(57)【要約】      （修正有）【課題】組み合わせ製剤として又は交互に治療用組み合わせを哺乳動物に投与することを含む過剰増殖性障害の処置方法【解決手段】治療上有効な量のＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される治療上有効な量の化学療法剤と、を含む、方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
組み合わせ製剤として又は交互に治療用組み合わせが哺乳動物に投与されることを含む過剰増殖性障害の処置方法であって、治療用組み合わせが、構造：
2018065793.tif 000035
を有する治療上有効な量のＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される治療上有効な量の化学療法剤とを含む、方法。
【請求項２】
化学療法剤が５−ＦＵである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
化学療法剤がドセタキセルである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
化学療法剤がエリブリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
化学療法剤がゲムシタビンである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
化学療法剤がＧＤＣ−０９７３である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
化学療法剤がＧＤＣ−０６２３である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
化学療法剤がパクリタキセルである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
化学療法剤がタモキシフェンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
化学療法剤がフルベストラントである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
化学療法剤がデキサメタゾンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
化学療法剤がペルツズマブである、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
化学療法剤がトラスツズマブエムタンシンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
化学療法剤がトラスツズマブである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
化学療法剤がレトロゾールである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
治療用組み合わせがカルボプラチンを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
治療用組み合わせが抗ＶＥＧＦ抗体を更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
抗ＶＥＧＦ抗体がベバシズマブである、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
ＧＤＣ−００３２の薬学的に許容可能な塩が、塩酸と形成される塩、臭化水素酸と形成される塩、ヨウ化水素酸と形成される塩、硫酸と形成される塩、硝酸と形成される塩、リン酸と形成される塩、メタンスルホン酸と形成される塩、ベンゼンスルホン酸と形成される塩、ギ酸と形成される塩、酢酸と形成される塩、トリフルオロ酢酸と形成される塩、プロピオン酸と形成される塩、シュウ酸と形成される塩、マロン酸と形成される塩、コハク酸と形成される塩、フマル酸と形成される塩、マレイン酸と形成される塩、乳酸と形成される塩、リンゴ酸と形成される塩、酒石酸と形成される塩、クエン酸と形成される塩、エタンスルホン酸と形成される塩、アスパラギン酸と形成される塩及びグルタミン酸と形成される塩から選択される、請求項１から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２０】
治療上有効な量のＧＤＣ−００３２と治療上有効な量の化学療法剤とが組み合わせ製剤として投与される、請求項１から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
治療上有効な量のＧＤＣ−００３２と治療上有効な量の化学療法剤とが交互に哺乳動物に投与される、請求項１から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
哺乳動物が、化学療法剤を投与され、その後にＧＤＣ−００３２を投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
治療上有効な量のＧＤＣ−００３２が１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与され、治療上有効な量の化学療法剤が１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与される投薬レジメンにより治療用組み合わせが投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
投薬レジメンが１回又は複数回繰り返される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
治療用組み合わせの投与により相乗効果が生じる、請求項１から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２６】
治療用組み合わせの投与により約０．７未満の組み合わせ指数値が得られる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
過剰増殖性障害が、乳房、子宮頸部、結腸、子宮内膜、胃、神経膠腫、肺、メラノーマ、卵巣、膵臓及び前立腺から選択される癌である、請求項１から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２８】
癌が、Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ、Ｑ５４６Ｒ、Ｈ１０４７Ｌ及びＨ１０４７Ｒから選択されるＰＩＫ３ＣＡ変異体を発現する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
癌がＰＴＥＮ変異体を発現する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
癌がＨＥＲ２陽性である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
哺乳動物が乳癌患者であり、患者がＨＥＲ２陰性、ＥＲ（エストロゲンレセプター）陰性及びＰＲ（プロゲステロンレセプター）陰性である、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
乳癌のサブタイプが基底又はルミナルである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
患者がＧＤＣ−００３２及びエリブリンを投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
ＧＤＣ−００３２及び化学療法剤が単位投薬形態当たり約１ｍｇから約１０００ｍｇの量でそれぞれ投与される、請求項１から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項３５】
ＧＤＣ−００３２及び化学療法剤が約１：５０から約５０：１の重量比で投与される、請求項１から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
ＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤とを含む薬学的製剤。
【請求項３７】
二酸化ケイ素、粉末化セルロース、微結晶セルロース、金属ステアレート、アルミノケイ酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、炭酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、コーンスターチ、炭酸マグネシウム、アスベストフリータルク、ステアロウェットＣ、スターチ、スターチ１５００、ラウリル硫酸マグネシウム、酸化マグネシウム及びそれらの組み合わせから選択される薬学的に許容可能な滑剤を更に含む請求項３６に記載の薬学的製剤。
【請求項３８】
ＧＤＣ−００３２と化学療法剤とが単位投薬形態当たり約１ｍｇから約１０００ｍｇの量をそれぞれ占める、請求項３６に記載の薬学的製剤。
【請求項３９】
癌の処置方法で使用するための請求項３６に記載の薬学的製剤。
【請求項４０】
乳房、子宮頸部、結腸、子宮内膜、神経膠腫、肺、メラノーマ、卵巣、膵臓及び前立腺から選択される癌の処置用の医薬の製造における、構造：
2018065793.tif 000036
を有するＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせの使用。
【請求項４１】
ａ）請求項１から１９の何れか一項に記載の治療用組み合わせ、及び
ｂ）使用説明書
を含む、過剰増殖性障害の処置用製造品。
【請求項４２】
過剰増殖性障害の処置で別々に、同時に又は順次に使用するための組み合わせ製剤としての、構造：
2018065793.tif 000037
を有するＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤と含む製品。
【請求項４３】
ａ）構造：
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を有するＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせで、Ｋ−ｒａｓ変異を有する腫瘍細胞株をインビトロで処置すること、並びに
ｂ）相乗効果又は非相乗効果を測定すること
を含み、それにより癌の処置用の相乗的な治療用組み合わせを決定する、癌の処置に組み合わせて使用する化合物の決定方法。
【請求項４４】
ａ）構造：
2018065793.tif 000039
を有するＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせを腫瘍細胞に投与すること、
ｂ）ｐＡｋｔレベルの変化を測定すること、並びに
ｃ）ｐＡｋｔレベルの増加を示す相乗的な治療用組み合わせを選択すること
を含む、癌の処置に組み合わせて使用する化合物の選択方法。
【請求項４５】
治療上有効な量のＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との組み合わせを患者に投与することを含む、患者の過剰増殖性障害の処置方法であって、患者から得られた生体試料は組み合わせの患者への投与前にＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変異状態に関して検査されており、ＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変異状態が組み合わせに対する患者による治療反応性を示す、方法。
【請求項４６】
治療上有効な量のＧＤＣ−００３２が単剤として患者に投与される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ＧＤＣ−００３２と化学療法剤との治療上有効な量の組み合わせが患者に投与される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
過剰増殖性障害がＨＥＲ２発現乳癌である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの投与後に機能的ＰＩ３Ｋタンパク質レベルを測定することにより生体試料は検査されており、機能的ＰＩ３Ｋタンパク質のレベルの変化は、患者がＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせに対して耐性又は反応性であることを示す、請求項４５に記載の方法。
【請求項５０】
（ａ）ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との組み合わせの少なくとも単回用量の投与後に患者から得られた生体試料におけるＰＩＫ３ＣＡ変異又はＰＴＥＮ変異を検出すること、並びに
（ｂ）ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの患者への投与前に患者から得られた生体試料におけるＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変異状態を比較すること
を含む、過剰増殖性障害を患う患者がＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせによる処置に反応するかどうかのモニタリング方法であって、
ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの投与後に得られた試料におけるＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変異状態の変化又はモジュレーションにより、ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせによる処置に反応する患者を同定する、方法。
【請求項５１】
過剰増殖性障害がＨＥＲ２発現乳癌である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
（ａ）ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との組み合わせの少なくとも単回用量の投与後に患者から得られた生体試料におけるＰＩＫ３ＣＡ変異又はＰＴＥＮ変異を検出すること、並びに
（ｂ）ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの患者への投与前に患者から得られた生体試料におけるＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの状態を比較すること
を含む、過剰増殖性障害の処置におけるＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの治療効果の最適化方法であって、
ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの投与後に得られた試料におけるＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変化又はモジュレーションにより、ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせによる処置が有効である可能性が増加している患者を同定する、方法。
【請求項５３】
過剰増殖性障害がＨＥＲ２発現乳癌である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
（ａ）ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との組み合わせの少なくとも単回用量が投与されている患者から得られた生体試料におけるＰＩＫ３ＣＡ変異又はＰＴＥＮ変異から選択されるバイオマーカーの発現、モジュレーション又は活性を検出すること、並びに
（ｂ）バイオマーカーの発現、モジュレーション又は活性と参照試料におけるバイオマーカーの状態とを比較することであって、参照試料がＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの患者への投与前に患者から得られた生体試料であること
を含む、過剰増殖性障害の処置におけるＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせに対する反応性のモニタリング用バイオマーカーの同定方法であって、
参照試料と比較して少なくとも２分の１又は２倍のバイオ−マーカー変化のモジュレーションを、ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせに対する反応性のモニタリングに有用なバイオマーカーとして同定する、方法。
【請求項５５】
過剰増殖性障害がＨＥＲ２発現乳癌である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
治療上有効な量のＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との組み合わせを患者に投与することを含む、患者の過剰増殖性障害の処置方法であって、処置がＰＩＫ３ＣＡ変異又はＰＴＥＮ変異を有する患者からの試料に基づく、方法。
【請求項５７】
バイオマーカーの変異がＰＩＫ３ＣＡのＨ１０４７Ｒ変異又はＨ１０４７Ｌ変異である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
バイオマーカーの変異がＰＩＫ３ＣＡのＥ５４２Ｋ変異、Ｅ５４５Ｋ変異又はＱ５４６Ｒ変異である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
過剰増殖性障害がＨＥＲ２発現乳癌である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
過剰増殖性障害がエストロゲンレセプター陽性（ＥＲ＋）乳癌である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
治療上有効な量のＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との組み合わせを患者に投与することを含む、患者の過剰増殖性障害の処置でのＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの使用であって、
患者から得られた生体試料はＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの患者への投与前にＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変異状態に関して検査されており、ＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変異状態がＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせに対する患者による治療反応性を示す、使用。
【請求項６２】
過剰増殖性障害がＨＥＲ２発現乳癌である、請求項６１に記載の使用。
【請求項６３】
過剰増殖性障害がエストロゲンレセプター陽性（ＥＲ＋）乳癌である、請求項６１に記載の使用。
【請求項６４】
乳房、子宮頸部、結腸、子宮内膜、神経膠腫、肺、メラノーマ、卵巣、膵臓及び前立腺から選択される癌の処置に使用するための、構造：
2018065793.tif 000040
を有するＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせ。
【請求項６５】
乳房、子宮頸部、結腸、子宮内膜、神経膠腫、肺、メラノーマ、卵巣、膵臓及び前立腺から選択される癌の処置における、構造：
2018065793.tif 000041
を有するＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせの使用。
【請求項６６】
上記に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願とのクロスリファレンス
米国特許法施行規則第３７条１．５３（ｂ）に基づき出願した本非仮出願は、出典明示によりその全体が援用される２０１２年６月８日出願の米国仮出願第６１／６５７４８４号及び２０１３年４月５日出願の米国仮出願第６１／８０８７２７号について米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく利益を主張する。
【０００２】
本発明は一般的に、ＰＩ３キナーゼ活性を阻害する化合物による、癌等の過剰増殖性障害の処置に関する。本発明はまた、哺乳動物細胞又は関連する病的状態のインビトロでの、インサイチュでの及びインビボでの診断又は処置のための化合物の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
投薬レジメンにおいて同時に又は順次に投与される抗癌の薬学的治療の組み合わせは、癌の処置において今や一般的である。成功した組み合わせ治療は、単独治療、即ち１種の薬剤に限定された薬学的処置よりも改善され更に相乗的な効果をもたらす（Ouchi等(2006) Cancer Chemother. Pharmacol. 57:693-702；Higgins等(2004) Anti-Cancer Drugs 15:503-512）。前臨床研究は、乳癌を処置するためのカペシタビン及びタキサン等の抗癌の薬学的治療の組み合わせの臨床段階での相乗作用を予測するための基礎となっている（Sawada等 (1998) Clin. Cancer Res. 4:1013-1019）。組み合わせ治療のある種の用量及びスケジュールは、有効性を損なうことなく安全性を向上させることができる（O’Shaughnessy等(2006) Clin. Breast cancer Apr 7(1):42-50）。インビトロでの相乗効果は臨床段階での相乗作用と相関性がある（Steinbach等(2003) Clin. Inf. Dis. Oct 1:37 Suppl 3:S188-224）。
【０００４】
ホスホイノシチド−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／Ａｋｔシグナル伝達経路の上方制御は、ほとんどの癌において共通する特徴である（Yuan及びCantley (2008) Oncogene 27:5497-510）。本経路での遺伝的な偏向は、多くのヒト癌において検出されており（Osaka等(2004) Apoptosis 9:667-76）、細胞の増殖、遊走及び生存を刺激するように主に作用する。ｐ１１０ａＰＩ３ＫアイソフォームをコードするＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の点変異又は増幅を活性化した後に本経路の活性化が起こる（Hennessy等(2005) Nat. Rev. Drug Discov. 4:988-1004）。ＰＩ３Ｋと反対の機能を有するホスファターゼである腫瘍抑制因子ＰＴＥＮ内での遺伝子欠失又は機能喪失変異によっても、ＰＩ３Ｋ経路でのシグナル伝達が増加する（Zhang及びYu(2010) Clin. Cancer Res. 16:4325-30）。これらの異常により、Ａｋｔ及びｍＴＯＲ等のキナーゼをとおして下流シグナル伝達の増加がもたらされる、ＰＩ３Ｋ経路の活性の増加を癌処置に対する耐性の特質とすることが提案されている（Opel等(2007) Cancer Res. 67:735-45；Razis等(2011) Breast cancer Res. Treat. 128:447-56）。
【０００５】
ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、リンパ腫にとって重要な生存シグナル及び増殖シグナルに関する主要なシグナル伝達のノードであり、ホスファターゼＰＴＥＮの活性とは対立するものである。ＰＩ３Ｋ経路は、侵攻性のリンパ腫では調節不全である（Abubaker (2007) Leukemia 21:2368-2370）。ＤＬＢＣＬ（びまん性大型Ｂ細胞リンパ腫）癌の８パーセントがＰＩ３ＣＡ（ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ触媒サブユニットアルファ）のミスセンス変異を有し、３７％が免疫組織化学検査によりＰＴＥＮ陰性である。
【０００６】
ホスファチジルイノシトールは細胞膜で見出された多くのリン脂質の内の１つであり、細胞内シグナル伝達に関与する。３’−リン酸化ホスホイノシチドを介する細胞シグナル伝達は、様々な細胞プロセス、例えば悪性形質転換、増殖因子シグナル伝達、炎症及び免疫に関与している（Rameh等(1999) J. Biol Chem. 274:8347-8350）。これらのリン酸化シグナル伝達産物の生成に関与する酵素であるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼ又はＰＩ３Ｋとも称される）は、ウイルスの腫瘍性タンパク質とホスファチジルイノシトール（ＰＩ）及びそのリン酸化誘導体をイノシトール環の３’−ヒドロキシルでリン酸化する増殖因子レセプターチロシンキナーゼとに関連する活性として元々は同定された（Panayotou等(1992) Trends Cell Biol 2:358-60）。ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、イノシトール環の３−ヒドロキシル残基で脂質をリン酸化する脂質キナーゼである（Whitman等(1988) Nature, 332:664）。ＰＩ３−キナーゼによって生成される３−リン酸化リン脂質（ＰＩＰ３）は、Ａｋｔ及びＰＤＫ１、ホスホイノシチド依存性キナーゼ−１等の脂質結合ドメイン（プレクストリン相同（ＰＨ）領域を含む）を有するキナーゼをリクルートするセカンドメッセンジャーとして作用する（Vivanco等(2002) Nature Rev. Cancer 2:489；Phillips等(1998) Cancer 83:41）。
【０００７】
ＰＩ３キナーゼファミリーは、構造的相同性によって細分類される少なくとも１５種の異なる酵素を含み、配列相同性と酵素触媒作用によって形成される産物とに基づいて３種のクラスに分けられる。クラスＩのＰＩ３キナーゼは２つのサブユニット、即ち１１０ｋｄの触媒サブユニット及び８５ｋｄの調節サブユニットから構成される。調節サブユニットはＳＨ２ドメインを含有しており、チロシンキナーゼ活性を有する増殖因子レセプター又は癌遺伝子産物によりリン酸化されたチロシン残基に結合し、それによって脂質基質をリン酸化するｐ１１０触媒サブユニットのＰＩ３Ｋ活性が誘導される。クラスＩのＰＩ３キナーゼは、サイトカイン、インテグリン、増殖因子及び免疫レセプターの下流の重要なシグナル伝達事象に関与していることから、この経路を制御することにより細胞増殖及び発癌の調節等の重要な治療効果がもたらされうることが示唆される。クラスＩのＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルイノシトール−４−リン酸及びホスファチジルイノシトール−４，５−二リン酸（ＰＩＰ２）をリン酸化してホスファチジルイノシトール−３−リン酸（ＰＩＰ）、ホスファチジルイノシトール−３，４−二リン酸及びホスファチジルイノシトール−３，４，５−三リン酸をそれぞれ生成することができる。クラスＩＩのＰＩ３Ｋは、ＰＩ及びホスファチジルイノシトール−４−リン酸をリン酸化する。クラスＩＩＩのＰＩ３ＫはＰＩのみをリン酸化することができる。癌において鍵となるＰＩ３−キナーゼアイソフォームは、ｐ１１０αにおける再発性の発癌性変異によって示されるクラスＩのＰＩ３−キナーゼ、ｐ１１０αである（Samuels等(2004) Science 304:554；米国特許５８２４４９２号；米国特許５８４６８２４号；米国特許６２７４３２７号）。他のアイソフォームが、癌において重要である可能性があり、心血管系疾患及び免疫炎症性疾患においても関与している（Workman P (2004) Biochem Soc Trans 32:393-396；Patel等(2004) Proc. Am. Assoc. of Cancer Res. (Abstract LB-247) 95th Annual Meeting, March 27-31, Orlando, Florida, USA；Ahmadi K及びWaterfield MD (2004) “Phosphoinositide 3-Kinase: Function and Mechanisms” Encyclopedia of Biological Chemistry (Lennarz W J, Lane M D編) Elsevier/Academic Press）。ｐ１１０アルファの発癌性変異は、結腸、乳房、脳、肝臓、卵巣、胃、肺及び頭頸部の固形腫瘍において著しい頻度で見出されている。ホルモンレレセプター陽性（ＨＲ＋）乳癌腫瘍の約３５−４０％は、ＰＩＫ３ＣＡ変異を持つ。ＰＴＥＮ異常は、神経膠芽腫、メラノーマ、前立腺、子宮内膜、卵巣、乳房、肺、頭頸部、肝細胞及び甲状腺の癌において見出されている。
【０００８】
ＰＩ３キナーゼは、ｐ８５サブユニット及びｐ１１０サブユニットから成るヘテロ二量体である（Otsu等(1991) Cell 65:91-104；Hiles等(1992) Cell 70:419-29）。それぞれが異なる１１０ｋＤａの触媒サブユニット及び調節サブユニットから成る、ＰＩ３Ｋα（アルファ）、β（ベータ）、δ（デルタ）及びω（ガンマ）と称される４種の異なるクラスＩのＰＩ３Ｋが同定されている。３種の触媒サブユニット、即ちｐ１１０アルファ、ｐ１１０ベータ及びｐ１１０デルタはそれぞれ、同じ調節サブユニットであるｐ８５と相互作用するが、ｐ１１０ガンマは異なる調節サブユニットであるｐ１０１と相互作用する。ヒトの細胞及び組織におけるこれらのＰＩ３Ｋの各々の発現パターンは異なる。ＰＩ３Ｋアルファ、ベータ及びデルタのサブタイプの各々では、ｐ８５サブユニットは、ｐ８５サブユニットのＳＨ２ドメインと標的タンパク質において（適切な配列構成中に存在する）リン酸化チロシン残基との相互作用によってＰＩ３キナーゼを形質膜に局在化させるように作用する（Rameh等(1995) Cell, 83:821-30；Volinia等(1992) Oncogene, 7:789-93）。
【０００９】
バイオマーカー（例えば血漿中に分泌されたタンパク質）の発現レベルの測定は、例えば化学療法剤による処置を含む特定の治療に反応することができる患者及び患者集団を同定するのに有効な手段となりえる。化学療法剤が単剤として使用されるか他の薬剤と組み合わされるかにかかわらず、癌等の過剰増殖性障害を患うどの患者が化学療法剤によるどの処置に反応することができることを決定するための、及びそのような決定を患者のより有効な処置レジメンに組み込むための、より有効な手段が必要とされている。
【００１０】
ＰＩ３キナーゼ／Ａｋｔ／ＰＴＥＮ経路は癌薬剤の開発のための魅力的な標的であり、なぜならば、そのような薬剤は、細胞増殖を阻害すること、癌細胞の生存性及び化学治療抵抗性を付与する間質細胞からのシグナルを抑制すること、アポトーシスの抑制を逆転させて癌細胞の細胞傷害剤に対する内因性の耐性を克服することが予期されるであろうからである。ＰＩ３Ｋキナーゼ阻害剤が報告されている（Yaguchi等(2006) Jour. of the Nat. Cancer Inst. 98(8):545-556；米国特許７１７３０２９号；米国特許７０３７９１５号；米国特許６６０８０５６号；米国特許６６０８０５３号；米国特許６８３８４５７号；米国特許６７７０６４１号；米国特許６６５３３２０号；米国特許６４０３５８８号；米国特許７７５０００２号；国際公開第２００６／０４６０３５号；米国特許７８７２００３号；国際公開第２００７／０４２８０６号；国際公開第２００７／０４２８１０号；国際公開第２００４／０１７９５０号；米国特許出願第２００４／０９２５６１号；国際公開第２００４／００７４９１号；国際公開第２００４／００６９１６号；国際公開第２００３／０３７８８６号；米国特許出願第２００３／１４９０７４号；国際公開第２００３／０３５６１８号；国際公開第２００３／０３４９９７号；米国特許出願第２００３／１５８２１２号；欧州特許１４１７９７６号；米国特許出願第２００４／０５３９４６号；日本国特許出願第２００１２４７４７７号；日本国特許０８１７５９９０号；日本国特許０８１７６０７０号）。
【００１１】
