(57)【要約】      （修正有）【課題】速い薬物動態学的および／または薬力学的作用を有しかつ商業用途のために安定であるヒトインスリンまたはインスリン類似体製剤の提供。【解決手段】インスリンと．約５から約２５ｍＭの濃度のクエン酸塩と、約０．０４から約２０μｇ／ｍＬの濃度のトレプロスチニルと、インスリンの６分子当り少なくとも２個の亜鉛イオンを提供するのに十分な濃度の亜鉛と、防腐剤と、マグネシウム含有化合物および塩化ナトリウムからなる群から選択される１種または複数の安定剤とを含み、室温で約７．０から約７．８のｐＨを有する、医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．インスリンと、
ｂ．約５から約２５ｍＭの濃度の、クエン酸塩と、
ｃ．約０．０４から約２０μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニルと、
ｄ．インスリンの６分子当り少なくとも２個の亜鉛イオンを提供するのに十分な濃度の、亜鉛と、
ｅ．防腐剤と、
ｆ．マグネシウム含有化合物および塩化ナトリウムからなる群から選択される１種または複数の安定剤と
を含み、室温で約７．０から約７．８のｐＨを有する、医薬組成物。
【請求項２】
前記亜鉛濃度が、約０．２から約２ｍＭである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記亜鉛濃度が、約０．２から約１ｍＭである、請求項１〜２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記亜鉛濃度が、約０．６から約０．８ｍＭである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記１種または複数の安定剤が、マグネシウム含有化合物を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記マグネシウム含有化合物が、約１：２から約１：１０のマグネシウム対クエン酸塩のモル比を生じる濃度で存在する、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記マグネシウム対クエン酸塩のモル比が、約１：３から約１：５である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記マグネシウム含有化合物が、塩化マグネシウムである、請求項５〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記インスリン濃度が、約１００から約３００Ｕ／ｍＬである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記インスリン濃度が、約１００Ｕ／ｍＬまたは約２００Ｕ／ｍＬのいずれかである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記インスリンが、インスリンリスプロである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記クエン酸塩の濃度が、約１０から約２５ｍＭである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記トレプロスチニルの濃度が、約０．０４から約１０μｇ／ｍＬである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記トレプロスチニルの濃度が、約０．５から約２μｇ／ｍＬである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記防腐剤が、ｍ−クレゾールである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記ｍ−クレゾールの濃度が、約２．５から約３．８ｍｇ／ｍＬである、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記１種または複数の安定剤が、塩化ナトリウムを含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記塩化ナトリウムが、約１から約５０ｍＭの濃度で存在する、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
塩化物の総濃度が、約１０から約５０ｍＭである、請求項８〜１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
等張化剤をさらに含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記等張化剤が、グリセロールである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記グリセロールの濃度が、約１から約１５ｍｇ／ｍＬである、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
ａ．約１００から約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロと、
ｂ．約５から約２５ｍＭの濃度の、クエン酸塩と、
ｃ．約０．５から約２μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニルと、
ｄ．約０．２ｍＭから約２ｍＭの濃度の、亜鉛と
を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記クエン酸塩の濃度が、約１５から約２５ｍＭである、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記亜鉛の濃度が、約０．６から約０．９ｍＭである、請求項２３〜２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
約１：３から約１：５のマグネシウム対クエン酸塩のモル比を生じる濃度の、マグネシウム含有化合物をさらに含む、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
約７．４のｐＨを有する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
ａ．インスリンリスプロが、約１００Ｕ／ｍＬの濃度であり、
ｂ．クエン酸塩が、約１５ｍＭの濃度であり、
ｃ．トレプロスチニルが、約１μｇ／ｍＬの濃度であり、
ｄ．亜鉛が、約０．６ｍＭの濃度であり、
かつ
ｅ．約５ｍＭの濃度の塩化マグネシウムと、
ｆ．約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾールと、
ｇ．約１２ｍｇ／ｍＬの濃度の、グリセロールと、
をさらに含み、
約７．４のｐＨを有する、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
ａ．インスリンリスプロが、約２００Ｕ／ｍＬの濃度であり、
ｂ．クエン酸塩が、約１５ｍＭの濃度であり、
ｃ．トレプロスチニルが、約１μｇ／ｍＬの濃度であり、
ｄ．亜鉛が、約０．８ｍＭの濃度であり、
かつ
ｅ．約５ｍＭの濃度の塩化マグネシウムと、
ｆ．約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾールと、
ｇ．約１２ｍｇ／ｍＬの濃度の、グリセロールと
をさらに含み、
約７．４のｐＨを有する、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
ａ．インスリンと、
ｂ．約５から約２５ｍＭの濃度の、クエン酸塩と、
ｃ．約０．０４から約２０μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニルと、
ｄ．防腐剤と、
ｅ．インスリンの６分子当り少なくとも２個の亜鉛イオンを提供するのに十分な濃度の、亜鉛を含む安定剤と
を含み、
室温で約７．０から約７．８のｐＨを有する、医薬組成物。
【請求項３１】
療法において使用するための、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
糖尿病の治療において使用するための、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
糖尿病の治療のための薬物の製造における請求項１〜３０のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３４】
請求項１〜３０のいずれか一項に記載の医薬組成物のうちのいずれか一つを含む製造物。
【請求項３５】
多目的バイアルである、請求項３４に記載の製造物。
【請求項３６】
多目的カートリッジである、請求項３４に記載の製造物。
【請求項３７】
再使用可能なペン型注射器である、請求項３４に記載の製造物。
【請求項３８】
使い捨てペン型装置である、請求項３４に記載の製造物。
【請求項３９】
持続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置である、請求項３４に記載の製造物。
【請求項４０】
持続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置において使用するための容器施栓系である、請求項３４に記載の製造物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食後の血液グルコース変動幅を弱めるために糖尿病の治療において使用するためおよび高血糖の急性治療のための医薬組成物である。ヒトインスリンまたはインスリン類似体、クエン酸塩、トレプロスチニルおよび安定剤を含む、組成物は、既存の市販のインスリン組成物より速い注射部位からのインスリンの取り込みを有し、商業用途のために安定である。組成物は、持続皮下インスリン注入（ＣＳＩＩ）においてまたはインスリンが必要とされる場合に高血糖の急性治療として使用するための、食事時間インスリン活性を提供するために有用である。
【背景技術】
【０００２】
インスリンの時間−作用プロファイルは、食後の血液グルコースレベルをコントロールするために重要である。健康な個体において、膵臓は、吸収された食物に反応してインスリンのスパイクを分泌し、これは数分以内に血漿インスリンレベルの増加をもたらす。１型糖尿病を有する個体および２型糖尿病を有するある種の個体においては、インスリンが投与される必要がある。しかしながら、投与されたインスリンは、皮下腔からゆっくり血液に入る。食事の初めにおける遅すぎるインスリンの遅延放出および作用の開始は、食事中または食事直後の高血糖に繋がる。皮下腔からの作用の遅延性持続時間は、食後の低血糖を引き起こし得る食間の過剰インスリンに繋がる。
【０００３】
インスリン製品の時間作用を加速するために先行の取り組みがなされてきた。こうした製品を開発するための初期の取り組みには、インスリンリスプロ（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標））、インスリンアスパルト（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））、およびインスリングルリジン（ＡＰＩＤＲＡ（登録商標））のような、新規の即効型インスリン類似体の開発が含まれた。インスリンリスプロおよびインスリンアスパルトは、二量体−二量体界面を弱めかつ皮下条件下の六量体の安定性を変更するヒトインスリンからのアミノ酸配列の変更によって即効作用を達成する。インスリングルリジンは、ヒトインスリンにおけるアミノ酸鎖の配列の変更も含む。しかしながら、その市販製剤は、亜鉛が無くかつ安定化六量体を形成しない。即効型であると述べられているが、まだ開発中である別のインスリン類似体、フルオロログ（Ｆｌｕｏｒｏｌｏｇ）は、インスリンＢ鎖の位置２４におけるＰｈｅ残基に結合した単一のフッ素原子を含む。
【０００４】
即効型インスリン類似体インスリンリスプロ、アスパルトおよびグルリジンは、１９９０年代および２０００年代初期に利用可能になった。しかしながら、いわゆる即効型インスリン類似体を用いてさえ、最大血漿インスリンレベルには、皮下注射後５０〜９０分まで達しない。これは、正常に機能している膵臓から放出される内因性のインスリンより遅くかつグルコース吸収プロファイルに常には一致しない。
【０００５】
調査された即効作用を達成するための別の手段は、インスリンと組み合わせて提供された場合にインスリンの時間作用プロファイルを改善する成分または賦形剤の使用である。例えば、特許文献１は、ニコチンアミドなどの、ニコチン性化合物、およびアミノ酸アルギニン、および場合によってはグルタミン酸を添加することによって既存のインスリン療法と比較してより速い作用の開始が達成され得ることを述べている。特許文献２は、単独でまたは多価陰イオン化合物と組み合わせて、インスリンおよびオリゴ糖を含む組成物を開示しており、こうした組成物は速効性であることを述べている。特許文献３は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などの、亜鉛キレート剤、クエン酸またはクエン酸ナトリウムなどの、「溶解／安定化」剤として公報に記載されている別の賦形剤、およびマグネシウム含有化合物と組み合わせてインスリンを含有する組成物を開示しており、こうした組成物は、より急速な吸収速度およびピーク濃度からの下降を有することを述べている。特許文献４は、ペプチドおよび血管拡張剤を含む組成物を記載し、３つの異なるカテゴリーからの血管拡張剤のリストを開示し、インスリンリスプロおよびニトログリセリンを含有する組成物のデータを提供し、こうした製剤は即効型であることを述べている。
【０００６】
これらおよび他の取り組みにもかかわらず、注射部位から血液内へのインスリンのより急速な取り込み、既存のインスリン製品より急速な作用の開始および／または相殺、ならびに貯蔵中および使用状態の化学的および物理的安定性を有するインスリン組成物の必要性が依然としてある。本発明は、これらの需要のうちの１つまたは複数を満たす組成物を提供することを目的とする。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第８，３２４，１５７号
【特許文献２】米国特許出願公開第２０１３／０２３１２８１号
【特許文献３】米国特許出願公開第２０１４／０１１３８５６号
【特許文献４】米国特許出願公開第２０１５／００６５４２３号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
驚いたことにある特定の濃度のクエン酸塩およびトレプロスチニルの両方を含有する組成物が、既存の市販されているインスリン組成物より急速な時間作用プロファイルを有すること、ならびにそれらの濃度のクエン酸塩およびトレプロスチニルの両方を含有する組成物の化学的および物理的安定性が、組成物に亜鉛および界面活性剤、塩化マグネシウムまたは塩化ナトリウムなどの１種または複数の追加の安定剤を含めることによって、時間作用における改善を排除することなく、維持され得ることが発見されている。
