(57)【要約】      （修正有）【課題】副作用を最小限にして、ＮＲＦ２（ＮＦ−Ｅ２−ｒｅｌａｔｅｄ  ｆａｃｔｏｒ  ２）活性化剤を用いた神経変性及び炎症性疾患の治療及び予防の効果を最大限に引き出すための方法の提供。【解決手段】ゾナロール、カルノシン酸、ジメチルフマル酸、ケルセチン、カテキン類、クロロゲン酸類等のＮＲＦ２活性化剤と、α−ケトグルタル酸、ピルビン酸、オキサロ酢酸等の有機酸とを併用する。【効果】ＮＲＦ２活性化剤の使用量を制限し、副作用を最小限にすることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
「有機酸」と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【請求項２】
「有機酸」と「フマル酸」と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【請求項３】
ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、「有機酸」と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【請求項４】
ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、「有機酸」と「フマル酸」と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【請求項５】
ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、時間について同時、個別、または逐次的に使用するための組合せとして、「有機酸」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品または機能性表示食品と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品または機能性表示食品を用いる方法。
【請求項６】
ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、時間について同時、個別、または逐次的に使用するための組合せとして、「有機酸」と「フマル酸」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品または機能性表示食品と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品または機能性表示食品を用いる方法。
【請求項７】
神経変性疾患または炎症性疾患の治療のため、ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、「有機酸」と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【請求項８】
神経変性疾患または炎症性疾患の治療のため、ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、「有機酸」と「フマル酸」と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【請求項９】
神経変性疾患または炎症性疾患の治療のため、ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、時間について同時、個別、または逐次的に使用するための組合せとして、「有機酸」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品または機能性表示食品と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【請求項１０】
神経変性疾患または炎症性疾患の治療のため、ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、時間について同時、個別、または逐次的に使用するための組合せとして、「有機酸」と「フマル酸」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品または機能性表示食品と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０に記載される「有機酸」は、α−ケトグルタル酸、ピルビン酸もしくはオキサロ酢酸から少なくともひとつ選択される酸もしくはその薬学上許容される塩またはその薬学上許容される溶媒和物であることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項１２】
請求項１〜１０に記載される「有機酸」は、好ましくはα−ケトグルタル酸もしくはその薬学上許容される塩またはその薬学上許容される溶媒和物であることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項１３】
請求項１〜１０に記載される「フマル酸」は、フマル酸もしくはその薬学上許容される塩またはその薬学上許容される溶媒和物であることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項１４】
請求項１〜１０に記載される「ＮＲＦ２活性化剤」は、ＮＲＦ２活性化剤もしくはその薬学上許容される塩またはその薬学上許容される溶媒和物であることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項１５】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はゾナロール、イソゾナロール、ヤハズノールまたはエントーヤハズノールおよびこれらの組み合わせからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項１６】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はカルノシン酸またはパラカルノシン酸であることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項１７】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はジメチルフマル酸またはモノメチルフマル酸であることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項１８】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤は、バルドキソロンメチル（ＲＴＡ４０２）、ＲＴＡ４０８、ＲＳ９、ＮＫ２５２またはＬＨ６０１であることを特微とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項１９】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はフマル酸であることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項２０】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はケルセチンであることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項２１】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤は茶カテキン類すなわちエピカテキン、メチル化カテキン、エピガロカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカテキンガレートおよびこれらの組み合わせからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項２２】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はイソフムロン類すなわちイソフムロン、イソアドフムロン、イソコフムロン、およびこれらの組み合わせからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項２３】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はクロロゲン酸類すなわちカフェオイルキナ酸、フェルロイルキナ酸、ジカフェオイルキナ酸、およびこれらの組み合わせからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項２４】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はレスベラトロールであることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項２５】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤は還元型コエンザイムＱ１０であることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項２６】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はクルクミンであることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項２７】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はスルフォラファンであることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項２８】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はターシャルブチルハイドロキノン（ＴＢＨＱ）であることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項２９】
請求項７〜１０に記載される神経変性疾患が、多発性硬化症であることを特徴とする、請求項７〜１０に記載される方法。
【請求項３０】
請求項７〜１０に記載される神経変性疾患が、アルツハイマー病であることを特徴とする、請求項７〜１０に記載される方法。
【請求項３１】
請求項７〜１０に記載される神経変性疾患が、パーキンソン病であることを特徴とする、請求項７〜１０に記載される方法。
【請求項３２】
請求項７〜１０に記載される神経変性疾患が、加齢黄班変性であることを特徴とする、請求項７〜１０に記載される方法。
【請求項３３】
請求項７〜１０に記載される炎症性疾患が、潰瘍性大腸炎であることを特徴とする、請求項７〜１０に記載される方法。
【請求項３４】
請求項７〜１０に記載される炎症性疾患が、クローン病であることを特徴とする、請求項７〜１０に記載される方法。
【請求項３５】
請求項７〜１０に記載される炎症性疾患が、関節性リウマチであることを特徴とする、請求項７〜１０に記載される方法。
【請求項３６】
請求項７〜１０に記載される炎症性疾患が、高脂血症であることを特徴とする、請求項７〜１０に記載される方法。
【請求項３７】
請求項７〜１０に記載される炎症性疾患が、糖尿病であることを特徴とする、請求項７〜１０に記載される方法。
【請求項３８】
請求項７〜１０に記載される炎症性疾患が、糖尿病性慢性腎疾患であることを特徴とする、請求項７〜１０に記載される方法。
【請求項３９】
