(57)【要約】【課題】被検者の血液検体が、ループスアンチコアグラントを含む検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定することを可能にする手段を提供することを課題とする。【解決手段】被検者の血液検体について測定した第１凝固時間と、この血液検体と調製用試薬との混合物について測定した第２凝固時間から、第１凝固時間及び第２凝固時間に基づく値を取得し、取得した値に基づいて、血液検体の判別を行うことにより、上記の課題を解決する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、第１凝固時間を測定する工程と、
前記血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製し、第２凝固時間を測定する工程と、
前記第１凝固時間及び前記第２凝固時間に基づく値を取得する工程と
を含み、
前記第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含み、
前記値は、前記被検者の血液検体がループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定するために用いられる、
血液検体の判定方法。
【請求項２】
取得した値に基づいて、前記被検者の血液検体が、ループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定する工程をさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項３】
判定工程が、前記取得した値と、前記取得した値に対応する閾値とを比較し、比較結果に基づいて、前記被検者の血液検体が、ループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定する工程である請求項２に記載の方法。
【請求項４】
第２凝固時間測定試薬が、ニッケルイオン、コバルトイオン、マンガンイオン、亜鉛イオン、アルミニウムイオン、鉄イオン、ナトリウムイオン及びカリウムイオンから選択される少なくとも１つの金属を含む請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
第２凝固時間測定試薬が、凝固に必要な成分を含む第１部分試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む第２部分試薬とを備える試薬である請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
第２凝固時間測定試薬が、凝固に必要な成分を含む第１部分試薬と、金属イオンを含む第２部分試薬とを備える試薬であり、
第２測定試料が、血液検体に、前記第２部分試薬を添加して混合物を調製し、得られた前記混合物と前記第１部分試薬とを混合することにより調製される
請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
金属イオンが、ニッケルイオン、コバルトイオン、マンガンイオン、亜鉛イオン、アルミニウムイオン及び鉄イオンから選択される少なくとも１つであり、前記混合物において、添加した前記金属イオンの濃度が0.001 mmol/L以上且つ100 mmol/L以下である請求項６に記載の方法。
【請求項８】
金属イオンが、ナトリウムイオン及びカリウムイオンから選択される少なくとも１つであり、前記混合物において、添加した前記金属イオンの濃度が0.1 mmol/L以上且つ５mol/L以下である請求項６に記載の方法。
【請求項９】
第２凝固時間測定試薬が、正常血漿を含む請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
第２凝固時間測定試薬が、凝固に必要な成分を含む第１部分試薬と、正常血漿である第２部分試薬とを備える試薬であり、
第２測定試料が、血液検体と前記第２部分試薬とを体積比１：１で混合し、得られた混合物と前記第１部分試薬とを混合することにより調製される
請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記値を取得する工程において、正常血漿の凝固時間を用いない請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
第１凝固時間及び第２凝固時間に基づく値が、第１凝固時間及び第２凝固時間の積に関する値、及び第１凝固時間及び第２凝固時間の積に関する値の少なくとも１つの値である請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
第１凝固時間及び第２凝固時間の積に関する値が、下記の式(１)により算出される請求項１２に記載の方法。
(第１凝固時間及び第２凝固時間の積に関する値)＝(第１凝固時間)×(第２凝固時間)  ・・・式(１)
【請求項１４】
第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値が、下記の式(２)により算出される請求項１２に記載の方法。
(第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値)＝(第１凝固時間)／(第２凝固時間)  ・・・式(２)、又は
(第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値)＝(第２凝固時間)／(第１凝固時間)  ・・・式(３)
【請求項１５】
前記第１及び第２凝固時間測定試薬が、リン脂質を含む凝固時間測定試薬である請求項１〜１４のいずれか１項に記載の血液検体の判定方法。
【請求項１６】
前記血液検体と、第３凝固時間測定試薬とを混合して第３測定試料を調製し、第３凝固時間を測定する工程と、
前記血液検体と、第４凝固時間測定試薬とを混合して第４測定試料を調製し、第４凝固時間を測定する工程と、
前記第３凝固時間及び前記第４凝固時間に基づく値を取得する工程と
をさらに含み、
前記第３凝固時間測定試薬が、前記第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬であり、
前記第４凝固時間測定試薬が、金属イオン及び／又は正常血漿を含み且つ前記第２凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬である、
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
判定工程が、前記第１凝固時間及び前記第２凝固時間の比に関する値と、前記第３凝固時間及び前記第４凝固時間の比に関する値とに基づいて、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接経口抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定する工程である請求項２又は３を引用する１６に記載の方法。
【請求項１８】
判定工程が、下記の式(４)又は(５)により算出される指標の値と、前記指標に対応する閾値とを比較し、比較結果に基づいて、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか、又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定する工程である請求項１７に記載の方法。
(指標)＝[(第２凝固時間)／(第１凝固時間)]×[(第４凝固時間)／(第３凝固時間)]  ・・・式(４)、又は
(指標)＝[(第１凝固時間)／(第２凝固時間)]×[(第３凝固時間)／(第４凝固時間)]  ・・・式(５)
【請求項１９】
判定工程が、前記第１凝固時間及び前記第２凝固時間の積に関する値と、前記第３凝固時間及び前記第４凝固時間の積に関する値とに基づいて、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか、又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定する工程である請求項２又は３を引用する１６に記載の方法。
【請求項２０】
判定工程が、下記の式(６)により算出される指標の値と、前記指標に対応する閾値とを比較し、比較結果に基づいて、前記血液検体が、ループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか、又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定する工程である請求項１８に記載の方法。
(指標)＝[(第１凝固時間)×(第２凝固時間)]×[(第３凝固時間)×(第４凝固時間)]  ・・・式(６)
【請求項２１】
第１凝固時間及び第３凝固時間の比の値を下記の式(７)により算出する工程、又は第２凝固時間及び第４凝固時間の比の値を下記の式(８)により算出する工程をさらに含み、
算出した第１凝固時間及び第３凝固時間の比の値が1.3以上であるか、又は算出した第２凝固時間及び第４凝固時間の比の値が1.5以上であるとき、血液検体の判定を行う請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
(第１凝固時間及び第３凝固時間の比の値)＝(第１凝固時間)／(第３凝固時間)  ・・・式(７)、又は
(第２凝固時間及び第４凝固時間の比の値)＝(第２凝固時間)／(第４凝固時間)  ・・・式(８)
【請求項２２】
被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、第１凝固時間を測定する工程と、
前記血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製し、第２凝固時間を測定する工程と、
前記血液検体と、第３凝固時間測定試薬とを混合して第３測定試料を調製し、第３凝固時間を測定する工程と、
前記血液検体と、第４凝固時間測定試薬とを混合して第４測定試料を調製し、第４凝固時間を測定する工程と、
下記の式(４)又は(５)により算出される指標の値を取得する工程と
を含み、
前記第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含み、
前記第３凝固時間測定試薬が、前記第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含み、
前記第４凝固時間測定試薬が、金属イオン及び／又は正常血漿を含み且つ前記第２凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む、
血液検体の判定方法。
(指標)＝[(第２凝固時間)／(第１凝固時間)]×[(第４凝固時間)／(第３凝固時間)]  ・・・式(４)、又は
(指標)＝[(第１凝固時間)／(第２凝固時間)]×[(第３凝固時間)／(第４凝固時間)]  ・・・式(５)
【請求項２３】
第２凝固時間測定試薬が、凝固に必要な成分及びリン脂質を含む第１部分試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む第２部分試薬とを備える試薬であり、
第４凝固時間測定試薬が、凝固に必要な成分を含み且つ前記第２凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む第１部分試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む第２部分試薬とを備える試薬である
請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、第１凝固時間を測定する工程と、
前記血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製し、第２凝固時間を測定する工程と、
前記第１凝固時間及び前記第２凝固時間に基づく値を取得する工程と
を含み、
前記第１凝固時間測定試薬は、リン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含み、
前記第２凝固時間測定試薬は、前記第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含み、
前記値は、前記被検者の血液検体がループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定するために用いられる、
血液検体の判定方法。
【請求項２５】
測定試料を調製する測定試料調製部と、
調製された前記測定試料に光を照射し、前記測定試料から光量に関する光学的情報を取得する光学的情報取得部と、
制御部と、
入力部と、
表示部と
を備え、
前記測定試料調製部は、被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、且つ前記血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製し、
前記光学的情報取得部は、前記第１測定試料から第１光学的情報を取得し、且つ前記第２測定試料から第２光学的情報を取得し、
前記制御部は、
前記第１光学的情報に基づいて第１凝固時間を取得し、且つ前記第２光学的情報に基づいて第２凝固時間を取得し、
前記第１凝固時間及び前記第２凝固時間に基づく値を取得し、
前記第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含む凝固時間測定試薬であり、
前記値は、前記被検者の血液検体がループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定するために用いられる、
血液検体分析装置。
【請求項２６】
前記測定試料調製部が、前記血液検体と、第３凝固時間測定試薬とを混合して第３測定試料を調製し、且つ前記血液検体と、第４凝固時間測定試薬とを混合して第４測定試料を調製し、
前記光学的情報取得部が、前記第３測定試料から第３光学的情報を取得し、且つ前記第４測定試料から第４光学的情報を取得し、
前記制御部が、
前記第３光学的情報に基づいて第３凝固時間を取得し、且つ前記第４光学的情報に基づいて第４凝固時間を取得し、
前記第３凝固時間及び前記第４凝固時間に基づく値を取得し、
前記第３凝固時間測定試薬が、前記第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬であり、
前記第４凝固時間測定試薬が、金属イオン及び／又は正常血漿を含み且つ前記第２凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬である、
請求項２５に記載の血液検体分析装置。
【請求項２７】
前記制御部が、取得した値に基づいて、前記被検者の血液検体が、ループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかについての参考情報を出力する請求項２５又は２６に記載の血液検体分析装置。
【請求項２８】
測定試料を調製する測定試料調製部と、
調製された前記測定試料に光を照射し、前記測定試料から光量に関する光学的情報を取得する光学的情報取得部と、
制御部と、
入力部と、
表示部と
を備え、
前記測定試料調製部は、
被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、
前記血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製し、
前記血液検体と、第３凝固時間測定試薬とを混合して第３測定試料を調製し、且つ
前記血液検体と、第４凝固時間測定試薬とを混合して第４測定試料を調製し、
前記光学的情報取得部は、前記第１測定試料から第１光学的情報を取得し、前記第２測定試料から第２光学的情報を取得し、前記第３測定試料から第３光学的情報を取得し、且つ前記第４測定試料から第４光学的情報を取得し、
前記制御部は、
前記第１光学的情報に基づいて第１凝固時間を取得し、前記第２光学的情報に基づいて第２凝固時間を取得し、前記第３光学的情報に基づいて第３凝固時間を取得し、且つ前記第４光学的情報に基づいて第４凝固時間を取得し、
下記の式(４)又は(５)により算出される指標の値を取得し、
前記第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含む凝固時間測定試薬であり、
前記第３凝固時間測定試薬が、前記第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬であり、
前記第４凝固時間測定試薬が、金属イオン及び／又は正常血漿を含み且つ前記第２凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬である、
血液検体分析装置。
(指標)＝[(第２凝固時間)／(第１凝固時間)]×[(第４凝固時間)／(第３凝固時間)]  ・・・式(４)、又は
(指標)＝[(第１凝固時間)／(第２凝固時間)]×[(第３凝固時間)／(第４凝固時間)]  ・・・式(５)
【請求項２９】
前記制御部が、少なくとも指標の値を出力する請求項２８に記載の血液検体分析装置。
【請求項３０】
前記制御部が、取得した指標の値に基づいて、前記被検者の血液検体が、ループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかについての参考情報を出力する請求項２８又は２９に記載の血液検体分析装置。
【請求項３１】
測定試料を調製する測定試料調製部と、
調製された前記測定試料に光を照射し、前記測定試料から光量に関する光学的情報を取得する光学的情報取得部と、
制御部と、
入力部と、
表示部と
を備え、
前記測定試料調製部は、被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、且つ前記血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製し、
前記光学的情報取得部は、前記第１測定試料から第１光学的情報を取得し、且つ前記第２測定試料から第２光学的情報を取得し、
前記制御部は、
前記第１光学的情報に基づいて第１凝固時間を取得し、且つ前記第２光学的情報に基づいて第２凝固時間を取得し、
