(57)【要約】【課題】新規な抗酸化系酵素群産生促進剤を提供すること。【解決手段】有効成分として３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を含有する抗酸化系酵素群産生促進剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を含有する、抗酸化系酵素群産生促進剤。
【請求項２】
ヒト線維芽細胞における抗酸化系酵素群の産生促進に用いられる、請求項１に記載の抗酸化系酵素群産生促進剤。
【請求項３】
前記抗酸化系酵素群が、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ及びグルタチオンペルオキシダーゼである、請求項２に記載の抗酸化系酵素群産生促進剤。
【請求項４】
内服用に用いられる、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗酸化系酵素群産生促進剤。
【請求項５】
３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を０．０１質量％以上２５質量％以下含有する、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗酸化系酵素群産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗酸化系酵素群産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生体成分を酸化させる要因として活性酸素が注目されており、生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、主に生体細胞内におけるエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド（すなわち酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン：・Ｏ２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）及び一重項酸素（１Ｏ２）などがある。これらの活性酸素は、好中球やマクロファージなどの食細胞による細胞内殺菌機構に関与するものであり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な役割を果たしているが、活性酸素が過剰に生成されると、活性酸素が細胞膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発するおそれがある。例えば、過酸化水素は、炎症、過酸化脂質の生成、種々の酵素の失活及びＤＮＡの損傷などを引き起こすことが知られている。また、従来、カタラーゼ、スーパーオキシドアニオン等の活性酸素種を消去する抗酸化剤は多く知られている（特許文献１，２参照）。またカタラーゼ産生促進剤も知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００６−００８５７１号公報
【特許文献２】特開２０１５−１６６３３０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
通常、過酸化水素がカタラーゼなどの過酸化水素分解酵素により分解されることで、生体内の過酸化水素濃度は低く維持され、その結果、過酸化水素によって生じる細胞や組織の酸化障害は回避されている。また、カタラーゼ産生促進剤のように細胞内において抗酸化能のある酵素の生産を促進することによって、細胞内において抗酸化能を高めることも考えられる。しかしながら、さらに、安全性が高く、かつ抗酸化作用が効果的に発揮される抗酸化剤やその産生促進剤が望まれている。そこで、カタラーゼのみならず、抗酸化系酵素群(スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ)に対して産生促進できれば、上記要望に応えるものとなると考えられる。
【０００５】
したがって、本発明は上記実状に鑑み、抗酸化系酵素群産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するための本発明の抗酸化系酵素群産生促進剤の特徴構成は、有効成分として３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を含有する点にある。
また、ヒト線維芽細胞（老化していない正常細胞）における抗酸化系酵素群の産生促進に用いられることが好ましい。
なお、抗酸化系酵素群は、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ及びグルタチオンペルオキシダーゼであることが好ましい。
さらに、抗酸化系酵素群産生促進剤は、内服用であってもよい。
ここで、３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を０．０１質量％以上２５質量％以下含有することができる。
【０００７】
本発明者らは、鋭意研究の結果、３ＨＢがヒト線維芽細胞（正常細胞）において、抗酸化系酵素群(スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ)産生促進効果を示すことを実験的に明らかにして、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、３ＨＢにより、抗酸化系酵素群を産生促進することで、細胞内における酸化ストレス耐性を向上させる効果が期待できる。
【０００９】
このような抗酸化系酵素群産生促進剤は、内服、外用いずれの形態でも用いることができ、たとえば、化粧水、乳液、クリーム、錠剤、清涼飲料水のような形態で用いることができる。
また、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
その他、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類なども適宜配合することができる。
【発明の効果】
【００１０】
