(57)【要約】【課題】本出願は、抗ＣＤ１０５抗体、その抗原結合断片の製剤、及びそれらの使用に関する。別の態様は、抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片の製剤の、プレフィルドシリンジに関する。別の態様は、癌及び眼科疾患などの血管新生関連障害の１つ又は複数の兆候又は症状を低減させるための、これらの製剤の使用に関する。【解決手段】約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、最大約１００ｍＭの緩衝剤、最大約１Ｍのポリオール及び約４．０〜約７．５のｐＨを含む、製剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、最大約１００ｍＭの緩衝剤、最大約１Ｍのポリオール及び約４．０〜約７．５のｐＨを含む、製剤。
【請求項２】
抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、少なくとも１２カ月間にわたる約２〜８℃での保存後にモノマーとして存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、少なくとも６カ月間にわたる約２５℃での保存後にモノマーとして存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項４】
抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９０％が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、少なくとも６カ月間にわたる約２５℃での保存後にモノマーとして存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項５】
前記緩衝剤がヒスチジン又はリン酸緩衝生理食塩水である、請求項１に記載の製剤。
【請求項６】
緩衝剤が酢酸塩であり、ｐＨが約４である、請求項１に記載の製剤。
【請求項７】
緩衝剤がヒスチジンであり、ｐＨが約５．５である、請求項１に記載の製剤。
【請求項８】
抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片が、少なくとも１２カ月間にわたる約２〜８℃での保存後に、ＣＤ１０５  ＥＬＩＳＡ結合アッセイによって約５０〜１５０％の結合を示す、請求項１に記載の製剤。
【請求項９】
抗ＣＤ１０５抗体の平均等電点（ｐＩ）が、キャピラリー電気泳動−等電点電気泳動によって測定して、少なくとも１２カ月間にわたる２〜８℃での保存後に、約８．７〜約９．２である、請求項１に記載の製剤。
【請求項１０】
前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域（ＣＬ）；配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する定常領域（Ｆｃ）を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１１】
前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１２】
約２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１３】
約５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１４】
約１００ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１５】
前記緩衝剤がヒスチジン又は酢酸塩である、請求項１に記載の製剤。
【請求項１６】
約２０ｍＭのヒスチジン又は酢酸塩を含む、請求項１５に記載の製剤。
【請求項１７】
硝子体内投与又は静脈内投与のために製剤化されている、請求項１に記載の製剤。
【請求項１８】
許容される担体又は賦形剤を更に含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１９】
前記担体又は賦形剤が、薬学的に許容される担体又は賦形剤である、請求項１８に記載の製剤。
【請求項２０】
等張又は高張である、請求項１に記載の製剤。
【請求項２１】
ポリオールが３００ｍＭ未満であり、製剤が塩で等張にされる、請求項１に記載の製剤。
【請求項２２】
抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％が、ＳＥＣによって測定して、製剤の凍結解凍サイクルの後にモノマーとして存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項２３】
抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％が、ＳＥＣによって測定して、撹拌ストレスにさらされた場合にモノマーとして存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項２４】
ポリオールが糖である、請求項１に記載の製剤。
【請求項２５】
前記糖が非還元糖である、請求項２４に記載の製剤。
【請求項２６】
非還元糖がトレハロース又はスクロースである、請求項２５に記載の製剤。
【請求項２７】
約２４０ｍＭのトレハロース又はスクロースを含む、請求項２６に記載の製剤。
【請求項２８】
糖がソルビトールである、請求項２４に記載の製剤。
【請求項２９】
約２４０ｍＭのソルビトールを含む、請求項２８に記載の製剤。
【請求項３０】
界面活性剤を更に含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３１】
界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０又はＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８である、請求項３０に記載の製剤。
【請求項３２】
請求項１から３１までのいずれか一項に記載の製剤を含む、静脈内投与又は硝子体内投与に適した、プレフィルドシリンジ。
【請求項３３】
それを必要とする対象において血管新生関連疾患を治療する方法であって、患者に、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、最大約１００ｍＭの緩衝剤、最大約１Ｍのポリオール及び約４．０〜約７．５のｐＨを含む製剤を投与することを含む、上記方法。
【請求項３４】
前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域（ＣＬ）；配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する定常領域（Ｆｃ）を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
約２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
約５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
約１００ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
前記製剤が３００ｍＭ未満のポリオールを含み、製剤が塩で等張にされる、請求項３３に記載の方法。
【請求項４０】
前記緩衝剤がヒスチジン又は酢酸塩である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４１】
約２０ｍＭのヒスチジン又は酢酸塩を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
ポリオールが糖である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４３】
糖が非還元糖である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
非還元糖がトレハロース又はスクロースである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
約２４０ｍＭのトレハロース又はスクロースを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
糖がソルビトールである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
約２４０ｍＭのソルビトールを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記製剤が、硝子体内又は静脈内に投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項４９】
界面活性剤を更に含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項５０】
界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０又はＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
血管新生関連疾患が癌、又は転移である、請求項３３に記載の方法。
【請求項５２】
癌が固形腫瘍である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
癌が上皮系腫瘍である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
癌が肺癌、婦人科悪性腫瘍、メラノーマ、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、子宮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、腎臓癌、頭部癌、膵臓癌、肝臓癌（肝細胞癌）、子宮癌、首部癌、腎臓癌（腎細胞癌）、肉腫、ミエローマ、脳癌又はリンパ腫である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
前記血管新生関連疾患が眼科的状態である、請求項３３に記載の方法。
【請求項５６】
眼科的状態が、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症又は脈絡膜血管新生である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）が滲出型ＡＭＤ又は萎縮型ＡＭＤである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記製剤が前記患者に１回又は複数回投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項５９】
前記製剤が、１日１回、１週間に１回、１カ月に１回、１カ月に２回、２カ月に１回、３カ月に１回、４カ月に１回、５カ月に１回又は６カ月に１回投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項６０】
前記製剤が、血管新生関連疾患の１つ又は複数の兆候又は症状が低減されるまで投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項６１】
前記１つ又は複数の兆候又は症状が、重症度又は持続期間において、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％又は約１００％低減される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記１つ又は複数の兆候又は症状が、重症度又は持続期間において、約２倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約５５倍、約６０倍、約６５倍、約７０倍、約７５倍、約８０倍、約９０倍、約９５倍、約１００倍又はそれ以上低減される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記１つ又は複数の兆候又は症状が、血管を収縮する、眼部疾患と関係がある内皮細胞増殖を阻害する、出血の兆候若しくは症状を除去する、不透明な視界を治療する、視力喪失の停止をもたらす、視覚を改善する、及び／又は血管漏出を防ぐことである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
治療が、患者の状態における改善をもたらし、１つ又は複数の以下の要因：細胞増殖の低下、細胞数の低下、アポトーシスの増大、又は細胞増殖障害を含む細胞の少なくとも一部分の生存の低下が発生したかどうか決定することによって評価することができる、請求項３３に記載の方法。
【請求項６５】
治療が、腫瘍若しくは転移の部分的若しくは完全な排除及び／又は患者の生存期間の延長をもたらす、請求項３３に記載の方法。
【請求項６６】
それを必要とする患者において眼科的状態を治療する方法であって、前記患者に、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、最大約１００ｍＭの緩衝剤、最大約１Ｍのポリオール、約４．０〜約７．５のｐＨ及び任意選択で界面活性剤を含む製剤を投与することを含み、それによって前記眼科的状態の１つ又は複数の兆候又は症状が改善される、上記方法。
【請求項６７】
眼科的状態が、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症又は脈絡膜血管新生である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）が滲出型ＡＭＤ又は萎縮型ＡＭＤである、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域（ＣＬ）；配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する定常領域（Ｆｃ）を含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
前記１つ又は複数の兆候又は症状が、血管を収縮する、眼部疾患と関係がある内皮細胞増殖を阻害する、出血の兆候若しくは症状を除去する、不透明な視界を治療する、視力喪失の停止をもたらす、視覚を改善する、及び／又は血管漏出を防ぐことである、請求項６６に記載の方法。
【請求項７２】
前記１つ又は複数の兆候又は症状が、重症度又は持続期間において、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％又は約１００％低減される、請求項６６に記載の方法。
【請求項７３】
前記１つ又は複数の兆候又は症状が、重症度又は持続期間において、約２倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約５５倍、約６０倍、約６５倍、約７０倍、約７５倍、約８０倍、約９０倍、約９５倍、約１００倍又はそれ以上低減される、請求項６６に記載の方法。
【請求項７４】
前記製剤が３００ｍＭ未満のポリオールを含み、製剤が塩で等張にされる、請求項６６に記載の方法。
【請求項７５】
それを必要とする対象において癌又は転移を予防又は治療する方法であって、前記患者に、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、最大約１００ｍＭの緩衝剤、最大約１Ｍのポリオール及び約４．０〜約７．５のｐＨを含む製剤を投与することを含み、それによって前記癌又は転移の１つ又は複数の兆候又は症状が改善される、上記方法。
【請求項７６】
抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域（ＣＬ）；配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する定常領域（Ｆｃ）を含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
製剤の投与が、対象の生命を延長させる、請求項７５に記載の方法。
【請求項７９】
前記癌が原発性腫瘍又は転移性腫瘍である、請求項７５に記載の方法。
【請求項８０】
前記癌が固形腫瘍である、請求項７５に記載の方法。
【請求項８１】
前記固形腫瘍が、皮膚、メラノーマ、肺、膵臓、乳、卵巣、結腸、直腸、胃、甲状腺、喉頭、卵巣、前立腺、結腸直腸、頭、首、眼、口、喉、食道、胸、骨、精巣、リンパ、骨髄、骨、肉腫、腎臓、汗腺、肝臓、腎臓、脳（例えば、多形性膠芽腫、グリオーマ）などから選択される組織又は器官の固形腫瘍である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記固形腫瘍が、結腸腫瘍、乳房腫瘍、腎臓腫瘍、肺腫瘍、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、又はこのような腫瘍のいずれかの転移である、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
治療が、対象の状態における改善をもたらし、１つ又は複数の以下の要因：細胞増殖の低下、細胞数の低下、アポトーシスの増大、又は細胞増殖障害を含む細胞の少なくとも一部分の生存の低下が発生したかどうか決定することによって評価することができる、請求項７５に記載の方法。
【請求項８４】
治療が、腫瘍若しくは転移の部分的若しくは完全な排除及び／又は患者の生存期間の延長をもたらす、請求項７５に記載の方法。
【請求項８５】
前記１つ又は複数の兆候又は症状が、重症度又は持続期間において、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％又は約１００％低減される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８６】
前記１つ又は複数の兆候又は症状が、重症度又は持続期間において、約２倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約５５倍、約６０倍、約６５倍、約７０倍、約７５倍、約８０倍、約９０倍、約９５倍、約１００倍又はそれ以上低減される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８７】
約２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項８８】
約５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項８９】
約１００ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項９０】
前記緩衝剤がヒスチジン又は酢酸塩である、請求項７５に記載の方法。
【請求項９１】
約２０ｍＭのヒスチジン又は酢酸塩を含む、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
ポリオールが糖である、請求項７５に記載の方法。
【請求項９３】
前記糖が非還元糖である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
非還元糖がトレハロース又はスクロースである、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
約２４０ｍＭのトレハロース又はスクロースを含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記糖がソルビトールである、請求項９２に記載の方法。
【請求項９７】
約２４０ｍＭのソルビトールを含む、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記製剤が３００ｍＭ未満のポリオールを含み、製剤が塩で等張にされる、請求項７５に記載の方法。
【請求項９９】
界面活性剤を更に含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項１００】
界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０又はＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記製剤が静脈内投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項１０２】
表１の製剤１〜３９のいずれか１つを含む、製剤。
【請求項１０３】
請求項１０２に記載の製剤を含む、プレフィルドシリンジ。
【請求項１０４】
血管新生関連疾患の治療のための、請求項１０２に記載の製剤の使用。
【請求項１０５】
血管新生関連疾患の治療のための医薬品の製造における、請求項１０２に記載の製剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その出願が参照として完全に本明細書に組み込まれる２０１２年９月５日に出願された米国仮出願第６１／６９７，１１１号の特典を請求するものである。
【０００２】
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、以下の同時係属中の特許出願：米国特許出願公開第２０１０−００９８６９２号Ａ１［代理人書類番号３５８８２−７０６．２０１］；米国特許第８，２２１，７５３号［代理人書類番号３５８８２−７０６．２０２］；米国特許出願第１３／４８５，７０２号［代理人書類番号３５８８２−７０６．３０１］；及び米国特許出願第１３／３９０，８９６号［代理人書類番号３５８８２−７１２．２０１］に関連している。
配列表
【０００３】
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩフォーマットで提出された、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。前記ＡＳＣＩＩのコピーは、２０１３年９月４日に作成され、名称は３５８８２−７１４．６０１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、２２，１２１バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００４】
癌は、冠状疾患に次ぐヒトの死の第二の主な原因である。世界中で毎年数百万人の人々が、癌が原因で死んでいる。米国単独で、癌は毎年五十万人をはるかに超える人々の死を引き起こし、一年当たり約１４０万の新たな症例が診断される。心臓疾患が原因の死は有意に減少している一方で、癌が原因の死は一般に増加している。多くの国では、癌は、既に死の主な原因である。
【０００５】
更に、その原発性癌を早期に生き延びた癌患者に関してさえ、それらの生命が劇的に変化するという一般的な経験が示されている。多くの癌患者は、再発又は治療の失敗に関する可能性を意識することにより駆り立てられる強い不安を経験する。多くの癌患者は、治療後に相当な身体の衰弱を経験する。
【０００６】
一般的に言うと、致命的な癌の管理における根本的な問題は、有効で非毒性の全身療法の欠如である。癌は、制御不能な細胞増殖をもたらす遺伝子突然変異によって特徴付けられる複雑な疾患である。癌細胞は全生物中に存在し、通常の条件下では、それらの過剰な増殖は様々な生理的要因によって密接に制御される。
【０００７】
血管新生は、それによって新たな血管が既存の血管から発生する生理的プロセスである。血管新生は、正常プロセスと病状プロセスの両方において役割を果たすことが示唆されている。例えば、血管新生プロセスは、動物の器官及び組織の脈管系の発生と関係がある。
【０００８】
特定の病状では、患部組織内の細胞に十分な血液及び栄養供給をもたらすための手段として血管新生が刺激される。これらの病状の多くは、異常な細胞増殖及び／又は制御と関係がある。固形癌及び滲出型黄斑変性症は、連続的増殖及び転移に関する新たな血液供給の動員に依存する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
抗ＣＤ１０５抗体の新たな製剤、この製剤を含むプレフィルドシリンジ、及び血管新生関連障害を治療するためのこのような製剤の使用を、本明細書で提供する。本出願は、例えば、ＣＤ１０５と関係がある癌及び眼科的状態の処置の静脈内投与又は眼内投与のために使用され得る製剤を提供する。
【００１０】
一態様では、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、最大約１００ｍＭの緩衝剤、最大約１Ｍのポリオール及び約４．０〜約７．５のｐＨを含む製剤を、本明細書で提供する。
【００１１】
一態様では、この製剤は調製後に安定であり、従来の手段に従って試験され得る。製剤の経時的な安定性に関して、抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片の少なくとも９５％が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、少なくとも約１２カ月間にわたる約２〜８℃での保存後にモノマーとして存在し得る。いくつかの実施形態では、このような製剤の緩衝剤は、ヒスチジン又はリン酸緩衝生理食塩水である。製剤の経時的な安定性に関して、抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片の少なくとも９０％が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、少なくとも約６カ月間にわたる約２５℃での保存後にモノマーとして存在し得る。いくつかの実施形態では、このような製剤の緩衝剤は、酢酸塩である。
【００１２】
更に、抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも約１２カ月間にわたる約２〜８℃での保存後に、ＣＤ１０５  ＥＬＩＳＡ結合アッセイによって約５０〜約１５０％の結合を示し得る。
【００１３】
抗ＣＤ１０５抗体の平均等電点（ｐＩ）は、例えばキャピラリー電気泳動−等電点電気泳動によって測定して、少なくとも約１２カ月間にわたる２〜８℃での保存後に、約８．７〜約９．２であり得る。
【００１４】
抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３０カ月間、少なくとも約３６カ月間又はそれ以上にわたって安定であり得ることが理解される。
【００１５】
製剤は、ＳＥＣによって測定して、製剤の凍結解凍サイクルの後にモノマーとして存在する、抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％を含み得る。或いは、又は更に、製剤は、ＳＥＣによって測定して、撹拌ストレスにさらされた場合にモノマーとして存在する、抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％を含み得る。
【００１６】
この抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ１０５に結合することが可能なＣＤＲの任意の配列を含み得る。非制限的な一実施形態では、この抗ＣＤ１０５抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域（ＣＬ）；配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する定常領域（Ｆｃ）を含む（例えば、図１を参照）。
【００１７】
別の非制限的実施形態では、この抗ＣＤ１０５抗体は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【００１８】
単離されたヒト化脱免疫化抗ＣＤ１０５抗体は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含み得る。ヒト化脱免疫化重鎖の他の非制限的例には、配列番号１３、１４、１５及び１６が含まれるが、これらだけには限られない。ヒト化脱免疫化軽鎖の他の非制限的例には、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２及び２３が含まれるが、これらだけには限られない。これらの配列は、以下の例１７に示される。
【００１９】
この製剤は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体若しくはその抗原結合断片、又は約２ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約７．５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約３５ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約４５ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ、約６５ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約７５ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約８５ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約９５ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１０５ｍｇ／ｍｌ、約１１０ｍｇ／ｍｌ、約１１５ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１２５ｍｇ／ｍｌ、約１３０ｍｇ／ｍｌ、約１３５ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１４５ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ若しくはそれ以上が含まれるが、これらだけには限られないそれらの間の任意の値の抗ＣＤ１０５抗体若しくはその抗原結合断片を含み得る。
【００２０】
一実施形態では、この製剤は、約２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む。
【００２１】
別の実施形態では、この製剤は、約５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む。
【００２２】
なお別の実施形態では、この製剤は、約１００ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む。
【００２３】
本明細書に記載する製剤は、例えば、ヒスチジン、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩などの緩衝剤を含み得る。一実施形態では、この製剤は、約５ｍＭ、約７．５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１２．５ｍＭ、約１５ｍＭ、約１７．５ｍＭ、２０ｍＭ、約２２．５ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ又は約１００ｍＭのヒスチジン、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩を含む。
【００２４】
製剤は、硝子体内投与及び静脈内投与が含まれるが、これらだけには限られない、抗体について公知の任意の型の投与のために調製され得る。
【００２５】
本明細書に提供する製剤は、薬学的に許容される担体又は賦形剤であり得、患者への投与のために許容される任意の担体又は賦形剤を含む、許容される担体又は賦形剤を更に含み得る。
【００２６】
一実施形態では、本明細書に提供する製剤は等張である。「等張」とは、対象の製剤が、ヒト血液と本質的に同じ浸透圧を有することを意味する。等張な製剤は、約２５０〜３５０ミリオスモル（ｍＯｓｍ）の浸透圧を一般に有する。等張性は、例えば、蒸気圧又は氷−凍結（ｉｃｅ−ｆｒｅｅｚｉｎｇ）型の浸透圧計を使用して測定され得る。別の実施形態では、本明細書に提供する製剤は高張である。「等張」な製剤は、ヒト血液と本質的に同じ浸透圧を有する製剤である。対応して、用語「高張」は、ヒト血液の浸透圧を上回る浸透圧を有する製剤を記述するために使用される。
【００２７】
本明細書に提供する製剤は、１Ｍ未満の量でポリオールを含み得る。例えば、ポリオールは、約５０ｍＭ、約７５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２２５ｍＭ、約２４０ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、約４００ｍＭ、約４５０ｍＭ、約５００ｍＭ、約５５０ｍＭ、約６００ｍＭ、約６５０ｍＭ、約７００ｍＭ、約７５０ｍＭ、約８００ｍＭ、約８５０ｍＭ、約９００ｍＭ、約９５０ｍＭ、約１Ｍ又はそれらの間の任意の整数の量で、製剤中に存在し得る。一実施形態では、この製剤は、約１００ｍＭ〜約１７５ｍＭの濃度の塩で等張にされる。例えば、３００ｍＭ未満の量でポリオールを含む製剤は、約１３０ｍＭの濃度の塩で等張にされる。
【００２８】
一態様では、本明細書に提供する製剤中で使用されるポリオールは、例えば非還元糖などの糖であり得る。非還元糖の代表的な例には、トレハロース及びスクロースが含まれるが、これらだけには限られない。例えば、製剤は、約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロース又はスクロースを含み得る。一実施形態では、製剤は、約２４０ｍＭのトレハロース又はスクロースを含み得る。
【００２９】
或いは、この糖は、約２００ｍＭ〜約３００ｍＭの量（濃度）のソルビトールであり得る。一実施形態では、製剤は、約２４０ｍＭのソルビトールを含み得る。
【００３０】
本明細書に提供する製剤の更なる非制限的例は、表１の製剤１〜３９のいずれか１つである。
【００３１】
本明細書に提供する製剤は、約４．０〜約７．５のｐＨを有し得る。一実施形態では、本明細書に提供する製剤は、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５又は約７．０のｐＨを有し得る。
【００３２】
一実施形態では、本明細書に提供する製剤は、界面活性剤を含まない。任意選択で、いくつかの場合には、界面活性剤は製剤中に含まれ得る。界面活性剤の非制限的例には、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０及びＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８が含まれる。
【００３３】
本明細書に記載する製剤を含む、静脈内投与又は硝子体内投与に適したプレフィルドシリンジもまた、本明細書で提供する。このようなプレフィルドシリンジは、本明細書に記載する状態のいずれかなどの血管新生関連状態の治療への使用のために、パッケージ及びラベルされ得る。パッケージは、保存及び投与のための指示を更に含み得る。上記請求項のいずれか一項に記載の製剤を含む、静脈内投与又は硝子体内投与に適した１つ又は複数のプレフィルドシリンジを含むパッケージを、本明細書で提供する。
【００３４】
本出願の一実施形態は、本明細書に記載する任意の組成物を使用して、本明細書に記載する障害を治療するための医薬品を製剤化することを企図する。医薬品は治療を必要とする患者／対象の身体的特徴に基づいて製剤化することができ、一回又は複数回の製剤で製剤化することができる。医薬品は病院及びクリニックに配給するのに適したラベルを有する適切なパッケージ中にパッケージすることができ、そのラベルは対象中の本明細書に記載する障害の治療を示すものである。医薬品は一回又は複数回単位としてパッケージすることができる。本明細書に記載する組成物の用量及び投与に関する説明書を、パッケージ中に含めることができる。
【００３５】
本明細書に記載する製剤を患者に投与することを含む、それを必要とする患者（対象）において血管新生関連疾患を治療する方法を、本明細書で提供する。このような製剤は、患者に硝子体内又は静脈内投与され得る。
【００３６】
本明細書に記載する血管新生関連疾患は、例えば、癌又は転移であり得る。一実施形態では、この癌は固形腫瘍である。治療する癌には、例えば、上皮ベースの腫瘍が含まれる。このような製剤で治療する癌の非制限的例には、肺癌、婦人科悪性腫瘍、メラノーマ、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、子宮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、腎臓癌、頭部癌、膵臓癌、肝臓癌（肝細胞癌）、子宮癌、首部癌、腎臓癌（腎細胞癌）、肉腫、ミエローマ及びリンパ腫が含まれるが、これらだけには限られない。癌又は転移の治療のための製剤は、患者に静脈内投与され得る。
【００３７】
或いは、本明細書に記載する血管新生関連疾患は、例えば、眼科的状態であり得る。眼科的状態には、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫及び／又は脈絡膜血管新生が含まれるが、これらだけには限られない。加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）は、滲出型ＡＭＤ（ウエット型ＡＭＤ）又は萎縮型ＡＭＤ（ドライ型ＡＭＤ）であり得る。眼科的状態の治療のための製剤は、患者に硝子体内投与され得る。