【０００９】
したがって、本発明は、インスリン、約５から約２５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約０．０４から約２０μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、インスリンの６分子当り少なくとも２個の亜鉛イオンを提供するのに十分な濃度の、亜鉛、防腐剤、および１種または複数の追加の安定剤を含み、室温で約７．０から約７．８のｐＨを有する医薬組成物を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約１００から約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５から約２５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約０．５から約２μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．２から約１ｍＭの濃度の、亜鉛、約２．５から約３．８ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾール、約０．０３から約０．１２ｗ／ｖの濃度の、ポロキサマー１８８、約１：３のマグネシウム対クエン酸塩のモル比を生じる濃度の、塩化マグネシウム、約１から約２ｍｇ／ｍＬの濃度の、グリセロールを含み、室温で約７．０から約７．８のｐＨを有する。
【００１１】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約１００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．６ｍＭの濃度の、亜鉛、約０．０９％ｗ／ｖの濃度の、ポロキサマー１８８、約５ｍＭの濃度の、塩化マグネシウム、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾール、約１．６１ｍｇ／ｍＬの濃度の、グリセロールを含み、約７．４のｐＨを有する。
【００１２】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．８ｍＭの濃度の、亜鉛、約０．０６から０．１２％ｗ／ｖの濃度の、ポロキサマー１８８、約５ｍＭの濃度の、塩化マグネシウム、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾール、約１．６１ｍｇ／ｍＬの濃度の、グリセロールを含み、約７．４のｐＨを有する。
【００１３】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約１００から約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５から約２５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約０．５から約２μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、および約０．２から約２ｍＭの濃度の、亜鉛を含む。
【００１４】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約１００から約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５から約２５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約０．５から約２μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．２から約２ｍＭの濃度の、亜鉛、および約１：１から約１：５のマグネシウム対クエン酸塩のモル比を生じる濃度の、マグネシウムを含む。
【００１５】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約１００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．６ｍＭの濃度の、亜鉛、および約５ｍＭの濃度の、マグネシウムを含む。
【００１６】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約１００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．６ｍＭの濃度の、亜鉛、約５ｍＭの濃度の、マグネシウム、および約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾールを含む。
【００１７】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約１００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．６ｍＭの濃度の、亜鉛、約５ｍＭの濃度の、マグネシウム、約３．１５ｍｇの濃度の、ｍ−クレゾール、および約１２ｍｇ／ｍＬの濃度の、グリセロールを含む。
【００１８】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約１００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．６ｍＭの濃度の、亜鉛、約５ｍＭの濃度の、マグネシウム、約３．１５ｍｇの濃度の、ｍ−クレゾール、および約１０から約５０ｍＭの総塩化物濃度を含み、約７．４のｐＨを有する。
【００１９】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約１００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．６ｍＭの濃度の、亜鉛、約５ｍＭの濃度の、マグネシウム、約３．１５ｍｇの濃度の、ｍ−クレゾール、約１２ｍｇ／ｍＬの濃度の、グリセロール、および約１０から約５０ｍＭの総塩化物濃度を含む。
【００２０】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約１００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．６ｍＭの濃度の、亜鉛、約５ｍＭの濃度の、マグネシウム、約３．１５ｍｇの濃度の、ｍ−クレゾール、約１２ｍｇ／ｍＬの濃度の、グリセロール、および約１０から約５０ｍＭの総塩化物濃度を含み、約７．４のｐＨを有する。
【００２１】
特定の実施形態において、医薬組成物は、ｐＨ７．４で約１００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．３ｍＭの濃度の、亜鉛、約７ｍＭの濃度のリン酸塩、約１６ｍｇ／ｍＬの濃度の、グリセロールを含む。
【００２２】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、および約０．７から約１．７ｍＭの濃度の、亜鉛を含む。
【００２３】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．８ｍＭの濃度の、亜鉛、および約５から約１０ｍＭの濃度のマグネシウムを含む。
【００２４】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．８ｍＭの濃度の、亜鉛、および約５ｍＭの濃度のマグネシウムを含む。
【００２５】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．８ｍＭの濃度の、亜鉛、約５から約１０ｍＭの濃度のマグネシウム、および約１０から約５０ｍＭの総塩化物濃度を含む。
【００２６】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．８ｍＭの濃度の、亜鉛、約５から約１０ｍＭの濃度のマグネシウム、および約１２ｍｇ／ｍＬの濃度のグリセロールを含む。
【００２７】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．８ｍＭの濃度の、亜鉛、約５から約１０ｍＭの濃度のマグネシウム、約１２ｍｇ／ｍＬの濃度のグリセロール、および約１０から約５０ｍＭの総塩化物濃度を含む。
【００２８】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．７から約１．７ｍＭの濃度の、亜鉛、および約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾールを含む。
【００２９】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．８ｍＭの濃度の、亜鉛、約５から約１０ｍＭの濃度のマグネシウム、および約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度のｍ−クレゾールを含む。
【００３０】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．８ｍＭの濃度の、亜鉛、約５から約１０ｍＭの濃度のマグネシウム、約１０から約５０ｍＭの総塩化物濃度、および約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾールを含む。
【００３１】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．８ｍＭの濃度の、亜鉛、約５から約１０ｍＭの濃度のマグネシウム、約１２ｍｇの濃度のグリセロール、および約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾールを含む。
【００３２】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．８ｍＭの濃度の、亜鉛、約５から約１０ｍＭの濃度のマグネシウム、約１２ｍｇ／ｍＬの濃度のグリセロール、および約１０から約５０ｍＭの総塩化物濃度、および約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾールを含む。
【００３３】
特定の実施形態において、医薬組成物は、約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロ、約１５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約１μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、約０．８ｍＭの濃度の、亜鉛、約５ｍＭの濃度のマグネシウム、約１２ｍｇ／ｍＬの濃度のグリセロール、および約１０から約５０ｍＭの総塩化物濃度、および約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾールを含む。
【００３４】
加えて、本発明は、それを必要とするヒトに有効量の本発明の医薬組成物を投与することを含む糖尿病を治療する方法も提供する。
【００３５】
加えて、本発明は、療法において使用するための医薬組成物を提供する。より詳細には、本発明は、糖尿病の治療において使用するための医薬組成物を提供する。本発明は、糖尿病の治療のための薬物の製造における医薬組成物の使用も提供する。
【００３６】
加えて、本発明は、医薬組成物を含む製造物を提供する。より詳細には、ある種の態様において製造物は、多目的バイアル、カートリッジ、再使用可能なペン型注射器、使い捨てペン型装置、持続皮下インスリン注入療法用のポンプ装置または持続皮下インスリン注入療法用のポンプ装置において使用するための容器施栓系（ｃｏｎｔａｉｎｅｒ  ｃｌｏｓｕｒｅ  ｓｙｓｔｅｍ）である。
【００３７】
本明細書において使用する場合、「組成物」と言う語は、インスリンおよび他の成分または賦形剤が、単一の組み合わせ製剤、典型的には水性製剤内にあるインスリンおよび他の成分または賦形剤の組み合わせを指す。
【００３８】
本明細書において用いられる場合、「インスリン」は、ヒトインスリンまたは即効型の構造変異体、突然変異タンパク質、あるいはヒトインスリンの機能活性を有するがヒトインスリンより作用の開始が速いヒトインスリンの類似体を意味する。ヒトインスリンの特定の即効型類似体は、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、およびインスリングルリジンである。市販の製品のためのインスリンは、組み換えＤＮＡ法を用いてまたは化学合成によって生成され得る。組み換え法は、よく知られており、非常に好ましい。ヒトインスリンの分子（ＣＡＳ番号１１０６１−６８−０）は、２つのアミノ酸鎖、ＡおよびＢからなり、その配列はよく知られている。
【００３９】
ヒトインスリンＡ鎖は、次のアミノ酸の配列を有する：
Ｇｌｙ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｉｌｅ  Ｃｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ（配列番号１）。
【００４０】
ヒトインスリンＢ鎖は、次のアミノ酸の配列を有する：
Ｐｈｅ  Ｖａｌ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ
Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ（配列番号２）。
【００４１】
鎖は、２つのジスルフィド結合：ＣｙｓＡ７−ＣｙｓＢ７およびＣｙｓＡ２０−ＣｙｓＢ１９によって連結される。Ａ鎖は、ＣｙｓＡ６−ＣｙｓＡ１１において鎖内ジスルフィド結合を有する。ヒトインスリンは、実験式Ｃ２５７Ｈ３８３Ｎ６５Ｏ７７Ｓ６および５８０８の分子量を有する。
【００４２】
ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）における原薬、インスリンリスプロは、位置２８および２９におけるＢ鎖上の天然のプロリン−リジン配列（２８Ｂ−Ｌ−リシン−２９Ｂ−Ｌ−プロリンヒトインスリン）の逆位を除きその一次アミノ酸配列に関してヒトインスリンと同一である。インスリンリスプロ（ＣＡＳ番号１３３１０７−６４−９）は、モルベースでヒトインスリンと等力であるが皮下注射後のその効果は、注射された可溶性のヒトインスリンのそれよりも急速かつ持続時間が短いことが分かっている。ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）は、防腐剤および安定剤としてｍ−クレゾール、浸透張力調節剤（グリセロール）、緩衝剤（二塩基性リン酸ナトリウム）、安定剤（酸化亜鉛）ならびにビヒクルのためのｐＨ調整剤を含有する。
