(57)【要約】      （修正有）【課題】脂肪形成の低減、脂肪代謝の強化、体脂肪形成の阻止、および胃腸機能の改善のうちの少なくとも１つのために使用されるラクトバチルスプランタルムの提供。【解決手段】ジャーマンコレクション・オブ・マイクロオーガニズム・アンド・セルカルチャー（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen、ＤＳＭＺ）に、寄託番号ＤＳＭ３２４５１として寄託されたラクトバチルスプランタルム（Lactobacillus plantarum）ＴＣＩ３７８。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジャーマンコレクション・オブ・マイクロオーガニズム・アンド・セルカルチャー（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen、ＤＳＭＺ）に、寄託番号ＤＳＭ３２４５１として寄託されたラクトバチルスプランタルム（Lactobacillus plantarum）ＴＣＩ３７８。
【請求項２】
請求項１に記載のラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８および／またはその代謝産物を含む組成物。
【請求項３】
脂肪形成の低減、脂肪代謝の増強、体脂肪形成の阻止、および胃腸機能の改善のうちの少なくとも１つのための、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
医薬組成物、食品組成物または飼料組成物である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
経口投与のための医薬組成物である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
食品組成物であって、前記食品組成物が健康食品、日常補助食品、機能性食品、栄養補助食品または特別栄養食品である、請求項４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国特許商標庁に２０１７年３月２０日に出願された米国仮出願第６２／４７３，７８５号に対する優先権を主張するものであり、その開示の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、新規ラクトバチルスプランタルム（Lactobacillus plantarum）ＴＣＩ３７８に関する。本発明はまた、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８および／またはその代謝産物の使用、特に、脂肪形成の低減、脂肪代謝の増強、および／または胃腸機能の改善におけるラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８および／またはその代謝産物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
今日、人々は、不規則な睡眠、家庭でほとんど食事をしない、ストレスに苦しむ、運動不足、という生活様式で暮らしているため、メタボリックシンドローム、高血糖、高血圧、高脂血症の発生率はますます高くなっている。この様な生活様式は、胃腸機能および代謝の低下から始まり、日々の摂取カロリーの蓄積および脂肪の形成へ至ることで、便秘、肥満、慢性疾患、並びに人々の健康を重度に脅かす疾患または症状をもたらすと考えられている。
【０００４】
規則的な運動および野菜の日常的な摂取は、胃腸機能を改善し、脂肪代謝を増強することができるが、忙しくて家庭で食事することがほとんどない人にとって、より便利なアプローチが必要である。近年、胃腸機能の改善または脂肪代謝の増強に関連するますます多くの製品（例えば、野菜から得られる酵素）が開発されている。また、プロバイオティクスは人気のある研究テーマである。
【０００５】
親油性プロバイオティクスについての議論は、脂肪の減少ためにプロバイオティクスを使用する人々に希望を与えたが、その後発見されたプロバイオティクスのいずれもが脂質分解により生存できないことを示した。ヒト胃腸管のグラム陰性病原体の中には、脂質を分解することによって生存するものもあれば、脂質消費量が多すぎるとグラム陰性病原体が劇的に増殖し、病原体の表面に存在するリポ多糖類（ＬＰＳ）が人体に炎症を誘発することにより、肥満、真性糖尿病、心臓血管疾患、さらには癌を引き起こすものもある。
【０００６】
ラクトバチルスは、ヒトに存在するプロバイオティクスの１つであり、様々な発酵食品の製造に使用することができる。ラクトバチルス属の多くの細菌は、ＦＤＡ（米国食品医薬品局、Food and Drug Administration）のＧＲＡＳ（Generally Recognized As Safe）プロセスによって食品添加物に分類されている。
【０００７】
本発明者らは、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を単離し、その株およびその代謝産物が、脂肪形成の低減、脂肪代謝の増強、および胃腸機能の改善に有効であることを見出した。
【発明の概要】
【０００８】
本発明の目的は、寄託番号ＤＳＭ３２４５１として、ジャーマンコレクション・オブ・マイクロオーガニズム・アンド・セルカルチャー（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen、ＤＳＭＺ）に寄託されたラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を提供することである。
【０００９】