前記第１凝固時間及び前記第２凝固時間に基づく値を取得し、
前記第１凝固時間測定試薬は、リン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含む凝固時間測定試薬であり、
前記第２凝固時間測定試薬は、前記第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含む凝固時間測定試薬であり、
前記値は、前記被検者の血液検体がループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定するために用いられる、
血液検体分析装置。
【請求項３２】
コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されているコンピュータプログラムであって、下記のステップ：
被検者の血液検体及び第１凝固時間測定試薬を含む第１測定試料から第１光学的情報を取得し、前記血液検体、第２凝固時間測定試薬を含む第２測定試料から第２光学的情報を取得するステップと、
前記第１光学的情報に基づいて第１凝固時間を取得し、且つ前記第２光学的情報に基づいて第２凝固時間を取得するステップと、
前記第１凝固時間及び前記第２凝固時間に基づく値を取得するステップと
を前記コンピュータに実行させ、
前記第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含む凝固時間測定試薬であり、
前記値は、前記被検者の血液検体がループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定するために用いられる、
血液検体の分析のためのコンピュータプログラム。
【請求項３３】
被検者の血液検体及び第３凝固時間測定試薬を含む第３測定試料から第３光学的情報を取得し、且つ前記血液検体、第４凝固時間測定試薬を含む第４測定試料から第４光学的情報を取得するステップと、
前記第３光学的情報に基づいて第３凝固時間を取得し、且つ前記第４光学的情報に基づいて第４凝固時間を取得するステップと、
前記第３凝固時間及び前記第４凝固時間に基づく値を取得するステップと
をさらに前記コンピュータに実行させ、
前記第３凝固時間測定試薬が、前記第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬であり、
前記第４凝固時間測定試薬が、金属イオン及び／又は正常血漿を含み且つ前記第２凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬である、請求項３２に記載のコンピュータプログラム。
【請求項３４】
取得した値に基づいて、前記被検者の血液検体が、ループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定するステップをさらに前記コンピュータに実行させる請求項３２又は３３に記載のコンピュータプログラム。
【請求項３５】
コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されているコンピュータプログラムであって、下記のステップ：
被検者の血液検体及び第１凝固時間測定試薬を含む第１測定試料から第１光学的情報を取得し、前記血液検体及び第２凝固時間測定試薬を含む第２測定試料から第２光学的情報を取得し、前記血液検体及び第３凝固時間測定試薬を含む第３測定試料から第３光学的情報を取得し、且つ前記血液検体及び第４凝固時間測定試薬を含む第４測定試料から第４光学的情報を取得するステップと、
前記第１光学的情報に基づいて第１凝固時間を取得し、前記第２光学的情報に基づいて第２凝固時間を取得し、前記第３光学的情報に基づいて第３凝固時間を取得し、且つ前記第４光学的情報に基づいて第４凝固時間を取得するステップと、
下記の式(４)又は(５)により算出される指標の値を取得するステップと
を前記コンピュータに実行させ、
前記第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含む凝固時間測定試薬であり、
前記第３凝固時間測定試薬が、前記第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬であり、
前記第４凝固時間測定試薬が、金属イオン及び／又は正常血漿を含み且つ前記第２凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬である、
血液検体の分析のためのコンピュータプログラム。
(指標)＝[(第２凝固時間)／(第１凝固時間)]×[(第４凝固時間)／(第３凝固時間)]  ・・・式(４)、又は
(指標)＝[(第１凝固時間)／(第２凝固時間)]×[(第３凝固時間)／(第４凝固時間)]  ・・・式(５)
【請求項３６】
取得した指標の値に基づいて、前記被検者の血液検体が、ループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定するステップをさらに前記コンピュータに実行させる請求項３５に記載のコンピュータプログラム。
【請求項３７】
コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されているコンピュータプログラムであって、下記のステップ：
被検者の血液検体及び第１凝固時間測定試薬を含む第１測定試料から第１光学的情報を取得し、前記血液検体、第２凝固時間測定試薬を含む第２測定試料から第２光学的情報を取得するステップと、
前記第１光学的情報に基づいて第１凝固時間を取得し、且つ前記第２光学的情報に基づいて第２凝固時間を取得するステップと、
前記第１凝固時間及び前記第２凝固時間に基づく値を取得するステップと
を前記コンピュータに実行させ、
前記第１凝固時間測定試薬は、リン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含む凝固時間測定試薬であり、
前記第２凝固時間測定試薬は、前記第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含む凝固時間測定試薬であり、
前記値は、前記被検者の血液検体がループスアンチコアグラントを含む血液検体であるか又は直接抗凝固薬を含む血液検体であるかを判定するために用いられる、
血液検体の分析のためのコンピュータプログラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液検体の判定方法に関する。また、本発明は、血液検体の分析のための装置及びコンピュータプログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
ループスアンチコアグラント(LA)は、リン脂質依存性の凝固反応を阻害する自己抗体であり、血栓症や妊娠合併症を呈する抗リン脂質抗体症候群の患者において検出される。LAは、リン脂質依存性の凝固反応に必要なリン脂質を阻害するので、LA陽性患者の血液では凝固時間が延長する。一方、ワーファリンなどの抗凝固薬を投与された患者の血液でも凝固時間が延長する。したがって、LA陽性患者の血液検体を正確に検出するためには、LAを含む血液検体と、抗凝固薬を含む血液検体とを判別する必要がある。しかし、通常の凝固検査では、両者を区別することは難しい。
【０００３】
被検者にLA陽性の疑いがある場合、LAの検査として混合試験が行われる。混合試験では、被検者の血漿と正常血漿とを混合し、得られた混合血漿の凝固時間を測定する。被検者がLA陽性患者の場合、混合試験を行っても凝固時間の延長は改善されない。さらに、被検者の血漿、正常血漿及び混合血漿の凝固時間から、ICA(Index of Circulating Anticoagulant)やLR (Lupus Ratio)値などの、混合試験の結果を定量的に評価するための指標を算出し、この指標に基づいてLAを検出する方法も知られている。また、LAの確認試験では、凝固時間の延長がリン脂質に依存するかを確認する。具体的には、リン脂質の濃度が異なる２種類の凝固時間測定試薬を用いて凝固時間を測定し、各試薬から得られた凝固時間の比に基づいて、リン脂質濃度に依存的な凝固時間の延長を確認して、LAを含む検体を検出する。例えば、特許文献１には、混合試験とリン脂質依存性の確認試験とを組み合わせて、LAを含む検体と、ワーファリンを含む検体とを判別できたことが記載されている。具体的には、リン脂質の濃度が異なる２種類の凝固時間測定試薬を用いて、混合血漿及び正常血漿の凝固時間を測定し、これらの凝固時間から算出したLR値により、LA陽性患者の血漿と、ワーファリンを投与された患者の血漿とを判別している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許出願第2004/091952号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従来、抗凝固薬として、ワーファリンがよく用いられている。ワーファリンは、ビタミンＫ拮抗薬とも呼ばれ、凝固因子の生成に必要なビタミンＫを阻害することにより、肝臓での凝固因子の生成を抑えて抗凝固作用を示す。近年では、ワーファリンとは異なる作用機序を有する新規な抗凝固薬も用いられる。そのような抗凝固薬は、凝固因子と結合して、該凝固因子が媒介する凝固反応を直接阻害する作用を示す。以下、凝固反応を直接阻害する作用を有する抗凝固薬を「直接抗凝固薬」又は「DAC」ともいう。DACを投与された患者の血液でも凝固時間が延長する。もし、DACを投与された被検者の血液検体が、誤ってLAを含む検体であると判定された場合、該被検者に過剰な抗凝固療法がなされるおそれがある。過剰な抗凝固療法は、出血リスクを増大する。そのため、LAを含む血液検体と、DACを含む血液検体との判別は臨床的に重要である。しかし、従来法では、そのような判別を行うことは困難であった。よって、LAを含む血液検体と、DACを含む血液検体とを判別を可能にする手段の開発が望まれる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
よって、本発明の第１の態様は、血液検体の判定方法を提供する。この方法は、被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、第１凝固時間を測定する工程と、該血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製し、第２凝固時間を測定する工程と、第１凝固時間及び第２凝固時間に基づく値を取得する工程とを含む。この方法において、第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含む。上記の値は、被検者の血液検体がLAを含む血液検体であるか又はDACを含む血液検体であるかを判定するために用いられる。
【０００７】
本発明の第２の態様は、リン脂質濃度の異なる複数種類の凝固時間測定試薬を用いる血液検体の判定方法を提供する。この方法は、被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、第１凝固時間を測定する工程と、該血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製し、第２凝固時間を測定する工程と、該血液検体と、第３凝固時間測定試薬とを混合して第３測定試料を調製し、第３凝固時間を測定する工程と、該血液検体と、第４凝固時間測定試薬とを混合して第４測定試料を調製し、第４凝固時間を測定する工程と、後述の式(４)又は(５)により算出される指標の値を取得する工程とを含む。この方法において、第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含む。第３凝固時間測定試薬は、第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む。第４凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含み且つ第２凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む。
【０００８】
本発明の第３の態様は、リン脂質濃度が異なり、且つ金属イオン及び／又は正常血漿を含む２種類の凝固時間測定試薬を用いる血液検体の判定方法を提供する。この方法は、被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、第１凝固時間を測定する工程と、該血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製し、第２凝固時間を測定する工程と、第１凝固時間及び第２凝固時間に基づく値を取得する工程とを含む。この方法において、第１凝固時間測定試薬は、リン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含む。第２凝固時間測定試薬は、第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含む。上記の値は、被検者の血液検体がLAを含む血液検体であるか又はDACを含む血液検体であるかを判定するために用いられる。
【０００９】
本発明の第４の態様は、血液検体分析装置を提供する。この装置は、測定試料を調製する測定試料調製部と、調製された測定試料に光を照射し、測定試料から光量に関する光学的情報を取得する光学的情報取得部と、制御部と、入力部と、表示部とを備える。この装置の測定試料調製部は、被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、且つ該血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製する。光学的情報取得部は、第１測定試料から第１光学的情報を取得し、且つ第２測定試料から第２光学的情報を取得する。制御部は、第１光学的情報に基づいて第１凝固時間を取得し、且つ第２光学的情報に基づいて第２凝固時間を取得し、第１凝固時間及び第２凝固時間に基づく値を取得する。ここで、第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含む凝固時間測定試薬である。上記の値は、被検者の血液検体がLAを含む血液検体であるか又はDACを含む血液検体であるかを判定するために用いられる。
【００１０】
本発明の第５の態様は、リン脂質濃度の異なる複数種類の凝固時間測定試薬を用いる血液検体分析装置を提供する。この装置は、測定試料を調製する測定試料調製部と、調製された測定試料に光を照射し、測定試料から光量に関する光学的情報を取得する光学的情報取得部と、制御部と、入力部と、表示部とを備える。この装置の測定試料調製部は、被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、該血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製し、該血液検体と、第３凝固時間測定試薬とを混合して第３測定試料を調製し、且つ該血液検体と、第４凝固時間測定試薬とを混合して第４測定試料を調製する。光学的情報取得部は、第１測定試料から第１光学的情報を取得し、第２測定試料から第２光学的情報を取得し、第３測定試料から第３光学的情報を取得し、且つ第４測定試料から第４光学的情報を取得する。制御部は、第１光学的情報に基づいて第１凝固時間を取得し、第２光学的情報に基づいて第２凝固時間を取得し、第３光学的情報に基づいて第３凝固時間を取得し、且つ第４光学的情報に基づいて第４凝固時間を取得し、後述の式(４)又は(５)により算出される指標の値を取得する。ここで、第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含む凝固時間測定試薬である。第３凝固時間測定試薬は、第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬である。第４凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含み且つ第２凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬である。
【００１１】
本発明の第６の態様は、リン脂質濃度が異なり、且つ金属イオン及び／又は正常血漿を含む２種類の凝固時間測定試薬を用いる血液検体分析装置を提供する。この装置は、測定試料を調製する測定試料調製部と、調製された測定試料に光を照射し、測定試料から光量に関する光学的情報を取得する光学的情報取得部と、制御部と、入力部と、表示部とを備える。この装置の測定試料調製部は、被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、且つ該血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製する。光学的情報取得部は、第１測定試料から第１光学的情報を取得し、且つ第２測定試料から第２光学的情報を取得する。制御部は、第１光学的情報に基づいて第１凝固時間を取得し、且つ第２光学的情報に基づいて第２凝固時間を取得し、第１凝固時間及び第２凝固時間に基づく値を取得する。ここで、第１凝固時間測定試薬は、リン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含む凝固時間測定試薬である。第２凝固時間測定試薬は、第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含む凝固時間測定試薬である。上記の値は、被検者の血液検体がLAを含む血液検体であるか又はDACを含む血液検体であるかを判定するために用いられる。
【００１２】
