(57)【要約】【課題】新規なアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤を提供すること。【解決手段】下記一般式（１）：2018131389.tif 000010［式（１）中、Ｒ１はＣ１−６アルキル基を示し、Ｒ２はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ３はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ４はカルボニル基又は水酸基を示す。］で表される化合物又はその塩を有効成分として含む、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）：
【化１】
2018131389.tif 000006
［式（１）中、Ｒ１はＣ１−６アルキル基を示し、Ｒ２はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ３はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ４はカルボニル基又は水酸基を示す。］
で表される化合物又はその塩を有効成分として含む、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤。
【請求項２】
前記化合物がイソα酸である、請求項１に記載の剤。
【請求項３】
前記化合物がシス−イソフムロン又はシス−イソアドフムロンである、請求項１又は２に記載の剤。
【請求項４】
下記一般式（１）：
【化２】
2018131389.tif 000007
［式（１）中、Ｒ１はＣ１−６アルキル基を示し、Ｒ２はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ３はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ４はカルボニル基又は水酸基を示す。］
で表される化合物又はその塩を有効成分として含む、血中アセトアルデヒド低減剤。
【請求項５】
前記化合物がイソα酸である、請求項４に記載の剤。
【請求項６】
前記化合物がシス−イソフムロン又はシス−イソアドフムロンである、請求項４又は５に記載の剤。
【請求項７】
下記一般式（１）：
【化３】
2018131389.tif 000008
［式（１）中、Ｒ１はＣ１−６アルキル基を示し、Ｒ２はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ３はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ４はカルボニル基又は水酸基を示す。］
で表される化合物又はその塩を有効成分として含む、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進用の食品組成物。
【請求項８】
前記化合物がイソα酸である、請求項７に記載の食品組成物。
【請求項９】
前記化合物がシス−イソフムロン又はシス−イソアドフムロンである、請求項７又は８に記載の食品組成物。
【請求項１０】
下記一般式（１）：
【化４】
2018131389.tif 000009
［式（１）中、Ｒ１はＣ１−６アルキル基を示し、Ｒ２はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ３はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ４はカルボニル基又は水酸基を示す。］
で表される化合物又はその塩を有効成分として含む、血中アセトアルデヒド低減用の食品組成物。
【請求項１１】
前記化合物がイソα酸である、請求項１０に記載の食品組成物。
【請求項１２】
前記化合物がシス−イソフムロン又はシス−イソアドフムロンである、請求項１０又は１１に記載の食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
体内に摂取されたアルコール（エタノール）は、肝臓においてアセトアルデヒドに変換された後、さらにアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）の働きによって無毒な酢酸に代謝される。このアルコール代謝過程で生成するアセトアルデヒドは非常に毒性が強く、悪酔いの原因物質の一つと言われている。そのため、体内のアセトアルデヒドを速やかに低減させることができれば、悪酔いの軽減につながるものと期待される。
【０００３】
例えば、非特許文献１には、スルフォラファンがアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼを活性化して、アセトアルデヒドの分解を促進させることが開示されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ushida Y. et al., Sulforaphane accelerates metabolism by inducingaldehyde dehydrogenases: relevance to ethanol intolerance, Alcohol andAlcoholism, 48(5), 526-534(2013)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、新規なアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、ビールの苦味成分であるイソα酸に、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を促進する効果があることを新たに見出した。
