(57)【要約】      （修正有）【課題】呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及び百日咳菌による感染から乳児を防御するための方法の提供。【解決手段】Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原と、百日咳キソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）、３型線毛（ＦＩＭ３）及びＢｒｋＡからなる群より選択される少なくとも１つの無細胞百日咳抗原を含む免疫原性組成物を妊婦に投与することにより、生じたＲＳＶ特異的抗体及び百日咳特異的抗体が胎盤を介して在胎児に移行し、それによって、乳児をＲＳＶ及び百日咳菌による感染から防御する方法。【選択図】図１
2018172417.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及び百日咳菌（パータシス）によって引き起こされる感染又は疾患からの乳児の防御に使用するための、Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原と、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）、３型線毛（ＦＩＭ３）及びＢｒｋＡからなる群より選択される少なくとも１つの無細胞パータシス抗原を含む１つ又は複数の免疫原性組成物であって、妊婦への投与のために製剤化され、ＲＳＶ及び百日咳菌の両方に特異的な体液性免疫応答を追加刺激することができ、免疫原性組成物によって妊婦において追加刺激された、ＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及びパータシス特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが、胎盤を介して在胎児に移行し、それによって、乳児をＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる感染又は疾患から防御する免疫原性組成物。
【請求項２】
妊婦がヒトである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
少なくとも１つの免疫原性組成物が、妊娠２６週以降の妊婦に投与される、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原及び少なくとも１つのパータシス抗原が、同じ免疫原性組成物中に共配合される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原及び少なくとも１つのパータシス抗原が、同日に投与（同時投与）される２つの異なる免疫原性組成物中に配合される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
Ｆタンパク質類似体が可溶性Ｆタンパク質類似体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
Ｆタンパク質類似体が、Ｎ末端からＣ末端の方向で、ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドのＦ2ドメイン及びＦ1ドメイン、及び異種三量体化ドメインを含み、Ｆ2ドメインとＦ1ドメインとの間にフーリン切断部位がない、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
Ｆタンパク質類似体が、
ａ）配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２の群から選択されるポリペプチドを含むポリペプチド、
ｂ）配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２１の群から選択されるポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
Ｆタンパク質類似体及び／又はパータシス抗原が、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、水中油エマルジョン及び鉱物塩の少なくとも１つであるアジュバントを含む少なくとも１つの免疫原性組成物中に配合される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
アジュバントがアルミニウム塩（ミョウバン）を含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
Ｆタンパク質類似体及び／又はパータシス抗原を含む少なくとも１つの免疫原性組成物が、ＲＳＶ及び百日咳菌以外の病原性生物由来の少なくとも１つのさらなる抗原をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
Ｄ及びＴ；Ｄ、Ｔ及びＩＰＶ；Ｄ、Ｔ及びＨＢｓＡｇ；Ｄ、Ｔ及びＨｉｂ；Ｄ、Ｔ、ＩＰＶ及びＨＢｓＡｇ；Ｄ、Ｔ、ＩＰＶ及びＨｉｂ；Ｄ、Ｔ、ＨＢｓＡｇ及びＨｉｂ；又はＤ、Ｔ、ＩＰＶ、ＨＢｓＡｇ及びＨｉｂをさらに含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
妊婦への投与による、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及び百日咳菌（パータシス）によって引き起こされる感染又は疾患からの乳児の防御に使用するための医薬の製造における、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の１つ又は複数の免疫原性組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１２年８月６日に出願された米国仮特許出願第６１／６７９，９２８号及び２０１３年３月１５日に出願された米国非仮特許出願第１３／８３５，８２９号の出願日の利益を主張し、これらの開示は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（連邦規則法典第３７巻１．７１（Ｅ）に従う著作権通知）
本特許文書の開示の部分は、著作権保護の主題である原文を含む。著作権者は、特許・商標庁の特許ファイル若しくは記録にあれば、特許文書若しくは特許開示の何人による複製に対しても異議を有さないが、さもなければ、全ての著作権を留保する。
【０００３】
（背景）
本開示は、免疫学の分野に関する。より詳細には、本開示は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及び百日咳菌（Bordetella pertussis）（パータシス（pertussis））に特異的な免疫応答を惹起するための組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
ヒト呼吸器合胞体ウイルス（Human Respitatory Syncytial Virus）（ＲＳＶ）は、６ヶ月未満の乳児及び妊娠３５週以下の未熟児における下気道感染症（ＬＲＴＩ）の最も一般的な世界的な病因である。
【０００５】
ＲＳＶは、細気管支炎及び肺炎を含む急性ＬＲＴＩの毎冬の流行の病因として十分に記述されている。それ以外では健康な児童に置けるＲＳＶ関連ＬＲＴＩの発生率は、年間で、生まれて２歳までの児童１０００人中３７人（６ヶ月未満の乳児における１０００人中４５人）であり、入院の危険性は、年間で児童１０００人中６人（生まれて６ヶ月までの子ども１０００人中）である。発生率は、心肺疾患を有する児童及び未熟児においてより高く、ＵＳＡにおいてＲＳＶ関連の病院への入院のほぼ半分を占める。ＲＳＶにより生じたより重度のＬＲＴＩを経験する児童は、後に小児喘息の発生率が高くなる。これらの研究は、ＲＳＶワクチンについての広い需要を実証する。
【０００６】
百日咳菌は、乳児及び若齢児童において重篤になり得る呼吸器疾患である百日咳の病原体である。ＷＨＯの推定は、２００８年内に、世界中で百日咳の約１，６００万の症例が生じ、１９５，０００人の児童がこの疾患により死亡したと示唆する。数十年間、ワクチンが利用可能であり、世界のワクチン接種は、２００８年内に約６８７，０００件の死亡を予防したと推定される（ＷＨＯ）。
【０００７】
この疾患の臨床経過は、速い咳の発作及びそれに続く吸気努力を特徴とし、しばしば、特徴的な「ぜいぜい」いう音を伴う。重度の症例において、酸素喪失が、脳損傷をもたらし得る。しかし、最も多い合併症は、続発性肺炎である。抗生物質による処置が利用できるが、疾患が診断された時点までに、細菌の毒素は、しばしば重度の損傷を引き起こしている。従って、この疾患の予防は、極めて重要であり、それ故、ワクチン接種の開発は、重要な関心事である。百日咳菌に対するワクチンの第一世代は、熱処理、ホルマリン若しくは他の手段によって殺傷された細菌全体で構成される全細胞ワクチンであった。これらは、１９５０年代及び１９６０年代に多くの国に導入され、百日咳の発生の低減に成功した。その後の改善は、高度に精製された百日咳菌タンパク質（通常は少なくともパータシストキソイド（ＰＴ、その毒性を消すために化学的に処理されたか若しくは遺伝子改変されたパータシストキシン）及び糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）であって、しばしば、６９ｋＤタンパク質であるパータクチン（ＰＲＮ）と一緒であり、幾つかの場合において、２型及び３型の線毛（ＦＩＭ２及び３）をさらに含む）を含む無細胞パータシスワクチンの開発を含んでいる。これらの無細胞ワクチンは、一般的に、全細胞ワクチンよりも反応原性がずっと低く、多くの国のワクチン接種プログラムに採用されている。
【０００８】
ＲＳＶ及びパータシスの両方は、児童期の後に免疫が衰えること、並びに最も重度の罹病及び死がこれらの病原体についての小児科用ワクチン接種が完全に実現する前に生後数ヶ月の間の感染からもたらされることを特徴とする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
パータシスワクチン接種は十分に確立しているが、健康な集団及び危険性のある集団において持続性の防御免疫応答を惹起する、安全且つ有効なＲＳＶワクチンを生産するための種々の試みにも拘らず、ＲＳＶ感染を予防する目的のため、及び／又はＲＳＶ疾患を低減するか若しくは予防する目的のためのワクチンとして、安全且つ有効であることが証明されたと評価された候補は、現在までに存在しない。従って、ＲＳＶ及び百日咳菌の両方の感染並びに新生児及び小さい乳児に特に危険を及ぼす関連疾患に対する防御を付与する混合ワクチンについての、満たされない需要が存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（概要）
本開示は、組換え抗原ＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体及びパータシス抗原を含有する少なくとも１種の免疫原性組成物を妊婦に投与することにより呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及び百日咳菌（パータシス）によって引き起こされる疾患から乳児を防御するためのワクチン接種レジメン及び方法に関する。Ｆタンパク質類似体及びパータシス抗原を含有する免疫原性組成物による妊婦の能動免疫は、母性抗体を惹起し、これは、胎盤を介して在胎児に移行し、それによって乳児を誕生後のＲＳＶ疾患から防御する。従って、本開示はまた、妊婦を免疫してその乳児をＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる疾患から防御するワクチン接種レジメン及び方法、並びに妊婦を免疫してＲＳＶによって引き起こされる疾患からのその乳児の防御における組換えＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体及びパータシス抗原の使用、並びに妊婦を免疫してＲＳＶ及びパータシスからその乳児を防御するために有用なキットに関する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１Ａは、ＲＳＶ  Ｆタンパク質の構造的特徴を強調した概略図である。図１Ｂは、例示的なＲＳＶ融合前Ｆ（ＰｒｅＦ）抗原の概略図である。
【図２】図２は、実施例１において行ったモルモット実験についての研究設計を示す。
【図３】図３は、モルモット後代をＲＳＶによってチャレンジした後の、実施例１の結果を示す。
【図４】図４は、実施例１におけるモルモットモデルにおける中和抗体応答の時間経過を示す。
【図５】図５Ａ及び５Ｂは、ＲＳＶ＋パータシス混合ワクチンによる免疫の後のＲＳＶチャレンジ感染に対する中和力価及び防御を示すグラフである。
【図６】図６Ａ及び６Ｂは、ＲＳＶ＋パータシス混合ワクチンによる免疫の後の百日咳菌によるチャレンジに対する血清抗体力価及び防御を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（詳細な説明）
（導入）
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及び百日咳菌（パータシス）によって引き起こされる疾患から乳児を防御する、安全且つ有効なワクチンの開発における特定の挑戦は、非常に幼い乳児における、罹病及び死に関する最も高い発生率及び重篤度である。これ自体が、大きな挑戦を提示する。幼い乳児、特に未熟児で生まれた乳児は、未熟な免疫系を有し得る。非常に幼い乳児において、ワクチン接種による母性抗体の干渉の潜在的な危険性もまた存在する。過去において、ＲＳＶに対する幼い乳児のワクチン接種によるＲＳＶ疾患の増大の問題、並びに、自然感染及び免疫によって惹起された免疫の漸減から生じたチャレンジの問題があった。本開示は、若年、例えば生後から６ヶ月までの間の月齢の乳児を、ＲＳＶ及びパータシスの両方によって引き起こされる疾患から、ＲＳＶ  Ｆタンパク質の類似体及びパータシス抗原を含む免疫原性組成物で妊婦を能動的に免疫することによって防御する方法に関する。Ｆタンパク質類似体及びパータシス抗原は、好ましくは、胎盤を介して在胎児に移行する抗体を惹起し、生後並びにＲＳＶ及びパータシスの両方によって引き起こされる感染及び重度の疾患の危険期を通じて続く、乳児の受動免疫防御をもたらす。
【００１３】
本開示の１つの態様は、ＲＳＶ及びパータシスの両方によって引き起こされる感染又は疾患から乳児（新生児を含む）を防御するワクチン接種レジメンに関する。ワクチン接種レジメンは、ＲＳＶ及びパータシスに対する体液性免疫応答（例えば、抗体応答）を追加刺激する（又は誘導する若しくは惹起する）ことができる少なくとも１種の免疫原性組成物を、妊婦に投与することを含む。好ましくは、この少なくとも１種の免疫原性組成物は、Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原及び全細胞パータシス抗原又は無細胞パータシス抗原のいずれかであるパータシス抗原を含む。少なくとも１種の免疫原性組成物の投与の際、この免疫原性組成物によって惹起されたＲＳＶ及びパータシスについて特異的な母性抗体の少なくとも１つのサブセットが、胎盤を介して在胎児に移行し、それによって、ＲＳＶ及びパータシスの両方によって引き起こされる感染又は疾患から乳児を防御する。
【００１４】
本開示の別の態様は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及びパータシスによって引き起こされる感染又は疾患から乳児を防御する方法に関し、この方法は、在胎児を有する妊婦に、Ｆタンパク質類似体及びパータシス抗原を含む少なくとも１種の免疫原性組成物を投与することを含み、この免疫原性組成物によって惹起された母性抗体の少なくとも１つのサブセットは、胎盤を介して在胎児に移行し、それによって、この乳児をＲＳＶによって引き起こされる感染又は疾患から防御する。
【００１５】
別の態様において、本開示は、ＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる感染又は疾患からの乳児の防御に使用するための、Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原及び少なくとも１つのパータシス抗原を含む１つ又は複数の免疫原性組成物に関し、この免疫原性組成物は、妊婦への投与のために製剤化される。妊婦への投与の際に、この免疫原性組成物は、ＲＳＶ及びパータシスに特異的な母性抗体の少なくとも１つのサブセットの体液性免疫応答を追加刺激する（例えば、誘導する、惹起する又は増強する）ことを可能にする。母性抗体は、胎盤を介して在胎児に移行し、それによって、ＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる感染及び／又は疾患に対する防御を付与する。
【００１６】
別の態様において、本開示は、妊婦への投与のために製剤化された複数（例えば、２以上）の免疫原性組成物を含むキットに関する。このキットは、（ａ）ＲＳＶに特異的な体液性免疫応答を誘導する、惹起する又は追加刺激することができるＦタンパク質類似体を含む第１の免疫原性組成物、並びに（ｂ）百日咳菌に特異的な体液性応答を誘導する、惹起する又は追加刺激することができる少なくとも１種のパータシス抗原を含む第２の免疫原性組成物を含む。この免疫原性組成物は、必要に応じて、１つ以上の事前充填シリンジ、例えば、二重（若しくは多重）チャンバシリンジに含まれていてもよい。妊婦への投与の際、このキットの少なくとも第１及び第２の免疫原性組成物は、ＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット、及びパータシス特異的抗体の少なくとも１つのサブセットを、誘導する、惹起する又は追加刺激し、この抗体は、胎盤を介して妊婦の孕む在胎児に移行する。母性抗体の胎盤を介した移行は、ＲＳＶ及びパータシスの両方によって引き起こされる感染及び／又は疾患に対する防御を付与する。
【００１７】
特定の実施形態において、ワクチン接種レジメン、方法、若しくは使用又はキットは、Ｆタンパク質の融合前立体構造を安定化させる少なくとも１つの修飾を含む融合前Ｆ若しくは「ＰｒｅＦ」抗原であるＦタンパク質類似体の免疫原性組成物（例えば、及びその投与）を含む。あるいは、Ｆ類似体は、融合後立体構造（「ＰｏｓｔＦ」）において安定化されるか、又は、本明細書中で記載される方法において使用され得る立体構造に関して不安定である。一般的に、Ｆタンパク質類似体（例えば、ＰｒｅＦ、ＰｏｓｔＦなど）抗原は、膜貫通ドメインを欠き、可溶性であり、すなわち、（例えば、Ｆタンパク質類似体の発現及び精製を容易にするために）膜結合していない。
【００１８】
例示的な実施形態において、ワクチン接種レジメン、方法、使用若しくはキットは、Ｎ末端からＣ末端の方向で、ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドのＦ２ドメイン及びＦ１ドメインの少なくとも一部分若しくは実質的に全てを、必要に応じて異種三量体化ドメインと共に含むＦタンパク質類似体の投与を含む。１つの実施形態において、Ｆ２ドメインとＦ１ドメインとの間にフーリン切断部位はない。特定の例示的実施形態において、Ｆ２ドメインは、配列番号２の参照Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸２６〜１０５に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドの少なくとも一部分を含み、及び／又はＦ１ドメインは、配列番号２の参照Ｆタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）のアミノ酸１３７〜５１６に対応するＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドの少なくとも一部分を含む。
【００１９】
例えば、特定の実施形態において、Ｆタンパク質類似体は、以下の群から選択される：ａ）  配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２の群から選択されるポリペプチドを含むポリペプチド、
ｂ）  配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２１の群から選択されるポリヌクレオチドによって、又は配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２１の群から選択されるポリヌクレオチドに実質的にその全長にわたってストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列によってコードされ、天然に存在するＲＳＶ株に少なくとも部分的に対応するアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｃ）  配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２の群から選択されるポリペプチドに対し少なくとも９５％の配列同一性を有し、天然に存在するＲＳＶ株に対応しないアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【００２０】
必要に応じて、Ｆタンパク質類似体は、シグナルペプチドをさらに含む。必要に応じて、Ｆタンパク質類似体は、「タグ」若しくは精製を容易にする配列、例えば、多ヒスチジン配列を、さらに含む。
【００２１】
異種三量体化ドメインを含む実施形態において、このようなドメインは、コイルドコイルドメイン、例えばイソロイシンジッパーを含んでもよく、又は、別の三量体化ドメイン、例えば、バクテリオファージＴ４フィブリチン（fibritin）（「フォルドン（foldon）」）又はインフルエンザＨＡに由来するものを含んでもよい。
【００２２】
特定の例示的実施形態において、Ｆタンパク質は、以下から選択される少なくとも１つの修飾を含む：
（ｉ）グリコシル化を改変する修飾、
（ｉｉ）少なくとも１つの非フーリン切断部位を消去する修飾、
（ｉｉｉ）ｐｅｐ２７ドメインの１以上のアミノ酸を欠失する修飾、並びに
（ｉｖ）Ｆタンパク質細胞外ドメインの疎水性ドメイン中に親水性アミノ酸を置換するか又は付加する修飾。
【００２３】
特定の実施形態において、Ｆタンパク質類似体は、ポリペプチドの多量体、例えば、ポリペプチドの三量体を含む。
【００２４】
パータシス抗原に関して、この抗原は、１以上の無細胞パータシスタンパク質を含んでも、又は全細胞パータシス抗原を含んでもよい。例えば、無細胞パータシスタンパク質は、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（fimbrae）（ＦＩＭ２）、３型線毛（ＦＩＭ３）及びＢｒｋＡからなる群より選択され得る。ＰＴは、化学的にトキソイド化されても、又は（例えば、変異Ｒ９Ｋ及びＥ１２９Ｇのうちの一方若しくは両方によって）遺伝的にトキソイド化されてもよい。特定の好ましい実施形態において、パータシス抗原は、パータシスタンパク質の組み合わせ、例えば、ＰＴ及びＦＨＡ；ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ；又はＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ及び必要に応じてＦＩＭ２とＦＩＭ３の一方若しくは両方を含む。
【００２５】
全細胞（Ｐｗ）パータシス抗原を含む実施形態において、Ｐｗ抗原は、低減した内毒素含量を有し得る。低減した内毒素含量は、リポオリゴ糖（ＬＯＳ）の化学的抽出によって、又は例えば３−Ｏ−デアシラーゼの過剰発現若しくは異種発現を誘導する、内毒素産生の遺伝子操作によって達成されてもよい。特定の好ましい実施形態において、Ｐｗ抗原は、少なくとも部分的に３−Ｏ−脱アシル化されたＬＯＳを含む百日咳菌細胞を含む。
【００２６】
特定の実施形態において、Ｆタンパク質類似体及び／又はパータシス抗原は、薬学的に許容される担体若しくは賦形剤、例えば緩衝液を含む免疫原性組成物中に製剤化（配合）される。必要に応じて、この免疫原性組成物はまた、アジュバント、例えば３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１（例えば、無毒化形態）、水中油エマルジョン（例えば、免疫刺激分子、例えばα−トコフェロールを含有若しくは非含有）、鉱物油、例えばミョウバンなどのアルミニウム塩（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）、又はこれらの組み合わせを含むアジュバントをも含む。好ましくは、免疫原性組成物がアジュバントを含む場合、このアジュバントは、抗体、特にＩｇＧ１サブクラスのＩｇＧ抗体の産生によって特徴付けられる体液性免疫を増強又は増大する。あるいは、免疫原性組成物は、アジュバントの非存在下で（すなわち、含まずに）製剤化される。
【００２７】
典型的には、Ｆタンパク質類似体及びパータシス抗原を含む免疫原性組成物は、妊娠（懐胎）後期の間に投与されるが、（特に、早期産の危険性が高い妊娠の場合）有益効果は、妊娠後期の開始の前に得られ得る。従って、Ｆタンパク質類似体は、（最後の生理周期の開始から数えて）妊娠２６週又はそれ以降、例えば、妊娠２６週〜３８週の間、又は妊娠２８週〜３４週の間に投与することができ、Ｆタンパク質類似体はまた、妊娠２６週より前に投与されてもよい。
【００２８】
ワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットの特定の実施形態において、ＲＳＶ抗原（組換えＦタンパク質類似体）及びパータシス抗原は、同じ免疫原性組成物中に共配合される。別の実施形態において、ＲＳＶ抗原（組換えＦタンパク質類似体）及びパータシス抗原は、異なる（例えば、２つの異なる）免疫原性組成物中に配合され、これは、同時投与（近い時間若しくは同時に、すなわち同日に投与される）されてもよく、又は、典型的には、両免疫原性組成物が妊娠後期の間、例えば、妊娠２６週の後若しくは妊娠２８週の後、及び典型的に妊娠３４週の前若しくは妊娠３８週の前に投与される限り、異なる日に投与されてもよい。妊婦への投与は、任意の種々の経路、例えば、筋肉内、皮膚（cutaneous）若しくは皮内投与経路によって、達成され得る。
【００２９】
好ましくは、ワクチン接種レジメン、方法、使用若しくはキットに含まれる免疫原性組成物の投与は、妊婦（好ましくは、ヒト妊婦）において免疫応答を惹起し、これは、その在胎児に胎盤を通して受動的に移行する場合、その乳児を、例えば、出生から少なくとも約６ヶ月齢まで防御する。従って、本明細書中で開示される方法によって防御される乳児は、免疫学的に未成熟な乳児、例えば、６ヶ月に満たない月齢の乳児、例えば、２ヶ月齢に満たない乳児、例えば、１ヶ月の月齢に満たない乳児、例えば、新生児（neonate）又は新生児（newborn）である。好ましくは、抗体の少なくとも１つのサブセット、例えば、ＩｇＧ抗体、例えばＩｇＧ１抗体は、胎盤を介して移行する。また、母性抗体のサブセットが、ＲＳＶに対する中和抗体を含むことも、利点と考えられる。
【００３０】
特定の実施形態において、抗体の少なくとも１つのサブセットの胎盤を介した移行は、免疫学的方法（例えば、ＥＬＩＳＡ）によって測定され得る。例えば、特定の好ましい実施形態において、ＲＳＶ特異的抗体は、出生時において、乳児の血清中３０ｍｃｇ／ｍｌ以上のレベルにて検出され得る。同様に、特定の好ましい実施形態において、パータシス特異的抗体は、出生時において、乳児の血清中１０  ＥＬＩＳＡ単位／ｍｌ（ＥＵ）以上のレベルにて検出され得る。好ましくは、ＲＳＶ及びパータシスに特異的な抗体は、乳児に免疫へのその後の応答を付与する（すなわち、曝露する）ことなく、ＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる感染に対して防御し（すなわち阻害し）、そして疾患を低減若しくは予防するレベルで、出生時において乳児の血清中に存在する。
【００３１】
必要に応じて、６ヶ月齢を超えて免疫応答の持続性を確実にするために、このワクチン接種レジメン、方法若しくは使用（及びキットの組成物の投与）は、（妊婦の出産した）乳児に対し、この乳児においてＲＳＶ及び／又はパータシスに対する活性な免疫応答をプライミングする又は誘導する１以上の組成物を投与することを含んでもよい。この乳児に投与した組成物は、妊婦に投与したものと同じであっても、異なっていてもよい。例えば、乳児に投与した組成物は、Ｆタンパク質類似体であるＲＳＶ抗原性成分、又は１以上のＲＳＶ抗原をコードする核酸であるＲＳＶ抗原性成分、例えば、生弱毒化ウイルス、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルスベクター若しくはＭＶＡベクター）、又はウイルスレプリコン粒子若しくは他の自己複製核酸を含んでもよい。この組成物は、本明細書中で記載される無細胞パータシス抗原（Ｐａ、例えば１以上のパータシスタンパク質）、又は全細胞パータシス抗原（Ｐｗ）であるパータシス抗原性成分を、代替的に、又は追加で含んでもよい。ＲＳＶ抗原性成分とパータシス抗原性成分との両方が乳児に投与される場合、ＲＳＶ抗原性成分及びパータシス抗原性成分は、同じ免疫原性組成物中に共配合されてもよい。あるいは、ＲＳＶ抗原性成分及びパータシス抗原性成分は、同時（同時若しくは同日に）投与されるか、又は異なるスケジュールに従って（例えば、種々の認可された及び／又は推奨された小児科免疫スケジュールに従って）投与されてもよい、２つ（以上）の異なる免疫原性組成物中に配合されてもよい。必要に応じて、乳児に投与される組成物（１又は複数）は、ＲＳＶ若しくはパータシス以外の病原体の１以上のさらなる抗原を含んでもよい（例えば、種々の小児科免疫スケジュールに従って一般的に投与されるワクチン中に配合されてもよい）。製剤に応じて、この免疫原性組成物は、種々の確立された経路によって、例えば、筋肉内、皮膚、皮内及び／又は粘膜（例えば、鼻腔内）で、乳児に投与され得る。
【００３２】
本明細書中で開示されるワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットは、ＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる感染又は疾患の発生又は重篤度を低減し得る。例えば、ワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットは、ＲＳＶ疾患、例えばＬＲＴＩの発生若しくは重篤度を低減し得るか、又は重度のＲＳＶ疾患、例えばＬＲＴＩの発生を低減することによる。同様に、ワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットは、百日咳菌による感染によって引き起こされる疾患の発生及び重篤度（例えば、「ぜいぜいする」咳若しくは肺炎、又は関連症状の持続時間若しくは重篤度）を低減し得る。乳児の防御は、好ましくは、この乳児を、ＲＳＶ及び／又はパータシスによって引き起こされる重度の疾患及び入院から防御することを含む。それ自体、本明細書中で開示される方法及び使用は、ワクチン接種を受けていない母の乳児と比較して、ワクチン接種した母の乳児のコホートにおいて、重度のＬＲＴＩ及び／又は入院の割合、及び／又は肺炎の割合を５０％以上、又は６０％以上、又は７０％以上低減させることにより測定されるように、ＲＳＶ及びパータシスの両方によって引き起こされる重度の疾患の発生を、５０％以上、又は６０％以上、又は７０％以上、低減し得る。
【００３３】
（用語）
本開示の種々の実施形態の検討を円滑にするために、以下に用語の説明を提供する。本開示の文脈で追加の用語及び説明を提供することもある。
【００３４】
特に説明されない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語はすべて本開示が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。分子生物学での一般用語の定義は、Benjamin Lewin, Genes V, Oxford University Pressより出版, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, Blackwell Science Ltd. より出版, 1994 (ISBN 0-632-02182-9); 及びRobert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, VCH Publishers, Inc.より出版, 1995 (ISBN 1-56081-569-8)に見い出すことができる。
【００３５】
単数用語「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は文脈が明瞭に示さない限り、複数の指示対象を含む。同様に、語「又は」は、文脈が明瞭に示さない限り、「及び」を含む。用語「複数の」は、２以上を指す。核酸又はポリペプチドに対して与えられる塩基のサイズ、アミノ酸のサイズはすべて、及び分子量又は分子質量はすべて近似であり、説明のために提供されることを理解されたい。さらに、抗原のような物質の濃度又はレベルに関して与えられる数値限定は近似であることが意図される。従って、濃度が少なくとも（たとえば）２００ｐｇであると示される場合、濃度は少なくともおよそ（又は「約」又は「〜」）２００ｐｇであると理解される。
【００３６】
本明細書で記載されるものに類似の又は均等の方法及び物質が本開示の実践又は試験で使用され得るが、好適な方法及び物質は以下に記載される。用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」は「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」を意味する。従って、文脈が必要としない限り、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」及びその変形「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」は、言及された化合物若しくは組成物（たとえば、核酸、ポリペプチド、抗原）若しくは工程、又は化合物若しくは工程の群の包含を暗示するように理解されるが、他の化合物、組成物、工程、又はそれらの群の排除を暗示しないように理解される。略記「ｅ．ｇ．」はラテン語のｅｘｅｍｐｌｉ  ｇｒａｔｉａに由来し、本明細書では非限定例を指すように使用される。従って、略記「ｅ．ｇ．」は用語「たとえば」と同義である。
【００３７】
用語「Ｆタンパク質」又は「融合タンパク質」又は「Ｆタンパク質ポリペプチド」又は「融合タンパク質ポリペプチド」は、ＲＳＶの融合タンパク質ポリペプチドのアミノ酸配列の全部又は一部を有するポリペプチド又はタンパク質を指す。多数のＲＳＶの融合タンパク質が記載されており、当業者に公知である。ＷＯ２００８１１４１４９は、例示的なＦタンパク質の変異体（たとえば、天然に存在する変異体）を示している。
【００３８】
「Ｆタンパク質類似体」とは、Ｆタンパク質の構造又は機能を改変する修飾を含んでいるが、Ｆタンパク質の免疫学的性質を保持しており、その結果、Ｆタンパク質類似体に対して生起された免疫応答が天然Ｆタンパク質を認識することになるようなＦタンパク質を指す。ＷＯ２０１０１４９７４５（参照によりその全文を本明細書に組み入れる）は、例示的なＦタンパク質類似体を示している。ＷＯ２０１１００８９７４（参照によりその全文を本明細書に組み入れる）もまた例示的なＦタンパク質類似体を示している。Ｆタンパク質類似体としては、例えばＦタンパク質の融合前立体構造を安定化させる少なくとも１つの修飾を含み、一般的には可溶性の（すなわち膜に結合しない）ＰｒｅＦ抗原が挙げられる。Ｆタンパク質類似体としてはまた、ＲＳＶ  Ｆタンパク質の融合後立体構造をとる融合後Ｆ（ｐｏｓｔＦ）抗原、好ましくはそのような立体構造で安定化されたものが挙げられる。Ｆ類似体としてはさらに、中間の立体構造をとるＦタンパク質、好ましくはそのような立体構造で安定化されたものが挙げられる。このような代替物もまた一般的に可溶性である。
【００３９】
核酸又はポリペプチド（たとえば、ＲＳＶのＦ又はＧタンパク質の核酸又はポリペプチド、あるいはＦ類似体核酸又はポリペプチド）を指す場合の「変異体」は、参照の核酸又はポリペプチドとは異なる核酸又はポリペプチドである。通常、変異体と参照の核酸又はポリペプチドとの間の差異は、該参照に比べて比率的に少数の差異を構成する。
【００４０】
ポリペプチド又はタンパク質の「ドメイン」は、ポリペプチド又はタンパク質の中で構造的に定義された要素である。たとえば、「三量体化ドメイン」は、ポリペプチドの三量体への集合を促進するポリペプチド内のアミノ酸配列である。たとえば、三量体化ドメインは他の三量体化ドメイン（同一の又は異なるアミノ酸配列を持つ追加のポリペプチドのもの）との会合を介して三量体への集合を促進することができる。用語は、そのようなペプチド又はポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指すのにも使用される。
【００４１】
用語「天然の」及び「天然に存在する」は、天然のままと同一状態で存在する、たとえばタンパク質、ポリペプチド、又は核酸のような要素を指す。すなわち、要素は人工的に修飾されていない。この開示の文脈で、たとえば、ＲＳＶの天然に存在する株又は分離株から得られるような、ＲＳＶタンパク質又はポリペプチドの多数の天然の／天然に存在する変異体があることが理解されるであろう。ＷＯ２００８１１４１４９（参照によりその全文が本明細書に組み入れられる）は、例示的なＲＳＶ株、タンパク質及びポリペプチドを含んでおり、例えば図４を参照されたい。
【００４２】
用語「ポリペプチド」は、モノマーがアミド結合を介して互いに連結されるアミノ酸残基であるポリマーを指す。用語「ポリペプチド」又は「タンパク質」は本明細書で使用されるとき、アミノ酸配列を包含し、糖タンパク質のような修飾された配列を含むことが意図される。用語「ポリペプチド」は特に、組換え的に又は合成的に製造されるものと同様に天然に存在するタンパク質を網羅することが意図される。用語「断片」は、ポリペプチドに関して、ポリペプチドの一部（すなわち、部分配列）を指す。用語「免疫原性断片」は、完全長の参照のタンパク質又はポリペプチドの少なくとも１つの優勢な免疫原性エピトープを保持するポリペプチドのあらゆる断片を指す。ポリペプチド内の方向は、個々のアミノ酸のアミノ部分とカルボキシ部分の方向によって定義される、Ｎ末端からＣ末端方向に向かうものとして一般に言及される。ポリペプチドは、Ｎ末端又はアミノ末端からＣ末端又はカルボキシ末端に向かって翻訳される。
【００４３】
「シグナルペプチド」は、膜、たとえば小胞体の膜に対して及びそれを介して新しく合成された分泌タンパク質又は膜タンパク質を指示する短いアミノ酸配列（たとえば、およそ１８〜２５アミノ酸の長さ）である。シグナルペプチドはポリペプチドのＮ末端に位置することが多いが、普遍的ではなく、タンパク質が膜を交差した後、シグナルペプチダーゼによって切断されることが多い。シグナル配列は通常、３つの一般的な特徴：Ｎ末端の極性塩基性領域（ｎ−領域）、疎水性コア及び親水性ｃ−領域を含有する。
【００４４】
用語「ポリヌクレオチド」及び「核酸配列」は、少なくとも１０塩基の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。ヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド又はいずれかのヌクレオチドの修飾された形態であり得る。該用語は、ＤＮＡの一本鎖形態及び二本鎖形態を含む。「単離されたポリヌクレオチド」とは、それが由来する生物の天然に存在するゲノムにおいて直接隣接する（一方は５’末端で一方は３’末端）コード配列の双方と直接隣接しないポリヌクレオチドを意味する。一実施形態では、ポリヌクレオチドはポリペプチドをコードする。核酸の５’及び３’の方向は、個々のヌクレオチド単位の接続性を参照して定義され、デオキシリボース（又はリボース）糖鎖の炭素部分に従って指定される。ポリヌクレオチド配列の情報（コード）内容は５’から３’の方向で読み取られる。
【００４５】
「組換え」核酸は、天然に存在しない配列を有し、又は配列の２つの分離した断片の人工的な組み合わせによって作製された配列を有するものである。この人工的な組み合わせは、化学的な合成によって、又は、さらに一般的には、たとえば、遺伝子操作技法による核酸の単離された断片の人工的な操作によって達成することができる。「組換え」タンパク質は、たとえば、細菌細胞又は真核細胞のような宿主細胞に導入された異種（たとえば、組換え）の核酸によってコードされるものである。核酸は、導入された核酸によってコードされるタンパク質を発現することが可能であるシグナルを有する発現ベクターに導入することができ、又は核酸は宿主細胞の染色体に組み込むことができる。
【００４６】
用語「異種の」は、核酸、ポリペプチド又は別の細胞成分に関して、通常天然に見出されない場合、及び／又は異なる供給源若しくは種を起源とする成分が存在することを示す。
【００４７】
「抗原」は、対象に注射される、吸収される又はさもなければ導入される組成物を含む、対象にて抗体の産生及び／又はＴ細胞反応を刺激することができる化合物、組成物又は物質である。用語「抗原」は、関連する抗原性エピトープすべてを含む。用語「エピトープ」又は「抗原決定基」は、Ｂ細胞及び／又はＴ細胞が応答する抗原の部位を指す。「優勢な抗原性エピトープ」又は「優勢なエピトープ」は、それに対して機能的に有意な宿主の免疫応答、たとえば、抗体反応又はＴ細胞反応が為されるエピトープである。従って、病原体に対する防御免疫応答に関して、優勢な抗原性エピトープは、宿主の免疫系によって認識されると病原体が原因で生じる疾患からの防御を生じる抗原性部分である。用語「Ｔ細胞エピトープ」は、適切なＭＨＣ分子に結合すると、Ｔ細胞によって（Ｔ細胞受容体を介して）特異的に結合されるエピトープを指す。「Ｂ細胞エピトープ」は、抗体（又はＢ細胞受容体分子）によって特異的に結合されるエピトープである。
【００４８】
「アジュバント」は、非抗原特異的に免疫応答の産生を高める剤である。一般的なアジュバントには、抗原が吸着した鉱物（ミョウバン、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）の懸濁液；油中水及び水中油（及びその変異体、二重エマルション及びリバーシブルエマルションを含む）を含むエマルション、リポ糖、リポ多糖、免疫刺激性核酸（たとえば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）、リポソーム、Ｔｏｌｌ様受容体作動薬（特に、ＴＬＰ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７／８、及びＴＬＲ９作動薬）、並びにそのような成分の種々の組み合わせが挙げられる。
【００４９】
「抗体」又は「免疫グロブリン」は、抗原に特異的に結合する４つのポリペプチドから構成される血漿タンパク質である。抗体分子は、ジスルフィド結合によって互いに保持される２つの重鎖ポリペプチド及び２つの軽鎖ポリペプチド（又はそれらの複数）から構成される。ヒトでは、抗体は、５つのアイソタイプ又はクラス、すなわちＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥに定義され、ＩｇＧ抗体はさらに４つのサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）に分けることができる。「中和」抗体は、ウイルスの感染性を阻害することができる抗体である。したがって、ＲＳＶに特異的な中和抗体は、ＲＳＶの感染性を阻害又は低下させることができる。
【００５０】
「免疫原性組成物」は、たとえば、ＲＳＶ又は百日咳菌のような病原体に対して特異的な免疫応答を誘発することが可能である、ヒト又は動物対象（たとえば、実験又は臨床設定で）に投与するのに好適な組成物である。そのようなものとして、免疫原性組成物は、１以上の抗原（たとえば、ポリペプチド抗原）又は抗原性エピトープを含む。免疫原性組成物はまた、たとえば、賦形剤、担体及び／又はアジュバントのような、免疫応答を誘発する又は高めることが可能である追加の１以上の成分を含むことができる。特定の例では、免疫原性組成物を投与して、病原体によって誘導される症状又は状態に対して対象を防御する免疫応答を誘発する。場合によっては、病原体により引き起こされる症状又は疾患は、病原体に対する対象の曝露に続く病原体の複製又は細胞感染を阻害ずることによって防がれる（又は低減される若しくは改善される）。本開示の文脈では、用語、免疫原性組成物は、ＲＳＶ又は百日咳菌（パータシス）に対する防御的、予防的又は緩和的な免疫応答を誘発する目的で対象又は対象の集団への投与を意図される組成物を包含することが理解されるであろう（すなわち、ワクチン組成物又はワクチン）。
【００５１】
「免疫応答」は、免疫系の細胞、たとえば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、又は単球の、病原体又は抗原（免疫原性組成物又はワクチンとして製剤化されている）などの刺激に対する応答である。免疫応答は、抗原特異的な中和抗体のような特異的抗体の産生を生じるＢ細胞の応答であることができる。免疫応答は、たとえば、ＣＤ４＋応答又はＣＤ８＋応答のようなＴ細胞の応答であることもできる。Ｂ細胞及びＴ細胞応答は、「細胞性」免疫応答の態様である。免疫応答はまた、抗体により媒介される「液性」免疫応答であってもよく、これは、例えばＥＬＩＳＡアッセイによって検出及び／又は測定することができる。場合によっては、応答は特定の抗原に特異的である（すなわち、「抗原特異的応答」）。抗原が病原体に由来するのであれば、抗原特異的応答は、「病原体特異的応答」である。「防御免疫応答」は、病原体の有害な機能又は活性を抑え、病原体による感染を低減し、あるいは病原体による感染の結果生じる症状（死亡を含む）を低減する免疫応答である。防御免疫応答は、たとえば、プラーク低減アッセイ若しくは中和アッセイにおけるウイルス複製若しくはプラーク形成の阻害によって、又は生体内での病原体チャレンジに対する耐性を測定することによって測定することができる。免疫原性刺激、例えば病原体又は抗原（例えば免疫原性組成物又はワクチンとして製剤化されたもの）への対象の曝露は、該刺激に特異的な一次免疫応答を惹起又は誘導し、すなわちその曝露が免疫応答を「プライミング」する。その後の該刺激に対する曝露、例えば免疫による曝露は、その特異的免疫応答の程度（若しくは持続期間、又は両方）を増大、すなわち「追加刺激（ブースト）」することができる。したがって、免疫原性組成物の投与による既に存在する免疫応答の「追加免疫（ブースト）」は、抗原（又は病原体）特異的応答の程度を増大する（例えば、抗体力価及び／又はアフィニティの増大により、抗原特異的Ｂ又はＴ細胞の頻度の増大により、成熟エフェクター機能の誘導により、あるいはこれらの任意の組み合わせにより）。
【００５２】
形容詞「薬学的に許容される」は、指示対象が対象（たとえば、ヒト又は動物対象）への投与に好適であることを指す。Remington’s Pharmaceutical Sciences, E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 15th Edition (1975)は、免疫原性組成物を含む、治療用及び／又は予防用の組成物の薬学送達に好適な組成物及び製剤（希釈剤を含む）を記載している。
【００５３】
用語「低減（軽減、低下）する」は、剤の投与に続いて応答又は状態が定量的に低下するならば、又は参照剤に比べて剤の投与に続いてそれが低下するのであれば、剤が応答又は状態を低減するように、相対的な用語である。同様に用語「防御する」は、応答又は状態の少なくとも１つの特徴が実質的に又は有意に低減又は除去される限り、剤が感染のリスク又は感染によって生じる疾患を完全に除去することを必ずしも意味しない。従って、感染又は疾患若しくはその症候を防御する又は低減する免疫原性組成物は、感染の発生若しくは重篤度又は疾患の発生若しくは重篤度が、剤の非存在下での又は参照剤と比べた感染又は応答の、たとえば、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％測定上低下する限り、すべての対象における感染又は疾患を防御又は除去することができるが、必ずしもそうでなくてもよい。特定の場合において、低減は、下気道感染（ＬＲＴＩ）の発生、又は重篤なＬＲＴＩの発生、又はＲＳＶ疾患による入院、又はＲＳＶによって引き起こされる疾患の重篤度の低減である。他の場合において、低減は、肺炎の発生、又は百日咳菌（B. pertussis）により引き起こされる疾患による入院の低減である。
【００５４】
「対象」は、生きている多細胞の脊椎生物である。本開示の文脈では、対象は、たとえば、非ヒト動物、たとえば、マウス、コットンラット、モルモット、ウシ又は非ヒト霊長類のような実験用対象であり得る。或いは、対象はヒト対象であり得る。同様に、妊娠女性及び乳児は、それぞれ非ヒト動物又はヒトの女性（雌）及び乳児であることができる。
【００５５】
（母体免疫）
下気道感染（ＬＲＴＩ）は、下気道の組織のいずれかの感染であり、気管支炎及び肺炎を含む最も重度の形態を有する。ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）は、６ヶ月齢未満の乳児及び妊娠３５週以下の未熟児における下気道感染（ＬＲＴＩ）の、最も一般的な世界的病因である。ＲＳＶ疾患スペクトルは、鼻炎及び耳炎から肺炎及び気管支炎まで広きにわたる気管症状を含み、後の二者の疾患は、無視できない罹病及び死を伴う。
【００５６】
細菌百日咳菌（パータシス）は、深刻な合併症である続発性肺炎、無呼吸並びに呼吸促迫及び呼吸不全によって乳児及び若齢児童において重篤になり得る、気管疾患である百日咳についての病原体である。抗生物質による処置が利用可能であるが、この疾患が診断される時点までに、細菌毒素は、重度の損傷を引き起こし得る。ＲＳＶの自然感染及びパータシスワクチンによる免疫の両方が、時間経過に従って減衰する免疫をもたらすので、その結果、青年及び成人が、これらの非常に伝染性の高い接触伝染病の保有者として行動し得る。このことは、新生児を、感染の結果が最も重篤となる生後数ヶ月以内に、大きな危険にさらす。
【００５７】
脆弱な新生児をパータシス感染及び疾患から防御するための戦略は、「繭化（cocooning）」、すなわち、新生児に接触する可能性のある青年及び成人（産後の女性を含む）にワクチン接種をすることを含む。現在、パータシスに対する妊婦のワクチン接種（母体免疫）は、幾つかの国で推奨されており、それにより、抗パータシス抗体が、胎盤を通じて移行し、乳児が直接接種可能になるまでの防御を提供する。それでもなお、ＲＳＶ及び百日咳菌の両方の感染及び関連疾患に対する防御を付与する混合ワクチンについての満たされない需要が存在し、これは、新生児及び幼い乳児を大きな危険にさらす。
