(57)【要約】      （修正有）【課題】免疫グロブリンシングル可変ドメインであるＶＨドメインの提供。【解決手段】特定のアミノ酸配列に於いて、（ｉ）１１２位のアミノ酸残基が、ＫもしくはＱの一方であり、（ｉｉ）８９位のアミノ酸残基が、Ｔであり、（ｉｉｉ）８９位のアミノ酸残基が、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基が、ＫもしくはＱの一方であり、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸が、好ましくはＶであり、前記ＶＨドメインは、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される）を含有する、ＶＨドメイン。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＶＨドメインであって、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、及び／又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、及び／又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくはＶであり、ここで、前記ＶＨドメインは、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する、
ＶＨドメイン。
【請求項２】
免疫グロブリンシングル可変ドメインである、請求項１記載のＶＨドメイン。
【請求項３】
ナノボディである、請求項２記載のＶＨドメイン。
【請求項４】
１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱの一方である、ＶＨドメイン。
【請求項５】
Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎが、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘが、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する、請求項４記載のＶＨドメイン。
【請求項６】
免疫グロブリンシングル可変ドメインである、請求項４又は５記載のＶＨドメイン。
【請求項７】
ナノボディである、請求項６記載のＶＨドメイン。
【請求項８】
ＶＨドメインであって、８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、ここで、前記ＶＨドメインは、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する、
ＶＨドメイン。
【請求項９】
免疫グロブリンシングル可変ドメインである、請求項８記載のＶＨドメイン。
【請求項１０】
ナノボディである、請求項９記載のＶＨドメイン。
【請求項１１】
８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱの一方である、ＶＨドメイン。
【請求項１２】
前記ＶＨドメインが、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎが、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘが、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する、請求項１１記載のＶＨドメイン。
【請求項１３】
免疫グロブリンシングル可変ドメインである、請求項１１又は１２記載のＶＨドメイン。
【請求項１４】
ナノボディである、請求項１３記載のＶＨドメイン。
【請求項１５】
１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱの一方である、ＶＨドメイン。
【請求項１６】
前記ＶＨドメインが、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎが、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘが、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する、請求項１５記載のＶＨドメイン。
【請求項１７】
免疫グロブリンシングル可変ドメインである、請求項１５又は１６記載のＶＨドメイン。
【請求項１８】
ナノボディである、請求項１７記載のＶＨドメイン。
【請求項１９】
８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖである、ＶＨドメイン。
【請求項２０】
前記ＶＨドメインが、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎが、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘが、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する、請求項１９記載のＶＨドメイン。
【請求項２１】
免疫グロブリンシングル可変ドメインである、請求項１９又は２０記載のＶＨドメイン。
【請求項２２】
ナノボディである、請求項２１記載のＶＨドメイン。
【請求項２３】
ＶＨドメインであって、
１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つであり、及び
１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び
４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び
８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び
１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び
１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び
１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、及び／又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、及び／又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくはＶであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、場合により、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する、
ＶＨドメイン。
【請求項２４】
免疫グロブリンシングル可変ドメインである、請求項２３記載のＶＨドメイン。
【請求項２５】
ナノボディである、請求項２３又は２４記載のＶＨドメイン。
【請求項２６】
１１２位におけるアミノ酸残基が、Ｋ又はＱの一方である、請求項２３〜２５のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項２７】
８９位におけるアミノ酸残基が、Ｔである、請求項２３〜２５のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項２８】
８９位におけるアミノ酸残基が、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基が、Ｋ又はＱの一方である、請求項２３〜２５のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項２９】
８９位におけるアミノ酸残基が、Ｌであり、１１位におけるアミノ酸残基が、Ｖである、請求項２３〜２５のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項３０】
前記ＶＨドメインが、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎが、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘが、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する、請求項２３〜２９のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項３１】
ＶＨドメインであって、
１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、及び
１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び
４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び
８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び
１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び
１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱの一方であり、及び
１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、場合により、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する、
ＶＨドメイン。
【請求項３２】
免疫グロブリンシングル可変ドメインである、請求項３１記載のＶＨドメイン。
【請求項３３】
ナノボディである、請求項３１又は３２記載のＶＨドメイン。
【請求項３４】
前記ＶＨドメインが、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する、請求項３０〜３２のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項３５】
ヒト血清アルブミンに特異的に結合することができる、請求項１〜３４のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項３６】
免疫グロブリンシングル可変ドメインである、請求項３５記載のＶＨドメイン。
【請求項３７】
ナノボディである、請求項３６記載のＶＨドメイン。
【請求項３８】
請求項１〜７のいずれか一項記載のＶＨドメインのライブラリ。
【請求項３９】
請求項１〜７のいずれか一項記載のＶＨドメインをコードする核酸残基のライブラリ。
【請求項４０】
発現ライブラリである、請求項３９記載のライブラリ。
【請求項４１】
合成ライブラリである、請求項３８〜４０のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項４２】
少なくとも１００種類の配列、例えば、少なくとも１０００種類の配列、特に、１０５種類を超える配列、とりわけ、１０６種類を超える配列、例えば、１０８〜１０１０種類以上の配列を含有する、請求項３８〜４１のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項４３】
請求項８〜１０のいずれか一項記載のＶＨドメインのライブラリ。
【請求項４４】
請求項８〜１０のいずれか一項記載のＶＨドメインをコードする核酸残基のライブラリ。
【請求項４５】
発現ライブラリである、請求項４４記載のライブラリ。
【請求項４６】
合成ライブラリである、請求項４３〜４５のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項４７】
少なくとも１００種類の配列、例えば、少なくとも１０００種類の配列、特に、１０５種類を超える配列、とりわけ、１０６種類を超える配列、例えば、１０８〜１０１０種類以上の配列を含有する、請求項４３〜４６のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項４８】
請求項１１〜１４のいずれか一項記載のＶＨドメインのライブラリ。
【請求項４９】
請求項１１〜１４のいずれか一項記載のＶＨドメインをコードする核酸残基のライブラリ。
【請求項５０】
発現ライブラリである、請求項４８記載のライブラリ。
【請求項５１】
合成ライブラリである、請求項４８〜５０のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項５２】
少なくとも１００種類の配列、例えば、少なくとも１０００種類の配列、特に、１０５種類を超える配列、とりわけ、１０６種類を超える配列、例えば、１０８〜１０１０種類以上の配列を含有する、請求項４８〜５１のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項５３】
請求項１５〜１８のいずれか一項記載のＶＨドメインのライブラリ。
【請求項５４】
請求項１５〜１８のいずれか一項記載のＶＨドメインをコードする核酸残基のライブラリ。
【請求項５５】
発現ライブラリである、請求項５４記載のライブラリ。
【請求項５６】
合成ライブラリである、請求項５３〜５５のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項５７】
少なくとも１００種類の配列、例えば、少なくとも１０００種類の配列、特に、１０５種類を超える配列、とりわけ、１０６種類を超える配列、例えば、１０８〜１０１０種類以上の配列を含有する、請求項５３〜５６のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項５８】
請求項１９〜２２のいずれか一項記載のＶＨドメインのライブラリ。
【請求項５９】
請求項１９〜２２のいずれか一項記載のＶＨドメインをコードする核酸残基のライブラリ。
【請求項６０】
発現ライブラリである、請求項５９記載のライブラリ。
【請求項６１】
合成ライブラリである、請求項５８〜６０のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項６２】
少なくとも１００種類の配列、例えば、少なくとも１０００種類の配列、特に、１０５種類を超える配列、とりわけ、１０６種類を超える配列、例えば、１０８〜１０１０種類以上の配列を含有する、請求項５８〜６１のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項６３】
請求項２３〜３０のいずれか一項記載のＶＨドメインのライブラリ。
【請求項６４】
請求項２３〜３０のいずれか一項記載のＶＨドメインをコードする核酸残基のライブラリ。
【請求項６５】
発現ライブラリである、請求項６４記載のライブラリ。
【請求項６６】
合成ライブラリである、請求項６３〜６５のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項６７】
少なくとも１００種類の配列、例えば、少なくとも１０００種類の配列、特に、１０５種類を超える配列、とりわけ、１０６種類を超える配列、例えば、１０８〜１０１０種類以上の配列を含有する、請求項６３〜６６のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項６８】
請求項３１〜３７のいずれか一項記載のＶＨドメインのライブラリ。
【請求項６９】
請求項３１〜３７のいずれか一項記載のＶＨドメインをコードする核酸残基のライブラリ。
【請求項７０】
発現ライブラリである、請求項６９記載のライブラリ。
【請求項７１】
合成ライブラリである、請求項６８〜７０のいずれか一項記載のライブラリ。
【請求項７２】
少なくとも１００種類の配列、例えば、少なくとも１０００種類の配列、特に、１０５種類を超える配列、とりわけ、１０６種類を超える配列、例えば、１０８〜１０１０種類以上の配列を含有する、請求項６８〜７１のいずれか一項記載のライブラリ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、改善された重鎖免疫グロブリン可変ドメインに関する。
【０００２】
本発明は、特に、露出したＣ末端領域又は端部（本明細書に更に記載された通り、国際公開公報第１２／１７５７４１号も参照のこと）のいずれかを有するか、又は、露出したＣ末端領域又は端部（再度、本明細書に更に記載された通り）を有する用途に使用される（又は、同用途に使用されることが意図される）改善された重鎖免疫グロブリン可変ドメインに言及する。前者の一部の好ましく、非限定的な例は、免疫グロブリンシングル可変ドメイン（本明細書において、「ＩＳＶ」又は「ＩＳＶＤ」とも呼ばれる）、例えば、ナノボディ（ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、及びラクダ化ＶＨ、例えば、ラクダ化ヒトＶＨを含む）、ＶＨドメインであるか、又は、ＶＨドメインから得られる（シングルドメイン）抗体、ならびに、ＶＨドメインであるか、又は、ＶＨドメインから得られるｄＡｂである。後者の一部の好ましく、非限定的な例は、一本鎖ＦＶ（ＳｃＦｖ）又はディアボディに使用される（又は、これらに使用されることが意図される）ＶＨドメインである。
【０００３】
また、本発明は、（１つ以上の）本明細書で記載された本発明の改善された重鎖免疫グロブリン可変ドメインを含むか、又は、本質的にこれらからなる、タンパク質、ポリペプチド、及び他の構築物、分子、又は化学成分；本発明の改善された重鎖免疫グロブリン可変ドメインを発現／生成するための方法、及び／又は、それを含むタンパク質、ポリペプチド、及び他の構築物、分子、又は化学成分を発現／生成するための方法；本発明の改善された重鎖免疫グロブリン可変ドメインを含む組成物及び製品（例えば、医薬組成物及び製品）、及び／又は、それを含むタンパク質、ポリペプチド、及び他の構築物、分子、又は化学成分；本発明の改善された重鎖免疫グロブリン可変ドメインをコードし、及び／又は、それを含むタンパク質もしくはポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び核酸；ならびに、本発明の改善された重鎖免疫グロブリン可変ドメインならびにそれを含むタンパク質、ポリペプチド、及び他の構築物、分子、又は化学成分の使用（及び特に、治療的、予防的、及び診断的使用）に関する。
【０００４】
本発明の更なる態様、実施態様、利点、用途、及び使用は、本明細書における更なる説明から明らかとなるであろう。
【０００５】
本願において、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン中のアミノ酸残基／位置は、Ｋａｂａｔに従ったナンバリングで示されるであろう。便宜上、図１に、本明細書において具体的に言及されるであろうアミノ酸位置の一部と、幾つかの代替的なナンバリングシステム（例えば、Ａｈｏ及びＩＭＧＴ。注記：本説明及び特許請求の範囲については、Ｋａｂａｔナンバリングが決定的であり、他のナンバリングシステムは、参考のためのみに提供される）に従ったそのナンバリングとを列記する表を提供する。
【０００６】
また、本発明において、免疫グロブリン可変ドメインは、定常ドメイン（例えば、ＣＨ１ドメイン）に会合又は連結していない場合、「露出したＣ末端又は領域」を有すると言える。本明細書で引用された関連する従来技術が参照される。
【背景技術】
【０００７】
特に、国際公開公報第１２／１７５７４１号に記載されているように、Ｃ末端領域（この用語も、本明細書においても使用される通り）は、ＩＳＶ上の仮想のエピトープの一部であり、また、他の残基の中でも、１４位におけるアミノ酸残基（及びアミノ酸配列における同残基の次／同残基近くのアミノ酸残基、例えば、１１、１３、及び１５位）も含み、８３位におけるアミノ酸残基（及びアミノ酸配列における同残基の次／同残基近くのアミノ酸残基、例えば、８２、８２ａ、８２ｂ、及び８４位）、及び／又は、１０８位におけるアミノ酸残基（及びアミノ酸配列における同残基の次／同残基近くのアミノ酸残基、例えば、１０７位）も含む場合がある。国際公開公報第１２／１７５７４１号におけるのと同様に、推定のエピトープは、本明細書においても、まとめて「Ｃ末端領域」と呼ばれる。このＣ末端領域は、Ｃ末端配列ＶＴＶＳＳ（すなわち、１０９、１１０、１１１、１１２、及び１１３位のそれぞれ）と、１４位におけるアミノ酸残基とを少なくとも含み、８３及び１０８位におけるアミノ酸残基も含む場合があり、１３、１５、８２ｂ、８３、８４、及び１０７位におけるアミノ酸残基も含む可能性があることが理解される。
【０００８】
（ＩＳＶＤと同様に、定常ドメインと会合していない免疫グロブリン可変ドメインを含有する構築物である）一本鎖Ｆｖ又はＳｃＦｖ中の調査の結果として、免疫グロブリン可変ドメインのＣ末端は、従来の全長抗体では、可変ドメインと定常ドメインとの間の界面に埋もれているが、可変ドメインが定常ドメインと会合していない場合には、溶媒に露出する疎水性パッチを含有することが、当技術分野において記載されている（例えば、Nieba et al., Protein Engineering, 10, 435-444 (1997)及びHarmsen et al., Molecular Immunology (2000), 579-590を参照のこと）。
【０００９】
また、タンパク質の構造内に通常は埋もれているエピトープ（「ネオ−エピトープ」又は「潜在性エピトープ」とも呼ばれる）は、それらが溶媒露出になると、例えば、関与するタンパク質の分解、ミスフォールディング、又は凝集により、免疫システムをトリガーする場合があることが周知である。例えば、生体分子の埋もれた疎水性部分（いわゆる、「ｈｙｐｐｏｓ」）の場合には、これらは、ｈｙｐｐｏｓが溶媒露出になると、生来の免疫応答をもたらす一般的な傷害関連分子パターンの一部を形成することが示唆されている（例えば、Seong and Matzinger, Nature Reviews 2004, 469を参照のこと）。免疫応答をトリガーする元は埋もれていた疎水性パッチの種々の例が、当技術分野において記載されている（例えば、David et al., JBC, 2001, 6370-6377；Matsuura et al., International Immunology, 2000, 1183-1192；Rasheed et al., Life Sciences 79 (2000), 2320-2328を参照のこと）。より一般的には、疎水性アミノ酸は、Ｂ細胞エピトープの一部である傾向があることも、当技術分野において公知である（例えば、国際公開公報第１１／０７５８６号、１０頁；及びKolaskar, FEBS 276, 172-174 (1990)を参照のこと）。同様に、（Nieba et al.及びHarmsen et al.、上記に記載された）重鎖可変ドメインのＣ末端における疎水性パッチは、（出現し及び／又は予め存在する）抗−薬剤抗体を生じ、及び／又は、同抗体と相互作用することができるＢ細胞エピトープを形成する場合があることが記載されている（国際公開公報第１１／０７５８６号）。この理由のために、疎水性を低下させ、及び／又は、Ｂ細胞エピトープを除去するために、可変ドメインのＣ末端の一部を形成するアミノ酸残基の一部を変異させることが提唱されている。例えば、Nieba et al.には、ＶＨ領域の１１、１４、４１、８４、８７、及び／又は８９位（Ｋａｂａｔに従ったナンバリング）を変異させることが提唱されている。一方、国際公開公報第１１／０７５８６号には、ＶＬドメインの９９、１０１、及び／もしくは１４８位（ＡＨｏナンバリング）、又は、ＶＨドメインの１２、９７、９８、１０３、及び／もしくは１４４位（再度、ＡＨｏナンバリング−これらの位置は、Ｋａｂａｔに従った１１、８３、８４、８５、８９、及び１０３位に対応する）を変異させることが提唱されている。同様に、Harmsen et al.には、ＣＨ１ドメインが存在しないのを補償する、１２及び１０１位（ＩＭＧＴナンバリング、これらは、Ｋａｂａｔに従った１１及び８９位である）を変異させることが提唱されている。また、同著者は、これらの位置における置換に適した候補であるアミノ酸を含有する、ＶＨＨの特定のサブファミリー（「ＶＨＨ４」と呼ばれる）も特定している。
【００１０】
また、ヒトの対象から得られた生体サンプルは、免疫グロブリン可変ドメインの露出したＣ末端領域又は端部（例えば、ＳｃＦｖ又はディアボディ中のＩＳＶＤ又はＶＨもしくはＶＬドメインのＣ末端領域又は端部）に結合可能な（既存の）タンパク質又は因子を含有している場合があることも、当技術分野において記載されている（例えば、国際公開公報第１２／１７５７４１号及び次の段落で引用した参考文献を参照のこと）。
【００１１】
例えば、国際公開公報第２０１３／０２４０５９号には、「一部の健康でナイーブなヒト対象からの血清には、ＶＨドメイン抗体及びＶＨＨ分子の両方に結合することができる既存の抗ＶＨ自己抗体と、ＶＬ分子に結合することができる抗ＶＬ（例えば、Ｖカッパ（ＶＫ））自己抗体が存在する」こと、及び、「ＶＨ  ｄＡｂに結合する既存のＡＤＡが、ＩｇＧフラグメントに結合するが、インタクトなＩｇＧ上にｉｎ  ｓｉｔｕで見出された同じ配列には結合しない抗ヒンジ抗体に類似する」ことが記載されている。
【００１２】
Holland et al., J. Clin. Immunol. 2013, 33(7):1192-203には、正常で健康なヒトの約半分の血液に、完全にヒトＶＨドメイン抗体のフレームワーク配列に結合することができる、変動するレベルでの新たな分類の抗ＩｇＧ自己抗体（Holland et al.において、「ＨＡＶＨ自己抗体」とも呼ばれる）が含まれることが記載されている。さらに、Holland et al.には、これらの自己抗体は、主にＩｇＧアイソタイプのものであり、ＶＨ配列に比較的高い親和性（約１０−１０Ｍ）を表わすと考えられこと、及び、遊離したＣ末端は、これらのＨＡＶＨ自己抗体のＶＨドメインへの結合に重要であると考えらえることが言及されている。
【００１３】
また、バイオ治療分子に対する既存のバイオ治療反応性抗体及びそのレギュラトリーな影響に関する問題は、Xue et al., AAPS J. 2013; 15(3):852-5において、全体的に議論されている。
【００１４】
また、前述の従来技術では、このような既存の抗体／因子の可変ドメインへの結合を妨げる又は低下させるために、免疫グロブリン可変ドメインの配列を改変することができる方法に焦点が当てられてきた。この観点において、国際公開公報第２０１１／０７５８６号には、可変ドメインのアミノ酸配列中において、このドメインの幾つかの特定の位置（この位置は、表面露出している）に、１つ以上の変異を生じさせることが示唆されている。国際公開公報第１２／１７５７４１号には、このような既存の抗体／因子の結合を、少しのアミノ酸残基（及び、最少で１つのアラニン残基）をＶＨドメインのＣ末端に付加することにより、及び／又は、１つ以上の特定の置換もしくは欠失を可変ドメインのＣ末端領域内に生じさせることにより低下させることができることが記載されている。このことは、国際公開公報第１２／１７５７４１号において、Ｃ末端アミノ酸配列ＶＴＶＳＳと１４位におけるアミノ酸残基とを少なくとも含み（これらの位置については、国際公開公報第１２／１７５７４１号には、アラニン残基の存在が、「ヒト」アミノ酸残基であるプロリンの存在と比較して、既存の抗体の低下した結合を提供することが教示されている）、１０８及び８３位のアミノ酸残基ならびに前記位置近くのアミノ酸残基も含む可能性があることが記載されている（国際公開公報第２０１３／０２４０５９号は、国際公開公報第１２／１７５７４１号と同じ教示を本質的に提供する）。
【００１５】
例えば、国際公開公報第１２／１７５７４１号の出願までに、出願人／譲受人主導で行われた調査において、１つのアラニン残基を露出したＶＨドメインのＣ末端領域又は端部に付加することにより、ほとんどのヒト対象から得られたサンプルに存在する既存の抗体／因子の結合（本質的に全ての結合）が通常妨げられ／除去されるであろうことが見出された（例えば、国際公開公報第１２／１７５７４１号の第６２頁２０〜２５行目、及び、第５７頁３０行目〜第５８頁３行目を参照のこと）。これらの知見は、国際公開公報第１２／１７５７４１号のＣ末端アラニン置換を他のナノボディに適用した、国際公開公報第１２／１７５７４１号の出願後の出願人／譲受人により得られた更なる結果により確認されている（データを示さず）。
【００１６】
また、出願人／譲受人による国際公開公報第１２／１７５７４１号及び同第１２／１７５４００号において、国際公開公報第１２／１７５７４１号に記載されたＣ末端伸長が、血清アルブミン結合ナノボディを確認するのに適用されている（例えば、国際公開公報第１２／１７５７４１号：配列番号：３７、５１〜５３、及び５５〜６４、ならびに、配列番号：４１、４３、及び４４に示された構築物、ならびに、国際公開公報第１２／１７５４００号：配列番号：６〜１１を参照のこと）。
【００１７】
また、国際公開公報第１２／１７５７４１号の図９には、以下の実験部において参照配列として使用される、２つのアルブミン結合配列も記載されいてる。これらは、国際公開公報第１２／１７５７４１号の図９からの配列番号：３７（本明細書において、「参照Ｂ」とも呼ばれ、その配列は、本明細書では、配列番号：４５として提供される）及び国際公開公報第１２／１７５７４１号の図９からの「付加されたＣ末端アミノ酸残基を含まない配列番号：３７」（本明細書において、「参照Ａ」とも呼ばれ、その配列は、配列番号：４４に提供される）である。参照Ａ及び参照Ｂは両方とも、国際公開公報第０６／１２２７８７号における配列番号：６２として提供される（及び本明細書では、「Ａｌｂ−１１」とも呼ばれる）、ヒト化抗アルブミンナノボディ「Ａｌｂ−８」の配列から得られる。一方、Ａｌｂ−１１の配列と比較して、参照Ａは、Ｎ末端Ｈｉｓタグを含み、参照Ｂは、Ｎ末端Ｈｉｓタグ及びＣ末端アラニン残基を含む。参照Ａ、参照Ｂ、及びＡｌｂ−８／Ａｌｂ−１１は全て、配列番号：４１〜４３それぞれに提供されるＣＤＲを含有する。
【００１８】
Ｃ末端伸長及び／又はＣ末端領域における変異を有するナノボディ及び他の免疫グロブリンシングル可変ドメインの他の例は、例えば、下記の従来技術に見出すことができる。国際公開公報第０６／１２９８４３号（例えば、配列番号：４、６、８、及び１０を参照のこと）；同第０３／０３５６９５号（例えば、第６１〜６４頁に列記された配列の一部を参照のこと）；Vu et al., Molecular Immunology, 1121-1131, 1997（例えば、図２に列記された配列の一部を参照のこと）；国際公開公報第１１／００３６２２号（例えば、配列番号：１０〜２７として提供された配列を参照のこと）；同第０９／０５８３８３号（例えば、第５１頁で言及されたＴＡＲ２ｈ−１０−２７の配列を参照のこと）；同第１０／０４２８１５号（例えば、配列番号：１５、１７、２７、及び３０の配列を参照のこと）；及び同第０４／０４４２０４号（例えば、配列番号：３１、３５、３７、４７、及び４９の配列を参照のこと）。
【００１９】
また、本明細書で引用された参考文献の一部は、例えば、１１３位におけるセリンが別のアミノ酸により置換されているため、及び／又は、１１３位におけるセリンが欠失されており、かつ、Ｃ末端アミノ酸が付加されている（実際には、Ｃ末端アミノ酸配列に関する最終結果は同じであろう）ために、ＩＳＶＤの最後のＣ末端アミノ酸がセリン（Ｓ）以外のアミノ酸であるＩＳＶＤ配列の例も提供する。
【００２０】
また、本明細書で引用された参考文献の一部は、１１２位がセリン以外のアミノ酸である、ナノボディ及び他の免疫グロブリンシングル可変ドメインの例も提供する。例えば、国際公開公報第１２／１７５７４１号には、１１２位がグリシン（Ｇ）であるナノボディが記載されている。Vu at al.（上記）には、１１２位がアラニン（Ａ）又はイソロイシン（Ｉ）であるナノボディが記載されている。国際公開公報第１３／０２４０５９号には、Ｓ１１２Ａ置換が例示されている。以下で引用された国際公開公報第０８／０２００７９号には、Ｓ１１２Ｆ置換が例示されており、また、同文献中で記載されたナノボディが、ナノボディのアミノ酸配列のカルボキシ末端に付加された限られた数のアミノ酸残基を含有することができることも全体的に記載されている。
【００２１】
本発明までに行われた調査において、Ｃ末端伸長（単純に、１つのＣ末端アラニン残基であることができる。再度、国際公開公報第１２／１７５７４１号、実施例３を参照のこと）をナノボディのＣ末端領域又は端部に付加することにより、ヒトの対象／患者のほとんどのサンプル中における既存の抗体／因子の結合が本質的に妨げられ／除去されることが確立された後、ヒト対象（健康なボランティア及び／又は疾患もしくは障害を患う対象）から得られたサンプルが、Ｃ末端伸長が存在する場合であっても、ナノボディ（又は他のＶＨドメイン）の露出したＣ末端領域に結合することができる（他の）既存の抗体又は因子を含有する可能性があるかどうかが調査された。そうすることで、本発明者らは、Ｃ末端伸長したＶＨドメインに結合するこのような既存の抗体を、健康なボランティアの血液もしくは血清中において、又は、数多くの種類の疾患の内の１つ（一部の炎症性疾患又は自己免疫障害−データを示さず）を患うヒト患者から得られた血液もしくは血清中において、基本的に見出すことができなかったが、特定の重篤な（自己）免疫障害（例えば、全身性エリテマトーデス、本明細書において、「ＳＬＥ」とも略される）を患う特定（全員ではない）ヒト対象から得られた一部の血液又は血清サンプルは、前記ナノボディがＣ末端伸長を含む場合であっても、ナノボディに結合することができる、一部の既存の抗体／因子を含有すると考えられる。
【００２２】
このため、一般的には、本発明の目的は、露出したＣ末端領域又は端部を有する場合、既存の抗体又は因子、例えば、ヒト対象から得られた血液又は血清サンプル中に見出されるものにより結合される傾向がほとんどない、改善された重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（及び特に、改善された重鎖ＩＳＶＤ、及びとりわけ、改善されたナノボディ）を提供することである。
【００２３】
特に、本発明の目的は、露出したＣ末端領域又は端部を有する場合、前記ドメインがＣ末端伸長（例えば、国際公開公報第１２／１７５７４１号、同第１３／０２４０５９号、及び本明細書で引用された更なる従来技術に記載）を含む場合でも、重鎖可変ドメインの露出したＣ末端領域又は端部にも結合することができる、既存の抗体又は因子（再度、例えば、ヒト対象から得られた血液又は血清サンプル中に見出されるもの）により結合される傾向がほとんどない、改善された重鎖免疫グロブリン可変ドメインを提供することである。
【００２４】
本明細書で言及されたように、Ｃ末端伸長を有する重鎖可変ドメインに結合することができるこのような既存の抗体が、本発明者らにより、免疫系に重篤な影響を及ぼし／同免疫系を活性化する特定の（自己）免疫疾患又は障害（例えば、ＳＬＥ）を患うヒト対象から得られた血液又は血清試料に存在することが見出されている。
【００２５】
このため、とりわけ、本発明の目的は、露出したＣ末端領域又は端部を有する場合、既存の抗体又は因子、例えば、免疫系に重篤な影響を及ぼし／同免疫系を活性化する特定の（自己）免疫疾患又は障害（例えば、ＳＬＥ）を患うヒト対象から得られた血液又は血清サンプル中に見出されるものにより結合される傾向がほとんどない、改善された重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（及び特に、改善された重鎖ＩＳＶＤ、及びとりわけ、改善されたナノボディ）を提供することである。
【００２６】
さらにとりわけ、本発明の目的は、露出したＣ末端領域又は端部を有する場合、特定の（自己）免疫疾患又は障害を患うヒト対象から得られた血液又は血清サンプル中に見出され、ＶＨドメインがＣ末端伸長を含む場合でも、ＶＨドメインの露出したＣ末端領域又は端部にも結合することができる既存の抗体又は因子により結合される傾向がほとんどない、改善された重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（及び特に、改善された重鎖ＩＳＶＤ、及びとりわけ、改善されたナノボディ）を提供することである。
【００２７】
現在、既存の抗体／因子の露出したＣ末端領域を有する重鎖可変ドメインへの結合を、１１２位（Ｋａｂａｔナンバリング）におけるセリンのリシン（Ｋ）又はグルタミン（Ｑ）のいずれかへの変異により、（更に）低下させることができることが見出されてきた。特に、このようなＳ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｑ変異により、Ｃ末端伸長を含む（が、Ｓ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｑ変異を含まない）重鎖可変ドメインに結合することができる既存の抗体／因子、例えば、重篤な自己免疫障害、例えば、ＳＬＥを患うヒト対象の血液又は血清中に見出された既存の抗体／因子の結合が、（更に）低下し、又は、同結合が本質的に妨げられ／除去されることが見出された。
【００２８】
本明細書で開示された特定の変異（及び特に、Ｖ８９Ｌとの組み合わせにおける、及び場合により、更にＴ１１０Ｋとの組み合わせにおける下記変異Ｌ１１Ｖ）を導入することは、本明細書で一般的に及び具体的に開示された免疫グロブリンシングル可変ドメイン、例えば、ＩＳＶＤの溶解性を改善することができ、又は、同溶解性の（更なる）改善に寄与することができる（データを示さず）。
【００２９】
このため、第１の態様では、本発明は、１１２位（Ｋａｂａｔナンバリング）におけるアミノ酸残基は、リシン（Ｋ）残基又はグルタミン（Ｑ）残基のいずれかである、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）に関する。このような免疫グロブリン重鎖可変ドメインは、本明細書において、「本発明のＶＨドメイン」とも呼ばれる。本発明のＶＨドメインが、免疫グロブリンシングル可変ドメインである（同様に、好ましい）場合、免疫グロブリンシングル可変ドメインは、本明細書において、「本発明のＩＳＶＤドメイン」とも呼ばれるであろう。同様に、本発明のＶＨドメインが、ナノボディである（同様に、更により好ましい）場合、ナノボディは、本明細書において、「本発明のナノボディ」とも呼ばれるであろう。
【００３０】
一般的には、本発明のＶＨドメインは、露出したＣ末端又は領域のいずれかを有し、及び／又は、露出したＣ末端又は領域を有するタンパク質、ポリペプチド、化合物、成分、又は構築物中に存在し、及び／又は、露出したＣ末端又を有する使用（例えば、Ｃ末端又は領域を形成するのを意図したタンパク質、ポリペプチド、化合物、成分、又は構築物における使用）を意図されている。
【００３１】
本発明の一態様では、本発明のＶＨドメインは、ＶＬドメインとの相互作用無しに、機能的な抗原結合部位を形成することができる重鎖可変ドメインを意味する、（重鎖）免疫グロブリンシングル可変ドメインである。例えば、本発明のＶＨドメインは、ナノボディ（ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、及び／又はラクダ化ＶＨ、例えば、ラクダ化ヒトＶＨを含む）、ＶＨドメインであるか、もしくは、ＶＨドメインから得られる（シングル）ドメイン抗体、又は、ＶＨドメインであるか、もしくは、ＶＨドメインから得られるｄＡｂであることができる。本発明のＶＨドメインは、好ましくは、ナノボディ（例えば、ＶＨＨドメイン、ヒト化ＶＨＨドメイン、又はラクダ化ＶＨドメイン、例えば、ラクダ化ヒトＶＨドメイン）である。
【００３２】
本発明の別の態様によれば、本発明のＶＨドメインは、それが存在するタンパク質、ポリペプチド、タンパク質、又は構築物において、抗原結合部位を形成するために、ＶＬドメインとの相互作用を必要とし、露出したＣ末端又は領域を有するもしくは形成する重鎖可変ドメインであることができる。例えば、本発明のこの態様のＶＨドメインは、ＳｃＦｖ及び／もしくはディアボディに存在し、ならびに／又は、ＳｃＦｖ及び／もしくはディアボディに使用されるＶＨドメインであることができる。
【００３３】
本発明のより具体的な態様によれば、本発明のＶＨドメインは、ＶＴＶＫＳ（配列番号：１）もしくはＶＴＶＱＳ（配列番号：２）であるＣ末端配列（Ｋａｂａｔに従った１０９〜１１３位）、又は、配列ＶＴＶＫＳ及び／もしくはＶＴＶＱＳのいずれかと１つのアミノ酸差（すなわち、１０９、１１０、１１１、又は１１３位の内の１つ）を有し、それでも１１２位においてリシン（Ｋ）もしくはグルタミン（Ｇ）のいずれかを有する配列を有する。
【００３４】
また、本明細書で更に記載されたように、本発明の特に好ましい一態様では、本発明のＶＨドメインは、Ｃ末端伸長（例えば、国際公開公報第１２／１７５７４１号及び／又は同第１３／０２４０５９号に記載された通り）、特に、本明細書で更に定義されたＣ末端伸長も、そのＣ末端（すなわち、ＶＴＶＫＳ−、ＶＴＶＱＳ−、又は類似するモチーフの端部においてセリン残基に連結されている）に含有する。ただし、本明細書でも更に記載されたように、ＶＴＶＫＳ−、ＶＴＶＱＳ−、又は類似するモチーフは、ＶＨドメインのＣ末端を形成する（ただし、これは、通常ほとんど好ましくないであろう）こと、又は、本発明のＶＨドメインは、そのＣ末端において（場合により、適切なリンカーを介して）、別のアミノ酸配列、部分、ドメイン、もしくは結合ユニットに連結されることも可能である。例えば、本発明のＶＨドメインがＩＳＶＤである場合、ＶＨドメインは、そのＣ末端において、別のＩＳＶＤに、場合により、リンカーを介して連結することができる（及び、例えば、前記他のＩＳＶＤも、本発明のＶＨドメインであることができる）。
【００３５】
全体として、一般的に免疫グロブリン可変ドメインについて周知であるように、本発明のＶＨドメインは、４つのフレームワーク領域（ＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３、及びＦＷ４）と、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）とを含むであろう。一般的には、免疫グロブリン可変ドメインについてと同様に、ＣＤＲの配列は、本発明のＶＨドメインが生じ、及び／又は、結合することが意図される、抗原／ターゲットにより決まるであろう。フレームワーク領域は、一般的には、ＶＨドメインの任意の適切なフレームワーク領域であることができる（それでも、１１２位及び／又は８９位は、本明細書で更に記載された通りであろう）。本発明のＶＨドメインがＩＳＶＤである場合、ＶＨドメインは、ＩＳＶＤに適したフレームワーク配列を有するであろう（場合により、１つ以上のＣＤＲとの会合において）。例えば、本発明のＶＨドメインがナノボディである場合、フレームワーク領域は、一般的には、適切な数のＶＨＨホールマーク残基を含有するであろう（これについては、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号及び本明細書で引用された出願人／譲受人の一部の他の特許出願が参照される）。
【００３６】
このため、例えば、本発明のＶＨドメインがナノボディである場合、前記本発明のナノボディは、ＶＨＨ／ナノボディに特徴的な１つ以上の「ホールマーク残基」（例えば、１１、３７、４４、４５、４７、８３、８４、１０３、１０４、及び／又は１０８位、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−３及びＡ−５〜Ａ−８を参照のこと）；ＶＨＨ／ナノボディに存在することができる１つ以上の他のアミノ酸残基（例えば、それ自体がＶＨＨ及びナノボディについて公知である１つ以上のヒト化置換、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号における教示が参照され、再度、先に言及された表Ａ−３及びＡ−５〜Ａ−８を参照のこと）、ならびに／又は、ＶＨＨ／ナノボディについて１つ以上の他の適切なアミノ酸残基もしくは置換；又は、このようなアミノ酸残基／置換の任意の適切な組み合わせを含有することができる。
【００３７】
１１２位がＫ又はＱである（すなわち、Ｃ末端伸長の有無に関わらず）本発明のナノボディは、好ましくは、Ｌ（ＶＨＨ中に最も頻繁に生じるアミノ酸残基）、Ｅ、Ｋ、Ｍ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹから選択され、より好ましくは、Ｌ、Ｅ、Ｋ、Ｖ、又はＹから選択され、及び更により好ましくは、Ｌ、Ｋ、又はＶ（Ｖが最も好ましい）から選択される、１１位におけるアミノ酸を含有する。例えば、限定されず、ＶＨＨに最も頻繁に生じるロイシン残基と比較して、本発明のナノボディは、Ｌ１１Ｋ又はＬ１１Ｖ変異を含有することができるが、これに限定されない。また、本発明のナノボディは、例えば、Ｑ１０８Ｌ変異（ＶＨＨ／ナノボディについて周知のヒト化置換）を含有することができるが、これに限定されない。存在することができる他のアミノ酸残基（再度、限定されず、例えば、ヒトＶＨ又はＶＨＨ中のこの位置における天然の他のアミノ酸残基も、これらの位置に存在することができる）は、例えば、１４位におけるアラニン（Ａ）（天然のＶＨＨ中のこの位置において非常に頻繁に生じるアミノ酸残基である）、１４位におけるプロリン（ヒトＶＨドメイン中のこの位置において最も一般的なアミノ酸である）、及び、Harmsen et al.により示唆された変異（特に、Harmsen et al.において、ＶＨＨ４−クラスＶＨＨ、例えば、Ｖ８９Ｍ又はＶ８９Ｔに基づいて示唆されているもの）、ならびに／又は、Niebaにおいて示唆された位置における（他の）変異（例えば、１１、８７、及び／又は８９位の内の１つ以上において、Nieba、第４３７頁、右側欄）の内の１つ以上である。別の適切な変異は、例えば、Ｔ１１０Ｋ又はＴ１１０Ｑである。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができ（又は、これらから選択することができ）（これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり）、及びとりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）また、４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、及び特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００３８】
本発明のより具体的な態様によれば、（本明細書で更に記載された）本発明のＶＨドメインは、下記のいずれかであるフレームワーク４（ＦＷ４配列）を有する。
ａ）以下の表１で言及された配列番号：３〜２０のＦＷ４配列の内の１つ
【表１】
2018162297.tif 000002
又は、
ｂ）配列番号：３〜２０のＦＷ４配列の内の少なくとも１つに対して、３つ未満、好ましくは２つ未満のアミノ酸差を有する配列。ここで、（ｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１１２位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、Ｋ又はＱのいずれかであり、ここで、（ｉｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０３位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｗ又はＲであり、（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０４位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｇであり、（ｉｖ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０６位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｇであり、（ｖ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０７位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｔであり、（ｖｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０８位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｑ又はＬであり（及び、ヒト化ナノボディでは、好ましくは、Ｌであり）、（ｖｉｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０９位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｖであり、（ｖｉｉｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１１０位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｔであり（又は、代替的に、ＫもしくはＱであることができ）、（ｉｘ）Ｋａｂａｔナンバリングの１１１位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｖである。以下の表２に、このようなＦＷ４配列の（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされた）種々の位置に存在することができるアミノ酸残基の一部の非限定的な例を提供する。
【００３９】
【表２】
2018162297.tif 000003
【００４０】
好ましくは、本発明のＶＨドメインは、下記のいずれかであるフレームワーク４（ＦＷ４配列）を有する。
ａ）ＷＧＱＧＴＱＶＴＶＫＳ（配列番号：３）又はＷＧＱＧＴＱＶＴＶＱＳ（配列番号：１２）
又は、
