(57)【要約】      （修正有）【課題】「E01C10216」と指定された新しいレタス品種の植物体の提供。【解決手段】レタス、ラクツカ・サチバ、その種子がＮＣＩＭＢ登録番号４２５６８をもつ「Ｅ０１Ｃ１０２１６」として指定されたレタスのであり、該種子を栽培することにより生産されるレタス植物体。植物体から得られる植物体の一部分であるレタスの球部、レタスの葉、レタスの葉の一部、花粉、胚珠、花等を含む。レタスの種子の生産方法であって、別のレタス植物体と交配し、それから種子を取ることを含む方法。【選択図】図１
2018014958.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
「Ｅ０１Ｃ１０２１６」として指定されたレタスの種子であり、種子の代表のサンプルはＮＣＩＭＢ登録番号４２５６８として寄託されている、レタスの種子。
【請求項２】
請求項１に記載の種子を栽培することにより生産されるレタス植物体。
【請求項３】
請求項２に記載の植物体から得られる植物体の一部分。
【請求項４】
前記一部分は球部、葉又はそれらの一部分である、請求項３に記載の植物体の一部分。
【請求項５】
前記一部分は球部である、請求項４に記載の植物体の一部分。
【請求項６】
請求項２に記載のレタス植物体の全ての生理学的及び形態学的特徴をもつ、レタス植物体。
【請求項７】
請求項６に記載の植物体の一部分。
【請求項８】
前記一部分は球部、葉又はそれらの一部である、請求項７に記載の植物体の一部分。
【請求項９】
前記一部分は球部である、請求項８に記載の植物体の一部分。
【請求項１０】
請求項１に記載の種子から「Ｅ０１Ｃ１０２１６」が栽培される場合に、親株として「Ｅ０１Ｃ１０２１６」をもつＦ１交配レタス植物。
【請求項１１】
請求項２に記載の植物体の花粉粒。
【請求項１２】
請求項２に記載の植物体の胚珠。
【請求項１３】
請求項２に記載の植物体の組織培養物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の組織培養物から再生したレタス植物体であって、前記植物体は「Ｅ０１Ｃ１０２１６」として指定された種子を栽培することにより生産されたレタス植物体の形態学的、及び生理学的特徴の全てを有し、前記種子の代表サンプルはＮＣＩＭＢ登録番号４２５６８として寄託されている、レタス植物体。
【請求項１５】
レタスの種子の生産方法であって、前記方法は請求項２に記載の植物体を別のレタス植物体と交配し、それから種子を取ることを含む方法。
【請求項１６】
レタス品種「Ｅ０１Ｃ１０２１６」の生産方法であって、前記方法は、一の「Ｅ０１Ｃ１０２１６」植物体と別の「Ｅ０１Ｃ１０２１６」植物体との交配から得られた種子を選択することを含み、「Ｅ０１Ｃ１０２１６」レタスの種子のサンプルはＮＣＩＭＢ登録番号４２５６８として寄託されたものである、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物育種の分野に関する。特に、本発明は「E01C10216」と指定されたラクツカ・サチバ(Lactuca sativa)の品種に関する。
【背景技術】
【０００２】
栽培されているレタスは、食用の球部と葉を目的として栽培される、高度に多形性の種、ラクツカ・サチバに属する。農作物として、レタスは、環境が経済的に成功可能な収穫を生み出すところでは、どこでも商業的に栽培されている。レタスを植える時期は、典型的に３つの時期に分けられる（つまり、早期、中期及び晩期）。海岸地方は１月から８月に種がまかれ、砂漠地域は８月から１２月に種がまかれる。新鮮なレタスは、ほぼ新鮮な、生野菜としてのみ消費され、時折、調理された野菜として消費される。
【０００３】
ラクツカ・サチバは、キク科(Asteraceae(Compositae))のシコリエ連(Cichorieae)に属する。レタスは、チコリ、ヒマワリ、シオン、タンポポ、アーティチョークおよび菊と関係がある。サチバ(Sativa)は、ラクツカ(Lactuca)属にある約300種のうちの一つである。レタスには７種の形態上のタイプがある。パリパリした球部の系統群は、アイスバーグ(iceberg)及びバタビアン(batavian)タイプを包含する。アイスバーグレタスは、パリパリした質感と白い又はクリーム様の黄色の内部を有する大きな、しっかりした球部をもっている。バタビアンレタスはアイスバーグタイプより先に生み出され、比較的小さく、柔軟な球部を有する。バターヘッド(butterhead)系統群は、ほとんど油のような質感がある小さい、柔らかい球部を有している。タチチシャは、またコスレタス(cos lettuce)としても知られ、ゆるく集まった塊状の球部をつくる長い、立ち上がった葉をもち、他の葉はふつう深い緑色である。葉レタスは、またカッティングレタス(cutting lettuce)としても知られ、多くの品種があるが、いずれも球部を形成せず、緑色の樫の葉様の品種を含む。ラテンレタス(latin lettuce)は、グラッセタイプレタス(grasse-type lettuce)としても知られ、タチチシャとバターヘッドの両方を合わせたように見える。ステムレタス(stem lettuce)は、長い、狭い葉と、厚い食用の茎を有する。オイルシード(oilseed)レタスは油を得るために絞られる大きい種をとるために栽培されるタイプである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
レタスは、ますます人気が高まっている作物である。世界中のレタスの消費は増加し続けている。この需要の結果、新しいレタスの品種が引き続き求められている。特に、安定した、高い収穫量を与え、農業経営上、健全な改良されたレタスの品種が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
このような求めに応じるため、本願の発明は改良されたレタスの品種に関する。
【０００６】
