(57)【要約】【課題】新規なコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤を提供すること。【解決手段】有効成分として３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を含有するコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を含有する、コラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤。
【請求項２】
ヒト線維芽細胞におけるコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制に用いられる、請求項１に記載のコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤。
【請求項３】
前記ヒト線維芽細胞が老化したヒト線維芽細胞である、請求項２に記載のコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤。
【請求項４】
内服用に用いられる、請求項１から３のいずれか一項に記載のコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤。
【請求項５】
３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を０．０１質量％以上２５質量％以下含有する、請求項１から４のいずれか一項に記載のコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、皮膚の老化に伴う変化（しわ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等）の原因として、コラーゲンやエラスチン等の真皮マトリックスの線維減少や変性等が知られている。この変化を誘導する因子として、コラゲナーゼＭＭＰ１（マトリックスメタロプロテアーゼ）は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるコラーゲンを分解する酵素として知られているが、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、コラーゲンの減少変性の原因となり、皮膚のシワの形成等の大きな要因の一つになると考えられている。コラゲナーゼＭＭＰ１の活性を阻害すると、コラーゲンを保護して真皮マトリックスを保護し、皮膚の老化を防ぐことにつながる。
【０００３】
上記実情を受け、従来、コラゲナーゼＭＭＰ１の活性阻害物質として、アセンヤク、柿、ワレモコウ、ペパーミント等の植物抽出物が有効であることが報告されている（特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０００−１５９６３１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、特許文献１によると、具体的な物質レベルで有効性が確認されたものではなく、また、より皮膚の老化の予防や改善作用に優れ、かつ安全性の高いコラゲナーゼＭＭＰ１の活性阻害剤の開発が望まれており、コラゲナーゼＭＭＰ１の活性阻害剤をより安定的に大量に提供するには、より入手容易で、安定供給可能な、コラゲナーゼＭＭＰ１の活性阻害物質を探索することが望まれている。一方、ヒト線維芽細胞におけるＭＭＰ１の産生量そのものを抑制すれば、コラーゲンの保護につながるものと考えられる。
【０００６】
したがって、本発明は上記実状に鑑み、新規なコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するための本発明のコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤の特徴構成は、有効成分として３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を含有する点にある。
また、ヒト線維芽細胞におけるコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制に用いられるものであってもよく、ヒト線維芽細胞が老化したヒト線維芽細胞であってもよい。
さらに、コラゲナーゼＭＭＰ１及び３産生抑制剤は、内服用であってもよい。
ここで、３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を０．０１質量％以上２５質量％以下含有することができる。
【０００８】
本発明者らは、鋭意研究の結果、３ＨＢがヒト線維芽細胞（特に、老化したヒト繊維芽細胞）において、コラーゲン分解酵素ＭＭＰ１の産生抑制効果を示すとともに、ＭＭＰ１の活性化因子であるコラーゲン分解酵素ＭＭＰ３に対しても産生抑制効果を有することを実験的に明らかにして、本発明を完成するに至った。なお、ＭＭＰは、マトリックスメタロプロテアーゼの略称である。
【０００９】
すなわち、３ＨＢにより、ＭＭＰ１と同時にＭＭＰ３の産生を抑制することで、より効果的なコラーゲン分解の抑制が期待できる。また、この時３ＨＢ添加でＭＭＰ１のインヒビターＴＩＭＰ１の発現に影響はないことから、インヒビターＴＩＭＰ１が有する阻害機能（ＭＭＰ１のコラーゲン分解活性の阻害機能）は有効に働くものと考えられる。
なお、「有効成分」とは、全成分中で所望の効果の発現に寄与する基本的な成分を意味するものであり、「有効成分として含有する」とは、上記基本的な成分が所望の効果の発現に寄与していると確認しうるに足る量を含んでいることを意味するものである。
【００１０】
このようなコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤は、内服、外用いずれの形態でも用いることができ、たとえば、化粧水、乳液、クリーム、錠剤、清涼飲料水のような形態で用いることができる。
また、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
その他、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類なども適宜配合することができる。
【発明の効果】
【００１１】
したがって、皮膚の線維を保護し、皮膚の老化の予防や改善作用に優れるコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤を提供することができた。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下に、本発明のコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤を説明する。尚、以下に好適な実施例を記すが、これら実施例はそれぞれ、本発明をより具体的に例示するために記載されたものであって、本発明の趣旨を逸脱しない範囲において種々変更が可能であり、本発明は、以下の記載に限定されるものではない。
