(57)【要約】      （修正有）【課題】ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に対して長期間の保護を誘導する、免疫原抗原を含むＲＳＶワクチンの提供。【解決手段】ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列であって、前記ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする前記核酸コード配列が、特定配列をコードする核酸配列であって、その配列をコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、等からなる特定の群から選択される、ＲＳＶ免疫原をコードする１つ以上の核酸配列を含む組成物。【選択図】図１２
2018065824.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下からなる群から選択される、ＲＳＶ免疫原をコードする１つ以上の核酸配列を含む組成物：
ａ）ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列であって、前記ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする前記核酸コード配列が、
配列番号２をコードする核酸配列であって、配列番号２をコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
少なくとも１１５個以上のアミノ酸である配列番号２のフラグメントをコードする核酸配列であって、配列番号２の前記フラグメントをコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードし、配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるそのタンパク質をコードするコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、および
少なくとも１１５個以上のアミノ酸である配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントをコードする核酸配列であって、配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の前記フラグメントをコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
からなる群から選択される、核酸コード配列、
ｂ）ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列であって、前記ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする前記核酸コード配列が、
配列番号６をコードする核酸配列であって、配列番号６をコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
少なくとも１２５個以上のアミノ酸である配列番号６のフラグメントをコードする核酸配列であって、配列番号６の前記フラグメントをコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードし、配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるそのタンパク質をコードするコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、および
少なくとも１２５個以上のアミノ酸である配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントをコードする核酸配列であって、配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の前記フラグメントをコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
からなる群から選択される、核酸コード配列、
および
ｃ）ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列であって、前記ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする前記核酸コード配列が、
配列番号８をコードする核酸配列であって、配列番号８をコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
少なくとも１２５個以上のアミノ酸である配列番号８のフラグメントをコードする核酸配列であって、配列番号８の前記フラグメントをコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードし、配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるそのタンパク質をコードするコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、および
少なくとも１２５個以上のアミノ酸である配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントをコードする核酸配列であって、配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の前記フラグメントをコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
からなる群から選択される、核酸コード配列。
【請求項２】
以下からなる群から選択される、ＲＳＶ免疫原をコードする１つ以上の核酸配列を含む、請求項１に記載の組成物：
ａ）ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列であって、前記ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする前記核酸コード配列が、
配列番号１を含み、配列番号１に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
少なくとも１１５個以上のアミノ酸をコードする配列番号１のフラグメントを含み、配列番号１に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
配列番号１に少なくとも９８％の相同性があり、配列番号１に少なくとも９８％の相同性があるコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、および
少なくとも１１５個以上のアミノ酸をコードする配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントであって、配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
からなる群から選択される、核酸コード配列、
ｂ）ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列であって、前記ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする前記核酸コード配列が、
配列番号５を含み、配列番号５に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
少なくとも１２５個以上のアミノ酸をコードする配列番号５のフラグメントを含み、配列番号５に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
配列番号５に少なくとも９８％の相同性があり、配列番号５に少なくとも９８％の相同性があるコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、および
少なくとも１２５個以上のアミノ酸をコードする配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントであって、配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
からなる群から選択される、核酸コード配列、
および
ｃ）ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列であって、前記ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする前記核酸コード配列が、
配列番号７を含み、配列番号７に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
少なくとも１２５個以上のアミノ酸をコードする配列番号７のフラグメントを含み、配列番号７に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
配列番号７に少なくとも９８％の相同性があり、配列番号７に少なくとも９８％の相同性があるコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、および
少なくとも１２５個以上のアミノ酸をコードする配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントであって、配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
からなる群から選択される、核酸コード配列。
【請求項３】
以下からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、請求項１に記載の組成物：
ａ）配列番号２を含み、配列番号２に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、
ｂ）配列番号６を含み、配列番号６に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、
および
ｃ）配列番号８を含み、配列番号８に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列。
【請求項４】
以下からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、請求項３に記載の組成物：
ａ）ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列であって、配列番号１を含み、配列番号１に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸コード配列、
ｂ）ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列であって、配列番号５を含み、配列番号５に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸コード配列、
および
ｃ）ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列であって、配列番号７を含み、配列番号７に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸コード配列。
【請求項５】
以下からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、請求項３に記載の組成物：
ａ）配列番号１０をコードする核酸配列、
ｂ）配列番号１４をコードする核酸配列、
および
ｃ）配列番号１６をコードする核酸配列。
【請求項６】
以下からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、請求項３に記載の組成物：
ａ）配列番号９を含む核酸配列、
ｂ）配列番号１３を含む核酸配列、
および
ｃ）配列番号１５を含む核酸配列、
からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
以下からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、請求項１に記載の組成物：
ａ）少なくとも３４５個以上のアミノ酸を有する配列番号２のフラグメントを含み、かつ配列番号２に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも３４５個以上のアミノ酸を有する配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントを含み、かつ配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、
ｂ）少なくとも２００個以上のアミノ酸を有する配列番号６のフラグメントを含み、かつ、配列番号６に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも２００個以上のアミノ酸を有する配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントを含み、かつ配列番号６に少なくとも９８％相同性があるタンパク質をコードする核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、
および、
ｃ）少なくとも２００個以上のアミノ酸を有する配列番号８のフラグメントを含み、かつ、配列番号８に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも２００個以上のアミノ酸を有する配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントを含み、かつ配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列。
【請求項８】
以下からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、請求項７に記載の組成物：
ａ）少なくとも３４５個以上のアミノ酸をコードする配列番号１のフラグメントを含み、かつ配列番号１に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも３４５個以上のアミノ酸をコードする配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含み、かつ配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列を含む、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、
ｂ）少なくとも２００個以上のアミノ酸をコードする配列番号５のフラグメントを含み、かつ配列番号５に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも１２５個以上のアミノ酸をコードする配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含み、かつ配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、
および
ｃ）少なくとも２００個以上のアミノ酸をコードする配列番号７のフラグメントを含み、かつ配列番号７に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも２００個以上のアミノ酸をコードする配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含み、かつ配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列。
【請求項９】
以下からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、請求項１に記載の組成物：
ａ）少なくとも５５０個以上のアミノ酸を有する配列番号２のフラグメントを含み、かつ配列番号２に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも５５０個以上のアミノ酸を有する配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントを含み、かつ配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、
ｂ）少なくとも２７０個以上のアミノ酸を有する配列番号６のフラグメントを含み、かつ配列番号６に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも２７０個以上のアミノ酸を有する配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントを含み、かつ配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、
および
ｃ）少なくとも２７０個以上のアミノ酸を有する配列番号８のフラグメントを含み、かつ配列番号８に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも２７０個以上のアミノ酸を有する配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントを含み、かつ配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列。
【請求項１０】
以下からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、請求項９に記載の組成物：
ａ）少なくとも５５０個以上のアミノ酸をコードする配列番号１のフラグメントを含み、かつ配列番号１に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも５５０個以上のアミノ酸をコードする配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含み、かつ配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列を含む、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、
ｂ）少なくとも２７０個以上のアミノ酸をコードする配列番号５のフラグメントを含み、かつ配列番号５に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも２７０個以上のアミノ酸をコードする配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含み、かつ配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、
および
ｃ）少なくとも２７０個以上のアミノ酸をコードする配列番号７のフラグメントを含み、かつ配列番号７に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも２７０個以上のアミノ酸をコードする配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含み、かつ配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列。
【請求項１１】
以下からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、請求項１に記載の組成物：
ａ）配列番号２に少なくとも９９％の相同性があるＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードし、配列番号２に少なくとも９９％の相同性があるコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸コード配列、
ｂ）配列番号６に少なくとも９９％の相同性があるＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードし、配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸コード配列、
および
ｃ）配列番号８に少なくとも９９％の相同性があるＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸コード配列。
【請求項１２】
以下からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、請求項１１に記載の組成物：
ａ）ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列であって、配列番号１に少なくとも９９％の相同性があり、配列番号１に少なくとも９９％の相同性があるコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸コード配列、
ｂ）ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列であって、配列番５に少なくとも９９％の相同性があり、配列番号５に少なくとも９８％の相同性があるコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸コード配列、
および
ｃ）ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列であって、配列番７に少なくとも９９％の相同性があり、配列番号７に少なくとも９８％の相同性があるコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸コード配列。
【請求項１３】
以下からなる群から選択される核酸配列を含む、請求項１に記載の組成物：
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、ならびに
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列。
【請求項１４】
ＣＣＬ２０をコードする核酸コード配列を更に含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
電気泳動の使用による個体への送達のために製剤化される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２８からなる群から選択される１つ以上のタンパク質をコードする核酸配列を更に含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記１つ以上の核酸コード配列が、１つ以上のプラスミドの一部である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記１つ以上の核酸コード配列のそれぞれが、別々のプラスミドに組み込まれるものの一部である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
ＲＳＶに対する免疫応答を誘導する方法であって、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物を、個体に、前記個体に免疫反応を誘導する有効量で投与することを含む、方法。
【請求項２０】
ＲＳＶが診断された個体を治療する方法であって、治療有効量の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物を個体に投与することを含む、方法。
【請求項２１】
個体のＲＳＶ感染を予防する方法であって、予防有効量の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物を個体に投与することを含む、方法。
【請求項２２】
配列番号２、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１４、および配列番号１６からなる群から選択されるタンパク質。
【請求項２３】
ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列を含む組成物であって、前記ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする前記核酸コード配列が、
配列番号４をコードする核酸配列であって、配列番号４をコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
少なくとも２５個以上のアミノ酸である配列番号４のフラグメントをコードする核酸配列であって、配列番号４の前記フラグメントをコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする核酸配列であって、配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードするコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、および
少なくとも２５個以上のアミノ酸である配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントをコードする核酸配列であって、配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の前記フラグメントをコードする前記配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
からなる群から選択される、組成物。
【請求項２４】
ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列を含み、前記ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする前記核酸コード配列が、
配列番号３を含む核酸配列であって、配列番号３に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
少なくとも２５個以上のアミノ酸をコードする配列番号３のフラグメントを含む核酸配列であって、配列番号３に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、
配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列であって、配列番号３に少なくとも９８％の相同性があるコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列、および
少なくとも２５個以上のアミノ酸をコードする配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントであって、配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、核酸配列のフラグメント、
からなる群から選択される、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
配列番号４を含み、配列番号４に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列を含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２６】
ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列を含み、前記コード配列が、配列番号３を含み、配列番号３に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
配列番号１２をコードする核酸配列を含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２８】
配列番号１１を含む核酸配列を含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２９】
少なくとも１３０個以上のアミノ酸を有する配列番号４のフラグメントを含み、配列番号４に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも１３０個以上のアミノ酸を有する配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントを含み、かつ配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列を含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項３０】
少なくとも１３０個以上のアミノ酸をコードする配列番号３のフラグメントを含み、かつ配列番号３に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも１３０個以上のアミノ酸をコードする配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含み、かつ配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列を含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
少なくとも１６５個以上のアミノ酸を有する配列番号４のフラグメントを含み、かつ、配列番号４に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも１６５個以上のアミノ酸を有する配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントを含み、かつ配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列を含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項３２】
少なくとも１６５個以上のアミノ酸をコードする配列番号３のフラグメントを含み、かつ配列番号３に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むか、または少なくとも１６５個以上のアミノ酸をコードする配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含み、かつ配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列の前記フラグメントのコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列を含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
配列番号４に少なくとも９９％の相同性があるＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列を含み、配列番号４に少なくとも９９％の相同性があるコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項３４】
ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列を含み、前記コード配列が、配列番号３に少なくとも９９％の相同性があり、配列番号３に少なくとも９９％の相同性があるコード配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
以下からなる群から選択される核酸配列を含む、請求項２３に記載の組成物：
ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、ならびに
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列。
【請求項３６】
ＣＣＬ２０をコードする核酸コード配列を更に含む、請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
電気泳動の使用による個体への送達のために製剤化される、請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２８からなる群から選択される１つ以上のタンパク質をコードする核酸配列を更に含む、請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記１つ以上の核酸コード配列が、１つ以上のプラスミドの一部である、請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記１つ以上の核酸コード配列のそれぞれが、別々のプラスミドに組み込まれるものの一部である、請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
ＲＳＶに対して免疫応答を誘導する方法であって、請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の組成物を、個体に、前記個体に免疫反応を誘導する有効量で投与することを含む、方法。
【請求項４２】
ＲＳＶが診断された個体を治療する方法であって、治療有効量の請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の組成物を個体に投与することを含む、方法。
【請求項４３】
個体のＲＳＶ感染を予防する方法であって、予防有効量の請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の組成物を個体に投与することを含む、方法。
【請求項４４】
配列番号４および配列番号１２からなる群から選択されるタンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、コンセンサス抗原呼吸器合胞体ウイルスタンパク質およびそれらをコードする核酸分子、そのようなタンパク質および／または核酸分子を含む改善された呼吸器合胞体ウイルスワクチン、ならびに免疫応答を誘導するため、および呼吸器合胞体ウイルス感染を予防するため、および／または呼吸器合胞体ウイルスに感染している個体を治療するためのワクチンの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
本出願は、米国特許仮出願第６１／６２２，２７９号の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
発明の背景
ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）は、乳児および幼児において上および下気道感染に最も一般的な原因である（未熟児は特に疾患にかかりやすい）。世界的には、ＲＳＶは世界中の乳児（特に、早産であり、慢性肺疾患または先天性心疾患を有するもの）および幼児における重篤な下気道感染の主な原因であり、入院小児の肺炎の原因の２０〜２５％、および細気管支炎の原因の４５〜５０％であること含む、様々な病気に関与している。米国では、ＲＳＶ発明は、毎年およそ１２０，０００人の入院および５００人超の死亡者をもたらしている。１歳未満の個人群では、ＲＳＶは乳児ウイルス性死亡の主な原因であり、この個人群における死亡数は、インフルエンザ感染に起因する死亡数よりも１０倍大きい。世界規模での年間罹患数および死亡数は、それぞれ６千４百万人および１６０，０００人の死亡者と推定される。ＲＳＶ関連医療費は、６億５千万ドル超／年であると推定される。
【０００４】
本質的に全ての小児が２歳になるまで感染を経験するが、重篤なＲＳＶ感染の最も多い年齢は、２〜６か月齢である。大多数の感染は、平穏に解決する。しかし一部の小児において、感染は、小児を高齢になってから喘息および気道応答性亢進になりやすくし得る。自然ＲＳＶ感染は、生涯免疫を付与せず、したがって、個人は繰り返し感染し得る。
【０００５】
ＲＳＶ感染は、高齢者および他の脆弱な個人群において有意な問題を生じる。高齢者においては、ＲＳＶはウイルス性死亡の二番目に多い原因である。被移植者および他の免疫無防備状態の個人群、ならびに嚢胞性線維症を罹患している個人は、感染に起因する重篤な健康上の影響に対して脆弱である。
【０００６】
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）は、インフルエンザ、ならびに流行性耳下腺炎および風疹を引き起こすもののような一般的な呼吸器ウイルスを含む科である、パラミクソウイルス科のエンベロープネガティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスである。全体でＲＳＶは、１１個の異なるタンパク質をコードする１０個の遺伝子を有する。１１個のＲＳＶタンパク質には、Ｉ型インターフェロン活性を阻害するタンパク質である、１）タンパク質「ＮＳ１」および２）タンパク質「ＮＳ２」；ヌクレオカプシドを形成するＲＮＡと会合するヌクレオカプシドタンパク質である、３）タンパク質「Ｎ」；タンパク質Ｌの補助因子である、４）タンパク質「Ｐ」；ウイルスアセンブリーに必要とされるマトリックスタンパク質である、５）タンパク質「Ｍ」；タンパク質Ｇおよびタンパク質Ｆとウイルスコートを形成するウイルス表面に発現する、６）タンパク質「ＳＨ」；高度にグリコシル化され、表面に発現し、ウイルス結合に関与し、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に結合する、７）タンパク質「Ｇ」；表面に発現し、ウイルス細胞膜融合体であり、融合を仲介して、細胞質へのウイルスの侵入を可能にする、８）タンパク質「Ｆ」；マトリックスタンパク質であり、延長因子である、９）タンパク質「Ｍ２−１」；マトリックスタンパク質であり、転写因子である、１０）タンパク質「Ｍ２−２」、ならびにＲＮＡポリメラーゼである、１１）タンパク質「Ｌ」が含まれる。Ｍ２遺伝子は、重複オープンリーディングフレームにおいてタンパク質Ｍ２−１およびタンパク質Ｍ２−２の両方をコードする。一次ＣＤ８  Ｔ細胞エピトープは、Ｍ２遺伝子によりコードされる。ヒトＲＳＶの２つの主なサブタイプがあり、ＡおよびＢである。２つのサブタイプの主な差は、Ｇタンパク質内にある。
【０００７】
ＲＳＶ感染は、多くの場合、免疫仲介病理およびウイルス仲介病理の両方をもたらす。一次ＲＳＶ感染は、多くの場合、炎症誘導性気道閉鎖をもたらす急性細気管支炎を結果的に生じる。ＲＳＶ  Ｆ結合は、線毛上皮細胞の脱落、損なわれた肺からの排除、およびその結果としての二次感染をもたらすアポトーシスを誘導することが示されている。
【０００８】
残念ながら、甚大な努力にもかかわらず、ＲＳＶに対して利用可能な有効なワクチンが依然として存在しない。１９６６〜１９６７年において、最初のＲＳＶワクチン候補であるホルマリン不活性化ミョウバン沈殿ＲＳＶ調合剤（ＦＩ−ＲＳＶワクチン）は、それに続く自然感染の際にワクチン接種された小児に疾患の増強をもたらした。ワクチン接種後の感染により引き起こされた疾患の増強により死亡した小児の肺の組織学的分析は、肺好酸球増多症を含む、広範囲の単核細胞浸潤を明らかにした。ＦＩ−ＲＳＶワクチンは、変性Ｆタンパク質のために中和活性のない結合抗体のみを生成し、ＣＴＬ活性を誘導しなかった。
【０００９】
続く実験は、この増強された肺疾患が、ＣＤ４  Ｔ細胞による誇張されたＴｈ２型サイトカイン応答、ＣＤ８  Ｔ細胞による不十分な細胞溶解性応答、および弱い中和抗体応答と関連することを示唆している。ＦＩ−ＲＳＶワクチン接種されたＢＡＬＢ／ｃおよびＣ５７ＢＬ／６マウスのＲＳＶ感染は、ＲＩ−ＲＳＶワクチン接種小児に観察された疾患の増強をもたらした。Ｔｈ２仲介免疫応答の特徴は、免疫化小児がワクチンによりＴｈ２免疫応答のために初回刺激されたことを示唆した。Ｔｈ２関連サイトカインのＩＬ−５、ＩＬ−４、およびＩＬ−１３のレベルの増加、ならびにＴｈ１関連サイトカインＩＬ−１２の減少したケモカインエオタキシンを示した。ＩＬ−４、ＩＬ−１０、またはＩＬ−１３の枯渇は、ＲＳＶ負荷後の疾患の増強に有意な減少をもたらした。
【００１０】
生の弱毒化および不活性化全ウイルスワクチンも、保護に失敗した。候補ワクチンは、不十分に弱毒化された、または疾患を増強する潜在性を示した、のいずれかであった。１９８２年には、生の弱毒化ＲＳＶワクチンは、安全であるが、ＲＳＶの病気の予防には有効でないことが見いだされた。
【００１１】
１９８３年には、Ｂ連鎖球菌疾患を有すると考えられたが、実際はＲＳＶに感染していた、ネイティブアメリカンの乳児の「ベイビームース（Ｂａｂｙ  Ｍｏｏｓｅ）」が、ＩＧＩＶを受けたときに偶発的に改善した。この結果は、ＲＳＶ疾患におけるＩＧＩＶの研究を促した。１９８０年代中頃から１９９０年代には、ＲＳＶの病気の治療および予防のための標準的なＩＧＩＶの研究は、ＲＳＶ疾患の予防における抗体の役割を確認した。