【００３８】
このような方法では、この製剤は、患者に１回又は複数回投与され得る。例えば、この製剤は、１日１回、１週間に１回、１カ月に１回、１カ月に２回、２カ月に１回、３カ月に１回、４カ月に１回、５カ月に１回又は６カ月に１回投与され得る。治療スケジュールは、治療に対する患者の応答に応じて、必要に応じて増加又は減少され得る。
【００３９】
一態様では、製剤は、血管新生関連疾患の１つ又は複数の兆候又は症状が低減されるまで投与される。
【００４０】
眼科的状態に関して、この１つ又は複数の兆候又は症状には、血管を収縮する、眼部疾患と関係がある内皮細胞増殖を阻害する、出血の兆候若しくは症状を除去する、不透明な視界を治療する、視力喪失の停止をもたらす、視覚を改善する、視力を改善する、黄斑浮腫を低減する、及び／又は血管漏出を防ぐことが含まれ得るが、これらだけには限られない。
【００４１】
癌又は転移に関して、治療は、患者の状態における改善をもたらし得、治療は、１つ又は複数の以下の要因：細胞増殖の低下、細胞数の低下、アポトーシスの増大、又は細胞増殖障害を含む細胞の少なくとも一部分の生存の低下が発生したかどうか決定することによって評価することができる。
【００４２】
治療は、腫瘍若しくは転移の部分的若しくは完全な排除及び／又は患者の生存期間の延長をもたらし得る。
【００４３】
一実施形態では、１つ又は複数の兆候又は症状は、患者への１つ又は複数の用量の製剤の投与後に、重症度又は持続期間において、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％又は約１００％低減される。
【００４４】
別の実施形態では、１つ又は複数の兆候又は症状は、患者への１つ又は複数の用量の製剤の投与後に、重症度又は持続期間において、約２倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約５５倍、約６０倍、約６５倍、約７０倍、約７５倍、約８０倍、約９０倍、約９５倍、約１００倍又はそれ以上低減される。
【００４５】
本明細書に記載する製剤を患者に投与することを含み、それによって眼科的状態の１つ又は複数の兆候又は症状がこの治療によって改善される、それを必要とする患者において眼科的状態を治療する方法を、本明細書で提供する。製剤の投与は硝子体内投与であり得る。
【００４６】
本明細書に記載する製剤を患者に投与することを含み、それによって癌又は転移の１つ又は複数の兆候又は症状が改善される、それを必要とする対象において癌又は転移を予防又は治療する方法もまた、本明細書で提供する。製剤の投与は静脈内投与であり得る。
【００４７】
本明細書に提供する方法では、治療する対象はヒト又は非ヒト対象であってよい。本明細書に提供する製剤は、患者の健康状態、疾患又は状態の進行、及び治療の有効性に応じて一回又は多数回投与することができる。療法及び治療に対する調節は治療過程を通じて行うことができる（例えば、組成物中の抗体の用量）。
【００４８】
本明細書に提供する任意の１つ又は複数の方法の有効性をモニタリングする方法を本明細書で提供する。可溶性ＣＤ１０５のレベルは、癌患者の生存と関連付けられており、治療前及び治療中にモニタリングすることができる。従って、可溶性ＣＤ１０５のレベルは、治療レジメンが患者を治療する際に有効である１つの指標であり得る。本明細書に記載する治療は、１つ又は複数の更なる治療を含み得る。
【００４９】
参照による組込み
本明細書中に言及する全ての刊行物、特許及び特許出願は、それぞれ個々の刊行物、特許又は特許出願が参照として組み込まれることが具体的且つ個別に示される場合と同程度に、参照として本明細書に組み込まれる。
【００５０】
実施形態の新規特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載される。本発明の実施形態の特徴及び利点のより良い理解は、実施形態の原理が利用されている例示的な実施形態を記載する以下の詳細な説明、及び添付の図面を参照して得ることができる：
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】図１Ａ〜Ｊは、本明細書に記載する抗ＣＤ１０５抗体（ＴＲＣ１０５）の例示的アミノ酸配列を与える図である。図１Ａは、抗ＣＤ１０５抗体の代表的な可変軽（ＶＬ）鎖（配列番号１）である；図１Ｂは、抗ＣＤ１０５抗体の代表的な定常軽鎖（ＣＬ）（配列番号２）である；図１Ｃは、抗ＣＤ１０５抗体の代表的な可変重（ＶＨ）鎖（配列番号３）である；図１Ｄは、抗ＣＤ１０５抗体の代表的な定常γ−１重鎖（配列番号４）である。図１Ｅ〜Ｇは、それぞれＶＬのＣＤＲ１、２及び３を示す。図１Ｈ〜Ｊは、それぞれＶＨのＣＤＲ１、２及び３を示す。
【００５２】
【図２】ＴＧＦ−β／ＡＬＫ５シグナル伝達経路のダイアグラムを与える図である。ＴＧＦ−β／ＡＬＫ５経路（Ａ）は細胞増殖の阻害をもたらす。ＴＧＦ−β／ＡＬＫ１経路（Ｂ）は内皮細胞増殖を誘導し、ＡＬＫ１シグナル伝達にＣＤ１０５（エンドグリン）を必要とする。点線は不活性又は遮断経路を示す。太い矢印はシグナル伝達経路の刺激を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
本明細書で使用する用語は単に個々の実施形態を記載する目的であり、限定的であることを意図するものではないことを理解されよう。更に、本明細書に記載する方法及び材料と類似又は均等ないくつかの方法及び材料は、本発明を実施する際に使用することができることは理解される。
【００５４】
本出願によれば、当技術分野で完全に説明されるように、従来の細胞生物学、分子生物学、微生物学、及び組換えＤＮＡ技法を利用することができる。
【００５５】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「この（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに他を示さない限り、複数形の言及を含む。従って、例えば、「（１つの）方法」に対する言及には、本明細書に記載する型の及び／又は本開示を読んだ当業者に明らかな、１つ又は複数の方法及び／又はステップを含む。
【００５６】
抗ＣＤ１０５抗体は、種々の形態の血管新生関連障害を治療又は予防するために使用され得る。本明細書に記載する製剤の投与を介して、種々の形態の癌、固形腫瘍及び転移などを治療又は予防する方法を、本明細書に記載する。
【００５７】
抗体に関する用語
本明細書で使用する用語「抗体」は、天然又は部分的若しくは完全に合成によって産生されたものであれ免疫グロブリン（Ｉｇ）を指す。この用語は、抗原結合ドメインである、又はそれと相同的である結合ドメインを有する任意のポリペプチド又はタンパク質も含む。この用語は、「抗原結合断片」及び以下に記載するような類似の結合断片に関する他の交換可能な用語を更に含む。
【００５８】
天然抗体及び天然免疫グロブリンは通常、２つの同一軽鎖（Ｌ）及び２つの同一重鎖（Ｈ）で構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ三量体糖タンパク質である。それぞれの軽鎖は典型的には１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖と結合するが、一方でジスルフィド結合の数は異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。それぞれの重鎖と軽鎖は、規則正しく配置した鎖間ジスルフィド架橋も有する。それぞれの重鎖は、一端に可変ドメイン（「ＶＨ」又は「ＶＨ」）次にいくつかの定常ドメイン（「ＣＨ」又は「ＣＨ」）を有する。それぞれの軽鎖は、一端に可変ドメイン（「ＶＬ」又は「ＶＬ」）及びその他端に定常ドメイン（「ＣＬ」又は「ＣＬ」）を有し、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第一定常ドメインと一直線に並び、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと一直線に並ぶ。個々のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間の界面を形成すると考えられる。
【００５９】
本明細書で使用する用語「合成ポリヌクレオチド」、「合成遺伝子」又は「合成ポリペプチド」は、対応するポリヌクレオチド配列若しくはその一部分、又はアミノ酸配列若しくはその一部分が、設計された、又はｄｅ  ｎｏｖｏ合成された、又は修飾された、同等の本来存在する配列に匹敵する配列に由来することを意味する。合成ポリヌクレオチド（抗体若しくは抗原結合断片）又は合成遺伝子は、核酸又はアミノ酸配列の化学合成だけには限られないが、これを含めた当技術分野で知られている方法によって調製することができる。合成遺伝子は典型的には、アミノ酸、又はポリヌクレオチドレベルのいずれか（又は両方）で天然に存在する遺伝子と異なり、典型的には合成発現制御配列の状態内に位置する。合成遺伝子ポリヌクレオチド配列は、天然遺伝子と比較して、タンパク質及び異なるアミノ酸を必ずしもコードすることはできず、例えばそれらは、異なるコドンを取り込むが同じアミノ酸をコードする合成ポリヌクレオチド配列も包含することができる（即ち、ヌクレオチドの変化はアミノ酸レベルでのサイレント突然変異を表す）。
【００６０】
抗体に関して、用語「可変ドメイン」は、その個々の抗原に対するそれぞれ個々の抗体の結合及び特異性において使用される抗体の可変ドメインを指す。しかし、可変性は抗体の可変ドメイン全体中に均一に分布されているわけではない。そうではなくて、可変性は軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方で（ＣＤＲとしても知られる）超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中する。可変ドメインのより高度に保存された部分は「フレーム領域」又は「ＦＲ」と呼ばれる。非修飾重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、結合ループ、及びいくつかの場合β−シート構造の一部を形成する３つのＣＤＲと散在する、主にβ−シート形状をとる４個のＦＲ（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）をそれぞれ含有する。それぞれの鎖中のＣＤＲはＦＲと非常に接近して一緒に保たれ、他の鎖由来のＣＤＲは抗体の抗原結合部位の形成に貢献する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１），ｐａｇｅｓ６４７−６６９を参照）。
【００６１】
用語「超可変領域」及び「ＣＤＲ」は、本明細書で使用するとき、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。ＣＤＲは、抗原と相補的に結合しＶＨ及びＶＬ鎖のそれぞれに関してＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３として知られる３つの配列領域由来のアミノ酸残基を含む。（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））によれば、軽鎖可変ドメイン中では、ＣＤＲは典型的にはおよそ残基２４〜３４（ＣＤＲＬ１）、５０〜５６（ＣＤＲＬ２）及び８９〜９７（ＣＤＲＬ３）に相当し、及び重鎖可変ドメイン中では、ＣＤＲは典型的にはおよそ残基３１〜３５（ＣＤＲＨ１）、５０〜６５（ＣＤＲＨ２）及び９５〜１０２（ＣＤＲＨ３）に相当する。異なる抗体のＣＤＲは挿入部分を含有する可能性があり、したがってアミノ酸ナンバリングは異なる可能性があることは理解される。Ｋａｂａｔのナンバリングシステムは、特定残基と結びつけた文字（例えば、軽鎖中のＣＤＲＬ１の２７Ａ、２７Ｂ、２７Ｃ、２７Ｄ、２７Ｅ、及び２７Ｆ）を利用するナンバリングスキームを用いてこのような挿入を説明し、異なる抗体間のナンバリング中の任意の挿入を反映する。或いは、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７））によれば、軽鎖可変ドメイン中では、ＣＤＲは典型的にはおよそ残基２６〜３２（ＣＤＲＬ１）、５０〜５２（ＣＤＲＬ２）及び９１〜９６（ＣＤＲＬ３）に相当し、及び重鎖可変ドメイン中では、ＣＤＲは典型的にはおよそ残基２６〜３２（ＣＤＲＨ１）、５３〜５５（ＣＤＲＨ２）及び９６〜１０１（ＣＤＲＨ３）に相当する。
【００６２】
本明細書で使用する「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」は、抗原結合のポケット又は溝の一部を形成するフレームワークアミノ酸残基を指す。いくつかの実施形態では、フレームワーク残基は抗原結合のポケット又は溝の一部であるループを形成し、ループ中のアミノ酸残基は抗原と接触することができる、又は接触することができない。フレームワーク領域はＣＤＲ間の領域を一般に含む。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））によれば、軽鎖可変ドメイン中では、ＦＲは典型的にはおよそ残基０〜２３（ＦＲＬ１）、３５〜４９（ＦＲＬ２）、５７〜８８（ＦＲＬ３）、及び９８〜１０９に相当し、及び重鎖可変ドメイン中では、ＦＲは典型的にはおよそ残基０〜３０（ＦＲＨ１）、３６〜４９（ＦＲＨ２）、６６〜９４（ＦＲＨ３）、及び１０３〜１３３に相当する。軽鎖に関してＫａｂａｔのナンバリングを用いて前に論じたように、重鎖も同様の形式で挿入を説明する（例えば、重鎖中のＣＤＲＨ１の３５Ａ、３５Ｂ）。或いは、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７））によれば、軽鎖可変ドメイン中では、ＦＲは典型的にはおよそ残基０〜２５（ＦＲＬ１）、３３〜４９（ＦＲＬ２）５３〜９０（ＦＲＬ３）、及び９７〜１０９（ＦＲＬ４）に相当し、及び重鎖可変ドメイン中では、ＦＲは典型的にはおよそ残基０〜２５（ＦＲＨ１）、３３〜５２（ＦＲＨ２）、５６〜９５（ＦＲＨ３）、及び１０２〜１１３（ＦＲＨ４）に相当する。
【００６３】
抗体の定常ドメイン（Ｆｃ）は抗体と抗原の結合には直接関与しないが、そうではなくて、例えばＦｃ受容体（ＦｃＲ）との相互作用による抗体依存性細胞傷害性における抗体の関与などの、様々なエフェクター機能を示す。Ｆｃドメインは、患者への投与後循環中に、抗体の生物学的利用能を増大することもできる。ヒトＦｃドメインとマウスＦｃドメインの置換もＨＡＭＡ副反応を減らすことができる。
【００６４】
その重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを異なるクラスに割り当てることができる。５つの主なクラスの免疫グロブリン、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分けることができる。異なるクラスの免疫グロブリンに相当する重鎖定常ドメイン（Ｆｃ）はそれぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元形状はよく知られている。
【００６５】
任意の脊椎動物種由来の抗体の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ又は（「κ」）及びラムダ又は（「λ」）と呼ばれる２つの明らかに異なる型の１つに割り当てることができる。
【００６６】
用語「抗体の抗原結合部分」、「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」、「抗体断片」又は「抗体の機能的断片」は、本明細書で交互に使用して、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ又は複数の断片を指す。このような用語内に含まれる抗体断片の非制限的な例には、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合した２つのＦａｂ断片を含有する二価断片、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の１アームのＶＬ及びＶＨドメインを含有するＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインを含有するｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４  ５４６）、及び（ｖｉ）単離ＣＤＲがあるが、これらだけには限られない。この定義中に更に含まれるのは、一本の重鎖と一本の軽鎖を含む「２分の１」抗体である。ダイアボディなどの他の型の単鎖抗体も、本明細書に包含される。
【００６７】
「Ｆ（ａｂ’）２」及び「Ｆａｂ’」成分は、ペプシン及びパパインなどのプロテアーゼでＩｇを処理することによって生成することができ、２本の重鎖それぞれ中のヒンジ領域間に存在するジスルフィド結合付近の免疫グロブリンを消化することによって作製される抗体断片を含む。例えば、パパインは２本の重鎖それぞれ中のヒンジ領域間に存在するジスルフィド結合上流のＩｇＧを切断して、その中においてＶＬ及びＣＬ（軽鎖定常領域）で構成される軽鎖と、重鎖の定常領域中のＶＨ及びＣＨγ１（γ１）領域で構成される重鎖断片とがジスルフィド結合を介してそれらのＣ末端領域で結合した、２つの相同的抗体断片を作製する。この２つの相同的抗体断片のそれぞれがＦａｂ’と呼ばれる。ペプシンも２本の重鎖それぞれ中のヒンジ領域間に存在するジスルフィド結合下流のＩｇＧを切断して、その中で２つの前述のＦａｂ’がヒンジ領域で結合した断片よりわずかに大きい抗体断片を作製する。この抗体断片はＦ（ａｂ’）２と呼ばれる。
【００６８】
Ｆａｂ断片は、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第一定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。抗体ヒンジ領域由来の１つ又は複数のシステイン（単数又は複数）を含めた重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端に数個の残基を加えることによって、Ｆａｂ’断片はＦａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、その中で定常ドメインのシステイン残基（単数又は複数）が遊離チオール基を有するＦａｂ’に関する本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、本来はその間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも知られている。
【００６９】
「Ｆｖ」は、完全抗原認識及び抗原結合部位を含有する抗体断片を指す。この領域は、強力な、非共有又は共有結合状態の１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる（ジスルフィド結合したＦｖ’は当技術分野で記載されている。Ｒｅｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４：１２３９−１２４５）。それぞれの可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を画定するのは、この形状中である。集合的に、ＶＨ鎖及びＶＬ鎖のそれぞれ由来の１つ又は複数のＣＤＲの組合せは、抗体に抗原結合特異性を与える。例えばＣＤＲＨ３及びＣＤＲＬ３は、レシピエント抗体又はその抗原結合断片のＶＨ鎖及びＶＬ鎖に移すと、抗体に抗原結合特異性を与えるのに十分である可能性があること、及びＣＤＲのこの組合せは、本明細書に記載する任意の技法を使用して結合、親和性などに関して試験することができることは、例えば理解されよう。１つの可変ドメイン（又は、抗原に特異的なわずか３つのＣＤＲを含むＦｖの半分）でさえ、第二の可変ドメインと組合せたときよりおそらく低い親和性ではあるが、抗原を認識しそれと結合する能力を有する。更に、Ｆｖ断片の２ドメイン（ＶＬ及びＶＨ）は別個の遺伝子によってコードされるが、ＶＬ及びＶＨ領域が対になり一価分子を形成する一本のタンパク質鎖としてそれらを作製することができる合成リンカーによる組換え法を使用して、それらを接合することができる（単鎖Ｆｖとして知られる（ｓｃＦｖ）；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３−４２６；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；及びＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：７７８）。このようなｓｃＦｖｓも、用語抗体の「抗原結合部分」内に包含されると考えられる。特異的ｓｃＦｖの任意のＶＨ及びＶＬ配列をＦｃ領域ｃＤＮＡ又はゲノム配列と結合させて、完全Ｉｇ（例えばＩｇＧ）分子又は他のアイソタイプをコードする発現ベクターを作製することが可能である。ＶＨ及びＶＬは、タンパク質化学又は組換えＤＮＡ技術のいずれかを使用して、Ｆａｂ、Ｆｖ又はＩｇの他の断片の作製において使用することもできる。
【００７０】
「単鎖Ｆｖ」又は「ｓＦｖ」抗体断片は抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは一本のポリペプチド鎖中に存在する。いくつかの実施形態では、ＦｖポリペプチドはＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーを更に含み、これはｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成するのを可能にする。ｓＦｖの総説に関しては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ  ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．  ２６９−３１５（１９９４）を参照。
【００７１】
用語「ＡＶＩＭＥＲ（商標）」は、抗体及び抗体断片と無関係であり、いくつかのモジュラー、及びＡドメイン（クラスＡモジュール、相補型反復、又はＬＤＬ受容体クラスＡドメインとも呼ばれる）と呼ばれる再利用可能結合ドメインで構成される、ヒト起源クラスの治療用タンパク質を指す。それらは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏエクソンシャッフリング及びファージディスプレイによってヒト細胞外受容体ドメインから開発された（Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１４９３−１４９４；Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２４：２２０）。生成するタンパク質は、１エピトープ結合タンパク質と比較して改善された親和性（いくつかの場合、ナノモル未満）及び特異性を示す可能性がある、多数の独立した結合ドメインを含有することができる。例えば、その各々が参照として全容が本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２００５／０２２１３８４号、同第２００５／０１６４３０１号、同第２００５／００５３９７３及び同第２００５／００８９９３２号、同第２００５／００４８５１２号、及び同第２００４／０１７５７５６号を参照。
【００７２】
知られている２１７ヒトＡドメインのそれぞれは約３５アミノ酸（約４ｋＤａ）を含み、これらのドメインは平均５アミノ酸長のリンカーによって隔てられている。天然Ａドメインは、カルシウム結合及びジスルフィド形成によって主に仲介される均一な安定構造に、迅速且つ効率よくフォールディングする。わずか１２アミノ酸の保存足場モチーフは、この共通構造に必要とされる。最終結果は、そのそれぞれが別個の機能を示す多数のドメインを含有する１タンパク質鎖である。タンパク質のそれぞれのドメインは独立して結合し、それぞれのドメインのエネルギー貢献は付加的である。これらのタンパク質は、親和性多量体からＡＶＩＭＥＲ（商標）と呼ばれた。
【００７３】
用語「ダイアボディ」は２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、それらの断片は同じポリペプチド鎖中で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と結合した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬ）。同じ鎖上において２ドメイン間で対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインを別の鎖の相補ドメインと対形成させ、２つの抗原結合部位を作製する。ダイアボディは、例えばＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４  ６４４８（１９９３）中により完全に記載される。
【００７４】
抗原結合ポリペプチドは、例えばラクダ及びサメ由来の抗体などの重鎖二量体も含む。ラクダ及びサメ由来の抗体は、Ｖ様ドメインとＣ様ドメイン（いずれも軽鎖を有さない）の二本鎖のホモ二量体対を含む。ラクダにおける重鎖二量体ＩｇＧのＶＨ領域は軽鎖と疎水性相互作用する必要はないので、軽鎖と通常接触する重鎖中の領域はラクダ中では親水性アミノ酸残基に変わる。重鎖二量体ＩｇＧのＶＨドメインはＶＨＨドメインと呼ばれる。サメＩｇ−ＮＡＲは、１つの可変ドメイン（Ｖ−ＮＡＲドメインと呼ばれる）及び５つのＣ様定常ドメイン（Ｃ−ＮＡＲドメイン）のホモ二量体を含む。ラクダでは、抗体レパートリーの多様性は、ＶＨ又はＶＨＨ領域中のＣＤＲ１、２、及び３によって決定する。ラクダＶＨＨ領域中のＣＤＲ３は、その比較的長い長さ、平均１６アミノ酸によって特徴付けられる（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ７（９）：１１２９）。これは、多くの他種の抗体のＣＤＲ３領域と対照的である。例えば、マウスＶＨのＣＤＲ３は平均９アミノ酸を有する。ラクダの可変領域のｉｎ  ｖｉｖｏ多様性を維持するラクダ由来抗体可変領域のライブラリーは、例えば米国特許出願第２００５００３７４２１号中に開示された方法によって作製することができる。
【００７５】
「キメラ」型の非ヒト（例えばマウス）抗体は、非ヒトＩｇ由来の最小配列を含有するキメラ抗体を含む。大部分に関して、キメラ抗体は、その中で少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれが、マウスＦｃの代わりに挿入されたマウス抗体である。詳細に関しては、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２）を参照。
【００７６】
本明細書で使用する用語「モノクローナル抗体」は、実質的に相同な抗体の集団から得られる抗体を指す。即ち、その集団を含む個々の抗体は、微量で存在し得る考えられる天然突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、１つの抗原部位を対象とする。更に、異なる抗原決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を含む可能性がある、従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は抗原上の１つの抗原決定基を対象とする。修飾語「モノクローナル」は、実質的に相同な抗体の集団から得られる抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするとは解釈すべきでない。例えば、モノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができ、又は組換えＤＮＡ法によって作製することができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）。特定の実施形態では、例えばＣｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）中に記載された技法を使用して、ファージ抗体ライブラリーからモノクローナル抗体を単離することができる。
【００７７】
飽和硫酸アンモニウム沈殿、ユーグロビン沈殿法、カプロン酸法、カプリル酸法、イオン交換クロマトグラフィー（ＤＥＡＥ又はＤＥ５２）、又は以下でより詳細に記載するように抗Ｉｇカラム又はプロテインＡ、Ｇ若しくはＬカラムを使用する親和性クロマトグラフィーによって、前述のように培養上清又は腹水から抗体を単離し精製することができる。
【００７８】
免疫グロブリン分子の構築時に、可変領域又はその一部分を、１つ又は複数の定常領域又はその一部分と融合、結合、又は他の場合は接合させて、本明細書に記載する任意の抗体を産生することが可能である。これは、分子クローニング技法又は分子をコードする核酸の直接合成だけには限らないが、これらを含めた、当技術分野で知られている様々な方法で実施することができる。
【００７９】
本明細書で使用する「免疫反応物質」は、アミノ酸残基の配列（「結合部位」又は「エピトープ」）に特異的である、ただし他のペプチド／タンパク質と交差反応し、それらがヒトへの投与用途のために製剤化されるレベルで毒性ではない場合、結合剤、抗体又はその断片を指す。用語「結合」は、塩架橋及び水架橋などの相互作用及び任意の他の従来結合手段を含めた、例えば生理条件下での共有、静電気、疎水性、並びにイオン及び／又は水素結合相互作用による、２分子間の直接結合を指す。用語「優先的に結合」は、結合剤が、それが無関係なアミノ酸配列と結合するより高い親和性で、結合部位と結合することを意味する。親和性は、無関係なアミノ酸配列に対する結合剤の親和性より、少なくとも１倍高い、少なくとも２倍高い、少なくとも３倍高い、少なくとも４倍高い、少なくとも５倍高い、少なくとも６倍高い、少なくとも７倍高い、少なくとも８倍高い、少なくとも９倍高い、少なくとも１０倍高い、少なくとも２０倍高い、少なくとも３０倍高い、少なくとも４０倍高い、少なくとも５０倍高い、少なくとも６０倍高い、少なくとも７０倍高い、少なくとも８０倍高い、少なくとも９０倍高い、少なくとも１００倍高い、又は少なくとも１０００倍高い可能性がある。用語「免疫反応性」と「優先的に結合」は本明細書で交互に使用する。
【００８０】
本明細書で使用する用語「親和性」は、２つの作用物質の可逆的結合に関する平衡定数を指し、Ｋｄとして表す。エピトープに対する抗体の親和性などの、リガンドに対する結合タンパク質の親和性は、例えば約１００ナノモル（ｎＭ）〜約０．１ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１ピコモル（ｐＭ）、又は約１００ｎＭ〜約１フェトモル（ｆＭ）であってよい。本明細書で使用する用語「親和力」は、希釈後の解離に対する２つ以上の作用物質の複合体の耐性を指す。見かけの親和性は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）又は当業者が精通している任意の他の技法などの方法によって決定することができる。親和力は、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ解析又は当業者が精通している任意の他の技法などの方法によって決定することができる。
【００８１】
「エピトープ」は、抗体の可変領域結合ポケットとの結合相互作用を形成することができる、抗原又は他のマクロ分子のその部分を指す。このような結合相互作用は、１つ又は複数のＣＤＲの１つ又は複数のアミノ酸残基との分子間接触として現れる可能性がある。抗原結合は、例えば、ＣＤＲ３若しくはＣＤＲ３対、又はいくつかの場合、ＶＨ及びＶＬ鎖の最大６個全てのＣＤＲの相互作用を含み得る。エピトープは直線状ペプチド配列（即ち「連続的」）であってよく、又は非隣接アミノ酸配列（即ち、「立体的」又は「不連続」）で構成されてよい。抗体は１つ又は複数のアミノ酸配列を認識することができ、したがってエピトープは２つ以上の異なるアミノ酸配列を画定することができる。抗体によって認識されるエピトープは、当業者によく知られるペプチドマッピング及び配列分析技法によって決定することができる。結合相互作用は、ＣＤＲの１つ又は複数のアミノ酸残基との分子間接触として現れる。ＴＲＣ１０５は、米国特許第５，９２８，６４１号、同第６，２００，５６６号、同第６，１９０，６６０号、及び同第７，０９７，８３６号中でＹ４−２Ｆ１又はＳＮ６ｊとして記載されたマウス抗体と同じアミノ酸配列である、マウス抗体である。Ｙ４−２Ｆ１及びＳＮ６ｊ、及びしたがってＴＲＣ１０５によって認識されるエピトープは以前に同定されている。
【００８２】
用語「特異的」は、抗体が、その抗体によって認識されるエピトープを含有する抗原以外の分子といかなる有意な結合も示さない状況を指す。この用語は、例えば抗原結合ドメインが、いくつかの抗原によって保有される特定のエピトープに特異的である場合にも適用可能であり、その場合抗体はそのエピトープを保有する様々な抗原と結合することが可能である。用語「優先的に結合」又は「特異的に結合」は、抗体が、それが無関係なアミノ酸配列と結合するより高い親和性でエピトープと結合すること、及びエピトープを含有する他のポリペプチドと交差反応する場合、それらがヒトへの投与用途のために製剤化されるレベルでは毒性ではないことを意味する。一態様では、このような親和性は、無関係なアミノ酸配列に対する抗体の親和性より、少なくとも１倍高い、少なくとも２倍高い、少なくとも３倍高い、少なくとも４倍高い、少なくとも５倍高い、少なくとも６倍高い、少なくとも７倍高い、少なくとも８倍高い、少なくとも９倍高い、少なくとも１０倍高い、少なくとも２０倍高い、少なくとも３０倍高い、少なくとも４０倍高い、少なくとも５０倍高い、少なくとも６０倍高い、少なくとも７０倍高い、少なくとも８０倍高い、少なくとも９０倍高い、少なくとも１００倍高い、又は少なくとも１０００倍高い。用語「免疫反応性」、「結合」、「優先的に結合」及び「特異的に結合」は本明細書で交互に使用する。用語「結合」は、塩架橋及び水架橋などの相互作用、及び任意の他の従来結合手段を含めた、例えば生理条件下での共有、静電気、疎水性、並びにイオン及び／又は水素結合相互作用による、２分子間の直接結合を指す。
【００８３】
（「実質的に純粋」と交互に使用する）「単離」は、ポリペプチドに適用するとき、本来又は操作によって、（ｉ）発現ベクターの一部分の発現産物として宿主細胞中に存在する、又は（ｉｉ）タンパク質又はそれが本来結合する化学成分以外の他の化学成分と結合した、又は（ｉｉｉ）本来存在しない、例えば、タンパク質が本来見られない形状であるように、タンパク質に少なくとも１つの疎水性成分を追加、又は付加することによって化学的に操作したタンパク質である、ポリペプチド又はその一部分を意味する。「単離」によって、（ｉ）化学的に合成された、又は（ｉｉ）宿主細胞中で発現され結合及び汚染タンパク質から精製されたタンパク質を更に意味する。この用語は、それらが本来共に存在した他のタンパク質及び核酸から分離されたポリペプチドを一般に意味する。典型的には、それを精製するために使用される抗体又はゲルマトリクス（ポリアクリルアミド）などの物質からも、ポリペプチドは分離される。
【００８４】
血管新生に関する用語
本明細書で使用する用語「血管新生阻害」、「血管新生を阻害する」又は「抗血管新生」は血管発生の阻害を含み、新血管形成の程度、量、又は割合の低下に影響を与えることを意味するものとする。組織中の内皮細胞増殖若しくは移動の程度、量、又は割合の低下に影響を与えることは、血管新生阻害の具体例である。
【００８５】
用語「血管新生阻害組成物」は、内皮細胞移動、増殖、血管形成などの血管新生仲介プロセスを阻害し、その後既存の血管からの新しい血管の発生の阻害をもたらし、結果として血管新生依存的状態に影響を与える組成物を指す。
【００８６】
本明細書で使用する用語「血管新生依存的状態」は、血管新生又は血管発生のプロセスが病的状態を維持若しくは増大し、又は正常な生理的プロセスに有利に影響を与える状態を意味するものとする。したがって、血管新生が病的状態を維持する血管新生依存的状態の治療は疾患の鎮静をもたらすことが可能であり、一方で血管新生が正常な生理的プロセスに有利に影響を与える血管新生依存的状態の治療は、例えば正常プロセスの向上をもたらす可能性がある。
【００８７】
血管新生とは、既存の毛細管又は後毛細管細静脈からの新しい血管の形成である。血管発生は、内皮細胞前駆体である血管芽細胞から生じる新しい血管の形成が原因である。いずれのプロセスも新しい血管の形成をもたらし、用語血管新生依存的状態の意味の中に含まれる。本明細書で使用する用語「血管新生」は、血管発生から生じる血管新生、及び既存の血管、毛細管及び細静脈の枝分かれ又は簇出から生じる血管新生などの、血管のｄｅ  ｎｏｖｏ形成を含むものとする。血管新生は、ＡＬＫ１シグナル伝達及び関連Ｓｍａｄ１／５／８リン酸化及び／又はシグナル伝達の誘導も含むことができる。ＣＤ１０５もＡＬＫ１シグナル伝達経路に関与することが知られており、したがってこれも血管新生の意味の中に含まれる。
【００８８】