ある種のチエノピリミジン化合物は、ｐ１１０アルファ結合活性、ＰＩ３キナーゼ阻害活性を有し、癌細胞の増殖を阻害する（Wallin等(2011) Mol. Can. Ther. 10(12):2426-2436；Sutherlin等(2011) Jour. Med. Chem. 54:7579-7587；米国特許出願第２００８／０２０７６１１号；米国特許７８４６９２９号；米国特許７７８１４３３号；米国特許出願第２００８／００７６７５８号；米国特許７８８８３５２号；米国特許出願第２００８／０２６９２１０号）。ＧＤＣ−０９４１（ＣＡＳ登録番号９５７０５４−３０−７、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）は、有望な薬物動態特性及び薬学的特性を有する選択的で経口で生物学的に利用可能なＰＩ３Ｋ阻害剤であり（Folkes等(2008) Jour. of Med. Chem. 51(18):5522-5532；米国特許７７８１４３３号；Belvin等, American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 15, Abstract 4004；Folkes等, American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 14, Abstract LB-146；Friedman等, American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 14, Abstract LB-110）、固形腫瘍細胞株に対するある種の化学療法剤との組み合わせにおいてインビトロで及びインビボで相乗活性を示す（米国特許出願第２００９／００９８１３５号）。
【００１２】
２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパンアミドと命名されているＧＤＣ−００３２（Ｒｏｃｈｅ  ＲＧ７６０４、ＣＡＳ登録番号１２８２５１２−４８−４）は強力なＰＩ３Ｋ活性を有し（国際公開第２０１１／０３６２８０号；米国特許８２４２１０４号；米国特許８３４３９５５号）、局所進行性の又は転移性の固形腫瘍を患う患者で研究されている。
【発明の概要】
【００１３】
本出願は、以下に列挙する本発明の態様の任意の組み合わせも含む。
【００１４】
インビトロ及びインビボでの癌細胞の増殖の阻害における相加効果又は相乗効果を、ある種の他の特定の化学療法剤と組み合わせて化合物ＧＤＣ−００３２又はその薬学的に許容可能な塩を投与することにより実現することができるとの結論に至っている。本組み合わせ及び本方法は、癌等の過剰増殖性障害の処置において有用であることができる。
2018065793.tif 000002
GDC-0032
【００１５】
一態様では、本発明は、組み合わせ製剤として又は交互に治療用組み合わせを哺乳動物に投与することを含む過剰増殖性障害の処置方法であって、治療用組み合わせが、構造：
2018065793.tif 000003
を有する治療上有効な量のＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される治療上有効な量の化学療法剤とを含む方法を含む。
【００１６】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害の処置方法であって、ＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される１種又は複数種の化学療法剤との投与が過剰増殖性障害の処置において相乗効果をもたらす方法を提供する。更なる態様では、相乗効果は約０．８未満の組み合わせ指数値を有する。
【００１７】
一態様では、本発明は、カルボプラチンを更に含む治療用組み合わせを提供する。
【００１８】
一態様では、本発明は、抗ＶＥＧＦ抗体を更に含む治療用組み合わせを含む。
【００１９】
一態様では、本発明は、抗ＶＥＧＦ抗体がベバシズマブであることを含む。
【００２０】
一態様では、本発明は、ＧＤＣ−００３２の薬学的に許容可能な塩が、塩酸と形成される塩、臭化水素酸と形成される塩、ヨウ化水素酸と形成される塩、硫酸と形成される塩、硝酸と形成される塩、リン酸と形成される塩、メタンスルホン酸と形成される塩、ベンゼンスルホン酸と形成される塩、ギ酸と形成される塩、酢酸と形成される塩、トリフルオロ酢酸と形成される塩、プロピオン酸と形成される塩、シュウ酸と形成される塩、マロン酸と形成される塩、コハク酸と形成される塩、フマル酸と形成される塩、マレイン酸と形成される塩、乳酸と形成される塩、リンゴ酸と形成される塩、酒石酸と形成される塩、クエン酸と形成される塩、エタンスルホン酸と形成される塩、アスパラギン酸と形成される塩及びグルタミン酸と形成される塩から選択されることを含む。
【００２１】
一態様では、本発明は、治療上有効な量のＤＧＣ−００３２又はＤＧＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせを患者に投与することを含む患者の過剰増殖性障害の処置方法であって、組み合わせの患者への投与前に患者から得られた生体試料はバイオマーカーの状態に関して検査されており、バイオマーカーの状態がＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせに対する患者による治療反応性を示す方法を含む。一実施態様では、生体試料は機能的バイオマーカータンパク質のレベルを測定することにより検査されており、機能的バイオマーカーのレベルの上昇は患者がＧＤＣ−００３２又は組み合わせに対して耐性であることを示す。別の実施態様では、生体試料は機能的バイオマーカーのレベルを測定することにより検査されており、機能的バイオマーカーのレベルの上昇又は低下は患者がＧＤＣ−００３２又は組み合わせに対して耐性であることを示す。
【００２２】
一態様では、本発明は、ＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤とを含む薬学的製剤を含む。
【００２３】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害の処置用の医薬の製造における、ＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせの使用を含む。
【００２４】
一態様では、本発明は、乳房、子宮頸部、結腸、子宮内膜、神経膠腫、肺、メラノーマ、卵巣、膵臓及び前立腺から選択される癌の処置用の医薬の製造における、ＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせの使用を含む。
【００２５】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害の処置で使用するための、構造：
2018065793.tif 000004
を有するＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせを含む。
【００２６】
一態様では、本発明は、乳房、子宮頸部、結腸、子宮内膜、神経膠腫、肺、メラノーマ、卵巣、膵臓及び前立腺から選択される癌の処置で使用するための、構造：
2018065793.tif 000005
を有するＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせを含む。
【００２７】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害の処置における、構造：
2018065793.tif 000006
を有するＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせの使用を含む。
【００２８】
一態様では、本発明は、乳房、子宮頸部、結腸、子宮内膜、神経膠腫、肺、メラノーマ、卵巣、膵臓及び前立腺から選択される癌の処置における、構造：
2018065793.tif 000007
を有するＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせの使用を含む。
【００２９】
一態様では、本発明は上記に記載の発明を含む。
【００３０】
一態様では、本発明は、
ａ）ＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせ、並びに
ｂ）使用説明書
を含む、過剰増殖性障害の処置用製造品を含む。
【００３１】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害の処置で別々に、同時に又は順次に使用するための組み合わせ製剤として、ＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤とを含む製品を含む。
【００３２】
一態様では、本発明は、治療上有効な量のＧＤＣ−００３２と治療上有効な量の化学療法剤とが組み合わせ製剤として投与される方法を含む。
【００３３】
一態様では、本発明は、治療上有効な量のＧＤＣ−００３２と治療上有効な量の化学療法剤とが交互に哺乳動物に投与されることを含む。
【００３４】
一態様では、本発明は、哺乳動物が化学療法剤を投与され、その後にＧＤＣ−００３２を投与されることを含む。
【００３５】
一態様では、本発明は、治療上有効な量のＧＤＣ−００３２が１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与され、治療上有効な量の化学療法剤が１日に２回から３週後に１回の範囲で投与される投薬レジメンにより治療用組み合わせが投与されることを含む。
【００３６】
一態様では、本発明は、投薬レジメンを１回又は複数回繰り返すことを含む。
【００３７】
一態様では、本発明は、治療用組み合わせの投与により相乗効果が生じることを含む。
【００３８】
一態様では、本発明は、治療用組み合わせの投与により約０．７未満の組み合わせ指数値が得られることを含む。
【００３９】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害が、乳房、子宮頸部、結腸、子宮内膜、胃、神経膠腫、肺、メラノーマ、卵巣、膵臓及び前立腺から選択される癌であることを含む。
【００４０】
一態様では、本発明は、癌が、Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ、Ｑ５４６Ｒ、Ｈ１０４７Ｌ及びＨ１０４７Ｒから選択されるＰＩＫ３ＣＡ変異体を発現することを含む。
【００４１】
一態様では、本発明は、癌がＰＴＥＮ変異体を発現することを含む。
【００４２】
一態様では、本発明は、癌がＨＥＲ２陽性であることを含む。
【００４３】
一態様では、本発明は、哺乳動物が乳癌患者であり、患者がＨＥＲ２陰性、ＥＲ（エストロゲンレセプター）陰性及びＰＲ（プロゲステロンレセプター）陰性であることを含む。
【００４４】
一態様では、本発明は、乳癌のサブタイプが基底又はルミナルであることを含む。
【００４５】
一態様では、本発明は、患者がＧＤＣ−００３２及びエリブリンを投与されることを含む。
【００４６】
一態様では、本発明は、ＧＤＣ−００３２及び化学療法剤が単位投薬形態当たり約１ｍｇから約１０００ｍｇの量でそれぞれ投与されることを含む。
【００４７】
一態様では、本発明は、ＧＤＣ−００３２及び化学療法剤が約１：５０から約５０：１の重量比で投与されることを含む。
【００４８】
一態様では、本発明は、ＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤とを含む薬学的製剤を含む。
【００４９】
一態様では、本発明は、二酸化ケイ素、粉末化セルロース、微結晶セルロース、金属ステアレート、アルミノケイ酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、炭酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、コーンスターチ、炭酸マグネシウム、アスベストフリータルク、ステアロウェットＣ、スターチ、スターチ１５００、ラウリル硫酸マグネシウム、酸化マグネシウム及びそれらの組み合わせから選択される薬学的に許容可能な滑剤を更に含む薬学的製剤を含む。
【００５０】
一態様では、本発明は、ＧＤＣ−００３２と化学療法剤とが単位投薬形態当たり約１ｍｇから約１０００ｍｇの量をそれぞれ占める薬学的製剤を含む。
【００５１】
一態様では、本発明は、癌の処置方法で使用するための薬学的製剤を含む。
【００５２】
一態様では、本発明は、
ａ）ＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせで、Ｋ−ｒａｓ変異を有する腫瘍細胞株をインビボで処置すること、並びに
ｂ）相乗効果又は非相乗効果を測定すること
を含み、それにより癌の処置用の相乗的な治療用組み合わせを決定する、癌の処置に組み合わせて使用する化合物の決定方法を含む。
【００５３】
一態様では、本発明は、
ａ）ＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との治療用組み合わせを腫瘍細胞に投与すること、
ｂ）ｐＡｋｔレベルの変化を測定すること、並びに
ｃ）ｐＡｋｔレベルの増加を示す相乗的な治療用組み合わせを選択すること
を含む、癌の処置に組み合わせて使用する化合物の選択方法を含む。
【００５４】
一態様では、本発明は、治療上有効な量のＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との組み合わせを患者に投与することを含む、患者の過剰増殖性障害の処置方法であって、組み合わせの患者への投与前に、患者から得られた生体試料はＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変異状態に関して検査されており、ＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変異状態が組み合わせに対する患者による治療反応性を示す方法を含む。治療上有効な量のＧＤＣ−００３２が単剤又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせとして患者に投与される。ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの投与後に機能的ＰＩ３Ｋタンパク質レベルを測定することにより生体試料を検査することができ、機能的ＰＩ３Ｋタンパク質のレベルの変化は、患者がＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせに対して耐性又は反応性であることを示す。
【００５５】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害がＨＥＲ２発現乳癌であることを含む。
【００５６】
一態様では、本発明は、生体試料が、ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの投与後に機能的ＰＩＫ３タンパク質レベルの測定により検査されており、機能的ＰＩ３Ｋタンパク質のレベルの変化は、患者がＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせに対する耐性又は反応性であることを示すことを含む。
【００５７】
一態様では、本発明は、
（ａ）ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との組み合わせの少なくとも単回用量の投与後に患者から得られた生体試料におけるＰＩＫ３ＣＡ変異又はＰＴＥＮ変異を検出すること、並びに
（ｂ）ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの患者への投与前に患者から得られた生体試料におけるＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変異状態を比較すること
を含む、過剰増殖性障害を患う患者がＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせによる処置に反応するかどうかのモニタリング方法であって、
ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの投与後に得られた試料におけるＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変異状態の変化又はモジュレーション（変調、modulation）により、ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせによる処置に反応する患者を同定する方法を含む。
【００５８】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害がＨＥＲ２発現乳癌であることを含む。
【００５９】
一態様では、本発明は、
（ａ）ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との組み合わせの少なくとも単回用量の投与後に患者から得られた生体試料中においてＰＩＫ３ＣＡ変異又はＰＴＥＮ変異を検出すること、並びに
（ｂ）ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの患者への投与前に患者から得られた生体試料におけるＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの状態を比較すること
を含む、ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの治療効果の最適化方法であって、
ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの投与後に得られた試料におけるＰＩＫ３ＣＡ又はＰＴＥＮの変化又はモジュレーションにより、ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせによる処置が有効である可能性が増加している患者を同定する方法を含む。
【００６０】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害がＨＥＲ２発現乳癌であることを含む。
【００６１】
一態様では、本発明は、
（ａ）ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との組み合わせの少なくとも単回用量が投与されている患者から得られた生体試料におけるＰＩＫ３ＣＡ変異又はＰＴＥＮ変異から選択されるバイオマーカーの発現、モジュレーション又は活性を検出すること、並びに
（ｂ）バイオマーカーの発現、モジュレーション又は活性と参照試料におけるバイオマーカーの状態とを比較することであって、参照試料がＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの患者への投与前に患者から得られた生体試料であること
を含む、ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせに対する反応性のモニタリング用バイオマーカーの同定方法であって、
参照試料と比較して少なくとも２分の１又は２倍のバイオ−マーカー変化のモジュレーションを、ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせに対する反応性のモニタリングに有用なバイオマーカーとして同定する方法を含む。一実施態様では、バイオマーカーはｐＡｋｔである。
【００６２】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害がＨＥＲ２発現乳癌であることを含む。
【００６３】
一態様では、本発明は、治療上有効な量のＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との組み合わせを患者に投与することを含む、患者の過剰増殖性障害の処置方法であって、処置がＰＩＫ３ＣＡ変異又はＰＴＥＮ変異を有する患者からの試料に基づく方法を含む。バイオマーカーの変異は、ＰＩＫ３ＣＡのＨ１０４７Ｒ変異、Ｈ１０４７Ｌ変異、Ｅ５４５Ｋ変異又はＥ５４２Ｋ変異であることができる。
【００６４】
一態様では、本発明は、バイオマーカーの変異がＰＩＫ３ＣＡのＨ１０４７Ｒ変異又はＨ１０４７Ｌ変異であることを含む。
【００６５】
一態様では、本発明は、バイオマーカーの変異がＰＩＫ３ＣＡのＥ５４２Ｋ変異、Ｅ５４５Ｋ変異又はＱ５４６Ｒ変異であることを含む。
【００６６】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害がＨＥＲ２発現乳癌であることを含む。
【００６７】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害がエストロゲンレセプター陽性（ＥＲ＋）乳癌であることを含む。
【００６８】
一態様では、本発明は、
治療上有効な量のＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との組み合わせを患者に投与することを含む、患者の過剰増殖性障害の処置でのＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの使用であって、
ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの患者への投与前に患者から得られた生体試料はＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変異状態に関して検査されており、ＰＩＫ３ＣＡの又はＰＴＥＮの変異状態がＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせに対する患者による治療反応性を示す使用を含む。
【００６９】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害がＨＥＲ２発現乳癌であることを含む。
【００７０】
一態様では、本発明は、過剰増殖性障害がエストロゲンレセプター陽性（ＥＲ＋）乳癌であることを含む。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】ＰＩＫ３ＣＡの野生型（ＷＴ）細胞株及び変異体細胞株に対する細胞増殖（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ）アッセイにおけるＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−０９４１（４−（２−（１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−（（４−（メチルスルホニル）ピペラジン−１−イル）メチル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）モルホリン）の有効性（ＥＣ５０マイクロモル濃度）についての２つのプロットを示すグラフである。各点は異なる癌細胞株を表す。
【図２】ＰＩＫ３ＣＡ野生型（ＷＴ）細胞株、ＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株、ＨＥＲ２発現細胞株及びＰＩ３Ｋ変異体／ＨＥＲ２発現細胞株に対する細胞増殖アッセイにおけるＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−０９４１の有効性（ＥＣ５０マイクロモル濃度）についての２つのプロットを示すグラフである。各点は異なる癌細胞株を表す。
【図３】４日のＣｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）生存率アッセイにおける、（３ａ、上部）ＰＩＫ３ＣＡのヘリカル領域変異体細胞株及びキナーゼ領域変異体細胞株；（３ｂ、中央部）ＰＩＫ３ＣＡ野生型細胞株、ＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株、ＰＴＥＮ欠損細胞株及びＰＴＥＮ／ＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株；並びに（３ｃ、下部）ＰＩＫ３ＣＡ野生型細胞株、ＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株、Ｒａｓ変異体細胞株及びＲａｓ／ＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株に対するＧＤＣ−００３２の有効性（ＥＣ５０マイクロモル濃度）について３つのプロットを示すグラフである。各点は異なる細胞株を表す。
【図４ａ】ＳＷ４８同質遺伝子細胞株セットにおけるＧＤＣ−００３２の効力を示すグラフである。ＳＷ４８親細胞と、共通のＰＩＫ３ＣＡホットスポット変異であるＥ５４５Ｋ又はＨ１０４７Ｒを持つノックイン変異体サブクローンとをＨｏｒｉｚｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙから得た。４日のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを使用して、これらの株におけるＧＤＣ−００３２のＥＣ５０生存率の値を決定した。
【図４ｂ】ＳＷ４８同質遺伝子細胞；親及びＰＩＫ３ＣＡノックイン変異体であるＥ５４５Ｋ及びＨ１０４７Ｒにおける、ある濃度範囲でのＧＤＣ−００３２曝露の１８時間後に収集した細胞溶解物のゲル電気泳動のウエスタンブロットオートラジオグラムを示す図である。
【図５ａ】ＰＩＫ３ＣＡ  Ｈ１０４７Ｒ及びＤ３５０Ｎを有する乳癌細胞株ＭＦＭ２２３に対するＧＤＣ−００３２、パクリタキセル（ＰＴＸ）及びＧＤＣ−００３２とパクリタキセルとの組み合わせの効果を示すグラフである。インビトロアッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、ＧＤＣ−００３２、パクリタキセル（ＰＴＸ）及びＧＤＣ−００３２とパクリタキセルとの組み合わせの２倍用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。
【図５ｂ】基底タイプ及びルミナルタイプの両方についてのＰＩＫ３ＣＡの野生型乳癌細胞株及び変異体乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋パクリタキセルの組み合わせ及びＧＤＣ−０９４１＋パクリタキセルの組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示すグラフである。ＰＩＫ３ＣＡ変異にはＥ５４５Ｋ及びＨ１０４７Ｒが含まれる。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は癌細胞株を表す。
【図６ａ】ＰＩＫ３ＣＡ  Ｅ５４２Ｋ変異及びＰＴＥＮ欠失を伴う基底乳癌細胞株Ｃａｌ５１に対するＧＤＣ−００３２、エリブリン及びＧＤＣ−００３２とエリブリンとの組み合わせの効果を示すグラフである。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、ＧＤＣ−００３２、エリブリン及びＧＤＣ−００３２とエリブリンとの組み合わせの２倍用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。
【図６ｂ】基底タイプ及びルミナルタイプの両方についての乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋エリブリンの組み合わせ、ＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせ、ＧＤＣ−０９４１＋エリブリンの組み合わせ及びＧＤＣ−０９４１＋ドセタキセルの組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示すグラフである。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は乳癌細胞株を表す。
【図７】基底タイプ及びルミナルタイプの両方についてのＰＩＫ３ＣＡ野生型乳癌細胞株、並びにＰＩＫ３ＣＡ  Ｅ５４５Ｋ、Ｈ１０４７Ｒ変異体乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋エリブリンの組み合わせ及びＧＤＣ−０９４１＋エリブリンの組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示すグラフである。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は癌細胞株を表す。
【図８ａ】ＰＩＫ３ＣＡ  Ｅ５４２Ｋ変異及びＰＴＥＮ欠損を伴う基底乳癌細胞株Ｃａｌ５１に対するＧＤＣ−００３２、ドセタキセル及びＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせの効果を示すグラフである。インビトロアッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、ＧＤＣ−００３２、ドセタキセル及びＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせの用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。
【図８ｂ】ＰＩＫ３ＣＡの野生型乳癌細胞株及び変異体乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせ及びＧＤＣ−０９４１＋ドセタキセルの組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示すグラフである。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は癌細胞株を表す。
【図９ａ】高ＨＥＲ２発現を有する乳癌細胞株ＳＫＢＲ３に対するＧＤＣ−００３２、トラスツズマブ及びＧＤＣ−００３２＋トラスツズマブの組み合わせの効果を示すグラフである。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、ＧＤＣ−００３２、トラスツズマブ及びＧＤＣ−００３２＋トラスツズマブの組み合わせの用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。
【図９ｂ】ＨＥＲ２＋  ＰＩＫ３ＣＡ野生型乳癌細胞株並びにＥ５４５Ｋ及びＨ１０４７Ｒを含むＰＩＫ３ＣＡ変異体乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせ及びＧＤＣ−０９４１＋ドセタキセルの組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示すグラフである。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は癌細胞株を表す。
【図１０ａ】ＨＥＲ２、ＰＩＫ３ＣＡ  Ｈ１０４７Ｒ及びＤ３５０Ｎを有する乳癌細胞株ＫＰＬ４に対するトラスツズマブ、ＧＤＣ−００３２、パクリタキセル並びにＧＤＣ−００３２＋トラスツズマブの組み合わせ、パクリタキセル＋トラスツズマブの組み合わせ、ＧＤＣ−００３２＋パクリタキセルの組み合わせ及びＧＤＣ−００３２＋パクリタキセル＋トラスツズマブの三重組み合わせの効果を示すグラフである。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。
【図１０ｂ】高ＨＥＲ２発現を有する乳癌細胞株ＳＫＢＲ３に対するトラスツズマブ、ＧＤＣ−００３２、パクリタキセル並びにＧＤＣ−００３２＋トラスツズマブの組み合わせ、パクリタキセル＋トラスツズマブの組み合わせ、ＧＤＣ−００３２＋パクリタキセルの組み合わせ及びＧＤＣ−００３２＋パクリタキセル＋トラスツズマブの組み合わせの効果を示すグラフである。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。
【図１１ａ】ＥＲ＋乳癌細胞株ＨＣＣ１４２８に対する５−ＦＵ、ＧＤＣ−００３２及び５−ＦＵとＧＤＣ−００３２との組み合わせの効果を示すグラフである。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、５−ＦＵ、ＧＤＣ−００３２及び５−ＦＵ＋ＧＤＣ−００３２の組み合わせの用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。
【図１１ｂ】ＨＥＲ２＋（ＨＥＲ２陽性）ＰＩＫ３ＣＡの野生型並びに基底サブタイプ及びルミナルサブタイプのＥ５４５Ｋ及びＨ１０４７Ｒを含む変異体乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋５ＦＵの組み合わせ及びＧＤＣ−０９４１＋５−ＦＵの組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示すグラフである。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は癌細胞株を表す。
