(57)【要約】【課題】被分析物質を高感度で検出することが可能な分析用具及び分析方法を提供する。【解決手段】サンプル中に含まれ得る被分析物質直接又は間接的に捕捉する捕捉物質が固定化されている測定部を備え、前記サンプル、前記被分析物質と複合体を形成する酵素標識化物質、及び前記酵素標識化物質中の酵素と反応する酵素基質が少なくとも展開される展開層と、水分と接触することで発熱反応が生じる発熱性物質を含有し、前記発熱性物質が水分と接触することで発生した熱により少なくとも前記測定部を加熱する発熱部と、を備え、前記サンプル中の前記被分析物質の有無を検出する分析用具【選択図】図１
2018091679.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル中に含まれ得る被分析物質を直接又は間接的に捕捉する捕捉物質が固定化されている測定部を備え、前記サンプル、前記被分析物質と複合体を形成する酵素標識化物質、及び前記酵素標識化物質中の酵素と反応する酵素基質が少なくとも展開される展開層と、
水分と接触することで発熱反応が生じる発熱性物質を含有し、前記発熱性物質が水分と接触することで発生した熱により少なくとも前記測定部を加熱する発熱部と、
を備え、前記サンプル中の前記被分析物質の有無を検出する分析用具。
【請求項２】
前記発熱性物質が、塩化カルシウム、酸化カルシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、水酸化バリウム、塩化バリウム、塩化鉄（III)、硫酸銅及び炭酸ナトリウムからなる群より選択される少なくとも一つである請求項１に記載の分析用具。
【請求項３】
少なくとも前記測定部を覆うことにより前記発熱部にて生じた熱の放熱を抑制する放熱抑制部を更に備える請求項１又は請求項２に記載の分析用具。
【請求項４】
前記発熱部における単位面積当たりの前記発熱性物質の含有量は、５０ｍｇ／ｃｍ２〜１５０ｍｇ／ｃｍ２である請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の分析用具。
【請求項５】
サンプル、前記サンプル中に含まれ得る被分析物質と複合体を形成する酵素標識化物質、及び前記酵素標識化物質中の酵素と反応する酵素基質を、前記被分析物質を直接又は間接的に捕捉する捕捉物質が固定化されている測定部を備える展開層に少なくとも展開させるときに、水分と接触することで発熱反応が生じる発熱性物質を水分と接触させることにより熱を発生させて少なくとも前記測定部を加熱し、
前記サンプル中の前記被分析物質の有無を検出する分析方法。
【請求項６】
前記複合体は、前記被分析物質と、前記酵素標識化物質と、前記測定部に固定化されている前記捕捉物質に捕捉される標識物質を有する物質と、を含んで構成され、
前記標識物質を有する物質を前記展開層に展開させる、請求項５に記載の分析方法。
【請求項７】
前記標識物質はビオチンである、請求項６に記載の分析方法。
【請求項８】
前記被分析物質は抗原であり、
前記酵素標識化物質は酵素標識抗体であり、
前記標識物質を有する物質は標識抗体である、請求項６又は請求項７に記載の分析方法。
【請求項９】
前記捕捉物質はアビジン又はストレプトアビジンである、請求項５〜請求項８のいずれか１項に記載の分析方法。
【請求項１０】
前記複合体は、前記被分析物質と前記酵素標識化物質とを含んで構成され、
前記捕捉物質は前記被分析物質と結合する物質である、請求項５に記載の分析方法。
【請求項１１】
前記被分析物質は抗原であり、
前記酵素標識化物質は酵素標識抗体であり、
前記捕捉物質は抗体である、請求項１０に記載の分析方法。
【請求項１２】
前記酵素基質は、前記酵素標識化物質中の前記酵素と反応して発色又は発光が生じる基質であり、
前記測定部にて前記酵素基質と前記酵素標識化物質中の前記酵素とが反応して生じる発色又は発光の有無を検出することにより、前記サンプル中の前記被分析物質の有無を検出する請求項５〜請求項１１のいずれか１項に記載の分析方法。
【請求項１３】
前記酵素標識化物質中の酵素は、パーオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ又はβ−Ｄ−ガラクトシダーゼである請求項５〜請求項１２のいずれか１項に記載の分析方法。
【請求項１４】
前記酵素基質は、ＢＣＩＰ（5-Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate)又はその塩である請求項５〜請求項１３のいずれか１項に記載の分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分析用具及び分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、例えば、感染症の診断等において、細菌、ウイルス等の病原体の抗原を、免疫反応を利用して検出する検体分析用具が普及している。検体分析用具では、簡便かつ迅速に、定量分析、半定量分析、定性分析等が可能なことから、イムノクロマト法が用いられている。イムノクロマト法は、例えば、妊娠診断薬、感染症のインフルエンザウイルス検出等に応用されている。
【０００３】
例えば、酵素標識した抗体又は抗原を用いて検体中の抗原又は抗体を測定するイムノクロマト法（免疫クロマトグラフィーを用いた測定方法）及び検体分析用具が開示されている（例えば、特許文献１、２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許４４３７２１１号
【特許文献２】特許３１７７９６４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
イムノクロマト法の原理としては、例えば以下の通りである。まず、試験片（展開層）を構成するニトロセルロース膜に検出目的の抗原と結合する抗体をライン状に予め塗布しておき、抗原を含有する検体及び酵素標識抗体をニトロセルロース膜に展開させる。ニトロセルロース膜に展開される抗原及び酵素標識抗体は複合体を形成し、形成された複合体は抗原を介してライン上の抗体と結合することにより、酵素標識抗体を含む複合体がライン上に捕捉される。次に、酵素基質を含有する基質液を展開させることで、酵素基質と酵素標識抗体とが反応し、ラインに発色が出現する。基質液をニトロセルロース膜に通常約１０分〜２０分展開させると、ラインの発色は徐々に強くなる。
【０００６】
特許文献１、２に記載のイムノクロマト法は、例えば、感染症の抗原検出に応用されている。感染症では発症初期の抗原量が少ない状態により測定法の検出限界以下になることで偽陰性が発生し、患者の見逃しに繋がることがある。また、抗原量の少ない検査項目では感度が足りず、イムノクロマト法を応用できない項目もある。したがって、抗原等の被分析物質を高感度で検出することが可能な分析用具及び分析方法（イムノクロマト法）が望まれている。
