(57)【要約】      （修正有）【課題】ホモ接合性家族性高コレステロール血症の治療方法の提供。【解決手段】特定のアミノ酸配列を含む軽鎖と特定のアミノ酸配列を含む重鎖とを含む、プロタンパク質コンベルターゼスブチリシン／ケクシン９型（ＰＣＳＫ９）に対する抗体（抗ＰＣＳＫ９抗体）を、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者に約１２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で投与する。前記抗ＰＣＳＫ９抗体は、（１）１週間に１回、（２）２週間に１回、（３）１カ月に１回、（４）３カ月に１回、（５）６カ月に１回、及び（６）１２カ月に１回からなる群から選択されるスケジュールで前記患者に投与する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の血清ＬＤＬコレステロールの低減方法であって、
少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を、血清ＬＤＬコレステロールの低減を必要とする前記患者に約１２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で投与することにより、前記血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約１０％低減させることを含む、前記方法。
【請求項２】
ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の治療方法であって、
少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を、治療を必要とする前記患者に約１２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で投与することにより、前記患者の前記ホモ接合性家族性高コレステロール血症を治療することを含む、前記方法。
【請求項３】
前記患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、ａ）少なくとも約１５％、ｂ）少なくとも約２０％、ｃ）少なくとも約３０％、ｄ）少なくとも約４０％、及びｅ）少なくとも約５０％からなる群から選択される量だけ低減させる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体が、
ａ）配列番号２３のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号２３のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号２３のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３、及び配列番号４９のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４９のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、及び配列番号４９のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３、または
ｂ）配列番号４６５のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６５のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４６５のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３、及び配列番号４６３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４６３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３、または、
ｃ）配列番号１２のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号１２のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号１２のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３、及び配列番号６７のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号６７のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号６７のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３、または、
ｄ）配列番号４６１のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６１のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４６１のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３、及び配列番号４５９のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４５９のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４５９のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３、または、
ｅ）配列番号４８５のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４８５のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４８５のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３、及び配列番号４８３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４８３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４８３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３と、または、
ｆ）配列番号５８２のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号５８２のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号５８２のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３、及び配列番号５８３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号５８３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号５８３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３、
を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体が、
（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、
（ｃ）配列番号４６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４５９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、
（ｄ）配列番号４６５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、
（ｅ）配列番号４８５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４８３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、または、
（ｆ）配列番号５８２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号５８３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体が、
（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、
（ｃ）配列番号４６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４５９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、
（ｄ）配列番号４６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４６３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、
（ｅ）配列番号４８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、
（ｆ）配列番号５８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号５８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、
（ｇ）配列番号５９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号５９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体が、
（ａ）配列番号１５６の軽鎖定常配列、または
（ｂ）配列番号１５７の軽鎖定常配列、または、
（ｃ）配列番号１５４の重鎖定常配列、または、
（ｄ）配列番号１５５の重鎖定常配列、または、
（ｅ）配列番号１５６の軽鎖定常配列と、配列番号１５４の重鎖定常配列、または、
（ｆ）配列番号１５７の軽鎖定常配列と、配列番号１５４の重鎖定常配列、または、
（ｇ）配列番号１５６の軽鎖定常配列と、配列番号１５５の重鎖定常配列、または、
（ｈ）配列番号１５７の軽鎖定常配列と、配列番号１５５の重鎖定常配列、
をさらに含む、請求項４、５、または６に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体が、前記軽鎖可変ドメインのＣ末端にグリシン残基をさらに含む、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体が、２１Ｂ１２、１１Ｆ１、３１Ｈ４、８Ａ３、及び８Ａ１からなる群から選択される請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体を、ａ）約１２０ｍｇ〜約７００ｍｇ、ｂ）約１４０ｍｇ〜約６００ｍｇ、ｃ）約１４０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、ｄ）約４２０ｍｇ、ｅ）約４５０ｍｇ、ｆ）約６００ｍｇ、ｇ）約７００ｍｇ、ｈ）約１４００ｍｇ、ｉ）約１２００ｍｇ、ｊ）約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇ、ｋ）約１０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、またはｌ）約３０００ｍｇからなる群から選択される投薬量で前記患者に投与する、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体を、（１）１週間に１回、（２）２週間に１回、（３）１カ月に１回、（４）３カ月に１回、（５）６カ月に１回、及び（６）１２カ月に１回からなる群から選択されるスケジュールで前記患者に投与する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記投与ステップが、前記少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を非経口で投与することを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記投与ステップが、前記少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を静脈内に投与することを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記投与ステップが、前記少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を皮下に投与することを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体が、配列番号２３のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号２３のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号２３のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３、及び配列番号４９のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４９のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４９のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体が、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体が、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む、請求項１４に記載の方法。。
【請求項１８】
前記少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体が、配列番号５９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号５９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体が、
（ａ）配列番号１５６の軽鎖定常配列、または、
（ｂ）配列番号１５７の軽鎖定常配列、または、
（ｃ）配列番号１５４の重鎖定常配列、または、
（ｄ）配列番号１５５の重鎖定常配列、または、
（ｅ）配列番号１５６の軽鎖定常配列と、配列番号１５４の重鎖定常配列、または、
（ｆ）配列番号１５７の軽鎖定常配列と、配列番号１５４の重鎖定常配列、または、
（ｇ）配列番号１５６の軽鎖定常配列と、配列番号１５５の重鎖定常配列、または、
（ｈ）配列番号１５７の軽鎖定常配列と、配列番号１５５の重鎖定常配列、
をさらに含む、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体が、前記軽鎖可変ドメインのＣ末端でグリシン残基をさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体を、前記患者に、約７０ｍｇ〜約４５０ｍｇの投薬量で２週間ごとに１回皮下投与し、前記患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１４日間で少なくとも約１０〜５０％低減させる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体を、前記患者に、約７０〜約４５０ｍｇの投薬量で１カ月に１回皮下投与し、前記患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で少なくとも約１０〜５０％低減させる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体を、約４２０ｍｇの投薬量で前記患者に投与する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体を、約４２０ｍｇの投薬量で前記患者に投与する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の血清ＬＤＬコレステロールの低減方法であって、
配列番号５９１のアミノ酸配列を含む軽鎖と配列番号５９０のアミノ酸配列を含む重鎖とを含む抗ＰＣＳＫ９抗体を、血清ＬＤＬコレステロールの低減を必要とする患者に約４２０ｍｇの投薬量で投与することにより、前記血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約１０％低減させることを含む、前記方法。
【請求項２６】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体を、前記患者に２週間ごとに１回投与する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗ＰＣＳＫ９抗体を、前記患者に１カ月に１回投与する、請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表の参照
本出願は、電子形式での配列表とともに出願されている。配列表は、２０１３年６月２７日に作成された、サイズ３２２ＫＢのＡ−１８３７−ＷＯ−ＰＣＴ−ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔ０６２７１３．ｔｘｔという表題のファイルとして提供される。電子形式での配列表の情報は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、プロタンパク質コンベルターゼスブチリシン／ケクシン９型（ＰＣＳＫ９）に対する抗原結合タンパク質（例えば、抗体）を用いた、ホモ接合性家族性高コレステロール血症の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ホモ接合性家族性高コレステロール血症はまれであるが、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体機能の実質的な低下によって引き起こされる重篤な臨床疾患である。その結果、ＬＤＬコレステロールレベルが著しく上昇し、小児期の心臓血管疾患やしばしば死に繋がることがある（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ＪＬ，Ｈｏｂｂｓ  ＨＨ，Ｂｒｏｗｎ  ＭＳ，ｅｄｓ．Ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ．８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ｅｄ：ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ；２００１）。９５％以上が、ＬＤＬ受容体に、４％未満が、アポリポタンパク質Ｂに、０．５％未満が、プロタンパク質コンベルターゼスブチリシン／ケキシン９（ＰＣＳＫ９）に突然変異を有している（Ａｂｉｆａｄｅｌ  Ｍ，Ｖａｒｒｅｔ  Ｍ，Ｒａｂｅｓ  ＪＰ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ＰＣＳＫ９  ｃａｕｓｅ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ．Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ２００３；３４：１５４−６；Ｒａｄｅｒ  ＤＪ，Ｃｏｈｅｎ  Ｊ，Ｈｏｂｂｓ  ＨＨ．Ｍｏｎｏｇｅｎｉｃ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ：ｎｅｗ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００３；１１１：１７９５−８０３）。真に遺伝性のホモ接合性家族性高コレステロール血症は珍しくはないが、患者の大半は、複合ヘテロ接合体である（Ｕｓｉｆｏ  Ｅ，Ｌｅｉｇｈ  ＳＥ，Ｗｈｉｔｔａｌｌ  ＲＡ，ｅｔ  ａｌ.Ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｅｒ  ｇｅｎｅ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ  ｖａｒｉａｎｔ  ｄａｔａｂａｓｅ：ｕｐｄａｔｅ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ．Ａｎｎ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ２０１２；７６：３８７−４０１）。陰性（２％未満の機能）若しくは欠損（２％〜２５％の機能）のいずれかのＬＤＬ受容体残存活性は、ＬＤＬコレステロール上昇の重症度及び低年齢での心臓血管疾患傾向と関連している（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ＪＬ，Ｈｏｂｂｓ  ＨＨ，Ｂｒｏｗｎ  ＭＳ，ｅｄｓ.Ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ．８ｔｈ.Ｅｄｉｔｉｏｎ  ｅｄ：ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ；２００１）。
【０００４】
ホモ接合性家族性高コレステロール血症に対して最も一般的に用いられる薬物であるスタチン及びエゼチミブなどの従来の治療に対する応答はそれほど大きくなく、通常、患者は、利用可能な場合にはＬＤＬアフェレーシスを要する。スタチンによるＬＤＬコレステロールの低下は、ＬＤＬ受容体機能と相関する傾向があるが、受容体陰性患者は低下を示している（Ｒａａｌ  ＦＪ，Ｐａｐｐｕ  ＡＳ，Ｉｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ  ＤＲ，ｅｔ  ａｌ.Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｂｙ  ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ  ｉｎ  ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉａ．Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ２０００；１５０：４２１−８）。スタチンによるＬＤＬコレステロールの改善は、心臓血管疾患の罹患率及び死亡率を低減させると思われる（Ｒａａｌ  ＦＪ，Ｐｉｌｃｈｅｒ  ＧＪ，Ｐａｎｚ  ＶＲ，ｅｔ  ａｌ.Ｒｅｄｕｃｉｏｎ  ｉｎ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｌｉｐｉｄ−ｌｏｗｅｒｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２０１１；１２４：２２０２−７）。近年、いずれも肝リポタンパク質産生を低減させるロミタピド及びミポメルセンという２つの薬物が、ホモ接合性家族性高コレステロール血症の治療のためだけに承認されている。これら２つの新規薬物が導入されているが、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の新規の治療方法を同定することが必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ＪＬ，Ｈｏｂｂｓ  ＨＨ，Ｂｒｏｗｎ  ＭＳ，ｅｄｓ．Ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ．８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ｅｄ：ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ；２００１
【非特許文献２】Ａｂｉｆａｄｅｌ  Ｍ，Ｖａｒｒｅｔ  Ｍ，Ｒａｂｅｓ  ＪＰ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ＰＣＳＫ９  ｃａｕｓｅ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ．Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ２００３；３４：１５４−６
【非特許文献３】Ｒａｄｅｒ  ＤＪ，Ｃｏｈｅｎ  Ｊ，Ｈｏｂｂｓ  ＨＨ．Ｍｏｎｏｇｅｎｉｃ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ：ｎｅｗ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００３；１１１：１７９５−８０３
【非特許文献４】Ｕｓｉｆｏ  Ｅ，Ｌｅｉｇｈ  ＳＥ，Ｗｈｉｔｔａｌｌ  ＲＡ，ｅｔ  ａｌ.Ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｅｒ  ｇｅｎｅ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ  ｖａｒｉａｎｔ  ｄａｔａｂａｓｅ：ｕｐｄａｔｅ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ．Ａｎｎ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ２０１２；７６：３８７−４０１
【非特許文献５】Ｒａａｌ  ＦＪ，Ｐａｐｐｕ  ＡＳ，Ｉｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ  ＤＲ，ｅｔ  ａｌ.Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｂｙ  ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ  ｉｎ  ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉａ．Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ２０００；１５０：４２１−８
【非特許文献６】Ｒａａｌ  ＦＪ，Ｐｉｌｃｈｅｒ  ＧＪ，Ｐａｎｚ  ＶＲ，ｅｔ  ａｌ.Ｒｅｄｕｃｉｏｎ  ｉｎ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｌｉｐｉｄ−ｌｏｗｅｒｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２０１１；１２４：２２０２−７
【発明の概要】
【０００６】
いくつかの態様では、提供される本発明は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の血清ＬＤＬコレステロールの低減方法であって、少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を、それを必要とする前記患者に約１２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で投与することにより、患者の血清ＬＤＬコレステロールの投与前のレベルと比べて、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約１０％低減させることを含む方法を含む。本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、前記患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、患者の血清ＬＤＬコレステロールの投与前のレベルと比べて少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％低減させる。
【０００７】
本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体を、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者に、約１４０ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約１２００ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約７００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約７００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約６００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、約２１０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、または約２８０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、約２１０ｍｇ〜約４２０ｍｇ、約２８０ｍｇ〜約４２０ｍｇ、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、または約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で投与する。この態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体を、患者に、約３５ｍｇ、約４５ｍｇ、約７０ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２８００ｍｇ、または約３０００ｍｇの投薬量で投与する。
【０００８】
本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体を、（１）１週間に１回、（２）２週間に１回、（３）１カ月に１回、（４）１カ月おきに１回、（５）３カ月に１回、（６）６カ月に１回、及び（７）１２カ月に１回からなる群から選択されるスケジュールで患者に投与する。本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体を非経口で投与する。本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体を静脈内に投与する。本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体を皮下に投与する。
【０００９】
本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、Ａ）（ｉ）配列番号４９、６７、４５９、４６３、及び４８３からなる群から選択される配列におけるＣＤＲＨ１からのＣＤＲＨ１、（ｉｉ）配列番号４９、６７、４５９、４６３、及び４８３からなる群から選択される配列におけるＣＤＲＨ２からのＣＤＲＨ２、（ｉｉｉ）配列番号４９、６７、４５９、４６３、及び４８３からなる群から選択される配列におけるＣＤＲＨ３からのＣＤＲＨ３、及び（ｉｖ）４つを超えないアミノ酸の１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、欠失、または挿入を含有する（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）のＣＤＲＨからなる群から選択される１つまたはそれ以上の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、Ｂ）（ｉ）配列番号２３、１２、４６１、４６５、及び４８５からなる群から選択される配列におけるＣＤＲＬ１からのＣＤＲＬ１、（ｉｉ）配列番号２３、１２、４６１、４６５、及び４８５からなる群から選択される配列におけるＣＤＲＬ２からのＣＤＲＬ２、（ｉｉｉ）配列番号２３、１２、４６１、４６５、及び４８５からなる群から選択される配列におけるＣＤＲＬ３からのＣＤＲＬ３、及び（ｉｖ）４つを超えないアミノ酸の１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、欠失、または挿入を含有する（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）のＣＤＲＬからなる群から選択される１つまたはそれ以上の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）、またはＣ）Ａ）の１つまたはそれ以上の重鎖ＣＤＲＨ及びＢ）の１つまたはそれ以上の軽鎖ＣＤＲＬを含む。いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、Ａ）のうちの少なくとも１つのＣＤＲＨ及びＢ）のうちの少なくとも１つのＣＤＲＬを含む。いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、Ａ）の少なくとも２つのＣＤＲＨ及びＢ）の少なくとも２つのＣＤＲＬを含む。いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、Ａ）の少なくとも３つのＣＤＲＨ及びＢ）の少なくとも３つのＣＤＲＬを含む。
【００１０】
いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、配列番号２３のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号２３のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号２３のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４９のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４９のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４９のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、配列番号４６５のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６５のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４６５のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４６３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４６３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。
【００１２】
いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、配列番号１２のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号１２のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号１２のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号６７のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号６７のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号６７のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、配列番号４６１のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６１のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４６１のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４５９のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４５９のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４５９のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、配列番号４８５のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４８５のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４８５のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４８３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４８３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４８３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、配列番号５８２のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号５８２のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号５８２のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号５８３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号５８３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号５８３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。
【００１６】
本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号４６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４５９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号４６５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号４８５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４８３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または配列番号５８２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号５８３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号４６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４５９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号４６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４６３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号４８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号５８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号５８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または配列番号５９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号５９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２１Ｂ１２、３１Ｈ４、８Ａ３、１１Ｆ１、及び８Ａ１からなる群から選択される。
【００１７】
いくつかの態様では、本発明は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の治療方法であって、少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を、それを必要とする前記患者に約１２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で投与することにより、前記患者のホモ接合性家族性高コレステロール血症を治療することを含む方法を含む。この態様のいくつかの実施形態において、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された前記患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、前記患者の血清ＬＤＬコレステロールの投与前のレベルと比べて少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％低減させる。
【００１８】
本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、Ａ）（ｉ）配列番号４９、６７、４５９、４６３、及び４８３からなる群から選択される配列におけるＣＤＲＨ１からのＣＤＲＨ１、（ｉｉ）配列番号４９、６７、４５９、４６３、及び４８３からなる群から選択される配列におけるＣＤＲＨ２からのＣＤＲＨ２、（ｉｉｉ）配列番号４９、６７、４５９、４６３、及び４８３からなる群から選択される配列におけるＣＤＲＨ３からのＣＤＲＨ３、及び（ｉｖ）４つを超えないアミノ酸の１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、欠失、または挿入を含有する（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）のＣＤＲＨからなる群から選択される１つまたはそれ以上の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、Ｂ）（ｉ）配列番号２３、１２、４６１、４６５、及び４８５からなる群から選択される配列におけるＣＤＲＬ１からのＣＤＲＬ１、（ｉｉ）配列番号２３、１２、４６１、４６５、及び４８５からなる群から選択される配列におけるＣＤＲＬ２からのＣＤＲＬ２、（ｉｉｉ）配列番号２３、１２、４６１、４６５、及び４８５からなる群から選択される配列におけるＣＤＲＬ３からのＣＤＲＬ３、及び（ｉｖ）４つを超えないアミノ酸の１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、欠失、または挿入を含有する（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）のＣＤＲＬからなる群から選択される１つまたはそれ以上の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）、またはＣ）Ａ）の１つまたはそれ以上の重鎖ＣＤＲＨ及びＢ）の１つまたはそれ以上の軽鎖ＣＤＲＬを含む。いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、Ａ）のうちの少なくとも１つのＣＤＲＨ及びＢ）のうちの少なくとも１つのＣＤＲＬを含む。いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、Ａ）の少なくとも２つのＣＤＲＨ及びＢ）の少なくとも２つのＣＤＲＬを含む。いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、Ａ）の少なくとも３つのＣＤＲＨ及びＢ）の少なくとも３つのＣＤＲＬを含む。
【００１９】
いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、配列番号２３のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号２３のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号２３のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４９のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４９のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４９のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、配列番号４６５のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６５のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４６５のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４６３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４６３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。
【００２１】
いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、配列番号１２のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号１２のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号１２のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号６７のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号６７のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号６７のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。
【００２２】
いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、配列番号４６１のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６１のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４６１のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４５９のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４５９のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４５９のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。
【００２３】
いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、配列番号４８５のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４８５のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４８５のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４８３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４８３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４８３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。
【００２４】
いくつかの実施形態において、単離抗原結合タンパク質は、配列番号５８２のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号５８２のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号５８２のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号５８３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号５８３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号５８３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。
【００２５】
本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号４６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４５９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号４６５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号４８５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４８３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または配列番号５８２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号５８３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号４６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４５９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号４６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４６３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号４８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号４８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号５８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号５８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または配列番号５９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と配列番号５９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。本発明のこの態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２１Ｂ１２、３１Ｈ４、８Ａ３、１１Ｆ１、及び８Ａ１からなる群から選択される。
【００２６】
特定の実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２３のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号２３のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号２３のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４９のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４９のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４９のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号５９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号５９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２１Ｂ１２である。特定の実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２３のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号２３のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号２３のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４９のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４９のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４９のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含むかまたは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列と、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、配列番号５９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号５９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、抗体は、２１Ｂ１２であり、抗ＰＣＳＫ９抗体を、患者に、約１２０ｍｇ〜約４５０ｍｇの投薬量で１週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３〜１０日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１２０ｍｇの投薬量で１週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３〜１０日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１４０ｍｇの投薬量で１週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３〜１０日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１２０ｍｇ〜約４５０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１４日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１２０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１４日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１４０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１４日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約２１０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１４日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約２８０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１４日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約３５０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１４日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約４２０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１４日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約２８０ｍｇ〜約４２０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約２８０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約３５０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約４２０ｍｇの投薬量で４週間おきに皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で１５〜５０％低減させる。
【００２７】
別の特定の実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２３のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号２３のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号２３のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４９のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４９のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４９のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含むかまたは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列と、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、配列番号５９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号５９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、抗体は、２１Ｂ１２であり、抗ＰＣＳＫ９抗体を、患者に、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で１週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３〜１０日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約７００ｍｇの投薬量で１週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３〜１０日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇの投薬量で１週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３〜１０日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で１週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３〜１０日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で１週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１４日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約７００ｍｇの投薬量で１週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１４日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇの投薬量で１週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で１週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１４日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で４週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約７００ｍｇの投薬量で４週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇの投薬量で４週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で４週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で１５〜５０％低減させる。
【００２８】
別の特定の実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２３のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号２３のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号２３のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４９のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４９のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４９のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含むかまたは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列と、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、抗体は、２１Ｂ１２であり、抗ＰＣＳＫ９抗体を、患者に、約１２０ｍｇの投薬量で１週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１０日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１４０ｍｇの投薬量で１週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１０日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１２０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１４０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約２１０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約２８０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約３５０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約４２０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し；患者に、約２８０ｍｇ〜約４５０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約２８０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約３５０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約４２０ｍｇの投薬量で４週間ごとに皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で３０〜５０％低減させる。
【００２９】
別の特定の実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列と、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、配列番号５９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号５９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、抗体は、２１Ｂ１２であり、抗ＰＣＳＫ９抗体を、患者に、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で１週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１０日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約７００ｍｇの投薬量で１週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１０日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇの投薬量で１週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１０日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇ超〜約３０００ｍｇの投薬量で１週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１０日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で１週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約７００ｍｇの投薬量で１週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇの投薬量で１週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇ超〜約３０００ｍｇの投薬量で１週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で４週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約７００ｍｇの投薬量で４週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇの投薬量で４週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇ超〜約３０００ｍｇの投薬量で４週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で３０〜５０％低減させる。
【００３０】
