(57)【要約】      （修正有）【課題】β３アドレナリン受容体(ＡＤＲＢ３)及びそのモノクローナル抗体の、腫瘍（悪性腫瘍）、炎症（慢性全身性炎症）、膿毒症、喘息、糖尿病、多臓器不全症候群、ウイルス感染、高齢化による疾患、貧血、重度の外傷、アレルギー性疾患、悪液質疾患、中毒、自己免疫疾患、器官移植免疫拒絶反応、肺動脈性肺高血圧症、アテローム性動脈硬化症、神経変性疾患、骨粗鬆症等の退行性骨疾患、肥大性心筋症やアルツハイマー病等の疾患治療への応用の提供。【解決手段】ＡＤＲＢ３、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体、又は抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変された細胞を、疾患治療、疾患診断、薬物製造又はバイオマーカーの検出に用いる方法。【選択図】図２０
2018161125.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＤＲＢ３、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体、又は抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変された細胞を、疾患治療、疾患診断、薬物製造又はバイオマーカーの検出に用いる方法。
【請求項２】
前記ＡＤＲＢ３はＴリンパ球の共抑制シグナル分子である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＡＤＲＢ３による免疫機能異常は、自己免疫疾患、腫瘍、炎症、病原体感染、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、老化、慢性疲労症候群、悪液質、肺動脈性肺高血圧症、高血圧、血栓性疾患、統合失調症、うつ病、依存症、ストレス障害、器官移植免疫拒絶反応、組織変性、線維性疾患、器官機能不全、生殖器及び性的機能不全、再生機能不全の共通の病理学的メカニズムとなる請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＡＤＲＢ３は、ヒト免疫機能を調節する薬物を製造するための標的である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＡＤＲＢ３は、Ｇ０期細胞、腫瘍細胞、ヒト骨髄由来サプレッサー細胞、リンパ球、調節性Ｔ細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、好中球、単核−マクロファージ、血小板、破骨細胞又は小膠細胞を検出するバイオマーカーとして用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＡＤＲＢ３は、腫瘍、炎症、膿毒症、喘息、糖尿病、多臓器不全症候群、ウイルス感染症、高齢化による疾患、アレルギー性疾患、悪液質、中毒性疾患、自己免疫疾患、器官移植免疫拒絶反応、肺動脈性肺高血圧症、急性冠症候群、変形性関節症又は神経変性疾患の診断及び／又は治療標的である請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、ヒト組織、細胞中のＡＤＲＢ３タンパク質含有量及び／又は血液又は脳脊髄液中の可溶性ＡＤＲＢ３タンパク質含有量の検出に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はＡＤＲＢ３の機能調節に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、顆粒球、リンパ球、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞又は単核−マクロファージの機能調節に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、免疫関連疾患の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、ヒト免疫機能を調節する薬物として用いられるか、又はその製造に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、免疫チェックポイント阻害剤の製造に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、悪性腫瘍の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、抗癌薬及び／又は抗癌ワクチンとして用いられるか、その製造に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、腫瘍多剤耐性逆転薬として用いられるか、その製造に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、炎症性疾患の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、抗炎症薬として用いられるか、その製造に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、細菌、ウイルス、真菌、マイコプラズマ、クラミジア又はプリオン感染症の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、自己免疫疾患の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、糖尿病の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、中毒性疾患の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、神経変性疾患の診断及び／又は治療の応用に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記神経変性疾患は、アルツハイマー病又はパーキンソン病を含むことを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、精神病の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、依存症の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、心臓血管・脳血管疾患の診断及び／又は治療の応用に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、抗アテローム性動脈硬化症薬の製造に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、心不全の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、抗血小板薬、抗血栓薬の製造に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、抗老化薬の製造に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、ヒトの肝臓、心筋、膵臓、脳、神経、腎臓、肺又は筋肉組織の再生能力を促進する薬物の製造に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、線維性疾患の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、器官移植免疫拒絶反応の予防及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、変形性関節症の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、アレルギー性疾患の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
前記抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、生殖器及び性的機能不全性疾患の診断及び／又は治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
前記抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたＴリンパ球は、悪性腫瘍、自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症、炎症性疾患、ウイルス感染、アルツハイマー病又は老化防止の治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたマクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞は、悪性腫瘍、自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症、炎症性疾患、ウイルス感染、アルツハイマー病又は老化防止の治療に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
ＡＤＲＢ３活性化作用を有するＡＤＲＢ３抗体、ＡＤＲＢ３アゴニスト又は遺伝子組換え技術によるヒトＡＤＲＢ３タンパク質は、白血球成長促進剤の製造に用いられる請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体を製造するポリペプチド断片であって、
ポリペプチドとして、ヒトＡＤＲＢ３全長タンパク質、ＡＤＲＢ３タンパク質のＮ末端の１−１５５位のアミノ酸残基断片、ＡＤＲＢ３タンパク質のＣ末端の１５６−４０８位のアミノ酸残基断片、ＡＤＲＢ３タンパク質における２９６−３１７位のアミノ酸残基であるロイシンジッパー断片、ＡＤＲＢ３タンパク質における３５１−３６９位のアミノ酸残基の核局在化配列、ＡＤＲＢ３タンパク質における１−３６位のアミノ酸残基のＥ１断片、ＡＤＲＢ３タンパク質における１０１−１１１位のアミノ酸残基のＥ２断片、ＡＤＲＢ３タンパク質における１３４−１５５位のアミノ酸残基のＩ２断片、ＡＤＲＢ３タンパク質における３１５−３２６位のアミノ酸残基のＥ４断片、ＡＤＲＢ３タンパク質における３４８−４０８位のアミノ酸残基のＩ４断片、３４４−３４９位のアミノ酸残基断片、１４３−１４８位のアミノ酸残基のＩＴＩＭ１断片、１４０−１４６位のアミノ酸残基のＩＴＩＭ１断片、２０２−２０７位のアミノ酸残基のＩＴＩＭ２断片、１９９−２０４位のアミノ酸残基のＩＴＩＭ２断片、２１２−２１７位のアミノ酸残基のＩＴＩＭ３断片を含むが、これらに制限されないことを特徴とするポリペプチド断片。
【請求項４１】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体であって、
（１）２０１５年９月３日に中国典型培養物寄託センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託され、寄託番号がＣＣＴＣＣ  Ｎｏ：Ｃ２０１５１４６であるハイブリドーマ細胞系５Ｄ１によるモノクローナル抗体；
（２）２０１６年１２月１２日に中国典型培養物寄託センター（ＣＣＴＣＣ）寄託され、寄託番号がＣ２０１６２０２のハイブリドーマ細胞系５Ｂ８によるモノクローナル抗体；
（３）２０１５年９月３日に中国典型培養物寄託センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託され、寄託番号がＣＣＴＣＣ  Ｎｏ：Ｃ２０１５１４７のハイブリドーマ細胞系４Ｇ７によるモノクローナル抗体；
（４）２０１６年１２月１２日に中国典型培養物寄託センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託され、寄託番号がＣ２０１６２０３のハイブリドーマ細胞系５Ｄ９によるモノクローナル抗体；
（５）ハイブリドーマ細胞系５Ｄ１、５Ｂ８、４Ｇ７又は５Ｄ９によるモノクローナル抗体の結合特性を有するモノクローナル抗体；
（６）ハイブリドーマ細胞系５Ｄ１、５Ｂ８、４Ｇ７又は５Ｄ９によるモノクローナル抗体と結合可能なエピトープ結合とのモノクローナル抗体；
（７）競合的結合測定においてハイブリドーマ細胞系５Ｄ１、５Ｂ８、４Ｇ７又は５Ｄ９によるモノクローナル抗体と競合可能なモノクローナル抗体；
（８）ＡＤＲＢ３を特異的結合可能なウサギモノクローナル抗体、マウス由来モノクローナル抗体、キメラ抗体、完全ヒト由来抗体、単一ドメイン抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂ抗体断片、合成抗体；
（９）下記複数のＡＤＲＢ３抗原とエピトープ結合することで、ＡＤＲＢ３タンパク質活性を調節する抗ＡＤＲＢ３抗体：Ｓ２１２、Ｓ２３９、Ｓ３４９、Ｃ１１０、Ｃ１８９、Ｔ６５、Ｔ１４０、Ｓ１９１、Ｙ３３６、Ｙ３４６、Ｋ１５１、Ｒ１５２、Ｃ１５３、Ｐ３４３、Ｐ３５０、Ｐ３６８、Ｐ３６９、Ｐ３７１、Ｐ３７７、Ｐ３８１、Ｐ３９１、Ｐ３９４、Ｈ１９０、Ｈ２８８、Ｎ８、Ｎ２６、Ｔ１５０、Ｔ１０８、Ｔ１１４、Ｇ４１、Ｇ１０６、Ｇ１４６、Ｇ２７１、Ｇ２９５、Ｇ３８３、Ｇ４０２、Ｃ２７５、Ｃ３６３、Ｙ１４５、Ｙ１４５、Ｙ２０４、Ｙ２１４、Ｙ２３６、Ｙ３４６（ただし、Ｓ：セリン、Ｃ：システイン、Ｔ：スレオニン、Ｙ：チロシン、Ｋ：リシン、Ｒ：アルギニン、Ｃ：システイン、Ｐ：バリン、Ｈ：ヒスチジン、Ｎ：アスパラギン）；
（１０）ＡＤＲＢ３を特異的結合した抗体；から選ばれ、
（１０）抗体は、
（ａ）下記重鎖相補性決定領域を含有し、
ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、４、７、１０と少なくとも７０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含有する第１相補性決定領域；
ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、５、８、１１と少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含有する第２相補性決定領域；
ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、６、９、１２と少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含有する第３相補性決定領域；及び
（ｂ）下記軽鎖相補性決定領域を含有し、
ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、１６、１９、２２と少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含有する第１相補性決定領域；
ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、１７、２０、２３と少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含有する第２相補性決定領域；及び
ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １５、１８、２１、２４と少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含有する第３相補性決定領域；
（ｃ）ヒト化抗体の重鎖可変領域にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５と少なくとも７０％の的配列相同性を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
（ｄ）ヒト化抗体の軽鎖可変領域にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６と少なくとも７０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はバイオ医薬品の技術分野に属し、具体的には、免疫調節シグナル伝達経路の技術に関する。より具体的には、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗癌、抗炎症、抗毒素、抗アレルギー、抗ウイルス感染、抗自己免疫疾患、抗悪液質、ショック防止、抗アテローム性動脈硬化症、抗変形性関節症、抗神経変性、抗老化薬の製造における新用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
人体内のβ３アドレナリン受容体（Ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ  Ｂｅｔａ  ３、ＡＤＲＢ３、Ｂ３ＡＲ、ｂｅｔａ３  ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ、β３受容体）はカテコールアミンを媒介する役割を果たす組織受容体の１種であり、Ｇタンパク質結合型である。従来、ＡＤＲＢ３についての研究は主に体脂肪、血糖と血中脂質のレベル、インシュリン分泌及び作用への影響に注目されている。
【０００３】
ＡＤＲＢ３の悪性腫瘍、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、炎症、膿毒症、多臓器不全症候群、ウイルス感染、自己免疫疾患、器官移植免疫拒絶反応、老化、骨粗鬆症、重度の外傷、中毒、悪液質等の疾患の分野での作用に関しては、まだ関連研究や報道がなかった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、ヒトＡＤＲＢ３及びそのモノクローナル抗体の、腫瘍（悪性腫瘍）、炎症（慢性全身性炎症）、膿毒症、喘息、糖尿病、多臓器不全症候群、ウイルス感染、高齢化による疾患、貧血、重度の外傷、アレルギー性疾患、悪液質疾患、中毒、自己免疫疾患、器官移植免疫拒絶反応、肺動脈性肺高血圧症、アテローム性動脈硬化症、神経変性疾患、骨粗鬆症等の退行性骨疾患、肥大性心筋症やアルツハイマー病等の疾患治療における応用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の上記目的は開示された以下の技術案によって達成される。
【０００６】
本発明では、大量の研究及び探索的実験を行ったところ、ＡＤＲＢ３は神経−内分泌−免疫調節ネットワークにおける重要な受容体であり、ＡＤＲＢ３媒介シグナル伝達経路が好中球、リンパ球や腫瘍細胞の増殖及び分化を調節することを見出した。健常な状態では、ＡＤＲＢ３は生体の非特異的免疫と特異的免疫の能力を維持して、外因性病原性微生物や老化した生体組織を除去することで、生体保護及び老化防止の作用を果たす。病理学的な状態では、該シグナル伝達経路の過剰な活性化により、系の慢性炎症を引き起こして、免疫恒常性を破壊する。このような共通メカニズムによれば、ＡＤＲＢ３は複数種の疾患関連に繋がる。ＡＤＲＢ３のモノクローナル抗体は、ＡＤＲＢ３と特異的結合してその活性を調節（遮断又は作動）できるため、炎症、ウイルス感染、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、神経変性疾患、自己免疫疾患、悪性腫瘍や高齢化による疾患等の治療に用いられ得る。すなわち、本質的には、これら疾患の治療メカニズムはいずれもＡＤＲＢ３に関連するものであり、ＡＤＲＢ３を遮断又は作動することによって疾患を予防、調節及び治療する。
【０００７】
従って、本発明はＡＤＲＢ３及び抗ＡＤＲＢ３ポリクローナル抗体の以下の応用を開示する。
ＡＤＲＢ３のヒト免疫機能調節における応用。
ＡＤＲＢ３による免疫機能異常は、自己免疫疾患、腫瘍、炎症、ウイルス病原体感染、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、老化、慢性疲労症候群、悪液質、肺動脈性肺高血圧症、高血圧、血栓性疾患、統合失調症、うつ病、依存症、ストレス障害、器官移植免疫拒絶反応、組織変性、線維性疾患、器官機能不全、生殖器及び性的機能不全、再生機能不全の共通の病理学的メカニズムとなる。
【０００８】
ＡＤＲＢ３のヒト免疫機能を調節する薬物を製造する標的としての応用。
【０００９】
ＡＤＲＢ３の、Ｇ０期細胞、腫瘍細胞、ヒト骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、リンパ球、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、好中球、単核−マクロファージ、造血幹細胞、巨核球、リンパ系前駆細胞、骨髄系前駆細胞、骨髄系細胞、血小板、破骨細胞又は小膠細胞を検出するバイオマーカーとしての応用。特に骨髄芽球、前骨髄球、骨髄球、好中球、好酸球、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、マスト細胞、樹状細胞、調節性Ｔ細胞、異型リンパ球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、抗原提示細胞、プラズマ細胞、原始リンパ球又は幼若リンパ球を検出するマーカーとしての応用。
【００１０】
ＡＤＲＢ３の、腫瘍細胞の悪性度、転移予後の評価及び／又は治療効果検測用のバイオマーカーとしての応用、細胞増殖及び／又は細胞分化能力を評価するマーカー、及び特異的免疫機能及び／又は老化程度を評価するマーカーとしての応用。
【００１１】
ＡＤＲＢ３の、腫瘍、炎症、膿毒症、喘息、糖尿病、多臓器不全症候群、ウイルス感染症、高齢化による疾患、アレルギー性疾患、悪液質、中毒性疾患、自己免疫疾患、器官移植免疫拒絶反応、肺動脈性肺高血圧症、急性冠症候群、変形性関節症又は神経変性疾患の診断及び／又は治療標的としての応用。
【００１２】
ＡＤＲＢ３の、特異的免疫機能を評価するマーカーとしての応用。
【００１３】
ＡＤＲＢ３の、Ｔリンパ球の共抑制シグナル分子としての応用。
【００１４】
可溶性ＡＤＲＢ３の生体免疫機能調節における応用。
【００１５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、体液可溶性ＡＤＲＢ３の検出・調節における応用。
【００１６】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、細胞、組織中のＡＤＲＢ３タンパク質含有量の検出における応用。
【００１７】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、免疫ブロッティング、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕ  ハイブリダイゼーション技術、免疫沈降、免疫組織化学、エライザ法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光、磁気細胞選別、免疫金コロイド検出又はフローサイトメトリー等の免疫学的実験、ヒト血清、組織細胞、人体分泌物又は細胞培養物中のＡＤＲＢ３タンパク質の検出における応用。
【００１８】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、ＡＤＲＢ３機能調節における応用。
【００１９】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、ケモカイン、免疫抑制性受容体及び／又は神経細胞接着分子の機能調節における応用。
【００２０】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、免疫関連疾患の診断及び／又は治療における応用。
【００２１】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、免疫チェックポイント阻害剤の製造における応用。
【００２２】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、Ｔリンパ球共抑制機能を調節する薬物の製造における応用。
【００２３】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、先天性免疫機能の調節における応用。
【００２４】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、補体機能調節における応用。
【００２５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、免疫耐性機能調節における応用。
【００２６】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗原提示機能調節における応用。
【００２７】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、免疫アジュバントによるワクチン機能の促進における応用。
【００２８】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、悪性腫瘍の診断及び／又は治療における応用。
【００２９】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗癌又は抗腫瘍薬又はワクチンの製造における応用。
【００３０】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、乳癌、肺癌、膵臓癌、肝癌、神経膠腫、結腸癌、直腸癌、腎臓癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、黒色腫、リンパ腫、前立腺癌、卵巣癌、子宮内膜癌、胆管癌、骨肉腫、甲状腺癌又は白血病の診断及び／又は治療における応用。具体的に、ＡＤＲＢ３抗体で血液、脳脊髄液、胸水や腹水等の体液における可溶性ＡＤＲＢ３を検出することで、疾患を診断できる。
【００３１】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗腫瘍転移薬の製造における応用。
【００３２】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、腫瘍多剤耐性逆転薬の製造における応用。
【００３３】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、悪性腫瘍患者の予後判断及び／又は治療効果の監視における応用。
【００３４】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、悪液質の診断及び／又は治療における応用。
【００３５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、炎症性疾患の診断及び／又は治療における応用。
【００３６】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗炎症薬の製造における応用。
【００３７】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、細菌、真菌、マイコプラズマ、クラミジア又はプリオン等の病原体感染症の診断及び／又は治療における応用。
【００３８】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、淋菌感染症の診断及び／又は治療における応用。
【００３９】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、ウイルス感染症の診断及び／又は治療における応用。
【００４０】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、呼吸器ウイルス感染症の診断及び／又は治療における応用。
【００４１】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、Ｂ型肝炎ウイルス感染症の診断及び／又は治療における応用。
【００４２】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、エイズの診断及び／又は治療における応用。
【００４３】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗ウイルスワクチンの製造における応用。
【００４４】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、腎炎、肝炎、肺炎、心筋炎又は脳炎の診断及び／又は治療における応用。
【００４５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、内毒素血症の診断及び／又は治療における応用。
【００４６】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、感染性ショックの診断及び／又は治療における応用。
【００４７】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、膿毒症の診断及び／又は治療における応用。
【００４８】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、多臓器不全症候群の診断及び／又は治療における応用。
【００４９】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、自己免疫疾患の診断及び／又は治療における応用。
【００５０】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の自己免疫疾患を治療する薬物の製造における応用。
【００５１】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、全身性エリテマトーデスの診断及び／又は治療における応用。
【００５２】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、関節リウマチの診断及び／又は治療における応用。
【００５３】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、慢性潰瘍性大腸炎の診断及び／又は治療における応用。
【００５４】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、乾癬の診断及び／又は治療における応用。
【００５５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、シェーグレン症候群の診断及び／又は治療における応用。
【００５６】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、多発性硬化症の診断及び／又は治療における応用。
【００５７】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、糖尿病の診断及び／又は治療における応用。
【００５８】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、中毒性疾患の診断及び／又は治療における応用。
【００５９】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、神経変性疾患の診断及び／又は治療における応用。
【００６０】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、アルツハイマー病又はパーキンソン病の診断及び／又は治療における応用。
【００６１】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、記憶改善薬の製造における応用。
【００６２】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、精神病の診断及び／又は治療における応用。
【００６３】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、統合失調症の診断及び／又は治療における応用。
【００６４】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗うつ薬の製造における応用。
【００６５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗ストレス障害薬の製造における応用。
【００６６】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、依存症の診断及び／又は治療における応用。
【００６７】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗アルコール薬又は抗薬物依存症薬の製造における応用。
【００６８】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗アンフェタミン中毒又は抗ヘロイン中毒薬の製造における応用。
【００６９】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、心臓血管・脳血管疾患の診断及び／又は治療における応用。
【００７０】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗アテローム性動脈硬化症薬の製造における応用。
【００７１】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗血小板薬、抗血栓薬物の製造における応用。
【００７２】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、血栓塞栓症を治療する薬物の製造における応用。
【００７３】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、脳、肝、肺、腸、腎臓、心虚血又は再灌流傷害を治療する薬物の製造における応用。
【００７４】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、脳卒中治療薬の製造における応用。
【００７５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、肺塞栓症を治療する薬物の製造における応用。
【００７６】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗好中球薬の製造における応用。
【００７７】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、急性冠症候群の診断及び／又は治療における応用。
【００７８】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、心不全の診断及び／又は治療における応用。
【００７９】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、高血圧の診断及び／又は治療における応用。
【００８０】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、血中脂質調節における応用。
【００８１】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、肺動脈性肺高血圧症の診断及び／又は治療における応用。
【００８２】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、薬物溶出ステント又は薬物溶出バルーンの製造における応用。
【００８３】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、高齢化による疾患の診断及び／又は治療における応用。
【００８４】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗老化薬の製造における応用。
【００８５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、上記疾患の治療薬又は抗顆粒球薬、化学療法薬の増感剤、止血薬、補体部分アゴニスト、免疫アジュバント、二重特異性抗体、分化誘導剤、デアセチラーゼ阻害剤、エラスターゼ阻害剤としての応用、又はそれらの製造における応用。
【００８６】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、スキンケア、抗皮膚老化又は美容類の化粧品の製造における応用。皮膚老化を遅延させて、皮膚の弾性を回復させ、しぼや色素沈着を減少させる効能がある。
【００８７】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗疲労又は睡眠改善、及び抗疲労又は睡眠改善の薬物又は製剤の製造における応用。
【００８８】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗慢性疲労症候群薬物の製造における応用。
【００８９】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、ヒト組織再生能力を促進する薬物の製造における応用。
【００９０】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、肝臓再生能力を促進する薬物の製造における応用。
【００９１】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、心筋、肝臓、骨髄、膵臓、脳、神経、腎臓、肺又は筋肉等の組織再生を促進する薬物の製造における応用。
【００９２】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、白血球減少症、好中球減少症、リンパ球減少症、再生不良性貧血、加齢による筋ジストロフィー、加齢黄斑変性症等の疾患の治療における応用。