【００４３】
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｍａ．ｅｕｒｏｐａ．ｅｕ／ｄｏｃｓ／ｅｎ＿ＧＢ／ｄｏｃｕｍｅｎｔ＿ｌｉｂｒａｒｙ／ＥＰＡＲ＿−＿Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＿Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ／ｈｕｍａｎ／００００８８／ＷＣ５０００５０３２９．ｐｄｆを参照のこと。インスリンリスプロの分子は、アミノ酸配列が下記の配列番号３によって与えられる、インスリンリスプロＢ鎖と架橋したヒトインスリンＡ鎖（配列番号１）からなる：
Ｐｈｅ  Ｖａｌ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ
Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｔｈｒ（配列番号３）。
【００４４】
インスリンリスプロの化学式はＣ２５７Ｈ３８３Ｎ６５Ｏ７７Ｓ６でありその分子量は約５８０８である。インスリンリスプロの１単位は、０．０３４７ｍｇのインスリンリスプロに相当する。ｈｔｔｐ：／／ｎｉｂ．ｇｏｖ．ｉｎ／Ｂｏｘ％２０３．ｐｄｆを参照のこと。
【００４５】
ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標）における原薬である、インスリンアスパルト（ＣＡＳ番号１１６０９４−２３−６）は、別の即効性インスリン類似体である。その構造は、次のアミノ酸配列に表されるように、ヒトインスリン（配列番号１）のＡ鎖およびＢ２８においてＰｒｏがＡｓｐで置き換えられているＢ鎖（Ｐｒｏ−Ｂ２８−Ａｓｐヒトインスリン）からなる：
Ｐｈｅ  Ｖａｌ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ
Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ（配列番号４）。
【００４６】
インスリンアスパルト（２８Ｂアスパラギン酸−ヒトインスリン）は、実験式Ｃ２５６Ｈ３８１Ｎ６５Ｏ７９Ｓ６および約５８２６の分子量を有する。インスリンアスパルトの１単位は、６ｎｍｏｌに相当し、０．０３５ｍｇの無塩無水インスリンアスパルトと一致する。  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｏｖｏｎｏｒｄｉｓｋ．ｃｏｍ．ａｕ／ｍｅｄｉａ／ＰＩｓ／ＮｏｖｏＲａｐｉｄ＿ＮｏｖｏＭｉｘ＿ＰＩ３ａ．ｐｄｆを参照のこと。
【００４７】
ＡＰＩＤＲＡ（登録商標）における原薬である、インスリングルリジン（ＣＡＳ番号２０７７４８−２９−６）は、さらに別の即効性インスリン類似体である。インスリングルリジンの分子は、次のアミノ酸配列において表されるように、ヒトインスリンＡ鎖（配列番号１）およびヒトインスリンと比較して変性されたＢ鎖（Ａｓｎ−Ｂ３−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｂ２９−Ｇｌｕ）からなる：
Ｐｈｅ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｎ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ
Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ（配列番号５）。
【００４８】
インスリングルリジン（３Ｂ−リジン−２９Ｂ−グルタミン酸−ヒトインスリン）は、実験式Ｃ２５８Ｈ３８４Ｎ６４Ｏ７８Ｓ６および５８２３の分子量を有する。インスリングルリジンの１単位は、０．０３４９ｍｇのインスリングルリジンにほぼ相当する。
【００４９】
次の図式は、血液グルコースの食事時間変動幅の治療における使用について現在認可されているヒトインスリンおよび即効型インスリン類似体のアミノ酸配列およびジスルフィド結合を描く。
【化１】
2018172404.tif 000002
【００５０】
特定の実施形態において、本発明の組成物は、約４０から約５００Ｕ／ｍＬのインスリンの濃度を有する。特定の実施形態において、本発明の組成物は、約１００から約５００Ｕ／ｍＬのインスリンの濃度を有する。特定の実施形態において、本発明の組成物は、約１００から約３００Ｕ／ｍＬのインスリンの濃度を有する。特定の実施形態において、本発明の組成物は、約１００から約２００Ｕ／ｍＬのインスリンの濃度を有する。特定の好ましい実施形態において、組成物は、約１００Ｕ／ｍＬまたは約２００Ｕ／ｍＬを含む。
【００５１】
一実施形態において、インスリンは、ヒトインスリン、またはヒトインスリンの即効型構造変異体、突然変異タンパク質、もしくは類似体、例えばインスリンリスプロ、インスリンアスパルトまたはインスリングルリジンからなる群から選択される。好ましい実施形態において、インスリンは、インスリンリスプロである。
【００５２】
本発明において実証されたインスリンの時間作用プロファイルにおける改善は、ある特定の濃度のクエン酸塩およびトレプロスチニルの使用によって達成される。
【００５３】
「クエン酸塩」と言う語は、化学名２−ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボン酸塩、分子式Ｃ６Ｈ５Ｏ７−３、および１８９の分子量を有する、クエン酸イオンを含有する任意の化合物を指す。クエン酸イオンは、植物および動物において広く分布しており、天然に存在する食餌の構成要素である。クエン酸イオンは、酸化代謝における一般的な代謝産物であり、骨の重要な構成要素である。いくつかのクエン酸塩は、以下を含めて、食品における使用に関して米国食品医薬品局によるＧＲＡＳ（一般に安全と認められる（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ  ｒｅｇａｒｄｅｄ  ａｓ  ｓａｆｅ））である。
【表１】
2018172404.tif 000003
【００５４】
種々のクエン酸塩含有化合物は、例えば、クエン酸、クエン酸一水和物、無水クエン酸、クエン酸ナトリウム、無水クエン酸三ナトリウム、クエン酸三ナトリウム二水和物を含めた、米国食品医薬品局不活性化成分データベースによる非経口薬剤製品にも含まれる。本発明の組成物において用いられる詳細なクエン酸塩化合物は、酸性形態または種々の塩形態、特にアルカリ（例えば、ナトリウムおよびカリウム）塩および／またはその一水和物もしくは二水和物であってよい。それらの中で、クエン酸ナトリウムは、好ましい。
【００５５】
速効性および安定性の両方である組成物において用いられる得るクエン酸塩の濃度は、約５から約２５ｍＭの範囲であることが分かっている。ある種の組成物は、約１５、約２０または約２５ｍＭのクエン酸塩濃度を有する。より高いクエン酸塩の濃度は、時間作用におけるより大きな改善に繋がり得るが、安定性の観点からはより大きな負担にも繋がり得ることが分かっている。したがって、範囲の上限のクエン酸塩濃度を有する組成物は、下記により詳細を記載するように、長期貯蔵および使用のための化学的および物理的安定性を有するために追加の安定剤を必要とする。
【００５６】
トレプロスチニルは、プロスタサイクリンの合成類似体であり、化学名（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，９ａＳ）−［［２，３，３ａ，４，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（３Ｓ）−３−ヒドロキシオクチル］−１Ｈ−ベンゾ［ｆ］インデン−５−イル］オキシ］酢酸（ＣＡＳ番号８１８４６−１９−７）、３９０．５２の分子量およびＣ２３Ｈ３４Ｏ５の分子式を有する。トレプロスチニルは、Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標）、Ｔｙｖａｓｏ（登録商標）およびＯｒｅｎｉｔｒａｎ（商標）の商品名で販売されている市販の薬剤製品における有効成分であり、運動に関連した症状を軽減する（Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標））ためならびに運動能力を改善する（Ｔｙｖａｓｏ（登録商標）およびＯｒｅｎｉｔｒａｎ（商標））ために肺動脈性肺高血圧症の治療に適応される。Ｔｙｖａｓｏ（登録商標）およびＯｒｅｎｉｔｒａｎ（商標）は、それぞれ、吸入および経口剤形であり、Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標）は、連続的注入として皮下または静脈内使用に適応される。Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標）は、１、２．５、５および１０ｍｇ／ｍＬの投与量強度（ｄｏｓａｇｅ  ｓｔｒｅｎｇｔｈ）で現在入手可能であり、１ｍＬ毎に３ｍｇのｍ−クレゾール、６．３ｍｇのクエン酸ナトリウム、５．３ｍｇ（１、２．５および５ｍｇ／ｍＬ強度）または４．０ｍｇ（１０ｍｇ／ｍＬ強度）いずれかの塩化ナトリウム、および注射用水を含有する。
【００５７】
トレプロスチニルは、クエン酸塩のように、インスリンの時間作用プロファイルにおける改善に寄与するために含められる。しかしながら、クエン酸塩とは異なり、トレプロスチニルの濃度の増加は、安定性への負の影響を有することは見つかっていない。しかしながら、トレプロスチニルの強力な血管拡張効果が原因で、本発明の組成物におけるトレプロスチニルの濃度は、望ましくない全身効果を生じるほど高くてはならない。
【００５８】
さらに、所与の時間において所与の対象に投与される、インスリンの量、およびしたがって組成物の体積は、対象の血液グルコースレベルおよび／または予想される炭水化物取り込みに基づいて用量設定される。結果として、提供されたトレプロスチニルの総量は、注射ごとに異なるであろう。例えば、ある環境において糖尿病は、１００Ｕ／ｍＬのインスリンリスプロ組成物から１０μＬにすぎない総注入量になるであろう、わずか１単位のインスリンが投与されることを望み得る。一方で、現在利用できる注射装置は、単回注射において８０Ｕもの高用量を提供する−１００Ｕ／ｍＬ組成物からのこれほどの用量の総容積は、１単位用量の総容積より１桁以上大きく、かつ一部の２型糖尿病患者は、通常２回以上の注射を必要とする、１００インスリン単位より多い用量を必要とし得る。
【００５９】
したがって、インスリンおよびトレプロスチニルが単一の組み合わせ製剤中に共に存在する組成物において、トレプロスチニル濃度は、比較的小用量のインスリンが必要とされる場合でさえ、時間作用における改善に寄与するのに十分でなければならないが、比較的高用量のインスリンが必要とされる場合に望ましくない全身効果を生じるほど高くてはならない。特定の実施形態において、組成物は、約０．１から約５０μＭ、または約０．０４から約２０μｇ／ｍＬの濃度のトレプロスチニルを含む。特定の実施形態において、組成物は、約０．０４から約１０μｇ／ｍＬの濃度のトレプロスチニルを含む。約１００から約２００Ｕ／ｍＬの範囲のインスリン濃度を有するインスリン組成物において好ましいトレプロスチニル濃度は、約０．５から約２μｇ／ｍＬである。特定の実施形態において、トレプロスチニル濃度は、約１μｇ／ｍＬである。
【００６０】
上で述べた通りに、クエン酸塩の添加は、時間作用における改善に繋がる一方で、安定性の観点からはより大きな負担にも寄与し得る。したがって、本発明の組成物は、過剰の亜鉛、界面活性剤、塩化マグネシウムなどの、マグネシウム含有化合物、ならびに塩化マグネシウムおよび／または塩化ナトリウムなどの、塩化物含有化合物などの、即効型インスリン類似体の現在利用できる市販製剤に含まれる上記およびそれら以上の１種または複数の安定剤を必要とする。
【００６１】
亜鉛に関して、本発明の組成物は、少なくとも、インスリン分子が、２つの特異的な、高親和性亜鉛結合部位を有する、安定化六量体を形成するのに少なくとも十分な亜鉛イオンを提供する濃度の亜鉛を含まなければならない。例えば、ｈｔｔｐ：／／ｒｄ．ｓｐｒｉｎｇｅｒ．ｃｏｍ／ａｒｔｉｃｌｅ／１０．１００７／ｓ１０５３４−００５−３６８５−ｙで利用可能な、ＢｉｏＭｅｔａｌｓ  １８：２９５〜３０３（２００５年）を参照されたい。こうしたインスリン六量体に組み込まれている亜鉛イオンは、時に「結合」亜鉛と呼ばれる。したがって、本発明の組成物は、インスリンの六量体１つ当り少なくとも２つの亜鉛のイオンを提供するのに十分な亜鉛を含まなければならない。例えば、約１００Ｕ／ｍＬ、約２００Ｕ／ｍＬ、約３００Ｕ／ｍＬまたは約５００Ｕ／ｍＬのインスリン濃度を有する本発明の特定の実施形態において、インスリン六量体１つ当り２個の亜鉛のイオンを提供するために必要な最低亜鉛濃度は、それぞれ、約０．２ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．６ｍＭまたは約１ｍＭであろう。
【００６２】
過剰な亜鉛の含有−すなわち、上述のインスリン六量体における２つの特異的な、高親和性亜鉛結合部位において結合するであろうより多くの亜鉛−は、しかしながら組成物をさらに安定化するために用いてよい。こうした亜鉛は、時に「遊離」または「非結合」亜鉛と呼ばれる。現在利用できる亜鉛含有製剤は、インスリンの六量体１つ当り約２から４個の亜鉛イオンを含む。例えば、インスリンリスプロ（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標））およびインスリンアスパルト（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））の１００Ｕ／ｍＬの製剤は、インスリンの６分子当り約３個の亜鉛のイオンを有し、これは約０．３ｍＭの濃度に相当する。現在利用できるＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）の２００Ｕ／ｍＬの製剤は、インスリンの６分子当り約３．５個の亜鉛のイオンを有し、これは約０．７ｍＭの亜鉛濃度に相当する。現在利用できる１００Ｕ／ｍＬのＥｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙによって販売されているヒトインスリンの製剤（ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）Ｒ）は、インスリンの６分子当り約２．３個の亜鉛のイオンを含有し、これは約０．２３ｍＭの亜鉛濃度に相当する。
【００６３】