【図１２ａ】癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋従来の化学療法剤（５−ＦＵ、ゲムシタビン、パクリタキセル、ドセタキセル及びエリブリンを含む）の組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示すグラフである。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は、化学療法剤＋ＧＤＣ−００３２の組み合わせで使用した異なる細胞株を表す。
【図１２ｂ】癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋標的とする化学療法剤（トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、トラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）及びＭＥＫｉ（ＧＤＣ−０９７３）を含む）の組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示すグラフである。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は異なる細胞株を表す。
【図１３】ビヒクル（ＭＣＴ；０．５％メチルセルロース（methycelluose）／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、ＧＤＣ−０９４１及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）投与により１日に１回投薬した、ＰＩＫ３ＣＡ  Ｈ１０４７Ｒ（ＰＩ３Ｋα）変異を持つＨＣＣ１９５４．ｘ１乳房腫瘍異種移植片を有する８−１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。用語ｕＬはマイクロリットルを意味する。
【図１４】ビヒクル及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）投与により投薬した、ＨＥＲ２＋及びＰＩＫ３ＣＡ  Ｈ１０４７Ｒ変異を有するＫＰＬ４乳房腫瘍異種移植片を有する８−１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図１５】ビヒクル及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）投与により１日に１回投薬した、ＭＣＦ７−ｎｅｏ／ＨＥＲ２（ＨＥＲ２＋、ＰＩＫ３ＣＡ  Ｅ５４５Ｋ）乳癌腫瘍異種移植片を有する８−１０匹の免疫無防備状態のマウスの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図１６】ＭＣＴビヒクル及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）投与により１日に１回投薬した、ＰＩＫ３ＣＡ  Ｅ５４５Ｋ変異を有するＭＣＦ−７乳癌腫瘍異種移植片を有する８−１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図１７】ビヒクル及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）投与により１日に１回投薬した、ＰＩＫ３ＣＡ  Ｈ１０４７Ｒ変異を持つＳＫＯＶ３卵巣腫瘍異種移植片を有する８−１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図１８】ビヒクル及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）投与により１日に１回投薬した、ＰＩ３Ｋアルファ（α）変異（Ｈ１０４７Ｒ）を有するＨＭ−７結腸直腸腫瘍異種移植片を有する８−１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの６＋日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図１９】ビヒクル及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）投与により１日に１回投薬した、ＰＴＥＮ欠損であるＰＣ３前立腺腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの１４日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図２０】ビヒクル及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）投与により投薬した、ＰＩ３Ｋα変異（Ｑ５４６Ｒ）を持つ２２ＲＶ１前立腺腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２４日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図２１】ビヒクル、ＧＤＣ−０９４１及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）投与により投薬した、ＰＴＥＮ欠損であり且つＢ−Ｒａｆ増幅を持つ５３７ＭＥＬメラノーマ腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図２２】ビヒクル（ＭＣＴ）及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）投与により投薬した、ＥＧＦＲ−二重変異体Ｌ８５８Ｒ及びＴ７９０Ｍ、ＰＩＫ３ＣＡ  Ｇ１１８Ｄ、ｐ５３変異を持つＮＣＩ−Ｈ１９７５非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの０から２４＋日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図２３】表５のスケジュールに従って投薬した、ＰＩ３Ｋアルファ（Ｅ５４５Ｋ）を持つＭＣＦ−７  ｎｅｏ／ＨＥＲ２乳房腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの５１日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−０９４１をＰＯ（経口）投与により１日に１回投薬し、ドセタキセルをＩＰ投与により投薬し、２１日目に最終投薬した。コホートは、ビヒクル、ドセタキセル（ＤＴＸ）、ＧＤＣ−０９４１、ＧＤＣ−００３２並びにドセタキセル＋ＧＤＣ−０９４１の組み合わせ及びドセタキセル＋ＧＤＣ−００３２の組み合わせである。
【図２４】ビヒクル、ドセタキセル、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせを投薬した、ＰＴＥＮ欠損を伴うＭＸ−１三重陰性（ＥＲ−（エストロゲンレセプター）、ＰＲ−（プロゲステロンレセプター）、ＨＥＲ２−（ＨＥＲ２陰性））乳癌腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２５日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図２５】ビヒクル、ドセタキセル、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせを２１日にわたり投薬した、ＰＩＫ３ＣＡ（ＰＩ３Ｋα）Ｈ１０４７Ｒを有するＳＫＯＶ３卵巣腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２６日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図２６】ビヒクル、パクリタキセル、ＧＤＣ−００３２及びパクリタキセル＋ＧＤＣ−００３２の組み合わせを２１日にわたり投薬した、ＰＩ３Ｋα変異（Ｅ５４５Ｋ）を持つＭＣＦ−７  ＰＩＫ３ＣＡ変異体乳房腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの４０日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図２７】ビヒクル、トラスツズマブ、ＧＤＣ−００３２及びトラスツズマブ＋ＧＤＣ−００３２の組み合わせを２１日にわたり投薬した、ＢＴ４７４、ＨＥＲ２＋乳癌腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの６１日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図２８】ビヒクル、トラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、ＧＤＣ−００３２、トラスツズマブ＋ＧＤＣ−００３２の組み合わせ及びトラスツズマブエムタンシンとＧＤＣ−００３２との組み合わせを投薬した、ＢＴ４７４、ＨＥＲ２＋乳癌腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの１４日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図２９】トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、ドセタキセル、ＧＤＣ−００３２、トラスツズマブとドセタキセルとの組み合わせ及びトラスツズマブとドセタキセルとＧＤＣ−００３２との三重組み合わせを投薬した、ＢＴ４７４、ＨＥＲ２＋乳癌腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図３０】２１日にわたりフルベストラント、ＧＤＣ−００３２及びフルベストラントとＧＤＣ−００３２との組み合わせをＰＯ（経口）投与により投薬した、ＰＥ３Ｋα変異（Ｅ５４５Ｋ）ＰＩＫ３ＣＡを持つＭＣＦ−７  ＥＲ＋を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの４２日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図３１】タモキシフェン、ＧＤＣ−００３２及びタモキシフェンとＧＤＣ−００３２との組み合わせを投薬した、ＭＣＦ−７  ｎｅｏ／ＨＥＲ２（ＥＲ＋、ＰＩＫ３ＣＡ（ＰＩ３Ｋα）変異（Ｅ５４５Ｋ）、ＨＥＲ２＋）乳癌腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図３２】ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−０９７３とＧＤＣ−００３２との組み合わせをＰＯ（経口）投与により２１日にわたり１日に１回投薬した、Ａ５４９非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの４０日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図３３】デキサメタゾン、ＧＤＣ−０９８０、ＧＤＣ−００３２、デキサメタゾンとＧＤＣ−０９８０との組み合わせ及びデキサメタゾンとＧＤＣ−００３２との組み合わせを投薬した、ＭＭ．１ｓ多発性骨髄腫腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの１８日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図３４】カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、ＧＤＣ−００３２及びカペシタビンとＧＤＣ−００３２との組み合わせをＰＯ（経口）投与で投薬した、ＭＣＦ−７  ｎｅｏ／ＨＥＲ２乳癌腫瘍異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図３５】ビヒクル、ドセタキセル、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせを投薬した、Ａ５４９（ＫＲＡＳＧ１２Ｓ、ＰＩ３ＫＭ７７２Ｘ、Ｎ９９６Ｈ）ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２０日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図３６】ビヒクル、ドセタキセル、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせを投薬した、Ｈ５２０（ｐ５３変異）ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２８日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。
【図３７】アンドロステンジオンを有するアロマターゼ発現ＭＣＦ７細胞及びアンドロステンジオンを有しないアロマターゼ発現ＭＣＦ７細胞におけるレトロゾール及びＧＤＣ−００３２の活性を示すグラフである。
【図３８】細胞生存性、ＢＬＩＳＳ及びＨＳＡの阻害の定量的な点数付けにより、インビトロでＧＤＣ−００３２がレトロゾールと良好に組み合わさることを示す図である。
【図３９】ＧＤＣ−００３２とレトロゾールとの組み合わせに関する作用機序を示唆する、ＰＩ３Ｋ経路とＥＲ経路との間のクロストークを示す図である。
【図４０】４日のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイにおける２４時間の処理後に、内分泌耐性のＭＣＦ７−ＡＲＯ細胞が、ＰＩ３Ｋ経路シグナル伝達を高めていること、及びＧＤＣ−０００３２に感受性であることを示す図である。
【図４１】２１日目でのビヒクルコントロールに対する割合としての腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ％）を、フルベストラント及びＧＤＣ−００３２を単独で投薬したＭＣＦ−７／ＥＲ＋／ＨＥＲ２−マウスで、並びにＭＣＦ−７／ＥＲ＋／ＨＥＲ２−マウスにおける組み合わせで、並びにタモキシフェン及びＧＤＣ−００３２単独で、並びにＭＣＦ−７／ＥＲ＋／ＨＥＲ２＋マウスにおける組み合わせで測定したことを示すグラフである。
【図４２】ビヒクル、パクリタキセル、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−００３２とパクリタキセルとの組み合わせを投薬した、ＭＣＦ−７（ＰＩ３Ｋ変異体、ＥＲ＋）乳房異種移植片を有する１２匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２３日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。ＧＤＣ−００３２を経口で（ＰＯ）、及び２１日わたって毎日（ＱＤ、パクリタキセル投薬前日の休薬日を含む）又は５サイクルで４日毎に（Ｑ４Ｄ）投薬した。パクリタキセルを７．５ｍｇ／ｋｇの薬剤により５サイクルで４日毎に静脈内に投薬した。
【図４３】ビヒクル、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＧＤＣ−００３２並びにＧＤＣ−００３２＋トラスツズマブ及びペルツズマブの三重組み合わせを投薬した、ＫＰＬ−４（ＰＩ３Ｋ変異体、Ｈｅｒ２＋）乳房異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。ＧＤＣ−００３２を経口で（ＰＯ）及び２１日にわたり毎日（ＱＤ）投薬した。トラスツズマブを３ｍｇ／ｋｇの薬剤で３週にわたり週に１回腹腔内に投薬し、ペルツズマブを２．５ｍｇ／ｋｇの薬剤で３週にわたり週に１回腹腔内に投薬した。
【図４４】ビヒクル、パクリタキセル、カルボプラチン、抗ＶＥＧＦ抗体（Ｂ２０−４．１．１）、ＧＤＣ−００３２並びにＧＤＣ−００３２＋パクリタキセル（ＰＴＸ）、カルボプラチン、＋／−抗ＶＥＧＦの三重組み合わせ及び四重組み合わせを投薬した、Ｈ２９２（ＫＲＡＳ変異体）ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）異種移植片を有する１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２２日わたる近似腫瘍体積変化を示すグラフである。ＧＤＣ−００３２を２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。パクリタキセルを１０ｍｇ／ｋｇの薬剤で１日目に静脈内に投薬し、カルボプラチンを８０ｍｇ／ｋｇの薬剤で１日目に腹腔内に投薬し、抗ＶＥＧＦを５ｍｇ／ｋｇの薬剤で３週にわたり週に２回腹腔内に投薬した。
【発明を実施するための形態】
【００７２】
ここで、本発明のある実施態様を詳細に言及し、その例を添付の構造及び式で例証する。列挙する実施態様と併せて本発明を説明するが、このことが本発明をこれらの実施態様に限定することを意図するものではないことが理解されるだろう。それどころか、本発明は、特許請求の範囲により規定される本発明の範囲内に含まれ得る全ての代替、改変及び等価物を包含することを意図する。当業者は、本発明の実施で使用され得る、本発明に記載のものと類似又は等価の多くの方法及び材料を認識するだろう。本発明は、記載された方法及び材料に限定されるものでは決してない。援用される文献、特許及び類似の資料の内の１つ又は複数が、定義した用語、用語の使用、記載した技術等を含むがこれらに限定されない本願と異なる又は矛盾する場合、本願が優先される。
【００７３】
定義
単語「含む（comprise）」、「含んでいる（comprising）」、「含む（include）」、及び「含んでいる（including）」は本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、述べた特徴、整数、成分又は工程の存在を特定することを意図するが、これらは、１つ又は複数の他の特徴、整数、成分、工程又はそれらの群の存在又は追加を除外しない。
【００７４】
用語「処置する（treat）」及び「処置（treatment）」は、治療的処置と予防的（prophylactic）手段又は予防的（preventative）手段との両方を指し、その目的は、癌の増殖、発症若しくは拡散等の望ましくない生理学的変化又は障害を予防する又は遅延させる（緩和する）ことである。本発明の目的のために、有益な又は所望の臨床結果には、検出可能又は検出不能にかかわらず、症状の緩和、疾患の程度の縮小、病態の安定化（即ち悪化させない）、疾患の進行の遅延（delay）又は遅延（slowing）、病態の改善又は緩和、及び寛解（部分的又は全体的）が含まれるがこれらに限定されない。「処置」はまた、処置を受けない場合に予測される生存期間と比較して生存期間が延びることも意味する。処置を必要とするものには、既にその状態若しくは障害を患うものだけでなく、その状態若しくは障害を有する傾向があるもの、又はその状態若しくは障害を予防すべきであるものが含まれる。
【００７５】
語句「治療上有効な量」は、本明細書に記載の、（ｉ）特定の疾患、状態若しくは障害を処置する、（ｉｉ）特定の疾患、状態若しくは障害の１つ若しくは複数の症状を軽減する、改善する若しくは除去する、又は（ｉｉｉ）特定の疾患、状態若しくは障害の１つ若しくは複数の症状の発症を予防する若しくは遅延させる、本発明の化合物の量を意味する。癌の場合、治療上有効な量の薬剤は、癌細胞の数を減少させることができ；腫瘍サイズを縮小させることができ；癌細胞の末梢器官への浸潤を阻害すること（即ち、ある程度遅延させること、好ましくは停止させること）ができ；腫瘍転移を阻害すること（即ち、ある程度遅延させること、好ましくは停止させること）ができ；ある程度、腫瘍増殖を阻害することができ；及び／又は癌に関連する１つ若しくは複数の症状をある程度緩和することがでる。薬剤が生存する癌細胞の増殖を予防する及び／又は生存する癌細胞を死滅させることができる範囲で、薬剤は、細胞増殖抑制性及び／又は細胞傷害性であることができる。癌治療の場合、例えば疾患の進行時間（ＴＴＰ）を評価することより、及び／又は反応速度（ＲＲ）を決定することにより、有効性を測定することができる。
【００７６】
用語「検出」には、直接的検出及び間接的検出を含む任意の検出手段が含まれる。
【００７７】
用語「診断」は本明細書において、分子状態若しくは病的状態、疾患又は状態の同定又は分類を指すために使用される。例えば、「診断」は特定の種類の癌の同定、例えば肺癌の同定を指すことができる。「診断」はまた、例えば組織学的による（例えば非小細胞肺癌腫）、分子の特徴による（例えば特定の遺伝子若しくはタンパク質におけるヌクレオチド及び／若しくはアミノ酸の多様性を特徴とする肺癌）又はその両方による、特定の種類の癌の分類を指すこともできる。
【００７８】
用語「予後」は本明細書において、癌等の腫瘍性疾患の例えば再発、転移拡散及び薬剤耐性を含む癌に起因する死又は進行の可能性の予測を指すために使用される。
【００７９】
用語「予測」（及び予測する等のバリエーション）は本明細書において、患者がある薬剤又は薬剤のセットに対して有利に又は不利に反応するであろう可能性を指すために使用される。一実施態様では、予測は、これらの反応の程度に関する。別の実施態様では、予測は、処置後に、例えば特定の療法剤による処置及び／若しくは原発性腫瘍の外科的切除後に、並びに／又は癌が再発することなくある期間にわたる化学治療後に、患者が生存するであろうかどうか及び／又はその可能性に関する。任意の特定の患者に関しては、本発明の予測方法を臨床的に使用して、最も適切な処置様式を選択することにより処置の決断を行なうことができる。本発明の予測方法は、患者が、例えば所定の療法剤又は組み合わせの投与、外科的介入、化学治療等を含む所定の治療レジメン等の処置レジメンに対して有利に反応する可能性があるかどうか、又は治療レジメン後に患者の長期生存の可能性があるかどうかの予測における価値あるツールである。
【００８０】
特定の療法剤又は処置の選択肢に対する用語「耐性の増加」は、本発明に従って使用する場合、薬剤の標準的な用量に対する又は標準的な処置プロトコルに対する反応性の低下を意味する。
【００８１】
特定の療法剤又は処置の選択肢に対する用語「感受性の低下」は、本発明に従って使用する場合、薬剤の標準的な用量に対する又は標準的な処置プロトコルに対する反応性の低下を意味し、反応性の低下を薬剤の用量の増加により又は強度５の処置により（少なくとも部分的に）補うことができる。
【００８２】
「患者反応」を、（１）遅延若しくは完全な増殖の停止を含む、腫瘍増殖のある程度までの阻害；（２）腫瘍細胞の数の減少；（３）腫瘍サイズの縮小；（４）隣接する末梢器官及び／若しくは末梢組織への腫瘍細胞の浸潤の阻害（例えば減少、遅延若しくは完全な停止）；（５）転移の阻害（例えば減少、遅延若しくは完全な停止）；（６）腫瘍の退縮若しくは除去をもたらすことができるがもたらさなくてもよい抗腫瘍免疫反応の増強；（７）腫瘍に関連する１つ若しくは複数の症状のある程度までの軽減；（８）処置後の生存期間の長さの増加；並びに／又は（９）処置後の所定の時点での死亡率の減少を含むがこれらに限定されない患者に対する利益を示す任意のエンドポイントを使用して評価することができる。
【００８３】
「バイオマーカー」は、正常な生物学的過程、発病過程又は治療介入に対する薬理学的反応の指標として客観的に測定される及び評価されることを特徴とする。バイオマーカーは、いくつかの種類、即ち予測的、予後的又は薬力学的（ＰＤ）であることができる。予測的バイオマーカーにより、どの患者が特定の治療に反応する又は該治療の利益を受ける可能性があることが予測される。予後的バイオマーカーにより、患者の疾患の起こりうる経過が予測され、処置が導かれ得る。薬力学的バイオマーカーにより、薬剤活性が確認され、用量及び投与スケジュールの最適化が可能になる。
【００８４】
ＰＩＫ３ＣＡ変異又はＰＩＫ３ＣＡ変異のセットを含む、バイオマーカーの状態の「変化」又は「モジュレーション」は、それがインビトロ又はインビボで起こる場合、（１）生体試料のゲノムＤＮＡ又は逆転写ＰＣＲ産物をシークエンシングすること（これにより１種又は複数種の変異が検出される）；（２）メッセージレベルの定量化により又はコピー数の評価により遺伝子発現レベルを評価すること；及び（３）免疫組織化学、免疫細胞化学、ＥＬＩＳＡ、又は質量分析によるタンパク質の分析（これによりタンパク質の分解、安定化、又はリン酸化若しくはユビキチン化等の翻訳後修飾が検出される）を含む、薬力学（ＰＤ）の確立に一般に用いられる１つ又は複数の方法を使用する生体試料の分析により検出される。
【００８５】
用語「癌」及び「癌性」は、典型的には未制御の細胞増殖を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指す、又は説明する。「腫瘍」は１つ又は複数の癌細胞を含む。癌の例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病又はリンパ性悪性疾患が含まれるがこれらに限定されない。そのような癌のより具体的な例には、扁平上皮細胞癌（例えば上皮扁平上皮細胞癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）、肺腺癌及び肺の扁平上皮癌腫を含む肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化管癌を含む胃癌（gastric or stomach cancer）、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌又は子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌又は腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌腫、肛門癌腫、陰茎癌腫、並びに頭頸部癌が含まれる。胃癌（Gastric cancer）は本明細書で使用する場合、胃癌（stomach cancer）を含み、胃の任意の部分で発症する可能性があり、並びに胃の全体にわたって及び他の器官に、特に食道、肺、リンパ節及び肝臓に拡散する可能性がある。
【００８６】
用語「造血器腫瘍」は、白血球、リンパ球、ナチュラルキラー細胞、形質細胞、並びに好中球及び単球等の骨髄性細胞等の細胞を含む造血中に生じる癌又は過剰増殖性障害を指す。造血器腫瘍には、非ホジキンリンパ腫、びまん性大型造血リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性のリンパ性白血病、多発性骨髄腫、急性の骨髄性白血病、及び骨髄球性白血病が含まれる。リンパ性（又は「リンパ芽球性」）白血病には、急性のリンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）及び慢性のリンパ性白血病（ＣＬＬ）が含まれる。骨髄性（又は「骨髄球性」若しくは「非リンパ性」）白血病には、急性の骨髄性（又は骨髄芽球性）白血病（ＡＭＬ）及び慢性の骨髄性白血病（ＣＭＬ）が含まれる。
【００８７】
「化学療法剤」は、作用機序にかかわらず、癌の処置に有用である生物学的な（大分子の）又は化学的な（小分子の）化合物である。
【００８８】
用語「哺乳動物」にはヒト、マウス、ラット、モルモット、サル、イヌ、ネコ、ウマ、雌ウシ、ブタ、及びヒツジが含まれるがこれらに限定されない。
【００８９】
用語「パッケージ挿入物」は、治療用製品の市販のパッケージに習慣的に含まれる説明書を指すために使用され、そのような治療用製品の使用に関する指示、用法、投薬量、投与法、禁忌及び／又は警告についての情報が含有される。
【００９０】
用語「薬学的に許容可能な塩」は本明細書で使用する場合、本発明の化合物の薬学的に許容可能な有機塩又は無機塩を指す。例示的な塩には、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシレート」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩及びパモ酸塩（即ち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸塩））が含まれるがこれらに限定されない。薬学的に許容可能な塩は、酢酸イオン、コハク酸イオン又は他の対イオン等の別の分子の介在を含むことができる。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化させる任意の有機部分又は無機部分であることができる。更に、薬学的に許容可能な塩は、その構造中に複数の荷電原子を有することができる。複数の荷電原子が薬学的に許容可能な塩の一部である場合、薬学的に許容可能な塩は複数の対イオンを有することができる。従って、薬学的に許容可能な塩は、１つ若しくは複数の荷電原子及び／又は１つ若しくは複数の対イオンを有することができる。
【００９１】
所望の薬学的に許容可能な塩を、当分野で利用可能な任意の適切な方法により調製することができる。例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、リン酸等の無機酸による、又は酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸、例えばグルクロン酸若しくはガラクツロン酸、アルファヒドロキシ酸、例えばクエン酸若しくは酒石酸、アミノ酸、例えばアスパラギン酸若しくはグルタミン酸、芳香族酸、例えば安息香酸若しくはケイ皮酸、スルホン酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸若しくはエタンスルホン酸等の有機酸による、遊離塩基の処理。塩基性の薬学的化合物からの薬学的に有用な又は許容可能な塩の形成に適切であると一般に考えられている酸が、例えばＰ．Ｓｔａｈｌ等、Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．（編）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ．Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ．（２００２）Ｚｕｒｉｃｈ：Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ；Ｓ．Ｂｅｒｇｅ等、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９７７）６６（１）１  １９；Ｐ．Ｇｏｕｌｄ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（１９８６）３３  ２０１  ２１７；Ａｎｄｅｒｓｏｎ等、Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９６），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈｅｄ、（１９９５）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡにより論じられており、及びＯｒａｎｇｅ  Ｂｏｏｋ（Food&Drug Administration,Washington,D.C.ウェブサイト上）において論じられている。これらの開示は、出典明示により本明細書に援用される。
【００９２】
語句「薬学的に許容可能な」は、物質又は組成物が、製剤を含む他の成分及び／又は該成分により処置される哺乳動物と化学的に及び／又は毒性学的に適合する必要があることを示す。
【００９３】
