(57)【要約】      （修正有）【課題】高濃度の天然材料を含有し、医薬又はサプリメント（好ましくは補助食品）として好適なナノ懸濁液、及びその製造方法の提供。【解決手段】少なくとも１つの天然材料を含むナノ懸濁液を調製するための方法であって、ａ．３２０μｍ未満の粒径（Ｄ１００）を有する少なくとも１つの天然材料を用意する工程；ｂ．前記工程ａ．の前記少なくとも１つの天然材料を溶媒中に分散させる工程；ｃ．前記工程ｂ．の前記分散液を摩砕して粒径（Ｄ９０）を１０００ｎｍ未満（Ｄ９０＜１０００ｎｍ）とする工程とを含む方法。前記天然材料は植物（例：オリーブ葉）、シアノバクテリア（例：スピルリナ）、藻類、菌類（例：アガリクス）等であることが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの天然材料を含むナノ懸濁液を調製するための方法であって、
ａ．３２０μｍ未満の粒径（Ｄ１００）を有する少なくとも１つの天然材料を用意するス
テップと、
ｂ．ステップａ．の前記少なくとも１つの天然材料を溶媒中に分散させるステップと、
ｃ．ステップｂ．の前記分散液を摩砕して粒径（Ｄ９０）を１０００ｎｍ未満（Ｄ９０＜
１０００ｎｍ）とするステップと
を含む方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つの天然材料が植物、シアノバクテリア、藻類および菌類からなる群
から選択され、および／または前記天然材料はチョウセンニンジンおよび／またはセルロ
ース繊維を含まない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つの天然材料が前記天然材料の一部または全体、好ましくは前記天然
材料の全体である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ナノ懸濁液が少なくとも２つの天然材料の混合物を含む、請求項１から３のいずれ
か一項に記載の方法。
【請求項５】
前記天然材料がステップａ．に先立ってステップａ．１で乾燥され、好ましくは凍結乾
燥および／または熱乾燥される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ステップａ．で用意される前記天然材料が、１５％未満（ｗ＜１５％）、好ましくは１
２％未満（ｗ＜１２％）、より好ましくは１０％未満（ｗ＜１０％）、最も好ましくは８
％未満（ｗ＜８％）の含水率ｗを有する、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記天然材料がステップａ．１の前記乾燥の前および／または後に、好ましくはナイフ
ミルで予備粉砕され、任意選択で３２０μｍ未満の粒径（Ｄ１００）に篩分けされる、請
求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記溶媒が水、好ましくは蒸留水、または水とエタノールの混合物である、請求項１か
ら７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ナノ懸濁液が水性ナノ懸濁液、または水とエタノールの混合物に基づくナノ懸濁液
である、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの天然材料がステップｂ．において、前記ナノ懸濁液に用いる溶媒
の全量に基づいて０．５〜２０％（ｗ／ｗ）、好ましくは２〜１０％（ｗ／ｗ）、さらに
好ましくは２〜５％（ｗ／ｗ）、または５〜１０％（ｗ／ｗ）の濃度で分散される、請求
項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記分散ステップｂ．または前記摩砕ステップｃ．が安定剤の添加を含み、好ましくは
前記分散ステップｂ．がリン脂質および／またはポリソルベートの添加を含む、請求項１
から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記分散ステップｂ．が０．５〜２％（ｗ／ｗ）の量のポリソルベートの添加を含み、
および／または前記ポリソルベートが、ポリソルベート８０およびポリソルベート２０か
らなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記分散ステップｂ．が、前記天然材料の全量に基づいて５０〜２００％（ｗ／ｗ）の
量のリン脂質の添加を含み、好ましくは前記リン脂質が９５（重量）％までのホスファチ
ジルコリン、および／または２０〜３０（重量）％のリゾホスファチジルコリンを含む、
請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
ステップｃ．の前記摩砕がウェットボールアジテーターミルにおいて実施される、請求
項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
摩砕ステップｃ．が、ウェットボールミル、好ましくはウェットボールアジテーターミ
ル中で直径０．５〜１．５ｍｍの粉砕ボールを用いる第１の摩砕ステップｃ．１、ウェッ
トボールミル、好ましくはウェットボールアジテーターミル中で直径０．３〜０．４ｍｍ
の粉砕ボールを用いる第２の摩砕ステップｃ．２、およびウェットボールミル、好ましく
はウェットボールアジテーターミル中で直径０．０５〜０．２ｍｍの粉砕ボールを用いる
第３の摩砕ステップｃ．２を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
摩砕ステップｃ．が、ウェットボールミル、好ましくはウェットボールアジテーターミ
ル中で直径０．４〜０．５ｍｍの粉砕ボールを用いる第１の摩砕ステップｃ．１、および
ウェットボールミル、好ましくはウェットボールアジテーターミル中で直径０．０５〜０
．２ｍｍの粉砕ボールを用いる第２の摩砕ステップｃ．２を含む、請求項１４に記載の方
法。
【請求項１７】
摩砕ステップｃ．が、粒径Ｄ９０＜９μｍ、好ましくはＤ９０＜３μｍ、より好ましく
はＤ９０＜８００ｎｍ、最も好ましくはＤ９０＜３００ｎｍの時点での安定剤の添加を含
み、好ましくは前記安定剤が静電的および／または立体安定剤である、請求項１から１６
のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記安定剤が、リン脂質、ポリソルベート、ホモポリマー、ブロックおよびグラフトコ
ポリマー（ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロ
ース（ＨＰＭＣ）およびポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等）等のポリマー、ポロキサマ
ー（たとえばＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７またはポロキサマー１８８）等の
非イオン性トリブロックコポリマー、コポリビニルピロリドン、Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録
商標）、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ（登録商標）、ゼラチン、レシチン（ホスファチド）、アカシ
アガム、コレステロール、トラガカント、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオ
キシエチレンカスター油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ソルビ
タン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンステアレート、モノ
およびジグリセリド、コロイド状二酸化ケイ素、ドデシル硫酸ナトリウム、ケイ酸マグネ
シウムアルミニウム、トリエタノールアミン、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、
グリセロールモノステアレート、セトステアリルアルコール、セトマクロゴール乳化ワッ
クス、短鎖および中鎖アルコール、Ｌａｂｒａｆｉｌ（登録商標）、Ｐｕｒｏｌ−ｏｌｅ
ｉｑｕｅ（登録商標）、プロパン−１，２，３−トリオール、ポリビニルアルコールなら
びにジオクチルスルホコハク酸ナトリウム（ＤＯＳＳ）からなる群から選択され、好まし
くは前記安定剤がポリソルベート８０、ポリソルベート２０、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録
商標）Ｐ４０７およびポロキサマー１８８からなる群から選択される、請求項１１または
１７に記載の方法。
【請求項１９】
摩砕ステップｃ．が終了した後におけるプロパン−１，２，３−トリオール（グリセリ
ン）の添加を含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記安定剤が、前記溶媒の全体積に基づいて３０〜１００％（ｖ／ｖ）の量の、好まし
くは４０％（ｖ／ｖ）または５０％（ｖ／ｖ）の量のグリセリンである、請求項１９に記
載の方法。
【請求項２１】
前記ナノ懸濁液が摩砕ステップｃ．の後に、コロイデーター中で好ましくは酸素の添加
とともにコロイド化ステップｄ．にさらに供され、前記ナノ懸濁液がプロパン−１，２，
３−トリオールを必ずしも含まない、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ナノ懸濁液が２０〜３０ｍｇ／ｌの酸素濃度を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ナノ懸濁液がステップｃ．の後に、および任意選択でステップｄ．の前または後で
、好ましくは無菌フィルターによって、さらに好ましくは４５０ｎｍ未満、より好ましく
は２２０ｎｍ未満の粒径にまで濾過される、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方
法。
【請求項２４】
前記ナノ懸濁液が、香味料、保存料、界面活性剤および浸透促進剤からなる群から選択
される少なくとも１つの化合物を追加的に含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載
の方法。
【請求項２５】
ステップｂ．の前記分散液が、動的光散乱またはレーザー回折アナライザーによって測
定される粒径（Ｄ９０）が５００ｎｍ未満（Ｄ９０＜５００ｎｍ）、好ましくは３００ｎ
ｍ未満（Ｄ９０＜３００ｎｍ）、さらに好ましくは２５０ｎｍ未満（Ｄ９０＜２５０ｎｍ
）、最も好ましくは２００ｎｍ未満（Ｄ９０＜２００ｎｍ）まで摩砕される、請求項１か
ら２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ナノ懸濁液の濃度が、さらなるステップｅ．において、好ましくは乾燥チャンバー
内における溶媒の蒸発によって、前記ナノ懸濁液の全体積に基づいて１０〜４０％（ｗ／
ｗ）、好ましくは１０〜２０％（ｗ／ｗ）の天然材料の濃度まで増大される、請求項１か
ら２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記少なくとも１つの天然材料が、０．４を超える、または０．５を超える、または０
．８を超える、または１を超える、または１．１をも超える溶解度因子をもたらす濃度で
前記ナノ懸濁液中に存在する、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法によって得られるナノ懸濁液。
【請求項２９】
医薬またはサプリメント、好ましくは補助食品の調製における使用のための、請求項２
８に記載のナノ懸濁液。
【請求項３０】
動物、好ましくはヒトへの頬側、局所または口腔内適用のための医薬の調製における使
用のための、請求項２８に記載のナノ懸濁液。
【請求項３１】
動物、好ましくはヒトへの、非経口、髄腔内、静脈内、経皮、または経粘膜適用、好ま
しくは頬側、局所的または口腔内適用のための医薬の調製における使用のための、請求項
２８に記載のナノ懸濁液。
【請求項３２】