腫瘍開始ＣＤ１０５＋細胞集団はヒト腎臓癌中で発見されている。ＣＤ１０５＋細胞は、他の腫瘍型中に存在する癌幹細胞に関して以前に記載された腫瘍幹細胞の特徴を示した。観察されたＣＤ１０５＋細胞はクローン原性であり、幹細胞マーカーを発現し、分化マーカーを欠いており、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで上皮及び内皮細胞型に分化する可能性があり、ｉｎ  ｖｉｖｏで連続移植可能な腫瘍を生成する可能性がある。これらの腫瘍は、間葉系マーカーを発現するクローンに由来するにもかかわらず腫瘍源としての上皮癌であり、ＣＤ１０５＋腫瘍原性集団の維持によって、及び非腫瘍原性の分化したＣＤ１０５集団の存在によって特徴付けられる。
【００８９】
「宿主の免疫応答の誘導」は、患者が疾患の兆候又は症状の緩和又は低減を経験することを意味し、具体的には、生存期間の延長を非制限的に含む。
【００９０】
本明細書で使用する用語「増殖障害」及び「増殖状態」は、異常又は望ましくない増殖によって特徴付けられる任意の病的又は非病的生理状態を意味する。用語「細胞増殖障害」及び「細胞増殖状態」は、異常又は望ましくない細胞増殖によって特徴付けられる任意の病的又は非病的生理状態を意味し、且つ望ましくない又は望まない細胞増殖又は細胞生存（例えば、欠損アポトーシスが原因）によって特徴付けられる状態、欠損又は異常又は欠損アポトーシスによって特徴付けられる状態、及び異常又は望ましくない又は望まない細胞生存によって特徴付けられる状態を含む。用語「分化障害」は、異常又は欠損分化によって特徴付けられる任意の病的又は非病的生理状態を意味する。
【００９１】
治療の影響を受けやすい増殖又は分化障害は、異常又は望ましくない細胞数、細胞増殖又は細胞生存によって特徴付けられる、良性及び新生物性の疾患状態を含む。したがって、このような障害又は状態は疾患状態を構成する可能性があり、全ての型の癌増殖又は発癌プロセス、転移性組織又は悪性形質転換細胞、組織、又は器官を含む。
【００９２】
増殖又は分化障害を含む細胞は細胞塊に凝集する、又は散在する可能性がある。「非固形腫瘍」は、リンパ腫、ミエローマ及び白血病、又は本来広汎性の新形成などの、造血系の新形成を指す。それらは典型的には固形塊を形成しないからである。白血病の個々の例には、例えば、急性及び慢性リンパ性白血病、骨髄芽球性及び多発性骨髄腫がある。
【００９３】
用語「固形腫瘍」は、典型的には１つに凝集し塊を形成する新形成又は転移を指す。このような障害は、ほぼ任意の細胞又は組織型に影響を与える可能性がある新生物又は癌、例えば癌腫、肉腫、メラノーマ、転移性障害又は造血系新形成障害を含む。転移性腫瘍は、乳房、肺、甲状腺、頭頸部、脳、リンパ、胃腸（口、食道、胃、小腸、結腸、直腸）、尿生殖器官（子宮、卵巣、子宮頸部、膀胱、睾丸、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、筋肉、皮膚などだけには限られないが、これらを含めた多数の原発性腫瘍型から生じる可能性がある。
【００９４】
癌腫は上皮又は内分泌組織の悪性腫瘍を指し、呼吸系癌腫、胃腸系癌腫、尿生殖器系癌腫、睾丸癌腫、乳癌腫、前立腺癌腫、内分泌系癌腫、及びメラノーマを含む。例示的な癌腫には、子宮頸部、肺、前立腺、乳房、頭頸部、結腸、肝臓及び卵巣から形成される癌腫がある。この用語は、例えば癌腫及び肉腫組織で構成される悪性腫瘍を含む、癌肉腫も含む。腺癌は、腺組織の癌腫、又は腫瘍が腺様構造を形成する癌腫を含む。
【００９５】
治療する癌性組織は、例えば、異常なレベルのＣＤ１０５を発現する内皮組織又は形質転換細胞である。本明細書で使用する用語「形質転換細胞」は、無制限な増殖の状態に自然に転換されている細胞を指し、即ちそれらは、培養中に無限数の分裂によって増殖する能力を獲得している。形質転換細胞は、それらの増殖制御の消失に関して新形成、退形成及び／又は過形成などの用語によって特徴付けることができる。本発明の目的で、用語「悪性哺乳動物細胞の形質転換した表現型」及び「形質転換した表現型」は、哺乳動物細胞の細胞形質転換、不死化、形態的又は増殖形質転換、及び細胞培養中の長期増殖、半固形培地中での増殖、又は免疫不全若しくは同系動物中での発癌性増殖によって検出される発癌性と関係がある以下の表現型形質のいずれかだけには限られないが、これらを含むものとする。
【００９６】
用語「腫瘍細胞抗原」は、無関係な腫瘍細胞、正常細胞、又は正常体液より、腫瘍細胞上又は体液中に多量に存在する抗原として本明細書では定義する。抗原の存在は当業者に知られている任意の数のアッセイによって試験することができ、ＥＬＩＳＡアッセイ、ラジオイムノアッセイ、又はウエスタンブロットなどの、抗体を用いた陰性及び／又は陽性選択を非制限的に含む。
【００９７】
用語「アポトーシス」又は「プログラムされた細胞死」は、それによって望まない若しくは無用な細胞が、発生及び他の正常な生物学的プロセス中に除去される生理プロセスを指す。アポトーシスは、正常な生理条件下で起こる細胞死の一形態であり、細胞は自己の消滅への積極的な参加者である（「細胞の自殺」）。アポトーシスは、正常な細胞ターンオーバー及び組織ホメオスタシス、胚発生、免疫寛容の誘導及び維持、神経系の発生及びエンドグリン依存性組織萎縮中に最も頻繁に見られる。アポトーシスを経る細胞は、特徴的な形態的及び生化学的特徴を示す。これらの特徴には、クロマチン凝集、核及び細胞質濃縮、リボソーム、形態学的に完全なミトコンドリア及び核物質を含有する膜結合小胞（アポトーシス体）への細胞質及び核の分配がある。ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、これらのアポトーシス体は、マクロファージ、樹状細胞又は隣接上皮細胞により迅速に認識され貪食される。ｉｎ  ｖｉｖｏでアポトーシス細胞を除去するのに有効なこのメカニズムのため、炎症応答が誘導されることはない。ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、アポトーシス体及び残りの細胞断片は、結局膨張し最終的に溶解する。このｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞死の末期は「第二次壊死」と呼ばれている。ＤＮＡ断片化、アネキシンＶの露出、カスパーゼの活性化、シトクロームｃの放出などのような当業者に知られている方法によって、アポトーシスを測定することができる。死を誘導されている細胞は、本明細書では「アポトーシス細胞」と呼ぶ。
【００９８】
「アポトーシス誘導剤」は、アポトーシス／プログラムされた細胞死を誘導すると本明細書では定義し、例えば、細胞、例えば腫瘍細胞又は内皮細胞がプログラムされた細胞死を経るように誘導する、抗ＣＤ１０５抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、照射、化学療法剤又は受容体リガンド剤を含む。例示的なアポトーシス誘導剤は以下でより詳細に記載する。
【００９９】
アポトーシスは、標準的なアネキシンＶアポトーシスアッセイを使用して試験することができる。ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ−３細胞を６ウエルプレート（ＮＵＮＣ）中で増殖させ、４〜４８時間アンタゴニスト（又は別の抗癌剤と併用して）で照射又は処理し、洗浄し、１時間アネキシンＶ−ＦＩＴＣ（ＢＤ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で染色する。細胞はフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ）によって分析し、ヨウ化プロピジウムで対比染色し、フローサイトメーターで再度分析する。
【０１００】
抗体を作製及び発現する方法
キメラ免疫グロブリンが遺伝子操作によって構築されている。以前に記載された大部分のキメラ免疫グロブリンは、マウスモノクローナル抗体由来のＶＨ及びＶＬ並びにヒト抗体のＣＬ及びＦｃを含んでいる。本明細書に記載する任意のアイソタイプ由来のＦｃ領域を使用することができる。本明細書に記載するように、キメラは、それによって軽鎖可変領域及び／又は重鎖可変鎖のフレームワーク中の限られた数のアミノ酸が修飾されて、抗体の親和性が増大する基準も含み得る。
【０１０１】
一般にキメラ抗体は、ヒト療法における用途に関して、マウス抗体に優るいくつかの考えられる利点を有する。抗体のエフェクター部分はヒトであるので、ヒト免疫系の他の部分とより良く相互作用する（例えば、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）又は抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）によってより効率よく標的細胞を破壊する）と考えられる。更に、ヒト免疫系は外来としてキメラ抗体の定常領域を認識しないはずであり、したがって、このような注射抗体に対する抗体応答は、典型的には、全く外来のマウス抗体に対する応答未満であるはずである。最後に、マウス抗体は、ヒト抗体の半減期よりはるかに短いヒト循環中の半減期を有することが知られている。おそらくキメラ抗体は、本来存在するヒト抗体と更に類似した半減期を有する可能性があり、より少量で低頻度の投与を与えることを可能にする。
【０１０２】
抗体の高い親和性が望ましいとき、抗体のＣＤＲ内の残基を、他のアミノ酸で更に置換することができる。典型的には、ＣＤＲ中の４個を超えないアミノ酸残基が変わり、最も典型的には、重鎖ＣＤＲ２を除いたＣＤＲ中の２個を超えない残基が変わり、この場合１０個もの多くの残基が変わる可能性がある。親和性の変化は、本明細書に記載する方法などの従来の方法（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）によって測定することができる。
【０１０３】
抗体は、当技術分野で知られている従来の技法を使用して構築及び産生することができる。更に、特に高レベルの発現ベクターを利用するとき、組換え調製抗体をしばしば多量に産生することができる。
【０１０４】
獣医学的用途のため、非ヒトＦｃを使用することによって、非ヒト（例えば、霊長類、ウシ、ウマ、ブタなど）への投与用に抗体を合成することができる。
【０１０５】
制限エンドヌクレアーゼ部位において組換え技法を使用して、アミノ酸配列をコードするヌクレオチドを修飾するために、本明細書で提供し組み込む技法などの当技術分野で認められる技法を使用することができる。
【０１０６】
発現用に、発現系は、選択可能マーカーとしてグルタミンシンテターゼ遺伝子を使用してＧＳ系（Ｌｏｎｚａ）を利用する発現系である。簡単に言うと、選択可能マーカーとしてグルタミンシンテターゼ遺伝子を使用しＧＳ系（Ｌｏｎｚａ）を使用して、エレクトロポレーション（２５０Ｖ）によりＣＨＯ細胞においてトランスフェクションを実施する。野生型ＣＨＯ細胞を、１０％透析ウシ胎児血清（ＦＣＳ）及び２ｍＭグルタミンを含有するＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）中で増殖させる。６×１０７個のＣＨＯ細胞を、エレクトロポレーションによって３００μｇの線状ＤＮＡでトランスフェクトする。エレクトロポレーション後、細胞はグルタミンを含むＤＭＥＭ中に再縣濁し、３６×９６ウエルプレート（５０μｌ／ウエル）に平板培養し、５％ＣＯ２中で３７℃においてインキュベートする。翌日、１５０μｌ／ウエルの選択培地（グルタミンを含まないＤＭＥＭ）を加える。約３週間後、陰性対照として無関係な抗体を使用して、ＥＬＩＳＡ（以下参照）によってコロニーをスクリーニングする。２０μｇ／ｍｌより多く産生する全てのコロニーは２４ウエルプレート、次に二連のＴ２５フラスコに増殖させる。
【０１０７】
高レベルの産生用に、広く使用される哺乳動物発現系は、デヒドロ葉酸レダクターゼ欠損（「ｄｈｆｒ−」）チャイニーズハムスター卵巣細胞によってもたらされる遺伝子増幅手順を利用する発現系である。この系は、テトラヒドロ葉酸へのデヒドロ葉酸の転換を触媒するＤＨＦＲ酵素をコードする、デヒドロ葉酸レダクターゼ「ｄｈｆｒ」遺伝子に基づく。高い産生を得るために、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を、機能性ＤＨＦＲ遺伝子、及び所望のタンパク質をコードする遺伝子を含有する発現ベクターでトランスフェクトする。この場合、所望のタンパク質は組換え抗体重鎖及び／又は軽鎖である。
【０１０８】
競合ＤＨＦＲ阻害剤メトトレキサート（ＭＴＸ）の量を増大することによって、ｄｈｆｒ遺伝子を増幅することにより、組換え細胞は耐性が発達する。標準的な場合、利用する増幅単位はｄｈｆｒ遺伝子のサイズよりはるかに大きく、結果として抗体重鎖が同時に増幅される。
【０１０９】
抗体鎖などのタンパク質の大規模産生が望ましいとき、利用する細胞の発現レベルと安定性の両方を考慮に入れる。長期培養中、組換えＣＨＯ細胞集団は、それらが片親クローンに由来するときでさえ、増幅中にそれらの特異的抗体産生に関する均一性を失う。
【０１１０】
本出願は、本明細書に記載する抗体又はその一部分をコードする単離ポリヌクレオチド（核酸）、このようなポリヌクレオチドを含有するベクター、並びにポリペプチドにこのようなポリヌクレオチドを転写及び翻訳するための宿主細胞及び発現系を提供する。
【０１１１】
本出願は、前述の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むプラスミド、ベクター、転写又は発現カセットの型の構築物も提供する。
【０１１２】
本出願は、前述の１つ又は複数の構築物を含む組換え宿主細胞も提供する。本明細書に記載する任意の抗体をコードする核酸は本出願の一態様を形成し、そのコード核酸からの発現を含む抗体の産生法も同様である。適切な条件下で核酸を含有する組換え宿主細胞を培養することによって、発現を好都合に実施することができる。発現による産生後、抗体又はその一部分は、任意の適切な技法を使用して単離及び／又は精製することができ、次いで必要に応じて使用することができる。
【０１１３】
特異的抗体（又はその一部分）をコードする核酸分子及び本明細書に記載するそれらを含有するベクターは、例えばそれらの本来の環境から、実質的に純粋又は均質な形態で、単離及び／又は精製して提供することができる。核酸の場合は、必要とされる機能を有するポリペプチドをコードする配列以外の、元の核酸又は遺伝子を含まない又は実質的に含まない。核酸配列はＤＮＡ又はＲＮＡを含むことができ、完全又は部分的に合成状態であってよい。精製の方法は当技術分野でよく知られている。
【０１１４】
様々な異なる宿主細胞中でのポリペプチドのクローニング及び発現のための系はよく知られている。適切な宿主細胞は、細菌、哺乳動物細胞、酵母及びバキュロウイルス系を含む。異種ポリペプチドの発現に関して当技術分野で利用可能な哺乳動物細胞系には、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、ＮＳ０マウスミエローマ細胞及びその他多くがあるが、これらだけには限られない。
【０１１５】
広く様々な単細胞宿主細胞もＤＮＡ配列の発現において有用である。これらの宿主は、よく知られている真核生物及び原核生物宿主、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）の株など、酵母などの真菌、及びＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＳＰ２／０、Ｒｌ．ｌ、Ｂ−Ｗ及びＬ−Ｍ細胞、アフリカミドリザル腎臓細胞（例えば、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、及びＢＭＴ１０）などの動物細胞、昆虫細胞（例えばＳｆ９）、並びに組織培養中のヒト細胞及び植物細胞を含む。
【０１１６】
大腸菌などの原核生物細胞中での抗体又はその一部分の発現は、当技術分野で十分確立している。総説に関しては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ａ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ９：５４５−５５１（１９９１）を参照。
【０１１７】
培養中の真核生物細胞中での発現も、本明細書に記載する抗体の産生に関する選択肢として当業者には利用可能である。最新の総説に関しては、例えば、その各々が参照として全容が本明細書に組み込まれる、Ｒａｆｆ，Ｍ．Ｅ．（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．４：５７３−５７６；Ｔｒｉｌｌ  Ｊ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ６：５５３−５６０を参照。
【０１１８】
プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子及び必要に応じて他の配列を含めた適切な制御配列を含有する、適切なベクターを選択又は構築することができる。ベクターは、必要に応じて、プラスミド、ウイルス、例えばファージ、又はファージミドであってよい。更なる詳細に関しては、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ：２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照。例えば核酸構築物の調製において核酸を操作するための、多くの知られている技法及びプロトコール、突然変異誘発、配列決定、細胞中へのＤＮＡの導入及び遺伝子発現、及びタンパク質の分析は、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９２中に詳細に記載される。Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌの方法の開示は参照として全容が本明細書に組み込まれ、当技術分野でよく知られている。
【０１１９】
したがって、更なる態様は、本明細書で開示する核酸を含有する宿主細胞を提供する。別の更なる態様は、宿主細胞にこのような核酸を導入することを含む方法を提供する。導入は任意の利用可能な技法を利用することができる。真核生物細胞に関して、適切な技法は、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、レトロウイルス又は他のウイルス、例えばワクシニア、又は昆虫細胞用にバキュロウイルスを使用するリポソーム仲介トランスフェクション及び形質導入を含むことができる。細菌細胞に関して、適切な技法は、例えば、バクテリオファージを使用する、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション及びトランスフェクションを含むことができる。
【０１２０】
例えば遺伝子発現用の条件下で宿主細胞を培養することによって、核酸からの発現を発生又は可能にした後に導入を続けることができる。
【０１２１】
一実施形態では、核酸を宿主細胞のゲノム（例えば染色体）に組み込む。標準的な技法に従いゲノムでの組換えを促進する配列を封入することによって、組込みを促進することができる。Ｉｇエンハンサーを必要に応じて初期化して発現を最大にすることができる。
【０１２２】
本出願は、発現系中で前述の構築物を使用して前述の抗体（又はその一部分）を発現させることを含む方法も提供する。
【０１２３】
本出願は、ＣＤ１０５と結合する抗体をコードする、組換えＤＮＡ分子又はクローン遺伝子、又はその変性変異体、突然変異体、アナログ、又はその断片などの単離核酸にも関する。
【０１２４】
更なる実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその一部分の組換えＤＮＡ分子又はクローン遺伝子の完全ＤＮＡ配列を、適切な宿主中に導入することができる発現制御配列に作動可能に連結させることが可能である。したがって本出願は、抗体のＶＨ、ＶＬ、ＣＬ及び／又はＦｃをコードするＤＮＡ配列を含むクローン遺伝子又は組換えＤＮＡ分子で形質転換した単細胞宿主に広がる。
【０１２５】
別の特徴は、本明細書に開示するＤＮＡ配列の発現である。当技術分野でよく知られているように、ＤＮＡ配列を適切な発現ベクター中の発現制御配列に作動可能に連結させ、その発現ベクターを利用して適切な単細胞宿主を形質転換することによって、ＤＮＡ配列を発現させることが可能である。
【０１２６】
発現制御配列とＤＮＡ配列のこのような作動可能な連結は、当然ながら、すでにＤＮＡ配列の一部ではない場合、ＤＮＡ配列の上流において適切なリーディングフレームで、開始コドン、ＡＴＧを与えることを含む。
【０１２７】
ポリヌクレオチド及びベクターは、単離及び／又は精製型で提供することができる（例えば、必要とされる機能を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド以外の、元のポリヌクレオチドを含まない又は実質的に含まない）。本明細書で使用する、「実質的に純粋」及び「実質的に含まない」は、例えば約２０％以下の異物、約１０％以下の異物、約５％以下の異物、約４％以下の異物、約３％以下の異物、約２％以下の異物、又は約１％以下の異物を含有する溶液又は縣濁液を指す。
【０１２８】
広く様々な宿主／発現ベクターの組合せを、本発明のＤＮＡ配列の発現において利用することができる。有用な発現ベクターは、例えば染色体、非染色体及び合成ＤＮＡ配列のセグメントからなる可能性がある。適切なベクターには、ＳＶ４０及び知られている細菌プラスミドの誘導体、例えば大腸菌プラスミドｃｏｌＥｌ、Ｐｃｒ１、Ｐｂｒ３２２、Ｐｍｂ９及びそれらの誘導体、ＲＰ４などのプラスミド、ファージＤＮＡ、例えばファージλ、例えばＮＭ９８９の多数の誘導体、及び他のファージＤＮＡ、例えばＭ１３及び繊維状単鎖ファージＤＮＡ、酵母プラスミド、２ｕプラスミド又はその誘導体など、真核生物細胞中で有用なベクター、昆虫又は哺乳動物細胞中で有用なベクターなど、プラスミドＤＮＡとファージＤＮＡの組合せに由来するベクター、ファージＤＮＡ又は他の発現制御配列などを利用するように修飾されたプラスミドなどがあるが、これらだけには限られない。
【０１２９】
１つ又は複数のポリヌクレオチド構築物を含む組換え宿主細胞も本明細書で提供する。本明細書で提供する抗体をコードするポリヌクレオチドは本出願の一態様を形成し、１つ又は複数のポリヌクレオチドからの発現を含む抗体の産生法も同様である。例えば、適切な条件下でポリヌクレオチドを含有する組換え宿主細胞を培養することによって、発現を実施することができる。次いで抗体は任意の適切な技法を使用して単離及び／又は精製することができ、必要に応じて使用することができる。
【０１３０】
任意の広く様々な発現制御配列、それと作動可能に連結したＤＮＡ配列の発現を制御する配列をこれらのベクター中で使用して、ＤＮＡ配列を発現させることが可能である。このような有用な発現制御配列には、例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ワクシニア、ポリオーマ又はアデノウイルス、ｌａｃ系、ｔｒｐ系、ＴＡＣ系、ＴＲＣ系、ＬＴＲ系の初期又は後期プロモーター、ファージλの主要オペレーター及びプロモーター領域、ｆｄコートタンパク質の制御領域、３−ホスホグリセレートキナーゼ又は他の解糖系酵素に関するプロモーター、酸性ホスファターゼ（例えばＰｈｏ５）のプロモーター、酵母アルファ接合因子のプロモーター、及び原核生物又は真核生物細胞又はそれらのウイルスの遺伝子の発現を制御することが知られている他の配列、及びそれらの様々な組合せがある。
【０１３１】
全てのベクター、発現制御配列及び宿主が、十分等しく機能して、ＤＮＡ配列を発現するわけではないことは理解されよう。全ての宿主が、同じ発現系で十分等しく機能するわけでもない。しかし当業者は、本出願の範囲から逸脱せずに、過度の実験なしで適切なベクター、発現制御配列及び宿主を選択して、望ましい発現を実施することが可能である。例えばベクターを選択する際に、宿主は考慮しなければならない。ベクターはその中で機能しなければならないからである。ベクターのコピー数、そのコピー数を制御する能力、及び抗体マーカーなどのベクターによってコードされる任意の他のタンパク質の発現も考慮する。当業者は、本出願の範囲から逸脱せずに、適切なベクター、発現制御配列及び宿主を選択して、望ましい発現を実施することが可能である。例えばベクターを選択する際には、宿主を考慮する。ベクターはその中で機能するからである。ベクターのコピー数、そのコピー数を制御する能力、及び抗体マーカーなどのベクターによってコードされる任意の他のタンパク質の発現も考慮することができる。
【０１３２】
本出願は、前述の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、本明細書中の他の箇所に記載するプラスミド、ベクター、転写又は発現カセットの型の構築物も提供する。プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子及び必要に応じて他の配列を含めた適切な制御配列を含有する、適切なベクターを選択又は構築することができる。ベクターは、必要に応じて、プラスミド、ウイルス、例えばファージ、ファージミドなどであってよい。更なる詳細に関しては、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ：２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照。例えば核酸構築物の調製において核酸を操作するための、多くの知られている技法及びプロトコール、突然変異誘発、配列決定、細胞中へのＤＮＡの導入及び遺伝子発現、及びタンパク質の分析は、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９２中に詳細に記載される。Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌの方法及び開示は参照として本明細書に組み込まれる。
【０１３３】
発現制御配列を選択する際に、様々な要因が通常考慮される。これらは、例えば、系の相対的な強さ、その制御能力、及び発現される特定ＤＮＡ配列又は遺伝子との、特に考えられる二次構造に関するその適合性を含む。適切な単細胞宿主は、例えば、選択したベクターとのそれらの適合性、それらの分泌特性、タンパク質を正確にフォールディングするそれらの能力、及びそれらの発酵要件、及び発現されるＤＮＡ配列によってコードされる産物の宿主に対する毒性、及び発現産物の精製し易さを考慮して選択される。
【０１３４】
更なる態様は、本明細書で開示する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を提供する。別の更なる態様は、任意の利用可能な技法によって、宿主細胞にこのような１つ又は複数のポリヌクレオチドを導入することを含む方法を提供する。真核生物細胞に関して、適切な技法は、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、レトロウイルス又は他のウイルス（例えばワクシニア）、又は昆虫用にバキュロウイルスを使用するリポソーム仲介トランスフェクション及び形質導入を含むことができる。細菌細胞に関して、適切な技法は、例えば、バクテリオファージを使用する、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション及びトランスフェクションを含むことができる。
【０１３５】
例えば１つ又は複数のポリヌクレオチドからの１つ又は複数のポリペプチドの発現用の条件下で宿主細胞を培養することによって、１つ又は複数のポリヌクレオチドからの発現を発生又は可能にした後に導入を続けることができる。誘導系を使用することができ、発現は活性剤を加えることによって誘導することができる。
【０１３６】
一実施形態では、ポリヌクレオチドを宿主細胞のゲノム（例えば染色体）に組み込むことができる。標準的な技法に従いゲノムでの組換えを促進する配列を封入することによって、組込みを促進することができる。別の実施形態では、宿主細胞中のエピソームベクター上に核酸を維持する。
【０１３７】
発現系中で前述の構築物を使用して特定ポリペプチドを発現させることを含む方法を、本明細書で提供する。
【０１３８】
これら及び他の要因を考慮して、当業者は、発酵又は大規模動物培養においてＤＮＡ配列を発現する様々なベクター／発現制御配列／宿主の組合せを構築することが可能である。
【０１３９】
抗体又はその一部分をコードするポリヌクレオチドは、クローニングに加えて、又はクローニングではなく、組換えによって／合成によって調製することができる。適切なコドンを用いてポリヌクレオチドを設計することができる。一般に、配列が発現に使用される場合、目的の宿主に好ましいコドンを選択する。完全なポリヌクレオチドは、標準的な方法によって調製した重複オリゴヌクレオチドから構築することができ、完全なコード配列に構築することができる。例えば、Ｅｄｇｅ，Ｎａｔｕｒｅ，２９２：７５６（１９８１）；Ｎａｍｂａｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２３：１２９９（１９８４）；Ｊａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５９：６３１１（１９８４）を参照。
【０１４０】
抗体（又はその一部分）コード核酸と選択したアミノ酸位置変化の同時的取込みは、例えば組換え及び化学合成を含めた、当業者に知られる様々な方法によって実施することができる。
【０１４１】
抗ＣＤ１０５抗体
エンドグリン（ＣＤ１０５）は、１８０ｋＤａのホモ二量体膜貫通タンパク質として細胞表面上で発現される。外部ドメインは高い親和性（５０ｎＭ）でＴＧＦ−β１及び−３アイソフォームと結合し、ＣＤ１０５の膜貫通ドメインと細胞内ドメインはベータグリカンと７１％の配列類似性を共有する。ヒトＣＤ１０５遺伝子は染色体９ｑ３４上に位置し、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを使用して同定され、コード領域は１４のエクソンを含有し、ＴＧＦ−βと結合する能力を有するＣＤ１０５の２つの異なるアイソフォーム（Ｌ及びＳ）が特徴付けされている。６００アミノ酸残基及び１４アミノ酸細胞質尾部からなるＳ−ＣＤ１０５に対して、Ｌ−ＣＤ１０５は６３３アミノ酸残基及び４７アミノ酸残基細胞質尾部からなる。しかし、Ｌ−ＣＤ１０５が主要型である。ＣＤ１０５は内皮細胞中、主にセリン及びスレオニン残基では構成的にリン酸化されており、このリン酸化は細胞内の構成的に活性があるＴＧＦ−βＲＩＩによるものである。ＣＤ１０５とＴＧＦ−βの結合は、タンパク質キナーゼＣ阻害剤で見られる影響と類似した、リン酸化の下方制御をもたらす。ヒトＣＤ１０５アミノ酸配列は、細胞外ドメインの露出領域中に位置するトリペプチドアルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）を含有する。ＲＧＤペプチドは、フィブロネクチン、ビトロネクチン、フォンヴィレブランド因子（ｖＷＦ）、Ｉ型コラーゲン、及びフィブリノゲンなどのＥＣＭタンパク質において見られる重要な認識構造であり、細胞表面インテグリンによって認識される。インテグリン接着は、ホメオスタシス、血栓症、血管新生及び炎症、内皮が重要な役割を果たすプロセスと関係している（Ｄｕｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，１７：９８４−９９２（２００３））。
【０１４２】
ＣＤ１０５は、増殖内皮細胞によって発現されるＴＧＦ−β受容体ファミリーのメンバーである。正常レベルのＣＤ１０５が内皮細胞増殖に必要とされる。ＣＤ１０５の発現は、低酸素誘導因子−１−α（ＨＩＦ−１−α）の生成を介した細胞の低酸素状態によって増大し、アポトーシスから低酸素細胞を保護する。ＣＤ１０５のいくつかの機能はＴＧＦ−βシグナル伝達と関係がある。ＴＧＦ−βは、セリンキナーゼ、受容体Ｉ（ＲＩ）、及び受容体ＩＩ（ＲＩＩ）からなるヘテロ二量体受容体を介してシグナル伝達する。受容体の外部ドメインとＴＧＦ−βの結合は、ＴＧＦ−βＲＩをリン酸化し、したがってＳｍａｄタンパク質などの下流シグナル伝達物質と相互作用することができる細胞質ＲＩＩキナーゼ活性を除去する。ＣＤ１０５はＴＧＦ−β受容体複合体の一部を形成するが、それは細胞表面上で独立して存在することができる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは多くの細胞中で、ＣＤ１０５はＴＧＦ−βシグナル伝達を抑制する。
【０１４３】
ＣＤ１０５は、アクチビンＡ及び骨形成タンパク質（ＢＭＰ）−１０、−９、−７及び−２などの他の増殖因子とも結合する。ＣＤ１０５とＴＧＦ−β又は増殖因子リガンドの結合は少なくとも受容体ＲＩＩの存在を必要とし、それはひとりでにリガンドと結合することはできない。受容体とＣＤ１０５結合が、リガンド自体に対するそれらの親和性を変えることはない。結合によって、ＣＤ１０５の細胞質ドメインはＴＧＦ−βＲＩ及びＴＧＦ−βＲＩＩ、次いでＴＧＦ−βＲＩＩではなくＴＧＦ−βＲＩによってリン酸化され、キナーゼは受容体複合体から解離する。
【０１４４】
ＣＤ１０５の発現はＴＧＦ−βＲＩＩのリン酸化レベルを阻害するが、ＴＧＦ−βＲＩのそれは増大させ、Ｓｍａｄ３ではなくＳｍａｄ２の増大したリン酸化をもたらす。Ｓｍａｄ２は様々な転写因子、コアクチベーター、及び抑制物質と相互作用することができるので、リン酸化したＳｍａｄ２は、遺伝子転写を調節する多重シグナルのインテグレーターとして作用することができる。したがって、ＣＤ１０５はＴＧＦ−βＲＩ及びＴＧＦ−βＲＩＩとの相互作用によってＴＧＦ−β機能を調節し、下流Ｓｍａｄタンパク質のリン酸化を改変する。
【０１４５】
ＣＤ１０５は、ＴＧＦ−β受容体（ＴＧＦ−βＲ）、アクチビン受容体様キナーゼ（ＡＬＫ）及びアクチビン受容体を含めた、ＴＧＦ−βスーパーファミリーの多数のキナーゼ受容体複合体のシグナル伝達を調節するために作用する。ＣＤ１０５の不在下において、ＴＧＦ−β受容体の活性化は、内皮細胞増殖を阻害するＳＭＡＤタンパク質（ＳＭＡＤ２及び３）のリン酸化をもたらす。しかし、ＴＧＦ−βによるＣＤ１０５の活性化は、（ＳＭＡＤ１、５及び８のリン酸化を含めた）ＳＭＡＤタンパク質のリン酸化を調節する。最終結果は、内皮細胞に対するＴＧＦ−β受容体活性化の増殖阻害効果の表れである（図２参照）。驚くべきことではないが、抗ＣＤ１０５抗体又はアンチセンスオリゴヌクレオチドによるＣＤ１０５活性化の防止は、ＴＧＦ−βと共同作用して内皮細胞の増殖を抑制する。
【０１４６】
ＣＤ１０５プロモーターは２．６ｋｂ長であるが、ＴＡＴＡ又はＣＡＡＴ転写開始ボックスは含有しない。しかし、それは２つのＧＣ多量領域、Ｓｐ１、ｅｔｓ、ＧＡＴＡ、ＡＰ−２、ＮＧＦ−β、及びＭａｄのコンセンサスモチーフ、並びにＴＧＦ−β応答エレメントを有する。それにもかかわらず、ＣＤ１０５は比較的制限された細胞分布を有する。基底レベルの転写は、位置−６８にｅｔｓ部位、及びＳｐ１部位を必要とするようであるが、例えば内皮細胞に対する発現の相対的制限は、多数の制御領域、特に−１２９４〜−９３２における領域、及び転写開始部位と非常に近い別の領域と関係があるようである。ＣＤ１０５はＴＧＦ−βによって上方制御され、これは−３７〜−２９におけるＳｐ１部位を必要とし、（ＴＧＦ−βシグナル伝達によって活性化される）Ｓｍａｄｓ３及び／又は４と結合した１つ又は複数の並列した上流ＳＢＥ部位とも関係があることが示されている。低酸素は虚血組織及び腫瘍の一般的な特徴であり、血管内皮細胞（ＥＣ）中でのＣＤ１０５遺伝子発現の強力な刺激物質である。このような効果はＴＧＦ−β１を併用して高まる。上方制御されたＣＤ１０５は、ＥＣ中で低酸素ストレス下において自己防御的役割を果たすことができる。
【０１４７】
血管ＥＣはＣＤ１０５の主な供給源である。血管平滑筋細胞、線維芽細胞、マクロファージ、前Ｂ及び骨髄単球起源の白血病細胞、及び赤血球前駆体を含めた他の細胞型は、ＣＤ１０５を低い程度で発現する。
【０１４８】
ＣＤ１０５は血管新生に関与する。アンチセンス実験は、ＨＵＶＥＣ中でのＣＤ１０５発現の抑制はＴＧＦ−β１と併用してｉｎ  ｖｉｔｒｏ血管新生の顕著な阻害をもたらすことを実証しており、ＣＤ１０５は内皮細胞中では血管新生促進成分であることを示す。血管新生におけるＣＤ１０５の重要な役割の更なる証拠は、ＣＤ１０５ノックアウトマウスに由来する。ＣＤ１０５欠損マウスは、初期胚段階で死をもたらす血管多重欠損及び心多重欠損を示す。ＣＤ１０５欠損マウス中で観察されるいくつかの血管障害は、ＣＤ１０５は胚外脈管構造中の成熟血管の形成に必要とされることを示し、血管新生におけるＣＤ１０５の直接的役割が更に確認される。
【０１４９】
特にエンドグリン又はｅｄｇ−１としても知られるＣＤ１０５は、増殖血管内皮細胞において高レベルで発現されるＩ型ホモ二量体膜糖タンパク質である。したがって、ＣＤ１０５は主に、活性血管新生を経る内皮細胞の増殖関連マーカーである。しかし、正常組織の血管内皮によるＣＤ１０５の限られた発現が存在する可能性がある。ヒトＣＤ１０５は形質転換増殖因子−β（ＴＧＦ−β）と特異的に結合することが知られており、ＣＤ１０５の推定アミノ酸配列はβ−グリカン、一型のＴＧＦ−β受容体に対して強い相同性を有する。
【０１５０】