【００１２】
１９９０年代の初めには、ＲＳＶワクチンの研究は、様々なサブユニット変種を使用して再開された。これらの試みは、疾患からの有意な保護を示すことに失敗した。
【００１３】
１９９０年代中頃から２００２年の初めまで、ＲＳＶにより引き起こされる重篤な気道疾患の予防のためのパリビズマブ（ＲＳＶ−Ｆに特異的なモノクローナル抗体）の臨床試験は、肯定的な結果を生じた。２００３年９月には、パリビズマブが、高危険度の小児におけるＲＳＶ関連疾患の予防に承認された。パリビズマブによる予防的治療は、疾患の重篤度の低減には有効であったが、治療に伴う高い費用に起因して、高危険度の患者にのみ推奨されている。
【００１４】
過去の研究は、有効なＲＳＶワクチンを生じることに失敗しているが、ＲＳＶ感染に対する十分な保護を提供することにおける免疫応答の重要性を、説得力を持って実証した。研究は、ＲＳＶ仲介疾患に対する保護における液性応答および抗体の重要性を支持する証拠を見いだした。肺におけるＩｇＧ抗体の存在は、ウイルス量の低減と直接的に相関し、重篤度の低いＲＳＶ疾患を有する小児は、多くの場合、感染の前に有意に高いＲＳＶ抗体価を有する。融合タンパク質に対する抗体は、免疫の重要な相関物である。ＲＳＶに感染しなかった乳児は、感染した乳児より高い平均力価のＩｇＧを有し、感染した乳児の母親より有意に高い母系ＲＳＶ特異的ＩｇＧ抗体レベルを有した母親から誕生した。保護を仲介する抗体の重要性は、なぜ未熟児がＲＳＶ感染の後に重篤な病気になる高い危険性があるかを説明する助けになる。母のＩｇＧは、妊娠第三期になるまで効率的に移動しない。
【００１５】
同様に、ＲＳＶ感染に対して十分な保護を提供することにおける細胞免疫応答の重要性も、実証されている。Ｔ細胞欠乏の小児はウイルスの排除に困難を有し、後のＲＳＶ感染に、より高い感受性がある。動物による研究では、マウスにおけるＣＤ８  Ｔ細胞のみの枯渇は、慢性感染をもたらさないが、ウイルス排除に遅延をもたらす。排除には、ＩＦＮ−γ、ＦａｓＬ、ＴＮＦ−αが必要である。これらのうちのいずれかの欠乏は、ウイルス排除の遅延をもたらす。更に、ＶＶ−Ｇにより免疫化されたＣ５７ＢＬ／６マウスは、ＲＳＶ関連の増強された疾患を発生しなかったが、免疫化前のＣＤ８  Ｔ細胞の枯渇は、疾患をもたらす。
【００１６】
ＲＳＶに対して長期間の保護を誘導する、免疫原抗原を含むＲＳＶワクチンの必要性が依然として存在する。ＲＳＶに対して大規模な予防ワクチン接種を可能にする、費用効率の高い送達系の必要性も存在する。ＲＳＶに感染した個体を治療する、追加的な治療剤の必要性も存在する。
【発明の概要】
【００１７】
発明の概要
１つ以上のコンセンサスＲＳＶ免疫原をコードする１つ以上の核酸配列を含む核酸分子が、提供される。ＲＳＶ免疫原には、コンセンサスＲＳＶ  Ｆ免疫原、コンセンサスＲＳＶ−Ｇ（Ａ）免疫原、およびコンセンサスＲＳＶ  Ｇ（Ｂ）免疫原が含まれる。
【００１８】
ＲＳＶ免疫原をコードする１つ以上の核酸配列を含む組成物が提供される。核酸は、ａ）ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、ｂ）ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、およびｃ）ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列からなる群から選択される。
【００１９】
幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列は、配列番号２、配列番号２のフラグメント、配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質、および配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントからなる群から選択されるＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列は、配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むことができる。
【００２０】
幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列は、配列番号６、配列番号６のフラグメント、配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質、および配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントからなる群から選択されるＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列は、配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むことができる。
【００２１】
幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列は、配列番号８、配列番号８のフラグメント、配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質、および配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントからなる群から選択されるＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｇｂａ免疫原をコードする核酸コード配列は、配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むことができる。
【００２２】
幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列は、配列番号１を含む核酸配列、配列番号１のフラグメントを含む核酸配列、配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある配列を含む核酸配列、および配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある配列のフラグメントを含む核酸配列からなる群から選択される。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列は、配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むことができる。配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある配列を含む核酸配列は、好ましくは、配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする。配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある配列のフラグメントを含む核酸配列は、好ましくは、配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントをコードする。
【００２３】
幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列は、配列番号５を含む核酸配列、配列番号５のフラグメントを含む核酸配列、配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある配列を含む核酸配列、および配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある配列のフラグメントを含む核酸配列からなる群から選択される。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列は、配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むことができる。配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある配列を含む核酸配列は、好ましくは、配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする。配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある配列のフラグメントを含む核酸配列は、好ましくは、配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントをコードする。
【００２４】
幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列は、配列番号７を含む核酸配列、配列番号７のフラグメントを含む核酸配列、配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある配列を含む核酸配列、および配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある配列のフラグメントを含む核酸配列からなる群から選択される。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｇｂａ免疫原をコードする核酸コード配列は、配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むことができる。配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある配列を含む核酸配列は、好ましくは、配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする。配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある配列のフラグメントを含む核酸配列は、好ましくは、配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントをコードする。
【００２５】
幾つかの実施形態において、組成物は、配列番号１０をコードする核酸配列、配列番号１４をコードする核酸配列、および配列番号１６をコードする核酸配列からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む。
【００２６】
幾つかの実施形態において、組成物は、配列番号９を含む核酸配列、配列番号１３を含む核酸配列、および配列番号１５を含む核酸配列からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む。
【００２７】
幾つかの実施形態において、組成物は、
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｇa免疫原をコードする核酸コード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、
からなる群から選択される核酸配列を含む。
【００２８】
組成物は、ＣＣＬ２０をコードする核酸コード配列を更に含み得る、および／または電気泳動の使用による個体への送達のために製剤化され得る、および／またはＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２８からなる群から選択される１つ以上のタンパク質をコードする核酸配列を更に含み得る。
【００２９】
幾つかの実施形態において、１つ以上の核酸コード配列は、１つ以上のプラスミドの一部である。幾つかの実施形態において、１つ以上の核酸コード配列は、それぞれ別々のプラスミドに組み込まれる。
【００３０】
ＲＳＶに対して免疫応答を誘導する方法であって、組成物を、個体に、前記個体に免疫反応を誘導する有効量で投与することを含む方法が、提供される。
【００３１】
ＲＳＶが診断された個体を治療する方法であって、治療有効量の組成物を個体に投与することを含む方法が、提供される。
【００３２】
個体のＲＳＶ感染を予防する方法であって、予防有効量の記載の組成物を個体に投与することを含む方法が、提供される。
【００３３】
新規の「ＲＳＶ  Ｆ免疫原」、「ＲＳＶ  Ｇａ免疫原」、および「ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原」が提供される。幾つかの実施形態において、配列番号２、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１４、および配列番号１６からなる群から選択されるタンパク質が提供される。
【００３４】
ケモカインＣＣＬ２０をコードする核酸コード配列を使用して免疫応答を調節する方法も、提供される。
【００３５】
加えて、コンセンサスＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列が、本明細書において提供される。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列は、配列番号４、配列番号４のフラグメント、配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質、および配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントからなる群から選択されるＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列は、配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むことができる。
【００３６】
幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列は、配列番号３を含む核酸配列、配列番号３のフラグメントを含む核酸配列、配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある配列を含む核酸配列、および配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある配列のフラグメントを含む核酸配列からなる群から選択される。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列は、配列に機能的に結合しているシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に更に含むことができる。配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある配列を含む核酸配列は、好ましくは、配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする。配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある配列のフラグメントを含む核酸配列は、好ましくは、配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質のフラグメントをコードする。
【００３７】
幾つかの実施形態において、配列番号１２をコードする核酸配列を含む１つ以上の核酸配列を含む組成物が、提供される。
【００３８】
幾つかの実施形態において、配列番号１１を含む核酸配列を含む１つ以上の核酸配列を含む組成物が、提供される。
【００３９】
幾つかの実施形態において、組成物は、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列およびＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列、ならびにＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸コード配列、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸コード配列およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸コード配列からなる群から選択される核酸配列を含む。
【００４０】
新規の「ＲＳＶ  Ｍ２−１」免疫原も提供される。幾つかの実施形態において、配列番号４および配列番号１２からなる群から選択されるタンパク質が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】ＲＳＶ  Ｆタンパク質の系統樹を示し、コンセンサスＲＳＶ  Ｆタンパク質アミノ酸配列が、配列番号２に記載されている。
【図２】ＲＳＶ  Ｍ２−１タンパク質の系統樹を示し、コンセンサスＲＳＶ  Ｍ２−１タンパク質アミノ酸配列が、配列番号４に記載されている。
【図３】ＲＳＶ  Ｆワクチンによる免疫化後の様々な時点での抗ＲＳＶ  Ｆタンパク質ＩｇＧの結果を示す。
【図４】ＲＳＶ  Ｆワクチンによる免疫化後の様々な時点での抗ＲＳＶ  Ｆタンパク質ＩｇＡの結果を示す。
【図５】最後の免疫化のおよそ８週間後のＲＳＶ−Ｆワクチンの異なる投与量によるＩＦＮ−γ産生を比較した結果を示す。
【図６】脾臓におけるＲＳＶ−Ｆ＋／−ケモカイン免疫化後の脾臓におけるＩＦＮ−γ＋ＣＤ８およびＣＤ４  Ｔ細胞を比較した結果を示す。
【図７】肺におけるＲＳＶ−Ｆ＋／−ケモカイン免疫化後の脾臓におけるＩＦＮ−γ＋ＣＤ８およびＣＤ４  Ｔ細胞を比較した結果を示す。
【図８】血清におけるＩｇＧの終点力価、および血清におけるＩｇＧサブタイプ（ＩｇＧ１対ＩｇＧ２ａ）を比較した結果を示す。
【図９】ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１比の比較を示す。
【図１０】ＴＺＭ−ＢＬ細胞／「ＯＮ」におけるＥｎｖ−偽型ウイルスを描写する。
【図１１】ＴＺＭ−ＢＬ細胞／「ＯＦＦ」におけるＥｎｖ−偽型ウイルスを描写する。
【図１２】２９３Ｔ細胞におけるＲＳＶ融合偽ウイルス産生を描写する。
【図１３】アッセイを使用するＲＳＶ−Ｆ中和試験に使用された免疫化プロトコールを示す。
【図１４】異なる標的細胞におけるＲＳＶ−Ｆ仲介感染の定量化データを示す。
【図１５】ＴＺＭ−Ｂｌ  ＨｅＬａ細胞におけるＲＳＶ−Ｆ中和活性の定量化データを示す。
【図１６】ＨｅＬａ細胞におけるＲＳＶ−Ｆ偽ウイルスによる細胞死活性の定量化データを示す。
【図１７】実施されたＲＳＶ−Ｍ２投与量試験の免疫化スケジュールを示す。
【図１８】最後の免疫化の１週間後のＲＳＶ−Ｍ２ワクチンの異なる投与量によるＩＦＮ−ｇ産生の比較を含む試験から収集したデータを示す。
【図１９】ＲＳＶ−ＦワクチンのＣＣＬ２０との組み合わせを評価するための免疫化スケジュールを描写する。
【図２０】最後の免疫化の１週間後の脾臓、肝臓、および肺のそれぞれにおける異なる投与量のＣＣＬ２０によるＩＦＮ−ｇ産生を比較したデータを含む試験データを示す。
【図２１】血清におけるＩｇＧサブタイプ（ＩｇＧ１対ＩｇＧ２ａ）を比較したデータを示す。
【図２２Ａ】図２２Ａ〜２２Ｃは、ＲＳＶ−Ｆ、ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、およびＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）構築物のプラスミド設計および構築を示す。図２２Ａは、ＲＳＶ−Ｆ構築物のプラスミド設計および構築を示す。
【図２２Ｂ】図２２Ａ〜２２Ｃは、ＲＳＶ−Ｆ、ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、およびＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）構築物のプラスミド設計および構築を示す。図２２Ｂは、ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）構築物のプラスミド設計および構築を示す。
【図２２Ｃ】図２２Ａ〜２２Ｃは、ＲＳＶ−Ｆ、ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、およびＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）構築物のプラスミド設計および構築を示す。図２２Ｃは、ＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）構築物のプラスミド設計および構築を示す。
【図２３】ＲＳＶ−Ｆ、ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、およびＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）構築物のインビトロ発現を確認する結果を示す。
【図２４】ＲＳＶ−Ｆ投与量試験の免疫化スケジュールを示す。
【図２５】ＲＳＶ−Ｆ投与量試験のＩｇＧデータを示す。
【図２６】ＲＳＶ−Ｆ投与量試験のＩＦＮ−γデータを示す。
【図２７】ＲＳＶ−Ｆ偽中和試験の免疫化スケジュールを示す。
【図２８】ＲＳＶ−Ｆ偽中和試験のデータを示す。
【図２９】ＨｅＬａ細胞におけるＲＳＶ−Ｆ偽ウイルスによるアポトーシス細胞死活性の阻害を決定するための２つの比較データを示す。
【図３０】ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）およびＵＳＶ−Ｇ（Ｂ）投与量試験の免疫化スケジュールを示す。
【図３１】ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）およびＵＳＶ−Ｇ（Ｂ）投与量試験のＲＳＶ−Ｇ（Ａ）のＩｇＧデータを示す。
【図３２】ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）およびＵＳＶ−Ｇ（Ｂ）投与量試験のＲＳＶ−Ｇ（Ａ）のＩｇＧデータを示す。
【図３３】マウス試験において単一ワクチンを使用したＲＳＶ予備中和試験の結果のまとめを示すチャートである。
【図３４】後のＲＳＶウサギ試験設計を示す。
【図３５】ＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のＲＳＶウサギ試験のデータを示す。
【図３６】ＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のＲＳＶウサギ試験のデータを示す。
【図３７】試験で従ったＲＳＶ非ヒト霊長類試験設計を示す。
【図３８Ａ】図３８Ａ〜３８Ｄは、ＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のＲＳＶ非ヒト霊長類試験のデータを示す。図３８Ａは、未処置動物においてＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のデータを示す。
【図３８Ｂ】図３８Ａ〜３８Ｄは、ＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のＲＳＶ非ヒト霊長類試験のデータを示す。図３８Ｂは、１つの部位にカクテルワクチンＩＭを受けた動物においてＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のデータを示す。
【図３８Ｃ】図３８Ａ〜３８Ｄは、ＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のＲＳＶ非ヒト霊長類試験のデータを示す。図３８Ｃは、１つの部位にカクテルワクチン＋ｒｈＭＥＣ構築物ＩＭを受けた動物においてＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のデータを示す。
【図３８Ｄ】図３８Ａ〜３８Ｄは、ＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のＲＳＶ非ヒト霊長類試験のデータを示す。図３８Ｄは、１つの部位にカクテルワクチンＩＤを受けた動物においてＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のデータを示す。
【図３９Ａ】図３９Ａ〜３９Ｄは、ＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のＲＳＶ非ヒト霊長類試験のデータを示す。図３９Ａは、未処置動物においてＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のデータを示す。
【図３９Ｂ】図３９Ａ〜３９Ｄは、ＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のＲＳＶ非ヒト霊長類試験のデータを示す。図３９Ｂは、１つの部位にカクテルワクチンＩＭを受けた動物においてＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のデータを示す。
【図３９Ｃ】図３９Ａ〜３９Ｄは、ＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のＲＳＶ非ヒト霊長類試験のデータを示す。図３９Ｃは、１つの部位にカクテルワクチン＋ｒｈＭＥＣ構築物ＩＭを受けた動物においてＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のデータを示す。
【図３９Ｄ】図３９Ａ〜３９Ｄは、ＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のＲＳＶ非ヒト霊長類試験のデータを示す。図３９Ｄは、１つの部位にカクテルワクチンＩＤを受けた動物においてＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のデータを示す。
【図４０】ウサギ比ヒト霊長類試験においてワクチンカクテルを使用したＲＳＶ予備中和試験の結果のまとめを示すチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
好ましい態様の詳細な説明
本発明の一態様において、コンセンサス抗原は、以下のうちの１つ以上を有することを含む、改善された転写および翻訳を提供することが望ましい：転写を増加するための低いＧＣ含有量のリーダー配列、ｍＲＮＡ安定およびコドン最適化、シス作用配列モチーフ（すなわち、内部ＴＡＴＡ−ボックス）を可能な限り排除すること。
【００４３】
本発明の幾つかの態様において、以下のうちの少なくとも１つを有することを含む、多数の菌株のわたる広範囲の免疫応答を生成するコンセンサス抗原を生成することが望ましい：全ての利用可能な全長配列の組み込み、それぞれの位置に最も一般的に生じるアミノ酸を利用するコンピューター生成配列、および菌株間の交差反応性の増加。
【００４４】
添付の配列リストには、様々なＲＳＶ配列および実施形態である配列番号１〜１６が含まれる。
【００４５】
配列番号１は、開始コドン（ＡＴＧ）またはシグナルペプチドを有さないＲＳＶ  Ｆをコードするヌクレオチド配列を示す。
【００４６】
配列番号２は、開始コドン（ＡＴＧ）またはシグナルペプチドによりコードされるＭｅｔを有さないＲＳＶ  Ｆをコードするアミノ配列を示す。
【００４７】
配列番号３は、開始コドン（ＡＴＧ）またはシグナルペプチドを有さないＲＳＶ  Ｍ２−１をコードするヌクレオチド配列を示す。
【００４８】
配列番号４は、開始コドン（ＡＴＧ）またはシグナルペプチドによりコードされるＭｅｔを有さないＲＳＶ  Ｍ２−１をコードするアミノ配列を示す。
【００４９】
配列番号５は、開始コドン（ＡＴＧ）またはシグナルペプチドを有さないＲＳＶ  Ｇａをコードするヌクレオチド配列を示す。
【００５０】
配列番号６は、開始コドン（ＡＴＧ）またはシグナルペプチドによりコードされるＭｅｔを有さないＲＳＶ  Ｇａをコードするアミノ配列を示す。
【００５１】
配列番号７は、開始コドン（ＡＴＧ）またはシグナルペプチドを有さないＲＳＶ  Ｇｂをコードするヌクレオチド配列を示す。
【００５２】
配列番号８は、開始コドン（ＡＴＧ）またはシグナルペプチドによりコードされるＭｅｔを有さないＲＳＶ  Ｇｂをコードするアミノ配列を示す。
【００５３】
配列番号９は、ＩｇＥシグナルペプチドをコードする開始コドン（ＡＴＧ）／配列を含むＲＳＶ  Ｆをコードするヌクレオチド配列を示す。
【００５４】
配列番号１０は、開始コドン／ＩｇＥまたはシグナルペプチドによりコードされるＭｅｔを有するＲＳＶ  Ｆをコードするアミノ配列を示す。
【００５５】
配列番号１１は、ＩｇＥシグナルペプチドをコードする開始コドン（ＡＴＧ）／配列を含むＲＳＶ  Ｍ２−１をコードするヌクレオチド配列を示す。
【００５６】
配列番号１２は、開始コドン／ＩｇＥシグナルペプチドによりコードされるＭｅｔを有するＲＳＶ  Ｍ２−１をコードするアミノ配列を示す。
【００５７】
配列番号１３は、ＩｇＥシグナルペプチドをコードする開始コドン（ＡＴＧ）／配列を含むＲＳＶ  Ｇａをコードするヌクレオチド配列を示す。
【００５８】
配列番号１４は、開始コドン／ＩｇＥまたはシグナルペプチドによりコードされるＭｅｔを有するＲＳＶ  Ｇａをコードするアミノ配列を示す。
【００５９】
配列番号１５は、ＩｇＥシグナルペプチドをコードする開始コドン（ＡＴＧ）／配列を含むＲＳＶ  Ｇｂをコードするヌクレオチド配列を示す。
【００６０】
配列番号１６は、開始コドン／ＩｇＥまたはシグナルペプチドによりコードされるＭｅｔを有するＲＳＶ  Ｇｂをコードするアミノ配列を示す。
【００６１】
添付の配列リストには、ＩｇＥシグナルペプチドのアミノ酸配列である配列番号１７が含まれる。
【００６２】
配列番号１７は、ＩｇＥシグナルペプチドのアミノ酸配列を示す。
【００６３】
添付の配列リストには、様々なＣＣＬ２０配列および実施形態である配列番号１８〜２１が含まれる。
【００６４】
配列番号１８は、開始コドン（ＡＴＧ）またはシグナルペプチドを有さないＣＣＬ２０をコードするヌクレオチド配列を示す。
【００６５】
配列番号１９は、開始コドン（ＡＴＧ）またはシグナルペプチドによりコードされるＭｅｔを有さないＣＣＬ２０。
【００６６】
配列番号２０は、ＩｇＥシグナルペプチドをコードする開始コドン（ＡＴＧ）／配列を含むＣＣＬ２０をコードするヌクレオチド配列を示す。
【００６７】
配列番号２１は、開始コドン／ＩｇＧシグナルペプチドによりコードされるＭｅｔを有するＣＣＬ２０。
【００６８】
添付の配列リストには、ＲＳＶ免疫原から誘導されるアミノ酸配列である配列番号２２〜３１が含まれる。
【００６９】
配列番号２２は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のＴ細胞エピトープである。
【００７０】
配列番号２３は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のＴ細胞エピトープである。
【００７１】
配列番号２４は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のＴ細胞エピトープである。
【００７２】
配列番号２５は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のＴ細胞エピトープである。
【００７３】
配列番号２６は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原プロテアーゼ切断部位である。
【００７４】
配列番号２７は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原プロテアーゼ切断部位である。
【００７５】
配列番号２８は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原融合ペプチドである。
【００７６】
配列番号２９は、パリビズマブのＲＳＶ  Ｆ免疫原結合部位である。
【００７７】
配列番号３０は、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫優性Ｔ細胞エピトープである。
【００７８】
配列番号３１は、ＲＳＶ  Ｍ２−１亜優性Ｔ細胞エピトープである。
【００７９】
本発明の幾つかの態様において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原、およびＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする配列が提供される。本発明の幾つかの態様において、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原、およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする配列が提供される。本発明の幾つかの態様において、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする配列が提供される。ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする配列、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする配列の組み合わせを含む組成物が提供され、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする配列、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする配列をそれぞれ含む。
【００８０】
ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原、およびＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする配列も提供され、単独で、または他のタンパク質および／もしくは核酸配列と組み合わせて使用され得る。
【００８１】
１．定義
本明細書において使用される用語は、特定の実施形態を記載するだけの目的であり、限定的であることを意図しない。明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、特に文脈から明白に示されない限り、複数の対象を含む。
【００８２】
本明細書における数値範囲の列挙では、同じ程度の正確さでその間に介在するそれぞれの数が、明確に考慮される。例えば、６〜９の範囲では、７および８の数が６および９に加えて考慮され、６．０〜７．０の範囲では、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、および７．０の数が明確に考慮される。
【００８３】
ａ．アジュバント
「アジュバント」は、本明細書で使用されるとき、本明細書に記載されているＤＮＡプラスミドワクチンに添加されて、ＤＮＡプラスミドおよび本明細書以降に記載されるコード核酸配列によりコードされる１つ以上の呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原の抗原性を増強する任意の分子を意味し得る。
【００８４】
ｂ．抗体
「抗体」は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、もしくはＩｇＥの部類の抗体、またはＦａｂ、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｄが含まれるそのフラグメント、フラグメント、もしくは誘導体、ならびに一本鎖抗体、二特異性抗体、二重特異性抗体、二官能性抗体、およびその誘導体を意味し得る。抗体は、哺乳動物の血清試料から単離された抗体、ポリクローナル抗体、親和精製抗体、または所望のエピトープもしくはそれから誘導される配列に対して十分な結合特異性を示すそれらの混合物であり得る。
【００８５】
ｃ．コード配列
「コード配列」または「コードする核酸」は、本明細書で使用されるとき、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸（ＲＮＡまたはＤＮＡ分子）を意味し得る。コード配列は、核酸が投与される個体または哺乳動物の細胞において発現を指示することができるプロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む、調節エレメントに機能的に結合している開始および終結シグナルを更に含み得る。
【００８６】
幾つかの実施形態において、配列番号２に記載されている、コンセンサスＲＳＶ  Ｆ免疫原のアミノ酸配列のコード配列は、配列番号１である。そのようなコード配列は、Ｎ末端メチオニン、またはＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドをコードする開始コドンを任意に更に含むことができる。配列番号１０は、ＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）を有する配列番号２に対応する。配列番号９は配列番号１０をコードする。
【００８７】
幾つかの実施形態において、配列番号６に記載されている、コンセンサスＲＳＶ  Ｇａ免疫原のアミノ酸配列のコード配列は、配列番号５である。そのようなコード配列は、Ｎ末端メチオニン、またはＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドをコードする開始コドンを任意に更に含むことができる。配列番号１４は、ＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）を有する配列番号６に対応する。配列番号１３は配列番号１４をコードする。
【００８８】
幾つかの実施形態において、配列番号８に記載されている、コンセンサスＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のアミノ酸配列のコード配列は、配列番号７である。そのようなコード配列は、Ｎ末端メチオニン、またはＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドをコードする開始コドンを任意に更に含むことができる。配列番号１６は、ＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）を有する配列番号８に対応する。配列番号１５は配列番号１６をコードする。
【００８９】
配列番号４に記載されているコンセンサスＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原のアミノ酸配列をコードする、配列番号３のコード配列も提供される。そのようなコード配列は、Ｎ末端メチオニン、またはＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドをコードする開始コドンを任意に更に含むことができる。配列番号１２は、ＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）を有する配列番号４に対応する。配列番号１１は配列番号１２をコードする。
【００９０】
ｄ．補体
「補体」または「相補」は、本明細書で使用されるとき、核酸が、核酸分子のヌクレオチドまたはヌクレオチド類縁体の間のワトソン・クリック（例えば、Ａ−Ｔ／ＵおよびＣ−Ｇ）またはフーグスティーン塩基対を意味し得ることを意味する。
【００９１】
ｅ．コンセンサスまたはコンセンサス配列
「コンセンサス」または「コンセンサス配列」は、本明細書で使用されるとき、特定のＲＳＶ抗原の多数のサブタイプまたは血清型に対して広範囲の免疫を誘導するために使用され得る、特定のＲＳＶ抗原の多数のサブタイプの整列の分析に基づいて構築された、合成核酸配列または対応するポリペプチド配列を意味し得る。コンセンサスＲＳＶ抗原は、タンパク質Ｆ、タンパク質Ｇ、およびタンパク質Ｍ２のコンセンサスアミノ酸配列を含むことができる。コンセンサスアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列も、提供される。また、融合タンパク質のような合成抗原は、コンセンサス配列（またはコンセンサス抗原）を含むように操作され得る。
【００９２】
コンセンサスＲＳＶ  Ｆ免疫原のアミノ酸配列は、配列番号２に記載されている。そのような配列は、Ｎ末端メチオニン、またはＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを任意に更に含むことができる。配列番号１０は、ＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）を有する配列番号２に対応する。
【００９３】
コンセンサスＲＳＶ  Ｇａ免疫原のアミノ酸配列は、配列番号６に記載されている。そのような配列は、Ｎ末端メチオニン、またはＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを任意に更に含むことができる。配列番号１４は、ＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）を有する配列番号６に対応する。
