(57)【要約】      （修正有）【課題】Ｃ５ａ、特にヒトＣ５ａの立体構造エピトープと特異的に結合する結合部分の提供。【解決手段】特定の配列からなる配列を含み、１０ｎＭ以下のＫｄ値を伴うＣ５ａに対する結合定数を有する、抗体又はその抗原結合断片。Ｃ５ａの特定のアミノ酸配列によって形成される立体構造エピトープと結合する、結合部分。【選択図】図１
2018080170.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体又はその抗原結合断片であって、
（ｉ）配列番号６に示される重鎖ＣＤＲ３配列、又は
（ｉｉ）配列番号７に示される重鎖ＣＤＲ３配列
（ここで、該重鎖ＣＤＲ３配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含む）
を含み、
以下の配列：
（ｉ）配列番号１０に示される重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｉｉ）配列番号１１に示される重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｉｉｉ）配列番号１２に示される軽鎖ＣＤＲ２配列、
（ｉｖ）配列番号１３に示される軽鎖ＣＤＲ２配列、
（ｖ）配列番号１４に示される重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｖｉ）配列番号１５に示される重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｖｉｉ）配列番号１６に示される軽鎖ＣＤＲ１配列、又は
（ｖｉｉｉ）配列番号１７に示される軽鎖ＣＤＲ１配列
（ここで、該重鎖ＣＤＲ２配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
該軽鎖ＣＤＲ２配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
該重鎖ＣＤＲ１配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
該軽鎖ＣＤＲ１配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含む）
のうち少なくとも１つを更に含み、
該抗体又はその抗原結合断片は１０ｎＭ以下のＫｄ値を伴うＣ５ａに対する結合定数を有する、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２】
（ｉ）配列番号８に示される軽鎖ＣＤＲ３配列、又は
（ｉｉ）配列番号９に示される軽鎖ＣＤＲ３配列
（ここで、該軽鎖ＣＤＲ３配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含む）
を更に含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３】
抗体又はその抗原結合断片であって、
（ｉ）配列番号８に示される軽鎖ＣＤＲ３配列、又は
（ｉｉ）配列番号９に示される軽鎖ＣＤＲ３配列
（ここで、該軽鎖ＣＤＲ３配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含む）
を含み、
該抗体又はその抗原結合断片は１０ｎＭ以下のＫｄ値を伴うＣ５ａに対する結合定数を有する、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４】
以下の配列：
（ｉ）配列番号１０に示される重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｉｉ）配列番号１１に示される重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｉｉｉ）配列番号１２に示される軽鎖ＣＤＲ２配列、
（ｉｖ）配列番号１３に示される軽鎖ＣＤＲ２配列、
（ｖ）配列番号１４に示される重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｖｉ）配列番号１５に示される重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｖｉｉ）配列番号１６に示される軽鎖ＣＤＲ１配列、又は
（ｖｉｉｉ）配列番号１７に示される軽鎖ＣＤＲ１配列
（ここで、該重鎖ＣＤＲ２配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
該軽鎖ＣＤＲ２配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
該重鎖ＣＤＲ１配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
該軽鎖ＣＤＲ１配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含む）
のうち少なくとも１つを更に含む、請求項３に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５】
抗体又はその抗原結合断片であって、以下の組：
（ｉ）配列番号６に示される重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１０に示される重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１４に示される重鎖ＣＤＲ１配列、又は
（ｉｉ）配列番号７に示される重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１１に示される重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１５に示される重鎖ＣＤＲ１配列
（ここで、各重鎖ＣＤＲ３配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
各重鎖ＣＤＲ２配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
各重鎖ＣＤＲ１配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含む）
のうちの１つから選択される重鎖ＣＤＲ３配列、重鎖ＣＤＲ２配列及び重鎖ＣＤＲ１配列の組を含み、
該抗体又はその抗原結合断片は１０ｎＭ以下のＫｄ値を伴うＣ５ａに対する結合定数を有する、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６】
抗体又はその抗原結合断片であって、以下の組：
（ｉ）配列番号８に示される軽鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１２に示される軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１６に示される軽鎖ＣＤＲ１配列、又は
（ｉｉ）配列番号９に示される軽鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１３に示される軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１７に示される軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ここで、各軽鎖ＣＤＲ３配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
各軽鎖ＣＤＲ２配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
各軽鎖ＣＤＲ１配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含む）
のうちの１つから選択される軽鎖ＣＤＲ３配列、軽鎖ＣＤＲ２配列及び軽鎖ＣＤＲ１配列の組を含み、
該抗体又はその抗原結合断片は１０ｎＭ以下のＫｄ値を伴うＣ５ａに対する結合定数を有する、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項７】
以下の組：
（ｉ）配列番号６に示される重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１０に示される重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１４に示される重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号８に示される軽鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１２に示される軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１６に示される軽鎖ＣＤＲ１配列、又は
（ｉｉ）配列番号７に示される重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１１に示される重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１５に示される重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号９に示される軽鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１３に示される軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１７に示される軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ここで、各重鎖ＣＤＲ３配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
各重鎖ＣＤＲ２配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
各重鎖ＣＤＲ１配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
各軽鎖ＣＤＲ３配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
各軽鎖ＣＤＲ２配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含み、
各軽鎖ＣＤＲ１配列は、１個のアミノ酸交換、１個のアミノ酸欠失、又は１個のアミノ酸付加を任意に含む）
のうち１つから選択されるＣＤＲ配列の組を含む、抗体又はその抗原結合断片であって、
該抗体又はその抗原結合断片は、１０ｎＭ以下のＫｄ値を伴うＣ５ａに対する結合定数を有する、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片であって、該抗体又はその抗原結合断片は以下の１つ又は複数の特徴を示す、抗体又はその抗原結合断片：
―  該抗体又はその抗原結合断片は、２ｎＭ以下のＫｄ値を伴うＣ５ａに対する結合定数を有する、
―  該抗体又はその抗原結合断片の１つは、１分子のＣ５ａによって誘導される生物学的効果に対して少なくとも８０％の遮断活性を示す、
―  該抗体又はその抗原結合断片は、ヒト血漿におけるＣＨ５０活性を阻害しない、
―  該抗体又はその抗原結合断片は、ヒト全血における大腸菌によって誘導されるＩＬ−８産生を低減することが可能である、
―  該抗体又はその抗原結合断片は、Ｃ５ａのアミノ酸配列NDETCEQRA（配列番号２）及びSHKDMQL（配列番号３）によって形成される立体構造エピトープと結合するものであって、該抗体又はその抗原結合断片は配列番号２に記載のアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸と結合し、かつ、配列番号３に記載のアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸と結合するものである。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片であり、前記抗体がポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体からなる群から選択される、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片であり、前記断片がＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合したＦｖ（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体及び一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体からなる群から選択される、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１１】
医薬組成物であって、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片を含み、
１つ又は複数の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤、充填剤、結合剤、滑剤、流動促進剤、崩壊剤、吸着剤及び／又は保存料
を更に含む、医薬組成物。
【請求項１２】
急性炎症を伴う様々な疾患、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、重度の敗血症、敗血症ショック、虚血／再灌流関連損傷若しくは虚血性心疾患、急性肺損傷、肺炎若しくは移植患者における急性及び慢性の移植片拒絶反応、移植片対宿主反応、並びに慢性型の炎症を伴う疾患、腎糸球体疾患、糸球体腎炎、及びその他の腎不全、関節リウマチ、及び類似の自己免疫疾患、ベヒテレフ病、狼瘡型疾患、炎症性腸疾患、クローン病、腫瘍成長、又は固形臓器がんの予防及び／又は治療用の医薬組成物の調製のための、
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｃ５ａ、特にヒトＣ５ａの立体構造エピトープと特異的に結合する結合部分に関する。好ましい結合部分は、この立体構造エピトープと結合する抗Ｃ５ａ抗体である。本明細書に記載される結合部分は、様々な急性疾患及び慢性疾患、特に急性炎症性疾患、例えば全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、並びに敗血症、重度の敗血症、及び敗血症ショックを含む種々の度合いの敗血症の治療及び予防のための医薬組成物における活性作用剤として有用である。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ５ａは、補体の活性化の際にＣ５から切断される。補体の活性化生成物のうち、Ｃ５ａは、広範囲の機能を有する最も強力な炎症性ペプチドの１つである（非特許文献１）。Ｃ５ａは、１１．２ｋＤａの分子量を有する、健康なヒトの血液中に存在する糖タンパク質である。Ｃ５ａのポリペプチド部分は７４個のアミノ酸を含有して８．２ｋＤａの分子量に相当し、炭水化物部分はおよそ３ｋＤａに相当する。Ｃ５ａは、高親和性のＣ５ａ受容体（Ｃ５ａＲ及びＣ５Ｌ２）によってその効果を発揮する（非特許文献２）。Ｃ５ａＲは、７回膜貫通型セグメントを有するＧタンパク質結合型受容体のロドプシン型ファミリーに属する。Ｃ５Ｌ２は類似しているが、Ｇタンパク質結合型ではない。現在、Ｃ５ａ−Ｃ５Ｌ２相互作用に関する生物学的応答はほとんど見出されていないため、Ｃ５ａは主にＣ５ａ−Ｃ５ａＲ相互作用によってその生物学的機能を発揮すると考えられている。Ｃ５ａＲは、好中球、好酸球、好塩基球及び単球を含む骨髄細胞、並びに多くの臓器、特に肺及び肝臓における非骨髄細胞において広く発現され、Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲシグナル伝達の重要性を示す。Ｃ５ａは、様々な生物学的機能を有する（非特許文献１）。Ｃ５ａは、好中球に対する強力な化学誘引物質であり、単球及びマクロファージに対する走化活性も有する。Ｃ５ａは、好中球における酸化的バースト（Ｏ２消費）を引き起こし、食作用及び顆粒酵素の放出を増強する。Ｃ５ａは、血管拡張因子であることも見出されている。Ｃ５ａは、好中球における接着分子の発現を増強する、様々な細胞型からのサイトカイン発現の変調に関与することが示されている。Ｃ５ａは、炎症反応連鎖の上流で機能する炎症応答に対する強力な誘導因子及び増強因子であるため、疾患状況において過度に産生された場合、非常に有害となることが見出されている。高用量のＣ５ａは、好中球に対して非特異的な走化性の「脱感作」を引き起こすことによって、広範な機能不全を引き起こす可能性がある（非特許文献３）。
【０００３】
Ｃ５ａが多数の炎症促進性応答を行うことが報告されており、敗血症において有害であることが報告されている。抗体によるＣ５ａ又はＣ５ａ受容体（Ｃ５ａＲ）の阻害が、マウス及びラットの様々な敗血症モデルにおける生存を劇的に改善することが示されている（非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７）。加えて、様々な報告によって、実験的敗血症における、未損傷の自然免疫及び臓器の機能に対するＣ５ａの有害な効果が実証されている（非特許文献５、非特許文献８、非特許文献３、非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３）。Ｃ５ａはアナフィラトキシンとして作用し、多数の炎症促進効果を発揮することが報告されている。ヒト敗血症においては、様々な研究において高レベルのＣ５ａが顕著な予後の悪化と関連することが報告されている（非特許文献１４、非特許文献１５、非特許文献１６）。
【０００４】
敗血症の実験設定において、Ｃ５ａに対する好中球の曝露によって、好中球機能不全及びシグナル伝達経路の停滞が引き起こされ、ＮＡＤＰＨオキシダーゼの集合不全、ＭＡＰＫシグナル伝達カスケードの停滞、酸化的バースト、食作用及び走化性の大幅な抑制が引き起こされる可能性がある（非特許文献１７、非特許文献９）。胸腺細胞のアポトーシス及び遅延化した好中球のアポトーシスは、Ｃ５ａの存在に依存する、敗血症の発症に関する２つの重要な病理的事象である（非特許文献５、非特許文献１８）。実験的敗血症において、Ｃ５ａは、好中球におけるβ２インテグリン発現を上方調節して、多臓器不全（ＭＯＦ）の主因の１つである臓器中への細胞遊走を促進する（非特許文献８）。Ｃ５ａが実験的敗血症において起こる凝固経路の活性化に起因することも見出されている（非特許文献１０）。Ｃ５ａは、ヒト白血球による炎症促進性サイトカイン、例えばＴＮＦ−α、ＩＬ−β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、及びマクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）の合成及び放出を刺激する（非特許文献１９、非特許文献１２、非特許文献２０）。Ｃ５ａは、肺胞上皮細胞におけるＴＮＦ−α、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−２、サイトカイン誘導性好中球化学誘引物質（ＣＩＮＣ）−１及びＩＬ−１βの産生において、ＬＰＳとの強い相乗効果を生じる（非特許文献２１、非特許文献２２）。補体の活性化が敗血症の開始時に起こる事象であることを考慮すると、Ｃ５ａは、「炎症性サイトカインストーム」の発生前に作用し始める可能性がある。Ｃ５ａは、サイトカインネットワークの能力、及び全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）の形成を調整する上で主要な役割を果たすと考えられる。実験的敗血症の設定において、Ｃ５ａの遮断は、ＭＯＦ及びＳＩＲＳを劇的に減弱させる。Ｃ５ａＲの発現の広範な上方調節が敗血症の開始時に起こり、敗血症の齧歯類モデルにおける抗Ｃ５ａ抗体若しくは抗Ｃ５ａＲ抗体又はＣ５ａＲアンタゴニストによるＣ５ａ／Ｃ５ａＲ相互作用の遮断によって、非常に保護的な効果がもたらされる（非特許文献４、非特許文献６、非特許文献７）。
【０００５】