ｂ）配列番号：３及び／又は配列番号：１２に対して、３つ未満、好ましくは２つ未満のアミノ酸差（例えば、１つのみのアミノ酸差）を有する配列。ここで、（ｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１１２位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、Ｋ又はＱのいずれかであり、ここで、（ｉｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０３位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｗ又はＲであり、（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０４位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｇであり、（ｉｖ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０６位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｇであり、（ｖ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０７位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｔであり、（ｖｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０８位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｑ又はＬであり（及び、ヒト化ナノボディでは、好ましくは、Ｌであり）、（ｖｉｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０９位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｖであり、（ｖｉｉｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１１０位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｔであり（又は、代替的に、ＫもしくはＱであることができ）、（ｉｘ）Ｋａｂａｔナンバリングの１１１位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、好ましくは、Ｖである。再度、表２に、このようなＦＷ４配列の（Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされた）種々の位置に存在することができるアミノ酸残基の一部の非限定的な例を提供する。
【００４１】
本明細書で更に記載されたように、本発明の好ましい態様によれは、上記されたＦＷ４配列を含む本発明のＶＨドメインは、好ましくは、（本明細書で更に記載された）Ｃ末端伸長も含有する。ただし、本明細書でも更に記載されたように、ＦＷ４配列が、ＶＨドメインのＣ末端を形成する可能性もあり（ただし、これは、通常ほとんど好ましくないであろう）、又は、本発明のＶＨドメインは、そのＣ末端において（場合により、適切なリンカーを介して）、別のアミノ酸配列、部分、ドメイン、又は結合ユニットに連結する可能性もある。例えば、本発明のＶＨドメインがＩＳＶＤである場合、ＶＨドメインは、そのＣ末端において、別のＩＳＶＤに、場合により、リンカーを介して連結することができる（及び、例えば、前記他のＩＳＶＤも、本発明のＶＨドメインであることができる）。
【００４２】
本明細書で示されたように、本発明の好ましく、非限定的な態様によれば、本発明のＶＨドメインは、Ｃ末端伸長、例えば、国際公開公報第１２／１７５７４１号及び／又は同第１３／０２４０５９号に記載され、及び特に、国際公開公報第１２／１７５７４１号に記載されたＣ末端伸長を含有する。
【００４３】
このため、この態様によれば、本発明のＶＨドメインは、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）であって、（ｉ）１１２位（Ｋａｂａｔナンバリング）におけるアミノ酸残基は、セリン残基ではなく、好ましくは、リシン（Ｋ）残基又はグルタミン（Ｑ）残基のいずれかであり、（ｉｉ）そのＣ末端（すなわち、Ｋａｂａｔナンバリングに従った１１３位であるか、又は、同１１３位に対応する位置において、アミノ酸残基に連結した）において、それぞれ独立して、適切なアミノ酸残基から選択され、好ましくはそれぞれ独立して、天然アミノ酸から選択され、より好ましくはそれぞれ独立して、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から選択される、１〜５個（例えば、１、２、３、４、又は５個、及び好ましくは、１、２、又は３個、及び最も好ましくは、１又は２個のみ、例えば、１個のみ）のアミノ酸残基を含む、更なるアミノ酸配列（すなわち、「Ｃ末端伸長」）に連結している（ただし、国際公開公報第１２／１７５７４１号に表されたデータからわかるように、他のアミノ酸残基、例えば、セリン、プロリン、スレオニン、及び／又はリシンも、Ｃ末端伸張の一部として使用することができる）。
【００４４】
特に、本発明のこの態様によれば、本発明のＶＨドメインは、好ましくは、ＶＴＶＫＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：２１）又はＶＴＶＱＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：２２）である（又は、ＶＴＶＫＳモチーフ又はＶＴＶＱＳモチーフの位置において、配列ＶＴＶＫＳ及び／又はＶＴＶＱＳのいずれかに対して１つのアミノ酸差有し、さらに、１１２位において、リシン（Ｋ）又はグルタミン（Ｑ）のいずれかを有する）Ｃ末端配列を有する。ここで、（ｉ）ＶＴＶＫＳもしくはＶＴＶＱＳモチーフ（又は、ＶＴＶＫＳもしくはＶＴＶＱＳ様モチーフ）のアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、ＶＨドメインの１０９〜１１３位に対応し、（ｉｉ）ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、（ｉｉｉ）各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される。
【００４５】
とりわけ、本発明のこの態様によれば、本発明のＶＨドメインは、そのＦＷ４配列として、配列番号：３〜２０のＦＷ４配列（又は、配列番号：３〜２０のＦＷ４配列の内の少なくとも１つに対して、３つ未満、好ましくは２つ未満のアミノ酸差を有するアミノ配列、ここで、Ｋａｂａｔナンバリングの１１２位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、Ｋ又はＱのいずれかである）の内の１つを有することができる。ここで、前記ＦＷ４配列は、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］に連結している。
【００４６】
したがって、本発明のこの態様では、本発明のＶＨドメインは、そのＣ末端において、下記のいずれかを有することができる。
ａ）表３中の配列番号：２３〜４０として提供されるアミノ酸配列の内の１つ
【表３】
2018162297.tif 000004
［ここで、（ｉ）配列番号：２３〜４０中の（Ｘ）ｎＣ末端伸長に先立つＦＷ４配列のアミノ酸残基は、ＶＨドメインにおけるＦＷ４のアミノ酸位置（すなわち、Ｋａｂａｔナンバリングに従った１０３〜１１３位）に対応し、（ｉｉ）ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、（ｉｉｉ）各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］
又は、
ｂ）配列番号：２３〜４０のアミノ酸配列の内の少なくとも１つに対して、３つ未満、好ましくは２つ未満のアミノ酸差を有するアミノ酸配列［ここで、前記アミノ酸差は、ＶＨドメインにおけるＦＷ４のアミノ酸位置に対応する位置、すなわち、Ｋａｂａｔナンバリングに従った１０３〜１１３位においてであり、ただし、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ中の任意のアミノ酸差は無視される）。ここで、（ｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１１２位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり、（ｉｉ）ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、（ｉｉｉ）各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される。再度、先の文章で言及された特徴（ｉ）〜（ｉｉｉ）に対して更に、このようなアミノ酸配列において、（ｉｖ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０３位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｗ又はＲであり、（ｖ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０４位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｇであり、（ｖｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０６位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｇであり、（ｖｉｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０７位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔであり、（ｖｉｉｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０８位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｑ又はＬであり（及び、ヒト化ナノボディでは、好ましくは、Ｌであり）、（ｉｘ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０９位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｖであり、（ｘ）Ｋａｂａｔナンバリングの１１０位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔであり（又は、代替的に、ＫもしくはＱであることができ）、（ｘｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１１１位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｖである。再度、表２に、各位置に存在することができる、潜在的なアミノ酸残基について、参照がなされる。
【００４７】
好ましくは、本発明のこの態様によれば、本発明のＶＨドメインは、そのＣ末端において、下記のいずれかを有する。
ａ）ＷＧＱＧＴＱＶＴＶＫＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：２３）又はＷＧＱＧＴＱＶＴＶＱＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：３２）［同配列中、（ｉｉ）ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、（ｉｉｉ）各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］であるアミノ酸配列
又は
ｂ）ＷＧＱＧＴＱＶＴＶＫＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：２３）又はＷＧＱＧＴＱＶＴＶＱＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：３２）のアミノ酸配列の内の少なくとも１つに対して、３つ未満、好ましくは２つ未満のアミノ酸差を有するアミノ酸配列（ここで、前記アミノ酸差は、ＶＨドメインにおけるＦＷ４のアミノ酸位置に対応する位置、すなわち、Ｋａｂａｔナンバリングに従った１０３〜１１３位においてであり、ただし、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ中の任意のアミノ酸差は無視される）。ここで、（ｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１１２位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり、（ｉｉ）ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、（ｉｉｉ）各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される。再度、このようなアミノ酸配列に対して、先の段落で記載された特徴（ｖｉ）〜（ｘｉ）も、好ましくは適用する。
【００４８】
また、本明細書で言及されたように、本発明のＶＨドメインは、それ自体が、ＶＨドメイン、及び特に、ＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）について当技術分野において公知である他のアミノ酸残基又は置換を、関連する位置に含有することができる。一部の非限定的な例は、本明細書で言及された通りであり、例えば、ＶＨＨ／ナノボディに特徴的な１つ以上の「ホールマーク残基」（例えば、１１位におけるロイシン（Ｌ）を含む）、ＶＨＨに自然に生じる他のアミノ酸残基（例えば、１４位におけるアラニン（Ａ））、それ自体がＶＨＨ／ナノボディについて公知であるヒト化置換（例えば、Ｑ１０８Ｌ及びＡ１４Ｐ）、Harmsenに示唆された１つ以上の変異（例えば、Ｖ８９Ｍ又はＶ８９Ｔ）、及び／又は、Niebaに示唆された位置（例えば、１１、８７、又は８９）、又は、それらの任意の適切な組み合わせ、及び／又は、例えば、Ｔ１１０Ｋ、Ｔ１１０Ｑ、もしくはＶ８９Ｌ変異を含む。
【００４９】
本発明のＶＨドメインがＣ末端伸長（Ｘ）ｎを含有する場合、このような伸張の一部の好ましく、非限定的な例によれば、Ｘ及びｎは、下記の通りであることができる。
（ａ）ｎ＝１及びＸ＝Ａｌａ；
（ｂ）ｎ＝２及び各Ｘ＝Ａｌａ；
（ｃ）ｎ＝３及び各Ｘ＝Ａｌａ；
（ｄ）ｎ＝２及び少なくとも一方のＸ＝Ａｌａ（ここで、残りのアミノ酸残基Ｘは、任意の天然のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくは、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及び／又はＩｌｅから独立して選択される）；
（ｅ）ｎ＝３及び少なくとも１つのＸ＝Ａｌａ（ここで、残りのアミノ酸残基Ｘは、任意の天然のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくは、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及び／又はＩｌｅから独立して選択される）；
（ｆ）ｎ＝３及び少なくとも２つのＸ＝Ａｌａ（ここで、残りのアミノ酸残基Ｘは、任意の天然のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくは、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及び／又はＩｌｅから独立して選択される）；
（ｇ）ｎ＝１及びＸ＝Ｇｌｙ；
（ｈ）ｎ＝２及び各Ｘ＝Ｇｌｙ；
（ｉ）ｎ＝３及び各Ｘ＝Ｇｌｙ；
（ｊ）ｎ＝２及び少なくとも一方のＸ＝Ｇｌｙ（ここで、残りのアミノ酸残基Ｘは、任意の天然のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくは、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及び／又はＩｌｅから独立して選択される）；
（ｋ）ｎ＝３及び少なくとも１つのＸ＝Ｇｌｙ（ここで、残りのアミノ酸残基Ｘは、任意の天然のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくは、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及び／又はＩｌｅから独立して選択される）；
（ｌ）ｎ＝３及び少なくとも２つのＸ＝Ｇｌｙ（ここで、残りのアミノ酸残基Ｘは、任意の天然のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくは、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及び／又はＩｌｅから独立して選択される）；
（ｍ）ｎ＝２及び各Ｘ＝Ａｌａ又はＧｌｙ；
（ｎ）ｎ＝３及び各Ｘ＝Ａｌａ又はＧｌｙ；
（ｏ）ｎ＝３及び少なくとも１つのＸ＝Ａｌａ又はＧｌｙ（ここで、残りのアミノ酸残基Ｘは、任意の天然のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくは、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及び／又はＩｌｅから独立して選択される）；又は、
（ｐ）ｎ＝３及び少なくとも２つのＸ＝Ａｌａ又はＧｌｙ（ここで、残りのアミノ酸残基Ｘは、任意の天然のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくは、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及び／又はＩｌｅから独立して選択される）。
【００５０】
ここで、態様（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｍ）、及び（ｎ）が特に好ましく、ｎ＝１又は２である態様が好ましく、ｎ＝１である態様が特に好ましい。
【００５１】
また、好ましくは、本発明のＶＨドメインに存在する任意のＣ末端伸張は、（遊離した）システイン残基を含有しないこと（前記システイン残基が更なる官能化、例えば、ペグ化に使用される又は同官能化を意図されない限り）も留意されたい。
【００５２】
また、国際公開公報第１２／１７５７４１号に基づいて使用されるＣ末端伸張（これは、本発明のＶＨドメインに使用される好ましいＣ末端伸張でもある）について、国際公開公報第１２／１７５７４１号の第３５〜４１頁に示された選択は、本発明のＶＨドメインに使用される好ましいＣ末端伸張にも適用する。また、国際公開公報第１２／１７５７４１号に基づくこれらの選択は、参照により本明細書に含まれる。
【００５３】
好ましくは、本発明のＶＨドメインがＣ末端伸長（Ｘ）ｎを含有する場合、ｎ＝１、２、又は３であり、各Ｘは、Ａｌａ又はＧｌｙのいずれかである。より好ましくは、各Ｘは、Ａｌａであり、ｎ＝１又は２であり、好ましくは、１である。
【００５４】
本発明のＶＨドメインがＣ末端伸長を含有する場合、本発明のＶＨドメインは、それが存在するタンパク質、ポリペプチド、化合物、構築物、又は他の化学成分のＣ末端に、通常存在する（多くの場合、同Ｃ末端を形成する）であろう。再度、このようなタンパク質、ポリペプチド、化合物、構築物、又は他の化学成分は、１つ以上の他の本発明のＶＨドメイン（すなわち、Ｃ末端においてではない）を含有することができる。このような場合において、前記他の本発明のＶＨドメインは、１１２位にリシン（Ｋ）又はグルタミン（Ｑ）を含有する（及び、本明細書で更に記載された通り）であろうが、Ｃ末端伸張を含有しないであろう（その代わりに、そのＣ末端において、タンパク質、ポリペプチド、化合物、構築物、又は他の化学成分に存在する１つ以上の他のアミノ酸配列、部分、結合ドメイン、又は結合ユニット、例えば、Ｃ末端に存在するＣ末端伸張を有する本発明のＶＨドメインに（場合により、１つ以上の適切なリンカーを介して）連結することができる）。
【００５５】
本発明のＶＨドメイン（ならびに、本明細書で更に記載されたのと同じものを含むタンパク質、ポリペプチド、化合物、構築物、及び他の化学成分）が、医薬用途（例えば、それを必要とするヒト対象における疾患及び障害の予防、治療、及び／又は診断）に使用するのに特に有用である（及び、同使用が意図される）場合、本発明のＶＨドメインは、好ましくは、ヒトＶＨドメインのフレームワーク領域に対して、そのフレームワーク領域における高い度合いの配列相同性を有する。特に、本発明のＶＨドメインは、好ましくは、少なくとも１つのヒト生殖系配列（例えば、ＤＰ−４７、ＤＰ−５１、又はＤＰ−２９）に対して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば、９０％以上の、全体的な度合いの配列同一性を有する（本明細書で更に記載された通りに決定、フレームワーク領域のみを考慮し、ＣＤＲを考慮せず、１１２位における置換及び存在する場合、任意のＣ末端伸張も考慮しない）。とりわけ、本発明のＶＨドメインは、好ましくは、少なくとも１つの下記ヒト生殖系配列：ＤＰ−４７、ＤＰ−５１、及び／又はＤＰ−２９に対して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば、９０％以上の、全体的な度合いの配列同一性を有する（本明細書で更に記載された通りに決定、フレームワーク領域のみを考慮し、ＣＤＲを考慮せず、１１２位における置換及び存在する場合、任意のＣ末端伸張も考慮しない）。
【００５６】
本明細書で更に記載されたように、本発明の一態様によれば、本発明のＶＨドメインは、それが存在するタンパク質、ポリペプチド、タンパク質、又は構築物において、抗原結合部位を形成するために、ＶＬドメインと相互作用／会合する（又は、相互作用／会合することが意図される）、重鎖可変ドメインであることができる。ここで、少なくともＶＨドメインは、露出したＣ末端又は領域を有する。例えば、本発明のこの態様におけるＶＨドメインは、ＳｃＦｖ及び／又はディアボディに存在し、及び／又は、これらに使用されるＶＨドメインであることができる。この場合、本発明のＶＨドメインは、抗原結合部位を形成するために、ＶＬドメインと会合するであろう。
【００５７】
ただし、本発明の好ましい態様によれば、本発明のＶＨドメインは、ＶＬドメインとの相互作用無しに、機能的な抗原結合部位を形成することができる重鎖可変ドメインを意味する、（重鎖）免疫グロブリンシングル可変ドメイン又は「ＩＳＶＤ」である。例えば、本発明のＶＨドメインは、ナノボディ（ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、及び／又はラクダ化ＶＨ、例えば、ラクダ化ヒトＶＨを含む）、ＶＨドメインであるか、もしくは、ＶＨドメインから得られる（シングルドメイン）抗体、又は、ＶＨドメインであるか、もしくは、ＶＨドメインから得られるｄＡｂであることができる。本発明のＶＨドメインは、好ましくは、ナノボディ（及びより好ましくは、ＶＨＨドメイン、ヒト化ＶＨＨドメイン、又はラクダ化ＶＨドメイン、例えば、ラクダ化ヒトＶＨドメイン）である。
【００５８】
本明細書において、
「ナノボディ」という用語は、一般的には、国際公開公報第０８／０２００７９号又は同第０９／１３８５１９号に定義された通りであり、このため、具体的な態様では、一般的には、ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、もしくはラクダ化ＶＨ（例えば、ラクダ化ヒトＶＨドメイン）又は、一般的には、配列最適化ＶＨＨ（例えば、化学的安定性及び／又は可溶性の最適化、公知のヒトフレームワーク領域との最大オーバーラップ、ならびに最大発現等）を意味する。ナノボディ（Nanobody）又はナノボディ（Nanobodies）という用語は、Ablynx N. V.の登録商標であるため、ナノボディ（Nanobody）（登録商標）又はナノボディ（Nanobodies）（登録商標）とも呼ぶことができることが留意される。
【００５９】
その最も広い意味において、本明細書で使用する時、「ＩＳＶＤ」（又は、「ＩＳＶ」）という用語は、「ＩＳＶＤ系生物学的製剤」も含み、ＩＳＶＤがナノボディである場合、「ナノボディ系生物学的製剤」も含む。「ＩＳＶＤ系生物学的製剤」は、本明細書において、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）のＩＳＶＤを含むか、又は、本質的に同ＩＳＶＤからなる、タンパク質、ポリペプチド、又は他の生物学的薬剤と定義される。同様に、「ナノボディ系生物学的製剤」は、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）のナノボディを含むか、又は、本質的に同ナノボディからなる、タンパク質、ポリペプチド、又は他の生物学的薬剤と定義される。「ＩＳＶＤ」という用語についてと同様に、「ＩＳＶＤ系生物学的製剤」という用語が使用される場合、このようなＩＳＶＤ系生物学的製剤は、好ましくは、ナノボディ系生物学的製剤であることを理解されたい。本発明の文脈内において、「ＩＳＶＤ系生物学的製剤」及び「ナノボディ系生物学的製剤」は両方とも、例えば、一価、二価（又は多価）、二重特異性（又は多重特異性）、及び二重抗原結合性（又は多重抗原結合性）のＩＳＶＤ構築物又はナノボディ構築物それぞれであることができる。また、任意のＩＳＶＤ系又はナノボディ系生物学的製剤は、例えば、１つ以上（例えば、１、２、又は３つ）のＩＳＶＤ又はナノボディに加えて、場合により更に、１つ以上（例えば、１つ又は２つ）の他の更なる治療部分及び／又は１つ以上（例えば、１つ又は２つ）の、ＩＳＶＤ系又はナノボディ系生物学的製剤の薬理学的又は薬力学的特性（例えば、半減期）に影響を及ぼす他の部分を含む。このような更なる治療的又は他の部分の適切な例は、当業者に明らかであろうし、例えば、一般的には、任意の治療活性タンパク質、ポリペプチド、又は他の結合ドメインもしくは結合ユニット、及び、例えば、改変、例えば、国際公開公報第０９／１３８１５９号の第１４９〜１５２頁に記載されたものを含むことができる。ＩＳＶＤ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤は、好ましくは、治療剤であるか、又は、治療剤（予防及び診断を含む）としての使用が意図されており、この目的のために、好ましくは、治療関連ターゲット（例えば、ＲＡＮＫ−Ｌ、ｖＷＦ、ＩｇＥ、ＲＳＶ、ＣＸＣＲ−４、ＩＬ−２３、又は他のインターロイキン等）に対する少なくとも１つのＩＳＶＤを含有する。このようなＩＳＶＤ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤の一部の具体的で、非限定的な例については、実施例８〜１８が参照され、また例えば、Ablynx N.V.による種々の出願（例えば、限定されず、国際公開公報第２００４／０６２５５１号、同第２００６／１２２８２５号、同第２００８／０２００７９号、及び同第２００９／０６８６２７号等）及び、例えば（及び、限定されず）、国際公開公報第０６／０３８０２７号、同第０６／０５９１０８号、同第０７／０６３３０８号、同第０７／０６３３１１号、同第０７／０６６０１６号、及び同第０７／０８５８１４号等の出願も参照される。また、本明細書で更に記載されたように、本明細書で記載されたＩＳＶＤ又はナノボディは、（ヒト）血清タンパク質、例えば、（ヒト）血清アル���ミンに対することができる。また、このようなＩＳＶＤ又はナノボディは、特に、治療部分及び化合物の半減期における、及び／又は、同半減期を伸ばすための（例えば、本明細書で記載されたＩＳＶ系生物学的製剤における、及び／又は、同ＩＳＶ系生物学的製剤のための）、治療的使用を見出すことができる。例えば、国際公開公報第２００４／０４１８６５号、同第２００６／１２２７８７号、及び同第２０１２／１７５４００号が参照される。これらの国際公開公報には、一般的に、半減期を伸ばすための、血清アルブミン結合ナノボディの使用が記載されている。また、本明細書において、特に断りない限り、本明細書で言及された全ての用語は、国際公開公報第０９／１３８５１９号（又は、同第０９／１３８５１９号で引用された従来技術）又は国際公開公報第０８／０２００７９号（又は、同第０８／０２００７９号で引用された従来技術）に提供された意味を有する。また、方法又は技術が、本明細書に具体的に記載されていない場合には、国際公開公報第０９／１３８５１９号（又は、同第０９／１３８５１９号で引用された従来技術）又は国際公開公報第０８／０２００７９号（又は、同第０８／０２００７９号で引用された従来技術）に記載された通りに行うことができる。
【００６０】
また、本明細書又は特許請求の範囲で使用する時、下記用語：「アゴニスト」、「アンタゴニスト」、「逆アゴニスト」、「非極性、無電荷アミノ酸残基」、「極性の無電荷アミノ酸残基」、「極性の電荷アミノ酸残基」、「配列同一性」、「正確に同じ」、及び「アミノ酸差」（２つのアミノ酸配列の配列比較に言及する場合）、「本質的に単離された（形態）（において）」、「ドメイン」、「結合ドメイン」、「抗原決定基」、「エピトープ」、「に対して」、（抗原）「に対する」、「特異性」、及び「半減期」は、国際公開公報第０９／１３８５１９号の第６２〜７５頁に提供されたのと同じ意味を有し、及び／又は、その適用可能性は、同頁に記載された方法において決定することができる。加えて、「モデュレーションすること」及び「モデュレーションするために」、「相互作用部位」、「に特異的な」、「クロスブロック」、「クロスブロックした」、及び「クロスブロッキング」、ならびに「本質的にｐＨとは独立して」という用語は、出願人の国際公開公報第１０／１３０８３２号における第７４〜７９頁に定義された通りである（及び／又は、同頁に記載された通りに決定することができる）。また、本発明の構築物、化合物、タンパク質、又はポリペプチドに言及する場合、「一価」、「二価」（又は「多価」）、「二重特異性」（又は「多重特異性」）、及び「二重抗原結合性」（又は「多重抗原結合性」）等の用語は、国際公開公報第０９／１３８５１９号、同第１０／１３０８３２号、又は同第０８／０２００７９号に提供された意味を有することができる。
【００６１】
本明細書で言及されたＩＳＶＤ、ナノボディ、ＩＳＶＤ系生物学的製剤、ナノボディ系生物学的製剤、又は任意の他のアミノ酸配列、化合物、もしくはポリペプチドに関して、本明細書で使用する時、「半減期」という用語は、一般的には、国際公開公報第０８／０２００７９号の第５７頁における段落ｏ）に記載された通りに、及び、本明細書言及された通りに定義することができ、例えば、配列もしくは化合物の分解及び／又は該配列もしくは化合物の本来のメカニズムによるクリアランスもしくはゼクエストレーションにより、アミノ酸配列、化合物、又はポリペプチドの血清濃度が、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて５０％に減少するのに掛かる時間を意味する。本発明のアミノ酸配列、化合物、又はポリペプチドのｉｎ  ｖｉｖｏ半減期は、それ自体公知の任意の方法において、例えば、薬物動態分析により決定することができる。適切な技術は、当業者に明らかであろうし、例えば、一般的には、国際公開公報第０８／０２００７９号の第５７頁における段落ｏ）に記載された通りであることができる。また、国際公開公報第０８／０２００７９号の第５７頁における段落ｏ）で言及されたように、半減期は、ｔ１／２−アルファ、ｔ１／２−ベータ、及び曲線下面積（ＡＵＣ）等のパラメータを使用して表現することができる。この観点において、本明細書で使用する時、「半減期」という用語は、特に、ｔ１／２−ベータ又は終末半減期を意味する（ここで、ｔ１／２−アルファ及び／もしくはＡＵＣ又は両方は考慮されなくてもよい）。例えば、以下の実験部及び、標準的な参考書、例えば、Kenneth, A et al: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists及びPeters et al, Pharmacokinete analysis: A Practical Approach (1996)が参照される。また、「Pharmacokinetics」, M Gibaldi & D Perron, published by Marcel Dekker, 2nd Rev. edition (1982)も参照される。同様に、「半減期を伸ばす」又は「延長した半減期」という用語も、国際公開公報第０８／０２００７９号の第５７頁における段落ｏ）に定義された通りであり、特に、ｔ１／２−アルファ及び／もしくはＡＵＣ又は両方の伸びに関わらず、ｔ１／２−ベータの伸びを意味する。
【００６２】
用語が、本明細書で具体的に定義されていない場合には、当量者に明らかであろう、当技術分野におけるその通常の意味を有する。例えば、標準的な参考書、例えば、Sambrook et al, 「Molecular Cloning: A Laboratory Manual」 (2nd.Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)；F. Ausubel et al, eds., 「Current protocols in molecular biology」, Green Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)；Lewin, 「Genes II」, John Wiley & Sons, New York, N.Y., (1985)；Old et al., 「Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic Engineering」, 2nd edition, University of California Press, Berkeley, CA (1981)；Roitt et al., 「Immunology」 (6th. Ed.), Mosby/Elsevier, Edinburgh (2001)；Roitt et al., Roitt’s Essential Immunology, 10th Ed. Blackwell Publishing, UK (2001)；及びJaneway et al., 「Immunobiology」 (6th Ed.), Garland Science Publishing/Churchill Livingstone, New York (2005)、ならびに、本明細書で引用された一般的な背景技術が参照される。
【００６３】
また、本明細書で既に示されているように、ナノボディのアミノ酸残基は、Kabat et al（「Sequence of proteins of immunological interest」, US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91）により提供された、ＶＨドメインについての一般的なナンバリングに従ってナンバリングされる。同様に、Riechmann and Muyldermans, J. Immunol. Methods 2000 Jun 23; 240 (1-2): 185-195の文献において、ラクダ科からのＶＨＨに適用され、本明細書で言及される。このナンバリングによれば、ナノボディのＦＲ１は、１〜３０位におけるアミノ酸残基を含む。ナノボディのＣＤＲ１は、３１〜３５位におけるアミノ酸残基を含む。ナノボディのＦＲ２は、３６〜４９位におけるアミノ酸残基を含む。ナノボディのＣＤＲ２は、５０〜６５位におけるアミノ酸残基を含む。ナノボディのＦＲ３は、６６〜９４位におけるアミノ酸残基を含む。ナノボディのＣＤＲ３は、９５〜１０２位におけるアミノ酸残基を含む。そして、ナノボディのＦＲ４は、１０３〜１１３位におけるアミノ酸残基を含む。［この観点において、ＶＨドメイン及びＶＨＨドメインについて当技術分野において周知であるように、各ＣＤＲにおけるアミノ酸残基の総数は変動する場合があり、Ｋａｂａｔナンバリングにより示されたアミノ酸残基の総数に対応しない場合がある（すなわち、Ｋａｂａｔナンバリングに従った１つ以上の位置が、実際の配列に占有されない場合があり、又は、実際の配列が、Ｋａｂａｔナンバリングにより認められた数より多くのアミノ酸残基を含有する場合がある）ことに留意されたい。このことは、一般的には、Ｋａｂａｔに従ったナンバリングは、この実際の配列中のアミノ酸残基の実際のナンバリングに対応してもよいし、又は、同ナンバリングに対応しなくてもよいことを意味する。ただし、一般的には、Ｋａｂａｔのナンバリングに従って、ＣＤＲ中のアミノ酸残基数に関係なく、Ｋａｂａｔナンバリングに従った１位は、ＦＲ１の開始及びその逆に対応し、Ｋａｂａｔナンバリングに従った３６位は、ＦＲ２の開始及びその逆に対応し、Ｋａｂａｔナンバリングに従った６６位は、ＦＲ３の開始及びその逆に対応し、Ｋａｂａｔナンバリングに従った１０３位は、ＦＲ４の開始又はその逆に対応する］。
【００６４】
また、ＶＨドメインのアミノ酸残基をナンバリングするための代替的な方法を、ラクダ科からのＶＨＨドメイン及びナノボディに類似する方法において適用することもでき、Chothia et al.（Nature 342, 877-883 (1989)）に記載された方法、いわゆる、「ＡｂＭ定義」及びいわゆる、「接触定義」である。ただし、本説明、態様、及び図面において、Riechmann及びMuyldermansによりＶＨＨに適用されるのと同様に、特に断りない限り、Ｋａｂａｔに従ったナンバリングに従うであろう。
【００６５】
また、図面、任意の配列表、及び実験部／実施例は、本発明を更に例示するためにのみ提供され、本発明及び／又は添付の特許請求の範囲における範囲を、特に断りない限り、何らか限定すると理解され、又は、解釈されるべきでないと留意されたい。
【００６６】
本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された任意の薬学的及び／又は治療的関連ターゲットを含む、任意の適切又は所望の抗原又はターゲットに対することができる。
【００６７】
本発明の具体的な態様によれば、本発明のＶＨドメインは、血清タンパク質、及び特に、ヒト血清タンパク質に対する。好ましい態様によれば、本発明のＶＨドメインが血清タンパク質に対する場合、本発明のＶＨドメインは、血清アルブミン、及び特に、ヒト血清アルブミンに対する。またこのため、本発明は、血清タンパク質、特にヒト血清タンパク質に特異的に結合することができ、及び好ましくは、血清アルブミン、及びより好ましくは、ヒト血清アルブミンに特異的に結合することができる本発明のＶＨドメイン（本明細書で定義された通り、本発明のＶＨドメインについて定義された選択を含む）に関する。再度、このようなＶＨドメインは、好ましくは、（本発明で記載された）ＩＳＶＤ、及びより好ましくは、ナノボディである。
【００６８】
例えば、血清アルブミンに対する本発明のＶＨドメインは、国際公開公報第２００４／０４１８６５号、及び特に、同第２００６／１２２７８７号及び同第２０１２／１７５４００号（全て出願人／譲受人の出願）に記載された（ヒト）血清アルブミンに対するナノボディの内の１つであることができ、ここで、１１２位におけるアミノ酸は、Ｋ又はＱのいずれかで置換されており、同ＶＨドメインは、場合により、本明細書で記載されたＣ末端伸長を備えている（及び、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、８９Ｔ、Ｖ８９Ｔ、８９Ｌ、Ｖ８９Ｌ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、１１０Ｑ、Ｔ１１０Ｑ、１１０Ｋ、及び／又はＴ１１０Ｋを適切に含有することもでき、ただし通常は、１１２位がＫ又はＱである場合、１１０位における更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１０位は、好ましくは、Ｔである）。さらに、本発明は、他の血清アルブミン結合重鎖ＩＳＶＤ、例えば、国際公開公報第０３／０３５６９４号、同第０４／００３０１９号、同第０５／１１８６４２号、同第０６／０５９１０６号、同第０８／０９６１５８号、同第０９／１２１８０４号、同第１０／１０８９３７号、又は米国特許出願公開公報第２０１３／０１２９７２７号に記載されたものに、すなわち、本明細書で記載された置換（すなわち、Ｓ１１２Ｋ、Ｓ１１２Ｑ、及び／又はＶ８９Ｔの内の少なくとも１つ、ならびに場合により、本明細書で記載された１つ以上の他のアミノ酸残基／置換、例えば、Ｌ１１Ｖ）を適切に導入すること、及び場合により（及び通常好ましくは、本明細書で概説されたように）（本明細書で更に記載された）Ｃ末端伸長を付加することにより、適用することもできると想定される。
【００６９】
本発明のこのような血清アルブミン結合ナノボディにおける一部の好ましく、非限定的な例は、国際公開公報第２００６／１２２７８７号における配列番号：５２のアミノ酸配列のヒト化変異体（国際公開公報第２００６／１２２７８７号において「Ａｌｂ−１」と呼ばれる）（同変異体中、１１２位におけるアミノ酸は、Ｋ又はＱのいずれかで置換されている（及び、同変異体は、場合により、本明細書で記載されたＣ末端伸長を備えている））、例えば、国際公開公報第２００６／１２２７８７号における配列番号：５７〜６４に提供されたＡｌｂ−１のヒト化変異体（各場合において、Ｓ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｑ置換を有し、場合により、Ｃ末端伸長を有する）、又は、国際公開公報第２０１２／１７５４００号の配列番号：３〜１１に提供されたＡｌｂ−１のヒト化変異体（再度、各場合において、Ｓ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｑ置換を有する）である。同変異体の内、配列番号：３、４、及び５は、場合により、Ｃ末端伸長を含有することができ、配列番号：６〜１１は、Ｃ末端伸長を予め含有している（及び再度、このような変異体は、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、８９Ｔ、Ｖ８９Ｔ、８９Ｌ、Ｖ８９Ｌ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、１１０Ｑ、Ｔ１１０Ｑ、１１０Ｋ、及び／又はＴ１１０Ｋを含有することができ、ただし通常は、１１２位がＫ又はＱである場合、１１０位における更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１０位は、好ましくは、Ｔである）。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００７０】
このため、更なる態様では、本発明は、血清アルブミン（及び特に、ヒト血清アルブミン）に結合する（及び特に、特異的に結合する）ことができる、（本明細書で定義された）本発明のナノボディに関し、ここで、
−ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号：４１）であり；
−ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：４２）であり；
−ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号：４３）であり；
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり、
場合により、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有し（再度、このようなＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りであり、また再度、このようなナノボディは、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、８９Ｔ、Ｖ８９Ｔ、８９Ｌ、Ｖ８９Ｌ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、１１０Ｑ、Ｔ１１０Ｑ、１１０Ｋ、及び／又はＴ１１０Ｋを含有することができ、ただし通常は、１１２位がＫ又はＱである場合、１１０位における更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１０位は、好ましくは、Ｔである）。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００７１】
特定の態様では、本発明は、国際公開公報第２００６／１２２７８７号における配列番号：５２のヒト化変異体である血清アルブミン（及び特に、ヒト血清アルブミン）に結合する（及び特に、特異的に結合する）ことができる、（本明細書で定義された）本発明のナノボディに関し、ここで、
−ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号：４１）であり；
−ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：４２）であり；
−ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号：４３）であり；
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり、
場合により、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有し（再度、このようなＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りであり、また再度、このようなナノボディは、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、８９Ｔ、Ｖ８９Ｔ、８９Ｌ、Ｖ８９Ｌ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、１１０Ｑ、Ｔ１１０Ｑ、１１０Ｋ、及び／又はＴ１１０Ｋを含有することができ、ただし通常は、１１２位がＫ又はＱである場合、１１０位における更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１０位は、好ましくは、Ｔである）。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００７２】
特定の態様では、本発明は、Ａｌｂ−１（国際公開公報第２００６／１２２７８７号の配列番号：５２）、Ａｌｂ−８（本明細書における配列番号：４６）、及び／又はＡｌｂ−２３（本明細書における配列番号：６１）の内の少なくとも１つ（フレームワーク配列及びＣＤＲの両方を考慮するが、任意のＣ末端伸長は考慮しない）に対して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する、血清アルブミン（及び特に、ヒト血清アルブミン）に結合する（及び特に、特異的に結合する）ことができる、（本明細書で定義された）本発明のナノボディに関し、ここで、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり、場合により、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有し（再度、このようなＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りであり、また再度、このようなナノボディは、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、８９Ｔ、Ｖ８９Ｔ、８９Ｌ、Ｖ８９Ｌ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、１１０Ｑ、Ｔ１１０Ｑ、１１０Ｋ、及び／又はＴ１１０Ｋを含有することができ、ただし通常は、１１２位がＫ又はＱである場合、１１０位における更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１０位は、好ましくは、Ｔである）。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００７３】
本発明のこのようなナノボディは、再度好ましくは、Ａｌｂ−１（ただし、Ｓ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｑ置換を有する）のヒト化変異体であり、より好ましくは、少なくとも１つ、特に任意の２つ、及びとりわけ、配列番号：４１〜４３のそれぞれで提供されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３の３つ全てを有する。
【００７４】
具体的な一態様によれば、本発明の任意の血清アルブミン結合ナノボディは、Ａｌｂ−２３の特徴を有するアミノ酸残基、及び、国際公開公報第１２／１７５４００号に記載されたその変異体（すなわち、４４及び４５位におけるアミノ酸モチーフＧＰ、７４〜７６位におけるアミノ酸モチーフＳＫＮ、ならびに好ましくは、１６位におけるＧ、また及び場合により、８３位におけるＲ）も有することができる。
【００７５】
ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例は、表４及び実施例２０に提供される。
【表４】
2018162297.tif 000005
2018162297.tif 000006
2018162297.tif 000007
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【００７６】
別の態様では、本発明は、ＶＨドメイン、及び特に、ＩＳＶＤ、及びとりわけ、ナノボディに関し、同ＶＨドメインは、下記を有する。
ａ）下記ＦＷ４配列の内の１つであるＦＷ４配列
【表５】
2018162297.tif 000009
【００７７】
ここで、（ｉ）配列番号：２３〜４０中の（Ｘ）ｎＣ末端伸長に先立つＦＷ４配列のアミノ酸残基は、ＶＨドメインにおけるＦＷ４のアミノ酸位置（すなわち、Ｋａｂａｔナンバリングに従った１０３〜１１３位）に対応し、（ｉｉ）ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、（ｉｉｉ）各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択され、又は、
【００７８】
ｃ）配列番号：９９〜１０６のアミノ酸配列の内の少なくとも１つに対して、３つ未満、好ましくは２つ未満のアミノ酸差を有するアミノ酸配列（ここで、前記アミノ酸差は、ＶＨドメインにおけるＦＷ４のアミノ酸位置に対応する位置、すなわち、Ｋａｂａｔナンバリングに従った１０３〜１１３位においてであり、ただし、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ中の任意のアミノ酸差は無視される）。ここで、（ｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１１２位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、Ｋ又はＱのいずれかである場合、前記アミノ酸差は、１１２以外のアミノ酸位置においてであり、ＶＨドメインの８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｖ、Ｔ、又はＬから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、（ｉ）、Ｋａｂａｔナンバリングの１１０位に対応する位置におけるアミノ酸残基が、Ｋ又はＱのいずれかである場合、前記アミノ酸差は、１１０以外のアミノ酸位置においてであり、ＶＨドメインの８９位は、Ｌであり、（ｉｉｉ）ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、（ｉｖ）各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される。再度、先の文章で言及された特徴（ｉ）〜（ｉｖ）に対して更に、このようなアミノ酸配列において、（ｖ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０３位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓであり、（ｖｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０４位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓであり、（ｖｉｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０６位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｇであり、（ｖｉｉｉ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０７位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔであり、（ｉｘ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０８位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｑ又はＬであり（及び、ヒト化ナノボディでは、好ましくは、Ｌであり）、（ｘ）Ｋａｂａｔナンバリングの１０９位に対応する位置におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｖである。再度、表２に、各位置に存在することができる、潜在的なアミノ酸残基について、参照される。