本発明のある種の組成物において、過剰な遊離または非結合亜鉛の含有−すなわち、上述のインスリン六量体における２つの特異的な、高親和性亜鉛結合部位において結合していない亜鉛は、安定化効果を有することが分かっている。約１００Ｕ／ｍＬのインスリンリスプロおよび約１ｍＭまでの亜鉛濃度を有する組成物−これは約０．２ｍＭの結合および約０．８ｍＭの非結合または遊離亜鉛を構成するであろう−は、速効性かつ安定性の両方であることが分かっている。しかしながら、多すぎる遊離または非結合亜鉛の含有は、時間作用における改善を弱め得る。例えば、約５ｍＭの亜鉛濃度と共に約１００Ｕ／ｍＬのインスリンリスプロを有する組成物−これは約４．８ｍＭの非結合亜鉛を構成するであろう−は、より低い亜鉛濃度を有する組成物で見られる時間作用における改善を有さないことが分かった。特定の実施形態において、亜鉛の濃度は、約０．２から約２ｍＭ、約０．３から約１．７ｍＭ、約０．７から約１．７ｍＭ、約０．４から約１ｍＭ、約０．４から約０．８ｍＭまたは約０．６から約０．９ｍＭの範囲である。特定の実施形態において亜鉛の組成物は、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１、約１．２５または約１．７ｍＭである。約１００Ｕ／ｍＬのインスリンリスプロを含む特定の実施形態において、亜鉛の濃度は、約０．６ｍＭである。約２００Ｕ／ｍＬのインスリンリスプロを含む特定の実施形態において、亜鉛の濃度は、約０．８ｍＭである。
【００６４】
別の用いてよい安定剤は、界面活性剤である。非経口の医薬組成物において使用するための開示されている界面活性剤の例には、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）などの、ポリソルベート、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３０００、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ−１００などのポリエチレングリコール、ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル（ＣＡＳ番号：９００２−９２−０、商品名ＢＲＩＪ（登録商標）で販売）などのポリエチレングリコール、ＭＹＲＪ（商標）などの、アルコキシル化脂肪酸、ポリプロピレングリコール、ポロキサマー１８８（ＣＡＳ番号９００３−１１−６、商品名ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ−６８で販売）およびポロキサマー４０７（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ１２７）などのブロックコポリマー、ソルビタンアルキルエステル（例えば、ＳＰＡＮ（登録商標））、ポリエトキシ化ヒマシ油（例えば、ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））ならびにトレハロースおよびトレハロースラウリン酸エステルなどの、その誘導体が含まれる。特定の実施形態において、界面活性剤は、ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル、ポロキサマー１８８およびトレハロースラウリン酸エステルからなる群から選択される。最も好ましいものは、ポロキサマー１８８である。特定の実施形態において、界面活性剤の濃度は、約０．００３から約２％ｗ／ｖ、約０．００３から約０．３％ｗ／ｖまたは約０．０１から約０．２％ｗ／ｖの範囲である。界面活性剤がポロキサマー１８８である好ましい実施形態において、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．０６から約０．１２ｗ／ｖの範囲である。特定の実施形態において、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．０６％ｗ／ｖである。他の実施形態において、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．０９％ｗ／ｖである。他の実施形態において、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．１２％ｗ／ｖである。
【００６５】
本発明の組成物において用いてよい別の安定剤は、マグネシウムであり、これは例えばＭｇＣｌ２の分子式および９５．２１１の分子量を有する、塩化マグネシウムなどのマグネシウム含有化合物の添加によって提供され得る。ＭｇＣｌ２が、ある種の組成物において安定化効果を有し得る一方で、高塩化物イオン（Ｃｌ−）濃度は、低温におけるインスリン結晶化をもたらすことがあり、クエン酸塩の濃度を超えるマグネシウム（Ｍｇ＋２）濃度は、インスリン沈殿をもたらすであろう。したがって、含まれていてよい塩化マグネシウムの最大量は、含まれているクエン酸塩の量によって制限される。特定の実施形態において、本発明の組成物における安定剤としてマグネシウムを提供するためにＭｇＣｌ２が用いられる場合、塩化マグネシウム：クエン酸塩のモル比は、約１：２から約１：１０の範囲である。特定の実施形態においてマグネシウムの比は、約１：１から約１：５の範囲である。好ましくは塩化マグネシウム：クエン酸塩のモル比は、約１：３から約１：５の範囲である。特定の実施形態において、マグネシウムの濃度は、約１から約１５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、マグネシウムの濃度は、約１から約５ｍＭ、約５から約１０ｍＭまたは約１０から約１５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、マグネシウムの濃度は、約２．５、約５、約７．５または約１０ｍＭである。
【００６６】
本発明の組成物において用いてよい別の安定剤は、分子式ＮａＣｌおよび５８．４４の分子量を有する、塩化ナトリウムなどの、塩化物含有化合物である。塩化ナトリウムは、５ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウムを含む、ＡＰＩＤＲＡ（登録商標）（インスリングルリジン）および０．５８ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウムを含む、ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標）（インスリンアスパルト）などの、幾つかの現在利用できる即効型インスリン類似体の製剤において用いられる。塩化ナトリウムが安定剤として用いられる本発明の特定の実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約１から約５０ｍＭの範囲である。塩化ナトリウムが安定剤として用いられる本発明の特定の実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約１０から約４０ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約１５から約２５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９または約２０ｍＭである。
【００６７】
ＭｇＣｌ２およびＮａＣｌの両方が、塩化物（Ｃｌ−）イオンの添加をもたらし、かつ組成物の総塩化物含有量が高すぎる場合、組成物中のインスリンは、低温で結晶化することがあり、高温における不安定性にもつながり得る。したがって、ＭｇＣｌ２および／またはＮａＣｌが安定剤として用いられる場合は、組成物の総塩化物含有量が考慮されなければならない。ＭｇＣｌ２および／またはＮａＣｌが安定剤として用いられる場合に組成物中に存在する総塩化物量を決定することは、塩化物イオンも、他の構成要素の添加によって、例えばインスリンバルク医薬品有効成分（ＡＰＩ）と共に、ｐＨ調整剤のために必要で有り得る少量のＨＣｌの追加によって、および／または酸化亜鉛（ＺｎＯ）をＨＣｌで安定化することによって調製された溶液の形態で加えられ得る、Ｚｎの供給に関連して、組成物に加えられ得るという事実も、考慮しなければならない。したがって、ＭｇＣｌ２および／またはＮａＣｌが安定剤として用いられる場合は全ての供給源からの総塩化物濃度が考慮されなければならない。濃度に関して、低温インスリン結晶化が約１００ｍＭのＮａＣｌを含有する組成物において観察されているが、こうした問題は、約３０ｍＭまでの総塩化物を含有する組成物においては観察されなかった。さらに、比較的高い塩化物濃度に関連した低温結晶化問題は、クエン酸塩濃度に対して影響されやすいことも分かっている。したがって、本明細書において提供された範囲の下端のクエン酸塩濃度を有する本発明の組成物は、本明細書において提供された範囲の上端のクエン酸塩濃度を有する組成物よりも相対的に高い塩化物濃度により耐性であり得る。例えば、２５ｍＭのクエン酸塩を含有する製剤への５０〜７５ｍＭもの高い塩化ナトリウム濃度の添加は、低温結晶化問題に繋がることが観察されているが、こうした問題は、５０ｍＭの塩化ナトリウムが１５ｍＭのクエン酸塩製剤に加えられた場合または２５ｍＭの塩化ナトリウムが２５ｍＭのクエン酸塩製剤に加えられた場合のどちらでも一貫しては観察されていない。安定剤としてのＮａＣｌおよび／またはＭｇＣｌ２の使用によって添加された総塩化物は、約５０ｍＭより多くてはならない。本発明の特定の実施形態において、全ての供給源からの、総塩化物濃度は、約１０から約５０ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約１３から約４５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約２０から約２５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約１５から約３５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約２０から約２５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭまたは約２５ｍＭである。
【００６８】
特定の実施形態において、組成物は、組成物が商業的に許容可能な安定性プロファイルを維持することを保証するために２種以上の追加の安定剤を含んでいてよい。本発明の組成物において用いてよい好ましい安定剤の組み合わせには、過剰の亜鉛およびマグネシウムが含まれる。本発明の組成物において用いてよい別の好ましい安定剤の組み合わせには、亜鉛、ポロキサマー１８８などの界面活性剤、および塩化マグネシウムまたは塩化ナトリウムが含まれる。
【００６９】
本発明の組成物には、抗菌特性を提供し、さらに安定性利益を提供し得る、１種または複数の防腐剤が含まれる。組成物は、最初に生成されたときは無菌であり、しかしながら、組成物が多目的バイアルまたはカートリッジにおいて提供される場合、製剤の他の構成要素と親和性がある抗菌性防腐剤化合物または化合物の混合物が、典型的には規制当局および薬局方抗菌性防腐剤要件に適合する十分な強度で追加される。米国薬局方モノグラフ、Ｉｎｓｕｌｉｎ  ｌｉｓｐｒｏ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．ＵＳＰ２９−ＮＦ２４、英国薬局方モノグラフ２００８第ＩＩＩ巻：Ｉｎｓｕｌｉｎ  ａｓｐａｒｔ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、米国薬局方モノグラフ、Ｉｎｓｕｌｉｎ  ａｓｓａｙｓ、および米国薬局方モノグラフ総則ＵＳＰ２９−ＮＦ２４．ロックビル、ＭＤ：米国薬局方協会、２００５．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｔｅｓｔｉｎｇ、２４９９〜２５００頁を参照されたい。好ましい保存料は、アリール酸およびフェノール性化合物、またはこうした化合物の混合物である。有効濃度は、上記で参照した方法を用いて容易に確認され得る。インスリン製品において一般的に用いられる防腐剤には、フェノール（ＣＡＳ番号１０８−９５−２、分子式Ｃ６Ｈ５ＯＨ、分子量９４．１１）、およびｍ−クレゾール（ＣＡＳ番号１０８−３９−４、分子式Ｃ７Ｈ８Ｏ、分子量１０８．１４）が含まれる。現在の市販の組成物は、例えば、３．１５ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾール（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）およびＡＰＩＤＲＡ（登録商標））、１．７２ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾールおよび１．５０ｍｇ／ｍＬのフェノール（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））、ならびに２．５ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾール（ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）Ｒ  Ｕ−５００）を含有する。一実施形態において、防腐剤は、フェノールおよびｍ−クレゾールからなる群から選択される。好ましくは防腐剤は、ｍ−クレゾールである。特定の実施形態においてｍ−クレゾール濃度は、約２．５から約３．８ｍｇ／ｍＬである。好ましくはｍ−クレゾールの濃度は、約３．１５ｍｇ／ｍＬである。
【００７０】
体液と近似的に等張ではない溶液は投与された時に刺痛感覚を生じ得るので、組成物を投与した時に注射部位における体液の張性（すなわち、重量オスモル濃度）と可能な限り近く近似的に一致することは、望ましい。したがって、組成物は、注射の部位において体液と近似的に等張であることが望ましい。等張化剤の非存在下での組成物の重量オスモル濃度が組織の重量オスモル濃度より十分に低い場合（血液については、約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、重量オスモル濃度に関する欧州薬局方要件は、＞２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、等張化剤は、一般には組成物の張性を約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに上昇させるために加えられるべきである。組成物の重量オスモル濃度は、安定剤（１種または複数）を含めた、組成物中の他の賦形剤の個性および濃度によって決定される。したがって、組成物中の種々の賦形剤の全ての濃度は、等張化剤が加えられなければならないかどうかを決定するために評価されなければならず、こうした評価および決定は、標準技術を用いて容易になされる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｄａｖｉｄ  Ｂ．ＴｒｏｙおよびＰａｕｌ  Ｂｅｒｉｎｇｅｒ編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００６年、２５７〜２５９頁、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、Ｌｉｎｄａ  Ｅｄ  Ｆｅｌｔｏｎ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ、２０１３年、２７７〜３００頁を参照されたい。典型的な等張化剤には、グリセロール（グリセリン）、マンニトールおよび塩化ナトリウムが含まれる。等張化剤の添加が必要とされる場合、グリセロールは、好ましい。特定の実施形態においてグリセロールの濃度は、約１から約１６ｍｇ／ｍＬである。特定の実施形態において、グリセロールの濃度は、約１から約２ｍｇ／ｍＬ、約３から約４ｍｇ／ｍＬ、約５から約６ｍｇ／ｍＬ、約７から約８ｍｇ／ｍＬ、約９から約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１から約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３から約１４ｍｇ／ｍＬ、または約１５から約１６ｍｇ／ｍＬである。特定の実施形態において、グリセロールの濃度は、約５、約１２または約１６ｍｇ／ｍＬである。
