(57)【要約】      （修正有）【課題】グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）及び／又はＧＬＰ−１の天然或いは人工的に生じる変異体若しくは類似体、又はそれらの薬学的に許容される塩を用いた疾患及び状態の処置並びに／又は改善に関連した方法及び組成物の提供。【解決手段】ＧＬＰ−１及び／又はＧＬＰ−１の天然若しくは人工的に生じる変異体若しくは類似体、又はそれらの薬学的に許容される塩を１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、投与することを含む、疾患又は状態の治療及び／又は予防のための方法及び組成物。更に１種以上の活性薬剤を含み、活性薬剤が、シクロスポリン、心臓療薬、抗炎症。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＬＰ−１を、単独で、あるいは、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）または第ＩＩ節もしくは表１に記載されている１つ以上の芳香族カチオン性ペプチドと組み合わせて含むことを特徴とする組成物。
【請求項２】
シクロスポリン、心臓病薬、抗炎症薬、降圧剤、抗体、点眼薬、抗酸化剤、金属錯体、および抗ヒスタミン薬などの１つ以上の追加の活性薬剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ミトコンドリア機能不全を治療または予防するための方法であって、治療上有効な量の請求項１または２に記載の組成物を投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項４】
ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患または状態を治療する方法であって、治療上有効な量の請求項１または２に記載の組成物を投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項５】
前記疾患または状態が、神経性または神経変性疾患または状態、虚血、再灌流、低酸素症、アテローム性動脈硬化症、尿管閉塞、糖尿病、糖尿病の合併症、関節炎、肝損傷、インスリン抵抗性、糖尿病性腎症、急性腎損傷、慢性腎損傷、腎毒性薬剤および／または放射性造影剤への曝露に起因する急性または慢性腎損傷、高血圧、代謝症候群、眼疾患または眼状態、例えば、ドライアイ、糖尿病性網膜症、白内障、網膜色素変性、緑内障、黄斑変性、脈絡膜血管新生、網膜変性、酸素誘発性網膜症、心筋症、虚血性心疾患、心不全、高血圧性心筋症、血管閉塞、血管閉塞損傷、心筋梗塞、冠動脈疾患、酸化的損傷を含む、請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
前記ミトコンドリア機能不全が、ミトコンドリア透過性転移を含む、請求項３〜５に記載の方法。
【請求項７】
前記神経性または神経変性疾患または状態が、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、ハンチントン病、または多発性硬化症を含む、請求項３〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記対象が、虚血を患っているか、または心血管組織、骨格筋組織、脳組織、および腎組織のうちの１つ以上においてノーリフローの解剖学的ゾーンを有する、請求項３〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
ＣＤ３６の発現の減少を必要とする対象におけるＣＤ３６の発現を減少させるための方法であって、有効な量の請求項１または２に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項１０】
ＣＤ３６の上昇を特徴とする疾患または状態の治療または予防を必要とする対象におけるＣＤ３６の上昇を特徴とする疾患または状態を治療または予防するための方法であって、有効な量の請求項１または２に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項１１】
前記対象が、アテローム性動脈硬化症、炎症、血管新生異常、脂質代謝異常、アポトーシス細胞の除去異常、脳虚血および心筋虚血などの虚血、虚血−再灌流、尿管閉塞、脳卒中、アルツハイマー病、糖尿病、糖尿病性腎症、または肥満を有する、有すると疑われる、または有する危険性があると診断される、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
除去された臓器または組織における酸化的損傷を低減させるための方法であって、有効な量の請求項１または２に記載の組成物を前記除去された臓器または組織に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項１３】
前記除去された臓器が、心臓、肺、膵臓、腎臓、肝臓、または皮膚を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ドーパミン産生ニューロンの損失の予防を必要とする対象におけるドーパミン産生ニューロンの損失を予防するための方法であって、有効な量の請求項１または２に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項１５】
前記対象が、パーキンソン病またはＡＬＳを有する、有すると疑われる、または有する危険性があると診断される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１６】
神経変性疾患に関連する酸化的損傷の低減を必要とする対象における神経変性疾患に関連する酸化的損傷を低減させる方法であって、有効な量の請求項１または２に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項１７】
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、またはＡＬＳを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
熱傷の予防または治療を必要とする対象における熱傷を予防または治療するための方法であって、有効な量の請求項１または２に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項１９】
人工呼吸誘発性横隔膜機能不全の治療または予防を必要とする対象における人工呼吸誘発性横隔膜機能不全を治療または予防するための方法であって、有効な量の請求項１または２に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項２０】
虚血−再灌流傷害後のノーリフローの治療または予防を必要とする対象における虚血−再灌流傷害後のノーリフローを治療または予防するための方法であって、有効な量の請求項１に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項２１】
鎮痛剤を必要とする哺乳動物におけるノルエピネフリン取り込みを予防するための方法であって、有効な量の請求項１または２に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項２２】
薬物誘発性末梢神経障害または痛覚過敏の治療または予防を必要とする対象における薬物誘発性末梢神経障害または痛覚過敏を治療または予防するための方法であって、有効な量の請求項１または２に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項２３】
疼痛の阻害または抑制を必要とする対象における疼痛を阻害または抑制するための方法であって、有効な量の請求項１または２に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項２４】
アテローム硬化性腎血管疾患（ＡＲＶＤ）の治療を必要とする対象におけるアテローム硬化性腎血管疾患（ＡＲＶＤ）を治療するための方法であって、有効な量の請求項１または２に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項２５】
１つ以上のＤ−アミノ酸の包含、１つ以上のＮ−メチル化部位の包含、および１つ以上の還元アミド結合（Ψ［ＣＨ2−ＮＨ］）の包含から選択される修飾を備えるＧｌｐ−１類似体を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項２６】
少なくとも１つの薬学的に許容されるｐＨ低下剤、および前記活性薬剤の生物学的利用能の促進に有効な少なくとも１つの吸収促進剤、および１つ以上の積層のうちの１つ以上をさらに含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ｐＨ低下剤が、クエン酸、酒石酸、およびアミノ酸の酸性塩からなる群から選択される、請求項２６に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１２年１２月６日に出願された米国仮出願第６１／７３４，２９３号の利益を主張するものであり、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（技術分野）
ＧＬＰ−１、および／またはＧＬＰ−１の天然もしくは人工的に生じる変異体もしくは類似体、またはそれらの薬学的に許容される塩を用いた疾患および状態の処置ならびに／または改善に関連した方法および組成物が本明細書に開示される。いくつかの実施形態において、疾患または状態は、ミトコンドリア機能不全を特徴とする。ＧＬＰ−１、および／またはＧＬＰ−１の天然もしくは人工的に生じる変異体もしくは類似体、またはそれらの薬学的に許容される塩を含む治療および薬学的組成物も本明細書に提供される。ＧＬＰ−１および１つ以上の芳香族カチオン性ペプチドを用いた疾患および状態の処置および／改善に関連した方法および組成物も本明細書に提供される。
【背景技術】
【０００３】
グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）は、栄養素摂取に応じて、２つの主要な主な分子形態であるＧＬＰ−１（７−３６）アミドおよびＧＬＰ−１（７−３７）へのプログルカゴンの分化プロセシングによって、腸内分泌細胞内で合成される。ペプチドは、１９８０年代初期にプログルカゴンのクローニングを受けて最初に特定された。
【０００４】
ＧＬＰ−１生物学的活性の初期研究は、ＧＬＰ−１の完全長Ｎ−末端延長形態（１−３７および１−３６アミド）を用いた。これらのより大きいＧＬＰ−１分子は、一般的に、生物学的活性を欠いていると考えられる。１９８７年に、３つの独立した研究グループは、第１の６個のアミノ酸の除去が実質的に強化された生物学的活性を有するＧＬＰ−１のバージョンをもたらすことを実証した。
【０００５】
循環している生物学的活性ＧＬＰ−１の大部分は、ＧＬＰ−１（７−３６）アミド形態で見つけられる。ＧＬＰ−１（７−３６）の生物学的効果は、グルコース依存性インスリン分泌および生合成の刺激、グルカゴン分泌および胃内容排出の阻害、ならびに食物摂取の阻害を含む。ＧＬＰ−１が細胞感受性を外来性分泌促進物質に戻し得るという示唆と共にまとめられた、ＧＬＰ−１が糖尿病を有する患者の血中グルコースを下げるという発見は、増大するＧＬＰ−１シグナル伝達が糖尿病患者の処置に有用な手段であることを示唆する。次々と出る証拠は、ＧＬＰ−１シグナル伝達が膵島増殖および膵島新生を調節することを強く示唆する。さらに、ＧＬＰ−１は、心筋機能の改善、体重の減少、および血圧の低下に関与している。
【０００６】
ＧＬＰ−１は、酵素ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ  ＩＶ）によってその分解産物ＧＬＰ−１（９−３６）に迅速に不活化される。ＤＰＰ  ＩＶ媒介不活化は、げっ歯類およびヒトの両方におけるインビボのＧＬＰ−１の生物学的活性を調節するための重要な制御機構である。いくつかの研究はまた、ＧＬＰ−１の細胞内タンパク質分解における中性エンドペプチダーゼ２４．１１の役割を含意した。
【０００７】
ＤＰＰ  ＩＶ阻害剤、およびＧＬＰ−１（７−３６）のより緩徐に分解する類似体は、現在、治療目的のために開発されている。ＤＰＰ  ＩＶ開裂に耐性のあるＧＬＰ−１類似体は、インビボでより強力であると予想される。天然に生じるＤＰＰ  ＩＶ耐性ＧＬＰ−１類似体の例は、リザードエキセンディン−４である。
【０００８】
糖尿病および他の疾患または状態の合併症を減少させるために、高血糖誘発活性酸素種を減少または除去する新たな処置の必要性が存在する。本発明は、これら両方の必要性に対応する。
【発明の概要】
【０００９】
一態様において、本開示は、ＧＬＰ−１を単独で、あるいは１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）、または第ＩＩ節もしくは表１に開示される１つ以上の芳香族カチオン性ペプチドと組み合わせて含む組成物を提供する。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本組成物は、シクロスポリン、心臓病薬、抗炎症薬、降圧剤、抗体、点眼薬、抗酸化剤、金属錯体（ｍｅｔａｌ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｒ）、および抗ヒスタミン薬などの１つ以上の追加の活性薬剤をさらに含む。
【００１１】
一態様において、本開示は、治療上有効な量の請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、対象においてミトコンドリア機能不全を処置または予防するための方法を提供する。
【００１２】
一態様において、本開示は、治療上有効な量の請求項１に記載の組成物を投与することを含む、ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患または状態を処置する方法を提供する。
【００１３】
いくつかの実施形態において、疾患または状態は、神経性または神経変性疾患または状態、虚血、再灌流、低酸素症、アテローム性動脈硬化症、尿管閉塞、糖尿病、糖尿病の合併症、関節炎、肝損傷、インスリン抵抗性、糖尿病性腎症、急性腎損傷、慢性腎損傷、腎毒性薬剤および／または放射性造影剤（ｒａｄｉｏｃｏｎｔｒａｓｔ  ｄｙｅ）への曝露に起因する急性または慢性腎損傷、高血圧、代謝症候群、眼疾患または眼状態、例えば、ドライアイ、糖尿病性網膜症、白内障、網膜色素変性、緑内障、黄斑変性、脈絡膜血管新生、網膜変性、酸素誘発性網膜症、心筋症、虚血性心疾患、心不全、高血圧性心筋症、血管閉塞、血管閉塞損傷、心筋梗塞、冠動脈疾患、酸化的損傷を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、ミトコンドリア機能不全は、ミトコンドリア透過性転移を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、神経性または神経変性疾患または状態は、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、ハンチントン病、または多発性硬化症を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、対象は、虚血を患っているか、または心血管組織、骨格筋組織、脳組織、および腎組織のうちの１つ以上においてノーリフロー（ｎｏ−ｒｅｆｌｏｗ）の解剖学的ゾーンを有する。
【００１７】
一態様において、本開示は、有効な量の請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、ＣＤ３６の発現の減少を必要とする対象におけるＣＤ３６の発現を減少させるための方法を提供する。
【００１８】
一態様において、本開示は、有効な量の請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、ＣＤ３６の上昇を特徴とする疾患または状態の処置または予防を必要とする対象におけるＣＤ３６の上昇を特徴とする疾患または状態を処置または予防するための方法を提供する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、対象は、アテローム性動脈硬化症、炎症、血管新生異常、脂質代謝異常、アポトーシス細胞の除去異常、脳虚血および心筋虚血などの虚血、虚血−再灌流、尿管閉塞、脳卒中、アルツハイマー病、糖尿病、糖尿病性腎症、または肥満を有する、有すると疑われる、または有する危険性があると診断される。
【００２０】
一態様において、本開示は、有効な量の請求項１に記載の組成物を除去された臓器または組織に投与することを含む、除去された臓器または組織における酸化的損傷を低減させるための方法を提供する。
【００２１】
いくつかの実施形態において、除去された臓器は、心臓、肺、膵臓、腎臓、肝臓、または皮膚を含む。
【００２２】
一態様において、本開示は、有効な量の請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、ドーパミン産生ニューロンの損失の予防を必要とする対象におけるドーパミン産生ニューロンの損失を予防するための方法を提供する。
【００２３】
いくつかの実施形態において、対象は、パーキンソン病またはＡＬＳを有する、有すると疑われる、または有する危険性があると診断される。
【００２４】
一態様において、本開示は、有効な量の請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、神経変性疾患に関連する酸化的損傷の低減を必要とする対象における神経変性疾患に関連する酸化的損傷を低減させる方法を提供する。
【００２５】
いくつかの実施形態において、神経変性疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、またはＡＬＳを含む。
【００２６】
一態様において、本開示は、有効な量の請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、熱傷の予防または処置を必要とする対象における熱傷を予防または処置するための方法を提供する。
【００２７】
一態様において、本開示は、有効な量の請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、人工呼吸誘発性横隔膜機能不全の処置または予防を必要とする対象における人工呼吸誘発性横隔膜機能不全を処置または予防するための方法を提供する。