ＣＤ１０５は腫瘍血管系を減らす抗体ベースの方法における標的となっている。ＣＤ１０５は、内皮及び白血病細胞上の増殖関連抗原であるからである。その発現は腫瘍関連血管内皮中で上方制御され、ＣＤ１０５は血管新生に必要不可欠である。血管新生は、新血管形成をもたらす新しい毛細血管の形成、及び既存の血管系の維持を含む。それは、血管基底膜及び間質性マトリクスの内皮細胞仲介分解、内皮細胞の移動、内皮細胞の増殖、及び内皮細胞による毛細血管ループの形成を含む、一連の連続ステップを含む複雑なプロセスである。
【０１５１】
ＣＤ１０５は、既存の血管系を含み支持する細胞、及び新たな血管系の増殖を促進する、その一部となる細胞において見ることができる。これらの抗体は、ＣＤ１０５と結合しそれによって血管新生を阻害することができ、既存の血管系又は既存の血管系の維持を阻害する、及び／又は小血管の拡張を阻害することができる。ＣＤ１０５を精製するためのその使用以外に、これらの抗体は精製、検出及び診断目的、並びに治療目的で有用である。本明細書で提供する抗体は、様々な状態及び疾患を治療するための医薬品の製剤化、前記状態及び疾患を治療するための方法、及び検出又は診断の方法に使用することができる。本明細書で使用する血管新生は、新たな血管の増殖及び／又は発達（新血管形成とも呼ばれる）、小血管の拡張、過剰又は長期血管増殖、及び既存の血管系の維持を含む。血管新生状態及び疾患は、血管新生に関連する、それによって引き起こされる、又はそれと関係がある疾患及び状態を指す。このような疾患の非制限的な例には、例えば様々な型の癌（原発性腫瘍及び転移）がある。ＣＤ１０５活性を調節しそれによって血管新生を阻害する及び／又は小血管の拡張を阻害するマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）が、ＣＤ１０５に対して産生されている。これらのマウス抗体は、その各々が参照として全容が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，９２８，６４１号、同第６，２００，５６６号、同第６，１９０，６６０号、及び同第７，０９７，８３６号中に記載される。更に、これらの抗体のいくつかのｅｘ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏ有効性が実証されている。ＣＤ１０５と結合するモノクローナル抗体は、ＣＤ１０５調節化合物としての対象である。マウス抗体の治療用途は、しかし実現可能ではない。マウス抗体の投与には、例えばヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）の型での免疫原性を含めた、いくつかの制約があるからである。
【０１５２】
いくつかの抗ＣＤ１０５抗体、特に抗ＣＤ１０５モノクローナル抗体（「ｍＡｂ」）が記載されている。ＭＡｂＳＮ６は、ヒト白血病細胞の細胞膜の糖タンパク質混合物を用いたマウスの免疫処置から作製された抗体である（Ｈａｒｕｔａ  ａｎｄ  Ｓｅｏｎ，１９８６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８３：７８９８−７９０２）。ＳＮ６は、ヒトＣＤ１０５を認識するマウスｍＡｂである。ＭＡｂ４４Ｇ４は、ヒト前Ｂ白血病細胞の全細胞縣濁液を用いたマウスの免疫処置から作製された抗体である（Ｇｏｕｇｏｓ  ａｎｄ  Ｌｅｔａｒｔｅ，１９８８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：１９２５−１９３３；１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：８３６１−８３６４）。４４Ｇ４も、ヒトＣＤ１０５を認識するマウスｍＡｂである。ＭＡｂＭＪ７／１８は、炎症状態のマウス皮膚を用いたラットの免疫処置から作製された抗体である（Ｇｅ  ａｎｄ  Ｂｕｔｃｈｅｒ，１９９４，上記）。ＭＪ７／１８も、マウスＣＤ１０５を認識するｍＡｂである。ｍＡｂＴｅｃ−１１は、ヒト臍帯静脈内皮細胞を用いたマウスの免疫処置から作製された抗体である（Ｂｕｒｒｏｗｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１：１６２３−１６３４）。Ｔｅｃ−１１は、ヒトＣＤ１０５限定の反応性を有するマウスｍＡｂである。それらの特異性を維持及び／又は改善しながら、低い免疫原性を示すＣＤ１０５と結合するキメラ抗体を、本明細書で記載する。更に、マウス抗体に関する問題に対処するため、それらの特異性を維持及び／又は改善しながら低い免疫原性を示す、ＣＤ１０５と結合し血管新生を低減及び／又は阻害するキメラ抗体を、本明細書で記載する。これらの抗ＣＤ１０５抗体は、様々な状態及び疾患の診断及び治療、並びにＣＤ１０５の精製及び検出に有用である。ＣＤ１０５に対する抗体は、血管新生と関係がある、それによって影響される、又はそれによって悪影響を受ける、様々な疾患及び状態を治療するための療法開発の重要部分となる。
【０１５３】
ＣＤ１０５と結合するその抗体を本明細書で提供する。ＣＤ１０５と結合し、血管新生／新血管形成、小血管の拡張を（部分的又は完全に）阻害又は（部分的又は完全に）管理／治療する、細胞増殖を阻害する又は腫瘍増殖を阻害する、抗体（又はその抗原結合断片）も提供する。同様に、ＣＤ１０５機能（例えば、シグナル伝達、結合、活性化など）の阻害も、阻害又は結合ＣＤ１０５の意味の中に含まれる。更に別の実施形態では、抗体は、ＣＤ１０５と結合することによって血管新生を阻害する。本出願は、抗体を産生するために使用することができる細胞系、これらの細胞系を生成するための方法、抗体を発現させそれらを精製するための方法も提供する。
【０１５４】
本明細書で記載する方法を使用して作製したＣＤ１０５と特異的に結合する抗体は、本明細書で提供するアッセイ又は当技術分野で知られているアッセイを使用して、ＥＬＩＳＡだけには限らないがこれを含めた従来の方法を使用して、ＣＤ１０５と結合する能力に関して試験することができることは理解することができる。本明細書で記載する抗体の親和性も、Ｂｉａｃｏｒｅ又は表面プラズモン共鳴だけには限らないが、これらを含めた従来の方法を使用して決定することができる。
【０１５５】
ＣＤ１０５と結合する抗体を本明細書で提供する。ＣＤ１０５と結合し血管新生を阻害する抗体も、本明細書で提供する。
【０１５６】
配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するガンマ１（γ１）定常領域（Ｆｃ）を含む抗体を、本明細書で提供する。配列番号３に記載の；及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する定常領域（Ｆｃ）。
【０１５７】
別の非制限的実施形態では、この抗ＣＤ１０５抗体は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１５８】
別の非制限的実施形態では、単離されたヒト化脱免疫化抗ＣＤ１０５抗体は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含み得る。ヒト化脱免疫化重鎖の他の非制限的例には、配列番号１３、１４、１５及び１６が含まれるが、これらだけには限られない。ヒト化脱免疫化軽鎖の他の非制限的例には、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２及び２３が含まれるが、これらだけには限られない。これらの配列は、以下の例１７に示される。
【０１５９】
別の態様では、本出願は、抗体のＶＨ及びＶＬ配列を有する抗体の少なくとも５％が、ＥＬＩＳＡアッセイ中でこのような抗体との競合によってＣＤ１０５との結合から遮断される条件下で、本明細書で記載する抗ＣＤ１０５抗体と競合することができる抗体を提供する。
【０１６０】
ＣＤ１０５と結合しＣＤ１０５の活性を調節する中和抗体を本明細書で提供する。中和抗体は、例えば、ＣＤ１０５と結合することによって血管新生を阻害することができる。
【０１６１】
本明細書で記載する抗体は、以下でより詳細に記載するように検出又は診断用途において有用である。本明細書で記載する抗体は、ＣＤ１０５と結合するのに有用であり、したがって本明細書で記載するように血管新生を阻害することができる。
【０１６２】
本明細書で記載する抗体は、治療用途で使用するための治療成分を更に含むことができる。
【０１６３】
本明細書で記載する抗体は、免疫複合体として使用することもできる。本明細書で使用するように、本明細書及び特許請求の範囲の目的で、免疫複合体は、本発明による抗ＣＤ１０５抗体又はその断片、及び少なくとも１つの治療標識を含む複合体を指す。治療標識は、抗腫瘍剤及び血管新生阻害剤を含む。このような抗腫瘍剤は当技術分野で知られており、毒素、薬剤、酵素、サイトカイン、放射性核種、光線力学的物質、及び血管新生阻害剤だけには限られないが、これらを含む。毒素は、リシンＡ鎖、突然変異シュードモナスエキソトキシン、ジフテリア毒素、ストレプトニグリン、ボアマイシン、サポリン、ゲロニン、及びヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質だけには限られないが、これらを含む。薬剤は、ダウノルビシン、メトトレキサート、及びカリケアマイシンを含む。放射性核種は放射性金属を含む。サイトカインは、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）−β、インターロイキン、インターフェロン、及び腫瘍壊死因子だけには限られないが、これらを含む。光線力学的物質は、ポルフィリン及びそれらの誘導体だけには限られないが、これらを含む。他の治療標識は当技術分野で知られており、本明細書でも企図する。抗ＣＤ１０５ｍＡｂ又はその断片と少なくとも１つの抗腫瘍剤を複合体形成させるための方法は当技術分野でよく知られている（即ち、Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．６３：２０９−３４により総説された抗体複合体）。このような方法は、分子のカップリング又は結合に使用する、いくつかの利用可能なヘテロ二官能性試薬の１つを利用することができる。他の放射性核種は、治療及び診断標識などの分子を結合させるための他の方法と共に、本明細書で更に記載する。
【０１６４】
例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の付加などによって、当技術分野で知られている技法を使用して、様々な目的で抗体を修飾することができる。ＰＥＧの修飾（ＰＥＧ化）は、１つ又は複数の改善された循環時間、改善された可溶性、タンパク質分解に対する改善された耐性、低減した抗原性及び免疫原性、改善された生物学的利用能、低減した毒性、改善された安定性、及び形成し易さもたらすことができる（総説に関しては、Ｆｒａｎｃｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ６８：１−１８，１９９８を参照）。
【０１６５】
抗体のＦｃ部分を修飾して、患者へ投与したときの血中循環の半減期を増大することができる。例えば参照として全容が本明細書に組み込まれる米国特許第７，２１７，７９８号中に記載された手段などの、当技術分野の従来手段を使用して修飾を測定することができる。
【０１６６】
例えばその各々が参照として本明細書に組み込まれる米国特許第７，０９１，３２１号及び同第６，７３７，０５６号中に記載された方法などの、循環中の抗体ベースの融合タンパク質の半減期を改善する他の方法も知られている。更に、それらがその複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖上にフコースを含有しないように、抗体を産生又は発現することが可能である。複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖からのフコースの除去は、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）だけには限られないが、これらを含めた、抗体及び抗原結合断片のエフェクター機能を増大することが知られている。同様に、ＣＤ１０５と結合することができる抗体は、任意の抗体アイソタイプ、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ及びＩｇＭ、及び任意のアイソタイプサブクラス、特にＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４由来の免疫グロブリン重鎖の全部又は一部と、それらのＣ末端において結合することができる。
【０１６７】
更に、本明細書で記載する抗体は、それらが血液脳関門を横断することができるように修飾することもできる。本明細書で記載する抗体のこのような修飾は、多形膠芽腫（ＧＢＭ）などの脳疾患の治療を可能にする。抗体などのタンパク質が血液脳関門を横断するのを可能にする例示的な修飾は、参照として全容が本明細書に組み込まれる米国特許公開第２００７００８２３８０号中に記載される。
【０１６８】
免疫グロブリンのグリコシル化は、それらのエフェクター機能、構造安定性、及び抗体産生細胞からの分泌率に対して有意な効果があることは示されている（Ｌｅａｔｈｅｒｂａｒｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：４０７（１９８５））。これらの性質を担う炭水化物群は、一般に抗体の定常（Ｃ）領域と結合する。例えば、ＣＨ２ドメイン中のアスパラギン２９７におけるＩｇＧのグリコシル化は、補体依存性細胞溶解の古典的経路を活性化するＩｇＧの完全能力に必要とされる（Ｔａｏ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３：２５９５（１９８９））。ＣＨ３ドメイン中のアスパラギン４０２におけるＩｇＭのグリコシル化は、抗体の適切な構築及び細胞溶解活性に必要である（Ｍｕｒａｏｋａ  ａｎｄ  Ｓｈｕｌｍａｎ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：６９５（１９８９））。ＩｇＡ抗体のＣＨ１及びＣＨ３ドメイン中の位置１６２及び４１９におけるグリコシル化部位の除去は、細胞内分解及び少なくとも９０％の分泌阻害をもたらした（Ｔａｙｌｏｒ  ａｎｄ  Ｗａｌｌ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：４１９７（１９８８））。更に、それらがその複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖上にフコースを含有しないように、抗体を産生又は発現することが可能である。複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖からのフコースの除去は、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）だけには限られないが、これらを含めた、抗体及び抗原結合断片のエフェクター機能を増大することが知られている。これらの「脱フコシル化」抗体は、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物、又はそれらがもはや酵素を含有しないように遺伝子操作された細胞系、及び複合Ｎ−グリコシド結合糖鎖中のフコースの封入に必要な生化学的経路（フコシルトランスフェラーゼノックアウト動物、植物、又は細胞としても知られる）だけには限られないが、これらを含めた、当技術分野で知られている分子クローニング技法を利用する様々な系によって産生することができる。フコシルトランスフェラーゼノックアウト細胞となるように操作した細胞の非制限的な例には、ＣＨＯ細胞、ＳＰ２／０細胞、ＮＳ０細胞、及びＹＢ２／０細胞がある。
【０１６９】
可変（Ｖ）領域中の免疫グロブリンのグリコシル化も観察されている。Ｓｏｘ及びＨｏｏｄは、約２０％のヒト抗体はＶ領域中でグリコシル化されることを報告した（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ６６：９７５（１９７０））。Ｖドメインのグリコシル化はＶ領域配列中のＮ結合グリコシル化シグナルＡｓｎ−Ｘａａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒの偶然的発生から生じると考えられ、当技術分野では免疫グロブリン機能において役割を果たすとして認められていない。
【０１７０】
可変ドメインフレームワーク残基でのグリコシル化は、抗体と抗原の結合相互作用を変える可能性がある。本発明は、免疫グロブリン鎖のフレームワーク又はＣＤＲ中の限られた数のアミノ酸を選択して（例えば、残基の置換、欠失、又は付加によって）突然変異させ抗体の親和性を増大させる基準を含む。
【０１７１】
抗原結合に対する親和性は一般に、Ｖ領域フレームワーク、典型的には１つ又は複数のＣＤＲと隣接する領域中及び／又は１つ又は複数のフレームワーク領域中に、１つ又は複数の突然変異を導入することによって調節することができる。典型的には、このような突然変異は、グリコシル化部位配列を破壊又は作製するが、ポリペプチドのヒドロパシック構造性に実質的に影響を与えない保存的アミノ酸置換の導入を含む。典型的には、プロリン残基を導入する突然変異は回避する。抗体のグリコシル化は、グリコシル化に関して参照として本明細書に組み込まれる米国特許第６，３５０，８６１号中に更に記載される。
【０１７２】
抗体は短期送達又は広範囲（長期）送達用に製剤化することができる。
【０１７３】
ＣＤ１０５と結合する抗体は、ＣＤ１０５の精製及び／又はサンプル又は患者中のＣＤ１０５レベルの検出に使用して、以下でより詳細に記載するようにＣＤ１０５と関係がある疾患又は障害を検出又は診断することもできる。
【０１７４】
このような方法を使用して作製したＣＤ１０５と結合する抗体は、それらの結合親和性、親和力、及び中和能力の１つ又は複数に関して試験することができる。有用な抗体は、血管新生と関係がある疾患状態又は障害を予防、阻害、管理又は治療するために患者に投与することができる。
【０１７５】
抗体は、結合親和性、会合率、解離率及び親和力の１つ又は複数に関して評価することができる。一態様では、ＣＤ１０５又はＶＥＧＦの活性を中和するそれらの能力に関して抗体を評価することができる。結合親和性、会合率、解離率及び親和力の測定は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ解析、ＢＩＡＣＯＲＥ解析（表面プラズモン共鳴）など、並びに一般に使用されており当業者に知られている他のアッセイだけには限られないが、これらを含めた、当技術分野で認められているアッセイを使用して実施することができる。
【０１７６】
ＣＤ１０５と抗体の結合、及び／又は、例えば血管新生を阻害する抗体の能力の測定は、例えば酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、競合結合アッセイ、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ、又は当技術分野で知られている任意の他の有用なアッセイを使用して決定することができる。これらのアッセイは一般に使用されており、当業者によく知られている。
【０１７７】
非制限的な一実施形態では、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ＣＤ１０５と結合する特異的抗体の結合能力を測定することができる。
【０１７８】
ＥＬＩＳＡなどのアッセイを使用して、他のそれに対する抗体と比較してＣＤ１０５に対する高い特異性を示す、それに対する抗体を同定することもできる。ＥＬＩＳＡなどのアッセイを使用して、１つ又は複数のポリペプチド上及び１又は複数種のＣＤ１０５又はＶＥＧＦ上のエピトープと結合する、それに対する抗体を同定することもできる。特異性アッセイは、ＣＤ１０５エピトープを含有する異なるポリペプチド種上の１つ又は複数のエピトープと結合する能力に関して、試験抗体を別個のアッセイチャンバー内で同時にスクリーニングして、ＣＤ１０５と結合するその抗体を同定する、平行ＥＬＩＳＡを行うことによって実施することができる。当業者が熟知している、見かけの結合親和性を測定するための別の技法は、（ＢＩＡＣＯＲＥ２０００システムで分析された）表面プラズモン共鳴技法である（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏ．Ｊ．２０００，１７：３２３−３２９）。標準的な測定法及び伝統的な結合アッセイは、Ｈｅｅｌｅｙ，Ｒ．Ｐ．，Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｓ．２００２，２８：２１７−２２９によって記載される。
【０１７９】
ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体は、様々な型の癌（例えば、原発性腫瘍、再発腫瘍、及び転移）と関係がある血管新生に関する様々な疾患及び状態を治療する、それらの能力に関してアッセイすることもできる。当業者に知られている任意の適切なアッセイを使用して、このような効果をモニタリングすることができる。いくつかのこのような技法は本明細書に記載する。一例では、本明細書に記載する抗体を、ＣＤ１０５と結合するそれらの能力に関してアッセイする。別の例では、本明細書に記載する抗体の親和性定数を表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定する。更に別の例では、本明細書に記載する抗体を、血管新生の阻害に対するそれらの効果に関してアッセイする。
【０１８０】
製剤
本明細書に提供する製剤は、活性成分（抗ＣＤ１０５抗体又はその抗体断片）以外に、当業者によく知られている、薬学的に許容される賦形剤、担体、バッファー、安定剤、界面活性剤又は他の物質を含むことができる。このような物質は無毒でなければならず、活性成分（単数又は複数）の有効性に干渉してはならない。担体又は他の物質の正確な性質は投与の経路に依存する。
【０１８１】
抗ＣＤ１０５抗体の新たな製剤、この製剤を含むプレフィルドシリンジ、及び血管新生関連障害を治療するために有用なこのような製剤の使用を、本明細書で提供する。本出願は、例えば、ＣＤ１０５と関係がある癌及び眼科的状態の処置の静脈内投与又は眼内投与のために使用され得る製剤を提供する。本明細書に記載するＣＤ１０５に対する抗体又はその抗原結合断片の結合、親和性、親和力及び活性は、上記アッセイ及び実施例に下記されるアッセイが含まれるが、これらだけには限られない当該分野で認識された方法を使用して評価され得る。
【０１８２】
一態様では、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、最大約１００ｍＭの緩衝剤、最大約１Ｍのポリオール及び約４．０〜約７．５のｐＨを含む製剤を、本明細書で提供する。
【０１８３】
一態様では、この製剤は調製後に安定であり、従来の手段に従って試験され得る。タンパク質を含む製剤の安全な取扱い及び投与は、薬剤処方者にとって顕著な挑戦を提示する。タンパク質は、安定性の問題を提示する独自の化学的性質及び物理的性質を有する：種々の分解経路がタンパク質について存在し、化学的不安定性及び物理的不安定性の両方を示している。化学的不安定性には、脱アミノ化、凝集、ペプチド骨格のクリッピング（ｃｌｉｐｐｉｎｇ）、及びメチオニン残基の酸化が含まれる。物理的不安定性は、例えば、凝集を含む多数の現象を包含する。
【０１８４】
「安定な」製剤は、保存の際にその物理的安定性及び／若しくは化学的安定性並びに／又は生物活性をその中のタンパク質が本質的に保持している製剤である。タンパク質の安定性を測定するための種々の分析技法が当該分野で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ  Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０（１９９３）で概説されている。安定性は、選択された時間にわたって選択された温度で測定され得る。好ましくは、この製剤は、少なくとも１カ月間にわたり室温（約３０℃）若しくは４０℃で安定であり、及び／又は少なくとも１年間若しくは少なくとも２年間にわたり約２〜８℃で安定である。更に、この製剤は、製剤の凍結（例えば、−８０℃まで）及び解凍の後に安定であり得る。
【０１８５】
タンパク質は、色及び／若しくは透明性の視覚的試験の際に、又はＵＶ光散乱若しくはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、凝集、沈殿及び／又は変性の兆候を示さない場合に、薬学的製剤中で「その物理的安定性を保持する」。このような測定値を決定する方法は、当該分野で公知であり、以下により詳細に記載される。
【０１８６】
タンパク質は、所与の時点における化学的安定性が、以下に規定されるその生物活性をタンパク質が未だ保持するとみなされるようなものである場合、製剤中で「その化学的安定性を保持する」。化学的安定性は、化学的に変えられた形態のタンパク質を検出及び定量することによって評価され得る。化学的変化は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及び／又はマトリックス支援レーザー脱離イオン化／飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ  ＭＳ）を使用して評価され得る、サイズ改変（例えば、クリッピング）を含み得る。他の型の化学的変化には、例えば、イオン交換クロマトグラフィー又はキャピラリー電気泳動−等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）によって評価され得る、電荷変化（例えば、脱アミド化の結果として生じる）が含まれる。
【０１８７】
抗体は、所与の時点における抗体の生物活性が、例えば、例えば抗原結合アッセイにおいて決定した場合、製剤が調製された時点で示された生物活性の約５０〜１５０％以内（アッセイの誤差範囲内）にある場合、製剤中で「その生物活性を保持する」。抗体についての他の「生物活性」アッセイは、以下で詳述する。
【０１８８】
製剤の経時的な安定性に関して、抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片の少なくとも９５％が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、少なくとも約１２カ月間にわたる約２〜８℃での保存後にモノマーとして存在し得る。実施例に記載するものが含まれるが、これらだけには限られない、安定性を評価するための更なる当該分野で認識された方法もまた、本明細書で企図される。
【０１８９】
更に、抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも約１２カ月間にわたる約２〜８℃での保存後に、ＣＤ１０５  ＥＬＩＳＡ結合アッセイによって約５０〜１５０％の結合を示し得る。
【０１９０】
抗ＣＤ１０５抗体の平均等電点（ｐＩ）は、例えばキャピラリー電気泳動−等電点電気泳動によって測定して、少なくとも約１２カ月間にわたる２〜８℃での保存後に、約８．８〜約９．２であり得る。
【０１９１】
抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３０カ月間、少なくとも約３６カ月間又はそれ以上にわたって安定であり得ることが理解される。
【０１９２】
製剤は、ＳＥＣによって測定して、製剤の凍結解凍サイクルの後にモノマーとして存在する、抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％を含み得る。或いは、又は更に、製剤は、ＳＥＣによって測定して、撹拌ストレスにさらされた場合にモノマーとして存在する、抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％を含み得る。
【０１９３】
この抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ１０５に結合することが可能なＣＤＲの任意の配列を含み得る。非制限的な一実施形態では、この抗ＣＤ１０５抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域（ＣＬ）；配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する定常領域（Ｆｃ）を含むＴＲＣ１０５である。
【０１９４】
別の非制限的実施形態では、この抗ＣＤ１０５抗体は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１９５】
この製剤は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体若しくはその抗原結合断片、又は約２ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約７．５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約３５ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約４５ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ、約６５ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約７５ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約８５ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約９５ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１０５ｍｇ／ｍｌ、約１１０ｍｇ／ｍｌ、約１１５ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１２５ｍｇ／ｍｌ、約１３０ｍｇ／ｍｌ、約１３５ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１４５ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ若しくはそれ以上が含まれるが、これらだけには限られないその間の任意の値、又はそれらの間の任意の整数の抗ＣＤ１０５抗体若しくはその抗原結合断片を含み得る。抗体濃度に言及して本明細書で使用する用語「約」は、示された値の±２％を意味する。
【０１９６】
一実施形態では、この製剤は、約２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む。別の実施形態では、この製剤は、約５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む。なお別の実施形態では、この製剤は、約１００ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む。
【０１９７】
本明細書に記載する製剤は、例えば、ヒスチジン、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩などの緩衝剤を含み得る。緩衝剤は、約５ｍＭ〜約１００ｍＭの量で含まれ得る。一実施形態では、この製剤は、約５ｍＭ、約７．５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１２．５ｍＭ、約１５ｍＭ、約１７．５ｍＭ、２０ｍＭ、約２２．５ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ又はそれらの間の任意の整数の、ヒスチジン、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩を含む。バッファー濃度に言及して本明細書で使用する用語「約」は、示された値の±２％を意味する。
【０１９８】
製剤は、硝子体内投与及び静脈内投与が含まれるが、これらだけには限られない、抗体について公知の任意の型の投与のために調製され得る。
【０１９９】
本明細書に提供する製剤は、薬学的に許容される担体又は賦形剤であり得、患者への投与のために許容される任意の担体又は賦形剤を含む、許容される担体又は賦形剤を更に含み得る。
【０２００】
一実施形態では、本明細書に提供する製剤は等張である。代表的な等張な製剤には、約２５０〜約３５０ミリオスモルの製剤が含まれるが、これらだけには限られない。別の実施形態では、本明細書に提供する製剤は高張である。代表的な高張製剤には、約３５１〜約１０００ミリオスモルの製剤が含まれるが、これらだけには限られない。
【０２０１】
ポリオールは、最大約１Ｍの量で本明細書に記載する製剤に加えられ得る。例えば、この製剤は、約５０ｍＭ、約７５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２２５ｍＭ、約２４０ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、約４００ｍＭ、約４５０ｍＭ、約５００ｍＭ、約５５０ｍＭ、約６００ｍＭ、約６５０ｍＭ、約７００ｍＭ、約７５０ｍＭ、約８００ｍＭ、約８５０ｍＭ、約９００ｍＭ、約９５０ｍＭ、約１Ｍ又はそれらの間の任意の整数の量で、ポリオールを含み得る。一実施形態では、本明細書に提供する製剤は、３００ｍＭ未満の量でポリオールを含み、この製剤は、約１００ｍＭ〜約１７５ｍＭの濃度の塩で等張にされる。例えば、３００ｍＭ未満の量でポリオールを含む製剤は、約１３０ｍＭの濃度の塩で等張にされる。ポリオール濃度に言及して本明細書で使用する用語「約」は、示された値の±２％を意味する。一態様では、本明細書に提供する製剤中で使用されるポリオールは、例えば非還元糖などの糖であり得る。非還元糖の代表的な例には、トレハロース及びスクロースが含まれるが、これらだけには限られない。例えば、製剤は、約２００ｍＭ〜約３００ｍＭのトレハロース又はスクロースを含み得る。一実施形態では、製剤は、約２４０ｍＭのトレハロース又はスクロースを含み得る。或いは、この糖は、約２００ｍＭ〜約３００ｍＭの量（濃度）のソルビトールであり得る。一実施形態では、製剤は、約２４０ｍＭのソルビトールを含み得る。
【０２０２】
本明細書に提供する製剤の更なる非制限的例は、表１の製剤１〜３９のいずれか１つである。
【表１−１】
2018076350.tif 000002
【表１−２】
2018076350.tif 000003
【０２０３】
本明細書に提供する製剤は、約４．０〜約７．５のｐＨを有し得る。一実施形態では、本明細書に提供する製剤は、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５又は約７．０のｐＨを有し得る。ｐＨに言及して本明細書で使用する用語「約」は、ｐＨ±０．０５、０．１又は０．２を指す。
【０２０４】
本明細書に記載する方法によって同定した抗体又は抗原結合断片を含む製剤は、望ましい純度を有するタンパク質と任意選択の生理的に許容される担体、賦形剤及び／又は安定剤を混合することによって、水溶液の形で、保存用に調製することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））。
【０２０５】
許容される担体は投与する患者に対して生理的に許容され、それと共に／その中に投与する化合物の治療性を保持する。許容される担体及びそれらの製剤は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ．Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ  １９９０）中に一般的に記載される。１つの例示的な担体は生理食塩水である。本明細書で使用する語句「薬学的に許容される担体」は、一器官、又は身体の一部分の投与部位から別の器官、又は身体の一部分への対象化合物の運搬又は輸送に関与する、液体又は固形充填剤、希釈剤、賦形剤、及び／又は溶媒などの、許容される物質、組成物又は媒体を意味する。それぞれの担体は、製剤の他の成分と適合性があり、それを投与する対象に有害ではない意味で許容される。許容される担体は、対象化合物の特異的活性を変えてもいけない。
【０２０６】
一態様において、投与と適合性がある、溶媒（水性又は非水性）、溶液、エマルジョン、分散媒、コーティング、等張及び吸収促進又は遅延剤を含む、薬学的に許容される又は生理的に許容される組成物を本明細書で提供する。したがって、組成物又は製剤は、対象における治療及び／又は診断用途に適した組成物を指す。組成物及び製剤は、一定量の本明細書に記載する化合物、及び薬学的又は生理的に許容される担体を含む。
【０２０７】
特定の投与経路（即ち、全身又は局所）と適合性があるように組成物を製剤化することができる。したがって組成物は、様々な経路による投与に適した、担体、希釈剤、又は賦形剤を含む。
【０２０８】