敗血症の適応に加えて、Ｃ５ａの遮断が、Klos A. et al（非特許文献２３）及びAllegretti M. et al（非特許文献２４）によって部分的に概説されたような様々な種における虚血／再灌流損傷、腎疾患、移植片拒絶反応、マラリア、関節リウマチ、感染性腸疾患、炎症性肺疾患、狼瘡様自己免疫疾患、神経変性疾患等の炎症の多くの他のモデルにおいて保護的であることも証明されている。さらに、マウスの腫瘍モデルにおいてＣ５ａの遮断が強い治療的利益を示すことが最近発見された（非特許文献２５）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Guo and Ward 2005
【非特許文献２】Ward 2009
【非特許文献３】Huber-Lang et al.2001a
【非特許文献４】Czermak et al.1999
【非特許文献５】Guo et al. 2000
【非特許文献６】Huber-Lang et al.2001b
【非特許文献７】Riedemann et al.2002a
【非特許文献８】Guo et al. 2002
【非特許文献９】Huber-Lang et al.2002
【非特許文献１０】Laudes et al.2002
【非特許文献１１】Riedemann et al.2003
【非特許文献１２】Riedemann et al.2004a
【非特許文献１３】Riedemann et al.2004b
【非特許文献１４】Bengtson andHeideman 1988
【非特許文献１５】Nakae et al.1994
【非特許文献１６】Nakae et al.1996
【非特許文献１７】Guo et al. 2006a
【非特許文献１８】Guo et al. 2006b
【非特許文献１９】Hopken et al.1996
【非特許文献２０】Strieter et al.1992
【非特許文献２１】Riedemann et al.2002b
【非特許文献２２】Rittirsch et al.2008
【非特許文献２３】Klos et al. 2009
【非特許文献２４】Allegretti etal. 2005
【非特許文献２５】Markiewski etal. 2008
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
Ｃ５のＣ５ａ部分と特異的に結合するがＣ５ｂ部分とは特異的に結合しない抗体が、従来技術から既知である（Klos et al. (1998) J. Immunol. Meth. 111: 241-252、国際公開第０１／１５７３１号、国際公開第０３／０１５８１９号）。
【０００８】
しかしながら、過去に作製された抗Ｃ５ａ抗体は、Ｃ５ａによって誘導される生物学的効果に対して中程度の遮断活性しか示さない。その結果、従来技術の抗Ｃ５ａ抗体は、Ｃ５ａによって誘導される生物学的効果の完全な遮断を達成することができないか、又はＣ５ａ活性の相応に高い遮断を達成するために超化学量論量（superstoichiometric amounts）で使用しなければならなかった。
【０００９】
したがって、特に、患者における臨床使用の可能性に鑑み、従来技術において、高い親和性でＣ５ａと特異的に結合し、Ｃ５ａによって誘導される生物学的効果に対してより強い遮断活性を示す抗Ｃ５ａ抗体又は他の結合部分に対する必要性が依然として存在する。また、好ましくはかかる抗体は、Ｃ５ｂと結合しないものとし、したがってＣ５ｂの生物学的活性に影響を及ぼさないものとする。
【００１０】
全く驚くべきことに、本発明の発明者らは、上で言及した高度な要求等を満たす対応する結合抗体を用いて、新たな立体構造結合エピトープを特定することができた。本発明の基礎をなす時間のかかる実験において、２０００を超える抗体の中から、化学量論量、すなわちＣ５ａ  １モル当たり二価抗体０．５モルで利用した場合、Ｃ５ａによって誘導される生物学的効果に対してかつてない遮断活性を示す２つの抗Ｃ５ａ抗体を作製することができた。
【００１１】
上記の概説は必ずしも、本発明によって解決される全ての課題を記載している訳ではない。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
第１の態様では、本発明は、結合部分であって、Ｃ５ａのアミノ酸配列X1X2ETCEX3RX4（配列番号１８）及びX5X6KX7X8X9L（配列番号１９）（ここで、X1は、N、H、D、F、K、Y及びTからなる群から選択され、X2は、D、L、Y及びHからなる群から選択され、X3は、Q、E及びKからなる群から選択され、X4は、A、V及びLからなる群から選択され、X5は、S、H、P及びNからなる群から選択され、X6は、H及びNからなる群から選択され、X7は、D、N、H、P及びGからなる群から選択され、X8は、M、L、I及びVからなる群から選択され、X9は、Q、L及びIからなる群から選択される）によって形成される立体構造エピトープと結合する、結合部分に関する。
【００１３】
第２の態様では、本発明は、抗体又はその抗原結合断片であって、（ｉ）配列番号６に示されるような重鎖ＣＤＲ３配列、又は（ｉｉ）配列番号７に示されるような重鎖ＣＤＲ３配列（ここで、該重鎖ＣＤＲ３配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含む）を含む、抗体又はその抗原結合断片に関する。
【００１４】
第３の態様では、本発明は、医薬組成物であって、（ａ）第１の態様による結合部分、又は（ｂ）第２の態様による抗体又はその抗原結合断片を含み、１つ又は複数の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤、充填剤、結合剤、滑剤、流動促進剤、崩壊剤、吸着剤及び／又は保存料を更に含む、医薬組成物に関する。
【００１５】
第４の態様では、本発明は、急性炎症を伴う様々な疾患、例えば全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、重度の敗血症、敗血症ショック、虚血／再灌流関連損傷、例えば虚血性心疾患、急性肺損傷、肺炎、移植患者における急性及び慢性の移植片拒絶反応、移植片対宿主反応、更には慢性型の炎症を伴う疾患、例えば腎糸球体疾患、例えば糸球体腎炎、及びその他の腎不全、関節リウマチ、及び類似の自己免疫疾患、例えばベヒテレフ病、狼瘡型疾患、炎症性腸疾患、クローン病、腫瘍成長、又は固形臓器がんの予防及び／又は治療用の医薬組成物の調製のための、（ａ）第１の態様による結合部分、又は（ｂ）第２の態様による抗体又はその抗原結合断片の使用に関する。
【００１６】
第５の態様では、本発明は、それを必要とする患者において全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、重度の敗血症、敗血症ショック、虚血／再灌流関連損傷、例えば虚血性心疾患、急性肺損傷、肺炎、移植患者における急性及び慢性の移植片拒絶反応、移植片対宿主反応、腎糸球体疾患、例えば糸球体腎炎、及びその他の腎不全、関節リウマチ、及び類似の自己免疫疾患、例えばベヒテレフ病、狼瘡型疾患、炎症性腸疾患、クローン病、腫瘍成長、又は固形臓器がんを治療する方法であって、有効量の（ａ）第１の態様による結合部分、又は（ｂ）第２の態様による抗体又はその抗原結合断片を該患者に投与することを含む、治療する方法に関する。
【００１７】
この本発明の概要は必ずしも、本発明の全ての特質を記載している訳ではない。
【００１８】
定義
本発明を以下で詳細に記載する前に、本明細書中に記載する特定の方法論、プロトコル及び試薬は変動し得るので、本発明はこれらに限定されないことを理解すべきである。本明細書中で使用される専門用語が、特定の実施形態を記載するためのものにすぎず、添付した特許請求の範囲のみによって限定される本発明の範囲を限定することは意図されないことも理解すべきである。他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
【００１９】
好ましくは、本明細書中で使用される用語は、"A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPACRecommendations)", Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. and Koelbl, H. eds. (1995),Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerlandに記載されているように定義される。
【００２０】
以下の本明細書及び添付の特許請求の範囲を通じて、文脈上他に必要な場合以外は、「を含む（comprise）」という単語、並びに「を含む（comprises）」及び「を含む（comprising）」等の変化形は、記載された整数若しくは工程、又は整数若しくは工程の群を包含することを示唆するが、任意の他の整数若しくは工程、又は整数若しくは工程の群を除外することを示唆しないと理解される。
【００２１】
複数の文書が、本明細書の文章全体を通じて引用される。本明細書中で引用される文書（全ての特許、特許出願、科学的刊行物、製造業者の仕様書、取扱説明書、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号配列提出書（submissions）等を含む）の各々が、上記のものであるか又は下記のものであるかに関わらず、その全体が参照により本明細書に援用される。本明細書のどの記載も、本発明が従来の発明に基づくかかる開示に先行する権利を有しないことを認めるものと解釈すべきではない。
【００２２】
本明細書中で使用する場合、「ヒトＣ５ａ」は、以下の７４個のアミノ酸のペプチドを表す：
TLQKKIEEIAAKYKHSVVKK CCYDGACVNN DETCEQRAAR ISLGPRCIKA
FTECCVVASQLRANISHKDM QLGR（配列番号１）。
【００２３】
「結合部分」という用語は、本明細書中で使用する場合、標的分子又は標的エピトープと特異的に結合することができる任意の分子又は分子の一部を表す。本出願との関連において好ましい結合部分は、（ａ）抗体又はその抗原結合断片、（ｂ）オリゴヌクレオチド、（ｃ）抗体様タンパク質又は（ｄ）ペプチド模倣物である。本発明を実施するために使用することができる「結合部分」は、２つのアミノ酸配列X1X2ETCEX3RX4（配列番号１８）及びX5X6KX7X8X9L（配列番号１９）（ここで、X1は、N、H、D、F、K、Y及びTからなる群から選択され、X2は、D、L、Y及びHからなる群から選択され、X3は、Q、E及びKからなる群から選択され、X4は、A、V及びLからなる群から選択され、X5は、S、H、P及びNからなる群から選択され、X6は、H及びNからなる群から選択され、X7は、D、N、H、P及びGからなる群から選択され、X8は、M、L、I及びVからなる群から選択され、X9は、Q、L及びIからなる群から選択される）によって形成される哺乳動物Ｃ５ａの立体構造エピトープと結合することが可能である。本発明を実施するのに特に好適である「結合部分」は、２つのアミノ酸配列NDETCEQRA（配列番号２）及びSHKDMQL（配列番号３）によって形成されるヒトＣ５ａの立体構造エピトープと結合することが可能である。
【００２４】
本明細書中で使用する場合、第１の化合物（例えば抗体）は、該第１の化合物が、１ｍＭ以下、好ましくは１００μＭ以下、好ましくは５０μＭ以下、好ましくは３０μＭ以下、好ましくは２０μＭ以下、好ましくは１０μＭ以下、好ましくは５μＭ以下、より好ましくは１μＭ以下、より好ましくは９００ｎＭ以下、より好ましくは８００ｎＭ以下、より好ましくは７００ｎＭ以下、より好ましくは６００ｎＭ以下、より好ましくは５００ｎＭ以下、より好ましくは４００ｎＭ以下、より好ましくは３００ｎＭ以下、より好ましくは２００ｎＭ以下、更により好ましくは１００ｎＭ以下、更により好ましくは９０ｎＭ以下、更により好ましくは８０ｎＭ以下、更により好ましくは７０ｎＭ以下、更により好ましくは６０ｎＭ以下、更により好ましくは５０ｎＭ以下、更により好ましくは４０ｎＭ以下、更により好ましくは３０ｎＭ以下、更により好ましくは２０ｎＭ以下、更により好ましくは１０ｎＭ以下の第２の化合物（例えば抗原、例えば標的タンパク質）に対する解離定数Ｋｄを有する場合、上記第２の化合物と「結合」するとみなされる。
【００２５】
本発明による「結合」という用語は好ましくは、特異的結合に関する。「特異的結合」は、結合部分（例えば抗体）が、別の標的との結合と比較して特異的な標的（例えばエピトープ）とより強く結合することを意味する。結合部分は、該結合部分が第２の標的に対する解離定数より低い解離定数（Ｋｄ）で第１の標的と結合する場合、第２の標的と比較して第１の標的とより強く結合する。好ましくは、結合部分が特異的に結合する標的に対する解離定数（Ｋｄ）は、該結合部分が特異的に結合しない標的に対する解離定数（Ｋｄ）より１０倍超、好ましくは２０倍超、より好ましくは５０倍超、更により好ましくは１００倍超、２００倍超、５００倍超又は１０００倍超低い。
【００２６】
本明細書中で使用する場合、「Ｋｄ」（「ｍｏｌ／Ｌ」（「Ｍ」と略されることもある）で測定される）という用語は、結合部分（例えば抗体又はその断片）と標的分子（例えば抗原又はそのエピトープ）との間の特定の相互作用の解離平衡定数を表すことを意図する。
【００２７】
抗原決定基としても知られる「エピトープ」は、免疫系によって、具体的には抗体、Ｂ細胞又はＴ細胞によって認識される高分子の一部である。本明細書中で使用する場合、「エピトープ」は、本明細書に記載されるような結合部分（例えば抗体又はその抗原結合断片）と結合することが可能な高分子の一部である。これとの関連で、「結合」という用語は好ましくは、特異的結合に関する。エピトープは、通常、アミノ酸又は糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面の基からなり、通常、特定の三次元構造特徴、及び特定の電荷特徴を有する。立体構造エピトープ及び非立体構造エピトープは、変性溶媒の存在下で立体構造エピトープとの結合は失われるが、非立体構造エピトープとの結合は失われない点において区別される。
【００２８】
本明細書中で使用する場合、「立体構造エピトープ」は、直鎖高分子（例えばポリペプチド）のエピトープであって、上記高分子の三次元構造によって形成される、直鎖高分子のエピトープを表す。本出願との関連において、「立体構造エピトープ」は、「不連続エピトープ」、すなわち高分子の一次配列（例えばポリペプチドのアミノ酸配列）における少なくとも２つの別々の領域から形成される高分子（例えばポリペプチド）における立体構造エピトープである。換言すれば、エピトープは、該エピトープが本発明の結合部分（例えば抗体又はその抗原結合断片）が同時に結合する一次配列における少なくとも２つの別々の領域（これらの少なくとも２つの別々の領域には、本発明の結合部分が結合しない一次配列におけるもう１つの領域が割り込んでいる）からなる場合、本発明との関連における「立体構造エピトープ」であるとみなされる。好ましくは、かかる「立体構造エピトープ」はポリペプチド上に存在し、一次配列における２つの別々の領域は、本発明の結合部分（例えば抗体又はその抗原結合断片）が結合する２つの別々のアミノ酸配列（これらの少なくとも２つの別々のアミノ酸配列には、本発明の結合部分が結合しない一次配列におけるもう１つのアミノ酸配列が割り込んでいる）である。好ましくは、割り込むアミノ酸配列は、結合部分が結合しない２つ以上のアミノ酸を含む、連続するアミノ酸配列である。本発明の結合部分が結合する少なくとも２つの別々のアミノ酸配列は、その長さに関して特に限定されない。上記少なくとも２つの別々のアミノ酸配列内のアミノ酸の総数が結合部分と立体構造エピトープとの間の特異的結合を達成するのに十分に大きいものであれば、かかる別々のアミノ酸配列は、１個のアミノ酸のみからなっていてもよい。
【００２９】
「パラトープ」は、エピトープを認識する抗体の一部である。本発明との関連では、「パラトープ」は、エピトープを認識する本明細書に記載されるような結合部分（例えば抗体又はその抗原結合断片）の一部である。
【００３０】
「抗体」という用語は典型的には、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖、又はその抗原結合部分を含む糖タンパク質を表す。「抗体」という用語は、全ての組換え型の抗体、特に本明細書に記載される抗体、例えば原核生物において発現される抗体、非グリコシル化抗体、並びに以下で記載されるような任意の抗原に結合する抗体断片及び誘導体も含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨ又はＶＨと略される）及び重鎖定常領域を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬ又はＶＬと略される）及び軽鎖定常領域を含む。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、より保存性の高い領域（フレームワーク領域（ＦＲ）と称される）によって散在した、超可変性を有する領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される）に更に細分することができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順序で配列した、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）、及び古典的な補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織又は因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【００３１】
抗体の「抗原結合断片」（又は単に「結合部分」）という用語は、本明細書中で使用する場合、抗原と特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ又は複数の断片を表す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって発揮され得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語内に包含される結合断片の例は、（ｉ）Ｆａｂ断片、すなわちＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメイン及びＣＨドメインからなる一価の断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、すなわちヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片、（ｉｉｉ）ＶＨドメイン及びＣＨドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメイン及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546）、（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）、並びに（ｖｉｉ）合成リンカーによって任意に連結することができる２つ以上の単離ＣＤＲの組合せを含む。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン（ＶＬ及びＶＨ）は別々の遺伝子によってコードされるが、これらは、組換え法を使用して、ＶＬ領域及びＶＨ領域が対になって一価の分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる。例えば、Bird et al. (1988) Science 242: 423-426、及びHustonet al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883を参照されたい）を形成する単一のタンパク質鎖としてこれらを作製することを可能とする合成リンカーによって連結することができる。かかる一本鎖抗体は、抗体の「抗原結合断片」という用語内に包含されることも意図する。更なる例は、（ｉ）免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドと融合した結合ドメインポリペプチド、（ｉｉ）該ヒンジ領域と融合した免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域、及び（ｉｉｉ）該ＣＨ２定常領域と融合した免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域を含む、結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質である。結合ドメインポリペプチドは、重鎖可変領域又は軽鎖可変領域であり得る。結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、米国特許出願公開第２００３／０１１８５９２号及び米国特許出願公開第２００３／０１３３９３９号に更に開示されている。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来の技法を使用して取得され、該断片は、インタクトな抗体がスクリーニングされるのと同じ方法で有用性に関してスクリーニングされる。「抗原結合断片」の更なる例は、単一のＣＤＲから得られるいわゆるマイクロ抗体である。例えば、Heap et al., 2005は、ＨＩＶ−１のｇｐ１２０エンベロープ糖タンパク質に指向性を有する抗体の重鎖ＣＤＲ３由来の１７個のアミノ酸残基のマイクロ抗体を記載している。他の例は、好ましくは同族の（cognate）フレームワーク領域によって、互いに融合した２つ以上のＣＤＲ領域を含む小抗体模倣物を含む。同族のＶＨのＦＲ２によって連結したＶＨのＣＤＲ１及びＶＬのＣＤＲ３を含むかかる小抗体模倣物は、Qiu et al., 2007によって記載されている。