【０００７】
本発明は、被分析物質を高感度で検出することが可能な分析用具及び分析方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上述した目的を達成するための具体的な手段は、以下の通りである。
＜１＞  本発明の一態様は、サンプル中に含まれ得る被分析物質を直接又は間接的に捕捉する捕捉物質が固定化されている測定部を備え、前記サンプル、前記被分析物質と複合体を形成する酵素標識化物質、及び前記酵素標識化物質中の酵素と反応する酵素基質が少なくとも展開される展開層と、水分と接触することで発熱反応が生じる発熱性物質を含有し、前記発熱性物質が水分と接触することで発生した熱により少なくとも前記測定部を加熱する発熱部と、を備え、前記サンプル中の前記被分析物質の有無を検出する分析用具である。
＜２＞  本発明の一態様は、前記発熱性物質が、塩化カルシウム、酸化カルシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、水酸化バリウム、塩化バリウム、塩化鉄（III)、硫酸銅及び炭酸ナトリウムからなる群より選択される少なくとも一つである＜１＞に記載の分析用具である。
＜３＞  本発明の一態様は、少なくとも前記測定部を覆うことにより前記発熱部にて生じた熱の放熱を抑制する放熱抑制部を更に備える＜１＞又は＜２＞に記載の分析用具である。
＜４＞  本発明の一態様は、前記発熱部における単位面積当たりの前記発熱性物質の含有量は、５０ｍｇ／ｃｍ２〜１５０ｍｇ／ｃｍ２である＜１＞〜＜３＞のいずれか１つに記載の分析用具である。
【０００９】
＜５＞  本発明の一態様は、サンプル、前記サンプル中に含まれ得る被分析物質と複合体を形成する酵素標識化物質、及び前記酵素標識化物質中の酵素と反応する酵素基質を、前記被分析物質を直接又は間接的に捕捉する捕捉物質が固定化されている測定部を備える展開層に少なくとも展開させるときに、水分と接触することで発熱反応が生じる発熱性物質を水分と接触させることにより熱を発生させて少なくとも前記測定部を加熱し、前記サンプル中の前記被分析物質の有無を検出する分析方法である。
＜６＞  本発明の一態様は、前記複合体は、前記被分析物質と、前記酵素標識化物質と、前記測定部に固定化されている前記捕捉物質に捕捉される標識物質を有する物質と、を含んで構成され、前記標識物質を有する物質を前記展開層に展開させる、＜５＞に記載の分析方法である。
＜７＞  本発明の一態様は、前記標識物質はビオチンである、＜６＞に記載の分析方法である。
＜８＞  本発明の一態様は、前記被分析物質は抗原であり、前記酵素標識化物質は酵素標識抗体であり、前記標識物質を有する物質は標識抗体である、＜６＞又は＜７＞に記載の分析方法である。
＜９＞  本発明の一態様は、前記捕捉物質はアビジン又はストレプトアビジンである、＜５＞〜＜８＞のいずれか１つに記載の分析方法である。
＜１０＞  本発明の一態様は、前記複合体は、前記被分析物質と前記酵素標識化物質とを含んで構成され、前記捕捉物質は前記被分析物質と結合する物質である、＜５＞に記載の分析方法である。
＜１１＞  本発明の一態様は、前記被分析物質は抗原であり、前記酵素標識化物質は酵素標識抗体であり、前記捕捉物質は抗体である、＜１０＞に記載の分析方法である。
＜１２＞  本発明の一態様は、前記酵素基質は、前記酵素標識化物質中の前記酵素と反応して発色又は発光が生じる基質であり、前記測定部にて前記酵素基質と前記酵素標識化物質中の前記酵素とが反応して生じる発色又は発光の有無を検出することにより、前記サンプル中の前記被分析物質の有無を検出する＜５＞〜＜１１＞のいずれか１つに記載の分析方法である。
＜１３＞  本発明の一態様は、前記酵素標識化物質中の酵素は、パーオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ又はβ−Ｄ−ガラクトシダーゼである＜５＞〜＜１２＞のいずれか１つに記載の分析方法である。
＜１４＞  本発明の一態様は、前記酵素基質は、ＢＣＩＰ（5-Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate)又はその塩である＜５＞〜＜１３＞のいずれか１つに記載の分析方法である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の一態様によれば、被分析物質を高感度で検出することが可能な分析用具及び分析方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】（ａ）は本発明の一態様の分析用具の断面図であり、（ｂ）は本発明の一態様の分析用具の上面図である。
【図２】実施例１及び比較例１におけるＣＲＰ抗原量とテストラインの反射率を示すグラフである。
【図３】実施例１及び比較例１における各時点でのニトロセルロース膜の表面温度を示すグラフである。
【図４】実施例２及び比較例２におけるＭＰＴ６４抗原量とテストラインの反射率との関係を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明の一態様の分析用具及び分析方法について図１を用いて説明する。図１は、本発明の一態様の分析用具の断面図であり、（ｂ）は本発明の一態様の分析用具の上面図である。
本明細書において、「〜」を用いて表される数値範囲は、「〜」の前後に記載される数値を下限値及び上限値として含む範囲を意味する。
【００１３】
〔分析用具〕
本態様の分析用具１０は、サンプル中に含まれ得る被分析物質を直接又は間接的に捕捉する捕捉物質が固定化されているテストライン１ａ（測定部）を備え、前記サンプル、前記被分析物質と複合体を形成する酵素標識化物質、及び前記酵素標識化物質中の酵素と反応する酵素基質が少なくとも展開される展開層１と、水分と接触することで発熱反応が生じる発熱性物質を含有し、前記発熱性物質が水分と接触することで発生した熱により少なくともテストライン１ａを加熱する発熱パッド４（発熱部）と、を備え、これにより、前記サンプル中の前記被分析物質の有無を検出するものである。また、分析用具１０は、図１に示すように、展開層１及び発熱パッド４以外に、吸収パッド２（吸収部）、支持基材３、サンプルパッド５（サンプル付与部）及び透明フィルム６を備えていてもよい。
【００１４】