用語「相乗的」は本明細書で使用する場合、２種以上の単剤の相加効果よりも有効である治療用組み合わせを指す。ＧＤＣ−００３２又はその薬学的に許容可能な塩である化合物と１種又は複数種の化学療法剤との間の相乗的相互作用の決定は、本明細書に記載したアッセイから得た結果に基づくことができる。これらのアッセイの結果をＣｈｏｕ及びＴａｌａｌｙ組み合わせ方法及びＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアによる用量効果分析を使用して分析し、組み合わせ指数を得ることができる（Chou及びTalalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22:27-55）。本発明により提供される組み合わせがいくつかのアッセイシステムにおいて評価されており、抗癌剤間の相乗作用、相加性、及び拮抗作用の定量化のための標準的なプログラムを利用してデータを分析することができる。例えば図１０で利用するプログラムは、「Ｎｅｗ  Ａｖｅｎｕｅｓ  ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７，Ｃｈａｐｔｅｒ２においてＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙにより説明されている。０．８未満の組み合わせ指数値は相乗作用を示し、１．２よりも高い値は拮抗作用を示し、０．８から１．２の値は相加効果を示す。組み合わせ治療は「相乗作用」をもたらすことができ、及び「相乗的」であることを証明することができ、即ち、その効果は、一緒に使用する活性成分が化合物の別々の使用により得られる結果の合計よりも大きい場合に実現される。相乗効果は、活性成分が（１）共製剤化されて投与される、若しくは組み合わされて同時に送達される単位投薬製剤である場合に；（２）別々の製剤として交互に若しくは並行して送達される場合に；又は（３）いくつかの他のレジメンによって、実現され得る。交互の治療において送達される場合、相乗効果は、化合物が例えば別々のシリンジにおける異なる注射剤、又は別々の丸剤若しくは錠剤により順次に投与される又は送達される場合に実現され得る。一般に、交互の治療中に有効投薬量の各活性成分は、順次に、即ち連続して投与されるが、組み合わせ治療では、有効投薬量の２種以上の活性成分が一緒に投与される。組み合わせ効果を、ＢＬＩＳＳ独立モデル及び最高単剤（ＨＳＡ）モデルの両方を用いて評価した（Lehar等、2007, Molecular Systems Biology 3:80）。ＢＬＩＳＳスコアは単剤からの増強の程度を定量化し、ＢＬＩＳＳスコア＞０は、単純な相加よりも大きいことを示唆する。ＨＳＡスコア＞０は、対応する濃度で単剤応答の最大値よりも大きい組み合わせ効果を示唆する。
【００９４】
「ＥＬＩＳＡ」（酵素連結免疫吸着アッセイ）は、液体試料又はウェット試料中に存在する物質を検出するために不均一固相酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）の１つのサブタイプを使用する一般的なフォーマットの「ウェットラボ」タイプの分析的生化学アッセイである（Engvall E, Perlman P (1971). "Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G". Immunochemistry 8 (9): 871-4；Van Weemen BK, Schuurs AH (1971). "Immunoassay using antigen-enzyme conjugates". FEBS Letters 15 (3): 232-236）。ＥＬＩＳＡは、厳密な「免疫」アッセイの代わりに他の形態のリガンド結合アッセイを実施することができるが、この方法の一般的な使用及び開発の歴史に起因して、その名称には元々の「免疫」が付されている。本技術には、適切に定量化され得るシグナルを生成するために、酵素に特異的に結合して該酵素を使用することができる検出試薬と共に、固相上に固定化され得る任意の結合試薬が本質的に必要である。洗浄の間では、リガンドとその特異的結合対応物のみが抗原−抗体相互作用により固相に特異的に結合し続ける又は「免疫吸着」し続けるが、非特異的な又は非結合の成分は洗い流される。同じ反応ウェル（例えばキュベット）を洗浄後に再利用することができる他の分光光度的なウェットラボアッセイフォーマットとは異なり、ＥＬＩＳＡプレートは該プレートの一部である固相上に免疫吸着した反応生成物を有し、そのため、ＥＬＩＳＡプレートを容易に再利用することができない。ＥＬＩＳＡの実施には、特定の抗原に対する特異性を有する少なくとも１種の抗体が必要である。未知の量の抗原を有する試料を、非特異的に（表面への吸着により）又は特異的に（「サンドイッチ」ＥＬＩＳＡにおいて、同じ抗原に特異的な別の抗体による捕捉により）固相支持体（通常はポリスチレンマイクロタイタープレート）上に固定化する。抗原を固定化した後、検出抗体を添加して抗原との複合体を形成する。検出抗体を酵素に対して共有結合的に連結させることができ、又はバイオコンジュゲートを介して酵素に連結される二次抗体で検出抗体自体を検出することができる。各工程の間にプレートを典型的には中性洗剤溶液で洗浄し、特異的に結合していない任意のタンパク質又は抗体を除去する。最終洗浄工程後に、酵素基質を添加することによりプレートを現像して可視的シグナルを作成する、該可視的シグナルは試料中の抗原の量を示す。
【００９５】
「免疫組織化学」（ＩＨＣ）は、生体組織中において抗原に特異的に結合する抗体の原理を利用することによる、組織切片の細胞における抗原（例えばタンパク質）の検出方法を指す。免疫組織化学的染色が、癌性腫瘍で見出されるもの等の異常細胞の診断で広く使用される。特異的分子マーカーは、増殖又は細胞死（アポトーシス）等の特定の細胞的事象を特徴とする。ＩＨＣはまた、バイオマーカー及び生体組織の異なる部位で差次的に発現されるタンパク質の分布及び局在化を理解するために広く使用される。抗体−抗原相互作用の可視化を様々な方法で実現することができる。最も一般的な例では、抗体をペルオキシダーゼ等の酵素にコンジュゲートさせ、このことにより発色反応を触媒することができる（免疫組織化学的染色を参照）。あるいは、抗体に、フルオレセイン又はローダミン等の蛍光色素分子を標識付けることもできる（免疫蛍光を参照）。
【００９６】
「免疫細胞化学」（ＩＣＣ）は、特異的エピトープにより細胞における特異的なペプチド抗原又はタンパク質抗原を標的とする抗体を使用する一般的な実験室技術である。特異的なペプチド抗原又はタンパク質抗原が結合した抗体を、次に、いくつかの異なる方法を使用して検出することができる。ＩＣＣにより、特定の試料における細胞が問題の抗原を発現するかどかを評価することができる。免疫陽性シグナルが見られる場合、ＩＣＣにより、どの細胞内区画が抗原を発現しているかも決定される。
【００９７】
例示的実施態様の詳細な説明
ＧＤＣ−００３２の調製
本発明の化合物はＧＤＣ−００３２（ＣＡＳ登録番号１２８２５１２−４８−４）として知られ、２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパンアミドと命名され、立体異性体、幾何異性体、互変異性体及びそれらの薬学的に許容可能な塩を含む構造：
2018065793.tif 000008
を有する。
【００９８】
ＧＤＣ−００３２を、国際公開第２０１１／０３６２８０号、米国特許８２４２１０４号及び米国特許８３４３９５５号に記載されているように、又は以下の実施例１に記載されているように、調製する及び特徴付けることができる。
【００９９】
化学療法剤
ある種の化学療法剤は、インビトロ及びインビボでの細胞増殖の阻害において、ＧＤＣ−００３２との組み合わせで驚くべき及び予期しない特性を示している。そのような化学療法剤には、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールが含まれる。
【０１００】
５−ＦＵ（フルオロウラシル、５−フルオロウラシル、ＣＡＳ登録番号５１−２１−８）はチミジル酸合成酵素阻害剤であり、結腸直腸癌及び膵臓癌を含む癌の処置で何１０年にもわたり使用されている（米国特許２８０２００５号；米国特許２８８５３９６号；Duschinsky等(1957) J. Am. chem. Soc. 79:4559；Hansen, R.M. (1991) Cancer Invest. 9:637-642）。５−ＦＵは５−フルオロ−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオンと命名され、構造：
2018065793.tif 000009
を有する。
【０１０１】
ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）は、乳癌、卵巣癌及びＮＳＣＬＣ癌の処置に使用される（米国特許４８１４４７０号；米国特許５４３８０７２号；米国特許５６９８５８２号；米国特許５７１４５１２号；米国特許５７５０５６１号；Mangatal等(1989) Tetrahedron 45:4177；Ringel等(1991) J. Natl. Cancer Inst. 83:288；Bissery等(1991) Cancer Res. 51:4845；Herbst等(2003) Cancer Treat. Rev. 29:407-415；Davies等(2003) Expert. Opin. Pharmacother. 4:553-565）。ドセタキセルは、５，２０−エポキシ−１，２，４，７，１０，１３−ヘキサヒドロキシタキサ−１１−エン−９−オン４−アセテート２−ベンゾエート三水和物を有する（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン，Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル，１３−エステル（米国特許４８１４４７０号；欧州特許２５３７３８号；ＣＡＳ登録番号１１４９７７−２８−５）と命名され、構造：
2018065793.tif 000010
を有する。
【０１０２】
エリブリン（ＨＡＬＡＶＥＮ（登録商標）、Ｅｉｓａｉ  ｃｏ．、Ｅ７３８９、ＥＲ−０８６５２６、ＮＳＣ７０７３８９（ＮＳ  ＮＣＩ名称））は、末期の乳癌用の少なくとも２種の前化学治療レジメンを受けた転移性乳癌を患う患者の処置用に承認されており、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、前立腺癌及び肉腫を含む他の固形腫瘍の処置用に研究されている。エリブリンは、ハリコンドリア（Ｈａｌｉｃｈｏｎｄｒｉａ）属の海綿動物（Hirata, Y.及びUemura D. (1986) Pure Appl. Chem. 58(5):701-710；Bai等(1991) J. Biol. Chem. 266(24):15882-15889）由来の海洋性海綿動物の天然物ハリコンドリンＢ（Towle等 (2001) Cancer Res. 61(3):1013-1021；Yu等(2005) Anticancer agents from natural products. Wash. DC, Taylor & Francis, ISBN 0-8493-1863-7； Kim等(2009) J. Am. Chem. Soc 131(43):15636-15641）の類似体である。エリブリンは、既存の微小管のプラス端における高親和性部位の選択群に主に結合する、微小管の阻害剤であり、長期的で不可逆的な有糸分裂の遮断後に癌細胞のアポトーシスを引き起こすことにより抗癌効果を発揮する（Jordan等(2005) Mol. Cancer Ther. 4(7):1086-1095；Okouneva等(2008) Mol. Cancer Ther. 7(7):2003-2011；Smith等(2010) Biochem. 49(6)1331-1337；Kuznetsov等(2004) Cancer Res. 64(16):5760-5766；Towle等(2011 Cancer Res. 71(2):496-505)。エリブリンは２−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル）ヘキサコサヒドロ−３−メトキシ−２６−メチル−２０，２７−ビス（メチレン）１１，１５−１８，２１−２４，２８−トリエポキシ−７，９−エタノ−１２，１５−メタノ−９Ｈ，１５Ｈ−フロ（３，２−ｉ）フロ（２’，３’−５，６）ピラノ（４，３−ｂ）（１，４）ジオキサシクロペンタコシン−５−（４Ｈ）−オン（ＣＡＳ登録番号２５３１２８−４１−５）と命名され、構造：
2018065793.tif 000011
を有する。
【０１０３】
ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）、Ｌｉｌｌｙ、ＣＡＳ登録番号９５０５８−８１−４）は、膵臓、乳房、ＮＳＣＬＣ及びリンパ腫を含む様々な癌腫を処置するために使用される、ＤＮＡ複製を遮断するヌクレオシド類似体である（米国特許４８０８６１４号；米国特許５４６４８２６号；Hertel等(1988) J. Org. Chem. 53:2406；Hertel等(1990) Cancer Res. 50:4417；Lund等(1993) Cancer Treat. Rev. 19:45-55）。ゲムシタビンは４−アミノ−１−［３，３−ジフルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ピリミジン−２−オンと命名され、構造：
2018065793.tif 000012
を有する。
【０１０４】
ＧＤＣ−０９７３（ＸＬ−５１８、ＣＡＳ登録番号：９３４６６０−９３−２、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．及びＥｘｅｌｉｘｉｓ）は、固形腫瘍を含む癌の潜在的処置用の、経口投与される、ＭＥＫの強力で高選択的な小分子阻害剤である（米国特許７８０３８３９号；米国特許７９９９００６号；米国特許７９１５２５０号）。クラスＩのＰＩ３Ｋ阻害剤であるＧＤＣ−０９７３及びＧＤＣ−０９４１は、単剤として及び組み合わせの両方の初期段階の臨床試験にある（Hoeflich等(2012) Cancer Research, 72(1):210-219；米国特許出願第２０１１／００８６８３７号）。ＥＲＫ経路の異常活性がヒト腫瘍において共通している。この経路は、キナーゼＲＡＦ、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）キナーゼ（ＭＥＫ）、並びに経路出力の頑健性及び安定化を付与するためのネガティブフィードバックの増幅器として機能する細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）を含む３段のキナーゼモジュールから成る。ＥＲＫ経路はヒト癌において調節不全であることが多いことから、抗癌剤としてＥＲＫ経路の選択的阻害剤を開発するために大きな努力が払われている。ＧＤＣ−０９７３とＰＩ３Ｋ阻害剤ＧＤＣ−０９４１との組み合わせにより、Ｂｃｌ−２ファミリーのアポトーシス促進性制御因子を含むアポトーシスと関連するバイオマーカーの誘導によりインビトロ及びインビボで組み合わせ効果が生じた。ＧＤＣ−０９７３は（Ｓ）−（３，４−ジフルオロ−２−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）フェニル）（３−ヒドロキシ−３−（ピペリジン−２−イル）アゼチジン−１−イル）メタノンと命名され、構造：
2018065793.tif 000013
を有する。
【０１０５】
ＧＤＣ−０６２３（ＣＡＳ登録番号：１１６８０９１−６８−６、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）は、固形腫瘍を含む癌の潜在的処置用の経口投与されるＭＥＫの強力で高選択的な小分子阻害剤である（米国特許７９２３４５６号；米国特許出願第２０１１／０１５８９９０号）。ＧＤＣ−０６２３は５−（（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシエトキシ）イミダゾ［１，５−ａ］ピリジン−６−カルボキサミドと命名され、構造：
2018065793.tif 000014
を有する。
【０１０６】
パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  ＮＪ、ＣＡＳ登録番号３３０６９−６２−４）は、太平洋イチイ、即ちセイヨウイチイ（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）の樹皮から単離された化合物であり、肺、卵巣、乳癌、及び進行性カポジ肉腫の処置に使用される（Wani等(1971) J. Am. Chem. Soc. 93:2325；Mekhail等(2002) Expert. Opin. Pharmacother. 3:755-766）。パクリタキセルはβ−（ベンゾイルアミノ）−α−ヒドロキシ−，６，１２ｂ−ビス（アセチルオキシ）−１２−（ベンゾイルオキシ）−２ａ，３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−４，１１−ジヒドロキシ−４ａ，８，１３，１３−テトラメチル−５−オキソ−７，１１−メタノ−１Ｈ−シクロデカ（３，４）ベンズ（１，２−ｂ）オキシエト−９−イルエステル、（２ａＲ−（２ａ−α，４−β，４ａ−β，６−β，９−α（α−Ｒ＊，β−Ｓ＊），１１−α，１２−α，１２ａ−α，２ｂ−α））−ベンゼンプロパン酸と命名され、構造：
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を有する。
【０１０７】
タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）、ＩＳＴＵＢＡＬ（登録商標）、ＶＡＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＣＡＳ登録番号１０５４０−２９−１）は、その活性代謝物であるヒドロキシタモキシフェンによる、乳房組織におけるエストロゲンレセプターのアンタゴニストである。子宮内膜等の他の組織ではタモキシフェンはアゴニストのように振る舞い、そのため混合アゴニスト／アンタゴニストとして特徴付けられ得る（New Engl. J. Med. (2009) 361:766 Aug. 20, 2009）。タモキシフェンは、閉経前の女性におけるホルモンレセプター陽性乳癌の通常の内分泌（抗エストロゲン）治療であり、閉経後の女性においても標準的ではあるが、この設定ではアロマターゼ阻害剤が使用されることも多い。タモキシフェンは現在、閉経前の女性及び閉経後の女性において早期の及び進行性の両方のＥＲ＋（エストロゲンレセプター陽性）乳癌の処置に使用される（Jordan, V. (1993) Br J Pharmacol 110(2): 507-17）。タモキシフェンは（Ｚ）−２−［４−（１，２−ジフェニルブト−１−エニル）フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミンと命名され、構造：
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を有する。
【０１０８】
フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、ＣＡＳ登録番号１２９４５３−６１−８）は、抗エストロゲン治療後に疾患が進行している閉経後の女性におけるホルモンレセプター陽性の転移性乳癌の薬剤処置である（Kansra (2005) Mol Cell Endocrinol 239(1-2):27-36）。フルベストラントは、アゴニスト効果を有しないエストロゲンレセプターアンタゴニストであり、エストロゲンレセプターを下方制御すること及び分解させることの両方によって作用する（Croxtall (2011) Drugs 71(3):363-380）。フルベストラントは、選択的エストロゲンレセプターダウンレギュレーター（ＳＥＲＤ）である。フルベストラントは、抗エストロゲン治療後に疾患が進行している閉経後の女性においてホルモンレセプター陽性の転移性乳癌の処置で必要とされる（Flemming等(2009) Breast cancer Res Treat. May;115(2):255-68；Valachis等(2010) Crit Rev Oncol Hematol. Mar;73(3):220-7）。フルベストラントは（７α，１７β）−７−｛９−［（４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチル）スルフィニル］ノニル｝エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７−ジオールと命名され、構造：
2018065793.tif 000017
を有する。
【０１０９】
デキサメタゾンは、抗炎症性及び免疫抑制活性を有する強力なグルココルチコイドステロイドホルモンである。腫瘍学では、デキサメタゾンは化学治療中の癌患者に与えられ、この抗腫瘍処置のある種の副作用が抑えられる。デキサメタゾンは、オンダンセトロンのような５−ＨＴ３レセプターアンタゴニストの鎮吐作用を増大させる可能性がある。デキサメタゾンはまた、デキサメタゾンが単独で又はサリドマイド（ｔｈａｌ−ｄｅｘ）若しくはアドリアマイシン（ドキソルビシン）とビンクリスチン（ＶＡＤ）との組み合わせと一緒に与えられるある種の血液系腫瘍でも使用され、特に多発性骨髄腫の処置でも使用される。脳腫瘍（原発性又は転移性）では、デキサメタゾンは浮腫の発生を抑えるために使用され、浮腫は他の脳構造を最終的には圧迫する可能性がある。デキサメタゾンは（８Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｒ，１７Ｒ）−９−フルオロ−１１，１７−ジヒドロキシ−１７−（２−ヒドロキシアセチル）−１０，１３，１６−トリメチル−６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６−オクタヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン３−オン（ＣＡＳ登録番号５０−０２−２）と命名され、構造：
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を有する。
【０１１０】
ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）、２Ｃ４、ｒｈｕＨＡｂ  ２Ｃ４、ＣＡＳ登録番号３８０６１０−２７−５、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、ＨＥＲ２の二量体化を阻害する組み換え型のヒト化モノクローナル抗体である。（米国特許６０５４２９７号；米国特許６４０７２１３号；米国特許６８００７３８号；米国特許６６２７１９６号、米国特許６９４９２４５号；米国特許７０４１２９２号）。ペルツズマブ及びトラスツズマブは、ＨＥＲ−２チロシンキナーゼレセプターの様々な細胞外領域を標的にする（Nahta等(2004) Cancer Res. 64:2343-2346）。ハイブリドーマ細胞株発現２Ｃ４（ペルツズマブ）は、１９９９年４月８日にＡＴＣＣ  ＨＢ−１２６９７としてアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）、１０８０１ユニバーシティブールバード、マナッサス、バージニア州２０１１０−２２０９、米国に寄託された。ペルツズマブは、他のＨＥＲレセプターファミリ−メンバー、即ちＨＥＲ１／ＥＧＦＲ、ＨＥＲ３及びＨＥＲ４と協同するＨＥＲ２レセプターの能力を遮断する（Agus等(2002) Cancer Cell 2:127-37；Jackson等(2004) Cancer Res 64:2601-9：Takai等(2005) Cancer 104:2701-8；米国特許６９４９２４５号）。癌細胞では、他のＨＥＲファミリーレセプターと協同するＨＥＲ２の能力を妨げることにより細胞シグナル伝達が遮断され、最終的には癌細胞増殖の阻害及び癌細胞の死滅がもたらされ得る。ＨＤＩは、その独特な作用機序により、ＨＥＲ２を過剰発現しないものを含む多種多様な腫瘍で作用する可能性を有する（Mullen等(2007) Molecular Cancer Therapeutics 6:93-100）。ペルツズマブは、転移性のＨＥＲ２陽性（＋）乳癌の処置用に開発されている。
【０１１１】
トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（商標）、トラスツズマブ−ＤＭ１、ＰＲ−１３２３６５、ＰＲＯ−１３２３６５；Ｒ−３５０２、ＲＧ−３５０２；Ｔｍａｂ−ＭＣＣ−ＤＭ１、トラスツズマブ−メルタンシン  トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１、Ｔ−ＤＭ１、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）は、ＨＥＲ２陽性（ＨＥＲ２＋）の転移性乳癌の処置用として承認された抗体−薬剤複合体（ＣＡＳ登録番号１３９５０４−５０−０）である（Burris等(2011) Clinical Breast cancer, 11(5):275-82；Phillips等(2008) Cancer Res 2008; 68(22):9280-9290）。トラスツズマブエムタンシンは構造：
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（ここで、Ｔｒは、リンカー部分ＭＣＣを介してマイタンシノイド薬剤部分ＤＭ１に連結されているトラスツズマブである（米国特許５２０８０２０号；米国特許６４４１１６３号））を有する。トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１の上記構造において、薬剤と抗体との比又は薬剤負荷がｐで表され、１から約８の整数値の範囲である。薬剤負荷値ｐは１から８である。トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個及び８個の薬剤部分が抗体であるトラスツズマブに共有結合的に付加されている、様々に負荷された及び付加された抗体−薬剤複合体の全ての混合物を含む（米国特許７０９７８４０号；米国特許出願第２００５／０２７６８１２号；米国特許出願第２００５／０１６６９９３号）。
【０１１２】
トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８、ｒｈｕＭＡｂ  ＨＥＲ２、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、ヒト表皮増殖因子レセプター２タンパク質であるＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）の細胞外ドメインに、細胞ベースアッセイ（Ｋｄ＝５ｎＭ）において高親和性で選択的に結合するマウスＨＥＲ２抗体の組み換えＤＮＡ由来のヒト化ＩｇＧ１カッパモノクローナル抗体バージョンである（米国特許５８２１３３７号；米国特許６０５４２９７号；米国特許６４０７２１３号；米国特許Ｓ６６３９０５５；Coussens L等(1985) Science 230:1132-9；Slamon DJ等(1989) Science 244:707-12）。トラスツズマブは、ＨＥＲ２に結合するマウス抗体（４Ｄ５）の相補性決定領域を有するヒトフレームワーク領域を含有する。トラスツズマブはＨＥＲ２抗原に結合し、そのため癌細胞の増殖を阻害する。トラスツズマブはインビトロアッセイ及び動物中の両方において、ＨＥＲ２を過剰発現するヒト腫瘍細胞の増殖を阻害することが示されている（Hudziak RM等(1989) Mol Cell Biol 9:1165-72； Lewis GD等(1993) Cancer Immunol Immunother; 37:255-63；Baselga J等(1998) Cancer Res. 58:2825-2831）。トラスツズマブは、抗体依存性細胞障害であるＡＤＣＣの媒介物質である（Hotaling TE等(1996) [abstract]. Proc. Annual Meeting Am Assoc Cancer Res; 37:471；Pegram MD等(1997) [abstract]. Proc Am Assoc Cancer Res; 38:602；Sliwkowski等(1999) Seminars in Oncology 26(4), Suppl 12:60-70；Yarden Y.及びSliwkowski, M. (2001) Nature Reviews: Molecular Cell Biology, Macmillan Magazines, Ltd., Vol. 2:127-137）。ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）は、ＥｒｂＢ２を過剰発現する転移性乳癌を患う患者の処置用に１９９８年に承認された（Baselga等(1996) J. Clin. Oncol. 14:737-744）。ＦＤＡは、ＨＥＲ２陽性でリンパ節転移陽性の乳癌を患う患者のアジュバント処置用の、ドキソルビシン、シクロホスファミド及びパクリタキセルを含有する処置レジメンの一部として２００６年にＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）を承認した。ＨＥＲ２を過剰発現する腫瘍、又はＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）処置に対して反応しない若しくはほとんど反応しないＨＥＲ２発現に関連する他の疾患を患う患者のための更なるＨＥＲ２指向性癌治療を開発することが臨床的に著しく必要とされている。
【０１１３】
レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍ．）は、手術後のホルモン反応性乳癌の治療用の経口非ステロイドアロマターゼ阻害剤である（Bhatnagar等(1990) J. Steroid Biochem. and Mol. Biol. 37:1021；Lipton等(1995) Cancer 75:2132；Goss, P.E.及びSmith, R.E. (2002) Expert Rev. Anticancer Ther. 2:249-260；Lang等(1993) The Journal of Steroid Biochem. and Mol. Biol. 44 (4-6):421-8；欧州特許２３６９４０号；米国特許４９７８６７２号）。ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）は、ホルモンレセプター陽性（ＨＲ＋）である又は閉経後の女性において未知のレセプターの状態を有する局所の又は転移性の乳癌の処置用にＦＤＡにより承認されている。レトロゾールは４，４’−（（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）メチレン）ジベンゾニトリル（ＣＡＳ登録番号１１２８０９−５１−５）と命名され、構造：
2018065793.tif 000020
を有する。
【０１１４】
カルボプラチン（ＣＡＳ登録番号４１５７５−９４−４）は、卵巣癌腫、肺癌、頭頸部癌に対して使用される化学療法剤である（米国特許４１４０７０７号）。カルボプラチンはアザニド；シクロブタン−１，１−ジカルボン酸白金と命名され、構造：
2018065793.tif 000021
を有する。
【０１１５】
ベバシズマブ（ＣＡＳ登録番号２１６９７４−７５−３、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、癌の処置で使用される血管内皮細胞増殖因子に対する抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体であり（米国特許７２２７００４号；米国特許６８８４８７９号；米国特許７０６０２６９号；米国特許７１６９９０１号；米国特許７２９７３３４号）、新たな血管の形成を遮断することにより細胞増殖を阻害する。ベバシズマブは、転移性結腸癌及び転移性非小細胞肺癌のほとんどの形態の処置における標準的な化学治療との組み合わせでの使用が２００４年にＦＤＡにより承認された米国において初めての臨床的に利用可能な血管新生阻害剤であった。ベバシズマブの安全性、並びにアジュバント／非転移性結腸癌、転移性乳癌、転移性腎細胞癌腫、転移性の多形性膠芽腫、転移性卵巣癌、転移性のホルモン不応性前立腺癌及び転移性の又は切除不能な局所進行性膵臓癌を患う患者に対する有効性を決定するために、いくつかの最終段階の臨床研究が進行中である。
【０１１６】