【０００７】
本発明は、下記一般式（１）：
【化１】
2018131389.tif 000002
［式（１）中、Ｒ１はＣ１−６アルキル基を示し、Ｒ２はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ３はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ４はカルボニル基又は水酸基を示す。］
で表される化合物又はその塩を有効成分として含む、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤を提供する。
【０００８】
本発明のアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤は、上記一般式（１）で表される化合物又はその塩を有効成分として含むことにより、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を促進させることができる。
【０００９】
上記アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤の有効成分である化合物は、イソα酸であることが好ましく、シス−イソフムロン又はシス−イソアドフムロンであることがより好ましい。
【００１０】
上記一般式（１）で表される化合物又はその塩を対象（例えば、哺乳動物）に投与することによって、当該対象の体内（特に血中）におけるアセトアルデヒド濃度が低減する。よって、本発明は、上記一般式（１）で表される化合物又はその塩を有効成分として含む、血中アセトアルデヒド低減剤を提供する。
【００１１】
本発明は、上記一般式（１）で表される化合物又はその塩を有効成分として含む、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進用の食品組成物を提供する。
【００１２】
本発明は、上記一般式（１）で表される化合物又はその塩を有効成分として含む、血中アセトアルデヒド低減用の食品組成物を提供する。
【００１３】
上記血中アセトアルデヒド低減剤、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進用の食品組成物及び血中アセトアルデヒド低減用の食品組成物の有効成分である化合物は、イソα酸であることが好ましく、シス−イソフムロン又はシス−イソアドフムロンであることがより好ましい。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、新規なアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤を提供することができる。また本発明によれば、新規な血中アセトアルデヒド低減剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】マウス肝癌由来細胞にイソα酸含有ホップエキスを添加したときのアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を示すグラフである。
【図２】マウス肝癌由来細胞にシス−イソコフムロン、シス−イソフムロン又はシス−イソアドフムロンを添加したときのアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を示すグラフである。
【図３】マウス肝癌由来細胞にイソα酸含有ホップエキスを添加したときのＡＬＤＨ１及びＡＬＤＨ２の発現量を示すグラフである。
【図４】イソα酸含有ホップエキスを摂取したマウスの血中アセトアルデヒド濃度を示すグラフである。
【図５】イソα酸含有ホップエキスを摂取したマウスの肝臓中におけるアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を示すグラフである。
【図６】イソα酸含有ホップエキスを摂取したマウスの肝臓中におけるＡＬＤＨ１及びＡＬＤＨ２の発現量を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。
【００１７】
〔１．アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤〕
本実施形態に係るアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤は、下記一般式（１）：
【化２】
2018131389.tif 000003
［式（１）中、Ｒ１はＣ１−６アルキル基を示し、Ｒ２はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ３はＣ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を示し、Ｒ４はカルボニル基又は水酸基を示す。］
で表される化合物（以下、「化合物（１）」ともいう）又はその塩を有効成分として含む。
【００１８】
本明細書において「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数１〜６の直鎖又は分枝鎖のアルキル基を意味する。Ｃ１−６アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、１−エチルプロピル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，２−ジメチルプロピル基、ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基等が挙げられる。