一実施態様では、本願の発明はレタス、ラクツカ・サチバ、その種子がNCIMB登録番号42568をもつ「E01C10216」と指定されたレタスに関する。一実施態様では、本願発明は、「E01C10216」レタスの種子を栽培して得られるラクツカ・サチバレタス植物体と、それから分離された一部に関する。別の実施態様では、本願発明は、NCIMB登録番号42568をもつ「E01C10216」レタスの種子を栽培して得られるラクツカ・サチバ植物体のすべての生理学的及び形態学的特性を有する、ラクツカ・サチバ植物体と、それから分離された一部に関する。さらに別の実施態様では、本願発明は、親として「E01C10216」を有するＦ１交配ラクツカ・サチバレタスの種子、この種子から得られた植物体及び、この植物体から分離された球部に関し、ここで「E01C10216」は、NCIMB登録番号42568をもつ「E01C10216」レタスの種子から得られる。
【０００７】
レタス植物体の一部は、レタスの球部、レタスの葉、レタスの葉の一部、花粉、胚珠、花等を含む。別の実施態様では、本願発明はさらに「E01C10216」レタス植物体から分離された、レタスの球部、レタスの葉、レタスの葉の一部、花、花粉、胚珠に関する。別の実施態様では、本願発明はさらに、「E01C10216」レタス植物体の組織培養物、この組織培養物から再生したレタス植物体に関し、ここで、この植物体は「E01C10216」レタス植物体の全ての形態学的及び生理学的特性を有している。
【０００８】
さらに別の実施態様では、本願発明はさらに「E01C10216」植物体の一部を包装する、包装材料に関する。そのような包装材料は箱、プラスチックの袋等を含むがこれらに限られない。「E01C10216」植物体の一部は、他の植物の品種の他の一部と組み合わされても良い。
【０００９】
さらに、別の実施態様では、本願発明はさらに、a)「E01C10216」レタス植物体を栽培すること（「E01C10216」レタス植物体はNCIMB登録番号42568をもつレタスの種子から得られるレタス植物体である）、及び、b)工程a)からの植物体を選択することにより、レタス植物体を選ぶ方法に関する。別の一実施態様では、本願発明はさらに、レタス植物体、レタス植物体から得られるレタス植物体の一部及び種子に関する。ここで、レタス植物体は本発明の選択方法により分離される。
【００１０】
別の実施態様では、本願発明は、さらにNCIMB登録番号42568をもつ「E01C10216」レタスの種子から育てられた植物体と、あるレタス植物体を交配することでレタス植物体を品種改良する方法に関する。さらに別の実施態様では、本願発明はさらにレタス植物体、レタス植物体の一部、レタス植物体から得られる種子に関する。ここで、上記レタス植物体は本発明の育種法により分離される。いくつかの実施態様では、上記育種法によって分離されたレタス植物体は、遺伝子が導入されたレタス植物体である。
【００１１】
別の実施態様では、本願発明は、遺伝物質に１以上の導入遺伝子を含むレタス植物体を生産する方法、及びその方法により生産される遺伝子が導入されたレタス植物体に関する。
【００１２】
別の実施態様では、本願発明は「E01C10216」レタスの種子を栽培することにより生産されるレタス植物体に雄性不稔性を与える核酸分子を導入することにより雄性不稔性レタス植物体を生産する方法、及びそのような方法により生産される雄性不稔性レタス植物体に関する。
【００１３】
別の実施態様では、本願発明は「E01C10216」レタスの種子を栽培して生産されるレタス植物体に除草剤抵抗性を与える遺伝子を導入することにより、除草剤抵抗性レタス植物体を生産する方法に関する。ここで、この遺伝子は、グリフォセート(glyphosate)、スルフォニルウレア(sulfonylurea)、イミダゾリノン(imidazolinone)、ジカンバ(dicamba)、グルフォシネート(glufosinate)、フェノキシプロピオン酸(phenoxy propionic acid)、L-ホスフィノトリシン(L-phosphinothricin)、シクロヘキソン(cyclohexone)、シクロヘキサンジオン(cyclohexanedione)、トリアジン(triazine)及びベンゾニトリル(benzonitrile)から選択される。ある実施態様はまた、上記方法により生産される除草剤抵抗性レタス植物体に関する。
【００１４】
別の実施態様では、本願発明は、害虫又は虫抵抗性を与える遺伝子を、「E01C10216」レタスの種子を栽培することにより生産されるレタス植物体に導入することにより、害虫または虫抵抗性レタス植物体を生産する方法、及びそのような方法により生産される害虫又は虫抵抗性レタス植物体に関する。ある実施態様では、害虫又は虫抵抗性を与える上記遺伝子は、バシルス・スリンギエンシス(Bacillus thuringiensis)のエンドトキシンをコードする。
【００１５】
別の実施態様では、本願発明は、「E01C10216」レタスの種子を栽培することにより生産されるレタス植物体に病気抵抗性を与える遺伝子を導入することによる、病気抵抗性レタス植物体を生産する方法及びそのような方法により生産される病気抵抗性レタス植物体に関する。
【００１６】
別の実施態様では、本願発明は「E01C10216」レタスの種子を栽培することにより生産されるレタス植物体に、価値を付加する形質を与える遺伝子を導入することによる、価値が付加された形質をもつレタス植物体を生産する方法に関する。ここで、この遺伝子はフェリチン、硝酸還元酵素、及びモネリンから選択されるタンパク質をコードする。ある実施態様は、またこの方法により生産される価値が付加された形質をもつレタス植物体に関する。
【００１７】
