(57)【要約】      （修正有）【課題】プラジエノライドピリジン化合物の新規固体形態、少なくとも１つのこのような固体形態を含む組成物、及び調製の方法並びにそれの使用の提供。【解決手段】（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）へプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレートの結晶形並びに医薬上許容しうる担体、医薬上許容しうる賦形剤、及び医薬上許容しうる添加剤から選択される少なくとも１つの追加の成分を含む、医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）へプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（「化合物１」）の結晶形１。
【請求項２】
化合物１が、立体異性的に純粋である、請求項１に記載の化合物１の結晶形１。
【請求項３】
５．９±０．２、７．７±０．２、１２．８±０．２、１５．３±０．２、１８．２±０．２、１９．３±０．２、２１．２±０．２、２３．６±０．２及び２５．８±０．２°２θにあるピークから選択された少なくとも１つのピークを有するＸＲＰＤディフラクトグラムを有する、請求項１又は２に記載の化合物１の結晶形１。
【請求項４】
前記ＸＲＰＤディフラクトグラムが、１８．２±０．２°２θにあるピークを有する、請求項３に記載の化合物１の結晶形１。
【請求項５】
前記ＸＲＰＤディフラクトグラムが、７．７±０．２、１５．３±０．２及び１８．２±０．２°２θにあるピークを有する、請求項３のいずれか一項に記載の化合物１の結晶形１。
【請求項６】
前記ＸＲＰＤディフラクトグラムが、７．７±０．２、１５．３±０．２、１８．２±０．２、１９．３±０．２及び２１．２±０．２°２θにあるピークを有する、請求項３のいずれか一項に記載の化合物１の結晶形１。
【請求項７】
図１に実質的に示されるとおりのＸＲＰＤディフラクトグラムを有する、請求項３に記載の化合物１の結晶形１。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物１の結晶形１、並びに医薬上許容しうる担体、医薬上許容しうる賦形剤、及び医薬上許容しうる添加剤から選択される少なくとも１つの追加の成分を含む、医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物１の結晶形１、並びに医薬上許容しうる担体、医薬上許容しうる賦形剤、及び医薬上許容しうる添加剤から選択される少なくとも１つの追加の成分からなる、医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物１の結晶形１、並びに医薬上許容しうる担体、医薬上許容しうる賦形剤、及び医薬上許容しうる添加剤から選択される少なくとも１つの追加の成分から本質的になる、医薬組成物。
【請求項１１】
化合物１の結晶形１が、治療上有効な量で存在する、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、前記対象に、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物１の結晶形１、又は請求項８〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を投与するステップを含み、前記がんが、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん及び肺がんから選択される、方法。
【請求項１３】
前記がんが、結腸がんである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記がんが、膵臓がんである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記がんが、白血病である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記がんが、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について陽性である、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
治療的処置の方法における請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物１の結晶形１の使用であって、
前記治療的処置が、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん又は肺がんの処置である、化合物１の結晶形１の使用。
【請求項１９】
薬物の調製における請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物１の結晶形１の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]本開示は、プラジエノライドピリジン化合物の新規固体形態、少なくとも１つのこのような固体形態を含む組成物、及び調製の方法並びにそれの使用を提供する。プラジエノライドピリジン化合物の新規固体形態が、がん、例えばスプライソソーム及びそこにある突然変異を標的にする薬剤が、有用であることが知られているがんなどの処置に有用でありうる。
【０００２】
[0002]特定のプラジエノライドＢ化合物、並びに他のプラジエノライド化合物は、以下の特許出願において開示されている：国際公開第２００２／０６０８９０号；国際公開第２００４／０１１４５９号；国際公開第２００４／０１１６６１号；国際公開第２００４／０５０８９０号；国際公開第２００５／０５２１５２号；国際公開第２００６／００９２７６号；及び国際公開第２００８／１２６９１８号。例えば、Ｅ７１０７としても知られているプラジエノライド化合物（８Ｅ，１２Ｅ，１４Ｅ）−７−（（４−シクロヘプチルピペラジン−１−イル）カルボニル）オキシ−３，６，１６，２１−テトラヒドロキシ−６，１０，１２，１６，２０−ペンタメチル−１８，１９−エポキシトリコサ−８，１２，１４−トリエン−１１−オリドは、天然物プラジエノライドＤの半合成誘導体であり、そのフェーズＩ研究の結果が報告されている。
【０００３】
[0003]本開示は、式Ｉ：
【化１】
2018111715.tif 000002
を有するプラジエノライドピリジン化合物及び医薬上許容しうるその塩（集約的に「式Ｉの化合物」）から選択される少なくとも１つの実体の新規固体形態を提供する。
【０００４】
[0004]いくつかの実施形態では、少なくとも１つの式Ｉの化合物の固体形態は、結晶形１である。いくつかの実施形態では、本開示は、（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）へプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレートの新規固体形態を提供する。
【０００５】
[0005]いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態を含む医薬組成物を対象とする。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬上許容しうる担体、医薬上許容しうる賦形剤及び医薬上許容しうる添加剤から選択される少なくとも１つの追加の成分をさらに含む。いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態及び任意選択で少なくとも１つの追加の成分からなる医薬組成物を対象とする。いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態及び任意選択で少なくとも１つの追加の成分から本質的になる医薬組成物を対象とする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態は、治療上有効な量で医薬組成物に存在する。
【０００６】
[0006]いくつかの実施形態では、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態が、がんを有する対象を処置する方法で使用されうる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態は、そのような対象に、処置上有益な応答を生じるのに有効な量で投与されうる。がんの制限のない例としては、骨髄異形成症候群、白血病（例えば、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、及び急性骨髄性白血病などの）、並びに固形腫瘍（例えば結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん、及び肺がんなどの）が挙げられる。がんは、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質、例えば下の表１に列挙されるものにおける１つ又は複数の突然変異について陽性であることを試験することができる。
【０００７】
[0007]いくつかの実施形態では、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態は、薬物の調製に有用でありうる。例えば、その薬物は、上に開示されるものなどのがんの処置のためであることがある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態は、スプライソソーム、例えば、ＳＦ３Ｂスプライソソームのサブユニット１を標的にするのに有用でありうる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】式Ｉの遊離塩基化合物の結晶形１のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）ディフラクトグラムを示すグラフである。
【図２】トルエン、アセトン、酢酸エチル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）／ジクロロメタン（ＤＣＭ）又はＭＴＢＥ／ヘプタンを含む種々の溶液の遅い蒸発により得られた式Ｉの遊離塩基化合物の結晶形１のＸＲＰＤディフラクトグラムを示すグラフである。
【図３】ＭＴＢＥ／ヘプタンの混合物又は酢酸エチル／ヘプタンの混合物から得られた式Ｉの遊離塩基化合物の結晶形１のＸＲＰＤディフラクトグラムを示すグラフである。
【図４】ＭＴＢＥ／ヘプタンの混合物又は酢酸エチル／ヘプタンの混合物から得られた式Ｉの遊離塩基化合物の急速冷却から得られた結晶形１の結晶を示す図である。
【図５】様々な方法から得られた結晶形１のＸＲＰＤディフラクトグラムを示す図である。上部のディフラクトグラムは、酢酸エチル／ヘプタン（３：１）溶液からの急速冷却により形成された結晶形１のものである。中間のディフラクトグラムは、ＭＴＢＥ／ヘプタン（１：１）溶液からの急速冷却により形成された結晶形１のものである。下部のディフラクトグラムは、酢酸エチル／ヘプタン（３：１）溶液（３０ｖ）からの遅い冷却結晶化（７５℃〜室温まで、２〜３時間かけて冷却し、その後一夜撹拌した）により形成された結晶形１のものである。
【図６】結晶形１で提示された結晶パッキングの描写の図である。
【図７】破砕の前後の結晶形１の試料のＸＲＰＤディフラクトグラムを示すグラフである。
【０００９】
[0016]本明細書で使用される場合、以下の定義は、特に指示されていない限り適用される。
【００１０】
[0017]本明細書で使用される場合、「式Ｉの化合物」は、式Ｉの化合物及び医薬上許容しうるその塩から選択される少なくとも１つの実体を意味する。さらに、特に規定がない限り、「式Ｉの化合物」は、化合物の１つ又は複数の鏡像異性体、ジアステレオマー及び／又は幾何学的（又は立体構造）形態（複数可）でありうる。例えば、各不斉中心についてのＲ及びＳ立体配置、（Ｚ）及び（Ｅ）二重結合異性体、並びに（Ｚ）及び（Ｅ）立体配座異性体である。特に規定がない限り、相互変異性形態と同時に存在する本明細書に描かれている化合物は、本開示の範囲内にある。さらに、特に規定がない限り、本明細書に描かれている構造は、１つ又は複数の同位体的に富化されている原子の存在下でのみ異なる化合物を含むことも意図されている。例えば、水素を重水素又はトリチウムに置換すること、又は炭素を１３Ｃ−又は１４Ｃ−富化炭素に置換すること以外は描かれた構造を有する化合物は、本開示の範囲内にある。このような化合物は、例えば、生物学的アッセイで分析ツール又はプローブとして有用であることがある。
【００１１】
[0018]式Ｉは、以下の
【化２】
2018111715.tif 000003
により代表されうる。
【００１２】
[0019]「医薬上許容しうる塩」は、親化合物の望ましい生物学的活性を維持し、望ましくない毒物学的効果を与えない塩である。このような塩の例は、（ａ）無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などで形成されている酸付加塩；及び有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸などで形成されている塩；及び（ｂ）陰イオン元素、例えば塩素、臭素及びヨウ素から形成されている塩である。例えば、Ｈａｙｎｅｓら、「Ｃｏｍｍｅｎｔａｒｙ：    Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ａｎｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｄａｔａｂａｓｅ」Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ｖｏｌ．  ９４、ｎｏ．１０（２００５）、及びＢｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ｖｏｌ．６６、ｎｏ．１（１９７７年）を参照されたい。これらは参照により本明細書に組み込まれる。
