＡＮ）、Ｐ０１８６０（ＩＧＨＧ３＿ＨＵＭＡＮ）、及びＰ０１８６１（ＩＧＨＧ１＿ＨＵＭＡＮ）でＵｎｉｐｒｏｔデータベース（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）に見出すことができる。表１〜３は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従い、ヒトＩｇＧ１（配列番号１）、ＩｇＧ２（配列番号２）、ＩｇＧ３（配列番号３）及びＩｇＧ４（配列番号４）からのＩｇＧ重鎖のアミノ酸配列及び番号付けを表示する。ＩｇＧサブクラス間で異なる残基には陰影を付け、既知の対立遺伝子変異体の部位は、星印（＊）で示す。
【００６３】
【表１−１】
2018184399.tif 000003
【００６４】
【表１−２】
2018184399.tif 000004
【００６５】
【表２】
2018184399.tif 000005
【００６６】
【表３】
2018184399.tif 000006
【００６７】
本明細書で用いる「変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン」及び「ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン」は、Ｆｃドメイン内のいずれかの位置に導入された１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、挿入又は修飾を含むＩｇＧ  Ｆｃドメインを指す。特定の態様において、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインは、１つ又は複数のアミノ酸置換を含まない野生型Ｆｃドメインと比較して、ＦｃγＲ及び／又はＣｌｑに対する結合親和性の低減又は除去をもたらす１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。Ｆｃ結合相互作用は、様々なエフェクター機能及び下流のシグナル伝達イベント、例えば、限定するわけではないが、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）にとって不可欠である。従って、特定の態様において、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン（例えば、抗体、融合タンパク質又はコンジュゲート）は、同じアミノ酸配列を有するが、１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、挿入又は修飾を含まない対応ポリペプチド、例えば、Ｆｃ領域の対応位置に天然のアミノ酸残基を含む非修飾Ｆｃ領域と比較して、少なくとも１つ又は複数のＦｃリガンド（例えば、ＦｃγＲ）に対する改変された結合親和性を呈示することができる。
【００６８】
「ＹＴＥ」又は「ＹＴＥ突然変異体」という用語は、ヒトＦｃＲｎとの結合の増大をもたらすと共に、突然変異を有する抗体の血清半減期を向上させる、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインにおける突然変異のセットを指す。ＹＴＥ突然変異体は、ＩｇＧの重鎖に導入された３つの「ＹＴＥ突然変異」：Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ（番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う）の組合せを含む。米国特許第７，６５８，９２１号明細書（参照として本明細書に組み込む）を参照されたい。ＹＴＥ突然変異体は、同じ抗体の野生型形態と比して、抗体の血清半減期を増大することが判明している。例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：２３５１４−２４（２００６）及び米国特許第７，０８３，７８４号明細書を参照されたい。尚、これらの文献は、その全体を参照として本明細書に組み込むものとする。「Ｙ」突然変異体は、Ｍ２５６Ｙ突然変異だけを含み、同様に、「ＹＴ」突然変異は、Ｍ２５２ＹとＳ２５４Ｔだけを含み、また「ＹＥ」突然変異は、Ｍ２５２ＹとＴ２５６Ｅだけを含む。特に、他の突然変異が、ＥＵ位置２５２及び／又は２５６に存在し得ることが考慮される。特定の態様において、ＥＵ位置２５２の突然変異は、Ｍ２５２Ｆ、Ｍ２５２Ｓ、Ｍ２５２Ｗ若しくはＭ２５２Ｔであってよく、及び／又はＥＵ位置２５６の突然変異は、Ｔ２５６Ｓ、Ｔ２５６Ｑ、Ｔ２５６Ｒ若しくはＴ２５６Ｄであってよい。
【００６９】
「ＦＥＳ」又は「ＦＥＳ突然変異体」という用語は、エフェクター機能の除外、すなわち抗体依存性細胞媒介細胞傷害及び補体媒介細胞傷害を媒介するＦｃドメインの能力の排除をもたらすＩｇＧ  Ｆｃドメインにおける突然変異のセットを指す。特定の態様において、ＦＥＳ突然変異体は、３つの「ＦＥＳ突然変異」：Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ（番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う）の組合せを含み得る。これらの突然変異は、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）及びＣ１ｑとのＦｃドメインの結合に大幅な低減を引き起こす。例えば、米国特許第２０１１／００５９０７８号明細書及びＯｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  Ｄ  ６４：７００−７０４（２００８）を参照されたい。尚、これらの文献は、その全体を参照として本明細書に組み込むものとする。「ＦＥ」突然変異体は、Ｌ２３４Ｆ突然変異とＬ２３５Ｅ突然変異だけを含む。
【００７０】
「ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメイン」という用語は、３つの「ＦＥＳ」突然変異（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）と３つの「ＹＴＥ」突然変異（Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）を含む野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを指し、ここで、全ての番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う。本明細書に示すように、ＦＥＳ突然変異とＹＴＥ突然変異を組み合わせると（例えば、「ＦＥＳ−ＹＴＥ」Ｆｃドメインの場合）、このような突然変異の組合せを含まない対応ポリペプチドと比較して、タンパク質安定性にかなりの低下がみられる（例えば、以下の実施例１を参照）。
【００７１】
本明細書で用いる「Ｆｃ融合物」という用語は、１つ又は複数のポリペプチド若しくは小分子をＦｃドメイン又はその変異体若しくは誘導体と作動可能に連結させたタンパク質を指す。Ｆｃ融合物は、免疫グロブリンのＦｃ領域と、融合相手（一般に任意のタンパク質又は小分子であってよい）を結合させる。Ｆｃ融合物の非Ｆｃ部分、すなわち融合相手の役割は、標的との結合を媒介することであってよく、従って、これは、抗体の可変領域に対して機能的に類似するものであってよい。
【００７２】
本明細書で用いる「親」ポリペプチドという用語は、変異体（例えば、変異型Ｆｃドメイン、又は変異型抗体若しくは変異型Ｆｃ融合物など、Ｆｃドメインを含む変異型ポリペプチド）を作製するために、後に修飾されるポリペプチド（例えば、親Ｆｃドメイン、又は抗体若しくはＦｃ融合物など、Ｆｃドメインを含むポリペプチド）である。親ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチド（例えば、野生型Ｆｃドメイン）、又は天然に存在するポリペプチドの変異体若しくは改変された形態（例えば、ＹＴＥ  Ｆｃドメイン及び／又はＦＥＳ−ＹＴＥ  Ｆｃドメイン）であってよい。親ポリペプチドという用語は、ポリペプチド自体、親ポリペプチドを含む組成物、又はそれをコードするアミノ酸を指すこともある。従って、本明細書で用いる「親Ｆｃドメイン」とは、変異体を作製するために修飾されるＦｃドメインを意味し、また、本明細書で用いる「親抗体」とは、ＩｇＧ変異型Ｆｃドメインを含む変異型抗体を作製するために、修飾される抗体を意味する。
【００７３】
本明細書で用いる「ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド」という用語は、上に定義した変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドを指す。
【００７４】
「Ｆｃ変異体」は、Ｆｃドメインを含み、単独で存在することもできるし、あるいは、抗体、Ｆｃ融合物、単離されたＦｃ、Ｆｃフラグメント、又はその他のポリペプチドに関連して存在することもできる。Ｆｃ変異体は、Ｆｃポリペプチド自体、Ｆｃ変異型ポリペプチドを含む組成物、又はそれをコードするアミノ酸配列を指すこともある。本明細書に記載する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインは、これらを構成するアミノ酸修飾に応じて定義される。本明細書で述べる全てのアミノ酸位置について、番号付けは、常にＫａｂａｔに記載されるＥＵインデックスに従う。従って、例えば、Ｍ２５２Ｙは、親Ｆｃドメインに対して、ＥＵ位置２５２のメチオニン（Ｍ）がチロシン（Ｙ）で置換されたＦｃ変異体である。同様に、例えば、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅは、親Ｆｃドメインに対して、ＥＵ位置２５２（ＭからＹ）、２５４（ＳからＴ）、及び２５６（ＴからＥ）にそれぞれ置換を有する変異型Ｆｃ変異体を定義する。また、変異体は、突然変異したＥＵアミノ酸位置におけるその最終アミノ酸組成に応じた名称で呼ぶこともできる。例えば、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ突然変異体は、ＹＴＥと称することができる。置換が記載される順序は任意である。すなわち、例えば、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅは、Ｔ２５６Ｅ／Ｓ２５４Ｔ／Ｍ２５２Ｙと同じＦｃであることに留意する。
【００７５】
本明細書で用いる「Ｆｃγ受容体」又は「ＦｃγＲ」という用語は、ＩｇＧ抗体Ｆｃ領域に結合して、ＦｃγＲ遺伝子によりコードされるタンパク質のファミリーの任意のメンバーを指す。ヒトの場合、このファミリーは、限定するわけではないが、以下のものを含む：アイソフォームＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、及びＦｃγＲＩｃなどのＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームＦｃγＲＩＩａ（アロタイプＨ１３１及びＲ１３１など）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ−１及びＦｃγＲＩＩｂ−２など）、及びＦｃγＲＩＩｃを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；並びにアイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプＶ１５８及びＦ１５８など）及びＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプＦｃγＲＩＩＩｂ−ＮＡ１及びＦｃγＲＩＩＩｂ−ＮＡ２など）を含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、さらにはいずれか未発見のヒトＦｃγＲ若しくはＦｃγＲイソフォーム又はアロタイプ。ＦｃγＲは、限定するわけではないが、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルなどのあらゆる生物に由来するものであってよい。マウスＦｃγＲとしては、限定するわけではないが、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、及びＦｃγＲＩＩＩ−２（ＣＤ１６−２）、並びにいずれか未発見のマウスＦｃγＲ若しくはＦｃγＲイソフォーム又はアロタイプが挙げられる。
【００７６】
本明細書で用いる「ＦｃＲｎ」又は「ＦｃＲｎ受容体」という用語は、ヒト又は霊長類胎盤、又は卵黄嚢（ウサギ）を介した胎児への、並びに初乳から小腸を介した新生児への母親のＩｇＧの輸送に関与することがわかっているＦｃ受容体（「ｎ」は、新生児を表す）を指す。また、ＦｃＲｎは、ＩｇＧ分子と結合し、これらを血清中に再循環させることにより、一定血清ＩｇＧレベルの維持に関与することも知られている。ＦｃＲｎとＩｇＧ分子の結合は、ｐＨ依存性であり、ｐＨ６．０で最適の結合が、またｐＨ＞７．０で弱い結合が起こる。ＩｇＧとＦｃγＲの結合によって、エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ）をトリガーすることができるのに対し、ｐＨ依存的様式でのＦｃＲｎとの結合により、ＩｇＧ抗体の血清半減期を延長することができる。エフェクター機能は、長い血清半減期を有する分子には望ましくないと考えられる。
【００７７】
本明細書で用いる「エフェクター機能」という用語は、ＦｃドメインとＦｃ受容体又はリガンドの相互作用から起こる生化学的イベントを指す。エフェクター機能としては、限定するわけではないが、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣが挙げられる。本明細書で用いる「エフェクター細胞」とは、１つ又は複数のＦｃ受容体を発現して、１つ又は複数のエフェクター機能を媒介する免疫系の細胞を意味する。エフェクター細胞としては、限定するわけではないが、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、肥満細胞、血小板、Ｂ細胞、大顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及びγδＴ細胞が挙げられ、これらは、限定するわけではないが、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルなどのあらゆる生物に由来するものであってよい。
【００７８】
「抗体依存性細胞媒介細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」という用語は、特定の細胞傷害性細胞（例えば、主としてＮＫ細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合したＦｃドメインを含むポリペプチド（例えば、抗体）が、上記の細胞傷害性エフェクター細胞を抗原提示「標的細胞」に特異的に結合させた後、細胞毒で標的細胞を死滅させることを可能にする、細胞傷害の形態を指す。（Ｈｏｇａｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２０１２，１１：３１３）。抗体及びそのフラグメント以外に、抗原発現標的細胞に特異的に結合する能力を有するＦｃドメイン、例えば、Ｆｃ融合物及びＦｃコンジュゲートタンパク質は、細胞媒介細胞傷害を実施する能力があることが考慮される。
【００７９】
簡略化のために、本明細書では、Ｆｃドメインを含むポリペプチドの活性から生じた細胞媒介細胞傷害もＡＤＣＣ活性と呼ぶ。本開示の特定のポリペプチドが、ＡＤＣＣにより標的細胞の溶解を媒介する能力を検定することができる。ＡＤＣＣ活性を評価するために、目的のポリペプチド（例えば、抗体）を、免疫エフェクター細胞と組み合わせた標的細胞に添加して、標的細胞の細胞溶解を引き起こす。細胞溶解は、一般に、溶解した細胞からの標識（例えば、放射性基質、蛍光染料又は天然の細胞内タンパク質）により検出される。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏＡＤＣＣアッセイの具体例が、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１（１９８７）；Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５８：１８３（２００１）；Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：２９（１９９５）に記載されている。これに代わり、又はこれに加えて、目的の抗体のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２（１９９８）に開示されているような動物モデルにおいて、評価することもできる。
【００８０】
本明細書で用いる「ＣＤＣ」という用語は、補体依存性細胞傷害、すなわち、補体系により媒介される標的細胞破壊の生化学的イベントを指す。
【００８１】
本明細書で用いる「半減期」又は「ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期」という用語は、所与の動物の循環における本開示の特定タイプのポリペプチドの生物学的半減期を指し、動物に投与した量の半分が、動物における循環及び／又は他の組織から排出されるのに必要な時間で表される。
【００８２】
本明細書で用いる「被験者（被験体）」という用語は、特定の治療の受容体となる任意の動物（例えば、哺乳動物）を指し、限定するわけではないが、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類などが挙げられる。「被験者」及び「患者」という用語は、ヒト被験者を指す場合、本明細書では置換え可能に用いられる。
【００８３】
本明細書で用いる「医薬組成物」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効となるような形態をしており、しかも、組成物が投与される被験者に対して許容不可能なほど毒性である別の成分を含まない製剤を指す。このような組成物は無菌であってよい。
【００８４】
本明細書に開示するポリペプチド（例えば、抗体）の「有効量」は、具体的に記載された目的を実施するのに十分な量である。「治療に有効な量」は、明示された目的に関して、経験に基づき、また常用の方法で決定することができる。本明細書で用いる「治療に有効な量」は、被験者又は哺乳動物の疾患若しくは障害を「治療する」のに有効なポリペプチド（例えば、抗体）、又はその他の薬剤の量を指す。
【００８５】
本明細書で用いる場合、「標識」という用語は、「標識された」ポリペプチドを作製するために、ポリペプチド（例えば、抗体）に直接若しくは間接的に結合させる検出可能な化合物又は組成物を指す。標識は、それ自体（例えば、放射性同位元素標識若しくは蛍光標識）で検出可能であるか、又は、酵素標識の場合には、検出可能な異質化合物若しくは組成物の化学的変質を触媒することができる。
【００８６】
「治療する」又は「治療」又は「治療すること」又は「緩和する」又は「緩和すること」という用語は、以下の両方を指す：（１）診断された病状又は障害の症状を治癒、減速、軽減する、及び／又はその進行を止める治療的措置、並びに（２）対象とする病状又は障害の発症を予防する、及び／又は遅らせる予防的措置。従って、治療が必要な者は、すでに障害を有する者；障害に罹患しやすい者；及び障害を予防しようとする者を含む。
【００８７】
「ベクター」という用語は、宿主細胞に、目的の１つ又は複数の遺伝子を送達する、またある態様では、発現することができる構築物を意味する。ベクターの例として、限定するわけではないが、ウイルス性ベクター、裸のＤＮＡ若しくはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミド又はファージベクター、カチオン縮合剤と結合したＤＮＡ若しくはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに被包されたＤＮＡ若しくはＲＮＡ発現ベクター、並びにプロデューサ細胞などの特定の真核細胞が挙げられる。
変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン
いくつかの態様では、延長された血清半減期を賦与し、エフェクター機能を大幅に低減するか、又は完全に排除する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインが提供される。これらの変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインは、例えば、望ましくない有害なＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を低減しながら、薬物動態的パラメータを好都合に改変する（同時に、投与回数の減少を可能にする）ために、例えば、既存の治療用抗体に導入することができる。
【００８８】
ＦｃドメインのＣＨ２領域に位置する突然変異（ＥＵ  Ｍ２５２Ｙ、ＥＵ  Ｓ２５４Ｔ、及びＥＵ  Ｔ２５６Ｅ置換に対応する）のＹＴＥセット（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５１７１−８０  ２００２；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：２３５１４−２４（２００６））は、ｐＨ６で循環受容体ＦｃＲｎとの結合を改善することにより、カニクイザルの抗体血清半減期を増加させることが判明している。やはりＦｃドメインのＣＨ２領域に位置するＦＥＳ三重突然変異（ＥＵ  Ｌ２３４Ｆ、ＥＵ  Ｌ２３５Ｅ、及びＥＵ  Ｐ３３１Ｓの置換セットに相当する）は、ＦＣγＲとＣ１ｑの結合を無効にすることによって、ＡＤＣＣ又はＣＤＣを誘発することができない抗体をもたらす（Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ  ６４：７００−７０４（２００８））。本明細書で明らかにするように、変異型Ｆｃドメイン、例えば、ある抗体の変異型Ｆｃドメインにおいて。これらの突然変異を組み合わせることにより、野生型親分子、例えば、野生型ＩｇＧ１  Ｆｃと比較して、低減した熱安定性を有するＦｃドメインが得られる。
【００８９】
本明細書で明らかにするように、ＥＵ位置２３４、２３５、及び３２２又は３３１（例えば、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｑ／Ｋ３２２Ｑ又はＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｑ／Ｐ３３１Ｇ）での特定のＩｇＧ  Ｆｃドメインアミノ酸置換は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを大幅に低減するか、又は排除する。ＥＵ位置２３４、２３５、及び３２２又は３３１でのこれらの特定のＩｇＧ  Ｆｃドメインアミノ酸置換をＹＴＥ突然変異と組み合わせると、得られる変異型Ｉｇ  Ｆｃドメインは、ＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異体と同等のＡＤＣＣ及びＣＤＣ特性を示すが、同時に大幅に向上した熱安定性も呈示する。
【００９０】
従って、ある態様では、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン（例えば、ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインの変異体又はそのＦｃＲｎ結合フラグメント）を含むポリペプチドが提供され、これは、以下：
（ｉ）ＥＵ位置２３４にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸、
（ｉｉ）ＥＵ位置２３５にアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）若しくはバリン（Ｖ）アミノ酸、並びに
（ｉｉｉ）ＥＵ位置３２２にアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）アミノ酸、又は（上記に代わり）３３１位にアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）アミノ酸
を含む。
【００９１】
一態様では、ＥＵ位置２３４にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸、ＥＵ位置２３５にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、並びにＥＵ位置３２２にグルタミン（Ｑ）アミノ酸を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。以後、この変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン及びアミノ酸置換のセットを「ＦＱＱ」と呼ぶ。
【００９２】
別の態様では、ＥＵ位置２３４にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸、ＥＵ位置２３５にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、並びにＥＵ位置３３１にグリシン（Ｇ）アミノ酸を含む、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。以後、この変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン及びアミノ酸置換のセットを「ＦＱＧ」と呼ぶ。
【００９３】
さらに別の態様では、ＥＵ位置２３４にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸、ＥＵ位置２３５にアラニン（Ａ）アミノ酸、並びにＥＵ位置３２２にグルタミン（Ｑ）アミノ酸を含む、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。以後、この変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン及びアミノ酸置換のセットを「ＦＡＱ」と呼ぶ。
【００９４】
特定の態様において、ＥＵ位置２３４、２３５、及び３２２又は３３１に、上に開示したアミノ酸置換の３つを含み、しかもＥＵ位置２５２、２５４、又は２５６のいずれか１つに、１つ又は複数のアミノ酸置換をさらに含む、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。従って、一態様では、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくはＥＵ位置２５２にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸、若しくはＥＵ位置２５２にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくはＥＵ位置２５２にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくはＥＵ位置２５２にトレオニン（Ｔ）アミノ酸をさらに含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン（例えば、ＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン）を含むポリペプチドが提供される。具体的態様では、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）アミノ酸をさらに含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン（例えば、ＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン）を含むポリペプチドが提供される。
【００９５】