請求項１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤は、ケルセチン、ジヒドロケルセチン、オーロン、バイカレイン、エピカテキン、メチル化カテキン、エピガロカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカテキンガレート没食子酸エピガロカテキン、エリオデイクチオール、エリオデイクチオール−７−Ｏ−グルコシド、フィセチン、カンプフェロール、ナリンゲニン、ナリンゲニン−７−Ｏ−グルコシド、プリアニジンＢ２、サッパカルコン、タキシフォリン、イソオリエンチン、ゲニスタイン、プエラリン、ジヒドログリアスペリンＣ、イカリシドＩ、２，‘３’−ジヒドロキシ−４‘，６’−ジメトキシカルコン、４，２‘，５’−トリヒドロキシ−４‘−メトキシカルコン、ブテイン、フォロレチン、ルシドン、アスタキサンチン、オカニン、キサントフモール、リコカルコンＥ、イソフラボン、バルドキソロンメチル、アンダルソール、コンチトリオール、ラガスカトリオール、カーウェオール、カウレノン酸、オリドニン、カルノシン酸、カルノソール、パラカルノシン酸、ゾナロール、イソゾナロール、ヤハズノール、エントヤハズノール、アンドログラホリド、リネアロール、シドール、ガノデルマンデイオール、マスリニン酸、コスツノリド、プルチャラミンＧ、イソアラントラクトン、ゼルンボン、α−イソキュベベノール、ＲＴＡ４０２、ＲＴＡ４０８、ＲＳ９、クロロゲン酸、カジャニンステイルベン酸、ダンシャンス、フェルラ酸、フェルラ酸エチル、リトスペルミン酸Ｂ、レスベラトロール、ピセアタンノール、プロトカテク酸、ガストロジン、ロットレリン、タンシノンＩ、タンシノンＩＩＡ、ストロンギロホリン８、プランバーギン、モルギン、アントロキノノール、ターシャルブチルハイドロキノン、ヒドロキノン、カテコール、アントシアニン、タンニン、ルチン、ルテイン、エラグ酸、リグナン、クルクミン、クマリン、スルフォラファン、６−（メチルスルフィニル）ヘキシルイソチアネート、６−メチルチオヘキシルイソチアネート、１−シアノ−２，３−エピチオプロパン、ジメチルマレイン酸、モノメチルマレイン酸、ジエチルマレイン酸、マレイン酸、ジメチルフマル酸、モノメチルフマル酸、ジエチルフマル酸、フマル酸、バルドキソロンメチル（ＲＴＡ４０２）、ＲＴＡ４０８、ＲＳ９、ＮＫ２５２、ＬＨ６０、フコキサンチン、３−ヒドロキシ−Ｂ−ダマスコン、オプテイプラッツ、エブセレン、カフェ酸、カフェ酸フェニルエステル、３Ｈ，２−ジチオール−３−チオン（Ｄ３Ｔ）及び還元型コエンザイムＱ１０、セプトリン、イソフムロン、イソアドフムロン、イソコフムロンから少なくともひとつ選択されることを特徴とする、請求項１〜１０に記載される方法。
【請求項４０】
請求項７〜１０に記載される「神経変性疾患または炎症性疾患」は、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、急性出血性白質脳脊髄炎、ハースト病、脳脊髄炎、視神経炎、脊髄病変、急性壊死性脊髄炎、横断性脊髄炎、慢性進行性ミエロパシー、進行性多巣性白質脳症、放射線ミエロパシー、ＨＴＬＶ−１関連ミエロパシー、単層性独立性脱髄、橋中心髄鞘崩壊症、白質ジストロフィー、炎症性脱髄性多発性ニューロパシー、急性ギラン−バレー症候群、多発神経炎、重症筋無力症、イートン−ランバート症候群、脳脊髄炎、炎症性腸疾患、クローン病、ループス、全身性エリテマトーデス、喘息、レーバー病、デビック病、フリードライヒ運動失調症、ミトコンドリア中枢神経系疾患、強皮症、ブドウ膜炎、抗リン脂質抗体症候群、多発性関節炎、多関節型若年性特発性関節炎、鎌状赤血球病、強直性脊椎炎、筋炎、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性末梢ニューロパシー、頭部損傷、脳卒中、ＨＩＶ−認知症、心筋梗塞、狭心症、心不全、乾癬、乾癬性関節炎、シェーグレン症候群、糖尿病、水疱形成性皮膚疾患、サルコイドーシス、変形性関節症、潰瘍性大腸炎、脈管炎、肺線維症、特発性肺線維症、肝線維症、腎線維症、急性腎障害、慢性腎疾患、糖尿病性腎硬化症、移植片対宿主反応、橋本甲状腺炎、グレーブス病、悪性貧血、肝炎、神経皮膚炎，網膜色素変性症、ミトコンドリア脳筋症、梅毒性骨軟骨炎（ヴェグナー病）、大理石様皮膚（リベド血管炎）、ベーチェット病、汎動脈炎、変形性関節症、痛風、動脈硬化症、ライター病、肺肉芽腫症、脳炎、エンドトキシンショック（肺血性毒素ショック）、敗血症、肺炎、拒食症、レンネルトＴ−リンパ腫症、メサンギウム腎炎、血管形成後の再狭窄、再灌流症候群、サイトメガロウイルス網膜症、アデノウイルス性疾患、ＡＩＤＳ、ヘルペス後神経痛、帯状疱疹後神経痛、多発性単ニューロパシー、嚢胞性線維症、ベヒテレフ病、バレット食道、エプスタイン−バーウイルス感染、心臓リモデリング、間質性膀胱炎、ヒト腫瘍放射線増感、化学療法剤に対する悪性細胞の多耐性、環状肉芽踵、癌、慢性閉塞性肺疾患、気管支平滑筋細胞のＰＤＧＦ誘発性チミジン取込み、気管支平滑筋細胞増殖、副腎白質ジストロフィー、アルコール依存症、アルパース病、毛細血管拡張性運動失調症、バッテン病、牛海綿状脳症、脳性麻痺、コケーン症候群、皮質基底核変性症、クロイツフェルト−ヤコブ病、家族性致死性不眠症、前頭側頭葉変性症、ケネディ病、レヴィー小体認知症、神経ボレリア症、マシャド−ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、ナルコレプシー、ニーマン−ピック病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性核上性麻痺、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血に続発する脊髄の亜急性連合変性症、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、スティール−リチャードソン−オルゼウスキー病、脊髄癆、中毒性脳症、ＭＥＬＡＳ（ミトコンドリア脳筋症；乳酸アシドーシス；脳卒中）、ＭＥＲＲＦ（ミオクローヌス癲癇；赤色ぼろ線維）、ＰＥＯ（進行性外眼筋麻痺）、リー症候群、ＭＮＧＩＥ（ミオパシーおよび外眼筋麻痺；ニューロパシー；胃腸；脳障害）、カーンズ−セイヤー症候群、ＮＡＲＰ、遺伝性痙性対麻痺、ミトコンドリア性ミエロパシー，視神経炎、進行性多巣性白質脳症、壊疽性膿皮症、頭皮のびらん性膿疱性皮膚症、スイート症候群、腸関連皮膚症−関節炎症候群、膿疱性乾癬、急性汎発性発疹性膿疱症、膿漏性角皮症、スネドン−ウィルキンソン病、皮膚襞の無菌性膿疱症、乳児肢端膿疱症、一過性新生児膿疱症、好中球性エクリン汗腺炎、リウマチ好中球性皮膚炎、好中球性じんましん、スティル病、有縁性紅斑、未分類間欠熱症候群／自己炎症性症候群、水疱性全身性エリテマトーデス、手の甲の好中球性皮膚病（膿疱性脈管炎）、過敏症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、肺癌、喘息の重度の窒息のエピソード、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、虚血再灌流障害、多臓器機能不全を伴う敗血症、分類不能大腸炎、鎌状赤血球クリーゼ、急性胸部症候群、強皮症性肺疾患、慢性喘息、放射線誘発性綿維症サルコイドーシス、肺高血圧症、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）、肺移植による拒絶反応、肺ＧＶＨＤ合併症、移植レシピエントにおける間質性肺炎症候群（ＩＰＳ）、ＣＯＰＤ、珪肺症、石綿肺症、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、アルコール誘発性肝線維症、自己免疫性肝炎、慢性ウイルス性肝炎（ＨｅｐＢ、Ｃ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝移植による拒絶反応、ＧＶＨＤの肝合併症、移植レシピエントにおける静脈閉塞症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、ＧＶＨＤの腎合併症（ＡＫＩ臓器移植後臓器機能障害）、ＣＡＢＧ後の急性腎破壊（ＣＡＢＧ後のＡＫＩ）、ループス腎炎、高血圧症誘発性腎線維症、ＨＩＶ−関連腎症、腹膜透析誘発性腹膜線維症、後腹膜線維症、特発性糸球体硬化症、腎移植による拒絶反応、アルポート症候群、再狭窄、くも膜下出血（ＳＡＨ）、心臓移植による拒絶反応、美容整形、慢性創傷、火傷、手術癒着、ケロイド、ドナー移植片再上皮化、骨髄線維症、角膜移植、ＬＡＳＩＸ、トラベクレクトミー、全身性硬化症、放射線誘発性線維症、膝蓋周囲線維症、デュピュイトラン拘縮、ジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンバ肉腫、リンパ芽球腫白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、慢性骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、血管腫、血管内皮腫、血管外皮細胞腫、血管肉腫、カポジ肉腫、骨肉腫、線維肉腫、食道扁平上皮癌、膵臓癌、胃腸腫瘍、結腸癌、直腸癌、胃癌、リンパ管腫、脳腫瘍、神経芽細胞腫、シュワン鞘腫、クロム親和細胞腫、肺癌、頭部および頚部扁平上皮癌、メラノーマ、非メラノーマ皮膚癌、平滑筋腫、平滑筋肉腫、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、膀胱癌、頚管癌、腎臓癌、前立腺癌、または転移形成から選択される１種以上の疾病であることを特徴とする、請求項７〜１０に記載される方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】本発明は、転写因子ＮＦ−Ｅ２−ｒｅｌａｔｅｄ  ｆａｃｔｏｒ  ２（ＮＲＦ２）活性化剤を用いた神経変性及び炎症性の疾患の治療及び予防の効果を最大限に引き出すための方法に関する。本発明により、ＮＲＦ２活性化剤の効果を、本明細書において有機酸（α−ケトグルタル酸：α―Ｋｅｔｏｇｌｕｔａｒｉｃ  ａｃｉｄ：ＡＫＧ、ピルビン酸：Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ：ＰＡまたはオキサロ酢酸：Ｏｘａｌｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ：ＯＡＡ）との共存によって増強することができる。または有機酸との共存によってＮＲＦ２活性化剤の使用量を制限するまたは副作用を最小限にすることができる。なお本発明におけるＮＲＦ２活性化剤とは、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ：ＥＣ）、ゾナロール（Ｚｏｎａｒｏｌ：ＺＯ）、カルノシン酸（Ｃａｒｎｏｓｉｃ  ａｃｉｄ：ＣＡ）、ターシャルブチルハイドロキノン（Ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ  ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ：ＴＢＨＱ）、ジメチルフマル酸（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｆｕｍａｒａｔｅ：ＤＭＦ）、フマル酸（Ｆｕｍａｒｉｃ  ａｃｉｄ：ＦＡ）またはレスベラトロール（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ：ＲＳＶ）などである。食品中のＮＲＦ２活性化剤の場合は、その効果を増強することが可能である。医薬品中のＮＲＦ２活性化剤の場合は、薬物量を調整し、副作用を低減することが可能である。【０００２】  ＮＲＦ２活性化剤が第２相酵素群の発現を誘導し、酸化ストレスから細胞を保護することによって、神経変性及び炎症性疾患の治療及び予防に効果があることが期待される（非特許文献１）。