【００７９】
再度、本発明のこのようなＶＨドメインにおいて、（ａ）１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つ（及びより好ましくは、Ｖ）であり、１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ａ又はＰの一方であり、４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ａ又はＰの一方である。また、本発明のこのようなＶＨドメインは、好ましくは、ＩＳＶＤであり、より好ましくは、ナノボディであり、再度、ヒト血清アルブミンに対することができる（この場合、本発明のこのようなＶＨドメインは、好ましくは、配列番号：４１、４２、及び４３それぞれに対応する、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３それぞれを有する）。また、前記ＶＨドメインがヒト血清アルブミンに対するＩＳＶＤ又はナノボディである場合、前記ＶＨドメインは、更に、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディについて本明細書に記載された通りであることができる。
【００８０】
血清アルブミンに対する本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明の血清アルブミン結合ＩＳＶＤ）は、下記の参考文献に開示された血清アルブミン結合ナノボディの使用について、国際公開公報第２００４／０４１８６５号、同第２００６／１２２７８７号、及び／又は同第２０１２／１７５４００号に本質的に記載された方法において（すなわち、血清アルブミン結合ＩＳＶＤを、タンパク質、ポリペプチド、化合物、又は他の成分に、場合により、適切なリンカーを介して、適切に連結させることにより、例えば、国際公開公報第２０１２／１７５４００号の第１２及び１３頁には、適切な融合タンパク質を構築することができる方法の一部の例が提供されている）、治療活性化合物、（ポリ）ペプチド、タンパク質、結合ドメイン、結合ユニット、又は他の治療活性成分もしくは部分の半減期を伸ばすのに使用することができる。
【００８１】
別の態様では、本発明は、８９位（Ｋａｂａｔナンバリング）におけるアミノ酸残基がスレオニン（Ｔ）であり、１１２位におけるアミノ酸残基がセリン（Ｓ）、リシン（Ｋ）残基、又はグルタミン（Ｑ）残基のいずれかである、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）に関する。また、８９位にＴを有するこのような免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）は、その最も広い意味において本明細書で使用する時、「本発明のＶＨドメイン」という用語に含まれ、更に、１１２位にＫ又はＱを含む本発明のＶＨドメインについて、本明細書で記載された通りであることができる。したがって、このような免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）は、本明細書で更に記載されたＣ末端伸長（このようなＣ末端伸長について示された選択を含む）を有することができ、本明細書で更に記載されたＩＳＶＤ、及び特に、ナノボディであることができる。
【００８２】
再度、本発明のこのようなＶＨドメインが、露出したＣ末端領域を有する（例えば、本発明のＶＨドメインは、それが存在するタンパク質、ポリペプチド、又は他の構築物のＣ末端を形成するためである）場合、本発明のＶＨドメインは、好ましくは、Ｃ末端伸長を含有する（以下の表Ｃに示されたデータが参照される）。
【００８３】
また、８９位がＴである（すなわち、Ｃ末端伸長の有無に関わらず）本発明のナノボディは、好ましくは、Ｌ（ＶＨＨ中で最も頻繁に生じるアミノ酸残基）、Ｅ、Ｋ、Ｍ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹから選択され、より好ましくは、Ｌ、Ｅ、Ｋ、Ｖ、又はＹから選択され、及び更により好ましくは、Ｌ、Ｋ、又はＶ（Ｖが最も好ましい）から選択される、１１位におけるアミノ酸を含有する。例えば、本発明のナノボディは、Ｌ１１ＫもしくはＬ１１Ｖ置換、及び、例えば、Ｐ１４ＡもしくはＡ１４Ｐ置換、Ｑ１０８Ｌ置換、ならびに／又はＴ１１０Ｋ、Ｔ１１０Ｑ、Ｓ１１２Ｋ、及び／もしくはＳ１１２Ｑ置換を含有することができる（ただし通常は、８９位がＴである場合、１１０及び／又は１１２位における１つ又は２つの更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１０位は、好ましくは、Ｔであり、１１２位は、好ましくは、Ｓである）。
【００８４】
特に、この特定の態様における本発明の免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）は、８９位（Ｋａｂａｔ）にＴと、ＶＴＶＳＳ（配列番号：７７）、ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：７８）、ＶＴＶＫＳ（配列番号：１）、ＶＴＶＫＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：２１）、ＶＴＶＱＳ（配列番号：２）、ＶＴＶＱＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：２２）、ＶＫＶＳＳ（配列番号：９５）、ＶＫＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：９７）、ＶＱＶＳＳ（配列番号：９６）、ＶＱＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：９８）、ＶＺＶＺＳ（配列番号：１０７（同配列中、各アミノ酸残基Ｚは、独立して、Ｋ又はＱである）、又はＶＺＶＺＳＸ（ｎ）（配列番号：１０８、同配列中、各アミノ酸残基Ｚは、独立して、Ｋ又はＱである）の内の１つ（及び特に、ＶＴＶＫＳ（配列番号：１）、ＶＴＶＱＳ（配列番号：２）、ＶＴＶＳＳ（配列番号：７７）、ＶＴＶＫＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：２１）、ＶＴＶＱＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：２２）、又はＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：７８）の内の１つ、及びとりわけ、ＶＴＶＳＳ（配列番号：７７）又はＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：７８）のいずれか）であるＣ末端とを有する。ここで、ｎ及びＸは、１１２位がＱ又はＫである本発明のＶＨドメインについて本明細書で更に記載された通りである（及びここで、任意のＣ末端伸長は、好ましくは、１１２位がＱ又はＫである本発明ＶＨドメインについて本明細書で更に記載された通りである）。また、１１２位がＱ又はＫである本発明ＶＨドメインについての場合と同様に、８９位にＴを有するこのようなＶＨドメインがナノボディである場合、１１位は、好ましくは、ロイシン（Ｌ）であり、１４位は、特に、アラニン（Ａ）又はプロリン（Ｐ）であることができ、１０８位は、特に、Ｑ又はＬであることができる（及び、ヒト化ナノボディでは、好ましくは、Ｌである）。８９位にＴを有するこのようなナノボディは、１つ以上のナノボディホールマーク残基を含有することができ、及び／又は、適切にヒト化されていることができる。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００８５】
８９位にＴを有する本発明のこのようなＶＨドメインは、再度、本明細書で更に記載された血清アルブミンナノボディであることもできる。例えば、このような血清アルブミン結合ナノボディは、配列番号：４６〜７５の配列の内の１つ（ただし、８９位にＴを有する）、又は、Ａｌｂ−１（国際公開公報第２００６／１２２７８７号の配列番号：５２）、Ａｌｂ−８（本明細書における配列番号：４６）、及び／又はＡｌｂ−２３（本明細書における配列番号：６１）の内の少なくとも１つ（フレームワーク配列及びＣＤＲの両方を考慮するが、任意のＣ末端伸長は考慮しない）に対して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する、８９位にＴを有する別の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。８９位にＴを有するこのようなナノボディの一部の他の例は、配列番号：７８〜９１に提供される（これらは、８９位にＴ及び１１２位にＳを有するＡｌｂ−１／Ａｌｂ−８又はＡｌｂ−２３の更なる変異体である）。
【００８６】
より一般的には、本発明におけるこの態様の血清アルブミンに対するＶＨドメインは、国際公開公報第２００４／０４１８６５号、及び特に、同第２００６／１２２７８７号及び同第２０１２／１７５４００号（全て出願人／譲受人の出願）に記載された（ヒト）血清アルブミンに対するナノボディの内の１つであることができ、ここで、８９位におけるアミノ酸は、スレオニン（Ｔ）であり、ここで、場合により、本明細書で記載されたＣ末端伸長を備えている（及び、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、１１０Ｋ、Ｔ１１０Ｋ、１１０Ｑ、Ｔ１１０Ｑ、Ｓ１１２Ｋ、及び／又はＳ１１２Ｑを適切に含有することもでき、ただし通常は、８９位にＴが存在する場合、１１０及び／又は１１２位における更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１０位は、好ましくは、Ｔであり、１１２位は、好ましくは、Ｓである）。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。またさらに、本発明は、他の血清アルブミン結合重鎖ＩＳＶＤ、例えば、国際公開公報第０３／０３５６９４号、同第０４／００３０１９号、同第０５／１１８６４２号、同第０６／０５９１０６号、同第０８／０９６１５８号、同第０９／１２１８０４号、同第１０／１０８９３７号、又は米国特許出願公開公報第２０１３／０１２９７２７号に記載されたものに、すなわち、８９位にスレオニン（Ｔ）、及び場合により、本明細書で記載された１つ以上の他のアミノ酸残基／置換を適切に導入すること、ならびに場合により（及び通常、本明細書で概説されたように好ましくは）（本明細書で更に記載された）Ｃ末端伸長を付加することにより、適用することもできると想定される。
【００８７】
本発明のこのような血清アルブミン結合ナノボディにおける一部の好ましく、非限定的な例は、国際公開公報第２００６／１２２７８７号における配列番号：５２のアミノ酸配列のヒト化変異体（国際公開公報第２００６／１２２７８７号において「Ａｌｂ−１」と呼ばれる）（同変異体中、８９位のアミノ酸は、Ｔである（及び、同変異体は、場合により、本明細書で記載されたＣ末端伸長を備えている））、例えば、国際公開公報第２００６／１２２７８７号における配列番号：５７〜６４に提供されたＡｌｂ−１のヒト化変異体（各場合において、Ｖ８９Ｔ置換を有し、場合により、Ｃ末端伸長を有する）、又は、国際公開公報第２０１２／１７５４００号の配列番号：３〜１１に提供されたＡｌｂ−１のヒト化変異体（再度、各場合において、Ｖ８９Ｔ置換を有する）である。同変異体の内、配列番号：３、４、及び５は、場合により、Ｃ末端伸長を含有することができ、配列番号：６〜１１は、Ｃ末端伸長を予め含有している（及び再度、このような変異体は、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、１１０Ｋ、Ｔ１１０Ｋ、１１０Ｑ、Ｔ１１０Ｑ、１１２Ｑ、１１２Ｋ、Ｓ１１２Ｑ、及び／又はＳ１１２Ｋを含有することができ、ただし通常は、８９位がＴである場合、１１０及び／又は１１２位における１つ又は２つの更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１０位は、好ましくは、Ｔであり、１１２位は、好ましくは、Ｓである）。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００８８】
このため、更なる態様では、本発明は、血清アルブミン（及び特に、ヒト血清アルブミン）に結合する（及び特に、特異的に結合する）ことができる、（本明細書で定義された）本発明のナノボディに関し、ここで、
−ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号：４１）であり；
−ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：４２）であり；
−ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号：４３）であり；
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、
場合により、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有し（再度、このようなＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りであり、また再度、このようなナノボディは、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、１１０Ｋ、Ｔ１１０Ｋ、１１０Ｑ、Ｔ１１０Ｑ、１１２Ｑ、１１２Ｋ、Ｓ１１２Ｑ、及び／又はＳ１１２Ｋを含有することができ、ただし通常は、８９位がＴである場合、１１０及び／又は１１２位における１つ又は２つの更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１０位は、好ましくは、Ｔであり、１１２位は、好ましくは、Ｓである）。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００８９】
特定の態様では、本発明は、国際公開公報第２００６／１２２７８７号における配列番号：５２のヒト化変異体である、血清アルブミン（及び特に、ヒト血清アルブミン）に結合する（及び特に、特異的に結合する）ことができる、（本明細書で定義された）本発明のナノボディに関し、ここで、
−ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号：４１）であり；
−ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：４２）であり；
−ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号：４３）であり；
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、
場合により、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有し（再度、このようなＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りであり、また再度、このようなナノボディは、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、１１０Ｋ、Ｔ１１０Ｋ、１１０Ｑ、Ｔ１１０Ｑ、１１２Ｑ、１１２Ｋ、Ｓ１１２Ｑ、及び／又はＳ１１２Ｋを含有することができ、ただし通常は、８９位がＴである場合、１１０及び／又は１１２位における１つ又は２つの更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１０位は、好ましくは、Ｔであり、１１２位は、好ましくは、Ｓである）。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００９０】
特定の態様では、本発明は、Ａｌｂ−１（国際公開公報第２００６／１２２７８７号の配列番号：５２）、Ａｌｂ−８（本明細書における配列番号：４６）、及び／又はＡｌｂ−２３（本明細書における配列番号：６１）の内の少なくとも１つ（フレームワーク配列及びＣＤＲの両方を考慮するが、任意のＣ末端伸長は考慮しない）に対して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する、血清アルブミン（及び特に、ヒト血清アルブミン）に結合する（及び特に、特異的に結合する）ことができる、（本明細書で定義された）本発明のナノボディに関し、ここで、８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、場合により、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有し（再度、このようなＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りであり、また再度、このようなナノボディは、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、１１０Ｋ、Ｔ１１０Ｋ、１１０Ｑ、Ｔ１１０Ｑ、１１２Ｑ、１１２Ｋ、Ｓ１１２Ｑ、及び／又はＳ１１２Ｋを含有することができ、ただし通常は、８９位がＴである場合、１１０及び／又は１１２位における１つ又は２つの更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１０位は、好ましくは、Ｔであり、１１２位は、好ましくは、Ｓである）。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００９１】
具体的な一態様によれば、８９位にＴを有する本発明の任意の血清アルブミン結合ナノボディは、国際公開公報第１２／１７５４００号に記載されたＡｌｂ−２３、及び、その変異体の特徴を有するアミノ酸残基（すなわち、４４及び４５位におけるアミノ酸モチーフＧＰ、７４〜７６位におけるアミノ酸モチーフＳＫＮ、ならびに好ましくは、１６位におけるＧ、また及び場合により、８３位におけるＲ）も有することができる。
【００９２】
１１２位にＱ又はＫを含有する本発明のＶＨドメインについてと同様に、８９位にＴを含有する（場合により、１１２位におけるＱもしくはＫ、及び／又は、Ｃ末端伸長を伴う）本発明のＶＨドメインは、既存の抗体による、及び特に、Ｃ末端伸長の存在下においてＶＨドメイン及びナノボディに結合可能な（例えば、ＳＬＥ患者から得られたサンプル中に見出された）このような既存の抗体による低下した結合を示す。
【００９３】
更に別の態様では、本発明は、８９位（Ｋａｂａｔナンバリング）におけるアミノ酸残基がロイシン（Ｌ）であり、１１０位におけるアミノ酸残基がリシン（Ｋ）残基又はグルタミン（Ｑ）残基のいずれかである、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）に関する。また、８９位にＬ及び１１０位にＫ又はＱを有するこのような免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）は、その最も広い意味において本明細書で使用する時、「本発明のＶＨドメイン」という用語に含まれ、更に、本発明の他のＶＨドメイン（すなわち、１１２位にＫもしくはＱを含むもの、又は、８９位にＴを含むもの）について、本明細書で記載された通りであることができる。したがって、このような免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）は、本明細書で更に記載されたＣ末端伸長（このようなＣ末端伸長について示された選択を含む）を有することができ、本明細書で更に記載されたＩＳＶＤ、及び特に、ナノボディであることができる。
【００９４】
再度、本発明のこのようなＶＨドメインが、露出したＣ末端領域を有する（例えば、本発明のＶＨドメインは、それが存在するタンパク質、ポリペプチド、又は他の構築物のＣ末端を形成するためである）場合、本発明のＶＨドメインは、好ましくは、Ｃ末端伸長を含有する（以下の表Ｃに示されたデータが参照される）。
【００９５】
また、８９位がＬであり、１１０位がＫ又はＱである（すなわち、Ｃ末端伸長の有無に関わらず）本発明のナノボディは、好ましくは、Ｌ（ＶＨＨ中で最も頻繁に生じるアミノ酸残基）、Ｅ、Ｋ、Ｍ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹから選択され、より好ましくは、Ｌ、Ｅ、Ｋ、Ｖ、又はＹから選択され、及び更により好ましくは、Ｌ、Ｋ、又はＶ（Ｖが最も好ましい）から選択される、１１位におけるアミノ酸を含有する。例えば、本発明のナノボディは、Ｌ１１ＫもしくはＬ１１Ｖ置換、及び、例えば、Ｐ１４ＡもしくはＡ１４Ｐ置換、及び／又は、Ｑ１０８Ｌ置換を含有することができる（また、本発明のナノボディは、Ｓ１１２Ｋ及び／又はＳ１１２Ｑ置換を適切に含有することもできる。ただし通常は、８９位がＬであり、１１０位がＫ又はＱである場合、１１２位における更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１２位は、好ましくは、Ｓである）。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００９６】
また、一態様では、８９がＬであり、１１０がＫ又はＱである、本発明のこのようなＶＨドメインにおいて、１１２位におけるアミノ酸残基は、セリン（Ｓ）である。とりわけ、このようなＶＨドメインのＣ末端は、ＶＫＶＳＳ（配列番号：９５）、ＶＱＶＳＳ（配列番号：９６）、ＶＫＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：９７）、又はＶＱＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：９８）の内の１つであることができる（及び好ましくは、これらの内の１つである）。ここで、ｎ及びＸは、１１２位がＱ又はＫである、本発明ＶＨドメインについて本明細書で更に記載された通りである（及びここで、任意のＣ末端伸長は、好ましくは、１１２位がＱ又はＫである、本発明のＶＨドメインについて本明細書で更に記載された通りである）。また、１１２位がＱもしくはＫであり、又は、８９位がＴである本発明のＶＨドメインについての場合と同様に、８９位にＬ及び１１０位にＫ又はＱを有するこのようなＶＨドメインがナノボディである場合、１１位は、好ましくは、ロイシン（Ｌ）であり、１４位は、特に、アラニン（Ａ）又はプロリン（Ｐ）であることができ、１０８位は、特に、Ｑ又はＬであることができる（及び、ヒト化ナノボディでは、好ましくは、Ｌである）。８９位にＬ及び１１０位にＫ又はＱを有するこのようなナノボディは、１つ以上のナノボディホールマーク残基を含有することができ、及び／又は、適切にヒト化されていることができる。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００９７】
また再度、８９位にＬ及び１１０位にＫ又はＱを有する本発明のこのようなＶＨドメインは、本明細書で更に記載された血清アルブミンナノボディであることもできる。例えば、このような血清アルブミン結合ナノボディは、配列番号：４６〜７５の配列の内の１つ（ただし、８９位にＬ及び１１０位にＫ又はＱを有する）、又は、Ａｌｂ−１（国際公開公報第２００６／１２２７８７号の配列番号：５２）、Ａｌｂ−８（本明細書における配列番号：４６）、及び／又はＡｌｂ−２３（本明細書における配列番号：６１）の内の少なくとも１つ（フレームワーク配列及びＣＤＲの両方を考慮するが、任意のＣ末端伸長は考慮しない）に対して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する、８９位にＬ及び１１０位にＫ又はＱを有する別の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。
【００９８】
より一般的には、本発明におけるこの態様の血清アルブミンに対するＶＨドメインは、国際公開公報第２００４／０４１８６５号、及び特に、同第２００６／１２２７８７号及び同第２０１２／１７５４００号（全て出願人／譲受人の出願）に記載された（ヒト）血清アルブミンに対するナノボディの内の１つであることができ、ここで、８９位におけるアミノ酸は、ロイシン（Ｌ）であり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱであり、ここで、場合により、本明細書で記載されたＣ末端伸長を備えている（及び、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、及び／又はＱ１０８Ｌ、ならびにＳ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｑを含有することもでき、ただし通常は、８９位がＬであり、１１０位がＫ又はＱである場合、１１２位における更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１２位は、好ましくは、Ｓである）。またさらに、本発明は、他の血清アルブミン結合重鎖ＩＳＶＤ、例えば、国際公開公報第０３／０３５６９４号、同第０４／００３０１９号、同第０５／１１８６４２号、同第０６／０５９１０６号、同第０８／０９６１５８号、同第０９／１２１８０４号、同第１０／１０８９３７号、又は米国特許出願公開公報第２０１３／０１２９７２７号に記載されたものに、すなわち、８９位にロイシン（Ｌ）及び１１０位にＫ又はＱのいずれか、ならびに場合により、本明細書で記載された１つ以上の他のアミノ酸残基／置換）を適切に導入すること、及び場合により（及び通常、好ましくは、本明細書で概説されたように）（本明細書で更に記載された）Ｃ末端伸長を付加することにより、適用することもできると想定される。血清アルブミンに対するこれらのＶＨドメインにおいて、１１２位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｓである。前記ＶＨドメインは、好ましくは、配列番号：９５〜９８の内の１つであるＣ末端を有する。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【００９９】
本発明のこのような血清アルブミン結合ナノボディにおける一部の好ましく、非限定的な例は、国際公開公報第２００６／１２２７８７号における配列番号：５２のアミノ酸配列のヒト化変異体（国際公開公報第２００６／１２２７８７号において「Ａｌｂ−１」と呼ばれる）（同変異体中、８９位におけるアミノ酸は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸は、Ｋ又はＱである（及び、同変異体は、場合により、本明細書で記載されたＣ末端伸長を備えている））、例えば、国際公開公報第２００６／１２２７８７号における配列番号：５７〜６４に提供されたＡｌｂ−１のヒト化変異体（各場合において、Ｖ８９Ｌ置換及びＴ１１０Ｑ又はＴ１１０Ｋ置換を有し、場合により、Ｃ末端伸長を有する）、又は、国際公開公報第２０１２／１７５４００号の配列番号：３〜１１に提供されたＡｌｂ−１のヒト化変異体（再度、各場合において、Ｖ８９Ｌ置換及びＴ１１０Ｑ又はＴ１１０Ｋ置換を有する）である。同変異体の内、配列番号：３、４、及び５は、場合により、Ｃ末端伸長を含有することができ、配列番号：６〜１１は、Ｃ末端伸長を予め含有している（及び再度、このような変異体は、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、及び／又はＱ１０８Ｌ、ならびにＳ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｑを含有することもでき、ただし通常は、８９位がＬであり、１１０位がＫ又はＱである場合、１１２位における更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１２位は、好ましくは、Ｓである）。血清アルブミンに対するこれらのＶＨドメインにおいて、１１２位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｓである。前記ＶＨドメインは、好ましくは、配列番号：９５〜９８の内の１つであるＣ末端を有する。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１００】
このため、更なる態様では、本発明は、血清アルブミン（及び特に、ヒト血清アルブミン）に結合する（及び特に、特異的に結合する）ことができる、（本明細書で定義された）本発明のナノボディに関し、ここで、
−ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号：４１）であり；
−ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：４２）であり；
−ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号：４３）であり；
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱであり、
場合により、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有し（再度、このようなＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りであり、また再度、このようなナノボディは、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、及び／又はＱ１０８Ｌ；ならびにＳ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｑを含有することができ、ただし通常は、８９位がＬであり、１１０位がＫ又はＱである場合、１１２位における更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１２位は、好ましくは、Ｓである）。血清アルブミンに対するこれらのＶＨドメインにおいて、１１２位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｓであり、前記ＶＨドメインは、好ましくは、配列番号：９５〜９８の内の１つであるＣ末端を有する。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１０１】
特定の態様では、本発明は、国際公開公報第２００６／１２２７８７号における配列番号：５２のヒト化変異体である血清アルブミン（及び特に、ヒト血清アルブミン）に結合する（及び特に、特異的に結合する）ことができる、（本明細書で定義された）本発明のナノボディに関し、ここで、
−ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号：４１）であり；
−ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：４２）であり；
−ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号：４３）であり；
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱであり、
場合により、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有し（再度、このようなＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りであり、また再度、このようなナノボディは、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、及び／又はＱ１０８Ｌ；ならびにＳ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｑを含有することができ、ただし通常は、８９位がＬであり、１１０位がＫ又はＱである場合、１１２位における更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１２位は、好ましくは、Ｓである）。血清アルブミンに対するこれらのＶＨドメインにおいて、１１２位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｓであり、前記ＶＨドメインは、好ましくは、配列番号：９５〜９８の内の１つであるＣ末端を有する。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１０２】
特定の態様では、本発明は、Ａｌｂ−１（国際公開公報第２００６／１２２７８７号の配列番号：５２）、Ａｌｂ−８（本明細書における配列番号：４６）、及び／又はＡｌｂ−２３（本明細書における配列番号：６１）の内の少なくとも１つ（フレームワーク配列及びＣＤＲの両方を考慮するが、任意のＣ末端伸長は考慮しない）に対して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する、血清アルブミン（及び特に、ヒト血清アルブミン）に結合する（及び特に、特異的に結合する）ことができる、（本明細書で定義された）本発明のナノボディに関し、ここで、８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱであり、場合により、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有し（再度、このようなＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りであり、また再度、このようなナノボディは、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、及び／又はＱ１０８Ｌ；ならびにＳ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｑを含有することができ、ただし通常は、８９位がＬであり、１１０位がＫ又はＱである場合、１１２位における更なる置換の存在は、多くの場合、必ずしも必要ではないであろう。その場合には、１１２位は、好ましくは、Ｓである）。再度、本発明のこのようなナノボディは、好ましくは、Ａｌｂ−１のヒト化変異体（ただし、Ｖ８９Ｌ及びＴ１１０Ｋ又はＴ１１０Ｑ置換を有する）であり、より好ましくは、少なくとも１つ、特に任意の２つ、およびとりわけ、３つ全ての、配列番号：４１〜４３のそれぞれで提供されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３を有する。血清アルブミンに対するこれらのＶＨドメインにおいて、１１２位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｓであり、前記ＶＨドメインは、好ましくは、配列番号：９５〜９８の内の１つであるＣ末端を有する。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１０３】
具体的な一態様によれば、８９位にＬ及び１１０位にＫ又はＱを有する本発明の任意のこのような血清アルブミン結合ナノボディは、国際公開公報第１２／１７５４００号に記載されたＡｌｂ−２３の特徴を有するアミノ酸残基及びその変異体（すなわち、４４及び４５位におけるアミノ酸モチーフＧＰ、７４〜７６位におけるアミノ酸モチーフＳＫＮ、ならびに好ましくは、１６位におけるＧ、また及び場合により、８３位におけるＲ）も有することができる。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１０４】
１１２位にＱ又はＫを含有するか、又は、８９位にＴを有する本発明のＶＨドメインについてと同様に、８９位にＬ及び１１０位にＫ又はＱを含有する本発明のＶＨドメインは、既存の抗体による、及び特に、Ｃ末端伸長の存在下においてＶＨドメイン及びナノボディに結合可能な（例えば、ＳＬＥ患者から得られたサンプル中に見出された）このような既存の抗体による低下した結合を示す。
【０１０５】
８９位にＬ及び１１０位にＫ（及び加えて、１１位にＶ）を有する本発明のＶＨドメインの一部の非限定的な例は、配列番号：１２３〜１３６として、図２に提供されている。これらは、ヒト血清アルブミンに結合するＶＨドメインであり、本発明の好ましい血清アルブミン結合ＶＨドメインについて本明細書で示したＣＤＲを有する。
【０１０６】
更に別の態様では、本発明は、８９位（Ｋａｂａｔナンバリング）におけるアミノ酸残基がロイシン（Ｌ）であり、１１位におけるアミノ酸残基がバリン（Ｖ）である、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）に関する。また、８９位にＬ及び１１位にＶを有するこのような免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）は、その最も広い意味において本明細書で使用する時、「本発明のＶＨドメイン」という用語に含まれ、更に、本明細書で記載された本発明の他のＶＨドメイン（すなわち、１１２位にＫもしくはＱを含むもの、８９位にＴを含むもの、又は、８９位にＬ及び１１０位にＫもしくはＱを含むもの）について、本明細書で記載された通りであることができる。本態様のＶＨドメインについてのそれにも関わらず、８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであろうし、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであろうし、１１０及び１１２位におけるアミノ酸残基はそれぞれ、これらの位置に適した任意のアミノ酸残基であることができる。したがって、このような免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）は、本明細書で更に記載されたＣ末端伸長（このようなＣ末端伸長について示された選択を含む）を有することができ、本明細書で更に記載されたＩＳＶＤ、及び特に、ナノボディであることができる。
【０１０７】
再度、本発明のこのようなＶＨドメインが、露出したＣ末端領域を有する（例えば、本発明のＶＨドメインは、それが存在するタンパク質、ポリペプチド、又は他の構築物のＣ末端を形成するためである）場合、本発明のＶＨドメインは、好ましくは、Ｃ末端伸長を含有する（以下の表Ｃに示されたデータが参照される）。
【０１０８】
また、８９位がＬであり、１１位がＶである（すなわち、Ｃ末端伸長の有無に関わらず）本発明のナノボディは、（ｉ）好ましくは、Ｔ、Ｉ、Ａ、Ｋ、又はＱから選択される（及び好ましくは、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択される、及び特に、Ｔであることができる）１１０位におけるアミノ酸を含有し、（ｉｉ）好ましくは、Ｓ、Ｆ、Ｋ、又はＱから選択される（及びより好ましくは、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択される、及び特に、Ｓであることができる）１１２位におけるアミノ酸を含有し、ならびに（ｉｉｉ）例えば、Ｐ１４ＡもしくはＡ１４Ｐ置換、及び／又は、Ｑ１０８Ｌ置換も含有することもできる。具体的な一実施態様によれば、本発明のこの態様におけるＶＨドメインにおいて、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓであり、より好ましくは、Ｃ末端は、ＶＴＶＳＳ（配列番号：７７）又はＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：７８）のいずれかである。ここで、Ｘ及びｎは、本発明の他のＶＨドメインのＣ末端伸張について本明細書で定義された通りである。また、本発明のこの態様におけるＶＨドメインにおいて、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１０９】
このため、例えば、８９がＬであり、１１がＶである、本発明のこのようなＶＨドメインにおいて、このようなＶＨドメインのＣ末端は、ＶＴＶＳＳ（配列番号：７７）、ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：７８）、ＶＴＶＫＳ（配列番号：１）、ＶＴＶＫＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：２１）、ＶＴＶＱＳ（配列番号：２）、ＶＴＶＱＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：２２）、ＶＫＶＳＳ（配列番号：９５）、ＶＫＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：９７）、ＶＱＶＳＳ（配列番号：９６）、ＶＱＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：９８）、ＶＺＶＺＳ（配列番号：１０７、同配列中、各アミノ酸残基Ｚは、独立して、Ｋ又はＱである）、又はＶＺＶＺＳＸ（ｎ）（配列番号：１０８、同配列中、各アミノ酸残基Ｚは、独立して、Ｋ又はＱである）の内の１つであることができる（及び好ましくは、これらの内の１つであり）（及び特に、ＶＴＶＳＳ、ＶＫＶＳＳ（配列番号：９５）、ＶＱＶＳＳ（配列番号：９６）、ＶＫＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：９７）、又はＶＱＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：９８）の内の１つであり、及びとりわけ、ＶＴＶＳＳ（配列番号：７７）又はＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号：７８）のいずれかであることができる）。ここで、ｎ及びＸは、１１２位がＱ又はＫである、本発明のＶＨドメインについて本明細書で更に記載された通りであり（及びここで、任意のＣ末端伸長は、好ましくは、１１２位がＱ又はＫである、本発明ＶＨドメインについて本明細書で更に記載された通りである）。また、１１２位がＱ又はＫであるか、又は、８９位がＬである本発明ＶＨドメインについての場合と同様に、８９位にＬ及び１１位にＶを有するこのようなＶＨドメインがナノボディである場合、１４位は、特に、アラニン（Ａ）又はプロリン（Ｐ）であることができ、１０８位は、Ｑ又はＬであることができる（及び、ヒト化ナノボディでは、好ましくは、Ｌである）。８９位にＬ及び１１位にＶを有するこのようなナノボディは、１つ以上のナノボディホールマーク残基を含有することができ、及び／又は、適切にヒト化されていることができる。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１１０】
８９位にＬ及び１１位にＶを有する本発明のこのようなＶＨドメインは、再度、本明細書で更に記載された血清アルブミンナノボディであることもできる。例えば、このような血清アルブミン結合ナノボディは、配列番号：４６〜７５の配列の内の１つ（ただし、８９位にＬ及び１１位にＶを有する）、又は、Ａｌｂ−１（国際公開公報第２００６／１２２７８７号の配列番号：５２）、Ａｌｂ−８（本明細書における配列番号：４６）、及び／又はＡｌｂ−２３（本明細書における配列番号：６１）の内の少なくとも１つ（フレームワーク配列及びＣＤＲの両方を考慮するが、任意のＣ末端伸長は考慮しない）に対して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する、８９位にＬ及び１１位にＶを有する別の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。
【０１１１】
より一般的には、本発明におけるこの態様の血清アルブミンに対するＶＨドメインは、国際公開公報第２００４／０４１８６５号、及び特に、同第２００６／１２２７８７号及び同第２０１２／１７５４００号（全て出願人／譲受人の出願）に記載された（ヒト）血清アルブミンに対するナノボディの内の１つであることができ、ここで、８９位におけるアミノ酸は、ロイシン（Ｌ）であり、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、場合により、本明細書で記載されたＣ末端伸長を備えている（及び、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、Ｖ１１０Ｋ、Ｖ１１０Ｑ、Ｓ１１２Ｋ、及び／又はＳ１１２Ｑを適切に含有することもできる）。またさらに、本発明は、他の血清アルブミン結合重鎖ＩＳＶＤ、例えば、国際公開公報第０３／０３５６９４号、同第０４／００３０１９号、同第０５／１１８６４２号、同第０６／０５９１０６号、同第０８／０９６１５８号、同第０９／１２１８０４号、同第１０／１０８９３７号、又は米国特許出願公開公報第２０１３／０１２９７２７号に記載されたものに、すなわち、８９位にロイシン（Ｌ）及び１１位にバリン、ならびに場合により、本明細書で記載された１つ以上の他のアミノ酸残基／置換を適切に導入すること、及び場合により（及び通常、好ましくは、本明細書で概説されたように）（本明細書で更に記載された）Ｃ末端伸長を付加することにより、適用することもできると想定される。血清アルブミンに対するこれらのＶＨドメインにおいて、１１２位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｓである。前記ＶＨドメインは、好ましくは、配列番号：９５〜９８の内の１つであるＣ末端を有する。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１１２】
本発明のこのような血清アルブミン結合ナノボディにおける一部の好ましく、非限定的な例は、国際公開公報第２００６／１２２７８７号における配列番号：５２のアミノ酸配列のヒト化変異体（国際公開公報第２００６／１２２７８７号において「Ａｌｂ−１」と呼ばれる）（同変異体中、８９位におけるアミノ酸は、Ｌであり、１１位におけるアミノ酸は、Ｖである（及び、同変異体は、場合により、本明細書で記載されたＣ末端伸長を備えている））、例えば、国際公開公報第２００６／１２２７８７号における配列番号：５７〜６４に提供されたＡｌｂ−１のヒト化変異体（各場合において、Ｖ８９Ｌ置換及びＬ１１Ｖ置換を有し、場合により、Ｃ末端伸長を有する）、又は、国際公開公報第２０１２／１７５４００号の配列番号：３〜１１に提供されたＡｌｂ−１のヒト化変異体（再度、各場合において、Ｖ８９Ｌ置換及びＬ１１Ｖを有する）である。同変異体の内、配列番号：３、４、及び５は、場合により、Ｃ末端伸長を含有することができ、配列番号：６〜１１は、Ｃ末端伸長を予め含有している（及び再度、このような変異体は、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、Ｔ１１０Ｋ、Ｔ１１０Ｑ、Ｓ１１２Ｋ、及び／又はＳ１１２Ｑを適切に含有することもできる）。８９位にＬ及び１１位にＶを有する血清アルブミンに対するこれらのＶＨドメインにおいて、１１０位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｔであり、１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓである。前記ＶＨドメインは、好ましくは、配列番号：９５〜９８の内の１つであるＣ末端を有する。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１１３】
このため、更なる態様では、本発明は、血清アルブミン（及び特に、ヒト血清アルブミン）に結合する（及び特に、特異的に結合する）ことができる、（本明細書で定義された）本発明のナノボディに関し、ここで、
−ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号：４１）であり；
−ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：４２）であり；
−ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号：４３）であり；
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、
ここで、好ましくは、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ、Ｑ、又はＴの内の１つ、及びより好ましくは、Ｔであり、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｋ、Ｑ、又はＳの内の１つ、及びより好ましくは、Ｓであり、
場合により、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有し（再度、このようなＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りであり、また再度、このようなナノボディは、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌを適切に含有することができる）。再度、８９位にＬ及び１１位にＶを有する血清アルブミンに対するこれらのＶＨドメインにおいて、１１０位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｔであり、１１２位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｓであり、前記ＶＨドメインは、好ましくは、配列番号：９５〜９８の内の１つであるＣ末端を有する。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１１４】
特定の態様では、本発明は、国際公開公報第２００６／１２２７８７号における配列番号：５２のヒト化変異体である血清アルブミン（及び特に、ヒト血清アルブミン）に結合する（及び特に、特異的に結合する）ことができる、（本明細書で定義された）本発明のナノボディに関し、ここで、
−ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＳＦＧＭＳ（配列番号：４１）であり；
−ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＩＳＧＳＧＳＤＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：４２）であり；
−ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＧＧＳＬＳＲ（配列番号：４３）であり；
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、
及び好ましくは、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ、Ｑ、又はＴの内の１つ、及びより好ましくは、Ｔであり、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｋ、Ｑ、又はＳの内の１つ、及びより好ましくは、Ｓであり、
場合により、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有し（再度、このようなＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りであり、また再度、このようなナノボディは、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１１Ｌ、Ｌ１１Ｖ、Ｌ１１Ｋ、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、及び／又はＱ１０８Ｌを含有することができる）。８９位にＬ及び１１位にＶを有する血清アルブミンに対するこれらのＶＨドメインにおいて、１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔであり、１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓであり、前記ＶＨドメインは、好ましくは、配列番号：９５〜９８の内の１つであるＣ末端を有する。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１１５】
特定の態様では、本発明は、Ａｌｂ−１（国際公開公報第２００６／１２２７８７号の配列番号：５２）、Ａｌｂ−８（本明細書における配列番号：４６）、及び／又はＡｌｂ−２３（本明細書における配列番号：６１）の内の少なくとも１つ（フレームワーク配列及びＣＤＲの両方を考慮するが、任意のＣ末端伸長は考慮しない）に対して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する、血清アルブミン（及び特に、ヒト血清アルブミン）に結合する（及び特に、特異的に結合する）ことができる、（本明細書で定義された）本発明のナノボディに関し、ここで、８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、場合により、そのＣ末端において、Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有し（再度、このようなＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りであり、また再度、このようなナノボディは、例えば、本明細書で言及された１つ以上の他の特定のアミノ酸残基／置換、例えば、１４Ａ、Ｐ１４Ａ、１４Ｐ、Ａ１４Ｐ、１０８Ｌ、Ｑ１０８Ｌ、Ｔ１１０Ｋ、Ｔ１１０Ｑ、Ｓ１１２Ｋ、及び／又はＳ１１２Ｑを適切に含有することができる）。再度、本発明のこのようなナノボディは、好ましくは、Ａｌｂ−１のヒト化変異体（ただし、Ｖ８９Ｌ及びＬ１１Ｖ置換を有する）であり、より好ましくは、少なくとも１つ、特に任意の２つ、およびとりわけ、３つ全ての、配列番号：４１〜４３のそれぞれで提供されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３を有する。血清アルブミンに対するこれらのＶＨドメインにおいて、１１２位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｓであり、前記ＶＨドメインは、好ましくは、配列番号：９５〜９８の内の１つであるＣ末端を有する。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１１６】
具体的な一態様によれば、８９位にＬ及び１１位にＶを有する本発明の任意のこのような血清アルブミン結合ナノボディは、国際公開公報第１２／１７５４００号に記載されたＡｌｂ−２３の特徴を有するアミノ酸残基及びその変異体（すなわち、４４及び４５位におけるアミノ酸モチーフＧＰ、７４〜７６位におけるアミノ酸モチーフＳＫＮ、ならびに好ましくは、１６位におけるＧ、また及び場合により、８３位におけるＲ）も有することができる。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１１７】
１１２位にＱ又はＫを含有するか、又は、８９位にＴを有する本発明のＶＨドメインについてと同様に、８９位にＬ及び１１位にＶを含有する本発明のＶＨドメインは、既存の抗体による、及び特に、Ｃ末端伸長の存在下においてＶＨドメイン及びナノボディに結合可能な（例えば、ＳＬＥ患者から得られたサンプル中に見出された）このような既存の抗体による低下した結合を示す。８９位がＬであり、１１位がＶである本発明のＶＨドメインについて留意する１つの更なる事項は、これらの置換は、ヒトＶＨドメインにおいて、いくらかの頻度で生じることが公知であることである（１１位については、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−５、及び、８９位については、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７を参照のこと）。
【０１１８】
１１位にＶ及び８９位にＴを有する本発明のＶＨドメインの一部の非限定的な例は、配列番号：１０９〜１３６として、図２に提供されている。これらのＶＨドメインの内、配列番号：１２３〜１３６として提供された配列は、Ｌ１１Ｖ及びＶ８９Ｌ変異に加えて、Ｔ１１０Ｋ変異も含有する。これらは、ヒト血清アルブミンに結合するＶＨドメインであり、本発明の好ましい血清アルブミン結合ＶＨドメインについて本明細書で示されたＣＤＲを有する。
【０１１９】
更なる態様では、本発明は、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、場合により、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する（このＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りである）。また、（ｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。好ましくは、この段落のＶＨドメインにおいて、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓである。再度、本発明の他のＶＨドメインについてと同様に、このようなＶＨドメインは、任意の適切なターゲット（及び特に、治療関連ターゲット）に対することができる。具体的な一態様によれば、このようなＶＨドメインは、血清アルブミンに対する。
【０１２０】
更なる態様では、本発明は、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、下記のいずれかであり、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、及び／又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、及び／又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｖであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、場合により、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する（このＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りである）。また、（ｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。本発明の別の態様は、この段落で記載された、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり（及びここで、１４、４１、８９、１０８、及び１１２位におけるアミノ酸残基は、上記ビュレットで列記された通りであることができ、４２及び８７位におけるアミノ酸残基は、例えば、この段落で記載された通りであることができ、このＶＨドメインは、場合により、この段落で記載されたＣ末端伸長（Ｘ）ｎを含有することができる）。
【０１２１】
更なる態様では、本発明は、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、下記のいずれかであり、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、８９位におけるアミノは、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり（及び好ましくは、Ｖであり）、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｔであり）、及び／又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｓであり）、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｔであり）、及び／又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｓであり）、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｖであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、場合により、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する（このＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りである）。また、（ｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。本発明の別の態様は、この段落で記載された、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり（及びここで、１４、４１、８９、１０８、及び１１２位におけるアミノ酸残基は、上記ビュレットで列記された通りであることができ、４２及び８７位におけるアミノ酸残基は、例えば、この段落で記載された通りであることができ、このＶＨドメインは、場合により、この段落で記載されたＣ末端伸長（Ｘ）ｎを含有することができる）。
【０１２２】
更なる態様では、本発明は、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、下記のいずれかであり、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｖであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、場合により、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する（このＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りである）。また、（ｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。本発明の別の態様は、この段落で記載された、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり（及びここで、１４、４１、８９、１０８、及び１１２位におけるアミノ酸残基は、上記ビュレットで列記された通りであることができ、４２及び８７位におけるアミノ酸残基は、例えば、この段落で記載された通りであることができ、このＶＨドメインは、場合により、この段落で記載されたＣ末端伸長（Ｘ）ｎを含有することができる）。
【０１２３】
更なる態様では、本発明は、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、下記のいずれかであり、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、８９位におけるアミノは、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり（及び好ましくは、Ｖであり）、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｔであり）、又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｓであり）、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｔであり）、又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｓであり）、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｖであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、場合により、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する（このＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りである）。また、（ｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。本発明の別の態様は、この段落で記載された、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり（及びここで、１４、４１、８９、１０８、及び１１２位におけるアミノ酸残基は、上記ビュレットで列記された通りであることができ、４２及び８７位におけるアミノ酸残基は、例えば、この段落で記載された通りであることができ、このＶＨドメインは、場合により、この段落で記載されたＣ末端伸長（Ｘ）ｎを含有することができる）。
【０１２４】
更なる態様では、本発明は、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、下記のいずれかであり、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、８９位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓであり（及び好ましくは、Ｓであり）、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｖであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、場合により、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する（このＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りである）。また、（ｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。本発明の別の態様は、この段落で記載された、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり（及びここで、１４、４１、８９、１０８、及び１１２位におけるアミノ酸残基は、上記ビュレットで列記された通りであることができ、４２及び８７位におけるアミノ酸残基は、例えば、この段落で記載された通りであることができ、このＶＨドメインは、場合により、この段落で記載されたＣ末端伸長（Ｘ）ｎを含有することができる）。
【０１２５】
更なる態様では、本発明は、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、下記のいずれかであり、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、及び／又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、及び／又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｖであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する（このＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りである）。また、（ｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。本発明の別の態様は、この段落で記載された、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり（及びここで、１４、４１、８９、１０８、及び１１２位におけるアミノ酸残基は、上記ビュレットで列記された通りであることができ、４２及び８７位におけるアミノ酸残基は、例えば、この段落で記載された通りであることができ、このＶＨドメインは、場合により、この段落で記載されたＣ末端伸長（Ｘ）ｎを含有することができる）。
【０１２６】
更なる態様では、本発明は、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、下記のいずれかであり、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、８９位におけるアミノは、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり（及び好ましくは、Ｖであり）、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｔであり）、及び／又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｓであり）、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｔであり）、及び／又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｓであり）、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｖであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される）を含有する（このＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りである）。また、（ｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。本発明の別の態様は、この段落で記載された、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり（及びここで、１４、４１、８９、１０８、及び１１２位におけるアミノ酸残基は、上記ビュレットで列記された通りであることができ、４２及び８７位におけるアミノ酸残基は、例えば、この段落で記載された通りであることができ、このＶＨドメインは、場合により、この段落で記載されたＣ末端伸長（Ｘ）ｎを含有することができる）。
【０１２７】
更なる態様では、本発明は、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、下記のいずれかであり、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｖであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する（このＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りである）。また、（ｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。本発明の別の態様は、この段落で記載された、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり（及びここで、１４、４１、８９、１０８、及び１１２位におけるアミノ酸残基は、上記ビュレットで列記された通りであることができ、４２及び８７位におけるアミノ酸残基は、例えば、この段落で記載された通りであることができ、このＶＨドメインは、場合により、この段落で記載されたＣ末端伸長（Ｘ）ｎを含有することができる）。
【０１２８】
更なる態様では、本発明は、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、
下記のいずれかであり、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、８９位におけるアミノは、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり（及び好ましくは、Ｖであり）、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｔであり）、又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｓであり）、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｔであり）、又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり（及び好ましくは、Ｓであり）、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｖであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する（このＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りである）。また、（ｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。本発明の別の態様は、この段落で記載された、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり（及びここで、１４、４１、８９、１０８、及び１１２位におけるアミノ酸残基は、上記ビュレットで列記された通りであることができ、４２及び８７位におけるアミノ酸残基は、例えば、この段落で記載された通りであることができ、このＶＨドメインは、場合により、この段落で記載されたＣ末端伸長（Ｘ）ｎを含有することができる）。
【０１２９】
更なる態様では、本発明は、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、下記のいずれかであり、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、８９位におけるアミノは、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓであり（及び好ましくは、Ｓであり）、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｖであり、
ここで、前記ＶＨドメインは、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、ｎは、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり、各Ｘは、（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）から独立して選択され、好ましくは、これらからなる群より独立して選択される］を含有する（このＣ末端伸長は、好ましくは、本明細書で更に記載された通りである）。また、（ｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。本発明の別の態様は、この段落で記載された、ＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤであるＶＨドメイン、及びとりわけ、ナノボディであるＶＨドメイン）に関し、ここで、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｋ又はＱのいずれかであり（及びここで、１４、４１、８９、１０８、及び１１２位におけるアミノ酸残基は、上記ビュレットで列記された通りであることができ、４２及び８７位におけるアミノ酸残基は、例えば、この段落で記載された通りであることができ、このＶＨドメインは、場合により、この段落で記載されたＣ末端伸長（Ｘ）ｎを含有することができる）。
【０１３０】
再度、本明細書で定義された本発明のＶＨドメインにおいて、本明細書で明確に定義されていない位置におけるアミノ酸残基は、ＶＨドメイン、及び特に、ＩＳＶＤ、及びとりわけ、ナノボディ（ヒト化ＶＨＨドメインを含む）についてこのような位置に適した任意のアミノ酸残基であることができる。再度、本明細書で引用された従来技術、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−３及びＡ−５〜Ａ−８等が参照される。好ましくは、各場合において、１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ又はＶであり、及びより好ましくは、Ｖである。また、（ｉ）４１位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４１位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アラニン（Ａ）、又はロイシン（Ｌ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。これらのアミノ酸残基は、ヒト又はラマのいずれかにおけるこの位置に最も頻繁に生じるアミノ酸残基の一部であり、とりわけ、プロリン（Ｐ）又はアラニン（Ａ）のいずれかであることができる。及び／又は、（ｉｉ）４２位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−６で言及された、４２位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、グリシン（Ｇ）又はグルタミン酸（Ｅ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。及び／又は、（ｉｉｉ）８７位は、例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号の表Ａ−７で言及された、８７位についてのアミノ酸残基（すなわち、ヒトＶＨ３残基及び／又はラクダ化ＶＨＨ残基）の内の１つであることができ、特に、スレオニン（Ｔ）又はアラニン（Ａ）であることができる（又は、これらから選択することができる）。
【０１３１】
また、本発明の前記ＶＨドメインは、任意の適切なターゲット、及び特に、治療ターゲットに対することができる。一態様において、本発明の前記ＶＨドメインは、ヒト血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミンに対する。
【０１３２】
また、本発明は、少なくとも１つの本発明のＶＨドメインを含む、タンパク質、ポリペプチド、構築物、化合物、又は他の化学成分（本明細書において、まとめて、「本発明の化合物」とも呼ばれる）に関する。
【０１３３】
本明細書で更に記載されたように、具体的な一態様によれば、本発明の化合物において、本発明のＶＨドメインは、本発明の化合物のＣ末端に存在する／同Ｃ末端を形成する。このような場合には、本発明の化合物のＣ末端を形成する／同Ｃ末端に存在する本発明のＶＨドメインは、好ましくは、本明細書で記載されたＣ末端伸長を有する。
【０１３４】
また、本明細書で更に記載されたように、本発明の化合物は、１つ以上の本発明のＶＨドメインが１つ以上のＶＬドメインと会合して、１つ以上の機能的な抗原結合部位を形成している、ＳｃＦｖ、ディアボディ、又は他のタンパク質、ポリペプチド、もしくは構築物であることができる。
【０１３５】
ただし、本発明の好ましい態様によれば、本発明のＶＨドメインは、ＩＳＶＤであり、本発明の化合物は、少なくとも１つの本発明のＩＳＶＤと、場合により、１つ以上の更なるアミノ酸配列、部分、結合ドメイン、又は結合ユニット（場合により、１つ以上のリンカーを介して、互いに適切に連結）とを含むか、又は、本質的にこれらからなる、タンパク質、ポリペプチド、構築物、化合物、又は他の化学成分である。特に、本発明のこのような化合物は、１つ以上のＩＳＶＤを含み、又は、本質的にこれらからなることができ、ＩＳＶＤの内の少なくとも１つは、本発明のＩＳＶＤである。本発明のこのような化合物は、特に、本発明のＩＳＶＤを、そのＣ末端に有することができる。またこの場合には、本発明のＩＳＶＤは、好ましくは、本明細書で記載されたＣ末端伸長を有する。また、本発明のこのような化合物が、２つ以上のＩＳＶＤを含有する場合、存在する２つ以上又は本質的に全てのＩＳＶＤは、本発明のＩＳＶＤであることができる（すなわち、それぞれが、下記アミノ酸残基／置換：１１２Ｋ、１１２Ｑ、Ｓ１１２Ｋ、Ｓ１１２Ｑ、８９Ｔ、及び／もしくはＶ８９Ｔ、又は、Ｖ８９ＬとＴ１１０ＫもしくはＴ１１０Ｑとの組み合わせ、ならびに場合により、本発明のＩＳＶＤについて本明細書で言及された１つ以上の更なる置換、例えば、Ｌ１１Ｖの内の少なくとも１つを有する）。また、本発明のこのような化合物において、本発明のＩＳＶＤは、好ましくは、本発明のナノボディであり、本発明の化合物に存在する全て又は本質的に全てのＩＳＶＤは、ナノボディ（及び特に、本発明のナノボディ、すなわち、それぞれが、下記アミノ酸残基／置換：１１２Ｋ、１１２Ｑ、Ｓ１１２Ｋ、Ｓ１１２Ｑ、８９Ｔ、及び／もしくはＶ８９Ｔ、又は、Ｖ８９ＬとＴ１１０ＫもしくはＴ１１０Ｑとの組み合わせ、ならびに場合により、本発明のナノボディについて本明細書で言及された１つ以上の更なる置換、例えば、Ｌ１１Ｖの内の少なくとも１つを有する）であることができる（好ましくは、同ナノボディである）。本発明のこのような化合物の例は、本明細書の更なる開示に基づいて、当業者に明らかであろう。
【０１３６】
１つ以上のＩＳＶＤ（少なくとも１つの本発明のＩＳＶＤを含む）を含むタンパク質、ポリペプチド、構築物、化合物、又は他の化学成分の一部の非限定的な例は、直接又は１つ以上の適切なリンカーを介して連結した２つ以上のＩＳＶＤを含有する、多価、多重特異性（例えば、二重特異性）、又は多重抗原結合性（例えば、二重抗原結合性）の構築物である。再度、ＩＳＶＤは、好ましくは、ナノボディである。このような構築物及びこのような構築物を（特にナノボディに基づいて）調製することができる方法における一般的な教示の一部の非限定的な例については、例えば、Conrath et al., JBC 276, 10(9), 7346 (2001)及びMuyldermansによるレビュー文献であるReviews in Mol. Biotechnol., 74: 27 (2001)が参照される。
【０１３７】
例えば、２つ以上のＩＳＶＤ（少なくとも１つのＩＳＶＤが本発明のＩＳＶＤである）を含有する本発明のこのような化合物は、二価、三価、四価、もしくは五価の構築物であることができ、及び／又は、単特異性、二重特異性、三重特異性の構築物であることができ、及び／又は、二重抗原結合性もしくは三重抗原結合性の構築物であることができる。再度、本明細書で引用されたＩＳＶＤ系及びナノボディ系生物学的製剤における従来技術が参照される。また、本発明のこのような化合物は、官能化により、及び／又は、構築物の半減期を伸ばす部分、もしくは結合ユニットを構築物に含ませることにより、延長した半減期を備えることができる。このような官能化、部分、又は結合ユニットの例は、当業者に明らかであろうし、例えば、本明細書に記載された通りであることができ、例えば、ペグ化、血清アルブミンへの融合、又は、血清タンパク質、例えば、血清アルブミンに結合することができるペプチドもしくは結合ユニットへの融合を含むことができる。このような血清アルブミン結合ペプチド又は結合ドメインは、（血清アルブミン結合ペプチド又は結合ドメインを含まない同じ構築物と比較して）構築物の半減期を伸ばすことができる、任意の適切な血清アルブミン結合ペプチド又は結合ドメインであることができ、特に、出願人による国際公開公報第２００８／０６８２８０号（及び特に、両方とも出願人による国際公開公報第２００９／１２７６９１号及び非公表の米国仮出願第６１／３０１，８１９号）に記載された血清アルブミン結合ペプチド、又は、血清アルブミン結合ＩＳＶ（例えば、血清アルブミン結合ナノボディ、例えば、Ａｌｂ−８もしくはヒト化バージョンのＡｋｂ−１、例えば、Ａｌｂ−８、これについては、例えば、国際公開公報第０６／１２２７８７号が参照される）、又は、（ヒト）血清タンパク質、例えば、（本明細書で更に記載された）（ヒト）血清アルブミンに対する本発明のＩＳＶＤであることができる。一般的には、延長した半減期を有する本発明の任意の化合物は、好ましくは、ヒト対象中において、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日の（本明細書で定義された）半減期を有するであろう。
【０１３８】
本発明の化合物が、（ヒト）血清タンパク質に対する、及び特に、（ヒト）血清アルブミンに対する、少なくとも１つ（及び好ましくは、１つ）の本発明のＩＳＶＤ（及び特に、本発明のナノボディ）を含む場合、本発明の化合物は、通常、１つ以上の治療活性アミノ酸配列、部分、結合ドメイン、又は結合ユニット（すなわち、治療関連ターゲット、経路、又はメカニズムに対する）を、更に含有するであろうし、本発明のＩＳＶＤは、それら（及び化合物全体）の半減期を伸ばすのに機能するであろう。再度、前記１つ以上の更なる治療活性部分は、好ましくは、ＩＳＶＤ（及びより好ましくは、ナノボディ）であり、本発明のＩＳＶＤ（及びより好ましくは、本発明のナノボディ）であることもできる。本発明のこのような化合物中において、ヒト血清アルブミンに対する本発明のＩＳＶＤは、再度、本化合物のＣ末端に存在する／同Ｃ末端を形成することができ、その場合、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができる（及び好ましくは、同Ｃ末端伸長を含む）。本発明の化合物が、（ヒト）血清アルブミンに対する本発明のＩＳＶＤを含有する場合、前記本発明の化合物は、好ましくは、それが投与され／投与されているヒト対象中において、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日の（本明細書で定義された）半減期を有する。この目的で使用することができる、ヒト血清アルブミンに対する本発明のＩＳＶＤの一部の非限定的な例は、本明細書で更に記載された通りである。
【０１３９】
一態様において、前記本発明の化合物に存在するＩＳＶＤ又はナノボディは全て、本発明のＩＳＶＤである（本明細書で定義された本発明のＶＨドメインの特徴を有するアミノ酸残基／置換、すなわち、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせにおける、少なくとも１１２ＫもしくはＱ、又は、少なくとも８９Ｔもしくは少なくとも８９Ｌを有することを意味する）。本発明の化合物中におけるＩＳＶＤが全て、本発明のＩＳＶＤである場合、本発明のＩＳＶＤは、同じ置換（例えば、全てＳ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｑ置換を有する）又は異なる置換（例えば、１つが、Ｓ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｑ置換を有することができ、他のものが、Ｔ１１０Ｋ又はＴ１１０Ｑとの組み合わせにおけるＶ８９Ｌ変異を有することができる）を有することができる。また通常、本発明の化合物のＣ末端におけるＩＳＶＤのみが、Ｃ末端伸長を有するであろう（他のものはおそらく、本化合物に存在する別のＩＳＶＤに対して、そのＣ末端において連結しているであろう）。
【０１４０】
このため、更なる態様では、本発明は、（本明細書で更に記載された）本発明のＩＳＶＤを含むか、又は、本質的に同ＩＳＶＤからなる、タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に関する。
【０１４１】
さらに、本発明は、少なくとも１つの本発明のＩＳＶＤと、少なくとも１つの他の治療部分又は成分とを（互いに直接又は適切なリンカーを介して連結）含む、タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に関する。
【０１４２】
さらに、本発明は、（ヒト）血清タンパク質に対する（及び好ましくは、ヒト血清アルブミンに対する）少なくとも１つの本発明のＩＳＶＤと、少なくとも１つの他の治療部分又は成分とを（互いに直接又は適切なリンカーを介して連結）含む、タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に関する。
【０１４３】
さらに、本発明は、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、又は４つ）の免疫グロブリンシングル可変ドメイン（互いに直接又は適切なリンカーを介して連結）を含む、タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に関する。免疫グロブリンシングル可変ドメインの少なくとも１つは、本発明のＩＳＶＤである。この態様において、（ｉ）存在するＩＳＶＤは、適切に、同じか又は異なることができ、それらが異なる場合、それらは、同じターゲット（例えば、それらは、異なる配列を有することができ、及び／又は、同じターゲット上の異なるエピトープに対することができる）、又は、２つ以上の異なるターゲット（すなわち、得られたタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子が、二重又は多重特異性構築物であるように）に対することができる。及び／又は、（ｉｉ）タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子のＣ末端に存在するＩＳＶＤは、本発明のＩＳＶＤであってもよいし、又は、同ＩＳＶＤでなくてもよい（ただし、好ましくは、同ＩＳＶＤである）。及び／又は、（ｉｉｉ）本発明のＩＳＶＤがタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子のＣ末端に存在する場合、本発明のＩＳＶＤは、好ましくは、本明細書で記載されたＣ末端伸長を有する。及び／又は、（ｉｖ）タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に存在する本質的に全てのＩＳＶＤは、本発明のＩＳＶＤであることができる。また、ＩＳＶＤが、異なるターゲットに対する場合（その内の少なくとも１つが、治療ターゲットである場合）、更なる一態様によれば、存在するＩＳＶＤの少なくとも１つが、（ヒト）血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミンに対することができる（このＩＳＶＤは、本発明のＩＳＶＤであってもよいし、又は、同ＩＳＶＤでなくてもよく、このＩＳＶＤが本発明のＩＳＶＤである場合、本明細書で更に記載されたヒト血清アルブミンに対するナノボディが好ましい）。
【０１４４】
さらに、本発明は、２つの免疫グロブリンシングル可変ドメイン（互いに直接又は適切なリンカーを介して連結）を含むか、又は、本質的にこれらからなる、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に関する。
【０１４５】
さらに、本発明は、３つの免疫グロブリンシングル可変ドメイン（互いに直接又は適切なリンカーを介して連結）を含むか、又は、本質的にこれらからなる、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に関する。
【０１４６】
さらに、本発明は、４つの免疫グロブリンシングル可変ドメイン（互いに直接又は適切なリンカーを介して連結）を含むか、又は、本質的にこれらからなる、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に関する。
【０１４７】
さらに、本発明は、延長した半減期を前記タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に付与する、少なくとも１つの部分、結合ドメイン、又は結合ユニットを更に含む、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に関する（すなわち、前記部分、結合ドメイン、又は結合ユニットを含まない、対応するタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子と比較）。より具体的な態様によれば、延長した半減期を前記タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に付与する、前記少なくとも１つの部分、結合ドメイン、又は結合ユニットは、免疫グロブリンシングル可変ドメイン、とりわけ、血清タンパク質（例えば、血清アルブミン）に対する、特に、ヒト血清タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン）に対する、免疫グロブリンシングル可変ドメインであり、本明細書で記載されたように、特に、本発明のＩＳＶＤであることができる。前記血清タンパク質に対するＩＳＶＤは、タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子のＮ末端に、Ｃ末端に、又は、（タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子が３つ以上のＩＳＶＤを含む場合）分子の中央に存在することができる。
【０１４８】
さらに、本発明は、以下のいずれかを含むか、又は、本質的に以下のいずれかからなる、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に関する。
−２つの免疫グロブリンシングル可変ドメイン（互いに直接又は適切なリンカーを介して連結）、すなわち、延長した半減期を付与する（前記）一方の免疫グロブリンシングル可変ドメイン（例えば、ナノボディ）と、特に治療ターゲットに対することができる他方の免疫グロブリンシングル可変ドメイン（例えば、ナノボディ）；
−３つの免疫グロブリンシングル可変ドメイン（互いに直接又は適切なリンカーを介して連結）、すなわち、延長した半減期を付与する（前記）１つの免疫グロブリンシングル可変ドメイン（例えば、ナノボディ）と、特に治療ターゲットに対することができる他の２つの免疫グロブリンシングル可変ドメイン（例えば、２つの他のナノボディ）（ここで、前記他の２つの免疫グロブリンシングル可変ドメインは、同じターゲットに対し、２つの異なるターゲットに対し、又は同じターゲット上の２つの異なるエピトープに対することができる）；又は
−４つの免疫グロブリンシングル可変ドメイン（互いに直接又は適切なリンカーを介して連結）、すなわち、延長した半減期を付与する（前記）１つの免疫グロブリンシングル可変ドメイン（例えば、ナノボディ）と、特に治療ターゲットに対することができる他の２つの免疫グロブリンシングル可変ドメイン（例えば、２つの他のナノボディ）（ここで、前記他の３つの免疫グロブリンシングル可変ドメインは、同じターゲットに対し、２つもしくは３つの異なるターゲットに対し、及び／又は、同じターゲット上の２つもしくは３つの異なるエピトープに対することができる）
【０１４９】
再度、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子において、（ｉ）存在するＩＳＶＤは、適切に、同じか、又は、異なることができ、ＩＳＶＤが異なる場合、ＩＳＶＤは、同じターゲットに対し（例えば、ＩＳＶＤが異なる配列であることができ、及び／又は、同じターゲット上の異なるエピトープに対することができる）、又は、２つ以上の異なるターゲットに対する（すなわち、得られたタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子は、二重又は多重特異性構築物であるように）ことができる。及び／又は、（ｉｉ）タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子のＣ末端に存在するＩＳＶＤは、本発明のＩＳＶＤでもよく、又は、同ＩＳＶＤでなくてもよい（ただし、好ましくは、本発明のＩＳＶＤである）。及び／又は、（ｉｉｉ）本発明のＩＳＶＤがタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子のＣ末端に存在する場合、本発明のＩＳＶＤは、好ましくは、本明細書で記載されたＣ末端伸張を有する。及び／又は、（ｉｖ）タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子に存在する本質的に全てのＩＳＶＤは、本発明のＩＳＶＤであることができる。
【０１５０】
さらに、本発明は、（本明細書で更に記載された）本発明のＶＨドメイン及び本発明の化合物を発現／生成／製造するための方法に関する。例えば、本発明のＶＨドメインは、適切なホスト生物中において、本発明のＶＨドメインをコードする核酸を適切に発現させることにより発現／生成することができる。例えば、国際公開公報第０８／０２００７９号（及び、本明細書で引用された出願人／譲受人の幾つかの他の特許出願）が参照される。同文献には、一般的に、ナノボディを発現／生成するのに適した方法及び技術が記載されている。また、この方法は、本発明のナノボディを発現／生成するのにも適切に使用することができる。また、ナノボディ以外の本発明のＶＨドメインを発現させるための方法は、本開示及び本明細書で引用された従来技術に基づいて、当業者に明らかであろう。本発明の化合物を、１つ以上の本発明のＶＨドメインを、本発明の最終化合物に存在させるべき１つ以上の更なるアミノ酸残基（及び／又は、他の基もしくは部分）に、場合により、１つ以上のリンカー又はスペーサを介して、（通常、共有結合を介して）適切に連結させることにより、適切に製造／生成することができる。あるいは、本発明の化合物がタンパク質又はポリペプチドである場合、本発明の化合物を、適切なホスト生物中において、本発明の化合物をコードする核酸を適切に発現させることにより、製造／生成することができる。例えば、再度、国際公開公報第０８／０２００７９号及び、本明細書で引用された出願人／譲受人の幾つかの他の特許出願に記載された一般的な方法が参照される。
【０１５１】
また、本発明は、本発明のＶＨドメイン又は本発明の化合物をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸に関する。このような核酸は、ＤＮＡ又はＲＮＡであることができ、及び好ましくは、ＤＮＡであり、プラスミド又はベクターの形態であることができる。例えば、再度、国際公開公報第０８／０２００７９号及び、本明細書で引用された出願人／譲受人の幾つかの他の特許出願が参照される。
【０１５２】
また、本発明は、少なくとも１つの本発明のＶＨドメイン、本発明の化合物、又は、それらのいずれかをコードする核酸を含む組成物に関する。
【０１５３】
さらに、本発明は、ＩＳＶ（及び好ましくは、治療用ＩＳＶ）又は、少なくとも１つのＩＳＶ（及び好ましくは、少なくとも１つの治療用ＩＳＶ）を含むタンパク質もしくはポリペプチド［ここで、前記ＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチドは、本明細書で更に記載された通りである（すなわち、１つ以上の本明細書で記載された態様、及び特に、先の頁に記載された１つ以上の態様のＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチド、及びとりわけ、本明細書で記載された１つ以上の態様によるＣ末端／配列を有するＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチド）］と、少なくとも１つの適切な（すなわち、医薬用途に適切な）担体、希釈剤、又は賦形剤と、場合により、１つ以上の更なる活性物質とを含む医薬組成物に関する。このような組成物、担体、希釈剤、又は賦形剤は、例えば、ナノボディ又は、少なくとも１つのナノボディを含むタンパク質もしくはポリペプチドを含む医薬組成物について、国際公開公報第０８／０２００７９号に記載された通りである（本発明により既に言及された通り、また、ＩＳＶは、好ましくは、ナノボディでもある）。
【０１５４】
さらに、本発明は、ヒトにおける疾患の治療（例えば、このような治療を必要とする患者）に使用するための、ＩＳＶ又は、少なくとも１つのＩＳＶを含むタンパク質もしくはポリペプチドであって、前記ＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチドが、本明細書で更に記載された通りである（すなわち、本明細書で記載された１つ以上の態様、及び特に、先の頁に記載された１つ以上の態様のＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチド、及びとりわけ、本明細書で記載された１つ以上の態様によるＣ末端／配列を有するＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチド）、ＩＳＶ又は、少なくとも１つのＩＳＶを含むタンパク質もしくはポリペプチドに関する。
【０１５５】
さらに、本発明は、医薬組成物の製造における、ＩＳＶ又は、少なくとも１つのＩＳＶを含むタンパク質もしくはポリペプチドの使用であって、前記ＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチドが、本明細書で更に記載された通りである（すなわち、本明細書で記載された１つ以上の態様、及び特に、先の頁に記載された１つ以上の態様のＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチド、及びとりわけ、本明細書で記載された１つ以上の態様によるＣ末端／配列を有するＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチド）使用に関する。