別の態様において、ＥＵ位置２５４にトレオニン（Ｔ）アミノ酸をさらに含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン（例えば、ＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン）を含むポリペプチドが提供される。別の態様では、ＥＵ位置２５６にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、又はＥＵ位置２５６にセリン（Ｓ）アミノ酸、又はＥＵ位置２５６にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、又はＥＵ位置２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、又はＥＵ位置２５６にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸をさらに含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン（例えば、ＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン）を含むポリペプチドが提供される。具体的態様では、ＥＵ位置２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸をさらに含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン（例えば、ＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン）を含むポリペプチドが提供される。
【００９６】
特定の態様において、ＥＵ位置２３４、２３５、及び３２２又は３１１に、上に開示したアミノ酸置換の３つを含み、しかもＥＵ位置２５２、２５４、又は２５６からなる群から選択される２つの位置に置換をさらに含む、ポリペプチドが提供される。従って、一態様では、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）アミノ酸、及びＥＵ位置２５４にトレオニン（Ｔ）アミノ酸をさらに含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン（例えば、ＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン）を含むポリペプチドが提供される。
【００９７】
別の態様において、ＥＵ位置２５４にトレオニン（Ｔ）アミノ酸及びＥＵ位置２５６にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸をさらに含むＩｇＧ  Ｆｃドメイン（例えば、ＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン）を含むポリペプチドが提供される。さらに別の態様では、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）アミノ酸及びＥＵ位置２５６にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸をさらに含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン（例えば、ＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン）を含むポリペプチドが提供される。
【００９８】
特定の態様において、ＥＵ位置２３４、２３５、及び３２２又は３３１に、上に開示したアミノ酸の３つを含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン（例えば、ＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン）を含むポリペプチドが提供され、ここで、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインは、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）アミノ酸、ＥＵ位置２５４にトレオニン（Ｔ）アミノ酸、及びＥＵ位置２５６にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸をさらに含む。
【００９９】
ある態様において、ＥＵ位置２３４にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸、ＥＵ位置２３５にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、ＥＵ位置３２２にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）アミノ酸、ＥＵ位置２５４にトレオニン（Ｔ）アミノ酸、及びＥＵ位置２５６にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。
【０１００】
別の態様において、ＥＵ位置２３４にフェニルアラニン（Ｆ）、ＥＵ位置２３５にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、ＥＵ位置３３１にグリシン（Ｇ）アミノ酸、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）アミノ酸、ＥＵ位置２５４にトレオニン（Ｔ）アミノ酸、及びＥＵ位置２５６にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。さらに別の態様では、ＥＵ位置２３４にフェニルアラニン（Ｆ）、ＥＵ位置２３５にアラニン（Ａ）アミノ酸、ＥＵ位置３２２にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）アミノ酸、ＥＵ位置２５４にトレオニン（Ｔ）アミノ酸、及びＥＵ位置２５６にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。従って、本開示は、限定するわけではないが、ＦＱＱ突然変異とＹＴＥ突然変異を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチド、及びＦＡＱ突然変異とＹＴＥ突然変異を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドを包含する。
【０１０１】
ある態様において、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインの親ポリペプチドは、前述した置換に対応するアミノ酸の１つ又は複数をすでに含んでいる。例えば、親Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ４に見出されるように、ＥＵ位置２３４にフェニルアラニン（Ｆ）を含んでいてもよい。このような態様では、開示された置換の１つ又は複数を既に含む１つ又は複数のアミノ酸の修飾は必要ない。
【０１０２】
ある態様において、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインはヒト由来である。ある別の態様では、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインは非ヒト由来である。非ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインは、例えば、げっ歯類（例えば、ラット若しくはマウス）、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、又はニワトリ由来のものであってよい。ヒト変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインは、例えば、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４  Ｆｃドメインであってよい。変異型ＩｇＧ  ＦｃドメインがマウスＩｇＧ  Ｆｃドメインである場合、ドメインは、例えば、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、又はＩｇＧ３ドメインであってよい。
【０１０３】
ある態様において、配列番号９〜配列番号３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。別の態様では、配列番号９〜配列番号３２からなる群から選択されるアミノ酸配列から構成される変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。本明細書に記載する教示に基づき、配列番号９〜配列番号３２に記載される変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、１つの特定の対立遺伝子変異を呈示することは、当業者に理解されよう。従って、ある態様では、配列番号９〜配列番号３２に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインの様々な対立遺伝子変異を含むポリペプチドが提供される。既知の対立遺伝子変異の部位を表１〜３に記載する。
【０１０４】
ある態様において、表４に開示したアミノ酸配列（配列番号３７〜配列番号４０）の１つを含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。別の態様では、表４に開示したアミノ酸配列（配列番号３７〜配列番号４０）の１つからなる変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。本明細書に記載の教示に基づき、配列番号３７〜配列番号４０に記載される変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインが１つの具体的対立遺伝子変異を呈示することは、当業者に理解されよう。従って、ある態様では、配列番号３７〜配列番号４０に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインの異なる対立遺伝子変異を含むポリペプチドが提供される。既知の対立遺伝子変異の部位を表１〜３に記載する。
【０１０５】
【表４】
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【０１０６】
半減期の増加
ある態様において、上に開示した変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドは、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、向上した薬物動態（ＰＫ）特性を有する。ある態様では、向上したＰＫ特性の例は、例えば、向上したＦｃＲｎ受容体との結合、又は半減期の増加である。本明細書に記載される変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドは、哺乳動物（例えば、ヒト）において５日超、１０日超、１５日超、２０日超、２５日超、３０日超、３５日超、４０日超、４５日超、２ヵ月超、３ヵ月超、４ヵ月超、又は５ヵ月超の半減期（例えば、血清半減期）を有し得る。
【０１０７】
哺乳動物における、本明細書に記載のポリペプチドを含むＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメインの半減期増加によって、ポリペプチド（例えば、抗体又は抗体フラグメント）のより高い血清力価が得られるため、ポリペプチドの投与回数を減少する、及び／又は投与しようとするポリペプチドの濃度を低減することができる。
【０１０８】
具体的態様において、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）を含むポリペプチドを含有するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメインは、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して半減期の増加を呈示する。他の具体的態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）を含むポリペプチドを含有するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメインは、ＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ突然変異をさらに含み、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、半減期の増加、並びに低減したＦｃエフェクター機能を呈示し得る。
【０１０９】
具体的態様において、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）を含むポリペプチドを含有するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメインは、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ｐＨ７．４よりｐＨ６．０でＦｃＲｎに対する高い親和性を有する。他の具体的態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）を含むＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメインは、ＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱをさらに含み、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ｐＨ７．４よりｐＨ６．０でＦｃＲｎに対する高い親和性を示すと共に、低減したＦｃエフェクター機能を呈示し得る。
【０１１０】
Ｆｃ受容体との結合
本明細書に記載のポリペプチドを含むＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン（例えば、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体又はそのフラグメント）は、Ｆｃ領域に位置する少なくとも１つのアミノ酸残基の置換をさらに含んでもよく、ここで、このような置換により、少なくとも１つのＦｃリガンドに対する親和性の低減又は除去が起こる。前述したように、野生型Ｆｃドメインは、限定するわけではないが、ＦｃγＲ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ）及び補体タンパク質Ｃ１ｑなどのいくつかのリガンドと相互作用し、これらの相互作用は、様々なエフェクター機能及び下流のシグナル伝達イベント、例えば、限定するわけではないが、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）にとって不可欠である。従って、特定の態様において、開示した分子と同じアミノ酸配列を有するが、Ｆｃ領域に少なくとも１つのアミノ酸残基の置換を含まない分子と比較して、エフェクター機能を促進することを担うＦｃリガンドに対する親和性が低減又は除去されたＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１１１】
ある態様において、以下の特性の１つ又は複数を含む、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される：エフェクター機能（ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ）の低減又は除去、Ｆｃ受容体との結合の低減又は除去、又は細胞傷害性の低減又は除去。特定の態様では、ＦｃγＲ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ）及び／又は補体タンパク質Ｃ１ｑに対する低減した親和性を呈示する、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。いくつかの態様では、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、ＦｃＲｎ受容体との増大した結合を有する。
【０１１２】
当業者であれば、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが、改変されたＦｃγＲ及び／又はＣ１ｑ結合特性を有し得ることは理解されよう。結合特性の例として、限定するわけではないが、結合特異性、平衡解離定数（ＫＤ）、解離及び会合定数（それぞれｋｏｆｆ及びｋｏｎ）、結合親和性及び／又は結合活性が挙げられる。当分野では、平衡解離定数（ＫＤ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして定義される。
【０１１３】
当業者であれば、所与の治療又は診断用途にとってどの動態パラメータが最も重要であるかを決定することができる。例えば、１つ又は複数の正の調節因子（例えば、ＦｃγＲＩＩＩＡ）との結合を低減する修飾及び／又は阻害性Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ）との結合の増大は、ＡＤＣＣ活性を低減する上で好適である。従って、結合親和性の比（例えば、ＫＤ）は、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドのＡＤＣＣ活性が増大したか、又は低減したかを示すことができる。さらに、Ｃ１ｑとの結合を低減する修飾は、ＣＤＣ活性を低減又は排除する上で好適となる。
【０１１４】
変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン含有ポリペプチドのそのリガンドに対する親和性及び結合特性は、Ｆｃ−ＦｃγＲ相互作用、すなわちＦｃ領域と特異的結合を決定するための当分野で公知の様々なｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ方法（生化学又は免疫学的アッセイ）により決定することができる。このような方法として、平衡方法（例えば、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）若しくは放射免疫測定法（ＲＩＡ））、又は動力学（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析などの表面プラズマ共鳴）、並びに間接結合アッセイ、競合阻害アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動及びクロマトグラフィー（例えば、ゲル濾過）などのその他の方法が挙げられる。
【０１１５】
上記及びその他の方法は、検査しようとする１つ又は複数の成分への標識を用いてもよいし、及び／又は、限定するものではないが、色素原、蛍光、ルミネセンス、又は同位体標識などの各種検出方法を使用してもよい。結合親和性及び動力学の詳細な説明は、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，ｅｄ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）に見出すことができる。
【０１１６】
一態様において、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、１つ又は複数のＦｃ受容体、例えば、限定するわけではないが、ＦｃγＲＩ（ＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、及びＦｃγＲＩｃアイソフォームなど）；ＦｃγＲＩＩ（ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、及びＦｃγＲＩＩｃアイソフォームなど）；並びにＦｃγＲＩＩＩ（ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂアイソフォームなど）などに対する低減した結合親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、前述した１つ又は複数のＦｃ受容体に対する、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドの結合は完全に除去される。
【０１１７】
一態様において、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲＩに対する低減した親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍低いか、又は検出不可能なレベルまで低減したＦｃγＲＩ受容体に対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１１８】
別の態様において、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、又は少なくとも５％低い、ＦｃγＲＩ受容体に対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。ある態様では、ＦｃγＲＩは、アイソフォームＦｃγＲＩａである。別の態様では、ＦｃγＲＩは、アイソフォームＦｃγＲＩｂである。さらに別の態様では、ＦｃγＲＩは、アイソフォームＦｃγＲＩｃである。
【０１１９】
一態様において、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲＩＩに対する低減した親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍低い、ＦｃγＲＩＩ受容体に対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１２０】
別の態様において、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、又は少なくとも５％低い、ＦｃγＲＩＩ受容体に対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。ある態様では、ＦｃγＲＩＩは、アイソフォームＦｃγＲＩＩａである。別の態様では、ＦｃγＲＩＩａアイソフォームは、アロタイプＨ１３１である。さらに別の態様では、ＦｃγＲＩＩａアイソフォームは、アロタイプＲ１３１である。別の態様では、ＦｃγＲＩＩは、アイソフォームＦｃγＲＩＩｂである。ある態様では、ＦｃγＲＩＩｂアイソフォームは、ＦｃγＲＩＩｂ−１である。別の態様では、ＦｃγＲＩＩｂアイソフォームは、ＦｃγＲＩＩｂ−２である。さらに別の態様では、ＦｃγＲＩＩは、アイソフォームＦｃγＲＩＩｃである。
【０１２１】
一態様において、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲＩＩＩに対する低減した親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍低い、ＦｃγＲＩＩＩ受容体に対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１２２】
別の態様において、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、又は少なくとも５％低い、ＦｃγＲＩＩＩ受容体に対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。ある態様では、ＦｃγＲＩＩＩは、アイソフォームＦｃγＲＩＩＩａである。別の態様では、ＦｃγＲＩＩＩａは、アロタイプ１５８Ｖ（Ｆ１５８Ｖ対立遺伝子変異体）である。別の態様では、ＦｃγＲＩＩＩａは、アロタイプ１５８Ｆである。別の態様では、ＦｃγＲＩＩＩは、アイソフォームＦｃγＲＩＩＩｂである。別の態様では、ＦｃγＲＩＩＩｂは、アロタイプＮＡ１である。別の態様では、ＦｃγＲＩＩＩｂは、アロタイプＮＡ２である。
【０１２３】
本明細書に記載するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド（例えば、変異体ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体又はそのフラグメント）は、Ｆｃ領域に位置する少なくとも１つのアミノ酸残基の置換をさらに含んでもよく、このような置換により、ＦｃＲｎに対する増大した親和性が得られる。前述したように、野生型ＦｃドメインとＦｃＲｎのｐＨ依存性相互作用は、半減期を延長する。一態様において、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＦｃＲｎに対する増大した親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍高い、ＦｃＲｎ受容体に対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、又は少なくとも５％高い、ＦｃＲｎ受容体に対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。特定の態様では、ｐＨ７．４よりｐＨ６．０でＦｃＲｎに対する高い親和性を示す、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１２４】
一態様において、約１００ｎＭ〜約１００μＭ、又は約１００ｎＭ〜約１０μＭ、又は約１００ｎＭ〜約１μＭ、又は約１ｎＭ〜約１００μＭ、又は約１０ｎＭ〜約１００μＭ、又は約１μＭ〜約１００μＭ、又は約１０μＭ〜約１００μＭであるＦｃγＲ受容体に対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。特定の態様では、１μＭ超、５μＭ超、１０μＭ超、２５μＭ超、５０μＭ超、１００μＭ超であるＦｃγＲ受容体に対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、１００μＭ未満、５０μＭ未満、１０μＭ未満、５μＭ未満、２．５μＭ未満、１μＭ未満、又は１００ｎＭ未満、又は１０ｎＭ未満であるＦｃγＲ受容体に対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１２５】
具体的態様では、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲに対する低減した親和性を呈示するＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。別の具体的態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲに対する低減した親和性を呈示する。
【０１２６】
具体的態様では、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲとの結合が完全に除去されたＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。別の具体的態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲとの結合が完全に除去されている。
【０１２７】
具体的態様では、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＦｃＲｎに対する増大した親和性を呈示するＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。別の具体的態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、野生型Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＦｃＲｎに対する増大した親和性を呈示する。
【０１２８】
Ｃ１ｑとの結合
補体活性化経路は、補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）と、コグネート抗原と複合体化した１分子、例えば、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドとの結合によって開始される。補体活性化を評価するためには、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）に記載のようなＣＤＣアッセイを実施することができる。
【０１２９】