【００２８】
一態様において、本開示は、有効な量の請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、虚血−再灌流傷害後のノーリフローの処置または予防を必要とする対象における虚血−再灌流傷害後のノーリフローを処置または予防するための方法を提供する。
【００２９】
一態様において、本開示は、有効な量の請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、鎮痛剤を必要とする哺乳動物におけるノルエピネフリン取り込みを予防するための方法を提供する。
【００３０】
一態様において、本開示は、有効な量の請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、薬物誘発性末梢神経障害または痛覚過敏の処置または予防を必要とする対象における薬物誘発性末梢神経障害または痛覚過敏を処置または予防するための方法を提供する。
【００３１】
一態様において、本開示は、有効な量の請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、疼痛の阻害または抑制を必要とする対象における疼痛を阻害または抑制するための方法を提供する。
【００３２】
一態様において、本開示は、有効な量の請求項１に記載の組成物を対象に投与することを含む、アテローム硬化性腎血管疾患（ＡＲＶＤ）の処置を必要とする対象におけるアテローム硬化性腎血管疾患（ＡＲＶＤ）を処置するための方法を提供する。
【００３３】
いくつかの実施形態において、本組成物は、１つ以上のＤ−アミノ酸の包含、１つ以上のＮ−メチル化部位の包含、および１つ以上の還元アミド結合の包含（Ψ［ＣＨ2−ＮＨ］）から選択される修飾を含むＧｌｐ−１類似体を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態において、本組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容されるｐＨ低下剤、および活性薬剤の生物学的利用能の促進に有効な少なくとも１つの吸収促進剤、および１つ以上の積層のうちの１つ以上をさらに含む。
【００３５】
いくつかの実施形態において、ｐＨ低下剤は、クエン酸、酒石酸、およびアミノ酸の酸性塩からなる群から選択される。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
Ｉ．ＧＬＰ−１
本明細書において使用される場合、用語「ＧＬＰ−１」は、天然に生じるグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）ポリペプチド、ならびに／または、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドおよびＧＬＰ−１（７−３７）を含むがそれらに限定されない、ＧＬＰ−１の天然に生じるか、または人工的な変異体もしくは類似体を含むよう意図される。かかるＧＬＰ−１ポリペプチドの例示的かつ非限定的な例が以下に提供される。それら全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２００８／００１５１４４号および米国特許公開第２０１１／０２７４７４７号も参照されたい。
Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｘａａ（配列番号：１）
Ｇ１ｙ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ（配列番号：２）
Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｇ１ｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇ１ｙ  Ａｒｇ（配列番号：３）
Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｇ１ｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ（配列番号：４）
Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇ１ｙ  Ａｒｇ（配列番号：５）
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Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ（配列番号：３９）
Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（配列番号：４０）
Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ（配列番号：４１）
Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ（配列番号：４２）
Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ（配列番号：４３）
Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｒｇ（配列番号：４４）
Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ（配列番号：４５）
Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（配列番号：４６）
Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ（配列番号：４７）
Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｒｇ（配列番号：４８）
Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ（配列番号：４９）
Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ（配列番号：５０）
Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ（配列番号：５１）
Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（配列番号：５２）
Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ（配列番号：５３）
Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（配列番号：５４）
Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ（配列番号：５５）
Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（配列番号：５６）
Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｌａ（配列番号：５７）
Ａｌａ  Ｌｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ（配列番号：５８）
【００３７】
ＩＩ．芳香族カチオン性ペプチド
本技術の芳香族カチオン性ペプチドは、水溶性、高極性であり、細胞膜を容易に透過することができる。
【００３８】
本技術の芳香族カチオン性ペプチドは、ペプチド結合によって共有結合された最低３個のアミノ酸を含む。
【００３９】
本発明の芳香族カチオン性ペプチド中に存在する最大数のアミノ酸は、ペプチド結合によって共有結合された約２０個のアミノ酸である。いくつかの実施形態において、アミノ酸の最大数は約１２個である。いくつかの実施形態において、アミノ酸の最大数は約９個である。いくつかの実施形態において、アミノ酸の最大数は約６個である。いくつかの実施形態において、アミノ酸の最大数は４個である。
【００４０】
本技術の芳香族カチオン性ペプチドのアミノ酸は、任意のアミノ酸であり得る。本明細書において使用される場合、用語「アミノ酸」は、少なくとも１つのアミノ基および少なくとも１つのカルボキシル基を含有する任意の有機分子を指すために使用される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのアミノ基は、カルボキシル基に対してα位にある。
【００４１】
アミノ酸は、天然に生じ得る。天然に生じるアミノ酸には、例えば、哺乳動物タンパク質中に通常見られる２０個の最も一般的な左旋性（Ｌ，）アミノ酸、すなわち、アラニン（Ａｌａ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、システイン（Ｃｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｕ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅｕ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、リジン（Ｌｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、トリプトファン、（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、およびバリン（Ｖａｌ）が含まれる。
【００４２】
他の天然に生じるアミノ酸には、例えば、タンパク質合成と関連しない代謝過程において合成されるアミノ酸が含まれる。例えば、アミノ酸オルニチンおよびシトルリンは、尿素の産生中に哺乳動物の代謝において合成される。
【００４３】
本発明において有用なペプチドは、１個以上の天然に生じないアミノ酸を含有し得る。天然に生じないアミノ酸は、Ｌ−、右旋性（Ｄ）、またはそれらの混合物であり得る。いくつかの実施形態において、ペプチドは、天然に生じるアミノ酸を有しない。
【００４４】
天然に生じないアミノ酸は、典型的に生きた生物における正常な代謝過程では合成されず、タンパク質中に天然に生じないアミノ酸である。加えて、本発明において有用な天然に生じないアミノ酸はまた、好ましくは共通プロテアーゼによって認識されない。
【００４５】
天然に生じないアミノ酸は、ペプチド中の任意の位置に存在し得る。例えば、天然に生じないアミノ酸は、Ｎ末端、Ｃ末端、またはＮ末端とＣ末端との間の任意の位置にあってもよい。
【００４６】
非天然のアミノ酸は、例えば、アルキル基、アリール基、またはアルキルアリール基を含み得る。アルキルアミノ酸のいくつかの例には、ａ−アミノ酪酸、（アミノ酪酸、ｙ−アミノ酪酸、６−アミノ吉草酸、およびＥ−アミノカプロン酸が含まれる。アリールアミノ酸のいくつかの例には、オルト−、メタ、およびパラ−アミノ安息香酸が含まれる。アルキルアリールアミノ酸のいくつかの例には、オルト−、メタ−、およびパラ−アミノフェニル酢酸、ならびにｙ−フェニル−Ｒ−アミノ酪酸が含まれる。
【００４７】
天然に生じないアミノ酸はまた、天然に生じるアミノ酸の誘導体を含み得る。天然に生じるアミノ酸の誘導体は、例えば、天然に生じるアミノ酸への１つ以上の化学基の付加を含み得る。
【００４８】
例えば、１つ以上の化学基は、フェニルアラニンもしくはチロシン残基の芳香環の２’、３’、４’、５’、もしくは６’位、またはトリプトファン残基のベンゾ環の４’、５’、６’、もしくは７’位のうちの１つ以上に付加され得る。この基は、芳香環に付加され得る任意の化学基であり得る。かかる基のいくつかの例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、またはｔ−ブチルなどの、分岐状もしくは非分岐状のＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルオキシ（すなわち、アルコキシ）、アミノ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノおよびＣ１〜Ｃ４ジアルキルアミノ（例えば、メチルアミノ、ジメチルアミノ）、ニトロ、ヒドロキシル、ハロ（すなわち、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨウ素）が含まれる。天然に生じるアミノ酸の天然に生じない誘導体の具体的な例には、ノルバリン（Ｎｖａ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、およびヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）が含まれる。
【００４９】
本方法において有用なペプチドにおけるアミノ酸の修飾の別の例は、ペプチドのアスパラギン酸またはグルタミン酸残基のカルボキシル基の誘導体化である。誘導体化の一例は、アンモニアを用いるか、または一級もしくは二級アミン、例えば、メチルアミン、エチルアミン、ジメチルアミン、またはデチルアミン（ｄｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）を用いたアミド化である。誘導体化の別の例には、例えば、メチルまたはエチルアルコールを用いたエステル化が含まれる。
【００５０】
別のかかる修飾には、リジン、アルギニン、またはヒスチジン残基のアミノ基の誘導体化が含まれる。例えば、かかるアミノ基は、アシル化され得る。いくつかの好適なアシル基には、例えば、アセチルまたはプロピオニル基などの、上述のＣ１〜Ｃ４アルキル基のうちのいずれかを含むベンゾイル基またはアルカノイル基が含まれる。
【００５１】
天然に生じないアミノ酸は、共通プロテアーゼに対して、いくつかの実施形態においては抵抗性であり、いくつかの実施形態においては非感受性である。プロテアーゼに対して抵抗性または非感受性である天然に生じないアミノ酸の例には、上述の天然に生じるｌ−アミノ酸のうちのいずれかの右旋性（ｄ−）形態、ならびにｌ−および／またはｄの天然に生じないアミノ酸が含まれる。ｄ−アミノ酸は、細胞の正常なリボソームタンパク質合成機構以外の手段によって合成されるある特定のペプチド抗生物質中に見られるが、それらは通常はタンパク質中では生じず、本明細書において使用される場合、ｄ−アミノ酸は天然に生じないアミノ酸と見なされる。
【００５２】
プロテアーゼ感受性を最小限に抑えるために、本発明の方法において有用なペプチドは、アミノ酸が天然に生じるか天然に生じないかに関わらず、共通プロテアーゼによって認識される５個未満、４個未満、３個未満、または２個未満の連続したｌ−アミノ酸を有すべきである。いくつかの実施形態において、ペプチドはｄ−アミノ酸のみを有し、ｌ−アミノ酸を有しない。
【００５３】
ペプチドがアミノ酸のプロテアーゼ感受性配列を含有する場合、アミノ酸のうちの少なくとも１個は、好ましくは、天然に生じないｖ−アミノ酸であり、それによってプロテアーゼ耐性を与える。プロテアーゼ感受性配列の一例には、エンドペプチダーゼおよびトリプシンなどの共通プロテアーゼによって容易に開裂される２個以上の連続した塩基性アミノ酸が含まれる。塩基性アミノ酸の例には、アルギニン、リジン、およびヒスチジンが含まれる。
【００５４】
芳香族カチオン性ペプチドが、ペプチド中のアミノ酸残基の総数と比較して、生理学的ｐＨで最低数の正味の正電荷を有することが重要である。生理学的ｐＨでの正味の正電荷の最低数は、以下で（ｐm）と称される。ペプチド中のアミノ酸残基の総数は、以下で（ｒ）と称される。
【００５５】
以下で論じられる正味の正電荷の最低数は、全て生理学的ｐＨにおけるものである。用語「生理学的ｐＨ」は、本明細書において使用される場合、哺乳動物の体の組織および臓器の細胞における正常なｐＨを指す。例えば、ヒトの生理学的ｐＨは、正常には、約７．４であるが、哺乳動物における正常な生理学的ｐＨは、約７．０〜約７．８の任意のｐＨであり得る。
【００５６】
「正味の電荷」は、本明細書において使用される場合、ペプチド中に存在するアミノ酸によって担持される正電荷の数と負電荷の数とのバランスを指す。本明細書において、正味の電荷は、生理学的ｐＨにおいて測定されるものと理解される。生理学的ｐＨにおいて正電荷を帯びる天然に生じるアミノ酸には、Ｌ−リジン、Ｌ−アルギニン、およびＬ−ヒスチジンが含まれる。生理学的ｐＨにおいて負電荷を帯びる天然に生じるアミノ酸には、Ｌ−アスパラギン酸およびＬ−グルタミン酸が含まれる。
【００５７】
典型的に、ペプチドは、正電荷を帯びたＮ末端アミノ基および負電荷を帯びたＣ末端カルボキシル基を有する。電荷は、生理学的ｐＨにおいて互いを相殺する。正味の電荷の計算の一例として、ペプチドＴｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ａｒｇは、１個の負電荷を帯びたアミノ酸（すなわち、Ｇｌｕ）、および４個の正電荷を帯びたアミノ酸（すなわち、２つのＡｒｇ残基、１つのＬｙｓ、および１つのＨｉｓ）を有する。したがって、上記のペプチドは、３個の正味の正電荷を有する。
【００５８】
本発明の一実施形態において、芳香族カチオン性ペプチドは、生理学的ｐＨにおける正味の正電荷の最低数（ｐm）とアミノ酸残基の総数（ｒ）との関係を有し、ここで、３ｐmがｒ＋１以下の最大数である。この実施形態において、正味の正電荷の最低数（ｐm）とアミノ酸残基の総数（ｒ）との間の関係は、以下の通りである。
【表１】
2018021033.tif 000002
【００５９】
別の実施形態において、芳香族カチオン性ペプチドは、正味の正電荷の最低数（ｐm）とアミノ酸残基の総数（ｒ）との間の関係を有し、ここで、２ｐmがｒ＋１以下の最大数である。この実施形態において、正味の正電荷の最低数（ｐm）とアミノ酸残基の総数（ｒ）との間の関係は、以下の通りである。
【表２】
2018021033.tif 000003
【００６０】
一実施形態において、正味の正電荷の最低数（ｐm）およびアミノ酸残基の総数（ｒ）は等しい。別の実施形態において、ペプチドは、３個もしくは４個のアミノ酸残基、および最低１個の正味の正電荷、最低２個の正味の正電荷、または最低３個の正味の正電荷を有する。
【００６１】
芳香族カチオン性ペプチドが、正味の正電荷の総数（ｐt）と比較して、最低数の芳香族基を有することもまた重要である。芳香族基の最低数は、以下で（ａ）と称される。
【００６２】
芳香族基を有する天然に生じるアミノ酸には、アミノ酸ヒスチジン、トリプトファン、チロシン、およびフェニルアラニンが含まれる。例えば、ヘキサペプチドＬｙｓ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐは、２個の正味の正電荷（リジンおよびアルギニン残基によって寄与される）、ならびに３個の芳香族基（チロシン、フェニルアラニン、およびトリプトファン残基によって寄与される）を有する。