別の実施態様では、本願の発明は、レタス品種「E01C120216」へ所望の形質を導入する方法に関する。本方法は、(a)「E01C10216」植物体（「EC01C10216」レタスの種子のサンプルはNCIMB登録番号42568で寄託されている）を、所望の形質を含む別のレタス品種の植物体と交配し、子孫の植物体を生産すること、ここで所望の形質は、雄性不稔性、除草剤耐性、虫又は害虫抵抗性、抽だいの変更(modified bolting)、細菌性疾病に対する抵抗性、菌類による疾病に対する抵抗性、又はウイルスによる疾病に対する抵抗性から選択される、(b)所望の形質をもつ１以上の子孫の植物体を選択すること、(c)選択した子孫の植物体を「E01C10216」植物体と戻し交配し、戻し交配された子孫の植物体を生産すること、(d)所望の形質と、レタスの品種「E01C10216」の全ての生理学的及び形態学的特性をもつ、戻し交配された子孫の植物体を選択すること、及び(e)(c)と(d)の工程を連続して２回以上繰り返し、３世代以降の所望の形質を含む戻し交配された子孫の植物体を生産することにより、レタス品種「E01C10216」に所望の形質を導入する方法に関する。ある実施態様は、またその方法により生産されるレタス植物体にも関する。ここで、この植物体は所望の形質と、レタス品種「E01C10216」の全ての生理学的及び形態学的特徴をもつ。ある実施態様では、所望の形質は除草剤抵抗性であり、この抵抗性は、グリフォセート、スルフォニルウレア、イミダゾリノン、ジカンバ、グルフォシネート、フェノキシプロピオン酸、L-ホスフィノトリシン、シクロヘキソン、シクロヘキサンジオン、トリアジン及びベンゾニトリルから選択される除草剤に対して与えられる。他の実施態様では、所望の形質は虫又は害虫抵抗性であり、虫又は害虫抵抗性はバシルス・スリンギエンシスのエンドトキシンをコードする導入遺伝子により与えられる。
【００１８】
別の実施態様では、本願発明は「E01C10216」の単一遺伝子で形質転換された植物体を与える。この単一の導入される遺伝子は、好ましくは優性対立遺伝子又は劣性対立遺伝子である。好ましくは、単一の導入される遺伝子は、雄性不稔性、除草剤抵抗性、虫又は害虫抵抗性、脂肪酸代謝の変更、炭水化物代謝の変更、細菌、菌類又はウイルス疾患への抵抗性、雄の妊性、栄養的品質の向上及び産業的用途のような特徴を与えるであろう。この単一遺伝子は天然のレタス遺伝子、又は遺伝子工学技術により導入された導入遺伝子である。
【００１９】
さらなる実施態様では、本願発明は、選択の繰り返し、戻し交配、血統栽培（pedigree breeding）、制限酵素断片長多型性増強選択(restriction fragment length polymorphism enhanced selection)、遺伝子マーカ増強選択(genetic marker enhanced selection)、及び形質転換を含む植物育種技術を使うレタス植物育種プログラムにおいてレタス植物を開発する方法に関する。上記育種法によって生産された種子、レタス植物体及びそれらの一部もまた本発明の一部である。
【００２０】
上記の例示的側面と実施態様に加え、さらなる側面と実施態様が、以下の記載の研究の参照により明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
図１は、レタス品種「E01C10216」の球部を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
〔発明の詳細な説明〕
新しい、望ましいレタスの生殖質を調製する多くの段階がある。植物育種は現在のレタス生殖質の問題と弱点の分析、計画の目標の確立、具体的育種の目的の定義から始まる。次の段階は育種プログラムの目標に合致する形質をもつ生殖質の選択である。この目標は親の生殖質からの望ましい形質を単一の品種に組み合わせること、或いは、それらの形質の組み合わせをもつ改良されたものを交配することである。これらの重要な形質は、球部の大きさ及び重量の増加、高い種子の収量、改善された色、疾病と虫に対する抵抗性、干ばつと熱に対する抵抗性、及び良好な農学的品質を含んでも良い。
【００２３】
育種又は選択方法の選択は植物の生殖方法、改良を受ける形質の遺伝性及び市販されている品種の種類（例．Ｆ１交配世代、純系品種等）により決めることができる。高度に遺伝的な形質に関しては、一か所で、評価された優れた個体植物を選択することが効果的であろう。一方、低い遺伝性を有する形質に関しては、選択は、関連する植物の科を繰り返し評価することから得られる平均値に基づくべきである。広く用いられる選択方法はふつう、系統選択、修飾された系統選択、集団選択及び繰り返し選択(recurrent selection)を含む。
【００２４】
複雑な遺伝は育種方法の選択に影響する。戻し交配育種は、望ましい品種へ高度に遺伝的な形質の一又は２，３の好ましい遺伝子を移すため使用される。この方法は疾病に抵抗性をもつ品種を育種するために広く使用されてきた。種々の繰り返し選択の技術は、多くの遺伝子により制御される遺伝的形質を定量的に改良するため使用される。自家受粉する作物の繰り返し選択の利用は、自家受粉の容易さ、受粉ごとの交配が成功する頻度及び成功した各受粉から得られる交配された子孫の数に依存する。
【００２５】
各育種プログラムは、育種手順の効率に対して定期的、客観的評価を含んでも良い。評価基準は目標と目的により変わり、適切な標準との比較、進んだ育種系統の総括的な値、一単位の入力ごと（例．年毎、費やしたドルごと）に生産された成功した品種の数に基づいて年毎の選択から得られる利益を含み得る。
【００２６】
有望な進んだ育種系統は、３年以上、商用生産の目標地域を代表する環境において徹底的に試験されても良いし、適当な基準と比較されても良い。最良の系統は、次に、新しい商用の品種の候補となりえる。２，３の形質でなお欠点のある系統は、さらに選択をするための新しい個体群を生産するために親株として使用されてもよい。これらの手順は、販売促進及び配送という最終段階に至るが、最初の交配又は選択が行われてから１０から２０年かかっても良い。
【００２７】
