(57)【要約】      （修正有）【課題】アセトアルデヒド及びホルムアルデヒドが共存している場合においても、アセトアルデヒドのみを正確に検出するための装置の提供。【解決手段】第１の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素を含む第１の溶液；第２の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びアセトアルデヒドに作用する脱水素酵素を含む第２の溶液；及び第１の溶液と第２の溶液との間に配置された半透膜；を含み、アセトアルデヒドの検出に使用するための装置。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アセトアルデヒドの検出に使用するための装置であって、
第１の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素を含む第１の溶液；
第２の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びアセトアルデヒドに作用する脱水素酵素を含む第２の溶液；及び
第１の溶液と第２の溶液との間に配置された半透膜；
を含み、
第１の溶液、第２の溶液及び半透膜が、被検ガスが第１の溶液を通過した後に半透膜を介して第２の溶液と接触するように、配置されており、
半透膜が、
少なくともアセトアルデヒドを通過させ、
前記の第１の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、ホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素、第２の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びアセトアルデヒドに作用する脱水素酵素を通過させず、
ホルムアルデヒドと第１の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドとホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素との反応により生じる第１の還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、並びにアセトアルデヒドと第２の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドとアセトアルデヒドに作用する脱水素酵素との反応により生じる第２の還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを通過させない膜である、
アセトアルデヒドの検出に使用するための装置。
【請求項２】
アセトアルデヒドの検出方法であって、
被検ガスを、第１の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素を含む第１の溶液と接触させる第１の接触工程；
第１の接触工程で得られた溶液の吸光度を測定する第１の測定工程；
被検ガスを、第２の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、並びにアセトアルデヒド及びホルムアルデヒドに作用する脱水素酵素を含む第２の溶液と接触させる第２の接触工程；
第２の接触工程で得られた溶液の吸光度を測定する第２の測定工程；
第１の測定工程で測定した吸光度と第２の測定工程で測定した吸光度との差を算出して、アセトアルデヒドに起因する吸光度を得る算出工程；及び
アセトアルデヒドの量と吸光度との関係を示す検量線に基づき、算出工程で得た吸光度に対応するアセトアルデヒドの量を決定する決定工程；
を含む、アセトアルデヒドの検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アセトアルデヒドの検出に使用するための装置及びアセトアルデヒドの検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アセトアルデヒドは、眩暈、吐気、頭痛等の症状を引き起こすシックハウス症候群の原因物質として知られている。そのため、環境中のアセトアルデヒドを検出する方法が必要とされている。
【０００３】