【００１３】
[0020]「固体形態」は、式Ｉについての化合物の不定形又は結晶形を指す。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの式Ｉの化合物の固体形態は、結晶形１である。固体形態は、例えば、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）ディフラクトグラム、単結晶構造、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）から得られる熱流量情報、動的水蒸気吸着測定（ＤＶＳ）から得られる吸収脱離プロット、及び／又は熱力学安定性などの１つ又は複数の分析試験及び／又は物理特性により互いに同定及び区別されうる。しかし、当業者は、このような分析技術から得られる結果が、実験誤差により、例えば±１０％まで変化していてもよいことを理解する。例えば、同じ結晶形についてさえＸＲＰＤディフラクトグラムでの強度及び／又はピーク位置における変動がありうる。したがって、当業者は、本明細書で示されるＸＲＰＤディフラクトグラムでのピーク最大値（°２θで）が、当業界で認識された変動である、報告された値の±０．２°２θで報告された値を一般に意味することを理解する。
【００１４】
[0021]「異性体」は、同じ数及び種類の原子を有し、したがって、同じ分子量を有するが、その原子の配列又は配置に関して異なる化合物を指す。「立体異性体」は、同じ原子結合性を有するが、空間でのそれらの原子の異なる配列を有する化合物を指す。「ジアステレオ異性体」又は「ジアステレオマー」は、鏡像異性体でない立体異性体を指す。「鏡像異性体」は、互いに重ねることができない鏡像である立体異性体を指す。「幾何学的異性体」は、二重結合又は環又は中心原子に関して異なる位置の基を有するシス−トランス異性体を指す。
【００１５】
[0022]本明細書で教示されている鏡像異性体としては、特定の不斉中心又は（複数の）不斉中心で、単独の鏡像異性体、例えば、９０％、９２％、９５％、９８％、若しくは９９％より大きいか又は等しい、又は１００％に等しい単一の鏡像異性体を実質的に含む「鏡像異性的に純粋な」異性体を挙げることができる。「不斉中心」又は「キラル中心」は、４つの異なる置換基を含む四面体炭素原子を指す。
【００１６】
[0023]本明細書で使用される場合、「立体異性的に（stereomerically）純粋な」は、ある化合物の１つの立体異性体を含み、その化合物の他の立体異性体を実質的に含まない化合物又はその組成物を意味する。例えば、１つのキラル中心を有する化合物の立体異性的に純粋な組成物は、その化合物の逆の鏡像異性体を実質的に含まない。２つのキラル中心を有する化合物の立体異性的に純粋な組成物は、その化合物のジアステレオマーを実質的に含まず、その化合物の逆の鏡像異性体を実質的に含まない。典型的な立体異性的に純粋な化合物は、その化合物の約８０重量％超の一方の立体異性体及び、その化合物の約２０重量％未満の他方の立体異性体、さらに好ましくはその化合物の約９０重量％超の一方の立体異性体及びその化合物の約１０重量％未満の他方の立体異性体、さらにいっそう好ましくはその化合物の約９５重量％超の一方の立体異性体及びその化合物の約５重量％未満の他方の立体異性体、最も好ましくはその化合物の約９７重量％超の一方の立体異性体及びその化合物の約３重量％未満の他方の立体異性体を含む。例えば、米国特許第７，１８９，７１５号を参照されたい。
【００１７】
[0024]異性体を記述する用語として、「Ｒ」及び「Ｓ」は、非対称に置換されている炭素原子での立体化学の配置の記述子である。「Ｒ」又は「Ｓ」としての非対称に置換されている炭素原子の名称は、当業者に周知であるので、カーン・インゴルド・プレローグ順位則の使用によって行われており、有機化学の命名法についての国際純正・応用化学連合（ＩＵＰＡＣ）規則、セクションＥ、立体化学に記述されている。
【００１８】
[0025]本明細書で使用される場合、「医薬上許容しうる担体」は、それと共に製剤されている化合物の薬理的活性を破壊しない毒性のない担体、アジュバント及び／又は賦形剤を指す。本開示の組成物で使用することができる医薬上許容しうる担体、アジュバント及び／又は賦形剤としては、それに限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レクチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝剤物質、例えばホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩、電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース基材の物質、ポリエチレングリコール、シクロデキストリン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂が挙げられる。
【００１９】
[0026]がんの「処置」、がんを「処置する（ｔｒｅａｔ）」又はがんを「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、本明細書に記述されるとおり、がんを逆戻りさせること（例えば、細胞の分化障壁を克服すること）、緩和すること（例えば、１つ又は複数の症状、例えば貧血からの疲労、血球数低下などを緩和すること）、及び／又はがんの進行を遅延させること（例えば、ＡＭＬへの形質転換などの症状の進行を遅延させること）を指す。
【００２０】
[0027]本明細書で使用される場合、「対象」は、哺乳類対象などの動物対象、例えばヒトを意味する。
【００２１】
[0028]いくつかの実施形態では、少なくとも１つの式Ｉの化合物の固体形態が、結晶形１である。
【００２２】
[0029]式Ｉの化合物の医薬上許容しうる塩の不定形態は、少なくとも１つの式Ｉの遊離塩基化合物を、例えば、リン酸、硫酸、塩酸、臭化水素酸、酢酸及びメタンスルホン酸から選択される少なくとも１つの酸を含み、及び任意選択で水をさらに含む溶媒系と組み合わせることにより得ることができる。式Ｉの遊離塩基化合物の不定形態を、例えば、式Ｉの遊離塩基化合物及びメタノール、テトラヒドロフラン、アセトニトリル及びイソプロピルアルコールから選択される少なくとも１つの溶媒を含有する溶液の遅い蒸発から得ることができる。遅い蒸発は、蒸発されるべき溶液を含むバイアルを緩く密閉すること、及び少なくとも１つの溶媒を約３日間又は必要に応じて室温で蒸発させることを含みうる。いくつかの実施形態では、式Ｉの遊離塩基化合物は、約１〜２ｍｇの量で存在し、少なくとも１つの溶媒は、蒸発の前に約２ｍＬの体積で存在する。
【００２３】
[0030]いくつかの実施形態では、式Ｉの遊離塩基化合物の結晶形１は、例えば、式Ｉの遊離塩基化合物並びにトルエン、アセトン、酢酸エチル及びＭＴＢＥ／ＤＣＭの９：１（ｖ／ｖ）混合物から選択される少なくとも１つの溶媒を含む溶液の遅い蒸発（例えば、先に記載されるとおり）から得ることができる。いくつかの実施形態では、式Ｉの遊離塩基化合物は、約５ｍｇの体積で存在し、少なくとも１つの溶媒は、蒸発の前に約５ｍＬの体積で存在する。上述の溶媒の遅い蒸発から得られた生成物のＸＲＰＤディフラクトグラムは、図２で示される。
【００２４】
[0031]同様に、式Ｉの遊離塩基化合物の結晶形１は、例えば、約２０分の期間にわたり、約５０℃〜室温、式Ｉの遊離塩基化合物、及びＭＴＢＥ／ヘプタンの１：１（ｖ／ｖ）混合物、又は酢酸エチル／ヘプタンの１：１（ｖ／ｖ）混合物のいずれかを含有する溶液の遅い冷却、続いて、−５℃まで冷却し、ろ過により収集することから得ることができる。いくつかの実施形態では、式Ｉの遊離塩基化合物は、約０．２ｇ〜約９ｇの範囲の量で存在し、少なくとも１つの溶媒は、約１２ｖ〜約１４ｖ（約８ｍＬ〜約１７２ｍＬ総溶媒体積）の範囲の体積で存在する。上述の溶媒の遅い蒸発から得られた生成物のＸＲＰＤディフラクトグラムは、図３で示される。
【００２５】
[0032]式Ｉの遊離塩基化合物の結晶形１は、例えば、式Ｉの遊離塩基化合物、並びに酢酸エチル中の５％メタノールの溶液、ＭＴＢＥ中の５％メタノールの溶液、１：１（ｖ／ｖ）ＭＴＢＥ／ヘプタン中の５％メタノールの溶液、１：１（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘプタン中の５％メタノールの溶液、酢酸エチル中の５％エタノールの溶液、ＭＴＢＥ中の５％エタノールの溶液、１：１（ｖ／ｖ）ＭＴＢＥ／ヘプタン中の５％エタノールの溶液、及び１：１（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘプタン中の５％エタノールの溶液から選択される少なくとも１つの溶媒系を含有する溶液の遅い蒸発から得ることもできる。いくつかの実施形態では、式Ｉの遊離塩基化合物は、約０．５ｍｇの量で存在し、少なくとも１つの溶媒は、約１ｍＬの体積で存在する。
【００２６】
[0033]式Ｉの遊離塩基化合物の結晶形１は、例えば、式Ｉの遊離塩基化合物、並びに１：１（ｖ／ｖ）ＭＴＢＥ／ヘプタン及び１：１（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘプタンから選択される少なくとも１つの溶媒系を含有する溶液の、下に記載されるとおりのクラッシュ（急速）冷却から得ることもできる。クラッシュ（急速）冷却は、溶液の温度を８０℃に増大させること、１０分間その温度を維持すること、その後、その溶液を、−２０℃で冷凍装置に入れることを含みうる。３０分後、その混合物を、冷凍装置から取り出し、固形物をろ過により単離しうる。いくつかの実施形態では、式Ｉの遊離塩基化合物は、約３．９ｇの量で存在し、少なくとも１つの溶媒は、約１０５ｍＬの体積で存在する。分析については、固形物並びに少量の溶液を、ＸＲＰＤ試料プレートに広げて、溶媒を室温で蒸発させうる（例えば、１時間）。上述の溶媒のクラッシュ（急速）冷却、及び継続ろ過から得られた結晶及びその生成物のＸＲＰＤディフラクトグラムは、図４及び５でそれぞれ示される。
【００２７】
[0034]ＭＴＢＥ（ＭＢＴＥ中の１％水、ＫＦにより測定される場合）から又は水−飽和ＭＴＢＥ／ヘプタンから結晶の遅い蒸発は、形態１から不定形又は様々の結晶形への変換を生じなかった。
【００２８】
[0035]いくつかの実施形態では、本開示は、式Ｉの遊離塩基化合物の結晶形１に達する。いくつかの実施形態では、本開示は、図１、２、３及び５のいずれか１つに実質的に示されるとおりのＸ線粉末ディフラクトグラムを有する結晶形１に関する。本明細書で使用される場合、Ｘ線粉末ディフラクトグラムは、図面（複数可）で、実験的変動により、使用される測定条件にもより、ピーク位置における可能性のある変化を考慮に入れるが、ピークの規模（定量的又は相対的）強度を考慮に入れないものと同じである場合、本明細書の１つ又は複数の図面で、「実質的に示されるとおり」である。
【００２９】
[0036]いくつかの実施形態では、結晶形１のＸＲＰＤディフラクトグラムは、５．８６９、７．７４９、１２．８３７、１５．２７６、１８．２２０、１９．９２５、２１．１８４、２３．５８６及び２５．８１７°２θ（又はその周囲の値）に最大値を有するピークから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つのピークを有する。いくつかの実施形態では、±０．２（００）の変動が、１つ又は複数のピーク最大値で観察されうる。
【００３０】
[0037]いくつかの実施形態では、結晶形１のＸＲＰＤディフラクトグラムは、５．９、７．７、１２．８、１５．３、１８．２、１９．３、２１．２、２３．６及び２５．８°２θに最大値を有するピークから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、又は９つのピークを有する。いくつかの実施形態では、±０．２の変動は、１つ又は複数のピーク最大値で観察されうる。いくつかの実施形態では、結晶形１のＸＲＰＤディフラクトグラムは、５．８７、７．７５、１２．８４、１５．２８、１８．２２、１９．２９、２１．１８、２３．５９及び２５．８２°２θに最大値を有するピークから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ又は９つのピークを有する。いくつかの実施形態では、±０．２０の変動は、１つ又は複数のピーク最大値で観察されうる。いくつかの実施形態では、結晶形１のＸＲＰＤディフラクトグラムは、５．８６９、７．７４９、１２．８３７、１５．２７６、１８．２２０、１９．２９５、２１．１８４、２３．５８６及び２５．８１７°２θに最大値を有するピークから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、又は９つのピークを有する。いくつかの実施形態では、±０．２００の変動は、１つ又は複数のピーク最大値で観察されうる。
【００３１】