本発明の第７の態様は、コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されている、血液検体の分析のためのコンピュータプログラムを提供する。このコンピュータプログラムは、被検者の血液検体及び第１凝固時間測定試薬を含む第１測定試料から第１光学的情報を取得し、該血液検体、第２凝固時間測定試薬を含む第２測定試料から第２光学的情報を取得するステップと、第１光学的情報に基づいて第１凝固時間を取得し、且つ第２光学的情報に基づいて第２凝固時間を取得するステップと、第１凝固時間及び第２凝固時間に基づく値を取得するステップとをコンピュータに実行させる。ここで、第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含む凝固時間測定試薬である。上記の値は、被検者の血液検体がLAを含む血液検体であるか又はDACを含む血液検体であるかを判定するために用いられる。
【００１３】
本発明の第８の態様は、コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されている、血液検体の分析のためのコンピュータプログラムを提供する。このコンピュータプログラムは、被検者の血液検体及び第１凝固時間測定試薬を含む第１測定試料から第１光学的情報を取得し、該血液検体及び第２凝固時間測定試薬を含む第２測定試料から第２光学的情報を取得し、該血液検体及び第３凝固時間測定試薬を含む第３測定試料から第３光学的情報を取得し、且つ該血液検体及び第４凝固時間測定試薬を含む第４測定試料から第４光学的情報を取得するステップと、第１光学的情報に基づいて第１凝固時間を取得し、第２光学的情報に基づいて第２凝固時間を取得し、第３光学的情報に基づいて第３凝固時間を取得し、且つ第４光学的情報に基づいて第４凝固時間を取得するステップと、後述の式(４)又は(５)により算出される指標の値を取得するステップとをコンピュータに実行させる。ここで、第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含む凝固時間測定試薬である。第３凝固時間測定試薬は、第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬である。第４凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含み且つ第２凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬である。
【００１４】
本発明の第９の態様は、コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されている、血液検体の分析のためのコンピュータプログラムを提供する。このコンピュータプログラムは、被検者の血液検体及び第１凝固時間測定試薬を含む第１測定試料から第１光学的情報を取得し、該血液検体及び第２凝固時間測定試薬を含む第２測定試料から第２光学的情報を取得するステップと、第１光学的情報に基づいて第１凝固時間を取得し、且つ第２光学的情報に基づいて第２凝固時間を取得するステップと、第１凝固時間及び第２凝固時間に基づく値を取得するステップとをコンピュータに実行させる。ここで、第１凝固時間測定試薬は、リン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含む凝固時間測定試薬である。第２凝固時間測定試薬は、第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含む凝固時間測定試薬である。上記の値は、被検者の血液検体がLAを含む血液検体であるか又はDACを含む血液検体であるかを判定するために用いられる。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、被検者の血液検体が、LAを含む血液検体(以下、「LA検体」ともいう)であるか又はDACを含む血液検体(以下、「DAC検体」ともいう)であるかについて、定量的に判定することを可能にする。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】血液検体分析装置の外観の構成を示す斜視図である。
【図２】血液検体分析装置の測定部の内部を上側から見た場合の平面図である。
【図３】血液検体分析装置の測定部の構成を示す図である。
【図４】測定装置が備えるランプユニットの構成を示す図である。
【図５Ａ】測定装置が備える検出部の構成を示す図である。
【図５Ｂ】測定装置が備える検出部の構成を示す図である。
【図５Ｃ】測定装置が備える検出部の構成を示す図である。
【図５Ｄ】測定装置が備える検出部の構成を示す図である。
【図６】血液検体分析装置の制御装置の機能構成を示す図である。
【図７】血液検体分析装置の制御装置のハードウェア構成を示す図である。
【図８Ａ】血液検体分析装置による血液検体の測定処理を示すフローチャートである。
【図８Ｂ】測定データの分析処理及び分析結果の表示処理の手順を示すフローチャートである。
【図９Ａ】血液検体分析装置による血液検体の分析処理を示すフローチャートである。
【図９Ｂ】血液検体分析装置による血液検体の分析処理を示すフローチャートである。
【図９Ｃ】血液検体分析装置による血液検体の分析処理を示すフローチャートである。
【図１０】血液検体分析装置による測定結果を表示する画面の一例を示す図である。
【図１１Ａ】LA検体及びDAC検体における比１(第１凝固時間／第３凝固時間)の値の分布を示す図である。
【図１１Ｂ】調製用試薬として正常血漿を用いた場合のLA検体及びDAC検体における比３(第１凝固時間／第２凝固時間)の値の分布を示す図である。
【図１１Ｃ】調製用試薬として正常血漿を用いた場合のLA検体及びDAC検体における比４(第３凝固時間／第４凝固時間)の値の分布を示す図である。
【図１１Ｄ】調製用試薬として正常血漿を用いた場合のLA検体及びDAC検体における積１(第１凝固時間×第２凝固時間)の値の分布を示す図である。
【図１１Ｅ】調製用試薬として正常血漿を用いた場合のLA検体及びDAC検体における積２(第３凝固時間×第４凝固時間)の値の分布を示す図である。
【図１１Ｆ】調製用試薬として正常血漿を用いた場合のLA検体及びDAC検体における指標２((第２凝固時間／第１凝固時間)×(第４凝固時間／第３凝固時間))の値の分布を示す図である。
【図１２Ａ】調製用試薬としてニッケルイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比２の値の分布を示す図である。
【図１２Ｂ】調製用試薬としてニッケルイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比３の値の分布を示す図である。
【図１２Ｃ】調製用試薬としてニッケルイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積１の値の分布を示す図である。
【図１２Ｄ】調製用試薬としてニッケルイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積２の値の分布を示す図である。
【図１２Ｅ】調製用試薬としてニッケルイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における指標２の値の分布を示す図である。
【図１３Ａ】調製用試薬としてコバルトイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比２の値の分布を示す図である。
【図１３Ｂ】調製用試薬としてコバルトイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比３の値の分布を示す図である。
【図１３Ｃ】調製用試薬としてコバルトイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比４の値の分布を示す図である。
【図１３Ｄ】調製用試薬としてコバルトイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積１の値の分布を示す図である。
【図１３Ｅ】調製用試薬としてコバルトイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積２の値の分布を示す図である。
【図１３Ｆ】調製用試薬としてコバルトイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における指標２の値の分布を示す図である。
【図１４Ａ】調製用試薬としてマンガンイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比３の値の分布を示す図である。
【図１４Ｂ】調製用試薬としてマンガンイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比４の値の分布を示す図である。
【図１４Ｃ】調製用試薬としてマンガンイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積１の値の分布を示す図である。
【図１４Ｄ】調製用試薬としてマンガンイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積２の値の分布を示す図である。
【図１４Ｅ】調製用試薬としてマンガンイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における指標２の値の分布を示す図である。
【図１５Ａ】調製用試薬として亜鉛イオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比２の値の分布を示す図である。
【図１５Ｂ】調製用試薬として亜鉛イオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比３の値の分布を示す図である。
【図１５Ｃ】調製用試薬として亜鉛イオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比４の値の分布を示す図である。
【図１５Ｄ】調製用試薬として亜鉛イオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積１の値の分布を示す図である。
【図１５Ｅ】調製用試薬として亜鉛イオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積２の値の分布を示す図である。
【図１５Ｆ】調製用試薬として亜鉛イオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における指標２の値の分布を示す図である。
【図１６Ａ】調製用試薬としてアルミニウムイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比２の値の分布を示す図である。
【図１６Ｂ】調製用試薬としてアルミニウムイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比３の値の分布を示す図である。
【図１６Ｃ】調製用試薬としてアルミニウムイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比４の値の分布を示す図である。
【図１６Ｄ】調製用試薬としてアルミニウムイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積１の値の分布を示す図である。
【図１６Ｅ】調製用試薬としてアルミニウムイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積２の値の分布を示す図である。
【図１６Ｆ】調製用試薬としてアルミニウムイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における指標２の値の分布を示す図である。
【図１７Ａ】調製用試薬として鉄イオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比２の値の分布を示す図である。
【図１７Ｂ】調製用試薬として鉄イオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比３の値の分布を示す図である。
【図１７Ｃ】調製用試薬として鉄イオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比４の値の分布を示す図である。
【図１７Ｄ】調製用試薬として鉄イオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積１の値の分布を示す図である。
【図１７Ｅ】調製用試薬として鉄イオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積２の値の分布を示す図である。
【図１７Ｆ】調製用試薬として鉄イオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における指標２の値の分布を示す図である。
【図１８Ａ】調製用試薬としてナトリウムイオン(NaCl)を用いた場合のLA検体及びDAC検体における比２の値の分布を示す図である。
【図１８Ｂ】調製用試薬としてナトリウムイオン(NaCl)を用いた場合のLA検体及びDAC検体における比３の値の分布を示す図である。
【図１８Ｃ】調製用試薬としてナトリウムイオン(NaCl)を用いた場合のLA検体及びDAC検体における比４の値の分布を示す図である。
【図１８Ｄ】調製用試薬としてナトリウムイオン(NaCl)を用いた場合のLA検体及びDAC検体における積１の値の分布を示す図である。
【図１８Ｅ】調製用試薬としてナトリウムイオン(NaCl)を用いた場合のLA検体及びDAC検体における積２の値の分布を示す図である。
【図１８Ｆ】調製用試薬としてナトリウムイオン(NaCl)を用いた場合のLA検体及びDAC検体における指標２の値の分布を示す図である。
【図１９Ａ】調製用試薬としてナトリウムイオン(Na2SO4)を用いた場合のLA検体及びDAC検体における比２の値の分布を示す図である。
【図１９Ｂ】調製用試薬としてナトリウムイオン(Na2SO4)を用いた場合のLA検体及びDAC検体における比３の値の分布を示す図である。
【図１９Ｃ】調製用試薬としてナトリウムイオン(Na2SO4)を用いた場合のLA検体及びDAC検体における比４の値の分布を示す図である。
【図１９Ｄ】調製用試薬としてナトリウムイオン(Na2SO4)を用いた場合のLA検体及びDAC検体における積１の値の分布を示す図である。
【図１９Ｅ】調製用試薬としてナトリウムイオン(Na2SO4)を用いた場合のLA検体及びDAC検体における積２の値の分布を示す図である。
【図１９Ｆ】調製用試薬としてナトリウムイオン(Na2SO4)を用いた場合のLA検体及びDAC検体における指標２の値の分布を示す図である。
【図２０Ａ】調製用試薬としてカリウムイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比３の値の分布を示す図である。
【図２０Ｂ】調製用試薬としてカリウムイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における比４の値の分布を示す図である。
【図２０Ｃ】調製用試薬としてカリウムイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積１の値の分布を示す図である。
【図２０Ｄ】調製用試薬としてカリウムイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における積２の値の分布を示す図である。
【図２０Ｅ】調製用試薬としてカリウムイオンを用いた場合のLA検体及びDAC検体における指標２の値の分布を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
[１．血液検体の判定方法]
本実施形態の血液検体の判定方法(以下、単に「方法」ともいう)は、LA検体とDAC検体とを判別する方法である。上述のように、直接抗凝固薬(DAC)とは、凝固因子と結合して、該凝固因子が媒介する凝固反応を直接阻害する薬剤をいう。経口投与可能な直接抗凝固薬は、DOAC(直接経口抗凝固薬)と呼ばれている。DACとしては、第Xa因子阻害薬及びトロンビン阻害薬が当該技術において公知である。第Xa因子阻害薬は、第Xa因子と直接結合でき、プロトロンビンからトロンビンへの変換を阻害する。第Xa因子阻害薬としては、例えば、リバーロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ベトリキサバン、オタミキサバン、ラザキサバン、ダレキサバン、レタキサバン、エリバキサバン、アンチスタシンなどが挙げられる。トロンビン阻害薬は、トロンビンと直接結合でき、トロンビンが媒介するフィブリノゲン活性化を阻害する。トロンビン阻害薬としては、例えば、ダビガトラン、ビバリルジン、ヒルジン、レピルジン、デシルジン、アルガトロバン、メラガトラン、キシメラガトランなどが挙げられる。
【００１８】
本実施形態の方法では、被検者の血液検体と、第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、第１凝固時間を測定する。第１凝固時間は、一般的な凝固検査で測定される、被検者の血液検体の凝固時間に相当する。
【００１９】
被検者の血液検体は、被検者から採取した血液(全血)又は該血液から調製した血漿であればよい。それらの中でも血漿が好ましく、血小板除去血漿がより好ましい。血小板は、遠心分離やフィルター分離など公知の手法により除去できる。本実施形態では、被検者の血液検体は、LAを含む疑いのある血液検体が好ましい。そのような血液検体としては、例えば、通常の凝固検査により凝固時間の延長が認められた血液検体、血栓症患者又は血栓症を有する疑いのある者から得た血液検体などが挙げられる。
【００２０】
第１凝固時間測定試薬は、当該技術において公知の測定原理に基づく凝固時間を測定するための試薬であればよい。例えば、希釈ラッセル蛇毒凝固時間(dRVVT)、活性化部分トロンボプラスチン時間(APTT)、希釈活性化部分トロンボプラスチン時間(dAPTT)、カオリン凝固時間(KCT)、プロトロンビン時間(PT)、希釈プロトロンビン時間(dPT)、トロンビン時間(TT)及び希釈トロンビン時間(dTT)の少なくとも１種を測定するための試薬が挙げられる。それらの中でも、dRVVT測定試薬、APTT測定試薬及びdAPTT測定試薬が好ましい。また、市販の凝固時間測定試薬及び試薬キットを用いてもよい。