【００９４】
コンセンサスＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のアミノ酸配列は、配列番号８に記載されている。そのような配列は、Ｎ末端メチオニン、またはＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを任意に更に含むことができる。配列番号１６は、ＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）を有する配列番号８に対応する。
【００９５】
配列番号４に記載されているコンセンサスＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原のアミノ酸配列も提供される。そのような配列は、Ｎ末端メチオニン、またはＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを任意に更に含むことができる。配列番号１２は、ＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）を有する配列番号４に対応する。
【００９６】
ｆ．定電流
「定電流」は、本明細書で使用されるとき、組織または前記組織を画定する細胞が、その組織に送達される電気パルスの持続時間にわたって受ける、または経験する電流を定義すること。電気パルスは、本明細書に記載されている電気穿孔装置から送達される。この電流は、前記組織に電気バルスの寿命にわたって一定のアンペア数で留まり、それは、本明細書において提供される電気穿孔装置が、好ましくは瞬時のフィードバックを有するフィードバック要素を有するからである。フィードバック要素は、パルスの持続時間の全体にわたって組織（または細胞）の抵抗を測定すること、ならびに電流が同じ組織において電気パルスの全体にわたって（数マイクロ秒台）、およびパルス毎に一定のままであるように、電気穿孔装置に電気エネルギー出力を変更させる（例えば、電圧を増加させる）ことができる。幾つかの実施形態において、フィードバック要素は、制御装置を含む。
【００９７】
ｇ．電流フィードバックまたはフィードバック
「電流フィードバック」または「フィードバック」は、本明細書で使用されるとき、交換可能に使用することができ、提供される電気穿孔装置の能動的応答を意味することができ、それは、電極の間の組織中の電流を測定すること、および電流を一定レベルに維持するため、ＥＰ装置により送達されたエネルギー出力をそれに応じて変えることを含む。この一定レベルは、パルス系列または電気処理を開始する前に、使用者により予め設定される。フィートバックは、電気穿孔装置の電気穿孔構成要素、例えば制御装置により達成することができ、それは、その電気回路が、電極の間の組織中の電流を連続的にモニターすること、ならびにモニターされた電流（または組織内の電流）を比較して、電流を予め設定する、およびモニターされた電流を予め設定されたレベルに維持するためにエネルギー出力調整を連続的に行うことができるからである。フィードバックループは、アナログ閉ループフィートバックであるので、瞬時であり得る。
【００９８】
ｈ．分散電流
「分散電流」は、本明細書で使用されるとき、本明細書に記載されている電気穿孔装置の様々な針電極配列から送達される電流のパターンを意味し得、パターンは、電気穿孔される組織の任意の領域における電気穿孔関連熱ストレスの発生を最小限にする、または排除する。
【００９９】
ｉ．電気穿孔
「電気穿孔」、「電気透過処理（ｅｌｅｃｔｒｏ−ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）」または「電気動力学的促進（ｅｌｅｃｔｒｏ−ｋｉｎｅｔｉｃ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）」（「ＥＰ」）は、本明細書で交換可能に使用されるとき、生体膜内の微視的経路（細孔）を誘導するための膜貫通電界パルスの使用を意味し得、それらの存在は、プラスミド、オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、薬剤、イオン、および水のような生体分子が細胞膜の一方の側から他方の側に通過することを可能にする。
【０１００】
ｊ．フィードバック機構
「フィードバック機構」は、本明細書で使用されるとき、ソフトウエアまたはハードウエア（もしくはファームウエア）のいずれかにより実施されるプロセスを意味し得、このプロセスは、所望の組織のインピーダンスを（エネルギーパルスの送達の前、間、および／または後に）受け、現在の値、好ましくは電流と比較し、送達されるエネルギーのパルスを調整して、予め設定された値を達成する。フィードバック機構は、アナログ閉ループ回路により実施することができる。
【０１０１】
ｋ．フラグメント
「フラグメント」は、特定のＲＳＶ抗原を認識することによって、哺乳動物においてＲＳＶに対して免疫応答を誘発することができる、ＲＳＶ免疫原のポリペプチドフラグメントを意味し得る。ＲＳＶ免疫原は、それぞれの場合に、シグナルペプチドおよび／または１位にメチオニンを有する、または有さない、ＲＳＶ  Ｆ免疫原、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原の本明細書に記載されているコンセンサス配列、それぞれの場合にシグナルペプチド、および／または１位にメチオニンを有する、または有さない、本明細書に記載されているコンセンサス配列に９８％以上の相同性があるタンパク質、本明細書に記載されているコンセンサス配列に９９％以上の相同性があるタンパク質、および本明細書に記載されているコンセンサス配列と１００％同一であるタンパク質を指す。フラグメントは、例えば、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）またはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドに結合しているＲＳＶ免疫原のフラグメントを含んでも、含まなくてもよい。
【０１０２】
ＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原のフラグメントは、それぞれの場合に、シグナルペプチドおよび／または１位にメチオニンを有する、または有さない、配列番号２、配列番号１０、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原配列に９８％以上の相同性があるタンパク質、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原配列に９９％以上の相同性があるタンパク質、または本明細書に記載されているコンセンサス配列に１００％同一であるＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原、のフラグメントであり得る。そのようなフラグメントは、付加された非ＲＳＶシグナルペプチドを除いて、本明細書に記載されている特定の全長ＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原配列の長さの、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含むことができる。フラグメントは、それぞれの場合に、シグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原の配列に９８％以上、または９９％以上の相同性がある、およびそのような配列と１００％同一である、ポリペプチドのフラグメントを指す。フラグメントは、ＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原に９８％以上の相同性、９９％以上の相同性がある、または１００％同一であるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のフラグメントは、配列番号２のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）またはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドに結合している配列番号２のフラグメントを含むことができる。したがって、幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号１７を含む配列番号１０のフラグメントである。フラグメントは、Ｎ末端メチオニンに結合している配列番号２のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、配列番号２に９８％以上または９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントも指す。フラグメントは、配列番号２に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号２に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号２に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号２に９��％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原は、５７５個のアミノ酸である。幾つかの実施形態において、そのフラグメントは、１１５個以上のアミノ酸の長さ、１６３個以上、２３０個以上、２８８個以上、３４５個以上、４０３個以上、４６０個以上、５１５個以上、５２０個以上、５２５個以上、５３０個以上、５３５個以上、５４０個以上、５４５個以上、５５０個以上、５５５個以上、５６０個以上、５６５個以上、５７０個以上、５７４個以上の長さであり得る。ポリペプチドフラグメントは、１４０個未満のアミノ酸、１９０個未満、２５０個未満、２８３個未満、３００個未満、３６５個未満、４２５個未満、４９５個未満、５１８個未満、５２３個未満、５２８個未満、５３３個未満、５４７未満、５５２個未満、５６３個未満、または５７２個未満の長さであり得る。フラグメントは、Ｎ末端メチオニン、および／または免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを更に含むことができる。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、５７４アミノ酸またはより小さいそのフラグメントに結合し得る。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、５７４アミノ酸に９８％の相同性があるポリペプチド、または５７４アミノ酸配列に９８％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得る。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、５７４アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチド、または５７４アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得る。相同性の程度を計算するとき、ポリペプチドは配列番号２またはそのフラグメントを必要があり、Ｎ末端メチオニンおよび／または任意のシグナルペプチドは、そのような計算に含まれない。シグナルペプチドの配列は、相同性の決定に使用されない。したがって、例えば、配列番号１０は、配列番号１７のシグナルペプチドに機能的に結合している配列番号２を含むが、配列番号１０は、配列番号２には不在であるシグナルペプチドにもかかわらず、配列番号２のフラグメントに１００％の相同性がある配列番号２のフラグメントを含む。したがって、配列番号２のフラグメントに少なくとも９８％の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むタンパク質は、少なくとも１１５個のアミノ酸であり、かつ例えばシグナルペプチドに任意に結合し得る、配列番号２のフラグメントに少なくとも９８％の相同性があるポリペプチドのフラグメントである、タンパク質を指すことが意図される。配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５は、配列番号２に記載されているＲＳＶ  Ｆ免疫原のＴ細胞エピトープに対応する。幾つかの実施形態において、フラグメントは、これらの配列、またはこれらに９８％以上もしくは９９％以上の相同性がある配列の１つ以上の全てまたは一部を含む。配列番号２６および配列番号２７は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原プロテアーゼ切断部位である。配列番号２８は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原融合ペプチドである。配列番号２９は、パリビズマブのＲＳＶ  Ｆ免疫原結合部位である。
【０１０３】
ＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原のフラグメントは、それぞれの場合に、シグナルペプチドおよび／または１位にメチオニンを有する、または有さない、配列番号６、配列番号１４、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原配列に９８％以上の相同性があるタンパク質、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原配列に９９％以上の相同性があるタンパク質、または本明細書に記載されているコンセンサス配列に１００％同一であるＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原、のフラグメントであり得る。そのようなフラグメントは、付加された非ＲＳＶシグナルペプチドを除いて、本明細書に記載されている特定の全長ＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原配列の長さの、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含むことができる含むことができる。フラグメントは、それぞれの場合に、シグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原の配列に９８％以上、または９９％以上の相同性がある、およびそのような配列と１００％同一である、ポリペプチドのフラグメントを指す。フラグメントは、ＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原に９８％以上の相同性、９９％以上の相同性がある、または１００％同一であるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原のフラグメントは、配列番号６のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）またはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドに結合している配列番号６のフラグメントを含むことができる。したがって、幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号１７を含む配列番号１４のフラグメントである。フラグメントは、Ｎ末端メチオニンに結合している配列番号６のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、配列番号６に９８％以上または９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントも指す。フラグメントは、配列番号６に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号６に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号６に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる��フラグメントは、配列番号６に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原は、Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドを除いた、２９７個のアミノ酸である。幾つかの実施形態において、そのフラグメントは、１２５個以上のアミノ酸の長さ、１３０個以上、１４０個以上、１５０個以上、１６０個以上、１７０個以上、１８０個以上、１９０個以上、２００個以上、２１０個以上、２２０個以上、２３０個以上、２４０個以上、２５０個以上、２６０個以上、２７０個以上、２８０個以上、２８５個以上、２９０個以上、２９５個以上の長さであり得る。ポリペプチドフラグメントは、１３５個未満のアミノ酸、１４５個未満、１５５個未満、１６５個未満、１７５個未満、１８５個未満、１９５個未満、２０５個未満、２１５個未満、２２５個未満、２３５個未満、２４５個未満、２５５未満、２６５個未満、２７５個未満、２８５個未満、２８８個未満、２９２個未満、または２９６個未満の長さであり得る。フラグメントは、Ｎ末端メチオニン、および／または免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを更に含むことができる。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、２９６アミノ酸またはより小さいそのフラグメントに結合し得る。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、２９６アミノ酸に９８％の相同性があるポリペプチド、または２９６アミノ酸配列に９８％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得る。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、２９６アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチド、または２９６アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得る。相同性の程度を計算するとき、ポリペプチドは配列番号６またはそのフラグメントを必要があり、Ｎ末端メチオニンおよび／または任意のシグナルペプチドは、そのような計算に含まれない。シグナルペプチドの配列は、相同性の決定に使用されない。したがって、例えば、配列番号１４は、配列番号１７のシグナルペプチドに機能的に結合している配列番号６を含むが、配列番号１４は、配列番号６には不在であるシグナルペプチドにもかかわらず、配列番号６のフラグメントに１００％の相同性がある配列番号６のフラグメントを含む。したがって、配列番号６のフラグメントに少なくとも９８％の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むタンパク質は、少なくとも１２５個のアミノ酸であり、かつ例えばシグナルペプチドに任意に結合し得る、配列番号６のフラグメントに少なくとも９８％の相同性があるポリペプチドのフラグメントである、タンパク質を指すことが意図される。
【０１０４】
それぞれの場合にシグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、配列番号８、配列番号１６、本明細書に開示されているＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原配列に９８％以上の相同性があるタンパク質、本明細書に開示されているＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原配列に９９％以上の相同性があるタンパク質、および本明細書に開示されているコンセンサス免疫原配列と１００％同一であるＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原に開示されているもののような、ＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原のフラグメントは、付加された任意の非ＲＳＶシグナルペプチドを除いて、本明細書に記載されている特定の全長ＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原配列の長さの、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含むことができる。フラグメントは、それぞれの場合に、シグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原の配列に９８％以上、または９９％以上の相同性がある、およびそのような配列と１００％同一である、ポリペプチドのフラグメントを指す。フラグメントは、ＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原に９８％以上の相同性、９９％以上の相同性がある、または１００％同一であるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のフラグメントは、配列番号８のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）またはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドに結合している配列番号８のフラグメントを含むことができる。したがって、幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号１７を含む配列番号１６のフラグメントである。フラグメントは、Ｎ末端メチオニンに結合している配列番号８のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、配列番号８に９８％以上または９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントも指す。フラグメントは、配列番号８に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号８に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号８に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号８��９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原は、Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドを除いて、２９１個のアミノ酸である。幾つかの実施形態において、そのフラグメントは、１２５個以上のアミノ酸の長さ、１３０個以上、１４０個以上、１５０個以上、１６０個以上、１７０個以上、１８０個以上、１９０個以上、２００個以上、２１０個以上、２２０個以上、２３０個以上、２４０個以上、２５０個以上、２６０個以上、２７０個以上、２８０個以上、２８５個以上、２８８個以上の長さであり得る。ポリペプチドフラグメントは、１３５個未満のアミノ酸、１４５個未満、１５５個未満、１６５個未満、１７５個未満、１８５個未満、１９５個未満、２０５個未満、２１５個未満、２２５個未満、２３５個未満、２４５個未満、２５５未満、２６５個未満、２７５個未満、２８５個未満、２８８個未満、２９０個未満の長さであり得る。フラグメントは、Ｎ末端メチオニン、および／または免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを更に含むことができる。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、２９０アミノ酸またはより小さいそのフラグメントに結合し得る。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、２９０アミノ酸に９８％の相同性があるポリペプチド、または２９０アミノ酸配列に９８％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得る。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは２９０アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチド、または２９０アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得る。相同性の程度を計算するとき、ポリペプチドは配列番号６またはそのフラグメントを必要があり、Ｎ末端メチオニンおよび／または任意のシグナルペプチドは、そのような計算に含まれない。シグナルペプチドの配列は、相同性の決定に使用されない。したがって、例えば、配列番号１６は、配列番号１７のシグナルペプチドに機能的に結合している配列番号８を含むが、配列番号１６は、配列番号８には不在であるシグナルペプチドにもかかわらず、配列番号８のフラグメントに１００％の相同性がある配列番号８のフラグメントを含む。したがって、配列番号８のフラグメントに少なくとも９８％の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むタンパク質は、少なくとも１２５個のアミノ酸であり、かつ例えばシグナルペプチドに任意に結合し得る、配列番号８のフラグメントに少なくとも９８％の相同性があるポリペプチドのフラグメントである、タンパク質を指すことが意図される。
【０１０５】
加えて、ＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原のフラグメントは、それぞれの場合に、シグナルペプチドおよび／または１位にメチオニンを有する、または有さない、配列番号４、配列番号１２、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原配列に９８％以上の相同性があるタンパク質、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原配列に９９％以上の相同性があるタンパク質、または本明細書に記載されているコンセンサス配列に１００％同一であるＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原、のフラグメントであり得る。そのようなフラグメントは、付加された非ＲＳＶシグナルペプチドを除いて、本明細書に記載されている特定の全長ＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原配列の長さの、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含むことができる含むことができる。フラグメントは、それぞれの場合に、シグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原の配列に９８％以上、または９９％以上の相同性がある、およびそのような配列と１００％同一である、ポリペプチドのフラグメントを指す。フラグメントは、ＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原に９８％以上の相同性、９９％以上の相同性がある、または１００％同一であるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原のフラグメントは、配列番号４のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）またはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドに結合している配列番号４のフラグメントを含むことができる。したがって、幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号１７を含む配列番号１２のフラグメントである。フラグメントは、Ｎ末端メチオニンに結合している配列番号４のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、配列番号４に９８％以上または９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントも指す。フラグメントは、配列番号４に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号４に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号４に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ��端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号４に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原は、１９５個のアミノ酸である。幾つかの実施形態において、そのフラグメントは、２５個以上のアミノ酸の長さ、３０個以上、４０個以上、５０個以上、６０個以上、７０個以上、８０個以上、９０個以上、１００個以上、１１０個以上、１２０個以上、１３０個以上、１４０個以上、１５０個以上、１６０個以上、１７０個以上、１８０個以上、１８４個以上、１９０個以上、１９３個以上の長さであり得る。ポリペプチドフラグメントは、３５個未満のアミノ酸、４５個未満、５５個未満、６５個未満、７５個未満、８５個未満、９５個未満、１０５個未満、１１５個未満、１２５個未満、１３５個未満、１４５個未満、１５５未満、１６５個未満、１７５個未満、１８５個未満、１８８個未満、１９２個未満、または１９４個未満の長さであり得る。フラグメントは、Ｎ末端メチオニン、および／または免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを更に含むことができる。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、１９４アミノ酸またはより小さいそのフラグメントに結合し得る。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、１９４アミノ酸に９８％の相同性があるポリペプチド、または１９４アミノ酸配列に９８％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得る。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは１９４アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチド、または１９４アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得る。相同性の程度を計算するとき、ポリペプチドは配列番号４またはそのフラグメントを必要があり、Ｎ末端メチオニンおよび／または任意のシグナルペプチドは、そのような計算に含まれない。シグナルペプチドの配列は、相同性の決定に使用されない。したがって、例えば、配列番号１２は、配列番号１７のシグナルペプチドに機能的に結合している配列番号４を含むが、配列番号１２は、配列番号４には不在であるシグナルペプチドにもかかわらず、配列番号４のフラグメントに１００％の相同性がある配列番号４のフラグメントを含む。したがって、配列番号４のフラグメントに少なくとも９８％の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むタンパク質は、少なくとも２５個のアミノ酸であり、かつ例えばシグナルペプチドに任意に結合し得る、配列番号４のフラグメントに少なくとも９８％の相同性があるポリペプチドのフラグメントである、タンパク質を指すことが意図される。配列番号３０は、配列番号４に記載されているＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原の免疫優性Ｔ細胞エピトープに対応する。配列番号３１は、配列番号４に記載されているＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原の免疫優性Ｔ細胞エピトープに対応する亜優性Ｔ細胞エピトープを意味する。幾つかの実施形態において、フラグメントは、これらの配列、またはこれらに９８％以上もしくは９９％以��の相同性がある配列の１つ以上の全てまたは一部を含む。
【０１０６】
「フラグメント」は、上に記載されたＲＳＶ免疫原フラグメント、すなわちＲＳＶ  Ｆ免疫原、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸フラグメントも意味することができ、それぞれの場合にシグナルペプチドおよび／または１位にメチオニンを有する、または有さず、本明細書に記載されているコンセンサス配列、それぞれの場合にシグナルペプチド、および／または１位にメチオニンを有する、または有さない、本明細書に記載されているコンセンサス配列に９８％以上の相同性があるタンパク質、本明細書に記載されているコンセンサス配列に９９％以上の相同性があるタンパク質、および本明細書に記載されているコンセンサス配列と１００％同一であるタンパク質であり得る。フラグメントは、例えば、Ｎ末端メチオニン（すなわち、開始コドン）のコード配列に、または免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）もしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドをコードするコード配列に結合しているＲＳＶ免疫原をコードする核酸のフラグメントを含んでも、含まなくてもよい。ＲＳＶ免疫原をコードするコード配列のフラグメントは、付加された非ＲＳＶシグナルペプチドをコードする任意のコード配列を除いて、本明細書に記載されている特定の全長ＲＳＶ免疫原配列のコード配列の長さの、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含むことができる。フラグメントは、本明細書に記載されているＲＳＶ免疫原の配列に９８％以上または９９％以上の相同性があるポリペプチドをコードするコード配列のフラグメントも指す。フラグメントは、９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントを含むことができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。
【０１０７】
幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号１に９８％以上の相同性がある核酸配列のフラグメントである。幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号１に９９％以上の相同性がある核酸配列のフラグメントである。幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号１のフラグメントである。本明細書に記載されているポリペプチドフラグメントをコードする核酸配列が、明示的に開示されていることが意図され、すなわち、ペプチドフラグメントのサイズおよび相同性を有するタンパク質をコードする核酸配列のフラグメントである。幾つかの実施形態において、ペプチドフラグメントのサイズおよび相同性を有するタンパク質をコードする核酸配列のフラグメントは、配列番号１のフラグメントである。例えば配列番号１または配列番号９のように、それぞれの場合にシグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、配列番号２、配列番号１０、本明細書に開示されているＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原配列に９８％以上の相同性があるタンパク質、本明細書に開示されているＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原配列に９９％以上の相同性があるタンパク質、および本明細書に開示されているコンセンサス免疫原配列と１００％同一であるＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原に開示されているもののような、ＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原をコードするコード配列のフラグメントは、付加された任意の非ＲＳＶシグナルペプチドを除いて、本明細書に記載されている特定の全長ＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原配列の長さの、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含むことができる。フラグメントは、それぞれの場合に、シグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原の配列に９８％以上、または９９％以上の相同性がある、およびそのような配列と１００％同一である、ポリペプチドのフラグメントをコードすることができる。フラグメントは、ＲＳＶ  Ｆコンセンサス免疫原に９８％以上の相同性、９９％以上の相同性がある、または１００％同一であるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードするフラグメントは、配列番号２のフラグメントをコードすること、および配列番号１のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）またはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドに結合している配列番号２のフラグメントをコードすることができる。したがって、幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号１７を含む配列番号１０のフラグメントであり、配列番号９によりコード��れ得る。フラグメントは、開始コドンに結合している配列番号１のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、配列番号２に９８％以上または９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントもコードする。フラグメントは、配列番号２に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号２に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号２に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号２に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号１に９８％以上または９９％以上の相同性があり得る。フラグメントは、配列番号１に９８％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号１に９９％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号１に９８％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号１に９９％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。それぞれの場合に開始コドンまたはシグナルペプチドをコードするコード配列を有する、または有さない、配列番号１のフラグメント、配列番号１に９８％以上の相同性がある核酸配列のフラグメント、および配列番号１に９９％以上の相同性がある核酸配列のフラグメントは、１１５個以上のアミノ酸の長さ、１６３個以上、２３０個以上、２８８個以上、３４５個以上、４０３個以上、４６０個以上、５１５個以上、５２０個以上、５２５個以上、５３０個以上、５３５個以上、５４０個以上、５４５個以上、５５０個以上、５５５個以上、５６０個以上、５６５個以上、５７０個以上、５７４個以上の長さであり得るＲＳＶ  Ｆ免疫原のフラグメントをコードすることができる。ポリペプチドフラグメントは、１４０個未満のアミノ酸、１９０個未満、２５０個未満、２８３個未満、３００個未満、３６５個未満、４２５個未満、４９５個未満、５１８個未満、５２３個未満、５２８個未満、５３３個未満、５４７未満、５５２個未満、５６３個未満、または５７２個未満の長さであり得る。フラグメントは、Ｎ末端メチオニン、および／または免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを更にコードすることができる。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、５７４アミノ酸またはより小さいそのフラグメントをコードする核酸配列に結合し得る。フラグメントは、５７４アミノ酸に９８％の相同性があるポリペプチド、または５７４アミノ酸配列に９８％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得るＮ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドをコードすることができる。フラグメントは、５７４アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチド、または５７４アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得るＮ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドをコードすることができる。相同性の程度を計算するとき、ポリペプチドは配列番号２またはそのフラグメントを必要があり、Ｎ末端メチオニンおよび／または任意のシグナルペプチドは、そのような計算に含まれない。シグナルペプチドの配列は、相同性の決定に使用されない。したがって、例えば、配列番号７は、配列番号１７のシグナルペプチドをコードするコード配列に機能的に結合している配列番号１を含むが、配列番号７は、配列番号１には不在であるシグナルペプチドにもかかわらず、配列番号１のフラグメントに１００％の相同性がある配列番号１のフラグメントを含む。配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５は、配列番号２に記載されているＲＳＶ  Ｆ免疫原のＴ細胞エピトープに対応する。幾つかの実施形態において、フラグメントは、これらの配列、または配列番号１のフラグメントを含むこれらに９８％以上もしくは９９％以上の相同性がある配列、または配列番号１に９８％以上もしくは９９％以上の相同性がある配列の１つ以上の全て、または一部をコードするコード配列を含む。
