(57)【要約】【課題】大うつ病性障害、双極性障害の検査に用いるマーカー、検査方法、検査キット及び大うつ病性障害、双極性障害の治療薬をスクリーニングする方法を提供することを課題とする。【解決手段】血液中に存在するタンパク質マーカーを網羅的に解析した結果、大うつ病性障害、双極性障害のマーカーを見出した。これにより、大うつ病性障害、双極性障害の検査を行い、治療薬をスクリーニングすることができる。特に、ＭＩＣＢとＰＤＧＦ−ＢＢは、大うつ病性障害、双極性障害患者間で有意な差が認められ、診断の有効なマーカーとなり得る。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体試料中のタンパク質濃度を測定することによって大うつ病性障害と双極性障害とを鑑別する検査方法であって、
ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  Ｉ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｂ  ｉｓｏｆｏｒｍ  ２（ＭＩＣＢ）、及び／又は血小板由来増殖因子ＢＢ（Ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ）濃度を測定することを特徴とする検査方法。
【請求項２】
さらに、ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｋｉｎａｓｅ（ＨＣＫ）、サイログロブリン（Ｔｈｙｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）、ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｋｉｎａｓｅ  ２（ＭＰ２Ｋ２）、グランザイムＨ（Ｇｒａｎｚｙｍｅ  Ｈ）、Ｎｏｎ−ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ａ２（ＮＰＳ−ＰＬＡ２）、マクロフャージ炎症性タンパク５（ｍａｃｒｏｐｈａｒｇｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ５、ＭＩＰ−５）、オルファクトメヂン４（Ｏｌｆａｃｔｏｍｅｄｉｎ−４）、インターロイキン１７Ｂ（ＩＬ−１７Ｂ）、Ａｍｐｈｏｔｅｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２（ＡＭＧＯ２）、ＷＮＴ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  １（ＷＩＦ−1）、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１４（ＬＩＧＨＴ）、ニドゲン（Ｎｉｄｏｇｅｎ）、ｉＣ３ｂ、Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ｇ−ｃｈａｉｎ  ｄｉｍｅｒ、線維芽細胞増殖因子１８（ＦＧＦ−１８）、ＣＨＩＰ、神経栄養因子５（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ−５）の少なくともいずれか１つのタンパク質濃度を測定することを特徴とする請求項１記載の検査方法。
【請求項３】
前記生体試料が、
血清、血漿、又は血液であることを特徴とする請求項１、又は２いずれか１項記載の検査方法。
【請求項４】
大うつ病性障害と双極性障害とを鑑別するキットであって、
生体試料中のＭＩＣＢタンパク質濃度、及び／又はＰＤＧＦ−ＢＢタンパク質濃度を測定するための試薬を含むことを特徴とする大うつ病性障害と双極性障害とを鑑別するための検査キット。
【請求項５】
さらに、生体試料中のＨＣＫ、サイログロブリン、ＭＰ２Ｋ２、グランザイムＨ、ＮＰＳ−ＰＬＡ２、ＭＩＰ−５、オルファクトメヂン４、ＩＬ−１７Ｂ、ＡＭＧＯ２、ＷＩＦ−1、ＬＩＧＨＴ、ニドゲン、ｉＣ３ｂ、Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ｇ−ｃｈａｉｎ  ｄｉｍｅｒ、ＦＧＦ−１８、ＣＨＩＰ、神経栄養因子５の少なくともいずれか１つのタンパク質濃度を測定するための試薬を含むことを特徴とする請求項４記載の大うつ病性障害と双極性障害とを鑑別するための検査キット。
【請求項６】
前記キットがＥＬＩＳＡによりタンパク質濃度を測定するものである、請求項４又は５記載の大うつ病性障害と双極性障害とを鑑別するための検査キット。
【請求項７】
ＭＩＣＢタンパク質、又はＰＤＧＦ−ＢＢタンパク質からなる