しかしＮＲＦ２活性化剤の効果を増強する、いわば「増強療法」は先行技術がないばかりか、全く知られていない分野である。本発明は、ＮＲＦ２活性化剤の効果の増強する方法という新た分野を拓くものである。【０００３】  本発明はＮＲＦ２活性化剤がもつ健康効果または慢性神経疾患または炎症性疾患の治療効果を、ＮＲＦ２活性化剤と有機酸を組み合わせて使用することによって増強及び／または調整することを目指す。【０００４】  本発明はＮＲＦ２活性化剤がもつ健康効果または慢性神経疾患または炎症性疾患の治療効果を、ＮＲＦ２活性化剤と有機酸とＦＡを組み合わせて使用することによって増強及び／または調整することができる。【０００５】  増強とはＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することである。食品中に含まれるＮＲＦ２活性化剤は慢性の神経変性疾患や炎症性疾患に対して高い予防効果を生み出すことができる（非特許文献２）。本発明によって、このＮＲＦ２の予防効果を持続的に増強することが可能である。【０００６】  ＮＲＦ２活性化剤の殆どは化学的には親電子性物質としての性質があるから、濃度が高くなれば必ず還元型グルタチオン（Ｒｅｄｕｃｅｄ  Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ：ＧＳＨ）の低下をもたらす。この副作用の危険性は常にある（非特許文献１）。増強療法を用いれば、より低い濃度で高い薬理効果を発現させることができる技術が必要なのである。これによりＮＲＦ２活性化剤の使用量は制限することが可能になり、副作用を低減させることができる。医薬品の場合はこの作用が重要である。【０００７】  糖尿病性慢性腎疾患の薬剤候補とされているＮＲＦ２活性化剤であるバルドロキソロンメチルは臨床試験において、副作用を高い確率で引き起こすことが明らかになった。多発硬化症の治療に応用されているＤＭＦには数多くの副作用が実際に報告されている。ＤＭＦの使用量を制限しても、薬理効果を最大限に引き出すことが重要なブレイクスルーとなる（非特許文献３）。これを可能にするのが、本発明が提案する「ＮＲＦ２活性化剤の増強療法」である。使ＮＲＦ２の増強療法はＮＲＦ２の使用量の調整に役立ち、さらに薬理効果を最大限に引き出すのに役立つ。【０００８】  精神医学では薬物療法の基本技術として増強療法という技術が導入されている。特に単一の薬物の投与のみでは効果が低い場合、他のカテゴリーの薬剤を併用するのである。このような背景から、神経医学の問題として薬剤の使い過ぎという問題が取り上げられることが多いのである【０００９】  薬剤の使い過ぎという問題に対して、薬物治療の観点からの対策のひとつが「増強療法」である。セロトニン再取り込み阻害剤（Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：ＳＳＲＩ）などの向精神薬の効果を増強する別の薬物を投与するによって、薬物治療の効果を上げるのである。これによって、一定の薬理効果が現れるのに必要な薬物量（有効同等量）を下げて、薬剤の使い過ぎを抑制する（調整する）のである。アリピプラゾールは臨床応用されているのをはじめ（特許文献１）、コネキシン阻害剤（特許文献２）などが増強療法の候補物質として臨床試験が進められている。【００１０】  アリピプラゾールは元々ドーパミンＤ２受容体の拮抗薬として開発され、当初は統合失調症が適用症とされた。その後アリピプラゾールとの共存によってＳＳＲＩなどの種々の向精神薬の効果を増強することが明らかになった。ＳＳＲＩの効果の有意な効果がある患者がうつ病全体の５０％程度しかなかったが、アリピプラゾールの増強療法によってこの割合が有意に増加した。【００１１】  精神科の領域では向精神薬の使用量を下げ、安全に使用するのが課題としてあったから、アリピプラゾールとの共存によって、ＳＳＲＩの使用量が大きく減らすことができることが明らかとなったことが大きかった。精神科の臨床に「増強療法」という新しいコンセプトを開きつつある（特許文献１）。アリピプラゾールが開いた「増強療法」が、向精神薬の使い過ぎの状況を変革することが期待される。【００１２】  本研究はＮＲＦ２活性化剤の分野に増強療法を導入することを目指した。食品の分野で実用化されているＮＲＦ２活性化剤においてはその効果を増強することを目指した。医薬品の分野では薬剤の使用量を調整することを目指した。
【背景技術】
【００１３】  有機酸は酸素を用いるエネルギー代謝においては最も基本的なエネルギー基質であり、特にミトコンドリア内で遂行されるクレブス回路においては構成成分である。特に糖のエネルギーへの変換において最も中心的な役割を担う。脂肪酸またはアミノ酸もこれらの有機酸などに変換されて、このクレブス回路に入る。有機酸からアミノ酸への変換において、ＡＫＧがアミノ基を転移されてグルタミン酸（Ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ：Ｇｌｕ）に変換されるが、この反応は糖からアミノ酸への変換の最も主要な通過点とされる（非特許文献４）。【００１４】  有機酸の中でも、ＰＡ、ＯＡＡ及びＡＫＧは特別な化学構造「α−ケト酸」を有しているので、過酸化水素と直接反応することができる。細胞内においてこれらの３つの有機酸は抗酸化剤として働くことが可能で、これは「α−ケト酸」を有しない他のアミノ酸にはこれができない。この抗酸化剤としての性質は、酸化ストレスに対して脆弱な性質を持つ神経細胞においてはその機能の維持に決定的な役割をもつ。これら３つの有機酸は、過酸化水素から神経細胞を保護することができる（非特許文献５）。【００１５】  「α−ケト酸」の中でも、ＡＫＧは特別な生理学的な機能を有している。例えばＡＫＧはアミノ酸への変換を促進するとともに、プロリンの水酸化に必須である。例えば骨折後の骨の再生時のように大量のコラーゲンの合成が必要な場合は、ＡＫＧはこれを加速できる。胃癌や極端な肥満の治療のため胃切除が行われるが、顕著な副作用として骨粗鬆症が起きる可能性が高い。このとき１日数グラム程度のＡＫＧを投与すると、有意に骨組織の退行が阻害される（非特許文献６）。【００１６】  さらにＡＫＧの産生を司るイソクエン酸脱水素酵素に変異とグリオーマの悪性度は非常に高い正の相関があるという。これはＡＫＧがガンの進行に対して抑制的に働いていることを示唆する（非特許文献７）。【００１７】  固形ガン組織が成長する時、血管の新生が追い付かないのでその内部は恒常的に低酸素の状況になるから、ガン細胞が生き残るには特別な仕組みが必要である。この特別な仕組みがＨｙｐｏｘｉａ−Ｉｎｄｕｃｉｂｅ  Ｆａｃｔｏｒ（ＨＩＦ−１）である（非特許文献８）。ＨＩＦ−１は低酸素というストレスに対する対抗するための防御システムを作動させる転写因子である。ＨＩＦ−１は、ＨＩＦ−１αとＨＩＦ−１βというふたつのサブユニットがダイマーでＤＮＡに結合し、転写因子として作用する。ＨＩＦ−１αは酸素、ＡＫＧ、Ｆｅイオン（ＩＩ）の働きでプロリン残基が水酸化され、プロテアソームで分解される。ＨＩＦ−１αの分解速度は、組織中の酸素濃度が高いときは高く、ＨＩＦ−１の機能は抑制されている。すなわち通常の状態では殆ど抑制されている。逆にＨＩＦ−１αの分解速度は、組織中の酸素濃度が低いときは低く、ＨＩＦ−１の機能は活性化されている。つまりＨＩＦ−１は酸素濃度で調節を受ける転写因子である。【００１８】  ＨＩＦ−１の機能を調節するもう一つの分子がある。ＡＫＧの濃度である。ＡＫＧの濃度が増加するとＨＩＦ−１αの分解が亢進し、ＨＩＦ−１の転写因子としての機能は抑制されるまたＡＫＧの濃度が減少するとＨＩＦ−１αの分解が抑制され、ＨＩＦ−１の転写因子としての機能は促進される。従ってＡＫＧが高濃度になると、ＨＩＦ−１αの分解が亢進し、ＨＩＦ−１の活性が低下し、ガン細胞が生き残れなくなると想定される（非特許文献８）。【００１９】  酸素濃度の変動がガンの進行に重要な役割を果たすが、酸素濃度の変動が関与しないＨＩＦ−１の活性の変動がある。もうひとつの調節因子であるＡＫＧ濃度の変動である。ＡＫＧはＨＩＦ−１を抑制し、他の抗ガン剤などの活性を増加させることができる（非特許文献８）。【００２０】  転写因子ＨＩＦ−１は酸素濃度の低下というストレスに対抗するためのシステムであると考えられるが、もう一つ重要なストレスとして酸化ストレスである。酸化ストレスに対しても対抗するためのシステムとして転写因子ＮＲＦ２がある（非特許文献１）。ＮＲＦ２活性化剤は酸化ストレスに対して耐性を持続的に与える分子でして注目されて新たな分子が次々に報告されているが、増強する先行技術は存在しない。【００２１】  本発明では、ＮＲＦ２活性化剤を増強する分子として、有機酸に注目したことが新しいアイデイアである。このアイデイアの最も基本的なことは、ＡＫＧの濃度を上げてＨＩＦ−１の活性を抑制して、ＮＲＦ２活性化剤の薬理効果を最大限に引き出すことにある。【００２２】  本発明はＨＩＦ−１の抑制因子としてのＡＫＧが、ＮＲＦ２の最大活性化が可能であることを示す。すなわち転写因子ＨＩＦ−１は転写因子ＮＲＦ２を通常抑制しているため、ＮＲＦ２の最大活性化をさせるためには、ＡＫＧによってＨＩＦ−１を抑制することが関与する可能性がある。【００２３】  有機酸に注目することの利点はＮＲＦ２活性化剤を増強することの他に、有機酸はミトコンドリアに直接作用して、エネルギー基質として機能できるということがある。すなわちガンを始めとして、多くの慢性疾患において細胞は、ミトコンドリアの代謝が抑制されて、専ら解糖系でエネルギーを得るようになる。有機酸を用いることはミトコンドリアの代謝を活性化するという点でも効果がある。【００２４】  食品中にもクルクミン、ケルセチン、ＥＣ、クロロゲンン酸、還元型コエンザイムＱ１０など多くのＮＲＦ２活性化剤が存在する（非特許文献９）。これらのＮＲＦ２活性化剤の機能を利用して、機能性表示食品や特定保健用食品が市場にも投入されている。ＮＲＦ２活性化剤の生理作用はＡＫＧと共に摂取することによって増強される可能性がある。すなわち既存の特定保健用食品や機能性表示食品に相応な量のＡＫＧを加えるだけで安全に副作用がなく機能性などを増強できるのである。【００２５】  ＮＲＦ２活性化剤の多くは親電子性物質でシステイン残基のチオール基と付加反応を起こす。ＮＲＦ２活性化剤が生理的な濃度であれば、Ｋｅｌｃｈ−ｌｉｋｅ  ＥＣＨ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １（ＫＥＡＰ１）蛋白質のチオール基と付加反応を起こし、転写因子ＮＲＦ２の核内移行を促進する。核内に移行したＮＲＦ２は特異的な転写エレメントでるａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ（ＡＲＥ）に結合し、第２相酵素群を誘導する。第２相酵素群の多くはＧＳＨの代謝に関与し、ＧＳＨの濃度を増加させ、酸化ストレスに対する耐性を誘導する（非特許文献２）。【００２６】  ＮＲＦ２活性化剤の濃度が過剰な場合、非特異的なチオール基の付加反応が優位になる。すなわちＧＳＨのチオール基と付加反応を起こし、細胞に酸化ストレスを与え、毒性を誘導する（非特許文献１）。ＮＲＦ２活性化剤の多くは親電子性物質であるから、低濃度では細胞を保護し、高濃度では逆に毒性を発現する。食品中の物質であっても、医薬品中の物質であっても例外はないが、特に医薬品である場合、副作用を最小限にする観点から、薬物の使用量は必要最小限であることが求められる。【００２７】  医薬品として使用されているＮＲＦ２活性化剤は、多発性硬化症を適用症としたＤＭＦ（商品名：テクフィデラ）がある。ＤＭＦ（非特許文献１０）の基本的なメカニズムはマクロファージ及びＴ細胞の活性化を抑制して、炎症性のサイトカインの遊離を抑制することである。ＤＭＦの抗炎症作用の分子機序の一つに転写因子ＮＲＦ２の活性化がある。【００２８】  ＩＩ型糖尿病が重篤化して慢性腎疾患になる患者が多く、現在では人工透析が必要な人の半分は「糖尿病性慢性腎疾患」である。この慢性腎疾患に対してはＮＲＦ２活性化剤が高い治療効果が得られる（非特許文献１１）。本発明の請求項１６で記載したＲＴＡ４０８、ＲＳ９、ＮＫ２５２、ＬＨ６０１はすべてこの慢性腎疾患を適用症としている創薬リードである。ＡＫＧは食経験が豊富で無害であることを考えれば、増強療法によって効果が期待できる分野である。【００２９】  発明者は、ＮＲＦ２活性化剤の分野でも「増強療法」が可能ではないかと考え、ＮＲＦ２活性化剤の最も基本的な薬理作用である神経細胞死の抑制で検査することを思い立ったのが本発明の出発点である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００３０】