本態様の分析用具１０では、サンプル、酵素標識化物質及び酵素基質が展開層１に少なくとも展開される。サンプル中に被分析物質が含まれる場合、展開層１のテストライン１ａに固定化された捕捉物質が被分析物質を直接又は間接的に捕捉することで複合体（少なくとも被分析物質と酵素標識化物質とを含んで構成される複合体）を捕捉する。捕捉された複合体における酵素標識化物質中の酵素と酵素基質との反応の有無を検出することにより、サンプル中の被分析物質の有無を検出することが可能である。ここで、分析用具１０は、少なくともテストライン１ａを加熱する発熱パッド４を備えており、サンプル、酵素標識化物質及び酵素基質を展開層１に展開させるとき、発熱パッド４に含有される発熱性物質が例えば空気中の水分と接触することで熱が発生する。発生した熱により、少なくともテストライン１ａが加熱されるため、抗原等の被分析物質と酵素標識抗体等の酵素標識化物質との反応性及び酵素標識化物質中の酵素と酵素基質との反応性の少なくとも一方を向上させることができ、その結果、被分析物質を高感度で検出することが可能となる。したがって、低濃度の被分析物質を検出することが可能となり、例えば、これまで検出が困難であった病原体の検出及びこれまで検出できなかった病原体の検出が可能となるため、感染症の発症初期で病原体を検出できることにより、早期の治療が可能となる。
【００１５】
さらに、本態様の分析用具１０では、水分との接触、例えば、空気中の水分との接触により熱を発生させる発熱性物質を含有する発熱パッド４を、少なくともテストライン１ａを加熱する熱源として用いている。そのため、熱源としてヒータ等の加熱手段を採用した場合と比較して、分析用具の構成を小型化及び簡略化することができる。また、発熱性物質を発熱パッド４に含有させ、発熱パッド４と展開層１とを別々に設けることにより、サンプル、酵素標識化物質及び酵素基質を展開層１に少なくとも展開させるとき、これらと発熱性物質との混在が抑制される。このため、抗原等の被分析物質と酵素標識抗体等の酵素標識化物質との反応が阻害されること、及び酵素標識化物質中の酵素と酵素基質との反応が阻害されることが抑制される。
【００１６】
以下、本態様で用いるサンプル、酵素標識化物質、酵素基質等、及び本態様の分析用具における各構成について説明する。
【００１７】
（サンプル）
分析用具で用いるサンプル（検体）としては、特に制限されず、例えば、生体試料、食品等が挙げられる。サンプルは、被分析物質を含み得るもの、例えば、被分析物質が存在するか否か検査が必要なものであってもよく、液状であってもよく、固体状であってもよい。また、サンプルを緩衝液等に溶解、懸濁、分散等させてもよい。生体試料としては、例えば、喀痰、鼻腔吸引液、鼻腔洗浄液、鼻腔ぬぐい液、鼻汁、咽頭ぬぐい液、含漱液、唾液、全血、血清、血漿、汗、尿、細胞、糞便等が挙げられる。食品としては、例えば、動物、植物等の食物、加工食品等が挙げられる。
【００１８】
（被分析物質）
被分析物質は、分析用具１０における分析対象物であり、後述の酵素標識化物質と複合体を形成し、かつ、テストライン１ａに固定化されている捕捉物質に直接又は間接的に捕捉されるものであれば特に制限されない。被分析物質としては、例えば、抗原が挙げられ、この場合、酵素標識化物質としては酵素標識抗体が挙げられる。
【００１９】
なお、被分析物質が捕捉物質に直接捕捉される構成としては、例えば、被分析物質が捕捉物質と結合する構成が挙げられる。また、被分析物質が捕捉物質に間接的に捕捉される構成としては、例えば、標識物質を有する物質を介して被分析物質が捕捉物質に捕捉される構成が挙げられる。被分析物質が捕捉物質に直接捕捉される構成では、複合体としては、例えば、被分析物質と酵素標識化物質とを含んで構成されるものが挙げられる。また、被分析物質が捕捉物質に間接的に捕捉される構成では、複合体としては、例えば、被分析物質と、酵素標識化物質と、標識物質を有する物質と、を含んで構成されるものが挙げられる。
【００２０】
被分析物質である抗原としては、特に制限されず、例えば、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、コロナウイルス、アストロウイルス、ノロウイルス、麻疹ウイルス、ロタウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ−１）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヘルペスウイルス、マイコプラズマ、梅毒トレポネーマ、クラミジア・トラコマチス、結核菌、大腸菌群、Ａ群溶連菌、Ｂ群溶連菌、肺炎球菌、ブドウ球菌、ＭＲＳＡ、レジオネラ、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７、ベロ毒素、サルモネラ、クロストリジウム・ディフィシル、ヘリコバクター・ピロリ、Ｃ反応性タンパク（ＣＲＰ）、ＨＢｓ抗原、ＨＢｓ抗体、ＨＢｃ抗原、ＨＢｃ抗体、ＨＢｅ抗原、ＨＢｅ抗体、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、トロポニンＴ、トロポニンＩ、ミオグロビン、Ｄ−ダイマー、便中ヘモグロビン、ヘモグロビンＡ１ｃ、ＩｇＥ抗体等の病原体抗原、抗体、癌マーカー、ホルモン等の生体成分、残留農薬、環境ホルモン、食品中のアレルギー物質等が挙げられる。
【００２１】
サンプルを緩衝液等に溶解、懸濁、分散等させてサンプル液としてもよく、サンプル液は、例えば、界面活性剤、抗菌剤、安定化剤等を含有していてもよい。緩衝液としては、特に制限されず、例えば、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等が挙げられる。緩衝液のｐＨは、特に制限されず、例えば、４〜１０の範囲であることが好ましく、６〜９の範囲であることがより好ましい。界面活性剤としては、特に制限されず、例えば、陰イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤等が挙げられる。抗菌剤としては、特に制限されず、例えば、アジ化ナトリウム、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン等が挙げられる。
【００２２】
（酵素標識化物質）
酵素標識化物質は、前述の被分析物質と複合体を形成し、かつ、好ましくは後述の参照部であるコントロールライン１ｂに固定化されている物質と結合するものであれば特に制限されない。酵素標識化物質としては、例えば、酵素標識した抗体である酵素標識抗体が挙げられ、この場合、被分析物質としては前述の抗原が挙げられる。酵素標識化物質が酵素標識抗体である場合、酵素標識抗体としては、例えば、前述の各種抗原等に対する抗体が挙げられ、抗原に応じて適宜設定できる。被分析物質が抗原であり、かつ、酵素標識化物質が酵素標識抗体である場合、抗原抗体反応により、抗原と酵素標識抗体とを含んで構成される複合体が形成される。
【００２３】