【００７１】
上述のように時間作用における改善に寄与するために加えられる、クエン酸塩は、緩衝特性も有することも既知であるが、必要に応じて追加の緩衝化合物を加えてよい。こうした緩衝化合物の例は、二塩基性リン酸ナトリウムなどの、リン酸緩衝液、酢酸ナトリウムおよびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、またはＴＲＩＳである。追加の緩衝化合物が必要な場合、ＴＲＩＳまたはリン酸緩衝液は、好ましい。市販のインスリン組成物に関するｐＨは、７．４±０．１を一般的目標ｐＨとして、通常は７．２から７．６の範囲である。本発明のｐＨは、典型的には約７．０から約７．８であり、生理学的に適切な酸および塩基、典型的には塩酸１０％および水酸化ナトリウム１０％を用いて調整される。好ましくは、ｐＨは、約７．４である。
【００７２】
本発明の組成物のための投与経路は、典型的には自己投与皮下注射によって、例えば、注射器もしくはペン型装置の使用によって、または静脈内、皮内を通して、インスリンポンプ装置を用いる持続皮下インスリン注入療法によってなされ、あるいは腹腔内経路も用いてよい。
【００７３】
上述の通り、本発明は、医薬組成物を含む製造物も提供する。特定の実施形態において、製造物は、多目的バイアルである。他の実施形態において、製造物は、多目的充填済みカートリッジである。他の実施形態において、製造物は、再使用可能なペン型注射器である。他の実施形態において、製造物は、使い捨てペン型装置である。他の実施形態において、製造物は、持続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置である。他の実施形態において、製造物は、持続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置において使用するための容器施栓系である。
【００７４】
一実施形態において、本発明は、インスリン、約５から約２５ｍＭの濃度の、クエン酸塩、約０．０４から約２０μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニル、インスリンの６分子当り少なくとも２個の亜鉛イオンを提供するのに十分な濃度の、亜鉛、防腐剤、および１種または複数の追加の安定剤を含み、室温で約７．０から約７．８のｐＨを有する医薬組成物を提供する。
【００７５】
特定の実施形態において、亜鉛の濃度は、約０．２から約２ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、亜鉛濃度は、約０．２から約１ｍＭである。特定の実施形態において、亜鉛濃度は、約０．６から約０．８ｍＭである。特定の実施形態において、亜鉛濃度は、約０．６ｍＭである。特定の実施形態において、亜鉛濃度は、約０．７ｍＭである。特定の実施形態において、亜鉛濃度は、約０．８ｍＭである。特定の実施形態において、亜鉛濃度は、約０．９ｍＭである。
【００７６】
特定の実施形態において、１種または複数の追加の安定剤は、界面活性剤、塩化マグネシウムおよび塩化ナトリウムからなる群から選択される。
【００７７】
特定の実施形態において、１種または複数の追加の安定剤は、約０．００３から約２％ｗ／ｖの濃度で存在する、界面活性剤を含む。特定の実施形態において、界面活性剤は、ポロキサマー１８８である。特定の実施形態において、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．０６から約０．１２％ｗ／ｖである。特定の実施形態において、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．０６％ｗ／ｖである。特定の実施形態において、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．０９％ｗ／ｖである。特定の実施形態において、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．１２％ｗ／ｖである。
【００７８】
特定の実施形態において、１種または複数の追加の安定剤は、約１：２から約１：１０の塩化マグネシウム：クエン酸塩のモル比を生じる濃度で存在する、塩化マグネシウムを含む。特定の実施形態において、マグネシウムの比は、約１：１から約１：５の範囲である。特定の実施形態において、塩化マグネシウム：クエン酸塩のモル比は、約１：３から約１：５である。特定の実施形態において、マグネシウムの濃度は、約１から約１５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、マグネシウムの濃度は、約１から約５ｍＭ、約５から約１０ｍＭまたは約１０から約１５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、マグネシウムの濃度は、約２．５、約５、約７．５または約１０ｍＭである。
【００７９】
特定の実施形態において、１種または複数の追加の安定剤は、約１０から約４０ｍＭの濃度で存在する、塩化ナトリウムを含む。特定の実施形態において、塩化ナトリウム濃度は、約１５から約２５ｍＭである。特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約５０ｍＭ以下である。特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約１０から約５０ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約１３から約４５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約２０から約２５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約１５から約３５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約２０から約２５ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭまたは約２５ｍＭである。
【００８０】
特定の実施形態において、インスリン濃度は、約１００から約５００Ｕ／ｍＬである。特定の実施形態において、インスリン濃度は、約１００から約３００Ｕ／ｍＬである。特定の実施形態において、インスリン濃度は、約１００Ｕ／ｍＬまたは約２００Ｕ／ｍＬのいずれかである。特定の実施形態において、インスリンは、インスリンリスプロである。
【００８１】
特定の実施形態において、クエン酸塩の濃度は、約１０から約２５ｍＭである。特定の実施形態において、クエン酸塩の濃度は、約１５ｍＭである。
【００８２】
特定の実施形態において、組成物は、約０．０４から約２０μｇ／ｍＬの濃度のトレプロスチニルを含む。特定の実施形態において、トレプロスチニルの濃度は、約０．０４から約１０μｇ／ｍＬである。特定の実施形態において、トレプロスチニルの濃度は、約０．５から約２μｇ／ｍＬである。特定の実施形態において、トレプロスチニルの濃度は、約１μｇ／ｍＬである。
【００８３】
特定の実施形態において、防腐剤は、ｍ−クレゾールである。特定の実施形態において、ｍ−クレゾールの濃度は、約２．５から約３．８ｍｇ／ｍＬである。特定の実施形態において、ｍ−クレゾールの濃度は、約３．１５ｍｇ／ｍＬである。
【００８４】
特定の実施形態において、組成物は、等張化剤をさらに含む。特定の実施形態において、等張化剤は、グリセロールである。特定の実施形態において、グリセロールの濃度は、約１から約１５ｍｇ／ｍＬである。特定の実施形態において、グリセロールの濃度は、約１から約２ｍｇ／ｍＬである。
【００８５】
特定の実施形態において、医薬組成物は、最大インスリン濃度までの時間（Ｔｍａｘ）、最大インスリン濃度の２分の１に達するまでの時間（初期１／２Ｔｍａｘ）、濃度時間曲線の下降局面中に最大インスリン濃度の２分の１に達するまでの時間（後期１／２Ｔｍａｘ）、初期と後期１／２Ｔｍａｘの間の時間（Ｔｍａｘ  ｓｐｒｅａｄ）、インスリン濃度曲線下の部分面積に基づく異なる時間において吸収された総インスリン用量の割合（例えば、ＡＵＣ０〜３０分、ＡＵＣ０〜６０分、ＡＵＣ０〜１２０分、ＡＵＣ０〜１８０分）、総インスリン濃度の２分の１に達するまでの時間（Ｔ５０）、最大グルコース注入速度に達するまでの時間（ＧＩＲｍａｘ）、最大グルコース注入速度の２分の１に達するまでの時間（初期１／２ＧＩＲｍａｘ）、濃度時間曲線の下降局面中に最大グルコース注入速度の２分の１に達するまでの時間（後期１／２ＧＩＲｍａｘ）、ＧＩＲ曲線下の部分面積に基づく異なる時間において注入された総グルコースの割合（例えば、ＧＩＲ０〜３０分、ＧＩＲ０〜６０分、ＧＩＲ０〜１２０分、ＧＩＲ０〜１８０分）などの、時間作用に関連する１つまたは複数の薬物動態学的または薬力学的パラメーターによって測定される場合に、同一のインスリンを含有するがクエン酸塩またはトレプロスチニルを含有しない組成物より少なくとも２０％急速である、血液へのインスリンの取り込み、作用の開始および／または作用の持続時間を提供する。
【００８６】
特定の実施形態において、医薬組成物は、上述の１つまたは複数の薬物動態学的または薬力学的パラメーターによって測定される場合に、同一のインスリンを含有するがクエン酸塩またはトレプロスチニルを含有しない組成物より少なくとも３０％、少なくとも４０％または少なくとも５０％急速な血液中へのインスリンの取り込み、作用の開始および／または作用の持続時間を提供する。
【００８７】
特定の実施形態において、医薬組成物は、上述の１つまたは複数の薬物動態学的または薬力学的パラメーターによって測定される場合に、同一のインスリンを含有するがクエン酸塩またはトレプロスチニルを含有しない組成物より約２０から約５０％、約２０から約３０％、約３０から約４０％または約４０から約５０％急速な血液中へのインスリンの取り込み、作用の開始および／または作用の持続時間を提供する。
【００８８】
特定の実施形態において、医薬組成物は、ＥＤＴＡなどの、任意の追加のキレート剤、ニトログリセリンなどの、任意の追加の血管拡張剤、および／または任意のオリゴ糖を含まない。
【００８９】
特定の実施形態において、医薬組成物は、バイアルまたは再使用可能なペン型注射器におけるカートリッジのために２〜８℃で少なくとも２４か月および３０℃までの温度で使用時に最大２８日間の貯蔵を可能にするために安定である。特定の実施形態において、医薬組成物は、バイアルまたは再使用可能なペン型注射器におけるカートリッジのために２〜８℃で少なくとも３６か月および３０℃までの温度で使用時に最大２８日間の貯蔵を可能にするために安定である。
【００９０】
特定の実施形態において、組成物は、持続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置において使用するために最大７日間安定である。
【００９１】
本発明の追加の実施形態には、下記のものが含まれる。
１．インスリン、クエン酸塩、およびトレプロスチニルを含む医薬組成物。
２．インスリンが、ヒトインスリン、インスリンリスプロ、インスリンアスパルトまたはインスリングルリジンからなる群から選択される、上記の実施形態の医薬組成物。
３．インスリンが、インスリンリスプロである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
４．インスリン濃度が、約１００から約５００Ｕ／ｍＬである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
５．インスリン濃度が、約１００から約３００Ｕ／ｍＬである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
６．インスリン濃度が、約１００から約２００Ｕ／ｍＬである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
７．インスリン濃度が、約１００Ｕ／ｍＬである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
８．インスリン濃度が、約２００Ｕ／ｍＬである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
９．クエン酸塩の濃度が、約５から約２５ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
１０．クエン酸塩の濃度が、約１５から約２５ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
１１．クエン酸塩の濃度が、約１５から約２０ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
１２．クエン酸塩の濃度が、約５、約１０、約１２、約１５、約１８、約２０または約２５ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
１３．クエン酸塩の濃度が、約１５ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
１４．トレプロスチニルの濃度が、約０．０４から約２０μｇ／ｍＬである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
１５．トレプロスチニルの濃度が、約０．０４から約１０μｇ／ｍＬである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