組成物は、例えば、皮下、硝子体内、皮内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は筋肉内注射だけには限られないが、これらを含めた注射によって投与することができる。等張化剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、及び塩化ナトリウムを組成物中に含めることができる。生成する溶液は使用するためにパッケージ、又は凍結乾燥することができ、凍結乾燥した調製物は後に、投与前に滅菌溶液と併用することができる。静脈内注射、又は患部への注射用に、活性成分は、発熱性物質を含まず適切なｐＨ、等張性及び安定性を有する、非経口的に許容される水溶液の形であってよい。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、乳酸加リンゲル液などの等張性媒体を使用して、適切な溶液を調製することが十分可能である。防腐剤、安定剤、バッファー、抗酸化剤及び／又は他の添加剤を必要に応じて含めることができる。滅菌注射溶液は、必要に応じて前に列挙した成分の１つ又は組合せと共に適切な溶媒中に必要量の活性成分を取り込み、次に濾過滅菌によって調製することができる。
【０２０９】
一実施形態では、本明細書に提供する製剤は、界面活性剤を含まない。別の実施形態では、本明細書に記載する製剤は、任意選択で、例えば、ポリソルベート２０若しくは８０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ６８又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの界面活性剤を含む。
【０２１０】
本明細書に提供する医薬品又は任意の方法における使用に関して組成物を考慮するとき、組成物は実質的に発熱性物質を含まない可能性があり、したがって組成物は、ヒト患者に投与するとき、炎症反応又は危険なアレルギー反応を引き起こさないことは企図される。発熱性物質に関する組成物の試験及び実質的に発熱性物質を含まない組成物の調製は、当業者にはよく理解されており、市販のパッケージを使用して実施することができる。
【０２１１】
語句「薬学的に許容される」は、生理的耐性があり、対象に投与したとき、例えば胃の不調、めまいなどのアレルギー又は同様の悪反応を典型的にもたらさない分子体及び組成物を指す。
【０２１２】
用語「単位用量」は、治療用組成物に関して使用するとき、対象に関する単位の用量として適切な物理的に明確な単位を指し、それぞれの単位は、必要な希釈剤、即ち担体、又は賦形薬と共に望ましい治療効果をもたらすように計算された所定量の活性物質を含有する。
【０２１３】
組成物は投与製剤と適合性がある形式、及び治療有効量で投与することができる。投与する量は、治療する対象、活性成分を利用する対象の免疫系の能力、及び望まれる結合能力の程度に依存する。投与に必要とされる活性成分の正確な量は実践者の判断に依存し、各個人に特有である。初回投与及び追加抗原刺激に適したレジメも様々であるが、初回投与、次に二次注射又は他の投与による１又は複数の時間間隔での反復投与によって類型化される。或いは、血中濃度を維持するのに十分な連続静脈内注入が企図される。
【０２１４】
一実施形態は、本明細書に記載する状態、疾患又は障害の治療用の医薬品を製造するための、本明細書に記載する組成物の使用を企図する。医薬品は治療を必要とする患者／対象の身体的特徴に基づいて製剤化することができ、状態、疾患又は障害の段階に基づいて１つ又は複数の製剤に製剤化することができる。病院及びクリニックへの配給に適したラベルを有する適切なパッケージに医薬品をパッケージすることができ、この場合ラベルは本明細書に記載する疾患を有する対象を治療する指標である。医薬品は単数回又は複数回単位としてパッケージすることができる。組成物の用量及び投与に関する説明書は、以下に記載するようにパッケージと共に含めることができる。
【０２１５】
本明細書に記載する製剤を含む、静脈内投与又は硝子体内投与に適したプレフィルドシリンジもまた、本明細書で提供する。このようなプレフィルドシリンジは、本明細書に記載する状態のいずれかなどの血管新生関連状態の治療への使用のために、パッケージ及びラベルされ得る。パッケージは、保存及び投与のための指示を更に含み得る。上記請求項のいずれか一項に記載の製剤を含む、静脈内投与又は硝子体内投与に適した１つ又は複数のプレフィルドシリンジを含むパッケージを、本明細書で提供する。本明細書に記載する状態のいずれかなどの血管新生関連状態の治療のための、本明細書に記載する製剤を含む医薬品の調製もまた、本明細書で提供する。
【０２１６】
治療方法
ＣＤ１０５と優先的に結合する抗体の製剤を対象に投与することによって、対象（ヒト又は非ヒト）を治療する方法を本明細書で提供する。抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む組成物を投与し、それによって疾患又はその重症度を予防、治療、改善、又は低減することを含む、血管新生／新血管形成、過剰な血管形成、腫瘍増殖、腫瘍細胞増殖又は小血管の拡張と関係がある１つ又は複数の疾患又は障害を予防又は治療する方法を本明細書で提供する。
【０２１７】
本発明の有効な応答は、具体的には生存期間の延長を非制限的に含む、疾患の兆候又は症状の停滞、又は部分的若しくは完全な緩和若しくは低減を、対象が経験するときに得られる。予想される無憎悪生存期間は、再発数、疾患の段階、及び他の要因を含めた予後予測因子に応じて、数カ月から数年で測定することができる。生存期間の延長は、少なくとも１カ月（ｍｏ）、約少なくとも２カ月、約少なくとも３カ月、約少なくとも４カ月、約少なくとも６カ月、約少なくとも１年（ｙｒ）、約少なくとも２年、約少なくとも３年、約少なくとも４年、約少なくとも５年など又はそれらの間の任意の間隔の時間を非制限的に含む。全体又は無憎悪生存期間も、数カ月から数年で測定することができる。或いは、有効な応答は、対象の兆候又は症状又は癌負荷が停滞状態であり悪化しない応答であってよい。治療指標の更なる指標は以下でより詳細に記載する。
【０２１８】
本明細書に記載する抗体の組成物は非治療剤（例えば、親和性精製物質）として使用することができる。一般に、このような一実施形態では、対象のタンパク質は、当技術分野で知られている従来の方法を使用して、Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）樹脂又は濾過紙などの固相上に固定する。固定タンパク質は精製する対象の標的（又はその断片）を含有するサンプルと接触させ、その後支持体を、固定抗体と結合した標的タンパク質以外の、サンプル中の実質的に全ての物質を除去する適切な溶媒で洗浄する。最後に支持体を、グリシンバッファー、ｐＨ５．０などの別の適切な溶媒で洗浄し、これによって標的タンパク質を切り離す。精製以外に、組成物は、ＣＤ１０５と関係がある疾患及び障害の検出、診断及び治療に使用することができる。
【０２１９】
「接触」は、本明細書に記載するように、本明細書で提供する製剤を細胞、器官、組織又は流体と物理的に近づける手段として本明細書では定義する。接触は、本明細書で提供する任意の製剤の全身又は局所投与を包含し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ及び／又はｅｘ  ｖｉｖｏの手順及び方法を非制限的に含む。「併用」と「接触」は本明細書では交互に使用して、同様に定義することを意味する。ｉｎ  ｖｉｖｏ適用例に関して、例えば任意の適切な手段による患者への組成物の投与によって接触を行うことができ、薬学的に許容される賦形剤及び担体を含む組成物は前でより詳細に記載している。
【０２２０】
本明細書で使用する「予防」は、兆候又は症状の発症の予防法、予防、血管新生と関係があるか又はＣＤ１０５活性に関連する疾患又は障害の進行の予防を指す。非制限的な一実施形態では、段階１の癌を有すると診断されると、本明細書に記載する製剤が投与され得、それによって癌が段階２に進行するのを予防する。なお別の実施形態では、無症候性であるが１つ又は複数の癌バイオマーカーについて陽性反応を示す患者には、本明細書に記載する製剤が投与され得、それによって癌の進行を予防する。本明細書で使用する「阻害」、「治療」及び「治療する」は交互に使用し、例えば、兆候又は症状の停滞、生存期間の延長、兆候又は症状の部分的又は完全な改善、及び腫瘍又は転移の部分的又は完全な根絶を指す。
【０２２１】
「対象」又は「患者」（例えば、ヒトなどの哺乳動物、又は霊長類、げっ歯類、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ラクダ、ラマなどの非ヒト動物など）は、本明細書に記載する疾患又は障害の、１つ又は複数の臨床兆候及び／又は兆候又は症状を示す哺乳動物であってよい。特定の状況では、対象は無症候性である可能性があり、疾患又は障害の臨床兆候を未だ依然として有する可能性がある。抗体は、治療成分、又は治療成分を含有する融合タンパク質と結合させることが可能である。抗体は、検出可能成分、又は検出可能成分を含有する融合タンパク質と結合させることが可能である。一実施形態では、抗体は、治療成分と検出可能成分の両方と結合させることが可能である。抗体は親和性タグ（例えば、精製タグ）と結合させる、又はそれらで組換え操作することが可能である。親和性タグは、当技術分野では従来のものである。
【０２２２】
本明細書で提供する抗体又はその断片は、それらが治療成分及び／又はイメージング又は検出可能成分及び／又は親和性タグと結合又は連結することができるようなものである。ポリペプチドの結合又は連結に関する方法は当技術分野でよく知られている。化合物と標識の間の会合（結合）は、共有及び非共有結合、化学結合及び組換え技法だけには限られないが、これらを含めた、当技術分野で知られている任意の手段を含む。
【０２２３】
「血管新生」は、血管の維持及び発達の全態様を含めるために本明細書で使用する。したがって血管新生は、新血管形成、並びに既存の血管系及び小血管の維持及び制御をもたらす、（ｄｅ  ｎｏｖｏ又は既存の血管からの形成であれ）新しい毛細血管の形成を含む。血管新生は、血管基底膜及び間質性マトリクスの内皮細胞仲介分解、内皮細胞の移動、内皮細胞の増殖、及び内皮細胞による毛細血管ループの形成を含む、一連の連続ステップを含む複雑なプロセスである。血管新生は、新たな血管の増殖及び／又は発達（新血管形成とも呼ばれる）、小血管の拡張、過剰又は長期血管増殖、及び既存の血管系の維持を含む。
【０２２４】
用語「血管新生関連疾患」を、本明細書において使用して、血管新生が異常に長引いているヒト中の特定の病的プロセスを意味する。これは更に、血管新生と関連する、それによって引き起こされる、又はそれと関係がある疾患及び状態などの、血管新生状態及び疾患を含む。このような疾患の非制限的な例には、様々な型の癌及び転移、黄斑変性症、及びＣＮＶがある。本明細書に記載する抗体を使用して、ＣＤ１０５との結合及び血管新生の阻害によって血管新生関連疾患を治療することができる。
【０２２５】
用語「抗血管新生療法」を本明細書において使用して、ＣＤ１０５を発現する（静止状態の血管系と比較して増殖血管系において高レベルで発現する）細胞及び／又は血管系を標的化する療法を意味し、これは更に、血管新生（即ち、新血管形成をもたらす新しい毛細血管の形成）を対象とする療法、既存の血管系及び／又は過剰な血管形成又は血管増殖を対象とする療法、小血管の拡張を対象とする療法、及び疾患又は状態を対象とする療法（例えば、血管標的化療法）を含む。本発明内で企図される例示的な疾患又は状態には、様々な型の癌及び転移があるが、これらだけには限られない。
【０２２６】
本明細書に記載する製剤を患者に投与することを含む、それを必要とする患者（対象）において血管新生関連疾患を治療する方法を、本明細書で提供する。このような製剤は、患者に硝子体内又は静脈内投与され得る。
【０２２７】
本明細書に記載する血管新生関連疾患は、例えば、癌又は転移であり得る。一実施形態では、この癌は固形腫瘍である。治療する癌には、例えば、上皮ベースの腫瘍が含まれる。このような製剤で治療する癌の非制限的例には、肺癌、婦人科悪性腫瘍、メラノーマ、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、子宮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、腎臓癌、頭部癌、膵臓癌、肝臓癌（肝細胞癌）、子宮癌、首部癌、腎臓癌（腎細胞癌）、肉腫、ミエローマ及びリンパ腫が含まれるが、これらだけには限られない。癌又は転移の治療のための製剤は、患者に静脈内投与され得る。
【０２２８】
或いは、本明細書に記載する血管新生関連疾患は、例えば、眼科的状態であり得る。眼科的状態には、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫及び／又は脈絡膜血管新生が含まれるが、これらだけには限られない。加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）は、滲出型ＡＭＤ又は萎縮型ＡＭＤであり得る。眼科的状態の治療のための製剤は、患者に硝子体内投与され得る。
【０２２９】
このような方法では、この製剤は、患者に１回又は複数回投与され得る。例えば、この製剤は、１日１回、１週間に１回、１カ月に１回、１カ月に２回、２カ月に１回、３カ月に１回、４カ月に１回、５カ月に１回又は６カ月に１回投与され得る。治療スケジュールは、治療に対する患者の応答に応じて、必要に応じて増加又は減少され得る。
【０２３０】
一態様では、製剤は、血管新生関連疾患の１つ又は複数の兆候又は症状が低減されるまで投与される。
【０２３１】
眼科的状態に関して、この１つ又は複数の兆候又は症状には、血管を収縮する、眼部疾患と関係がある内皮細胞増殖を阻害する、出血の兆候若しくは症状を除去する、不透明な視界を治療する、視力喪失の停止をもたらす、視覚を改善する、及び／又は血管漏出を防ぐことが含まれ得るが、これらだけには限られない。
【０２３２】
癌又は転移に関して、治療は、患者の状態における改善をもたらし得、治療は、１つ又は複数の以下の要因：細胞増殖の低下、細胞数の低下、アポトーシスの増大、又は細胞増殖障害を含む細胞の少なくとも一部分の生存の低下が発生したかどうか決定することによって評価することができる。
【０２３３】
治療は、腫瘍若しくは転移の部分的若しくは完全な排除及び／又は患者の生存期間の延長をもたらし得る。
【０２３４】
一実施形態では、１つ又は複数の兆候又は症状は、患者への１つ又は複数の用量の製剤の投与後に、重症度又は持続期間において、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％又は約１００％低減される。
【０２３５】
別の実施形態では、１つ又は複数の兆候又は症状は、患者への１つ又は複数の用量の製剤の投与後に、重症度又は持続期間において、約２倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約５５倍、約６０倍、約６５倍、約７０倍、約７５倍、約８０倍、約９０倍、約９５倍、約１００倍又はそれ以上低減される。
【０２３６】
本明細書に記載する製剤を患者に投与することを含み、それによって眼科的状態の１つ又は複数の兆候又は症状がこの治療によって改善される、それを必要とする患者において眼科的状態を治療する方法を、本明細書で提供する。製剤の投与は硝子体内投与であり得る。
【０２３７】
本明細書に記載する製剤を患者に投与することを含み、それによって癌又は転移の１つ又は複数の兆候又は症状が改善される、それを必要とする対象において癌又は転移を予防又は治療する方法もまた、本明細書で提供する。製剤の投与は静脈内投与であり得る。
【０２３８】
用語「再発」、「ぶり返し」又は「ぶり返した」は、疾患消失の臨床評価後の癌又は疾患の逆行を指す。遠隔転移又は局所再発の診断は、ぶり返しと考えることができる。
【０２３９】
用語「維持療法」は、以前の治療効果の維持を助けるために与えられるスケジュール化された再治療を指す。維持療法は、疾患の進行とは無関係に、癌を軽減状態に保つ又は特定療法に対する応答を延長するのを助けるために与えられることが多い。
【０２４０】
腫瘍学における用語「無憎悪生存期間」は、癌が進行しない治療中及びその後の時間の長さを指す。無憎悪生存期間は、患者が完全奏功又は部分奏功を経験した時間の量、及び患者が安定（ｓｔａｂｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）を経験した時間の量を含む。
【０２４１】
一態様では、癌又は転移に罹患する患者に本明細書で提供する任意の組成物を投与することによって、対象中の癌又は転移を予防又は治療する方法を本明細書で提供する。このような患者は症候性又は無症候性であってよい。
【０２４２】
いくつかの場合、組成物の投与は、治療する患者の生命を延長し、腫瘍体積を低減し、腫瘍を除去し、細胞増殖を低下させ、腫瘍細胞のアポトーシスを増大する、又はこれらの組合せである。
【０２４３】
必要な場合、方法は、外科手術による癌の除去及び／又は追加的抗癌剤又は治療剤の投与を更に含むことができる。抗癌剤は本明細書の他の箇所で提供する。
【０２４４】
一態様では、癌に罹患する患者の兆候又は症状を改善する。改善は、例えば痛みの低下、腫瘍サイズの低下、腫瘍の除去、腫瘍サイズの増大若しくは疾患の進行の予防、転移の形成の予防、又は転移増殖の阻害、又はこれらの組合せとして現れ得る。
【０２４５】
一態様では、本明細書に記載する製剤の投与は、患者が外科手術又は１つ若しくは複数の追加的抗癌剤若しくは治療剤を用いた治療を受ける必要性を低減又は排除する。
【０２４６】
抗ＣＤ１０５抗体を含む組成物は、抗ＶＥＧＦ抗体（又はその抗原結合断片）を含有する組成物と順次又は同時に投与することができる。このような投与には、互いに約１２週間以内、互いに約８週間以内、互いに約４週間以内、互いに約３週間以内、互いに約２週間以内、互いに約１週間以内、互いに１日以内、互いに約１２時間以内、互いに約６時間以内、互いに約３時間以内、互いに約１時間以内、互いに約３０分以内、同日、同時、又はこれらの組合せの投与が含まれるが、これらだけには限られない。多用量の本発明の組成物及び／又は併用療法成分を企図するとき、標準的な市販品を使用し対象の年齢、身長、体重、健康状態及び他の身体的特徴に基づいて、知られている用量及び濃度を使用して、それぞれの用量を経験的に決定することができることは理解される。
【０２４７】
任意の医学治療に適用可能な妥当な利点／リスク比で疾患又は障害を阻害することによって、ある程度の望ましい治療効果をもたらすのに有効である治療有効量で、患者に製剤を投与することができる。ヒト患者への本発明の製剤の投与のため、当業者に知られている方法によって製剤を製剤化することができる。治療有効量は、器官又は組織において少なくとも部分的に望ましい治療又は予防効果を得る量である。疾患又は障害の予防及び／又は療法治療をもたらすのに必要な抗ＣＤ１０５抗体又は抗ＶＥＧＦ抗体の量は、それ自体は固定されていない。投与する抗体の量は、疾患又は障害に罹患する哺乳動物の疾患の型、疾患の拡大、及び大きさと共に変わる可能性がある。一実施形態では、本明細書に記載する２つの抗体を、前に記載したように併用して患者に投与する。投与の併用は、一製剤又は別個の製剤での投与を指すことができる。
【０２４８】
「投与」は、患者の身体内に製剤をもたらす形式で、患者に１つ又は複数の製剤を与えることを本明細書では指す。このような投与は、皮下、硝子体内、皮内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は筋肉内投与（例えば注射）による局所、局部又は全身投与を非制限的に含む、任意の経路による投与であってよい。
【０２４９】
製剤中の活性成分の実際の用量レベルは、患者に対する毒性なしで、特定の患者、製剤、及び投与の形式に望ましい治療応答を得るのに有効な量の活性成分を得るように変えることが可能である。選択する用量レベルは、利用する個々の化合物の活性、投与の経路、投与の時間、利用する個々の化合物の分泌率、治療の期間、利用する個々の製剤と併用使用する他の薬剤、化合物及び／又は物質、治療する患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康状態及び以前の病歴、及び医学分野でよく知られている同様の要因を含めた、様々な要因に依存する。
【０２５０】
更に、用量（単数又は複数）の抗体を、週２回、週１回、２週毎、３週毎、４週毎、６週毎、８週毎、１２週毎、２４週毎、又はこれらの週の任意の組合せで投与することができる。例えば２、３、４、５又は６週、次に療法なしで１、２、３、４、５、又は６週の週１回又は２回の抗体投与などの、投与サイクルも企図される。或いは、療法に対する対象の応答性に応じて、治療間のサイクル時間は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２カ月であってよい。例えば本明細書に記載する異なる用量の組合せ及び週一回サイクルを含めた、別の投与サイクルも本発明の範囲内で企図される。
【０２５１】
医師又は獣医師は、必要とされる製剤の有効量（ＥＤ５０）を容易に決定し処方することができる。例えば、医師又は獣医師は、必要とされるより低いレベルにおいて製剤中に利用する化合物の投与で始め、望ましい治療効果を得て、望ましい効果が得られるまで用量を徐々に増大することが可能である。或いは、用量は一定に保つことができる。
【０２５２】
前に記載した経路などの任意の好都合な経路によって、患者に製剤を投与することができる。選択する投与の経路とは無関係に、適切な水和型で使用することができる本発明の化合物、及び／又は製剤は、以下に記載するように、又は当業者に知られている他の従来の方法によって許容される剤形に製剤化する。
【０２５３】
細胞培養アッセイ及び／又は動物試験から得たデータは、ヒトにおける使用のために一定範囲の用量で製剤化する際に使用することができる。利用する剤形及び利用する投与経路に応じて、用量はこの範囲内で変わる可能性がある。任意の化合物に関して、治療有効用量は細胞培養アッセイから初期に推測することができる。用量は動物モデルにおいて処方して、細胞培養において決定するＩＣ５０（即ち、半最大阻害を得る試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を得ることができる。血漿中のレベルは、例えば高性能液体クロマトグラフィーによって測定することができる。このような情報を使用して、ヒト中で有用な用量をより正確に決定することができる。化合物の組合せを含有する製剤は、任意のこれらの方法を使用して評価することもできる。
【０２５４】
一実施形態では、本発明は組織中の血管新生の阻害を企図する。組織中の血管新生の程度、及び、したがって得られる阻害の程度は、本明細書に記載するように様々な方法によって評価することができる。
【０２５５】
ＣＤ１０５又はＶＥＧＦを認識し（例えば、優先的に結合する）血管新生を阻害する抗体の独自の特異性は、血管新生（新血管形成）、小血管の拡張、過剰な血管形成、腫瘍細胞増殖、及び／又は腫瘍増殖によって特徴付けられる疾患用の診断及び治療用途を与える。抗体は様々な型の癌（原発性腫瘍及び転移）に罹患する対象に投与することができる。
【０２５６】
本明細書に記載する組成物の投与以外に、１つ又は複数の追加的血管新生阻害剤で対象を治療することも可能であることが、本明細書において企図されることは理解されよう。
【０２５７】
用語「血管新生阻害剤」は、本明細書及び特許請求の範囲の目的で本明細書において使用して、血管新生を阻害するために機能する、ペプチド、タンパク質、酵素、多糖、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、組換えベクター、及び薬剤だけには限られないが、これらを含めた化合物又は分子を意味する。血管新生阻害剤は当技術分野で知られており、全ての型は本明細書において企図される。化合物及び分子の非制限的な例には、パクリタキセル、Ｏ−（クロロアセチル−カルボミル）フマギロール（「ＴＮＰ−４７０」又は「ＡＧＭ１４７０」）、トロンボスポンジン−１、トロンボスポンジン−２、アンギオスタチン、ヒト軟骨細胞由来血管新生阻害剤（「ｈＣＨＩＡＭＰ」）、軟骨由来血管新生阻害剤、血小板因子−４、グロ−β、ヒトインターフェロン誘導性タンパク質１０（「ＩＰ１０」）、インターロイキン１２、Ｒｏ３１８２２０、トリシクロデカン−９−イルキサンテート（「Ｄ６０９」）、イルソグラジン、８，９−ジヒドロキシ−７−メチル−ベンゾ［ｂ］キノリジニウムブロマイド（「ＧＰＡ１７３４」）、メドロキシプロゲステロン、ヘパリンとコルチゾンの組合せ、グルコシダーゼ阻害剤、ゲニステイン、サリドマイド、ジアミノ−アントラキノン、ヘルビマイシン、ウルソル酸、及びオレアノール酸などの天然及び合成生体分子がある。抗体の非制限的な例には、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ受容体、又はＣＤ１０５の異なるエピトープなどの分子を対象とする抗体がある。更に、ＶＥＧＦ受容体の小分子阻害剤が知られており、本明細書において企図される。ＶＥＧＦ受容体阻害剤の非制限的な例には、ラニビズマブ、アフリベルセプト、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、ペガプタニブ及びパゾパニブがある。
【０２５８】
これらのＶＥＧＦ受容体阻害剤の多数の併用は、本明細書に記載する製剤と共に投与することができる。一実施形態では、併用は低用量の記載する抗体又は抗原結合断片の使用をもたらす可能性がある。このような用量の改変は、抗体の併用の相乗効果に原因がある可能性がある。
【０２５９】
癌
ＣＤ１０５は腫瘍血管新生と関係があり、正常組織中のそれと比較して様々な腫瘍組織の内皮中で強く上方制御される。ＣＤ１０５は広範囲の腫瘍内皮において上方制御される。更に、対応する正常組織より強いＣＤ１０５の発現が腫瘍内皮において存在する。したがって、抗ＣＤ１０５抗体を用いた血管新生の阻害は、癌性腫瘍の治療オプションとなる。本明細書に記載する製剤を使用して、癌性腫瘍及び転移を治療することができる。癌性腫瘍及び転移を治療するための医薬品の製剤化において、製剤を使用することもできる。
【０２６０】
ＶＥＧＦは抗腫瘍療法の一標的となる。その発現が一定範囲の固形腫瘍において上方制御されるからである。ＶＥＧＦは、血管新生、既存の血管からの新たな血管の増殖の主なレギュレーターである。このプロセスは固形腫瘍の増殖の根本にあり、新たな血管の形成に頼るものである。特定の小分子療法剤は血管内皮増殖因子受容体（「ＶＥＧＦＲ」）を標的化することができ、小分子療法剤によるこのような標的化は抗癌効果をもたらすことができる。ＶＥＧＦ受容体標的化作用物質は、新たな血管形成の阻害によって腫瘍増殖を間接的に遮断する。ＶＥＧＦ誘導血管新生を阻害することによって、マクロファージ、骨芽細胞又は軟骨吸収細胞のＶＥＧＦ刺激を著しく阻害せずに、抗腫瘍又は改善された抗腫瘍効果を発揮することができる。
【０２６１】
用語「腫瘍」は、（同型の正常組織による発現と比較して）ＣＤ１０５及び／又はＶＥＧＦを発現する癌性組織を指すために本明細書で使用する。腫瘍は固形腫瘍及び半固形腫瘍を含むことができる。腫瘍の非制限的な例には、非Ｔ細胞型（非Ｔ）急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、骨髄単球性白血病を含めたヒト白血病、並びに、血管肉腫、乳癌腫、胃癌腫、結腸癌腫、ホジキンリンパ腫、リンパ腫、多形膠芽腫（ＧＢＭ）、肺癌腫、メラノーマ、ミエローマ、リンパ腫、骨肉腫、卵巣癌腫、耳下腺腫瘍、咽頭癌腫、前立腺癌腫、肝細胞癌腫、腎臓癌腫、及び直腸Ｓ字結腸癌腫を含めた、ヒト固形腫瘍及び半固形腫瘍、並びに（同型の正常組織による発現と比較して）中〜高レベルでＣＤ１０５を発現するその周囲の血管系がある。
【０２６２】
治療する癌性組織は、例えば、異常なレベルのＣＤ１０５及び／又はＶＥＧＦを発現する内皮組織である。
【０２６３】
腫瘍組織の新血管形成の不在下では、腫瘍組織は必要な栄養素が得られず、増殖が遅れ、更なる増殖が停止し、退化し最終的には壊死状態になり、腫瘍の殺傷に至る。腫瘍の血管新生を阻害することによって、腫瘍の新血管形成を阻害する方法を本明細書で提供する。同様に、腫瘍の増殖を阻害する方法を本明細書で提供する。
【０２６４】
これらの方法は、転移の形成に対しても特に有効である。それらの形成は、転移性癌細胞が原発性腫瘍から出ることができるような原発性腫瘍の血管形成を必要とし、二次部位中でのそれらの樹立は転移増殖をサポートするための新血管形成を必要とするからである。
【０２６５】
本発明の「癌／転移に罹患する対象」は、突然変異タンパク質（腫瘍関連抗原）又は突然変異遺伝子を発現する可能性があり、未だ疾患の前兆を示していないことは理解されよう。（突然変異Ｋ−ｒａｓタンパク質と関連がある）結腸癌の非制限的な一実施形態では、結腸のいくつかの細胞中の突然変異Ｋ−ｒａｓタンパク質を有する対象は、その対象が未だ結腸癌の前兆を示していない可能性がある場合でも、治療する対象である。「疾患の前兆又は症状」は、臨床的に認められた疾患の出現又は指標を表す。
【０２６６】
腫瘍又は転移に罹患する対象を「治療すること」によって、対象の兆候又は症状が、治療後に部分的に軽減されている、完全に軽減されている、又は停滞状態であることを意味する。治療されている患者は、腫瘍量の部分的又は完全な軽減を示すことができる。これは予防、療法及び治癒を含むものとする。非制限的な一例では、高転移性の癌（例えば、乳癌）に罹患する対象を治療し、この場合更なる転移がいずれかで生じる、又は治療を受けていない対象と比較して数が減少する。非制限的な別の例では、対象を治療し、この場合治療を受けていない対象と比較して、対象の固形癌は大きさが減少した状態、又は大きさが増大しない状態のいずれかになる。非制限的な更に別の例では、治療した対象中の癌細胞の数は、治療を受けていない対象中の癌細胞の数と比較して増大しないか、又は減少するかのいずれかである。例えば、細胞増殖の低下、細胞数の低下、アポトーシスの増大、及び／又は治療する対象の生存期間の増大として、改善を定義することもできる。
【０２６７】
治療は、腫瘍若しくは転移の部分的若しくは完全な排除及び／又は患者の生存期間の延長をもたらし得る。
【０２６８】
一実施形態では、１つ又は複数の兆候又は症状は、患者への１つ又は複数の用量の製剤の投与後に、重症度又は持続期間において、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％又は約１００％低減される。
【０２６９】
別の実施形態では、１つ又は複数の兆候又は症状は、患者への１つ又は複数の用量の製剤の投与後に、重症度又は持続期間において、約２倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約５５倍、約６０倍、約６５倍、約７０倍、約７５倍、約８０倍、約９０倍、約９５倍、約１００倍又はそれ以上低減される。
【０２７０】
本明細書に記載する方法中で治療する腫瘍又は癌には、肺癌、婦人科悪性腫瘍、メラノーマ、乳癌、脳癌（例えば、多形膠芽腫、「ＧＢＭ」又はグリオーマ）、膵臓癌、卵巣癌、子宮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、腎臓癌、頭部癌、肝臓癌（肝細胞癌）、頸部癌、腎臓癌（腎臓細胞癌）、陰茎癌、胃癌、甲状腺癌、膀胱癌、肉腫、癌腫、ミエローマ、及びリンパ腫があるが、これらだけには限られない。一実施形態では、治療する腫瘍は固形又は半固形腫瘍である。別の実施形態では、治療する腫瘍は原発性腫瘍である。別の実施形態では、治療する腫瘍は転移性腫瘍である。一実施形態では、治療する腫瘍又は癌は上皮起源である。別の実施形態では、治療する癌はミエローマである。別の実施形態では、治療する癌は卵巣癌である。別の実施形態では、治療する癌は腎臓／腎癌である。更に別の実施形態では、治療する癌は肝細胞／肝臓癌である。
【０２７１】
化合物は、必要に応じて、アドリアマイシン、シクロホスファミド、パクリタキセル、ペメトレキセド、テモゾロミド、オキサリプラチン、セツキシマブ、パニツムマブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、５−フルオロウラシル、イリノテカン、トポテカン、ロイコボリン、ボルテズミブ、レナリドマイド、サリドマイド、カペシタビン、ドセタキセル、及び本明細書に記載する多くの他の従来の癌治療剤だけには限られないが、これらを含めた、１つ若しくは複数の他の療法治療剤と併用して投与することができる。本明細書で使用する「放射線」は、例えば、マイクロ波、紫外線（ＵＶ）、赤外線（ＩＲ）、又はα−、β−若しくはγ−放射線を指す。放射線は、従来技法を使用して体全体を照射せずに１つ若しくは複数の腫瘍部位に「焦点を当てる」、又はそこに放射線を向けて局所送達することができる。以下に列挙する治療レジメンの一覧は従来の療法を表すが、本発明が、本明細書で具体的に開示しない他の知られている治療レジメンを包含することは理解されるであろう。
【０２７２】
一実施形態では、癌は卵巣癌であり、１つ若しくは複数の他の療法治療は、外科手術、化学療法剤（例えば、ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシンリポソーム、ゲムシタビン、及び白金系化学療法剤、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンなど）、メルファラン、トポテカン及びイリノテカンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤、タキサン系化学療法剤、ホルモン、放射線療法、全身低体温法、イソフラボン誘導体、エポチロンなどの細胞障害性マクロライド、ベバシズマブなどの血管新生阻害剤、トラツズマブなどのシグナル伝達阻害剤、遺伝子療法、ＲＮＡｉ療法、免疫療法、モノクローナル抗体、ラパマイシンなどのホスファチジルイノシトール様キナーゼ阻害剤、又はこれらの任意の組合せである。本明細書に記載する抗体と卵巣癌療法剤の併用療法は、療法剤の同時投与からの相乗効果により、低用量の１つ又は２つの療法をもたらすこともできる。
【０２７３】
一実施形態では、癌は腎臓／腎臓癌であり、１つ若しくは複数の他の療法治療は、外科手術、化学療法剤、パゾパニブ、インターフェロン−α又はＩＬ−２である。更に別の実施形態では、他の作用物質はＶＥＧＦ受容体阻害剤である。ＶＥＧＦ受容体阻害剤の非制限的な例には、前に記載した阻害剤、アフリベルセプト、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ及びパゾパニブがある。本明細書に記載する抗体と腎臓癌療法剤の併用療法は、療法剤の同時投与からの相乗効果により、低用量の１つ又は２つの療法をもたらすこともできる。
【０２７４】
一実施形態では、癌はミエローマであり、１つ若しくは複数の他の療法治療は、外科手術、放射線療法、ボルテゾミブ、レナリドマイド、又はサリドマイドである。任意のこれらの療法に関する用量は当技術分野で知られており、必要に応じて併用療法で調節することができる。
【０２７５】
一実施形態では、癌は前立腺癌であり、１つ若しくは複数の他の療法治療は、外科手術、放射線療法（例えば、外部ビーム又は小線源治療）、ホルモン剥奪療法（アビラテロンを含めたアンドロゲン抑制）、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）阻害剤、化学療法剤（例えば、ドセタキセル、エストラムスチン、シスプラチン、カルボプラチン、サトラプラチン及びオキサリプラチンなどの白金系化学療法剤）、プレドニソン又はプレドニソロン、スタチンなどのコレステロール低下薬、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニスト、ＲＮＡｉ療法、樹状細胞系療法、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を分泌するように遺伝的に改変された完全腫瘍細胞（ＧＶＡＸとしても知られる）、又はこれらの任意の組合せである。更に別の実施形態では、他の作用物質はＶＥＧＦ受容体阻害剤である。ＶＥＧＦ受容体阻害剤の非制限的な例には、アフリベルセプト、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ及びパゾパニブがある。
【０２７６】
一実施形態では、癌は肺癌であり、１つ若しくは複数の他の療法治療は、外科手術、放射線療法（例えば、胸部放射線療法、帯電粒子を用いた放射線療法）、ウラシル−テガフール及び白金系化学療法剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチンなど）、及びビノレブリン、エルロチニブ、ゲフィニチブ、抗上皮増殖因子受容体抗体（例えば、セツキシマブ）、チロシンキナーゼの小分子阻害剤、肺癌細胞増殖に関与するタンパク質の直接阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、レーザー誘導温熱療法、ＲＮＡｉ療法、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を分泌するように遺伝的に改変された完全腫瘍細胞（ＧＶＡＸとしても知られる）、又はこれらの任意の組合せである。他の療法治療剤はパクリタキセル又はペメトレキセドを含む。更に別の実施形態では、他の作用物質はＶＥＧＦ受容体阻害剤である。ＶＥＧＦ受容体阻害剤の非制限的な例には、アフリベルセプト、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ及びパゾパニブがある。任意のこれらの療法に関する用量は当技術分野で知られており、必要に応じて併用療法で調節することができる。
【０２７７】