アセトアルデヒドと同様に人体に悪影響を与える物質としてホルムアルデヒドが知られている。特許文献１は、特にホルムアルデヒドを検出するためのパッシブ型放散フラックスサンプラを開示している。具体的には、パッシブ型放散フラックスサンプラは、発色剤としてのｐ−ヨードニトロテトラゾリュウムバイオレット並びに反応触媒としてのデヒドロゲナーゼ及びジアホラーゼを担持させた紙製基材シートを含んでいる。紙製基材シートにホルムアルデヒドが接触すると、デヒドロゲナーゼの作用により蟻酸及びニコチンアミドアデニンジヌクレオチドが生成し、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドがｐ−ヨードニトロテトラゾリュウムバイオレット及びジアホラーゼと反応することにより発色する。発色の程度に基づき、ホルムアルデヒドの量を決定することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００６−２０８４０５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特許文献１に記載されているような方法によってアセトアルデヒドを検出しようとすると、デヒドロゲナーゼがアセトアルデヒドのみならずホルムアルデヒドにも作用してしまうため、アセトアルデヒドのみを検出することは困難である。
【０００６】
そのため、本発明は、アセトアルデヒド及びホルムアルデヒドが共存している場合においても、アセトアルデヒドのみを正確に検出するための装置及び方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は、被検ガスを、ホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素と接触させてホルムアルデヒドを分解した後に、アセトアルデヒドに作用する脱水素酵素と接触させることにより、アセトアルデヒドのみを正確に検出できることを見出した。例えば、本発明として以下の実施形態を挙げることができる。
【０００８】
［１−１］アセトアルデヒドの検出に使用するための装置であって、
第１の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素を含む第１の溶液；
第２の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びアセトアルデヒドに作用する脱水素酵素を含む第２の溶液；及び
第１の溶液と第２の溶液との間に配置された半透膜；
を含み、
第１の溶液、第２の溶液及び半透膜が、被検ガスが第１の溶液を通過した後に半透膜を介して第２の溶液と接触するように、配置されており、
半透膜が、
少なくともアセトアルデヒドを通過させ、
前記の第１の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、ホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素、第２の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びアセトアルデヒドに作用する脱水素酵素を通過させず、
ホルムアルデヒドと第１の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドとホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素との反応により生じる第１の還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、並びにアセトアルデヒドと第２の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドとアセトアルデヒドに作用する脱水素酵素との反応により生じる第２の還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを通過させない膜である、
アセトアルデヒドの検出に使用するための装置。
【０００９】
［１−２］アセトアルデヒドの検出方法であって、
被検ガスを、第１の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素を含む第１の溶液と接触させる第１の接触工程；