一態様において、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、Ｃ１ｑに対する低減した親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍低い、Ｃ１ｑ受容体に対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１３０】
別の態様では、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、又は少なくとも５％低い、Ｃ１ｑに対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１３１】
別の態様において、約１００ｎＭ〜約１００μＭ、又は約１００ｎＭ〜約１０μＭ、又は約１００ｎＭ〜約１μＭ、又は約１ｎＭ〜約１００μＭ、又は約１０ｎＭ〜約１００μＭ、又は約１μＭ〜約１００μＭ、又は約１０μＭ〜約１００μＭであるＣ１ｑに対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。特定の態様では、１μＭ超、５μＭ超、１０μＭ超、２５μＭ超、５０μＭ超、１００μＭ超であるＣ１ｑに対する親和性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１３２】
具体的態様では、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、Ｃ１ｑに対する低減した親和性を呈示するＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。別の具体的態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、Ｃ１ｑに対する低減した親和性を呈示する。
【０１３３】
特定の具体的態様では、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、Ｃ１ｑとの結合が完全に除去されたＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。別の具体的態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、Ｃ１ｑとの結合が完全に除去されている。
【０１３４】
低減したＡＤＣＣ活性
一態様において、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、低減したＡＤＣＣ活性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍低いＡＤＣＣ活性を呈示するか、又は３００μｇ／ｍｌの濃度で検出不可能なＡＤＣＣ活性を有するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。さらに別の態様では、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドに対して、少なくとも１０％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも１００％、又は少なくとも２００％、又は少なくとも３００％、又は少なくとも４００％、又は少なくとも５００％低減したＡＤＣＣ活性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。特定の態様では、検出不可能なＡＤＣＣ活性を有するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１３５】
具体的態様では、ＡＤＣＣ活性の低減又は除去は、本明細書に記載のＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが、Ｆｃリガンド及び／又は受容体に対して呈示する親和性の低減に起因すると考えられる。
【０１３６】
具体的態様において、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＡＤＣＣ活性の低減又は除去を呈示するＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。別の具体的態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＡＤＣＣ活性の低減又は除去を呈示する。
【０１３７】
本明細書に記載のＩｇＧ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、１つ又は複数のＦｃγＲ媒介エフェクター細胞機能を決定するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ機能アッセイによって特性決定することができる。特定の態様では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのものと同様の結合特性及びエフェクター細胞機能をｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて有するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。しかし、本開示は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで要望される表現型を呈示しないが、ｉｎ  ｖｉｖｏで要望される表現型を呈示する、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを排除しない。
【０１３８】
低減したＣＤＣ活性
一態様において、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、低減したＣＤＣ活性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍低いＣＤＣ活性を呈示する、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。さらに別の態様では、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドに対して、少なくとも１０％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも１００％、又は少なくとも２００％、又は少なくとも３００％、又は少なくとも４００％、又は少なくとも５００％低減したＣＤＣ活性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。特定の態様では、検出可能なＣＤＣ活性を一切呈示しないＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。具体的態様では、ＣＤＣ活性の低減及び／又は除去は、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが、Ｆｃリガンド及び／又は受容体に対して呈示する親和性の低減に起因すると考えられる。
【０１３９】
具体的態様において、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＣＤＣ活性の低減又は完全な除去を呈示するＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。別の具体的態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＣＤＣ活性の低減又は完全な除去を呈示する。
【０１４０】
低減した毒性
エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ及びＣＤＣ）は、臨床効果に寄与する重要な機序となり得るが、生物学的療法は、不要な細胞及び／又は標的を認識して攻撃するよう免疫系に指令する複雑な性質に関連する有害な毒性の課題を呈し得ることが当分野において理解されている。さらに、攻撃のための認識及び／又はターゲティングが、治療が必要な部位で実施されない場合、有害な毒性などの結果が起こり得る。従って、所望する作用の機序に応じて、関連する毒性を低減するように所与の治療分子のエフェクター機能を調節することができる。
【０１４１】
一態様において、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、低減した毒性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドより、少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍低い毒性を呈示する、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドに対して、少なくとも１０％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも１００％、又は少なくとも２００％、又は少なくとも３００％、又は少なくとも４００％、又は少なくとも５００％低減した毒性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１４２】
具体的態様において、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、低減した毒性を呈示するＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供される。別の具体的態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、野生型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、低減した毒性を呈示する。
【０１４３】
増大した安定性
別の態様において、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、増大した安定性、例えば、熱安定性を有するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。ある態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、増大した安定性、例えば、熱安定性を有する。具体的態様では、ＹＴＥ突然変異をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、増大した安定性、例えば、熱安定性を有する。
【０１４４】
本明細書で用いる「安定性」という用語は、環境条件（例えば、高温又は低温）に応じたポリペプチドの１つ又は複数の物理的性質の維持の当分野で認定された尺度を指す。特定の態様では、物理的性質は、ポリペプチドの共有結合構造の維持（例えば、タンパク質分解切断、不要な酸化又は脱アミノの非存在）であってよい。別の態様では、物理的性質はまた、適正に折りたたまれた状態のポリペプチドの存在（例えば、可溶性若しくは不溶性凝集体又は沈殿物の非存在）であってもよい。一態様において、ポリペプチドの安定性は、ポリペプチドの生物物理学的特性、例えば、熱不安定性、ｐＨアンフォールディングプロフィール、グリコシル化の安定な除去、生化学的機能（例えば、別のタンパク質に結合する能力）、フラグメント化率（％）、純度損失など、及び／又はこれらの組合せをアッセイすることにより測定する。別の態様では、生化学的機能は、相互作用の結合親和性によって証明される。
【０１４５】
一態様において、タンパク質安定性の尺度は、熱安定性、すなわち、熱攻撃に対する耐性である。安定性は、当分野では公知の方法、例えば、ＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィー）、ＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）、ＤＬＳ（動的光散乱法）などを用いて、測定することができる。熱安定性を測定する方法としては、限定するものではないが、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）、円偏光二色性（ＣＤ）、及び熱攻撃アッセイが挙げられる。
【０１４６】
ある態様において、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、増大した熱安定性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。ある態様では、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ＤＳＣにより測定される熱安定性に、少なくとも１℃、少なくとも２℃、少なくとも３℃、少なくとも４℃、少なくとも５℃、少なくとも６℃、少なくとも７℃、少なくとも８℃、少なくとも９℃若しくは少なくとも１０℃の増大を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ＤＳＣにより測定される熱安定性に、約１℃、約２℃、約３℃、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃若しくは約１０℃の増大を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１４７】
ある態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ＤＳＣにより測定される熱安定性に増大を呈示する。具体的態様では、ＹＴＥ突然変異をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＤＳＣにより測定される熱安定性に増大を呈示する。
【０１４８】
ある態様では、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、増大した熱安定性を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。ある態様では、熱安定性は、ＤＳＦ及びＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｏｒａｎｇｅ  ＤＳＦ蛍光プローブを用いて測定される。当業者であれば、ＤＳＦによりタンパク質安定性を測定するために、ＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｏｒａｎｇｅ以外の蛍光プローブ、例えば、中でもＮｉｌｅ  Ｒｅｄ、ＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｒｅｄ、ダポキシルスルホン酸、ビス−アニリノナフタレンスルホン酸（ビス−ＡＮＳ）、１−アニリノナフタレン−８−スルホン酸（１，８−ＡＮＳ）、又はＣＰＭなど（例えば、Ｎｉｅｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ２：２２１２−２１（２００７）を参照）を使用できることは理解されよう。
【０１４９】
ある態様では、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｏｒａｎｇｅを用いたＤＳＦにより測定される熱安定性に、少なくとも１℃、少なくとも２℃、少なくとも３℃、少なくとも４℃、少なくとも５℃、少なくとも６℃、少なくとも７℃、少なくとも８℃、少なくとも９℃若しくは少なくとも１０℃の増大を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。別の態様では、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｏｒａｎｇｅを用いたＤＳＦにより測定される熱安定性に、約１℃、約２℃、約３℃、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃若しくは約１０℃の増大を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。
【０１５０】
ある態様において、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｏｒａｎｇｅを用いたＤＳＦにより測定される熱安定性に増大を呈示する。具体的態様では、ＹＴＥ突然変異をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｏｒａｎｇｅを用いたＤＳＦにより測定される熱安定性に増大を呈示する。
【０１５１】
ある態様において、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿アッセイを用いて測定される増大した見かけ溶解度を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。例えば、Ｍｉｄｄａｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５４：３６７−３７０（１９７９）；Ｓｈｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，２０１０，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ；Ｇｉｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１００：１００９−２１（２０１１）を参照されたい。ある態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿アッセイを用いて測定される増大した見かけ溶解度を呈示する。具体的態様では、ＹＴＥ突然変異をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドと比較して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿アッセイを用いて測定される増大した見かけ溶解度を呈示する。
【０１５２】
貯蔵中のバイオ医薬品は、時間の経過と共に変化するが、その特性が製造業者の規格の範囲内に維持されている限り、安定しているとみなされる。製剤が、推奨される貯蔵条件で安定した状態を維持する日数は、貯蔵寿命と呼ばれる。製剤の貯蔵寿命を推定する基準として役立つデータ収集に一般に用いられる実験プロトコルは、安定性アッセイと呼ばれる。貯蔵寿命は、一般に、安定性試験の種類：リアルタイム安定性アッセイ及び加速安定性アッセイに従って推定する。加速安定性アッセイでは、製剤を増大したストレス条件：例えば、温度、湿度及びｐＨ下で貯蔵する。例えば、Ｔｙｄｅｍａｎ及びＫｉｒｋｗｏｏｄ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．１２：１９５−２０６（１９８４）；Ｓｏｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９０：１７５９−６６（２００１）；ＦＤＡ．Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｓｕｂｍｉｔｔｉｎｇ  ｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ．Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ（ＭＤ），１９８７を参照されたい。
【０１５３】
ある態様において、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、加速安定性アッセイを用いて測定される安定性の増大を呈示するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドが提供される。ある態様では、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換（例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ突然変異）をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、加速安定性アッセイを用いて測定される安定性の増大を呈示する。具体的態様では、ＹＴＥ突然変異をさらに含むＦＱＱ、ＦＱＧ又はＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドが提供され、これは、ＦＥＳ−ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、加速安定性アッセイを用いて測定される安定性の増大を呈示する。
【０１５４】
ある態様において、加速安定性アッセイは、長期間にわたるＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドのインキュベーション及び／又は高温でのインキュベーションを含む。別の態様では、加速安定性アッセイは、高濃度でのＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドのインキュベーションにより実施する。ある態様では、加速安定性アッセイによる測定は、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）を用いて実施する。他の態様では、加速安定性アッセイによる測定は、動的光散乱法（ＤＳＬ）を用いて実施する。当業者であれば、当分野で公知の各種方法によりポリペプチド凝集を測定できることを理解されよう。
【０１５５】
ある態様において、加速安定性アッセイの長期の時間は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヵ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヵ月、又は少なくとも４ヶ月である。別の態様では、加速安定性アッセイの長期の時間は、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヵ月、約２ヶ月、約３ヵ月、又は約４ヶ月である。
【０１５６】
ある態様において、加速安定性アッセイで用いるＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドの濃度は、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも４０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも４５ｍｇ／ｍｌ、又は少なくとも５０ｍｇ／ｍｌである。ある態様では、加速安定性アッセイで用いるＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドの濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約３５ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約４５ｍｇ／ｍｌ、又は約５０ｍｇ／ｍｌである。
【０１５７】
ある態様において、加速安定性アッセイで用いる温度は、少なくとも３０℃、少なくとも３５℃、少なくとも４０℃、少なくとも４５℃、少なくとも５０℃、少なくとも５５℃、又は少なくとも６０℃である。ある態様において、加速安定性アッセイで用いる高温は、約３０℃、約３５℃、約４０℃、約４５℃、約５０℃、約５５℃、又は約６０℃である。
【０１５８】
方法
ある態様において、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドのＦｃ誘導性エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ）を低減する方法が提供され、この方法は、以下：（ａ）ＦｃドメインにおけるＥＵ位置２３４のアミノ酸をフェニルアラニン（Ｆ）で置換するステップ；（ｂ）ＦｃドメインにおけるＥＵ位置２３５のアミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）で置換するステップ；（ｃ）ＦｃドメインのＥＵ位置３２２のアミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）で置換するステップ；又はＦｃドメインのＥＵ位置３３１のアミノ酸をアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）で置換するステップを含む。ある態様において、親ポリペプチドのＦｃドメインは、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）；及び／又はＥＵ位置２５４にトレオニン（Ｔ）；及び／又はＥＵ位置２５６にグルタミン酸（Ｅ）を含む。ある具体的態様では、親ポリペプチドのＦｃドメインは、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）、ＥＵ位置２５４にトレオニン（Ｔ）、及びＥＵ位置２５６にグルタミン酸（Ｅ）を含む。すなわち、親ポリペプチドのＦｃドメインは、ＹＴＥ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインである。
【０１５９】
ある態様において、ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドのＦｃ誘導性エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ）を低減すると共に、その半減期を増大する方法も提供され、この方法は、以下：（ａ）ＦｃドメインにおけるＥＵ位置２３４のアミノ酸をフェニルアラニン（Ｆ）で置換するステップ；（ｂ）ＦｃドメインにおけるＥＵ位置２３５のアミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）で置換するステップ；並びに（ｃ）ＦｃドメインのＥＵ位置３２２のアミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）で置換するステップ；又はＦｃドメインのＥＵ位置３３１のアミノ酸をアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）で置換するステップ；並びに（ｄ）ＥＵ位置２５２のアミノ酸をチロシン（Ｙ）で置換するステップを含む。ある態様では、この方法は、ＥＵ位置２５４のアミノ酸をトレオニン（Ｔ）で置換するステップ；及びＥＵ位置２５６のアミノ酸をグルタミン酸（Ｅ）で置換するステップをさらに含む。
【０１６０】
ある態様において、Ｆｃ誘導性エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ）を低減する方法、並びにＦｃ誘導性エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ）を低減すると共に、前述した半減期を増大する方法は、ＦｃドメインにおけるＥＵ位置２３４のアミノ酸のフェニルアラニン（Ｆ）による置換；ＦｃドメインにおけるＥＵ位置２３５のアミノ酸のグルタミン（Ｑ）による置換；ＦｃドメインにおけるＥＵ位置３２２のアミノ酸のグルタミン（Ｑ）による置換を含む。
【０１６１】
ある態様において、Ｆｃ誘導性エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ）を低減する方法、並びにＦｃ誘導性エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ）を低減すると共に、前述した半減期を増大する方法は、ＦｃドメインのＥＵ位置２３４のアミノ酸のフェニルアラニン（Ｆ）による置換；ＦｃドメインのＥＵ位置２３５のアミノ酸のグルタミン（Ｑ）による置換；ＦｃドメインのＥＵ位置３３１のアミノ酸のグリシン（Ｇ）による置換を含む。
【０１６２】
ある態様において、Ｆｃ誘導性エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ）を低減する方法、並びにＦｃ誘導性エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ）を低減すると共に、前述した半減期を増大する方法は、ＦｃドメインにおけるＥＵ位置２３４のアミノ酸のフェニルアラニン（Ｆ）による置換；ＦｃドメインにおけるＥＵ位置２３５のアミノ酸のアラニン（Ａ）による置換；ＦｃドメインにおけるＥＵ位置３２２のアミノ酸のグルタミン（Ｑ）による置換を含む。
【０１６３】
抗体及びそのフラグメント