【０１０８】
幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号５に９８％以上の相同性がある核酸配列のフラグメントである。幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号５に９９％以上の相同性がある核酸配列のフラグメントである。幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号５のフラグメントである。本明細書に記載されているポリペプチドフラグメントをコードする核酸配列が、明示的に開示されていることが意図され、すなわち、ペプチドフラグメントのサイズおよび相同性を有するタンパク質をコードする核酸配列のフラグメントである。幾つかの実施形態において、ペプチドフラグメントのサイズおよび相同性を有するタンパク質をコードする核酸配列のフラグメントは、配列番号５のフラグメントである。例えば配列番号５または配列番号１３のように、それぞれの場合にシグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、配列番号６、配列番号１４、本明細書に開示されているＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原配列に９８％以上の相同性があるタンパク質、本明細書に開示されているＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原配列に９９％以上の相同性があるタンパク質、および本明細書に開示されているコンセンサス免疫原配列と１００％同一であるＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原に開示されているもののような、ＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原をコードするコード配列のフラグメントは、付加された任意の非ＲＳＶシグナルペプチドを除いて、本明細書に記載されている特定の全長ＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原配列の長さの、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含むことができる。フラグメントは、それぞれの場合に、シグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原の配列に９８％以上、または９９％以上の相同性がある、およびそのような配列と１００％同一である、ポリペプチドのフラグメントをコードすることができる。フラグメントは、ＲＳＶ  Ｇａコンセンサス免疫原に９８％以上の相同性、９９％以上の相同性がある、または１００％同一であるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードするフラグメントは、配列番号６のフラグメントをコードすること、および配列番号５のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）またはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドに結合している配列番号６のフラグメントをコードすることができる。したがって、幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号１７を含む配列番号１４のフラグメントであり、配列��号１３によりコードされ得る。フラグメントは、開始コドンに結合している配列番号５のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、配列番号６に９８％以上または９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントもコードする。フラグメントは、配列番号６に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号６に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号６に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号６に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号５に９８％以上または９９％以上の相同性があり得る。フラグメントは、配列番号５に９８％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号５に９９％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号５に９８％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号５に９９％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。それぞれの場合に開始コドンまたはシグナルペプチドをコードするコード配列を有する、または有さない、配列番号５のフラグメント、配列番号５に９８％以上の相同性がある核酸配列のフラグメント、および配列番号５に９９％以上の相同性がある核酸配列のフラグメントは、幾つかの実施形態において、そのフラグメントが、１２５個以上のアミノ酸の長さ、１３０個以上、１４０個以上、１５０個以上、１６０個以上、１７０個以上、１８０個以上、１９０個以上、２００個以上、２１０個以上、２２０個以上、２３０個以上、２４０個以上、２５０個以上、２６０個以上、２７０個以上、２８０個以上、２８５個以上、２９０個以上、２９５個以上の長さであり得るＲＳＶ  Ｇａ免疫原のフラグメントをコードすることができる。ポリペプチドフラグメントは、１３５個未満のアミノ酸、１４５個未満、１５５個未満、１６５個未満、１７５個未満、１８５個未満、１９５個未満、２０５個未満、２１５個未満、２２５個未満、２３５個未満、２４５個未満、２５５未満、２６５個未満、２７５個未満、２８５個未満、２８８個未満、２９２個未満、または２９６個未満の長さであり得る。フラグメントは、Ｎ末端メチオニン、および／または免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを更にコードすることができる。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、２９６アミノ酸またはより小さいそのフラグメントをコードする核酸配列に結合し得る。フラグメントは、２９６アミノ酸に９８％の相同性があるポリペプチド、または２９６アミノ酸配列に９８％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得るＮ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドをコードすることができる。フラグメントは、２９６アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチド、または２９６アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得るＮ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドをコードすることができる。相同性の程度を計算するとき、ポリペプチドは配列番号６またはそのフラグメントを必要があり、Ｎ末端メチオニンおよび／または任意のシグナルペプチドは、そのような計算に含まれない。シグナルペプチドの配列は、相同性の決定に使用されない。したがって、例えば、配列番号１３は、配列番号１７のシグナルペプチドをコードするコード配列に機能的に結合している配列番号５を含むが、配列番号１３は、配列番号５には不在であるシグナルペプチドにもかかわらず、配列番号５のフラグメントに１００％の相同性がある配列番号５のフラグメントを含む。
【０１０９】
幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号７に９８％以上の相同性がある核酸配列のフラグメントである。幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号７に９９％以上の相同性がある核酸配列のフラグメントである。幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号７のフラグメントである。本明細書に記載されているポリペプチドフラグメントをコードする核酸配列が、明示的に開示されていることが意図され、すなわち、ペプチドフラグメントのサイズおよび相同性を有するタンパク質をコードする核酸配列のフラグメントである。幾つかの実施形態において、ペプチドフラグメントのサイズおよび相同性を有するタンパク質をコードする核酸配列のフラグメントは、配列番号７のフラグメントである。例えば配列番号７または配列番号１５のように、それぞれの場合にシグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、配列番号８、配列番号１６、本明細書に開示されているＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原配列に９８％以上の相同性があるタンパク質、本明細書に開示されているＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原配列に９９％以上の相同性があるタンパク質、および本明細書に開示されているコンセンサス免疫原配列と１００％同一であるＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原に開示されているもののような、ＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原をコードするコード配列のフラグメントは、付加された任意の非ＲＳＶシグナルペプチドを除いて、本明細書に記載されている特定の全長ＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原配列の長さの、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含むことができる。フラグメントは、それぞれの場合に、シグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原の配列に９８％以上、または９９％以上の相同性がある、およびそのような配列と１００％同一である、ポリペプチドのフラグメントをコードすることができる。フラグメントは、ＲＳＶ  Ｇｂコンセンサス免疫原に９８％以上の相同性、９９％以上の相同性がある、または１００％同一であるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードするフラグメントは、配列番号８のフラグメントをコードすること、および配列番号７のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）またはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドに結合している配列番号８のフラグメントをコードすることができる。したがって、幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号１７を含む配列番号１６のフラグメント��あり、配列番号１５によりコードされ得る。フラグメントは、開始コドンに結合している配列番号７のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、配列番号８に９８％以上または９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントもコードする。フラグメントは、配列番号８に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号８に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号８に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号８に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号７に９８％以上または９９％以上の相同性があり得る。フラグメントは、配列番号７に９８％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号７に９９％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号７に９８％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号７に９９％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。それぞれの場合に開始コドンまたはシグナルペプチドをコードするコード配列を有する、または有さない、配列番号７のフラグメント、配列番号７に９８％以上の相同性がある核酸配列のフラグメント、および配列番号７に９９％以上の相同性がある核酸配列のフラグメントは、幾つかの実施形態において、そのフラグメントが、１２５個以上のアミノ酸の長さ、１３０個以上、１４０個以上、１５０個以上、１６０個以上、１７０個以上、１８０個以上、１９０個以上、２００個以上、２１０個以上、２２０個以上、２３０個以上、２４０個以上、２５０個以上、２６０個以上、２７０個以上、２８０個以上、２８５個以上、２８８個以上の長さであり得るＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のフラグメントをコードすることができる。ポリペプチドフラグメントは、１３５個未満のアミノ酸、１４５個未満、１５５個未満、１６５個未満、１７５個未満、１８５個未満、１９５個未満、２０５個未満、２１５個未満、２２５個未満、２３５個未満、２４５個未満、２５５未満、２６５個未満、２７５個未満、２８５個未満、２８８個未満、２９０個未満の長さであり得る。フラグメントは、Ｎ末端メチオニン、および／または免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを更にコードすることができる。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、２９０アミノ酸またはより小さいそのフラグメントをコードする核酸配列に結合し得る。フラグメントは、２９０アミノ酸に９８％の相同性があるポリペプチド、または２９０アミノ酸配列に９８％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得るＮ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドをコードすることができる。フラグメントは、２９０アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチド、または２９０アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得るＮ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドをコードすることができる。相同性の程度を計算するとき、ポリペプチドは配列番号８またはそのフラグメントを必要があり、Ｎ末端メチオニンおよび／または任意のシグナルペプチドは、そのような計算に含まれない。シグナルペプチドの配列は、相同性の決定に使用されない。したがって、例えば、配列番号１５は、配列番号１７のシグナルペプチドをコードするコード配列に機能的に結合している配列番号７を含むが、配列番号１５は、配列番号７には不在であるシグナルペプチドにもかかわらず、配列番号７のフラグメントに１００％の相同性がある配列番号７のフラグメントを含む。
【０１１０】
配列番号３に９８％以上の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むＲＳＶ  Ｍ２−１に関する配列も、提供される。幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号３に９９％以上の相同性がある核酸配列のフラグメントである。幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号３のフラグメントである。本明細書に記載されているポリペプチドフラグメントをコードする核酸配列が、明示的にに開示されていることが意図され、すなわち、ペプチドフラグメントのサイズおよび相同性を有するタンパク質をコードする核酸配列のフラグメントである。幾つかの実施形態において、ペプチドフラグメントのサイズおよび相同性を有するタンパク質をコードする核酸配列のフラグメントは、配列番号３のフラグメントである。例えば配列番号３または配列番号１１のように、それぞれの場合にシグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、配列番号４、配列番号１２、本明細書に開示されているＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原配列に９８％以上の相同性があるタンパク質、本明細書に開示されているＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原配列に９９％以上の相同性があるタンパク質、および本明細書に開示されているコンセンサス免疫原配列と１００％同一であるＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原に開示されているもののような、ＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原をコードするコード配列のフラグメントは、付加された任意の非ＲＳＶシグナルペプチドを除いて、本明細書に記載されている特定の全長ＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原配列の長さの、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含むことができる。フラグメントは、それぞれの場合に、シグナルペプチド、および／または１位のメチオニンを有する、または有さない、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原の配列に９８％以上、または９９％以上の相同性がある、およびそのような配列と１００％同一である、ポリペプチドのフラグメントをコードすることができる。フラグメントは、ＲＳＶ  Ｍ２−１コンセンサス免疫原に９８％以上の相同性、９９％以上の相同性がある、または１００％同一であるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードするフラグメントは、配列番号４のフラグメントをコードすること、および配列番号３のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）またはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドに結合している配列番号４のフラグメントをコードすることができる。したがって、幾つかの実施形態において、フラグメントは、配列番号１７を含む配列番号１２のフラグメントであり、配列番号１１によりコードされ得る。フラグメントは、開始コドンに結合している配列番号３のフラグメントを含むことができる。フラグメントは、配列番号４に９８％以上または９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントもコードする。フラグメントは、配列番号４に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号４に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号４に９８％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号４に９９％以上の相同性があるポリペプチドのフラグメントをコードすることができ、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号３に９８％以上または９９％以上の相同性があり得る。フラグメントは、配列番号３に９８％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号３に９９％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれない免疫グロブリンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号３に９８％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。フラグメントは、配列番号３に９９％以上の相同性があり得、相同性の率を計算するときに含まれないＮ末端メチオニンを追加的に含むことができる。それぞれの場合に開始コドンまたはシグナルペプチドをコードするコード配列を有する、または有さない、配列番号３のフラグメント、配列番号３に９８％以上の相同性がある核酸配列のフラグメント、および配列番号３に９９％以上の相同性がある核酸配列のフラグメントは、幾つかの実施形態において、そのフラグメントが、２５個以上のアミノ酸の長さ、３０個以上、４０個以上、５０個以上、６０個以上、７０個以上、８０個以上、９０個以上、１００個以上、１１０個以上、１２０個以上、１３０個以上、１４０個以上、１５０個以上、１６０個以上、１７０個以上、１８０個以上、１８４個以上、１９０個以上、１９３個以上の長さであり得るＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原のフラグメントをコードすることができる。ポリペプチドフラグメントは、３５個未満のアミノ酸、４５個未満、５５個未満、６５個未満、７５個未満、８５個未満、９５個未満、１０５個未満、１１５個未満、１２５個未満、１３５個未満、１４５個未満、１５５未満、１６５個未満、１７５個未満、１８５個未満、１８８個未満、１９２個未満、または１９４個未満の長さであり得る。フラ���メントは、Ｎ末端メチオニン、および／または免疫グロブリンシグナルペプチド、例えばＩｇＥもしくはＩｇＧシグナルペプチドのようなシグナルペプチドを更にコードすることができる。Ｎ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドは、１９４アミノ酸またはより小さいそのフラグメントをコードする核酸配列に結合し得る。フラグメントは、１９４アミノ酸に９８％の相同性があるポリペプチド、または１９４アミノ酸配列に９８％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得るＮ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドをコードすることができる。フラグメントは、１９４アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチド、または１９４アミノ酸配列に９９％の相同性があるポリペプチドのより小さいフラグメントに結合し得るＮ末端メチオニンおよび／またはシグナルペプチドをコードすることができる。相同性の程度を計算するとき、ポリペプチドは配列番号４またはそのフラグメントを必要があり、Ｎ末端メチオニンおよび／または任意のシグナルペプチドは、そのような計算に含まれない。シグナルペプチドの配列は、相同性の決定に使用されない。したがって、例えば、配列番号９は、配列番号１７のシグナルペプチドをコードするコード配列に機能的に結合している配列番号３を含むが、配列番号９は、配列番号３には不在であるシグナルペプチドにもかかわらず、配列番号３のフラグメントに１００％の相同性がある配列番号３のフラグメントを含む。配列番号３０は、配列番号４に記載されているＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原の免疫優性Ｔ細胞エピトープに対応する。配列番号３１１は、配列番号４に記載されているＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原の免疫優性Ｔ細胞エピトープに対応する亜優性Ｔ細胞エピトープを意味する。幾つかの実施形態において、フラグメントは、これらの配列、または配列番号３のフラグメントを含むこれらに９８％以上もしくは９９％以上の相同性がある配列、または配列番号３に９８％以上もしくは９９％以上の相同性がある配列の１つ以上の全て、または一部をコードするコード配列を含む。
【０１１１】
Ｉ．同一
「同一」または「同一性」は、２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈において本明細書で使用されるとき、配列が、特定の領域にわたって同じである残基の特定の率（％）を有することを意味し得る。率（％）は、２つの配列を最適に整列すること、２つの配列を特定の領域にわたって比較すること、同一残基が両方の配列に発生してマッチした位置の数を生じる、位置の数を決定すること、マッチした位置の数を、特定の領域内の位置の総数で割ること、および結果に１００を掛けて、配列同一性の率（％）を生じることによって、計算することができる。２つの配列が異なる長さである、または整列が１つ以上の付着末端を生じ、特定の比較領域が、単一配列のみを含む場合、単一配列の残基は、計算の分母に含まれるが、分子には含まれない。ＤＮＡおよびＲＮＡを比較すると、チミン（Ｔ）およびウラシル（Ｕ）は、同等であると考慮することができる。同一性は、手作業により、またはＢＬＡＳＴもしくはＢＬＡＳＴ２．０のようなコンピューター配列アルゴリズムを使用して実施することができる。
【０１１２】
ｍ．インピーダンス
「インピーダンス」は、本明細書で使用されるとき、フィードバック機構を考察する場合に使用することができ、オームの法則に従って電流値に変換することができ、したがって、予め設定された電流との比較を可能にする。
【０１１３】
ｎ．免疫応答
「免疫応答」は、本明細書で使用されるとき、提供されたＤＮＡプラスミドワクチンを介した１つ以上のＲＳＶコンセンサス抗原の導入に応答した宿主の免疫系、例えば哺乳動物の免疫系の活性化を意味し得る。免疫応答は、細胞性もしくは液性応答、またはその両方の形態であり得る。
【０１１４】
ｏ．核酸
「核酸」または「オリゴヌクレオチド」または「ポリヌクレオチド」は、本明細書で使用されるとき、一緒に共有結合している少なくとも２つのヌクレオチドを意味し得る。一本鎖の描写は、相補鎖の配列も定義する。したがって、核酸は、描写される一本鎖の相補鎖も包含する。核酸の多くの変種を、所定の核酸と同じ目的で使用することができる。したがって、核酸は、実質的に同一の核酸およびその相補体も包含する。一本鎖は、厳密なハイブリッド形成条件下で標的配列とハイブリッド形成することができるプローブを提供する。したがって、核酸は、厳密ハイブリッド形成条件下でハイブリッド形成するプローブも包含する。
【０１１５】
核酸は、一本鎖もしくは二本鎖であり得る、または二本鎖と一本鎖の配列の両方の部分を含有し得る。核酸は、ゲノムおよびｃＤＮＡの両方のＤＮＡ、ＲＮＡ、またはハイブリッドであり得、ここで核酸は、デオキシリボ−およびリボ−ヌクレオチドの組み合わせ、ならびにウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチン  ヒポキサンチン、イソシトシン、およびイソグアニンを含む塩基の組み合わせを含有し得る。核酸は、化学合成法により、または組み換え法により得ることができる。
【０１１６】
ｐ．機能的に連結する
「機能的に連結する」は、本明細書で使用されるとき、遺伝子の発現が、空間的に連結しているプロモーターの制御下にあることを意味し得る。プロモーターは、その制御下の遺伝子の５′（上流）または３′（下流）に位置することができる。プロモーターと遺伝子との間隔は、プロモーターが誘導される遺伝子における、プロモーターと、それが制御する遺伝子との間隔とほぼ同じであり得る。当該技術において知られているように、この間隔の変動は、プロモーター機能を失うことなく適応され得る。
【０１１７】
ｑ．プロモーター
「プロモーター」は、本明細書で使用されるとき、細胞において核酸の発現を付与する、活性化する、または増強することができる合成的または天然に誘導される分子を意味し得る。プロモーターは、１つ以上の特定の転写調節配列を含み、発現を更に増強すること、ならびに／またはその空間的発現および／もしくは時間的発現を変更することができる。プロモーターは、遠位エンハンサーまたはリプレッサー要素も含むことができ、これらは、転写の開始部位から数千塩基対まで位置することができる。プロモーターは、ウイルス、細菌、真菌、植物、昆虫、および動物を含む供給源から誘導することができる。プロモーターは、遺伝子成分の発現を構造的に、あるいは発現が生じる細胞、組織、もしくは臓器に関して、または発現が生じる発生段階に関して、または生理的ストレス、病原体、金属イオン、もしくは誘導剤のような外部刺激に応答して、差別的に調節することができる。プロモーターの代表例には、バクテリオファージＴ７プロモーター、バクテリオファージＴ３プロモーター、ＳＰ６プロモーター、ｌａｃオペレータープロモーター、ｔａｃプロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＲＳＶ−ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶ  ＩＥプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーターまたはＳＶ４０後期プロモーター、およびＣＭＶ  ＩＥプロモーターが含まれる。
【０１１８】
ｒ．厳密なハイブリッド形成条件
「厳密なハイブリッド形成条件」は、本明細書で使用されるとき、核酸の複合混合物におけるように、第１の核酸配列（例えば、プローブ）が第２の核酸配列（例えば、標的）とハイブリッド形成する条件を意味し得る。厳密な条件は、配列依存性であり、異なる状況において異なる。厳密な条件は、確定されたイオン強度のｐＨで特定の配列の熱融点（Ｔm）よりも約５〜１０℃低くなるように選択することができる。Ｔmは、標的に相補的なプローブの５０％が標的配列と平衡（標的配列がＴmで過剰に存在するので、５０％のプローブが平衡を占める）にハイブリッド形成する（確定されたイオン強度、ｐＨ、および核濃度下での）温度であり得る。厳密な条件は、塩濃度が、ｐＨ７．０〜８．３で約０．０１〜１．０Ｍのナトリウムイオン濃度のような約１．０Ｍ未満のナトリウムイオン（または他の塩）であり、温度が、短プローブ（例えば、約１０〜５０個のヌクレオチド）では少なくとも約３０℃、長プローブ（例えば、約５０個を超えるヌクレオチド）では少なくとも約６０℃であるものであり得る。厳密な条件は、ホルムアミドのような不安定化剤の添加により達成することもできる。選択的または特定的なハイブリッド形成では、陽性シグナルは、バックグラウンドハイブリッド形成の少なくとも２〜１０倍であり得る。例示的な厳密なハイブリッド形成条件には、以下が含まれる：５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、および１％ＳＤＳ、４２℃でのインキュベーション、または５×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ、６５℃でのインキュベーションと、０．２×ＳＳＣでの洗浄および６５℃での０．１％ＳＤＳ。
【０１１９】
ｓ．  実質的に相補的
「実質的に相補的」は、本明細書で使用されるとき、第１の配列が第２の配列の補体と、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、またはそれ以上のヌクレオチドもしくはアミノ酸の領域にわたって、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一であること、あるいは２つの配列が厳密なハイブリッド形成条件下でハイブリッド形成することを意味し得る。
【０１２０】
ｔ．実質的に同一
「実質的に同一」は、本明細書で使用されるとき、第１の配列および第２の配列が、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、またはそれ以上のヌクレオチドもしくはアミノ酸の領域にわたって、あるいは第１の配列が第２の配列の補体と実質的に相補的である場合、核酸に関して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一であることを意味し得る。
【０１２１】
ｕ．変種
「変種」は、核酸に関して本明細書で使用されるとき、（ｉ）基準ヌクレオチド配列の一部もしくはフラグメント、（ｉｉ）基準ヌクレオチド配列の補体もしくはその一部、（ｉｉｉ）基準核酸もしくはその補体と実質的に同一である核酸、または（ｉｖ）厳密な条件下、基準核酸、その補体もしくはそれと実質的に同一の配列とハブリッド形成する核酸を意味する。
【０１２２】
「変種」は、ペプチドまたはポリペプチドに関して、アミノ酸の挿入、欠失、または保存置換によりアミノ酸配列が異なるが、少なくとも１つの生物学的活性を保持する。変種は、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する基準タンパク質と実質的に同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質も意味し得る。アミノ酸の保存置換、すなわち、アミノ酸を同様の特性（例えば、親水性、荷電領域の程度および分布）の異なるアミノ酸と代えることは、典型的には僅かな修正を伴って、当該技術において認識されている。これらの僅かな修正は、部分的には、当該技術において理解されているようにアミノ酸の疎水性親水性指標を考慮することにより確認することができる。Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２（１９８２）。アミノ酸の疎水性親水性指標は、その疎水性および電荷の考慮に基づいている。同様の疎水性親水性指標のアミノ酸を置換して、依然としてタンパク質機能を保持できることは、当該技術において知られている。１つの態様において、±２の疎水性親水性指標を有するアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性を使用して、タンパク質が生物学的活性を保持することをもたらす置換を明らかにすることもできる。ペプチドの文脈におけるアミノ酸の親水性の考慮は、抗原性および免疫原性と十分相関することが報告されている有用な測度である、ペプチドの最大局所平均親水性の計算を可能にする。米国特許第４，５５４，１０１号は参照により完全に本明細書に組み込まれる。同様の親水性値を有するアミノ酸の置換は、ペプチドが生物学的活性、例えば免疫原性を保持することをもたらすことができ、このことは当該技術において理解されている。置換は、互いに±２以内の親水性値を有するアミノ酸で実施することができる。アミノ酸の疎水性指標と親水性値の両方は、そのアミノ酸の特定の側鎖により影響を受ける。その観察と一致して、生物学的機能に匹敵するアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、大きさ、および他の特性により明らかなように、アミノ酸、特にこれらのアミノ酸の側鎖の相対的な類似性に依存していることが理解される。
【０１２３】
ｖ．ベクター
本明細書で使用される「ベクター」は、複製の起点を含有する核酸配列を意味し得る。ベクターは、プラスミド、バクテリオファージ、細菌人工染色体、または酵母人工染色体であり得る。ベクターは、ＤＮＡまたはＲＮＡベクターであり得る。ベクターは、自己複製染色体外ベクター、または宿主ゲノムに組み込まれるベクターのいずれかであり得る。
【０１２４】
２．ＲＳＶタンパク質
ＲＳＶタンパク質が本明細書において提供され、本明細書において「ＲＳＶ免疫原」とも呼ばれ、ＲＳＶに対して免疫応答を誘発することができるコンセンサス抗原である。３つのコンセンサスＲＳＶ免疫原は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原、ならびに本明細書においてＲＳＶ  Ｇａ免疫原およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原と呼ばれているＲＳＶ  Ｇ免疫原の２つの形態である。２つのＲＳＶ  Ｇ免疫原形態は、ＲＳＶ  Ｇタンパク質の多様性に起因して提供される。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ免疫原は、免疫グロブリンタンパク質、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）またはＩｇＧシグナルペプチドのような異なるタンパク質からのシグナルペプチドを含むことができる。ＲＳＶ免疫原には、ＲＳＶ  Ｆ免疫原、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原が含まれる。ＲＳＶ  Ｍ２−１に対して免疫応答を誘発することができるコンセンサス抗原である「ＲＳＶ免疫原」が、本明細書において提供され、すなわち、免疫グロブリンタンパク質、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）またはＩｇＧシグナルペプチドのような異なるタンパク質からのシグナルペプチドを任意に含み得るＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原である。
【０１２５】