また本発明の目的は、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８およびその代謝産物を含む組成物を提供することである。
【００１０】
さらに本発明の目的は、組成物の製造におけるラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８およびその代謝産物の使用を提供することである。
【００１１】
本発明によって提供される組成物は、脂肪形成の低減、脂肪代謝の強化、体脂肪形成の阻止、および胃腸機能の改善のうちの少なくとも１つのために使用される。組成物は、医薬組成物、食品組成物、または飼料組成物である。好ましくは、医薬組成物は、経口投与のための形態として提供される。食品組成物は、健康食品、健康補助食品（dietary supplement）、機能性食品、栄養補助食品、または特別栄養食品である。
【００１２】
また本発明の目的は、上記の組成物の有効量を必要とする対象に投与することを含む、脂肪の減少方法および／または胃腸機能を改善する方法を提供することである。
【００１３】
本発明において実施される詳細な技術、および好ましい実施形態を、当業者が特許請求の範囲に記載された発明の特徴を十分に理解できるよう、以下の図面の簡単な説明で説明する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１〜４は、異なる培地で処理した脂肪細胞の結果を示す。図１は、処理され染色された細胞（矢印で指したダークゾーンは油滴である）を示す写真である。
【図２】対照群と比較した、他の群における脂質の相対含量を示す（＊＊は、対照群の結果と有意差があり、ｐ＜０．０１；＃＃は、ブランク群の結果と有意差があり、ｐ＜０．０１）。
【図３】対照群と比較した、他の群の細胞におけるＰＬＩＮ１遺伝子の発現レベルを示す（＊は、対照群の結果と有意差があり、ｐ＜０．０５；＊＊は、対照群の結果と有意差があり、ｐ＜０．０１；＃は、ブランク群の結果と有意差があり、ｐ＜０．０５）。
【図４】対照群と比較した、他の群の細胞におけるＧＬＵＴ４遺伝子の発現レベルを示す（＊＊は対照群の結果と有意差があり、ｐ＜０．０１；＃は、ブランク群の結果と有意差があり、ｐ＜０．０５）。対照群の細胞は脂肪細胞維持培地で培養し、ブランク群の細胞は１％ＭＲＳブロスを含む脂肪細胞維持培地で培養し、ＴＣＩ３７８群の細胞は、１％ＴＣＩ３７８試料を含む脂肪細胞維持培地で培養した。
【００１５】
【図５】図５〜図９は、０日目（すなわち、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を含有するカプセルを摂取する前）および１４日目（すなわち、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を含むカプセルを１４日間連続して摂取した後）に対象の指標を比較することによって、脂肪の減少に対するラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８の効果を示す。図５は、全身脂肪率（＊は、０日目の結果と有意差があり、ｐ＜０．０５）を示す。
【図６】体幹脂肪率（＊は、０日目の結果と有意差があり、ｐ＜０．０５）を示す。
【図７】体重（＊＊は、０日目の結果と有意差があり、ｐ＜０．０１）を示す。
【図８】腹囲（＊は、０日目の結果と有意差があり、ｐ＜０．０５）を示す。
【図９】ＢＭＩ値（＊＊は、０日目の結果と有意差があり、ｐ＜０．０１）を示す。
【００１６】
【図１０】０日目および１４日目の対象の排便頻度を示しており、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８が胃腸機能の改善に及ぼす影響を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下の段落では、本発明のいくつかの実施形態を詳細に説明する。しかしながら、本発明の精神から逸脱することなく、本発明は様々な実施形態で実施されてもよく、本明細書に記載された実施形態に限定されるべきではない。本明細書中で特に指示がない限り、本発明の明細書（特に特許請求の範囲）に記載された表現「a」、「an」、「the」等は、単数形および複数形の両方を含むことを意図している。本明細書において、「対象」という用語は、哺乳動物（例えば、ヒト）または非哺乳動物（例えば、家禽または鳥）を含む動物を指す。
【００１８】
本発明者らは、キムチから新規菌株を単離し、１６ＳｒＲＮＡ遺伝子配列分析により菌株を分析し、系統関係から乳酸菌をラクトバチルスプランタルムと同定してラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８と命名した。ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８は、ジャーマンコレクション・オブ・マイクロオーガニズム・アンド・セルカルチャー（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen、ＤＳＭＺ）に寄託番号ＤＳＭ３２４５１として寄託されている。ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８は、配列番号１の１６ＳｒＲＮＡフラグメントを有する。
【００１９】