ある態様において、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、抗原結合ドメインを含む。ある具体的態様では、抗原結合ドメインは、抗体、例えば、モノクローナル抗体、又はその抗原結合ドメインであってよい。抗原結合ドメインは、完全長抗体、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体、又はそのフラグメントであってよい。ある態様では、抗原結合ドメインは、例えば、一本鎖抗体；ダイアボディ；抗体のポリペプチド鎖；Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；又はＦ（ａｂ）フラグメントを含む。
【０１６４】
「抗体変異体（抗体バリアント）」という用語は、本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン含有ポリペプチドを指し、ここで、このポリペプチドは抗体である。抗体変異体としては、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）抗体、キメラ抗体、抗イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体、及びこれらのいずれかのＦｃドメイン含有フラグメントが挙げられる。ある態様では、抗体変異体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性のフラグメント、すなわち、抗原結合ドメインを含有する分子を包含し、ここで、これらのフラグメントは、本明細書に記載する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む別の免疫グロブリンドメインに融合又は結合させることができる。一態様では、抗体変異体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【０１６５】
本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体変異体及びそのフラグメントは、鳥類及び哺乳動物（例えば、ヒト、マウス若しくはラットなどのげっ歯類、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、又はニワトリ）を含むあらゆる動物に由来するものでよい。具体的態様では、抗体変異体は、ヒト又はヒト化モノクローナル抗体である抗体変異体が提供される。本明細書で用いる場合、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、また、ヒト免疫グロブリン、又はヒト遺伝子由来の抗体を発現するマウスから単離された抗体を含む。
【０１６６】
抗体変異体は、単一特異性、二重特異性、三重特異性であってもよいし、又はより大きな特異性を有することもできる（多重特異性抗体）。多重特異性抗体変異体は、要望される標的分子の様々なエピトープに特異的に結合することができるか、又は標的分子と、異種ポリペプチド若しくは固体支持体材料などの異種エピトープの両方に特異的に結合することができる。例えば、以下の文献を参照されたい：国際公開番号：国際公開第９４／０４６９０号パンフレット；国際公開第９３／１７７１５号パンフレット；国際公開第９２／０８８０２号パンフレット；国際公開第９１／００３６０号パンフレット；及び国際公開第９２／０５７９３号パンフレット；Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号明細書、米国特許第４，７１４，６８１号明細書、米国特許第４，９２５，６４８号明細書、米国特許第５，５７３，９２０号明細書、及び米国特許第５，６０１，８１９号明細書；並びにＫｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７（１９９２）。二重特異性又は多重特異性抗体を作製するための方法は当分野では公知である。
【０１６７】
変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体を生成する方法
抗体変異体又はそのフラグメントは、特に、化学的合成又は組換え発現技術により、抗体の合成のために当分野では公知のいずれかの方法により生成することができる。
【０１６８】
モノクローナル抗体変異体は、ハイブリドーマ、組換え、及びファージ展示技術の使用、又はこれらの組合せなど、当分野では公知の多様な技術を用いて作製することができる。例えば、モノクローナル抗体変異体は、ハイブリドーマ技術を用いて生成することができ、そのようなものとして、当分野では公知であり、例えば、以下の文献に教示されているものがある：Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）。ハイブリドーマ技術を用いて、特定の抗体を生成及びスクリーニングする方法は常用であり、当分野では公知である。
【０１６９】
抗体変異体は、当分野では公知の様々な方法により作製することができる。非制限的例は、抗体コード領域を（例えば、ハイブリドーマから）単離するステップと、１つ又は複数のＦｃドメインアミノ酸置換を単離された抗体コード領域に導入するステップとを含む。あるいは、本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインをコードするベクターに可変領域をサブクローン化することも可能である。
【０１７０】
特定のエピトープを認識する抗体変異体フラグメントは、当分野では公知の任意の技術により作製することができる。ヒトにおける抗体変異体のｉｎ  ｖｉｖｏ使用及びｉｎ  ｖｉｔｒｏ検出アッセイなどのいくつかの用途の場合、ヒト又はキメラ抗体変異体を使用することが有利となり得る。完全にヒトの抗体は、ヒト被験者の治療的処理の場合、特に望ましい。本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むヒト抗体又はそのフラグメントは、当分野では公知の様々な方法によって作製することができる。例えば、以下の文献を参照されたい：米国特許第４，４４４，８８７号明細書、米国特許第４，７１６，１１１号明細書；並びに国際公開番号：国際公開第９８／４６６４５号パンフレット、国際公開第９８／５０４３３号パンフレット、国際公開第９８／２４８９３号パンフレット、国際公開第９８／１６６５４号パンフレット、国際公開第９６／３４０９６号パンフレット、国際公開第９６／３３７３５号パンフレット、及び国際公開第９１／１０７４１号パンフレット。
【０１７１】
本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むキメラ抗体変異体又はそのフラグメントは、当分野では公知の様々な方法によって作製することができる。例えば、以下の文献を参照されたい：Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２（１９８９）；米国特許第５，８０７，７１５号明細書、米国特許第４，８１６，５６７号明細書、米国特許第４，８１６，３９７号明細書、及び米国特許第６，３１１，４１５号明細書。特定の態様では、ヒト化抗体変異体又はそのフラグメントは、本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む。ヒト化抗体変異体は、当分野では公知の様々な技術を用いて生成することができ、そのような技術として、限定するわけではないが、以下のものが挙げられる：ＣＤＲグラフティング（欧州特許第２３９，４００号明細書；国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；及び米国特許第５，２２５，５３９号明細書、米国特許第５，５３０，１０１号明細書、及び米国特許第５，５８５，０８９号明細書）、ベニア化若しくは再表面化（欧州特許第５９２，１０６号明細書及び欧州特許第５１９，５９６号明細書；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７：８０５−８１４（１９９４）；及びＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９６９−９７３（１９９４））、チェーンシャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号明細書）、並びに例えば、下記の文献に開示されている技術：米国特許第６，４０７，２１３号明細書及び米国特許第５，７６６，８８６号明細書、国際公開第９３１７１０５号パンフレット、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−２５（２００２）、Ｃａｌｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３：３５３−６０（２０００）、Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−７９（２０００），Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−８４（１９９７）、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．９：８９５−９０４（１９９６）、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ（１９９５）、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：１７１７−２２（１９９５），Ｓａｎｄｈｕ，Ｇｅｎｅ  １５０：４０９−１０（１９９４）、及びＰｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５：９５９−７３（１９９４）。
【０１７２】
ヒト抗体変異体はまた、機能性内在性免疫グロブリン遺伝子を発現することができないが、ヒト免疫グロブリンを発現することができるトランスジェニックマウスを用いて生成することもできる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体をランダムに、又は相同的組換えにより、マウス胚性幹細胞に導入することができる。あるいは、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域、及び多様性領域もマウス胚性幹細胞に導入することができる。マウス重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同性組換えによりヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入とは別に、又は導入と同時に非機能性にすることができる。特に、ＪＨ領域の同型接合性欠失は、内在性抗体生成を妨げる。修飾された胚性幹細胞を増殖して、マイクロインジェクションで芽細胞に導入することにより、キメラマウスを作製する。次に、キメラマウスを繁殖させて、ヒト抗体を発現する同型接合性子孫を生産する。トランスジェニックマウスを通常の方法で、選択した抗原又はその免疫原性フラグメントで免疫する。
【０１７３】
抗原に対するモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を用いて免疫したトランスジェニックマウスから得ることができる。トランスジェニックマウスが保有するヒト免疫グロブリントランスジーンは、Ｂ細胞分化の間に再配列し、続いて、クラススイッチ及び体細胞突然変異を被る。従って、このような技術を用いて、治療に有用な抗体を生成することが可能である。ヒト抗体を生成する上記の技術の概要については、Ｌｏｎｂｅｒｇ及びＨｕｓｚａｒ，Ｉｎｔ．Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）を参照されたい。ヒト抗体及びヒトモノクローナル抗体を生成する上記の技術並びにこのような抗体を生成するためのプロトコルの詳細については、例えば、以下の文献を参照されたい：国際公開第９８／２４８９３号パンフレット、国際公開第９６／３４０９６号パンフレット、及び国際公開第９６／３３７３５号パンフレット；並びに米国特許第５，４１３，９２３号明細書、米国特許第５，６２５，１２６号明細書、米国特許第５，６３３，４２５号明細書、米国特許第５，５６９，８２５号明細書、米国特許第５，６６１，０１６号明細書、米国特許第５，５４５，８０６号明細書、米国特許第５，８１４，３１８号明細書、及び米国特許第５，９３９，５９８号明細書。
【０１７４】
ポリヌクレオチド
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供される。また、高度ストリンジェンシー、中度又は低度ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドも提供される。
【０１７５】
ある態様では、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、好適な供給源から得られる親ポリヌクレオチド配列から生成することができる。ポリヌクレオチド配列を取得したら、ヌクレオチド配列の操作のための当分野では公知の方法、例えば、組換えＤＮＡ技術、部位指定突然変異、ＰＣＲなど（例えば、下記の文献に記載されている技術を参照：Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．１９９８，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  ＮＹ；尚、いずれの文献も参照としてその全体を本明細書に組み込む）を用いて、ポリヌクレオチド配列を操作することにより、異なるアミノ酸配列を有するＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを作製する、例えば、アミノ酸置換、欠失、及び／又は挿入を形成することができる。
【０１７６】
別の態様では、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドからアセンブリングすることができる（例えば、Ｋｕｔｍｅｊｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７：２４２（１９９４）に記載のように）が、これは、手短には、コード配列の一部を含む重複オリゴヌクレオチドの合成、これらオリゴヌクレオチドのアニーリング及び連結、続いてＰＣＲによる連結オリゴヌクレオチドの増幅を含む。
【０１７７】
特定の抗原及び融合相手
変異体ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む結合分子、例えば、抗体、融合タンパク質、又はコンジュゲートを用いて、ほぼ全ての分子をターゲティングすることができる。さらに、ほぼ全ての分子を、本明細書に記載の変異体ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む融合タンパク質又はコンジュゲートに組み込むこともできる。
【０１７８】
これらの具体的標的分子及び／又は融合相手として、限定するわけではないが、以下のタンパク質のリストに属するタンパク質、並びにサブユニット、ドメイン、部分及びエピトープが挙げられる：レニン；ヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激ホルモン；リポタンパク質；α−１−抗トリプシン；インスリンＡ鎖；インスリンＢ鎖；プロインスリン；卵胞刺激ホルモン；カルシトニン；黄体形成ホルモン；グルカゴン；第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩＣ因子、第ＩＸ因子、組織因子（ＴＦ）、及びフォン・ヴィレブランド因子などの凝固因子；プロテインＣなどの抗凝固因子；心房ナトリウム利尿因子；肺サーファクタント；ウロキナーゼ又はヒト尿又は組織プラスミノーゲン活性化因子などのプラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）；ボンベシン；トロンビン；造血成長因子；腫瘍壊死因子−α及び−β；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｎｏｒｍａｌｌｙ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ）；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ−１−α）；ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミン；ミュラー管抑制物質；リラキシンＡ鎖；リラキシンＢ鎖；プロレラキシン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；β−ラクタマーゼなどの微生物タンパク質；ＤＮａｓｅ；ＩｇＥ；ＣＴＬＡ−４などの細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）；例えば、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲなどのホルモン又は成長因子に対する受容体；αインターフェロン（α−ＩＦＮ）、βインターフェロン（β−ＩＦＮ）及びγインターフェロン（γ−ＩＦＮ）などのインターフェロン；プロテインＡ又はＤ；リウマチ因子；骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニュートロフィン−３、−４、−５若しくは−６（ＮＴ−３、ＮＴ−４、ＮＴ−５若しくはＮＴ−６）、又は神経成長因子などの神経栄養因子；血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）；ＡＦＧＦ及びＰＦＧＦなどの線維芽成長因子；上皮成長因子（ＥＧＦ）；ＴＧＦ−α及びＴＧＦ−β（ＴＧＦ−１、ＴＧＦ−２、ＴＧＦ−３、ＴＧＦ−４、若しくはＴＧＦ−５など）のようなトランスフォーミング増殖因子；インスリン様成長因子Ｉ及びＩＩ（ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩ）；ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、インスリン様成長因子結合タンパク質；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ５２、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ８０及びＣＤ１４７などのＣＤタンパク質；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；インターフェロン−α、−β及び−γなどのインターフェロン；Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＧ−ＣＳＦなどのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；インターロイキン、例えば、ＩＬ−１〜ＩＬ−１３；ＴＮＦα、スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；例えば、ＡＩＤＳエンベロープの一部（例：ｇｐ１２０）などのウイルス抗原；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；調節タンパク質；細胞接着分子、例えば、ＬＦＡ−１、Ｍａｃ  １、ｐ１５０．９５、ＶＬＡ−４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−３及びＶＣＡＭ、ａ４／ｐ７インテグリン、並びに（Ｘｖ／ｐ３インテグリン（１つ又は複数のいずれかのそのサブユニットを含む）、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、α７、α８、α９、αＤ、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ５１、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ４１、αＩＩｂ、αＩＥＬｂなどのインテグリンαサブユニット；ＣＤ２９、ＣＤ１８、ＣＤ６１、ＣＤ１０４、β５、β６、β７及びβ８などのインテグリンβサブユニット；限定するわけではないが、αＶβ３、αＶβ５及びα４β７などのインテグリンサブユニットの組合せ；アポトーシス経路のメンバー；ＩｇＥ；血液型抗原；ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体；肥満（ＯＢ）受容体；ｍｐ１受容体；ＣＴＬＡ−４；タンパク質Ｃ；ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ４、ＥｐｈＢ２などのＥｐｈ受容体；ＨＬＡ−ＤＲなどのヒト白血球抗原（ＨＬＡ）；補体受容体ＣＲ１、Ｃ１Ｒｑなどの補体タンパク質及びＣ３及びＣ５などのその他の補体因子；ＧｐＩｂα、ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ及びＣＤ２００などの糖タンパク質受容体；並びに上に挙げたポリペプチドのいずれかの断片。
【０１７９】
ある態様では、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド（例えば、抗体変異体、融合タンパク質、又はコンジュゲート）は、限定するわけではないが、以下に挙げる癌抗原に特異的に結合することができる：ＡＬＫ受容体（プレイトロフィン受容体）、プレイトロフィン、ＫＳ１／４全身性癌抗原；卵巣癌抗原（ＣＡ１２５）；前立腺酸性ホスフェート；前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）；メラノーマ関連抗原ｐ９７；メラノーマ抗原ｇｐ７５；高分子量メラノーマ抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）；前立腺特異的膜抗原；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；多形性上皮ムチン抗原；ヒト乳脂肪球抗原；ＣＥＡ、ＴＡＧ−７２、ＣＯ１７−１Ａ、ＧＩＣＡ１９−９、ＣＴＡ−１及びＬＥＡなどの結腸直腸腫瘍関連抗原；バーキットリンパ腫抗原−３８．１３；ＣＤ１９；ヒトＢ細胞リンパ腫抗原−ＣＤ２０；ＣＤ３３；ガングリオシドＧＤ２、ガングリオシドＧＤ３、ガングリオシドＧＭ２及びガングリオシドＧＭ３などのメラノーマ特異的抗原；腫瘍特異的移植型細胞表面抗原（ＴＳＴＡ）；Ｔ抗原、ＤＮＡ腫瘍ウイルス及びＲＮＡ腫瘍ウイルスのエンベロープ抗原などのウイルス誘導性腫瘍抗原；結腸のＣＥＡ、５Ｔ４癌胎児栄養膜糖タンパク質及び膀胱癌腫瘍癌胎児抗原などの癌胎児抗原−α−フェトプロテイン；ヒト肺癌抗原Ｌ６及びＬ２０などの分化抗原；線維肉腫の抗原；ヒト白血病Ｔ細胞抗原−Ｇｐ３７；ネオ糖タンパク質；スフィンゴ脂質；ＥＧＦＲ（表皮成長因子受容体）などの乳癌抗原；ＮＹ−ＢＲ−１６；ＮＹ−ＢＲ−１６及びＨＥＲ２抗原（ｐ１８５ＨＥＲ２）；多形性上皮ムチン（ＰＥＭ）；悪性ヒトリンパ球抗原−ＡＰＯ−１；胎児赤血球に見出されるＩ抗原などの分化抗原；成体赤血球に見出される初期内胚葉Ｉ抗原；着床前胚；胃腺癌に認められるＩ（Ｍａ）；乳房上皮に認められるＭ１８、Ｍ３９；骨髄細胞に認められるＳＳＥＡ−１；ＶＥＰ８；ＶＥＰ９；Ｍｙ１；Ｖａ４−Ｄ５；結腸直腸癌に認められるＤ１５６−２２；ＴＲＡ−１−８５（血液型Ｈ）；精巣及び卵巣癌に認められるＳＣＰ−１；結腸腺癌に認められるＣ１４；肺腺癌に認められるＦ３；胃癌に認められるＡＨ６；Ｙハプテン；胚性癌細胞に認められるＬｅｙ；ＴＬ５（血液型Ａ）；Ａ４３１細胞に認められるＥＧＦ受容体；膵臓癌に認められるＥ１シリーズ（血液型Ｂ）；胚性癌細胞に認められるＦｃ１０．２；胃腺癌抗原；腺癌に認められるＣＯ−５１４（血液型Ｌｅａ）；腺癌に認められるＮＳ−１０；ＣＯ−４３（血液型Ｌｅｂ）；Ａ４３１細胞のＥＧＦ受容体に認められるＧ４９；結腸腺癌に認められるＭＨ２（血液型ＡＬｅｂ／Ｌｅｙ）；結腸癌に認められる１９．９；胃癌ムチン；骨髄細胞に認められるＴ５Ａ７；メラノーマに認められるＲ２４；胚性癌に認められる４．２、ＧＤ３、Ｄ１．１、ＯＦＡ−１、ＧＭ２、ＯＦＡ−２、ＧＤ２、及びＭ１：２２：２５：８並びに４〜８細胞期胚に認められるＳＳＥＡ−３及びＳＳＥＡ−４；皮膚Ｔ細胞リンパ腫抗原；ＭＡＲＴ−１抗原；シアリル（Ｓｉａｌｙ）Ｔｎ（ＳＴｎ）抗原；結腸癌ＮＹ−ＣＯ−４５；肺癌抗原ＮＹ−ＬＵ−１２変異型Ａ；腺癌抗原ＡＲＴ１；腫瘍随伴性関連脳−精巣癌抗原（腫瘍と神経組織の共通抗原（ｏｎｃｏｎｅｕｒｏｎａｌ  ａｎｔｉｇｅｎ）ＭＡ２；腫瘍随伴性神経抗原）；神経−腫瘍学的腹側抗原(ｎｅｕｒｏ−ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｖｅｎｔｒａｌ  ａｎｔｉｇｅｎ)２（ＮＯＶＡ２）；肝細胞癌抗原遺伝子５２０；腫瘍関連抗原ＣＯ−０２９；腫瘍関連抗原ＭＡＧＥ−Ｃ１（癌／精巣抗原ＣＴ７）、ＭＡＧＥ−Ｂ１（ＭＡＧＥ−ＸＰ抗原）、ＭＡＧＥ−Ｂ２（ＤＡＭ６）、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−４−ａ、ＭＡＧＥ−４−ｂ及びＭＡＧＥ−Ｘ２；癌／精巣抗原（ＮＹ−ＥＯＳ−１）並びに上に挙げたポリペプチドのいずれかのフラグメント。
【０１８０】