大うつ病性障害と双極性障害とを鑑別するためのマーカー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、大うつ病性障害や双極性障害のマーカー、及びこれを用いた検査方法、検査キットに関する。特に、大うつ病性障害と双極性障害を鑑別診断するための検査方法、及びマーカーに関する。また、該マーカーを用いた大うつ病性障害や双極性障害の治療薬のスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
厚生労働省の報告によると、大うつ病性障害（うつ病）の生涯有病率は３〜１６％であり、国内で約１００万人以上が罹患し、大きな社会問題となっている。また、わが国で大きな社会問題になっている自殺者の多くは、大うつ病性障害などの精神疾患に罹患していると言われている。わが国における大うつ病性障害の人的・経済的損失は約３兆円と推計されており、日本社会において大きな社会問題となっている。世界的に見ても先進国、新興国とも同じ問題を抱えており、世界保健機構（ＷＨＯ）の報告では、世界中には、３億人以上のうつ病患者がいると考えられている。
【０００３】
大うつ病性障害や双極性障害（躁うつ病）は早期に適切な治療を開始すれば多くは回復する疾患であるが、客観的な精度の高い確立された診断法がなく、多くの患者の発見が遅れているのが現状である。双極性障害は、うつ状態と躁状態を繰り返す精神疾患であり、双極性障害のうつ症状は、大うつ病性障害のうつ症状と誤診されることが多く、治療抵抗性うつ病として治療されている患者の多くは、双極性障害である可能性が指摘されている。
【０００４】
現在のところ、大うつ病性障害や双極性障害の診断は、十分な専門知識と経験を有する精神科医による患者面接と診察で行われている。熟練した精神科医が大うつ病性障害を診断するためには、病歴の聴取から始まり、患者の様々な状況等を把握した上で、一般的身体状態及び神経学的状態に大きな異常のないことを確認し、世界保健機構やアメリカ精神医学会による診断基準（ＩＣＤ−１１、ＤＳＭ−５等）と照合して診断するのが一般的である。
【０００５】
しかしながら、他の精神疾患患者にもうつ症状を呈する疾患が多いため、誤診されることも多い。特に、双極性障害のうつ症状は、大うつ病性障害のうつ症状と酷似しているため、大うつ病性障害として診断されることが多い。双極性障害の症状は、最初にうつ症状として現れるため大うつ病性障害と誤診され、治療抵抗性うつ病とされる場合の多くが、かなりの年数が経過した後に、双極性障害と診断される場合も多い。
【０００６】
大うつ病性障害や双極性障害は早期に適切な治療を開始すれば多くは回復する疾患であることから、患者面接のように主観的な診断方法だけではなく、客観的な精度の高い診断法が求められている。そのため、従来から双極性障害、あるいは大うつ病性障害を診断するためのマーカーや検査方法が提唱されているもののいずれも実用化には至っていない。
【０００７】
特許文献１〜４には、双極性障害、あるいは大うつ病性障害を診断するためのマーカー及び該マーカーを用いた診断方法が記載されている。特許文献１には、脳脊髄液のイソクエン酸や血清中のピルビン酸などのマーカーを測定し双極性障害を診断する方法が開示されている。特許文献２には、統合失調症及び双極性障害を診断するためのペプチドマーカーが記載されている。特許文献３には、うつ病性障害のマーカーとしていくつかのマーカーを含む多パラメータをアルゴリズムによって診断する方法が開示されている。特許文献４には、双極性障害、大うつ病障害、及び統合失調症を含めた精神疾患を遺伝子の発現レベルをもとに診断する方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１６−２１８０６１号公報
【特許文献２】特表２００８−５２９０２９号公報
【特許文献３】特表２０１２−５０６０５３号公報
【特許文献４】特表２００９−５１９７０４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
特許文献１〜４に開示されている方法は、双極性障害の診断方法、うつ病性障害の診断方法、あるいは他の精神疾患も併せた診断方法であって、大うつ病性障害と双極性障害の鑑別診断を行う方法ではない。特許文献４に記載の方法は、双極性障害と大うつ病性障害で異常発現する遺伝子群が開示されているが、鑑別診断を目的とするものではなく、さらに大脳皮質における分子の発現レベルの観察をもとにしており、実臨床に使用できるマーカーとはなり得ない。
【００１０】
