(57)【要約】【課題】ジカウイルス感染症の治療及び／又は予防に有効な手段を提供すること。【解決手段】リバビリンを含有する、ジカウイルス感染症の予防及び／又は治療用医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
リバビリンを含有する、ジカウイルス感染症の予防及び／又は治療用医薬組成物。
【請求項２】
経口投与形態又は静脈注射形態である、請求項１に記載の医薬組成物。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ジカウイルス感染症の治療に関する技術が開示される。
【背景技術】
【０００２】
現在、諸外国では蚊によって媒介されるジカウイルスが流行している。これに伴い新生児の小頭症患者が増加している。妊婦のジカウイルス感染と新生児の小頭症が関与することが近年明らかになってきた。しかし、ジカウイルスに対する有効な治療薬やワクチンは未だ開発されていない。小頭症患者を減らすためにもジカウイルス感染者の早期治療を実施し、感染拡大を防ぐことが求められている。
【０００３】
一方、１−β−Ｄ−リボフラノシル−１、２、４−トリアゾール−３−カルボキサミド（リバビリン）は、核酸構造類似化合物であり、現在インターフェロンα−２αとの併用によりＣ型肝炎の治療に用いられている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開2011-51898
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記のような現状の下、ジカウイルス感染症の治療及び／又は予防に有効な手段を提供することが１つの課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記の課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、Ｃ型肝炎ウイルスの治療薬として知られるリバビリンがジカウイルスの増殖抑制又は感染抑制に有効であることを見出した。斯かる知見に基づき、更なる研究を重ねた結果、下記に代表される発明が提供される。
【０００７】
項１．
リバビリンを含有する、ジカウイルス感染症の予防及び／又は治療用医薬組成物。
項２．
経口投与形態である、項１に記載の医薬組成物。
項３．
ジカウイルスに感染している又はジカウイルスに感染していることが疑われる被検体にリバビリンを投与することを含む、ジカウイルス感染の治療方法。
項４．
ジカウイルス感染症の予防及び／又は治療用医薬組成物を製造するためのリバビリンの使用。
【発明の効果】
【０００８】
ジカウイルス感染症の有効な治療及び／又は予防手段が提供される。一実施形態において、副作用が軽減された安全性の高いジカウイルス感染症の治療及び／又は治療手段が提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】リバビリンによるジカウイルス増殖抑制能をプラーク形成に基づいて評価した結果を示す。（Ａ）はウイルス力価が０、０．００１、及び０．０１の場合の結果であり、（Ｂ）はウイルス力価が０、０．１、及び１の場合の結果である。（Ｃ）はプラーク数を相対的に評価した結果である。
【図２】ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒによるジカウイルス増殖抑制能をプラーク形成に基づいて評価した結果を示す。（Ａ）はプラークの形成を撮影した写真であり、（Ｂ）はプラーク数を相対的に評価した結果である。
【図３】リバビリンによるジカウイルス増殖抑制能の濃度異存性及び安全性を評価した結果を示す。
【図４】蚊の幼虫由来の細胞を用いてリバビリンによるジカウイルス増殖抑制能を評価した結果を示す。
【図５】蚊の幼虫由来の細胞を用いてリバビリンによるジカウイルス増殖抑制能を評価した結果を示す。
【図６】ジカウイルス感染に高感受性の遺伝子改変マウスを用いてリバビリンによるジカウイルス増殖抑制能を評価した結果を示す。
【図７】リバビリンのジカウイルス増殖抑制効果をＶｅｒｏ細胞を用いて評価した結果を示す。
【図８】リバビリンのジカウイルス増殖抑制効果をヒト神経芽細胞腫の細胞を用いて評価した結果を示す。
【図９】ジカウイルスによるアポトーシス及び細胞死に対するリバビリンの抑制効果を評価した結果を示す。
【図１０】ジカウイルスによるウイルス血症の発現に対するリバビリンの抑制効果を評価した結果を示す。