本発明の特定の実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、８Ａ３、１１Ｆ１、及び８Ａ１である。いくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号４６５のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６５のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４６５のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４６３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４６３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号４６５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号４６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４６３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、１１Ｆ１である。特定の実施形態において、前記抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号４６５のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６５のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４６５のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４６３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４６３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む、または、配列番号４６５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列と、配列番号４６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含、または、配列番号４６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４６３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む、または、抗体は、１１Ｆ１であり、抗ＰＣＳＫ９抗体を、患者に、約１５０ｍｇの投薬量で１週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３〜１０日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇの投薬量で１週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１４日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇ超〜約２００ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１７０ｍｇ〜約１８０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇ〜約１７０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約４５０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２１〜３１日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇの投薬量で６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３１〜４２日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇ超〜約２００ｍｇの投薬量で６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３１〜４２日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１７０ｍｇ〜約１８０ｍｇの投薬量で６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３１〜４２日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇ〜約１７０ｍｇの投薬量で６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３１〜４２日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約４５０ｍｇの投薬量で６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３１〜４２日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；患者に、約１４０ｍｇ〜約２００ｍｇの投薬量で８週間ごとに皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約４５〜５６日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約１７０ｍｇ〜約１８０ｍｇの投薬量で８週間ごとに皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約４５〜５６日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇ〜約１７０ｍｇの投薬量で８週間ごとに皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約４５〜５６日間で１５〜５０％低減させ；患者に、約４５０ｍｇの投薬量で８週間ごとに皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約４５〜５６日間で１５〜５０％低減させ；約６００ｍｇの投薬量で８週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約４５〜５６日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；約７００ｍｇの投薬量で８週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約４５〜５６日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；約６００ｍｇの投薬量で１２週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７４〜８４日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；約７００ｍｇの投薬量で１２週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７４〜８４日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；約６００ｍｇの投薬量で１６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１００〜１１２日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；約７００ｍｇの投薬量で１６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１００〜１１２日間で少なくとも約１５〜５０％低減させる。
【００３１】
本発明の特定の実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号４６５のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６５のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４６５のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４６３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４６３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号４６５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列と、配列番号４６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、配列番号４６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４６３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、抗体は、１１Ｆ１であり、抗ＰＣＳＫ９抗体を、患者に、約１５０ｍｇの投薬量で１週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１０日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇ超〜約２００ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１７０ｍｇ〜約１８０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇ〜約１７０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約４５０ｍｇの投薬量で４週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇの投薬量で６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約４０〜４１日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇ超〜約２００ｍｇの投薬量で６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約４０〜４１日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１７０ｍｇ〜約１８０ｍｇの投薬量で６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約４０〜４１日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇ〜約１７０ｍｇの投薬量で６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約４０〜４１日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約４５０ｍｇの投薬量で６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約４０〜４１日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１４０ｍｇ〜約２００ｍｇの投薬量で８週間ごとに皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約５０〜５６日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１７０ｍｇ〜約１８０ｍｇの投薬量で８週間ごとに皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約５０〜５６日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１５０ｍｇ〜約１７０ｍｇの投薬量で８週間ごとに皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約５０〜５６日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約４５０ｍｇの投薬量で８週間ごとに皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約５０〜５６日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；約６００ｍｇの投薬量で８週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約５０〜５６日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；約７００ｍｇの投薬量で８週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約５０〜５６日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；約６００ｍｇの投薬量で１２週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約８０〜８４日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；約７００ｍｇの投薬量で１２週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約８０〜８４日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；約６００ｍｇの投薬量で１６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０５〜１１２日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；約７００ｍｇの投薬量で１６週間に１回皮下投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０５〜１１２日間で少なくとも約３０〜５０％低減させる。
【００３２】
本発明の特定の実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号４６５のＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６５のＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２と、配列番号４６５のＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３と、配列番号４６３のＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、配列番号４６３のＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２と、配列番号４６３のＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号４６５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列と、配列番号４６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、配列番号４６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４６３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含むかまたは、抗体は、１１Ｆ１であり、抗ＰＣＳＫ９抗体を、患者に投与し、抗ＰＣＳＫ９抗体を、患者に、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で１週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１０日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約７００ｍｇの投薬量で１週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１０日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇの投薬量で１週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１０日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇ超〜約３０００ｍｇの投薬量で１週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約７〜１０日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で１週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約７００ｍｇの投薬量で１週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇの投薬量で１週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇ超〜約３０００ｍｇの投薬量で１週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１０〜１４日間で３０〜５０％低減させ；患者に、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で４週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約７００ｍｇの投薬量で４週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇの投薬量で４週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；患者に、約１２００ｍｇ超〜約３０００ｍｇの投薬量で４週間おきに静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約２４〜２８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；約１０００ｍｇ〜３０００ｍｇの投薬量で２４週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１５０〜１６８日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；約１０００ｍｇ〜３０００ｍｇの投薬量で２４週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約１６０〜１６８日間で少なくとも約３０〜５０％低減させ；約１０００ｍｇ〜３０００ｍｇの投薬量で５２週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３５０〜３６５日間で少なくとも約１５〜５０％低減させ；約１０００ｍｇ〜３０００ｍｇの投薬量で５２週間に１回静脈内投与し、ここで、患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを、約３６０〜３６５日間で少なくとも約３０〜５０％低減させる。
【００３３】
本発明の別の態様において、少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を、少なくとも１つの他のコレステロール降下剤の投与の前、後、または同時に患者に投与する。コレステロール降下剤には、スタチン（例えば、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン）、ニコチン酸（ナイアシン）、徐放ナイアシン（ＳＬＯ−ＮＩＡＣＩＮ）、ラロピプラント（ＣＯＲＤＡＰＴＩＶＥ）、フィブリン酸（ＬＯＰＩＤ（ゲムフィブロジル）、ＴＲＩＣＯＲ（フェノフィブラート））、胆汁酸封鎖剤、例えば、コレスチラミン（ＱＵＥＳＴＲＡＮ）、コレセベラム（ＷＥＬＣＨＯＬ）、ＣＯＬＥＳＴＩＤ（コレスチポール））、コレステロール吸収阻害剤（ＺＥＴＩＡ（エゼチミブ））、脂質調節剤、ＰＰＡＲ−γアゴニスト、ＰＰＡＲ−α／γアゴニスト、スクアレン合成酵素阻害剤、ＣＥＴＰ阻害剤、抗高血圧剤、抗糖尿病剤、例えば、スルホニル尿素、インスリン、ＧＬＰ−１類縁体、ＤＤＰＩＶ阻害剤、ＡｐｏＢ調節物質、ＭＴＰ阻害剤、及び／または閉塞性動脈硬化症治療、オンコスタチンＭ、エストロゲン、ベルビン、及び免疫関連疾患用治療剤が含まれる。
【００３４】
いくつかの態様では、本発明は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の血清ＬＤＬコレステロールの低減方法を含む。該方法は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者に、本明細書中に記載されている少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を約１２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で投与することを含む。いくつかの実施形態において、投薬量は、１週間に１回（ＱＷ）投与される、約１２０ｍｇ〜約４５０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、１週間に１回投与される、約１４０ｍｇ〜約４５０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、１週間に１回投与される、約２８０ｍｇ〜約４５０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約１２０ｍｇ〜約４５０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約１４０ｍｇ〜約４５０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約２８０ｍｇ〜約４２０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約４００ｍｇ〜約４５０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約４２０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、４週間に１回（Ｑ４Ｗ）投与される、約２５０ｍｇ〜約４８０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、４週間に１回（Ｑ４Ｗ）投与される、約２８０ｍｇ〜約４２０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、約４週間に１回（Ｑ４Ｗ）投与される、約３５０ｍｇ〜約４２０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、１週間に１回（ＱＷ）投与される、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、１週間に１回（ＱＷ）投与される、約１０００ｍｇ〜約３０００ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、１週間に１回（ＱＷ）投与される、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、隔週に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、隔週に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約１０００ｍｇ〜約３０００ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、隔週に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体約である。いくつかの実施形態において、投薬量は、１カ月に１回（Ｑ４Ｗ）投与される、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、１カ月に１回（Ｑ４Ｗ）投与される、約１０００ｍｇ〜約３０００ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、１カ月に１回（Ｑ４Ｗ）投与される、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約１０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約１５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約２０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約２５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約３５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約４５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約９０％低減させる。
【００３５】
いくつかの態様では、本発明は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の血清ＬＤＬコレステロールの低減方法を含み、該方法は、それを必要とする患者に、投薬量のうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を投与することを含み、投薬量の抗ＰＣＳＫ９抗体を：（１）少なくとも約１２０ｍｇで毎週（ＱＷ）、（２）少なくとも約１４０ｍｇの量で毎週（ＱＷ）、（３）少なくとも約１２０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）、（４）少なくとも約１４０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）、（５）少なくとも約１５０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）、（６）少なくとも約２８０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）、（７）少なくとも約３５０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）、（８）少なくとも約４２０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）、及び（９）少なくとも約１５０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）、（１０）少なくとも約１６０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）、（１１）少なくとも約１７０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）、（１２）少なくとも約１８０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）、（１３）少なくとも約１９０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）、（１４）少なくとも約２００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）、（１５）少なくとも約２８０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）、（１６）少なくとも約３５０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）、（１７）少なくとも約４２０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）、（１８）少なくとも約１０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）、（１９）少なくとも約２０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）、及び（２０）少なくとも約３０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）からなる群から選択されるスケジュールで投与する。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約１０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約１０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約１５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約２０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約２５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約３５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約４５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約９０％低減させる。
【００３６】
いくつかの態様では、本発明は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の血清ＰＣＳＫ９レベルの低減方法を含む。該方法は、それを必要とする患者に、投薬量のうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を投与することを含み、投薬量の抗ＰＣＳＫ９抗体を：１）少なくとも約１２０ｍｇで毎週（ＱＷ）；（２）少なくとも約１４０ｍｇの量で毎週（ＱＷ）；（３）少なくとも約１２０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（４）少なくとも約１４０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（５）少なくとも約１５０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（６）少なくとも約２８０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（７）少なくとも約３５０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（８）少なくとも約４２０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；及び（９）少なくとも約１５０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１０）少なくとも約１６０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１１）少なくとも約１７０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１２）少なくとも約１８０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１３）少なくとも約１９０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１４）少なくとも約２００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１５）少なくとも約２８０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１６）少なくとも約３５０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１７）少なくとも約４２０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１８）少なくとも約１０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１９）少なくとも約２０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；及び（２０）少なくとも約３０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）からなる群から選択されるスケジュールで投与する。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を、投与前の血清ＰＣＳＫ９レベルと比べて少なくとも約２０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約６５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約７０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約７５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約８０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約８５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約９０％低減させる。
【００３７】
いくつかの態様では、本発明は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の全コレステロールレベルの低減方法を含み、該方法は、それを必要とする患者に、投薬量のうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を投与することを含み、投薬量の抗ＰＣＳＫ９抗体を：（１））少なくとも約１２０ｍｇで毎週（ＱＷ）；（２）少なくとも約１４０ｍｇの量で毎週（ＱＷ）；（３）少なくとも約１２０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（４）少なくとも約１４０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（５）少なくとも約１５０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（６）少なくとも約２８０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（７）少なくとも約３５０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（８）少なくとも約４２０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；及び（９）少なくとも約１５０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１０）少なくとも約１６０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１１）少なくとも約１７０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１２）少なくとも約１８０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１３）少なくとも約１９０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１４）少なくとも約２００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１５）少なくとも約２８０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１６）少なくとも約３５０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１７）少なくとも約４２０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１８）少なくとも約１０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１９）少なくとも約２０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；及び（２０）少なくとも約３０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）からなる群から選択されるスケジュールで投与する。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを、投与前の全コレステロールレベルと比べて少なくとも約２０％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約２５％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約３５％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約４５％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約６０％低減させる。
【００３８】
いくつかの態様では、本発明は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の非ＨＤＬコレステロールレベルの低減方法を含み、該方法は、それを必要とする患者に、投薬量のうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を投与することを含み、投薬量の抗ＰＣＳＫ９抗体を：（１）少なくとも約１２０ｍｇで毎週（ＱＷ）；（２）少なくとも約１４０ｍｇの量で毎週（ＱＷ）；（３）少なくとも約１２０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（４）少なくとも約１４０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（５）少なくとも約１５０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（６）少なくとも約２８０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（７）少なくとも約３５０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（８）少なくとも約４２０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；及び（９）少なくとも約１５０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１０）少なくとも約１６０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１１）少なくとも約１７０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１２）少なくとも約１８０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１３）少なくとも約１９０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１４）少なくとも約２００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１５）少なくとも約２８０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１６）少なくとも約３５０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１７）少なくとも約４２０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１８）少なくとも約１０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１９）少なくとも約２０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；及び（２０）少なくとも約３０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）からなる群から選択されるスケジュールで投与する。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを、投与前の非ＨＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約３５％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約４５％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６５％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７０％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７５％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８０％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８５％低減させる。
【００３９】
いくつかの態様では、本発明は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者のＡｐｏＢレベルの低減方法を含み、該方法は、それを必要とする患者に、投薬量のうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を投与することを含み、投薬量の抗ＰＣＳＫ９抗体を：（１）少なくとも約１２０ｍｇで毎週（ＱＷ）；（２）少なくとも約１４０ｍｇの量で毎週（ＱＷ）；（３）少なくとも約１２０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（４）少なくとも約１４０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（５）少なくとも約１５０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（６）少なくとも約２８０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（７）少なくとも約３５０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（８）少なくとも約４２０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；及び（９）少なくとも約１５０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１０）少なくとも約１６０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１１）少なくとも約１７０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１２）少なくとも約１８０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１３）少なくとも約１９０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１４）少なくとも約２００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１５）少なくとも約２８０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１６）少なくとも約３５０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１７）少なくとも約４２０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１８）少なくとも約１０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１９）少なくとも約２０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；及び（２０）少なくとも約３０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）からなる群から選択されるスケジュールで投与する。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを、投与前のＡｐｏＢレベルと比べて少なくとも約１０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約１５％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約２０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約２５％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約３５％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約４５％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約６５％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約７０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約７５％低減させる。
【００４０】
いくつかの態様では、本発明は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者のリポタンパク質Ａ（「Ｌｐ（ａ）」）レベルの低減方法を含み、該方法は、それを必要とする患者に、投薬量のうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を投与することを含み、投薬量の抗ＰＣＳＫ９抗体を：（１）少なくとも約１２０ｍｇで毎週（ＱＷ）；（２）少なくとも約１４０ｍｇの量で毎週（ＱＷ）；（３）少なくとも約１２０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（４）少なくとも約１４０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（５）少なくとも約１５０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（６）少なくとも約２８０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（７）少なくとも約３５０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；（８）少なくとも約４２０ｍｇの量で２週間おきまたは隔週（Ｑ２Ｗ）；及び（９）少なくとも約１５０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１０）少なくとも約１６０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１１）少なくとも約１７０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１２）少なくとも約１８０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１３）少なくとも約１９０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１４）少なくとも約２００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１５）少なくとも約２８０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１６）少なくとも約３５０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１７）少なくとも約４２０ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１８）少なくとも約１０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；（１９）少なくとも約２０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）；及び（２０）少なくとも約３０００ｍｇの量で４週間おき（Ｑ４Ｗ）からなる群から選択されるスケジュールで投与する。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを、投与前のＬｐ（ａ）レベルと比べて少なくとも約１０％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約１５％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約２０％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約２５％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約３５％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約４５％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約６５％低減させる。
【００４１】
いくつかの態様では、本発明は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の治療方法を含み、該方法は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者に、本明細書中に記載されている少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を約１２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で投与することを含む。いくつかの実施形態において、投薬量は、１週間に１回（ＱＷ）投与される、約１２０ｍｇ〜約４５０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、１週間に１回投与される、約１４０ｍｇ〜約４５０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約１２０ｍｇ〜約４５０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約１４０ｍｇ〜約４２０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約１０５ｍｇ〜約３５０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約１４０ｍｇ〜約２８０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約１５０ｍｇ〜約２８０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約１５０ｍｇ〜約２００ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約４００ｍｇ〜約４５０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与される、約４２０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、４週間に１回（Ｑ４Ｗ）投与される、約１２０ｍｇ〜約４８０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、４週間に１回（Ｑ４Ｗ）投与される、約１５０ｍｇ〜約４２０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、４週間に１回（Ｑ４Ｗ）投与される、約４００ｍｇ〜約４５０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、４週間に１回（Ｑ４Ｗ）投与される、約２５０ｍｇ〜約４８０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、４週間に１回（Ｑ４Ｗ）投与される、約２８０ｍｇ〜約４２０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、４週間に１回投与される、約３５０ｍｇ〜約４２０ｍｇのうちの少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体である。いくつかの実施形態において、投薬量は、４週間おき（Ｑ４Ｗ）の約１０００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投薬量は、４週間おき（Ｑ４Ｗ）の約２０００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投薬量は、４週間おき（Ｑ４Ｗ）の約３０００ｍｇである。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約１０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約１５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約２０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約２５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約３５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約４５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約９０％低減させる。
【００４２】
いくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体は、２１Ｂ１２、２６Ｈ５、３１Ｈ４、８Ａ３、１１Ｆ１、及び／または８Ａ１である。
【００４３】
本発明の他の実施形態は、本明細書で提供される開示から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１Ａ】ＰＣＳＫ９の成熟形態のアミノ酸配列を図示しており、プロドメインに下線が付されている。
【図１Ｂ１】ＰＣＳＫ９のアミノ酸及び核酸配列を図示しており、プロドメインには下線が付され、シグナル配列は太字で記載されている。
【図１Ｂ２】ＰＣＳＫ９のアミノ酸及び核酸配列を図示しており、プロドメインには下線が付され、シグナル配列は太字で記載されている。
【図１Ｂ３】ＰＣＳＫ９のアミノ酸及び核酸配列を図示しており、プロドメインには下線が付され、シグナル配列は太字で記載されている。
【図１Ｂ４】ＰＣＳＫ９のアミノ酸及び核酸配列を図示しており、プロドメインには下線が付され、シグナル配列は太字で記載されている。
【図２Ａ】様々な抗原結合タンパク質の様々な軽鎖の配列比較表である。図２Ｃは、図２Ａから始まる配列の続きである。図２Ｄは、図２Ｂから始まる配列の続きである。
【図２Ｂ】様々な抗原結合タンパク質の様々な軽鎖の配列比較表である。図２Ｃは、図２Ａから始まる配列の続きである。図２Ｄは、図２Ｂから始まる配列の続きである。
【図２Ｃ】様々な抗原結合タンパク質の様々な軽鎖の配列比較表である。図２Ｃは、図２Ａから始まる配列の続きである。図２Ｄは、図２Ｂから始まる配列の続きである。
【図２Ｄ】様々な抗原結合タンパク質の様々な軽鎖の配列比較表である。図２Ｃは、図２Ａから始まる配列の続きである。図２Ｄは、図２Ｂから始まる配列の続きである。
【図３Ａ】様々な抗原結合タンパク質の様々な重鎖の配列比較表である。図３Ｃは、図３Ａから始まる配列の続きである。図３Ｄは、図３Ｂから始まる配列の続きである。
【図３Ｂ】様々な抗原結合タンパク質の様々な重鎖の配列比較表である。図３Ｃは、図３Ａから始まる配列の続きである。図３Ｄは、図３Ｂから始まる配列の続きである。
【図３Ｃ】様々な抗原結合タンパク質の様々な重鎖の配列比較表である。図３Ｃは、図３Ａから始まる配列の続きである。図３Ｄは、図３Ｂから始まる配列の続きである。
【図３Ｄ】様々な抗原結合タンパク質の様々な重鎖の配列比較表である。図３Ｃは、図３Ａから始まる配列の続きである。図３Ｄは、図３Ｂから始まる配列の続きである。
【図３Ｅ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｆ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｇ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｈ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｉ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｊ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｋ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｌ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｍ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｎ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｏ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｐ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｑ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｒ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｓ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｔ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｕ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｖ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｗ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｘ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｙ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３Ｚ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３ＡＡ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３ＢＢ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３ＣＣ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３ＤＤ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３ＥＥ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３ＦＦ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３ＧＧ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３ＨＨ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３ＩＩ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３ＪＪ（ｉ）】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３ＪＪ（ｉｉ）】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を図示する。
【図３ＫＫ】様々な定常ドメインに対するアミノ酸配列を図示する。
【図３ＬＬ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＭＭ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＮＮ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＯＯ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＰＰ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＱＱ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＲＲ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＳＳ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＴＴ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＵＵ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＶＶ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＷＷ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＸＸ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＹＹ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＺＺ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＡＡＡ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＢＢＢ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の可変ドメインに対するアミノ酸及び核酸配列を示す。
【図３ＣＣＣ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の様々な重鎖及び軽鎖の配列比較表である。
【図３ＤＤＤ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の様々な重鎖及び軽鎖の配列比較表である。
【図３ＥＥＥ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の様々な重鎖及び軽鎖の配列比較表である。
【図３ＦＦＦ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の様々な重鎖及び軽鎖の配列比較表である。
【図３ＧＧＧ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の様々な重鎖及び軽鎖の配列比較表である。
【図３ＨＨＨ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の様々な重鎖及び軽鎖の配列比較表である。
【図３ＩＩＩ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の様々な重鎖及び軽鎖の配列比較表である。
【図３ＪＪＪ】抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態の様々な重鎖及び軽鎖の配列比較表である。
【図３ＬＬＬ】大腸菌中で産生されたヒトＡＢＰ配列とＡＢＰ配列の間の様々な差異を特定する一連のＡＢＰ配列である（米国特許第８，０３０，４５７号）。
【図４Ａ】ヒトＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の結合曲線である。
【図４Ｂ】ヒトＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の結合曲線である。
【図４Ｃ】カニクイザルＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の結合曲線である。
【図４Ｄ】カニクイザルＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の結合曲線である。
【図４Ｅ】マウスＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の結合曲線である。
【図４Ｆ】マウスＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の結合曲線である。
【図５Ａ】ＰＣＳＫ９及び様々な抗原結合タンパク質を用いたＳＤＳＰＡＧＥ実験の結果を図示しており、タンパク質の相対的純度及び濃度を示している。
【図５Ｂ】２１Ｂ１２に対するＢｉａｃｏｒｅ溶液平衡アッセイから得られたグラフを図示している。
【図５Ｃ】２１Ｂ１２に対するＢｉａｃｏｒｅ溶液平衡アッセイから得られたグラフを図示している。
【図５Ｄ】Ｂｉａｃｏｒｅ捕捉アッセイから得られた動態のグラフを図示している。
【図６Ａ】インビトロＰＣＳＫ９：ＬＤＬＲ結合アッセイにおける、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質３１Ｈ４  ＩｇＧ２の阻害曲線である。
【図６Ｂ】インビトロＰＣＳＫ９：ＬＤＬＲ結合アッセイにおける、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質３１Ｈ４  ＩｇＧ４の阻害曲線である。
【図６Ｃ】インビトロＰＣＳＫ９：ＬＤＬＲ結合アッセイにおける、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質２１Ｂ１２  ＩｇＧ２の阻害曲線である。
【図６Ｄ】インビトロＰＣＳＫ９：ＬＤＬＲ結合アッセイにおける、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質２１Ｂ１２  ＩｇＧ４の阻害曲線である。
【図７Ａ】ＰＣＳＫ９のＬＤＬ取り込み遮断効果を低減させるＡＢＰの効果を示す細胞ＬＤＬ取り込みアッセイにおける抗原結合タンパク質３１Ｈ４  ＩｇＧ２の阻害曲線である。
【図７Ｂ】ＰＣＳＫ９のＬＤＬ取り込み遮断効果を低減させるＡＢＰの効果を示す細胞ＬＤＬ取り込みアッセイにおける抗原結合タンパク質３１Ｈ４  ＩｇＧ４の阻害曲線である。
【図７Ｃ】ＰＣＳＫ９のＬＤＬ取り込み遮断効果を低減させるＡＢＰの効果を示す細胞ＬＤＬ取り込みアッセイにおける抗原結合タンパク質２１Ｂ１２  ＩｇＧ２の阻害曲線である。
【図７Ｄ】ＰＣＳＫ９のＬＤＬ取り込み遮断効果を低減させるＡＢＰの効果を示す細胞ＬＤＬ取り込みアッセイにおける抗原結合タンパク質２１Ｂ１２  ＩｇＧ４の阻害曲線である。
【図８Ａ】マウス中でのＡＢＰ３１Ｈ４の血清コレステロール低減能力を図示するグラフである（ＩｇＧ対照処理マウスと比較した変化）（＊ｐ＜０．０１）。
【図８Ｂ】マウス中でのＡＢＰ３１Ｈ４の血清コレステロール低減能力を図示するグラフである（時間＝ゼロ時と比較した変化）（＃ｐ＜０．０５）。
【図８Ｃ】Ｃ５７Ｂ１／６マウス中でのＨＤＬコレステロールレベルに対するＡＢＰ３１Ｈ４の効果を図示するグラフである（＊ｐ＜０．０１）。
【図８Ｄ】Ｃ５７Ｂ１／６マウス中でのＨＤＬコレステロールレベルに対するＡＢＰ３１Ｈ４の効果を図示するグラフである（＃ｐ＜０．０５）。
【図９】様々な時点後に存在する肝臓ＬＤＬＲタンパク質の量を増大させるＡＢＰ３１Ｈ４の能力のウェスタンブロット分析を図示している。
【図１０Ａ】野生型マウス中で、総血清コレステロールを低減させる抗原結合タンパク質３１Ｈ４の能力を図示するグラフである。
【図１０Ｂ】野生型マウス中で、ＨＤＬを低減させる抗原結合タンパク質３１Ｈ４の能力を図示するグラフである。
【図１０Ｃ】様々な抗原結合タンパク質３１Ｈ４及び１６Ｆ１２の血清コレステロール低減能力を図示するグラフである。
【図１１Ａ】抗原結合タンパク質が血清コレステロールを低減させる期間及び能力を調べるための注射プロトコルを図示している。
【図１１Ｂ】図１１Ａのプロトコルの結果を図示するグラフである。
【図１２Ａ】スタチンとＡＢＰ２１Ｂ１２の組み合わせに応答した、ＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬＲレベルを図示する。
【図１２Ｂ】スタチンとＡＢＰ３１Ｈ４の組み合わせに応答した、ＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬＲレベルを図示する。
【図１２Ｃ】スタチンと（中和抗体である「２５Ａ７」とは異なり）非中和抗体であるＡＢＰ２５Ａ７．１の組み合わせに応答した、ＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬＲレベルを図示する。
【図１２Ｄ】スタチンとＡＢＰ２１Ｂ１２の組み合わせに応答した、ＰＣＳＫ９を過剰発現するＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬＲレベルを図示する。
【図１２Ｅ】スタチンとＡＢＰ３１Ｈ４の組み合わせに応答した、ＰＣＳＫ９を過剰発現するＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬＲレベルを図示する。
【図１２Ｆ】スタチンと（中和抗体である「２５Ａ７」とは異なり）非中和抗体であるＡＢＰ２５Ａ７．１の組み合わせに応答した、ＰＣＳＫ９を過剰発現するＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬＲレベルを図示する。