[0038]いくつかの実施形態では、結晶形１のＸＲＰＤディフラクトグラムは、５．９±０．２、７．７±０．２、１２．８±０．２、１５．３±０．２、１８．２±０．２、１９．３±０．２、２１．２±０．２、２３．６±０．２及び２５．８±０．２°２θにあるピークから選択された少なくとも１つのピークを有するＸＲＰＤディフラクトグラムを有する。いくつかの実施形態では、結晶形１のＸＲＰＤディフラクトグラムは、１８．２±０．２°２θにあるピークを有するＸＲＰＤディフラクトグラムを有する。いくつかの実施形態では、結晶形１のＸＲＰＤディフラクトグラムは、７．７±０．２、１５．３±０．２及び１８．２±０．２°２θにあるピークを有するＸＲＰＤディフラクトグラムを有する。いくつかの実施形態では、結晶形１のＸＲＰＤディフラクトグラムは、７．７±０．２、１５．３±０．２、１８．２±０．２、１９．３±０．２及び２１．２±０．２°２θにあるピークを有するＸＲＰＤディフラクトグラムを有する。
【００３２】
[0039]いくつかの実施形態では、結晶形１は、空間群Ｐ２１にある。いくつかの実施形態では、結晶形１の単位セルは、寸法：ａ＝５．９３０６（２）Å、ｂ＝１７．４３０４（６）Å、ｃ＝１５．１８００（５）Å、β＝９９．６４１（２）を有する。いくつかの実施形態では、結晶形１の単位セルは、１５４７．０３（９）Å３の体積を有する。
【００３３】
[0040]いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態を含む医薬組成物を対象とする。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬上許容しうる担体、医薬上許容しうる賦形剤及び医薬上許容しうる添加剤から選択される少なくとも１つの追加の成分をさらに含む。
【００３４】
[0041]いくつかの実施形態では、医薬組成物の少なくとも１つの式Ｉの化合物の固体形態は、少なくとも１つの式Ｉの化合物の不定形態である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの式Ｉの化合物の不定形態は、式Ｉの化合物の少なくとも１つの医薬上許容しうる塩の不定形態である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの医薬上許容しうる塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸及びポリガラクツロン酸から選択される少なくとも１つの酸で形成されている酸付加塩から選択される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの医薬上許容しうる塩は、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸及びメタンスルホン酸から選択される少なくとも１つの酸で形成されている酸付加塩から選択される。
【００３５】
[0042]いくつかの実施形態では、医薬組成物の少なくとも１つの式Ｉの化合物の固体形態は、少なくとも１つの式Ｉの化合物の結晶形１である。
【００３６】
[0043]いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態及び任意選択で少なくとも１つの追加の成分からなる医薬組成物を対象とする。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、活性成分として、８０％超の少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、活性成分として、９０％超の少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、活性成分として、９５％超の少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、活性成分として、９９％超の少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態を含む。
【００３７】
[0044]いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態及び任意選択で少なくとも１つの追加の成分から本質的になる医薬組成物を対象とする。少なくとも１つの追加の成分は、少なくとも１つの式Ｉの化合物ではない。
【００３８】
[0045]医薬組成物の少なくとも１つの追加の成分は、医薬組成物が意図される投与の経路により選択されうる。医薬組成物が使用されうる投与の適切な経路の制限のない例としては、非経口、経口、吸入噴霧、局所、直腸、鼻、頬側、膣内及び移植されているリザーバー投与を挙げられる。本明細書で使用される場合、用語「非経口」としては、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、クモ膜下腔内、肝内、病巣内及び頭蓋内注射又は注入技術が挙げられる。いくつかの実施形態では、投与の様式は、静脈内、経口、皮下及び筋肉内投与から選択される。本開示の組成物の滅菌の注射用形態は、例えば、水性又は油性懸濁液であってもよい。これらの懸濁液は、当業界で知られている適切な分散又は湿潤剤及び懸濁剤を使用して、当業界で知られている技術により製剤してもよい。滅菌の注射用製剤は、非毒性の非経口で許容しうる希釈剤又は溶媒中の滅菌の注射用溶液若しくは懸濁液、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液でもありうる。使用されうる賦形剤及び溶媒の制限のない例としては、水、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液が挙げられる。さらに、滅菌されている不揮発性油は、溶媒及び／又は懸濁媒体として使用されうる。
【００３９】
[0046]この目的のために、合成のモノ又はジグリセリドを含めた任意のブランドの不揮発性油を使用してもよい。脂肪酸、例えばオレイン酸及びそのグリセリド誘導体は、天然の医薬上許容しうる油、例えば、オリーブ油又はひまし油、特にそれらのポリオキシエチレン化バージョンであるとき、注射用のものの調製に有用である。これらの油溶液又は懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤又は分散剤、例えばカルボキシメチルセルロース、又はエマルジョン及び懸濁液を含めた医薬上許容しうる剤形の製剤で一般に使用されている類似の分散剤をも含むことができる。他の一般に使用されている界面活性剤、例えば、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）、スパン（Ｓｐａｎ）及び医薬上許容しうる固体、液体及び／又は他の剤形の製造で一般に使用される他の乳化剤又は生物学的利用能増強剤は、製剤の目的のためにも使用されていてもよい。
【００４０】
[0047]経口投与については、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態は、それに限定されないが、カプセル剤、錠剤、水性懸濁液又は溶液を含めた許容しうる経口剤形で提供されていてもよい。経口用途の錠剤の場合には、一般に使用されている担体としては、ラクトース及びコーンスターチが挙げられる。滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムも添加されていてよい。カプセル剤形態での経口投与のために、有用な希釈剤としては、ラクトース及び乾燥コーンスターチが挙げられる。水性懸濁液が経口用途で必要とされる場合、活性成分は、乳化及び／又は懸濁剤と組み合わせられている。所望の場合、ある一定の甘味、風味又は着色剤も添加されていてよい。
【００４１】
[0048]本開示の少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態は、ＳＦ３Ｂ１を標的にする薬剤に応答性のあるものを含めた様々の種類のがんを処置するために使用されうる。プラジエノライドＢの抗腫瘍活性が、そのＳＦ３ｂ複合体の標的に結合されること、遺伝子発現のパターンのスプライシング及び改変を阻害することとして報告されている。（Ｋｏｔａｋｅら、「Ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ＳＦ３ｂ  ａｓ  ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｎａｔｕｒａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００７、３巻、５７０〜５７５頁）。スプライソソーム遺伝子、例えばスプライシング因子３Ｂサブユニット１（ＳＦ３Ｂ１）タンパク質における突然変異は、いくつかのがん、例えば血液悪性腫瘍及び固形腫瘍と関係づけられることが知られている。Ｓｃｏｔｔら、「Ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｔｈａｔ  ａｆｆｅｃｔ  ｐｒｅ−ｍＲＮＡ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｉｎ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ  ａｎｄ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ」、ＪＮＣＩ  １０５、２０、１５４０〜１５４９頁。
【００４２】
[0049]血液悪性腫瘍の制限のない例としては、血液のがん（白血病）及びリンパ節のがん（リンパ腫）が挙げられる。白血病の制限のない例としては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）などが挙げられる。リンパ腫の制限のない例としては、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫を挙げることができる。他の血液悪性腫瘍の制限のない例としては、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を挙げることができる。
【００４３】
[0050]固形腫瘍の制限のない例としては、細胞がん（例えば、腺がん、例えば、乳がん、膵臓がん、前立腺がん、結腸及び結腸直腸がんなどの）、肺がん、胃がん、子宮頚がん、子宮内膜がん、卵巣がん、胆管細胞がん、神経膠腫及び黒色腫を挙げることができる。
【００４４】
[0051]本開示の少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態は、ＳＦ３Ｂ１以外のスプライソソーム遺伝子又はタンパク質を標的にする薬剤に応答性があり得るがんを処置するためにも使用されうる。以下の実施例は、スプライソソームを標的にする薬剤に応答性があり得るがんのいくつかの例であり、いかなる手段でも本開示の範囲を限定することは意図されていない。したがって、本開示の少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態は、以下のような多様ながん又は状態を処置するために対象に投与することができる：
ａ）骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）：例えば、「ＳＦ３Ｂ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ：  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｄａｍｍ  Ｆ．ら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２０１１、１〜４頁；「Ｆｒｅｑｕｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｍａｃｈｉｎｅｒｙ  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｉａ」、Ｙｏｓｈｉｄａ  Ｋ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、２０１１年、４７８巻、６４〜６９頁；「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ＳＦ３Ｂ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ  ａｎｄ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ／ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｎｅｏｐｌａｓｍｓ」、Ｍａｌｃｏｖａｔｉ  Ｌ．ら、Ｂｌｏｏｄ、２０１１年、１１８、２４、６２３９〜６２４６頁；「Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｐｌｉｃｅｏｓｏｍｅ  ｍａｃｈｉｎｅｒｙ，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｄ  ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ  ｐａｔｈｗａｙ  ２０  ｉｎ  ｌｅｕｋｅｍｏｇｅｎｅｓｉｓ」、Ｍａｋｉｓｈｉｍａら、Ｂｌｏｏｄ、２０１２年、１１９巻、３２０３〜３２１０頁；「Ｓｏｍａｔｉｃ  ＳＦ３Ｂ１  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｉａ  ｗｉｔｈ  ｒｉｎｇ  ｓｉｄｅｒｏｂｌａｓｔｓ」、Ｐａｐｐａｅｍａｎｎｕｉｌ，Ｅ．ら、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ．  Ｍｅｄ．２０１１年、ＤＯＩ  １０．１０５６／ＮＥＪＭｏａ１１０３２８３を参照されたい。