第１の接触工程を経た被検ガスを、第２の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びアセトアルデヒドに作用する脱水素酵素を含む第２の溶液と接触させる第２の接触工程；
第２の接触工程で得られた溶液の吸光度を測定する測定工程；及び
アセトアルデヒドの量と吸光度との関係を示す検量線に基づき、測定工程で測定された吸光度に対応するアセトアルデヒドの量を決定する決定工程；
を含む、アセトアルデヒドの検出方法。
【００１０】
［１−３］アセトアルデヒドの検出方法であって、
被検ガスを、第１の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素を含む第１の溶液と接触させる第１の接触工程；
第１の接触工程を経た被検ガスを、第２の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、アセトアルデヒドに作用する脱水素酵素、２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロリド及びジアホラーゼを含む第２の溶液と接触させる第２の接触工程；
第２の接触工程で得られた溶液の色を観察する観察工程；及び
アセトアルデヒドの量と色との関係を示すカラーチャートに基づき、観察工程で観察された色に対応するアセトアルデヒドの量を決定する決定工程；
を含む、アセトアルデヒドの検出方法。
【００１１】
また、本発明者等は、被検ガスを、ホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素と接触させてホルムアルデヒドのみを分解した場合と、被検ガスを、アセトアルデヒド及びホルムアルデヒドに作用する脱水素酵素と接触させてアセトアルデヒド及びホルムアルデヒドを分解した場合との差に基づいて、アセトアルデヒドのみを正確に検出できることを見出した。例えば、本発明として以下の実施形態を挙げることができる。
【００１２】
［２］アセトアルデヒドの検出方法であって、
被検ガスを、第１の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、及びホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素を含む第１の溶液と接触させる第１の接触工程；
第１の接触工程で得られた溶液の吸光度を測定する第１の測定工程；
被検ガスを、第２の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、並びにアセトアルデヒド及びホルムアルデヒドに作用する脱水素酵素を含む第２の溶液と接触させる第２の接触工程；
第２の接触工程で得られた溶液の吸光度を測定する第２の測定工程；
第１の測定工程で測定した吸光度と第２の測定工程で測定した吸光度との差を算出して、アセトアルデヒドに起因する吸光度を得る算出工程；及び
アセトアルデヒドの量と吸光度との関係を示す検量線に基づき、算出工程で得た吸光度に対応するアセトアルデヒドの量を決定する決定工程；
を含む、アセトアルデヒドの検出方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、アセトアルデヒド及びホルムアルデヒドが共存している場合においても、アセトアルデヒドのみを正確に検出することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】アセトアルデヒドの検出に使用するための装置に含まれる検出部の断面図の一例を示す。
【図２】アセトアルデヒドの濃度と吸光度との関係を表す検量線を示す。
【図３】ホルムアルデヒド又はアセトアルデヒドの濃度と吸光度との関係を表す図を示す。
【図４】アセトアルデヒドの濃度と吸光度との関係を表す検量線を示す。
【図５】反応時間と吸光度との関係を表す図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
＜アセトアルデヒドの検出に使用するための装置＞
本発明の一実施形態は、第１の溶液、第２の溶液、及び第１の溶液と第２の溶液との間に配置された半透膜を含む、アセトアルデヒドの検出に使用するための装置に関する。
【００１６】