「ＲＳＶ  Ｆ免疫原」は、配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むタンパク質を指す。ＲＳＶ  Ｆ免疫原は、配列番号２に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むことができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原は、配列番号２の免疫原性フラグメントを含むことができる。それぞれの場合において、免疫原性フラグメントは、配列番号１７のようにシグナルペプチドを任意に更に含むことができる。配列番号２の免疫原性フラグメントおよび配列番号１７のシグナルペプチドを含むＲＳＶ  Ｆ免疫原は、配列番号１７を含む配列番号１０の免疫原性フラグメントであり得る。ＲＳＶ  Ｆ免疫原は、配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質を含むことができ、幾つかの実施形態では、配列番号２に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質を含むことができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原は、配列番号２を含むことができる。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原は、配列番号１７のようにシグナルペプチドを任意に更に含むことができる。配列番号２および配列番号１７のシグナルペプチドを含むＲＳＶ  Ｆ免疫原は、配列番号１０を含むことができる。
【０１２６】
「ＲＳＶ  Ｇａ免疫原」は、配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むタンパク質を指す。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原は、配列番号６に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むことができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原は、配列番号６の免疫原性フラグメントを含むことができる。それぞれの場合において、免疫原性フラグメントは、配列番号１７のようにシグナルペプチドを任意に更に含むことができる。配列番号６の免疫原性フラグメントおよび配列番号１７のシグナルペプチドを含むＲＳＶ  Ｇａ免疫原は、配列番号１７を含む配列番号１４の免疫原性フラグメントであり得る。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原は、配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質を含むことができ、幾つかの実施形態では、配列番号６に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質を含むことができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原は、配列番号６を含むことができる。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原は、配列番号１７のようにシグナルペプチドを任意に更に含むことができる。配列番号６および配列番号１７のシグナルペプチドを含むＲＳＶ  Ｇａ免疫原は、配列番号１４を含むことができる。
【０１２７】
「ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原」は、配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むタンパク質を指す。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原は、配列番号８に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むことができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原は、配列番号８の免疫原性フラグメントを含むことができる。それぞれの場合において、免疫原性フラグメントは、配列番号１７のようにシグナルペプチドを任意に更に含むことができる。配列番号８の免疫原性フラグメントおよび配列番号１７のシグナルペプチドを含むＲＳＶ  Ｇｂ免疫原は、配列番号１７を含む配列番号１６の免疫原性フラグメントであり得る。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原は、配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質を含むことができ、幾つかの実施形態では、配列番号８に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質を含むことができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原は、配列番号８を含むことができる。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原は、配列番号１７のようにシグナルペプチドを任意に更に含むことができる。配列番号８および配列番号１７のシグナルペプチドを含むＲＳＶ  Ｇｂ免疫原は、配列番号１６を含むことができる。
【０１２８】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されている２つ以上のＲＳＶタンパク質セットの組み合わせを含む融合タンパク質が、提供される。例えば、融合タンパク質は、配列番号２もしくはその免疫原性フラグメント、および配列番号６もしくはその免疫原性フラグメント；配列番号２もしくはその免疫原性フラグメント、および配列番号８もしくはその免疫原性フラグメント；または配列番号６もしくはその免疫原性フラグメント、および配列番号８もしくはその免疫原性フラグメントを含むことができる。融合タンパク質は、配列番号２またはその免疫原性フラグメント、配列番号６またはその免疫原性フラグメント、および配列番号８またはその免疫原性フラグメントを含むことができる。あるいは、１つ以上の上記融合タンパク質は、配列番号２または免疫原性フラグメントに対応する上記に記載された融合タンパク質の部分の代わりに、配列番号２またはその免疫原性フラグメントに少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列を含むことができる。同様に、１つ以上の上記融合タンパク質は、配列番号６または免疫原性フラグメントに対応する上記に記載された融合タンパク質の部分の代わりに、配列番号６またはその免疫原性フラグメントに少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列を含むことができる、ならびに／あるいは１つ以上の上記融合タンパク質は、配列番号８または免疫原性フラグメントに対応する上記に記載された融合タンパク質の部分の代わりに、配列番号８またはその免疫原性フラグメントに少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列を含むことができる。融合タンパク質は、コンセンサスタンパク質、および／またはコンセンサスタンパク質のフラグメント、および／またはコンセンサスタンパク質の変種、および／または変種コンセンサスタンパク質のフラグメントの組み合わせを含むことができる。コンセンサスタンパク質、および／またはコンセンサスタンパク質のフラグメント、および／またはコンセンサスタンパク質の変種、および／または変種コンセンサスタンパク質のフラグメントは、互いに隣接して直接結合され得る、またはその間のスペーザーまたは１つ以上のアミノ酸により結合され得る。幾つかの実施形態において、空間は、タンパク質分解性切断部位であり得る。幾つかの実施形態において、空間は、ワクチンが投与されること、および取り込まれることが意図される細胞において見いだされるプロテアーゼにより認識されるタンパク質分解性切断部位であり得る。
【０１２９】
「ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原」は、配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むタンパク質を意味する。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原は、配列番号４に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むことができる。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原は、配列番号４の免疫原性フラグメントを含むことができる。それぞれの場合において、免疫原性フラグメントは、配列番号１７のようにシグナルペプチドを任意に更に含むことができる。配列番号４の免疫原性フラグメントおよび配列番号１７のシグナルペプチドを含むＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原は、配列番号１７を含む配列番号１２の免疫原性フラグメントであり得る。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原は、配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質を含むことができ、幾つかの実施形態では、配列番号４に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質を含むことができる。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原は、配列番号４を含むことができる。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原は、配列番号１７のようにシグナルペプチドを任意に更に含むことができる。配列番号４および配列番号１７のシグナルペプチドを含むＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原は、配列番号１２を含むことができる。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されているＲＳＶ  Ｍ２−１と別のＲＳＶ免疫原のタンパク質セットの組み合わせを含む融合タンパク質が、提供される。例えば、融合タンパク質は、配列番号２もしくはその免疫原性フラグメント、および配列番号４もしくはその免疫原性フラグメント；配列番号４もしくはその免疫原性フラグメント、および配列番号６もしくはその免疫原性フラグメント；配列番号４もしくはその免疫原性フラグメント、および配列番号８もしくはその免疫原性フラグメント；または配列番号６もしくはその免疫原性フラグメント、および配列番号８もしくはその免疫原性フラグメントを含むことができる。融合タンパク質は、配列番号４またはその免疫原性フラグメントを含むことができる。あるいは、１つ以上の上記融合タンパク質は、配列番号４または免疫原性フラグメントに対応する上記に記載された融合タンパク質の部分の代わりに、配列番号４またはその免疫原性フラグメントに少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列を含むことができる。
【０１３０】
３．ＲＳＶタンパク質をコードするコード配列
本明細書に記載されている「ＲＳＶ免疫原」をコードする核酸配列が、本明細書において提供される。核酸配列を含む核酸分子の投与は、細胞に取り込まれ、発現すると、ＲＳＶに対して広範囲の免疫応答ともたらす。ＲＳＶ免疫原のコード配列が提供され、すなわち、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列、ならびにＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列である。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ免疫原をコードする核酸配列は、免疫グロブリンタンパク質、例えばＩｇＥシグナルペプチド（配列番号１７）またはＩｇＧシグナルペプチドのような異なるタンパク質からのシグナルペプチドをコードする核酸配列を含むことができる。
【０１３１】
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号２に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号２の免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードすることができる。それぞれの場合において、免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１７をコードする核酸配列のような、シグナルペプチドをコードする核酸配列を任意に更に含むことができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号２の免疫原性フラグメントおよび配列番号１７のシグナルペプチドを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７を含む配列番号１０の免疫原性フラグメントであり得るタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードすることができ、幾つかの実施形態では、配列番号２に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号２を含むタンパク質をコードすることができる。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７のようなシグナルペプチドをコードする核酸配列を任意に更に含むことができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号２および配列番号１７のシグナルペプチドを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１０を含むタンパク質をコードすることができる。
【０１３２】
ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むことができる。配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列は、配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする。フラグメントは、配列番号２に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントをコードする。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むことができ、ここで核酸配列は、配列番号２に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質をコードし、幾つかの実施形態において、核酸配列は、配列番号２を含むタンパク質をコードし、核酸配列のフラグメントは、配列番号２の免疫原性フラグメントのような、配列番号２に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントをコードする。幾つかのそのような実施形態において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１に、幾つかの実施形態では配列番号１のフラグメントに少なくとも９９％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むことができる。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７のようなシグナルペプチドをコードする核酸配列を任意に更に含むことができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号２のフラグメントおよび配列番号１７のシグナルペプチドをコードするコード配列を含むことができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７のシグナルペプチドをコードするコード配列を含む配列番号９のフラグメントを含むことができる。
【０１３３】
ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号６に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号６の免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードすることができる。それぞれの場合において、免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１７をコードする核酸配列のような、シグナルペプチドをコードする核酸配列を任意に更に含むことができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号６の免疫原性フラグメントおよび配列番号１７のシグナルペプチドを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７を含む配列番号１４の免疫原性フラグメントであり得るタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードすることができ、幾つかの実施形態では、配列番号６に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号６を含むタンパク質をコードすることができる。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７のようなシグナルペプチドをコードする核酸配列を任意に更に含むことができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号６および配列番号１７のシグナルペプチドを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１４を含むタンパク質をコードすることができる。
【０１３４】
ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むことができる。配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列は、配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする。フラグメントは、配列番号６に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントをコードする。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号５に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むことができ、ここで核酸配列は、配列番号６に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質をコードし、幾つかの実施形態において、核酸配列は、配列番号６を含むタンパク質をコードし、核酸配列のフラグメントは、配列番号６の免疫原性フラグメントのような、配列番号６に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントをコードする。幾つかのそのような実施形態において、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号５に、幾つかの実施形態では配列番号５のフラグメントに少なくとも９９％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むことができる。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７のようなシグナルペプチドをコードする核酸配列を任意に更に含むことができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号６のフラグメントおよび配列番号１７のシグナルペプチドをコードするコード配列を含むことができる。ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７のシグナルペプチドをコードするコード配列を含む配列番号１３のフラグメントを含むことができる。
【０１３５】
ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号８に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号８の免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードすることができる。それぞれの場合において、免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１７をコードする核酸配列のような、シグナルペプチドをコードする核酸配列を任意に更に含むことができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号８の免疫原性フラグメントおよび配列番号１７のシグナルペプチドを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７を含む配列番号１６の免疫原性フラグメントであり得るタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードすることができ、幾つかの実施形態では、配列番号８に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号８を含むタンパク質をコードすることができる。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７のようなシグナルペプチドをコードする核酸配列を任意に更に含むことができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号８および配列番号１７のシグナルペプチドを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１６を含むタンパク質をコードすることができる。
【０１３６】
ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むことができる。配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列は、配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする。フラグメントは、配列番号８に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントをコードする。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号７に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むことができ、ここで核酸配列は、配列番号８に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質をコードし、幾つかの実施形態において、核酸配列は、配列番号８を含むタンパク質をコードし、核酸配列のフラグメントは、配列番号８の免疫原性フラグメントのような、配列番号８に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントをコードする。幾つかのそのような実施形態において、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号７に、幾つかの実施形態では配列番号７のフラグメントに少なくとも９９％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むことができる。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７のようなシグナルペプチドをコードする核酸配列を任意に更に含むことができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号８のフラグメントおよび配列番号１７のシグナルペプチドをコードするコード配列を含むことができる。ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７のシグナルペプチドをコードするコード配列を含む配列番号１５のフラグメントを含むことができる。
【０１３７】
ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号４に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号４の免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードすることができる。それぞれの場合において、免疫原性フラグメントを含むタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１７をコードする核酸配列のような、シグナルペプチドをコードする核酸配列を任意に更に含むことができる。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号４の免疫原性フラグメントおよび配列番号１７のシグナルペプチドを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７を含む配列番号１２の免疫原性フラグメントであり得るタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードすることができ、幾つかの実施形態では、配列番号４に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号４を含むタンパク質をコードすることができる。それぞれの場合において、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７のようなシグナルペプチドをコードする核酸配列を任意に更に含むことができる。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号４および配列番号１７のシグナルペプチドを含むタンパク質をコードすることができる。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１２を含むタンパク質をコードすることができる。
【０１３８】
ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むことができる。配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列は、配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質をコードする。フラグメントは、配列番号４に少なくとも９８％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントをコードする。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号３に少なくとも９８％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むことができ、ここで核酸配列は、配列番号４に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質をコードし、幾つかの実施形態において、核酸配列は、配列番号４を含むタンパク質をコードし、核酸配列のフラグメントは、配列番号４の免疫原性フラグメントのような、配列番号４に少なくとも９９％の相同性があるタンパク質の免疫原性フラグメントをコードする。幾つかのそのような実施形態において、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号３に、幾つかの実施形態では配列番号３のフラグメントに少なくとも９９％の相同性がある核酸配列のフラグメントを含むことができる。幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７のようなシグナルペプチドをコードする核酸配列を任意に更に含むことができる。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号４のフラグメントおよび配列番号１７のシグナルペプチドをコードするコード配列を含むことができる。ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする核酸配列は、配列番号１７のシグナルペプチドをコードするコード配列を含む配列番号１１のフラグメンを含むことができる。
【０１３９】
コード配列は、本明細書に記載されている２つ以上のＲＳＶタンパク質セットの組み合わせを含む融合タンパク質をコードすることができる。コード配列は、コンセンサスタンパク質、および／またはコンセンサスタンパク質のフラグメント、および／またはコンセンサスタンパク質の変種、および／または変種コンセンサスタンパク質のフラグメントの組み合わせを含む融合タンパク質をコードすることができる。コンセンサスタンパク質、および／またはコンセンサスタンパク質のフラグメント、および／またはコンセンサスタンパク質の変種、および／または変種コンセンサスタンパク質のフラグメントは、互いに隣接して直接結合され得る、またはその間のスペーザーまたは１つ以上のアミノ酸により結合され得る。幾つかの実施形態において、空間は、タンパク質分解性切断部位であり得る。幾つかの実施形態において、空間は、ワクチンが投与されること、および取り込まれることが意図される細胞において見いだされるプロテアーゼにより認識されるタンパク質分解性切断部位であり得る。
【０１４０】
幾つかの実施形態において、コード配列は、本明細書に記載されている２つ以上のＲＳＶタンパク質セットの組み合わせを含む融合タンパク質をコードする、例えば、コード配列は、配列番号２またはその免疫原フラグメント、および配列番号４またはその免疫原性フラグメント、例えば、配列番号１またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、および配列番号３またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント；配列番号２またはその免疫原性フラグメント、および配列番号６またはその免疫原性フラグメント、例えば、配列番号１またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、および配列番号５またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント；配列番号２またはその免疫原性フラグメント、および配列番号８またはその免疫原性フラグメント、例えば、配列番号１またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、および配列番号７またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント；配列番号４またはその免疫原性フラグメント、および配列番号６またはその免疫原性フラグメント、例えば、配列番号３またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、および配列番号５またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント；配列番号４またはその免疫原性フラグメント、および配列番号８またはその免疫原性フラグメント、例えば、配列番号３またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、および配列番号５またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント；ならびに配列番号６またはその免疫原性フラグメント、および配列番号８またはその免疫原性フラグメント、例えば、配列番号５またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、および配列番号７またはその免疫原性フラグメントコードフラグメントを含む融合タンパク質をコードすることができる。コード配列は、本明細書に記載されている３つのＲＳＶタンパク質セットの組み合わせを含む融合タンパク質をコードすることができる。例えば、コード配列は、配列番号２またはその免疫原フラグメント、配列番号４またはその免疫原性フラグメント、および配列番号６またはその免疫原性フラグメント、例えば、配列番号１またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、配列番号３またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、および配列番号５またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント；配列番号２またはその免疫原性フラグメント、配列番号４またはその免疫原性フラグメント、および配列番号８またはその免疫原性フラグメント、例えば、配列番号１またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、配列番号３またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、および配列番号７またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント；ならびに配列番号４またはその免疫原性フラグメント、配列番号６またはその免疫原性フラグメント、および配列番号８またはその免疫原性フラグメント、例えば、配列番号３またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、配列番号５またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、および配列番号７またはその免疫原性フラグメントコードフラグメントを含む融合タンパク質をコードすることができる。コード配列は、配列番号２またはその免疫原性フラグメント、配列番号４またはその免疫原性フラグメント、配列番号６またはその免疫原性フラグメント、および配列番号８またはその免疫原性フラグメント、例えば、配列番号１またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、配列番号３またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、配列番号５またはその免疫原性フラグメントコードフラグメント、および配列番号７またはその免疫原性フラグメントコードフラグメントをコードするコード配列のように、本明細書に記載されている４つのＲＳＶタンパク質の組み合わせを含む融合タンパク質をコードすることができる。あるいは、１つ以上の上記融合タンパク質をコードするコード配列は、配列番号２または免疫原性フラグメントに対応する上記に記載された融合タンパク質の部分の代わりに、配列番号２またはその免疫原性フラグメントに少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性があるタンパク質をコードする配列を含むことができる。同様に、１つ以上の上記融合タンパク質のコード配列は、配列番号４または免疫原性フラグメントに対応する上記に記載された融合タンパク質の部分の代わりに、配列番号４またはその免疫原性フラグメントに少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性があるコード配列を含む、１つ以上の上記融合タンパク質は、配列番号６または免疫原性フラグメントに対応する上記に記載された融合タンパク質の部分の代わりに、配列番号６またはその免疫原性フラグメントに少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列を含むことができる、ならびに／あるいは１つ以上の上記融合タンパク質のコード配列は、配列番号８または免疫原性フラグメントに対応する上記に記載された融合タンパク質の部分の代わりに、配列番号８またはその免疫原性フラグメントに少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列を含むことができる。幾つかの実施形態において、１つ以上の上記融合タンパク質をコードするコード配列は、配列番号２または免疫原性フラグメントをコードする部分に対応する上記に記載された融合タンパク質のコード配列の部分の代わりに、配列番号２の免疫原性フラグメントに少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列番号１またはそのフラグメントに、少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列を含むことができる。１つ以上の上記融合タンパク質をコードするコード配列は、配列番号４または免疫原性フラグメントをコードする部分に対応する上記に記載された融合タンパク質のコード配列の部分の代わりに、配列番号４の免疫原性フラグメントに少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列番号３またはそのフラグメントに、少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列を含むことができる。１つ以上の上記融合タンパク質をコードするコード配列は、配列番号６または免疫原性フラグメントをコードする部分に対応する上記に記載された融合タンパク質のコード配列の部分の代わりに、配列番号６の免疫原性フラグメントに少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列番号５またはそのフラグメントに、少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列を含むことができる。１つ以上の上記融合タンパク質をコードするコード配列は、配列番号８または免疫原性フラグメントをコードする部分に対応する上記に記載された融合タンパク質のコード配列の部分の代わりに、配列番号８の免疫原性フラグメントに少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列番号７またはそのフラグメントに、少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性がある配列を含むことができる。融合タンパク質は、コンセンサスタンパク質、および／またはコンセンサスタンパク質のフラグメント、および／またはコンセンサスタンパク質の変種、および／または変種コンセンサスタンパク質のフラグメントの組み合わせを含むことができる。コンセンサスタンパク質、および／またはコンセンサスタンパク質のフラグメント、および／またはコンセンサスタンパク質の変種、および／または変種コンセンサスタンパク質のフラグメントは、互いに隣接して直接結合され得る、またはその間のスペーザーまたは１つ以上のアミノ酸により結合され得る。幾つかの実施形態において、空間は、タンパク質分解性切断部位であり得る。幾つかの実施形態において、空間は、ワクチンが投与されること、および取り込まれることが意図される細胞において見いだされるプロテアーゼにより認識されるタンパク質分解性切断部位であり得る。
【０１４１】
４．プラスミド
哺乳動物において免疫応答を誘発するのに有効な量で哺乳動物の細胞内に１つ以上のＲＳＶタンパク質を発現することができるベクターが、本明細書において提供される。ベクターは、１つ以上のＲＳＶ抗原をコードする異種核酸を含むことができる。ベクターはプラスミドであり得る。プラスミドは、細胞を、ＲＳＶ抗原をコードする核酸により細胞を形質移入するのに有用であり得、形質転換された宿主細胞は培養され、ＲＳＶ抗原の発現が生じる条件下で維持される。
【０１４２】