本発明者らは、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８およびその代謝産物が、脂肪形成の低減、脂肪代謝の増強および胃腸機能の改善に有効であることを見出した。したがって、本発明は、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８および／またはその代謝産物を含む組成物、ならびに組成物の製造におけるラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８および／またはその代謝産物の使用を提供し、前記組成物は、脂肪形成を減少させ、脂肪代謝を強化し、体脂肪形成を阻止し、胃腸機能を改善する。
【００２０】
本発明によって採用されたラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８の代謝産物は、その増殖に適した環境下でラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を培養することによって生成することができる。例えば、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８の代謝産物含有液体は、適切な培地中でラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を培養し、続いて必要に応じ細菌を含む固形物を培地から除去することによって得られる。
【００２１】
所望の代謝産物を提供するために、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８の増殖および代謝のための所望の栄養素（例えば、酵母抽出物、タンパク質およびグルコース）および条件（例えば、ｐＨ値）を提供できる限り、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８の培養のために、任意の培地を適宜選択して使用することができる。さらに、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を培養する時間は、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８が少なくとも１回の代謝サイクルを完了するのに十分な時間であれば特に限定されない。例えば、本発明の一実施形態では、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を１８時間ＭＲＳブロス中で培養して、その株が代謝産物を代謝し生成する。
【００２２】
本発明は、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８の代謝サイクルを経た培地、すなわちラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８およびその代謝産物を含む培地を直接使用することができる。あるいは、本発明は、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８のような固形物が除去されたラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８の代謝産物を含有する液体を使用することができる。培養後に生成される代謝産物の所望の効果に悪影響を及ぼさない限り、適宜任意の手順により固形物を除去することができる。一般に、遠心分離、フィルター濾過、沈殿およびデカンテーション等の物理的アプローチを用いて固形物を除去することができる。必要に応じて、上記の手順を繰り返すか、または組み合わせて、可能な限り培地から固形物（細菌を含む）を除去することができる。
【００２３】
所望の目的に応じて、本発明による医薬組成物は、特に限定されない任意の適切な形態で提供することができる。例えば、医薬組成物は、経口投与によって、必要とする対象に投与することができる。投与形態および目的に応じて、適切な担体を選択して医薬組成物を提供することができ、前記担体として、賦形剤、希釈剤、助剤、安定剤、吸収遅延剤、崩壊剤、ハイドロトロープ剤、乳化剤、酸化防止剤、接着剤、結合剤、粘着付与剤、分散剤、懸濁剤、潤滑剤、および吸湿剤等を挙げることができる。
【００２４】
経口投与剤形として、本発明により提供される医薬組成物は、活性成分（すなわち、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８およびその代謝産物）の所望の効果に悪影響を及ぼさない任意の薬学的に許容される担体を含んでもよい。適切な担体の例として、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールまたはその誘導体、セルロース、デンプン、糖ベントナイトおよびそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。医薬組成物は、錠剤（例えば、糖衣錠）、丸薬、カプセル、顆粒、散剤（pulvis）、フルイド抽出物、溶液、シロップ、懸濁液、チンキ（tincture）等の経口投与のための任意の適切な形態で提供することができる。
【００２５】
対象の必要性、年齢、体重および健康状態に依存して、本発明によって提供される医薬組成物は、１日１回、１日複数回、または数日に１回等、様々な頻度で投与することができる。本発明により提供される医薬組成物中のラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８および／またはその代謝産物の含有量比は、実際の適用の要件に応じて調整することができる。さらに、薬学的組成物は、必要に応じて、さらに１つ以上の他の活性成分を含んでもよく、あるいは１以上の他の活性成分を含む医薬と組み合わせて使用することができ、他の活性成分が本発明の活性成分（すなわち、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８およびその代謝産物）の効果に悪影響を及ぼさない限り、提供される調製物の適用可能性および適応症を広げることができる。