【図１１】ジカウイルスが感染したマウスの生存率に対するリバビリンの影響を評価した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
ジカウイルス感染症の治療及び／又は予防用の医薬組成物（以下、本発明の医薬組成物とも称する）は、有効成分としてリバビリンを含むことが好ましい。リバビリンは、公知の化合物であり、その入手方法としては、市販品を用いてもよく、また公知の方法に基づき製造してもよい。
【００１１】
本発明の医薬組成物は、ジカウイルスに感染した被検体、または感染する（した）恐れのある被検体に投与するものである。一般に、感染患者は、発熱、頭痛、眼球結膜充血、皮疹、筋痛、及び関節痛等の症状を示す。よって、本発明の医薬組成物はリバビリンの他に、これらの症状の対症療法薬を配合してもよい。
【００１２】
そのような対症療法薬としては、例えば、次を挙げることができる：アスピリン、アスピリンアルミニウム、サザピリン、エテンザミド、サリチルアミド、イブプロフェン、アセトアミノフェン、イソプロピルアンチピリン等の解熱鎮痛薬；カフェイン、無水カフェイン、安息香酸ナトリウムカフェイン等の中枢神経興奮薬；ブロムワレリル尿素、アリルイソプロピルアセチル尿素等の鎮静剤、マレイン酸クロルフェニラミン、ジフェンヒドラミン、サリチル酸ジフェンヒドラミン、フマル酸クレマスチン、マレイン酸カルビノキサミン、メキタジン、酒石酸アリメマジン、塩酸ジフェニルピラリン、塩酸トリプロリジン等の抗ヒスタミン薬；塩化リゾチーム、ブロメライン、セラペプターゼ、セミアルカリプロティナーゼ、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸ジカリウム、グリチルリチン酸アンモニウム、グリチルレチン酸、アズレンスルホン酸ナトリウム等の抗炎症薬；ベラドンナ（総）アルカロイド、ベラドンナエキス、ヨウ化イソプロパミド、臭化水素スコポラミン、臭化メチルベナクチジウム、臭化チメピジウム、ピレンゼピン等の抗アセチルコリン剤；セチルピリジニウム、塩化セチルピリジニウム、ポピドンヨード、グルコン酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、塩化デカリニウム、チモール、ヨウ素・ヨウ化カリウム、フェノール、塩酸クロルヘキシジン、クレオソート、塩化ベンゼトニウム等の殺菌消毒剤；塩酸ジブカイン、アミノ安息香酸エチル、リドカイン、塩酸リドカイン、オキセサゼイン等の局所麻酔剤；ビタミンＡ、肝油、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、アスコルビン酸カルシウム、ビタミンＤ、ビタミンＥ、コハク酸トコフェノールカルシウム等のビタミン剤；パントテン酸、パンテノール、パントテン酸ナトリウム、パントテン酸カルシウム、パンテチン、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、グルクロン酸、グルクロノラクトン、アミノエチルスルホン酸、ビオチン、γ−オリザノール等の代謝性成分；地黄、ケイヒ、ゴオウ、ショウキョウ、マオウ、カンゾウ、キョウニン、ハンゲ、シャゼンソウ、サイコ、ブクリョウ、シンイ等の生薬およびこれらの抽出物（エキス、チンキ等）等。対症療法薬は、本発明の医薬組成物に、単一成分を配合してもよく、２種以上のものを組み合わせて配合してもよい。
【００１３】
本発明の医薬組成物は、経口的または非経口的に投与することができる。経口的に投与する製剤としては、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、トローチ剤、及びゼリー剤等を挙げることができる。また、非経口的に投与する製剤としては、注射剤、硬膏剤、酒精剤、エキス剤、坐剤、懸濁剤、チンキ剤、軟膏剤、パップ剤、点鼻剤、吸入剤、リニメント剤、ローション剤、エアゾール剤等を挙げることができる。本発明の医薬組成物をうがい薬、のどスプレーや洗口液に配合してもよい。一実施形態において、本発明の医薬組成物は、経口投与製剤が好ましく、より好ましくは錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、トローチ剤、及びゼリー剤等の固形製剤である。
【００１４】
これらの製剤は、当業者に公知慣用の製造方法により製造でき、また、このような種々の剤形の医薬製剤を調製するには、所望により添加物を配合することが可能である。該添加物としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、流動化剤、乳化剤、及び安定化剤等を挙げることができる。これらの添加物は、１種又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１５】