プラスミドは、ＲＳＶに対して免疫応答を誘発することができる合成のコンセンサス抗原をコードし、かつ以下の３つのタンパク質のＦ、ＧＡ、Ｇｂ、そのようなタンパク質のフラグメント、そのようなタンパク質の変種、変種のフラグメント、またはコンセンサスタンパク質、および／もしくはコンセンサスタンパク質のフラグメント、および／もしくはコンセンサスタンパク質の変種、および／もしくは変種コンセンサスタンパク質のフラグメントの組み合わせから作製される融合タンパク質のそれぞれに対して提供されるコード配列を含む、上で開示された様々なＲＳＶタンパク質の１つ以上をコードする核酸配列を含むことができる。プラスミドは、ＲＳＶ  Ｍ２−１、そのようなタンパク質のフラグメント、そのようなタンパク質の変種、変種のフラグメント、またはコンセンサスタンパク質、および／もしくはコンセンサスタンパク質のフラグメント、および／もしくはコンセンサスタンパク質の変種、および／もしくは変種コンセンサスタンパク質のフラグメントの組み合わせから作製される融合タンパク質に対して免疫応答を誘発することができる合成のコンセンサス抗原をコードするコード配列を含む、上で開示されたなＲＳＶ  Ｍ２−１タンパク質をコードする核酸配列を含むことができる。
【０１４３】
単一のプラスミドは、単一のＲＳＶ免疫原のコード配列、２つのＲＳＶ免疫原のコード配列、または３つのＲＳＶ免疫原のコード配列を含有することができる。幾つかの実施形態において、４番目のＲＳＶ免疫原のコード配列が提供され得る。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のコード配列およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のコード配列およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原のコード配列およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のコード配列、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原のコード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のコード配列を含有することができる。
【０１４４】
ＲＳＶ  Ｍ２−１コード配列が提供される場合、単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のコード配列およびＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原のコード配列およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原のコード配列およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のコード配列、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原のコード配列、およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のコード配列、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原のコード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原のコード配列、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原のコード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のコード配列を含有することができる。単一のプラスミドは、ＲＳＶ  Ｆ免疫原のコード配列、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原のコード配列、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原のコード配列、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のコード配列を含有することができる。
【０１４５】
幾つかの実施形態において、プラスミドは、ＣＣＲ２０のみをコードする、またはこれらのプラスミドのうちの１つの一部としてコードするコード配列を含むことができる。同様に、プラスミドは、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、および／またはＩＬ−２８のコード配列を更に含むことができる。
【０１４６】
プラスミドは、コード配列の上流にあり得る開始コドン、およびコード配列の下流にあり得る終止コドンを更に含むことができる。開始および終結コドンは、抗原コード配列と共にフレーム内にあり得る。
【０１４７】
プラスミドは、コード配列に機能的に結合しているプロモーターも含むことができる。コード配列と機能的に結合しているプロモーターは、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）のプロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモーターのようなヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）プロモーター、モロニーウイルスプロモーター、トリ白血病ウイルス（ＡＬＶ）プロモーター、サイトメガウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、例はＣＭＶ最初期プロモーター、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）プロモーター、またはラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターであり得る。プロモーターは、また、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン、またはヒトメタロチオネインのようなヒト遺伝子からのプロモーターであり得る。プロモーターは、また、天然または合成の筋肉または皮膚特異的プロモーターのような組織特異的プロモーターであり得る。そのようなプロモーターの例は、米国特許出願公開第２００４０１７５７２７号に記載されており、その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４８】
プラスミドは、コード配列の下流にあり得るポリアデニル化シグナルを含むこともできる。ポリアデニル化シグナルは、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、ＬＴＲポリアデニル化シグナル、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化シグナル、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリアデニル化シグナル、またはヒトβグロブリンポリアデニル化シグナルであり得る。ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルは、ｐＣＥＰ４プラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）からのポリアデニル化シグナルであり得る。
【０１４９】
プラスミドは、コード配列の上流にエンハンサーを含むこともできる。エンハンサーは、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン、またはＣＭＶ、ＦＭＤＶ、ＲＳＶ、もしくはＥＢＶのうちの１つのようなウイルスエンハンサーであり得る。ポリヌクレオチド機能の増強は、米国特許第５，９３９，９７２号、同第５，９６２，４２８号、および国際公開公報第９４／０１６７３７号に記載されており、それぞれの内容は参照により完全に組み込まれる。
【０１５０】
プラスミドは、プラスミド染色体外性を維持し、かつ細胞内にプラスミドの複数のコピーを産生するため、哺乳類の複製の起点を含むこともできる。プラスミドは、エプスタイン・バーウイルスの複製の起点を含むことができるＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）からのｐＶＡＸ１、ｐＣＥＰ４、またはｐＲＥＰ４、および組み込みなしで高コピーエピソーム複製を生じることができる核抗原ＥＢＮＡ−１コード領域であり得る。プラスミドの主鎖は、ｐＡＶ０２４２であり得る。プラスミドは、複製欠損アデノウイルス型５（Ａｄ５）プラスミドであり得る。
【０１５１】
プラスミはド、プラスミドが投与される細胞における遺伝子発現に十分に適切であり得る調節配列を含むこともできる。コード配列は、宿主細胞におけるコード配列のより効率的な転写を可能にし得るコドンを含むことができる。
【０１５２】
コード配列は、Ｉｇリーダー配列を含むこともできる。リーダー配列は、コード配列の５′であり得る。この配列でコードされるコンセンサス抗原は、Ｎ末端Ｉｇリーダー、続いてコンセンサス抗原タンパク質を含むことができる。Ｎ末端Ｉｇリーダーは、ＩＧＥまたはＩｇＧであり得る。
【０１５３】
プラスミドは、エシェリキア・コリ（大腸菌）におけるタンパク質産生に使用することができるｐＳＥ４２０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ）であり得る。プラスミドは、酵母のサッカロマイセス・セレビシエ株におけるタンパク質産生に使用することができるｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ）でもあり得る。プラスミドは、昆虫細胞におけるタンパク質産生に使用することができる、ＭＡＸＢＡＣ（商標）完全バキュロウイルス発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）でもあり得る。プラスミドは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のような哺乳類細胞におけるタンパク質産生に使用することができる、ｐｃＤＮＡ  ＩまたはｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）でもあり得る。
【０１５４】
５．組成物
核酸分子を含む組成物が提供される。組成物は、単一のプラスミドのような単一の核酸分子の複数のコピー、２つ以上の異なるプラスミドのような２つ以上の異なる核酸分子の複数のコピーを含むことができる。例えば、組成物は、複数の２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個、またはそれ以上の異なる核酸分子を含むことができる。そのような組成物は、複数の、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個、またはそれ以上の異なるプラスミドを含むことができる。
【０１５５】
組成物は、単一のＲＳＶ免疫原のコード配列、２つのＲＳＶ免疫原のコード配列、または３つのＲＳＶ免疫原のコード配列を集合的に含有する、プラスミドのような核酸分子を含むことができる。幾つかの実施形態において、４番目のＲＳＶ免疫原のコード配列が提供され得る。
【０１５６】
２つのＲＳＶ免疫原のコード配列を含む組成物は、単一のプラスミドのような単一の核酸分子上であり得る、または組成物は、一方の核酸分子が１つのＲＳＶ免疫原のコード配列を含み、他方の核酸分子が異なるＲＳＶ免疫原のコード配列を含む２つの異なるプラスミドのような、２つの異なる核酸分子を含むことができる。同様に、３つのＲＳＶ免疫原のコード配列を含む組成物は、単一のプラスミドのような単一の核酸分子、２つの異なる核酸分子、または３つの異なる核酸分子を含むことができる。同様に、４つのＲＳＶ免疫原のコード配列を含む組成物は、単一のプラスミドのような単一の核酸分子、２つの異なる核酸分子、３つの異なる核酸分子、または４つの異なる核酸分子を含むことができる。
【０１５７】
幾つかの実施形態において、組成物は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原、またはＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のような１つのＲＳＶ免疫原をコードする複数の単一核酸分子を含む。幾つかの実施形態において、組成物は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原とＲＳＶ  Ｇａ免疫原、ＲＳＶ  Ｆ免疫原とＲＳＶ  Ｇｂ免疫原、およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原とＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のような２つのＲＳＶ免疫原をコードする単一のプラスミドのような複数の単一核酸分子を含む。幾つかの実施形態において、組成物は、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原、ＲＳＶ  Ｆ免疫原、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のような３つのＲＳＶ免疫原をコードする単一のプラスミドのような複数の単一核酸分子を含む。
【０１５８】
幾つかの実施形態において、組成物は、異なる核酸分子が異なるＲＳＶ免疫原の単一の異なるコード配列をそれぞれ含み、異なる核酸分子の対が、ＲＳＶ  Ｆ免疫原とＲＳＶ  Ｇａ免疫原、ＲＳＶ  Ｆ免疫原とＲＳＶ  Ｇｂ免疫原、およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原とＲＳＶ  Ｇｂ免疫原を含む、２つのプラスミドのような、複数の２つの異なる核酸分子を含む。
【０１５９】
幾つかの実施形態において、組成物は、３つの異なるＲＳＶ免疫原のコード配列を集合的に含む、２つのプラスミドのような、複数の２つの異なる核酸分子を含む。幾つかの実施形態において、１つのものはＲＳＶ  Ｆ免疫原およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードし、第２のものはＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする。幾つかの実施形態において、１つのものはＲＳＶ  Ｆ免疫原およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、第２のものはＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする。幾つかの実施形態において、１つのものはＧａ免疫原およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、第２のものはＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする。
【０１６０】
幾つかの実施形態において、組成物は、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする複数の単一核酸分子を含む。
【０１６１】
ＲＳＶ  Ｍ２−１のコード配列が提供される幾つかの実施形態において、組成物は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原とＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原とＲＳＶ  Ｇａ免疫原、およびＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原とＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のような２つのＲＳＶ免疫原をコードする単一のプラスミドのような、複数の単一核酸分子を含む。
【０１６２】
ＲＳＶ  Ｍ２−１のコード配列が提供される幾つかの実施形態において、ＲＳＶ  Ｆ免疫原、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原、およびとＲＳＶ  Ｇａ免疫原、ＲＳＶ  Ｆ免疫原、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のような３つのＲＳＶ免疫原をコードする単一のプラスミドのような、複数の単一核酸分子。幾つかの実施形態において、組成物は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原のような３つのＲＳＶ免疫原をコードする単一のプラスミドのような複数の単一核酸分子を含む。
【０１６３】
ＲＳＶ  Ｍ２−１のコード配列が提供される幾つかの実施形態において、組成物は、異なる核酸分子が異なるＲＳＶ免疫原の単一の異なるコード配列をそれぞれ含み、異なる核酸分子の対が、ＲＳＶ  Ｆ免疫原とＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原とＲＳＶ  Ｇａ免疫原、およびＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原とＲＳＶ  Ｇｂ免疫原を含む、２つのプラスミドのような複数の２つの異なる核酸分子を含む。
【０１６４】
ＲＳＶ  Ｍ２−１のコード配列が提供される幾つかの実施形態において、組成物は、３つの異なるＲＳＶ免疫原のコード配列を集合的に含むか、または１つがＲＳＶ  Ｍ２−１である、２つのプラスミドのような複数の２つの異なる核酸分子を含む。実施形態は、１つの核酸分子がＲＳＶ  Ｆ免疫原およびＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードし、第２が、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする、１つの核酸分子がＲＳＶ  Ｆ免疫原およびＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードし、第２がＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする、１つがＲＳＶ  Ｆ免疫原およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードし、第２がＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする、１つがＲＳＶ  Ｆ免疫原およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、第２がＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードする、１つがＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードし、第２がＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする、１つがＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードし、第２がＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする、１つがＲＳＶ  Ｍ２−１およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、第２がＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードする、１つがＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、第２がＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする、ならびに１つがＧａ免疫原およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、第２がＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードすることからなる群から選択され得る。
【０１６５】
ＲＳＶ  Ｍ２−１のコード配列が提供される幾つかの実施形態において、組成物は、４つの異なるＲＳＶ免疫原のコード配列を集合的に含む２つのプラスミドのような複数の２つの異なる核酸分子を含む。幾つかの実施形態において、１つの核酸分子は、ＲＳＦ  Ｆ免疫原をコードし、第２は、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原コードする、１つの核酸は、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードし、第２は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする、１つは、ＲＳＦ  Ｇａ免疫原をコードし、第２は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原、およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、１つは、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、第２は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原、およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする、１つは、ＲＳＶ  ＦおよびＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードし、第２は、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする、１つは、ＲＳＶ  ＦおよびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードし、第２は、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする、ならびに１つはＲＳＶ  ＦおよびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、第２はＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする。幾つかの実施形態において、組成物は、３つの異なるＲＳＶ免疫原のコード配列を集合的に含む、３つのプラスミドのような、複数の３つの異なる核酸分子を含む。幾つかの実施形態において、１つの核酸分子は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードし、１つは、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードし、第３は、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする、１つの核酸分子は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードし、１つは、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードし、第３は、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする、１つの核酸分子は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードし、１つは、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードし、第３は、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする、および１つの核酸分子は、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードし、１つは、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードし、第３は、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする。幾つかの実施形態において、組成物は、４つの異なるＲＳＶ免疫原のコード配列を集合的に含む、３つのプラスミドのような、複数の３つの異なる核酸分子を含む。幾つかの実施形態において、１つの核酸分子は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードし、第２はＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードし、第３は、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする、１つの核酸分子は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードし、第２は、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードし、第３は、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする、１つの核酸分子は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードし、第２は、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、第３は、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする、１つの核酸分子は、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードし、第２は、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードし、第３は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原およびＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする、１つの核酸分子は、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードし、第２は、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、第３は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原およびＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードする、ならびに１つはＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードし、第２は、��ＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードし、第３は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原およびＲＳＶ  Ｍ２−１をコードする。幾つかの実施形態において、組成物は、４つの異なるＲＳＶ免疫原のコード配列を集合的に含む、４つのプラスミドのような、複数の４つの異なる核酸分子を含み、すなわち、１つの核酸分子は、ＲＳＶ  Ｆ免疫原をコードし、第２は、ＲＳＶ  Ｍ２−１免疫原をコードし、第３は、ＲＳＶ  Ｇａ免疫原をコードし、第４は、ＲＳＶ  Ｇｂ免疫原をコードする。
【０１６６】
幾つかの実施形態において、組成物は、ケモカインＣＣＬ２０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、および／またはＩＬ−２８のコード配列を更に含む。ケモカインＣＣＬ２０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、および／またはＩＬ−２８のコード配列は、１つ以上のＲＳＶ免疫原のコード配列を含む１つ以上の核酸分子に含まれ得る。ケモカインＣＣＬ２０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、および／またはＩＬ−２８のコード配列は、別個のプラスミドのような別個の核酸分子に含まれ得る。
【０１６７】
６．ワクチン
哺乳動物においてＲＳＶに対して免役応答を生成することができるワクチンが、本明細書により提供される。ワクチンは、上で考察されたそれぞれのプラスミドを含むことができる。ワクチンは、複数のプラスミドまたはそれらの組み合わせを含むことができる。ワクチンは、治療または予防免疫応答を誘導するために提供され得る。
【０１６８】
幾つかの実施形態において、ワクチンは、前のＴｈ２関連病理発生に役割を果たさないよう、好ましくはＴｈ１に偏向しており、中和に感受性がある環境において機能することができるべきである。好ましくは、生であるべきではない。
【０１６９】
ワクチンは、Ｆ、Ｇａ、およびＧｂ、そのようなタンパク質のフラグメント、そのようなタンパク質の変種、変種のフラグメントからなる群から選択される１つ以上の免疫原標的を送達するために使用することができる。複数の標的を送達する場合、ワクチンは、複数の組成物または単一の組成物を含むことができる。異なるタンパク質をコードする異なるプラスミドを含む単一のプラスミドまたは組成物における複数のタンパク質をコードするプラスミドを、使用することができる。幾つかの実施形態において、ワクチンは、Ｍ２、そのフラグメント、Ｍ２−１の変種、変種のフラグメントを単独で、またはＦ、Ｇａ、およびＧｂ、そのようなタンパク質のフラグメント、そのようなタンパク質の変種、変種のフラグメントからなる群から選択される１つ以上の免疫原標的と組み合わせて送達するために使用することができる。複数の標的を送達する場合、ワクチンは、複数の組成物または単一の組成物を含むことができる。異なるタンパク質をコードする異なるプラスミドを含む単一のプラスミドまたは組成物における複数のタンパク質をコードするプラスミドを、使用することができる。
【０１７０】
ワクチンは、薬学的に許容される賦形剤を更に含むことができる。薬学的に許容される賦形剤は、ビヒクル、アジュバント、担体、または希釈剤としての機能分子であり得る。薬学的に許容される賦形剤は、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）のような界面活性剤、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリル脂質Ａを含むＬＰＳ類縁体、ムラミルペプチド、キノン類縁体、スクアレンおよびスクアレンのような小胞、ヒアルロン酸、脂質、リポソーム、カルシウムイオン、ウイルス粒子、ポリアニオン、ポリカチオン、もしくはナノ粒子が含まれ得る形質移入促進剤、または他の既知の形質移入促進剤であり得る。
【０１７１】
形質移入促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタミン酸（ＬＧＳ）を含むポリアニオン、ポリカチオン、または脂質である。形質移入促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタミン酸であり、より好ましくは、ポリ−Ｌ−グルタミン酸は６ｍｇ／ｍｌ未満の濃度でワクチンに存在する。形質移入促進剤は、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）のような界面活性剤、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリル脂質Ａを含むＬＰＳ類縁体、ムラミルペプチド、キノン類縁体、ならびにスクアレンおよびスクアレンのような小胞を含むことができ、ヒアルロン酸を遺伝子構築物と一緒に投与に使用することもできる。幾つかの実施形態において、ＤＮＡプラスミドワクチンは、脂質、レクチンリポソーム、もしくはＤＮＡリポソーム混合物（例えば、国際公報第０９３２４６４０号を参照すること）のような当該技術において既知の他のリポソームを含むリポソーム、カルシウムイオン、ウイルス粒子、ポリアニオン、ポリカチオン、もしくはナノ粒子のような形質移入促進剤、または他の既知の形質移入促進剤を含むこともできる。好ましくは、形質移入促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタミン酸（ＬＧＳ）を含むポリアニオン、ポリカチオン、または脂質である。ワクチン中の形質移入剤の濃度は、４ｍｇ／ｍｌ未満、２ｍｇ／ｍｌ未満、１ｍｇ／ｍｌ未満、０．７５０ｍｇ／ｍｌ未満、０．５００ｍｇ／ｍｌ未満、０．２５０ｍｇ／ｍｌ未満、０．１００ｍｇ／ｍｌ未満、０．０５０ｍｇ／ｍｌ未満、または０．０１０ｍｇ／ｍｌ未満である。
【０１７２】
薬学的に許容される賦形剤は１つ以上のアジュバントであり得る。アジュバントは、ワクチンにおいて、同じもしくは代替的なプラスミドに発現される、または上記のプラスミドと組み合わされたタンパク質として送達される、他の遺伝子であり得る。１つ以上のアジュバントは、ＣＣＬ２０、α−インターフェロン（ＩＦＮ−α）、β−インターフェロン（ＩＦＮ−β）、γ−インターフェロン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＧＭ−ＣＳＦ、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、皮膚Ｔ細胞誘引性ケモカイン（ＣＴＡＣＫ）、胸腺上皮発現ケモカイン（ＴＥＣＫ）、粘膜関連上皮ケモカイン（ＭＥＣ）、ＩＬ−１２、欠失されたシグナル配列をコードするシグナル配列またはコード配列を有し、かつＩｇＥからのもののような異なるシグナルペプチド、またはＩｇＥからのもののような異なるシグナルペプチドをコードするコード配列を任意に含むＩＬ−１５を含む、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８、ＭＨＣ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＩＬ−８、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭａｄＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−１、Ｍａｃ−１、ｐｌ５０．９５、ＰＥＣＡＭ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ２、ＬＦＡ−３、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１８の突然変異形態、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、血管増殖因子、線維芽細胞増殖因子、ＩＬ−７、神経増殖因子、血管内皮増殖因子、Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｌｔ、Ａｐｏ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、ＤＲ６、カスパーゼＩＣＥ、Ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、Ｓｐ−１、Ａｐ−１、Ａｐ−２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、不活性ＮＩＫ、ＳＡＰ  Ｋ、ＳＡＰ−１、ＪＮＫ、インターフェロン応答遺伝子、ＮＦｋＢ、Ｂａｘ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬｒｅｃ、ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫ  ＬＩＧＡＮＤ、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０  ＬＩＧＡＮＤ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、およびこれらの機能性フラグメント、またはこれらの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質および／またはタンパク質をコードする核酸分子であり得る。幾つかの実施形態において、アジュバントは、ＣＣＬ−２０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８、ＣＴＡＣＫ、ＴＥＣＫ、ＭＥＣ、またはＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される１つ以上のタンパク質および／またはタンパク質をコードする核酸分子であり得る。ＩＬ−１２の構築物および配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＴＣ／ＵＳ１９９７／０１９５０２号、ならびに対応する米国特許出願第０８／９５６，８６５号および２０１１年１２月１２日に出願の米国特許仮出願第６１／５６９６００号に開示されており、これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−１５の構築物および配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０４／１８９６２号および対応する米国特許出願第１０／５６０，６５０号、ならびにＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ０７／００８８６号および対応する米国特許出願第１２／１６０，７６６号、ならびにＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１０／０４８８２７号に開示されており、これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−２８の構築物および配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＴＣ／ＵＳ０９／０３９６４８号および対応する米国特許出願第１２／９３６，１９２号に開示されており、これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。ＲＡＮＴＥＳおよび他の構築物および配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＴＣ／ＵＳ１９９９／００４３３２号および対応する米国特許出願第０９／６２２４５２号に開示されており、これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。ＲＡＮＴＥＳの構築物および配列の他の例は、ＰＣＴ出願番号ＰＴＣ／ＵＳ１１／０２４０９８号に開示されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。ＲＡＮＴＥＳおよび他の構築物および配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＴＣ／ＵＳ１９９９／００４３３２号および対応する米国特許出願第０９／６２２４５２号に開示されており、これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。ＲＡＮＴＥＳの構築物および配列の他の例は、ＰＣＴ出願番号ＰＴＣ／ＵＳ１１／０２４０９８号に開示されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。ケモカインのＣＴＡＣＫ、ＴＥＣＫ、およびＭＥＣの構築物および配列の例は、ＰＣＴ出願第ＰＴＣ／ＵＳ２００５／０４２２３１号および対応する米国特許出願第１１／７１９／６４６号に開示されており、これらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。ＯＸ４０および他の免疫調節剤の例は、米国特許出願第１０／５６０，６５３号に開示されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。ＤＲ５および他の免疫調節剤の例は、米国特許出願第０９／６２２４５２号に開示されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７３】
ワクチンは、１９９４年４月１日に出願の米国特許出願第０２１／５７９号に記載されている遺伝子ワクチン促進剤を更に含むことができる。
【０１７４】