【００２１】
第１凝固時間測定試薬は、測定する凝固時間の種類に応じて、凝固に必要な成分を含む。本明細書において、凝固に必要な成分とは、インビトロで血液凝固を起こすために必要な成分をいう。そのような成分は当該技術において公知であり、例えば、活性化剤、蛇毒、組織因子などが挙げられる。活性化剤としては、接触因子活性化剤が好ましく、例えば、エラグ酸、カオリン、セライト、シリカなどが挙げられる。エラグ酸は、金属イオンとキレートを形成した状態にあるエラグ酸であってもよい。蛇毒としては、ラッセル蛇毒、テキスタリン蛇毒、エカリン蛇毒などが挙げられる。組織因子としては、ウサギ脳又はヒト胎盤由来の組織因子、組換え型組織因子などが挙げられる。
【００２２】
第１凝固時間測定試薬は、血液凝固を促進させるために、リン脂質を含んでもよい。リン脂質としては、ホスファチジルエタノールアミン(PE)、ホスファチジルコリン(PC)及びホスファチジルセリン(PS)が挙げられる。第１凝固時間測定試薬は、PE、PC及びPSから選択される１種、好ましくは２種、より好ましくは全種のリン脂質を含む。リン脂質は、天然由来リン脂質であってもよいし、合成リン脂質であってもよい。LAに対する感度を向上させる観点からは、合成リン脂質又は純度99％以上に精製された天然由来リン脂質が好ましい。PE、PC及びPSの脂肪酸側鎖は特に限定されないが、例えば、パルミチン酸、オレイン酸、ステアリン酸などが挙げられる。それらの中でもオレイン酸が好ましい。
【００２３】
第１凝固時間測定試薬におけるリン脂質の濃度は、測定する凝固時間の種類に応じて、適宜決定できる。例えば、第１凝固時間測定試薬がdRVVT又はdAPTT測定試薬であり、血液検体と該試薬とを体積比１：１で混合する場合、該試薬におけるリン脂質の濃度は、通常20〜150μg/mLであり、好ましくは30〜70μg/mLである。第１凝固時間測定試薬がAPTT測定試薬であり、血液検体と該試薬とを体積比１：１で混合する場合、該試薬におけるリン脂質の濃度は、通常150〜2000μg/mLであり、好ましくは150〜600μg/mLである。血液検体と第１凝固時間測定試薬との混合割合が１：１でない場合は、その混合割合に応じて、試薬におけるリン脂質の濃度を適宜調整すればよい。
【００２４】
第１凝固時間測定試薬が、活性化剤としてカオリンを含み、KCT測定の原理に基づく試薬である場合、該試薬はリン脂質を含まなくてもよい。KCT測定では、血液検体に含まれる内因性リン脂質が凝固反応に利用されるからである。
【００２５】
第１凝固時間測定試薬は、血液凝固を開始させるために、カルシウムイオンを含んでもよい。この場合、第１凝固時間測定試薬は、凝固に必要な成分及びカルシウムイオンを含むか、又は凝固に必要な成分、リン脂質及びカルシウムイオンを含む１液型の試薬であってもよい。あるいは、第１凝固時間測定試薬は、凝固に必要な成分を含むか、又は該成分及びリン脂質を含む第１部分試薬と、カルシウムイオンを含む第２部分試薬とから構成される２液型の試薬であってもよい。
【００２６】
カルシウムイオンは、カルシウム塩又はその水溶液により、第１凝固時間測定試薬中に供給されることが好ましい。カルシウム塩としては、例えば、塩化カルシウムなどが挙げられる。第１凝固時間測定試薬におけるカルシウムイオンの含有量としては、凝固を生じさせるのに十分な量であればよく、例えば、塩化カルシウムの濃度で表して、通常２mmol/L以上40 mmol/L以下、好ましくは４mmol/L以上30 mmol/L以下である。第１凝固時間測定試薬が２液型の試薬である場合、カルシウムイオンを含む第２部分試薬は、カルシウム塩の水溶液であることが好ましい。なお、本明細書では、「mmol/L」を「mM」とも表す。
【００２７】
第１凝固時間測定試薬が、凝固に必要な成分としてラッセル蛇毒を含み、dRVVT測定の原理に基づく試薬である場合、該試薬はカルシウムイオンを含まなくてもよい。ラッセル蛇毒は、凝固第Ｘ因子を直接活性化して血液凝固を惹起するからである。
【００２８】
第１測定試料は、血液検体と第１凝固時間測定試薬とを混合することにより調製される。血液検体と第１凝固時間測定試薬との反応条件は、該試薬の種類に応じて適宜決定できる。第１凝固時間測定試薬が２液型の試薬である場合、血液検体と第１部分試薬との反応時間は、通常１分以上10分以下であり、好ましくは３分以上５分以下である。温度条件は、通常25℃以上45℃以下であり、好ましくは35℃以上38℃以下である。測定試料の調製は、用手法で行ってもよいし、全自動測定装置で行ってもよい。そのような装置としては、例えば、CS-5100(シスメックス株式会社)、CS-2400(シスメックス株式会社)、CS-2000i(シスメックス株式会社)などが挙げられる。
【００２９】
第１凝固時間の測定は、第１測定試料の調製後、すみやかに行う。具体的には、第１凝固時間測定試薬が２液型の試薬である場合、血液検体と第１部分試薬との混合物に、カルシウムイオンを含む第２部分試薬を添加した時点から、第１凝固時間の測定を開始する。第１凝固時間測定試薬がカルシウムイオン又は蛇毒を含む１液型の試薬の場合は、該試薬を血液検体に添加した時点から第１凝固時間の測定を開始する。
【００３０】
第１凝固時間の測定は、用手法で行ってもよいし、上記の全自動凝固時間測定装置で行ってもよい。好ましくは、全自動凝固時間測定装置で測定を行う。この装置により凝固時間を測定する場合は、測定試料に光を照射して、得られた光学的情報に基づいて凝固時間が算出される。照射する光は、凝固時間の測定に通常用いられる光であればよく、例えば、波長が660 nm近傍である光が挙げられる。光源は特に限定されないが、例えば、発光ダイオード、ハロゲンランプなどが挙げられる。光源から測定試料に光を照射することにより、該測定試料から散乱光及び透過光が生じる。本実施形態では、光量に関する光学的情報として、例えば、散乱光量又は透過光量に関する情報が挙げられ、散乱光強度、透過度、吸光度などが好ましい。
【００３１】
本実施形態の方法では、被検者の血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製し、第２凝固時間を測定する。第２凝固時間は、上記の第１凝固時間と組み合わせて、LA検体とDAC検体とを判別可能なパラメータを取得するために測定される凝固時間である。第２凝固時間測定試薬は、金属イオン及び／又は正常血漿を含む。本実施形態において、金属イオン及び正常血漿は、そのような第２凝固時間を取得するために、被検者の血液検体に添加される試薬である。以下、本実施形態の凝固時間測定試薬に含まれる「金属イオン及び／又は正常血漿」を、「調製用試薬」とも呼ぶ。
【００３２】
第２凝固時間測定試薬は、当該技術において公知の測定原理に基づく凝固時間を測定するための試薬であればよい。好ましい実施形態では、第２凝固時間測定試薬は、第１凝固時間測定試薬と同じ種類の凝固時間を測定するための試薬である。第２凝固時間測定試薬は、測定する凝固時間の種類に応じて、上記の凝固に必要な成分を含む。本実施形態では、第２凝固時間測定試薬は、凝固に必要な成分と調製用試薬とを含む１液型の試薬であってもよい。また、第２凝固時間測定試薬は、凝固に必要な成分を含む第１部分試薬と、調製用試薬を含む第２部分試薬とを含む２液型の試薬であってもよい。この場合、凝固に必要な成分を含む第１部分試薬は、第１凝固時間測定試薬と同じであってもよい。
【００３３】
第２凝固時間測定試薬は、リン脂質を含んでもよい。リン脂質の詳細については、上述のとおりである。第２凝固時間測定試薬が、上記の２液型の試薬である場合、リン脂質は、第１部分試薬及び第２部分試薬のいずれに含まれてもよい。好ましい実施形態では、リン脂質は第１部分試薬に含まれる。
【００３４】
第２凝固時間測定試薬は、血液凝固を開始させるために、カルシウムイオンを含んでもよい。カルシウムイオンの詳細については、上述のとおりである。第２凝固時間測定試薬が、上記の２液型の試薬である場合、カルシウムイオンは、第１部分試薬及び第２部分試薬のいずれに含まれてもよい。好ましい実施形態では、カルシウムイオンは第１部分試薬に含まれる。あるいは、第２凝固時間測定試薬は、凝固に必要な成分と調製用試薬とを含むか、又は凝固に必要な成分と、調製用試薬と、リン脂質とを含む第１部分試薬と、カルシウムイオンを含む第３部分試薬とを含む２液型の試薬であってもよい。あるいは、第２凝固時間測定試薬は、凝固に必要な成分を含むか、又は凝固に必要な成分とリン脂質とを含む第１部分試薬と、調製用試薬を含む第２部分試薬と、カルシウムイオンを含む第３部分試薬とを含む３液型の試薬であってもよい。なお、第１凝固時間測定試薬の第２部分試薬と、第２凝固時間測定試薬の第３部分試薬は、同一の試薬であってもよい。
【００３５】
第２測定試料は、血液検体と、第２凝固時間測定試薬とを混合することにより調製される。第２凝固時間測定試薬が、例えば、凝固に必要な成分を含む第１部分試薬と、調製用試薬を含む第２部分試薬とを含む２液型の試薬である場合、血液検体とこれらの部分試薬を混合する順序は特に限定されない。好ましい実施形態では、血液検体と調製用試薬とを先に混合する。具体的には、次のとおりである。まず、血液検体に、調製用試薬を含む第２部分試薬を添加して混合物を調製する。次いで、得られた混合物と、凝固に必要な成分を含む第１部分試薬とを混合する。血液検体と、第２部分試薬(調製用試薬)との反応時間は、必須ではないが、通常180分以下であり、好ましくは30分以下である。温度条件は、通常15℃以上45℃以下であり、好ましくは15℃以上38℃以下である。上記の混合物と第１部分試薬との反応条件は、血液検体と第１凝固時間測定試薬との反応条件と同じでよい。
【００３６】
本実施形態において、調製用試薬は、LA及びDACのそれぞれに対して異なる反応性を示す。ここで、LAは、リン脂質に対する抗原抗体反応に関与し、DACは、凝固因子と基質との酵素反応に関与する。よって、調製用試薬は、酵素反応及び抗原抗体反応のそれぞれに対する反応性が異なる。そのような性質を有する調製用試薬を血液検体に添加することにより、上記の第２凝固時間を取得することができる。
【００３７】
調製用試薬としての金属イオンは、LA及びDACのそれぞれに対して異なる反応性を示す。そのような金属イオンとしては、ニッケルイオン、コバルトイオン、マンガンイオン、亜鉛イオン、アルミニウムイオン、鉄イオン、ナトリウムイオン及びカリウムイオンが挙げられる。それらの中でも、コバルトイオン、亜鉛イオン、アルミニウムイオン、ナトリウムイオン及びカリウムイオンが好ましい。本実施形態では、調製用試薬として２種以上の金属イオンを用いてもよい。
【００３８】
調製用試薬としての金属イオンは、水性溶媒に可溶な金属化合物又はその溶液により、第２測定試料中に供給されることが好ましい。そのような化合物は、血液検体中に上記の金属イオンを生じ、且つ該化合物から生じるアニオンが凝固反応を阻害しないかぎり、特に限定されない。本実施形態では、ニッケル、コバルト、マンガン、亜鉛、アルミニウム、鉄、ナトリウム及びカリウムから選択される少なくとも１つの金属と、無機酸又は有機酸との塩が好ましい。特に、上記の金属と無機酸との塩が好ましく、例えば、塩酸、硫酸、硝酸などの強酸と上記の金属との塩が挙げられる。それらの中でも、上記の金属の塩化物及び硫酸ナトリウムが特に好ましい。塩は無水物であってもよいし、水和物であってもよい。本実施形態では、調製用試薬は、上記の金属イオンを生じ得る塩を適切な溶媒で溶解した溶液、特に水溶液の形態で用いることが好ましい。
【００３９】
調製用試薬が、コバルトイオン、ニッケルイオン、マンガンイオン、亜鉛イオン、アルミニウムイオン及び鉄イオンから選択される少なくとも１つの金属イオンであるとき、血液検体と該調製用試薬との混合物において、添加した金属イオンの濃度が0.01 mmol/L以上且つ100 mmol/L以下であることが好ましい。また、調製用試薬が、ナトリウムイオン及びカリウムイオンから選択される少なくとも１つの金属イオンであるとき、血液検体と該調製用試薬との混合物において、添加した金属イオンの濃度が１mmol/L以上且つ５mol/L以下であることが好ましい。ここで、「添加した金属イオンの濃度」とは、調製用試薬により供給された金属イオンの濃度を示し、血液検体自体が有する金属イオンの濃度は含まれないことを意図する。本実施形態では、調製用試薬として、上記の金属の無機酸塩の水溶液を用いる場合、血液検体と該調製用試薬との混合物における金属イオンの濃度は、該無機酸塩の濃度で表してもよい。
【００４０】
本発明者は、正常血漿がLA及びDACのそれぞれに対して異なる反応性を示すことを見出した。調製用試薬としての正常血漿は、健常者由来の血漿であればよい。例えば、医療機関などで調製された正常プール血漿を用いてもよいし、市販の正常血漿を用いてもよい。本実施形態では、血液検体と正常血漿とを体積比１：１で混合し、得られた混合物と第１凝固時間測定試薬とを混合することにより、第２測定試料を調製することが好ましい。
【００４１】
第２凝固時間の測定は、第２測定試料の調製後、すみやかに行う。具体的には、第２凝固時間測定試薬が、調製用試薬とカルシウムイオンとを別個の部分試薬に含む２液型又は３液型の試薬である場合、血液検体と、調製用試薬を含む部分試薬との混合物に、カルシウムイオンを含む部分試薬を添加した時点から、第２凝固時間の計測を開始する。第２凝固時間測定試薬がカルシウムイオン又は蛇毒を含む１液型の試薬の場合は、該試薬を血液検体に添加した時点から第２凝固時間の計測を開始する。
【００４２】
第２凝固時間の測定は、用手法で行ってもよいし、上記の全自動凝固時間測定装置で行ってもよい。好ましくは、第２凝固時間は、第１凝固時間と同じ手段で測定する。本実施形態では、第１凝固時間及び第２凝固時間は、同時に測定してもよいし、逐次測定してもよい。第１凝固時間及び第２凝固時間を逐次測定する場合、測定の順序は特に限定されない。
【００４３】
一般に、LAの検査では、対照として、健常者由来の正常血漿の凝固時間を測定する場合がある。しかし、本発明者は、被検者の血液検体の凝固時間(第１凝固時間)と、該血液検体及び調製用試薬の混合物の凝固時間(第２凝固時間)とから取得されるパラメータに基づいて、該血液検体が、LA検体であるか又はDAC検体であるかを判定できることを見出した。すなわち、本実施形態の方法では、判定のために、正常血漿そのものの凝固時間を必要としない。
【００４４】
本実施形態の方法では、第１凝固時間及び第２凝固時間に基づく値を取得する。そのような値としては、第１凝固時間及び第２凝固時間の積に関する値、及び第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値の少なくとも１つの値が好ましい。これらの値は、LA検体とDAC検体とを判別のために用いられるパラメータである。上述のとおり、本実施形態の方法では、正常血漿の凝固時間を必要としないので、上記の積に関する値及び比に関する値を取得するときに、正常血漿の凝固時間は用いない。
【００４５】
第１凝固時間及び第２凝固時間の積に関する値には、第１凝固時間及び第２凝固時間の積の値そのものだけではなく、該積の値から算出される値も含まれる。第１凝固時間と第２凝固時間との積の値から算出される値としては、例えば、該積の値に定数を乗じた値、該積の値に定数を足した値、該積の値から定数を引いた値、該積の値の逆数、及びこれらの計算を組み合わせて得られる値などが挙げられる。本実施形態では、第１凝固時間及び第２凝固時間の積に関する値は、下記の式(１)で算出される値であることが好ましい。
【００４６】
(第１凝固時間及び第２凝固時間の積に関する値)＝(第１凝固時間)×(第２凝固時間)  ・・・式(１)
【００４７】
第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値には、第１凝固時間と第２凝固時間との比の値そのものだけではなく、該比の値から算出される値も含まれる。第１凝固時間と第２凝固時間との比の値から算出される値としては、例えば、該比の値に定数を乗じた値、該比の値に定数を足した値、該比の値から定数を引いた値、該比の値の逆数、及びこれらの計算を組み合わせて得られる値などが挙げられる。本実施形態では、第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値は、下記の式(２)又は(３)で算出される値であることが好ましい。
【００４８】
(第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値)＝(第１凝固時間)／(第２凝固時間)  ・・・式(２)、又は
(第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値)＝(第２凝固時間)／(第１凝固時間)  ・・・式(３)
【００４９】
本実施形態の方法では、取得した値に基づいて、被検者の血液検体が、LAを含む血液検体であるか、又はDACを含む血液検体であるかを判定することができる。好ましい実施形態では、取得した値と、該取得した値に対応する閾値とを比較し、比較結果に基づいて、被検者の血液検体について判定を行う。
【００５０】
例えば、式(１)で算出される積の値は、いずれの調製用試薬を用いた場合も、DAC検体の方が、LA検体よりも高くなる傾向にある。よって、式(１)で算出される積の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(１)で算出される積の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００５１】
第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値は、調製用試薬の種類によって、所定の閾値との比較結果が異なる。例えば、式(２)で算出される比の値は、調製用試薬としてニッケルイオン、コバルトイオン、マンガンイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンを用いた場合、LA検体の方が、DAC検体よりも高くなる傾向にある。よって、これらの調製用試薬を用いた場合、式(２)で算出される比の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(２)で算出される比の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００５２】