抗ＶＥＧＦ抗体は通常、ＶＥＧＦ−Ｂ又はＶＥＧＦ−Ｃ等の他のＶＥＧＦ相同体にもＰＩＧＦ、ＰＤＧＦ又はｂＦＧＦ等の他の増殖因子にも結合しないであろう。好ましい抗ＶＥＧＦ抗体には、ハイブリドーマＡＴＣＣ  ＨＢ  １０７０９により産生されるモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体；ヒトＶＥＧＦの該ヒトＶＥＧＦレセプターへの結合を遮断するマウス抗ｈＶＥＧＦモノクローナル抗体Ａ．４．６．１由来の変異型ヒトＩｇＧ１フレームワーク領域及び抗原結合相補性決定領域を含むベバシズマブを含むがそれに限定されない、Ｐｒｅｓｔａ等（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９に従って生成された組み換え型のヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体が含まれる。フレームワーク領域の大部分を含むベバシズマブのアミノ酸配列の約９３％はヒトＩｇＧ１に由来し、該配列の約７％がマウス抗体Ａ４．６．１に由来する。ベバシズマブは約１４９，０００ダルトンの分子量を有し、グリコシル化されている。ベバシズマブ及び他のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体は、米国特許６８８４８７９号に更に記載されている。国際公開第２００５／０１２３５９号の図２７−２９の内の何れか１つに記載されているように、更なる抗ＶＥＧＦ抗体にはＧ６シリーズ又はＢ２０シリーズの抗体（例えばＧ６−３１．Ｂ２０−４．１）が含まれる。一実施態様では、Ｂ２０シリーズの抗体は、残基Ｆ１７、Ｍ１８、Ｄ１９、Ｙ２１、Ｙ２５、Ｑ８９、Ｉ９１、Ｋ１０１、Ｅ１０３及びＣ１０４を含むヒトＶＥＧＦ上の機能的なエピトープに結合する。Ａ４．６．１（ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０７０９）及びＢ２．６．２（ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０７１０）抗ＶＥＧＦ発現ハイブリドーマ細胞株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）、１０８０１ユニバーシティブールバード、マナッサス、バージニア州２０１１０−２２０９米国に寄託されて保存されている。Ｂ２０−４．１．１はベバシズマブ代用物である（Liang等(2006) Jour. Biol. Chem. 281:951-961）。ＤＮＡ２９１０１−１２７６として同定されるＡＴＣＣ寄託物のヌクレオチド配列挿入によりコードされるＶＥＧＦ−Ｅポリペプチドを発現するクローン（米国特許６３９１３１１号）が、アメリカンタイプカルチャーコレクション、１０８０１ユニバーシティブールバード、マナッサス、バージニア州２０１１０−２２０９、米国に１９９８年３月５日に寄託されてＡＴＣＣ２０９６５３として保存されている。
【０１１７】
生物学的評価
ＧＤＣ−００３２の生物活性を、単剤として、並びに小分子及び大分子（タンパク質、抗体）の両方を含む様々な化学療法剤との組み合わせで測定した。単剤としての及び組み合わせでのＧＤＣ−００３２のそのような生物活性をＰＩ３Ｋ阻害剤であるＧＤＣ０９４１及びＧＤＣ−０９８０と比較した、これらは両方とも癌の処置用にＧｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発されている。
【０１１８】
ＧＤＣ−０９４１（ピクトレリシブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｈｅ、ＲＧ−７３２１）は、ＰＩ３Ｋアイソフォームの強力な多標的化クラスＩ（パン）阻害剤である。ＧＤＣ−０９４１は現在、進行性固形腫瘍の処置に関する第ＩＩ相臨床試験中である。ＧＤＣ−０９４１は４−（２−（１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−（（４−（メチルスルホニル）ピペラジン−１−イル）メチル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）モルホリン（米国特許７７８１４３３号；米国特許７７５０００２号；Folkes等(2008) Jour. of Med. Chem. 51(18):5522-5532）と命名され、立体異性体、幾何異性体、互変異性体及びそれらの薬学的に許容可能な塩を含む構造：
2018065793.tif 000022
GDC-0941
を有する。
【０１１９】
ＧＤＣ−０９８０（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｈｅ、ＲＧ−７４２２）は、ｍＴＯＲ及びＰＩ３Ｋの強力な二重阻害剤である（Wallin等(2011) Mol. Can. Ther. 10(12):2426-2436；Sutherlin等(2011) Jour. Med. Chem. 54:7579-7587）。ＧＤ−０９８０は、前臨床の異種移植片癌モデル；乳房、卵巣、肺及び前立腺において広範な活性を示し、固形腫瘍及び非ホジキンリンパ腫を含む癌の潜在的経口処置用に開発されている（Wagner AJ ; Burris III HA; de Bono JS等AACR-NCI-EORTC International Congress (2009), 21st:November 17 (Abs B137) “Pharmacokinetics and Pharmacodynamic biomarkers for the dual PI3K/mTOR inhibitor GDC-0980: initial phase I evaluation”；米国特許７８８８３５２号；米国特許出願第２００９／００９８１３５号；米国特許出願第２０１０／０２３３１６４号）。ＧＤＣ−０９８０は現在、進行性固形腫瘍の処置に関する第ＩＩ相臨床試験中である。ＧＤＣ−０９８０は（Ｓ）−１−（４−（（２−（２−アミノピリミジン−５−イル）−７−メチル−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）ピペラジン−１−イル）−２−ヒドロキシプロパン−１−オンと命名され、立体異性体、幾何異性体、互変異性体及びそれらの薬学的に許容可能な塩を含む構造：
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GDC-0980
を有する。
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【０１２０】
細胞の生存、増殖及び代謝に関する重要な媒介物質であるホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）シグナル伝達カスケードは、ヒト癌において頻繁に改変される。ＰＩ３Ｋのα−触媒サブユニットをコードする遺伝子であるＰＩＫ３ＣＡにおける変異の活性化は乳癌の約３０％で起こる。これらの変異により酵素の構成的な活性がもたらされ、これらの変異は癌遺伝子である。管腔乳房上皮における変異体ＰＩＫ３ＣＡ  Ｈ１０４７Ｒの発現により、管腔マーカー及び基底マーカーを発現する及びエストロゲンレセプターに関して陽性である異種腫瘍が誘起される。ＰＩＫ３ＣＡ  Ｈ１０４７Ｒ癌遺伝子は多能性前駆細胞を標的とし、ＰＩＫ３ＣＡ  Ｈ１０４７Ｒを有するヒト乳房腫瘍の特徴を再現する（Meyer等(2011). Cancer Res; 71(13):4344-51）。ＰＩ３Ｋのｐ１１０αサブユニットをコードする遺伝子であるＰＩＫ３ＣＡにおける体細胞変異の結果として、ＰＩ３Ｋの過剰活性化が起こる可能性がある。ＨＥＲ２癌遺伝子は全乳癌の２５％で増幅され、これらの腫瘍の内の一部はＰＩＫ３ＣＡ変異も持つ。ＰＩ３Ｋは、形質転換を増強する可能性があり、ＨＥＲ２指向性治療に対する耐性を付与する可能性がある。ＨＥＲ２も過剰発現するＭＣＦ１０Ａヒト乳房上皮細胞中にＰＩ３Ｋ変異体Ｅ５４５Ｋ及びＨ１０４７Ｒを導入することにより、ＭＣＦ１０Ａ／ＨＥＲ２細胞の機能が増加した。アロマターゼ発現ＭＣＦ７細胞は、培養液中でアンドロステンジオンをエストロゲンに変換する。Ｅ５４５Ｋ  ＰＩ３ＫではないＨ１０４７Ｒ  ＰＩ３Ｋの発現により、ＨＥＲ３／ＨＥＲ４リガンドヘレグリン（ＨＲＧ）が顕著に上方制御された（Chakrabarty等(2010) Oncogene 29(37):5193-5203）。
【０１２１】
ＧＤＣ−００３２単剤のインビトロ活性
単剤としてのＧＤＣ−００３２の細胞傷害活性又は細胞増殖抑制活性を、細胞培養培地で増殖する哺乳動物の腫瘍細胞株を確立し、試験化合物を添加し、細胞を約６時間から約５日の期間にわたって培養すること；及び細胞生存率を測定することにより測定した（実施例３）。細胞ベースのインビトロアッセイを使用して生存率を、即ち増殖（ＩＣ５０）、細胞傷害性（ＥＣ５０）及びアポトーシスの誘導（カスパーゼ活性化）を測定した。
【０１２２】
ＧＤＣ−００３２のインビトロでの効力を、実施例３の細胞増殖アッセイ；Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、マディソン、ウィスコンシン州から商業的に入手可能なＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイによって測定した。この均一アッセイ方法は、鞘翅目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）ルシフェラーゼの組み換え発現に基づいており（米国特許５５８３０２４号；米国特許５６７４７１３号；米国特許５７００６７０号）、代謝的に活性な細胞の指標であるＡＴＰの存在の定量化に基づいて培養液における生細胞の数を決定する（Crouch等(1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88；米国特許６６０２６７７号）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを９６ウェルフォーマット又は３８４ウェルフォーマットで実施し、自動化高スループットスクリーニング（ＨＴＳ）に適応させた（Cree等(1995) AntiCancer Drugs 6:398-404）。均一アッセイの手順は、血清補充培地で培養した細胞に単一試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を直接添加することを含む。細胞の洗浄工程、培地の除去工程及び複数回のピペット操作工程は必要ではない。本システムは、試薬の添加及び混合後１０分での３８４ウェルフォーマットにおいてわずか１５個の細胞／ウェルを検出する。
【０１２３】
均一な「添加混合測定」フォーマットにより、存在するＡＴＰの量に比例して細胞溶解及び発光シグナルの生成が得られる。ＡＴＰの量は、培養液中に存在する細胞の数に直接的に比例する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ-Ｇｌｏ（登録商標）アッセイにより、使用する細胞の種類及び培地に応じて一般に５時間よりも長い半減期を有する「グロータイプ」の発光シグナルが生成され、該発光シグナルはルシフェラーゼ反応によって生じる。生細胞は相対発光単位（ＲＬＵ）に反映される。基質である甲虫ルシフェリンは、ＡＴＰからＡＭＰへの転換及び光子の生成を伴って、組み換えホタルルシフェラーゼにより酸化的に脱カルボキシル化される。半減期の延長により、試薬注入器の使用の必要性が排除され、複数のプレートの連続的な又はバッチモードでの処理に柔軟性がもたらされる。この細胞増殖アッセイを、様々なマルチウェルフォーマットと共に使用することができ、例えば９６ウェルフォーマット又は３８４ウェルフォーマットと共に使用することができる。データをルミノメーター又はＣＣＤカメラ撮像装置により記録することができる。発光出力は、経時的に測定される相対光単位（ＲＬＵ）として示される。
【０１２４】
比較するために、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−０９４１の抗増殖効果を、図１−４及び表２における腫瘍細胞株に対するＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（実施例３）により測定した。実験のためにＥＣ５０値を確立した。インビトロの細胞効力活性の範囲は約１００ｎＭから約１０μＭであった。
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【０１２５】
表２は、ＰＩＫ３ＣＡ増幅細胞株及びＨＥＲ２増幅細胞株に対する細胞増殖インビトロアッセイにおいて、単剤活性としてのＧＤＣ−００３２の著しい効力を示す。
【０１２６】
図１は、Ｈ１０４７Ｒ変異を有するＨＣＣ−１９５４を含む、ＰＩＫ３ＣＡの野生型（ＷＴ）細胞株及び変異体細胞株に対する細胞増殖アッセイにおけるＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−０９４１（４−（２−（１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−（（４−（メチルスルホニル）ピペラジン−１−イル）メチル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）モルホリン）の有効性（ＥＣ５０マイクロモル濃度）についての２つのプロットを示す。図１の上部のプロットは、ＧＤＣ−００３２がＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株に対してパン阻害剤ＧＤＣ−０９４１（下部のプロット）よりも広い治療ウィンドウを有することを示す。図２は、ＰＩＫ３ＣＡ野生型（ＷＴ）細胞株、ＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株、ＨＥＲ２発現細胞株及びＰＩ３Ｋ変異体／ＨＥＲ２発現細胞株に対する細胞増殖アッセイにおけるＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−０９４１の有効性（ＥＣ５０マイクロモル濃度）についての２つのプロットを示す。図１及び図２は、ＧＤＣ−００３２がＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞及びＨＥＲ２＋乳癌細胞に対してＧＤＣ−０９４１よりも強力であることを示す。ＨＥＲ２増幅を有する癌細胞株はＨＥＲ２増幅を有しないものよりも、ＧＤＣ−０９４１に対して９倍感受性であるのに比べてＧＤＣ−００３２に対して約４４倍感受性である。
【０１２７】
図２は、ＰＩＫ３ＣＡ野生型（ＷＴ）細胞株、ＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株、ＨＥＲ２発現細胞株及びＰＩＫ３ＣＡ変異体／ＨＥＲ２発現細胞株に対する細胞増殖アッセイにおけるＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−０９４１の有効性（ＥＣ５０マイクロモル濃度）について２つのプロットを示す。各点は異なる細胞株を表す。
【０１２８】
図３は、（３ａ、上部）ヘリカル領域変異体細胞株及びキナーゼ領域変異体細胞株；（３ｂ、中央部）ＰＩ３Ｋ経路野生型細胞株、ＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株、ＰＴＥＮ欠損細胞株及びＰＴＥＮ／ＰＩＫ３ＣＡ細胞株；並びに（３ｃ、下部）ＰＩ３Ｋ経路野生型細胞株、ＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株、Ｒａｓ変異体細胞株及びＲａｓ／ＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株に対するＧＤＣ−００３２の有効性（ＥＣ５０マイクロモル濃度）について３つのプロットを示すグラフである。結果は、ＰＩＫ３ＣＡ変異体腫瘍がＲａｓ又はＰＴＥＮ欠失の共変異を有する場合にＧＤＣ−００３２の有効性が低下することを示す。
【０１２９】
図４ａは、ＳＷ４８同質遺伝子細胞株セットにおけるＧＤＣ−００３２の効力を示す。ＳＷ４８親と、共通のＰＩ３Ｋホットスポット変異であるＥ５４５Ｋ又はＨ１０４７Ｒを持つノックイン変異体サブクローンとをＨｏｒｉｚｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙから得て、４日のＣｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）アッセイを使用して、これらの株におけるＧＤＣ−００３２のＥＣ５０生存率の値を決定した。３種の細胞のサブタイプに関する生存率のＥＣ５０値は、親では０．０２μＭであり、Ｅ５４５Ｋでは０．００５μＭであり、Ｈ１０４７Ｒでは０．００８μＭであった。まとめると、ＰＩ３Ｋ変異を有する同質遺伝子細胞株は、ＧＤＣ−００３２に対する感受性の増加を示す。
【０１３０】
図４ｂは、ＳＷ同質遺伝子細胞；親及びＰＩ３Ｋノックイン変異体であるＥ５４５Ｋ及びＨ１０４７Ｒの投薬後１８時間に収集した溶解物のゲル電気泳動のオートラジオグラムを示す。ＧＤＣ−００３２は、非常に低い化合物濃度でＰＩ３Ｋ変異を持つ細胞におけるアポトーシスを誘導する。ＭＣＦ１０乳房細胞株及びＨＣＣ１９５４（ＰＩ３Ｋ  Ｈ１０４７Ｒ変異体乳癌細胞株）由来のＰＩ３Ｋ変異体同質遺伝子細胞で同様の効果を観測した。
【０１３１】
ＧＤＣ−００３２と化学治療との組み合わせのインビトロ活性
ＧＤＣ−００３２と例示的な化学療法剤との組み合わせの細胞傷害活性又は細胞増殖抑制活性を、細胞培養培地で増殖する哺乳動物の腫瘍細胞株を確立し、試験化合物を添加し、細胞を約６時間から約５日の期間にわたって培養すること；及び細胞生存率を測定することにより測定した（実施例３）。細胞ベースのインビトロアッセイを使用して生存率を、即ち増殖（ＩＣ５０）、細胞傷害性（ＥＣ５０）及びアポトーシスの誘導（カスパーゼ活性化）を測定した。
【０１３２】
ＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせのインビトロでの効力を、実施例３の細胞増殖アッセイ；Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、マディソン、ウィスコンシン州から商業的に入手可能なＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイによって測定した。この均一アッセイ方法は、鞘翅目ルシフェラーゼの組み換え発現に基づいており（米国特許５５８３０２４号；米国特許５６７４７１３号；米国特許５７００６７０号）、代謝的に活性な細胞の指標であるＡＴＰの存在の定量化に基づいて培養液中の生細胞の数を決定する（Crouch等(1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88；米国特許６６０２６７７号）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを９６ウェルフォーマット又は３８４ウェルフォーマットで実施し、自動化高スループットスクリーニング（ＨＴＳ）に適応させた（Cree等(1995) AntiCancer Drugs 6:398-404）。均一アッセイの手順は、血清補充培地で培養した細胞に単一試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を直接添加することを含む。細胞の洗浄工程、培地の除去工程及び複数回のピペット操作工程は必要ではない。本システムは、試薬の添加及び混合後１０分での３８４ウェルフォーマットにおいてわずか１５個の細胞／ウェルを検出する。
【０１３３】
ＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの抗増殖効果を、図５−１２における腫瘍細胞株に対するＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（実施例３）により測定した。試験した化合物及び組み合わせのためにＥＣ５０値を確立した。インビトロの細胞効力活性の範囲は約１００ｎＭから約１０μＭであった。
【０１３４】
特定の細胞に対するＧＤＣ−００３２及び化学療法剤の個々に測定したＥＣ５０値を組み合わせのＥＣ５０値と比較する。組み合わせ指数（ＣＩ）スコアをＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法により算出する（Chou, T.及びTalalay, P. (1984) Adv. Enzyme Regul. 22:27-55）。約０．７未満のＣＩは相乗作用を示す。０．８から１．２のＣＩは相加性を示す。１．２を超えるＣＩは拮抗作用を示す。相乗作用の強さをＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙに従って評価する。図４−６におけるある種の治療用組み合わせは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）及び多発性骨髄腫を含む腫瘍タイプの細胞株によるインビトロ細胞増殖アッセイにおいて驚くべき及び予期しない相乗的な特性を示す。他の組み合わせは相乗作用を示さず、相加性又は拮抗作用のみを示す。ある種の組み合わせは１種又は複数種の腫瘍タイプでは相乗的であるが、他ではそうではない。インビトロ細胞増殖アッセイで示される相乗作用は、ヒト患者での癌の処置において対応する相乗作用を期待する根拠を提供する。
【０１３５】
図５ａは、Ｈ１０４７Ｒ変異及びＤ３５０Ｎ変異を有する乳癌細胞株ＭＦＭ２２３に対するＧＤＣ−００３２、パクリタキセル（ＰＴＸ）及びＧＤＣ−００３２とパクリタキセルとの組み合わせの効果を示す。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、ＧＤＣ−００３２、パクリタキセル（ＰＴＸ）及びＧＤＣ−００３２とパクリタキセルとの組み合わせの用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。２種の薬剤を組み合わせた場合、細胞生存性の阻害において顕著な改善が観測される。
【０１３６】
図５ｂは、基底タイプ及びルミナルタイプの両方についてのＰＩＫ３ＣＡの野生型乳癌細胞株及び変異体乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋パクリタキセルの組み合わせ及びＧＤＣ−０９４１＋パクリタキセルの組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示す。ＰＩＫ３ＣＡ変異にはＥ５４５Ｋ及びＨ１０４７Ｒが含まれる。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は癌細胞株を表す。結果は、ＰＩＫ３ＣＡの野生型乳癌細胞株及び変異体乳癌細胞株に対する２種の組み合わせの活性に関して同様の傾向を示す。
【０１３７】
図６ａは、基底サブタイプのＥ５４２Ｋ  ＰＩＫ３ＣＡ変異及びＰＴＥＮタンパク質発現の欠失を伴う乳癌細胞株Ｃａｌ５１に対するＧＤＣ−００３２、エリブリン及びＧＤＣ−００３２とエリブリンとの組み合わせの効果を示す。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、ＧＤＣ−００３２、エリブリン及びＧＤＣ−００３２とエリブリンとの組み合わせの用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。２種の薬剤を組み合わせた場合、細胞生存性の阻害において顕著な改善が観測される。
【０１３８】
図６ｂは、基底タイプ及びルミナルタイプの両方についてのＰＩＫ３ＣＡ野生型乳癌細胞株、並びにＥ５４５Ｋ、Ｈ１０４７Ｒ、ＰＴＥＮ陰性及びＰＴＥＮ陰性／Ｅ５４２Ｋ変異体乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋エリブリンの組み合わせ、ＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせ、ＧＤＣ−０９４１＋エリブリンの組み合わせ及びＧＤＣ−０９４１＋ドセタキセルの組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示す。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は癌細胞株を表す。評価した細胞株の大部分において、これらの組み合わせに関して相乗作用を観測した。
【０１３９】
図７は、基底タイプ及びルミナルタイプの両方についてのＰＩＫ３ＣＡ野生型乳癌細胞株、並びにＥ５４５Ｋ、Ｈ１０４７Ｒ  ＰＩＫ３ＣＡ変異体乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋エリブリンの組み合わせ及びＧＤＣ−０９４１＋エリブリンの組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示す。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は癌細胞株を表す。評価した細胞株の大部分においてこれらの組み合わせに関して相乗作用を観測した。
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【０１４０】
表３は、いくつかの異なる化学療法剤と標的薬剤との組み合わせにおいて、ＧＤＣ−００３２に関して相乗作用が観測されることを示す。
【０１４１】
ＧＤＣ−００３２は、Ｅ５４５Ｋ  ＰＩＫ３ＣＡ変異を有するＭＣＦ７．１−ｎｅｏ／ＨＥＲ２乳癌細胞に対して、トラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）との組み合わせにおいてＧＤＣ−０９４１（ＣＩ  ０．３９）よりも優れた相乗作用（ＣＩ  ０．２５）を示した。
【０１４２】
図８ａは、基底サブタイプのＥ５４２Ｋ変異及びＰＴＥＮタンパク質発現の欠失を伴う乳癌細胞株Ｃａｌ５１に対するＧＤＣ−００３２、ドセタキセル及びＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせの効果を示す。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、ＧＤＣ−００３２、ドセタキセル及びＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせの用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。２種の薬剤を組み合わせた場合、細胞生存性の阻害において顕著な改善が観測される。
【０１４３】
図８ｂは、ＰＩＫ３ＣＡの野生型乳癌細胞株及び変異体乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせ及びＧＤＣ−０９４１＋ドセタキセルの組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示す。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は異なる細胞株を表す。評価した細胞株の大部分においてこの組み合わせで相乗作用を観測した。
【０１４４】
図９ａは、高ＨＥＲ２発現を有する乳癌細胞株ＳＫＢＲ３に対するＧＤＣ−００３２、トラスツズマブ及びＧＤＣ−００３２＋トラスツズマブの組み合わせの効果を示す。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、ＧＤＣ−００３２、トラスツズマブ及びＧＤＣ−００３２＋トラスツズマブの組み合わせの用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。２種の薬剤を組み合わせた場合、細胞生存性の阻害において顕著な改善が観測される。
【０１４５】
図９ｂは、ＨＥＲ２＋  ＰＩＫ３ＣＡの野生型乳癌細胞株並びにＥ５４５Ｋ及びＨ１０４７Ｒを含む変異体乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせ及びＧＤＣ−０９４１＋ドセタキセルの組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示す。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は異なる細胞株を表す。評価した細胞株の大部分においてこの組み合わせで相乗作用を観測した。
【０１４６】
図１０ａは、Ｈ１０４７Ｒ及びＤ３５０Ｎ  ＰＩＫ３ＣＡ変異を有する乳癌細胞株ＫＰＬ４に対するトラスツズマブ、ＧＤＣ−００３２、パクリタキセル並びにＧＤＣ−００３２＋トラスツズマブの組み合わせ、パクリタキセル＋トラスツズマブの組み合わせ、ＧＤＣ−００３２＋パクリタキセルの組み合わせ及びＧＤＣ−００３２＋パクリタキセル＋トラスツズマブの三重組み合わせの効果を示す。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。パクリタキセル＋ＧＤＣ−００３２の組み合わせは細胞生存性を低下させた。この組み合わせにおけるトラスツズマブは、この細胞株における細胞生存性に対する効果を有しなかった。
【０１４７】
図１０ｂは、高ＨＥＲ２発現を有する乳癌細胞株ＳＫＢＲ３に対するトラスツズマブ、ＧＤＣ−００３２、パクリタキセル並びにＧＤＣ−００３２＋トラスツズマブの組み合わせ、パクリタキセル＋トラスツズマブの組み合わせ、ＧＤＣ−００３２＋パクリタキセルの組み合わせ及びＧＤＣ−００３２＋パクリタキセル＋トラスツズマブの組み合わせの効果を示す。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。この細胞株において二重組み合わせ及び三重組み合わせにより、細胞生存性の低下における顕著な改善を観測した。
【０１４８】
図１１ａは、乳癌細胞株ＨＣＣ１４２８に対する５−ＦＵ、ＧＤＣ−００３２及び５−ＦＵとＧＤＣ−００３２との組み合わせの効果を示す。インビトロ細胞生存及び増殖アッセイ（Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ、Ｐｒｏｍｅｇａ）で、５−ＦＵ、ＧＤＣ−００３２及び５−ＦＵ＋ＧＤＣ−００３２の組み合わせの用量漸増により、様々な阻害剤濃度にわたって生細胞を測定した（ＲＬＵ＝相対光単位）。この細胞株において２種の薬剤を組み合わせた場合、細胞生存性の阻害において顕著な改善を観測した。
【０１４９】
図１１ｂは、ＨＥＲ２＋  ＰＩＫ３ＣＡの野生型乳癌細胞株並びに基底サブタイプ及びルミナルサブタイプのＥ５４５Ｋ及びＨ１０４７Ｒを含む変異体乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋５ＦＵの組み合わせ及びＧＤＣ−０９４１＋５−ＦＵの組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示す。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は異なる細胞株を表す。評価したいくつかの細胞株において、この組み合わせで相乗作用を観測した。
【０１５０】
図１２ａは、癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋従来の化学療法剤（５−ＦＵ、ゲムシタビン、パクリタキセル、ドセタキセル及びエリブリンを含む）の組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示す。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は異なる細胞株を表す。評価した細胞株及び化学療法剤の組み合わせの大部分において、相乗作用を示すＣＩ値を観測した。
【０１５１】
図１２ｂは、癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２＋標的とする化学療法剤（トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、トラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）及びＭＥＫｉ（ＧＤＣ−０９７３）を含む）の組み合わせの組み合わせ指数（ＣＩ）を示す。約０．７未満のＣＩ値は相乗作用を示す。各点は異なる細胞株を表す。評価した細胞株の大部分において、標的とする薬剤の組み合わせで相乗作用を観測した。
【０１５２】