【００９３】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、線維性疾患の診断及び／又は治療における応用。
【００９４】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、肺繊維化、珪肺症の診断及び／又は治療における応用。
【００９５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、器官移植免疫拒絶反応の予防及び／又は治療における応用。
【００９６】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、器官移植免疫抑制剤の製造における応用。
【００９７】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、変形性関節症の診断及び／又は治療における応用。
【００９８】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、骨粗鬆症の診断及び／又は治療における応用。
【００９９】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、アレルギー性疾患の診断及び／又は治療における応用。
【０１００】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、抗アレルギー薬物の製造における応用。
【０１０１】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、喘息の診断及び／又は治療における応用。
【０１０２】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、生殖器及び性的機能不全性疾患の診断及び／又は治療における応用。
【０１０３】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、不妊症の治療における応用。
【０１０４】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、勃起不全、早漏の治療における応用。
【０１０５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、キメラ抗原受容体Ｔ細胞の製造における応用。
【０１０６】
抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたＴリンパ球の、悪性腫瘍の治療における応用。
【０１０７】
抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたＴリンパ球の、自己免疫疾患の治療又は治療薬の製造における応用。
【０１０８】
抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたＴリンパ球の、炎症性疾患の治療又は治療薬の製造における応用。
【０１０９】
抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたＴリンパ球の、アテローム性動脈硬化症の治療又は治療薬の製造における応用。
【０１１０】
抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたＴリンパ球の、ウイルス感染症の治療又は治療薬の製造における応用。
【０１１１】
抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたＴリンパ球の、神経変性疾患の治療又は治療薬の製造における応用。
【０１１２】
抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたＴリンパ球の、老化防止又は抗老化薬の製造における応用。
【０１１３】
抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたマクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞の、悪性腫瘍、自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症、炎症、ウイルス感染、神経変性疾患又は高齢化による疾患の治療又は治療薬の製造における応用。
【０１１４】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、腫瘍細胞、好中球、単核−マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、調節性Ｔ細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、血小板、リンパ球の増殖及び分化の調節における応用。
【０１１５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、樹状細胞機能調節における応用。
【０１１６】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、Ｂリンパ球機能の調節における応用。
【０１１７】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、ナチュラルキラー細胞機能の調節における応用。
【０１１８】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、単核−マクロファージ機能の調節における応用。
【０１１９】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、赤血球機能の調節における応用。
【０１２０】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、グリア細胞機能の調節における応用。
【０１２１】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、造血幹細胞機能の調節における応用。
【０１２２】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、ミトコンドリア機能の調節における応用。
【０１２３】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、リボソーム機能の調節における応用。
【０１２４】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、核小体機能の調節における応用。
【０１２５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、リゾソーム機能の調節における応用。
【０１２６】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、細胞骨格と細胞移動能力の調節における応用。
【０１２７】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、細胞微小管機能の調節における応用。
【０１２８】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、細胞接着能力の調節における応用。
【０１２９】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、遺伝子のエピジェネティックな改変の調節における応用。
【０１３０】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、アミノ酸アセチル化改変の調節における応用。
【０１３１】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、細胞自食機能の調節における応用。
【０１３２】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、細胞解糖の調節における応用。
【０１３３】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、Ｇ０期細胞機能の調節における応用。
【０１３４】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、Ｇ０期細胞の同定、スクリーニングにおける応用。
【０１３５】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、細胞周期調節における応用。腫瘍細胞、幹細胞、顆粒球、単核−マクロファージ及びリンパ球の細胞周期及び有糸分裂機能の調節が含まれる。
【０１３６】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、細胞有糸分裂の調節における応用。
【０１３７】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、細胞分化及び増殖機能の調節における応用。
【０１３８】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、アポトーシス調節における応用。
【０１３９】
抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の、コーティング薬物として薬物溶出ステント又は薬物溶出バルーンの製造に用いるときの応用。
【０１４０】
ＡＤＲＢ３活性化作用を有するＡＤＲＢ３抗体、ＡＤＲＢ３アゴニスト又は遺伝子組換え技術によるヒトＡＤＲＢ３タンパク質の、白血球成長促進剤の製造における応用。
【０１４１】
ＡＤＲＢ３タンパク質又はポリペプチドの、骨髄球系の造血を促進する薬物の製造における応用。
【０１４２】
本発明はさらに、抗ＡＤＲＢ３抗体に関連するＡＤＲＢ３エピトープを開示し、抗原エピトープとして、Ｓ２１２、Ｓ２３９、Ｓ３４９、Ｃ１１０、Ｃ１８９、Ｔ６５、Ｔ１４０、Ｓ１９１、Ｙ３３６、Ｙ３４６、Ｋ１５１、Ｒ１５２、Ｃ１５３、Ｐ３４３、Ｐ３５０、Ｐ３６８、Ｐ３６９、Ｐ３７１、Ｐ３７７、Ｐ３８１、Ｐ３９１、Ｐ３９４、Ｈ１９０、Ｈ２８８、Ｎ８、Ｎ２６、Ｔ１５０、Ｔ１０８、Ｔ１１４、Ｇ４１、Ｇ１０６、Ｇ１４６、Ｇ２７１、Ｇ２９５、Ｇ３８３、Ｇ４０２、Ｃ２７５、Ｃ３６３、Ｙ１４５、Ｙ２０４、Ｙ２１４、Ｙ２３６、Ｙ３４６を含むが、これらに制限されない。本発明に係る抗体は、上記エピトープと結合することで、ＡＤＲＢ３機能を調節する作用を果たし、なお、上記エピトープに制限されない。（Ｓ：セリン、Ｃ：システイン、Ｔ：スレオニン、Ｙ：チロシン、Ｋ：リシン、Ｒ：アルギニン、Ｃ：システイン、Ｐ：バリン、Ｈ：ヒスチジン、Ｎ：アスパラギン）。
【０１４３】
本発明は、抗ＡＤＲＢ３抗体の製造に必要なポリペプチド断片を開示し、ポリペプチドとして、
ヒトＡＤＲＢ３全長タンパク質（１−４０８アミノ酸残基）、ＡＤＲＢ３タンパク質のＮ末端の１−１５５位のアミノ酸残基断片、ＡＤＲＢ３タンパク質のＣ末端の１５６−４０８位のアミノ酸残基断片、ＡＤＲＢ３タンパク質における２９６−３１７位のアミノ酸残基のロイシンジッパー断片、ＡＤＲＢ３タンパク質における３５１−３６９位のアミノ酸残基の核局在化配列（ＮＬＳ）、ＡＤＲＢ３タンパク質における１−３６位のアミノ酸残基のＥ１断片、ＡＤＲＢ３タンパク質における１０１−１１１位のアミノ酸残基のＥ２断片、ＡＤＲＢ３タンパク質における１３４−１５５位のアミノ酸残基のＩ２断片、ＡＤＲＢ３タンパク質における３１５−３２６位のアミノ酸残基のＥ４断片、ＡＤＲＢ３タンパク質における３４８−４０８位のアミノ酸残基のＩ４断片、３４４−３４９位のアミノ酸残基断片、１４３−１４８位のアミノ酸残基のＩＴＩＭ１断片、１４０−１４６位のアミノ酸残基のＩＴＩＭ１断片、２０２−２０７位のアミノ酸残基のＩＴＩＭ２断片、１９９−２０４位のアミノ酸残基のＩＴＩＭ２断片、２１２−２１７位のアミノ酸残基のＩＴＩＭ３断片を含むが、これらに制限されない。
【０１４４】
本発明はさらに、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体に関する、
（１）２０１５年９月３日に中国典型培養物寄託センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託され、寄託番号がＣＣＴＣＣ  Ｎｏ：Ｃ２０１５１４６のハイブリドーマ細胞系５Ｄ１によるモノクローナル抗体；
（２）２０１６年１２月１２日に中国典型培養物寄託センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託され、寄託番号がＣ２０１６２０２のハイブリドーマ細胞系５Ｂ８によるモノクローナル抗体；
（３）２０１５年９月３日に中国典型培養物寄託センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託され、寄託番号がＣＣＴＣＣ  Ｎｏ：Ｃ２０１５１４７のハイブリドーマ細胞系４Ｇ７によるモノクローナル抗体；
（４）２０１６年１２月１２日に中国典型培養物寄託センター（ＣＣＴＣＣ）に寄託され、寄託番号がＣ２０１６２０３のハイブリドーマ細胞系５Ｄ９によるモノクローナル抗体；
（５）ハイブリドーマ細胞系５Ｄ１、５Ｂ８、４Ｇ７又は５Ｄ９によるモノクローナル抗体の結合特性を有するモノクローナル抗体；
（６）ハイブリドーマ細胞系５Ｄ１、５Ｂ８、４Ｇ７又は５Ｄ９によるモノクローナル抗体と結合可能なエピトープ結合とのモノクローナル抗体；
（７）競合的結合測定にハイブリドーマ細胞系５Ｄ１、５Ｂ８、４Ｇ７又は５Ｄ９によるモノクローナル抗体と競合可能なモノクローナル抗体；
（８）ＡＤＲＢ３と特異的結合可能なウサギモノクローナル抗体、マウス由来抗体、キメラ抗体、完全ヒト由来抗体、単一ドメイン抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂ抗体断片、合成抗体；
（９）下記複数のＡＤＲＢ３抗原とエピトープ結合することで、ＡＤＲＢ３タンパク質活性を調節する抗ＡＤＲＢ３抗体：Ｓ２１２、Ｓ２３９、Ｓ３４９、Ｃ１１０、Ｃ１８９、Ｔ６５、Ｔ１４０、Ｓ１９１、Ｙ３３６、Ｙ３４６、Ｋ１５１、Ｒ１５２、Ｃ１５３、Ｐ３４３、Ｐ３５０、Ｐ３６８、Ｐ３６９、Ｐ３７１、Ｐ３７７、Ｐ３８１、Ｐ３９１、Ｐ３９４、Ｈ１９０、Ｈ２８８、Ｎ８、Ｎ２６、Ｔ１５０、Ｔ１０８、Ｔ１１４、Ｇ４１、Ｇ１０６、Ｇ１４６、Ｇ２７１、Ｇ２９５、Ｇ３８３、Ｇ４０２、Ｃ２７５、Ｃ３６３、Ｙ１４５、Ｙ１４５、Ｙ２０４、Ｙ２１４、Ｙ２３６、Ｙ３４６；以下を含む但不限于上記エピトープ；そのうち、Ｓ：セリン、Ｃ：システイン、Ｔ：スレオニン、Ｙ：チロシン、Ｋ：リシン、Ｒ：アルギニン、Ｃ：システイン、Ｐ：バリン、Ｈ：ヒスチジン、Ｎ：アスパラギン；
（１０）ＡＤＲＢ３と特異的結合した抗体から選ばれ、
（１０）抗体は、
（ａ）下記重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有し、
ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、４、７、１０と少なくとも７０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含有する第１相補性決定領域；
ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、５、８、１１と少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含有する第２相補性決定領域；
ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、６、９、１２と少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含有する第３相補性決定領域；及び
（ｂ）下記軽鎖相補性決定領域を含有し、
ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、１６、１９、２２と少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含有する第１相補性決定領域；
ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、１７、２０、２３と少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含有する第２相補性決定領域；及び
ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、１８、２１、２４と少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含有する第３相補性決定領域；
（ｃ）ヒト化抗体の重鎖可変領域（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ、Ｖ領域）にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５と少なくとも７０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
（ｄ）ヒト化抗体の軽鎖可変領域にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６と少なくとも７０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１４５】
当業者によれば、本明細書に開示されているＣＤＲは変異体を含んでもよく、本明細書に開示されているＣＤＲを異なるフレームワーク領域に復帰突然変異する。通常、個体変異体ＣＤＲは本明細書の前記配列とのアミノ酸相同性が少なくとも７０％又は８０％であり、より典型的には、好ましくは少なくとも７５％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、さらにほぼ１００％のように増加している相同性がある。
【０１４６】
【表１】
2018161125.tif 000003
【０１４７】
本発明に係るＡＤＲＢ３抗体はさらに、ウサギモノクローナル抗体、マウス由来抗体、キメラ抗体、完全ヒト由来抗体、単一ドメイン抗体（ｓｉｎｇｌｅ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、二重特異性抗体、Ｆａｂ抗体断片、合成抗体（Ｓｙｎｂｏｄｙ）等を含み、これら抗体の共通点として、ＡＤＲＢ３を特異的結合できる。抗体生産用の細胞はＣＨＯ、ＳＰ２／０、ＢＨＫ−２１、Ｖｅｒｏ細胞等を含む。
【０１４８】
なお、当業者であれば、本発明の前記内容に基づいて、本発明について各種の変化又は修正を行うことができ、これら同等形態がいずれも本願に添付した特許請求の範囲により限定される範囲に属する。
【０１４９】
具体的に、本発明では、大量の研究を行ったところ、ＡＤＲＢ３及び抗ＡＤＲＢ３ポリクローナル抗体は以下の作用を有することを見出した。
本発明は、新規な免疫調節受容体と腫瘍マーカーであるＡＤＲＢ３を開示し、ＡＤＲＢ３の生理機能と疾患の病理学的メカニズムにおける作用を開示するとともに、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体及びその応用を開示する。本発明における抗体は、ヒトＡＤＲＢ３のアミノ酸配列に特異的にターゲティングし、ＡＤＲＢ３と特異的結合してその生物学的活性を調節することができる。該抗体は、腫瘍細胞、造血幹細胞、骨髄系前駆細胞、リンパ系前駆細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、好中球、リンパ球や単核−マクロファージの分化及び機能を調節して、抗癌、抗炎症症、腫瘍免疫耐性逆転の作用を果たす。本抗体はさらに、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）の分化・成熟を誘導して、アポトーシス能力を回復させて、特異的免疫機能を強化させることもできる。さらに、本抗体は腫瘍細胞の分化を誘導して増殖を阻害し、抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）及び直接作用（細胞周期の遮断、リボソーム合成の阻害、ミトコンドリア膜電位の低下、アポトーシス誘導、ミトコンドリア自食の阻害、ペントースリン酸経路の阻害、解糖阻害、ケトン体合成減少及び脂代謝低下等のメカニズムを含む）により腫瘍細胞を殺滅する。本発明の抗体は、マウスハイブリドーマ技術を用いて得られてヒト化改変を行ったものである。本発明はこれら抗体の抗原エピトープ及びモノクローナル抗体を生産するためのハイブリドーマ細胞株を開示するする。ハイブリドーマ細胞株は、２０１６年１２月１２日に武漢大学中国典型培養物寄託センターに寄託されて、寄託番号がＣＣＴＣＣ  ＮＯ：Ｃ２０１６２０３及びＣＣＴＣＣ  ＮＯ：Ｃ２０１６２０２である５Ｄ９と５Ｂ８を含むが、これらに制限されず、ハイブリドーマ細胞は、ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体を分泌可能である。本発明に係るＡＤＲＢ３抗体「変異体」のアミノ酸配列には、前記配列に対する「保存的」アミノ酸改変が１個又は複数含まれ、好ましくは、抗体フレームワーク及び定常ドメインはヒトフレームワークとヒト定常ドメインである。本発明は該抗体の応用及びその検出キットの開発を開示し、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、免疫ブロッティング、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕ  ハイブリダイゼーション技術、免疫沈降、免疫組織化学、エライザ法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光、磁気細胞選別、免疫金コロイド検出やフローサイトメトリー等の免疫学的実験、ヒト血清、ヒト組織細胞、人体分泌物や人細胞培養物中の可溶性ＡＤＲＢ３タンパク質又はＡＤＲＢ３タンパク質断片の定量的及び定性的検出に適用できる。本発明の抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、ＡＤＲＢ３を活性化又は遮断する作用を発揮できる。
【０１５０】
本発明では、ＡＤＲＢ３は、新規なＴ細胞共阻害分子（Ｃｏ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ）と腫瘍マーカーであり、免疫細胞の活性化、増殖、分化、アポトーシス及び免疫応答を調節し、免疫阻害性の調節性Ｔ細胞（Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌ、Ｔｒｅｇ）、骨髄由来サプレッサー細胞（Ｍｙｅｌｏｉｄ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｃｅｌｌｓ、ＭＤＳＣ）、腫瘍浸潤好中球（ｔｕｍｏｒ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ、ＴＩＮｓ）や多数のタイプの癌細胞に発現可能であることが開示される。ＡＤＲＢ３は、膜性と可溶性の２種の形態があり、組織細胞と体液中のＡＤＲＢ３含有量の検出が治療効果、治療法の適用性の予測や疾患診断に寄与できる。腫瘍細胞のＡＤＲＢ３は、生体の免疫機能阻害を誘導して、Ｔ細胞挙動を変えて、Ｔ細胞が感作エフェクター細胞に分化して腫瘍を殺滅できないようにする。腫瘍細胞、老化細胞、ウイルスや細菌等の病原体は、リンパ球、顆粒球、単球、樹状細胞、ＮＫ細胞を誘導してＡＤＲＢ３を高発現させ、ＡＤＲＢ３媒介シグナル伝達経路を介して抗原提示と免疫細胞の活性化を阻害することによって、腫瘍細胞、老化細胞やウイルス等の病原体が免疫系により認識されず、除去されずに済む。ＡＤＲＢ３抗体は、ＡＤＲＢ３シグナル伝達経路を遮断して、ＡＤＲＢ３が高発現された免疫細胞を除去して、リンパ球の正常機能を回復させ、免疫系により病原体、癌細胞や老化細胞を認識して除去する。
【０１５１】
ＡＤＲＢ３は、ケモカイン、免疫阻害性受容体及び神経細胞接着分子の機能を備える。ＡＤＲＢ３は核小体における腫瘍マーカータンパク質（腫瘍ポリペプチド）と結合し、次に「ＭＨＣクラスＩ分子−腫瘍ポリペプチド−ＡＤＲＢ３」複合体は癌細胞の表面にディスプレイして、ＣＤ８＋Ｔ細胞とＭＨＣクラスＩ分子との結合によりＣＤ８＋Ｔ細胞と癌細胞を直接接触させ、このように、ＡＤＲＢ３は癌細胞表面からＣＤ８＋Ｔ細胞に接着して、ＡＤＲＢ３の免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆ、ＩＴＩＭ）でＣＤ８＋Ｔ細胞を阻害することにより、ＣＤ８＋Ｔ細胞が癌細胞を殺滅できなくなる。
【０１５２】
ＡＤＲＢ３は、ナイーブ免疫細胞などの低分化細胞と癌細胞に大量で存在している。ＡＤＲＢ３は腫瘍において過剰に発現され、リンパ球の活性化を遮断することでＴ細胞による腫瘍への衝撃を阻害する。ＡＤＲＢ３は誘導性タンパク質で、正常な細胞に存在する場合が極めて少ないが、病理学的な状態では、腫瘍細胞及び腫瘍微小環境での免疫細胞に存在するものであり、腫瘍増殖の免疫微小環境の形成を促進する。ＰＤ−１又はＣＴＬＡ−４遺伝子ノックアウトマウスには深刻な自己免疫疾患が発生するが、ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスは癌、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病や自己免疫疾患に罹患することがなく、寿命が著しく延長している。ＡＤＲＢ３抗体は、癌細胞を直接殺滅する機能とともに、免疫チェックポイント阻害剤（Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、ＩＣＩ）のような作用を有し、特異的免疫を活性化させることで癌細胞を除去する。化合物阻害剤又は中和抗体でＡＤＲＢ３シグナル伝達経路を遮断すると、腫瘍の成長を効果的に阻害して、増殖期と休眠期にある癌細胞を殺滅し、腫瘍細胞とナイーブリンパ球の分化・成熟を誘導することができる。腫瘍の悪性度を低下させるとともに、免疫細胞の抗癌機能を回復できる。正常なリンパ球と組織細胞にはほぼＡＤＲＢ３が含まれていないため、本抗体は正常な免疫系と組織へ損傷を与えたりすることがなく、高効率、広域スペクトル、低毒性、特異的な標的を有する抗癌薬と言える。
【０１５３】
交感神経−副腎髄質がＡＤＲＢ３を介して免疫機能を調節し、ＡＤＲＢ３は神経−内分泌−免疫ネットワークの恒常性を維持するのに重要なタンパク質であり、疾患と老化は神経−内分泌−免疫ネットワークの恒常性調節障害による異常な生命活動である。ＡＤＲＢ３抗体は、ＡＤＲＢ３活性を阻害して、免疫系が改めて腫瘍細胞、病原体で感染された細胞や老化細胞を認識して除去できるようにし、抗癌、抗炎症、再生促進、老化防止の作用を果たす。
【０１５４】
本発明では、ＡＤＲＢ３は、新規なリンパ球阻害分子であり、３個の免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を有し、ＩＴＩＭアミノ酸配列は、以下のとおりであることが開示される。ＩＴＩＭ  １：（１４３）ＬＲＹＧＡＬ（１４８）又は（１４３）  ＬＲＹＧＴＬ  （１４８）又は（１４０）ＬＲＹＲＡＶ（１４６）；ＩＴＩＭ  ２：（２０２）ＩＰＹＡＬＬ（２０７）又は（２０２）ＭＰＹＶＬＬ（２０７）又は（１９９）ＶＰＹＡＬＬ（２０４）；ＩＴＩＭ  ３：（２１２）ＳＦＹＬＰＬ（２１７）。ＡＤＲＢ３は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及びマクロファージの分化・成熟と自己認識を阻害することによって、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及びマクロファージが老化したり損傷したりした細胞を除去できなくなるばかり、正常な細胞に免疫キラーを及ぼす。リンパ球の自然免疫阻害分子、たとえばＣＤ２８ファミリータンパク質と異なり、ＡＤＲＢ３は疾患により発現を誘発されるものである。健常な状態では、リンパ球膜に少量のＡＤＲＢ３が存在する。腫瘍、ウイルス感染、自己免疫疾患等の病理学的な状態では、自然免疫細胞（たとえば好中球）又は腫瘍細胞はリンパ球がＡＤＲＢ３を大量発生するように誘導し、ＡＤＲＢ３が細胞質を貫通して核に入り、遺伝子発現を調節してリンパ球表現型を変え、阻害性リンパ球の増殖を促進して、特異的免疫を阻害して疾患の発展を促進する。ＡＤＲＢ３によるリンパ球への免疫阻害作用により、フィードバックとして自然免疫細胞、特に好中球とマクロファージの活性が強化されて、生体を炎症状態にする。腫瘍、ウイルスはリンパ球のＡＤＲＢ３発現を誘導して、リンパ球のアポトーシスを阻止し、死亡したリンパ球は免疫系にとって危険信号になり、死亡した免疫細胞は静止状態にある抗原提示細胞（ａｎｔｉｇｅｎ−ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ  ｃｅｌｌ、ＡＰＣ）を活性化状態に変換して、更に提示抗原がＴ細胞を活性化させて、抗癌と病原体除去の作用を果たす。ＡＤＲＢ３抗体は、ＡＤＲＢ３を高発現させた顆粒球、マクロファージ及びリンパ球のアポトーシスを誘導して、危険信号を送信し、特異的免疫系を活性化させて、リンパ球の抗癌機能を回復させる。ＡＤＲＢ３抗体は、正常なリンパ球を損傷せずに誘導性ＡＤＲＢ３を含有する「病原性」リンパ球を特異的に除去し、リンパ球の正常な死亡とアポトーシスを回復させ、免疫系を正常にして、自己免疫の発生を回避する。
【０１５５】
本発明では、過剰に発現された又は機能が強化されたＡＤＲＢ３により癌、炎症、自己免疫疾患や老化が引き起こされることが開示される。過剰に活性化されたＡＤＲＢ３は、天然免疫による特異的免疫の調節に干渉を与えて、リンパ球の分化が阻害されて機能できないナイーブ細胞になり、低分化リンパ球が外来性組織と自己組織を認識できないため、腫瘍細胞は免疫から逃がされて自己免疫疾患ヲ引き起こす。ＡＤＲＢ３シグナル伝達経路を遮断すると、免疫を正常に回復させて、Ｔ細胞で癌細胞と老化細胞を除去して、自己免疫損傷を回避することができる。ＡＤＲＢ３は天然免疫と特異的免疫をリンクする重要なものであり、好中球、ＮＫ細胞及びマクロファージによる先天性免疫応答を強化させて、リンパ球の増殖を刺激する。本発明者は、マウス乳癌ウイルスを有するＭＭＴＶ−ＰｙＶＴマウスからＡＤＲＢ３遺伝子を除去すると、乳癌が発生することはなく、ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスは寿命が長くなり、自己免疫疾患や癌に罹患することがなく、外因性腫瘍細胞もその体内で成長できず、ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスの血清中の炎症性因子、たとえばＩＬ−４、ＩＬ−６のレベルが著しく低下し、原始顆粒球と幼若顆粒球の数が減少されることを見出した。本発明者はヒトＡＤＲＢ３を遮断するモノクローナル抗体を開発し、腫瘍、炎症及び自己免疫疾患の治療に用いる。ＡＤＲＢ３抗体は、マウスの特異的抗腫瘍応答を強化させて、全身性炎症を軽減させる。ＡＤＲＢ３抗体を４Ｔ１乳癌細胞担癌マウスの治療に用いると、同所移植腫瘍の増殖と遠隔転移が阻害され、好中球、ＭＤＳＣ及びＴｒｅｇが減少し、樹状細胞の抗原提示能力が高まり、補体、ＮＫ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の抗癌活性が活性化されて、好中球−リンパ球比（ＮＬＲ）が低下して、抗癌と抗炎症の作用が発揮される。ＡＤＲＢ３抗体は、インビトロでヒトリンパ球の分化を刺激して、抗癌活性を有するＣＤ８＋Ｔ細胞の発生を誘導する。
【０１５６】
本発明は天然免疫と特異的免疫を調節する新規なメカニズムを開示し、すなわち、交感神経−副腎髄質がまず顆粒球と単核−マクロファージにおける構成的発現されたＡＤＲＢ３を活性化させることで自然免疫細胞を活性化させ、次にリンパ球によるＡＤＲＢ３の誘導性発現を促進してリンパ球の活性化を阻害する。不安、抑鬱等の高レベルの心理的ストレスがＡＤＲＢ３を介して生体の免疫機能を低下させて、癌、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病等の疾患に罹患するリスクを高める。ＡＤＲＢ３の異常な活性化により、天然免疫と特異的免疫系の障害が発生して、具体的には、好中球をはじめ、骨髄系細胞が過剰に活性化されるのに対して、リンパ球が活性化できず、好中球の数も白血球に占める百分率も高くなり、ＮＬＲが高まり、生体の慢性全身性炎症の原因となる。ＡＤＲＢ３媒介免疫障害は、自己免疫疾患、炎症、腫瘍、ウイルス感染、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病及び老化の共通の病理学的メカニズムである。腫瘍の病理学的プロセスは最も典型的であり、早期の上皮内癌段階では、ＡＤＲＢ３は主に局所組織における好中球とマクロファージを活性化させて、炎症性因子のレベルを向上させ、癌組織が局所で浸潤性増殖をしているが、ＡＤＲＢ３の活性が連続的に向上すると、顆粒球、脾臓、肝臓、腫瘍細胞のいずれも可溶性ＡＤＲＢ３を分泌して、ＮＫ細胞とリンパ球によるＡＤＲＢ３の発現を誘導できるようになる。リンパ球におけるＡＤＲＢ３は、エピジェネティックな改変を変えて、ＮＫ細胞とリンパ球の分化・成熟を阻害し、血液における循環腫瘍細胞を除去できず、腫瘍の遠隔転移を招く。従来の癌免疫療法では、リンパ球媒介の特異的免疫機能を高めることは主な手段であり、自然免疫細胞を調節するのに好適な標的がなく、それにより、抗癌効果が低く、自己免疫疾患を生じさせ易い。ＡＤＲＢ３抗体は、好中球、マクロファージによるＮＫ細胞とリンパ球への阻害作用を解消して、ＮＫ細胞とリンパ球による腫瘍免疫認識を回復できる。
【０１５７】
死亡したリンパ球が最大の免疫機能を発揮できるため、リンパ球の正常な死亡又はアポトーシスの回復は癌免疫療法の重点となる。従来の癌免疫療法では、Ｔ細胞の増殖を促進して、Ｔアポトーシスを防止することが一般的であり、早期では効く可能性があるが、再発率が高く、且つ深刻な自己免疫ヲ引き起こす。本発明では、癌免疫療法の新手段、すなわちＴ細胞死亡の誘導が提供されて、Ｔ細胞の死亡数について調節が求められる。ＡＤＲＢ３抗体は、最初から小用量で投与し、過剰なＡＤＲＢ３抗体による正常Ｔ細胞への障害を避けるように、腫瘍が縮小して又は好中球の数が１，０００／ｍｍ３未満になると、減量又は停用する。
【０１５８】
ＡＤＲＢ３は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、樹状細胞及び腫瘍細胞膜に存在するものであり、阻害シグナルを組み込んで、リンパ球の活性化を調節する。癌細胞、Ｔ細胞及び樹状細胞の表面と細胞内にコーン状の「ＡＤＲＢ３サブタイプ」構造が大量存在しており、「ＡＤＲＢ３サブタイプ」は免疫細胞と腫瘍細胞の接着界面を維持して、それらをしっかり結合させる。コーン状のＡＤＲＢ３複合体は細胞膜で発生して、細胞質を貫通して、細胞核まで延びており、１本の通路になり。細胞外の物質、たとえば神経伝達物質、病原体等が該通路を介して細胞核に入って、ＤＮＡ複製と遺伝子発現を調節して、細胞の分化と増殖に影響を及ぼす。ＡＤＲＢ３抗体は免疫細胞と腫瘍細胞の接着を破壊して、腫瘍細胞によるＴ細胞への阻害を遮断する。ＡＤＲＢ３は免疫シナプスの形成とシグナル伝達を調節して、ほかの免疫シグナル分子（たとえばＢ７／ＣＤ２８、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１）を集めてシグナルを伝達する。ＡＤＲＢ３シグナル伝達経路は、細胞内に阻害シグナルを伝達して、Ｔ細胞とＮＫ細胞の活性化について負の調節作用を果たす。ＡＤＲＢ３は、それぞれ初期Ｔ細胞の一次応答段階、活性化段階、記憶Ｔ細胞の二次応答段階において重要な負の調節作用を果たす。ＡＤＲＢ３遺伝子を高発現させたエフェクターＴ細胞は抗アポトーシス能力を有するため生き残り、記憶Ｔ細胞になるまで生育する。ＡＤＲＢ３は、ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を促進して、Ｔｒｅｇの活性を高め、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を阻害することによって、リンパ球による癌細胞、病原体で感染された細胞及び老化細胞の除去を阻害して、悪性腫瘍、アテローム性動脈硬化症、自己免疫疾患、アルツハイマー病や老化を引き起こす。
【０１５９】
本発明者により、ＡＤＲＢ３は抗原プロセシング及び提示過程に関与して、生体の免疫認識と免疫応答を調節することが見出された。ＡＤＲＢ３はＡＰＣとリンパ球との接触部位に集まることが、細胞間接着複合体の安定化に役立ち、樹状細胞、マクロファージ及び顆粒球のリンパ球への粘着を促進する。ＡＰＣ中のＡＤＲＢ３が処理抗原に関与することにより、処理済みの腫瘍抗原情報が失われてリンパ球により認識できなくなる。ＡＤＲＢ３は以下のメカニズムによって抗原処理過程を調節する。[1]．ＡＤＲＢ３はアセチラーゼの機能を有し、抗原情報のアセチル化修飾を調節するものであり、アセチル化修飾を行われた腫瘍抗原は抗原性を保持できず、Ｔ細胞を活性化させることができない。[2]．ＡＤＲＢ３は、ＡＰＣ中の抗原情報が含まれたエンドサイトーシス小胞の自食を促進する。ＡＤＲＢ３がリゾソームの成熟を促進して、抗原を含有するエンドサイトーシス小胞がリゾソームと融合して、エンドサイトーシス小胞の自食性分解を早めて、腫瘍の抗原情報を除去し、特異的免疫系による腫瘍の免疫認識と応答を阻害する。[3]．ＡＰＣ、たとえば樹状細胞、マクロファージ及びＢ細胞には、ＡＤＲＢ３は、オートファゴソームに外被された外膜を介してＭＨＣ  クラスII分子に接着されて、「ＡＤＲＢ３：ポリペプチド：ＭＨＣクラスII分子」複合体を形成し、該複合体はＡＰＣの表面に提示されて、次にＣＤ４＋Ｔ細胞に直接接触して、Ｔ細胞応答を阻害する。
【０１６０】