一方、調製用試薬として、正常血漿、亜鉛イオン、アルミニウムイオン又は鉄イオンを用いた場合、式(２)で算出される比の値は、DAC検体の方が、LA検体よりも高くなる傾向にある。よって、これらの調製用試薬を用いた場合、式(２)で算出される比の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(２)で算出される比の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００５３】
式(３)で算出される比は、式(２)で算出される比の逆数である。よって、式(３)で算出される比の値を用いた判定結果は、式(２)で算出される比の値を用いた判定結果と反対になる。具体的には、調製用試薬としてニッケルイオン、コバルトイオン、マンガンイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンを用いた場合、式(３)で算出される比の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(３)で算出される比の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００５４】
また、調製用試薬として、正常血漿、亜鉛イオン、アルミニウムイオン又は鉄イオンを用いた場合、式(３)で算出される比の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(３)で算出される比の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００５５】
本実施形態では、所定の閾値の数値自体は特に限定されない。例えば、LA陽性患者の血液検体及びDACを投与された患者の血液検体の凝固時間に関するデータの蓄積により、所定の閾値を経験的に設定できる。あるいは、LA陽性患者の血液検体の群と、DACを投与された患者の血液検体の群のそれぞれから、第１凝固時間及び第２凝固時間の積に関する値及び比に関する値を取得し、取得した値に基づいて、両群を明確に区別可能な値を、所定の閾値として設定できる。所定の閾値の算出には、ROC解析などの統計学的手法を用いてもよい。
【００５６】
[２．リン脂質濃度の異なる複数種類の凝固時間測定試薬を用いる血液検体の判定方法]
さらなる実施形態では、リン脂質濃度の異なる複数種類の凝固時間測定試薬を用いて、本実施形態の方法を行ってもよい。以下、この第２の態様に係る血液検体の判定方法について説明する。
【００５７】
本実施形態では、第１凝固時間測定試薬と、調製用試薬を含む第２凝固時間測定試薬と、第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む第３凝固時間測定試薬と、調製用試薬を含み且つ第２凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む第４凝固時間測定試薬を用いる。調製用試薬の詳細については、上述のとおりである。
【００５８】
第１及び第２凝固時間測定試薬は、リン脂質を含まなくてもよい。好ましい実施形態では、第１凝固時間測定試薬は、第２凝固時間測定試薬よりも低い濃度でリン脂質を含み、第２凝固時間測定試薬は、第４凝固時間測定試薬よりも低い濃度でリン脂質を含む。この場合、第１及び第２凝固時間測定試薬におけるリン脂質の濃度は、血液検体と該試薬とを体積比１：１で混合する場合、通常20〜150μg/mLであり、好ましくは30〜70μg/mLである。第１及び第２凝固時間測定試薬のリン脂質濃度は、同じであってもよいし、異なっていてもよい。第３及び第４凝固時間測定試薬におけるリン脂質の濃度は、血液検体と該試薬とを体積比１：１で混合する場合、通常150〜2000μg/mLであり、好ましくは150〜600μg/mLである。第３及び第４凝固時間測定試薬のリン脂質濃度は、同じであってもよいし、異なっていてもよい。血液検体と各凝固時間測定試薬との混合割合が１：１でない場合は、その混合割合に応じて、各試薬におけるリン脂質の濃度を適宜調整すればよい。なお、リン脂質の種類については、上述のとおりである。
【００５９】
第１、第２、第３及び第４凝固時間測定試薬は、測定する凝固時間の種類に応じて、上述の凝固に必要な成分を含む。また、市販の凝固時間測定試薬及び試薬キットを用いてもよい。当該技術では、LA検体のスクリーニングのために、まずdRVVTを測定することが主流となっている。よって、本実施形態では、第１凝固時間測定試薬は、蛇毒及びリン脂質を含む試薬(dRVVT測定試薬)であり、第３凝固時間測定試薬は、蛇毒、及び該第１凝固時間測定試薬よりも高濃度のリン脂質を含む試薬であることが好ましい。この場合、第２凝固時間測定試薬は、蛇毒、リン脂質及び調製用試薬を含む試薬であり、第４凝固時間測定試薬は、蛇毒、該第１凝固時間測定試薬よりも高濃度のリン脂質、及び調製用試薬を含む試薬であることが好ましい。
【００６０】
第１、第２、第３及び第４凝固時間測定試薬は、血液凝固を開始させるために、カルシウムイオンを含んでもよい。この場合、第１及び第３凝固時間測定試薬は、凝固に必要な成分、リン脂質及びカルシウムイオンを含む１液型の試薬であってもよい。また、第２及び第４凝固時間測定試薬は、凝固に必要な成分、調製用試薬、リン脂質及びカルシウムイオンを含む１液型の試薬であってもよい。あるいは、第１及び第３凝固時間測定試薬は、凝固に必要な成分及びリン脂質を含む第１部分試薬と、カルシウムイオンを含む第２部分試薬とから構成される２液型の試薬であってもよい。また、第２及び第４凝固時間測定試薬は、凝固に必要な成分、調製用試薬及びリン脂質を含む第１部分試薬と、カルシウムイオンを含む第３部分試薬とを含む２液型の試薬であってもよい。あるいは、第２及び第４凝固時間測定試薬は、凝固に必要な成分及びリン脂質を含む第１部分試薬と、調製用試薬を含む第２部分試薬と、カルシウムイオンを含む第３部分試薬とを含む３液型の試薬であってもよい。各凝固時間測定試薬のカルシウムイオンを含む部分試薬は、同一の試薬であってもよい。カルシウムイオンの詳細については、上述のとおりである。
【００６１】
本実施形態では、上述のように、第１及び第２凝固時間測定試薬を用いて、それぞれ第１凝固時間及び第２凝固時間を測定する。さらに、第３及び第４凝固時間測定試薬を用いて、それぞれ第３凝固時間及び第４凝固時間を測定する。具体的には、上記の被検者の血液検体と、第３凝固時間測定試薬とを混合して第３測定試料を調製し、第３凝固時間を測定する。また、被検者の血液検体と、第４凝固時間測定試薬とを混合して第４測定試料を調製し、第４凝固時間を測定する。
【００６２】
本実施形態において、第３凝固時間の測定は、第１凝固時間測定試薬に代えて第３凝固時間測定試薬を用いること以外は、第１凝固時間の測定と同様にして行うことができる。同様に、第４凝固時間の測定は、第２凝固時間測定試薬に代えて第４凝固時間測定試薬を用いること以外は、第２凝固時間の測定と同様にして行うことができる。これらの４つの凝固時間は、同じ手段で測定することが好ましい。本実施形態では、これらの４つの凝固時間は、同時に測定してもよいし、逐次測定してもよい。これらの４つの凝固時間を逐次測定する場合、測定の順序は特に限定されない。
【００６３】
本実施形態の方法では、上述のようにして、第１凝固時間及び第２凝固時間に基づく値を取得する。好ましくは、第１凝固時間及び第２凝固時間の積に関する値、及び第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値の少なくとも１つの値を取得する。さらに、第３凝固時間及び第４凝固時間に基づく値を取得する。好ましくは、第３凝固時間及び第４凝固時間の積に関する値、及び第３凝固時間及び第４凝固時間の比に関する値の少なくとも１つの値を取得する。なお、これらの積に関する値及び比に関する値を取得するときに、正常血漿の凝固時間は用いない。
【００６４】
第３凝固時間及び第４凝固時間の積に関する値には、第３凝固時間及び第４凝固時間の積の値そのものだけではなく、該積の値から算出される値も含まれる。第３凝固時間と第４凝固時間との積の値から算出される値としては、例えば、該積の値に定数を乗じた値、該積の値に定数を足した値、該積の値から定数を引いた値、該積の値の逆数、及びこれらの計算を組み合わせて得られる値などが挙げられる。本実施形態では、第３凝固時間及び第４凝固時間の積に関する値は、下記の式(１')で算出される値であることが好ましい。
【００６５】
(第３凝固時間及び第４凝固時間の積に関する値)＝(第３凝固時間)×(第４凝固時間)  ・・・式(１')
【００６６】
第３凝固時間及び第４凝固時間の比に関する値には、第３凝固時間と第４凝固時間との比の値そのものだけではなく、該比の値から算出される値も含まれる。第３凝固時間と第４凝固時間との比の値から算出される値としては、例えば、該比の値に定数を乗じた値、該比の値に定数を足した値、該比の値から定数を引いた値、該比の値の逆数、及びこれらの計算を組み合わせて得られる値などが挙げられる。本実施形態では、第３凝固時間及び第４凝固時間の比に関する値は、下記の式(２')又は(３')で算出される値であることが好ましい。
【００６７】
(第３凝固時間及び第４凝固時間の比に関する値)＝(第３凝固時間)／(第４凝固時間)  ・・・式(２')、又は
(第３凝固時間及び第４凝固時間の比に関する値)＝(第４凝固時間)／(第３凝固時間)  ・・・式(３')
【００６８】
本実施形態の方法では、取得した値に基づいて、被検者の血液検体が、LAを含む血液検体であるか、又はDACを含む血液検体であるかを判定することができる。例えば、第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値と、第３凝固時間及び第４凝固時間の比に関する値とに基づいて、被検者の血液検体について判定を行うことができる。好ましい実施形態では、下記の式(４)又は(５)により算出される指標の値と、該指標に対応する閾値とを比較し、比較結果に基づいて判定を行う。
【００６９】
(指標)＝[(第２凝固時間)／(第１凝固時間)]×[(第４凝固時間)／(第３凝固時間)]  ・・・式(４)、又は
(指標)＝[(第１凝固時間)／(第２凝固時間)]×[(第３凝固時間)／(第４凝固時間)]  ・・・式(５)
【００７０】
式(４)で算出される指標の値は、調製用試薬の種類によって、所定の閾値との比較結果が異なる。例えば、式(４)で算出される指標の値は、調製用試薬としてニッケルイオン、コバルトイオン、マンガンイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンを用いた場合、DAC検体の方が、LA検体よりも高くなる傾向にある。よって、これらの調製用試薬を用いた場合、式(４)で算出される指標の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(４)で算出される指標の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００７１】
一方、調製用試薬として、正常血漿、亜鉛イオン、アルミニウムイオン又は鉄イオンを用いた場合、式(４)で算出される指標の値は、LA検体の方が、DAC検体よりも高くなる傾向にある。よって、これらの調製用試薬を用いた場合、式(４)で算出される指標の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(４)で算出される指標の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００７２】
式(５)で算出される指標は、式(４)で算出される指標の逆数である。よって、式(５)で算出される指標の値を用いた判定結果は、式(４)で算出される指標の値を用いた判定結果と反対になる。具体的には、調製用試薬としてニッケルイオン、コバルトイオン、マンガンイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンを用いた場合、式(５)で算出される指標の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(５)で算出される比の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００７３】
また、調製用試薬として、正常血漿、亜鉛イオン、アルミニウムイオン又は鉄イオンを用いた場合、式(５)で算出される指標の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(５)で算出される指標の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００７４】
上記の式(４)は、下記の式(4A)又は(4B)に変形できる。また、上記の式(５)は、下記の式(5A)又は(5B)に変形できる。本実施形態では、下記の式(4A)又は(4B)により算出した指標の値は、上記の式(４)により算出した指標の値とみなす。また、下記の式(5A)又は(5B)により算出した指標の値は、上記の式(５)により算出した指標の値とみなす。
【００７５】
(指標)＝[(第２凝固時間)×(第４凝固時間)]／[(第１凝固時間)×(第３凝固時間)]  ・・・式(4A)、又は
(指標)＝[(第２凝固時間)／(第３凝固時間)]×[(第４凝固時間)／(第１凝固時間)]  ・・・式(4B)
【００７６】
(指標)＝[(第１凝固時間)×(第３凝固時間)]／[(第２凝固時間)×(第４凝固時間)]  ・・・式(5A)、又は
(指標)＝[(第４凝固時間)／(第１凝固時間)]×[(第２凝固時間)／(第３凝固時間)]  ・・・式(5B)
【００７７】
さらなる実施形態では、第１凝固時間及び第２凝固時間の積に関する値と、第３凝固時間及び第４凝固時間の積に関する値とに基づいて、被検者の血液検体について判定を行うことができる。好ましい実施形態では、下記の式(６)により算出される指標の値と、該指標に対応する閾値とを比較し、比較結果に基づいて判定を行う。
【００７８】
(指標)＝[(第１凝固時間)×(第２凝固時間)]×[(第３凝固時間)×(第４凝固時間)]  ・・・式(６)
【００７９】
式(６)で算出される指標の値は、いずれの調製用試薬を用いた場合も、DAC検体の方が、LA検体よりも高くなる傾向にある。よって、式(６)で算出される指標の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(６)で算出される指標の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００８０】
上記の式(６)により算出される指標の値は、第１凝固時間、第２凝固時間、第３凝固時間及び第４凝固時間の積の値ともいえる。本実施形態では、４つの凝固時間の積の値は、上記の式(６)により算出した指標の値とみなす。
【００８１】
リン脂質濃度の異なる複数種類の凝固時間測定試薬を用いる本実施形態の方法では、被検者の血液検体が、LAを含む疑いのある検体であるかを調べることもできる。具体的には、まず、第１凝固時間及び第３凝固時間の比の値を下記の式(７)により算出するか、又は第２凝固時間及び第４凝固時間の比の値を下記の式(８)により算出する。
【００８２】
(第１凝固時間及び第３凝固時間の比の値)＝(第１凝固時間)／(第３凝固時間)  ・・・式(７)、又は
(第２凝固時間及び第４凝固時間の比の値)＝(第２凝固時間)／(第４凝固時間)  ・・・式(８)
【００８３】
血液検体が、健常者由来の血液検体のような、LAもDACも含まない検体である場合、式(７)及び(８)で算出される比の値は、ほぼ1.0である。一方、血液検体がLAを含む場合、凝固時間の延長はリン脂質に依存するので、式(７)及び(８)で算出される比の値は1.0よりも高くなる。よって、式(７)又は(８)で算出される比の値により、被検者の血液検体のうち、LAを含む疑いのある検体を判定対象として選択できる。本実施形態では、被検者の血液検体について算出した第１凝固時間及び第３凝固時間の比の値が1.3以上であるか、又は算出した第２凝固時間及び第４凝固時間の比の値が1.5以上であるとき、該血液検体の判定を行ってもよい。
【００８４】
［３．リン脂質濃度が異なり、且つ調製用試薬を含む２種類の凝固時間測定試薬を用いる血液検体の判定方法］
さらなる実施形態では、上記の第２凝固時間及び第４凝固時間に基づく値を用いても、被検者の血液検体を判別することができる。以下、この第３の態様に係る血液検体の判定方法について説明する。
【００８５】
本実施形態では、リン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含む第１凝固時間測定試薬を用いる。また、第１凝固時間測定試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む凝固時間測定試薬と、金属イオン及び／又は正常血漿を含む調製用試薬とを含む第２凝固時間測定試薬を用いる。この実施形態に用いられる第１及び第２凝固時間測定試薬は、それぞれ、上述の第２の態様の方法に用いられる第２及び第４凝固時間測定試薬に相当する。
【００８６】
本実施形態では、被検者の血液検体と、上記の第１凝固時間測定試薬とを混合して第１測定試料を調製し、第１凝固時間を測定する。また、該血液検体と、上記の第２凝固時間測定試薬とを混合して第２測定試料を調製し、第２凝固時間を測定する。この実施形態で測定される第１及び第２凝固時間は、それぞれ、上述の第２の態様の方法で測定される第２及び第４凝固時間に相当する。なお、各測定試料の調製及び測定の詳細は、第２の態様の方法について述べたことと同様である。
【００８７】