第１の溶液は、第１の酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、及びホルムアルデヒドに選択的に作用する脱水素酵素（以下「ホルムアルデヒド選択的脱水素酵素」と称する。）を含む。第１の溶液の溶媒としては、例えば水等を挙げることができる。
【００１７】
本明細書において「ホルムアルデヒド選択的脱水素酵素」とは、ホルムアルデヒド及びアセトアルデヒドが共存している場合に、ホルムアルデヒドと優先的に反応する酵素を意味する。例えば、２５℃の温度条件下で第１の溶液中において、ホルムアルデヒドとの反応速度が、アセトアルデヒドとの反応速度の１０倍以上、２５倍以上、５０倍以上、７５倍以上、１００倍以上等である酵素を使用することが好ましい。具体的なホルムアルデヒド選択的脱水素酵素の一例としては、ナカライテスク株式会社製のFormaldehyde Dehydrogenaseを挙げることができる。
【００１８】
第２の溶液は、第２のＮＡＤ、及びアセトアルデヒドに作用する脱水素酵素（以下「アセトアルデヒド脱水素酵素」と称する。）を含む。第２の溶液は、２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロリド（ＩＮＴ）及びジアホラーゼを更に含んでいてもよい。第２の溶液の溶媒としては、例えば水等を挙げることができる。
【００１９】
本明細書において「アセトアルデヒド脱水素酵素」とは、アセトアルデヒドと反応する酵素を意味するが、ホルムアルデヒド及びアセトアルデヒドが共存している場合には、アセトアルデヒドのみならずホルムアルデヒドと反応する酵素であってもよい。具体的なアセトアルデヒド脱水素酵素の一例としては、シグマアルドリッチジャパン合同会社製のAcetaldehyde Dehydrogenaseを挙げることができる。
【００２０】
半透膜は、少なくともアセトアルデヒドを通過させるが、第１の溶液に含まれる第１のＮＡＤ及びホルムアルデヒド選択的脱水素酵素、並びに第２の溶液に含まれる第２のＮＡＤ及びアセトアルデヒド脱水素酵素を通過させず、また、ホルムアルデヒドと第１のＮＡＤとホルムアルデヒド選択的脱水素酵素との反応により生じる第１の還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、並びにアセトアルデヒドと第２のＮＡＤとアセトアルデヒド脱水素酵素との反応により生じる第２のＮＡＤＨを通過させない膜である。半透膜がホルムアルデヒドを通過させないことが、アセトアルデヒドの測定精度を高めるために好ましいが、ホルムアルデヒドを通過させる膜であっても、第１の溶液中で十分にホルムアルデヒドを分解できれば使用可能である。
【００２１】
具体的な半透膜の一例としては、スペクトラムラボラトリーズ株式会社製のMicro Float-A-lyzerを挙げることができる。
【００２２】
第１の溶液、第２の溶液及び半透膜は、被検ガスが第１の溶液を通過した後に半透膜を介して第２の溶液と接触するように、装置内に配置されている。このように配置することにより、被検ガスは最初に第１の溶液と接触する。第１の溶液中において、ホルムアルデヒドと第１のＮＡＤとホルムアルデヒド選択的脱水素酵素とが反応し、ホルムアルデヒドが分解され、第１のＮＡＤＨが生じる。その後、被検ガスは半透膜を介して第２の溶液と接触する。第２の溶液中において、アセトアルデヒドと第２のＮＡＤとアセトアルデヒド脱水素酵素とが反応し、アセトアルデヒドが分解され、第２のＮＡＤＨが生じる。
【００２３】
例えば、アセトアルデヒドの量は、第２の溶液の吸光度を測定することにより決定することができる。具体的には、アセトアルデヒドの量と吸光度との関係を示す検量線を予め作成しておくことにより、測定した吸光度からアセトアルデヒドの量を決定することができる。吸光度は４９０ｎｍの波長を有する可視光を使用して測定することが好ましい。
【００２４】
また、第２の溶液中において、第２のＮＡＤＨとＩＮＴとジアホラーゼとを反応させると発色するが、その第２の溶液の吸光度を測定してアルデヒドの量を決定してもよい。また、アセトアルデヒドの量は、発色した第２の溶液の色を目視観察することにより決定することもできる。具体的には、アセトアルデヒドの量と色との関係を示すカラーチャートを予め作成しておくことにより、目視観察した色からアセトアルデヒドの量を決定することができる。