【特許文献１】特開２０１３−１５５８７２。
【特許文献２】特開２０１５−１７２０６７。
【非特許文献】
【００３１】
【非特許文献１】Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２００７，３０，３７−４５。
【非特許文献２】Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  ２００９，４６，６７２−６７９。
【非特許文献３】Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｏｐｉｎ  ２０１４，３０，６１３−６２７。
【非特許文献４】Ｃｅｌｌ  Ｖｏｌ  １４８：１１３２−１１４４，２０１２。
【非特許文献５】Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ  ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ。
【非特許文献６】Ｅｘｐ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  Ｖｏｌ  ２４１：１４−２４，２０１６。
【非特許文献７】Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ．２０１６  Ｏｃｔ  １７。
【非特許文献８】Ａｒｃｈ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｅｘｐ  ２０１６  Ｊｕｎｅ  ２０。
【非特許文献９】Ｎａｔ  Ｐｒｏｄ  Ｒｅｐ  ２０１４，３１，１０９−１３９。
【非特許文献１０】Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１５，１９４，２４９３−５０３。
【非特許文献１１】Ｏｘｙ  Ｍｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｌｏｎｇｅｖ  ２０１６，７４６９３２６。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３２】  ＤＭＦは親電子性を有する物質であり、ＮＲＦ２を活性化させ抗炎症作用を発現する（Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ  ２０１６，３６，９２４−９２６）。これらの薬物は親電子性を有する物質であり、高濃度になればＧＳＨのチオール基と結合し、細胞に毒性をもたらすことは化学的には明確である。従ってこれらの薬物は必ず副作用はあるという認識で使用することが必要である。これらの医薬品ではできるだけ低い薬物量で高い薬理効果を発現する技術が必要とされてきたのである。【００３３】  生活習慣が原因でおこる、神経変性及び炎症性の疾患には炎症の暴走や酸化ストレスなどの多くの共通点がある。これらの疾患に対してはＮＲＦ２活性化剤が大きな効果を持つ（Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ  ２０１６，３６，９２４−９２６）。【００３４】  ＮＲＦ２活性化剤は強い神経保護作用がある。ＮＲＦ２活性化剤は神経細胞においてＧＳＨ濃度を増加させ、酸化ストレスに対して耐性を誘導する（Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２０１０，１５，７７９２−７８１４）。さらにアルツハイマー病、パーキンソン病、虚血再灌流、光誘導性網膜変性を抑制する（Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２０１０，１５，７７９２−７８１４）。ＺＯ、ＣＡ、ＥＣ、ケルセチン、クロロゲン酸などのＮＲＦ２活性化剤を含有する食品を継続的に摂取することによって脳の慢性的な変性を遅延させることが可能である。【００３５】  ＮＲＦ２活性化剤は強い抗炎症作用がある。ＮＲＦ２活性化剤はマクロファージやミクログリアからの炎症性のサイトカインの遊離を強く抑制し、潰瘍性大腸炎、動脈硬化、肥満などの抑制が起こる（ＰＬｏｓＯｎｅ  ２０１４，９、ｅ１１３５０９）。ケルセチン、クロロゲン酸、レスベラトロール、ゾナロールなどの抗炎症作用は、一酸化窒素合成酵素やサイクロオキシゲナーゼの誘導を抑制することに起因する（Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  ２０１３，６５，６４５−６５７）。【００３６】  本発明が目指す増強技術がどのように個々のＮＲＦ２活性化剤の機能性に貢献するのかを具体的に見てゆくことにする。【００３７】  ＺＯ及びイソゾナロールは褐藻類ではアミジグサ科のシワヤハズだけに含まれるテルペノイドである。またヤハズノール及びエントーヤハズノールは褐藻類ではアミジグサ科のヤハズグサ科だけに含まれるテルペノイドである。ＺＯはＮＲＦ２活性化を介してマクロファージからの炎症性サイトカインの遊離を抑制すること、またラットの潰瘍性大腸炎のモデルにおいて抑制効果がある（ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１４，９，ｅ１１３５０９）。本発明はこれらの作用を増強することに貢献できる。【００３８】  ＣＡは乾燥葉中で５％程度の含有量があり、ローズマリーの生理作用の原因物質として認められている（Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄ、  ２０１０、７６、６８３−６８８）。ＣＡは脳虚血―再灌流による神経細胞死を抑制し（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ２００８，１０４，１１１６−１１３１）また抗アルツハイマー病効果を持つ（Ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓ  ，７，ｅ２４９９）。特に神経変性疾患をターゲットに増強療法を導入可能である。【００３９】  ＤＭＦは、２０１３年にＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｉｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎは多発性硬���症の薬剤として承認された（Ｎｅｕｒｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２０１６，５，１３１−１４３）。この薬剤でも効果のない多発性硬化症の患者が多く存在することから、増強療法を導入して、より低い薬物量で大きな薬理効果のある方法が望まれているが、本発明は薬剤の使用量の調整が可能にできる。【００４０】  ＤＭＦだけでなく、モノメチルフマル酸もＮＲＦ２活性化剤として知られている。パーキンソン病モデルではモノメチルフマル酸のほうが抑制活性が強く、副作用も弱かった（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２０１６，３６，６３３２−６３５１）。中枢での神経保護剤としての応用が期待される。本発明により薬剤の使用量の調整が望まれる。【００４１】  ＦＡはＡＫＧとともにクレブス回路を構成する有機酸であり、食経験も豊富で健康食品として応用しやすいという利点がある。ＦＡはＮＲＦ２を活性化して心臓を保護することができ（Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ  ２０１２，１５，３６１−３７１）、ＤＭＦやモノメチルフマル酸だけでなくＦＡもＮＲＦ２活性化剤として機能できることが示された。【００４２】  大部分のＮＲＦ２活性化剤が脂溶性であることを考えれば、ＦＡは親水性のＮＲＦ２活性化剤であることから、同じ親水性の性質を持つＡＫＧと容易に組み合わせることができるという点で、産業への応用面で効果が高い。抗酸化剤の分野では、例えば親水性のビタミンＣと疎水性のビタミンＥを組み合わせて使用すると効果が高いことがわかっている。従ってＮＲＦ２活性化剤においても親水性のＦＡと他の疎水性のＮＲＦ２活性化剤を組み合わせるというのは合理的な方法である。【００４３】  本発明では、ＨＩＦ−１の阻害剤であるＡＫＧとＮＲＦ２活性化剤との組み合わせを基本的な技術とした。特に本発明の技術を応用して、食品分野でのＦＡ（ＮＲＦ２活性化剤）とＡＫＧ（ＨＩＦ−１抑制剤）の組み合わせの応用が期待される。従ってＨＩＦ−１阻害剤であるＡＫＧとＮＲＦ２活性化剤であるＦＡと他のＮＲＦ２活性化剤との組わせをもって、ＮＲＦ２活性を増強させる組み合わせとした。【００４４】  バルドキソロンメチルを始めとして糖尿病性慢性腎疾患はターゲットとして臨床試験の段階にある数種の薬剤がある（Ｏｘｉｄ  Ｍｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｌｏｎｇｅｖ  ２０１６，７４６９３２６）。心臓機能に副作用があることから、より低い濃度での臨床での使用が望まれているから、増強療法が貢献できる余地は大きい。【００４５】  ケルセチン：ケルセチンは最も有名なフラボノイドであり、タマネギなどに含まれるＮＲＦ２活性化剤であり、脳保護作用や抗炎症作用に関して多くの報告がある（Ｏｘｉｄ  Ｍｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｌｏｎｇｅｖ  ２０１６、２９８６７９６）。「関節の機能の維持」に関して機能性表示があり、ケルセチンの抗炎症作用に注目しており、本発明の増強療法が貢献できる。【００４６】  カテキンは、ポリフェノールの中のフラボノイド、その中でもフラバノールという種類に入る。緑茶中には、ＥＣ、（−）エピガロカテキン、（−）エピカテキンガレート、（−）エピガロカテキンガレートなどの約４種類のカテキンが含まれている。  ＮＲＦ２活性化剤カテキンの含有することが「体脂肪を低下させる作用」などの機能性表示の基盤になっているから、カテ��ンの作用を本発明で増強させることが可能である。【００４７】  ビールは何千年も前から人類に飲まれてきた発酵酒の一つである。ビールは種々の生理活性物質を含有するが、イソフムロン類（イソフムロン、イソアドフムロン、イソコフムロン）  はＮＲＦ２活性化剤として知られる（Ｗ０２００６／０４３６７１）。イソフムロンはアルツハイマー病を予防できることが期待されており、本発明はこれらの生理作用を増強することに貢献できる。【００４８】  クロロゲン酸はコーヒー豆中に５％―１０％近く含まれるポリフェノールである。クロロゲン酸は種々の生理機能特に抗炎症作用や体脂肪減少効果がある（Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉ  Ｎｔｒｉ  ２０１１，５１，３６３−３７３）。クロロゲン酸の体脂肪の減少効果の増強に本発明を用いることができる。【００４９】  クルクミンは香辛料に多く含まれるＮＲＦ２を活性化するポリフェノールであり、肝臓の保護に効果があるとされる（Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｐ２０１５，１，１２９−１３９）。肝機能の維持作用の成分として表示され、本発明の増強効果の貢献が望まれる。【００５０】  ＲＳＶは長寿遺伝子を活性化させる作用とともに、特に神経細胞ではＮＲＦ２を活性化して酸化ストレスに耐性を与えることが報告されている（Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｓ  ２０１６、１１７、１６６−１７６）。【００５１】  還元型コエンザイムＱ１０は細胞内のミトコンドリアの内膜に存在し、一度酸化されてもまた還元されて抗酸化剤として再生できる（Ａｍ  Ｆａｍ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ  ２０１６，９４，３６９−３７４）。機能性表示食品では疲労感の減退作用の成分として表示され、本発明の増強効果の貢献が望まれる。