癌、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、その他のウ
イルス性疾患、神経皮膚炎もしくは乾癬等の皮膚疾患、または多発性硬化症、血管炎、関
節リウマチもしくは皮膚筋炎等の自己免疫疾患の治療または予防における使用のための、
請求項２８に記載のナノ懸濁液。
【請求項３３】
医薬の調製のための、請求項２８に記載のナノ懸濁液の使用。
【請求項３４】
癌、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、その他のウ
イルス性疾患、神経皮膚炎もしくは乾癬等の皮膚疾患、または多発性硬化症等の自己免疫
疾患の治療または予防のための医薬の調製のための、請求項２８に記載のナノ懸濁液の使
用。
【請求項３５】
癌、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、その他のウ
イルス性疾患、神経皮膚炎もしくは乾癬等の皮膚疾患、または多発性硬化症等の自己免疫
疾患の治療または予防のための方法であって、それを必要とする患者への有効量の請求項
２８に記載のナノ懸濁液の投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、天然材料からのナノ懸濁液を調製するための方法、少なくとも１つの天然材
料を含むナノ懸濁液、および医薬の調製のためのそのようなナノ懸濁液の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
植物、シアノバクテリア、藻類または菌類等の天然材料は、疾患を治療する可能性を有
する活性剤を含んでいる。天然材料からこれらの活性剤を溶出させるために、水性もしく
はアルコールによる浸透または浸軟、錠剤もしくはカプセルの形態の乾燥した粉末抽出物
、または注射用投与製剤等の種々の薬学的調製物が知られている。しかし、これらの種類
の投与には、関連する多くの難点がある。成分の多くは胃腸管内で分解されるか、肝臓で
初回通過代謝を受ける。さらに、集団の一部は丸剤を飲み込むことが困難であるか、そも
そも固体を受け付けることができない。さらに、天然材料の活性剤の多くは水に難溶性で
ある。したがって、多くの天然材料の活性剤の能力および治療効果には限界がある。
【０００３】
米国特許第５，８５８，４１０号明細書は、高圧均一化によって製造される、「ナノ懸
濁液」と呼ばれる薬物調製物に関する。高圧均一化を用いる前に、ナノ懸濁液はパールミ
リングプロセスによって調製されたが、これは加圧均一化に比べて時間を要するプロセス
である。この技術は、とりわけ米国特許第５，２７１，９４４号明細書の主題である。ナ
ノ懸濁液を調製するために、低エネルギーアジテーター、タービンアジテーター、コロイ
ドミル、ソノレーター、オリフィス、メディアミル、ローターステーターミキサーおよび
ソニケーター等の、いくつかの他の方法が用いられてきたが、その成功の程度は様々であ
った。
【０００４】
中国特許出願公開第１４１６８４７号明細書は、濃度２０％から１１．１％（ｗ／ｗ）
の間における高圧均一化によって製造される、ラディックス・パナシス・クインケフォリ
イ（Radix Panacis Quinquefolii）（アメリカニンジン）のナノ懸濁液の調製に関する。
【０００５】
欧州特許出願公開第２２２６１７１号明細書は、最大３０ｎｍの平均繊維径を有するセ
ルロース繊維を得るためのミルストーン型グラインダーによる木質材料（たとえばダグラ
スファー）の分解、およびそれから製造される対応するセルロース繊維複合体に関する。
繊維の平均最小長さは５０μｍである。
【０００６】
しかし、ナノ懸濁液を調製するための先行技術の方法には、大量の天然材料、即ち高濃
度の天然材料を有するナノ懸濁液を天然材料から調製するための方法が含まれていない。
したがって、天然材料からナノ懸濁液を調製するための方法に対するニーズがまだ存在し
ている。このナノ懸濁液は疾患の治療または予防において有利に用いることができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
したがって、本開示の１つの目的は、医薬の調製に用いることができる、天然材料の全
体または一部からのナノ懸濁液を調製するための方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
第１の態様において、本開示は請求項１に開示するナノ懸濁液を調製するための方法を
提供する。
【０００９】
別の態様において、本開示は第１の態様の方法によって得られるナノ懸濁液を提供する
。
【００１０】
別の態様において、本開示は動物、好ましくはヒトへの頬側、局所的もしくは口腔内適
用のための医薬の調製における使用のため、または非経口、髄腔内、静脈内、経皮、また
は経粘膜適用、好ましくは動物、好ましくはヒトへの頬側、局所的もしくは口腔内適用の
ための医薬の調製における使用のための、第１の態様のナノ懸濁液を提供する。
【００１１】
別の態様において、本開示は癌、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節炎、ヒト免疫不全ウイ
ルス（ＨＩＶ）、その他のウイルス性疾患、神経皮膚炎もしくは乾癬等の皮膚疾患、また
は多発性硬化症等の自己免疫疾患の治療または予防における使用のための、第１の態様の
ナノ懸濁液を提供する。
【００１２】
さらに別の態様において、本開示は医薬の調製のための第１の態様のナノ懸濁液の使用
を提供する。
【００１３】
さらに別の態様においては、本開示は、癌、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節炎、ヒト免
疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、その他のウイルス性疾患、神経皮膚炎もしくは乾癬等の皮膚
疾患、または多発性硬化症等の自己免疫疾患の治療または予防のための方法であって、そ
れを必要とする患者への有効量の第１の態様のナノ懸濁液の投与することを含む方法を提
供する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】コロイデーター（colloidator）の概略図である。
【図２】実施例１．１の摩砕に用いた比エネルギーにおけるオリーブ葉のナノ懸濁液の粒径（Ｄ９０）を示す図である。
【図３】実施例１．３のオリーブ葉の抽出液およびナノ懸濁液の乾燥質量を示す図である。
【図４】実施例２．１の摩砕に用いた比エネルギーにおけるスピルリナのナノ懸濁液の粒径（Ｄ９０）を示す図である。
【図５】実施例２．３のスピルリナの抽出液およびナノ懸濁液の乾燥質量を示す図である。
【図６】実施例３．１（実線）および３．２（点線）の摩砕に用いた比エネルギーにおけるアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）（ＡＢＭ）のナノ懸濁液の粒径（Ｄ９０）を示す図である。
【図７】実施例３．１（実線）および３．３（点線）の摩砕に用いた比エネルギーにおけるアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）（ＡＢＭ）のナノ懸濁液の粒径（Ｄ９０）を示す図である。
【図８】実施例３．５のアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）（ＡＢＭ）の抽出液およびナノ懸濁液の乾燥質量を示す図である。
【図９】実施例４．１で調製したアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）の粉末に対する、アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）のナノ懸濁液および様々な抽出液のβ−グルカン含量を示す図である。
【図１０】実施例５．１で調製したシリカのナノ懸濁液に基づく物理的安定化の効果を示す図である。
【図１１】実施例３．１で調製したアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）のナノ懸濁液に基づく、プロパン−１，２，３−トリオールがない場合の化学的安定性の効果を示す図である。
【図１２】実施例３．１で調製したアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）のナノ懸濁液に基づく、２０％（ｖ／ｖ）プロパン−１，２，３−トリオールがある場合の化学的安定性の効果を示す図である。
【図１３】実施例３．１で調製したアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）のナノ懸濁液に基づく、５０％（ｖ／ｖ）プロパン−１，２，３−トリオールがある場合の化学的安定性の効果を示す図である。
【図１４】５％（ｗ／ｗ）アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）のナノ懸濁液（実施例３．１で調製）および５％（ｗ／ｗ）アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）抽出液（実施例３．４で調製）のβ−１，３／１，６−グルカンの微分（differential）重量分率（即ち平均モル質量）を示す図である。
【図１５】非刺激末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、５％（ｗ／ｗ）アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液（実施例３．１で調製）で刺激したＰＢＭＣ、および５％（ｗ／ｗ）アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）抽出液（実施例３．４で調製）で刺激したＰＢＭＣの試料におけるデクチン−１陽性単球の相対量（％で表わす）を示す図である。
【図１６】５％（ｗ／ｗ）アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液（実施例３．１で調製）および５％（ｗ／ｗ）抽出液（実施例３．４で調製）によって惹起されたサイトカインＴＮＦ−αのインビトロ誘導の比較を示す図である。
【図１７】５％（ｗ／ｗ）アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液（実施例３．１で調製）および５％（ｗ／ｗ）抽出液（実施例３．４で調製）によって惹起されたインビトロ誘導におけるサイトカインＩＬ−１０の比較を示す図である。
【図１８】５％（ｗ／ｗ）アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液（実施例３．１で調製）および５％（ｗ／ｗ）抽出液（実施例３．４で調製）によって惹起されたインビトロ誘導におけるサイトカインＩＬ−６の比較を示す図である。
【図１９】５％（ｗ／ｗ）アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液（実施例３．１で調製）による粒子分布を示す図である。
【図２０】５％（ｗ／ｗ）アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液（実施例１２で調製）による粒子分布を示す図である。
【図２１】５％（ｗ／ｗ）アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液（実施例１２で調製）の取り込みによって惹起されたインビボ誘導におけるＣＤ２５活性化Ｔ細胞ＣＤ３＋ＣＤ２５＋を示す図である。
【図２２】カプセル取り込みにおけるアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）粉末によって惹起されたインビボ誘導におけるＣＤ２５活性化Ｔ細胞ＣＤ３＋ＣＤ２５＋を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本開示は少なくとも１つの天然材料を含むナノ懸濁液を調製するための方法であって、
ａ．３２０μｍ未満の粒径（Ｄ１００）を有する少なくとも１つの天然材料を用意するス
テップと、
ｂ．ステップａ．の前記少なくとも１つの天然材料を溶媒中に分散させるステップと、