【００５８】
乳児をＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる疾患から防御する安全且つ有効なワクチンの開発における特定の挑戦は、最も高い発生並びに最も大きな罹病及び死亡が、非常に幼い乳児において存在することである。幼い乳児、特に未熟児で生まれた乳児は、未熟な免疫系を有し得る。生理学的に、乳児は、より大きな児童よりも、下気道の疾患に感染し易い場合がある。従って、幼い乳児をＲＳＶ疾患、百日咳、及び特に重度のＬＲＴＩ、肺炎並びに呼吸促迫及び呼吸不全から防御することは、特に重要である。また、胎盤を介して乳児に移行した抗体（「母性抗体」）の乳児のワクチン接種に対する干渉の潜在的な危険性もあり、従って、乳児期のワクチン接種は、例えば、完全に防御的な中和抗体応答を惹起するために十分に有効ではない場合がある。
【００５９】
本開示は、ＲＳＶ  Ｆタンパク質の類似体及び無細胞若しくは全細胞パータシス抗原を含む安全且つ有効な免疫原性組成物によって妊婦を能動免疫することにより、ＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる疾患から幼い乳児を防御するために好適な、ワクチン接種レジメン、方法及び免疫原性組成物の使用、並びにキットに関する。Ｆタンパク質類似体は、好適に、ＲＳＶへの自然な曝露（若しくはこれに対する以前のワクチン接種によって）以前にプライミングされた体液性応答の規模を追加刺激するか又は増大することによって、抗体（例えば、中和抗体）を惹起する。同様に、パータシス抗原は、パータシスへの自然な曝露（若しくはこれに対する以前のワクチン接種によって）以前にプライミングされた体液性応答の規模を追加刺激するか又は増大することによって、抗体を惹起する。Ｆタンパク質類似体及びパータシス抗原に対する応答において産生された抗体は、胎盤を介して在胎児に移行し、生後に乳児に受動免疫防御をもたらし、ＲＳＶ及びパータシスにより引き起こされる感染及び重度の疾患の危険期を通して持続する（例えば、乳児のワクチン接種前は完全に防御される）。典型的には、この方法によって付与される受動免疫防御は、出生と少なくとも２ヶ月齢との間、例えば、約６ヶ月齢まで、又はなおそれより長くすら、持続する。
【００６０】
本明細書中で記載される、Ｆタンパク質類似体及び／又はパータシス抗原を含む免疫原性組成物は、強い抗体応答（例えば、中和抗体）を誘導するように設計される。妊婦は、典型的に、その人生で１回以上ＲＳＶに曝されているので、彼女らは、ＲＳＶに対する既存のプライミング応答を有する。成人までにＲＳＶ感染に曝される集団の割合は、本質的に１００％である。百日咳に対して防御し予防するように設計された小児科免疫プログラムは、広まっている。しかし、広範な免疫にも拘らず、百日咳菌による自然感染もまた一般的である。従って、パータシスに対するプライミングもまた広まっている。従って、生後すぐからの乳児及びその後の重要な最初の数ヶ月のためのＲＳＶ及びパータシスからの防御の提供は、これらのプライミング応答を、母親においてＲＳＶ及びパータシスに対し、好ましくは、胎盤を通り乳児に防御を提供することができる特定の抗体サブクラス（サブタイプ）、例えばＩｇＧ１に関して、できる限り有効に追加刺激して血清抗体応答（レベル）を増大することによって達成され得る。１つの実施形態において、本明細書中での使用のための免疫原性組成物は、アジュバントを含まないか、又は強いＩｇＧ１応答を支持するアジュバント、例えばアルミニウム塩若しくはカルシウム塩などの鉱物塩、詳細には水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム若しくはリン酸カルシウムを含み得る。従って、特定の実施形態において、本明細書に記載の方法及び使用のためのＦタンパク質類似体は、好ましくは、鉱物塩、好ましくはミョウバンと共に製剤化される。別の実施形態において、強いＩｇＧ１応答を支持するアジュバントは、水中油エマルジョン、又はサポニン、例えばＱＳ２１（若しくはその無毒化形態）であり、以下でより詳細に記載される。
【００６１】
妊婦は、ヒト妊婦であり得、従って、乳児若しくは在胎児は、ヒト乳児であり得る。ヒト妊婦について、発生胎児の在胎齢は、最後の月経周期の開始から数える。受胎後の週数は、最後の月経周期の開始の１４日後から数えられる。従って、ヒト妊婦は、受胎後２４週といえる場合、最後の月経周期の開始の２６週後、すなわち妊娠２６週と同じである。妊娠が、生殖技術の補助によって達成されている場合、発生胎児の在胎の段階は、受胎の日の２週間前から計算される。
【００６２】
用語「在胎児」は、本明細書中で使用される場合、妊婦の胎児すなわち発育中の胎児を意味する。用語「在胎齢」は、妊娠の週数、すなわち、最後の月経周期の開始からの週数を意味するように使用される。ヒトの妊娠は、典型的には、最後の月経の開始から約４０週間であり、便宜上、３つの期に分けられ、前期は最後の月経周期の開始日から妊娠の１３週目まで続き、中期は妊娠の１４週目から２７週目までに及び、そして後期は２８週目から始まって出生まで続く。従って、後期は、受胎後２６週で開始し、児の出生まで続く。
【００６３】
用語「乳児」は、ヒトについて言う場合、０歳から２歳までである。本明細書中で記載される方法及び使用によって提供される防御は、乳児から２歳から１１歳までの児童期、又は例えば２歳から５歳までの児童期の初期、又は、なお１２歳から１８歳までの青年期までについての防御を提供する可能性があってもよい。しかし、これは、重度のＲＳＶ疾患及び百日咳（パータシス）の合併症に対し個体が最も脆弱である乳児期の間であり、従って、本開示の焦点である（例えば、生後約６ヶ月齢まで）。
【００６４】
ヒト乳児は、生後数ヶ月の間、免疫学的に未熟である。特に、未熟児で、例えば、妊娠３５週齢より前に生まれた場合、病原体によって引き起こされる感染又は疾患を、同じ病原体に対して発達した免疫系が応答できるのと同じ方法で予防することができる免疫応答を起こすために十分に免疫系が発達していない。免疫学的に未熟な乳児は、より発達した若しくは成熟した免疫系を有する乳児よりも、病原体によって引き起こされる感染及び疾患に罹り易い。ヒト乳児はまた、生理学的及び発達上の理由で、例えば、気道が小さく、児童及び成人よりも発達が低く未熟であるから、生後数ヶ月の間、ＬＲＴＩ（肺炎を含む）に対し増大した脆弱性を有し得る。これらの理由のために、本明細書中で、乳児期の最初の６ヶ月を、４０週未満、又は３８週未満、又は３５週未満の在胎齢で失われた時間の量に従って、未熟乳児若しくは産後乳児について延長し得る。
【００６５】
別の実施形態において、妊婦及びその乳児は、任意の種由来であってよく、例えば、これらは、上で「対象」と記載される。妊娠動物、例えば妊娠モルモット若しくは妊娠ウシは、受胎後の時間が、交尾からの時間で数えられる。ヒトにおいて、及び幾つかの動物、例えばモルモットにおいて、抗体は、母親から在胎児へ胎盤を介して渡される。幾つかの抗体アイソタイプは、胎盤を通じて優先的に移行され得る。例えばヒトＩｇＧ１抗体は、胎盤を通って最も効率的に移行するアイソタイプである。実験動物、例えばモルモット及びマウスにおいて、サブクラスが存在するが、種々のサブクラスは、必ずしも同じ機能を果たす必要はなく、ヒトのサブクラスと動物のサブクラスとの間の直接関連性は、容易には作られ得ない。
【００６６】
好ましくは、ＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる感染を阻害し、疾患の発生及び重篤度を低減することによって乳児を防御することは、少なくとも、新生児期及び非常に幼い乳児、例えば、乳児が、妊娠約４０週齢以降に生まれた正期産児であった場合に、例えば、生後最初の数週間、例えば生後１ヶ月又は２ヶ月、又は最初の３ヶ月、又は最初の４ヶ月、又は最初の５ヶ月、又は生後最初の６ヶ月、又はそれ以上に及ぶ。重度のＲＳＶ及び百日咳の影響に対し乳児がより脆弱ではなくなる最初の数ヶ月の後、これらの感染に対する防御は、減衰し得る。従って、致命的な防御は、最も必要とされる期間の間、提供される。正期産前の乳児の場合、好ましくは、防御は、出生からより長い期間、例えば、乳児の出生と妊娠３５週になるまでの間の時間間隔と少なくとも同等のさらなる期間（すなわち、さらに約５週間）、又は妊娠３８週になるまでの間の時間間隔と少なくとも同等のさらなる期間（すなわち、さらに約２週間）、又は出生時の乳児の妊娠（在胎）週数に応じてより長い期間、提供される。
【００６７】
乳児の防御が、ＲＳＶによるか若しくはパータシスによる感染に対する１００％の防御を必ずしも意味しないことは、明らかである。感染又は疾患の発生及び重篤度の低減が存在する限り、防御が提供されたと認識される。乳児の防御は、好ましくは、ＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる重度の疾患及び入院から乳児を防御することを含む。このように、本明細書中で開示される方法及び使用は、ＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる疾患、例えばＬＲＴＩ、肺炎若しくは他の症候若しくは疾患の、発生又は重篤度を低減する。例えば、本明細書中で開示されるＦタンパク質類似体を含む免疫原性組成物の投与は、ＬＲＴＩの発生を、（ワクチン接種した母親の乳児のコホートにおいて）ワクチン接種していない母の乳児と比較して、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は６０〜７０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、低減し得る。好ましくは、このような投与は、ＬＲＴＩの重篤度を、ワクチン接種していない母の乳児の感染と比較して、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は６０〜７０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、低減する。好ましくは、このような投与は、重度のＲＳＶ疾患による入院の必要性を、このようなコホートにおいて、ワクチン接種していない母の乳児の感染と比較して、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は６０〜７０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、低減する。重度のＬＲＴＩによる入院の必要性があると考えられるか否か、又は特定のＬＲＴＩの症例が入院されるか否かは、国によって変動し得、従って、当該分野で周知の規定の臨床症候に従って判定されたＬＲＴＩの重篤度は、入院を必要とするものよりもよい程度であり得る。パータシスに関して、本明細書中で開示されるとおり無細胞若しくは全細胞のパータシス抗原を含む免疫原性組成物の投与は、重度の疾患（例えば、肺炎及び／又は呼吸促迫及び呼吸不全）の（ワクチン接種した母親の乳児のコホートにおいて）、ワクチン接種していない母の乳児の感染と比較して、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は６０〜７０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、発生を低減し得る。好ましくは、このような投与は、肺炎の重篤度を、ワクチン接種していない母の乳児の感染と比較して、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は６０〜７０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、低減する。好ましくは、このような投与は、パータシスの重度の合併症による入院の必要性を、このようなコホートにおいて、ワクチン接種していない母の乳児の感染と比較して、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％、又は６０〜７０％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、低減する。
【００６８】
典型的には、ワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットに従い、Ｆタンパク質類似体及びパータシス抗原は、妊娠（懐胎）の後期の間に、妊婦に投与される。母体免疫のタイミングは、母性抗体の産生及びこの母性抗体の胎児への移行が可能であるように設計される。従って、好ましくは、免疫と出生との間に、胎盤を通った母性抗体の最適な移行が可能であるために充分な時間が経過する。抗体移行は、ヒトにおいて、一般的に、妊娠の約２５週から始まり、２８週まで増大し、妊娠の約３０週から最適となり、これを維持する。ＲＳＶ  Ｆタンパク質及びパータシス抗原（例えば、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）、３型線毛（ＦＩＭ３）及びＢｒｋＡの１以上又は全細胞パータシス抗原）に対する母性抗体の胎児への有効な移行を可能にするために、本明細書中で記載される母体免疫と出生との間に、最低約２〜４週間が必要であると考えられる。従って、母体免疫は、妊娠２５週の後の任意の時点、例えば、妊娠２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３若しくは３４週（受胎後２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５若しくは３６週）以降、又は妊娠３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１若しくは３０週（受胎後３６、３５、３４、３３、３２、３１、２９若しくは２８週）以前に、行われ得る。好ましくは、母体免疫は、妊娠２６週〜３８週の間、例えば、２８週〜３４週の間に行われる。
【００６９】
好ましくは、母体免疫は、乳児の出産予定日よりも少なくとも２週間、又は少なくとも３週間、又は少なくとも４週間、又は少なくとも５週間、又は少なくとも６週間前に行われる。投与のタイミングは、早産の危険のある妊婦の場合、抗体の産生及び胎児への移行のための充分な時間を提供するために、調整する必要がある場合がある。
【００７０】
好ましくは、Ｆタンパク質類似体及びパータシス抗原又はそれらの製剤は、上述の期間の間に、単回用量で妊婦に投与される。本明細書中で記載される、ＲＳＶ及びパータシスに対する母体免疫は、ＲＳＶ及びパータシスに対する既存の母体免疫についての「追加刺激」であると考えられ、これは、以前に、例えば自然曝露若しくはワクチン接種によってプライミングされたＲＳＶ及びパータシスに対する免疫応答を増大する。従って、単回用量のみが必要であると予測される。第２の用量が投与される場合、これもまた、第１の用量についての投与期間内に、好ましくは、第１と第２の用量との間の時間間隔を、例えば、１〜８週間、若しくは２〜６週間、例えば、２週間若しくは４週間若しくは６週間あける。Ｆタンパク質類似体及びパータシス抗原の妊婦への投与は、母性抗体力価における追加刺激をもたらし、例えば、好適にはＩｇＧ１サブクラスの、血清（例えば、中和）抗体の力価を増大する。母体において増大した抗体力価は、胎盤を通り、Ｆｃレセプターによって媒介される能動輸送メカニズムを介して、例えば、絨毛膜絨毛の合胞栄養芽層において、ＲＳＶ特異的抗体及びパータシス特異的抗体（例えば中和エフェクター機能を有する）の在胎児への受動移行をもたらす。本明細書中で開示された免疫方法からもたらされたＲＳＶ特異的ＩｇＧ１抗体及びパータシス特異的ＩｇＧ１抗体の胎盤を通った輸送は、効率的であり、出生時若しくはそれに近い時期の乳児において、母体循環における力価と近い、それと同等若しくはそれを超える力価をもたらす。例えば、ＲＳＶ特異的抗体の力価は、好ましくは、出生時に少なくとも３０ｍｃｇ／ｍＬのレベルである。典型的には、正規産での健康な乳児の出生時において、この力価は、このレベル以上、例えば、４０ｍｃｇ／ｍＬ、５０ｍｃｇ／ｍＬ、６０ｍｃｇ／ｍＬ又はそれ以上、例えば７５ｍｃｇ／ｍＬ、８０ｍｃｇ／ｍＬ、９０ｍｃｇ／ｍＬ、１００ｍｃｇ／ｍＬ又は１２０ｍｃｇ／ｍＬまで若しくはそれ以上ですらあり得る。
【００７１】
パータシス（例えば、ＰＴ）に特異的な抗体の力価は、典型的に、Meade et al.,“Description and evaluation of serologic assays used in a multicenter trial of acellular pertussis vaccines", Pediatrics (1995) 96:570-5に記載されるように、ＥＬＩＳＡにより測定され、ＥＬＩＳＡ単位／ｍｌ（ＥＵ）で表される。簡潔にいうと、例えば、マイクロタイタープレート（例えば、Ｉｍｍｕｌｏｎ  ２、VWR International、West Chester、PA、USA）を、標準量のＰＴ、ＦＨＡ、ＦＩＭ若しくはＰＲＮでコーティングする。血清の連続希釈物を、およそ２時間にわたって２８℃にてインキュベートし、アルカリホスファターゼコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧの適当な希釈物を添加する。この反応を発色させ、そして４０５ｎｍにて読み取る。各特異的抗体の希釈の下限を、各抗原についての連続希釈した参照物質の多重測定によって決定し、ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮについて１ＥＬＩＳＡ単位（ＥＵ）を、そしてＦＩＭについて２ＥＵを設定する。好ましくは、本明細書中で開示されるワクチン接種レジメン、方法、使用に従うか、又はキット内に含まれる、パータシス抗原を含む免疫原性組成物の投与の後に、パータシス特異的抗体力価は、出生時に少なくとも１０ＥＵのレベルである。典型的には、この力価は、このレベル以上、例えば、２０ＥＵ、３０ＥＵ、４０ＥＵ、５０ＥＵ、６０ＥＵ、７０ＥＵ、８０ＥＵ、９０ＥＵ又は１００ＥＵ以上であり得る。これらの値は、個々に基づいても、集団平均に基づいてもよい。好ましくは、出生時に観察される抗体のレベルは、上述の閾値を超え、そして出生後数ヶ月にわたって持続する。
【００７２】
移行した抗体のエフェクター機能、例えば、中和能力（中和力価）もまた評価され得、そして、防御に相関する抗体の機能的属性の測定値を提供する。例えば、ＲＳＶの場合、特定の量の複製可能なＲＳＶウイルス及び血清の所定の希釈物が、混合され、インキュベートされる。次いで、このウイルス−血清反応混合物を、ウイルス複製に許容的な宿主細胞（例えば、ＨＥｐ−２細胞）上に移し、細胞増殖及びウイルス複製に好適な条件下で、好適な時間にわたってインキュベートする。非中和ウイルスは、宿主細胞に感染し、そしてそこで複製することができる。このことは、細胞単層上に所定数のプラーク形成単位（ＰＦＵ）の形成をもたらし、これは、蛍光色素でタグ化した抗ＲＳＶ抗体を用いて検出され得る。中和力価は、ウイルスに感染したのみで血清を含まない細胞単層と比較して、ＰＦＵにおける特定のレベルの阻害（例えば、５０％阻害又は６０％阻害）を誘導する血清希釈を計算することによって決定される。例えば、パリビズマブ抗体は、未処理ウイルス感染細胞と比較したＲＳＶ抗原の検出を５０％低減させる抗体濃度として示される中和力価（５０％有効濃度［ＥＣ５０］）を、臨床的ＲＳＶ  Ａ及びＲＳＶ  Ｂ単離物に対し、それぞれ１ｍＬあたり０．６５ｍｃｇ（１ｍＬあたり平均０．７５±０．５３ｍｃｇ；ｎ＝６９，１ｍＬあたり０．０７〜２．８９ｍｃｇの範囲）及び１ｍＬあたり０．２８ｍｃｇ（１ｍＬあたり平均０．３５±０．２３ｍｃｇ；ｎ＝３５，１ｍＬあたり０．０３〜０．８８ｍｃｇの範囲）で有することが示されている。従って、特定の実施形態において、胎盤を介して在胎児へ移行する抗体の中和力価は、出生後の乳児において測定され得、（集団中央値に基づき）ＲＳＶ  Ａ株に対し少なくとも約０．５０ｍｃｇ／ｍＬ（例えば、少なくとも約０．６５ｍｃｇ／ｍＬ）又はそれを超えるＥＣ５０、及びＲＳＶ  Ｂ株に対し少なくとも約０．３ｍｃｇ／ｍＬ（例えば、少なくとも約０．３５ｍｃｇ／ｍＬ）又はそれを超えるＥＣ５０を有する。好ましくは、中和抗体力価は、出生後、数週間から数ヶ月にわたって、上述の閾値を上回り続ける。
【００７３】
所望の場合、パータシス毒素に特異的な抗体のトキシン中和エフェクター機能もまた、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中和アッセイにおいて、例えばGillenius et al.,“The standardization of an assay for pertussis toxin and antitoxin in microplate culture of Chinese hamster ovary cells". J. Biol. Stand. (1985) 13:61-66において記載されるように測定され得る。しかし、このアッセイにおける中和活性は、防御とあまり相関しない。
【００７４】
必要に応じて、本明細書中で開示されるワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットに従い、ＲＳＶ及びパータシスに対する防御を、受動的に移行した母性抗体が防御を提供する間である出生後数ヶ月を超えて延長させるために、乳児は、ＲＳＶ及び／又はパータシスに特異的な後天免疫応答を惹起するために、能動的に免疫されてもよい。乳児のこのような能動免疫は、ＲＳＶ抗原及び／又はパータシス抗原を含む１又はそれ以上の組成物を投与することによって、達成され得る。例えば、この（１以上の）組成物は、必要に応じて抗原により惹起される免疫応答を増大するためにアジュバントと共に製剤化されたＦタンパク質類似体を含み得る。以前にＲＳＶに曝されていない乳児への投与のために、Ｆタンパク質類似体は、Ｔｈ１サイトカインプロフィールを提示するＴ細胞の産生によって特徴付けられる（又はＴｈ１及びＴｈ２サイトカインプロフィールを提示するＴ細胞の平衡によって特徴付けられる）免疫応答を惹起するアジュバントと共に製剤化され得る。
【００７５】
あるいは、Ｆタンパク質類似体若しくは他のタンパク質サブユニットワクチンを投与するよりむしろ、ＲＳＶに対して防御する後天的免疫応答を惹起する組成物は、弱毒化生ウイルスワクチン若しくは１以上のＲＳＶ抗原（例えば、Ｆ抗原、Ｇ抗原、Ｎ抗原若しくはＭ２抗原又はこれらの一部分）をコードする核酸を含み得る。例えば、核酸は、ベクター、例えば組換えウイルスベクター、例えばアデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ＭＶＡベクター、麻疹ベクターなどに存在させうる。例示的なウイルスベクターは、ＷＯ２０１２  ０８９２３１に開示され、これは、１以上のＲＳＶ抗原をコードするウイルスベクターを含む免疫原性組成物を説明する目的で、本明細書中に組み込まれる。あるいは、この核酸は、自己複製型核酸、例えば自己複製型ＲＮＡ、例えば、アルファウイルスレプリコンなどのウイルスレプリコンの形態で（例えば、ウイルス構造タンパク質と共にパッケージングされたウイルスレプリコン粒子の形態で）あってもよい。このような自己複製型ＲＮＡレプリコンの例は、ＷＯ２０１２／１０３３６１に記載され、これは、ＲＳＶタンパク質をコードするＲＮＡレプリコン及び免疫原性組成物としてのその製剤を開示する目的で、本明細書中に組み込まれる。
【００７６】
さらに、又はあるいは、パータシス抗原を含む１以上の組成物が、乳児に投与され得る。例えば、この組成物は、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）、３型線毛（ＦＩＭ３）及びＢｒｋＡ、又はこれらの組み合わせ（例えば、ＰＴ及びＦＨＡ；ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ；又はＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ及びＦＩＭ２とＦＩＭ３のいずれか若しくは両方）からなる群より選択される無細胞パータシス抗原を含み得る（例えば、本明細書中以下で記載されるようにＰＴが化学的に若しくは遺伝的にトキソイド化されている）。あるいは、組成物は本明細書中以下で記載されるように、全細胞パータシス抗原を含み得る。
【００７７】
特定の実施形態において、ＲＳＶ抗原性成分（例えば、組換えタンパク質、例えばＦタンパク質類似体）及びパータシス抗原性成分は、単一の免疫原性組成物中に共配合されて、本明細書中で記載されるワクチン接種レジメン、方法又は使用に従って投与される。あるいは、ＲＳＶ抗原性成分及びパータシス抗原性成分は、２（又はそれ以上）の異なる免疫原性組成物中に配合され、これは、同時若しくは異なる時点で、例えば、種々の認可され且つ推奨された小児科免疫スケジュールに従って、投与され得る。
【００７８】
後天的ＲＳＶ免疫応答及び／又は後天的パータシス免疫応答を惹起する組成物は、本明細書中で開示されるＲＳＶワクチンを妊娠中に受けた母に生まれた乳児に投与され、この組成物は、１回以上投与されてもよい。最初の投与は、出生時若しくはそれに近い時点であってもよく（例えば、出生日若しくはその翌日）、又は出生の１週間以内若しくは２週間以内であってもよい。あるいは、最初の投与は、出生の約４週間後、出生の約６週間後、出生の約２ヶ月後、出生の約３ヶ月後、出生の約４ヶ月後、又はそれ以降、例えば出生の約６ヶ月後、出生の約９ヶ月後、又は出生の約１２ヶ月後であり得る。例えば、パータシス抗原（例えば、Ｐａ若しくはＰｗ）を含む組成物の場合、出生の約２、４及び６ヶ月後にワクチンを投与することが一般的である（さらなる用量を１２〜１８ヶ月に、及び必要に応じて４〜７歳の間に行う）。従って、１つの実施形態において、本開示は、その乳児を妊娠していた間にＦタンパク質類似体及びパータシス抗原を含む免疫原性組成物を投与された女性に生まれた乳児に、ＲＳＶ及び／又はパータシスに特異的な免疫応答を惹起する１以上の組成物を投与することにより、ＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる疾患から乳児を防御するための方法を提供する。