【課題を解決するための手段】
【００５２】  本発明者らは、上記課題を解決すべく、有機酸を種々検索した結果、ＡＫＧがＮＲＦ２活性化剤による神経細胞死の抑制作用を有意に増強することを発見し、本発明を完成するに至った。【００５３】  ＡＫＧは細胞に含まれる安全な有機酸であり、微生物による大量生産の技術も既に確立されている（特開２０１２−１７０３８５）ので、サプリメントなどで食経験が豊富である。ＡＫＧの製剤を産業化することは容易であり、「ＡＫＧとＮＲＦ２活性化剤」を組み合わせて使用する本技術は、容易に産業化が可能である。【００５４】  ＦＡは細胞に含まれる安全な有機酸であり、微生物による大量生産の技術も既に確立されている（特開２０１６−２０２０７３）ので、サプリメントなどで食経験が豊富であるＦＡの製剤を産業化することは容易であり、「ＡＫＧとＦＡとＮＲＦ２活性化剤」を組み合わせて使用する本技術は、容易に産業化が可能である。【００５５】  上記のＡＫＧを有効成分として含む健康食品、特定保健用食品、機能性表示食品、化粧品などを製品は、ＮＲＦ２活性化剤を有効成分として含む健康食品、特定保健用食品、機能性表示食品、化粧品、病者用食品、医薬品、動物用医薬品などと同時にあるいは別個に摂取することにより、ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することができる。【００５６】  本発明は、これらの知見に基づき完成されたものであり、以下の有機酸によるＮＲＦ２活性化剤の増強する方法などを提供し、医薬品や食品の分野で応用する方法を示す。これを実現するため、以下の請求項を求める。
特許請求の範囲
【本発明０００１】
「有機酸」と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【本発明０００２】
「有機酸」と「フマル酸」と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【本発明０００３】
ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、「有機酸」と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【本発明０００４】
ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、「有機酸」と「フマル酸」と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【本発明０００５】
ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、時間について同時、個別、または逐次的に使用するための組合せとして、「有機酸」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品または機能性表示食品と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品または機能性表示食品を用いる方法。
【本発明０００６】
ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、時間について同時、個別、または逐次的に使用するための組合せとして、「有機酸」と「フマル酸」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品または機能性表示食品と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品または機能性表示食品を用いる方法。
【本発明０００７】
神経変性疾患または炎症性疾患の治療のため、ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、「有機酸」と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【本発明０００８】
神経変性疾患または炎症性疾患の治療のため、ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、「有機酸」と「フマル酸」と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【本発明０００９】
神経変性疾患または炎症性疾患の治療のため、ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、時間について同時、個別、または逐次的に使用するための組合せとして、「有機酸」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品または機能性表示食品と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【本発明００１０】
神経変性疾患または炎症性疾患の治療のため、ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強することを意図して、時間について同時、個別、または逐次的に使用するための組合せとして、「有機酸」と「フマル酸」を有効成分として含有する健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品または機能性表示食品と「ＮＲＦ２活性化剤」を有効成分として含有する病者用食品、医薬品または動物用医薬品を用いる方法。
【本発明００１１】
本発明０００１〜００１０に記載される「有機酸」は、α−ケトグルタル酸、ピルビン酸もしくはオキサロ酢酸から少なくともひとつ選択される酸もしくはその薬学上許容される塩またはその薬学上許容される溶媒和物であることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００１２】
本発明０００１〜００１０に記載される「有機酸」は、好ましくはα−ケトグルタル酸もしくはその薬学上許容される塩またはその薬学上許容される溶媒和物であることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００１３】
本発明０００１〜００１０に記載される「フマル酸」は、フマル酸もしくはその薬学上許容される塩またはその薬学上許容される溶媒和物であることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００１４】
本発明０００１〜００１０に記載される「ＮＲＦ２活性化剤」は、ＮＲＦ２活性化剤もしくはその薬学上許容される塩またはその薬学上許容される溶媒和物であることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００１５】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はゾナロール、イソゾナロール、ヤハズノールまたはエントーヤハズノールおよびこれらの組み合わせからなる群より選択されることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００１６】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はカルノシン酸またはパラカルノシン酸であることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００１７】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はジメチルフマル酸またはモノメチルフマル酸であることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００１８】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤は、バルドキソロンメチル（ＲＴＡ４０２）、ＲＴＡ４０８、ＲＳ９、ＮＫ２５２またはＬＨ６０１であることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００１９】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はフマル酸であることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００２０】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はケルセチンであることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００２１】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤は茶カテキン類すなわちエピカテキン、メチル化カテキン、エピガロカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカテキンガレートおよびこれらの組み合わせからなる群より選択されることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００２２】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はイソフムロン類すなわちイソフムロン、イソアドフムロン、イソコフムロン、およびこれらの組み合わせからなる群より選択されることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００２３】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はクロロゲン酸類すなわちカフェオイルキナ酸、フェルロイルキナ酸、ジカフェオイルキナ酸、およびこれらの組み合わせからなる群より選択されることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００２４】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はレスベラトロールであることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００２５】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤は還元型コエンザイムＱ１０であることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００２６】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はクルクミンであることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００２７】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はスルフォラファンであることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００２８】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤はターシャルブチルハイドロキノン（ＴＢＨＱ）であることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００２９】