レトロゾール又はフルベストラント等の内分泌治療が転移性のホルモンレセプター陽性（ＨＲ＋）乳癌の処置の選択肢として一般に使用されるが、患者は最終的には再発する。ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、乳房腫瘍細胞の増殖、遊走及び生存を制御する。ＰＩ３Ｋのアルファアイソフォームは、ＨＲ＋乳癌において頻繁に変異し、活性化しており、内分泌治療に対する耐性に関与している。従って、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、内分泌治療との組み合わせにとって魅力的である。ＧＤＣ−００３２は、クラスＩ  ＰＩ３Ｋアルファ、デルタ及びガンマのアイソフォームの経口で生物利用可能な強力で選択的な阻害剤であり、ＰＩ３Ｋベータアイソフォームの阻害はＰＩ３Ｋアルファアイソフォームに対して３０倍低い。前臨床データは、ＰＩ３Ｋアルファアイソフォーム（ＰＩＫ３ＣＡ）変異及びＨＥＲ２増幅癌細胞株に対するＧＤＣ−００３２の活性が増加していることを示す。ＧＤＣ−００３２がヒト乳癌モデルにおける内分泌治療の抗腫瘍活性を増強するかどうかを決定するために、単剤及び組み合わせの研究が実施された。図３７は、アロマターゼ発現ＭＣＦ７細胞におけるレトロゾール及びＰＩ３Ｋ阻害剤ＧＤＣ−００３２の活性を示す。培地中のエストロゲン前駆体アンドロステンジオンによるＭＣＦ７−ＡＲＯ細胞増殖において内分泌治療に対する感受性が増加する。アロマターゼ発現ＭＣＦ７細胞は、培養下でアンドロステンジオンをエストロゲンに変換する。ＭＣＦ７細胞（エストロゲンレセプター陽性（ＥＲ＋）、ＰＩ３ＫアルファＥ５４５Ｋ変異）にアロマターゼ遺伝子を遺伝子導入し、培養下でアンドロステンジオンをエストロゲンに変換することができる安定したクローン（ＭＣＦ７−ＡＲＯ）を選択した。アンドロステンジオンの存在下で増殖した場合、ＭＣＦ７−ＡＲＯ細胞は増殖のためにエストロゲンにより依存した。培地中のエストロゲン前駆体によるＭＣＦ７−ＡＲＯ細胞増殖においては内分泌治療に対する感受性が増加する。これらの条件下で、細胞を、内分泌治療との組み合わせでＧＤＣ−００３２により処理し、細胞生存性、ＰＩ３Ｋ経路マーカー及びＥＲ経路マーカーのモジュレーション並びにアポトーシス誘導に関してアッセイした。ＧＤＣ−００３２と内分泌治療との組み合わせにより、ＭＣＦ７−ＡＲＯ細胞の細胞生存性が低下し、いずれの単剤と比べてもアポトーシスが増加した。ＧＤＣ−００３２及びレトロゾールの組み合わせにより、応答性細胞におけるアポトーシスが増加する。なぜならば、レトロゾールはｍＴＯＲでのＰＩ３Ｋ経路シグナル伝達を低下させ、レトロゾールはフルベストラントと同様にｐＡＫＴ及びＨＥＲ２を上方制御するからである。
【０１５３】
図３８は、細胞生存性、ＢＬＩＳＳ及びＨＳＡの阻害の定量的な点数付けにより、インビトロでＧＤＣ−００３２がレトロゾールと良好に組み合わさることを示す。図３９は、ＰＩ３Ｋ経路とＥＲ経路との間のクロストークがＧＤＣ−００３２とレトロゾールとの組み合わせに関する作用機序を示唆することが観測されたことを示す。レトロゾールによる細胞の２４時間処理により、ＨＥＲ２及びｐＡｋｔが増加するが、ｐｍＴＯＲ及びｐｐ７０Ｓ６Ｋが低下する。図４０は、内分泌耐性細胞がＰＩ３Ｋ経路シグナル伝達を高めており、及びＧＤＣ−００３２に感受性であることを示す。約４カ月にわたるレトロゾールの用量漸増により、内分泌耐性ＭＣＦ７−ＡＲＯ細胞を得た。細胞は、エキセメスタン、フルベストラント、タモキシフェン及びレトロゾールに対して耐性であった。データは、診療所におけるＨＲ＋乳癌処置のために内分泌治療との組み合わせでＧＤＣ−００３２を評価するための理論的根拠を提供する。
【０１５４】
ＧＤＣ−００３２単剤のインビボでの腫瘍異種移植片活性
乳癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、メラノーマ及び結腸直腸癌を呈する腫瘍細胞の異種移植片を免疫無防備状態のマウスに移植し、担腫瘍動物をＧＤＣ−００３２で処置することにより、ＧＤＣ−００３２の有効性をインビボで測定した。結果は、細胞株、腫瘍細胞におけるある種の変異の存在又は不在、ＧＤＣ−００３２の投薬レジメン及び他の因子に依存する。対象のマウスを薬剤又はコントロール（ビヒクル）で処置し、数週間又はそれ以上にわたってモニタリングして腫瘍倍加までの期間、死滅細胞の対数値及び腫瘍阻害を測定した（実施例４）。図１３−２２は、実施例４のプロトコルに従ってＧＤＣ−００３２で処置した担腫瘍マウスの処置後の腫瘍体積の経時変化のプロットを示す。
【０１５５】
図１３は、ビヒクル（ＭＣＴ；０．５％メチセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、ＧＤＣ−０９４１及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）及び毎日（ＱＤ）の投与により表４のスケジュールに従って投薬した、ＰＩ３Ｋα（Ｈ１０４７Ｒ）変異を持つＨＣＣ１９５４．ｘ１乳房腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２の毎日の投薬で腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）における用量依存的な増加を観測し、２１日の最後の投薬で１３８％の最大ＴＧＩを達成した。１２．５及び２５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２の用量で腫瘍退縮を観測した。用語ｕＬはマイクロリットルを意味する。
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【０１５６】
図１４は、ビヒクル（ＭＣＴ；０．５％メチセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）及び毎日（ＱＤ）の投与により投薬した、ＰＩ３Ｋα（Ｈ１０４７Ｒ）変異を持つＫＰＬ４乳房腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ＳＣＩＤベージュ）マウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。２１日目の処置終了時にビヒクルコントロール処置マウスと比較して２５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２により腫瘍退縮の増加を観測したＫＰＬ４異種移植片モデルにおいて、ＧＤＣ−００３２の毎日の投薬により腫瘍体積が用量依存的に減少した。
【０１５７】
図１５は、ビヒクル（ＭＣＴ；０．５％メチセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）及び毎日（ＱＤ）の投与により投薬した、ＰＩ３Ｋα変異（Ｅ５４５Ｋ）を持つＭＣＦ７−ｎｅｏ／ＨＥＲ２乳房腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの２０日わたる近似腫瘍体積変化を示す。処置の１０日後にビヒクルコントロール処置マウスと比較して２２．５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２により腫瘍退縮の増加を観測したＭＣＦ７−ｎｅｏ／ＨＥＲ２異種移植片モデルにおいて、ＧＤＣ−００３２の毎日の投薬により腫瘍体積が用量依存的に減少した。
【０１５８】
図１６は、ビヒクル（ＭＣＴ；０．５％メチセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）及び毎日（ＱＤ）の投与により投薬した、ＰＩ３Ｋα変異（Ｅ５４５Ｋ）を持つＭＣＦ−７乳房腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。ＭＣＦ−７異種移植片モデルにおいて、ＧＤＣ−００３２の毎日の投薬により腫瘍体積が用量依存的に減少した。ビヒクルコントロールと比較して、試験したＧＤＣ−００３２の全ての用量で腫瘍退縮の増加を観測した。
【０１５９】
図１７は、ビヒクル（ＭＣＴ；０．５％メチセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）及び毎日（ＱＤ）の投与により投薬した、ＰＩ３Ｋα変異（Ｈ１０４７Ｒ）を持つＳＫＯＶ３卵巣腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。ＳＫＯＶ３異種移植片モデルにおいて、２１日の処置期間中にＧＤＣ−００３２の毎日の投薬により腫瘍体積が用量依存的に減少した。
【０１６０】
図１８は、ビヒクル（ＭＣＴ；０．５％メチセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）及び毎日（ＱＤ）の投与により投薬した、ＰＩＫ３α変異（Ｈ１０４７Ｒ）を持つＨＭ−７結腸直腸癌腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの７日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。７日目の処置終了時にビヒクルコントロール処置マウスと比較して２５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２により腫瘍退縮の増加を観測したＨＭ−７異種移植片モデルにおいて、ＧＤＣ−００３２の毎日の投薬により腫瘍体積が用量依存的に減少した。
【０１６１】
図１９は、ビヒクル（ＭＣＴ；０．５％メチセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）及び毎日（ＱＤ）の投与により投薬した、ＰＴＥＮ陰性（欠損）であるＰＣ３前立腺癌腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの１４日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。１４日にわたるＧＤＣ−００３２の毎日の投薬後に＜１２．５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２の用量は有効ではなかった。しかしながら、最高用量試験（２５ｍｇ／ｋｇ）でのＰＣ３異種移植片モデルにおいて抗腫瘍反応を観測し、該抗腫瘍反応を腫瘍停滞と特徴付けた。
【０１６２】
図２０は、ビヒクル（ＭＣＴ；０．５％メチセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）又は毎日（ＱＤ）の投与により投薬した、ＰＴＥＮ陰性（欠損）であった２２ＲＶ１前立腺癌腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの２４日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。２２ＲＶ１異種移植片モデルにおいて、ＧＤＣ−００３２の毎日の投薬により腫瘍体積が用量依存的に減少した。
【０１６３】
図２１は、ビヒクル（ＭＣＴ；０．５％メチセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、ＧＤＣ−０９４１及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）及び毎日（ＱＤ）の投与により投薬した、ＰＴＥＮ欠損でありＢ−Ｒａｆ増幅を有する５３７ＭＥＬメラノーマ癌腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。２２ＲＶ１異種移植片モデルにおいて、ＧＤＣ−００３２の毎日の投薬により腫瘍体積が用量依存的に減少した。
【０１６４】
図２２は、ビヒクル（ＭＣＴ；０．５％メチセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）及びＧＤＣ−００３２をＰＯ（経口）及び毎日（ＱＤ）の投与により投薬した、ＥＧＦＲ変異（Ｔ７９０Ｍ）、ＰＩ３Ｋ変異（Ｇ１１８Ｄ）及びｐ５３変異を持つＮＣＩ−Ｈ１９７５非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの２４日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ビヒクルコントロール処置マウスと比較してＧＤＣ−００３２による２４日の処置期間にわたって腫瘍体積の用量依存的減少を観測した。
【０１６５】
ＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせのインビボ腫瘍異種移植片活性
癌細胞の同種移植片又は異種移植片を齧歯動物に移植し、担腫瘍動物を薬剤の組み合わせで処置することにより、ＧＤＣ−００３２と小分子標的剤及び大分子標的剤を含む様々な化学療法剤との組み合わせの有効性をインビボで測定した。結果は、細胞株、腫瘍細胞におけるある種の変異の存在又は不存在、ＧＤＣ−００３２及び化学療法剤の投与の順序、投薬レジメン及び他の因子に依存する。対象のマウスを薬剤又はコントロール（ビヒクル）で処置し、数週間又はそれ以上にわたってモニタリングして腫瘍倍加までの期間、死滅細胞の対数値及び腫瘍阻害を測定した（実施例４）。図２３−３６は、実施例４のプロトコルに従ってＧＤＣ−００３２と様々な化学療法剤との組み合わせで処置した担腫瘍マウスの処置後の腫瘍体積の経時変化のプロットを示す。
【０１６６】
図２３は、ビヒクル、ドセタキセル（ＤＴＸ）、ＧＤＣ−０９４１、ＧＤＣ−００３２及びドセタキセル＋ＧＤＣ−０９４１の組み合わせ又はドセタキセル＋ＧＤＣ−００３２の組み合わせを投与により表５のスケジュールにしたがって投薬した、ＭＣＦ−７  ｎｅｏ／ＨＥＲ２乳癌腫瘍異種移植片を持つ免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの５１日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−０９４１及びＧＤＣ−００３２を２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。ドセタキセルを３週にわたり静脈内に毎週（ＱＷ）投薬した。２１日目の投薬終了後に、更に３０日にわたって腫瘍の再増殖に関してマウスをモニタリングした。各単剤単独と比較した場合、ＧＤＣ−００３２の組み合わせは、腫瘍退縮を増加させることによりＤＴＸの抗腫瘍活性を増強した。ＤＴＸとの組み合わせにおいて最高用量で試験したＧＤＣ−００３２（２０ｍｇ／ｋｇ）は、ＤＴＸとの組み合わせにおけるＧＤＣ−００９４１に対してＴＧＩ％に関して同等であった（表５）。
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【０１６７】
図２４は、ＰＴＥＮ陰性（欠損）であり、ビヒクル（０．５％メチルセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ−８０）、ドセタキセル（ＤＴＸ）、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせを投与により投薬した、ＭＸ−１三重陰性（ＥＲ−（エストロゲンレセプター）、ＰＲ−（プロゲステロンレセプター）、ｎｅｕ／ＨＥＲ２−（ＨＥＲ２レセプター））乳癌腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態のマウスのコホートの２５日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。ＤＴＸを、２．５、５．０及び７．５ｍｇ／ｋｇの薬剤で３週にわたり静脈内に毎週（ＱＷ）投薬した。２１日目の投薬終了後に、更に４日にわたって腫瘍の再増殖に関してマウスをモニタリングした。試験した全用量でＧＤＣ−００３２はＤＴＸの抗腫瘍活性を増強した。各薬剤単独と比較した場合、５及び１０ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋７．５ｍｇ／ｋｇのＤＴＸで最大の組み合わせ活性を観測した。
【０１６８】
図２５は、ビヒクル（０．５％メチルセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ−８０）、ドセタキセル（ＤＴＸ）、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせを投与により投薬した、ＰＩ３Ｋ（Ｈ１０４７Ｒ）変異を持つＳＫＯＶ３卵巣癌腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態のマウスのコホートの２５日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。ＤＴＸを７．５ｍｇ／ｋｇの薬剤で３週にわたり静脈内に毎週（ＱＷ）投薬した。２１日目の投薬終了後に、更に４日にわたって腫瘍の再増殖に関してマウスをモニタリングした。試験したＧＤＣ−００３２の全用量でＧＤＣ−００３２はＤＴＸの抗腫瘍活性を増強した。各薬剤単独と比較した場合、１５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋７．５ｍｇ／ｋｇのＤＴＸで最大の組み合わせ活性を観測した。
【０１６９】
図２６は、ビヒクル（０．５％メチルセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ−８０）、パクリタキセル、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−００３２＋パクリタキセルの組み合わせを投与により投薬した、ＰＩ３Ｋ変異（Ｅ５４５Ｋ）を持つＭＣＦ−７乳癌腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの４０＋日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。パクリタキセルを１０ｍｇ／ｋｇの薬剤で３週にわたり静脈内に毎週（ＱＷ）投薬した。各薬剤単独と比較した場合、７．５及び１２．５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２がパクリタキセルの抗腫瘍活性を増強した。
【０１７０】
図２７は、ビヒクル（０．５％メチルセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ−８０）、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、ＧＤＣ−００３２及びトラスツズマブ＋ＧＤＣ−００３２の組み合わせをＰＯ（経口）投与により投薬した、ＰＩ３Ｋ変異（Ｋ１１１Ｎ）を持つＢＴ４７４、ＨＥＲ２＋乳癌腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態のマウスのコホートの６０日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を、５、１０及び２０ｍｇ／ｋｇで２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。トラスツズマブを３ｍｇ／ｋｇで静脈内に（ＩＶ）毎週（ＱＷ）投薬した。ＩＶ投与前に負荷用量である６ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブを与えた。ＧＤＣ−００３２は、用量依存的な様式でトラスツズマブの有効性を増強した。
【０１７１】
図２８は、ビヒクル（０．５％メチルセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ−８０）、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、トラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）、ＧＤＣ−００３２、トラスツズマブ＋ＧＤＣ−００３２の組み合わせ及びＴ−ＤＭ１とＧＤＣ−００３２との組み合わせを経口（ＰＯ）投与により投薬した、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）によってＨＥＲ２を過剰発現させるように操作されているＦｏｕｎｄｅｒ５（Ｆｏ５）ＨＥＲ２＋乳癌同種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの１０＋日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を、２５ｍｇ／ｋｇの薬剤で１５日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。トラスツズマブを３０ｍｇ／ｋｇで静脈内に（ＩＶ）及び毎週（ＱＷ）投薬し、Ｔ−ＤＭ１をＩＶで一回投薬した。各薬剤単独と比較すると、ＧＤＣ−００３２の組み合わせはトラスツズマブ及びＴ−ＤＭ１の抗腫瘍活性を増強して腫瘍停滞を誘発した。ＧＤＣ−００３２及びトラスツズマブ対ＧＤＣ−００３２及びＴ−ＤＭ１による組み合わせ活性の差異を観測しなかった。
【０１７２】
図２９は、ビヒクル（０．５％メチルセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ−８０）、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、ドセタキセル、ＧＤＣ−００３２、トラスツズマブとドセタキセルとの組み合わせ又はトラスツズマブとドセタキセルとＧＤＣ−００３２との三重組み合わせをＰＯ（経口）投与により投薬した、ＢＴ４７４、ＨＥＲ２＋乳癌腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの２１日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を、５、１０及び１５ｍｇ／ｋｇで２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。トラスツズマブを３ｍｇ／ｋｇで静脈内に（ＩＶ）及び毎週（ＱＷ）投薬した。ドセタキセルを、７．５ｍｇ／ｋｇの薬剤で３週にわたり静脈内に毎週（ＱＷ）投薬した。トラスツズマブ及びドセタキセルの単剤治療と比較すると、両方の薬剤の組み合わせにより腫瘍退縮が増加した。試験した全用量でのＧＤＣ−００３２のドセタキセルとトラスツズマブとの二重組み合わせへの添加により、処置期間中に腫瘍退縮が更に増加した。
【０１７３】
図３０は、ビヒクル（０．５％メチルセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ−８０）、フルベストラント、ＧＤＣ−００３２及びフルベストラントとＧＤＣ−００３２との組み合わせをＰＯ（経口）投与により投薬した、ＰＩ３Ｋ変異（Ｅ５４５Ｋ）を持つＭＣＦ−７乳癌腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの４０＋日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を、５、１０及び１５ｍｇ／ｋｇで２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。フルベストラントを３週にわたり週（ＱＷ）に１回５ｍｇの薬剤で皮下に投薬した。単剤治療と比較すると、５及び１０ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２が、処置期間中に及び投薬終了後に更に２０日にわたり、フルベストラントの抗腫瘍活性を増強した。ＧＤＣ−００３２の単剤活性と比較すると、１５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２とフルベストラントとの組み合わせにより、処置期間後に腫瘍増殖の阻害が持続した。
【０１７４】
図３１は、ビヒクル（ＭＣＴ；０．５％メチルセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、タモキシフェン、ＧＤＣ−００３２及びタモキシフェンとＧＤＣ−００３２との組み合わせをＰＯ（経口）投与により投薬した、ＰＩ３Ｋ変異（Ｅ５４５Ｋ）を持つＭＣＦ−７  ｎｅｏ／ＨＥＲ２乳癌腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの２０＋日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を、５、１０及び２０ｍｇ／ｋｇで２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日投薬した。タモキシフェンを、マウスの皮下に埋め込んだ５ｍｇの錠剤により投与した。単剤治療と比較すると、２０ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２が、タモキシフェンの抗腫瘍活性を増強して腫瘍を退縮させた。
【０１７５】
図３２は、ビヒクル（０．５％メチセルロース／０．２％Ｔｗｅｅｎ８０）、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−０９７３とＧＤＣ−００３２との組み合わせをＰＯ（経口）投与により投薬した、Ａ５４９変異体非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ヌード）マウスのコホートの４０日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−０９７３を、それぞれ７．５及び５．０ｍｇ／ｋｇで２１日にわたり毎日投薬した。ＧＤＣ−００３２とＧＤＣ−０９７３との組み合わせにより、処置期間中に腫瘍退縮が増加した。処置終了後に更に１９日にわたり持続的な抗腫瘍活性を観測したことから、両方の薬剤の組み合わせ効果は永続的であった。
【０１７６】
図３３は、ビヒクル、デキサメタゾン、ＧＤＣ−０９８０、ＧＤＣ−００３２、デキサメタゾンとＧＤＣ−０９８０との組み合わせ及びデキサメタゾンとＧＤＣ−００３２との組み合わせを投与により投薬した、ＭＭ．１ｓ多発性骨髄腫腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の（ＳＣＩＤベージュ）マウスのコホートの１５＋日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を、１及び４ｍｇ／ｋｇの薬剤で経口（ＰＯ）及び毎日投薬した。ＧＤＣ−０９８０を１ｍｇ／ｋｇの薬剤で経口及び毎日投薬した。単剤治療と比較すると、１及び４ｍｇ／ｋｇの薬剤でのＧＤＣ−００３２の組み合わせが、デキサメタゾン（２．５ｍｇ／ｋｇ）の抗腫瘍活性を増強した。ＧＤＣ−００３２とデキサメタゾンとで観測した抗腫瘍の組み合わせ効果は、ＧＤＣ−０９８０とデキサメタゾンとの組み合わせに対して同等であった。
【０１７７】
図３４は、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、ＧＤＣ−００３２及びカペシタビンとＧＤＣ−００３２との組み合わせをＰＯ（経口）投与により１日に１回投薬した、ＭＣＦ−７  ｎｅｏ／ＨＥＲ２乳癌腫瘍異種移植片を有する１０匹のマウスのコホートの２１日にわたる平均腫瘍体積変化を示す。
【０１７８】
図３５は、ビヒクル、ドセタキセル、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせを投薬した、Ａ５４９（ＫＲＡＳＧ１２Ｓ、ＰＩ３ＫＭ７７２Ｘ、Ｎ９９６Ｈ）ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２０日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。ＤＴＸを、１０ｍｇ／ｋｇの薬剤で３週にわたり静脈内に毎週（ＱＷ）投薬した。２１日目の投薬終了後、更に４日にわたり腫瘍の再増殖に関してマウスをモニタリングした。試験したＧＤＣ−００３２の全用量でＧＤＣ−００３２はＤＴＸの抗腫瘍活性を増強した。各薬剤単独と比較した場合、１５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋１０ｍｇ／ｋｇのＤＴＸで最大の組み合わせ活性を観測した。
【０１７９】
図３６は、ビヒクル、ドセタキセル、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−００３２＋ドセタキセルの組み合わせを投薬した、Ｈ５２０（ｐ５３変異）ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２８日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。ＤＴＸを１０ｍｇ／ｋｇの薬剤で３週にわたり静脈内に毎週（ＱＷ）投薬した。２１日目の投薬終了後、更に４日にわたり細胞の再増殖に関してマウスをモニタリングした。２．５ｍｇ／ｋｇを除く、試験したＧＤＣ−００３２の全用量でＧＤＣ−００３２はＤＴＸの抗腫瘍活性を増強した。各単剤単独と比較した場合、１５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋１０ｍｇ／ｋｇのＤＴＸで最大の組み合わせ活性を観測した。
【０１８０】
図４１は、ＧＤＣ−００３２と抗エストロゲン剤であるフルベストラント及びタモキシフェンとを組み合わせる場合に、インビボで抗腫瘍活性が増加することを示す。２１日目でのビヒクルコントロールに対する割合としての腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ％）を、フルベストラント及びＧＤＣ−００３２を単独で投薬したＭＣＦ−７／ＥＲ＋／ＨＥＲ２−マウスで、並びにＭＣＦ−７／ＥＲ＋／ＨＥＲ２−マウスにおける組み合わせで、並びにタモキシフェン及びＧＤＣ−００３２単独で、並びにＭＣＦ−７／ＥＲ＋／ＨＥＲ２−マウスにおける組み合わせで測定した。ＧＤＣ−００３２とエストロゲンレセプターアンタゴニストであるフルベストラント及びタモキシフェンの両方との組み合わせは単剤と比べてＴＧＩを増加させており、相乗効果を示す。
【０１８１】
図４２は、ビヒクル、パクリタキセル、ＧＤＣ−００３２及びＧＤＣ−００３２＋パクリタキセルの組み合わせを投薬した、ＭＣＦ−７（ＰＩ３Ｋ変異体、ＥＲ＋）乳房異種移植片を有する１２匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２３日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を経口で（ＰＯ）、及び２１日わたって毎日（ＱＤ、パクリタキセル投薬前日の休薬日を含む）又は５サイクルで４日毎に（Ｑ４Ｄ）投薬した。パクリタキセルを７．５ｍｇ／ｋｇの薬剤により５サイクルで４日毎に静脈内に投薬した。ＧＤＣ−００３２の両方のレジメン（ＱＤ及びＱ４Ｄ）により、組み合わせの抗腫瘍活性が増強した。各薬剤と比較した場合、４０ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋パクリタキセルで最大の組み合わせ活性を観測した。
【０１８２】
図４３は、ビヒクル、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＧＤＣ−００３２並びにＧＤＣ００３２＋トラスツズマブ及びペルツズマブの三重組み合わせを投薬した、ＫＰＬ−４（ＰＩ３Ｋ変異体、Ｈｅｒ２＋）乳房異種移植片を有する８から１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２１日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。ＧＤＣ−００３２を２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。トラスツズマブを３ｍｇ／ｋｇの薬剤で３週にわたり週に１回腹腔内に投薬し、ペルツズマブを２．５ｍｇ／ｋｇの薬剤で３週にわたり週に１回腹腔内に投薬した。ＧＤＣ−００３２により、試験したＧＤＣ−００３２の全ての用量で組み合わせの抗腫瘍活性が増強した。各薬剤単独又はＧＤＣ−００３２を含まない組み合わせと比較した場合、１．５６−６．２５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋トラスツズマブ及びペルツズマブで最大の組み合わせ活性を観測した。
【０１８３】
図４４は、ビヒクル、パクリタキセル、カルボプラチン、Ｂ２０−４．１．１抗マウスＶＥＧＦ抗体（Bagri等(2010) Clin. Cancer Res. 16:3887；Shrimali等(2010) Cancer Res. 70(15):6171-6180）、ＧＤＣ−００３２並びにＧＤＣ−００３２＋パクリタキセル（ＰＴＸ）、カルボプラチン＋／−Ｂ２０−４．１．１抗ＶＥＧＦの三重組み合わせ及び四重組み合わせを投薬した、Ｈ２９２（ＫＲＡＳ変異体）ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）異種移植片を有する１０匹の免疫無防備状態のマウスのコホートの２２日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。Ｂ２０−４．１．１は、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）代用物である（Liang等(2006) Jour. Biol. Chem. 281:951-961）。ＧＤＣ−００３２を２１日にわたり経口（ＰＯ）及び毎日（ＱＤ）投薬した。パクリタキセルを１０ｍｇ／ｋｇの薬剤で１日目に静脈内に投薬し、カルボプラチンを８０ｍｇ／ｋｇの薬剤で１日目に腹腔内に投薬し、抗ＶＥＧＦを５ｍｇ／ｋｇの薬剤で３週にわたり週に２回腹腔内に投薬した。ＧＤＣ−００３２により、試験したＧＤＣ−００３２の全ての用量で組み合わせの抗腫瘍活性が増強した。各薬剤単独又はＧＤＣ−００３２を含まない組み合わせと比較した場合、５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋パクリタキセル（ＰＴＸ）、カルボプラチン及び抗ＶＥＧＦで最大の組み合わせ活性を観測した。