【００２５】
本実施形態に係る装置では、半透膜が第１の溶液及び第２の溶液の成分並びに第１のＮＡＤＨ及び第２のＮＡＤＨを通過させないため、第１の溶液中においてアセトアルデヒドが分解すること、第２の溶液中においてホルムアルデヒドが分解すること、第１のＮＡＤＨが第２の溶液に移行すること、及び第２のＮＡＤＨが第１の溶液に移行することを回避することができる。その結果、第２の溶液は、ホルムアルデヒドの影響を受けることなく、被検ガスに含まれる実質的に全てのアセトアルデヒドに基づいて第２のＮＡＤＨを生じ、吸光度が変化する又は発色することになる。そのため、本実施形態に係る装置は、被検ガスにアセトアルデヒド及びホルムアルデヒドが共存している場合においても、アセトアルデヒドのみを正確に検出することができる。
【００２６】
本実施形態に係る装置は、ホルムアルデヒド及びアセトアルデヒドを含む被検ガスを対象とする場合に特に有効であるが、アセトアルデヒドのみを含む被検ガスを対象としてもよい。また、本実施形態に係る装置は、ホルムアルデヒドのみを含む被検ガス、及びいずれのアルデヒドも含まない被検ガスを対象としてもよく、この場合には、アセトアルデヒドが検出されないため、被検ガス中にアセトアルデヒドが存在しないことが判明する。
【００２７】
アセトアルデヒドを検出するための従来の方法では、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等が使用されていたが、本実施形態に係る装置によれば、従来の高価な設備は不要となる。また、本実施形態に係る装置によれば、被検ガスが存在する場所に赴いて、その場でアセトアルデヒドの検出を行うことができる。
【００２８】
本実施形態に係る装置は、例えば図１に示すような検出部を含む。
図１の検出部は：
底部（１）と、底部の周縁から立設して開口部（２）を形成する側壁部（３）とを有する容器（４）；
容器（４）の開口部（２）を覆う蓋（５）であって、気体を通過させるが液体を通過させない蓋（５）；
容器（４）の内表面と蓋（５）の内表面とによって形成される内部領域を２つに分断させるように配置された半透膜（６）であって、半透膜（６）の第１の面と側壁部（３）の第１の内表面（７）と蓋（５）の内表面とによって画定される第１の領域（８）、並びに半透膜（６）の第２の面と側壁部（３）の第２の内表面（９）と底部（１）の内表面とによって画定される第２の領域（１０）を形成する半透膜（６）；
第１の領域（８）に収容された第１の溶液（１１）；及び
第２の領域（１０）に収容された第２の溶液（１２）；
を含む。
【００２９】
具体的な蓋の一例としては、三洋化成工業株式会社製の高透湿高耐水圧型防水布用ウレタン樹脂を挙げることができる。
【００３０】
容器は測定波長に対して透過率が高いことが好ましい。容器を透明にすることによって、第２の溶液の発色の程度が外部から観察しやすくなる。
【００３１】
＜アセトアルデヒドの検出方法＞
本発明の一実施形態は、以下で説明する第１の接触工程、第１の測定工程、第２の接触工程、第２の測定工程、算出工程及び決定工程を含む、アセトアルデヒドの検出方法に関する。
【００３２】
第１の接触工程は、被検ガスを、第１のＮＡＤ及びホルムアルデヒド選択的脱水素酵素を含む第１の溶液と接触させる工程である。第１の溶液の溶媒としては、例えば水等を挙げることができる。第１の測定工程では、被検ガスに含まれるホルムアルデヒドと第１のＮＡＤとホルムアルデヒド選択的脱水素酵素とが反応し、ホルムアルデヒドが分解され、第１のＮＡＤＨが生じる。
【００３３】
ホルムアルデヒド選択的脱水素酵素は、上記＜アセトアルデヒドの検出に使用するための装置＞の項目において説明した通りである。
【００３４】
第１の測定工程は、第１の接触工程で得られた溶液の吸光度を測定する工程である。第１の測定工程で測定される吸光度は、第１のＮＡＤＨの量に基づくものであり、これは被検ガスに含まれるホルムアルデヒドの量に起因する。吸光度は３４０ｎｍの波長を有する紫外光を使用して測定することが好ましい。
【００３５】