レタス植物体の育種の一つの目標は、新しい、独特な、遺伝学的に優れたレタスの品種を開発することである。育種家は、最初に２以上の親株の系統を選択、交配できる。その後、自家受粉と選択を繰り返し、多くの新しい遺伝的組み合わせを生産する。さらに、育種家は交配、自家受粉及び突然変異により複数の異なる遺伝的組み合わせを作ることができる。植物の育種家は、次に、どの生殖質を次の世代に進めるべきかを選択できる。これらの生殖質は異なる地理的、気候的及び土壌の条件で栽培されても良い。そして、さらなる選択が栽培する季節の間と終わりになされ得る。
【００２８】
市販用レタス品種の開発は、このように親レタス品種の開発、これらの品種の交配、交配の評価を必要とする。系統育種(pedigree breeding)と繰り返し選択育種方法(recurrent selection breeding method)は育種する個体群から品種を開発するために使用されても良い。育種プログラムは２以上の品種または種々の広範囲のソースから望ましい形質を育種プールへ組み合わせるために使用されても良い。この育種プールから新しい品種が自家受粉と望ましい表現型の選択により作られる。この新しい品種は、他の品種と交配され、これらの交配からの交配種はいずれが商用的に可能性があるかを決めるため評価される。
【００２９】
系統育種は、一般的に自家受粉作物又は同系交配の他家受粉の作物の改良のために用いられる。好ましい相補的な形質をもつ２の親株が交配されＦ１を生産する。Ｆ２個体群は１株又は数株のＦ１を自家受粉することにより、又は２株のＦ１を相互交配（同胞交配）することにより生産される。最良の個体の選択は、ふつうＦ２個体群の中で始められる。その後、Ｆ３の始め、最良の系統の中の最良の個体が選択される。低い遺伝性をもつ形質を選択する効率を改善するため、系統又はこれらの系統の個体に関する交配による組み合わせの繰り返しの試験は、しばしばＦ４世代で行われる。同系交配を進めた段階（つまり、Ｆ6とＦ7）では、表現型が類似の系統のうちの最良の系統又は表現型が類似の系統の混合は、新しい品種として出荷できる可能性について試験される。
【００３０】
集団選択又は繰り返し選択は自己受粉又は他家受粉の作物のいずれかの個体群を改良するために使用できる。ヘテロ接合をもつ個体の遺伝的に不定な個体群は、いくつかの異なった親株の交配により特定され又は調製され得る。最良の植物体は個体の優越性、優秀な子孫、または優れた組み合わせ能力(combining ability)にもとづいて選択される。選択された植物体は相互交配され新しい個体群をつくり、この個体群の中でさらに選択の繰り返しが続けられる。
【００３１】
戻し交配育種は、単純に遺伝され、高度に遺伝できる形質に関する遺伝子を、反復親である、望ましいホモ接合の栽培品種又は系統へ移すために使用されてもよい。移動される形質の源はドナー親(donor parent)と呼ばれる。最初の交配の後、ドナー親の表現形をもつ個体が選択され、繰り返し、戻し親と交配（戻し交配）される。結果的に得られる植物体は、反復親（例、栽培品種）の性質とドナー親から移された望ましい形質をもつと期待される。
【００３２】
厳密な意味で単粒系統法（the single-seed descent procedure）の栽培手順は、隔離した個体群を植え、１植物体あたり１個の種子のサンプルを収穫し、１個の種子のサンプルを使い次世代を植えることをいう。個体群がＦ２から同系交配の望ましい水準へ進んだとき、系統のもとになった植物体はそれぞれ異なるＦ２個体に遡る。ある個体群の植物体の数は、種子のなかには発芽しないものがあり、又は植物の中に１以上の種子を生産できないことにより各世代と共に減少する。その結果、世代進行を終えたとき、個体群の中で当初採取されたＦ２植物体の全てが、子孫により表されるわけではなくなるだろう。
【００３３】
表現型の観察に加え、植物の遺伝子型もまた、試験され得る。植物の遺伝子型の分析、比較又は特徴づけのために使用できる、本願技術分野で知られた、試験室で使える技術が多くある。そのような技術は、アイソザイム電気泳動法(Isozyme Electrophoresis)
、制限酵素断片長多型(Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLPs)、無作為増幅多型DNAs(Randomly Amplified Polymorphic DNAs, RAPDs)、任意プライムポリメラーゼ連鎖反応(Arbitrarily Primed Polymerase Chain Reaction, AP-PCR)、ＤＮＡ増幅フィンガープリンティング(DNA Amplification Fingerprinting, DAF)、配列特性増幅領域(Sequence Characterized Amplified Regions, SCARs)、増幅断片長多型(Amplified Fragment Length polymorphisms, AFLPs)、単純反復配列(Simple Sequence Repeats、SSRs  マイクロサテライト(Microsatelites)ともいわれる)、及び一塩基多型(Single Nucleotide Polymorphisms、SNPs)を含むが、これらに限定されない。
【００３４】
分子マーカーは、質的な形質を選択するための育種過程の間使用されてもよい。例えば、対立遺伝子の近くで連結するマーカー又は、問題の、実際の対立遺伝子内にある配列を含むマーカーは、戻し交配育種プログラムの間に、問題の対立遺伝子を含む植物体を選択するために使用できる。マーカーは、また反復親のゲノムの方を選択し、かつドナー親のマーカーを避けるため使用できる。この手順は、選択された植物に残っているドナー親からのゲノムの量を最小にするよう試みるものである。これは、戻し交配プログラムで必要とされる戻し親への戻し交配の数を減少するために使用できる。選択手順における分子マーカーの使用は、しばしば、遺伝的マーカー増強選択(genetic marker enhanced selection)又はマーカーアシスト選択(marker-assisted selection)と呼ばれる。分子マーカーは、交配による遺伝的プロファイルを追跡する手段を与えることにより、植物の親品種である、又は祖先種である生殖質のある源を特定し排除するために使用されても良い。