ｃ．ステップｂ．の分散液を摩砕して粒径（Ｄ９０）を１０００ｎｍ未満（Ｄ９０＜１０
００ｎｍ）とするステップと
を含む方法に関する。
【００１６】
本発明は、以下に説明的に記述するように、本明細書に具体的に開示していない任意の
要素（単数または複数）、限定（単数または複数）なしに好適に実施することができる。
【００１７】
本発明を特定の実施形態に関して、またある図面を参照して記述するが、本発明はそれ
らに限定されず、特許請求の範囲のみによって限定される。これ以降説明する用語は、そ
の他に指示しない限り、一般にその一般的意味において理解されるべきである。
【００１８】
本明細書および特許請求の範囲において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語
を用いる場合、これはその他の要素を排除しない。本発明の目的のため、「からなる（ｃ
ｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」という用語は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の
好ましい実施形態であると考えられる。これ以降、あるグループが少なくともある数の実
施形態を含むと定義された場合、これは好ましくはこれらの実施形態のみからなるグルー
プを開示しているとも理解されるべきである。
【００１９】
単数の名詞、たとえば「ａ」、「ａｎ」または「ｔｈｅ」を指す不定冠詞または定冠詞
を用いる場合、具体的に他に記述しない限り、これはその名詞の複数を含む。
【００２０】
「得られる（ｏｂｔａｉｎａｂｌｅ）」または「定義される（ｄｅｆｉｎａｂｌｅ）」
および「得られた（ｏｂｔａｉｎｅｄ）」または「定義された（ｄｅｆｉｎｅｄ）」とい
う用語は、相互交換可能に用いられる。たとえばこれは、「得られた」または「定義され
た」という用語にはそのような限定された理解が好ましい実施形態として常に含まれると
しても、文脈による別段の明記がない限り、たとえばある実施形態がたとえば「得られた
」という用語にかかる一連のステップによって得られなければならないということを示す
意図はないという意味である。
【００２１】
本明細書において用いる「ナノ懸濁液」は、たとえば水、エタノール、またはそれらの
混合物等の溶媒中のナノ粒子の懸濁液を指す。ナノ懸濁液は追加的に安定剤、またはその
他の化合物を含んでもよい。ナノ懸濁液は溶媒中に懸濁したナノ粒子の形態で水難溶性化
合物を含む。そのようなナノ懸濁液は、溶媒、脂質媒体、またはその両方に難溶性の化合
物の「溶解度」（または分散性）を高めるために用いられる。「溶解度」が増大した結果
として、難溶性化合物の血漿中濃度が高くなり、前記化合物の最大血漿中濃度への到達が
速くなる。本開示において「懸濁液」および「分散液」という用語は、溶媒中の固体粒子
を指し、相互交換可能に用いられる。
【００２２】
本明細書において用いる「ナノ粒子」は１０００ｎｍ未満の粒径を有する粒子である。
溶媒中の複合ナノ粒子は一次粒子であってもよく、小粒子から構成される凝集した粒子で
あってもよい。ナノ懸濁液中の粒径はレーザー回折アナライザー（たとえばＢｅｃｋｍａ
ｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＬＳ１３３２０またはＨｏｒｉｂａ  ＬＡ−９５０）によって測定
することができる。
【００２３】
本開示において用いる天然材料の「溶解度」または「溶解度限界」という用語は、溶媒
中に溶解できる天然材料の最大量に関する。本開示の目的のため、特定の溶媒中における
天然材料の溶解度は以下のように決定することができる。粒径Ｄ９０が３２０μｍ未満の
乾燥した天然材料を用いこれを最初の量として、５％または１０％（ｗ／ｗ）の濃度で、
蒸留水等の溶媒中の前記天然材料の懸濁液を調製する。前記懸濁液の調製のため、天然材
料を６０分間、３０℃の温度で溶媒中に懸濁する。得られた懸濁液を次いで１５００ｇで
３０分間遠心分離し、上清から沈殿を分離して、対照とするために秤量する。上清を６０
℃で２４時間乾燥し、上清中に溶解した天然材料（乾燥ベース）を得て、秤量する。溶解
度は以下の式：
溶解度（％）＝上清の質量（乾燥ベース）×１００／最初の天然材料粉末の質量（乾燥ベ
ース）
を用いて計算される。
【００２４】
本開示において用いる「溶解度因子」という用語は、ナノ懸濁液を調製するために用い
た溶媒中における天然材料の溶解度または溶解度限界に対する、本開示によるナノ懸濁液
中の前記天然材料の量に関する。溶解度因子はナノ懸濁液中に存在する天然材料の量（％
（ｗ／ｗ）で表わす）を、用いた溶媒中における前記天然材料の溶解度で割った値である
。言い換えれば、溶解度因子を１とすれば、前記溶媒中における天然材料の溶解度限界に
到達する。溶解度因子が１未満であればナノ懸濁液中の天然材料の量は溶解度限界未満で
あり、１を超える溶解度因子は前記溶媒に溶解できる天然材料の量を超える量の天然材料
がナノ懸濁液中に存在していること、即ちナノ懸濁液中の天然材料の濃度がその溶解度限
界を超えていることを示す。
【００２５】
本開示において用いる「セルロース繊維」という用語は、数百から１万を超えるβ−１
，４−Ｄ−グルコース単位の直鎖を有する多糖からなり、１μｍを超える繊維長を有する
植物繊維（特に木材繊維）に関する。したがってセルロース繊維は直径１μｍ未満の球状
または半軸１μｍ未満の楕円状の幾何形状を有するβ−１，３／１，６−グルカンからな
っていない。
【００２６】
好ましい実施形態においては、少なくとも１つの天然材料は、植物、好ましくはチョウ
センニンジンおよび／またはセルロース繊維を除く植物、シアノバクテリア、藻類および
菌類からなる群から選択される。別の実施形態においては、天然材料はチョウセンニンジ
ンおよび／またはセルロース繊維を含まない。本明細書において用いる植物はイチョウ綱
（イチョウ）、グネツム綱、マツ綱（たとえば針葉樹）、および被子植物（顕花植物）を
含んでもよい種子植物を含んでよく、これらはモクレン亜綱、ユリ亜綱（たとえばパイナ
ップル）、キントラノオ目（たとえばセイヨウオトギリソウ、柳皮）、バラ亜綱（たとえ
ばイラクサ）、アブラナ目（たとえばカリーカパパイヤ）、マメ目（たとえばゲンゲ）、
シソ目（たとえばオリーブの木およびオリーブ葉）、マツムシソウ目（たとえばニワトコ
）等の亜綱をさらに含んでよい。シアノバクテリアはたとえばスピルリナを含んでよい。
藻類は紅色植物亜界（たとえば紅藻類、褐藻類および珪藻類）、緑藻類および緑色植物亜
界を含んでよい。菌類はアクラシオ亜門、変形菌類、不等毛植物亜門、および真菌門（ア
ガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）等のピラー菌類）を含んでよい
。
【００２７】
別の好ましい実施形態においては、天然材料はイチョウ、パイナップル、セイヨウオト
ギリソウ、柳皮、イラクサ、カリーカパパイヤ、ゲンゲ、オリーブ葉、ニワトコ、スピル
リナ、クロレラ藻類、紅藻類、褐藻類ならびに珪藻緑色藻類および緑色植物亜門、アガリ
クス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）、ボスウェリア、イワベンケイ、キ
ナ皮、トコン、ヒヨドリバナ、ブリオニアアニル、ナンバンコマツナギ（anil root）、
クルクマ、デビルズクロー、キャッツクロー、ゴジアオイ、アマニ、オオアザミ（ホーリ
ーシスル）、クサノオウ（セランダイン）、カプランペラルゴニア、エキナセア、ブドウ
の種である。
【００２８】
別の好ましい実施形態においては、天然材料はチョウセンニンジンおよび／またはセル
ロース繊維を含まない。
【００２９】
別の好ましい実施形態においては、少なくとも１つの天然材料は前記天然材料の一部ま
たは全体、好ましくは前記天然材料の全体である。本開示の方法は任意の天然材料につい
て全体として、またはその一部として用いることができる。例として、根、茎、葉、果実
、花、その他の植物の一部のみが、天然材料の種類に応じて用いることができる。
【００３０】
別の好ましい実施形態においては、ナノ懸濁液は少なくとも２つの天然材料の混合物を
含む。したがって、ナノ懸濁液は単一の天然材料、または２つ以上の天然材料、即ち少な
くとも２つの天然材料の混合物を含むナノ懸濁液であってよい。ナノ懸濁液はその上、同
じ天然材料の異なる部分、たとえば根の部分および花の部分を含んでよく、および／また
はナノ懸濁液は異なる種類の天然材料、たとえば異なる植物または植物およびシアノバク
テリアを含んでもよい。
【００３１】
別の好ましい実施形態においては、ナノ懸濁液の調製において用いる天然材料はステッ
プａ．に先立ってステップａ．１で乾燥され、好ましくは冷凍乾燥および／または熱乾燥
される。
【００３２】
別の好ましい実施形態においては、ナノ懸濁液の調製に用いられ、上で開示したように
本方法のステップａ．で用意される天然材料は、１５％未満（ｗ＜１５％）、好ましくは
１２％未満（ｗ＜１２％）、より好ましくは１０％未満（ｗ＜１０％）、最も好ましくは
８％未満（ｗ＜８％）の含水率ｗを有する。
【００３３】
ナノ懸濁液の調製のために用いる天然材料の含水率は低いことが好ましい。本開示にお
いて用いる「含水率」または「残存水分」という用語は、以下の式：
残存水分含量［％］ｗ＝（ｍｒｅｓ−ｍｄｒｙ）／（ｍｗｅｔ−ｍｄｒｙ）×１００％
を用いて、含水または湿潤した材料の質量ｍｗｅｔおよび水を含まない乾燥した材料の質
量ｍｄｒｙならびに残存水分を含んだ材料の質量ｍｒｅｓから計算される天然材料等の材
料の含水率ｗを指す。
【００３４】
ナノ懸濁液を調製する際には、そのような低い含水率が有利であり得る。さらに、天然
材料の粒径（Ｄ１００）を３２０μｍ未満にする際にもこれは有益であり得る。天然材料
の含水率を低減させるためには当技術分野で公知の様々な方法があり、これらの方法のい
ずれも本開示と組み合わせて用いることができる。例として、天然材料は凍結乾燥（即ち
冷凍乾燥）または熱乾燥することができる。乾燥ステップの前に、天然材料の種類に応じ
て天然材料を清浄化、皮むき、および／または芯抜きすることが有利であり得る。以下に
、乾燥のための２つの例示的な方法を示す。
【００３５】
天然材料は凍結乾燥機を用いて、たとえば４ステップのプロセスで以下のようにして凍
結乾燥することができる。
・天然材料を天然材料の大きさおよび構造に応じてナイフで約１〜２ｃｍの小片に切断す
る。
・１〜２ｃｍの小片をナイフミル（たとえばＲｅｔｓｃｈ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙの
Ｇｒｉｎｄｏｍｉｘ（登録商標）２００または３００）に入れ、以下のパラメーターで粉
砕する。２０００ｒｐｍで１０秒、続いて５０００ｒｐｍで１０秒、最後に１０，０００
ｒｐｍで２０秒。
・得られたパルプを−１８℃で４時間凍結し、さらに凍結乾燥機に入れ、製品温度が２０
℃になるまで凍結乾燥する。
【００３６】
上記冷凍乾燥プロセスは例示的なものであり、当業者は天然材料の種類に応じてプロセ
スを適合させ得ることが理解される。例として、シアノバクテリアは前もって粉砕または
切断せずに直接冷凍乾燥してよい。同様に、ナイフミル中で小片を切断するパラメーター
も必要に応じて調整してよい。
【００３７】
天然材料は、残存水分含量が８％もの低さになるまで、天然材料中の化合物の熱感受性
に応じて、たとえば３６〜４５℃の温度で、空気中またはオーブン中で乾燥することもで
きる。
【００３８】
別の好ましい実施形態においては、ナノ懸濁液の調製において用いられ、上で開示した
方法のステップａ．で用意される天然材料は、ステップａ．１の乾燥の前および／または
後に、好ましくはナイフミルで予備粉砕され、任意選択で３２０μｍ未満の粒径（Ｄ１０
０）に篩分けされる。天然材料のそのような粉砕は天然材料をそのまま、即ち前もって切
断または乾燥せずに、行なうことができる。あるいは、天然材料を上述のように小片に切
断および／または乾燥してもよい。さらに、３２０μｍ未満の粒径（Ｄ１００）を有する
天然材料の粉末を得るために天然材料を篩分けしてもよい。
【００３９】