本発明の医薬組成物の患者への投与量は、患者の性別、年齢、体重、症状、投与方法、投与回数、投与時期等を考慮して適宜決定される。一実施形態において、本発明の医薬組成物は、患者に経口投与されることが好ましく、その際のリバビリンの投与量は、例えば、１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは５〜２０ｍｇ／ｋｇ／日とすることができる。投与回数は特に制限されず、例えば、１日1回、１日２回、１日３回、又は１日４回とすることができる。投与期間は特に制限されず、例えば、症状が緩和又は消失するまで継続することができ、例えば、３ヶ月、２カ月、１カ月、３週間、２週間、１週間、５日間、４日間、３日間、又は２日間とすることができる。投与期間中に投与量を変更してもよい。例えば、初回の投与量（リバビリン）を高く設定し（例えば、１５〜５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは２０〜４０ｍｇ／ｋｇ）、２回目移行の投与量を段階的（例えば、１日毎、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、１週間毎、２週間毎、３週間毎、又は１月毎）に下げることが可能である。一実施形態において、本発明の医薬組成物は、患者に静脈注射によって投与されること好ましい。静脈投与の場合の投与量、投与頻度、及び投与期間は、上記に例示した経口投与の場合と同じであっても、異なっても良い。
【００１６】
本発明の医薬組成物は、本発明に係る複数の成分を含む単一の製剤として製造し、これを投与してもよいし、また本発明に係る各成分を分けて別個の製剤とし、それら製剤を同時または順次投与可能としたキット製剤としてもよい。
【００１７】
一実施形態において、本発明の医薬組成物をジカウイルスに感染していることが疑われる被検体に投与することによってジカウイルス感染症の予防が図られる。ジカウイルスに感染していることが疑われる被検体とは、例えば、ジカウイルス感染症が流行している地域に訪れたヒト、又はそのようなヒト若しくはジカウイルス感染症を発症しているヒトに接触したヒトを挙げることができる。予防を目的とした本発明の医薬組成物の投与は、ヒトがジカウイルス感染が流行している地域を訪れた時又はヒトがジカ熱ウイルスを発症しているヒトと接触した時から一定期間内に行うことが好ましい。一定期間とは、例えば、２カ月、１カ月、３週間、２週間、１週間、６日、５日、４日、３日、２日、又は１日であり得る。
【実施例】
【００１８】
以下、実施例により本発明についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに制限されるものではない。
【００１９】
試験例１．  ｒｉｂａｖｉｒｉｎのジカウイルス増殖抑制能（Ｖｅｒｏ細胞）
Ｖｅｒｏ細胞はアフリカミドリザルの腎臓上皮細胞に由来する細胞株であり、ウイルス増殖抑制に重要な役割を持つＩ型インターフェロン遺伝子のクラスターが欠損しているため、ウイルス感染に対して非常に感受性が高い細胞株である。プラークアッセイはウイルスの力価を計測するために有効な手技である。ｄｉｓｈに付着しているＶｅｒｏ細胞にウイルスを感染させ、その上からメチルセルロースを重層する。これにより、感染細胞から放出されたウイルスが、遠くの細胞に感染するのを防止できる。１つの細胞に感染したウイルスは隣接した細胞にのみ感染し、初感染細胞から同心円上に感染細胞が広がる。この部分のＶｅｒｏ細胞は死滅し、剥がれることでプラーク状を呈する。このプラークの個数を数えることで、ｐｌａｑｕｅ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔ（ＰＦＵ）を算出し、ウイルス力価を求めることができる。
【００２０】
Ｖｅｒｏ細胞を１２ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに２×１０５／ｗｅｌｌずつ播種した。翌日、ジカウイルスをｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  （ＭＯＩ）  ０、０．００１、０．０１、０．１、及び１の５段階のウイルス力価で感染させた（ＭＯＩは、細胞１個に対するウイルスの数を表す）。感染１時間後、２％メチルセルロースを重層し、ｒｉｂａｖｉｒｉｎを０、１０、１００、及び１０００μｇ／ｍｌ  の４段階の濃度で添加した。感染４日後、プラーク数を数えることで、ｐｌａｑｕｅ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔ  （ＰＦＵ）を算出し、ウイルス力価を求め、ｒｉｂａｖｉｒｉｎのウイルスの増殖抑制効果を評価した。