癌患者の腫瘍細胞、リンパ球及び顆粒球のいずれにもＡＤＲＢ３の発現量が著しく増加して、Ｔ細胞の活性化に必須な第２シグナルシステムが阻害され、Ｔ細胞は免疫応答不全になり、腫瘍の免疫逃避。
ＡＤＲＢ３は細胞膜、リゾソーム、ミトコンドリア、リボソーム、細胞核や核小体等の細胞小器官に局在化されて、所在する細胞小器官の機能を調節する。ＡＤＲＢ３は、細胞質で合成した後、迅速に核に輸送し且つ核質間で往来できる特性を有し、胞核と細胞質の間で輸送キャリアとして働くとともにシグナル伝達を行い、ＤＮＡ複製と遺伝子発現を調節する。核内のＡＤＲＢ３はＧ０期細胞の増殖期への発展を促進し、癌細胞におけるＡＤＲＢ３が一般的に細胞核に位置することは、ＡＤＲＢ３による癌細胞増殖への促進を示唆する。細胞膜と細胞質ＡＤＲＢ３の核への輸送能力を遮断することにより、癌細胞の増殖を阻害できる。
【０１６１】
ＡＤＲＢ３遺伝子発現とタンパク質の局在化は悪性度の異なる腫瘍細胞に有意な差異がある。悪性度の低い癌細胞では、ＡＤＲＢ３の発現量が少なく、大部分が細胞核に局在化されて、細胞膜には少ない。悪性度の高い癌細胞では、ＡＤＲＢ３の発現量が多く、細胞核、細胞質及び膜に分布して、免疫細胞と接触して免疫阻害作用を発揮させることに役立つ。腫瘍患者では、ＡＤＲＢ３は以下の経路を介してリンパ球を阻害する。[1]、ＡＤＲＢ３は、ＡＰＣのリンパ球への阻害シグナルの伝達を誘導する。[2]、腫瘍細胞膜におけるＡＤＲＢ３はリンパ球に直接接触して阻害する。[3]、腫瘍細胞は可溶性ＡＤＲＢ３又はＡＤＲＢ３を含むエキソソームをシグナル分子として分泌して、リンパ球を調節する。ＡＤＲＢ３抗体はＡＤＲＢ３による免疫阻害機能を拮抗でき、癌患者の免疫不全Ｔ細胞とともに培養することで、Ｔ細胞の不全状態を解消してＴ細胞の機能を回復させ、癌治療作用を果たす。
【０１６２】
ＡＤＲＢ３は、細胞の増殖を刺激して分化を阻害することができ、悪性腫瘍細胞、骨髄系細胞、リンパ球、ＮＫ細胞、樹状細胞及び造血幹細胞の増殖に対して重要な役割を果たす。本発明では、ＡＤＲＢ３が細胞増殖能力を評価する「増殖マーカー」であり、ＡＤＲＢ３が多いほど、細胞の増殖能力が高まることが開示されている。従来、一般的に使用されている増殖マーカーはＭｃｍ、Ｋｉ−６７及びＰＣＮＡであり、この３種類のタンパク質はいずれもＧ０期細胞に発現できず、Ｇ１中期以降しか発現できず、「診断ギャップ」が存在するという欠点がある。ＡＤＲＢ３は、Ｇ１早期を含む増殖期全体とＧ０期のいずれにも発現可能であるので、より全面的且つ正確に細胞の増殖能力を反映できる。ＡＤＲＢ３を基礎及び臨床研究、薬物スクリーニング、人間疾患の動物モデルの評価、老化、幹細胞、ストレス、腫瘍、再生、細胞周期、Ｇ０期のメカニズムの研究に用いることは、患者予後の判断、診断、治療指導のために有効な手段である。
【０１６３】
ＡＤＲＢ３は細胞分化能力を評価する「分化マーカー」であり、ＡＤＲＢ３が多いほど、細胞の分化能力が悪い。癌細胞の場合、ＡＤＲＢ３が多いほど、分化程度が低く、悪性度が高い。ＡＤＲＢ３は、分化誘導薬物を研究するための標的タンパク質である。
【０１６４】
ＡＤＲＢ３は、初期Ｔ細胞に存在して、交感神経を介して直接調節して初期Ｔ細胞の死亡を防止する。このように、一部の機能がなくて自体細胞に対して殺滅作用を有する初期Ｔ細胞が生存して、自己免疫疾患の原因となる。Ｔ細胞ＡＤＲＢ３の含有量検出は、特異的免疫系の機能の重要な指標としてもよい。Ｔ細胞は、ＡＤＲＢ３含有量が多いほど、抗原認識機能が低下して、正常な組織細胞を損害しやすく、ＡＤＲＢ３＋Ｔ細胞は自己免疫を引き起こす犯罪者と言える細胞である。
【０１６５】
本発明は、Ｔ細胞の増殖と分化を調節する新しいメカニズムを開示し、すなわち、交感神経−副腎髄質系により造血幹細胞と末梢免疫器官Ｔ細胞のＡＤＲＢ３を活性化させることによって、Ｔ細胞の増殖を刺激して分化を阻害する。ＡＤＲＢ３は、Ｇ０期の造血幹細胞とＴ細胞が細胞周期に入って有糸分裂を行うように促進する。健常な状態では、ＡＤＲＢ３シグナル伝達経路は免疫耐性を維持する。病理学的な状態では、過剰に活性化されたＡＤＲＢ３によって、成熟Ｔ細胞が脱分化又は分化転換して特異的免疫機能を失い、腫瘍の免疫逃逸、自己免疫、アレルギー反応等を招いてしまう。
【０１６６】
本発明では、脾臓と肝臓の特異的なＮＫ細胞、マクロファージ、好中球及びリンパ球の発生分化がＡＤＲＢ３調節ネットワークに依存することが開示される。活性が異常なＡＤＲＢ３は脾臓におけるマクロファージ及びリンパ球の機能を阻害し、老化した血液細胞、病原体や異物を除去できなくなり、人体が老化していく。ＡＤＲＢ３抗体は、脾臓による老化・損傷の血液細胞の除去能力を回復させて、老化を遅延させる。
【０１６７】
ＡＤＲＢ３は、肝臓造血免疫組織の発生分化を調節して、肝臓での顆粒球、リンパ球、マクロファージ、ＮＫ細胞及びリンパ球の発生を促進し、天然免疫細胞の肝臓への富化を促進する。ＡＤＲＢ３シグナル伝達経路の活性が亢進した状態では、肝臓の造血機能が向上して、好中球の発生が増加し、炎症、自己免疫疾患や癌が起こる。正常な肝細胞において、大部分のＡＤＲＢ３は細胞質に分布し、少部分は細胞核に位置する。肝炎患者の肝細胞質でのＡＤＲＢ３含有量が向上し、ＡＤＲＢ３は肝細胞のリボソーム機能を高めて、肝臓によるＣ反応性タンパク質、補体、凝固因子の合成を促進し、全身性炎症反応が重篤化される。ＡＤＲＢ３は、肝臓中の炎症性細胞の浸潤を刺激して、ＡＤＲＢ３を高発現させた顆粒球、リンパ球、マクロファージ及びＮＫ細胞の肝組織での数がいずれも有意に増加する。肝癌及び肝硬変患者は、肝細胞中のＡＤＲＢ３含有量が増加しており、主に細胞核に分布し、肝臓中のＡＤＲＢ３＋顆粒球、ＡＤＲＢ３＋マクロファージの数が増える。肝臓中のＡＤＲＢ３＋顆粒球とＡＤＲＢ３＋マクロファージは、転移巣を形成する環境に必要な細胞として働き、ＡＤＲＢ３抗体は乳癌細胞の肝転移を阻害する。ＡＤＲＢ３抗体は肝臓の造血・免疫機能を回復させて、肝臓炎症を抑制して、肝繊維化を減少し、肝炎や肝硬変の治療に利用できる。
【０１６８】
ＡＤＲＢ３によるＴ細胞の増殖と分化の調節メカニズムは以下のとおりである。[1]、カテコールアミンによりＧ０期Ｔ細胞膜におけるＡＤＲＢ３が活性化されて、Ｐ６２／ｍＴＯＲ／ＡＫＴシグナル伝達経路が活性化され、Ｋｉ−６７、ＣＤＫ３、Ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１等のタンパク質の合成が増えて、成熟したＴ細胞が「脱分化」して、増殖期に入るように誘導する。[2]、Ｔ細胞膜における活性化されたＡＤＲＢ３は陥入して細胞に取り込まれた後、細胞質に二量体を形成して、ロイシンジッパードメインを露出させ、微小管に沿って核内に輸送されて、核ＤＮＡに結合される。細胞質におけるＡＤＲＢ３はｃ−Ｍｙｃとヘテロ二量体を形成して、プロモーター領域に結合されたＥ−ｂｏｘ構造により遺伝子に対して転写活性化調節を行う。[3]、ＡＤＲＢ３は、アセチラーゼの機能を有し、核小体Ｈ３ヒストンアセチル化修飾を追加することで、細胞のエピジェネティック状態を変化させて、高度に圧縮されたクロマチンを解けるものであり、増殖関連の遺伝子転写に寄与する。
【０１６９】
細胞の有糸分裂が終了した後、ＡＤＲＢ３はユビキチン化により分解されて、新生Ｔ細胞が徐々に分化して成熟する。ＡＤＲＢ３の分解が制限されると、ナイーブＡＤＲＢ３ｂｒｉｇｈｔＴ細胞（ＡＤＲＢ３強陽性のＴ細胞）が分化して成熟することができず、生体は特異的免疫機能の欠損状態になる。ＡＤＲＢ３抗体は、ナイーブＴ細胞膜上のＡＤＲＢ３のリガンド結合ドメインをブロッキングさせて、カテコールアミンによるＡＤＲＢ３の活性化を競合的に阻害し、リンパ球が増殖期からＧ０期に入って成熟するまで生育するように誘導する。
【０１７０】
本発明では、リンパ球のＡＤＲＢ３発現量が特異的免疫機能と老化程度を評価する指標であることが開示されており、リンパ球のＡＤＲＢ３発現量が高いほど、特異的免疫機能は低下して、生体の老化程度は高く、死亡するリスクは高い。
【０１７１】
本発明では、血液中のリンパ球ＡＤＲＢ３含有量を検出することによって早期癌患者をスクリーニングすることが開示される。健常者の場合、成熟リンパ球はＡＤＲＢ３を発現させるか少量で発現され、発現量が好中球より少ない。腫瘍細胞と顆粒球はリンパ球のＡＤＲＢ３発現を誘導させて、リンパ球の活性化を阻害する。リンパ球のＡＤＲＢ３発現量が好中球の発現量に近く又は好中球の発現量を超え、且つ、細胞核と核小体に蓄積されると、該細胞はＡＤＲＢ３ｂｒｉｇｈｔリンパ球になり、細胞が分化しておらず又は脱分化を大なって、抗癌機能を失うことを示す。ＡＤＲＢ３抗体を用いて、末梢血中のＡＤＲＢ３高発現を伴うＫｉ−６７陰性（ＡＤＲＢ３ｂｒｉｇｈｔＫｉ−６７−）リンパ球を検出することは、身体検査の指標として、早期癌患者のスクリーニングに用いられ得る。ＡＤＲＢ３ｂｒｉｇｈｔ  Ｋｉ−６７−  リンパ球がリンパ球全数の１０％以上を占めると、がん罹患リスクの高い集団又は早期癌患者であることが分かる。末梢血５０％以上のリンパ球がＡＤＲＢ３高発現を伴うＫｉ−６７陽性（ＡＤＲＢ３ｂｒｉｇｈｔ  Ｋｉ−６７＋）であると、ナイーブリンパ球が分化して成熟することができず、特異的免疫機能が深刻に損なわれ、癌が進行期に入ったことが分かる。
【０１７２】
本発明では、ＡＤＲＢ３は腫瘍マーカー（ｔｕｍｏｒ  ｍａｒｋｅｒ）であり、正常な細胞に比べて、癌細胞のＡＤＲＢ３発現量が有意に増加することが開示される。ＡＤＲＢ３発現量は重症度、腫瘍の大きさ又は段階と関連性がある。体液のＡＤＲＢ３濃度の変化が治療効果に繋がり、濃度が低下すると、治療効果があることが示される。疾患再発の場合、ＡＤＲＢ３のレベルは著しく高くなり、ＡＤＲＢ３濃度検出により再発が予測できる。腫瘍組織におけるＡＤＲＢ３発現量検出外、ＡＤＲＢ３抗体は尿液、喀痰、腹水、胸水、脳脊髄液、気管支肺胞洗浄液に落脱した細胞のＡＤＲＢ３発現量も検出でき、普通の人向けの癌スクリーニング及び癌患者の診断に適用できる。
【０１７３】
本発明では、腫瘍組織中のＡＤＲＢ３融合遺伝子とＡＤＲＢ３遺伝子の突然変異、欠失、挿入、重複、染色体転位再編成等の検出が、腫瘍患者治療の指導に対して重要な参照価値があることが開示される。
【０１７４】
ＡＤＲＢ３は、造血幹細胞、リンパ系前駆細胞とリンパ球（Ｂ細胞、Ｔ細胞）、骨髄系前駆細胞と骨髄系細胞（赤血球、顆粒球、単球、巨核球）、ＮＫ細胞、腫瘍細胞、破骨細胞、小膠細胞には発現量が比較的高い。特に骨髄芽球、前骨髄球、骨髄球、好中球、好酸球、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ（Ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ、ＴＡＭ）、マスト細胞、樹状細胞（ＤＣ）、異型リンパ球（ａｂｎｏｒｍａｌ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）、Ｔｒｅｇ、プラズマ細胞、原始リンパ球及び幼若リンパ球のいずれにもＡＤＲＢ３高発現が見られる。本発明では、ＡＤＲＢ３は骨髄系細胞とナイーブリンパ球の抗原マーカーであり、人体内のＡＤＲＢ３は主に骨髄系細胞に発現され、成熟リンパ球にはＡＤＲＢ３が含まず又は少量で含まれているが、ナイーブリンパ球ではＡＤＲＢ３発現が高まることが開示される。リンパ球と好中球におけるＡＤＲＢ３が過剰に活性化されることにより、免疫監視と免疫防御が阻害されて、複数種の疾患の原因となる。ＡＤＲＢ３は、骨髄系前駆細胞とリンパ系前駆細胞の分化を阻害して、癌細胞、ウイルスやほかの病原性微生物に抵抗する防御メカニズムを弱める。癌細胞、病原性微生物及び老化細胞は、好中球とリンパ球のＡＤＲＢ３シグナル伝達経路を活性化させて、成熟した好中球とリンパ球を刺激して脱分化（ｄｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）させて、低分化のナイーブ又は原始細胞にして、免疫系の監視、防御、調節作用に悪影響を与える。ＡＤＲＢ３抗体は、ＡＤＲＢ３の免疫阻害機能を遮断して、腫瘍細胞、骨髄系前駆細胞及びリンパ系前駆細胞の分化を誘導し、成熟した好中球とリンパ球の脱分化を遮断してリンパ球、ＮＫ細胞、単核−マクロファージ、樹状細胞、好中球及び補体系の正常機能を回復させる。
【０１７５】
細胞分化障害は、ほとんどの疾患、たとえば腫瘍、心臓血管疾患、炎症和老化の発生を引き起こす根本原因である。腫瘍の本質が細胞分化の機能不全であるため、癌細胞の分化能力回復が腫瘍治療のキーと言える。本発明者により、ＡＤＲＢ３は分化調節用の重要なタンパク質であり、ＡＤＲＢ３が遮断されると、腫瘍細胞の分化能力が回復して、正常又は正常に近い細胞に分化されることが見出される。
【０１７６】
リンパ球分化障害による機能低下は、悪性腫瘍と自己免疫疾患が発生する原因である。心筋細胞、ニューロン等の分化障害は、心不全と神経変性疾患の発生に繋がる。重要な臓器の分化機能障害は老化を引き起こす重要な要素である。本発明者は老化と疾患発生メカニズムに関する「二次分化障害打撃」仮説を提出しており、細胞分化欠陥により不全な細胞が発生して疾患を引き起こすことは、一回目の「分化障害打撃」である。免疫系が正常な場合、不全な細胞を除去して生体を疾患から守ることができるが、免疫細胞の分化に障害が発生して、生体の免疫機能欠陥を引き起こし、免疫細胞が一回目の「分化障害打撃」による腫瘍細胞、老化細胞や不全な細胞を除去できなければ、二回目の「分化障害打撃」が発生して発症することになる。本発明者は、心筋梗塞後、壊死性心筋に大量のＡＤＲＢ３高発現炎症性細胞が浸潤して、心臓幹細胞の成熟型心筋細胞への分化を阻害して、不完全な分化を引き起こし、ナイーブ心筋細胞と成繊維細胞が発生して、心筋リモデリングと心不全の原因となることを見出した。ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウス（ＡＤＲＢ３−／−マウス）の左冠動脈前下行枝を結紮して、心筋梗塞後の心不全モデルを作り、ＡＤＲＢ３野生型マウスと比較したところ、ＡＤＲＢ３−／−マウスの左室駆出率（ＬＶＥＦ）が有意に上昇し、心筋リモデリングが著しくない。若いＡＤＲＢ３−／−マウス（１０〜３０週齢）に比べて、老年マウス（７０週齢）のほうはＬＶＥＦが有意に低下せず、一部の７０週齢のＡＤＲＢ３−／−マウスのＬＶＥＦは１０週齢のマウスよりも高かった。本発明者はＡｐｏ  ＥとＡＤＲＢ３の二重遺伝子ノックアウトマウスを構築して、高脂肪飼料で飼育したところ、Ａｐｏ  ＥとＡＤＲＢ３二重遺伝子ノックアウトマウスではアテローム性動脈硬化症のプラーク数がＡｐｏ  Ｅノックアウトマウスより遥かに少ないことを見出した。二重遺伝子ノックアウトマウスは、学習と記憶能力がＡｐｏ  Ｅノックアウトマウスより優れて、寿命も有意に延長している。本発明者により、ヒト腫瘍組織にＡＤＲＢ３を高発現させた顆粒球、マクロファージ及びリンパ球が大量浸潤しており、これら炎症性細胞は癌細胞に直接接触してＡＤＲＢ３を放出するように、癌細胞でのＡＤＲＢ３の大量発現を誘導して、癌細胞の分化障害を深刻にして、癌細胞の悪性度を向上させ、遠隔転移と薬剤耐性を発生させることが見出された。前記のとおり、ＡＤＲＢ３遺伝子をノックアウトするか、又は中和抗体でＡＤＲＢ３を遮断することによって、組織細胞と免疫細胞の分化機能を回復させて、二次「分化障害打撃」を回避し、人体の免疫細胞で病原性微生物、癌細胞や損傷した組織細胞を除去し得る。
【０１７７】
本発明では、ＡＤＲＢ３は細胞融合（ｃｅｌｌ  ｆｕｓｉｏｎ）を誘発し、ＡＤＲＢ３アゴニストと遺伝子組換え技術によるヒトＡＤＲＢ３タンパク質薬物は細胞融合を促進するための誘導剤として、体細胞ハイブリダイゼーション、動物や植物の遠隔ハイブリダイゼーション育種、リンパ球ハイブリドーマやモノクローナル抗体の製造に用いられることが開示される。ロイシンジッパー（ｌｅｕｃｉｎｅ  ｚｉｐｐｅｒ）ドメインを有するＡＤＲＢ３は、独立した生物膜を近づけて膜を一体化させることができ、異なる種類の細胞同士の生物膜融合を促進することで組織・器官の形成を促進する。ミトコンドリア等の細胞小器官の形成、原核細胞から真核細胞へ、単細胞生物から多細胞生物への進化過程において、ＡＤＲＢ３は重要な役割を果たす。ＡＤＲＢ３は、異なるタンパク質の融合を促進し、たとえば、前骨髄球白血病に関連するＰＭＬ−ＲＡＲα融合タンパク質の形成が促進できる。ＡＤＲＢ３遺伝子はほかのガン原遺伝子と融合すると、腫瘍の発展を促進する。ＡＤＲＢ３媒介細胞融合により染色体が不安定になり、細胞融合に起因する中心体の過量（３個以上）が三又は四極の有糸分裂又は分裂時間の延長を引き起こす。本発明者により、ＡＤＲＢ３が中心体の数を増やして、多倍体の形成を促進することが見出される。ＡＤＲＢ３媒介細胞融合は、腫瘍の形成に寄与し、マクロファージ、好中球又はリンパ球は高いＡＤＲＢ３融合能力を利用して、腫瘍細胞融合に重要な役割を果たす。ＡＤＲＢ３は顆粒球と癌細胞の融合を誘導して、癌細胞の異質性と表現型の不安定性を高め、親よりも悪性のある細胞を発生させて、腫瘍の転移を加速させ、癌細胞に薬剤耐性を発生させる。ウイルス（たとえば、ヒトパピローマウイルス、Ｂ型及びＣ型肝炎ウイルス、ＨＴＬＶ−１、ＥＢＶ）媒介細胞融合過程に、ＡＤＲＢ３は重要な役割を果たす。ＡＤＲＢ３抗体は、ウイルス媒介細胞融合を遮断できる。
【０１７８】
本発明者は、活性化されたＡＤＲＢ３によって、細胞が脱分化して、遺伝子発現プロファイルとエピジェネティックな改変が変わり、細胞表現型が変換することを見出した。ＡＤＲＢ３は、ロイシンジッパードメインを有するものであり、ＤＮＡ及びＲＮＡとの結合能力を持つとともに、各種の転写因子の二量又は多量体化も媒介し得る。ＡＤＲＢ３は、ほかの転写因子とオリゴマーを形成して、遺伝子のプロモーターに結合して、標的遺伝子の転写を活性化又は阻害する。細胞膜における活性化されたＡＤＲＢ３は陥入して細胞質に入り、ホモ又はヘテロ二量体を形成し、アセチルトランスフェラーゼの機能を有するＡＤＲＢ３は３０００個余りの遺伝子（約ゲノムの１２％）のプロモーターに結合して、核小体ヒストンのアセチル化状態を調節し、細胞増殖に関連する遺伝子転写を促進して、腫瘍細胞、リンパ系前駆細胞及び骨髄系前駆細胞の増殖を刺激して分化・成熟を阻害する。
【０１７９】
本発明は、細胞核中にＡＤＲＢ３分子を高発現させたリンパ球を開示し、該タイプのリンパ球は骨髄系細胞のマーカータンパク質−ミエロペルオキシダーゼ（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ、ＭＰＯ）を発現させず又は低発現させ、骨髄系細胞へ分化する能力を持っている。本発明者は、該タイプの細胞をＭＰＯｄｉｍ／−  ＡＤＲＢ３＋リンパ球と命名し、該タイプのリンパ球はリンパ系前駆細胞又は原始リンパ球である。ＭＰＯｄｉｍ／−  ＡＤＲＢ３＋リンパ球の増殖と分化がＡＤＲＢ３により調節され、ＡＤＲＢ３活性又は発現量が向上する場合、該タイプのリンパ球は骨髄系細胞へ分化して、ＭＰＯの発現増加が見られ、細胞核に顆粒球様の変化が起こり、核型が長円状、分葉状、不規則状である。ＡＤＲＢ３は、ＭＰＯｄｉｍ／−ＡＤＲＢ３＋リンパ球の骨髄系細胞への分化を誘導してリンパ球を減少させることで、好中球とマクロファージの数を増やして、Ｔ細胞枯渇を招く。
【０１８０】
ＭＰＯｄｉｍ／−ＡＤＲＢ３＋リンパ球は、免疫阻害機能を有し、交感神経系がＡＤＲＢ３で該タイプの細胞を調節して、天然免疫と適応免疫のバランスを維持する。健常者の体内では、ＭＰＯｄｉｍ／−ＡＤＲＢ３＋リンパ球の数が少ないものの、癌、アルツハイマー病、ウイルス性肝炎、自己免疫疾患の患者や高齢者の末梢血、脾臓、肝臓や骨髄には大量で存在している。ＭＰＯｄｉｍ／−ＡＤＲＢ３＋リンパ球は、癌細胞の増殖を刺激し、且つその活性には広いスペクトルがあるので、乳癌、膵臓癌、肺癌、結腸癌、神経膠腫、黒色腫、白血病、肉腫等のいずれに対しても増殖促進作用を示す。ＭＰＯｄｉｍ／−ＡＤＲＢ３＋リンパ球は、肝炎ウイルス、エイズウイルス等のウイルスの感染と複製を促進する。ＡＤＲＢ３抗体はＭＰＯｄｉｍ／−ＡＤＲＢ３＋リンパ球の機能を阻害して、骨髄系細胞への分化転換を遮断し、成熟リンパ球への分化を促進する。
【０１８１】
本発明では、ＡＤＲＢ３は末梢血と骨髄におけるＣＤ４又はＣＤ８単陽性Ｔ細胞のＣＤ４＋ＣＤ８＋共陽性（ｄｏｕｂｌｅ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ、ＤＰ）Ｔ細胞への脱分化を誘導し、ＤＰＴアポトーシスを阻害するとともにＤＰＴ細胞の増殖を促進し、その血液中含有量を向上させることが開示される。高齢者、ウイルス感染、腫瘍、自己免疫疾患の患者では、末梢血ＣＤ４＋  ＣＤ８＋  ＤＰＴ細胞は有意に増加する。ＡＤＲＢ３抗体は、ＤＰＴ細胞の増殖を遮断することでその数を減少させ、ＤＰＴ増加による疾患や老化の治療に適用できる。
【０１８２】
本発明では、ＡＤＲＢ３はＣＤ８＋Ｔ細胞の骨髄系細胞におけるＭＤＳＣと好中球への系間分化転換（ｔｒａｎｓ−ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）を促進することが開示される。ＡＤＲＢ３は体内のＣＤ８＋Ｔ細胞の数を減少させて、ＣＤ８＋Ｔ細胞枯渇を招く一方、Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ及び好中球の血液、骨髄、脾臓やリンパ節内での比率と数を増加して、全身性炎症を引き起こす。
【０１８３】
本発明では、ＡＤＲＢ３は新規な細胞表面分子であり、Ｂ細胞の増殖、分化、アポトーシス及び免疫応答を調節し、Ｂ細胞とプラズマ細胞の細胞質と細胞膜で発現されることが開示される。
【０１８４】
本発明はプラズマ細胞の同定方法を開示し、すなわち、ＡＤＲＢ３抗体を用いて免疫蛍光又は免疫組織化学を行い、ＡＤＲＢ３がリンパ球の細胞質中に大量蓄積すると、該細胞がプラズマ細胞である。ＡＤＲＢ３は、Ｂ細胞とプラズマ細胞の活性に影響を与え、関連する表面マーカーたとえばＣＤ１９の合成を増加して、プラズマ細胞による自己抗体の合成を増加する。ＡＤＲＢ３抗体は、Ｂ細胞による免疫グロブリンの発生を阻害して、自己抗体の合成を減少させるものであり、自己免疫疾患の治療に有用である。
【０１８５】
本発明では、ＡＤＲＢ３はパターン認識受容体（ｐａｔｔｅｒｎ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＰＲＲ）であり、機能として、[1]調節作用；[2]補体活性化阻害；[3]貪食と自食；[4]免疫細胞の活性化と炎症性シグナルの伝達の起動作用を備える。ＡＤＲＢ３と病原体関連分子パターンとの相互認識と作用は天然免疫応答を開始させるキーとなる。ＡＤＲＢ３は、細菌のリポ多糖（ＬＰＳ）、リポタンパク質（ＢＬＰ）、ペプチドグリカン（ＰＧＮ）、酵母菌のマンナン等を認識し得る。ＡＤＲＢ３は、ほかのパターン認識受容体（たとえばＴｏｌｌ受容体、スカベンジャー受容体、マンノース受容体及びＣ型レクチン）の活性とシグナル伝達を調節する。ＡＤＲＢ３は、ＮＫ細胞、マクロファージ、好酸球、好中球やマスト細胞等で媒介した天然免疫応答を調節する。ＡＤＲＢ３は前炎症反応の重要な受容体であり、パターン認識受容体を調節することで、細菌、真菌及びウイルス成分を認識するものであり、病原体による細胞感染過程に重要な役割を果たす。ＡＤＲＢ３は、病原体の細胞での生存を可能し、メカニズムについては、１．ＡＤＲＢ３は、細胞内のウイルス、細菌又は寄生虫等の病原体の複製と放出を促進する自食を促進する。２．ＡＤＲＢ３は活性酸素種の発生を減少させるが、活性酸素種の遊離基が外因性病原体を殺滅できる。３．細胞膜ＡＤＲＢ３は細菌、真菌、ウイルス、寄生虫等の病原体の接着、融合及び侵入を媒介し、ＡＤＲＢ３はウイルス−宿主細胞間の膜融合にとって重要な融合タンパク質である。病原体が宿主細胞に入ると、ＡＤＲＢ３の支援下で安全障壁−液泡（ｖａｃｕｏｌｅ）を形成し、リゾソームによる消化から保護される。ＡＤＲＢ３抗体は細胞内の細菌、真菌、ウイルス、寄生虫等の病原体を除去できる。
【０１８６】
非特異的免疫（天然免疫）はすべての免疫保護能力の基礎となり、特異的免疫（適応性免疫）応答を開始させて、それにも関与する。血液中の可溶性ＡＤＲＢ３の含有量を、非特異的免疫系機能の重要な指標とすることが可能である。現在の免疫治療薬は一般的に特異的免疫細胞に対するもので、大量存在する非特異的免疫細胞を無視するため、免疫治療による有効率を低下させる。本発明に係るＡＤＲＢ３抗体は、非特異的免疫と特異的免疫細胞の機能を同時に調節して、免疫系を正常に回復させることができ、免疫系障害に起因する疾患の治療に利用し得る。
【０１８７】
本発明では、ＡＤＲＢ３は造血幹細胞の増殖を調節するものであり、体内の造血幹細胞の再生能力を高めて、骨髄を刺激して造血を促進できることが開示される。ＡＤＲＢ３の幹細胞表面での発現が、接着因子の分布と数に影響を与える。ＡＤＲＢ３抗体は、骨髄中の造血幹細胞と細胞外マトリックスの結合強度を変えることにより、造血幹細胞を末梢血に進入させ、造血幹細胞を分離して収集し、末梢血造血幹細胞移植に用いることが可能である。
【０１８８】
本発明では、ＡＤＲＢ３は、骨髄球系造血を調節する主なサイトカインであり、顆粒球系造血前駆細胞に作用してその増殖、分化を促進し、且つ、顆粒球系最終分化細胞である末梢血好中球の数を増やして機能を高めることが開示される。ＡＤＲＢ３は顆粒球、単核−マクロファージの成熟を刺激して、成熟細胞の末梢血への放出を促進するとともに、マクロファージ及び噬酸性顆粒球の複数種の機能を促進できる。ＡＤＲＢ３アゴニスト及び遺伝子組換え技術によるヒトＡＤＲＢ３タンパク質薬物は、白血球成長促進剤として、腫瘍放射線治療又は化学療法後の白血球減少症の予防・治療、骨髄造血機能障害及び骨髄異形成症候群の治療、白血球減少により発生可能な感染合併症の予防、及び感染による好中球減少の回復加速に有用である。適応症：１．骨髄移植の場合、好中球数の増加を促進する。２．抗腫瘍化学療法薬による好中球減少症の予防及び好中球減少症の持続期間短縮；急性リンパ球白血病。３．骨髄異形成症候群の好中球減少症。４．再生不良性貧血の好中球減少症。５．先天性及び原発性好中球減少症。６．免疫抑制療法（腎移植）に続発する好中球減少症。７．肝不全。
【０１８９】
ＡＤＲＢ３は、骨髄造血を調節して、血液の赤血球成長を促進する。ＡＤＲＢ３アゴニストと遺伝子組換え技術によるヒトＡＤＲＢ３タンパク質薬物は、赤血球成長促進剤として、貧血症の治療に利用できる。ＡＤＲＢ３アゴニスト、ＡＤＲＢ３活性化作用を有するＡＤＲＢ３抗体及びＡＤＲＢ３組換えタンパク質因子は、運動中の体の酸素運搬能力を改善して、スポーツのパフォーマンスを向上させ、損傷組織を修復するものであり、アスリートの訓練や負傷後のリハビリに用いられ得る。
【０１９０】
本発明では、ＡＤＲＢ３は新規な炎症性因子であり、自己分泌と傍分泌の方式で前炎症効果を発揮させ、ＡＤＲＢ３シグナル伝達経路は、全身性感染と自己免疫疾患の病理学的プロセスを調節する。ＡＤＲＢ３シグナル伝達経路は、好中球、マクロファージ、リンパ球と腫瘍細胞におけるＰ６２、Ｅｌａｓｔａｓｅ、ＨＫ２、ＧＡＰＤＨ、Ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１、Ｐ２１、Ｐ１６、Ｐ２７、Ｒａｓ、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、Ｒｂ、Ｋｉ−６７、ｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、ｃ−Ｍｙｃ、  Ｒｈｅｂ、ＰＩ３Ｋ、ＡＫＴ、Ｔｕｂｕｌｉｎ、Ａｃｔｉｎ、ＶＥＧＦ、ＴＲＡＦ６、ＰＤ−Ｌ１、ＺＡＰ７０、Ｐ５３、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  （ＩＬ−６）、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−２、ＭＰＯ、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｃ反応性タンパク質、アセチルトランスフェラーゼＴｉｐ６０、ＴＧＦ−βやＴＮＦ等のタンパク質分子を調節する。
【０１９１】
本発明では、ＡＤＲＢ３は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）のバイオマーカーであり、ＭＤＳＣに高発現されて、ＭＤＳＣの成長生育がＡＤＲＢ３に依存することが開示される。ＡＤＲＢ３はＭＤＳＣ増殖を促進し、ＡＤＲＢ３抗体はＭＤＳＣ機能を阻害して、薬剤耐性を発生させたり再発したりする腫瘍患者を治療する。
【０１９２】
本発明では、Ｋｉ−６７とＡＤＲＢ３は、悪性腫瘍患者のＭＤＳＣ、リンパ球、単核−マクロファージ及び好中球において同時に発生して、Ｋｉ−６７とＡＤＲＢ３共陽性（Ｋｉ−６７＋  ＡＤＲＢ３＋）顆粒球の数が腫瘍患者の予後不良と正相関になり、該タイプの細胞は原始又はナイーブ顆粒球であり、Ｔ細胞のナイーブＴ細胞への逆分化を誘導する能力を持っていることが開示される。ＡＤＲＢ３とＫｉ−６７はともに顆粒球細胞質に局在化され、ＡＤＲＢ３は顆粒球のリボソーム機能を高めて、Ｋｉ−６７とほかの細胞成長因子の合成を促進する。顆粒球はＫｉ−６７と成長因子を放出して、Ｇ０期のリンパ球と腫瘍細胞が増殖期に入るように刺激する。Ｋｉ−６７＋  ＡＤＲＢ３＋顆粒球は悪化のマーカー細胞であり、数が連続して増加し、患者の転移又は再発を高精度で示唆する。
【０１９３】
本発明は新規好中球を開示し、このような細胞はＡＤＲＢ３分子を大量で発生して分泌するものであり、ＡＤＲＢ３＋顆粒球と命名され、該タイプの細胞は生体の天然免疫を阻害して、リンパ球の成熟を調節する。腫瘍患者、ウイルス又は細菌感染者の体内では、ＡＤＲＢ３＋顆粒球の含有量と百分率が有意に増加する。腫瘍患者、特に慢性顆粒球白血病患者の脾臓はＡＤＲＢ３＋顆粒球の発生が活発に行われる器官であり、脾臓由来のＡＤＲＢ３＋顆粒球は腫瘍の発展や転移を促進する可能性がある。化学療法後の腫瘍患者の脾臓、骨髄及び末梢血において、白血球中のＡＤＲＢ３＋顆粒球の比率が著しく高くなり、ＡＤＲＢ３＋顆粒球は、Ｇ０期の腫瘍細胞が増殖期に入ることを促進して、癌再発を引き起こす。脾動脈にカテーテルを留置してＡＤＲＢ３抗体を灌注することは、ＡＤＲＢ３＋顆粒球を標的に殺滅して、腫瘍転移を防止することができる。
【０１９４】
ＡＤＲＢ３＋顆粒球は、腫瘍細胞を接着して携帯することで遠隔転移を引き起こす。ＡＤＲＢ３は好中球の死亡を遅延させて、好中球の組織での濃度を低下させる。ＡＤＲＢ３は、リボソームの機能を向上させて、好中球の合成を刺激し、炎症性因子と成長因子を放出して、血管新生を誘導し、炎症性反応を深刻にする。ＡＤＲＢ３は、ミトコンドリアの機能を保護して、活性酸素種の発生を減少させ、顆粒球又はマクロファージにより貪食される寄生虫、細菌やウイルス等の細胞内での生育と増殖を可能にし、それは病原体の免疫逃避メカニズムの１種である。血液中ＡＤＲＢ３＋顆粒球は、リンパ球への接着又はＡＤＲＢ３を血液へ放出する等の方式で、リンパ球のＡＤＲＢ３高発現を誘導して、リンパ球の脱分化を引き超し、特異的免疫不全を発生させる。
【０１９５】
健常者の場合は、好中球の表面足突起が少なく、ＡＤＲＢ３含有量が癌患者の顆粒球よりも遥かに少ない。癌患者の場合は、顆粒球の足突起が増えて、ＡＤＲＢ３は微小管と微小線維を調節することで顆粒球の足突起形成を促進する。ＡＤＲＢ３は顆粒球の足突起接着を促進して、リンパ球を捕獲し、リンパ球を誘導して抗癌活性を失わせる。腫瘍患者の血液には、リンパ球と腫瘍細胞を接着して捕獲するための好中球細胞外トラップネット（ＮＥＴｓ）が大量存在している。ＡＤＲＢ３はＮＥＴｓの主な組成成分であり、ＮＥＴｓ中の腫瘍細胞がＡＤＲＢ３でリンパ球を阻害し、ＮＥＴｓは腫瘍とリンパ球の間の介在環境である。ＡＤＲＢ３抗体はＮＥＴｓ形成を阻害する。
【０１９６】
アテローム性動脈硬化症のプラーク形成過程に、ＡＤＲＢ３は、顆粒球が血管内皮細胞へ接着して、さらに内皮下へ移行してＮＥＴｓを形成することを促進し、ＮＥＴｓはリンパ球とマクロファージを接着して、サイトカインＩＬ−６を分泌し、免疫細胞のアテローム性動脈硬化病変部での集まりを広げて、慢性炎症反応を引き起こし、脂肪線条プラークを形成する。ＡＤＲＢ３は、顆粒球とプラークにおける泡沫細胞との融合を促進し、泡沫細胞が増殖と移動能力を付与されて、プラークが血管壁に沿って延びている。ＡＤＲＢ３は好中球と泡沫細胞におけるエラスターゼ（Ｅｌａｓｔａｓｅ）を活性化させて、血管壁組織へ放出し、エラスターゼは、血管壁中層にあるエラスチンとコラーゲンを消化する。血管の弾力性が血管の正常な生理機能を維持するための重要な特性であり、主にエラスチン繊維により提供され、ＡＤＲＢ３はエラスチンの分解を促進するため、血管の弾力性を低下させて、動脈壁の肉厚を増加して硬くして、内腔を狭くし、動脈硬化、肺動脈性肺高血圧症、高血圧の原因となる。肺、心臓等の弾力性に富んだ組織には豊かなエラスチンが含まれ、肺、心臓エラスターゼは主に好中球とマクロファージに由来するものであり、ＡＤＲＢ３は好中球とマクロファージにおけるエラスターゼの放出を促進して、肺、心臓の弾力性を低下させ、組織構造を破壊して、肺気腫、気管支拡張症、喘息、肺繊維化、拡張型心筋症、心室肥大等を招く。本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、エラスターゼ阻害剤として、顆粒球エラスターゼの活性と放出を阻害して、エラスターゼ亢進に起因する疾患を治療することができ、膵臓炎、肺気腫、肺動脈性肺高血圧症、喘息、心筋病、心室肥大、肝硬変、脳虚血、脳出血、外傷性脳損傷が含まれるが、これらに制限されないことが開示される。
【０１９７】
ＡＤＲＢ３は、好中球の活性化、凝集、浸潤を引き起こし、炎症反応の発生・発展にとって重要なステップである。脳、肝、肺、腸、腎臓、心臓等の複数種の器官の虚血／再灌流傷害の過程において、ＡＤＲＢ３は、好中球の虚血領域での組織微小血管の内皮細胞表面への接着を促進して、毛細血管を塞いで、ｎｏ−ｒｅｆｌｏｗ現象を発生させ、組織への血液供給を減少させる。好中球は微小血管内に凝集すると同時に、炎症性メディエーターとタンパク質分解酵素を放出し、炎症性メディエーターはより多くの好中球を凝集させて、炎症反応過程を自己増殖可能な悪循環にし、タンパク質分解酵素はほぼすべての白血球の細胞外マトリックス成分を分解して、完全な細胞を攻撃し、内皮細胞を脱落させて、微小血管の透過性を向上させ、このように、血液と組織の間のバリアが深刻に破壊されて、肺水腫、脳浮腫等を引き起こし、組織損傷を深刻にして、虚血性壊死を発生させる。ＡＤＲＢ３抗体は、好中球の活性を弱めて、虚血再灌流後の壊死組織の範囲を減少させて、虚血領域での微小血管機能の回復を高める。本発明では、ＡＤＲＢ３抗体を脳、肝、肺、腸、腎臓、心臓虚血／再灌流傷害の治療に用いることが開示される。
【０１９８】
組織中の好中球は、老化細胞を貪食後、崩解、脱顆粒を行って、細胞内のＡＤＲＢ３を放出する。ＡＤＲＢ３は可溶性受容体になりＧ０期の組織細胞に取り込まれて、核小体に移動し、核小体機能を向上させて、リボソームの大、小サブユニットの合成を促進する。ＡＤＲＢ３は、各種のＧ１期に必要なＲＮＡ（たとえばＵ３  ｓｎＲＮＡ）とタンパク質（たとえばサイクロン、サイクリンキナーゼ等）を付加的に合成して、Ｇ０期の細胞のＧ１期への発展を活性化させる。Ｇ０期は細胞が分化する時期であるため、ＡＤＲＢ３によりＧ０期の細胞が増殖期に入ることを促進することは、細胞が脱分化能力を失うことを意味する。組織中のＡＤＲＢ３濃度が高すぎると、細胞増殖を連続して刺激して、新生細胞の分化を阻害し、発癌を誘導する。顆粒球は解糖を経由してエネルギーを取得し、ＡＤＲＢ３は好中球解糖を維持するのに重要なタンパク質である。腫瘍細胞は、ＡＤＲＢ３を高発現させるもので、細胞の代謝パターンが解糖を主にするように変更される。本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は腫瘍細胞の解糖を阻害できることが開示される。
【０１９９】
腫瘍組織に浸潤している好中球が解糖して大量の乳酸を発生させ、ＡＤＲＢ３によるモノカルボン酸トランスポーター（ＭＣＴ）の活性化により乳酸が外部へ排出されて、腫瘍の周囲環境に大量の乳酸を含ませる。ＡＤＲＢ３は、ＳＬＣ１６Ａ３遺伝子のプロモーターと結合して、ＭＣＴ４発現を増加させて、乳酸の膜貫通輸送を促進する。高濃度の乳酸は、腫瘍のエネルギーになる上、細胞傷害性Ｔ細胞とＮＫ細胞の活性を阻害して、腫瘍細胞の免疫逃逸を可能にする。腫瘍細胞外の酸性環境は細胞外マトリックスの分解とリモデリングを促進して、癌細胞の侵襲や転移に有利である。ＡＤＲＢ抗体は乳酸排出に干渉を与えて、腫瘍細胞外の酸性微小環境を中和する。膿毒症等の炎症状態では、カテコールアミンは好中球とリンパ球におけるＡＤＲＢ３を作動させることで、血液中の乳酸を増加し、患者の予後不良の原因となる。本発明では、ＡＤＲＢ抗体はＭＤＳＣ、好中球及びリンパ球による乳酸排出を阻害して、高乳酸血症と乳酸アシドーシスを治療することが開示される。ＡＤＲＢ抗体はＨ＋／Ｋ＋−ＡＴＰ酵素を阻害して、胃酸分泌を遮断する。十二指腸潰瘍、胃潰瘍、逆流性食道炎、ヘリコバクターピロリ感染を治療することができる。
【０２００】
老化細胞、腫瘍細胞、内毒素、細菌、ウイルス等は、顆粒球とリンパ球中のＡＤＲＢ３遺伝子発現を向上させて、血液中のＡＤＲＢ３＋顆粒球、ＡＤＲＢ３＋リンパ球の数及び可溶性ＡＤＲＢ３的濃度を向上できる。膿毒症患者では、血管内皮細胞、好中球及びリンパ球はＡＤＲＢ３を発生させて血へ放出し、また、血液中のＡＤＲＢ３は好中球を活性化させて、サイトカインを爆発的に分泌し、制御できない炎症反応を引き起こし、多臓器不全症候群を招いてしまう。腫瘍患者では、ＡＤＲＢ３＋リンパ球と可溶性ＡＤＲＢ３は腫瘍の遠隔転移を促進する。高齢者の場合は、ＡＤＲＢ３は組織再生を制限して、新生細胞の分化を阻害し、新生細胞が機能細胞になるまで生育できず、このような不完全な再生は体の老化を促進するか、又は腫瘍を誘発させる。
【０２０１】