【００７９】
（ＲＳＶ  Ｆタンパク質類似体）
本明細書に開示し、ワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットに使用するために好適な組換えＲＳＶ抗原は、ＲＳＶ  Ｆタンパク質から誘導された（すなわち、免疫学的にそれの全体又は一部に相当する）Ｆタンパク質類似体である。それらは、Ｆタンパク質の構造又は機能を改変する１以上の修飾を含むが、Ｆタンパク質の免疫学的性質を保持し、結果として、Ｆタンパク質類似体に対して生起された免疫応答は天然のＦタンパク質を認識し、したがってＲＳＶを認識するものである。本明細書に記載するＦタンパク質類似体は免疫原として有用である。
【００８０】
当該技術で広く受け入れられている用語及び指示を参照してＲＳＶ  Ｆタンパク質の構造の詳細を本明細書で提供し、図１Ａで模式的に説明する。Ｆタンパク質ポリペプチドの一次アミノ酸配列を参照して（図１Ａ）、以下の用語を利用してＦタンパク質類似体の構造的特徴を説明する。
【００８１】
用語Ｆ０は、完全長の翻訳されたＦタンパク質前駆体を指す。Ｆ０ポリペプチドは、ｐｅｐ２７と命名された介在ペプチドによって分離されるＦ２ドメインとＦ１ドメインにさらに分割される。成熟の間に、Ｆ０ポリペプチドは、Ｆ２とＦ１と隣接ｐｅｐ２７の間に配置されている２つのフーリン部位でタンパク分解切断を受ける。議論を確実にする目的で、Ｆ２ドメインは、アミノ酸１〜１０９の少なくとも一部及び最大で全部を含み、Ｆ１ドメインの可溶性部分は、Ｆタンパク質のアミノ酸１３７〜５２６の少なくとも一部及び全部までを含む。上で示したように、これらアミノ酸の位置（及び本明細書で指定される後に続くアミノ酸の位置すべて）は、配列番号２の例示的なＦタンパク質前駆体ポリペプチド（Ｆ０）を参照して与えられる。
【００８２】
本来は、ＲＳＶ  Ｆタンパク質は、Ｆ０と命名された単一のポリペプチド前駆体、長さ５７４のアミノ酸として発現される。生体内で、Ｆ０は、小胞体にてオリゴマー化され、２つの保存されたフーリンコンセンサス配列（フーリン切断部位）、ＲＡＲＲ１０９（配列番号１５）とＲＫＲＲ１３６（配列番号１６）にてフーリンプロテアーゼによってタンパク分解処理を受けて、２つのジスルフィド結合断片から成るオリゴマーを生成する。これら断片の小さい方はＦ２と呼ばれ、Ｆ０前駆体のＮ末端部分を起源とする。略記、Ｆ０、Ｆ１及びＦ２は科学文献では一般にＦ０、Ｆ１及びＦ２と示されることが当業者によって認識されるであろう。大きい方のＣ末端Ｆ１断片は、２４アミノ酸の細胞質尾部に隣接する疎水性アミノ酸の配列を介して膜にＦタンパク質を固定する。３つのＦ２−Ｆ１二量体が会合して成熟Ｆタンパク質を形成し、それは、標的細胞膜との接触の際、立体構造変化を受けるきっかけとなる準安定的な前融合型（「融合前」）の立体構造を取る。この立体構造変化は、融合ペプチドとして知られる疎水性配列を露出させ、それは、宿主細胞の膜と会合し、標的細胞膜とのウイルス又は感染細胞の膜の融合を促進する。
【００８３】
Ｆ１断片は、ＨＲＡ及びＨＲＢと命名され、それぞれ融合ペプチド及び膜貫通アンカードメインの近傍に位置する少なくとも２つの７個（heptad）反復ドメインを含有する。融合前立体構造では、Ｆ２−Ｆ１二量体は、球形の頭部と茎構造を形成し、そこでＨＲＡドメインは球形の頭部における断片化（伸長した）立体構造にある。それに対して、ＨＲＢドメインは、頭部領域から伸びる三本鎖のコイルドコイルの茎を形成する。融合前から融合後立体構造への転移の間、ＨＲＡドメインは崩壊し、ＨＲＢドメインの近傍にもたらされ、逆平行の６らせん束を形成する。融合後の状態で、融合ペプチドと膜貫通ドメインは、並置されて膜の融合を円滑にする。
【００８４】
上記で提供された立体構造の記載は、結晶学データの分子モデル化に基づくが、融合前と融合後立体構造の構造的な識別は、結晶学への手段なしでモニターできる。たとえば、その技術的教示の目的で、参照によって本明細書に組み入れられるCalder et al., Virology, 271:122-131 (2000)及びMorton et al., Virology, 311:275-288によって明らかにされたように、電子顕微鏡を用いて融合前と融合後（あるいは前融合型と融合型と称される）の立体構造の間を区別することができる。また、その技術的教示の目的で、参照によって本明細書に組み入れられるConnolly et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:17903-17908 (2006)により記載されたようなリポソーム会合アッセイによって融合前立体構造を融合型（融合後）立体構造から区別することができる。さらに、ＲＳＶ  Ｆタンパク質の融合前形態又は融合形態の１つ又はその他に存在するが、他の形態には存在しない立体構造エピトープを特異的に認識する抗体を用いて融合前の立体構造と融合型の立体構造を区別することができる。そのような立体構造のエピトープは、分子の表面における抗原決定基の優先的な曝露による。或いは、立体構造のエピトープは、直鎖ポリペプチドで隣接しないアミノ酸の並置から生じ得る。
【００８５】
典型的には、Ｆタンパク質類似体（ＰｒｅＦ、ＰｏｓｔＦなど）は、膜貫通ドメイン及び細胞質尾部を欠損し、Ｆタンパク質細胞外ドメイン又は可溶性Ｆタンパク質細胞外ドメインとも称されることがある。
【００８６】
Ｆタンパク質類似体には、Ｆタンパク質の融合前立体構造、すなわち、宿主細胞の膜との融合に先立った成熟集合Ｆタンパク質の立体構造を安定化させるために修飾されているＦタンパク質ポリペプチドが含まれる。これらのＦタンパク質類似体は、明瞭性と単純性の目的で、「ＰｒｅＦ類似体」、「ＰｒｅＦ」又は「ＰｒｅＦ抗原」と呼称され、一般的に可溶性である。本明細書で開示されるＰｒｅＦ類似体は、ヘテロの三量体ドメインの組み入れによって改変されている可溶性Ｆタンパク質類似体が改善された免疫的特徴を示し、生体内で対象に投与された場合安全で高度に防御的であるという予期しない発見にその基礎を置く。例示的なＰｒｅＦ抗原は、ＷＯ２０１０１４９７４５に開示されており、これをＰｒｅＦ抗原の例を提供する目的でその全文を参照により本明細書に組み入れる。
【００８７】
Ｆタンパク質類似体としてはまた、融合後Ｆタンパク質の立体構造を有し、ＰｏｓｔＦ抗原又は融合後抗原とも称されるＦタンパク質ポリペプチドが含まれる。ＰｏｓｔＦ類似体はＷＯ２０１１００８９７４（参照により本明細書に組み入れられる）に記載されている。ＰｏｓｔＦ抗原は、天然の融合後Ｆタンパク質の構造又は機能を改変する少なくとも１つの修飾を含んでいる。
【００８８】
好ましい実施形態において、ＲＳＶ疾患に対して乳児を防御するための母体免疫用の組成物は、細胞接着及び融合の前にウイルス上に見出される融合前立体構造で安定化されたＲＳＶ  ＰｒｅＦ類似体抗原を含む。例示的なＰｒｅＦ類似体の模式図は図１Ｂに提供する。ＲＳＶ  Ｆタンパク質は、本明細書で提供される教示に従って融合前立体構造を安定化させるために修飾できることが当業者によって理解されるであろう。従って、ＰｒｅＦ（並びにＰｏｓｔＦ、及び他の立体構造）類似体の作出を導く原理の理解を円滑にするために、個々の構造的成分は、例示的なＦタンパク質を参照して示し、そのポリヌクレオチド配列及びアミノ酸配列はそれぞれ、配列番号１及び２に提供する。同様に、該当する場合、例示的なＧタンパク質を参照してＧタンパク質抗原が説明されるが、そのポリヌクレオチド配列及びアミノ酸配列はそれぞれ、配列番号３及び４に提供する。
【００８９】
本明細書で開示されるＰｒｅＦ類似体は、発現されたタンパク質の集団にて、発現されたタンパク質の集団の実質的な部分が、前融合型（融合前）の立体構造にあるように（たとえば、構造的な及び／若しくは熱動態的なモデル化によって予測されるように又は上記で開示された方法の１以上によって評価されるように）、ＲＳＶ  Ｆタンパク質の融合前立体構造を安定化させ、維持するように設計される。Ｆタンパク質の融合前立体構造の主な免疫原性エピトープが、細胞環境又は細胞外環境（たとえば、対象への投与に続く生体内）へのＰｒｅＦ類似体の導入に続いて維持されるように、安定化する修飾は、天然（又は合成）のＦタンパク質、たとえば、配列番号２の例示的なＦタンパク質のような天然の（又は合成の）Ｆタンパク質に導入される。
【００９０】
先ず、Ｆ０ポリペプチドの膜アンカードメインを置き換えるためにヘテロ安定化ドメインを構築物のＣ末端に置くことができる。この安定化ドメインは、ＨＲＢの不安定性を代償し、融合前の配座異性体を安定化するのを助けると予測される。例示的な実施形態では、ヘテロ安定化ドメインはタンパク質多量体化ドメインである。そのようなタンパク質多量体化ドメインの特に好都合な一例は、三量体化ドメインである。例示的な三量体化ドメインは、コイルドコイルドメインを有する複数のポリペプチドの三量体への集合を促進するコイルドコイルに折り畳む。三量体化ドメインの例としては、インフルエンザヘマグルチニン、ＳＡＲＳスパイク、ＨＩＶ  ｇｐ４１、修飾ＧＣＮ４、バクテリオファージＴ４フィブリチン及びＡＴＣａｓｅ由来の三量体化ドメインが挙げられる。三量体化ドメインの好都合な一例は、イソロイシンジッパーである。例示的なイソロイシンジッパーは、Harbury et al. Science 262:1401-1407 (1993)によって記載された操作された酵母ＧＣＮ４イソロイシン変異体である。好適なイソロイシンジッパードメインの１つの配列は配列番号１１で表されるが、コイルドコイル安定化ドメインを形成する能力を保持するこの配列の変異体も同様に好適である。代わりの安定化コイルドコイル三量体化ドメインには、ＴＲＡＦ２（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）登録番号Ｑ１２９３３［ｇｉ：２３５０３１０３］；アミノ酸２９９−３４８）；トロンボスポンジン１（登録番号ＰＯ７９９６［ｇｉ：１３５７１７］；アミノ酸２９１−３１４）；Ｍａｔｒｉｌｉｎ−４（登録番号Ｏ９５４６０［ｇｉ：１４５４８１１７］；アミノ酸５９４−６１８；ＣＭＰ（ｍａｔｒｉｌｉｎ−１）（受登録番号ＮＰ＿００２３７０［ｇｉ：４５０５１１１］；アミノ酸４６３−４９６；ＨＳＦ１（登録番号ＡＡＸ４２２１１［ｇｉ：６１３６２３８６］；アミノ酸１６５−１９１；及びＣｕｂｉｌｉｎ（登録番号ＮＰ＿００１０７２［ｇｉ：４５５７５０３］；アミノ酸１０４−１３８が挙げられる。好適な三量体ドメインは、発現されたタンパク質の実質的な部分の三量体への集合を生じることが期待される。たとえば、三量体化ドメインを有する組換えＰｒｅＦポリペプチドの少なくとも５０％が三量体へと集合する（たとえば、ＡＦＦ−ＭＡＬＳによって評価されるように）。通常、発現されたポリペプチドの少なくとも６０％、さらに好都合には少なくとも７０％、最も望ましくは少なくとも約７５％が三量体として存在する。
【００９１】
安定化変異の別の例は、Ｆタンパク質の疎水性ドメインへの親水性アミノ酸の付加又は置換である。典型的には、荷電アミノ酸、例えばリジンを、疎水性領域において、付加する、又は該領域において中性アミノ酸、例えばロイシンと置換する。例えば、Ｆタンパク質細胞外ドメインのＨＲＢコイルドコイルドメイン内において、親水性アミノ酸を付加する、又は該ドメイン内の疎水性若しくは中性アミノ酸と置換する。例えば、荷電アミノ酸残基（リジンなど）で、Ｆタンパク質の５１２位に存在するロイシン（天然Ｆ０ポリペプチドに対して；配列番号６の例示的なＰｒｅＦ類似体ポリペプチドのＬ４８２Ｋ）を置換することができる。あるいは、又はさらに、Ｆタンパク質のＨＲＡドメイン内において、親水性アミノ酸を付加する、又は該ドメイン内の疎水性若しくは中性アミノ酸と置換する。例えば、１以上の荷電アミノ酸（リジンなど）を、ＰｒｅＦ類似体の１０５〜１０６位に又はその近傍（例えば、参照配列番号２の残基１０５に対応するアミノ酸の後ろ、例えばアミノ酸１０５と１０６の間など）に挿入することができる。任意により、ＨＲＡ及びＨＲＢドメインの両方において親水性アミノ酸を付加又は置換してもよい。あるいは、ＰｒｅＦ類似体の全体の立体構造が有害な影響を受けない限り、１以上の疎水性残基を欠失してもよい。
【００９２】
第２に、ｐｅｐ２７を取り除くことができる。融合前状態でのＲＳＶ  Ｆタンパク質の構造モデルの解析は、ｐｅｐ２７が、Ｆ１とＦ２の間で大きな非拘束ループを創ることを示唆している。このループは、融合前状態の安定化に寄与することはなく、フーリンによる天然タンパク質の切断に続いて取り除かれる。したがって、ｐｅｐ２７はまた融合後（又は他の）立体構造類似体を含む実施形態から取り除かれる。
【００９３】
第３に、（天然Ｆ０タンパク質におけるＦ２ドメインとＦ１ドメインの間から）フーリン切断モチーフの一方又は双方を欠失させることができる。１０５〜１０９又は１０６〜１０９位及び１３３〜１３６位に位置するフーリン認識部位の一方又は両方を、フーリン認識部位の１以上のアミノ酸の欠失又は置換により、例えば１以上のアミノ酸の欠失、又は１以上のアミノ酸の置換、又は１以上の置換若しくは欠失の組み合わせにより消去することができ、あるいはプロテアーゼがＰｒｅＦ（又は他のＦタンパク質類似体）ポリペプチドのその構成するドメインへの切断を不可能にするように修飾することによって消去することができる。任意により、介在ｐｅｐ２７ペプチドもまた、例えばリンカーペプチドにより、除去又は置換することができる。さらに、又は場合により、融合ペプチドに近接する非フーリン切断部位（例えば、１１２〜１１３位におけるメタロプロテイナーゼ部位）を除去又は置換してもよい。
【００９４】
したがって、本発明に係る方法及び使用において使用するためのＦタンパク質類似体は、１以上の改変されたフーリン切断部位を有する非切断型の細胞外ドメインで得ることができる。そのようなＦタンパク質類似体ポリペプチドは、それらをアミノ酸１０１〜１６１の位置で切断されずに、例えば１０５〜１０９位及び１３１〜１３６位におけるフーリン切断部位において切断されずに分泌する宿主細胞において組換えにより産生される。特定の実施形態において、置換Ｋ１３１Ｑ、１３１〜１３４位におけるアミノ酸の欠失、又は置換Ｋ１３１Ｑ又はＲ１３３Ｑ又はＲ１３５Ｑ又はＲ１３６Ｑは、１３６／１３７における切断を阻害するために使用される。
【００９５】
例示的な設計において、融合タンパク質はＦ２から切断されず、融合前の配座異性体の球形頭部からの放出を妨げ、すぐ近くの膜への接近性を妨げる。融合ペプチドと膜界面との間の相互作用が融合前状態の不安定性における主な課題であると予測される。融合プロセスの間、融合ペプチドと標的膜の間の相互作用は、球形頭部構造内からの融合ペプチドの曝露を生じ、融合前状態の不安定性を高め、融合後の配座異性体に折り畳む。この立体構造の変化によって膜融合のプロセスが可能になる。フーリン切断部位の一方又は両方の除去は、融合ペプチドのＮ末端部分への膜接近性を妨げ、融合前状態を安定化させると予測される。従って、本明細書で開示される例示的な実施形態では、フーリン切断モチーフの除去は、インタクトな融合ペプチドを含むＰｒｅＦ類似体を生じ、それは、プロセシング及び集合の間又はそれに続いてフーリンによって切断されない。
【００９６】
任意で、たとえば、１以上のアミノ酸の置換によって少なくとも１つの非フーリン切断部位を取り除くことができる。たとえば、実験的証拠は、特定のメタロプロテイナーゼによる切断につながる条件下では、Ｆタンパク質類似体はアミノ酸１１０〜１１８の近傍で切断され得る（たとえば、Ｆタンパク質類似体のアミノ酸１１２と１１３の間；配列番号２の参照Ｆタンパク質ポリペプチドの１４２位のロイシンと１４３位のグリシンの間で切断が生じる）。従って、この領域内での１以上のアミノ酸の修飾は、Ｆタンパク質類似体の切断を低下させ得る。たとえば、１１２位のロイシンは、たとえば、イソロイシン、グルタミン又はトリプトファン（配列番号２０の例示的な実施形態で示されるような）のような異なるアミノ酸で置換することができる。代わりに又はさらに、１１３位のグリシンは、セリン又はアラニンによって置換することができる。さらなる実施形態において、Ｆタンパク質類似体はさらに改変型トリプシン切断部位を含み、Ｆタンパク質類似体は、アミノ酸１０１と１６１との間の位置でトリプシンにより切断されない。
【００９７】
任意で、Ｆタンパク質類似体は、（たとえば、天然のＦタンパク質ポリペプチドに存在する１以上のグリコシル化部位でグリコシル化された分子の比率を上げる又は下げることによって、）グリコシル化のパターン又は状況を改変する１以上の修飾を含むことができる。たとえば、配列番号２の天然Ｆタンパク質ポリペプチドは、２７位、７０位及び５００位（配列番号６の例示的なＰｒｅＦ類似体の２７位、７０位及び４７０位に対応する）でのアミノ酸にてグリコシル化されると予測される。一実施形態では、修飾は、５００位のアミノ酸（Ｎ４７０と命名）でのグリコシル化部位の近傍に導入される。たとえば、５００位（参照配列の、例示的なＰｒｅＦ類似体の４７０位へのアライメントに対応する）のアスパラギンの代わりにグルタミン（Ｑ）のようなアミノ酸を置換することによってグリコシル化部位を取り除くことができる。好都合には、このグリコシル化部位でグリコシル化効率を高める修飾が導入される。好適な修飾の例には、５００〜５０２位にて以下のアミノ酸配列：ＮＧＳ；ＮＫＳ；ＮＧＴ；ＮＫＴが挙げられる。興味深いことに、高いグリコシル化を生じるこのグリコシル化部位の修飾はまた実質的に高いＰｒｅＦ産生を生じることが見出された。従って、特定の実施形態では、ＰｒｅＦ類似体は、参照ＰｒｅＦ配列（配列番号２）のアミノ酸５００に対応する位置で、たとえば、配列番号６によって例示されるＰｒｅＦ類似体の４７０位にて修飾されたグリコシル化部位を有する。好適な修飾には、参照Ｆタンパク質ポリペプチド配列の５００〜５０２位に対応するアミノ酸での、配列：ＮＧＳ；ＮＫＳ；ＮＧＴ；ＮＫＴが挙げられる。「ＮＧＴ」の修飾を含む例示的な実施形態のアミノ酸は、配列番号１８にて提供される。当業者は、対応するＮＧＳ、ＮＫＳ及びＮＫＴについての同様の修飾を容易に決定することができる。そのような修飾は、本明細書で開示される安定化変異（たとえば、イソロイシンジッパーのようなヘテロコイルドコイル、疎水性領域におけるドメイン及び／又は修飾、及び／又はｐｅｐ２７の除去、及び／又はフーリン切断部位の除去、及び／又は非フーリン切断部位の除去、及び／又は非フーリン切断部位の除去）のいずれかと好都合に組み合わせられる。たとえば、特定の一実施形態では、Ｆタンパク質類似体は非フーリン切断部位を消去させる置換とグリコシル化を高める修飾を含む。例示的なＰｒｅＦ類似体配列は、配列番号２２（例示的な実施形態が、「ＮＧＴ」の修飾と１１２位でのロイシンに代わるグルタミンの置換を含む）にて提供される。例えば、特定の例示的な実施形態において、グリコシル化修飾ＰｒｅＦ類似体は、ａ）配列番号２２を含む又はこれからなるポリペプチド；ｂ）配列番号２１により又は配列番号２１に対して実質的にその全長にわたってストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチド；ｃ）配列番号２２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される。
【００９８】
さらに一般的には、本明細書で開示される安定化の修飾、たとえば、好ましくは可溶性Ｆタンパク質類似体のＣ末端に位置する、たとえば、コイルドコイル（たとえば、イソロイシンジッパードメイン）のような異種の安定化ドメインの付加；疎水性ＨＲＢドメインにおけるロイシンからリジンへのような残基の修飾；ｐｅｐ２７の除去；フーリン切断モチーフの一方又は双方の除去；非フーリン切断部位、例えばトリプシン切断部位などの除去；並びに／あるいはグリコシル化部位の修飾のいずれか１つを、ほかの安定化修飾の１以上との組み合わせにて（又は任意の所望の組み合わせで全部まで）採用することができる。たとえば、ヘテロコイルドコイル（又はそのほかの異種安定化ドメイン）を単独で利用することができ、又は疎水性領域の修飾及び／又はｐｅｐ２７の除去及び／又はフーリン切断部位の除去及び／又は非フーリン切断部位の除去及び／又は非フーリン切断部位の除去のいずれかと組み合わせて利用することができる。特定の特殊な実施形態では、Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ類似体は、Ｃ末端のコイルドコイル（イソロイシンジッパー）ドメイン、ＨＲＢ疎水性ドメインにおける安定化置換、及びフーリン切断部位の一方又は双方の除去を含む。そのような実施形態は、フーリン切断によって除去されないインタクトな融合ペプチドを含む。特定の一実施形態では、Ｆタンパク質類似体はまた５００位のアミノ酸にて修飾されたグリコシル化部位を含む。
【００９９】
本明細書に記載する方法及び使用のためのＦタンパク質類似体は、Ｆタンパク質類似体（例えばＰｒｅＦ類似体、ＰｏｓｔＦ類似体、又は非切断型Ｆタンパク質細胞外ドメインなど）を含む生物学的材料を準備し、その類似体ポリペプチドの単量体若しくは多量体（例えば三量体）又はその混合物を生物学的材料から精製することを含む方法によって製造することができる。
【０１００】
Ｆタンパク質類似体は、ポリペプチド単量体若しくは三量体、又は平衡して存在しうる単量体と三量体の混合物の形態で存在することができる。単一形態の存在は、より予測可能な免疫応答及びより良好な安定性などの利点をもたらすだろう。
【０１０１】
したがって、一実施形態において、本発明において使用するためのＦタンパク質類似体は、単量体若しくは三量体又は単量体と三量体の混合物の形態で、実質的に脂質及びリポ多糖を含まない、精製されたＦタンパク質類似体である。
【０１０２】
Ｆタンパク質ポリペプチドは、ＲＳＶのＡ株若しくはＲＳＶのＢ株又はその変異株（上記と同義）のＦタンパク質から選択することができる。特定の例示的な実施形態では、Ｆタンパク質ポリペプチドは、配列番号２で表されるＦタンパク質である。本開示の理解を円滑にするために、アミノ酸残基の位置はすべて、株にかかわりなく、例示的なＦタンパク質のアミノ酸の位置（すなわち、対応するアミノ酸残基の位置）に関して与えられる。ほかのＲＳＶのＡ株又はＢ株の匹敵するアミノ酸の位置は、容易に利用でき、周知のアライメントアルゴリズム（たとえば、ＢＬＡＳＴ、たとえば、デフォルトパラメータを用いて）を用いて例示的な配列と共に選択されたＲＳＶ株のアミノ酸配列をアライメントすることによって当業者によって容易に決定することができる。異なるＲＳＶ株に由来するＦタンパク質ポリペプチドの多数の追加の例は、ＷＯ２００８／１１４１４９（ＲＳＶ  Ｆ及びＧタンパク質配列の追加の例を提供する目的で参照によって本明細書に組み入れられる）に開示されている。別の変異体は、遺伝的ドリフトによって生じることができ、又は部位特異的若しくは無作為の突然変異誘発を用いて人為的に作出することができ、又は２以上の既存の変異体の組換えによって作出することができる。そのような別の変異体も本明細書で開示される免疫方法の文脈で用いられるＦタンパク質類似体の文脈で好適である。
【０１０３】
本明細書に記載する方法及び使用に有用な別の実施形態において、組換えＲＳＶタンパク質は、ＷＯ２０１１００８９７４（別のＦタンパク質類似体を説明する目的で参照により本明細書に組み入れられる）に記載されるようなＦタンパク質類似体である。例えば、ＷＯ２０１１００８９７４の図１及びＷＯ２０１１００８９７４の実施例１に記載されるＦタンパク質類似体を参照されたい。
【０１０４】
Ｆタンパク質のＦ２及びＦ１ドメインの選択では、当業者は、Ｆ２及び／又はＦ１ドメイン全体を厳格に含む必要はないことを認識するであろう。通常、Ｆ２ドメインの部分配列（又は断片）を選択する場合、立体構造の考慮が重要である。従って、Ｆ２ドメインは通常、ポリペプチドの集合と安定性を促進するＦ２ドメインの部分を含む。特定の例示的な変異体では、Ｆ２ドメインはアミノ酸２６〜１０５を含む。しかしながら、長さのわずかな修飾（１以上のアミノ酸の付加又は欠失による）を有する変異体も可能である。
【０１０５】
通常、Ｆ１ドメインの少なくとも部分配列（又は断片）は、Ｆタンパク質の免疫優勢エピトープを含む安定な立体構造を維持するように選択され、設計される。たとえば、アミノ酸２６２〜２７５（パリビズマブ中和）及び４２３〜４３６（Ｃｅｎｔｏｃｏｒのｃｈ１０１Ｆ  ＭＡｂ）の領域で中和抗体によって認識されるエピトープを含むＦ１ポリペプチドドメインの部分配列を選択することが一般に望ましい。さらに、たとえば、アミノ酸３２８〜３５５の領域でＴ細胞エピトープを含むことが望ましい。最も一般的には、Ｆ１サブユニット（たとえば、貫通アミノ酸２６２〜４３６）の単一の連続部分として、しかし、エピトープは安定な立体構造を形成する不連続な要素としてこれらの免疫優勢エピトープを含む合成配列で保持され得る。従って、Ｆ１ドメインポリペプチドは、ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドの少なくともおよそアミノ酸２６２〜４３６を含む。本明細書において提供する非限定的な一例では、Ｆ１ドメインは、天然Ｆタンパク質ポリペプチドのアミノ酸１３７〜５１６を含む。当業者は、追加のさらに短い部分配列を熟練者の裁量で使用できることを認識するであろう。