本発明０００７〜００１０に記載される神経変性疾患が、多発性硬化症であることを特徴とする、本発明０００７〜００１０に記載される方法。
【本発明００３０】
本発明０００７〜００１０に記載される神経変性疾患が、アルツハイマー病であることを特徴とする、本発明０００７〜００１０に記載される方法。
【本発明００３１】
本発明０００７〜００１０に記載される神経変性疾患が、パーキンソン病であることを特徴とする、本発明０００７〜００１０に記載される方法。
【本発明００３２】
本発明０００７〜００１０に記載される神経変性疾患が、加齢黄班変性であることを特徴とする、本発明０００７〜００１０に記載される方法。
【本発明００３３】
本発明０００７〜００１０に記載される炎症性疾患が、潰瘍性大腸炎であることを特徴とする、本発明０００７〜００１０に記載される方法。
【本発明００３４】
本発明０００７〜００１０に記載される炎症性疾患が、クローン病であることを特徴とする、本発明０００７〜００１０に記載される方法。
【本発明００３５】
本発明０００７〜００１０に記載される炎症性疾患が、関節性リウマチであることを特徴とする、本発明０００７〜００１０に記載される方法。
【本発明００３６】
本発明０００７〜００１０に記載される炎症性疾患が、高脂血症であることを特徴とする、本発明０００７〜００１０に記載される方法。
【本発明００３７】
本発明０００７〜００１０に記載される炎症性疾患が、糖尿病であることを特徴とする、本発明０００７〜００１０に記載される方法。
【本発明００３８】
本発明０００７〜００１０に記載される炎症性疾患が、糖尿病性慢性腎疾患であることを特徴とする、本発明０００７〜００１０に記載される方法。
【本発明００３９】
本発明００１４で記載されるＮＲＦ２活性化剤は、ケルセチン、ジヒドロケルセチン、オーロン、バイカレイン、エピカテキン、メチル化カテキン、エピガロカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカテキンガレート没食子酸エピガロカテキン、エリオデイクチオール、エリオデイクチオール−７−Ｏ−グルコシド、フィセチン、カンプフェロール、ナリンゲニン、ナリンゲニン−７−Ｏ−グルコシド、プリアニジンＢ２、サッパカルコン、タキシフォリン、イソオリエンチン、ゲニスタイン、プエラリン、ジヒドログリアスペリンＣ、イカリシドＩ、２，‘３’−ジヒドロキシ−４‘，６’−ジメトキシカルコン、４，２‘，５’−トリヒドロキシ−４‘−メトキシカルコン、ブテイン、フォロレチン、ルシドン、アスタキサンチン、オカニン、キサントフモール、リコカルコンＥ、イソフラボン、バルドキソロンメチル、アンダルソール、コンチトリオール、ラガスカトリオール、カーウェオール、カウレノン酸、オリドニン、カルノシン酸、カルノソール、パラカルノシン酸、ゾナロール、イソゾナロール、ヤハズノール、エントヤハズノール、アンドログラホリド、リネアロール、シドール、ガノデルマンデイオール、マスリニン酸、コスツノリド、プルチャラミンＧ、イソアラントラクトン、ゼルンボン、α−イソキュベベノール、ＲＴＡ４０２、ＲＴＡ４０８、ＲＳ９、クロロゲン酸、カジャニンステイルベン酸、ダンシャンス、フェルラ酸、フェルラ酸エチル、リトスペルミン酸Ｂ、レスベラトロール、ピセアタンノール、プロトカテク酸、ガストロジン、ロットレリン、タンシノンＩ、タンシノンＩＩＡ、ストロンギロホリン８、プランバーギン、モルギン、アントロキノノール、ターシャルブチルハイドロキノン、ヒドロキノン、カテコール、アントシアニン、タンニン、ルチン、ルテイン、エラグ酸、リグナン、クルクミン、クマリン、スルフォラファン、６−（メチルスルフィニル）ヘキシルイソチアネート、６−メチルチオヘキシルイソチアネート、１−シアノ−２，３−エピチオプロパン、ジメチルマレイン酸、モノメチルマレイン酸、ジエチルマレイン酸、マレイン酸、ジメチルフマル酸、モノメチルフマル酸、ジエチルフマル酸、フマル酸、バルドキソロンメチル（ＲＴＡ４０２）、ＲＴＡ４０８、ＲＳ９、ＮＫ２５２、ＬＨ６０、フコキサンチン、３−ヒドロキシ−Ｂ−ダマスコン、オプテイプラッツ、エブセレン、カフェ酸、カフェ酸フェニルエステル、３Ｈ，２−ジチオール−３−チオン（Ｄ３Ｔ）及び還元型コエンザイムＱ１０、セプトリン、イソフムロン、イソアドフムロン、イソコフムロンから少なくともひとつ選択されることを特徴とする、本発明０００１〜００１０に記載される方法。
【本発明００４０】
本発明０００７〜００１０に記載される「神経変性疾患または炎症性疾患」は、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、急性出血性白質脳脊髄炎、ハースト病、脳脊髄炎、視神経炎、脊髄病変、急性壊死性脊髄炎、横断性脊髄炎、慢性進行性ミエロパシー、進行性多巣性白質脳症、放射線ミエロパシー、ＨＴＬＶ−１関連ミエロパシー、単層性独立性脱髄、橋中心髄鞘崩壊症、白質ジストロフィー、炎症性脱髄性多発性ニューロパシー、急性ギラン−バレー症候群、多発神経炎、重症筋無力症、イートン−ランバート症候群、脳脊髄炎、炎症性腸疾患、クローン病、ループス、全身性エリテマトーデス、喘息、レーバー病、デビック病、フリードライヒ運動失調症、ミトコンドリア中枢神経系疾患、強皮症、ブドウ膜炎、抗リン脂質抗体症候群、多発性関節炎、多関節型若年性特発性関節炎、鎌状赤血球病、強直性脊椎炎、筋炎、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性末梢ニューロパシー、頭部損傷、脳卒中、ＨＩＶ−認知症、心筋梗塞、狭心症、心不全、乾癬、乾癬性関節炎、シェーグレン症候群、糖尿病、水疱形成性皮膚疾患、サルコイドーシス、変形性関節症、潰瘍性大腸炎、脈管炎、肺線維症、特発性肺線維症、肝線維症、腎線維症、急性腎障害、慢性腎疾患、糖尿病性腎硬化症、移植片対宿主反応、橋本甲状腺炎、グレーブス病、悪性貧血、肝炎、神経皮膚炎，網膜色素変性症、ミトコンドリア脳筋症、梅毒性骨軟骨炎（ヴェグナー病）、大理石様皮膚（リベド血管炎）、ベーチェット病、汎動脈炎、変形性関節症、痛風、動脈硬化症、ライター病、肺肉芽腫症、脳炎、エンドトキシンショック（肺血性毒素ショック）、敗血症、肺炎、拒食症、レンネルトＴ−リンパ腫症、メサンギウム腎炎、血管形成後の再狭窄、再灌流症候群、サイトメガロウイルス網膜症、アデノウイルス性疾患、ＡＩＤＳ、ヘルペス後神経痛、帯状疱疹後神経痛、多発性単ニューロパシー、嚢胞性線維症、ベヒテレフ病、バレット食道、エプスタイン−バーウイルス感染、心臓リモデリング、間質性膀胱炎、ヒト腫瘍放射線増感、化学療法剤に対する悪性細胞の多耐性、環状肉芽腫、癌、慢性閉塞性肺疾患、気管支平滑筋細胞のＰＤＧＦ誘発性チミジン取込み、気管支平滑筋細胞増殖、副腎白質ジストロフィー、アルコール依存症、アルパース病、毛細血管拡張性運動失調症、バッテン病、牛海綿状脳症、脳性麻痺、コケーン症候群、皮質基底核変性症、クロイツフェルト−ヤコブ病、家族性致死性不眠症、前頭側頭葉変性症、ケネディ病、レヴィー小体認知症、神経ボレリア症、マシャド−ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、多系統萎縮症、ナルコレプシー、ニーマン−ピック病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性核上性麻痺、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血に続発する脊髄の亜急性連合変性症、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、スティール−リチャードソン−オルゼウスキー病、脊髄癆、中毒性脳症、ＭＥＬＡＳ（ミトコンドリア脳筋症；乳酸アシドーシス；脳卒中）、ＭＥＲＲＦ（ミオクローヌス癲癇赤色ぼろ線維）、ＰＥＯ（進行性外眼筋麻痺）、リー症候群、ＭＮＧＩＥ（ミオパシーおよび外眼筋麻痺；ニューロパシー；胃腸；脳障害）、カーンズ−セイヤー症候群、ＮＡＲＰ、遺伝性痙性対麻痺、ミトコンドリア性ミエロパシー，視神経炎、進行性多巣性白質脳症、壊疽性膿皮症、頭皮のびらん性膿疱性皮膚症、スイート症候群、腸関連皮膚症−関節炎症候群、膿疱性乾癬、急性汎発性発疹性膿疱症、膿漏性角皮症、スネドン−ウィルキンソン病、皮膚襞の無菌性膿疱症、乳児肢端膿疱症、一過性新生児膿疱症、好中球性エクリン汗腺炎、リウマチ好中球性皮膚炎、好中球性じんましん、スティル病、有縁性紅斑、未分類間欠熱症候群／自己炎症性症候群、水疱性全身性エリテマトーデス、手の甲の好中球性皮膚病（膿疱性脈管炎）、過敏症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、肺癌、喘息の重度の窒息のエピソード、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、虚血再灌流障害、多臓器機能不全を伴う敗血症、分類不能大腸炎、鎌状赤血球クリーゼ、急性胸部症候群、強皮症性肺疾患、慢性喘息、放射線誘発性線維症サルコイドーシス、肺高血圧症、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）、肺移植による拒絶反応、肺ＧＶＨＤ合併症、移植レシピエントにおける間質性肺炎症候群（ＩＰＳ）、ＣＯＰＤ、珪肺症、石綿肺症、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、アルコール誘発性肝線維症、自己免疫性肝炎、慢性ウイルス性肝炎（ＨｅｐＢ、Ｃ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝移植による拒絶反応、ＧＶＨＤの肝合併症、移植レシピエントにおける静脈閉塞症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、ＧＶＨＤの腎合併症（ＡＫＩ臓器移植後臓器機能障害）、ＣＡＢＧ後の急性腎破壊（ＣＡＢＧ後のＡＫＩ）、ループス腎炎、高血圧症誘発性腎線維症、ＨＩＶ−関連腎症、腹膜透析誘発性腹膜線維症、後腹膜線維症、特発性糸球体硬化症、腎移植による拒絶反応、アルポート症候群、再狭窄、くも膜下出血（ＳＡＨ）、心臓移植による拒絶反応、美容整形、慢性創傷、火傷、手術癒着、ケロイド、ドナー移植片再上皮化、骨髄線維症、角膜移植、ＬＡＳＩＸ、トラベクレクトミー、全身性硬化症、放射線誘発性線維症、膝蓋周囲線維症、デュピュイトラン拘縮、ジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ肉腫、リンパ芽球腫白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、慢性骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、血管腫、血管内皮腫、血管外皮細胞腫、血管肉腫、カポジ肉腫、骨肉腫、線維肉腫、食道扁平上皮癌、膵臓癌、胃腸腫瘍、結腸癌、直腸癌、胃癌、リンパ管腫、脳腫瘍、神経芽細胞腫、シュワン鞘腫、クロム親和細胞腫、肺癌、頭部および頚部扁平上皮癌、メラノーマ、非メラノーマ皮膚癌、平滑筋腫、平滑筋肉腫、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、膀胱癌、頚管癌、腎臓癌、前立腺癌、または転移形成から選択される１種以上の疾病であることを特徴とする、本発明０００７〜００１０に記載される方法。