生理状態では、ＡＤＲＢ３は、好中球、マクロファージ及びリンパ球による老化・死亡細胞の除去を促進すると同時に、組織・器官におけるＧ０期にある細胞が増殖期に入り、有糸分裂を経て子孫細胞を発生させることを促進し、新生細胞のＡＤＲＢ３発現レベルが低く、改めてＧ０期に入り機能細胞になるまで分化し、それによって、死亡細胞の分補充し、このような過程は「完全再生」である。新生細胞は正常な組織・器官機能を維持して、生体の老化を防止するために、成熟するまで分化することが必要である。有糸分裂後に新生した細胞内のＡＤＲＢ３活性が亢進することが原因で、新生細胞がＧ０期に入ることができず、細胞分化が阻害されて成熟に生育できない場合、このような過程は「不完全再生」になり、老化と腫瘍の原因でもある。本発明者により、高齢者の血液、脳脊髄液中の可溶性ＡＤＲＢ３含有量も活性も若者より高く、過剰に活性化されたＡＤＲＢ３により「不完全再生」が発生して、老化組織・器官の修復ができなくなることが見出された。ＡＤＲＢ３抗体は、不完全再生を阻害して、完全再生を回復させ、老化防止作用がある。
【０２０２】
血中のＡＤＲＢ３濃度が日、月、年を周期として変動して、細胞のストレス、代謝、増殖又は分化を調節し、生体再生に有利である。血中ＡＤＲＢ３濃度の周期的変動の維持は再生調節のキーである。血液中のＡＤＲＢ３濃度の変動曲線が消えると、ＡＤＲＢ３濃度に応じて調節することになる。ＡＤＲＢ３が過量に発生して放出される場合（たとえば腫瘍又は炎症）、ＡＤＲＢ３抗体を投与することでＡＤＲＢ３の活性を低下させ、正常レベルに回復させる。ＡＤＲＢ３濃度が低すぎると、ＡＤＲＢ３アゴニストを投与することでＡＤＲＢ３の活性を向上させる。ＡＤＲＢ３を活性化又は過剰発現させることで、細胞の有糸分裂を促進して、組織再生を開始させ、ＡＤＲＢ３を遮断することにより新生細胞の分化を維持して、新生細胞を成熟した機能細胞にして、組織・器官の機能を回復させる。ＡＤＲＢ３抗体は心臓、肝臓、骨髄、膵臓、脳、末梢神経、腎臓、肺や筋肉等の組織の再生を調節する。ＡＤＲＢ３機能が低下した血液、脳脊髄液及び組織中のＡＤＲＢ３の濃度と活性を回復させることにより、細胞を増殖して、老化防止作用を果たすことができる。
【０２０３】
本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、組織再生を促進して、再生機能不全による疾患を治療することができ、白血球減少症、好中球減少症、リンパ球減少症、再生不良性貧血、慢性肉芽腫症、白血球接着欠陥症、Ｂ細胞欠損症、Ｘ連鎖低ガンマグロブリン血症、Ｔ細胞欠損症、重症複合免疫不全症、補体欠損症、火傷、非治癒創傷、サルコペニア、加齢による筋ジストロフィー、骨粗鬆症、加齢黄斑変性症、老人性難聴やほかの高齢化による疾患等が含まれるが、これらに制限されない。
【０２０４】
炎症は生体の免疫応答の重要な一部であり、慢性炎症は致癌、アルツハイマー病やほかの認知症、心臓血管疾患、骨関節炎、うつ病等の疾患を引き起こすことがあり、９０％以上の非伝染性加齢性疾患が慢性炎症に関わる。最初段階の炎症が好中球に引き起こされることであり、ＡＤＲＢ３シグナル伝達経路は好中球の活性化過程に重要な作用がある。ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスが大量の内毒素に抵抗して膿毒症の発生を遅延させて、膿毒症による死亡を減少させることから、膿毒症はＡＤＲＢ３シグナル伝達経路の活性化に繋がることが確認された。活性化されたＡＤＲＢ３は各種の炎症性メディエーターを発生させるための「ゲート」として働き、「トリガー」のような作用により炎症性メディエーターのカスケード反応をトリガーする。炎症性因子としてのＡＤＲＢ３は好中球、リンパ球、好酸球、単核−マクロファージリリースＭＰＯ、Ｅｌａｓｔａｓｅ、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＶＥＧＦ等の炎症性因子を促進できる。炎症性因子の増加は逆にＡＤＲＢ３の活性化を刺激させて、炎症を拡大させる。
【０２０５】
ＡＤＲＢ３は、好酸球、好塩基球とリンパ球によるヒスタミン、ロイコトリエン、血小板活性化因子等の発生と放出を促進して、平滑筋収縮、毛細血管拡大及び透過性強化を発生させ、腺分泌物を増やして、局所又は全身性アレルギー反応を引き起こす。本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、マスト細胞膜を安定化させて、脱顆粒を抑制し、リンパ球の形質転換及びインターロイキン２の発生を阻害し、表皮ランゲルハンス細胞の数を低下させ、血小板凝集を阻害して、赤血球の変形能力を高め、細胞の分裂と増殖を阻害する作用を有することが開示される。ＡＤＲＢ３抗体は、アレルギー性疾患、アレルギー性接触性皮膚炎の治療に用いられ得る。
【０２０６】
本発明では、可溶性ＡＤＲＢ３は血清学的腫瘍マーカーであり、血液又はその他の体液中の可溶性ＡＤＲＢ３の濃度を監視して、悪性腫瘍の早期診断、予後判断、治療応答及び再発監視にとって重要な価値があることが開示される。本発明者によって、血液、脳脊髄液、胸水、腹水等の体液には、細胞膜外のすべてのドメインを含んでリガンドとは結合能力があり可溶性ＡＤＲＢ３（ｓｏｌｕｂｌｅ  ＡＤＲＢ３、ｓＢ３）として命名されるＡＤＲＢ３が存在することが見出された。腫瘍細胞は、ＡＤＲＢ３を発生して血へ放出し、血液中のＡＤＲＢ３含有量を増加する。腫瘍患者の血中ｓＢ３含有量が健常者より高く、腫瘍再発患者の血液中のｓＢ３が治療寛解状態にあった患者より高く、高レベルｓＢ３腫瘍患者の生存率が低レベル者より低い。ｓＢ３は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞及び単球に結合されて、免疫を阻害して、腫瘍が免疫監視から逃避することを可能にする。ｓＢ３は、循環腫瘍細胞の活性向上に有利であり、ＡＤＲＢ３抗体はＡＤＣＣ効果を利用して循環腫瘍細胞を除去できる。
【０２０７】
治療用途以外、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はさらに、ヒトＡＤＲＢ３  ＥＬＩＳＡ検出試薬、可溶性ＡＤＲＢ３酵素結合検出試薬、金コロイド検出試薬等の開発にも用いられ得る。血液、唾液、尿液、脳脊髄液、胸水や腹水等の体液中のｓＢ３含有量の検出は、膿毒症、心臓血管疾患、アルツハイマー病、腫瘍、自己免疫疾患の診断及び治療効果評価に利用できる。血清中のｓＢ３は、膿毒症、心筋梗塞、自己免疫疾患や悪性腫瘍等の疾患の診断指標及び病状監視マーカーとして利用できる。血液とほかの体液中のｓＢ３含有量の検出により、寿命及び５年内の死亡率が予測でき、ｓＢ３濃度が高いほど、死亡リスクが高まる。血液中のｓＢ３含有量を低下させることにより、老化を遅延できる。
【０２０８】
ＡＤＲＢ３は、補体を活性化させる典型的な経路及び替代経路を低下させることで、細菌、ウイルス、腫瘍を宿主による免疫応答から逃逸させる。ＡＤＲＢ３は、補体Ｃ３、Ｃ５、Ｃ８、Ｃ９発現を減少させて、膜攻撃複合体（Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ａｔｔａｃｋ  Ｃｏｍｐｌｅｘ、ＭＡＣ）の形成を阻害し、腫瘍細胞が補体攻撃から逃避するようにする。ＡＤＲＢ３を構成的及び誘導的に発現させることによって、腫瘍及びウイルス感染細胞はＭＡＣ集合を制限して、自体を補体に起因する有害な破壊から保護できる。本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、補体系を活性化させて、補体Ｃ３、Ｃ５、Ｃ８、Ｃ９発現量を向上させ、ＭＡＣ集合を促進し、腫瘍細胞の溶解を開始させて、病原性微生物と溶解感染細胞を除去し、悪性腫瘍、ウイルス感染、淋菌感染等の治療に用いられ得ることが開示される。
【０２０９】
本発明では、ＡＤＲＢ３は炎症マーカーであり、ＡＤＲＢ３レベルの変化が局所・全身性炎症を反映できることが開示される。可溶性ＡＤＲＢ３（ｓＢ３）は細胞表面にあるＡＤＲＢ３がタンパク質にて分解されて脱落した可溶性細胞外成分であり、循環中にｓＢ３のレベルと好中球のＡＤＲＢ３が並行して変化するため、血清中のｓＢ３の検出が好中球機能監視の指標とされ得る。ＡＤＲＢ３抗体は、炎症抑制作用を有し、様々な病原性微生物、たとえば真菌、細菌、ウイルス、マイコプラズマ、クラミジア、スパイラル体、原虫や寄生虫感染による疾患の治療に効く。炎症は腫瘍のリスク因子であり、ＡＤＲＢ３による炎症は感染又は自己免疫疾患を腫瘍まで発展させて、腫瘍細胞がさらに大量のＡＤＲＢ３とほかのプロ炎症性因子を分泌して、炎症反応を深刻にし、遠隔転移を促進して、患者の死亡を早める。腫瘍微小環境での免疫細胞、たとえば好中球、Ｔｒｅｇ及びマクロファージ等は腫瘍の発展を促進する。腫瘍細胞の分泌するＡＤＲＢ３は、血液や腫瘍の局所組織でのＡＤＲＢ３含有量を増加し、走化性顆粒球、リンパ球及びマクロファージ等の炎症性細胞が腫瘍組織へ移動したり、浸潤したりする。炎症と腫瘍細胞のいずれも、慢性炎症の維持、腫瘍発展促進、腫瘍に対する免疫監視阻害にとって重要な作用があるＡＤＲＢ３を活性化できる。ＡＤＲＢ３は、炎症と腫瘍を繋がる重要な過程であり、炎症と腫瘍の間でポジティブフィードバックループを形成して、炎症と腫瘍の相互促進を発生させる。ＡＤＲＢ３抗体は、炎症と腫瘍の悪循環連鎖を遮断して、炎症性細胞の腫瘍部位への動員を阻害し、腫瘍微小環境での炎症反応を軽減させて、抗炎症と抗癌の２重作用を発揮させる。
【０２１０】
腫瘍は、ＡＤＲＢ３を血液へ放出して好中球を活性化させて、Ｔ細胞媒介特異的免疫応答を弱め、悪液質を発生させる。癌細胞中のＡＤＲＢ３は免疫阻害細胞、たとえばＭＤＳＣやＴｒｅｇの増殖を誘導して、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）とナチュラルキラー細胞（ＮＫ）による抗腫瘍免疫応答を阻害し、癌細胞の免疫殺滅からの逃避が可能になり、腫瘍増殖と転移を促進させる。腫瘍中のＡＤＲＢ３は、正常な内皮前駆細胞を腫瘍組織へ動員して、新生血管形成を促進する。ＡＤＲＢ３抗体は、腫瘍微小環境における免疫阻害細胞と腫瘍細胞のＡＤＲＢ３発現と活性を阻害するものであり、腫瘍の炎症環境を軽減させることで腫瘍免疫作用を高めるとともに、腫瘍細胞の増殖に対する直接阻害が可能であり、悪性腫瘍や悪液質の治療に適合する。
【０２１１】
ＡＤＲＢ３抗体の軽鎖・重鎖配列決定結果に基づいて、本発明では、抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたＴ細胞は、ＡＤＲＢ３を発現させた腫瘍細胞以外、腫瘍微小環境での癌促進炎症性細胞を除去して、その他キメラ抗原受容体Ｔ細胞免疫治療法（ＣＡＲ−Ｔ）による治療効果を高めることができ、ＣＡＲ−Ｔ治療が失敗した腫瘍患者に適用できることが開示される。癌細胞、顆粒球、Ｔ細胞及びマクロファージは、ＣＡＲ−Ｔ細胞の脱分化を誘導して、ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗癌活性を失わせる。ＡＤＲＢ３抗体は、ＣＡＲ−Ｔ細胞の分化状態を維持して、ＣＡＲ−Ｔによる癌細胞への殺滅能力を高めることができる。該キメラ抗原受容体は、マウス抗ヒトＡＤＲＢ３の一本鎖抗体、ＣＤ８ヒンジ領域及び膜貫通領域、ＣＤ１３７（４−１ＢＢとも呼ばれる）の細胞内シグナル領域、ＣＤ３ζの胞内シグナル構造を直列接続してなる。抗ＡＤＲＢ３  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、腫瘍細胞と腫瘍内環境での癌促進炎症性細胞（好中球、Ｔｒｅｇ及びマクロファージ）を殺滅でき、腫瘍細胞がＡＤＲＢ３を発現させなくても、抗ＡＤＲＢ３  ＣＡＲ−Ｔ細胞は腫瘍環境細胞を阻害することにより抗癌作用を果たすことができ、汎用型ＣＡＲ−Ｔ細胞として、悪性腫瘍、自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症、炎症、ウイルス感染、神経変性疾患たとえばアルツハイマー病や高齢化による疾患の治療に用いられ得る。
【０２１２】
本発明では、抗ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたマクロファージ、樹状細胞、ＮＫ細胞及び顆粒球は、腫瘍細胞と老化細胞を除去して、悪性腫瘍、自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症、炎症、ウイルス感染、神経変性疾患や高齢化による疾患の養子免疫療法に用いられ得ることが開示される。
【０２１３】
本発明はＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＴＡＬＥＮ及びＺＦＮ技術によりＡＤＲＢ３遺伝子を削除、添加、活性化又は阻害する、ＡＤＲＢ３に基づく遺伝子治療を開示する。老化防止及び悪性腫瘍、自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症、炎症、ウイルス感染、アルツハイマー病や高齢化による疾患を治療できる。ＡＤＲＢ３標的に基づく遺伝子治療の適応症はＡＤＲＢ３抗体の適応症と同様である。
【０２１４】
本発明では、ＡＤＲＢ３は新規な単球表面分子であり、単核−マクロファージの分化と増殖を調節して、単球のＭ１マクロファージへの分化を誘導し、特に腫瘍関連マクロファージの活性を調節することが開示される。
【０２１５】
本発明は、ＡＤＲＢ３分子を大量で発生して分泌し、ＡＤＲＢ３＋マクロファージと命名されて、生体の天然免疫を阻害する新規なマクロファージを開示する。
【０２１６】
本発明では、ＡＤＲＢ３は新規な赤血球表面分子であることが開示される。
【０２１７】
本発明では、ＡＤＲＢ３は新規な巨核球と血小板表面分子であることが開示される。
【０２１８】
本発明では、ＡＤＲＢ３は新規なＮＫ細胞表面分子であることが開示される。
【０２１９】
本発明では、ＡＤＲＢ３は新規な樹状細胞表面分子であることが開示される。
【０２２０】
本発明では、ＡＤＲＢ３遺伝子は細胞増殖に関連するガン原遺伝子（ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ）であり、大部分の癌では重要な駆動因子になることが開示される。膵臓癌、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、肝癌、黒色腫、リンパ腫や白血病等の悪性腫瘍細胞では、ＡＤＲＢ３は異常に高発現される。ＡＤＲＢ３遺伝子は、主に増幅と染色体転位再編成の方式で活性化される。ＡＤＲＢ３遺伝子の融合、過剰発現及び突然変異のいずれによっても、ＡＤＲＢ３タンパク質障害が引き起こされることがあり、異常なＡＤＲＢ３タンパク質は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ、ＲＡＳ／ＭＡＰＫ、Ｊａｋ／Ｓｔａｔ、ＴＧＦ−β／Ｓｍａｄ、ＥｒｂＢ／ＨＥＲ、Ｗｎｔ／Ｈｅｄｇｅｈｏｇ／Ｎｏｔｃｈ等を含む、下流にある複数の発がん性シグナル経路を活性化させる。
【０２２１】
本発明では、ＡＤＲＢ３は腫瘍転移を促進し、ＡＤＲＢ３抗体は腫瘍転移を遮断して、遠隔転移が起こった進行癌患者の治療に適用できることが開示される。ＡＤＲＢ３は、腫瘍細胞の移動能力を向上させることにより血液へ侵入させ、腫瘍細胞と好中球の間の強度作用を高めて腫瘍転移を促進する。循環腫瘍細胞はＡＤＲＢ３を大量発現させ、腫瘍細胞はＡＤＲＢ３を介して顆粒球、マクロファージに接着して、顆粒球、マクロファージに連れてほかの位置に運ばれて転移する。腫瘍転移は腫瘍自体の侵襲能力に依存するだけでなく、前転移ニッチ（ｐｒｅ−ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｎｉｃｈｅ）の形成にも密接に関係する。前転移ニッチの構築は、循環器系まで侵襲している腫瘍細胞が遠隔転移巣部位に付着して生存し、増殖し最終的に転移癌を形成できるか否かを決定する。血液中の顆粒球とマクロファージが組織に入ると、ＡＤＲＢ３因子を放出して、腫瘍細胞の生存に適する微小環境を構築する。循環腫瘍細胞の分泌する可溶性ＡＤＲＢ３タンパク質は、骨髄前駆体細胞が動員されて遠隔特定器官や組織に移植して前転移ニッチを構成し、循環腫瘍細胞を特定部位へ動員して転移巣を形成するように誘導できる。
【０２２２】
腫瘍細胞でのＡＤＲＢ３レベルの向上が、転移速度増加、再発及び死亡率を含む不良な臨床結果に繋がる。腫瘍組織におけるＡＤＲＢ３含有量の検出は、悪性腫瘍の診断、予後や治療効果評価に利用できる。血液における可溶性ＡＤＲＢ３の濃度が高くなることは、腫瘍発展加速又は再発、患者予後の不良を示すことになる。
【０２２３】
本発明では、ＡＤＲＢ３は、細胞核小体内の重要な構造タンパク質であり、核小体機能を維持するのに重要な役割を果たすことが開示される。ＡＤＲＢ３は、Ｇ０期細胞の核小体内に蓄積されて、リボソームの大、小サブユニットの合成を促進し、遺伝子サイレンシング、細胞老化、細胞周期調節に関与する。ＡＤＲＢ３は、Ｋｉ−６７遺伝子の発現とタンパク質の合成を促進して、休眠したＧ０細胞を活性化させて増殖期に入るようにする。ＡＤＲＢ３抗体は、腫瘍細胞の核小体の機能と構造を阻害する。ＡＤＲＢ３は、Ｇ０、Ｇ１、Ｓ及びＧ２期細胞の核小体に存在して、休眠期（Ｇ０）と増殖期の切り替えを促進して、有糸分裂を促進する。ＡＤＲＢ３は、Ｇ０期と増殖期にある細胞の核小体の機能及び構造を調節するものの、Ｇ０期と増殖期にある細胞の核小体におけるＡＤＲＢ３の立体配置が異なり、露出された抗原エピトープも異なるため、異なる細胞周期にある核小体中のＡＤＲＢ３を検出するのに、異なるＡＤＲＢ３抗体の使用が必要である。本発明では、異なるＡＤＲＢ３ポリペプチド断片を用いてＡＤＲＢ３抗体を製造し、ＡＤＲＢ３タンパク質のＮ末端の断片（第１−１５５位アミノ酸残基）で免疫された抗体は、増殖期にある細胞核小体中のＡＤＲＢ３を検出でき、ＡＤＲＢ３タンパク質の中間ドメイン断片（第１００−３００位のアミノ酸残基）で免疫された抗体は休眠期にある細胞の核小体中のＡＤＲＢ３を検出できる。免疫組織化学、免疫蛍光やフローサイトメトリー等の検出には、抗原エピトープがＡＤＲＢ３のＮ末端のポリペプチドであるモノクローナル抗体は増殖期細胞の検出に適用でき、抗原エピトープがＡＤＲＢ３の中間ドメインであるモノクローナル抗体はＧ０期細胞の検出に適用できる。
【０２２４】
本発明では、ＡＤＲＢ３はＧ０期細胞マーカーであり、ＡＤＲＢ３を発現させたＧ０期細胞しか細胞周期に改めて入ることができないことが開示される。化学療法薬によっては、癌再発の根本原因と考えられるＧ０期癌細胞を殺滅することができない。循環腫瘍細胞と播散した腫瘍細胞は、原始の成長微小環境が欠乏することにより休眠状態に誘導される。ＡＤＲＢ３抗体は、Ｇ０期癌細胞を特異的に殺滅して、Ｇ０期癌細胞が増殖期（たとえばＧ１期）に入ることを防止し、再発や薬剤耐性を発生させた悪性腫瘍患者の治療に用いられる。ＡＤＲＢ３抗体は、Ｇ０期循環腫瘍細胞を除去するものとして、癌細胞転移の予防に用いられる。
【０２２５】
ＡＤＲＢ３の細胞核での分布状態が細胞周期の段階に密に関連する。Ｇ０期と増殖期にある細胞核小体においてＡＤＲＢ３の分布が異なり、核小体にＡＤＲＢ３が大量蓄積されることはＧ０期細胞が増殖期に入ることについてマーカーイベントである。ＡＤＲＢ３がＫｉ−６７陰性細胞の核小体に蓄積されることは、該細胞がＧ０期からＧ１期に入ろうとすることを示している。本発明では、ＡＤＲＢ３抗体を用いて免疫蛍光実験を行い、核小体でのＡＤＲＢ３輝点が検出されることにより、増殖能力を有するＧ０期細胞（図１中、右上にある細胞は増殖能力を有するＧ０期細胞である）を同定できることが開示され、同定基準は以下のとおりである。（１）、細胞核小体でのＡＤＲＢ３が塊状に凝集して、２〜６個の輝点を形成し、輝点が所在する部位のＤＡＰＩ染色が陰性であり、ＡＤＲＢ３輝点の周辺にヘテロクロマチン又は高度に圧縮されたクロマチン（ＤＡＰＩ染色強陽性）が存在する。（２）、細胞核中にＫｉ−６７が発現されていない。
【０２２６】
ＡＤＲＢ３が細胞核に散在している場合、細胞はＧ０期から増殖期（細胞周期のＧ１、Ｓ又はＧ２期）に入ったことを示し、このとき、ＡＤＲＢ３は、核受容体と転写因子として、遺伝子発現を調節する。本発明では、ＡＤＲＢ３はアセチラーゼ活性を有し、核小体中のヒストンのアセチル化を調節し、特にＨ３ヒストンの９、１４、１８、２７、５６番目のリシンのアセチル化を増加することが開示される。アセチルトランスフェラーゼＴｉｐ６０はＡＤＲＢ３により染色体上に動員されて、ヒストンＨ４Ｋ５、Ｈ４Ｋ１２等のリシン部位のアセチル化を行うことができる。本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、アセチラーゼ阻害剤として、アセチル化修飾に関する疾患の治療に用いられることが開示される。
【０２２７】
核小体の構造と機能の完全性が癌細胞の活性にとって大切なことであり、ＡＤＲＢ３はＧ０期腫瘍細胞の核小体の機能と構造を維持するものであり、ストレス能力を高め、腫瘍細胞が不都合な環境でも生存し続けることに役立つ。適切な環境では、ＡＤＲＢ３は休眠したＧ０期細胞を刺激してＧ１期に入るようにして、細胞を脱分化させて、腫瘍の悪性度を向上させる。ＡＤＲＢ３抗体は核小体の機能を破壊して、Ｇ０期腫瘍細胞のエネルギー代謝を弱め、Ｇ０期腫瘍細胞が細胞周期に入ることを阻害して、Ｇ０期細胞の老化、アポトーシスを誘導する。
【０２２８】
Ｇ０期細胞の核小体以外、ＡＤＲＢ３はＧ１、Ｓ及びＧ２期細胞の核小体にも少量で存在する。細胞が糸分裂期に入ったとき、核小体が分裂して、ＡＤＲＢ３は中心体位置に位置して、紡錘体の形成を促進する。ＡＤＲＢ３は各細胞周期に幅広く分布しているため、有糸分裂に対して重要な調節作用を果たす。ＡＤＲＢ３抗体は増殖期癌細胞の殺滅にも適用できる。
【０２２９】
核小体は、複数種のウイルスの複製、転写場所である。ＡＤＲＢ３抗体は核小体の機能を阻害して、ウイルス複製を遮断し、ウイルス感染症の治療に用いられ得る。
【０２３０】
ＡＤＲＢ３は、有糸分裂期細胞の紡錘体の両極又は中心体に存在して、微小管の発生を調節して、キネトコア機能を高め、姉妹染色体の分離を促進する。本発明では、ＡＤＲＢ３は、微小管関連タンパク質（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）であり、分裂期細胞の紡錘体形成を促進するものであり、ＡＤＲＢ３抗体は、腫瘍細胞の微小管に対する阻害により抗癌作用を果たすことが開示される。ＡＤＲＢ３は分子モータ（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｏｔｏｒ）の機能を持っており、細胞内の物質、たとえばオートファゴソーム、リポフスチン等の輸送を調節する。ＡＤＲＢ３抗体は腫瘍細胞の物質搬送を遮断することにより、オートファゴソームとリポフスチンが除去できず細胞内に蓄積されて、腫瘍細胞老化を早める。
【０２３１】
ＡＤＲＢ３は、腫瘍細胞のミトコンドリア外膜に局在化されて、ミトコンドリア膜電位を正常に維持し、ミトコンドリア融合を促進する。本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、腫瘍細胞の解糖と酸化的リン酸化を弱めて、ＡＴＰ発生を阻害することが開示される。ＡＤＲＢ３抗体は、ミトコンドリア膜貫通電位を破壊して、ミトコンドリアによる活性酸素種の発生を促進し、リポフスチン等の過酸化物を増加することで、アポトーシスを引き起こす。ＡＤＲＢ３抗体は、腫瘍細胞リゾソームの成熟を阻害して、損傷したミトコンドリアやほかの代謝廃棄物たとえばリポフスチンの除去を阻害する。
【０２３２】
本発明では、ＡＤＲＢ３は、ミトコンドリアの自食を促進するとともに、オートファゴソームとリゾソームとの膜融合を促進してオートリゾソームを形成し、オートファゴソームの除去を促進することが開示される。ＡＤＲＢ３は、オートファゴソーム前駆体膜に局在化されて、オートファゴソーム膜を延長させて完全なオートファゴソームを形成する。ＡＤＲＢ３は、オートファゴソームの二層膜間腔による水素イオンリザーバの形成を促進して、Ｖ−ＡＴＰａｓｅによるＡＴＰの生産を駆動し、それはＧ０期細胞の主なエネルギー発生方式であり、細胞が酸素ガスを必要とせずに低代謝の休眠状態を維持できる。ＡＤＲＢ３抗体又はＡＤＲＢ３阻害剤たとえばＳＲ５９２３０Ａは、自食を遮断して、ミトコンドリアのオートファゴソームの除去を阻害し、オートファゴソーム、損傷したミトコンドリアやリポフスチン等の代謝廃棄物を細胞内に蓄積させて、細胞老化又はアポトーシスを促進することができる。自食遮断以外、ＡＤＲＢ３抗体は老化関連遺伝子ｐ１６  ＩＮＫ４／ｐ５３／ｐ６３発現を増加して、ＳＩＲＴ１を減少させ、癌細胞老化を促進することも可能である。
【０２３３】
通常の状況では、細胞内のオートファゴソームの分解速度が非常に高いため、オートファゴソームの検出が困難である。ＡＤＲＢ３抗体又はＡＤＲＢ３阻害剤は、自食誘導剤として、オートファゴソームの分解を遅延させ、自食研究のためのツール薬物として利用し得る。
【０２３４】
本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、ペントースリン酸経路を遮断して、癌細胞のＤＮＡ複製を阻害することが開示される。
【０２３５】
本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、細胞中のリボソーム合成を遮断して、腫瘍細胞のタンパク質合成能力を低下させることが開示される。
【０２３６】
本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、癌細胞のストレス反応を遮断して、癌細胞の放射線治療、化学療法に対する耐性発生を防止することが開示される。ＡＤＲＢ３抗体は、癌細胞の酸化ストレス能力を低下させて、腫瘍細胞がオキシドールと活性酸素種を除去できなくなることが開示される。
【０２３７】
ＡＤＲＢ３は、以下のメカニズムを利用して癌細胞の増殖と転移を促進する。（１）、Ｐ５３タンパク質の分解を促進して、アポトーシスを阻害する。（２）、ミトコンドリアの自食、解糖及び酸化的リン酸化を促進して、ミトコンドリア外膜における電圧依存性アニオンチャネル（ＶＤＡＣ）を調節し、ヘキソキナーゼ２（ＨＫ２）、ＧＡＰＤＨを活性化させる。（３）、Ｇ０期の核小体機能を高めて、リボソーム合成を促進する。（４）、リソソーム外膜におけるＨ＋−ＡＴＰａｓｅとＶＤＡＣを活性化させて、リソソーム内の加水分解酵素の活性を維持する。（５）、Ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１／ＣＤＫ３／ＣＤＫ４発現を向上させて、Ｒｂリン酸化を増加する。（６）、紡錘体の形成を促進して、リン酸化ＣＥＮＰ−Ａを増加する。（７）、ＡＭＰＫ、ＳＩＲＴ１及びｍＴＯＲで媒介したストレス経路を活性化させて、癌細胞のストレス能力を高める。（８）、好中球とＭＤＳＣの増殖を促進して、調節性樹状細胞と腫瘍関連マクロファージの活性を高め、Ｔ細胞とＮＫ細胞の抗癌機能を阻害する。（９）、好中球、リンパ球及び腫瘍細胞によるＩＬ−６、ＶＥＧＦやＴＧＦ等の炎症性因子の合成を促進する。（１０）、走化性内皮細胞、成繊維細胞、巨核球、リンパ球、顆粒球等が腫瘍組織へ浸潤して、新生血管の形成を促進する。（１１）、循環腫瘍細胞が血管内皮細胞に接着して、内皮を貫通して組織間隙に入り、転移巣を形成することを促進する。（１２）、Ｐ−糖タンパク質の活性を向上させて、癌細胞に薬剤耐性を発生させる。
【０２３８】
ＡＤＲＢ３は、免疫細胞（好中球、単核−マクロファージ、リンパ球）と腫瘍細胞に存在するものであり、炎症促進と癌促進の２重機能を兼ね備える。ＡＤＲＢ３は、免疫細胞の癌促進作用を強化させて、癌細胞の炎症促進作用を向上させ、炎症と腫瘍が互いに促進されて、悪循環になる。ＡＤＲＢ３抗体は、免疫細胞と腫瘍細胞における共通の重要なシグナル分子にターゲティングして、腫瘍環境での免疫阻害細胞に干渉するとともに、腫瘍細胞を阻害して、炎症及び腫瘍の発展を効果的に遮断できる。
【０２３９】
本発明では、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、広域スペクトル抗癌薬であり、癌細胞、リンパ球又は好中球にＡＤＲＢ３の高度過剰発現（免疫組織化学ＡＤＲＢ３陽性）又は遺伝子増幅（蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕ  ハイブリダイゼーション検出により実証）が発生した腫瘍にＡＤＲＢ３モノクローナル抗体を適用する場合、臨床的な治療効果が最も高いことが開示される。治療できる悪性腫瘍としては、悪性リンパ腫（ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫）、急性白血病、慢性白血病、混合系統白血病、悪性組織球症、多発性骨髄腫、頭頸部扁平上皮癌、甲状腺癌、鼻咽頭癌、中咽頭癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆管癌、結腸直腸癌、皮膚癌、湿疹様癌（Ｐａｇｅｔ病）、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、黒色腫、神経神経膠腫、星状細胞腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、前立腺癌、骨肉腫、平滑筋肉腫、消化管間質腫瘍、繊維肉腫、悪性線維性組織球腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、血管肉腫、悪性胸腺腫、傍腫瘍性神経症候群及び悪液質が含まれるが、これらに制限されない。
【０２４０】
ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、免疫チェックポイント阻害剤による免疫関連有害事象を治療することができ、免疫媒介性肺炎、免疫媒介性結腸炎、免疫媒介性肝炎、免疫媒介性下垂体炎、腎不全と免疫媒介性腎炎、免疫媒介性甲状腺機能亢進や甲状腺機能低下症が含まれるが、これらに制限されない。
【０２４１】
本発明に係る抗体は、キャリアとしてそれぞれ細胞傷害性薬物（メトトレキセート、アドリアマイシン、ビンクリスチン等）、放射性同位元素（Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｉｎ１１１等）又は生物毒素（ジフテリア毒素、リシン等）と架橋して、悪性腫瘍に対する目標指向療法を行うことができる。本発明に係る抗体は、化学療法薬の増感剤として、化学療法の治療効果を向上させ、化学療法薬について薬剤耐性が生じた患者を治療することもできる。本発明における抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の剤型と製造方法について特に制限がなく、本分野で一般的に使用されている製法によって、注射剤、外用剤、吸入剤、普通の経口投与剤型、カプセル、顆粒剤、徐放剤、噴霧剤、エアロゾル剤等の各種剤型として調製できる。
【０２４２】
ＡＤＲＢ３は、血小板と好中球を活性化させるため、血液を高凝固、高炎症性の状態にする。ＡＤＲＢ３は血小板活性化のマーカーであり、血小板、内皮細胞及び白血球の間の相互作用を媒介して、癌細胞キャリアとして転移を促進する可能性がある。本発明では、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、血小板と好中球の活性を阻害して、血小板の凝集を阻害し、血栓形成を防止し、血栓塞栓症の予防と治療に効き、このような疾患としては、バーナード・スーリエ症候群、フォンビルブラント病、血小板無力症、血小板増加症、深部静脈血栓症、末梢血管塞栓症、肺塞栓症、脳塞栓症、網膜動脈閉塞症、急性亜急性末梢動脈血栓症、網膜中心静動脈閉塞症、血液透析シャントによる凝固、手術過程に生じた血栓形成、心臓カテーテル検査、溶血性や外傷性ショック及び播種性血管内凝固（ＤＩＣ）を合併した敗血症ショックが含まれるが、これらに制限されないことが開示される。
【０２４３】
本発明では、ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、止血薬として、流血又は止血減少を必要とする各種の治療シナリオ、たとえば、外科、内科、婦人科、眼科、耳鼻咽喉科、口腔科等の臨床部門での出血及び出血性疾患に利用できることが開示される。血友病、血小板減少症、紫斑病、鼻出血、歯茎の出血等の病症に利用できる。
【０２４４】
アテローム性動脈硬化症（ＡＳ）は、慢性炎症に密接に関連して、過剰に活性化されたマクロファージ、好中球及びリンパ球に起因する炎症はＡＳプラークの不安定性を引き起こす要因である。ＡＤＲＢ３は、アテローム性動脈硬化症の発生や形成したプラークの不安定性を引き起こす。ＡＤＲＢ３はマクロファージ、好中球、リンパ球及び血管内皮細胞が接着してプラークに入り、プラークが炎症を発生させて割れ、心筋虚血または壊死の重篤化を引き起こし、臨床的に、不安定狭心症と急性心筋梗塞が発生する。ＡＤＲＢ３を豊富に含んだマクロファージ、顆粒球及びリンパ球は急性冠症候群（ＡＣＳ）を引き起こす「犯罪者」細胞である。ＡＤＲＢ３は、ＡＰＣの動脈壁でのＴ細胞への抗原提示を促進して、局所でのＴ細胞の活性化と炎症性サイトカインの生産を発生させて、慢性炎症を介して、泡沫細胞の形成を誘導することで、アテローム性動脈硬化症を促進する。ＡＤＲＢ３は、アテローム性動脈硬化症に対する独立予測因子であり、末梢血可溶性ＡＤＲＢ３レベルと冠状アテローム性動脈硬化症の重篤度が正相関を示している。ＡＤＲＢ３は以下のメカニズムによりＡＣＳを引き起こす。１、炎症性細胞の血管内皮への接着を促進して、内皮を損害し、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）を内皮へ堆積させて、プラークを形成する。２、血小板、マクロファージ、Ｔ細胞及び好中球を活性化させることで、血液を高凝固、高炎性の状態にする。３、プラーク内の血管新生を促進する。４、顆粒球、Ｔ細胞のプラークへの浸潤を促進して、プラークに炎症を発生させる。５、ＭＭＰを活性化させて、プラークの線維性キャップを分解する。６、ＡＤＲＢ３は顆粒球、マクロファージ及び内皮細胞のＬＤＬＲ、スカベンジャー受容体を増加して、細胞によるＬＤＬ−Ｃとカイロミクロンの貪食を刺激して泡沫細胞にする。７、ＡＤＲＢ３はマクロファージのペントースリン酸経路を活性化させて、ヌクレオチドを合成してマクロファージ増殖を促進する戊糖とコレステロールの合成に関与してＬＤＬ−Ｃの濃度を増加してマクロファージによるＬＤＬ−Ｃ貪食を促進する、強還元剤であるＮＡＰＤＨとを大量発生させる。８、溶質キャリア（ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ、ＳＬＣ）スーパーファミリーがコレステロールを輸送するための重要なタンパク質であり、ＡＤＲＢ３はマクロファージでのＳＬＣ１６Ａ３発現を増加して、マクロファージによるＬＤＬ−Ｃ摂取を促進する。９、ＡＤＲＢ３は肝細胞のリボソーム機能を向上させて、肝臓によるＣ反応性タンパク質、凝固因子、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の合成を促進して、血管炎症反応を深刻にする。１０、ＡＤＲＢ３は、単球のＭ１マクロファージへの分化を促進して、コレステロールへの貪食を増加して泡沫細胞を形成する。
【０２４５】
本発明では、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体を用いて心臓血管・脳血管疾患を製造することが開示され、この心臓血管・脳血管疾患としては、冠状アテローム性動脈硬化症性心疾患、急性冠症候群、心筋梗塞、アテローム性動脈硬化症、冠動脈ステント内再狭窄、大動脈解離、慢性肺性心疾患、原発性高血圧、高脂血症、心不全、心筋繊維化、心筋炎、ウイルス性心筋炎、原発性心筋症、拡張型心筋症、肥大性心筋症、狭窄性心筋症、リウマチ性心疾患、リウマチ性心臓弁疾患、感染性心内膜炎、先天性心疾患、不整脈、心房細動、心室頻拍、心室フラッター、心室細動、アダムス・ストークス症候群、心臓及び腎臓再灌流傷害、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、脳卒中、癲癇、認知症、脳出血、くも膜下出血、脳梗死、脳動脈瘤、脳動静脈奇形が含まれるが、これらに制限されない。
【０２４６】
本発明者により、ラパマイシンが血管内皮細胞と平滑筋細胞でのＡＤＲＢ３発現量を増加して、ラパマイシン薬物溶出ステントの術後再狭窄の原因となることが見出された。本発明では、ＡＤＲＢ３抗体による、冠動脈インターベンション後の再狭窄とステント内再狭窄の治療が開示される。ＡＤＲＢ３抗体は、コーティング薬物として、新型薬物溶出ステントや薬物溶出バルーンの生産に用いられ得る。
【０２４７】
本発明では、可溶性ＡＤＲＢ３は急性冠症候群の診断と心臓血管疾患予後予測用の新指標であることが開示される。可溶性ＡＤＲＢ３の測定は、冠状動脈性心疾患の早期診断の分子マーカーとされてもよく、可溶性ＡＤＲＢ３レベルの上昇は冠状動脈性心疾患を示す要因の１つであり、血液中のＡＤＲＢ３レベルの上昇に伴い、ＡＣＳ発症リスクも有意に高くなり、心臓血管疾患予後が悪くなる。急性冠症候群患者の末梢血中の可溶性ＡＤＲＢ３レベルが安定狭心症患者より高く、血液中の可溶性ＡＤＲＢ３レベルはＡＣＳ診断用の重要な指標であり、ＡＣＳ患者の血液中のＡＤＲＢ３＋顆粒球とＡＤＲＢ３＋リンパ球の数のいずれも増加する。
【０２４８】