ｂ）慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）：例えば、「Ｄｅｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｐｌｉｃｅｏｓｏｍａｌ  ｍａｃｈｉｎｅｒｙ：  ａ  ｎｅｗ  ｐａｔｈｗａｙ  ｏｆ  ｌｅｕｋａｅｍｏｇｅｎｅｓｉｓ」、Ｍａｃｉｅｊｅｗｓｋｉ，  Ｊ．Ｐ．、Ｐａｄｇｅｔｔ，Ｒ．Ａ．、Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ、２０１２、１〜９頁；「Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＳＦ３Ｂ１  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｉｎｅｓｓ」、Ｒｏｓｓｉら、Ｂｌｏｏｄ、２０１１年、１１８巻、６９０４〜６９０８頁；「Ｅｘｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ＳＦ３Ｂ１  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ」、Ｑｕｅｓａｄａら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２０１１年、４４巻、４７〜５２頁を参照されたい。
ｃ）慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）：例えば、Ｙｏｓｈｉｄａら、Ｎａｔｕｒｅ  ２０１１；３０「Ｓｐｌｉｃｅｏｓｏｍａｌ  ｇｅｎｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ａｒｅ  ｆｒｅｑｕｅｎｔ  ｅｖｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｍｏｎｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｂｕｔ  ｌａｒｇｅｌｙ  ａｂｓｅｎｔ  ｉｎ  ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｍｙｅｌｏｍｏｎｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ」、Ｋａｒ  Ｓ．Ａ．ら、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉａ、２０１２、ＤＯＩ：１０．３３２４／ｈａｅｍａｔｏｌ．２０１２．０６４０４８；ＤｅＢｏｅｖｅｒら、「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｃｒｙｐｔｉｃ  ３’  ｓｐｌｉｃｅ  ｓｉｔｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ＳＦ３Ｂ１−ｍｕｔａｔｅｄ  ｃａｎｃｅｒｓ」、ＰＬＯＳ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１３、ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｃｂｉ．１００４１０５を参照されたい。
ｄ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）：例えば、Ｍａｌｃｏｖａｔｉら、Ｂｌｏｏｄ  ２０１１；Ｙｏｓｈｉｄａら、Ｎａｔｕｒｅ  ２０１１を参照されたい。
ｅ）乳がん：例えば、「Ｗｈｏｌｅ  ｇｅｎｏｍｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎｆｏｒｍｓ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ａｒｏｍａｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ」、Ｅｌｌｉｓら、Ｎａｔｕｒｅ、２０１２年、４８６巻、３５３〜３６０頁；ＤｅＢｏｅｖｅｒら、「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｃｒｙｐｔｉｃ  ３’  ｓｐｌｉｃｅ  ｓｉｔｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ＳＦ３Ｂ１−ｍｕｔａｔｅｄ  ｃａｎｃｅｒｓ」、ＰＬＯＳ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１３、ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｃｂｉ．１００４１０５；Ｍａｇｕｉｒｅら、「ＳＦ３Ｂ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ」、Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ２０１５、２３５巻、５７１〜５８０頁を参照されたい。
ｆ）ブドウ膜黒色腫：例えば、「ＳＦ３Ｂ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｉｎ  ｕｖｅａｌ  ｍｅｌａｎｏｍａ」、Ｆｕｒｎｅｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃ．  ２０１３、１０巻、１１２２〜１１２９頁；ＤｅＢｏｅｖｅｒら、「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｃｒｙｐｔｉｃ  ３’  ｓｐｌｉｃｅ  ｓｉｔｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ＳＦ３Ｂ１−ｍｕｔａｔｅｄ  ｃａｎｃｅｒｓ」、ＰＬＯＳ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１３、ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｃｂｉ．１００４１０５を参照されたい。
ｇ）子宮内膜がん：例えば、Ｔｅｆｆｅｒｉら、「Ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ」。Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２００９；３６１巻：１８７２〜８５頁を参照されたい。
ｈ）胃がん：例えば、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１３  Ｊｕｌ；１３３（１）：２６０〜５頁、「Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｍａｃｈｉｎｅｒｙ  ｇｅｎｅｓ  ＳＦ３Ｂ１，Ｕ２ＡＦ１  ａｎｄ  ＳＲＳＦ２  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｉａ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｃｏｍｍｏｎ  ｔｕｍｏｒｓ」。  Ｊｅらを参照されたい。
ｉ）卵巣がん：例えば、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１３  Ｊｕｌ；１３３（１）：２６０〜５頁、「Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｍａｃｈｉｎｅｒｙ  ｇｅｎｅｓ  ＳＦ３Ｂ１，  Ｕ２ＡＦ１  ａｎｄ  ＳＲＳＦ２  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｉａ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｃｏｍｍｏｎ  ｔｕｍｏｒｓ」。Ｊｅらを参照されたい。
ｊ）胆管がん、例えば胆管細胞がん及び膵臓がん：例えば、Ｂｉａｎｋｉｎら、「Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｇｅｎｏｍｅｓ  ｒｅｖｅａｌ  ａｂｅｒｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ａｘｏｎ  ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ｇｅｎｅｓ」、Ｎａｔｕｒｅ  ２０１２、４９１巻、３９９〜４０５頁を参照されたい。
ｋ）肺がん：例えば、「Ｅｘｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ＳＦ３Ｂ１  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ」、Ｑｕｅｓａｄａら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４４巻、４７〜５２頁（２０１２年）；Ｓｃｏｔｔら、「Ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｔｈａｔ  ａｆｆｅｃｔ  ｐｒｅ−ｍＲＮＡ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｉｎ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ  ａｎｄ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ」、ＪＮＣＩ  １０５、２０、１５４０〜１５４９頁を参照されたい。
【００４５】
[0052]さらに、がんにおける体細胞突然変異のカタログ（ＣＯＳＭＩＣ）（Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｔｒｕｓｔ  Ｓａｎｇｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ｅｎｇｌａｎｄ）では、ＳＦ３Ｂ１突然変異が、様々な種類のがん試料で見出されていることが報告されている。
【００４６】
[0053]いくつかの実施形態では、本開示の少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態を、対象に、処置である量で及び／又は治療上有効な量で投与する。担体材料と組み合わせて、単一剤形での組成物を生成することができる本開示の少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態の量は、処置される対象及び投与の経路により変化しうる。いくつかの実施形態では、式Ｉの遊離塩基の重量に基づいて、少なくとも１つの固体形態０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の投与量の少なくとも１つの式Ｉの化合物を、これらの組成物を受ける対象に投与することができるように医薬組成物が製剤される。いくつかの実施形態では、本開示の医薬組成物は、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態の式Ｉの遊離塩基の重量に基づいて、０．０１ｍｇ〜５０ｍｇを含む。いくつかの実施形態では、本開示の医薬組成物は、式Ｉの遊離塩基の重量に基づいて、少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、例えば５ｍｇ〜４０ｍｇを含む。
【００４７】
[0054]任意の特定の患者についての投与量及び処置レジームはまた、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、全般的健康、性別、食事、投与の時間、排出の速度、薬物併用、処置する医師の判断、及び処置される特定の疾患の重症度を含めた、多様な因子に依存しうる。組成物中の本開示の少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態の重量は、組成物中の特定の化合物／塩にも依存する。
【００４８】
[0055]いくつかの実施形態では、上記がんは、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について試験され、及び／又は陽性であり、突然変異（複数可）の存在（「陽性」）は、対象のがんが、このタンパク質及び／又はスプライソソームを標的にする化合物の投与を含む処置の方法に応答性があることを示すことができる。このようなスプライソソーム遺伝子の例としては、それに限定されないが、下の表１に表されるものが挙げられる。
【００４９】
[0056]
【表１】
2018111715.tif 000004
【００５０】
[0057]いくつかの実施形態では、対象のがんは、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質におけるこのような突然変異の不在下でさえ、このタンパク質及び／又はスプライソソームを標的とする少なくとも１つの式Ｉの化合物の少なくとも１つの固体形態の投与を含む処置の方法に応答性がありうる。
【００５１】
[0058]突然変異についてのスクリーニング又は試験は、核酸増殖、電気泳動、マイクロアレイ、ブロッティング（blot）、官能性アッセイ、免疫アッセイなどを介した、任意の既知手段、例えば遺伝子型決定、表現型決定（phenotyping）などによって実施されうる。スクリーニングの方法としては、例えば、がん性細胞／組織を含む上記対象から生物学的試料を採取することを挙げることができる。
【００５２】