【０１５６】
さらに、本発明は、ヒト対象（例えば、以下の処置を必要とする患者）に、ＩＳＶ又は、少なくとも１つのＩＳＶを含むタンパク質もしくはポリペプチドを投与することを含む処置方法であって、前記ＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチドが、本明細書で更に記載された通りである（すなわち、本明細書で記載された１つ以上の態様、及び特に、先の頁に記載された１つ以上の態様のＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチド、及びとりわけ、本明細書で記載された１つ以上の態様によるＣ末端／配列を有するＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチド）方法、又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶ、タンパク質、もしくはポリペプチドを含む（上記された）医薬組成物に関する。
【０１５７】
上記に関して、本明細書で記載されたＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチドの治療的使用が、本発明の非常に重要な態様であることが明らかであろう。したがって、治療的使用（又は、このような治療的使用のための、このようなＩＳＶ、タンパク質、及びポリペプチドの臨床開発）は、前記ＩＳＶ、タンパク質、又はポリペプチドが免疫原性である（すなわち、ヒト対象に投与された際に、ＡＤＡを生じる可能性がある）かを判定するＡＤＡアッセイ法の使用を含むことができる。この観点において、可能性のある免疫原性についての懸念は、治療剤が長期間（数週間、数か月、又は数年の間）使用される、及び／又は、少なくとも３日、例えば、少なくとも１週間、及び最長１０日以上のヒト対象における半減期（好ましくは、ｔ１／２ベータとして表現）を有するかのいずれかである場合、特に取り組まれなければならないであろうことも明らかであろう。
【０１５８】
このため、具体的な一態様によれば、本発明は、ヒトにおける慢性疾患の処置に意図された、本明細書で記載された本発明のＩＳＶ、タンパク質、ポリペプチド、化合物、又は分子（又は、それらを含む医薬組成物）に関する。及び／又は、本明細書で記載されたこのようなＩＳＶ、タンパク質、ポリペプチドは、少なくとも１週間の期間、好ましくは少なくとも２週間、例えば、少なくとも１か月間（すなわち、治療活性用量で）投与された対象の循環中に（すなわち、薬理活性レベルで）存在することが意図される。及び／又は、本明細書で記載されたこのようなＩＳＶ、タンパク質、ポリペプチドは、これらが、少なくとも３日、例えば、少なくとも１週間、及び最大１０日以上のヒト対象における半減期（好ましくは、ｔ１／２ベータとして表現）を有するようにである。及び／又は、本明細書で記載されたこのようなＩＳＶ、タンパク質、ポリペプチド、又は医薬組成物は、少なくとも３日、例えば、少なくとも１週間、例えば、少なくとも２週間もしくは少なくとも１か月、又はそれより長く（すなわち、少なくとも３ヶ月、少なくとも６か月、又は少なくとも１年）の期間にわたって投与され、又は、更に慢性的に投与される２回以上の投与として、ヒトに投与されるのが意図される。
【０１５９】
また、本明細書の開示に基づいて当業者に明らかであろうように、本明細書で記載されたＶＨドメインに対する改善及び得られた改善ＶＨドメインは、−本発明によれば−ＳＬＥ患者から得られたサンプル中に見出された種類の既存の抗体、すなわち、本明細書で記載されたＣ末端伸長の存在下においてもＶＨドメインのＣ末端領域に結合することができる既存の抗体が全血／血清に含まれる（又は、同抗体が含まれると疑われる）ヒト対象（及び特に、患者）への投与が意図されるタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子における特定の使用を見出すであろう。特に、本明細書で記載されたＶＨドメインに対する改善及び得られた改善ＶＨドメインは、このような患者における疾患又は障害を治療又は予防するのが意図されるタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは分子における特定の使用を見出すであろう。これは、任意の疾患又は障害であることができるが、特に、このような既存の抗体の存在もしくは発生をもたらす、及び／又は、同存在もしくは発生に関連する疾患又は障害（一例は、ＳＬＥであるが、他の重篤な（自己）免疫障害も、このような既存の抗体をもたらすおそれがあると予想される。既存の抗体は、関連する患者集団から得られたサンプルを、このような既存の抗体の存在について、以下の実験部においてＳＬＥ患者からのサンプルに行われた試験に本質的に類似する方法において試験することにより、容易に確認することができる）であることができる。
【０１６０】
このため、具体的な一態様によれば、本発明は、ＶＨドメインの露出したＣ末端領域に、前記ＶＨドメインが本明細書で記載されたＣ末端伸長を含有する場合（又は、ＶＨドメインのＣ末端が別のタンパク質又はポリペプチド、例えば、別のＩＳＶに、場合により、適切なリンカーを介して連結されている場合）でも、結合することができる既存の抗体が血液に含まれるヒト対象への投与が意図される、本明細書で記載された本発明のＩＳＶ、タンパク質、ポリペプチド、化合物、又は分子（又は、これらを含む医薬組成物）に関する。
【０１６１】
特に、本発明は、ＶＨドメインの露出したＣ末端領域に、前記ＶＨドメインが本明細書で記載されたＣ末端伸長を含有する場合（又は、ＶＨドメインのＣ末端が別のタンパク質又はポリペプチド、例えば、別のＩＳＶに、場合により、適切なリンカーを介して連結されている場合）でも、結合することができる既存の抗体が血液に含まれるヒト対象における疾患又は障害の処置に使用するための、本明細書で記載された本発明のＩＳＶ、タンパク質、ポリペプチド、化合物、又は分子（又は、これらを含む医薬組成物）に関する。前記疾患又は障害は、任意の疾患又は障害であることができるが、特に、このような患者の血中におけるこのような既存の抗体の存在により、引き起こされ、もたらされ、又は他の方法で関連付けられる疾患又は障害、例えば、ＳＬＥ又は別の（重篤な）自己免疫疾患であることができる。
【０１６２】
このため、より具体的な態様によれば、本発明は、ヒト対象／患者における疾患又は障害の処置に使用するためのものであり、ここで、前記疾患又は障害が、ＶＨドメインの露出したＣ末端領域に、前記ＶＨドメインが本明細書で記載されたＣ末端伸長を含有する場合（又は、ＶＨドメインのＣ末端が別のタンパク質又はポリペプチド、例えば、別のＩＳＶに、場合により、適切なリンカーを介して連結されている場合）でも、結合することができる、前記ヒト対象／患者の血中における既存の抗体の存在により、引き起こされ、もたらされ、又は他の方法で関連付けられる疾患又は障害である、本明細書で記載された本発明のＩＳＶ、タンパク質、ポリペプチド、化合物、又は分子（又は、これらを含む医薬組成物）に関する。例えば、本明細書で記載された本発明のこのようなＩＳＶ、タンパク質、ポリペプチド、化合物、又は分子（又は、これらを含む医薬組成物）は、ヒト対象／患者におけるＳＬＥ又は別の（重篤な）自己免疫疾患の処置に使用するためのものである。
【０１６３】
当業者に明らかであろうように、タンパク質、ポリペプチド、化合物、又は分子がこのような疾患又は障害の予防又は治療に意図されている場合、これらは、関連する疾患又は障害に対する（例えば、適切な疾患又は障害に治療的に関連するターゲット又は経路に対する）治療活性剤である、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、又は４つ）のドメイン、結合ユニット、又は部分もしくは成分を含有するであろう。再度、このような結合ドメイン又は結合ユニットは、例えば、（他の）ＩＳＶＤであることができ、一態様によれば、特に、本発明のＶＨドメイン又はＩＳＶＤであることができる。このようなタンパク質、ポリペプチド、化合物、又は分子の別の一般的な例は、前記１つ以上の治療ドメイン、結合ユニット、又は部分もしくは成分がＩＳＶＤでないが（ただし、例えば、別のスキャフォールドから得られた）、タンパク質、ポリペプチド、化合物、又は分子の半減期を伸ばすために、本発明のＶＨドメインを含有するタンパク質、ポリペプチド、化合物、又は分子（例えば、本明細書で記載された血清アルブミンバインダー）である。
【０１６４】
更なる態様では、（本明細書で記載された）本発明のＶＨドメイン、ＩＳＶＤ、又は化合物は、イオンチャネルＫｖ１．３に対する。このようなＶＨドメイン、ＩＳＶＤ、又は化合物の一部の好ましく、非限定的な例は、実施例７に提供される。前記実施例に記載されたＫｖ１．３に対するＶＨドメイン（及び、それを含む本発明の化合物）及び前記実施例で記載されたＫｖ１．３に対する本発明の特定の化合物は、本発明の更なる態様を構成する。
【０１６５】
例えば、限定されず、Ｋｖ１．３に対する本発明の化合物は、Ｋｖ１．３に対する本発明のシングルＶＨドメイン−及び好ましくは、ナノボディ−を含むか、もしくは、本質的にこれからなることができ、又は、少なくとも２つ（例えば、２つもしくは３つ）のＫｖ１．３に対する本発明のＶＨドメイン−及び好ましくは、ナノボディ−を含むか、もしくは、本質的にこれからなることができる。このようなポリペプチドが２つ以上のＫｖ１．３に対する本発明のＶＨドメインを含有する場合、これらのＶＨドメインは、同じか、又は、異なることができる。それらが異なる場合、それらは、Ｋｖ１．３上の同じエピトープもしくはＫｖ１．３上のサブユニットに対して、又は、異なるエピトープもしくはサブユニットに対することができる。
【０１６６】
再度、本発明の化合物について本明細書で一般的に記載されたように、このような化合物は、１つ以上のリンカーを適切に含有することができ、Ｃ末端伸長（すなわち、本明細書で記載された通り）を含有することができ、また、１つ以上の更なる結合ユニット又は結合ドメイン（又は、他のアミノ酸配列もしくは部分）、例えば、Ｋｖ１．３以外のターゲットに対する更なるＩＳＶＤを含有することもできる。例えば、限定されず、本発明の化合物は、延長した半減期を提供する結合ドメイン又は結合ユニット、例えば、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミンに対するＩＳＶＤ（例えば、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ、例えば、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディ）を（も）含有することができる。
【０１６７】
更なる態様では、本発明は、本明細書で記載された（すなわち、本明細書で記載されたアミノ酸残基／変異／置換を含有する）免疫グロブリン可変ドメイン配列の（合成）ライブラリに関する。このようなライブラリは、通常、（本質的に）全て同じフレームワーク配列（本明細書で示されたアミノ酸残基／変異を含有する前記フレームワーク配列）と、種々のＣＤＲ（ライブラリ中の各配列が、ライブラリ中の他の配列と比較して、そのＣＤＲの少なくとも１つにおいて、少なくとも「１つのアミノ酸差」を有することを意味する）とを伴って、通常、少なくとも１００種類の配列、例えば、少なくとも１０００種類の配列、特に、１０５種類を超える配列、とりわけ、１０６種類を超える配列、例えば、１０８〜１０１０種類以上の配列を含有するであろう（その広い意味において、配列間に少なくとも１つのアミノ酸差を有することを意味する）。
【０１６８】
免疫グロブリンシングル可変ドメイン配列（例えば、ヒトＶＨ配列又はラクダ誘導体化ＶＨＨ配列に基づく）の合成ライブラリ及びそれらを生成／構築する方法（所定のスキャフォールドに基づき、及び／又は、フレームワーク領域中に１つ以上の特定のアミノ酸残基／変異を含有するライブラリを含む）は、当技術分野において周知である。例えば、Tanha et al., J. Biol. Chem., Vol. 276, pp. 24774-24780, 2001；Bond et al., J. Mol. Biol. (2003) 332, 643-655；Mandrup et al., PLOS One, October 2013, Volume 8, Issue 10, e76834；Goldman et al., Anal. Chem., 2006, 78, 8245-8255；Hussak et al., Protein Engineering, Design & Selection vol. 25 no. 6 pp. 313-318, 2012；及び、Chen et al., Methods Mol. Biol., 2009, 525, 81が参照される。これらに文献に記載された技術（及びそれ自体公知の類似する技術）を、本発明の免疫グロブリンシングル可変ドメインライブラリを生成するのに、適切に使用又は適合させることができる。
【０１６９】
このようなライブラリに存在するＩＳＶＤは、任意の適切なソースからの任意の適切なＣＤＲ、例えば、「ナイーブな」哺乳類からの免疫レパートリー（例えば、ラクダ種又はヒト配列類）から開始して得られた／生成されたＣＤＲ、抗原により適切に免疫化されている動物（例えば、ラクダ種）からの免疫レパートリーから開始して得られた／生成されたＣＤＲ、完全に合成ＣＤＲレパートリー、又は、突然変異誘発（例えば、ランダム突然変異誘発又は部位特異的突然変異誘発）等の技術により得られたレパートリーを適切に含有することができる。また、このようなライブラリは、例えば、それ自体公知の親和性成熟法の過程で生成されてくるライブラリであることもできる。
【０１７０】
このようなライブラリ中に存在するＩＳＶＤのフレームワーク領域は、例えば、ＶＨ配列（例えば、ヒトＶＨ配列）から開始して、又は、ナノボディ配列（例えば、ＶＨＨ配列又はヒト化ＶＨ配列）から開始して得られるスキャフォールドに基づく、任意の適切な開始配列／スキャフォールドから、適切に得ることができる。また、ライブラリは、２種類以上のソースから得られ、又は、２種類以上のスキャフォールドに基づくＩＳＶＤを含有することも可能である（例えば、ライブラリは、異なるソースから得られ、又は、異なるスキャフォールドに基づく２つ以上のライブラリを組み合わせることにより得られるためである）。
【０１７１】
また、ライブラリ（中に存在するＩＳＶＤ）は、タンパク質の形態、又は、関連するＩＳＶＤをコードするＤＮＡもしくはＲＮＡの形態にあることができる。例えば、ライブラリは、スクリーニング及び／又は選択技術に適した発現ライブラリの形態にあることができ、この目的で、例えば、適切なディスプレイ技術、例えば、ファージディスプレイライブラリ、酵母ディスプレイライブラリ、又はリボソームディスプレイライブラリを使用してディスプレイすることができる形態にあることができる。
【０１７２】
このため、また一般的には、本発明は、（本明細書で更に記載された）本発明のＶＨドメインを含有する（本明細書で記載された）ライブラリに関する。好ましくは、このようなライブラリの特定の態様によれば、存在するＶＨドメインは、全て同じ（又は本質的に同じ）フレームワーク配列を有するが、異なるＣＤＲ配列（再度、言及されたように、これは、ライブラリ中の個々のＶＨドメインがそれぞれ、ライブラリ中の他のＶＨドメインと比較して、少なくとも１つのＣＤＲ中に少なくとも１つのアミノ酸差を有することを意味する）を有する。
【０１７３】
一態様において、本発明のライブラリは、本発明のＩＳＶＤのライブラリ（本明細書で更に記載された通り、前記ＩＳＶＤをコードするのに適した核酸のライブラリを含む）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｌ、Ｖ、又はＫの内の１つであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｖ、又はＬの内の１つであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、
ここで、下記のいずれかであり、（ｉ）１１２位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、及び／又は、（ｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｔであり、及び／又は、（ｉｉｉ）８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、１１０位におけるアミノ酸残基は、ＫもしくはＱの一方であり、及び、（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の各場合において、１１位におけるアミノ酸は、好ましくは、Ｖである。また場合により、このようなライブラリに存在するＩＳＶＤは、（本発明のＶＨドメインについて本明細書で更に記載された）Ｃ末端伸長を含有することができ、及び／又は、適切なタグ（例えば、ヒスチジンタグ）を適切に含有することができる。
【０１７４】
別の態様では、本発明のこのようなライブラリは、本発明のＩＳＶＤのライブラリ（本明細書で更に記載された通り、前記ＩＳＶＤをコードするのに適した核酸のライブラリを含む）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、Ｖであり、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、Ａ又はＰの一方であり、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、Ｌであり、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、Ｑ又はＬの一方であり、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、Ｔ、Ｋ、又はＱの内の１つであり、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、Ｓ、Ｋ、又はＱの内の１つである。
【０１７５】
また場合により、このようなライブラリに存在するＩＳＶＤは、（本発明のＶＨドメインについて本明細書で更に記載された）Ｃ末端伸長を含有することができ、及び／又は、適切なタグ（例えば、ヒスチジンタグ）を適切に含有することができる。
【０１７６】
本発明のライブラリは、それ自体公知で、任意の適切な／意図した目的に使用することができる。例えば、本発明のライブラリは、例えば、スクリーニング及び／又は選択の目的（又は、スクリーニング及び／又は選択プロセスの一部）に使用することができ、親和性成熟の目的又は改善されたＶＨドメインの生成を意図した他のプロセスに／これらの一部として、例えば、アラニンスキャニングに使用することができる。実際には、通常、ライブラリのサイズ、設計、及び他の特徴は、当業者の範囲であるであろう、その意図した使用に適合されるであろう。
【０１７７】
ここから、本発明は、下記の非限定的な好ましい、態様、実施例、及び図面により更に説明されるであろう。ここで、
【図面の簡単な説明】
【０１７８】
【図１】図１は、本明細書で具体的に言及されるであろうアミノ酸位置の一部及び幾つかの代替的なナンバリングシステム（例えば、Ａｈｏ及びＩＭＧＴ）に従ったそのナンバリングを列記した表である。
【図２】図２は、本明細書で言及された配列を列記する。
【図３】図３は、９６個の血清サンプルを、Ｓ１１２Ｋ変異を有する代表的なナノボディ（参照Ａ＋Ｓ１１２Ｋ＋Ｃ末端アラニン、図３中に（２）として示す）との結合について、Ｓ１１２Ｋ変異を有さない参照ナノボディ（参照Ａ、配列番号：４４、図３中に（１）として示す）と比較して試験した、
【図４】図４は、１２９個の血清サンプルを、Ｖ８９Ｔ変異を有する代表的なナノボディ（参照Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｔ＋Ｃ末端アラニン、図４中に（２）として示す）との結合について、Ｖ８９Ｔ変異を有さない参照ナノボディ（参照Ａ、配列番号：４４、図４中に（１）として示す）と比較して試験した場合の、実施例４で得られたデータ点を示すプロットである。
【図５】図５は、１００個の血清サンプルを、Ｖ８９Ｌ、Ｔ１１０Ｋ、及び／又はＴ１１０Ｑ変異を有する代表的なナノボディ（参照Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端Ａｌａ、図５中に（２）として示す；参照Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ＋Ｃ末端Ａｌａ、図５中に（３）として示す；参照Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｑ＋Ｃ末端Ａｌａ、図５中に（４）として示す；及び、参照Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｔ８７Ａ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端Ａｌａ、図５中に（５）として示す）との結合について、これらの変異をいずれも有さない参照ナノボディ（参照Ａ、配列番号：４４、図５中に（１）として示す）と比較して試験した場合の、実施例５で得られたデータ点を示すプロットである。
【図６】図６は、健康なボランティアから得られた９８個の血清サンプルを、代表的な三価のナノボディ構築物との結合について試験した場合の、実施例６で得られたデータ点を示すプロットである。各ドットは、９８個の血清サンプルの内の１つに対して、示された構築物を試験することにより収集されたデータ点を表わす。凡例：（１）＝参照Ｘ（ナノボディＡ−３５ＧＳ−ナノボディＡ−３５ＧＳ−ナノボディＢ）；（２）＝参照Ｘ＋Ｃ末端Ａｌａ；（３）＝参照Ｘ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端Ａｌａ；（４）＝参照Ｘ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｔ８７Ａ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端Ａｌａ；（５）＝参照Ｘ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ＋Ｃ末端Ａｌａ；（６）＝参照Ｘ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｑ＋Ｃ末端Ａｌａ。
【図７】図７は、健康なボランティアから得られた３０個の血清サンプル（高力価の既存の抗体又は、Ｃ末端アラニン伸長が存在する場合でも高度の結合を有する既存の抗体の存在について選択したサンプル）を、代表的な三価のナノボディ構築物との結合について試験した場合の、実施例６で得られたデータ点を示すプロットである。各ドットは、３０個の血清サンプルの内の１つに対して、示された構築物を試験することにより収集されたデータ点を表わす。凡例：（１）＝参照Ｘ＋Ｃ末端Ａｌａ；（２）＝参照Ｘ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端Ａｌａ；（３）＝参照Ｘ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｔ８７Ａ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端Ａｌａ；（４）＝参照Ｘ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ＋Ｃ末端Ａｌａ。
【図８】図８は、健康なボランティアから得られた９８個の血清サンプルを、代表的な二価のナノボディ構築物との結合について試験した場合の、実施例６で得られたデータ点を示すプロットである。各ドットは、３０個の血清サンプルの内の１つに対して、示された構築物を試験することにより収集されたデータ点を表わす。凡例：（１）＝参照Ｙ（ナノボディＡ−３５ＧＳ−ナノボディＢ）；（２）＝参照Ｙ＋Ｃ末端Ａｌａ；（３）＝参照Ｙ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端Ａｌａ；（４）＝参照Ｙ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｔ８７Ａ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端Ａｌａ；（５）＝参照Ｙ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ＋Ｃ末端Ａｌａ；（６）＝参照Ｙ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｑ＋Ｃ末端Ａｌａ。
【図９Ａ】図９Ａ及び９Ｂは、イオンチャネルＫｖ１．３に対する、本発明の一価のナノボディ（図９Ａ）、及び、本発明の三価の二重特異性半減期延長化合物（図９Ｂ）の好ましく、非限定的な例を示す。図９Ｃは、Ｋｖ１．３に対するＩＳＶＤについての一部の好ましいＣＤＲ（Ｋａｂａｔ及びＡｂｍそれぞれに従った分類）を列記する。
【図９Ｂ】図９Ａ及び９Ｂは、イオンチャネルＫｖ１．３に対する、本発明の一価のナノボディ（図９Ａ）、及び、本発明の三価の二重特異性半減期延長化合物（図９Ｂ）の好ましく、非限定的な例を示す。図９Ｃは、Ｋｖ１．３に対するＩＳＶＤについての一部の好ましいＣＤＲ（Ｋａｂａｔ及びＡｂｍそれぞれに従った分類）を列記する。
【図９Ｃ】図９Ａ及び９Ｂは、イオンチャネルＫｖ１．３に対する、本発明の一価のナノボディ（図９Ａ）、及び、本発明の三価の二重特異性半減期延長化合物（図９Ｂ）の好ましく、非限定的な例を示す。図９Ｃは、Ｋｖ１．３に対するＩＳＶＤについての一部の好ましいＣＤＲ（Ｋａｂａｔ及びＡｂｍそれぞれに従った分類）を列記する。
【図１０】図１０は、糖尿病を患うヒト対象から得られた４７個の血清サンプルを、Ｋｖ１．３に対する本発明の代表的な三価の二重特異性半減期延長化合物との結合について試験した場合の、実施例７で得られたデータ点を示すプロットである。各ドットは、４７個の血清サンプルの内の１つに対して、示された構築物を試験することにより収集されたデータ点を表わす。配列番号は、図９で列記された関連する配列を意味する。
【図１１】図１１は、健康なボランティアから得られた９０個の血清サンプルを、Ｋｖ１．３に対する本発明の代表的な三価の二重特異性半減期延長化合物との結合について試験した場合の、実施例７で得られたデータ点を示すプロットである。各ドットは、４７個の血清サンプルの内の１つに対して、示された構築物を試験することにより収集されたデータ点を表わす。配列番号は、図９で列記された関連する配列を意味する。
【図１２Ａ】図１２Ａ及び１２Ｂは、示された参照配列に基づく、ＩＬ−２３に対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例８も参照のこと。
【図１２Ｂ】図１２Ａ及び１２Ｂは、示された参照配列に基づく、ＩＬ−２３に対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例８も参照のこと。
【図１３】図１３は、示された参照配列に基づく、ＯＸ４０−Ｌに対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例９も参照のこと。
【図１４】図１４は、示された参照配列に基づく、ＩｇＥに対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１０も参照のこと。
【図１５Ａ】図１５Ａ及び１５Ｂは、示された参照配列に基づく、ＣＸＣＲ−４に対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１１も参照のこと。
【図１５Ｂ】図１５Ａ及び１５Ｂは、示された参照配列に基づく、ＣＸＣＲ−４に対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１１も参照のこと。
【図１６Ａ】図１６Ａ及び１６Ｂは、示された参照配列に基づく、ＨＥＲ−３に対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１２も参照のこと。
【図１６Ｂ】図１６Ａ及び１６Ｂは、示された参照配列に基づく、ＨＥＲ−３に対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１２も参照のこと。
【図１７Ａ】図１７Ａ及び１７Ｂは、示された参照配列に基づく、ＴＮＦに対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１３及び１４も参照のこと。
【図１７Ｂ】図１７Ａ及び１７Ｂは、示された参照配列に基づく、ＴＮＦに対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１３及び１４も参照のこと。
【図１８Ａ】図１８Ａ及び１８Ｂは、示された参照配列に基づく、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１５も参照のこと。
【図１８Ｂ】図１８Ａ及び１８Ｂは、示された参照配列に基づく、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１５も参照のこと。
【図１９】図１９は、示された参照配列に基づく、ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１６も参照のこと。
【図２０Ａ】図２０Ａ〜２０Ｃは、示された参照配列に基づく、ＣＸＣＲ−７に対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１７も参照のこと。
【図２０Ｂ】図２０Ａ〜２０Ｃは、示された参照配列に基づく、ＣＸＣＲ−７に対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１７も参照のこと。
【図２０Ｃ】図２０Ａ〜２０Ｃは、示された参照配列に基づく、ＣＸＣＲ−７に対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１７も参照のこと。
【図２１Ａ】図２１Ａ及び２１Ｂは、示された参照配列に基づく、Ａ−ベータに対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１８も参照のこと。
【図２１Ｂ】図２１Ａ及び２１Ｂは、示された参照配列に基づく、Ａ−ベータに対する本発明のナノボディの一部の好ましく、非限定的な例のＣＤＲ及びアミノ配列を列記する。実施例１８も参照のこと。
【図２２】図２２は、ＩＬ−２３に対する本発明の化合物の一部の好ましく、非限定的な例のアミノ酸配列を提供する。
【図２３】図２３は、ＯＸ４０−Ｌに対する本発明の化合物の一部の好ましく、非限定的な例のアミノ酸配列を提供する。
【図２４】図２４は、ＩｇＥに対する本発明の化合物の一部の好ましく、非限定的な例のアミノ酸配列を提供する。
【図２５】図２５は、ＣＸＣＲ−４に対する本発明の化合物の一部の好ましく、非限定的な例のアミノ酸配列を提供する。
【図２６】図２６は、ＨＥＲ−３に対する本発明の化合物の一部の好ましく、非限定的な例のアミノ酸配列を提供する。
【図２７】図２７は、ＴＮＦに対する本発明の化合物の一部の好ましく、非限定的な例のアミノ酸配列を提供する。
【図２８Ａ】図２８Ａ及び２８Ｂは、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明の化合物の一部の好ましく、非限定的な例のアミノ酸配列を提供する。
【図２８Ｂ】図２８Ａ及び２８Ｂは、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明の化合物の一部の好ましく、非限定的な例のアミノ酸配列を提供する。
【図２９】図２９は、ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明の化合物の一部の好ましく、非限定的な例のアミノ酸配列を提供する。
【図３０】図３０は、Ａ−ベータに対する本発明の化合物の一部の好ましく、非限定的な例のアミノ酸配列を提供する。
【図３１Ａ】図３１Ａは、健康なボランティアから得られた９２個の血清サンプルを、Ａ−ベータに対する本発明の代表的な三価の二重特異性半減期延長化合物との結合について試験した場合の、実施例１９で得られたデータ点を示すプロットである。各ドットは、９２個の血清サンプルの内の１つに対して、示された構築物を試験することにより収集されたデータ点を表わす。参照番号は、表ＣＣ−１で列記された通りである。同様に、図３１Ｂは、健康なボランティアから得られた９２個の血清サンプルを、図３１Ａで試験された構築物に存在する（一価の）Ｃ末端ナノボディとの結合について試験した場合の、実施例１９で得られたデータ点を示すプロットである。各ドットは、９２個の血清サンプルの内の１つに対して、示された構築物を試験することにより収集されたデータ点を表わす。参照番号は、表ＣＣ−２で列記された通りである。
【図３１Ｂ】図３１Ａは、健康なボランティアから得られた９２個の血清サンプルを、Ａ−ベータに対する本発明の代表的な三価の二重特異性半減期延長化合物との結合について試験した場合の、実施例１９で得られたデータ点を示すプロットである。各ドットは、９２個の血清サンプルの内の１つに対して、示された構築物を試験することにより収集されたデータ点を表わす。参照番号は、表ＣＣ−１で列記された通りである。同様に、図３１Ｂは、健康なボランティアから得られた９２個の血清サンプルを、図３１Ａで試験された構築物に存在する（一価の）Ｃ末端ナノボディとの結合について試験した場合の、実施例１９で得られたデータ点を示すプロットである。各ドットは、９２個の血清サンプルの内の１つに対して、示された構築物を試験することにより収集されたデータ点を表わす。参照番号は、表ＣＣ−２で列記された通りである。
【実施例】
【０１７９】
実験部
以下の実験部で使用したヒトサンプルを、商業的供給元又はヒトボランティアのいずれかから取得し（全ての必要とされる同意及び承認を得た後）、適用される法律及び規則の要件（医療秘匿及び患者プライバシーに関するものを含むが、これらに限定されない）に従って使用した。
【０１８０】
以下の実施例において、使用したサンプル（すなわち、健康なボランティア、関節リウマチ（ＲＡ）患者、及びＳＬＥ患者からのサンプル）中に存在する既存の抗体の試験したナノボディに対する結合を、ProteOnを使用して下記のように決定した。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に捕捉されたナノボディへの既存の抗体の結合を、ProteOn XPR36（Bio-Rad Laboratories, Inc.）を使用して評価した。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ２０）を、ランニングバッファーとして使用した。実験を、２５℃で行った。ProteOn GLCセンサチップのリガンドレーンを、ＥＤＣ／ＮＨＳ（流速３０μL/分）で活性化した。ＨＳＡを、ProteOnアセタートバッファー  ｐＨ４．５（流速１００μL/分）中において、１０μg/mLで注入して、固定化レベルを約３２００RUにした。固定化後、表面を、エタノールアミンＨＣｌ（流速３０μL/分）で不活性化した。ナノボディを、ＨＳＡ表面上に、４５μL／分で２分間注入して、ナノボディ捕捉レベルを約２００RUにした。既存の抗体を含有するサンプルを、１４，０００rpmで２分間遠心分離した。上清を、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０（０．００５％）中において、１：１０希釈し、その後、４５μL／分で２分間注入し、その後の４００秒解離工程を続けた。各サイクル後（すなわち、新たなナノボディの捕捉及び血液サンプル注入工程前）に、ＨＳＡ表面を、４５μL／分でのＨＣｌ（１００mM）の２分間の注入により再生した。センサグラム処理及びデータ分析を、ProteOn Manager 3.1.0（Bio-Rad Laboratories, Inc.）で行った。既存の抗体の結合を示すセンサグラムを、１）ナノボディ−ＨＳＡ解離及び２）参照リガンドレーンに対する非特異的結合を差し引くことによる二重参照後に得た。既存の抗体の結合レベルを、１２５秒（会合終了後５秒）で報告点を設定することにより決定した。既存の抗体結合における％低下を、参照ナノボディの１２５秒での結合レベルに対して算出した。
【０１８１】
実施例１：Ｓ１１２Ｋ変異により既存の抗体の結合が阻害される
ヒトサンプル中の既存の抗体のナノボディへの結合における、１１２位における置換の影響を決定し、国際公開公報第１２／１７５７４１号に記載されたＣ末端アラニン伸長の影響と比較した。
【０１８２】
２つの参照化合物（Ｃ末端アラニン伸長を有さない参照Ａ及びＣ末端アラニン伸長を有する参照Ｂ）及び１１２位に種々の変異を有するこれらの参照化合物の変異体を、６名の異なるＲＡ患者から得られた血清及び異なる健康なヒト対象から得られた８つの血清に対して試験した。サンプル中の既存の抗体の試験したナノボディへの結合を、ProteOnにおいて、上記概説した全体的なプロトコールに従って測定した。結果を、以下の表Ａに示す。
【０１８３】
分かるように、試験した１１２位における変異の内、Ｓ１１２Ｋ変異により、（Ｃ末端アラニン伸長がＳ１１２Ｋ変異体に存在しなかった場合でも）Ｃ末端アラニン伸長の低下に匹敵する、試験した血清中に存在した既存の抗体による結合の低下が提供された。同様の結果を、３つのヒト血漿サンプルについて得た（データを示さず）。
【０１８４】
【表６】
2018162297.tif 000010
【０１８５】
実施例２：ヒトＳＬＥサンプル中に存在する既存の抗体の結合における、Ｓ１１２Ｋ変異の影響
実施例１で使用したのと同じナノボディ変異体を、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）について陽性であることが確認された患者から得られた７つの血清サンプルからの既存の抗体による結合について試験した。比較のために、２名の健康なヒトボランティアからの血漿サンプルを含めた。
【０１８６】
サンプル中の既存の抗体の試験したナノボディへの結合を、ProteOnにおいて、上記概説した全体的なプロトコールに従って測定した。結果を、以下の表Ｂに示す。
【０１８７】
参照Ａ及び参照Ｂ、ならびに本発明のナノボディについての結合データの比較から分かるように、一部のＳＬＥ患者から得られたサンプルは、Ｃ末端アラニン残基が存在してもナノボディに結合することができる特定の既存の抗体を含有すると考えられる（Ｃ末端アラニン残基は、健康なボランティアからの血漿サンプル中に存在した既存の抗体の全ての結合を本質的に（部分的に又は本質的に完全に）妨げる／除去する）。
【０１８８】
ＳＬＥサンプルからのこれらの既存の抗体の結合を、１１及び１１２位における変異（及び、１１２位の場合には、特に、Ｓ１１２Ｋ）により、大きく低下させることができたことが更に分かる。
【０１８９】
【表７】
2018162297.tif 000011
【０１９０】
実施例３：ヒトＳＬＥサンプル中に存在する既存の抗体の結合における、組み合わせたフレームワーク変異及びＣ末端伸長の影響
（特定のフレームワーク変異を有し、Ｃ末端アラニン伸長を有する又は有さない）４種類のナノボディを、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）について陽性であることが確認された患者から得られた５つの血清サンプルからの既存の抗体の結合について試験した。比較のために、健康なヒトボランティアからの１つの血漿サンプルを含めた。
【０１９１】
サンプル中の既存の抗体の試験したナノボディへの結合を、ProteOnにおいて、上記概説した全体的なプロトコールに従って測定した。結果を、以下の表Ｃ及びＤに示す。
【０１９２】
参照Ａ及び参照Ｂについての結合データの比較から分かるように、ＳＬＥ患者から得られたサンプルは、Ｃ末端アラニン残基が存在してもナノボディに結合することができる特定の既存の抗体を含有すると考えられる（Ｃ末端アラニン残基は、健康なボランティアからの血漿サンプル中に存在した既存の抗体の全ての結合を本質的に妨げる／除去する）。
【０１９３】
ＳＬＥサンプルからのこれらの既存の抗体の結合を、１１及び１１２位における変異（及び、１１２位の場合には、特に、Ｓ１１２Ｋ）により、大きく低下させることができたことが更に分かる。
【０１９４】
実施例４：ＳＬＥ患者からのサンプル中の既存の抗体の結合における、Ｖ８９Ｔ変異の影響
本明細書で記載されたように、特定のＳＬＥ患者から得られたサンプルは、Ｃ末端伸長が存在する場合でも、ＶＨドメインの露出したＣ末端に結合することができる既存の抗体／因子を含有すると考えられる。Ｖ８９Ｔ変異が、Ｃ末端伸長の存在の有無に関わらず、このような結合を低下させ、又は、妨げ／除去することができるかを調査した。結果を、以下の表Ｃ及びＥにも示す。
【０１９５】
分かるように、Ｖ８９Ｔ変異により、Ｓ１１２Ｋ変異と同程度に、ＳＬＥ患者から得られたサンプル中に存在する既存の抗体の結合を本質的に妨げ／除去することができた。ただし、Ｖ８９Ｔ変異を有し、Ｃ末端伸長を有さないナノボディと、Ｓ１１２Ｋ変異を有し、Ｃ末端伸長を有さない類似するナノボディとについての表Ｃ及びＥに提供されたデータの比較から分かるように、Ｃ末端伸長を有さないナノボディ中の１１２位に変異を有することは、健康なボランティアからのサンプル中の既存の抗体の結合を、Ｖ８９Ｔ変異より大きい程度に全体的に低下させる（すなわち、それぞれ１００％、８５％、及び６４％ Ｓ１１２Ｋナノボディ  ｖｓ  ９％、１１％、及び１６％ Ｖ８９Ｔナノボディ）。この理由で、１１２位における変異の使用（及び特に、Ｓ１１２Ｋ又はＳ１１２Ｋ）が、８９位における変異（例えば、Ｖ８９Ｔ）の使用を上回って、多くの場合好ましいであろう。
【０１９６】
しかしながら、表Ｃ及びＥにおけるデータからも分かるように、Ｃ末端アラニンをＶ８９Ｔナノ抗体に付加することにより、健康なボランティアから得られたサンプル中の既存の抗体の結合を完全に妨げ／除去し、この理由で、Ｖ８９Ｔナノボディ又はＶＨドメインが、それが存在するであろうタンパク質又はポリペプチド中に露出したＣ末端領域を有するか、又は、同領域を有することが意図される場合（例えば、Ｖ８９Ｔナノボディ又はＶＨドメインが、同タンパク質又はポリペプチドのＣ末端を形成する場合）、本明細書で記載されたＶ８９Ｔ変異とＣ末端伸長との組み合わせが、（すなわち、Ｃ末端伸長を有さないＶ８９Ｔの使用を上回って）通常好ましいであろう。
【０１９７】
【表８】
2018162297.tif 000012
【０１９８】
【表９】
2018162297.tif 000013
【０１９９】
【表１０】
2018162297.tif 000014
【０２００】
上記表からの結果／知見が広く適用できることを確認するために、Ｓ１１２Ｋ及び／又はＶ８９Ｔ変異を有する代表的なナノボディを、９６個（Ｓ１１２Ｋ）及び１２９個（Ｖ８９Ｔ）のヒト血清サンプルの試験パネルに対して試験した。結合を、ProteOnにおいて、上記設定されたプロトコールを使用して決定した。
【０２０１】
結果を、図３及び表Ｆ（Ｓ１１２Ｋ変異を有する代表的なナノボディ）と、図４及び表Ｇ（Ｖ８９Ｔ変異を有する代表的なナノボディ）にまとめる。
【０２０２】
図３において、Ｓ１１２Ｋ変異を有するナノボディ（参照Ａ＋Ｓ１１２Ｋ＋Ｃ末端アラニン−上記表Ｃを参照のこと）を、参照ナノボディ（参照Ａ；配列番号：４４）と比較した。Ｓ１１２Ｋ変異を有するナノボディ及び参照Ａを両方とも、それぞれの血清サンプルに対して試験した。１２５秒での結合レベル（RU）を決定した。ついで、データを、図３にプロットした。ここで、各点は、参照Ａ（図３において（１）と示す）又はＳ１１２Ｋ変異（図３において（２）と示す）のいずれかについて、１つのサンプルにおいて測定された結合を表わす。破線は、測定結合レベル２０RUを示す。
【０２０３】
また、同じデータを、表Ｆ中に数値で表わす。表Ｆは、（参照Ａ及びＳ１１２Ｋ変異それぞれについて）２０RU超、２０RU未満（すなわち、０〜２０RU）、及び１０RU未満の１２５秒での結合レベルを提供する試験したサンプルの総数に言及している。
【０２０４】
参照Ａについては、図３にプロットされ、表Ｆに示されたデータから分かるように、試験した９６個のサンプルの内の半分超から、２０RUを超える結合レベルが提供された（一部の場合では、１５０〜２００RUの高さ）。このことは、サンプル中に存在する既存の抗体が、参照Ａに結合したことを示している。比較により、Ｓ１１２Ｋ変異については、サンプルから、２０RUを超える結合レベルが提供されなかった（及びほとんどが、１０RU未満）。このことは、Ｓ１１２Ｋ変異は、試験した全９６個のサンプル中の既存の抗体の結合を本質的に妨げ／除去することができたことを示している。
【０２０５】
１２９個の血清サンプルに対して試験したＶ８９Ｔ変異を有する代表的なナノボディ（参照Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｔ＋Ｃ末端アラニン、上記表Ｅを参照のこと）について、類似するプロット及び類似するデータを、図４及び表Ｇそれぞれに示し、再度、参照Ａ（図４において（１）で示す、Ｖ８９Ｔ変異を、図４において（２）で示す）と比較した。再度、図４中のプロット及び表Ｇ中のデータから、わずかな例外を伴って（すなわち、試験したサンプルの内の１０％未満、例えば、それらはそれぞれ、約１００RU以下の１２５秒後の絶対結合値を提供した）、Ｖ８９Ｔ変異は、試験した１２９個のサンプルのほとんどにおいて、既存の抗体の結合を低下させ／妨げることができたことがわかる。一方、Ｖ８９Ｔ変異を有さない参照は、試験したサンプルのほとんどにおける既存の抗体に結合した。
【０２０６】
【表１１】
2018162297.tif 000015
【０２０７】
【表１２】
2018162297.tif 000016
【０２０８】
実施例５：ＳＬＥ患者からのサンプル中の既存の抗体の結合における、Ｔ１１０Ｋ又はＴ１１０Ｑと組み合わせたＶ８９Ｌ変異の影響
本明細書で記載されたように、特定のＳＬＥ患者から得られたサンプルは、Ｃ末端伸長が存在する場合でも、ＶＨドメインの露出したＣ末端に結合することができる既存の抗体／因子を含有すると考えられる。Ｖ８９Ｌ及び／又はＴ１１０ＱもしくはＴ１１０Ｋ変異（又は、それらの組み合わせ）が、Ｃ末端伸長の存在の有無に関わらず、このような結合を低下させ、又は、妨げ／除去することができるかを調査した。結果を、以下の表Ｈ及びＩにも示す。これらの表は、２つの別々の実験からのデータを表わす（上記表Ｄにも、Ｖ８９Ｌ変異と組み合わせた本発明のＳ１１２Ｑ変異についてのデータを示す）。また、表Ｉで使用されたナノボディを、図５及び表Ｊに示されたデータを生成するのにも使用した。
【０２０９】
【表１３】
2018162297.tif 000017
【０２１０】
【表１４】
2018162297.tif 000018
【０２１１】
上記表からの結果／知見が広く適用できることを確認するために、再度、Ｖ８９Ｌ、Ｔ１１０Ｋ、及び／又はＴ１１０Ｑ変異を有する代表的なナノボディを、９９個のヒト血清サンプルのパネルに対して試験した。再度、結合データを取得し、図３及び４ならびに表Ｆ及びＧに示された結果及びデータについて、実施例４で示したのと同様にプロットした。
【０２１２】
試験したナノボディを、図５で使用されたナンバリングに対応するナンバー：（１）参照Ａ、（２）参照Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端Ａｌａ、（３）参照Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ＋Ｃ末端Ａｌａ、（４）参照Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｑ＋Ｃ末端Ａｌａ、（５）参照Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｔ８７Ａ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端Ａｌａとした。結果を、図５及び表Ｉに示す。
【０２１３】
分かるように、再度、試験した変異を導入することにより、既存の抗体が試験したナノボディに結合することができたサンプル数が大きく減少した。図５におけるナノボディ（２）（参照Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端Ａｌａ）については、一部のサンプルは、２０RUを超える（が、１００RU未満の）レベルで１２５秒後の既存の抗体の結合を示したことも分かった。ただし、Ｖ８９Ｌ変異をＴ１１０Ｋ変異（ナノボディ（３））又はＴ１００Ｑ変異（ナノボディ（４））と組み合わせた場合には、９９個の試験した全てのサンプルは、２０RU未満（及び実際には、１０RU未満、表Ｊを参照のこと）の結合レベルを本質的に示した。
【０２１４】
【表１５】
2018162297.tif 000019
【０２１５】
実施例６：既存の抗体の結合についての多価構築物の試験
多価構築物を、下記ナノボディに基づいて調製する。
ナノボディＡ（治療ターゲットに対する）：
【表１６】
2018162297.tif 000020
ナノボディＢ（血清アルブミンに対する）：
【表１７】
2018162297.tif 000021
ナノボディＣ（治療ターゲットに対する）：
【表１８】
2018162297.tif 000022
【０２１６】
調製した構築物を、以下の表Ｋに列記する（各場合において、関連するナノボディ中に（存在する場合）導入された置換を、丸かっこ間に記載した。「ＨＩＳ６」は、６つのヒスチジン残基のＮ末端ｈｉｓ−タグを意味する。「−Ａｌａ」は、１つのアラニン残基のＣ末端伸長を意味する。
【０２１７】
【表１９】
2018162297.tif 000023
2018162297.tif 000024
2018162297.tif 000025
【０２１８】
代表的な多価構築物を、ＳＬＥを患う患者及び健康なボランティアから得られた血液又は血清サンプル中に存在する既存の抗体による結合について試験した。両方とも、本質的に上記されたProteOnを使用して決定した。
【０２１９】
試験した代表的な構築物を、表Ｌ（三価構築物）及びＭ（二価構築物）に列記した。結果を、図６〜８及び表Ｎ〜Ｑに示す。試験した三価構築物を、参照構築物であるナノボディＡ−３５ＧＳ−ナノボディＡ−３５ＧＳ−ナノボディＢ（「参照Ｘ」）から得た。二価構築物を、参照構築物であるナノボディＡ−３５ＧＳ−ナノボディＢ（「参照Ｙ」）から得た。全ての構築物（参照構築物を除く）は、Ｃ末端アラニン残基ならびに「ナノボディＡ」及び「ナノボディＢ」構築ブロックのそれぞれに示された変異を有し、示した。
【０２２０】
【表２０】
2018162297.tif 000026
【０２２１】
【表２１】
2018162297.tif 000027
【０２２２】
【表２２】
2018162297.tif 000028
【０２２３】
【表２３】
2018162297.tif 000029
【０２２４】
【表２４】
2018162297.tif 000030
【０２２５】
また、３つの代表的な三価構築物を、ＳＬＥ患者から得られた血清サンプルに対しても試験した。結果を、表Ｑに示す。
【表２５】
2018162297.tif 000031
【０２２６】
実施例７：イオンチャネルＫｖ１．３に対するナノボディ及びナノボディ構築物