本発明では、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、広域スペクトル抗炎症薬及び免疫阻害剤であり、全身性炎症反応及び組織損害を軽減させることができ、炎症性疾患、アレルギー性疾患や自己免疫疾患の治療に用いられ得ることが開示され、この疾患としては、上気道感染症、気管支炎、肺炎、肺気腫、喘息、グルココルチコイド耐性喘息、好酸球増加症、特発性好酸球増多症候群、アレルギー性鼻炎、間質性肺炎、肺間質線維症、慢性閉塞性肺疾患、原発性肺動脈性肺高血圧症、結合組織病関連肺動脈性肺高血圧症、肺繊維化、特発性肺線維症及び嚢胞性線維症、肺サルコイドーシス、珪肺、肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、呼吸不全、胸膜炎、結核病、内毒素血症、敗血症性ショック、中毒性ショック症候群、敗血症、膿毒症、膿毒性ショック、内毒素性ショック、アナフィラキシー、多臓器不全症候群、播種性血管内凝固、火傷、急性重症肝炎、急性肝不全、慢性肝炎、ウイルス性肝炎、肝硬変、肝性脳症、原発性硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、胆嚢炎、膵臓炎、慢性胃炎、消化性潰瘍、消化管ストレス潰瘍、ストレス性消化管出血、糖尿病、湿疹、接触性皮膚炎、神経性皮膚炎、脳炎、脳膜炎、脊髓炎、ギランバレー症候群、多発性硬化症、緑内障、感染性多発根神経炎、視神経炎、視神経乳頭炎、糖尿病性網膜症、虹彩異色虹彩毛様体炎、ブドウ膜炎、交感性眼炎、網膜静脈閉塞、視神経脊髄炎、脱髄疾患、結膜炎、角膜炎、強膜炎、ドライアイ、白内障、黄斑変性症、加齢黄斑変性症、破傷風、生殖器疣贅、淋病、生殖器ヘルペス、梅毒、乾癬、単純性粃糠疹、白斑、色素性乾皮症、太田母斑、肝斑、帯状ヘルペス、体部白癬や股部白癬、手足白癬、湿疹、アレルギー性皮膚炎、にきび、脂漏性皮膚炎、脱毛、脂漏性脱毛症、精神的ストレスによる脱毛症、円形脱毛症、神経性脱毛症、若白髪、関節リウマチ、変形性関節症、骨粗鬆症、全身性エリテマトーデス、全身性強皮症、サルコイドーシス、強直性脊椎炎、赤痢、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、シェーグレン症候群、痛風、混合結合組織病、重症筋無力症、内臓リーシュマニア症、シャーガス病、アメーバ性肝膿瘍、小児粘膜皮膚リンパ節症候群、血管炎、全身性血管炎、原発性小血管炎、肉芽腫性血管炎、閉塞性血栓性血管炎、発作性夜行性ヘモグロビン尿症、巨細胞性動脈炎、毛管内増殖性糸球体腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎、ループス腎炎、糸球体腎炎、尿細管萎縮及び間質性線維化、腎盂腎炎、腎炎性ネフローゼ症候群、腎不全、多発性嚢胞腎、尿路感染症、骨盤内炎症性疾患、卵管炎、前立腺炎、多発性硬化症、ベーチェット病、天疱瘡、類天疱瘡、皮膚筋炎、蜂巣炎、急性化膿性脳膜炎、マラリア、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、ギランバレー症候群、川崎病、甲状腺炎橋本甲状腺炎、原発性粘液水腫、甲状腺機能亢進症、移植片対宿主病、同種移植拒絶反応、筋症、筋変性、筋ジストロフィー、毛細血管拡張性運動失調症、慢性肉芽腫症、リンパ節炎、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血、アレルギー性紫斑病、血小板減少性紫斑病、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、白血球接着欠陥症、Ｂ細胞欠損症、Ｔ細胞欠損症、重症複合免疫不全症、補体欠損症、リソソーム蓄積症、ムコ多糖症、ムコ脂質蓄積症、ヘリコバクターピロリ感染、ブルセラ症、梅毒、レプトスピラ症、バング病、トキソプラズマ症、包虫症、住血吸虫症、腸チフ、黒熱病、フィラリア症が含まれるが、これらに制限されない。
【０２４９】
本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、淋菌の薬剤耐性に対して逆転作用を有するため、薬剤耐性淋病を治療できることが開示される。
【０２５０】
本発明では、可溶性ＡＤＲＢ３は、上記炎症性疾患の予後を予測する新指標であり、血液中のＡＤＲＢ３レベルの上昇に伴い、予後が悪くなることが開示される。
【０２５１】
ＡＤＲＢ３は、ヒト免疫不全ウイルス、肝炎ウイルス、エボラウイルス、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、パピローマウイルス、単純ヘルペスウイルス、ＥＢウイルス及び狂犬病ウイルスの複製を促進する。ＡＤＲＢ３抗体は、ウイルス複製を阻害して、ウイルス除去を促進する。ＨＩＶが細胞を感染すると、元々細胞質に分布しているＡＤＲＢ３の膜上への蓄積を誘導して、ＣＤ４＋Ｔ細胞を走化させて、Ｔ細胞をＡＤＲＢ３が富化した領域に接着させる。ＡＤＲＢ３によるシナプスを介して、ＨＩＶは宿主細胞−ＣＤ４＋Ｔ細胞に移動する。
【０２５２】
本発明では、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、広域スペクトルの抗ウイルス薬であり、ウイルス感染症の治療に用いられることが開示され、上記ウイルス感染症としては、重症急性呼吸器症候群、感染性非定型肺炎、後天性免疫不全症候群、Ｂ及びＣウイルス性肝炎、インフルエンザ、麻しん、尋常性疣贅、生殖器疣贅（コンジローマ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス感染、単純ヘルペスウイルス感染に起因する新生児ヘルペス、生殖器ヘルペス、ウイルス性髄膜炎、レンチウイルス脳炎及び脳症、ヒトプリオン病、クロイツフェルト病、Ｋｕｒｕ病、亜急性硬化性汎脳炎、ウイルス性心筋炎、手足口病、ＥＢウイルス感染、感染性単核球症、ウイルス性出血熱、流行性出血熱、デング出血熱、エボラ出血熱、帯状ヘルペス、特発性血小板減少性紫斑病及び狂犬病が含まれるが、これらに制限されない。
【０２５３】
ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の抗ウイルス作用に基づいて、本発明では、ＡＤＲＢ３遺伝子で予防用抗ウイルスワクチンを製造し、ＡＤＲＢ３全長タンパク質とポリペプチド断片を用いて治療用抗ウイルスワクチンを製造し、生体の特異的細胞免疫と体液性免疫応答を誘導することにより、ウイルスを除去又は調節する目的を達成させることが開示される。
【０２５４】
本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、抗原提示細胞を活性化させて、Ｔ細胞免疫応答を刺激し、ワクチンの免疫効果を高めることが開示される。ワクチン接種前後、ＡＤＲＢ３抗体を投与することによって、抗原提示細胞の数を増加して、それにより、抗原を効果的に捕獲して、処理しＴ細胞へ提示することができる。本抗体は、免疫アジュバントとして、抗原性の弱い物質による生体の特異的免疫応答の誘導を強化させて、遺伝子組換えワクチンの免疫原性を向上させ、新型Ｂ型肝炎、流感ウイルス、ＨＩＶ遺伝子組換えワクチンの開発に利用できる。本抗体はさらに、抗毒素血清の生産や開発にも適用でき、蛇、日本脳炎、破傷風、狂犬病の抗毒素血清が含まれるが、これらに制限されない。
【０２５５】
本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、移植器官後免疫系に生じた各種の拒絶反応を阻害して、器官移植後の拒絶反応の予防・治療に用いられることが開示される。
【０２５６】
ＡＤＲＢ３シグナル伝達経路におけるタンパク質に基づき、本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、Ｐ６２、ＨＫ２、ＧＡＰＤＨ、ＶＥＧＦ、Ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、Ｒｂ、Ｋｉ−６７、ｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、ＡＫＴ、Ｔｕｂｕｌｉｎ、ＴＲＡＦ６、ＰＤ−Ｌ１、Ｐ５３、Ｐ６３、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦ及びＴＮＦシグナル伝達経路に関連する疾患を治療することが開示される。
【０２５７】
本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、骨髄芽球、前骨髄球早、骨髄球の増殖を阻害して、ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ及び骨髄由来サプレッサー細胞のアポトーシスを促進し、組織での顆粒球、マクロファージ及びリンパ球の浸潤を減少して、炎症反応に起因して老化、器官不全や悪性腫瘍の原因となる組織傷害を軽減させることが開示される。
【０２５８】
本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、生体の細菌内毒素耐性を高めることができ、解熱や毒血症を緩和させる作用に優れることが開示される。重度の外傷、膿毒症性、内毒素血症、感染性ショック、多臓器不全症候群を治療できる。ＡＤＲＢ３抗体は、急性化膿性感染症、たとえば膿腫、肺炎、虫垂炎、丹毒、菌血症、内臓穿孔、猩紅熱等の治療に有用である。
【０２５９】
ＡＤＲＢ３は溶質キャリアスーパーファミリーの調節とＡＴＰ結合カセットスーパーファミリーの遺伝子発現に関与して、薬物と有毒物質の吸収、分布や除去等の過程に影響を与える。本発明では、了ＡＤＲＢ３抗体は、中毒、たとえば酸中毒、高乳酸血症、尿毒症、有機リン中毒、アルコール中毒、バルビツール酸系中毒、重金属（鉛、水銀、砒素、タリウム等）中毒、細菌毒素（破傷風毒素、ジフテリア毒素、ボツリヌス菌毒素等）中毒等を治療できることが開示される。可溶性ＡＤＲＢ３は、上記中毒性疾患の予後を予測するための新指標として、血液中のＡＤＲＢ３レベルが上昇すると、予後が悪くなる。
【０２６０】
本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、ｍＴＯＲシグナル、特にｍＴＯＲＣ１（ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  １）の活性を阻害するものであり、老化関連性疾患の治療や老化防止に有用であることが開示される。視床下部中のｍＴＯＲＣ１タンパク質は血圧調節のための重要な因子であり、過度の活性化により血圧の上昇を引き起こし、ＡＤＲＢ３抗体はｍＴＯＲＣ１を阻害することで血圧降下作用を果たす。
【０２６１】
シナプス（ｓｙｎａｐｓｅ）は２つのニューロン間又はニューロンとエフェクター細胞の間が相互に接触して、情報を伝達するための部位である。シナプス機能阻害とシナプス喪失が認知機能低下に強く関連している。アルツハイマー病の早期段階では、ＡＤＲＢ３はシナプス間のシグナル伝達を阻害し、最近記憶力減退が現れる。本発明者により、アルツハイマー病患者の脳脊髓液において、可溶性ＡＤＲＢ３の濃度が正常レベルより高く、それによって、神経の炎症を引き起こして、患者の記憶力減退を招くことが見出された。ＡＤＲＢ３抗体はアルツハイマー病に起因する記憶喪失を逆転し得る。
【０２６２】
小膠細胞（ｍｉｃｒｏｇｌｉａ）は、中枢神経系の免疫細胞であり、中枢神経系における損傷神経、プラーク及び感染性物質を除去する。ＡＤＲＢ３は小膠細胞中に発現され、正常な活性を有するＡＤＲＢ３シグナル伝達経路は、小膠細胞の増殖を促進して、小膠細胞の機能を維持し、神経成長因子を増やして、神経組織再生を促進する。病理学的な状態では、活発なＡＤＲＢ３シグナル伝達経路は、過量の小膠細胞を活性化させて、小膠細胞の脱分化による機能喪失を引き起こし、神経毒性を発生させて、ニューロンのシナプス可塑性を低下させ、神経変性疾患の発症メカニズムについて重要な役割を果たす。本発明では、抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、学習及び記憶能力を高めて、神経再生を促進し、神経疾患を治療できることが開示され、上記疾患としては、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、癲癇、毛細血管拡張性運動失調症、ギランバレー症候群、ウシ海綿状脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン舞踏病、ウィルソン病、トゥレット症候群、脆弱Ｘ症候群、Ｌａｍｂｅｒｔ  Ｅａｔｏｎ筋無力症症候群、後天性ニューロミオトニア、辺縁系脳炎、自己免疫性脳炎、抗ＮＭＤＡ受容体脳炎、視神経脊髄炎、橋本脳症、ループス脳症、ウイルス性脳炎、錐体外路疾患、急性出血性白質脳炎、びまん性硬化症、脱髄疾患、小脳萎縮、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、対麻痺、脊髄損傷、脊髄空洞症、脊髓炎等が含まれるが、これらに制限されない。
【０２６３】
本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は、神経系の炎症反応を阻害して、ストレス状態による不安又は抑鬱を緩和させることが開示される。ＡＤＲＢ３抗体は精神病を治療するものであり、上記精神病としては、統合失調症、統合失調感情障害、妄想精神病、てんかんに起因する精神障害、双極性感情障害、うつ病、自閉症、強迫性障害、拒食症、神経性過食症、パニック障害、境界性人格障害、感染性精神病、身体疾患に起因する精神病、中毒性精神病（一酸化炭素中毒、農薬中毒）、アルツハイマー病、アルコール中毒性精神病、脳外傷性精神病、神経症、慢性疲労症候群等が含まれるが、これらに制限されない。
【０２６４】
本発明では、ＡＤＲＢ３抗体はアルコールや毒品（たとえば、ヘロイン、メタンフェタミン、モルフィン、大麻やコカイン等）に起因する中毒を治療できることが開示される。
【０２６５】
ＡＤＲＢ３は、骨リモデリング過程に重要な作用を果たし、破骨細胞中に発現されて、骨吸収を調節するものである。ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトによりマウスの骨質を増加できる。本発明では、ＡＤＲＢ３抗体は破骨細胞を阻害して骨形成を促進でき、骨退行変性関連の疾患治療に利用でき、前記骨退行変性としては、骨粗鬆症、変形性関節症、退行性関節炎、骨折治癒遅延又は非治癒骨折、大腿骨頭壊死、大腿骨頭すべり症、大腿骨頸部異常、多発性骨端異形成症、古い骨折、化膿性関節炎、骨髄炎、痛風、軟骨石灰化症等が含まれることが開示される。
【０２６６】
本発明における異なるハイブリドーマ細胞株により生じた抗ヒトＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、機能が異なり、一部のハイブリドーマ細胞株たとえば５Ｂ８、５Ｄ１により生じた抗体は、ＡＤＲＢ３を遮断して、ＡＤＲＢ３活性を低下できる。別のハイブリドーマ細胞株たとえば４Ｇ７、４Ｆ７等により生じた抗体は、ＡＤＲＢ３を活性化させて、ＡＤＲＢ３活性を向上できる。ＡＤＲＢ３活性化作用を有するＡＤＲＢ３抗体とアゴニストたとえばＢＲＬ３７３４４は、幹細胞の未分化状態を維持することができ、培地に添加して幹細胞、胚性幹細胞、造血幹細胞の培養に用いられ得る。また、誘導多能性幹細胞の生産と培養にも有用である。
【０２６７】
ＡＤＲＢ３抗体を細胞培養板に外被して、リンパ球培養を行うことができる。本抗体を用いて、免疫磁気ビーズ細胞選別試薬、エライザ実験（ＥＬＩＳＡ）試薬、蛍光結合抗体、ＨＲＰ結合抗体又はその他のタグタンパク質結合抗体を製造できる。
【０２６８】
細胞膜以外、ＡＤＲＢ３タンパク質は細胞質と細胞核にも存在。腫瘍細胞内のＡＤＲＢ３の大部分が細胞核に存在し、好中球内のＡＤＲＢ３が主に細胞質に存在し、ＡＤＲＢ３は局在化によって、露出された抗原エピトープが異なり、同一次抗体体は局在化の異なるＡＤＲＢ３との親和力も異なる。本発明では、ＡＤＲＢ３タンパク質のＮ末端と中部の断片ポリペプチドで動物を免疫して得る抗体は、腫瘍細胞のＡＤＲＢ３と結合しやすく、腫瘍細胞の標識に利用でき、ＡＤＲＢ３タンパク質のＣ末端のポリペプチド断片で免疫して得た抗体は、顆粒球細胞質におけるＡＤＲＢ３と結合しやすく、顆粒球の標識に利用できることが開示される。
【０２６９】
本発明では、ＡＤＲＢ３遺伝子を用いて予防用腫瘍ワクチンを製造し、ＡＤＲＢ３全長タンパク質とポリペプチド断片を用いて治療用腫瘍ワクチンを製造し、生体の特異的細胞免疫と体液免疫応答を誘導することにより、腫瘍を除去又は調節する目的を達成させることが開示される。本発明では、ＡＤＲＢ３抗体がプラズマ細胞の抗体発生能力を高めることが開示される。
【０２７０】
本発明では、ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体とほかの腫瘍又はウイルス特異抗原との組換え融合タンパク質を製造して、抗腫瘍及び抗ウイルスの免疫応答を誘導することが開示される。ほかの腫瘍又はウイルス特異抗原としては、ヒト前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、α−フェトプロテイン、癌胎児性抗原、突然変異したｒａｓ遺伝子コードタンパク質、ｃ−ｍｙｃ遺伝子産物、糖タンパク質抗原（ＣＡ）  ５０、ＣＡ１５２３、ＣＡ７２２４、ＣＡ５４９、サイトケラチン１９、扁平上皮細胞関連抗原（ＳＣＣ）、Ｃ反応性タンパク質、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＨＩＶタンパク質、Ｂ型及びＣ型肝炎ウイルスタンパク質等が含まれるが、これらに制限されない。
【０２７１】
本発明では、ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体を用いて、血漿分離、血液透析、腹膜透析等の技術により血液、腹水又はその他の体液において過剰に活性化されたＡＤＲＢ３を減少させることによって、炎症、膿毒症、腫瘍、心不全や悪液質を治療することが開示される。高齢者の血液中ＡＤＲＢ３の減少により、老化を遅延できる。ＡＤＲＢ３抗体で患者の血液、胸水、腹水又はその他の体液中の好中球、リンパ球、ＭＤＳＣ、Ｔｒｅｇ及びＭ２単球を吸着して、免疫吸着治療を行うことができ、治療適応症はＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の適応症と同様である。
【０２７２】
正常な活性を有するＡＤＲＢ３の再生促進の生理学的機能を利用して、ＡＤＲＢ３活性が低下した場合に、血液、脳脊髄液、心臓、脳、末梢神経、脊髓、肝臓、膵臓、腎臓、筋肉等の組織におけるＡＤＲＢ３含有量と活性を適切に向上させることにより、組織再生を促進して、老化関連性疾患や外傷に起因する損傷たとえば対麻痺を治療する。ＡＤＲＢ３活性亢進の場合は、ＡＤＲＢ３活性を低下させた抗体で再生を促進すべきである。
【０２７３】
生殖道の炎症は不妊症に繋がり、精漿ＡＤＲＢ３検出が男性生殖道炎症の特異的指標である。本発明者は、ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウト老齢マウスの繁殖力が正常な高齢マウスより高く、ＡＤＲＢ３抗体を投与した雌マウスの１回あたりの産子数が正常な雌マウスより多いことを見出した。ＡＤＲＢ３抗体は、雄マウスの精漿エラスターゼレベルを低下させて、ＡＤＲＢ３抗体が生殖道炎症を阻害することを示している。ＣｈＩＰ−ｃｈｉｐの結果から分かるように、ＡＤＲＢ３は卵、精子の運動性に関連する多数の遺伝子、たとえばＩＺＵＭＯ１、ＴＳＳＫ３、ＴＳＳＫ６、ＴＳＫＳ等の発現を調節できる。ＡＤＲＢ３抗体は、卵、精子の運動性を向上でき、不妊症、勃起不全、早漏、性機能障害を治療できる。
【０２７４】
ＡＤＲＢ３がエラスターゼ活性を向上できるため、本発明では、ＡＤＲＢ３抗体はスキンケア類化粧品の製造に用いると、皮膚老化を遅延させて、皮膚の張りを回復させ、しぼを減少して、色素沈着を低減させる効能を有することが開示される。
【発明の効果】
【０２７５】
従来技術に比べて、本発明は、下記有益な効果を有する。
本発明から明らかなように、ＡＤＲＢ３は、神経−内分泌−免疫調節ネットワークにおける重要な受容体であり、複数種のシグナル伝達経路を媒介することができ、媒介したシグナル伝達経路は好中球、リンパ球や腫瘍細胞等の増殖と分化を調節できる。健常な状態では、ＡＤＲＢ３は、生体の非特異的免疫と特異的免疫の能力を維持して、外因性病原性微生物や老化した生体組織を除去し、生体保護及び老化防止の役割を果たす。病理学的な状態では、該シグナル伝達経路の過剰な活性化によりシステム慢性炎症が発生して、免疫恒常性が損なわれる。ＡＤＲＢ３のモノクローナル抗体は、ＡＤＲＢ３と特異的に結合してその活性を調節（遮断又は作動）できるため、炎症、悪性腫瘍、ウイルス感染、心臓血管・脳血管疾患（たとえば、アテローム性動脈硬化症）、糖尿病、神経変性疾患（たとえば、アルツハイマー病）、自己免疫疾患、高齢化による疾患、膿毒症、喘息、内毒素血症、感染性刺激、多臓器不全症候群、急性化膿性感染症、再生機能不全による疾患、淋菌感染、貧血、重度の外傷、アレルギー性疾患、悪液質疾患、中毒性疾患、器官移植免疫拒絶反応、悪液質疾患、肺動脈性肺高血圧症、急性冠症候群、骨退行変性、肥大性心筋症、ＭＤＳＣ関連性疾患や精神病等、複数種の疾患の治療に利用でき、重要な薬用価値及び応用の将来性が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【０２７６】
【図１】ＡＤＲＢ３（Ｂ３ＡＲ）タンパク質はＧ０期（Ｋｉ−６７陰性）ヒト乳癌ＭＣＦ７細胞の核小体において高発現された。増殖期細胞（Ｋｉ−６７陽性）の細胞核にもＡＤＲＢ３は存在するものの、核小体での分布が少ない。
【図２】ＡＤＲＢ３タンパク質はＧ０期（Ｎｕｃｌｅｏｌｉｎ陰性）ＭＣＦ７細胞の核小体において高発現された。
【図３】ＡＤＲＢ３タンパク質はＭＣＦ７細胞の核小体（Ｆｉｂｒｉｌｌａｒｉｎ陽性）において高発現された。
【図４】ＡＤＲＢ３タンパク質はＧ０期ＭＣＦ７細胞（Ｈ３Ｋ９ＡＣ陰性）の核小体に蓄積している。
【図５】Ｂｒｄｕ陰性（非Ｓ期）のＭＣＦ７細胞核には、大量のＡＤＲＢ３タンパク質が存在する。
【図６】Ａ．ＡＤＲＢ３はＭＣＦ７細胞核と核小体に蓄積されている。Ｂ．ＡＤＲＢ３は融合細胞の複数の細胞核に存在する。
【図７】ＡＤＲＢ３はＧ０期（Ｋｉ−６７陰性）ヒト肺癌Ａ５４９細胞の核小体において高発現され、増殖期細胞（Ｋｉ−６７陽性）核における発現量が比較的少ない。
【図８】ＡＤＲＢ３はＧ０期（Ｎｕｃｌｅｏｌｉｎ陰性）ヒト膵臓癌ＣＦＰＡＣ１細胞の核小体において高発現され、増殖期細胞（Ｎｕｃｌｅｏｌｉｎ陽性）の核小体における発現量が比較的少ない。
【図９】ＡＤＲＢ３はヒト黒色腫Ａ３７５細胞の核小体（Ｆｉｂｒｉｌｌａｒｉｎ陽性）において高発現された。
【図１０】ＡＤＲＢ３はヒト膵臓癌ＰＡＮＣ１細胞のミトコンドリア外膜に局在化されている。
【図１１】ＡＤＲＢ３はＭＣＦ７細胞の紡錘体の両極の中心体に局在化されている。
【図１２】ＡＤＲＢ３はＡ５４９細胞の紡錘体の両極と赤道に局在化されている。
【図１３】Ａ．ＡＤＲＢ３はヒト肝癌ＨｅｐＧ２細胞の微小管に局在化されている。Ｂ．ＡＤＲＢ３はヒト膵臓癌ＰＡＮＣ１細胞の微小管、細胞核及びミトコンドリアに局在化されている。
【図１４】Ａ．ＡＤＲＢ３はヒト神経膠腫Ａ１７２細胞の紡錘体の両極に局在化されている。Ｂ．ＡＤＲＢ３はＭＣＦ７多倍体細胞の中心体位置に局在化されている。
【図１５】ＡＤＲＢ３はＭＣＦ７細胞のリゾソームに局在化されている。
【図１６】Ａ．ＡＤＲＢ３はＧ０期細胞膜におけるタンパク質のチロシンリン酸化を増加することにより、ＨＥＲ２／ＥＧＦＲ／薬物ポンプ等の膜タンパク質のチロシンリン酸化を促進して膜タンパク質を活性化させる可能性がある。Ｂ．ＡＤＲＢ３は、Ｇ２後期ＭＣＦ７細胞核に大量で蓄積しており、この際、ＤＮＡ複製が完了し、染色体が形成されており、核小体と核膜が消えた。
【図１７】Ａ．ＡＤＲＢ３は、Ｇ２後期ＭＣＦ７細胞の中心体に存在して、微小管形成中心の形成を促進する。Ｂ．ＡＤＲＢ３は、ＭＣＦ７細胞の液泡外膜に存在して、液泡形成を促進する。
【図１８】乳癌組織と隣接組織におけるＡＤＲＢ３発現模式図である。ＡＤＲＢ３は病理学的グレード３の乳癌組織に高発現された。各列が１名の患者についてのモデルであり、上方にある２つのサンプルは癌組織、下方にある２つは隣接組織である。
【図１９】１４２例の乳癌患者のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存曲線であり、縦座標が累積生存率、横座標が生存時間（月）を示す。癌組織ＡＤＲＢ３陰性患者（ｎｅｇａｔｉｖｅ）の生存率が陽性者（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）より有意的に高く、Ｐ＝０．０２５である。
【図２０】肺癌組織と隣接組織におけるＡＤＲＢ３発現模式図である。右１と右２は１名の肺扁平上皮癌患者（ｇ１５）の隣接組織と癌組織である。右３と右４は１名の肺腺癌患者（ｆ１５）の隣接組織と癌組織である。
【図２１】１１２例の肺癌患者のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存曲線であり、縦座標が累積生存率、横座標が生存時間（月）を示す。癌組織ＡＤＲＢ３弱陽性患者の生存率が強陽性患者著より有意的に高く、Ｐ＝０．０３８である。１は弱陽性、２は強陽性を示す。
【図２２】膵臓癌組織と隣接組織におけるＡＤＲＢ３発現模式図である。
【図２３】１２９例の膵臓癌患者のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存曲線であり、縦座標が累積生存率、横座標が生存時間（月）を示す。癌組織ＡＤＲＢ３陰性患者（０）の生存率が陽性者（１）より有意的に高く、Ｐ＝０．０１９である。
【図２４】９０例の結腸癌組織と隣接組織におけるＡＤＲＢ３の発現模式図であり、左図は癌組織である。
【図２５】９０例の結腸癌組織と隣接組織におけるＡＤＲＢ３の発現状況であり、癌組織でのＡＤＲＢ３発現は正常結腸組織（Ｐ＝０．０００１）より有意的に高い。
【図２６】Ａ．５０歳以上の肝癌患者の癌組織におけるＡＤＲＢ３発現量が隣接組織より有意的に高く、Ｐ＝０．０４である。Ｂ．１６２例の肝細胞肝癌患者のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存曲線であり、縦座標が累積生存率、横座標が生存時間（月）を示す。癌組織ＡＤＲＢ３陰性患者（０）の生存率が陽性者（１）より有意的に高く、Ｐ＝０．０３８である。
【図２７】Ａ．健常者の骨髄塗抹標本についてＡＤＲＢ３とＭＰＯ染色を行った結果、ＡＤＲＢ３は好中球（ＭＰＯ陽性）において高発現された。Ｂ．好中球内のＡＤＲＢ３はコーン状構造として細胞核に埋め込まれる。Ｃ．コーン状のＡＤＲＢ３複合体は細胞膜で発生して、細胞質を貫通し、細胞核まで延びて、１本の通路を形成する。
【図２８】グラノサイト（組換えヒト顆粒球コロニー刺激因子）を注射した健常者の骨髄塗抹標本についてのＡＤＲＢ３とＭＰＯ染色である。リンパ球はＡＤＲＢ３を誘導的に発現させた。
【図２９】同一の急性Ｂリンパ球白血病の患者の治療前と治療後の寛解（ＣＲ）をした骨髄塗抹標本についてのＡＤＲＢ３とＫｉ−６７染色であり、上図は治療前である。治療前に比べて、治療後の寛解した顆粒球と白血病細胞中のＡＤＲＢ３発現が低下した。
【図３０】Ａ．急性Ｂリンパ球白血病の治療後再発患者の骨髄塗抹標本についてのＡＤＲＢ３とＭＰＯ染色であり、ＡＤＲＢ３は顆粒球と白血病細胞に高発現されており、ＡＤＲＢ３がＢリンパ球癌化を誘導することを示す。Ｂ．ＡＤＲＢ３は顆粒球とリンパ球との接触部位に集まり、細胞間接着複合体の安定性に有利であり、阻害性免疫シナプスの形成を促進する。Ｃ．リンパ球の細胞質と細胞核におけるＡＤＲＢ３はコーン状構造を形成する。
【図３１】急性Ｂリンパ球白血病の治療後再発患者の骨髄塗抹標本についてのＡＤＲＢ３とＫｉ−６７染色である；顆粒球にはＡＤＲＢ３とＫｉ−６７が高発現されており、このような顆粒球はＭＤＳＣであり、病状の発展を促進する。
【図３２】急性単球白血病（Ｍ５）患者の治療後の寛解した骨髄塗抹標本のＡＤＲＢ３とＭＰＯ染色である。
【図３３】急性骨髄性白血病患者の治療後の寛解した骨髄塗抹標本についてのＡＤＲＢ３とＫｉ−６７染色である。ＡＤＲＢ３は増殖期顆粒球（Ｋｉ−６７陽性）において高発現されている。
【図３４】Ａ．免疫マウスに使用される異なるＡＤＲＢ３ポリペプチド。Ｂ．ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔにより抗体の特異性を検出する。
【図３５】抗体軽鎖の核酸とタンパク質配列である。
【図３６】抗体重鎖の核酸とタンパク質配列である。
【図３７】ＡＤＲＢ３抗体はインビトロもインビボもＭＣＦ７細胞を殺滅できる。Ａ．ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、ＭＣＦ７乳癌細胞の活性を低下させた。Ｂ．ＡＤＲＢ３抗体は、ヌードマウスＭＣＦ７乳癌細胞移植腫瘍の増殖を阻害し、縦座標が移植腫瘍体積（立方ミリメートル）、横座標が細胞接種後の日間、Ｂ３  Ａｂが抗体群を示す。Ｃ．ＡＤＲＢ３抗体はＭＣＦ７移植腫瘍ヌードマウスの脾臓指数を向上させた。Ｄ．ＡＤＲＢ３抗体は、ヌードマウスＭＣＦ７移植腫瘍ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１、リン酸化Ｒｂ、ＣＤＫ３及びＩＬ−６の発現を減少させて、ＣＤＫ３活性を低下させた。
【図３８】異なる骨髄ハイブリドーマ細胞株によるＡＤＲＢ３抗体で処理した後、ＳＷ１９９０膵臓癌細胞の活性減少率である。使用される抗体濃度が２５０ｎｇ／ｍｌである。横座標はハイブリドーマ細胞株の番号を示す。
【図３９】異なる骨髄ハイブリドーマ細胞株によるＡＤＲＢ３抗体で処理した後、ＣＦＰＡＣ１細胞の活性減少率である。使用される抗体濃度が２５０ｎｇ／ｍｌである。横座標はハイブリドーマ細胞株の番号を示す。
【図４０】ＡＤＲＢ３抗体はヌードマウスＣＦＰＡＣ１細胞移植腫瘍の体積を減少させた。
【図４１】ヌードマウスに接種したヒトＣＦＰＡＣ１膵臓癌細胞移植腫瘍の成長曲線であり、Ａｂは抗体処理群である。ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はＣＦＰＡＣ１細胞移植腫瘍の増殖を阻害した。
【図４２】ヌードマウスＣＦＰＡＣ１膵臓癌細胞移植腫瘍重量の棒グラフである。ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、ＣＦＰＡＣ１細胞移植腫瘍の重量を減少させた。
【図４３】ＣＦＰＡＣ１移植腫瘍ヌードマウスの体重の棒グラフである。ＡＤＲＢ３抗体はＣＦＰＡＣ１移植腫瘍ヌードマウスの体重に影響を与えない。
【図４４】ヌードマウスＡＳＰＣ１膵臓癌細胞移植腫瘍である。ＡＤＲＢ３抗体はＡＳＰＣ１細胞移植腫瘍の体積を減少させた。
【図４５】ヌードマウスに接種したヒトＡＳＰＣ１膵臓癌細胞移植腫瘍の成長曲線であり、ＡｂはＡＤＲＢ３抗体処理群である。ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はＡＳＰＣ１細胞移植腫瘍の増殖を阻害した。
【図４６】ヌードマウスＡＳＰＣ１膵臓癌細胞移植腫瘍の重量の棒グラフである。ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はＡＳＰＣ１細胞移植腫瘍の重量を減少させた。
【図４７】ＡＳＰＣ１膵臓癌細胞移植腫瘍ヌードマウスの体重の棒グラフである。ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はＡＳＰＣ１移植腫瘍ヌードマウスの体重に影響を与えない。
【図４８】ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体によるＳＷ１９９０移植腫瘍ヌードマウスの治療である。Ａ．ヌードマウスに接種したヒトＳＷ１９９０膵臓癌細胞移植腫瘍の成長曲線であり、ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はＳＷ１９９０細胞移植腫瘍の増殖を阻害した。Ｂ．ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はＳＷ１９９０アポトーシス率を増加した。Ｃ．ＡＤＲＢ３抗体は、ＳＷ１９９０担癌マウスの好中球とＮＬＲを減少させ、対照群に比べて、＊Ｐ＜０．０５であった。
【図４９】ヌードマウスに接種したヒトＡ３７５黒色腫細胞移植腫瘍の成長曲線である。ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はＡ３７５細胞移植腫瘍の増殖を阻害する。＊ｐ＝０．０３２、＃ｐ＝０．００５。ＡｂはＡＤＲＢ３抗体処理群である。
【図５０】ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体によるＡ３７５移植腫瘍ヌードマウスの治療である。Ａ．Ａ３７５移植腫瘍ヌードマウスの末梢血中のＭＳＤＣフローサイトメトリー。Ｂ．ＡＤＲＢ３抗体はＡ３７５移植腫瘍ヌードマウスの末梢血中のＭＳＤＣ数を減少させた。Ｃ．担癌マウス血清ＥＬＩＳＡ検出。ＡＤＲＢ３抗体はＩＬ−１０を増加して、ＩＬ−６、ＶＥＧＦ及びＭＰＯの濃度を減少させ、対照群に比べて、＊ｐ＜０．０５であった。
【図５１】Ａ．ヌードマウスに接種したヒトＡ５４９肺癌細胞移植腫瘍の成長曲線。ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はＡ５４９細胞移植腫瘍の増殖を阻害し、対照群に比べて、＊ｐ＜０．０５であった。Ｂ．ＡＤＲＢ３抗体はマウス４Ｔ１乳癌細胞の肝転移阻害した。
【図５２】ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はヒト肺癌Ｈ１２９９細胞の活性を用量依存的に低下させた。
【図５３】ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はヒト肝癌ＨｅｐＧ２細胞の活性を用量依存的に低下させた。
【図５４】ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はヒト結腸癌ＨＣＴ１１６細胞の活性を用量依存的に低下させた。
【図５５】ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はヒト前骨髄球性白血病ＨＬ−６０細胞の活性を用量依存的に低下させた。
【図５６】ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体はヒト神経膠腫Ｕ２５１細胞の活性を用量依存的に低下させた。
【図５７】ＡＤＲＢ３特異的キメラ抗原受容体で改変されたＴリンパ球は、ＳＷ１９９０細胞（左図中、Ａ１はＳＷ１９９０である）とＨ１２９９細胞（右図Ｃ３）を殺滅できる。
【図５８】ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスの末梢血中の白血球総量、好中球及び単球のいずれも低下している。ＷＢＣ：白血球、ｎｅ＃：好中球、ｌｙ＃：リンパ球、ｍｏ＃：単球。
【図５９】ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスのリンパ球百分率は増加し、好中球百分率は低下し、ＮＬＲは低下している。ｌｙ％：リンパ球百分率、ｎｅ％：好中球百分率、ｍｏ％：単球百分率。
【図６０】ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスの筋肉量は増加した。
【図６１】ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスの骨密度と骨ミネラル含有量のいずれも増加した。
【図６２】Ａ．ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスの血清サイトカイン検出、Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｕｎｉｔｓ：相対蛍光単位；対照群に比べて、＊Ｐ＜０．０５であった。ｘＢ．ＡＤＲＢ３−／−マウス血清ＥＬＩＳＡ検出。ＡＤＲＢ３−／−マウス血清ＩＬ−１０は増加し、ＩＬ−６、ＶＥＧＦ及びＭＰＯは減少した。
【図６３】ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスの脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞のフローサイトメトリー。
【図６４】ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスの心筋Ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１免疫組織化学。ＦＶＢマウスは正常対照であった。
【図６５】ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスの心臓Ｂ超音波検査。ＡＤＲＢ３ノックアウト後、心機能は良好であった。ＦＶＢマウスは正常対照であった。
【図６６】４Ｔ１マウス乳癌細胞はＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスの皮下で成長できない。ＦＶＢマウスは正常対照であった。
【図６７】ＡＤＲＢ３抗体はＣＤＫ４、ｎｕｃｌｅｏｌｉｎ、ＨＥＲ２及びｐ−Ｒｂ（Ｓｅｒ７８０）を減少させて、ｐ１６発現を増加した。
【図６８】ＡＤＲＢ３抗体はｍＴＯＲ、ｐ−ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４８１）、ＨＫ２及びＰ６２を減少させた。Ｒａｐａはラパマイシン、ＣＱはクロロキンである。
【図６９】５Ｄ１抗体は、ＡＤＲＢ３、ｐ−Ｒｂ（Ｓｅｒ７８０）及びＧＡＰＤＨを減少させた。４Ｇ７はＡＤＲＢ３、ｐ−Ｒｂ（Ｓｅｒ７８０）を増加した。２種の抗体のいずれもＧＡＰＤＨとＣＤＫ４を低下できる。ＳＲはＡＤＲＢ３阻害剤ＳＲ５９２３０Ａである。
【図７０】５Ｄ１抗体はＰＤ−Ｌ１、ＣＤＫ３及びＧＡＰＤＨの発現を減少させた。
【図７１】ｓｉＲＮＡでｐ６２阻害後、ＡＤＲＢ３とＲａｂ７の発現が減少した。ラパマイシンはＡＤＲＢ３発現を増加させる。ｐ６２サイレンシング後、ＡＤＲＢ３はｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、ＳＩＲＴ１及びＡＤＲＢ３の発現を向上できない。
【図７２】ＡＤＲＢ３抗体は、ヌードマウスＭＣＦ７移植腫瘍中のｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、ｐ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ  ４７３）、ｐ−４ＥＢＰ１（Ｔ３７／４６）、ＨＫ２、Ｐ６２、Ｒａｂ７、ＳＩＲＴ１、ＡＤＲＢ３、ＶＤＡＣ、Ｒｈｅｂの発現を減少させるが、ｐ５３発現を増加した。
【図７３】ＡＤＲＢ３抗体は、ヌードマウスＭＣＦ７移植腫瘍中のＨＫ２、Ｐ６２、ｐ−ｍＴＯＲ（Ｓ２４８１）、Ｒｉｃｔｏｒ、ＩＬ−６を減少させた。Ａ．対照群、Ｂ．抗体群。