本発明は、血液などの生体試料中に含まれるマーカーを検出することによって、早期に大うつ病性障害、双極性障害、さらに両者を鑑別する検査方法を提供することを課題とする。また、該マーカーを用いて、大うつ病性障害、双極性障害を治療するための医薬をスクリーニングする方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、大うつ病性障害及び双極性障害のマーカー、及び該マーカーを用いた検査方法、検査キット、医薬のスクリーニング方法に関する。特に、大うつ病性障害と双極性障害の鑑別診断のための検査方法、検査キットに関する。
【００１２】
以下の表１〜３に記載するタンパク質は、大うつ病性障害、双極性障害の患者から得た試料において、それぞれ健常者と濃度が有意に異なる、あるいは両疾患群で濃度が有意に異なるタンパク質である。したがって、これらタンパク質を大うつ病性障害、あるいは双極性障害のマーカーとすることができる。これらマーカーを用いて検査を行うことによって、大うつ病性障害、あるいは双極性障害を客観的な指標に基いて診断することができる。今まで大うつ病性障害、あるいは双極性障害を面接などにより診断を行ってきた臨床現場において、客観的指標が得られることは、診断の精度を高めるだけではなく、疾患の経過を観察するうえでも重要な意味を持つ。
【００１３】
大うつ病性障害と双極性障害とを鑑別するためには、生体試料中のＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  Ｉ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｂ  ｉｓｏｆｏｒｍ  ２（ＭＩＣＢ）濃度、さらに血小板由来増殖因子ＢＢ（Ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ）を測定することによって、検査を行うことができる。また、ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｋｉｎａｓｅ（ＨＣＫ）、サイログロブリン（Ｔｈｙｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）、ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｋｉｎａｓｅ  ２（ＭＰ２Ｋ２）、グランザイムＨ（Ｇｒａｎｚｙｍｅ  Ｈ）、Ｎｏｎ−ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ａ２（ＮＰＳ−ＰＬＡ２）、マクロフャージ炎症性タンパク５（ｍａｃｒｏｐｈａｒｇｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ５、ＭＩＰ−５）、オルファクトメヂン４（Ｏｌｆａｃｔｏｍｅｄｉｎ−４）、インターロイキン１７Ｂ（ＩＬ−１７Ｂ）、Ａｍｐｈｏｔｅｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２（ＡＭＧＯ２）、ＷＮＴ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  １（ＷＩＦ−1）、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１４（ＬＩＧＨＴ）、ニドゲン（Ｎｉｄｏｇｅｎ）、ｉＣ３ｂ、Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ｇ−ｃｈａｉｎ  ｄｉｍｅｒ、線維芽細胞増殖因子１８（ＦＧＦ−１８）、ＣＨＩＰ、神経栄養因子５（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ−５）を測定することにより、より確実に判定を行うことができる。
【００１４】
大うつ病性障害を検査する方法としては、表１に記載されているタンパク質の生体試料中の濃度、特にサイログロブリン（Ｔｈｙｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）、増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、補体因子Ｈ関連５（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ  Ｈ−ｒｅｌａｔｅｄ  ５）、Ｒｅｔｉｃｕｌｏｎ  ４（ＲＴＮ４)、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＴＦＩＩＩＢ  ｓｕｂｕｎｉｔ（ＢＲＦ-1）、グランザイムＨ、インスリン様増殖因子結合タンパク質２（ＩＧＦＢＰ２）、Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌ１（Ａｐｏ  