【００１３】
本発明の実施例にかかるコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤は、有効成分として３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を含有するものである。
【００１４】
〔３ＨＢ〕
３ＨＢは、３ＨＢ生産性のハロモナス菌を添加した発酵プロセスを行い、得られた発酵液からハロモナス菌を分離除去し、精製することにより得られる。発酵プロセスは、果汁等の糖質栄養源を含有する原料液に、３ＨＢ生産性のハロモナス菌をそのまま添加し、好気発酵、嫌気発酵を順に行うプロセス（特開２０１３−０８１４０３号公報等参照）として実施することができる。これにより、糖質が３ＨＢに変換され、３ＨＢが発酵液中に生産されることになる。
【００１５】
なお３ＨＢの製造工程は、上記微生物によるものによらず、他の生物学的手法で製造するものであってもよいし、化学的に合成するものであってもよい。
【００１６】
〔コラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制効果〕
（１）  セネッセンス細胞の調製
ヒト皮膚線維芽細胞の老化モデルを過酸化水素処理により調製した。調製方法を以下に記載する。
<1>ヒト皮膚線維芽細胞を１００ｍｍのディッシュに４．４×１０６ 個播種し、ＣＯ２インキュベータで一晩静置した。
<2>上清を除去後、１００μＭの過酸化水素を含有するＤ−ＭＥＭ培地に交換し、１時間、ＣＯ２インキュベータで静置した。静置後、上清を除去し１０％ＦＢＳを含有するＤ−ＭＥＭ培地に交換し、ＣＯ２インキュベータで一晩静置した。
<3><2>の工程を４日間連続して実施した。
<4>上清除去後、１００μＭの過酸化水素を含有するＤ−ＭＥＭ培地に交換し、１時間ＣＯ２インキュベータで静置した。静置後、上清を除去し１０％ＦＢＳを含有するＤ−ＭＥＭ培地に交換し、６０時間、ＣＯ２インキュベータで静置した。
<5>細胞でセネッセンスが起こっているかどうかは、セネッセンスで特異的に発現するβ―ガラクトシダーゼを検出することで判断した。β―ガラクトシダーゼの検出には細胞内ＳＡ β−Ｇａｌ染色キット(コスモバイオ)を用いた。
【００１７】
（２）  ３ＨＢ添加試験
正常細胞または調製したセネッセンス細胞を96ウェルプレートに，1ウエルあたり２×１０４個播種した。播種24時間後に５００ｍｇ/Ｌの３ＨＢを含有するＤ−ＭＥＭ培地に交換し，更に24時間培養を実施した。
【００１８】
（３）  ＲＮＡの調製
ＲＮＡの抽出は、QuickGene RNA cultured cell kit S(クラボウ)を用いて実施した。
【００１９】
（４）  ＤＮＡチップ解析
皮膚チップおよび酸化ストレス・アンチエイジングチップ(三菱レイヨン)を用いてＤＮＡチップ解析を実施した。
３ＨＢを添加せず培養した（表１中「無添加」）正常細胞におけるコラゲナーゼＭＭＰ１の発現量を基準値（１）とし、当該基準値に対する３ＨＢを添加せず培養したセネッセンス細胞のコラゲナーゼＭＭＰ１（表１中「ＭＭＰ１」）の発現量の割合、及び、当該基準値に対する３ＨＢを添加し培養した（表１中「３ＨＢ添加」）正常細胞、セネッセンス細胞のコラゲナーゼＭＭＰ１の発現量の比をそれぞれ測定した。その結果を表１に示す。
同様に、３ＨＢを添加せず培養した（表１中「無添加」）正常細胞におけるコラゲナーゼＭＭＰ３（表１中「ＭＭＰ３」）の発現量を基準値（１）とし、当該基準値に対する３ＨＢを添加せず培養したセネッセンス細胞のコラゲナーゼＭＭＰ３の発現量の割合、及び、当該基準値に対する３ＨＢを添加し培養した（表１中「３ＨＢ添加」）正常細胞、セネッセンス細胞のコラゲナーゼＭＭＰ３の発現量の比をそれぞれ測定した。その結果を表１に示す。
【００２０】
【表１】
2018158897.tif 000002
【００２１】
表１の結果より、３ＨＢにはヒト線維芽細胞におけるコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の生成抑制効果があり、特にセネッセンス細胞（老化したヒト線維芽細胞）において抑制効果が高いことが分かった。よって、３ＨＢを有効成分として含有するコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤を用いることで、老化したヒト線維芽細胞におけるコラーゲンの分解を効果的に抑制し、皮膚の老化を防ぐことが期待できることが分かった。
【００２２】
このようなコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤は、下記表２〜６のような組成物として調整され、化粧水、乳液、クリーム、錠剤、清涼飲料水の形態で用いられる。
【００２３】
〔化粧水〕
【表２】
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【００２４】
〔乳液〕
【表３】
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【００２５】
〔クリーム〕
【表４】
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【００２６】
〔錠剤〕
【表５】
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【００２７】
〔清涼飲料水〕
【表６】
2018158897.tif 000007
【００２８】
上述の通り、有効成分として３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を含有する化粧水、乳液、クリーム、錠剤、清涼飲料水などのコラゲナーゼＭＭＰ１及び３産生抑制剤は、いずれもヒト線維芽細胞（特に、老化したヒト線維芽細胞）におけるコラーゲンの分解を効果的に抑制し、皮膚の老化を防ぐことが期待できる。
また、当該コラゲナーゼＭＭＰ１及び３産生抑制剤は、３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を０．０１質量％以上２５質量％以下含有することが好ましい。
さらに、当該コラゲナーゼＭＭＰ１及び３産生抑制剤は、錠剤や清涼飲料水等のように内服用であってもよく、この場合、３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を５質量％以上２５質量％以下含有することが好ましい。
【産業上の利用可能性】
【００２９】
本発明によると、皮膚の線維を保護し、皮膚の老化の予防や改善作用に優れるコラゲナーゼＭＭＰ１及び３の産生抑制剤を提供することができた。