【０１０６】
立体構造の考慮に加えて、Ｆ２又はＦ１ドメインの部分配列を選択する場合（例えば、特定のＰｒｅＦ−Ｇ類似体のＧタンパク質成分に関して以下で議論するように）、追加の免疫原性エピトープの包含に基づいて配列（たとえば、変異体、部分配列など）を選択することが望ましいこともある。たとえば、当該技術で既知の、たとえば、神経網又は多項式決定のようなアンカーモチーフ又はそのほかの方法を用いて、追加のＴ細胞エピトープを特定することができ、たとえば、ＲＡＮＫＰＥＰ（ウエブサイト：mif.dfci.harvard.edu/Tools/rankpep.htmlで利用可能）；ＰｒｏＰｒｅｄＩ（ウエブサイト：imtech.res.in/raghava/propredI/index.htmlで利用可能）；Ｂｉｍａｓ（ウエブサイト：www-bimas.dcrt.nih.gov/molbi/hla_bind/index.htmlで利用可能）；及びＳＹＦＰＥＩＴＨ（ウエブサイト：syfpeithi.bmi-heidelberg.com/scripts/MHCServer.dll/home.htmで利用可能）を参照のこと。たとえば、アルゴリズムを用いてペプチドの「結合閾値」を決定し、特定の親和性で結合するＭＨＣ又は抗体の高い確率をそれらに与えるスコアを持つものを選択する。アルゴリズムは、特定の位置での特定のアミノ酸のＭＨＣ結合に対する効果、特定の位置での特定のアミノ酸の抗体結合に対する効果、又はモチーフを含有するペプチドの特定の置換の結合に対する効果のいずれかに基づく。免疫原性ペプチドの文脈の範囲内で、「保存された残基」は、ペプチドの特定の位置で無作為な分布で予想されるものより有意に高い頻度で出現するものである。アンカー残基はＭＨＣ分子との接触点を提供する保存された残基である。そのような予測方法で特定されるＴ細胞エピトープは、特定のＭＨＣタンパク質への結合を測定することによって、及びＭＨＣタンパク質の背景で提示される場合にはＴ細胞を刺激するその能力によって確認することができる。
【０１０７】
好都合には、Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ類似体（以下で議論されるＰｒｅＦ−Ｇ類似体など）、Ｐｏｓｔ Ｆ類似体、又は他の立体構造類似体は、発現系に対応するシグナルペプチド、たとえば、哺乳類又はウイルスのシグナルペプチド、たとえば、ＲＳＶ  Ｆ０の天然シグナル配列（たとえば、配列番号２のアミノ酸１〜２５又は配列番号６のアミノ酸１〜２５）を含む。通常、シグナルペプチドは、組換え発現に選択される細胞に適合するように選択される。たとえば、バキュロウイルスのシグナルペプチド又はメリチンシグナルペプチドのようなシグナルペプチドは、昆虫細胞における発現のために置換され得る。植物の発現系が好ましい場合には、好適な植物シグナルペプチドが当該技術で既知である。多数の例示的なシグナルペプチドが当該技術で既知であり（たとえば、多数のヒトのシグナルペプチドを記載しているZhang & Henzel, Protein Sci., 13:2819-2824（2004)を参照）、古細菌、原核生物及び真核生物のシグナル配列を含むＳＰｄｂシグナルペプチドデータベース（http://proline.bic.nus.edu.sg/spdb/）にてカタログ化されている。任意で、先行の抗原のいずれかが追加の配列又はタグ、例えば精製を促進するＨｉｓタグなどを含んでもよい。
【０１０８】
任意で、Ｆタンパク質類似体（例えば、ＰｒｅＦ若しくはＰｏｓｔＦ又は他の類似体）は追加の免疫原性成分を含むことができる。特定の特に好都合な実施形態では、Ｆタンパク質類似体はＲＳＶ  Ｇタンパク質の抗原性成分を含む。ＰｒｅＦ及びＧの成分を有する例示的なキメラタンパク質には、以下のＰｒｅＦ＿Ｖ１（配列番号７及び８で表される）及びＰｒｅＦ＿Ｖ２（配列番号９及び１０で表される）が挙げられる。
【０１０９】
ＰｒｅＦ−Ｇ類似体では、Ｇタンパク質の抗原性部分（たとえば、アミノ酸残基１４９〜２２９のような切断型Ｇタンパク質）を構築物のＣ末端に付加する。通常、Ｇタンパク質成分は、自由度のあるリンカー配列を介してＦタンパク質成分に連結される。たとえば、例示的なＰｒｅＦ＿Ｖ１の設計では、Ｇタンパク質は、-GGSGGSGGS-リンカー（配列番号１４）によってＰｒｅＦ成分に連結される。ＰｒｅＦ＿Ｖ２の設計では、リンカーはさらに短い。-GGSGGSGGS-リンカー（配列番号１４）の代わりに、ＰｒｅＦ＿Ｖ２は２つのグリシン（−ＧＧ−）をリンカーに有する。
【０１１０】
存在する場合、Ｇタンパク質ポリペプチドドメインは、ＲＳＶのＡ株又はＲＳＶのＢ株から選択されるＧタンパク質のすべて又は一部を含むことができる。特定の例示的な実施形態では、Ｇタンパク質は、配列番号４で表されるＧタンパク質である（又はそれと９５％同一である）。好適なＧタンパク質配列の別の例は、ＷＯ２００８／１１４１４９（参照によって本明細書に組み入れられる）に見出すことができる。
【０１１１】
Ｇタンパク質ポリペプチド成分は、例えばアミノ酸１８３〜１９７の領域で免疫優勢なＴ細胞エピトープを保持するＧタンパク質の少なくとも部分配列（又は断片）、たとえば、天然のＧタンパク質のアミノ酸１５１〜２２９、１４９〜２２９又は１２８〜２２９を含むＧタンパク質の断片を含むように選択される。例示的な一実施形態では、Ｇタンパク質ポリペプチドは、天然のＧタンパク質ポリペプチドのアミノ酸残基１４９〜２２９の全部又は一部を含む、天然のＧタンパク質ポリペプチドの部分配列（又は断片）である。当業者は、選択される部分が、Ｆタンパク質類似体の発現、折り畳み又はプロセシングを構造的に不安定化又は破壊しない限り、Ｇタンパク質のさらに長い又は短い部分を使用できることを容易に十分に理解するであろう。任意で、ホルマリン不活化ＲＳＶワクチンと関連する好酸球増多を特徴とする増強された疾患を低減する及び／又は防ぐことが以前示された１９１位にて、Ｇタンパク質ドメインはアミノ酸置換を含む。天然に存在する及び置換された（Ｎ１９１Ａ）Ｇタンパク質の特性の完全な記載は、例えば参照によって本明細書に組み入れられる米国特許公開第２００５／００４２２３０に見出すことができる。
【０１１２】
あるいは、Ｆタンパク質類似体は、Ｇタンパク質成分を含む第２のポリペプチドをまた含有する免疫原性組成物中に配合されてもよい。Ｇタンパク質成分は典型的に、Ｇタンパク質の少なくともアミノ酸１４９〜２２９を含む。Ｇタンパク質のより小さい部分を使用することもできるが、そのような断片には、最小限でも、アミノ酸１８４〜１９８の免疫優勢エピトープが含まれる必要がある。あるいは、Ｇタンパク質は、Ｇタンパク質のより大きな部分、例えばアミノ酸１２８〜２２９又は１３０〜２３０、場合によりさらに大きいタンパク質の要素として、例えば全長Ｇタンパク質又はキメラポリペプチドを含んでもよい。
【０１１３】
たとえば、天然に存在する株に対応する配列の選択に関して、１以上のドメインが、たとえば、Ａ２若しくはＬｏｎｇと命名された一般の研究室単離株、又はそのほかの天然に存在する株若しくは単離株のようなＲＳＶのＡ株又はＢ株に配列では対応し得る。ＲＳＶの多数の株が現在までに単離されている。ＧｅｎＢａｎｋ及び／又はＥＭＢＬアクセッション番号により示される例示的な株はＷＯ２００８１１４１４９（本明細書に開示されるＦタンパク質類似体に使用するのに好適なＲＳＶ  Ｆの核酸及びポリペプチド配列を開示する目的で参照により本明細書に組み入れられる）に見出すことができる。ＲＳＶの別の株が単離される可能性があり、ＲＳＶの属に包含される。同様に、ＲＳＶの属は、天然に存在するもの（例えば以前に又はその後同定された株）から遺伝子ドリフト及び／又は組換えにより生じた変異株を包含する。
【０１１４】
そのような天然に存在する及び単離される変異体に加えて、前述の配列と配列類似性を共有する操作された変異体もＦタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ、ＰｏｓｔＦ又は他の類似体（ＰｒｅＦ−Ｇを含む）類似体の文脈で採用され得る。ポリペプチド（及び一般にヌクレオチド配列）に関してＦタンパク質類似体ポリペプチド（及び以下に記載されるポリヌクレオチド配列）間の類似性は、配列同一性を参照して配列間での類似性という点で表現され得る。配列同一性は、同一性（又は類似性）比率という点で測定されることが多く；比率が高ければ高いほど、２つの配列の一次構造はより類似する。一般に、２つのアミノ酸（又はポリヌクレオチド）の配列の一次構造が似ていれば似ているほど、折り畳み及び集合の結果生じる高次構造も類似する。Ｆタンパク質、ポリペプチド（及びポリヌクレオチド）配列の変異体は通常、１又は少数のアミノ酸の欠失、付加又は置換を有するが、それでもなお、非常に高い比率でアミノ酸、一般にはそのポリヌクレオチド配列を共有する。さらに重要なことに、変異体は、本明細書で開示される参照配列の構造的な特性、従って立体構造の特性を保持する。
【０１１５】
配列同一性を決定する方法は当該技術で周知であり、Ｆタンパク質類似体ポリペプチド、並びにそれをコードする核酸に適用可能である（たとえば、下記のように）。種々のプログラム及びアライメントアルゴリズムは、Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482, 1981; Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443, 1970; Higgins and Sharp, Gene 73:237, 1988; Higgins and Sharp, CABIOS 5:151, 1989; Corpet et al., Nucleic Acids Research 16:10881, 1988; 及びPearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444, 1988に記載されている。Altschul et al., Nature Genet.  6:119, 1994は、配列アライメント法と相同性算出の詳細な考察を提示している。ＮＣＢＩベーシックローカルアライメントサーチツール（ＢＬＡＳＴ）（Altschul et al., J.  Mol.  Biol.  215:403, 1990）は、配列解析プログラム、ｂｌａｓｔｐ、ｂｌａｓｔｎ、ｂｌａｓｔｘ、ｔｂｌａｓｔｎ及びｔｂｌａｓｔｘと関連して使用するために、全米バイオテクノロジー情報センター（ＭＤ州、ベセスダ、ＮＣＢＩ）を含む幾つかの供給源、及びインターネットにて利用可能である。このプログラムを用いて配列同一性を決定する方法の記載はインターネットのＮＣＢＩウエブサイトで利用可能である。
【０１１６】
一部の例では、Ｆタンパク質類似体は、それが由来する天然に存在する株のアミノ酸配列に比べて１以上のアミノ酸修飾を有する（たとえば、前述の安定化修飾に加えて）。そのような差異は、１以上のアミノ酸の付加、欠失又は置換であり得る。変異体は通常、アミノ酸残基の約１％又は２％又は５％又は６％又は１０％又は１５％又は２０％以下が異なる。たとえば、変異体Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ若しくはＰｏｓｔＦ又は他の類似体ポリペプチド配列は、参照Ｆタンパク質配列（例えば、配列番号６、８、１０，１８、２０及び／又は２２のＰｒｅＦ類似体ポリペプチド配列）の関連する部分と比べて、１又は２又は５までの又は約１０までの、又は約１５までの、又は約５０までの又は約１００までのアミノ酸の差異を含み得る。従って、ＲＳＶ  Ｆ又はＧタンパク質又はＦタンパク質類似体の文脈では、変異体は、通常、参照タンパク質、例えばＰｒｅＦ類似体の場合には配列番号２、４、６、８、１０，１８、２０及び／又は２２に示される参照タンパク質との、あるいは本明細書で開示される例示的なＰｒｅＦ類似体のいずれかとの、少なくとも８０％、又は８５％、さらに一般的には、少なくとも約９０％以上、たとえば、９５％又はさらに９８％又は９９％の配列同一性を共有する。本開示の特徴として含まれる別の変異体には、ＷＯ２００８／１１４１４９で開示された天然に存在する変異体から選択されるヌクレオチド配列又はアミノ酸配列の全部又は一部を含むＦタンパク質類似体である。別の変異体は、遺伝的ドリフトによって生じることができ、又は部位特異的若しくは無作為の突然変異誘発を用いて人為的に作出することができ、又は２以上の既存の変異体の組換えによって作出することができる。そのような別の変異体も本明細書で開示されるＦタンパク質類似体抗原の文脈で好適である。たとえば、修飾は、得られるＦタンパク質類似体の立体構造又は免疫原性エピトープを変化させない１以上のアミノ酸（たとえば、２つのアミノ酸、３つのアミノ酸、４つのアミノ酸、５つのアミノ酸、１０までのアミノ酸、又はそれ以上）の置換であり得る。
【０１１７】
代わりに又はさらに、修飾は、１以上のアミノ酸の欠失及び／又は１以上のアミノ酸の付加を含むことができる。実際、所望であれば、１以上のポリペプチドドメインは、単一株に一致しないが、複数株、又はさらにＲＳＶのウイルスポリペプチドの複数の株をアライメントすることによって推定されるコンセンサス配列に由来する成分の部分配列を含む合成ポリペプチドであり得る。特定の実施形態では、その後のプロセシング又は精製を円滑にするタグを構成するアミノ酸配列の付加によって１以上のポリペプチドドメインが修飾される。そのようなタグは抗原性タグ、又はエピトープタグ、酵素タグ又はポリヒスチジンタグであり得る。通常、タグは、たとえば、抗原又は融合タンパク質のＣ末端又はＮ末端のようなタンパク質の一方又は他方の末端に位置する。
【０１１８】
本明細書に開示されるＦタンパク質類似体（また可能であればＧ抗原も）は、組換えタンパク質の発現及び精製のための十分に確立された手順を用いて製造することができる。
【０１１９】
簡単に説明すると、Ｆタンパク質類似体をコードする組換え核酸を、ベクター及び宿主細胞の選択に応じて、種々の周知の手法、例えばエレクトロポレーション、リポソーム媒介トランスフェクション、リン酸カルシウム沈降、感染、トランスフェクションなどのいずれかにより宿主細胞に導入する。好ましい宿主細胞としては、原核（すなわち細菌）宿主細胞、例えば大腸菌、並びに多数の真核宿主細胞、例えば真菌（例として酵母、例えばサッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）及びピヒア・パストリス（Picchia pastoris））細胞、昆虫細胞、植物細胞、及び哺乳動物細胞（例えば３Ｔ３、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３など）、又はＢｏｗｅｓメラノーマ細胞が挙げられる。選択した宿主細胞における発現後、組換えＦタンパク質類似体を当技術分野で周知の手法により単離及び／又は精製することができる。例示的な発現方法、並びにＰｒｅＦ類似体（ＰｒｅＦ−Ｇ類似体など）をコードする核酸は、ＷＯ２０１０１４９７４５（Ｆタンパク質類似体の発現及び精製のために好適な方法を提供する目的で本明細書に組み入れられる）に提供されている。
【０１２０】
（百日咳菌（パータシス）抗原）
本明細書中で開示されるワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットの文脈において、少なくとも１種の百日咳菌抗原は、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）、３型線毛（ＦＩＭ３）からなる群より選択される少なくとも１種の無細胞パータシス（Ｐａ）タンパク質である。このような無細胞抗原は、当該分野で周知である。この抗原は、部分的に若しくは高度に、精製される。
【０１２１】
ＰＴは、種々の方法で、例えば、（例えば、参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ９１／１２０２０において記載されるとおり）百日咳菌の培養からの毒素の精製とその後の化学的無毒化によって、又は代わりに、（例えば、ＰＴの遺伝的改変を企図した開示の目的で参照によって本明細書に組み込まれるＥＰ３０６３１８、ＥＰ３２２５３３、ＥＰ３９６９６４、ＥＰ３２２１１５、ＥＰ２７５６８９において記載されるとおり）ＰＴの遺伝的無毒化類似体の精製によって、産生され得る。特定の実施形態において、ＰＴは、遺伝的に無毒化される。より詳細には、遺伝的無毒化ＰＴは、以下の置換のうち１つ又は両方を有する：Ｒ９Ｋ及びＥ１２９Ｇ。
【０１２２】
パータシス抗原性成分は、無細胞パータシス抗原であるＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、ＦＩＭ２及びＦＩＭ３の任意の１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つをこれらの組み合わせを含めて、含み得る。より詳細には、この組み合わせとしては、具体的に、以下が挙げられ得る（限定はしない）：ＰＴ及びＦＨＡ；ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ；ＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ及びＦＩＭ２；ＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ及びＦＩＭ３；並びにＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、ＦＩＭ２及びＦＩＭ３。
【０１２３】
特定の実施形態において、ＰＴは、２〜５０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ２．５若しくは３．２μｇ）、５〜４０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ５若しくは８μｇ）又は１０〜３０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ２０若しくは２５μｇ）の量で使用される。
【０１２４】
特定の実施形態において、ＦＨＡは、２〜５０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ２．５若しくは３４．４μｇ）、５〜４０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ５若しくは８μｇ）又は１０〜３０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ２０若しくは２５μｇ）の量で使用される。
【０１２５】
特定の実施形態において、ＰＲＮは、０．５〜２０μｇ、０．８〜１５μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ０．８若しくは１．６μｇ）又は２〜１０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ２．５若しくは３若しくは８μｇ）の量で使用される。
【０１２６】
特定の実施形態において、ＦＩＭ２及び／又はＦＩＭ３は、合わせて０．５〜１０μｇ（例えば、１用量あたり正確に又はおよそ０．８若しくは５μｇ）の量で使用される。
【０１２７】
特定の実施形態において、パータシス抗原性成分は、ＰＴ及びＦＨＡを１用量あたり等量で、例えば、１用量あたり正確に又はおよそ８若しくは２０若しくは２５μｇのいずれかで、含む。あるいは、パータシス抗原性成分は、ＰＴ及びＦＨＡを、それぞれ、正確に若しくはおよそ５及び２．５μｇ、又は正確に若しくはおよそ３．２及び３４．４μｇ含む。さらなる実施形態において、免疫原性組成物は、ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮを、それぞれ、１用量あたり正確に又はおよその量で、２５：５：８μｇ；８：８：２．５μｇ；２０：２０：３μｇ；２．５：５：３μｇ；５：２．５：２．５μｇ；又は３．２：３４．４：１．６μｇ含む。
【０１２８】
あるいは、又は上で議論した無細胞パータシス抗原のいずれかと組み合わせて、パータシス抗原性成分は、（参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２００５／０３２５８４及びMarr et al (2008), Vaccine, 26(34):4306-4311に記載されるとおり）百日咳菌「ＢｒｋＡ」抗原に由来する抗原を含み得る。
【０１２９】
さらなる実施形態において、少なくとも１種のＰａ抗原は、参照によって本明細書に組み込まれるRoberts et al (2008), Vaccine, 26:4639-4646に開示されるとおり、百日咳菌から得られる外膜小胞（ＯＭＶ）の形態を取り得る。詳細には、このようなＯＭＶは、リピドＡ修飾酵素、例えば３−Ｏ−デアシラーゼ、例えばＰａｇＬ（参照によって本明細書に組み込まれるAsensio et al (2011), Vaccine, 29:1649-1656）を発現する組換え百日咳菌株に由来し得る。
【０１３０】
別の実施形態において、少なくとも１種の百日咳菌抗原は、全細胞パータシス（Ｐｗ）ワクチンであり、このようなＰｗワクチンは、当該分野で周知である。Ｐｗは、水銀非含有方法を含む幾つかの公知の方法によって不活化され得る。このような方法としては、熱（例えば、５５〜６５℃若しくは５６〜６０℃、５〜６０分間若しくは１０〜３０分間にわたる、例えば、６０℃、３０分間にわたる）、ホルムアルデヒド（例えば、０．１％、３７℃にて、２４時間）、グルタルアルデヒド（例えば、０．０５％、室温にて１０分間）、アセトン−Ｉ（例えば、室温にて３回処理）若しくはアセトン−ＩＩ（例えば、室温にて３回処理及び３７℃にて４回目の処理）の不活化が挙げられる（例えば、Gupta et al., 1987, J. Biol. Stand. 15:87; Gupta et al., 1986, Vaccine, 4:185を参照されたい）。本発明の免疫原性組成物における使用に適した殺傷した全細胞百日咳菌（Ｐｗ）を調製する方法は、ＷＯ９３／２４１４８において開示される。
【０１３１】
より詳細には、本発明の免疫原性組成物は、５〜５０、７〜４０、９〜３５、１１〜３０、１３〜２５、１５〜２１又はおよそ若しくは正確に２０の１用量あたりの量（国際不透明単位、「ＩＯＵ」で）にてＰｗを含む。
【０１３２】
本発明のＰｗ含有免疫原性組成物の特定の実施形態において、この組成物のＰｗワクチン成分は、低減した反応原性（reactogenicity）を惹起する。Ｐｗワクチンの反応原性（疼痛、熱、腫れなど）は、主に、細菌外膜由来の内毒素であるリポオリゴ糖（「ＬＯＳ」、百日咳菌に関してリポ多糖（「ＬＰＳ」）の同義語；「ＬＯＳ」は、本明細書中で使用される）によって起こる。ＬＯＳのリピドＡ部分が主に関与する。（例えば上で議論した不活化手順によって産生されるような「伝統的な」Ｐｗワクチンに対して）より反応原性の低いＰｗ含有ワクチンを産生するために、内毒素は、遺伝的に若しくは化学的に無毒化されるか、及び／又は外膜から抽出される。しかし、ＬＯＳは免疫系の強力なアジュバントであるので、これは、Ｐｗワクチンの免疫原性を実質的に損なわない方法で行われなければならない。
【０１３３】
１つの実施形態において、本発明の免疫原性組成物の少なくとも１種の百日咳菌抗原は、ＬＯＳが遺伝的に若しくは化学的に無毒化されている及び／又は抽出されている「低反応原性」Ｐｗワクチンを含む。例えば、Ｐｗワクチンは、ＬＯＳの化学的抽出を開示する目的で参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２００６／００２５０２及びDias et al (2012), Human Vaccines & Immunotherapeutics, 9(2):339-348で開示されるように、ブタノールなどの有機溶媒及び水の混合物による処理を受け得る。
【０１３４】
別の実施形態において、「低反応原性」は、低毒性ＬＯＳを産生するように遺伝的に操作された百日咳菌株からＰｗワクチンを得ることによって、達成される。ＷＯ２００６／０６５１３９（参照によって本明細書に組み込まれる）は、遺伝的３−Ｏ−脱アシル化及び百日咳菌ＬＯＳの無毒化により、少なくとも部分的な３−Ｏ−脱アシル化ＬＯＳを含む株を得る。本発明の免疫原性組成物の少なくとも１種の百日咳菌抗原は、従って、デ−Ｏ−アシラーゼなどのリピドＡ修飾酵素を発現するように操作されている百日咳菌の株に由来するＰｗワクチンであり得る。詳細には、このような株は、全て参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２００６／０６５１３９、並びにGeurtsen et al (2006), Infection and Immunity, 74(10):5574-5585及びGeurtsen et al (2007), Microbes and Infection, 9:1096-1103において開示されるとおり、ＰａｇＬを発現し得る。代わりに、又はさらに、Ｐｗワクチンが由来する株は、天然に、又は操作の結果として、リピドＡリン酸基をグルコサミンで修飾する能力を欠き、Ｃ−３’位においてＣ１０−ＯＨ若しくはＣ１２−ＯＨで置換されたリピドＡジグルコサミン骨格を有するか、及び／又は末端へプトースを欠く分子ＬＯＳ種を発現する。このような株、１８〜３２３は、Marr et al (2010), The Journal of Infectious Diseases, 202(12):1897-1906（参照によって本明細書に組み込まれる）において開示される。