【００３２】
したがって、「抗体又はその抗原結合断片」という用語は、本明細書中で使用する場合、免疫グロブリン分子、及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち抗原と免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子を表す。例えば、標的分子又は標的エピトープと、例えばアミノ酸配列X1X2ETCEX3RX4（配列番号１８）及びX5X6KX7X8X9L（配列番号１９）（ここで、X1は、N、H、D、F、K、Y及びTからなる群から選択され、X2は、D、L、Y及びHからなる群から選択され、X3は、Q、E及びKからなる群から選択され、X4は、A、V及びLからなる群から選択され、X5は、S、H、P及びNからなる群から選択され、X6は、H及びNからなる群から選択され、X7は、D、N、H、P及びGからなる群から選択され、X8は、M、L、I及びVからなる群から選択され、X9は、Q、L及びIからなる群から選択される）によって形成されるＣ５ａの立体構造エピトープと、又は配列番号２によるアミノ酸配列及び配列番号３によるアミノ酸配列によって形成されるヒトＣ５ａの立体構造エピトープと、又はアミノ酸配列DETCEQR（配列番号４）及びKDMによって形成されるヒトＣ５ａの立体構造エピトープと特異的に結合させるファージディスプレイを含む技法によって選択される免疫グロブリン様タンパク質も含まれる。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、好ましくはＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスのものであり得る。
【００３３】
本発明において使用可能な抗体及びその抗原結合断片は、鳥及び哺乳動物を含む任意の動物起源由来であり得る。好ましくは、抗体又は断片は、ヒト、チンパンジー、齧歯類（例えばマウス、ラット、モルモット又はウサギ）、ニワトリ、シチメンチョウ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ウシ、ウマ、ロバ、ネコ又はイヌ起源由来である。抗体がヒト又はマウス起源のものであることが特に好ましい。本発明の抗体は、１つの種、好ましくはヒト由来の抗体定常領域を別の種、例えばマウス由来の抗原結合部位と組み合わせたキメラ分子も含む。さらに、本発明の抗体は、非ヒト種（例えばマウス）由来の抗体の抗原結合部位をヒト起源の定常領域及びフレームワーク領域と組み合わせたヒト化分子を含む。
【００３４】
本明細書で例示されるように、本発明の抗体は、該抗体を発現するハイブリドーマから直接取得することができ、又はクローニングして、宿主細胞（例えばＣＨＯ細胞又はリンパ球細胞）において組換え的に発現させることができる。宿主細胞の更なる例は、微生物、例えば大腸菌及び真菌、例えば酵母である。代替的には、該抗体をトランスジェニック非ヒト動物又は植物において組換え的に作製することができる。
【００３５】
「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列の各々の一部分が、特定の種由来の又は特定のクラスに属する抗体中の対応する配列に対して相同であり（homologous）、該鎖の残りのセグメントが別の種又はクラスの抗体中の対応する配列に対して相同である抗体を表す。典型的には、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は哺乳動物の１つの種由来の抗体の可変領域を模倣し、定常部分は別の種由来の抗体の配列に対して相同である。かかるキメラ形態の明らかな利点の１つは、例えばヒト細胞調製物由来の定常領域と組み合わせて、可変領域を、非ヒト宿主生物から容易に入手可能なＢ細胞又はハイブリドーマを使用して、現在既知の供給源から都合良く得ることができることである。この可変領域は調製し易いという利点を有しており、その特異性は供給源によって影響されない一方で、ヒト種のものである定常領域は、非ヒト供給源由来の定常領域の場合よりも、抗体を注入した場合にヒト被験体から免疫応答を誘発する可能性が低い。しかしながら、この定義はこの特定の例に限定されない。
【００３６】
「ヒト化抗体」という用語は、実質的に非ヒト種由来の免疫グロブリン由来の抗原結合部位を有する分子であって、該分子の残りの免疫グロブリン構造がヒト免疫グロブリンの構造及び／又は配列に基づくものである、分子を表す。抗原結合部位は、定常ドメイン上に融合した完全な可変ドメイン、又は可変ドメインにおける適切なフレームワーク領域上にグラフティングした相補性決定領域（ＣＤＲ）のみのいずれかを含み得る。抗原結合部位は、野生型であってもよく、又は１つ若しくは複数のアミノ酸置換によって変更されていてもよく、例えばより密接にヒト免疫グロブリンに類似するように変更されていてもよい。ヒト化抗体の幾つかの形態は、全てのＣＤＲ配列を保存している（例えば、マウス抗体由来の６つのＣＤＲを全て含有するヒト化マウス抗体）。他の形態は、元の抗体に対して変化させた１つ又は複数のＣＤＲを有する。
【００３７】
Almagro& Fransson, 2008（その内容はその全体が参照によって本明細書に援用される）によって概説されるように、抗体をヒト化する種々の方法が当業者に既知である。Almagro & Franssonによる総説を以下に簡潔に要約する。Almagro& Franssonは、理論的アプローチと経験的アプローチとを区別している。理論的アプローチは、改変した抗体の僅かな変異体を作製するとともに、その結合又は対象となる任意の他の特性を評価することを特徴とする。設計した変異体が期待された結果をもたらさない場合、設計及び結合評価の新たなサイクルを開始する。理論的アプローチは、ＣＤＲグラフティング、リサーフェシング（Resurfacing）、超ヒト化（Superhumanization）及びヒトストリング含有量最適化（Human String Content Optimization）を含む。対照的に、経験的アプローチは、ヒト化変異体の大規模ライブラリの作製、及び濃縮技術又はハイスループットスクリーニングを使用する最良のクローンの選択に基づいている。したがって、経験的アプローチは、抗体変異体の広大な空間全体にわたり探索することが可能である、確実な選択及び／又はスクリーニング系に依存する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏのディスプレイ技術、例えばファージディスプレイ及びリボソームディスプレイは、これらの要求を満たし、当業者に既知である。経験的アプローチは、ＦＲライブラリ、誘導選択（Guided selection）、フレームワークシャッフリング（Framework-shuffling）及びヒューマニアリング（Humaneering）を含む。
【００３８】
ＣＤＲグラフティング
ＣＤＲグラフティングプロトコルは典型的には、３つの意思決定点を含む：（１）ドナー抗体、すなわちグラフティングの標的の特異性を決定する領域の規定、（２）ＦＲドナーとして利用されるヒト配列の供給源の特定、及び（３）特異性を規定する領域以外の残基の選択、すなわちヒト化抗体の親和性を回復させる又は改善するための復帰突然変異の標的であるアミノ酸位置の決定。
【００３９】
（１）抗体の特異性を決定する領域
抗原と複合体を形成している非ヒト抗体の実験的構造によって、抗原と接触している残基、及びひいてはその特異性の決定に関与する残基の詳細なマップがもたらされる。構造情報を、アラニン走査突然変異誘発及び／又はコンビナトリアル突然変異誘発によって補って、結合エネルギー又は機能的パラトープに最も寄与する残基を特定することができる。機能的パラトープは接触している残基のサブセットであるため、機能的パラトープのみをグラフティングすることによって、ヒト化生成物における非ヒト残基の数が低減すると考えられる。しかしながら、抗原−抗体複合体及び／又は機能的パラトープの実験的構造がヒト化プロトコルの開始時に利用可能であることは極めて稀である。所与の抗体の特異性に関与する残基の正確な規定がない場合、特異性を規定する領域としてＣＤＲが利用されることが多い。グラフティングのための標的としてＣＤＲ及びＨＶループの組合せを使用することも可能である。ヒトＦＲ上にグラフティングされる残基の数を低減するために、ＳＤＲグラフティング、すなわち特異性決定残基（ＳＤＲ）のグラフティングが説明されている。
【００４０】
（２）ヒトＦＲの供給源
典型的なＣＤＲグラフティングプロトコルにおける第２工程は、ヒトＦＲドナーを特定することである。初期の作業は、非ヒト抗体に対するその相同性に関わらず、既知の構造のヒト抗体のＦＲを利用するものであった。このアプローチは、「固定ＦＲ法」として知られている。後期の作業は、非ヒト抗体に対して最高の相同性を有するヒト配列を使用するものであった。このアプローチは、「ベスト・フィット」と称されている。「ベスト・フィット」戦略はより高い親和性を有する抗体をもたらす傾向があるが、ヒト化のためのＦＲを選ぶ際には、低免疫原性及び生産収率等の他のパラメータも考慮に入れなければならない。したがって、「ベスト・フィット」及び「固定ＦＲ」の組合せも考え得る。例えば、ＶＬ部分を固定ＦＲ法によってヒト化することができ、ＶＨ部分をベスト・フィット法によってヒト化することができ、又はその逆も考えられる。
【００４１】
成熟配列及び生殖系列配列というヒト配列の２つの供給源が利用されている。免疫応答の産物である成熟配列は、ランダムプロセスによって生じる体細胞突然変異を保有し、種の選択下にはなく、潜在的な免疫原性残基をもたらす。したがって、免疫原性残基を回避するために、ＦＲドナーの供給源としてのヒト生殖系列遺伝子の利用が増大している。ヒト生殖系列ＦＲのヌクレオチド配列が、例えばDall’Acqua et al, 2005による論文の付録Ａ及び付録Ｂに開示されている。さらに、生殖系列遺伝子に基づく抗体は、成熟抗体と比較してより柔軟な傾向がある。このより高い柔軟性は、多様なＣＤＲを、ヒト化抗体の親和性（affinity）を回復させるためのＦＲ中の復帰突然変異をほとんど又は全く伴わずに、より良好に適合させると考えられる。
【００４２】
（３）親和性を回復させる又は増強するための復帰突然変異
一般的には、非ヒトＣＤＲとヒトＦＲとの間の不適合の結果として、ＣＤＲグラフティング後に親和性は減少する。したがって、典型的なＣＤＲグラフティングプロトコルにおける第３工程は、親和性喪失を回復させる又は防止すると考えられる突然変異を規定することである。復帰突然変異は、ヒト化抗体の構造又はモデルに基づいて慎重に設計し、実験的に試験しなければならない。ＷＡＭと称される自動化抗体モデリングに関するウェブサイトを、ＵＲＬ：http://antibody.bath.ac.ukに見出すことができる。タンパク質構造モデリングに関するソフトウェアを、次のサイト：http://salilab.org/modeller/modeller.html（Ｍｏｄｅｌｌｅｒ）及びhttp://spdbv.vital-it.ch（Ｓｗｉｓｓ  ＰｄｂＶｉｅｗｅｒ）でダウンロードすることができる。
【００４３】
リサーフェシング
リサーフェシングは、ＣＤＲグラフティングに類似しており、最初の２つの意思決定点を共有する。ＣＤＲグラフティングとは対照的に、リサーフェシングは、非ヒト抗体の露出しない残基を保持する。非ヒト抗体における表面残基のみがヒト残基へと変化する。
【００４４】
超ヒト化
ＣＤＲグラフティングは非ヒト配列とヒト配列との間のＦＲの比較によるものであるが、超ヒト化はＣＤＲの比較に基づくものであるため、ＦＲの相同性は無関係である。このアプローチは、機能的ヒト生殖系列遺伝子レパートリーとの非ヒト配列の比較を含む。次いで、マウスの配列と同じ又は密接に関連したカノニカル構造をコードするこれらの遺伝子を選択する。次に、非ヒト抗体とカノニカル構造を共有する遺伝子内において、ＣＤＲ内で最高の相同性を有するものをＦＲドナーとして選ぶ。最後に、これらのＦＲ上に非ヒトＣＤＲをグラフティングする。
【００４５】
ヒトストリング含有量最適化
このアプローチは、ヒトストリング含有量（ＨＳＣ）と称される、抗体に関する尺度「人間性」に基づくものである。簡潔に述べると、このアプローチは、マウスの配列をヒト生殖系列遺伝子のレパートリーと比較する。差異をＨＳＣとしてスコア化する。全体的な同一性尺度を使用するのではなくそのＨＳＣを最大化することによって標的配列をヒト化して、複数の多様なヒト化変異体を作製する。
【００４６】
フレームワークライブラリ（略してＦＲライブラリ）
ＦＲライブラリアプローチでは、残基変異体の集合物をＦＲ中の特定の位置で導入した後、ライブラリのパニングを行い、グラフティングしたＣＤＲを最も良好に支持するＦＲを選択する。したがって、このアプローチはＣＤＲグラフティングに類似するが、ＦＲ中に数個の復帰突然変異を創出する代わりに、典型的には１００個を超える突然変異体のコンビナトリアルライブラリを構築する。
【００４７】
誘導選択
このアプローチは、特定の抗原に特異的な所与の非ヒト抗体のＶＨドメイン又はＶＬドメインを、ヒトのＶＨ及びＶＬのライブラリと組み合わせることを含む。その後、対象となる抗原に対して特異的なヒトＶドメインを選択する。例えば、最初に非ヒトＶＨをヒト軽鎖のライブラリと組み合わせることによって、非ヒト抗体をヒト化することができる。次いで、ファージディスプレイによって標的抗原に対してライブラリを選択し、選択したＶＬをヒトＶＨ鎖のライブラリ中にクローニングし、標的抗原に対して選択する。非ヒトＶＬをヒト重鎖のライブラリと組み合わせることから開始することも可能である。次いで、ファージディスプレイによって標的抗原に対してライブラリを選択し、選択したＶＨをヒトＶＬ鎖のライブラリ中にクローニングし、標的抗原に対して選択する。結果として、非ヒト抗体と同様の親和性を有する完全なヒト抗体を単離することができる。エピトープドリフトの発生を回避するために、親抗体と同じエピトープを認識するクローンの選択を可能とするいわゆる阻害ＥＬＩＳＡを実行することが可能である。代替的には、ＣＤＲ保持法を適用して、エピトープドリフトを回避することができる。ＣＤＲ保持法では、１つ又は複数の非ヒトＣＤＲが保持され、好ましくは、重鎖ＣＤＲ３は抗原結合部位の中心にあるため重鎖ＣＤＲ３が保持される。
【００４８】
フレームワークシャッフリング（略してＦＲシャッフリング）
ＦＲシャッフリングアプローチでは、ＦＲ全体を非ヒトＣＤＲと組み合わせる。ＦＲシャッフリングを使用して、Dall’Acqua及び共同研究者らは、マウス抗体をヒト化した。マウス抗体の６つの全てのＣＤＲをヒト生殖系列遺伝子のＦＲを全て含有するライブラリ中にクローニングした（Dall’Acqua et al., 2005）。ライブラリを、最初にＶＬを、その後ＶＨをヒト化する２工程選択プロセスにおいて結合に関してスクリーニングした。その後の研究において、１工程ＦＲシャッフリングプロセスを使用することに成功した（Damschroder et al., 2007）。全ての既知のヒト生殖系列軽鎖（κ）フレームワークをコードするオリゴヌクレオチド配列が、Dall’Acqua et al., 2005（付録Ａ）に開示されている。全ての既知のヒト生殖系列重鎖フレームワークをコードするオリゴヌクレオチド配列が、Dall’Acqua et al., 2005（付録Ｂ）に開示されている。
【００４９】
ヒューマニアリング
ヒューマニアリングによって、ヒト生殖系列遺伝子抗体に対して９１％〜９６％相同である抗体の単離が可能となる。この方法は、本質的な最小特異性決定基（ＭＳＤ）の実験的な特定、並びにヒトＦＲのライブラリ中への非ヒト断片の配列の置き換え及び結合の評価に基づくものである。この方法は、非ヒトＶＨ鎖及びＶＬ鎖のＣＤＲ３の領域から開始され、ＶＨ及びＶＬの両方のＣＤＲ１及びＣＤＲ２を含む非ヒト抗体の他の領域をヒトＦＲへと進行的に置き換える。
【００５０】
上で説明される抗体をヒト化する方法は、本明細書に記載される立体構造エピトープと特異的に結合するヒト化抗体を作製する場合に好ましい。しかしながら、本発明は、上で言及される抗体をヒト化する方法に限定されない。
【００５１】
上で言及されるヒト化方法の幾つか、すなわち「固定ＦＲ法」（ＣＤＲグラフティングの変法）、超ヒト化、フレームワークシャッフリング及びヒューマニアリングは、ドナー抗体中のＦＲ配列についての情報を用いずとも行うことができる。「固定ＦＲ法」の変形形態は、Qin et al., 2007及びChang et al., 2007によって実施が成功した。特に、Qin et al.は、３つのＣＤＲ領域をマウス抗体のＣＤＲ配列由来の抗原ペプチドによって置き換えたヒト重鎖可変領域を含む抗体断片を構築した。Chang et al.は、これらの実験を継続し、ＶＨ部分由来の全てのＣＤＲ及びＶＬ部分由来のＣＤＲ３をマウス抗体のＣＤＲ配列由来の抗原ペプチドによって置き換えたｓｃＦｖ断片を構築した。
【００５２】
本明細書中で使用する場合、「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する抗体を含む。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでランダム突然変異誘発若しくは部位特異的突然変異誘発によって、又はｉｎ  ｖｉｖｏで体細胞突然変異によって導入される突然変異）を含んでいてもよい。本発明のヒト抗体は、ヒト免疫グロブリンライブラリから、又は例えばKucherlapati & Jakobovitsによる米国特許第５，９３９，５９８号に記載されるような、１つ若しくは複数のヒト免疫グロブリンを遺伝子導入し、内在性免疫グロブリンを発現しない動物から単離される抗体を含む。
【００５３】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書中で使用する場合、単一分子組成の抗体分子の調製物を表す。モノクローナル抗体は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す。１つの実施の形態では、モノクローナル抗体は、不死化細胞と融合した非ヒト動物（例えばマウス）から得られるＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
【００５４】
「組換え抗体」という用語は、本明細書中で使用する場合、組換え手段によって調製、発現、創出又は単離される全ての抗体、例えば（ａ）免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニック若しくはトランスクロモソーマルである動物（例えばマウス）、又はそれから調製されるハイブリドーマから単離される抗体、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞、例えばトランスフェクトーマから単離される抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアル抗体ライブラリから単離される抗体、及び（ｄ）免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、創出又は単離される抗体を含む。
【００５５】
「トランスフェクトーマ」という用語は、本明細書中で使用する場合、抗体を発現する組換え真核生物宿主細胞、例えばＣＨＯ細胞、ＮＳ／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、植物細胞、又は酵母細胞を含む真菌を含む。