[0059]本開示に記述されている本発明を、より十分に理解することができるために、以下の実施例が規定される。これらの実施例は、例示の目的のためのみであって、本開示を、なんらかの手段で限定すると解釈されるべきでないと理解すべきである。
【００５３】
[0060]
【実施例】
【００５４】
[0061]Ｂｉｏｔａｇｅ  ＥｍｒｙｓのＬｉｂｅｒａｔｏｒ又はＩｎｉｔｉａｔｏｒのマイクロ波を使用して、マイクロ波加熱を行った。Ｉｓｃｏ  Ｒｆ２００ｄを使用して、カラムクロマトグラフィーを実行した。Ｂｕｃｈｉのロータリーエバポレーター又はＧｅｎｅｖａｃ遠心分離エバポレーターのいずれかを使用して、溶媒除去を実行した。酸性移動相条件下でＷａｔｅｒｓの自動精製装置及び１９×１００ｍｍ  ＸＴｅｒｒａ５ミクロンＭＳ  Ｃ１８カラムを使用して、分取ＬＣ／ＭＳを行った。Ｖａｒｉａｎ４００ＭＨｚ分光測定装置を使用して、ＮＭＲスペクトルを記録した。
【００５５】
[0062]用語「不活性化」が、反応器（例えば、反応容器、フラスコ、ガラス製反応器など）を記述するために使用される場合、反応器内の空気は、基本的に湿気なし、又は乾燥している不活性ガス（例えば、窒素、アルゴンなど）に置換されていることが意図される。
【００５６】
[0063]本開示の式Ｉの化合物を調製する全般的方法及び実験詳細は、下に規定されている。
【００５７】
[0064]以下の略語を、本明細書で使用する。
ＭｅＯＨ：メタノール
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＫＨＭＤＳ：カリウムビス（トリメチルシリル）アミド
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー−質量分光測定装置
ＴＢＳ  Ｃｌ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
【００５８】
[0065]材料：以下の化合物は、市販で入手可能である、及び／又は有機合成の当業者に周知であるいくつかの方法で調製することができる。式Ｉの化合物は、本明細書に記述されている反応及び技術を使用して調製することができる。下に記述されている合成方法の説明で、溶媒、反応雰囲気、反応温度、実験の期間及び検査手段の選択を含めて提案されている全ての反応条件は、特に指示されない限り、その反応についての条件基準として選択されうると理解すべきである。分子の種々の部分に存在する官能性が、提案されている試薬及び反応に適合性があるであろうことが、有機合成の当業者に理解される。それらの反応条件に適合性がない置換基は、当業者には明らかであり、したがって、代替方法が示されている。例えば、出発材料は、市販で入手可能であるか、又は既知材料から標準方法により十分に調製されるかのいずれかである。
【００５９】
[0066]ＬＣＭＳ情報
移動相：Ａ（Ｈ２Ｏ中の０．１％ギ酸）及びＢ（アセトニトリル中の０．１％ギ酸）。
勾配：１．８分でＢ  ５％→９５％。
カラム：ＡｃｑｕｉｔｙＢＥＨ  Ｃ１８カラム（１．７ｕｍ、２．１×５０ｍｍ）。
【００６０】
[0067]米国特許第７，８８４，１２８号及び第７，８１６，４０１号、共に「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  Ｔｏｔａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ  Ｂ  ａｎｄ  Ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ  Ｄ，  ｄｅｓｃｒｉｂｅ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｋｎｏｗｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｒｔ  ｆｏｒ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ  Ｂ  ａｎｄ  Ｄ」と題される。プラジエノライドＢ及びＤの合成は、当業界で知られている方法を使用しても行うことができ、Ｋａｎａｄａら、「Ｔｏｔａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ２０  Ｍａｃｒｏｌｉｄｅｓ  Ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ  Ｂ  ａｎｄ  Ｄ」、Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．編、４６：４３５０〜４３５５頁（２００７年）に記述されている。「Ｎｏｖｅｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ，ｄｅｓｃｒｉｂｅ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｋｎｏｗｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｒｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｅ７１０７（国際公開第’８１３号の化合物４５）  ｆｒｏｍ  Ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ  Ｄ（国際公開第’８１３号の１１１０７Ｄ）」と題されるＫａｎａｄａら、及びＰＣＴ国際出願公報の国際公開第２００３／０９９８１３号。Ｋｏｔａｋｅらに対応する米国特許は、第７，５５０，５０３号である。
【００６１】
[0068]（Ｓ）−２−（１−（（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）スルホニル）プロパン−２−イル）ピリジンの合成
【化３】
2018111715.tif 000005
【００６２】
[0069]ステップ１：０℃で、メタノール（５００ｍＬ、０．５Ｍ）中の２−（ピリジン−２−イル）酢酸ヒドロクロリド塩ＭＭＭＭＭＭ（５０．０ｇ、２８８．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、滴下で、塩化チオニル（３１．５ｍＬ、４３２．０ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加した。反応物を、０℃で、６０分間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、炭酸ナトリウムで注意深く急冷し、水性層を、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた生成物（ＮＮＮＮＮＮ、４１．５ｇ、２７５．０ｍｍｏｌ、９５％）を、さらなる精製なしに次のステップに使用した。
【００６３】
[0070]ステップ２：０℃で、ＴＨＦ（１５００ｍＬ、０．２Ｍ）中のエステルＮＮＮＮＮＮ（４１．５ｇ、２７５．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、２−メチルプロパン−２−オレイン酸ナトリウム（olate）（２８．６ｇ、２８８．３ｍｍｏｌ、１．０５当量）を添加し、ヨードメタン（３４．３ｍＬ、５４９．１ｍｍｏｌ、２．０当量）の添加の前に、反応混合物を３０分間、０℃で撹拌した。反応物を、室温で、１時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、塩化アンモニウムで急冷し、過剰な溶媒を真空で除去した。その後、粗材料を、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過後、混合物を、真空で濃縮した。得られたメチルエステル（ＯＯＯＯＯＯ、４１．３ｇ、２５０ｍｍｏｌ、９１％）を、精製なしに進行させた。
【００６４】
[0071]ステップ３：０℃で、ＴＨＦ（１５００ｍＬ、０．１Ｍ）中のメチルエステルＯＯＯＯＯＯ（４３．０ｇ、２６０．３ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、滴下で、水素化アルミニウムリチウム（３１２ｍＬ、３１２．４ｍｍｏｌ、１．２当量、ＴＨＦ中の溶液）を添加した。反応物を、３０分間、徐々に０℃に加温させ、その後１時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで室温に加温させた。反応物を、水、水酸化ナトリウム及び水で注意深く急冷した。３０分間混合物を撹拌した後、白色沈殿物をろ取し、溶媒を真空で除去した。その後、反応物を、ジエチルエーテルで抽出し、合わせた有機留分を、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られたアルコール（ＰＰＰＰＰＰ、３０．０ｇ、２１９．０ｍｍｏｌ、８４％）を、精製なしに進行させた。
【００６５】
[0072]ステップ４：０℃で、ジクロロメタン（７００ｍＬ、０．３Ｍ）中のアルコールＰＰＰＰＰＰ（３０．０ｇ、２１９．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、トリエチルアミン（６１．５ｍＬ、４３７．４ｍｍｏｌ、２．０当量）及びＤＭＡＰ（２．７ｇ、２１．９ｍｍｏｌ、０．１当量）を添加した。酢酸無水物（２４．８ｍＬ、２６２．４ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加し、反応混合物を、３０分間、又は反応が、ＬＣＭＳ  又はＴＬＣにより完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、塩化アンモニウムで急冷し、有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。その後、得られた溶液を蒸発させ、粗アセテート（ＱＱＱＱＱＱ、３７．０ｇ、２０６．０ｍｍｏｌ、９４％）を、さらなる精製なしに以下のステップで使用した。
【００６６】
[0073]ステップ５：アセテートＱＱＱＱＱＱ（３９．４ｇ、２１９．８ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）に溶解し、その後、１１８ｇのシリカゲルを添加した。過剰なエーテルを真空で除去し、その後、粗固体を、ｐＨ７水性緩衝液（１９７０ｍＬ、０．１Ｍ）（水酸化ナトリウム／モノ塩基性リン酸ナトリウム／水）で希釈した。ブタの膵臓リパーゼＩＩ型（３．３ｇ、（１５ｍｇ／ｍｍｏｌ））を添加し、４時間、又はＴＬＣ又はＬＣＭＳにより完了していると決定されるまで、反応物を、３７℃で撹拌した。（４時間後、変換は、ＥＬＳＤにより４０％に達し、鏡像異性体過剰は、キラルＳＦＣにより決定され、１３：１  Ｓ：Ｒの鏡像異性体比を示した）。（ＳＦＣ条件：ＳＦＣ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ（Ｗａｔｅｒｓ／Ｔｈａｒ）、ソフトウエア：Ｃｈｒｏｍｓｃｏｐｅ  ｖ１．２、方法：１０分かけてアイソクラチック１５％共溶媒、９５：５ヘプタン：ＩＰＡ  ＋０．１％ＤＥＡ、カラム：Ｌｕｘ−Ａｍｙｌｏｓｅ−２、４．６×２５０ｍｍ、５μｍ、全流量：４ｍｌ／分（ＣＯ２ポンプから３．８０ｍｌ、改質剤ポンプから０．２０ｍｌ）、オーブン温度を３５℃に設定し、システム圧力を１００ｂａｒに設定し、滞留時間：所望及び主要な（Ｓ）−鏡像異性体６．９分、微量の（Ｒ）−鏡像異性体、８．４分）。シリカゲルをろ取し、水性層を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン：酢酸エチル）により精製して、所望のアルコール（ＲＲＲＲＲＲ、１２．５ｇ、９１ｍｍｏｌ、４１％）を得た。
【００６７】
[0074]ステップ６：室温で、ジクロロメタン（５７０ｍＬ、０．１６Ｍ）中のアルコールＲＲＲＲＲＲ（１２．５ｇ、９１．０ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、トリエチルアミン（１３．９ｍＬ、１００．１ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加した。反応物を、０℃に冷却し、その後、メタンスルホニルクロリド（７．４４ｍＬ、９５．５ｍｍｏｌ、１．０５当量）を添加した。反応物を、０℃で、３０分間、又はＴＬＣ又はＬＣＭＳにより完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、炭酸水素ナトリウムで急冷し、その層を分離した。その後、水性層を、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で濃縮した。得られたスルホネートＳＳＳＳＳＳ（１９．２ｇ、８９ｍｍｏｌ、９８％）を、さらなる精製なしに進行させた。
【００６８】
[0075]ステップ７：室温で、ＤＭＦ（１２０ｍＬ、０．１Ｍ）中のスルホネートＳＳＳＳＳＳ（１９．２ｇ、８９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、炭酸セシウム（４０．７ｇ、１２５．０ｍｍｏｌ、１．４当量）及び１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−チオール（１９．１ｇ、１０７．１ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。反応混合物を、５０℃で、４８時間、又はＴＬＣ又はＬＣＭＳにより完了していると決定されるまで撹拌した。混合物を室温に冷却後、ブラインを添加し、水性層を、３回、ジエチルエーテルで抽出した。合わせた有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過後、溶媒を真空で除去し、残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）を使用して精製して、所望の生成物（ＴＴＴＴＴＴ、２８．９ｇ、８８ｍｍｏｌ、９９％）を得た。