【０１３５】
（免疫原性組成物）
発現及び精製の後、Ｆタンパク質類似体は、典型的に、妊婦への投与のための免疫原性組成物中に、所望の場合は出生後の乳児への投与のための製剤中に配合される。このような製剤は、典型的に、薬学的に許容される担体若しくは賦形剤を含む。必要に応じて、別のＲＳＶ抗原（例えば、ＷＯ２０１０１４９７４５に記載されるとおりのＧタンパク質抗原）、又はヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）抗原、ジフテリア抗原、破傷風抗原若しくはインフルエンザ抗原などのさらなる抗原もまた、この製剤中に含まれ得る。ＷＯ２０１０１４９７４３は、ＲＳＶ抗原と併用され得るｈＭＰＶ抗原の実施例を記載し、これは、ｈＭＰＶ抗原の例を提供する目的で、本明細書中に参照として組み込まれる。Gall S.A. et al. Maternal Immunization with tetanus-diphtheria-pertussis vaccine: effect on maternal and neonatal serum antibody levels. Am J Obstet Gynecol 2011:204は、パータシス抗原であるパータクチン（ＰＲＮ）、パータシス毒素（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）及び２／３型線毛（ＦＩＭ）を含むジフテリア−破傷風−パータシス（Ｔｄａｐ）ワクチンによる、妊婦の免疫を記載し、パータシス抗原を用いる母体免疫におけるさらなる詳細を提供する目的で参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１３６】
薬学的に許容される担体及び賦形剤は当業者に周知であり、当業者によって選択され得る。たとえば、担体又は賦形剤は好都合には緩衝液を含むことができる。任意で、担体又は賦形剤は、溶解性及び／又は安定性を安定化させる少なくとも１つの成分も含有する。可溶化剤／安定剤の例には界面活性剤、たとえば、ラウレルサルコシン及び／又はツイーンが挙げられる。代替の可溶化剤／安定剤には、アルギニン及びガラス形成ポリオール（たとえば、スクロース、トレハロース等）が挙げられる。多数の薬学的に許容される担体及び／又は薬学的に許容される賦形剤が当該技術で既知であり、たとえば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, E.  W.  Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 5th Edition (975)に記載されている。
【０１３７】
従って、好適な賦形剤及び担体が当業者によって選択され、選択された投与経路によって対象に送達するために好適な製剤を製造することができる。
【０１３８】
好適な賦形剤には、限定されないが、グリセロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ソルビトール、トレハロース、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム塩、Ｌ−プロリン、非界面活性剤スルホベタイン、塩酸グアニジン、尿素、酸化トリメチルアミン、ＫＣｌ、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｍｎ２＋、Ｚｎ２＋及びそのほかの二価のカチオン関連塩、ジチオスレイトール、ジチオエリトール、及びβ−メルカプトエタノールが挙げられる。そのほかの賦形剤は、界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ８０、Ｔｗｅｅｎ２０、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、ＮＰ−４０、ＥｍｐｈｉｇｅｎＢＢ、オクチルグルコシド、ラウロイルマルトシド、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ（両性洗浄剤）３−０８、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−０、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−２、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−４、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−６、ＣＨＡＰＳ、デオキシコール酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、臭化セチルトリメチルアンモニウムを含む）であり得る。
【０１３９】
本明細書に記載するワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットのためのＦタンパク質類似体及び／又はパータシス抗原を含む組成物において、該組成物は、強い血清（例えば中和）抗体応答を誘導するように設計される。母体は、（例えば自然感染又は免疫によって）ＲＳＶ及びパータシスにすでに暴露されており、従って、既存のプライミング応答を有することとなり、乳児のための防御を提供するという目標は、高効率に胎盤を通過することができる抗体サブクラス（ＩｇＧ１など）の観点から、このプライミングされた応答をできる限り効果的に追加刺激し、乳児に対する防御をもたらすことである。これは、アジュバントを含まずに、又は鉱物塩（アルミニウム塩若しくはカルシウム塩など、特に水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム若しくはリン酸カルシウム）のみを含むアジュバントを含むことによって達成することができる。あるいは、これは、油と水のエマルジョンアジュバント、又はＩｇＧ１サブクラスの抗体の産生を増強する別のアジュバントと共に製剤化することによって達成することもできる。したがって、本明細書に記載するワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットのためのＦタンパク質類似体及び／又はパータシス抗原は、好ましくは、鉱物塩、好ましくはミョウバン（水酸化アルミニウム若しくはリン酸アルミニウム）と共に、又は油と水のエマルジョンアジュバントと共に製剤化される。
【０１４０】
妊婦において安全かつ十分に耐容される任意のアジュバントを選択する。場合により、免疫原性組成物は、ミョウバン以外のアジュバントを含んでもよい。例えば、１以上の３Ｄ−ＭＰＬ、スクワレン（たとえば、ＱＳ２１）、リポソーム及び／又は油と水のエマルションなどのアジュバントが好都合に選択される。ただし、最終製剤は、所望の特性（例えばサブクラス及び中和機能）を有するＲＳＶ特異的抗体及びパータシス抗体の妊婦（及び典型的にはプライミングされた妊婦）における産生を増強するものである。
【０１４１】
いくつかの場合には、アジュバント製剤はまた、たとえば、アルミニウム塩（ミョウバン）又はカルシウム塩、例えばリン酸カルシウム、リン酸アルミニウム又は水酸化アルミニウムのような鉱物塩を含む。ミョウバンが存在する場合には、それ単独で又は例えば３Ｄ−ＭＰＬと組み合わせて、その量は、典型的には用量あたり約１００μｇ及び１ｍｇ、例えば約１００μｇ又は約２００μｇから約７５０μｇ、例えば約５００μｇである。
【０１４２】
一部の実施形態では、アジュバントは、油と水のエマルション、たとえば、水中油型エマルションを含む。水中油型エマルションの一例は、水性担体中に代謝可能な油、たとえば、スクアレン、トコフェロールのようなトコール、たとえば、α−トコフェロール、及びたとえば、トリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８５（商標））又はモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ８０（商標））のような界面活性剤を含む。水中油型エマルジョンの例はＭＦ５９である。特定の実施形態では、水中油型エマルションは、追加の免疫賦活剤を含有しない（特に３Ｄ−ＭＰＬのような非毒性リピドＡ誘導体又はＱＳ２１のようなサポニンを含有しない）。水性担体は、たとえば、リン酸緩衝生理食塩水であり得る。さらに、水中油型エマルションは、Ｓｐａｎ８５及び／又はレシチン及び／又はトリカプリリンを含有することができる。
【０１４３】
本発明の別の実施形態では、アジュバント組成物は、水中油型エマルションと任意で１以上のさらなる免疫賦活剤を含み、前記水中油型エマルションは、０．５〜１０ｍｇの代謝可能な油（好適にはスクアレン）、０．５〜１１ｍｇのトコール（好適には、α−トコフェロールのようなトコフェロール）及び０．４〜４ｍｇの乳化剤を含む。
【０１４４】
Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ類似体を含む免疫原性組成物、本明細書に記載のワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットのための免疫原性組成物において、それ自体で、又は３Ｄ−ＭＰＬ若しくは本明細書に記載の他のアジュバントとの組み合わせで用いることができる他のアジュバントは、ＱＳ２１のようなサポニンである。そのようなアジュバントは、典型的には、（それが望まれる場合に可能ではあるが）パータシス抗原と共に使用されない。
【０１４５】
一実施形態において、本明細書に記載される方法及び使用のための組換えＦタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ抗原は、サポニン、例えばＱＳ２１と共に製剤化され、特にＰｒｅＦ類似体とＱＳ２１の組み合わせが提供される。
【０１４６】
別の実施形態において、本明細書に記載される方法及び使用のためのＦタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ抗原は、ＱＳ２１及び３Ｄ−ＭＰＬと共に製剤化される。
【０１４７】
サポニンは、Lacaille-Dubois, M and Wagner H.（1996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol 2 pp 363-386）にて教示されている。サポニンは、植物界及び海洋動物界に広く分布するステロイド又はトリテルペングリコシドである。サポニンは、振盪すると泡立つコロイド状水溶液を形成し、コレステロールを沈殿させることについて言及される。サポニンは細胞膜の近傍にあると、膜を破裂させる膜における孔様の構造を創る。赤血球の溶血はこの現象の例であり、それは、サポニンすべてではないが、特定のサポニンの特性である。
【０１４８】
サポニンは、全身投与用のワクチンにおけるアジュバントとして知られる。個々のサポニンのアジュバント活性と溶血活性は当該技術で広範に研究されている（Lacaille-Dubois and Wagner、上記）。たとえば、ＱｕｉｌＡ（南米の樹木Quillaja Saponaria Molinaの樹皮に由来する）及びその分画は米国特許第５，０５７，５４０号及び“Saponins as vaccine adjuvants”, Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2):1-55；及びＥＰ０３６２２７９Ｂ１に記載されている。ＱｕｉｌＡの分画を含む免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）と呼ばれる粒子状の構造は、溶血性であり、ワクチンの製造に使用されている（Morein, B., ＥＰ ０ １０９ ９４２ Ｂ１； ＷＯ９６／１１７１１；ＷＯ９６／３３７３９）。溶血性のサポニンＱＳ２１及びＱＳ１７（ＱｕｉｌＡのＨＰＬＣ精製した分画）は、強力な全身性アジュバントとして記載されており、その製造方法は、米国特許第５，０５７，５４０号及びＥＰ０３６２２７９Ｂ１に記載されており、それらは参照によって本明細書に組み入れられる。全身性ワクチンの研究で使用されているそのほかのサポニンには、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａ及びＳａｐｏｎａｒｉａ（Bomford et al., Vaccine, 10(9):572-577, 1992）のような他の植物種に由来するものが挙げられる。
【０１４９】
ＱＳ２１は、Quillaja Saponaria Molinaの樹皮に由来するＨＰＬＣ精製した非毒性の分画である。ＱＳ２１の製造方法は、米国特許第５，０５７，５４０に開示されている。ＱＳ２１を含有する非反応原性のアジュバント製剤はＷＯ９６／３３７３９に記載されている。前述の参考文献は参照によって本明細書に組み入れられる。ＱＳ２１のような免疫学的に活性のあるサポニンは、免疫原性組成物のヒト用量当たり１〜５０μｇの量で使用することができる。有利なことに、ＱＳ２１は、約２５μｇのレベルで、たとえば、２０〜３０μｇの間で、好適には２１〜２９μｇの間で、又は２２〜２８μｇの間で、又は２３〜２７μｇの間で、又は２４〜２６μｇの間で、又は２５μｇで使用することができる。別の実施形態では、免疫原性組成物のヒト用量は、約１０μｇのレベルで、たとえば、５〜１５μｇの間で、好適には６〜１４μｇの間で、たとえば、７〜１３μｇの間で、又は８〜１２μｇの間で、又は９〜１１μｇの間で、又は１０μｇのレベルでＱＳ２１を含む。さらなる実施形態では、免疫原性組成物のヒト用量は、約５μｇのレベルで、たとえば、１〜９μｇの間で、又は２〜８μｇの間で、好適には３〜７μｇ又は４〜６μｇの間で、又は５μｇのレベルでＱＳ２１を含む。ＱＳ２１とコレステロールを含むそのような製剤は、抗原と共に製剤化されると功を奏するＴｈ１刺激性アジュバントであることが示されている。従って、たとえば、ＱＳ２１とコレステロールの組み合わせを含むアジュバントを伴った免疫原性組成物にてＰｒｅＦポリペプチドを好都合に採用することができる。
【０１５０】
上で示したように、アジュバントは、たとえば、アルミニウム塩又はカルシウム塩、特に水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム及びリン酸カルシウムのような鉱物塩を含むことができる。そのようなアジュバントはまた３Ｄ−ＭＰＬを含むことができる。たとえば、アルミニウム塩（たとえば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム又は「ミョウバン」）との組み合わせで３Ｄ−ＭＰＬを含有するアジュバントは、ヒト対象に投与するためのＦタンパク質類似体を含有する免疫原性組成物でのアジュバントに好適である。そのような製剤は典型的に、それが所望である場合に可能ではあるが、パータシス抗原と共に使用されない。
【０１５１】
３Ｄ−ＭＰＬは、非毒性の細菌性リポ多糖類誘導体である。リピドＡの好適な非毒性誘導体の例、すなわちモノホスホリルリピドＡ、又はさらに詳しくは３−脱アセチル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）である。３Ｄ−ＭＰＬは、ＭＰＬの名称のもとでＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ Ｎ．Ａ．によって販売され、文書全体を通してＭＰＬ又は３Ｄ−ＭＰＬと呼ばれる。米国特許第４，４３６，７２７；同第４，８７７，６１１号；同第４，８６６，０３４号及び同第４，９１２，０９４号を参照のこと。３Ｄ−ＭＰＬは、ＩＦＮ−γ（Ｔｈ１）表現型を持つＣＤ４＋Ｔ細胞の応答を主に促進する。３Ｄ−ＭＰＬは、ＧＢ２２２０２１１Ａで開示された方法に従って製造することができる。化学的には、それは、３，４，５又は６のアシル化鎖を持つ３−脱アセチル化モノホスホリルリピドＡの混合物である。本発明の組成物では、小粒子３Ｄ−ＭＰＬを使用することができる。小粒子３Ｄ−ＭＰＬは、０．２２μｍのフィルターを介して無菌濾過できるような粒度を有する。そのような調製物はＷＯ９４／２１２９２に記載されている。
【０１５２】
３Ｄ−ＭＰＬのようなリポ多糖は、免疫原性組成物のヒト用量当たり１〜５０μｇの量で使用することができる。そのような３Ｄ−ＭＰＬは、約２５μｇのレベルで、たとえば、２０〜３０μｇの間で、好適には２１〜２９μｇの間で、又は２２〜２８μｇの間で、又は２３〜２７μｇの間で、又は２４〜２６μｇの間で、又は２５μｇで使用することができる。別の実施形態では、免疫原性組成物のヒト用量は、約１０μｇのレベルで、たとえば、５〜１５μｇの間で、好適には６〜１４μｇの間で、たとえば、７〜１３μｇの間で、又は８〜１２μｇの間で、又は９〜１１μｇの間で、又は１０μｇのレベルで３Ｄ−ＭＰＬを含む。さらなる実施形態では、免疫原性組成物のヒト用量は、約５μｇのレベルで、たとえば、１〜９μｇの間で、又は２〜８μｇの間で、好適には３〜７μｇの間で、又は４μｇ若しくは５μｇのレベルで３Ｄ−ＭＰＬを含む。
【０１５３】
他の実施形態では、リポ多糖は、米国特許第６，００５，０９９号及び欧州特許第０７２９４７３Ｂ１号に記載されたようにβ（１〜６）グルコサミン二糖であり得る。当業者は、これらの参考文献の教示に基づいて３Ｄ−ＭＰＬのような種々のリポ多糖を容易に製造することができる。それにもかかわらず、これら参考文献のそれぞれは、参照によって本明細書に組み入れられる。前述の免疫賦活剤（ＬＰＳ又はＭＰＬ又は３Ｄ−ＭＰＬに似た構造の）に加えて、ＭＰＬの上記構造の一部であるアシル化された単糖類及び二糖類の誘導体も好適なアジュバントである。他の実施形態では、アジュバントはリピドＡの合成誘導体であり、その一部は、ＴＬＲ−４作動薬として記載され、ＯＭ１７４（２−デオキシ−６−ｏ−［２−デオキシ−２−［（Ｒ）−３−ドデカノイルオキシテトラ−デカノイルアミノ］−４−ｏ−ホスホノ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−２−［（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイルアミノ］−β−Ｄ−グルコピラノシルジヒドロゲンホスフェート）、（ＷＯ９５／１４０２６）；ＯＭ２９４ＤＰ（３Ｓ，９Ｒ）−３−［（Ｒ）−ドデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］−４−オキソ−５−アザ−９（Ｒ）−［（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイルアミノ］デカン−１，１０−ジオール、１，１０−ビス（ジヒドロゲノホスフェート）（ＷＯ９９／６４３０１及びＷＯ００／０４６２）；及びＯＭ１９７ＭＰ−ＡｃＤＰ（３Ｓ−，９Ｒ）−３−（Ｒ）−ドデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］−４−オキソ−５−アザ−９−［（Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイルアミノ］デカン−１，１０−ジオール、１−ジヒドロゲノホスフェート１０−（６−アミノヘキサノエート）（ＷＯ０１／４６１２７）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５４】
特定の一実施形態では、アジュバント製剤は、水中油型エマルションのようなエマルション形態で調製された３Ｄ−ＭＰＬを含む。場合によっては、エマルションはＷＯ９４／２１２９２で開示されたように直径２μｍ未満の小さな粒度を有する。たとえば、３Ｄ−ＭＰＬの粒子は、０．２２μｍの膜を介して無菌濾過されるのに十分なくらい小さくてもよい（欧州特許第０６８９４５４号に記載されたように）。或いは、３Ｄ−ＭＰＬはリポソーム製剤に調製することができる。任意で、３Ｄ−ＭＰＬ（又はその誘導体）を含有するアジュバントは、別の免疫賦活成分も含んでよい。
【０１５５】
上述のもののような異なるアジュバントの組み合わせも、Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ類似体を含む組成物（及び場合により、所望であればパータシス抗原も含む組成物）で使用することができる。たとえば、すでに言及したように、ＱＳ２１を３Ｄ−ＭＰＬと一緒に製剤化することができる。ＱＳ２１：３Ｄ−ＭＰＬの比率は通常、たとえば、１：５〜５：１のような１：１０〜１０：１の桁であり、実質的に１：１であることが多い。通常、比率は、２．５：１〜１：１の３Ｄ−ＭＰＬ：ＱＳ２１の範囲である。別の組み合わせアジュバントの製剤には、３Ｄ−ＭＰＬと、たとえば、水酸化アルミニウムのようなアルミニウム塩が含まれる。
【０１５６】
使用することができるそのほかのＴＬＲ４リガンドは、たとえば、ＷＯ９８／５０３９９又は米国特許第６，３０３，３４７号で開示された（ＡＧＰの調製方法も開示されている）もののようなアルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）であり、好適には、ＲＣ５２７若しくはＲＣ５２９、又は米国特許第６，７６４，８４０号で開示されたようなＡＧＰの薬学的に許容される塩である。一部のＡＧＰはＴＬＲ４の作動薬であり、一部はＴＬＲ４の拮抗剤である。双方共アジュバントとして有用であると思われる。
【０１５７】
ＴＬＲ−４を介したシグナル伝達反応（Sabroe et al, JI 2003 p1630-5）を起こすことが可能であるそのほかの好適なＴＬＲ−４リガンドは、たとえば、グラム陰性細菌に由来するリポ多糖類及びその誘導体又はその断片、特にＬＰＳの非毒性誘導体（たとえば、３Ｄ−ＭＰＬ）である。そのほかの好適なＴＬＲ作動薬は、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）１０、６０、６５、７０、７５又は９０；界面活性剤プロテインＡ、ヒアルロナンオリゴ糖、ヘパラン硫酸断片、フィブロネクチン断片、フィブリノーゲンペプチド及びｂ−デフェンシン−２、及びムラミルジペプチド（ＭＤＰ）である。一実施形態では、ＴＬＲ作動薬はＨＳＰ６０、７０又は９０である。ほかの好適なＴＬＲ−４リガンドは、ＷＯ２００３／０１１２２３及びＷＯ２００３／０９９１９５に記載されており、たとえば、ＷＯ２００３／０１１２２３の４〜５ページ又はＷＯ２００３／０９９１９５の３〜４ページで開示された化合物Ｉ、化合物ＩＩ及び化合物ＩＩＩ、特にＥＲ８０３０２２、ＥＲ８０３０５８、ＥＲ８０３７３２、ＥＲ８０４０５３、ＥＲ８０４０５７、ＥＲ８０４０５８、ＥＲ８０４０５９、ＥＲ８０４４４２、ＥＲ８０４６８０及びＥＲ８０４７６４としてＷＯ２００３／０１１２２３で開示された化合物である。たとえば、好適なＴＬＲ−４リガンドの１つはＥＲ８０４０５７である。
【０１５８】
別のＴＬＲ作動薬もアジュバントとして有用である。用語「ＴＬＲ作動薬」は、直接的なリガンドとして又は内因性若しくは外因性のリガンドの生成を介して間接的に、ＴＬＲシグナル伝達経路を介したシグナル伝達反応を起こすことが可能である剤を指す。そのような天然の又は合成のＴＬＲ作動薬は、代わりの又は追加のアジュバントとして使用することができる。アジュバント受容体としてのＴＬＲの役割の手短な概説は、Kaisho & Akira, Biochimica et Biophysica Acta 1589:1-13, 2002に提供されている。これらの潜在的なアジュバントには、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８及びＴＬＲ９についての作動薬が挙げられるが、これらに限定されない。従って、一実施形態では、アジュバント及び免疫原性組成物はさらに、ＴＬＲ−１作動薬、ＴＬＲ−２作動薬、ＴＬＲ−３作動薬、ＴＬＲ−４作動薬、ＴＬＲ−５作動薬、ＴＬＲ−６作動薬、ＴＬＲ−７作動薬、ＴＬＲ−８作動薬、ＴＬＲ−９作動薬又はこれらの組み合わせから成る群から選択されるアジュバントを含む。
【０１５９】
本発明の一実施形態では、ＴＬＲ−１を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−１を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、トリアシル化リポペプチド（ＬＰｓ）；フェノール可溶性モジュリン；結核菌（Mycobacterium tuberculosis）ＬＰ；Ｓ−（２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２−ＲＳ）−プロピル）−Ｎ−パルミトイル−（Ｒ）−Ｃｙｓ−（Ｓ）−Ｓｅｒ−（Ｓ）−Ｌｙｓ（４）−ＯＨ、細菌性リポタンパク質のアシル化アミノ末端を模倣するトリヒドロクロリド（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）ＬＰ及びボレリア（Borrelia burgdorferi）由来のＯｓｐＡ ＬＰから選択される。
【０１６０】
別の実施形態では、ＴＬＲ−２を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−２を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、結核菌（M tuberculosis）、ボレリア（B burgdorferi）又は梅毒トレポネーマ（T pallidum）に由来するリポタンパク質、ペプチドグリカン、細菌性リポペプチド；黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）を含む種に由来するペプチドグリカン；リポタイコ酸、マンヌロン酸、ナイセリアポリン、細菌性線毛、エルシニア毒性因子、ＣＭＶビリオン、麻疹血液凝集素及び酵母由来のザイモサンの１以上である。