本実施形態では、第１凝固時間及び第２凝固時間に基づく値を取得する。この値は、LA検体とDAC検体とを判別のために用いられる。そのような値としては、第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値が好ましい。第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値には、第１凝固時間と第２凝固時間との比の値そのものだけではなく、該比の値から算出される値も含まれる。第１凝固時間と第２凝固時間との比の値から算出される値としては、例えば、該比の値に定数を乗じた値、該比の値に定数を足した値、該比の値から定数を引いた値、該比の値の逆数、及びこれらの計算を組み合わせて得られる値などが挙げられる。本実施形態では、第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値は、下記の式(９)又は(10)で算出される値であることが好ましい。
【００８８】
(第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値)＝(第１凝固時間)／(第２凝固時間)  ・・・式(９)、又は
(第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値)＝(第２凝固時間)／(第１凝固時間)  ・・・式(10)
【００８９】
第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値は、調製用試薬の種類によって、所定の閾値との比較結果が異なる。例えば、式(９)で算出される比の値は、調製用試薬として亜鉛イオン、アルミニウムイオン又は鉄イオンを用いた場合、LA検体の方が、DAC検体よりも高くなる傾向にある。よって、これらの調製用試薬を用いた場合、式(９)で算出される比の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(９)で算出される比の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００９０】
一方、調製用試薬として、ニッケルイオン、コバルトイオン又はナトリウムイオンを用いた場合、式(９)で算出される比の値は、DAC検体の方が、LA検体よりも高くなる傾向にある。よって、これらの調製用試薬を用いた場合、式(９)で算出される比の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(９)で算出される比の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００９１】
式(10)で算出される比は、式(９)で算出される比の逆数である。よって、式(10)で算出される比の値を用いた判定結果は、式(９)で算出される比の値を用いた判定結果と反対になる。具体的には、調製用試薬として亜鉛イオン、アルミニウムイオン又は鉄イオンを用いた場合、式(10)で算出される比の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(10)で算出される比の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００９２】
また、調製用試薬として、ニッケルイオン、コバルトイオン又はナトリウムイオンを用いた場合、式(10)で算出される比の値が、所定の閾値よりも高いか又は所定の閾値と同じであるとき、被検者の血液検体は、LAを含む検体であると判定してもよい。また、式(10)で算出される比の値が、所定の閾値よりも低いとき、被検者の血液検体は、DACを含む検体であると判定してもよい。
【００９３】
[４．血液凝固の分析のための装置及びコンピュータプログラム]
以下に、本実施形態の血液検体分析装置の一例を、図面を参照して説明する。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されない。図１に示されるように、血液検体分析装置１０は、測定試料の調製及び光学的測定を行う測定装置５０と、測定装置５０により取得された測定データを分析すると共に測定装置５０に指示を与える制御装置４０とを備える。測定装置５０は、測定試料からの光量に関する光学的情報を取得する測定部２０と、測定部２０の前方に配置された検体搬送部３０とを備える。
【００９４】
測定部２０には、蓋２０ａ及び２０ｂと、カバー２０ｃと、電源ボタン２０ｄが設けられている。ユーザは、蓋２０ａを開けて、試薬テーブル１１及び１２(図２参照)に設置されている試薬容器１０３を新たな試薬容器１０３と交換したり、また、別の試薬容器１０３を新たに追加したりすることができる。試薬容器１０３には、収容する試薬の種類と、試薬に付与されたシリアルナンバーからなる試薬ＩＤとを含むバーコードが印刷されたバーコードラベル１０３ａが貼付されている。
【００９５】
ユーザは、蓋２０ｂを開けて、ランプユニット２７(図２参照)を交換できる。また、ユーザは、カバー２０ｃを開けて、ピアサ１７ａ(図２参照)を交換できる。検体搬送部３０は、検体ラック１０２に支持された検体容器１０１を、ピアサ１７ａによる吸引位置まで搬送する。検体容器１０１は、ゴム製の蓋１０１ａにより密封されている。
【００９６】
血液検体分析装置１０を使用する場合、ユーザは、まず、測定部２０の電源ボタン２０ｄを押して測定部２０を起動させ、制御装置４０の電源ボタン４３９を押して制御装置４０を起動させる。制御装置４０が起動すると、表示部４１にログオン画面が表示される。ユーザは、ログオン画面にユーザ名及びパスワードを入力して制御装置４０にログオンし、血液検体分析装置１０の使用を開始する。
【００９７】
測定装置の構成について、以下に説明する。図２に示されるように、測定部２０は、試薬テーブル１１及び１２と、キュベットテーブル１３と、バーコードリーダ１４と、キュベット供給部１５と、キャッチャ１６と、検体分注アーム１７と、試薬分注アーム１８と、緊急検体セット部１９と、光ファイバ２１と、検出部２２と、キュベット移送部２３と、加温部２４と、廃棄口２５と、流体部２６と、ランプユニット２７とを備えている。
【００９８】
(測定試料調製部)
試薬テーブル１１及び１２とキュベットテーブル１３は、それぞれ、円環形状を有し、回転可能に構成されている。試薬テーブル１１及び１２は試薬収納部に相当し、ここには試薬容器１０３が載せ置かれる。試薬テーブル１１及び１２に載せ置かれた試薬容器１０３のバーコードは、バーコードリーダ１４により読み取られる。バーコードから読み取られた情報(試薬の種類、試薬ID)は、制御装置４０に入力され、ハードディスク４３４(図７参照)に格納される。
【００９９】
本実施形態の装置では、試薬テーブル１１及び／又は１２には、第１凝固時間測定試薬の第１部分試薬及び第２部分試薬(塩化カルシウム水溶液)、第２凝固時間測定試薬の第１部分試薬、第２部分試薬(調製用試薬)及び第３部分試薬(塩化カルシウム水溶液)などがそれぞれ収容された試薬容器１０３が載せ置かれる。また、第３及び第４凝固時間測定試薬の部分試薬のそれぞれが収容された試薬容器１０３がさらに載せ置かれてもよい。この例では、凝固時間測定試薬は２液型又は３液型の試薬であるが、これらは１液型の試薬であってもよい。
【０１００】
キュベットテーブル１３には、キュベット１０４を支持可能な複数の孔からなる支持部１３ａが形成されている。ユーザによってキュベット供給部１５に投入された新しいキュベット１０４は、キュベット供給部１５により順次移送され、キャッチャ１６によりキュベットテーブル１３の支持部１３ａに設置される。
【０１０１】
検体分注アーム１７と試薬分注アーム１８には、それぞれ、上下移動及び回転移動できるようステッピングモータが接続されている。検体分注アーム１７の先端には、検体容器１０１の蓋１０１ａを穿刺できるよう先端が鋭利に形成されたピアサ１７ａが設置されている。試薬分注アーム１８の先端にはピペット１８ａが設置されている。ピペット１８ａの先端は、ピアサ１７ａと異なり平坦に形成されている。また、ピペット１８ａには、静電容量式の液面検知センサ２１３(図３参照)が接続されている。
【０１０２】
検体搬送部３０(図１参照)によって検体容器１０１が所定位置に搬送されると、ピアサ１７ａが、検体分注アーム１７の回転移動により検体容器１０１の真上に位置付けられる。そして、検体分注アーム１７が下方向に移動され、ピアサ１７ａが検体容器１０１の蓋１０１ａを貫通し、検体容器１０１に収容されている血液検体が、ピアサ１７ａにより吸引される。緊急を要する血液検体が緊急検体セット部１９にセットされている場合、ピアサ１７ａは、検体搬送部３から供給される検体に割り込んで、緊急を要する血液検体を吸引する。ピアサ１７ａにより吸引された血液検体は、キュベットテーブル１３上の空のキュベット１０４に吐出される。
【０１０３】
血液検体が吐出されたキュベット１０４は、キュベット移送部２３のキャッチャ２３ａにより、キュベットテーブル１３の支持部１３ａから、加温部２４の支持部２４ａに移送される。加温部２４は、支持部２４ａに設置されたキュベット１０４に収容されている血液検体を、所定の温度(例えば37℃)で一定時間加温する。加温部２４による血液検体の加温が終了すると、このキュベット１０４は、キャッチャ２３ａによって再び把持される。そして、このキュベット１０４は、キャッチャ２３ａにより把持されたまま所定位置に位置付けられ、この状態で、ピペット１８ａにより吸引された試薬がキュベット１０４内に吐出される。
【０１０４】
ピペット１８ａによる試薬の分注では、まず、試薬テーブル１１及び１２が回転され、測定項目に対応する試薬を収容する試薬容器１０３が、ピペット１８ａによる吸引位置に搬送される。そして、原点位置を検知するためのセンサに基づいて、ピペット１８ａの上下方向の位置が原点位置に位置付けられた後、液面検知センサ２１３によりピペット１８ａの下端が試薬の液面に接触するまで、ピペット１８ａが下降される。ピペット１８ａの下端が試薬の液面に接触すると、必要な量の試薬を吸引できる程度に、さらにピペット１８ａが下降される。そして、ピペット１８ａの下降が停止され、ピペット１８ａにより試薬が吸引される。ピペット１８ａにより吸引された試薬は、キャッチャ２３ａによって把持されたキュベット１０４に吐出される。そして、キャッチャ２３ａの振動機能により、キュベット１０４内の血液検体と試薬が攪拌される。これにより、測定試料の調製が行われる。その後、測定試料を収容するキュベット１０４は、キャッチャ２３ａにより、検出部２２の支持部２２ａに移送される。
【０１０５】
(光学的情報取得部)
ランプユニット２７は、検出部２２による光学的信号の検出に用いられる複数種類の波長の光を供給する。図４を参照して、ランプユニット２７の構成の一例を説明する。ランプユニット２７は光源に相当し、ハロゲンランプ２７ａと、ランプケース２７ｂと、集光レンズ２７ｃ〜２７ｅと、円盤形状のフィルター部２７ｆと、モータ２７ｇと、光透過型のセンサ２７ｈと、光ファイバカプラ２７ｉとを備える。
【０１０６】
図２を参照して、ランプユニット２７からの光は、光ファイバ２１を介して、検出部２２に供給される。検出部２２には、穴状の支持部２２ａが複数設けられており、各支持部２２ａには、キュベット１０４が挿入可能となっている。各支持部２２ａには、それぞれ、光ファイバ２１の端部が装着され、支持部２２ａに支持されたキュベット１０４に光ファイバ２１からの光が照射可能となっている。検出部２２は、光ファイバ２１を介して、ランプユニット２７から供給される光をキュベット１０４に照射し、キュベット１０４を透過する光(又はキュベット１０４からの散乱光)の光量を検出する。
【０１０７】
図５Ａ〜Ｄを参照して、検出部２２に配された複数の支持部２２ａのうちの一つの構成の例を示すが、他の支持部２２ａも同様の構成を有する。図５Ａを参照して、検出部２２には、光ファイバ２１の先端が挿入される円形の穴２２ｂが形成される。さらに、検出部２２には、穴２２ｂを支持部２２ａに連通させる円形の連通孔２２ｃが形成されている。穴２２ｂの径は、連通孔２２ｃの径よりも大きい。穴２２ｂの端部には、光ファイバ２１からの光を集光するレンズ２２ｄが配置されている。さらに、支持部２２ａ内壁面には、連通孔２２ｃに対向する位置に孔２２ｆが形成される。この孔２２ｆの奥に、光検出器２２ｇが配置されている。光検出器２２ｇは受光部に相当し、受光光量に応じた電気信号を出力する。レンズ２２ｄを透過した光は、連通孔２２ｃ、支持部２２ａ及び孔２２ｆを介して、光検出器２２ｇの受光面に集光される。光ファイバ２１は、端部が穴２２ｂに挿入された状態で、板ばね２２ｅによって抜け止めされる。
【０１０８】
図５Ｂを参照して、支持部２２ａにキュベット１０４が支持されると、レンズ２２ｄによって集光された光は、キュベット１０４およびキュベット１０４に収容された試料を透過して、光検出器２２ｇに入射する。試料において血液凝固反応が進むと、試料の濁度が上昇する。これに伴い、試料を透過する光の光量(透過光量)が減少し、光検出器２２ｇの検出信号のレベルが低下する。
【０１０９】
図５Ｃを参照して、散乱光を用いる場合の検出部２２の構成を説明する。支持部２２ａの内側面において、連通孔２２ｃと同じ高さの位置に、孔２２ｈが設けられる。この孔２２ｈの奥に、光検出器２２ｉが配置される。支持部２２ａにキュベット１０４が挿入され、光ファイバ２１から光が出射されると、キュベット１０４内の測定試料によって散乱された光が、孔２２ｈを介して光検出器２２ｉに照射される。この例では、光検出器２２ｉからの検出信号は、測定試料による散乱光の強度を示す。また、図５Ｄに示されるように、測定試料を透過する透過光と、測定試料により散乱される散乱光との両方を検出できるようにしてもよい。
【０１１０】
上記のように、検出部２２は、ランプユニット２７から供給される光をキュベット１０４に照射し、測定試料からの光学的情報を取得する。取得された光学的情報は、制御装置４０に送信される。制御装置４０は、光学的情報に基づいて分析を行い、分析結果を表示部４１に表示する。
【０１１１】
測定終了後、不要となったキュベット１０４は、キュベットテーブル１３により搬送され、キャッチャ１６により廃棄口２５に廃棄される。なお、測定動作の際に、ピアサ１７ａとピペット１８ａは、流体部２６から供給される洗浄液などの液体により、適宜洗浄される。
【０１１２】
測定装置のハードウェア構成について、以下に説明する。図３に示されるように、測定部２０は、制御部２００と、ステッピングモータ部２１１と、ロータリーエンコーダ部２１２と、液面検知センサ２１３と、センサ部２１４と、機構部２１５と、光学的情報取得部２１６と、バーコードリーダ１４とを含む。
【０１１３】
図３を参照して、制御部２００は、ＣＰＵ２０１と、メモリ２０２と、通信インターフェース２０３と、Ｉ／Ｏインターフェース２０４を含んでいる。ＣＰＵ２０１は、メモリ２０２に記憶されているコンピュータプログラムを実行する。メモリ２０２は、ＲＯＭ、ＲＡＭ、ハードディスクなどからなる。また、ＣＰＵ２０１は、通信インターフェース２０３を介して、検体搬送部３０を駆動させると共に、制御装置４０との間で指示信号及びデータの送受信を行う。また、ＣＰＵ２０１は、Ｉ／Ｏインターフェース２０４を介して、測定部２０内の各部を制御すると共に、各部から出力された信号を受信する。
【０１１４】
ステッピングモータ部２１１は、試薬テーブル１１及び１２と、キュベットテーブル１３と、キャッチャ１６と、検体分注アーム１７と、試薬分注アーム１８と、キュベット移送部２３を、それぞれ駆動するためのステッピングモータを含んでいる。ロータリーエンコーダ部２１２は、ステッピングモータ部２１１に含まれる各ステッピングモータの回転変位量に応じたパルス信号を出力するロータリーエンコーダを含んでいる。
【０１１５】
液面検知センサ２１３は、試薬分注アーム１８の先端に設置されたピペット１８ａに接続されており、ピペット１８ａの下端が試薬の液面に接触したことを検知する。センサ部２１４は、ピペット１８ａの上下方向の位置が原点位置に位置付けられたことを検知するセンサと、電源ボタン２０ｄが押されたことを検知するセンサを含んでいる。機構部２１５は、キュベット供給部１５と、緊急検体セット部１９と、加温部２４と、流体部２６を駆動するための機構と、ピアサ１７ａとピペット１８ａによる分注動作が可能となるようピアサ１７ａとピペット１８ａに圧力を供給する空圧源を含んでいる。光学的情報取得部２１６は、図２を参照して、少なくとも、ランプユニット２７と、光ファイバ２１と、検出部２２とを含む。
【０１１６】
制御装置４０の構成について、以下に説明する。図１に示されるように、制御装置４０は、表示部４１と、入力部４２と、コンピュータ本体４３とから構成されている。制御装置４０は、測定部２０から光学的情報を受信する。そして、制御装置４０のプロセッサは、光学的情報に基づいて第１凝固時間及び第２凝固時間を算出する。制御装置４０のプロセッサは、算出された第１及び第２凝固時間に基づく値として、第１凝固時間及び第２凝固時間の積に関する値と、第１凝固時間及び第２凝固時間の比に関する値とを算出する。また、制御装置４０のプロセッサは、血液検体の分析のためのコンピュータプログラムを実行する。制御装置４０は、血液検体の判定のための装置としても機能する。
【０１１７】
リン脂質濃度の異なる複数種類の凝固時間測定試薬を用いる分析を実行する場合、制御装置４０のプロセッサは、光学的情報に基づいて第３凝固時間及び第４凝固時間をさらに算出する。制御装置４０のプロセッサは、算出された第３及び第４凝固時間に基づく値として、第３凝固時間及び第４凝固時間の積に関する値と、第３凝固時間及び第４凝固時間の比に関する値とを算出する。さらに、制御装置４０のプロセッサは、これらの算出した値に基づいて、上述の指標の値を算出する。あるいは、第３の態様に係る方法を本実施形態の装置で実施する場合、制御装置４０のプロセッサは、第２及び第４凝固時間に基づく値として、第２凝固時間及び第４凝固時間の比に関する値を算出してもよい。なお、上記の積に関する値、比に関する値、及び指標の値を総称して、以下、パラメータともいう。
【０１１８】
制御装置４０の機能構成について、図６に示されるように、制御装置４０は、取得部４０１と、記憶部４０２と、算出部４０３と、判定部４０４と、出力部４０５とを備える。取得部４０１は、測定部２０と、ネットワークを介して通信可能に接続されている。出力部４０５は、表示部４１と通信可能に接続されている。
【０１１９】
取得部４０１は、測定部２０から送信された光学的情報を取得する。記憶部４０２は、光学的情報から凝固時間を算出するための式、及び上記のパラメータを算出するための式などを記憶する。また、記憶部４０２は、各種パラメータに対応する閾値を記憶していてもよい。算出部４０３は、取得部４０１で取得された情報を用い、記憶部４０２に記憶された式にしたがって、各種パラメータを算出する。判定部４０４は、算出部４０３によって算出されたパラメータの値が、記憶部４０２に記憶された所定の閾値よりも小さいか否かを判定する。出力部４０５は、算出部４０３によって算出されたパラメータを、血液検体についての参考情報として出力する。