【００３５】
突然変異育種は、またレタス品種に新しい形質を導入するためにも使用されてよい。自発的に起こるまたは、人為的に誘導される突然変異は植物の育種家にとり、品種の有用な源となりえる。人為的突然変異生成の目標は、望ましい特性を得るための突然変異率を高めることである。突然変異率は、温度、長期間の種子の貯蔵、組織の培養条件、照射（例えば、Ｘ線、ガンマ線、中性子、ベータ線照射又は紫外線照射）、化学的突然変異誘発要因（例えば、5-ブロモウラシルのような塩基類縁物）、抗生剤、アルキル化剤（例えば、サルファマスタード、窒素マスタード、エポキシド、エチレンアミン、硫酸塩(sulfates)、スルホン酸塩(sulfonates)、スルホン又はラクトン）、アジド、ヒドロキシアミン、亜硝酸、またはアクリジンを含む多くの異なった手段により増やすことができる。突然変異誘発により一度、望ましい形質が観察されると、その形質は、次に伝統的な育種技術により既存の生殖質に組み入れられても良い。突然変異誘育種の詳細は、「品種開発の原理」（フェール、マクミリアン出版会社(1993)）(Principles of Cultivar Development by Fehr, Macmillan Publishing Company (1993))に見出すことができる。
【００３６】
倍加半数体(double haploid)の生産は、育種プログラムにおいてホモ接合品種の開発のためにも使用され得る。倍加半数体は、一組のヘテロ接合植物からの染色体を二倍にして生産され、完全にホモ接合の個体を与える。例えば、Wan, et al.,Theor. Appl. Genet., 77: 889-892(1989)参照。
【００３７】
使用されても良い育種方法の非限定的な例は、Principles of Plant Breeding, John Wiley and Son, pp.115-161(1960); Allard(1960);Simmonds(1979));Sneep, et.al.(1979);Fehr(1987); 及び “Carrots and Related Vegetable Umbelliferae” Rubatzky, V.E.,et.al.(1999)に見出されるものである。
【００３８】
〔定義〕
以下の明細書の中では、多くの用語が使用される。そのような用語に与えられる範囲を含めて、明細書と請求項の明確で一貫した理解を与えるために、以下の定義が与えられる。
【００３９】
対立遺伝子：対立遺伝子は、一遺伝子の一以上の代替型の一つである。それらの全ては一つの形質又は特性に関係する。二倍体の細胞又は生物においては、一の所与の遺伝子の二つの対立遺伝子は、一組の相同の染色体上の対応する遺伝子座を占める。
【００４０】
戻し交配：戻し交配は、育種家が繰り返し交雑された子孫を親株の一つに戻って交配する過程であり、たとえば、Ｆ１交配株の親の遺伝子型の一つと第一世代の交配株Ｆ１を交配する過程である。
【００４１】
ビッグベインウイルス(Big Vein virus)：ビッグベインは菌類 オルピディウム・ヴィルレンツス(Olpidium virulentus)によって伝染される、レタスビッグベインウイルスにより引き起こされたレタスの疾患であり、植物体の葉脈がはっきり現れ、葉が縮み、その結果、低品質で、市場価値の低いレタスとなる。
【００４２】
抽だい：植物が食用作物を生産する前の、花をつける茎とその後の種子の早期の成長。。抽だいは、典型的には、遅い植え付けにより生じる。
【００４３】
ブレミア・ラクツアエ(Bremia lactuae)：清涼な栽培地域で、レタスにべと病を起こす卵菌類。
【００４４】
芯の長さ：切り取られ、刈り揃えられた球部の基部から茎部の先まで測定された、内部レタス茎部の長さ。
【００４５】
コルク根(Corky root)：細菌、スフィンゴモナス・スベリファシエンス(Sphingomonas suberifaciens)により引き起こされる疾病であり、全主根を褐色にし、ひどくひび割れさせ、機能を失わせる。
【００４６】
子葉：種子植物の胚の最初の葉のうちの一枚；典型的には、単子葉植物では一枚以上、双子葉植物では２枚、裸子植物では２枚以上である。
【００４７】
本質的にすべての生理学的及び形態学的特徴：本質的にすべての生理学的及び多型的特徴を有する植物とは、転換された遺伝子に由来する特徴を除き、戻し親の生理学的及び形態学的特徴をもつ植物をいう。
【００４８】
第一水やり日：種子が発芽のために適当な湿気を最初に受けた日。これは、植え付け日と同日であり得、多くの場合そうである。
【００４９】
遺伝子：本明細書では、「遺伝子」は核酸の一部をいう。遺伝子は、異なる種から又は同一種からであれ、形質転換法又は種々の育種法を使って種のゲノムに導入され得る。
【００５０】
球部の直径：切り取られ、刈り揃えられた球部の直径。垂直に薄く切られ、茎に垂直な、最も幅の大きい点で測定されたもの。
【００５１】
球部の高さ：切り取られ、刈り揃えられた球部の高さ。垂直に薄く切られ、切られた茎の基部からカップリーフ(cup leaf)までを測定したもの。
【００５２】
球部の重量：切り取られ、刈り込まれて市販品質とされた市販できる、レタスの球部の重量。
【００５３】
レタスモザイクウイルス(Lettuce Mosaic virus)：若いレタスに矮小な、変形した、又はまだらの模様を生じ得、かつ古いレタスには、黄色で、ねじれた、かつ変形した葉を生じ得る病気。
【００５４】
成熟日：成熟は植物体が、市販できる形状又は姿で、十分な大きさ又は最適な重量をもち商業的又は経済的価値をもつことをいう。
【００５５】
ナソノヴィア・リビスニグリ(Nasonovia ribisnigri)：レタス植物体の最も奥の葉に群棲するレタスのアブラムシ。殺虫剤で容易に処理できない領域を汚染している。
【００５６】