さらに別の態様において、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド（例えば、抗体変異体、融合タンパク質、又はコンジュゲート）は、感染因子（例えば、細菌、ウイルス）に特異的に結合することができる。感染性細菌としては、限定するものではないが、グラム陰性菌及びグラム陽性菌が挙げられる。グラム陽性菌としては、限定するわけではないが、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）種、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）種、及び連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種が挙げられる。グラム陰性菌としては、限定するものではないが、大腸菌属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、及びサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種が挙げられる。感染性細菌の具体的例を以下に挙げるが、これらに限定されるわけではない：ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、ボレリア菌（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）種（例えば、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・イントラセルラレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、カンサシ菌（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、マイコバクテリウム・ゴルドナエ（Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ））、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、緑濃菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群ストレプトコッカス属）、ストレプトコッカス・アガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群ストレプトコッカス属）、ストレプトコッカス属（ビリダンス群）、フェカリス菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・ボビス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、ストレプトコッカス属（嫌気性種）、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）種、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈａｅ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、エンテロバクター・エロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種、フソバクテリウム・ヌクレアツム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）、トレポネーマ・ペルテヌエ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リケッチア属（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、及びアクチノミセス・イスラエリ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｉｉ）。ウイルスとしては、限定するものではないが、エンテロウイルス、ロタウイルス、アデノウイルス、肝炎ウイルスがある。ヒトにおいて認められているウイルスの具体的例を以下に挙げるが、これらに限定されるわけではない：レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）；ピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキー（Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ）ウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；カリシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、胃腸炎を引き起こす株）；トガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、コロナウイルス）；ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス科（Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、エボラウイルス）；パラミクソウイルス科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；オルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、インフルエンザウイルス）、ブンガウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ハンタン（Ｈａｎｔａａｎ）ウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルス（ｐｈｌｅｏｂｏｖｉｒｕｓ）及びナイロ（Ｎａｉｒｏ）ウイルス）；アレナウイルス科（Ａｒｅｎａ  ｖｉｒｉｄａｅ）（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、レオウイルス、オルビウイルス、及びロタウイルス）；ビルナウイルス科（Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）；ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）（パルボウイルス）；パポバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）（大部分のアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）（例えば単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）Ｉ及びＩＩ、帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ））；ポックスウイルス科（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；イリドウイルス科（Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、アフリカブタ熱ウイルス）；並びに未分類ウイルス（例えば、海綿状脳疾患の病原体、デルタ肝炎の病原体、非Ａ型、非Ｂ型肝炎の病原体；ノーウォーク（Ｎｏｒｗａｌｋ）及び関連ウイルス及びアストロウイルス）。
【０１８１】
コンジュゲート及び誘導体
ある態様において、本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインは、限定するわけではないが、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、融合タンパク質、核酸分子、小分子、模倣剤、合成薬、無機分子、及び有機分子などの１つ又は複数の部分と結合又は融合させることができる。
【０１８２】
ある態様において、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、例えば、ポリペプチドへのあらゆるタイプの分子の共有結合、又は化学若しくは酵素修飾により修飾された誘導体を含む。例えば、誘導体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペギル化、リン酸化、アミド化、公知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンド若しくはその他のタンパク質との連結により修飾されたポリペプチドを含む。様々な化学修飾のいずれかを公知の技術により実施することができ、このような技術として、限定するわけではないが、特異的化学分解、アセチル化、ホルミル化などがある。さらに、誘導体は、１つ又は複数の非古典的アミノ酸を含有することもできる。
【０１８３】
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを、高分子ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリマー分子に結合させることができる。ＰＥＧは、ポリペプチドのＮ−若しくはＣ−末端とのＰＥＧの部位特異的結合、又はリシン残基に存在するエプシロン−アミノ基のいずれかにより、多機能リンカーを用いて、又は用いずに、ポリペプチドに結合させることができる。生物活性の損失を最小限にする直鎖状又は分岐状ポリマー誘導体化を用いることができる。
【０１８４】
異種タンパク質若しくはポリペプチド（又はそれらの断片、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０若しくは少なくとも１００アミノ酸）に化学的に結合させた（共有及び非共有結合の両方を含む）ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを含むコンジュゲートが提供される。結合は、必ずしも直接である必要はなく、リンカーを介して実施することもできる。このようなリンカー分子は、当分野では公知であり、以下の文献に記載されている：Ｄｅｎａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４：２４８３（１９９８）；Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０：５５３（１９９９）；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２６：９４３（１９９９）；Ｇａｒｎｅｔｔ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５３：１７１（２００２）。
【０１８５】
さらに、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドに結合させた異種タンパク質、ペプチド若しくはポリペプチドを含む組成物も提供される。ポリペプチドを抗体部分と融合又は結合させる方法は当分野において公知である。例えば、以下の文献を参照されたい：米国特許第５，３３６，６０３号明細書、米国特許第５，６２２，９２９号明細書、第５，３５９，０４６号明細書、第５，３４９，０５３号明細書、第５，４４７，８５１号明細書、及び第５，１１２，９４６号明細書；欧州特許第３０７，４３４号明細書、欧州特許第３６７，１６６号明細書；国際公開第９６／０４３８８号パンフレット及び国際公開第９１／０６５７０号パンフレット；Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１０５３５−３９（１９９１，）；Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−５６００（１９９５）；Ｖｉｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：１１３３７−４１（１９９２）。
【０１８６】
ある態様において、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを診断又は検出可能な薬剤と結合させる。このようなコンジュゲートは、特定の治療法の効果の決定などの臨床試験手順の一環として炎症性疾患の発症又は進行をモニター又は予測する上で有用となり得る。このような診断及び検出は、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを検出可能な物質と結合させることにより達成することができる。
【０１８７】
ある態様において、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを治療剤と結合させる。ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、細胞毒素、例えば、静細胞若しくは細胞致死物質、治療剤又は放射性金属イオン、例えば、α放射体などの治療部分と結合させることができる。細胞毒素若しくは細胞致死物質は、細胞に対して有害な任意の物質を含む。
【０１８８】
ある態様において、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、所与の生体応答を改変する治療剤又は薬物部分と結合させることができる。治療剤又は薬物部分が古典的化学治療剤に限定されると解釈すべきではない。例えば、薬物部分は、要望される生体活性を有するタンパク質又はポリペプチドであってよい。このようなタンパク質として、例えば、毒素、シトシン、又は成長因子などを挙げることができる。
【０１８９】
さらには、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、放射性金属イオン（放射性金属の例については上記を参照）を結合させるのに有用な放射性物質又は大環状キレート剤などの治療部分と結合させることができる。
【０１９０】
本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体、すなわち、抗体変異体を治療部分に結合させることができる。治療部分を抗体に結合させる技術は公知であり、例えば、以下の文献を参照されたい：Ａｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３−５６．（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  （２ｎｄ  Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３−５３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ”，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５−５０６（１９８５）；“Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３−１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９８５）、並びにＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８（１９８２）。あるいは、Ｓｅｇａｌにより米国特許第４，６７６，９８０号明細書に記載されているように、抗体変異体を第２抗体と結合させることにより、抗体ヘテロコンジュゲートを形成することもできる。
【０１９１】
ある態様において、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、１つ又は複数の改変糖型、すなわち、このポリペプチドに共有結合している炭水化物組成物を含む。改変糖型は、限定するわけではないが、エフェクター機能の低減などの様々な目的に有用となり得る。改変糖型は、当業者には公知の任意の方法、例えば、改変又は変異型発現株の使用、１種又は複数種の酵素（例えば、ＤＩ  Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩ１１））との共発現、様々な生物若しくは様々な生物由来の細胞株におけるＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドの発現、又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを発現させた後の炭水化物の修飾により作製することができる。改変糖型を作製する方法は当分野では公知であり、限定するわけではないが、以下の文献に記載のものを含む：Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６−１８０（１９９９）；Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．７４：２８８−２９４（２００１）；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０（２００２）；Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６−３４７３（２００３）；Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−４９（２００４）；米国特許第６，６０２，６８４号明細書；米国特許第２００９／０００４１７９号明細書；国際公開第００／６１７３９号パンフレット、国際公開第０１／２９２２４６号パンフレット、国際公開第０２／３１１１４０号パンフレット、国際公開第０２／３０９５４号パンフレット、国際公開第０７／００５７８６号パンフレット。
【０１９２】
融合タンパク質
Ｆｃ融合タンパク質は、免疫グロブリン又はその断片のＦｃドメインと融合相手（一般に、任意のタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、又は小分子であってよい）を結合させる。Ｆｃ融合タンパク質の非Ｆｃ部分、すなわち融合相手の役割は、必ずというわけではないが、多くの場合、標的との結合を媒介することであるため、抗体の可変領域と機能的に類似している。従って、融合タンパク質、すなわち、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドと、ある分子（例えば、細胞表面受容体、ケモカインなど）に特異的に結合する融合相手が提供される。
【０１９３】
ある態様において、融合タンパク質は、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質スカホールド、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、Ｔａｎｄａｂ（タンデムダイアボディ）、又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドに融合する抗体模倣物を含んでもよい。ある態様では、融合タンパク質は、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質スカホールド、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、Ｔａｎｄａｂ、又は抗体模倣物とＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをつなげるリンカー領域を含んでもよい。ポリペプチドをつなげて新規の連結された融合ポリペプチドにするための天然及び人工のペプチドリンカーの使用は、文献からよく知られている（Ｈａｌｌｅｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４，５２６０−５２６８（１９８９）；Ａｌｆｔｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８，７２５−７３１（１９９５）；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＆  Ｓａｕｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３５，１０９−１１６（１９９６）；Ｋｈａｎｄｅｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，３２１９０−３２１９７（１９９７）；Ｆａｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８），Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １３９，２４５９−２４６４；Ｓｍａｌｌｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９），Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１２，６２３−６３０；米国特許第５，８５６，４５６号明細書）。
【０１９４】
ある態様において、融合タンパク質は、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを融合相手と結合させるものでよく、融合相手は、一般に、タンパク質であってよく、このようなタンパク質として、限定するわけではないが、リガンド、酵素、受容体のリガンド部分、接着タンパク質、又はいずれか他のタンパク質若しくはドメインなどが挙げられる。例えば、Ｃｈａｍｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：５２−６０（１９９６）；Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：１９５−２００（１９９７）；Ｈｅｉｄａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１４０−５（１９９５）を参照されたい。
【０１９５】
一態様において、融合タンパク質は、標的分子に特異的に結合する部分と融合した変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含んでもよく、ここで、標的分子は、例えば、リガンド、受容体又はその断片である。融合タンパク質は、前述したアミノ酸置換、例えば、ＦＱＱ、ＦＡＱ、若しくはＦＱＧ  Ｆｃドメイン突然変異を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含んでもよく、ＥＵ位置２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ又は複数の位置に置換、例えば、Ｙ、ＹＴ、ＹＥ、ＹＴＥ  Ｆｃドメイン突然変異をさらに含んでもよい。
【０１９６】
具体的態様において、融合タンパク質は、ＥＵ位置２３４にフェニルアラニン（Ｆ）、ＥＵ位置２３５にグルタミン（Ｑ）、及びＥＵ位置３２２にグルタミン（Ｑ）を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む。ある態様では、ＦＱＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む融合タンパク質は、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）、ＥＵ位置２５４にトレオニン（Ｔ）、及びＥＵ位置２５６にグルタミン酸（Ｅ）をさらに含む。
【０１９７】
別の態様において、融合タンパク質は、ＥＵ位置２３４にフェニルアラニン（Ｆ）、ＥＵ位置２３５にグルタミン（Ｑ）、及びＥＵ位置３３１にグリシン（Ｇ）を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む。ある態様では、ＦＱＧ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む融合タンパク質は、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）、ＥＵ位置２５４にトレオニン（Ｔ）、及びＥＵ位置２５６にグルタミン酸（Ｅ）をさらに含む。
【０１９８】
さらに別の態様では、融合タンパク質は、ＥＵ位置２３４にフェニルアラニン（Ｆ）、ＥＵ位置２３５にアラニン（Ａ）、及びＥＵ位置３２２のグルタミン（Ｑ）を含む変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む。ある態様では、ＦＡＱ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む融合タンパク質は、ＥＵ位置２５２にチロシン（Ｙ）、ＥＵ位置２５４位にトレオニン（Ｔ）、及びＥＵ位置２５６にグルタミン酸（Ｅ）をさらに含む。
【０１９９】
別の態様において、融合タンパク質は、本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインと融合した生体活性分子を含む。本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインと融合させることができる生体活性分子としては、限定するわけではないが、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、小分子、模倣剤、合成薬、無機分子、及び有機分子が挙げられる。一態様では、生体活性分子は、少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、少なくとも６０個、少なくとも７０個、少なくとも８０個、少なくとも９０個又は少なくとも１００個の連続したアミノ酸残基を含むポリペプチドであり、これは、本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインのアミノ酸配列に対して異種である。
【０２００】
本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む融合タンパク質は、精製を容易にするために、限定するわけではないが、ペプチドなどのマーカ配列と融合させることができる。ある態様では、マーカアミノ酸配列は、Ｈｉｓ６タグ、「フラグ」タグ、血球凝集素「ＨＡ」タグ、又は他の市販の様々なタグの１つである。
【０２０１】
様々なリンカーを用いて、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを融合相手に共有結合させることにより、融合タンパク質を作製することができる。あるいは、ポリペプチド、タンパク質及び融合タンパク質は、標準的組換えＤＮＡ技術、又はタンパク質合成技術、例えば、ペプチド合成装置により生成することができる。
【０２０２】
組換えポリペプチド発現
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド、誘導体、類似体又はその断片、例えば、本明細書に記載の変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体変異体又は融合タンパク質の組換え発現は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築により達成することができる。ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド（例えば、抗体変異体又は融合タンパク質）をコードするポリヌクレオチドを取得したら、当分野では公知の組換えＤＮＡ技術により、ポリペプチド生成のためのベクターを作製することができる。
【０２０３】
従って、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド（例えば、抗体変異体又は融合タンパク質）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを発現させることによりタンパク質を作製する方法が、本明細書に記載される。当業者には公知の方法を用いて、コード配列と適切な転写及び翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ技術、合成技術、及びｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子組換えが含まれる。従って、プロモータに作動可能に連結した、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターが提供される。
【０２０４】
従来の技術により、発現ベクターを宿主細胞に転移させた後、トランスフェクトした細胞を従来の技術により培養することにより、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを生成することができる。従って、異種プロモータに作動可能に連結した、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞が提供される。
【０２０５】
様々な宿主発現ベクター系を使用して、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを発現することができる（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号明細書を参照）。このような宿主発現系は、目的のコード配列を生成し、その後にこれを精製するのに用いられるビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコート配列で形質転換又はトランスフェクトすると、変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むポリペプチドをｉｎ  ｓｉｔｕで発現することができる細胞も表す。このような宿主発現系として、限定するわけではないが、以下のものが挙げられる：ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする１つ又は複数の配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ若しくはコスミドＤＮＡで形質転換させた細菌（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及び枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ））などの微生物；ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする１つ又は複数の配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換させた酵母（例えば、サッカロミセス・ピキア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  Ｐｉｃｈｉａ））；ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする１つ又は複数の配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）で感染させた昆虫細胞系；ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする１つ又は複数の配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）で感染させるか、又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする１つ又は複数の配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換させた植物細胞系；あるいは、哺乳動物細胞又は哺乳動物ウイルスのゲノム由来のプロモータを含む組換え発現構築物を保有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、ＮＳ０、３Ｔ３細胞）。