一実施形態では、癌は乳癌であり、１つ若しくは複数の他の療法治療は、外科手術、モノクローナル抗体（例えば、Ｈｅｒ−２抗体、ヘルセプチン）、単剤化学療法又は併用化学療法などのアジュバント化学療法（例えば、アントラサイクリン−及びタキサン系多剤化学療法）、又は標的特異的トラツズマブ、エンドクリン操作あり又はなし、ＰＭＲＴ操作あり又はなし、ビノレルビン）、アドリアマイシン、シクロホスファミド、カペシタビン、ドセタキセル、タモキシフェン及びラロキシフェンなどの選択的エストロゲン受容体モジュレーター、トリロスタンなどのアロステリックエストロゲン受容体モジュレーター、放射線療法（例えば、腸内小線源治療、マンモサイトデバイス、３次元等角外部放射及び術中放射線療法）、全身合成を抑制するアロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、エクセメスタン及びレトロゾール）、ＲＮＡｉ療法、テムシロリムスなどの免疫抑制があり抗増殖性である静脈内用ラパマイシンアナログ、又はこれらの任意の組合せである。乳癌の三次元ｉｎ  ｖｉｔｒｏ組織培養モデルを実施するための方法の総説は、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ８５（３）：２８１−９１（２００４）によって記載される。癌を試験するための他のｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルは知られており、本明細書に記載する抗体を試験するために使用することができる。更に別の実施形態では、他の作用物質はＶＥＧＦ受容体阻害剤である。ＶＥＧＦ受容体阻害剤の非制限的な例には、アフリベルセプト、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ及びパゾパニブがある。任意のこれらの療法に関する用量は当技術分野で知られており、必要に応じて併用療法で調節することができる。
【０２７８】
一実施形態では、癌は結腸癌であり、１つ若しくは複数の他の療法治療は、外科手術、放射線療法、及び化学療法剤（例えば、５−フルオロウラシル、レバミゾール、ロイコボリン又はセムスチン（メチルＣＣＮＵ））、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］アクリジン−４−カルボキシアミド及び他の関連カルボキシアミド抗癌剤、非トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、イリノテカン、リポソームトポテカン、タキサンクラスの抗癌剤（例えば、パクリタキセル又はドセタキセル）、キサンテノン酢酸クラスの化合物（例えば、５，６−ジメチルアンテノン−４−酢酸ＰＭＡＡ）、ラミナリン、部位選択的環状ＡＭＰアナログ（例えば、８−クロロアデノシン３’，５’−環状リン酸）、Ｃｏｘ−２のピラノインドール阻害剤、Ｃｏｘ−２のカルバゾール阻害剤、Ｃｏｘ−２のテトラヒドロカルバゾール阻害剤、Ｃｏｘ−２のインデン阻害剤、ＮＳＡＩＤＳの局所阻害剤（例えば、アンスラニル酸、アスピリン（５−アセチルサリチル酸）、アゾジサルナトリウム、ヘテロ複素環式炭酸、カルプロフェン、クロラムブシル、ジクロフェナク、フェンブフェン、フェンクロフェナク、フェノプロフェン、フルフェナム酸、フルビプロフェン、フルプロフェン、フロセミド、チオマレイン酸ナトリウム金、イブプロフェン、インドメタシン、インドプロフェン、ケトプロフェン、ロナゾラック、ロキソプロフェン、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メルファラン、ナプロキセン、ペニシラミン、フェニル酢酸、プロピオン酸、サリチル酸、サラゾスルファピリジン、スリンダク、トルメチン、ピラゾロンブタゾンプロパゾンＮＳＡＩＤ、メロキシカム、オキシカム、ピロキシカム、フェルデン、ピロキシカムβシクロデキストラン、テノキシカム、エトドラック、及びオキサプロジン）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕの阻害剤、ＲＮＡｉ療法、ＧＭ−ＣＳＦ、モノクローナル抗体（例えば、抗Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ抗体、抗ＣＥＡ抗体、Ａ３３（ＨＢ８７７９）、１００−２１０（ＨＢ１１７６４）及び１００−３１０（ＨＢ１１０２８））、セツキシマブ、パニツムマブ、ホルモン療法、ピリミジンアミン、カンプトテシン誘導体（例えば、ＣＰＴ−１１）、フォリン酸（ＦＡ）、ゲムシタビン、Ａｒａ−Ｃ、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンなどの白金系化学療法剤、ｃＧＭＰ特異的ホスホジエステラーゼ阻害剤、又はこれらの任意の組合せである。一実施形態では、他の療法治療剤は５−フルオロウラシル、ロイコボリン及びオキサリプラチンの組合せ（ＦＯＬＦＯＸ）である。一実施形態では、他の療法治療剤は５−フルオロウラシル、イリノテカン及びロイコボリンの組合せ（ＩＦＬ）である。一実施形態では、他の作用物質はセツキシマブである。一実施形態では、他の作用物質はパニツムマブである。更に別の実施形態では、他の作用物質はＶＥＧＦ受容体阻害剤である。ＶＥＧＦ受容体阻害剤の非制限的な例には、アフリベルセプト、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ及びパゾパニブがある。任意のこれらの療法に関する用量は当技術分野で知られており、必要に応じて併用療法で調節することができる。
【０２７９】
一実施形態では、癌は膵臓癌であり、１つ若しくは複数の他の療法治療は、療法治療の組合せ、外科手術、放射線療法、５−フルオロウラシル及び放射線治療、全身療法、ステント挿入、ゲムシタビン、ゲムシタビン及び放射線治療、セツキシマブ、エルロチニブ、化学的放射、又はこれらの任意の組合せである。更に別の実施形態では、他の作用物質はＶＥＧＦ受容体阻害剤である。ＶＥＧＦ受容体阻害剤の非制限的な例には、アフリベルセプト、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ及びパゾパニブがある。
【０２８０】
治療レジメン前、最中、及び後を含めた１回又は多数回の時間地点で、いくつかの兆候又は症状に関して患者を評価することができる。治療は対象の状態の改善をもたらすことができ、１つ又は複数の以下の要因：腫瘍の大きさの低下、細胞増殖の低下、細胞数の低下、新血管形成の低下、アポトーシスの増大、又は細胞増殖障害を含む細胞の少なくとも一部分の生存の低下が発生したかどうか決定することによって評価することができる。１つ又は複数のこれらの発生は、いくつかの場合、癌の部分的又は完全排除及び／又は患者の生存期間の延長をもたらす可能性がある。或いは、末期段階の癌に関して、治療は疾患の停滞、より良い生活の質及び／又は生存期間の延長をもたらす可能性がある。
【０２８１】
組成物を順次に投与するとき、本明細書に記載する抗ＣＤ１０５抗体を含む組成物は、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（又はその抗原結合断片）の前及び／又は後に投与することができる。
【０２８２】
組成物を同時に投与するとき、抗ＣＤ１０５抗体を含有する組成物は、抗ＶＥＧＦ抗体を含有する組成物と同じ部位、又は異なる部位に投与することができる。
【０２８３】
なお別の実施形態では、細胞分裂促進活性、細胞増殖、腫瘍増殖、新血管形成、又は血管新生活性などの、それぞれＣＤ１０５又はＶＥＧＦの生物活性の１つ又は複数を阻害することができる、抗ＣＤ１０５抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体（又はその抗原結合断片）を含有する組成物（医薬品）を本明細書で提供する。
【０２８４】
治療レジメンは、本明細書に記載するそれぞれの組成物の、単数回又は複数回の投与を含むことができることは理解されよう。組成物は単数回用量又は複数回用量で投与することができる。別個の組成物の投与は、同じ経路又は異なる経路による投与であってよい。
【０２８５】
一実施形態では、６〜１２サイクル又は腫瘍進行まで１〜３週毎に組成物を投与する。この方法は、最大２年間１〜１２週毎に組成物を投与するステップを更に含むことができる。別の非制限的な例では、抗ＣＤ１０５抗体と抗ＶＥＧＦ抗体（又はその抗原結合断片）の同時投与は第１週で行い、次に第１、２、３又は４週で組成物を追加投与し、この場合同時投与は６〜１２サイクル又は腫瘍進行まで繰り返し、次に最大２年間１〜１２週毎に組成物を投与する。
【０２８６】
患者中の癌を治療するための方法の非制限的な一例では、この方法は、外科手術による癌の除去、及び１２カ月間１〜３週又は腫瘍進行までの抗ＣＤ１０５抗体と抗ＶＥＧＦ抗体（又はその抗原結合断片）の投与、次に１〜１２週一定用量での抗ＣＤ１０５抗体と抗ＶＥＧＦ抗体（又はその抗原結合断片）の同時投与を含む。更に、抗ＣＤ１０５抗体と抗ＶＥＧＦ抗体（又はその抗原結合断片）の同時投与は、最大６サイクルで１〜３週毎に繰り返すことができる。場合によっては、この方法は、最大２年間１〜１２週毎に、抗ＣＤ１０５抗体と抗ＶＥＧＦ抗体（又はその抗原結合断片）を投与することを更に含む。治療レジメンを本明細書で提供するモニタリング法と組合せて、更なる用量の抗ＣＤ１０５抗体と抗ＶＥＧＦ抗体（又はその抗原結合断片）を投与する必要があるかどうか、及びいつ投与すべきかを決定することができることは理解されよう。
【０２８７】
併用療法は相乗及び／若しくは有益効果をもたらすことができ、又は低用量の組合せを与えて高度の安全性をもたらすことができる。本発明は、癌又は他の疾患を予防、管理、治療又は除去するための、抗ＣＤ１０５抗体と抗ＶＥＧＦ抗体（又はその抗原結合断片）の予防又は治療効果を高める治療プロトコールを包含する。
【０２８８】
一実施形態では、例えば（本明細書に記載する）血管新生阻害剤などの更なる療法治療剤を対象に投与する。このような更なる療法治療剤を含有する組成物は、本明細書に記載する他の組成物と併用して（順次又は同時のいずれかで）投与することができる。
【０２８９】
本明細書に提供する癌を治療するための１つの非制限的な方法では、更なる療法治療は、外科手術による癌の除去、照射、１つ若しくは複数の化学療法剤、又はこれらの組合せ、及び本明細書に記載する１つ又は複数の組成物の同時投与を含む。一態様では、組成物の投与は、例えば２０分の静脈内注入であってよい。
【０２９０】
血管新生を伴う眼の状態
一態様では、本発明は、治療有効量の本明細書で提供する１つ又は複数の製剤を患者に投与することによって、患者中の糖尿病性網膜症、黄斑変性症、脈絡膜血管新生、黄斑浮腫又は血管新生緑内障を治療するための方法を提供する。
【０２９１】
黄斑変性症（ＡＭＤ）は、高い視力を担う黄斑と呼ばれる中心網膜部分の光受容体の消失である。黄斑の変性は、網膜色素上皮と血管脈絡膜との間の膜中の、細胞外マトリクス要素及び他の残骸の異常な堆積と関係がある。この残骸様の物質は硝子小体と呼ばれる。硝子小体は眼底鏡検査で観察される。正常な眼が硝子小体を含まない黄斑を有する可能性はあるが、硝子小体は網膜周辺に多量に存在する可能性がある。黄斑視覚のいかなる消失もない状態での、黄斑中の柔らかい硝子小体の存在は初期段階のＡＭＤであると考えられる。黄斑変性症は、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、網膜の網膜色素上皮（ＲＰＥ）層下の異常な血管の発達によって特徴付けられる。これらの血管はブルッフ膜を介して破裂し、網膜色素上皮を破壊し、出血し、黄斑瘢痕形成を最終的に引き起こし、これが中心視力の顕著な消失をもたらす（円盤状瘢痕形成）。
【０２９２】
脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）は、他の眼部障害以外に黄斑変性症において一般に生じ、脈絡膜内皮細胞の増殖、細胞外マトリクスの過剰生産、及び線維血管性網膜下膜の形成と関係がある。網膜色素上皮細胞増殖及び血管新生因子の生成は、脈絡膜血管新生に影響をもたらすようである。
【０２９３】
糖尿病性網膜症（ＤＲ）は、毛細血管基底膜の肥大が原因で糖尿病において発症する過剰な血管新生、及び毛細血管の周皮細胞と内皮細胞との間の接触の欠如によって特徴付けられる眼部障害である。周皮細胞の消失によって毛細血管の漏出が増大し、血液−網膜関門の破壊をもたらす。糖尿病性網膜症は微小血管網膜の変化の結果である。高血糖誘導性の周皮細胞死及び基底膜の肥大は、血管壁の不全をもたらす。これらの損傷は血液−網膜関門の形成を変え、更に網膜血管をより浸透性が高い状態にする。眼中の血管などの小血管は、低血糖（血中グルコース）調節の影響を特に受けやすい。グルコース及び／又はフルクトースの過剰蓄積は網膜中の小血管に損傷を与える。損傷血管が黄斑に流体及び脂質を漏出するときに、黄斑浮腫が発症する可能性もある。これらの流体が黄斑を膨張させ、それが視界を曇らせる。この損傷は網膜における酸素の欠如を更にもたらす。
【０２９４】
疾患が進行すると、網膜における酸素の欠如は、網膜及び眼の内側を満たす透明な、ゲル様の硝子体液に沿った血管新生を刺激する。適時の治療がない場合、これらの新しい血管は出血し、視界を曇らせ、網膜を破壊する可能性がある。維管束増殖は牽引性網膜剥離を引き起こす可能性もある。新しい血管は前眼房隅角に増殖し、血管新生緑内障を引き起こす可能性もある。
【０２９５】
増殖性硝子体網膜症は、硝子体膜内及び網膜表面上の細胞及び線維膜の細胞増殖と関係がある。網膜色素上皮細胞の増殖及び移動はこの眼部障害に共通である。増殖性硝子体網膜症と関係がある膜は、コラーゲンＩ、ＩＩ、及びＩＶ型並びにフィブロネクチンなどの細胞外マトリクス要素を含有し、徐々に線維状になる。
【０２９６】
加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）及び糖尿病性網膜症は、先進国における２つの主な失明の原因である。アフリベルセプト、ラニビズマブ及びペガプタニブは、ＡＭＤ患者に利用可能な治療の選択肢を改善した。ラニビズマブはＦａｂであり、アルフィベリセプト（ａｌｆｉｂｅｒｃｅｐｔ）は融合タンパク質である。これらはいずれも血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）と結合し、ＡＭＤを治療する最も印象的な結果が今日までに実証されているが、しかし、少数の治療患者のみが視力の有意な改善を経験する。ＶＥＧＦ以外の標的に焦点を当てる抗血管新生療法は、ＶＥＧＦ経路を標的化する薬剤に関するいくつかの制約を克服することができる。
【０２９７】
本明細書に記載する抗ＣＤ１０５抗体を使用して、黄斑変性症、ＣＮＶ、糖尿病性網膜症、又は増殖性硝子体網膜症を治療又は予防することができる。本明細書に記載する抗体の投与によって、黄斑変性症、ＣＮＶ、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫又は増殖性硝子体網膜症を治療又は予防する方法を本明細書で記載する。本明細書に記載する抗ＣＤ１０５抗体は、血管を収縮する、眼部疾患と関係がある内皮細胞増殖を阻害する、出血の兆候若しくは症状を除去する、不透明な視界を治療する、視力喪失の停止をもたらす、視覚を改善する、及び／又は血管漏出を防ぐこともできる。本明細書に記載する抗ＣＤ１０５抗体は、黄斑変性症、ＣＮＶ、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫又は増殖性硝子体網膜症を治療するための医薬品において使用することもできる。
【０２９８】
更に、本明細書に記載する抗ＣＤ１０５抗体を、黄斑変性症、ＣＮＶ、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫又は増殖性硝子体網膜症を治療するための知られている治療剤及び／又は化合物と併用して使用することもできる。このような化合物の例には、ラニビズマブ、アフリベルセプト及びペガプタニブが含まれるが、これらだけには限られない。本明細書に記載する投与形態以外に、硝子体内経路によって抗ＣＤ１０５抗体を投与することができる。硝子体内投与形態の非制限的な例には、硝子体内注射、及び硝子体内移植の使用がある。
【０２９９】
治療に対する改善及び応答性に関して患者を評価することができる。治療は、黄斑浮腫の減少、ＣＮＶ領域の減少、及び視力の増大を含むが、これらだけには限られない。兆候又は症状の測定は当技術分野で知られており、以下の実施例中で更に記載する。
【０３００】
本明細書に記載する実施形態によれば、本明細書に記載する製剤は、単独で、又は１つ若しくは複数の更なる活性剤若しくは不活性剤と併用して投与することができる。併用を使用するとき、抗ＣＤ１０５抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体（その抗原結合断片）の同時又は連続投与を使用することができる。
【０３０１】
機能アッセイ
本明細書に記載する製剤は、様々なｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ及びｅｘ  ｖｉｖｏアッセイ中で評価することができる。当技術分野で知られている任意の適切なアッセイを使用して、このような影響をモニタリングすることができる。いくつかのこのような技法は本明細書に記載する。
【０３０２】
ＣＤ１０５のシグナル伝達及び機能に関するアッセイ
ＣＤ１０５（エンドグリン）は増殖内皮細胞によって発現されるＴＧＦ−β受容体ファミリーのメンバーであり、正常レベルのＣＤ１０５が内皮細胞増殖に必要とされる。ＣＤ１０５は固形腫瘍の血管新生脈管構造中で強く発現され、血管新生／血管発達に関与し、補助的形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β）受容体である。ＣＤ１０５は、白血病細胞及び内皮細胞において発現されるホモ二量体細胞膜糖タンパク質である。それらの細胞質尾部のアミノ酸配列が異なる、２つのアイソフォームのＣＤ１０５、Ｌ−エンドグリン（１７０ｋＤａ）及びＳ−エンドグリン（１６０ｋＤａ）が特徴付けされている。
【０３０３】
ＣＤ１０５の発現は、低酸素誘導因子−１−α（ＨＩＦ−１−α）の生成を介した細胞の低酸素状態によって増大し、アポトーシスから低酸素細胞を保護する。ＣＤ１０５は、ＴＧＦ−β受容体（ＴＧＦ−βＲ）、アクチビン受容体様キナーゼ（ＡＬＫ）及びアクチビン受容体を含めた、ＴＧＦ−βスーパーファミリーの多数のキナーゼ受容体複合体のシグナル伝達を調節するために作用する。ＣＤ１０５の不在下において、ＴＧＦ−β受容体の活性化は、内皮細胞増殖を阻害するＳＭＡＤタンパク質のリン酸化をもたらす。しかし、ＴＧＦ−βによるＣＤ１０５の活性化は、ＳＭＡＤタンパク質のリン酸化を調節する。最終結果は、内皮細胞に対するＴＧＦ−β受容体活性化の増殖阻害効果の表れである。
【０３０４】
抗ＣＤ１０５抗体によるＣＤ１０５活性化の防止は、ＴＧＦ−βと共同作用して内皮細胞の増殖を抑制する。ＴＧＦ−βは、内皮細胞中とは逆の効果で２つの異なるＩ型受容体／ＳＭＡＤシグナル伝達経路を刺激することができる。ＴＧＦ−β／ＡＬＫ５シグナル伝達経路（Ａ）は細胞の増殖及び移動の阻害をもたらし、一方ＴＧＦ−β／ＡＬＫ１経路（Ｂ）は内皮細胞の増殖及び移動を誘導する。血管新生中に高度に発現されるＣＤ１０５、補助的ＴＧＦ−β受容体は、ＡＬＫ１シグナル伝達に必要不可欠である。ＣＤ１０５の不在下では、ＴＧＦ−β／ＡＬＫ５シグナル伝達経路が主要であり、静止状態の内皮を維持する。高いＣＤ１０５発現はＡＬＫ１経路を刺激し、ＡＬＫ５シグナル伝達を間接的に阻害し、したがって血管新生の活性化状態を促進する。
【０３０５】
非制限的な一実施形態では、血管新生の阻害及び内皮細胞増殖に関して、抗体を評価することができる。抗ＣＤ１０５抗体とＨＵＶＥＣの結合が、ＴＧＦ−βとＨＵＶＥＣの後の結合を妨げることはない。したがって、抗ＣＤ１０５抗体による内皮細胞増殖の直接抑制は、それによって抗血管新生及び腫瘍抑制効果がｉｎ  ｖｉｖｏで観察される根底メカニズムの１つを表す。別の実施形態では、Ｓｍａｄ１／５／８リン酸化及び／又はシグナル伝達の予防による血管新生の遮断に関して、抗体を評価することができる。ＣＤ１０５はＴＧＦ−β／ＡＬＫ１のシグナル伝達を介した血管新生の促進に関与し、したがってこれはＳｍａｄ２／３タンパク質のリン酸化の低下及び／又は遮断と関係する。更に別の実施形態では、Ｓｍａｄ２／３リン酸化及び／又はシグナル伝達の増大による血管新生の遮断に関して、抗体を評価することができる。
【０３０６】
ＴＧＦ−β／ＡＬＫ１シグナル伝達経路及び／又はＳｍａｄ１／５のリン酸化に対する本明細書で提供する抗体の遮断又は阻害効果をアッセイするための方法及び技法には、知られている分子学的技法があるが、これらだけには限られない。例えば、ＴＧＦ−β／ＡＬＫ５又はＴＧＦ−β／ＡＬＫ１経路中の任意のタンパク質に特異的な抗体を用いるウエスタンブロッティングを使用して、ＴＧＦ−β／ＡＬＫ５又はＴＧＦ−β／ＡＬＫ１経路に対する本明細書で開示する抗ＣＤ１０５抗体の阻害及び／又は刺激効果を決定することができる。同様に、ＴＧＦ−β／ＡＬＫ５又はＴＧＦ−β／ＡＬＫ１経路に関与するタンパク質のｍＲＮＡの検出又はｍＲＮＡの制御を使用して、本明細書で開示する抗体の阻害及び／又は刺激効果をアッセイすることができる。ＴＧＦ−β／ＡＬＫ５又はＴＧＦ−β／ＡＬＫ１経路に関する細胞のシグナル伝達をアッセイするための他の方法は当技術分野で知られており、本明細書において企図する。
【０３０７】
本明細書で開示する抗ＣＤ１０５抗体の活性は、当技術分野で認められているアッセイを使用して、例えばＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡなどの結合アッセイ、表面プラズモン共鳴、及び以下でより詳細に記載するＨＵＶＥＣ細胞に対する影響によって評価することができる。
【０３０８】
ＳＣＩＤ／ヌードマウス
腫瘍増殖をアッセイするための１つの方法は、以下のようにＳＣＩＤマウスを利用する。半密集状態のヒトＭ２１メラノーマ細胞を採取し、洗浄し、滅菌ＰＢＳ（１ｍＬ当たり２０×１０６）中に再縣濁する。ＳＣＩＤマウスには、１００μＬのＭ２１ヒトメラノーマ細胞（２×１０６）縣濁液を皮下注射する。腫瘍細胞注射後３日で、マウスは未治療状態であるか、或いは１つ又は複数の対照又は試験製剤で静脈内又は腹腔内治療する（例えば、１００μｇ／マウス）。マウスは２４日間一日一回治療する。腫瘍の大きさはカリパスで測定し、体積は式Ｖ＝（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して測定し、前式でＶは体積に等しく、Ｌは長さに等しく、且つＷは幅に等しい。
【０３０９】
腫瘍増殖をアッセイするための１つの方法は、以下のようにヌードマウスを利用する。ＭＤＡ−ＭＢ−４３５腫瘍細胞（０．４×１０６細胞／マウス）、５０μｌＰＢＳ中を、メスヌードマウス（５〜６週齢）の乳腺脂肪体中に正所移植する。腫瘍が約５０〜８０ｍｍ３の平均体積に達したとき、マウスをランダムに処理し（少なくとも１０／群）、１週間当たり２回の、１つ又は複数の抗体、投与当たり１μｇ（０．０５ｍｇ／ｋｇ）、１０μｇ（０．５ｍｇ／ｋｇ）、１００μｇ（５ｍｇ／ｋｇ）又は２００μｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）、又は１００μｇ対照抗体、１００μｌＰＢＳ中、又は賦形剤ＰＢＳ１００μｌを用いた静脈内又は腹腔内治療を開始し、いくつかの試験では、未治療群も評価することができる。腫瘍の大きさはカリパスで測定し、体積は式Ｖ＝（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して測定し、前式でＶは体積に等しく、Ｌは長さに等しく、且つＷは幅に等しい。
【０３１０】
ＢＡＬＢ／ｃ同系マウスモデル
或いは、ＢＡＬＢ／ｃ同系マウスモデルを利用して、抗体により、又は例えばＴｓｕｊｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２９：１０８７−１０９４（２００６）によって例証され本明細書に記載するように、腫瘍増殖及びその阻害を評価することもできる。
【０３１１】
マウス
別のアッセイはキメラマウス：ヒトマウスモデルにおける血管新生を測定し、キメラマウスアッセイと呼ばれる。このアッセイは他者によって詳細に記載されており、本明細書で更に記載して血管新生、新血管形成、及び腫瘍組織の退行を測定する。Ｙａｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：９８６−９９６を参照。
【０３１２】
キメラマウスアッセイは、移植皮膚片が組織学的に正常なヒトの皮膚と非常に似ているので、ｉｎ  ｖｉｖｏ血管新生の有用なアッセイモデルであり、全組織の新血管形成が起こり、この場合実際のヒト血管は、移植したヒトの皮膚から、移植したヒトの皮膚の表面上のヒト腫瘍組織に増殖する。ヒト移植片への新血管形成の起源は、ヒト特異的内皮細胞マーカーを用いた新血管の免疫組織化学的染色によって実証することができる。
【０３１３】
キメラマウスアッセイは、新血管増殖の退行の量と程度の両方に基づいて、新血管形成の退行を実証する。更に、腫瘍組織などの移植片皮膚上に移植した任意の組織の増殖に対する影響を、モニタリングすることは容易である。最後に、アッセイシステム中に毒性に関する内部対照が存在するので、このアッセイは有用である。キメラマウスは任意の試験試薬に曝し、したがってマウスの健康状態は毒性の指標である。本明細書に記載し当技術分野で知られている他の動物モデルも、本明細書に記載する方法中で利用することができる。
【０３１４】
ウサギの眼のアッセイ
血管新生の別の測定法はｉｎ  ｖｉｖｏウサギの眼モデルであり、ウサギの眼のアッセイと呼ばれる。ウサギの眼のアッセイは他者によって詳細に記載されており、Ｄ’Ａｍａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１（９）：４０８２−４０８５によって例証されたように、これを使用して血管新生阻害剤の存在下で血管新生と新血管形成の両方が測定されている。
【０３１５】
ウサギの眼のアッセイはｉｎ  ｖｉｖｏ血管新生の認められているアッセイモデルである。角膜の縁から角膜に増大するウサギの血管によって例証される新血管形成プロセスは、本来透明な眼の角膜によって容易に見ることができるからである。更に、新血管形成又は新血管形成の退行の刺激又は阻害の程度と量の両方を、経時的に容易にモニタリングすることができる。
【０３１６】
最後に、ウサギは任意の試験試薬に曝し、したがってウサギの健康状態は試験試薬の毒性の指標である。
【０３１７】
簡単に言うと、ニワトリ絨毛尿膜（ＣＡＭ）アッセイを実施し、脈管構造発達に対する影響を、１つ又は複数の対照又は試験化合物を含有する０．５％カルボキシメチルセルロースペレットの移植後４８時間で記録する。角膜の新血管形成は、スクラルフェート（ショ糖硫酸エステルアルミニウム塩；Ｂｕｋｈ  Ｍｅｄｉｔｅｃ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ）と結合した６５０ｎｇの強力な血管新生タンパク質塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）を含有するポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）（Ｈｙｄｒｏｎ；Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ）の移植ペレットによって誘導する。ペレットへのスクラルフェートの添加はｂＦＧＦが分解するのを妨げ、その徐放をもたらし、したがってｂＦＧＦ／Ｈｙｄｒｏｎ単独によって誘導される血管新生より顕著な絶えず攻撃性のある血管新生をもたらす。スクラルフェート／Ｈｙｄｒｏｎを含有するペレットからのｂＦＧＦの放出は、Ｈｙｄｒｏｎのみを有するペレットのわずか１日と比較して、ペレット形成後最大４日間ｉｎ  ｖｉｔｒｏで検出することができる。ペレットは１２μｇの組換えｂＦＧＦ（Ｔａｋｅｄａ，Ｏｓａｋａ）を含有する１１０μｌの生理食塩水と４０ｍｇのスクラルフェートを混合することによって作製し、この縣濁液を８０μｌの１２％（ｗｔ／ｖｏｌ）Ｈｙｄｒｏｎ、エタノール中に加える。次いでこの混合物のアリコート（１０μｌ）をテフロンペグにピペットで加え、放置乾燥させて、約１７ペレットを生成する。
【０３１８】
縁から２ｍｍの麻酔済みメスニュージーランドホワイトウサギのそれぞれの眼の角膜マイクロポケットにペレットを移植し、次に角膜の表面上にエリスロマイシン軟膏を１回局所施用する。数日連続の組織学的検査は、角膜中ペレットでの段階的な血管増殖を実証し、わずかな炎症細胞のみが見られる。この血管新生応答が全身照射による重度の免疫抑制によって変わることはなく、スクラルフェートのみを有するペレットが血管新生を誘導することはない。新しい血管は、炎症によってではなくｂＦＧＦによって主に誘導される。０．５％カルボキシメチルセルロース又は賦形剤単独に縣濁した１つ又は複数の化合物を用いる胃洗浄による移植後２日から、動物には毎日エサを与える。免疫抑制動物には、ペレットの移植直前に６分間６Ｇｙの全身照射を与える。この照射線量は、顕著な白血球減少、並びに第２日までに８０％超及び第３日までに９０％超の白血球数の減少、以前の報告と一致する結果をもたらす。
【０３１９】
同じ角膜専門家（Ｍ．Ｓ．Ｌ．）によって一日おきに、密閉状態においてスリットランプで動物を調べる。角膜新血管形成の領域は、レティキュールで縁からの血管長（Ｌ）、及び関連縁の実働時間数（Ｃ）を測定することによって決定する。式：Ｃ／１２×３．１４１６［ｒ２−（ｒ−Ｌ）２］を使用して環状帯分節領域を決定し、この場合ｒ＝６ｍｍ、測定したウサギの角膜の径である。ペレット近辺の新血管形成の均一な隣接帯を測定し、したがって新血管形成の全体的阻害を評価することができる。
【０３２０】
マウスマトリゲルプラグ血管新生アッセイ
血管新生に対する製剤の影響を確認するために、マウスマトリゲルプラグ血管新生アッセイを使用することができる。様々な増殖因子（例えば、ＩＧＦ−１、ｂＦＧＦ又はＶＥＧＦ）（２５０ｎｇ）及びヘパリン（１ｍＬ当たり０．００２５単位）を、以前に記載されたように（Ｍｏｎｔｅｓａｎｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９８３，９７：１６４８−１６５２；Ｓｔｅｆａｎｓｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０００，２７６：８１３５−８１４１）低増殖因子マトリゲルと混合する。本明細書に記載する製剤又は対照抗体は、１つ又は複数の用量群の動物を利用してマトリゲル調製物に含めることができる。対照実験では、マトリゲルは増殖因子の不在下で調製する。マウスには０．５ｍＬのマトリゲル調製物を皮下注射し、１週間インキュベーションする。インキュベーション時間後、マウスを屠殺し、重合マトリゲルプラグは外科手術によって除去する。マトリゲルプラグ内の血管新生は、免疫組織化学的分析及びヘモグロビン含有量（Ｆｕｒｓｔｅｎｂｅｒｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ．２００２，３：２９８−３０２；Ｖｏｌｐｅｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２００２，２（６）：４７３−８３；及びＳｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００３，６３：３５８５−３５９２）を含めた、２つの確立した方法によって定量化する。免疫組織化学的分析用に、マトリゲルプラグはＯＣＴ中に包埋し、急凍結し、４μｍ切片を調製する。凍結切片はメタノール／アセトン（１：１）中に固定する。凍結切片はＣＤ３１を対象とするポリクローナル抗体で染色する。２０倍高倍（２００Ｘ）顕微鏡視野内の微小血管密度数によって血管新生を定量化する。
【０３２１】
ヘモグロビン含有量は、以前に記載されたように（Ｓｃｈｎａｐｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９９３，２５６：２３５−２４６；Ｍｏｎｔｅｓａｎｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９８３，９７：１６４８−１６５２；Ｓｔｅｆａｎｓｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０００，２７６：８１３５−８１４１；及びＧｉｇｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８６，１００：１１５４−１１６４）定量化することができる。マトリゲルインプラントはドライアイス上で急凍結し、一晩凍結乾燥させる。乾燥したインプラントは１時間１．０％サポニン０．４ｍＬ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）中に再縣濁し、強度のピペット処理で破壊する。調製物は１４，０００Ｘｇで１５分間遠心分離して、いかなる粒子も除去する。次いで上清中のヘモグロビン濃度を、４０５ｎｍでの吸光度を測定することによって直接決定し、精製ヘモグロビンの標準濃度と比較する。
【０３２２】
細胞移動をアッセイする方法
細胞移動に関するアッセイは文献中で、例えばＢｒｏｏｋｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ  １９９７，９９：１３９０−１３９８によって記載されており、細胞移動を測定するための方法は当業者に知られている。本明細書に記載する細胞移動を測定するための一方法では、トランスウエル移動チャンバーからの膜を基質（ここでは、ＣＤ１０５及び／又はＶＥＧＦ）でコーティングし、トランスウエルを洗浄し、非特異的結合部位はＢＳＡで遮断する。半密集状態の培養物由来の腫瘍細胞を採取し、洗浄し、アッセイ抗体の有無の下で移動バッファー中に再縣濁する。コーティングしたトランスウエル膜の下側に腫瘍細胞を移動させた後、膜の上側に残存する細胞を除去し、下側に移動した細胞はクリスタルバイオレットで染色する。次いで細胞移動は、顕微鏡視野当たりの直接細胞数によって定量化する。
【０３２３】
細胞増殖をアッセイする方法
細胞増殖は当業者に知られている方法によってアッセイすることができる。本明細書に記載するように、半密集状態のヒト内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、ＥＣＶ又はＥＣＶＬ細胞由来のＣＭ（２５μＬ）の有無の下で低濃度（５．０％）血清を含有する増殖バッファー中に再縣濁することができ、内皮細胞は２４時間増殖することができる。市販のＷＳＴ−１アッセイキット（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）を使用してミトコンドリアデヒドロゲナーゼ活性を測定することによって、増殖を定量化することができる。更に、本明細書に記載するように、標準的な方法を使用して３Ｈの取込みを測定することによって、増殖を定量化することができる。（Ｓｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，１０８：２５１−２５７（２００４））。
【０３２４】
細胞増殖を評価する他の方法は当技術分野で知られており、本明細書において企図する。更なる非制限的な例は実施例中でより詳細に記載する。
【０３２５】
ＣＤＣ、ＡＤＣＣ及びオプソニン作用を誘導する方法
様々な療法が、形質転換細胞に対する身体の本来の免疫応答を高めることを対象としている。従来のエフェクター法には、補体依存性細胞溶解反応（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）及びファゴサイトーシス（標的細胞を免疫グロブリンでコーティングした後の細網内皮系による除去）がある。抗体の存在下では、抗体のＦｃ領域に対する表面結合受容体を有するリンパ球細胞などの特定のエフェクター細胞は、標的細胞に対する抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）反応を仲介することが知られている。ＡＤＣＣによって、これらのエフェクター細胞は、このような標的細胞に対して細胞溶解活性を発揮する。
【０３２６】