【図７４】ＡＤＲＢ３作動後、下流シグナル伝達経路におけるｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、４ＥＢＰ１、ＣＥＮＰＡ、Ｐ６２、Ｄｒｐ１、ＡＫＴ及びＡＭＰＫ等のタンパク質のリン酸化が増加した。
【図７５】ＡＤＲＢ３抗体は、ＭＣＦ７細胞ミトコンドリアのオートファゴソームの除去を阻害した。
【図７６】Ａ．ＡＤＲＢ３抗体はミトコンドリア膜電位を低下させ、その表現としてＪＣ１染色が緑色であった。Ｂ．ＡＤＲＢ３抗体はＭＣＦ７細胞内の活性酸素種を増加した。
【図７７】Ａ．ＡＤＲＢ３抗体は細胞内のリポフスチンを増加した。Ｂ．ＡＤＲＢ３抗体はＭＣＦ７細胞内の５−ＣＦＤＡ含有量を増加した。
【図７８】Ａ．ＡＤＲＢ３抗体は、ＭＣＦ７細胞内のローダミン１２３含有量を増加した。Ｂ．ＡＤＲＢ３抗体は細胞内のＳＡ−β−Ｇａｌ（老化関連βガラクトシダーゼ）を増加した。
【図７９】ＡＤＲＢ３抗体は、ヌードマウスＭＣＦ７細胞移植腫瘍組織による１８Ｆ−ＦＤＧの取り込みを減少させた。（Ａ）１８Ｆ−ＦＤＧ  ＰＥＴ走査図。（Ｂ）再構成画像での標的組織（Ｔ）と隣接正常組織（非標的組織Ｎ）のグレイスケール比の棒グラフ。（Ｃ）対照群：移植腫瘍に放射性取り込み像が見られ、腫瘍のＦＤＧ取り込みが肝臓と類似して、中心壊死がなく、白矢印が移植腫瘍を示す。（Ｄ）ＡＤＲＢ３抗体群：移植腫瘍の中間に放射性疎欠陥が見られ、腫瘍のＦＤＧ取り込みが肝臓より少なく、中心液化壊死が発生した。（Ｅ）ＡＤＲＢ３抗体は、腫瘍組織ＡＴＰの発生量を減少させた。（Ｆ）ＡＤＲＢ３抗体は腫瘍組織ＨＫ活性を低下させた。
【図８０】ＡＤＲＢ３抗体群のＭＣＦ７細胞移植腫瘍組織の透過型電子顕微鏡写真であり、ＡＤＲＢ３抗体はミトコンドリアクリステの減少と体積膨張を引き起こした。
【図８１】ＡＤＲＢ３抗体群のヌードマウスＭＣＦ７細胞移植腫瘍細胞において、ミトコンドリアのオートファゴソームが細胞質に蓄積されて、除去されておらず、黒矢印がミトコンドリアのオートファゴソームを示し、白矢印が脂肪滴を示す。
【図８２】肺癌胸水細胞塗抹標本のＭＰＯ、ＡＤＲＢ３免疫蛍光。Ａ．肺癌患者胸水に大量の可溶性ＡＤＲＢ３（ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｂ３、ｓＢ３）が存在しており、顆粒球は脱顆粒によりｓＢ３を血液と組織間隙へ放出することを示す。Ｂ．顆粒球の細胞質に大量のＡＤＲＢ３が存在する。Ｃ／Ｄ．胸水においてＡＤＲＢ３を高発現させた顆粒球（ＭＰＯ＋）は肺癌細胞に接着しやすい。Ｅ．胸水に脱落した肺癌細胞はＡＤＲＢ３を高発現させた。
【図８３】健常者の末梢血塗抹標本の細胞におけるＡＤＲＢ３の発現の免疫蛍光検出。Ａ．ＡＤＲＢ３は、健常者の好中球において発現され、リンパ球には微量で発現されている。Ｂ．ＡＤＲＢ３は、ナイーブ又は原始Ｔリンパ球（細胞質に大量のＣＤ４又はＣＤ８のリンパ球が含まれる）において大量発現されている。Ｃ．Ｇ２後期と有糸分裂早期にある細胞にはＡＤＲＢ３が高発現され、この期間にある細胞核膜は既に破裂しており、染色体の複製は完了するが、紡錘体が形成されていない。
【図８４】Ａ．乳癌患者の末梢血塗抹標本のＡＤＲＢ３免疫蛍光を行ったところ、顆粒球及び異型リンパ球に大量のＡＤＲＢ３が存在し、右上方は異型リンパ球であり、ＡＤＲＢ３が大量で発現されており、細胞核は顆粒球様の変化が起こった。Ｂ．乳癌患者の顆粒球に大量の足突起が発生し、ＡＤＲＢ３が足突起に付着している。
【図８５】乳癌患者の末梢血塗抹標本のＡＤＲＢ３免疫蛍光。上方はリンパ球であり、ＡＤＲＢ３を高発現させ、ＭＰＯを微量で発現させた。下方は顆粒球であり、ＡＤＲＢ３は顆粒球とリンパ球との接触位置に大量で蓄積して、接着因子のような作用を果たし、免疫シナプスの形成を促進する。顆粒球はリンパ球の骨髄系細胞への分化を誘導した。
【図８６】乳癌患者の末梢血塗抹標本のＡＤＲＢ３免疫蛍光。Ａ．乳癌患者の血液には大量の好中球細胞外ネットワーク（ＮＥＴ）が形成されて、リンパ球（ＭＰＯ陰性）がＮＥＴに接着している。Ｂ．黄色枠内のリンパ球はＭＰＯｄｉｍＡＤＲＢ３ｂｒｉｇｈｔとして示されて、リンパ系前駆細胞又は原始型リンパ球である可能性がある。
【図８７】乳癌患者の血液におけるリンパ球（黄色枠内）はＡＤＲＢ３とＫｉ−６７を高発現させて、増殖期にあり、脱分化が起こり、ナイーブ又は原始リンパ球である。患者のリンパ球機能は減退して、特異的免疫不全は発生したことを示す。
【図８８】乳癌患者の一部のリンパ球はＡＤＲＢ３を高発現させて、Ｋｉ−６７とＭＰＯを少量で発現させ、ナイーブ又は原始リンパ球である。
【図８９】乳癌患者の血液には大量のＤＮＡ断片があり、ＡＤＲＢ３はＤＮＡ断片に付着した。
【図９０】健常者の末梢血塗抹標本の細胞におけるＡＤＲＢ３の免疫蛍光検出−形質芽球の細胞核がＴ細胞より大きく、細胞質内に大量のＡＤＲＢ３が存在する。
【図９１】健常者の末梢血塗抹標本の細胞におけるＡＤＲＢ３の免疫蛍光検出−成熟形質細胞の特徴として細胞質にＣＤ４又はＣＤ８がないが、大量のＡＤＲＢ３が含まれている。
【図９２】健常者の末梢血塗抹標本の細胞におけるＡＤＲＢ３の免疫蛍光検出−ＣＤ１９＋Ｂ細胞膜にＡＤＲＢ３が発現されている。
【図９３】Ａ．緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を有するＡＤＲＢ３は膵臓癌ＳＷ１９９０細胞を殺滅できる。Ｂ．ＡＤＲＢ３プラスミドマップ。
【図９４】Ａ．Ｆｌａｇタグタンパク質を有するＡＤＲＢ３はＭＣＦ７細胞核に入ることができない。Ｂ．ＡＤＲＢ３はＭＣＦ７細胞の微小管、細胞核及びミトコンドリアに局在化されている。
【図９５】ＣｈＩＰ−Ｃｈｉｐ実験チップの走査図である。
【図９６】ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスと正常マウスの腹腔にＬＰＳ  ３０ｍｇ／ｋｇを注射した各群のマウスの生存曲線である。ＡＤＲＢ３−／−マウスの膿毒症死亡率は低下した。
【図９７】ＡＤＲＢ３が阻害されると、アデノウイルスはＡ５４９肺癌細胞を感染できなくなり、ＡＤＲＢ３抗体はｍＴＯＲの第２４４８部位にあるセリンリン酸化を阻害することで、アデノウイルス感染を阻害する作用を果たす。Ａ．上列の図はアデノウイルス感染細胞であり、ｐ−ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８）が有意的に増加して細胞膜に蓄積され、下列の図はＡＤＲＢ３抗体で前処理した細胞であり、アデノウイルス感染を発生させることがない。Ｂ．ＡＤＲＢ３抗体はｐ−ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８）を阻害し、ｍＴＯＲ下流基質４ＥＢＰ１のリン酸化を減少させた。
【図９８】ＡＤＲＢ３とアデノウイルスのいずれも核小体に局在化され、ＡＤＲＢ３はウイルス複製に必要な重要なタンパク質である。
【図９９】Ｂ型肝炎患者の肝細胞の細胞質にはＡＤＲＢ３が増加し、ＡＤＲＢ３抗体はＨＢＶによるＨｅｐＧ２細胞の感染を阻害した。
【図１００】ＡＤＲＢ３／ＡｐｏＥダブルノックアウトマウスとＡｐｏＥノックアウトマウスのアテローム性動脈硬化症プラークの検出。Ａ．ＡＤＲＢ３とＡｐｏＥダブルノックアウトマウスの大動脈がＡｐｏＥ−／−マウスよりも有意的に太い。Ｂ．大動脈のオイルレッドＯ染色；Ｃ．血清炎症性因子のＥＬＩＳＡ検出。
【図１０１】ＡＤＲＢ３抗体は補体活性化を促進する。Ａ．ＡＤＲＢ３抗体は補体Ｃ８とＣ５Ｒ１を増加した。ＬＰＳは内毒素であり、補体誘導用の陽性対照とされる。Ｂ．Ｃ８とＢ３ＡＲの免疫蛍光検出。
【図１０２】ＡＤＲＢ３は血小板膜にある。
【図１０３】臍帯血ＮＫ細胞はＡＤＲＢ３とＣＤ５６を発現させた。
【図１０４】ＮＫ９２細胞はＡＤＲＢ３とＭＰＯを発現させた。
【図１０５】急性心筋梗塞患者の単球はＡＤＲＢ３とＫｉ６７を発現させた。（Ａ）Ｇ１期細胞であって、Ｋｉ６７が比較的少ない。（Ｂ）Ｇ２又はＳ期であって、Ｋｉ６７が比較的多い。
【図１０６】急性冠症候群患者では、心筋トロポニンＴ（ｃＴｎＴ）陽性者の巨核球のＡＤＲＢ３含有量がｃＴｎＴ陰性者より高い。（Ａ）ｃＴｎＴ陽性、（Ｂ）ｃＴｎＴ陰性。
【発明を実施するための形態】
【０２７７】
以下、明細書の図面及び実施例を参照しながら、本発明についてさらに詳細に説明したが、前記実施例は本発明を解釈するためのものに過ぎず本発明の範囲を限定するものではない。
【０２７８】
下記実施例に使用された試験方法について、特に断らない限り、いずれも常法である。使用される材料、試薬等について、特に断らない限り、市販品として入手できる試薬及び材料が使用される。
【０２７９】
実施例１  腫瘍細胞におけるＡＤＲＢ３の局在化の免疫蛍光検出
１、実験方法
乳癌ＭＣＦ７細胞、肺癌Ａ５４９細胞、黒色腫Ａ３７５、膵臓癌ＣＦＰＡＣ１細胞、肝癌ＨｅｐＧ２細胞、神経膠腫Ａ１７２細胞を１０５／ウェルで６ウェルプレートに接種して、内部に無菌カバーグラスを載せて、細胞が付着するまでインキュベートした後、４％ポリオキシメチレンで１０ｍｉｎ固定して、ＰＢＳで３回洗浄した。０．１％  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００で１０分間透過して、３％ＢＳＡで１ｈブロッキングさせ、Ｋｉ−６７／ＡＤＲＢ３／Ｎｕｃｌｅｏｌｉｎ／Ｆｉｂｒｉｌｌａｒｉｎ／Ｈ３Ｋ９ＡＣ／Ｂｒｄｕ／α−ｔｕｂｕｌｉｎ／Ｆｌａｇ等の抗体（１：１００）を滴下し、ミトコンドリア染料としてＭｉｔｏｔｒａｃｋｅｒ、リゾソーム染料としてＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒを用いて、細胞固定前にＢｒｄｕを添加し、ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ  ３０００でｐｃＤＮＡ３−ｆｌａｇ−Ｂ３プラスミドを細胞にトランスフェクションした。ウェットボックスを密閉させて、４℃冷蔵庫に入れて１晩インキュベートした。ＰＢＳを用いて５ｍｉｎ×３リンスして、ＦＩＴＣ標識二次抗体（ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ、１：８００）とＰＥ標識二次抗体（ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ、１：８００）を滴下し、室温で１ｈインキュベートして、ＤＡＰＩ  ０．５μｇ／ｍｌで３ｍｉｎ染色し、ＰＢＳで５ｍｉｎ×３リンスして、５０％グリセリン／ＰＢＳで封入して、レーザー走査共焦点顕微鏡で、５〜７個の視野をランダムに観察して撮影し、Ｆｌｕｏｒｃｈｅｍ  ８９００ソフトウェアを用いて細胞の平均赤色蛍光強度と平均緑色蛍光強度を測定した。
【０２８０】
２、実験結果
図１〜１７に示すように、下記結果は得られた。
（１）Ｋｉ６７／ｎｕｃｌｅｏｌｉｎ／Ｂｒｄｕで染色したところ、Ｇ０期細胞に大量の核小体が存在するが、Ｇ０期核小体の組成タンパク質がＧ１期細胞と異なり、Ｇ１期核小体のタンパク質マーカーでＧ０期細胞の核小体を標識できない。ＡＤＲＢ３は、Ｇ０期（Ｋｉ−６７とＮｕｃｌｅｏｌｉｎは陰性である）ヒト乳癌ＭＣＦ７細胞の核小体において高発現された。図１中、右上にある細胞は増殖能力を有するＧ０期細胞であった。
（２）ＡＤＲＢ３は、Ｇ０期（Ｋｉ−６７陰性）ヒト肺癌Ａ５４９細胞の核小体において高発現された。
（３）ＡＤＲＢ３は、Ｇ０期（Ｎｕｃｌｅｏｌｉｎ陰性）ヒト膵臓癌ＣＦＰＡＣ１細胞の核小体において高発現された。
（４）ＡＤＲＢ３は、ヒト黒色腫Ａ３７５細胞の核小体（Ｆｉｂｒｉｌｌａｒｉｎ陽性）において高発現された。
（５）ＡＤＲＢ３は、ヒト膵臓癌ＰＡＮＣ１細胞のミトコンドリア外膜に局在化された。
（６）ＡＤＲＢ３は、Ａ５４９細胞の紡錘体の両極の中心体と紡錘体の赤道に局在化された。ＡＤＲＢ３は融合細胞の複数の細胞核に存在する。
（７）ＡＤＲＢ３は、ヒト肝癌ＨｅｐＧ２細胞の微小管に局在化された。
（８）ＡＤＲＢ３は、ヒト神経膠腫Ａ１７２細胞の紡錘体の両極の中心体に局在化された。ＡＤＲＢ３は、多倍体細胞の中心体位置に局在化された。
（９）ＡＤＲＢ３は、ＭＣＦ７細胞のリゾソームに局在化された。ＡＤＲＢ３は、Ｇ０期細胞膜におけるタンパク質のチロシンリン酸化を増加して、ＨＥＲ２／ＥＧＦＲ／薬物ポンプ等の膜タンパク質のチロシンリン酸化を促進することで、膜タンパク質を活性化させた。
（１０）ＡＤＲＢ３は、Ｇ２後期ＭＣＦ７細胞の中心体に局在化されて、微小管形成中心の形成を促進した。
（１１）ＡＤＲＢ３は、ＭＣＦ７細胞の液泡外膜に存在して、液泡形成を促進した。ＡＴＰ６Ｖ０Ｄ１は、液泡型ＡＴＰ酵素のＤサブユニットであり、液泡膜に存在する。ＡＤＲＢ３とＡＴＰ６Ｖ０Ｄ１は共局在されており、ＡＤＲＢ３が液泡膜に存在することを示した。
【０２８１】
実施例２  組織マイクロアレイ免疫組織化学方法による腫瘍組織でのＡＤＲＢ３の発現状況の検出
１、本研究では、計１４７９例の患者から、異なる組織由来の１１種類の腫瘍組織マイクロアレイを用いた。（１）非小細胞肺癌組織４２例；（２）生存期間資料のある肺腺癌１５０例；（３）生存期間にある肺扁平上皮癌１５０例；（４）生存期間にある肝癌１８０例；（５）生存期間乳癌１７０例及び生存期間のない乳癌８２例；（６）生存期間にある膵臓癌１７０例；（７）甲状腺乳頭癌６２例；（８）生存期間にある結腸癌９０例；（９）生存期間にある腎臓癌９０例；（１０）生存期間にある食道癌９３例；（１１）生存期間にある胃癌９０例；（１２）生存期間にある直腸癌９０例；（１３）白血病２０例。
２、実験ステップ：（１）パラフィン切片：厚み４μｍ。（２）ベーク：６５℃、３ｈ。（３）水和まで脱パラ：キシレン１０ｍｉｎ×３バット、１００％−１００％−９５％−９５％−９０％−８０％−７０％アルコールそれぞれ５ｍｉｎ、５−１０ｍｉｎ水和した。（４）抗原賦活化：ＰＨ８．０  ＴＲＩＳ−ＥＤＴＡ賦活化液を用いて高圧で賦活化させ、排気弁から排気してから３ｍｉｎかけて、自然冷却させた。（５）３％過酸化水素で１０ｍｉｎインキュベートした。（６）ＰＢＳで５ｍｉｎ×３回浸漬洗浄した。（７）１０％ヤギ血清で１０ｍｉｎブロッキングした。（８）一次抗体（１：１００）を調製した。（９）血清を捨てて一次抗体を加えて、４℃で１晩放置した。（１０）インキュベート終了後、ＰＢＳで５ｍｉｎ×３回浸漬洗浄した。（１１）二次抗体を加えて、室温で３０ｍｉｎインキュベートした。（１２）ＰＢＳで５ｍｉｎ×３回浸漬洗浄した。（１３）ＤＡＢで発色（Ａ液とＢ液の比率１：５０）させて、顕微鏡下で観察したところ、適切に発現されて、バックグラウンドが明瞭になると、終止した。（１４）ヘマトキシリンで１ｍｉｎ重染色して、温水で１５ｍｉｎ青染した。（１５）グラジエントアルコールによる脱水：７０％−８０％−９０％−９５％−９５％−１００％−１００％、それぞれ３秒間；（１６）キシレン透徹化５ｍｉｎ×２バット；（１７）ニュートラルバルサムで封入した。
【０２８２】
３、染色強度判定：
各組織点ごとに６〜８個の高倍視野をランダムに観察し、陽性細胞数が５％を超える場合は、染色陽性症例と決定した。弱陽性は淡黄色（＋又は１）、中等陽性は淡い茶色（＋＋又は２）、強陽性は濃い茶色（＋＋＋又は３）であった。
染色陽性率の判定：
各組織点ごとに６〜８個の高倍視野をランダムに観察し、陽性細胞数が５％を超える場合は、染色陽性症例と決定した。弱陽性は淡黄色（＋又は１）、中等陽性は淡い茶色（＋＋又は２）、強陽性は濃い茶色（＋＋＋又は３）であった。
染色陽性率の判定：
染色強度の異なる３個の視野を高倍率で判読し、各視野ごとに１００個の細胞についてランダムに記録して、１００個の細胞のうち、陽性細胞が占める百分率をＸ１％とし、同様に、別の２個の視野での陽性細胞が占める百分率を観察してＸ２％、Ｘ３％とし、該組織点の最終の染色陽性率をＸ１％、Ｘ２％及びＸ３％の平均値とする。
組織マイクロアレイの各点について採点して、細胞の染色強度と染色細胞が占める面積との両方の積分の和に基づいて判断した。まず染色強度について採点する：０点を無色、１点を淡黄色、２点を淡い茶色、３点を濃い茶色とする。次に陽性細胞が占める百分率について採点する：０点を陰性、＜２５％を１点、２５％〜５０％を２点、＞５０％を３点とする。２種の積分を加算して該点でのスコアを得た。
Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ法によって、癌組織中のＡＤＲＢ３陰性と陽性の患者について生存分析を行い、２群の生存曲線を取得した。Ｌｏｇ  Ｒａｎｋ法により統計的検定を行って、比較して各組の生存曲線の分布が同一であるか否かを決定した。
【０２８３】
４、実験結果
結果は図１８〜２６と表１〜３に示される。表１から明らかなように、乳癌組織におけるＡＤＲＢ３発現は正常乳腺組織（Ｐ＜０．０１）よりも有意的に高かった。表２から明らかなように、肺癌組織におけるＡＤＲＢ３発現は正常肺組織（Ｐ＜０．０１）よりも有意的に高かった。表３から明らかなように、膵臓癌組織におけるＡＤＲＢ３発現正常膵臓組織（Ｐ＜０．０１）よりも有意的に高かった。
【０２８４】
【表２】
2018161125.tif 000004
【０２８５】
【表３】
2018161125.tif 000005
【０２８６】
【表４】
2018161125.tif 000006
【０２８７】
図１８〜２６と表１〜３から、下記実験結果は得られた。
（１）ＡＤＲＢ３タンパク質の陽性発現は主に細胞核に局在化され、少量が細胞質と胞膜に存在する。ＡＤＲＢ３は、乳癌組織では、陽性率が９２．１％（２１０／２２８）であり、そのうち、５６．７％が中等、強陽性であった。隣接乳腺組織では、ＡＤＲＢ３の陽性率が３１．５％（２８／８９）であり、中等陽性が３．６％（１／２８）を占め、強陽性のものがなかった。乳癌組織におけるＡＤＲＢ３発現は正常乳腺組織（Ｐ＜０．０１）より有意的に高かった。ＡＤＲＢ３発現量は乳癌の悪性度と正の相関を示し、細胞の悪性度向上に伴い、ＡＤＲＢ３は徐々に上昇した。病理学的グレードＩの乳癌組織では、陽性率は７３．７％（２８／３８）、グレードIIIの乳癌組織では、陽性率は９７．６％（４０／４１）であり、ＡＤＲＢ３は、病理学的グレードIIIの乳癌組織で高発現されており、グレードＩの乳癌組織（Ｐ＜０．０１）より有意的に高かった。ＡＤＲＢ３発現量は乳癌のステージ（ＡＪＣＣ第六版臨床ステージ）に関連し、腫瘍が末期に近づけるほど、ＡＤＲＢ３の発現は強くなった。１期乳癌組織では、ＡＤＲＢ３陽性率は６５．０％（１３／２０）であった。３期乳癌組織では、陽性率は１００％（６７／６７）であった。ＡＤＲＢ３は乳癌患者の生存率を減少させて、乳癌患者のうち、ＡＤＲＢ３陽性発現者の生存期間がいずれも陰性者より有意的に短かった。１４２例の乳癌患者のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存曲線を分析した結果、癌組織ＡＤＲＢ３陰性患者の生存率は陽性者より有意的により高く、Ｐ＝０．０２５であった。２組の平均生存時間（ｍｅａｎ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）はそれぞれ１５４ヶ月と１２６ヶ月であった。生存率曲線図から分かるように、ＡＤＲＢ３陽性患者の生存率は経時的に徐々に低下し、１７０ヶ月目にアプローチするとき、生存率は約６０％であった。ＡＤＲＢ３陰性患者の生存率低下は陽性者より低速であり、１７０ヶ月目には、生存率はまだ９０％以上であった。リスク量の曲線図からも、経時的に延長する傾向も明らかであり、ＡＤＲＢ３陽性患者の死亡リスクは高くなり、１７０ヶ月目になると、約初期（０ヶ月目）の５倍になった。それに対して、ＡＤＲＢ３陰性患者の死亡リスクは陽性者より低く、１７０ヶ月目になると、初期の１倍未満であった。癌組織ＡＤＲＢ３とＫｉ６７の相関係数は０．２９６（Ｐ＝０．０２）であり、顕著な線形正相関関係を持っている。
（２）肺癌組織におけるＡＤＲＢ３発現は正常肺組織（Ｐ＜０．０１）よりも有意的に高かった。ＡＤＲＢ３発現が多いほど、生存期間は短縮された。Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存分析を行った結果、肺癌組織ＡＤＲＢ３弱陽性患者の生存率は強陽性患者よりも有意的に高く、Ｐ＝０．０３８であった。ＡＤＲＢ３弱陽性患者の生存期間中央値は８１ヶ月であり、強陽性患者の生存期間中央値は５０ヶ月であった。癌組織ＡＤＲＢ３レベルと肺癌の急速悪化は悪い予後に直接繋がる。ＡＤＲＢ３抗体はＡＤＲＢ３の癌での発現を減少させ、肺癌転移患者の治療に利用できる。
（３）膵臓癌組織におけるＡＤＲＢ３発現は隣接組織（Ｐ＜０．０１）よりも有意的に高く、癌組織ＡＤＲＢ３陰性患者（０）の生存率は陽性者（１）よりも有意的に高く、Ｐ＝０．０１９であった。陰性患者の平均生存時間は４３．６ヶ月、陽性患者は２９．４ヶ月であった。
（４）結腸癌組織におけるＡＤＲＢ３発現は正常結腸組織（Ｐ＝０．０００１）より有意的に高かった。
（５）肝細胞癌組織におけるＡＤＲＢ３発現量は年齢及び病理学的グレードと正の相関を示し、高齢であるほど、悪性度が高まり、ＡＤＲＢ３タンパク質が多くなる。５０歳以上の肝癌患者癌組織におけるＡＤＲＢ３発現量は隣接組織よりも有意的に高く、Ｐ＝０．０４であった。１６２例の肝細胞癌患者のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存分析結果から分かるように、癌組織ＡＤＲＢ３陰性患者の生存率は陽性者より有意的に高く、Ｐ＝０．０３８であった。ＡＤＲＢ３陰性患者の生存期間中央値は３７ヶ月、陽性者の生存期間中央値は２５ヶ月であった。
（６）急性リンパ球白血病再発患者では、骨髄顆粒球の細胞質内に密な粗面小胞体が大量含まれ、ＡＤＲＢ３とＫｉ−６７が小胞体に付着して、ＡＤＲＢ３とＫｉ−６７含有量が著しく増加して、治療寛解者より有意的に高かった。
（７）腎臓癌、甲状腺癌、直腸癌、食道癌や胃癌の癌組織のいずれでのＡＤＲＢ３発現も隣接組織より高かった。
【０２８８】
実施例３  異なるタイプの白血病患者の骨髄塗抹標本細胞におけるＡＤＲＢ３の発現の免疫蛍光検出
１、実験方法は実施例１と同様である。
２、結果は図２７〜３３に示された。
（１）ミエロペルオキシダーゼ（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ、ＭＰＯ）は、好中球のマーカータンパク質であり、ＡＤＲＢ３は健常者の好中球に発現されているが、リンパ球には発現されなかった。好中球細胞質内のＡＤＲＢ３はコーン状構造を形成して細胞核に入り、ＡＤＲＢ３による通路が細胞外の物質（たとえばウイルス）の細胞核への進入を促進して、ＡＤＲＢ３を遮断し、ウイルスが細胞核に入ることを阻害した。Ｂリンパ球白血患者では、ＡＤＲＢ３は白血病細胞と好中球のいずれにも発現され、ＡＤＲＢ３によるＢリンパ球癌化の誘導が示されている。白血病細胞におけるＡＤＲＢ３も細胞核に連通する通路を形成した。
（２）グラノサイト（注射用組換えヒト顆粒球コロニー刺激因子）を注射した健常者の骨髄塗抹標本についてのＡＤＲＢ３とＭＰＯ染色。顆粒球コロニー刺激因子は、一般的に増殖期にある顆粒球の増殖を刺激し、ＡＤＲＢ３が増殖期にある未成熟顆粒球において高発現されることは、ＡＤＲＢ３が顆粒球の増殖を刺激するとともにその分化・成熟を阻害することを示した。顆粒球コロニー刺激因子の作用下で、リンパ球（ＭＰＯ陰性）でのＡＤＲＢ３の発現は、ＡＤＲＢ３が誘導的に発現されて、リンパ球の増殖と分化を調節する作用を有することを示した。
（３）急性Ｂリンパ球白血病の治療後再発患者の骨髄塗抹標本についてのＡＤＲＢ３及びＭＰＯ染色。白血病治療後再発患者の顆粒球と白血病細胞のいずれでも、ＡＤＲＢ３はい高発現であり、大量のＡＤＲＢ３を含有する顆粒球はＢリンパ球白血病を再発させる要因であり、ＡＤＲＢ３＋顆粒球は、Ｇ０期の白血病細胞が増殖期に入ることを促進して、再発を引き起こした。治療前に比べて、治療後の急性Ｂリンパ球白血病患者の顆粒球と白血病細胞におけるＡＤＲＢ３発現は低下した。ＡＤＲＢ３は顆粒球（抗原提示細胞）とリンパ球との接触部位に集まり、細胞間接着複合体の安定性を向上させて、阻害性免疫シナプスの形成を形成した。ＡＤＲＢ３は顆粒球と白血病細胞の融合を誘導して、癌細胞の表現型を変え、癌細胞の悪性度を高めて、癌細胞の薬剤耐性を発生させた。リンパ球内には、ＡＤＲＢ３はコーン状構造になり細胞核に入り、リンパ球のエピジェネティックな修飾と遺伝子発現プロファイルに悪影響を及ぼして、増殖を促進した。
（４）急性Ｂリンパ球白血病治療後再発患者の骨髄塗抹標本についてのＡＤＲＢ３とＫｉ−６７染色。顆粒球にはＡＤＲＢ３とＫｉ−６７が高発現され、２つのタンパク質は細胞質中に共局在化され、それから示されるように、顆粒球リボソームの機能が活発であり、大量の細胞成長因子を合成できる。成長因子を放出することにより、Ｇ０期のリンパ球と腫瘍細胞が増殖期に入ることが刺激された。ＭＤＳＣはＡＤＲＢ３とＫｉ−６７共陽性顆粒球であり、Ｔ細胞、ＮＫ細胞等の免疫細胞による白血病細胞とほかの腫瘍細胞の除去を阻害できる。白血病治療後に再発された患者の骨髄及び末梢血では、ＡＤＲＢ３＋  Ｋｉ−６７＋顆粒球は著しく増加し、それは、該顆粒球は白血病再発を引き起こすキーであることが示された。
（５）治療後に寛解した急性単球白血病（Ｍ５）の患者の骨髄塗抹標本の顆粒球も白血病細胞もＡＤＲＢ３を発現させた。
（６）ＡＤＲＢ３は、急性骨髄性白血病患者の増殖期にある顆粒球（Ｋｉ−６７陽性）において高発現された。
【０２８９】
実施例４  ハイブリドーマ細胞株の製造、ＡＤＲＢ３抗体の精製、抗体配列決定及びヒト化
１、ヒトＡＤＲＢ３タンパク質断片（全長を含む）でマウスを免疫して、使用される抗原エピトープの一部は、図３４Ａに示されるように、ヒトＡＤＲＢ３全長タンパク質（１−４０８位のアミノ酸残基）、ＡＤＲＢ３タンパク質のＮ末端の断片（１−１５５位のアミノ酸残基）、ＡＤＲＢ３タンパク質のＣ末端の断片（１５６−４０８位のアミノ酸残基）、ＡＤＲＢ３タンパク質におけるロイシンジッパー断片（２９６−３１７  ａａ）、核局在化配列（ＮＬＳ）（３５１−３６９  ａａ）、Ｅ１（ＡＤＲＢ３の１−３６位のアミノ酸残基）、Ｅ２（ＡＤＲＢ３の１０１−１１１位のアミノ酸残基）、Ｉ２（ＡＤＲＢ３の１３４−１５５位のアミノ酸残基）、Ｅ４（ＡＤＲＢ３の３１５−３２６位のアミノ酸残基）、Ｉ４（ＡＤＲＢ３の３４８−４０８アミノ位の酸残基）等を含むが、これらに制限されない。フロイント完全アジュバントを加えて、ＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下注射し、初回免疫２１日間後、尾静脈からブースター免疫を行った。４日間後、脾細胞懸濁液を製造して骨髄腫細胞ＳＰ２／０と細胞融合を行い、ＨＡＴ選択によりハイブリドーマ細胞を選別して、ハイブリドーマをクローニングし、最終的に、それぞれのＡＤＲＢ３タンパク質断片に複数のハイブリドーマ細胞株を付与し、ＡＤＲＢ３抗体を発生可能なハイブリドーマ細胞株を計３０個余りスクリーニングした。エライザ試験（ＥＬＩＳＡ）、タンパク質免疫ブロッティング（図３４Ｂ）及び免疫蛍光試験によって抗体の特異性、親和性を検出した。Ｔｒｉｚｏｌでハイブリドーマ細胞を溶解した後、ＲＮＡを抽出して、抗体の軽重鎖配列決定を行った。ヒト化抗体の軽鎖プラスミド（核酸とタンパク質の配列は図３５に示されるが、図３５に制限されない）と重鎖プラスミド（核酸とタンパク質の配列は図３６に示されるが、図３６に制限されない）を構築した。ＢＰｆｅｃｔｉｎ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ、Ｈ：Ｌ＝１：１を用いて、トランスフェクション試薬とプラスミドの比３：１で、ＨＥＫ２９３をトランスフェクションして、バイオリアクターで培養し、大量の抗体を生産した。
マウス腹水からの抗体収集：
１０〜１１週齢のＢａｌｂ／ｃマウスに、完全免疫アジュバントを０．１ｍｌ／匹で腹腔内注射して、６日間後、ハイブリドーマ細胞を５＊１０６腹腔内注射して、細胞接種８日間目から、腹水を１日に１回抜き始めた。３０００ｒｍｐで１０ｍｉｎ処理して、腹水上澄みを−８０℃で保存した。硫酸アンモニウムで濃縮させた後、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇ  アフィニティークロマトグラフィーカラムにより精製して、抗体精製する標準工法に従って精製溶出を行い、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで純度同定を行った。定量にはＵＶ定量が使用された。
【０２９０】
実施例５    ＭＴＴ実験を用いたＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の抗癌効果検出
１、実験のステップ：
（１）対数増殖期にある接着腫瘍細胞をパンクレアチンで消化した後、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ  ｌ６４０培地で５０００個／ｍｌの細胞懸濁液を調製し、１ウェルに２００μｌ接種するように９６ウェル培養板に接種し、３７℃、５％ＣＯ２で２４ｈ培養した。
（２）実験群では、濃度の異なるＡＤＲＢ３モノクローナル抗体を含む培地を用い、対照群では、等体積の溶媒を含む培地を用い、１群ごとに３〜５個の平行ウェルを設置して、３７℃、５％ＣＯ２で４〜５ｄ培養した。
（３）上澄み液を捨てて、新たに調製したＭＴＴを０．５ｍｇ／ｍｌ含む無血清培地を１ウェルあたりに２００μｌ添加した。３７℃で４ｈ培養し続けた。上澄みを慎重に捨てて、２００  μｌ  ＤＭＳＯを加えて、小型超音波振とう装置で均一に混合した後、マイクロプレートリーダーにおいて５７０ｎｍ試験波長、４５０ｎｍ参照波長で光学濃度値を測定した。
２、実験結果は図３７Ａ〜３９と図５２〜５６に示された。
ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、ヒトＭＣＦ７乳癌細胞、ＳＷ１９９０及びＣＦＰＡＣ１膵臓癌細胞、Ａ５４９肺癌細胞、Ｈ１２９９肺癌細胞、ＨｅｐＧ２肝癌細胞、ＨＣＴ１１６結腸癌細胞、ＨＬ−６０前骨髄球性白血病細胞、Ｕ２５１神経膠腫細胞の活性を用量依存的に低下させた。対照群に比べて、＊Ｐ＜０．０５、＃Ｐ＜０．０１であった。
【０２９１】
実施例６  ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体によるヌードマウス移植腫瘍増殖の阻害
１、実験方法
５週齢の雌性ヌードマウス１匹ごとに、乳腺に接近する位置にヒト腫瘍細胞又はマウス４Ｔ１乳癌細胞を５＊１０６細胞皮下注射した。ヒト腫瘍細胞にはＭＣＦ７、ＣＦＰＡＣ１、ＡＳＰＣ１、ＳＷ１９９０、Ａ３７５、Ａ５４９細胞が含まれる。８〜１０日間後、移植腫瘍が約１００ｍｍ３になると、抗体群と対照群を1群に８匹のようにランダムに分けた。抗体群にＡＤＲＢ３抗体を、３日間おきに、用量範囲１〜１０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射して、腫瘍の長さ、高さ及び幅を測定した。対照群にマウスＩｇＧを腹腔内注射した。対照群の腫瘍体積が動物倫理委員会により許可された最大体積になると、目の周りから採血して、頚椎脱臼でヌードマウスを殺し、移植腫瘍と脾臓を取り、腫瘍重量、脾臓重量及び体重を秤量した。脾臓指数＝脾臓重量（ｍｇ）／マウス体重（ｇ）から脾臓指数を算出した。
２、実験結果は図３７、図４０〜５１に示された。
（１）ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体は、ヌードマウスＭＣＦ７乳癌細胞移植腫瘍の増殖を阻害し、対照群に比べて、＊Ｐ＜０．０５、＃Ｐ＜０．０１であった。ＡＤＲＢ３抗体群ｎマウスの脾臓は対照群動物よりも有意的に大きく、ＡＤＲＢ３抗体は脾臓指数を増加して、免疫器官の成熟を促進する機能を有する。移植腫瘍のＨＥ染色から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体は移植腫瘍の好中球浸潤を減少させた。脾臓組織のＨＥ染色を行ったところ、対照群の脾臓内に構造境界が不明瞭で、白脾髄と赤脾髄に対する顕著な境界線が見られず、大量の好中球が観察できる。ＡＤＲＢ３抗体は、脾小節と胚中心を増大して、脾臓での好中球の数を減少させた。免疫組織化学法により分かるように、ＡＤＲＢ３抗体は、移植腫瘍における腫瘍細胞と浸潤性好中球ＡＤＲＢ３、Ｐ６２、Ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１、ＭＰＯ、Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  Ｅｌａｓｔａｓｅ、ｐ−Ｒｂ（Ｓ７８０）、ＣＤＫ３及びＩＬ−６の発現を減少させて、ＣＤＫ３の活性を低下させた。
（２）ＡＤＲＢ３抗体は、ヌードマウスＣＦＰＡＣ１膵臓癌細胞移植腫瘍の成長を減少させ、対照群に比べて、＊ｐ＜０．０５であった。ＡＤＲＢ３抗体は、ＣＦＰＡＣ１細胞移植腫瘍の重量を低減させ、ＣＦＰＡＣ１移植腫瘍ヌードマウスの体重に影響を与えず、ＡＤＲＢ３抗体は脾臓指数を増加した。ＨＥ染色から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体は、移植腫瘍の好中球浸潤を減少させた。免疫組織化学法により分かるように、ＡＤＲＢ３抗体は、移植腫瘍における腫瘍細胞と浸潤性好中球ＡＤＲＢ３、Ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１、Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  Ｅｌａｓｔａｓｅ、ｐ−Ｒｂ（Ｓ７８０）、ｐ−ｍＴＯＲ（Ｓ２４８１）、Ｒｉｃｔｏｒ、ＨＫ２、ＣＤＫ３及びＩＬ−６の発現を減少させた。
（３）ＡＤＲＢ３抗体は、ヌードマウスＡＳＰＣ１膵臓癌細胞移植腫瘍の成長を阻害し、対照群に比べて、＊Ｐ＜０．０５であった。ＡＤＲＢ３抗体は、ＡＳＰＣ１細胞移植腫瘍の重量を減少させるが、ＡＳＰＣ１移植腫瘍ヌードマウスの体重に影響を与えない。
（４）ＡＤＲＢ３抗体は、ＳＷ１９９０膵臓癌細胞移植腫瘍の増殖を阻害して、ＳＷ１９９０アポトーシス率を増加し、対照群に比べて、＊Ｐ＜０．０５であった。ＡＤＲＢ３抗体は、担癌マウスの好中球の数と好中球−リンパ球比率（ＮＬＲ）を低下させ、対照群に比べて、＊Ｐ＜０．０５であった。ＡＤＲＢ３抗体は脾臓指数を増加した。
（５）ＡＤＲＢ３抗体は、Ａ３７５黒色腫細胞移植腫瘍の増殖を阻害し、対照群に比べて、＊Ｐ＝０．０３２、＃Ｐ＝０．００５であった。ＡＤＲＢ３抗体は、Ａ３７５移植腫瘍ヌードマウスの末梢血ＭＳＤＣ数を減少させた。ＨＥ染色と免疫組織化学法より分かるように、対照群のＡ３７５移植腫瘍には大量の好中球が浸潤しており、且つ好中球にＰＤ−Ｌ１が高発現され、ＡＤＲＢ３抗体はＡ３７５移植腫瘍の好中球浸潤を減少させた。免疫組織化学法より分かるように、ＡＤＲＢ３抗体は、Ａ３７５移植腫瘍細胞と浸潤している好中球ＡＤＲＢ３、ＩＬ−６、ＭＰＯ、Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  Ｅｌａｓｔａｓｅ、ＰＤ−Ｌ１、ｐ−Ｒｂ（Ｓｅｒ  ７８０）、ｐ−ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ  ２４８１）、Ｒｉｃｔｏｒ、ＨＫ２及びＣＤＫ４の発現を阻害した。抗体治療後、移植腫瘍が浸潤している好中球にはＰＤ−Ｌ１発現が無かった。ＥＬＩＳＡで血清中の炎症性因子を検出したところ、ＡＤＲＢ３抗体はマウス血清中のＩＬ−１０濃度を増加して、ＩＬ−６、ＶＥＧＦ及びＭＰＯ濃度を減少させた。ＡＤＲＢ３抗体は、ＡＤＲＢ３の発現と活性を特異的に阻害することによって、好中球媒介性炎症反応を阻害して、腫瘍の微小環境を変え、さらに抗癌作用を果たす。
（６）ＡＤＲＢ３抗体は、脾臓指数を増加して、ヒト肺癌Ａ５４９細胞移植腫瘍の増殖を阻害し、対照群に比べて、＊Ｐ＜０．０５であった。ＨＥ染色から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体は移植腫瘍の好中球浸潤を減少させた。免疫組織化学法より分かるように、ＡＤＲＢ３抗体は、移植腫瘍細胞と浸潤性好中球ＡＤＲＢ３、ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１、Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  Ｅｌａｓｔａｓｅ、ｐ−Ｒｂ（Ｓｅｒ  ７８０）、ｐ−ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ  ２４８１）、Ｒｉｃｔｏｒ、ＨＫ２、ＣＤＫ３及びＩＬ−６の発現を減少させた。
（７）ＡＤＲＢ３抗体は、マウス４Ｔ１乳癌細胞移植腫瘍の増殖を減少させて、４Ｔ１細胞の肝臓転移を阻害し、対照群では、８匹のマウスはすべ深刻な肝転移が発生し、抗体群では、肝臓転移巣が対照群より有意的に少なかった。ＡＤＲＢ３が４Ｔ１細胞の肝転移を促進するため、ＡＤＲＢ３の遮断により肝臓転移が阻害できる。ＡＤＲＢ３抗体は脾臓指数を増加して、血液の好中球数を減少して、ＷＢＣに占めるリンパ球の比率を向上させ、ＮＬＲを低下させた。ＮＬＲは全身性炎症反応の指標であり、ＮＬＲの上昇は腫瘍患者の予後不良に対して独立リスク要因であった。ＡＤＲＢ３抗体によるＮＬＲの低下から、本抗体は炎症を阻害して患者予後を改善できることが分かった。
【０２９２】
実施例７    ＡＤＲＢ３特異的キメラ抗原受容体で改変されたＴリンパ球による、ＳＷ１９９０細胞（Ａ１）とＨ１２９９細胞（Ｃ３）の殺滅
１、実験方法
ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体は、抗ヒトＡＤＲＢ３の一本鎖抗体、ＣＤ８ヒンジ領域及び膜貫通領域、ＣＤ１３７（４−１ＢＢとも呼ばれる）の細胞内シグナル領域、ＣＤ３ζの細胞内シグナル構造を直列接続してなるものである。ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体の配列決定結果に基づき、キメラ抗原受容体のレンチウイルス発現ベクターを構築して、レンチウイルスをパッケージングした。初代Ｔ細胞を分離して、上記レンチウイルスで組換えＣＡＲ−Ｔ細胞を構築した。標的細胞であるＳＷ１９９０細胞（Ａ１）とＨ１２９９細胞（Ｃ３）を、５００００個／ウェルの濃度で９６ウェルプレートに接種して１晩培養し、次に図示したエフェクター／ターゲット比（Ｅ／Ｔ）でＣＡＲ−Ｔ細胞を加え、６時間共培養して、遠心後、上澄みを取り、ＬＤＨキットで検出した。ＣＡＲ−Ｔ未添加の標的細胞ウェルを溶解してＭａｘｉｍａｌ  ｌｙｓｉｓとし、未溶解ウェルをｍｉｎｉｍａｌ  ｌｙｓｉｓとした。