【００５６】
本明細書中で使用する場合、「異種抗体」は、かかる抗体を産生するトランスジェニック生物との関係において定義される。この用語は、トランスジェニック生物からなるものでない生物中に見出されるものに対応するアミノ酸配列又はコードする核酸配列を有する、一般的にトランスジェニック生物以外の種由来の抗体を表す。
【００５７】
本明細書中で使用する場合、「ヘテロハイブリッド抗体」は、異なる生物起源の軽鎖及び重鎖を有する抗体を表す。例えば、マウス軽鎖と結合したヒト重鎖を有する抗体は、ヘテロハイブリッド抗体である。
【００５８】
したがって、本発明における使用に好適な「抗体及びその抗原結合断片」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、一価抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、多重特異性抗体、組換え抗体、異種抗体、ヘテロハイブリッド抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体（特にＣＤＲグラフティングを行った抗体）、脱免疫化（deimmunized）抗体若しくはヒト抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ発現ライブラリによって作製される断片、Ｆｄ、Ｆｖ、ジスルフィド結合したＦｖ（ｄｓＦｖ）、一本鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、ダイアボディ又はテトラボディ（Holliger P. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90(14),6444-6448）、ナノボディ（単一ドメイン抗体としても知られる）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）、及び上記のいずれかのエピトープ結合断片を含むが、これらに限定されない。
【００５９】
本明細書に記載される抗体は、好ましくは単離されている。「単離抗体」は、本明細書中で使用する場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を表すことを意図する（例えば、Ｃ５ａと特異的に結合する単離抗体は、Ｃ５ａ以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、ヒトＣ５ａのエピトープ、アイソフォーム又は変異体と特異的に結合する単離抗体は、例えば他の種由来の他の関連抗原（例えばＣ５ａの種相同体、例えばラットＣ５ａ）との交差反応性を有し得る。さらに、単離抗体は、他の細胞性物質及び／又は化学物質を実質的に含まない場合もある。本発明の１つの実施の形態では、「単離」モノクローナル抗体の組合せは、異なる特異性を有し、十分に規定される組成で組み合わせられる抗体に関する。
【００６０】
「天然」という用語は、或る対象物に適用されるものとして本明細書中で使用する場合、対象物を自然中に見出すことができることを表す。例えば、自然中の供給源から単離することができる生物（ウイルスを含む）中に存在し、実験室において人間によって意図的に変更されていないポリペプチド配列又はポリヌクレオチド配列は天然のものである。
【００６１】
本明細書中で使用する場合、「核酸アプタマー」という用語は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択の繰り返し又はＳＥＬＥＸ（試験管内進化法）により標的分子と結合するように改変された核酸分子を表す（概説に関してはBrody E.N. and Gold L.(2000), Aptamers as therapeutic and diagnosticagents. J. Biotechnol. 74 (1):5-13を参照されたい）。核酸アプタマーはＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子であり得る。アプタマーは、例えば修飾ヌクレオチド、例えば２’−フッ素置換ピリミジンのように修飾を含有していてもよい。
【００６２】
本明細書中で使用する場合、「抗体様タンパク質」という用語は、標的分子と特異的に結合するように改変された（例えばループの突然変異誘発により）タンパク質を表す。典型的には、かかる抗体様タンパク質は、両端でタンパク質骨格と結合した少なくとも１つの可変ペプチドループを含む。この二重の構造的制約により、抗体様タンパク質の結合親和性が抗体の結合親和性に匹敵するレベルまで大幅に増大する。可変ペプチドループの長さは典型的には、１０個〜２０個のアミノ酸からなる。骨格タンパク質は、良好な溶解特性を有する任意のタンパク質であり得る。好ましくは、骨格タンパク質は小さい球状タンパク質である。抗体様タンパク質は、アフィボディ（affibodies）、アンチカリン（anticalins）、及び設計されたアンキリン反復タンパク質（概説に関してはBinz H.K. et al.(2005) Engineering novel binding proteins fromnonimmunoglobulin domains. Nat. Biotechnol. 23(10):1257-1268を参照されたい）を含むがこれらに限定されない。抗体様タンパク質は、突然変異体の大規模ライブラリ由来のものであってもよく、例えば大規模ファージディスプレイライブラリから選択して（panned）もよく、正規の抗体と同様に単離してもよい。また、抗体様結合タンパク質を、球状タンパク質の表面露出残基のコンビナトリアル突然変異誘発により得ることができる。抗体様タンパク質は「ペプチドアプタマー」と呼ばれることもある。
【００６３】
本明細書中で使用する場合、「ペプチド模倣物」は、ペプチドを模倣するように設計される小さいタンパク質様の鎖である。ペプチド模倣物は典型的には、分子の特性を変化させるための既存のペプチドの修飾によって生じる。例えば、ペプチド模倣物は、分子の安定性又は生物学的活性を変化させるための修飾によって生じ得る。これは、既存のペプチド由来の薬剤様化合物の開発において一定の役割を有し得る。これらの修飾は、自然には起こらないペプチドに対する変化（例えば、骨格の変化、及び非天然アミノ酸の組込み）を含む。
【００６４】
「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解性、疎水性、親水性及び／又は両親媒性の類似性に基づいて行われ得る。アミノ酸は、以下の６つの標準的なアミノ酸群に分類することができる：
（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性、親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の配向性に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、及び
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
本明細書中で使用する場合、「保存的置換」は、上で示される６つの標準的なアミノ酸群の同じ群内に列挙される別のアミノ酸による、或るアミノ酸の交換と定義される。例えば、ＧｌｕによるＡｓｐの交換によって、そのように変更されたポリペプチドにおける１つの負電荷は保持される。加えて、グリシン及びプロリンを、α−ヘリックスを破壊するその能力に基づき互いに置換することができる。上の６つの群内における幾つかの好ましい保存的置換は、以下の下位群内における交換である：（ｉ）Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅ、（ｉｉ）Ｓｅｒ及びＴｈｒ、（ｉｉ）Ａｓｎ及びＧｌｎ、（ｉｖ）Ｌｙｓ及びＡｒｇ、並びに（ｖ）Ｔｙｒ及びＰｈｅ。既知の遺伝コード、並びに組換えＤＮＡ技法及び合成ＤＮＡ技法を踏まえて、熟練した科学者は、保存的アミノ酸変異体をコードするＤＮＡを容易に構築することができる。
【００６５】
本明細書中で使用する場合、「非保存的置換」又は「非保存的アミノ酸交換」は、上で示される６つの標準的なアミノ酸群（１）〜（６）の異なる群に列挙される別のアミノ酸による、或るアミノ酸の交換と定義される。
【００６６】
「生物学的活性」は、本明細書中で使用する場合、酵素活性、別の化合物との結合活性（例えば別のポリペプチドとの結合、特に受容体との結合、又は核酸との結合）、阻害活性（例えば酵素阻害活性）、活性化活性（例えば酵素活性化活性）、又は毒性効果を含むがこれらに限定されない、或るポリペプチドが示し得る任意の活性を表す。ポリペプチドの変異体及び誘導体に関して、変異体又は誘導体がかかる活性を親ポリペプチドと同程度示すことは必要とされない。変異体は、親ポリペプチドの活性の少なくとも１０％程度、関連する活性を示す場合、本出願との関連内における変異体とみなされる。同様に、誘導体は、親ポリペプチドの活性の少なくとも１０％程度、関連する生物学的活性を示す場合、本出願との関連内における誘導体とみなされる。関連する「生物学的活性」は、本発明との関連では、アミノ酸配列X1X2ETCEX3RX4（配列番号１８）及びX5X6KX7X8X9L（配列番号１９）（ここで、X1は、N、H、D、F、K、Y及びTからなる群から選択され、X2は、D、L、Y及びHからなる群から選択され、X3は、Q、E及びKからなる群から選択され、X4は、A、V及びLからなる群から選択され、X5は、S、H、P及びNからなる群から選択され、X6は、H及びNからなる群から選択され、X7は、D、N、H、P及びGからなる群から選択され、X8は、M、L、I及びVからなる群から選択され、X9は、Q、L及びIからなる群から選択される）によって形成されるＣ５ａの立体構造エピトープとの結合活性である。特に関連する「生物学的活性」は、本発明との関連では、配列番号２によるアミノ酸配列及び配列番号３によるアミノ酸配列によって形成されるヒトＣ５ａの立体構造エピトープとの結合活性である。好ましくは、関連する「生物学的活性」は、本発明との関連では、アミノ酸配列DETCEQR（配列番号４）及びKDMによって形成されるヒトＣ５ａの立体構造エピトープとの結合活性である。結合活性を決定するためのアッセイは、当業者に既知であり、実施例の節において記載されるもの等のＥＬＩＳＡを含む。
【００６７】
本明細書中で使用する場合、「患者」は、本明細書に記載される標的結合部分による治療から利益を受け得る任意の哺乳動物又は鳥を意味する。好ましくは、「患者」は、実験動物（例えばマウス又はラット）、家畜動物（例えばモルモット、ウサギ、ニワトリ、シチメンチョウ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ウシ、ウマ、ロバ、ネコ又はイヌを含む）、又はチンパンジー及び人間を含む霊長類からなる群から選択される。「患者」は人間であることが特に好ましい。
【００６８】
米国胸部専門医学会（American College of Chest Physicians）及び米国集中治療医学会（Society of Critical Care Medicine）（Bone R.C.et al. (1992). "Definitions for sepsis and organ failure and guidelinesfor the use of innovative therapies in sepsis. The ACCP/SCCM ConsensusConference Committee. American College of Chest Physicians/Society of CriticalCare Medicine". Chest 101 (6): 1644-55）によれば、種々のレベルの敗血症が存在する：
全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）：以下の所見のうち２つ以上の存在によって定義される：
体温＜３６℃（９７°Ｆ）、又は＞３８℃（１００°Ｆ）（低体温又は発熱）。
心拍＞毎分１００回（頻脈）。
呼吸数＞毎分２０回、又は血液ガスにおいてＰａ  ＣＯ２が３２ｍｍＨｇ（４．３ｋＰａ）未満（頻呼吸、又は過剰換気による低炭酸ガス症）。
白血球数＜４０００細胞／ｍｍ３、若しくは＞１２０００細胞／ｍｍ３（＜４×１０９細胞／Ｌ、若しくは＞１２×１０９細胞／Ｌ）、又は１０％を超える桿状球（band forms）（未熟な白血球）。（白血球減少症、白血球増加症又は多桿状球血液症（bandemia））。
敗血症：確認された感染プロセスに応答したＳＩＲＳと定義される。感染は、疑わしいものであっても、若しくは（培養、染色又はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって）証明済みのものであってもよく、又は感染に特徴的な臨床症候群であってもよい。感染の具体的な証拠は、通常は無菌状態の液（例えば尿又は脳脊髄液（ＣＳＦ））中のＷＢＣ、内蔵の穿孔の証拠（腹部のｘ線又はＣＴスキャンによる自由空気流、急性腹膜炎の徴候）、肺炎と一致する異常な胸部ｘ線（ＣＸＲ）（局所不透明化を伴う）、又は点状出血、紫斑病若しくは電撃性紫斑病を含む。
重度の敗血症：臓器機能不全、低灌流又は低血圧を伴う敗血症と定義される。
敗血症ショック：十分な輸液蘇生にも関わらず難治性動脈低血圧又は低灌流異常を伴う敗血症と定義される。全身性低灌流の徴候は、終末器官機能不全、又は４ｍｍｏｌ／ｄＬを超える血清乳酸であり得る。他の徴候は、乏尿症及び精神状態の変化を含む。患者は、積極的な（aggressive）輸液蘇生（典型的には６リットル又は４０ｍｌ／ｋｇのクリスタロイドを超える）後に敗血症に加えて低血圧を有する場合、敗血症ショックを有すると定義される。
【００６９】
「腫瘍」は、急速で非制御的な細胞増殖によって成長し、新たな成長を開始させる刺激を止めた後も成長し続ける異常な細胞又は組織の群を意味する。腫瘍は、正常組織による構造的機構及び機能的協調の部分的な又は完全な欠如を示し、通常、良性又は悪性であり得る明確な組織の塊を形成する。
【００７０】
「転移」は、身体のその元の部位から別の部分へのがん細胞の拡散を意味する。転移の形成は、非常に複雑なプロセスであり、原発性腫瘍からの悪性細胞の脱離、細胞外マトリクスの侵入、体腔及び血管に進入する内皮基底膜の浸透、並びに、その後、血液によって輸送された後での、標的臓器の浸潤に依存する。最後に、標的部位での新たな腫瘍の成長は、血管新生に依存する。腫瘍の転移は多くの場合、原発性腫瘍の除去後であっても起こるが、これは腫瘍細胞又は成分は残存し、転移能を発達させることができるためである。１つの実施の形態では、本発明による「転移」という用語は、原発性腫瘍及び局所リンパ節系から離れた転移に関する「遠隔転移」に関する。
【００７１】
本明細書中で使用する場合、或る疾患又は障害に関する「治療する（treat）」、「治療すること（treating）」又は「治療（treatment）」は、（ａ）該障害の重症度及び／又は期間を低減すること、（ｂ）治療される該障害（複数も可）に特徴的な症状の発症を制限又は予防すること、（ｃ）治療される該障害（複数も可）に特徴的な症状の悪化を阻止すること、（ｄ）該障害（複数も可）を過去に有していた患者における該障害（複数も可）の再発を制限又は予防すること、及び（ｅ）過去に該障害（複数も可）の症状を示した患者における症状の再発を制限又は予防することのうち１つ又は複数を達成することを意味する。
【００７２】
本明細書中で使用する場合、疾患又は障害に関する「予防する（prevent）」、「予防すること（preventing）」、「予防（prevention）」又は「予防法（prophylaxis）」は、被験体において障害が起こることを防ぐことを意味する。
【００７３】
本明細書中で使用する場合、「投与すること（administering）」は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの投与、及びｅｘ  ｖｉｖｏでの組織（例えば静脈移植片）への直接の投与を含む。
【００７４】
「有効量」は、意図した目的を達成するのに十分な治療剤の量である。所定の治療剤の有効量は、作用剤の性質、投与経路、治療剤の投与対象の動物の大きさ及び種、並びに投与目的等の因子により変動し得る。各々の個別のケースにおける有効量は、当該技術分野において確立された方法に従って当業者が経験的に決定することができる。
【００７５】
「薬学的に許容可能な」は、連邦政府若しくは州政府の監督官庁により承認されていること、又は米国薬局方、若しくは動物における、より具体的にはヒトにおける使用のための他の一般的に認められた薬局方にリストされていることを意味する。
【００７６】
「担体」という用語は、本明細書中で使用する場合、これとともに治療剤が投与される希釈剤、補助剤、賦形剤又はビヒクルを表す。かかる薬学的担体は、無菌の液体、例えば水、及び石油起源、動物起源、植物起源又は合成起源の油、例えばラッカセイ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等を含む油中の食塩溶液であってもよい。食塩溶液は、医薬組成物を静脈内投与する場合、好ましい担体である。食塩溶液並びにデキストロース及びグリセロールの水溶液を、特に注射用溶液のために、液体担体として利用することもできる。好適な薬学的賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等を含む。必要に応じて、組成物は、微量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を含有していてもよい。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳濁液、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、持続放出製剤等の形態を採り得る。組成物を、伝統的な結合剤及び担体、例えばトリグリセリドを用いて、坐剤として処方することができる。本発明の化合物を、中性形態又は塩形態として処方することができる。薬学的に許容可能な塩は、遊離のアミノ基とともに形成されるもの、例えば塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸等由来のもの、及び遊離のカルボキシル基とともに形成されるもの、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等由来のものを含む。好適な薬学的担体の例は、E. W. Martinによる"Remington'sPharmaceutical Sciences"に記載されている。かかる組成物は、患者への適当な投与のための形態をもたらすための好適な量の担体とともに、好ましくは精製形態の、治療的有効量の化合物を含有する。製剤は、投与様式に適合しているものとする。
【００７７】
分子生物学、細胞生物学、タンパク質化学及び抗体技法の分野において一般的に知られており実施されている方法は、継続的に更新されている以下の刊行物に十分に記載されている："Molecular Cloning: A Laboratory Manual",(Sambrook et al.,Cold Spring Harbor)、Current Protocols in MolecularBiology (F. M. Ausubel et al. Eds., Wiley & Sons)、CurrentProtocols in Protein Science (J. E. Colligan et al. eds., Wiley & Sons)、Current Protocols in Cell Biology (J. S. Bonifacino et al., Wiley& Sons)及びCurrent Protocols in Immunology (J. E.Colligan et al., Eds., Wiley & Sons)。細胞培養及び培地に関する既知の技法は、"Large Scale Mammalian Cell Culture" (Hu et al., Curr. Opin., Biotechnol.8: 148, 1997)、"Serum free Media" (K. Kitano,Biotechnol. 17:73, 1991)及び"Suspension Culture ofMammalian Cells" (Birch et al. Bioprocess Technol. 19: 251, 1990)に記載されている。
【００７８】
本発明の実施形態