【００１９】
本明細書において「Ｃ２−６アルケニル基」とは、炭素数２〜６の直鎖又は分枝鎖のアルケニル基を意味する。Ｃ２−６アルケニル基としては、例えば、ビニル基、プロペン−１−イル基、プロペン−２−イル基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、３−ブテニル基、１−メチル−１−プロペニル基、２−メチル−１−プロペニル基、１−ペンテニル基、２−ペンテニル基、３−ペンテニル基、４−ペンテニル基、５−ペンテニル基、１−メチル−１−ブテニル基、２−メチル−１−ブテニル基、３−メチル−１−ブテニル基、４−メチル−１−ブテニル基、１−メチル−２−ブテニル基、２−メチル−２−ブテニル基、３−メチル−２−ブテニル基、４−メチル−２−ブテニル基、１−メチル−３−ブテニル基、２−メチル−３−ブテニル基、３−メチル−３−ブテニル基、４−メチル−３−ブテニル基、１，２−ジメチル−１−プロペニル基、１−ヘキセニル基、２−ヘキセニル基、３−ヘキセニル基、４−ヘキセニル基、５−ヘキセニル基、６−ヘキセニル基等が挙げられる。
【００２０】
上記一般式（１）において、Ｒ１は、好ましくはＣ２−５アルキル基であり、より好ましくはエチル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、又はイソペンチル基であり、更に好ましくはイソプロピル基、イソブチル基、又はｓｅｃ−ブチル基であり、特に好ましくはイソブチル基、又はｓｅｃ−ブチル基である。
【００２１】
上記一般式（１）において、Ｒ２は、好ましくはＣ２−６アルケニル基であり、より好ましくは３−メチル−２−ブテニル基である。
【００２２】
上記一般式（１）において、Ｒ３は、好ましくはＣ２−６アルケニル基であり、より好ましくは３−メチル−２−ブテニル基である。
【００２３】
上記一般式（１）において、Ｒ４は、好ましくはカルボニル基である。
【００２４】
化合物（１）には立体異性体、互変異性体等の異性体が存在しうる。それらの異性体も本発明の範囲に包含されるが、中でも、下記一般式（２）：
【化３】
2018131389.tif 000004
［式（２）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、上記式（１）におけるＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４と同義である。］
で表される化合物が好ましい。
【００２５】
化合物（１）としては、イソα酸が好ましい。本明細書における「イソα酸」は、イソポストフムロン、イソコフムロン、イソフムロン、イソアドフムロン、イソプレフムロン、テトラヒドロイソポストフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソアドフムロン、テトラヒドロイソプレフムロン、ヘキサヒドロイソポストフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソアドフムロン、ヘキサヒドロイソプレフムロン等を含む意味で用いられる。なお、イソα酸にはシス体及びトランス体の立体異性体が存在するが、特に断りのない限り両者を含む意味で用いられる。
【００２６】
イソα酸の中でも、シス−イソコフムロン、シス−イソフムロン、シス−イソアドフムロン等のシス体のイソα酸が好ましく、シス−イソコフムロン、シス−イソフムロン、又はシス−イソアドフムロンがより好ましく、下記式（３）で表されるシス−イソフムロン、又は下記式（４）で表されるシス−イソアドフムロンが更に好ましい。
【化４】
2018131389.tif 000005
【００２７】
本実施形態に係るアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤が化合物（１）の塩を有効成分として含む場合、化合物（１）の塩は薬学的に許容される塩であることが好ましい。薬学的に許容される塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩などが挙げられる。
【００２８】
化合物（１）又はその塩は、市販品であってもよく、公知の方法（例えば、特開２０１０−１８６３１号公報に記載の方法）で合成したものであってもよい。また、化合物（１）又はその塩として、ホップエキス、ホップペレット等のホップ加工物を加熱等の異性化処理することで得られたもの（以下、「イソα酸含有ホップ加工物」ともいう）を用いてもよく、イソα酸含有ホップ加工物を、文献（Taniguchi Y. et al., Identification and quantification of theoxidation products derived from α-acids and β-acids during storage of hops (Human lupulus L.), J. Agric. FoodChem., 61(12), 3121-3130(2013)）に記載の方法で更に精製したものを用いてもよい。
【００２９】
したがって、本発明の一実施形態として、イソα酸含有ホップ加工物を有効成分として含む、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤が提供される。
【００３０】
アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼには、ＡＬＤＨ１とＡＬＤＨ２の２種類のアイソザイムが存在することが確認されている。ＡＬＤＨ１は、アセトアルデヒドの濃度が高い状態になってから作用する酵素であるのに対し、ＡＬＤＨ２はアセトアルデヒドの濃度が低い状態でも作用する酵素である。本実施形態に係るアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤は、ＡＬＤＨ１及びＡＬＤＨ２の少なくとも一方の活性化を促進するものであればよいが、アルコール代謝におけるアセトアルデヒドの分解に主に関与するのはＡＬＤＨ２であることから、少なくともＡＬＤＨ２の活性化を促進するものであることが好ましい。
【００３１】
本実施形態に係るアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤は、固体（例えば、粉末）、液体（水溶性又は脂溶性の溶液又は懸濁液）、ペースト等のいずれの形状であってもよい。また、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤等のいずれの剤形であってもよい。
【００３２】
上述の各種製剤は、化合物（１）又はその塩と、薬学的に許容される添加剤（賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、乳化剤、界面活性剤、基剤、溶解補助剤、懸濁化剤等）とを混和し、必要に応じて成形することによって調製することができる。
【００３３】
例えば、賦形剤としては、ラクトース、スクロース、デンプン、デキストリン等が挙げられる。結合剤としては、ポリビニルアルコール、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク等が挙げられる。崩壊剤としては、結晶セルロース、寒天、ゼラチン、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン等が挙げられる。乳化剤又は界面活性剤としては、Ｔｗｅｅｎ６０、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｓｐａｎ８０、モノステアリン酸グリセリン等が挙げられる。基剤としては、セトステアリルアルコール、ラノリン、ポリエチレングリコール、米糠油、魚油（ＤＨＡ、ＥＰＡ等）、オリーブ油等が挙げられる。溶解補助剤としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、Ｔｗｅｅｎ８０等が挙げられる。懸濁化剤としては、Ｔｗｅｅｎ６０、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｓｐａｎ８０、モノステアリン酸グリセリン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム等が挙げられる。
【００３４】
本実施形態に係るアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤は、ヒトに投与しても、非ヒト哺乳動物に投与してもよい。投与量及び投与方法は、投与される個体の状態、年齢等に応じて適宜決定することができる。好適な投与方法としては、例えば、経口投与が挙げられる。
【００３５】
本実施形態に係るアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤は、医薬品、医薬部外品、飲食品（飲料、食品）、飲食品添加物、飼料、飼料添加物等の製品の成分として使用することができる。飲料としては、例えば、水、清涼飲料水、果汁飲料、乳飲料、アルコール飲料、スポーツドリンク、栄養ドリンク等が挙げられる。食品としては、例えば、パン類、麺類、米類、豆腐、乳製品、醤油、味噌、菓子類等が挙げられる。また、本実施形態に係るアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤は、健康食品、機能性表示食品、特別用途食品、栄養補助食品、サプリメント又は特定保健用食品等の成分として使用することもできる。
【００３６】
上述のとおり、化合物（１）又はその塩を有効成分として含むアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤は、飲食品、又は飲食品添加物の成分として使用することが可能である。よって、本発明の一実施形態として、上記一般式（１）で表される化合物又はその塩を有効成分として含む、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進用の食品組成物が提供される。
【００３７】
〔２．血中アセトアルデヒド低減剤〕
化合物（１）又はその塩を対象（例えば、哺乳動物）に投与することによって、当該対象の血中におけるアセトアルデヒド濃度を低減する効果が奏される。よって、本発明の一実施形態として、上記一般式（１）で表される化合物又はその塩を有効成分として含む、血中アセトアルデヒド低減剤が提供される。なお、上記実施形態において、製剤形態、投与量及び投与方法、用途等については、〔１．アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性促進剤〕におけるものと同様である。
【００３８】
また、本発明の一実施形態として、上記一般式（１）で表される化合物又はその塩を有効成分として含む、血中アセトアルデヒド低減用の食品組成物が提供される。
【実施例】
【００３９】
以下、実施例に基づいて本発明をより具体的に説明する。但し、本発明は、以下の実施例により限定されるものではない。
【００４０】
１．試料の調製