２、実験結果
Ｈ１２９９細胞の中央値効果Ｅ／Ｔは２：１、ＳＷ１９９０細胞の中央値効果Ｅ／Ｔは２．５：１（図５７）であった。ＡＤＲＢ３キメラ抗原受容体で改変されたＴリンパ球は、ＡＤＲＢ３陽性腫瘍を殺滅することができ、肺癌と膵臓癌の治療に対して有用であった。抗ＡＤＲＢ３  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、腫瘍細胞と腫瘍内環境での炎症性細胞（好中球、Ｔｒｅｇ及びマクロファージ）に対するものであるため、腫瘍細胞にＡＤＲＢ３が発現されなくても、腫瘍環境細胞を阻害することで抗癌作用を果たすことができ、汎用型ＣＡＲ−Ｔ細胞と言え、すべての悪性腫瘍や炎性疾患の治療に適用できる。
【０２９３】
実施例８    ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウス実験
１、実験方法
１６週齢のＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスと正常ＦＶＢマウスを雄性としてそれぞれ１５匹準備して、末梢血を採血して血液ルーチン検査、血液生化学を行った。マウスＴＨ１７サイトカイン抗体チップ（ＱＡＭ−ＴＨ１７−１、Ｑｕａｎｔｉｂｏｄｙ（登録商標）Ａｒｒａｙ  Ｇｌａｓｓ  Ｃｈｉｐ）で血清サイトカインを検出して、レーザースキャナーＡｘｏｎ  ＧｅｎｅＰｉｘでシグナルを走査した。骨密度、脂肪及び筋肉含有量を検出した。１０、３０、７０週齢のＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスをそれぞれ８匹準備して、心臓Ｂスキャン超音波検査により心機能を検出した。末梢血液細胞と脾細胞について、異なるサブタイプのＴ細胞とマクロファージの数及び比率をフローサイトメトリーにより検出した。心臓ＣＤＫ３、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｐ−ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８）、ｐ−ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４８１）、ｐ−４ＥＢＰ１（Ｔ３７／４６）について免疫組織化学的検出を行った。水迷路試験によってマウスの学習記憶能力を研究した。
１２週齢のＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスと正常ＦＶＢマウスをそれぞれ１０匹準備して、いずれも雌性とし、１０６マウス乳癌細胞４Ｔ１を皮下接種して、移植腫瘍形成後、３日間おきに、腫瘍の長さ、幅及び高さを測定した。マウス乳房腫瘍ウイルスを有するＭＭＴＶ−ＰｙＶＴマウスからＡＤＲＢ３遺伝子をノックアウトして、雌マウスの乳癌発生状況を観察した。
２、実験結果は図５８〜６６に示された。
マウスのＡＤＲＢ３遺伝子をノックアウトして、外因性腫瘍細胞の腫瘍形成状況を検出したところ、マウスの体の免疫系が改善されて、癌細胞を殺滅できることが見出された。４Ｔ１乳癌細胞は、正常ＦＶＢマウスの体内で腫瘍を形成するが、ＡＤＲＢ３−／−マウスでは腫瘍形成が出来なかった。高齢ＡＤＲＢ３−／−マウスの自発腫瘍の発症率が著しく減少された。ＭＭＴＶ−ＰｙＶＴマウスからＡＤＲＢ３遺伝子をノックダウンした後、雌マウスの乳癌発生率は著しく減少された。ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスは、寿命が延長して、自己免疫疾患と癌に罹患することがない。
（１）ＡＤＲＢ３−／−マウスの末梢血好中球は著しく減少して、リンパ球の百分率は低下し、ＮＬＲは低下して、赤血球の平均体積は比較的低かった。ＡＤＲＢ３は好中球と単球の数を増加するとともに、リンパ球の数に影響を与えることがなく、好中球数の増加によりＮＬＲを低下させて、白血球の総量を向上させた。ＡＤＲＢ３は、好中球と単球の百分率を増加して、リンパ球の百分率を減少させた。
（２）ＡＤＲＢ３−／−マウスの筋肉量は増加した。ＡＤＲＢ３ノックアウトマウスの骨密度と骨ミネラル含有量はいずれも増加した。
（３）ＡＤＲＢ３−／−マウスは、血清中炎症サイトカイン、たとえばＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＴＧＦ−β、ＭＩＰ−３等を低下させ、ＩＬ−１０を増加した。ＥＬＩＳＡで血清中炎症性因子を検出したところ、ＡＤＲＢ３−／−マウスの血清ＩＬ−１０濃度は高くなり、ＩＬ−６、ＶＥＧＦ及びＭＰＯの濃度は低下した。
（４）ＡＤＲＢ３−／−マウスの脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞とＴｒｅｇ細胞はいずれも著しく低下した。
（５）ＡＤＲＢ３−／−マウスについて心臓のＢ超音波検査を行った。その結果、高齢ＡＤＲＢ３−／−マウスの心機能はＡＤＲＢ３野生型高齢マウスより高く、ＡＤＲＢ３−／−マウスの心機能は加齢に伴いしく低下しなかった。対照群に比べて、ＡＤＲＢ３−／−マウスの心筋にはＣＤＫ３、ｃｙｃｌｉｎＤ１発現は増加し、ｍＴＯＲＣ２／４ＥＢＰ１経路は活性化されて、心筋細胞のリボソームは増加した。
（６）腫瘍細胞と顆粒球は、ＡＤＲＢ３を発生させて血液へ放出することでＴリンパ球を阻害し、生体の特異的免疫を破壊して、癌細胞成長を促進するものである。ＡＤＲＢ３ノックアウトによる抗癌効果は、免疫系の抗癌活性を高めることによるものである。ＡＤＲＢ３−／−マウスは、好中球とＴｒｅｇ細胞のいずれも減少して、ＣＤ８＋Ｔ細胞が増加するため、生体の免疫監視、防御機能が強化された。
（７）ＡＤＲＢ３−／−マウスの学習記憶能力はＡＤＲＢ３野生型マウスより高かった。
【０２９４】
実施例９  異なる濃度のＡＤＲＢ３抗体を用いたＭＣＦ−７／Ａ５４９／ＳＷ１９９０細胞の処理
１、実験方法
異なる濃度のＡＤＲＢ３抗体でＭＣＦ−７／Ａ５４９／ＳＷ１９９０細胞を処理し、対照群では、マウスＩｇＧを用いた。２４ｈ後、細胞を溶解して、総タンパク質を抽出した。ＢＣＡ法でタンパク質の濃度を測定し、タンパク質１０ｕｇを１０％  ＳＤＳ  ＰＡＧＥで分離した後、タンパク質をＰＶＤＦ膜に移して、４％スキムミルクで１ｈブロッキングして、一次抗体をインキュベートし、４℃で１晩放置して、二次抗体を１ｈインキュベートし、ＥＣＬ発色を行い、実験を３回繰り返した。Ｆｌｕｏｒｃｈｅｍ  ８９００ソフトウェアでタンパク質バンドのグレイスケールを分析して、目的バンドと内部基準バンド（ＧＡＰＤＨ又はａｃｔｉｎ）との比を算出した。ヌードマウス移植腫瘍組織について、免疫組織化学的検出を行って、ＡＤＲＢ３シグナル伝達経路における関連タンパク質ｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、ｐ−ＡＫＴ（Ｓ４７３）、ｐ−４ＥＢＰ１（Ｔ３７／４６）、ＨＫ２、Ｐ６２、Ｒａｂ７、ＳＩＲＴ１、ＡＤＲＢ３、ＶＤＡＣ、Ｒｈｅｂ発現を測定した。
２、実験結果は図６７〜７４に示された。
（１）ＡＤＲＢ３抗体は、ＭＣＦ−７／Ａ５４９／ＳＷ１９９０細胞ＣＤＫ４、ｎｕｃｌｅｏｌｉｎ、ＨＥＲ２及びｐＲｂの発現を減少させて、Ｐ１６発現を増加した。
（２）ＡＤＲＢ３抗体は、ＭＣＦ−７／Ａ５４９／ＳＷ１９９０細胞Ｒｈｅｂ、ｍＴＯＲ、ｐ−ｍＴＯＲ（Ｓ２４８１）、ＨＫ２及びＰ６２を用量依存的に減少させた。
（３）ＡＤＲＢ３抗体（５Ｄ１）は、ＭＣＦ−７／Ａ５４９／ＳＷ１９９０細胞ＡＤＲＢ３、ｐ−Ｒｂ（Ｓ７８０）及びＧＡＰＤＨを減少させた。４Ｇ７はＡＤＲＢ３、ｐ−Ｒｂ（Ｓ７８０）を増加した。２種の抗体はいずれもＧＡＰＤＨとＣＤＫ４を低下できる。
（４）ＡＤＲＢ３抗体は、ＭＣＦ−７／Ａ５４９／ＳＷ１９９０細胞ＰＤ−Ｌ１、ＣＤＫ３の発現を減少させた。
（５）ｓｉＲＮＡを設計してＰ６２をサイレンシングしたところ、ＭＣＦ−７／Ａ５４９／ＳＷ１９９０細胞ＡＤＲＢ３とＲａｂ７の発現が減少した。ラパマイシンはＡＤＲＢ３発現を増加した。Ｐ６２発現サイレンシング後、ＡＤＲＢ３はｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、ＳＩＲＴ１及びＡＤＲＢ３の発現を向上出来なくなった。
（６）ＡＤＲＢ３抗体は、ヌードマウスＭＣＦ−７移植腫瘍におけるｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、ｐ−ＡＫＴ（Ｓ４７３）、ｐ−４ＥＢＰ１（Ｔ３７／４６）、ＨＫ２、Ｐ６２、Ｒａｂ７、ＳＩＲＴ１、ＡＤＲＢ３、ＶＤＡＣ、Ｒｈｅｂを減少させて、Ｐ５３を増加した。
（６）ＡＤＲＢ３抗体は、ヌードマウスＭＣＦ−７移植腫瘍におけるＨＫ２、Ｐ６２、ｐ−ｍＴＯＲ（Ｓ２４８１）、Ｒｉｃｔｏｒ、ＩＬ−６を減少させた。
（８）ＡＤＲＢ３作動後、ＭＣＦ−７／Ａ５４９／ＳＷ１９９０細胞の下流シグナル伝達経路におけるｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、４ＥＢＰ１、ＣＥＮＰＡ、Ｐ６２、Ｄｒｐ１、ＡＫＴ及びＡＭＰＫ等のタンパク質のリン酸化が増加した。
【０２９５】
実施例１０  ミトコンドリア自食検出
１、実験方法
最終濃度２０ｎｇ／ｍｌのＡＤＲＢ３抗体でＭＣＦ−７細胞処理し、２ｈ又は８ｈ後、細胞を固定して、Ｍｉｔｏｔｒａｃｋｅｒでミトコンドリアを染色し、免疫蛍光によりＬＣ３ＩＩ発現を検出し、レーザー走査共焦点顕微鏡で観察した。ＪＣ−１（１０ｕｇ／ｍｌ）で１５ｍｉｎ染色して、生きている細胞のまま、共焦点顕微鏡下で観察して、励起光の波長を５１０ｎｍと５８０ｎｍとした。ＲＯＳ染料Ｈ２ＤＣＦＤＡ  １０ｕＭで、１５ｍｉｎ染色して、共焦点顕微鏡下で観察した。４８８ｎｍ波長の蛍光を利用して細胞内リポフスチンを観察した。Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ、  Ｐ−ｇＰ）基質５−ＣＦＤＡ−ＡＭ、１０ｕＭで細胞を標識して、励起光波長５１０ｎｍで、共焦点顕微鏡により観察した。ローダミン１２３（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  １２３）で細胞染色を行って、フローサイトメーターを用いて検出した。β−ガラクトシダーゼを用いてその場で染色して、ＭＣＦ７細胞中のβ−ガラクトシダーゼの発現を検出した。
２、実験結果は図７５〜７８に示された。
作用時間の延長に伴い、ＡＤＲＢ３抗体群では、ＬＣ３ＩＩ発現は著しく増加した。ＡＤＲＢ３抗体は、ミトコンドリアのオートファゴソームの除去を阻害することにより、オートファゴソームを細胞に蓄積させ、ＡＤＲＢ３はオートファゴソームの除去を促進して、ミトコンドリア自食過程を順調に発生させた。ＡＤＲＢ３抗体は、ミトコンドリア膜電位を低下させ、その表現としてＪＣ１染色時に緑色になった。ＡＤＲＢ３抗体は、細胞内の活性酸素種、リポフスチン及びβ−ガラクトシダーゼを増加した。ＡＤＲＢ３抗体は、自食を遮断して、オートファゴソーム、損傷したミトコンドリアやリポフスチン等の代謝廃棄物を細胞内に蓄積させることで、細胞活性を低下させ、細胞老化又はアポトーシスを促進した。５−ＣＦＤＡ染色をしたところ、細胞には大量の糸状シナプスが成長したことが見出され、それによっても細胞老化が示されている。ＡＤＲＢ３抗体は、ＭＣＦ−７細胞内の５−ＣＦＤＡとローダミン１２３の含有量を増加し、それは、ＡＤＲＢ３抗体によりＭＣＦ−７細胞の多剤耐性が逆転されることを示した。
【０２９６】
実施例１１    ＡＤＲＢ３抗体による腫瘍組織の糖代謝減少
１、実験方法
ＡＤＲＢ３抗体で５週間処理後、ＭＣＦ−７担癌マウスごとに、尾静脈から１８Ｆ−ＦＤＧを１ミリキュリー（ｍＣｉ）注射して、５０分間後、３％イソフルランと酸素ガス（１Ｌ／ｍｉｎ）の混合ガスで麻酔し、仰臥位にしてＰＥＴ／ＣＴ走査を行って、画像を動的に収集し、反復法によって１８Ｆ−ＦＤＧ腫瘍代謝の現像画像を再建し、Ｆｌｕｏｒｃｈｅｍ  ８９００ソフトウェアを用いて再建画像における標的組織（Ｔ）と隣接正常組織（非標的組織Ｎ）とのグレイスケール値を分析して、Ｔ／Ｎ値を算出した。移植腫瘍組織を氷で予冷されたＲＩＰＡ溶解に入れて、高速均質化させて、対応したキットで組織中のＡＴＰ含有量とヘキソキナーゼ（ＨＫ）活性を検出した。
２、実験結果から（図７９）明らかなように、対照群の移植腫瘍部位には放射性取り込みが見られ、ＡＤＲＢ３抗体群の移植腫瘍部位には放射性が対照群よりも約６０％（０．７８±０．４４  ｖｓ  １．９６±０．９４、Ｐ＜０．０１）減少した。ＡＤＲＢ３抗体は、腫瘍組織のＡＴＰ発生量を減少させた。ＡＤＲＢ３抗体は、腫瘍組織ＨＫ活性を低下させた。
【０２９７】
実施例１２  透過型電子顕微鏡を用いた、移植腫瘍細胞のミトコンドリアとオートファゴソームの観察
１、実験方法
移植腫瘍を２．５％グルタルアルデヒドに入れて固定し、約１ｍｍ３の組織ブロックに切り、透過型電子顕微鏡サンプルを製作した。脱水、浸透、包埋処理を経たサンプルをＲｅｉｃｈｅｒｔミクロトームで切片して、７０ｎｍの切片を得て、該切片について、クエン酸鉛溶液と酢酸ウラニル５０％エタノール飽和溶液でそれぞれ１５ｍｉｎ染色して、ＦＥＩ  （Ｃｚｅｃｈ  Ｒｅｐｕｂｌｉｃ）透過型電子顕微鏡で観察した。
２、実験結果
ＡＤＲＢ３抗体群は、ＭＣＦ−７細胞移植腫瘍細胞に、ミトコンドリアクリステが減少したり、消失したり、体積が膨張したりする欠陥型ミトコンドリアが大量発生した（図８０）。抗体群では、移植腫瘍細胞のミトコンドリアのオートファゴソームが細胞質に蓄積されて、細胞老化を加速させた。ミトコンドリア外膜のＡＤＲＢ３の遮断によって、ミトコンドリア膜電位が破壊されて、ミトコンドリア構造及び機能が損害されて、細胞質による大量の欠陥型ミトコンドリアの発生が引き起こされる。細胞の自食が正常であれば、欠陥ミトコンドリアは自食により除去された。ＡＤＲＢ３の遮断によって、オートファゴソームとリゾソームの融合が破壊されて、オートファゴソームが除去できなくなる。黒矢印はミトコンドリアのオートファゴソーム、白矢印は脂肪滴を示す（図８１）。
【０２９８】
実施例１３  肺癌胸水細胞の塗抹標本を用いた細胞中のＭＰＯ／ＡＤＲＢ３発現状況の免疫蛍光検出
１、実験方法
肺癌と確診された患者の胸水を２０例収集して、容器底部の液体を約５ｍｌ遠心管内に吸い取り、２０００ｒｐｍで１０ｍｉｎ処理して、上澄みを捨てて、０．５ｍｌの余剰液体と沈殿を残し、細いガラス棒を用いて沈殿と液体を均一に混合して、ストローで均一に混合した液体を吸い取って、１枚に１〜２滴滴下するようにスライドガラスに滴下し、プッシュ法により均一な塗抹標本を作製して、９５％アルコールに入れて１５ｍｉｎ固定し、取り出して乾燥させて、使用に備えた。０．１％  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００で１０ｍｉｎ透過させて、ＢＳＡで１ｈブロッキングし、ＭＰＯ／ＡＤＲＢ３抗体（１：１００）を滴下して、ウェットボックスでブロッキングし、４℃で１晩放置した。ＦＩＴＣとＰＥ標識二次抗体を滴下して、室温で１ｈ放置し、ＤＡＰＩ  ０．５  ｕｇ／ｍｌで３ｍｉｎ処理して、５０％グリセリン／ＰＢＳで封入し、レーザー走査共焦点顕微鏡下で、５〜７個の視野をランダムに観察して撮影し、Ｆｌｕｏｒｃｈｅｍ  ８９００ソフトウェアで細胞の平均赤色蛍光強度と平均緑色蛍光強度を測定した。
２、実験結果（図８２参照）：
（１）肺癌患者の胸水に大量の可溶性ＡＤＲＢ３（ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｂ３、  ｓＢ３）が存在した。癌細胞と顆粒球は脱顆粒によってｓＢ３を血液と組織間隙へ放出したことを示した。
（２）胸水における顆粒球の細胞質にＡＤＲＢ３が大量存在しており、ＡＤＲＢ３を豊富に含む顆粒球は肺癌細胞に接着しやすく、直接接触によって癌細胞の増殖を刺激した。
（３）胸水に脱落した肺癌細胞はＡＤＲＢ３を高発現させた。
【０２９９】
実施例１４  健常者と乳癌患者の末梢血塗抹標本の細胞中のＡＤＲＢ３発現の免疫蛍光検出
１、実験方法は実施例１と同様である。
２、実験結果
（１）ＡＤＲＢ３は、健常者の好中球とリンパ系前駆細胞において発現された（図８３Ａ）。成熟ＣＤ４＋和ＣＤ８＋Ｔ細胞には少量で発現され、ナイーブ又は原始Ｔリンパ球（細胞質に大量のＣＤ４が含まれたリンパ球）には大量発現された（図８３Ｂ）。有糸分裂早期にある細胞ではＡＤＲＢ３が高発現された（図８３Ｃ）。リンパ球におけるＡＤＲＢ３発現量は顆粒球より少なかった。乳癌患者の末梢血においては、大量の異型リンパ球が発生して、細胞核に顆粒球様の変化が起こり、長円孔状、分葉状、不規則形になり、核型には顆粒球様の変化が起こったリンパ球においては、ＡＤＲＢ３は大量で発現された（図８４Ａ）。癌患者の顆粒球では、大量の足突起が発生して、ＡＤＲＢ３は足突起に大量存在している。健常者の顆粒球表面では足突起が少なく、ＡＤＲＢ３含有量は癌患者の顆粒球よりも有意的に減少した（図８４Ｂ）。
（２）乳癌患者の好中球とリンパ球では、ＡＤＲＢ３とＫｉ−６７が大量発現され、腫瘍細胞と
顆粒球は、リンパ球のＡＤＲＢ３発現を誘導して、リンパ球の活性化を阻害した。一部のリンパ球では、ＡＤＲＢ３発現量は顆粒球を超える。ＡＤＲＢ３とＫｉ−６７を高発現させたリンパ球は、骨髄系細胞のマーカータンパク質−ＭＰＯを少量発現可能であり（図８５）、このことは、該タイプの細胞の骨髄系細胞への分化を示し、乳癌患者のリンパ球が脱分化して、ナイーブ又は原始リンパ球になることが示された。ＡＤＲＢ３はＴ細胞分化を阻害した。
（３）乳癌患者の血液には大量の好中球細胞外ネットワーク（ＮＥＴ）が存在し、リンパ球はＮＥＴ中に接着され、ＡＤＲＢ３はＮＥＴの主成分（図８６）である。それは、トリンパ球が付近にある微小環境（ｎｉｃｈｅ）での顆粒球からのシグナルを受信して、癌細胞と顆粒球ＡＤＲＢ３がＮＥＴを形成して、リンパ球を包んで、リンパ球の分化と増殖を調節することを示した。ＮＥＴは阻害性の免疫環境を作り、リンパ球の抗癌機能を阻害した。
（４）乳癌患者の顆粒球は、ＡＤＲＢ３によってリンパ球に接着した（図８５）。健常者の末梢血では、顆粒球とリンパ球の接着が少なく、癌患者の顆粒球とリンパ球の接着はさらに強固且つ頻繁に行われ、癌患者の顆粒球とリンパ球の表面にあるＡＤＲＢ３接着因子のような活性の向上に密に関係している。顆粒球により接着されたリンパ球がＭＰＯを発現させることから、顆粒球のＡＤＲＢ３はリンパ球の脱分化を誘導して、リンパ系前駆細胞又は骨髄系細胞に退化させることを示した。
（５）癌患者のリンパ球では、Ｋｉ−６７発現量とＡＤＲＢ３発現量は正の相関を示し、ＡＤＲＢ３陽性リンパ球においては、Ｋｉ−６７発現が見られた（図８７）。顆粒球とリンパ球が接触すると、リンパ球にＫｉ−６７が発現される場合、該細胞のＡＤＲＢ３含有量は顆粒球より多い。顆粒球又は癌細胞はリンパ球におけるＡＤＲＢ３発現を増加し、ＡＤＲＢ３はリンパ球の脱分化を誘導して、増殖能力を有する原始細胞又は前駆細胞にすることが示された。乳癌患者の一部のリンパ球はＡＤＲＢ３を高発現させて、Ｋｉ−６７とＭＰＯを少量発現させるものであり、ナイーブリンパ球である（図８８）。
（６）乳癌患者の血液には大量のＤＮＡ断片が存在し、ＡＤＲＢ３はＤＮＡ断片に付着しており（図８９）、ＤＮＡ断片は癌細胞の複製に核酸原料を提供する。血液中のＤＮＡ／ＡＤＲＢ３複合体の含有量が多いほど、癌細胞の増殖能力は強くなり、遠隔転移を発生させやすい。
（７）ＡＤＲＢ３は、細胞質内に密な粗面小胞体が大量含まれて、細胞質内に大量のＡＤＲＢ３が存在し（図９０）、Ｔ細胞より大きいことを特徴とする形質芽球の細胞質において高発現された。細胞質にＣＤ４又はＣＤ８がなくＡＤＲＢ３を大量含むことを特徴とする成熟形質細胞の細胞質内にも大量のＡＤＲＢ３が存在する（図９１）。ＣＤ１９＋Ｂ細胞膜にはＡＤＲＢ３が発現された（図９２）。ＡＤＲＢ３はプラズマ細胞による抗体合成を促進できる。
【０３００】
実施例１５    ＡＤＲＢ３抗体によるＰＡＮＣ−１膵臓癌アポトーシスの促進
１、実験方法
ＰＡＮＣ−１を培養して、５０ｎｇ／ｍｌのＡＤＲＢ３抗体で１２ｈ処理し、対照群の場合は、マウスＩｇＧを用いた。Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ／ＰＩ二重染色を行って、フローサイトメーターでアポトーシス率を検出した。
２、実験結果：対照群に比べて、ＡＤＲＢ３抗体は、ＰＡＮＣ−１アポトーシス率（４５．３±７．３％  ｖｓ  ９．７±３．４％、Ｐ＜０．０１）を増加した。乳癌ＭＤＡ２３１と肺癌Ｈ１２９９細胞は類似結果を取得し、いずれもＡＤＲＢ３抗体はアポトーシスを促進した。
【０３０１】
実施例１６  緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を有するＡＤＲＢ３プラスミドによる膵臓癌ＳＷ１９９０細胞の殺滅
１、実験方法
ｐＥＮＴＥＲ-ＡＤＲＢ３−ＧＦＰベクタープラスミド、ｐｃＤＮＡ３／ＦＬＡＧ−ＡＤＲＢ３プラスミドを構築して、膵臓癌ＳＷ１９９０細胞及びＭＣＦ７細胞をトランスフェクションし、２４ｈ後、共焦点顕微鏡下で観察した。
２、実験結果：
ＧＦＰ発現のある細胞であれば、いずれもこすアポトーシス、具体的には、核濃縮、細胞破壊が起こるが、細胞核内にＧＦＰがなかった（図９３）。ＧＦＰを有する外因性ＡＤＲＢ３は、細胞核に入ることができず、核膜上に蓄積されて、細胞核の内外物質交換に影響を及ぼして、細胞のアポトーシスを引き起こすことを示した。Ｆｌａｇタグタンパク質を有するＡＤＲＢ３も細胞核に入ることができないが、細胞活性に影響を与えない。ＡＤＲＢ３はＭＣＦ７細胞の微小管、細胞核及びミトコンドリアに局在化されている（図９４）。
【０３０２】
実施例１７  クロマチン共免疫沈降−チップ実験（ＣｈＩＰ−ｃｈｉｐ）
１、実験方法
５０ｎｇ／ｍｌのＡＤＲＢ３抗体で２４ｈ処理し、対照群ではマウスＩｇＧを用いた。１０ｃｍの培養皿（ＭＣＦ７細胞）に３７％ホルムアルデヒドを２７０ｕｌ加えて、軽く均一に混合して、室温で１０分間放置した。１．２５Ｍチロシンを１ｍｌ加えて、室温で、５分間かけて、ホルムアルデヒド中和した。皿中の混合液を吸い取り、予冷されたＰＢＳ／ＥＤＴＡで細胞を２回洗浄して、ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌを含むＰＢＳを１ｍｌ加えて、細胞掻爬で皿底の細胞を掻き取り、１．５ｍｌの遠心管に収集した。２０００×ｇで５分間遠心処理して、上澄みを捨てた。収集したサンプルについて専門会社に検出を依頼し、なお、免疫沈降に使用される抗体はＡＤＲＢ３抗体とＨ３Ｋ９ＡＣ抗体であった。ＡＤＲＢ３の異なる活性状態下で、ＡＤＲＢ３の全ゲノムでの結合部位とプロモーターにおけるＨ３Ｋ９アセチル化のレベルを分析した。
２、実験結果（図９５参照）
ＡＤＲＢ３抗体を用いたＣｈＩＰ−ｃｈｉｐによって、転写因子ＡＤＲＢ３に特異的に結合されたプロモーター配列（３０００個余りの遺伝子のプロモーター）をスクリーニングし、上記遺伝子としては、ＦＡＢＰ５（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｅｐｉｄｅｒｍａｌ。ＡＤＲＢ３は第８染色体の８２１９１４２６〜８２１９１８９７塩基に結合された）、ＦＡＢＰ４、ＦＡＢＰ３、ＰＴＰＲＡ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｔｙｐｅ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ａｌｐｈａ）、ＰＴＰＲＣＡＰ（ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  Ｃ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、ＰＴＰＮ７、ＰＴＰＲＺ１（ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｔｙｐｅ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｚｅｔａ  ｉｓｏｆｏｒｍ）、ＰＴＰＲＤ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｔｙｐｅ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｄｅｌｔａ  ｉｓｏｆｏｒｍ）、ＰＴＰＲＲ、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＡ４、ＬＩＬＲＡ３、ＬＩＬＲＰ２、ＦＥＳ（ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｆｅｓ／Ｆｐｓ）、ＴＵＭＯＲ  ＮＥＣＲＯＳＩＳ  ＦＡＣＴＯＲ−ＲＥＬＡＴＥＤ  ＡＰＯＰＴＯＳＩＳ−ＩＮＤＵＣＩＮＧ  ＬＩＧＡＮＤ  ＲＥＣＥＰＴＯＲ、  ＳＴＡＴ５Ｂ、ＴＣＬ１（Ｔ−ｃｅｌｌ  ｌｅｕｋｅｍｉａ／ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １Ａ）、ＣＤ８Ａ（Ｔ−ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ＣＤ８  ａｌｐｈａ  ｃｈａｉｎ）、Ｃ８Ｇ（補体Ｃ８γをコートし、ＡＤＲＢ３は第９染色体の１３９８３８３９８−１３９８３８８７６塩基に結合された）、Ｃ５ＡＲ１（補体Ｃ５ａ受容体、ＡＤＲＢ３は第１９染色体の４７８１２８７０−４７８１３３９１塩基に結合された）、ＡＫＴ１（ＡＤＲＢ３は第１４染色体の１０５２６０６６８−１０５２６１１７４塩基に結合された）、ＬＤＨＡＬ６Ｂ（乳酸デヒドロゲナーゼＡ様タンパク質６Ｂをコートし、ＡＤＲＢ３は第１５染色体の５９４９７８０５−５９４９８２６２塩基に結合された）、ＳＬＣ１６Ａ３（該遺伝子はモノカルボン酸トランスポーターをコードし、乳酸の膜貫通輸送を調節する。ＡＤＲＢ３は第１７染色体の８０１８５２０３−８０１８６５８５塩基に結合された）、ＲＲＰ９（ＡＤＲＢ３は第３染色体の５１９７５０６５−５１９７５５３８塩基に結合され、該遺伝子はＵ３  ｓｍａｌｌ  ｎｕｃｌｅｏｌａｒ  ＲＮＡ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２をコードする）、ＤＫＣ１（ＡＤＲＢ３はＸ染色体の１５３９８９７４２−１５３９９０２０９塩基に結合され、該遺伝子はテロメアの安定性に関連する）、ＩＺＵＭＯ１（ｉｚｕｍｏ  ｓｐｅｒｍ−ｅｇｇ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＡＤＲＢ３は第１９染色体の４９２５０７２２−４９２５１２９０塩基に結合された）、ＴＳＫＳ（ｔｅｓｔｉｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｅｒｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、ＡＤＲＢ３は第１９染色体の５０２６６２６１−５０２６６９３０塩基に結合された）、ＴＳＳＫ６（ｔｅｓｔｉｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ−ｐｒｏｔ���ｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ６）、ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  Ａ４  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｓｏｆｏｒｍ  ｄ、ＥＤＡ２Ｒ、ＥＤＡＲ、ＰＤＥ１０Ａ、ＰＤＥ１２、ＰＤＥ１Ｃ、ＰＤＥ４Ａ、ＰＤＥ４Ｂ、ＰＤＥ４Ｃ、ＰＤＥ６、ＰＤＥ７、ＰＤＥ９多剤耐性関連タンパク質１（ＭＲＰ１）、ＰＳＰＮ、ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ、ＮＧＤＮ、ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ＩＩ、Ｘ連鎖アポトーシス阻害タンパク質（Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｐｒｏｔｅｉｎ、  ＸＩＡＰ）、ｖｅｓｉｃｌｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＳＦＴ２Ａ、ｐｏｌｙ  ［ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｅ］  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  １、ＧＰＢＰ１、ＭＹＬ３、ＧＪＡ９−ＭＹＣＢＰ、ＩＮＨＢＣ、ＳＥＨ１Ｌ、ＴＮＰＯ２、ＮＵＰ５０、ＮＵＳＡＰ１、ＧＡＲ１、ＤＫＣ１、ＧＴＰＢＰ４、ＮＯＰ５６、ＮＥＸＮ、ＡＣＶＲ１、ＴＮＮＴ２、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＨ２、ＡＣＴＬ６Ａ、ＡＴＰ６Ｖ０Ｂ、ＰＡＸ６、ＤＣＸ、ＴＳＫＳ、ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｔｅｌｏｍｅｒｅ  ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ  ｈｅｌｉｃａｓｅ  １、ＰＣＳＫ１、ＰＣＳＫ４、ＬＤＬＲＡＤ１、ＳＣＡＲＦ１、Ｓ１ＰＲ３、ＳＭＧ６、ＤＫＣ１、ＮＯＰ１０、ＢＡＤ、ＢＣＬ２、ＣＡＳＰ１２、ＣＦＬＡＲ、ＬＡＭＢ３、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ７、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＲＹＲ３、ｓｙｎｔａｘｉｎ−１Ｂ、ＰＡＣＲＧ  、ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  Ｄｐ−２、ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＭａｆＢ、ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  Ｅ２Ｆ８、ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  Ｅ２−ａｌｐｈａ  ｉｓｏｆｏｒｍ  Ｅ４７、ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  １、ｍｉｔｏｆｕｓｉｎ−１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ２１、ＨＥＹ１、ＨＥＹ２、ＴＬＥ３、ＴＸＮＩＰ、ＲＩＺ１、ＩＦＴ１４０、ＮＰＨＰ３、ＧＡＴＡ１、ＧＡＴＡＤ１、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ、ＣＤＹ１、ＣＤＹ２、ＡＰＰ（Ａｍｙｌｏｉｄ  Ｂｅｔａ  Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）、ＰＮＭＴ、ＣＯＭＴ、ＺＭＩＺ２、ＤＮＭＴ１、ＳＥＴＤＢ２、ＳＵＶ３９Ｈ１、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ１６、ＫＡＺＮ、ＣＥＡＣＡＭ２１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＥＮＯ１、ＦＧＦ１、ＦＧＦ４、ＧＲＥＭ１、ＴＭＣ６、ＴＭＥＭ４３、ＳＴＫ３６、ＩＲＦ１（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  １）、ＷＨＳＣ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ９、ｃａｒｄｉｏｔｒｏｐｈｉｎ−ｌｉｋｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｆａｃｔｏｒ  １、ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ６３（ＡＤＲＢ３は第３染色体の１８９３４９３３３−１８９３４９７０７塩基に結合された）、ＴＰＲＧ１、ＦＫＢＰ５、ＰＲＲ５（ＡＤＲＢ３は第２２染色体の４５０６３１６６−４５０６３７１５塩基に結合された）、ＳＥＴＤ１Ｂ、ｐ１６、ｍｙｂ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ（ＡＤＲＢ３は第２０染色体の４２２９４３６０−４２２９４６２５塩基に結合された）、ＲＰＬ１８Ａ、ｏｐｔｉｎｅｕｒｉｎ、ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ−１Ｂ、ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＴＧＩＲ）、ｐｅｎｔｒａｘｉｎ−４、  ＣＴＢＰ１、ＦＥＳ、ＺＡＰ７０、ＩＧＳＦ１１、ＩＲＦ７、ＫＬＲＣ１、ＴＡＲＤＢＰ、ＭＲＰＬ１９、ＭＲＰＬ２、ＭＲＰＬ４１、ＭＲＰＳ１７、ＭＲＰＳ２６、ＲＰＬ１４、ＲＰＬ１８Ａ、ＲＰＬ１９、ＲＰＳ６ＫＬ１、ａｔｙｐｉｃａｌ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＲ５、ＥＥＦ１Ｄ、ＤＮＭＴ１、ＰＤＥ４Ｂ、ＦＯＸＰ３（ＡＤＲＢ３はＸ染色体の４９１２１９７５−４９１２２４６９塩基に結合された）、ＤＣＡＮＰ１、ＤＣＳＴ１、ＤＣＳＴ２、ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ、ＩＬ１７ＲＢ、ＴＲＡＦ６、ｐ６２、ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ−２（ＡＤＲＢ３は第２染色体の７５０５９８８２−７５０６０１２５塩基に結合された）、ＴＣＩＲＧ１、ＨＫ１、ＣＡＭＫＫ２、ＧＡＰＤＨ、Ｇ１／Ｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｙｃｌｉｎ−Ｄ３（ＡＤＲＢ３は第６染色体の４２０１６７０６−４２０１７６２４塩基に結合された）、Ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１、ｃｙｃｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｋｉｎａｓｅ  ３（ＣＤＫ３、ＡＤＲＢ３は第１７染色体の７３９９５７６２−７３９９６２２７塩基に結合された）、ＣＤＫ４、ＣＤＫ１５、ＣＤＫ１８、ｃｙｃｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｋｉｎａｓｅ  ２−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １、Ｒｂ、Ｋｉ−６７、ｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、ＡＫＴ、ｔｕｂｕｌｉｎ、Ｓｒｃ（ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｓｒｃ）、ＰＤ−Ｌ１、ｐ５３、ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １  （ＩＬ−１）、ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  （ＩＬ−６）、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ１７ＲＢ、ＩＬ１６、ＬＥＦ１、ＡＤＲＢ３、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＴＡＢ２、ＬＴＢＰ２、ＲＡＳ、  ＡＲＨＧＡＰ２１、ＴＧＦ−及びＴＮＦが含まれるが、これらに制限されない。
Ｈ３Ｋ９ＡＣ抗体のＣＨＩＰ−ｃｈｉｐ結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３の結合するＣＤＫ３プロモーター領域（第１７染色体の７３９９５７６２−７３９９６２２７塩基）内にあるＨ３ヒストンのＫ９はアセチル化修飾された。このことから、ＡＤＲＢ３は、アセチル基をＨ３Ｋ９に転移させるアセチラーゼであることを示した。ＡＤＲＢ３は、標的遺伝子プロモーターでのＨ３Ｋ９のアセチル化レベルを調節することで、標的遺伝子の転写に影響する。ＡＤＲＢ３の神経栄養因子のプロモーターとの結合可能性は、ＡＤＲＢ３が神経栄養因子の発現を調節することを示し、ＡＤＲＢ３抗体はアルツハイマー病、パーキンソン病等の神経変性疾患を治療できることが示された。
【０３０３】
実施例１８  内毒素致死実験
１、実験方法
マウス（正常ＦＶＢマウスとＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウトマウスそれぞれ１０匹）にＬＰＳを３０ｍｇ／ｋｇ腹腔内注射した。注射用水でＬＰＳを溶解して、１ｍｇ／ｍｌに調製した。マウスの重量（ｇ）を秤量して、重量＊０．０３を行って、注射使用量（ｍｌ）を算出し、マウスの死亡を観察して、死亡時間を記録し、各群のマウスの生存曲線を作成した。ＨＥ染色によって、肝、肺組織の炎症性壊死及び顆粒球浸潤の状況を観察した。腹腔分泌物の細胞塗抹標本について免疫蛍光を行って、好中球を検出した。免疫組織化学的検出によって肝、肺組織ＩＬ−６、ＭＰＯ、Ｅｌａｓｔａｓｅタンパク質の発現を検出した。
２、実験結果