【００６３】
本発明の一実施形態において、本技術の方法において有用な芳香族カチオン性ペプチドは、芳香族基の最低数（ａ）と生理学的ｐＨにおける正味の正電荷の総数（ｐt）との間の関係を有し、ここで、ｐtが１であるとき、ａも１であり得ることを除いて、３ａがｐt＋１以下の最大数である。この実施形態において、芳香族基の最低数（ａ）と正味の正電荷の総数（ｐt）との間の関係は、以下の通りである。
【表３】
2018021033.tif 000004
【００６４】
別の実施形態において、芳香族カチオン性ペプチドは、芳香族基の最低数（ａ）と正味の正電荷の総数（ｐt）との間の関係を有し、ここで、２ａがｐt＋１以下の最大数である。この実施形態において、芳香族アミノ酸残基の最低数（ａ）と正味の正電荷の総数（ｐt）との間の関係は、以下の通りである。
【表４】
2018021033.tif 000005
【００６５】
別の実施形態において、芳香族基の数（ａ）および正味の正電荷の総数（ｐt）は等しい。
【００６６】
カルボキシル基、特にＣ末端アミノ酸の末端カルボキシル基は、好ましくは、Ｃ末端アミドを形成するように、例えば、アンモニアでアミド化される。あるいは、Ｃ末端アミノ酸の末端カルボキシル基は、任意の一級または二級アミンでアミド化されてもよい。一級または二級アミンは、例えば、アルキル、特に分岐状もしくは非分岐状Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはアリールアミンであり得る。したがって、ペプチドのＣ末端におけるアミノ酸は、アミド、Ｎ−メチルアミド、Ｎ−エチルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミド、Ｎ，Ｎ−デチルアミド（ｄｅｔｈｙｌ  ａｍｉｄｏ）、Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアミド、Ｎ−フェニルアミド、またはＮ−フェニル−Ｎ−エチルアミド基に変換され得る。
【００６７】
本発明の芳香族カチオン性ペプチドのＣ末端で生じないアスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸残基の遊離カルボキシレート基も、それらがペプチド中のどこで生じようともアミド化され得る。これらの内部位置におけるアミド化は、アンモニアまたは本明細書に記載される一級もしくは二級アミンのいずれかを用いてもよい。
【００６８】
一実施形態において、本発明の方法において有用な芳香族カチオン性ペプチドは、２個の正味の正電荷および少なくとも１個の芳香族アミノ酸を有するトリペプチドである。特定の実施形態において、本発明の方法において有用な芳香族カチオン性ペプチドは、２個の正味の正電荷および２個の芳香族アミノ酸を有するトリペプチドである。
【００６９】
本発明の方法において有用な芳香族カチオン性ペプチドには、以下のペプチドの例が含まれるが、それらに限定されない。
【表５】
2018021033.tif 000006
2018021033.tif 000007
2018021033.tif 000008
【００７０】
いくつかの実施形態において、芳香族カチオン性ペプチドは、
少なくとも１個の正味の正電荷と、
最低４個のアミノ酸と、
最大約２０個のアミノ酸と、
正味の正電荷の最低数（ｐm）とアミノ酸残基の総数（ｒ）との間の関係であって、３ｐmがｒ＋１以下の最大数である、関係と、芳香族基の最低数（ａ）と正味の正電荷の総数（ｐt）との間の関係であって、ａが１であるとき、ｐtも１であり得ることを除いて、２ａがｐt＋１以下の最大数である、関係と、を有するペプチドである。
【００７１】
一実施形態において、２ｐmは、ｒ＋１以下の最大数であり、ａは、ｐtに等しくあり得る。芳香族カチオン性ペプチドは、最低２個または最低３個の正電荷を有する水溶性ペプチドであり得る。
【００７２】
一実施形態において、ペプチドは、１個以上の天然に生じないアミノ酸、例えば、１個以上のＤ−アミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、Ｃ末端におけるアミノ酸のＣ末端カルボキシル基は、アミド化される。ある特定の実施形態において、ペプチドは最低４個のアミノ酸を有する。ペプチドは、最大約６個、最大約９個、または最大約１２個のアミノ酸を有し得る。
【００７３】
いくつかの実施形態において、ペプチドは、オピオイド受容体アゴニスト活性を有する。他の実施形態において、ペプチドは、オピオイド受容体アゴニスト活性を有しない。
【００７４】
一実施形態において、ペプチドは、Ｎ末端にチロシンまたは２’，６’−ジメチルチロシン（Ｄｍｔ）残基を含む。例えば、ペプチドは、Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ2または２’，６’−Ｄｍｔ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ2の式を有し得る。別の実施形態において、ペプチドは、Ｎ末端にフェニルアラニンまたは２’，６’−ジメチルフェニルアラニン残基を含む。例えば、ペプチドは、Ｐｈｅ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ2または２’，６’−Ｄｍｐ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ2の式を有し得る。特定の実施形態において、芳香族カチオン性ペプチドは、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2の式を有する。
【００７５】
一実施形態において、ペプチドは、次の式Ｉによって定義される。
【化１】
2018021033.tif 000009
【００７６】
式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、
（ｉ）水素、
（ｉｉ）直鎖または分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキル、
（ｉｉｉ）
【化２】
2018021033.tif 000010
（ｉｖ）
【化３】
2018021033.tif 000011
（ｖ）
【化４】
2018021033.tif 000012
から選択され、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、
（ｉ）水素、
（ｉｉ）直鎖または分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキル、
（ｉｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、
（ｉｖ）アミノ、
（ｖ）Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノ、
（ｖｉ）Ｃ１〜Ｃ４ジアルキルアミノ、
（ｖｉｉ）ニトロ、
（ｖｉｉｉ）ヒドロキシル、
（ｉｘ）ハロゲンから選択され、ここで、「ハロゲン」は、クロロ、フルオロ、ブロモ、およびヨウ素を包含し、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、それぞれ独立して、
（ｉ）水素、
（ｉｉ）直鎖または分岐鎖のＣ１〜Ｃ６アルキル、
（ｉｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、
（ｉｖ）アミノ、
（ｖ）Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノ、
（ｖｉ）Ｃ１〜Ｃ４ジアルキルアミノ、
（ｖｉｉ）ニトロ、
（ｖｉｉｉ）ヒドロキシル、
（ｉｘ）ハロゲンから選択され、ここで、「ハロゲン」は、クロロ、フルオロ、ブロモ、およびヨウ素を包含し、
ｎは、１〜５の整数である。
【００７７】
特定の実施形態において、Ｒ１およびＲ２は水素であり、Ｒ３およびＲ４はメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は全て水素であり、ｎは４である。
【００７８】
本明細書において使用される場合、「神経障害」または「末梢神経障害」は、末梢神経系の神経への損傷を一般的に指す。この用語は、遺伝性障害、代謝性／内分泌性合併症、炎症性疾患、ビタミン欠乏症、悪性疾患、ならびにアルコール、有機金属、重金属、放射線、および薬物毒性などの毒性によって引き起こされるか、それらに起因するか、またはそれらに関連する神経障害を含むがそれらに限定されない、様々な病因の神経障害を包含する。本明細書において使用される場合、この用語は、運動性、感覚性、混合型感覚運動性、慢性、および急性の神経障害を包含する。本明細書において使用される場合、この用語は、単神経障害、多発単神経障害、および多発神経障害を包含する。
【００７９】
いくつかの実施形態において、本開示は、末梢神経障害または末梢神経障害の症状の処置または予防のための組成物を提供する。いくつかの実施形態において、末梢神経障害は、薬物誘発性末梢神経障害である。いくつかの実施形態において、末梢神経障害は、化学療法剤によって誘発される。いくつかの実施形態において、化学療法剤はビンカアルカロイドである。いくつかの実施形態において、ビンカアルカロイドはビンクリスチンである。いくつかの実施形態において、末梢神経障害の症状は痛覚過敏を含む。
【００８０】
本明細書において使用される場合、「痛覚過敏」は、侵害受容器または末梢神経への損傷（すなわち、神経障害）によって引き起こされ得る、疼痛への上昇した感受性を指す。この用語は一時的および永久的な痛覚過敏を指し、一次性痛覚過敏（すなわち、損傷した組織中で直接的に疼痛感受性が起こる）および二次性痛覚過敏（すなわち、損傷した組織を包囲する未損傷の組織中で疼痛感受性が起こる）の両方を包含する。この用語は、遺伝性障害、代謝性／内分泌性合併症、炎症性疾患、ビタミン欠乏症、悪性疾患、ならびにアルコール、有機金属、重金属、放射線、および薬物毒性などの毒性によって引き起こされるか、それらに起因するか、ないしはそれらに関連する神経障害によって引き起こされるがそれに限定されない痛覚過敏を包含する。いくつかの実施形態において、痛覚過敏は薬物誘発性末梢神経障害によって引き起こされる。
【００８１】
いくつかの実施形態において、本開示は、痛覚過敏の処置または予防のための組成物を提供する。いくつかの実施形態において、痛覚過敏は薬物誘発性である。いくつかの実施形態において、痛覚過敏は、化学療法剤によって誘発される。いくつかの実施形態において、化学療法剤はビンカアルカロイドである。いくつかの実施形態において、ビンカアルカロイドはビンクリスチンである。
【００８２】
本明細書に記載されるＧｌｐ−１ペプチドは、神経障害または痛覚過敏の処置または予防において有用である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、神経障害または痛覚過敏の発症後に、対象に投与され得る。したがって、用語「処置」は、本明細書において広義で使用され、神経障害または痛覚過敏の部分的もしくは完全な治癒のためのＧｌｐ−１ペプチドの使用を指す。
【００８３】
他の実施形態において、本技術のＧｌｐ−１ペプチドは、神経障害または痛覚過敏を防ぐため、または神経障害または痛覚過敏の発症予防を提供するために、神経障害または痛覚過敏の発症前に、対象に投与され得る。したがって、用語「予防」は、本明細書において広義で使用され、神経障害または痛覚過敏を完全または部分的に予防する、予防的使用を指す。Ｇｌｐ−１化合物は、神経障害または痛覚過敏を発症する危険性がある対象に投与され得ることがまた企図される。
【００８４】
ＩＩＩ．ＧＬＰ−１の使用
治療上有効な量のＧＬＰ−１を投与すること、または治療上有効な量のＧＬＰ−１を１つ以上の追加の活性薬剤と併用して投与することによって、疾患および状態を処置および／または寛解する方法が、本明細書に開示される。いくつかの実施形態において、１つ以上の追加の活性薬剤は、芳香族カチオン性ペプチド、例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩を含む。
【００８５】
ＧＬＰ−１機能、例えば、疾患、病状、または状態の処置に関する機能の例示的かつ非限定的な例を以下に提供する。いくつかの実施形態において、疾患、病状、または状態は、ミトコンドリア機能不全（例えば、ミトコンドリア透過性転移）に関連する。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１単独の投与、または１つ以上の追加の活性薬剤（例えば、芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与は、疾患、状態、または疾患または状態の兆候および症状を、予防、処置、または寛解する働きをする。
【００８６】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、マウス腹腔マクロファージにおいて、ｏｘＬＤＬ誘発性ＣＤ３６  ｍＲＮＡおよびタンパク質レベル、ならびに泡沫細胞形成を減少させると予測される。
【００８７】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、急性脳虚血を患っている対象において、梗塞体積および大脳半球の膨張を減少させると予測される。
【００８８】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、減少したグルタチオン（ＧＳＨ）の減少の低減を必要とする対象において、虚血後の脳内の減少したグルタチオン（ＧＳＨ）の減少を低減させると予測される。
【００８９】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＣＤ３６の発現の減少を必要とする対象において、虚血後の脳内のＣＤ３６の発現を減少させると予測される。
【００９０】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＣＤ３６の発現の減少を必要とする対象において、片側尿管閉塞（ＵＵＯ）後の腎尿細管細胞におけるＣＤ３６の発現を減少させると予測される。
【００９１】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＵＵＯ後の腎臓における脂質過酸化を低減させると予測される。
【００９２】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＵＵＯ後の閉塞した腎臓における尿細管細胞アポトーシスを減少させると予測される。
【００９３】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＵＵＯによって誘発される閉塞した腎臓におけるマクロファージ浸潤を低減させると予測される。
【００９４】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＵＵＯ後の閉塞した腎臓における間質性線維症を低減させると予測される。
【００９５】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて用いる、摘出された心臓の冷保存は、ＣＤ３６の発現の発現上昇を低減させると予測される。
【００９６】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、長期の冷虚血後に温かい再灌流に曝される心臓組織（例えば、心臓）における脂質過酸化を低減させると予測される。
【００９７】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、長期の冷虚血後に温かい再灌流に曝される心臓組織（例えば、心臓）における内皮アポトーシスを無効にすると予測される。
【００９８】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、長期の冷虚血後に温かい再灌流に曝される心臓組織（例えば、心臓）における冠動脈血流量を維持すると予測される。
【００９９】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、糖尿病の対象における腎臓の近位尿細管への損傷を予防すると予測される。
【０１００】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、糖尿病の対象における腎尿細管上皮細胞アポトーシスを予防すると予測される。
【０１０１】
ＣＤ３６発現を減少させるための方法を必要とする哺乳動物には、例えば、増加したＣＤ３６発現を有する哺乳動物が含まれる。ＣＤ３６の発現増加は、ＧＬＰ−１、その類似体、変異体、もしくは薬学的に許容される塩の、単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与が治療的である、様々な疾患および状態に関連する。増加したＣＤ３６発現を特徴とする疾患および状態の例には、アテローム性動脈硬化症、炎症、血管新生異常、脂質代謝異常、アポトーシス細胞の除去異常、脳虚血および心筋虚血などの虚血、虚血−再灌流、尿管閉塞、脳卒中、アルツハイマー病、糖尿病、糖尿病性腎症、および肥満が含まれるが、それらに限定されない。
【０１０２】
ＣＤ３６発現の減少を必要とする哺乳動物には、糖尿病の合併症を患っている哺乳動物も含まれる。ＧＬＰ−１、その類似体、変異体、もしくは薬学的に許容される塩の、単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与は、かかる患者の集合に対して治療的である。糖尿病の合併症には、腎症、神経障害、網膜症、冠動脈疾患、および末梢血管疾患が含まれるが、それらに限定されない。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される方法は、ＧＬＰ−１、その類似体、変異体、もしくは薬学的に許容される塩を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて投与することによって、除去された臓器および組織におけるＣＤ３６の発現を減少させるための方法である。本方法は、除去された臓器または組織を、有効な量の本明細書に記載されるペプチド（複数可）と接触させることを含む。臓器または組織は、例えば、自家移植または異種移植のために提供者から除去され得る。本技術の方法に従う臓器および組織の例には、心臓、肺、膵臓、腎臓、肝臓、皮膚などが含まれるが、それらに限定されない。