【０１２０】
図７に示されるように、制御装置４０のコンピュータ本体４３は、ＣＰＵ４３１と、ＲＯＭ４３２と、ＲＡＭ４３３と、ハードディスク４３４と、読出装置４３５と、入出力インターフェース４３６と、通信インターフェース４３７と、画像出力インターフェース４３８と、電源ボタン４３９とを備える。ＣＰＵ４３１、ＲＯＭ４３２、ＲＡＭ４３３、ハードディスク４３４、読出装置４３５、入出力インターフェース４３６、通信インターフェース４３７、画像出力インターフェース４３８及び電源ボタン４３９は、バス４４０によって通信可能に接続されている。
【０１２１】
ＣＰＵ４３１は、ＲＯＭ４３２に記憶されているコンピュータプログラム及びＲＡＭ４３３にロードされたコンピュータプログラムを実行する。ＣＰＵ４３１がアプリケーションプログラムを実行することにより、上述した各機能ブロックが実現される。これにより、コンピュータシステムが、血液検体の判定のための装置の端末として機能する。
【０１２２】
ＲＯＭ４３２は、マスクＲＯＭ、ＰＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭなどによって構成されている。ＲＯＭ４３２には、ＣＰＵ４３１によって実行されるコンピュータプログラム及びこれに用いるデータが記録されている。
【０１２３】
ＲＡＭ４３３は、ＳＲＡＭ、ＤＲＡＭなどによって構成されている。ＲＡＭ４３３は、ＲＯＭ４３２及びハードディスク４３４に記録されているコンピュータプログラムの読み出しに用いられる。また、ＲＡＭ４３３は、これらのコンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ４３１の作業領域としても利用される。
【０１２４】
ハードディスク４３４は、オペレーティングシステム、ＣＰＵ４３１に実行させるためのアプリケーションプログラム(血液検体の分析のためのコンピュータプログラム)などのコンピュータプログラム、当該コンピュータプログラムの実行に用いるデータ、及び制御装置４０の設定内容がインストールされている。
【０１２５】
読出装置４３５は、フレキシブルディスクドライブ、ＣＤ−ＲＯＭドライブ、ＤＶＤ−ＲＯＭドライブなどによって構成されている。読出装置４３５は、ＣＤ、ＤＶＤなどの可搬型記録媒体４４１に記録されたコンピュータプログラムまたはデータを読み出すことができる。
【０１２６】
入出力インターフェース４３６は、例えば、ＵＳＢ、ＩＥＥＥ１３９４、ＲＳ−２３２Ｃなどのシリアルインターフェイスと、ＳＣＳＩ、ＩＤＥ、ＩＥＥＥ１２８４などのパラレルインターフェイスと、Ｄ／Ａ変換器、Ａ／Ｄ変換器などからなるアナログインターフェイスとから構成されている。入出力インターフェース４３６には、キーボード、マウスなどの入力部４２が接続されている。ユーザは入力部４２を介して指示を入力し、入出力インターフェース４３６は、入力部４２を介して入力された信号を受け付ける。
【０１２７】
通信インターフェース４３７は、例えば、Ethernet(登録商標)インターフェースなどである。制御装置４０は、通信インターフェース４３７により、プリンタへの印刷データの送信が可能である。通信インターフェース４３７は測定部２０に接続されており、ＣＰＵ４３１は、通信インターフェース４３７を介して、測定部２０との間で指示信号及びデータの送受信を行う。
【０１２８】
画像出力インターフェース４３８は、ＬＣＤ、ＣＲＴなどで構成される表示部４１に接続されている。画像出力インターフェース４３８は、画像データに応じた映像信号を表示部４１に出力し、表示部４１は、画像出力インターフェース４３８から出力された映像信号に基づいて画像を表示する。
【０１２９】
図３を参照して、測定動作の際、測定部２０のＣＰＵ２０１は、検出部２２(図２参照)から出力された検出信号をデジタル化したデータ(光学的情報)を、メモリ２０２に一時格納する。メモリ２０２の記憶領域は、支持部２２ａ毎にエリア分割される。各エリアには、対応する支持部２２ａに支持されたキュベット１０４に対して所定波長の光を照射したときに取得されるデータ(光学的情報)が、順次格納される。こうして、所定の測定時間にわたって順次、データがメモリ２０２に格納される。測定時間が経過すると、ＣＰＵ２０１は、メモリ２０２に対するデータの格納を中止し、格納したデータを、通信インターフェース２０３を介して制御装置４０に送信する。制御装置４０は、受信したデータを処理して解析を行い、解析結果を表示部４１に表示する。
【０１３０】
測定部２０における処理は、主として測定部２０のＣＰＵ２０１の制御の下で行われ、制御装置４０における処理は、主として制御装置４０のＣＰＵ４３１の制御の下で行われる。しかし、本実施形態はこの例に限定されない。測定部２０における処理を、制御装置４０のＣＰＵ４３１の制御の下で行ってもよい。図８Ａを参照して、測定処理が開始されると、測定部２０は、検体搬送部により搬送された検体容器１０１から所定量の血液検体を吸引し、これを、キュベットテーブル１３上の空のキュベット１０４に分注する。また、測定部２０は、血液検体が収容された試薬容器１０３から所定量の血液検体を吸引して、これを空のキュベット１０４に分注する。そして、測定部２０は、調製用試薬(正常血漿又は金属イオン含有水溶液)が収容された試薬容器１０３から所定量の調製用試薬を吸引し、これを、血液検体が入っているキュベット１０４に分注して攪拌することにより、混合検体を調製する。
【０１３１】
次いで、測定部２０は、血液検体及び混合検体のそれぞれが入っているキュベット１０４を加温部２４に移送して、キュベット１０４内の検体を所定温度(例えば37℃)に加温する。そして、測定部２０は、血液検体が入っているキュベット１０４に第１凝固時間測定試薬(第１部分試薬及び第２部分試薬)を添加して、第１測定試料を調製する。また、測定部２０は、混合検体が入っているキュベット１０４に第２凝固時間測定試薬(第１部分試薬及び第３部分試薬)を添加して、第２測定試料を調製する(ステップＳ１１)。リン脂質濃度の異なる複数種類の凝固時間測定試薬を用いる判定を実行する場合、測定部２０は、血液検体が入っているキュベット１０４に第３凝固時間測定試薬(第１部分試薬及び第２部分試薬)を添加して、第３測定試料を調製する。また、測定部２０は、混合検体が入っているキュベット１０４に第４凝固時間測定試薬(第１部分試薬及び第３部分試薬)を添加して、第４測定試料を調製する。測定部２０は、キュベット１０４に塩化カルシウム水溶液を含む部分試薬を添加した時点から凝固時間の測定を開始する。凝固時間測定試薬がいずれも、カルシウムイオン又は蛇毒を含む１液型の試薬の場合は、該試薬を添加した時点から凝固時間の測定を開始する。その後、測定部２０は、試薬が添加されたキュベット１０４を検出部２２に移送し、キュベット１０４に光を照射して測定試料を測定する(ステップＳ１２)。この測定では、波長660 nmの光に基づくデータ(散乱光量又は透過光量)が、測定時間の間、順次、メモリ２０２に格納される。このとき、データは、試薬添加時点からの経過時間に対応付けられた状態でメモリ２０２に格納される。そして、測定時間が経過すると、測定部２０は、測定を中止し、メモリ２０２に格納された測定結果(データ)を制御装置４０に送信する(ステップＳ１３)。
【０１３２】
制御装置４０が測定部２０から測定結果(データ)を受信すると(ステップＳ２１：ＹＥＳ）、制御装置４０は、受信した測定結果に対して分析処理を実行する(ステップＳ２２)。すなわち、制御装置４０は、各測定試料の凝固時間から、各種パラメータを算出する。分析処理を行った後、制御装置４０は、分析結果の表示処理を実行する(ステップＳ２３)。
【０１３３】
上記の分析処理及び表示処理について、図８Ｂを参照して説明する。ステップＳ３１において、制御装置４０の取得部４０１は、測定部２０から受信したデータ(散乱光量又は透過光量)に基づいて、光学的情報(散乱光強度、又は透過度もしくは吸光度)を取得する。ステップＳ３２において、算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から、記憶部４０２に記憶された凝固時間を算出するための式にしたがって、第１及び第２凝固時間を算出し、算出された値を記憶部４０２に記憶する。第３及び第４凝固時間測定試薬を用いた場合は、算出部４０３は、第３及び第４凝固時間をさらに算出し、算出された値を記憶部４０２に記憶する。ステップＳ３３において、算出部４０３は、記憶部４０２に記憶された凝固時間の値から、記憶部４０２に記憶されたパラメータを算出するための式にしたがって、パラメータを算出し、算出された値を記憶部４０２に記憶する。ステップＳ３４において、出力部４０５は、分析結果として、少なくともパラメータの値を表示部４１に表示させる。出力部４０５は、各測定試料の凝固時間をさらに表示部４１に表示させてもよい。
【０１３４】
本実施形態の装置は、取得したパラメータに基づいて、被検者の血液検体が、LAを含む血液検体であるか又はDACを含む血液検体であるかを判定し、その判定結果を参考情報として出力してもよい。図９Ａを参照して、制御装置による判定のフローを以下に説明する。図９Ａは、第１及び第２凝固時間測定試薬と、調製用試薬としての亜鉛イオンを用いた測定の結果から、血液検体の判定を行う場合の処理のフローを示す。ここでは、パラメータとして、上記の式(２)で算出される第１凝固時間及び第２凝固時間の比の値を取得し、取得した値と、対応する所定の閾値とを比較して血液検体の判定を行なう場合を例として説明する。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されるものではない。本実施形態の方法について述べたことを参照して、調製用試薬及びパラメータの種類、並びに後述の判定に関するステップは適宜変更できる。
【０１３５】
ステップＳ１０１において、制御装置４０の取得部４０１は、測定部２０から受信したデータ(散乱光量又は透過光量)に基づいて、光学的情報(散乱光強度、又は透過度もしくは吸光度)を取得する。ステップＳ１０２において、算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から、記憶部４０２に記憶された凝固時間を算出するための式にしたがって、第１及び第２凝固時間を算出する。ステップＳ１０３において、算出部４０３は、算出した第１及び第２凝固時間から、記憶部４０２に記憶された式(２)にしたがって、第１凝固時間及び第２凝固時間の比の値を算出する。なお、図９Ａ中、「第１の比」は、第１凝固時間及び第２凝固時間の比を指す。
【０１３６】
ステップＳ１０４において、判定部４０４は、算出部４０３で算出された比の値と、記憶部４０２に記憶された所定の閾値とを用いて、被検者の血液検体が、LAを含む検体であるか又はDACを含む検体であるかを判定する。ここで、比の値が所定の閾値よりも低いとき、処理はステップＳ１０５に進行する。ステップＳ１０５において、判定部４０４は、被検者の血液検体が、LAを含む検体であるとの判定結果を出力部４０５に送信する。比の値が所定の閾値よりも低くないとき(すなわち、比の値が所定の閾値より高いか又は所定の閾値と同じであるとき)、処理はステップＳ１０６に進行する。ステップＳ１０５において、判定部４０４は、被検者の血液検体が、DACを含む検体であるとの判定結果を出力部４０５に送信する。
【０１３７】
ステップＳ１０７において、出力部４０５は、判定結果を出力し、表示部４１に表示させたり、プリンタに印刷させたりする。あるいは、音声で出力してもよい。これにより、判定結果を、被検者の血液検体についての参考情報としてユーザに提供できる。
【０１３８】
図９Ｂを参照して、第１、第２、第３及び第４凝固時間測定試薬と、調製用試薬としての亜鉛イオンを用いた測定の結果から、血液検体の判定を行う場合の処理のフローを示す。ここでは、パラメータとして、上記の式(４)で算出される指標の値を取得し、取得した値と、対応する所定の閾値とを比較して血液検体の判定を行なう場合を例として説明する。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されるものではない。本実施形態の方法について述べたことを参照して、調製用試薬及びパラメータの種類、並びに後述の判定に関するステップは適宜変更できる。
【０１３９】
ステップＳ２０１において、制御装置４０の取得部４０１は、測定部２０から受信したデータに基づいて、光学的情報を取得する。ステップＳ２０２において、算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から、記憶部４０２に記憶された凝固時間を算出するための式にしたがって、第１、第２、第３及び第４凝固時間を算出する。ステップＳ２０３において、算出部４０３は、算出した凝固時間から、記憶部４０２に記憶された式(３)及び(３')にしたがって、第１凝固時間及び第２凝固時間の比の値と、第３凝固時間及び第４凝固時間の比の値とを算出する。なお、図９Ｂ中、「第１の比」は、第１凝固時間及び第２凝固時間の比を指し、「第２の比」は、第３凝固時間及び第４凝固時間の比を指す。ステップＳ２０４において、算出部４０３は、これらの比の値から、記憶部４０２に記憶された式(４)にしたがって、指標の値を算出する。
【０１４０】
ステップＳ２０５において、判定部４０４は、算出部４０３で算出された指標の値と、記憶部４０２に記憶された所定の閾値とを用いて、被検者の血液検体が、LAを含む検体であるか又はDACを含む検体であるかを判定する。ここで、指標の値が所定の閾値よりも低くないとき(すなわち、比の値が所定の閾値より高いか又は所定の閾値と同じであるとき)、処理はステップＳ２０６に進行する。ステップＳ２０６において、判定部４０４は、被検者の血液検体が、LAを含む検体であるとの判定結果を出力部４０５に送信する。比の値が所定の閾値よりも低いとき、処理はステップＳ２０７に進行する。ステップＳ２０７において、判定部４０４は、被検者の血液検体が、DACを含む検体であるとの判定結果を出力部４０５に送信する。ステップＳ２０８の詳細は、ステップＳ１０７について述べたことと同様である。
【０１４１】
図９Ｂに示されるフローにおいて、第１凝固時間及び第３凝固時間の比の値に基づいて、LA及びDACを含まない検体を判別するステップをさらに含む場合のフローについて、図９Ｃを参照して説明する。ここでは、上記の式(７)で算出される比の値を用いる場合を例として説明する。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されるものではない。本実施形態の方法について述べたことを参照して、調製用試薬及びパラメータの種類、並びに後述の判定に関するステップは適宜変更できる。
【０１４２】
ステップＳ３０１において、制御装置４０の取得部４０１は、測定部２０から受信したデータに基づいて、光学的情報を取得する。ステップＳ３０２において、算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から、記憶部４０２に記憶された凝固時間を算出するための式にしたがって、第１、第２、第３及び第４凝固時間を算出する。ステップＳ３０３において、算出部４０３は、算出した凝固時間から、記憶部４０２に記憶された式(３)、(３')及び(７)にしたがって、第１凝固時間及び第２凝固時間の比の値と、第３凝固時間及び第４凝固時間の比の値と、第１凝固時間及び第３凝固時間の比の値とを算出する。なお、図９Ｃ中、「第１の比」は、第１凝固時間及び第２凝固時間の比を指し、「第２の比」は、第３凝固時間及び第４凝固時間の比を指し、「第３の比」は、第１凝固時間及び第３凝固時間の比を指す。ステップＳ３０４において、算出部４０３は、第１凝固時間及び第２凝固時間の比の値と、第３凝固時間及び第４凝固時間の比の値とから、記憶部４０２に記憶された式(４)にしたがって、指標の値を算出する。
【０１４３】
ステップＳ３０５において、判定部４０４は、算出部４０３で算出された第１凝固時間及び第３凝固時間の比の値と、記憶部４０２に記憶された所定の閾値(1.3)とを用いて、被検者の血液検体が、LAを含む検体であるか又はDACを含む検体であるかを判定する。ここで、比の値が1.3よりも低いとき、処理はステップＳ３０６に進行する。ステップＳ３０６において、判定部４０４は、被検者の血液検体が、LA及びDACを含まない検体であるとの判定結果を出力部４０５に送信する。比の値が1.3よりも低くないとき(比の値が1.3以上のとき)、処理はステップＳ３０７に進行する。
【０１４４】
ステップＳ３０７において、判定部４０４は、算出部４０３で算出された指標の値と、記憶部４０２に記憶された所定の閾値とを用いて、被検者の血液検体が、LAを含む検体であるか又はDACを含む検体であるかを判定する。ステップＳ３０７、Ｓ３０８及びＳ３０９の詳細は、それぞれステップＳ２０５、Ｓ２０６及びＳ２０７について述べたことと同様である。そして、判定部４０４は、判定結果を出力部４０５に送信する。ステップＳ３１０については、ステップＳ１０７について述べたことと同様である。
【０１４５】
分析結果を表示する画面の一例として、図１０を参照して、各検体の第１及び第２凝固時間を測定した結果を表示する画面について説明する。図１０に示される画面には、ラック番号及び位置と、検体番号と、測定の開始時刻及び終了時刻、第１凝固時間(LA1 1-1 sec)と、第２凝固時間(LA2 1-1 sec)とが表示されているが、これに限定されない。本実施形態では、画面において、凝固時間から算出されたパラメータを表示することが好ましい。ユーザは、画面に表示されたパラメータを、血液検体がLA検体であるか又はDAC検体であるかの判定に用いることができる。本実施形態の装置により血液検体の判定を行う場合、画面には、判定結果を「LAを含む疑い」又は「DACを含む疑い」などの文字で表示してもよい。判定結果をフラグなどの記号や図形標識で表示してもよい。あるいは、判定結果を音声で出力してもよい。なお、血液検体の判定は、本実施形態の装置による判定結果だけでなく、他の検査結果などの情報も考慮して行われることが望ましい。よって、本実施形態の装置による判定結果及び所定の閾値が参考情報であることを示すために、「(参考)」と表示してもよい。