１６．トレプロスチニルの濃度が、約０．５から約１０μｇ／ｍＬである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
１７．トレプロスチニルの濃度が、約０．５から約２μｇ／ｍＬである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
１８．トレプロスチニルの濃度が、約０．５、約０．６、約１、約２、約２．３、約９．３または約１０μｇ／ｍＬである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
１９．トレプロスチニルの濃度が、約１μｇ／ｍＬである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
２０．組成物が、亜鉛をさらに含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
２１．亜鉛の濃度が、約０．２から約２ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
２２．亜鉛の濃度が、約０．３から約１．７ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
２３．亜鉛の濃度が、約０．７から約１．７ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
２４．亜鉛の濃度が、約０．３から約１ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
２５．亜鉛の濃度が、約０．４から約０．８ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
２６．亜鉛の濃度が、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９ｍＭ、約１．２５または約１．７ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
２７．亜鉛の濃度が、約０．６ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
２８．亜鉛の濃度が、約０．７ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
２９．亜鉛の濃度が、約０．８ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
３０．亜鉛の濃度が、約０．９ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
３１．マグネシウムをさらに含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
３２．約１：２から約１：１０のマグネシウム：クエン酸塩のモル比を生じる濃度で存在するマグネシウムを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
３３．約１：１から約１：５のマグネシウム：クエン酸塩のモル比を生じる濃度で存在するマグネシウムを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
３４．マグネシウム：クエン酸塩のモル比が、約１：３から約１：５である、上記の実施形態の医薬組成物。
３５．約１から約１５ｍＭの濃度のマグネシウムを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
３６．約２．５から約１０ｍＭの濃度のマグネシウムを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
３７．約５から約１０ｍＭの濃度のマグネシウムを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
３８．約２．５から約７．５ｍＭの濃度のマグネシウムを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
３９．約２．５、約５、約７．５または約１０ｍＭの濃度のマグネシウムを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
４０．マグネシウムが、塩化マグネシウムとして提供される、マグネシウムを含む上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
４１．塩化ナトリウムをさらに含む、上記の実施形態の医薬組成物。
４２．組成物が、約１から約５０ｍＭの範囲の濃度の塩化ナトリウムを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
４３．組成物が、約１０から約４０ｍＭの範囲の濃度の塩化ナトリウムを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
４４．組成物が、約１５から約２５ｍＭの範囲の濃度の塩化ナトリウムを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
４５．組成物が、約１から約２０ｍＭの範囲の濃度の塩化ナトリウムを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
４６．組成物が、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９または約２０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
４７．総塩化物濃度が、約１から約１００ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
４８．総塩化物濃度が、約１０から約１００ｍＭである、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
４９．総塩化物濃度が、約１０から約５０ｍＭの範囲である、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
５０．総塩化物濃度が、約１３から約４５ｍＭの範囲である、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
５１．総塩化物濃度が、約１６から約３５ｍＭの範囲である、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
５２．総塩化物濃度が、約２０から約２５ｍＭの範囲である、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
５３．特定の実施形態において、総塩化物濃度は、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭまたは約２５ｍＭである。
５４．組成物が、界面活性剤をさらに含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
５５．組成物が、ポロキサマー１８８をさらに含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
５６．約０．００３から約２％ｗ／ｖの濃度のポロキサマー１８８を含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
５７．約０．００３から約０．３％ｗ／ｖの濃度のポロキサマー１８８を含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
５８．約０．０１から約０．２％ｗ／ｖの濃度のポロキサマー１８８を含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
５９．約０．０６から約０．１２ｗ／ｖの濃度のポロキサマー１８８を含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
６０．組成物が、防腐剤をさらに含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
６１．ｍ−クレゾールおよびフェノールからなる群から選択される防腐剤を含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
６２．ｍ−クレゾールである防腐剤を含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
６３．約２．５から約３．８ｍｇ／ｍＬの濃度のｍ−クレゾールを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
６４．約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度のｍ−クレゾールを含む、上記の実施形態のいずれかの医薬組成物。
６５．等張化剤をさらに含む、上記の実施形態の医薬組成物。
６６．グリセロールである等張化剤を含む、上記の実施形態の医薬組成物。
６７．約１から約２０ｍｇ／ｍＬの濃度のグリセロールを含む、上記の実施形態の医薬組成物。
６８．約１から約１５ｍｇ／ｍＬの濃度のグリセロールを含む、上記の実施形態の医薬組成物。
６９．約１から約２ｍｇ／ｍＬ、約３から約４ｍｇ／ｍＬ、約５から約６ｍｇ／ｍＬ、約７から約８ｍｇ／ｍＬ、約９から約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１から約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３から約１４ｍｇ／ｍＬまたは約１５から約１６ｍｇ／ｍＬの濃度のグリセロールを含む、上記の実施形態の医薬組成物。
７０．約５、約１２または約１６ｍｇ／ｍＬの濃度のグリセロールを含む、上記の実施形態の医薬組成物。
７１．約１２ｍｇ／ｍＬの濃度のグリセロールを含む、上記の実施形態の医薬組成物。
【００９２】
本発明は、限定するものとは解釈されない、以下の実施例によってさらに例示される。
【実施例】
【００９３】
薬物動態学的および薬力学的調査
０．５μｇ／ｍｌのトレプロスチニルおよび／または１５ｍＭのクエン酸ナトリウムと共に製剤されたインスリンリスプロ
糖尿病の（アロキサン誘発した）、去勢された、前もって取り付けた血管アクセスポートを有する雄のユカタンミニブタ（平均月齢２３か月、平均体重４５ｋｇ）をスタッフおよび獣医師の管理下で用いる。糖尿病の動物は、個別に飼育し、常に淡水へのアクセスを有する。それらに標準食の１日当たり２回の食事を与え、それらの糖尿病状態を管理するために１日当たり２回の適切な維持基礎インスリンおよび食事インスリンを受けさせる。
【００９４】
試験物（下表の組成物Ａ、ＢおよびＣ）を、示した量のクエン酸塩および／またはトレプロスチニルをＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）のバイアルに加えることによって製剤する。必要量のトレプロスチニルを、１ｍｇ／ｍＬのＲｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標）のバイアルから回収する。Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標）は１ｍＬ毎に、３ｍｇのｍ−クレゾール、６．３ｍｇのクエン酸ナトリウムおよび５．３ｍｇの塩化ナトリウムも含有するので、試験組成物へのトレプロスチニルの追加は、少量のこれらの賦形剤の追加、ならびにＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）賦形剤のわずかな希釈という結果にもなる。しかしながら、こうした少量は、組成物の特性に影響するとは考えられず、したがって下表１には反映されない。
【表２】
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【００９５】
調査の前日に、動物にそれらの一日の割当量の半分を与えて０．２Ｕ／ｋｇのＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）Ｍｉｘ７５／２５インスリンをそれらの朝の維持投与において受けさせる。全ての調査動物は、一晩絶食してそれらの夜のインスリンまたは調査日の薬剤投与の前の食餌を受けさせない。
【００９６】
調査の朝、全ての動物を拘束用の吊りひも内に置いてそれらの（血液試料採取のために装備した）血管アクセスポートを接触させ開通性を確認する。動物を、無作為に治療群に入れる。
【００９７】
調査は、ｎ＝２０で完全クロスオーバーデザインである。１匹の動物は、ポート非開通が原因で４つの部分のうちの２つから抑えるので、組成物ＢおよびＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）はｎ＝２０であるが組成物ＡおよびＣはｎ＝１９である。
【００９８】
２つのベースライン血液試料を収集した後（−３０および−２０分）、動物をそれらの檻に戻して約３００ｇを与える。完全に消費された食事の提示の２０分後に、動物に試験物を、Ｔｅｒｕｍｏインスリン注射器で脇腹（０分）の皮下に注射する（１／２インチ針で０．３または０．５ｍｌ）。全ての調査動物は、残りの採血期間を通してきれいな、淡水へのアクセスを有する。
【００９９】
連続的な血液試料（それぞれ２．０ｍＬ）を、次の時点においてそれぞれの動物から収集する：−３０、−２０（次いで、直ちに餌を与える）、０（投与直前）、ＳＣ投薬後５、１０、１５、３０、４５、６０、７５、９０、１０５、１２０、１５０、１８０、２４０、および３６０分。
【０１００】
血液試料（抗凝血性：無し［血清］）を、周囲温度において少なくとも３０分間だが２時間以下維持し、凝固させる。血清を、次いで遠心分離によって分離して２つのアリコートに分割し約−７０℃で冷凍保管する。
【０１０１】
血清グルコース濃度を、自動化ＡＵ４８０臨床化学分析装置（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州、ブレア）を用いて決定する。ＰＫ用のアリコートを、翌日配達サービスによってドライアイス上でかつ詳細の試料送品明細書を含めてＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．、ミズーリ州、セントチャールズに送る。
【０１０２】
血清グルコースデータを、別段の指定がない限り平均（ｍｇ／ｄＬ）＋／−平均の標準誤差（ＳＥＭ）として下表２に示す。
【表３】
2018172404.tif 000005
【０１０３】