【０１０４】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ミトコンドリア中に転座し蓄積すると予測される。
【０１０５】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、Ｃａ２＋過負荷および３−ニトロプロピオン酸（３ＮＰ）によって誘発されるミトコンドリア透過性転移（ＭＰＴ）を防ぐと予測される。
【０１０６】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ミトコンドリア膨張およびチトクロムｃ放出を阻害すると予測される。
【０１０７】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、心臓組織における虚血−再灌流の間の心筋の収縮力を防ぐと予測される。
【０１０８】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）の、単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせての心停止液への添加は、摘出され灌流された心臓組織（例えば、心臓）における長期の虚血の後の収縮機能を著しく強化すると予測される。
【０１０９】
本明細書に記載されるペプチド（例えば、ＧＬＰ−１単独、または１つ以上の芳香族カチオン性ペプチドと組み合わせて）は、ＭＰＴに関連する任意の疾患または状態の処置において有用である。かかる疾患および状態には、組織もしくは臓器の虚血および／または再灌流、低酸素症、ならびにある数の神経変性疾患のうちのいずれかが含まれるが、それらに限定されない。ＭＰＴの処置または予防を必要とする哺乳動物は、これらの疾患または状態を患っている哺乳動物である。
【０１１０】
本開示の方法および組成物はまた、ＭＰＴに関連する神経変性疾患の処置または発症予防において使用され得る。ＭＰＴに関連する神経変性疾患には、例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）が含まれる。本明細書に開示される方法および組成物は、ＭＰＴに関連するこれらおよび他の神経変性疾患の発症を遅延するか、または進行を遅くするために使用され得る。本明細書に開示される方法および組成物は、ＭＰＴに関連する早期の神経変性疾患を患っているヒト、ならびにこれらの疾患に罹りやすいヒトの処置において特に有用である。
【０１１１】
本明細書に開示されるペプチド（例えば、ＧＬＰ−１単独、またはＤ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドと組み合わせて）は、移植の前に哺乳動物の臓器を貯蔵するために使用され得る。除去された臓器は、血流の欠如に起因して、ＭＰＴの影響を受けやすい。したがって、臓器を本技術のペプチドと接触させることを含む方法は、除去された臓器におけるＭＰＴを予防するために使用され得る。
【０１１２】
除去された臓器は、当該技術分野において一般的に使用されているものなどの、標準的な緩衝液中に配置されてもよい。例えば、除去された心臓は、本明細書に記載されるペプチドを含有する心停止液中に配置されてよい。標準的な緩衝液中のペプチドの濃度は、当業者によって容易に決定され得る。かかる濃度は、例えば、約０．１ｎＭ〜約１０μＭであり得る。
【０１１３】
ペプチド（例えば、ＧＬＰ−１単独、またはＤ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドと組み合わせて）はまた、状態または疾患を処置するために薬物を取っている哺乳動物に投与され得る。薬物の副作用がＭＰＴを含む場合、かかる薬物を取っている哺乳動物は、本明細書に開示されるペプチドの投与から大いに利益を受けるであろう。
【０１１４】
ＭＰＴをもたらすことによって細胞毒性を誘発する薬物の一例は、化学療法薬アドリアマイシンである。ＧＬＰ−１単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与は、かかる薬物の副作用を寛解、減少、または予防すると予測される。
【０１１５】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、Ｈ2Ｏ2を用量依存的に除去すると予測される。
【０１１６】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＡＢＡＰによって誘発されるリノール酸過酸化を用量依存的に阻害し、ＡＢＡＰによって誘発されるリノール酸過酸化の速度を低減させると予測される。
【０１１７】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、１０ｍＭのＣｕＳＯ４によって誘発されるＬＤＬ酸化を用量依存的に阻害し、ＬＤＬ酸化の速度を低減させると予測される。
【０１１８】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、基本条件下のルミノール化学発光によって、アンチマイシンによる刺激作用時に測定される、過酸化水素のミトコンドリア産生を阻害すると予測される。
【０１１９】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ある特定のストレスまたは病状におけるミトコンドリアによる過酸化水素の自然発生を低減させると予測される。
【０１２０】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ミトコンドリア中の過酸化水素の自然産生、およびアンチマイシンによって刺激される過酸化水素産生を阻害すると予測される。
【０１２１】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、細胞の生存の増加を必要とする対象、例えば、ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患または状態を患っている対象の、細胞内ＲＯＳ（活性酸素種）を減少させ、細胞の生存を増加させると予測される。
【０１２２】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患または状態を患っている対象における細胞生存率の損失を予防すると予測される。
【０１２３】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、増加したカスパーゼ活性を示す細胞のパーセントの低減を必要とする対象、例えば、ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患または状態を患っている対象において、増加したカスパーゼ活性を示す細胞のパーセントを低減させると予測される。
【０１２４】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＲＯＳ蓄積の速度の低減を必要とする対象、例えば、ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患または症状を患っている対象において、ＲＯＳ蓄積の速度を低減させると予測される。
【０１２５】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、脂質過酸化の阻害を必要とする対象、例えば、ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患または状態を患っている対象において、脂質過酸化を阻害すると予測される。
【０１２６】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ミトコンドリア脱分極およびＲＯＳ蓄積の予防を必要とする対象、例えば、ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患または状態を患っている対象において、ミトコンドリア脱分極およびＲＯＳ蓄積を予防すると予測される。
【０１２７】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、アポトーシスの予防を必要とする対象、例えば、ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患または状態を患っている対象において、アポトーシスを予防すると予測される。
【０１２８】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、長期（例えば、１８時間）の冷虚血後に温かい再灌流に曝される心臓組織（例えば、心臓）における冠動脈血流量を著しく改善すると予測される。
【０１２９】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、長期（例えば、１８時間）の冷虚血後に温かい再灌流に曝される心臓組織（例えば、心臓）における内皮細胞および筋細胞内のアポトーシスを予防すると予測される。
【０１３０】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、膵臓細胞の生存の改善を必要とする対象において、膵臓細胞の生存を改善すると予測される。
【０１３１】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、アポトーシスの低減および生存率の上昇を必要とする対象において、膵臓の膵島細胞におけるアポトーシスを低減させ、生存率を上昇させると予測される。
【０１３２】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、膵臓の膵島細胞内の酸化的損傷の低減を必要とする対象において、膵臓の膵島細胞内の酸化的損傷を低減させると予測される。
【０１３３】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＭＰＰ＋毒性からの保護を必要とする対象において、ＭＰＰ＋毒性からドーパミン作動性細胞を保護すると予測される。
【０１３４】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ドーパミン作動性ニューロンの損失の予防を必要とする対象におけるドーパミン作動性ニューロンの損失を予防すると予測される。
【０１３５】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、線条体ドーパミン、ＤＯＰＡＣ（３，４−ジヒドロキシフェニル酢酸）、およびＨＶＡ（ホモバニリン酸）のレベルの上昇を必要とする対象において、それらのレベルを上昇させると予測される。
【０１３６】
本明細書に記載されるペプチド（例えば、ＧＬＰ−１単独、またはＤ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドと組み合わせて）は、酸化的損傷の低減を必要とする哺乳動物における、酸化的損傷の低減に有用である。酸化的損傷の低減を必要とする哺乳動物は、酸化的損傷に関連する疾患、状態、または処置を患っている哺乳動物である。典型的に、酸化的損傷は、活性酸素種（ＲＯＳ）および／または活性窒素種（ＲＮＳ）などのフリーラジカルによって引き起こされる。ＲＯＳおよびＲＮＳの例には、ヒドロキシルラジカル（ＨＯ．）、超酸化物アニオンラジカル（Ｏ２．−）、一酸化窒素（ＮＯ．）、過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）、次亜塩素酸（ＨＯＣＩ）、およびペルオキシナイトライトアニオン（ＯＮＯＯ−）が含まれる。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、それを必要とする哺乳動物は、酸化的損傷に関連する処置を受けている哺乳動物であり得る。例えば、哺乳動物は、再灌流を受けている場合がある。「再灌流」は、血流が減少またはブロックされている任意の臓器もしくは組織への、血流の回復を指す。再灌流の間の血流の回復は、呼吸性バーストおよびフリーラジカルの形成を引き起こす。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、それを必要とする哺乳動物は、酸化的損傷に関連する疾患または状態を患っている哺乳動物である。酸化的損傷は、哺乳動物のいずれの細胞、組織、または臓器においても起こり得る。酸化的損傷の影響を受ける細胞、組織、または臓器の例には、内皮細胞、上皮細胞、神経系細胞、皮膚、心臓、肺、腎臓、および肝臓が含まれるが、それらに限定されない。例えば、脂質過酸化および炎症過程は、疾患または状態の酸化的損傷に関連する。
【０１３９】
「脂質過酸化」は、脂質の酸化的修飾を指す。脂質は、細胞膜内に存在し得る。この膜脂質の修飾は、細胞の膜機能の変化および／または損傷を典型的にもたらす。加えて、脂質過酸化はまた、細胞に対して外来性の脂質またはリポタンパク質中で起こり得る。例えば、低密度リポタンパク質は、脂質過酸化の影響を受けやすい。脂質過酸化に関連する状態の一例は、アテローム性動脈硬化症である。アテローム性動脈硬化症は、例えば、心発作および冠動脈疾患に関与するため、アテローム性動脈硬化症に関連する酸化的損傷を低減させることは重要である。
【０１４０】
「炎症過程」は、免疫系の活性化を指す。典型的に、免疫系は、抗原性物質によって活性化される。抗原性物質は免疫系によって認識されるいずれの物質でもあり得、自己由来の物質および異物由来の物質を含む。自己由来の物質に対する炎症応答に起因する疾患または状態の例には、関節炎および多発性硬化症が含まれる。生体異物の例には、ウイルスおよび細菌が含まれる。
【０１４１】
ウイルスは、炎症過程を活性化させ、かつ酸化的損傷に関連するいずれのウイルスでもあり得る。ウイルスの例には、Ａ型、Ｂ型、またはＣ型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、およびウシ下痢症ウイルスが含まれる。例えば、肝炎ウイルスは、炎症過程およびフリーラジカルの形成を誘発し、それによって肝臓を損傷し得る。
【０１４２】
細菌はいずれの細菌でもあり得、グラム陰性菌およびグラム陽性菌を含む。グラム陰性菌は、細菌細胞壁内にリポポリサッカライドを含有する。グラム陰性菌の例には、大腸菌、肺炎桿菌、プロテウス菌種、緑膿菌、セラチア、およびバクテロイデスが含まれる。グラム陽性菌の例には、肺炎球菌および連鎖球菌が含まれる。
【０１４３】
本明細書に開示される方法および組成物は、任意の神経変性疾患または状態に関連する酸化的損傷の低減において使用され得る。神経変性疾患は、中枢神経系および末梢神経系のいかなる細胞、組織、または臓器にも影響を及ぼし得る。かかる細胞、組織、および臓器の例には、脳、脊髄、ニューロン、神経節、Ｓｃｈｗａｎｎ細胞、アストロサイト、オリゴデンドロサイト、およびミクログリアが含まれる。
【０１４４】
神経変性状態は、脳卒中または外傷性脳傷害もしくは脊髄傷害などの、急性状態であり得る。一実施形態において、神経変性疾患または状態は、慢性神経変性状態である。慢性神経変性状態において、フリーラジカルは、例えば、タンパク質への損傷を引き起こし得る。かかるタンパク質の一例は、アミロイドｐ−タンパク質である。フリーラジカルによる損傷に関連する慢性神経変性疾患の例には、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）が含まれる。
【０１４５】
開示される方法および組成物に従い処置され得る他の状態には、糖尿病、ならびに、黄斑変性および皺などの、加齢の症状およびそれに関連する状態が含まれる。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるペプチド（例えば、ＧＬＰ−１単独、またはＤ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドと組み合わせて）は、移植の前に哺乳動物の臓器における酸化的損傷を低減させるために使用される。例えば、除去された臓器は、移植後に再灌流に曝されると、酸化的損傷の影響を受けやすくなり得る。したがって、ペプチドは、移植された臓器の再灌流からの酸化的損傷を低減させるために使用され得る。
【０１４７】
除去された臓器は、移植に好適な任意の臓器であり得る。かかる臓器の例には、心臓、肝臓、腎臓、肺、および膵臓の膵島が含まれる。除去された臓器は、当該技術分野において一般的に使用される標準的な緩衝液などの、好適な媒体中に配置される。
【０１４８】
例えば、除去された心臓は、本明細書に記載されるペプチド（例えば、ＧＬＰ−１単独、またはＤ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドと組み合わせて）を含有する心停止液中に配置されてもよい。標準的な緩衝液中のペプチドの濃度は、当業者によって容易に決定され得る。かかる濃度は、例えば、約０．０１μＭ〜約１０μＭ、約０．１ｎＭ〜約１０μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約１ｎＭ〜約１００ｎＭであり得る。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、本技術は、酸化的損傷の低減を必要とする細胞における酸化的損傷を低減させるための方法および組成物を包含する。いくつかの実施形態において、本方法は、治療上有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて投与することを含む。酸化的損傷の低減を必要とする細胞は、一般的に、フリーラジカル、例えば、ＲＯＳおよび／またはＲＮＳによって細胞膜またはＤＮＡが損傷された細胞である。酸化的損傷を維持することができる細胞の例には、膵臓の膵島細胞、筋細胞、内皮細胞、神経細胞、幹細胞、および本明細書で論じられる他の細胞型が含まれるが、それらに限定されない。
【０１５０】
細胞は、組織培養細胞であり得る。あるいは、細胞は、哺乳動物から得ることができる。一事例では、細胞は、細胞侵襲の結果としての酸化的損傷によって損傷され得る。細胞侵襲には、例えば、疾患もしくは状態（例えば、糖尿病など）または紫外線放射（例えば、太陽など）が含まれる。例えば、糖尿病の結果としての酸化的損傷によって損傷された膵臓の膵島細胞は、哺乳動物から得ることができる。
【０１５１】
本明細書に記載されるペプチド（例えば、ＧＬＰ−１単独、またはＤ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドと組み合わせて）は、当業者に既知の任意の方法によって細胞に投与され得る。例えば、ペプチドは、好適な条件下で細胞と共にインキュベートされ得る。かかる状態は、当業者によって容易に決定され得る。