【０１６１】
別の実施形態では、ＴＬＲ−３を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−３を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）又はポリイノシン−ポリシチジン酸（ＰｏｌｙＩＣ）、ウイルス感染に関連する分子核酸パターンである。
【０１６２】
別の実施形態では、ＴＬＲ−５を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−５を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、細菌性フラジェリンである。
【０１６３】
別の実施形態では、ＴＬＲ−６を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−６を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、マイコバクテリアリポタンパク質、脱アシル化ＬＰ、及びフェノール可溶性モジュリンである。別のＴＬＲ６作動薬はＷＯ２００３／０４３５７２に記載されている。
【０１６４】
別の実施形態では、ＴＬＲ−７を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−７を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、ロキソリビン、Ｎ７位及びＣ８位におけるグアノシン類似体、又はイミダゾキノリン化合物若しくはその誘導体である。一実施形態では、ＴＬＲ作動薬はイミキモドである。さらなるＴＬＲ７作動薬はＷＯ２００２／０８５９０５に記載されている。
【０１６５】
別の実施形態では、ＴＬＲ−８を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。好適には、ＴＬＲ−８を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、抗ウイルス活性を持つイミダゾキノリン分子、たとえば、レシキモド（Ｒ８４８）であり；レシキモドはまたＴＬＲ−７による認識が可能である。使用することができるそのほかのＴＬＲ−８作動薬には、ＷＯ２００４／０７１４５９に記載されたものが挙げられる。
【０１６６】
別の実施形態では、ＴＬＲ−９を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬が使用される。一実施形態では、ＴＬＲ−９を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、ＨＳＰ９０である。或いは、ＴＬＲ−９を介してシグナル伝達反応を起こすことが可能であるＴＬＲ作動薬は、細菌性又はウイルス性のＤＮＡであり、特にＣｐＧモチーフとして知られる配列の状況にて非メチル化ＣｐＧヌクレオチドを含有するＤＮＡである。ＣｐＧを含有するオリゴヌクレオチドはＴｈ１反応を優勢に誘導する。そのようなオリゴヌクレオチドは周知であり、たとえば、ＷＯ９６／０２５５５、ＷＯ９９／３３４８８及び米国特許第６，００８，２００号及び同第５，８５６，４６２号に記載されている。好適には、ＣｐＧヌクレオチドはＣｐＧオリゴヌクレオチドである。本発明の免疫原性組成物で使用するのに好適なオリゴヌクレオチドは、少なくとも３つ、好適には少なくとも６つ又はそれ以上のヌクレオチドによって分離される２以上のジヌクレオチドＣｐＧモチーフを任意で含有してもよいＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドである。ＣｐＧモチーフは、グアニンヌクレオチドが後に続くシトシンヌクレオチドである。本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは通常、デオキシヌクレオチドである。特定の実施形態では、ホスホジエステル結合及びそのほかのヌクレオチド間結合は本発明の範囲内であるが、オリゴヌクレオチドにおけるヌクレオチド間はホスホロジチオエート結合又は好適にはホスホロチオエート結合である。また本発明の範囲内に含まれるのは混合されたヌクレオチド間結合を伴うオリゴヌクレオチドである。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド又はホスホロジチオエートを作製する方法は、米国特許第５，６６６，１５３号、同第５，２７８，３０２号及びＷＯ９５／２６２０４に記載されている。
【０１６７】
Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ類似体（及び場合により、所望であればパータシス抗原、例えば精製無細胞パータシスタンパク質と共に）と共に製剤化するのに使用するために好適なアジュバントの別のクラスには、ＯＭＰに基づく免疫賦活組成物が挙げられる。ＯＭＰに基づく免疫賦活組成物は、たとえば、鼻内投与用の粘膜アジュバントとして特に好適である。ＯＭＰに基づく免疫賦活組成物は、細菌性又はウイルス性抗原のような免疫原のためのキャリアとして又は組成物にて有用である、たとえば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ種（たとえば、Lowell et al., J. Exp. Med. 167:658, 1988; Lowell et al., Science 240:800, 1988; Lynch et al., Biophys. J. 45:104, 1984; Lowell, "New Generation Vaccines" 2nd ed., Marcel Dekker, Inc., New York, Basil, Hong Kong, page 193, 1997；米国特許第５，７２６，２９２号；同第４，７０７，５４３号を参照）のような、しかし、これらに限定されないグラム陰性細菌に由来する外膜タンパク質（一部のポリンを含むＯＭＰ）の調製物に属する。一部のＯＭＰに基づく免疫賦活組成物は、「プロテオソーム」と呼ぶことができ、それは疎水性であり、ヒトでの使用に安全である。プロテオソームは、約２０ｎｍ〜約８００ｎｍの小胞又は小胞様のＯＭＰクラスターに自己集合する能力を有し、タンパク質抗原（Ａｇ）、特に疎水性部分を有する抗原と非共有的に取り込み、配位し、会合し（たとえば、静電気的に又は疎水的に）、又はさもなければ共同する。複数の分子膜構造又は１以上のＯＭＰの溶融球状ＯＭＰ組成物を含む小胞形態又は小胞様形態で外膜タンパク質成分を生じる任意の調製方法は、プロテオソームの定義の範囲内に含まれる。たとえば、当該技術（たとえば、米国特許第５，７２６，２９２号又は同第５，９８５，２８４号）に記載されたようにプロテオソームを調製することができる。プロテオソームはまた、ＯＭＰポリンを製造するのに使用される細菌（たとえば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ種）を起源とする内因性のリポ多糖又はリポオリゴ糖（それぞれＬＰＳ又はＬＯＳ）を含有することができ、それらは一般にＯＭＰ調製物全体の２％未満である。
【０１６８】
プロテオソームは髄膜炎菌（Neisseria menigitidis）から化学的に抽出された外膜タンパク質（ＯＭＰ）（ほとんど、クラス４のＯＭＰと同様にポリンＡ及びＢ）から主として構成され、界面活性剤によって溶液で維持される（Lowell GH. Proteosomes for Improved Nasal, Oral, or Injectable Vaccines.: Levine MM, Woodrow GC, Kaper JB, Cobon GS, eds, New Generation Vaccines. New York: Marcel Dekker, Inc. 1997; 193-206）。プロテオソームは、たとえば、透析濾過又は従来の透析工程によって、あるいは精製されたパータシス抗原性タンパク質と共に、本明細書で開示されるＦタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦポリペプチドを含むウイルス供給源に由来する精製された又は組換えタンパク質のような種々の抗原と共に製剤化することができる。界面活性剤を徐々に取り除くことによって約１００〜２００ｎｍの直径の粒子状疎水性複合体を形成することができる（Lowell GH. Proteosomes for Improved Nasal, Oral, or Injectable Vaccines.: Levine MM, Woodrow GC, Kaper JB, Cobon GS, eds, New Generation Vaccines. New York: Marcel Dekker, Inc. 1997; 193-206）。
【０１６９】
「プロテオソーム：ＬＰＳ又はプロトリン」は、本明細書で使用されるとき、少なくとも１種のリポ多糖による外因性添加によって混合されてＯＭＰ−ＬＰＳ組成物（免疫賦活組成物として機能することができる）を提供するプロテオソームの調製物を指す。従って、ＯＭＰ−ＬＰＳ組成物は、（１）たとえば、髄膜炎菌（Neisseria menigitidis）のようなグラム陰性細菌から調製されるプロテオソームの外膜タンパク質調製物（たとえば、プロジュバント（Projuvant））と（２）１以上のリポ糖の調製物を含む、プロトリンの２つの基本成分で構成することができる。リポオリゴ糖は、外因性であることができ（たとえば、ＯＭＰプロテオソーム調製物に天然に含有される）、外因性に調製されたリポオリゴ糖（たとえば、ＯＭＰ調製物とは異なる培養物又は微生物から調製された）と混合することができ又は組み合わせることができ、又はそれらの組み合わせであることができる。そのような外因性に添加されるＬＰＳは、ＯＭＰ調製物が作製されたのと同じグラム陰性細菌に由来することができ、又は異なるグラム陰性細菌に由来することができる。プロトリンはまた、任意で脂質、糖脂質、糖タンパク質、小分子等、及びそれらの組み合わせを含むことが理解されるべきである。プロトリンは、たとえば、米国特許出願公開第２００３／００４４４２５号に記載されたように調製することができる。
【０１７０】
選択されるアジュバントにかかわりなく、最終製剤の濃度は、標的の妊娠女性集団で安全且つ有効であるように算出されることに留意すべきである。
【０１７１】
本明細書におけるワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットにおいて使用するための免疫原性組成物は通常、免疫防御量（又はその画分用量）の抗原、あるいは免疫された妊娠女性の乳児において免疫防御となるような抗体の受動移行をもたらす量の抗原を含有し、従来の技法によって調製することができる。ヒト対象への投与用のものを含む免疫原性組成物の調製は、一般に、Pharmaceutical Biotechnology, Vol.61  Vaccine Design-the subunit and adjuvant approach, Powell and Newman編, Plenurn Press, 1995.  New Trends and Developments in Vaccines, Voller et al. 編, University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A. 1978に記載されている。リポソーム内へのカプセル化は、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎによる米国特許第４，２３５，８７７号に記載されている。高分子へのタンパク質のコンジュゲートは、たとえば、Ｌｉｋｈｉｔｅによる米国特許第４，３７２，９４５号及びＡｒｍｏｒらによる同第４，４７４，７５７号に開示されている。
【０１７２】
通常、免疫原性組成物の各用量における抗原（例えばタンパク質）の量は、典型的な対象、すなわち妊娠女性又は在胎の乳児にて重大な有害な副作用なしで乳児において免疫防御の応答を誘導する量として選択される。この文脈での免疫防御は、感染に対する完全な防御を必ずしも意味するものではなく；症状又は疾患、特にウイルスに関連した重篤な疾患に対する防御を意味する。抗原の量は、どの特定の免疫原が採用されるかによって変化し得る。一般に、各ヒト用量は、１〜１０００μｇの各タンパク質又は抗原、たとえば、約１μｇ〜約１００μｇ、たとえば、約１μｇ〜約６０μｇ、たとえば、約１μｇ、約２μｇ、約５μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約２５μｇ、約３０μｇ、約４０μｇ、約５０μｇ又は約６０μｇを含むことが予想される。一般に、ヒト用量は０．５ｍｌの容量である。したがって、本明細書において記載される使用及び方法のための組成物は、例えば０．５ｍｌのヒト用量において１０μｇ、又は３０μｇ、又は６０μｇとすることができる。免疫原性組成物で利用される量は、対象集団に基づいて選択される。特定の組成物の任意の量は、対象における抗体力価及びそのほかの応答の所見を含む標準的な検討によって確定することができる。最初のワクチン接種後、約４〜１２週間で、又は乳児の出産前の任意の時点で、好ましくは出産予定日の少なくとも２週間前又は少なくとも４週間前に、対象に追加刺激を与えることができる。
【０１７３】
さらなる製剤の詳細は、ＷＯ２０１０１４９７４５において見出され得、これは、Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ類似体を含む免疫原性組成物の製剤に関するさらなる詳細を提供する目的で、参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１７４】
必要に応じて、Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ類似体若しくはＰｏｓｔＦ類似体を含む免疫原性組成物は、ＲＳＶ以外の病原性生物の少なくとも１種のさらなる抗原と共配合される。例えば、この病原性生物は、気道の病原体であり得る（例えば、気道感染を起こすウイルス）。特定の場合において、この免疫原性組成物は、ＲＳＶ以外の病原性ウイルス、例えば気道の感染を起こすウイルス、例えばインフルエンザ若しくはパラインフルエンザに由来する抗原を含む。同様に、所望される場合、パータシス抗原もまた、ＲＳＶ以外の病原性ウイルスの抗原と共配合され得る。
【０１７５】
ＲＳＶタンパク質類似体と無細胞パータシス抗原若しくは全細胞パータシス抗原との共配合は、本明細書中で記載され、本明細書中で開示されるワクチン接種レジメン、方法及び使用の１つの好ましい実施形態である。
【０１７６】
特定の実施形態において、本明細書中で開示されるワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットのために好適な免疫原性組成物は、さらに、ＲＳＶ及び百日咳菌以外の少なくとも１つの病原性生物由来の少なくとも１つの抗原を含む。詳細には、この少なくとも１つの病原性生物は、コリネバクテリウム・ジフテリエ（Corynebacterium diphtheriae）、クロストリジウム・テタニ（Clostridium tetani）、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）ｂ型、髄膜炎菌Ｃ型、髄膜炎菌Ｙ型、髄膜炎菌Ａ型、髄膜炎菌Ｗ型、及び髄膜炎菌Ｂ型からなる群より選択され得る。より詳細には、上記少なくとも１つの抗原は、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）；キャリアタンパク質とコンジュゲートしたインフルエンザ菌ｂ型（Ｈｉｂ）の莢膜糖；キャリアタンパク質とコンジュゲートした髄膜炎菌Ｃ型タンパク質の莢膜糖（ＭｅｎＣ）；キャリアタンパク質とコンジュゲートした髄膜炎菌Ｙ型の莢膜糖（ＭｅｎＹ）；キャリアタンパク質とコンジュゲートした髄膜炎菌Ａ型の莢膜糖（ＭｅｎＡ）；キャリアタンパク質とコンジュゲートした髄膜炎菌Ｗ型の莢膜糖（ＭｅｎＷ）；及び髄膜炎菌Ｂ型由来の抗原（ＭｅｎＢ）からなる群より選択され得る。これら及び他の実施形態において、さらなる抗原が、投与を容易にするために、又は複数の感染性生物に対して対象を防御するために必要な接種の回数を減らすために、選択され得る。例えば、抗原は、とりわけ、任意の１以上のインフルエンザ、Ｂ型肝炎、ジフテリア、破傷風菌、百日咳菌、インフルエンザ菌、ポリオウイルス、ｈＭＰＶ、連鎖状球菌（Streptococcus）又は肺炎球菌（Pneumococcus）に由来し得る。
【０１７７】
百日咳菌抗原（Ｐａ若しくはＰｗ）をＤ及びＴ並びに、ＩＰＶ、ＨＢｓＡｇ、Ｈｉｂ及びコンジュゲート髄膜炎菌莢膜糖から選択されるものなどの種々の他の抗原の組み合わせと共に含む混合ワクチンは、当該分野で周知であり、そして本明細書中のワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットの文脈において好適であり、例えば、製品Ｉｎｆａｎｒｉｘ（商標）（例えば、ＤＴＰａ−ＩＰＶ−ＨＢｓＡｇ−Ｈｉｂ）及びＢｏｏｓｔｒｉｘ（商標）（例えば、ｄＴｐａ）である。このことに関して、ＷＯ９３／０２４１４８、ＷＯ９７／０００６９７及びＷＯ９８／０１９７０２は、参照によって組み込まれ、ＷＯ０２／００２４９は、ＤＴＰｗ−ＨｅｐＢ−ＭｅｎＡＣ−Ｈｉｂ組成物を開示する。このような混合ワクチンは、本明細書中で開示されるワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットの文脈において好適である。
【０１７８】
本明細書中で開示されるワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットにおいて好適な特定の免疫原性組成物は、少なくとも１つのＲＳＶ抗原及び少なくとも１つの百日咳菌抗原に加えて：Ｄ及びＴ；Ｄ，Ｔ及びＩＰＶ；Ｄ，Ｔ及びＨＢｓＡｇ；Ｄ，Ｔ及びＨｉｂ；Ｄ，Ｔ，ＩＰＶ及びＨＢｓＡｇ；Ｄ，Ｔ，ＩＰＶ及びＨｉｂ；Ｄ，Ｔ，ＨＢｓＡｇ及びＨｉｂ；又はＤ，Ｔ，ＩＰＶ，ＨＢｓＡｇ及びＨｉｂを含む。
【０１７９】
特定の実施形態において、Ｄは、１用量あたり１〜１０国際単位（ＩＵ）（例えば、正確に若しくはおよそ２ＩＵ）又は１０〜４０ＩＵ（例えば、正確に若しくはおよそ２０若しくは３０ＩＵ）の量で、あるいは１〜１０リミットオブフロッキュレーション（Limit of flocculation）（Ｌｆ単位）（例えば、正確に若しくはおよそ２又は２．５又は９Ｌｆ）又は１０〜３０Ｌｆ（例えば、正確に若しくはおよそ１５又は２５Ｌｆ）の量で使用される。
【０１８０】
特定の実施形態において、Ｔは、１用量あたり１０〜３０ＩＵ（例えば、正確に若しくはおよそ２０ＩＵ）又は３０〜５０ＩＵ（例えば、正確に若しくはおよそ４０ＩＵ）又は１〜１５Ｌｆ（例えば、正確に若しくはおよそ５又は１０Ｌｆ）の量で使用される。
【０１８１】
例示的な実施形態において、ワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットに好適な免疫原性組成物は、少なくとも１つのＲＳＶ抗原及び少なくとも１つの百日咳菌抗原に加えて、Ｄ及びＴを、それぞれ、１用量あたり、正確に又はおよその量で：３０：４０ＩＵ；２５：１０Ｌｆ；２０：４０ＩＵ；１５：５Ｌｆ；２：２０ＩＵ；２．５：５Ｌｆ；２：５Ｌｆ；２５：１０Ｌｆ；９：５Ｌｆ含む。例えば、このような組成物は、（少なくとも１つのＲＳＶ抗原に加えて）
（ｉ）  ２０〜３０μｇ、例えば、正確に又はおよそ２５μｇのＰＴ、
（ｉｉ）  ２０〜３０μｇ、例えば、正確に又はおよそ２５μｇのＦＨＡ、
（ｉｉｉ）  １〜１０μｇ、例えば、正確に又はおよそ３若しくは８μｇのＰＲＮ、
（ｉｖ）  １０〜３０Ｌｆ、例えば、正確に又はおよそ１５若しくは２５ＬｆのＤ、及び（ｖ）  １〜１５Ｌｆ、例えば、正確に又はおよそ５若しくは１０ＬｆのＴ
を含み得る。
【０１８２】
別の例として、このような好適な組成物は、（少なくとも１つのＲＳＶ抗原に加えて）（ｉ）  ２〜１０μｇ、例えば、正確に又はおよそ２．５若しくは８μｇのＰＴ、
（ｉｉ）  ２〜１０μｇ、例えば、正確に又はおよそ５若しくは８μｇのＦＨＡ、
（ｉｉｉ）  ０．５〜４μｇ、例えば、２〜３μｇ、例えば、正確に又はおよそ２．５又は３μｇのＰＲＮ、
（ｉｖ）  １〜１０Ｌｆ、例えば、正確に又はおよそ２又は２．５又は９ＬｆのＤ、及び（ｖ）  １〜１５Ｌｆ、例えば、正確に又はおよそ５又は１０ＬｆのＴ
を、含み得る。
【０１８３】
従って、本明細書中で開示されるワクチン接種レジメン、方法、使用及びキットに従い、免疫原性組成物は、医薬、詳細には、ヒト対象における感染の予防若しくは処置のための、又はＲＳＶ及び百日咳菌に関連する疾患の予防若しくは処置のための、医薬における使用を企図されることが、明らかである。他の病原体由来の抗原を含む特定の実施形態において、このような予防若しくは処置は、他の病原体に及ぶ。
【０１８４】
本明細書中で記載される母体免疫は、ＲＳＶワクチン及びパータシスワクチンの投与のために好適な経路を介して実施される。この経路としては、筋肉内、鼻腔内、若しくは皮膚投与が挙げられる。好ましくは、本明細書中で記載されるＲＳＶ及び／又はパータシス母体免疫は、皮膚的に実施され、これは、この抗原が、皮膚の真皮及び／又は表皮に（例えば、皮内に）導入されることを意味する。特定の実施形態において、Ｆタンパク質類似体、例えばＰｒｅＦ抗原若しくはＰｏｓｔＦ抗原などの組換えＲＳＶ抗原及び／又は無細胞パータシスタンパク質若しくは全細胞パータシスを含むパータシス抗原が、妊婦に、皮膚的に若しくは皮内に送達される。特定の実施形態において、Ｆタンパク質、例えばＰｒｅＦ抗原若しくはｐｏｓｔＦ抗原は、本明細書中で記載されるアジュバント、例えば、サポニン、例えば３Ｄ−ＭＰＬ含有又は非含有のＱＳ２１と共に、皮膚送達若しくは皮内送達のために製剤化される。別の実施形態において、Ｆタンパク質類似体、例えば、ＰｒｅＦ若しくはＰｏｓｔＦ抗原は、免疫刺激剤、例えばＱＳ２１若しくは３Ｄ−ＭＰＬ含有若しくは非含有の、鉱物塩、例えば水酸化アルミニウム若しくはリン酸アルミニウム又はリン酸カルシウムと共に、皮膚送達若しくは皮内送達のために製剤化される。パータシス抗原は、典型的に、アルミニウム塩と組み合わせて製剤化され、そして必要に応じて、皮膚経路若しくは皮内経路によって投与され得る。必要に応じて、Ｆタンパク質類似体及びパータシス抗原は、例えば、免疫刺激剤、例えばＱＳ２１若しくは３Ｄ−ＭＰＬ含有若しくは非含有の鉱物塩、例えば水酸化アルミニウム若しくはリン酸アルミニウム又はリン酸カルシウムの存在下で、皮膚送達若しくは皮内送達のために製剤化される。
【０１８５】
皮内経路を含む皮膚経路を介した送達は、筋肉内経路などの他の経路よりも低用量の抗原を必要とする、すなわちより低用量を可能にする場合がある。従って、皮膚送達若しくは皮内送達のための、低用量、例えば通常の筋肉内用量よりも低い用量、例えば通常の筋肉内用量の５０％以下で、例えば、ヒトの１用量あたり５０μｇ以下、又は２０μｇ以下、又は１０μｇ以下又は５μｇ以下で、Ｆタンパク質類似体を含む免疫原性組成物もまた、提供される。同様に、パータシス抗原を含む免疫原性組成物は、皮膚投与若しくは皮内投与についての用量範囲の下限（若しくはなおより低い用量）、例えば、（さらなる抗原性成分含有若しくは非含有で）１〜１０μｇの間のＰＴ、１〜１０μｇの間のＦＨＡ、０．５〜４μｇの間のＰＲＮで製剤化され得る。必要に応じて、皮膚送達若しくは皮内送達のための免疫原性組成物はまた、アジュバント、例えば、アルミニウム塩又はＱＳ２１若しくは３Ｄ−ＭＰＬ、又はこれらの組み合わせをも含む。
【０１８６】
皮膚投与のためのデバイスとしては、短針デバイス（約１ｍｍと約２ｍｍとの間の長さの針を有する）が挙げられ、ＵＳ４，８８６，４９９、ＵＳ５，１９０，５２１、ＵＳ５，３２８，４８３、ＵＳ５，５２７，２８８、ＵＳ４，２７０，５３７、ＵＳ５，０１５，２３５、ＵＳ５，１４１，４９６、ＵＳ５，４１７，６６２及びＥＰ１０９２４４４に記載されるものである。皮膚ワクチンはまた、参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ９９／３４８５０において記載されるように、皮膚への針の有効な進入長さを制限するデバイス及びその機能的均等物によって投与され得る。液体ジェット注射器を介して又は角質層を貫き真皮に達するジェットを生み出す針を介して液体ワクチンを真皮に送達するジェット注射デバイスもまた、好適である。ジェット注射デバイスは、例えば、ＵＳ５，４８０，３８１、ＵＳ５，５９９，３０２、ＵＳ５，３３４，１４４、ＵＳ５，９９３，４１２、ＵＳ５，６４９，９１２、ＵＳ５，５６９，１８９、ＵＳ５，７０４，９１１、ＵＳ５，３８３，８５１、ＵＳ５，８９３，３９７、ＵＳ５，４６６，２２０、ＵＳ５，３３９，１６３、ＵＳ５，３１２，３３５、ＵＳ５，５０３，６２７、ＵＳ５，０６４，４１３、ＵＳ５，５２０，６３９、ＵＳ４，５９６，５５６、ＵＳ５４，７９０，８２４、ＵＳ４，９４１，８８０、ＵＳ４，９４０，４６０、ＷＯ９７／３７７０５及びＷＯ９７／１３５３７において記載される。
【０１８７】