【０２０６】
挿入した配列の発現を調節するか、又は要望される特定の様式で遺伝子産物を修飾及びプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のこのような修飾（例えば、グリコシル化）及びプロセシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能に重要となり得る。様々な宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後プロセシング及び修飾のための特有かつ独特の機構を有する。一次転写物の適正なプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化、及びリン酸化のための細胞機構を有する真核宿主細胞を用いることができる。このような哺乳動物宿主細胞としては、限定するわけではないが、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、ＨｅＬａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられる。
【０２０７】
組換えタンパク質の長期にわたる高収率生成のためには、多くの場合、安定した発現が好ましい。例えば、当分野では公知の方法を用いて、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを安定して発現する細胞株を作製することができる。
【０２０８】
組換え発現により、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド（例えば、抗体変異体又は融合タンパク質）を生成したら、当分野では公知のタンパク質の精製方法、例えば、クロマトグラフィー（例：イオン交換クロマトグラフィー、特にプロテインＡの後の特定の抗原に対する親和性によるアフィニティークロマトグラフィー、及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、又はその他いずれかの標準的タンパク質精製方法により精製することができる。
【０２０９】
特性決定及び機能性アッセイ
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、様々な方法で特性決定することができる。特に、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、リガンド、例えば、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡ（１５８Ｖ）、Ｃｌｑに特異的に結合する能力についてアッセイすることができる。このようなアッセイは、溶液中で（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１３：４１２−４２１（１９９２）を参照）、ビーズを用いて（例えば、Ｌａｍ，Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２−８４を参照）、チップを用いて（例えば、Ｆｏｄｏｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６４：５５５−５５６（１９９３）を参照）、細菌を用いて（例えば、米国特許第５，２２３，４０９号明細書を参照）、プラスミドを用いて（例えば、Ｃｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１８６５−１８６９（１９９２）を参照）、又はファージを用いて（例えば、Ｓｃｏｔｔ及びＳｍｉｔｈ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６−３９０（１９９０）；Ｄｅｖｌｉｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：４０４−４０６（１９９０）；Ｃｗｉｒｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：６３７８−６３８２（１９９０）；及びＦｅｌｉｃｉ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１−３１０（１９９１）を参照）実施することができる。リガンド、例えば、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡ（１５８Ｖ）、Ｃｌｑに特異的に結合することが判明した分子は、続いて、リガンドに対するその親和性についてアッセイすることができる。
【０２１０】
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、当分野では公知の任意の方法により、抗原（例えば、癌抗原及び他の抗原との交差反応性）又はリガンド（例えば、ＦｃγＲ）などの分子に対する特異的結合についてアッセイすることができる。特異的結合及び交差反応性を分析するのに用いることができる免疫アッセイとして、限定するわけではないが、ウエスタンブロットなどの技術を用いた競合及び非競合アッセイ系、放射性免疫検定、ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベントアッセイ）、「サンドイッチ」免疫検定、免疫沈降検定、沈降素反応、凝集アッセイ、補体固定アッセイ、蛍光免疫検定、プロテインＡ免疫アッセイなどが挙げられる。このようなアッセイは常用であり、当分野では公知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【０２１１】
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドの、抗原又はリガンド（例えば、ＦｃγＲ）などの分子に対する結合親和性、及び相互作用の解離速度は、競合結合アッセイで決定することができる。ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドの動態パラメータも、当分野では公知の任意の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）に基づくアッセイを用いて決定することができる（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ又はＰｒｏｔｅＯｎ動態分析）。例えば、Ｍｕｌｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２２：７７−９１（２０００）；Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．８２：３０３−２３（２００２）；Ｆｉｖａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９：９７−１０１（１９９８）；Ｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１：５４−６１（２０００）を参照されたい。さらに、米国特許第６，３７３，５７７号明細書；米国特許第６，２８９，２８６号明細書；米国特許第５，３２２，７９８号明細書；米国特許第５，３４１，２１５号明細書；米国特許第６，２６８，１２５号明細書に記載のタンパク質−タンパク質相互作用を測定するための、ＳＰＲ計器及びＳＰＲに基づく方法のいずれかが、本開示の方法で考慮される。
【０２１２】
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドと細胞表面に発現された分子（例えば、ＦｃγＲ）との結合を特性決定するために、当業者には公知の技術のいずれかを用いて、蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）を使用することができる。
【０２１３】
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、ＦｃγＲ媒介エフェクター細胞機能を媒介するその能力についてアッセイすることができる。アッセイすることができるエフェクター細胞機能の例としては、限定するわけではないが、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、Ｃ１ｑ結合、及び補体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＣＤＣ）がある。エフェクター細胞機能活性を決定するために、当業者には公知の任意の細胞ベースアッセイ又は無細胞アッセイを用いることができる（例えば、Ｐｅｒｕｓｓｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１２１：１７９−９２（２０００）；Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ  ４４：８４１−８（１９９８）；Ｌｅｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４３：２２９−４２（２０００）；Ｂｒｏｗｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．４５：１４７−６４（１９９４）；Ｍｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：２３１−２３７（１９９０）；Ａｂｄｕｌ−Ｍａｊｉｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５５：７０−８１（２００２）；Ｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ８：４０３−４１１（１９９８）を参照）。特に、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドは、当業者には公知の標準的方法のいずれかを用いて、ナチュラルキラー細胞などのエフェクター細胞におけるＦｃγＲ媒介ＡＤＣＣ活性についてアッセイすることができる（例えば、Ｐｅｒｕｓｓｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１２１：１７９−９２（２０００）を参照）。
【０２１４】
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドがＣ１ｑに結合して、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介する能力を特性決定する方法は、当分野では公知である。例えば、Ｃ１ｑ結合を決定するためには、Ｃ１ｑ結合ＥＬＩＳＡを実施することができる。補体活性化をアッセイするためには、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）に記載されているように、補体依存性細胞（ＣＤＣ）アッセイを実施することができる。
【０２１５】
医薬組成物及び投与方法
別の態様において、担体と一緒に製剤化されたＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸、又はこれらの組合せを含む組成物が提供される。このような組成物は、１つの抗体若しくは（例えば、２つ以上の異なる）抗体の組合せ、融合タンパク質、又はコンジュゲートを含むことができる。ある態様では、このような組成物は、生理学的に耐容性であり、従って、被験者への治療、予防、又は診断用の投与に好適である。
【０２１６】
別の態様において、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド（例えば、抗体変異体、融合タンパク質、若しくはコンジュゲート）又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸を含む組成物は、１種又は複数種の薬学的に許容される塩を含んでもよい。
【０２１７】
考慮される組成物に用いることができる好適な水性及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、及びこれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、オレイン酸エチルなどの注入用有機エステルが挙げられる。例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用、分散液の場合には要求される粒度の維持、並びに界面活性剤の使用により、適正な流動性を維持することができる。
【０２１８】
別の態様において、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド（例えば、抗体変異体、融合タンパク質、若しくはコンジュゲート）又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸を含む組成物は、さらに、防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤などの薬剤を含んでもよい。微生物の存在の防止は、滅菌方法、並びに各種の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの含有の両方によって確実にすることができる。また、糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含有させることが望ましい場合もある。さらに、注射用薬剤形態の長期間の吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなど、吸収を遅らせる薬剤の含有によりもたらすことができる。
【０２１９】
薬学的に許容される担体としては、滅菌注射液又は分散液の即時調剤のための滅菌水溶液又は分散液及び滅菌粉末がある。薬学的に活性の物質のためのこのような媒質及び薬剤の使用は当分野では公知である。従来の媒質又は薬剤が活性化合物と不適合ではない限り、医薬組成物へのそれらの使用が考慮される。また、追加の活性化合物を組成物に組み込むこともできる。ある態様では、許容される担体は、ヒト及び動物への投与に承認されているか、又はそのような投与に安全とみなされる賦形剤、すなわち、ＧＲＡＳ物質（一般に安全とみなされる）を含む。ＧＲＡＳ物質は、米国食品医薬品局（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）により、米国連邦規則（Ｃｏｄｅ  ｏｆ  Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ（ＣＦＲ））の２１  ＣＦＲ  １８２及び２２  ＣＦＲ  １８２に記載されており、これらは、参照として本明細書に組み込むものとする。
【０２２０】
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド（例えば、抗体変異体、融合タンパク質、若しくはコンジュゲート）又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸を含む医薬組成物への活性成分の実際の使用量は、具体的患者、組成物、及び投与方法について要望される治療応答を、患者に有毒となることなく達成するのに有効な活性成分の量を得るために変動し得る。選択される使用量は、使用する具体的組成物、又はそのエステル、塩若しくはアミド、投与経路、投与時間、使用される具体的化合物の排出速度、治療期間、使用する具体的組成物と併用される他の薬物、化合物及び／又は物質、治療しようとする患者の年齢、性別、体重、病状、全身の健康状態及び以前の病歴、並びに医療分野で公知の同様の要因など、様々な薬物動態学的要因に応じて異なる。
【０２２１】
治療に有効な用量のＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸、又はその医薬組成物によって、疾患の症状の重症度の低減、無症状期間の頻度及び長さの増加、又は罹患による機能障害又は能力障害の予防がもたらされる。また、治療に有効な用量は、疾患発症を阻止又は遅らせることができる。従って、臨床又は生化学的モニタリングアッセイを用いて、特定の治療が、治療に有効な用量であるか否かを決定することができる。当業者であれば、被験者の大きさ、被験者の症状の重症度、及び選択した具体的組成物若しくは投与経路などの要因に基づき、そのような量を決定することができる。
【０２２２】
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド（例えば、抗体変異体、融合タンパク質、若しくはコンジュゲート）又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸を含む組成物は、当分野では公知の様々な方法の１つ又は複数を用いて、１つ又は複数の投与経路により投与することができる。当業者には理解されるように、投与の経路及び／又は方法は、要望される結果に応じて異なる。ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸を含む組成物、及びその医薬組成物について選択される投与経路としては、例えば、注射又は注入による静脈内、筋内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄又はその他の非経口投与経路がある。非経口投与は、経腸又は局所投与以外の投与方法であり、通常、注射により行われ、限定するわけではないが、静脈内、筋内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、気管内、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、せき髄内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入が挙げられる。あるいは、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸を含む組成物、及びその医薬組成物は、局所、表皮又は粘膜への投与経路などの非腸管外経路により投与することもでき、例えば、鼻内、経口、膣、直腸、舌下又は局所投与がある。
【０２２３】
治療方法
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド（例えば、抗体変異体、融合タンパク質、若しくはコンジュゲート）又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸は、疾患、障害、又は感染に関連する１つ又は複数の症状を予防、治療、若しくは改善するために、動物、とくに哺乳動物、具体的には、ヒトに投与することができる。
【０２２４】
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸は、エフェクター細胞機能（例えば、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ）の効果の改変が要望される疾患若しくは障害の治療又は予防に特に有用となり得る。
【０２２５】
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸、及びその組成物は、原発性又は転移性腫瘍疾患（すなわち、癌）、自己免疫疾患、及び感染症の治療又は予防に特に有用であり得る。ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸は、当分野では公知の、又は本明細書に記載の薬学的に許容される組成物として提供することができる。以下に詳述するように、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸は、癌（特に、受動免疫療法において）、自己免疫疾患、炎症性疾患若しくは感染症を治療又は予防する方法に用いることができる。
【０２２６】
さらに、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸、及びその組成物は、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患若しくは感染症の治療又は予防のための当分野では公知の他の治療薬と併用して、有利に用いることもできる。ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸、及びその組成物はまた、疾患、障害、若しくは感染を治療するのに用いられる１種又は複数種の薬物、例えば、抗癌薬、抗炎症薬又は抗ウイルス薬などと併用して、有利に用いることもできる。
【０２２７】
ある態様において、ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸を投与することにより、癌及び関連病状に関連する１つ又は複数の症状を予防、治療、又は改善するための方法が提供される。
【０２２８】
ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド又はＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドをコードする核酸は、被験者の炎症性疾患に関連する１つ又は複数の症状を予防、治療、又は管理するために用いることができる。
【０２２９】
本開示は、治療又は予防に有効な量のＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドを投与することを含む、被験者の感染症を治療又は予防する方法も包含する。ＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチドにより治療又は予防することができる感染症は、限定するわけではないが、ウイルス、細菌、真菌、原生動物、及びウイルスなどの感染因子によって引き起こされる。
【０２３０】
キット
さらに、本明細書に開示する１種又は複数種の医薬組成物を充填した１つ又は複数の容器を含む医薬パック又はキットも提供される。任意選択で、このような容器に、医薬又は生物製剤の製造、使用若しくは販売を規制する政府機関が規定した書式での通知を備えることができ、この通知は、ヒトへの投与のための製造、使用又は販売機関による承認を表すものである。本開示は、治療及び投与方法に用いることができるキットを提供する。一態様では、キットは、１つ又は複数の容器中に、好ましくは精製形態のＩｇＧ  Ｆｃ変異型ドメイン含有ポリペプチド（例えば、抗体変異体、融合タンパク質、若しくはコンジュゲート）を含む。
【実施例】
【０２３１】
これらの実施例は、あくまで例示を目的として記載され、特許請求の範囲を限定するものとして決して解釈すべきではなく、むしろ本明細書に記載する教示の結果として明らかになるあらゆる変更を包含するものと解釈すべきである。
【０２３２】
実施例１
変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインの作製と抗体の生成及び精製
抗ＲＳＶ糖タンパク質Ｆヒト化モノクローナル抗体モタビズマブ（ＭＥＤＩ  ５３２，Ｎｕｍａｘ（商標）；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３５０：１２６−１４４（２００５）；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６８：６５２−６５（２００７）を参照）（以後「Ａｂ１」と呼ぶ）、抗ＩＬ−４Ｒ抗体（例えば、米国特許第８，０９２，８０４号明細書を参照）（以後、「Ａｂ２」と呼ぶ）、抗ＣＤＲ２０抗体ＨＢ２０．３（例えば、米国特許第２００９／０１３６５１６号明細書：米国特許第２００９／０１５５２７５号明細書を参照）（以後、「Ａｂ３」と呼ぶ）、又は抗Ｃ５ａ抗体１Ｂ８（以後、「Ａｂ４」と呼ぶ）の重鎖のＦｃ領域に突然変異を導入した。突然変異は、オーバーラップエクステンションによるＰＣＲを用いた部位指定突然変異誘発（例えば、Ｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ７７：５１−５９（１９８９)を参照）により導入した。要望される突然変異を含むプライマーを用いて、重鎖遺伝子の領域を増幅した。次に、これらの断片を合わせて（必要に応じ）、要望される突然変異を含む完全長ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ遺伝子断片を作製した。次いで、最終ＰＣＲ断片を個別に重鎖コード哺乳動物発現ベクター中にクローン化した。この処理により、上記抗体の野生型重鎖定常部分の、異なるＦｃ修飾対応部分による置換が実施された。構築物を確認するために用いるＤＮＡ配列決定をＧｅｎｅｗｉｚ（Ｓｏｕｔｈ  Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ，ＮＪ）により実施した。
【０２３３】
２９３ｆｅｃｔｉｎ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をトランスフェクション試薬として用いて、全ての構築物をＨＥＫ２９３Ｆ細胞に一時的に発現させ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎの無血清Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）培地中で増殖させた。トランスフェクションから１０日後に培地を収集し、製造者のプロトコル（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）に従って標準的プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより全ての抗体フォーマットを精製した。続いて、抗体を２５ｍＭヒスチジン−ＨＣｌ（ｐＨ６．０）でバッファー交換し、還元及び非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて、さらには分析サイズ排除クロマトグラフィーにより構築物の純度を分析した。分取サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、９９〜１００％純粋なＩｇＧサンプルを取得した。
【０２３４】
実施例２
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、及びＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｏｒａｎｇｅ示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）熱安定性測定
ＩｇＧドメインの不安定性は、好ましくない化学、製造、及び制御（ＣＭＣ）特性と相関すると考えられ、このような特性には、熱安定性及び溶解度の低下、凝集又はフラグメント化の増加があり、これらは最終的に純度損失の増大、製剤化／送達選択肢の限定、並びにその他の開発性の課題を招くことになる。
【０２３５】
Ｍｉｃｒｏｃａｌ  ＶＰ−ＤＳＣ示差走査マイクロ熱量計（Ｍｉｃｒｏｃａｌ，Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ，ＭＡ）を用いて、ＤＳＣ実験を実施した。ＤＳＣに用いた全ての溶液及びサンプルは、０．２２μｍフィルターを用いて濾過し、熱量計にロードする前にガス抜きした。ＤＳＣ試験に用いた抗体は、分析ゲル濾過クロマトグラフィーにより判断して、＞９５％モノマーであった。ＤＳＣ分析の前に、全サンプルを２５ｍＭヒスチジン−ＨＣｌ（ｐＨ６）で入念に（少なくとも３回のバッファー交換）透析した。この透析からのバッファーを後のＤＳＣ実験の基準バッファーとして用いた。サンプル測定前に、ベースライン測定値（バッファー対バッファー）を取得し、サンプル測定値から差し引いた。透析したサンプル（濃度１ｍｇ／ｍｌ）をサンプルウェルに添加し、ＤＳＣ測定を走査速度１℃／分で実施した。Ｍｉｃｒｏｃａｌにより提供されたＯｒｉｇｉｎ（商標）ＤＳＣソフトウエアを用いて、データ解析及びデコンボリューションを実施した。
【０２３６】