【００２６】
本発明によって提供される食品組成物は、健康食品、日常補助食品、機能性食品、栄養補助食品、または特別栄養食品とすることができ、乳製品、肉製品、パン、パスタ、クッキー、トローチ、カプセル、フルーツジュース、茶、スポーツドリンク、栄養ドリンク等として製造可能であるが、これに限定されない。
【００２７】
対象の年齢、体重および健康状態に応じて、本発明によって提供される健康食品、日常補助食品、機能性食品、栄養補助食品、および特別栄養食品は、１日１回、１日複数回、または数日に１回等様々な頻度で摂取することができる。本発明によって提供される健康食品、日常補助食品、機能性食品、栄養補助食品、および特別栄養食品中のラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８および／またはその代謝産物の含有量は、特定の個体群ごとに毎日摂取すべき適切な量に調節することができる。
【００２８】
特定の個体群（例えば、高脂血症、妊婦等）に対して推奨される1日用量、使用標準および使用条件、あるいは他の食品または医薬品と組み合わせて使用する場合の推奨事項は、本発明によって提供される健康食品、日常補助食品、機能性食品、栄養補助食品、および/または特別栄養食品の外装パッケージ上に表示することができる。したがって、ユーザーが、医師、薬剤師、または関連する役職者の指導を受けることなく自分自身で、健康食品、日常補助食品、機能性食品、栄養補助食品、および／または特別栄養食品を安全かつ確実に摂取することが好ましい。本発明によって提供される食品組成物において、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８および／またはその代謝産物の種類（the types）は、上記の記載に即している。
【００２９】
必要に応じて、本発明によって提供される医薬組成物、食品組成物、または飼料組成物は、食品組成物、または飼料組成物の嗜好性および視覚を増強するために適切な量の香味剤、トナー、または着色剤等の添加剤、および／または医薬組成物、食品組成物、または飼料組成物の安定性および保存性を向上させるための緩衝剤、保存剤、防腐剤、抗菌剤、または抗真菌剤等の添加剤をさらに含んでもよい。
【００３０】
本発明はまた、有効量の組成物を必要とする対象に投与することを含む、脂肪形成を減少させ、脂肪代謝を増強し、体脂肪形成をブロックする、および／または胃腸機能を改善するための方法であって、前記組成物は、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８および／またはその代謝産物を含む方法を提供する。ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８および／またはその代謝産物の種類（the types）も上記の記載に即している。
【００３１】
以下、具体例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。ただし、以下の実施例は、本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲はこれに限定されるものではない。本発明の範囲は添付の特許請求の範囲に示される。
【００３２】
実施例
【００３３】
（製造例）
【００３４】
Ａ．ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８の選択および同定
【００３５】
（Ａ−１）選択
【００３６】
キムチのホモジネート（キムチと漬け汁を含む）を、キムチ：ＭＲＳブロス＝１：１００の体積比でＭＲＳブロスと混合した後、得られた混合物を嫌気的に培養（すなわち、酸素濃度が５％未満）し、３７℃の温度で１８時間インキュベートした。その後、培養した混合物をＭＳＲ寒天上に広げ、３７℃で嫌気的に培養して、寒天上に異なるコロニーを形成した。ＭＳＲ寒天を単一コロニーが現れるまで３７℃の嫌気性インキュベーターで培養した。次に、菌株の単一性（uniqueness）を確認するために、滅菌接種ループを用いてコロニーを拾い、ＭＳＲ寒天上で象限ストリーキング法を行い、ＭＳＲ寒天を単一コロニーが現れるまで３７℃の嫌気性インキュベーターで培養した。
【００３７】
（Ａ−２）同定
【００３８】
（Ａ−１）から選択された菌株を系統発生解析したところ、配列番号１に示す配列を有する１６ＳｒＲＮＡ断片を有することが確認された。配列番号１は、米国国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）のオンラインデータベースと比較され、配列番号１は、ラクトバチルスプランタルム株の１６ＳｒＲＮＡフラグメントに対して約９９％の同一性を有することが確認された。したがって、系統発生の同定に応じて、（Ａ−１）から選択された菌株は、系統発生の関係でラクトバチルスプランタルム株として同定され、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８と命名された。
【００３９】
（Ａ−３）保管
【００４０】
（Ａ−１）から得られた独自の菌株をＭＲＳブロスで液体培養し、細菌培養液を得た。グリセロール：細菌培養液＝１：３の体積比でグリセロールを添加して混合物とし、この混合物をコレクションチューブに入れ−８０℃で保存した。
【００４１】
Ｂ．ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８活性化および試料調製
【００４２】
（Ｂ−１）活性化
【００４３】
ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を含むコレクションチューブを解凍した後、ＭＲＳブロスに接種濃度１％（約１×１０４ＣＦＵ／ｍＬ）でＴＣＩ３７８株を植菌し、３７℃で１８時間嫌気条件下において培養し、以下の実験に用いるＴＣＩ３７８培養液を調製した。
【００４４】
（Ｂ−２）試料調製
【００４５】
（Ｂ−１）から得られたＴＣＩ３７８培養液を接種濃度１％（約１×１０４ＣＦＵ／ｍＬ）でＭＲＳブロスに植菌し、３７℃で１８時間嫌気条件下において培養した。上記培養後、５０００ｒｐｍで５分間遠心分離して菌体（ＴＣＩ３７８株）を除去した。遠心分離した培地の上清を０．２μｍフィルターでろ過し、さらに細菌を除去した。ろ液を回収し、ＴＣＩ３７８試料（ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８の代謝産物を含む）を得た。
【００４６】
Ｃ．脂肪細胞の培養
【００４７】
（Ｃ−１）培地
（１）前脂肪細胞増殖培地：
・９０％ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ；Gibcoから購入）
・１０％ウシ血清（Gibcoから購入）
・１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Gibcoから購入）
（２）分化培地：
・９０％ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ；Gibcoから購入）
・１０％ウシ胎仔血清（Gibcoから購入）
・１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Gibcoから購入）
・１．０μｍｏｌ／ｍＬデキサメタゾン（Sigmaから購入）
・０．５ｍｍｏｌ／ｍＬメチルイソブチルキサンチン（Sigmaから購入）
・１．０μｇ／ｍＬインスリン（Sigmaから購入）
（３）脂肪細胞維持培地：
・９０％ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ；Gibcoから購入）
・１０％ウシ胎仔血清（Gibcoから購入）
・１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Gibcoから購入）
・１．０μｇ／ｍＬインスリン（Sigmaから購入）
【００４８】
（Ｃ−２）脂肪細胞の分化
【００４９】
２４ウェルプレートの各ウェルに（Ｃ−１）の前脂肪細胞増殖培地を注入した後、マウス３Ｔ３−Ｌ１線維芽細胞（ＢＣＲＣ６００７１、財団法人食品工業発展研所から購入）を２４ウェルプレートに８×１０４細胞／ウェルの播種密度で播種し、３７℃で４８時間培養した。その後、培地を（Ｃ−１）の分化培地に交換し、３７℃で４日間培養を継続した。その後、培地をさらに（Ｃ−１）の脂肪細胞維持培地に置き換え、３７℃で８日間培養を継続して以下の実験に用いる脂肪細胞を得た。
【００５０】
実施例１：ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８およびその代謝産物の脂肪の減少に対する効果
【００５１】
（１−１）細胞処理
【００５２】
製造例Ｃ−２で得られた脂肪細胞を３群に分け、３７℃で４８時間、以下の培地で別々に培養した。
【表１】
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【００５３】
（１−２）脂質（オイルレッドＯ）染色
【００５４】
（１−１）の培養で得られた各群の細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した後、各群に１０％メタノールを１ｍＬ加えて混合物とし、混合物を室温に３０分間置いて細胞を固定した。次いで、メタノールを除去し、細胞をＰＢＳで２回洗浄した。５０％イソプロパノール１ｍＬを各群に１分間加えた後、取り出した。最後に、オイルレッドＯ溶液を各群に添加し、室温で１時間インキュベートして細胞の油滴を染色した。オイルレッドＯ溶液を除去し、細胞をＰＢＳで２回洗浄した。次に、脂肪細胞の油滴を顕微鏡下で観察し写真を撮影した。結果を図１に示す（矢印で指し示すダークゾーンは油滴である）。
【００５５】
上記油滴の観察および記録が完了した後、各群の細胞を１００％イソプロパノールで１０分間処理して、蓄積した油滴を溶解させた。そして、各群の細胞を５１０ｎｍの波長で吸光度測定に供して、各群の細胞中の脂質含量を測定した。最後に、ブランク群およびＴＣＩ３７８群の細胞における脂質の相対含量を、対照群の結果を基に（すなわち、対照群の脂質含量を１として）計算した。結果を図２に示す。
【００５６】
図１に示すように、対照群と比較して、ＴＣＩ３７８群の油滴は小さく、ブランク群の油滴は有意に変化しなかった。図２に示すように、対照群およびブランク群と比較して、ＴＣＩ３７８群の細胞における脂質の相対含量は約１５％減少した。これらの結果は、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８およびその代謝産物が脂肪細胞中の脂質含量を減少させるのに有効であることを示す。
【００５７】
（１−３）遺伝子発現の解析
【００５８】