冷凍乾燥された天然材料の予備粉砕および篩分けの例示的な方法は下記の通りである。
・冷凍乾燥された粗な天然材料粉末をナイフミル（たとえばＲｅｔｓｃｈ  ＧｍｂＨ、Ｇ
ｅｒｍａｎｙのＧｒｉｎｄｏｍｉｘ（登録商標）２００または３００）に入れ、以下のパ
ラメーターで粉砕する。２０００ｒｐｍで１０秒、続いて５０００ｒｐｍで１０秒、最後
に１０，０００ｒｐｍで２０秒。
・ナイフミルプロセスからの粗な天然材料粉末を、メッシュサイズ３２０μｍの篩で篩分
けする。
・３２０μｍより大きな天然材料粒子を再びナイフミルに入れてさらに粉砕し、続いて３
２０μｍの篩で篩分けする。第２または第３の粉砕ステップの残留物は廃棄してよい。
【００４０】
同様に、熱乾燥された天然材料の予備粉砕および篩分けの例示的な方法は下記の通りで
ある。
・熱乾燥された天然材料をナイフで約１〜２ｃｍの小片に切断する。
・１〜２ｃｍの小片をナイフミル（たとえばＲｅｔｓｃｈ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙの
Ｇｒｉｎｄｏｍｉｘ（登録商標）２００または３００）に入れ、以下のパラメーターで粉
砕する。２０００ｒｐｍで１０秒、続いて５０００ｒｐｍで１０秒、最後に１０，０００
ｒｐｍで２０秒。
・ナイフミルプロセスからの粗な天然材料粉末を、メッシュサイズ３２０μｍの篩で篩分
けする。
・３２０μｍより大きな天然材料粒子を再びナイフミルに入れてさらに粉砕し、続いて３
２０μｍの篩で篩分けする。第２または第３の粉砕ステップの残留物は廃棄してよい。
【００４１】
ステップａ．で得られる３２０μｍ未満の粒径（Ｄ１００）を有する少なくとも１つの
天然材料を、本開示の方法に従ってステップｂ．で溶媒に分散させる。
【００４２】
別の好ましい実施形態においては、溶媒は水、好ましくは蒸留水、または水とエタノー
ルの混合物である。
【００４３】
溶媒として用いる水は通常水、精製水、蒸留水、２回もしくは３回蒸留水、または脱ミ
ネラル水等、任意の種類の水であってよい。同様に、用いるエタノールも通常のエタノー
ル、または水とエタノールの混合物であってよい。したがって、得られるナノ懸濁液は水
性ナノ懸濁液、またはエタノール中のナノ懸濁液、または水とエタノールの混合物もしく
は任意のその他の溶媒もしくは溶媒の混合物に基づくナノ懸濁液であってよい。本明細書
で用いる「溶媒」という用語は、単一の溶媒または溶媒の混合物を指す。好ましくは、ナ
ノ懸濁液が医薬として用いられる場合には、溶媒は薬学的に許容される溶媒である。
【００４４】
別の好ましい実施形態においては、ナノ懸濁液は水性ナノ懸濁液、または水とエタノー
ルの混合物に基づくナノ懸濁液である。
【００４５】
ステップｂ．において天然材料を溶媒中に分散させる際には、天然材料は好ましくは用
いる溶媒の全量に基づいて０．５〜２０％（ｗ／ｗ）、好ましくは２〜１０％（ｗ／ｗ）
、さらに好ましくは２〜５％（ｗ／ｗ）、または５〜１０％（ｗ／ｗ）の範囲の濃度を有
する。本出願の別の好ましい実施形態においては、天然材料は好ましくは用いる溶媒の全
量に基づいて０．５〜７０％（ｗ／ｗ）、好ましくは４０〜７０％（ｗ／ｗ）、または１
０〜４０％（ｗ／ｗ）の範囲の濃度を有する。天然材料の％（ｗ／ｗ）で表わした濃度は
、ナノ懸濁液を調製するために用いる溶媒の全量に基づいている。例として、溶媒１００
０ｇに対して天然材料の粉末５０ｇを用いて、５％（ｗ／ｗ）が調製される。前記濃度範
囲内で、懸濁液のナノ懸濁液へのさらなる摩砕が容易になる。分散液は、溶媒と天然材料
を、たとえば磁気攪拌器または任意のその他の回転デバイスを用いて好ましくは１０００
ｒｐｍまでの速度で撹拌することによって調製できる。
【００４６】
したがって、別の好ましい実施形態においては、少なくとも１つの天然材料はステップ
ｂ．において、ナノ懸濁液に用いる溶媒の全量に基づいて０．５〜２０％（ｗ／ｗ）、好
ましくは２〜１０％（ｗ／ｗ）、さらに好ましくは２〜５％（ｗ／ｗ）または５〜１０％
（ｗ／ｗ）の濃度で分散される。
【００４７】
特に好ましい実施形態においては、少なくとも１つの天然材料は、０．４を超える、ま
たは０．５を超える、または０．８を超える、または１を超える、または１．１をも超え
る溶解度因子をもたらす濃度でナノ懸濁液中に存在する。
【００４８】
ナノ懸濁液は安定剤の使用によって安定化されることが好ましい。そのような安定剤は
、リン脂質、ポリソルベート、プロパン−１，２，３−トリオール（グリセリン）、静電
的もしくは立体安定剤および界面活性剤からなる群から選択され得る。そのような安定剤
はステップｂ．において、または摩砕ステップｃ．の間に、または摩砕ステップｃ．の後
でも、分散液に添加され得る。リン脂質、非イオン性界面活性剤および乳化剤、たとえば
ポリソルベート等のいくつかの安定剤は、好ましくは分散ステップｂ．において好ましく
はナノ懸濁液に添加される。ポロキサマー等の非イオン性トリブロックコポリマー等のそ
の他の安定剤は、好ましくは摩砕ステップｃ．の間に添加される。プロパン−１，２，３
−トリオールまたはジオクチルスルホコハク酸ナトリウム（ＤＯＳＳ）等のさらにその他
の安定剤は、好ましくは摩砕ステップｃ．の後に添加される。分散ステップｂ．において
安定剤を添加する場合、特に安定剤がリン脂質である場合には、天然材料の全量に基づい
て５０％〜２００％（ｗ／ｗ）までの量で安定剤を添加することが好ましい。安定剤がポ
リソルベート等の非イオン性界面活性剤または乳化剤である場合には、これは溶媒の量に
基づいて好ましくは１．５％（ｗ／ｗ）までの量で添加される。摩砕ステップｃ．の間に
、２〜１０μｍまでの範囲の特定の粒径（Ｄ９０）に達した場合、または摩砕ステップｃ
．の間に粒径（Ｄ９０）が、たとえば摩砕時間１時間の間に少なくとも４％、さらに低減
しない場合、または摩砕ステップｃ．の間に粒径（Ｄ９０）が、摩砕時間１時間の間に少
なくとも１０％増大した場合には、ポロキサマー等の非イオン性トリブロックコポリマー
等の安定剤を添加することが好ましい。
【００４９】
好ましい実施形態においては、安定剤は、リン脂質、ポリソルベート、ホモポリマー、
ブロックおよびグラフトコポリマー（ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロ
キシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）およびポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等）
等のポリマー、ポロキサマー（たとえばＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７または
ポロキサマー１８８）等の非イオン性トリブロックコポリマー、コポリビニルピロリドン
、Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録商標）、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ（登録商標）、ゼラチン、レシチン
（ホスファチド）、アカシアガム、コレステロール、トラガカント、ポリオキシエチレン
アルキルエーテル、ポリオキシエチレンカスター油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタ
ン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、ポリオキシエ
チレンステアレート、モノおよびジグリセリド、コロイド状二酸化ケイ素、ドデシル硫酸
ナトリウム、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、トリエタノールアミン、ステアリン酸、
ステアリン酸カルシウム、グリセロールモノステアレート、セトステアリルアルコール、
セトマクロゴール乳化ワックス、短鎖および中鎖アルコール、Ｌａｂｒａｆｉｌ（登録商
標）、Ｐｕｒｏｌ−ｏｌｅｉｑｕｅ（登録商標）、プロパン−１，２，３−トリオール、
ポリビニルアルコールならびにジオクチルスルホコハク酸ナトリウム（ＤＯＳＳ）からな
る群から選択される。ポリソルベートの好ましい例はポリソルベート８０およびポリソル
ベート２０である。安定剤は、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、Ｋｏｌｌｉｐ
ｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７およびポロキサマー１８８からなる群から選択されることが
さらに好ましい。特に好ましい実施形態においては、安定剤はＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録
商標）Ｐ４０７またはＴｗｅｅｎ（登録商標）８０等のポリソルベート８０である。別の
好ましい実施形態においては、分散ステップｂ．は、リン脂質およびポリソルベートから
なる群から選択される安定剤の添加を含む。
【００５０】
別の好ましい実施形態においては、分散ステップｂ．は、ナノ懸濁液において用いる溶
媒の全量に基づいて０．５〜２％（ｗ／ｗ）の量のポリソルベートの添加を含み、および
／またはポリソルベートは、ポリソルベート８０およびポリソルベート２０からなる群か
ら選択される。
【００５１】
別の好ましい実施形態においては、分散ステップｂ．は、天然材料の量に基づいて１０
０％〜２００％（ｗ／ｗ）の量、好ましくは１３０％〜１７０％（ｗ／ｗ）の量のリン脂
質の添加を含み、好ましくはリン脂質は９５（重量）％までのホスファチジルコリン、お
よび２０〜３０（重量）％のリゾホスファチジルコリンを含む。リン脂質は２０〜９５％
のホスファチジルコリン、好ましくは２０〜７５％のホスファチジルコリン、および２０
〜３０％のリゾホスファチジルコリン（たとえばＬｉｐｏｉｄ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎ
ｙのＬｉｐｏｉｄ  Ｐ１００、Ｐ７５、Ｒ  ＬＰＣ２０）を含むことが好ましい。天然材
料の全量に基づいてリン脂質を１００〜３００％（ｗ／ｗ）、より好ましくは５０〜２０
０％（ｗ／ｗ）の量で添加することも好ましい。
【００５２】
安定剤として立体安定剤を用いる場合には、立体安定剤はナノ粒子の表面に吸着され、
または付着して、大きく濃密な立体バリアとなり、これがファンデルワールス引力に打ち
勝つことにより、立体安定剤は凝集、集塊、またはさらには粒子の融合を低減する。立体
安定剤は好ましくは薬学的に許容される賦形剤であり、ヒドロキシプロピルセルロース（
ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）およびポリビニルピロリド
ン（ＰＶＰ）等のホモポリマー、ブロックおよびグラフトコポリマー等のポリマーから選
択され得る。特に好ましい立体安定剤は非イオン性トリブロックコポリマーＫｏｌｌｉｐ
ｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７である。Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７は２つの
親水性ポリオキシエチレン鎖（ポリ（エチレンオキシド））に挟まれた中央の疎水性ポリ
オキシプロピレン鎖（ポリ（プロピレンオキシド））から構成される。立体安定剤は摩砕
ステップｃ．の間に添加することが有利であり得る。したがって、立体安定剤を摩砕ステ
ップｃ．の間に、さらに好ましくは粒子が５μｍ未満の粒径（Ｄ９０）を有する時点で、
０．５〜２％（ｗ／ｗ）の量で添加することが好ましい。
【００５３】
本開示のプロセスにおいて用いる別の好ましい安定剤はグリセリン（プロパン−１，２
，３−トリオール）である。前記グリセリンは好ましくは摩砕ステップｃ．の後に、さら
に好ましくは溶媒の全体積に基づいて３０〜１００％（ｖ／ｖ）または４０〜１００％（
ｖ／ｖ）の量で、さらにより好ましくは４０％（ｖ／ｖ）または５０％（ｖ／ｖ）の量で
添加される。
【００５４】
グリセリンに加えて、またはその代替として、静電的安定剤としてのジオクチルスルホ
コハク酸ナトリウム（ＤＯＳＳ）を、好ましくは溶媒の全量に基づいて０．５〜２％（ｗ