【０１５２】
酸化的損傷の低減に起因して、処置された細胞は、再生することができる場合がある。かかる再生した細胞は、疾患または状態のための治療的処置として、それらが抽出された哺乳動物に再導入され得る。上述の通り、かかる状態の１つは糖尿病である。
【０１５３】
酸化的損傷は、有効な量の本明細書に記載されるペプチドの投与後に、哺乳動物、除去された臓器、または細胞における酸化的損傷の量が減少する場合に、「低減した」と見なされる。典型的に、酸化的損傷は、酸化的損傷が少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約９０％減少する場合に、低減したとみなされる。
【０１５４】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、筋組織の酸化状態に影響を及ぼすと予測される。
【０１５５】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、痩せたヒト対象および肥満のヒト対象における筋組織の酸化状態に影響を及ぼすと予測される。
【０１５６】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、筋組織中のインスリン抵抗性に影響を及ぼすと予測される。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、肥満または高脂肪食によって誘発されるインスリン抵抗性は、ミトコンドリア生体エネルギーに影響を及ぼす。理論に束縛されることを望むものではないが、過多の代謝基質は、ミトコンドリア呼吸器系の機能の低減、ならびにＲＯＳ産生の増加および総合的な酸化還元環境のより酸化した状態への移行を引き起こすと考えられる。持続する場合、これはインスリン抵抗性の発達を引き起こす。ミトコンドリア生体エネルギーをインスリン抵抗性の病因に関連付けることには、ある数の臨床的意味がある。例えば、ヒトにおけるインスリン抵抗性（ＮＩＤＤＭ）はしばしば、体重増加、そして選択された個人では、結果として生じる代謝的および臨床的結果と共に血糖の上昇した可変性をもたらすことが知られる。本明細書に示される実施例は、ミトコンドリア標的化抗酸化剤（例えば、ＧＬＰ−１ペプチド）を用いるミトコンドリアの欠損の処置が、増加したインスリンの代謝的副作用を伴わずにインスリン抵抗性を処置または予防する新規かつ驚くべき手法を提供することを実証する。
【０１５８】
本方法および組成物は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与によって、インスリン抵抗性を低減させると予測される。
【０１５９】
ＧＬＰ−１ペプチド単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせは、本明細書に開示される通り、疾患を予防または処置するために有用である。特に、ペプチドは、障害の危険性がある（もしくはその影響を受けやすい）対象、またはインスリン抵抗性に関連する障害を有する対象を処置する、予防的および治療的方法のために有用である。インスリン抵抗性は一般的に、ＩＩ型糖尿病、冠動脈疾患、腎機能不全、アテローム性動脈硬化症、肥満、高脂血症、および本態性高血圧に関連する。インスリン抵抗性はまた、慢性炎症（ＮＡＳＨ、「非アルコール性脂肪性肝炎」）、線維症、および硬変へと進行し得る、脂肪肝に関連する。累積的に、糖尿病を含むがそれに限定されないインスリン抵抗性症候群は、４０歳を超える人々の病的状態および死の主な原因のうちの多くの根底にある。したがって、本発明は、予防および／または処置を必要とする対象におけるインスリン抵抗性および関連する症候群の予防および／または処置のための方法であって、有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、対象に投与することを含む、方法を提供する。例えば、対象は、インスリンに対する哺乳動物の骨格筋組織の感受性を改善するために、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて含む組成物を投与され得る。一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、薬物誘発性の肥満、インスリン抵抗性、および／または糖尿病を予防するために使用され、ペプチドは、これらの状態のうちの１つ以上を引き起こす副作用を示す薬物（例えば、オランザピン、Ｚｙｐｒｅｘａ（登録商標））と共に投与される。
【０１６０】
様々な実施形態において、好適なインビトロまたはインビボのアッセイが、特定のＧＬＰ−１ペプチド系治療薬の効果、およびその投与が対象における罹患組織の処置のために指示されるかを決定するために実施される。様々な実施形態において、所定のＧＬＰ−１ペプチド系治療薬が細胞型（複数可）に所望の効果を及ぼすかを決定するために、対象の障害に関与する代表的な細胞の型（複数可）を用いたインビトロアッセイが実施される。治療に使用する化合物は、ヒト対象における試験より前に、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、イエウサギなどを含むがそれらに限定されない、好適な動物モデル系において試験され得る。同じく、インビボ試験についても、ヒト対象への投与より前に、当該技術分野において既知の任意の動物モデル系が使用され得る。上昇または減少したインスリン抵抗性または感受性は、体重、空腹時グルコース／インスリン／遊離脂肪酸、経口グルコース耐性（ＯＧＴＴ）、インビトロ筋肉インスリン感受性、インスリンシグナル伝達のマーカー（例えば、Ａｋｔ−Ｐ、ＩＲＳ−Ｐ）、ミトコンドリア機能（例えば、呼吸もしくはＨ2Ｏ2産生）、細胞内酸化ストレスのマーカー（例えば、脂質過酸化、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比、もしくはアコニターゼ活性）、またはミトコンドリア酵素活性を定量化することによって容易に検出され得る。
【０１６１】
一態様において、本明細書に開示される方法は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または、インスリン抵抗性の１つ以上の兆候またはマーカー、例えば、体重、空腹時グルコース／インスリン／遊離脂肪酸、経口グルコース耐性（ＯＧＴＴ）、インビトロ筋肉インスリン感受性、インスリンシグナル伝達のマーカー（例えば、Ａｋｔ−Ｐ、ＩＲＳ−Ｐ）、ミトコンドリア機能（例えば、呼吸もしくはＨ2Ｏ2産生）、細胞内酸化ストレスのマーカー（例えば、脂質過酸化、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比、もしくはアコニターゼ活性）、またはミトコンドリア酵素活性を調節するための、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、対象に投与することによって、対象において、骨格筋組織中のインスリン抵抗性に関連する疾患または状態を予防するための方法である。
【０１６２】
異常なミトコンドリア機能もしくはインスリン抵抗性によって引き起こされるか、またはそれによって寄与される疾患の危険性がある対象は、本明細書に記載される通り、例えば、診断アッセイもしくは予後アッセイのいずれか、またはそれらの組み合わせによって特定され得る。予防的応用では、ＧＬＰ−１ペプチドを単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて含む薬学的組成物もしくは薬品が、疾患の発達の間に現れる疾患の生化学的、組織学的、および／または行動学的な症状、その合併症、ならびに中間の病理学的表現型を含む疾患の危険性を排除もしくは低減させるか、その重症度を低下させるか、またはその発症を遅延させるために十分な量で、疾患または状態の影響を受けやすいか、ないしはその危険性がある対象に投与される。予防的なＧＬＰ−１ペプチド単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与は、疾患または障害が予防されるか、あるいは、その進行が遅延されるように、異常に特徴的な症状の顕在化より前に起こり得る。異常の種類に依存して、ＧＬＰ−１ペプチドは、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ミトコンドリア機能を強化もしくは改善するように作用し、対象を処置するために使用され得る。適切な化合物は、本明細書に記載されるスクリーニングアッセイに基づいて決定され得る。
【０１６３】
本明細書に開示される別の態様は、治療目的のために対象におけるインスリン抵抗性または感受性を調節する方法を含む。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、インスリン抵抗性または感受性を患っている対象に投与される。治療応用では、組成物または薬品は、疾患の発達におけるその合併症および中間の病理学的表現型を含む疾患の症状（生化学的、組織学的、および／または行動学的）を治癒するか、または部分的に停止するために十分な量で、かかる疾患の疑いがあるか、または既に患っている対象に投与される。治療的または予防的処置を達成するために適当な量は、治療上または予防上有効な用量として定義される。これらの調節方法は、インビトロで（例えば、細胞をＧＬＰ−１ペプチドと共に培養することによって）、あるいは、インビボで（例えば、ＧＬＰ−１ペプチドを、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて対象に投与することによって）、実施され得る。このため、本発明は、インスリン抵抗性関連疾患または障害を患う個人を処置する方法を提供する。
【０１６４】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、虚血および再灌流に起因する病理組織学スコアを改善すると予測される。
【０１６５】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、虚血後の腎組織中の再灌流後にＡＴＰ産生の速度を上昇させると予測される。
【０１６６】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、虚血後の腎ミトコンドリア呼吸を改善すると予測される。
【０１６７】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、片側尿管閉塞（ＵＵＯ）における髄質線維症を減少させると予測される。
【０１６８】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＵＵＯにおける間質性線維症を減少させると予測される。
【０１６９】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＵＵＯにおける尿細管アポトーシスを減少させると予測される。
【０１７０】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＵＵＯにおけるマクロファージ浸潤を減少させると予測される。
【０１７１】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＵＵＯにおける尿細管増殖を増加させると予測される。
【０１７２】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＵＵＯにおける酸化的損傷を減少させると予測される。
【０１７３】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、放射性造影剤によって引き起こされる腎機能不全を低減させると予測される。
【０１７４】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、放射性造影剤傷害から腎尿細管を保護すると予測される。
【０１７５】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、放射性造影剤傷害によって誘発される腎尿細管アポトーシスを予防すると予測される。
【０１７６】
ＧＬＰ−１ペプチドは、単独で、または本明細書に記載される１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、腎損傷から対象の腎臓を保護するのに有用である。急性腎損傷（ＡＲＩ）は、腎機能および患者の血液からの老廃物の濾過の低減を指す。ＡＲＩは、典型的に、尿がほとんどまたは全く形成されないほど低いレベルまでの、糸球体濾過率（ＧＦＲ）の低下を含むものとして特徴付けられる。したがって、腎臓によって通常は除去される物質が体内に残る。
【０１７７】
ＡＲＩの原因は、以下の３つの区分に分類される様々な要因によって引き起こされ得る：（１）例えば、ショック／心停止のような、または出血に続く、低下した全身血圧に起因して、腎臓が適当な血液供給を受けられない、腎前性ＡＲＩ；（２）例えば、薬物誘発性毒性に起因して、不全が腎臓内で起こる、内因性ＡＲＩ；および（３）腎結石または膀胱癌／前立腺癌に起因する尿管閉塞のような、腎臓から出る尿流の機能障害によって引き起こされる、腎後性ＡＲＩ。ＡＲＩは、これらの区分のうちのいずれか１つ、またはこれらの組み合わせに関連し得る。
【０１７８】
腎臓が腎臓への適当な血液供給を受けられない状態の一例は、虚血である。虚血はＡＲＩの主な原因である。腎臓の一方または両方の虚血は、大動脈手術、腎移植、または心血管麻酔の間に経験される一般的な問題である。大動脈および／または腎動脈の締め付けを伴う外科手技、例えば、腎臓上および腎臓近傍の腹部大動脈瘤および腎移植のための手術はまた、著しい手術後の合併症および早期の同種移植片拒絶を引き起こす腎虚血を、特に生み出しやすい。これらの手術を受けている危険性が高い患者において、腎機能不全の発生率は５０％の高さまで報告されてきた。
【０１７９】
腎虚血は、血液の損失、重度の下痢または熱傷の結果としての体液の損失、ショック、および移植の前の提供者の腎臓の保存に関連する虚血によって引き起こされ得る。これらの状況において、腎臓への血流は、尿細管上皮細胞の虚血傷害、尿細管内腔内への上皮細胞の皮膚脱落、糸球体濾過の損失を引き起こす尿細管流の閉塞、および急性腎損傷を引き起こすほど十分に長い期間にわたって、危険なほど低いレベルまで低減され得る。
【０１８０】
対象はまた、関連する全身性または腎血管収縮が原因で、麻酔、手術、またはα−アドレナリン作動性アゴニストを受けた後にＡＲＩに対して脆弱になる場合がある。さらに、身体の自然防御は停止すること、すなわち、腎臓などの非必須な臓器の血管収縮であるため、アナフィラキシー、および降圧剤、敗血症、または薬物過剰投与によって引き起こされる全身性血管拡張はまた、ＡＲＩを引き起こし得る。
【０１８１】
したがって、いくつかの実施形態において、ＡＲＩの危険性がある対象は、腎臓への血液供給もしくは血圧の中断または低減を経験している対象であり得る。これらの対象は、かかる血液供給の中断または低減の前またはそれと同時に、ＧＬＰ−１ペプチドを、単独で、または本技術の１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて投与され得る。同様に、ＧＬＰ−１ペプチドは、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、虚血を処置するための治療剤の後に投与され得る。
【０１８２】
ＡＲＩの別の原因には、薬物誘発性毒性が含まれる。例えば、ネフロトキシンは、尿細管上皮細胞に対する直接毒性を引き起こし得る。ネフロトキシンには、治療薬、例えば、シスプラチン、ゲンタマイシン、セファロリジン、シクロスポリン、アンホテリシン、放射性造影剤（以下にさらに詳細に記載される）、駆除薬（例えば、パラコート）、および環境汚染物（例えば、トリクロリエチレンおよびジクロロアセチレン）が含まれるが、それらに限定されない。他の例には、ピューロマイシンアミノヌクレオシド（ＰＡＮ）、ゲンタマイシンなどのアミノグリコシド、セファロリジンなどのセファロスポリン、タクロリムスまたはシロリムスなどのカレイニューリン阻害剤が含まれる。薬物誘発性腎毒性はまた、非ステロイド性抗炎症薬、抗レトロウイルス薬、抗サイトカイン薬、免疫抑制剤、腫瘍薬、またはアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤によって引き起こされ得る。薬物誘発性腎毒性はさらに、鎮痛薬乱用、シプロフロキサシン、クロピドグレル、コカイン、ｃｏｘ−２阻害剤、利尿薬、ホスカルネット、金、イホスファミド、イムノグロビン、漢方薬、インターフェロン、リチウム、マンニトール、メサラミン、マイトマイシン、ニトロソ尿素、ペニシラミン、ペニシリン、ペンタミジン、キニーネ、リファンピン、ストレプトゾシン、スルホンアミド、チクロピジン、トリアムテレン、バルプロ酸、ドキソルビシン、グリセロール、シドホビル、トブラマイシン、ネオマイシン硫酸塩、コリスチメタート、バンコマイシン、アミカシン、セフォタキシム、シスプラチン、アシクロビル、リチウム、インターロイキン−２、シクロスポリン、またはインジナビルによって引き起こされ得る。
【０１８３】
尿細管上皮細胞に対する直接毒性に加えて、いくつかのネフロトキシンはまた、腎灌流を低減させ、制限された酸素利用能を有することで知られるゾーン（髄質内部領域）への傷害を引き起こす。かかるネフロトキシンは、アンホテリシンおよび放射性造影剤を含む。腎不全は、虚血、容量欠乏、閉塞、または感染と組み合わされたとき、これらの薬物の臨床的に関連する用量からさえももたらされる。一例は、腎機能障害を有する患者における放射性造影剤の使用である。造影剤誘発性腎症（ＣＩＮ）の発生率は、健常な患者においては３〜８％であるが、真性糖尿病を有する患者については２５％に上昇する。ＡＲＩのほとんどの事例は、素因的併存症を有する患者において起こる（ＭｃＣｏｍｂｓ，Ｐ．Ｒ．＆  Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｂ．，Ｓｕｒｇ  Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｂｓｔｅｔ．，１４８：１７５−１７８（１９７９））。
【０１８４】
したがって、一実施形態において、ＡＲＩの危険性がある対象は、腎毒性効果を有する１つ以上の治療薬を受けている。対象は、かかる治療剤の前またはそれと同時に、本技術のＧＬＰ−１ペプチドを投与される。同様に、ＧＬＰ−１ペプチドは、腎毒性を処置するための治療剤の後に投与され得る。
【０１８５】