ＤＳＦ実験のために、ＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｏｒａｎｇｅを、２５ｍＭヒスチジン−ＨＣｌ（ｐＨ６）中、濃度０．５ｍｇ／ｍｌで、抗体に添加した（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１００：１３０６−１３１５（２０１１））。２５マイクロリットルの調製サンプルを、白色のＰＣＲプレートに２回繰り返して添加した。Ｃｈｒｏｍｏ４  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）をサーマルサイクラーとして使用し、ソフトウエアのカスタム色素較正ルーチンを用いて、蛍光放射を検出した。試験サンプルを含むＰＣＲプレートを、０．２℃の増分で、温度増分毎に１０秒の間隔を置き、２０℃〜９０℃までの昇温に付した。曲線の変曲点を計算するための数学的二次関数法を用いたソフトウエアによりＴｍを計算した。記録したＴｍは、３つの測定値の平均値である。
【０２３７】
Ａｂ１又はＡｂ２のＦｃ領域に突然変異を導入した。ＦＥＳ及びＹＴＥ突然変異をＡｂ１及びＡｂ２のＦｃドメインに導入し（表４のＩｇＧ１−ＦＥＳ−ＹＴＥに対応するデータを参照）、熱安定性の低下及び純度損失の増大を観察した。Ａｂ１及びＡｂ２は、熱安定性においてそれぞれ１４℃及び１３℃の損失を示した（ＤＳＣにより測定）。ＦＥＳ−ＹＴＥ抗体変異体（表５のＩｇＧ１−ＦＥＳ−ＹＴＥ）もまた、野生型又はＹＴＥ対応物のいずれに対しても有意に増大した純度損失を示した（加速安定性アッセイを用いて、１ヵ月にわたり４０℃で測定した場合）。
【０２３８】
【表５】
2018184399.tif 000008
【０２３９】
ＹＴＥセットの突然変異又はＦＥＳ−ＹＴＥの付加の際の熱安定性は、ＣＨ２ドメインだけに影響を与えた（図１）。Ａｂ４のＤＳＣトレースから、ＣＨ２ドメインＴｍは、ＹＴＥ及びＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異の付加により低下するが、Ｆａｂ及びＣＨ３ドメインの熱安定性は影響を受けないまま維持されることが判明した。ＹＴＥの付加により熱安定性は低下した（表４及び図１を参照）が、純度損失の有意な増大は、ＦＥＳ突然変異をＹＴＥ突然変異と組み合わせて導入したときに初めて開始した。
【０２４０】
ＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異を含む変異型Ｆｃドメインと同じ生物学的特性を備える、より高い熱安定性の変異型Ｆｃドメインの構築に役立てるために、本発明者らは、離断突然変異誘発による各ＦＥＳ突然変異の熱安定性への寄与を決定したが、結果は、ＥＵ  Ｌ２３４Ｆ突然変異が熱安定性に何の作用も及ぼさなかったのに対し、ＥＵ  Ｌ２３５Ｅ突然変異及びＥＵ  Ｐ３３１Ｓ突然変異は、Ａｂ３−ＹＴＥバックグラウンドに対し、ＤＳＣにより定量して、それぞれ約−２．５℃及び−３．５℃の熱安定性の低下を示した（すなわち、ＦｃドメインがすでにＹＴＥ突然変異を含むＡｂ３抗体に、ＥＵ  Ｌ２３４Ｆ、ＥＵ  Ｌ２３５Ｅ、及びＥＵ  Ｐ３３１Ｓ突然変異を導入した）。
【０２４１】
ＦｃドメインのＬ２３５及びＰ３３１ＥＵ位置に別の突然変異を形成し、熱安定性の増加について評価した（表６）。Ｃ１ｑ結合を低減する目的で、ＥＵ  Ｐ３３１Ｓ置換がＦＥＳ突然変異体に最初に含まれているため、本発明者らは、同様に突然変異誘発するために、別の部位、ＥＵ位置Ｋ３２２（やはりＣ１ｑ結合を低減することがわかっている）を選択した（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）)。
【０２４２】
ＥＵ位置Ｌ２３５での選択した突然変異（Ｉ、Ａ、Ｎ、Ｆ、Ｑ及びＶ）を有する変異型Ｆｃドメインを含む抗体は全て、ＥＵ  Ｌ２３５Ｅ突然変異を有する変異型Ｆｃドメインを含む対応抗体と比較して、Ｌ２３４Ｆ  ＹＴＥ  Ａｂ３バックグラウンドにおいて約２℃増加した熱安定性を呈示した。
【０２４３】
ＥＵ位置Ｐ３３１で、アラニン及びグリシン突然変異は、ＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異を有するＦｃドメインを含む抗体と比較して、ごくわずかに（１℃）熱安定性を向上させた（突然変異は、ＥＵ  Ｌ２３４Ｆ  Ｌ２３５Ｅ  ＹＴＥ  Ａｂ３バックグラウンドに導入した）。ＥＵ位置Ｋ３２２（ＥＵ位置Ｐ３３１の代わりの部位）で、Ａ、Ｅ、Ｎ、Ｈ及びＱへの突然変異を形成し、熱安定性の増加について分析した。ＥＵ  Ｋ３２２Ｅ、Ｋ３２２Ｎ及びＫ３２２Ｈ置換は、実際に、ＦＥＳ−ＹＴＥと比較して熱安定性の低下をもたらした。これらの突然変異をＥＵ  Ｌ２３４Ｆ  Ｌ２３５Ｅ  ＹＴＥ  Ａｂ３バックグラウンドに導入したところ、ＣＨ２  Ｔｍは、それぞれ０．３、７、及び２．６℃低下した。ＥＵ  Ｌ２３４Ｆ  Ｌ２３５Ｅ  ＹＴＥ  Ａｂ３バックグラウンドへのＥＵ  Ｋ３２２Ａ及びＫ３２２Ｑ突然変異は、ＦＥＳ−ＹＴＥと比較して、それぞれ１．２℃及び２．８℃の熱安定性の向上をもたらした。
【０２４４】
【表６】
2018184399.tif 000009
【０２４５】
次に、熱安定性の向上、純度損失及び生物物理学的安定性の向上、並びに要望される生物学的特性（ＦｃＲｎ結合の増大及びＡＤＣＣ及びＣＤＣ誘導の欠如など）を評価するために、ＥＵ位置Ｌ２３５及びＰ３３１又はＫ３２２での最も高い熱安定性の突然変異を組み合わせた構築物を作製した。
【０２４６】
ＦＱＧ−ＹＴＥ、ＦＱＱ−ＹＴＥ、及びＦＡＱ−ＹＴＥ変異型ＦｃドメインをＡｂ３及びＡｂ４バックグラウンドに形成した。ＦＱＧ−ＹＴＥ、ＦＱＱ−ＹＴＥ、及びＦＡＱ−ＹＴＥ変異型Ｆｃドメインを含むＡｂ３及びＡｂ４変異体は、ＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異を含むＡｂ３及びＡｂ４変異体（図１）と比較して、有意な熱安定性の向上を示した（図２）。
【０２４７】
Ａｂ３バックグラウンドにおいて、ＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異体は５５．６℃のＣＨ２  Ｔｍを有した。対照的に、ＦＡＱ−ＹＴＥ、ＦＱＧ−ＹＴＥ、及びＦＱＱ−ＹＴＥ突然変異を含むＡｂ３変異体は、それぞれ６０．６℃、６０．２℃、及び６１．６℃のＣＨ２  Ｔｍを有し（表７）、これは、Ｆｃドメイン突然変異のこれらの組合せが、実際に、ＣＨ２ドメインに向上した熱安定性を賦与したことを示している。
【０２４８】
【表７】
2018184399.tif 000010
【０２４９】
実施例３
表面プラズモン共鳴結合分析
３つの突然変異体ＦＱＱ、ＦＱＦ、及びＦＡＱの組合せ、並びにＹＴＥ突然変異を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体を、これらが、ＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体と同じ結合プロフィールを有することを確認するために、ＦｃγＲ受容体、Ｃ１ｑ及びＦｃＲｎとの結合について試験した。
【０２５０】
ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６表面プラズモン共鳴装置（Ｂｉｏ  Ｒａｄ）を用いて、実験を実施した。０．００５％Ｔｗｅｅｎ  ２０（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ）、ｐＨ７．４を含むリン酸緩衝食塩水を、ヒトＦｃＲｎ（細胞外ドメイン）結合を除くほとんどの実験の泳動用バッファーとして用いた。ヒトＦｃＲｎ結合には、０．００５％Ｔｗｅｅｎ  ２０（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ）、ｐＨ６．０を含むリン酸緩衝食塩水を用いた。実験は全て２５℃で実施した。ＥＤＡＣ（１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド）及びスルホ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド）を用いて、ＰｒｏｔｅｏＯｎ（商標）ＧＬＣ  Ｓｅｎｓｏｒ  Ｃｈｉｐ（＃１７６−５０１１）上に、４０００〜６０００のＲ．Ｕ．（応答単位）レベルまで抗体を固定化した。次に、Ｃ１ｑ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩ（１５８Ｖ）、ＦｃγＲＩＩＩ（１５８Ｆ）、及びＦｃＲｎをＩｇＧ固定化表面上に様々な濃度にて、２５μｌ／分の流量で、定常状態、又はほぼ定常状態を達成するのに十分な時間にわたり流した。ＰｒｏｔｅＯｎソフトウエアを用いて、定常状態平衡結合分析により、結合（わずかでも決定することができる場合）を定量した。ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩ（１５８Ｖ）、ＦｃγＲＩＩＩ（１５８Ｆ）、及びＦｃＲｎ細胞外ドメインを所内で哺乳動物発現ベクターにより作製した。ヒトＣ１ｑをＱｕｉｄｅｌ（ＣＡ）から取得した。
【０２５１】
ＦＥＳ−ＹＴＥ、ＦＡＱ−ＹＴＥ、ＦＱＧ−ＹＴＥ、又はＦＱＱ−ＹＴＥ突然変異を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体は、ＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｖ）、ＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｆ）、又はＣ１ｑと、ＳＰＲ（ＰｒｏｔｅＯｎ）により定量可能な結合を示さなかった（表８及び９）。ＦＱＱ−ＹＴＥ又はＦＱＧ−ＹＴＥ突然変異を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体に対するＦｃＲｎ結合は、ＦＥＳ−ＹＴＥ又はＹＴＥ突然変異を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体について得られた値と同様であったが、これは、ｐＨ６．０で、向上したＦｃＲｎ結合が維持されていることを示している（表８及び９）。
【０２５２】
【表８】
2018184399.tif 000011
【０２５３】
【表９】
2018184399.tif 000012
【０２５４】
このように、ＳＰＲ結合実験から、ＦＡＱ−ＹＴＥ、ＦＱＧ−ＹＴＥ、又はＦＱＱ−ＹＴＥ突然変異を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体には、ＡＤＣＣに不可欠であることがわかっている細胞受容体への結合、及びＣＤＣを開始することができる可溶性受容体Ｃ１ｑが欠如していることが判明した。
【０２５５】
実施例４
抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイ
抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイを、Ａｂ３（ＨＢ２０．３抗ＣＤ２０；配列番号５及び６）バックグラウンドに組み込んだ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを用いて実施した。ＣＤ１６を発現するナチュラルキラー細胞株をエフェクター細胞として、またＤａｕｄｉ細胞を標的として用いた。Ｄａｕｄｉ細胞及びエフェクター細胞をＰＢＳで洗浄し、８００，０００ｃ／ｍｌの密度まで希釈した。Ｄａｕｄｉ細胞及びエフェクター細胞を白色のＶ字状ウェル底９６ウェルプレート（各々５０μｌ）に添加した。様々な濃度のＡｂ３抗体変異体をウェルに添加した。細胞と抗体を３７℃で４時間インキュベートした。また、製造業者の指示に従い、ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６非放射性細胞傷害アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いたＬＤＨ放出の分析により、Ｄａｕｄｉ細胞死もモニターした。
【０２５６】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞由来の細胞株をエフェクター細胞として、Ｄａｕｄｉ細胞を標的として用いた実験において、ＷＴ  Ａｂ３抗体と、ＹＴＥ突然変異を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むＡｂ３抗体が、滴定可能なＡＤＣＣ応答を示した。逆に、ＦＡＱ−ＹＴＥ、ＦＱＱ−ＹＴＥ、又はＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むＡｂ３抗体は、３００μｇ／ｍｌまでの濃度でも有意な細胞傷害性を誘導しなかった（図３）。
【０２５７】
実施例５
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）アッセイ
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）アッセイを、Ａｂ３（ＨＢ２０．３抗ＣＤ２０；配列番号５及び６）に組み込んだ変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを用いて実施した。健康なドナーからのヒト血清を補体供給源として、またＤａｕｄｉ細胞をエフェクター細胞として用いた。Ｄａｕｄｉ細胞をＰＢＳで洗浄し、８００，０００ｃ／ｍｌの密度まで希釈した。次いで、細胞を白色のＶ字底プレート（各々５０μｌ）に添加した。次に、希釈した血清（５０μｌ）を所望の濃度で、様々な希釈度の抗体と一緒に添加した。細胞を３７℃で４時間インキュベートした。続いて、アラマーブルー（ａｌａｍａｒ  ｂｌｕｅ）試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を添加し、１２時間後にＤａｕｄｉ細胞死を定量した（製造業者の指示に従い）。
【０２５８】
ＷＴ  Ａｂ３抗体又はＹＴＥ突然変異を有するＦｃドメインを含むＡｂ３抗体のみが、頑健な補体依存性細胞傷害を誘導することが判明した。逆に、ＦＡＱ−ＹＴＥ、ＦＱＧ−ＹＴＥ、ＦＱＱ−ＹＴＥ、ＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含むＡｂ３抗体は、補体依存性細胞傷害を誘導しないで終わった（図４）。
【０２５９】
実施例６
加速安定性試験
Ａｂ４抗体（１Ｂ８抗Ｃ５ａ抗体；配列番号７及び８）バックグラウンドにおける抗体変異体を２５ｍＭヒスチジンｐＨ６．０中で１００ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。抗体をガラスバイアルに入れ、（４０℃、７５％相対湿度）制御室内で６週間にわたり貯蔵した。サンプルを凝集体割合（％）について高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）により１週間毎に試験した。ＨＰＳＥＣ分析は、ＴＳＫ−Ｇｅｌ  Ｇ３０００カラムを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣ装置（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で実施した。溶出したタンパク質を２８０ｎｍでの紫外線吸光度を用いて検出し、結果を生成物モノマーピークの面積割合（％）として記録した。モノマーより早期に溶出したピークを凝集体割合（％）として記録し、モノマーの後に溶出したピークをフラグメント／その他の割合（％）として記録した。一定時間にわたる凝集率を線形回帰により決定した。
【０２６０】
加速安定性試験を実施して、ＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体に対する、ＦＡＱ−ＹＴＥ、ＦＱＧ−ＹＴＥ、ＦＱＱ−ＹＴＥ突然変異を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む抗体の凝集／フラグメント化速度に認められる向上を評価した（表１０）。ＦＥＳ−ＹＴＥ抗体変異体（Ａｂ４バックグラウンド中の）は、１ヵ月にわたり４０℃で１．９３％凝集率を有したのに対し、ＦＱＧ−ＹＴＥ及びＦＱＱ−ＹＴＥ突然変異を有するＡｂ４抗体は、それぞれ１．０１％〜１．１％までの向上を示した。
【０２６１】
ＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異を有するＡｂ４抗体は、１ヵ月当たり３．８２％の全体モノマー損失率を有したのに対し、ＷＴ  Ａｂ４抗体及びＹＴＥ突然変異を有するＡｂ４抗体は、それぞれ１ヵ月当たり２．７１％及び２．７５％の全体モノマー損失率を有した。ＦＱＱ−ＹＴＥ及びＦＱＧ−ＹＴＥ突然変異を有するＡｂ４抗体は、３．２８％及び３．３６％と、ＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異を有するＡｂ４抗体と比較して、４０℃での向上した全体モノマー損失率を有した。ＦＡＱ−ＹＴＥ突然変異を有するＡｂ４抗体は、より高いフラグメント化率（５．７４％）のために、予想より高いモノマー損失／月を有した。
【０２６２】
【表１０】
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【０２６３】
実施例７
等電点電気泳動（ＩＥＦ）ゲル
プレキャストアムホリン（ａｍｐｈｏｌｉｎｅ）ゲル（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｕｐｐｓａｌａ  Ｓｗｅｄｅｎ；ｐＩ範囲３．５〜９．５）にＩｇＧをロードした。広範囲ｐＩマーカ標準（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｐＩ範囲３〜１０）を用いて、様々な抗体又は抗体フラグメントについて相対ｐＩを決定した。１５００Ｖ、５０ｍＡで電気泳動を１０５分間実施した。Ｓｉｇｍａ固定液（Ｓｉｇｍａ，Ｓａｉｎｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いて、ゲルを４５分固定した。Ｓｉｍｐｌｙ  Ｂｌｕｅ染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、室温で一晩染色を実施した。２５％エタノール、８％酢酸及び６７％精製水からなる溶液を用いて、脱染を実施した。
【０２６４】
ＩＥＦゲルによる分析から、Ａｂ４抗体（１Ｂ８抗Ｃ５ａ抗体；配列番号７及び８）のＦｃドメインへのＦＡＱ−ＹＴＥ、ＦＱＧ−ＹＴＥ、及びＦＱＱ−ＹＴＥ突然変異の導入が、ｐＩに対して最小限の影響しか及ぼさず、構築物は全て近似のｐＩ＞８．３であることが判明した（図５）。
【０２６５】
実施例８
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿による見かけ溶解度
ＰＥＧ沈殿アッセイは、Ｇｉｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１００：１００９−１０２１（２０１１）と同様に実施した。ＰＥＧ  ６０００の量を増加しながら添加することにより、抗体を沈殿させた。５０ｍＭリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．２中０％〜４０％［ｗ／ｖ］ＰＥＧの範囲のＰＥＧ６０００溶液を調製した。これらの溶液を９６ウェル白色ポリスチレンフィルタープレートのウェルに添加した。次いで、様々なレベルのＰＥＧを含むウェルに抗体を最終濃度１ｍｇ／ｍＬまで添加した。９６ウェルプレートを室温で一晩インキュベートした。次に、プレートを遠心分離して、濾過液を透明のポリスチレン９６ウェルコレクションプレートに回収した。続いて、各サンプル濾過液を等量ずつ新しい透明ポリスチレン９６ウェルプレートに移した後、ナノドロップ（ｎａｎｏｄｒｏｐ）を用い、２８０ｎｍでの吸光度を測定することにより、濾過液をタンパク質濃度について分析した。凝集トランジッションの傾きを用いて、見かけ溶解度を算出する。
【０２６６】
ＦＡＱ−ＹＴＥ、ＦＱＧ−ＹＴＥ、及びＦＱＱ−ＹＴＥ突然変異を有する変異型Ｆｃドメインを含むＡｂ４抗体（１Ｂ８抗Ｃ５ａ抗体；配列番号７及び８）を見かけ溶解度の向上について評価したが、これは、ＰＥＧ沈殿により評価した（表１１）。凝集トランジッションの外挿法によって、「見かけ溶解度」の尺度を得ることができる。この値は、絶対値が実際の溶解限度を示さない（例えば、高度に可溶性のタンパク質の値は過大評価される）ため、抗体変異体を等級付けするのに限り有用である。
【０２６７】
ＦＥＳ−ＹＴＥ突然変異を有する変異型Ｆｃドメインを含むＡｂ４抗体は、＜１０ｍｇ／ｍｌで、試験した全抗体の中で最も低い見かけ溶解度を示した。ＦＡＱ−ＹＴＥ、ＦＱＧ−ＹＴＥ、ＦＱＱ−ＹＴＥを有する変異型Ｆｃドメインを含むＡｂ４抗体は全て、高い見かけ溶解度スコア＞１００ｍｇ／ｍｌを有し、ＦＥＳ−ＹＴＥに対して向上した溶解性を示した。
【０２６８】
【表１１】
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【０２６９】
実施例９
動的光散乱（ＤＬＳ）
タンパク質粒度分布及び分子サイズをＺｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ）を用いて、動的光散乱（ＤＬＳ）によりモニターした。６３３ｎｍレーザーを用いて、サンプル（２５ｍＭヒスチジン−ＨＣｌｐＨ６中１ｍｇ／ｍｌ）を照射し、散乱光の強度を１７３°の角度で測定した。室温で分析したサンプルを実験用ベンチトップ上で約９０分インキュベートした後、サンプリングした。各サンプル分析の前に、粘度、屈折率及び吸光度などのパラメータについて補正率を導入した。
【０２７０】
それぞれのＦｃドメインにＦＡＱ−ＹＴＥ、ＦＱＧ−ＹＴＥ、ＦＱＱ−ＹＴＥ突然変異を含むＡｂ４抗体（１Ｂ８抗Ｃ５ａ抗体；配列番号７及び８）の変異体、並びに野生型Ａｂ４及びそれぞれのＦｃドメインにＦＥＳ−ＹＴＥ及びＹＴＥ突然変異を含む変異体は全て、動的光散乱（ＤＬＳ）により、単分散であることが認められた（表１２）。従って、Ａｂ４抗体のＦｃドメインにＦＡＱ−ＹＴＥ、ＦＱＧ−ＹＴＥ、ＦＱＱ−ＹＴＥ突然変異の各組合せを導入しても、多分散性の増大は起こらなかった。
【０２７１】
【表１２】
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【０２７２】
具体的態様についての以上の説明から、他の者が、当分野の基礎知識を適用することにより、記載した全体的概念を逸脱することなく、過度の実験なしに、上記の具体的態様を容易に変更及び／又は多様な応用のために改変できるという、本開示の全体的性質が十分に明らかになるであろう。従って、このような改変及び変更は、本明細書に提示した教示及び指針に基づき、開示された態様の同等物の意味及び範囲に含まれるものとする。本明細書の用語及び表現は、本教示及び指針に照らして、本明細書の用語及び表現が当業者に解釈されるように、説明を目的とするものであり、限定を目的とするものではないことを理解すべきである。
【０２７３】
本開示の広さ及び範囲は、前述した例示的態様のいずれによっても限定すべきではなく、以下の特許請求の範囲及びそれらの同等物に従ってのみ定めるべきである。
【０２７４】
本出願に引用した全ての刊行物、特許、特許出願、又はその他の文献は、あたかも各々個別の刊行物、特許、特許出願、又はその他の文献が、あらゆる目的のために参照として組み込まれることが個別に示されているのと同じ範囲まで、あらゆる目的のためにそれらの全体が参照として本明細書に組み込まれる。さらに、２０１２年４月３０日に提出された米国仮特許出願第６１／６４０，３２７号明細書は、あらゆる目的のためにその全体が参照として本明細書に組み込まれる。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年6月28日(2018.6.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む単離されたポリペプチドであって、前記変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、
（ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；
（ｂ）２３５位にアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）アミノ酸；及び
（ｃ）３２２位にアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）アミノ酸；又は３３１位にアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）アミノ酸
を有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、単離されたポリペプチド。
【請求項２】
以下からなる群より選択される、請求項１に記載のポリペプチド、すなわち
（ｉ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；及び３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン、
（ｉｉ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；及び３３１位にグリシン（Ｇ）アミノ酸を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン、並びに
（ｉｉｉ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；２３５位にアラニン（Ａ）アミノ酸；及び３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸を有する変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメイン、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸
をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】
（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；及び／又は
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸
をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、向上した半減期を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、向上したＦｃＲｎ結合を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記ポリペプチドが、さらに、抗原結合ドメイン、又、はモノクローナル抗体若しくはその抗原結合フラグメントに由来する抗原結合ドメインを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、低減したＦｃ媒介エフェクター機能を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対し低い親和性を有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
前記ポリペプチドが、ｐＨ７．４におけるよりもｐＨ６．０において、ＦｃＲｎに対する高い親和性を有する、請求項９に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリペプチドと、治療部分とを含むコンジュゲート。
【請求項１２】
哺乳動物を治療するための医薬の製造における請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１３】
Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドのＦｃ誘導性エフェクター機能を低減する方法であって、以下：
（ａ）Ｆｃドメインにおける２３４位の前記アミノ酸をフェニルアラニン（Ｆ）で置換するステップ；
（ｂ）Ｆｃドメインにおける２３５位の前記アミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）で置換するステップ；及び
（ｃ）Ｆｃドメインの３２２位の前記アミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）で置換するステップ；又はＦｃドメインの３３１位のアミノ酸をアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）で置換するステップ