【図１３Ａ】ＰＣＳＫ９に対する様々なＡＢＰの様々な軽鎖アミノ酸配列を図示する。点（．）は、アミノ酸が存在しないことを示す。
【図１３Ｂ】ＰＣＳＫ９に対する様々なＡＢＰに対する軽鎖分岐図を図示する。
【図１３Ｃ】ＰＣＳＫ９に対する様々なＡＢＰの様々な重鎖アミノ酸配列を図示する。点（．）は、アミノ酸が存在しないことを示す。
【図１３Ｄ】ＰＣＳＫ９に対する様々なＡＢＰに対する重鎖樹形図を図示する。
【図１３Ｅ】軽鎖と重鎖ＣＤＲの比較及びコンセンサスを与えるグループの表記を示す。
【図１３Ｆ】グループ１及び２に対するコンセンサス配列を図示する。
【図１３Ｇ】グループ３及び４に対するコンセンサス配列を図示する。
【図１３Ｈ】グループ１及び２に対するコンセンサス配列を図示する。点（．）は、同一の残基を示した。
【図１３Ｉ】グループ２に対するコンセンサス配列を図示する。点（．）は、同一の残基を示した。
【図１３Ｊ】グループ３及び４に対するコンセンサス配列を図示する。点（．）は、同一の残基を示した。
【図１４】縦軸にＯＤ４５０を取り、横軸にＰＣＳＫ９（ｕｇ／ｍｌ）の濃度を取った、ＰＣＳＫＰ、ＰＣＳＫ２、ＰＣＳＫ１、ＰＣＳＫ７、及びフリンによる競合アッセイにおける１１Ｆ１の結合特異性を示すグラフである。
【図１５】競合アッセイにおける、１１Ｆ１によるＬＤＬＲ：Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９結合の阻害に対する用量反応曲線を示すグラフであり、縦軸にＯＤ４５０を取り、横軸にＬｏｇ［１１Ｆ１］（ｐＭ）を取っている。
【図１６】競合アッセイにおける、１１Ｆ１によるＬＤＬＲ：ＷＴ  ＰＣＳＫ９結合の阻害に対する用量反応曲線を示すグラフであり、縦軸にＯＤ４５０を取り、横軸にＬｏｇ［１１ｆ１］（ｐＭ）を取っている。
【図１７】ＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬ取り込みのヒトＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９−媒介低下を遮断する１１Ｆ１の能力に対する用量反応曲線を示すグラフであり、縦軸に相対蛍光単位（×１０４）を取り、横軸にＬｏｇ［１１Ｆ１］（ｎＭ）を取っている。
【図１８】ＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬ取り込みのヒトＷＴ  ＰＣＳＫ９−媒介低下を遮断する１１Ｆ１の能力に対する用量反応曲線を示すグラフであり、縦軸に相対蛍光単位（×１０４）を取り、横軸にＬｏｇ［１１Ｆ１］（ｎＭ）を取っている。
【図１９】ＡＡＶによってヒトＰＣＳＫ９を発現するマウス中の血清非ＨＤＬコレステロールに対する１１Ｆ１及び８Ａ３の効果を示す棒グラフであり、縦軸に非ＨＤＬ−Ｃ血清濃度（ｍｇ／ｍｌ）を取り、横軸に注射後の時間（日目）を取っている。
【図２０】ＡＡＶによってヒトＰＣＳＫ９を発現するマウス中の血清総コレステロールに対する１１Ｆ１及び８Ａ３の効果を示す棒グラフであり、縦軸に血清総コレステロール（ｍｇ／ｍｌ）を取り、横軸に注射後の時間（日目）を取っている。
【図２１】ＡＡＶによってヒトＰＣＳＫ９を発現するマウス中の血清ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）に対する１１Ｆ１及び８Ａ３の効果を示す棒グラフであり、縦軸にＨＤＬ−Ｃ（ｍｇ／ｍｌ）を取り、横軸に注射後の時間（日目）を取っている。
【図２２】ＡＡＶによってヒトＰＣＳＫ９を発現するマウス中のＩｇＧ２、８Ａ３、及び１１Ｆ１の抗体濃度プロファイルを示すグラフであり、縦軸に血清抗体濃度（ｎｇ／ｍＬ）を取り、横軸に注射後の時間（日目）を取っている。
【図２３】ＡＡＶによってヒトＰＣＳＫ９を発現するマウス中のＩｇＧ２、１１Ｆ１、及び８Ａ３に対するＰＫパラメータをまとめた表である。
【図２４】カニクイザル中の血清ＬＤＬ濃度（ＬＤＬ−Ｃ）に対する抗ＫＬＨ抗体（対照）、２１Ｂ１２、８Ａ３、及び１１Ｆ１の単回皮下投与の効果を図示するグラフであり、縦軸にＬＤＬ−Ｃ（ｍｇ／ｄｌ）を取り、横軸に投与後の時間（日目）を取っている。
【図２５】カニクイザル中の血清総コレステロールに対する抗ＫＬＨ抗体（対照）、２１Ｂ１２、８Ａ３、及び１１Ｆ１の単回皮下投与の効果を図示するグラフであり、縦軸に総コレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ）を取り、横軸に投与後の時間（日目）を取っている。
【図２６】カニクイザル中の血清ＨＤＬコレステロールに対する抗ＫＬＨ抗体（対照）、２１Ｂ１２、８Ａ３、及び１１Ｆ１の単回皮下投与の効果を図示するグラフであり、縦軸にＨＤＬ−Ｃ（ｍｇ／ｄｌ）を取り、横軸に投与後の時間（日目）を取っている。
【図２７】カニクイザル中の血清トリグリセリドに対する抗ＫＬＨ抗体（対照）、２１Ｂ１２、８Ａ３、及び１１Ｆ１の単回皮下投与の効果を図示するグラフであり、縦軸に血清トリグリセリド濃度（ｍｇ／ｄｌ）を取り、横軸に投与後の時間（日目）を取っている。
【図２８】カニクイザル中のアポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）に対する抗ＫＬＨ抗体（対照）、２１Ｂ１２、８Ａ３、及び１１Ｆ１の単回皮下投与の効果を図示するグラフであり、縦軸にＡＰＯＢ濃度（ｍｇ／ｄｌ）を取り、横軸に投与後の時間（日目）を取っている。
【図２９】カニクイザル中の抗ＫＬＨ抗体（対照）、２１Ｂ１２、８Ａ３、及び１１Ｆ１に対する平均薬物動態プロファイルを図示するグラフであり、縦軸に抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）を取り、横軸に投与後の時間（日目）を取っている。
【図３０】カニクイザル中の抗ＫＬＨ抗体（対照）、２１Ｂ１２、８Ａ３、及び１１Ｆ１に対するＰＫパラメータをまとめた表である。
【図３１Ａ】８Ａ１、８Ａ３、及び１１Ｆ１の軽鎖アミノ酸配列の比較、並びに該比較から得られたコンセンサス配列を図示する。ＣＤＲ配列に下線が付されている。
【図３１Ｂ】８Ａ１、８Ａ３、及び１１Ｆ１の重鎖アミノ酸配列の比較、並びに該比較から得られたコンセンサス配列を図示する。ＣＤＲ配列に下線が付されている。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本明細書で提供されるのは、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の治療方法も含み、前記方法は、プロタンパク質コンベルターゼスブチリシン／ケクシン９型（ＰＣＳＫ９）に対する少なくとも１つの抗原結合タンパク質（例えば、抗体）を患者に投与することを含む。さらに、プロタンパク質コンベルターゼスブチリシン／ケクシン９型（ＰＣＳＫ９）に対する抗原結合タンパク質（例えば、抗体）を用いた、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の血清ＬＤＬコレステロールの低減方法も、本明細書中に提供される。
【００４６】
便宜のため、以下の節は、本明細書において使用される用語の様々な意味を全般的に概観する。この論述の後に、抗原結合タンパク質に関する一般的な態様が論述されており、その後に、抗原結合タンパク質の様々な実施形態の特性及びそれらをどのように使用することができるかを示す具体例が続く。
【００４７】
定義及び実施形態
前記一般的な記述及び以下の詳細な説明はいずれも例示的及び説明的なものに過ぎず、特許請求の範囲に記載されている本発明を限定するものではないことを理解しなければならない。本出願において、単数形の使用は、特に別段の記載がなければ、複数形を含む。本出願において、「または」の使用は、別段の記載がなければ、「及び／または」を意味する。さらに、「含んでいる」という用語並びに「含む」及び「含まれた」などのその他の語形の使用は、限定的なものではない。また、「要素」または「成分」などの用語は、特に別段の記載がなければ、一つの単位を含む要素及び成分並びに２つ以上のサブユニットを含む要素及び成分の両方を包含する。また、「部分」という用語の使用は、構成部分の一部または構成部分の全体を含み得る。
【００４８】
本明細書に記載されている見出しは、構成を目的とするものに過ぎず、記載されている主題を限定するものと解釈すべきではない。特許、特許出願、論説、書物及び論文などの（但し、これらに限定されない）、本出願に引用されている全ての文献または文献の一部は、あらゆる目的のために、その全体が、参照により、本明細書に明示的に組み込まれる。本開示において使用される場合、以下の用語は、別段の記載がなければ、以下の意味を有するものと理解されるものとする。
【００４９】
「プロタンパク質コンベルターゼスブチリシンケクシン９型」または「ＰＣＳＫ９」という用語は、配列番号１及び／または３に記載されているポリペプチドまたはその断片、並びに対立遺伝子バリアント、スプライスバリアント、誘導体バリアント、置換バリアント、欠失バリアント、及び／または挿入バリアント（Ｎ末端メチオニンの付加を含む）、融合ポリペプチド、及び種間相同体を含む（但し、これらに限定されない）関連ポリペプチドのことを言う。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９ポリペプチドは、リーダー配列残基、標的化残基、アミノ末端メチオニン残基、リジン残基、タグ残基、及び／または融合タンパク質残基などの（但し、これらに限定されない）末端残基を含む。「ＰＣＳＫ９」は、ＦＨ３、ＮＡＲＣ１、ＨＣＨＯＬＡ３、プロタンパク質コンベルターゼスブチリシン／ケクシン９型、及び神経アポトーシス制御コンベルターゼ１とも称されている。ＰＣＳＫ９遺伝子は、分泌性スブチラーゼファミリーのプロテイナーゼＫサブファミリーに属するプロタンパク質コンベルターゼタンパク質をコードする。「ＰＣＳＫ９」という用語は、プロタンパク質及びプロタンパク質の自己触媒後に生成される産物の両方を表す。（例えば、切断されたＰＣＳＫ９に選択的に結合する抗原結合タンパク質に対して）自己触媒された産物のみが言及されている場合には、このタンパク質は、「成熟」、「切断された」、「プロセッシングされた」または「活性な」ＰＣＳＫ９と称され得る。非活性形態のみが言及されている場合には、このタンパク質は、ＰＣＳＫ９の「非活性」、「プロ型」または「プロセッシングを受けていない」形態と称され得る。本明細書において使用されるＰＣＳＫ９という用語は、変異Ｄ３７４Ｙ、Ｓ１２７Ｒ、及びＦ２１６Ｌなどの天然に存在する対立遺伝子も含む。ＰＣＳＫ９という用語は、グリコシル化、ＰＥＧ化されたＰＣＳＫ９配列、そのシグナル配列が切断されたＰＣＳＫ９配列、触媒ドメインからそのプロドメインから切断されているが、触媒ドメインから分離されていないＰＣＳＫ９配列（例えば、図１Ａ及び１Ｂ）など、ＰＣＳＫ９アミノ酸配列の翻訳後修飾を取り込んだＰＣＳＫ９分子も包含する。
【００５０】
「ＰＣＳＫ９活性」という用語は、ＰＣＳＫ９のあらゆる生物学的効果を含む。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９活性は、基質若しくは受容体と相互作用し、または基質若しくは受容体に結合するＰＣＳＫ９の能力を含む。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９活性は、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）に結合するＰＣＳＫ９の能力によって表される。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９は、ＬＤＬＲを伴う反応に結合し、触媒する。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９活性は、ＬＤＬＲの利用可能性を変化させる（例えば、低減させる）ＰＣＳＫ９の能力を含む。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９活性は、対象中のＬＤＬの量を増加させるＰＣＳＫ９の能力を含む。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９活性は、ＬＤＬへの結合に利用可能なＬＤＬＲの量を減少させるＰＣＳＫ９の能力を含む。いくつかの実施形態において、「ＰＣＳＫ９活性」は、ＰＣＳＫ９シグナル伝達から生じるあらゆる生物活性を含む。典型的な活性には、ＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９の結合、ＬＤＬＲまたは他のタンパク質を切断するＰＣＳＫ９酵素活性、ＰＣＳＫ９作用を促進するＬＤＬＲ以外のタンパク質へのＰＣＳＫ９の結合、ＡＰＯＢ分泌を変化させるＰＣＳＫ９（Ｓｕｎ  Ｘ−Ｍ  ｅｔ  ａｌ，“Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ＰＣＳＫ９  ｏｎ  ａｐｏｌｉｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ａｓ  ｔｈｅ  ｃａｕｓｅ  ｏｆ  ｕｎｕｓｕａｌｌｙ  ｓｅｖｅｒｅ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ，Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １４：１１６１−１１６９，２００５  ａｎｄ  Ｏｕｇｕｅｒｒａｍ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ，“Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ１００  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ−ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎ  ＰＣＳＫ９，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｅ  Ｂｉｏｌ．２４：１４４８−１４５３，２００４）、肝臓の再生及び神経細胞の分化におけるＰＣＳＫ９の役割（Ｓｅｉｄａｈ  ＮＧ  ｅｔ  ａｌ，“Ｔｈｅ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  ｎｅｕｒａｌ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  １（ＮＡＲＣ−Ｉ）：Ｌｉｖｅｒ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ”ＰＮＡＳ  １００：９２８−９３３，２００３）、及び肝臓のグルコース代謝におけるＰＣＳＫ９の役割（Ｃｏｓｔｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｈｅｐａｔｉｃ  ＰＣＳＫ９  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｓｔａｔｕｓ  ｖｉａ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ａｎｄ  ｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １ｃ”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（１０）：６２１１−１８，２００６）が含まれるが、これらに限定されない。
【００５１】
本明細書において使用される「高コレステロール血症」という用語は、コレステロールレベルが所望のレベルを上回って上昇している症状のことを言う。いくつかの実施形態において、これは、血清コレステロールレベルが上昇していることを表す。いくつかの実施形態において、所望のレベルは、当業者に公知である（及び、本明細書に記載され、または引用されている）様々な「リスク因子」を考慮に入れる。
【００５２】
本明細書において使用される「ホモ接合性家族性高コレステロール血症」または「ＨｏＦＨ」という用語は、遺伝子確認または臨床診断（例えば、１３ｍｍｏｌ／Ｌを超える非処置ＬＤＬコレステロール濃度並びに１０歳前の黄色腫または両親のホモ接合性家族性高コレステロール血症の証拠の何れかの履歴）によって決定されるコレステロール関連疾患のことを言う。
【００５３】
「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、一本鎖及び二本鎖ヌクレオチドポリマーの両方を含む。ポリヌクレオチドを含むヌクレオチドは、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチド、またはヌクレオチドの何れかの種類の修飾された形態であり得る。前記修飾には、ブロモウリジン及びイノシン誘導体などの塩基修飾、２’，３’−ジデオキシリボースなどのリボース修飾、並びにホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレノアート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアニロチオアート、ホスホルアニラダート、及びホスホロアミダートなどのヌクレオチド間結合修飾が含まれる。
【００５４】
「オリゴヌクレオチド」という用語は、２００またはそれ以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを意味する。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１０から６０塩基の長さである。他の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０から４０ヌクレオチド長である。オリゴヌクレオチドは、例えば、変異体遺伝子の構築において使用するために、一本鎖または二本鎖であり得る。オリゴヌクレオチドは、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドであり得る。オリゴヌクレオチドは、検出アッセイのための、放射線標識、蛍光標識、ハプテン、または抗原性標識などの標識を含むことができる。オリゴヌクレオチドは、例えば、ＰＣＲプライマー、クローニングプライマーまたはハイブリッド形成プローブとして使用することができる。
【００５５】
「単離された核酸分子」は、単離されたポリヌクレオチドがその中に自然で見出されるポリヌクレオチドの全部若しくは一部を伴っていない、または自然で連結されていないポリヌクレオチドに連結されているゲノムのＤＮＡまたはＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたは合成起源またはこれらのいくつかの組み合わせを意味する。本開示の目的のためには、特定のヌクレオチド配列「を含む核酸分子」は完全な状態の染色体を包含しないことを理解すべきである。指定された核酸配列を「含む」単離された核酸分子は、指定された配列に加えて、最大１０個の若しくは最大２０個の他のタンパク質若しくはその一部に対するコード配列を含むことができ、または言及されている核酸配列のコード領域の発現を制御する作用可能に連結された調節配列を含むことができ、及び／またはベクター配列を含むことができる。
【００５６】
別段の記載がなければ、本明細書中に論述されているあらゆる一本鎖ポリヌクレオチド配列の左側末端は５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手の方向が５’方向と称される。新生ＲＮＡ転写物の５’から３’への付加の方向は、転写方向と称される。ＲＮＡ転写物の５’末端に対して５’である、ＲＮＡ転写物と同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」と称される。ＲＮＡ転写物の３’末端に対して３’である、ＲＮＡ転写物と同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域は、「下流配列」と称される。
【００５７】
「制御配列」という用語は、制御配列が連結されているコード配列の発現及びプロセッシングに影響を及ぼすことができるポリヌクレオチド配列のことを言う。そのような制御配列の性質は、宿主生物に依存し得る。特定の実施形態において、原核生物に対する制御配列には、プロモーター、リボソーム結合部位、及び転写終結配列が含まれ得る。例えば、真核生物に対する制御配列には、転写因子に対する認識部位の１つまたは複数を含むプロモーター、転写強化配列、及び転写終結配列が含まれ得る。「制御配列」には、リーダー配列及び／または融合対配列が含まれ得る。
【００５８】
「ベクター」という用語は、宿主細胞中にタンパク質コード情報を伝達するために使用されるあらゆる分子または実体（例えば、核酸、プラスミド、バクテリオファージ、またはウイルス）を意味する。
【００５９】
「発現ベクター」または「発現構築物」という用語は、宿主細胞の形質転換に適しており、並びに核酸配列に作用可能に連結された１つまたはそれ以上の異種のコード領域の発現を（宿主細胞と一緒に）誘導し、及び／または制御する核酸配列を含有するベクターのことを言う。発現構築物には、転写、翻訳に影響を及ぼしまたは制御し、イントロンが存在する場合には、作用可能に連結されているコード領域のＲＮＡスプライシングに影響を及ぼす配列が含まれ得るが、これらに限定されない。
【００６０】
本明細書において使用される「作用可能に連結された」とは、この用語が適用される成分が、適切な条件下でその固有の機能を発揮できる関係にあることを意味する。例えば、タンパク質のコード配列に「作用可能に連結された」ベクター中の制御配列は、制御配列の転写活性と適合する条件下で、タンパク質コード配列の発現が達成されるように、タンパク質コード配列に連結されている。
【００６１】
「宿主細胞」という用語は、核酸配列で形質転換されており、または核酸配列で形質転換されることができ、これにより、目的の遺伝子を発現する細胞を意味する。この用語は、目的の遺伝子が存在する限り、子孫が元の親細胞と形態的に同一であるかどうか、または元の親細胞と遺伝的組成が同一であるかどうかを問わず、親細胞の子孫を含む。
【００６２】
「形質移入」という用語は、細胞による外来または外因性ＤＮＡの取り込みを意味し、外因性ＤＮＡが細胞膜内に導入された場合に、細胞は「形質移入されている」。多数の形質移入技術が当該技術分野において周知であり、本明細書中に開示されている。例えば、「Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９７３，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ５２：４５６；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、上記；Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ，１９８１，Ｇｅｎｅ  １３：１９７」を参照されたい。そのような技術を、適切な宿主細胞中に１つまたはそれ以上の外来ＤＮＡ部分を導入するために使用することができる。
【００６３】
「形質転換」という用語は、細胞の遺伝的特性の変化のことを言い、新しいＤＮＡまたはＲＮＡを含有するように修飾された場合に、細胞は形質転換されている。例えば、形質移入、形質導入、または他の技術を介して新しい遺伝物質を導入することによって、その固有状態から遺伝的に修飾されている場合に、細胞は形質転換されている。形質移入または形質導入後に、細胞の染色体中に物理的に統合することによって、形質転換されているＤＮＡは細胞のＤＮＡと組み換えることができ、または複製されずに、エピソーム要素として一過性に維持されることができ、またはプラスミドとして独立に複製することができる。形質転換されているＤＮＡが細胞分裂とともに複製されるときに、細胞は、「安定に形質転換された」と考えられる。
【００６４】
「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語は、天然のタンパク質、即ち、天然に存在する非組み換え細胞によって産生されたタンパク質のアミノ酸配列を有する高分子を意味し、または「ポリペプチド」または「タンパク質」は、遺伝子操作された細胞若しくは組み換え細胞によって産生され、天然のタンパク質のアミノ酸配列を有する分子または天然配列の１つ若しくはそれ以上のアミノ酸からの欠失、付加、及び／または置換を有する分子を含む。この用語は、１つまたはそれ以上のアミノ酸が天然に存在する対応するアミノ酸及びポリマーの化学的類縁体であるアミノ酸ポリマーも含む。具体的には、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、抗原結合タンパク質の１つまたはそれ以上のアミノ酸からの欠失、付加、及び／または置換を有するＰＣＳＫ９抗原結合タンパク質、抗体、または配列を包含する。「ポリペプチド断片」という用語は、完全長の天然のタンパク質と比べて、アミノ末端の欠失、カルボキシル末端の欠失、及び／または内部欠失を有するポリペプチドのことを言う。そのような断片は、天然のタンパク質と比べて、修飾されたアミノ酸も含有する。ある特定の実施形態において、断片は約５〜５００アミノ酸長である。例えば、断片は、少なくとも５、６、８、１０、１４、２０、５０、７０、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、または４５０アミノ酸長であり得る。有用なポリペプチド断片には、抗体の免疫学的に機能的な断片（結合ドメインを含む）が含まれる。ＰＣＳＫ９結合抗体の場合、有用な断片には、ＣＤＲ領域、重鎖及び／または軽鎖の可変ドメイン、抗体鎖の一部、または２つのＣＤＲを含むその可変領域のみなどが含まれるが、これらに限定されない。
【００６５】
言及されている「単離されたタンパク質」という用語は、対象タンパク質が（１）通常一緒に見出される少なくともいくつかの他のタンパク質を含まない、（２）同じ源からの（例えば、同じ種からの）他のタンパク質を実質的に含まない、（３）異なる種からの細胞によって発現されている、（４）自然の状態で一緒に存在するポリヌクレオチド、脂質、炭水化物、または他の物質の少なくとも約５０％から分離されている、（５）自然の状態で一緒に存在しないポリペプチドと、（共有または非共有的相互作用によって）作用可能に結合されている、または（６）自然の状態で存在しないことを意味する。典型的には、「単離されたタンパク質」は、ある試料の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、または少なくとも約５０％を占める。ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、若しくは合成起源の他のＲＮＡ、またはこれらのあらゆる組み合わせは、そのような単離されたタンパク質をコードし得る。好ましくは、単離されたタンパク質は、その治療的、診断的、予防的な研究またはその他の使用を妨害する、その天然環境中に見出されるタンパク質またはポリペプチドまたは他の夾雑物を実質的に含まない。
【００６６】
「アミノ酸」という用語は、当該技術分野においてその通常の意味を含む。
【００６７】
ポリペプチド（例えば、抗原結合タンパク質または抗体）の「バリアント」は、別のポリペプチド配列と比べて、アミノ酸配列中に１つまたはそれ以上のアミノ酸残基が挿入され、欠失され、及び／または置換されているアミノ酸配列を含む。バリアントは、融合タンパク質を含む。
【００６８】
「同一性」という用語は、配列を並置及び比較することによって決定された、２つまたはそれ以上のポリペプチド分子または２つまたはそれ以上の核酸分子の配列間の関係のことを言う。「％同一性」とは、比較されている分子中のアミノ酸またはヌクレオチド間の同じ残基のパーセントを意味し、比較されている分子のうち最も小さなサイズに基づいて計算される。これらの計算のために、特定の数学的モデルまたはコンピュータプログラム（即ち、「アルゴリズム」）によって、好ましくは、（ギャップが存在する場合）並置中のギャップが割り当てられる。並置された核酸またはポリペプチドの同一性を計算するために使用することができる方法には、「Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．），１９８８，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．），１９９３，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ，（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．），１９９４，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ：Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，１９８７，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．），１９９１，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ；及びＣａｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，ＳＩＡＭＪ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．，４８：１０７３」に記載されているものが含まれる。
【００６９】
％同一性を計算する際には、比較されている配列は、配列間で最大の合致を与えるように典型的には並置される。％同一性を測定するために使用することができるコンピュータプログラムの一例は、ＧＡＰを含むＧＣＧプログラムパッケージである（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄＲｅｓ．１２：３８７；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）。コンピュータアルゴリズムＧＡＰは、％配列同一性を測定すべき２つのポリペプチドまたはポリヌクレオチドを並置するために使用される。配列は、それぞれのアミノ酸またはヌクレオチドの最適な合致が得られるように並置される（アルゴリズムによって決定される「合致したスパン」）。ギャップオープニングペナルティ（３×平均対角として計算される。「平均対角」は、使用されている比較行列の対角の平均である。「対角」は、この比較行列による各完全なアミノ酸の合致に対して割り当てられるスコアまたは数である）及びギャップ伸長ペナルティ（通常、ギャップオープニングペナルティの１／１０である）並びにＰＡＭ２５０またはＢＬＯＳｕｍ６２などの比較行列が、アルゴリズムとともに使用される。ある特定の実施形態において、標準的な比較行列も、アルゴリズムによって使用される（ＰＡＭ２５０比較行列に関して、Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８，Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５：３４５−３５２；ＢＬＯＳｕｍ６２比較行列に関して、Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８９：１０９１５−１０９１９を参照されたい）。
【００７０】
ＧＡＰプログラムを用いてポリペプチドまたはヌクレオチド配列に対する％同一性を測定する際に使用することができるパラメータの例は、以下の通りである：
・アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４３−４５３
・比較行列：Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，上記から得られるＢＬＯＳｕｍ６２
・ギャップペナルティ：１２（末端ギャップに対するペナルティはなし）
・ギャップ長ペナルティ：４
・類似性の閾値：０
【００７１】
２つのアミノ酸配列を並置するためのある特定の並置スキームは、２つの配列の短い領域の合致のみをもたらす場合があり得、２つの完全長配列の間には有意な関係が存在しなくても、この小さな並置された領域は極めて高い配列同一性を有し得る。従って、標的ポリペプチドの連続するアミノ酸の少なくとも５０または他の数値を包含する並置をもたらすことが所望されるのであれば、選択された並置法（ＧＡＰプログラム）を調整することができる。
【００７２】
本明細書において使用される、２０の従来（例えば、天然に存在する）アミノ酸及びそれらの略号は、慣用的な用法に従う。「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ  ａｎｄ  Ｄ．Ｒ．Ｇｒｅｎ，Ｅｄｓ．，Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．（１９９１））」（あらゆる目的のために、参照により、本明細書に組み込まれる）を参照されたい。２０の従来アミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、α−、α−二置換されたアミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、及び他の非慣用アミノ酸などの非天然アミノ酸も、本発明のポリペプチドに対する適切な成分であり得る。非従来アミノ酸の例には、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、σ−Ｎ−メチルアルギニン、並びに他の類似のアミノ酸及びイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が含まれる。本明細書において使用されるポリペプチドの表記法では、標準的な用法と慣習に従って、左手方向がアミノ末端方向であり、右手方向がカルボキシ末端方向である。
【００７３】
同様に、別段の記載がなければ、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左側末端が５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向が５’方向と称される。新生ＲＮＡ転写物の５’から３’への方向の付加は、転写方向と称される。ＲＮＡと同じ配列を有し、及びＲＮＡ転写物の５’末端に対して５’であるＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」と称される。ＲＮＡと同じ配列を有し、及びＲＮＡ転写物の３’末端に対して３’であるＤＮＡ鎖上の配列領域は、「下流配列」と称される。
【００７４】
保存的なアミノ酸置換は、生物系内での合成ではなく、典型的には、化学的なペプチド合成によって取り込まれる天然に存在しないアミノ酸残基を包含することができる。これらには、ペプチド模倣物及びアミノ酸部分の他の逆転または反転された形態が含まれる。
【００７５】
天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて、クラスに分類され得る：
【００７６】
１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
５）鎖の方向性に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【００７７】
例えば、非保存的置換は、これらのクラスの１つの一員を別のクラスの一員で交換することを含み得る。そのような置換された残基は、例えば、非ヒト抗体と相同であるヒト抗体の領域中に、または分子の非相同領域中に導入することができる。
【００７８】
抗原結合タンパク質またはＰＣＳＫ９タンパク質に対して変化を施す上で、ある特定の実施形態によれば、アミノ酸の疎水性親水性指標を考慮し得る。各アミノ酸は、その疎水性及び電荷的特徴に基づいて疎水性親水性指標を割り当てられている。疎水性親水性指標は、イソロイシン（＋４．５）、バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、システイン／シスチン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１．８）、グリシン（−０．４）、トレオニン（−０．７）、セリン（−０．８）、トリプトファン（−０．９）、チロシン（−１．３）、プロリン（−１．６）、ヒスチジン（−３．２）、グルタミン酸（−３．５）、グルタミン（−３．５）、アスパラギン酸（−３．５）、アスパラギン（−３．５）、リジン（−３．９）、及びアルギニン（−４．５）である。
【００７９】
タンパク質に対する相互作用性生物機能を付与する上での疎水性親水性アミノ酸指標の重要性は、当該技術分野において理解されている。Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３１（１９８２）。ある特定のアミノ酸は、類似の疎水性親水性指標またはスコアを有する他のアミノ酸で置換することができ、それでもなお類似の生物活性を保持することが知られている。疎水性親水性指標に基づいて変化させる際には、ある特定の実施形態において、疎水性親水性指標が±２以内であるアミノ酸の置換を含む。ある特定の実施形態において、±１以内であるアミノ酸の置換を含み、ある特定の実施形態においては±０．５以内であるアミノ酸の置換を含む。
【００８０】
類似アミノ酸の置換は、本事例のように、それによって産生される生物学的に機能的なタンパク質またはペプチドを免疫学的実施形態に用いようとする場合には特に、親水性に基づいて効果的に実施することができることも当該技術分野では理解されている。ある特定の実施形態において、隣接アミノ酸の親水性によって支配される、タンパク質の局所的な最大平均親水性は、その免疫原性及び抗原性、即ち、タンパク質の生物学的特性と相関がある。
【００８１】
以下の親水性値がこれらのアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）、リジン（＋３．０）、アスパラギン酸（＋３．０±１）、グルタミン酸（＋３．０±１）、セリン（＋０．３）、アスパラギン（＋０．２）、グルタミン（＋０．２）、グリシン（０）、トレオニン（−０．４）、プロリン（−０．５±１）、アラニン（−０．５）、ヒスチジン（−０．５）、システイン（−１．０）、メチオニン（−１．３）、バリン（−１．５）、ロイシン（−１．８）、イソロイシン（−１．８）、チロシン（−２．３）、フェニルアラニン（−２．５）、及びトリプトファン（−３．４）。類似の親水性値に基づいて変化させる際には、ある特定の実施形態において、その親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれ、ある特定の実施形態において、±１以内であるアミノ酸の置換が含まれ、ある特定の実施形態において、±０．５以内であるアミノ酸の置換が含まれる。親水性に基づいて、一次アミノ酸配列からエピトープを特定することもできる。これらの領域は、「エピトープコア領域」とも称される。
【００８２】
アミノ酸置換の例が、表１に示されている。
【００８３】
【表１】
2018076351.tif 000002
【００８４】
「誘導体」という用語は、アミノ酸（または核酸）の挿入、欠失、または置換以外の化学的修飾を含む分子のことを言う。ある特定の実施形態において、誘導体は、ポリマー、脂質、または他の有機若しくは無機部分との化学的結合などの（但し、これらに限定されない）共有修飾を含む。ある特定の実施形態において、化学的に修飾された抗原結合タンパク質は、化学的に修飾されていない抗原結合タンパク質より長い循環半減期を有することができる。ある特定の実施形態において、化学的に修飾された抗原結合タンパク質は、所望の細胞、組織、及び／または臓器に対する改善された標的誘導能力を有し得る。いくつかの実施形態において、誘導体抗原結合タンパク質は、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、またはポリプロピレングリコールなど（但し、これらに限定されない）、１つまたはそれ以上の水溶性ポリマー付着を含むように共有的に修飾される。例えば、米国特許第４，６４０，８３５号、同第４，４９６，６８９号、同第４，３０１，１４４号、同第４，６７０，４１７号、同第４，７９１，１９２号、及び同第４，１７９，３３７号を参照されたい。ある特定の実施形態において、誘導体抗原結合タンパク質は、モノメトキシ−ポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、または他の炭水化物をベースとするポリマー、ポリ−（Ｎ−ビニルピロリドン）−ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化されたポリオール（例えば、グリセロール）、及びポリビニルアルコール、並びにそのようなポリマーの混合物などの（但し、これらに限定されない）１つまたはそれ以上のポリマーを含む。
【００８５】
ある特定の実施形態において、誘導体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットで共有的に修飾されている。ある特定の実施形態において、１つまたはそれ以上の水溶性ポリマーは、１つまたはそれ以上の特定の位置で、例えば、誘導体のアミノ末端で結合されている。ある特定の実施形態において、１つまたはそれ以上の水溶性ポリマーは、誘導体の１つまたはそれ以上の側鎖に無作為に付着されている。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質に対して治療能力を向上させるためにＰＥＧが使用される。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体に対して治療能力を向上させるためにＰＥＧが使用される。ある特定のそのような方法が、例えば、米国特許第６，１３３，４２６号（参照により、あらゆる目的のために組み込まれる）に論述されている。
【００８６】
ペプチド類縁体は、テンプレートペプチドの特性と類似の特性を有する非ペプチド薬として、医薬産業において一般的に使用されている。非ペプチド化合物のこれらの種類は、「ペプチド模倣物（“ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃｓ”または“ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｔｉｃｓ”）」と称されている。「Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５：２９（１９８６）；Ｖｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ  ＴＩＮＳ  ｐ．３９２（１９８５）；及びＥｖａｎｓｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０：１２２９（１９８７）」（あらゆる目的のために、参照により、本明細書に組み込まれる）。そのような化合物は、しばしば、コンピュータ化された分子モデリングの助けを借りて開発される。治療的に有用なペプチドと構造的に類似するペプチド模倣物は、類似の治療効果または予防効果を生じさせるために使用し得る。一般に、ペプチド模倣物は、ヒト抗体などの模範ポリペプチド（即ち、生化学的特性または薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に類似するが、当該技術分野において周知の方法によって、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シス及びトランス）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、及び−ＣＨ２ＳＯ−から選択される結合によって必要に応じて置換された１つまたはそれ以上のペプチド結合を有する。コンセンサス配列の１つまたはそれ以上のアミノ酸を同種のＤアミノ酸で体系的に置換すること（例えば、Ｌ−リジンに代えてＤ−リジン）は、ある特定の実施形態において、より安定なペプチドを作製するために使用し得る。さらに、コンセンサス配列または実質的に同一なコンセンサス配列変異を含む拘束されたペプチドは、当該技術分野で公知の方法によって、例えば、ペプチドを環状化する分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を付加することによって、作製され得る（Ｒｉｚｏ  ａｎｄ  Ｇｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２）、参照により、あらゆる目的のために、本明細書に組み込まれる）。
【００８７】
ポリペプチド、核酸、宿主細胞などの生物学的材料に関連して本明細書を通じて使用される「天然に存在する」という用語は、自然の状態で見出される物質または自然の状態で見出される物質の形態のことを言う。
【００８８】
本明細書において使用される「抗原結合タンパク質」（「ＡＢＰ」）は、特定された標的抗原を結合するあらゆるタンパク質を意味する。本出願において、特定された標的抗原は、ＰＣＳＫ９タンパク質またはその断片である。「抗原結合タンパク質」には、抗体及びその結合部分（免疫学的に機能的な断片など）が含まれるが、これらに限定されない。ペプチボディは、抗原結合タンパク質の別の例である。本明細書において使用される抗体または免疫グロブリン鎖（重鎖または軽鎖）抗原結合タンパク質の「免疫学的に機能的な断片」（または単に「断片」）という用語は、完全長の鎖中に存在するアミノ酸の少なくともいくつかを欠如するが、抗原になお特異的に結合することができる抗体の部分（当該部分がどのようにして取得され、または合成されたかを問わない）を含む抗原結合タンパク質の種である。そのような断片は、標的抗原に結合し、あるエピトープへの結合に関して、完全な状態の抗体を含む他の抗原結合タンパク質と競合し得るという点で生物学的に活性を有する。いくつかの実施形態において、断片は、中和断片である。いくつかの実施形態において、断片は、ＬＤＬＲとＰＣＳＫ９の間の相互作用の可能性を遮断し、または低減させることができる。一態様において、そのような断片は、完全長の軽鎖または重鎖中に存在する少なくとも１つのＣＤＲを保持し、いくつかの実施形態において、単一の重鎖及び／または軽鎖またはその一部を含む。これらの生物学的に活性な断片は、組み換えＤＮＡ技術によって作製することが可能であり、または完全な状態の抗体を含む抗原結合タンパク質の酵素的若しくは化学的切断によって作製することが可能である。免疫学的に機能的な免疫グロブリン断片には、Ｆａｂ、ダイアボディ（同一鎖上の２つのドメイン間での対形成を可能にするには短すぎる短いペプチドリンカーを介して接続された、軽鎖可変ドメインと同一のポリペプチド上の重鎖可変ドメイン）、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体、及び一本鎖抗体が含まれるが、これらに限定されず、ヒト、マウス、ラット、ラクダ科の動物またはウサギなどの（但し、これらに限定されない）あらゆる哺乳動物源に由来し得る。本明細書中に開示されている抗原結合タンパク質の機能的部分、例えば、１つまたはそれ以上のＣＤＲは、体内の特定の標的に誘導され、二機能性治療特性を有し、または延長された血清半減期を有する治療剤を作製するために、第二のタンパク質または小分子に共有結合され得ることも考えられる。当業者によって理解されるように、抗原結合タンパク質は、非タンパク質成分を含むことができる。本開示のいくつかの節において、ＡＢＰの例は、「数字／文字／数字」（例えば、２５Ａ７）の形式で本明細書中に記載されている。これらの場合、正確な名前は、特定の抗体（例えば、２５Ａ７対２１Ｂ１２）を示す。即ち、２５Ａ７という名前のＡＢＰは、（本明細書において、同じであることが明示的に教示されていない限り（例えば、２５Ａ７及び２５Ａ７．３））、必ずしも２５Ａ７．１という名前の抗体と同じであるとは限らない。特に明記しない限り、ＡＢＰの名前は、抗体を意味する遺伝子表記であると理解される。
【００８９】
本明細書に記載されているある特定の抗原結合タンパク質は、抗体であり、または抗体に由来する。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質のポリペプチド構造は、モノクローナル抗体、二重特異的抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では、「抗体模倣物」と称される場合がある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合物（本明細書において、「抗体連結物」と称される場合がある）及びそれぞれ、これらの断片を含む（但し、これらに限定されない）抗体を基礎とする。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、アビマー（強固に結合するペプチド）を含むかまたはアビマーからなる。これらの様々な抗原結合タンパク質は、本明細書中にさらに記載されている。さらに、抗体の例は、例えば、米国特許第８，０３０，４５７号、米国特許第８，１６８，７６２号に記載されている。抗体のさらなる例は、例えば、米国特許第８，１８８，２３３号、米国特許第８，１８８，２３４号、米国特許第８，０８０，２４３号、米国特許第８，０６２，６４０号、ＷＯ２００８／０６３３２、ＷＯ２００９／０５５７８３、ＷＯ２０１１／０５３７５９、ＷＯ２０１２／０５４４３８、ＷＯ２０１２／０８８３１３、ＷＯ２０１２／１０９５３０、及びＷＯ２０１３／０３９９５８に記載されている。
【００９０】
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ１及びＣＨ２ドメインを含む２つの重鎖断片を含む。２つの重鎖断片は、２つまたはそれ以上のジスルフィド結合によって、及びＣＨ３ドメインの疎水的相互作用によって一緒に結合される。
【００９１】
「Ｆａｂ断片」は、１つの軽鎖並びに１つの重鎖のＣＨ１及び可変領域を含む。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。
【００９２】
「Ｆａｂ’断片」は、１つの軽鎖とＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインを含有し、並びに２つのＦａｂ’断片の２つの重鎖間で鎖間ジスルフィド結合を形成して、Ｆ（ａｂ’）２分子を形成できるように、ＣＨ１及びＣＨ２ドメインの間の領域も含有する１つの重鎖の一部を含む。
【００９３】
「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、２つの軽鎖及び鎖間ジスルフィド結合が２つの重鎖間で形成されるように、ＣＨ１とＣＨ２ドメインの間の定常領域の一部を含有する２つの重鎖を含有する。従って、Ｆ（ａｂ’）２断片は、２つの重鎖間のジスルフィド結合によって一緒に結合された２つのＦａｂ’断片から構成される。
【００９４】
「Ｆｖ領域」は、重鎖及び軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが、定常領域を欠如する。
【００９５】
「一本鎖抗体」は、柔軟なリンカーによって重鎖及び軽鎖可変領域が接続されて、抗原結合領域を形成する単一のポリペプチド鎖を形成するＦｖ分子である。一本鎖抗体は、国際特許出願公開ＷＯ８８／０１６４９並びに米国特許第４，９４６，７７８号及び同第５，２６０，２０３号（これらの開示は、参照により組み込まれる）に詳しく論述されている。
【００９６】
「ドメイン抗体」は、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含有する免疫学的に機能的な免疫グロブリン断片である。いくつかの例において、二価のドメイン抗体を作製するために、２つまたはそれ以上のＶＨ領域がペプチドリンカーを用いて共有結合される。二価のドメイン抗体の２つのＶＨ領域は、同一または別異の抗原を標的とし得る。
【００９７】
「二価の抗原結合タンパク質」または「二価の抗体」は、２つの抗原結合部位を含む。いくつかの例において、２つの結合部位は、同じ抗原特異性を有する。二価の抗原結合タンパク質及び二価の抗体は、二重特異的であり得る。下記を参照。「多重特異的」または「多重機能的」抗体以外の二価の抗体は、ある特定の実施形態において、典型的には、同一のその結合部位の各々を有するものと理解される。
【００９８】
「多重特異的抗原結合タンパク質」または「多重特異的抗体」は、２つ以上の抗原またはエピトープを標的とするものである。
【００９９】
「二重特異的」、「デュアル特異的」、または「二重機能的」抗原結合タンパク質または抗体は、それぞれ、２つの異なる抗原結合部位を有するハイブリッド抗原結合タンパク質または抗体である。二重特異的抗原結合タンパク質及び抗体は、多重特異的抗原結合タンパク質抗体の種であり、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の連結を含む（但し、これらに限定されない）様々な方法によって作製することができる。例えば、「Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ａｎｄ  Ｌａｃｈｍａｎｎ，１９９０，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３」を参照されたい。二重特異的抗原結合タンパク質または抗体の２つの結合部位は、同一または別異のタンパク質標的上に存在し得る２つの異なるエピトープに結合する。
【０１００】
抗原結合タンパク質は、解離定数（Ｋｄ）が１０−７Ｍ以下である場合に、その標的抗原を「特異的に結合する」と称される。ＡＢＰは、Ｋｄが５×１０−９Ｍ以下である場合に、「高親和性」で抗原に特異的に結合し、Ｋｄが５×１０−１０Ｍ以下である場合に、「極めて高親和性」で抗原に特異的に結合する。一実施形態において、ＡＢＰは、１０−９Ｍ以下のＫｄを有する。一実施形態において、オフ速度は、１×１０−５未満である。他の実施形態において、ＡＢＰは、約１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍの間のＫｄでヒトＰＣＳＫ９に結合し、さらに別の実施形態において、ＡＢＰは、５×１０−１０以下のＫｄで結合する。当業者によって理解されるように、いくつかの実施形態において、抗原結合断片のいずれもまたは全てが、ＰＣＳＫ９に特異的に結合し得る。
【０１０１】
第二の標的への結合より、ある標的により強固に結合する場合に、抗原結合タンパク質は「選択的」である。
【０１０２】
「抗原結合領域」は、特定の抗原（例えば、パラトープ）に特異的に結合するタンパク質またはタンパク質の一部を意味する。例えば、抗原と相互作用し、抗原に対するその特異性及び親和性を抗原結合タンパク質に対して付与するアミノ酸残基を含有する抗原結合タンパク質のその部分は、「抗原結合領域」と称される。抗原結合領域は、典型的には、１つまたはそれ以上の「相補性結合領域」（「ＣＤＲ」）を含む。ある特定の抗原結合領域は、１つまたはそれ以上の「フレームワーク」領域も含む。「ＣＤＲ」は、抗原結合特異性及び親和性に寄与するアミノ酸配列である。「フレームワーク」領域は、ＣＤＲの適切な立体構造の維持を補助して、抗原結合領域と抗原の間の結合を促進することができる。構造的には、フレームワーク領域は、抗体中においてＣＤＲ間に位置することができる。フレームワーク及びＣＤＲ領域の例は、図２Ａ〜３Ｄ、３ＣＣＣ〜３ＪＪＪに示されている。いくつかの実施形態において、抗体３Ｂ６の軽鎖に対するＣＤＲの配列は以下の通りである：ＣＤＲ１  ＴＬＳＳＧＹＳＳＹＥＶＤ（配列番号２７９）、ＣＤＲ２  ＶＤＴＧＧＩＶＧＳＫＧＥ（配列番号２８０）、ＣＤＲ３  ＧＡＤＨＧＳＧＴＮＦＶＶＶ（配列番号２８１）、ＦＲは、以下の通りである。ＦＲ１  ＱＰＶＬＴＱＰＬＦＡＳＡＳＬＧＡＳＶＴＬＴＣ（配列番号２８２）、ＦＲ２  ＷＹＱＱＲＰＧＫＧＰＲＦＶＭＲ（配列番号２８３）、ＦＲ３  ＧＩＰＤＲＦＳＶＬＧＳＧＬＮＲＹＬＴＩＫＮＩＱＥＥＤＥＳＤＹＨＣ（配列番号２８４）、及びＦＲ４  ＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２８５）。
【０１０３】
ある態様において、ＰＣＳＫ９、例えば、ヒトＰＣＳＫ９に結合する組み換え抗原結合タンパク質が提供される。この文脈において、「組み換え抗原結合タンパク質」は、組み換え技術を用いて、即ち、本明細書中に記載されている組み換え核酸の発現を通じて作製されたタンパク質である。組み換えタンパク質を作製するための方法及び技術は、当該技術分野において周知である。
【０１０４】
「抗体」という用語は、あらゆるアイソタイプの完全な免疫グロブリンまたは標的抗原への特異的結合に関して完全な状態の抗体と競合することができるその断片のことを言い、例えば、キメラ、ヒト化、完全ヒト、及び二重特異的抗体が含まれる。「抗体」は、抗原結合タンパク質の種である。完全な状態の抗体は、少なくとも２つの完全長重鎖及び２つの完全長軽鎖を一般に含むが、いくつかの事例では、重鎖のみを含み得る、ラクダ科の動物中に天然に存在する抗体などのように、より少ない鎖を含み得る。抗体は、単一の源からのみ得ることが可能であり、または「キメラ」であり得る、即ち、抗体の異なる部分が、以下でさらに記載されているように２つの異なる抗体に由来し得る。抗原結合タンパク質、抗体、または結合断片は、組み換えＤＮＡ技術によって、または完全な状態の抗体の酵素的若しくは化学的切断によって、ハイブリドーマ中で製造することができる。別段の記載がなければ、「抗体」という用語は、２つの完全長重鎖及び２つの完全長軽鎖を含む抗体に加えて、その誘導体、バリアント、断片、及び変異タンパク質を含み、その例は以下に記載されている。さらに、明示的に除外されていなければ、抗体には、モノクローナル抗体、二重特異的抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書において、「抗体模倣物」と称される場合がある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合物（本明細書において、「抗体連結物」と称される場合がある）及びそれぞれ、これらの断片が含まれる。いくつかの実施形態において、この用語は、ペプチボディも包含する。
【０１０５】
天然に存在する抗体構造単位は、典型的には、四量体を含む。そのような四量体の各々は、ポリペプチド鎖の２つの同じ対から典型的には構成され、各対は、１つの完全長「軽」鎖（ある特定の実施形態において、約２５ｋＤａ）及び１つの完全長「重」鎖（ある特定の実施形態において、約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、典型的には、抗原認識に必要とされる約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に必要とされ得る定常領域を典型的には規定する。ヒト軽鎖は、κ及びλ軽鎖として典型的に分類される。重鎖は、μ、δ、γ、αまたはεとして典型的に分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥとして規定する。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４などの（但し、これらに限定されない）いくつかのサブクラスを有する。ＩｇＭは、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２などの（但し、これらに限定されない）サブクラスを有する。ＩｇＡは、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２などの（但し、これらに限定されない）サブクラスへ同様に細分される。完全長の軽鎖及び重鎖内に、典型的には、可変及び定常領域は、約１２またはそれ以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結されており、重鎖は約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。例えば、「Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））（参照により、全ての目的のために、その全体が組み込まれる）」を参照されたい。各軽／重鎖対の可変領域は、典型的には、抗原結合部位を形成する。
【０１０６】
可変領域は、３つの超可変領域（相補性決定領域またはＣＤＲとも称される）によって連結された、相対的に保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般的構造を典型的に呈する。各対の２つの鎖から得られるＣＤＲは、フレームワーク領域によって典型的には並列され、これにより、特異的なエピトープへの結合が可能となり得る。Ｎ末端からＣ末端へ、軽鎖及び重鎖可変領域はいずれも、典型的には、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、典型的には、免疫学的に関心が持たれるタンパク質のＫａｂａｔ配列の定義（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７  ａｎｄ  １９９１））、または「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７８−８８３（１９８９）」に従う。
【０１０７】
ある特定の実施形態において、抗体重鎖は、抗体軽鎖の不存在下で、抗原に結合する。ある特定の実施形態において、抗体軽鎖は、抗体重鎖の不存在下で、抗原に結合する。ある特定の実施形態において、抗体結合領域は、抗体軽鎖の不存在下で、抗原に結合する。ある特定の実施形態において、抗体結合領域は、抗体重鎖の不存在下で、抗原に結合する。ある特定の実施形態において、各可変領域は、他の可変領域の不存在下で、抗原に特異的に結合する。
【０１０８】
ある特定の実施形態において、ＣＤＲの確定的な描写及び抗体の結合部位を含む残基の同定は、抗体の構造を解明し、及び／または抗体−リガンド複合体の構造を解明することによって達成される。ある特定の実施形態において、これは、Ｘ線結晶学など、当業者に公知の様々な技術の何れによっても達成することができる。ある特定の実施形態において、ＣＤＲ領域を同定し、または概測するために、様々な分析の方法を使用することができる。そのような方法の例には、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、及び接触定義が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０９】
Ｋａｂａｔ定義は、抗体中の残基に付番するための標準であり、ＣＤＲ領域を識別するために典型的に使用される。例えば、「Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｗｕ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  ＡｃｉｄｓＲｅｓ．，２８：２１４−８（２０００）」を参照されたい。Ｃｈｏｔｈｉａ定義はＫａｂａｔ定義に類似しているが、Ｃｈｏｔｈｉａ定義はある特定の構造的ループ領域の位置を考慮に入れている。例えば、「Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−１７（１９８６）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７−８３（１９８９）」を参照されたい。ＡｂＭ定義は、抗体構造をモデル化するＯｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐによって作製されたコンピュータプログラムの一体化されたパッケージを使用する。例えば、「Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ（ＵＳＡ），８６：９２６８−９２７２（１９８９）；“ＡｂＭ（商標），Ａ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ；Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｌｔｄ」を参照されたい。ＡｂＭ定義は、公知のデータベースとＰＲＯＴＥＩＮＳ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｕｐｐｌ．，３：１９４−１９８（１９９９）中の「Ｓａｍｕｄｒａｌａ  ｅｔ  ａｌ，“Ａｂ  Ｉｎｉｔｉｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ＨｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，”によって記載されているようなアブイニシオ法の組み合わせを用いて、一次配列から抗体の四次構造をモデル化する。接触定義は、利用可能な複雑な結晶構造の解析を基礎とする。例えば、「ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５：７３２−４５（１９９６）」を参照されたい。
【０１１０】
慣例により、重鎖中のＣＤＲ領域は、典型的には、Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３と称され、アミノ末端からカルボキシ末端の方向に順に付番される。軽鎖中のＣＤＲ領域は、典型的には、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３と称され、アミノ末端からカルボキシ末端の方向に順に付番される。
【０１１１】
「軽鎖」という用語は、完全長の軽鎖及び結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するその断片を含む。完全長軽鎖は、可変領域ドメイン、ＶＬ及び定常領域ドメイン、ＣＬを含む。軽鎖の可変領域ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端に位置する。軽鎖は、κ鎖及びλ鎖を含む。
【０１１２】
「重鎖」という用語は、完全長の重鎖及び結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するその断片を含む。完全長の重鎖は、可変領域ドメインＶＨ及び３つの定常領域ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。ＶＨドメインは、ポリペプチドのアミノ末端に、ＣＨドメインは、カルボキシル末端に位置し、ＣＨ３がポリペプチドのカルボキシ末端に最も近い。重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４サブタイプを含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２サブタイプを含む）、ＩｇＭ及びＩｇＥなどのあらゆるアイソタイプのものであり得る。
【０１１３】
二重特異的または二重機能的抗体は、典型的には、２つの異なる重／軽鎖対及び２つの異なる結合部位を有する人工のハイブリッド抗体である。二重特異的抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の連結などの（但し、これらに限定されない）様々な方法によって産生され得る。例えば、「Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７９：３１５−３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：１５４７−１５５３（１９９２）」を参照されたい。
【０１１４】
哺乳動物のいくつかの種は、単一の重鎖のみを有する抗体も産生する。
【０１１５】
それぞれの各免疫グロブリン鎖は、それぞれ概ね９０〜１１０のアミノ酸からなり、特徴的な折り畳みパターンを有する数個の「免疫グロブリンドメイン」から典型的に構成される。これらのドメインは、抗体ポリペプチドを構成する基本単位である。ヒトでは、ＩｇＡ及びＩｇＤアイソタイプは４つの重鎖と４つの軽鎖を含有し、ＩｇＧ及びＩｇＥアイソタイプは２つの重鎖と２つの軽鎖を含有し、並びにＩｇＭアイソタイプは５つの重鎖と５つの軽鎖を含有する。重鎖Ｃ領域は、エフェクター機能に必要とされ得る１つまたはそれ以上のドメインを典型的に含む。重鎖定常領域ドメインの数は、アイソタイプに依存する。ＩｇＧ重鎖は、例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３として知られる３つのＣ領域ドメインを含有する。提供される抗体は、これらのアイソタイプ及びサブタイプの何れをも有し得る。本発明のある特定の実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体はＩｇＧ２またはＩｇＧ４サブタイプの抗体である。
【０１１６】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、重鎖中にアミノ末端の約１２０〜１３０個のアミノ酸及び軽鎖中に約１００から１１０個のアミノ末端アミノ酸を典型的には含む、抗体の軽鎖及び／または重鎖の一部を表す。ある特定の実施形態において、異なる抗体の可変領域は、同じ種の抗体間でさえ、アミノ酸配列が大幅に異なる。抗体の可変領域は、ある抗体の標的に対する特異性を典型的には決定する。
【０１１７】