ＰＫ分析のために血清インスリン濃度を、総インスリンＲＩＡを用いて測定する。アッセイのための定量の下限および上限は、それぞれ、２０ｐＭおよび５０００ｐＭである。定量の下限未満の値は、２０ｐＭであると仮定する。ノンコンパートメント薬物動態学的解析を、Ｐｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ｖ６．３を用いて実行する。血清インスリン濃度から導かれたＰＫパラメーターを、下表３において提供する。
【表４】
2018172404.tif 000006
【０１０４】
本調査は、本発明の組成物が、薬物動態学的および／または薬力学的時間作用を改善したことを支持する。
【０１０５】
１０ｍＭのクエン酸塩および／または１０ｍｇ／ｍＬのトレプロスチニルと共に製剤されたインスリンリスプロ
異なるクエン酸塩の濃度および／または１０μｇ／ｍＬのトレプロスチニルを含む組成物の調査を、概ね上述の手順に従って糖尿病の（アロキサン誘発した）、去勢された、雄のユカタンミニブタ（平均月齢２４か月、平均体重４３ｋｇ）において実行する。
【０１０６】
試験物（下表の組成物Ｄ〜Ｈ）を、示した量のクエン酸塩および／またはトレプロスチニルをＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）のバイアルに加えることによって製剤する。上述の調査と同様に、必要量のトレプロスチニルを、１ｍｇ／ｍＬのＲｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標）のバイアルから回収するので、試験組成物へのトレプロスチニルの追加は、少量のｍ−クレゾール、クエン酸ナトリウムおよび塩化ナトリウムの追加、ならびにＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）賦形剤のわずかな希釈という結果にもなる。しかしながら、こうした少量は、組成物の特性に影響するとは考えられず、したがって下表４には反映されない。
【表５】
2018172404.tif 000007
【０１０７】
調査は、各ブタが各試験物で試験される１９匹のブタの完全クロスオーバーデザインとして設計する。数匹の動物は、ポート非開通が原因で調査に参加せずしたがって製剤Ｆ〜Ｈはｎ＝１９およびＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）ｎ＝１７である一方で製剤ＤおよびＥは、ｎ＝１８である。
【０１０８】
血清グルコースデータを、別段の指定がない限り平均（ｍｇ／ｄＬ）＋／−ＳＥＭとして下表５に示す。
【表６】
2018172404.tif 000008
【０１０９】
Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照ならびに組成物Ｅ、ＦおよびＨに関する血清インスリン濃度およびＰＫパラメーターを、概ね上で述べた通りに生成および分析して、ＰＫ結果を下表６において提供する。
【表７】
2018172404.tif 000009
【０１１０】
本調査は、本発明の組成物が、薬物動態学的および／または薬力学的時間作用を改善したことを支持する。
【０１１１】
１５ｍＭのクエン酸塩および０．６〜９．３μｇ／ｍＬのトレプロスチニルと共に製剤されたインスリンリスプロ
【０１１２】
１５ｍＭのクエン酸塩および／または異なる濃度のトレプロスチニルを含む組成物の調査を、概ね上述の手順に従って糖尿病の（アロキサン誘発した）、去勢された、雄のユカタンミニブタ（平均月齢２５か月、平均体重４３ｋｇ）において実行する。
【０１１３】
試験物（下表の組成物Ｉ〜Ｍ）は、示した量のクエン酸塩および／またはトレプロスチニル、ならびに下記で指定した組成物中のＭｇＣｌ２および／またはＮａＣｌを、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）のバイアルに加えることによって製剤する。上述の調査と同様に、必要量のトレプロスチニルを、１ｍｇ／ｍＬのＲｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標）のバイアルから回収するので、試験組成物へのトレプロスチニルの追加は、少量のｍ−クレゾール、クエン酸ナトリウムおよび塩化ナトリウムの追加、ならびにＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）賦形剤のわずかな希釈という結果にもなる。しかしながら、こうした少量は、組成物の特性に影響するとは考えられず、したがって下表７には反映されない。
【表８】
2018172404.tif 000010
【０１１４】
調査は、各ブタが各試験物で試験される１７匹のブタの完全クロスオーバーデザインとして設計する。一部の動物は、ポート非開通または低いベースライングルコースが原因で調査に参加しない。Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）のデータはｎ＝１７、組成物Ｉはｎ＝１７、組成物Ｊはｎ＝１６、組成物Ｋはｎ＝１５、組成物Ｌはｎ＝１６および組成物Ｍはｎ＝１６である。
【０１１５】
血清グルコースデータを、別段の指定がない限り平均（ｍｇ／ｄＬ）＋／−ＳＥＭとして下表８に示す。
【表９】
2018172404.tif 000011
【０１１６】
血清インスリン濃度およびＰＫパラメーターを、概ね上で述べた通りに生成および分析して、ＰＫ結果を下表９において提供する。
【表１０】
2018172404.tif 000012
【０１１７】
本調査は、本発明の組成物が、薬物動態学的および／または薬力学的時間作用を改善したことを支持する。
【０１１８】
１０μｇ／ｍＬのトレプロスチニルおよび１５または２５ｍＭいずれかのクエン酸塩と共に製剤されたインスリンリスプロ
１０μｇ／ｍＬのトレプロスチニルおよび１５または２５ｍＭいずれかのクエン酸塩を含む組成物の調査を、概ね上述の手順に従って糖尿病の（アロキサン誘発した）、去勢された、雄のユカタンミニブタ（平均月齢３３か月、平均体重４９ｋｇ）において実行する。
【０１１９】
試験物（下表の組成物ＮおよびＯ）を、示した量のクエン酸塩、トレプロスチニル、ＮａＣｌおよびＭｇＣｌ２をＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）のバイアルに加えることによって製剤する。上述の調査と同様に、必要量のトレプロスチニルを、１ｍｇ／ｍＬのＲｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標）のバイアルから回収するので、試験組成物へのトレプロスチニルの追加は、少量のｍ−クレゾール、クエン酸ナトリウムおよび塩化ナトリウムの追加、ならびにＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）賦形剤のわずかな希釈という結果にもなる。しかしながら、こうした少量は、組成物の特性に影響するとは考えられず、したがって下表１０には反映されない。
【表１１】
2018172404.tif 000013
【０１２０】
調査は、各ブタが各試験物で試験される２０匹のブタの完全クロスオーバーデザインとして設計する。１匹の動物が、ポート非開通または低いベースライングルコースが原因で組成物Ｎ群において参加せず、その群に関するデータはｎ＝１９である。血清グルコースデータを、別段の指定がない限り平均（ｍｇ／ｄＬ）＋／−ＳＥＭとして下表１１に示す。
【表１２】
2018172404.tif 000014
【０１２１】
集合的に、上述の調査は、本発明の組成物が、既存のインスリン類似体製品の市販製剤より速い薬物動態学的および／または薬力学的作用を有することを支持する。
【０１２２】
安定性調査
様々なクエン酸塩濃度、トレプロスチニルおよび他の賦形剤と共に製剤された場合のインスリンリスプロの安定性を評価する。下表１２に示した、例示的な製剤の組成物は、インスリンリスプロ医薬品有効成分を、示した他の賦形剤と共に製剤することによって調製する。
【表１３】
2018172404.tif 000015
【０１２３】
溶液を、０．２２μＭのＰＥＳメンブレン（カタログ番号：ＳＣＧＰ００５２５、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ビレリカ、ＭＤ）を備えた５０ｍｌのＳｔｅｒｉｆｌｉｐ真空フィルターを用いてろ過してクリンプトップを備えた１０ｍＬバイアルまたは３ｍＬガラスインスリンカートリッジのいずれかに分配し、次いでそれぞれ４℃および３０℃でインキュベートする。４℃の試料を、撹拌せずに６４日間貯蔵し、一方で３０℃の試料を、撹拌せずに３６日間インキュベートし、その後に２８日間の模擬使用期間が続く。使用模擬実験では２８日間１日に３回容器を逆さまにして試料をそれぞれのバイアルまたはカートリッジから取り出す。いかなる土曜、日曜または休日の前または後の日の各時点においても２回の取り出しを行う。８０μＬのアリコートを、Ｔｅｒｕｍｏ  Ｕ−１００インスリン（１／２ｃｃ  ２７Ｇ×１／２インチ）注射器を用いて各バイアルから取り出し、３０μＬを、Ｃｏｍｆｏｒｔ  Ｐｏｉｎｔ  ６ｍｍ（３１Ｇ×１／４インチ）針を用いてＨｕｍａＰｅｎ  Ｌｕｘｕｒａ  ＨＤを用いて各カートリッジから取り出す。
【０１２４】
試料を、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）および分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いて分析するために３６日（３０℃における使用期間の１日目）、５０日および６４日に収集する。
【０１２５】
全ての製剤を、約１００ｒｐｍで振とうしながら３７℃で３ｍＬのガラスインスリンカートリッジにおいても評価する。本条件は、持続皮下インスリン注入療法における安定性を示すことが意図される。本条件からの終点試料を、ＲＰ−ＨＰＬＣおよびＳＥＣを用いて分析する。
【０１２６】
ＲＰ−ＨＰＬＣ分析を、２１４ｎｍでＵＶ検出器を用いて安定時点でのそれぞれの製剤におけるタンパク質純度を評価するために実行する。それぞれの試料（５μＬ）を、０．６ｍＬ／分の流速ならびに移動相Ａ（５０ｍＭ硫酸塩、ｐＨ２．３＋２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ））および移動相Ｂ（５０ｍＭ硫酸塩、ｐＨ２．３＋５０％アセトニトリル（ｖ／ｖ））で４０℃でＺｏｒｂａｘ  ３００ＳＢ−Ｃ１８、ラピッドレゾリューション４．６×１５０ｍＭ  ３．５ミクロンカラム（部品番号８６３９７３−９０２）を用いて分離する。０、３、１５、２１、２６、２７、２７．５および３５．０分における移動相Ｂの勾配は、それぞれ、２１、２５、２５、３０、８０、８０、２１および２１％である。インスリン含有量を、インスリン主ピーク面積およびＡ２１面積の積分を組み合わせ次いでインスリンリスプロ標準で割ることによってＲＰ−ＨＰＬＣを用いて計算する。Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照と比較した製剤試料のインスリン損失は、４℃および３０℃で６４日間の最後まで全ての試料について５％未満である。Ａ２１での主ピークの外側の試料の割合を、クロマトグラフの主ピーク面積を総ピーク面積で割って１００からその面積およびＡ２１を引くことによって計算する。主ピーク面積の外側の割合は、６４日間４℃において全ての試料について１．７６％未満であり、６４日間３０℃において全ての試料について２．４８％未満である。
【０１２７】
ＳＥＣ分析のために、それぞれの試料（５μＬ）を、２５分の実行時間にわたる移動相（０．１％ＴＦＡ、５０％ＡＣＮ）の定組成溶離で５℃および１．０ｍＬ／分の流速でＳｅｐａｘ  Ｚｅｎｉｘ−Ｃ  ＳＥＣ−８０、７．８×３００ｍＭ、３μｍ粒子カラム（カタログ番号２３３０８０−７８３０）を用いて分離する。
【０１２８】
高分子量ポリマー（％ＨＭＷＰ）の割合を、主ピークより前に溶離する全てのピークの総面積率を積分することによって計算する。結果（％ＨＭＷＰ）を、下表に示す。ＨＭＷＰ形成は、４℃および３０℃で６４日間の最後まで全ての試料について１％未満であり、クエン酸塩含有試料におけるＨＭＷＰ形成は、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照試料におけるＨＭＷＰ形成と同等である。
【表１４】
2018172404.tif 000016
【表１５】
2018172404.tif 000017
【表１６】
2018172404.tif 000018
【表１７】
2018172404.tif 000019
【表１８】
2018172404.tif 000020
【表１９】
2018172404.tif 000021
【表２０】
2018172404.tif 000022
【０１２９】
インスリンリスプロならびに異なる濃度のクエン酸塩、トレプロスチニル、亜鉛および他の賦形剤を含有する製剤を異なる条件に掛ける追加の安定性調査を実行する。クエン酸塩含有製剤の２４種の製剤およびクエン酸塩を含有しない２種の対照製剤を、調製する。製剤におけるクエン酸塩、塩化マグネシウム、Ｚｎ、総塩化物、トレプロスチニルおよびポロキサマーの濃度を、下表２０に示す。
【表２１】
2018172404.tif 000023
【０１３０】
製剤を調製するために、無菌バルク操作用に水中に２００単位のインスリンリスプロ／ｍＬ、２４．２ｍｇグリセリン／ｍＬ、６．３０ｍｇメタクレゾール／ｍＬ、および０．６ｍＭ亜鉛を含有するリスプロ濃縮原液を調製する。本原液は、インスリンリスプロを溶解するために塩酸でｐＨを調節しついで水酸化ナトリウムで７．４０のｐＨに調節する。
【０１３１】
クエン酸塩含有製剤を、リスプロ濃縮物を適切な体積の賦形剤原液、クエン酸ナトリウム、塩化マグネシウム、酸化亜鉛、トレプロスチニル、およびポロキサマー１８８で希釈することにより調製する。目的の塩化物含有量を達成するために、塩化ナトリウムの原液を、一部の製剤に加える。溶液は、無菌バルク操作用に塩酸または水酸化ナトリウムその後適量の水で７．３０〜７．５０に調節されたｐＨである。
【０１３２】
非クエン酸塩製剤を、リスプロ濃縮物を無菌バルク操作用の適切な体積の水でまたは無菌バルク操作用の水および塩化ナトリウム溶液で希釈することにより調製する。溶液は、無菌バルク操作用に塩酸または水酸化ナトリウムその後適量の水で７．３０〜７．５０に調節されたｐＨである。
【０１３３】
製剤を、除菌ろ過し次いで１０．３ｍＬ充填、止め具付き、かつ圧着密封を備えた１０ｍＬガラスバイアルに体積測定して移す。２０個のバイアルを、１回分ごとに充填する。
【０１３４】
調査には、それぞれの製剤のバイアルを、下で述べた通りの、３つの異なる条件のうちの１つに掛けることが含まれる。
【表２２】
2018172404.tif 000024
【０１３５】