第２の接触工程は、被検ガスを、第２のＮＡＤ、並びにアセトアルデヒド及びホルムアルデヒドに作用する脱水素酵素（以下「アルデヒド脱水素酵素」と称する。）を含む第２の溶液と接触させる工程である。第２の溶液の溶媒としては、例えば水等を挙げることができる。第２の接触工程では、第１の接触工程で使用した被検ガスと同一種類の被検ガスを使用する。第２の接触工程では、アセトアルデヒド及びホルムアルデヒドと第２のＮＡＤとアルデヒド脱水素酵素とが反応し、アセトアルデヒド及びホルムアルデヒドが分解され、第２のＮＡＤＨが生じる。
【００３６】
具体的なアルデヒド脱水素酵素の一例としては、シグマアルドリッチジャパン合同会社製のAcetaldehyde Dehydrogenaseを挙げることができる。
【００３７】
第２の測定工程は、第２の接触工程で得られた溶液の吸光度を測定する工程である。第２の測定工程で測定される吸光度は、第２のＮＡＤＨの量に基づくものであり、これは被検ガスに含まれるアセトアルデヒド及びホルムアルデヒドの総量に起因する。吸光度は３４０ｎｍの波長を有する紫外光を使用して測定することが好ましい。
【００３８】
第１の接触工程及び第１の測定工程と、第２の接触工程及び第２の測定工程とは、どちらを先に行ってもよいし、並行して行ってもよい。
【００３９】
算出工程は、第１の測定工程で測定した吸光度と第２の測定工程で測定した吸光度との差を算出して、アセトアルデヒドに起因する吸光度を得る工程である。第１の測定工程で測定される吸光度は被検ガスに含まれるホルムアルデヒドの量に起因し、第２の測定工程で測定される吸光度は被検ガスに含まれるアセトアルデヒド及びホルムアルデヒドの総量に起因するため、算出工程では、アセトアルデヒド及びホルムアルデヒドの総量からホルムアルデヒドの量が除かれたアセトアルデヒドの量に起因する吸光度が得られる。
【００４０】
決定工程は、アセトアルデヒドの量と吸光度との関係を示す検量線に基づき、算出工程で得た吸光度に対応するアセトアルデヒドの量を決定する工程である。アセトアルデヒドの量と吸光度との関係を示す検量線を予め作成しておくことにより、算出工程で得た吸光度から、被検ガスに含まれるアセトアルデヒドの量を決定することができる。
【００４１】
本実施形態に係る検出方法では、アセトアルデヒド及びホルムアルデヒドの総量からホルムアルデヒドの量を除く工程が含まれているため、アセトアルデヒド及びホルムアルデヒドが共存している場合においても、アセトアルデヒドのみを正確に検出することができる。
【００４２】
本実施形態に係る検出方法は、上記の装置とは異なり、半透膜を使用することなく実施することができる。また、本実施形態に係る検出方法によれば、従来の方法で使用されていた高価な設備（ＨＰＬＣ等）は不要となる。また、本実施形態に係る検出方法によれば、被検ガスが存在する場所に赴いて、その場でアセトアルデヒドの検出を行うことができる。
【００４３】
本実施形態に係る検出方法は、ホルムアルデヒド及びアセトアルデヒドを含む被検ガスを対象とする場合に特に有効であるが、アセトアルデヒドのみを含む被検ガスを対象としてもよい。また、本実施形態に係る検出方法は、ホルムアルデヒドのみを含む被検ガス、及びいずれのアルデヒドも含まない被検ガスを対象としてもよく、この場合には、被検ガス中にアセトアルデヒドが存在しないことが判明する。
【実施例】
【００４４】
＜アセトアルデヒドの検出に使用するための装置＞
［実施例１］
（１）試薬
ＮＡＤ：β-Nicotinamide Adenine Dinucleotide（ナカライテスク株式会社製）
緩衝液：ピロリン酸カリウム緩衝液（pH 9.0）（株式会社ジェイ・ケイ・インターナショナル製）
ホルムアルデヒド選択的脱水素酵素：Formaldehyde Dehydrogenase（ナカライテスク株式会社製）
アセトアルデヒド脱水素酵素：Acetaldehyde Dehydrogenase（シグマアルドリッチジャパン合同会社製）
ＩＮＴ：2-(4-Iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyltetrazolium Chloride（東京化成工業株式会社製）
ジアホラーゼ：Diaphorase（from Clostridium kluyveri）（和光純薬工業株式会社製）
【００４５】
（２）検量線
市販のアセトアルデヒド含有溶液（1000 μg/ml）を純水で希釈して、5 μg/ml又は10 μg/mlのアセトアルデヒド含有溶液を調製した。各溶液に、ＮＡＤ、アセトアルデヒド脱水素酵素、ＩＮＴ及びジアホラーゼを作用させた。得られた各溶液の吸光度を、４９０ｎｍの波長を有する可視光を使用して測定した。アセトアルデヒドの濃度と吸光度との関係をプロットして検量線を作成した（図２）。