【００６９】
[0076]ステップ８：−１０℃で、ＥｔＯＨ（７００ｍＬ、０．１Ｍ）中のスルフィドＴＴＴＴＴＴ（３１．５ｇ、１０５．９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、モリブデン酸アンモニウム４水和物（６．５ｇ、５．３ｍｍｏｌ、０．０５当量）及び過酸化水素（１０８ｍＬ、１０６０ｍｍｏｌ、５．０当量、３３％水溶液）を添加した。反応物を、−１０℃で、４時間、又はＴＬＣ又はＬＣＭＳにより完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、水及びメタ重亜硫酸ナトリウム溶液で急冷した。粗生成物を、ろ過により収集し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（ＵＵＵＵＵＵ、２３．２ｇ、７０．４ｍｍｏｌ、６６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ：１．５０（ｄ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，３Ｈ）１．６６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）３．７５（ｍ，１Ｈ）３．９４（ｄｄ，Ｊ＝１４．８１，５．０２Ｈｚ，１Ｈ）４．５５（ｄｄ，Ｊ＝１４．６８，７．９１Ｈｚ，１Ｈ）７．１４〜７．２２（ｍ，２Ｈ）７．２９（ｓ，１Ｈ）７．５７〜７．７０（ｍ，６Ｈ）８．４４〜８．４９（ｍ，１Ｈ）。
【００７０】
[0077]その後、無色油状を、トルエン／ヘプタン（１／１）（１００ｍｇの化合物当たり１ｍＬのトルエン及び１ｍＬのヘプタンを使用して再結晶させた。混合物を穏やかに加熱して、２つの溶媒を混合した。１２時間、混合物を室温に冷却する。（再結晶化が観察されない場合、溶液に１つの結晶を添加する。結晶は、種晶添加方法を介して結晶を得る助けになる。）結晶は、時間をかけてゆっくりと形成した。その結晶は、ろ過を介して単離するか、又はピペットを介して液層を除去することができたであろう。その後、結晶をヘプタンで洗浄し、次いで、トルエンで急速に洗浄した。再結晶の前後で、スルホンのｅｒを分析した。（ＳＦＣ諸条件：ＳＦＣ条件：ＳＦＣ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ（Ｗａｔｅｒｓ／Ｔｈａｒ）、ソフトウエア：Ｃｈｒｏｍｓｃｏｐｅ  ｖ１．２、方法：１０分かけてアイソクラチック１０％共溶媒ＭｅＯＨ、カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＩＣ、４．６×２５０ｍｍ、５ｕｍ、全流量：４ｍｌ／分（ＣＯ２ポンプから３．８０ｍｌ、改質剤ポンプから０．２０ｍｌ）、オーブン温度を、３５℃に設定し、システム圧力を、１００ｂａｒに設定した、滞留時間：所望及び主要な（Ｓ）−鏡像異性体３．５分、微量の（Ｒ）−鏡像異性体３．８分）。
【００７１】
[0078]化合物１の実験的合成
【化４】
2018111715.tif 000006
【００７２】
[0079]ステップ１：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−７−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン−２−イル）オキシラン−２−イル）−６−ヒドロキシ−６−メチルヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）−７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソオキサシクロドデカ−４−エン−６−イルアセテートの合成。０℃でＤＭＦ（８０ｍＬ、０．１Ｍ）中の窒素下のプラジエノライドＤ（Ｆ、５．３ｇ、９．７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、イミダゾール（４．６ｇ、６７．８ｍｍｏｌ、７．０当量）及びＴＢＳＣｌ（７．３ｇ、４８．４ｍｍｏｌ、５．０当量）で処理した。反応物を、室温に加温させ、２０時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、酢酸エチルで抽出し、有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（Ｇ、７．５ｇ、９．６ｍｍｏｌ、９９％）を得た。
【００７３】
[0080]ステップ２：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−（（６Ｒ，Ｅ）−７−（（２Ｒ，３Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン−２−イル）オキシラン−２−イル）−４，５，６−トリヒドロキシ−６−メチルヘプタ−２−エン−２−イル）−７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソオキサシクロドデカ−４−エン−６−イルアセテートの合成。窒素下、０℃で、脱気されているＴＥＦ：Ｈ２Ｏ（２１０ｍＬ：２１ｍＬ、０．０１Ｍ）中のオレフィンＧ（７．６ｇ、９．７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、四酸化オスミウム（２４．４ｍＬ、１．９ｍｍｏｌ、０．２当量、ｔｅｒｔ−ブタノール中の２．５％溶液）を、続いてＮ−メチルモルホリンＮ−オキシド（２．３ｇ、１９．５ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。反応物を、室温に加温し、１３時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、亜硫酸ナトリウムで急冷し、酢酸エチルで希釈し、有機層を、水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン／メタノール）により精製して、所望の生成物（Ｈ，６．８ｇ、８．３ｍｍｏｌ、８６％）を得た。
【００７４】
[0081]ステップ３：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｅ）−４−オキソブタ−２−エン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イルアセテートの合成。窒素下室温で、ベンゼン（３５０ｍＬ、０．０３Ｍ）中のジオールＨ（７．９ｇ、９．７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、四酢酸鉛（８．６ｇ、１９．４ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。反応物を、３０分間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（Ｉ、２．５ｇ、５．２６ｍｍｏｌ、５４％）を得た。
【００７５】
[0082]ステップ４：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（１−エトキシエトキシ）−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｅ）−４−オキソブタ−２−エン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イルアセテートの合成。ＴＨＦ（９．５ｍＬ、０．５Ｍ）中のアルデヒドＩ（１．４ｇ、２．９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、室温で、エトキシエテン（１１．１ｍＬ、４０．０当量）及びピリジニウムｐ−トルエンスルホネート（０．０７ｇ、０．３ｍｍｏｌ、０．１当量）を添加した。反応物を、２４時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、炭酸水素ナトリウムで急冷し、酢酸エチルで希釈した。酢酸エチルを、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（Ｊ、１．２ｇ、２．２ｍｍｏｌ、７５％）を得た。
【００７６】
[0083]ステップ５：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（１−エトキシエトキシ）−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル）アセテートの合成。窒素下−７８℃で、ＴＨＦ（２０ｍＬ、０．０６Ｍ）中の（Ｓ）−２−（１−（（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）スルホニル）プロパン−２−イル）ピリジン（ＵＵＵＵＵ）（６９５．０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液に、滴下でＫＨＭＤＳ（４．２ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、反応物を、２０分間撹拌した。その後、ＴＨＦ（１．０ｍＬ）中のアルデヒドＪ（７８０．０ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ、１．０当量）を滴下で添加した。反応物を、−７８℃で、９０分間撹拌し、その後１時間、−２０℃に加温させた。反応物を、塩化アンモニウムで急冷し、酢酸エチルで希釈し、室温に加温した。有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望のジュリア生成物（Ｋ、４９０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ、５３％）を得た。
【００７７】
[0084]ステップ６：（４Ｒ，７Ｒ，８Ｓ，１１Ｓ，Ｅ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（１−エトキシエトキシ）−８−ヒドロキシ−７，１１−ジメチル−１２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−９−エン−２−オンの合成。室温で、メタノール（１５ｍＬ、０．０５Ｍ）中のアセテートＫ（４９０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、炭酸カリウム（１５５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加した。２４時間、又は反応がＬＣＭＳ又はＴＬＣにより完了していると決定されるまで、反応を実行した。反応物を水で急冷し、酢酸エチルで希釈し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた発泡性固体（Ｌ、４５９ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ、１００％）を、追加の精製なしに次のステップに進めた。
【００７８】
[0085]ステップ７：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（１−エトキシエトキシ）−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレートの合成。室温で、ジクロロメタン（０．５ｍＬ、０．１Ｍ）中のアルコールＬ（４５９ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２７．３ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、０．３当量）及びトリエチルアミン（１．０ｍＬ、７．４ｍｍｏｌ、１０．０当量）、続いて４−ニトロフェニルクロロホルメート（４５１ｍｇ、０２．２ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。反応物を、室温で３時間撹拌した。次に、Ｎ−メチル−ピペラジン（２９９ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ、４．０当量）を室温で添加した。１時間撹拌した後、反応物を、水で急冷し、ジクロロメタンで希釈した。有機層を、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液で洗浄し、有機層を濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤（ｅｌｕａｎｔ）としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（Ｍ、５５３ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、１００％）を得た。
【００７９】