本発明をここでさらに記載する。以下の節では本発明の種々の態様をより詳細に規定する。そのようにして規定した各態様は、反対の内容が明示されない限り、任意の他の態様（単数又は複数）と組み合わせることができる。特に、好ましい又は有利であるとして示した任意の特徴を、好ましい又は有利であるとして示した任意の他の特徴（単数又は複数）と組み合わせることができる。
【００７９】
第１の態様では、本発明は、結合部分であって、Ｃ５ａのアミノ酸配列X1X2ETCEX3RX4（配列番号１８）及びX5X6KX7X8X9L（配列番号１９）（ここで、X1は、N、H、D、F、K、Y及びTからなる群から選択され、X2は、D、L、Y及びHからなる群から選択され、X3は、Q、E及びKからなる群から選択され、X4は、A、V及びLからなる群から選択され、X5は、S、H、P及びNからなる群から選択され、X6は、H及びNからなる群から選択され、X7は、D、N、H、P及びGからなる群から選択され、X8は、M、L、I及びVからなる群から選択され、X9は、Q、L及びIからなる群から選択される）によって形成される立体構造エピトープと結合する、結合部分に関する。換言すれば、第１の態様による結合部分は、配列番号１８によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸、及び配列番号１９によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸と同時に結合する。
【００８０】
配列番号１８は、ヒトＣ５ａの３０位〜３８位のアミノ酸を、チンパンジー（Pan troglodytes）、アカゲザル（Macaca mulatta）、イノシシ（Sus scrofa）、ウマ（Equus caballus）、ウシ（Bos Taurus）、マウス（Mus musculus）、ラット（Rattus norvegicus）、ハイイロオオカミ（Canis lupus）及びハイイロジネズミオポッサム（Monodelphis domestica）における対応するアミノ酸配列と比較することによって決定されるコンセンサス配列である。配列番号１９は、ヒトＣ５ａの６６位〜７２位のアミノ酸を、チンパンジー、アカゲザル、イノシシ、ウマ、ウシ、マウス、ラット、ハイイロオオカミ及びハイイロジネズミオポッサムにおける対応するアミノ酸配列と比較することによって決定されるコンセンサス配列である。
【００８１】
第１の態様の好ましい実施の形態では、結合部分は、アミノ酸配列X2ETCEX3R（配列番号２０）（ここで、X2及びX3は、上記と同様に規定される）の少なくとも１つのアミノ酸と結合する。配列番号２０は、配列番号１８によるコンセンサス配列のより短い型であり、ヒトＣ５ａの３１位〜３７位のアミノ酸に対応する。
【００８２】
第１の態様の好ましい実施の形態では、結合部分は、アミノ酸配列X6KX7X8X9（配列番号２１）、好ましくはKX7X8（ここで、X6、X7、X8及びX9は、上記と同様に規定される）の少なくとも１つのアミノ酸と結合する。配列番号２１は、配列番号１９によるコンセンサス配列のより短い型であり、ヒトＣ５ａの６７位〜７１位のアミノ酸に対応する。KX7X8は、配列番号２１によるコンセンサス配列のより短い型であり、ヒトＣ５ａの６８位〜７０位のアミノ酸に対応する。
【００８３】
特に好ましい実施の形態では、結合部分は、アミノ酸配列X2ETCEX3R（配列番号２０）内の少なくとも１つのアミノ酸、及びアミノ酸配列KX7X8（ここで、X2、X3、X7及びX8は、上記と同様に規定される）内の少なくとも１つのアミノ酸と同時に結合する。
【００８４】
第１の態様の好ましい実施の形態では、立体構造エピトープは、（ａ）Ｃ５ａのアミノ酸配列NDETCEQRA（配列番号２）及びSHKDMQL（配列番号３）（ヒト（Homo sapiens）及びチンパンジー由来の配列）、（ｂ）Ｃ５ａのアミノ酸配列HDETCEQRA（配列番号２２）及びSHKDLQL（配列番号２３）（アカゲザル由来の配列）、（ｃ）Ｃ５ａのアミノ酸配列DDETCEERA（配列番号２４）及びSHKNIQL（配列番号２５）（イノシシ由来の配列）、（ｄ）Ｃ５ａのアミノ酸配列DLETCEQRA（配列番号２６）及びSHKHIQL（配列番号２７）（ウマ由来の配列）、（ｅ）Ｃ５ａのアミノ酸配列DDETCEQRA（配列番号２８）及びHHKNMQL（配列番号２９）（ウシ由来の配列）、（ｆ）Ｃ５ａのアミノ酸配列FYETCEERV（配列番号３０）及びPHKPVQL（配列番号３１）（マウス由来の配列）、（ｇ）Ｃ５ａのアミノ酸配列KYETCEQRV（配列番号３２）及びHHKGMLL（配列番号３３）（ラット由来の配列）、（ｈ）Ｃ５ａのアミノ酸配列YDETCEQRA（配列番号３４）及びSNKPLQL（配列番号３５）（ハイイロオオカミ由来の配列）、又は（ｉ）Ｃ５ａのアミノ酸配列THETCEKRL（配列番号３６）及びNHKPVIL（配列番号３７）（ハイイロジネズミオポッサム由来の配列）によって形成される。
【００８５】
第１の態様の好ましい実施の形態では、結合部分は、（ａ）DETCEQR（配列番号４）、（ｂ）DETCEER（配列番号３８）、（ｃ）LETCEQR（配列番号３９）、（ｅ）YETCEER（配列番号４０）、（ｆ）YETCEQR（配列番号４１）及び（ｇ）HETCEKR（配列番号４２）からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも１つのアミノ酸と結合する。
【００８６】
第１の態様の好ましい実施の形態では、結合部分は、（ａ）HKDMQ（配列番号５）、好ましくはKDM、（ｂ）HKDLQ（配列番号４３）、好ましくはKDL、（ｃ）HKNIQ（配列番号４４）、好ましくはKNI、（ｄ）HKHIQ（配列番号４５）、好ましくはKHI、（ｅ）HKNMQ（配列番号４６）、好ましくはKNM、（ｆ）HKPVQ（配列番号４７）、好ましくはKPV、（ｇ）HKGML（配列番号４８）、好ましくはKGM、（ｈ）NKPLQ（配列番号４９）、好ましくはKPL、及び（ｉ）HKPVI（配列番号５０）、好ましくはKPVからなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも１つのアミノ酸と結合する。
【００８７】
第１の態様の特に好ましい実施の形態では、Ｃ５ａはヒトＣ５ａである。したがって、結合部分が、ヒトＣ５ａのアミノ酸NDETCEQRA（配列番号２）及びSHKDMQL（配列番号３）によって形成される立体構造エピトープと結合することが好ましい。換言すれば、第１の態様のこの好ましい実施の形態による結合部分は、配列番号２によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸、及び配列番号３によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸と同時に結合する。配列番号２は、ヒトＣ５ａの３０位〜３８位のアミノ酸に対応する。配列番号３は、ヒトＣ５ａの６６位〜７２位のアミノ酸に対応する。ヒトＣ５ａのアミノ酸配列を配列番号１に示す。第１の態様のより好ましい実施の形態では、結合部分は、アミノ酸DETCEQR（配列番号４）の少なくとも１つのアミノ酸と結合する。配列番号４は、ヒトＣ５ａの３１位〜３７位のアミノ酸に対応する。第１の態様のより好ましい実施の形態では、結合部分は、アミノ酸HKDMQ（配列番号５）の少なくとも１つ、より好ましくはアミノ酸KDMの少なくとも１つのアミノ酸と結合する。配列番号５は、ヒトＣ５ａの６７位〜７１位のアミノ酸に対応し、配列KDMは、ヒトＣ５ａの６８位〜７０位のアミノ酸に対応する。特に好ましい実施の形態では、結合部分は、アミノ酸配列DETCEQR（配列番号４）内の少なくとも１つのアミノ酸、及びアミノ酸配列KDM内の少なくとも１つのアミノ酸と同時に結合する。
【００８８】
第１の態様の好ましい実施の形態では、立体構造エピトープを形成する２つの配列（例えば、配列番号１８及び配列番号１９、配列番号２及び配列番号３、配列番号２２及び配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５、配列番号２６及び配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９、配列番号３０及び配列番号３１、配列番号３２及び配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５、配列番号３６及び配列番号３７による配列対）は、本発明の結合部分との結合に関与しない１個〜５０個の連続するアミノ酸によって隔てられる。以下では、本発明の結合部分との結合に関与しないかかるアミノ酸を「非結合アミノ酸」と称する。立体構造エピトープを形成する２つの配列は、好ましくは、６個〜４５個の連続する非結合アミノ酸によって、より好ましくは１２個〜４０個の連続する非結合アミノ酸によって、より好ましくは１８個〜３５個の連続する非結合アミノ酸によって、より好ましくは２４個〜３０個の連続する非結合アミノ酸によって、より好ましくは２５個〜２９個の連続する非結合アミノ酸によって、更により好ましくは２６個〜２８個の連続する非結合アミノ酸によって、最も好ましくは２７個の連続する非結合アミノ酸によって隔てられる。
【００８９】
第１の態様の好ましい実施の形態では、結合部分は、１０ｎＭ以下、好ましくは９ｎＭ以下、より好ましくは８ｎＭ以下、より好ましくは７ｎＭ以下、より好ましくは６ｎＭ以下、より好ましくは５ｎＭ以下、より好ましくは４ｎＭ以下、より好ましくは３ｎＭ以下、より好ましくは２ｎＭ以下、更により好ましくは１ｎＭ以下のＫｄ値を伴うＣ５ａ、好ましくはヒトＣ５ａに対する結合定数を有する。
【００９０】
第１の態様の好ましい実施の形態では、１つの結合部分が、１分子のＣ５ａ、好ましくはヒトＣ５ａによって誘導される生物学的効果に対して少なくとも７５％の遮断活性、好ましくは少なくとも８０％の遮断活性、より好ましくは少なくとも８５％の遮断活性、より好ましくは少なくとも９０％の遮断活性、より好ましくは少なくとも９５％の遮断活性を示す。これらの好ましい遮断活性は、結合部分がＣ５ａ、好ましくはヒトＣ５ａと結合する単一のパラトープを含む、これらの実施の形態を表す。結合部分が２つ以上のＣ５ａ特異的パラトープを含む実施の形態では、１つの結合部分分子を、結合部分に存在するＣ５ａ特異的パラトープの数と等しい数のＣ５ａ分子と接触させた場合に、上記の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％等の遮断活性が達成される。換言すれば、第１の態様の結合部分のパラトープとＣ５ａとが等モル濃度で存在する場合に、第１の態様による結合部分が、Ｃ５ａによって誘導される生物学的効果に対して少なくとも７５％の遮断活性、好ましくは少なくとも８０％の遮断活性、より好ましくは少なくとも８５％の遮断活性、より好ましくは少なくとも９０％の遮断活性、より好ましくは少なくとも９５％の遮断活性を示す。遮断される好ましい生物学的効果は、Ｃ５ａによって誘導されるヒト全血細胞からのリゾチーム放出である。このＣ５ａによって誘導されるリゾチーム放出及びその遮断を決定するためのアッセイを、実施例の節において記載する。
【００９１】
第１の態様の好ましい実施の形態では、結合部分は、ヒト血漿におけるＣＨ５０活性を阻害しない。ＣＨ５０活性を決定するためのアッセイは、当業者に既知であり、以下の実施例の節において記載される。
【００９２】
第１の態様の好ましい実施の形態では、結合部分は、少なくとも１つのＣ５ｂによって誘導される生物学的効果に対して遮断活性を示さず、好ましくは結合部分は、任意のＣ５ｂによって誘導される生物学的効果に対して遮断活性を示さない。
【００９３】
第１の態様の好ましい実施の形態では、結合部分は、ヒト全血における大腸菌によって誘導されるＩＬ−８産生を低減することが可能である。全血におけるＩＬ−８産生を測定するためのアッセイは、当業者に既知であり、以下の実施例の節において記載される。
【００９４】
第１の態様の好ましい実施の形態では、結合部分は、（ａ）抗体又はその抗原結合断片、（ｂ）オリゴヌクレオチド、（ｃ）抗体様タンパク質、又は（ｄ）ペプチド模倣物から選択される。
【００９５】
第１の態様の好ましい実施の形態では、結合部分は抗体又はその抗原結合断片であり、上記抗体がポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、一価抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、多重特異性抗体、脱免疫化抗体、キメラ抗体、ヒト化（特にＣＤＲグラフティングを行った）抗体及びヒト抗体からなる群から選択される。
【００９６】
第１の態様の好ましい実施の形態では、結合部分は抗体の抗原結合断片であり、上記断片がＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合したＦｖ（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ナノボディとしても知られる）及び一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体からなる群から選択される。
【００９７】
第１の態様の特に好ましい実施の形態では、結合部分は、抗体又はその抗原結合断片であって、（ｉ）配列番号６に示されるような重鎖ＣＤＲ３配列、又は（ｉｉ）配列番号７に示されるような重鎖ＣＤＲ３配列（ここで、該重鎖ＣＤＲ３配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含む）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。
【００９８】
好ましくは、抗体又はその断片は、（ｉ）配列番号８に示されるような軽鎖ＣＤＲ３配列、又は（ｉｉ）配列番号９に示されるような軽鎖ＣＤＲ３配列（ここで、該軽鎖ＣＤＲ３配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含む）を更に含む。
【００９９】
好ましくは抗体又は断片は、以下の配列：（ｉ）配列番号１０による重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉ）配列番号１１による重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉｉ）配列番号１２による軽鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｖ）配列番号１３による軽鎖ＣＤＲ２配列、（ｖ）配列番号１４による重鎖ＣＤＲ１配列、（ｖｉ）配列番号１５による重鎖ＣＤＲ１配列、（ｖｉｉ）配列番号１６による軽鎖ＣＤＲ１配列、又は（ｖｉｉｉ）配列番号１７による軽鎖ＣＤＲ１配列（ここで、該重鎖ＣＤＲ２配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、該軽鎖ＣＤＲ２配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、該重鎖ＣＤＲ１配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、該軽鎖ＣＤＲ１配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含む）のうち少なくとも１つを更に含む。好ましくは、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６及び配列番号１７によるアミノ酸配列の各々におけるこれらの任意の変化の総数、すなわち各配列における交換、欠失及び付加の総数は、１又は２である。
【０１００】
第１の態様の幾つかの実施の形態では、結合部分はオリゴヌクレオチドである。これらの実施の形態では、オリゴヌクレオチドが、核酸アプタマー、例えばＤＮＡアプタマー若しくはＲＮＡアプタマー、又はＤＮＡヌクレオチド及びＲＮＡヌクレオチドを含む混合型アプタマーであることが更に好ましい。幾つかの実施の形態では、１つ又は複数のヌクレオチドを、修飾ヌクレオチド、例えば２’−フッ素置換ピリミジンによって置き換えてもよい。核酸アプタマーが、蛍光レポーター分子、親和性タグ及び／又は高分子と複合体形成していてもよい。例えば、アプタマーをポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又は同等の高分子と複合体形成させることによって、アプタマーの生物学的半減期が増大する。
【０１０１】
第１の態様の幾つかの実施の形態では、結合部分は、抗体様タンパク質、例えば「定義」の節において上で例示されるような抗体様タンパク質である。
【０１０２】
第１の態様の幾つかの実施の形態では、結合部分は、ペプチド模倣物である。本発明の実施に好適なペプチド模倣物は好ましくは、上で記載されるような抗体様タンパク質に基づくものである。
【０１０３】
第１の態様の好ましい実施の形態は、急性炎症を伴う様々な疾患、例えば全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、重度の敗血症、敗血症ショック、虚血／再灌流関連損傷、例えば虚血性心疾患、急性肺損傷、肺炎、移植患者における急性及び慢性の移植片拒絶反応、移植片対宿主反応、更には慢性型の炎症を伴う疾患、例えば腎糸球体疾患、例えば糸球体腎炎、及びその他の腎不全、関節リウマチ、及び類似の自己免疫疾患、例えばベヒテレフ病、狼瘡型疾患、炎症性腸疾患、クローン病、腫瘍成長、又は固形臓器がんの予防及び／又は治療のための結合部分に関する。
【０１０４】
第２の態様では、本発明は、抗体又はその抗原結合断片であって、（ｉ）配列番号６に示されるような重鎖ＣＤＲ３配列、又は（ｉｉ）配列番号７に示されるような重鎖ＣＤＲ３配列（ここで、該重鎖ＣＤＲ３配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含む）を含む、抗体又はその抗原結合断片に関する。好ましくは、配列番号６のアミノ酸配列におけるこれらの任意の変化の総数、すなわち交換、欠失及び付加の総数は、１又は２である。好ましくは、配列番号７のアミノ酸配列におけるこれらの任意の変化の総数、すなわち交換、欠失及び付加の総数は、１又は２である。
【０１０５】
第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号８に示されるような軽鎖ＣＤＲ３配列、又は（ｉｉ）配列番号９に示されるような軽鎖ＣＤＲ３配列（ここで、該軽鎖ＣＤＲ３配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含む）を更に含む。好ましくは、配列番号８のアミノ酸配列におけるこれらの任意の変化の総数、すなわち交換、欠失及び付加の総数は、１又は２である。好ましくは、配列番号９のアミノ酸配列におけるこれらの任意の変化の総数、すなわち交換、欠失及び付加の総数は、１又は２である。
【０１０６】
本発明の第２の態様は、抗体又はその抗原結合断片であって、（ｉ）配列番号８に示されるような軽鎖ＣＤＲ３配列、又は（ｉｉ）配列番号９に示されるような軽鎖ＣＤＲ３配列（ここで、該軽鎖ＣＤＲ３配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含む）を含む、抗体又はその抗原結合断片にも関する。好ましくは、配列番号８のアミノ酸配列におけるこれらの任意の変化の総数、すなわち交換、欠失及び付加の総数は、１又は２である。好ましくは、配列番号９のアミノ酸配列におけるこれらの任意の変化の総数、すなわち交換、欠失及び付加の総数は、１又は２である。
【０１０７】
第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、以下の配列：（ｉ）配列番号１０による重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉ）配列番号１１による重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉｉ）配列番号１２による軽鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｖ）配列番号１３による軽鎖ＣＤＲ２配列、（ｖ）配列番号１４による重鎖ＣＤＲ１配列、（ｖｉ）配列番号１５による重鎖ＣＤＲ１配列、（ｖｉｉ）配列番号１６による軽鎖ＣＤＲ１配列、又は（ｖｉｉｉ）配列番号１７による軽鎖ＣＤＲ１配列（ここで、該重鎖ＣＤＲ２配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、該軽鎖ＣＤＲ２配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、該重鎖ＣＤＲ１配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、該軽鎖ＣＤＲ１配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含む）のうち少なくとも１つを更に含む。好ましくは、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６及び配列番号１７によるアミノ酸配列の各々におけるこれらの任意の変化の総数、すなわち各配列における交換、欠失及び付加の総数は、１又は２である。