ワクチンは、約１ナノグラムから１００ミリグラム、約１マイクログラムから約１０ミリグラム、または好ましくは約０．１マイクログラムから約１０ミリグラム、またはより好ましくは約１ミリグラムから約２ミリグラムの量でコンセンサス抗原およびプラスミドを含むことができる。幾つかの好ましい実施形態において、本発明による薬学的組成物は、約５ナノグラムから約１０００マイクログラムのＤＮＡを含む。幾つかの好ましい実施形態において、薬学的組成物は、約１０ナノグラムから約８００マイクログラムのＤＮＡを含有する。幾つかの好ましい実施形態において、薬学的組成物は、約０．１〜約５００マイクログラムのＤＮＡを含有する。幾つかの好ましい実施形態において、薬学的組成物は、約１〜約３５０マイクログラムのＤＮＡを含有する。幾つかの好ましい実施形態において、薬学的組成物は、約２５〜約２５０マイクログラム、約１００〜約２００マイクログラム、約１ナノグラムから１００ミリグラム、約１マイクログラムから約１０ミリグラム、約０．１マイクログラムから約１０ミリグラム、約１ミリグラムから約２ミリグラム、約５ナノグラムから約１０００マイクログラム、約１０ナノグラムから約８００マイクログラム、約０．１〜約５００マイクログラム、約１〜約３５０マイクログラム、約２５〜約２５０マイクログラム、約１００〜約２００マイクログラムのコンセンサス抗原およびそのプラスミドを含有する。
【０１７５】
ワクチンは、使用される投与様式に従って製剤化することができる。注射用ワクチンの薬学的組成物は、滅菌、発熱物質無含有、および粒子無含有であり得る。等張製剤または液剤を使用することができる。等張のための添加剤には、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、およびラクトースが含まれ得る。ワクチンは、血管収縮剤を含むことができる。等張液剤には、リン酸緩衝食塩水が含まれ得る。ワクチンは、ゼラチンおよびアルブミンを含む安定剤を更に含むことができる。安定化は、製剤が室温または周囲温度で長時間安定であることを可能にし得、例えば、ワクチン製剤へのＬＧＳ、またはポリカチオンもしくはポリアニオンであり得る。
【０１７６】
７．ワクチンの送達方法
免疫応答が誘導され得るＲＳＶへの特に有効な免疫原にするエピトープを含む、コンセンサス抗原の遺伝子構築物およびタンパク質を提供するワクチンを送達する方法が、本明細書において提供される。ワクチンを送達する、またはワクチン接種の方法は、治療的および予防的な免疫応答を誘導するために提供することができる。ワクチン接種の方法は、ＲＳＶに対する免疫応答を哺乳動物において生成することができる。ワクチンを個体に送達して、哺乳動物の免疫系の活性を調節し、免疫応答を増強することができる。ワクチンの送達は、細胞内で発現し、細胞の表面に送達され、その時点で免疫系が認識し、細胞性、液性、または細胞性および液性の応答を誘導する核酸分子としてのコンセンサス抗原の形質移入であり得る。ワクチンの送達は、上記に考察されたワクチンを哺乳動物に投与して、ＲＳＶに対する免疫応答を哺乳動物に誘導または誘発することに使用できる。
【０１７７】
哺乳動物の細胞へのワクチンおよびプラスミドの送達によって、形質移入細胞が発現し、ワクチンから注入されたそれぞれのプラスミドへコンセンサス抗原を分泌する。これらのタンパク質は、免疫系により外来性であると認識され、これらに対して抗体が作製される。抗体は、免疫系により維持され、後のＲＳＶ感染への有効な応答を可能にする。
【０１７８】
ワクチンを哺乳動物に投与して、免疫応答を哺乳動物に誘発することができる。哺乳動物は、ヒト、霊長類、非ヒト霊長類、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、アンテロープ、バイソン、スイギュウ、バイソン、ウシ科、シカ、ハリネズミ、ゾウ、ラマ、アルパカ、マウス、ラット、およびニワトリであり得る。
【０１７９】
ａ．併用治療
ワクチンは、ＣＣＬ２０、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＧＭ−ＣＳＦ、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、皮膚Ｔ細胞誘引性ケモカイン（ＣＴＡＣＫ）、胸腺上皮発現ケモカイン（ＴＥＣＫ）、粘膜関連上皮ケモカイン（ＭＥＣ）、ＩＬ−１２、欠失されたシグナル配列を有し、かつＩｇＥシグナルペプチドのような異なるシグナルペプチド任意に含むＩＬ−１５を含む、ＩＬ−１５、ＭＨＣ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ−２８、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＩＬ−８、ＲＡＮＴＥＳ、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭａｄＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−１、Ｍａｃ−１、ｐｌ５０．９５、ＰＥＣＡＭ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ２、ＬＦＡ−３、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１８の突然変異形態、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、血管増殖因子、線維芽細胞増殖因子、ＩＬ−７、神経増殖因子、血管内皮増殖因子、Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｌｔ、Ａｐｏ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、ＤＲ６、カスパーゼＩＣＥ、Ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、Ｓｐ−１、Ａｐ−１、Ａｐ−２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、不活性ＮＩＫ、ＳＡＰ  Ｋ、ＳＡＰ−１、ＪＮＫ、インターフェロン応答遺伝子、ＮＦｋＢ、Ｂａｘ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬｒｅｃ、ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫ  ＬＩＧＡＮＤ、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０  ＬＩＧＡＮＤ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、およびこれらの機能性フラグメント、またはこれらの組み合わせをコードする、他のタンパク質および／または遺伝子と組み合わせて投与され得る。幾つかの実施形態において、ワクチンは、以下の核酸分子および／またはタンパク質の１つ以上と組み合わせて投与され、核酸分子は、ＣＣＬ２０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８、ＣＴＡＣＫ、ＴＥＣＫ、ＭＥＣ、およびＲＡＮＴＥＳ、またはこれら機能性のフラグメントの１つ以上をコードするコード配列を含む核酸分子からなる群から選択され、タンパク質は、ＣＣＬ０２、ＩＬ−１２タンパク質、ＩＬ−１５タンパク質、ＩＬ−２８タンパク質、ＣＴＡＣＫタンパク質、ＴＥＣＫタンパク質、ＭＥＫタンパク質、もしくはＲＡＮＴＥＳタンパク質、またはこれらの機能性フラグメントからなる群から選択される。
【０１８０】
ワクチンは、経口、非経口、舌下、経皮、直腸内、経粘膜、局所、吸入、口腔内投与、胸膜内、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、鼻腔内、鞘内、および関節内、またはこれらの組み合わせを含む異なる経路で投与することができる。獣医学的使用では、組成物を、通常の獣医学の診療に適切に許容される製剤として投与することができる。獣医師は、特定の動物に最も適した投与レジメンおよび投与経路を容易に決定することができる。ワクチンは、伝統的なシリンジ、無針注射装置、「微粒子銃」、または電気穿孔（「ＥＰ」）、「流体力学法」、もしくは超音波のような他の物理的方法により投与することができる。
【０１８１】
ワクチンのプラスミドは、インビボ電気穿孔を用いるおよび用いないＤＮＡ注入（ＤＮＡワクチン接種とも呼ばれる）、組み換えアデノウイルス、組み換えアデノウイルス関連ウイルス、および組み換えワクシニアのようなリポソーム仲介、ナノ粒子促進組み換えベクターを含む幾つかの周知の技術により哺乳動物に送達することができる。コンセンサス抗原は、ＤＮＡ注入を介し、インビボ電気穿孔を伴って送達することができる。
【０１８２】
ｂ．電気穿孔
ワクチンのプラスミドの電気穿孔を介したワクチンの投与は、細胞膜に可逆的細孔を形成させるのに有効なエネルギーパルスを、哺乳動物の所望の組織に送達すように構成され得る電気穿孔装置を使用して達成することができ、好ましくは、エネルギーパルスは、使用者により予め設定された電流入力に類似した定電流である。電気穿孔装置は、電気穿孔構成要素および電極アセンブリーまたはハンドルアセンブリーを含むことができる。電気穿孔構成要素は、制御装置、電流波形発生器、インピーダンス試験器、波形自動記録器、入力要素、状況報告要素、通信ポート、記憶装置構成要素、電源、および電源スイッチが含まれる、電気穿孔装置の様々な要素の１つ以上を含み、組み込むことができる。電気穿孔は、インビボ電気穿孔装置、例えば、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ  ＥＰシステム（ＶＧＸ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｂｌｕｅ  Ｂｅｌｌ，ＰＡ）またはＥｌｇｅｎ電気穿孔機（Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用することにより達成され、プラスミドによる細胞の形質移入を促進することができる。
【０１８３】
電気穿孔構成要素は、電気穿孔装置の１つの要素として機能することができ、他の要素は、電気穿孔構成要素と通信する別個の要素（または構成要素）である。電気穿孔構成要素は、電気穿孔装置の１つを超える要素として機能することができ、これも、電気穿孔構成要素から離れている電気穿孔装置の他の要素と通信し得る。電気機械的または機械的な装置の一部として存在する電気穿孔装置の要素は、１つの装置として、または互いに通信する別個の要素として機能し得る要素として限定されることはない。電気穿孔構成要素は、所望の組織に定電流を生じるエネルギーパルスを送達することができ得、フィードバック機構を含む。電極アセンブリーは、空間を開けて配置された複数の電極を有する電極配列を含むことができ、ここで電極アセンブリーは、電気穿孔構成要素からのエネルギーパルスを受け取り、これを、電極を介して所望の組織に送達する。複数の電極の少なくとも１つは、エネルギーパルスの送達の間は中性であり、所望の組織においてインピーダンスを測定し、インピーダンスを電気穿孔構成要素に通信する。フィードバック機構は、測定されたインピーダンスを受け取ることができ、電気穿孔構成要素により送達されたエネルギーパルスを調整して、定電流を維持することができる。
【０１８４】
複数の電極が、分散パターンでエネルギーパルスを送達することができる。複数の電極は、プログラム化シーケンスによる電極の制御を介する分散パターンでエネルギーパルスを送達することができ、プログラム化シーケンスは、使用者により電気穿孔構成要素に入力される。プログラム化シーケンスは、シーケンスで送達された複数のパルスを含むことができ、複数のパルスのそれぞれのパルスは、インピーダンスを測定する１つの中性電極を有する少なくとも２つの活性電極により送達され、後から続く複数のパルスは、インピーダンスを測定する１つの中性電極を有する少なくとも２つの活性電極のうちの異なる１つにより送達される。
【０１８５】
フィードバック機構は、ハードウエアまたはソフトウエアのいずれかにより実施することができる。フィードバック機構は、アナログ閉ループ回路により実施することができる。フィードバックは、５０μｓ、２０μｓ、１０μｓ、または１μｓ毎に発生するが、好ましくはリアルタイムフィードバックまたは瞬時（すなわち、応答時間を決定する利用可能な技術により決定される、実質的な瞬時）である。中性電極は、所望の組織においてインピーダンスを測定し、インピーダンスをフィードバック機構に通信することができ、フィードバック機構は、インピーダンス応答し、エネルギーパルスを調整して、予め設定された電流と類似した値に定電流を維持する。フィードバック機構は、エネルギーパルスの送達の間に定電流を連続的または瞬時に維持することができる。
【０１８６】
本発明のＤＮＡワクチンの送達を促進することができる電気穿孔装置および電気穿孔法の例には、Ｄｒａｇｈｉａ−Ａｋｌｉ，ｅｔ  ａｌ．による米国特許第７，２４５，９６３号、Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ  ａｌ．による米国特許公開第２００５／００５２６３０号に記載されたものが含まれ、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＤＮＡワクチンの送達の促進に使用することができる他の電気穿孔装置および電気穿孔法には、２００６年１０月１７日出願の米国特許仮出願第６０／８５２，１４９号および２００７年１０月１０日出願の同第６０／９７８，９８２号の特許法１１９条（ｅ）に基づく利益を主張する、２００７年１０月１７日出願の同時係属および共有の米国特許出願第１１／８７４０７２号において提供されたものが含まれ、これらは全て、その全体が参照により組み込まれる。
【０１８７】
Ｄｒａｇｈｉａ−Ａｋｌｉらによる米国特許第７，２４５，９６３号は、身体または植物内の選択された組織の細胞への生体分子の導入を促進するためのモジュール式電極システムおよびこれらの使用を記載する。モジュール式電極システムは、複数の針電極、皮下注射針、プログラム可能定電流パルス制御装置から複数の針電極へ導電性インクを提供する電気コネクタ、および電源を含むことができる。操作者は、支持構造に装填された複数の針電極をつかみ、それらを身体または植物の選択された組織の中にしっかりと挿入することができる。次に生体分子が、選択された組織内に皮下注射針を介して送達される。プログラム可能定電流パルス制御装置を作動し、定電流電気パルスを複数の針電極に適用する。適用される定電流電気パルスは、複数の電極の間の細胞への生体分子の導入を促進する。米国特許第７，２４５，９６３号の全ての内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８８】
Ｓｍｉｔｈらにより提出された米国特許公開第２００５／００５２６３０号は、身体または植物内の選択された組織の細胞への生体分子の導入を効果的に促進するために使用され得る電気穿孔装置を記載する。電気穿孔装置は、動作がソフトウエアまたはファームウエアにより特定される動電学的装置（「ＥＫＤ装置」）を含む。ＥＫＤ装置は、電極配列の間に一連のプログラム可能定電流パルスパターンを、使用者の制御およびパルスパラメーターの入力に基づいて生成し、電流波形データの記憶および取得を可能にする。電気穿孔装置は、また、針電極の配列を有する交換可能な電極ディスク、注入針の中央注入チャンネル、および取り外し可能なガイドディスクを含む。米国特許公開第２００５／００５２６３０号の全ての内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８９】
米国特許第７，２４５，９６３号および米国特許公開第２００５／００５２６３０号に記載されている電極配列および方法を、筋肉のような組織のみならず、他の組織または臓器の中にも深く侵入するように適合させることができる。電極配列の構成のため、（選択された生体分子を送達する）注入針も、標的臓器の中に完全に挿入され、注入は、電極により予め描かれた領域内の標的組織に対して垂直に施用される。米国特許第７，２４５，９６３号および米国特許公開第２００５／００５２６３０号に記載されている電極は、好ましくは長さが２０ｍｍであり、ゲージが２１である。
【０１９０】
加えて、電気穿孔装置およびその使用を組み込む幾つかの実施形態において考慮されるように、以下の特許：１９９３年１２月２８日発行の米国特許第５，２７３，５２５号、２０００年８月２９日発行の米国特許第６，１１０，１６１号、２００１年７月１７日発行の同第６，２６１，２８１号、および２００５年１０月２５日発行の同第６，９５８，０６０号、ならびに２００５年９月６日発行の米国特許第６，９３９，８６２号に記載される電気穿孔装置が存在する。更に、様々な装置のいずれかを使用したＤＮＡの送達に関する２００４年２月２４日発行の米国特許第６，６９７，６６９号、およびＤＮＡを注入する方法を対象とする２００８年２月５日発行の米国特許第７，３２８，０６４号に提供された主題を網羅する特許が、本明細書において考慮される。上記の特許は、その全体が参照により組み込まれる。
【０１９１】
ｃ．ＤＮＡプラスミドの調製方法
本明細書で考察されているＤＮＡワクチンを含むＤＮＡプラスミドを調製する方法が、本明細書において提供される。ＤＮＡプラスミドは、哺乳類発現プラスミドへの最終サブクローニングステップの後、当該技術において既知の方法を使用して、大規模発酵タンク中の細胞培養物への接種に使用することができる。
【０１９２】
本発明のＥＰ装置で使用されるＤＮＡプラスミドは、既知の装置および技術の組み合わせを使用して製剤化および製造することができるが、好ましくは、これらは２００７年５月２３日出願の契約対象同時継続米国特許仮出願第６０／９３９，７９２号に記載されている最適化プラスミド製造技術を使用して製造される。幾つかの例において、これらの研究に使用されたＤＮＡプラスミドを、１０ｍｇ／ｍＬ以上の濃度で製剤化することができる。製造技術は、また、契約対象特許である２００７年７月３日出願の米国特許第７，２３８，５２２号に記載されているものを含む、米国特許出願第６０／９３９７９２号に記載されているものに加えて、当業者に一般的に既知の様々な装置およびプロトコールを含む、または組み込む。上で参照された出願および特許である米国特許出願第６０／９３９，７９２号および米国特許第７，２３８，５２２号は、それぞれその全体が本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０１９３】
本発明は以下の実施例において更に説明される。これらの実施例は、本発明の好ましい実施形態を示しているが、例示のためにのみ提示されていることが理解されるべきである。上記の考察およびこれらの実施例から、当業者は、本発明の本質的な特長を確認することができ、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明の様々な変更および修正を行って様々な用途および条件に適合させることができる。したがって、本明細書において示され、記載されているものに加えて、本発明の様々な変更が、前記の記載から当業者には明白となるであろう。そのような変更も、添付の特許請求の範囲の範囲内であることが意図される。
【０１９４】
実施例１
将来的にＲＳＶ感染の高い危険性のある個人数が連続的に増加すると予測されるので（例えば、年少乳児および高齢者）、ＲＳＶ感染の効果的で経済的に対処できる治療を開発する緊急の必要性が存在する。免疫化の際に目的のコード化タンパク質を発現するように遺伝子操作された小型細菌プラスミドであるＤＮＡワクチンは、効果的なＲＳＶワクチンの設計に伴う多くの障害を回避することを助け得る、幾つかの大きな利点を提供する。例えば、臨床的に有意な病気および再感染を予防するため、ワクチンは、自然ＲＳＶ感染のときに発生するものより大きく、長く持続する免疫を付与する必要がある。ＤＮＡワクチンは、多くのウイルスに対して、液性（例えば、中和抗体）と細胞性（例えば、細胞毒性Ｔリンパ球）の両方の免疫応答を誘発するのみならず、生涯にわたる免疫性も誘発することができる。加えて、ＲＳＶワクチン接種の主要な標的は、新生児および年少乳児である。新生児免疫系は機能的に未熟であり、したがって従来のワクチン（例えば、生の弱毒化または不活性化ウイルス）に対して弱い免疫応答しか発生しない。一方、ＤＮＡワクチンは、新生児動物モデルにおいて安全で免疫原性であることを示している。更に、免疫化の時点での母親抗体の存在は、様々な従来のワクチンへの免疫応答を抑制または阻害することが知られている。しかし、ＤＮＡワクチンでは、免疫化タンパク質は、ワクチン調合剤には存在せず、したがって母親抗体による直接的な不活性化には感受性がないはずである。
【０１９５】
現在、３つの主なＲＳＶワクチンが臨床試験の初期またはほぼ初期段階にあり、１）生弱毒化ＲＳＶ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）、２）ＲＳＶ  Ｆおよび／またはＧタンパク質を発現するセンダイウイルス（ＡｍＶａｃ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ならびに３）ＲＳＶのＧタンパク質を含有するウイルス様粒子（Ｎｏｖａｖａｘ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）である（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｒｅｓｕｌｔｓ？ｔｅｒｍ＝ＲＳＶ＆ｐｇ＝ｌ）。これらの手法は、ＲＳＶ感染の予防にある程度の効果を示しているが、そのようなワクチン設計に伴う本来的な不利益が存在する。例えば、生の弱毒化ウイルスの最大の問題は、発病力の復帰をもたらす弱毒化不足または突然変異であり、したがって、免疫無防備状態の個人に投与されるべきではない。全てのウイルスベクターにおける一般的な欠点は、宿主免疫反応であり、それは、ウイルスタンパク質の認識が中和抗体の生成をもたらし、そのことが後の免疫化の際にワクチンの効果を有意に低減し得るからである。最後に、ＲＳＶのＧタンパク質は、ＲＳＶの２つのサブタイプのうちで非常に多様であり、したがって、Ｇタンパク質を標的にする任意のワクチンは、交差保護を提供する可能性が少ない。
【０１９６】
対照的に、ＤＮＡワクチンは、極めて免疫原性であること、および上記に記載されたワクチン手法に伴う多くの不利益を欠いていることが示されている。電気穿孔により送達されるとき、ＤＮＡワクチン免疫原性は更に改善される。ＤＮＡワクチンは、完全なセットより少ないウイルス成分を含有し、タンパク質サブユニットワクチンのように、宿主に発病力復帰または感染の危険性がなく、乳児および免疫無防備状態の個人の両方における使用で安全である。
【０１９７】
ＲＳＶの両方のサブタイプＡおよびＢのコンセンサス配列の使用は、ウイルスの両方の菌株に対する広範囲の保護を得るための基礎を提供する。そのような利点は、コンセンサスＲＳＶ  ＤＮＡワクチンをさらに有益にし、過去に提案された任意の他の手法より潜在的に効果的にする。
【０１９８】
主なＲＳＶタンパク質である融合体（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇａ）、および糖タンパク脂質（Ｇａ）を、新たなＲＳＶワクチンの標的として選択した。第２のマトリックスタンパク質（Ｍ２）も評価のために選択した。上で記述されたように、ＦおよびＧタンパク質は、表面に発現し、中和抗体の理想的な標的である。Ｍ２タンパク質は、主な免疫優性ＣＤ８  Ｔ細胞エピトープを含有する。これらのＲＳＶタンパク質のそれぞれにおいて、単一のコンセンサス配列を、ＲＳＶの両方のサブタイプＡおよびＢではＰＵＢＭＥＤにより提供されたアミノ酸配列に基づいて生成した（図１は、ＲＳＶ−Ｆタンパク質の系統樹を示し、コンセンサスＲＳＶ  Ｆタンパク質アミノ酸配列は、配列番号２に記載されている。図２は、ＲＳＶ  Ｍ２−１タンパク質の系統樹を示し、コンセンサス、ＲＳＶ  Ｍ２−１タンパク質アミノ酸配列は、配列番号４に記載されている）。好ましい実施形態では、コンセンサスタンパク質配列をコードするコドンおよびＲＮＡ最適化ＤＮＡ配列が産生され、電気穿孔により送達され得るＤＮＡワクチンを作製するために使用される。
【０１９９】
実施例２
ＲＳＶコンセンサスＦタンパク質の発現の成功を、免疫蛍光顕微鏡法および／またはウエスタンブロット分析により確認した。構築物を免疫化試験に使用した。
【０２００】
マウスを、様々な投与量の異なるＲＳＶ  ＤＮＡワクチン構築物により免疫化した。１つの群は、対照として、ＤＮＡワクチン主鎖プラスミドｐＶＡＸを受けた。１つの群は、５μｇの用量のプラスミドＲＳＶ−Ｆを受け、１つの群は、１５μｇの用量のプラスミドＲＳＶ−Ｆを受け、１つの群は、３０μｇの用量のプラスミドＲＳＶ−Ｆを受け、１つのぐんは、６０μｇの用量のプラスミドＲＳＶ−Ｆを受けた。
【０２０１】
マウスを、電気穿孔により筋肉内へ２週間間隔で合計３回（０、２、および４週目）の免疫化により免疫化した。マウスを、それぞれの免疫化の２、４、６、および１２週間後に出血させ、全ＲＳＶ  Ｆタンパク質特異的ＩｇＧおよびＩｇＡ抗体を血清において測定した。図３は、免疫化１（すなわち、０週目）、免疫化２（すなわち、２週目）、および免疫化３（すなわち、４週目）後の抗ＲＳＶ  Ｆタンパク質ＩｇＧを示す。図４は、免疫化１（すなわち、０週目）、免疫化２（すなわち、２週目）、および免疫化３（すなわち、４週目）後の抗ＲＳＶ  Ｆタンパク質ＩｇＡを示す。マウスを１２週目に殺処分した。血清中の全ＩｇＧと血清中の全ＩｇＡの比較に加えて、最終免疫化のおよそ８週間後の異なる投与量のＲＳＶ−ＦワクチンによるＩＦＮ−γ産生の比較を行った。
【０２０２】
ＲＳＶ−Ｆ  ＤＮＡワクチンは、血清においてＩｇＧおよびＩｇＡの両方を高いレベルで誘発した。応答は、全ての投与量試験において第２の免疫化の２週間後の早さで検出可能であった。誘発された抗体応答は、強くＴｈ１偏向していると思われ、したがって、以前のＲＳＶへのＴｈ２免疫応答の副作用に関する問題が回避される。ＲＳＶ−Ｆ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞が、最後の免疫化の８週間後においてさえも観察された。図５は、最後の免疫化のおよそ８週間後のＲＳＶ−Ｆワクチンの異なる投与量によるＩＦＮ−γ産生を比較した結果を示す。
【０２０３】
実施例３
ケモカインは、近くの応答細胞において高い濃度勾配に向けての直接的な走化性を誘発することができる、細胞により分泌される、小型タンパク質のファミリーである。様々なグループが、ケモカインを免疫アジュバントとして使用する実現性について調査している。
【０２０４】
ＣＣＲ１０に結合するＣＣＬ２８／ＭＥＣ（粘膜関連上皮ケモカイン）は、腸、肺、乳房、および唾液腺の上皮細胞に発現する。以前の研究における粘膜ケモカインの使用は、全身免疫化の後に粘膜組織に良好な免疫応答を誘発して、免疫アジュバントとしての有用性を示した。
【０２０５】
実験は、コンセンサスＲＳＶ  Ｆタンパク質ＤＮＡワクチン構築物のアジュバントとしてのＣＣＬ２８遺伝子構築物の使用を試験するために実施した。、肝臓活性化制御ケモカイン（ＬＡＲＣ）またはマクロファージ炎症性タンパク質−３（ＭＩＰ３Ａ）とも呼ばれる、ＣＣＬ２０をコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物も、コンセンサスＲＳＶ  Ｆタンパク質ＤＮＡワクチン構築物の可能なアジュバントとして試験した。
【０２０６】
ＲＳＶ−Ｆの免疫化スケジュール＋ケモカイン実験は、１群がＲＳＶ−Ｆ構築物のみを受け、１群がＲＳＶ−Ｆ構築物＋ＣＣＬ２０構築物を受け、１群がＲＳＶ−Ｆ構築物＋ＣＣＬ２８構築物を受ける、３群のマウスを利用した。マウスを、０週目、２週目、および４週目の合計３回免疫化した。マウスを、２週目、４週目、および５週目に出血させた。５週目にはマウスを膣内洗浄して、膣試料を収集し、殺処分した後、肺および脾臓を収集した。
【０２０７】
比較は、脾臓におけるＲＳＶ−Ｆ＋／−ケモカイン免疫化後の脾臓（図６）およびＲＳＶ−Ｆ＋／−ケモカイン免疫化後の肺（図７）におけるＩＦＮ−γ＋ＤＣ８およびＣＤ４  Ｔ細胞によって行った。
【０２０８】
血清中のＩｇＧ終点力価を測定し、血清中のＩｇＧサブタイプ（ＩｇＧ１対ＩｇＧ２ａ）を比較した（図８）。ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１比の比較も行った（図９）。
【０２０９】
ＣＣＬ２０およびＣＣＬ２８ケモカインは、脾臓または肺のいずれにおいてもＲＳＶ−Ｆ  ＤＮＡワクチン接種後にＣＤ８およびＣＤ４  Ｔ細胞免疫応答を増強したとは（ＩＦＮーγＩＣＳに基づいて）思われなかったが、ケモカイン構築物の投与量が不十分であったかは不明である。
【０２１０】
ＣＣＬ２０免疫アジュバントを受けた動物は、ＲＳＶ−Ｆ  ＤＮＡワクチン接種後にＴｈ１免疫応答（一次ＩｇＧ２ａ）への大きな偏向を示した。免疫応答をＴｈ２から追い払い、Ｔｈ１へ向けることは、ＲＳＶ感染後のワクチン関連増強疾患を回避するために有用であり得る。
【０２１１】
実施例４
上に述べたように、ＣＣＬ２０をコードするコード配列の投与は、優先的なＴｈ１免疫応答、およびＴｈ２免疫応答から離れることをもたらす。ＣＣＬ２０投与の特性は、免疫療法、ならびにＴｈ１免疫応答の増加からＴｈ２免疫応答の減少へのシフトが望ましい他の標的のワクチンアジュバントの両方の文脈において有用であり得る。
【０２１２】
例えば、ＣＣＬ２０、またはＣＣＬ２０をコードする核酸分子の投与は、Ｔｈ２免疫応答により特徴付けられる自己免疫性疾患または炎症性状態を有する個体を治療するのに有用であり得る。本明細書において示されているＴｈ２免疫応答を減少する能力は、例えばを含む特定の自己免疫性疾患または炎症性状態に関連するＴｈ２免疫応答を低減するために使用され得る。
【０２１３】
加えて、ＣＣＬ２０を、本明細書に記載されているワクチンアジュバントとして、他の炎症性疾患、ならびに癌を標的にするワクチンと共に使用することができる。ワクチンアジュバントとしてのＣＣＬ２０の使用に伴うＴｈ１増加／Ｔｈ２減少特性は、ワクチンにとって有用であり得る。配列番号１８および配列番号２０は、ＩｇＥシグナルペプチドをコードするコード配列を有する、および有さない、ＣＣＬ２０の高発現コード配列を含有する。幾つかの実施形態において、配列番号１８は、開始コドンを更に含む。配列番号１９および配列番号２１は、ＩｇＥシグナルペプチドをコードするコード配列を有する、および有さない、ＣＣＬ２０のコンセンサス配列を含有する。幾つかの実施形態において、配列番号１９は、Ｎ末端メチオニンを更に含む。
【０２１４】
実施例５
ＴＺＭ−ｂｌ細胞のルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイは、分子クローンＥｎｖ偽型ウイルスによる１回感染に基づいている。ＴＺＭ−ｂｌ（ＪＣ５３−ｂｌ）は、ＣＤ４、ＣＸＣＲ４、およびＣＣＲ５を発現し、かつＴａｔ誘導性Ｌｕｃおよびβ−Ｇａｌレポーター遺伝子を含有する、遺伝子操作されたＨｅＬａ細胞系である。このアッセイは、１回感染での高い成功率、増大したアッセイ能力（２日アッセイ）、向上した精度（５０％の中和を正確に測定する）、改善された基準化のレベル（安定した細胞系）、ならびに最適化および検証されたアッセイプラットフォームをもたらす。参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｏｎｔｅｆｉｏｒｉ，Ｄ．Ｃ．（２００４）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１２．１１．１−１２．１１．１５は、このアッセイを記載した。
【０２１５】
図１０は、ＴＺＭ−ＢＬ細胞／「ＯＮ」におけるＥｎｖ−偽型ウイルスを描写する。
【０２１６】
図１１は、ＴＺＭ−ＢＬ細胞／「ＯＦＦ」におけるＥｎｖ−偽型ウイルスを描写する。
【０２１７】
図１２は、２９３Ｔ細胞におけるＲＳＶ融合偽ウイルス産生を描写する。
【０２１８】
図１３は、このアッセイを使用するＲＳＶ−Ｆ中和試験に使用される免疫化プロトコールを示す。
【０２１９】
図１４は、異なる標的細胞におけるＲＳＶ−Ｆ仲介感染の定量化データを示す。ＲＳＶ−Ｆタンパク質を担持する偽型の感染性。偽型ウイルスをペレット化し、粒子量を、ＨＩＶ  ｐ２４抗原を定量化することによって推定した。細胞を、偽型ウイルスにより、またはエンベロープを担持しない、１０ｎｇの粒状ＨＩＶ  ｐ２４抗原を含有する多様な細胞系のパネルにより感染させた。感染の７２時間後、細胞上澄み、およびｐ２４抗原についてアッセイした。値は、三重のウエルの平均および標準偏差である。
【０２２０】
図１５は、ＴＺＭ−ｂｌ  ＨｅＬａ細胞におけるＲＳＶ−Ｆ中和活性の定量化データを示す。データは、ＨＩＶ−Ｌｕｃ／ＦＭＤＶ偽ウイルスが標的細胞に侵入し、標的細胞を感染することを遮断できる、ＤＮＡワクチン接種動物からのＲＳＶ−Ｆ免疫化血清試料において、ルシフェラーゼアッセイを使用して中和能力とＲＳＶ−Ｆとを比較した結果を示す。力価は、ウイルスの５０％阻害を生じる血清の希釈度の逆数として定義される。ワクチン接種されたマウスからの血清試料の、ＨＩＶ−１  Ｌｕｃ／ＲＳＶ−Ｆの感染性を中和および遮断する能力、正常なマウス血清（ＮＭＳ）におけるそのような遮断活性の不在。
【０２２１】
図１６は、ＨｅＬａ細胞におけるＲＳＶ−Ｆ偽ウイルスによる細胞死活性の定量化データを示す。結果は、コンセンサスＲＳＶ−Ｆ  ＤＮＡプラスミドが、電気穿孔による３回のワクチン接種の後、マウスにおいて強力な液性および細胞性免疫応答を誘発することを示す。血清中の高レベルのＲＳＶ−Ｆ特異的ＩｇＧが、僅か５μｇのＤＮＡによる２回目の免疫化後の１週間の早さで観察された。細胞仲介免疫応答は、３回目の免疫化後の８週間もたってから検出され、ＲＳＶ−Ｆ  ＤＮＡワクチン接種後の免疫応答の長期間の持続性を示唆した。ＲＳＶ−Ｆ  ＤＮＡ濃度の増加は、免疫応答の増加をもたらさなかった。ＲＳＶ−Ｆ  ＤＮＡ＋電気穿孔による３回のワクチン接種の後に生成された抗体は、偽ウイルス中和アッセイにより測定すると、感染を中和することができた。結果は、緩和されたＲＳＶ−Ｆは、標的細胞のアポトーシスを仲介したことも示した。
【０２２２】
実施例６
図１７は、実施されたＲＳＶ−Ｍ２投与量試験の免疫化スケジュールを示す。この試験から収集されたデータは、最後の免疫化のおよそ１週間後のＲＳＶ−Ｍ２ワクチンの異なる投与量によるＩＦＮ−ｇ産生の比較を含む（図１８）。結果は、コンセンサスに基づいたＲＳＶ−Ｍ２  ＤＮＡプラスミドが、電気穿孔による３回のワクチン接種の後、マウスにおいて有意な細胞性免疫応答を誘発したことを示した。脾臓および肺の両方におけるＲＳＶ−Ｍ２の免疫優性または亜優性エピトープのいずれかに特異的な高レベルのＩＦＮ−ｇ＋Ｔ細胞が、観察された。最大免疫応答は、６０μｇのＤＮＡにより観察された（しかし、応答は、１０μｇのＤＮＡにより観察されたものよりさほど大きくなかった）。
【０２２３】
実施例７
更なる試験が、ＤＮＡ免疫化後に粘膜免疫応答を増強する潜在的な免疫アジュバントとしてのＣＣＬ２０を評価するために実施された。ＣＣＬ２０（生の活性化制御ケモカイン−ＬＡＲＣ、マクロファージ炎症性タンパク質３−ＭＩＰ３ａ）は、ＣＣＲ６に結合し、リンパ節、肝臓、虫垂、胎児の肺（低いレベルで胸腺、精巣、前立腺、および腸）に発現する。
【０２２４】
図１９は、ＲＳＶ−ＦワクチンとＣＣＬ２０との組み合わせを評価するための免疫化スケジュールを描写する。
【０２２５】
図２０は、最後の免疫化の１週間後の脾臓、肝臓、および肺のそれぞれにおける異なる投与量のＣＣＬ２０によるＩＦＮ−ｇ産生を比較したデータを含む試験データを示す。
【０２２６】
図２１は、血清におけるＩｇＧサブタイプ（ＩｇＧ１対ＩｇＧ２ａ）を比較したデータを示す。
【０２２７】
結果は、ＣＣＬ２０との同時免疫化が、ＲＳＶ−Ｆ  ＤＮＡ免疫化後に肺および肝臓の両方において細胞仲介免疫応答を増加しないことを示す。ＣＣＬ２０は、ＤＮＡ免疫化後に生成されたＲＳＶ−Ｆ特異的ＩｇＧ抗体を、Ｔｈ１アイソタイプに偏向すると思われる。ＲＳＶ−Ｆ免疫化単独と比較して、より少ないＩｇＧ１およびより多いＩｇＧ２ａが、ＣＣＬ２０＋ＲＳＶ−Ｆ同時免疫化後に血清において観察された。
【０２２８】
したがって、改善されたワクチン、粘膜免疫応答を含むそのような応答を誘導する、ならびに免疫原に対して、特に病原体および粘膜組織を介して宿主に侵入する他の作用物質に関連するものに対して個体を予防的および／または治療的に免疫化する改善された方法が、提供される。例えば感染体は、一般に、口腔粘膜、ならびに消化管、嗅と結膜の粘膜を含む気道、乳腺、および尿生殖路の他の粘膜を横断して宿主に侵入する。
【０２２９】
ＣＣＬ２０およびその機能性フラグメントをコードする核酸と組み合わせて免疫原をコードする核酸配列を含む組成物が、提供される。組成物は、免疫原と、ＣＣＬ２０およびその機能性フラグメントの両方をコードする単離核酸分子を含むことができ、ならびに／またはＣＣＬ２０およびその機能性フラグメントの両方をコードする単離核酸分子と組み合わせて免疫原をコードする単離核酸分子を含む組成物。そのような組成物は、注射用医薬品として提供され得る。
【０２３０】
組成物は、免疫原に対して個体に免疫応答を誘導する方法であって、そのような組成物を個体に投与することを含む方法に使用され得る。
【０２３１】
調節エレメントに機能的に結合している免疫原をコードするヌクレオチド配列、およびＣＣＬ２０またはその機能性配列をコードするヌクレオチド配列を含む組み換えワクチンが提供され、そのような組み換えワクチンを個体に投与することを含む、免疫原に対して個体に粘膜免疫応答を誘導する方法を含む免疫応答を誘導する方法も提供される。
【０２３２】
ＣＣＬ２０またはその機能性フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む生の弱毒化病原体、ならびに生の弱毒化病原体を個体に投与することを含む、病原体に対して個人に粘膜免疫応答を誘導する方法を含む免疫応答を誘導する方法も、提供される。
【０２３３】
免疫原に対して個体に免疫応答を誘導する方法であって、前記個体に、ＣＣＬ２０タンパク質またはその機能性フラグメントを、免疫原をコードする単離核酸分子、および／または免疫原をコードする組み換えワクチン、および／または免疫原を含むサブユニットワクチン、および／または生の弱毒化ワクチン、および／または死菌ワクチンと組み合わせて投与することを含む方法。ＣＣＬ２０タンパク質またはその機能性フラグメントを、免疫原をコードする単離核酸分子、免疫原をコードする組み換えワクチン、免疫原を含むサブユニットワクチン、生の弱毒化ワクチン、および死菌ワクチンの１つ以上と組み合わせて含む、組成物。本明細書で使用されるとき、「ＣＣＬ２０の機能性フラグメント」は、免疫原と一緒に送達される場合、免疫原がそのフラグメントなしで送達される場合に誘導される免疫応答と比較して改変された免疫応答を提供する、ｉＣＣｌ２０タンパク質のフラグメントを指すことが意図される。フラグメントは、一般に１０個以上のアミノ酸の長さである。幾つかの実施形態において、ＣＣＬ２０の機能性フラグメントは、特定の全長ＣＣＬ２０タンパク質の長さの、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の割合を含むことができる。
【０２３４】
免疫原と組み合わせて送達される場合、ＣＣＬ２０およびその機能性フラグメント、ならびにその組み合わせは、免疫応答を調節する。したがって、これらのタンパク質の組み合わせは、治療的もしくは予防的免疫応答を誘導するために、ＤＮＡもしくはタンパク質に基づいたワクチンの成分として、または免疫応答を誘導するのに有用な組成物によって送達され得る。幾つかの実施形態において、免疫原を送達する手段は、ＤＮＡワクチン、組み換えワクチン、タンパク質サブユニットワクチン、弱毒化ワクチン、または死菌ワクチンである。幾つかの実施形態において、１つ以上のＣＣＬ２０およびその機能性フラグメントを送達する手段は、ＤＮＡワクチン、組み換えワクチン、または弱毒化ワクチンに含まれるコード配列の発現である。
【０２３５】
免疫応答は、抗原特異的抗体、ならびに／または抗原特異的ＴおよびＢ細胞の産生をもたらす。抗体および／または細胞に特異的な抗原は、感染に対して保護する、現存する感染を低減する、または排除する手段を提供する。またこれらを個体から単離することができ、能動免疫化プロトコール、免疫カラム、または試薬のような他の用途に使用することができる。
【０２３６】
幾つかの実施形態において、ＣＣＬ２０は、組成物が全身に送達されるプロトコールであっても、粘膜免疫応答、特に、増加してＩｇＧ２ａ応答および減少したＩｇＧ１応答により特徴付けられる、増加したＴｈ１応答を誘導するのに有用である。ＤＮＡワクチンまたは他のプラスミド手段のような免疫原と、ＤＮＡワクチンまたは別の種類のワクチンのコード配列の一部のようなこれらのケモカインの１つ以上との同時免疫化は、特有のアジュバント特性を提供する。
【０２３７】
ＣＣＬ２０タンパク質、およびそれをコードするヌクレオチドは、多くの天然および合成の供給源から得ることができる。タンパク質が使用される幾つかの実施形態において、例えば、当業者は、周知の技術の使用により、例えばタンパク質に特異的に結合する抗体を含有する免疫カラムを使用して、天然供給源からＣＣＬ２０タンパク質を単離することができる。あるいは、タンパク質は、電気泳動を使用して分離され、電気泳動マトリックスから単離され、例えば透析により精製されて、実質的に純粋なタンパク質を生じることができる。他の周知のタンパク質精製方法を用いて、単離された実質的に純粋なタンパク質を生じることができる。タンパク質が使用される幾つかの実施形態において、例えば、当業者は、周知の技術の使用により、ＣＣＬ２０およびその機能性フラグメントのいずれかをコードするＤＮＡ分子を、周知の発現形に使用される市販の発現ベクターに挿入する。天然供給源からタンパク質を単離すること、または組み換え技術によりタンパク質を産生することに加えて、自動ペプチド合成機を用いて、実質的に純粋な単離タンパク質を産生することができる。