「中和抗原結合タンパク質」または「中和抗体」という用語は、リガンドに結合し、そのリガンドの生物学的効果を妨げ、または低減させる、それぞれ、抗原結合タンパク質または抗体のことを言う。これは、例えば、リガンド上の結合部位を直接封鎖することによって、またはリガンドに結合し、間接的な手段（例えば、リガンド中の構造的またはエネルギー的変化など）を通じて、リガンドの結合能を変化させることによって行うことができる。いくつかの実施形態において、この用語は、それが結合しているタンパク質が生物学的機能を発揮するのを妨げる抗原結合タンパク質も表し得る。抗原結合タンパク質（例えば、抗体または免疫学的に機能的なその断片）の結合及び／または特異性を評価する際に、抗体の過剰が（インビトロ競合結合アッセイで測定された場合に）少なくとも約１〜２０、２０〜３０％、３０〜４０％、４０〜５０％、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、９７〜９８％、９８〜９９％、またはそれ以上、リガンドに結合された結合対の量を低減させるときに、抗体または断片は、その結合対へのリガンドの結合を大幅に阻害することができる。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９抗原結合タンパク質の場合には、そのような中和分子は、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲに結合する能力を低減させることができる。いくつかの実施形態において、競合アッセイを介して、中和能力を性質決定し、及び／または記載する。いくつかの実施形態において、中和能力は、ＩＣ５０またはＥＣ５０値の観点で記載される。いくつかの実施形態において、ＡＢＰ２７Ｂ２、１３Ｈ１、１３Ｂ５、及び３Ｃ４は、非中和ＡＢＰであり、３Ｂ６、９Ｃ９、及び３１Ａ４は、弱い中和物質であり、表２中の残りのＡＢＰは、強い中和物質である。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合タンパク質は、ＰＣＳＫ９に結合し、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲに結合するのを妨げる（またはＰＣＳＫ９がＬＤＬＲに結合する能力を低減させる）ことによって中和する。いくつかの実施形態において、抗体またはＡＢＰは、ＰＣＳＫ９に結合し、ＰＣＳＫ９をＬＤＬＲに結合させながら、ＬＤＬＲのＰＣＳＫ９媒介性分解を妨げ、または低減させることによって中和する。従って、いくつかの実施形態において、中和ＡＢＰまたは抗体は、ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ結合をなお可能にしながら、ＰＣＳＫ９が関与するＬＤＬＲのその後の分解を妨げる（または低減させる）。
【０１１８】
「標的」という用語は、抗原結合タンパク質によって結合することができる分子または分子の一部のことを言う。ある特定の実施形態において、標的は、１つまたはそれ以上のエピトープを有することができる。ある特定の実施形態において、標的は、抗原である。「抗原結合タンパク質」という用語における「抗原」の使用は、抗原を含むタンパク質配列が抗体によって結合され得ることを単に表す。この文脈において、タンパク質は外来であること、または免疫応答を誘導可能であることは必要とされない。
【０１１９】
同じエピトープに対して競合する抗原結合タンパク質（例えば、中和抗原結合タンパク質または中和抗体）という文脈において使用される場合の「競合する」という用語は、検査されている抗原結合タンパク質（例えば、抗体または免疫学的に機能的なその断片）が共通の抗原（例えば、ＰＣＳＫ９またはその断片）への参照抗原結合タンパク質（例えば、リガンドまたは参照抗体）の特異的結合を妨げ、または阻害する（例えば、低減させる）アッセイによって測定された抗原結合タンパク質間の競合を意味する。ある抗原結合タンパク質が別の抗原結合タンパク質と競合するかどうかを決定するために、競合結合アッセイの多数の種類、例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ  ｅｔ  ａｌ，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ９：２４２−２５３参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−３６１９参照）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ）；Ｉ−１２５標識を用いた固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７−１５）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：５４６−５５２参照）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７−８２参照）を使用することができる。典型的には、そのようなアッセイは、固体表面に結合された精製抗原又はそれらの何れかを有する細胞、標識されていない検査抗原結合タンパク質、及び標識された参照抗原結合タンパク質を使用することを含む。競合的阻害は、検査抗原結合タンパク質の存在下で、固体表面または細胞に結合された標識の量を測定することによって測定される。通常、検査抗原結合タンパク質は過剰に存在する。競合アッセイによって同定される抗原結合タンパク質（競合抗原結合タンパク質）には、参照抗原結合タンパク質と同じエピトープに結合する抗原結合タンパク質、及び立体的妨害が生じるのに、参照抗原結合タンパク質によって結合されるエピトープに十分に近接した隣接エピトープに結合する抗原結合タンパク質が含まれる。競合結合を測定するための方法に関するさらなる詳細は、本明細書中の実施例に提供されている。通常、競合抗原結合タンパク質が過剰に存在する場合には、少なくとも４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％または７５％またはそれ以上、共通の抗原への基準抗原結合タンパク質の特異的結合を阻害する（例えば、低減させる）。いくつかの例において、少なくとも８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％または９７％またはそれ以上、結合が阻害される。
【０１２０】
「抗原」という用語は、抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその免疫学的機能断片など）などの選択的結合因子によって結合され得る分子または分子の一部のことを言う。いくつかの実施形態において、抗原は、その抗原に結合することができる抗体を産生するために、動物内で使用することができる。抗原は、異なる抗原結合タンパク質（例えば、抗体）と相互作用することができる１つまたはそれ以上のエピトープを有することができる。
【０１２１】
「エピトープ」という用語は、抗体またはＴ細胞受容体などの抗原結合タンパク質によって結合され得るあらゆる決定基を含む。エピトープは、抗原の、その抗原を標的とする抗原結合タンパク質によって結合される領域であり、抗原がタンパク質である場合、抗原結合タンパク質に直接接触する特定のアミノ酸を含む。最も頻繁には、エピトープはタンパク質上に存在するが、いくつかの事例では、核酸などの分子の他の種類上に存在することができる。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面基を含むことができ、特異的な三次元構造の特徴及び／または特異的な電荷的特徴を有することができる。一般に、特定の標的抗原に対して特異的な抗体は、タンパク質及び／または高分子の複合混合物中において、標的抗原上のエピトープを優先的に認識する。
【０１２２】
本明細書において使用される「実質的に純粋な」とは、分子の記載されている種が存在している主要な種であること、即ち、モル濃度ベースで、同じ混合物中の他の何れの個別の種より豊富に存在することを意味する。ある特定の実施形態において、実質的に純粋な分子は、対象種が存在する全ての高分子種の少なくとも５０％（モル濃度を基礎とする）を占める組成物である。他の実施形態において、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全ての高分子種の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％を含む。他の実施形態において、慣用の検出法によって、夾雑種を組成物中に検出することができず、従って、組成物が単一の検出可能な高分子種からなる実質的均一状態になるまで対象種が精製される。
【０１２３】
「因子」という用語は、本明細書において、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生物学的高分子、または生物学的材料から作製された抽出物を表すために使用される。
【０１２４】
本明細書において使用される「標識」または「標識された」という用語は、例えば、放射線標識されたアミノ酸の取り込みまたは標識されたアビジン（例えば、蛍光マーカーまたは光学的若しくは色素測定法によって検出可能な酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出することが可能なビオチン部分のポリペプチドへの付着によって、検出可能マーカーを取り込むことを言う。ある特定の実施形態において、標識またはマーカーは、治療用でもあり得る。ポリペプチド及び糖タンパク質を標識する様々な方法が当該技術分野において公知であり、使用することが可能である。ポリペプチドに対する標識の例には、以下のものが含まれるが、これらに限定されない。放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光物質）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。ある特定の実施形態において、立体障害の可能性を低減するために、標識は、様々な長さのスペーサーアームによって付着される。
【０１２５】
本明細書において使用される「生物学的試料」という用語には、生物または以前に生物であった物から得られる物質のあらゆる量が含まれるが、これらに限定されない。そのような生物には、ヒト、マウス、サル、ラット、ウサギ、及び他の動物が含まれるが、これらに限定されない。そのような物質には、血液、血清、尿、細胞、臓器、組織、骨、骨髄、リンパ節、及び皮膚が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２６】
本明細書において使用される「薬剤組成物」（または薬剤または薬物）という用語は、患者に適切に投与された場合に、所望の治療効果を誘導することができる、化学的化合物、組成物、組成物、薬剤、または薬物のことを言う。薬剤組成物は、成分のうちの２つ以上の種類を必ずしも必要としない。
【０１２７】
「治療的有効量」という用語は、哺乳動物中の治療的応答を生じさせることが決定されたＰＣＳＫ９抗原結合タンパク質のことを言う。そのような治療的有効量は、当業者によって容易に確定される。
【０１２８】
本明細書において使用される「調節物質」という用語は、分子の活性または機能を変化または改変させる化合物である。例えば、調節物質は、調節物質の不存在下で観察される活性または機能の規模と比べて、分子のある特定の活性または機能の規模の増加または減少を引き起こすことができる。ある特定の実施形態において、調節物質は、分子のうちの少なくとも１つの活性または機能の規模を減少させる阻害剤である。分子のある特定の典型的な活性及び機能には、結合親和性、酵素活性、及びシグナル伝達が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の典型的な阻害剤には、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチボディ、炭水化物または小有機分子が含まれるが、これらに限定されない。ペプチボディは、例えば、米国特許第６，６６０，８４３号（ＰＣＴ出願ＷＯ０１／８３５２５に対応する）に記載されている。
【０１２９】
「患者」と「対象」という用語は互換的に使用され、ヒト及び非ヒト動物対象並びに以前に診断された疾患を有する対象、以前に認識された疾患を持たない対象、医学的な治療を受けた対象、疾患を発症するリスクを有する対象などが含まれる。
【０１３０】
「治療する」及び「治療」という用語は、治療的処置、予防的処置、及び対象が疾患または他のリスク因子を発症するリスクを低減する適用が含まれる。治療は、疾患の完全な治癒を必要とするものではなく、症候または伏在するリスク因子を低減させる実施形態を包含する。
【０１３１】
「予防する」という用語は、事象の確率を１００％除去することを必要とするものではない。むしろ、「予防する」という用語は、化合物または方法の存在下で、事象の発生の可能性が低下されることを表す。
【０１３２】
組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、及び組織培養並びに形質転換（例えば、電気穿孔、リポフェクション）のための標準的な技術を使用することができる。酵素反応及び精製技術は、製造業者の仕様に従って、または当該技術分野で一般的に実施されるように、または本明細書中に記載されているように実施することができる。前記技術及び手技は、当該技術分野において周知の方法に従って、並びに本明細書を通じて引用及び論述されている様々な一般的な、及びより具体的な参考文献に記載されているように、一般に実施することができる。例えば、「Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））」（参照により、あらゆる目的のために本明細書中に組み込まれる）を参照されたい。特別な定義が与えられていない限り、本明細書中に記載されている分析化学、合成有機化学並びに医学及び薬剤化学に関連して使用される命名法並びにこれらの研究手技及び技術は、当該技術分野において周知であり、一般的に使用されるものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、製剤化及び送達及び患者の治療のための標準的な技術を使用することができる。
【０１３３】
ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質
プロタンパク質コンベルターゼスブチリシンケクシン９型（ＰＣＳＫ９）は、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）タンパク質のレベルの制御に関与しているセリンプロテアーゼである（Ｈｏｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ，２００７；Ｓｅｉｄａｈ  ａｎｄ  Ｐｒａｔ，２００７）。ＰＣＳＫ９は、セリンプロテアーゼのスブチリシン（Ｓ８）ファミリーのプロホルモン−プロタンパク質コンベルターゼである（Ｓｅｉｄａｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。典型的なヒトＰＣＳＫ９アミノ酸配列は、図１Ａの配列番号１（下線が付されているタンパク質の「プロ」ドメインを図示する）及び図１Ｂの配列番号３（太字のシグナル配列及び下線が付されたプロドメインを図示する）として表されている。典型的なヒトＰＣＳＫ９のコード配列が、配列番号２として表されている（図１Ｂ）。本明細書において記載されているように、ＰＣＳＫ９タンパク質は、完全長ＰＣＳＫ９タンパク質の断片も含むことができる。ＰＣＳＫ９タンパク質の構造は、２つのグループによって最近解決された（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ＆  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，ａｎｄ  Ｐｉｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，１５：１−８，２００７）（いずれも、参照により、全体が本明細書に組み込まれる）。ＰＣＳＫ９は、シグナル配列、Ｎ末端プロドメイン、スブチリシン様触媒ドメイン、及びＣ末端ドメインを含む。
【０１３４】
ヒトＰＣＳＫ９を含むＰＣＳＫ９に結合する抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が、本明細書中に記載の方法で使用される。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、本明細書において記載されている、１つまたはそれ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むポリペプチドである。いくつかの抗原結合タンパク質において、ＣＤＲは、ＣＤＲの適切な抗原結合特性が達成されるようにＣＤＲを方向付ける「フレームワーク」領域中に包埋されている。いくつかの実施形態において、本明細書中に提供されている方法で使用することができる抗原結合タンパク質は、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲ間の相互作用を妨害し、遮断し、低減させ、または調節することができる。そのような抗原結合タンパク質は、「中和」と表される。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質が中和性であり、ＰＣＳＫ９に結合されている場合でさえ、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲ間の結合はなお起こり得る。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書中に提供されている方法で有用なＡＢＰは、ＰＣＳＫ９上のＬＤＬＲ結合部位を封鎖することなく、ＬＤＬＲに対するＰＣＳＫ９の悪影響を妨げ、または低減させる。従って、いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲ間の結合相互作用を抑制する必要なしに、ＬＤＬＲの分解をもたらすＰＣＳＫ９の能力を調節し、または変化させる。そのようなＡＢＰは、「非競合的に中和する」ＡＢＰと特に記載することができる。いくつかの実施形態において、中和ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲに結合するのを妨げる位置及び／または様式で、ＰＣＳＫ９に結合する。そのようなＡＢＰは、「競合的に中和する」ＡＢＰと特に記載することができる。上記中和物質はいずれも、対象中に存在している遊離のＬＤＬＲのより大きな量をもたらすことができ、これにより、ＬＤＬに結合しているより多くのＬＤＬＲがもたらされる（これにより、対象中のＬＤＬの量を低減させる）。続いて、これは、対象中に存在する血清コレステロールの量の低下をもたらす。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、本明細書中に提供されている抗原結合タンパク質は、ＰＣＳＫ９によって媒介される活性（結合を含む）を阻害することができる。いくつかの実施形態において、これらのエピトープに結合する抗原結合タンパク質は、とりわけ、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲの間の相互作用及びＰＣＳＫ９によって媒介される他の生理学的効果を阻害する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＰＣＳＫ９に対する完全ヒト抗体など、ヒトである。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９の触媒ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９の成熟形態に結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９のプロドメイン中に結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９の成熟形態に選択的に結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲに結合できない様式で、または効率的には結合できない様式で、触媒ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、触媒ドメインのＣ末端に結合しない。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、触媒ドメインのＮ末端に結合しない。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９タンパク質のＮ末端またはＣ末端に結合しない。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、本明細書中に論述されている抗体によって結合されるエピトープの何れか１つに結合する。いくつかの実施形態において、これは、本明細書中に開示されている抗体と他の抗体の間の競合アッセイによって測定することができる。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、表２に記載されている抗体の１つによって結合されるエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＰＣＳＫ９の特異的な立体構造状態に結合して、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲと相互作用するのを妨げる。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９のＶドメインに結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９のＶドメインに結合し、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲに結合するのを妨げる（または低減させる）。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９のＶドメインに結合し、ＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９の結合を妨げ（または低減させ）ないが、ＬＤＬＲ上のＰＣＳＫ９を通じて媒介されるＬＤＬＲに対する有害な活性を妨げ、または低減させる。
【０１３７】
本明細書中に提供されている方法で有用な開示の抗原結合タンパク質は、様々な用途を有する。抗原結合タンパク質のいくつかは、例えば、特異的結合アッセイ、ＰＣＳＫ９、特に、ヒトＰＣＳＫ９またはそのリガンドの親和性精製において、及びＰＣＳＫ９活性の他のアンタゴニストを同定するためのスクリーニングアッセイにおいて有用である。抗原結合タンパク質のいくつかは、ＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９の結合を阻害し、またはＰＣＳＫ９によって媒介される活性を阻害するのに有用である。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、本明細書中に提供されている方法で有用な抗原結合タンパク質は、１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ポリペプチド構造及び（ｂ）ポリペプチド構造中に挿入され、及び／または連結された１つまたはそれ以上のＣＤＲを含む。ポリペプチド構造は、様々な異なる形態を取ることができる。例えば、ポリペプチド構造は、天然に存在する抗体のフレームワークまたはその断片若しくはバリアントであり得、若しくはこれらを含むことができ、または性質上、完全に合成であり得る。様々なポリペプチド構造の例は、以下にさらに記載されている。
【０１３９】
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質のポリペプチド構造は、抗体であり、またはモノクローナル抗体、二重特異的抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では、「抗体模倣物」と称される場合がある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体融合物（本明細書において、「抗体連結物」と称される場合がある）及びそれぞれ、各々の一部若しくは断片を含む（但し、これらに限定されない）抗体に由来する。いくつかの例において、抗原結合タンパク質は、抗体の免疫学的断片である（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖ）。様々な構造は、本明細書中にさらに記載及び定義されている。
【０１４０】
本明細書中に提供されている方法で有用な抗原結合タンパク質のいくつかは、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に及び／または選択的に結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３の残基１５３〜６９２を有する及び／またはからなるヒトＰＣＳＫ９タンパク質に特異的に及び／または選択的に結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、配列番号３の残基３１〜１５２を有する及び／またはからなるヒトＰＣＳＫ９に特異的に及び／または選択的に結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、図１Ａに図示されているヒトＰＣＳＫ９タンパク質（配列番号１）に選択的に結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＰＣＳＫ９タンパク質の少なくとも断片及び／またはシグナル配列あり若しくはなしの完全長ＰＣＳＫ９タンパク質に特異的に結合する。
【０１４１】
抗原結合タンパク質が治療用途のために使用される実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＰＣＳＫ９の１つまたはそれ以上の生物学的活性を阻害し、妨害し、または調節することができる。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合し、及び／または（例えば、インビトロ競合結合アッセイにおける結合を測定することによって）少なくとも約２０％〜４０％、４０〜６０％、６０〜８０％、８０〜８５％、またはそれ以上、ＬＤＬＲへのヒトＰＣＳＫ９の結合を実質的に阻害する。本明細書中に提供されている抗原結合タンパク質のいくつかは、抗体である。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、１０−１３Ｍより小さいＫｄを有する（より強固に結合する）。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９へのＬＤＬＲの結合の遮断に関して、１μＭ未満、１０００ｎＭ〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜１０ｎＭ、１０ｎＭ〜１ｎＭ、１０００ｐＭ〜５００ｐＭ、５００ｐＭ〜２００ｐＭ、２００ｐＭ未満、２００ｐＭ〜１５０ｐＭ、２００ｐＭ〜１００ｐＭ、１００ｐＭ〜１０ｐＭ、１０ｐＭ〜１ｐＭのＩＣ５０を有する（Ｄ３４７Ｙ、高親和性バリアント）。
【０１４２】
本発明の抗ＰＣＳＫ９抗体のＩｇＧ２重鎖定常ドメインの一例は、配列番号１５４、図３ＫＫに示されているアミノ酸配列を有する。
【０１４３】
本発明の抗ＰＣＳＫ９抗体のＩｇＧ４重鎖定常ドメインの一例は、配列番号１５５、図３ＫＫに示されているアミノ酸配列を有する。
【０１４４】
抗ＰＣＳＫ９抗体のκ軽鎖定常ドメインの一例は、配列番号１５７、図３ＫＫに示されているアミノ酸配列を有する。
【０１４５】
抗ＰＣＳＫ９抗体のλ軽鎖定常ドメインの一例は、配列番号１５６、図３ＫＫに示されているアミノ酸配列を有する。
【０１４６】
免疫グロブリン鎖の可変領域は、３つの超可変領域（より頻繁には、「相補性決定領域」またはＣＤＲと称される。）によって連結された、相対的に保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）を含む同一の全体構造を一般に呈する。上記各重鎖／軽鎖対の２つの鎖からのＣＤＲは、標的タンパク質（例えば、ＰＣＳＫ９）上の特異的エピトープと特異的に結合する構造を形成するために、フレームワーク領域によって典型的に並列される。Ｎ末端からＣ末端へ、天然に存在する軽鎖及び重鎖可変領域は何れも、これらの要素の以下の順序と通例合致する。ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４。これらの各ドメイン中の位置を占めるアミノ酸に番号を割り当てるために、付番系が考案されている。この付番系は、「Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９８７  ａｎｄ  １９９１，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）」または「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３」において定義されている。
【０１４７】
様々な重鎖及び軽鎖可変領域が本明細書中に提供されており、図２Ａ〜３ＪＪ及び３ＬＬ〜３ＪＪＪ並びに３ＬＬＬ中に図示されている。いくつかの実施形態において、これらの可変領域の各々は、それぞれ、完全な抗体重鎖及び軽鎖を形成するために、上記重鎖及び軽鎖定常領域に付着させることができる。さらに、完全な抗体構造を形成するために、このようにして作製された重鎖及び軽鎖配列の各々を組み合わせることが可能である。
【０１４８】
提供されている抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域のいくつかの具体例及びそれらの対応するアミノ酸配列が、表２中に要約されている。
【０１４９】
【表２】
2018076351.tif 000003
2018076351.tif 000004
【０１５０】
同じく、表２に列記されている典型的な可変重鎖の各々は、抗体を形成するために、表２に示されている典型的な可変軽鎖の何れとも組み合わせることができる。表２は、本明細書中に開示されている抗体のいくつかの中に見出される典型的な軽鎖及び重鎖の対を示している。いくつかの例において、抗体は、表２に列記されているものから得られる少なくとも１つの可変重鎖と１つの可変軽鎖を含む。他の例において、抗体は、２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含有する。一例として、抗体または抗原結合タンパク質は、重鎖及び軽鎖、２つの重鎖または２つの軽鎖を含むことができる。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、表２に列記されている配列のうちの少なくとも１つから得られる１、２、及び／または３つの重及び／または軽ＣＤＲ（これらの配列に対するＣＤＲは、図２Ａ〜３Ｄ並びに図３ＣＣＣ〜３ＪＪＪ及び３ＫＫＫ並びに１３Ａ〜１３Ｊ中の他の実施形態中に概説されている）を含む（及び／またはからなる）。いくつかの実施形態において、６つのＣＤＲ（軽鎖からのＣＤＲ１〜３（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）及び重鎖からのＣＤＲ１〜３（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）の全てが、ＡＢＰの一部である。いくつかの実施形態において、１、２、３、４、５、またはそれ以上のＣＤＲが、ＡＢＰ中に含まれている。いくつかの実施形態において、表２中の配列中のＣＤＲから得られる１つの重及び１つの軽ＣＤＲが、ＡＢＰ中に含まれる（表２中の配列に対するＣＤＲは、図２Ａ〜３Ｄ中に概説されている）。いくつかの実施形態において、（例えば、図２Ａ〜２Ｄ、３Ａ〜３Ｄ中に、３ＣＣＣ〜３ＪＪＪ及び３ＬＬＬ並びに１３Ａ〜１３Ｊ中の他の実施形態中に図示されているような）さらなる区画も、ＡＢＰ中に含まれる。表２中に記載されている重鎖及び軽鎖に対するＣＤＲ及びＦＲの例は、図２Ａ〜３Ｄ（及び図３ＣＣＣ〜３ＪＪＪ及び３ＬＬＬ並びに１３Ａ〜１３Ｊ中の他の実施形態）中に概説されている。任意で存在する軽鎖可変配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４を含む。）は、以下から選択することができる：５、７、９、１０、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、３１、３２、３３、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４２、４４、４６、４２１、４２５、４２９、４３３、４３７、４４１、４４５、４４９、４５３、４５７、４６１，４６５、４６９、４７３、４７７、４８１、及び４８５。任意で存在する重鎖可変配列（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４を含む。）は、以下から選択することができる：７４、８５、７１、７２、６７、８７、５８、５２、５１、５３、４８、５４、５５、５６、４９、５７、５０、９１、６４、６２、８９、６５、７９、８０、７６、７７、７８、８３、６９、８１，６０、４１９、４２３、４２７、４３１、４３５、４３９、４４３、４４７、４５１、４５５、４５９、４６３、４６７、４７１、４７５、４７９、及び４８３。図２Ａ〜３Ｄ、図３ＣＣＣ〜３ＪＪＪ、及び３ＬＬＬ中のエントリーのいくつかでは、配列の変動またはＣＤＲ及びＦＲの別の境界が特定されている。これらの代替物は、ＡＢＰ名の後の「ｖｌ」によって特定されている。これらの代替物の殆どは本来僅かなので、相違を有する区画のみが表中に示されている。軽鎖または重鎖の残りの区画は他のパネル中の基本ＡＢＰに対して示されているものと同じであることが理解される。従って、図２Ｃ中では、相違のみが記載されているので、例えば、図２Ｃ中の１９Ｈ９ｖｌは、図２Ａ中の１９Ｈ９と同じＦＲ１、ＣＤＲ１、及びＦＲ２を有する。核酸配列の３つ（ＡＢＰ２６Ｅ１０、３０Ｂ９、及び３１Ｂ１２）に対して、さらなる別の核酸配列が図中に提供されている。当業者によって理解されるように、抗体またはＡＢＰの作製において、実際には、そのような配列の１つ以下を使用する必要がある。実際に、いくつかの実施形態において、特異的な重鎖または軽鎖核酸の１つのみが存在する必要があり、または全く存在する必要がない。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されている方法で有用な抗体には、米国特許第８，０３０，４５７号または米国特許第８，１６８，７６２号に記載されている抗体が含まれる。本明細書中に記載されている方法で有用な抗体のさらなる例は、例えば、米国特許第８，１８８，２３３号、米国特許第８，１８８，２３４号、米国特許第８，０８０，２４３号、米国特許第８，０６２，６４０号、ＷＯ２００８／０６３３２、ＷＯ２００９／０５５７８３、ＷＯ２０１１／０５３７５９、ＷＯ２０１２／０５４４３８、ＷＯ２０１２／０８８３１３、ＷＯ２０１２／１０９５３０、及びＷＯ２０１３／０３９９５８に記載されている。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、表２中のタンパク質配列の何れかをコードすることができる核酸配列によってコードされる。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＬＤＬＲに結合するＰＣＳＫ９の形態（例えば、当該分子の自己触媒化された形態）に選択的に結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、触媒ドメインのｃ末端（例えば、ｃ末端中の５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜４０の多くのアミノ酸）に結合しない。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、触媒ドメインのｎ末端（例えば、ｎ末端中の５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜４０の多くのアミノ酸）に結合しない。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９の成熟形態のアミノ酸１〜１００内のアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、アミノ酸３１〜１００、１００〜２００、３１〜１５２、１５３〜６９２、２００〜３００、３００〜４００、４５２〜６８３、４００〜５００、５００〜６００、３１〜６９２、３１〜４４９、及び／または６００〜６９２内のアミノ酸（及び／またはこれらからなるアミノ酸配列）に結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、触媒ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、中和及び／または非中和ＡＢＰは、プロドメインに結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、触媒及びプロドメインの両方に結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、触媒ドメインに結合して、プロドメインと相互作用する触媒ドメイン上の領域を塞ぐ。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、Ｐｉｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ１５：１〜８（２００７）（その中の立体表示も含めて、その全体が、参照により、本明細書に組み込まれる）に概説されているように、プロドメインが相互作用する位置または表面において触媒ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、触媒ドメインに結合し、プロドメインの移動性を制約する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、プロドメインに結合することなしに、触媒ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９をＬＤＬＲに結合させるようにプロドメインが再配向するのを妨げながら、プロドメインに結合することなしに、触媒ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、Ｐｉｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．中のプロドメインの周囲の残基１４９〜１５２と同じエピトープ中に結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、Ｖドメイン上の（Ｐｉｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．において概説されているような）溝に結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、Ｖドメイン上の溝に近いヒスチジンに富むパッチに結合する。いくつかの実施形態において、（Ｖドメインに結合する）そのような抗体は、中和でない。いくつかの実施形態において、Ｖドメインに結合する抗体は、中和である。いくつかの実施形態において、中和ＡＢＰは、ＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９の結合を妨げる。いくつかの実施形態において、中和ＡＢＰは、ＬＤＬＲのＰＣＳＫ９分解を妨げながら、ＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９の結合を妨げない（例えば、ＡＢＰ  ３１Ａ４）。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、Ｐｉｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．の論文の図４に図示されているヒスチジンのうちの少なくとも１つに結合し、または遮断する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＣＳＫ９中の触媒三連構造を遮断する。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、抗体は、野生型ＰＣＳＫ９に比べて、バリアントＰＣＳＫ９タンパク質（例えば、Ｄ３７４Ｙ）に選択的に結合する。いくつかの実施形態において、これらの抗体は、（Ｋｄを介して測定した場合に）野生型より少なくとも２倍強くバリアントに結合し、好ましくは、２〜５、５〜１０、１０〜１００、１００〜１０００、１０００〜１０，０００倍またはそれ以上、野生型より変異体に強く結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、野生型ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲと相互作用することを阻害する能力を上回って、バリアントＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲと相互作用することを選択的に阻害する。いくつかの実施形態において、これらの抗体は、（ＩＣ５０を介して測定した場合に）野生型がＬＤＬＲに結合する能力より強く、バリアントがＬＤＬＲに結合する能力を遮断する（例えば、野生型より少なくとも２倍強く、好ましくは、野生型より２〜５、５〜１０、１０〜１００、１００〜１０００倍、またはそれ以上強く変異体に）。いくつかの実施形態において、抗体は、野生型ＰＣＳＫ９及びＰＣＳＫ９のバリアント形態（Ｄ３７４Ｙなど）の両方に同様のレベルで結合し、中和する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＰＣＳＫ９に結合して、ＬＤＬＲのバリアントがＰＣＳＫ９に結合するのを妨げる。いくつかの実施形態において、ＬＤＬＲのバリアントは、ヒトＬＤＬＲと少なくとも５０％同一である。ＬＤＬＲのバリアントは、当業者に公知であることが注目される（例えば、ＢｒｏｗｎＭＳ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃａｌｃｉｕｍ  ｃａｇｅｓ，  ａｃｉｄ  ｂａｔｈｓ  ａｎｄ  ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”Ｎａｔｕｒｅ  ３８８：６２９−６３０，  １９９７）。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（ＬＤＬＲの機能喪失バリアントが存在する）中の有効ＬＤＬＲのレベルを上昇させることができる。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、図１Ａ及び／または図１Ｂ中に図示されているＰＣＳＫ９の形態に対して少なくとも５０％、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜９５、９５〜９９、またはそれ以上の％同一性であるＰＣＳＫ９のバリアントに結合する（但し、遮断しない）。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、図１Ａ及び／または図１Ｂ中に図示されているＰＣＳＫ９の成熟形態に対して少なくとも５０％、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜９５、９５〜９９、またはそれ以上の％同一性であるＰＣＳＫ９のバリアントに結合する（但し、遮断しない）。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、図１Ａ及び／または図１Ｂ中に図示されているＰＣＳＫ９の形態に対して少なくとも５０％、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜９５、９５〜９９、またはそれ以上の％同一性であるＰＣＳＫ９のバリアントに結合し、ＬＤＬＲと相互作用するのを妨げる。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、図１Ｂ中に図示されているＰＣＳＫ９の成熟形態に対して少なくとも５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜９５、９５〜９９、またはそれ以上の％同一性であるＰＣＳＫ９のバリアントに結合し、ＬＤＬＲと相互作用するのを妨げる。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９のバリアントは、４７４位におけるバリアント、Ｅ６２０Ｇ及び／またはＥ６７０Ｇなどのヒトバリアントである。いくつかの実施形態において、４７４位のアミノ酸は（他のヒトにおけるように）バリンまたは（カニクイザル及びマウスにおけるように）トレオニンである。本明細書中に提示されている交叉反応性のデータに鑑みれば、本抗体は上記バリアントへ容易に結合するものと考えられる。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、表２に記載されている抗体の１つによって結合されるエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＰＣＳＫ９の特異的な立体構造状態に結合して、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲと相互作用するのを妨げる。
【０１５７】
ヒト化された抗原結合タンパク質（例えば、抗体）
本明細書において記載されているように、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、ヒト化抗体及び／またはその一部を含むことができる。そのような戦略の重要な実用的用途は、マウス液性免疫系の「ヒト化」である。
【０１５８】
ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒトの中で実質的に非免疫原性である。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化抗体が誘導された別の種由来の抗体と、標的に対する実質的に同一の親和性を有する。例えば、米国特許第５，５３０，１０１号、米国特許第５，６９３，７６１号、米国特許第５，６９３，７６２号、米国特許第５，５８５，０８９号を参照されたい。
【０１５９】
ある特定の実施形態において、その免疫原性を減少させつつ、抗原結合ドメインの天然親和性を減弱させずに修飾され得る抗体可変ドメインのアミノ酸が特定される。例えば、米国特許第５，７６６，８８６号及び同第５，８６９，６１９号を参照されたい。
【０１６０】
ある特定の実施形態において、当該技術分野で公知の方法による抗体の修飾は、典型的には、標的に対する増加された結合親和性を達成し、及び／または服用者中の抗体の免疫原性を減少させるように設計されている。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、その同種抗原に対する抗体の親和性を増加させるために、グリコシル化部位を除去するように修飾される。例えば、「Ｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏ１.Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３０：１３６１−１３６７（１９９３）」を参照されたい。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体を作製するために、「リシェーピング」、「超キメラ化」、または「ベニヤリング／リサーフェシング」などの技術が使用される。例えば、「Ｖａｓｗａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ，＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ８１：１０５（１９９８）；Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒ．，９：８９５−９０４（１９９６）、及び米国特許第６，０７２，０３５号」を参照されたい。そのようなある特定の実施形態において、そのような技術は、典型的には、外来残基の数を減らすことによって抗体の免疫原性を減少させるが、抗体の反復投与後に抗イディオタイプ及び抗アロタイプ応答を抑制しない。例えば、「Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６２（６）：３６６３−７１（１９９９）」には、免疫原性を減少させるための他の方法がいくつか記載されている。
【０１６１】
ある特定の事例において、ヒト化抗体は、抗原結合能の喪失をもたらす。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は「逆突然変異」される。そのような実施形態において、ヒト化抗体は、ドナー抗体中に見られるアミノ酸残基の１つまたはそれ以上を含むように変異される。例えば、「Ｓａｌｄａｎｈａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３６：７０９−１９（１９９９）」を参照されたい。
【０１６２】
ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗体の軽鎖及び重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、同じ種または別の種由来のフレームワーク領域（ＦＲ）に移植され得る。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗体の軽鎖及び重鎖可変領域のＣＤＲは、コンセンサスヒトＦＲに移植され得る。コンセンサスヒトＦＲを作製するために、ある特定の実施形態において、コンセンサスアミノ酸配列を特定するために、いくつかのヒト重鎖または軽鎖アミノ酸配列由来のＦＲが並置される。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９重鎖または軽鎖に対する抗体のＦＲは、異なる重鎖または軽鎖由来のＦＲで置換される。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗体の重鎖及び軽鎖のＦＲ中にある珍しいアミノ酸は置換されないが、ＦＲアミノ酸の残りは置換される。珍しいアミノ酸は、ＦＲ中に通常見出されない位置にある特定のアミノ酸である。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗体由来の移植された可変領域は、ＰＣＳＫ９に対する抗体の定常領域とは異なる定常領域とともに使用され得る。ある特定の実施形態において、移植された可変領域は、一本鎖Ｆｖ抗体の一部である。ＣＤＲ移植は、例えば、米国特許第６，１８０，３７０号、第６，０５４，２９７号、第５，６９３，７６２号、第５，８５９，２０５号、第５，６９３，７６１号、第５，５６５，３３２号、第５，５８５，０８９号及び第５，５３０，１０１号並びに「Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８），Ｗｉｎｔｅｒ，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｓ．，４３０：９２−９４（１９９８）」に記載されており、これらは、参照により、あらゆる目的のために本明細書に組み込まれる。
【０１６３】
ヒト抗原結合タンパク質（例えば、抗体）
本明細書において記載されているように、ＰＣＳＫ９に結合する抗原結合タンパク質は、ヒト（即ち、完全ヒト）抗体及び／またはその一部を含み得る。ある特定の実施形態において、重鎖及び軽鎖免疫グロブリン分子をコードするヌクレオチド配列並びに重鎖及び軽鎖免疫グロブリン分子を含むアミノ酸配列（特に、可変領域に対応する配列）が提供される。ある特定の実施形態において、相補性決定領域（ＣＤＲ）、特に、ＣＤＲ１からＣＤＲ３に対応する配列が提供される。ある特定の実施形態によれば、そのような免疫グロブリン分子を発現するハイブリドーマ細胞株が提供される。ある特定の実施形態によれば、そのようなモノクローナル抗体を発現するハイブリドーマ細胞株が提供される。ある特定の実施形態において、ハイブリドーマ細胞株は、表２中に記載されている細胞株のうちの少なくとも１つ、例えば、２１Ｂ１２、１６Ｆ１２、及び３１Ｈ４から選択される。ある特定の実施形態において、ヒトＰＣＳＫ９に対する精製されたヒトモノクローナル抗体が提供される。
【０１６４】
マウス抗体の不存在下でマウスがヒト抗体を産生することを期待して、ヒトＩｇ遺伝子座の巨大断片を用いて、マウス抗体産生が欠損するマウス株を改変することができる。巨大ヒトＩｇ断片は、巨大な可変遺伝子の多様性並びに抗体産生及び発現の適切な制御を保存することができる。抗体の多様化及び選択並びにヒトタンパク質に対する免疫学的寛容性の欠如のためにマウスの機構を活用することによって、これらのマウス系統中の再生されたヒト抗体レパートリーは、目的とするあらゆる抗原（ヒト抗原を含む）に対して、高親和性完全ヒト抗体を与えることができる。ハイブリドーマ技術を用いて、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトＭＡｂを作製し、選択することができる。ある特定の典型的な方法が、ＷＯ９８／２４８９３、米国特許第５，５４５，８０７号、ＥＰ５４６０７３、及びＥＰ５４６０７３に記載されている。
【０１６５】
ある特定の実施形態において、ヒト可変領域とともに、ヒト以外の種から得られる定常領域を使用することができる。
【０１６６】
酵母人工染色体（ＹＡＣ）中でメガ塩基サイズのヒト遺伝子座をクローニング及び再構築する能力、並びにマウス生殖系列中にそれらを導入する能力によって、極めて巨大なまたは大まかにマッピングされた遺伝子座の機能的成分を解明し、及びヒト疾病の有用なモデルを作製するためのアプローチが与えられる。さらに、マウス遺伝子座をそれらのヒト均等物で置換するためのそのような技術の使用によって、発達中のヒト遺伝子産物の発現及び制御、他の系とのそれらのやり取り並びに疾病の誘導及び進行におけるそれらの関与に対する洞察が与えられ得る。
【０１６７】
ヒト抗体は、マウスまたはラットの可変及び／または定常領域を有する抗体に伴う問題のいくつかを回避する。そのようなマウスまたはラット由来のタンパク質の存在は、抗体の迅速な排除をもたらすことがあり、または患者による、抗体に対する免疫応答の生成をもたらすことがある。マウスまたはラットに由来する抗体の使用を回避するために、げっ歯類、他の哺乳動物または動物が完全ヒト抗体を産生するように、げっ歯類、他の哺乳動物、または動物中に機能的なヒト抗体遺伝子座の導入を通じて、完全ヒト抗体を作製することができる。
【０１６８】
ヒト化抗体は、まずヒトでない抗体アミノ酸配列を含有することから開始しながら、ヒト抗体配列で置換されたこれらの非ヒト抗体アミノ酸配列の少なくともいくつかを有する抗体である。これは、ヒトが有する遺伝子によって抗体がコードされる（またはコードされることができる）ヒト抗体とは異なる。
【０１６９】
抗原結合タンパク質のバリアント
提供される他の抗体は、表２及び図２Ａ〜３ＪＪ及び３ＬＬ〜ＪＪＪ並びに３ＬＬＬ中に示されている可変重鎖及び可変軽鎖の組み合わせまたはサブパートによって形成され、表２中の配列（配列全体または配列のサブパート（例えば、１つまたはそれ以上のＣＤＲ））及び図２Ａ〜３ＪＪ及び３ＬＬ〜ＪＪＪ並びに３ＬＬＬの配列のアミノ酸配列に対して、それぞれ、少なくとも５０％、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、９７〜９９％、または９９％超の同一性を有する可変軽鎖及び／または可変重鎖を含む上掲のＡＢＰバリアントである。いくつかの事例において、そのような抗体は、少なくとも１つの重鎖及び１つの軽鎖を含むのに対して、他の例において、バリアント形態は、２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖（またはこれらのサブパート）を含有する。いくつかの実施形態において、結合に影響を及ぼす変動及び結合に影響を及ぼさないと思われる変動を観察することによって修飾することが可能な抗体の区画を特定するために、図２Ａ〜３Ｄ（並びに１３Ａ〜１３Ｊ、及び図３１Ａ及び３１Ｂ中の他の実施形態）中の配列比較を使用することができる。例えば、類似の配列を比較することによって、修飾可能な区画（例えば、特定のアミノ酸）を特定し、ＡＢＰの機能性をなお保持しながら（または改善しながら）、それらをどのようにして修飾することができるかを特定することができる。いくつかの実施形態において、ＡＢＰのバリアントは、図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｇ、１３Ｈ、１３Ｉ、１３Ｊ、及び／または３１Ａ及び３１Ｂ中に図示されているコンセンサス基及び配列を含み、変動が、図中に可変として特定される位置において可能である。図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｇ、３１Ａ、及び３１Ｂに示されているＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ法（構造ループ領域の位置に基づく。例えば、「Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」Ｂｉｓｓａｎ  Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ａｒｔｈｕｒ  Ｍ．Ｌｅｓｋ  ａｎｄ  Ｃｙｒｕｓ  Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３（４）：９２７−９４８，７  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ（１９９７）を参照されたい）とＫａｂａｔ法（配列変動性に基づく。例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２，Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）を参照されたい）のハイブリッド組み合わせに基づいて定義された。何れかの方法によって決定された各残基は、ＣＤＲ残基の最終リスト中に含められた（図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ、１３Ｇ、３１Ａ、及び３１Ｂに記載されている）。図１３Ｈ、１３Ｉ、及び１３Ｊ中のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ法のみによって得られた。別段の記載がなければ、図１３Ｈ〜１３Ｊ中の定義されたコンセンサス配列、ＣＤＲ、及びＦＲは、図１３中において参照されているＡＢＰに対する表記ＣＤＲ及びＦＲを定義し、制御する。
【０１７０】
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号７４、８５、７１、７２、６７、８７、５８、５２、５１、５３、４８、５４、５５、５６、４９、５７、５０、９１、６４、６２、８９、６５、７９、８０、７６、７７、７８、８３、６９、８１、６０、４１９、４２３、４２７、４３１、４３５、４３９、４４３、４４７、４５１、４５５、４５９、４６３、４６７、４７１、４７５、４７９、及び４８３の配列のうちの少なくとも１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号７４、８５、７１、７２、６７、８７、５８、５２、５１、５３、４８、５４、５５、５６、４９、５７、５０、９１、６４、６２、８９、６５、７９、８０、７６、７７、７８、８３、６９、８１、６０、４１９、４２３、４２７、４３１、４３５、４３９、４４３、４４７、４５１、４５５、４５９、４６３、４６７、４７１、４７５、４７９、及び４８３の配列のうちの少なくとも１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号７４、８５、７１、７２、６７、８７、５８、５２、５１、５３、４８、５４、５５、５６、４９、５７、５０、９１、６４、６２、８９、６５、７９、８０、７６、７７、７８、８３、６９、８１、６０、４１９、４２３、４２７、４３１、４３５、４３９、４４３、４４７、４５１、４５５、４５９、４６３、４６７、４７１、４７５、４７９、及び４８３の配列のうちの少なくとも１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む重鎖を含む。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号７４、８５、７１、７２、６７、８７、５８、５２、５１、５３、４８、５４、５５、５６、４９、５７、５０、９１、６４、６２、８９、６５、７９、８０、７６、７７、７８、８３、６９、８１、６０、４１９、４２３、４２７、４３１、４３５、４３９、４４３、４４７、４５１、４５５、４５９、４６３、４６７、４７１、４７５、４７９、及び４８３の配列のうちの少なくとも１つ中のＣＤＲから得られる１つまたはそれ以上のＣＤＲと少なくとも９０％、９０〜９５％、及び／または９５〜９９％同一である配列を含む。いくつかの実施形態において、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲ（それぞれ、上記配列と少なくとも９０％、９０〜９５％、及び／または９５〜９９％同一である）が存在する。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号７４、８５、７１、７２、６７、８７、５８、５２、５１、５３、４８、５４、５５、５６、４９、５７、５０、９１、６４、６２、８９、６５、７９、８０、７６、７７、７８、８３、６９、８１、６０、４１９、４２３、４２７、４３１、４３５、４３９、４４３、４４７、４５１、４５５、４５９、４６３、４６７、４７１、４７５、４７９、及び４８３の配列のうちの少なくとも１つ中のＦＲから得られる１つまたはそれ以上のＦＲと少なくとも９０％、９０〜９５％、及び／または９５〜９９％同一である配列を含む。いくつかの実施形態において、１、２、３、または４つのＦＲ（それぞれ、上記配列と少なくとも９０％、９０〜９５％、及び／または９５〜９９％同一である）が存在する。
【０１７３】
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５、７、９、１０、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、３１、３２、３３、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４２、４４、４６、４２１、４２５、４２９、４３３、４３７、４４１、４４５、４９、４５３、４５７、４６１、４６５、４６９、４７３、４７７、４８１、及び４８５の配列のうちの少なくとも１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５、７、９、１０、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、３１、３２、３３、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４２、４４、及び４６の配列のうちの少なくとも１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５、７、９、１０、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、３１、３２、３３、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４２、４４、４６、４２１、４２５、４２９、４３３、４３７、４４１、４４５、４９、４５３、４５７、４６１、４６５、４６９、４７３、４７７、４８１、及び４８５の配列のうちの少なくとも１つから選択されたアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む可変領域を含む軽鎖を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５、７、９、１０、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、３１、３２、３３、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４２、４４、４６、４２１、４２５、４２９、４３３、４３７、４４１、４４５、４９、４５３、４５７、４６１、４６５、４６９、４７３、４７７、４８１、及び４８５の配列のうちの少なくとも１つ中のＣＤＲから得られる１つまたはそれ以上のＣＤＲと少なくとも９０％、９０〜９５％、及び／または９５〜９９％同一である配列を含む。いくつかの実施形態において、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲ（それぞれ、上記配列と少なくとも９０％、９０〜９５％、及び／または９５〜９９％同一である）が存在する。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５、７、９、１０、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、２８、３０、３１、３２、３３、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４２、４４、４６、４２１、４２５、４２９、４３３、４３７、４４１、４４５、４９、４５３、４５７、４６１、４６５、４６９、４７３、４７７、４８１、及び４８５の配列のうちの少なくとも１つ中のＦＲから得られる１つまたはそれ以上のＦＲと少なくとも９０％、９０〜９５％、及び／または９５〜９９％同一である配列を含む。いくつかの実施形態において、１、２、３、または４つのＦＲ（それぞれ、上記配列と少なくとも９０％、９０〜９５％、及び／または９５〜９９％同一である）が存在する。
【０１７６】
本開示に照らして、当業者であれば、本明細書において記載されているように、周知の技術を用いて、ＡＢＰの適切なバリアントを決定することができるであろう。ある特定の実施形態において、当業者は、活性にとって重要でないと考えられている領域を標的とすることによって、活性を破壊することなく変化することができる、分子の適切な領域を特定し得る。ある特定の実施形態において、類似のポリペプチド間で保存されている、分子の残基及び部分を特定することができる。ある特定の実施形態において、生物活性にとって、または構造にとって重要であり得る領域でさえ、生物活性を破壊することなく、またはポリペプチド構造に悪影響を与えることなく、保存的なアミノ酸置換を施すことができる。
【０１７７】
さらに、当業者は、活性または構造にとって重要である類似のポリペプチド中の残基を特定する構造機能研究を調査することができる。そのような比較の見地から、類似のタンパク質において活性または構造にとって重要であるアミノ酸に対応するタンパク質中のアミノ酸残基の重要性を予測することができる。当業者であれば、そのような予測された重要なアミノ酸残基に対して化学的に類似するアミノ酸置換を選択し得る。
【０１７８】
当業者であれば、類似のＡＢＰ中の構造に関して、三次元構造及びアミノ酸配列を分析することも可能である。そのような情報の見地から、当業者は、その三次元構造に関して、抗体のアミノ酸残基の並置を予測し得る。ある特定の実施形態において、タンパク質の表面上に存在すると予測されるアミノ酸残基は、他の分子との重要な相互作用に関与し得るので、当業者は、タンパク質の表面上に存在すると予測されるアミノ酸残基に対して大幅な変化を与えないように選択し得る。さらに、当業者であれば、各所望のアミノ酸残基に単一アミノ酸置換を含有する試験バリアントを作製することもできる。次いで、このバリアントは、当業者に公知の活性アッセイを用いてスクリーニングすることができる。そのようなバリアントは、適切なバリアントについての情報を集めるために使用し得る。例えば、特定のアミノ酸残基への変化が、損なわれた活性、望ましくない程度に減少した活性または不適切な活性をもたらすことを発見したのであれば、そのような変化を有するバリアントが回避され得る。換言すれば、そのような日常的な実験から集められた情報に基づいて、当業者は、単独で、または他の変異と組み合わせて、さらなる置換を回避すべきアミノ酸を容易に決定することができる。
【０１７９】
多数の科学的刊行物が二次構造の予測を取り扱っている。「Ｍｏｕｌｔ  Ｊ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，７（４）：４２２−４２７（１９９６），Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３（２）：２２２−２４５（１９７４）；Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１１３（２）：２１１−２２２（１９７４）；Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｒｅｌａｔ．Ａｒｅａｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４７：４５−１４８（１９７８）；Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，４７：２５１−２７６  ａｎｄ  Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．，２６：３６７−３８４（１９７９）」を参照されたい。さらに、現在では、二次構造の予測を補助するために、コンピュータプログラムを使用することができる。二次構造を予測する一つの方法は、相同性モデリングに基づいている。例えば、３０％を超える配列同一性または４０％を超える類似性を有する２つのポリペプチドまたはタンパク質は、しばしば、類似の構造的トポロジーを有する。近年のタンパク質構造データベース（ＰＤＢ）の充実は、ポリペプチドまたはタンパク質の構造内に生じ得る折り畳みの数など、二次構造の予測可能性を向上させた。「Ｈｏｌｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，２７（１）：２４４−２４７（１９９９）」を参照されたい。所定のポリペプチドまたはタンパク質中には、限られた数の折り畳みが存在すること、及び、一定以上の数の構造が決定されると、構造予測は劇的に正確さが増し得ることが、示唆されている（Ｂｒｅｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３６９−３７６（１９９７））。