【０１４６】
以下に、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【０１４７】
実施例１
調製用試薬として正常血漿を用いて、LAを含む血液検体と、DACを含む血液検体との判別が可能であるかを検討した。
【０１４８】
(１) 試薬及び検体
(1.1) 凝固時間測定試薬
凝固時間測定試薬として、LA1 Screening Reagent(Lot No. 549855AA、Siemens社：以下、「第１試薬」という)、及びLA2 Confirm Reagent(Lot No. 548732A、Siemens社：以下、「第２試薬」という)を用いた。第１試薬は、dRVVT測定に基づくLA検出用試薬であり、ラッセル蛇毒及びリン脂質を含む。第２試薬は、ラッセル蛇毒を含み且つ第１試薬よりも高い濃度でリン脂質を含む。
【０１４９】
(1.2) 調製用試薬
調製用試薬として、正常血漿であるControl N(Lot No. 503197A：Siemens社)を用いた。
【０１５０】
(1.3) 血液検体
LAを含む血液検体として、以下の表１に示すLA含有血漿(13検体)を用いた。また、DACを含む血液検体として、以下の表２に示すリバーロキサバン含有血漿(10検体：以下、「DAC含有血漿」ともいう)を用いた。
【０１５１】
【表１】
2018124160.tif 000002
【０１５２】
【表２】
2018124160.tif 000003
【０１５３】
(２) 凝固時間の測定
(2.1) 調製用試薬を含まない測定試料の凝固時間(第１及び第３凝固時間)
各検体(100μL)を37℃で4分間加温した後、第１試薬(100μL)を混合し、第１凝固時間を測定した。また、第１試薬に代えて第２試薬を用いたこと以外は上記と同様にして、第３凝固時間を測定した。凝固時間の測定は、全自動凝固時間測定装置CS-5100(シスメックス株式会社)により行った。
【０１５４】
(2.2) 調製用試薬を含む測定試料の凝固時間(第２及び第４凝固時間)
調製用試薬(50μL)を各検体(50μL)と混合したサンプルを37℃で4分間加温した後、混合物に第１試薬(100μL)を混合し、第２凝固時間を測定した。また、第１試薬に代えて第２試薬を用いたこと以外は上記と同様にして、第４凝固時間を測定した。凝固時間の測定は、CS-5100(シスメックス株式会社)により行った。
【０１５５】
(３) パラメータの取得
各検体について測定した凝固時間から、以下の式(Ａ)〜(Ｇ)にしたがって、凝固時間の積又は比に関する値を取得した。また、各パラメータについて、LA含有血漿の群(以下、「LA群」ともいう)と、DAC含有血漿の群(以下、「DAC群」ともいう)との間の有意差をt-テストにより検定した。
【０１５６】
(比１)＝(第１凝固時間)／(第３凝固時間)  ・・・式(Ａ)
(比３)＝(第１凝固時間)／(第２凝固時間)  ・・・式(Ｂ)
(比４)＝(第３凝固時間)／(第４凝固時間)  ・・・式(Ｃ)
(積１)＝(第１凝固時間)×(第２凝固時間)  ・・・式(Ｄ)
(積２)＝(第３凝固時間)×(第４凝固時間)  ・・・式(Ｅ)
(指標１)＝(比２)／(比１)  ・・・式(Ｆ)
(指標２)＝[(第２凝固時間)／(第１凝固時間)]×[(第４凝固時間)／(第３凝固時間)]  ・・式(Ｇ)：
【０１５７】
(４) 結果
測定結果の一例として、一部の検体の凝固時間及びパラメータを表３に示す。また、各パラメータの分布の一例として、LA群及びDAC群における比１、比３、比４、積１、積２及び指標２を、それぞれ図１１Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ及びＦに示す。
【０１５８】
【表３】
2018124160.tif 000004
【０１５９】
実施例１において、比１は、リン脂質濃度の異なる２種類の凝固時間測定試薬を用いて測定した被検血漿の凝固時間の比である。図１１Ａに示されるように、比１では、LA群とDAC群とを判別できないことがわかる。図示しないが、指標１も、比１と同様に、LA群とDAC群とを判別できなかった。
【０１６０】
比１は、LA群及びDAC群との判別には利用できないが、凝固時間の延長する検体を選択するためのパラメータとして利用できる。図１１Ａに示されるように、LA群及びDAC群のいずれにおいても、比１は1.3以上である。健常者由来の血液検体では、比１はほぼ1.0であるので、比１が1.3以上である検体を判定対象として選択できる。
【０１６１】
実施例１において、比３、比４、積１及び積２は、１種類の凝固時間測定試薬を用いて測定した被検血漿の凝固時間及び混合血漿の凝固時間から算出されたパラメータである。図１１Ｂ及びＣに示されるように、比３及び積１では、比１に比べて、LA群の値のばらつきが小さくなっていた。このため、比３及び積１により、LA群とDAC群とを区別できる傾向にあることがわかる。実施例１において、比４及び積２は、リン脂質濃度が第１凝固時間測定試薬よりも高い凝固時間測定試薬を用いて測定した被検血漿の凝固時間及び混合血漿の凝固時間から算出されたパラメータである。図１１Ｄ及びＥに示されるように、比４及び積２により、LA群とDAC群とを判別できることがわかる。なお、比３、比４、積１及び積２はいずれも、LA群とDAC群との間において有意差があった(p<0.1)。これらのパラメータは、LAを含む血液検体と、DACを含む血液検体との判別に有用な指標であることが示された。これらの結果より、比３及び比４の積、及び、積１及び積２の積も、LA群とDAC群との判別に用い得ることが示唆される。
【０１６２】
指標２は、比３及び比４の積の逆数である。図１１Ｆに示されるように、指標２により、LA群とDAC群とを判別できることがわかる。なお、指標２は、LA群とDAC群との間において有意差があった(p<0.1)。指標２は、LAを含む血液検体と、DACを含む血液検体との判別に有用な指標であることが示された。
【０１６３】
実施例２
調製用試薬として種々の金属イオンを用いて、LAを含む血液検体と、DACを含む血液検体との判別が可能であるかを検討した。
【０１６４】
(１) 試薬及び検体
実施例２では、実施例１と同じ凝固時間測定試薬及び血液検体を用いた。調製用試薬として、金属イオンを含む水溶液を用いた。該水溶液は、塩化ニッケル(II)、塩化コバルト(II)、塩化マンガン、塩化亜鉛、塩化アルミニウム及び塩化鉄(III)のそれぞれを、金属イオン濃度が50 mmol/Lとなるように蒸留水に溶解して調製した。
【０１６５】
(２) 凝固時間の測定
(2.1) 調製用試薬を含まない測定試料の凝固時間(第１及び第３凝固時間)
各検体の第１及び第３凝固時間は、実施例１と同様にしてCS-5100(シスメックス株式会社)により測定した。
【０１６６】
(2.2) 調製用試薬を含む測定試料の凝固時間(第２及び第４凝固時間)
アルミニウムイオン以外の金属イオンを含む調製用試薬を、添加した金属イオンの濃度が0.1、0.25及び0.5 mmol/Lとなるように、各検体(100μL)に混合した。アルミニウムイオンを含む調製用試薬を、添加したアルミニウムイオンの濃度が0.1、0.25、0.5及び1.0 mmol/Lとなるように、各検体(100μL)に混合した。得られた混合物を37℃で約4分間加温した後、第１試薬(100μL)を混合して第２凝固時間を測定した。また、第１試薬に代えて第２試薬を用いたこと以外は上記と同様にして、第４凝固時間を測定した。凝固時間の測定は、CS-5100(シスメックス株式会社)により行った。
【０１６７】
(３) パラメータの算出
各検体について測定した凝固時間から、実施例１の式(Ａ)〜(Ｇ)及び下記の式(Ｈ)にしたがって、各種パラメータを取得した。また、各パラメータについて、LA群とDAC群との間の有意差をt-テストにより検定した。
(比２)＝(第２凝固時間)／(第４凝固時間)  ・・・式(Ｈ)
【０１６８】
(４) 結果
測定結果の一例として、一部の検体について亜鉛イオンを用いたときの凝固時間及びパラメータを表４に示す。また、各パラメータの分布の一例として、LA群及びDAC群における比２、比３、比４、積１、積２及び指標２を、それぞれ図１２Ａ〜図１７Ｆに示す。
【０１６９】
【表４】
2018124160.tif 000005
【０１７０】
図示しないが、比１及び指標１は、LA群とDAC群との判別ができなかった。なお、LA群及びDAC群のいずれにおいても、比１は1.3以上であり、比２は1.5以上であった。健常者由来の血液検体では、比１及び比２はほぼ1.0であるので、比１が1.3以上又は比２が1.5以上である検体を判定対象として選択できる。
【０１７１】
実施例２において、比３、比４、積１及び積２は、１種類の凝固時間測定試薬を用いて測定した被検血漿の凝固時間及び金属イオンを含む被検血漿の凝固時間から算出されたパラメータである。比２及び指標２は、リン脂質濃度の異なる複数種類の凝固時間測定試薬を用いて測定した被検血漿の凝固時間及びアルカリ金属イオンを含む被検血漿の凝固時間から算出されたパラメータである。指標２は、比３及び比４の積の逆数である。なお、いずれの金属イオンを用いた場合も、比３、比４、積１、積２及び指標２はいずれも、LA群とDAC群との間において有意差があった(p<0.1)。以下、各金属イオンを用いた結果について説明する。
【０１７２】
ニッケルイオンを用いた場合、図１２Ａ〜Ｅに示されるように、比２、比３、積１、積２及び指標２により、LA群とDAC群とを区別できる傾向にあることがわかる。
【０１７３】
コバルトイオンを用いた場合、図１３Ａ〜Ｆに示されるように、比２、比３、比４、積１、積２及び指標２により、LA群とDAC群とを区別できる傾向にあることがわかる。特に、比３、比４及び指標２は、LA群とDAC群とを明確に切り分けられることがわかる。
【０１７４】
マンガンイオンを用いた場合、図１４Ａ〜Ｅに示されるように、比３、比４、積１、積２及び指標２により、LA群とDAC群とを区別できる傾向にあることがわかる。
【０１７５】
亜鉛イオンを用いた場合、図１５Ａ〜Ｆに示されるように、比２、比３、比４、積１、積２及び指標２により、LA群とDAC群とを区別できる傾向にあることがわかる。特に、比３、比４及び指標２は、LA群とDAC群とを明確に切り分けられることがわかる。
【０１７６】
アルミニウムイオンを用いた場合、図１６Ａ〜Ｆに示されるように、比２、比３、比４、積１、積２及び指標２により、LA群とDAC群とを区別できる傾向にあることがわかる。特に、比３及び指標２は、LA群とDAC群とを明確に切り分けられることがわかる。
【０１７７】
鉄イオンを用いた場合、図１７Ａ〜Ｆに示されるように、比２、比３、比４、積１、積２及び指標２により、LA群とDAC群とを区別できる傾向にあることがわかる。
【０１７８】
以上より、上記の金属イオンを用いる場合、比２、比３、比４、積１、積２及び指標２は、LAを含む血液検体と、DACを含む血液検体と判別に有用な指標であることが示された。これらの結果より、比３及び比４の積、及び、積１及び積２の積も、LA群とDAC群との判別が可能であることが示唆される。
【０１７９】
実施例３
調製用試薬としてアルカリ金属イオンを用いて、LAを含む血液検体と、DACを含む血液検体との判別が可能であるかを検討した。
【０１８０】
(１) 試薬及び検体
実施例３では、実施例１と同じ凝固時間測定試薬及び血液検体を用いた。調製用試薬として、アルカリ金属イオンを含む水溶液を用いた。該水溶液は、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム及び塩化カリウムを、それぞれ3.4 mol/L(20質量%)、1.4 mol/L(20質量%)及び2.7 mol/L(20質量%)の濃度となるように蒸留水に溶解して調製した。
【０１８１】
(２) 凝固時間の測定
(2.1) 調製用試薬を含まない測定試料の凝固時間(第１及び第３凝固時間)
各検体の第１及び第３凝固時間は、実施例１と同様にしてCS-5100(シスメックス株式会社)により測定した。
【０１８２】
(2.2) 調製用試薬を含む測定試料の凝固時間(第２及び第４凝固時間)
調製用試薬を、濃度が0.5質量%となるように各検体(100μL)に混合し、37℃で約4分間加温した。なお、検体と調製用試薬との混合物において、添加した金属イオンの濃度は、85 mmol/L(塩化ナトリウム)、70 mmol/L(硫酸ナトリウム)及び67.5 mmol/L(塩化カリウム)である。得られた混合物に第１試薬(100μL)を混合した。第２凝固時間を測定した。また、第１試薬に代えて第２試薬を用いたこと以外は上記と同様にして、第４凝固時間を測定した。凝固時間の測定は、CS-5100(シスメックス株式会社)により行った。
【０１８３】
(３) パラメータの算出
各検体について測定した凝固時間から、実施例２と同様にして各種パラメータを取得した。また、各パラメータについて、LA群とDAC群との間の有意差をt-テストにより検定した。
【０１８４】
(４) 結果
測定結果の一例として、一部の検体についてナトリウムイオン(硫酸ナトリウム)を用いたときの凝固時間を表５に示す。また、各パラメータの分布の一例として、LA群及びDAC群における比２、比３、比４、積１、積２及び指標２を、それぞれ図１８Ａ〜図２０Ｅに示す。
【０１８５】
【表５】
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【０１８６】
図示しないが、比１及び指標１は、LA群とDAC群との判別ができなかった。なお、LA群及びDAC群のいずれにおいても、比１は1.3以上であった。健常者由来の血液検体では、比１はほぼ1.0であるので、比１が1.3以上である検体を判定対象として選択できる。
【０１８７】
実施例３において、比３、比４、積１及び積２は、１種類の凝固時間測定試薬を用いて測定した被検血漿の凝固時間及びアルカリ金属イオンを含む被検血漿の凝固時間から算出されたパラメータである。比２及び指標２は、リン脂質濃度の異なる複数種類の凝固時間測定試薬を用いて測定した被検血漿の凝固時間及びアルカリ金属イオンを含む被検血漿の凝固時間から算出されたパラメータである。指標２は、比３及び比４の積の逆数である。なお、いずれの金属イオンを用いた場合も、比３、比４、積１、積２及び指標２はいずれも、LA群とDAC群との間において有意差があった(p<0.1)。以下、各アルカリ金属イオンを用いた結果について説明する。
【０１８８】
塩化ナトリウム由来のナトリウムイオンを用いた場合、図１８Ａ〜Ｆに示されるように、比２、比３、比４、積１、積２及び指標２により、LA群とDAC群とを区別できる傾向にあることがわかる。特に、比３及び指標２は、LA群とDAC群とを明確に切り分けられることがわかる。
【０１８９】
硫酸ナトリウム由来のナトリウムイオンを用いた場合、図１９Ａ〜Ｆに示されるように、比２、比３、比４、積１、積２及び指標２により、LA群とDAC群とを区別できる傾向にあることがわかる。特に、比３及び指標２は、LA群とDAC群とを明確に切り分けられることがわかる。
【０１９０】
カリウムイオンを用いた場合、図２０Ａ〜Ｅに示されるように、比３、比４、積１、積２及び指標２により、LA群とDAC群とを区別できる傾向にあることがわかる。特に、比３及び指標２は、LA群とDAC群とを明確に切り分けられることがわかる。
【０１９１】
以上より、上記のアルカリ金属イオンを用いる場合、比２、比３、比４、積１、積２及び指標２は、LAを含む血液検体と、DACを含む血液検体と判別に有用な指標であることが示された。これらの結果より、比３及び比４の積、及び、積１及び積２の積も、LA群とDAC群との判別が可能であることが示唆される。
【符号の説明】
【０１９２】
１０    血液検体分析装置
１１、１２    試薬テーブル(試薬収容部)
２０    測定部
２２ｇ、２２ｉ    光検出器(受光部)
２７    ランプユニット(光源)
３０    検体搬送部
４０    制御装置(制御部)
４１    表示部
４２    入力部
４３    コンピュータ本体
５０    測定装置(測定試料調製部及び光学的情報取得部)
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１１Ｆ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１４Ｅ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１５Ｆ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
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【図１６Ｅ】
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【図１６Ｆ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１７Ｄ】
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【図１７Ｅ】
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【図１７Ｆ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１８Ｅ】
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【図１８Ｆ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図１９Ｅ】
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【図１９Ｆ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２０Ｄ】
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【図２０Ｅ】
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