ホップエキス（三栄源エフ・エフ・アイ株式会社製）に１Ｎ塩酸を加えて懸濁させた後、ヘキサンを添加して水層と有機層に分配した。有機層をエバポレーターで留去することで、イソα酸の濃度が７０％のイソα酸含有ホップエキスを得た。
また、文献（Taniguchi Y. et al., Identificationand quantification of the oxidation products derived from α-acids and β-acids during storage of hops(Human lupulus L.), J. Agric. Food Chem., 61(12), 3121-3130(2013)）に記載の方法に準じて、シス−イソコフムロン、シス−イソフムロン、及びシス−イソアドムロンの標品を得た。
【００４１】
２．培養細胞におけるアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）の活性測定
マウス肝癌由来細胞（Ｈｅｐａ−１ｃ１ｃ７（ＥＣＡＣＣ：９５０９０６１３））を１２ウェルプレートに２．５×１０５細胞／ウェルとなるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で２４時間培養した。培地は、α−ＭＥＭ（ナカライテスク株式会社製）に、非動化した１０％  ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、５００ｕｎｉｔ／ｍＬのペニシリン、及び５００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを添加したものを使用した。培養後、上記１．で調製した各試料を添加し、さらに４８時間培養した。ここで、イソα酸含有ホップエキスについては終濃度５ｐｐｍ、１０ｐｐｍ及び２５ｐｐｍとなるように添加し、シス−イソコフムロン、シス−イソフムロン及びシス−イソアドフムロンについては、各標品の５０％アセトニトリル水溶液を終濃度５ｍＭ及び１５ｍＭとなるように添加した。一方、コントロールについては、５０％アセトニトリル水溶液を添加した。培養液を除去し、付着細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した後、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ８．４）を加えて、スクラーパーにて細胞をこすり落とし、マイクロホモジナイザーでホモジナイズした。このホモジネートを遠心分離し（３，０００×ｇ、４℃、１５分間）、得られた上清をＡＬＤＨの活性測定に用いた。
ＡＬＤＨの活性測定は、以下のように６−メトキシ−２−ナフトアルデヒド（ＭＯＮＡＬ−６２）を基質として、アルデヒド基の酸化により生成する６−メトキシ−２−ナフトエ酸を、蛍光検出器を備えたＨＰＬＣで定量することで行った。反応液の全量が２００μＬとなるように、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ８．４）、１ｍＭ  ピラゾール、１ｍＭ  ＮＡＤ＋、上記で得られた上清、及び０．１ｍＭ  ＭＯＮＡＬ−６２を混合し、３７℃で３０分間反応させた。得られた反応液にアセトニトリル（８００μＬ）を加え、撹拌してＡＬＤＨを失活させた後、濾過してＨＰＬＣによる６−メトキシ−２−ナフトエ酸定量のための検体を得た。なお、ＨＰＬＣの分析条件は以下のとおりである。
カラム：Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ社製、２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ）
移動相：Ａ  ２．０％ギ酸（０．０２％ＥＤＴＡ含有）、Ｂ  アセトニトリル（２．０％ギ酸含有）、Ｂ：３６−５４％（０．０−４．５ｍｉｎ）
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
温度：３７℃
検出：ＦＬＤ（Ｅｘ  ３１０ｎｍ、Ｅｍ  ３６０ｎｍ）
結果を図１及び２に示す。
【００４２】
イソα酸含有ホップエキスについては、濃度依存的にＡＬＤＨ活性を促進させることが確認された（図１）。また、シス−イソフムロン及びシス−イソアドフムロンについては、有意にＡＬＤＨ活性を促進させることが確認された（図２）。一方、シス−イソコフムロンについては、有意差は見られなかったものの、ＡＬＤＨ活性を促進させることが確認された（図２）。
【００４３】
３．培養細胞におけるＡＬＤＨ１及びＡＬＤＨ２のｍＲＮＡ発現解析
上記２．と同様の方法で、試料としてイソα酸含有ホップエキスを添加して培養したマウス肝癌由来細胞（Ｈｅｐａ−１ｃ１ｃ７）からＴＲＩｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製、商品名）を用いてｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出し、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製、商品名）を用いて精製した。ｃＲＮＡは、ｔｏｔａｌ  ＲＮＡを鋳型としてＲｅｖｅｒＴｒａ  Ａｃｅ（東洋紡株式会社製、商品名）を用いて調製した。
ｍＲＮＡ発現解析は、リアルタイムＰＣＲにて行った。リアルタイムＰＣＲは、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  ４８０  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｉ  Ｍａｓｔｅｒ（Ｒｏｃｈｅ社製）を用い、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  ４８０システム（Ｒｏｃｈｅ社製）にて行った。なお、使用したプライマーの配列は以下のとおりである。