タンパク質のペリリピンは、脂肪細胞の油滴を破壊から保護することができることが知られている。ペリリピンの発現量を低下させることができれば、脂肪細胞の油滴がより破壊されやすくなり、脂肪代謝を高めることができる。また、ＧＬＵＴ４遺伝子の発現の増加は、グルコースの吸収に対する脂肪細胞の能力に影響を及ぼし、それによって脂肪酸の生成および肥満の原因となることも知られている。したがって、ＧＬＵＴ４遺伝子の発現レベルを低下させることができれば、脂肪の形成が減少する。ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８およびその代謝産物が、脂肪代謝の促進および／または脂肪形成の低減に効果を有することを確認するため、ＰＬＩＮ１（すなわち、ペリリピンを発現する遺伝子）およびＧＬＵＴ４遺伝子の発現レベルにおけるラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８およびその代謝産物の影響を調べる分析を行った。
【００５９】
（１−１）で得られた各群の細胞を採取し、ＲＮＡ精製キット（GeneMarkより購入）を用いてＲＮＡ抽出を行った。つづいてＲＮＡを、SuperScriptTM逆転写酵素キット（Invitrogenから購入）を用いてｃＤＮＡに逆転写した。その後、SYBR Green Master Mix（KAPAより購入）およびABI StepOne PlusTM Systemを用いて定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）を行い、各群の細胞におけるＰＬＩＮ１およびＧＬＵＴ４遺伝子の発現量を測定した。次に、対照群の結果を基にＴＣＩ３７８群のＰＬＩＮ１遺伝子およびＧＬＵＴ４遺伝子の相対発現量を算出した（対照群の発現量を１とした）。結果を図３および図４に示す。
【００６０】
図３および図４に示すように、対照群およびブランク群と比較して、ＴＣＩ３７８群におけるＰＬＩＮ１およびＧＬＵＴ４遺伝子の発現レベルは有意に低かった。
【００６１】
（１−２）および（１−３）の結果は、本発明のラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８およびその代謝産物が、脂肪生成の低減および脂肪代謝の増強に有効であることを示しており、したがって、脂肪細胞における脂質の含量を減少させ、それによって体脂肪形成を阻止するために使用可能であることを示している。
【００６２】
実施例２：ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８の脂肪の減少および胃腸機能の改善に対する効果
【００６３】
体脂肪率が２７％を超えていて、ダイエット食品や薬物を服用していない１０人のボランティア対象を募集した。実験を行う前に（すなわち、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を含むカプセルを採取する前に）、不完全な排便（incomplete bowel movement）を感じる頻度を自己評価し（「一度もない」、「しばしば」、「ときどき」、および「常に」からなる群より１つを選択する）、体重、胴囲、ＢＭＩ値、全身脂肪率、および体幹脂肪率を測定した。次いで、各対象は、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８（５×１０９ＣＦＵ／カプセル）を含むカプセルを１４日間連続して摂取した（すなわち、各対象はカプセルを１４回服用した）。その後、各対象に不完全な排便感の頻度を自己評価させ、体重、胴囲、ＢＭＩ値、全身脂肪率、体幹脂肪率を測定した。最後に、１０名の対象の全身脂肪率、体幹脂肪率、体重、胴囲、ＢＭＩ値を平均して図５〜図９に示した。また、不完全な排便を感じる自己評価結果について統計的分析を行い、対象の総数を「１」とすることで、「一度もない」、「しばしば」、「ときどき」、「常に」不完全な排便を感じる割合を算出した。結果を図１０に示す。
【００６４】
図５〜図９に示すように、０日目（ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８含有カプセルの摂取前）と比較して、全身脂肪率も体幹脂肪率も、１４日目（すなわち、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を含むカプセルを１４日間連続して摂取させた後）に有意に低下した。０日目と比較して、体重、胴囲、ＢＭＩ値も１４日目に低下した。さらに、図１０に示すように、対象がラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を含むカプセルを１４日間連続して服用した後、不完全な排便の感覚の頻度が減少した。
【００６５】
以上の結果から、ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８を含むカプセルを服用した後、脂肪蓄積と胃腸機能が改善され、体重、ＢＭＩ値、胴囲が減少することが示された。したがって、本発明によって提供されるラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８およびその代謝産物は、脂肪生成の低下、脂肪代謝の増強、体脂肪形成の阻止、および胃腸機能の改善のうちの少なくとも１つのために使用することができる。
（微生物の寄託）
寄託機関：ジャーマンコレクション・オブ・マイクロオーガニズム・アンド・セルカルチャー（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen、ＤＳＭＺ）
住所：インフォッフェンシュトラーセ７Ｂ、３８１２４  ブラウンシュヴァイク、ドイツ
日付：２０１７年３月１３日
寄託された微生物：ラクトバチルスプランタルムＴＣＩ３７８
受付番号：ＤＳＭ３２４５１
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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