量的形質遺伝子座(Quantitative Trait Loci)：量的形質遺伝子座(QTL)は、ふつう連続的に分布している数字で表され得る形質を、ある程度まで制御する遺伝子座をいう。
【００５７】
球部の高さ/直径の比率：球部の高さを球部の直径で割ったものは、球部の姿の指標である；＜１は平ら、１＝まるであり、＞１は尖っている。
【００５８】
再生：再生は組織培養物から植物体をつくることをいう。
【００５９】
ＲＨＳ：ＲＨＳは、定義された数値化システムにより定量的に色を特定する公式の植物学的色彩図を出版する英国王立園芸協会(Royal Horticultural Society of England)をさす。当該色彩図は、王立園芸協会エンタープライズ株式会社（Royal Horticulture Society Enterprise Ltd., RHS Garden; Wisley, Woking; Surrey GU236QB, UK）から購入可能である。
【００６０】
単一遺伝子転換(Single gene converted)：単一遺伝子転換された植物とは、戻し交配と呼ばれる植物育種技術又は遺伝子工学により開発された植物をいう。この場合、戻し交配技術又は遺伝子工学を経てある系統へ前記単一遺伝子が移されることに加えて、その系統の望ましい形態学的及び生理学的特徴のほぼ全てが、回復される。
【００６１】
チップバーン(Tip burn)：カルシウムの不足への生理学的応答である、レタスの葉の端又は先端が褐色になること。
【００６２】
ウェットデート(Wet date) ウェットデートはレタスを植えた最初の日に相当する。
【００６３】
〔品種「E01C10216」の概観〕
レタス品種「E01C10216」は、濃い緑のパリパリした（すなわち、クリスプヘッド(crisphead)）球部を結ばない、水耕栽培用に開発されたレタス品種である。「E01C10216」は、葉のふちが丸くへこみ、葉の先端は強く起伏している抽だいが遅い品種である。「E01C10216」は、オランダのような地域では春、夏、秋、冬を含む栽培時期をもち、温室での栽培に適している。加えて、レタス品種「E01C10216」は、レタスモザイクウイルス(LMV)菌株Ls-1と、ナソノビア・リビスニギリ(Nasonovia ribisnigri)生物型(biotype)0 (Nr:0)に抵抗性を有し、ブレミア・ラクツカエ（Bremia lactucae）（べと病）菌株Bl:2,、Bl:5、Bl:7、Bl:12、Bl:14−Bl:18、Bl:20−Bl:27及びBL:29−Bl:31に感受性がある。図１はレタス品種「E01C10216」の球部を示す。レタス品種「E01C10216」は、水耕法で育つ能力、その葉縁、葉の先端が起伏をもつこと、ナソノビア・リビスニギリへの抵抗性、並びに春、夏、秋及び冬の間、球部を結ぶ能力についての多くの世代にわたる植物選択の結果である。
【００６４】
この品種は、当該形質に対する環境の影響の限度内で、当該形質の均一性と安定性を示した。植物のタイプの均一性に対する注意深い関心をもって、十分な数の世代、自家受粉を受けた。この系統は、増やされたが均一性が継続して観察された。いずれの変化した形質も、品種「E01C10216」では、観察、予測されなかった。
【００６５】
〔品種「E01C10216」の客観的性状〕
レタス品種「E01C10216」は、以下の形態及び他の特性をもつ：
草型：クリスプ(Crisp) (つまり、パリパリした球部)
種子：
色：白
成熟した葉：
縁：
外側の葉の緑の色合い：なし
外側の葉の色の強度：濃い（Dark）
アントシアニン呈色：なし
抽だい：
分類：晩期（例．フリリス(Frillice)に匹敵）
病気/害虫抵抗性：
レタスモザイクウイルス(LMV)株 Ls-1：抵抗性
べと病（Bremia Lactucae）(Bl)：Bl:2、Bl:5、Bl:7、Bl:12、Bl:14-Bl:18、Bl:20-Bl:27、及びBl:29-Bl:31に対して感受性
害虫：
ナソノヴィア・リビスニギリ生物型 0(Nr:0)：抵抗性
〔市販レタス品種との比較〕
下の表１は、レタス品種「E01C10216」の特徴をレタス品種「フリリス」と比較している。第１列は特徴を示し、第２列はレタス品種「E01C10216」の特徴を示し、第３列は、レタス品種「フリリス」の特徴を示す。
【００６６】
【表１】
2018014958.tif 000003
【００６７】
〔追加の実施態様〕
本発明は第一の親のレタス植物体と第２の親のレタス植物体を交配することによりレタス植物体を生産する方法にも関する。ここで、第１又は第２の親レタス植物体は、品種「E01C10216」のレタス植物体である。さらに、第１と第２の親レタス植物体の両者は、レタス品種「E01C10216」から生じ得る。従って、レタス品種「E01C10216」を使用する、どのような方法も本発明の一部である：自家受粉、戻し交配、交配種生産、個体群への交配等。１以上の親として、レタス品種「E01C10216」を使って生産される全ての植物体は、レタス品種「E01C10216」から生じた品種から開発されたものを含め、本発明の範囲内にある。このレタス品種は、優れた特徴をもった第１世代(F1)のレタス交配種の種子と植物体を生産するために、他の異なるレタス植物体と交配するときに使用されると有利である。本発明の品種は形質転換のためにも使用でき、外来の遺伝子が、本発明の品種により導入され発現される。レタス品種「E01C10216」を使う伝統的な育種法、または、本願技術分野の当業者に知られている多くの試験計画による品種E01C10216の形質転換のいずれかにより作られる遺伝による品種は、本発明の範囲内にある。
【００６８】