Ｌ１）、アンギオジェニン（Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ）、Ｃ５ａ、ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２（ＭＣＰ−２）、ｐｒｏｈｏｒｍｏｎｅ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  １（ＰＣＩ）、ＣＣＡＡＴ／ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｅｔａ（ＣＥＢＰＢ）、ｔｈｙｍｉｃ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ（ＴＳＬＰ）、ＣＤＫ５／ｐ３５、Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｑ（ＨＮＲＰＱ）、Ｅｃｔｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ／ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  ７（ＥＮＰＰ７）、Ｃ５、オステロプロテグリン（ＯＰＧ）、増殖分化因子（ＧＤＦ−１１／８）、ＣＤＫ８／ｃｙｃｌｉｎ  Ｃ、カテプシンＨ（Ｃａｔｅｐｓｉｎ  Ｈ）、Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ４８（ＣＤ４８）のタンパク質濃度を測定することによって検査を行うことができる。
【００１５】
また、双極性障害を検査する方法としては、表２に記載されているタンパク質の生体試料中の濃度、特にタザロテン誘導遺伝子２（ＴＩＧ２）、ＭＩＣＢ、ＭＰ２Ｋ２、Ｆａｃｔｏｒ  Ｈ、エンドカン（Ｅｎｄｏｃａｎ）、ＷＡＰ  Ｋａｚａｌ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｋｕｎｉｔｚ  ａｎｄ  ＮＴＲ  ｄｏｍａｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２（ＷＦＫＮ２）、Ｍｙｏｇｌｏｂｉｎ、ｍａｃｒｏｐｈａｒｇｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １（ＭＩＣ−１）、ＮＧ３６、タウ（ｔａｕ）、エンドスタチン（Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、Ｒａｓ  ＧＴＰａｓｅ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １（ＲＡＳＡ１）、ＩＬ−７受容体α（ＩＬ−７  Ｒａ）、Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ２（ＧＨＣ２）のタンパク質濃度を測定することによって検査を行うことができる。
【００１６】
また、表１〜３に記載するタンパク質を検出するキットは、大うつ病性障害や双極性障害の診断、これら障害の鑑別診断を行うために有用である。さらに、これらマーカーを指標として、化合物等をスクリーニングすることにより、大うつ病性障害、双極性障害を治療するための新規の医薬をスクリーニングすることができる。
【００１７】
例えば、候補化合物を細胞の培養液に添加、又はモデル動物に投与し、表１又は表３に記載の少なくとも１つ以上のタンパク質濃度を指標とすることにより、大うつ病性障害の治療薬をスクリーニングすることができる。また、候補化合物を細胞の培養液に添加、又はモデル動物に投与し、表２又は表３に記載の少なくとも１つ以上のタンパク質濃度を指標とすることにより双極性障害の治療薬をスクリーニングすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】大うつ病性障害患者、双極性障害患者間で有意差が認められたマーカーのＥＬＩＳＡの結果を示す図。
【図２】ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＭＩＣＢによるＲＯＣ曲線解析。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行なった結果、大うつ病性障害患者の生体試料中のタンパク質、あるいは双極性障害患者の生体試料中のタンパク質が、健常者のそれと比較して有意に変化しているタンパク質が存在することを見出した。さらに、大うつ病性障害患者と双極性障害患者を比較して両者で有意に変化しているタンパク質を見出した。
【００２０】
本発明の検査に供することのできる生体試料としては、血清、血漿、血液、尿、髄液、唾液、涙液、汗等の生体由来の液体成分、毛髪、血球、バイオプシー等で切除された組織の一部等の生体由来の固形成分等が挙げられる。また、これに限らず、以下のマーカーを検出することができれば、どのような試料を用いてもよい。