酵素標識抗体となる抗体としては、例えば、生体由来の抗体であってもよく、人工合成された抗体であってもよい。生体由来の抗体としては、例えば、免疫グロブリン（Ｉｇ）、抗体フラグメント、キメラ抗体等が挙げられる。免疫グロブリンとしては、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ等が挙げられる。抗体フラグメントとしては、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２等が挙げられる。キメラ抗体としては、例えば、ヒト化抗体等が挙げられる。抗体は、例えば、マウス、ウサギ、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ等の哺乳動物、ニワトリ等の鳥類、ヒト等の動物種由来のものでもよく、特に制限されない。また、抗体としては、例えば、動物種由来の血清から、従来公知の方法により作製してもよく、あるいは市販の各種抗体を利用してもよく、特に制限されない。抗体としては、例えば、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体のいずれを用いてもよい。人工合成された抗体としては、例えば、アフィボディー等が挙げられる。
【００２４】
酵素標識化物質中の酵素、好ましくは酵素標識抗体中の酵素としては、特に制限されず、例えば、パーオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ等が挙げられる。酵素標識抗体の調製方法は、特に制限されず、例えば、従来公知の方法を用いてもよい。
【００２５】
酵素標識化物質を緩衝液等に溶解、懸濁、分散等させた標識液としてもよく、標識液は、例えば、界面活性剤、抗菌剤、安定化剤等を含有していてもよい。緩衝液としては、特に制限されず、前述の緩衝液が挙げられる。
【００２６】
（捕捉物質）
捕捉物質は、前述の被分析物質、及び前述の被分析物質と前述の酵素標識化物質との複合体における被分析物質を直接又は間接的に捕捉する物質であり、展開層１におけるテストライン１ａに固定化されている。
【００２７】
捕捉物質としては、例えば、サンプル中に含まれ得る被分析物質が前述の抗原である場合、抗原と結合する抗体、アビジン、ストレプトアビジン等が挙げられる。抗原と結合する抗体としては、前述の各種抗原等に対して結合する抗体が挙げられ、例えば、前述の酵素標識抗体となる抗体として例示したものから適宜選択される。アビジン及びストレプトアビジンは、たんぱく質の一種であり、このとき、標識物質を有する物質としては、標識物質としてビオチンを有し、被分析物質と結合するビオチン標識物質が好ましい。被分析物質が抗原である場合、標識物質を有する物質としては、標識物質としてビオチンを有し、かつ抗原と結合するビオチン標識抗体であることが好ましい。
【００２８】
（標識物質を有する物質）
標識物質を有する物質は、測定部に固定化されている捕捉物質に捕捉される標識物質を含む物質であり、標識物質を介して捕捉物質に捕捉される。
【００２９】
標識物質を有する物質としては、例えば、サンプル中に含まれ得る被分析物質が前述の抗原である場合、抗原と結合する標識抗体が挙げられる。本態様の分析用具及び後述する本態様の分析方法において、標識物質を有する物質を用いる場合、複合体は、被分析物質と、酵素標識化物質と、標識物質を有する物質と、を含んで構成される。例えば、被分析物質が前述の抗原、酵素標識物質が前述の酵素標識抗体及び標識物質を有する物質が標識抗体の場合、抗原と酵素標識抗体とが結合し、かつ抗原と標識抗体とが結合することにより複合体が形成され、形成された複合体は標識物質を介して捕捉物質に捕捉される。
【００３０】
捕捉物質がアビジン、ストレプトアビジン等である場合、捕捉物質に捕捉される標識物質としては、アビジン、ストレプトアビジン等と高い親和性を有するビオチンが好ましい。
【００３１】
標識物質を有する物質を緩衝液等に溶解、懸濁、分散等させた標識液としてもよく、標識液は、例えば、界面活性剤、抗菌剤、安定化剤等を含有していてもよい。緩衝液としては、特に制限されず、前述の緩衝液が挙げられる。
【００３２】
（酵素基質）
酵素基質は、酵素標識化物質中の酵素と反応する基質であり、好ましくは、酵素標識化物質中の酵素と反応して発色又は発光が生じる基質である。後述するように、展開層１に酵素基質を展開させることにより、テストライン１ａに捕捉された複合体における酵素標識化物質中の酵素と酵素基質とが反応するため、その反応を検出することで被分析物質の検出が可能となる。このとき、酵素基質が酵素標識化物質中の酵素と反応して発色又は発光が生じる基質であれば、その反応により得られる発色又は発光を検出することにより、被分析物質の検出がより容易に可能となる。発色又は発光の検出は、テストライン１ａの目視により行ってもよく、テストライン１ａの吸光度、反射率等を測定して行ってもよい。
【００３３】
酵素基質は、酵素標識化物質中の酵素と反応する基質であれば特に制限されず、例えば、２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ）、３，３’，５，５’−テトラメチルベンチジン（ＴＭＢ）、ジアミノベンチジン（ＤＡＢ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸（ＢＣＩＰ）、４−メチルウムベリフェニル−β−Ｄ−ガラクトシド（４ＭＵＧ）、３−（２’−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−（３’’−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）フェニル−１，２−ジオキセタン（ＡＭＧＰＤ）、これらの塩（好ましくは金属塩）等が挙げられる。中でも視認性に優れる点から、ＢＣＩＰ又はその塩が好ましい。
【００３４】
酵素基質を緩衝液等に溶解、懸濁、分散等させた基質液としてもよく、基質液は、例えば、界面活性剤、抗菌剤、安定化剤等を含有していてもよい。緩衝液としては、特に制限されず、前述の緩衝液が挙げられる。
【００３５】
（展開層）
展開層１は、サンプル、酵素標識化物質、標識物質を有する物質、酵素基質等が展開される層であればよく、例えば、毛細管現象を奏する多孔質構造の層が挙げられる。展開層１の形成材料としては、例えば、多孔質膜、粒状物質、微粒子粉末等が挙げられる。多孔質膜としては、例えば、セルロース膜、酢酸セルロース、ニトロセルロース等のセルロース誘導体膜、ガラスフィルター、濾紙等が挙げられる。粒状物質又は微粒子粉末としては、例えば、ポリマービーズ、ガラスビーズ、二酸化チタン、セルロース、塩類、疎水化多糖類等が挙げられる。なお、展開層は、形状を安定的に保つ観点から、支持体上に多孔質膜、粒状物質、微粒子粉末等が形成されたものであってもよい。支持体の材質としては、例えば、後述する支持基材の材質と同様である。