以下は、さらにレタス植物体を開発する中で、レタス品種「E01C10216」に関して使用されても良い育種方法を述べるものである。一のそのような実施態様は、レタス植物体育種プログラムにおいて「E01C10216」子孫レタス植物体の品種を開発するための方法である。この方法は、品種「E01C10216」のレタス植物体、又はその一部を得、育種原料源として前記植物体又は植物体の一部を使用し、品種「E01C10216」と共通の分子マーカーにより、及び/または「品種「E01C10216」の客観的性状」という題の節に記載されている特徴から選択される形態学的及び/又は生理学的特徴で、「E01C10216」品種の子孫植物体を選ぶものである。レタス植物体育種プログラムで使用されても良い育種段階は、系統育種、戻し交配、突然変異育種及び繰り返し選択を含む。これらの段階と組み合わせて、RFLP-増強選択(RFLP-enhanced selection)、遺伝子マーカー増強選択(genetic marker enhanced selection)（例えば、SSRマーカー）、及び倍加半数体の作製のような技術が使用されても良い。
【００６９】
別の方法は、「E01C10216」レタス品種を別のレタス植物体と交配し、それにより、レタス植物体の個体群を生産し、平均してその対立遺伝子の50%をレタス品種「E01C10216」から得ることにより、レタス品種「E01C10216」の子孫であるレタス植物体の個体群を生産することを含む。この個体群の植物体が選択され、そして繰り返し自家受粉され又はこれらの連続した交配世代から得られるレタス品種と同種交配されても良い。この発明の一実施態様は本方法により生産されたレタス品種であり、レタス品種「E01C10216」からの対立遺伝子の50%以上を得ているものである。植物育種の技術分野の当業者は、２種の植物品種の形質の評価法を知っており、これらの品種により発現された２つの形質の間に有意な相違があるか否かを決定するであろう。例えば、フェーラとヴァルト(Fehr and Walt)、「品種開発の原理」261-286頁(1987) (Principles of Variety Development, pp261-286(1987))参照。従って、本発明は、「品種「E01C10216」の客観的性状」との表題の節に記載されたものから選択された２以上の品種「E01C10216」の形質の組み合わせを含む、レタス品種「E01C10216」の子孫レタス植物体、あるいは、「発明の概要」に記載された形質をもつ品種「E01C10216」の交配種を含み、その結果、前記子孫レタス植物体は前記形質に関しては、同一の環境条件で栽培された場合に５％有意で検定されたとき、レタス品種「E01C10216」と有意には異ならない。本明細書に記載された技術を用いて、分子マーカーはレタス品種「E01C10216」の子孫の植物体として、前記子孫植物体を特定するために使用されてもよい。平均的な形質値は、形質の相違が有意であるかを決定するために使用されても良く、そして、この形質は、同一の環境条件下で栽培された植物体について測定されることが好ましい。そのような品種が一度開発されると、その値は重要である。なぜなら、収量、病気へ抵抗性、害虫への抵抗性及び極端な環境条件における植物体の性能のような形質を維持、改良するため、全体として生殖質ベースを進歩させることが重要であるからである。
【００７０】
レタス品種「E01C10216」の子孫はレタス品種「E01C10216」との世代的関係（例えば、レタス品種「E01C10216」との育種交配の回数がある回数以内にある）により特徴づけられてもよい。育種交配は子孫に新しい遺伝子を導入するために行われる交配であり、既存の対立遺伝子から選択するために行われる自家受粉又は同種交配とは区別される。系統内での育種において育種交配の回数が低いほど、レタス品種「E01C10216」とその子孫との関係は近い。例えば、本明細書に記載された方法により生産された子孫は、レタス品種「E01C10216」との１、２，３，４または５回の育種交配以内でも良い。
【００７１】
品種の再生産は組織培養と再生によっても起こり得る。レタスの種々の組織の組織培養と、組織から生じる植物体の再生はよく知られ、広く発表されている。例えば、テングら(Teng, et.al.,)、園芸科学 27:9,1030-1032(1992) (HortScience, 27:9, 1030-1032(1992))、テングら(Teng et.al.,)、園芸科学 28:6, 669-1671(1993) (HortScience, 28:6, 669-1671(1993))、ツァーングら(Zhang et.al.,)、遺伝学及び育種雑誌, 46:3, 287-290(1992)(Zhang, et al, Journal of Genetics and Breeding, 46:3, 287-290(1992))；ウェブら(Webb et.al.,)、植物細胞組織と器官培養 38:1, 77-79(1994)(Plant Cell Tissue and Organ Culture 38:1, 77-79(1994))；クルチスら(Curtis et.al.,)、実験植物学誌、45;279,1441-1449(1994)（Journal of Experimental Botany 45:279,1441-1449(1994)）、ナガタら(Nagata et.al.,)、アメリカ園芸科学協会誌、125:6, 669-672(2000)（Journal of the American Society of Horicultural Science, 125:6, 669-672(2000)）; 及びイブラヒムら(Ibrahim et.al.,)、植物細胞組織と器官培養、28(2),139-145(1992)(Plant Cell Tissue and Organ Culture 28(2), 139-145(1992))を参照してよい。本願の技術分野では、植物を得るこれらの方法が日常的に使用され、非常に高い成功率をもつことが文献から明らかである。したがって、本発明の別の側面は品種「E01C10216」の生理学的及び形態学的特徴をもつレタス植物体を、成長と分化により生み出す細胞を提供することである。
【００７２】