／ｗ）の量で用いてもよく、好ましくは摩砕ステップｃ．の後に添加してもよい。
【００５５】
摩砕ステップｃ．の間に、３２０μｍ未満の粒径で天然材料を含む分散液は、１０００
ｎｍ未満の粒径（Ｄ９０）まで摩砕される。これは任意の好適な摩砕機によって達成する
ことができる。
【００５６】
好ましい実施形態においては、前記摩砕ステップｃ．はウェットボールミル、好ましく
はウェットボールアジテーターミルにおいて実施される。
【００５７】
さらに好ましい実施形態においては、前記摩砕ステップｃ．は、ウェットボールミル、
好ましくはウェットボールアジテーターミル中で直径０．５〜１．５ｍｍの粉砕ボールを
用いる第１の摩砕ステップｃ．１、ウェットボールミル、好ましくはウェットボールアジ
テーターミル中で直径０．３〜０．４ｍｍの粉砕ボールを用いる第２の摩砕ステップｃ．
２、およびウェットボールミル、好ましくはウェットボールアジテーターミル中で直径０
．０５〜０．２ｍｍの粉砕ボールを用いる第３の摩砕ステップｃ．２を含む。第２の摩砕
ステップｃ．２は粒径（Ｄ９０）が約３〜６μｍに達するまで行ない、第３の摩砕ステッ
プｃ．３は粒径（Ｄ９０）が約８０〜５００ｎｍ、好ましくは８０〜３００ｎｍに達する
まで行なうことが好ましい。天然材料粉末の開始時の粒径（Ｄ１００）が３２０μｍ未満
である別の好ましい実施形態においては、前記摩砕ステップｃ．は、ウェットボールミル
、好ましくはウェットボールアジテーターミル中で直径０．４〜０．５ｍｍの粉砕ボール
を用いる第１の摩砕ステップｃ．１、およびウェットボールミル、好ましくはウェットボ
ールアジテーターミル中で直径０．０５〜０．２ｍｍの粉砕ボールを用いる第２の摩砕ス
テップｃ．２を含む。第１の摩砕ステップｃ．１は粒径（Ｄ９０）が約２〜６μｍに達す
るまで行ない、第２の摩砕ステップｃ．２は粒径（Ｄ９０）が約８０〜５００ｎｍ、好ま
しくは８０〜３００ｎｍに達するまで行なうことが好ましい。ミルチャンバー内の温度は
２５〜３６℃、リム速度は１０〜１４ｍ／ｓ、好ましくは１１〜１４ｍ／ｓとすることが
さらに好ましい。
【００５８】
したがって、好ましい実施形態においては、ステップｂ．の分散液はステップｃ．にお
いて、動的光散乱またはレーザー回折アナライザーによって測定される粒径（Ｄ９０）が
５００ｎｍ未満（Ｄ９０＜５００ｎｍ）、好ましくは３００ｎｍ未満（Ｄ９０＜３００ｎ
ｍ）、さらに好ましくは２５０ｎｍ未満（Ｄ９０＜２５０ｎｍ）、最も好ましくは２００
ｎｍ未満（Ｄ９０＜２００ｎｍ）まで摩砕される。
【００５９】
したがって、得られるナノ懸濁液は動的光散乱またはレーザー回折アナライザーによっ
て測定される５００ｎｍ未満（Ｄ９０＜５００ｎｍ）、好ましくは３００ｎｍ未満（Ｄ９
０＜３００ｎｍ）、さらに好ましくは２５０ｎｍ未満（Ｄ９０＜２５０ｎｍ）、最も好ま
しくは２００ｎｍ未満（Ｄ９０＜２００ｎｍ）の粒径（Ｄ９０）および４０ｎｍを超える
粒径（Ｄ９０＞４０ｎｍ）を有し得る。
【００６０】
得られるナノ懸濁液は単峰性懸濁液としての最良の安定性結果によってさらに特徴付け
られ、単一モードは３００ｎｍ未満、好ましくは２００ｎｍ未満の平均値を有する。その
ような単峰性懸濁液は、懸濁液を濾過することによって得ることができる。フィルターに
よって粒径は４５０ｎｍ未満、好ましくは３００ｎｍ未満、さらに好ましくは２２０ｎｍ
未満の粒径（Ｄ９０）に低減することができる。フィルターデバイスとしては任意の最新
技術のデバイス、たとえばＳａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｔｅｄｉｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈフィルタ
ーを用いることができる。ナノ懸濁液が４５０ｎｍにまで濾過されれば、そのような濾過
は粒径分布の標準偏差をさらにより狭くすることができ、それが安定性に貢献する。代替
として、単峰性懸濁液は対応するプロセス手段によっても達成することができる。例とし
て、実施例１２の懸濁液は濾過なしの単峰性懸濁液である。
【００６１】
摩砕ステップｃ．の間に、ある比エネルギーがナノ懸濁液に加えられる。比エネルギー
は［ｋＷ］で表わしたウェットボールアジテーターミルの正味のエネルギー（全エネルギ
ーからアイドリングドライブパワーを引いたもの）と［ｈ］で表した摩砕時間の積を［ｔ
］で表わしたナノ懸濁液の全量（［ｔ］で表わした、溶媒、天然材料粉末および全ての安
定剤の量）で割った値である。
【００６２】
上で開示した安定剤を用いる化学的安定化の代替として、ナノ懸濁液は図１に示すコロ
イデーター（たとえばＬｅｖｉｇａｔａ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙの改良型Ｋａｍｅｎ
ａ）を用いて物理的に安定化することもできる。このプロセスの間、ナノ懸濁液は容器（
１）の中で、ローター（４）および支持ローター（５）の回転によって凹形シリンダー（
３）の中に、バッフルプレートを介してその上端に、殆ど乱流のない形で導かれる。内部
の凹形シリンダー（３）の中で、下向きのナノ懸濁液の流れ（７）は、凹形シリンダーの
下端の出口におけるローター（４、５）によって撹拌された、逆回転する上向きのナノ懸
濁液の流れと衝突する。ナノ懸濁液の下向きの流れとナノ懸濁液の反対向きの回転流との
衝突において、ナノ粒子は摩擦によって帯電する。この静電気または粒子電荷によって、
ナノ粒子の分離、したがって物理的安定化引き起こされ得る。その後、ナノ懸濁液は外側
の双曲線形のシリンダーを反対方向に上昇する（６）。こうしてナノ懸濁液は上向きおよ
び下向きに整列した動きに固定される。ここで発生した熱エネルギーは容器（１）の二重
壁（２）内に組み込まれた水冷装置によって伝導され、冷媒は二重壁に供給され、二重壁
から除かれる（８ａ、８ｂ、９ａ、９ｂ）。
【００６３】
したがって、好ましい実施形態においては、ナノ懸濁液は摩砕ステップｃ．の後に、コ
ロイデーター中で好ましくは酸素の添加とともにコロイド化ステップｄ．にさらに供され
る。そのようなコロイド化は、さらには安定剤の使用の代わりになることができ、さらな
る好ましい実施形態においては、ナノ懸濁液は安定剤を一切含まず、特にプロパン−１，
２，３−トリオールを一切含まない。
【００６４】
上に詳述したように、本開示のナノ懸濁液は化学的または物理的に安定化することがで
きる。
【００６５】
本開示のナノ懸濁液はさらに酸素（Ｏ２）を含んでよい。本開示については、水に多く
の酸素が含有されていれば、酸素は水に物理的または化学的に溶解する等、水に溶解する
ことができ、またはナノ粒子のいずれにも付着することもできる。ナノ懸濁液に過剰量の
酸素を含有させるために、上記のコロイデーターを用いることができる。本開示の例示的
な方法において、コロイド化プロセスの開始の約１分後に２０〜３０ｍｇ／リットルの酸
素がナノ懸濁液中に含まれるまで、酸素を添加してよい。この種のプロセスによって、酸
素が圧力によって溶液中に注入される圧力法とは対照的に、いわゆる吸入プロセスによっ
て酸素がナノ懸濁液に添加される。酸素富化デバイスとして、必ずしもこれに制限するも
のではないが、Ｌｅｖｉｇａｔａ  Ｌｔｄ．のウルトラコロイデーターを用いることがで
きる。
【００６６】
本開示の好ましい実施形態においては、ナノ懸濁液は２０〜３０ｍｇ／ｌの酸素濃度を
有する。
【００６７】
少なくとも１つの天然材料および任意選択の酸素に加えて、本開示のナノ懸濁液は、香
味料、保存料、界面活性剤および浸透促進剤、たとえばリボフラビンまたはアスコルビン
酸からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含んでもよい。
【００６８】
ナノ懸濁液は任意選択でステップｃ．の後の濾過ステップで、および任意選択でステッ
プｄ．の前または後で、濾過してもよい。そのような濾過によって、ナノ懸濁液中のナノ
粒子の大きさを必要に応じてさらに適合させることができる。例として、ナノ懸濁液の無
菌濾過が挙げられる。そのような無菌フィルターによって粒径は４５０ｎｍ未満、好まし
くは２２０ｎｍ未満の粒径（Ｄ９０）に低減することができる。フィルターデバイスとし
ては標準のＭｉｌｉｐｏｒｅフィルター等の任意の最新技術のデバイスを用いることがで
きる。ナノ懸濁液が２２０ｎｍにまで濾過されれば、そのような濾過によって粒径分布の
標準偏差がさらにより狭くなり、安定性に寄与することができる。
【００６９】
本開示の好ましい実施形態においては、ナノ懸濁液はステップｃ．の後に、および任意
選択でステップｄ．の前または後で、好ましくは無菌フィルターによって、さらに好まし
くは４５０ｎｍ未満、より好ましくは２２０ｎｍ未満の粒径にまで濾過される。
【００７０】
ナノ懸濁液の使用の前に、ナノ懸濁液の濃度は必要に応じて適合させることができる。
一方、ナノ懸濁液はさらなる溶媒の添加によって希釈してもよい。他方、ナノ懸濁液の濃
度はさらなるステップｅ．において増大させてもよい。濃度の増大は、好ましくは乾燥チ
ャンバー内における溶媒の蒸発によって、さらに好ましくは４０℃を超えない温度で、ま
た任意選択で減圧下で達成することができる。次いで最終のナノ懸濁液は好ましくはナノ
懸濁液中に存在する溶媒の全量に基づいて１０〜４０％（ｗ／ｗ）、好ましくは１０〜２
０％（ｗ／ｗ）の範囲の天然材料の濃度を有する。
【００７１】
したがって、好ましい実施形態においては、ナノ懸濁液の濃度はさらなるステップｅ．
において、好ましくは乾燥チャンバー内における溶媒の蒸発によって、ナノ懸濁液中に存
在する溶媒の全量に基づいて１０〜４０％（ｗ／ｗ）、好ましくは１０〜２０％（ｗ／ｗ
）の天然材料の濃度まで増大される。
【００７２】
上述の調製方法から結論され、実験の部における実施例によって支持されるように、天
然材料のナノ懸濁液は以下の要素によって抽出液と異なる。
【００７３】
活性成分の濃度
ナノ懸濁液は水溶性化合物等の抽出された部分のみでなく、その天然の組成の中にナノ
粒子として天然材料の全体または一部を含んでいるので、ナノ懸濁液中の親水性ならびに
疎水性の化合物の濃度は抽出液に比べて高い。抽出液中ではそれぞれの溶媒中のそれらの
溶解度によって、親水性または疎水性の化合物のみが溶液中に存在する。
【００７４】
乾燥質量の量
ナノ懸濁液の性質から、乾燥質量は通常、ナノ懸濁液を形成するためにステップｂ．で
添加した化合物の量と同じまたはほぼ同じである。それと対照的に、大部分の化合物の溶
解度は１００％よりかなり小さいので、抽出液の乾燥質量は常に、溶媒中に加えた化合物
の量よりも少ない。
【００７５】
酸化
ナノ粒子は通常、限定された溶解度でナノ懸濁液中に分散しているので、化学反応の可
能性は溶液系の製剤ほど高くない。したがって、ナノ懸濁液の化学的安定性は一般に溶液
のそれよりも優れている。ナノ懸濁液の酸化安定性はアルミニウム表面における酸化層に
類似した機構に帰せられる。ナノ粒子が水および酸素に曝されると、ナノ粒子表面におけ
る単層の劣化が生じる。この単層がナノ粒子の内部部分をさらなる劣化から保護し、それ
によりナノ懸濁液の酸化安定性を向上させる。
【００７６】
化学的安定化
ナノ粒子の独特のナノスケール構造は表面積と体積の比の顕著な増大をもたらし、それ
により従来のミクロ粒子に比べてインビトロおよびインビボの両方で著しく異なる挙動が
もたらされる。薬物のナノ結晶の利点にも関わらず、これらは複雑な製造および安定性の
問題を含む種々の欠点を生じる。安定性は医薬品の安全性および有効性を担保する上での
重要な視点の１つである。たとえば静脈内投与されるナノ懸濁液においては、大粒子（＞
５μｍ）の形成は毛細血管の閉塞および塞栓をもたらす可能性があり、したがって薬物の
粒径および粒径分布は保存の間、厳密にモニターする必要がある。そのような大粒子は本
発明のナノ懸濁液から除外される。
【００７７】
物理的安定化
粒子電荷はナノ懸濁液の物理的安定性を決定する要素の１つである。より多い粒子が均
等に荷電していれば、粒子間の静電的反発が大きくなり、物理的安定性が高くなる。典型
的には、粒子電荷はいわゆるゼータ電位として定量化され、これはたとえば電場内におけ
る粒子の電気泳動による移動度によって測定される。