【００４６】
（３）調製
ＮＡＤを緩衝液に溶解し、Ａ液（8 mg/30 ml）を調製する。
ホルムアルデヒド選択的脱水素酵素を純水に溶解し、Ｂ液（40 U／6 ml）を調製する。
アセトアルデヒド脱水素酵素を純水に溶解し、Ｃ液（40 U／6 ml）を調製する。
ＩＮＴを純水に溶解し、Ｄ液（6 mg／6 ml）を調製する。
ジアホラーゼを純水に溶解し、Ｅ液（6 mg／6 ml）を調製する。
【００４７】
Ａ液（1.5 ml）及びＢ液（0.05 ml）を混合して、第１の溶液を調製する。
Ａ液（1.5 ml）、Ｃ液（0.05 ml）、Ｄ液（0.05 ml）及びＥ液（0.05 ml）を混合して、第２の溶液を調製する。
【００４８】
（４）試験
図１に示す検出部を含む装置を使用して試験を行う。半透膜として、Micro Float-A-lyzer（スペクトラムラボラトリーズ株式会社製）を使用する。蓋として、高透湿高耐水圧型防水布用ウレタン樹脂（三洋化成工業株式会社製）を使用する。
【００４９】
装置を車内に３０分間放置し、気相に存在するホルムアルデヒド及びアセトアルデヒドを第１の溶液に溶解させる。第１の溶液中において、ホルムアルデヒドと第１のＮＡＤとホルムアルデヒド選択的脱水素酵素とが反応し、ホルムアルデヒドが分解され、第１のＮＡＤＨが生じる。
【００５０】
次に、アセトアルデヒドが半透膜を通過し、第２の溶液と接触する。第２の溶液中において、アセトアルデヒドと第２のＮＡＤとアセトアルデヒド脱水素酵素とが反応し、アセトアルデヒドが分解され、第２のＮＡＤＨが生じる。更に、第２の溶液中において、第２のＮＡＤＨとＩＮＴとジアホラーゼが反応し、発色する（薄桃色〜赤色）。
【００５１】
発色した第２の溶液の吸光度を、４９０ｎｍの波長を有する可視光を使用して測定する。予め作成した検量線（図２）に基づき、測定した吸光度に対応するアセトアルデヒドの量を、車内の気相中に含まれるアセトアルデヒドの量として決定する。
【００５２】
或いは、発色した第２の溶液の吸光度を測定する代わりに、発色した第２の溶液の色を目視観察することによりアセトアルデヒドの量を決定する。予め作成したアセトアルデヒドの量と色との関係を示すカラーチャートに基づき、目視観察した色に対応するアセトアルデヒドの量を、車内の気相中に含まれるアセトアルデヒドの量として決定する。
【００５３】
本実施例では第２のＮＡＤＨとＩＮＴとジアホラーゼとを反応させて発色させ、その吸光度を測定した、又は発色の程度を観察したが、第２のＮＡＤＨが生成するだけでも吸光度が変化するため、発色させることなく吸光度を測定するだけでもよい。
【００５４】
［参考例１］
市販のホルムアルデヒド含有溶液（100 μg/ml）を純水で希釈して、各種濃度のホルムアルデヒド含有溶液を調製した。市販のアセトアルデヒド含有溶液（1000 μg/ml）を純水で希釈して、各種濃度のアセトアルデヒド含有溶液を調製した。なお、ホルムアルデヒド又はアセトアルデヒドの濃度は、ホルムアルデヒド又はアセトアルデヒドを２，４−ジニトロフェニルヒドラジンで誘導体化し、ＨＰＬＣで分析することにより確認することができる。
【００５５】
各溶液に、ＮＡＤ及びホルムアルデヒド選択的脱水素酵素を作用させた。得られた各溶液の吸光度を、３４０ｎｍの波長を有する紫外光を使用して測定した。ホルムアルデヒド又はアセトアルデヒドの濃度と吸光度との関係をプロットした（図３）。
【００５６】
図３から理解されるように、ホルムアルデヒド選択的脱水素酵素は、ホルムアルデヒドに選択的に作用するため、ホルムアルデヒドのみを分解し、アセトアルデヒドを残存させることが可能である。
【００５７】
＜アセトアルデヒドの検出方法＞
［実施例２］
（１）試薬
ＮＡＤ：β-Nicotinamide Adenine Dinucleotide（ナカライテスク株式会社製）
緩衝液：ピロリン酸カリウム緩衝液（pH 9.0）（株式会社ジェイ・ケイ・インターナショナル製）
ホルムアルデヒド選択的脱水素酵素：Formaldehyde Dehydrogenase（ナカライテスク株式会社製）
アルデヒド脱水素酵素：Acetaldehyde Dehydrogenase（シグマアルドリッチジャパン合同会社製）