２つの型のＡＤＣＣ反応がｉｎ  ｖｉｔｒｏで実証されている。古典的ＡＤＣＣ反応では、エフェクター細胞は抗体コーティング標的細胞と結合し、後に標的細胞の細胞溶解を引き起こす（Ａ．Ｈ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  Ｍｅｄｉａｔｉｎｇ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｃｏａｔｅｄ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｃｅｌｌｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１，ｐ．７１９（１９７５））。エフェクターと標的細胞の間のこの結合は、標的細胞コーティング抗体のＦｃ領域とエフェクター細胞のＦｃ受容体の相互作用に起因する。この型のＡＤＣＣ反応の１つの欠点は、エフェクター細胞のＦｃ受容体に対する標的細胞結合抗体と競合し様々な疾患に関与することが多い循環抗原−抗体複合体によって、それが妨害される可能性があることである（Ｉ．Ｃ．Ｍ．ＭａｃＬｅｎｎａｎ，「Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ  Ｆｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｏｎ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ」、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０，ｐ．２７５（１９７２））。古典的ＡＤＣＣのこの欠点のため、第二の型のＡＤＣＣ反応、抗体対象ＡＤＣＣを利用することができる。抗体対象ＡＤＣＣでは、標的特異的抗体がエフェクター細胞と最初に結合し、次いで生成した複合体が、標的細胞表面上のその特異的抗原に対する抗体によって「対象にされる」。有利なことに、抗体対象ＡＤＣＣが、宿主系を循環する抗原−抗体複合体の存在によって影響を受ける可能性はない。Ｆｃ領域／Ｆｃ受容体結合を介した抗体とエフェクター細胞の間の相互作用は通常弱い。更に、いくつかの場合、標的細胞の溶解を可能にするほど十分な時間の間、抗体はエフェクター細胞との結合状態を保たない。この潜在的な問題を鑑みて、ポリエチレングリコールとフタル酸油の混合物を用いた前処理を使用して、抗体とエフェクター細胞を結合させている（Ｊ．Ｆ．Ｊｏｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄ．  Ｍ．Ｓｅｇａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２５，ｐｐ．９２６−３３（１９８０））。しかし、ｉｎ  ｖｉｖｏ治療に関するこの方法の適用性は、抗体−エフェクター細胞複合体上の任意のポリエチレングリコールとフタル酸油残基が身体に対して有し得る毒性効果によって低下する可能性がある。
【０３２７】
或いは、細胞傷害性薬剤を用いたアジュバント化学療法によって、抗体対象ＡＤＣＣを高めるための方法が提案されている（Ｉ．Ｒ．Ｍａｃｋａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，１６，ｐｐ．９８−１００（１９８３））。例えば米国特許第５，７５６，０９７号などの、ＡＤＣＣを試験するためのアッセイは当技術分野でよく知られている。
【０３２８】
したがって、本発明のいくつかの実施形態は、その新血管形成又は血管新生において役割を有し、ファゴサイトーシスを高め細胞を殺傷し、それによってｉｎ  ｖｉｖｏでの防御を高めることができる、細胞と結合することができる抗体を提供する。このような抗体と結合することができ同じ効果を有する、結合部位又はエピトープと免疫反応、特異的に結合、又は優先的に結合する、他の抗体及びその機能断片も提供する。
【０３２９】
更に抗体はオプソニン性である可能性があり、又は新血管形成又は血管新生において役割を有する細胞（例えば、内皮細胞）に対するオプソニン活性を示す可能性がある。当業者が理解しているように、「オプソニン活性」は、抗原又は細胞受容体と結合して、食細胞と抗原又は細胞受容体の結合を促進し、それによってファゴサイトーシスを高める、オプソニン（一般に、抗体又は血清因子Ｃ３ｂのいずれか）の活性を指す。オプソニン抗体でコーティングしたとき、及び血中からのそれらのクリアランス率が著しく高まるときに、特定の細胞は好中球及びマクロファージなどの食細胞に非常に誘引された状態になる。例えば米国特許第６，６１０，２９３号中に記載されたような任意の従来の形式で、オプソニン活性を測定することができる。
【０３３０】
別の非制限的実施形態において、血管新生障害又は血管新生依存性障害を有する患者は、血管新生から抗原／ペプチド（例えばＣＤ１０５）を除去する。これらの抗原／ペプチドは「腫瘍関連抗原」であってよい。このような患者には抗原／ペプチド（例えばＣＤ１０５）に対する抗体を全身投与することができ、本明細書に記載する経路のいずれかを開始して、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、オプソニン作用、又は任意の他の型の細胞仲介型殺傷を誘導することができる。
【０３３１】
他のアッセイ
例えば以下の実施例中に記載するアッセイなどの、当技術分野で知られている他のアッセイを使用して、本明細書に記載する製剤の影響を試験することもできる。
【実施例】
【０３３２】
本出願は、本出願の例示的な実施形態として与える以下の非制限的な実施例を参照することによって、より良く理解することができる。以下の実施例は例示的な実施形態をより完全に例示するために表すが、しかし、決して本出願の広範囲を制限するものとして解釈すべきではない。本出願の特定の実施形態を本明細書で示し記載しているが、このような実施形態は単なる例によって与えられることは明らかであろう。多くの変更、変化、及び置換が存在する可能性があり、本明細書に記載する実施形態に対する様々な実施形態を、本明細書に記載する方法を実施する際に利用することができることは理解されるはずである。
【０３３３】
（例１）
投与のための例示的用量スケジュール
本明細書に記載する抗体及びその抗原結合断片の投与の最適な用量スケジュールは、当該分野で認識される方法を使用して、上記のように決定され得る。
【０３３４】
非制限的な一実施形態では、本明細書に記載する抗体は、様々な時間枠で対象に投与することができる。抗体又はその抗原結合断片の用量（単数又は複数）は、１週間に２回、毎週、２週間毎、３週間毎、４週間毎、６週間毎、８週間毎、１２週間毎又はそれらの間の任意の週間の組合せで投与され得る。例えば抗体投与、４週間の間週に１回又は２回、次に２週間治療なしなどの、投与サイクルも企図される。例えば本明細書に記載する用量及び週サイクルの異なる組合せを含めた、別の投与サイクルも本明細書で企図される。
【０３３５】
（例２）
ＢＩＡｃｏｒｅ（表面プラズモン共鳴：ＳＰＲ）分析
抗体の親和性は、標準的なプロトコールを使用して、例えばＢＩＡｃｏｒｅ分析を使用して評価することができる。簡単に言うと、抗ヒスチジンタグ抗体をヒスチジンタグ組換えヒトＣＤ１０５の捕捉用のＢＩＡｃｏｒｅチップとカップリングさせ、次いでそれを使用して抗ＣＤ１０５抗体の結合を測定する。ＳＰＲアッセイの進行は、少なくとも２チップの調製バッチ及び８チップの分析バッチで実施する。以下のパラメーターをアッセイの進行中に評価する：
【０３３６】
（ａ）ＣＭ５チップと抗ヒスチジン抗体のカップリング
ＥＤＣ／ＮＨＳを使用し従来のアミン化学法によって、抗ヒスチジンタグ抗体をＢＩＡｃｏｒｅ  ＣＭ５チップにカップリングさせる。反応条件（濃度及びｐＨ）は最適化する。
【０３３７】
（ｂ）ヒトＣＤ１０５の結合及びバイオセンサーチップの再生
ヒトＣＤ１０５の結合及びチップの再生に関する条件を、（以前の経験に基づき）様々なバッファーを使用し結合抗体を溶出することによって試験する。候補となる再生法を開発した後、１チップ表面の結合能力及びバックグラウンドを少なくとも２５サイクルにわたり測定する。目的は、平均でサイクル当たり１０ＲＵ未満のバックグラウンドの増大及びサイクル当たり１％未満の能力の低下を得ることである。
【０３３８】
（ｃ）ヒトＣＤ１０５の結合
ヒトＣＤ１０５の用量応答を測定して、最大結合に近づくのに適した濃度を決定する。
【０３３９】
（ｄ）抗ＣＤ１０５抗体の結合
抗ＣＤ１０５抗体の用量応答を測定して、（相対的運動定数、ｋａとｋｄの比較、又は平行線法による相対的効力の比較を含み得る）運動又は平衡状態結合実験に適した範囲を決定する。
【０３４０】
（ｅ）予備確認実験
結合実験を、異なるときに異なるチップ、異なるフローセルを使用し選択した条件下で少なくとも３回繰り返して、測定の精密度及び精度に関する予備情報を得る。全てのＢＩＡｃｏｒｅ実験は、ＨＢＳ−ＥＰランニングバッファー中で２５℃において実施する。
【０３４１】
（例３）
抗ＣＤ１０５抗体の結合に関するＥＬＩＳＡ
ＥＬＩＳＡを使用してＣＤ１０５と抗ＣＤ１０５抗体の結合をアッセイすることができる。簡単に言うと、ＥＬＩＳＡを以下のステップに従い実施する：
１．１５００ｎｇ／ｍｌ、ＰＢＳ中、１００μｌ／ウエルでＭＡＢ９８１１−０１（モノクローナル抗ＣＤ１０５抗体）を用いてプレートをコーティングする。シーラーでプレートを覆い、４℃で（１６〜２４時間）一晩インキュベートする。
２．（Ｔｗｅｅｎを含まない）約２００μｌのＰＢＳでプレートを２回洗浄する。
３．Ｔｗｅｅｎ含有ＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）でプレートを３回洗浄する。
４．ＰＢＳ−Ｔ及び０．１％ＢＳＡ中１００ｎｇ／ｍｌで１００μｌ／ウエルのＣＤ１０５を加え、室温で６０分間インキュベートする。
５．ＰＢＳ−Ｔでプレートを３回洗浄する。
５．試験ウエル中：１００μｌ／ウエルの抗ＣＤ１０５抗体を（ＰＢＳ−Ｔ及び０．１％ＢＳＡ中に希釈し）２０、１０、４、２、１、０．５及び０．２ｎｇ／ｍｌで加え、室温で６０分インキュベートする。陰性対照ウエル中：１００μｌ／ウエルのアイソタイプ適合対照抗体を加える。
７．ＰＢＳ−Ｔでプレートを３回洗浄する。
８．ＰＢＳ−Ｔ及び０．１％ＢＳＡ中に１：１００００希釈した、１００μｌ／ウエルのＨＲＰと結合したヤギ抗ヒトＩｇＧを全てのウエルに加え、室温で３０〜６０分インキュベートする。
９．ＰＢＳ−Ｔでプレートを５回洗浄する。
１０．１００μｌ／ウエルのＴＭＢ基質溶液を加え、１５分間暗所において非被覆状態でインキュベートする。
１１．１００μｌ／ウエルのＴＭＢ停止溶液を加えることにより反応を停止させる。
【０３４２】
サンプルは三連で処理し、光学濃度を読取り標準曲線を構築し、結合定数を決定する。統計解析は、スチューデントのｔ−検定又は別の標準検定を使用して実施する。
【０３４３】
同様のプロトコールを使用して、抗体とＶＥＧＦの結合に関して試験することができることは理解されよう。
【０３４４】
（例４）
ＣＤ１０５発現細胞における抗体親和性及び利用可能なエピトープの数
ＣＤ１０５発現細胞における抗体親和性及び利用可能なエピトープの数は、標準的なプロトコールを使用しスキャッチャードプロット解析を利用して評価することができる。
【０３４５】
簡単に言うと、ＣＤ１０５発現ＫＭ−３白血病細胞及び半密集状態の増殖ＨＵＶＥＣと放射性標識抗ＣＤ１０５抗体の直接結合の、スキャッチャードプロット解析を実施する。精製抗ＣＤ１０５抗体は、Ｉｏｄｏ−Ｇｅｎを使用して当業者に知られている標準的な方法に従い、１２５Ｉで個別に放射性標識する。放射性標識抗ＣＤ１０５抗体は、ＩｇＧ分子当たりの平均ヨウ素原子に関してそれぞれアッセイする。滴定実験は一定量（０．１μｇ）の各１２５Ｉ標識ｍＡｂ及び２倍連続増量のＣＤ１０５発現ＫＭ−３又はＨＵＶＥＣ細胞を使用して実施し、抗原結合活性を決定する。結合データのスキャッチャードプロット解析は知られている方法に従い実施する。平衡定数及びｍＡｂ結合／細胞の平均最大数はこの解析によって評価する。
【０３４６】
（例５）
遮断活性に関するウエスタンブロットアッセイ
ＣＤ１０５を発現する細胞のＣＤ１０５刺激活性化を遮断する抗ＣＤ１０５抗体の能力を、ウエスタンブロットによりアッセイして、ＣＤ１０５シグナル伝達経路に関与するタンパク質のリン酸化を検出することができる。
【０３４７】
知られているウエスタンブロット技法に従い、ウエスタンブロット分析を実施してリン酸化Ｓｍａｄ１／５／８又はＳｍａｄ２を同定する。ＰＳｍａｄ１及びＰＳｍａｄ２抗体は、非トランスフェクト内皮細胞においてリン酸化Ｓｍａｄ１／５又はリン酸化Ｓｍａｄ２を特異的に認識する。Ｓｍａｄ１、Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ５、Ｉｄ１（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）及びＣＤ１０５に対する一次抗体を利用してサンプル中の分子を検出する。検出は増大した化学発光（ＥＣＬ）によって実施する。
【０３４８】
（例６）
ＨＵＶＥＣ増殖の阻害及び３Ｈ−チミジン取込みアッセイ
いくつかのアッセイが細胞増殖の阻害を評価するのに利用可能である。
【０３４９】
一例では、半密集状態下で３７℃においてＣＯ２インキュベーター中、７５ｃｍ２フラスコ（Ｆａｌｃｏｎ、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）内でＨＵＶＥＣを培養する。１５分間３７℃において、ハンクスの平衡塩溶液、及び１５ｍＭ  ＥＤＴＡ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー中、ｐＨ７．３とインキュベートすることにより細胞を脱着させる。氷冷ＰＢＳで２回洗浄した後、細胞は２５，０００細胞／ｍｌの濃度で内皮細胞増殖培地中に再縣濁する。
【０３５０】
更なる実験では、ヒト臍帯静脈内内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を縣濁し、ＦＢＳ及びウシ脳抽出物を含まない内皮細胞増殖培地中で培養する。細胞縣濁液のアリコート２００μｌを、９６ウエル培養プレートのそれぞれのウエルに接種する。抗ＣＤ１０５抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＤ１０５抗体と抗ＶＥＧＦ抗体の組合せ、対照ＩｇＧ又はＴＧＦ−β１を三連で加える前に、一晩ＣＯ２インキュベーター中で３７℃において細胞を培養する。培養プレートは７２時間インキュベーター中に保ち、その間に新たな培地及び抗体又は対照を２４時間毎に交換する。３Ｈ−チミジン（１μＣｉ）をそれぞれのウエルに加え、プレートは２０時間インキュベートする。細胞はＰＢＳで洗浄し、次に１５分間３７℃において１００μｌ／ウエルのトリプシン−ＥＤＴＡ（０．０５％のトリプシン、０．５３ｍＭのＥＤＴＡ）で処理する。細胞はＨａｒｖｅｓｔｅｒ  ９６（ＴＯＭＴＥＣ、Ｈａｍｄｅｎ、ＣＴ）を使用してグラスファイバーフィルター（Ｗａｌｌａｃ  Ｐｒｉｎｔｅｄ  ＦｉｌｔｅｒｍａｔＡ）上に採取し、３Ｈ−放射能はＴｒｉｌｕｘ  １５４０  ＭｉｃｒｏＢｅｔａ液体シンチレーション及び発光カウンター（Ｗａｌｌａｃ、Ｔｕｒｋｕ、Ｆｉｎｌａｎｄ）において測定する。
【０３５１】
（例７）
細胞移動の阻害に関するアッセイ
細胞増殖及び活性化の指標としての移動（化学運動性）を、Ｂｏｙｄｅｎチャンバーを使用し測定する。
【０３５２】
簡単に言うと、細胞移動を以下のように評価する。Ｃｏｓｔａｒヌクレオポアフィルター（８ｍｍ孔）は４℃において一晩フィブロネクチンでコーティングする。チャンバーはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、下部チャンバーには、血清有り又は無し及びＴＧＦ−β３有り又は無しでＤＭＥＭを充填した。細胞はトリプシン処理し、対照抗体、抗ＣＤ１０５抗体、抗ＶＥＧＦ抗体又はこれらの組合せの存在下においてＤＭＥＭ中に５０，０００細胞／ｍｌの最終濃度で縣濁する。細胞縣濁液のアリコート１５０μｌを上部チャンバーに加え、３７℃でインキュベートする。１６時間後、細胞を洗浄し、上側表面を拭いて非移動性細胞を除去する。膜はメタノール中に固定し、水で洗浄し、染色して下側表面上に存在する細胞数を数える。
【０３５３】
（例８）
ＡＤＣＣアッセイ
本明細書に記載する抗体は、例えば以下のプロトコールを使用して、ＩＬ−２活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を生成しＡＤＣＣを誘導するそれらの能力に関して評価することができる。
ＮＫの単離及びＩＬ−２活性化ＮＫ細胞の生成
【０３５４】
ＰＢＭＣを単離し、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ中で４℃において２４時間放置する。次いでＰＢＭＣは２％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ中に置き（合計体積＝５０ｍＬ）、１０ｍＬの細胞縣濁液をペトリ皿に平板培養する。ＰＢＭＣは３７℃で２時間インキュベートし、非接着性細胞を回収する。ＮＫ細胞は４８時間８×１０６／ｍＬ及び１０００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２で培養し、次にアッセイ中で使用する前に５〜８日間通常培養する。
ナチュラルキラー細胞障害性及びＡＤＣＣアッセイ
【０３５５】
ＮＫ細胞を培養物からかき取り、５０ｍＬ円錐形チューブ中に回収する。細胞はＲＰＭＩ完全培地で一回洗浄し、１０分間１２００ｒｐｍで遠心分離する。次いでＮＫ細胞を５ｍＬのＲＰＭＩ完全培地中に再縣濁し計数する。アッセイを実施する前に、ＮＫ細胞数を１０：１のエフェクター：標的比に標準化する。標準化したＮＫ細胞は平板培養し、１０μＬの抗ＣＤ１０５抗体を指定ウエルに加え、３７℃で３０分間インキュベートする。対照サンプルは、未処理又は対照抗体処理した細胞集団を含む。
【０３５６】
対象の標的細胞を回収し（ＨＵＶＥＣ細胞）、洗浄し、１０分間１２００ｒｐｍで遠心分離し、５ｍＬのＲＰＭＩ完全培地中に再縣濁する。標的細胞を再度洗浄し、１×１０６細胞／ｍＬの最終濃度まで無血清ＲＰＭＩ中に再縣濁する。次いで標的細胞を３７℃で１時間、最終濃度５μｇ／ｍＬのＣａｌｃｅｉｎ  ＡＭで標識し、次にＲＰＭＩ完全培地で２回洗浄する。次いで標的細胞を再縣濁し、ＮＫ細胞ウエルに加える。標的細胞／ＮＫ細胞の組合せを３７℃で４時間インキュベートする。インキュベーション後、プレートを５分間１２００ｒｐｍで遠心分離し、細胞を洗浄し、ＤＰＢＳ中に再縣濁する。蛍光は４５０／５３０ｎｍの励起／発光を使用して読み取り、発光は抗体によって仲介される細胞殺傷の指標である。
【０３５７】
（例９）
ＴＲＣ１０５（抗ＣＤ１０５抗体）製剤の安定性評価
本発明者らは、５ｍｇ／ｍｌよりも高い濃度のＴＲＣ１０５について適切な安定性を提供した製剤を同定した。初期の研究により、任意の見かけの溶解性の問題なしに少なくとも２５ｍｇ／ｍｌまでＴＲＣ１０５を濃縮できることが示されている。従って、２５ｍｇ／ｍｌのＴＲＣ１０５を、スクリーニング研究の開始濃度として選択した。これらの研究の過程の間、５０ｍｇ／ｍｌの高い濃度のＴＲＣ１０５の製剤を評価した。７ｍｇ／ｍｌのＴＲＣ１０５及び１００ｍｇ／ｍｌのＴＲＣ１０５の濃度を有する更なる製剤もまた評価した。
【０３５８】
手順
紫外線（ＵＶ）吸光分光法
ＵＶ分光法を使用して、種々の安定性サンプル中のタンパク質濃度を決定した。バルク物質（７．０ｍｇ／ｍＬ）の２８０ｎｍでの吸光度は、１ｍｍ路長のセルを使用して１．１３であることが決定され、１．６１ｍＬ／ｍｇ＊ｃｍの吸光係数が導かれた。この値を、この計画における全ての計算に使用した。更なる測定を、高濃度のサンプルについてより適した０．００９６ｃｍセルを使用して実施した。
【０３５９】
ＴＲＣ１０５熱安定性サンプルのインキュベーション
各熱安定性製剤を、Ｌｕｅｒロックシリンジアタッチメントを備えた０．２２ミクロンのＭｉｌｌｅｘフィルタを通過させ、次いで、１ｍＬの凍結乾燥バイアル中にアリコート化した。各バイアルをブチルストッパーで密封し、アルミニウムキャップで圧着した。サンプルを、示された温度で安定性チャンバー中に置き、週で示されたインキュベーション期間後に取り出した。
【０３６０】
ＴＲＣ１０５の凍結−解凍及び撹拌
凍結−解凍（Ｆ／Ｔ）サンプルを、２５分間凍結させ、次いで、０回、３回又は５回、２５分間解凍した。全ての凍結は−８０℃で実施した。解凍したサンプルを、完全な解凍について試験し、その後冷凍室に戻した。各凍結−解凍サンプルは、１００μＬの溶液を含み、０．５ｍＬ  Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ中に保存した。各サンプルは、０．１％Ｆ６８、０．００５％Ｔｗｅｅｎ  ８０又は界面活性剤無しを含んだ。
【０３６１】
撹拌研究サンプルを、バイアル当たり３５０ｍＬで調製し、静止状態又は振盪のいずれかとしてラベルした。全てのサンプルを、４℃の低温室に移動した。振盪とラベルしたサンプルを、１５０ＲＰＭで動作するオービタルシェーカー上に置いた。静止状態サンプルを、オービタルシェーカーの隣の棚に置いた。各サンプルは、０．１％Ｆ６８、０．００５％Ｔｗｅｅｎ  ８０又は界面活性剤無しを含んだ。サンプルを、示された条件で２４時間インキュベートした。
【０３６２】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
０．２Ｍリン酸二水素ナトリウムを含む移動相を調製し、１．０Ｍ水酸化ナトリウムを使用してｐＨ７．０に調整した。ＴＳＫ  Ｇｅｌ  Ｇ３０００  ＰＷｘｌカラム（７．８ｍｍ×３０ｃｍ、７μｍ粒子＃Ｐ００４７−０２ＰＮ）を全ての分離に使用した。１ｍＬ／分の流速を使用し、検出波長は２８０ｎｍに設定した。注入体積は、２５ｍｇ／ｍＬサンプルについて２μＬ、５０ｍｇ／ｍＬサンプルについて１μＬとした。バッファーブランクを、各三連サンプル分析の前に流し、これらのクロマトグラムを適切に差し引いた。ピークの全ての積分は、Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ  ６．０８において実施した。
【０３６３】
キャピラリーＩＥＦ（ｃＩＥＦ）
キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）分析を、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒによって刊行されたＰＡ  ８００  ｐｌｕｓ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｇｕｉｄｅに記載されるように実施した。より詳細な説明は、Ｍａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  ２００９，３０（２３），４０４９−４０５８）に見出すことができる。全ての分析を、３０ｃｍ全長（２０ｃｍ有効）の中性キャピラリー（５０μｍ  ｉ．ｄ．）を用いて周囲温度で動作するＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｐ／ＡＣＥ（商標）ＭＤＱシステム（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．；Ｂｒｅａ、ＣＡ）を使用して実施した。この中性キャピラリーを、Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ  ２００４，７６（２４），７１７９−７１８６）に記載される方法を使用して、キャピラリー壁にポリ（アクリルアミド）を固定化することによって調製した。全てのｃＩＥＦサンプルを、０．２５ｍｇ／ｍＬの対象のタンパク質を、両性電解質、カソード安定剤、アノード安定剤及びｐＩマーカーを含む３Ｍ尿素−ｃＩＥＦゲルの混合物と混合することによって調製した。サンプルを、キャピラリー中に９．５ｐｓｉで４．１分間圧力注入し、その後、陽極液と陰極液との間で２５ｋＶの電圧を１５分間適用することによって泳動した。このステップの後に、陽極液と化学的可動化剤との間で３０ｋＶで３０分間の化学的可動化を行った。ｐＩマーカー及び対象のタンパク質を、この可動化ステップの間に２８０ｎｍにおける吸光度で検出した。タンパク質のｐＩを、ｐＩ対ｐＩ標準から得られた第１のピークモーメントの得られた回帰方程式から計算した。
【０３６４】
結果及び考察
研究１
ＴＲＣ１０５のサンプルを、５ｍｇ／ｍＬより高い濃度まで首尾よく濃縮した。結果として、研究１を、２５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を使用して実施した。サンプルを、４０℃で２週間保存した。１５の製剤を、ｐＨ及びバッファー組成の影響に焦点を当てて調製した（表２）。これらのサンプルの安定性を評価するために使用した１次分析方法は、ＳＥＣであった。４０℃で２週間の保存後、モノマー含量又は高分子量凝集体の量のいずれにおいても、ＳＥＣによって非常に僅かな変化が見られた（表３）。全ての製剤は、保存後に９９％よりも多いモノマーをなおも含んでいた。
【表２】
2018076350.tif 000004
【表３】
2018076350.tif 000005
【０３６５】
ＴＲＣ１０５は非常に安定であることが見出された。
【０３６６】
研究２
手もとの研究１からの結果を用いて、新たな研究を設計した。研究２では、酢酸塩、ヒスチジン及びクエン酸塩を用いた４．０〜５．５の範囲のｐＨを評価した。選択した浸透圧調節剤／安定剤は、ソルビトール及びトレハロースであった。最後に、２５ｍｇ／ｍｌの製剤に加えて、５０ｍｇ／ｍｌの３つの製剤を試験した。
【表４】
2018076350.tif 000006
【０３６７】
ＴＲＣ１０５の安定性を考えて、これらのサンプルを４０℃で４週間保存して、製剤をより高い程度まで識別することを試みた。１次スクリーニングツールはＳＥＣであった。
【表５】
2018076350.tif 000007
【０３６８】
研究１で見られたのと同様に、ほぼ全ての製剤のモノマー含量は、４０℃で１カ月間の後でさえ、９９．５％を超えている（表５）。１つのサンプルは、増加したレベルの凝集を示すように思われ、これはＦ１６であった；このサンプルは、これが実際の結果であるかどうかを見るための再試験を行わなかった。酢酸塩中ｐＨ４又はヒスチジン中ｐＨ５．５が、適切且つ匹敵する安定性を提供するように見えることが示されている。クエン酸塩及び刺激を懸念して、これを更なる検討の対象から除外した。
【０３６９】
これらのサンプルも、キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を使用して分析した。ｃＩＥＦ電気泳動図の全体の重心を、第１のモーメントとして計算した。これらの値を、サンプルの平均ｐＩ値とみなすことができる（表６）。
【表６】
2018076350.tif 000008
【０３７０】
全体として、任意の製剤についてのｐＩ値における変化は小さく、脱アミド化、即ち荷電したＡｓｐ生成物を形成するＡｓｎ側鎖の加水分解は、比較的緩徐であることを示唆している（表６）。従って、ＴＲＣ１０５のこれらの製剤は、物理的に安定であり（即ち、凝集がほとんど又はまったくない）、化学的に安定である（即ち、断片化がなく、脱アミド化がほとんど又はまったくない）ようである。
【０３７１】
他の懸念は、これらのより高い濃度の製剤が、有害な粘度を示し、それによってその臨床利用を制限するかどうかであった。
【表７】
2018076350.tif 000009
【０３７２】
５０ｍｇ／ｍｌであっても、ＴＲＣ１０５は、限定的な取扱い及び投与についての懸念を引き起こすいずれの値も十分に下回る、２ｃＳｔ未満の粘度を示す（表７を参照）。
【０３７３】
撹拌研究
熱ストレスは、異なる安定性の製剤を識別するために有用であるが、これはタンパク質が遭遇し得る唯一のストレスではない。タンパク質の界面損傷は一般的であり、界面ストレスに対する感受性を評価すべきである。これを、撹拌及び反復凍結−解凍（Ｆ／Ｔ）サイクリングを使用して実施した。
【表８】
2018076350.tif 000010
【０３７４】
撹拌に際してモノマーの特記すべき損失は存在せず、全ての製剤が、９９．７％よりも多いモノマーを示し、静止状態対照との顕著な差異は存在しなかった（表８）。Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８又はポリソルベート８０などの界面活性剤を加えても、撹拌に際した安定性の役に立つことも損なうこともしないようである。
【０３７５】
Ｆ／Ｔ研究
界面ストレスに対するＴＲＣ１０５の感受性を試験する第２の研究は、反復凍結−解凍サイクルへの曝露を含んだ。これは、界面（氷−水界面など）における損傷についての情報を提供するだけでなく、引き続く分析のため又は出荷の間にＴＲＣ１０５サンプルを凍結できるかどうかについての本質的な情報を提供する。
【表９】
2018076350.tif 000011
【０３７６】
反復Ｆ／Ｔサイクリングに際してモノマー含量における変化は事実上存在しない（表９）。驚くべきことに、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８又はポリソルベート８０などの界面活性剤を加えても、反復Ｆ／Ｔサイクリングに際した安定性は変わらなかった。撹拌データと合わせると、界面損傷が懸念される程度までにＴＲＣ１０５が界面活性的であることを示すものはない。従って、界面活性剤は、液体製剤には必要ない。
【０３７７】
まとめ
製剤スクリーニング研究を、最大５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度でＴＲＣ１０５に対して実施した。このタンパク質は非常に安定であり、４０℃で４週間の保存後でも、ＳＥＣによってモノマー含量における小さい減少のみを示した。断片化はＳＥＣでは全く見られなかった。その間、ｃＩＥＦ分析により、全体的なｐＩにおける小さな変化だけが観察されたことが示され、脱アミド化が問題のｐＨ範囲（４．０〜５．５）にわたって最小であったことを示唆している。界面損傷に対する感受性に関して証拠は存在しなかったが、界面活性剤がＴＲＣ１０５の液体製剤中では必要なかったことを示している。
【０３７８】
リード製剤は、浸透圧調節剤及び安定剤としてのソルビトール又はトレハロースと共に、ｐＨ４．０で酢酸塩バッファー又はｐＨ５．５でヒスチジンバッファーを使用した。
【０３７９】
（例１０）
ＴＲＣ１０５製剤の長期安定性評価
長期安定性評価を実施して、研究１及び研究２における結果を検証した。表１０に示される製剤のサンプルを、５℃及び２５℃で保存した。
【表１０】
2018076350.tif 000012
【０３８０】
結果及び考察
７つの試験製剤を、５℃で１年間及び２５℃で６カ月間の過程にわたって評価した。５℃では、全ての製剤が良好な成績であった。この研究の全ての時点における全てのサンプルについての外観は、透明で無色であった。一般に、ｐＨ値は、研究の持続期間にわたって新たな製剤の全てにわたって一定のままであった（表１１及び１２を参照）。値は、標的よりも０．１〜０．２単位僅かに高かったが、安定なままであった。ＵＶによって決定した新たな製剤についての濃度値は、濃度に関わらず、元の標的値の約３〜４％以内で一定のままであった（表１１及び１２を参照）。これらの値は、研究の過程にわたって顕著には変化しなかった。５℃ではＳＥＣによる最小のモノマー損失（表１３を参照）、及びｃＩＥＦによる最小量の化学的分解（表１５及び１６を参照）が存在した。Ｆ０５についての開始時の結果を除いて、ＣＤ１０５結合ＥＬＩＳＡの結果においてある程度の変動性が存在したが、全ての値は参照標準の値と比較して５０％〜１５０％の許容基準内であり、ＥＬＩＳＡアッセイの発色の段階と一致していた（表１７を参照）。ＣＥ−ＳＤＳ試験の結果により、これらのサンプルが、１年間の過程にわたって５℃で参照物質と匹敵していたことが示された（データ示さず）。
【０３８１】
５℃で保存したサンプルは、本質的に変化しなかったが、製剤のパラメーターは、２５℃のサンプルの安定性に対して影響を有していた。最も顕著なことに、酢酸塩バッファー系を含む製剤（Ｆ０３、Ｆ０５、Ｆ０７）は、ヒスチジンバッファーを含む製剤（Ｆ０１、Ｆ０２、Ｆ０４及びＦ０６）よりも、パーセントモノマーにおいて高い減少を示した（表１４を参照）。その間、タンパク質濃度における変化は、ほとんど又は全く影響を有さないようである。２つの１００ｍｇ／ｍＬ製剤（Ｆ０６、Ｆ０７）は、そのＳＥＣプロファイル及びｃＩＥＦプロファイルに関して、その５０ｍｇ／ｍＬ対応物（Ｆ０４、Ｆ０５）と匹敵している。
【表１１】
2018076350.tif 000013
【表１２】
2018076350.tif 000014
【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
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【表１６】
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【表１７】
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【０３８２】
（例１１）
４ｍｇ／ｍＬ  ＴＲＣ１０５製剤の長期安定性評価
安定性研究を、１４５ｍＭ塩化ナトリウムを含む１７ｍＭリン酸塩バッファーｐＨ７．２中４ｍｇ／ｍＬで製剤化したＴＲＣ１０５に対して実施した（Ｌｏｔ  ＦＩＮ−０５３６）。３６カ月間の安定性データが、推奨された保存条件（２〜８℃）で利用可能であり、１カ月間のデータが、２５℃／６０％ＲＨの加速条件において利用可能である。この安定性データを以下の表に示す。顕著な変化は、実施した試験のいずれについても観察されなかった。結果として、これらの研究は、１４５ｍＭ塩化ナトリウムを含む１７ｍＭリン酸塩バッファーｐＨ７．２中４ｍｇ／ｍＬで製剤化したＴＲＣ１０５が、２〜８℃で保存した場合少なくとも３６カ月間安定であることを示している。
【表１８−１】
2018076350.tif 000020
【表１８−２】
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【表１９】
2018076350.tif 000022
ＳＥＣ−ＨＰＬＣ及びＵＶについての分析手順は例９に記載したものと同じである。ＣＤ１０５結合ＥＬＩＳＡについての分析手順は例３に記載したものと同じである。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ非還元、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ還元及びＩＥＦについての分析手順は以下に記載する。
【０３８３】
非還元型タンパク質及びペプチドのＳＤＳ−ＰＡＧＥ、クマシー染色
正体及び純度を、ポリアクリルアミドゲル電気泳動分析を使用して評価する。タンパク質を変性条件下で分離する。プレキャスト４〜１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  ＳＤＳ含有ゲルを使用する。ＳＤＳは、タンパク質と相互作用して負に荷電した複合体を形成するアニオン性洗浄剤である。これらの複合体は、そのサイズに従ってポリアクリルアミドゲルを移動し、より小さいタンパク質はより大きいタンパク質よりも速く移動する。標準、対照及び試験物を変性させ、ゲル上にロードする。泳動の完了後、ゲルをクマシーブルーで染色する。ゲルを、画像化濃度計を使用して走査する。
【０３８４】
各染色バンドの相対量を、各試験物のレーンについて濃度測定によって決定する。これらの量を、そのレーンについて得られた総バンド量の百分率として表す。試験物バンドの分子量（ｋＤａ）値を、分子量マーカーとの比較に基づいて決定する。
【０３８５】
還元型タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ、クマシー染色
還元型タンパク質についてのＳＤＳ−ＰＡＧＥ法は、還元ステップを追加して（分子間及び分子内ジスルフィド結合を切断して、タンパク質サブユニット及び他の凝集体を放出するため）、非還元サンプルについてセクション１．３．２（上記）に記載したのと同じである。タンパク質を還元するために、ジチオスレイトール（５０ｍＭ）をサンプル及び参照に加え、その後８５℃で５分間加熱する。還元型タンパク質を泳動する場合、抗酸化剤をランニングバッファーに加える。
【０３８６】
水平等電点電気泳動（ＩＥＦ）
適用された電気力下のタンパク質上の変動する電荷を利用して、タンパク質を分離する。ｐＨ勾配を、カソードをより高いｐＨ値にして、カソードとアノードとの間で確立する。タンパク質は両性の性質を有するので、タンパク質は、そのｐＩより下では正に荷電した値を有し、そのｐＩより上では負に荷電した値を有する。電気力の影響下でｐＨ勾配を確立すると、タンパク質は、その等電点において移動及び集中する。この手順は、水平形式でプレキャストゲルを使用するタンパク質サンプルの等電点電気泳動の使用を含む。電気泳動後、ゲルをクマシー染色する。各バンドの面積を、各サンプルレーンについて濃度測定によって決定する。バンドの面積を、総バンド面積の百分率として計算する。ｐＩ及びＲｆ値もまた、各バンドについて決定する。
【０３８７】
（例１２）
結腸直腸癌に関する臨床試験
この実施例は、結腸直腸癌を有する患者において抗ＣＤ１０５抗体の安全性及び有効性の予備アセスメントを与えるために設計した、ランダム化、盲検化、プラセボ対照、多施設、第ＩＩ相試験を記載する。およそ約１００〜約８００の患者を登録し、約５０〜約４００の患者を治療群に割り当て、約５０〜約４００の患者をプラセボ群に割り当てる。臨床試験は、約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇで反復用量の抗ＣＤ１０５抗体の静脈内投与、又は６〜１０サイクルで２週毎にプラセボの静脈内投与を含む。全ての群で化学療法を使用することができる。ＶＥＧＦ阻害剤は、全ての群で使用することができる。試験の時間枠は約６カ月〜約５年で推定し、初期試験の最後に必要を示す応答者には治療を続ける。他の結果測定法は以下の通りである：
【０３８８】
主要評価項目測定：奏功率。この試験の１つの目的は、対照ＩｇＧと比較した、抗ＣＤ１０５抗体による治療からの奏功率の増大を実証することである。
【０３８９】
評価することができる二次評価項目測定は、奏功期間、腫瘍進行の時間、全体的生存率、重度及び軽度の有害事象を含む。例えば、治療は疾患の進行を予防することができ（即ち安定状態）、又は改善をもたらすことができる。代替的、又は追加的に、以下の１つ又は複数、腫瘍負荷の減少、新血管形成の減少、副作用の低下、有害反応の減少、及び／又は患者のコンプライアンスの向上に関する、他の目的を測定することができる。