【００３６】
（測定部）
展開層１は測定部としてテストライン１ａを備える。テストライン１ａには、被分析物質を直接又は間接的に捕捉する捕捉物質が固定化されており、固定化された捕捉物質が展開層１に展開させた前述の複合体における被分析物質を直接又は間接的に捕捉することにより、テストライン１ａに複合体が捕捉される。また、展開層１に酵素基質を展開させることにより、テストライン１ａに捕捉された複合体における酵素標識化物質中の酵素と、酵素基質と、が反応する。
【００３７】
測定部に捕捉物質、好ましくは前述の抗体、アビジン、ストレプトアビジン等を固定化する方法としては、例えば、塗布装置を用いて多孔質膜等の展開層に、前記捕捉物質、好ましくは前述の抗体、アビジン、ストレプトアビジン等を含む液を塗布し、乾燥機等により風乾させる方法等が挙げられる。
【００３８】
（発熱部）
発熱部は、水分と接触することで発熱反応が生じる発熱性物質を含有し、発熱性物質が水分と接触することで発生した熱により少なくとも測定部を加熱するものであればよく、例えば、発熱性物質を含有する発熱パッドが挙げられる。
【００３９】
本態様の分析用具において、少なくとも展開層における測定部を加熱できる位置であれば、発熱部の配置場所は特に限定されない。例えば、展開層１におけるテストライン１ａと対面する位置に発熱パッド４を配置することが好ましく、多孔質膜、粒状物質、微粒子粉末等とそれを支持する支持体とから構成される展開層１では、当該支持体と接触するように発熱パッド４を配置することが好ましい。
【００４０】
また、被分析物質と酵素標識化物質との反応性及び酵素標識化物質中の酵素と酵素基質との反応性の少なくとも一方をより向上させる点から、発熱部は展開層を加熱する構成が好ましく、発熱部は展開層及びサンプル付与部（例えば、サンプルパッド）を加熱する構成がより好ましい。
【００４１】
発熱性物質としては、水分と接触することで発熱反応が生じる物質であれば特に限定されず、例えば、塩化カルシウム、酸化カルシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、水酸化バリウム、塩化バリウム、塩化鉄(III)、硫酸銅、炭酸ナトリウム等が挙げられ、発熱性に優れる点から、塩化カルシウムが好ましい。また、発熱性物質としては、１種を単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。
【００４２】
発熱部における単位面積当たりの発熱性物質の含有量は、被分析物質と酵素標識化物質との反応性及び酵素標識化物質中の酵素と酵素基質との反応性の少なくとも一方を好適に向上させる観点から、５０ｍｇ／ｃｍ２〜１５０ｍｇ／ｃｍ２であることが好ましく、７０ｍｇ／ｃｍ２〜１３０ｍｇ／ｃｍ２であることがより好ましく、８０ｍｇ／ｃｍ２〜１２０ｍｇ／ｃｍ２であることがさらに好ましい。
【００４３】
（支持基材）
図１に示すように、展開層１は、その形状を安定に保つ観点及び展開層１と吸収パッド２とを接続させた状態で好適に保持する観点から、支持基材３上に形成されていてもよい。支持基材の材質としては、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリエステル、酢酸セルロース等が挙げられる。支持基材の形状としては、展開層を支持可能な形状であれば特に制限されず、例えば、フィルム状、シート状、板状等が挙げられる。支持基材３上への展開層１の形成は、例えば、両面テープ、接着剤等を用いて支持基材３上に展開層１を固定すればよい。
【００４４】
（吸収部）
また、図１に示すように、サンプル、酵素標識化物質、標識物質を有する物質、これらの複合体、酵素基質が展開層１に展開されることを促進する観点から、これらの展開方向におけるテストライン１ａの外側にて展開層１と接触する吸収パッド２（吸収部）が配置されていてもよい。また吸収パッド２は、少なくとも一部が支持基材３上に形成されていてもよい。また、例えば、両面テープ、接着剤を用いて、支持基材３上に吸収パッド２の少なくとも一部を固定してもよく、展開層１と接触させて吸収パッド２を固定してもよい。
【００４５】
吸収部の材質としては、特に制限されず、例えば、ポリエチレン、グラスファイバー、レーヨン、ナイロン、紙、セルロース等が挙げられる。吸収部の形状及び大きさは、特に制限されず、例えば、展開層の形状等に応じて適宜設定できる。
【００４６】
（参照部）
図１に示すように、分析用具１０は、展開層１にてコントロールライン１ｂ（参照部）を備えていてもよい。コントロールライン１ｂには、酵素標識化物質と結合する物質が固定化されており、展開層１に展開される酵素標識化物質がコントロールライン１ｂに固定化された物質と結合することにより、コントロールライン１ｂに酵素標識化物質が捕捉される。コントロールライン１ｂは、展開層１の展開方向において、一例として、テストライン１ａの外側に配置されており、テストライン１ａと吸収パッド２との間にコントロールライン１ｂが位置する。なお、コントロールラインは、例えば、テストラインの内側に位置していてもよい。
【００４７】
酵素標識化物質と結合する物質としては、酵素標識抗体と結合する抗体が挙げられる。酵素標識抗体と結合する抗体としては、一次抗体である酵素標識抗体に対する二次抗体が挙げられ、酵素標識抗体に応じて適宜選択される。
【００４８】
（サンプル付与部）
図１に示すように、分析用具１０は、サンプルが付与（好ましくは滴下）されるサンプルパッド５（サンプル付与部）を備えていてもよい。サンプルパッド５は、展開層１の長手方向において、吸収パッド２が展開層１と接触するように配置されている側とは反対側にて展開層１と接触するように配置されていればよい。また、サンプルパッド５は、展開層１の展開方向において、サンプルパッド５、テストライン１ａ、及び吸収パッド２がこの順番となるように配置されていることが好ましい。これにより、サンプルパッド５に付与されたサンプルは、サンプルパッド５から展開層１に展開される。サンプルパッド５は、サンプルの他、酵素標識化物質、標識物質を有する物質、酵素基質等が付与されてもよい。
【００４９】
また、分析用具１０は、サンプルパッド５と展開層１との間に、酵素標識化物質が予め付与され、酵素標識化物質を含有する標識化物質含有部を備えていてもよい。分析用具１０では、例えば、展開層１の展開方向において、サンプルパッド５、標識化物質含有部、テストライン１ａ、及び吸収パッド２がこの順になるように配置されていてもよい。例えば、標識化物質含有部としてはコンジュゲートパッドが挙げられる。また、サンプルパッド５に酵素標識化物質が予め付与されている構成、すなわち、サンプルパッド５が標識化物質含有部を兼ねていてもよい。