【００２１】
ｒｉｂａｖｉｒｉｎを作用させていないジカウイルス感染Ｖｅｒｏ細胞では、ＭＯＩが高くなるにしたがって、多くのプラーク形成が観察された（図１（Ａ）及び（Ｂ））。一方で、ｒｉｂａｖｉｒｉｎを作用させた場合には、ｒｉｂａｖｉｒｉｎの濃度依存的にプラーク形成が抑制された（図１（Ａ）及び（Ｂ））。図１（Ｃ）は、各ＭＯＩにおけるｒｉｂａｖｉｒｉｎ未添加群でのプラーク数に対するｒｉｂａｖｉｒｉｎ添加群でのプラーク数の割合を示したグラフである。ｒｉｂａｖｉｒｉｎを添加した群では、その濃度依存的にプラーク形成が抑制され、１０００μｇ／ｍｌのｒｉｂａｖｉｒｉｎを作用させた場合には、ＭＯＩの値が高くてもほとんどプラークが形成されないことが判明した。以上の結果より、ｒｉｂａｖｉｒｉｎは哺乳類細胞であるＶｅｒｏ細胞内でのジカウイルスの増殖を抑制し、その効果は濃度依存的に高くなることが明らかになった。
【００２２】
試験例２：ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉのジカウイルス増殖抑制能
試験例１におけるｒｉｂａｖｉｒｉｎ  をｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒに変更した以外は、試験例１と同様の試験を行った。但し、ジカウイルスはＭＯＩ  ０、０．１、及び１の３段階のウイルス力価で感染させ、ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒは０、０．５、１、及び２μＭの４段階の濃度で添加した。ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒはサイトメガロウイルスや単純ヘルペスウイルス感染症に対する治療薬として使用されており、ＤＮＡポリメラーゼ阻害作用を有している。
【００２３】
各ＭＯＩにおいて、ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒの濃度に関係せず、ほぼ同数のプラーク形成が観察された（図２（Ａ））。また、いずれの濃度のｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒにもプラーク形成の抑制作用は認められなかった。以上の結果より、ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒはＶｅｒｏ細胞内でのジカウイルスの増殖抑制能を有さないことが明らかになった。
【００２４】
試験例３：濃度異存性及び安全性の評価
Ｖｅｒｏ細胞を１２ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに２×１０５／ｗｅｌｌずつ播種した。翌日、Ｖｅｒｏ細胞にジカウイルス（ＺＩＫＶ）をＭＯＩ  １のウイルス力価で感染させた。感染１時間後、ｒｉｂａｖｉｒｉｎを０、７．８、１５．６、３１．３、６２．５、１２５、２５０、５００、７５０、１０００、１５００、及び２０００μｇ／ｍｌの１２段階の濃度で添加した。感染４日後、各ｗｅｌｌを倒立顕微鏡下で撮影し、Ｖｅｒｏ細胞の生死を評価した。
【００２５】
図３に示すとおり、ｒｉｂａｖｉｒｉｎ濃度が１２５μｇ／ｍｌ以下のｗｅｌｌではＶｅｒｏ細胞が死滅し、剥がれていることが確認された。一方で、ｒｉｂａｖｉｒｉｎ濃度が２５０μｇ／ｍｌ以上のｗｅｌｌではＶｅｒｏ細胞が生存し、ｄｉｓｈに付着していた。ｒｉｂａｖｉｒｉｎ濃度が２０００μｇ／ｍｌの場合も、Ｖｅｒｏ細胞は生存していた。これらの結果から、ｒｉｂａｖｉｒｉｎは１００μｇ／ｍｌでプラークアッセイによるウイルス増殖抑制効果を示し、２５０μｇ／ｍｌで細胞死を抑制できることが明らかになった。また、ｒｉｂａｖｉｒｉｎ濃度を高くしても、Ｖｅｒｏ細胞の生存に悪影響を及ぼさなかったことより、ｒｉｂａｖｉｒｉｎの安全性が高いことが示唆された。
【００２６】
試験例４：リバビリンのジカウイルス増殖抑制能（Ｃ６／３６細胞：ＲＴ−ＰＣＲ）