【０１０８】
第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体はポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、一価抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、多重特異性抗体、脱免疫化抗体、キメラ抗体、ヒト化（特にＣＤＲグラフティングを行った）抗体及びヒト抗体からなる群から選択される。
【０１０９】
第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体の抗原結合断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合したＦｖ（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ナノボディとしても知られる）及び一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体からなる群から選択される。
【０１１０】
第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、Ｃ５ａのアミノ酸配列X1X2ETCEX3RX4（配列番号１８）及びX5X6KX7X8X9L（配列番号１９）（ここで、X1は、N、H、D、F、K、Y及びTからなる群から選択され、X2は、D、L、Y及びHからなる群から選択され、X3は、Q、E及びKからなる群から選択され、X4は、A、V及びLからなる群から選択され、X5は、S、H、P及びNからなる群から選択され、X6は、H及びNからなる群から選択され、X7は、D、N、H、P及びGからなる群から選択され、X8は、M、L、I及びVからなる群から選択され、X9は、Q、L及びIからなる群から選択される）によって形成される立体構造エピトープと結合する。換言すれば、第２の態様による抗体又は抗原結合断片は、配列番号１８によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸、及び配列番号１９によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸と同時に結合する。好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列X2ETCEX3R（配列番号２０）（ここで、X2及びX3は、上記と同様に規定される）の少なくとも１つのアミノ酸と結合する。好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列X6KX7X8X9（配列番号２１）、より好ましくはKX7X8（ここで、X6、X7、X8及びX9は、上記と同様に規定される）の少なくとも１つのアミノ酸と結合する。特に好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列X2ETCEX3R（配列番号２０）内の少なくとも１つのアミノ酸、及びアミノ酸配列KX7X8（ここで、X2、X3、X7及びX8は、上記と同様に規定される）内の少なくとも１つのアミノ酸と同時に結合する。
【０１１１】
第２の態様の好ましい実施の形態では、立体構造エピトープは、（ａ）Ｃ５ａのアミノ酸配列NDETCEQRA（配列番号２）及びSHKDMQL（配列番号３）（ヒト及びチンパンジー由来の配列）、（ｂ）Ｃ５ａのアミノ酸配列HDETCEQRA（配列番号２２）及びSHKDLQL（配列番号２３）（アカゲザル由来の配列）、（ｃ）Ｃ５ａのアミノ酸配列DDETCEERA（配列番号２４）及びSHKNIQL（配列番号２５）（イノシシ由来の配列）、（ｄ）Ｃ５ａのアミノ酸配列DLETCEQRA（配列番号２６）及びSHKHIQL（配列番号２７）（ウマ由来の配列）、（ｅ）Ｃ５ａのアミノ酸配列DDETCEQRA（配列番号２８）及びHHKNMQL（配列番号２９）（ウシ由来の配列）、（ｆ）Ｃ５ａのアミノ酸配列FYETCEERV（配列番号３０）及びPHKPVQL（配列番号３１）（マウス由来の配列）、（ｇ）Ｃ５ａのアミノ酸配列KYETCEQRV（配列番号３２）及びHHKGMLL（配列番号３３）（ラット由来の配列）、（ｈ）Ｃ５ａのアミノ酸配列YDETCEQRA（配列番号３４）及びSNKPLQL（配列番号３５）（ハイイロオオカミ由来の配列）、又は（ｉ）Ｃ５ａのアミノ酸配列THETCEKRL（配列番号３６）及びNHKPVIL（配列番号３７）（ハイイロジネズミオポッサム由来の配列）によって形成される。第２の態様のより好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、（ａ）DETCEQR（配列番号４）、（ｂ）DETCEER（配列番号３８）、（ｃ）LETCEQR（配列番号３９）、（ｅ）YETCEER（配列番号４０）、（ｆ）YETCEQR（配列番号４１）及び（ｇ）HETCEKR（配列番号４２）からなる群から選択されるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸と結合する。第１の態様の更により好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、（ａ）HKDMQ（配列番号５）、好ましくはKDM、（ｂ）HKDLQ（配列番号４３）、好ましくはKDL、（ｃ）HKNIQ（配列番号４４）、好ましくはKNI、（ｄ）HKHIQ（配列番号４５）、好ましくはKHI、（ｅ）HKNMQ（配列番号４６）、好ましくはKNM、（ｆ）HKPVQ（配列番号４７）、好ましくはKPV、（ｇ）HKGML（配列番号４８）、好ましくはKGM、（ｈ）NKPLQ（配列番号４９）、好ましくはKPL、及び（ｉ）HKPVI（配列番号５０）、好ましくはKPVからなる群から選択されるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸と結合する。
【０１１２】
第２の態様の特に好ましい実施の形態では、Ｃ５ａはヒトＣ５ａである。したがって、抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＣ５ａのアミノ酸NDETCEQRA（配列番号２）及びSHKDMQL（配列番号３）によって形成される立体構造エピトープと結合することが好ましい。換言すれば、第２の態様のこの好ましい実施の形態による抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸、及び配列番号３によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸と同時に結合する。第２の態様のより好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列DETCEQR（配列番号４）内の少なくとも１つのアミノ酸と結合する。第２の態様のより好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列HKDMQ（配列番号５）内の少なくとも１つのアミノ酸、より好ましくはアミノ酸配列KDM内の少なくとも１つのアミノ酸と結合する。特に好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列DETCEQR（配列番号４）内の少なくとも１つのアミノ酸、及びアミノ酸配列KDM内の少なくとも１つのアミノ酸と同時に結合する。
【０１１３】
第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１０ｎＭ以下、好ましくは９ｎＭ以下、より好ましくは８ｎＭ以下、より好ましくは７ｎＭ以下、より好ましくは６ｎＭ以下、より好ましくは５ｎＭ以下、より好ましくは４ｎＭ以下、より好ましくは３ｎＭ以下、より好ましくは２ｎＭ以下、更により好ましくは１ｎＭ以下のＫｄ値を伴うＣ５ａ、好ましくはヒトＣ５ａに対する結合定数を有する。
【０１１４】
第２の態様の好ましい実施の形態では、１つの抗体又はその抗原結合断片が、１分子のＣ５ａ、好ましくはヒトＣ５ａによって誘導される生物学的効果に対して少なくとも７５％の遮断活性、好ましくは少なくとも８０％の遮断活性、より好ましくは少なくとも８５％の遮断活性、より好ましくは少なくとも９０％の遮断活性、より好ましくは少なくとも９５％の遮断活性を示す。これらの好ましい遮断活性は、抗体（又はその抗原結合断片）がＣ５ａ、好ましくはヒトＣ５ａと結合する単一のパラトープを含む、これらの実施の形態を表す。抗体（又はその抗原結合断片）が２つ以上のＣ５ａ特異的パラトープを含む実施の形態では、１つの結合部分分子を、抗体（又はその抗原結合断片）に存在するＣ５ａ特異的パラトープの数と等しい数のＣ５ａ分子と接触させた場合に、上記の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％等の遮断活性が達成される。例えば、ＩｇＧ型の典型的な抗Ｃ５ａ抗体はＣ５ａと結合することが可能なパラトープを２個含むが、ＩｇＭ型の典型的な抗Ｃ５ａ抗体はＣ５ａと結合することが可能なパラトープを１０個含む。したがって、ＩｇＧ型の抗体の遮断活性は、上記抗体をＣ５ａと１：２のモル比で接触させることによって決定するものとする。ＩｇＭ型の抗体の遮断活性は、上記抗体をＣ５ａと１：１０のモル比で接触させることによって決定するものとする。これらのモル比を選ぶと、抗体内のパラトープとＣ５ａとが等モル濃度で存在する。換言すれば、第２の態様による抗体（又はその抗原結合断片）のパラトープとＣ５ａとが等モル濃度で存在する場合に、該抗体又はその抗原結合断片が、Ｃ５ａによって誘導される生物学的効果に対して少なくとも７５％の遮断活性、好ましくは少なくとも８０％の遮断活性、より好ましくは少なくとも８５％の遮断活性、より好ましくは少なくとも９０％の遮断活性、より好ましくは少なくとも９５％の遮断活性を示す。遮断される好ましい生物学的効果は、Ｃ５ａによって誘導されるヒト全血細胞からのリゾチーム放出である。このＣ５ａによって誘導されるリゾチーム放出及びその遮断を決定するためのアッセイを、実施例の節において記載する。
【０１１５】
第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ヒト血漿におけるＣＨ５０活性を阻害しない。ＣＨ５０活性を決定するためのアッセイは、当業者に既知であり、以下の実施例の節において記載される。
【０１１６】
第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣ５ｂによって誘導される生物学的効果に対して遮断活性を示さず、好ましくは抗体又はその抗原結合断片は、任意のＣ５ｂによって誘導される生物学的効果に対して遮断活性を示さない。
【０１１７】
第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ヒト全血における大腸菌によって誘導されるＩＬ−８産生を低減することが可能である。全血におけるＩＬ−８産生を測定するためのアッセイは、当業者に既知であり、以下の実施例の節において記載される。
【０１１８】
第２の態様の好ましい実施の形態は、急性炎症を伴う様々な疾患、例えば全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、重度の敗血症、敗血症ショック、虚血／再灌流関連損傷、例えば虚血性心疾患、急性肺損傷、肺炎、移植患者における急性及び慢性の移植片拒絶反応、移植片対宿主反応、更には慢性型の炎症を伴う疾患、例えば腎糸球体疾患、例えば糸球体腎炎、及びその他の腎不全、関節リウマチ、及び類似の自己免疫疾患、例えばベヒテレフ病、狼瘡型疾患、炎症性腸疾患、クローン病、腫瘍成長、又は固形臓器がんの予防及び／又は治療のための抗体又はその抗原結合断片に関する。
【０１１９】
第１の態様及び第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、以下の表１に列挙されるような重鎖ＣＤＲ３配列、重鎖ＣＤＲ２配列及び重鎖ＣＤＲ１配列（ここで、各重鎖ＣＤＲ３配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、各重鎖ＣＤＲ２配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、各重鎖ＣＤＲ１配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含む）の組のうちの１つを含む。
【０１２０】
表１：本発明の抗体又はその断片における使用に好適な重鎖ＣＤＲ配列の組
重鎖の組の記号
【表１】
2018080170.tif 000003
【０１２１】
第１の態様及び第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、以下の表２に列挙されるような軽鎖ＣＤＲ３配列、軽鎖ＣＤＲ２配列及び軽鎖ＣＤＲ１配列（ここで、各軽鎖ＣＤＲ３配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、各軽鎖ＣＤＲ２配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、各軽鎖ＣＤＲ１配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含む）の組のうちの１つを含む。
【０１２２】
表２：本発明の抗体又はその断片における使用に好適な軽鎖ＣＤＲ配列の組
抗体ＩＮａｂ３０８の軽鎖ＣＤＲ２配列（配列番号１２）は抗体ＩＮａｂ７０８の軽鎖ＣＤＲ２配列（配列番号１３）と同一であるため、配列番号１３を含む組は配列番号１２を含む組と重複すると考えられる。したがって、この表は４組の軽鎖ＣＤＲ配列のみを列挙している。
【表２】
2018080170.tif 000004
【０１２３】
第１の態様及び第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上の表１に列挙される重鎖ＣＤＲの組Ａ〜Ｈのうちの１つ、及び上の表２に列挙される軽鎖ＣＤＲの組Ｉ〜ＩＶのうちの１つ、すなわち以下の組の組合せ：Ａ−Ｉ、Ａ−ＩＩ、Ａ−ＩＩＩ、Ａ−ＩＶ、Ｂ−Ｉ、Ｂ−ＩＩ、Ｂ−ＩＩＩ、Ｂ−ＩＶ、Ｃ−Ｉ、Ｃ−ＩＩ、Ｃ−ＩＩＩ、Ｃ−ＩＶ、Ｄ−Ｉ、Ｄ−ＩＩ、Ｄ−ＩＩＩ、Ｄ−ＩＶ、Ｅ−Ｉ、Ｅ−ＩＩ、Ｅ−ＩＩＩ、Ｅ−ＩＶ、Ｆ−Ｉ、Ｆ−ＩＩ、Ｆ−ＩＩＩ、Ｆ−ＩＶ、Ｇ−Ｉ、Ｇ−ＩＩ、Ｇ−ＩＩＩ、Ｇ−ＩＶ、Ｈ−Ｉ、Ｈ−ＩＩ、Ｈ−ＩＩＩ又はＨ−ＩＶのうちの１つを含む（ここで、各重鎖ＣＤＲ３配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、各重鎖ＣＤＲ２配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、各重鎖ＣＤＲ１配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、各軽鎖ＣＤＲ３配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、各軽鎖ＣＤＲ２配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含み、各軽鎖ＣＤＲ１配列は、１個、２個若しくは３個のアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１個、２個若しくは３個のアミノ酸欠失、及び／又は１個、２個若しくは３個のアミノ酸付加を任意に含む）。
【０１２４】
第１の態様及び第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）ＩＮａｂ３０８のＶＨドメイン、又は（ｉｉ）ＩＮａｂ７０８のＶＨドメインを含む、これから本質的になる、又はこれからなるＶＨドメインを含む。
【０１２５】
ＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８のＶＨドメインを規定するＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４の配列を以下の表４に示す。
【０１２６】
第１の態様及び第２の態様の好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）ＩＮａｂ３０８のＶＬドメイン、又は（ｉｉ）ＩＮａｂ７０８のＶＬドメインを含む、これから本質的になる、又はこれからなるＶＬドメインを含む。
【０１２７】
ＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８のＶＬドメインを規定するＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４の配列を以下の表４に示す。
【０１２８】
第１の態様及び第２の態様の更に好ましい実施の形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、
（ｉ）上記ＶＨドメインはＩＮａｂ３０８のＶＨドメインを含み、これから本質的になり、又はこれからなり、上記ＶＬドメインはＩＮａｂ３０８のＶＬドメインを含み、これから本質的になり、又はこれからなり、又は
（ｉ）上記ＶＨドメインはＩＮａｂ７０８のＶＨドメインを含み、これから本質的になり、又はこれからなり、上記ＶＬドメインはＩＮａｂ７０８のＶＬドメインを含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【０１２９】
第１の態様及び第２の態様の好ましい実施の形態では、本明細書に記載されるような１つ又は複数のＣＤＲ、ＣＤＲの組、又はＣＤＲの組の組合せを含む抗体又はその抗原結合断片は、ヒト抗体のフレームワークにおいて上記ＣＤＲを含む。
【０１３０】
本明細書中における、その重鎖に関して特定の鎖、又は特定の領域若しくは配列を含む抗体に対する言及は、好ましくは、上記抗体の全ての重鎖が上記特定の鎖、領域又は配列を含む状況に関する。このことは、抗体の軽鎖にも同様に適用される。
【０１３１】
特定の核酸配列及びアミノ酸配列、例えば配列リストに示される核酸配列及びアミノ酸配列に関して本明細書において提示される教示は、上記特定の配列と機能的に同等である配列、例えば該特定のアミノ酸配列の特性と同一又は類似の特性を示すアミノ酸配列、及び該特定の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列の特性と同一又は類似の特性を示すアミノ酸配列をコードする核酸配列をもたらす上記特定の配列の変更にも関するように解釈される。１つの重要な特性は、その標的に対する抗体の結合を保持すること、又は抗体のエフェクター機能を維持することである。好ましくは、特定の配列に対して変更された配列は、抗体における特定の配列を置き換えた場合、Ｃ５ａ、特に本明細書中で特定されるＣ５ａの立体構造エピトープに対する上記抗体の結合を保持し、好ましくは、本明細書に記載されるような上記抗体の機能、例えばＣ５ａによって誘導されるヒト全血細胞からのリゾチーム放出の遮断、及び／又はヒト全血における大腸菌によって誘導されるＩＬ−８産生の低減を保持する。
【０１３２】
Ｃ５ａと結合する能力を失わなければ、特にＣＤＲ、超可変領域及び可変領域の配列を変更してもよいことを、当業者は理解するであろう。例えば、ＣＤＲ領域は、本明細書において記載される領域と同一又は高度に相同である。「高度に相同」は、ＣＤＲにおいて１個〜５個、好ましくは１個〜４個、例えば１個〜３個、又は１個若しくは２個の置換、欠失又は付加がなされてもよいことを意図する。加えて、超可変領域及び可変領域を、本明細書において具体的に開示される領域と実質的な相同性を示すように変更してもよい。
【０１３３】
さらに、本発明によれば、本明細書に記載されるアミノ酸配列、特にヒト重鎖定常領域のアミノ酸配列を変更して、該配列を所望のアロタイプ、例えば白人集団に見出されるアロタイプに適合させることが望ましい場合がある。