【００５０】
標識化物質含有部を分析用具１０に配置する代わりに、展開層１に酵素標識化物質が予め付与されていてもよい。このとき、酵素標識化物質は、サンプルが付与されるサンプルパッド５とテストライン１ａとの間の少なくとも一部に予め付与されていればよい。
【００５１】
また、分析用具の展開層が標識物質を有する物質が展開される層である場合、被分析物質は標識物質を有する物質を介して捕捉物質に捕捉され、かつ、捕捉物質に捕捉される複合体は、被分析物質と、酵素標識化物質と、標識物質を有する物質と、を含んで構成されることになる。この場合、分析用具は、サンプル付与部と展開層との間に標識物質を有する物質が予め付与され、標識物質を有する物質を含有する物質含有部を備えていてもよい。例えば、標識化物質含有部としてはコンジュゲートパッドが挙げられる。また、物質含有部を配置する代わりに、展開層に標識物質を有する物質が予め付与されていてもよい。
【００５２】
さらに、分析用具１０は、展開層１に酵素基質を供給する構成を有していてもよく、例えば、酵素基質を含有する酵素基質含有部及び前述の緩衝液等を含む展開液を酵素基質含有部に供給する展開液供給部を備えていてもよい。展開層１の展開方向において、展開液供給部、酵素基質含有部、サンプルパッド５、テストライン１ａ及び吸収パッド２がこの順に各構成が配置されていてもよい。これにより、酵素基質含有部に供給された展開液により、酵素基質がサンプルパッド５からテストライン１ａ側に展開され、テストライン１ａにて酵素標識化物質中の酵素と酵素基質との反応を好適に検出することができる。
【００５３】
（放熱抑制部）
図１に示すように、分析用具１０は、少なくともテストライン１ａを覆うことにより発熱パッド４にて生じた熱の放熱を抑制する透明フィルム６（放熱抑制部）を備えていてもよい。透明フィルム６は、発熱パッド４にて生じた熱の放熱をより抑制する点から、発熱パッド４と対面し、かつ展開層１を覆うように配置されていることが好ましい。透明フィルム６は、展開層１を保護する保護フィルムとしても機能しうる。
【００５４】
放熱抑制部の材質としては、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエステル、ポリ塩化ビニル、ポリアミド、ポリカーボネート、酢酸セルロース等が挙げられる。
【００５５】
〔分析方法〕
以下、本態様の分析方法について説明する。本態様の分析方法は、サンプル、前記サンプル中に含まれ得る被分析物質と複合体を形成する酵素標識化物質、及び前記酵素標識化物質中の酵素と反応する酵素基質を、前記被分析物質を直接又は間接的に捕捉する捕捉物質が固定化されている測定部を備える展開層に少なくとも展開させるときに、水分と接触することで発熱反応が生じる発熱性物質を水分と接触させることにより熱を発生させて少なくとも前記測定部を加熱し、前記サンプル中の前記被分析物質の有無を検出する方法である。
【００５６】
本態様の分析方法では、サンプル、酵素標識化物質及び酵素基質を展開層に少なくとも展開させるとき、発熱性物質が例えば空気中の水分と接触することで熱が発生する。発生した熱により、少なくとも展開層の測定部が加熱されるため、抗原等の被分析物質と酵素標識抗体等の酵素標識化物質との反応性及び酵素標識化物質中の酵素と酵素基質との反応性の少なくとも一方を向上させることができ、その結果、被分析物質を高感度で検出することが可能となる。また、本態様の分析方法では、例えば、発熱性物質を空気中の水分と接触させることで熱が発生するため、別途水分を発熱性物質に供給しなくてもよい。
【００５７】
＜分析方法の具体例１＞
以下では、前述の本態様の分析用具１０を用いた分析方法の具体例１について説明する。また、被分析物質が抗原、酵素標識化物質が酵素標識抗体、及び被分析物質を直接又は間接的に捕捉する捕捉物質が抗原と結合する抗体であり、サンプル中に抗原が含まれている場合について説明する。
【００５８】
まず、サンプル中の抗原、及び抗原と複合体を形成する酵素標識抗体を、サンプルパッド５に付与し、サンプルパッド５から、抗原と結合する抗体が固定化されているテストライン１ａを備える展開層１に抗原及び酵素標識抗体を展開させる。例えば、抗原を含有するサンプル液、及び酵素標識抗体を含有する標識抗体液（酵素標識液）をこの順番でサンプルパッド５に付与し、抗原及び酵素標識抗体を展開層１に展開させてもよい。サンプル液及び標識抗体液をサンプルパッド５に付与する方法としては、例えば、サンプル液及び標識抗体液をサンプルパッド５に滴下、塗布等すればよい。サンプルパッド５に付与されたサンプル液及び標識抗体液は、毛細管現象により、サンプルパッド５からテストライン１ａ及び吸収パッド２側に展開されるため、抗原及び酵素標識抗体もテストライン１ａ及び吸収パッド２側に展開される。
【００５９】
抗原及び酵素標識抗体は複合体を形成し、形成された複合体も展開層１にて吸収パッド２が配置されている側に展開される。展開層１に展開される抗原は、テストライン１ａに固定化された抗体と結合する。そのため、展開層１に展開される抗原は、テストライン１ａに固定化された抗体に捕捉され、展開層１に展開される複合体は、複合体における抗原を介してテストライン１ａに固定化された抗体に捕捉される。また、展開層１に展開される酵素標識抗体は、テストライン１ａに捕捉された抗原と複合体を形成し、その結果、複合体がテストライン１ａに固定化された抗体に捕捉されることになってもよい。
【００６０】
ここで、発熱性物質を含有する発熱パッド４を空気中に曝すことにより、発熱性物質が空気中の水分と接触することで熱が発生する。発生した熱により、少なくとも展開層１のテストライン１ａ、好ましくは展開層１が加熱されるため、抗原と酵素標識抗体との反応性が向上しうる。その結果、抗原を高感度で検出することが可能になると考えられる。
【００６１】
なお、抗原を含有するサンプル液、及び酵素標識抗体を含有する標識抗体液を、サンプルパッド５に別々に付与する構成の代わりに、抗原を含有するサンプルと、酵素標識抗体とを混合した混合液を、サンプルパッド５に付与する構成であってもよい。
【００６２】
また、酵素標識抗体を含有する標識抗体液をサンプルパッド５に付与する代わりに、サンプルパッド５に酵素標識抗体が予め付与されていてもよい。これにより、抗原を含有するサンプル液をサンプルパッド５に付与することで展開される抗原と、予め付与された酵素標識抗体との複合体がサンプルパッド５にて形成され、形成された複合体がサンプルパッド５から展開層１に展開される。
【００６３】