【００７８】
ナノ懸濁液の調製のための上述の方法によってナノ懸濁液が得られる。したがって、本
開示は本明細書に記載する方法のいずれか１つによって得られるナノ懸濁液にも関する。
【００７９】
さらに、本開示のナノ懸濁液は医薬または補助食品等のサプリメントの調製において使
用することができる。本開示のナノ懸濁液は動物、好ましくはヒトへの頬側、局所および
／または口腔内適用のための医薬の調製において有利に使用できる。
【００８０】
天然材料のナノ懸濁液は、経粘膜ルートを経由して投与される可能性を含む際立った利
点を提供する。天然材料のナノ懸濁液は単位体積あたりより高い濃度の活性剤および小粒
子の非水溶性活性剤を含み、したがって、免疫細胞によって免疫調節性活性剤が取り込ま
れ、免疫調節性活性剤の粒径が小さいことが必要とされる、免疫調節性薬物の新たな可能
性を提供する。
【００８１】
口腔を通しての物質の取り込み容量には限界があるので、口腔内投与のためには薬物は
好ましくは液体であり、低用量で有効である必要がある。さらに、口腔を通して投与され
る薬物の粒子はナノメートル範囲、たとえば約３００ｎｍ未満である必要があり、そうで
なければ口腔を経由する通過は制限される。本開示のナノ懸濁液は３００ｎｍ未満の粒径
Ｄ９０で提供されるので、ナノ懸濁液は口腔内投与に有利に用いることができる。
【００８２】
口腔内においては、生物活性剤の投与の２つの一般に認められたルートがある。舌下送
達は、口底部の内側を覆う粘膜を通して行なわれる。舌下ルートは透過性が高く血液の供
給が豊富であるので、舌下腺ルートを経由する輸送によって、作用の開始が早く、送達時
間が短い必要があり投与頻度が少ない、透過性が高い活性剤に適した送達ルートが得られ
る。第２の一般に認められたルートは頬粘膜を経由する。この領域は頬の内側を覆う粘膜
を包含している。この領域も血液の供給が豊富で強固であり、ストレスまたは損傷の後の
細胞回復時間が短くなる。頬粘膜は舌下領域よりも透過性が低いが、平滑で比較的動きに
くい粘膜が拡張することにより、生物活性剤の維持放出および制御放出送達のための高度
に望ましい吸収経路を提供する。その他の経粘膜投与ルートと同様、２つの主な利点とし
ては肝による初回通過代謝および胃腸管内でのプレシステミックな除去が避けられること
が挙げられる。
【００８３】
さらに、任意の公知の浸透促進剤が、本開示によるナノ懸濁液の通過を増大させ得る。
【００８４】
経口投与とは別に、本開示のナノ懸濁液は動物、好ましくはヒトへの、非経口、髄腔内
、静脈内、経皮、または経粘膜適用にも使用することができる。したがって、本開示の好
ましい実施形態は、動物、好ましくはヒトへの、非経口、髄腔内、静脈内、経皮、または
経粘膜適用、好ましくは頬側、局所的または口腔内適用のための医薬の調製におけるナノ
懸濁液の使用に関する。
【００８５】
本開示は、天然材料の安定なナノ懸濁液、前記ナノ懸濁液を調製する方法、および対象
の血流中への生物活性剤の送達の促進を可能にする前記ナノ懸濁液の使用を提供する。そ
のようなナノ懸濁液が身体、たとえば頬粘膜を含む口腔の領域と接触すると、所望の生物
学的反応を誘起するのに充分な量で化合物が血流中に吸収される。したがって、ナノ懸濁
液は通常のまたはミクロ流動化されたスプレイ、エアロゾルまたは液体によって送達する
ことができる。送達は非経口、髄腔内、静脈内、経皮、経粘膜、および薬物送達のための
一般に認められた任意または全ての方法で達成することができる。
【００８６】
たとえば抽出液と比較した、本明細書に開示した方法によって調製したナノ懸濁液の最
も顕著な差別化要素としては、（ｉ）天然材料の主要活性成分の平均モル質量−平均モル
質量が小さければ生体利用効率が高い、（ｉｉ）特定のヒト受容体によるヒト体内におけ
る天然材料の主要活性成分の認識度（いわゆる病原体認識受容体またはトール様受容体Ｔ
ＬＲ；ＴＬＲによる検出の程度が高くさえあれば、引き続くシグナルカスケートによって
高められた免疫刺激効果が開始される）、および（ｉｉｉ）その結果としての、ヒト体内
における天然材料の主要活性成分の効果がある。天然材料であるアガリクス・サブルフェ
センス（agaricus subrufescens）について、これらの差別化要素は、アガリクス・サブ
ルフェセンス（agaricus subrufescens）の主要活性成分としての、水不溶性であるβ−
１，３／１，６−グルカンを用いた、以下の実施例７〜９に示されている。
【００８７】
本開示のナノ懸濁液は、癌、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節炎、ヒト免疫不全ウイルス
（ＨＩＶ）、その他のウイルス性疾患、神経皮膚炎もしくは乾癬等の皮膚疾患、または多
発性硬化症、血管炎、関節リウマチもしくは皮膚筋炎等の自己免疫疾患の治療または予防
において使用することができる。
【００８８】
本開示のナノ懸濁液は、たとえば天然材料から調製された抽出液と比べて、より長期に
わたって、より高い濃度の天然材料の活性剤を血流中に提供するために効果的である。こ
のことは、そのような天然材料に含まれる疎水性化合物について特に当てはまる。さらに
、ナノ懸濁液はたとえば抽出液と比べて、ナノメートル範囲の免疫刺激性がより高い粒子
をより高い量で含んでおり、これらはそれぞれの免疫サブポピュレーションによってより
良く取り込まれ、または認識されるので、天然材料からの免疫調節化合物を含むナノ懸濁
液は、より広く、より強い様式で免疫系を刺激する。
（実施例）
【００８９】
実験の部
以下、本発明をより詳細に説明する。しかし、保護の範囲は添付した特許請求の範囲に
よってのみ決定され、以下の実施例のいずれによっても制限されないことが理解される。
以下の実施例は発明の理解を助けるために説明され、本明細書に記載し、特許請求する発
明を具体的に限定すると解釈すべきではない。現在知られているか、または後に開発され
る全ての均等物の置換を含めて、当業者の領域内に含まれる本発明の変形、ならびに処方
の変更または実験的設計の変更は、本明細書に組み込まれた本発明の範囲内にあると考え
るべきである。
【実施例１】
【００９０】
実施例１．１：オリーブ葉のナノ懸濁液の安定な製剤
乾燥したオリーブ葉粉末（粒径Ｄ９０＜３２０μｍ、残存水分＜５％）２００ｇを再蒸
留水４０００ｇに加えて、オリーブ葉粉末の水中５％（ｗ／ｗ）分散液とした。粒径Ｄ９
０＜３２０μｍのオリーブ葉粉末の溶解度は１．４４％（ｗ／ｗ）である。これに基づく
と、ナノ懸濁液の５％（ｗ／ｗ）の濃度はオリーブ葉粉末の溶解度限界よりも３．５倍（
溶解度因子）高い。粒径（Ｄ９０）が約３８０ｎｍになるまでは大きさ０．４〜０．５ｍ
ｍのイットリウムで安定化されたジルコニアボールを用い、次いで最終粒径（Ｄ９０）が
２７２ｎｍに達するまでは大きさ０．１ｍｍのイットリウムで安定化されたジルコニアボ
ールを用いて、分散液をウェットボールアジテーターミル（Ｘ１型、Ｂｕｅｈｌｅｒ  Ａ
Ｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で粒径（Ｄ９０）４００ｎｍ未満まで摩砕した。粒径（Ｄ
９０）が３８０ｎｍになったところでＴｗｅｅｎ（登録商標）８０を１４．５ｇ（０．４
％（ｗ／ｗ））加えた。これにより粒径が３４０ｎｍまで低下した。粒径（Ｄ９０）が約
３４０ｎｍになったところでさらにＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７を２９ｇ（
０．７％（ｗ／ｗ））加えることによって、粒径（Ｄ９０）が２７２ｎｍまで顕著に低下
した（図２参照）。摩砕に用いた比エネルギーの量［ｋＷｈ／ｔ］が図２から分かる。
【００９１】
実施例１．２：オリーブ葉の抽出（比較）
同量のオリーブ粉末（２００ｇ、粒径Ｄ９０＜３２０μｍ）を再蒸留水４０００ｇで、
温度２２℃で２時間抽出した。
【００９２】
実施例１．３：乾燥質量の比較
上で調製した抽出液（実施例１．２）およびナノ懸濁液（実施例１．１）の乾燥質量の
量を、抽出液およびナノ懸濁液をそれぞれ０．４５μｍのフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒ
ｅ、セルロースエステル膜）を用いて濾過することによって決定した。濾過した固体を乾
燥し、濾過した粒子の乾燥質量を決定した。図３からも分かるように、同じ濃度（５％（
ｗ／ｗ））のオリーブ葉粉末で、抽出液の０．３％（ｗ／ｗ））に比べてナノ懸濁液の乾
燥質量の量は４．５％（ｗ／ｗ）である。
【実施例２】
【００９３】
実施例２．１：スピルリナナノ懸濁液の安定な製剤
スピルリナ粉末（１０％（ｗ／ｗ）、粒径Ｄ９０＜１５０μｍ、残存水分＜５％）３０
０ｇおよびＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７  ６０ｇを再蒸留水３０００ｇに加
えて、スピルリナの水中分散液とした。粒径Ｄ９０＜１５０μｍのスピルリナ粉末の溶解
度は０．５２％（ｗ／ｗ）である。これに基づくと、ナノ懸濁液の１０％（ｗ／ｗ）の濃
度はスピルリナ粉末の溶解度限界よりも１９．２倍（溶解度因子）高い。粒径（Ｄ９０）
が約１２０ｎｍになるまでは大きさ０．４〜０．５ｍｍのイットリウムで安定化されたジ
ルコニアボールを用い、次いで最終粒径（Ｄ９０）である８０ｎｍになるまでは大きさ０
．１ｍｍのイットリウムで安定化されたジルコニアボールを用いて、分散液をウェットボ
ールアジテーターミル（Ｘ１型、Ｂｕｅｈｌｅｒ  ＡＧ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で粒
径（Ｄ９０）約８０ｎｍまで摩砕した。摩砕に用いた比エネルギーの量［ｋＷｈ／ｔ］が
図４から分かる。
【００９４】
実施例２．２：スピルリナの抽出（比較）
同量のスピルリナ粉末（３００ｇ、粒径Ｄ９０＜１５０μｍ）を再蒸留水３０００ｇで
、温度２２℃で２時間抽出した。
【００９５】
実施例２．３：乾燥質量の比較
上で調製した抽出液（実施例２．２）およびナノ懸濁液（実施例２．１）の乾燥質量の
量を、抽出液およびナノ懸濁液をそれぞれ０．４５μｍのフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒ
ｅ、セルロースエステル膜）を用いて濾過することによって決定した。濾過した固体を乾
燥し、濾過した粒子の乾燥質量を決定した。図５からも分かるように、同じ濃度（１０％
（ｗ／ｗ））のスピルリナ粉末で、抽出液の３．３％（ｗ／ｗ））に比べてナノ懸濁液の
乾燥質量の量は９．４％（ｗ／ｗ）である。
【実施例３】
【００９６】
実施例３．１：５％Ｐ１００、０．５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０および１％Ｋｏｌｌ
ｉｐｈｏｒ  Ｐ４０７によるアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）
キノコナノ懸濁液の安定な製剤
アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）の粉末（粒径Ｄ９０＜３２
０μｍ、残存水分＜５％）１５０ｇ、Ｌｉｐｏｉｄ  Ｐ１００（５％（ｗ／ｗ））１５０
ｇおよびポリソルベートＴｗｅｅｎ（登録商標）８０（０．５％（ｗ／ｗ））１５ｇを再
蒸留水３０００ｇに加えて、アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）
粉末の水中５％（ｗ／ｗ）分散液とした。粒径Ｄ９０＜３２０μｍのアガリクス・サブル
フェセンス（agaricus subrufescens）粉末の溶解度は３．２％（ｗ／ｗ）である。これ
に基づくと、ナノ懸濁液の５％（ｗ／ｗ）の濃度はアガリクス・サブルフェセンス（agar
icus subrufescens）粉末の溶解度限界よりも１．６倍（溶解度因子）高い。粒径（Ｄ９
０）が約６．３μｍになるまでは大きさ０．４〜０．５ｍｍのイットリウムで安定化され
たジルコニアボールを用い、次いで最終粒径（Ｄ９０）が２４０ｎｍに達するまでは大き
さ０．１ｍｍのイットリウムで安定化されたジルコニアボールを用いて、分散液をウェッ