上表に示したように、熱ストレスおよび累積ストレス条件には、バイアルを国際安全輸送協会（ＩＳＴＡ）手順３Ａ（２００８年）に記載のように実行される、概略化した輸送ストレス模擬実験に最初に掛けることが含まれる。熱ストレス条件については、バイアルを、次いで３０℃の固定直立型貯蔵庫内に置く。累積ストレス条件については、バイアルを、次いで患者使用模擬実験に掛ける。患者使用模擬実験は、８単位の空気を任意のインスリン注射器に引き込むこと、バイアルを直立位置にしながら針をバイアルに挿入すること、針先がインスリン溶液に接触しないことを確保すること、バイアルに空気を注入すること、バイアルおよび注射器を逆さまにすること、８単位の生成物溶液を取り出すこと、プランジャをゆっくり動かして気泡をバイアル内に押し戻すこと（必要に応じて繰り返す）および最終投与量が８単位となるように注射器プランジャを調節することによって注射器内のいかなる気泡も除去すること、注射器を除去すること、ならびにバイアルを３０℃のインキュベーター内に戻すことによって行う。この手順は、３２日間１日当たり３用量のために繰り返す。投薬されないときは、バイアルを３０℃で立てて貯蔵する。
【０１３６】
化学安定性を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）および逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって試験する。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析を、２１４ｎｍでＵＶ検出器を用いてそれぞれの製剤におけるタンパク質純度を評価するために実行する。それぞれの試料（５μＬ）を、１．０ｍＬ／分の流速ならびに移動相Ａ（５０ｍＭ硫酸塩、ｐＨ２．３＋２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ））および移動相Ｂ（５０ｍＭ硫酸塩、ｐＨ２．３＋５０％アセトニトリル（ｖ／ｖ））で４０℃でＨａｌｏ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＥＳ−Ｃ１８、４．６×１５０ｍＭ  ２．７ミクロンカラム（部品番号９２１２４−７０２）を用いて分離する。０、２、１７、２２、２５、２９、２９．５、および３５分における移動相Ｂの勾配は、それぞれ、２５、２５、２７、４０、９０、９０、２５および２５％である。インスリン含有量を、インスリン主ピーク面積およびＢ３ピーク面積の積分を組み合わせ次いでインスリンリスプロ標準で割ることによって計算する。ＳＥＣのために、それぞれの試料（５０μＬ）を、２５分の実行時間にわたる移動相（０．１％ＴＦＡ、５０％ＡＣＮ）の定組成溶離で５℃および１．０ｍＬ／分の流速でＳｅｐａｘ  Ｚｅｎｉｘ−Ｃ  ＳＥＣ−８０、７．８×３００ｍＭ、３μｍ粒子カラム（カタログ番号２３３０８０−７８３０）を用いて分離する。高分子量ポリマー（％ＨＭＷＰ）の割合を、主ピークより前に溶離する全てのピークの総面積率を積分することによって計算する。累積ストレス条件に掛けた製剤ＰＰおよびＱＱからのそれぞれ１つのバイアルは、粒子状物質形成が原因で試料採取できなかった。全ての他のバイアルを試験し、全ての結果が、効力（９５〜１０５Ｕ／ｍＬ）およびＨＭＷＰ（ＮＭＴ１．５％）の両方についてインスリンリスプロ許容基準内であった。
【０１３７】
物理的安定性を、試料を視覚的に検査する外観試験によって評価する。試料は、透明、無色、および本質的に目に見える粒子が無いことに合格するものとして選別する。全ての製剤の全ての試料は、対照および熱ストレス条件におけるすべての時点で外観試験に合格する。累積ストレス条件についての外観試験結果を、下表２２において提供する。
【表２３】
2018172404.tif 000025
【０１３８】
製剤Ｕ、Ｖ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＡＡ、ＢＢ、ＣＣ、ＤＤおよびＯＯの全てのバイアルは、患者使用模擬実験の３２日目を経て累積ストレス試験に合格する。製剤ＦＦ、ｍＭ、ＮＮ、ＲＲおよびＳＳの全てのバイアルは、２８日目を経て累積ストレス条件に合格する。製剤ＥＥ、ＨＨ、ＩＩ、ＪＪおよびＫＫの全てのバイアルは、２４日目を経て合格する。製剤ＧＧの全てのバイアルは、２１日目を経て合格する。
【０１３９】
上述の調査は、組成物が、冷凍および熱ストレス条件下で化学的および物理的に安定であること、ならびに本発明のある種の組成物が、模擬使用試験下でも３２日間の最後まで商業用途のために十分に安定であることを支持する。
【０１４０】
配列
ヒトインスリンＡ鎖
Ｇｌｙ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｉｌｅ  Ｃｙｓ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ（配列番号１）。
ヒトインスリンＢ鎖
Ｐｈｅ  Ｖａｌ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ
Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ（配列番号２）。
インスリンリスプロＢ鎖
Ｐｈｅ  Ｖａｌ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ
Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｔｈｒ（配列番号３）。
インスリンアスパルトＢ鎖
Ｐｈｅ  Ｖａｌ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ
Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｔｈｒ（配列番号４）。
インスリングルリジンＢ鎖
Ｐｈｅ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｎ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ（配列番号５）。
また、本発明は以下を提供する。
［１］  ａ．インスリンと、
ｂ．約５から約２５ｍＭの濃度の、クエン酸塩と、
ｃ．約０．０４から約２０μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニルと、
ｄ．インスリンの６分子当り少なくとも２個の亜鉛イオンを提供するのに十分な濃度の、亜鉛と、
ｅ．防腐剤と、
ｆ．１種または複数の追加の安定剤と
を含み、室温で約７．０から約７．８のｐＨを有する、医薬組成物。
［２］  前記亜鉛濃度が、約０．２から約２ｍＭである、［１］に記載の医薬組成物。
［３］  前記亜鉛濃度が、約０．２から約１ｍＭである、［１］〜［２］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［４］  前記亜鉛濃度が、約０．６から約０．８ｍＭである、［１］〜［３］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［５］  前記１種または複数の追加の安定剤が、界面活性剤、マグネシウムおよび塩化ナトリウムからなる群から選択される、［１］〜［４］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［６］  前記１種または複数の追加の安定剤が、マグネシウムを含む、［１］〜［５］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［７］  前記マグネシウムが、約１：２から約１：１０のマグネシウム対クエン酸塩のモル比を生じる濃度で存在する、［６］に記載の医薬組成物。
［８］  前記マグネシウム対クエン酸塩のモル比が、約１：３から約１：５である、［７］に記載の医薬組成物。
［９］  前記マグネシウムが、塩化マグネシウムとして提供される、［７］〜［８］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［１０］  前記インスリン濃度が、約１００から約３００Ｕ／ｍＬである、［１］〜［９］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［１１］  前記インスリン濃度が、約１００Ｕ／ｍＬまたは約２００Ｕ／ｍＬのいずれかである、［１］〜［１０］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［１２］  前記インスリンが、インスリンリスプロである、［１］〜［１１］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［１３］  前記クエン酸塩の濃度が、約１０から約２５ｍＭである、［１］〜［１２］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［１４］  前記トレプロスチニルの濃度が、約０．０４から約１０μｇ／ｍＬである、［１］〜［１３］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［１５］  前記トレプロスチニルの濃度が、約０．５から約２μｇ／ｍＬである、［１］〜［１４］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［１６］  前記防腐剤が、ｍ−クレゾールである、［１］〜［１５］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［１７］  前記ｍ−クレゾールの濃度が、約２．５から約３．８ｍｇ／ｍＬである、［１６］に記載の医薬組成物。
［１８］  前記１種または複数の追加の安定剤が、塩化ナトリウムを含む、［１］〜［１７］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［１９］  前記塩化ナトリウムが、約１から約５０ｍＭの濃度で存在する、［１８］に記載の医薬組成物。
［２０］  前記塩化物の総濃度が、約１０から約５０ｍＭである、［１］〜［１９］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［２１］  等張化剤をさらに含む、［１］〜［２０］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［２２］  前記等張化剤が、グリセロールである、［２１］に記載の医薬組成物。
［２３］  前記グリセロールの濃度が、約１から約１５ｍｇ／ｍＬである、［２２］に記載の医薬組成物。
［２４］  ａ．約１００から約２００Ｕ／ｍＬの濃度の、インスリンリスプロと、
ｂ．約５から約２５ｍＭの濃度の、クエン酸塩と、
ｃ．約０．５から約２μｇ／ｍＬの濃度の、トレプロスチニルと、
ｄ．約０．２ｍＭから約２ｍＭの濃度の、亜鉛と
を含む医薬組成物。
［２５］  前記クエン酸塩の濃度が、約１５から約２５ｍＭである、［２４］に記載の医薬組成物。
［２６］  前記亜鉛の濃度が、約０．６から約０．９ｍＭである、［２４］〜［２５］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［２７］  約１：３から約１：５のマグネシウム対クエン酸塩のモル比を生じる濃度の、マグネシウムをさらに含む、［２４］〜［２６］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［２８］  約７．４のｐＨを有する、［１］〜［２７］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［２９］  ａ．インスリンリスプロが、約１００Ｕ／ｍＬの濃度であり、
ｂ．クエン酸塩が、約１５ｍＭの濃度であり、
ｃ．トレプロスチニルが、約１μｇ／ｍＬの濃度であり、
ｄ．亜鉛が、約０．６ｍＭの濃度であり、
かつ
ｅ．約５ｍＭの濃度の塩化マグネシウムと、
ｆ．約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾールと、
ｇ．約１２ｍｇ／ｍＬの濃度の、グリセロールと、
をさらに含み、
約７．４のｐＨを有する、［２４］に記載の医薬組成物。
［３０］  ａ．インスリンリスプロが、約２００Ｕ／ｍＬの濃度であり、
ｂ．クエン酸塩が、約１５ｍＭの濃度であり、
ｃ．トレプロスチニルが、約１μｇ／ｍＬの濃度であり、
ｄ．亜鉛が、約０．８ｍＭの濃度であり、
かつ
ｅ．約５ｍＭの濃度の塩化マグネシウムと、
ｆ．約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度の、ｍ−クレゾールと、
ｇ．約１２ｍｇ／ｍＬの濃度の、グリセロールと
をさらに含み、
約７．４のｐＨを有する、［２４］に記載の医薬組成物。
［３１］  前記組成物が、同一のインスリンを含有するがクエン酸塩およびトレプロスチニルを含有しない組成物よりも少なくとも２０％急速である血液中へのインスリンの取り込みを提供する、［１］〜［３０］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［３２］  前記組成物が、２〜８℃で少なくとも２４か月および３０℃までの温度で使用時に最大２８日間の貯蔵を可能にするために安定である、［１］〜［３０］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［３３］  ［１］〜［３２］のいずれか一項に記載の有効量の医薬組成物を、それを必要とするヒトに投与するステップを含む、糖尿病を治療する方法。
［３４］  療法において使用するための、［１］〜［３２］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［３５］  糖尿病の治療において使用するための、［１］〜［３２］のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［３６］  糖尿病の治療のための薬物の製造における［１］〜［３２］のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
［３７］  ［１］〜［３２］のいずれか一項に記載の医薬組成物のうちのいずれか一つを含む製造物。
［３８］  多目的バイアルである、［３７］に記載の製造物。
［３９］  多目的カートリッジである、［３７］に記載の製造物。
［４０］  再使用可能なペン型注射器である、［３７］に記載の製造物。
［４１］  使い捨てペン型装置である、［３７］に記載の製造物。
［４２］  持続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置である、［３７］に記載の製造物。
［４３］  持続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置において使用するための容器施栓系である、［３７］に記載の製造物。
【配列表】
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