【０１８４】
薬学的組成物及び製剤
本発明の薬学的組成物又は製剤は、ＧＤＣ−００３２と、化学療法剤と、１種又は複数種の薬学的の許容可能な担体、滑剤、希釈剤又は賦形剤との組み合わせを含む。
【０１８５】
本発明のＧＤＣ−００３２及び化学療法剤は、例えば水、エタノール等の薬学的に許容可能な溶媒との非溶媒和形態及び溶媒和形態で存在することができ、本発明が溶媒和形態及び非溶媒和形態の両方を包含することが意図される。
【０１８６】
本発明の化合物はまた様々な互変異性体形態で存在することもでき、そのような形態全てが本発明の範囲内に包含される。用語「互変異性体」又は「互変異性体形態」は、低いエネルギー障壁を介して相互転換可能である、エネルギーが異なる構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトン性互変異性体としても知られている）には、プロトンの移動による相互変換、例えばケト−エノール異性化及びイミン−エナミン異性化が含まれる。原子価互変異性体には、結合電子の内のいくつかの再編成による相互変換が含まれる。
【０１８７】
薬学的組成物は、ＧＤＣ−００３２及び本明細書に記載した追加の薬剤のリストから選択される化学療法剤を含む複数種（例えば２種）の薬学的に活性な薬剤と、任意の薬学的に不活性な賦形剤、希釈剤、担体又は滑剤を含むバルク組成物及び個々の投薬単位の両方を包含する。バルク組成物及びそれぞれ個々の投薬単位は、定量の前述した薬学的に活性な薬剤を含有することができる。バルク組成物とは、個々の投薬単位にまだ形成されていない物質のことである。例示的な投薬単位は、例えば錠剤、丸薬、カプセル剤等の経口投薬単位である。同様に、薬学的組成物を投与することによる患者の処置方法もバルク組成物及び個々の投薬単位の投与を包含することが意図される。
【０１８８】
薬学的組成物はまた、本明細書に列挙されたものと同一であるが１種又は複数種の原子が天然で通常見出される原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子に置き換えられている本発明の同位体標識化合物も包含する。規定した任意の特定の原子又は元素の全ての同位体が本発明の化合物及びその用途の範囲内であると考えられる。本発明の化合物に組み入れることができる例示的な同位体には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素及びヨウ素の同位体、例えば２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ及び１２５Ｉが含まれる。本発明のある種の同位体標識化合物（例えば３Ｈ及び１４Ｃで標識したもの）は、化合物及び／又は基質の組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム標識（３Ｈ）同位体及び炭素−１４（１４Ｃ）同位体は、それらの調製の容易さ及び検出可能性のために有用である。更に、重水素（２Ｈ）等のより重い同位体との置換により、より大きな代謝安定性から生じるある種の治療上の利点（例えば、インビボでの半減期の増加又は必要な投薬量の減少）をもたらすことができ、従って、該置換は、ある環境下では好ましいものであることができる。１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃ、及び１８Ｆ等の陽電子放出同位体は、基質レセプター占有率を調べるための陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）研究に有用である。本発明の同位体標識化合物は一般的に、非同位体標識試薬の代わりに同位体標識試薬を用いることにより、以下の本明細書の実施例で開示したものと類似する手順に従って調製され得る。
【０１８９】
ＧＤＣ−００３２及び化学療法剤は、ヒトを含む哺乳動物における過剰増殖性障害の治療的処置（予防的処置を含む）のための治療用組み合わせで使用するために、標準的な薬務に従って製剤化される。本発明は、１種又は複数種の薬学的に許容可能な担体、滑剤、希釈剤、添加剤又は賦形剤と共にＧＤＣ−００３２を含む薬学的組成物を提供する。
【０１９０】
適切な担体、希釈剤、添加剤及び賦形剤は当業者に公知であり、これらには、炭水化物、ロウ、水溶性ポリマー及び／又は膨潤性ポリマー、親水性の又は疎水性の物質、ゼラチン、油、溶媒、水等の物質が含まれる。使用される具体的な担体、希釈剤又は賦形剤は、本発明の化合物が適用される手段及び目的に依存するだろう。溶媒は一般的に、哺乳動物への投与に安全（ＧＲＡＳ）であると当業者に認識されている溶媒に基づいて選択される。一般的に、安全な溶媒は、水等の無毒な水溶性溶媒、及び水に溶解する又は混和する他の無毒な溶媒である。適切な水性溶媒には、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、クレモフォール（例えばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬ（登録商標）、ＢＡＳＦ）及びこれらの混合物が含まれる。製剤はまた、１種又は複数種の緩衝剤、安定化剤、表面活性剤、湿潤剤、潤滑剤、乳化剤、懸濁剤、防腐剤、抗酸化剤、不透明化剤、滑剤、加工助剤、着色料、甘味料、芳香剤、香料、及び薬剤（即ち、本発明の化合物又はその薬学的組成物）の美しい見栄えをもたらすための又は薬学的製品（即ち医薬）の製造を補助するための他の既知の添加剤を含むこともできる。
【０１９１】
製剤は、従来の溶解手段及び混合手段を使用して調製され得る。例えば、バルク薬剤物質（即ち、本発明の化合物又は該化合物の安定化形態（例えば、シクロデキストリン誘導体又は他の既知の錯化剤との錯体））を、上述した賦形剤の内の１種又は複数種の存在下で適切な溶媒に溶解させる。本発明の化合物は、典型的には薬学的投薬形態に製剤化され、薬剤の投薬量の制御が容易となり、処方されたレジメンを患者が順守することが可能となる。
【０１９２】
適用される薬学的組成物（又は製剤）を、薬剤の投与に使用される方法に応じて様々な方法で包装することができる。一般的に、流通用の物品は、適切な形態の薬学的製剤が蓄積されている容器を含む。適切な容器は当業者に公知であり、該容器には瓶（プラスチック及びガラス）、小袋、アンプル、プラスチックバッグ、金属シリンダ等の物質が含まれる。容器はまた、包装の内容物への軽率なアクセスを防止するために、不正開封防止集合体を含むこともできる。加えて、容器には、容器の内容物を説明するラベルが付着されている。ラベルはまた、適切な警告を含むこともできる。
【０１９３】
本発明の化合物の薬学的製剤を、様々な経路及びタイプの投与用に調製することができる。例えば、所望の程度の純度を有するＧＤＣ−００３２を、凍結乾燥製剤、粉砕粉末又は水溶液の形態で、薬学的に許容可能な希釈剤、担体、賦形剤又は安定化剤と任意選択的に混合することができる（Remington's Pharmaceutical Sciences (1995) 18th edition, Mack Publ. Co.、イーストン、ペンシルバニア州）。製剤化を、生理学的に許容可能な担体、即ち用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに非毒性である担体と適切なｐＨで、及び所望の程度の純度で、室温にて混合することにより行なうことができる。製剤のｐＨは特定の用途及び化合物の濃度に主に依存するが、約３から約８の範囲であることができる。
【０１９４】
薬学的製剤は、好ましくは無菌である。特に、インビボ投与に使用される製剤は無菌でなければならない。そのような無菌化は、無菌ろ過膜を通すろ過により容易に達成される。
【０１９５】
薬学的製剤を通常、固形組成物、凍結乾燥製剤又は水溶液として保存することができる。
【０１９６】
本発明の薬学的製剤を、良好な医療行為と一致した様式で、即ち投与の量、濃度、スケジュール、経過、ビヒクル及び経路で投薬する及び投与することができる。これに関連して考慮される因子には、処置される具体的な障害、処置される具体的な哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール及び医師に既知の他の因子が含まれる。そのような考慮が、投与される化合物の「治療上有効な量」に影響を与えることができ、該「治療上有効な量」は、凝固因子媒介障害を予防する、改善する又は処置するのに必要な最小量である。そのような量は好ましくは、ホストに対して毒性である又はホストを有意により出血させ易くさせる量未満である。
【０１９７】
経口で又は非経口で投与されるＧＤＣ−００３２の用量当たりの初回の薬学的に有効な量は約０．０１−１０００ｍｇ／ｋｇの範囲であることができ、即ち１日当たり患者の体重の約０．１から２０ｍｇ／ｋｇであることができ、使用される化合物の典型的な初回の範囲は０．３から１５ｍｇ／ｋｇ／日である。投与されるＧＤＣ−００３２の用量及び化学療法剤の用量はそれぞれ、単位投薬形態当たり約１ｍｇから約１０００ｍｇの範囲であることができ、又は単位投薬形態当たり約１０ｍｇから約１００ｍｇの範囲であることができる。ＧＤＣ−００３２化合物及び化学療法剤の用量を約１：５０から約５０：１の重量比で投与することができ、又は約１：１０から約１０：１の重量比で投与することができる。
【０１９８】
許容可能な希釈剤、担体、賦形剤及び安定化剤は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエント対して非毒性であり、これらには、リン酸、クエン酸及び他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えば塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコール若しくはベンジルアルコール；メチルパラベン若しくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。活性な薬学的成分を、それぞれコロイド性の薬剤送達系（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルションで、例えばコアセルベーション技術により又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えばヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に捕捉することもできる。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、（１９９５）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡに開示されている。
【０１９９】
ＧＤＣ−００３２及び化学療法化合物の徐放性製剤を調製することができる。徐放性製剤の適切な例には、ＧＤＣ−００３２を含有する固形の疎水性ポリマーの半透性マトリクスが含まれ、マトリクスは成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリクスの例には、ポリエステル、ハイドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とガンマ−エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性のエチレン−酢酸ビニル、分解性の乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸リュープロリドから構成される注射可能なミクロスフェア）並びにポリ−Ｄ（−）３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。
【０２００】
薬学的製剤には、本明細書で詳述した投与経路に適したものが含まれる。製剤を好都合なことに単位投薬形態で提供することができ、及び薬学の分野で公知の任意の方法により調製することができる。技術及び製剤は一般的に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １８ｔｈＥｄ．（１９９５）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ中に見出される。そのような方法は、活性成分と１種又は複数種の副成分を構成する担体とを会合させる工程を含む。一般的に、製剤は、活性成分と、液状担体若しくは微細に分割された固形担体又は両方とを均一に及び十分に会合させ、次いで必要に応じて生成物を成形することにより調製される。
【０２０１】
経口投与に適したＧＤＣ−００３２及び／又は化学療法剤の製剤を別々の単位として調製することができ、例えばそれぞれが所定量のＧＤＣ−００３２及び／又は化学療法剤を含有する、丸薬、硬カプセル剤若しくは柔カプセル剤、例えばゼラチンカプセル剤、カシェ剤、トローチ、ロゼンジ、水性若しくは油性の懸濁液、分散性の粉末若しくは顆粒、エマルション、シロップ又はエリキシル剤として調製することができる。所定量のＧＤＣ−００３２及び所定量の化学療法剤を、組み合わせ製剤として丸薬、カプセル剤、溶液又は懸濁液に製剤化することができる。あるいは、ＧＤＣ−００３２及び化学療法剤を、交互投与用の丸薬、カプセル剤、溶液又は懸濁液に別々に製剤化することができる。
【０２０２】
製剤を、薬学的組成物を製造するための当分野で既知の任意の方法に従って調製することができ、そのような組成物は、口当たりが良い製剤を提供するために、甘味料、香料、着色料及び保存料を含む１種又は複数種の薬剤を含有することができる。任意選択的にバインダー、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤又は分散剤と混合した、粉末又は顆粒等の自由に流動する形態で活性成分を適切な機械で圧縮することにより、圧縮錠剤を調製することができる。不活性な液状希釈剤で湿らせた粉末化活性成分の混合物を適切な機械で成形することにより、湿製錠剤を作ることができる。任意選択的に錠剤を被覆することでき、又は錠剤に割線を入れることができ、及び任意選択的に錠剤からの活性成分の放出を遅延させる又は制御するように錠剤を製剤化することができる。
【０２０３】
本発明の薬学的製剤の錠剤賦形剤は、錠剤を構成する粉末化薬剤のバルク体積を増加させるためのフィラー（又は希釈剤）；摂取される場合に錠剤の小さな断片への、理想的には個々の薬剤粒子への分解を助長し、薬剤の速やかな溶解及び吸収を促進するための崩壊剤；顆粒及び錠剤を必要とされる機械的強度で形成することができ、該顆粒及び錠剤が圧縮された後に共に錠剤を保持することができ、包装、輸送及び通常の取り扱い中における成分粉末への分解が防止され得るようにするためのバインダー；製造中に錠剤を構成する粉末の流動性を改善するための滑剤；製造中に錠剤をプレスするのに使用される装置に錠剤化粉末が付着しないようにするための潤滑剤、潤滑剤は、完成した錠剤が装置から放出される場合に、プレスを通過する粉末化混合物の流れを改善し、並びに摩擦及び破損を最小化する；滑剤と類似の機能を有し、製造中に、錠剤を構成する粉末と錠剤の形状を打ち抜くために使用される機械との間の付着を低減する抗付着剤；錠剤により心地よい味を与えるために又は不快な味をマスクするために錠剤に組み入れられるフレーバー、並びに認識及び患者コンプライアンスを補助するための着色料を含むことができる。
【０２０４】
錠剤の製造に適している非毒性の薬学的に許容可能な賦形剤との混合物で活性成分を含有する錠剤が許容可能である。これらの賦形剤は、例えば炭酸カルシウム又は炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム又はリン酸ナトリウム等の不活性希釈剤；トウモロコシデンプン又はアルギン酸等の顆粒化剤及び崩壊剤；デンプン、ゼラチン又はアカシア等の結合剤；及びステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルク等の潤滑剤であることができる。錠剤は非被覆であることができ、又は消化管中での崩壊及び吸着を遅延させるためのマイクロカプセル化を含む既知の技術で錠剤を被覆することができ、これにより長期間にわたる持続作用がもたらされる。例えば、モノステアリン酸グリセリル又はジステアリン酸グリセリル等の時間遅延物質を単独で又はロウと共に用いることができる。
【０２０５】
目又は他の外部組織、例えば口及び皮膚を処置するために、製剤は、好ましくは例えば０．０７５から２０％ｗ／ｗの量で活性成分を含有する局所用の軟膏又はクリームとして適用される。軟膏に製剤化される場合、活性成分をパラフィン系の又は水混和性の軟膏基剤と共に用いることができる。あるいは、水中油型クリーム基剤により活性成分をクリームに製剤化することができる。
【０２０６】
クリーム基剤の水性相は、多価アルコール、即ち２個以上のヒドロキシル基を有するアルコール、例えばプロピレングリコール、ブタノン１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００を含む）並びにこれらの混合物を含むことができる。局所用製剤は望ましくは、皮膚又は他の患部を通して活性成分の吸収又は浸透を増強させる化合物を含むことができる。そのような皮膚浸透増強剤の例には、ジメチルスルホキシド及び関連類似体が含まれる。
【０２０７】
本発明のエマルションの油性相は、少なくとも１種の乳化剤と脂肪若しくは油との又は脂肪及び油の両方との混合物を含む、既知の方法で既知の成分から構成され得る。好ましくは、親水性乳化剤が、安定化剤として作用する親油性乳化剤と一緒に含まれる。併せて、安定化剤を伴う又は伴わない乳化剤は乳化ロウを構成し、ロウは油及び脂肪と一緒に、クリーム製剤の油性分散相を形成する乳化軟膏基剤を構成する。本発明の製剤での使用に適した乳化剤及びエマルション安定化剤には、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、セトステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ミリスチルアルコール、モノ−ステアリン酸グリセリル及びラウリル硫酸ナトリウムが含まれる。
【０２０８】
本発明の薬学的製剤の水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤との混合物で活性物質を含有する。そのような賦形剤には、懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスカルメロース、ポビドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム及びアカシアガム、並びに分散剤又は湿潤剤、例えば天然に生じるリン脂質（例えばレシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合産物（例えばステアリン酸ポリオキシエチレン）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合産物（例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール無水物由来の部分エステルとの縮合産物（例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）が含まれる。水性懸濁液はまた、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル又はｐ−ヒドロキシ安息香酸ｎ−プロピル等の１種又は複数種の防腐剤、１種又は複数種の着色料、１種又は複数種の香料、及びスクロース又はサッカリン等の１種又は複数種の甘味料を含有することができる。
【０２０９】
薬学的組成物は、無菌注射用製剤の形態であることができ、例えば無菌注射用水性懸濁液又は無菌注射用油性懸濁液であることができる。この懸濁液を、上述した好適な分散剤又は湿潤剤と懸濁剤とを使用する既知の技術に従って製剤化することができる。無菌注射用製剤は、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤若しくは溶媒の溶液若しくは懸濁液であることができ、例えば１，３−ブタンジオール溶液であることができ、又は該無菌注射用製剤を凍結乾燥粉末から調製することができる。用いることができる許容可能なビヒクル及び溶媒には、水、リンガー溶液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、無菌固定油を、溶媒又は懸濁媒質として慣習的に用いることができる。この目的のために、合成モノグリセリド又は合成ジグリセリドを含む任意の無刺激の固定油を用いることができる。加えて、オレイン酸等の脂肪酸も同様に、注射剤の調製に使用することができる。
【０２１０】
単一投薬形態を作るために担体物質と組み合わせることができる活性成分の量は、処置されるホスト及び投与の具体的な態様に応じて変化することができる。例えば、ヒトへの経口投与を目的とするタイムリリース製剤は、全組成物の約５％から約９５％（重量：重量）へと変化することができる適切で好都合な量の担体物質と共に調合される約１から１０００ｍｇの活性物質を含有することができる。投与のために容易に測定可能な量をもたらように薬学的組成物を調製することができる。例えば、約３０ｍＬ／hrの速度で適切な体積の点滴を行なうことができるように、静脈内点滴を目的とする水溶液は溶液１ミリリットル当たり約３から５００μｇの活性成分を含有することができる。
【０２１１】
非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤及び製剤を目的のレシピエントの血液と等張にする溶質を含有することができる水性の及び非水性の無菌注射用溶液；並びに懸濁剤及び増粘剤を含むことができる水性の及び非水性の無菌懸濁液が含まれる。
【０２１２】
目への局所投与に適した製剤には、活性成分が好適な担体中に、特に活性成分用の水性溶媒中に溶解している又は懸濁されている点眼剤も含まれる。そのような製剤中に、活性成分は好ましくは約０．５から２０％ｗ／ｗの、例えば約０．５から１０％ｗ／ｗの、例えば約１．５％ｗ／ｗの濃度で存在する。
【０２１３】
口への局所投与に適した製剤には、香味基剤中に、通常はスクロール及びアカシア又はトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン、又はスクロール及びアカシア等の不活性基剤中に活性成分を含む香錠；並びに適切な液状担体中に活性成分を含むうがい薬が含まれる。
【０２１４】
直腸投与用の製剤を、例えばココアバター又はサリチレートを含む適切な基剤を有する坐薬として提供することができる。
【０２１５】
肺内投与又は経鼻投与に適した製剤は、例えば０．１から５００ミクロンの範囲の粒径（例えば０．５、１、３０ミクロン、３５ミクロン等のミクロン刻みで０．１から５００ミクロンの範囲の粒径を含む）を有し、該製剤は、鼻経路を通って速やかに吸入されることにより又は肺胞嚢に達するように口を通って吸入されることにより投与される。適切な製剤には、活性成分の水性溶液又は油性溶液が含まれる。エアゾール又は乾燥粉末投与に適した製剤を従来の方法に従って調製することができ、及び以下に記載するように障害の処置又は予防に従来使用されている化合物等の他の治療薬と共に送達することができる。
【０２１６】
膣投与に適した製剤を、適切であることが当分野で知られている担体を活性成分に加えて含有する、膣坐薬、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム又はスプレー製剤として提供することができる。
【０２１７】
製剤を、単位用量の又は複数用量の容器に、例えば密閉されたアンプル及びバイアルに包装することができ、使用直前に注射用の無菌液状担体の、例えば水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）条件下で保存することができる。即時注射の溶液及び懸濁液は、既に記載した種類の無菌粉末、顆粒及び錠剤から調製される。好ましい単位投薬製剤は、活性成分の本明細書において前述した毎日の投薬若しくは毎日の副投薬単位又はその適切な画分を含有するものである。
【０２１８】
本発明は、獣医学的担体と一緒に、上記で定義した少なくとも１種の活性成分を含む獣医学的組成物を更に提供する。獣医学的担体は組成物を投与する目的に有用な物質であり、並びに不活性又は獣医学分野で許容可能であり及び活性成分と相溶性である固体物質、液体物質又は気体物質であることができる。これらの獣医学的組成物は、非経口的に、経口的に又は任意の他の所望の経路により投与することができる。
【０２１９】
組み合わせ治療
ＧＤＣ−００３２を、前悪性の及び非腫瘍性の又は非悪性の過剰増殖性障害と共に、固形腫瘍又は造血器腫瘍を含む過剰増殖性障害の処置用のある種の化学療法剤との組み合わせで用いることができる。ある実施態様では、ＧＤＣ−００３２は単一の錠剤、丸薬、カプセル剤又は溶液としての単一製剤で化学療法剤と組み合わされ、該組み合わせが同時に投与される。他の実施態様では、ＧＤＣ−００３２及び化学療法剤は、ＧＤＣ−００３２と５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤との順次投与用の別々の錠剤、丸薬、カプセル剤又は溶液としての別々の製剤で投薬レジメン又は治療経過に従って投与される。化学療法剤は抗過剰増殖特性を有し、又は過剰増殖性障害の処置に有用である。ＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせは相乗特性を有することができる。薬学的組み合わせ製剤又は投与レジメンの化学療法剤は、好ましくはＧＤＣ−００３２に対する補完活性を有し、その結果、化学療法剤及びＧＤＣ−００３２は互いに悪影響を与えない。治療用組み合わせのそのような化合物を、意図した目的に有効な量で投与することができる。一実施態様では、本発明の薬学的製剤は、ＧＤＣ−００３２及び本明細書に記載されたような化学療法剤を含む。別の実施態様では、治療用組み合わせは投薬レジメンにより投与され、ここで、治療上有効な量のＧＤＣ−００３２が１日に２回から３週毎に１回（ｑ３ｗｋ）の範囲で投与され、治療上有効な量の化学療法剤が１日に２回から３週毎に１回の範囲で別々に、交互に投与される。
【０２２０】
本発明の治療用組み合わせは、過剰増殖性障害の処置において別々に、同時に又は順次に使用するための、ＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される化学療法剤とを含む。
【０２２１】
組み合わせ治療を、同時レジメン又は順次レジメンとして投与することができる。順次に投与する場合、組み合わせを２回以上の投与で投与することができる。組み合わせ投与には、別々の製剤又は単一の薬学的製剤を使用する同時投与、及び好ましくは両方の（又は全ての）活性な薬剤が同時にそれらの生物学的活性を発揮させる期間がある何れかの順での逐次投与が含まれる。
【０２２２】
上記の同時投与薬剤の何れかに適切な投薬量は現在使用されているものであり、該投薬量を、新たに同定された薬剤及び他の化学療法剤又は処置の組み合わせ作用（相乗作用）に起因して、例えば治療指数を増加させる又は毒性又は他の副作用若しくは事象を緩和するために低下させることができる。
【０２２３】
抗腫瘍治療の特定の実施態様では、治療用組み合わせを、アジュバント治療として手術治療及び放射線治療と組み合わせることができる。本発明に係る組み合わせ治療は、ＧＤＣ−００３２の投与と、１種又は複数種の癌処置の方法又は様式とを含む。ＧＤＣ−００３２及び化学療法剤の量と投与の相対的なタイミングとを、所望の組み合わせ治療効果を達成するために選択することができる。
【０２２４】
薬学的組成物の投与
本発明の治療用組み合わせを、処置する状態に適した任意の経路により投与することができる。適切な経路には、経口、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、吸入、皮内、くも膜下腔内、髄腔外及び注入法を含む）、経皮、直腸、経鼻、局所（頬側及び舌下を含む）、膣、腹腔内、肺内並びに鼻腔内が含まれる。局所投与には、経皮パッチ又はイオン泳動装置等の経皮投与の使用も含まれ得る。薬剤の製剤化がＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈＥｄ．、（１９９５）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡで論じられている。薬剤の製剤化の他の例を、Ｌｉｂｅｒｍａｎ，Ｈ．Ａ．及びＬａｃｈｍａｎ，Ｌ．編、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ、Ｖｏｌ３、２ｎｄＥｄ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ中に見出すこともできる。局所的な免疫抑制処置のために、化合物を、移植前に移植片と阻害剤とを灌流する又は接触させることを含む病巣内投与により投与することができる。当然のことながら、好ましい経路を例えばレシピエントの状態によって変更することができる。化合物が経口投与される場合、化合物を、薬学的に許容可能な担体、滑剤又は賦形剤と共に丸薬、カプセル剤、錠剤等として製剤化することができる。化合物が非経口的に投与される場合、以下に詳述するように、化合物を、薬学的に許容可能な非経口のビヒクル又は希釈剤と共に及び単位投薬注射可能な形態で製剤化することができる。
【０２２５】
ヒト患者を処置するための用量は、約１ｍｇから約１０００ｍｇのＧＤＣ−００３２の範囲であることができ、例えば約５ｍｇから約２０ｍｇの化合物の範囲であることができる。用量を、具体的な化合物の吸収、分布、代謝及び排出を含む薬物動態学的（ＰＫ）特性及び薬力学的（ＰＤ）特性に応じて、１日に１回（ＱＤ）、１日当たり２回（ＢＩＤ）又はより頻繁に投与することができる。加えて、毒性要因が投薬量及び投与投薬レジメンに影響を及ぼす可能性がある。経口投与される場合、丸薬、カプセル剤又は錠剤を、特定の期間にわたり１日に２回、毎日又は低い頻度、例えば毎週、２週に１回又は３週に１回、摂取させることができる。レジメンを多くの治療サイクルにわたり繰り返すことができる。
【０２２６】
処置方法
本発明の方法には：
バイオマーカーの同定に基づく診断方法；
患者がＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせに反応することができるかどうかの決定方法；
ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせのクリアランスをモニタリングすることによる、治療効果の最適化方法；
治療耐性変異の発生をモニタリングすることによる、ＧＤＣ−００３２又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせの治療レジメンの最適化方法；並びに
ＧＤＣ−００３２治療による又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせ治療による処置が最も有効である患者の同定方法、及びＧＤＣ−００３２治療による又はＧＤＣ−００３２と化学療法剤との組み合わせ治療による処置に対する患者の感受性及び応答性に関する患者のモニタリング方法
が含まれる。
【０２２７】
本発明の方法は、哺乳動物（例えばヒト）における異常細胞増殖の阻害に又は癌等の過剰増殖性障害の処置に有用である。例えば、本方法は、哺乳動物（例えばヒト）における多発性骨髄腫、リンパ腫、白血病、前立腺癌、乳癌、肝細胞癌腫、膵臓癌及び／又は大腸癌の診断、モニタリング及び処置に有用である。
【０２２８】
（１）ＧＤＣ−００３２と（２）化学療法剤との治療用組み合わせは、ＰＩ３キナーゼ経路の活性化を特徴とするものを含むがこれに限定されない疾患、状態及び／又は障害の処置に有用である。従って、本発明の別の態様は、ＰＩ３を含む脂質キナーゼを阻害することにより処置することができる疾患又は状態の処置方法を含む。一実施態様では、固形腫瘍又は造血器腫瘍の処置方法は、治療用組み合わせを組み合わせ製剤として又は交互に哺乳動物に投与することを含み、治療用組み合わせは、治療上有効な量のＧＤＣ−００３２と、５−ＦＵ、ドセタキセル、エリブリン、ゲムシタビン、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、パクリタキセル、タモキシフェン、フルベストラント、デキサメタゾン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ及びレトロゾールから選択される治療上有効な量の１種又は複数種の化学療法剤とを含む。（１）ＧＤＣ−００３２と（２）化学療法剤との治療用組み合わせを、前癌性の及び非腫瘍性の又は非悪性の過剰増殖性障害と共に、造血器腫瘍、腫瘍、癌及び腫瘍生組織を含む過剰増殖性の疾患又は障害の処置に用いることができる。一実施態様では、ヒト患者は治療用組み合わせと薬学的に許容可能な担体、アジュバント又はビヒクルとで処置され、前記治療用組み合わせのＧＤＣ−００３２又はその代謝産物は、ＰＩ３キナーゼ活性を検出可能な程度に阻害する量で存在する。