【０１８０】
二次構造を予測するさらなる方法には、「スレッディング」（Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３７７−８７（１９９７）；Ｓｉｐｐｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，４（１）：１５−１９（１９９６））、「プロファイル分析」（Ｂｏｗｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１６４−１７０（１９９１）；Ｇｒｉｂｓｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．，１８３：１４６−１５９（１９９０）；Ｇｒｉｂｓｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８４（１３）：４３５５−４３５８（１９８７））、及び「進化的連関」（Ｈｏｌｍ，上記（１９９９），及びＢｒｅｎｎｅｒ，上記（１９９７）を参照。）が含まれる。
【０１８１】
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質バリアントには、親ポリペプチドのアミノ酸配列に比べて、グリコシル化部位の数及び／または種類が変化している、グリコシル化バリアントが含まれる。ある特定の実施形態において、タンパク質バリアントは、天然のタンパク質より多いまたは少ない数のＮ結合型グリコシル化部位を含む。Ｎ結合型グリコシル化部位は、配列：Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ（Ｘとして表記されるアミノ酸残基は、プロリンを除く任意のアミノ酸残基であり得る。）を特徴とする。この配列を作製するためのアミノ酸残基の置換は、Ｎ結合型炭水化物鎖を付加し得る新しい部位を与える。あるいは、この配列を除去する置換は、既存のＮ結合型炭水化物鎖を除去するであろう。１つまたはそれ以上のＮ結合型グリコシル化部位（典型的には、天然に存在するもの）が除去され、１つまたはそれ以上の新たなＮ結合型部位が作出されている、Ｎ結合型炭水化物鎖の再配置も提供される。その他の好ましい抗体バリアントには、親アミノ酸配列と比べて、１つまたはそれ以上のシステイン残基が欠失され、または別のアミノ酸（例えば、セリン）に置換されている、システインバリアントが含まれる。システインバリアントは、不溶性の封入体の単離後のように、抗体が生物学的に活性な立体構造に再折り畳みされなければならないときに、有用であり得る。システインバリアントは、一般に、天然のタンパク質に比べて少ないシステイン残基を有しており、典型的には、対を形成していないシステインから生じる相互作用を最小限に抑えるために、偶数を有する。
【０１８２】
ある特定の実施形態によれば、アミノ酸置換は、（１）タンパク質分解の受け易さを減少させる、（２）酸化され易さを減少させる、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させる、（４）結合親和性を変化させる、及び／または（４）そのようなポリペプチドに対して、他の物理化学的若しくは機能的特性を付与し、若しくは修飾するアミノ酸置換である。ある特定の実施形態によれば、単一または複数のアミノ酸置換（ある特定の実施形態において、保存的なアミノ酸置換）は、天然に存在する配列中に（ある特定の実施形態において、分子間接触を形成するドメインの外側にある、ポリペプチド部分中に）行い得る。ある特定の実施形態において、保存的なアミノ酸置換は、典型的には、親配列の構造的特性を実質的に変化し得ない（例えば、置換アミノ酸は、親配列中に存在するヘリックスを切断する傾向が存在すべきでなく、または親配列を特徴付ける他の種類の二次構造を破壊する傾向が存在すべきない）。本分野で認知されているポリペプチド二次構造及び三次構造の例は、「Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））；ａｎｄ  Ｔｈｏｒｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５（１９９１）」（それぞれ、参照により、本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、バリアントは、本明細書中に開示されているＡＢＰの核酸配列のバリアントである。当業者には、ＡＢＰタンパク質バリアントを特定し、評価し、及び作製するために、及びこれらのタンパク質バリアントをコードし得る核酸配列に対して、上記考察を使用できることが分かるであろう。従って、タンパク質バリアントをコードする核酸配列（及び表２中のＡＢＰをコードするが、本明細書中に明示的に開示されている核酸配列とは異なる核酸配列）が想定される。例えば、ＡＢＰバリアントは、配列番号１５２、１５３、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、２９６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、及び４８４中に記載されている少なくとも１つの核酸配列または配列番号１５２、１５３、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、及び１５１、２９６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、及び４８４中の核酸配列によってコードされるＣＤＲのうちの少なくとも１つから６つ（及びこれらの様々な組み合わせ）と少なくとも８０、８０〜８５、８５〜９０、９０〜９５、９５〜９７、９７〜９９、またはそれ以上の同一性を有することができる。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、ストリンジェントな条件下で、特定のＡＢＰをコードする核酸配列（または核酸配列そのもの）が表２中のタンパク質をコードする核酸配列の何れか（例えば、配列番号１５２、１５３、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、２９６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、及び４８４など（但し、これらに限定されない））に選択的にハイブリッド形成することができるのであれば、抗体（または抗体をコードする核酸配列）は、バリアントである。一実施形態において、適切な中度にストリンジェントな条件は、５ＸＳＳＣ；０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中での事前洗浄、５０℃、−６５℃、５×ＳＳＣ、一晩でのハイブリッド形成、または種間相同性の場合には、０．５×ＳＳＣでの４５℃のハイブリッド形成、次いで、０．１％ＳＤＳを含有する２×、０．５×、及び０．２×ＳＳＣの各々での、２０分間、６５℃で２回の洗浄を含む。そのようなハイブリッド形成ＤＮＡ配列も本発明の範囲に属し、コード縮重のために、ハイブリッド形成ＤＮＡ配列によってコードされる抗体ポリペプチドと、これらの核酸配列によってコードされるアミノ酸配列とをコードするヌクレオチド配列も同様である。いくつかの実施形態において、ＣＤＲのバリアントには、上記配列内のＣＤＲの１つまたはそれ以上（図２Ａ〜３Ｄ並びに図３ＣＣＣ〜３ＪＪＪ及び１５Ａ〜１５Ｄ中の他の実施形態に照らして、各ＣＤＲは容易に決定することができる）にハイブリッド形成する核酸配列及び核酸配列によってコードされるアミノ酸配列が含まれる。この文脈において言及される「選択的にハイブリッド形成する」という用語は、検出可能に及び選択的に結合することを意味する。本発明に係るポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、及びこれらの断片は、非特異的な核酸への検出可能な結合の多量を最小化するハイブリッド形成及び洗浄条件下で、核酸鎖に選択的にハイブリッド形成する。当該技術分野で公知であるように、及び本明細書に論述されているように、選択的なハイブリッド形成条件を達成するために、高いストリンジェンシー条件を使用することができる。一般に、本発明のポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、及び断片と目的の核酸配列との間の核酸配列相同性は、少なくとも８０％であり、より典型的には、少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％、及び１００％の好ましく増大する相同性を有する。２つのアミノ酸配��の間に部分的なまたは完全な同一性が存在する場合には、２つのアミノ酸配列は相同的である。例えば、８５％の相同性は、最大の合致が得られるように、２つの配列が並置される場合にアミノ酸の８５％が同一であることを意味する。合致を最大化する上で（合致されている２つの配列の何れかの中に）ギャップが許容される。５またはそれ以下のギャップ長が好ましく、２またはそれ以下がさらに好ましい。これに代えて及び好ましくは、本明細書においてこの用語が使用される場合には、変異データマトリックス及び６またはそれ以上のギャップペナルティを使用するプログラムＡＬＩＧＮを用いて、（標準偏差単位で）５より多くの並置スコアを有すれば、２つのタンパク質配列（または少なくとも３０アミノ酸長の、これらから得られるポリペプチド配列）は、相同である。「Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，ｉｎ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｐｐ．１０１〜１１０（Ｖｏｌｕｍｅ  ５，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（１９７２））及びこの巻に対する補遺２、ｐｐ．１〜１０」を参照されたい。ＡＬＩＧＮプログラムを用いて最適に並置された場合に、２つの配列またはその一部のアミノ酸が５０％より大きいまたは５０％に等しければ、２つの配列またはその一部は、より好ましく相同的である。本明細書において、「対応する」という用語は、参照ポリヌクレオチド配列の全て若しくは一部に対して、ポリヌクレオチド配列が相同的である（即ち、同一であり、厳格に進化的に関連していない）こと、またはポリペプチド配列が参照ポリペプチド配列と同一であることを意味するために使用される。これに対して、「相補的な」という用語は、本明細書において、相補的配列が参照ポリヌクレオチド配列の全部または一部に対して相同的であることを意味するために使用される。例として、ヌクレオチド配列「ＴＡＴＡＣ」は、参照配列「ＴＡＴＡＣ」に対応し、参照配列「ＧＴＡＴＡ」に対して相補的である。
【０１８５】
抗原結合タンパク質（例えば、抗体）の調製
ある特定の実施形態において、（抗体などの）抗原結合タンパク質は、抗原（例えば、ＰＣＳＫ９）を用いた免疫化によって産生される。ある特定の実施形態において、抗体は、完全長ＰＣＳＫ９、ＰＣＳＫ９の可溶性形態、触媒ドメインのみ、図１Ａ中に示されているＰＣＳＫ９の成熟形態、ＰＣＳＫ９のスプライスバリアント形態、またはこれらの断片を用いた免疫化によって作製することができる。ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、ポリクローナル若しくはモノクローナルであり得、及び／または組み換え抗体であり得る。ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、例えば、ヒト抗体を産生することができるトランスジェニック動物の免疫化によって調製されたヒト抗体である（例えば、ＰＣＴ出願公開Ｗ０９３／１２２２７を参照されたい）。
【０１８６】
ある特定の実施形態において、その標的に対する抗体の親和性など、抗体の固有の特性を操作するために、ある特定の戦略を使用することができる。そのような戦略には、抗体バリアントを作製するために、抗体をコードするポリヌクレオチド分子の部位特異的なまたは無作為の突然変異導入を使用することが含まれるが、これに限定されない。ある特定の実施形態において、そのような作製の後には、所望の変化（例えば、増加または減少した親和性）を示す抗体バリアントのスクリーニングを行う。
【０１８７】
ある特定の実施形態において、突然変異導入戦略中で標的とされるアミノ酸残基は、ＣＤＲ中のアミノ酸残基である。ある特定の実施形態において、可変ドメインのフレームワーク領域中のアミノ酸が標的とされる。ある特定の実施形態において、そのようなフレームワーク領域は、ある抗体の標的結合特性に寄与することが示されている。例えば、「Ｈｕｄｓｏｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，９：３９５−４０２（１９９９）」及びその中の参考文献を参照されたい。
【０１８８】
ある特定の実施形態において、無作為のまたは部位指定突然変異導入をＣＤＲ中の高頻度変異部位（体細胞親和性成熟プロセスの間に変異を受けやすい領域に対応する部位）に制限することによって、抗体バリアントのより小さく、より効果的にスクリーニングされるライブラリーが作製される。例えば、「Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ  ＆  Ｐａｓｔａｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１７：５６８−５７２（１９９９）」及びその中の参考文献を参照されたい。ある特定の実施形態において、ある特定の直接及び反転リピート、ある特定のコンセンサス配列、ある特定の二次構造、及びある特定のパリンドロームなど（但し、これらに限定されない）の高頻度変異部位を特定するために、ＤＮＡ要素のある種類を使用することができる。例えば、高頻度変異部位を特定するために使用することができるそのようなＤＮＡ要素には、プリン（ＡまたはＧ）を含む四塩基配列に続くグアニン（Ｇ）に続くピリミジン（ＣまたはＴ）に続くアデノシンまたはチミジン（ＡまたはＴ）の何れか（即ち、Ａ／Ｇ−Ｇ−Ｃ／Ｔ−Ａ／Ｔ）が含まれるが、これらに限定されない。高頻度変異部位を特定するために使用することができるＤＮＡ要素の別の例は、セリンコドンＡ−Ｇ−Ｃ／Ｔである。
【０１８９】
完全ヒトＡＢＰ（例えば、抗体）の調製
ある特定の実施形態において、モノクローナル抗体を作製するために、ファージディスプレイ技術が使用される。ある特定の実施形態において、そのような技術は、完全ヒトモノクローナル抗体を作製する。ある特定の実施形態において、単一のＦａｂまたはＦｖ抗体断片をコードするポリヌクレオチドが、ファージ粒子の表面上に発現される。例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２２：５８１（１９９１）；米国特許第５，８８５，７９３号を参照されたい。ある特定の実施形態において、標的に対する親和性を有する抗体断片を特定するために、ファージが「スクリーニング」される。従って、ある特定のそのようなプロセスは、糸状バクテリオファージの表面上への抗体断片レパートリーのディスプレー及び標的への抗体断片レパートリーの結合によってファージのその後の選択を通じて免疫選択を模倣する。ある特定のそのような手法では、高親和性機能的中和抗体断片が単離される。（以下により詳しく論述されている）ある特定のそのような実施形態において、ヒト抗体遺伝子の完全なレパートリーは、末梢血リンパ球から天然に再配置されたヒトＶ遺伝子をクローニングすることによって作製される。例えば、「Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ（ＵＳＡ），８７：８０９５−８０９９（１９９０）」を参照されたい。
【０１９０】
ある特定の実施形態によれば、挿入されたヒト抗体産生ゲノムのかなりの部分を有するが、内在性マウス抗体の産生が欠失されたトランスジェニックマウスの使用を通じて、本発明の抗体が調製される。次いで、そのようなマウスは、ヒト免疫グロブリン分子及び抗体を産生することができ、マウス免疫グロブリン分子及び抗体の産生を欠損している。この結果を達成するために使用される技術は、本明細書中に開示されている特許、出願、及び参考文献中に開示されている。ある特定の実施形態において、ＰＣＴ公開出願ＷＯ９８／２４８９３または「Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５：１４６−１５６（１９９７）」（あらゆる目的のために、参照により、本明細書に組み込まれる）に開示される方法などの方法を使用することができる。
【０１９１】
一般に、ＰＣＳＫ９に対して特異的な完全ヒトモノクローナルＡＢＰ（例えば、抗体）は、以下のように作製することができる。ヒト免疫グロブリン遺伝子を含有するトランスジェニックマウスが、目的の抗原（例えば、ＰＣＳＫ９）で免疫化され、抗体を発現するマウスからリンパ細胞（Ｂ細胞など）が得られる。不死化ハイブリドーマ細胞株を調製するために、そのような回収された細胞は骨髄性細胞株と融合され、目的の抗原に対して特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を特定するために、そのようなハイブリドーマ細胞株はスクリーニング及び選択される。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対して特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株の産生が提供される。
【０１９２】
ある特定の実施形態において、完全ヒト抗体が、ヒト脾細胞（ＢまたはＴ細胞）をインビトロで抗原に曝露させ、次いで、免疫不全化されたマウス（例えば、ＳＣＩＤまたはｎｏｄ／ＳＣＩＤ）中で曝露された細胞を再構成させることによって産生される。例えば、「Ｂｒａｍｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：２０５１−２０５８（１９９８）；Ｃａｒｂａｌｌｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，６：１０３−１０６（２０００）」を参照されたい。ある特定のそのようなアプローチにおいて、ＳＣＩＤマウス（ＳＣＩＤ−ｈｕ）中へのヒト胎児組織の移植が、長期造血及びヒトＴ細胞の成長をもたらす。例えば、「ＭｃＣｕｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４１：１５３２−１６３９（１９８８）；Ｉｆｖｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８：２４３−２４８（１９９６）」を参照されたい。ある特定の事例において、そのようなキメラマウス中での液性免疫応答は、動物内でのヒトＴ細胞の同時成長に依存する。例えば、「Ｍａｒｔｅｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８３：１２７１−１７９（１９９４）」を参照されたい。ある特定のアプローチにおいて、ヒト末梢血液リンパ球がＳＣＩＤマウス中に移植される。例えば、「Ｍｏｓｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３５：２５６−２５９（１９８８）」を参照されたい。ある特定のそのような実施形態において、ブドウ球菌のエンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）などの刺激剤で、または抗ヒトＣＤ４０モノクローナル抗体の何れかで、そのような移植された細胞が処理されると、より高いレベルのＢ細胞産生が検出される。例えば、「Ｍａｒｔｅｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８４：２２４−２３０（１９９５）；Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，８６：１９４６−１９５３（１９９５）」を参照されたい。
【０１９３】
従って、ある特定の実施形態において、完全ヒト抗体は、宿主細胞中での組み換えＤＮＡの発現によって、またはハイブリドーマ細胞中での発現によって産生され得る。他の実施形態において、抗体は、本明細書中に記載されているファージディスプレイ技術を用いて産生され得る。
【０１９４】
本明細書中に記載されている抗体は、本明細書中に記載されているように、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）技術の使用を通じて調製された。次いで、そのようなマウスは、ヒト免疫グロブリン分子及び抗体を産生することができ、マウス免疫グロブリン分子及び抗体の産生を欠損している。それを達成するために使用される技術は、本明細書の背景技術の部に開示されている特許、出願、及び参考文献中に開示されている。しかしながら、特に、マウスのトランスジェニック産生及びそこから得られる抗体の好ましい実施形態は、１９９６年１２月３日に出願された米国特許出願第０８／７５９，６２０号及び１９９８年６月１１日に公開された国際特許出願ＷＯ９８／２４８９３及び２０００年１２月２１日に公開されたＷＯ００／７６３１０（これらの開示は、参照により、本明細書に組み込まれている）に開示されている。「Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５：１４６−１５６（１９９７）」（その開示は、参照により、本明細書に組み込まれる）も参照されたい。
【０１９５】
そのような技術の使用を通じて、様々な抗原に対する完全ヒトモノクローナル抗体が産生されている。基本的に、マウスのＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）系統が目的の抗原（例えば、ＰＣＳＫ９）で免疫化され、リンパ細胞（Ｂ細胞など）が高度免疫化されたマウスから回収され、回収されたリンパ球が、不死化されたハイブリドーマ細胞株を調製するために、骨髄型細胞株と融合される。目的の抗原に対して特異的な抗体を産生されるハイブリドーマ細胞株を特定するために、これらのハイブリドーマ細胞株は、スクリーニング及び選択される。ＰＣＳＫ９に対して特異的な抗体を産生する複数のハイブリドーマ細胞株を作製するための方法が、本明細書において提供される。さらに、そのような抗体の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド及びアミノ酸配列分析など、そのような細胞株によって産生される抗体の性質決定が本明細書に提供される。
【０１９６】
マウスのＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）系統の作製は、１９９０年１月１２日に出願された米国特許出願第０７／４６６，００８号、１９９０年１１月８日に出願された第０７／６１０，５１５号、１９９２年７月２４日に出願された第０７／９１９，２９７号、１９９２年６月３０日に出願された第０７／９２２，６４９号、１９９３年３月１５日に出願された第０８／０３１，８０１号、１９９３年８月２７日に出願された第０８／１１２，８４８号、１９９４年４月２８日に出願された第０８／２３４，１４５号、１９９５年１月２０日に出願された第０８／３７６，２７９号、１９９５年４月２７日に出願された第０８／４３０，９３８号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４６４，５８４号、１９９５年６月５日に出願された０８／４６４，５８２号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４６３，１９１号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４６２，８３７号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４８６，８５３号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４８６，８５７号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４８６，８５９号、１９９５年６月５日に出願された第０８／４６２，５１３号、１９９６年１０月２日に出願された第０８／７２４，７５２号、１９９６年１２月３日に出願された第０８／７５９，６２０号、２００１年１１月３０日に出願された米国公開第２００３／００９３８２０号及び米国特許第６，１６２，９６３号、同第６，１５０，５８４号、同第６，１１４，５９８号、同第６，０７５，１８１号、同第５，９３９，５９８号及び日本国特許第３０６８１８０Ｂ２、同第３０６８５０６Ｂ２、及び同第３０６８５０７Ｂ２中に論述され、記載されている。１９９６年６月１２日に許諾公表された欧州特許ＥＰ０４６３１５１Ｂ１、１９９４年２月３日に公開された国際特許出願ＷＯ９４／０２６０２、１９９６年１０月３１日に公開された国際特許出願ＷＯ９６／３４０９６、１９９８年６月１１日に公開されたＷＯ９８／２４８９３、２０００年１２月２１日に公開されたＷＯ００／７６３１０も参照されたい。上記特許、出願、及び参考文献の各々の開示の全体が、参照により、本明細書に組み込まれる。
【０１９７】
別のアプローチにおいて、ＧｅｎＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，などの他社は、「ミニローカス」アプローチを使用した。ミニローカスアプローチでは、Ｉｇ遺伝子座からの片（各遺伝子）を含めることを通じて、外来Ｉｇ遺伝子座が模倣される。従って、１つまたはそれ以上のＶＨ遺伝子、１つまたはそれ以上のＤＨ遺伝子、１つまたはそれ以上のＪＨ遺伝子、μ定常領域、及び通常第二の定常領域（好ましくは、γ定常領域）が、動物中に挿入するための構築物中に形成される。このアプローチは、Ｓｕｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．に対する米国特許第５，５４５，８０７号並びにそれぞれＬｏｎｂｅｒｇ  ＆  Ｋａｙに対する米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，６２５，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，７７０，４２９号、同第５，７８９，６５０号、同第５，８１４，３１８号、同第５，８７７，３９７号、同第５，８７４，２９９号、及び同第６，２５５，４５８号、Ｋｒｉｍｐｅｎｆｏｒｔ及びＢｅｒｎｓに対する米国特許第５，５９１，６６９号及び同第６，０２３．０１０号、Ｂｅｒｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，に他する米国特許第５，６１２，２０５号、同第５，７２１，３６７号及び同第５，７８９，２１５号並びにＣｈｏｉ  ＆  Ｄｕｎｎ，ａｎｄ  ＧｅｎＰｈａｒｍに対する米国特許第５，６４３，７６３号、１９９０年８月２９日に出願された国際米国特許出願第０７／５７４，７４８号、１９９０年８月３１日に出願された第０７／５７５，９６２号、１９９１年１２月１７日に出願された０７／８１０，２７９号、１９９２年３月１８日に出願された第０７／８５３，４０８号、１９９２年６月２３日に出願された第０７／９０４，０６８号、１９９２年１２月１６日に出願された第０７／９９０，８６０号、１９９３年４月２６日に出願された第０８／０５３，１３１号、１９９３年７月２２日に出願された第０８／０９６，７６２号、１９９３年１１月１８日に出願された第０８／１５５，３０１号、１９９３年１２月３日出願された第０８／１６１，７３９号、１９９３年１２月１０日に出願された第０８／１６５，６９９号、１９９４年３月９日に出願された第０８／２０９，７４１号（これらの開示は、参照により、本明細書に組み込まれる）中に記載されている。欧州特許第０５４６０７３Ｂ１、国際特許出願ＷＯ９２／０３９１８、ＷＯ９２／２２６４５、ＷＯ９２／２２６４７、ＷＯ９２／２２６７０、ＷＯ９３／１２２２７、ＷＯ９４／００５６９、ＷＯ９４／２５５８５、ＷＯ９６／１４４３６、ＷＯ９７／１３８５２、及びＷＯ９８／２４８８４、並びに米国特許第５，９８１，１７５号（これらの開示全体が、参照により、本明細書に組み込まれる）も参照されたい。Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ，１９９３．，Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４），Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）及びＴｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５），Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）（これらの開示全体が、参照により、本明細書に組み込まれる）をさ���に参照されたい。
【０１９８】
Ｋｉｒｉｎは、微小細胞融合、染色体の大きな片、または染色体全体がその中に導入されたマウスからのヒト抗体の作製も示した。欧州特許出願第７７３２８８号及び同第８４３９６１号（これらの開示は、参照により、本明細書に組み込まれる）を参照されたい。さらに、ＫｉｒｉｎのＴｃマウスとＭｅｄａｒｅｘのミニローカス（Ｈｕｍａｂ）マウスとの交雑の結果であるＫＭ（商標）マウスが作製されている。これらのマウスは、ＫｉｒｉｎマウスのヒトＩｇＨ導入染色体及びＧｅｎｐｈａｒｍマウスのκ鎖導入遺伝子を有する（Ｉｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ，（２００２）４：９１−１０２）。
【０１９９】
ヒト抗体は、インビトロ法によっても誘導され得る。適切な例には、ファージディスプレイ（ＣＡＴ、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ、Ｄｙａｘ、Ｂｉｏｓｉｔｅ／Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｘｏｍａ、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ、Ａｌｅｘｉｏｎ（旧Ｐｒｏｌｉｆｅｒｏｎ）、Ａｆｆｉｍｅｄ）、リボソームディスプレー（ＣＡＴ）、酵母ディスプレーなどが含まれるが、これらに限定されない。
【０２００】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されている抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖及びＩｇＧ２重鎖を有する。抗体は、ＩｇＧ１を含む他のヒトアイソタイプのものでもあり得る。様々な技術によって測定された場合に、抗体は、高い親和性を有しており、典型的には、約１０−６〜約１０−１３Ｍまたはそれ以下のＫｄを有する。
【０２０１】
理解されるであろうように、抗体は、ハイブリドーマ細胞株以外の細胞株中で発現させることができる。適切な哺乳動物宿主細胞を形質転換するために、特定の抗体をコードする配列を使用することができる。形質転換は、例えば、ポリヌクレオチドをウイルス中に（またはウイルスベクター中に）パッケージし、ウイルス（またはベクター）でまたは米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，９１２，０４０号、同第４，７４０，４６１号及び同第４，９５９，４５５号（これらの特許は、参照により、本明細書に組み込まれる）によって例示されているような、当該技術分野で公知の形質移入手法によって宿主細胞を形質導入することを含む、宿主細胞中にポリヌクレオチドを導入するためのあらゆる公知の方法により得る。使用される形質転換手法は、形質転換されるべき宿主に依存する。哺乳動物細胞中に異種のポリヌクレオチドを導入するための方法は、当該技術分野において周知であり、デキストランによって媒介された形質移入、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレンによって媒介される形質移入、プロトプラスト融合、電気穿孔、リポソーム中のポリヌクレオチドの封入化、及びＤＮＡの核内への直接的微小注入を含む。
【０２０２】
発現用の宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当該技術分野において周知であり、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、ＨｅｐＧ２）、ヒト上皮腎臓２９３細胞、及び多数の他の細胞株など（但し、これらに限定されない）、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化された細胞株が含まれる。特に好ましい細胞株は、何れの細胞が高い発現レベルを有し、恒常的なＰＣＳＫ９結合特性を有する抗体を産生するかの決定を通じて選択され得る。
【０２０３】
ある特定の実施形態において、抗体及び／またはＡＢＰは、以下のハイブリドーマのうちの少なくとも１つによって産生される：２１Ｂ１２、３１Ｈ４、１６Ｆ１２、表２中に列記されているまたは実施例に開示されている他の何れかのハイブリドーマ。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、約１ｎＭ未満、例えば、１０００ｐＭ〜１００ｐＭ、１００ｐＭ〜１０ｐＭ、１０ｐＭ〜１ｐＭ、及び／または１ｐＭ〜０．１ｐＭまたはそれ以下の解離定数（ＫＤ）でＰＣＳＫ９に結合する。
【０２０４】
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＭアイソタイプのうちの少なくとも１つの免疫グロブリン分子を含む。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒトκ軽鎖及び／またはヒト重鎖を含む。ある特定の実施形態において、重鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＭアイソタイプの重鎖である。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、哺乳動物細胞中での発現のためにクローニングされている。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＭアイソタイプの定常領域の何れか以外の定常領域を含む。
【０２０５】
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒトλ軽鎖及びヒトＩｇＧ２重鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒトλ軽鎖及びヒトＩｇＧ４重鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒトλ軽鎖及びヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＭ重鎖を含む。他の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒトκ軽鎖及びヒトＩｇＧ２重鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒトκ軽鎖及びヒトＩｇＧ４重鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒトκ軽鎖及びヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＭ重鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ２アイソタイプに対する定常領域でもなく、ＩｇＧ４アイソタイプに対する定常領域でもない定常領域に連結された抗体の可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、哺乳動物細胞中での発現のためにクローニングされている。
【０２０６】
ある特定の実施形態において、ハイブリドーマ株：２１Ｂ１２、３１Ｈ４、及び１６Ｆ１２のうち少なくとも１つから得られる抗体の重鎖及び軽鎖への保存的な修飾（及びコードするヌクレオチドへの対応する修飾）は、ハイブリドーマ株：２１Ｂ１２、３１Ｈ４、及び１６Ｆ１２から得られる抗体と同様の機能的及び化学的特性を有する、ＰＣＳＫ９に対する抗体を産生するであろう。さらに、ハイブリドーマ株：２１Ｂ１２、３１Ｈ４、及び１６Ｆ１２のうち少なくとも１つから得られる抗体の重鎖及び軽鎖への、ある特定の他の修飾（及びコードするヌクレオチドへの対応する修飾）は、ハイブリドーマ株：２１Ｂ１２、３１Ｈ４、及び１６Ｆ１２（例えば、配列番号５９２〜５９３など）から得られる抗体と同様の機能的及び化学的特性を有する、ＰＣＳＫ９に対する抗体を産生するであろう。これに対して、ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗体の機能的及び／または化学的特性の実質的な修飾は、（ａ）置換の領域中にある分子骨格の構造（例えば、シートまたはヘリカル構造として）、（ｂ）標的部位における分子の電荷若しくは疎水性、または（ｃ）側鎖のかさ高さの維持に対するそれらの効果とは著しく異なる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列中の置換を選択することによって達成され得る。
【０２０７】
例えば、「保存的なアミノ酸置換」は、その位置にあるアミノ酸残基の極性または電荷に対して、ほとんどまたは全く影響が存在しないように、天然アミノ酸残基を非天然残基で置換することが含まれ得る。さらに、「アラニンスキャニング突然変異導入」について以前に記載されているように、ポリペプチド中の任意の天然残基をアラニンに置換することもできる。
【０２０８】
所望のアミノ酸挿入または置換（保存的であると、保存的でないとを問わない）は、そのような挿入または置換が望まれる時点で、当業者によって決定することができる。ある特定の実施形態において、アミノ酸置換が、ＰＣＳＫ９に対する抗体の重要な残基を特定するために、または本明細書に記載されている、ＰＣＳＫ９に対する抗体の親和性を増加若しくは減少させるために使用することができる。
【０２０９】
ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、ハイブリドーマ細胞株以外の細胞株中で発現することができる。ある特定の実施形態において、特定の抗体をコードする配列を、適切な哺乳動物宿主細胞の形質転換のために使用することができる。ある特定の実施形態によれば、形質転換は、宿主細胞中にポリヌクレオチドを導入するための任意の公知の方法によって、例えば、ウイルス中（またはウイルスベクター中に）にポリヌクレオチドをパッケージングし、宿主細胞をこのウイルス（またはベクター）で形質導入するか、または米国特許第４，３９９，２１６号、第４，９１２，０４０号、第４，７４０，４６１、及び第４，９５９，４５５号（これらの特許は、あらゆる目的のために、参照により、本明細書に組み込まれる）に例示されているような、当該技術分野で公知の形質移入手法などによって行うことができる。ある特定の実施形態において、使用される形質転換手法は、形質転換すべき宿主に依存し得る。異種のポリヌクレオチドを哺乳動物細胞中に導入する方法は、当該技術分野において周知であり、デキストランによって媒介される形質移入、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレンによって媒介される形質移入、プロトプラスト融合、電気穿孔、リポソーム中へのポリヌクレオチドの封入、及びＤＮＡの核内への直接微量注入が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１０】
発現用の宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当該技術分野において周知であり、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、ＨｅｐＧ２）、及び多数の他の細胞株を含む（但し、これらに限定されない）、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から入手できる多くの不死化された細胞株が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、細胞株は、どの細胞株が高い発現レベルを有し、恒常的なＨＧＦ結合特性を有する抗体を産生するかを決定することを通じて選択され得る。哺乳動物宿主細胞にとって適切な発現ベクターは周知である。
【０２１１】
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、１つまたはそれ以上のポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、様々な発現ベクター／宿主系のいずれも、１つまたはそれ以上のＡＢＰ成分またはＡＢＰ自体を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子を発現するために使用し得る。そのような系には、組み換えバクテリオファージ、プラスミド、若しくはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌のような微生物；酵母発現ベクターで形質転換された酵母；ウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）で感染された昆虫細胞系；ウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ、タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）を形質移入され、若しくは細菌発現ベクター（例えば、ＴｉまたはｐＢＲ３２２プラスミド）で形質転換された植物細胞系；または動物細胞系が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１２】
ある特定の実施形態において、１つまたはそれ以上のＡＢＰ成分またはＡＢＰ自体を含むポリペプチドは、酵母中で組み換え的に発現される。ある特定のそのような実施形態は、製造業者の指示書に従って、市販の発現系、例えば、Ｐｉｃｈｉａ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用する。ある特定の実施形態において、そのような系は、分泌を誘導するためにプレプロα配列に依存する。ある特定の実施形態において、挿入物の転写は、メタノールによる誘導に際して、アルコールオキシダーゼ（ＡＯＸ１）プロモーターによって駆動される。
【０２１３】
ある特定の実施形態において、１つまたはそれ以上のＡＢＰ成分またはＡＢＰ自体を含む分泌されたポリペプチドが、酵母増殖培地から精製される。ある特定の実施形態において、酵母増殖培地からポリペプチドを精製するために使用される方法は、細菌及び哺乳動物の細胞上清からポリペプチドを精製するために使用される方法と同じである。
【０２１４】
ある特定の実施形態において、１つまたはそれ以上のＡＢＰ成分またはＡＢＰ自体を含むポリペプチドをコードする核酸が、ｐＶＬ１３９３（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）などの、バキュロウイルス発現ベクター中にクローニングされる。ある特定の実施形態において、そのようなベクターは、ｓＦ９タンパク質の含まれていない培地中でＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞を感染させ、組み換えポリペプチドを産生するために、製造業者（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）の指示に従って使用することができる。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、ヘパリン−セファロースカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて、そのような培地から精製及び濃縮される。
【０２１５】
ある特定の実施形態において、１つまたはそれ以上のＡＢＰ成分またはＡＢＰ自体を含むポリペプチドが、昆虫系中で発現される。ポリペプチド発現用のある特定の昆虫系が、当業者に周知である。そのような系の１つでは、オートグラファカルフォルニカ核多角体ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞中またはＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ幼生中で外来遺伝子を発現するためのベクターとして使用される。ある特定の実施形態において、ポリペプチドをコードする核酸分子を、ウイルスの非必須遺伝子中（例えば、ポリヘドリン遺伝子内）に挿入し、その遺伝子に対するプロモーターの制御下に置くことができる。ある特定の実施形態において、核酸分子を上手く挿入することによって、非必須遺伝子が不活性になるであろう。ある特定の実施形態において、その不活化は、検出可能な特徴をもたらす。例えば、ポリヘドリン遺伝子の不活化は、コートタンパク質を欠くウイルスの産生をもたらす。
【０２１６】
ある特定の実施形態において、Ｓ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞またはＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ幼生を感染させるために、組み換えウイルスを使用することができる。例えば、「Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，４６：５８４（１９８３）；Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９１：３２２４−７（１９９４）」を参照されたい。
【０２１７】
ある特定の実施形態において、細菌細胞中で作られた、１つまたはそれ以上のＡＢＰ成分またはＡＢＰ自体を含むポリペプチドが、細菌中の不溶性封入体として産生される。ある特定の実施形態において、そのような封入体を含む宿主細胞は、遠心分離によって集められ、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ８、１ｍＭ  ＥＤＴＡ中で洗浄し、０．１ｍｇ／ｍＬのリゾチーム（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で、１５分間室温で処理される。ある特定の実施形態において、溶解物は音波処理によって清浄化され、細胞破砕物は、１２，０００Ｘｇで１０分間の遠心分離によって沈降される。ある特定の実施形態において、ポリペプチドを含有するペレットは、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ８及び１０ｍＭ  ＥＤＴＡ中に再懸濁され；５０％グリセロール上に積層され、６０００Ｘｇで３０分間遠心分離される。ある特定の実施形態において、このペレットは、Ｍｇ＋＋及びＣａ＋＋を含まない標準的なリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁することができる。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、変性ＳＤＳポリアクリルアミドゲル中に、再懸濁されたペレットを分画することによってさらに精製される（例えば、上記Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい）。ある特定の実施形態において、そのようなゲルは、タンパク質を可視化するために、０．４Ｍ  ＫＣｌ中に浸すことが可能であり、浸したゲルは、切り出して、ＳＤＳを欠くゲル走行緩衝液中で電気溶出することができる。ある特定の実施形態によれば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）融合タンパク質が、可溶性タンパク質として細菌中に産生される。ある特定の実施形態において、そのようなＧＳＴ融合タンパク質は、ＧＳＴ精製モジュール（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて精製される。
【０２１８】
ある特定の実施形態において、ある特定のポリペプチド、例えば、１つまたはそれ以上のＡＢＰ成分またはＡＢＰ自体を含むポリペプチドを「再折り畳みする」ことが望ましい。ある特定の実施形態において、そのようなポリペプチドは、本明細書に論述されているある特定の組み換え系を用いて産生される。ある特定の実施形態において、所望の三次構造を形成し、及び／またはジスルフィド結合を生成するために、ポリペプチドは、「再折り畳みされ」及び／または「酸化され」る。ある特定の実施形態において、そのような構造及び／または連結は、ポリペプチドのいくつかの生物活性に関連する。ある特定の実施形態において、再折り畳みは、当該技術分野で公知の多数の手法のうち任意の手法を用いて達成される。典型的な方法には、カオトロピック剤の存在下で、可溶化されたポリペプチド因子を、典型的には７を上回るｐＨに曝露することが含まれるが、これに限定されない。典型的なカオトロピック剤は、グアニジンである。ある特定の実施形態において、再折り畳み／酸化溶液は、還元剤及び該還元剤の酸化された形態も含有する。ある特定の実施形態において、還元剤及びその酸化形態は、ジスルフィドシャッフリングの発生を可能とする特定の酸化還元電位を生じ得る比で存在する。ある特定の実施形態において、そのようなシャッフリングは、システイン架橋の形成を可能とする。典型的な酸化還元対には、システイン／シスタミン、グルタチオン／ジチオビスＧＳＨ、塩化第二銅、ジチオスレイトールＤＴＴ／ジチアンＤＴＴ、及び２−メルカプトエタノール（ｂＭＥ）／ジチオ−ｂＭＥが含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、再折り畳みの効率を増加させるために、共溶媒が使用される。典型的な共溶媒には、グリセロール、様々な分子量のポリエチレングリコール、及びアルギニンが含まれるが、これらに限定されない。
【０２１９】
ある特定の実施形態において、１つまたはそれ以上のＡＢＰ成分またはＡＢＰ自体を含むポリペプチドを実質的に精製する。ある特定のタンパク質精製技術が、当業者に公知である。ある特定の実施形態において、タンパク質精製は、非ポリペプチド画分からポリペプチド分画を粗分画することを含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、クロマトグラフィー及び／または電気泳動技術を用いて精製される。典型的な精製法には、硫酸アンモニウムによる沈殿、ＰＥＧによる沈殿、免疫沈降、熱変性後の遠心分離、クロマトグラフィー（親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテイン−Ａ−セファロース）、イオン交換クロマトグラフィー、排除クロマトグラフィー及び逆相クロマトグラフィーが含まれるが、これらに限定されない）、ゲルろ過、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、等電点電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、並びにそのような技術及び他の技術の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、高速タンパク質液体クロマトグラフィーまたは高圧液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）によって精製される。ある特定の実施形態において、精製ステップは変化させることができ、またはいくつかのステップを省略することができるが、実質的に精製されたポリペプチドの調製に適した方法をなお与える。
【０２２０】
ある特定の実施形態において、ポリペプチド調製物の精製度を定量する。精製度を定量するための、ある特定の方法が、当業者に公知である。ある特定の典型的の方法には、調製物の特異的結合活性を測定し、調製物中のポリペプチドの量をＳＤＳ／ＰＡＧＥ分析によって評価することが含まれるが、これに限定されるものではない。ポリペプチド調製物の精製の量を評価するための典型的なある特定の方法は、調製物の結合活性を算出すること、及びこれを最初の抽出物の結合活性と比較することを含む。ある特定の実施形態において、そのような計算の結果は、「精製倍数」として表される。結合活性の量を表すために使用される単位は、実施されている特定のアッセイに依存する。
【０２２１】
ある特定の実施形態において、１つまたはそれ以上のＡＢＰ成分またはＡＢＰ自体を含むポリペプチドは、部分的に精製される。ある特定の実施形態において、部分精製は、より少ない精製ステップを使用することによって、または同じ一般的な精製スキームの異なる形態を用いることによって達成することができる。例えば、ある特定の実施形態において、ＨＰＬＣ装置を用いて行われる陽イオン交換カラムクロマトグラフィーは、一般的には、低圧クロマトグラフィーシステムを用いた同じ技術より大きな「精製倍数」をもたらし得る。ある特定の実施形態において、より低い精製度をもたらす方法は、ポリペプチドの総回収率の上で、またはポリペプチドの結合活性を維持する上で利点を有し得る。
【０２２２】
ある特定の事例において、ポリペプチドの電気泳動的移動は、ＳＤＳ／ＰＡＧＥの異なる条件とともに、（時に著しく）変動し得る。例えば、「Ｃａｐａｌｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，７６：４２５（１９７７）」を参照されたい。異なる電気泳動条件下において、精製されたまたは部分的に精製されたポリペプチドの見かけの分子量は異なり得ることが理解される。
【０２２３】
典型的なエピトープ
本明細書中に提供されている方法で有用な抗ＰＣＳＫ９抗体が結合するエピトープが提供される。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されている抗体によって結合されるエピトープは、特に有用である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されている抗体によって結合されるエピトープの何れかに結合する抗原結合タンパク質は、有用である。いくつかの実施形態において、表２並びに図２及び３に列記されている抗体の何れかによって結合されるエピトープは、特に有用である。いくつかの実施形態において、エピトープは、触媒ドメインＰＣＳＫ９上に存在する。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、本明細書中に開示されている抗原結合タンパク質は、Ｎ末端プロドメイン、スブチリシン様触媒ドメイン、及び／またはＣ末端ドメインに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＰＣＳＫ−９の基質結合溝に結合する（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，に記載されており、参照により、その全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、抗体と接触し、または抗体によって埋没される残基を含有するドメイン／領域は、ＰＣＳＫ９（例えば、野生型抗原）中の特定の残基を変異させ、抗原結合タンパク質が変異されたまたはバリアントＰＣＳＫ９タンパク質と結合することができるかどうかを測定することによって同定することができる。多数の個別の変異を作製することによって、変異が抗原結合タンパク質と抗原間の結合に影響を及ぼし得るように、結合に直接的な役割を果たしている残基または抗体と十分に近接している残基を同定することができる。これらのアミノ酸の知見から、抗原結合タンパク質と接触する残基または抗体によって被覆されている残基を含有する抗原のドメインまたは領域を解明することができる。そのようなドメインは、抗原結合タンパク質の結合エピトープを含むことができる。この一般的なアプローチの１つの具体例は、アルギニン／グルタミン酸スキャニングプロトコルを使用する（例えば、Ｎａｎｅｖｉｃｚ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７０：３７，２１６１９−２１６２５  ａｎｄ  Ｚｕｐｎｉｃｋ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ，２００６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８１：２９，２０４６４−２０４７３）を参照されたい）。一般に、アルギニン及びグルタミン酸は帯電しており、嵩が大きく、従って、変異が導入されている抗原の領域中での抗原結合タンパク質と抗原との間の結合を崩壊させる可能性を有しているので、野生型ポリペプチド中のアミノ酸は、アルギニン及びグルタミン酸へ（典型的には、個別に）置換される。野生型抗原中に存在するアルギニンは、グルタミン酸と置換される。そのような様々な個別の変異体が得られ、どの残基が結合に影響を及ぼすかを決定するために、収集された結合結果が分析される。
【０２２６】
抗原結合タンパク質及び本明細書において使用されるバリアントＰＣＳＫ９の間の結合の変化（例えば、低下または増加）は、（例えば、実施例中で以下に記載されているＢｉａｃｏｒｅ検査またはビーズをベースとしたアッセイなどの公知の方法によって測定した場合に）結合親和性、ＥＣ５０の変化、及び／または（例えば、抗原結合タンパク質濃度対抗原濃度のプロットにおけるＢｍａｘの減少によって明らかとなる）抗原結合タンパク質の総結合能力の変化（例えば、低下）が存在することを意味する。結合の著しい変化は、変異を受けた残基が抗原結合タンパク質への結合に直接関与しており、または結合タンパク質が抗原に結合されたときに、結合タンパク質に近接していることを示唆する。
【０２２７】
いくつかの実施形態において、結合の著しい低下は、抗原結合タンパク質と変異体ＰＣＳＫ９抗原間での結合親和性、ＥＣ５０、及び／または能力が、抗原結合タンパク質と野生型ＰＣＳＫ９（例えば、配列番号１及び／または配列番号３０３に示されている）間での結合と比べて、１０％超、２０％超、４０％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超低下していることを意味する。ある特定の実施形態において、結合は、検出可能な限界を下回って低下する。いくつかの実施形態において、バリアントＰＣＳＫ９タンパク質への抗原結合タンパク質の結合は、抗原結合タンパク質と野生型ＰＣＳＫ９タンパク質（例えば、配列番号１及び／または配列番号３０３のタンパク質）間で観察される結合の５０％未満（例えば、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、または１０％未満）である場合に、結合の著しい低下が証明される。そのような結合の測定は、当該技術分野で公知の様々な結合アッセイを用いて実施され得る。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、野生型ＰＣＳＫ９タンパク質（例えば、配列番号１または配列番号３０３）中の残基がアルギニンまたはグルタミン酸で置換されているバリアントＰＣＳＫ９タンパク質に対して著しくより低い結合を示す抗原結合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態において、野生型ＰＣＳＫ９タンパク質（例えば、配列番号１または配列番号３０３）と比べて、以下の変異：Ｒ２０７Ｅ、Ｄ２０８Ｒ、Ｒ１８５Ｅ、Ｒ４３９Ｅ、Ｅ５１３Ｒ、Ｖ５３８Ｒ、Ｅ５３９Ｒ、Ｔ１３２Ｒ、Ｓ３５１Ｒ、Ａ３９０Ｒ、Ａ４１３Ｒ、Ｅ５８２Ｒ、Ｄ１６２Ｒ、Ｒ１６４Ｅ、Ｅ１６７Ｒ、Ｓ１２３Ｒ、Ｅ１２９Ｒ、Ａ３１１Ｒ、Ｄ３１３Ｒ、Ｄ３３７Ｒ、Ｒ５１９Ｅ、Ｈ５２１Ｒ、及びＱ５５４Ｒの１つまたはそれ以上の何れか（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または２４４）を有するバリアントＰＣＳＫ９タンパク質に対して、抗原結合タンパク質の結合が著しく低下または増加する。本明細書において使用される省略型表記において、形式は、：野生型残基：ポリペプチド中の位置：変異体残基であり、配列番号１または配列番号３０３に示されているように残基の付番が為されている。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、野生型ＰＣＳＫ９タンパク質（例えば、配列番号１または配列番号３０３）と比べて、配列番号１に示されているような以下の位置：２０７、２０８、１８５、１８１、４３９、５１３、５３８、５３９、１３２、３５１、３９０、４１３、５８２、１６２、１６４、１６７、１２３、１２９、３１１、３１３、３３７、５１９、５２１、及び５５４に１つまたはそれ以上の（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上の）変異を有する変異体ＰＣＳＫ９タンパク質に対して、抗原結合タンパク質の結合が低下または増加する。いくつかの実施形態において、野生型ＰＣＳＫ９タンパク質（例えば、配列番号１または配列番号３０３）と比べて、配列番号１に示されているような以下の位置：２０７、２０８、１８５、１８１、４３９、５１３、５３８、５３９、１３２、３５１、３９０、４１３、５８２、１６２、１６４、１６７、１２３、１２９、３１１、３１３、３３７、５１９、５２１及び５５４に１つまたはそれ以上の（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上の）変異を有する変異体ＰＣＳＫ９タンパク質に対して、抗原結合タンパク質の結合が低下または増加する。いくつかの実施形態において、野生型ＰＣＳＫ９タンパク質（例えば、配列番号１または配列番号３０３）と比べて、配列番号１内の以下の位置：２０７、２０８、１８５、１８１、４３９、５１３、５３８、５３９、１３２、３５１、３９０、４１３、５８２、１６２、１６４、１６７、１２３、１２９、３１１、３１３、３３７、５１９、５２１、及び５５４に１つまたはそれ以上の（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上の）変異を有する変異体ＰＣＳＫ９タンパク質に対して、抗原結合タンパク質の結合が実質的に低下または増加する。
【０２３０】
いくつかの実施形態において、野生型ＰＣＳＫ９タンパク質（例えば、配列番号１または配列番号３０３）と比べて、以下の変異：配列番号１または配列番号３０３内のＲ２０７Ｅ、Ｄ２０８Ｒ、Ｒ１８５Ｅ、Ｒ４３９Ｅ、Ｅ５１３Ｒ、Ｖ５３８Ｒ、Ｅ５３９Ｒ、Ｔ１３２Ｒ、Ｓ３５１Ｒ、Ａ３９０Ｒ、Ａ４１３Ｒ、Ｅ５８２Ｒ、Ｄ１６２Ｒ、Ｒ１６４Ｅ、Ｅ１６７Ｒ、Ｓ１２３Ｒ、Ｅ１２９Ｒ、Ａ３１１Ｒ、Ｄ３１３Ｒ、Ｄ３３７Ｒ、Ｒ５１９Ｅ、Ｈ５２１Ｒ、及びＱ５５４Ｒの１つまたはそれ以上（例えば、１、２、３、４、５など）を有する変異体ＰＣＳＫ９タンパク質に対して、ＡＢＰの結合が著しく低下または増加する。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、野生型ＰＣＳＫ９タンパク質（例えば、配列番号１または配列番号３０３）と比べて、以下の変異：配列番号１または配列番号３０３内のＲ２０７Ｅ、Ｄ２０８Ｒ、Ｒ１８５Ｅ、Ｒ４３９Ｅ、Ｅ５１３Ｒ、Ｖ５３８Ｒ、Ｅ５３９Ｒ、Ｔ１３２Ｒ、Ｓ３５１Ｒ、Ａ３９０Ｒ、Ａ４１３Ｒ、及びＥ５８２Ｒの１つまたはそれ以上（例えば、１、２、３、４、５など）を有する変異体ＰＣＳＫ９タンパク質に対して、ＡＢＰの結合が著しく低下または増加する。いくつかの実施形態において、結合は低下する。いくつかの実施形態において、結合の低下は、ＥＣ５０の変化として観察される。いくつかの実施形態において、ＥＣ５０の変化は、ＥＣ５０の数値の増加（従って、結合の減少）である。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、野生型ＰＣＳＫ９タンパク質（例えば、配列番号１または配列番号３０３）と比べて、以下の変異：配列番号１内のＤ１６２Ｒ、Ｒ１６４Ｅ、Ｅ１６７Ｒ、Ｓ１２３Ｒ、Ｅ１２９Ｒ、Ａ３１１Ｒ、Ｄ３１３Ｒ、Ｄ３３７Ｒ、Ｒ５１９Ｅ、Ｈ５２１Ｒ、及びＱ５５４Ｒの１つまたはそれ以上（例えば、１、２、３、４、５など）を有する変異体ＰＣＳＫ９タンパク質に対して、ＡＢＰの結合が著しく低下または増加する。いくつかの実施形態において、結合は低下する。いくつかの実施形態において、結合の低下は、Ｂｍａｘの変化として観察される。いくつかの実施形態において、Ｂｍａｘのシフトは、ＡＢＰによって生じた最大シグナルの低下である。いくつかの実施形態において、エピトープの一部であるアミノ酸に関して、Ｂｍａｘは、少なくとも１０％低下し、例えば、以下の量、即ち、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、８５、９８、９９、または１００％の少なくとも何れかの低下は、いくつかの実施形態において、残基がエピトープの一部であることを示すことができる。
【０２３３】
直前に列記されているバリアント形態は、配列番号１または配列番号３０３に示されている野生型配列に関して言及されているが、ＰＣＳＫ９の対立遺伝子バリアントにおいて、表記位置のアミノ酸が異なり得ることが理解される。ＰＣＳＫ９のそのような対立遺伝子形態に対して著しくより低い結合を示す抗原結合タンパク質も想定される。従って、いくつかの実施形態において、上記実施形態の何れもが、図１Ａに示されている純粋に野生型の配列ではなく、対立遺伝子配列と比較され得る。
【０２３４】
いくつかの実施形態において、野生型ＰＣＳＫ９タンパク質中の選択された位置における残基が他の何れかの残基へ変異されているバリアントＰＣＳＫ９タンパク質に関して、抗原結合タンパク質の結合は著しく低下している。いくつかの実施形態において、特定された位置に対して、本明細書に記載されているアルギニン／グルタミン酸置換が使用される。いくつかの実施形態において、特定された位置に対して、アラニンが使用される。
【０２３５】
上述のように、結合に直接関与する残基または抗原結合タンパク質によって覆われた残基は、スキャニングの結果から同定され得る。従って、これらの残基は、抗原結合タンパク質が結合する結合領域を含有する配列番号１（または配列番号３０３または配列番号３）のドメインまたは領域の指標を提供し得る。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号１または配列番号３０３のアミノ酸：２０７、２０８、１８５、１８１、４３９、５１３、５３８、５３９、１３２、３５１、３９０、４１３、５８２、１６２、１６４、１６７、１２３、１２９、３１１、３１３、３３７、５１９、５２１、及び５５４のうちのうちの少なくとも１つを含有するドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号１または配列番号３０３のアミノ酸：２０７、２０８、１８５、１８１、４３９、５１３、５３８、５３９、１３２、３５１、３９０、４１３、５８２、１６２、１６４、１６７、１２３、１２９、３１１、３１３、３３７、５１９、５２１、及び５５４のうちのうちの少なくとも１つを含有する領域に結合する。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号１または配列番号３０３のアミノ酸：１６２、１６４、１６７、２０７、及び／または２０８のうちのうちの少なくとも１つを含有する領域に結合する。いくつかの実施形態において、特定された残基のうちの２つ以上（例えば、２、３、４、または５）がＡＢＰによって結合される領域の一部である。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＡＢＰ２１Ｂ１２と競合する。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号１または配列番号３０３のアミノ酸１８５のうちのうちの少なくとも１つを含有する領域に結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＡＢＰ３１Ｈ４と競合する。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号１または配列番号３０３のアミノ酸：４３９、５１３、５３８、及び／または５３９のうちの少なくとも１つを含有する領域に結合する。いくつかの実施形態において、特定された残基のうちの２つ以上（例えば、２、３、または４）がＡＢＰによって結合される領域の一部である。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＡＢＰ３１Ａ４と競合する。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号１または配列番号３０３のアミノ酸：１２３、１２９、３１１、３１３、３３７、１３２、３５１、３９０、及び／または４１３のうちの少なくとも１つを含有する領域に結合する。いくつかの実施形態において、特定された残基のうちの２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、または９）がＡＢＰによって結合される領域の一部である。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＡＢＰ１２Ｈ１１と競合する。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号１または配列番号３０３のアミノ酸：５８２、５１９、５２１、及び／または５５４のうちの少なくとも１つを含有する領域に結合する。いくつかの実施形態において、特定された残基のうちの２つ以上（例えば、２、３、または４）がＡＢＰによって結合される領域の一部である。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＡＢＰ３Ｃ４と競合する。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号１または配列番号３０３の断片または完全長配列内の前記領域に結合する。他の実施形態において、抗原結合タンパク質は、これらの領域からなるポリペプチドに結合する。「配列番号１または配列番号３０３」という表記は、これらの配列の一方または両方が使用され得ること、または適切であり得ることを表す。この用語は、一つのみが使用されるべきことを表さない。