トボールアジテーターミル（Ｘ１型、Ｂｕｅｈｌｅｒ  ＡＧ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）
で摩砕した。摩砕に用いた比エネルギーの量［ｋＷｈ／ｔ］が図６（実線）から分かる。
粒径（Ｄ９０）が約６．３μｍになったところでＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０
７を３０ｇ（１％（ｗ／ｗ））加えた。ナノ懸濁液の最終粒径（Ｄ９０）は２４０ｎｍで
あった（図６−実線も参照）。
【００９７】
実施例３．２：１０％Ｐ１００、０．５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０および１％Ｋｏｌ
ｌｉｐｈｏｒ  Ｐ４０７によるアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens
）キノコナノ懸濁液の安定な製剤
アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）の粉末（粒径Ｄ９０＜３２
０μｍ）１５０ｇ、Ｌｉｐｏｉｄ  Ｐ１００（１０％（ｗ／ｗ））３００ｇおよびポリソ
ルベートＴｗｅｅｎ（登録商標）８０（０．５％（ｗ／ｗ））１５ｇを再蒸留水３０００
ｇに加えて、アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）粉末の水中５％
（ｗ／ｗ）分散液とした。粒径（Ｄ９０）が約６．３μｍになるまでは大きさ０．４〜０
．５ｍｍのイットリウムで安定化されたジルコニアボールを用い、次いで最終粒径（Ｄ９
０）が３６８ｎｍに達するまでは大きさ０．１ｍｍのイットリウムで安定化されたジルコ
ニアボールを用いて、分散液をウェットボールアジテーターミル（Ｘ１型、Ｂｕｅｈｌｅ
ｒ  ＡＧ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で摩砕した。摩砕に用いた比エネルギーの量［ｋＷ
ｈ／ｔ］が図６（点線）から分かる。粒径（Ｄ９０）が約２．６μｍになったところでＫ
ｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７を３０ｇ（１％（ｗ／ｗ））加えた。ナノ懸濁液
の最終粒径（Ｄ９０）は３６８ｎｍであった（図６−点線も参照）。
【００９８】
実施例３．３：５％Ｐ１００、０．７５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０によるアガリクス
・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）キノコナノ懸濁液の安定な製剤
アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）の粉末（粒径Ｄ９０＜３２
０μｍ）１５０ｇ、Ｌｉｐｏｉｄ  Ｐ１００（５％（ｗ／ｗ））１５０ｇおよびポリソル
ベートＴｗｅｅｎ（登録商標）８０（０．５％（ｗ／ｗ））１５ｇを再蒸留水３０００ｇ
に加えて、アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）粉末の水中５％（
ｗ／ｗ）分散液とした。大きさ０．４〜０．５ｍｍのイットリウムで安定化されたジルコ
ニアボールを用いて、分散液をウェットボールアジテーターミル（Ｘ１型、Ｂｕｅｈｌｅ
ｒ  ＡＧ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で摩砕した。摩砕に用いた比エネルギーの量［ｋＷ
ｈ／ｔ］が図７（点線）から分かる。比エネルギー１５１７０ｋＷｈ／ｔでナノ懸濁液の
粒径（Ｄ９０）は３４３ｎｍに低減された（図７−点線も参照）。比エネルギーを増大さ
せて摩砕を継続した後、粒径が急激に増大した。これは集塊の原因と考えられる粒子の表
面積の増大によるものであろう。ポリソルベートＴｗｅｅｎ（登録商標）８０をさらに７
．５ｇ追加（全体で０．７５％（ｗ／ｗ）になる）しても、粒径は顕著に低減しなかった
。比較として、１％のＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７（上の実施例３．２）お
よび０．５％のポリソルベートＴｗｅｅｎ（登録商標）８０を追加した同じナノ懸濁液は
、粒径のさらなる減少および安定性のさらなる低下を示す（図７−実線参照）。
【００９９】
実施例３．４：アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）キノコの抽出
（比較）
同量のアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）粉末（１５０ｇ、粒
径Ｄ９０＜３２０μｍ）を再蒸留水３０００ｇで、温度２２℃で２時間抽出した。
【０１００】
実施例３．５：乾燥質量の比較
上で調製した抽出液（実施例３．４）およびナノ懸濁液（実施例３．１）の乾燥質量の
量を、抽出液およびナノ懸濁液をそれぞれ０．４５μｍのフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒ
ｅ、セルロースエステル膜）を用いて濾過することによって決定した。濾過した固体を乾
燥し、濾過した粒子の乾燥質量を決定した。図８からも分かるように、同じ濃度（５％（
ｗ／ｗ））のアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）粉末で、抽出液
の０％（ｗ／ｗ））に比べてナノ懸濁液の乾燥質量の量は４．４％（ｗ／ｗ）である。
【実施例４】
【０１０１】
実施例４．１：活性成分の濃度
アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）の主要な活性剤はβ−１，
３／１，６−グルカンであり、したがってアガリクス・サブルフェセンス（agaricus sub
rufescens）の様々な抽出液およびアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufesce
ns）のナノ懸濁液の濃度を比較するための参照材料としてこのグルカンを用いることがで
きる。実施例３．１の５％（ｗ／ｗ）ナノ懸濁液および実施例３．４のアガリクス・サブ
ルフェセンス（agaricus subrufescens）の５％（ｗ／ｗ）抽出液とは別に、実施例３．
４と同様の方法でさらなる抽出液を調製した。図９の他の抽出物の型も全て同じパラメー
ター（アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）粉末１５０ｇ、溶媒３
０００ｇ、抽出時間２時間）で、図９に示す異なる溶媒（再蒸留水および６０％（ｖ／ｖ
）エタノール（ＥｔＯＨ））および異なる温度（室温２２℃および８０℃）を用い行なっ
た。
【０１０２】
図９に、抽出液およびナノ懸濁液の調製に用いた純粋なアガリクス・サブルフェセンス
（agaricus subrufescens）粉末に関連する、アガリクス・サブルフェセンス（agaricus 
subrufescens）粉末の種々な抽出液および実施例３．１のナノ懸濁液のβ−１，３／１，
６−グルカン含量の比較を示す。室温のエタノール抽出で僅か２％、再蒸留水中８０℃で
４６％までであるのと比較して、ナノ懸濁液中には粉末が９８％のβ−１，３／１，６−
グルカン含量で取り込まれる。これにより、ナノ懸濁液中には粉末分画からの殆ど全ての
β−１，３／１，６−グルカンが保持されることが示される。
【実施例５】
【０１０３】
実施例５．１：シリカナノ懸濁液の安定な製剤
シリカ粉末（粒径Ｄ９０＜２５ｎｍ）１００ｇを再蒸留水２０００ｇに加えて、シリカ
粉末の水中５％（ｗ／ｗ）分散液とした。上に詳述した物理的安定化によってシリカナノ
懸濁液を安定化した。レーザー回折アナライザーＺｅｔａｓｉｚｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ  
Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ＵＫ）によって測定したゼータ電位を物理的パラメーターとし
て、物理的安定化の効果を評価した。即ち、コロイデーターによる物理的安定化の前後に
ゼータ電位を測定した。コロイデーター中、３０００ｍｉｎ−１、３分間の物理的安定化
により、ゼータ電位は−０．８４ｍＶから−１０．４ｍＶに減少した。これは物理的安定
化がない場合の値に比べて顕著な低減である（図１０参照）。
【実施例６】
【０１０４】
実施例６において、様々なナノ懸濁液の長期安定性を検討した。ナノ懸濁液の沈降、浮
遊または圧密化等の脱混合現象を分類し、定量化するために、分析用遠心分離機（ＬＵＭ
ＧｍｂＨ、ＧｅｒｍａｎｙのＬｕｍｉｆｕｇｅ）を用いて加速安定性試験を行なった。
この試験は、ナノ懸濁液の安定性を決定するために行なった。ナノ粒子の沈降、浮遊また
は圧密化がないか僅かであれば、ナノ懸濁液は長期に安定であると考えられる。
【０１０５】
加速安定性試験において、ナノ懸濁液を２０００ｇ（ｇ＝重力定数＝９．８１ｍ／ｓ２
）の遠心分離で加速した。Ｌｕｍｉｆｕｇｅを用いて、試料の全長にわたって空間分解お
よび時間分解された消光プロファイルを得た。平行光（Ｉ０）によって試料セル全体を照
明し、上面から下面まで試料全体にわたって直線的に配置したマイクロスケールの分解能
を有する数千個のセンサーによって、透過光Ｉを検出する。透過率をｌｇ（Ｉ／Ｉ０）に
よって消光に換算し、粒子濃度を計算することができる。
【０１０６】
長期にわたって安定なナノ懸濁液を得るため、プロパン−１，２，３−トリオールを添
加してナノ懸濁液の粘度を増大させ、ナノ懸濁液中におけるナノ粒子の沈降を防ぐことが
できる。以下の実施例は、プロパン−１，２，３−トリオールの添加の効果を示す。
【０１０７】
実施例６．１：プロパン−１，２，３−トリオールが０％の場合のアガリクス・サブルフ
ェセンス（agaricus subrufescens）キノコナノ懸濁液の長期安定製剤
実施例３．１で調製したナノ懸濁液を取り、プロパン−１，２，３−トリオールを添加
せずに磁気攪拌器で約３０分間撹拌した。次いで上述のように、ナノ懸濁液の沈降、浮遊
または圧密化等の脱混合現象を分類し、定量化するために、分析用遠心分離機（ＬＵＭ  
ＧｍｂＨ、ＧｅｒｍａｎｙのＬｕｍｉｆｕｇｅ）を用いて加速安定性試験を行なった。
【０１０８】
図１１に、プロパン−１，２，３−トリオールが０％の場合のナノ懸濁液の光透過率曲
線を示す。見てとれるように、２０００ｇの遠心場において最初の回転で大粒子が沈降し
（透過率４０％から約２５％の間は明灰色の線）、次いでさらなる大粒子が次の回転でそ
れに続き、２０分後までにキュベットの底部に沈降物を生ずる。透過率は開始時の４４％
から１０％にまで減少し（キュベットの底部における沈降物）、２０００ｇの遠心場にお
ける沈降プロセスを表わしている。これは、ナノ懸濁液が長期には不安定であることを示
している。
【０１０９】
実施例６．２：２０％のプロパン−１，２，３−トリオールを含むアガリクス・サブルフ
ェセンス（agaricus subrufescens）キノコナノ懸濁液の長期安定製剤
実施例３．１で調製したナノ懸濁液５００ｍｌを取り、２０％（ｖ／ｖ）のプロパン−
１，２，３−トリオールを添加した。得られた混合物を磁気攪拌器で約３０分間撹拌した
。次いで、上述の加速安定性試験を行なった。
【０１１０】
図１２に、２０％のプロパン−１，２，３−トリオールを含むナノ懸濁液の光透過率曲
線を示す。見てとれるように、２０００ｇの遠心場において沈降する大粒子の量（透過率
５０％から４０％の間は明灰色の線）は最初の回転ではずっと少なく、２０分後にキュベ
ットの底部に沈降物が生じる。透過率は開始時の５８％から１０％にまで減少し（キュベ
ットの底部における沈降物）、２０００ｇの遠心場における沈降プロセスを表わしている
。これは、２０％（ｖ／ｖ）のプロパン−１，２，３−トリオールの添加によってナノ懸
濁液の安定性が増大し得ることを示している。
【０１１１】
実施例６．３：５０％のプロパン−１，２，３−トリオールを含むアガリクス・サブルフ
ェセンス（agaricus subrufescens）キノコナノ懸濁液の長期安定製剤