[0086]ステップ８：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（化合物１）の合成。室温で、メタノール（２０ｍＬ、０．０４Ｍ）中のシリルエーテル（Ｍ、５５３ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ｐ−メトキシトルエンスルホン酸（４２５ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。反応物を、３時間、又は、ＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、炭酸水素ナトリウムで急冷し、酢酸エチルで希釈した。有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の化合物１（１８４ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、４４％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ：０．８２〜１．００（ｍ，３Ｈ）１．２２〜１．４８（ｍ，８Ｈ）１．５０〜１．６３（ｍ，１Ｈ）１．６６〜１．８３（ｍ，４Ｈ）１．９７（ｓ，１Ｈ）２．０７（ｓ，１Ｈ）２．３３（ｓ，３Ｈ）２．４０（ｂｒ．ｓ．，３Ｈ）２．４５〜２．６８（ｍ，３Ｈ）３．４４〜３．６１（ｍ，５Ｈ）３．７４（ｄｄ，Ｊ＝１４．２，７．２Ｈｚ，２Ｈ）５．０４（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ）５．１７（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ）５．５７〜５．７６（ｍ，２Ｈ）６．０２（ｄｄ，Ｊ＝１５．１，７．５Ｈｚ，１Ｈ）６．１３（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ）６．３４（ｄｄｄ，Ｊ＝１５．１，１０．７，１．０Ｈｚ，１Ｈ）７．１４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）７．１８（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）７．６３（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）８．５７（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）＝５５６．４［Ｍ＋Ｈ］。
【００８０】
[0087]結晶形１の例示の合成
【００８１】
[0088]式Ｉの化合物（２９０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ）の遊離塩基を、ＭＴＢＥ（３．２２ｇ、１１ｗｔ、４．３５ｍｌ、１５ｖｏｌ）に懸濁させ、穏やかに還流するまで加熱して、そこに白色沈殿物が形成した。Ｎ−ヘプタン（２．９８ｇ、１０．３ｗｔ、４．３５ｍｌ、１５ｖｏｌ）を、Ｔ−内部≧５２℃を維持しながら添加した。結果物である混合物を、５分間穏やかに還流して加熱し、２０分かけて室温まで冷却し、その後、−５℃にさらに低下させた。１０分間、−５℃で撹拌した後、ろ過により白色沈殿物を収集し、ｎ−ヘプタン（１．５０ｍｌ、５．２ｖｏｌ）及びＭＴＢＥ（０．５０ｍｌ、１．７ｖｏｌ）の混合物ですすぎ、５分間、窒素／真空下で乾燥させ、その後バイアルに移し、１時間真空下でさらに乾燥させて、白色結晶粉末（２０６ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、０．７１ｗｔ、収率７１％）として形態１を得た。
【００８２】
[0089]結晶形１の例示の合成
【００８３】
[0090]２つのバッチから得られた式Ｉの化合物の遊離塩基（８．１７ｇ＋４．１０ｇ；総量１２．２７ｇ、２２．１ｍｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ）を、５００ｍｌフラスコ（３×１０ｍｌのＴＨＦを移動のために使用した）に集約し、濃縮して、１６．４１ｇの黄色油状物を得て、それをＭＴＢＥ（６１．４ｍｌ、５ｖｏｌ）に懸濁／溶解させた。ＭＴＢＥ添加の直後に、ある程度の白色沈殿物が形成した。その混合物を、溶媒交換のために真空下で濃縮して、１５．４８ｇの淡黄色固形物（約３ｇ溶媒が残った）を得た。ＭＴＢＥ（８６ｍｌ、７ｖｏｌ）を添加し（２５℃）、混合物を、０．５時間５０〜５３℃で加熱して、流動性懸濁液を達成した。ｎ−ヘプタン（８６ｍｌ、７ｖｏｌ）を、Ｔ−内部≧５０℃（１０分にわたり）を維持しながら、添加した。加熱装置を切り、混合物を、室温に冷却させた（０時間：５４℃；０．５時間：３８℃；１時間：２８℃；２．５時間：２５℃）。２．５時間後、ろ過により沈殿物を収集し、ＭＴＢＥ（１０ｍｌ、０．８２ｖｏｌ）及びＮ−ヘプタン（２０ｍｌ、１．６ｖｏｌ）の混合物ですすぎ、２時間窒素／真空下で乾燥させて、形態１をオフホワイト結晶粉末（９．０５ｇ、１６．３ｍｍｏｌ、０．７４ｗｔ、収率７３．８％）として得た。
【００８４】
[0091]結晶形１の例示の合成
【００８５】
[0092]式Ｉの化合物の遊離塩基（残留溶媒と共に；３７９ｍｇ、０．６８２ｍｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１当量）を、ＭＴＢＥ（２．７５ｍｌ、７ｖｏｌ）に溶解させ、５０℃に加熱した（白色沈殿物が、４０℃周辺で形成した）。５０℃超のＴ−内部を維持しながら、Ｎ−ヘプタン（２．７５ｍｌ、７ｖｏｌ）を添加した。添加完了により、混合物を冷却させた。１時間後（２５℃）、ろ過により沈殿物を収集し（固形物を緩めるために超音波処理を適用した）、ＭＴＢＥ（０．７９ｍｌ、２ｖｏｌ）及びＮ−ヘプタン（０．７９ｍｌ、２ｖｏｌ）の混合物ですすぎ、１時間周囲温度で窒素／真空下で乾燥させて、形態１を白色結晶粉末として得た（２０５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、０．５４ｗｔ、収率５４％）。
【００８６】
[0093]結晶形１の例示の合成
【００８７】
[0094]式Ｉの化合物の遊離塩基（０．３８０ｇ、０．６８４ｍｍｏｌ、１ｗｔ、１ｖｏｌ、１当量）を、酢酸エチル（１．１４ｍｌ、３ｖｏｌ）に溶解させ、６５℃に加熱した（白色沈殿物が、４０℃周辺で形成した）。６５℃超のＴ−内部を制御しながら、Ｎ−ヘプタン（３．４２ｍｌ、９ｖｏｌ）を添加した。結果物である懸濁液を、一夜撹拌しながら、室温に冷却させた。ろ過（固形物を緩めるために超音波処理を適用した）により沈殿物を収集し、ｎ−ヘプタン（０．９５ｍｌ、２．５ｖｏｌ）及び酢酸エチル（０．１９ｍｌ、０．５ｖｏｌ）の混合物ですすぎ、１時間窒素／真空下で乾燥させて、白色結晶粉末（２３０ｍｇ、０．４１４ｍｍｏｌ、０．６０５ｗｔ、収率６０．５％）として形態１を得た。
【００８８】
[0095]Ｘ線粉末回折
【００８９】
[0096]透過様式で、エックスパートプロ（Ｘ’Ｐｅｒｔ  Ｐｒｏ）回折装置（Ｙａｍａｔｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏ．、Ｌｔｄ．）を使用して、結晶形１のＸＲＰＤディフラクトグラムを得た。試料を、２つのマイヤー（Ｍｙｌａｒ）フィルムの間に入れ、試料支持体で固定した。ＸＲＰＤディフラクトグラムについての分析条件は、下の表２に示される。
【００９０】
[0097]
【表２】
2018111715.tif 000007
【００９１】
[0098]
【表３】
2018111715.tif 000008
【００９２】
[0099]図１は、結晶形１の例示のＸＲＰＤディフラクトグラムを含む。
【００９３】
[00100]単結晶Ｘ線回折
【００９４】
[00101]単結晶Ｘ線回折分析は、結晶形１の結晶構造を解くために使用された。式Ｉの遊離塩基化合物（１２．２１ｍｇ）を、酢酸エチル（１ｍＬ）に溶解させ、ｎ−ヘプタン（１ｍＬ）を添加した。１日間室温で遅い蒸発方法により、結晶を成長させた。無色の単結晶（０．３×０．２×０．１ｍｍ）を、ガラスファイバーに載せた。回折データを、グラファイトモノクロ化Ｃｕ−Ｋα照射を使用したω軸振動法で、Ｒ−ＡＸＩＳ  ＲＡＰＩＤ  ＩＩ−Ｒ画像プレート検出器システム（Ｒｉｇａｋｕ）を用いて、室温で収集した。
【００９５】
[00102]形態１についての結晶データ及び構造精密化データは、表１に要約されている。解明された構造は、各単位セルで互いにほぼ対峙した方向に向けて２分子の式Ｉの遊離塩基化合物を含むと考えられる。図６は、形態１の提案された結晶パッキングの描写である。
【００９６】
[00103]
【表４】
2018111715.tif 000009
【００９７】
[00104]乳鉢及び乳棒で結晶形１の試料を破砕することで、図７で示されるとおりＸ線ディフラクトグラムでの変化を生じ、不定形材料の形成をおそらく示した。
【００９８】
[00105]固体安定性試験は、以下の条件下で結晶形１で実行した。
７日間及び１４日間２５℃で保存
７日間及び１４日間４０℃／７５％ＲＨ（開放）で保存
７日間及び１４日間６０℃で保存
それらの条件下で、有意な崩壊は、それらの条件下で観察されるものはなく、１４日間４０℃／７５％ＲＨ（開放）で保存した試料のＸＲＰＤ及びＴＧＡ−ＤＳＣ分析は、結晶性に変化を示さなかった。
【００９９】
[00106]生物学的アッセイ
【０１００】
[00107]細胞生存能力アッセイプロトコール
【０１０１】
[00108]細胞（ＡＴＣＣから得られているＷｉＤｒ及びＰａｎｃ０５．０４）を、９６ウエルプレートに、細胞２０００個／１００μＬ／ウエルで播種し、一夜インキュベートした。消耗された培地を除去し、９つの異なる濃度の化合物を含有する新鮮な培地（１００μＬ／ウエル）を添加し、化合物保存溶液から得られるＤＭＳＯ濃度を０．１％に調節した。各化合物処置を、各濃度で二重に又は三重に行った。
【０１０２】
[00109]播種した細胞を有する別のプレートを、時間ゼロ（Ｔｚ）プレートとし、そのプレートに、細胞生存能力の代理としてのＡＴＰ測定のために、培地（１００μＬ／ウエル）中の０．１％ＤＭＳＯ、続いてセルタイター−グロ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ）（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）（５０μＬ／ウエル）を添加した。このプレートの複数のウエルの測定から得られる平均値をＴｚとして使用する。
【０１０３】
[00110]化合物で処置したプレートを、７２時間、３７℃でインキュベートした。その後、セルタイター−グロ（登録商標）試薬（５０μＬ／ウエル）を添加し、ＡＴＰを測定した。二重又は三重で化合物処置したウエルの測定から得られる平均値をＴｉとして使用し、化合物なしに０．１％ＤＭＳＯを有する培地で播種されているプレートを対照成長（Ｃ）として使用する。
【０１０４】
[00111]成長阻害率／生存率を、以下のとおりに計算した：
Ｔｉ＞／＝Ｔｚの濃度について、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／（Ｃ−Ｔｚ）］×１００
Ｔｉ＜Ｔｚの濃度について、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／Ｔｚ］×１００。
*時間ゼロ（Ｔｚ）、対照成長（Ｃ）、及び化合物の存在下での試験成長（Ｔｉ）
成長阻害率／生存率を、化合物濃度に対してプロットし、Ｅｍａｘを決定した。
【０１０５】
[00112]５０％の成長阻害（ＧＩ５０）は、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／（Ｃ−Ｔｚ）］×１００＝５０から計算され、この値は、化合物処置中の対照成長（Ｃ）でのＡＴＰ総増加における５０％減少を生じる薬物濃度である。
【０１０６】
[00113]インビトロスプライシング（生化学的）アッセイプロトコール
【０１０７】
[00114]介在配列の欠失を有するアデノウイルス２型構築物（Ａｄ２）のビオチンで標識されているプレｍＲＮＡ（Ｂｅｒｇ，Ｍ．Ｇ．ら、２０１２  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．、３２（７）：１２７１〜８３頁）を、インビトロ転写により調製した。Ｅｘｏｎ１  （４１ヌクレオチド）、イントロン（２３１ヌクレオチド）、及びＥｘｏｎ２（７２ヌクレオチド）を含有するＡｄ２構築物を、遺伝子合成により産生させ、ジーンウィズ（Ｇｅｎｅｗｉｚ）（登録商標）（Ｓｏｕｔｈ  Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）によるｐＧＥＭ（登録商標）−３Ｚベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＥｃｏＲＩ及びＸｂａＩ部位にクローン化した。その後、プラスミドを、ＸｂａＩ消化により直線化し、精製した。製造業者の指示により、それぞれ、ＭＥＧＡスクリプト（ｓｃｒｉｐｔ）（登録商標）Ｔ７転写キット（インビトロゲン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（商標）、ライフ  テクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（商標）、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）及びＭＥＧＡクリア（ｃｌｅａｒ）（商標）転写クリーンアップキット（インビトロゲン（商標）、ライフ  テクノロジーズ（商標）、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を使用して、転写プレ−ｍＲＮＡのインビトロ転写及び精製を行った。ビオチン−１６−ＵＴＰ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄｉａｎａ）対冷ＵＴＰの比は、スプライシングされているＡｄ２ｍＲＮＡ当たりおよそ２つのビオチン分子を組み込むのに１：１３であった。