【０２４２】
上述のように、上記記述は、配列番号１を参照して特定のアミノ酸位置に言及する。しかしながら、本明細書を通じて一般に、配列番号３に記載されている３１位で始まるＰｒｏ／Ｃａｔドメインが参照される。以下に記載されているように、配列番号１及び配列番号３０３は、ＰＣＳＫ９のシグナル配列を欠如する。従って、これらの様々な開示の間での何れの比較も、付番におけるこの差を考慮すべきである。特に、配列番号１中の何れのアミノ酸位置も、配列番号３のタンパク質中の３０位先のアミノ酸に対応する。例えば、配列番号１の２０７位は、配列番号３の２３７位に対応する（完全長配列及び一般に、本明細書中で使用されている付番系）。表３９．６は、配列番号１（及び／または配列番号３０３）を参照する上記位置が、配列番号３（シグナル配列を含む）にどのように対応するかを要約する。従って、配列番号１（及び／または配列番号３０３）に関して記載されている上記実施形態の何れもが、記載されている対応する位置によって、配列番号３を参照して記載されている。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、ＡＢＰ２１Ｂ１２は、残基１６２〜１６７（例えば、配列番号１の残基Ｄ１６２〜Ｅ１６７）を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰ１２Ｈ１１は、残基１２３〜１３２（例えば、配列番号１のＳ１２３〜Ｔ１３２）を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰ１２Ｈ１１は、残基３１１〜３１３（例えば、配列番号１のＡ３１１〜Ｄ３１３）を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、配列のこれらの鎖の何れか１つを含むエピトープに結合し得る。
【０２４４】
競合する抗原結合タンパク質
別の態様において、ＰＣＳＫ９への特異的結合に関して、本明細書中に記載されているエピトープに結合する例示された抗体または機能的断片の１つと競合する抗原結合タンパク質が提供される。そのような抗原結合タンパク質は、本明細書中に例示されている抗原結合タンパク質の１つと同じエピトープまたは重複するエピトープにも結合し得る。例示された抗原結合タンパク質と同じエピトープと競合し、または結合する抗原結合タンパク質及び断片は、類似の機能的特性を示すと予想される。例示された抗原結合タンパク質及び断片は、重鎖及び軽鎖可変領域ドメイン並びに表２及び／または図２〜３に含まれるＣＤＲを有するものなど、上述のものを含む。従って、具体例として、提供される抗原結合タンパク質には、
（ａ）図２〜３に列記されている抗体に対して列記されているＣＤＲの６つ全て；
（ｂ）表２中に列記されている抗体に対して列記されているＶＨ及びＶＬ；または
（ｃ）表２に列記されている抗体に対して明記されている２つの軽鎖及び２つの重鎖
を有する抗体または抗原結合タンパク質と競合するものが含まれる。
【０２４５】
治療医薬製剤及び投与
本明細書で提供されるのは、上述の方法で有用な、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を含む医薬製剤である。本明細書において使用される、「医薬製剤」は、それを必要とする患者への非経口投与（静脈内、筋肉内、皮下、噴霧、肺内、鼻腔内、または髄腔内を含むが、これらに限定されない）に適している薬学的に活性な薬物、すなわち、ＰＣＳＫ９に対する少なくとも１つの抗原結合タンパク質の無菌組成物であり、米国食品医薬品局または他の外国国内当局によって安全と見なされた、医薬的に許容される賦形剤、希釈剤、及び他の添加剤のみが含まれる。医薬製剤としては、液体、例えば、直接投与され得る水溶液、投与前に希釈剤を加えることで溶液に再構成され得る凍結乾燥された粉末が挙げられる。「医薬製剤」という用語の範囲から具体的に除外されるものは、患者への局所投与用の組成物、経口摂取用の組成物、及び非経口栄養補給用の組成物である。
【０２４６】
ある特定の実施形態において、医薬製剤は、安定な医薬製剤である。本明細書において使用される、「安定な医薬製剤」、「安定な製剤」、または「医薬製剤が安定である」という字句は、少なくとも１カ月間、または２カ月間、または３カ月間、または６カ月間、または１年間、または２年間２〜８℃で保存した場合に、対照処方試料と比較して、５％を超えない凝集の増加、及び／または生物活性喪失を示す生物学的に活性なタンパク質の医薬製剤のことを言う。製剤の安定性は、サイズ排除ＨＰＬＣ（「ＳＥＣ−ＨＰＬＣ」）、陽イオン交換ＨＰＬＣ（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）、光遮蔽（「ＨＩＡＣ」）による目に見えない微粒子の検出、及び／または目視検査（但し、これらに限定されない）を含む任意の数の標準アッセイを用いて、当業者により簡単に決定することができる。
【０２４７】
ある特定の実施形態において、医薬製剤は、表２及び図２及び／または３並びに図３１Ａ及び３１Ｂ中に図示されている、１つまたはそれ以上の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）と、１つまたはそれ以上の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）とを含む、ＰＣＳＫ９に対する任意の抗原結合タンパク質を含む。他のある特定の実施形態において、医薬製剤は、表２及び図２及び／または３並びに図３１Ａ及び３１Ｂ中に図示されている、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、表２及び図２及び／または３並びに図３１Ａ及び３１Ｂ中に図示されている、ＰＣＳＫ９に対する任意の抗原結合タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む、ＰＣＳＫ９に対する任意の抗原結合タンパク質を含む。さらに他の実施形態において、医薬製剤は、表２及び図２及び／または３並びに図３１Ａ及び３１Ｂ中に図示されている、ＰＣＳＫ９に対する任意の抗原結合タンパク質を含む。他のある特定の実施形態において、医薬製剤は、ＰＣＳＫ９に対する他の抗原結合タンパク質、すなわち、配列番号５８８の軽鎖可変ドメインと配列番号５８９の重鎖可変ドメインとからなる抗体を含み得る。いくつかの実施形態において、医薬製剤は、２１Ｂ１２、２６Ｈ５、３１Ｈ４、８Ａ３、１１Ｆ１、または８Ａ１の何れか１つを含む。
【０２４８】
いくつかの実施形態において、医薬製剤は、２つ以上の異なる、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を含む。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、２つ以上のエピトープと結合する、２つ以上のＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を含む。いくつかの実施形態において、様々な抗原結合タンパク質は、ＰＣＳＫ９への結合に関して、互いと競合しない。いくつかの実施形態において、表２並びに図２及び／または３に図示されている抗原結合タンパク質の何れもが、医薬製剤中で一緒に組み合わせることができる。
【０２４９】
ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質及び／または治療分子は、当該技術分野で公知の半減期延長ビヒクルに連結されている。そのようなビヒクルには、ポリエチレングリコール、グリコーゲン（例えば、ＡＢＰのグリコシル化）、及びデキストランが含まれるが、これらに限定されない。そのようなビヒクルは、例えば、米国特許出願第０９／４２８，０８２号（現在、米国特許第６，６６０，８４３号）及び公開ＰＣＴ出願ＷＯ９９／２５０４４号（これらは、あらゆる目的のために、参照により、本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２５０】
ある特定の実施形態において、許容される製剤材料は、好ましくは、使用される投薬量及び濃度で服用者に対して無毒である。いくつかの実施形態において、製剤材料は、皮下及び静脈内投与用である。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、例えば、組成物のｐＨ、浸透圧、粘度、透明度、色、等張性、匂い、無菌性、安定性、溶解または放出、吸着または浸透の速度を改変し、維持し、または保持するための製剤材料を含む。
【０２５１】
ある特定の実施形態において、適切な製剤材料には、アミノ酸（プロリン、アルギニン、リジン、メチオニン、タウリン、グリシン、グルタミン、またはアスパラギンなど）、抗菌剤、抗酸化剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または亜硫酸水素ナトリウム）、緩衝液（ホウ酸塩、重炭酸塩、リン酸ナトリウム（「ＮａＯＡＣ」）、トリス−ＨＣｌ、トリス緩衝液、クエン酸塩、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（即ち、ＰＢＳ緩衝液）、または他の有機酸など）、増量剤（マニトールまたはグリシンなど）、キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）、錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリン、またはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなど）、充填剤、単糖、二糖、及び他の炭水化物（グルコース、スクロース、フルクトース、ラクトース、マンノース、トレハロース、またはデキストリンなど）、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）、着色剤、着香剤及び希釈剤、乳化剤、親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）、低分子量ポリペプチド、塩形成対イオン（ナトリウムなど）、防腐剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または過酸化水素など）、溶媒（グリセリン、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコールなど）、糖アルコール（マニトールまたはソルビトールなど）、懸濁剤、界面活性剤または湿潤剤（プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパールなど）、安定性強化剤（スクロースまたはスロビトールなど）、張度増強剤（アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マニトールソルビトールなど）、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤、及び／または医薬補助剤が含まれるが、これらに限定されない。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９５）。
【０２５２】
ある特定の実施形態において、最適な医薬製剤は、例えば、意図される投与経路、送達形式、及び所望の投薬量に応じて、当業者により決定される。例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、上記」を参照されたい。ある特定の実施形態において、そのような製剤は、本発明の抗体の物理的状態、安定性、インビボ放出の速度、及びインビボ除去の速度に影響を及ぼし得る。
【０２５３】
一態様において、医薬製剤は、高濃度の、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を含む。ある特定の実施形態において、ＡＢＰ濃度は、約７０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌの範囲であり、例えば、約７０ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１３０ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１６０ｍｇ／ｍｌ、約１７０ｍｇ／ｍｌ、約１８０ｍｇ／ｍｌ、約１９０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌ、約２１０ｍｇ／ｍｌ、約２２０ｍｇ／ｍｌ、約２３０ｍｇ／ｍｌ、約２４０ｍｇ／ｍｌ、または約２５０ｍｇ／ｍｌ、及びその間の全ての値を含む。いくつかの実施形態において、２１Ｂ１２、２６Ｈ５、または３１Ｈ４の濃度は、約１００ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの範囲であり、例えば、１００ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１３０ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、または約１５０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態において、８Ａ３、１１Ｆ１、または８Ａ１の濃度は、約１４０ｍｇ／ｍｌ〜約２２０ｍｇ／ｍｌの範囲であり、例えば、１４０ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１６０ｍｇ／ｍｌ、約１７０ｍｇ／ｍｌ、約１８０ｍｇ／ｍｌ、約１９０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌ、約２１０ｍｇ／ｍｌ、約２２０ｍｇ／ｍｌ、または約２５０ｍｇ／ｍｌである。
【０２５４】
別の態様において、医薬製剤は、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、リン酸塩、リン酸緩衝生理食塩水（「ＰＢＳ」）、及び／または約ｐＨ７．０〜８．５のトリス緩衝液などの少なくとも１つの緩衝剤を含む。緩衝剤は、生理学的に適当なｐＨを維持するのに役立つ。さらに、緩衝剤は、医薬製剤の等張性及び化学安定性を増強させるのに役立つ。ある特定の実施形態において、緩衝剤は、約０．０５ｍＭ〜約４０ｍＭの範囲であり、例えば、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．５ｍＭ、約１．０ｍＭ、約５．０ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、または約１００ｎＭ、及びその間の全ての値を含む緩衝剤である。ある特定の実施形態において、緩衝剤は、ＮａＯＡＣである。医薬製剤の典型的なｐＨとしては、約４〜約６、または約４．８〜約５．８、または約５．０〜約５．２、または約５、または約５．２が挙げられる。
【０２５５】
ある特定の実施形態において、医薬製剤は、約２５０〜約３５０ミリオスモル／ｋｇの範囲であり、例えば、約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、または約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、及びその間の全ての値を含むオスモル濃度を有する等張性である。本明細書において使用される、「オスモル濃度」は、溶質対体積流体の比率の尺度である。換言すれば、溶液１キログラム当たりの分子及びイオン（または分子）の数である。オスモル濃度は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ２０２０多試料浸透圧計、Ｎｏｒｗｏｏｄ、ＭＡなどの浸透圧計と呼ばれる分析機器で測定してもよい。Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ２０２０多試料浸透圧計は、氷点降下法を用いることでオスモル濃度を測定する。溶液中のオスモライトが高くなるほど、その溶液が凍結する温度は下がる。オスモル濃度は、任意の他の方法を用いて、かつ、線形外挿などの当該技術分野で公知の任意の他の単位で測定してもよい。
【０２５６】
さらに別の態様において、医薬製剤は、ポリソルベート８０、ポリソルベート６０、ポリソルベート４０、及びポリソルベート２０を含む（但し、これらに限定されない）少なくとも１つの界面活性剤を含む。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、界面活性剤を、製剤の体積当たりの重量（「ｗ／ｖ」）で約０．００４％〜約１０％の範囲、例えば、製剤の約０．００４％、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０５％、約０．１％、約０．５％、約１％、約５％、または約１０％ｗ／ｖの濃度で含む。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、ポリソルベート８０を、製剤の約０．００４％〜約０．１％ｗ／ｖの範囲の濃度で含む。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、ポリソルベート２０を、製剤の約０．００４％〜約０．１％ｗ／ｖの範囲の濃度で含む。
【０２５７】
ある特定の実施形態において、医薬製剤は、ポリヒドロキシ炭化水素（ソルビトール、マニトール、グリセロール、及びズルシトールを含むが、これらに限定されない）、及び／または二糖（スクロース、ラクトース、マルトース、及びトレハロースを含むが、これらに限定されない）、及び／またはアミノ酸（プロリン、アルギニン、リジン、メチオニン、及びタウリンを含むが、これらに限定されない）、及び／またはベンジルアルコールなどの少なくとも１つの安定化剤を、前記ポリヒドロキシ炭化水素の合計、及び／または二糖、及び／またはアミノ酸、及び／またはベンジルアルコールなど製剤の約０．５％〜約１０％ｗ／ｖで含む。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、安定化剤を、スクロースの約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、安定化剤を、スクロースの約５％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、安定化剤を、ソルビトールの約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、安定化剤を、ソルビトールの約９％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、安定化剤を、プロリン、アルギニン、リジン、メチオニン、及び／またはタウリンの約１％、約２％、約３％、約４％、約５％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、安定化剤を、プロリンの約２〜３％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、安定化剤を、ベンジルアルコールの約１％、約２％、約３％、約４％、約５％の濃度で含む。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、安定化剤を、ベンジルアルコールの約１〜２％の濃度で含む。
【０２５８】
一態様において、医薬製剤は、室温（即ち、２５Ｃ）測定した際に、約３０センチポアズ（ｃＰ）未満の粘度レベルを有する。本明細書において使用される「粘度」とは、流体の流れ抵抗であり、センチポアズ（ｃＰ）またはミリパスカル秒（ｍＰａ−ｓ）の単位で測定してもよく、ここで、所与のせん断速度で、１ｃＰ＝１ｍＰａ−ｓである。粘度は、粘度計、例えば、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｄｉａｌ  Ｒｅａｄｉｎｇ  ＶｉｓｃｏｍｅｔｅｒモデルＬＶＴを用いて測定してもよい。粘度は、任意の他の方法を用いて、当該技術分野で公知の任意の他の単位（例えば、絶対、動（ｋｉｎｅｍａｔｉｃまたはｄｙｎａｍｉｃ）粘度、または絶対粘度）で測定してもよい。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、約２５ｃＰ、約２０ｃＰ、約１８ｃＰ、約１５ｃＰ、約１２ｃＰ、約１０ｃＰ；約８ｃＰ、約６ｃＰ、約４ｃＰ；約２ｃＰ；または約１ｃＰ未満の粘度レベルを有する。
【０２５９】
一態様において、医薬製剤は、生物学的に活性なタンパク質の生物理学的または生化学的特徴を経時的に調べるアッセイなどの、当業者に公知である少なくとも１つの安定性アッセイによって測定した際に安定である。上述のように、本発明の安定な医薬製剤は、少なくとも１カ月間、または２カ月間、または３カ月間、または６カ月間、または１年間、または２年間２〜８℃で保存した場合に、対照処方試料と比較して、５％未満を超えない凝集の増加及び／または生物活性喪失を示す生物学的に活性なタンパク質の医薬製剤である。ある特定の実施形態において、医薬製剤の安定性は、サイズ排除ＨＰＬＣ（「ＳＥＣ−ＨＰＬＣ」）を用いて測定される。ＳＥＣ−ＨＰＬＣは、流体力学的体積における差異に基づいてタンパク質を分離する。大きな流体力学的タンパク質体積を持つ分子は、小さな体積を持つ分子よりもより速く溶出する。ＳＥＣ−ＨＰＬＣの場合、安定な医薬製剤は、対照試料と比べて、約５％を超えない高分子量種の増加を呈するべきである。他のある特定の実施形態において、医薬製剤は、対照試料と比べて、約４％を超えない、約３％を超えない、約２％を超えない、約１％を超えない、約０．５％を超えない高分子量種の増加を呈するべきである。
【０２６０】
ある特定の実施形態において、医薬製剤の安定性は、陽イオン交換ＨＰＬＣ（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）を用いて測定される。ＣＥＸ−ＨＰＬＣは、表面電荷における差異に基づいてタンパク質を分離する。所定のｐＨで、抗ＰＣＳＫ９  ＡＢＰの荷電アイソフォームを陽イオン交換カラム上で分離し、塩勾配を用いて溶出した。溶離液を紫外吸光度によりモニターする。全ピーク面積の％として各アイソフォームのピーク面積を決定することで、荷電アイソフォーム分布を評価する。ＣＥＸ−ＨＰＬＣの場合、安定な医薬製剤は、対照試料と比べて、約５％以下のアイソフォーム主要ピークの低下を呈するべきである。他のある特定の実施形態において、安定な医薬製剤は、対照試料と比べて、約３％〜約５％以下のアイソフォーム主要ピークの低下を呈するべきである。ある特定の実施形態において、医薬製剤は、対照試料と比べて、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、約０．５％以下のアイソフォーム主要ピークの低下を呈するべきである。
【０２６１】
ある特定の実施形態において、医薬製剤の安定性は、光遮蔽（「ＨＩＡＣ」）による目に見えない微粒子の検出を用いて測定する。液採取器具付きの光遮蔽センサー（ＨＩＡＣ／Ｒｏｙｃｏ  ＨＲＬＤ−１５０または等価物）を含む電子液中粒子計数システム（ＨＩＡＣ／Ｒｏｙｃｏ  ９７０３または等価物）が、所与の試験試料における粒子数及びサイズ幅を定量化する。液体中の粒子が光源と検出器の間を通過すると、検出器に当たる光束を低下若しくは「ぼやけ」させる。粒子の濃度がセンサーの正常範囲内にある場合、これらの粒子は、１つずつ検出される。各粒子の検出領域通過は、光検出器への入射光を減少させ、光検出器の電圧出力は瞬間的に減少する。電圧の変化は、電気パルスとして登録され、機器によって存在する粒子数に変換される。方法は、非特異的であり、粒子の起源に関わらず粒子を測定する。モニターする粒径は、一般に、１０μｍ及び２５μｍである。ＨＩＡＣの場合、安定な医薬製剤は、対照試料と比べて、容器（または単位）当たり６０００を超えない１０μｍ粒子を呈するべきである。ある特定の実施形態において、安定な医薬製剤は、対照試料と比べて、容器（または単位）当たり５０００を超えない、４０００を超えない、３０００を超えない、２０００を超えない、１０００を超えない１０μｍ粒子を呈するべきである。さらに他の実施形態において、安定な医薬製剤は、対照試料と比べて、容器（または単位）当たり６００を超えない２５μｍ粒子を呈するべきである。ある特定の実施形態において、安定な医薬製剤は、対照試料と比べて、容器（または単位）当たり５００を超えない、４００を超えない、３００を超えない、２００を超えない、１００を超えない、５０を超えない２５μｍ粒子を呈するべきである。
【０２６２】
ある特定の実施形態において、医薬製剤の安定性は、目視評価を用いて測定される。目視評価は、試料の目に見える物理的特性の説明に使う定性的方法である。評価される特徴（例えば、色、透明度、粒子または異物の存在）に応じて、検査ブースの黒色及び／または白色の背景に試料を照らす。乳白色の参照基準及び色参照基準にも試料を照らす。目視評価の場合、安定な医薬製剤は、対照試料と比べて、色、透明度、粒子または異物の存在について著しい変化を呈するべきではない。
【０２６３】
本発明の一態様は：（ｉ）約７０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌの、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質と、（ｉｉ）約０．０５ｍＭ〜約４０ｍＭの、緩衝剤として作用する酢酸ナトリウム（「ＮａＯＡＣ」）などの緩衝剤と、（ｉｉｉ）約１％〜約５％の、プロリン、アルギニン、リジン、メチオニン、またはタウリン（２−アミノエタンスルホン酸としても知られる）、及び／または０．５％〜約５％の、安定化剤として作用するベンジルアルコールと、（ｉｖ）製剤のｗ／ｖで約０．００４％〜約１０％の非イオン界面活性剤（ポリソルベート８０、ポリソルベート６０、ポリソルベート４０、及びポリソルベート２０を含むが、これらに限定されない）とを含み、ここで、前記製剤は、約４．０〜６．０の範囲のｐＨを有する医薬製剤である。他のある特定の実施形態において、本発明の医薬製剤は、（ｉ）少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１６０ｍｇ／ｍｌ、約１７０ｍｇ／ｍｌ、約１８０ｍｇ／ｍｌ、約１９０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌの抗ＰＣＳＫ９抗体と、（ｉｉ）約１０ｍＭ  ＮＡＯＡＣと、（ｉｉｉ）約０．０１％ポリソルベート８０と、（ｉｖ）約２％〜３％プロリン（または約２５０ｍＭ〜約２７０ｍＭプロリン）とを含み、ここで、製剤は、約５のｐＨを有する。他のある特定の実施形態において、本発明の医薬製剤は、（ｉ）少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌの抗ＰＣＳＫ９抗体、２１Ｂ１２、２６Ｈ５、及び／または３１Ｈ４と、（ｉｉ）約１０ｍＭ  ＮＡＯＡＣと、（ｉｉｉ）約０．０１％ポリソルベート８０と、（ｉｖ）約２％〜３％プロリン（または約２５０ｍＭ〜約２７０ｍＭプロリン）とを含み、ここで、製剤は、約５のｐＨを有する。他のある特定の実施形態において、本発明の医薬製剤は、（ｉ）少なくとも約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１６０ｍｇ／ｍｌ、約１７０ｍｇ／ｍｌ、約１８０ｍｇ／ｍｌ、約１９０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌの抗ＰＣＳＫ９抗体、８Ａ３、１１Ｆ１、及び／または８Ａ１と、（ｉｉ）約１０ｍＭ  ＮＡＯＡＣと、（ｉｉｉ）約０．０１％ポリソルベート８０と、（ｉｖ）約２％〜３％プロリン（または約２５０ｍＭ〜約２７０ｍＭプロリン）とを含み、ここで、製剤は、約５のｐＨを有する。
【０２６４】
本発明の一態様は：（ｉ）少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌの抗ＰＣＳＫ９抗体と、（ｉｉ）約５ｍＭ〜約２０ｍＭの緩衝剤（ＮＡＯＡＣなど）と、（ｉｉｉ）製剤のｗ／ｖで約１％〜約１０％のポリヒドロキシ炭化水素（ソルビトールなど）または二糖（スクロースなど）と、（ｉｖ）製剤のｗ／ｖで約０．００４％〜約１０％の界面活性剤（ポリソルベート２０またはポリソルベート８０など）とを含み、ここで、前記製剤は、約４．８〜５．８の範囲のｐＨを有する医薬製剤であり、前記医薬製剤は、必要に応じて、約８０ｍＭ〜約３００ｍＭのプロリン、アルギニン、リジン、メチオニン、またはタウリン、及び／または０．５％〜約５％の、粘度を軽減させる作用をするベンジルアルコールを含む。他のある特定の実施形態において、本発明の医薬製剤は、（ｉ）少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌの抗ＰＣＳＫ９抗体と、（ｉｉ）約１０ｍＭ  ＮＡＯＡＣと、（ｉｉｉ）約９％スクロースと、（ｉｖ）約０．００４％ポリソルベート２０とを含み、ここで、製剤は、約５．２のｐＨを有する。他のある特定の実施形態において、本発明の医薬製剤は、（ｉ）少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１６０ｍｇ／ｍｌ、約１８０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌの抗ＰＣＳＫ９抗体と、（ｉｉ）約１５ｍＭ  ＮＡＯＡＣと、（ｉｉｉ）約９％スクロースと、（ｉｖ）約０．０１％ポリソルベート２０とを含み、ここで、製剤は、約５．２のｐＨを有する。他のある特定の実施形態において、本発明の医薬製剤は、（ｉ）少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１６０ｍｇ／ｍｌ、約１８０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌの抗ＰＣＳＫ９抗体と、（ｉｉ）約２０ｍＭ  ＮＡＯＡＣと、（ｉｉｉ）約９％スクロースと、及び（ｉｖ）約０．０１％ポリソルベート２０とを含み、ここで、製剤は、約５．２のｐＨを有する。他のある特定の実施形態において、本発明の医薬製剤は、（ｉ）少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１６０ｍｇ／ｍｌ、約１８０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌの抗ＰＣＳＫ９抗体と、（ｉｉ）約１０ｍＭ  ＮＡＯＡＣと、（ｉｉｉ）約９％スクロースと、（ｉｖ）約０．０１％ポリソルベート８０と、（ｖ）約２５０ｍＭプロリンとを含み、ここで、製剤は、約５のｐＨを有する。
【０２６５】
本発明の医薬製剤は、組み合わせ療法において（即ち、他の薬剤と組み合わせて）投与することができる。ある特定の実施形態において、組み合わせ療法は、少なくとも１つの抗コレステロール剤と組み合わせた、ＰＣＳＫ９と結合することができる抗原結合タンパク質を含む。薬剤には、インビトロで合成的に調製された化学製剤、抗体、抗原結合領域、並びにこれらの組み合わせ及び複合体が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、薬剤は、アゴニスト、アンタゴニスト、アロステリック調節物質、またはトキシンとして作用することができる。ある特定の実施形態において、薬剤は、その標的（例えば、受容体または酵素の活性化または阻害）を阻害または刺激するように作用することにより、ＬＤＬＲの増加した発現を促進し、または血清コレステロールレベルを減少させることができる。
【０２６６】
ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、コレステロール低下（血清及び／または総コレステロール）剤を用いた治療前、同時に及び後に投与することができる。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、高コレステロール血症、心臓病、糖尿病、及び／またはコレステロール関連疾患の何れかの開始を予防または軽減するために、予防的に投与することができる。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、既存の高コレステロール血症症状の治療のために投与することができる。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、疾患及び／または疾患に伴う症候の開始を遅延させる。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、コレステロール関連疾患の何れか１つの何れの症候またはその一部をも欠如する対象に提供される。
【０２６７】
ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、ホモ接合性家族性高コレステロール血症を治療するための特定の治療剤とともに使用される。ある特定の実施形態において、２つ、３つ、またはそれ以上の薬剤を投与することができる。ある特定の実施形態において、同じ製剤中に含めることによって、そのような薬剤を一緒に与えることができる。ある特定の実施形態において、そのような薬剤及びＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、同じ製剤中に含めることによって一緒に与えることができる。ある特定の実施形態において、そのような薬剤は、別々に製剤化し、治療キット中に含めることによって一緒に与えることができる。ある特定の実施形態において、そのような薬剤及びＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、別々に製剤化し、治療キット中に含めることによって一緒に与えることができる。ある特定の実施形態において、そのような薬剤は別々に与えることができる。
【０２６８】
ある特定の実施形態において、所望の純度を有する選択された製剤を、凍結乾燥されたケーキまたは水溶液の形態の、任意で使用される製剤化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、上記）と混合することによって、少なくとも１つのさらなる治療剤を加えたまたは加えず、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を含む製剤を保存のために調製することができる。さらに、ある特定の実施形態において、少なくとも１つのさらなる治療剤を加えたまたは加えず、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を含む製剤を、適切な賦形剤を用いて、凍結乾燥物質として製剤化され得る。
【０２６９】
ある特定の実施形態において、非経口投与が企図されている場合には、治療製剤は、医薬的に許容されるビヒクル中に、さらなる治療剤を加えてまたは加えずに、ＰＣＳＫ９に対する所望の抗原結合タンパク質を含む、非経口的に許容される無発熱物質水溶液の形態であり得る。ある特定の実施形態において、非経口注射用ビヒクルは、少なくとも１つのさらなる治療剤を加えてまたは加えずに、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質が適切に防腐された無菌等張溶液として製剤化されている無菌蒸留水である。ある特定の実施形態において、調製物は、注射可能な微小球体、生物腐食可能な粒子、ポリマー性化合物（ポリ乳酸またはポリグリコール酸など）、ビーズまたはリポソームなど、産物の徐放または持続的放出（産物は、その後、デポ注射を介して送達され得る）を与えることができる薬剤を加えた所望の分子の製剤を含むことができる。ある特定の実施形態において、ヒアルロン酸を使用することも可能であり、循環中での持続的な期間を促進する効果を有し得る。ある特定の実施形態において、所望の分子を導入するために、インプラント可能な薬物送達装置を使用することができる。
【０２７０】
ある特定の実施形態において、医薬製剤は、吸入のために製剤化することができる。ある特定の実施形態において、少なくとも１つのさらなる治療剤を加えたまたは加えずに、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、乾燥した吸入用粉末として製剤化することができる。ある特定の実施形態において、少なくとも１つのさらなる治療剤を加えたまたは加えずに、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を含む吸入溶液は、エアロゾル送達のために噴射剤とともに製剤化することができる。ある特定の実施形態において、溶液は噴霧され得る。経肺投与は、化学的に修飾されたタンパク質の経肺送達を記載するＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５中にさらに記載されている。
【０２７１】
ある特定の実施形態において、医薬製剤は、錠剤の製造に適した無毒の賦形剤との混合物中に、少なくとも１つのさらなる治療剤を加えてまたは加えずに、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の有効量を含むことができる。ある特定の実施形態において、無菌水または別の適切なビヒクル中に錠剤を溶解させることによって、単位投与量形態で溶液を調製することができる。ある特定の実施形態において、適切な賦形剤には、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム若しくは重炭酸ナトリウム、ラクトース若しくはリン酸カルシウムなどの不活性な希釈剤、またはデンプン、ゼラチン若しくはアラビアゴムなどの結合剤、またはステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸若しくはタルクなどの滑沢剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０２７２】
持続的または制御送達製剤中に、少なくとも１つのさらなる治療剤を加えてまたは加えずに、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を含む製剤など、さらなる医薬製剤が当業者に自明であろう。ある特定の実施形態において、リポソーム担体、生体内分解性微粒子、または多孔性ビーズ及びデポ注射などの様々な他の持続的または制御送達手段を製剤化するための技術も当業者に公知である。例えば、医薬製剤の送達用の多孔性ポリマー微粒子の徐放について記載しているＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９を参照されたい。ある特定の実施形態において、徐放調製物は、成型された製品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態の半透過性ポリマーマトリックスを含み得る。持続的放出マトリックスには、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号及びＥＰ０５８，４８１）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタミン酸の共重合体（Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリラート）（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：１６７−２７７（１９８１）及びＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８−１０５（１９８２））、エチレン酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，上記）、及びポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）が含まれ得る。ある特定の実施形態において、徐放製剤は、リポソームも含み得、これは、当該技術分野で公知の方法の何れによっても調製することが可能である。例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８−３６９２（１９８５）；ＥＰ０３６，６７６；ＥＰ０８８，０４６、及びＥＰ１４３，９４９を参照されたい。
【０２７３】
インビボ投与のために使用されるべき医薬製剤は、典型的には、無菌である。ある特定の実施形態において、これは、無菌ろ過膜を通じたろ過によって達成することができる。ある特定の実施形態において、製剤が凍結乾燥される場合には、この方法を用いた無菌化は、凍結乾燥及び再構成の前または後の何れかにおいて実施し得る。ある特定の実施形態において、非経口投与用製剤は、凍結乾燥された形態で、または溶液中に保存し得る。ある特定の実施形態において、非経口製剤は、一般的に、無菌アクセスポートを有する容器中に、例えば、皮下注射針によって突き刺すことが可能なストッパーを有する静脈内溶液袋またはバイアル中に配置される。
【０２７４】
ある特定の実施形態において、医薬製剤が調合された後、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体として、または脱水若しくは凍結乾燥された粉末として、無菌バイアル中に保存され得る。ある特定の実施形態において、そのような製剤は、即時使用形態で、または投与前に再構成される形態（例えば、凍結乾燥された形態）の何れかで保存し得る。
【０２７５】
ある特定の実施形態において、医薬製剤が調合された後、即時使用形態で溶液または懸濁液として、予め充填された注射器中で保存し得る。
【０２７６】
ある特定の実施形態において、単回投薬投与単位を作成するためのキットが提供される。ある特定の実施形態において、キットは、乾燥されたタンパク質を有する第一の容器と、水性製剤を有する第二の容器の両方を含有し得る。ある特定の実施形態において、単一及び／または複数チャンバーの予め充填された注射器（例えば、液体注射器及び凍結乾燥注射器）を含有するキットが含まれる。
【０２７７】
ある特定の実施形態において、少なくとも１つのさらなる治療剤を加えてまたは加えずに、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を含む医薬製剤の治療において使用されるべき有効量は、例えば、治療的な文脈及び目的に依存する。従って、当業者であれば、ある特定の実施形態に従って、送達される分子、少なくとも１つの追加の治療剤とともにまたは少なくとも１つの追加の治療剤なしに、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質が使用されている適応症、投与の経路、及びサイズ（体重、体表面または臓器サイズ）、及び／または患者の症状（年齢及び一般的な健康）に部分的に依存して、治療用の適切な投薬量レベルが変動することを理解されるであろう。ある特定の実施形態において、医師は、最適な治療効果を得るために、投薬量を滴定し、投与の経路を改変し得る。
【０２７８】
ある特定の実施形態において、製剤は、膜、スポンジ、またはその上に所望の分子が吸収若しくは封入された別の適切な材料の埋め込みを介して、局所的に投与され得る。ある特定の実施形態において、埋め込み装置が使用される場合、該装置は、任意の適切な組織または臓器中に埋め込むことができ、所望の分子の送達は、拡散、持続放出ボーラスまたは継続的投与によって行うことができる。
【０２７９】
投薬量及び投与計画
表２及び図２及び／または３並びに図３１Ａ及び３１Ｂ中に図示されている１つまたはそれ以上の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）及び１つまたはそれ以上の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含むＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の何れかを、本発明の方法に従って、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者に投与することができる。他のある特定の実施形態において、表２及び図２及び／または３並びに図３１Ａ及び３１Ｂ中に図示されているＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、表２及び図２及び／または３並びに図３１Ａ及び３１Ｂ中に図示されているＰＣＳＫ９に対する任意の抗原結合タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を、本発明の方法に従って、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者に投与することができる。さらに他の実施形態において、表２及び図２及び／または３及び／または１３及び／または図３１Ａ及び３１Ｂ中に図示されている、ＰＣＳＫ９に対する任意の抗原結合タンパク質を、本発明の方法に従って、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者に投与することができる。他のある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する他の抗原結合タンパク質；すなわち、配列番号５８８の軽鎖可変ドメインと配列番号５８９の重鎖可変ドメインとからなる抗体を、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者に投与することができる。いくつかの実施形態において、２１Ｂ１２、２６Ｈ５、３１Ｈ４、８Ａ３、１１Ｆ１、または８Ａ１のうちの何れか１つを、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者に投与することができる。
【０２８０】
本発明の方法に従って患者に投与される、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質（例えば、抗ＰＣＳＫ９抗体）の量は、一般に、治療的有効量である。ＡＢＰの量は、抗体のミリグラム（即ち、ｍｇ）または患者の体重キログラム当たりの抗体のミリグラム（即ち、ｍｇ／ｋｇ）の形式で表わさる。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９抗原結合タンパク質の典型的な投薬量は、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の約０．１μｇ／ｋｇ〜最大約１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。ある特定の実施形態において、投薬量は、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の０．１μｇ／ｋｇ〜最大約１００ｍｇ／ｋｇ；または１μｇ／ｋｇ〜最大約１００ｍｇ／ｋｇ；または５μｇ／ｋｇ〜最大約１００ｍｇ／ｋｇ；またはＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ；またはＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の２ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ；またはＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の２ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。
【０２８１】
ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質の量（または投薬量）は、少なくとも約１２０ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約１２００ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約７００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約７００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約６００ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、約１２０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、約１４０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、約２１０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、または約２８０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、約２１０ｍｇ〜約４２０ｍｇ、約２８０ｍｇ〜約４２０ｍｇ、約４２０ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、または約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇの範囲であり得る。この態様のいくつかの実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体を、患者に、約３５ｍｇ、約４５ｍｇ、約７０ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２８００ｍｇ、または約３０００ｍｇの投薬量で投与する。
【０２８２】
ある特定の実施形態において、投薬の頻度は、使用される製剤中のＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質及び／または何れかのさらなる治療剤の薬物動態学的パラメータを考慮に入れる。ある特定の実施形態において、臨床医は、所望の効果を達成する投薬量に到達するまで、製剤を投与する。ある特定の実施形態において、製剤は、従って、単回用量として、または経時的に２つ若しくはそれ以上の用量（所望の分子の同じ用量を含有してもよく、含有しなくてもよい）として、または埋め込み装置若しくはカテーテルを介した連続注入として投与され得る。製剤は、標準針及び注射器で皮下若しくは静脈内に送達することもできる。さらに、皮下送達に対しては、ペン型送達器具、並びに自己注射器送達デバイスが、本発明の医薬製剤の送達に適用される。適切な投薬量をさらに精密化することは、当業者によって日常的に行われており、当業者によって日常的に行われる作業の範疇に属する。ある特定の実施形態において、適切な投薬量は、適切な用量応答データの使用を通じて確認し得る。いくつかの実施形態において、投与の量及び頻度は、取得されるべき所望のコレステロールレベル（血清及び／または総）及び対象の現在のコレステロールレベル、ＬＤＬレベル、及び／またはＬＤＬＲレベルを考慮に入れることができ、これらの全ては当業者に周知の方法によって取得することができる。
【０２８３】
ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を、それを必要とする患者に、少なくとも約１２０ｍｇ、または最大約１４０ｍｇ、または最大約２１０ｍｇ、または最大約２８０ｍｇ、または最大約３５０ｍｇ、または最大約４２０ｍｇ、または最大約４５０ｍｇの投薬量で１週間に１回（ＱＷ）投与する。
【０２８４】
いくつかの他の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を、それを必要とする患者に、少なくとも約１２０ｍｇ、または最大約１４０ｍｇ、または最大約１５０ｍｇ、または最大約２１０ｍｇ、または最大約２８０ｍｇ、または最大約３５０ｍｇ、または最大約４２０ｍｇ、または最大約４５０ｍｇの投薬量で１週間おきに１回（または２週間ごと）（Ｑ２Ｗ）投与する。
【０２８５】
他のある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を、それを必要とする患者に、少なくとも約２５０ｍｇ、または最大約２８０ｍｇ、または最大約３００ｍｇ、または最大約３５０ｍｇ、または最大約４００ｍｇ、または最大約４２０ｍｇ、または最大約４５０ｍｇ、または最大約６００ｍｇ、または最大約７００ｍｇ、または最大約１０００ｍｇ、または最大約２０００ｍｇ、または最大約３０００ｍｇの投薬量で４週間に１回（または１カ月に１回）（Ｑ４Ｗ）投与する。
【０２８６】
他のある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を、それを必要とする患者に、少なくとも約４００ｍｇ、または最大約４２０ｍｇ、または最大約４５０ｍｇ、または最大約６００ｍｇ、または最大約７００ｍｇ、または最大約１０００ｍｇ、または最大約２０００ｍｇ、または最大約３０００ｍｇの投薬量で８週間に１回（または１カ月おきに１回）投与する。
【０２８７】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約１０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約１５％低減させる．いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約２０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約２５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約９０％低減させる。
【０２８８】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約１０％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０２８９】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約１５％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０２９０】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約２０％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０２９１】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約２５％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０２９２】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約３０％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０２９３】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約３５％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０２９４】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約４０％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０２９５】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約４５％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０２９６】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約５０％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０２９７】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約５５％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０２９８】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約６０％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０２９９】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約６５％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０３００】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約７０％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０３０１】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約７５％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０３０２】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約８０％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０３０３】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約８５％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０３０４】
いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比べて少なくとも約９０％低減させ、該低減を、投与前のレベルに対して少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約３１日間の期間にわたって維持する。
【０３０５】
ある特定の治療用途
当業者によって理解されるように、本明細書中に提供されている方法は、プロタンパク質コンベルターゼスブチリシン／ケクシン９型（ＰＣＳＫ９）に対する抗原結合タンパク質（例えば、抗体）を用いた、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の治療方法である。
【０３０６】
一態様において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を用いて、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の血清ＬＤＬコレステロールレベルを調節する。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を用いて、異常に高いレベルからまたは正常なレベルからさえも、血清ＬＤＬコレステロールの量を低減させる。ある特定の実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを、投与前のレベルと比べて少なくとも約１0％低減させる。ある特定の実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約１5％低減させる。ある特定の実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約２０％低減させる。ある特定の実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約２５％低減させる。ある特定の実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約３０％低減させる。ある特定の実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約３５％低減させる。ある特定の実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約４０％低減させる。ある特定の実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約４５％低減させる。ある特定の実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５０％低減させる。ある特定の実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルを少なくとも約９０％低減させる。
【０３０７】
一態様において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を用いて、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の血清ＰＣＳＫ９値を調節する。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、中和である。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を用いて、異常に高いレベルからまたは正常なレベルからさえも、ＰＣＳＫ９値を低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を、投与前のレベルと比べて少なくとも約２０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約２５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約３５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約４５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約６５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約７０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約７５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約８０％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約８５％低減させる。いくつかの実施形態において、血清ＰＣＳＫ９値を少なくとも約９０％低減させる。
【０３０８】
一態様において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を用いて、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の全コレステロールレベルを調節する。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、中和である。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を用いて、異常に高いレベルからまたは正常なレベルからさえも、総コレステロールの量を低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを、投与前のレベルと比べて少なくとも約２０％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約２５％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約３５％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約４５％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、全コレステロールレベルを少なくとも約６０％低減させる。
【０３０９】
一態様において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を用いて、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の非ＨＤＬコレステロールレベルを調節する。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、中和である。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を用いて、異常に高いレベルからまたは正常なレベルからさえも、非ＨＤＬコレステロールレベルを低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約３５％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約６５％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７０％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約７５％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８０％低減させる。いくつかの実施形態において、非ＨＤＬコレステロールレベルを少なくとも約８５％低減させる。
【０３１０】
一態様において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を用いて、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者のＡｐｏＢレベルを調節する。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、中和である。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を用いて、異常に高いレベルからまたは正常なレベルからさえも、ＡｐｏＢの量を低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを、投与前のレベルと比べて少なくとも約１０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約１５％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約２０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約２５％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約３５％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約４５％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約６５％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約７０％低減させる。いくつかの実施形態において、ＡｐｏＢレベルを少なくとも約７５％低減させる。
【０３１１】
一態様において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を用いて、ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者のＬｐ（ａ）レベルを調節する。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、中和である。いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を用いて、異常に高いレベルからまたは正常なレベルからさえも、Ｌｐ（ａ）の量を低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを、投与前のレベルと比べて少なくとも約１０％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約１５％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約２０％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約２５％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約３０％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約３５％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約４０％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約４５％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約５０％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約５５％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約６０％低減させる。いくつかの実施形態において、Ｌｐ（ａ）レベルを少なくとも約６５％低減させる。