一実施形態において、ＧＬＰ−１ペプチドは、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＣＩＮの危険性がある対象に、その状態を予防するために投与される。ＣＩＮは、急性腎不全の重要な原因である。ＣＩＮは、血管内Ｘ線検査造影材料への曝露の４８時間以内に起こる急性腎不全として定義され、依然としてＸ線検査手技の一般的な合併症である。
【０１８６】
ＣＩＮは、冠動脈、心臓、または神経の血管造影手技の間などに、対象が放射性造影剤に曝露されるときに生じる。造影剤は、ブロックされた体組織を医師が可視化することを可能にするため、多くの診断的かつ介入性手技に対して本質的である。クレアチニン試験は、ＣＩＮの発症、状態の処置、およびＣＩＮを処置または予防するに当たっての本発明のＧＬＰ−１ペプチドの有効性を監視するために使用され得る。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１ペプチドは、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＣＩＮからの保護を提供するために、造影剤の投与の前またはそれと同時に、対象に投与される。例えば、対象は、造影剤を受けるよりも約１〜２時間、約１〜６時間、約１〜１２時間、約１〜２４時間、または約１〜４８時間前に、ペプチドを受けてもよい。同様に、対象は、造影剤とほぼ同時にペプチドを投与されてもよい。さらに、対象へのペプチドの投与は、造影剤の投与後に続いてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、ＣＩＮに対する保護的または予防的効果を提供するために、造影剤の投与後、約１、２、３、４、５、６、７、８、１２、２４、および４８時間の間隔でペプチドを受け続ける。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１ペプチドは、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＣＩＮを処置するために、造影剤の投与後に対象に投与される。例えば、対象は、造影剤を受けた約１〜２時間、約１〜６時間、約１〜１２時間、約１〜２４時間、約１〜４８時間、または約１〜７２時間後に、ペプチドを受ける。例えば、対象は、本発明のペプチドを受けるより前に、上昇した血清クレアチニンレベルおよび／または減少した尿量などの、ＣＩＮの１つ以上の兆候もしくは症状を示し得る。本発明のペプチドの投与は、ペプチドを投与されない対照対象と比較して、対象における腎機能のこれらの指標のうちの１つ以上を改善する。
【０１８９】
一実施形態において、それを必要とする対象は、尿流の機能障害を有する対象であり得る。尿の流れの閉塞は尿路内のどこでも起こり得、腎結石または膀胱癌／前立腺癌を含むがそれらに限定されない、可能性のある原因を多く有する。片側尿管閉塞（ＵＵＯ）は、閉塞した尿流に関連する一般的な臨床的障害である。それは、尿細管細胞アポトーシス、マクロファージ浸潤、および間質性線維症にも関連する。間質性線維症は、低酸素環境を引き起こし、外科的矯正にも関わらず、腎機能の進行性の低下に寄与する。したがって、ＵＵＯを有するか、またはその危険性がある対象は、ＡＲＩを予防または処置するために、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて投与され得る。
【０１９０】
本発明のさらに別の態様において、腎臓の保護を必要とする哺乳動物における腎線維症から腎臓を保護するための方法が提供される。本方法は、本明細書に記載される通り、有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、哺乳動物に投与することを含む。本明細書に記載されるペプチドは、本明細書に記載される通り、当業者に既知の任意の方法によって、それを必要とする哺乳動物に投与され得る。
【０１９１】
本発明の別の態様において、急性腎損傷の処置を必要とする哺乳動物における急性腎損傷を処置するための方法が提供される。本方法は、本明細書に記載される通り、有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、哺乳動物に投与することを含む。本明細書に記載されるペプチドは、本明細書に記載される通り、当業者に既知の任意の方法によって、それを必要とする哺乳動物に投与され得る。
【０１９２】
本発明の方法は、腎機能不全、腎不全、または薬物もしくは化学物質の腎毒性に少なくとも部分的に起因する末期腎疾患を有する患者において特に有用である。他の徴候には、９７（男性）および８８（女性）ｍＬ／分より低いクレアチニンクリアランスレベル、または２０〜２５ｍｇ／ｄｌ以上の血中尿素レベルを含まれ得る。その上、この処置は、２４時間当たり１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０ｇ以上の微量アルブミン尿レベル、顕性アルブミン尿レベル、および／もしくはタンパク尿レベル、ならびに／または約１．０、１．５、２．０、２．５、３、３．５、４．０、４．５、５、５．５、６、７、８、９、１０ｍｇ／ｄｌ以上の血清クレアチニンレベルを有する患者において有用であり得る。
【０１９３】
本発明の方法は、対照対象と比較して、その腎機能が正常を２５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％以上下回る患者における腎疾患の進行を遅くするか、または逆転するために使用され得る。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、対照対象と比較して、腎機能の損失を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％以上遅くする。他の実施形態において、本発明の方法は、対照対象と比較して、患者の血清クレアチニンレベル、タンパク尿、および／または尿中アルブミン排泄量を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％以上改善する。腎機能を評価するための非限定的かつ例示的な方法は、本明細書、および、例えば、国際公開第０１／６６１４０号に記載される。
【０１９４】
一実施形態において、本明細書に開示されるペプチド、例えば、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、移植の前に急性腎損傷から対象の腎臓を保護するに当たっても使用され得る。例えば、除去された腎臓は、本明細書に記載されるペプチドを含有する溶液中に配置されてもよい。標準的な緩衝液中のペプチドの濃度は、当業者によって容易に決定され得る。かかる濃度は、例えば、約０．０１ｎＭ〜約１０μＭ、約０．１ｎＭ〜約１０μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、または約１ｎＭ〜約１００ｎＭであり得る。
【０１９５】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＡＲＩを予防または処置するのに有用であり、腎臓以外の臓器系における組織傷害および臓器不全にも適用可能である。例えば、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ミトコンドリア機能不全、細胞死、炎症、および線維症を最小限に抑えると予測される。いくつかの実施形態において、本発明は、組織傷害、例えば、膵炎、虚血、多発外傷、出血性ショック、および免疫媒介臓器傷害などの非伝染性の病理学的状態を有する対象を処置する方法を提供する。
【０１９６】
組織傷害は、例えば、大動脈瘤手術、多発外傷、末梢血管疾患、腎血管疾患、心筋梗塞、脳卒中、敗血症、および多臓器不全に関連し得る。一態様において、本発明は、傷害および／または虚血性事象に曝されている心臓、脳、血管系、腸、肝臓、腎臓、および眼などからの組織を有する対象を処置する方法に関連する。本方法は、治療的もしくは予防的効果を提供するために、治療上有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、対象に投与することを含む。本発明の別の実施形態は、腎臓、肺、心臓、肝臓、脳、膵臓などからなる群から選択される１つ以上の臓器の機能を改善するための、本発明のペプチドの投与を提供する。特定の実施形態において、肺機能の改善は、より低レベルの浮腫、改善された組織傷害スコア、およびより低レベルの炎症からなる群から選択される。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、虚血、薬物（例えば、アセトアミノフェン、アルコール）、ウイルス、肥満（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎）、および閉塞（例えば、胆管閉塞症、腫瘍）によって引き起こされる急性肝傷害の予防および／または処置のために使用される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、急性肝不全（ＡＬＦ）を予防または処置するために対象に投与される。ＡＬＦは、肝臓が正常に機能することの不全をもたらす、肝細胞の重度かつ広範囲の損傷に起因する臨床状態である。ＡＬＦは、肝性脳症および肝機能の重度の機能障害をもたらす肝細胞の大量壊死に起因する。これは、ウイルス肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ）、薬物毒性、頻繁なアルコール中毒、および自己免疫性肝炎などの、様々な原因を有する。ＡＬＦは、高い死亡率を有する非常に重度の臨床状態である。薬物関連肝毒性は、米国におけるＡＬＦの主因である。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＡＬＦからの保護を提供するために、肝毒性を誘発すると知られるか、またはその疑いがある薬物もしくは薬剤、例えば、アセトアミノフェンの投与の前またはそれと同時に、対象に投与される。例えば、対象は、薬物もしくは薬剤を受けるよりも約１〜２時間、約１〜６時間、約１〜１２時間、約１〜２４時間、または約１〜４８時間前に、ペプチドを受けてもよい。同様に、対象は、薬物または薬剤によって引き起こされるＡＬＦに対する予防的効果を提供するために、薬物または薬剤とほぼ同時にペプチドを投与されてもよい。さらに、対象へのペプチドの投与は、薬物または薬剤の投与後に続いてもよい。いくつかの実施形態において、対象は、保護的または予防的効果を提供するために、薬物または薬剤の投与後、約１、２、３、４、５、６、７、８、１２、２４、および４８時間の間隔でペプチドを受け続けてもよい。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、肝酵素（トランスアミナーゼ、アルカリホスファターゼ）の上昇したレベル、上昇した血清ビリルビン、アンモニア、グルコース、乳酸塩、またはクレアチニンを含むがそれらに限定されない、ＡＬＦの１つ以上の兆候もしくは症状を示す対象に投与される。本技術のペプチドの投与は、ペプチドを投与されない対照対象と比較して、対象における肝機能のこれらの指標のうちの１つ以上を改善する。対象は、ＡＬＦの第１の兆候もしくは症状の約１〜２時間、約１〜６時間、約１〜１２時間、約１〜２４時間、約１〜４８時間、または約１〜７２時間後に、ペプチドを受けてもよい。
【０２００】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、代謝亢進および臓器損傷を含むがそれらに限定されない、熱傷の局所および遠位の病態生理学的効果を処置または寛解するために使用される。本発明の実質的な理解を提供するために、本発明のある特定の態様、様態、実施形態、変形、および特徴が、様々なレベルの詳細で本明細書に記載されることを理解されたい。
【０２０１】
本明細書に記載される通り、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、熱傷および熱傷に関連する全身状態を処置または予防するのに有用である。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、熱傷の後かつ全身性傷害の検出可能な症状の発症後に、対象に投与される。したがって、用語「処置」は、本明細書において広義で使用され、熱傷ならびに／または臓器機能不全および代謝亢進などの二次的合併症の部分的または完全な治癒のためのＧＬＰ−１ペプチドの使用を指す。
【０２０２】
他の実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、臓器損傷もしくは代謝亢進などの全身性傷害を防ぐか、またはその発症予防を提供するために、熱傷の後であるが、全身性傷害の検出可能な症状の発症の前に、対象に投与される。したがって、用語「予防」は、本明細書において広義で使用され、皮膚への局所傷害、または熱傷後の臓器機能不全もしくは代謝亢進などの全身性傷害を完全または部分的に予防する、予防的使用を指す。化合物は、熱傷を受ける危険性がある対象に投与され得ることがまた企図される。
【０２０３】
熱傷は、一般的に、その重症度および程度に従って分類される。第１度熱傷は最軽度であり、典型的に表皮のみに影響を及ぼす。熱傷部位は赤く見え、有痛性、乾性であり、疱疹を欠き、体液漏出に起因してわずかに湿性であり得る。軽度の日焼けが第１度熱傷に典型的である。第２度熱傷では、表皮および真皮の両方が影響を受ける。疱疹は、通常、皮膚上に現れ、神経および皮脂腺への損傷を伴う。第３度熱傷が最も重篤であり、皮下組織を含む皮膚の全ての層への損傷を伴う。典型的には疱疹はなく、熱傷した表面は、焦げに起因して白色または黒色に見えるか、創傷の底面の血液に起因して明赤色に見える。ほとんどの場合、熱傷は表層筋膜を透過し、筋層内まで及び、動脈および静脈が影響を受ける。神経損傷が原因で、それが無痛性であることは可能である。
【０２０４】
ＧＬＰ−１の投与（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、乾熱もしくは低温熱傷、熱湯傷、日焼け、電気熱傷、例えばフッ化水素酸、ギ酸、無水アンモニア、セメント、およびフェノールを含む酸ならびにアルカリなどの化学薬剤、または放射線熱傷を含む、いかなる原因による熱傷の処置にも有効であると企図される。高温または低温のいずれかへの曝露に起因する熱傷が、本発明の範囲内である。熱傷の重症度および程度は変動し得るが、二次的な臓器損傷または代謝亢進は、通常、熱傷が非常に広範囲または非常に重度（第２度または第３度熱傷）であるときに生じる。二次的な臓器機能不全または不全の発達は、熱傷の程度、患者の免疫系の応答、ならびに感染および敗血症などの他の要因に依存する。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、熱傷に続発する臓器機能不全を処置または予防するために使用される。熱傷後の臓器機能不全を引き起こす生理学的過程の連鎖は複雑である。重篤な熱傷を有する対象において、カテコラミン、バソプレシン、およびアンジオテンシンの放出は、傷害から離れた臓器の灌流を損ない得る末梢および内臓床の血管収縮を引き起こす。心筋収縮力はまた、ＴＮＦ−αの放出によって低減され得る。活性化された好中球は、熱傷後の数時間以内に、皮膚臓器および肺などの遠位の臓器中で隔絶され、毒性の活性酸素種およびプロテアーゼの放出をもたらし、血管内皮細胞損傷を生み出す。肺毛細血管および肺胞上皮の整合性が損なわれると、間質内および肺胞内の空間に血漿および血液が漏出し、肺水腫をもたらす。肺機能の減少は、ヒスタミン、セロトニン、およびトロンボキサンＡ２などの液性因子によって引き起こされる気管支収縮の結果として、重度に熱傷した患者において生じ得る。
【０２０６】
熱傷を患っている対象は、骨格筋機能不全の危険性もある。理論に束縛されることを望むものではないが、熱傷誘発性ミトコンドリア骨格筋機能不全は、活性酸素種（ＲＯＳ）のミトコンドリア産生の刺激、および結果として生じるミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）への損傷による、酸化的リン酸化（ＯＸＰＨＯＳ）における欠損に起因するものと考えられる。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１ペプチドは、ミトコンドリア酸化還元状態の回復によって、またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体−γコアクチベーター−１βによって、ＡＴＰ合成を誘発し、これは早ければ熱傷の６時間後に発現減少されると予測される。したがって、熱傷によって引き起こされるミトコンドリア機能不全は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与をもって回復すると予測される。
【０２０７】
一態様において、本方法は、有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、対象に投与することによって、熱傷に起因する創傷を処置することに関連する。ペプチドは、全身的に、または創傷に対して局所的に投与され得る。熱創傷は典型的に、深さおよび重症度において不均一である。凝固した組織の周囲に、傷害が可逆的であり得、かつ炎症細胞および免疫細胞によって媒介される皮膚の微小血管系への損傷が予防され得る有意な領域が典型的にある。一実施形態において、ペプチドの投与は、創傷収縮の効果を遅くするか、または寛解する。創傷収縮は、全層開放創、特に全層熱傷の大きさを縮小させる過程である。拘縮および皮下線維組織の形成中に発生する張力は、奇形、そして特に創傷が関節上の領域を含む場合、関節の固定屈曲または固定伸長をもたらし得る。かかる合併症は、熱傷治癒に特に関連する。組織への傷害がない場合、創傷収縮は起こらず、熱傷が全層であり、かつ生存可能な組織が創傷に残らない場合、最大収縮が起こる。一実施形態において、ペプチドの投与は、第２度熱傷から第３度熱傷への熱傷の進行を予防すると予測される。
【０２０８】
熱傷の処置のための方法は、瘢痕または熱傷部位における治癒過程に付随する瘢痕組織の形成を減少させるためにも有効であり得ることも予測される。瘢痕は、正常な組織が破壊された部位における線維組織の形成である。したがって本開示は、第２度または第３度熱傷後の瘢痕を減少させるための方法も含む。本方法は、有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて用い、第２度または第３度熱傷を有する動物を処置することを含む。
【０２０９】