具体的な一態様では、本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明のＩＳＶＤ、及びとりわけ、本発明のナノボディ）及び本発明の化合物は、イオンチャネルＫｖ１．３に対することができる。
【０２２７】
同時係属中の米国仮出願第６２／０１４，０２３号（発明の名称：「Ｋｖ１．３結合免疫グロブリン」；譲受人：Ablynx N.V.；出願日：２０１４年６月１８日）及びその後に出願された同じ発明の名称の米国仮出願（出願日：２０１５年３月１６日；譲受人：Ablynx N.V.）には、カリウム選択的電位作動型イオンチャネルＫｖ１．３に対する免疫グロブリンシングル可変ドメイン（及び特に、ナノボディ）ならびに少なくとも１つのＫｖ１．３に対するこのようなナノボディを含むタンパク質、ポリペプチド、及び他のナノボディ系構築物が、特に記載されている。
【０２２８】
また、（場合により、本明細書及び／又は国際公開公報第１２／１７５７４１号で記載されたＣ末端伸長と適切に組み合わせられた）本願で記載された変異は、これらの２つの米国仮出願に記載されたＫｖ１．３に対するナノボディ、タンパク質、ポリペプチド、及び他のナノボディ系構築物に、適切に適用することができる。
【０２２９】
このため、一態様において、本発明は、Ｋｖ１．３に対し、本発明のＩＳＶＤについて本明細書で更に記載された（すなわち、本明細書で記載されたアミノ酸残基／変異を含む）ＶＨドメインに関する。
【０２３０】
再度、本明細書で記載された本発明の他の態様及び実施態様についてと同様に、具体的なＩＳＶＤ（例えば、この実施例で記載されたＫｖ１．３に対するＩＳＶＤ）又はそれを含む化合物が、「本発明の」又は「本明細書で更に記載された」と言われる場合、本発明のＩＳＶＤ又は化合物について本明細書で全体的に記載された好ましい態様／実施態様及び選択も、他の方法で明確に示さない限り、又は、他の方法で必要とされる具体的な技術的文脈が無い限り、前記具体的なＩＳＶＤ又は化合物それぞれにも具体的に適用する。
【０２３１】
このため、特定の態様では、本発明は、Ｋｖ１．３に対するＶＨドメインに関し、ここで、（ｉ）１１２位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位が、ＫもしくはＱであり、１１位が、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位が、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位が、Ｌであり、１１０位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位が、Ｖであり、８９位が、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。特に、Ｋｖ１．３に対するこのようなＶＨドメインにおいて、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０２３２】
この実施例において言及されたＫｖ１．３に対するＶＨドメインは、特に、米国仮出願第６２／０１４，０２３号の第５〜１０頁に記載されたＣＤＲ（このようなＣＤＲの任意の好ましい態様／実施態様を含む）又は上記で参照された他の米国仮出願に記載されたその配列最適化バージョンを有することができる。
【０２３３】
特に、この実施例において言及されたＫｖ１．３に対するＶＨドメインは、特に、米国仮出願第６２／０１４，０２３号の第９及び１０頁に跨るリスト中に好ましい態様として列記されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の組み合わせの内の１つから選択される、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の組み合わせを有することができる。
【０２３４】
本発明の一部の好ましく、非限定的な態様では、
−本発明のＶＨドメイン中において、（ｉ）ＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）は、配列番号：１６６の配列又は、配列番号：１６６の配列と１つもしくは２つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）は、配列番号：１６７の配列又は、配列番号：１６７の配列と１つもしくは２つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列であり、そして（ｉｉｉ）ＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）は、配列番号：１６８の配列又は、配列番号：１６８の配列と１つもしくは２つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列であり；及び更により好ましくは、（ｉ）ＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）は、配列番号：１６６の配列であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）は、配列番号：１６７の配列であり、そして（ｉｉｉ）ＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）は、配列番号：１６８の配列であり、及び／又は、
−本発明のＶＨドメイン中において、（ｉ）ＣＤＲ１（Ａｂｍによる）は、配列番号：１６９の配列又は、配列番号：１６９の配列と１つもしくは２つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２（Ａｂｍによる）は、配列番号：１７０の配列又は、配列番号：１７０の配列と１つもしくは２つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列であり、そして（ｉｉｉ）ＣＤＲ３（Ａｂｍによる）は、配列番号：１７１の配列又は、配列番号：１７１の配列と１つもしくは２つのアミノ酸差を有するアミノ酸配列であり；及び更により好ましくは、（ｉ）ＣＤＲ１（Ａｂｍによる）は、配列番号：１６９の配列であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２（Ａｂｍによる）は、配列番号：１７０の配列であり、そして（ｉｉｉ）ＣＤＲ３（Ａｂｍによる）は、配列番号：１７８の配列である。
【０２３５】
さらに、Ｋｖ１．３に対する本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された通りであることができ、再度特に、Ｋｖ１．３に対するＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物であることができる。また、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、例えば、延長した半減期を有することができ（すなわち、本明細書で記載された通り、例えば、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日のヒト対象における半減期−ｔ１／２ベータとして表現−）、及びこの目的で、例えば、血清アルブミン結合ナノボディを含むことができる。また、同ナノボディは、（再度、本明細書で記載された）本発明の血清アルブミン結合ナノボディであることもできる。
【０２３６】
また、このようなＩＳＶＤは、特に、前記ＩＳＶＤが（再度、本明細書で更に記載された）それを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物のＣ末端を形成する場合、（本明細書及び国際公開公報第１２／１７５７４１号で更に記載された）Ｃ末端伸長を適切に有することができる。
【０２３７】
例えば、限定されず、Ｋｖ１．３に対する本発明のＶＨドメインは、米国仮出願第６２／０１４，０２３号の表Ａ−１に列記された配列（米国仮出願第６２／０１４，０２３号中の配列番号：１〜１２３）の内の１つ、又は、米国仮出願、発明の名称「Ｋｖ１．３結合免疫グロブリン」（譲受人：Ablynx N.V.；出願日：２０１５年３月１６日）の表Ａ−１に列記された配列（前記米国仮出願中の配列番号：１〜１２３、４９５、４９８〜５１３、又は５２３〜５４０、及び特に、配列番号：４９５の配列）の内の１つであることができ、適切に、本発明のＩＳＶＤについて本明細書で記載された変異／特定のアミノ酸残基を有し、及び場合により、適切に、Ｃ末端伸長を有する。
【０２３８】
具体的な一態様では、Ｋｖ１．３に対する本発明のナノボディは、配列番号：１３７のナノボディの変異体（配列番号：１３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０２３９】
Ｋｖ１．３に対する本発明のナノボディ及びそれを含む本発明の化合物の一部の具体的に好ましく、非限定的な例を、図９Ａ（一価ナノボディ：配列番号：１３８〜１５５）及び図９Ｂ（三価の二重特異性半減期延長構築物：配列番号：１５６〜１６４）に列記する。配列番号：１３８〜１５５の抗Ｋｖ１．３ナノボディから選択される、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の抗Ｋｖ１．３ナノボディを含むか、又は、本質的に同ナノボディからなる本発明の化合物は、本発明の更なる態様を構成する。また、配列番号：１５６〜１６４の化合物はそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。具体的な一態様では、このような化合物は、Ｋｖ１．３に対する本発明の２つのこのようなナノボディと、１つのヒト血清アルブミンに対するナノボディ（好ましくは、本発明のナノボディでもある）とを含有する。また再度、このような構築物は、適切なリンカー及びＣ末端伸長も含有することができる。
【０２４０】
配列番号：１３８〜１５５の一価の抗Ｋｖ１．３ナノボディを、本発明のＬ１１Ｖ及びＶ８９Ｌ変異を配列番号：１３７（参照）の開始配列に導入することにより生成した。加えて、種々の組み合わせのヒト化（又は他の配列最適化）変異を導入した（例えば、Ｅ１Ｄ、Ａ１４Ｐ、Ｇ１９Ｒ、Ｍ５３ＡもしくはＭ５３ＱもしくはＭ５３Ｙ、Ｔ６２Ｓ、Ａ７４Ｓ、Ｋ８３Ｒ、Ｓ９４Ｇ、及び／又はＴ９７Ｅ）。配列番号：１３８〜１５５の配列のそれぞれに導入した具体的な変異を、図９Ａに提供する。
【０２４１】
また、図９Ａからの一価の抗Ｋｖ１．３ナノボディの一部を、２つのＫｖ１．３に対する本発明のナノボディと、１つのヒト血清アルブミンに対する本発明の半減期延長ナノボディ（配列番号：１０９、図９Ｂにおいて、「ＡＬＢ−８２」とも呼ばれる）とを含む三価の二重特異性構築物としてもフォーマットした。３５ＧＳリンカーを使用した。全ての構築物は、Ｃ末端伸長（１つのＣ末端アラニン残基）を有する。得られた構築物の配列を、配列番号：１５６〜１６４に提供する。これらの内、３つの構築物（配列番号：１５６、１５７、及び１６０）を、４７名の糖尿病を患うヒト対象及び９０名の健康なヒト対象から得られたサンプル中の既存の抗体による結合について、本明細書で記載された全体的なプロトコールを使用して試験した。これらの２つのセットからのサンプルによる既存の抗体による結合を、配列番号：１６５の参照構築物と比較した。同構築物は、再度、Ｃ末端アラニン伸長と組み合わせた、配列番号：１３７の参照抗Ｋｖ１．３構築ブロック及び血清アルブミンバインダーＡｌｂ−８（配列番号：４６）に基づく対応する三価の二重特異性構築物である。結果を、図１０（４７名の糖尿病を患う患者からのサンプル）及び図１１（９０名の健康なボランティアからのサンプル）に示す。各場合において、本発明のＬ１１Ｖ及びＶ８９Ｌ変異を有する構築物は、参照構築物と比較して、既存の抗体による低下した結合を示した。
【０２４２】
実施例８：ＩＬ−２３に対するＶＨドメイン（及び特に、ナノボディ）及びそれを含む本発明の化合物
具体的な一態様では、本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明のＩＳＶＤ、及びとりわけ、本発明のナノボディ）及び本発明の化合物は、ＩＬ−２３に対することができる。
【０２４３】
ＩＬ−２３に対する本発明のこのようなＶＨドメインは、（ｉ）本明細書で記載された本発明のアミノ酸残基／変異を適切に含む適切なフレームワーク配列、及び、（ｉｉ）本発明のＶＨドメインがＩＬ−２３に特異的に結合するのを可能にするＣＤＲ配列を、概ね含むであろう。また加えて、ＩＬ−２３に対する本発明のこのようなＶＨドメインは、特に、前記ＶＨドメインが一価であるか、又は、前記ＶＨドメインが（再度、本明細書で更に記載されたように）存在する本発明の化合物のＣ末端を形成する場合、本明細書で記載されたＣ末端伸長を適切に有することもできる。さらに、ＩＬ−２３に対する本発明のこのようなＶＨドメインは、本明細書で更に記載された通りであることができ、特に、ＩＳＶＤであることができる。
【０２４４】
再度、本明細書で記載された本発明の他の態様及び実施態様についてと同様に、具体的なＩＳＶＤ（例えば、この実施例で記載されたＩＬ−２３に対するＩＳＶＤ）又はそれを含む化合物が、「本発明の」又は「本明細書で更に記載された」と言われる場合、本発明のＩＳＶＤ又は化合物について本明細書で全体的に記載された好ましい態様／実施態様及び選択も、他の方法で明確に示さない限り、又は、他の方法で必要とされる具体的な技術的文脈が無い限り、前記具体的なＩＳＶＤ又は化合物それぞれにも具体的に適用する。
【０２４５】
このため、特定の態様では、本発明は、ＩＬ−２３に対するＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤ）に関し、ここで、（ｉ）１１２位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位が、ＫもしくはＱであり、１１位が、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位が、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位が、Ｌであり、１１０位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位が、Ｖであり、８９位が、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。特に、ＩＬ−２３に対するこのようなＶＨドメインにおいて、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０２４６】
さらに、ＩＬ−２３に対する本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された通りであることができ、再度特に、ＩＬ−２３に対するＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）、又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物であることができる。また、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、例えば、延長した半減期を有することができ（すなわち、本明細書で記載された通り、例えば、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日のヒト対象における半減期−ｔ１／２ベータとして表現−）、及びこの目的で、例えば、血清アルブミン結合ナノボディを含むことができる。また、同ナノボディは、（再度、本明細書で記載された）本発明の血清アルブミン結合ナノボディであることもできる。
【０２４７】
また、このようなＩＳＶＤは、特に、前記ＩＳＶＤが（再度、本明細書で更に記載された）それを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物のＣ末端を形成する場合、（本明細書及び国際公開公報第１２／１７５７４１号で更に記載された）Ｃ末端伸長を適切に有することができる。
【０２４８】
好ましい一態様では、ＩＬ−２３に対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：１７３の配列又は、配列番号：１７３の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：１７３の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：１７４の配列又は、配列番号：１７４の配列と１つもしくは２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：１７４の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：１７５の配列又は、配列番号：１７５の配列と１つもしくは２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：１７５の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０２４９】
より好ましくは、この態様のＩＬ−２３に対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：１７３であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：１７４であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：１７５である。
【０２５０】
具体的な一態様では、ＩＬ−２３に対する本発明のナノボディは、配列番号：１７２のナノボディの変異体（配列番号：１７２に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０２５１】
別の好ましい態様では、ＩＬ−２３に対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：１９１の配列又は、配列番号：１９１の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：１９１の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：１９２の配列又は、配列番号：１９２の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：１９２の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：１９３の配列又は、配列番号：１９３の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：１９３の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０２５２】
より好ましくは、この態様のＩＬ−２３に対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：１９１であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：１９２であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：１９３である。
【０２５３】
具体的な一態様では、ＩＬ−２３に対する本発明のナノボディは、配列番号：１７２のナノボディの変異体（配列番号：１９０に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。再度、このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０２５４】
ＩＬ−２３に対する本発明のこのようなナノボディの一部の具体的に好ましく、非限定的な例を、配列番号：１７６〜１８９として図１２Ａに、配列番号：１９４〜２０７として図１２Ｂにそれぞれ列記する。これらのナノボディはそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。
【０２５５】
また、本発明は、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の配列番号：１７６〜１８９及び／又は１９４〜２０７の本発明のナノボディを含む、ＩＬ−２３に対する本発明の化合物に関する。再度、ＩＬ−２３に対する本発明のこのような化合物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、このため、例えば、適切なリンカーを含むことができ、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができ、半減期を伸ばすことができる（例えば、本発明の化合物が、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ、例えば（好ましくは）、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディを含むため）。以下の表Ｒが参照される。
【０２５６】
例えば、国際公開公報第２００９／０６８６２７号、同第２０１０／１４２５３４号、及び同第２０１１／１３５０２６号に記載されたように、特に好ましい一分類のＩＬ−２３に対するナノボディ系化合物は、二重抗原結合性化合物である。このため、本発明の一態様では、ＩＬ−２３に対する本発明の化合物は、配列番号：１７２の１つのＩＳＶ又は（好ましくは）（この実施例８で記載された）配列番号：１７２から得られた本発明のＩＳＶのいずれかと、配列番号：１９０の１つのＩＳＶ又は（好ましくは）（この実施例８で記載された）配列番号：１９０から得られた本発明のＩＳＶのいずれかをと含む二重抗原結合性構築物である。ただし、少なくとも一方（及び好ましくは、両方）のこれらのＩＳＶが、本発明のＩＳＶであるという条件である。また、このような二重抗原結合性構築物は、（すなわち、血清アルブミン結合ＩＳＶにより）半減期を伸ばすこともできる。このような二重抗原結合性構築物の一部の具体的な例は、配列番号：５１４〜５４９に提供される。
【０２５７】
ＩＬ−２３に対する本発明の化合物の一部の具体的に好ましい例を、配列番号：５１４〜５４９として図２２に提供し、これらの化合物はそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。このため、別の態様では、本発明は、ＩＬ−２３に対し、配列番号：５１４〜５４９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドに関する。より一般的には、ＩＬ−２３に対する本発明の化合物は、国際公開公報第２００９／０６８６２７号、同第２０１０／１４２５３４号、及び同第２０１１／１３５０２６号に記載された通りであることができ、本発明のＩＳＶを含む。また、本発明の化合物は、国際公開公報第２００９／０６８６２７号、同第２０１０／１４２５３４号、及び同第２０１１／１３５０２６号に記載された目的に使用することもできる。
【０２５８】
【表２６】
2018162297.tif 000032
2018162297.tif 000033
2018162297.tif 000034
2018162297.tif 000035
2018162297.tif 000036
【０２５９】
実施例９：ＯＸ４０−Ｌに対するＶＨドメイン（及び特に、ナノボディ）及びそれを含む本発明の化合物
具体的な一態様では、本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明のＩＳＶＤ、及びとりわけ、本発明のナノボディ）及び本発明の化合物は、ＯＸ４０−Ｌに対することができる。
【０２６０】
ＯＸ４０−Ｌに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、（ｉ）本明細書で記載された本発明のアミノ酸残基／変異を適切に含む適切なフレームワーク配列、及び、（ｉｉ）本発明のＶＨドメインがＯＸ４０−Ｌに特異的に結合するのを可能にするＣＤＲ配列を、概ね含むであろう。また加えて、ＯＸ４０−Ｌに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、特に、前記ＶＨドメインが一価であるか、又は、前記ＶＨドメインが（再度、本明細書で更に記載されたように）存在する本発明の化合物のＣ末端を形成する場合、本明細書で記載されたＣ末端伸長を適切に有することもできる。さらに、ＯＸ４０−Ｌに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、本明細書で更に記載された通りであることができ、特に、ＩＳＶＤであることができる。
【０２６１】
再度、本明細書で記載された本発明の他の態様及び実施態様についてと同様に、具体的なＩＳＶＤ（例えば、この実施例で記載されたＯＸ４０−Ｌに対するＩＳＶＤ）又はそれを含む化合物が、「本発明の」又は「本明細書で更に記載された」と言われる場合、本発明のＩＳＶＤ又は化合物について本明細書で全体的に記載された好ましい態様／実施態様及び選択も、他の方法で明確に示さない限り、又は、他の方法で必要とされる具体的な技術的文脈が無い限り、前記具体的なＩＳＶＤ又は化合物それぞれに具体的に適用する。
【０２６２】
このため、特定の態様では、本発明は、ＯＸ４０−Ｌに対するＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤ）に関し、ここで、（ｉ）１１２位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位が、ＫもしくはＱであり、１１位が、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位が、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位が、Ｌであり、１１０位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位が、Ｖであり、８９位が、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。特に、ＯＸ４０−Ｌに対するこのようなＶＨドメインにおいて、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０２６３】
さらに、ＯＸ４０−Ｌに対する本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された通りであることができ、再度特に、ＯＸ４０−Ｌに対するＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）、又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物であることができる。また、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、例えば、延長した半減期を有することができ（すなわち、本明細書で記載された通り、例えば、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日のヒト対象における半減期−ｔ１／２ベータとして表現−）、及びこの目的で、例えば、血清アルブミン結合ナノボディを含むことができる。また、同ナノボディは、（再度、本明細書で記載された）本発明の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。
【０２６４】
また、このようなＩＳＶＤは、特に、前記ＩＳＶＤが（再度、本明細書で更に記載された）それを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物のＣ末端を形成する場合、（本明細書及び国際公開公報第１２／１７５７４１号で更に記載された）Ｃ末端伸長を適切に有することができる。
【０２６５】
好ましい一態様では、ＯＸ４０−Ｌに対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：２０９の配列又は、配列番号：２０９の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２０９の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：２１０の配列又は、配列番号：２１０の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２１０の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：２１１の配列又は、配列番号：２１１の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２１１の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０２６６】
より好ましくは、この態様のＯＸ４０−Ｌに対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：２０９であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：２１０であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：２１１である。
【０２６７】
具体的な一態様では、ＯＸ４０−Ｌに対する本発明のナノボディは、配列番号：２０８のナノボディの変異体（配列番号：２０８に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０２６８】
ＯＸ４０−Ｌに対する本発明のナノボディの一部の具体的に好ましく、非限定的な例を、配列番号：２１２〜２２５として図１３に列記する。これらのナノボディはそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。
【０２６９】
また、本発明は、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の配列番号：２１２〜２２５の本発明のナノボディを含む、ＯＸ４０−Ｌに対する本発明の化合物に関する。再度、ＯＸ４０−Ｌに対する本発明のこのような化合物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、このため、例えば、適切なリンカーを含むことができ、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができ、半減期を伸ばすことができる（例えば、本発明の化合物が、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ、例えば（好ましくは）、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディを含むため）。以下の表Ｓが参照される。
【０２７０】
ＯＸ４０−Ｌに対する本発明の化合物の一部の具体的に好ましい例を、配列番号：５５０〜５８５として図２３に提供する。これらの化合物はそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。このため、別の態様では、本発明は、ＯＸ４０−Ｌに対し、配列番号：５５０〜５８５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドに関する。より一般的には、ＯＸ４０−Ｌに対する本発明の化合物は、国際公開公報第２０１１／０７３１８０号に記載された通りであることができ、本発明のＩＳＶを含む。また、本発明の化合物は、国際公開公報第２０１１／０７３１８０号に記載された目的に使用することもできる。
【０２７１】
【表２７】
2018162297.tif 000037
2018162297.tif 000038
2018162297.tif 000039
2018162297.tif 000040
2018162297.tif 000041
【０２７２】
実施例１０：ＩｇＥに対するＶＨドメイン（及び特に、ナノボディ）及びそれを含む本発明の化合物
具体的な一態様では、本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明のＩＳＶＤ、及びとりわけ、本発明のナノボディ）及び本発明の化合物は、ＩｇＥに対することができる。
【０２７３】
ＩｇＥに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、（ｉ）本明細書で記載された本発明のアミノ酸残基／変異を適切に含む適切なフレームワーク配列、及び、（ｉｉ）本発明のＶＨドメインがＩｇＥに特異的に結合するのを可能にするＣＤＲ配列を、概ね含むであろう。また加えて、ＩｇＥに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、特に、前記ＶＨドメインが一価であるか、又は、前記ＶＨドメインが（再度、本明細書で更に記載されたように）存在する本発明の化合物のＣ末端を形成する場合、本明細書で記載されたＣ末端伸長を適切に有することもできる。さらに、ＩｇＥに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、本明細書で更に記載された通りであることができ、特に、ＩＳＶＤであることができる。
【０２７４】
再度、本明細書で記載された本発明の他の態様及び実施態様についてと同様に、具体的なＩＳＶＤ（例えば、この実施例で記載されたＩｇＥに対するＩＳＶＤ）又はそれを含む化合物が、「本発明の」又は「本明細書で更に記載された」と言われる場合、本発明のＩＳＶＤ又は化合物について本明細書で全体的に記載された好ましい態様／実施態様及び選択も、他の方法で明確に示さない限り、又は、他の方法で必要とされる具体的な技術的文脈が無い限り、前記具体的なＩＳＶＤ又は化合物それぞれに具体的に適用する。
【０２７５】
このため、特定の態様では、本発明は、ＩｇＥに対するＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤ）に関し、ここで、（ｉ）１１２位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位が、ＫもしくはＱであり、１１位が、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位が、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位が、Ｌであり、１１０位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位が、Ｖであり、８９位が、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。特に、ＩｇＥに対するこのようなＶＨドメインにおいて、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０２７６】
さらに、ＩｇＥに対する本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された通りであることができ、再度特に、ＩｇＥに対するＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）、又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物であることができる。また、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、例えば、延長した半減期を有することができ（すなわち、本明細書で記載された通り、例えば、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日のヒト対象における半減期−ｔ１／２ベータとして表現−）、及びこの目的で、例えば、血清アルブミン結合ナノボディを含むことができる。また、同ナノボディは、（再度、本明細書で記載された）本発明の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。
【０２７７】
また、このようなＩＳＶＤは、特に、前記ＩＳＶＤが（再度、本明細書で更に記載された）それを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物のＣ末端を形成する場合、（本明細書及び国際公開公報第１２／１７５７４１号で更に記載された）Ｃ末端伸長を適切に有することができる。
【０２７８】
好ましい一態様では、ＩｇＥに対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：２２７の配列又は、配列番号：２２７の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２２７の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：２２８の配列又は、配列番号：２２８の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２２８の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：２２９の配列又は、配列番号：２２９の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２２９の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０２７９】
より好ましくは、この態様のＩｇＥに対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：２２７であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：２２８であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：２２９である。
【０２８０】
具体的な一態様では、ＩｇＥに対する本発明のナノボディは、配列番号：２２６のナノボディの変異体（配列番号：２２６に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０２８１】
ＩｇＥに対する本発明のナノボディの一部の具体的に好ましく、非限定的な例を、配列番号：２３０〜２４３として図１４に列記する。これらのナノボディはそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。
【０２８２】
また、本発明は、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の配列番号：２３０〜２４３の本発明のナノボディを含む、ＩｇＥに対する本発明の化合物に関する。再度、ＩｇＥに対する本発明のこのような化合物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、このため、例えば、適切なリンカーを含むことができ、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができ、半減期を伸ばすことができる（例えば、本発明の化合物が、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ、例えば（好ましくは）、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディを含むため）。以下の表Ｔが参照される。
【０２８３】
ＩｇＥに対する本発明の化合物の一部の具体的に好ましい例を、配列番号：５８６〜５９４として図２４に提供する。これらの化合物はそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。このため、別の態様では、本発明は、ＩｇＥに対し、配列番号：５８６〜５９４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドに関する。
【０２８４】
より一般的には、ＩｇＥに対する本発明の化合物は、国際公開公報第２０１２／１７５７４０号及び同第２０１２／１７５４００号の関連部分に記載された通りであることができ、本発明のＩＳＶを含む。また、本発明の化合物は、国際公開公報第２０１２／１７５７４０号に記載された目的に使用することもできる。
【０２８５】
【表２８】
2018162297.tif 000042
2018162297.tif 000043
2018162297.tif 000044
2018162297.tif 000045
2018162297.tif 000046
【０２８６】
実施例１１：ＣＸＣＲ−４に対するＶＨドメイン（及び特に、ナノボディ）及びそれを含む本発明の化合物
具体的な一態様では、本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明のＩＳＶＤ、及びとりわけ、本発明のナノボディ）及び本発明の化合物は、ＣＸＣＲ−４に対することができる。
【０２８７】
ＣＸＣＲ−４に対する本発明のこのようなＶＨドメインは、（ｉ）本明細書で記載された本発明のアミノ酸残基／変異を適切に含む適切なフレームワーク配列、及び、（ｉｉ）本発明のＶＨドメインがＣＸＣＲ−４に特異的に結合するのを可能にするＣＤＲ配列を、概ね含むであろう。また加えて、ＣＸＣＲ−４に対する本発明のこのようなＶＨドメインは、特に、前記ＶＨドメインが一価であるか、又は、前記ＶＨドメインが（再度、本明細書で更に記載されたように）存在する本発明の化合物のＣ末端を形成する場合、本明細書で記載されたＣ末端伸長を適切に有することもできる。さらに、ＣＸＣＲ−４に対する本発明のこのようなＶＨドメインは、本明細書で更に記載された通りであることができ、特に、ＩＳＶＤであることができる。
【０２８８】
再度、本明細書で記載された本発明の他の態様及び実施態様についてと同様に、具体的なＩＳＶＤ（例えば、この実施例で記載されたＣＸＣＲ−４に対するＩＳＶＤ）又はそれを含む化合物が、「本発明の」又は「本明細書で更に記載された」と言われる場合、本発明のＩＳＶＤ又は化合物について本明細書で全体的に記載された好ましい態様／実施態様及び選択も、他の方法で明確に示さない限り、又は、他の方法で必要とされる具体的な技術的文脈が無い限り、前記具体的なＩＳＶＤ又は化合物それぞれに具体的に適用する。
【０２８９】
このため、特定の態様では、本発明は、ＣＸＣＲ−４に対するＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤ）に関し、ここで、（ｉ）１１２位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位が、ＫもしくはＱであり、１１位が、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位が、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位が、Ｌであり、１１０位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位が、Ｖであり、８９位が、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。特に、ＣＸＣＲ−４に対するこのようなＶＨドメインにおいて、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０２９０】
さらに、ＣＸＣＲ−４に対する本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された通りであることができ、再度特に、ＣＸＣＲ−４に対するＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）、又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物であることができる。また、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、例えば、延長した半減期を有することができ（すなわち、本明細書で記載された通り、例えば、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日のヒト対象における半減期−ｔ１／２ベータとして表現−）、及びこの目的で、例えば、血清アルブミン結合ナノボディを含むことができる。また、同ナノボディは、（再度、本明細書で記載された）本発明の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。
【０２９１】
また、このようなＩＳＶＤは、特に、前記ＩＳＶＤが（再度、本明細書で更に記載された）それを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物のＣ末端を形成する場合、（本明細書及び国際公開公報第１２／１７５７４１号で更に記載された）Ｃ末端伸長を適切に有することができる。
【０２９２】
好ましい一態様では、ＣＸＣＲ−４に対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：２４５の配列又は、配列番号：２４５の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２４５の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：２４６の配列又は、配列番号：２４６の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２４６の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：２４７の配列又は、配列番号：２４７の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２４７の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０２９３】
より好ましくは、この態様のＣＸＣＲ−４に対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：２４５であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：２４６であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：２４７である。
【０２９４】
具体的な一態様では、ＣＸＣＲ−４に対する本発明のナノボディは、配列番号：２４４のナノボディの変異体（配列番号：２４４に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０２９５】
別の好ましい態様では、ＣＸＣＲ−４に対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：２６３の配列又は、配列番号：２６３の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２６３の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：２６４の配列又は、配列番号：２６４の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２６４の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：２６５の配列又は、配列番号：２６５の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２６５の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０２９６】
より好ましくは、この態様のＣＸＣＲ−４に対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：２６３であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：２６４であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：２６５である。
【０２９７】
具体的な一態様では、ＩＬ−２３に対する本発明のナノボディは、配列番号：２６２のナノボディの変異体（配列番号：２６２に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。再度、このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０２９８】
ＣＸＣＲ−４に対する本発明のナノボディの一部の具体的に好ましく、非限定的な例を、配列番号：２４８〜２６１として図１５Ａ及び配列番号：２６６〜２７９として図１５Ｂにそれぞれ列記する。これらのナノボディはそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。
【０２９９】
また、本発明は、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の配列番号：２４８〜２６１及び／又は２６６〜２７９の本発明のナノボディを含む、ＣＸＣＲ−４に対する本発明の化合物に関する。再度、ＣＸＣＲ−４に対する本発明のこのような化合物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、このため、例えば、適切なリンカーを含むことができ、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができ、半減期を伸ばすことができる（例えば、本発明の化合物が、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ、例えば（好ましくは）、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディを含むため）。以下の表Ｕが参照される。
【０３００】
例えば、国際公開公報第２００９／１３８５１９号、同第２０１１／０４２３９８号、及び同第２０１１／１６１２６６号に記載されたように、特に好ましい一分類のＣＸＣＲ−４に対するナノボディ系化合物は、二重抗原結合性化合物である。このため、本発明の一態様では、ＣＸＣＲ−４に対する本発明の化合物は、配列番号：２４４の１つのＩＳＶ又は（好ましくは）（この実施例１１で記載された）配列番号：２４４から得られた本発明のＩＳＶのいずれかと、配列番号：２６２の１つのＩＳＶ又は（好ましくは）（この実施例１１で記載された）配列番号：２６２から得られた本発明のＩＳＶのいずれかとを含む二重抗原結合性構築物である。ただし、少なくとも一方（及び好ましくは、両方）のこれらのＩＳＶが、本発明のＩＳＶであるという条件である。また、このような二重抗原結合性構築物は、（すなわち、血清アルブミン結合ＩＳＶにより）半減期を伸ばすこともできる。このような二重抗原結合性構築物の一部の具体的な例は、配列番号：５９５〜６０３に提供される。
【０３０１】