【００２１】
上記生体試料のうち、患者の検査を行う場合には、精度よく検査を行うことができ、かつ患者の負担が少ない生体試料として血液、血清、血漿を挙げることができ、中でも、血清が好ましい。
【００２２】
また、生体から直接採取された試料に、種々の処理を加えて得られた産物も生体試料として用いることができる。処理の種類としては、脱塩、透析、酸／塩基／緩衝液等の添加、加熱、カラムによるアミノ酸含有画分の分離・精製等が挙げられるが、これらに限定されない。処理の種類、回数も限定されず、複数種類の処理を組み合わせてもよい。
【００２３】
以下に述べるように、本発明のマーカーはＳＯＭＡｓｃａｎ（登録商標、日本電気株式会社製）を用いて微量のタンパク質の変化を解析して得られた結果をもとにしている。しかし、本発明のマーカーを検査に用いる場合には、タンパク質濃度を測定、あるいは検出することができればどのような方法を用いてもよい。具体的には、免疫測定法やアプタマー技術などタンパク質を特異的に検出する技術を挙げることができる。免疫測定法を用いる場合であれば、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ウェスタンブロット法などにより検出することが好ましい。また、タンパク質の濃度を測定する方法として上記以外の公知の方法を用いることができることは言うまでもない。さらに、今後新たに開発されるであろう、生体試料中の濃度を測定する方法も用いることが可能である。
【００２４】
本発明の大うつ病性障害および双極性障害の検査方法は、従来の主観的検査、診断方法（例えばＩＣＤ−１１、ＤＳＭ−５、ハミルトンうつ病評価尺度等）や今後開発される全ての検査、診断方法と併用することもできる。また、何らかの方法によって、大うつ病性障害あるいは双極性障害であると判断された患者から、本発明の検査、診断方法において指標とするタンパク質の定量値についてデータを収集し、本発明の検査、診断方法によって確定的な判定を下すことも可能となる。また、本発明の検査、診断方法は、法的責任能力の有無を調べる目的で、又はその他の目的で行われる精神鑑定に適用することも可能である。
【００２５】
本発明の検査方法は、患者の初診時に診断を確定するための検査として用いることができるだけではなく、重症度の判定、病態の経過観察、治療効果の有無の判定、予後の予測、他の精神疾患との判別等が容易に出来る。
【００２６】
本発明で見出されたマーカーを検査に用いるときは単独で用いてもよいし、複数組み合わせて用いてもよい。マーカーを複数組み合わせて用いる場合には、各疾患群に特徴的なマーカーを複数用いてもよいし、他の群のマーカーと組み合わせて用いてもよい。例えば、大うつ病性障害を検出するマーカー（以下、大うつ病性障害検出マーカーと記載する。）を複数用いてもよいし、大うつ病性障害検出マーカーと双極性障害を検出するマーカー（以下、双極性障害検出マーカーという。）を組み合わせるなど、他の群のマーカーと組み合わせて用いてもよい。
【００２７】
また、本発明のマーカーは、治療方法にも応用することができる。マーカーとして挙げられているタンパク質の発現が低い患者は、このタンパク質を増やすような治療法が有効な患者である。また、マーカーとして挙げられているタンパク質の発現が高い患者は、このタンパク質を低下させるような治療法が有効な患者である。したがって、治療方法として、例えば、このタンパク質の発現を上昇（あるいは低下）させる化合物等を投与することによって、生体中のタンパクを増加（あるいは減少）させるような、大うつ病性障害あるいは双極性障害の治療方法をとることができる。マーカー濃度を測定することによって、治療開始前に治療方法に対して反応性の高い患者を選択することができることから、より効率的な治療を行うことができる。
【００２８】
本発明のキットは、大うつ病性障害検出マーカー、双極性障害検出マーカー、両疾患を鑑別するマーカーを検出するために必要な試薬や器具を含むことができる。例えば、ＥＬＩＳＡなどの免疫測定法による検出キットの場合には、各マーカーと特異的に結合する抗体、結合した抗体を検出するための酵素標識抗体、あるいは蛍光標識抗体、検出に必要な試薬、緩衝液、チューブなどを含むことができる。キットはどのような検出方法を行うかによって、必要な試薬、器具等を適宜選択して含むことができる。
【００２９】
大うつ病性障害や、双極性障害の治療薬をスクリーニングする場合には、本発明で見出されたマーカーを指標として、まず、培養細胞を用いたハイスループットスクリーニングを行うことが望ましい。神経から単離された細胞株などの培養液に、候補となる化合物を添加し、マーカーの発現を解析し、治療薬の候補となり得る化合物を選択する。さらに、サル、マウス、ラット、モルモットなどの大うつ病性障害や双極性障害のモデル動物に候補化合物を投与し、マーカーの発現動向を解析し、治療薬のスクリーニングを行うことができる。