特定の実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、遠位の臓器もしくは組織への損傷を処置または予防するために、熱傷を患っている対象に投与される。特に、皮膚または他の身体の部位への熱傷後の肺、肝臓、腎臓、および／または腸の機能不全もしくは不全は、病的状態および死亡率に対して著しい影響を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、全身性炎症応答は熱傷後に対象において生じ、この全身性炎症が、傷害部位から離れた臓器の機能不全および不全として発現する離れた組織傷害を引き起こすと考えられている。臓器機能不全および代謝亢進を含む全身性傷害は、典型的に、第２度および第３度熱傷に関連する。全身性傷害、すなわち、臓器機能不全または代謝亢進の特徴は、後続の傷害または状態を誘発する熱傷が問題の臓器に直接影響を及ぼさない、すなわち、傷害が熱傷に続発するということである。
【０２１０】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、熱傷に続発する肝組織への損傷を処置または防ぐために投与される。肝機能を評価するための方法は当該技術分野において周知であり、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、またはビリルビンレベルについて血液検査を使用することを含むが、それに限定されない。肝臓構造の悪化を評価するための方法も周知である。かかる方法には、肝臓撮像（例えば、ＭＲＴ、超音波）、または肝生検の組織学的評価が含まれる。
【０２１１】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、熱傷に続発する肝組織への損傷を処置または防ぐために投与される。肝機能を評価するための方法は当該技術分野において周知であり、血清クレアチニン、または糸球体濾過率についての血液検査を使用することを含むが、それに限定されない。腎臓構造の悪化を評価するための方法も周知である。かかる方法には、腎臓撮像（例えば、ＭＲＩ、超音波）、または腎生検の組織学的評価が含まれる。
【０２１２】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、熱傷に関連する代謝亢進を予防または処置するために投与される。代謝亢進状態は、高血糖、タンパク質損失、および除脂肪体重の著しい低減に関連し得る。代謝亢進応答の逆転は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて投与すること、ならびに、特定の栄養素、成長因子、または他の薬剤の投与を介して対象の生理学的および生化学的環境を操作することによって達成され得る。実施例において実証される通り、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、代謝亢進を処置または予防するために、熱傷を患っている対象に投与され得る。
【０２１３】
一態様において、本開示は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、対象に投与することによって、対象において熱傷または熱傷に関連する状態を予防するための方法を提供する。ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、熱傷を受ける危険性がある対象に投与され得る。予防的応用では、ＧＬＰ−１ペプチドの薬学的組成物もしくは薬品は、熱傷およびその合併症の危険性を排除もしくは減少させるか、その重症度を低下させるか、またはその発症を遅延させるために、熱傷の影響を受けやすいか、ないしはその危険性がある対象に投与される。
【０２１４】
本開示の別の態様は、治療目的のために対象における熱傷および関連する合併症を処置する方法を含む。治療応用では、組成物または薬品は、疾患の発達におけるその合併症および中間の病理学的表現型を含む症状を、治癒するか、または部分的に停止するために十分な量で、熱傷を既に患っている対象に投与される。ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、熱傷の後であるが、臓器機能不全もしくは不全などの全身性傷害の検出可能な症状の発達前に、対象に投与され得、したがって、用語「処置」は、本明細書において広義で使用され、熱傷後の臓器機能不全もしくは不全または代謝亢進などの全身性傷害を完全または部分的に予防する、予防的使用を指す。このため、本開示は、熱傷を患う個人を処置する方法を提供する。
【０２１５】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、哺乳動物の対象における代謝症候群を予防または処置し得る。いくつかの場合、代謝症候群は、高脂肪食、またはより一般的には、過栄養および運動不足に起因し得る。ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、脂質異常症、中心性肥満、血中脂肪障害、およびインスリン抵抗性を含むがそれらに限定されない、代謝症候群の１つ以上の兆候もしくは症状を低減させ得る。
【０２１６】
理論に束縛されることを望むものではないが、ミトコンドリア整合性の喪失およびインスリン感受性は、一般的な代謝障害、すなわち、酸化ストレスから起こると考えられる。特に高脂肪食による過栄養は、ミトコンドリア活性酸素種（ＲＯＳ）産生および総合的な酸化ストレスを増加させ、急性および慢性ミトコンドリア機能不全の両方、ならびに代謝症候群の発症を引き起こし得る。ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、これらの効果を軽減し、それによって様々な体組織中のミトコンドリア機能を改善し、代謝症候群に関連する危険因子のうちの１つ以上を改善する。
【０２１７】
本技術はまた、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与による、代謝症候群の症状の低減に関連する。
【０２１８】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、疾患を予防または処置するために有用である。特に、本開示は、代謝症候群の危険性がある（またはその影響を受けやすい）対象を処置する予防的方法および治療的方法の両方を提供する。代謝症候群は、一般的に、ＩＩ型糖尿病、冠動脈疾患、腎機能不全、アテローム性動脈硬化症、肥満、脂質異常症、および本態性高血圧に関連する。したがって、本方法は、有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、予防および／または処置を必要とする対象に投与することによる、対象における代謝症候群または関連する状態の予防および／または処置のための方法を提供する。例えば、対象は、代謝症候群に寄与する要因のうちの１つ以上を改善するために、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて投与され得る。
【０２１９】
一態様において、本技術は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて投与することによって、哺乳動物における肥満、糖尿病、高血圧、および高脂血症などの代謝症候群に関連する特異的障害を処置または予防する方法を提供し得る。ある特定の実施形態において、特異的障害は肥満であり得る。ある特定の実施形態において、特異的障害は脂質異常症（すなわち、高脂血症）であり得る。
【０２２０】
一実施形態において、代謝症候群に関連する１つ以上の状態を示す対象への、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与は、これらの状態のうちの１つ以上の改善を引き起こすと予測される。例えば、対象は、ＧＬＰ−１ペプチド組成物を受ける前の対象と比較して、体重の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、または少なくとも約５０％の低減を示し得る。一実施形態において、対象は、ＧＬＰ−１ペプチド組成物を受ける前の対象と比較して、ＨＤＬコレステロールの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約５０％の低減、ならびに／または、ＬＤＬコレステロールの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約５０％の増加を示し得る。一実施形態において、対象は、いくつかのトリグリセリドの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、または少なくとも約５０％の低減を示し得る。一実施形態において、対象は、経口グルコース耐性（ＯＧＴＴ）の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、または少なくとも約５０％の改善を示し得る。いくつかの実施形態において、対象は、代謝症候群に関連する１つ以上の状態において観察可能な改善を示し得る。
【０２２１】
一態様において、本発明は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または、代謝症候群の１つ以上の兆候またはマーカー、例えば、体重、血清トリグリセリド、もしくはコレステロール、空腹時グルコース／インスリン／遊離脂肪酸、経口グルコース耐性（ＯＧＴＴ）、インビトロ筋肉インスリン感受性、インスリンシグナル伝達のマーカー（例えば、Ａｋｔ−Ｐ、ＩＲＳ−Ｐ）、ミトコンドリア機能（例えば、呼吸もしくはＨ2Ｏ2産生）、細胞内酸化ストレスのマーカー（例えば、脂質過酸化、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比、もしくはアコニターゼ活性）、またはミトコンドリア酵素活性を調節する１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、対象に投与することによって、対象において、骨格筋組織中の代謝症候群に関連する疾患または状態を予防するための方法を提供し得る。空腹時グルコース／インスリン／遊離脂肪酸、経口グルコース耐性（ＯＧＴＴ）、コレステロール、およびトリグリセリドレベルなどは、当該技術分野において周知の標準的な臨床検査技術を使用して測定され得る。
【０２２２】
代謝症候群の危険性がある対象は、本明細書に記載される通り、例えば、診断アッセイもしくは予後アッセイのいずれか、またはそれらの組み合わせによって特定され得る。予防的応用では、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの薬学的組成物もしくは薬品は、疾患の発達の間に現れる疾患の生化学的、組織学的、および／または行動学的な症状、その合併症、ならびに中間の病理学的表現型を含む疾患の危険性を排除もしくは低減させるか、その重症度を低下させるか、またはその発症を遅延させるために十分な量で、疾患または状態の影響を受けやすいか、ないしはその危険性がある対象に投与される。予防的なＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与は、疾患または障害が予防されるか、あるいは、その進行が遅延されるように、異常に特徴的な症状の顕在化より前に起こり得る。異常の種類に依存して、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または、ミトコンドリア機能を強化もしくは改善するように作用する１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、対象を処置するために使用され得る。適切な化合物は、本明細書に記載されるスクリーニングアッセイに基づいて決定され得る。
【０２２３】
本技術の別の態様は、治療目的のために対象における代謝症候群に関連する症状を低減させる方法を含む。治療応用では、組成物または薬品は、疾患の発達におけるその合併症および中間の病理学的表現型を含む疾患の症状を治癒するか、または部分的に停止するために十分な量で、かかる疾患の疑いがあるか、または既に患っている対象に投与される。このため、本発明は、代謝症候群または代謝症候群関連疾患もしくは障害を患う個人を処置する方法を提供する。
【０２２４】
本開示は、血圧、血中トリグリセリドレベル、または高コレステロールの処置のための、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせと、１つ以上の薬剤との併用療法を企図する。代謝症候群、肥満、インスリン抵抗性、高血圧、脂質異常症などの処置はまた、体重減少および運動、ならびに食事の変化を含む、様々な他の手法を含み得る。これらの食事の変化には、糖質を総カロリーの５０パーセント以下に制限する食事を維持すること、全粒粉パン（精白パンの代わりに）、玄米（白米の代わりに）、未精製の糖などの、複合糖質として定義される食物を食べること、マメ科植物（例えば、マメ）、全粒粉、果物、および植物を食べることによって線維消費量を増加させること、赤身肉および家禽の摂取量を低減させること、オリーブ油、アマニ油、およびナッツ中のものなどの「健康な」脂肪の消費、アルコール摂取量を制限することなどが含まれる。加えて、凝固障害（例えば、アスピリン療法により）、および一般的に、血栓形成促進性状態または炎症誘発性状態が制御され得るのと同様に、血圧の処置、および血中トリグリセリドレベルは、様々な利用可能な薬物（例えば、コレステロール調節薬）によって制御され得る。代謝症候群が糖尿病を引き起こす場合、もちろん、この疾患に対して利用可能な処置が多くある。
【０２２５】
本技術は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与による、眼状態の処置または予防に関連する。理論に束縛されることを望むものではないが、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、眼における酸化的損傷の重症度もしくは発生率を低減させることによって、眼疾患もしくは状態を処置または予防し得る。一実施形態において、眼状態は、ドライアイ、糖尿病性網膜症、白内障、網膜色素変性、緑内障、黄斑変性、脈絡膜血管新生、網膜変性、および酸素誘発性網膜症からなる群から選択される。
【０２２６】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて用いる処置は、ヒト網膜上皮細胞（ＨＲＥＣ）中の細胞内の活性酸素種（ＲＯＳ）を低減させると予測される。
【０２２７】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、高グルコースで処置したＨＲＥＣのミトコンドリアの潜在的損失を予防すると予測される。ＨＲＥＣのΔψｍは、ＪＣ−ｌ蛍光性プローブ染色後にフローサイトメトリーによって測定される。高グルコース（３０ｍＭ）処置は、培養されたＨＲＥＣのミトコンドリア膜電位の迅速な損失をもたらすと予測される。その一方、フローサイトメトリー分析は、ＧＬＰ−１組成物で共処置した３０ｍＭのグルコースが、高グルコース単独の群と比較してΔψｍを増加させることを示すと予測される。
【０２２８】
高グルコース（ＨＧ）で処置したＨＲＥＣ中のカスパーゼ−３の発現増加は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの処置によって低減されると予測される。カスパーゼ−３発現は、β−アクチンの発現に正規化される。ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、高グルコース処置されたＨＲＥＣ中のＴｒｘ２の発現を増加させると予測される。
【０２２９】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、初代ヒト網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞の生存率に悪影響を有しないと予測される。
【０２３０】
本明細書に記載される通り、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、疾患を予防または処置するために有用であると予測される。特に、本開示は、眼疾患もしくは状態の危険性がある（またはその影響を受けやすい）対象を処置する予防的方法および治療的方法の両方を提供する。したがって、本方法は、有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、眼状態の予防および／または処置を必要とする対象に投与することによる、対象における眼状態の予防および／または処置を提供する。例えば、対象は、眼疾患もしくは状態に寄与する要因のうちの１つ以上を改善するために、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて含む組成物を投与され得る。
【０２３１】
本技術の一態様は、治療目的のために対象における眼状態を低減させる方法を含む。治療応用では、組成物または薬品は、疾患の発達における合併症および中間の病理学的表現型を含む疾患の症状を治癒するか、または部分的に停止／低減させるために十分な量で、疾患を有することが知られるか、または有すると疑われる対象に投与される。このため、本開示は、眼状態を患う個人を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本技術は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて投与することによって、哺乳動物における糖尿病性網膜症、白内障、網膜色素変性、緑内障、脈絡膜血管新生、網膜変性、および酸素誘発性網膜症などの特異的眼障害を処置または予防する方法を提供する。
【０２３２】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、糖尿病性網膜症を処置または予防するために対象に投与される。糖尿病性網膜症は、毛細血管瘤および点状出血を特徴とする。その後、微小血管閉塞が網膜上に棉状白斑を形成させる。さらに、上昇した血管透過性亢進に起因して、糖尿病性網膜症を有する個人において網膜浮腫および／または硬性白斑が形成し得る。その後、血管新生が現れ、硝子体中で成長した結合組織の牽引によって網膜剥離が引き起こされる。虹彩ルベオーシスおよび血管新生緑内障が生じ得、これが今度は、盲目を引き起こし得る。糖尿病性網膜症の症状には、読字困難、霧視、片眼の突然の視力喪失、光の周囲に輪を見ること、暗点を見ること、および／または閃光灯を見ることが含まれるが、それらに限定されない。