実施例３．１で調製したナノ懸濁液５００ｍｌを取り、５０％（ｖ／ｖ）のプロパン−
１，２，３−トリオールを添加した。得られた混合物を磁気攪拌器で約３０分間撹拌した
。次いで、上述の加速安定性試験を行なった。
【０１１２】
図１３に、５０％のプロパン−１，２，３−トリオールを含むナノ懸濁液の光透過率曲
線を示す。見てとれるように、２０００ｇの遠心場において２０分の間に沈降はなかった
（透過率５０％から約５３％の間は明灰色の線）。キュベットの底部に沈降物はなかった
。これは、５０％（ｖ／ｖ）のプロパン−１，２，３−トリオールの添加によってナノ懸
濁液の安定性がさらに増大することを示している。
【実施例７】
【０１１３】
いずれも濃度５％（ｗ／ｗ）のアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens
）キノコナノ懸濁液および抽出液のβ−１，３／１，６−グルカンの平均モル質量
図１４に、実施例３．１で調製したアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufe
scens）ナノ懸濁液および実施例３．４で調製した抽出液のβ−１，３／１，６−グルカ
ンの微分重量分率（即ち平均モル質量）を示す（ナノ懸濁液１：検出器注入量２０μｌ；
ナノ懸濁液２：検出器注入量１０μｌ；抽出液：検出器注入量１０μｌ）。分析方法の信
頼性を示すため、アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液
のモル質量を２つの注入量で測定したが、これらは安定であることが示された。アガリク
ス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液の活性物質β−１，３／１
，６−グルカンの平均モル質量は１５から１６ｋＤａの間であり、抽出液のそれは１３５
ｋＤａである。これは、本明細書に記載した天然材料からナノ懸濁液を調製する方法によ
って主要活性物質β−１，３／１，６−グルカンのモル質量が顕著に低下することを示し
ている。これにより、投与した際にナノ懸濁液中に存在するβ−１，３／１，６−グルカ
ンの吸収が大きくなる。
【実施例８】
【０１１４】
いずれも濃度５％（ｗ／ｗ）のアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens
）キノコナノ懸濁液および抽出液のβ−１，３／１，６−グルカンの検出
デクチン−１はヒト体内でβ−１，３／１，６−グルカンを検知する免疫細胞上の主要
な受容体である。図１５に、それぞれ非刺激末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、５％（ｗ／ｗ）
のアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液（実施例３．１
で調製）および５％（ｗ／ｗ）のアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescen
s）抽出液（実施例３．４で調製）で刺激したＰＢＭＣの試料中におけるデクチン−１陽
性単球の相対量（％で表わす）を示す。５％（ｗ／ｗ）のアガリクス・サブルフェセンス
（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液で刺激すると、ＰＢＭＣの数が非刺激試料に対し
て４０９％増加したのに対して、５％（ｗ／ｗ）のアガリクス・サブルフェセンス（agar
icus subrufescens）抽出液で刺激した場合の増加は１２２％であった。
【実施例９】
【０１１５】
濃度５％（ｗ／ｗ）のアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）キノコ
ナノ懸濁液および抽出液によるサイトカインＴＮＦ−αの誘導
ＴＮＦ−αは疾患の進行における主要なサイトカインの１つである。図１６に、アガリ
クス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液（実施例３．１で調製）
および抽出液（実施例３．４で調製）によって惹起されたサイトカインＴＮＦ−αのイン
ビトロ誘導の比較を示す。アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナ
ノ懸濁液によるＴＮＦ−αの誘導は抽出液に比べて６０倍高い。
【実施例１０】
【０１１６】
いずれも濃度５％（ｗ／ｗ）のアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens
）キノコナノ懸濁液および抽出液によるサイトカインＩＬ−１０の誘導
図１７に、アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液（実
施例３．１で調製）および抽出液（実施例３．４で調製）によって惹起されたインビトロ
誘導における、主要な炎症誘発性サイトカインの１つとしてのサイトカインＩＬ−１０の
比較を示す。アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液によ
るＩＬ−１０の誘導は抽出液に比べて２６．５倍高い。
【実施例１１】
【０１１７】
いずれも濃度５％（ｗ／ｗ）のアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens
）キノコナノ懸濁液および抽出液によるヒト体内で得られる効果としてのサイトカインＩ
Ｌ−６の誘導
図１８に、アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液（実
施例３．１で調製）および抽出液（実施例３．４で調製）によって惹起されたインビトロ
誘導における、主要な炎症誘発性サイトカインの１つとしてのサイトカインＩＬ−６の比
較を示す。アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）ナノ懸濁液による
ＩＬ−１０の誘導は抽出液に比べて６．７倍高い。
【実施例１２】
【０１１８】
濃度５％（ｗ／ｗ）のアガリクス（agaricus）キノコナノ懸濁液および７．５％脂質の粒
子分布の改良
アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）の粉末（粒径Ｄ９０＜３２
０μｍ）１５０ｇ、Ｌｉｐｏｉｄ  Ｐ１００（７．５％（ｗ／ｗ））２２５ｇおよびポリ
ソルベートＴｗｅｅｎ（登録商標）８０（０．５％（ｗ／ｗ））１５ｇを再蒸留水３００
０ｇに加えて、アガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）粉末の水中５
％（ｗ／ｗ）分散液とした。粒径（Ｄ９０）が約１５μｍになるまでは大きさ０．４〜０
．５ｍｍのイットリウムで安定化されたジルコニアボールを用い、次いで最終粒径（Ｄ１
００）が３７５ｎｍに達するまでは大きさ０．１ｍｍのイットリウムで安定化されたジル
コニアボールを用いて、分散液をウェットボールアジテーターミル（Ｘ１型、Ｂｕｅｈｌ
ｅｒ  ＡＧ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で摩砕した。粒径（Ｄ９０）が約４μｍになった
ところでＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ４０７を３０ｇ（１％（ｗ／ｗ））加えた。
ナノ懸濁液の最終粒径（Ｄ１００）は３７５ｎｍであった。得られたナノ懸濁液の濾過は
不要であった。
【０１１９】
２．５％（ｗ／ｗ）のＬｉｐｏｉｄ  Ｐ１００をさらに加えることにより、実施例３．
１と比べて２つの主要な改善が得られた。第１に、実施例３．１における粒径（Ｄ１００
）の１０μｍ（図１９参照）に比べて、３７５ｎｍ（図２０参照）の最終粒径（Ｄ１００
）が得られた。第２に、実施例３．１における二峰性の粒子分布に比べて、単峰性の粒子
分布が得られた（それぞれ図１９および図２０参照）。オストワルド熟成が生じ不安定な
ナノ懸濁液をもたらす可能性があるので、ナノ懸濁液を安定に保つためには、粒子分布を
単峰性にしてオストワルド熟成を避けまたは低減することが好ましい。２つの実施例のよ
り詳細な粒子分布からも相違は明白である。実施例３．１においてＤ１０粒径は０．１０
８μｍ、Ｄ５０粒径は０．１５９μｍ、Ｄ９０粒径は０．２４０μｍ、Ｄ１００粒径は１
０μｍである（図１９参照）。これと対照的に、実施例１２の詳細な粒径分布は、Ｄ１０
粒径が０．０６５μｍ、Ｄ５０粒径が０．１０４μｍ、Ｄ９０粒径が０．１７８μｍ、Ｄ
１００粒径が０．３７５μｍである（図２０参照）。
【実施例１３】
【０１２０】
ヒト体内で得られる効果としての実施例１２のアガリクス・サブルフェセンス（agaricus
subrufescens）キノコナノ懸濁液によるＣＤ２５活性化Ｔ細胞の誘導
ＣＤ２５活性化Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞２（Ｔｈ２）からヘルパーＴ細胞１（Ｔｈ１
）への応答のシフトを誘起すると考えられる重要なＴ細胞のサブポピュレーションの１つ
である。Ｔｈ１応答へのＴｈ１／Ｔｈ２バランスのシフトは、免疫系のウイルス防御能力
の増大に関与している。以下の実施例において、アガリクス・サブルフェセンス（agaric
us subrufescens）を含む実施例１２のナノ懸濁液を用い、市販のアガリクス・サブルフ
ェセンス（agaricus subrufescens）の粉末と比較して、ＣＤ２５活性化Ｔ細胞の増加を
ヒトで試験した。
【０１２１】
実施例１２で調製したナノ懸濁液をプロパン−１，２，３−トリオール（グリセリン）
と混合して、４０％のグリセリンを含む混合物とした。ポンプスプレイアクチュエーター
により、８名のヒトからなる第１のグループに３．７８ｍｌ／日の用量でこの混合物を投
与した。この用量はアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufescens）１０５ｍ
ｇ（乾燥固体量）に相当する。前記第１のグループにおいては、ＣＤ２５活性化Ｔ細胞は
開始後４週間以内に３３％増加した（図２１参照）。比較のため、８名のヒトからなる第
２のグループには、カプセル化されたアガリクス・サブルフェセンス（agaricus subrufe
scens）粉末（粒径約２２０μｍ）を推奨される一日用量２５２０ｍｇで投与した。前記
第２のグループにおいては、ＣＤ２５活性化Ｔ細胞は開始後４週間以内に１１．５％増加
した（図２２参照）。
【０１２２】
以上のデータから分かるように、実施例１２のナノ懸濁液によって粉末に比べて約３倍
のＣＤ２５活性化Ｔ細胞の増加がもたらされる。換言すれば、実施例１２のナノ懸濁液は
従来の粉末より約３倍活性が高い。粉末に比べて用量が２４分の１と少なかったので、こ
のことはさらにいっそう驚くべきことである。
【符号の説明】
【０１２３】
１  容器
２  二重壁
３  凹形シリンダー
４  ローター
５  ローター、支持ローター
６  ナノ懸濁液は上昇する
７  ナノ懸濁液の下向きの流れ
８ａ  冷媒は二重壁に供給される
８ｂ  冷媒は二重壁から除かれる
９ａ  冷媒は二重壁に供給される
９ｂ  冷媒は二重壁から除かれる
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2018172394.tif 000016
【図１６】
2018172394.tif 000017
【図１７】
2018172394.tif 000018
【図１８】
2018172394.tif 000019
【図１９】
2018172394.tif 000020
【図２０】
2018172394.tif 000021
【図２１】
2018172394.tif 000022
【図２２】
2018172394.tif 000023
【手続補正書】
【提出日】平成30年7月4日(2018.7.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書に記載された発明。
【外国語明細書】
2018172394000001.pdf