Ｃ６／３６細胞はヒトスジシマカの孵化幼虫由来の細胞株であり、蚊媒介性ウイルスの増殖実験に有用である。Ｃ６／３６細胞を１２ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに２×１０５／ｗｅｌｌずつ播種した。翌日、Ｃ６／３６細胞にジカウイルスをＭＯＩ  ０．００１のウイルス力価で感染させた。感染１時間後、ｒｉｂａｖｉｒｉｎを０、１０、１００、及び１０００μｇ／ｍｌの４段階の濃度で添加した。感染４日後、Ｃ６／３６細胞をＴＯＲＩＺＯＬにて回収しＲＮＡを抽出した。抽出したＲＮＡに対して逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを得た。このｃＤＮＡに対してジカウイルスに特異的な塩基配列を認識するプライマーを用いてｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲを実施した。また、インターナルコントロールとして、Ｃ６／３６細胞の４０Ｓ  ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓ１７に対するプライマーを使用した。
【００２７】
図４に示すとおり、ｒｉｂａｖｉｒｉｎを１０μｇ／ｍｌ濃度で作用させると、作用させない場合に比べ、そのジカウイルス量は１／８程度にまで低くなることが判明した。また、１００μｇ／ｍｌ又は１０００μｇ／ｍｌ濃度で作用させると、ほぼ完全にジカウイルスは検出されなかった。これらの結果から、ｒｉｂａｖｉｒｉｎはＣ６／３６細胞内でのジカウイルスの増殖を抑制した。その効果は濃度依存的に高くなることが明らかになった。これは、ｒｉｂａｖｉｒｉｎがベクターである蚊の細胞内においてもジカウイルス増殖の抑制能を有することを示す。
【００２８】
試験例５：リバビリンのジカウイルス増殖抑制能（Ｃ６／３６細胞：ＲＴ−ＰＣＲ）
試験例４にてＣ６／３６細胞から抽出したＲＮＡに対してジカウイルスに特異的な塩基配列を認識するプライマーを用いてＲＴ−ＰＣＲを実施した。ＰＣＲ後のサンプルをアガロースゲルで電気泳動し、バンドの有無、濃さを評価した。
【００２９】
図５に示すとおり、ｒｉｂａｖｉｒｉｎの濃度依存的に検出されるバンドの濃さが薄くなることが確認された。この結果から、試験例４と同様に、ｒｉｂａｖｉｒｉｎがベクターである蚊の細胞内においてもジカウイルス増殖の抑制能を有することが示された。
【００３０】
試験例６：ｒｉｂａｖｉｒｉｎのジカウイルス感染防御能（ｉｎ  ｖｉｖｏ）
マウスはジカウイルスに対する感受性が低く、高力価のウイルスを接種しても感染は成立しないが、ウイルス感染防御に重要なＩ型インターフェロン受容体を欠損した遺伝子改変マウスはジカウイルス感染に高感受性であることが報告されている（Lazear et al., Cell Host Microbe. 2016 May 11;19(5):720-30）。そこで、Ｉ型インターフェロンの受容体の下流でそのシグナルを伝達するのに必須であるＳＴＡＴ１の欠損マウスを作製し、それがジカウイルス感染に高感受性であることを確認した。
【００３１】
６匹のＳＴＡＴ１欠損マウスに１×１０４ＰＦＵのジカウイルスを皮下投与した。感染当日３匹にはｒｉｂａｖｉｒｉｎを１個体あたり２５ｍｇ腹腔内投与した。一方残りの３匹にはｖｉｅｃｌｅとして等量のＰＢＳを腹腔内投与した。感染２日後採血を行い、血清中のウイルスＲＮＡをＲＴ−ＰＣＲ法にて解析した。
【００３２】
血清サンプルに対してジカウイルスの有する塩基配列を特異的に検出するｐｒｉｍｅｒを用いてＲＴ−ＰＣＲ解析を実施し、ウイルス血症の有無を確認した。その結果、ｒｉｂａｖｉｒｉｎ非投与群では３匹中３匹の個体でバンドが検出されたが、ｒｉｂａｖｉｒｉｎ投与群では３匹中３匹の個体でバンドが検出されなかった（図６）。この結果から、ｒｉｂａｖｉｒｉｎは生体レベルでジカウイルスによるウイルス血症を抑制することが明らかになった。
【００３３】
試験例７
Ｖｅｒｏ細胞にジカウイルスをＭＯＩ ５×１０−５のウイルス力価で感染させた。感染１時間後、ｒｉｂａｖｉｒｉｎを０、１０、２０、４０、８０μｇ/ｍｌの濃度で作用させた。４日後、定量的ＲＴ−ＰＣＲ解析を実施し、ｒｉｂａｖｉｒｉｎのウイルス増殖抑制効果を評価した。結果を図７に示す。棒グラフは３つの独立した実験の平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す（*: P<0.05、**: P<0.01）。図７に示されるとおり、ｒｉｂａｖｉｒｉｎは２０μｇ／ｍｌで有意にVero細胞内でのジカウイルスの増殖を抑制した。また、８０μｇ／ｍｌでジカウイルスの増殖をほぼ完全に抑制した。