【０３９０】
（例１３）
腎臓癌に関する臨床試験
この実施例は、腎細胞癌（腎臓癌）を有する患者において抗ＣＤ１０５抗体の安全性及び有効性の予備アセスメントを与えるために設計した、ランダム化、盲検化、プラセボ対照、多施設、第ＩＩ相試験を記載する。およそ約１００〜約８００の患者を登録し、約５０〜約４００の患者を治療群に割り当て、約５０〜約４００の患者をプラセボ群に割り当てる。臨床試験は、約０．１〜約３０ｍｇ／ｋｇで反復用量の抗ＣＤ１０５抗体の静脈内投与、又は３〜６サイクル若しくは進行まで１〜３週毎にプラセボの静脈内投与を含む。インターフェロンも両治療群で使用することができる。ＶＥＧＦ阻害剤は、両治療群で使用することができる。試験の時間枠は約６カ月〜約５年で推定し、初期試験の最後に必要を示す応答者には治療を続ける。他の結果測定法は以下の通りである：
【０３９１】
主要評価項目測定：無憎悪生存期間。この試験の１つの目的は、プラセボと比較した、抗ＣＤ１０５抗体による治療後の無憎悪生存期間の増大を実証することである。
【０３９２】
評価することができる二次評価項目測定は、奏功期間、腫瘍進行の時間、全体的生存率、重度及び軽度の有害事象を含む。例えば、治療は疾患の進行を予防することができ（即ち安定状態）、又は改善をもたらすことができる。代替的、又は追加的に、以下の１つ又は複数、腫瘍負荷の減少、新血管形成の減少、副作用の低下、有害反応の減少、及び／又は患者のコンプライアンスの向上に関する、他の目的を測定することができる。
【０３９３】
（例１４）
肝細胞癌に関する臨床試験
この実施例は、肝細胞癌（肝臓癌）を有する患者において抗ＣＤ１０５抗体の安全性及び有効性の予備アセスメントを与えるために設計した、ランダム化、盲検化、プラセボ対照、多施設、第ＩＩ相試験を記載する。およそ約１００〜約８００の患者を登録し、約５０〜約４００の患者を治療群に割り当て、約５０〜約４００の患者をプラセボ群に割り当てる。ＶＥＧＦ阻害剤は、両群で使用することができる。臨床試験は、約０．１〜約３０ｍｇ／ｋｇで反復用量の抗ＣＤ１０５抗体の静脈内投与、又は１〜３週毎に若しくは進行までプラセボの静脈内投与を含む。試験の時間枠は約６カ月〜約５年で推定し、初期試験の最後に必要を示す応答者には治療を続ける。他の結果測定法は以下の通りである：
【０３９４】
主要評価項目測定：無憎悪生存期間。この試験の１つの目的は、プラセボと比較した、抗ＣＤ１０５抗体による治療後の無憎悪生存期間の増大を実証することである。
【０３９５】
評価することができる二次評価項目測定は、奏功期間、腫瘍進行の時間、全体的生存率、重度及び軽度の有害事象を含む。例えば、治療は疾患の進行を予防することができ（即ち安定状態）、又は改善をもたらすことができる。代替的、又は追加的に、以下の１つ又は複数、腫瘍負荷の減少、新血管形成の減少、副作用の低下、有害反応の減少、及び／又は患者のコンプライアンスの向上に関する、他の目的を測定することができる。
【０３９６】
（例１５）
卵巣癌に関する臨床試験
この実施例は、卵巣癌を有する患者において抗ＣＤ１０５抗体の安全性及び有効性の予備アセスメントを与えるために設計した、ランダム化、盲検化、プラセボ対照、多施設、第ＩＩ相試験を記載する。およそ約１００〜約８００の患者を登録し、約５０〜約４００の患者を治療群に割り当て、約５０〜約４００の患者をプラセボ群に割り当てる。臨床試験は、約０．１〜約３０ｍｇ／ｋｇで反復用量の抗ＣＤ１０５抗体の静脈内投与、又は５サイクルで１〜３週毎にプラセボの静脈内投与を含む。化学療法を両治療群で使用することもできる。ＶＥＧＦ阻害剤は、両治療群で使用することができる。試験の時間枠は約６カ月〜約５年で推定し、初期試験の最後に必要を示す応答者には治療を続ける。他の結果測定法は以下の通りである：
【０３９７】
主要評価項目測定：無憎悪生存期間。この試験の１つの目的は、プラセボと比較した、抗ＣＤ１０５抗体による治療後の無憎悪生存期間の増大を実証することである。
【０３９８】
評価することができる二次評価項目測定は、奏功期間、腫瘍進行の時間、全体的生存率、重度及び軽度の有害事象を含む。例えば、治療は疾患の進行を予防することができ（即ち安定状態）、又は改善をもたらすことができる。代替的、又は追加的に、以下の１つ又は複数、腫瘍負荷の減少、新血管形成の減少、副作用の低下、有害反応の減少、及び／又は患者のコンプライアンスの向上に関する、他の目的を測定することができる。
【０３９９】
（例１６）
加齢性黄斑変性症の治療
第一試験
加齢性黄斑変性症の症状を示す患者を、抗ＣＤ１０５抗体又は対照抗体の硝子体内注射により治療して、血管新生、黄斑疾患、及び網膜障害の発生を低減又は予防する。
【０４００】
治療の第一ステップとして、患者は完全な眼科検査を受けて眼部健康のベースラインを確定する。眼科検査は、間接的眼底検査、細隙灯生体鏡検、周辺部網膜検査、眼内圧測定、視力（肉眼及び最高矯正）症候学、眼底撮影法、蛍光眼底造影法、光干渉断層法、網膜電図写真及びＡ−スキャン測定を含む。
【０４０１】
予備検査後、前に記載した硝子体内注射を、ＡＭＤの症状を示す患者の罹患した眼に与える。両眼が罹患している場合、それらは別々に治療することができる。治療する眼には点眼液を注射する。
【０４０２】
治療後、患者の眼は第１、２、７、１５、３０及び６０日に、及びその後は２年間にわたり毎月検査する。再発の可能性があるため、患者はその後１カ月単位の定期健診に戻らなければならない。それぞれの検診日に、硝子体液化に関して患者をモニタリングする。更に、間接的眼底検査及び強膜圧迫法を使用して、後部硝子体剥離に関して患者をモニタリングする。最後に、患者によって示されるＡＭＤの程度を、定期的網膜検査、光干渉断層法及び蛍光眼底造影法により絶えずモニタリングして、網膜下液、血液、滲出液、ＲＰＥ剥離、網膜内嚢胞様変化の存在、又はグレーがかった緑色の網膜下血管新生膜の存在をモニタリングする。再発する血管新生の兆候が観察される場合、別の治療が必要とされる可能性がある。別の治療は１週間又は１カ月単位で与えることができる。好ましい実施形態では、初期治療に１〜６カ月間隔の間で二次治療を続ける。
【０４０３】
第二試験
目的：血管新生加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）を治療するための硝子体内での抗ＣＤ１０５抗体の有効性を実証すること。ＶＥＧＦ阻害剤は、全ての患者で使用することができる。
【０４０４】
方法：ＡＭＤが原因である中心眼窩の脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を有する５０〜５００の患者（５０〜５００の眼）が、承認された場所での試験に関与する。
【０４０５】
再注射の基準は、黄斑中の流体の存在、少なくとも１００ミクロンの増大した中心網膜厚（ＣＲＴ）、黄斑中の増大した流体に関連した少なくとも５視標の消失、新古典的ＣＮＶ、又は新黄斑出血である。主要評価項目測定は、１２カ月後に１５視標未満を失う眼の割合である。最高矯正視力及び眼の臨床検査は、第１週、第１カ月で、及び次いで５〜１２カ月間月に１回実施する。
【０４０６】
平均視力及び平均ＣＲＴはベースラインと比較して測定する。眼部及び／又は全身副作用を記す。
【０４０７】
（例１７）
ヒト化脱免疫化抗体配列
単離されたヒト化脱免疫化抗ＣＤ１０５抗体は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含み得る。
【０４０８】
配列番号１１：
【化１】
2018076350.tif 000023
【０４０９】
配列番号１２：
【化２】
2018076350.tif 000024
【０４１０】
ヒト化脱免疫化重鎖の他の非制限的例には、配列番号１３、１４、１５及び１６が含まれるが、これらだけには限られない。
【０４１１】
配列番号１３：
【化３】
2018076350.tif 000025
【０４１２】
配列番号１４：
【化４】
2018076350.tif 000026
【０４１３】
配列番号１５：
【化５】
2018076350.tif 000027
【０４１４】
配列番号１６：
【化６】
2018076350.tif 000028
【０４１５】
ヒト化脱免疫化軽鎖の他の非制限的例には、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２及び２３が含まれるが、これらだけには限られない。
【０４１６】
配列番号１７：
【化７】
2018076350.tif 000029
【０４１７】
配列番号１８：
【化８】
2018076350.tif 000030
【０４１８】
配列番号１９：
【化９】
2018076350.tif 000031
【０４１９】
配列番号２０：
【化１０】
2018076350.tif 000032
【０４２０】
配列番号２１：
【化１１】
2018076350.tif 000033
【０４２１】
配列番号２２：
【化１２】
2018076350.tif 000034
【０４２２】
配列番号２３：
【化１３】
2018076350.tif 000035
【０４２３】
本明細書に記載する実施形態は、本発明の精神若しくはその本質的特徴から逸脱せずに、他の型で具体化することができ、又は他の方法で実施することができる。したがって本開示は、全態様において制限的ではなく例示的として考えられ、均等性の意味及び範囲内に入る全ての変形はその中に包含されると考えられる。
【図１】
2018076350.tif 000036
【図２】
2018076350.tif 000037
【配列表】
2018076350000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成29年12月26日(2017.12.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
約２５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、約１０ｍＭから約２０ｍＭの緩衝剤、及び約１２０ｍＭから約２４０ｍＭのポリオールを含み、ｐＨが約４．０〜約７．５である製剤であって、該緩衝剤がヒスチジン又は酢酸塩であり、かつ該ポリオールがトレハロース又はソルビトールである、上記製剤。
【請求項２】
約２５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、約１０ｍＭから約２０ｍＭの緩衝剤、及び約１２０ｍＭから約２４０ｍＭのポリオールを含み、ｐＨが４．０±０．２である製剤であって、該緩衝剤が酢酸塩であり、かつ該ポリオールがトレハロース又はソルビトールである、上記製剤。
【請求項３】
約２５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、約１０ｍＭから約２０ｍＭの緩衝剤、及び約１２０ｍＭから約２４０ｍＭのポリオールを含み、ｐＨが５．５±０．２である製剤であって、該緩衝剤がヒスチジンであり、かつ該ポリオールがトレハロース又はソルビトールである、上記製剤。
【請求項４】
前記抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、少なくとも１２カ月間にわたる約２〜８℃での保存後にモノマーとして存在する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項５】
前記抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、少なくとも６カ月間にわたる約２５℃での保存後にモノマーとして存在する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項６】
前記抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９０％が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、少なくとも６カ月間にわたる約２５℃での保存後にモノマーとして存在する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項７】
前記ｐＨが約４．０〜約５．５である、請求項１に記載の製剤。
【請求項８】
前記緩衝剤がヒスチジンであり、かつ前記ｐＨが約５．５である、請求項１に記載の製剤。
【請求項９】
前記緩衝剤がヒスチジンであり、かつ前記ｐＨが５．３〜５．７である、請求項８に記載の製剤。
【請求項１０】
前記緩衝剤がヒスチジンであり、かつ前記ｐＨが５．５である、請求項１又は３に記載の製剤。
【請求項１１】
前記緩衝剤が酢酸塩であり、かつ前記ｐＨが約４．０である、請求項１に記載の製剤。
【請求項１２】
前記緩衝剤が酢酸塩であり、かつ前記ｐＨが３．８〜４．２である、請求項１１に記載の製剤。
【請求項１３】
前記緩衝剤が酢酸塩であり、かつ前記ｐＨが４．０である、請求項１又は２に記載の製剤。
【請求項１４】
前記抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片が、少なくとも１２カ月間にわたる約２〜８℃での保存後に、ＣＤ１０５  ＥＬＩＳＡ結合アッセイによって約５０〜１５０％の結合を示す、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１５】
前記抗ＣＤ１０５抗体の平均等電点（ｐＩ）が、キャピラリー電気泳動−等電点電気泳動によって測定して、少なくとも１２カ月間にわたる２〜８℃での保存後に、約８．７〜約９．２である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１６】
前記抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１７】
前記抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１８】
約２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１９】
約５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２０】
約１００ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２１】
約２０ｍＭのヒスチジンを含む、請求項１又は３に記載の製剤。
【請求項２２】
前記製剤が硝子体内投与用に製剤化されている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２３】
前記製剤が静脈内投与用に製剤化されている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２４】
更に許容される担体又は賦形剤を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２５】
前記担体又は賦形剤が、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤である、請求項２４に記載の製剤。
【請求項２６】
等張又は高張である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２７】
前記ポリオールが約１２０ｍＭから約２４０ｍＭであり、かつ前記製剤が塩で等張にされる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２８】
前記抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％が、製剤の凍結解凍サイクルの後にＳＥＣによって測定してモノマーとして存在する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２９】
前記抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％が、撹拌ストレスにさらされた場合にＳＥＣによって測定してモノマーとして存在する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項３０】
前記ポリオールがトレハロースである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項３１】
約２４０ｍＭのトレハロースを含む、請求項３０に記載の製剤。
【請求項３２】
前記ポリオールがソルビトールである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項３３】
約２４０ｍＭのソルビトールを含む、請求項３２に記載の製剤。
【請求項３４】
界面活性剤を更に含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項３５】
前記界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０又はＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８である、請求項３４に記載の製剤。
【請求項３６】
前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域（ＣＬ）；及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＦｃ領域をさらに含む、請求項１６に記載の製剤。
【請求項３７】
血管新生関連疾患の治療のための、請求項１から３６までのいずれか一項に記載の製剤。
【請求項３８】
前記血管新生関連疾患が癌又はその転移癌である、請求項３７に記載の製剤。
【請求項３９】
前記癌が固形腫瘍である、請求項３８に記載の製剤。
【請求項４０】
前記癌が上皮ベースの腫瘍である、請求項３８に記載の製剤。
【請求項４１】
前記癌が、肺癌、メラノーマ、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、子宮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、腎臓癌、頭部癌、肝臓癌、首部癌、肉腫、ミエローマ、脳腫瘍又はリンパ腫である、請求項３８に記載の製剤。
【請求項４２】
前記血管新生関連疾患が眼科的症状である、請求項３７に記載の製剤。
【請求項４３】
前記眼科的症状が、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、又は脈絡膜血管新生である、請求項４２に記載の製剤。
【請求項４４】
前記加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）が萎縮型ＡＭＤである、請求項４３に記載の製剤。
【請求項４５】
前記加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）が滲出型ＡＭＤである、請求項４３に記載の製剤。
【請求項４６】
請求項１〜２１、及び２３〜４１のいずれか一項に記載の製剤を含む、静脈内投与に適したプレフィルドシリンジ。
【請求項４７】
請求項１〜２２、２４〜３７、及び４２〜４５のいずれか一項に記載の製剤を含む、硝子体内投与に適したプレフィルドシリンジ。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４２３】
本明細書に記載する実施形態は、本発明の精神若しくはその本質的特徴から逸脱せずに、他の型で具体化することができ、又は他の方法で実施することができる。したがって本開示は、全態様において制限的ではなく例示的として考えられ、均等性の意味及び範囲内に入る全ての変形はその中に包含されると考えられる。
本発明の好ましい態様には以下が含まれる。
（１）約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、最大約１００ｍＭの緩衝剤、及び最大約１Ｍのポリオールを含み、ｐＨが約４．０〜約７．５である製剤。
（２）抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、少なくとも１２カ月間にわたる約２〜８℃での保存後にモノマーとして存在する、（１）に記載の製剤。
（３）抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、少なくとも６カ月間にわたる約２５℃での保存後にモノマーとして存在する、（１）に記載の製剤。
（４）抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９０％が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定して、少なくとも６カ月間にわたる約２５℃での保存後にモノマーとして存在する、（１）に記載の製剤。
（５）前記緩衝剤がヒスチジン又はリン酸緩衝生理食塩水である、（１）に記載の製剤。
（６）緩衝剤が酢酸塩であり、ｐＨが約４である、（１）に記載の製剤。
（７）緩衝剤がヒスチジンであり、ｐＨが約５．５である、（１）に記載の製剤。
（８）抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片が、少なくとも１２カ月間にわたる約２〜８℃での保存後に、ＣＤ１０５  ＥＬＩＳＡ結合アッセイによって約５０〜１５０％の結合を示す、（１）に記載の製剤。
（９）抗ＣＤ１０５抗体の平均等電点（ｐＩ）が、キャピラリー電気泳動−等電点電気泳動によって測定して、少なくとも１２カ月間にわたる２〜８℃での保存後に、約８．７〜約９．２である、（１）に記載の製剤。
（１０）前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域（ＣＬ）；配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する定常領域（Ｆｃ）を含む、（１）に記載の製剤。
（１１）前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む、（１）に記載の製剤。
（１２）約２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、（１）に記載の製剤。
（１３）約５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、（１）に記載の製剤。
（１４）約１００ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、（１）に記載の製剤。
（１５）前記緩衝剤がヒスチジン又は酢酸塩である、（１）に記載の製剤。
（１６）約２０ｍＭのヒスチジン又は酢酸塩を含む、（１５）に記載の製剤。
（１７）硝子体内投与又は静脈内投与のために製剤化されている、（１）に記載の製剤。
（１８）許容される担体又は賦形剤を更に含む、（１）に記載の製剤。
（１９）
前記担体又は賦形剤が、薬学的に許容される担体又は賦形剤である、（１８）に記載の製剤。
（２０）等張又は高張である、（１）に記載の製剤。
（２１）ポリオールが３００ｍＭ未満であり、製剤が塩で等張にされる、（１）に記載の製剤。
（２２）抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％が、ＳＥＣによって測定して、製剤の凍結解凍サイクルの後にモノマーとして存在する、（１）に記載の製剤。
（２３）抗ＣＤ１０５抗体の少なくとも９５％が、ＳＥＣによって測定して、撹拌ストレスにさらされた場合にモノマーとして存在する、（１）に記載の製剤。
（２４）ポリオールが糖である、（１）に記載の製剤。
（２５）前記糖が非還元糖である、（２４）に記載の製剤。
（２６）非還元糖がトレハロース又はスクロースである、（２５）に記載の製剤。
（２７）約２４０ｍＭのトレハロース又はスクロースを含む、（２６）に記載の製剤。
（２８）糖がソルビトールである、（２４）に記載の製剤。
（２９）約２４０ｍＭのソルビトールを含む、（２８）に記載の製剤。
（３０）界面活性剤を更に含む、（１）に記載の製剤。
（３１）界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０又はＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８である、（３０）に記載の製剤。
（３２）（１）から（３１）までのいずれか一項に記載の製剤を含む、静脈内投与又は硝子体内投与に適した、プレフィルドシリンジ。
（３３）それを必要とする対象において血管新生関連疾患を治療する方法であって、患者に、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、最大約１００ｍＭの緩衝剤、最大約１Ｍのポリオール及び約４．０〜約７．５のｐＨを含む製剤を投与することを含む、上記方法。
（３４）前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域（ＣＬ）；配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する定常領域（Ｆｃ）を含む、（３３）に記載の方法。
（３５）前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む、（３３）に記載の方法。
（３６）約２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、（３３）に記載の方法。
（３７）約５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、（３３）に記載の方法。
（３８）約１００ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、（３３）に記載の方法。
（３９）前記製剤が３００ｍＭ未満のポリオールを含み、製剤が塩で等張にされる、（３３）に記載の方法。
（４０）前記緩衝剤がヒスチジン又は酢酸塩である、（３３）に記載の方法。
（４１）約２０ｍＭのヒスチジン又は酢酸塩を含む、（４０）に記載の方法。
（４２）ポリオールが糖である、（３３）に記載の方法。
（４３）糖が非還元糖である、（４２）に記載の方法。
（４４）非還元糖がトレハロース又はスクロースである、（４３）に記載の方法。
（４５）約２４０ｍＭのトレハロース又はスクロースを含む、（４４）に記載の方法。
（４６）糖がソルビトールである、（４２）に記載の方法。
（４７）約２４０ｍＭのソルビトールを含む、（４６）に記載の方法。
（４８）前記製剤が、硝子体内又は静脈内に投与される、（３３）に記載の方法。
（４９）界面活性剤を更に含む、（３３）に記載の方法。
（５０）界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０又はＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８である、（４９）に記載の方法。
（５１）血管新生関連疾患が癌、又は転移癌である、（３３）に記載の方法。
（５２）癌が固形腫瘍である、（５１）に記載の方法。
（５３）癌が上皮系腫瘍である、（５１）に記載の方法。
（５４）癌が肺癌、婦人科悪性腫瘍、メラノーマ、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、子宮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、腎臓癌、頭部癌、膵臓癌、肝臓癌（肝細胞癌）、子宮癌、首部癌、腎臓癌（腎細胞癌）、肉腫、ミエローマ、脳癌又はリンパ腫である、（５１）に記載の方法。
（５５）前記血管新生関連疾患が眼科的状態である、（３３）に記載の方法。
（５６）眼科的状態が、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症又は脈絡膜血管新生である、（５５）に記載の方法。
（５７）前記加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）が滲出型ＡＭＤ又は萎縮型ＡＭＤである、（５６）に記載の方法。
（５８）前記製剤が前記患者に１回又は複数回投与される、（３３）に記載の方法。
（５９）前記製剤が、１日１回、１週間に１回、１カ月に１回、１カ月に２回、２カ月に１回、３カ月に１回、４カ月に１回、５カ月に１回又は６カ月に１回投与される、（３３）に記載の方法。
（６０）前記製剤が、血管新生関連疾患の１つ又は複数の兆候又は症状が低減されるまで投与される、（３３）に記載の方法。
（６１）前記１つ又は複数の兆候又は症状が、重症度又は持続期間において、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％又は約１００％低減される、（６０）に記載の方法。
（６２）前記１つ又は複数の兆候又は症状が、重症度又は持続期間において、約２倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約５５倍、約６０倍、約６５倍、約７０倍、約７５倍、約８０倍、約９０倍、約９５倍、約１００倍又はそれ以上低減される、（６０）に記載の方法。
（６３）前記１つ又は複数の兆候又は症状が、血管を収縮する、眼部疾患と関係がある内皮細胞増殖を阻害する、出血の兆候若しくは症状を除去する、不透明な視界を治療する、視力喪失の停止をもたらす、視覚を改善する、及び／又は血管漏出を防ぐことである、（６０）に記載の方法。
（６４）治療が、患者の状態における改善をもたらし、１つ又は複数の以下の要因：細胞増殖の低下、細胞数の低下、アポトーシスの増大、又は細胞増殖障害を含む細胞の少なくとも一部分の生存の低下が発生したかどうか決定することによって評価することができる、（３３）に記載の方法。
（６５）治療が、腫瘍若しくは転移の部分的若しくは完全な排除及び／又は患者の生存期間の延長をもたらす、（３３）に記載の方法。
（６６）それを必要とする患者において眼科的状態を治療する方法であって、前記患者に、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、最大約１００ｍＭの緩衝剤、最大約１Ｍのポリオール、約４．０〜約７．５のｐＨ及び任意選択で界面活性剤を含む製剤を投与することを含み、それによって前記眼科的状態の１つ又は複数の兆候又は症状が改善される、上記方法。
（６７）眼科的状態が、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症又は脈絡膜血管新生である、（６６）に記載の方法。
（６８）前記加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）が滲出型ＡＭＤ又は萎縮型ＡＭＤである、（６７）に記載の方法。
（６９）前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域（ＣＬ）；配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する定常領域（Ｆｃ）を含む、（６６）に記載の方法。
（７０）前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む、（６６）に記載の方法。
（７１）前記１つ又は複数の兆候又は症状が、血管を収縮する、眼部疾患と関係がある内皮細胞増殖を阻害する、出血の兆候若しくは症状を除去する、不透明な視界を治療する、視力喪失の停止をもたらす、視覚を改善する、及び／又は血管漏出を防ぐことである、（６６）に記載の方法。
（７２）前記１つ又は複数の兆候又は症状が、重症度又は持続期間において、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％又は約１００％低減される、（６６）に記載の方法。
（７３）前記１つ又は複数の兆候又は症状が、重症度又は持続期間において、約２倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約５５倍、約６０倍、約６５倍、約７０倍、約７５倍、約８０倍、約９０倍、約９５倍、約１００倍又はそれ以上低減される、（６６）に記載の方法。
（７４）前記製剤が３００ｍＭ未満のポリオールを含み、製剤が塩で等張にされる、（６６）に記載の方法。
（７５）それを必要とする対象において癌又は転移癌を予防又は治療する方法であって、前記患者に、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片、最大約１００ｍＭの緩衝剤、最大約１Ｍのポリオール及び約４．０〜約７．５のｐＨを含む製剤を投与することを含み、それによって前記癌又は転移癌の１つ又は複数の兆候又は症状が改善される、上記方法。
（７６）抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域（ＣＬ）；配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する定常領域（Ｆｃ）を含む、（７５）に記載の方法。
（７７）前記抗ＣＤ１０５抗体が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号７に記載のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号９に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む、（７５）に記載の方法。
（７８）製剤の投与が、対象の生命を延長させる、（７５）に記載の方法。
（７９）前記癌が原発性腫瘍又は転移性腫瘍である、（７５）に記載の方法。
（８０）前記癌が固形腫瘍である、（７５）に記載の方法。
（８１）前記固形腫瘍が、皮膚、メラノーマ、肺、膵臓、乳、卵巣、結腸、直腸、胃、甲状腺、喉頭、卵巣、前立腺、結腸直腸、頭、首、眼、口、喉、食道、胸、骨、精巣、リンパ、骨髄、骨、肉腫、腎臓、汗腺、肝臓、腎臓、脳（例えば、多形性膠芽腫、グリオーマ）などから選択される組織又は器官の固形腫瘍である、（８０）に記載の方法。
（８２）前記固形腫瘍が、結腸腫瘍、乳房腫瘍、腎臓腫瘍、肺腫瘍、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍、又はこのような腫瘍のいずれかの転移である、（８１）に記載の方法。
（８３）治療が、対象の状態における改善をもたらし、１つ又は複数の以下の要因：細胞増殖の低下、細胞数の低下、アポトーシスの増大、又は細胞増殖障害を含む細胞の少なくとも一部分の生存の低下が発生したかどうか決定することによって評価することができる、（７５）に記載の方法。
（８４）治療が、腫瘍若しくは転移の部分的若しくは完全な排除及び／又は患者の生存期間の延長をもたらす、（７５）に記載の方法。
（８５）前記１つ又は複数の兆候又は症状が、重症度又は持続期間において、約２％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約９０％、約９５％又は約１００％低減される、（７５）に記載の方法。
（８６）前記１つ又は複数の兆候又は症状が、重症度又は持続期間において、約２倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約４５倍、約５０倍、約５５倍、約６０倍、約６５倍、約７０倍、約７５倍、約８０倍、約９０倍、約９５倍、約１００倍又はそれ以上低減される、（７５）に記載の方法。
（８７）約２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、（７５）に記載の方法。
（８８）約５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、（７５）に記載の方法。
（８９）約１００ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ１０５抗体又はその抗原結合断片を含む、（７５）に記載の方法。
（９０）前記緩衝剤がヒスチジン又は酢酸塩である、（７５）に記載の方法。
（９１）約２０ｍＭのヒスチジン又は酢酸塩を含む、（９０）に記載の方法。
（９２）ポリオールが糖である、（７５）に記載の方法。
（９３）前記糖が非還元糖である、（９２）に記載の方法。
（９４）非還元糖がトレハロース又はスクロースである、（９３）に記載の方法。
（９５）約２４０ｍＭのトレハロース又はスクロースを含む、（９４）に記載の方法。
（９６）前記糖がソルビトールである、（９２）に記載の方法。
（９７）約２４０ｍＭのソルビトールを含む、（９６）に記載の方法。
（９８）前記製剤が３００ｍＭ未満のポリオールを含み、製剤が塩で等張にされる、（７５）に記載の方法。
（９９）界面活性剤を更に含む、（７５）に記載の方法。
（１００）界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０又はＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８である、（９９）に記載の方法。
（１０１）前記製剤が静脈内投与される、（７５）に記載の方法。
（１０２）表１の製剤１〜３９のいずれか１つを含む、製剤。
（１０３）（１０２）に記載の製剤を含む、プレフィルドシリンジ。
（１０４）血管新生関連疾患の治療のための、（１０２）に記載の製剤の使用。
（１０５）血管新生関連疾患の治療のための医薬品の製造における、（１０２）に記載の製剤の使用。