(57)【要約】【課題】循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中のリスクの判断を補助する方法を提供すること。【解決手段】循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中のリスクの判断を補助する方法は、生体から分離された血液中の低密度リポタンパク質中のトリグリセリド値を測定することを含む。測定された低密度リポタンパク質中のトリグリセリド値が高いことが、循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中のリスクが高いことを示す。【発明の効果】循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中を発症していない段階において、将来的にこれらの疾患を発症するリスクの高低を的確に判断する方法が初めて提供された。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体から分離された血液中のLDL-TG値を測定することを含み、測定されたLDL-TG値が高いことが、循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中のリスクが高いことを示す、循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中のリスクの判断を補助する方法。
【請求項２】
生体から分離された血液中のLDL-TG値を測定することを含み、測定されたLDL-TG値が高いことが、脳卒中を発症している可能性が高いことを示す、脳卒中の診断を補助する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中のリスクの判断を補助する方法、及び脳卒中の診断を補助する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血清・血漿中の脂質の主な成分は、コレステロール、トリグリセリド、リン脂質等であり、これら血中脂質はアポ蛋白と結合し、リポ蛋白として血液中を循環する。これらリポ蛋白は密度の差により、カイロミクロン(CM)、超低密度リポ蛋白（VLDL）、中間密度リポ蛋白（IDL）、低密度リポ蛋白（以下、LDLと称することがある）、高密度リポ蛋白（以下、HDLと称することがある）等に分類される。これらリポ蛋白のうち、LDLは肝臓から各組織へのコレステロールの主たる運搬体であり、LDLコレステロール（以下、LDL-Cと称することがある）の増加は動脈硬化発生と密接な関係があるといわれている。このことから、LDL-Cは、動脈硬化症、虚血性心疾患（冠動脈疾患）等の危険因子と考えられ、LDL-Cの含有量を知ることは、これら疾患の診断・治療および予防において重要な指標とされている。その一方で、血液中のLDL-Cが正常範囲であっても虚血性心疾患等を発症する例も数多く認められ、最近ではLDL粒子の質の変化にも注目するようになってきた。
【０００３】
トリグリセリドを多く含むLDL（以下、TG-rich LDLと称することがある）は、コレステロールの含有量が高い正常なＬＤＬとは性状が異なるリポタンパク質で、肝疾患患者血液中に多く見られ、肝疾患の進行に伴い血液中濃度は増加し、肝疾患の末期では血液中に存在するリポタンパク質の大部分を占めるとの報告がある。また、TG-rich LDLはマクロファージを泡沫化するが、このTG-rich LDLによるマクロファージ泡沫化率と酸化LDLの一種であるマロンジアルデヒド修飾LDLの血清中濃度とが正比例すること、健常者血液中には過酸化トリグリセリドがほとんど検出されないのに対し、肝疾患患者血液中には過酸化トリグリセリドの著しい増加が見られること、などの報告により、LDL中のトリグリセリドは酸化LDLとの関連も深いと考えられている。冠動脈心疾患（Coronary Heart Disease：CHD）を起こしている患者と健常人のLDL中のトリグリセリド（以下、LDL-TGと称することがある）を比較した場合、冠動脈心疾患患者では血中のLDL-TGが増加することが報告されている（非特許文献１）。しかし現在冠動脈疾患を発症していない健常人の中でもLDL-TGが高い人が将来冠動脈心疾患発症のリスクが高くなることを示すエビデンスは存在しない。
【０００４】
一方、脳卒中に関してはLDL-TGとの関連性を示すエビデンスが存在せず、脳卒中を起こしている患者の診断に使用できるかどうか、またはLDL-TG高値の被験者が将来脳卒中を発症するリスクが高まるかどうかは明らかとなっていない。
【０００５】
LDL-TGの定量方法としては、分画分離とトリグリセリド定量の２つの段階操作を組み合わせて求める方法がある。分画分離操作は、超遠心法、電気泳動法、高速液体クロマトグラフィーを利用した方法等があり、定量法としては、たとえば臨床検査の場で用いられている自動分析装置を用いてトリグリセリド測定用試薬により定量を行う方法等がある。この両者を組み合わせて、LDL-TGの定量を行うことができるが、これらはLDLとLDL以外のリポ蛋白とを完全に分離する前処理工程と、測定を行う工程の二段階で行われるため、操作が煩雑で時間がかかる。また分離方法によっては、分離した試料そのものの回収が困難であったり、定量的に回収することが困難であったり、定量的に回収することができる方法でも、作業に熟練が必要であったり、特別な機器が必要であったりする。これらは費用も高額となり、簡便性や経済性において普及しにくい方法である。
【０００６】
これらの問題点を解消する方法で、分画操作を行うことなく自動分析装置等で測定可能な方法としては、第１工程でLDL以外の全てのリポ蛋白中のトリグリセリドを除去した後、第２工程で残ったLDL中のトリグリセリドを測定する方法（特許文献１、２）や、第１工程で（遊離型グリセロールおよび）HDL中のトリグリセリドを除去した後、第２工程でLDL中のトリグリセリドのみを測定する方法（特許文献３）が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００６−１８０７０７号公報
【特許文献２】ＷＯ２０１３/１５７６４２
【特許文献３】再公表２０００−０４３５３７号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Circulation 2004; 109, 2844-2849
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中のリスクの判断を補助する方法を提供することである。さらに本発明の目的は、脳卒中の診断を補助する方法を提供することである。