抗原を含有するサンプル及び酵素標識抗体をサンプルパッド５に付与し、サンプル及び酵素標識抗体をサンプルパッド５から展開層１に展開させた後、酵素標識抗体中の酵素と反応する酵素基質をサンプルパッド５に付与することが好ましい。例えば、酵素基質を含有する基質液をサンプルパッド５に付与し、基質液をサンプルパッド５から展開層１のテストライン１ａ及び吸収パッド２側に展開させればよい。
【００６４】
展開層１に展開される酵素基質は、テストライン１ａに捕捉された複合体における酵素標識抗体中の酵素と反応する。このとき、酵素標識抗体中の酵素と酵素基質との反応を検出することにより、サンプル中の抗原の検出が可能となる。酵素標識抗体中の酵素と反応して発色又は発光が生じる酵素基質を用いた場合、酵素標識抗体中の酵素と当該酵素基質との反応により得られる発色又は発光を検出することにより、サンプル中の抗原の検出がより容易に可能となる。
【００６５】
ここで、発熱パッド４は、発熱性物質が空気中の水分と接触することで熱を発生しており、発生した熱により、少なくとも展開層１のテストライン１ａ、好ましくは展開層１が加熱される。このため、酵素標識抗体中の酵素と酵素基質との反応性が向上しうる。その結果、抗原を高感度で検出することが可能になると考えられる。
【００６６】
＜分析方法の具体例２＞
以下では、前述の本態様の分析用具１０を用いた分析方法の具体例２について説明するまた、被分析物質が抗原、酵素標識化物質が酵素標識抗体、標識物質を有する物質がビオチン標識抗体、及び捕捉物質がアビジン又はストレプトアビジン（以下、「アビジン等」とも称する。）であり、サンプル中に抗原が含まれている場合について説明する。なお、前述の分析方法の具体例１と共通する事項、例えば、酵素基質を展開層１に展開させる方法等についてはその詳細な説明を省略する。
【００６７】
まず、サンプル中の抗原、酵素標識抗体、及びビオチン標識抗体を、サンプルパッド５に付与し、サンプルパッド５から、ビオチンと結合するアビジン等が固定化されているテストライン１ａを備える展開層１に抗原、酵素標識抗体、及びビオチン標識抗体を展開させる。例えば、ビオチン標識抗体を含有するビオチン標識抗体液、抗原を含有するサンプル液、及び酵素標識抗体を含有する標識抗体液をこの順番でサンプルパッド５に付与し、ビオチン標識抗体、抗原及び酵素標識抗体を展開層１に展開させてもよい。ビオチン標識抗体液をサンプルパッド５に付与する方法としては、前述の分析方法の具体例１におけるサンプル液をサンプルパッド５に付与する方法と同様である。
【００６８】
抗原、酵素標識抗体及びビオチン標識抗体は複合体を形成し、形成された複合体も吸収パッド２が配置されている側に展開される。展開層１に展開されるビオチン標識抗体は、ビオチンを介してテストライン１ａに固定化されたアビジン等と結合する。そのため、展開層１に展開されるビオチン標識抗体は、テストライン１ａに固定化されたアビジン等に捕捉され、展開層１に展開される複合体は、複合体におけるビオチン標識抗体を介してテストライン１ａに固定化されたアビジン等に捕捉される。また、展開層１に展開される抗原はテストライン１ａに捕捉されたビオチン標識抗体と結合し、かつ、展開層１に展開される酵素標識抗体はテストライン１ａに間接的に捕捉された抗原と結合することにより複合体を形成し、その結果、複合体がテストライン１ａに固定化されたアビジン等に捕捉されることになってもよい。
【００６９】
なお、ビオチン標識抗体を含有するビオチン標識抗体液、抗原を含有するサンプル液、及び酵素標識抗体を含有する標識抗体液を、展開層１に別々に付与する構成の代わりに、ビオチン標識抗体と、抗原を含有するサンプルと、酵素標識抗体とを混合した混合液を、サンプルパッド５に付与する構成であってもよい。
【００７０】
また、ビオチン標識抗体を含有するビオチン標識抗体液及び酵素標識抗体を含有する標識抗体液をサンプルパッド５に付与する代わりに、サンプルパッド５にビオチン標識抗体及び酵素標識抗体が予め付与されていてもよい。これにより、抗原を含有するサンプル液をサンプルパッド５に付与することで展開される抗原と、予め付与されたビオチン標識抗体及び酵素標識抗体と、の複合体がサンプルパッド５にて形成され、形成された複合体がサンプルパッド５から展開層１に展開される。
【００７１】
ビオチン標識抗体、抗原を含有するサンプル及び酵素標識抗体をサンプルパッド５に付与し、ビオチン標識抗体、サンプル及び酵素標識抗体をサンプルパッド５から展開層１に展開させた後、酵素標識抗体中の酵素と反応する酵素基質をサンプルパッド５に付与することが好ましい。例えば、酵素基質を含有する基質液をサンプルパッド５に付与し、基質液をサンプルパッド５から展開層１のテストライン１ａ及び吸収パッド２側に展開させればよい。
【００７２】
展開層１に展開される酵素基質は、テストライン１ａに捕捉された複合体における酵素標識抗体中の酵素と反応する。このとき、酵素標識抗体中の酵素と酵素基質との反応を検出することにより、サンプル中の抗原の検出が可能となる。
【００７３】
前述の本態様の分析用具１０を用いた分析方法の具体例１、２について説明したが、本発明はこれに限定されない。
【実施例】
【００７４】
次に、本発明の一態様を以下の実施例に基づき説明するが、本発明は実施例に限定されるものではない。
【００７５】
〔実施例１〕
まず、テストラインとして抗ＣＲＰポリクローナル抗体（ＤＡＫＯ社製）、及びコントロールラインとして抗マウスＩｇＧポリクローナル抗体（イムノプローブ社製）をライン状に塗布したニトロセルロース膜を準備した。コントロールライン側にて支持基材を介して吸収パッド（ＧＥヘルスケア・ジャパン社製  ＣＦ６）とニトロセルロース膜とを接続させ、テストライン側にてサンプルパッド（日本ポール社製  Glass fiber filter8964）とニトロセルロース膜とを接続させた。さらに、ＰＥＴフィルムで裏打ちされたニトロセルロース膜の裏面に発熱パッドを接触させ、分析用具を作製した。
【００７６】
実施例１にて用いる各種反応試薬は以下の通りである。
サンプル液：ＣＲＰ抗原  ０ｎｇ／ｍＬ、３ｎｇ／ｍＬ（ＢＳＡ１質量％含有ＰＢＳ、ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン、ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水）Ｃａｐｒｉｃｏｒｎ社製  C-reactive protein antigen
ＡＬＰ（アルカリホスファターゼ）標識抗ＣＲＰモノクローナル抗体：イムノプローブ社製ＣＲＰマウスモノクローナル抗体と同仁化学研究所製Alkaline Phosphatase Labeling Kit-SHとを用いて調製を行った。調製した酵素標識抗体は以下の希釈液で希釈し、標識抗体液とした。
希釈液：５０ｍＭ  Tris-HCl（ｐＨ７．４)、０．９質量％  NaCl、０．０５質量％  ＢＳＡ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．５ｍＭ  ＺｎＣｌ２