【０２３８】
本発明の幾つかの実施形態によると、個体をアレルゲン、病原体、または異常な疾患関連細胞のような免疫原に対して予防的および／または治療的に免疫化する組成物および方法が、提供される。ワクチンは、生の弱毒化ワクチン、細胞ワクチン、組み換えワクチン、または核酸、もしくはＤＮＡワクチンのような任意の種類のワクチンであり得る。免疫原、ならびに１つ以上のＣＬ２０およびその機能性フラグメントをコードする核酸分子を送達することによって、ワクチンにより誘導される免疫応答は調節され得る。
【０２３９】
免疫原およびＣＣＬ２０を送達する組成物、特に、調節エレメントに機能的に結合している１つ以上のＣＣＬ２０およびその機能性フラグメントをコードするヌクレオチド配列を、調節エレメントに機能的に結合している免疫原をコードするヌクレオチド配列と組み合わせて含む１つ以上の核酸分子を含むものが、提供される。ＣＣＬ２０および免疫原をコードする核酸配列は、同じ分子または別個の分子のうちの１つであり得る。
【０２４０】
核酸分子は、ＤＮＡ注入（ＤＮＡワクチン接種とも呼ばれる）、組み換えアデノウイルス、組み換えアデノウイルス関連ウイルス、および組み換えワクシニアのような組み換えベクターを含む幾つかの周知の技術のいずれかを使用して送達することができる。幾つかの実施形態において、ＤＮＡワクチンは、本明細書に記載されているように構築され、本明細書に記載されている電気穿孔を使用して送達される。本明細書に記載されているＲＳＶワクチンの記載は、例えば、他の免疫原を伴うＣＣＬ２０の使用に適用することができる。ＤＮＡワクチンは、米国特許第５，５９３，９７２号、同第５，７３９，１１８号、同第５，８１７，６３７号、同第５，８３０，８７６号、同第５，９６２，４２８号、同第５，９８１，５０５号、同第５，５８０，８５９号、同第５，７０３，０５５号、同第５，６７６，５９４号、およびこれらに引用されている先行出願に記載されており、これらは参照により完全に組み込まれる。これらの出願に記載されている送達プロトコールに加えて、ＤＮＡを送達する代替的な方法が、米国特許第４，９４５，０５０号および同第５，０３６，００６号に記載されており、これらは両方とも参照により本明細書に組み込まれる。投与経路には、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、皮内、皮下、静脈内、動脈内、眼球内、および経口、ならびに局所、経皮、吸入もしくは坐剤、または膣、直腸、尿道、頬、および舌下組織の洗浄のような粘膜組織が含まれるが、これらに限定されない。好ましい投与経路には、筋肉内、腹腔内、皮内、および皮下注射が含まれる。幾つかの実施形態において、ＣＣＬ２０またはその機能性フラグメントをコードするヌクレオチド配列は、ＩｇＥシグナルペプチドを結合することができる。幾つかの実施形態において、免疫原は、病原体抗原、癌関連抗原、または自己免疫疾患に関連する細胞に結合している抗原である。本発明は、ウイルス、原核生物、ならびに単細胞病原性生物および多細胞寄生虫のような病原性真核生物、のような全ての病原体に対して個体を免疫化するために使用することができる。本発明は、細胞を感染し、かつウイルスのように被包性ではなく、淋菌、リステリア、およびシゲラのような原核生物ではないこれらの病原体に対して個体を免疫化するために特に有用である。加えて、本発明は、細胞内病原体である生活環の段階を含む原生動物病原体に対して個体を免疫化するためにも有用である。そのような病原体の例には以下が挙げられる。レトロウイルスのようなピコルナウイルス科属（感冒の５０％の症例の原因）、エーテロウイルス（ポリオウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルス、およびＡ型肝炎ウイルスのようなヒトエンテロウイルスを含む）、ならびにアプトウイルス（獣医学、標的に抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４，ＶＰＧを含む）。カルシウイルス科属のウイルスは、ウイルスのノーウォーク群（流行性胃腸炎の原因作用物質）が含まれる。トガウイルス科属のウイルスにはアルファウイルスが含まれる（例には、セニリスウイルス、ロスリバーウイルス、および東部＆西部ウマ脳炎が含まれる）。レオウイルスには、風疹ウイルスが含まれる。フラリビリドゥエ科の例には、デング熱、黄熱、日本脳炎、セントルイス脳炎、およびダニ媒介脳炎ウイルスが含まれる。西ナイルウイルス（Ｇｅｎｂａｎｋ  ＮＣ００１５６３、ＡＦ５３３５４０、ＡＦ４０４７５７、ＡＦ４０４７５６、ＡＦ４０４７５５、ＡＦ４０４７５４、ＡＦ４０４７５３、ＡＦ４８１８６４、Ｍ１２２９４、ＡＦ３１７２０３、ＡＦ１９６８３５、ＡＦ２６０９６９、ＡＦ２６０９６８、ＡＦ２６０９６７、ＡＦ２０６５１８、およびＡＦ２０２５４１）。代表的な標的抗原：Ｅ  ＮＳ５Ｃ。Ｃ型肝炎ウイルス。コロナウイルス科には、感染性気管支炎ウイルス、ブタ伝染性胃腸ウイルス、ブタ血球凝集性脳脊髄炎ウイルス、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス、ネコ腸コロナウイルス、イヌコロナウイルス、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス、感冒の約４０症例の原因であるヒト呼吸器コロナウイルスが含まれる。ＥＸ．２２４Ｅ、ＯＣ４３。標的抗原：Ｍとも呼ばれるＥ１、またはＳとも呼ばれるマトリックスタンパク質Ｅ２、またはＢＥとも呼ばれるスパイクタンパク質Ｅ３、またはヘマグルチン、エルテロース糖タンパク質Ｎ、ヌクレオカプシド。ラブドウイルス科属には、狂犬病のようなベシリオウイルス、リッサウイルスが含まれる。標的抗原：Ｇタンパク質、Ｎタンパク質。フィロウイルス科には、（医療用）マーブルグおよびエボラウイルスのような出血熱ウイルスが含まれる。パラミクソウイルス属には、流行性耳下腺炎ウイルス、ニューカッスル病ウイルスのような科のパラミクソウイルス、風疹、イヌジステンバーのようなモルビリウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、オルソミクソウイルスのようなニューミンウイルスが含まれる。インフルエンザウイルス科には、ブニガウイルス、カリフォルニア脳炎、ラクロスウイルスのようなブニガウイルス科属、リフトバレー熱のようなフレボウイルス、プレマラ、ヘマハジン熱ウイルス、ナイルウイルス、非指定ブニガウイルスのアレナウイルス科ＬＣＭ、およびラッシ熱ウイルスのようなハンタウイルスが含まれる。レオウイルス科属には、レオウイルス、ロタウイルス、コロラドダニ熱、レボンボ、ウマ脳症、ブルータングのようなオルビウイルスが含まれる。レトロウイルス科亜科には、白血病ウイルス、ＨＴＬＶ１、およびＨＴＬＶＩＩのようなオンコリウイルス亜科、ＨＩＶ、ネコ免疫不全ウイルス、および貧血ウイルスのようなレンチウイルス亜科が含まれる。スプマウイルス亜科パボバウイルス科亜科には、ＢＫＵおよびＪＣＵウイルス、亜科パピローマウイルスのようなポリオ−マウイルスが含まれる。ＥＸ  ＡＤ７、ＡＲＤ、ＯＢ、２７５のようなアデノウイルス。パルボウイルス科には、ネコパルボウイルス、ネコパンロイコペニアウイルス、イヌパルボウイルス、ブタパルボウイルスが含まれる。ヘルペスウイルス科亜科には、アルファ属シンプレックスウイルスヘルペスウイルス科ＨＳＶＩ（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ｘ１４１１２、ＮＣ００１８０６）、ＨＳＶＩＩ（ＮＣ００１７９８）、バリセロビニス、偽狂犬病、水痘帯状疱疹が含まれる。亜科ベータには、ヘルペスウイルス亜科ＨＣＭＶのようなサイトメガロウイルス属が含まれる。ムロメガロウイルス亜科には、リンホクリプトウイルス属ガンマＥＢＶ（バーキットリンホ）、ヘルペスウイルス亜科が含まれる。ラジノウイルスポック���ウイルス科亜科属痘瘡には、（天然痘）コードポックスウイルス亜科ワクシニア（ウシ痘）（パラポキシウイルス）、アウイポックスウイルス（Ａｕｉｐｏｘｖｉｒｕｓ）、カプリポックスウイルス、レポリポックスウイルスが含まれる。スイポックスウイルス亜科には、エンテモポックスウイルス亜科ヘパドナウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス科非分類肝炎デルタウイルスが含まれる。細菌性病原体には、肺炎球菌、ブドウ球菌、および連鎖球菌のような病原性グラム陽性球菌が含まれる。病原性グラム陽性球菌には、髄膜炎菌および淋菌が含まれる。病原性腸内グラム陽性桿菌には、腸内細菌科；シュードモナス、アシネトバクテリア、およびエイケネラ、類鼻疽；サーノネラ；細菌性赤痢；ヘモフィルス；軟性下疳；ブルセラ症；野兎病；エルシニア（パスツレラ）；ストレプトバチルス・モルチリホルミス、およびスピリルム；リステリア・モノサイトゲネス；ブタ丹毒菌；ジフテリア、コレラ、炭疽；鼠径リンパ肉芽腫症（鼠径肉芽腫）；ならびにバルトネラ症が含まれる。病原性嫌気性細菌には、テタヌス、ボツリヌス、他のクロストリジウム、結核、ハンセン病、および他のマイコバクテリアが含まれる。病原性スピロヘータ症には、梅毒；トレポネーマ症；イチゴ種および地方病性梅毒；ならびにレプトスピラ症が含まれる。高等な病原性細菌および病原性真菌により引き起こされる他の感染には、放線菌症；ノカルジア症；クリプトコッカス症、ブラストミセス症、ヒストプラズマ症、およびコクシジオイデス症；カンジダ症、アスペルギルス症、およびムコール症；スポロトリクム症；パラコクシジオドミコーシス、ペトリエリジオーシス、トルロプシス症、菌腫、および黒色真菌症；ならびに皮膚糸状菌症が含まれる。リケッチア感染には、リケッチアおよびリケッチア症が含まれる。マイコプラズマおよびクラルニジア感染の例には、マイコプラズマニューロノニア、鼠径リンパ肉芽腫症、オウム病、および周産期クラミジア感染症が含まれる。感染性真核生物、感染性原生動物、および蠕虫、ならびにこれらによる感染には、アメーバ症、マラリア、リーシュマニア症、トリパノソーマ症、トキソプラズマ症、ニューロノシスチス・カリニ、バベシア症、ジアルジア症、旋毛虫症、フィラリア症、住血吸虫症、線形動物、吸虫類または吸虫、および条虫類（条虫）感染が含まれる。病原性抗原に表示されたエピトープと少なくとも同一または実施的に類似しているエピトープを含むペプチドをコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ構築物のようなワクチンを、作製することができる。幾つかの実施形態において、病原体に対して個体を免疫化する方法は、ＲＳＶ、ＨＩＶ、ＨＳＶ、ＨＣＶ、ＷＮＶ、またはＨＢＶに対して直接向けられる。
【０２４１】
過剰繁殖細胞に対して保護免疫応答を付与する方法は、過剰繁殖性疾患において特徴的である免疫原タンパク質として利用する。これらは、過剰繁殖性疾患に罹患している個体を治療するワクチン、および方法において有用である。過剰繁殖性疾患の例には、全形態の癌および乾癬が含まれる。過剰繁殖性疾患に対する標的タンパク質の例には、ｍｂｙ、ｍｙｃ、ｆｙｎのような腫瘍遺伝子、ならびにｂｃｒ／ａｂｌ、ｒａｓ、ｓｒｃ、Ｐ５３、ｎｅｕ、ｔｒｋ、およびＥＧＲＦのような転座遺伝子によりコードされるタンパク質が含まれる。標的抗原としての腫瘍遺伝子の産生に加えて、抗癌治療および保護レジメンのための標的タンパク質は、Ｂ細胞リンパ腫により作製される抗体の可変領域、およびＴ細胞リンパ腫にＴ細胞受容体の可変領域を含み、幾つかの実施形態では、自己免疫疾患のための標的抗原も使用される。モノクローナル抗体１７−ＩＡにより認識されるタンパク質、および葉酸結合タンパク質、またはＰＳＡを含む、腫瘍細胞に高いレベルで見いだされるタンパク質のような他の腫瘍関連タンパク質が、標的タンパク質として使用され得る。「自己」指向性抗体を生じる細胞受容体および細胞を含む自己免疫性と関連する標的に対して広範囲な保護免疫応答を付与することにより、自己免疫性疾患および症状を罹患する個体を治療する方法も、提供される。Ｔ細胞仲介自己免疫性疾患には、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、シェーグレン症候群、サルコイドーシス、インスリン依存性真性糖尿病（１ＤＤＭ）、自己免疫性甲状腺炎、反応性関節炎、強直性脊椎炎、強皮症、多発性筋炎、  皮膚筋炎、乾癬、血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、クローン病、および潰瘍性大腸炎が含まれる。これらの疾患のそれぞれは、内在性抗原に結合し、かつ自己免疫性疾患に関連する炎症性カスケードを開始するＴ細胞受容体によって特徴付けられる。Ｔ細胞の可変領域に対するワクチン接種は、これらのＴ細胞を排除するＣＴＬを含む免疫応答を誘発するであろう。ＲＡでは、疾患に関与するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の幾つかの特異的な可変領域が特徴決定されている。これらのＴＣＲには、Ｖβ−３、Ｖβ−１４，２０、Ｖβ−１７、およびＶα−１７が含まれる。したがって、これらのタンパク質の少なくとも１つをコードするＤＮＡ構築物によるワクチン接種は、ＲＡに関与するＴ細胞を標的にする免疫応答を誘発する。それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、Ｈｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９１  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１０９２１−１０９２５、Ｐｉｌｉａｒｄ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ，１９９１  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：３２５−３２９、Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｗ．Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９２  Ｊ  Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：３２６−３３３を参照こと。ＭＳでは、疾患に関与するＴＣＲの幾つかの特異的な可変領域が特徴決定されている。これらのＴＣＲには、ＶｆＰおよびＶα−１０が含まれる。したがって、これらのタンパク質の少なくとも１つをコードするＤＮＡ構築物によるワクチン接種は、ＭＳに関与するＴ細胞を標的にする免疫応答を誘発する。それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｕｃｈｅｒｐｆｅｎｎｉｇ，Ｋ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９０  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４８：１０１６−１０１９、Ｏｋｓｅｎｂｅｒｇ，Ｊ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ，１９９０  Ｎａｔｕｒｅ  ３４５：３４４−３４６を参照のこと。強皮症では、疾患に関与するＴＣＲの幾つかの特異的な可変領域が特徴決定されている。これらのＴＣＲには、Ｖβ−６、Ｖβ−ｇ、Ｖβ−１４、ならびにＶα−１６、Ｖα−３Ｃ、Ｖα−７、Ｖα−１４、Ｖα−１５、Ｖα−１６、Ｖα−２８、およびＶα−１２が含まれる。したがって、これらのタンパク質の少なくとも１つをコードするＤＮＡ構築物によるワクチン接種は、強皮症に関与するＴ細胞を標的にする免疫応答を誘発する。Ｔ細胞仲介自己免疫性疾患に罹患している患者を治療するため、特に、ＴＣＲの可変領域がまだ特徴決定されていない患者には、滑膜生検を実施することができる。Ｔ細胞が存在する試料を採取し、これらのＴＣＲの可変領域を標準的な技術の使用により特定することができる。遺伝子ワクチンを、この情報を使用して調製することができる。Ｂ細胞仲介自己免疫性疾患には、ループス（ＳＬＥ）、グレーブス病、重症筋無力症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、喘息、クリオグロブリン血症、原発硬化性胆管炎、および悪性貧血が含まれる。これらの疾患のそれぞれは、内在性抗原に結合し、かつ自己免疫性疾患に関連する炎症性カスケードを開始する抗体によって特徴付けられる。抗体の可変領域に対するワクチン接種は、抗体を産生するこれらのＢ細胞を排除するＣＴＬを含む免疫応答を誘発する。
【０２４２】
Ｂ細胞仲介自己免疫性疾患を罹患している患者を治療するため、自己免疫性活性に関与している抗体の可変領域を特定しなければならない。生検を実施することができ、抗体が存在する炎症部位の試料を採取することができる。これらの抗体の可変領域を、標準的な技術を使用して特定することができる。遺伝子ワクチンは、この情報を使用して調製することができる。ＳＬＥの場合では、１つの抗原はＤＮＡであると考えられる。したがって、ＳＬＥに対して免疫化された患者では、血清を抗ＤＮＡ抗体についてスクリーンすることができ、血清において見いだされたそのような抗ＤＮＡ抗体の可変領域をコードするＤＮＡ構築物を含むワクチンを、調製することができる。ＴＣＲおよび抗体の両方の可変領域における共通の構造的特徴は、良く知られている。特定のＴＣＲまたは抗体をコードするＤＮＡ配列は、一般に、Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ  １９８７  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｍｄ．に記載されているもののような、周知の方法に従って見いだすことができ、これは参照により本明細書に組み込まれる。加えて、抗体の機能性可変領域をクローンする一般的な方法は、Ｃｈａｕｄｈａｒｙ，Ｖ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ，１９９０  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：１０６６において見いだすことができ、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４３】
ＤＮＡワクチンを改善するためにＣＣＬ２０タンパク質コード配列の発現可能形態を使用することに加えて、ＣＣＬ２０タンパク質もしくはその機能性フラグメント、および／またはＣＣＬ２０もしくはその機能性フラグメントをコードするコード配列を含む、改善された弱毒化生ワクチン、改善された死菌ワクチン、および抗原とサブユニットをコードする改善されたワクチン、ならびに糖タンパク質ワクチンが、提供される。弱毒化生ワクチン、外来抗原を送達する組換えベクターを使用するもの、サブユニットワクチン、および糖ワクチンの例は、米国特許第４，５１０，２４５号、同第４，７９７，３６８号、同第４，７２２，８４８号、同第４，７９０，９８７号、同第４，９２０，２０９号、同第５，０１７，４８７号、同第５，０７７，０４４号、同第５，１１０，５８７号、同第５，１１２，７４９号、同第５，１７４，９９３号、同第５，２２３，４２４号、同第５，２２５，３３６号、同第５，２４０，７０３号、同第５，２４２，８２９号、同第５，２９４，４４１号、同第５，２９４，５４８号、同第５，３１０，６６８号、同第５，３８７，７４４号、同第５，３８９，３６８号、同第５，４２４，０６５号、同第５，４５１，４９９号、同第５，４５３，３６４号、同第５，４６２，７３４号、同第５，４７０，７３４号、同第５，４７４，９３５号、同第５，４８２，７１３号、同第５，５９１，４３９号、同第５，６４３，５７９号、同第５，６５０，３０９号、同第５，６９８，２０２号、同第５，９５５，０８８号、同第６，０３４，２９８号、同第６，０４２，８３６号、同第６，１５６，３１９号、および同第６，５８９，５２９号に記載されており、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４４】
実施例８
ＲＳＶ免疫原Ｆ、Ｇ（Ａ）、およびＧ（Ｂ）のコンセンサス配列を使用して、中和免疫応答を得るための基礎を提供する。そのような利点は、コンセンサスＲＳＶ  ＤＮＡワクチンをさらに有益にし、過去に提案された任意の他の手法より潜在的に効果的にする。
【０２４５】
主なＲＳＶタンパク質である融合体（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇａ）、および糖タンパク脂質（Ｇａ）を、新たなＲＳＶワクチンの標的として選択した。上で記述されたように、ＦおよびＧタンパク質は、表面に発現し、中和抗体の理想的な標的である。コンセンサスＲＳＶ−Ｆをコードおよび発現する配列を有するプラスミド、コンセンサスＲＳＶ−Ｇ（Ａ）をコードおよび発現する配列を有するプラスミド、ならびにＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）をコードおよび発現する配列を有するプラスミドを含む、ＤＮＡカクテルワクチンを調製した。個別のプラスミドとカクテルを試験に使用した。カクテルワクチンをウサギおよび非ヒト霊長類の試験に使用し、これらの試験の結果は、高レベルの中和免疫応答が誘導されることを示し、カクテルワクチンを、ＲＳＶ感染に対して保護することに特に価値がある予防および治療用途の両方に使用できることを示唆している。
【０２４６】
図２２Ａ、図２２Ｂ、および図２２Ｃに示されているようにＲＳＶ−Ｆ、ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、およびＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）それぞれの単一の挿入プラスミドを、ｐＶＡＸベクターを使用して構築した。それぞれのプラスミドのコンセンサス配列を、ｐＶＡＸベクターのＢａｍＨｉとＸｈｏＩ部位の間にクローンした。得られたプラスミドは、４８１２塩基対を有するプラスミドを産生するためにｐＶＡＸにクローンされたコンセンサスＲＳＶ−Ｆをコードする１８１３塩基対挿入物を含むｐＲＳＶ−Ｆ、３９４４塩基対を有するプラスミドを産生するためにｐＶＡＸにクローンされたコンセンサスＲＳＶ−Ｇ（Ａ）をコードする９４５塩基対挿入物を含むｐＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、３９２９塩基対を有するプラスミドを産生するためにｐＶＡＸにクローンされたコンセンサスＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）をコードする９３０塩基対挿入物を含むｐＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）であった。
【０２４７】
ＲＳＶ−Ｆ、ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、およびＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）構築物の発現を確認するため、ＲＤ細胞をｐＲＳＶ−Ｆ、ｐＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、およびｐＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）によりそれぞれ形質移入した。免疫蛍光評価を、プールした免疫化ウサギ血清を使用して実施した。ＲＳＶ免疫原は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）と化学的に結合させた抗ＲＳＶ免疫原抗体を結合させることによって可視化した。ＤＡＰＩを核対比染色として使用した。図２３の結果は、ｐＶＡＸにより形質移入されたＲＤ細胞が、ＦＩＴＣ標識抗ＲＳＶ免疫原抗体による免疫染色を示さなかったことを示す。
【０２４８】
ＲＳＶ−Ｆ投与量試験を、マウスを使用して行った。免疫化スケジュールを図２４に示す。５群のマウスを使用した。第１の群は、ｐＶＡＸを注射した対照であった。第２の群には、５μｇのｐＲＳＶ−Ｆ構築物を注射した。第３の群には、１５μｇのｐＲＳＶ−Ｆ構築物を注射した。第４の群には、３０μｇのｐＲＳＶ−Ｆ構築物を注射した。第５の群には、６０μｇのｐＲＳＶ−Ｆ構築物を注射した動物を、電気穿孔の使用により、０週目に第１の免疫化、２週目に第２の免疫化、および４週目に第３の免疫化の合計３回免疫化した。２週目に第１の収集、４週目に第２の収集、６週目に第３の収集、および１２週目に第４の収集の合計４回、血清を収集し、ＩｇＧを測定した。動物を１２週目に殺処分し、脾臓を採取し、ＩＦＮ−γをＥＬＩＳＰＯＴにより測定した。
【０２４９】
図２５は、血清中の総ＲＳＶ−Ｆ  ＩｇＧと比較したＲＳＶ−Ｆ投与量のデータを示す。第１の免疫化後、第２の免疫化後、および第３の免疫化後に収集された血清からのデータを示す。抗ＲＳＶ−Ｆ  ＩｇＧを、１０，１００、１，０００、および１０，０００の血清希釈の逆数で測定した。データは、ｐＶＡＸが、いかなる免疫化後にも抗体を誘導しなかったことを示す。データは、ｐＲＳＶ−Ｆ構築物が、第１の免疫化後に抗体を誘導しなかったことを示す。データは、ｐＲＳＶ−Ｆ構築物が、第２および第３の免疫化後に抗体を誘導したことを示す。
【０２５０】
図２６は、最後の免疫化のおよそ８週間後のＲＳＶ−Ｆワクチン接種により誘導されたＩＦＮ−γと比較した、ＲＳＶ−Ｆ投与量のデータを示す。データは、ｐＶＡＸおよび１５μｇの平均用量のｐＲＳＶ−Ｆ構築物を注射した動物によるＩＦＮ−γ産生（ＳＦＵ／１０６脾細胞）の比較を示す。
【０２５１】
ＲＳＶ−Ｆ偽中和試験を、マウスを使用して行った。免疫化スケジュールを図２７に示す。マウスには、１５μｇのｐＲＳＶ−Ｆ構築物で免疫化した。動物を、電気穿孔の使用により、０週目に第１の免疫化、２週目に第２の免疫化、および４週目に第３の免疫化の合計３回免疫化した。５週目に血清を収集し、中和アッセイを実施した。
【０２５２】
ＲＳＶ−Ｆ偽中和試験のデータを図２８に示す。ＴＺＭ−ｂｌ  ＨｅＬａ細胞におけるＲＳＶ−Ｆ偽中和活性を定量化した。データは、ＨＩＶ−Ｌｕｃ／ＲＳＶ−Ｆ偽ウイルスが標的細胞に侵入し、標的細胞を感染することを遮断できる、ＤＮＡワクチン接種動物からのＲＳＶ−Ｆ免疫化血清試料おける、ルシフェラーゼアッセイを使用したＲＳＶ−Ｆの中和能力の比較。力価は、ウイルスの５０％阻害を生じる血清の希釈度の逆数として定義される。正常なマウス血清（ＮＭＳ）において遮断活性の不在下でＨＩＶ−１  Ｌｕｃ／ＲＳＶ−Ｆの感染性を中和および遮断する、ワクチン接種されたマウスからの血清試料の能力に注目すること。
【０２５３】
図２９に示されているように、２つの比較を、ｐＲＳＶ−Ｆ（ＲＳＶ−Ｆ２およびＲＳＶ−Ｆ５）をワクチン接種した２匹の動物からの血清と、ｐＶＡＸワクチン接種動物からの血清とを使用して、ＨｅＬａ細胞におけるＲＳＶ−Ｆ偽ウイルスによるアポトーシス細胞死活性の阻害を決定するために行った。それぞれの比較では、血清を１：１、１：１０、１：１００、および１：１０００に希釈した。百分率で表した細胞死のレベルを決定し、ｐＲＳＶ−Ｆをワクチン接種した動物の血清は、血清の存在下でＲＳＶ−Ｆ偽ウイルスに曝露されたＨｅＬａ細胞のアポトーシス細胞死を阻害したことを示した。
【０２５４】
ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）およびＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）投与量試験を、マウスを使用して行った。免疫化スケジュールを図３０に示す。６つの群のマウスを使用した。第１の群は、ｐＶＡＸを注射した対照であった。第２の群には、１μｇのｐＲＳＶ−Ｇ（Ａ）またはｐＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）構築物を注射した。第３の群には、５μｇのｐＲＳＶ−Ｇ（Ａ）またはｐＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）構築物を注射した。第４の群には、１０μｇのｐＲＳＶ−Ｇ（Ａ）またはｐＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）構築物を注射した。第５の群には、２０μｇのｐＲＳＶ−Ｇ（Ａ）またはｐＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）構築物を注射した。第６の群には、４０μｇのｐＲＳＶ−Ｇ（Ａ）またはｐＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）構築物を注射した。動物を、電気穿孔の使用により、０週目に第１の免疫化、２週目に第２の免疫化、および４週目に第３の免疫化の合計３回免疫化した。４週目に第１の収集および６週目に第２の収集の合計２回、血清を収集し、ＩｇＧを測定した。
【０２５５】
図３１は、ＲＳＶ（Ａ）またはＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）投与量試験におけるＲＳＶ−Ｇ（Ａ）ＤＮＡ免疫化後の血清におけるＩｇＧのデータを示す。血清中の総抗ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）ＩｇＧを、投与量試験において測定した。図３１にｘ軸に記載されているように、様々な用量で収集された血清のデータを示す。抗ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）ＩｇＧを、１：１００の血清希釈で測定した。
【０２５６】
図３２は、ＲＳＶ（Ａ）またはＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）投与量試験におけるＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）ＤＮＡ免疫化後の血清におけるＩｇＧのデータを示す。血清中の総抗ＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）ＩｇＧを、投与量試験において測定した。図３１にｘ軸に記載されているように、様々な用量で収集された血清のデータを示す。抗ＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）ＩｇＧを、１：１００の血清希釈で測定した。
【０２５７】
図３３は、マウス試験において単一ワクチンを使用したＲＳＶ予備中和試験の結果のまとめを示すチャートである。免疫化の３日後に収集された血清の中和力価を測定した。陰性血清を陰性対照として使用した。陽性対照には、抗ＲＳＶモノクローナル抗体および抗ＲＳＶポリクローナル抗体が含まれた。中和力価を、対照において、ならびにｐＲＳＶ−Ｆをワクチン接種した２匹のマウス、ｐＲＳＶ−Ｇ（Ａ）をワクチン接種した２匹のマウス、およびｐＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）をワクチン接種した１匹のマウスからの血清において測定した。
【０２５８】
ＲＳＶウサギ試験を設計し、実施した。ＲＳＶウサギ試験設計を図３４に示す。４匹の雌ニュージーランド白色（ＮＺＷ）ウサギを、ｐＲＳＶ−Ｆ、ｐＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、およびｐＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）を含有するカクテルで免疫化した。それぞれの動物は、２００μｇ／プラスミドを最終１００μｌ体積で受けた動物を、筋肉内／電気穿孔免疫化を使用して、合計４回免疫化した。第１の免疫化を０週目に行い、第２の免疫化を３週目に行い、第３の免疫化を６週目に行い、第４を９週目に行った。血液を、第２週（前出血、第１の免疫化の２週間前）、０週目（第１の免疫化前の前出血）、２週目、５週目、８週目、および１３週目の６回、動物から収集した。血液を、ＥＬＩＳＡおよびウイルス中和アッセイを使用して分析した。
【０２５９】
ウサギ試験のデータを図３５に示す。ＲＳＶ−Ｆに対する液性応答を測定した。第２週および０週目に採取した前出血試料から、ならびに２週目、５週目、８週目、および１３週目に採取した試料からの抗ＲＳＶ−Ｆ  ＩｇＧ。２週目には、試料が収集された動物を１回免疫化し、試料を免疫化の２週間後に収集した。５週目には、試料が収集された動物を２回免疫化し、試料を第２の免疫化の２週間後に収集した。８週目には、試料が収集された動物を３回免疫化し、試料を第３の免疫化の２週間後に収集した。１３週目には、試料が収集された動物を４回免疫化し、試料を第４の免疫化の４週間後に収集した。
【０２６０】
ウサギ試験のデータを図３６に示す。ＲＳＶ−Ｇに対する液性応答を測定した。第２週および０週目に採取した前出血試料から、ならびに２週目、５週目、８週目、および１３週目に採取した試料からの抗ＲＳＶ−Ｇ  ＩｇＧ。２週目には、試料が収集された動物を１回免疫化し、試料を免疫化の２週間後に収集した。５週目には、試料が収集された動物を２回免疫化し、試料を第２の免疫化の２週間後に収集した。８週目には、試料が収集された動物を３回免疫化し、試料を第３の免疫化の２週間後に収集した。１３週目には、試料が収集された動物を４回免疫化し、試料を第４の免疫化の４週間後に収集した。
【０２６１】
ＲＳＶ非ヒト霊長類試験を実施した。試験の目的は、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）にカクテルとして投与された単一挿入物ｐＤＮＡ  ＲＳＶワクチンの液性免疫原性を評価することであった。また、試験は、ワクチンの複数部位送達、電気穿孔方法、およびアジュバントによる送達のような要因が液性応答の範囲を増加するかを評価および決定するために使用した。実験は、ＲＳＶ−Ｆ、ＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、およびＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）に対して合成ＤＮＡワクチンが高い力価の抗ＲＳＶ抗体を刺激するかを決定するため、ＲＳＶカクテルでワクチン接種した動物における特異的免疫応答を分析するため、ならびに生成された免疫応答に対するアジュバントおよび／または複数部位送達の効果を評価するために実施した。ＲＳＶ非ヒト霊長類試験設計を図３７に示す。使用した非ヒト霊長類は、アカゲザルであった。試験では、１５匹のアカゲザルを４群に分け、３群はそれぞれ４匹の動物を含有し、１群は３匹の動物を含有した。ｎ＝４の群は処理群であり、すなわち、これらをワクチン接種した。ｎ＝３の群は未処理群であり、対照として機能した。群を以下のように治療した。
群１（ｎ＝４）：それぞれの動物には、１ｍｇのＲＳＶ−Ｆ
、１ｍｇのＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、１ｍｇのＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）を混合
し、１つの部位にＩＭで送達するカクテルを投与した。
群２（ｎ＝４）：それぞれの動物には、１ｍｇのＲＳＶ−Ｆ
、１ｍｇのＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、１ｍｇのＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）、１ｍ
ｇのｒｈＭＥＣを混合し、１つの部位にＩＭで送達するカクテル
を投与した。
群３（ｎ＝４）：それぞれの動物には、１ｍｇのＲＳＶ−Ｆ
、１ｍｇのＲＳＶ−Ｇ（Ａ）、１ｍｇのＲＳＶ−Ｇ（Ｂ）を1混
合し、３つの部位にＩＤで送達するカクテルを投与した。
群４（ｎ＝３）：それぞれの動物は、未処理であった。
動物を、電気穿孔免疫化を使用して合計３回免疫化した。第１の免疫化を１週目に行い、第２の免疫化を５週目に行い、第３の免疫化を１３週目に行った。血液を、０週目（第１の免疫化前の前出血）、３週目、７週目、１５週目、１７週目、および１８週目の６回、動物から収集した。血液を、ＥＬＩＳＡおよびウイルス中和アッセイを使用して分析した。
【０２６２】
図３８Ａ〜３８Ｄは、ＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のＲＳＶ非ヒト霊長類試験のデータを示す。図３８Ａは、未処置動物においてＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のデータを示す。図３８Ｂは、１つの部位にカクテルワクチンＩＭを受けた動物においてＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のデータを示す。図３８Ｃは、１つの部位にカクテルワクチン＋ｒｈＭＥＣ構築物ＩＭを受けた動物においてＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のデータを示す。図３８Ｄは、１つの部位にカクテルワクチンＩＤを受けた動物においてＲＳＶ−Ｆに対して測定された液性免疫のデータを示す。０週目に採取した前出血試料から、ならびに３週目、１５週目、および１８週目に採取した試料からの抗ＲＳＶ−Ｆ  ＩｇＧ。３週目には、試料が収集された動物を１回免疫化し、試料を免疫化の２週間後に収集した。１５週目には、試料が収集された動物を３回免疫化し、試料を第３の免疫化の２週間後に収集した。１８週目には、試料が収集された動物を３回免疫化し、試料を第３の免疫化の５週間後に収集した。
【０２６３】
図３９Ａ〜３９Ｄは、ＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のＲＳＶ非ヒト霊長類試験のデータを示す。図３９Ａは、未処置動物においてＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のデータを示す。図３９Ｂは、１つの部位にカクテルワクチンＩＭを受けた動物においてＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のデータを示す。図３９Ｃは、１つの部位にカクテルワクチン＋ｒｈＭＥＣ構築物ＩＭを受けた動物においてＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のデータを示す。図３９Ｄは、１つの部位にカクテルワクチンＩＤを受けた動物においてＲＳＶ−Ｇに対して測定された液性免疫のデータを示す。０週目に採取した前出血試料から、ならびに３週目、１５週目、および１８週目に採取した試料からの抗ＲＳＶ−Ｇ  ＩｇＧ。３週目には、試料が収集された動物を１回免疫化し、試料を免疫化の２週間後に収集した。１５週目には、試料が収集された動物を３回免疫化し、試料を第３の免疫化の２週間後に収集した。１８週目には、試料が収集された動物を３回免疫化し、試料を第３の免疫化の５週間後に収集した。
【０２６４】
図４０は、ウサギ比ヒト霊長類試験においてワクチンカクテルを使用したＲＳＶ予備中和試験の結果のまとめを示すチャートである。免疫化の３日後に収集された血清の中和力価を測定した。陰性血清を陰性対照として使用した。陽性対照には、抗ＲＳＶモノクローナル抗体および抗ＲＳＶポリクローナル抗体が含まれた。中和力価を、対照において、ならびにカクテルワクチンでワクチン接種した２匹のウサギ、およびカクテルワクチンでワクチン接種した２匹の非ヒト霊長類からの血清において測定した。前出血したものからのデータは、ウサギおよび非ヒト霊長類における中和力価が、ワクチン接種後に生成されたことを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３８Ｃ】
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【図３８Ｄ】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図３９Ｃ】
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【図３９Ｄ】
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【図４０】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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