【０２２９】
造血器腫瘍には、非ホジキンリンパ腫、びまん性大型造血リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ種、慢性のリンパ性白血病、多発性骨髄腫、ＡＭＬ及びＭＣＬが含まれる。
【０２３０】
本発明の別の態様は、本明細書に記載の疾患又は状態を罹患している哺乳動物における、例えばヒトにおけるそのような疾患又は状態の処置に使用するための薬学的組成物又は治療用組み合わせを提供する。また、本明細書に記載の障害を罹患している温血動物における、例えばヒト等の哺乳動物における本明細書に記載の疾患及び状態の処置用の医薬の調製での薬学的組成物の使用も提供される。
【０２３１】
製造品
本発明の別の実施態様では、上述した疾患及び障害の処置に有用なＧＤＣ−００３２を含有する製造品又は「キット」が提供される。一実施態様では、キットはＧＤＣ−００３２を含む容器を含む。キットは、容器上に又は容器と関連してラベル又はパッケージ挿入物を更に含むことができる。用語「パッケージ挿入物」は、治療用製品の市販のパッケージに慣習的に含まれる説明書を指すために使用され、そのような治療用製品の使用に関する指示、用法、投薬量、投与法、禁忌及び／又は警告についての情報が含まれる。適切な容器には、例えば瓶、バイアル、シリンジ、ブリスターパック等が含まれる。容器を、ガラス又はプラスチック等の様々な材料から形成することができる。容器は、状態を処置するのに有効なＧＤＣ−００３２又はその製剤を収容することができ、無菌アクセスポートを有することができる（例えば、容器は、皮下注射針で貫通可能なストッパを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであることができる）。組成物中の少なくとも１種の活性な薬剤はＧＤＣ−００３２である。ラベル又はパッケージ挿入物は、組成物が癌等の選択した状態の処置に使用されることを示す。一実施態様では、ラベル又はパッケージ挿入物は、異常細胞増殖から生じる障害の処置に式Iの化合物を含む組成物を使用することができることを示す。ラベル又はパッケージ挿入物はまた、他の障害の処置に組成物を使用することができることも示すことができる。あるいは又は加えて、製造品は、薬学的に許容可能な緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液を含む第２の容器を更に含むこともできる。第２の容器は、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針及びシリンジを含む、商業的な及び使用者の観点から望ましい他の物質を更に含むことができる。
【０２３２】
キットは、ＧＤＣ−００３２と存在する場合には第２の薬学的製剤との投与に関する説明書を更に含むことができる。例えば、キットがＧＤＣ−００３２を含む第１の組成物と第２の薬学的製剤とを含む場合、キットは、第１の及び第２の薬学的組成物の、それを必要とする患者への同時の、順次の又は別々の投与に関する説明書を更に含むことができる。
【０２３３】
別の実施態様では、キットは、錠剤又はカプセル剤等のＧＤＣ−００３２の固形経口形態の送達に適している。そのようなキットは、多くの単位投薬量を好ましくは含む。そのようなキットは、それらの意図した使用の順に配列された投薬量を有するカードを含むことができる。そのようなキットの一例は「ブリスターパック」である。ブリスターパックは包装産業において公知であり、薬学的単位投薬形態の包装に広く使用されている。必要に応じて、例えば数字、文字又は他のマークの形態で、又は投薬量が投与される処置スケジュールにおける日を指定するカレンダー挿入物により、記憶を補助することができる。
【０２３４】
一実施態様によれば、キットは、（ａ）ＧＤＣ−００３２が収容された第１の容器；及び任意選択的に（ｂ）第２の薬学的製剤が収容された第２の容器を含むことができ、第２の薬学的製剤は、抗過剰増殖性活性を有する第２の化合物を含む。あるいは又は加えて、キットは、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液等の薬学的に許容可能な緩衝液を含む第３の容器を更に含むことができる。第３の容器は、他の緩衝液、希釈液、フィルタ、針及びシリンジを含む、商業的な及び使用者の観点から望ましい他の物質を更に含むことができる。
【０２３５】
キットがＧＤＣ−００３２と第２の治療剤、即ち化学療法剤とを含む場合、キットは、分割された瓶又は分割されたホイルパケット等の、別々の組成物を収容するための容器を含むことができるが、別々の組成物を単一の分割されていない容器内に収容することもできる。典型的には、キットは、別々の成分を投与するための説明書を含む。別々の成分が異なる投薬形態（例えば経口及び非経口）で好ましく投与される場合、異なる投薬間隔で投与される場合、又は処方医師による組み合わせの個々の成分の用量設定が望まれる場合、キット形態は特に有利である。
【実施例】
【０２３６】
実施例１  ２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパンアミド（ＧＤＣ−００３２）
工程１：  ２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパン酸エチル
2018065793.tif 000033
【０２３７】
９−ブロモ−２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン（５００ｍｇ、０．００１ｍｏｌ）と、２−メチル−２−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン酸エチル（５９４ｍｇ、０．００１５ｍｏｌ）とを、マイクロ波（ｕＷ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２及びＣｓ２ＣＯ３、水並びにジメトキシエタンを含むパラジウム触媒鈴木カップリング条件下で反応させ、対応する酸と一緒に２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパン酸エチルを得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ４９０（Ｍ＋Ｈ）
【０２３８】
工程２：  ２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパン酸
2018065793.tif 000034
【０２３９】
２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパン酸エチル（２５０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を、水（２ｍＬ）及びメタノール（１ｍＬ）中において１Ｍの水酸化リチウムで処理した。反応物を１２時間にわたり室温で撹拌した。１０％クエン酸水によりｐＨ５に酸性化し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。組み合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させて濃縮した。反応生成物２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパン酸を、更なる精製工程にかけることなく使用した。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ４６２（Ｍ＋Ｈ）。1H NMR (500MHz, DMSO) δ 8.44 (s, 1H), 8.36 (d, J=8.4, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.44 (dd, J=8.4, 1.7, 1H), 7.35 (d, J=1.7, 1H), 5.82 (dt, J=13.1, 6.6, 1H), 4.52 (s, 4H), 2.25 (s, 3H), 1.78 (s, 6H), 1.45 (t, J=13.9, 6H)
【０２４０】
工程３：  ２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパン酸（９０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解させ、ＮＨ４Ｃｌ（４０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．３ｍＬ、２ｍｍｏｌ）、続いてＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を２時間にわたり室温で撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウムを添加し、混合物をＥＴＯＡｃで抽出した。組み合わせた有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥させて濃縮した。粗物質を、最小のＥｔＯＡｃによる倍散後に１０％ＭｅＯＨ／ＥＴＯＡｃで精製し、７４ｍｇ（８２％収率）の２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパンアミド（ＧＤＣ−００３２、ＣＡＳ登録番号１２８２５１２−４８−４）を生成した。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ＋）：ｍ／ｚ４６３（Ｍ＋Ｈ）。1H NMR (500MHz, DMSO) δ 8.44-8.26 (m, 2H), 8.01 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.44 (dd, J=8.4, 1.8, 1H), 7.35 (d, J=1.7, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 5.82 (dt, J=13.3, 6.6, 1H), 4.52 (s, 4H), 2.25 (s, 3H), 1.75 (s, 6H), 1.47 (d, J=6.6, 6H)
【０２４１】
実施例２  ｐ１１０α（アルファ）ＰＩ３Ｋ結合アッセイ
結合アッセイ：  最初の偏光実験を、Ａｎａｌｙｓｔ  ＨＴ９６−３８４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ、サニーベール、カリフォルニア州）で実施した。偏光緩衝液（１０ｍＭのトリスｐＨ７．５、５０ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０５％のＣｈａｐｓ及び１ｍＭのＤＴＴ）中２０μｇ／ｍＬの最終濃度で始まるｐ１１０アルファＰＩ３Ｋの１：３段階希釈物（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、シャーロッツビル、バージニア州）を最終濃度１０ｍＭのＰＩＰ２（Ｅｃｈｅｌｏｎ−Ｉｎｃ．、ソルトレイクシティ、ユタ州）に添加することにより、蛍光偏光親和性測定用の試料を調製した。室温での３０分のインキュベーション時間後、それぞれ１００ｎＭ及び５ｎＭの最終濃度のＧＲＰ−１及びＰＩＰ３−ＴＡＭＲＡプローブ（Ｅｃｈｅｌｏｎ−Ｉｎｃ．、ソルトレイクシティ、ユタ州）の添加により反応を停止させた。３８４ウェルのブラック低容量Ｐｒｏｘｉｐｌａｔｅｓ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ウェルズリー、マサチューセッツ州）中のローダミンフルオロフォア（λｅｘ＝５３０ｎｍ；λｅｍ＝５９０ｎｍ）用の標準的なカットオフフィルタによる読み取り。蛍光偏光値を、タンパク質濃度の関数としてプロットした。ＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ（登録商標）ソフトウェア（Ｓｙｎｅｒｇｙ  ｓｏｆｔｗａｒｅ、レディング、ペンシルベニア州）を使用してデータを４パラメータ方程式に当てはめることにより、ＥＣ５０値を得た。この実験はまた、後の阻害剤との競合実験において使用する適切なタンパク質濃度も規定する。
【０２４２】
ＰＩＰ２（１０ｍＭの最終濃度）と組み合わせた０．０４ｍｇ／ｍＬのｐ１１０アルファＰＩ３Ｋ（最終濃度）の、偏光緩衝液中最終濃度２５ｍＭのＡＴＰ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、ダンバーズ、マサチューセッツ州）におけるアンタゴニストの１：３段階希釈物を含有するウェルへの添加により、阻害剤のＩＣ５０値を決定した。室温での３０分のインキュベーション時間後、それぞれ１００ｎＭ及び５ｎＭの最終濃度のＧＲＰ−１及びＰＩＰ３−ＴＡＭＲＡプローブ（Ｅｃｈｅｌｏｎ−Ｉｎｃ．、ソルトレイクシティ、ユタ州）の添加により反応を停止させた。３８４ウェルのブラック低容量Ｐｒｏｘｉｐｌａｔｅｓ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ウェルズリー、マサチューセッツ州）中のローダミンフルオロフォア（λｅｘ＝５３０ｎｍ；λｅｍ＝５９０ｎｍ）用の標準的なカットオフフィルタによる読み取り。蛍光偏光値をアンタゴニスト濃度の関数としてプロットし、Ａｓｓａｙ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒソフトウェア（ＭＤＬ、サンラモン、カリフォルニア州）でデータを４パラメータ方程式に当てはめることにより、ＩＣ５０値を得た。
【０２４３】
あるいは、精製した組み換え酵素及びＡＴＰを１μＭ（マイクロモル濃度）の濃度で使用する放射測定アッセイでＰＩ３Ｋの阻害を決定した。化合物を１００％ＤＭＳＯで段階希釈した。キナーゼ反応物を室温で１時間にわたりインキュベートし、ＰＢＳの添加により反応を終了させた。その後、シグモイド用量反応曲線の当てはめ（可変勾配）を使用してＩＣ５０値を決定した。
【０２４４】
実施例３  インビトロ細胞増殖アッセイ
以下のプロトコル（Mendoza等(2002) Cancer Res. 62:5485-5488）を用いる細胞増殖アッセイにより、ＧＤＣ−００３２及び化学治療化合物の有効性を評価した。
【０２４５】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイはＡＴＰの存在の定量化に基づいて、培養液中の生細胞の数を決定するための均一法であり、ＡＴＰの存在は代謝的に活性な細胞の存在を示す。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、マルチウェルプレートフォーマットと共に使用するように設計されており、自動化高スループットスクリーニング（ＨＴＳ）アッセイ、細胞増殖アッセイ及び細胞傷害性アッセイに理想的なものになっている。均一アッセイの手順は、血清補充培地で培養した細胞に単一試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を直接添加することを含む。細胞の洗浄工程、培地の除去工程又は複数回のピペット操作工程は必要ではない。試薬及びプロコトルを含むＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイは商業的に入手可能である（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、マディソン、ウィスコンシン州、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ＴＢ２８８）。
【０２４６】
本アッセイにより、化合物が細胞に入って細胞増殖を阻害する能力が評価される。本アッセイの原理は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬の添加により細胞溶解とルシフェラーゼ反応を介した発光シグナルの生成とがもたらされる均一アッセイにおいてＡＴＰの存在を定量化することによる、存在する生細胞の数の決定に基づく。発光シグナルは、存在するＡＴＰの量に比例する。
【０２４７】
手順：  １日目−細胞プレート（Ｆａｌｃｏｎ＃３５３９６２の３８４ウェル  ブラック、透明な底部、マイクロクリア、蓋つきＴＣプレート）播種、細胞を収集し、３日のアッセイにわたり３８４ウェル細胞プレート中に１０００個の細胞／５４μｌ／ウェルで細胞を播種する。細胞培養培地：  ＲＰＭＩ又はＤＭＥＭ高グルコース、１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭのＬ−グルタミン、Ｐ／Ｓ。５％ＣＯ２、３７℃でインキュベートＯ／Ｎ（終夜）。
【０２４８】
２日目−細胞、化合物希釈液、ＤＭＳＯプレート（９ポイントについて１：２段階希釈）に薬剤を添加する。９６ウェルプレートの２番目のカラム中に１０ｍＭで２０μｌの化合物を添加する。Ｎｕｎｃの精密培地プレート９６ウェル円錐底ポリプロピレンプレート（カタログ番号２４９９４６）（１：５０希釈）を使用して、全９ポイントについてプレート全体で１：２段階希釈を実施する（１０μｌ＋２０μｌの１００％ＤＭＳＯ）。１４７μｌの培地を全てのウェルに添加する。Ｒａｐｉｄｐｌａｔｅ（登録商標）（Ｃａｌｉｐｅｒ、ａ  Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｃｏ．）を使用して、ＤＭＳＯプレート中の各ウェルから３μｌのＤＭＳＯ＋化合物を培地プレート上の各対応するウェルに移す。２種の薬剤の組み合わせを研究するために、ＤＭＳＯプレート中の各ウェルからの１．５μｌのＤＭＳＯ＋化合物である一方の薬剤を、Ｒａｐｉｄｐｌａｔｅを使用して培地プレート上の各対応するウェルに移す。次いで、別の薬剤１．５μｌを培地プレートに移す。
【０２４９】
細胞、細胞プレート（１：１０希釈）への薬剤の添加：６μｌの培地＋化合物を細胞（既に細胞上に５４μｌの培地）に直接添加する。頻繁に開けられないであろうインキュベーター中において５％ＣＯ２、３７℃で３日間インキュベートする。
【０２５０】
５日目−プレートを展開し、室温でＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ緩衝液を解凍する：細胞プレートを３７℃から取り出し、約３０分にわたり室温に平衡化する。Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）緩衝液をＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）基質に添加する（瓶から瓶へ）。３０μｌのＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｇ７５７２）を細胞の各ウェルに添加する。約３０分にわたりプレート振盪機上に置く。Ａｎａｌｙｓｔ  ＨＴプレートリーダー上で発光を読み取る（ウェル当たり０．５秒）。
【０２５１】
細胞生存率アッセイ及び組み合わせアッセイ：  １６時間にわたり３８４ウェルプレート中に１０００−２０００個の細胞／ウェルで細胞を播種した。２日目に、９６ウェルプレート中においてＤＭＳＯで９回の段階１：２化合物希釈を行なった。Ｒａｐｉｄｐｌａｔｅ（登録商標）ロボット（Ｚｙｍａｒｋ  Ｃｏｒｐ．、ホプキントン、マサチューセッツ州）を使用して、化合物を増殖培地中に更に希釈した。次いで、希釈した化合物を３８４ウェル細胞プレート中の４組のウェルに添加し、３７℃及び５％ＣＯ２でインキュベートした。４日後、生細胞の相対数を、製造者の指示に従ってＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発光により測定し、Ｗａｌｌａｃ  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｒｅａｄｅｒ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、フォスターシティ）で読み取った。Ｐｒｉｓｍ（登録商標）４．０ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、サンディエゴ）を使用してＥＣ５０値を算出した。組み合わせアッセイにおいては、薬剤を４×ＥＣ５０濃度で開始して投薬した。薬剤のＥＣ５０が＞２．５μＭであった場合、使用した最高濃度は１０μＭであった。全てのアッセイにおいて、ＧＤＣ−００３２及び化学療法剤を同時に又は４時間を空けて（他方の前に一方を）添加した。
【０２５２】
更なる例示的なインビトロ細胞増殖アッセイは以下の工程を含む：
１．培地中に約１０４個の細胞を含有する１００μｌの細胞培養物のアリコート（細胞株及び腫瘍タイプに関して表３を参照）を、３８４ウェルの不透明な壁のプレートの各ウェル中に沈着させた。
２．培地を含有するが細胞を含有しないコントロールウェルを調製した。
３．化合物を実験ウェルに添加し、３−５日にわたりインキュベートした。
４．プレートを約３０分にわたり室温に平衡化した。
５．各ウェル中に存在する細胞培養培地の体積と等しい体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬を添加した。
６．内容物を軌道振盪機上で２分にわたり混合して細胞溶解を誘発した。
７．プレートを１０分にわたり室温でインキュベートし、発光シグナルを安定化させた。
８．発光を記録し、ＲＬＵ＝相対発光単位としてグラフで報告した。
９．Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの組み合わせ法及びＣａｌｃｕＳｙｎ（登録商標）ソフトウェア（Ｂｉｏｓｏｆｔ、ケンブリッジ、イギリス）による用量効果解析を使用して分析し、組み合わせ指数を得る。
【０２５３】
あるいは、細胞を９６ウェルプレートに最適密度で播種し、試験化合物の存在下で４日にわたりインキュベートした。その後、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ（商標）をアッセイ培地に添加し、細胞を６時間にわたりインキュベートした後に５４４ｎｍの励起、５９０ｎｍの発光で読み取った。シグモイド用量反応曲線の当てはめを使用してＥＣ５０値を算出した。
【０２５４】
あるいは、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｉｎｃ．、マディソン、ウィスコンシン州）を使用して増殖／生存率を薬物処理から４８時間後に分析した。全ての生存率アッセイにおいてＤＭＳＯ処理をコントロールとして使用した。ＸＬフィットソフトウェア（ＩＤＢＳ、アラメダ、カリフォルニア州）を使用してＩＣ５０値を算出した。
【０２５５】
細胞株を、ＡＴＣＣ（アメリカンタイプカルチャーコレクション、マナッサス、バージニア州）又はＤＳＭＺ（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ、ブラウンシュワイク、ドイツ）から得た。５％ＣＯ２下における３７℃で、１０％ウシ胎仔血清、１００単位／ｍｌのペニシリン、２ｍＭのＬ−グルタミン及び１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、グランドアイランド、ニューヨーク州）中で細胞を培養した。
【０２５６】
実施例４  インビボマウス腫瘍異種移植片の有効性
マウス：  雌の重篤な複合免疫不全マウス（Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅ  ＳＣＩＤ（登録商標）、Ｃ．Ｂ−１７／ＩｃｒＨｓｄ、Ｈａｒｌａｎ）又はヌードマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ、Ｈａｒｌａｎ）は８から９週齢であり、研究の０日目で１５．１から２１．４グラムのＢＷ範囲を有した。動物に、水（逆浸透、１ｐｐｍＣｌ）と１８．０％粗タンパク質、５．０％粗脂肪及び５．０％粗繊維から成るＮＩＨ３１改変及び照射Ｌａｂ  Ｄｉｅｔ（登録商標）とを適宜与えた。１２時間の照明周期、２１−２２℃（７０−７２ｏＦ）及び４０−６０％湿度での静的マイクロアイソレーター中において、照射されたＡＬＰＨＡ−Ｄｒｉ（登録商標）ｂｅｄ−ｏ’ｃｏｂｓ（登録商標）実験動物床敷上でマウスを飼育した。ＰＲＣは、拘束、飼育、手術手順、餌及び液体の調節、並びに獣医学的管理に関する実験動物の管理及び使用に関する指針の推奨を特に順守する。ＰＲＣでの動物管理及び使用プログラムは国際実験動物管理公認協会（ＡＡＡＬＡＣ）の認定を受けており、実験動物の管理及び使用に関する承認された標準の順守を保障する。
【０２５７】
腫瘍移植：  異種移植を癌細胞で開始した。細胞を、１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭのグルタミン、１００単位／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬの硫酸ストレプトマイシン及び２５μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。細胞を指数的増殖中に収集し、細胞株の倍加時間に応じて５×１０６個又は１０×１０６個の細胞／ｍＬの濃度でリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。腫瘍細胞を右脇腹の皮下に移植し、平均サイズが１００から１５０ｍｍ３の標的範囲に近づいたときに腫瘍増殖をモニタリングした。腫瘍移植後２１日目を研究の０日目とし、マウスを、７５−１７２ｍｍ３の範囲の個々の腫瘍体積及び１２０−１２１ｍｍ３の群平均腫瘍体積を有する１０匹のマウスからそれぞれ成る４つの群に分けた（付録Ａを参照）。体積を、式：
腫瘍体積（ｍｍ３）＝（ｗ２×ｌ）／２（式中、Ｗ＝腫瘍の幅（ｍｍ）及びｌ＝腫瘍の長さ（ｍｍ））を使用して算出した。腫瘍重量を、１ｍｇが１ｍｍ３の腫瘍体積に相当すると仮定して推定することができる。
【０２５８】
治療薬剤：ＧＤＣ−００３２を、７３％の活性な薬剤を含有した塩形態の乾燥粉末として供給し、光から保護して室温で保存した。薬剤用量を０．５％メチルセルロース：脱イオン水中の０．２％Ｔｗｅｅｎ８０（「ビヒクル」）で毎週調製し、４℃で保存した。７３％の活性な薬剤を含有する塩形態はＧ−０３３８２９用量の製剤に含まれる。無菌生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）でストックのアリコートを希釈することにより、ＧＤＣ−００３２の用量を各投薬日に調製した。体重２０グラム当たり０．２ｍＬの体積（１０ｍＬ／ｋｇ）で所定のｍｇ／ｋｇの投薬量を送達するように全用量を製剤化した。
【０２５９】
処置：  全用量を個々の動物の体重に合わせて調整し、各図に示した経路で与えた。
【０２６０】
エンドポイント：  腫瘍体積を、Ｕｌｔｒａ  Ｃａｌ  ＩＶキャリパー（モデル５４  １０  １１１；Ｆｒｅｄ  Ｖ．Ｆｏｗｌｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙ）を使用して次のように２次元（長さ及び幅）で測定し：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）×０．５、Ｅｘｃｅｌバージョン１１．２（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して分析した。線形混合効果（ＬＭＥ）モデリングアプローチを使用し、同じ動物の腫瘍体積の反復測定を経時的に分析した（Pinheiro J等nlme: linear and nonlinear mixed effects models. R package version 3.1 92. 2009；Tan N等Navitoclax enhances the efficacy of taxanes in non-small cell lung cancer models. Clin. Cancer Res. 2011;17(6):1394-1404）。このアプローチは、反復測定と研究終了前の動物の任意の非処置関連死に起因する少量のドロップアウトとの両方に対応する。三次回帰スプラインを使用して、非線形プロファイルを各用量レベルでのｌｏｇ２腫瘍体積の時間経過に適合させた。次いで、これらの非線形プロファイルを混合モデル内の用量に関連づけた。ビヒクルコントロールに対する割合としての腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ％）を、次式：ＴＧＩ％＝１００×（１−ＡＵＣ用量／ＡＵＣビヒクル）を使用し、ビヒクルに関する１日当たりのそれぞれの用量群に対する近似曲線下の面積（ＡＵＣ）の割合として算出した。この式を使用して、１００％のＴＧＩ値は腫瘍停滞を示し、＞１％であるが＜１００％のＴＧＩ値は腫瘍増殖の遅延を示し、＞１００％のＴＧＩ値は腫瘍退縮を示す。動物に関する部分反応（ＰＲ）を、開始腫瘍体積の＞５０％であるが＜１００％の腫瘍退縮として定義した。完全反応（ＣＲ）を、研究中の任意の日における１００％腫瘍退縮（即ち測定不可能な腫瘍）として定義した。
【０２６１】
毒性：  動物の体重を、研究の最初の５日にわたり毎日測定し、その後、週に２回測定した。動物の体重を、Ａｄｖｅｎｔｕｒｅｒ  Ｐｒｏ（登録商標）ＡＶ８１２スケール（Ｏｈａｕｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して測定した。パーセント重量変化を次のように算出した：体重変化（％）＝［（重量新規日−重量０日）／重量０日］×１００。マウスを任意の有害な処置関連の副作用の明白な兆候について頻繁に観察し、観察時に毒性の臨床徴候を記録した。許容可能な毒性を、研究中における２０％未満の群平均体重（ＢＷ）減少及び１０匹の処置動物中で処置関連（ＴＲ）死が１匹を超えないものとして定義する。より高い毒性を生じる任意の投薬レジメンは最大耐量（ＭＴＤ）を超えると考えられる。死を、臨床徴候及び／若しくは部検により証明された処置の副作用に起因する場合にはＴＲと分類し、又は投薬期間中の若しくは最後の投薬の１０日以内の不明の原因に起因する場合にもＴＲと分類することができる。死が処置の副作用に関連したという証拠がない場合、死をＮＴＲと分類する。
【０２６２】
前述の本発明は、理解を明確にするために例示及び例としていくらか詳細に説明されているが、説明及び例は本発明の範囲を限定するものとして解釈されてはならない。本明細書に引用される全ての特許及び科学文献の開示は、その全体が出典明示により明示的に援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図６ａ】
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【図６ｂ】
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【図７】
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【図８ａ】
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【図８ｂ】
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【図９ａ】
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【図９ｂ】
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【図１０ａ】
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【図１０ｂ】
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【図１１ａ】
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【図１１ｂ】
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【図１２ａ】
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【図１２ｂ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年11月10日(2017.11.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載された発明。
【外国語明細書】
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