本明細書に記載されているように、用語「組織培養物」は、同一又は異なるタイプの単離された細胞、または植物の一部に組織化されたそのような細胞の集合を含む組成物を示す。実施例の組織培養物のタイプは、プロトプラスト、カルス、成長点の細胞及び植物体の中で、損なわれていない組織培養物を生じ得る植物細胞、又は葉、花粉、胚、根、根端、葯、めしべ、花、種子、葉柄、吸根のような植物体の一部を発生できる植物細胞などである。植物組織培養物を調製し維持する手段は本願技術分野で良く知られている。例として、器官を含む組織培養物は再生植物を生産するため使用されてきた。米国特許5,959,185、5,973,234及び5,977,445はある技術群を説明し、この開示は引用により本願に組み入れられる。
【００７３】
本願で使用されるとき、用語「植物体」は植物細胞、植物プロトプラスト、レタス植物が再生できる植物細胞組織培養物、植物カルス、植物集塊、及び植物の中の損なわれていない植物細胞、又は、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、根、根端、葯、めしべ、花、胚珠、種子、茎のような植物の一部を含む。
【００７４】
本発明を述べる文脈において”a”、”an”及び”the”及び類似の指示（以下の請求項の文脈において特に）は、本明細書で別に指示されている場合、又は文脈から明確に否定されている場合でないならば、単数と複数の両方を意味すると解釈されるべきである。用語「含む(comprising)」、「もつ(having)」、「含む(including)」及び「含む(containing)」は、別に記載がないならば、開放型の用語として解釈されるべきである（つまり、「含むが限定されない」を意味する）。本明細書における数値の範囲の記載は、本明細書で別に指示がないならば、その範囲内にある各離れた値をそれぞれ指す速記的方法として働き、各離れた値は、別々に本明細書に引用されているように明細書に組み入れられる。例えば、範囲10-15が開示されているなら、11,12,13及び14もまた開示されている。本明細書に記載された全ての方法は、本明細書に別の指示がなく、文脈により明確に別に否定されていないならば、いずれの適当な順序によっても行われ得る。いずれかの及びすべての実施例の使用、または、本明細書に記載された例示的言語（例、「たとえば」）は単に発明を良く説明することが意図され、別に主張されていないならば、発明の範囲に限定を加えない。明細書のいかなる言葉も本発明の実施に欠くことができないものとして何らかの請求項にない発明の構成要素を示すものと解釈されてはならない。
【００７５】
多くの実施例の側面及び実施態様が、上記に開示されてきたが、本願技術分野の当業者はある変更、並べ替え、付加及びそれらのサブコンブネーションを認識するであろう。従って、以下に並べた請求項及びその後に導入された請求項は、全ての変更、並べ替え、付加及びサブコンブネーションを請求項の真意と範囲のうちにあるとして含むと解釈されることが意図されている。
【００７６】
〔寄託に関する情報〕
レタス品種「E01C10216」の寄託は、７ハリスプレ−ス、サリナス、カルフォルニア93901、米国(7 Harris Place, Salinas, California 93901, United States)に住所があるエンザザーデン  ＵＳＡ会社(Enza Zaden USA, Inc.,)により保管されている。この寄託へのアクセスは、連邦規則集  37巻1.14(37C.F.R. §1.14)及び特許法122条(35U.S.C§122)により特許商標庁の長官により、その資格が与えられると決定された者に対して、本願が継続している間に可能である。本願のいずれかの請求項についての許可があったときは、公衆が本品種を使用することに関するすべての制限は、工業的、食品及び海洋細菌株式会社(National Collection of Industrial, Food and Marine Bacteria Ltd.(NCIMB Ltd))、ファーガソンビルディング、クレイブストーン  エステート、バックスバーン、アバディーン、AB21 9YA、連合王国(Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen, AB21 9YA, United Kingdom)の国立コレクション(National Collection)に関して同じ品種の2,500個以上の種子の寄託へのアクセスを与えることにより、最終的に除かれる。
【００７７】
２５００個以上のレタス品種「E01C10216」の種子が、2016年4月5日に、ブダペスト条約により、工業的、食品及び海洋細菌株式会社（National Collection of Industrial, Food and Marine Bacteria Ltd(NCIMB Ltd)、ファーガソンビルディング、クレイブストーン  エステート、バックスバーン、アバディーン、AB21 9YA、連合王国(Ferguson Building, CraibstoneEstate, Bucksburn, Aberdeen, AB21 9YA, United Kingdom)の国立コレクション(National Collection)に寄託された。この寄託にはNCIMB番号42568が割り当てられた。この寄託へのアクセスは、連邦規則集  37巻1.14(37C.F.R. §1.14)及び特許法122条(35U.S.C§122)により特許商標庁の長官により、資格が与えられると決定された者に対して、本願が継続している間に可能である。本願のいずれかの請求項が許可されたときは、公衆がこの品種を利用することについて全ての制限は最終的に除かれる。
【００７８】
寄託はNCIMB保管所で保管される。これは、公的な寄託であり、30年以上の期間、又は寄託サンプルの最近の請求後５年以上、または特許の有効期間のうち、いずれか長い期間保管されることになり、寄託が上記期間中に行えなくなると、交換される。
【図１】
2018014958.tif 000004