【００３０】
以下に、詳細に本発明について説明する。
［試験例１］
本試験は千葉大学医学部倫理委員会で承認された後、健常者および患者から採血し、マーカー解析を行った。解析を行ったのは、健常者８名（男女各４名）、大うつ病性障害８名（男女各４名）及び双極性障害患者８名（男女各４名）である。すべての患者はＤＳＭ−ＩＶあるいはＤＳＭ-５等に従って診断された患者である。健常者及び患者より血液を採取した後、通常の方法で血清を分離し、以下の試験に供した。
【００３１】
血清中のタンパク質の測定は、ＳＯＭＡｓｃａｎで解析を実施した。ＳＯＭＡｓｃａｎは、アプタマー技術を応用したタンパク質の定量方法であるが、ヒト血清等の微量の生体サンプルから、一度に１３１０種類のタンパク質の定量が可能である。１３１０種類のタンパク質を定量して得られた解析結果を大うつ病性障害、双極性障害、健常者の各群でＳｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔで統計解析した。それぞれの群で有意に差が認められたタンパク質とＰ値を以下の表１〜３に示す。
【００３２】
健常者群と大うつ病性障害患者群のタンパク質発現を比較すると、７０種のタンパク質で有意（Ｐ値＜０．０５）に差が認められた（表１）。表中［ＨＣＣ−ＭＤＤ］欄において、正の値で示しているのは、健常者群と大うつ病性障害患者群のタンパク質発現を比較して、健常者群で発現が高かったもの、すなわち大うつ病性患者群では発現が減少していたタンパク質を示し、負の値で示しているタンパク質は、大うつ病性障害患者群で発現が増強していたタンパク質を示す。
【００３３】
[表１]健常者群と大うつ病性障害患者群を比較した結果
2018132526.tif 000003
【００３４】
これらタンパク質のうち、サイログロブリン、ＰＣＮＡ、ＣＮＴＦ、ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ  Ｈ−ｒｅｌａｔｅｄ  ５、ＲＴＮ４、ＢＲＦ-1、グランザイムＨ、ＩＧＦＢＰ２、Ａｐｏ  Ｌ１、アンギオジェニン、Ｃ５ａ、ＭＣＰ−２、ＰＣＩ、ＣＥＢＰＢ、ＴＳＬＰ、ＣＤＫ５／ｐ３５、ＨＮＲＰＱ、ＥＮＰＰ７、Ｃ５、ＯＰＧ、ＧＤＦ−１１／８、ＣＤＫ８／ｃｙｃｌｉｎ  Ｃ、カテプシンＨ、ＣＤ４８は、いずれもＰ値が０．０２５以下であり健常者との発現の差が有意であるだけではなく、両群での発現量の差が大きく、検出を容易に行うことができるタンパク質である。
【００３５】
表２には、健常者群と双極性障害患者群のタンパク質発現の比較を示す。３９種のタンパク質で有意（Ｐ値＜０．０５）に健常者群と双極性障害患者群との間でタンパク質発現に差が認められた。表中［ＨＣＣ−ＢＰＤ］欄において、正の値で示しているのは、健常者群と双極性障害患者群のタンパク質発現を比較して、双極性障害患者群では発現が減少していたタンパク質を示し、負の値で示しているタンパク質は、双極性障害患者群で発現が増強していたタンパク質を示す。
【００３６】
[表２]健常者群と双極性障害患者群を比較した結果
2018132526.tif 000004
【００３７】
これらタンパク質のうち、ＴＩＧ２、ＭＩＣＢ、ＭＰ２Ｋ２、Ｆａｃｔｏｒ  Ｈ、エンドカン、ＷＦＫＮ２、Ｍｙｏｇｌｏｂｉｎ、ＭＩＣ−１、ＮＧ３６、タウ、エンドスタチン、ＲＡＳＡ１、ＩＬ−７受容体α、ＧＨＣ２は、いずれもＰ値が０．０２５以下であり、また、両群での発現量の差が大きいことから、検出を容易に行うことができる。
【００３８】
表３には、大うつ病性障害患者群と双極性障害患者群のタンパク質発現の比較を示す。４２種のタンパク質で有意（Ｐ値＜０．０５）に大うつ病性障害患者群と双極性障害患者群との間でタンパク質発現に差が認められた。表中［ＭＤＤ−ＢＰＤ］欄において、正の値で示しているのは、大うつ病性障害患者群と双極性障害患者群のタンパク質発現を比較して、大うつ病性障害患者群で発現が増加していたタンパク質を示し、負の値は双極性障害患者群で発現が増加していたタンパク質を示す。
【００３９】
[表３]大うつ病性障害患者群と双極性障害患者群を比較した結果
2018132526.tif 000005
【００４０】