を含み、
ここで、前記Ｆｃドメインの前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う方法。
【請求項１４】
前記親ポリペプチドの前記Ｆｃドメインが、置換により
（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）；及び／又は
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）；及び／又は
（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）
を有し、
ここで、前記Ｆｃドメインの前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリペプチドを含む、哺乳動物を治療するための医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２７４】
本出願に引用した全ての刊行物、特許、特許出願、又はその他の文献は、あたかも各々個別の刊行物、特許、特許出願、又はその他の文献が、あらゆる目的のために参照として組み込まれることが個別に示されているのと同じ範囲まで、あらゆる目的のためにそれらの全体が参照として本明細書に組み込まれる。さらに、２０１２年４月３０日に提出された米国仮特許出願第６１／６４０，３２７号明細書は、あらゆる目的のためにその全体が参照として本明細書に組み込まれる。
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本発明は以下の実施形態を包含する：
[１]  変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む単離されたポリペプチドであって、前記変異型ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、
（ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；
（ｂ）２３５位にアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）アミノ酸；及び
（ｃ）３２２位にアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）アミノ酸；又は３３１位にアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）アミノ酸
を有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、単離されたポリペプチド。   
[２]  ２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；及び３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸を有し、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１に記載のポリペプチド。   
[３]  ２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；及び３３１位にグリシン（Ｇ）アミノ酸を有し、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１に記載のポリペプチド。   
[４]  ２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；２３５位にアラニン（Ａ）アミノ酸；及び３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸を有し、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１に記載のポリペプチド。   
[５]  （ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸
をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[６]  （ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；及び／又は
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸
をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[７]  （ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸
をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[８]  （ａ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び
（ｂ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸
をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[９]  （ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；並びに
（ｂ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸
をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[１０]  （ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、及び２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；又は、
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸及び２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸；又は、
（ｃ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸及び２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸をさらに有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[１１]  ２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸、及び２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸をさらに有し、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[１２]  （ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；
（ｂ）２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；
（ｃ）３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；
（ｄ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；
（ｅ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び、
（ｆ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸
を有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１に記載のポリペプチド。   
[１３]  （ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；
（ｂ）２３５位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；
（ｃ）３３１位にグリシン（Ｑ）アミノ酸；
（ｄ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；
（ｅ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び、
（ｆ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸
を有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１に記載のポリペプチド。   
[１４]  （ａ）２３４位にフェニルアラニン（Ｆ）アミノ酸；
（ｂ）２３５位にアラニン（Ａ）アミノ酸；
（ｃ）３２２位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸；
（ｄ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸；
（ｅ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び、
（ｆ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸
を有し、
ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、１に記載のポリペプチド。   
[１５]  前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、向上した薬物動態（ＰＫ）特性を有する、１〜１４のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[１６]  前記ＰＫ特性が、半減期である、１５に記載のポリペプチド。   
[１７]  前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、向上したＦｃＲｎ結合を有する、１〜１６のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[１８]  前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、非ヒト由来である、１〜１７のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[１９]  前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、ヒト由来である、１〜１７のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[２０]  前記非ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインが、げっ歯類、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ又はニワトリに由来する、１８に記載のポリペプチド。   
[２１]  前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、ヒト免疫グロブリンＧクラス１（ＩｇＧ１）Ｆｃドメイン、ヒト免疫グロブリンＧクラス２（ＩｇＧ２）Ｆｃドメイン、ヒト免疫グロブリンＧクラス３（ＩｇＧ３）Ｆｃドメイン、及びヒト免疫グロブリンＧクラス４（ＩｇＧ４）Ｆｃドメインからなる群から選択される、１９に記載のポリペプチド。   
[２２]  前記ポリペプチドが、さらに抗原結合ドメインを含む、１〜２１のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[２３]  前記抗原結合ドメインが、モノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントに由来する、２２に記載のポリペプチド。   
[２４]  前記抗原結合ドメインが、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体に由来する、２２に記載のポリペプチド。   
[２５]  前記抗原結合ドメインが、以下：
（ａ）一本鎖抗体；
（ｂ）ダイアボディ；
（ｃ）抗体のポリペプチド鎖；
（ｄ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；又は、
（ｅ）Ｆ（ａｂ）フラグメント
を含む、２２に記載のポリペプチド。   
[２６]  前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、低減したＦｃ媒介エフェクター機能を有する、１〜２１のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[２７]  前記エフェクター機能が、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）である、２６に記載のポリペプチド。   
[２８]  前記エフェクター機能が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）である、２６に記載のポリペプチド。   
[２９]  前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対し低い親和性を有する、１〜２８のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[３０]  前記ＦｃγＲが、ヒトＦｃγＲである、２９に記載のポリペプチド。   
[３１]  前記ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩからなる群から選択される、２９に記載のポリペプチド。   
[３２]  前記ＦｃγＲＩが、ＦｃγＲＩαである、３１に記載のポリペプチド。   
[３３]  前記ＦｃγＲＩＩが、ＦｃγＲＩＩａ又はＦｃγＲＩＩｂである、３１に記載のポリペプチド。   
[３４]  前記ＦｃγＲＩＩＩが、ＦｃγＲＩＩＩ（１５８Ｖ）又はＦｃγＲＩＩＩ（１５８Ｆ）である、３１に記載のポリペプチド。   
[３５]  前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、向上した親和性でＦｃＲｎと結合する、１〜３４のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[３６]  前記ポリペプチドが、ｐＨ７．４におけるよりもｐＨ６．０において、ＦｃＲｎに対する高い親和性を有する、３５に記載のポリペプチド。   
[３７]  前記ポリペプチドが、野生型Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、低減した親和性でＣ１ｑと結合する、１〜３６のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[３８]  前記ポリペプチドが、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、熱安定性の増加を呈示する、１〜３７のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[３９]  前記熱安定性が、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定される、３８に記載のポリペプチド。   
[４０]  前記熱安定性の増加が、少なくとも４℃である、３９に記載のポリペプチド。   
[４１]  前記熱安定性が、示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）により測定される、３８に記載のポリペプチド。   
[４２]  前記ＤＳＦ蛍光プローブが、Ｓｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅである、４１に記載のポリペプチド。   
[４３]  前記熱安定性の増加が、少なくとも５℃である、４２に記載のポリペプチド。   
[４４]  前記ポリペプチドが、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿アッセイを用いて測定される見かけ溶解度の増加を呈示する、１〜４３のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[４５]  前記ポリペプチドが、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、加速安定性アッセイを用いて測定される安定性の増加を呈示する、１〜４４のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[４６]  前記加速安定性アッセイが、（ｉ）長期間にわたるポリペプチドのインキュベーション、及び（ｉｉ）高温でのインキュベーションを含む、４５に記載のポリペプチド。   
[４７]  前記加速安定性アッセイが、高濃度でのインキュベーションにより実施される、４６に記載のポリペプチド。   
[４８]  前記長期間が、少なくとも１ヵ月である、４６に記載のポリペプチド。   
[４９]  前記高濃度が、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌである、４７に記載のポリペプチド。   
[５０]  前記高温が、少なくとも４０℃である、４６に記載のポリペプチド。   
[５１]  前記加速安定性アッセイが、高機能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）又は動的光散乱法（ＤＬＳ）を用いて実施される、４５〜５０のいずれか１項に記載のポリペプチド。   
[５２]  １〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする配列を含む、単離された核酸。   
[５３]  ５２に記載の核酸を含む組成物。   
[５４]  ５２に記載の核酸を含む発現ベクター。   
[５５]  ５２に記載の核酸、５３に記載の組成物、又は５４に記載のベクターを含む宿主細胞。   
[５６]  （ａ）５５に記載の細胞を培養するステップ；及び（ｂ）前記ポリペプチドを単離するステップを含む、１〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチドを作製する方法。   
[５７]  １〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチドと、担体とを含む組成物。   
[５８]  １〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチドを含む診断薬。   
[５９]  前記ポリペプチドが標識されている、５８に記載の診断薬。   
[６０]  １〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチドと、治療部分とを含むコンジュゲート。   
[６１]  １〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチド、又は５２〜５５若しくは５７〜６０のいずれか１項に記載の組成物を含むキット。   
[６２]  哺乳動物を治療する方法であって、１〜５１のいずれか１項に記載のポリペプチド、又は５２〜５５若しくは５７〜６０のいずれか１項に記載の組成物を有効量で、治療が必要な哺乳動物に投与することを含む方法。   
[６３]  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドのＦｃ誘導性エフェクター機能を低減する方法であって、以下：
（ａ）Ｆｃドメインにおける２３４位の前記アミノ酸をフェニルアラニン（Ｆ）で置換するステップ；
（ｂ）Ｆｃドメインにおける２３５位の前記アミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）で置換するステップ；及び
（ｃ）Ｆｃドメインの３２２位の前記アミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）で置換するステップ；又はＦｃドメインの３３１位のアミノ酸をアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）で置換するステップ
を含み、
ここで、前記Ｆｃドメインの前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う方法。   
[６４]  前記親ポリペプチドの前記Ｆｃドメインが、
（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）アミノ酸、若しくは２５２位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５２位にトリプトファン（Ｗ）アミノ酸、若しくは２５２位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）アミノ酸；及び／又は
（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）アミノ酸、若しくは２５６位にセリン（Ｓ）アミノ酸、若しくは２５６位にアルギニン（Ｒ）アミノ酸、若しくは２５６位にグルタミン（Ｑ）アミノ酸、若しくは２５６位にアスパラギン酸（Ｄ）アミノ酸
を有し、
ここで、前記Ｆｃドメインの前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う方法。   
[６５]  前記親ポリペプチドの前記Ｆｃドメインが、
（ａ）２５２位にチロシン（Ｙ）；及び／又は
（ｂ）２５４位にトレオニン（Ｔ）；及び／又は
（ｃ）２５６位にグルタミン酸（Ｅ）
を有し、
ここで、前記Ｆｃドメインの前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う方法。   
[６６]  Ｆｃドメインを含む親ポリペプチドのＦｃ誘導性エフェクター機能を低減すると共に、その半減期を増加させる方法であって、以下：
（ａ）前記Ｆｃドメインにおける２３４位の前記アミノ酸をフェニルアラニン（Ｆ）で置換するステップ；
（ｂ）前記Ｆｃドメインにおける２３５位の前記アミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン（Ｎ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グルタミン（Ｑ）、若しくはバリン（Ｖ）で置換するステップ；及び
（ｃ）前記Ｆｃドメインの３２２位の前記アミノ酸をアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、若しくはグルタミン（Ｑ）で置換するステップ；又は前記Ｆｃドメインの３３１位のアミノ酸をアラニン（Ａ）若しくはグリシン（Ｇ）で置換するステップ；並びに
（ｄ）２５２位の前記アミノ酸をチロシン（Ｙ）若しくはセリン（Ｓ）若しくはトリプトファン（Ｗ）若しくはトレオニン（Ｔ）で置換するステップ
を含み；
ここで、前記Ｆｃドメインの前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う方法。   
[６７]  ２５２位の前記アミノ酸がチロシン（Ｙ）で置換され、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、６６に記載の方法。   
[６８]  （ａ）２５４位の前記アミノ酸をトレオニン（Ｔ）で置換するステップ；及び、
（ｂ）２５６位の前記アミノ酸をグルタミン酸（Ｅ）若しくはセリン（Ｓ）、若しくはアルギニン（Ｒ）、若しくはグルタミン（Ｑ）で置換するステップ
をさらに含み、
ここで、前記Ｆｃドメインの前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、６６又は６７に記載の方法。   
[６９]  ２５６位の前記アミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）で置換され、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、６８に記載の方法。   
[７０]  ２３４位の前記アミノ酸がフェニルアラニン（Ｆ）で置換され；２３５位の前記アミノ酸がグルタミン（Ｑ）で置換され；３２２位の前記アミノ酸がグルタミン（Ｑ）で置換され、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、６３〜６９のいずれか１項に記載の方法。   
[７１]  ２３４位の前記アミノ酸がフェニルアラニン（Ｆ）で置換され；２３５位の前記アミノ酸がグルタミン（Ｑ）で置換され；３３１位の前記アミノ酸がグリシン（Ｇ）で置換され、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、６３〜７０のいずれか１項に記載の方法。   
[７２]  ２３４位の前記アミノ酸がフェニルアラニン（Ｆ）で置換され；２３５位の前記アミノ酸がアラニン（Ａ）で置換され；３２２位の前記アミノ酸がグルタミン（Ｑ）で置換され、ここで、前記アミノ酸番号付けは、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従う、６３〜７０のいずれか１項に記載の方法。   
[７３]  前記エフェクター機能が、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）である、６３〜７２のいずれか１項に記載の方法。   
[７４]  前記エフェクター機能が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）である、６３〜７２のいずれか１項に記載の方法。   
[７５]  前記ポリペプチドが、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、熱安定性の増加を呈示する、６３〜７２のいずれか１項に記載の方法。   
[７６]  前記熱安定性が、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定される、７５に記載の方法。   
[７７]  前記熱安定性の増加が、少なくとも４℃である、７５に記載の方法。   
[７８]  前記熱安定性が、ＤＳＦ蛍光プローブを用いた示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）により測定される、７５に記載の方法。   
[７９]  前記ＤＳＦ蛍光プローブが、Ｓｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅである、７８に記載の方法。   
[８０]  前記熱安定性の増加が、少なくとも５℃である、７８に記載の方法。   
[８１]  前記ポリペプチドが、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿アッセイを用いて測定される見かけ溶解度の増加を呈示する、６３〜７２のいずれか１項に記載の方法。   
[８２]  前記ポリペプチドが、ＦＥＳ−ＹＴＥ  ＩｇＧ  Ｆｃドメインを含む同じポリペプチドと比較して、加速安定性アッセイを用いて測定される安定性の増加を呈示する、６３〜７２のいずれか１項に記載の方法。   
[８３]  前記加速安定性アッセイが、（ｉ）長期間にわたるポリペプチドのインキュベーション、及び（ｉｉ）高温でのインキュベーションを含む、８２に記載の方法。   
[８４]  前記加速安定性アッセイが、高濃度でのインキュベーションにより実施される、８３に記載の方法。   
[８５]  前記長期間が、少なくとも１ヵ月である、８３に記載の方法。   
[８６]  前記高濃度が、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌである、８４に記載の方法。   
[８７]  前記高温が、少なくとも４０℃である、８３に記載の方法。
【外国語明細書】
2018184399000001.pdf