【０１３４】
本発明は、抗体の機能特性又は薬物動態特性を変化させるためにＦｃ領域に変化を加えた抗体を更に含む。かかる変化によって、Ｃ１ｑ結合及びＣＤＣ、又はＦｃγＲ結合及びＡＤＣＣの減少又は増大をもたらすことができる。例えば、重鎖定常領域のアミノ酸残基の１つ又は複数において置換を行うことによって、変更した抗体と比較して、抗原と結合する能力を保持しながらエフェクター機能の変化を引き起こすことができる（米国特許第５，６２４，８２１号及び米国特許第５，６４８，２６０号を参照されたい）。
【０１３５】
抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を、Ｉｇ定常ドメイン又はＩｇ様定常ドメインのサルベージ受容体エピトープを変更して、該分子がインタクトなＣＨ２ドメイン又はインタクトなＩｇ  Ｆｃ領域を含まないようにすることによって、改善することができる（米国特許第６，１２１，０２２号及び米国特許第６，１９４，５５１号を参照されたい）。さらに、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を、Ｆｃ領域中に突然変異を起こすことによって、例えば２５２位のロイシンをトレオニンに置換することによって、２５４位のセリンをトレオニンに置換することによって、又は２５６位のフェニルアラニンをトレオニンに置換することによって増大させることができる（米国特許第６，２７７，３７５号を参照されたい）。
【０１３６】
さらに、抗体のエフェクター機能を変化させるために、抗体のグリコシル化パターンを変更することができる。例えば、Ｆｃ受容体に対するＦｃ領域の親和性を増強してＮＫ細胞の存在下における抗体のＡＤＣＣの増大をもたらすために、Ｆｃ領域の２９７位のＡｓｎに通常結合しているフコース単位を付加しないトランスフェクトーマにおいて、抗体を発現させることができる（Shield et al. (2002) JBC, 277: 26733を参照されたい）。さらに、ガラクトシル化の変更を、ＣＤＣを変更するために行うことができる。
【０１３７】
代替的には、別の実施の形態では、突然変異を、例えば飽和突然変異誘発によって、抗Ｃ５ａ抗体をコードする配列の全て又は一部に沿ってランダムに導入することができ、得られる変更された抗Ｃ５ａ抗体を、結合活性に関してスクリーニングすることができる。
【０１３８】
第３の態様では、本発明は、医薬組成物であって、（ａ）第１の態様による結合部分、又は（ｂ）第２の態様による抗体又はその抗原結合断片を含み、１つ又は複数の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤、充填剤、結合剤、滑剤、流動促進剤、崩壊剤、吸着剤及び／又は保存料を更に含む、医薬組成物に関する。
【０１３９】
第４の態様では、本発明は、急性炎症を伴う様々な疾患、例えば全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、重度の敗血症、敗血症ショック、虚血／再灌流関連損傷、例えば虚血性心疾患、急性肺損傷、肺炎、移植患者における急性及び慢性の移植片拒絶反応、移植片対宿主反応、更には慢性型の炎症を伴う疾患、例えば腎糸球体疾患、例えば糸球体腎炎、及びその他の腎不全、関節リウマチ、及び類似の自己免疫疾患、例えばベヒテレフ病、狼瘡型疾患、炎症性腸疾患、クローン病、腫瘍成長、又は固形臓器がんの予防及び／又は治療用の医薬組成物の調製のための、（ａ）第１の態様による結合部分、又は（ｂ）第２の態様による抗体又はその抗原結合断片の使用に関する。
【０１４０】
第５の態様では、本発明は、それを必要とする患者において急性炎症を伴う様々な疾患、例えば全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症、重度の敗血症、敗血症ショック、虚血／再灌流関連損傷、例えば虚血性心疾患、急性肺損傷、肺炎、移植患者における急性及び慢性の移植片拒絶反応、移植片対宿主反応、更には慢性型の炎症を伴う疾患、例えば腎糸球体疾患、例えば糸球体腎炎、及びその他の腎不全、関節リウマチ、及び類似の自己免疫疾患、例えばベヒテレフ病、狼瘡型疾患、炎症性腸疾患、クローン病、腫瘍成長、又は固形臓器がんを予防及び／又は治療する方法であって、有効量の（ａ）第１の態様による結合部分、又は（ｂ）第２の態様による抗体又はその抗原結合断片を該患者に投与することを含む、予防及び／又は治療する方法に関する。
【０１４１】
本発明の任意の態様の実施において、上で記載されるような医薬組成物、又は結合部分（例えば抗体又はその抗原結合断片）を、患者において十分なレベルの結合部分をもたらす、当該技術分野において確立された任意の経路によって患者に投与することができる。医薬組成物又は結合部分を、全身的に又は局所的に投与することができる。かかる投与は、非経口的に、経粘膜的に、例えば経口的に、経鼻的に、直腸に、膣内に、舌下に、粘膜下に、経皮的に、又は吸入によって行われ得る。好ましくは、投与は、例えば静脈内注射又は腹腔内注射を介した、非経口投与であり、動脈内投与、筋肉内投与、皮内投与及び皮下投与も含むがこれらに限定されない。本発明の医薬組成物を局所的に投与する場合、該医薬組成物を治療対象の臓器又は組織に、例えば腫瘍に罹患した臓器に直接注射することができる。
【０１４２】
経口投与に適した医薬組成物は、カプセル若しくは錠剤として、粉末若しくは顆粒として、溶液、シロップ若しくは懸濁液（水性液体又は非水性液体中の）として、可食性の泡若しくはホイップとして、又は乳濁液として提供することができる。錠剤又は硬ゼラチンカプセルは、ラクトース、デンプン又はその誘導体、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、ステアリン酸又はその塩を含んでいてもよい。軟ゼラチンカプセルは、植物油、ワックス、脂肪、半固体又は液体のポリオール等を含んでいてもよい。溶液及びシロップは、水、ポリオール及び糖を含んでいてもよい。
【０１４３】
経口投与を意図した活性作用剤は、胃腸管中で活性作用剤の崩壊及び／又は吸収を遅延化する材料でコーティングしてもよく、又はこれと混和してもよい（例えば、モノステアリン酸グリセリン又はジステアリン酸グリセリンを使用することができる）。したがって、活性作用剤の持続放出を長時間にわたって達成することができ、必要に応じて、活性作用剤を胃内における分解から保護することができる。経口投与のための医薬組成物は、特定のｐＨ又は酵素的条件による特定の胃腸位置での活性作用剤の放出を促進するように処方することができる。
【０１４４】
経皮投与に適した医薬組成物を、長期間にわたりレシピエントの表皮と密に接触した状態とすることを意図する分離型のパッチとして提供することができる。局所投与に適した医薬組成物を、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、粉末、溶液、ペースト、ゲル、噴霧剤、エアロゾル又はオイルとして提供することができる。皮膚、口、眼又は他の外部組織への局所投与のために、好ましくは局所用の軟膏又はクリームを使用する。軟膏において処方する場合、活性成分をパラフィン系軟膏基剤又は水混和性軟膏基剤とともに利用することができる。代替的には、活性成分を、水中油型基剤又は油中水型基剤を含むクリーム中で処方することができる。眼に対する局所投与に適した医薬組成物は、点眼剤を含む。これらの組成物では、活性成分を、好適な担体、例えば水性溶媒に溶解又は懸濁することができる。口における局所投与に適した医薬組成物は、ロゼンジ、トローチ及び洗口剤を含む。
【０１４５】
経鼻投与に適した医薬組成物は、固体担体、例えば粉末（好ましくは、２０ミクロン〜５００ミクロンの範囲の粒子径を有する）を含んでいてもよい。粉末を、嗅ぎタバコを吸うような形で、すなわち、鼻の近くに保持した粉末の容器からの鼻での急速な吸入によって投与することができる。代替的には、経鼻投与に適した（adapted）組成物は、例えば、経鼻噴霧剤又は点鼻剤のように、液体担体を含んでいてもよい。これらの組成物は、活性成分の水溶液又は油溶液を含んでいてもよい。吸入による投与用の組成物を、所定の投与量の活性成分をもたらすように構築することができる加圧エアロゾル、ネブライザ又は吸入器を含むがこれらに限定されない特に適した装置において供給することができる。好ましい実施の形態では、本発明の医薬組成物を、鼻腔を介して肺へと投与する。
【０１４６】
直腸投与に適した医薬組成物を、坐剤又は注腸剤として提供することができる。経膣投与に適した医薬組成物を、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡又は噴霧剤の製剤として提供することができる。
【０１４７】
非経口投与に適した医薬組成物は、水性及び非水性の無菌の注射用溶液又は懸濁液を含み、これらは抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び組成物を対象のレシピエントの血液と実質的に等張にする溶質を含有していてもよい。かかる組成物中に存在していてもよい他の成分は、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセリン及び植物油を含む。非経口投与に適した組成物は、単位用量又は複数用量の容器、例えば封止アンプル及びバイアルにおいて与えることができ、使用直前に無菌液体担体、例えば注射用無菌食塩溶液を添加するだけでよいフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存することができる。即時注射溶液及び懸濁液を、無菌の粉末、顆粒及び錠剤から調製することができる。
【０１４８】
好ましい実施の形態では、組成物を、日常的な手法に従って、人間への静脈内投与に適した医薬組成物として処方する。典型的には、静脈内投与用の組成物は、無菌の等張水性緩衝液中の溶液である。必要に応じて、組成物は、可溶化剤、及び注射部位における疼痛を緩和するための局所麻酔薬、例えばリドカインを含んでいてもよい。概して、成分は、別々に、又は単位投与形態中に混合して、例えば活性作用剤の量を示した気密封止容器、例えばアンプル又は小袋（sachette）中における乾燥凍結乾燥粉末又は水を含まない濃縮物として、供給される。組成物を注入によって投与する場合、該組成物を、無菌の医薬品グレードの水又は生理食塩水を含有する注入ボトルを用いて分注することができる。組成物を注射によって投与する場合、無菌生理食塩水のアンプルを、投与前に成分を混合することができるように提供することができる。
【０１４９】
別の実施の形態では、例えば、化学誘引の阻害剤を、制御放出システムにおいて送達することができる。例えば、阻害剤を、静脈内注入、埋込み型浸透圧ポンプ、経皮パッチ、リポソーム、又は他の投与様式を使用して投与することができる。１つの実施の形態では、ポンプを使用することができる（Sefton (1987) CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 201、Buchwald et al. (1980) Surgery 88:507、Saudeket al. (1989) N. Eng. J. Med. 321: 574を参照されたい）。別の実施の形態では、化合物を、小胞、特にリポソームにおいて送達することができる（Langer (1990) Science 249:1527-1533、Treat etal. (1989) inLiposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein andFidler (eds.), Liss, N.Y., 353-365、国際公開第９１／０４０１４号、米国特許第４，７０４，３５５号を参照されたい）。別の実施の形態では、ポリマー材料を使用することができる（Medical Applications of Controlled Release (1974) Langer and Wise(eds.), CRC Press: Boca Raton, Fla.、Controlled DrugBioavailability, Drug Product Design and Performance, (1984) Smolen and Ball(eds.), Wiley: N.Y.、Ranger and Peppas (1953) J.Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23: 61を参照されたい。Levyet al. (1985) Science 228:190、During et al. (1989) Ann.Neurol. 25: 351、Howard et al. (1989) J. Neurosurg. 71:105も参照されたい）。
【０１５０】
更に別の実施の形態では、制御放出システムを、治療標的、すなわち標的細胞、標的組織又は標的臓器の近くに配置することによって、全身用の用量の一部しか必要でないものとすることができる（例えば、Goodson (1984) 115-138 in Medical Applications of Controlled Release, vol. 2を参照されたい）。他の制御放出システムが、Langerによる概説（1990, Science 249: 1527-1533）において論じられている。
【０１５１】
特定の実施の形態では、本発明の医薬組成物を、治療を必要とする領域に対して局所的に投与することが望ましい場合がある。これは、例えば、限定するものではないが、外科処置時の局所注入、局所塗布（例えば、外科処置後の創傷被覆と組み合わせて）によって、注射によって、カテーテルを用いて、坐剤を用いて、又は膜、例えばシラスチック膜、若しくは繊維を含む多孔質、非多孔質若しくはゼラチン質の材料のものである埋込み剤を用いて、達成することができる。
【０１５２】
好ましい有効用量の選択は、当業者に既知である複数の因子の検討に基づいて、熟練技能者によって決定される。かかる因子は、薬学的化合物に対する規制認可を取得する際に典型的に利用される通常の開発手順において確立されている、医薬組成物の特定の形態、例えばポリペプチド又はベクター、及びその薬物動態パラメータ、例えば生物学的利用能、代謝、半減期等を含む。用量を検討する際の更なる因子は、予防及び／若しくは治療すべき病態若しくは疾患、又は正常な個体において達成すべき利益、患者のボディマス、投与経路、投与が急性であるか若しくは慢性であるか、併用薬、並びに投与される薬学的作用剤の有効性に影響を及ぼすことが知られている他の因子を含む。したがって、正確な投与量は、施術医の判断及び各患者の状況によって、例えば標準的な臨床技法によって、個々の患者の病態及び免疫状態に応じて、決定するものとする。
【０１５３】
腫瘍成長又は固形臓器がんの予防及び／又は治療に関する本発明の任意の態様の実施において、本発明の結合部分又は抗体を投与される被験体は、化学療法剤、放射線、又はＦｃ受容体、例えばＦｃ−γ受容体の発現若しくは活性を変調する、例えば増強若しくは阻害する作用剤、例えばサイトカインによって更に治療される。治療時に投与するための典型的なサイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を含む。典型的な治療剤は、とりわけ、抗悪性腫瘍剤、例えばドキソルビシン、シスプラチン、タキソテール、５−フルオロウラシル（fluorouracil）、メトトレキサート（methotrexate）、ゲムシタビン（gemcitabin）及びシクロホスファミドを含む。
【０１５４】
以下の図及び実施例は、単に本発明を例示するものであり、添付の特許請求の範囲によって示されるような本発明の範囲を限定するものとは決して解釈されないものとする。
【図面の簡単な説明】
【０１５５】
【図１】血液細胞からの酵素放出に対するＣ５ａ突然変異体の効果を示す図である。抗体のエピトープの構築に関して有望なＣ５ａ分子中のアミノ酸を、アラニンへと突然変異させ、これらのＣ５ａ突然変異体を、ヒト全血細胞からのリゾチーム放出を誘導するそれらの生物活性に関して試験した。ヒトＣ５ａと比較して５０％を超える生物活性喪失をもたらすＣ５ａの部位突然変異を、Ｃ５ａの生物学的機能のために重要な部位とみなした。これらの部位は、２４位、２９位、３１位、３７位、６８位及び６９位である。図中英語：C5a bioactivity  Ｃ５ａの生物活性Con  対照None  なしC-del  Ｃ−ｄｅｌC5a mutation sites  Ｃ５ａの突然変異部位
【図２】Ｃ５ａ突然変異体に対するＩＮａｂ３０８の結合能を示す図である。Ｃ５ａ及びＣ５ａ突然変異体を、９６ウェルプレート上にコーティングした。これらのタンパク質に対するＩＮａｂ３０８の結合能を、ＥＬＩＳＡアプローチによって評価した。５０％を超える結合能の喪失を有意とみなす。データは、ＩＮａｂ３０８が２つの領域（３１位〜３７位及び６８位〜６９位）と結合することを示す。図中英語：Binding Capability  結合能Con  対照
【図３】Ｃ５ａ突然変異体に対するＩＮａｂ７０８の結合能を示す図である。Ｃ５ａ及びＣ５ａ突然変異体を、９６ウェルプレート上にコーティングした。これらのタンパク質に対するＩＮａｂ７０８の結合能を、ＥＬＩＳＡアプローチによって評価した。５０％を超える結合能の喪失を有意とみなす。データは、ＩＮａｂ７０８が２つの領域（３１位〜３７位及び６８位〜７０位）と結合することを示す。図中英語：Binding Capability  結合能Con  対照
【図４】ＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８がヒト血漿のＣＨ５０活性に影響を及ぼさないことを示す図である。ヒト血漿の溶血活性を、古典的なＣＨ５０アッセイによって決定した。ＩＮａｂ７０８、ＩＮａｂ３０８及びＦ２０を含むヒトＣ５ａに対するＭａｂを、ヒト血漿とともにプレインキュベートした後、引き続きＣＨ５０アッセイを行った。ヒト全血中で生じるＣ５濃度（およそ０．４μＭ）よりはるかに高いおよそ５μＭの濃度で使用した場合、これらの抗体の中で、Ｆ２０はＣＨ５０活性を強く阻害するが、ＩＮａｂ７０８及びＩＮａｂ３０８は影響を有しない。図中英語：Control plasma  対照血漿INab708 treated plasma  ＩＮａｂ７０８で処理した血漿INab308 treated plasma  ＩＮａｂ３０８で処理した血漿F20 treated plasma  Ｆ２０で処理した血漿plasma  血漿
【図５】Ｃ５ａの生物活性に対するＩＮａｂ３０８、ＩＮａｂ７０８及びＬ２Ｂ２３の遮断効果の比較を示す図である。ＩＮａｂ３０８、ＩＮａｂ７０８及びＬ２Ｂ２３の遮断活性を、Ｃ５ａによって誘導されるリゾチーム放出のアッセイによって評価した。２個のＣ５ａ分子によって誘発される生物学的効果に対する１個の抗体の遮断活性を評価するために、抗体対Ｃ５ａのモル比を１：２に設定した。データは、ＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８がＣ５ａの生物活性に対して非常に高い遮断活性（≧９０％）を有するが、Ｌ２Ｂ２３は最小限の効果しか示さないことを示す。図中英語：Fluorescence  蛍光
【図６】ヒト全血における大腸菌によって誘導されるＩＬ−８産生に対するＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８の阻害効果を示す図である。大腸菌を全血とともに４時間インキュベートし、ＩＬ−８レベルをＥＬＩＳＡによって評価した。インキュベーション時のＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８の存在下においてＩＬ−８レベルは有意に減少した（Ｐ＜０．０１）が、Ｌ２Ｂ２３の存在下において有意な低減は起こらなかった。図中英語：Control  対照None  なしE.coli  大腸菌
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【０１５６】
１．  方法
１．１  組換えＣ５ａ及びＣ５ａ突然変異体の調製：