【発明の効果】
【００５７】  ＮＲＦ２活性化剤はそれのみでは十分な効果が得られない場合も多いから、本発明は、ＮＲＦ２活性化剤の効果を増強する方法とて有効である。
【００５８】  ＤＭＦやバルドロキソロンメチルなどでは副作用も報告され、できるだけ少ない量の薬剤で薬理効果を得ることが必要である。本発明は薬剤の量を調整する方法として役立つ。
【図面の簡単な説明】
【００５９】  ＮＲＦ２活性化剤は持続的に第２相酵素群を誘導し、少なくとも数時間にわたってＧＳＨの濃度を増加させるため、神経細胞に酸化ストレスに対する耐性を誘導するので、神経細胞死を抑制することができる（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ２００８，１０４，１１１６−１１３１）。【００６０】  酸化ストレスによる神経細胞死のモデルとして、高濃度Ｇｌｕによる細胞死を用いることができる（Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １９９８，１４１，１４２３−１４３２）。高濃度Ｇｌｕ（５ｍＭ以上）を培養液に添加すると、細胞外から細胞内へのシスチンの取りこみが抑制され、ＧＳＨが合成できなくなり、１０時間から２０時間のゆっくりとして時間経過で細胞死が起こる。この細胞死は生理活性物質の検出には鋭敏である（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ２００２，８１，１３９４−１４００）。本発明ではＮＲＦ２活性化剤の生物活性を計測するモデルとして、このＧｌｕによる細胞死の系を用いた。ＡＫＧと同じようにα−ケト酸構造をもつＰＡ及びＯＡＡを比較対象として用いた。【００６１】
【図１】ＡＫＧはＥＣによる神経細胞死の抑制を増強した：図１は本発明の実施例において、神経細胞死の抑制試験におけるＥＣの抑制効果とＡＫＧ，ＰＡ及びＯＡＡの共存によるその増強作用である。
【図２】ＡＫＧはＺＯによる神経細胞死の抑制を増強した：図２は本発明の実施例において、ＺＯの抑制効果とＡＫＧ，ＰＡ及びＯＡＡの共存の共存によるその増強作用である。
【図３】ＡＫＧはＣＡによる神経細胞死の抑制を増強した：図３は本発明の実施例において、神経細胞死の抑制試験におけるＣＡの抑制効果とＡＫＧ，ＰＡ及びＯＡＡの共存によるその増強作用である。
【図４】ＡＫＧはＴＢＨＱによる神経細胞死の抑制を増強した：図４は本発明の実施例において、神経細胞死の抑制試験におけるＴＢＨＱの抑制効果とＡＫＧ，ＰＡ及びＯＡＡの共存によるその増強作用である。
【図５】ＡＫＧはＤＭＦによる神経細胞死の抑制を増強した：図５は本発明の実施例において、神経細胞死の抑制試験におけるＤＭＦの抑制効果とＡＫＧ，ＰＡ及びＯＡＡの共存によるその増強作用である。
【図６】ＡＫＧはＦＡによる神経細胞死の抑制を増強した：図６は本発明の実施例において、神経細胞死の抑制試験におけるＦＡの抑制効果とＡＫＧ，ＰＡ及びＯＡＡの共存によるその増強作用である。
【図７】ＡＫＧはＲＳＶによる神経細胞死の抑制を増強した：図７は本発明の実施例において、神経細胞死の抑制試験におけるＲＳＶの抑制効果とＡＫＧ，ＰＡ及びＯＡＡの共存によるその増強作用である。
【図８】ＡＫＧは高濃度Ｇｌｕによる神経細胞死を抑制しなかった：図８は本発明の実施例において、神経細胞死の試験におけるＡＫＧによる抑制作用である。
【図９】ＰＡは高濃度Ｇｌｕによる神経細胞死を抑制しなかった：図９は本発明の実施例において、神経細胞死の試験におけるＰＡによる抑制作用である。
【図１０】ＯＡＡは高濃度Ｇｌｕによる神経細胞死を抑制しなかった：図１０は本発明の実施例において、神経細胞死の試験におけるＯＡＡによる抑制作用である。
【図１１】ＡＫＧはＥＣによる転写活性化を増強した：図１１は本発明の実施例において、ＡＲＥ転写活性化の試験におけるＥＣの活性化とＡＫＧによるその増強作用である。
【図１２】ＡＫＧはＺＯによる転写活性化を増強した：図１２は本発明の実施例において、ＡＲＥ転写活性化の試験におけるＺＯの活性化とＡＫＧによるその増強作用である。
【図１３】ＡＫＧはＣＡによる転写活性化を増強した：図１３は本発明の実施例において、転写活性化の試験におけるＣＡの活性化とＡＫＧによるその増強作用である。
【図１４】ＡＫＧはＴＢＨＱによる転写活性化を増強した：図１４は本発明の実施例において、転写活性化の試験におけるＴＢＨＱの活性化とＡＫＧによるその増強作用である。
【図１５】ＡＫＧはＤＭＦによる転写活性化を増強した：図１５は本発明の実施例において、転写活性化の試験におけるＤＭＦの活性化とＡＫＧによるその増強作用である。
【００６２】  本発明は、各種ＮＲＦ２活性化剤がＨＴ２２細胞の２０ｍＭのＧｌｕによる細胞死を５０％抑制する濃度を（ＩＣ５０）をもって増強作用を定量化する。このときＮＲＦ２活性化剤とＡＫＧとを共存させたときと、ＮＲＦ２活性化剤単独のときのＩＣ５０を比較すれば増強作用を定量化できる。
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とあらわすことができる。増強作用は、ＡＫＧと組合せることによって、ＮＲＦ２活性化剤の薬理学的用量がどれほど多く低減されうるかを定量的に述べている。すなわち同じ薬理効果を得られるためのＮＲＦ２活性化剤の使用量は数分の１になる可能性があるということである。【００６３】  ＮＲＦ２活性化剤は親電子性物質であるがゆえの副作用は避けられないから、同じ薬理効果を得るためにはできるだけ低い容量であったほうがよい。ＡＫＧと組み合わせによって、同じ薬理効果を得られるための容量が数分の１に減るのだから有意に副作用が出る可能性を減らせるのである。特にＮＲＦ２活性化剤が薬剤であるとき、この効果は大きい。【００６４】  ５０％の細胞死を抑制するための有効な濃度（ＩＣ５０）を求めた。さらにＡＫＧによる、本発明で用いたＮＲＦ２活性化剤の増強作用は以下のように求められた。
図１：エピカテキンでは１０倍以上
図２：ゾナロールでは６．２倍
図３：カルノシン酸では５．４倍
図４：ＴＢＨＱでは３．２倍
図１２：ＤＭＦでは２．８倍
【発明を実施するための形態】
【００６５】  ＡＫＧ及び／またはＦＡは、市販されているものを入手して用いることができる。本発明において、有効成分はまた、公知の方法に従って製造することができる。微生物による製造法として  特開２０１２−１７３８５またはＡｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ２０１１，９２．６８９−６９５に記載の方法に従って合成することができる。ＡＫＧ及び／またはＦＡは、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等の金属との塩、リジン等のアミノ酸との塩とすることもできる。さらに、薬学上許容される溶媒和物としては、例えば、水和物、アルコール和物（例えば、メタノール和物、エタノール和物）、エーテル和物が挙げられる。
【００６６】  本発明による組成物は、有効成分であるＡＫＧ及び／またはＦＡを用いて、生理学的に許容されうる担体、賦形剤、結合剤、希釈剤などと混合することにより製造できる。本発明による組成物は、経口（食品及び医薬品）に摂取することができる。経口用の形態としては、食品、顆粒剤、散剤、錠剤（糖衣錠を含む）、丸剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤が挙げられる。これらの製剤は、薬学的に許容される担体（例えば、賦形剤、添加剤）とともに製剤化することができる。薬学的に許容される賦形剤や添加剤としては、担体、結合剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられる。薬学的に許容される担体としては、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、カカオバター等が挙げられる。
【００６７】  経口剤は、有効成分として、例えば賦形剤（乳糖、白糖、デンプン、マンニトールなど）、崩壊剤（炭酸カルシウム、カルボキシメチルセルロースカルシウムなど）、結合剤（α化デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリビニールピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロースなど）または滑沢剤（タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール６０００など）を添加して圧縮成形し、次いで必要により、味のマスキング、腸溶性あるいは持続性の目的のため自体公知の方法でコーティングすることにより製造することができる。コーティング剤としては、例えばエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ポリオキシエチレングリコール、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートおよびオイドラギット（メタアクリル酸・アクリル酸共重合物）などを用いることができる。
【００６８】  本発明による食品には、本発明による有効成分をそのまままたは上記のような組成物または活性化剤の形態で、食品に配合することができる。より具体的には、本発明による食品は、本発明による有効成分（ＡＫＧ及び／またはＦＡは）を食品として調製したもの、各種タンパク質、糖類、脂肪、微量元素、ビタミン類等をそれらにさらに配合して調製したもの、液状、半液体状若しくは固体状にしたもの、ペースト状にしたもの、または、一般の飲食品へ添加したものであってもよい。
【００６９】  本発明において「食品」には、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、機能性表示食品、または病者用食品のような分類のものも包含される。さらに「食品」という用語は、ヒト以外の哺乳動物を対象として使用される場合には、飼料を含む意味でここで用いてもよい。食品はまた、通常の食品の形状であっても、サプリメントのような栄養補助食品の形状であってもよい。
【００７０】  本発明の別の態様によれば、ＡＫＧ及び／またはＦＡを有効成分として含む食品であって、ＮＲＦ２活性化剤の効果の増強により治療、予防または改善しうる疾患または状態の治療、予防または改善する機能が表示された食品が提供される。本発明のさらに別の態様によれば、ＡＫＧ及び／またはＦＡを有効成分として含む食品であって、抗酸化能、解毒能、または、抗炎症能が表示された食品が提供される。
【００７１】  本発明において提供される飲料（飲料形態の健康食品や機能性食品を含む）の製造に当たっては、通常の飲料の処方設計に用いられている糖類、香料、果汁、食品添加剤などを適宜添加することができる。飲料の製造に当たってはまた、当業界に公知の製造技術を参照することができる。
【００７２】  本発明による食品は様々な形態を取ることができ、公知の医薬品の製造技術に準じて本発明による食品を製造してもよい。その場合には、本発明による治療剤の製造の項目において述べたような担体や製剤用添加剤を用いて製造することができ、具体的には、経口剤の欄に記載された担体や製造用添加剤を用いて製造することができる。
【００７３】  本発明の有効成分であるＡＫＧは、人類がワインや果物の成分としての飲食品として長年摂取してきた成分であることから、毒性も低く、哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル等）に対し安全に用いることができる。