これらタンパク質のうち、ＨＣＫ、ＭＩＣＢ、サイログロブリン、ＭＰ２Ｋ２、グランザイムＨ、ＮＰＳ−ＰＬＡ２、ＭＩＰ−５、オルファクトメヂン４、インターロイキン１７Ｂ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＡＭＧＯ２、ＷＩＦ−1、ＬＩＧＨＴ、ニドゲン、ｉＣ３ｂ、Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ｇ−ｃｈａｉｎ  ｄｉｍｅｒ、ＦＧＦ−１８、ＣＨＩＰ、神経栄養因子５は、いずれもＰ値が０．０２５以下であり、両群での発現量の差が大きいことから、両者の鑑別を容易に行うことができるマーカーとなる。また、今までに大うつ病性障害と双極性障害との間で発現に差が生じるマーカーの存在は報告されていない。
【００４１】
また、表１〜表３に記載されているマーカーのタンパク質濃度を少なくとも１つ以上組み合わせて測定することによって精度よく鑑別診断を行うことができる。例えば、表１の大うつ病性障害、表２の双極性障害、表３の大うつ病性障害と双極性障害とを鑑別するマーカーの濃度を夫々少なくとも１つ以上測定すれば、精度良く鑑別診断を行うことができる。以下の実施例でも、表３に記載の大うつ病性障害と双極性障害とを鑑別するマーカーを単独で用いた場合より、２つ合わせて用いた方が、鑑別診断の精度が高くなることを示している。また、大うつ病性障害が疑われる場合には、表１のマーカーと表３のマーカーを、双極性障害が疑われる場合には、表２のマーカーと表３のマーカーを用いて診断するなど、これらのマーカーを適宜組み合わせて用いることができる。
【００４２】
［実施例１］
次に、これらマーカーのうち鑑別診断マーカーについて、患者血清を用いて検討を行った。健常者、大うつ病性障害患者、双極性障害患者、それぞれ４０名から得た試料についてＥＬＩＳＡにより代表的なマーカーについて解析を行った。図１（Ａ）にＰＤＧＦ−ＢＢ、図１（Ｂ）にＭＩＣＢの結果を示している。ＰＤＧＦ−ＢＢは、Ｈｕｍａｎ  ＰＤＧＦ−ＢＢ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ社製）、ＭＩＣＢは、Ｈｕｍａｎ  ＭＩＣＢ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（ａｂｃａｍ社製）を用いて定量した。
【００４３】
各群の検体で得られた血清中のＰＤＧＦ−ＢＢ、ＭＩＣＢ濃度をｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ解析を行い、ポストホックテストとしてＴｕｋｅｙ検定を行っている。いずれのタンパク質も大うつ病性障害患者群と双極性障害患者群との間で有意な差があることが認められた。ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＭＩＣＢは、ＳＯＭＡｓｃａｎの解析によって、大うつ病性障害患者群と双極性障害患者群間で発現の差が認められたタンパク質であるが、ＥＬＩＳＡによっても両群間で有意差が認められた。うつ状態の双極性障害患者と大うつ病性障害患者とを見分ける、いわゆる鑑別診断を行うことは非常に難しいことから、これらマーカーで有意な差が見られることは診断を行ううえで非常に有益である。
【００４４】
［実施例２］
次に、上記２つのマーカーについてモデルに対するＲＯＣ曲線解析を行った（図２）。ＰＤＧＦ−ＢＢ単独（図２（Ａ））ではＡＵＣ（曲線下面積）＝０．７００７、ＭＩＣＢ単独（図２（Ｂ））ではＡＵＣ＝０．７９４１という結果が得られた。また、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＭＩＣＢ両者を合わせて解析することにより（図２（Ｃ））、ＡＵＣ＝０．８３４９という結果が得られた。ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＭＩＣＢ単独でも、大うつ病性障害患者と双極性障害患者とを有意に判別することができるが、２つのマーカーを測定し両者を合わせて判定することにより、より正確な判断を行うことができる。
【００４５】
本発明のマーカーを用いれば、血清中のマーカー濃度を指標とすることにより、被験者が大うつ病性障害あるいは双極性障害に罹患しているか否かを客観的に検査することができる。今まで医師による患者面接によって診断を行っていた大うつ病性障害、双極性障害の診断を客観的な指標により判断できることは、発症早期の鑑別が困難であった大うつ病性障害と双極性障害の正確な診断に寄与するものと考えられる。早期に正確な診断結果を得ることにより、患者に適切な治療を行うことができるため、患者の回復につなげることができる。
【図１】
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【図２】
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