ヒトＣ５ａをコードするＤＮＡ配列を、末梢血白血球から単離されたＲＮＡを使用する逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）によって取得した。Ｃ５ａ突然変異体を、突然変異部位にGCT（アラニン）を導入することによって、ＰＣＲ法を使用して作製した。引き続き、Ｃ５ａのＤＮＡを、ｐＥＴ−３２ａ（Novagen、Gibbstown, NJ）とライゲーションし、ライゲーション混合物を使用して、ＪＭ１０９コンピテント細胞を形質転換した。発現プラスミドを、標準的な塩化カルシウム法を使用して、ＢＬ２１中に形質転換した。ルリア・ベルターニ・ブロス（ＬＢ）プレートからシングルコロニーをピックアップし、アンピシリンを含むＬＢ培地中に接種して、３７℃で終夜インキュベートした。培養物を２ＬのＬＢ培地に移し、指数増殖期中期（Ａ６００≒０．６）まで３７℃でインキュベートした後、イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を０．１ｍＭの最終濃度まで添加した。細胞を、３０℃で終夜継続して成長させ、培養物を７０００ｒｐｍ、４℃で１５分間遠沈することによって回収した。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；１０ｍＭ  ＰＢ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ［ｐＨ７．４］）で１回洗浄した後、細菌ペレットを、ＰＢＳ中に再懸濁し、氷上で超音波処理した。１２０００ｒｐｍ、４℃で１５分間の遠心分離の後、可溶性画分を不溶性ペレットから分離した。ヒト組換えＣ５ａを精製するために、細胞溶解物の上清を、ＰＢＳで予め平衡化したニッケルキレート化親和性カラムにロードした。引き続き、カラムを、それぞれＰＢＳ中の５０ｍＭイミダゾール及び２００ｍＭイミダゾールで洗浄した。最後に、結合したタンパク質を５００ｍＭイミダゾールによって溶出し、ＰＢＳに対して終夜透析し、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分析した。
【０１５７】
１．２  免疫化、及びＥＬＩＳＡによるハイブリドーマスクリーニング：
モノクローナル抗体を、ハイブリドーマ法を使用して作製した。免疫化及びＭＡｂの産生を、標準的なプロトコルを使用して実施した。５匹の４週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスを、動物１匹当たり、完全フロイントアジュバント中の精製した組換えＣ５ａ  １００μｇを用いて皮下的に免疫化した。動物を、不完全フロイントアジュバント中の抗原１００μｇを使用して４週間隔で２回追加免疫した。最後の追加免疫の３日後、マウスを屠殺し、その脾細胞をＮＳ−１と５：１の比率で融合させ、２００μＬの細胞を５つの９６ウェルプレート上の各ウェルにプレーティングした。ハイブリッド細胞を、２０％  ウシ胎児血清並びに５×１０−３Ｍ  ヒポキサンチン、２×１０−５Ｍ  アミノプテリン及び８×１０−４Ｍ  チミジン（ＨＡＴ）を添加したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）において選択した。
【０１５８】
８日後、ヒトＣ５ａに対する抗体を分泌する細胞クローンを、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によってスクリーニングした。簡潔に述べると、９６ウェルプレートを、２μｇ／ｍＬの組換えヒトＣ５ａを用いて４℃で終夜コーティングした。ＰＢＳ中の５％無脂肪乳を用いて３７℃で１時間ブロッキングした後、成長中のクローンの培養培地５０μＬを各ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートし、その後セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識化したヤギ抗マウス抗体１００μＬで１時間処理した。ペルオキシダーゼ反応を、５．５ｍＭ  ｏ−フェニレン−ジアミン塩酸塩（ＯＰＤ）及び８．５ｍＭ  Ｈ２Ｏ２を含有する発色溶液を用いて進行させた。吸光度を、ＥＬＩＳＡリーダー（Anthos、Wals/Salzburg、オーストリア）を用いて４９２ｎｍで測定した。
【０１５９】
１．３  モノクローナル抗体の産生及び精製：
大量のＭａｂを作製するために、５×１０６のハイブリドーマ細胞をマウスの腹腔中に注射した。１４日後、腹水を抜き取り、１５００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離した。上清を収集し、ＰＢＳ中で予め平衡化したプロテインＡ−セファロース４Ｂのカラムに適用した。結合したＭａｂをクエン酸（ｐＨ４．０）で溶出し、ＰＢＳに対して終夜透析した。精製したタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析した。
【０１６０】
１．４  Ｃ５ａの生物活性に関する酵素放出アッセイ
脱顆粒による酵素放出の誘導は、Ｃ５ａの重要な生物学的特質である。本発明者らの研究では、健康なボランティアから得た新鮮なヒト全血を使用して、リゾチーム放出に対するＣ５ａの効果を評価した。全血細胞から放出されるリゾチームレベルを、ＥｎｚＣｈｅｋ（商標）リゾチームアッセイキット（Invitrogen、CA, USA）によって分析した。抗Ｃ５ａ抗体の遮断活性を研究するために、ｒｈＣ５ａ（１００ｎＭ）を、種々の濃度の抗体と混合した。その後、全血細胞を直ぐに添加して、Ｃ５ａとの抗体のプレインキュベーションを回避した。インキュベーション後、５０μｌの試料上清を５０μｌの希釈基質溶液に添加した。プレートを、暗所で３７℃で３０分間インキュベートし、その後、Perkin Elmer（Massachusetts, USA）の１４２０マルチラベルカウンターによって読み取った。蛍光強度を、４９０ｎｍでの励起及び５２５ｎｍでの発光によって測定し、ゼロの標準値（ブランク）を全ての試料から減算した。抗体の遮断活性を、ｒｈＣ５ａによって誘導されるリゾチーム放出の蛍光強度からｒｈＣ５ａ非依存性のリゾチーム放出（緩衝剤対照）の蛍光強度を減算した後で、算出した。遮断活性を、以下の式を用いて算出した：遮断活性＝Ｃ５ａ蛍光−（Ｃ５ａ＋Ａｂ）蛍光／Ｃ５ａ蛍光−緩衝剤対照蛍光。
【０１６１】
１．５  ヒトＣ５ａ又はＣ５ａ突然変異体に対するＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８の結合能のＥＬＩＳＡ分析
結合Ｅｌｉｓａを実施して、ヒトＣ５ａ及びＣ５ａ突然変異体に対するＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８の結合活性を決定した。Ｃ５ａ突然変異体は、ｃＤＮＡレベルからの突然変異部位へのGCTの導入によって対応するアミノ酸をアラニンと置き換えることによって作製される。これらのＣ５ａ突然変異体は、２４位、２９位、３０位、３１位、３２位、３５位、３６位、３７位、３０位／３７位（二重突然変異）、４０位、５３位、６４位、６５位、６６位、６８位、６４位／６８位、６６位／６８位、６９位、７０位における部位突然変異、及びＣ−ｄｅｌ（Ｃ５ａのＣ末端から１２個のアミノ酸を欠失させた）を含む。
【０１６２】
ヒトＣ５ａ（Sigma  Ｃ５７８８）、組換えＣ５ａ及びＣ５ａ突然変異体（２μｇ／ｍＬ）を、９６ウェルＥＩＡプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ９０１８）上に４℃で終夜コーティングした。ＰＢＳ中の５％無脂肪乳を用いて３７℃で１時間ブロッキングした後、希釈緩衝液を用いて調製した０．０８μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌの抗Ｃ５ａ抗体（ＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８）を各ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートし、その後セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識化したヤギ抗マウス抗体１００μＬで１時間処理した。ペルオキシダーゼ反応を、５．５ｍＭ  ｏ−フェニレン−ジアミン塩酸塩（ＯＰＤ）及び８．５ｍＭ  Ｈ２Ｏ２を含有する発色溶液を用いて進行させた。吸光度を、ＥＬＩＳＡリーダー（Anthos、Wals/Salzburg、オーストリア）を用いて４９２ｎｍで測定した。組換えＣ５ａに対するＯＤ値を１００％の結合活性とした。Ｃ５ａ突然変異体の結合能を、ＯＤＣ５ａ突然変異体／ＯＤＣ５ａによって算出する。
【０１６３】
１．６  血漿の溶血活性（ＣＨ５０）：
簡潔に述べると、ヒツジ赤血球（ｓＲＢＣ）を、新鮮なヒツジ全血から遠心分離によって調製した後、抗ｓＲＢＣで感作させた。健康なボランティア由来の血漿試料を段階希釈し、感作させたｓＲＢＣとともにインキュベートした。インキュベーションの３０分後、溶解していない細胞を遠沈させ、上清についてプレートリーダーによって５４２ｎｍで読み取った。Ｃ５の活性化に対する抗Ｃ５ａ抗体の効果を決定するために、等体積の抗Ｃ５ａ抗体と血漿とを、感作ｓＲＢＣの添加の前に１時間プレインキュベートした。
【０１６４】
１．７  大腸菌感染の全血モデルにおけるＩＬ−８産生：
臨床的敗血症に近い設定における抗Ｃ５ａ抗体の有効性を評価するために、健康なボランティア由来の全血２５０μｌに抗Ｃ５ａ抗体を加え、引き続き、緩衝生理食塩水で希釈した大腸菌（濃度１×１０７／ｍｌ）２５０μｌを添加した。３７℃、４時間のインキュベーションの後、上清を、遠沈させ、ＩＬ−８に関するＥＬＩＳＡ分析のために収集した。上清中のＩＬ−８レベルを、ＩＬ−８  ＥＬＩＳＡキット（BioLegend、USA）によって分析した。
【０１６５】
１．８  新たな立体構造エピトープと結合する抗体をスクリーニングするためのアッセイ：
コンピュータモデリング法によって得られたＣ５ａの３Ｄ構造において、Ｃ５ａの２８位〜４０位のペプチド（VNNDETCEQRAAR、配列番号６７）及びＣ５ａの６５位〜７０位のペプチド（ISHKDM、配列番号６８）を含有する空間的エピトープは、ランダムコイルとみなすことができる。この２つのペプチドを柔軟なペプチドリンカーGGGGS（配列番号６９）によって連結すると、２つのペプチドによる弱い疎水的相互作用がポケット形の立体構造を確保するため、親抗原の立体構造に類似する空間的エピトープが再構築される。ペプチドＮＨ２−２８〜４０−リンカー（GGGGS）−６５〜７０−ＣＯＯＨのコンピュータモデリング解析結果は、親抗原と同じ立体構造を維持している。この新たなアミノ酸２４個のペプチドを合成し、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）と複合体形成させて、マウスを免疫化するための免疫原を形成することができ、引き続き、伝統的なハイブリドーマ技術を適用して、この新たなアミノ酸２４個のペプチドに基づくＥＬＩＳＡをスクリーニングツールとして使用してＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８を得ることができる。
【０１６６】
９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、立体構造エピトープを有する１μｇ／ｍＬ〜２μｇ／ｍＬの合成ペプチドを用いて４℃で終夜コーティングする。ＰＢＳ中の５％無脂肪乳を用いて３７℃で１時間ブロッキングした後、ハイブリドーマの成長中のクローン（hybridoma growing clones）の培養培地５０μＬを各ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートし、その後セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識化したヤギ抗マウス抗体１００μＬで１時間処理する。ペルオキシダーゼ反応を、５．５ｍＭ  ｏ−フェニレン−ジアミン塩酸塩（ＯＰＤ）及び８．５ｍＭ  Ｈ２Ｏ２を含有する発色溶液を用いて進行させる。吸光度を、ＥＬＩＳＡリーダーを用いて４９２ｎｍで測定する。
【０１６７】
２．  結果
２．１  Ｃ５ａの活性に関連するアミノ酸の特定
考え得る抗体エピトープを構成するＣ５ａ分子内の複数のアミノ酸を、アラニンへと突然変異させた。特に、Ｃ５ａ突然変異体は、２４位、２９位、３０位、３１位、３２位、３５位、３６位、３７位、３０位／３７位（二重突然変異）、４０位、５３位、６４位、６５位、６６位、６８位、６４位／６８位、６６位／６８位、６９位、７０位における部位突然変異、及びＣ−ｄｅｌ（Ｃ５ａのＣ末端から１２個のアミノ酸を欠失させた）を含む。Ｃ５ａ突然変異体を、ヒト全血細胞からのリゾチーム放出を誘導するそれらの生物活性に関して試験した（図１）。
【０１６８】
ヒトＣ５ａと比較して５０％を超える生物活性喪失をもたらすＣ５ａの部位突然変異を、Ｃ５ａの生物学的機能のために重要な部位とみなした。したがって、２４位、２９位、３１位、３７位、６８位及び６９位のアミノ酸残基を、機能にとって重要な部位として特定した（図１）。
【０１６９】
２．２  抗体ＩＮａｂ３０８及び抗体ＩＮａｂ７０８によって結合されるＣ５ａ上のエピトープの特徴付け
ヒトＣ５ａに対する抗体を分泌する２０００個の細胞クローンを、機能的アッセイ（酵素放出）によってスクリーニングした。２つの抗体のみが優れた遮断活性を示した。
【０１７０】
これら２つの抗体（ＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８）を、該２つの抗体によって認識されるＣ５ａ上の特定のアミノ酸との関係で、更に特徴付けた。
【０１７１】
特に、１つ又は複数のアミノ酸をアラニンによって置き換えたＣ５ａの複数の突然変異体を作製した。抗体ＩＮａｂ３０８及び抗体ＩＮａｂ７０８をこれらの突然変異体と接触させ、結合の程度をＥＬＩＳＡによって決定した（上の１．５節を参照されたい）。（野生型Ｃ５ａと比較して）５０％を超える結合能の喪失を有意とみなした。
【０１７２】
データは、ＩＮａｂ３０８が２つの領域（３１位〜３７位及び６８位〜６９位）と結合することを示す（図２）。同様に、ＩＮａｂ７０８は、２つの領域（３１位〜３７位及び６８位〜７０位）と結合する（図３）。
【０１７３】
注目すべきことには、両方の抗体に関して特定された領域が、上の２．１節においてＣ５ａの機能にとって重要な部位として特定された４つのアミノ酸残基（３１位、３７位、６８位及び６９位）を包含している。
【０１７４】
２．３  ヒト血漿の溶血活性に対する抗体ＩＮａｂ３０８、抗体ＩＮａｂ７０８及び抗体Ｆ２０の効果
総溶血補体価（ＣＨ５０）は、古典的な補体経路の活性化を決定するための従来的方法である（１．６節を参照されたい）。
【０１７５】
Ｃ５ａに対するモノクローナル抗体（ＩＮａｂ７０８、ＩＮａｂ３０８及びＦ２０）を、およそ５μＭの濃度でヒト血漿とともにプレインキュベートし、引き続き、ＣＨ５０アッセイを行った。これらの抗体の中では、Ｆ２０はＣＨ５０活性を強く阻害するが、ＩＮａｂ７０８及びＩＮａｂ３０８は影響を有しない（図４）。
【０１７６】
これらの結果によって、ＩＮａｂ７０８及びＩＮａｂ３０８がＣ５ｂによって媒介される補体の活性化を妨げないことが実証される。
【０１７７】
２．４  Ｃ５ａの生物活性に対する抗体ＩＮａｂ３０８、抗体ＩＮａｂ７０８及び抗体Ｌ２Ｂ２３の効果
Ｃ５ａに対する抗体ＩＮａｂ３０８、抗体ＩＮａｂ７０８及び抗体Ｌ２Ｂ２３の遮断活性を、Ｃ５ａによって誘導されるリゾチーム放出のアッセイによって評価した（１．４節を参照されたい）。２個のＣ５ａ分子によって誘発される生物学的効果に対する１個の抗体の遮断活性を評価するために、抗体対Ｃ５ａのモル比を１：２に設定した。これらの抗体は、二価抗体である。したがって、上記の１：２というモル比を選ぶことによって、一方では抗体のパラトープと他方ではＣ５ａとが、等モル濃度で存在する。
【０１７８】
図５のデータは、ＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８がＣ５ａの生物活性に対して非常に高い遮断活性（それぞれ、９４％及び１００％）を有するが、Ｌ２Ｂ２３は最小限の効果（約１２％）しか示さないことを示す。
【０１７９】
２．５  ヒト全血における大腸菌によって誘導されるＩＬ−８産生に対する抗体ＩＮａｂ３０８及び抗体ＩＮａｂ７０８の効果
臨床的敗血症に近い設定における抗Ｃ５ａ抗体の有効性を評価するために、全血における大腸菌によって誘導されるＩＬ−８産生を決定した。このアッセイは、大腸菌感染のモデルとみなすことができる（１．７節も参照されたい）。
【０１８０】
インキュベーション時のＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８の存在下において、ＩＬ−８レベルは有意に減少した（Ｐ＜０．０１）が、Ｌ２Ｂ２３の存在下では有意な低減は起こらなかった（図６）。
【０１８１】
３．  まとめ
好ましい本発明の抗体ＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８の重要な特性を、以下の表３に要約する。本発明において特定される立体構造エピトープのアミノ酸配列、すなわち配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列の両方と同時に結合しない比較用抗体８ｇ８、ＭＡｂ  １３７−２６、Ａｂ１１８７６、Ｇ５７、Ｆ２０、Ｌ２Ｂ２３及びＧ１３が更に含まれる。比較用抗体８ｇ８、ＭＡｂ  １３７−２６、Ｆ２０、Ｇ５７、Ｌ２Ｂ２３及びＧ１３は、これらの２つのアミノ酸配列のうち１つのみと結合する（８ｇ８、ＭＡｂ  １３７−２６、Ｆ２０、Ｇ５７及びＧ１３）か、又は異なるアミノ酸配列と結合する（Ｌ２Ｂ２３）。Ａｂ１１８７６の標的エピトープは知られていない。
【０１８２】
表３：Ｃ５ａに対する中和抗体、及びそのエピトープ
ヒトＣ５ａに対するモノクローナル抗体は、古典的なハイブリドーマ技術を使用して作製した。ヒトＣ５に対するＭａｂの結合部位は、アラニンスクリーニング法によって決定した。Ｍａｂの遮断活性は、ヒト全血細胞からのＣ５ａによって誘導されるリゾチーム放出の阻害によって定量化した。
【表３】
2018080170.tif 000005
antibody  抗体
Binding  sites  結合部位
Affinity  親和性
Ration  of  Ab  to  C5a  Ａｂ対Ｃ５ａの比率
Blocking  activity  遮断活性
ＮＤ：決定されなかった。＊欧州特許出願公開第１８７８４４１号に開示される抗体に関するＡＴＣＣクローン番号ＰＴＡ−３６５０。＊＊Ａｂ１１８７６は、ABCAM（Cambridge, UK）から取得可能なモノクローナルマウス抗Ｃ５／Ｃ５ａ抗体である。
【０１８３】
表３に示されるように、幾つかの比較用抗体（８ｇ８、ＭＡｂ  １３７−２６）が、好ましい本発明の抗体、ＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８より高い、Ｃ５ａに対する結合親和性を示す。しかしながら、ＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８は、研究したいずれの比較用抗体よりも高い遮断活性を示す。より具体的には、ＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８の各々が、化学量論量で、すなわちエピトープ１個当たりパラトープ１個、すなわち標的分子１個当たり抗体分子０．５個の比率で使用した場合でさえも、非常に高い遮断活性（≧９０％）を示す。従来技術の抗体（ＭＡｂ  １３７−２６、Ａｂ１１８７６）は、超化学量論量で使用した場合にのみ、適度の遮断活性を達成した。これらの知見によって、高い結合親和性を高い遮断活性と必ずしも結び付けることができる訳ではないことが実証される。
【０１８４】
まとめると、本発明は、ちょうど化学量論量で使用した場合でさえも極めて高い遮断活性を示す抗体を初めて提供する。
【０１８５】
抗体ＩＮａｂ３０８及び抗体ＩＮａｂ７０８の重鎖及び軽鎖の相補性決定領域のアミノ酸配列を、以下の表４に列挙する。
【０１８６】
表４：抗体ＩＮａｂ３０８及び抗体ＩＮａｂ７０８のＣＤＲ配列及びＦＲ配列（Chothiaの分類法）
【表４】
2018080170.tif 000006
Heavy  Chain  重鎖
Light  Chain  軽鎖
【０１８７】
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【０１８８】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
2018080170.tif 000009
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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