ＡＬＤＨ１
ＴＧＡＡＣＡＡＧＣＴＧＧＣＴＧＡＣＴＴＡＡＴＧＧ（配列番号１）
ＣＧＡＣＡＡＧＴＡＴＧＣＡＴＴＧＧＣＡＡＡＧＡＣ（配列番号２）
ＡＬＤＨ２
ＴＣＴＴＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＧＴＧＧＣＡＣＧＡ（配列番号３）
ＡＧＣＡＧＣＣＴＴＣＡＣＴＧＣＣＴＴＧＴＣＴＡ（配列番号４）
β−アクチン
ＣＡＴＣＣＧＴＡＡＡＧＡＣＣＴＣＴＡＴＧＣＣＡＡＣ（配列番号５）
ＡＴＧＧＡＧＣＣＡＣＣＧＡＴＣＣＡＣＡ（配列番号６）
結果を図３に示す。
【００４４】
イソα酸含有ホップエキスを添加することによって、ＡＬＤＨ１及びＡＬＤＨ２のｍＲＮＡ発現量が有意に上昇することが確認された。
【００４５】
４．マウスにおける血中アセトアルデヒド濃度の測定
５週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６ＮＣｒＳｌｃマウスを日本エスエルシー社より購入した。飼育温度２４±１℃、湿度４８±４％、１２時間の明暗サイクル（明期：８時〜２０時）の環境下において、ＡＩＮ−９３Ｇ（粉末飼料）で１週間の予備飼育を行い、体重を基に２群に分けた。
通常食群（コントロール）は、ＡＩＮ−９３Ｇ全量の１．０％をデキストリンで置換した粉末飼料を与えて飼育した。試験食群は、ＡＩＮ−９３Ｇ全量の１．０％を上記１．で得られたイソα酸含有ホップエキスで置換した粉末飼料を与えて飼育した。また、総摂餌量の差が通常食群と試験食群との間で生じないようにするため、ペアフィーディングにより給餌量を調節した。
通常食又は試験食を与えて１週間飼育したマウスにアセトアルデヒド（２００ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与し、眼底静脈より経時採血を行った（アセトアルデヒド投与前、５分後、１０分後、及び１５分後）。なお、アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ）によるアセトアルデヒドの分解を抑えるため、アセトアルデヒドの投与１時間前に４−メチルピラゾール（８２ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与した。採取した血液（４０μＬ）に０．６Ｎ過塩素酸（５００μＬ）を加え、ボルテックスミキサーで撹拌した後、遠心分離（１，５００×ｇ、４℃、５分間）し、上清を得た。得られた上清（４５０μＬ）を１．５ｍＬ容ＧＣバイアルに移し、内部標準液として０．０２％ｔ−ブタノール（５００μＬ）を加えて検体とし、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）を用いて血中アセトアルデヒド濃度を測定した。なお、ＧＣの分析条件は以下のとおりである。
カラム：Ｓｕｐｅｌｃｏｗａｘ（Ｓｕｐｅｌｃｏ社製、６０ｍ×０．５３ｍｍ、２．０μｍ）
キャリアガス：Ｎ２、５０ｋＰａ（定圧）
オーブン：９０℃
注入口：１１０℃
検出：ＦＩＤ、２００℃
結果を図４に示す。
【００４６】
イソα酸含有ホップエキスを含む飼料で飼育した試験食群は、通常食群（コントロール）と比較して、有意に血中アセトアルデヒド濃度が減少していることが確認された。
【００４７】
５．マウスの肝臓中におけるアセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）の活性測定
上記４．で使用したマウスから肝臓を摘出した。この肝臓に５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ８．４、３ｍＬ／肝臓１ｇ）を加えて、マイクロホモジナイザーでホモジナイズした。このホモジネートを遠心分離し（９，０００×ｇ、４℃、５分間）、得られた上清をＡＬＤＨの活性測定に用いた。ＡＬＤＨの活性測定は、上記２．と同様の方法で行った。結果を図５に示す。
【００４８】
イソα酸含有ホップエキスを含む飼料で飼育した試験食群は、通常食群（コントロール）と比較して、有意にＡＬＤＨ活性を促進させることが確認された。
【００４９】
６．マウスの肝臓中におけるＡＬＤＨ１及びＡＬＤＨ２のｍＲＮＡ発現解析
上記３．と同様の方法で、上記４．で摘出した肝臓からｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出した後、リアルタイムＰＣＲにてｍＲＮＡ発現解析を行った。結果を図６に示す。
【００５０】
イソα酸含有ホップエキスを含む飼料で飼育した試験食群は、通常食群（コントロール）と比較して、ＡＬＤＨ１及びＡＬＤＨ２のｍＲＮＡ発現量を有意に上昇させることが確認された。
【００５１】
なお、上記各試験で得られた測定値は、平均値±標準偏差、又は平均値±標準誤差で示した。また、測定値の統計解析は、ＪＭＰ１２（ＳＡＳ社製、商品名）ソフトウェアを用いてＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定で２群比較、又はＤｕｎｎｅｔｔの検定で多重比較を行い、危険率５％未満を有意とした。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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