皮膚投与のためのデバイスとしてはまた、圧縮ガスを用いて粉末形態のワクチンを皮膚の外層を通って真皮へ加速させる弾道粉末／粒子送達デバイスが、挙げられる。さらに、慣用的なシリンジが、皮膚投与の古典的マントー法において使用され得る。しかし、慣用的シリンジの使用は、高度に熟練した技術者が必要であり、従って、高度に熟練した使用者がいなくても正確な送達を可能にするデバイスが好ましい。皮膚投与のためのさらなるデバイスとしては、本明細書中で記載される免疫原性組成物を含むパッチが挙げられる。皮膚送達パッチは、一般に、固体基板（例えば、閉塞性若しくは非閉塞性の外科用包帯）を備えた裏打ちプレートを備える。このようなパッチは、角質層に穴をあける微小突起を介して、真皮若しくは表皮に免疫原性組成物を送達する。微小突起は、一般に、１０Ｄｍ〜２ｍｍの間、例えば、２０Ｄｍ〜５００Ｄｍ、３０Ｄｍ〜１ｍｍ、１００〜２００、２００〜３００、３００〜４００、４００〜５００、５００〜６００、６００〜７００、７００、８００、８００〜９００、１００Ｄｍ〜４００Ｄｍ、詳細には、約２００Ｄｍ〜３００Ｄｍの間若しくは約１５０Ｄｍ〜２５０Ｄｍの間である。皮膚送達パッチは、一般に、複数の微小突起、例えば、２〜５０００の間の微小針、例えば、１０００〜２０００の間の微小針を備える。微小突起は、角質層、表皮及び／又は真皮に穴をあけるために好適な任意の形状であってもよい。微小突起は、例えば、ＷＯ２０００／０７４７６５及びＷＯ２０００／０７４７６６に開示されるような形状であってもよい。微小突起は、少なくとも３：１（高さ対直径に基づく）、少なくとも約２：１又は少なくとも約１：１の縦横比を有し得る。微小突起の１つの特定の形状は、多角形、例えば六角形若しくは菱形の形状の底を有する錐状である。他の可能性のある微小突起形状は、例えば、米国特許出願公開第２００４／００８７９９２号において示される。特定の実施形態において、微小突起は、基部に向かって太くなる形状を有する。アレイにおける微小突起の数は、典型的に、少なくとも約１００、少なくとも約５００、少なくとも約１０００、少なくとも約１４００、少なくとも約１６００、又は少なくとも約２０００である。微小突起の面密度は、その小さなサイズを前提に、特に高くなくてもよいが、例えば、１ｃｍ２あたりの微小突起の数は、少なくとも約５０、少なくとも約２５０、少なくとも約５００、少なくとも約７５０、少なくとも約１０００、又は少なくとも約１５００であり得る。本発明の１つの実施形態において、Ｆタンパク質類似体は、宿主の皮膚上にパッチを置いて５時間以内に、例えば、４時間、３時間、２時間、１時間若しくは３０分間以内に、対象に送達される。特定の実施形態において、Ｆタンパク質類似体は、皮膚上にパッチを置いて２０分間以内、例えば、３０秒以内、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８若しくは１９分間以内に送達される。
【０１８８】
微小突起は、当業者に公知の任意の好適な材料で作られ得る。特定の実施形態において、微小突起の少なくとも一部、詳細には、微小突起の先端若しくは微小突起の最外層は、生分解性である。特定の実施形態において、微小突起の実質的に全てが生分解性である。用語「生分解性」は、本明細書中で、生分解のメカニズムにかかわらず、インビボ使用（例えば、皮膚への挿入）の予測される条件下で分解性であることを意味する。生分解の例示的なメカニズムとしては、崩壊、分散、溶解、侵食、加水分解及び酵素分解が挙げられる。
【０１８９】
抗原を含む微小突起の例は、ＷＯ２００８／１３０５８７及びＷＯ２００９／０４８６０７に開示される。代謝可能微小針の製造の方法は、ＷＯ２００８／１３０５８７及びＷＯ２０１０／１２４２５５に開示される。抗原による微小突起のコーティングは、当業者に公知の任意の方法、例えば、ＷＯ０６／０５５８４４、ＷＯ０６／０５５７９９において開示される方法によって、実施され得る。
【０１９０】
本明細書中で記載される方法及び使用における皮内送達を含む皮膚送達のために好適な送達デバイスとしては、皮内投与のための微小針デバイスであるＢＤ  Ｓｏｌｕｖｉａ（商標）デバイス、Ｃｏｒｉｕｍ  ＭｉｃｒｏＣｏｒ（商標）パッチ送達システム、Ｇｅｏｒｇｉａ  Ｔｅｃｈ微小針ワクチンパッチ、Ｎａｎｏｐａｓｓ微小針送達デバイス及びＤｅｂｉｏｔｅｃｈ  Ｎａｎｏｊｅｃｔ（商標）微小針デバイスが挙げられる。また、本明細書中に記載されるＲＳＶ母体免疫のための免疫原性組成物、例えば、必要に応じて鉱物塩、例えばミョウバン又はＱＳ２１若しくは３Ｄ−ＭＰＬあるいはこれらの組み合わせなどのアジュバントと共に製剤化されたＰｒｅＦ抗原などの組換えＦタンパク質類似体を含む、皮膚送達デバイス若しくは皮内送達デバイスもまた、提供される。
【実施例】
【０１９１】
［実施例１］概念の証明−モルモットモデルにおける母体免疫
胎盤構造及びＩｇＧ移行が典型的げっ歯類モデルの場合よりもヒトに近いので、モルモットモデルを選択した（Pentsuk and van der Laan (2009) Birth Defects Research（part B) 86:328-344において概説される）。モルモットの相対的に長い妊娠期間（６８日間）のため、妊娠の間の免疫及び免疫応答発生が可能になる。その人生を通してＲＳＶに対する曝露を経験しており、ＲＳＶ対する免疫応答が事前に存在している妊婦のＲＳＶ免疫状態を模倣するために、雌モルモットを、ワクチン接種の６週間前若しくは１０週間前のいずれかにおいて、生ＲＳＶでプライミングした。
【０１９２】
雌モルモット（Ｎ＝５／群）を、ワクチン接種の６週間前若しくは１０週間前（およそ、交配の時点若しくは交配の４週間前）に、生ＲＳＶウイルス（２．５×１０５ｐｆｕ）で鼻腔内プライミングした。２群は、プライミングしないままにした。妊娠雌を、妊娠の開始約６週間後に水酸化アルミニウムと合わせた１０μｇのＰｒｅＦ抗原で免疫した。プライミングなしの１群の雌に、ＰＢＳを注射した。血清サンプルを、プライミング及び妊娠期間にわたって収集し、抗ＲＳＶ結合及び中和抗体のレベルをモニタリングした。
【０１９３】
後代（７〜１６日齢）を、生ＲＳＶで１×１０７ｐｆｕにて鼻腔内チャレンジした。チャレンジの４日後、肺を採取し、７葉に分割した。７葉のうち６葉においてウイルスを力価測定し、肺１グラムあたりの全ウイルス粒子を計算した。
【０１９４】
結果を、図２及び図３にグラフで示す。
【０１９５】
モルモットを６週間若しくは１０週間前にプライミングしようとしまいと、ワクチン接種の日に同様のレベルの抗体が観察された。プラトー力価に、プライミングの１４日後に到達した。中和抗体力価は、プラトーに達した後、少なくとも約６０日間、低下しなかった。従って、両時点でのプライミングは、このモデルにおいて等価であり、ヒトにおける母胎感染を模倣するために好適であった。
【０１９６】
モルモット後代における肺ウイルス負荷からの結果は、プライミング及びワクチン接種された母に生まれた後代は、プライミングなし／ワクチン接種なし母に生まれた後代と比較して、ＲＳＶチャレンジから防御されたことを示す。対照的に、プライミングなし／ワクチン接種なし母に生まれた後代は、ＲＳＶチャレンジから防御されなかった。
【０１９７】
［実施例２］混合ワクチンは、ＲＳＶによるチャレンジに対して防御する
本実施例は、ＲＳＶ及び百日咳菌抗原（ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ）を含む混合ワクチンによって惹起されたＲＳＶに対する防御を実証する。２用量の混合Ｐａ−ＲＳＶワクチンの免疫原性（中和抗体力価）を、Ｂａｌｂ／ｃマウスモデルにおいて評価し、その後、鼻腔内ＲＳＶチャレンジを行って、混合ワクチンの効力を測定した。
【０１９８】
ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１４／群）を、表１に示される処方物により、３週間間隔で２回筋肉内に免疫した。
【０１９９】
【表１】
2018172417.tif 000003
【０２００】
全てのマウス由来の血清を、０日目（１回目免疫の前）、２１日目（２回目免疫の前）及び３５日目（２回目免疫の２週間後）に個別に収集し、ＲＳＶ中和抗体の存在を、プラーク減少アッセイを用いて試験した。簡潔にいうと、各血清の連続希釈物を、ＲＳＶ  Ａ  Ｌｏｎｇ（１ウェルあたり１００ｐｆｕを標的化）と共に３７℃にて２０分間にわたってインキュベートした。インキュベーション後、ウイルス−血清混合物を、Ｖｅｒｏ細胞を予め植菌し、増殖培地を空にしておいたプレートに移した。各ウェル上に、一列の細胞を、ウイルスのみと共にインキュベートし（１００％の感染性）、２ウェルにはウイルスも血清も与えなかった（細胞対照）。プレートを、３７℃にて２時間にわたってインキュベートし、培地を除去し、そして０．５％ＣＭＣ（低粘度カルボキシメチルセルロース）を含むＲＳＶ培地を全てのウェルに添加した。このプレートを、３日間３７℃にてインキュベートした後、免疫蛍光染色した。
【０２０１】
染色のために、細胞単層を、ＰＢＳで洗浄し、そして１％パラホルムアルデヒドで固定した。ＲＳＶ陽性細胞を、市販のヤギ抗ＲＳＶ抗血清を用い、その後ＦＩＴＣにコンジュゲートしたウサギ抗ヤギＩｇＧを用いて、検出した。１ウェルあたりの染色プラークの数を、自動画像化システムを用いて計数した。各血清の中和抗体力価を、血清なしの対照と比較してプラークの数の６０％の減少を起こす血清希釈の逆関数（ＥＤ６０）として決定した。結果を、図５Ａに示す。
【０２０２】
Ａｌ（ＯＨ）３のアジュバントが添加されたＰｒｅＦベースのワクチンは、鼻腔内ＲＳＶチャレンジからマウスを防御する。従って、この動物モデルは、肺におけるウイルスクリアランスを媒介するＲＳＶワクチンの能力を研究するために有用である。次いで、単一ワクチン中の百日咳菌（ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ）抗原とＲＳＶ（ＰｒｅＦ）抗原との組み合わせを、鼻腔内ＲＳＶチャレンジマウスモデルにおける防御有効性について試験した。２回目のワクチン投与の２週間後、マウスを、５０μｌ（１つの鼻腔あたり２５μＬ）の生ＲＳＶ  Ａ  Ｌｏｎｇ株（約１．４５×１０６ｐｆｕ／５０μｌ）の点鼻によってチャレンジした。肺ウイルス負荷の評価のために、チャレンジの４日後、肺を採取した。チャレンジの４日後、マウスを安楽死させ、肺を、無菌的に採取し、個々に計量し、ホモジナイズした。各肺ホモジネートの連続希釈物（各８連）を、Ｖｅｒｏ細胞と共にインキュベートし、プラークを含むウェルを、植菌の６日後に免疫蛍光によって同定した。ウイルス力価を、ＴＣＩＤ５０計算のためにＳｐｅａｒｍａｎ−Ｋａｒｂｅｒ法を用いて決定し、肺１グラムあたりで示した。使用した統計学的方法は、ｌｏｇ１０値における分散分析（ＡＮＯＶＡ  １）である。
【０２０３】
結果を、図５Ｂに示す。予測されるとおり、Ａｌ（ＯＨ）３と混合した２μｇのＰｒｅＦは、Ｐａ単独でワクチン接種したマウス（ＲＳＶチャレンジからの防御が予測されない対照群）と比較して、肺におけるウイルスクリアランスを効率的に促進した。ＰｒｅＦ群における１４匹のうち２匹の動物のみが、肺に検出可能なレベルのＲＳＶを有し、他の１２匹の動物は、ＲＳＶが検出可能ではなかった。Ｐａ−ＲＳＶ混合ワクチンは、１４匹中１匹の動物のみが肺においてＲＳＶが検出可能であり、残る１３匹の動物においてＲＳＶが検出不能であったことによって示されるとおり、ＲＳＶチャレンジに対しマウスを等しく防御することができた。全体で、ＰｒｅＦ＋Ａｌ（ＯＨ）３ワクチン又はＰａ抗原＋ＰｒｅＦ＋Ａｌ（ＯＨ）３をワクチン接種した動物は、Ｐａ単独でワクチン接種した対照動物よりも有意に低い肺ウイルス力価を有した（Ｐ＜０．００１）。アジュバントなしでＰａ抗原＋ＰｒｅＦをワクチン接種した群において、肺ウイルス力価の有意な低下（Ｐ＜０．００１）があったが、しかし、全ての動物からの肺においてウイルスを定量したが、この群の動物に、ＲＳＶチャレンジに対して完全な防御を示した動物はなかった。
【０２０４】
チャレンジ動物モデルを用い、我々は、Ｐａ−ＲＳＶ混合ワクチンが、ＲＳＶワクチンと同等の、ＲＳＶに対する防御的な免疫応答を惹起することを示した。この免疫応答は、ＲＳＶ中和抗体の産生に関連していた。
【０２０５】
［実施例３］混合ワクチンは、百日咳菌によるチャレンジに対して防御する
本実施例は、ＲＳＶ及び百日咳菌抗原（ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ）を含む混合ワクチンによって惹起される、百日咳菌（Bordetella Pertussis）に対する防御を実証する。混合Ｐａ−ＲＳＶワクチンの２用量の免疫原性（中和抗体力価）を、Ｂａｌｂ／ｃモデルにおいて評価し、その後、感染性百日咳菌による鼻腔内チャレンジを行って、この混合ワクチンの有効性を測定した。
【０２０６】
ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝２０／群）の群を、皮下２回、３週間間隔で、表２に示した処方物によって免疫した。
【０２０７】
【表２】
2018172417.tif 000004
【０２０８】
全てのマウス由来の血清を、２回目免疫の７日後（ｄ２８−チャレンジの前日）に個別に回収し、そして抗ＰＴ抗体、抗ＦＨＡ抗体及び抗ＰＲＮ  ＩｇＧ抗体の存在について試験した。簡潔にいうと、９６ウェルプレートを、炭酸重炭酸塩緩衝液（５０ｍＭ）中のＦＨＡ（２μｇ／ｍｌ）、ＰＴ（２μｇ／ｍｌ）若しくはＰＲＮ（６μｇ／ｍｌ）にてコーティングし、４℃にて一晩インキュベートした。ＰＢＳ−ＢＳＡ  １％緩衝液による飽和ステップの後、マウス血清を、１／１００にＰＢＳ−ＢＳＡ  ０．２％Ｔｗｅｅｎ０．０５％中で希釈し、そしてプレートのウェル内に、連続的に希釈した（１２希釈、ステップ１／２）。ペルオキシダーゼと結合した抗マウスＩｇＧを添加した（１／５０００希釈）。ペルオキシダーゼ基質（ＯＰＤＡ）添加後、呈色反応を観察し、そして吸光度測定法（波長：４９０〜６２０ｎｍ）による読み取りの前に、ＨＣＬ  １Ｍで停止した。各プレート上に加えた試験した各血清及び標準について、４パラメーターロジスティック曲線を、ＯＤと希釈との間の関係に適合させた（Ｓｏｆｔｍａｘｐｒｏ）。これは、各サンプル力価の導出を、ＳＴＤ力価で示した。ワクチンによって誘導されたＰａ抗原（ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ）に特異的な血清学的抗体応答を、Ｐａワクチンにおいて見出される個別の抗原に対してワクチンが抗体応答を惹起する能力を示すものである（しかし決定的なものではない）と考える。図６Ａは、２回の免疫後、ＤＴＰａが、Ｐａ単独及びＰａ−ＲＳＶ混合でＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮに特異的なＩｇＧ応答を促進したことを示す。ワクチン接種しなかったマウス若しくはＲＳＶワクチン接種したマウス由来の血清中で、抗原特異的抗体が検出されなかった（データは表示せず）。統計学的分析は、ＤＴＰａ（Ｉｎｆａｎｒｉｘ）及びＰａ−ＲＳＶ混合によって誘導された抗ＰＴ抗体応答と抗ＦＴＡ抗体応答との間が同等であることを実証した。Ｐａ単独及びＰａ−ＲＳＶ混合ワクチンによって誘導された抗ＰＲＮ特異的抗体の量もまた、統計学的に同等であり、このことは、ＲＳＶ抗原の存在が、抗パータシス抗体応答の産生に干渉しなかったことを実証した。
【０２０９】
防御を実証するために、追加刺激の１週間後、マウスを、５０μｌの細菌懸濁液（約５Ｅ６  ＣＦＵ／５０μｌ）の左鼻腔への点鼻によってチャレンジした。各群５匹のマウスを、細菌チャレンジの２時間後、２日後、５日後及び８日後に、安楽死させた。肺を、無菌的に採取し、個別にホモジナイズした。肺細菌クリアランスを、Ｂｏｒｄｅｔ−Ｇｅｎｇｏｕアガープレート上のコロニー増殖を計数することによって測定した。データを、各処置群における各採取時点について、１つの肺あたりのコロニー形成単位の数の平均（ＣＦＵ−ｌｏｇ１０）に従って、プロットした。使用した統計学的方法は、異質分散モデルを用いた、２つの因子（処置及び日）によるｌｏｇ１０値に対する分散分析（ＡＮＯＶＡ）である。
【０２１０】
このモデルにおいて、無細胞百日咳菌ワクチン（Ｐａ）は、マウスを、細菌による鼻腔内チャレンジから防御する。従って、この動物モデルは、百日咳菌ベースのワクチンが肺における細菌クリアランスを媒介する能力を研究するために、有用である。単一ワクチン中の百日咳菌（ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ）抗原及びＲＳＶ（Ｐｒｅ−Ｆ）抗原の組み合わせを、鼻腔内チャレンジマウスモデルにおける防御有効性について試験した。典型的結果を、図６Ｂに図示する。予測どおり、調製したヒト用量（市販のＤＴＰａワクチンＩｎｆａｎｒｉｘの４分の１用量）は、ワクチン接種なしのマウスと比較して、細菌クリアランスを効果的に促進した。Ｐａ単独及びＰａ−ＲＳＶ混合ワクチンはまた、両方とも、細菌消滅に導く防御免疫応答を惹起し得る。予測どおり、Ｐｒｅ−Ｆ  ＲＳＶワクチン単独では、この動物モデルを、百日咳菌から防御できなかった。
【０２１１】
これらの結果は、上の実施例２において実証されたように、動物モデルにおいて、Ｐａ−ＲＳＶ混合ワクチンが、百日咳菌に対して及びＲＳＶに対して、防御免疫応答を惹起したことを実証する。この免疫応答は、無細胞Ｐａワクチン（ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮ）において見出される３つのサブユニット抗原に対する特異的抗体の産生に関連していた。
【図１】
2018172417.tif 000005
【図２】
2018172417.tif 000006
【図３】
2018172417.tif 000007
【図４】
2018172417.tif 000008
【図５】
2018172417.tif 000009
【図６】
2018172417.tif 000010
【配列表】
2018172417000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年7月6日(2018.7.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及び百日咳菌（パータシス）によって引き起こされる感染又は疾患からの乳児の防御に使用するための、Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原及び少なくとも１つのパータシス抗原を含む１つ又は複数の免疫原性組成物であって、妊婦への投与のために製剤化され、ＲＳＶ及び百日咳菌の両方に特異的な体液性免疫応答を追加刺激することができ、免疫原性組成物によって妊婦において追加刺激された、ＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及びパータシス特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが、胎盤を介して在胎児に移行し、それによって、乳児をＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる感染又は疾患から防御する免疫原性組成物。
【請求項２】
妊婦への投与による、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）及び百日咳菌（パータシス）によって引き起こされる感染又は疾患からの乳児の防御に使用するための医薬の製造における、Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原及び少なくとも１つのパータシス抗原を含む１つ又は複数の免疫原性組成物の使用であって、該免疫原性組成物がＲＳＶ及び百日咳菌の両方に特異的な体液性免疫応答を追加刺激することができ、免疫原性組成物によって妊婦において追加刺激された、ＲＳＶ特異的抗体の少なくとも１つのサブセット及びパータシス特異的抗体の少なくとも１つのサブセットが、胎盤を介して在胎児に移行し、それによって、乳児をＲＳＶ及びパータシスによって引き起こされる感染又は疾患から防御する、上記使用。
【請求項３】
妊婦がヒトである、請求項１に記載の組成物又は請求項２に記載の使用。
【請求項４】
少なくとも１つの免疫原性組成物が、妊娠２６週以降の妊婦に投与される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物又は使用。
【請求項５】
Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原及び少なくとも１つのパータシス抗原が、同じ免疫原性組成物中に共配合される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物又は使用。
【請求項６】
Ｆタンパク質類似体を含む組換えＲＳＶ抗原及び少なくとも１つのパータシス抗原が、同日に投与（同時投与）される２つの異なる免疫原性組成物中に配合される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物又は使用。
【請求項７】
乳児においてＲＳＶに対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物を、乳児に投与することをさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物又は使用。
【請求項８】
乳児においてパータシスに対する能動免疫応答をプライミングする又は誘導する少なくとも１つの組成物を、乳児に投与することをさらに含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物又は使用。
【請求項９】
乳児に投与される少なくとも１つの組成物が、少なくとも１つのＲＳＶタンパク質抗原又は抗原類似体をコードする核酸、組換えウイルスベクター又はウイルスレプリコン粒子を含む、請求項７又は８に記載の組成物又は使用。
【請求項１０】
前記少なくとも１つのパータシス抗原が、パータシストキソイド（ＰＴ）、糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ＰＲＮ）、２型線毛（ＦＩＭ２）、３型線毛（ＦＩＭ３）及びＢｒｋＡからなる群より選択される少なくとも１つの無細胞パータシス抗原である、請求項１〜９のいずれかに記載の組成物又は使用。
【請求項１１】
少なくとも１つのパータシス抗原が全細胞（Ｐｗ）パータシスである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物又は使用。
【請求項１２】
Ｆタンパク質類似体が可溶性Ｆタンパク質類似体である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物又は使用。
【請求項１３】
Ｆタンパク質類似体が、Ｎ末端からＣ末端の方向で、ＲＳＶ  Ｆタンパク質ポリペプチドのＦ2ドメイン及びＦ1ドメイン、及び異種三量体化ドメインを含み、Ｆ2ドメインとＦ1ドメインとの間にフーリン切断部位がない、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物又は使用。
【請求項１４】
Ｆタンパク質類似体が、
ａ）配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２の群から選択されるポリペプチドを含むポリペプチド、
ｂ）配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２１の群から選択されるポリヌクレオチドによって、又は配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１７、配列番号１９及び配列番号２１の群から選択されるポリヌクレオチドに実質的にその全長にわたってストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドであって、天然に存在するＲＳＶ株に少なくとも部分的に対応するアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｃ）配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１８、配列番号２０及び配列番号２２の群から選択されるポリペプチドに対し少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチドであって、天然に存在するＲＳＶ株に対応しないアミノ酸配列を含むポリペプチド
からなる群より選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物又は使用。
【請求項１５】
Ｆタンパク質類似体及び／又はパータシス抗原が、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、水中油エマルジョン及び鉱物塩の少なくとも１つであるアジュバントを含む少なくとも１つの免疫原性組成物中に配合される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物又は使用。
【請求項１６】
アジュバントがアルミニウム塩（ミョウバン）を含む、請求項１５に記載の組成物又は使用。
【請求項１７】
Ｆタンパク質類似体及び／又はパータシス抗原を含む少なくとも１つの免疫原性組成物が、ＲＳＶ及び百日咳菌以外の病原性生物由来の少なくとも１つのさらなる抗原をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物又は使用。
【請求項１８】
Ｄ及びＴ；Ｄ、Ｔ及びＩＰＶ；Ｄ、Ｔ及びＨＢｓＡｇ；Ｄ、Ｔ及びＨｉｂ；Ｄ、Ｔ、ＩＰＶ及びＨＢｓＡｇ；Ｄ、Ｔ、ＩＰＶ及びＨｉｂ；Ｄ、Ｔ、ＨＢｓＡｇ及びＨｉｂ；又はＤ、Ｔ、ＩＰＶ、ＨＢｓＡｇ及びＨｉｂをさらに含む、請求項１７に記載の組成物又は使用。