ＣＸＣＲ−４に対する本発明の化合物の一部の具体的に好ましい例を、配列番号：５９５〜６０３として図２５に提供し、これらの化合物はそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。このため、別の態様では、本発明は、ＣＸＣＲ−４に対し、配列番号：５９５〜６０３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドに関する。より一般的には、ＣＸＣＲ−４に対する本発明の化合物は、国際公開公報第２００９／１３８５１９号、同第２０１１／０４２３９８号、及び同第２０１１／１６１２６６号、同第２０１１／１４４７４９号に記載された通りであることができ、本発明のＩＳＶを含む。また、本発明の化合物は、国際公開公報第２００９／１３８５１９号、同第２０１１／０４２３９８号、及び同第２０１１／１６１２６６号に記載された目的に使用することもできる。
【０３０２】
【表２９】
2018162297.tif 000047
2018162297.tif 000048
2018162297.tif 000049
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【０３０３】
実施例１２：ＨＥＲ−３に対するＶＨドメイン（及び特に、ナノボディ）及びそれを含む本発明の化合物
具体的な一態様では、本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明のＩＳＶＤ、及びとりわけ、本発明のナノボディ）及び本発明の化合物は、ＨＥＲ−３に対することができる。
【０３０４】
ＨＥＲ−３に対する本発明のこのようなＶＨドメインは、（ｉ）本明細書で記載された本発明のアミノ酸残基／変異を適切に含む適切なフレームワーク配列、及び、（ｉｉ）本発明のＶＨドメインがＨＥＲ−３に特異的に結合するのを可能にするＣＤＲ配列を、概ね含むであろう。また加えて、ＨＥＲ−３に対する本発明のこのようなＶＨドメインは、特に、前記ＶＨドメインが一価であるか、又は、前記ＶＨドメインが（再度、本明細書で更に記載されたように）存在する本発明の化合物のＣ末端を形成する場合、本明細書で記載されたＣ末端伸長を適切に有することもできる。さらに、ＨＥＲ−３に対する本発明のこのようなＶＨドメインは、本明細書で更に記載された通りであることができ、特に、ＩＳＶＤであることができる。
【０３０５】
再度、本明細書で記載された本発明の他の態様及び実施態様についてと同様に、具体的なＩＳＶＤ（例えば、この実施例で記載されたＨＥＲ−３に対するＩＳＶＤ）又はそれを含む化合物が、「本発明の」又は「本明細書で更に記載された」と言われる場合、本発明のＩＳＶＤ又は化合物について本明細書で全体的に記載された好ましい態様／実施態様及び選択も、他の方法で明確に示さない限り、又は、他の方法で必要とされる具体的な技術的文脈が無い限り、前記具体的なＩＳＶＤ又は化合物それぞれに具体的に適用する。
【０３０６】
このため、特定の態様では、本発明は、ＨＥＲ−３に対するＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤ）に関し、ここで、（ｉ）１１２位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位が、ＫもしくはＱであり、１１位が、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位が、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位が、Ｌであり、１１０位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位が、Ｖであり、８９位が、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。特に、ＨＥＲ−３に対するこのようなＶＨドメインにおいて、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０３０７】
さらに、ＨＥＲ−３に対する本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された通りであることができ、再度特に、ＨＥＲ−３に対するＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）、又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物であることができる。また、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、例えば、延長した半減期を有することができ（すなわち、本明細書で記載された通り、例えば、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日のヒト対象における半減期−ｔ１／２ベータとして表現−）、及びこの目的で、例えば、血清アルブミン結合ナノボディを含むことができる。また、同ナノボディは、（再度、本明細書で記載された）本発明の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。
【０３０８】
また、このようなＩＳＶＤは、特に、前記ＩＳＶＤが（再度、本明細書で更に記載された）それを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物のＣ末端を形成する場合、（本明細書及び国際公開公報第１２／１７５７４１号で更に記載された）Ｃ末端伸長を適切に有することができる。
【０３０９】
好ましい一態様では、ＨＥＲ−３に対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：２８１の配列又は、配列番号：２８１の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２８１の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：２８２の配列又は、配列番号：２８２の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２８２の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：２８３の配列又は、配列番号：２８３の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２８３の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０３１０】
より好ましくは、この態様のＨＥＲ−３に対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：２８１であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：２８２であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：２８３である。
【０３１１】
具体的な一態様では、ＨＥＲ−３に対する本発明のナノボディは、配列番号：２８０のナノボディの変異体（配列番号：２８０に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０３１２】
別の好ましい態様では、ＨＥＲ−３に対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：２９９の配列又は、配列番号：２９９の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：２９９の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：３００の配列又は、配列番号：３００の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３００の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：３０１の配列又は、配列番号：３０１の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３０１の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０３１３】
より好ましくは、この態様のＨＥＲ−３に対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：２９９であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：３００であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：３０１である。
【０３１４】
具体的な一態様では、ＨＥＲ−３に対する本発明のナノボディは、配列番号：２９８のナノボディの変異体（配列番号：２９８に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。再度、このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０３１５】
ＨＥＲ−３に対する本発明のナノボディの一部の具体的に好ましく、非限定的な例を、配列番号：２８４〜２９７として図１６Ａ及び配列番号：３０２〜３１５として図１６Ｂにそれぞれ列記する。これらのナノボディはそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。
【０３１６】
また、本発明は、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の配列番号：２８４〜２９７及び／又は３０２〜３１５の本発明のナノボディを含む、ＨＥＲ−３に対する本発明の化合物に関する。再度、ＨＥＲ−３に対する本発明のこのような化合物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、このため、例えば、適切なリンカーを含むことができ、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができ、半減期を伸ばすことができる（例えば、本発明の化合物が、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ、例えば（好ましくは）、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディを含むため）。以下の表Ｖが参照される。
【０３１７】
例えば、国際公開公報第２０１１／１４４７４９号に記載されたように、特に好ましい一分類のＨＥＲ−３に対するナノボディ系化合物は、二重抗原結合性化合物である。このため、本発明の一態様では、ＨＥＲ−３に対する本発明の化合物は、配列番号：２８０の１つのＩＳＶ又は（好ましくは）（この実施例１２で記載された）配列番号：２８０から得られた本発明のＩＳＶのいずれかと、配列番号：２９８の１つのＩＳＶ又は（好ましくは）（この実施例１２で記載された）配列番号：２９８から得られた本発明のＩＳＶのいずれかとを含む二重抗原結合性構築物である。ただし、少なくとも一方（及び好ましくは、両方）のこれらのＩＳＶが、本発明のＩＳＶであるという条件である。また、このような二重抗原結合性構築物は、（すなわち、血清アルブミン結合ＩＳＶにより）半減期を伸ばすこともできる。このような二重抗原結合性構築物の一部の具体的な例は、配列番号：６０４〜６３９に提供される。
【０３１８】
ＨＥＲ−３に対する本発明の化合物の一部の具体的に好ましい例を、配列番号：６０４〜６３９として図２６に提供し、これらの化合物はそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。このため、別の態様では、本発明は、ＨＥＲ−３に対し、配列番号：６０４〜６３９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドに関する。より一般的には、ＨＥＲ−３に対する本発明の化合物は、国際公開公報第２０１１／１４４７４９号に記載された通りであることができ、本発明のＩＳＶを含む。また、本発明の化合物は、国際公開公報第２０１１／１４４７４９号に記載された目的に使用することもできる。
【０３１９】
【表３０】
2018162297.tif 000052
2018162297.tif 000053
2018162297.tif 000054
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2018162297.tif 000056
【０３２０】
実施例１３：ＴＮＦに対するＶＨドメイン（及び特に、ナノボディ）及びそれを含む本発明の化合物
具体的な一態様では、本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明のＩＳＶＤ、及びとりわけ、本発明のナノボディ）及び本発明の化合物は、ＴＮＦに対することができる。
【０３２１】
ＴＮＦに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、（ｉ）本明細書で記載された本発明のアミノ酸残基／変異を適切に含む適切なフレームワーク配列、及び、（ｉｉ）本発明のＶＨドメインがＴＮＦに特異的に結合するのを可能にするＣＤＲ配列を、概ね含むであろう。また加えて、ＴＮＦに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、特に、前記ＶＨドメインが一価であるか、又は、前記ＶＨドメインが（再度、本明細書で更に記載されたように）存在する本発明の化合物のＣ末端を形成する場合、本明細書で記載されたＣ末端伸長を適切に有することもできる。さらに、ＴＮＦに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、本明細書で更に記載された通りであることができ、特に、ＩＳＶＤであることができる。
【０３２２】
再度、本明細書で記載された本発明の他の態様及び実施態様についてと同様に、具体的なＩＳＶＤ（例えば、この実施例で記載されたＴＮＦに対するＩＳＶＤ）又はそれを含む化合物が、「本発明の」又は「本明細書で更に記載された」と言われる場合、本発明のＩＳＶＤ又は化合物について本明細書で全体的に記載された好ましい態様／実施態様及び選択も、他の方法で明確に示さない限り、又は、他の方法で必要とされる具体的な技術的文脈が無い限り、前記具体的なＩＳＶＤ又は化合物それぞれに具体的に適用する。
【０３２３】
このため、特定の態様では、本発明は、ＴＮＦに対するＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤ）に関し、ここで、（ｉ）１１２位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位が、ＫもしくはＱであり、１１位が、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位が、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位が、Ｌであり、１１０位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位が、Ｖであり、８９位が、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。特に、ＴＮＦに対するこのようなＶＨドメインにおいて、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０３２４】
さらに、ＴＮＦに対する本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された通りであることができ、再度特に、ＴＮＦに対するＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）、又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物であることができる。また、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、例えば、延長した半減期を有することができ（すなわち、本明細書で記載された通り、例えば、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日のヒト対象における半減期−ｔ１／２ベータとして表現−）、及びこの目的で、例えば、血清アルブミン結合ナノボディを含むことができる。また、同ナノボディは、（再度、本明細書で記載された）本発明の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。
【０３２５】
また、このようなＩＳＶＤは、特に、前記ＩＳＶＤが（再度、本明細書で更に記載された）それを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物のＣ末端を形成する場合、（本明細書及び国際公開公報第１２／１７５７４１号で更に記載された）Ｃ末端伸長を適切に有することができる。
【０３２６】
好ましい一態様では、ＴＮＦに対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：３１７の配列又は、配列番号：３１７の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３１７の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：３１８の配列又は、配列番号：３１８の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３１８の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：３１９の配列又は、配列番号：３１９の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３１９の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０３２７】
より好ましくは、この態様のＴＮＦに対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：３１７であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：３１８であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：３１９である。
【０３２８】
具体的な一態様では、ＴＮＦに対する本発明のナノボディは、配列番号：３１６のナノボディの変異体（配列番号：３１６に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
ここで、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０３２９】
ＴＮＦに対する本発明のナノボディの一部の具体的に好ましく、非限定的な例を、配列番号：３２０〜３３３として図１７Ａに列記する。これらのナノボディはそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。
【０３３０】
また、本発明は、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の配列番号：３２０〜３３３の本発明のナノボディを含む、ＴＮＦに対する本発明の化合物に関する。再度、ＴＮＦに対する本発明のこのような化合物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、このため、例えば、適切なリンカーを含むことができ、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができ、半減期を伸ばすことができる（例えば、本発明の化合物が、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ、例えば（好ましくは）、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディを含むため）。以下の表Ｗが参照される。一般的には、ＴＮＦが多価ターゲットであるため、２つ又は３つの抗ＴＮＦ  ＩＳＶ（及び、適切な長さのリンカー、国際公開公報第０６／１２２７８６号を参照のこと）を含む本発明の化合物が好ましい。
【０３３１】
ＴＮＦに対する本発明の化合物の一部の具体的に好ましい例を、配列番号：６４０〜６７５として図２７に提供し、これらの化合物はそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。このため、別の態様では、本発明は、ＴＮＦに対し、配列番号：６４０〜６７５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドに関する。より一般的には、ＴＮＦに対する本発明の化合物は、国際公開公報第２００６／１２２７８６号に記載された通りであることができ、本発明のＩＳＶを含む。また、本発明の化合物は、国際公開公報第２００６／１２２７８６号に記載された目的に使用することもできる。
【０３３２】
【表３１】
2018162297.tif 000057
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2018162297.tif 000059
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2018162297.tif 000061
【０３３３】
実施例１４：ＴＮＦに対する更なるＶＨドメイン（及び特に、ナノボディ）及びそれを含む本発明の化合物
具体的な一態様では、本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明のＩＳＶＤ、及びとりわけ、本発明のナノボディ）及び本発明の化合物は、ＴＮＦに対することができる。
【０３３４】
ＴＮＦに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、（ｉ）本明細書で記載された本発明のアミノ酸残基／変異を適切に含む適切なフレームワーク配列、及び、（ｉｉ）本発明のＶＨドメインがＴＮＦに特異的に結合するのを可能にするＣＤＲ配列を、概ね含むであろう。また加えて、ＴＮＦに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、特に、前記ＶＨドメインが一価であるか、又は、前記ＶＨドメインが（再度、本明細書で更に記載されたように）存在する本発明の化合物のＣ末端を形成する場合、本明細書で記載されたＣ末端伸長を適切に有することもできる。さらに、ＴＮＦに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、本明細書で更に記載された通りであることができ、特に、ＩＳＶＤであることができる。
【０３３５】
再度、本明細書で記載された本発明の他の態様及び実施態様についてと同様に、具体的なＩＳＶＤ（例えば、この実施例で記載されたＴＮＦに対するＩＳＶＤ）又はそれを含む化合物が、「本発明の」又は「本明細書で更に記載された」と言われる場合、本発明のＩＳＶＤ又は化合物について本明細書で全体的に記載された好ましい態様／実施態様及び選択も、他の方法で明確に示さない限り、又は、他の方法で必要とされる具体的な技術的文脈が無い限り、前記具体的なＩＳＶＤ又は化合物それぞれに具体的に適用する。
【０３３６】
このため、特定の態様では、本発明は、ＴＮＦに対するＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤ）に関し、ここで、（ｉ）１１２位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位が、ＫもしくはＱであり、１１位が、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位が、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位が、Ｌであり、１１０位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位が、Ｖであり、８９位が、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。特に、ＴＮＦに対するこのようなＶＨドメインにおいて、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０３３７】
さらに、ＴＮＦに対する本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された通りであることができ、再度特に、ＴＮＦに対するＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）、又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物であることができる。また、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、例えば、延長した半減期を有することができ（すなわち、本明細書で記載された通り、例えば、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日のヒト対象における半減期−ｔ１／２ベータとして表現−）、及びこの目的で、例えば、血清アルブミン結合ナノボディを含むことができる。また、同ナノボディは、（再度、本明細書で記載された）本発明の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。
【０３３８】
また、このようなＩＳＶＤは、特に、前記ＩＳＶＤが（再度、本明細書で更に記載された）それを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物のＣ末端を形成する場合、（本明細書及び国際公開公報第１２／１７５７４１号で更に記載された）Ｃ末端伸長を適切に有することができる。
【０３３９】
好ましい一態様では、ＴＮＦに対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：３３５の配列又は、配列番号：３３５の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３３５の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：３３６の配列又は、配列番号：３３６の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３３６の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：３３７の配列又は、配列番号：３３７の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３３７の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０３４０】
より好ましくは、この態様のＴＮＦに対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：３３５であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：３３６であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：３３７である。
【０３４１】
具体的な一態様では、ＴＮＦに対する本発明のナノボディは、配列番号：３３４のナノボディの変異体（配列番号：３３４に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０３４２】
ＴＮＦに対する本発明のナノボディの一部の具体的に好ましく、非限定的な例を、配列番号：３３８〜３５１として図１７Ｂに列記する。これらのナノボディはそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。
【０３４３】
また、本発明は、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の配列番号：３３８〜３５１の本発明のナノボディを含む、ＴＮＦに対する本発明の化合物に関する。再度、ＴＮＦに対する本発明のこのような化合物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、このため、例えば、適切なリンカーを含むことができ、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができ、半減期を伸ばすことができる（例えば、本発明の化合物が、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ、例えば（好ましくは）、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディを含むため）。以下の表Ｘが参照される。一般的には、ＴＮＦが多価ターゲットであるため、２つ又は３つの抗ＴＮＦ  ＩＳＶを含む本発明の化合物が好ましい。
【０３４４】
【表３２】
2018162297.tif 000062
2018162297.tif 000063
2018162297.tif 000064
2018162297.tif 000065
2018162297.tif 000066
【０３４５】
実施例１５：ｃ−Ｍｅｔに対するＶＨドメイン（及び特に、ナノボディ）及びそれを含む本発明の化合物
具体的な一態様では、本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明のＩＳＶＤ、及びとりわけ、本発明のナノボディ）及び本発明の化合物は、ｃ−Ｍｅｔに対することができる。
【０３４６】
ｃ−Ｍｅｔに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、（ｉ）本明細書で記載された本発明のアミノ酸残基／変異を適切に含む適切なフレームワーク配列、及び、（ｉｉ）本発明のＶＨドメインがｃ−Ｍｅｔに特異的に結合するのを可能にするＣＤＲ配列を、概ね含むであろう。また加えて、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、特に、前記ＶＨドメインが一価であるか、又は、前記ＶＨドメインが（再度、本明細書で更に記載されたように）存在する本発明の化合物のＣ末端を形成する場合、本明細書で記載されたＣ末端伸長を適切に有することもできる。さらに、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、本明細書で更に記載された通りであることができ、特に、ＩＳＶＤであることができる。
【０３４７】
再度、本明細書で記載された本発明の他の態様及び実施態様についてと同様に、具体的なＩＳＶＤ（例えば、この実施例で記載されたｃ−Ｍｅｔに対するＩＳＶＤ）又はそれを含む化合物が、「本発明の」又は「本明細書で更に記載された」と言われる場合、本発明のＩＳＶＤ又は化合物について本明細書で全体的に記載された好ましい態様／実施態様及び選択も、他の方法で明確に示さない限り、又は、他の方法で必要とされる具体的な技術的文脈が無い限り、前記具体的なＩＳＶＤ又は化合物それぞれに具体的に適用する。
【０３４８】
このため、特定の態様では、本発明は、ｃ−Ｍｅｔに対するＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤ）に関し、ここで、（ｉ）１１２位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位が、ＫもしくはＱであり、１１位が、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位が、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位が、Ｌであり、１１０位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位が、Ｖであり、８９位が、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。特に、ｃ−Ｍｅｔに対するこのようなＶＨドメインにおいて、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０３４９】
さらに、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された通りであることができ、再度特に、ｃ−Ｍｅｔに対するＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）、又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物であることができる。また、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、例えば、延長した半減期を有することができ（すなわち、本明細書で記載された通り、例えば、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日のヒト対象における半減期−ｔ１／２ベータとして表現−）、及びこの目的で、例えば、血清アルブミン結合ナノボディを含むことができる。また、同ナノボディは、（再度、本明細書で記載された）本発明の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。
【０３５０】
また、このようなＩＳＶＤは、特に、前記ＩＳＶＤが（再度、本明細書で更に記載された）それを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物のＣ末端を形成する場合、（本明細書及び国際公開公報第１２／１７５７４１号で更に記載された）Ｃ末端伸長を適切に有することができる。
【０３５１】
好ましい一態様では、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：３５３の配列又は、配列番号：３５３の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３５３の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：３５４の配列又は、配列番号：３５４の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３５４の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：３５５の配列又は、配列番号：３５５の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３５５の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０３５２】
より好ましくは、この態様のｃ−Ｍｅｔに対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：３５３であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：３５４であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：３５５である。
【０３５３】
具体的な一態様では、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明のナノボディは、配列番号：３５２のナノボディの変異体（配列番号：３５２に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、
ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０３５４】
別の好ましい態様では、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：３７１の配列又は、配列番号：３７１の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３７１の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：３７２の配列又は、配列番号：３７２の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３７２の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：３７３の配列又は、配列番号：３７３の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３７３の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０３５５】
より好ましくは、この態様のｃ−Ｍｅｔに対する本発明のこのようなＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：３７１であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：３７２であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：３７３である。
【０３５６】
具体的な一態様では、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明のナノボディは、配列番号：３７０のナノボディの変異体（配列番号：３７０に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０３５７】
ｃ−Ｍｅｔに対する本発明のナノボディの一部の具体的に好ましく、非限定的な例を、配列番号：３５６〜３６９として図１８Ａ及び配列番号：３７４〜３８７として図１８Ｂにそれぞれ列記する。これらのナノボディはそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。
【０３５８】
また、本発明は、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の配列番号：３５６〜３６９及び／又は３７４〜３８７の本発明のナノボディを含む、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明の化合物に関する。再度、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明のこのような化合物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、このため、例えば、適切なリンカーを含むことができ、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができ、半減期を伸ばすことができる（例えば、本発明の化合物が、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ、例えば（好ましくは）、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディを含むため）。以下の表Ｙが参照される。
【０３５９】
例えば、国際公開公報第２０１３／０４５７０７号に記載されたように、特に好ましい一分類のｃ−Ｍｅｔに対するナノボディ系化合物は、二重抗原結合性化合物である。このため、本発明の一態様では、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明の化合物は、配列番号：３５２の１つのＩＳＶ又は（好ましくは）（この実施例１５で記載された）配列番号：３５２から得られた本発明のＩＳＶのいずれかと、配列番号：３７０の１つのＩＳＶ又は（好ましくは）（この実施例１５で記載された）配列番号：３７０から得られた本発明のＩＳＶのいずれかをと含む二重抗原結合性構築物である。ただし、少なくとも一方（及び好ましくは、両方）のこれらのＩＳＶが、本発明のＩＳＶであるという条件である。また、このような二重抗原結合性構築物は、（すなわち、血清アルブミン結合ＩＳＶにより）半減期を伸ばすこともできる。このような二重抗原結合性構築物の一部の具体的な例は、配列番号：６７６〜６９３に提供される。また、ｃ−Ｍｅｔに対する二重抗原結合性構築物は、ＶＥＧＦ又はＥＧＦＲに対するＩＳＶを含むこともできる。再度、国際公開公報第２０１４／３４１３０９号が参照される。
【０３６０】
ｃ−Ｍｅｔに対する本発明の化合物の一部の具体的に好ましい例を、配列番号：６７６〜６９４として図２８Ａ及び２８Ｂに提供し、これらの化合物はそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。このため、別の態様では、本発明は、ｃ−Ｍｅｔに対し、配列番号：６７６〜６９４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドに関する。より一般的には、ｃ−Ｍｅｔに対する本発明の化合物は、国際公開公報第２０１３／０４５７０７号に記載された通りであることができ、本発明のＩＳＶを含む。また、本発明の化合物は、国際公開公報第２０１３／０４５７０７号に記載された目的に使用することもできる。
【０３６１】
【表３３】
2018162297.tif 000067
2018162297.tif 000068
2018162297.tif 000069
2018162297.tif 000070
2018162297.tif 000071
【０３６２】
実施例１６：ＲＡＮＫ−Ｌに対するＶＨドメイン（及び特に、ナノボディ）及びそれを含む本発明の化合物
具体的な一態様では、本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明のＩＳＶＤ、及びとりわけ、本発明のナノボディ）及び本発明の化合物は、ＲＡＮＫ−Ｌに対することができる。
【０３６３】
ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、（ｉ）本明細書で記載された本発明のアミノ酸残基／変異を適切に含む適切なフレームワーク配列、及び、（ｉｉ）本発明のＶＨドメインがＲＡＮＫ−Ｌに特異的に結合するのを可能にするＣＤＲ配列を、概ね含むであろう。また加えて、ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、特に、前記ＶＨドメインが一価であるか、又は、前記ＶＨドメインが（再度、本明細書で更に記載されたように）存在する本発明の化合物のＣ末端を形成する場合、本明細書で記載されたＣ末端伸長を適切に有することもできる。さらに、ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、本明細書で更に記載された通りであることができ、特に、ＩＳＶＤであることができる。
【０３６４】
再度、本明細書で記載された本発明の他の態様及び実施態様についてと同様に、具体的なＩＳＶＤ（例えば、この実施例で記載されたＲＡＮＫ−Ｌに対するＩＳＶＤ）又はそれを含む化合物が、「本発明の」又は「本明細書で更に記載された」と言われる場合、本発明のＩＳＶＤ又は化合物について本明細書で全体的に記載された好ましい態様／実施態様及び選択も、他の方法で明確に示さない限り、又は、他の方法で必要とされる具体的な技術的文脈が無い限り、前記具体的なＩＳＶＤ又は化合物それぞれに具体的に適用する。
【０３６５】
このため、特定の態様では、本発明は、ＲＡＮＫ−Ｌに対するＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤ）に関し、ここで、（ｉ）１１２位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位が、ＫもしくはＱであり、１１位が、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位が、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位が、Ｌであり、１１０位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位が、Ｖであり、８９位が、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。特に、ＲＡＮＫ−Ｌに対するこのようなＶＨドメインにおいて、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０３６６】
さらに、ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された通りであることができ、再度特に、ＲＡＮＫ−Ｌに対するＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）、又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物であることができる。また、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物は、本明細書で更に記載された通りであり、例えば、延長した半減期を有することができ（すなわち、本明細書で記載された通りであることができ、例えば、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日のヒト対象における半減期−ｔ１／２ベータとして表現−）、及びこの目的で、例えば、血清アルブミン結合ナノボディを含むことができる。また、同ナノボディは、（再度、本明細書で記載された）本発明の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。
【０３６７】
また、このようなＩＳＶＤは、特に、前記ＩＳＶＤが（再度、本明細書で更に記載された）それを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物のＣ末端を形成する場合、（本明細書及び国際公開公報第１２／１７５７４１号で更に記載された）Ｃ末端伸長を適切に有することができる。
【０３６８】
好ましい一態様では、ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：３８９の配列又は、配列番号：３８９の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３８９の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：３９０の配列又は、配列番号：３９０の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３９０の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：３９１の配列又は、配列番号：３９１の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：３９１の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０３６９】
より好ましくは、この態様のＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：３８９であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：３９０であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：３９１である。
【０３７０】
具体的な一態様では、ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明のナノボディは、配列番号：３８８のナノボディの変異体（配列番号：３８８に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０３７１】
ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明のナノボディの一部の具体的に好ましく、非限定的な例を、配列番号：３９２〜４０５として図１９に列記する。これらのナノボディはそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。
【０３７２】
また、本発明は、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の配列番号：３９２〜４０５の本発明のナノボディを含む、ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明の化合物に関する。再度、ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明のこのような化合物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、このため、例えば、適切なリンカーを含むことができ、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができ、半減期を伸ばすことができる（例えば、本発明の化合物が、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ、例えば（好ましくは）、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディを含むため）。以下の表Ｚが参照される。
【０３７３】
ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明の化合物の一部の具体的に好ましい例を、配列番号：６９４〜７２９として図２９に提供し、これらの化合物はそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。このため、別の態様では、本発明は、ＲＡＮＫ−Ｌに対し、配列番号：６９４〜７２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドに関する。
【０３７４】
より一般的には、ＲＡＮＫ−Ｌに対する本発明の化合物は、国際公開公報第２００８／１４２１６４号に記載された通りであることができ、本発明のＩＳＶを含む。また、本発明の化合物は、国際公開公報第２００８／１４２１６４号に記載された目的に使用することもできる。
【０３７５】
【表３４】
2018162297.tif 000072
2018162297.tif 000073
2018162297.tif 000074
2018162297.tif 000075
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【０３７６】
実施例１７：ＣＸＣＲ−７に対するＶＨドメイン（及び特に、ナノボディ）及びそれを含む本発明の化合物