【００５８】
（２）検量線
市販のアセトアルデヒド含有溶液（1000 μg/ml）を純水で希釈して、5 μg/ml又は10 μg/mlのアセトアルデヒド含有溶液を調製した。各溶液に、ＮＡＤ及びアルデヒド脱水素酵素を作用させた。得られた各溶液の吸光度を、３４０ｎｍの波長を有する紫外光を使用して測定した。アセトアルデヒドの濃度と吸光度との関係をプロットして検量線を作成した（図４）。
【００５９】
（３）調製
ＮＡＤを緩衝液に溶解し、Ａ液（8 mg/30 ml）を調製する。
ホルムアルデヒド選択的脱水素酵素を純水に溶解し、Ｂ液（40 U／6 ml）を調製する。
アルデヒド脱水素酵素を純水に溶解し、Ｃ液（40 U／6 ml）を調製する。
【００６０】
Ａ液（1.5 ml）及びＢ液（0.05 ml）を混合して、第１の溶液を調製する。
Ａ液（1.5 ml）及びＣ液（0.05 ml）を混合して、第２の溶液を調製する。
【００６１】
（４）試験
第１の溶液及び第２の溶液を車内に３０分間放置し、気相に存在するホルムアルデヒド及びアセトアルデヒドを第１の溶液及び第２の溶液に溶解させる。
【００６２】
第１の溶液中において、ホルムアルデヒドと第１のＮＡＤとホルムアルデヒド選択的脱水素酵素とが反応し、ホルムアルデヒドが分解され、第１のＮＡＤＨが生じる。第１のＮＡＤＨを含む第１の溶液の吸光度（第１の吸光度）を、３４０ｎｍの波長を有する紫外光を使用して測定する。
【００６３】
第２の溶液中において、ホルムアルデヒドとアセトアルデヒドと第２のＮＡＤとアルデヒド脱水素酵素とが反応し、ホルムアルデヒド及びアセトアルデヒドが分解され、第２のＮＡＤＨが生じる。第２のＮＡＤＨを含む第２の溶液の吸光度（第２の吸光度）を、３４０ｎｍの波長を有する紫外光を使用して測定する。
【００６４】
第１の吸光度と第２の吸光度との差を算出する。予め作成した検量線（図４）に基づき、算出した吸光度に対応するアセトアルデヒドの量を、車内の気相中に含まれるアセトアルデヒドの量として決定する。
【００６５】
1.0 μg/mlのホルムアルデヒド＋1.0 μg/mlのアセトアルデヒド含有溶液、2.5 μg/mlのホルムアルデヒド＋2.5 μg/mlのアセトアルデヒド含有溶液、及び5 μg/mlのホルムアルデヒド＋5 μg/mlのアセトアルデヒド含有溶液を使用した場合における第１の吸光度、第２の吸光度、及びこれらの吸光度の差を表１に示す。
【００６６】
【表１】
2018050555.tif 000002
【００６７】
例えば、5 μg/mlのホルムアルデヒド＋5 μg/mlのアセトアルデヒド含有溶液を使用した場合における吸光度の差は0.113である。検量線（図４）に基づき、吸光度0.113に対応するアセトアルデヒドの量を決定すると約5 μg/mlとなる。従って、実際のアセトアルデヒドの量と、検量線で決定したアセトアルデヒドの量との間に高い相関性が認められた。
【００６８】
［参考例２］
市販のホルムアルデヒド含有溶液（100 μg/ml）及び／又は市販のアセトアルデヒド含有溶液（1000 μg/ml）を純水で希釈して、5 μg/mlのホルムアルデヒド含有溶液、5 μg/mlのアセトアルデヒド含有溶液、及び5 μg/mlのホルムアルデヒド＋5 μg/mlのアセトアルデヒド含有溶液を調製した。
【００６９】
各溶液に、ＮＡＤ及びアルデヒド脱水素酵素を作用させた。各溶液の吸光度を、一定時間ごとに、３４０ｎｍの波長を有する紫外光を使用して測定した。反応時間と吸光度との関係をプロットした（図５）。
【００７０】
図５から理解されるように、アルデヒド脱水素酵素はアセトアルデヒドと直ちに反応するが、ホルムアルデヒドとの反応には時間が必要となる。そのため、ホルムアルデヒドの量に応じて反応時間を十分に確保することが好ましい。
【符号の説明】
【００７１】
１・・底部
２・・開口部
３・・側壁部
４・・容器
５・・蓋
６・・半透膜
７・・側壁部の第１の内表面
８・・第１の領域
９・・側壁部の第２の内表面
１０・・第２の領域
１１・・第１の溶液
１２・・第２の溶液
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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