内毒素注射後、マウスの活性は顕著に弱まり、体温は低下し、一部のマウスでは、目から膿液が流れて、膿毒症の病症が現れた。ＬＰＳ注射後の１６時間内、１０匹のＦＶＢマウスはすべて死亡し、２匹のＡＤＲＢ３−／−マウスは死亡し、８匹のＡＤＲＢ３−／−マウスは生存した。正常マウスに比べて、ＡＤＲＢ３−／−マウスは膿毒症による死亡率が著しく低下し（図９６）、肝、肺組織に発生した炎症性壊死の面積も著しく減少した。２群のマウスの腹部はいずれも大量の膿液が発生して、腹膜炎を伴う膿毒症が生じた。ＡＤＲＢ３遺伝子ノックアウト後の腹膜炎マウスの’体内では、腹膜病変部へ動員された好中球の数が著しく減少した。ＡＤＲＢ３−／−マウスの肝、肺組織におけるＩＬ−６、Ｅｌａｓｔａｓｅタンパク質の発現はすべて著しく低下し、このことから、肝、肺組織の炎症反応と好中球浸潤が阻害されたことが分かった。
【０３０４】
実施例１９    ＡＤＲＢ３抗体によるアデノウイルスとＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）への細胞感染阻害
１、  実験方法
Ａ５４９細胞をカバーグラスに成長させて、ＡＤＲＢ３抗体で３０ｍｉｎ前処理し、ＧＦＰを有するアデノウイルス１０６  ＰＦＵ／ｍｌを接種して、３７℃インキュベータ内に入れて２４時間インキュベートし、対照群にはマウスＩｇＧを用いた。免疫蛍光検出によりリン酸化ｍＴＯＲ（Ｓ２４４８）の発現を検出した。なお、方法は実施例１と同様である。
慢性Ｂ型肝炎患者の肝組織モデルを収集して、実施例２と同様な方法によって、免疫組織化学的検出によりＡＤＲＢ３発現を検出した。
ＨｅｐＧ２細胞をカバーグラスに成長させて、ＡＤＲＢ３抗体で３０ｍｉｎ前処理し、ＨＢＶ  １ｍｌ接種して、３７℃インキュベータ内に入れて２４時間インキュベートし、対照群にはマウスＩｇＧを用いた。４％ポリオキシメチレンで固定して、ウサギ抗−ＨＢＣ（１：１００）を加えてＨＢｃＡｇを検出し、４℃で１晩放置し、翌日、ヒツジ抗ウサギＩｇＧを加えて、３７℃で１時間作用させ、洗浄後、ＰＡＰ（１：５０）を加えて、３７℃で１時間インキュベートし、３回洗浄後、ＤＡＢ発色を行って、顕微鏡検査をした。
２、実験結果
（１）ＡＤＲＢ３が阻害された後、アデノウイルスはＡ５４９肺癌細胞を感染できなくなった。ＡＤＲＢ３抗体は、ｍＴＯＲの第２４４８位のセリンのリン酸化を阻害することでアデノウイルス感染を阻害する作用を果たし（図９７）、第２４４８位のセリンのリン酸化はｍＴＯＲを活性化させて、アデノウイルスの複製と放出を促進する細胞自食を促進する。ＡＤＲＢ３抗体は、ｍＴＯＲ活性化を阻害して自食遮断作用を果たし、それによって、アデノウイルスの複製と放出を阻害した。ＡＤＲＢ３抗体によりＡＤＲＢ３が遮断された後、ウイルスを溶解してウイルス感染を防止可能なＣ８発現は増加した。
（２）ＡＤＲＢ３とアデノウイルスはいずれもＡ５４９肺癌細胞の核小体に局在化され、ＡＤＲＢ３はウイルス複製に必要な重要なタンパク質（図９８）である可能性がある。アデノウイルスは核小体中のＡＤＲＢ３を活性化させることで、細胞を癌化させた。
（３）Ｂ型肝炎患者の肝細胞では、細胞質でのＡＤＲＢ３は健常者より高く、細胞核内にはＡＤＲＢ３発現はほぼなく、細胞質におけるＡＤＲＢ３はリボソーム機能を強化させて、ＨＢＶ複製に必要なタンパク質の合成に寄与し、細胞質ＡＤＲＢ３と細胞核ＡＤＲＢ３との比は著しく高くなり、この比が高いほど、ウイルス複製は活発であることになり、該比はＢ型肝炎ウイルス複製を検出するための指標とされることができる。ＨＢＶは細胞質におけるＡＤＲＢ３を媒介してＨｅｐＧ２細胞に入ってＨＢＶ複製を促進する。ＡＤＲＢ３抗体は、ＨＢＶによるＨｅｐＧ２細胞の感染を阻害し（図９９）、このことから、本抗体はＢ型肝炎治療への応用が期待できることを示した。
【０３０５】
実施例２０  高コレステロール（ＨＣＤ）食と低コレステロール（ＬＣＤ）食によるＡＤＲＢ３欠失ＡｐｏＥ−／−マウス（Ｂ３−／−ＡｐｏＥ−／−）のアテローム性動脈硬化症プラークへの影響の研究
１、実験方法
ＨＣＤ食によるＢ３＋／＋ＡｐｏＥ−／−マウスを対照として、（Ｂ３−／−ＡｐｏＥ−／−）高コレステロール（ＨＣＤ）食と低コレステロール（ＬＣＤ）食によるＡＤＲＢ３欠失ＡｐｏＥ−／−マウスのアテローム性動脈硬化症プラークへの影響を研究した。試験用マウスは、１、Ｂ３＋／＋ＡｐｏＥ−／−マウスの高コレステロール（ＨＣＤ）食群；２、Ｂ３−／−ＡｐｏＥ−／−マウスＨＣＤ食群；３、Ｂ３−／−ＡｐｏＥ−／−マウスの低コレステロール（ＬＣＤ）食群；４、Ｂ３＋／＋ＡｐｏＥ−／−マウスＨＣＤ食とＡＤＲＢ３抗体治療との複合群に分けられた。８週齢の雄マウスをそれぞれ１０匹選択して、高脂肪飼料（トリグリセリド２０％、コレステロール１．２５％）と普通の飼料で飼育した。ＡＤＲＢ３抗体１０ｍｇ／ｋｇを６日間おきに１回腹腔内注射投与し、高脂肪飼料で１２週間飼育後、大動脈を取り、オイルレッドＯ染色を行った。４群のマウスの動脈プラークの数と大きさを比較して、ＨＥ染色によってプラーク内の炎症性細胞を検出し、免疫組織化学的検出によってプラーク内の炎症性因子の発現を検出し、ＥＬＩＳＡ検出によって血清中の炎症性因子ＩＬ−６、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１０、ＭＰＯを検出した。
２、実験結果（図１００参照）
高脂肪飼料で３ヶ月飼育後、ＡｐｏＥ−／−マウスは極端に老化して、せむし、脱毛、皮下脂肪、運動機能の喪失等が見られ、Ｂ３−／−ＡｐｏＥ−／−マウスは老化特性が著しくなかった。ＨＣＤ群のＢ３−／−ＡｐｏＥ−／−マウスとＢ３＋／＋ＡｐｏＥ−／−マウスＡＤＲＢ３抗体治療群は、大動脈部位でのプラークの数も面積もＢ３＋／＋ＡｐｏＥ−／−マウスより減少し、動脈プラークの面積は８０％〜９０％減少した。ＡＤＲＢ３欠失ＡｐｏＥ−／−マウスでは、硬い安定プラークが発生した。Ｂ３−／−ＡｐｏＥ−／−マウスでは、ＨＣＤ群の血中脂質濃度がＬＣＤ群より遥かに高いが、２群の大動脈部位でのプラークの数と面積には差がなかった。ＨＣＤ群のＢ３＋／＋ＡｐｏＥ−／−マウスに比べて、ＨＣＤ群のＢ３−／−ＡｐｏＥ−／−マウスとＢ３＋／＋ＡｐｏＥ−／−マウスのＡＤＲＢ３抗体治療群は、大動脈部位でのプラークの線維性キャップが厚くなり、ＣＤ４＋Ｔ細胞と顆粒球浸潤が減少して、プラーク内の泡沫細胞ＭＰＯ、Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  Ｅｌａｓｔａｓｅ、ＩＬ−６、ＡＤＲＢ３、ＭＩＦが低下した。Ｂ３−／−ＡｐｏＥ−／−マウスは、血清中ＩＬ−１０濃度が高くなり、ＩＬ−６、ＶＥＧＦ及びＭＰＯの濃度が低下した。
結論：（１）ＡＤＲＢ３は、アテローム性動脈硬化症のプラーク形成を促進して、プラークを不安定的にして、急性冠症候群の要因の１つである。（２）ＡＤＲＢ３は老化促進に繋がる。
【０３０６】
実施例２１    ＡＤＲＢ３モノクローナル抗体による自然発症高血圧ラットの血圧降下
１、実験方法
収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇより高い１４週齢の自然発症高血圧雄ラット（ＳＨＲ）を、１群に８匹を割り当てるように、ランダムに２群に分けて、６日間おきに腹腔内注射投与し、連続的に６週間投与した。具体的に、群は[1]抗体群：ＡＤＲＢ３抗体１０ｍｇ／ｋｇ；[2]空白対照群：マウスＩｇＧ腹腔内注射であった。ＲＢＰ−１Ｂラット血圧計で、ラットの意識がはっきりした状態下で、テールカフ法により尾動脈の収縮期血圧と心拍数を間接的に測定し、なお、１週間ごとに、投与前と投与後に尾動脈の収縮期血圧、心拍数を測定し、且つ体重を量り、血圧降下程度＝（治療前の収縮期血圧−治療後の収縮期血圧）／治療前の収縮期血圧から血圧降下程度を算出した。６週間投与後、ラットを殺して、開胸して、心臓を迅速に切り取り、心臓を４℃のＫＨ液に入れて、心腔内に残留された血液を押し出し、上行大動脈を分離して、大動脈について逆行カニューレ挿入を行った後、Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流装置に掛けて、９５％  Ｏ２と５％  ＣＯ２で十分に酸素化されたＫＨ液を用いて、３７℃恒温で逆行性灌流を行い、左心房を経てカテーテルバルーンを左心室に挿入して、カテーテルを圧力トランスデューサに接続し、バルーン内に注水して内圧を４０ｍｍＨｇに上げて一定に保持し、２０ｍｉｎ事前灌流して、各指標が安定的になると、Ｐｃｌａｂ生体信号収集システムで各項の心機能指標：左室内圧（ＬＶＰ）、左室最大収縮期血圧（ＬＶＳＰ）、左心室拡張末期圧（ＬＶＥＤＰ）、左室発生圧（ＬＶＤＰ）、左室収縮期血圧の最大上昇速度（＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ）、左心室拡張期血圧の最大低下速度（−ｄｐ／ｄｔｍａｘ）、心拍数（ＨＲ）を記録して、冠状動脈の流量（ＣＦ）を収集して記録した。灌流終了後、心臓を降ろして、ろ紙で拭き干し、大動脈を切り落として、重量を量り、心臓重量／体重（ＨＷ／ＢＷ）を算出し、心室自由壁と心房を切り落として、左心室（心室中隔を含む）の重量を量り、左心室の肥大程度を左心室重量と体重の比（ＬＶＷ／ＢＷ）として表示した。ＳＰＳＳ１９を用いて統計分析を行い、計量データを平均値±標準偏差として表示し、２群間の平均値の比較にはｔ検定が使用された。
２、実験結果
ＡＤＲＢ３抗体治療群は、血圧がすべて正常血圧範囲内（表４）に低下し、治療前と対照群に比べて有意的に低下した（Ｐ＜０．０１）。ＡＤＲＢ３抗体群は、血圧降下の差と血圧降下程度が対照群に比べて有意的に増加し、差異には有意性がある（Ｐ＜０．０１）。ＡＤＲＢ３抗体による心機能への影響については、表５に示されるように、抗体治療群では、ＬＶＥＤＰは有意に対照群より低く（Ｐ＜０．０５）、ＨＲは対照群に比べて有意に減少し（Ｐ＜０．０５）、心機能改善が明らかであった。各群のラットの心臓重量／体重、左室重量／体重の変化については、表６に示されるように、抗体群ＨＷ／ＢＷ、ＬＶＷ／ＢＷはいずれも対照群よりも有意に低く、差異に有意性がある（Ｐ＜０．０５）。ＡＤＲＢ３抗体は、ＳＨＲ血圧を正常範囲に効果的に低下させ、ＳＨＲ心機能を改善して、高血圧による左心室肥大を解消した。
【表５】
2018161125.tif 000007
注：治療前に比べて、＊Ｐ＜０．０１、対照群に比べて、＃Ｐ＜０．０１である。
【表６】
2018161125.tif 000008
注：対照群に比べて、＊Ｐ＜０．０５であり、ＬＶＰ、ＬＶＳＰ、ＬＶＥＤＰ、ＬＶＤＰの単位はｍｍＨｇ；ＣＦ単位はｍｌ／ｍｉｎである。
【表７】
2018161125.tif 000009
注：対照群に比べて較、＊Ｐ＜０．０５である。
【０３０７】
実施例２２    ＡＤＲＢ３抗体による、ヒト末梢血単球（ＰＢＭＣ）の細胞傷害性Ｔ細胞への分化の誘導
１、実験方法
健常者、膵臓癌患者、肝癌患者、肺癌患者及び白血病患者それぞれ５名から、末梢血を３〜５ｍｌ採血して、Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心分離法によりＰＢＭＣを分離して、５％ウシ胎仔血清を含むＤＭＥＭで培養し、異なる濃度のＡＤＲＢ３抗体で誘導培養を行い、対照群にはＡＤＲＢ３抗体を用いない。それぞれ０、２、４、６、８、１０日間誘導培養したとき、細胞を取り、フローサイトメーターでＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＴｒｅｇ細胞の定量的分析を行った。溶解誘導後の細胞を遠心処理して細胞の上澄みを得て、ＭＴＴ法で分化誘導細胞による標的細胞への殺滅効果を検証した。ＳＷ１９９０、ＭＣＦ−７等の接着腫瘍細胞を標的細胞として、９６ウェル培養板に接種した。実験群では、異なる濃度の細胞溶解上澄み、対照群では等体積の溶媒を含む培地を用いて、３７℃、５％ＣＯ２で５ｄ培養した。新たに調製してＭＴＴを０．５ｍｇ／ｍｌ含む無血清培地を１ウェルに２００ｕｌ加えて、４ｈ培養し続けた。１ウェルの液体を全部吸収させて、２００ｕｌのＤＭＳＯを添加して、１０ｍｉｎ振とうさせ、マイクロプレートリーダーにおいて、試験波長５７０ｎｍ、基準波長４５０ｎｍで光学濃度値を測定した。
２、実験結果：
０．５〜１００ｕｇ／ｍｌの用量範囲内で、ＡＤＲＢ３抗体はＰＢＭＣのＣＤ８＋Ｔ細胞への誘導分化を促進すると同時に、Ｔｒｅｇ細胞の比率を低下させた。同等濃度の抗体で６〜８日間作用させる場合、誘導後の細胞での抗癌サイトカインの効果が最も高く、最高用量の細胞溶解液は約８０％の標的細胞を殺滅できる。ＡＤＲＢ３抗体は、免疫不全のリンパ球を誘導して、機能細胞にして、抗癌作用を発揮させた。
【０３０８】
実施例２３    ＡＤＲＢ３抗体の補体活性化促進
異なる濃度のＡＤＲＢ３抗体でＭＣＦ−７、Ａ５４９、ＳＷ１９９０細胞を処理した。内毒素（ＬＰＳ）を陽性対照とした。２日間後、細胞タンパク質を収集して、ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ検出によって補体Ｃ３、Ｃ８とＣ５受容体（Ｃ５Ｒ）を検出した。免疫蛍光検出によってＣ８とＢ３ＡＲを検出した。
実験結果から分かるように、ＡＤＲＢ３抗体は、Ｃ３、Ｃ８及びＣ５Ｒの発現を用量依存的に増加した（図１０１Ａ）。ＡＤＲＢ３抗体で処理した後、細胞膜上に大量のＣ８が発生したのに対して、Ｂ３ＡＲは消えて、細胞核が濃縮されて、アポトーシスを引き起こした（図１０１Ｂ）。Ｃ８は膜攻撃複合体（Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ａｔｔａｃｋ  Ｃｏｍｐｌｅｘ、ＭＡＣ）の形成のために不可欠な重要物質であり、ＡＤＲＢ３抗体はＭＡＣ集合を促進して細胞膜に挿入させることで、細胞の破裂、死亡を起こした。
【０３０９】
実施例２４    ＡＤＲＢ３抗体による心臓血管系への作用
研究結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体は、程度が異なるが、実験的心筋梗塞又は不整脈等の動物モデルのいずれに対しても抵抗作用を果たす。虚血心筋への酸素供給と需要の不均衡を改善した。ＡＤＲＢ３抗体は、前下行枝結紮によるラット心筋梗塞モデルの心筋虚血程度を軽減させて、冠動脈閉塞後の梗塞範囲を減少させた。ラットにＡＤＲＢ３抗体を腹腔内注射することによって、アコニチンによる不整脈等に対する抑制作用を果たす。ＡＤＲＢ３抗体は、老化心筋細胞を減少させて、心機能を改善した。
【０３１０】
実施例２５    ＡＤＲＢ３抗体による血液系への影響
研究結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３は血小板膜に存在する（図１０２）。ＡＤＲＢ３抗体は微小循環を改善して、血小板凝集を阻害し、ラットのインビトロ血栓形成に対して顕著な阻害効果がある。
【０３１１】
実施例２６    ＡＤＲＢ３抗体による呼吸器系への影響
研究結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体は、灌流モルモットの肺流量を減少させ、気管支収縮作用があり、アセチルコリンによる摘出腸管攣縮に対して鎮痙作用を果たす。
【０３１２】
実施例２７    ＡＤＲＢ３抗体の抗疲労作用
マウスの尾根部に体重５％の鉛シートによる荷重をかけて、水の深さ（３０±１）ｃｍ、水温（２５±１）℃の水泳箱に入れて水泳させ、マウスの四肢に運動を保持させた。マウスの水泳開始から死亡までの時間（ｍｉｎ）を記録して、マウスの水泳時間とした。結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体を注射したマウスは氷水での水泳時間が対照群より長く、ＡＤＲＢ３抗体は抗疲労作用を有する。
【０３１３】
実施例２８    ＡＤＲＢ３抗体の睡眠改善機能
研究結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体は、マウスの睡眠潜時を短縮させて、睡眠マウスの数を増加し、閾値用量のペントバルビタールナトリウムを投与したマウスの睡眠時間を顕著に延長させる。
【０３１４】
実施例２９    ＡＤＲＢ３抗体によるアルツハイマー病（ＡＤ）モデルマウスへの治療作用
研究結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体は、ＡＤマウスの学習記憶を改善して、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）遺伝子の発現を向上させ、脳内のＡβ堆積に起因する老人斑の生成を減少できる。
【０３１５】
実施例３０    ＡＤＲＢ３抗体に備える血中脂質調節作用
研究結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体を注射することによって、実験的高コレステロール血症に罹患した家ウサギの血中トリグリセリド、総コレステロール、ＬＤＬレベルを低下させて、ＨＤＬを下げる。プラークを安定化させて、大動脈及び冠状アテローム性動脈硬化症のプラーク形成を減少できる。
【０３１６】
実施例３１    ＡＤＲＢ３抗体による、アデノウイルスとＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の細胞感染の阻害
研究結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体は、Ｃ５７ＢＬマウスにＣＣＬ４を腹腔内注射した肝硬変モデルの肝臓繊維化程度を軽減させて、肝組織ポータルエリアと胆管周囲への炎症性細胞の浸潤を阻害し、肝硬変に起因する腹水を減少して、肝機能を改善できる。
【０３１７】
実施例３２    ＡＤＲＢ３抗体によるＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の複製阻害
ＡＤＲＢ３抗体を尾静脈から注射してＨＢＶ遺伝子組換えマウスをトランスフェクションし、注射後の６日目、２１日目、１ヶ月目、３ヶ月目及び９ヶ月目の異なる時間に、眼角静脈から採血して、化学発光法によりマウスの血清中ＨＢｓＡｇレベルを定量的検出し、ＰＣＲでＨＢＶ−ＤＮＡレベルを検出した。結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体は、遺伝子組換えマウスの血清ＨＢｓＡｇとＨＢＶ−ＤＮＡのレベルを著しく低下できる。
【０３１８】
実施例３３    ＡＤＲＢ３抗体による繁殖能力と性機能向上
ＡＤＲＢ３抗体は、マウスの性的能力を向上できる。交配実験結果から分かるように、免疫細胞溶解物は、勃起不全モデルマウスの交配回数を顕著に増加して、交配率を向上させ、交配時間を延長させた。雌マウスの妊娠率、産仔数及び仔マウスの生後生存率を向上させる。
【０３１９】
実施例３４    ＡＤＲＢ３抗体によるループスマウス自己免疫及びその生存時間への影響
研究結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体はＢＸＳＢループスマウスの生存時間を延長させて、末梢血抗ｄｓ−ＤＮＡ抗体及びＩｇＧの発現レベルを低下させ、脾臓や腎臓組織のＩＦＮ−γ発現を阻害できる。
【０３２０】
実施例３５    高齢マウスについての治療の研究
健康なＣ５７ＢＬ／６マウスを雌雄を問わずに選別した。実験用の２群であるＡＤＲＢ３抗体治療群、生理食塩水対照群に分けて、１群に１０匹とし、マウスの１２月齢から治療を開始させた。ＡＤＲＢ３抗体治療群にＡＤＲＢ３抗体を０．１ｍｇ／回、１回／週間腹腔内注射して、合計３ヶ月治療し、生理食塩水対照群に生理食塩水を注射した。マウス１２、１５、１８、２１月齢のとき、受動的回避試験、Ｍｏｒｒｉｓ  水迷路試験、オープンフィールド迷路試験及び高架式十字迷路試験など、行動学的試験を行った。
行動学的結果から明らかなように、Ｍｏｒｒｉｓ  水迷路試験では、場所テストでは、生理食塩水対照群のマウスのほうは、逃避潜時が長く、プローブテストでは、生理食塩水対照群のマウスはプラットフォーム区画距離百分率、時間百分率のいずれも減少して、ＡＤＲＢ３抗体治療群に比べると、有意的な差異がある。
行動学に基づいて不安指標を検出し、オープンフィールド迷路試験の結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体治療群マウスに比べて、生理食塩水対照群マウスは、中央領域距離百分率が著しく減少し、両方間に有意性がある。
高架式十字迷路試験結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体治療群マウスに比べて、生理食塩水対照群は、オープンアーム領域に入る距離の百分率、オープンアームに入る回数の百分率が著しく減少して、両方間に有意差がある。
受動的回避試験の結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体治療群に比べて、生理食塩水対照群は、間違った回数が増加して、潜時が短くなった。
ＨＥ染色結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体治療群は、健康な１２月齢のマウスに近く、脳細胞数が大きく、規則的に配列されており、ニューロン細胞が完全であり、生理食塩水対照群マウスは、明らかなニューロン空胞変性が発生して、細胞が希に配列されている。
【０３２１】
実施例３６    神経膠腫の治療研究
ヒト神経膠腫Ｕ８７細胞を６週齢のヌードマウスの背部皮下に移植して、腫瘍形成後、神経膠腫モデルとした。実験用のため、それぞれ８匹を含む４群、すなわち、正常対照群、モデル対照群、ＡＤＲＢ３抗体治療群、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅとＣＤ４０抗体の併用療法群に分けた。ＡＤＲＢ３抗体治療群にＡＤＲＢ３抗体を、０．１ｍｇ／回、１回／５日間で腹腔内注射して、合計６週間治療した。モデル対照群に等量の生理食塩水を腹腔内注射した。
結果から明らかなように、対照群及びＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ治療群に比べて、ＡＤＲＢ３抗体治療群には、肺部転移巣が認められず、対照群のすべての肺部に転移巣が見られ、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ治療群の一部では、転移巣が発生し、ＡＤＲＢ３抗体治療群の生存期間がほかの群よりも延長している。
【０３２２】
実施例３７    ラット上皮内膀胱癌の治療研究
Ｎ−メチルニトロソウレア（ＭＮＵ）で誘導してラット上皮内膀胱癌モデルを構築した。実験のため、それぞれ８匹を含む４群、すなわち、正常対照群、モデル対照群、ＡＤＲＢ３抗体治療群、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅとＣＤ４０抗体の併用療法群に分けた。ＡＤＲＢ３抗体治療群にＡＤＲＢ３抗体を０．５ｍｇ／回、１回／５日で腹腔内注射して、合計７週間治療した。モデル対照群に等量の生理食塩水を腹腔内注射した。
結果から明らかなように、ＡＤＲＢ３抗体治療群の腫瘍の大きさは平均７０％減少し、連続的に３０日間治療した後、腫瘍の成長が停止した。
【０３２３】
実施例３８    マウス白血病の治療研究
ヒトＢリンパ性白血病細胞ＮＡＬＭ−６細胞を尾静脈注射により高度免疫不全ＮＣＧマウスの体内に移植して、マウス白血病モデルを構築した。実験のため、それぞれ８匹を含む４群、すなわち、正常対照群、モデル対照群、ＡＤＲＢ３抗体治療群、ＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅとＣＤ４０抗体の併用療法群に分けた。ＡＤＲＢ３抗体治療群にＡＤＲＢ３抗体を０．１ｍｇ／回、１回／５日で腹腔内注射して、合計５週間治療した。モデル対照群に等量の生理食塩水を腹腔内注射した。
結果から明らかなように、他の群に比べて、ＡＤＲＢ３抗体治療群は、体重、生存状態及び生存期間のいずれも良好であり、ＮＡＬＭ−６細胞の数が有意的に減少して、フローサイトメトリーでＴ細胞表面マーカーが検出されることから、治療群のＴエフェクター細胞の免疫機能が各対照群より高いことが示された。
【０３２４】
実施例３９    マウス糖尿病の治療研究
８週齢の糖尿病マウス（ｄｂ／ｄｂ  ｍｏｕｓｅ）を断食させて水を投与した状態を１２時間続けた後、内側眼角から採血して、空腹時血糖値（ＦＧＢ）を促進し、ＦＧＢが１１．１ｍｍｏｌ／Ｌより高いものを、それぞれ８匹を含む２群、すなわち、モデル対照群、ＡＤＲＢ３抗体治療群にランダムに分けた。ＡＤＲＢ３抗体治療群にＡＤＲＢ３抗体を０．１ｍｇ／回、１回／５日で腹腔内注射して、合計５週間治療した。モデル対照群に等量の生理食塩水を腹腔内注射した。最終回投与後、目の周りから採血して血糖、血中脂質の指標を測定した。
結果から明らかなように、（１）ＡＤＲＢ３抗体群では、ｄｂ／ｄｂマウスの血糖は低下しｔ（Ｐ＜０．０１）。（２）ＡＤＲＢ３抗体はｄｂ／ｄｂマウスの総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ含有量を低下させて、ＨＤＬ−Ｃ含有量を向上させ、糖尿病マウスの血中脂質レベルの回復に有利であった（Ｐ＜０．０１）。
【０３２５】
実施例４０    マウス統合失調症の治療研究
８週齢のＣ５７ＢＬ／６雄マウスに、マレイン酸ジゾシルピン（ＭＫ８０１）０．５ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射して、統合失調症マウスモデルを構築した。統合失調症の病症と類似した症状である自発運動の亢進（ｈｙｐｅｒｌｏｃｏｍｏｔｉｏｎ）と常同行動（ｓｔｅｒｅｏｔｙｐｙ）が観察された後、モデル対照群（ＭＫ８０１未注射）、モデル群（ＭＫ８０１注射）及びＡＤＲＢ３抗体治療群（ＭＫ８０１＋ＡＤＲＢ３抗体注射）に分けた。ＡＤＲＢ３抗体治療群にＡＤＲＢ３抗体を０．１ｍｇ／回、１回／５日で腹腔内注射して、合計５週間治療した。モデル対照群とモデル群に等量の生理食塩水を腹腔内注射した。各群の動物について、オープンフィールド試験とプレパルス抑制テスト（ＰＰＩ）を行って、各群のマウスの自発運動量と感覚運動ゲーティング機能を評定して比較した。
結果から明らかなように、対照群に比べて、モデル群マウスは、運動量が著しく増加し［運動総距離（１６２２±１４６．７）ｃｍ  ｖｓ（５５０２±４３２．４）ｃｍ；自発運動回数（１２２±１６．５）回  ｖｓ（３３２．６±２４．３）回；いずれもＰ＜０．００１］、且つ、ＰＰＩに障害が発生しており［７８  ｄＢ：（３５．５±１．６）ｖｓ（１１．４±２．１）；８４  ｄＢ：（４６．２±５．６）ｖｓ（１７．４±３．６）；いずれもＰ＜０．０１］、モデル群に比べて、ＡＤＲＢ３抗体治療群は、運動量が著しく低下し［（２６５５±３３１．４）ｃｍ、（１９２．３±１７．３）回］、ＰＰＩ異常が大幅に改善された。
【０３２６】
実施例４１    ＡＤＲＢ３のＮＫ細胞での位置及び機能
妊婦の臍帯血と成人の血塗抹標本について、ＡＤＲＢ３とＣＤ５６の二重染色をしたところ、臍帯血ＮＫ細胞には大量のＡＤＲＢ３が存在し、臍帯血のリンパ球に微量のＡＤＲＢ３（図１０３）があり、成人ＮＫ細胞にもＡＤＲＢ３が存在することが見出された。成人のリンパ球のＡＤＲＢ３増加は老化に関連する。ＮＫ細胞にはＡＤＲＢ３とＣＤ５６の含有量は正の相関を示し、ＡＤＲＢ３が多いほど、ＣＤ５６は多くなる。ＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔはナイーブＮＫであり、ＡＤＲＢ３はＣＤ５６を向上させて、ＮＫ分化・成熟を阻害した。ＮＫ９２細胞で細胞塗抹標本を製作して、ＡＤＲＢ３とＭＰＯを検出した。その結果、ＮＫ９２細胞では、ＡＤＲＢ３とＭＰＯが高発現された（図１０４）。ＡＤＲＢ３抗体（５〜５０ｎｇ／ｍｌ）でＮＫ９２細胞を処置して２日間後、溶解細胞について、ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ検出を行って、ＭＰＯ／ＣＤ５６タンパク質含有量を測定した。その結果、ＡＤＲＢ３抗体はＭＰＯ、ＣＤ５６タンパク質を用量依存的に低下させた。ＡＤＲＢ３は、ＮＫ細胞を阻害して、ＮＫ細胞による自体正常細胞への攻撃を回避する作用を有する。
【０３２７】
実施例４２    ＡＤＲＢ３による単球と巨核球の調節
免疫蛍光によって、健常者と急性心筋梗死患者の末梢血での単球、巨核球中のＡＤＲＢ３分布と含有量を検出した。その結果、急性心筋梗塞患者の単球（図１０５）、巨核球では、ＡＤＲＢ３は大量発現され、健常者よりも有意に高く、増殖期にある単球核内にＡＤＲＢ３がある。
急性冠症候群患者では、心筋トロポニンＴ（ｃＴｎＴ）陽性者の巨核球では、ＡＤＲＢ３含有量はｃＴｎＴ陰性者より高かった（図１０６）。
動物実験に、Ｂａｌｂ／ｃマウスにＡＤＲＢ３抗体（１ｍｇ／ｋｇ体重）を３日おきに１回腹腔内注射して、２週間後、マウスの凝固機能を検出した。その結果、ＡＤＲＢ３抗体は、血小板数を低減させて、血小板凝集を阻害し、インビトロ血栓に対して顕著な阻害効果がある。
【０３２８】
実施例４３    ＡＤＲＢ３融合遺伝子検出
膵臓癌細胞Ｐａｎｃ−１、膵臓癌患者癌組織及び隣接正常組織について、エクソン配列決定方法によって、ＡＤＲＢ３融合遺伝子を検出した。その結果、ＡＤＲＢ３遺伝子は、大量の癌関連遺伝子、たとえばｍｙｃ、ｒａｓ、ｓｒｃ、ｍｐｏ、ｐｍｌ、Ｈｅｒ２、ｅｇｆｒ、Ｂ７、ＣＤ８、ＣＤ２８等の遺伝子と融合遺伝子を形成した。Ｐａｎｃ−１をＡＤＲＢ３抗体で処置すると、ＡＤＲＢ３融合遺伝子は有意に減少した。
【０３２９】
実施例４４    ＡＤＲＢ３抗体によるヘロイン中毒の治療
ＳＤ成年雄ラットを、ヘロイン中毒群、治療群の２群にランダムに分けた。１日目の１０ｍｇ／ｋｇから１０日目の１００ｍｇ／ｋｇまで、１日ずつ増量するように、１日に３回に分けてラットにヘロインを皮下注射し、ラットヘロイン中毒モデルを構築した。治療群のラットは、毎日、ヘロイン注射後、ＡＤＲＢ３抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。ヘロインの最後投与の翌日、塩酸ナロキソン（４ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射して２ｈ後、ラット発生ライジング、激しい震え、歯噛み、ジャンプ、立ち等の禁断症状が発生すると、中毒動物モデルの構築に成功し、禁断症状について採点した後、各群の動物を麻酔して、全脳を取り出し、免疫組織化学法でラット関連脳領域のＡＤＲＢ３タンパク質発現を測定した。
結果から明らかなように、禁断評価スコアとして、ヘロイン中毒群のラットは、が２１．７±４．４、ＡＤＲＢ３抗体治療群は１１．７±２．８であり、２群間で有意性がある（Ｐ＜０．０５）。ヘロイン中毒群のラットは、ＡＤＲＢ３を発現させた陽性ニューロンの数が治療群ラットより有意に減少した（Ｐ＜０．０５）。
結論：ＡＤＲＢ３抗体は、ラットのヘロイン中毒を軽減させることができ、その作用メカニズムがニューロンＡＤＲＢ３シグナル伝達調節に繋がると考えられる。
【０３３０】
まとめ
以上の結果のとおり、ＡＤＲＢ３は、神経−内分泌−免疫調節ネットワークにおける重要な受容体であり、ＡＤＲＢ３媒介シグナル伝達経路が好中球、リンパ球や腫瘍細胞の増殖及び分化を調節するものである。健常な状態では、ＡＤＲＢ３は生体の非特異的免疫と特異的免疫の能力を維持して、外因性病原性微生物や老化した生体組織を除去することによって、生体保護及び老化防止作用を果たす。病理学的な状態では、該シグナル伝達経路の過剰な活性化により、系の慢性炎症を引き起こして、免疫恒常性を破壊する。ＡＤＲＢ３のモノクローナル抗体がＡＤＲＢ３と特異的に結合してその活性を調節（遮断又は作動）することができるため、炎症、ウイルス感染、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、神経変性疾患、自己免疫疾患、悪性腫瘍及び和高齢化による疾患の治療に適用できる。
【図１】
2018161125.tif 000010
【図２】
2018161125.tif 000011
【図３】
2018161125.tif 000012
【図４】
2018161125.tif 000013
【図５】
2018161125.tif 000014
【図６】
2018161125.tif 000015
【図７】
2018161125.tif 000016
【図８】
2018161125.tif 000017
【図９】
2018161125.tif 000018
【図１０】
2018161125.tif 000019
【図１１】
2018161125.tif 000020
【図１２】
2018161125.tif 000021
【図１３】
2018161125.tif 000022
【図１４】
2018161125.tif 000023
【図１５】
2018161125.tif 000024
【図１６】
2018161125.tif 000025
【図１７】
2018161125.tif 000026
【図１８】
2018161125.tif 000027
【図１９】
2018161125.tif 000028
【図２０】
2018161125.tif 000029
【図２１】
2018161125.tif 000030
【図２２】
2018161125.tif 000031
【図２３】
2018161125.tif 000032
【図２４】
2018161125.tif 000033
【図２５】
2018161125.tif 000034
【図２６】
2018161125.tif 000035
【図２７】
2018161125.tif 000036
【図２８】
2018161125.tif 000037
【図２９】
2018161125.tif 000038
【図３０】
2018161125.tif 000039
【図３１】
2018161125.tif 000040
【図３２】
2018161125.tif 000041
【図３３】
2018161125.tif 000042
【図３４】
2018161125.tif 000043
【図３５】
2018161125.tif 000044
【図３６】
2018161125.tif 000045
【図３７】
2018161125.tif 000046
【図３８】
2018161125.tif 000047
【図３９】
2018161125.tif 000048
【図４０】
2018161125.tif 000049
【図４１】
2018161125.tif 000050
【図４２】
2018161125.tif 000051
【図４３】
2018161125.tif 000052
【図４４】
2018161125.tif 000053
【図４５】
2018161125.tif 000054
【図４６】
2018161125.tif 000055
【図４７】
2018161125.tif 000056
【図４８】
2018161125.tif 000057
【図４９】
2018161125.tif 000058
【図５０】
2018161125.tif 000059
【図５１】
2018161125.tif 000060
【図５２】
2018161125.tif 000061
【図５３】
2018161125.tif 000062
【図５４】
2018161125.tif 000063
【図５５】
2018161125.tif 000064
【図５６】
2018161125.tif 000065
【図５７】
2018161125.tif 000066
【図５８】
2018161125.tif 000067
【図５９】
2018161125.tif 000068
【図６０】
2018161125.tif 000069
【図６１】
2018161125.tif 000070
【図６２】
2018161125.tif 000071
【図６３】
2018161125.tif 000072
【図６４】
2018161125.tif 000073
【図６５】
2018161125.tif 000074
【図６６】
2018161125.tif 000075
【図６７】
2018161125.tif 000076
【図６８】
2018161125.tif 000077
【図６９】
2018161125.tif 000078
【図７０】
2018161125.tif 000079
【図７１】
2018161125.tif 000080
【図７２】
2018161125.tif 000081
【図７３】
2018161125.tif 000082
【図７４】
2018161125.tif 000083
【図７５】
2018161125.tif 000084
【図７６】
2018161125.tif 000085
【図７７】
2018161125.tif 000086
【図７８】
2018161125.tif 000087
【図７９】
2018161125.tif 000088
【図８０】
2018161125.tif 000089
【図８１】
2018161125.tif 000090
【図８２】
2018161125.tif 000091
【図８３】
2018161125.tif 000092
【図８４】
2018161125.tif 000093
【図８５】
2018161125.tif 000094
【図８６】
2018161125.tif 000095
【図８７】
2018161125.tif 000096
【図８８】
2018161125.tif 000097
【図８９】
2018161125.tif 000098
【図９０】
2018161125.tif 000099
【図９１】
2018161125.tif 000100
【図９２】
2018161125.tif 000101
【図９３】
2018161125.tif 000102
【図９４】
2018161125.tif 000103
【図９５】
2018161125.tif 000104
【図９６】
2018161125.tif 000105
【図９７】
2018161125.tif 000106
【図９８】
2018161125.tif 000107
【図９９】
2018161125.tif 000108
【図１００】
2018161125.tif 000109
【図１０１】
2018161125.tif 000110
【図１０２】
2018161125.tif 000111
【図１０３】
2018161125.tif 000112
【図１０４】
2018161125.tif 000113
【図１０５】
2018161125.tif 000114
【図１０６】
2018161125.tif 000115