したがって、抗酸化系酵素群(スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ)を産生促進することにより、効率的に細胞内から抗酸化能を高めることができた。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下に、本発明の抗酸化系酵素群産生促進剤を説明する。尚、以下に好適な実施例を記すが、これら実施例はそれぞれ、本発明をより具体的に例示するために記載されたものであって、本発明の趣旨を逸脱しない範囲において種々変更が可能であり、本発明は、以下の記載に限定されるものではない。
【００１２】
本発明の実施例にかかる抗酸化系酵素群産生促進剤は、有効成分として３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を含有するものである。
【００１３】
〔３ＨＢ〕
３ＨＢは、３ＨＢ生産性のハロモナス菌を添加した発酵プロセスを行い、得られた発酵液からハロモナス菌を分離除去し、精製することにより得られる。発酵プロセスは、果汁等の糖質栄養源を含有する原料液に、３ＨＢ生産性のハロモナス菌をそのまま添加し、好気発酵、嫌気発酵を順に行うプロセス（特開２０１３−０８１４０３号公報等参照）として実施することができる。これにより、糖質が３ＨＢに変換され、３ＨＢが発酵液中に生産されることになる。
【００１４】
なお３ＨＢの製造工程は、上記微生物によるものによらず、他の生物学的手法で製造するものであってもよいし、化学的に合成するものであってもよい。
【００１５】
〔抗酸化系酵素群産生促進効果〕
（１）  セネッセンス細胞の調製
ヒト皮膚線維芽細胞の老化モデルを過酸化水素処理により調製した。調製方法を以下に記載する。
<1>ヒト皮膚線維芽細胞を１００ｍｍのディッシュに４．４×１０６ 個播種し、ＣＯ２インキュベータで一晩静置した。
<2>上清を除去後、１００μＭの過酸化水素を含有するＤ−ＭＥＭ培地に交換し、１時間、ＣＯ２インキュベータで静置した。静置後、上清を除去し１０％ＦＢＳを含有するＤ−ＭＥＭ培地に交換し、ＣＯ２インキュベータで一晩静置した。
<3><2>の工程を４日間連続して実施した。
<4>上清除去後、１００μＭの過酸化水素を含有するＤ−ＭＥＭ培地に交換し、１時間ＣＯ２インキュベータで静置した。静置後、上清を除去し１０％ＦＢＳを含有するＤ−ＭＥＭ培地に交換し、６０時間、ＣＯ２インキュベータで静置した。
<5>細胞でセネッセンスが起こっているかどうかは、セネッセンスで特異的に発現するβ―ガラクトシダーゼを検出することで判断した。β―ガラクトシダーゼの検出には細胞内ＳＡ β−Ｇａｌ染色キット(コスモバイオ)を用いた。
【００１６】
（２）  ３ＨＢ添加試験
正常細胞または調製したセネッセンス細胞を96ウェルプレートに，1ウエルあたり２×１０４個播種した。播種24時間後に５００ｍｇ/Ｌの３ＨＢを含有するＤ−ＭＥＭ培地に交換し，更に24時間培養を実施した。
【００１７】
（３）  ＲＮＡの調製
ＲＮＡの抽出は、QuickGene RNA cultured cell kit S(クラボウ)を用いて実施した。
【００１８】
（４）  ＤＮＡチップ解析
皮膚チップおよび酸化ストレス・アンチエイジングチップ(三菱レイヨン)を用いてＤＮＡチップ解析を実施した。
３ＨＢを添加せず培養した（表１中「無添加」）正常細胞におけるカタラーゼ酵素ＣＡＴの発現量を基準値（１）とし、当該基準値に対する３ＨＢを添加せず培養したセネッセンス細胞のカタラーゼ酵素ＣＡＴの発現量の割合、及び、当該基準値に対する３ＨＢを添加し培養した（表１中「３ＨＢ添加」）正常細胞、セネッセンス細胞のカタラーゼ酵素ＣＡＴ（表１中「ＣＡＴ」）の発現量の比をそれぞれ測定した。その結果を表１に示す。
同様に、３ＨＢを添加せず培養した（表１中「無添加」）正常細胞におけるその他の酵素（「ＧＰＸ１〜４」、「ＳＯＤ１〜３」）の発現量を基準値（１）とし、当該基準値に対する３ＨＢを添加せず培養したセネッセンス細胞の各酵素（「ＧＰＸ１〜４」、「ＳＯＤ１〜３」）の発現量の割合、及び、当該基準値に対する３ＨＢを添加し培養した（表１中「３ＨＢ添加」）正常細胞、セネッセンス細胞の各酵素（グルタチオンペルオキシダーゼ（表１中「ＧＰＸ１〜４」）、スーパーオキシドジスムターゼ（表１中「ＳＯＤ１〜３」））の発現量の比をそれぞれ測定した。その結果を表１に示す。
【００１９】
【表１】
2018158899.tif 000002
【００２０】
表１の結果より、３ＨＢには正常細胞（老化していない正常なヒト線維芽細胞）における抗酸化系酵素の産生促進効果があり、効率的に細胞内から抗酸化能を高めることが期待できることが分かった。
【００２１】
このような抗酸化系酵素産生促進剤は、下記表２〜６のような組成物として調整され、化粧水、乳液、クリーム、錠剤、清涼飲料水の形態で用いられる。
【００２２】
〔化粧水〕
【表２】
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【００２３】
〔乳液〕
【表３】
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【００２４】
〔クリーム〕
【表４】
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【００２５】
〔錠剤〕
【表５】
2018158899.tif 000006
【００２６】
〔清涼飲料水〕
【表６】
2018158899.tif 000007
【００２７】
上述の通り、有効成分として３ＨＢ（Ｒ−３ヒドロキシ酪酸）を含有する化粧水、乳液、クリーム、錠剤、清涼飲料水などの抗酸化系酵素群産生促進剤は、いずれも正常細胞（老化していない正常なヒト線維芽細胞）における抗酸化系酵素群(スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ)の産生を促進し、皮膚の老化を防ぐことが期待できる。
【産業上の利用可能性】
【００２８】
本発明によると、皮膚の線維を保護し、皮膚の老化の予防や改善作用に優れ、かつ安全性の高い抗酸化系酵素群産生促進剤を提供することができた。