【００３４】
試験例８
ヒト神経芽細胞腫の細胞株であるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞にジカウイルスをＭＯＩ ５×１０−４のウイルス力価で感染させた。感染１時間後、ｒｉｂａｖｉｒｉｎを０、１０、２０、４０、８０μｇ／ｍｌの濃度で作用させた。４日後、定量的ＲＴ−ＰＣＲ解析を実施し、ｒｉｂａｖｉｒｉｎのウイルスの増殖抑制効果を評価した。結果を図８に示す。棒グラフは３つの独立した実験の平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す（**: P<0.01）。図８に示されるとおり、ｒｉｂａｖｉｒｉｎは１０μｇ／ｍｌで有意にＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞内でのジカウイルスの増殖を抑制した。また、２０μｇ／ｍｌでその増殖をほぼ完全に抑制した。
【００３５】
試験例９
Ｖｅｒｏ細胞にジカウイルスをＭＯＩ ５×１０−３のウイルス力価で感染させた。感染１時間後、ｒｉｂａｖｉｒｉｎを図９に示す各濃度で作用させた。４日後、FACS解析により、アポトーシス細胞および死細胞の割合を測定した（図９）。Ａｎｅｘｉｎ Ｖ陽性はアポトーシス細胞を、Ｚｏｍｂｉｅ ｒｅｄ陽性は死細胞を表す。図９に示されるとおり、ｒｉｂａｖｉｒｉｎは濃度依存的にジカウイルスによるアポトーシス及び細胞死を抑制した。２５０μｇ／ｍｌ以上の濃度の ｒｉｂａｖｉｒｉｎはジカウイルス感染によるＶｅｒｏ細胞の細胞死をほぼ完全に抑制した。また２０００μｇ／ｍｌの高濃度ｒｉｂａｖｉｒｉｎを作用させても、細胞毒性は確認されなかった。アポトーシス細胞の割合は１２５μｇ／ｍｌのｒｉｂａｖｉｒｉｎを作用させた場合に最も高くなったが、より高濃度のｒｉｂａｖｉｒｉｎを作用させるとその割合は低下した。
【００３６】
試験例１０
ＳＴＡＴ１欠損マウスに１．０×１０４ ＰＦＵのジカウイルスを皮下投与により感染させた。感染当日より３日連続で（感染後０、１、２日後）１５ｍｇのｒｉｂａｖｉｒｉｎを腹腔内投与した(ｎ＝５)。対照群(ｎ＝５)には同量のPBSを投与した。血清からＲＮＡを精製し、ＲＴ−ＰＣＲ解析により、ウイルス血症を評価した。結果を図１０に示す（、ｒｉｂａｖｉｒｉｎ（−）： ｒｉｂａｖｉｒｉｎ非投与群、ｒｉｂａｖｉｒｉｎ （＋）： ｒｉｂａｖｉｒｉｎ投与群、 Ｎ： 陰性対照、Ｐ：陽性対照）。ここで、陰性対照は、RNase-free WaterをサンプルとしてZIKVゲノムに対するPrimerでRT-PCRを実施したものであり、陽性対照は、ウイルス希釈液から精製したRNAをサンプルにとしてZIKVゲノムに対するPrimerでRT-PCRを実施したものである。感染後６日目以降はサンプル数が減少しているが、これは個体の死亡によるものである。ｒｉｂａｖｉｒｉｎ非投与群では感染後２日でウイルス血症が確認され、感染後４日目まで強いウイルス血症が継続した。感染後５日目からはウイルス血症は消退するが、感染後８日目までに全個体が死に至る。ｒｉｂａｖｉｒｉｎ投与群では感染後４日目までウイルス血症の抑制が確認された。しかし、感染後５日目からはウイルス血症が確認されるようになり、感染後８日目までに全て死に至った。この結果から、感染初期におけるribavirinの投与はウイルス血症を抑制することができることが明らかになった。
【００３７】
試験例１１
ＳＴＡＴ１欠損マウスにジカウイルスを１匹あたり１．０×１０４ＰＦＵ皮下投与により感染させた。感染当日より連日１０ｍｇのｒｉｂａｖｉｒｉｎを腹腔内投与した(ｎ＝５)。対照群(ｎ＝５)には同量のＰＢＳを投与した。その後、生存率を解析した。結果を図１１に示す（ｒｉｂ （−）： ｒｉｂａｖｉｒｉｎ非投与群、ｒｉｂ(＋)：ｒｉｂａｖｉｒｉｎ投与群、**: P<0.01）。図１１に示されるとおり、ｒｉｂａｖｉｒｉｎ非投与群では感染後７日目までに全個体が死に至った。一方、ｒｉｂａｖｉｒｉｎ投与群では感染後９日目までに全個体が死に至ったものの、その生存期間は非投与群に比べて有意に延長することが明らかになった。
【００３８】
試験例１０及び１１の結果から、ジカウイルスによる感染初期だけでなく、継続して一定濃度のリバビリンを投与することにより、ジカウイルスに感染した被検体の延命に望ましいと考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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