【０１０８】
[00115]９５μｇＨｅＬａ核抽出物（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）、４７ｎＭ  Ａｄ２プレ−ｍＲＮＡ、２５Ｕ  ＲＮａｓｉｎＲＮａｓｅ阻害剤（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）、１ＸＳＰ緩衝液（０．５ｍＭ  ＡＴＰ、２０ｍＭリン酸クレアチン、１．６ｍＭ  ＭｇＣｌ２）、及びＤＭＳＯ中の化合物（１％最終濃度のＤＭＳＯで）を含有する２５μＬ反応混合物中、３０℃で、インビトロスプライシングアッセイを行った。９０分のインキュベーションの後、１８μＬの５Ｍ  ＮａＣｌを添加することにより反応を停止させ、その混合物を、１０μＬのＭ−２８０ストレプトアビジンで被覆されている磁性ビーズ（インビトロゲン（商標）、ライフ  テクノロジーズ（商標）、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）と、３０分間、室温でインキュベートして、Ａｄ２プレ−及びスプライシングされているｍＲＮＡを捕捉した。ビーズを、１０ｍＭトリス（ｐＨ＝７．５）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ及び２Ｍ  ＮａＣｌを含有する１００ｕＬ緩衝液で２回洗浄し、その後、９５％ホルムアミドを含有するＲＮＡゲル負荷緩衝液中、７０℃で、１０分間、インキュベートして、ＲＮＡを溶出した。Ａｄ２  ＲＮＡを、６％ＴＢＥ−ＵＲＥＡゲルにより溶解し、ナイロン膜に移行させ、ＵＶ架橋し、ＩＲＤｙｅ（登録商標）で標識されているストレプトアビジン（ＬＩ−ＣＯＲ、Ｌｉｎｃｏｌｎ、Ｎｅｂｒａｓｋａ）で探索した。ＬＩ−ＣＯＲ  Ｉｍａｇｅ  Ｓｔｕｄｉｏソフトウエアを使用してバンド蛍光強度を測定することによりスプライシングされているＲＮＡの量を定量した。
【０１０９】
[00116]結果
【０１１０】
[00117]データを下の表４で報告する。Ｅｍａｘは、試験した用量範囲での化合物に対する最大達成可能な応答を指し、負の値は、細胞致死性を示す。大きな負のＥｍａｘ値は、特定の化合物について細胞致死性が大きいことを示す。
【０１１１】
[00118]ＷｉＤｒ−Ｒ細胞は、化学的に誘発されたＲ１０７４Ｈ突然変異を有する結腸がん細胞であり、成長阻害の点でプラジエノライドＢに耐性であることが示されている（Ｙｏｋｏｉ，Ａ．ら、２０１１  ＦＥＢＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ、２７８巻：４８７０〜４８８０頁）。「耐性」ＷｉＤｒ−Ｒ細胞株を用いたこの生存能力アッセイにおける化合物のカウンタースクリーニング（counter-screening）は、これらの化合物が、オフターゲット効果（複数可）を有するかどうかを示すことができる。耐性ＷｉＤｒ−Ｒ細胞株で成長阻害（ＧＩ５０）活性を欠くが、親のＷｉＤｒ細胞株における活性を維持する化合物は、オンメカニズムスプライシング調節が、親のＷｉＤｒ細胞株で観察される成長阻害に応答性があることを示唆する。
【０１１２】
[00119]上述のインビトロスプライシング（ＩＶＳ）アッセイは、例示のプレ−ｍＲＮＡのｍＲＮＡへのスプライシングの阻害を監視する生化学的アッセイである。この生化学的アッセイは、研究者らが、どの化合物濃度で、この特定の転写物のスプライシングが、非細胞状況で阻害され、機械論的スプライシング阻害活性を示すために使用されるかを評価することを可能にする。
【０１１３】
[00120]
【表５】
2018111715.tif 000010
【０１１４】
[00121]凡例
Ｐａｎｅ  ０５．０４細胞:膵臓がん細胞、突然変異体SF3B1細胞株（ＳＦ３Ｂ１におけるＱ６９９Ｈ及びＫ７００Ｅ突然変異）
ＷｉＤｒ細胞：結腸がん細胞（野生型ＳＦ３Ｂ１）
ＷｉＤｒ−Ｒ細胞：結腸がん細胞（Ｅ７１０７に耐性である化学的に誘発されているＳＦ３Ｂ１突然変異体（Ｒ１０７４Ｈ突然変異））
【図１】
2018111715.tif 000011
【図２】
2018111715.tif 000012
【図３】
2018111715.tif 000013
【図４】
2018111715.tif 000014
【図５】
2018111715.tif 000015
【図６】
2018111715.tif 000016
【図７】
2018111715.tif 000017
【手続補正書】
【提出日】平成30年4月3日(2018.4.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）へプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（「化合物１」）の結晶形１を調製するための方法であって、
（ａ）化合物１と第１の溶媒とを混ぜ合わせて混合物を得ること、
（ｂ）前記混合物を加熱すること、
（ｃ）前記混合物に第２の溶媒を添加すること、
（ｄ）前記混合物を冷却すること、及び
（ｅ）化合物１の結晶形１を単離すること、
を含み、
化合物１の結晶形１は、５．９±０．２、７．７±０．２、１２．８±０．２、１５．３±０．２、１８．２±０．２、１９．３±０．２、２１．２±０．２、２３．６±０．２及び２５．８±０．２°２θにあるピークから選択された少なくとも５つのピークを有するＸＲＰＤディフラクトグラムを有する、方法。
【請求項２】
（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）へプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（「化合物１」）の結晶形１を調製するための方法であって、
（ａ）化合物１とメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとを混ぜ合わせて第１の混合物を得ること、
（ｂ）前記第１の混合物からメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを除去して化合物１を単離すること、
（ｃ）化合物１と第１の溶媒とを混ぜ合わせて第２の混合物を得ること、
（ｄ）前記第２の混合物を加熱すること、
（ｅ）前記第２の混合物に第２の溶媒を添加すること、
（ｆ）前記第２の混合物を冷却すること、及び
（ｇ）化合物１の結晶形１を単離すること、
を含み、
化合物１の結晶形１は、５．９±０．２、７．７±０．２、１２．８±０．２、１５．３±０．２、１８．２±０．２、１９．３±０．２、２１．２±０．２、２３．６±０．２及び２５．８±０．２°２θにあるピークから選択された少なくとも５つのピークを有するＸＲＰＤディフラクトグラムを有する、方法。
【請求項３】
前記第１の溶媒が、酢酸エチル及びメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルから選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の溶媒が、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記第２の溶媒が、Ｎ−ヘプタンである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記混合物又は第２の混合物が、５０〜５３℃又は６５℃に加熱される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）へプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（「化合物１」）の結晶形１を調製するための方法であって、
（ａ）化合物１と少なくとも１つの第１の溶媒とを混ぜ合わせて混合物を得ること、
（ｂ）前記混合物を加熱すること、及び
（ｃ）前記少なくとも１つの第１の溶媒を蒸発させること、
を含み、
化合物１の結晶形１は、５．９±０．２、７．７±０．２、１２．８±０．２、１５．３±０．２、１８．２±０．２、１９．３±０．２、２１．２±０．２、２３．６±０．２及び２５．８±０．２°２θにあるピークから選択された少なくとも５つのピークを有するＸＲＰＤディフラクトグラムを有する、方法。
【請求項８】
前記少なくとも１つの第１の溶媒が、トルエン、アセトン、酢酸エチル及びメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル／ジクロロメタンの９：１（ｖ／ｖ）混合物から選択される、請求項７に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１３】
[00120]
【表５】
2018111715.tif 000018
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１４】
[00121]凡例
Ｐａｎｃ  ０５．０４細胞：膵臓がん細胞、突然変異体ＳＦ３Ｂ１細胞株（ＳＦ３Ｂ１におけるＱ６９９Ｈ及びＫ７００Ｅ突然変異）
ＷｉＤｒ細胞：結腸がん細胞（野生型ＳＦ３Ｂ１）
ＷｉＤｒ−Ｒ細胞：結腸がん細胞（Ｅ７１０７に耐性である化学的に誘発されているＳＦ３Ｂ１突然変異体（Ｒ１０７４Ｈ突然変異））
【手続補正書】
【提出日】平成30年4月27日(2018.4.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）へプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（「化合物１」）の結晶形１を調製するための方法であって、
（ａ）化合物１と第１の溶媒とを混ぜ合わせて混合物を得ること、
（ｂ）前記混合物を加熱すること、
（ｃ）前記混合物にＮ−ヘプタンを添加すること、
（ｄ）前記混合物を冷却すること、及び
（ｅ）化合物１の結晶形１を単離すること、
を含み、
前記第１の溶媒は、酢酸エチル及びメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルから選択され、
化合物１の結晶形１は、５．９±０．２、７．７±０．２、１２．８±０．２、１５．３±０．２、１８．２±０．２、１９．３±０．２、２１．２±０．２、２３．６±０．２及び２５．８±０．２°２θにあるピークから選択された少なくとも５つのピークを有するＸＲＰＤディフラクトグラムを有する、方法。
【請求項２】
（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）へプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（「化合物１」）の結晶形１を調製するための方法であって、
（ａ）化合物１とメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルとを混ぜ合わせて第１の混合物を得ること、
（ｂ）前記第１の混合物からメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを除去して化合物１を単離すること、
（ｃ）化合物１と第１の溶媒とを混ぜ合わせて第２の混合物を得ること、
（ｄ）前記第２の混合物を加熱すること、
（ｅ）前記第２の混合物にＮ−ヘプタンを添加すること、
（ｆ）前記第２の混合物を冷却すること、及び
（ｇ）化合物１の結晶形１を単離すること、
を含み、
前記第１の溶媒は、酢酸エチル及びメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルから選択され、
化合物１の結晶形１は、５．９±０．２、７．７±０．２、１２．８±０．２、１５．３±０．２、１８．２±０．２、１９．３±０．２、２１．２±０．２、２３．６±０．２及び２５．８±０．２°２θにあるピークから選択された少なくとも５つのピークを有するＸＲＰＤディフラクトグラムを有する、方法。
【請求項３】
前記第１の溶媒が、酢酸エチルである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の溶媒が、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
前記混合物又は第２の混合物が、５０〜５３℃又は６５℃に加熱される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）へプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（「化合物１」）の結晶形１を調製するための方法であって、
（ａ）化合物１と少なくとも１つの第１の溶媒とを混ぜ合わせて混合物を得ること、
（ｂ）前記混合物を加熱すること、及び
（ｃ）前記少なくとも１つの第１の溶媒を蒸発させること、
を含み、
前記少なくとも１つの第１の溶媒が、トルエン、アセトン、酢酸エチル及びメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル／ジクロロメタンの９：１（ｖ／ｖ）混合物から選択され、
化合物１の結晶形１は、５．９±０．２、７．７±０．２、１２．８±０．２、１５．３±０．２、１８．２±０．２、１９．３±０．２、２１．２±０．２、２３．６±０．２及び２５．８±０．２°２θにあるピークから選択された少なくとも５つのピークを有するＸＲＰＤディフラクトグラムを有する、方法。
【請求項７】
前記少なくとも１つの第１の溶媒が、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル／ジクロロメタンの９：１（ｖ／ｖ）混合物である、請求項６に記載の方法。
【外国語明細書】
2018111715000001.pdf