【０３１２】
併用療法
ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する１つまたはそれ以上の抗原結合タンパク質の治療的有効量及び別の治療剤を投与することを含む、ホモ接合性家族性高コレステロール血症を治療する方法が提供される。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、少なくとも１つの他の治療剤の投与前に投与される。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、少なくとも１つの他の治療剤の投与と同時に投与される。ある特定の実施形態において、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は、少なくとも１つの他の治療剤の投与後に投与される。
【０３１３】
（抗原結合タンパク質とは別の）治療剤は、少なくとも１つの他のコレステロール降下（血清及び／または全身コレステロール）剤を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、薬剤は、ＬＤＬＲの発現を増加させ、血清ＨＤＬレベルを増加させ、ＬＤＬレベルを低減させ、またはトリグリセリドレベルを低減させることが観察されている。典型的な薬剤には、スタチン（アトロバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン）、ニコチン酸（ナイアシン）（ＮＩＡＣＯＲ、ＮＩＡＳＰＡＮ（徐放性ナイアシン）、ＳＬＯ−ＮＩＡＣＩＮ（徐放性ナイアシン）、ＣＯＲＤＡＰＴＩＶＥ（ラロピプラント））、フィブリン酸（ＬＯＰＩＤ（ゲムフィブロジル）、ＴＲＩＣＯＲ（フェノフィブラート）、胆汁酸封鎖剤（ＱＵＥＳＴＲＡＮ（コレスチラミン）、コレセベラム（ＷＥＬＣＨＯＬ）、ＣＯＬＥＳＴＩＤ（コレスチポール））、コレステロール吸収阻害剤（ＺＥＴＩＡ（エゼチミブ））、スタチンとニコチン酸の組み合わせ（ＡＤＶＩＣＯＲ  （ＬＯＶＡＳＴＡＴＩＮ及びＮＩＡＳＰＡＮ）、吸収阻害剤とのスタチンの組み合わせ（ＶＹＴＯＲＩＮ（ＺＯＣＯＲ及びＺＥＴＩＡ）、及び／または脂質調節剤が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＰＰＡＲα／γアゴニスト、スクアレン合成酵素阻害剤、ＣＥＴＰ阻害剤、抗高血圧剤、抗糖尿病薬（スルホニル尿素、インスリン、ＧＬＰ−１類縁体、ＤＤＰＩＶ阻害剤など、例えば、メタホルミン）、ＡｐｏＢ調節物質（Ｍｉｐｏｍｅｒｓｅｎなど）、ＭＴＰ阻害剤、及び／または閉塞性動脈硬化症治療と組み合わされる。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、スタチン、オンコスタチンＭのようなある特定のサイトカイン、エストロゲン、及び／またはベルベリンなどのある特定の植物成分のような、対象中のＬＤＬＲタンパク質のレベルを増加させる薬剤と組み合わされる。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、（ある特定の抗精神病薬、ある特定のＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、高フルクトース、スクロース、コレステロールまたはある特定の脂肪酸などの食事要因、並びにＲＸＲ、ＲＡＲ、ＬＸＲ、ＦＸＲに対するある特定の核受容体アゴニスト及びアンタゴニストなど）、対象中の血清コレステロールレベルを増加させる薬剤と組み合わされる。いくつかの実施形態において、ＡＢＰは、スタチン及び／またはインスリンなどの、対象中のＰＣＳＫ９のレベルを増加させる薬剤と組み合わされる。それらの２つの組み合わせは、他の薬剤の望ましくない副作用をＡＢＰによって軽減させることを可能とし得る。
【実施例】
【０３１４】
実施される実験及び達成された結果を含めて、以下の実施例は、例示の目的でのみ提供されるものであり、本発明を限定するものと解釈してはならない。明示的に別段の定めがある場合を除くほか、ＡＢＰ名は、本明細書中で一般的に用いられることに注意されたい（例えば、「２１Ｂ１２」は、実施例７に概説されているように表２におけるように、または図２及び／または３及び／または図１３Ａ、１３Ｃ、１３Ｆ〜１３Ｊにおけるように用いることができる）。
【０３１５】
実施例１
免疫化及び力価測定
抗ＰＣＫＳ９抗体及びハイブリドーマの作製
【０３１６】
ＰＣＳＫ９の成熟形態に対する抗体（図１Ａ中の配列として図示されており、プロドメインに下線が付されている）を、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含有するマウスであるＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）マウス（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）中で作製した。ＰＣＳＫ９に対する抗体を作製するために、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）２つのグループのマウス（グループ１及び２）を使用した。グループ１は、完全ヒトＩｇＧ２κ及びＩｇＧ２λ抗体を産生するＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）系統ＸＭＧ２−ＫＬのマウスを含んだ。グループ１のマウスを、ヒトＰＣＳＫ９で免疫化した。ＧｅｎＢａｎｋ配列を参照として（ＮＭ＿１７４９３６）を使用し、標準的組み換え技術を用いて、ＰＣＳＫ９を調製した。グループ２は、完全ヒトＩｇＧ４κ及びＩｇＧ４λ抗体を産生するＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）系統ＸＭＧ４−ＫＬのマウスを含んだ。グループ２のマウスも、ヒトＰＣＳＫ９で免疫化した。
【０３１７】
表３中のスケジュールに従って、両グループのマウスに抗原を１１回注射した。最初の免疫化において、腹部中に腹腔内送達された抗原計１０μｇを各マウスに注射した。その後の強化免疫は５μｇの用量であり、注射法は、腹部内への腹腔内注射と尾の基部への皮下注射を交互に行った。腹腔内注射のために、ＴｉｔｅｒＭａｘ（登録商標）Ｇｏｌｄ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｔ２６８４）を加えたエマルジョンとして抗原を調製し、皮下注射のために、抗原をＡｌｕｍ（リン酸アルミニウム）及びＣｐＧオリゴと混合する。注射２〜８及び１０において、アジュバントａｌｕｍゲル中の抗原計５μｇを各マウスに注射した。マウス当たり抗原５μｇの最終注射をリン酸緩衝化された生理的食塩水中に送達し、２つの部位に送達する（腹部内へ５０％腹腔内及び尾の基部に５０％皮下）。免疫化プログラムは、以下に示されている表１．１中に要約されている。
【０３１８】
【表３】
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【０３１９】
ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ動物を滴定するために使用したプロトコルは、以下の通りであった。Ｃｏｓｔａｒ３３６８培地結合プレートを８μｇ／ｍＬ（５０μＬ／ウェル）のニュートラビジンで被覆し、１ＸＰＢＳ／０．０５％アジド中において、４℃で一晩インキュベートした。ＲＯ水でのＴｉｔｅｒＴｅｋ３サイクル洗浄を用いて、プレートを洗浄した。１ＸＰＢＳ／１％ミルク２５０μＬを用いてプレートをブロックし、室温で少なくとも３０分間インキュベートした。ＲＯ水でのＴｉｔｅｒＴｅｋ３サイクル洗浄を用いて、ブロックを洗浄除去した。次いで、１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋（アッセイ希釈液）５０μＬ／ウェル中に、２μｇ／ｍＬでｂ−ヒトＰＣＳＫ９を捕捉し、室温で１時間インキュベートした。次いで、ＲＯ水を用い、ＴｉｔｅｒＴｅｋ３サイクル洗浄を使用して洗浄した。一次抗体に関しては、１：１００から二つ組みで、血清を１：３滴定した。アッセイ希釈液５０μＬ／ウェル中でこれを行い、室温で１時間インキュベートした。次いで、ＲＯ水を用い、ＴｉｔｅｒＴｅｋ３サイクル洗浄を使用して洗浄した。二次抗体は、５０μＬ／ウェルのアッセイ希釈液中の４００ｎｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃＨＲＰであった。これを室温で１時間インキュベートした。次いで、ＲＯ水を用い、ＴｉｔｅｒＴｅｋ３サイクル洗浄を使用してこれを洗浄し、ペーパータオル上で叩いて乾燥させた。基質に関しては、一ステップのＴＭＢ溶液（Ｎｅｏｇｅｎ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，Ｋｅｎｔｕｃｋｙ）を使用し（５０μＬ／ウェル）、室温で３０分間展開させた。
【０３２０】
ＥＬＩＳＡアッセイにおいて従ったプロトコルは、以下の通りであった。Ｖ５Ｈｉｓタグを持たないｂ−ＰＣＳＫ９を含む試料に関して、以下のプロトコルを使用した。Ｃｏｓｔａｒ３３６８培地結合プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用した。１×ＰＢＳ／０．０５％アジド（５０μＬ／ウェル）中の８μｇ／ｍＬのニュートラビジンで、プレートを被覆した。４℃で一晩、プレートをインキュベートした。次いで、ＴｉｔｅｒｔｅｋＭ３８４プレート洗浄装置（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）を用いて、プレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。１×ＰＢＳ／１％ミルク２５０μＬでプレートをブロックし、室温で約３０分間インキュベートした。次いで、Ｍ３８４プレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。捕捉は、Ｖ５タグを持たないｂ−ｈｕＰＣＳＫ９であり、１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋（４０μＬ／ウェル）中に２μｇ／ｍＬで添加した。次いで、プレートを室温で１時間インキュベートした。３サイクルの洗浄を行った。１：１００から２つ組みで、血清を１：３滴定し、列Ｈは血清のためのブランクとした。滴定は、５０μＬ／ウェルの体積で、アッセイ希釈液中において行った。プレートを室温で１時間インキュベートした。次に、３サイクルの洗浄を行った。１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋（５０μｌ／ウェル）中の１００ｎｇ／ｍＬ（１：４０００）のヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃＨＲＰをプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。３サイクル洗浄を用いて、プレートをもう一度洗浄した。次いで、ペーパータオルで叩いて、プレートを乾燥させた。最後に、１ステップＴＭＢ（Ｎｅｏｇｅｎ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，Ｋｅｎｔｕｃｋｙ）（５０μＬ／ウェル）をプレートに添加し、室温で３０分後に、１Ｎ塩酸（５０μＬ／ウェル）で反応停止処理した。Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレートリーダーを用いて、４５０ｎｍでＯＤを直ちに読み取った。
【０３２１】
ＰＣＳＫ９が結合したプレートを検出するための陽性対照は、アッセイ希釈液中で３μｇ／ｍＬから２つ組みで１：３滴定された、可溶性ＬＤＬ受容体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２１４８ＬＤ／ＣＦ）及びポリクローナルウサギ抗ＰＣＳＫ９抗体（Ｃａｙｍｅｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＃１０００７１８５）であった。４００ｎｇ／ｍＬの濃度でヤギ抗ＬＤＬＲ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＡＦ２１４８）及びウサギ抗ヤギＩｇＧＦｃＨＲＰを用いて、ＬＤＬＲを検出した。アッセイ希釈液中の、４００ｎｇ／ｍＬの濃度のヤギ抗ウサギＩｇＧＦｃを用いて、ウサギポリクローナルを検出した。陰性対照は、アッセイ希釈液中において、１：１００から２つ組みで１：３滴定されたナイーブＸＭＧ２−ＫＬ及びＸＭＧ４−ＫＬ血清であった。
【０３２２】
Ｖ５Ｈｉｓタグを有するｂ−ＰＣＳＫ９を含む試料に関しては、以下のプロトコルを使用した。Ｃｏｓｔａｒ３３６８培地結合プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用した。１×ＰＢＳ／０．０５％アジド（５０μＬ／ウェル）中の８μｇ／ｍＬのニュートラビジンで、プレートを被覆した。４℃で一晩、プレートをインキュベートした。次いで、ＴｉｔｅｒｔｅｋＭ３８４プレート洗浄装置（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）を用いて、プレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。１×ＰＢＳ／１％ミルク２５０μＬでプレートをブロックし、室温で約３０分間インキュベートした。次いで、Ｍ３８４プレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。捕捉は、Ｖ５タグを有するｂ−ｈｕＰＣＳＫ９であり、１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋（４０μＬ／ウェル）中に２μｇ／ｍＬで添加した。次いで、プレートを室温で１時間インキュベートした。３サイクルの洗浄を行った。１：１００から２つ組みで、血清を１：３滴定し、列Ｈは血清のためのブランクとした。滴定は、５０μＬ／ウェルの体積で、アッセイ希釈液中において行った。プレートを室温で１時間インキュベートした。次に、３サイクル洗浄を用いて作動されるＭ３８４プレート洗浄装置を用いて、プレートを洗浄した。１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中の４００ｎｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃＨＲＰを５０μＬ／ウェルでプレートに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。３サイクル洗浄を用いて、プレートをもう一度洗浄した。次いで、ペーパータオルで叩いて、プレートを乾燥させた。最後に、１ステップＴＭＢ（Ｎｅｏｇｅｎ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，Ｋｅｎｔｕｃｋｙ）（５０μＬ／ウェル）をプレートに添加し、室温で３０分後に、１Ｎ塩酸（５０μＬ／ウェル）でプレートを反応停止処理した。Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレートリーダーを用いて、４５０ｎｍでＯＤを直ちに読み取った。
【０３２３】
陽性対照は、ＬＤＬＲ、アッセイ希釈液中において、３μｇ／ｍＬから２つ組みで１：３滴定されたウサギ抗ＰＣＳＫ９であった。ヤギ抗ＬＤＬＲ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＡＦ２１４８）及び４００ｎｇ／ｍＬの濃度のウサギ抗ヤギＩｇＧＦｃＨＲＰを用いて、ＬＤＬＲを検出する。ウサギポリは、アッセイ希釈液中、４００ｎｇ／ｍＬの濃度のヤギ抗ウサギＩｇＧＦｃを用いて検出された。アッセイ希釈液中で１μｇ／ｍＬから２つ組みで、ヒト抗Ｈｉｓ１．２．３及び抗Ｖ５１．７．１を１：３滴定した。何れも、アッセイ希釈液中、４００ｎｇ／ｍＬの濃度のヤギ抗ＩｇＧＦｃＨＲＰを用いて検出された。陰性対照は、アッセイ希釈液中において、１：１００から２つ組みで１：３滴定されたナイーブＸＭＧ２−ＫＬ及びＸＭＧ４−ＫＬ血清であった。
【０３２４】
ヒトＰＣＳＫ９に対する抗体の力価を、記載されている可溶性抗原で免疫化されたマウスに対するＥＬＩＳＡアッセイによって検査した。表４は、ＥＬＩＳＡデータを要約し、ＰＣＳＫ９に対して特異的であるように見受けられるいくつかのマウスが存在したことを示す。例えば、表４を参照されたい。従って、免疫化プログラムの終わりに、１０匹のマウス（表１．２中の太字）を採集のために選択し、本明細書中に記載されているように、それぞれ、脾臓及びリンパ節から脾細胞及びリンパ球を単離した。
【０３２５】
【表４】
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【０３２６】
実施例２
リンパ球の回収、Ｂ細胞の単離、融合及びハイブリドーマの作製
この実施例は、免疫細胞がどのようにして回収され、ハイブリドーマがどのようにして作製されたかについて概説する。選択された免疫化マウスを頚椎脱臼によって屠殺し、各コホートから流入領域リンパ節を採集し、プールした。細胞を組織から放出させるために、ＤＭＥＭ中で磨り潰すことによって、リンパ系組織からＢ細胞を解離させ、細胞をＤＭＥＭ中に懸濁した。細胞を計数し、穏やかに、但し、完全に細胞を再懸濁させるために、１億のリンパ球当たりＤＭＥＭ０．９ｍＬを細胞ペレットに添加した。
【０３２７】
１：４の比で、リンパ球をＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ１５８０から購入した非分泌性骨髄腫Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（Ｋｅａｒｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２３，１５４８−１５５０）と混合した。４００×ｇで、４分の遠心分離によって、細胞混合物を穏やかに沈降させた。容器を傾けて上清を除去した後、１ｍＬピペットを用いて、細胞を穏やかに混合した。１分にわたって、穏やかに撹拌しながら、Ｓｉｇｍａ（カタログ番号Ｐ７３０６）から得た事前加熱されたＰＥＧ／ＤＭＳＯ溶液（Ｂ細胞１００万個当たり１ｍＬ）をゆっくり添加した後、１分間混合した。次いで、穏やかに撹拌しながら、２分にわたって、事前加熱されたＩＤＭＥＭ（Ｂ細胞１００万個当たり２ｍＬ）（グルタミン、Ｌ−グルタミン、ペニシリン／ストレプトマイシン、ＭＥＭ非必須アミノ酸なしのＤＭＥＭ）（全て、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから得た）を添加した。最後に、３分にわたって、事前加熱されたＩＤＭＥＭ（１０６個のＢ細胞当たり８ｍＬ）を添加した。
【０３２８】
４００×ｇで６分、融合された細胞を遠心沈降させ、１００万個のＢ細胞当たり選択培地２０ｍＬ（Ｌ−グルタミン、ペニシリン／ストレプトマイシン、ＭＥＭ非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、２−メルカプトエタノール（全て、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手）、ＨＡ−アザセリンヒポキサンチン、及びＯＰＩ（オキサロ酢酸、ピルビン酸塩、ウシインスリン）（何れも、Ｓｉｇｍａから入手）、及びＩＬ−６（Ｂｏｅｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）が補充された、ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１５％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）中に再懸濁した。３７Ｃで２０〜３０分間、細胞をインキュベートし、次いで、選択培地２００ｍＬ中に再懸濁し、９６ウェルへの播種の前に、Ｔ１７５フラスコ中で３〜４日間培養した。このようにして、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質を産生するハイブリドーマを作製した。
【０３２９】
実施例３
ＰＣＳＫ９抗体の選択
本実施例は、様々なＰＣＳＫ９抗原結合タンパク質をどのようにして性質決定し、選択したかについて概説する。（実施例１及び２で作製されたハイブリドーマから産生された）分泌された抗体のＰＣＳＫ９への結合を評価した。抗体の選択は、結合データ及びＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９の結合の阻害及び親和性に基づいた。以下に記載されているように、ＥＬＩＳＡによって、可溶性ＰＣＳＫ９への結合を分析した。結合親和性を定量するために、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（表面プラズモン共鳴）を使用した。
【０３３０】
一次スクリーニング
野生型ＰＣＳＫ９に結合する抗体に対する一次スクリーニングを行った。２つの採集物に対して、一次スクリーニングを行った。一次スクリーニングは、ＥＬＩＳＡアッセイを含み、以下のプロトコルを用いて行った。
【０３３１】
Ｃｏｓｔａｒ３７０２培地結合３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用した。４０μＬ／ウェルの体積で、１×ＰＢＳ／０．０５％アジド中、４μｇ／ｍＬの濃度のニュートラビジンで、プレートを被覆した。４℃で一晩、プレートをインキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）を用いて、プレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。１×ＰＢＳ／１％ミルク９０μＬでプレートをブロックし、室温で約３０分間インキュベートした。次いで、プレートを洗浄した。再度、３サイクルの洗浄を行った。捕捉試料は、Ｖ５タグを持たないビオチン化されたＰＣＳＫ９であり、４０μＬ／ウェルの体積で、１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中に０．９μｇ／ｍＬで添加した。次いで、プレートを室温で１時間インキュベートした。次に、３サイクル洗浄を用いて作動されるＴｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いて、プレートを洗浄した。１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋４０μＬ中に、上清１０μＬを移し、室温で１．５時間インキュベートした。再度、３サイクル洗浄を用いて作動されるＴｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いて、プレートを洗浄した。１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中、１００ｎｇ／ｍＬ（１：４０００）の濃度のヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃＰＯＤ４０μＬ／ウェルをプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。３サイクル洗浄を用いて、プレートをもう一度洗浄した。最後に、１ステップＴＭＢ（Ｎｅｏｇｅｎ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，Ｋｅｎｔｕｃｋｙ）（４０μＬ／ウェル）をプレートに添加し、室温で３０分後に、１Ｎ塩酸（４０μＬ／ウェル）で反応停止処理した。Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレートリーダーを用いて、４５０ｎｍでＯＤを直ちに読み取った。
【０３３２】
一次スクリーニングによって、２つの採集物から同定された合計３１０４の抗原特異的ハイブリドーマが得られた。最高のＥＬＩＳＡのＯＤに基づいて、合計３０００の陽性に対して、採集物当たり１５００のハイブリドーマをさらなる操作に用いた。
【０３３３】
確認用スクリーニング
次いで、安定なハイブリドーマが確立されたことを確認するために、野生型ＰＣＳＫ９への結合に関して、３０００の陽性を再スクリーニングした。スクリーニングは、以下のように行った。Ｃｏｓｔａｒ３７０２培地結合３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用した。４０μＬ／ウェルの体積で、１×ＰＢＳ／０．０５％アジド中、３μｇ／ｍＬのニュートラビジンで、プレートを被覆した。４℃で一晩、プレートをインキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）を用いて、プレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。１×ＰＢＳ／１％ミルク９０μＬでプレートをブロックし、室温で約３０分間インキュベートした。次いで、Ｍ３８４プレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。捕捉試料は、Ｖ５タグを持たないｂ−ＰＣＳＫ９であり、４０μＬ／ウェルの体積で、１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中に０．９μｇ／ｍＬで添加した。次いで、プレートを室温で１時間インキュベートした。次に、３サイクル洗浄を用いて、プレートを洗浄した。１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋４０μＬ中に、上清１０μＬを移し、室温で１．５時間インキュベートした。再度、３サイクル洗浄を用いて作動されるＴｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いて、プレートを洗浄した。１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中、１００ｎｇ／ｍＬ（１：４０００）の濃度のヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃＰＯＤ４０μＬ／ウェルをプレートに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。３サイクル洗浄を用いて作動されるＴｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いて、プレートをもう一度洗浄した。最後に、１ステップＴＭＢ（Ｎｅｏｇｅｎ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，Ｋｅｎｔｕｃｋｙ）の４０μＬ／ウェルをプレートに添加し、室温で３０分後に、１Ｎの塩酸（４０μＬ／ウェル）で反応停止処理した。Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレートリーダーを用いて、４５０ｎｍでＯＤを直ちに読み取った。合計２４４１の陽性を、第二のスクリーニングで反復した。次いで、その後のスクリーニングにおいて、これらの抗体を使用した。
【０３３４】
マウス交叉反応スクリーニング
次いで、抗体がヒト及びマウスＰＣＳＫ９の両方に結合できることを確認するために、マウスＰＣＳＫ９に対する交叉反応性に関して、ハイブリドーマのパネルをスクリーニングした。交叉反応性スクリーニングでは、以下のプロトコルを使用した。Ｃｏｓｔａｒ３７０２培地結合３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用した。４０μＬ／ウェルの体積で、１×ＰＢＳ／０．０５％アジド中、３μｇ／ｍＬのニュートラビジンでプレートを被覆した。４℃で一晩、プレートをインキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）を用いて、プレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。１×ＰＢＳ／１％ミルク９０μＬでプレートをブロックし、室温で約３０分間インキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。捕捉試料は、ビオチン化されたマウスＰＣＳＫ９であり、４０μＬ／ウェルの体積で、１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中に１μｇ／ｍＬで添加した。次いで、プレートを室温で１時間インキュベートした。次に、３サイクル洗浄を用いて作動されるＴｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いて、プレートを洗浄した。上清５０μＬをプレートに移し、室温で１時間インキュベートした。再度、３サイクル洗浄を用いて、プレートを洗浄した。１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中、１００ｎｇ／ｍＬ（１：４０００）の濃度のヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃＰＯＤ４０μＬ／ウェルをプレートに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。３サイクル洗浄を用いて、プレートをもう一度洗浄した。最後に、１ステップＴＭＢ（Ｎｅｏｇｅｎ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，Ｋｅｎｔｕｃｋｙ）の４０μＬ／ウェルをプレートに添加し、室温で３０分後に、１Ｎ塩酸（４０μＬ／ウェル）で反応停止処理した。Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレートリーダーを用いて、４５０ｎｍでＯＤを直ちに読み取った。５７９抗体が、マウスＰＣＳＫ９と交叉反応することが観察された。次いで、その後のスクリーニングにおいて、これらの抗体を使用した。
【０３３５】
Ｄ３７４Ｙ変異体結合スクリーニング
ＰＣＳＫ９中のＤ３７４Ｙ変異は、ヒト集団中において文献に記載されている（例えば、Ｔｉｍｍｓ  ＫＭ  ｅｔ  ａｌ，「Ａ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＰＣＳＫ９  ｃａｕｓｉｎｇ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ−ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ  ｉｎ  ａ  Ｕｔａｈ  ｐｅｄｉｇｒｅｅ」，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１１４：３４９−３５３，２００４）。抗体が野生型に対して特異的であるか、またはＰＣＳＫ９のＤ３７４Ｙ形態に結合したかどうかを測定するために、次いで、変異Ｄ３７４Ｙを含む変異体ＰＣＳＫ９配列への結合に関して、試料をスクリーニングした。スクリーニングのためのプロトコルは、以下の通りであった。スクリーニングでは、Ｃｏｓｔａｒ３７０２培地結合３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用した。４０μＬ／ウェルの体積で、１×ＰＢＳ／０．０５％アジド中、４μｇ／ｍＬのニュートラビジンで、プレートを被覆した。４℃で一晩、プレートをインキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）を用いて、プレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。１×ＰＢＳ／１％ミルク９０μＬでプレートをブロックし、室温で約３０分間インキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中、１μｇ／ｍＬの濃度のビオチン化されたヒトＰＣＳＫ９Ｄ３７４Ｙでプレートを被覆し、室温で１時間インキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。後期枯渇ハイブリドーマ培養上清を、ＰＢＳ／ミルク／Ｃａ２＋中に１：５希釈し（１０ｍＬ＋４０ｍＬ）、室温で１時間インキュベートした。次に、１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中、１μｇ／ｍＬで、ウサギ抗ヒトＰＣＳＫ９（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）及びヒト抗Ｈｉｓ１．２．３（１：２）の４０μＬ／ウェルをプレート上に滴定し、次いで、室温で１時間インキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中、１００ｎｇ／ｍＬ（１：４０００）の濃度のヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃＨＲＰ４０μＬ／ウェルをプレートに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中、１００ｎｇ／ｍＬ（１：４０００）の濃度のヤギ抗ウサギＩｇＧＦｃＨＲＰ４０μＬ／ウェルをプレートに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。最後に、１ステップＴＭＢ（Ｎｅｏｇｅｎ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，Ｋｅｎｔｕｃｋｙ）の４０μＬ／ウェルをプレートに添加し、室温で３０分後に、１Ｎ塩酸(４０μＬ／ウェル)で反応停止処理した。Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレートリーダーを用いて、４５０ｎｍでＯＤを直ちに読み取った。野生型ＰＣＳＫ９に対する陽性ヒットの９６％以上が、変異体ＰＣＳＫ９も結合した。
【０３３６】
大規模受容体リガンド遮断スクリーニング
ＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９結合を遮断する抗体をスクリーニングするために、Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９変異体を用いたアッセイを開発した。ＬＤＬＲに対してより高い結合親和性を有するので、このアッセイに対してその変異体を使用し、より感度が高い受容体リガンド遮断アッセイの開発を可能とした。受容体リガンド遮断スクリーニングでは、以下のプロトコルを使用した。スクリーニングでは、Ｃｏｓｔａｒ３７０２培地結合３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用した。４０μＬ／ウェルの体積で、１×ＰＢＳ／０．０５％アジド中、２μｇ／ｍＬのヤギ抗ＬＤＬＲ（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号ＡＦ２１４８）でプレートを被覆した。４℃で一晩、プレートをインキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）を用いて、プレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。１×ＰＢＳ／１％ミルク９０μＬでプレートをブロックし、室温で約３０分間インキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。捕捉試料は、ＬＤＬＲ（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号２１４８ＬＤ／ＣＦ）であり、４０μＬ／ウェルの体積で、１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中に０．４μｇ／ｍＬで添加した。次いで、プレートを室温で１時間１０分間インキュベートした。同時に、Ｎｕｎｃポリプロピレンプレート中のハイブリドーマ枯渇上清１５μＬとともに、ビオチン化されたヒトＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９の２０ｎｇ／ｍＬをインキュベートし、枯渇上清濃度を１：５希釈した。次いで、プレートを室温で約１時間３０分間プレインキュベートした。次に、３サイクル洗浄を用いて作動されるＴｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いて、プレートを洗浄した。プレインキュベートされた混合物５０μＬ／ウェルを、ＬＤＬＲで被覆されたＥＬＩＳＡプレート上に移し、室温で１時間インキュベートした。ＬＤＬＲに結合されたｂ−ＰＣＳＫ９を検出するために、アッセイ希釈液中の５００ｎｇ／ｍＬのストレプトアビジンＨＲＰ４０μＬ／ウェルをプレートに添加した。プレートを室温で１時間インキュベートした。再度、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。最後に、１ステップＴＭＢ（Ｎｅｏｇｅｎ，  Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，  Ｋｅｎｔｕｃｋｙ）の４０μＬ／ウェルをプレートに添加し、室温で３０分後に、１Ｎ塩酸（４０μＬ／ウェル）で反応停止処理した。Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレートリーダーを用いて、４５０ｎｍでＯＤを直ちに読み取った。スクリーニングによって、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲウェル間での相互作用を遮断する３８４の抗体が同定され、１００の抗体は相互作用を強く遮断した（ＯＤ＜０．３）。これらの抗体は、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲの結合相互作用を９０％超阻害した（９０％超の阻害）。
【０３３７】
遮断物質のサブセットに対する受容体リガンド結合アッセイ
次いで、第一の大規模受容体リガンド阻害アッセイにおいて同定された中和物質の３８４のサブセットに対して、変異体酵素を用いて受容体リガンドアッセイを反復した。３８４の遮断物質サブセットアッセイのスクリーニングでは、大規模受容体リガンド遮断スクリーニングにおいて行われたものと同じプロトコルを使用した。この反復スクリーニングによって、最初のスクリーニングデータが確認された。
【０３３８】
この３８４メンバーのサブセットのスクリーニングによって、９０％を超えて、ＰＣＳＫ９変異体酵素とＬＤＬＲ間の相互作用を遮断する８５の抗体が同定された。
【０３３９】
野生型ＰＣＳＫ９と結合するが、Ｄ３７４Ｙ変異体と結合しない遮断物質の受容体リガンド結合アッセイ
３０００の上清の当初パネル中には、野生型ＰＣＳＫ９に特異的に結合するが、ｈｕＰＣＳＫ９（Ｄ３７４Ｙ）変異体に結合しないことが示された８６の抗体が存在していた。ＬＤＬＲ受容体への野生型ＰＣＳＫ９の結合を遮断する能力に関して、これらの８６の上清を検査した。以下のプロトコルを使用した。スクリーニングでは、Ｃｏｓｔａｒ３７０２培地結合３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用した。４０μＬ／ウェルの体積で、１×ＰＢＳ／０．０５％アジド中、１０μｇ／ｍＬの抗Ｈｉｓ１．２．３でプレートを被覆した。４℃で一晩、プレートをインキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）を用いて、プレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。１×ＰＢＳ／１％ミルク９０μＬでプレートをブロックし、室温で約３０分間インキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。ＬＤＬＲ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃２１４８ＬＤ／ＣＦまたはＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃２１４８ＬＤ）を、４０μＬ／ウェルの体積で、１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中に５μｇ／ｍＬで添加した。次いで、プレートを室温で１時間インキュベートした。次に、３サイクル洗浄を用いて作動されるＴｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いて、プレートを洗浄した。同時に、Ｎｕｎｃポリプロピレンプレート中のハイブリドーマ枯渇上清とともに、ビオチン化されたヒト野生型ＰＣＳＫ９をプレインキュベートした。１×ＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭ  Ｃａ２＋中、５８３ｎｇ／ｍＬの濃度でｂ−ＰＣＳＫ９の３３μＬ中にハイブリドーマ上清２２μＬを移し、最終のｂ−ＰＣＳＫ９濃度＝３５０ｎｇ／ｍＬ及び１：２．５の最終希釈で枯渇上清を得た。プレートを室温で約１時間３０分間プレインキュベートした。プレインキュベートされた混合物５０μＬ／ウェルを、ＬＤＬＲが捕捉されたＥＬＩＳＡプレート上に移し、室温で１時間インキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。アッセイ希釈液中の５００ｎｇ／ｍＬのストレプトアビジンＨＲＰ４０μＬ／ウェルをプレートに添加した。プレートを室温で１時間インキュベートした。次いで、Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄装置を用いてプレートを洗浄した。３サイクルの洗浄を行った。最後に、１ステップＴＭＢ（Ｎｅｏｇｅｎ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，Ｋｅｎｔｕｃｋｙ）の４０μＬ／ウェルをプレートに添加し、室温で３０分後に、１Ｎ塩酸（４０μＬ／ウェル）で反応停止処理した。Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレートリーダーを用いて、４５０ｎｍでＯＤを直ちに読み取った。
【０３４０】
スクリーニングの結果
記載されているアッセイの結果に基づいて、ＰＣＳＫ９との所望の相互作用を有する抗体を産生するとして、いくつかのハイブリドーマ株が同定された。各株からクローンの管理可能な数を単離するために、限外希釈を使用した。ハイブリドーマ株の番号（例えば、２１Ｂ１２）及びクローン番号（例えば、２１Ｂ１２．１）によって、クローンを表記した。一般に、いかなる特定の株の異なるクローン間の差も、本明細書中に記載されている機能的アッセイによって検出されなかった。少数の事例では、機能的アッセイにおいて異なる挙動を示した特定の株からクローンが特定された。例えば、２５Ａ７．１は、ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲを遮断しないが、２５Ａ７．３（本明細書において、２５Ａ７と称される）は中和性であることが見出された。単離されたクローンを、ハイブリドーマ培地５０〜１００ｍＬ中でそれぞれ増殖させ、枯渇するまで増殖させた（即ち、約１０％未満の細胞生存率）。これらの培養物の上清中でのＰＣＳＫ９に対する抗体の濃度及び効力を、本明細書中に記載されているようなＥＬＩＳＡによって、及びインビトロ機能的検査によって測定した。本明細書に記載されているスクリーニングの結果として、ＰＣＳＫ９に対する抗体の最も高い力価を有するハイブリドーマを同定した。図２Ａ〜３Ｄ及び表２中に、選択されたハイブリドーマが示されている。
【０３４１】
実施例４．１
ハイブリドーマからのヒト３１Ｈ４  ＩｇＧ４抗体の作製
この実施例は、ハイブリドーマ株から、抗原結合タンパク質の１つをどのようにして作製するかについて一般的に記載する。作製作業は、枯渇上清生成５０ｍＬを使用した後、プロテインＡ精製を行った。Ｉｎｔｅｇｒａ作製を大規模化し、その後実行した。ハイブリドーマ株３１Ｈ４を、培地２０ｍＬ中のＴ７５フラスコで増殖させた（Ｉｎｔｅｇｒａ  Ｍｅｄｉａ、表５）。ハイブリドーマはＴ７５フラスコ中でほぼ集密状態になった時点で、Ｉｎｔｅｇｒａフラスコに移した（Ｉｎｔｅｇｒａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｔｅｇｒａ  ＣＬ１０００，カタログ番号９０  ００５）。
【０３４２】
Ｉｎｔｅｇｒａフラスコは、２つのチャンバー（小さなチャンバー及び大きなチャンバー）へ膜によって分けられた細胞培養フラスコである。３１Ｈ４ハイブリドーマ株から得られた１×１０６細胞／ｍＬの最小細胞密度のハイブリドーマ細胞２０〜３０ｍＬ体積を、Ｉｎｔｅｇｒａ培地中のＩｎｔｅｇｒａフラスコの小さなチャンバー中に配置した（Ｉｎｔｅｇｒａ培地の成分に関しては、表４.1を参照されたい）。Ｉｎｔｅｇｒａ培地のみ（１Ｌ）を、Ｉｎｔｅｇｒａフラスコの大きなチャンバー中に配置した。２つのチャンバーを隔てる膜は、小分子量栄養素に対して透過性であるが、ハイブリドーマ細胞及びハイブリドーマ細胞によって産生された抗体に対して非透過性である。従って、ハイブリドーマ細胞及びそのハイブリドーマ細胞によって産生された抗体を小さなチャンバー中に保持した。
【０３４３】
１週後、Ｉｎｔｅｇｒａフラスコの両チャンバーから培地を除去し、新鮮なＩｎｔｅｇｒａ培地と交換した。小さなチャンバーから集められた培地は、別個に保持した。増殖の第２週後に、小さなチャンバーから得た培地を再度集めた。ハイブリドーマ株から１週目に集めた培地を、ハイブリドーマ株から２週目に集めた培地と合わせた。ハイブリドーマ株から得られた集められた培地試料を遠心して、細胞及び破砕物を除去して（３０００ｒｐｍで１５分）、得られた上清をろ過した（０．２２μｍ）。透明になった馴化培地をプロテインＡ−セファロースカラム上に搭載した。任意で、培地をまず濃縮し、次いで、プロテインＡセファロースカラム上に搭載することができる。徹底的なＰＢＳ洗浄によって、非特異的結合を除去した。プロテインＡカラムからの標準的酸性抗体溶出（５０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．０など）によって、プロテインＡカラム上に結合された抗体タンパク質を回収した。プロテインＡセファロースプール中の凝集した抗体タンパク質を、サイズ排除クロマトグラフィーまたはＱセファロース樹脂などの陰イオン交換樹脂上の結合イオン交換クロマトグラフィーによって除去した。３１Ｈ４タンパク質に対する具体的なＩＥＸ条件は、ｐＨ７．８〜８．０でＱ−セファロースＨＰである。２５カラム体積の１０ｍＭ〜５００ｍＭのＮａＣｌ勾配を用いて、抗体を溶出した。
【０３４４】
【表５】
2018076351.tif 000008
【０３４５】
実施例４．２
形質移入された細胞からの組み換え３１Ｈ４ヒトＩｇＧ２抗体の作製
本実施例は、３１Ｈ４  ＩｇＧ２抗体が形質移入された細胞からどのようにして作製されるかを概説している。一過性発現のために２９３細胞及び安定な発現のためにＣＨＯ細胞を、３１Ｈ４重鎖及び軽鎖をコードするプラスミドで形質移入した。細胞及び細胞破砕物を除去することによって、形質移入された細胞からの馴化培地を回収した。透明になった馴化培地をプロテインＡ−セファロースカラム上に搭載した。任意で、培地をまず濃縮し、次いで、プロテインＡセファロースカラム上に搭載することができる。徹底的なＰＢＳ洗浄によって、非特異的結合を除去した。プロテインＡカラムからの標準的酸性抗体溶出（５０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．０など）によって、プロテインＡカラム上に結合された抗体タンパク質を回収した。プロテインＡセファロースプール中の凝集した抗体タンパク質を、サイズ排除クロマトグラフィーまたはＱセファロース樹脂などの陰イオン交換樹脂上の結合イオン交換クロマトグラフィーによって除去した。３１Ｈ４タンパク質に対する具体的なＩＥＸ条件は、ｐＨ７．８〜８．０でＱ−セファロースＨＰである。２５カラム体積の１０ｍＭ〜５００ｍＭのＮａＣｌ勾配を用いて、抗体を溶出した。
【０３４６】
実施例５
ハイブリドーマからのヒト２１Ｂ１２  ＩｇＧ４抗体の作製
本実施例は、ハイブリドーマから抗体２１Ｂ１２  ＩｇＧ４がどのようにして作製されたかを概説する。ハイブリドーマ株２１Ｂ１２を、培地中のＴ７５フラスコで増殖させた（Ｉｎｔｅｇｒａ  Ｍｅｄｉａ、表５）。ハイブリドーマはＴ７５フラスコ中でほぼ集密状態になった時点で、Ｉｎｔｅｇｒａフラスコに移した（Ｉｎｔｅｇｒａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｔｅｇｒａ  ＣＬ１０００，カタログ番号９０  ００５）。
【０３４７】
Ｉｎｔｅｇｒａフラスコは、２つのチャンバー（小さなチャンバー及び大きなチャンバー）へ膜によって分けられた細胞培養フラスコである。３１Ｈ４ハイブリドーマ株から得られた１×１０６細胞／ｍＬの最小細胞密度のハイブリドーマ細胞２０〜３０ｍＬの容量を、Ｉｎｔｅｇｒａ培地中のＩｎｔｅｇｒａフラスコの小さなチャンバー中に配置した（Ｉｎｔｅｇｒａ培地の成分に関しては、表５を参照されたい）。Ｉｎｔｅｇｒａ培地のみ（１Ｌ）を、Ｉｎｔｅｇｒａフラスコの大きなチャンバー中に配置した。２つのチャンバーを隔てる膜は、小分子量栄養素に対して透過性であるが、ハイブリドーマ細胞及びハイブリドーマ細胞によって産生された抗体に対して非透過性である。従って、ハイブリドーマ細胞及びそのハイブリドーマ細胞によって産生された抗体を小さなチャンバー中に保持した。
【０３４８】
１週後、Ｉｎｔｅｇｒａフラスコの両チャンバーから培地を除去し、新鮮なＩｎｔｅｇｒａ培地と交換した。小さなチャンバーから集められた培地は、別個に保持した。増殖の第２週後に、小さなチャンバーから得た培地を再度集めた。ハイブリドーマ株から１週目に集めた培地を、ハイブリドーマ株から２週目に集めた培地と合わせた。ハイブリドーマ株から得られた集められた培地試料を遠心して、細胞及び破砕物を除去して（３０００ｒｐｍで１５分）、得られた上清をろ過した（０．２２μｍ）。透明になった馴化培地をプロテインＡ−セファロースカラム上に搭載した。任意で、培地をまず濃縮し、次いで、プロテインＡセファロースカラム上に搭載する。徹底的なＰＢＳ洗浄によって、非特異的結合を除去した。プロテインＡカラムからの標準的酸性抗体溶出（５０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．０など）によって、プロテインＡカラム上に結合された抗体タンパク質を回収した。プロテインＡセファロースプール中の凝集した抗体タンパク質を、サイズ排除クロマトグラフィーまたはＱセファロース樹脂などの陰イオン交換樹脂上の結合イオン交換クロマトグラフィーによって除去した。２１Ｂ１２タンパク質に対する具体的なＩＥＸ条件は、ｐＨ７．８〜８．０でＱ−セファロースＨＰである。２５カラム容量の１０ｍＭ〜５００ｍＭのＮａＣｌ勾配を用いて、抗体を溶出した。
【０３４９】
実施例６
形質移入された細胞からのヒト２１Ｂ１２  ＩｇＧ２抗体の作製
本実施例は、２１Ｂ１２  ＩｇＧ２抗体が形質移入された細胞からどのようにして作製されるかを概説している。細胞（一過性発現のために２９３細胞及び安定な発現のためにＣＨＯ細胞）を、２１Ｂ１２重鎖及び軽鎖をコードするプラスミドで形質移入した。細胞及び細胞破砕物を除去することによって、ハイブリドーマ細胞からの馴化培地を回収した。透明になった馴化培地をプロテインＡ−セファロースカラム上に搭載した。任意で、培地をまず濃縮し、次いで、プロテインＡセファロースカラム上に搭載することができる。徹底的なＰＢＳ洗浄によって、非特異的結合を除去した。プロテインＡカラムからの標準的酸性抗体溶出（５０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ３．０など）によって、プロテインＡカラム上に結合された抗体タンパク質を回収した。プロテインＡセファロースプール中の凝集した抗体タンパク質を、サイズ排除クロマトグラフィーまたはＳＰ−セファロース樹脂などの陽イオン交換樹脂上の結合イオン交換クロマトグラフィーによって除去した。２１Ｂ１２タンパク質に対する具体的なＩＥＸ条件は、ｐＨ５．２でＳＰ−セファロースＨＰであった。２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍＭ〜５００ｍＭのＮａＣｌ勾配を含有する緩衝液の２５カラム体積で抗体を溶出した。
【０３５０】
実施例７
抗体重鎖及び軽鎖の配列分析
次いで、Ｓａｎｇｅｒ（ジデオキシ）ヌクレオチド配列決定によって、上記抗体の軽鎖及び重鎖に対する核酸及びアミノ酸配列を決定した。次いで、核酸配列に対してアミノ酸配列を推定した。可変ドメインに対する核酸配列が、図３Ｅ〜３ＪＪ及び図３ＬＬ〜ＢＢＢ中に図示されている。
【０３５１】
３１Ｈ４、２１２Ｂ１２、及び１６Ｆ１２のλ軽鎖可変領域に対するｃＤＮＡ配列が決定され、それぞれ、配列番号１５３、９５、及び１０５として開示されている。
【０３５２】
３１Ｈ４、２１２Ｂ１２、及び１６Ｆ１２の重鎖可変領域に対するｃＤＮＡ配列が決定され、それぞれ、配列番号１５２、９４、及び１０４として開示されている。
【０３５３】
λ軽鎖定常領域（配列番号１５６）並びにＩｇＧ２及びＩｇＧ４重鎖定常領域（配列番号１５４及び１５５）が、図３ＫＫに示されている。
【０３５４】
ｃＤＮＡ配列の各々から予測されたポリペプチド配列を決定した。３１Ｈ４、２１Ｂ１２、及び１６Ｆ１２のλ軽鎖可変領域に対する予測ポリペプチド配列が予測され、それぞれ、配列番号１２、２３、及び３５として開示されており、λ軽鎖定常領域（配列番号１５６）、３１Ｈ４、２１Ｂ１２、及び１６Ｆ１２の重鎖可変領域は、それぞれ、配列番号６７、４９、及び７９として開示されている。ＩｇＧ２及びＩｇＧ４重鎖定常領域（配列番号１５４及び１５５）。
【０３５５】
ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４分類が、図２Ａ〜３Ｄ及び図３ＣＣＣ〜３ＪＪＪに示されている。
【０３５６】
配列データに基づいて、それぞれの重鎖または軽鎖可変領域が得られた生殖系列遺伝子を決定した。図２Ａ〜３Ｄ及び図３ＣＣＣ〜３ＪＪＪにおいて、生殖系列遺伝子の識別が、対応するハイブリドーマ株の隣に示されおり、それぞれ、一意的な配列番号によって表されている。図２Ａ〜３Ｄ及び図３ＣＣＣ〜３ＪＪＪは、性質決定されたさらなる抗体に対する決定されたアミノ酸配列も図示している。
【０３５７】
実施例８
大腸菌中の抗体の作製
抗体のいくつかは、大腸菌中でも産生され、例えば、実施例４〜６と同様に作製された抗体とはいくつか若干のアミノ酸の相違を有する。可変領域中の第一の残基は、２１Ｂ１２の重鎖及び軽鎖並びに３１Ｈ４の軽鎖に対するグルタミンに代わるグルタミン酸であった。可変領域の配列中の相違の他に、（同じく、抗体が大腸菌中で産生されたという事実のために）座標によって記載されている抗体の定常領域中にもいくつかの相違が存在した。図３ＬＬＬは、配列番号１５６及び１５５と比べた場合の、（大腸菌中で産生された）２１Ｂ１２、３１Ｈ４、及び３１Ａ４Ｆａｂの定常領域間の相違を（下線付きの影または太字によって）強調表示している。２１Ｂ１２、３１Ｈ４、及び３１Ａ４に関して、軽鎖定常配列は、ヒトλ（配列番号１５６）と類似している。下線が付されたグリシン残基は挿入であり、この間で、２１Ｂ１２と３１Ｈ４可変領域が終結し、λ配列が開始する。
【０３５８】
２１Ｂ１２及び３１Ｈ４の両方に関して、重鎖定常は、ヒトＩｇＧ４（配列番号１５５）と類似している。図３ＬＬＬ中の強調表示された相違が、表８．１に示されている。
【０３５９】
【表６】
2018076351.tif 000009
【０３６０】
３１Ａ４に関して、３１Ａ４は、上記の同じ相違を有するが、３つのさらなる相違が存在する。図３ＬＬＬに示されているように、先頭に２つの追加のアミノ酸が存在し、これは、大腸菌発現中でのシグナルペプチドの不完全なプロセッシングに起因する。さらに、配列番号１５５と比べたときに、３１Ａ４重鎖定常領域中に１つの追加の置換が存在し、これは、（配列番号１５５中の）ＬのＨへの調整である。最後に、３１Ａ４は、２１Ｂ１２及び３１Ｈ４に対して上述のグルタミン酸への調整ではなく、Ｆａｂの最初のアミノ酸としてグルタミンを有する。
【０３６１】
３つの抗体全てに関して、（濃い灰色の枠で囲まれている）重鎖の末端も異なるが、構造中でアミノ酸が整理されていないので、座標中には出現しない。当業者によって理解されるように、ヒスチジンタグを含む特定の配列番号への参照及びＡＢＰ配列が「ヒスチジンタグを含む」という記述によって明示的に言及されていない限り、ＨｉｓタグはＡＢＰの必要な一部でなく、ＡＢＰの配列の一部と考えるべきではない。
【０３６２】
実施例９
ＰＣＳＫ９に対する抗体の結合の性質決定
ＰＣＳＫ９に結合するいくつかの抗原が同定されたら、結合の性質を定量し、さらに性質決定するために、いくつかのアプローチを使用した。試験の一態様において、Ｂｉａｃｏｒｅ親和性分析を行った。試験の別の態様において、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）親和性分析を行った。これらの試験において使用された試料及び緩衝液が、以下の表９．１に示されている。
【０３６３】
【表７】
2018076351.tif 000010
【０３６４】
ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）親和性測定
本実施例に記載されているＰＣＳＫ９に対する２１Ｂ１２抗体のＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（表面プラズモン共鳴装置、Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）親和性分析を、製造業者の指示書に従って行った。
【０３６５】
要約すれば、表面プラズモン共鳴実験は、Ｂｉａｃｏｒｅ２０００光学的バイオセンサー（Ｂｉａｃｏｒｅ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いて行った。２００共鳴単位（ＲＵ）を超えない最大分析物結合応答（Ｒｍａｘ）を与えるレベルで、アミン結合によって研究等級のＣＭ５バイオセンサーチップに、それぞれの個別の抗ＰＣＳＫ９抗体を固定化した。ＰＣＳＫ９タンパク質の濃度を２倍間隔で変動させ（分析物）、（１．５分間、１００μＬ／分の流速で）固定化された抗体表面上に注入した。０．０１％ＢＳＡが補充された新鮮なＨＢＳ−Ｐ緩衝液（ｐＨ７．４、０．０１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ−２０、Ｂｉａｃｏｒｅ）を結合緩衝液として使用した。ｐＨ７．４のヒト、マウス、及びカニクイザルＰＣＳＫ９タンパク質の各々に対する別個の実験において、各抗ＰＣＳＫ９抗体の結合親和性を測定した（使用した濃度は、１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１２５、及び０ｎＭであった）。
【０３６６】
さらに、ヒトＰＣＳＫ９に対する抗体の結合親和性も、０．０１％ＢＳＡが補充されたｐＨ６．０ＨＢＳ−Ｐ緩衝液（ｐＨ６．０、０．０１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ−２０、Ｂｉａｃｏｒｅ）を用いて、ｐＨ６．０で測定した。得られた結合シグナルは、溶液中の遊離ＰＣＳＫ９に比例していた。解離平衡定数（ＫＤ）を、二重曲線一部位均一結合モデル（ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）ソフトウェア、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）（６．０ｐＨの実行に対して、ｎ＝１）を用いて、競合曲線の非線形回帰分析から得た。興味深いことに、抗体は、より低いｐＨで、より強固な結合親和性を示すように見受けられた（Ｋｄは、それぞれ、３１Ｈ４、２１Ｂ１２、及び１６Ｆ１２に対して、１２．５、７．３、及び２９ｐＭであった）。
【０３６７】
ｋａ（会合速度定数）、ｋｄ（解離速度定数）及びＫＤ（解離平衡定数）を含む抗体結合速度論パラメータを、ＢＩＡ評価３．１コンピュータプログラム（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いて測定した。より低い解離平衡定数は、ＰＣＳＫ９に対する抗体のより大きな親和性を示す。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）親和性分析によって測定されたＫＤ値が、以下に示されている表９．２に表されている。
【０３６８】
【表８】
2018076351.tif 000011
【０３６９】
表９．３は、ｋｏｎ及びｋｏｆｆ速度を示す。
【０３７０】
【表９】
2018076351.tif 000012
【０３７１】
ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）親和性測定
１６Ｆ１２及び３１Ｈ４のＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）親和性分析を、製造業者の指示書に従って行った。簡潔に述べれば、Ｒｅａｃｔｉ−Ｇｅｌ（商標）（６×）（Ｐｉｅｒｃｅ）を、ヒトＶ５タグ付加されたカニクイザルまたはＨｉｓタグ付加されたマウスＰＣＳＫ９タンパク質の１つで予め被覆し、ＢＳＡで遮断した。次いで、抗体３１Ｈ４及びＰＣＳＫ９タンパク質の１つの何れかの１０または１００ｐＭを、室温で８時間、ＰＣＳＫ９タンパク質の様々な濃度（０．１ｐＭ〜２５ｎＭ）でインキュベートした後ＰＣＳＫ９が被覆されたビーズを通過させた。ビーズが結合された３１Ｈ４の量を、蛍光的に（Ｃｙ５）標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）によって定量した。結合シグナルは、結合平衡での遊離の３１Ｈ４の濃度に比例している。一部位均一結合モデルを用いて、競合曲線の２つの組の非線形回帰から、平衡解離定数（ＫＤ）を得た。ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）Ｐｒｏソフトウェアを分析で使用した。この分析において作製された結合曲線が、図４Ａ〜４Ｆとして表されている。
【０３７２】
１６Ｆ１２及び３１Ｈ４抗体は何れも、ヒト及びカニクイザルＰＣＳＫ９に対して類似の親和性を示したが、マウスＰＣＳＫ９に対して約１０〜２５０倍より低い親和性を示した。ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）システムを用いて検査された２つの抗体のうち、抗体３１Ｈ４は、それぞれ、３及び２ｐＭのＫＤで、ヒト及びカニクイザルＰＣＳＫ９の両方に対してより高い親和性を示した。１６Ｆ１２は、ヒトＰＣＳＫ９に対して１５ｐＭのＫＤで、カイニクイザルＰＣＳＫ９に対して１６ｐＭのＫＤで、若干より弱い親和性を示した。
【０３７３】
ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）親和性分析の結果が、以下に示されている表９．４に要約されている。
【０３７４】
【表１０】
2018076351.tif 000013
【０３７５】
さらに、試料の質及び量をチェックするために、ＳＤＳ  ＰＡＧＥを実施し、図５Ａに示す。ｃＰＣＳＫ９は、ゲル上でおおよそ５０％少ないことを示し、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）アッセイから計算された活性結合濃度からも示した。従って、ｃＰＣＳＫ９に対するｍＡｂのＫＤは、活性なｃＰＣＳＫ９の５０％として調整された。
【０３７６】
ＡＢＰ２１Ｂ１２に対するＫｄ値を測定するために、ＢＩＡｃｏｒｅ溶液平衡結合アッセイを使用した。２１Ｂ１２．１は、ＫｉｎＥｘＡアッセイを用いてほとんどシグナルを示さなかったため、ｂｉａｃｏｒｅ溶液平衡アッセイを適用した。固定化されたＰＣＳＫ９表面に対する抗体の結合に対して、有意な結合は観察されなかったため、約７０００ＲＵの密度でのアミン結合を用いて、ＣＭ５チップのフローセル４の上に、２１Ｂ１２抗体を固定化した。フローセル３を、バックグラウンド対照として使用した。ヒトＰＣＳＫ９またはカニクイザルＰＣＳＫ９の０．３、１、及び３ｎＭを、０．１ｍｇ／ｍＬＢＳＡ、０．００５％Ｐ２０を加えたＰＢＳ中の２１Ｂ１２．１抗体試料（０．００１〜２５ｎＭの範囲）の系列希釈と混合した。混合された溶液中での遊離のＰＣＳＫ９の結合を、２１Ｂ１２．１抗体表面上に注入することによって測定した。２１Ｂ１２．１表面上の１００％のＰＣＳＫ９結合シグナルを、溶液中のｍＡｂの不存在下で測定した。ｍＡｂの増加する濃度につれて減少したＰＣＳＫ９の結合応答は、溶液中でのｍＡｂへのＰＣＳＫ９の結合を示し、これによって、固定化されたペプチボディ表面へのＰＣＳＫ９の結合を遮断した。ｍＡｂ濃度に対してＰＣＳＫ９結合シグナルをプロットして、ＫｉｎＥｘＡＰｒｏ（商標）ソフトウェア中の一部位均一結合モデルを用いて、曲線の３つの組（０．３、１、及び３ｎＭの固定されたＰＣＳＫ９濃度）からＫＤを計算した。ｃＰＣＳＫ９は、ＫｉｎＥｘＡアッセイ及びＳＤＳ−ゲルから観察されるより低いタンパク質濃度を有するが、ｃＰＣＳＫ９の濃度は、ＫＤの計算のために使用されなかったので、ここでは、その濃度は調整しなかった。結果は、以下の表９．５及び図５Ｂ〜５Ｄ中に示されている。図５Ｂは、ｈＰＣＳＫ９に対する３つの異なるｈＰＣＳＫ９濃度での溶液平衡アッセイから得られた結果を図示している。図５Ｃは、ｍＰＣＳＫ９に対する一組の類似の結果を図示する。図５Ｄは、上記ｂｉａｃｏｒｅ捕捉アッセイから得られた結果を示す。
【０３７７】
【表１１】
2018076351.tif 000014
【０３７８】
実施例１０
Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ結合を遮断する３１Ｈ４及び２１Ｂ１２の効力
本実施例は、ＰＣＳＫ９  Ｄ３７４ＹがＬＤＬＲに結合する能力を遮断する上での、抗体の２つに対するＩＣ５０値を提供する。緩衝液Ａ（１００ｍＭカコジル酸ナトリウム、ｐＨ７．４）中に希釈されたヤギ抗ＬＤＬ受容体抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）２μｇ／ｍＬで、透明な３８４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）を被覆した。緩衝液Ａでプレートを完全に洗浄した後、緩衝液Ｂ（緩衝液Ａ中の１％ミルク）で２時間ブロックした。洗浄後、緩衝液Ｃ（１０ｍＭ  ＣａＣｌ２が補充された緩衝液Ｂ）中に希釈されたＬＤＬ受容体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）０．４μｇ／ｍＬとともに、プレートを１．５時間インキュベートした。このインキュベーションと同時に、緩衝液Ａ中に希釈された３１Ｈ４  ＩｇＧ２、３１Ｈ４  ＩｇＧ４、２１Ｂ１２  ＩｇＧ２、または２１Ｂ１２  ＩｇＧ４抗体の様々な濃度または緩衝液Ａのみ（対照）とともに、ビオチン化されたＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９の２０ｎｇ／ｍＬをインキュベートした。ＬＤＬ受容体を含有するプレートを洗浄し、ビオチン化されたＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９／抗体混合物をプレートに移し、室温で１時間インキュベートした。ＬＤＬ受容体へのビオチン化されたＤ３７４Ｙの結合を、緩衝液Ｃ中の５００ｎｇ／ｍＬのストレプトアビジン−ＨＲＰ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ）とともに、次いで、ＴＭＢ基質（ＫＰＬ）とともにインキュベートすることによって検出した。１Ｎ  ＨＣｌを用いてシグナルをクエンチし、４５０ｎｍで吸光度を読み取った。
【０３７９】
この結合研究の結果が、図６Ａ〜６Ｄに示されている。要約すると、各抗体に対してＩＣ５０値を測定し、３１Ｈ４  ＩｇＧ２に対して１９９ｐＭ（図６Ａ）、３１Ｈ４  ＩｇＧ４に対して１５６ｐＭ（図６Ｂ）、２１Ｂ１２  ＩｇＧ２に対して１７０ｐＭ（図６Ｃ）、及び２１Ｂ１２  ＩｇＧ４に対して１６９ｐＭ（図６Ｄ）であることが見出された。
【０３８０】
抗体は、このアッセイにおいて、ＬＤＬＲへの野生型ＰＣＳＫ９の結合も遮断した。
【０３８１】
実施例１１
細胞ＬＤＬ取り込みアッセイ
本実施例は、様々な抗原結合タンパク質が細胞によるＬＤＬの取り込みを低減させ得ることを示す。１０％ＦＢＳが補充されたＤＭＥＭ培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｉｎｃ）中に、５×１０５細胞／ウェルの濃度で、透明な底の黒い９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）中に、ヒトＨｅｐＧ２細胞を播種し、３７℃（５％ＣＯ２）で一晩インキュベートした。ＰＣＳＫ９と抗体の複合体を形成させるために、取り込み緩衝液（１％ＦＢＳを加えたＤＭＥＭ）中に希釈された抗体の様々な濃度または取り込み緩衝液のみ（対照）とともに、室温で１時間、Ｄ３７４Ｙ  ヒトＰＣＳＫ９の２μｇ／ｍＬをインキュベートした。ＰＢＳで細胞を洗浄した後、Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９／抗体混合物を細胞に移した後、６μｇ／ｍＬの最終濃度で、取り込み緩衝液中にＬＤＬ−ＢＯＤＩＰＹ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を希釈した。３７℃（５％ＣＯ２）で３時間インキュベーション後、細胞をＰＢＳで完全に洗浄し、４８０〜５２０ｎｍ（励起）及び５２０〜６００ｎｍ（発光）で、Ｓａｆｉｒｅ（商標）（ＴＥＣＡＮ）によって、細胞蛍光シグナルを検出した。