ＢＣＩＰ（酵素基質）：5-Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate disodium salt（Ｂｉｏ Ｖｅｃｔｒａ社製）が１ｍｇ／ｍＬになるように以下の希釈液で希釈し、基質液とした。
希釈液：１００ｍＭ  CAPSO-NaOH（ｐＨ１０．３）、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．００５質量％  Triton X-100
発熱パッド：５０質量％塩化カルシウム水溶液をセルロースパッドPALL#165（２０ｍｍ×４ｍｍ）に１６０μＬ含浸させた後、セルロースパッドを乾燥機にて７０℃で２時間乾燥させた。その後、使用するまで乾燥剤（モレキュラーシーブ）の入ったアルミ袋で密閉して保管した。なお、セルロースパッドは計算上８０ｍｇの塩化カルシウムを含んでおり、発熱パッドにおける単位面積当たりの塩化カルシウムの含有量は、１００ｍｇ／ｃｍ２である。
【００７７】
実施例１での反応手順は以下の通りである。
（１）まず、サンプルパッドに１００μＬのサンプル液を滴下し、１０分間サンプル液を展開させた。
（２）次に、サンプルパッドに１００μＬの標識抗体液を滴下し、１０分間標識抗体液を展開させた。
（３）次に、サンプルパッドに１００μＬの基質液を滴下し、１０分間基質液を展開させた。
（４）スポットケムＩＬ（ＳＬ−４７２０、アークレイ社製）を用いてテストラインの反射率を測定した。
結果を表１及び図２に示す。
【００７８】
また、サンプル液滴下前（発熱パッドが水分に接触する前、図３中の「測定前」）、サンプル液展開後（前述の（１）終了後、図３中の「サンプル」）、標識抗体液展開後（前述の（２）終了後、図３中の「標識抗体」）及び基質液展開後（前述の（３）終了後、図３中の「基質液」）において、ニトロセルロース膜の発熱パッドと接触している箇所における表面温度をそれぞれ測定した。
結果を表２及び図３に示す。
【００７９】
【表１】
2018091679.tif 000003
【００８０】
【表２】
2018091679.tif 000004
【００８１】
〔比較例１〕
ニトロセルロース膜の裏面に発熱パッドを設けていない点以外は、実施例１と同様にして分析用具を作製した。また、分析用具以外は実施例１と同様にして、テストラインの反射率を測定した。また、サンプル液滴下前（図３中の「測定前」）、サンプル液展開後（前述の（１）終了後、図３中の「サンプル」）、標識抗体液展開後（前述の（２）終了後、図３中の「標識抗体」）及び基質液展開後（前述の（３）終了後、図３中の「基質液」）において、ニトロセルロース膜における表面温度をそれぞれ測定した。
結果を表１、２及び図２、３に示す。
【００８２】
実施例１及び比較例１では、ＣＲＰ抗原が０ｎｇ／ｍＬのサンプル液を用いてテストラインの反射率を測定したとき、１００％近い反射率を示した。一方、ＣＲＰ抗原が３ｎｇ／ｍＬのサンプル液を用いてテストラインの反射率を測定したとき、実施例１では比較例１よりも低い反射率を示し、より濃く発色していることが示された。また、実施例１ではニトロセルロース膜の表面温度が比較例１よりも約６℃高かった。したがって、実施例１では、発熱パッドにより反応温度が上昇したため反応性が向上し、より高感度で被分析物質であるＣＲＰ抗原を検出できたことが示された。
【００８３】
〔実施例２〕
テストラインに抗ＭＰＴ６４マウスモノクローナル抗体（ＢＭＲＩ社製）、及びコントロールラインに抗マウスＩｇＧポリクローナル抗体（イムノプローブ社製）をライン状に塗布したニトロセルロース膜を準備した。そして、実施例１と同様にして分析用具を作製した。
【００８４】
実施例２にて用いる各種反応試薬は以下の通りである。
サンプル液：ＭＰＴ６４抗原  ０ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ（ＢＳＡ１質量％含有ＰＢＳ）ＢＭＲＩ社製リコンビナント
ＡＬＰ標識抗ＭＰＴ６４モノクローナル抗体：ＢＭＲＩ社製抗ＭＰＴ６４モノクローナル抗体と同仁化学研究所製Alkaline Phosphatase Labeling Kit-SHを用いて調製を行った。調製した酵素標識抗体は以下の希釈液で希釈し、標識抗体液とした。
希釈液：  ５０ｍＭ  Tris-HCl（ｐＨ７．４）、０．９質量％  NaCl、０．０５質量％  ＢＳＡ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．５ｍＭ  ＺｎＣｌ２
ＢＣＩＰ（酵素基質）：5-Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate disodium salt（Ｂｉｏ Ｖｅｃｔｒａ社製）が１ｍｇ／ｍＬになるように以下の希釈液で希釈し、基質液とした。
希釈液：１００ｍＭ  CAPSO-NaOH（ｐＨ１０．３）、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．００５質量％  Triton X-100
発熱パッド：実施例１と同様
【００８５】
実施例２での反応手順は、前述の実施例１と同様である。
結果を表３及び図４に示す。
【００８６】
【表３】
2018091679.tif 000005
【００８７】
〔比較例２〕
ニトロセルロース膜の裏面に発熱パッドを設けていない点以外は、実施例２と同様にして分析用具を作製した。また、分析用具以外は実施例２と同様にして、テストラインの反射率を測定した。
結果を表３及び図４に示す。
【００８８】
実施例２及び比較例２では、ＭＰＴ６４抗原が０ｎｇ／ｍＬのサンプル液を用いてテストラインの反射率を測定したとき、１００％近い反射率を示した。一方、ＭＰＴ６４抗原が１ｎｇ／ｍＬのサンプル液を用いてテストラインの反射率を測定したとき、実施例２では比較例２よりも低い反射率を示し、より濃く発色していることが示された。したがって、実施例２では、発熱パッドにより反応温度が上昇したため反応性が向上し、より高感度で被分析物質であるＭＰＴ６４抗原を検出できたことが示された。
【符号の説明】
【００８９】
１  展開層
１ａ  テストライン（測定部）
１ｂ  コントロールライン（参照部）
２  吸収パッド（吸収部）
３  支持基材
４  発熱パッド（発熱部）
５  サンプルパッド（サンプル付与部）
６  透明フィルム（放熱抑制部）
１０  分析用具
【図１】
2018091679.tif 000006
【図２】
2018091679.tif 000007
【図３】
2018091679.tif 000008
【図４】
2018091679.tif 000009