具体的な一態様では、本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明のＩＳＶＤ、及びとりわけ、本発明のナノボディ）及び本発明の化合物は、ＣＸＣＲ−７に対することができる。
【０３７７】
ＣＸＣＲ−７に対する本発明のこのようなＶＨドメインは、（ｉ）本明細書で記載された本発明のアミノ酸残基／変異を適切に含む適切なフレームワーク配列、及び、（ｉｉ）本発明のＶＨドメインがＣＸＣＲ−７に特異的に結合するのを可能にするＣＤＲ配列を、概ね含むであろう。また加えて、ＣＸＣＲ−７に対する本発明のこのようなＶＨドメインは、特に、前記ＶＨドメインが一価であるか、又は、前記ＶＨドメインが（再度、本明細書で更に記載されたように）存在する本発明の化合物のＣ末端を形成する場合、本明細書で記載されたＣ末端伸長を適切に有することもできる。さらに、ＣＸＣＲ−７に対する本発明のこのようなＶＨドメインは、本明細書で更に記載された通りであることができ、特に、ＩＳＶＤであることができる。
【０３７８】
再度、本明細書で記載された本発明の他の態様及び実施態様についてと同様に、具体的なＩＳＶＤ（例えば、この実施例で記載されたＣＸＣＲ−７に対するＩＳＶＤ）又はそれを含む化合物が、「本発明の」又は「本明細書で更に記載された」と言われる場合、本発明のＩＳＶＤ又は化合物について本明細書で全体的に記載された好ましい態様／実施態様及び選択も、他の方法で明確に示さない限り、又は、他の方法で必要とされる具体的な技術的文脈が無い限り、前記具体的なＩＳＶＤ又は化合物それぞれに具体的に適用する。
【０３７９】
このため、特定の態様では、本発明は、ＣＸＣＲ−７に対するＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤ）に関し、ここで、（ｉ）１１２位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位が、ＫもしくはＱであり、１１位が、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位が、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位が、Ｌであり、１１０位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位が、Ｖであり、８９位が、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。特に、ＣＸＣＲ−７に対するこのようなＶＨドメインにおいて、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０３８０】
さらに、ＣＸＣＲ−７に対する本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された通りであることができ、再度特に、ＣＸＣＲ−７に対するＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）、又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物であることができる。また、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物は、本明細書で更に記載された通りであり、例えば、延長した半減期を有することができ（すなわち、本明細書で記載された通り、例えば、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日のヒト対象における半減期−ｔ１／２ベータとして表現−）、及びこの目的で、例えば、血清アルブミン結合ナノボディを含むことができる。また、同ナノボディは、（再度、本明細書で記載された）本発明の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。
【０３８１】
また、このようなＩＳＶＤは、特に、前記ＩＳＶＤが（再度、本明細書で更に記載された）それを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物のＣ末端を形成する場合、（本明細書及び国際公開公報第１２／１７５７４１号で更に記載された）Ｃ末端伸長を適切に有することができる。
【０３８２】
好ましい一態様では、ＣＸＣＲ−７に対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：４０７の配列又は、配列番号：４０７の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：４０７の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：４０８の配列又は、配列番号：４０８の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：４０８の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：４０９の配列又は、配列番号：４０９の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：４０９の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０３８３】
より好ましくは、この態様のＣＸＣＲ−７に対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：４０７であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：４０８であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：４０９である。
【０３８４】
具体的な一態様では、ＣＸＣＲ−７に対する本発明のナノボディは、配列番号：４０６のナノボディの変異体（配列番号：４０６に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
ここで、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０３８５】
別の好ましい態様では、ＣＸＣＲ−７に対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：４２５の配列又は、配列番号：４２５の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：４２５の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：４２６の配列又は、配列番号：４２６の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：４２６の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：４２７の配列又は、配列番号：４２７の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：４２７の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０３８６】
より好ましくは、この態様のＣＸＣＲ−７に対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：４２５であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：４２６であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：４２７である。
【０３８７】
具体的な一態様では、ＣＸＣＲ−７に対する本発明のナノボディは、配列番号：４２４のナノボディの変異体（配列番号：４２４に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。再度、このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０３８８】
ＣＸＣＲ−７に対する本発明のナノボディの一部の具体的に好ましく、非限定的な例を、配列番号：４１０〜４２３として図２０Ａ及び配列番号：４２８〜４４１として図２０Ｂに列記する。これらのナノボディはそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。
【０３８９】
また、本発明は、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の配列番号：４１０〜４２３及び／又は４２８〜４４１の本発明のナノボディを含む、ＣＸＣＲ−７に対する本発明の化合物に関する。再度、ＣＸＣＲ−７に対する本発明のこのような化合物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、このため、例えば、適切なリンカーを含むことができ、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができ、半減期を伸ばすことができる（例えば、本発明の化合物が、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ、例えば（好ましくは）、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディを含むため）。以下の表ＡＡが参照される。
【０３９０】
例えば、国際公開公報第２０１２／１３０８７４号に記載されたように、特に好ましい一分類のＣＸＣＲ−７に対するナノボディ系化合物は、二重抗原結合性化合物である。このため、本発明の一態様では、ＣＸＣＲ−７に対する本発明の化合物は、配列番号：４０６の１つのＩＳＶ又は（好ましくは）（この実施例１７で記載された）配列番号：４０６から得られた本発明のＩＳＶのいずれかと、配列番号：４２４の１つのＩＳＶ又は（好ましくは）（この実施例１７で記載された）配列番号：４２４から得られた本発明のＩＳＶのいずれかとを含む二重抗原結合性構築物である。ただし、少なくとも一方（及び好ましくは、両方）のこれらのＩＳＶが、本発明のＩＳＶであるという条件である。また、このような二重抗原結合性構築物は、（すなわち、血清アルブミン結合ＩＳＶにより）半減期を伸ばすこともできる。
【０３９１】
より一般的には、ＣＸＣＲ−７に対する本発明の化合物は、国際公開公報第２０１２／１３０８７４号に記載された通りであり、本発明のＩＳＶを含む。また、本発明の化合物は、国際公開公報第２０１２／１３０８７４号に記載された目的に使用することもできる。
【０３９２】
【表３５】
2018162297.tif 000077
2018162297.tif 000078
2018162297.tif 000079
2018162297.tif 000080
2018162297.tif 000081
【０３９３】
実施例１８：Ａ−ベータに対するＶＨドメイン（及び特に、ナノボディ）及びそれを含む本発明の化合物
具体的な一態様では、本発明のＶＨドメイン（及び特に、本発明のＩＳＶＤ、及びとりわけ、本発明のナノボディ）及び本発明の化合物は、Ａ−ベータに対することができる。
【０３９４】
Ａ−ベータに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、（ｉ）本明細書で記載された本発明のアミノ酸残基／変異を適切に含む適切なフレームワーク配列、及び、（ｉｉ）本発明のＶＨドメインがＡ−ベータに特異的に結合するのを可能にするＣＤＲ配列を、概ね含むであろう。また加えて、Ａ−ベータに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、特に、前記ＶＨドメインが一価であるか、又は、前記ＶＨドメインが（再度、本明細書で更に記載されたように）存在する本発明の化合物のＣ末端を形成する場合、本明細書で記載されたＣ末端伸長を適切に有することもできる。さらに、Ａ−ベータに対する本発明のこのようなＶＨドメインは、本明細書で更に記載された通りであることができ、特に、ＩＳＶＤであることができる。
【０３９５】
再度、本明細書で記載された本発明の他の態様及び実施態様についてと同様に、具体的なＩＳＶＤ（例えば、この実施例で記載されたＡ−ベータに対するＩＳＶＤ）又はそれを含む化合物が、「本発明の」又は「本明細書で更に記載された」と言われる場合、本発明のＩＳＶＤ又は化合物について本明細書で全体的に記載された好ましい態様／実施態様及び選択も、他の方法で明確に示さない限り、又は、他の方法で必要とされる具体的な技術的文脈が無い限り、前記具体的なＩＳＶＤ又は化合物それぞれに具体的に適用する。
【０３９６】
このため、特定の態様では、本発明は、Ａ−ベータに対するＶＨドメイン（及び特に、ＩＳＶＤ）に関し、ここで、（ｉ）１１２位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位が、ＫもしくはＱであり、１１位が、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位が、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位が、Ｌであり、１１０位が、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位が、Ｖであり、８９位が、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。特に、Ａ−ベータに対するこのようなＶＨドメインにおいて、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。
【０３９７】
さらに、Ａ−ベータに対する本発明のＶＨドメインは、本明細書で記載された通りであることができ、再度特に、Ａ−ベータに対するＩＳＶＤ（及びとりわけ、ナノボディ）、又は、少なくとも１つのこのようなＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物であることができる。また、このようなタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、例えば、延長した半減期を有することができ（すなわち、本明細書で記載された通り、例えば、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば、少なくとも１０日のヒト対象における半減期−ｔ１／２ベータとして表現−）、及びこの目的で、例えば、血清アルブミン結合ナノボディを含むことができる。また、同ナノボディは、（再度、本明細書で記載された）本発明の血清アルブミン結合ナノボディであることができる。
【０３９８】
また、このようなＩＳＶＤは、特に、前記ＩＳＶＤが（再度、本明細書で更に記載された）それを含むタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物もしくは構築物のＣ末端を形成する場合、（本明細書及び国際公開公報第１２／１７５７４１号で更に記載された）Ｃ末端伸長を適切に有することができる。
【０３９９】
好ましい一態様では、Ａ−ベータに対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：４６１の配列又は、配列番号：４６１の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：４６１の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：４６２の配列又は、配列番号：４６２の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：４６２の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：４６３の配列又は、配列番号：４６３の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：４６３の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０４００】
より好ましくは、この態様のＡ−ベータに対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：４６１であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：４６２であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：４６３である。
【０４０１】
具体的な一態様では、Ａ−ベータに対する本発明のナノボディは、配列番号：４６０のナノボディの変異体（配列番号：４６０に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０４０２】
別の好ましい態様では、Ａ−ベータに対する本発明のＶＨドメインは、（ｉ）配列番号：４７９の配列又は、配列番号：４７９の配列と１つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：４７９の配列が好ましい）であるＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号：４８０の配列又は、配列番号：４８０の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：４８０の配列が好ましい）であるＣＤＲ２配列、及び、（ｉｉｉ）配列番号：４８１の配列又は、配列番号：４８１の配列と１つ又は２つのアミノ酸差のみを有するアミノ酸配列（配列番号：４８１の配列が好ましい）であるＣＤＲ３配列を含む。
【０４０３】
より好ましくは、この態様のＡ−ベータに対する本発明のＶＨドメインにおいて、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号：４７９であり、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号：４８０であり、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号：４８１である。
【０４０４】
具体的な一態様では、Ａ−ベータに対する本発明のナノボディは、配列番号：４７８のナノボディの変異体（配列番号：４７８に対して、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を有する）であり、ここで、
−１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ、Ｖ、又はＫから選択され（及び最も好ましくは、Ｖであり）、及び、
−１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ａ又はＰから選択され、及び、
−８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｖ、又はＬから選択され、及び、
−１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｑ又はＬから選択され、及び、
−１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｔ、Ｋ、又はＱから選択され、及び、
−１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくは適切に、Ｓ、Ｋ、又はＱから選択され、
このため、下記のいずれか、（ｉ）１１２位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｉｉ）１１０位は、ＫもしくはＱであり、１１位は、Ｖであり、又は、（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり、又は、（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、１１０位は、ＫもしくはＱであり、又は、（ｖ）１１位は、Ｖであり、８９位は、Ｌであり、又は、（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである。再度、このようなＩＳＶのＣＤＲは、好ましくは、先の２つの段落で定義された通りである。
【０４０５】
Ａ−ベータに対する本発明のナノボディの一部の具体的に好ましく、非限定的な例を、配列番号：４６４〜４７７として図２１Ａ及び配列番号：４８２〜４９５として図２１Ｂに列記する。これらのナノボディはそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。
【０４０６】
また、本発明は、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の配列番号：４６４〜４７７及び／又は４８２〜４９５の本発明のナノボディを含む、Ａ−ベータに対する本発明の化合物に関する。再度、Ａ−ベータに対する本発明のこのような化合物は、本明細書で更に記載された通りであることができ、このため、例えば、適切なリンカーを含むことができ、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができ、半減期を伸ばすことができる（例えば、本発明の化合物が、ヒト血清アルブミンに対するナノボディ、例えば（好ましくは）、ヒト血清アルブミンに対する本発明のナノボディを含むため）。以下の表ＢＢが参照される。
【０４０７】
例えば、国際公開公報第２００６／０４０１５３号、及び特に、欧州特許第２５４２５７９号に記載されたように、特に好ましい一分類のＡ−ベータに対するナノボディ系化合物は、二重抗原結合性化合物である。このため、本発明の一態様では、Ａ−ベータに対する本発明の化合物は、配列番号：４６０の１つのＩＳＶ又は（好ましくは）（この実施例１７で記載された）配列番号：４６０から得られた本発明のＩＳＶのいずれかと、配列番号：４７８の１つのＩＳＶ又は（好ましくは）（この実施例１７で記載された）配列番号：４７８から得られた本発明のＩＳＶのいずれかとを含む。ただし、少なくとも一方（及び好ましくは、両方）のこれらのＩＳＶが、本発明のＩＳＶであるという条件である。また、このような二重抗原結合性構築物は、（すなわち、血清アルブミン結合ＩＳＶにより）半減期を伸ばすこともできる。このような二重抗原結合性構築物の一部の具体的な例は、配列番号：７３０〜７６６に提供される。
【０４０８】
Ａ−ベータに対する本発明の化合物の一部の具体的に好ましい例を、配列番号：７３０〜７６６として図３０に提供し、これらの化合物はそれぞれ、本発明の更なる態様を構成する。このため、別の態様では、本発明は、Ａ−ベータに対し、配列番号：７３０〜７６６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドに関する。より一般的には、Ａ−ベータに対する本発明の化合物は、国際公開公報第２００６／０４０１５３号に記載された通りであることができ、及び特に、欧州特許第２５４２５７９号に記載された通りであることができ、本発明のＩＳＶを含む。また、本発明の化合物は、国際公開公報第２００６／０４０１５３号、及び特に、欧州特許第２５４２５７９号に記載された目的に使用することもできる。
【０４０９】
【表３６】
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【０４１０】
実施例１９：既存の抗体による結合についての抗Ａ−ベータ構築物の試験
３つの半減期延長抗Ａ−ベータ構築物（一般式［Ａ−ベータ−１］−９ＧＳ−ＡＬＢ８−９ＧＳ−［Ａ−ベータ−２］−Ａ）を試験し、既存の抗体による結合について、本明細書で記載された全体的なプロトコールを使用して比較した。本発明の２つの構築物は、３つ全ての構築ブロック中（すなわち、２つの抗Ａ−ベータナノボディ中及び血清アルブミン結合ナノボディ中）に本発明の示された変異を有した。参照構築物（配列番号：７６６）は、いずれの構築ブロック中にも、本発明の変異を有さなかった。試験した全ての構築物は、Ｃ末端アラニンを有する。結果を、表ＣＣ−１及び図３１Ａに提供する。
【０４１１】
【表３７】
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【０４１２】
また、該構築物のＣ末端に存在する抗Ａ−ベータナノボディを、（Ｃ末端アラニンを有する）一価の構築物として別々に試験した。結果を、表ＣＣ−２及び図３１Ｂに提供する。
【０４１３】
【表３８】
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【０４１４】
実施例２０：本発明の血清アルブミンバインダーの概観
以下の表ＤＤ及びＥＥは、Ａｌｂ−８（表ＤＤ）及びＡｌｂ−２３（表ＥＥ）それぞれに基づく、本発明の血清アルブミン結合ナノボディの一部の好ましく、非限定的な例を提供する。
【０４１５】
言及されたように、また、本発明は、以下の表ＤＤ又はＥＥに列記された血清アルブミン結合ナノボディの内の１つを含む、ポリペプチド、タンパク質、化合物、又は構築物（及び特に、本発明の化合物）に関する。このようなポリペプチド、タンパク質、化合物、又は構築物（及び特に、本発明の化合物）は、少なくとも１つの治療ターゲットに対する、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、又は３つ）の結合ドメイン又は結合ユニット（例えば、ＩＳＶＤ、及び特に、本発明のＩＳＶ）を更に含むことができる。再度、このようなポリペプチド、タンパク質、化合物、又は構築物は、適切に、治療ターゲットに対して、単特異性、二重特異性、又は三重特異性であることができ、二価、三価、四価、又はより高い価であることができる。また通常、このようなポリペプチド、タンパク質、化合物、又は構築物は、適切なリンカーを含有するであろうし、本明細書で記載されたＣ末端伸長を含むことができる。
【０４１６】
特に、このようなポリペプチド、タンパク質、化合物、又は構築物は、（本明細書で記載された）本発明の化合物であることができ、及び／又は、本発明の化合物（本発明についての好ましい実施態様を含む。このため、ＩＳＶＤ、及び特に、ナノボディを含む化合物が特に好ましい）について、本明細書で更に記載された通りであることができる。したがって、表ＤＤ又はＥＥに列記された血清アルブミン結合ナノボディの内の１つを含む本発明の化合物は、本発明の更なる態様を構成する。
【０４１７】
【表３９】
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【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図２−６】
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【図２−７】
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【図２−８】
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【図２−９】
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【図２−１０】
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【図２−１１】
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【図２−１２】
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【図２−１３】
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【図２−１４】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ−１】
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【図９Ａ−２】
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【図９Ａ−３】
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【図９Ａ−４】
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【図９Ｂ−１】
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【図９Ｂ−２】
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【図９Ｂ−３】
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【図９Ｂ−４】
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【図９Ｃ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ−１】
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【図１２Ｂ−２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１５Ａ−１】
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【図１５Ａ−２】
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【図１５Ｂ−１】
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【図１５Ｂ−２】
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【図１６Ａ−１】
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【図１６Ａ−２】
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【図１６Ｂ−１】
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【図１６Ｂ−２】
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【図１７Ａ−１】
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【図１７Ａ−２】
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【図１７Ｂ−１】
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【図１７Ｂ−２】
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【図１８Ａ−１】
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【図１８Ａ−２】
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【図１８Ｂ−１】
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【図１８Ｂ−２】
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【図１９−１】
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【図１９−２】
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【図２０Ａ−１】
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【図２０Ａ−２】
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【図２０Ｂ−１】
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【図２０Ｂ−２】
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【図２０Ｃ−１】
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【図２０Ｃ−２】
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【図２１Ａ−１】
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【図２１Ａ−２】
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【図２１Ｂ−１】
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【図２１Ｂ−２】
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【図２２−１】
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【図２２−２】
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【図２２−３】
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【図２２−４】
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【図２２−５】
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【図２２−６】
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【図２３−１】
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【図２３−２】
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【図２３−３】
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【図２３−４】
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【図２３−５】
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【図２３−６】
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【図２３−７】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６−１】
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【図２６−２】
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【図２６−３】
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【図２６−４】
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【図２６−５】
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【図２６−６】
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【図２７−１】
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【図２７−２】
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【図２７−３】
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【図２７−４】
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【図２７−５】
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【図２７−６】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９−１】
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【図２９−２】
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【図２９−３】
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【図２９−４】
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【図２９−５】
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【図２９−６】
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【図３０−１】
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【図３０−２】
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【図３０−３】
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【図３０−４】
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【図３０−５】
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【図３０−６】
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【図３０−７】
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【図３０−８】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【配列表】
2018162297000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年6月28日(2018.6.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＮＦに対するＶＨドメインであって、（ｉ）１１２位は、Ｋ又はＱであり；又は（ｉｉ）１１０位は、Ｋ又はＱであり、そして１１位は、Ｖであり；又は（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり；又は（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、そして１１０位は、Ｋ又はＱであり；又は（ｖ）１１位は、Ｖであり、そして８９位は、Ｌであり；又は（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである、ＶＨドメイン。
【請求項２】
請求項１記載のＶＨドメインであって、
１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＬ、Ｖ、又はＫから選択され（そして最も好ましくはＶである）、及び
１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＡ又はＰから適切に選択され、及び
４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＡ又はＰから適切に選択され、及び
８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＴ、Ｖ、又はＬから適切に選択され、及び
１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＱ又はＬから適切に選択され、及び
１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＴ、Ｋ、又はＱから適切に選択され、及び
１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＳ、Ｋ、又はＱから適切に選択され、
ここで、（ｉ）１１２位は、Ｋ又はＱであり；又は（ｉｉ）１１０位は、Ｋ又はＱであり、そして１１位は、Ｖであり；又は（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり；又は（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、そして１１０位は、Ｋ又はＱであり；又は（ｖ）１１位は、Ｖであり、そして８９位は、Ｌであり；又は（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである、ＶＨドメイン。
【請求項３】
１１２位におけるアミノ酸残基が、Ｋ又はＱある、請求項１又は２記載のＶＨドメイン。
【請求項４】
１１０位におけるアミノ酸残基が、Ｋ又はＱであり、そして１１位におけるアミノ酸残基が、Ｖである、請求項１又は２記載のＶＨドメイン。
【請求項５】
８９位におけるアミノ酸残基が、Ｔである、請求項１又は２記載のＶＨドメイン。
【請求項６】
８９位におけるアミノ酸残基が、Ｌであり、そして１１０位におけるアミノ酸残基が、Ｋ又はＱである、請求項１又は２記載のＶＨドメイン。
【請求項７】
１１位におけるアミノ酸残基が、Ｖであり、そして８９位におけるアミノ酸残基が、Ｌである、請求項１又は２記載のＶＨドメイン。
【請求項８】
さらに（ｉ）Ｐ１４Ａ置換又はＡ１４Ｐ置換、及び／又は（ｉｉ）Ｑ１０８Ｌ置換を含む、請求項１〜７のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項９】
前記ＶＨドメインが、Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ［同伸長中、（ｉ）ｎが、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば、１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり；そして（ｉｉ）各Ｘが、独立して選択される（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）からなる群より独立して選択される］を含有する、請求項１〜８のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項１０】
（ｉ）配列番号３１７の配列であるか、又は配列番号３１７の配列と１個だけアミノ酸が異なるアミノ酸配列であるＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号３１８の配列であるか、又は配列番号３１８の配列と１又は２個だけアミノ酸が異なるアミノ酸配列である、ＣＤＲ２配列；及び（ｉｉｉ）配列番号３１９の配列であるか、又は配列番号３１９の配列と１又は２個だけアミノ酸が異なるアミノ酸配列であるＣＤＲ３配列、を含む、請求項１〜９のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項１１】
（ｉ）ＣＤＲ１が、配列番号３１７であり；（ｉｉ）ＣＤＲ２が、配列番号３１８であり；そして（ｉｉｉ）ＣＤＲ３が、配列番号３１９である、請求項１０記載のＶＨドメイン。
【請求項１２】
配列番号３１６と少なくとも９０％の配列同一性の度合いを有する、ＴＮＦに対するＶＨドメインであって、
１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＬ、Ｖ、又はＫから選択され（そして最も好ましくはＶである）であり、及び
１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＡ又はＰから適切に選択され、及び
４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＡ又はＰから適切に選択され、及び
８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＴ、Ｖ、又はＬから適切に選択され、及び
１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＱ又はＬから適切に選択され、及び
１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＴ、Ｋ、又はＱから適切に選択され、及び
１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＳ、Ｋ、又はＱから適切に選択され、
ここで、（ｉ）１１２位は、Ｋ又はＱであり；又は（ｉｉ）１１０位は、Ｋ又はＱであり、そして１１位は、Ｖであり；又は（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり；又は（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、そして１１０位は、Ｋ又はＱであり；又は（ｖ）１１位は、Ｖであり、そして８９位は、Ｌであり；又は（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである、ＶＨドメイン。
【請求項１３】
免疫グロブリンシングル可変ドメインである、請求項１〜１２のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項１４】
ＶＨＨドメイン、ヒト化ＶＨＨドメイン、又はラクダＶＨドメインである、請求項１〜１３のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項１５】
配列番号３２０〜３３３のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン。
【請求項１６】
（ｉ）配列番号３３５の配列であるか、又は配列番号３３５の配列と１個だけアミノ酸が異なるアミノ酸配列であるＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号３３６の配列であるか、又は配列番号３３６の配列と１又は２個だけアミノ酸が異なるアミノ酸配列である、ＣＤＲ２配列；及び（ｉｉｉ）配列番号３３７の配列であるか、又は配列番号３３７の配列と１又は２個だけアミノ酸が異なるアミノ酸配列であるＣＤＲ３配列、を含む、請求項１〜９のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項１７】
（ｉ）ＣＤＲ１が配列番号３３５であり；（ｉｉ）ＣＤＲ２が、配列番号３３６であり；そして（ｉｉｉ）ＣＤＲ３が、配列番号３３７である、請求項１６記載のＶＨドメイン。
【請求項１８】
配列番号３３４と少なくとも９０％の配列同一性の度合いを有する、ＴＮＦに対するＶＨドメインであって、
１１位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＬ、Ｖ、又はＫから選択され（そして最も好ましくはＶである）であり、及び
１４位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＡ又はＰから適切に選択され、及び
４１位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＡ又はＰから適切に選択され、及び
８９位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＴ、Ｖ、又はＬから適切に選択され、及び
１０８位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＱ又はＬから適切に選択され、及び
１１０位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＴ、Ｋ、又はＱから適切に選択され、及び
１１２位におけるアミノ酸残基は、好ましくはＳ、Ｋ、又はＱから適切に選択され、
ここで、（ｉ）１１２位は、Ｋ又はＱであり；又は（ｉｉ）１１０位は、Ｋ又はＱであり、そして１１位は、Ｖであり；又は（ｉｉｉ）８９位は、Ｔであり；又は（ｉｖ）８９位は、Ｌであり、そして１１０位は、Ｋ又はＱであり；又は（ｖ）１１位は、Ｖであり、そして８９位は、Ｌであり；又は（ｉ）〜（ｖ）の任意の適切な組み合わせである、ＶＨドメイン。
【請求項１９】
免疫グロブリンシングル可変ドメインである、請求項１６〜１８のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項２０】
ＶＨＨドメイン、ヒト化ＶＨＨドメイン、又はラクダＶＨドメインである、請求項１６〜１９のいずれか一項記載のＶＨドメイン。
【請求項２１】
配列番号３３８〜３５１のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか一項記載のＶＨドメインの少なくとも１つを含む、タンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物又は構築物。
【請求項２３】
ヒト対象中において、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、たとえば少なくとも１０日の半減期（ｔ１／２ベータとして表現される）を有する、請求項２２記載のタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物又は構築物。
【請求項２４】
血清アルブミン結合免疫グロブリンシングル可変ドメインを含む、請求項２２又は２３記載のタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物又は構築物。
【請求項２５】
Ｃ末端伸張（Ｘ）ｎ［同伸張中、（ｉ）ｎが、１〜１０、好ましくは、１〜５、例えば１、２、３、４、又は５（及び好ましくは、１又は２、例えば、１）であり；そして（ｉｉ）各Ｘが、独立して選択される（好ましくは、天然の）アミノ酸残基であり、好ましくはアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、又はイソロイシン（Ｉ）からなる群より独立して選択される］を含有する、請求項２２〜２４のいずれか一項記載のタンパク質、ポリペプチド、又は他の化合物又は構築物。
【請求項２６】
配列番号６４０〜６７５のアミノ酸配列から選択される、アミノ酸配列を有するポリペプチド。
【請求項２７】
請求項１〜２１のいずれか一項記載のＶＨドメイン、又は請求項２２〜２６のいずれか一項記載のタンパク質又はポリペプチドを含む、組成物。
【請求項２８】
医薬組成物である、請求項２７記載の組成物。
【外国語明細書】
2018162297000001.pdf