【０３８２】
細胞取り込みアッセイの結果が、図７Ａ〜７Ｄに示されている。要約すると、各抗体に対してＩＣ５０値を測定し、３１Ｈ４  ＩｇＧ２に対して１６．７ｎＭ（図７Ａ）、３１Ｈ４  ＩｇＧ４に対して１３．３ｎＭ（図７Ｂ）、２１Ｂ１２  ＩｇＧ２に対して１３．３ｎＭ（図７Ｃ）、及び２１Ｂ１２  ＩｇＧ４に対して１８ｎＭ（図７Ｄ）であることが見出された。これらの結果は、適用された抗原結合タンパク質がＰＣＳＫ９（Ｄ３７４Ｙ）の効果を低減させて、細胞によるＬＤＬの取り込みを遮断できることを実証している。抗体は、このアッセイにおいて、野生型ＰＣＳＫ９の効果も遮断した。
【０３８３】
実施例１２
６日の試験における３１Ｈ４抗体の血清コレステロール低減効果
ＰＣＳＫ９タンパク質に対する抗体治療を介した野生型（ＷＴ）マウスにおける総血清コレステロール（ＴＣ）低減を評価するために、以下の手順を行った。
【０３８４】
Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から得られた雄のＷＴマウス（Ｃ５７ＢＬ／６系統、９〜１０週齢、１７〜２７ｇ）に、実験の期間を通じて、通常の食餌（Ｈａｒｌａｎｄ−Ｔｅｋｌａｄ，Ｄｉｅｔ  ２９１８）を与えた。Ｔ＝０において、マウスの尾静脈を通じて、１０ｍｇ／ｋｇのレベルで、抗ＰＣＳＫ９抗体３１Ｈ４（ＰＢＳ中の２ｍｇ／ｍＬ）または対照ＩｇＧ（ＰＢＳ中２ｍｇ／ｍＬ）の何れかをマウスに投与した。ナイーブマウスも、ナイーブ対照群として別に分けた。投薬群及び屠殺の時間が、表１２．１に示されている。
【０３８５】
【表１２】
2018076351.tif 000015
【０３８６】
表９に示されている所定の時点でのＣＯ２窒息を用いて、マウスを屠殺した。大静脈を介して、エッペンドルフチューブの中に血液を集め、室温で３０分間凝固させた。次いで、１０分間、１２，０００×ｇでの卓上遠心分離機中で、試料を遠心沈降させて、血清を分離した。Ｈｉｔａｃｈｉ９１２臨床分析装置及びＲｏｃｈｅ／Ｈｉｔａｃｈｉ  ＴＣ及びＨＤＬ−Ｃキットを用いて、血清総コレステロール及びＨＤＬ−Ｃを測定した。
【０３８７】
実験の結果が、図８Ａ〜８Ｄに示されている。要約すると、抗体３１Ｈ４が投与されたマウスは、実験の間にわたって、減少した血清コレステロールレベルを示した（図８Ａ及び図８Ｂ）。さらに、マウスは減少したＨＤＬレベルを示すことも注目される（図８Ｃ及び図８Ｄ）。図８Ａ及び図８Ｃに関して、％変化は、同じ時点での対照ＩｇＧに対する（＊Ｐ＜０．０１、＃Ｐ＜０．０５）。図８Ｂ及び８Ｄに関して、％変化は、ｔ＝０時間で、ナイーブ動物中において測定された総血清コレステロール及びＨＤＬレベルに対する（＊Ｐ＜０．０１、＃Ｐ＜０．０５）。
【０３８８】
低下したＨＤＬレベルに関して、マウス中でのＨＤＬの減少は、ＨＤＬの減少がヒトで起きることを示唆せず、この生物中での血清コレステロールが減少したことをさらに反映するに過ぎないことが当業者に理解されることが注目される。マウスは、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）粒子中に血清コレステロールの大半を輸送し、これはＬＤＬ粒子上に殆どの血清コレステロールを有するヒトとは異なることが注目される。マウスでは、総血清コレステロールの測定は、血清ＨＤＬ−Ｃのレベルと最も近似する。マウスＨＤＬは、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）に対するリガンドであるアポリポタンパク質Ｅ（ａｐｏＥ）を含有しており、ＬＤＬＲによるＨＤＬの排除を可能とする。従って、ＨＤＬを調べることは、マウスにおける、本実施例での適切な指標である（ＨＤＬの減少は、ヒトに対しては予測されないことが理解される）。これに対して、例えば、ヒトＨＤＬは、ａｐｏＥを含有しておらず、ＬＤＬＲに対するリガンドではない。ＰＣＳＫ９抗体は、マウス中でのＬＤＬＲ発現を増加させるので、肝臓は、より多くのＨＤＬを排除させることができるため、血清ＨＤＬ−Ｃレベルを低減させる。
【０３８９】
実施例１３
６日の試験における、ＬＤＬＲレベルに対する抗体３１Ｈ４の効果
本実施例は、予測されたように、抗原結合タンパク質が、経時的に、対象中のＬＤＬＲのレベルを変化させることを示す。ＬＤＬＲレベルに対する抗体３１Ｈ４の効果を確認するために、ウェスタンブロット分析を行った。実施例１１で記載した屠殺されたマウスから得られた肝臓組織５０〜１００ｍｇを、完全なプロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）を含有するＲＩＰＡ緩衝液（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．）０．３ｍＬ中において均質化した。ホモジネートを氷上で３０分間インキュベートし、細胞破砕物を沈降させるために遠心分離した。ＢｉｏＲａｄタンパク質アッセイ試薬（ＢｉｏＲａｄ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて、上清中のタンパク質濃度を測定した。７０℃で１０分間、タンパク質１００μｇを変性させ、４〜１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  ＳＤＳ勾配ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上で分離した。０．４５μｍ  ＰＶＤＦ膜（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にタンパク質を移し、室温で１時間、５％無脂肪ミルクを含有する洗浄緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＰＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２、及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）中でブロックした。次いで、室温で１時間、ヤギ抗マウスＬＤＬＲ抗体（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ）１：２０００または抗βアクチン（ｓｉｇｍａ）１：２０００を用いて、ブロットのプローブ検査を行った。ブロットを短時間洗浄し、ウシ抗ヤギＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．）１：２０００またはヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｕｐｓｔａｔｅ）１：２０００とともにインキュベートした。室温で１時間インキュベーション後、ブロットを完全に洗浄し、ＥＣＬ  ｐｌｕｓキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、免疫反応性バンドを検出した。ウェスタンブロットは、図９に図示されているように、抗体３１Ｈ４の存在下でのＬＤＬＲタンパク質レベルの増加を示した。
【０３９０】
実施例１４
１３日の試験における抗体３１Ｈ４の血清コレステロール低減効果
１３日の試験において、ＰＣＳＫ９タンパク質に対する抗体治療を介した野生型（ＷＴ）マウスにおける総血清コレステロール（ＴＣ）低減を評価するために、以下の手順を行った。
【０３９１】
Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から得られた雄のＷＴマウス（Ｃ５７ＢＬ／６系統、９から１０週齢、１７〜２７ｇ）に、実験の期間を通じて、通常の食餌（Ｈａｒｌａｎｄ−Ｔｅｋｌａｄ，  Ｄｉｅｔ  ２９１８）を与えた。Ｔ＝０において、マウスの尾静脈を通じて、１０ｍｇ／ｋｇのレベルで、抗ＰＣＳＫ９抗体３１Ｈ４（ＰＢＳ中の２ｍｇ／ｍＬ）または対照ＩｇＧ（ＰＢＳ中２ｍｇ／ｍＬ）の何れかをマウスに投与した。ナイーブマウスも、ナイーブ対照群として別に分けた。
【０３９２】
投薬群及び屠殺の時間が、表１４．１に示されている。動物を屠殺し、肝臓を摘出し、実施例１１と同様に調製した。
【０３９３】
【表１３】
2018076351.tif 000016
【０３９４】
６日の実験を１３日の試験に延長すると、６日の試験において観察された同じ血清コレステロール低減効果が、１３日の試験においても観察された。より具体的には、１０ｍｇ／ｋｇで投薬された動物は、３日目に、血清コレステロールの３１％の減少を示し、１３日までに、投薬前レベルまで徐々に戻った。図１０Ａは、この実験の結果を図示する。図１０Ｃは、３１Ｈ４の１０ｍｇ／ｋｇ投薬量を用いた、及び同じく１０ｍｇ／ｋｇの別の抗体１６Ｆ１２を用いた上記手順を反復した結果を図示している。投薬群及び屠殺の時間が、表１４．２に示されている。
【０３９５】
【表１４】
2018076351.tif 000017
【０３９６】
図１０Ｃに示されているように、１６Ｆ１２及び３１Ｈ４は何れも、単回投薬のみの後に、総血清コレステロールの著しく、大幅な減少をもたらし、１週間以上にわたって（１０日間またはそれ以上）有益であった。反復された１３日の研究の結果は、最初の１３日の研究の結果と合致しており、３日目において２６％の血清コレステロールレベルの減少が観察された。図１０Ａ及び図１０Ｂに関して、％変化は、同じ時点での対照ＩｇＧに対する（＊Ｐ＜０．０１）。図１０Ｃに関して、％変化は、同じ時点での対照ＩｇＧに対する（＊Ｐ＜０．０５）。
【０３９７】
実施例１５
１３日の試験における、ＨＤＬレベルに対する抗体３１Ｈ４の効果
実施例１４中の動物に対するＨＤＬレベルも調べた。ＨＤＬレベルは、マウスにおいて減少していた。より具体的には、１０ｍｇ／ｋｇで投薬された動物は、３日目に、ＨＤＬレベルの３３％の減少を示し、１３日までに、投薬前レベルまで徐々に復帰した。図１０Ｂは、この実験の結果を図示する。ＨＤＬレベルは、３日目に３４％減少した。図１０Ｂは、反復された１３日の実験の結果を図示する。
【０３９８】
当業者によって理解されるように、抗体は、マウスＨＤＬを低減させるが、ヒト及び他の生物（マウスなど）でのＨＤＬの差のために、これは、ヒトで起こるとは予想されない。従って、マウスＨＤＬの減少は、ヒトＨＤＬの減少を示唆するものではない。
【０３９９】
実施例１６
抗体の反復投与は、抗原結合ペプチドの継続的な有益性をもたらす
追加の投薬によるさらなる有益性に関して、上記実施例において得られた結果を延長することができるかを確認するために、実施例１４及び１５中の実験を反復した（投薬スケジュールは、図１１Ａに図示されている）。結果が、図１１Ｂに示されている。図１１Ｂのグラフから明らかなように、全てのマウスが３１Ｈ４抗原結合タンパク質の最初の注射を受けたので、マウスの両群は、総血清コレステロールの著しい減少を示し、３１Ｈ４  ＡＢＰのさらなる注射を受けたマウスは、総血清コレステロールの継続した低下を示したのに対して、対照注射を受けただけのマウスは、最終的には、総血清コレステロールの増加を示した。図１１に関して、％変化は、ｔ＝０時間でのナイーブ動物に対する（＊Ｐ＜０．０１、＊＊Ｐ＜０．００１）。
【０４００】
本実施例から得られる結果は、対象中での生物学的調整のために、反復適用が効力の低下をもたらす他のコレステロール治療法とは異なり、本発明のアプローチには、検査した時間においては、この問題が存在しないように見受けられることを示している。さらに、このことは、前実施例において観察された、ベースラインへの総血清コレステロールまたはＨＤＬコレステロールレベルの復帰が、対象によって発達された治療に対する何らかの耐性によるものではなく、対象中での利用可能な抗体の枯渇によるものであることを示唆している。
【０４０１】
実施例１７
高コレステロール血症を治療するためのＰＣＳＫ９抗体の使用
高コレステロール血症の症候を呈するヒト患者に、３１Ｈ４（または、例えば、２１Ｂ１２）などのＰＣＳＫ９抗体の治療的有効量を投与する。治療中の定期的な時点で、血清コレステロールレベルが低下したかどうかを測定するために、ヒト患者をモニターする。治療後に、ＰＣＳＫ９抗体を用いた治療を受けている患者は、治療を受けていない関節炎患者と比べて、低下した血清コレステロールレベルを有することが見出される。
【０４０２】
実施例１８
高コレステロール血症を予防するためのＰＣＳＫ９抗原結合タンパク質の使用
高コレステロール血症を発症するリスクを示すヒト患者が、家族歴の分析及び／またはライフスタイル及び／または現在のコレステロールレベルを介して特定される。対象は、ＰＣＳＫ９抗体、３１Ｈ４（または例えば、２１Ｂ１２）の治療的有効量を定期的に投与される（例えば、週に１回）。治療中の定期的な時点で、血清コレステロールレベルが減少したかどうかを測定するために、患者をモニターする。治療後に、ＰＣＳＫ９抗体を用いた予防的処置を行っている対象は、治療されていない対象と比べて、血清コレステロールレベルを低減させたことが見出される。
【０４０３】
実施例１９
ＰＣＳＫ９  ＡＢＰは、スタチンの存在下でＬＤＬＲをさらに上方制御した
本実施例は、スタチンの存在下で使用された場合、ＰＣＳＫ９に対するＡＢＰは、ＬＤＬＲの利用可能性のさらなる増加をもたらしたことを示し、２つの併用によってさらなる有益性を達成し得ることを示す。
【０４０４】
１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を加えたＤＭＥＭ中でＨｅｐＧ２細胞を播種し、約９０％の集密度になるまで増殖させた。３％ＦＢＳを加えたＤＭＥＭ中のメビノリン（スタチン、Ｓｉｇｍａ）及びＰＣＳＫ９  ＡＢＰ（図１２Ａ〜１２Ｃ）の表記量で細胞を４８時間処理した。全細胞溶解物を調製した。ゲル電気泳動によって全タンパク質５０ｍｇを分離し、ＰＶＤＦ膜に転写した。ウサギ抗ヒトＬＤＬ受容体抗体（Ｆｉｔｚｇｅｒｌａｄ）またはウサギ抗ヒトｂ−アクチン抗体を用いて、イムノブロットを行った。増強された化学発光の結果が、図１２Ａ〜１２Ｃの上部パネルに示されている。ＩｍａｇｅＪソフトウェアによって、バンドの強度を定量し、ｂ−アクチンによって正規化した。ＬＤＬＲの相対レベルが、図１２Ａ〜１２Ｃの下部パネル中に示されている。ＡＢＰ  ２１Ｂ１２及び３１Ｈ４は、ＰＣＳＫ９中和抗体であるのに対して、２５Ａ７．１は、非中和抗体である。
【０４０５】
ＨｅｐＧ２−ＰＣＳＫ９細胞も作製した。これらは、ヒトＰＣＳＫ９で形質移入された安定なＨｅｐＧ２細胞株であった。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を加えたＤＭＥＭ中に細胞を播種し、約９０％の集密度になるまで増殖させた。３％ＦＢＳを加えたＤＭＥＭ中のメビノリン（Ｓｉｇｍａ）及びＰＣＳＫ９  ＡＢＰ（図１２Ｄ〜１２Ｆ）の表記量で細胞を４８時間処理した。全細胞溶解物を調製した。ゲル電気泳動によって全タンパク質５０ｍｇを分離し、ＰＶＤＦ膜に転写した。ウサギ抗ヒトＬＤＬ受容体抗体（Ｆｉｔｚｇｅｒｌａｄ）またはウサギ抗ヒトｂ−アクチン抗体を用いて、イムノブロットを行った。増強された化学発光の結果が、上部パネルに示されている。ＩｍａｇｅＪソフトウェアによって、バンドの強度を定量し、ｂ−アクチンによって正規化した。
【０４０６】
図１２Ａ〜１２Ｆに図示されている結果から明らかなように、中和抗体の増加する量及びスタチンの増加する量は、ＬＤＬＲのレベルの増加を一般にもたらした。ＡＢＰの増加するレベルの有効性のこの増加は、細胞がＰＣＳＫ９でも形質移入されており、ＡＢＰがより大きな程度までその有効性を示すことができる図１２Ｄ〜１２Ｆにおいて特に明瞭である。
【０４０７】
興味深いことに、図１２Ｄ〜１２Ｆ乃至図１２Ａ〜１２Ｃの比較の結果によって示されるように、ＬＤＬＲレベルに対するＡＢＰ濃度の影響は、ＰＣＳＫ９が細胞によって産生された場合に劇的に増加した。さらに、中和ＡＢＰ（２１Ｂ１２及び３１Ｈ４）が２５Ａ７．１  ＡＢＰ（非中和物質）よりも、スタチンの存在下でさえ、ＬＤＬＲレベルのより大きな増加をもたらしたことは明瞭であり、スタチン及びＰＣＳＫ９に対するＡＢＰの両方を使用することによって、さらなる有益性が達成できることを示す。
【０４０８】
実施例２０
コンセンサス配列
抗ＰＣＳＫ９  ＡＢＰのＶＨ及びＶＬに対応するＣＤＲの標準的な系統発生分析を用いて、コンセンサス配列を決定した。ＶＨまたはＶＬに対応する同じ配列内に隣接するＣＤＲを保持することによって、コンセンサス配列を決定した。要約すれば、比較並置の遂行及び系統発生の推定を容易にするために、ＶＨまたはＶＬの何れかの可変ドメイン全体に対応するアミノ酸配列をＦＡＳＴＡフォーマットに変換した。次に、ＶＨまたはＶＬに対応する同じ配列内にＣＤＲをなお隣接させながら、偶発的現象（例えば、共通の生殖系列フレームワークの承継を偶発的に共有する無関係の抗体など）に起因するアミノ酸位置重み付けバイアスを一切導入することなく、ＣＤＲのみの検査を実施できるように、これらの配列のフレームワーク領域を、人工のリンカー配列（「ｂｂｂｂｂｂｂｂｂｂ」代用配列、非特異的な核酸構築物）で置き換えた。次いで、標準的なＣｌｕｔａｌＷ様アルゴリズム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２：４６７３−４６８０を参照されたい）を使用するプログラムを用いて、配列類似性並置検査に、このフォーマットのＶＨまたはＶＬ配列を供した。２．０のギャップ伸長ペナルティとともに、８．０のギャップ生成ペナルティを使用した。同様に、このプログラムは、分岐長の比較及びグループ分けを介して配列群の類似性及び相違を構築し、図解するために、ＵＰＧＭＡ（ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ  ｐａｉｒ  ｇｒｏｕｐ  ｍｅｔｈｏｄ  ｕｓｉｎｇ  ａｒｉｔｈｍｅｔｉｃ  ａｖｅｒａｇｅｓ；非加重結合法）または隣接結合法（Ｎｅｉｇｈｂｏｒ−Ｊｏｉｎｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ）（Ｓａｉｔｏｕ  ａｎｄ  Ｎｅｉ，１９８７，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ４：４０６−４２５を参照されたい）を用いる配列類似性並置に基づくフィログラム（系統発生樹の図解）を作成した。何れの方法も、類似の結果をもたらしたが、ＵＰＧＭＡ法はより単純で、より保守的な一群の仮説を使用するので、ＵＰＧＭＡによって得られた系統樹を最終的に使用した。ＵＰＧＭＡによって得られた系統樹（グループ内の各配列のうち、１００残基当たり１５未満の置換を有するとして、配列の類似のグループ（スケールに関して、系統樹の図解中の注釈参照）が定義された）を作成し、コンセンサス配列集合を定義するために使用した。比較の結果が、図１３Ａ〜１３Ｊ並びに図３１Ａ及び３１Ｂ中に図示されている。図１３Ｅでは、クレードを形成する軽鎖中の配列が、重鎖中でもクレードであり、１５未満の置換を有するように、グループを選択した。
【０４０９】
実施例２１
１１Ｆ１結合特異性
このアッセイからの結果は、１１Ｆ１がＰＣＳＫ９に結合するが、ＰＣＳＫ１、ＰＣＳＫ２、ＰＣＳＫ７、またはフリンには結合しないことを実証しており、１１Ｆ１のＰＣＳＫ９に対する特異性を実証している。
【０４１０】
緩衝液Ａ（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％ツイーン、ｐＨ７．５）中に希釈されたビオチン化されたＰＣＳＫ９を、ニュートラビジンで被覆した９６ウェルプレートに０．２μｇ／ｍＬの濃度で結合させ、室温で１時間インキュベートした。別個に、１１Ｆ１（０．４μｇ／ｍＬ）を、（緩衝液Ａｗ／ｏツイーン中に希釈された）ＰＣＳＫ１、ＰＣＳＫ２、ＰＣＳＫ７、ＰＣＳＫ９、またはフリン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）の何れかの様々な濃度（０〜２０μｇ／ｍＬの範囲）で、室温で１時間インキュベートした。フリン阻害剤が、４．５μｇ／ｍＬで、フリンを含む全ての反応に含まれた。ＰＣＳＫ９を被覆したストレプトアビジンプレートを緩衝液Ａで洗浄し、抗体／プロタンパク質コンベルターゼ混合物をプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。洗浄後、結合した抗体を、ヤギαヒトＦｃ−ＨＲＰ（１６０ｎｇ／ｍＬ、緩衝液Ａ中に希釈された）（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）とともに、次いで、ＴＭＢ基質とともにインキュベーションすることによって検出した。反応を１Ｎ  ＨＣｌで停止させ、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｐｌｕｓ  ３８４分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）で４５０ｎｍの波長で吸光度を読み取った。
【０４１１】
このアッセイは、溶液中のプロタンパク質コンベルターゼが、プレートが捕捉したＰＣＳＫ９に対する１１Ｆ１の結合と競合する能力に依存した。溶液中の１１Ｆ１及びＰＣＳＫ９のプレインキュベーションにより、プレートが捕捉したＰＣＳＫ９に１１Ｆ１が結合する量は、用量依存的かつ強固に減少し、ＯＤ４５０の減少として検出された（図１４）。全ての結果は、平均ＯＤ４５０値±標準偏差対プロタンパク質コンベルターゼの濃度で表した。溶液中でＰＣＳＫ１、ＰＣＳＫ２、ＰＣＳＫ７、またはフリンとともに１１Ｆ１をプレインキュベーションすることは、プレートが捕捉したＰＣＳＫ９への１１Ｆ１の結合に著しい影響を及ぼさなかった。従って、試験したタンパク質濃度では、１１Ｆ１は、ＰＣＳＫ９のみに結合し、試験した他のプロタンパク質コンベルターゼファミリーメンバーには結合しなかった。
【０４１２】
実施例２２
ＬＤＬＲ：ＰＣＳＫ９結合の１１Ｆ１阻害の効力
この実施例は、ナノモル濃度の１１Ｆ１が、このアッセイの条件下で、ＬＤＬＲへのＤ３７４Ｙ及び野生型ＰＣＳＫ９の両方の結合を阻害することが可能であることを実証している。
【０４１３】
簡潔に述べれば、ＰＢＳ中に希釈されたヤギ抗ＬＤＬ受容体抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）２μｇ／ｍＬで、透明な３８４ウェルプレートを被覆し、４℃で一晩インキュベートした。緩衝液Ａ（１００ｍＭカコジル酸ナトリウム、ｐＨ７．５）でプレートを完全に洗浄した後、緩衝液Ｂ（緩衝液Ａ中の１％無脂肪乾燥ミルク［Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ］）で、室温で２時間ブロックした。洗浄後、緩衝液Ｃ（１０ｍＭ  ＣａＣｌ２が補充された緩衝液Ｂ）中に希釈されたＬＤＬ受容体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）０．４μｇ／ｍＬとともに、プレートを室温で１．５時間インキュベートした。このインキュベーションと同時に、緩衝液Ａ中に希釈された抗ＰＣＳＫ９抗体１１Ｆ１の様々な濃度とともに、ビオチン化されたＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９の２０ｎｇ／ｍＬまたはビオチン化された野生型ＰＣＳＫ９の１００ｎｇ／ｍＬをインキュベートした（最終濃度は、Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９アッセイに関しては６．０μｇ／ｍＬ〜２００μｇ／ｍＬの範囲、または野生型ＰＣＳＫ９アッセイに関しては３．１μｇ／ｍＬ〜２５μｇ／ｍＬの範囲であった）。ＬＤＬＲで被覆されたプレートを洗浄し、ビオチン化されたＰＣＳＫ９／抗体混合物を添加した。ＬＤＬＲプレートを室温で１時間インキュベートした。ＬＤＬ受容体へのビオチン化されたＰＣＳＫ９の結合を、ストレプトアビジン−ＨＲＰ（緩衝液Ｃ中の５００ｎｇ／ｍＬ）とともに、次いで、ＴＭＢ基質とともにインキュベートすることによって検出した。反応を１ＮのＨＣｌで停止させ、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｐｌｕｓ  ３８４分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）で４５０ｎｍの波長で吸光度を読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ｖ４．０１）ソフトウェアを用いて、抗体濃度の対数対ＯＤ４５０をプロットし、非線形回帰によってＩＣ５０値を決定した。
【０４１４】
１１Ｆ１は、ＬＤＬＲ：ＰＣＳＫ９結合を阻害した。Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９アッセイにおける１１Ｆ１のＩＣ５０値は、７．３ｎＭ〜１０．１ｎＭの範囲であり、平均（±標準偏差）は、９．１ｎＭ±１．５ｎＭであった（ｎ＝３）。野生型ＰＣＳＫ９アッセイにおける１１Ｆ１のＩＣ５０値は、４．４ｎＭ〜８．１ｎＭの範囲であり、平均（±標準偏差）は、５．９ｎＭ±１．９ｎＭであった（ｎ＝３）。これらのＩＣ５０値は、結合アッセイで用いた組み換えＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９または野生型ＰＣＳＫ９の量に依存していることに留意されたい。Ｄ３７４Ｙ及び野生型アッセイの両方の代表的な用量反応曲線を図１５及び図１６にそれぞれ示す。
【０４１５】
実施例２３
細胞ＬＤＬ取り込みを遮断する１１Ｆ１の効果
１１Ｆ１は、インビトロでＰＣＳＫ９とＬＤＬＲの間の相互作用を遮断し、ＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬ取り込みのＰＣＳＫ９−媒介低下を防ぐことができる。
【０４１６】
簡潔に述べれば、１０％ＦＢＳ及び及び１％抗菌抗真菌溶液（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）が補充されたＤＭＥＭ培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）中に、５×１０４細胞／ウェルの濃度で、透明な底の黒い９６ウェルプレート（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＣＯ  ＬＬＣ，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）中に、ヒトＨｅｐＧ２細胞を播種した。細胞を３７℃（５％ＣＯ２）で一晩インキュベートした。Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９と抗体の複合体または野生型ＰＣＳＫ９と抗体の複合体を形成させるために、（Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９を遮断するための）６６６．７ｎＭ〜０．７ｎＭの範囲、または、（野生型ＰＣＳＫ９をブロックするための）３．３μｍ〜３．３ｎＭの範囲の１１Ｆ１の系列希釈（１：２）を、製剤緩衝液（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．１５Ｍ  ＮａＣＬ）中で調製した。Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９（２μｇ／ｍＬ）または野生型ＰＣＳＫ９（２５μｇ／ｍＬ）のいずれかを、取り込み緩衝液（１％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ）中に希釈し、１１Ｆ１の様々な濃度または取り込み緩衝液のみ（陰性対照）とともに、室温で１時間振盪させながらインキュベートした。ＢＯＤＩＰＹ−ＬＤＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を取り込み緩衝液中で１２μｇ／ｍＬの濃度に希釈した。一晩インキュベーションした後、ＨｅｐＧ２細胞をＤＰＢＳ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）で２回洗浄した。１１Ｆ１とＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９または野生型ＰＣＳＫ９の複合体２５μＬと、希釈したＢＯＤＩＰＹ−ＬＤＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）２５μＬとを細胞に添加し、３７℃（５％ＣＯ２）で３時間インキュベートした。細胞をＤＰＢＳで５時間洗浄し、１００μＬ  ＤＰＢＳ中に再懸濁させた。４８０〜５２０ｎｍ（励起）及び５２０〜６００ｎｍ（発光）で、Ｓａｆｉｒｅプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて、相対蛍光単位（ＲＦＵ）として蛍光シグナルを検出した。
【０４１７】
ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（バージョン４．０２、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）ソフトウェアを用いて、抗体濃度の対数対ＲＦＵをプロットし、Ｓ字形用量応答（可変勾配）曲線適合プログラムを用いて、非線形回帰によってＥＣ５０値を決定した。
【０４１８】
この実施例は、１１Ｆ１が、用量依存的にＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬ取り込みのＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９または野生型ＰＣＳＫ９−媒介低下を遮断したことを示す。組み換え精製されたＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９（２μｇ／ｍＬ）または野生型ＰＣＳＫ９（２５μｇ／ｍＬ）をＨｅｐＧ２細胞に添加することで、ＢＯＤＩＰＹ−ＬＤＬの取り込みを、非処置細胞で測定したレベルの約５０〜６０％及び約４０％にぞれぞれ低減させた。抗体は、ＬＤＬ取り込みを、非処置細胞で観察されたレベルに用量依存的に戻した。１１Ｆ１がＬＤＬ取り込みのＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９−媒介低下を遮断する能力の平均（±標準偏差）ＥＣ５０値は、３５．３±９．１ｎＭであった（ｎ＝６、図１７）。１１Ｆ１がＬＤＬ取り込みの野生型ＰＣＳＫ９−媒介低下を遮断する能力のＥＣ５０値は、１２４．２±２８．５ｎＭであった（ｎ＝３、図１８）。これらのＥＣ５０値は、細胞アッセイで用いた組み換えＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９または野生型ＰＣＳＫ９の量に依存することに留意されたい。Ｄ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲへの結合親和性は野生型ＰＣＳＫ９のものよりも５〜３０倍であるので、アッセイにおいてより少ないＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９を用いたため、ＥＣ５０値は、野生型ＰＣＳＫ９よりもＤ３７４Ｙ  ＰＣＳＫ９に対して低い（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ，２００７；Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ，２００７；Ｋｗｏｎ  ｅｔ  ａｌ，２００８）。
ここで報告されたＥＣ５０値は、１１Ｆ１に対して３〜６回の別々の測定から得られた代表的な平均値である。
【０４１９】
実施例２４
マウスモデル中のアデノ随伴ウイルスを介して発現したヒトＰＣＳＫ９を遮断する１１Ｆ１及び８Ａ３の効果
抗ＰＣＳＫ９抗体１１Ｆ１または８Ａ３の単回静脈内ボーラス投与により、ＡＡＶによってヒトＰＣＳＫ９を発現するマウス中の血清非ＨＤＬ−Ｃ及びＴＣの著しい減少をもたらす。この実施例は、インビボでのヒトＰＣＳＫ９の機能を遮断する抗ＰＣＳＫ９抗体の両方の効果を実証している。
【０４２０】
簡潔に述べれば、ヒトＰＣＳＫ９をコードする改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）で感染させることで、ヒトＰＣＳＫ９を発現する１２０匹のＣ５７ＢＬ／６マウスを作製し、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）の循環レベルの上昇がもたらされた。Ｃｏｂａｓ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００  ｐｌｕｓ化学分析器（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を用いて、血清コレステロール分析を行った。動物を、非ＨＤＬ−Ｃ（ＬＤＬ−Ｃ及びＶＬＤＬ−Ｃ）、ＨＤＬ−Ｃ、及びＴＣが類似レベルの処置群に無作為化した。処置０日目（Ｔ＝０）に、マウスの一部を安楽死させ、血清を回収して、その日のベースラインレベルを確立した。次いで、残りのマウスに、１１Ｆ１、８Ａ３、または抗キーホール・リンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）ＩｇＧ２対照抗体を尾静脈注射を介して３０ｍｇ／ｋｇ投与した。注射後１〜５日目に、マウスの一部を安楽死させ、大静脈から全血を回収し、３０分間室温で凝固させた。卓上遠心分離機で１０分間１２，０００ｒｐｍで遠心分離後、血清を回収した。Ｃｏｂａｓ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００  ｐｌｕｓ化学分析器を用いて、血清コレステロール分析を行った。
【０４２１】
ＰＣＳＫ９の血清濃度を、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを用いて決定した。１×ＰＢＳ中に希釈されたモノクローナル抗ＰＣＳＫ９抗体（３１Ｈ４）２μｇ／ｍｌで、透明な９６ウェルプレートを一晩被覆した。１×ＰＢＳ／．０５％ツイーンでプレートを完全に洗浄した後、３％ＢＳＡ／１×ＰＢＳで２時間ブロックした。洗浄後、一般的なアッセイ希釈液中に希釈された血清とともに、プレートを２時間インキュベートした（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＮ）。組み換えヒトＰＣＳＫ９（１ｎｇ／ｍｌ〜５００ｎｇ／ｍｌ）を同時に評価し、各ＥＬＩＳＡプレート上の標準曲線の生成に用いた。ウサギポリクローナルビオチン化抗ＰＣＳＫ９抗体（Ｄ８７７３，Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ，ＣＡ）を（１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中に）１μｇ／ｍｌで添加した後、ニュートラビジン−ＨＲＰを（１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中に）２００ｎｇ／ｍｌで添加した。結合したＰＣＳＫ９は、ＴＭＢ基質とともにインキュベーションすることによって検出した。反応を１ＮのＨＣｌで停止させ、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｐｌｕｓ  ３８４分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）で４５０ｎｍで吸光度を読み取った。組み換えヒトＰＣＳＫ９で生成された標準曲線（４パラメータロジスティック適合）を用いて、血清試料中のＰＣＳＫ９の対応濃度を決定した。
【０４２２】
ＰＣＳＫ９の血清濃度を、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを用いて決定した。ポリクローナルヤギ抗ヒトＦｃ  ＩｇＧ及びＨＲＰ標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧのＦｃγポリクローナル試薬（両方とも、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡから得た）を、それぞれ、捕捉及び検出抗体として用いた。３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質溶液を過酸化物と反応させ、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の存在下で、捕捉試薬によって結合した各抗ＰＣＳＫ９抗体の量に比例した比色シグナルを作成した。マイクロプレートリーダー（Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｍａｘ  Ｐｌｕｓ  ３８４）を用いて、色（光学密度、ＯＤ）の強度を４５０ｎｍ−６５０ｎｍで測定した。データを、別途準備された標準曲線のロジスティック（自動推定）回帰モデルを用いるＷａｔｓｏｎバージョン７．０．０．０１（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）データ整理パッケージを用いて分析した。アッセイの定量下限（ＬＬＯＱ）は、３４．４ｎｇ／ｍＬであった。
【０４２３】
ＡＡＶマウス中の薬物動態パラメータの算出
ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅバージョン５．１．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いて、各対象の所定の基準時点を用いて血清濃度の非コンパートメント解析（ＮＣＡ）を行った。終末相排出速度定数及び半減期を推定するためのデータポイントを、濃度−時間プロファイルの目視検査によって選択した。報告されたＮＣＡパラメータには、見かけ上の半減期（ｔ１／２）、時間０から最後に測定した濃度の血清濃度−時間曲線下の領域（ＡＵＣ０−ｔ）、及び見かけ上の血清クリアランス（ＣＬ０−ｔ）が含まれる。ＡＵＣ０−ｔは、線形／対数線形台形方法を用いて決定し、ＣＬ０−ｔは、１１Ｆ１、８Ａ３、及び３１Ｈ４抗体に関して投薬量／ＡＵＣ０−ｔによって算出した。実際の投薬量は３０ｍｇ／ｋｇ標的の２０％以内であることが試験後の投薬量溶液分析により示された。しかしながら、ＩｇＧ２対照に関して、実際の投薬量は目的とする標的の４０％のみであったことが分析により示された。従って、１２ｍｇ／ｋｇの補正投薬量を、ＩｇＧ２対照のＣＬ０−ｔ算出に用いた。パラメータは、有効数字２桁で報告された半減期以外は、有効数字３桁で報告された。
【０４２４】
統計分析
全てのコレステロール結果を平均±標準誤差で表した。全ての薬物動態学的データを平均±標準偏差で表した。１元配置分散分析によって決定されたｐ値０．０５を閾値として用いて、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体を注入した動物と抗ＰＣＳＫ９抗体を同じ時点で投与した動物の間の統計的有意性を決定した。
【０４２５】
血清非ＨＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、及びＴＣに対する抗ＰＣＳＫ９抗体の効果
ベースラインを確立するため、ヒトＰＣＳＫ９を発現するマウスの一部を、抗体の注射前に安楽死させ、血液を回収した。これらの動物中の非ＨＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、及びＴＣレベルは、それぞれ、３３±４、１１７±４、及び１８３±９ｍｇ／ｄＬ（平均±標準誤差）であった。ナイーブ動物中のＰＣＳＫ９レベルは、４９２１ｎｇ／ｍＬ±２０４４ｎｇ／ｍＬであると決定した。
【０４２６】
抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体を注入したマウス（対照動物）と比較して、１１Ｆ１の注射は、注射後１日目、２日目、及び４日目に非ＨＤＬ−Ｃの著しい低減（最大で５９％）をもたらしたが、ＴＣは、４日目のみ著しい低減（２２％）をもたらした（図１９、図２０）。ＨＤＬ−Ｃの著しい低減は、いずれの時点でも観察されなかった（図２１）。
【０４２７】
対照動物と比較して、８Ａ３の注射は、注射後１日目、２日目、及び４日目に非ＨＤＬ−Ｃの著しい減少（最大で６５％）をもたらしたが、ＴＣは、注射後２日目に著しい減少（最大で２４％）をもたらした（図１９、図２０）。ＨＤＬ−Ｃの著しい減少は、いずれの時点でも観察されなかった（図２１）。
【０４２８】
薬物動態
３０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与で、１１Ｆ１及び８Ａ３は、非常によく似た薬物動態学的挙動を有した（図２２）。これら２つの分子に関して、ＡＵＣ０−ｔ曝露、推定ＣＬ０−ｔ、及び見かけ上の半減期は同等であった（図２３の表）。抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体は、１１Ｆ１及び８Ａ３よりもＡＵＣ０−ｔ曝露が予想外に低下したが、これは、意図したよりも低い投薬量で抗体が投与されたことによる可能性が高い（３０ｍｇ／ｋｇとは対照的に１２ｍｇ／ｋｇ、抗体濃度が標的の４０％であることが投薬量溶液分析により示された。補正投薬量を用いて算出した場合、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体ＣＬ０−ｔは、１１Ｆ１及び８Ａ３のものと同様であり、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体の見かけ上の半減期は、１２０時間超と推定された。１１Ｆ１及び８Ａ３のＣＬ０−ｔ値は抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体により近いので、ＡＡＶモデル中で投与した他の抗体と比較した場合、抗体の体内動態におけるＰＣＳＫ９リガンドの影響は、１１Ｆ１及び８Ａ３に対してあまりはっきりしないことがこれらのデータにより示された。
【０４２９】
概要
マウス中のＡＡＶ（約５μｇ／ｍＬ）によるヒトＰＣＳＫ９の発現により、約３３ｍｇ／ｄＬの血清非ＨＤＬ−Ｃレベルがもたらされた。１１Ｆ１を３０ｍｇ／ｋｇ注射後、血清非ＨＤＬ−Ｃの著しい低減が、注射後１日目、２日目、及び４日目に観察された（対照動物と比べて最大で５９％）。ＴＣの著しい低減は、４日目のみ見られた。８Ａ３の注射により、対照動物と比べて最大で６５％の非ＨＤＬ−Ｃ低減という類似パターンがもたらされた。しかしながら、８Ａ３投与は、注射後２日目のみ著しいＴＣ低減をもたらし、最大で２４％であった。１１Ｆ１または８Ａ３のいずれを投与された動物においても、ＨＤＬ−Ｃの著しい減少は観察されなかった。１１Ｆ１及び８Ａ３の血清抗体レベルの分析により、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体と同様のプロファイルが実証された。
【０４３０】
実施例２５
カニクイザルの血清脂質に対する１１Ｆ１、２１Ｂ１２、及び８Ａ３の単回皮下投与の効果
カニクイザルへの１１Ｆ１、８Ａ３、または２１Ｂ１２の単回皮下投与により、血清ＬＤＬ−Ｃ及びＴＣの著しい低減がもたらされる。この試験は、抗ＰＣＳＫ９抗体が非ヒト霊長類における血清コレステロールを低減する能力があることを実証している。
【０４３１】
簡潔に述べれば、ナイーブ雄カニクイザルを、実験前に少なくとも２週間、環境に順応させた。動物を、血清ＴＣ、ＨＤＬ−Ｃ、ＬＤＬ−Ｃ、及びトリグリセリドレベル、並びに体重のプレスクリーニングに基づいて処置群に無作為化した。１週間後、動物を一晩絶食させ、末梢血管系（橈側皮または伏在静脈）から採血し、指定された時点（Ｔ＝０）でベースラインの血清脂質レベルを測定した。その後、動物に、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体、１１Ｆ１、２１Ｂ１２、または８Ａ３（全て、１０ｍＭ  ＮａＯＡｃ、ｐＨ５．２、９％スクロース中で）のいずれかを０．５ｍｇ／ｋｇ（全て、０．４ｍＬ／ｋｇ体重にて）で皮下注射した。その後、空腹時血液試料を動物から４５日間にわたって指定された時点で回収した。
【０４３２】
【表１５】
2018076351.tif 000018
【０４３３】
特定された時点で、一晩絶食条件下の動物の末梢血管系（橈側皮または伏在静脈）から血液を回収した。全血を３０分間室温で凝固させた。２０分間３，０００ｒｐｍで遠心分離後、血清を回収した。Ｃｏｂａｓ  Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００分析器（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を用いて、直接血清コレステロール分析を行った。以下の手法で、Ａｎｉｌｙｔｉｃｓ，ＭＤによって特定の時点（０日目、３日目、６日目、１５日目、２４日目、及び３３日目）のアポリポタンパク質Ｂ血清レベルを決定した。試料（事前準備なし）１７μＬアリコートを、６点標準曲線を用いてＨｉｔａｃｈｉ  ７１７分析器による分析に用いた。試料の初期値が標準曲線直線性よりも高い場合、試料を希釈して、結果に適切な希釈係数を乗じて繰り返した。アッセイ用の試薬（ＡＰＯ−Ｂ試薬キット番号８６０７１、抗体セット番号８６０６０、対照セット番号８６１０３）は、ＤｉａＳｏｒｉｎ（Ｓｔｉｌｌｗａｔｅｒ，ＭＮ）から入手した。
【０４３４】
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて、３４．４〜３０００ｎｇ／ｍＬ（３４．４ｎｇ／ｍＬは、定量下限［ＬＬＯＱ］である）のアッセイ範囲で、血清中の抗体濃度を決定した。
【０４３５】
Ｗａｔｓｏｎ（登録商標）ＬＩＭＳバージョン７．０．０．０１（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）によって、各対象の所定の基準時点を用いて血清濃度の非コンパートメント解析（ＮＣＡ）を行った。終末相排出速度定数及び半減期を推定するためのデータポイントを、濃度−時間プロファイル及び最適な線形当てはめの目視検査によって選択した（典型的には、約３６０時間、抗体濃度が定量下限より下に落ちるまで）。報告されたＮＣＡパラメータには、終末相半減期（ｔ１／２，ｚ）、最大血清濃度（Ｃｍａｘ）、時間０から無限の血清濃度−時間曲線下の領域（ＡＵＣ０−ｉｎｆ）、及び見かけ上の血清クリアランス（ＣＬ／Ｆ）が含まれる。ＡＵＣ０−ｉｎｆは、線形／対数線形台形方法を用いて算出した。全てのパラメータは、有効数字２桁で報告された半減期以外は、有効数字３桁で全て報告された。
【０４３６】
統計分析
ベースラインを共変量として、かつ、処置群を母数効果として見なす統計モデルを、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、ＴＣ、及びトリグリセリドの各時点での対数変換された応答にフィッティングした。チューキーの多重比較補正を適用して、各時点での一対比較を調整した。調整されたｐ値を用いて、統計的有意性をα＝０．０５で評価した。
【０４３７】
血清ＬＤＬコレステロールに対する１１Ｆ１、２１Ｂ１２、及び８Ａ３の効果
１１Ｆ１の最大ＬＤＬ−Ｃ低減は、注射後９日目に観察され、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体処置サル（対照動物）と比べて、ＬＤＬ−Ｃは５７％低減した。ＬＤＬ−Ｃは、対照動物で観察されたものと類似のレベルに２７日目までに戻った。２１Ｂ１２の最大ＬＤＬ−Ｃ低減は、注射後３日目に観察され、対照動物と比べて、ＬＤＬ−Ｃは６４％低減した。ＬＤＬ−Ｃは、対照動物と類似のレベルに６日目までに戻った。８Ａ３の最大ＬＤＬ−Ｃ低減は、注射後４日目に観察され、対照動物と比べて、ＬＤＬ−Ｃは５４％低減した。ＬＤＬ−Ｃは、対照動物で観察されたものと類似のレベルに２７日目までに戻った（図２４）。
【０４３８】
血清総コレステロールに対する１１Ｆ１、２１Ｂ１２、及び８Ａ３の効果
１１Ｆ１の最大ＴＣ低減は、注射後９日目に観察され、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体処置サル（対照動物）と比べて、ＴＣは２７％低減した。ＴＣは、対照動物で観察されたものと類似のレベルに２７日目までに戻った。２１Ｂ１２の最大ＴＣ低減は、注射後３日目に観察され、対照動物と比べて、ＴＣは２０％低減した。ＴＣは、ビヒクル処置サルで観察されたものと類似のレベルに４日目までに一時的に戻ったが、１４〜１８日（１４日及び１８日を含む）目に著しく低下した。８Ａ３の最大ＴＣ低減は、注射後９日目に観察され、対照動物と比べて、ＴＣは２２％低減した。ＴＣは、対照動物で観察されたものと類似のレベルに３０日目までに戻った（図２５）。
【０４３９】
血清ＨＤＬコレステロール及びトリグリセリドに対する１１Ｆ１、２１Ｂ１２、及び８Ａ３の効果
平均でかつ各時点において、１１Ｆ１または８Ａ３で処置した動物のＨＤＬ−Ｃまたはトリグリセリドレベルは、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体処置サルで観察されたものと（α＝０．０５有意水準に基づいて）有意に異なっていなかった。しかしながら、２１Ｂ１２は、単一の時点で（注射後１８日目に）ＨＤＬ−Ｃに統計的に有意な変化を示した（図２６及び図２７）。
【０４４０】
アポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）に対する１１Ｆ１、２１Ｂ１２、及び８Ａ３の効果
注射後３日目、６日目、１５日目、２４日目、及び３３日目に血清ＡｐｏＢレベルを測定した。１１Ｆ１及び８Ａ３は、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体処置サルと比べて３〜２４日目にＡｐｏＢ低減を伴った（図２８）。２１Ｂ１２は、３日目のみ統計的に有意により低いＡｐｏＢレベルを伴った。
【０４４１】
１１Ｆ１、２１Ｂ１２、及び８Ａ３の薬物動態プロファイル
治療による平均濃度−時間プロファイルの要約プロットを図２９に示す。１１Ｆ１、２１Ｂ１２、８Ａ３、及び抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体を受けた動物の推定平均薬物動態パラメータを図３０の表に示す。
【０４４２】
全てのグループにおける抗体吸収は、皮下抗体投与の特徴と一致していた。ＣＬ／Ｆ、Ｃｍａｘ、及びＡＵＣ０−ｉｎｆに関する２１Ｂ１２薬物動態挙動は、２１Ｂ１２を同一用量で投与した過去の試験で観察されたものと一致していた。１１Ｆ１及び８Ａ３の薬物動態は、２１Ｂ１２とは著しく異なっており、より低いＣＬ／Ｆが観察され（約１５％の２１Ｂ１２  ＣＬ／Ｆ）、かつ、より長い半減期が推定された（２１Ｂ１２の４０時間と比べて約２００時間）。特に、１１Ｆ１及び８Ａ３の薬物動態は、互いにかつ抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体と区別がつかなかった。１１Ｆ１及び８Ａ３がＰＣＳＫ９に対して親和性を持たない抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体と同じ曝露プロファイルを有することを考えると、１１Ｆ１及び８Ａ３の体内動態は、ＰＣＳＫ９標的と関連することで２１Ｂ１２よりも影響を受ける程度がかなり少ないことをこれらのデータは示唆している。
【０４４３】
結果のまとめ
４５日間にわたる試験で、ＴＣ及びＬＤＬ−Ｃの統計的に有意な低減が、抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体と比べて１１Ｆ１、２１Ｂ１２、または８Ａ３を投与された動物で観察された。１１Ｆ１は、２〜２４日目（２日目及び２４日目を含む）で（抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体と比べて）統計的に有意なＬＤＬ−Ｃ低減を伴った。２１Ｂ１２は、１〜４日目（１日目及び４日目を含む）で（抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体と比べて）統計的に有意なＬＤＬ−Ｃ低減を示した。８Ａ３は、１〜２４日目（１日目及び２４日目を含む）で（抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体と比べて）統計的に有意なＬＤＬ−Ｃ低減を示した。ＴＣの変化及びＡｐｏＢの変化は、全てのグループにおいてＬＤＬ−Ｃで観察された変化に酷似していた。１１Ｆ１は、注射後９日目で（同じ時点での抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体と比べて）ＬＤＬ−Ｃの最大低減を達成した（−５７％）。２１Ｂ１２は、注射後３日目で（同じ時点での抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体と比べて）ＬＤＬ−Ｃの最大低減を達成した（−６４％）。８Ａ３は、注射後４日目で（同じ時点での抗ＫＬＨ  ＩｇＧ２対照抗体と比べて）ＬＤＬ−Ｃの最大低減を達成した（−５４％）。２１Ｂ１２は、単一の時点、注射後１８日目でＨＤＬ−Ｃを低減させた。１１Ｆ１または８Ａ３投与後のＨＤＬ−Ｃレベルに統計的に有意な変化は観察されなかった。１１Ｆ１、２１Ｂ１２、または８Ａ３投与後のトリグリセリドレベルに統計的に有意な変化は観察されなかった。
【０４４４】
実施例２６
ヘテロ接合型家族性高コレステロール血症を有する対象のＬＤＬ−Ｃに対するヒト抗ＰＣＳＫ９抗体の安全性、耐性、及び効果を評価するための２部の試験
研究設計：これは、２部からなる試験である。Ａ部は、非盲検、単一アーム、多施設共同の予備試験である。Ｂ部は、登録を拡張した以外はＡ部と同一設計である、抗体、２１Ｂ１２、（配列番号５９２の重鎖及び配列番号５９１の軽鎖）の二重盲検、無作為化、プラセボ対照、多施設共同の試験である。組み入れ／除外基準及び評価スケジュールの両方は、Ａ部及びＢ部で同一である。
【０４４５】
組み入れ基準は以下を含む：
・  １２以上〜６５歳以下の男性及び女性
・  ホモ接合性家族性高コレステロール血症の診断
・  少なくとも４週間の安定した脂質低減療法
・  ＬＤＬコレステロールが１３０ｍｇ／ｄｌ（３．４ｍｍｏｌ／Ｌ）超
・  トリグリセリドが４００ｍｇ／ｄＬ（４．５ｍｍｏｌ／Ｌ）未満
・  スクリーニング時の体重が４０ｋｇ以上
を含む。
除外基準は：
・  無作為化前の８週間以内にＬＤＬまたは血漿アフェレーシス
・  ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）クラスＩＩＩまたはＩＶ、または最新の既知の左心室駆出分画率が３０％未満
・  無作為化前の３カ月以内に心筋梗塞、不安定狭心症、経皮冠動脈インターベンション  （ＰＣＩ）、冠動脈バイパス・グラフト（ＣＡＢＧ）、または発作
・  計画されている心臓手術または血管再開通術
・  制御されない心臓不整脈
・  管理不良高血圧
を含む。
【０４４６】
評価スケジュールには、有害事象の収集（ＡＥ）及び重要な有害事象（ＳＡＥ）データ、バイタルサイン、併用薬、臨床検査などが含まれるが、これらに限定されない。
【０４４７】
組み入れ／除外基準を満たす対象は、ＮＣＥＰ成人処置パネルＴＬＣ（または同等な）食生活に従うように指示させ、試験の期間を通じて現在の脂質低減療法を維持することを求められる。
【０４４８】
２１Ｂ１２製剤は、無菌で、透明な、無色の冷凍液として提示される。各無菌バイアルには、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％（ｗ／ｖ）スクロース、０．００４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、ｐＨ５．２ととも配合した２１Ｂ１２製剤７０ｍｇ／ｍＬの送達可能体積１ｍＬを満たす。各バイアルは、使い捨て用である。プラセボは、透明で、無色、無菌の、タンパク質を含まない冷凍液として同一容器中に提示され、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％（ｗ／ｖ）スクロース、０．００４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、ｐＨ５．２として製剤化される。
【０４４９】
Ａ部では、ホモ接合性家族性高コレステロール血症であると遺伝的に確認された、４週間を超えて（または４週間）安定な脂質低減薬物療法を受けている８人の対象が登録され、非盲検で２１Ｂ１２製剤を受けた。表２６．１は、研究における患者の遺伝子型を示す。
【０４５０】
【表１６】
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【０４５１】
２１Ｂ１２製剤（４２０ｍｇ）を４週間ごとに１２週間皮下投与し、４週間隔でさらにさらに１２週間処置した後、ＡＭＧ１４５  ４２０ｍｇを２週間ごとに１２週間投与する。治験来院を少なくとも４週間ごとに行う。これらの来院中に、有害事象（ＡＥ）及び重要な有害事象（ＳＡＥ）データ、バイタルサイン、併用薬、臨床検査などを収集する。
【０４５２】
脂質関連パラメータの変化及び％変化を表３８．２に示す。４週間ごとの治療の１２週目に、超遠心分離による平均ＬＤＬコレステロールは、ベースラインから１６．５％（７０．６ｍｇ／ｄＬ；１．８ｍｍｏｌ／Ｌ）減少し、＋５．２％〜−４３．６％の範囲であった。４人（５０％）の患者は、１５％以上の低下を有し、４人のうち３人（３８％）は、３０％以上のＬＤＬコレステロール低下を達成した。陰性のＬＤＬ受容体活性を持つ患者は、ＬＤＬコレステロールが低下しない。
【０４５３】
２週間ごとの治療の１２週間後に、ベースラインからの平均ＬＤＬコレステロール低下は、１３．９％（６０．８ｍｇ／ｄＬ；１．６ｍｍｏｌ／Ｌ）であった。ＬＤＬコレステロール低下は、ＬＤＬ受容体陰性患者では観察されなかったが、受容体機能不全の患者では、より大きな低下が起こる（表２６．３）。３人の患者（３８％）は、ＬＤＬコレステロールが３０％以上低下する。受容体欠損患者は、４週間ごと及び２週間ごとの投与で、１２週間の治療期間にわたりそれぞれ、平均で２２．９％及び２３．６％低下する（表２６．３）。
【０４５４】
４週間ごと及び２週間ごとの投与でのアポリポタンパク質Ｂ及び関連リポタンパク質における１２週目でのベースラインからの変化を表２６．２に示す。Ｌｐ（ａ）の平均変化は、４週間ごと及び２週間ごとの投与で、それぞれ、−１１．７％及び−１８．６％であり、これは、ＬＤＬ受容体活性に関連していないと思われる。トリグリセリドは、４週間ごと及び２週間ごとの投与で、それぞれ、５．７％減少、５．９％増加する。ＨＤＬ−コレステロール及びアポリポタンパク質Ａ１は、４週間ごとまたは２週間ごとの投与のいずれでも、実質的に変わらない（表２６．２）。２１Ｂ１２製剤４２０ｍｇによる４週間ごとの治療は、遊離ＰＣＳＫ９を、４週間ごと及び２週間ごとの投与の１２週目に、それぞれ、２２．７％及び８７．６％減少させる（表２６．２）。
【０４５５】
【表１７】
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【０４５６】
特に明記しない限り、値は平均（標準誤差）である。
＊コレステロールの値を１リットル当たりのミリモルに変換するには、０．０２５９で乗算する。アポリポタンパク質Ａ１またはアポリポタンパク質Ｂの値を１リットル当たりのグラムに変換するには、０．０１で乗算する。トリグリセリドの値を１リットル当たりのミリモルに変換するには、０．０１１３で乗算する。遊離ＰＣＳＫ９の値を１リットル当たりのナノモルに変換するには、７２で除算する。
†中央値（四分位範囲）。
Ｑ４Ｗ：４週間ごと、Ｑ２Ｗ：２週間ごと、ＳＥ：標準誤差、ＬＤＬ：低密度リポタンパク質、ＨＤＬ：高密度リポタンパク質、ＰＣＳＫ９：プロタンパク質コンベルターゼスブチリシン／ケクシン９型。
【０４５７】
【表１８】
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【０４５８】
約５１人の新規対象をＢ部に登録する。登録した対象を、４２０ｍｇの２１Ｂ１２Ｑ４Ｗ皮下またはプラセボＱ４Ｗ皮下の２つの処置群に２：１の配分で無作為化する。無作為化をベースラインＬＤＬ−Ｃレベルにより階層化する。４週間ごとに治験来院を行い、２週目及び１０週目に２回の任意の来院を行う。来院には、ＡＥ及びＳＡＥデータ、バイタルサイン、併用薬、臨床検査などの収集を伴う。空腹時脂質パネルを６週目に収集し、２１Ｂ１２治療に応じた天底のＬＤＬ−Ｃレベルを評価する。２１Ｂ１２製剤は、１日目、４週目、及び８週目に投与する。治験終了（ＥＯＳ）来院及び脂質の最終推定は、全対象に対して１２週目に行う。
【０４５９】
参照による組み込み
特許、特許出願、論文、教科書など、本明細書中に引用される全ての参考文献、及びそれらの中に引用されている参考文献は、すでに組み込まれていない場合には、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれた参考文献中に与えられている定義または用語の何れもが本明細書中に提供されている用語及び論述と異なる場合、本発明の用語及び定義が優先される。
【０４６０】
均等物
前記明細書は、当業者が本発明の実施を可能にするのに十分であると考えられる。前述の記載及び実施例は、本発明のある特定の好ましい実施形態を詳述し、本発明者らによって想定される最良の様式を記載する。しかしながら、前記述が本文中でどれほど詳細に記載されているとしても、本発明は、多くの様式で実施することができ、本発明は、添付の特許請求の範囲及びそのあらゆる均等物に従って解釈すべきであることが理解される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ１】
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【図１Ｂ２】
2018076351.tif 000024
【図１Ｂ３】
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【図１Ｂ４】
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【図２Ａ】
2018076351.tif 000027
【図２Ｂ】
2018076351.tif 000028
【図２Ｃ】
2018076351.tif 000029
【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
2018076351.tif 000031
【図３Ｂ】
2018076351.tif 000032
【図３Ｃ】
2018076351.tif 000033
【図３Ｄ】
2018076351.tif 000034
【図３Ｅ】
2018076351.tif 000035
【図３Ｆ】
2018076351.tif 000036
【図３Ｇ】
2018076351.tif 000037
【図３Ｈ】
2018076351.tif 000038
【図３Ｉ】
2018076351.tif 000039
【図３Ｊ】
2018076351.tif 000040
【図３Ｋ】
2018076351.tif 000041
【図３Ｌ】
2018076351.tif 000042
【図３Ｍ】
2018076351.tif 000043
【図３Ｎ】
2018076351.tif 000044
【図３Ｏ】
2018076351.tif 000045
【図３Ｐ】
2018076351.tif 000046
【図３Ｑ】
2018076351.tif 000047
【図３Ｒ】
2018076351.tif 000048
【図３Ｓ】
2018076351.tif 000049
【図３Ｔ】
2018076351.tif 000050
【図３Ｕ】
2018076351.tif 000051
【図３Ｖ】
2018076351.tif 000052
【図３Ｗ】
2018076351.tif 000053
【図３Ｘ】
2018076351.tif 000054
【図３Ｙ】
2018076351.tif 000055
【図３Ｚ】
2018076351.tif 000056
【図３ＡＡ】
2018076351.tif 000057
【図３ＢＢ】
2018076351.tif 000058
【図３ＣＣ】
2018076351.tif 000059
【図３ＤＤ】
2018076351.tif 000060
【図３ＥＥ】
2018076351.tif 000061
【図３ＦＦ】
2018076351.tif 000062
【図３ＧＧ】
2018076351.tif 000063
【図３ＨＨ】
2018076351.tif 000064
【図３ＩＩ】
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【図３ＪＪ（ｉ）】
2018076351.tif 000066
【図３ＪＪ（ｉｉ）】
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【図３ＫＫ】
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【図３ＬＬ】
2018076351.tif 000069
【図３ＭＭ】
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【図３ＮＮ】
2018076351.tif 000071
【図３ＯＯ】
2018076351.tif 000072
【図３ＰＰ】
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【図３ＱＱ】
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【図３ＲＲ】
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【図３ＳＳ】
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【図３ＴＴ】
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【図３ＵＵ】
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【図３ＶＶ】
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【図３ＷＷ】
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【図３ＸＸ】
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【図３ＹＹ】
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【図３ＺＺ】
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【図３ＡＡＡ】
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【図３ＢＢＢ】
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【図３ＣＣＣ】
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【図３ＤＤＤ】
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【図３ＥＥＥ】
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【図３ＦＦＦ】
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【図３ＧＧＧ】
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【図３ＨＨＨ】
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【図３ＩＩＩ】
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【図３ＪＪＪ】
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【図３ＬＬＬ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１２Ｆ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
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【図１３Ｇ】
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【図１３Ｈ】
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【図１３Ｉ】
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【図１３Ｊ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年1月19日(2018.1.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホモ接合性家族性高コレステロール血症と診断された患者の血清ＬＤＬコレステロール
の低減方法であって、
少なくとも１つの抗ＰＣＳＫ９抗体を、血清ＬＤＬコレステロールの低減を必要とする
前記患者に約１２０ｍｇ〜約３０００ｍｇの投薬量で投与することにより、前記血清ＬＤ
Ｌコレステロールレベルを少なくとも約１０％低減させることを含む、前記方法。