【００１０】
本願発明者らは鋭意研究の結果、循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中を発症していない健常者において、血中LDL-TG値が高い場合には、将来的に循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中を発症する可能性が高くなることを見出し、また、脳卒中を発症している患者において、血中LDL-TG値が高いことを見出し、本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
すなわち、本発明は、以下のものを提供する。
(1)  生体から分離された血液中のLDL-TG値を測定することを含み、測定されたLDL-TG値が高いことが、循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中のリスクが高いことを示す、循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中のリスクの判断を補助する方法。
(2)  生体から分離された血液中のLDL-TG値を測定することを含み、測定されたLDL-TG値が高いことが、脳卒中を発症している可能性が高いことを示す、脳卒中の診断を補助する方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中を発症していない段階において、将来的にこれらの疾患を発症するリスクの高低を的確に判断する方法が初めて提供された。リスクが高いと判断された場合には、生活習慣を改めたり、薬を服用したりすることにより、リスクの低減に努めることが可能となり、これらの疾患の発症を予防することが可能になる。
【００１３】
また、本発明により、脳卒中を迅速、的確に診断することを補助することが可能になった。したがって、脳卒中発症の初期において、迅速な処置を行うことが可能となり、脳卒中が原因の死亡を防ぐことができる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の方法では、血液中のLDL-TG値を測定する。血液試料としては、血清又は血漿を用いることが、測定を行いやすいので好ましい。
【００１５】
血液中のLDL-TG値を測定する方法自体は周知（例えば上記特許文献１〜３）であり、そのための試薬も市販されているので、市販の試薬を用いて容易に血中LDL-TGを定量することができる。
【００１６】
循環器疾患、冠動脈心疾患又は脳卒中を発症していない健常者において、血中LDL-TG値が高いほど、将来的にこれらの疾患を発症する可能性が高くなる。したがって、測定された血中LDL-TG値に基づいて将来的にこれらの疾患を発症するリスクの判断を補助することができる。血中LDL-TG値が高いほど、将来的にこれらの疾患を発症する可能性が高くなるので、具体的な判定基準は、適宜設定することが可能である。例えば、下記実施例では、血中LDL-TG値に基づき被験者をほぼ４等分し、各群における、15.6年以内の発症率を調査した結果、LDL-TG値が最も低い第１四分位における発症率を基準とすると、第２四分位、第３四分位及び第４四分位の各群における発症率は、高い統計学的有意差をもって統計学的に有意に増大していた。この際の第２四分位の下限値が17.1mg/dLであるので、例えば、閾値を17mg/dLに設定し、17mg/dLを超える場合に高リスクと判定することができる。あるいは、より高いリスクを高リスクとする場合には、例えば、中間値である22.7mg/dL以上を高リスクと判定することもできる。このように、閾値は、検出したいリスクの高さとの兼ね合いで任意に設定することが可能である。例えば、17mg/dL〜40mg/dLの範囲の任意の値、とりわけ25mg/dL〜35mg/dLの範囲の任意の値を閾値として設定することができる。なお、LDL-TG値は、民族等の集団により異なる可能性があるので、その集団内における中間値や平均値、第１四分位と第２四分位の境界の値等を閾値としたり、これらの近傍の値（例えば±20%以内の任意の値等）を閾値として判断することができる。さらに、適宜設定された閾値に比べて高ければ高いほどリスクが高くなるので、具体的な測定値に基づきリスクを判定することもできるし、測定値とイベントが発生する頻度を関連付けることにより、確率を数値で示すことも可能である。
【００１７】
同様に、血中LDL-TG値に基づき、発症中の脳卒中の診断を補助することができ、さらにStrokeが重症か否かを評価・判定することができる。例えばLDL-TGの定量値が20〜40mg/dL、好ましくは30mg/dLを超える場合、将来CVDまたはCHDまたはStrokeを発症するリスクが高くなると判断される。ただし、FCHL診断の基準値については民族等により異なることが考えられるためこの限りではない。また、CHDまたはStrokeを発症するリスクが高いと診断されたヒトの中でもLDL-TG値が40mg/dL、50mg/dLと高くなるに従い、その発症リスクは高まると判定し得る。
【００１８】
以下、本発明を実施例に基づき具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【００１９】
実施例１
米国におけるコホート試験の保存検体（血清）を用いて、LDL-TG濃度を測定した。具体的には、ベースラインの採血時にCHDまたは脳卒中を発症していない9,334例を対象として、LDL-TG濃度を測定した。そして、コホート研究の被験者を15.6年間追跡した結果より、その間のCHD、脳卒中発症（およびこれらを合わせたCVD）を調査し、測定項目との関連性を検証した。
【００２０】
LDL-TGの測定は、LDL-TG“Seiken”（デンカ生研株式会社社製）を使用した。
【００２１】
LDL-TG値を四分位に分け、COX proportional regression model モデルを用いて第1四分位群に対するハザード比を比較した。
【００２２】
結果を表１に示す。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
表１に示すように、LDL-TG値が第1四分位に対し第2四分位、第3四分位、第4四分位ではCHD、脳卒中、CVDのハザード比が上昇し、リスクの増加が認められた。以上の結果はLDL-TG値を求めることにより将来的なCHD、脳卒中（およびこれらを合わせたCVD）発症のリスクの程度を判断できることを示すものである。