【００７４】  本発明による組成物および食品を投与または摂取する場合、本発明による有効成分の投与量または摂取量は、受容者、受容者の年齢および体重、症状、投与時間、剤形、投与方法、薬剤の組み合わせ等に依存して決定できる。例えば、本発明による有効成分を健康食品として投与する場合、ＡＫＧ及び／またはＦＡの有効量として、成人１人当たり１．００〜２００ｍｇ／ｋｇ体重（好ましくは１０．０〜１００ｍｇ／ｋｇ体重）の範囲で一日１または数回の投与単位に分割して投与することができる。なお、これらの投与量または摂取量は、成人の体重を６０ｋｇと仮定して、体重６０ｋｇの成人１人１日あたりのＡＫＧ及び／またはＦＡの摂取量もしくは投与量として、必要により計算することによって表すことができる。
【００７５】  本発明を以下の例によって詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００７６】  図１〜７：ＡＫＧによるＮＲＦ２活性化剤の神経細胞死の抑制作用を増強した：サブコンフレントのＨＴ２２細胞を２４ウエルプレートに４００００ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２の密度で散布した。ＡＫＧ、ＰＡまたはＯＡＡの１０ｍＭ（図６及び７においてはＡＫＧ）を添加後、１０％非働化牛胎児血清を含むＤ−ＭＥＭ培地でマウス神経芽腫由来細胞株ＨＴ２２細胞を１時間培養した後、各種濃度のＥＣ（図１）、ＺＯ（図２）、ＣＡ（図３）、ＴＢＨＱ（図４）、ＤＭＦ（図５）、ＦＡ（図６）またはＲＳＶ（図７）を添加した。さらに１時間後に２０ｍＭのＧｌｕを添加して２４時間培養した。次に、発色試薬３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ（ＭＴＴ，和光純薬）を１ｍｇ／ｍｌ添加し、２時間培養した後、細胞融解液（５０％フォルムアミド、２０％ドデシル硫酸ナトリウム）を添加し、二十四時間放置した。その後、５４０ｎｍの吸光度を吸光度測定装置（Ｂｉｏｒａｄマイクロプレートリーダー）を用いて測定した。全ての場合において、ＡＫＧは他のグループ（ＰＡまたはＯＡＡ処置群または無処置群）と比較して有意に強く高濃度Ｇｌｕによる神経細胞死を抑制していた。＊は危険率５％でＳｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ＴＥＳＴで有意差検定を行い、有意差のあるもの。有意差の表示はＡＫＧとコントロール群の比較で行った。【００７７】  図８〜１０：ＡＫＧ、ＰＡ及びＯＡＡの高濃度Ｇｌｕによる細胞死への影響：サブコンフレントのＨＴ２２細胞を２４ウエルプレートに４００００ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２の密度で散布した。ＡＫＧ（図８）、ＰＡ（図９）またはＯＡＡ  （図１０）１０ｍＭを添加後、１０％非働化牛胎児血清を含むＤ−ＭＥＭ培地でマウス神経芽腫由来細胞株ＨＴ２２細胞を１時間培養した。さらに１時間後に０、５、１０または２０ｍＭのＧｌｕを添加して１８時間培養した。次に、発色試薬３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ（ＭＴＴ，和光純薬）を１ｍｇ／ｍｌ添加し、２時間培養した後、細胞融解液（５０％フォルムアミド、２０％ドデシル硫酸ナトリウム）を添加し、２４時間放置した。その後、５４０ｎｍの吸光度を吸光度測定装置（Ｂｉｏｒａｄマイクロプレートリーダー）を用いて測定した。有機酸非処置群（白のカラム）と有機酸処置群（灰色のカラム）の比較を危険率５％でＳｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ＴＥＳＴで有意差検定を行い、全ての場合において有意差がなかったから、有意差の表示を行わなかった。【００７８】  図１１〜１５：ＮＲＦ２活性化剤によるＮＲＦ２活性化：サブコンフレントのＨＴ２２細胞を２４ウエルプレートに４００００ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２の密度で散布した。１０％非働化牛胎児血清を含むＤ−ＭＥＭ培地でマウス神経芽腫由来細胞株ＨＴ２２細胞を１時間培養した。その後ＮＲＦ２転写活性に対するＡＫＧの影響を調べるため、ＧＳＴＹａ  ＡＲＥ−ルシフェラーゼベクター（Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ  ２００８，４３４，２６０−２６５）をレポーターとして用い、このプラスミドＤＮＡをＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＬＴＸ（ｉｎｖｉ���ｒｏｇｅｎ製）を用いてＨＴ２２細胞にトランスフェクションし、ＡＫＧ１０ｍＭ及びＮＲＦ２活性化剤（図１１ではＥＣ１０μＭ，図１２ではＺＯ１μＭ，図１３ではＣＡ１μＭ、図１４ではＴＢＨＱ１μＭまたは図１５ではＤＭＦ１０μＭ）添加した１０％非働化牛胎児血清を含むＤ−ＭＥＭ培地に変えて、さらに２４時間培養し細胞を回収してＮＲＦ２の転写活性をルシフェラーゼの酵素活性として評価した。薬物で処理していない細胞株におけるルシフェラーゼ活性（コントロール）を１００％として、相対活性を算出することにより行った。ＥＣ、ＺＯ、ＣＡ、ＴＢＨＱ及びＤＭＦは転写活性を有意に増加させたが、ＡＫＧ１０ｍＭが共存するとさらに転写活性を増強した。＊は危険率５％でＳｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ＴＥＳＴで有意差検定を行い、有意差のあるもの。有意差の表示は、対照とＮＲＦ２活性化剤処置群の比較及びＮＲＦ２処置群とＡＫＧ＋ＮＲＦ２処置群の比較である。
【産業利用の可能性】
【００７９】  主題「高濃度カテキン茶で潰瘍性大腸炎を克服する」
具体的な製品像「潰瘍性大腸炎を適用症とした病者用食品」
潰瘍性大腸炎とは：特にストレスが原因で炎症反応の暴走が起こり、その結果大腸に広範な潰瘍が起こる病気である。患者数は２０１５年現在１７万人余りで、１９７０年代以降著しく増加傾向にある。現状では「メザラジン」、「ステロイド」及び「抗ＴＮＦ−α抗体」などの薬剤しか治療法がなく、これらに効果がなければ、大腸を切除し、一生人工肛門に頼らなければならなくなる。従って新たな薬剤治療の方法または効果的な食品が必要とされている。特に日常の食品で治療できれば患者への負担が小さく受け入れやすい。お茶は、日本人には毎日飲むことに全く抵抗がなくできるという点で最も優れた「産業利用」の対象である。
本発明の貢献：発明者は高濃度カテキン茶を基盤として潰瘍性大腸炎を適用症とした病者用食品の開発を進めている。本発明が明らかにしたＮＲＦ２活性化剤の効果の増強の技術を実用化する上で最も大きなハードルになるのは、親水性の化合物であるＡＫＧとＦＡを多くは疎水性であるＮＲＦ２活性化剤とどのように組み合わせるのかという課題である。もしＮＲＦ２活性化剤が親水性のものであるならば産業化することは極めて容易である。すなわちカテキンを高濃度に含むお茶ならば親水性の化合物であるＡＫＧとＦＡを組み合わせることは容易である。この水溶液（ＡＫＧとＦＡは３０００ｍｇ程度＋カテキン５００ｍｇ程度）のお茶３００ｍｌを毎日朝晩摂取することによって、潰瘍性大腸炎に有意な治療効果をもたらすことが可能である。発明の実施例で示すようにカテキンの薬理効果はＡＫＧによって１０倍以上に増強されるから、潰瘍性大腸炎のような激しい炎症反応でも抑制できる可能がある。本発明により増幅された「機能性」を産業利用して、病者用食品の開発を目指している。
【００８０】  主題「体脂肪低減作用を強化した高濃度カテキン茶」
具体的な製品像「体脂肪低減を強化した機能性表示食品」
カテキン類の最も有名な薬理効果は体脂肪の低減効果である。お茶は毎日飲むことは容易であるが、効果を実感しにくいという欠点があった。本発明によって、カテキンを高濃度に含むお茶をＡＫＧとＦＡを組み合わせたお茶（ＡＫＧとＦＡは３０００ｍｇ程度＋カテキン５００ｍｇ程度）３００ｍｌを製品として開発する。これを  毎日朝晩摂取することによって、体脂肪低減作用を、今までの高濃度カテキン緑茶よりも有意強く誘導することが可能であると考える。この増強された脂肪低減作用によって新たな機能性表示食品の製品の開発を目指す。
【００８１】  主題「ＤＭＦの副作用を最小限にする病者用食品」
ＤＭＦは多発性硬化症の治療薬として臨床で使われ、現在適用症の拡大が図られている。この薬物には副作用を最小限にして、薬物の使用量を制限する技術が必要である。本発明で示すように、同等薬効量を有意に減少させることができる可能性が大きい。このことから、上記の高濃度カテキン茶を、ＤＭＦを使用する際の増強療法に用いることが可能である。
【符合の説明】
【００８２】ＮＲＦ２：ＮＦ−Ｅ２−ｒｅｌａｔｅｄ  ｆａｃｔｏｒ  ２
ＡＫＧ：α−Ｋｅｔｏｇｌｕｔａｒｉｃ  ａｃｉｄ：α−ケトグルタル酸
ＥＣ：Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ：エピカテキン
ＺＯ：Ｚｏｎａｒｏｌ：ゾナロール
ＣＡ：Ｃａｒｎｏｓｉｃ  ａｃｉｄ：カルノシン酸
ＴＢＨＱ：ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ  ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ：ターシャルブチルハイドロキノン
ＤＭＦ：Ｄｉｍｅｔｈｅｙｌ  ｆｕｍａｒａｔｅ：ジメチルフマル酸
ＦＡ：Ｆｕｍａｒｉｃ  ａｃｉｄ：フマル酸
ＲＳＶ：Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ：レスベラトロール
ＧＳＨ：Ｒｅｄｕｃｅｄ  Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ：還元型グルタチオン
ＳＳＲＩ：Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  Ｒｅｕｐｔａｋｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：選択的セロトニン再取り込み阻害剤
Ｇｌｕ：Ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ：グルタミン酸
ＰＡ：Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ：ピルビン酸
ＯＡＡ：Ｏｘａｌｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ：オキサロ酢酸
ＨＩＦ−１：Ｈｙｐｏｘｉａ  Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ｆａｃｔｏｒ
ＫＥＡＰ１：Ｋｅｌｃｈ−ｌｉｋｅ  ＥＣＨ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １
ＡＲＥ：ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ
ＭＴＴ：３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ
ＤＭＥＭ：Ｄｕｌｂｅｃｃｏ‘ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ：ダルベッコ改変イーグル培地
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年7月12日(2017.7.12)
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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