【０２３３】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、白内障を処置または予防するために対象に投与される。白内障は、自然な水晶体の透明性の低減を特徴とする先天性または後天性の疾患である。白内障を有する個人は、水晶体表面の曇り、水晶体内面の曇り、および／または水晶体の膨張を含むがそれらに限定されない、１つ以上の症状を示し得る。先天性白内障関連疾患の典型例は、偽白内障、膜性白内障、冠状白内障、層状白内障、点状白内障、および糸状白内障である。後天性白内障関連疾患の典型例は、老人性白内障、続発性白内障、褐変白内障、併発白内障、糖尿病性白内障、および外傷性白内障である。後天性白内障はまた、電気ショック、放射線、超音波、薬物、全身性疾患、および栄養障害によって誘発可能である。後天性白内障は、手術後白内障をさらに含む。
【０２３４】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、網膜色素変性を処置または予防するために対象に投与される。網膜色素変性は、桿体細胞および／または錐体細胞の損傷を特徴とする障害である。網膜内の暗線の存在は、網膜色素変性を患っている個人において典型的である。網膜色素変性を有する個人はまたは、頭痛、四肢の無感覚もしくは刺痛、光閃光、および／または視覚変化を含むがそれらに限定されない、様々な症状を提示する。例えば、Ｈｅｃｋｅｎｌｉｖｅｌｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１０５（５）：５０４−５１１（１９８８）を参照されたい。
【０２３５】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、緑内障を処置または予防するために対象に投与される。緑内障は、視力の低下を引き起こす眼圧の上昇を特徴とする遺伝性疾患である。緑内障は、創傷、手術、および他の構造的奇形などの、個人において既に存在する様々な眼科的状態から発し得る。緑内障はいかなる年齢でも起こり得るが、それはしばしば高齢の個人において発達し、盲目を引き起こす。緑内障患者は、典型的に、２１ｍｍ  Ｈｇを超す眼圧を有する。しかしながら、緑内障の変化が視野および視神経乳頭に見られる、正常眼圧緑内障は、かかる上昇した眼圧、すなわち、２１ｍｍ  Ｈｇ超の眼圧の不在下で起こり得る。緑内障の症状には、霧視、重度の眼痛、頭痛、光の周囲にハローを見ること、悪心、および／または嘔吐が含まれるが、それらに限定されない。
【０２３６】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、黄斑変性を処置または予防するために対象に投与される。黄斑変性は、典型的には加齢性疾患である。黄斑変性の一般的区分は、湿性、乾性、および非加齢性の黄斑変性を含む。全事例の約８０〜９０パーセントを占める乾性黄斑変性は、萎縮性、非滲出性、またはドルセノイド（ｄｒｕｓｅｎｏｉｄ）黄斑変性としても知られる。乾性黄斑変性では、ドルーゼンが典型的に、網膜色素上皮組織の下に蓄積する。その後、ドルーゼンが黄斑内の光受容体の機能に干渉するとき、視力喪失が生じる。乾性黄斑発生の症状には、視覚の歪み、視覚中心の歪み、明暗の歪み、および／または色覚の変化が含まれるが、それらに限定されない。乾性黄斑変性は、漸進的な視力喪失をもたらし得る。
【０２３７】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、脈絡膜血管新生を処置または予防するために対象に投与される。脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）は、眼の脈絡膜層内の新たな血管の発達を特徴とする疾患である。新たに形成された血管が脈絡膜内で成長し、ブルッフ膜を通り、網膜下の空間に侵入する。ＣＮＶは、視力の機能障害または完全な視力喪失を引き起こし得る。ＣＮＶの症状には、影響を受けた片眼または両眼にちらつく点滅光もしくは灰色点を見ること、霧視、視覚の歪み、および／または視力喪失が含まれるが、それらに限定されない。
【０２３８】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、網膜変性を治療または予防するために対象に投与される。網膜変性は、網膜の破綻に関連する遺伝性疾患である。網膜組織は、動脈もしくは静脈閉塞、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、および／または後水晶体線維増殖症などの様々な理由で変性し得る。網膜分解は一般的に、網膜分離症、網膜格子状変性を含み、進行性黄斑変性に関連する。網膜分解の症状には、視力障害、視力喪失、夜盲、トンネル状視野、周辺視野の喪失、網膜剥離、および／または光感受性が含まれるが、それらに限定されない。
【０２３９】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、酸素誘発性網膜症を処置または予防するために対象に投与される。酸素誘発性網膜症（ＯＩＲ）は、微小血管変性を特徴とする疾患である。ＯＩＲは、未熟児網膜症を研究するための確立されたモデルである。ＯＩＲは、結果的に異常血管新生になる血管細胞損傷に関連する。微小血管変性は、ＯＩＲに関連する物理的変化に寄与する虚血を引き起こす。酸化ストレスはまた、内皮細胞が過酸化的損傷を受けやすいＯＩＲの発達において重要な役割を果たす。しかしながら、周皮細胞、平滑筋細胞、および血管周囲のアストロサイトは、一般的に、過酸化的傷害に耐性がある。例えば、Ｂｅａｕｃｈａｍｐ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．９０：２２７９−２２８８（２００１）を参照されたい。未熟児網膜症を含むＯＩＲは、一般的に、無症候性である。しかしながら、異常眼球運動、内斜視、重度の近視、および／または白色瞳孔が、ＯＩＲまたは未熟児網膜症の兆候であり得る。
【０２４０】
一態様において、本技術は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または、眼状態の１つ以上の兆候もしくはマーカーを調節する１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、対象に投与することによって、対象における眼状態を予防するための方法を提供すると予測される。眼状態の危険性がある対象は、本明細書に記載される通り、例えば、診断アッセイもしくは予後アッセイのいずれか、またはそれらの組み合わせによって特定され得る。予防的応用では、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの薬学的組成物もしくは薬品は、疾患の発達の間に現れる疾患の生化学的、組織学的、および／または行動学的な症状、その合併症、ならびに中間の病理学的表現型を含む疾患の危険性を排除もしくは低減させるか、その重症度を低下させるか、またはその発症を遅延させるために十分な量で、疾患または状態の影響を受けやすいか、ないしはその危険性がある対象に投与される。予防的なＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与は、疾患または障害が予防されるか、あるいは、その進行が遅延されるように、異常に特徴的な症状の顕在化より前に起こり得る。異常の種類に依存して、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ミトコンドリア機能を強化もしくは改善するか、または酸化的損傷を低減させるように作用し、対象を処置するために使用され得る。適切な化合物は、本明細書に記載されるスクリーニングアッセイに基づいて決定され得る。
【０２４１】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または本明細書に記載される１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、疾患を予防または処置するために有用である。特に、本開示は、心不全を有するか、またはその危険性がある（その影響を受けやすい）対象を処置する予防的方法および治療的方法の両方を提供する。したがって、本方法は、有効な量のＧＬＰ−１ペプチドを、予防および／または処置を必要とする対象に投与することによる、対象における心不全の予防および／または処置を提供する。Ｔｓｕｔｓｕｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｏｘ．Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇ．８（９）：１７３７−１７４４（２００６）を参照されたい。特定の実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、心臓組織中のミトコンドリア機能を強化することによって心不全を治療または予防するために使用される。
【０２４２】
本技術の一態様は、治療目的のために対象における心不全を処置する方法を含む。治療応用では、組成物または薬品は、疾患の発達におけるその合併症および中間の病理学的表現型を含む疾患の症状を治癒するか、または部分的に停止するために十分な量で、かかる疾患の疑いがあるか、または既に患っている対象に投与される。このため、本発明は、心不全を患う個人を処置する方法を提供する。
【０２４３】
心不全を患っている対象は、当該技術分野において既知の診断アッセイもしくは予後アッセイのいずれか、またはそれらの組み合わせによって特定され得る。例えば、心不全の典型的な症状には、息切れ（呼吸困難）、疲労、衰弱、横になった時の呼吸困難、および脚、足首、または腹部の膨張（浮腫）が含まれる。対象は、冠動脈疾患、全身性高血圧、心筋症または心筋炎、先天性心疾患、異常心臓弁または心臓弁膜症、重度の肺疾患、糖尿病、重度の貧血症甲状腺機能亢進症、不整脈またはリズム障害、および心筋梗塞を含む他の障害を患っている場合がある。うっ血性心不全の主要な兆候は、心拡大（肥大心）、頻呼吸（速い呼吸、左心不全の場合に起こる）、および肝腫大（肥大肝、右心不全の場合に起こる）である。冠動脈の閉塞に起因する急性心筋梗塞（「ＡＭＩ」）は、最終的に心不全を引き起こし得る一般的な起因事象である。しかしながら、ＡＭＩを有する対象は、必ずしも心不全を発症するとは限らない。同様に、心不全を患う対象は、必ずしもＡＭＩを患うとは限らない。
【０２４４】
一態様において、本技術は、有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、高血圧性心筋症を処置する必要がある患者に投与することによって、高血圧性心筋症を処置する方法を提供する。高血圧性心筋症が悪化すると、それはうっ血性心不全を引き起こし得る。高血圧性心筋症を患っている対象は、当該技術分野において既知の診断アッセイもしくは予後アッセイのいずれか、またはそれらの組み合わせによって特定され得る。例えば、高血圧性心筋症の典型的な症状には、高血圧（高い血圧）、咳、衰弱、および疲労が含まれる。高血圧性心筋症の追加の症状には、脚膨張、体重増加、横になった時の呼吸困難、活動に伴って強まる息切れ、および息切れを伴う深夜の覚醒が含まれる。
【０２４５】
一態様において、本技術は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または、梗塞の開始または進行を予防する１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、対象に投与することによって、対象における心不全を予防するための方法を提供する。心不全の危険性がある対象は、本明細書に記載される通り、例えば、診断アッセイもしくは予後アッセイのいずれか、またはそれらの組み合わせによって特定され得る。予防的応用では、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの薬学的組成物もしくは薬品は、疾患の発達の間に現れる疾患の生化学的、組織学的、および／または行動学的な症状、その合併症、ならびに中間の病理学的表現型を含む疾患の危険性を排除もしくは低減させるか、その重症度を低下させるか、またはその発症を遅延させるために十分な量で、疾患または状態の影響を受けやすいか、ないしはその危険性がある対象に投与される。予防的なＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせての投与は、疾患または障害が予防されるか、あるいは、その進行が遅延されるように、異常に特徴的な症状の顕在化より前に起こり得ると予測される。適切な化合物は、本明細書に記載されるスクリーニングアッセイに基づいて決定され得る。
【０２４６】
様々な実施形態において、好適なインビトロまたはインビボのアッセイが、特定のＧＬＰ−１ペプチド系治療薬（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせての効果、ならびにその投与が処置のために指示されるかを決定するために実施される。様々な実施形態において、所定のＧＬＰ−１ペプチド系治療薬（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）が、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、心不全を予防または処置するに当たって所望の効果を及ぼすかを決定するために、代表的な動物モデルを用いたインビトロアッセイが実施され得る。治療に使用する化合物は、ヒト対象における試験より前に、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、イエウサギなどを含むがそれらに限定されない、好適な動物モデル系において試験され得る。同じく、インビボ試験についても、ヒト対象への投与より前に、当該技術分野において既知の動物モデル系のいずれかが使用され得る。
【０２４７】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ＮＡＯＰＨオキシダーゼの下流で作用し、Ａｎｇ  ＩＩに応答してｐ３８  ＭＡＰＫの活性化およびアポトーシスを低減させることができると予測される。
【０２４８】
Ｇαｑマウスにおける心筋性能指数（ＭＰＩ）の悪化は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせによって、有意に寛解されると予測される。Ｇａｑマウスにおける正規化された心臓の重量の増加は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせによって実質的に予防されること、および、正規化された肺の重量の増加は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの処置による効果として示されることが予測される。
【０２４９】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または本明細書に記載される１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、疾患を予防または処置するために有用であると予測される。特に、本開示は、血管閉塞損傷、虚血−再灌流傷害、または心虚血−再灌流傷害の危険性がある（またはその影響を受けやすい）対象を処置する予防的方法および治療的方法の両方を提供する。したがって、本方法は、有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、予防および／もしくは処置を必要とする対象または冠動脈バイパス移植（ＣＡＢＧ）手技を有する対象に投与することによる、対象における血管閉塞損傷、虚血−再灌流傷害、または心虚血−再灌流傷害の予防および／もしくは処置を提供する。
【０２５０】
一態様において、本技術は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または状態の開始または進行を予防する１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、対象に投与することによって、対象において、血管閉塞損傷を予防するための方法を提供する。血管閉塞損傷の危険性がある対象は、本明細書に記載される通り、例えば、診断アッセイもしくは予後アッセイのいずれか、またはそれらの組み合わせによって特定され得る。予防的応用では、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの薬学的組成物もしくは薬品は、疾患の発達の間に現れる疾患の生化学的、組織学的、および／または行動学的な症状、その合併症、ならびに中間の病理学的表現型を含む疾患の危険性を排除もしくは低減させるか、その重症度を低下させるか、またはその発症を遅延させるために十分な量で、疾患または状態の影響を受けやすいか、ないしはその危険性がある対象に投与される。予防的なＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与は、疾患または障害が予防されるか、あるいは、その進行が遅延されるように、異常に特徴的な症状の顕在化より前に起こり得る。適切な化合物は、本明細書に記載されるスクリーニングアッセイに基づいて決定され得る。いくつかの実施形態において、ペプチドは、ＣＡＢＧからの腎臓または脳の合併症を予防するために十分な量で投与される。
【０２５１】
本技術の別の態様は、対象における血管閉塞損傷または虚血−再灌流傷害を処置する方法を含む。治療応用では、組成物または薬品は、疾患の発達におけるその合併症および中間の病理学的表現型を含む疾患の症状を治癒するか、または部分的に停止するために十分な量で、かかる疾患の疑いがあるか、または既に患っている対象に投与される。このため、本技術は、有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて投与し、ＣＡＢＧ手技を実施することによって、虚血−再灌流傷害を患う個人を処置する方法、または心虚血−再灌流傷害を患う個人を処置する方法を提供する。
【０２５２】
本技術はまた、哺乳動物における急性心筋梗塞および臓器移植に関連する虚血−再灌流傷害の処置または予防のための組成物および方法に潜在的に関連する。一般的に、本方法および組成物は、１つ以上のＧＬＰ−１ペプチド（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）もしくはそれらの薬学的に許容される塩と組み合わせて含む。
【０２５３】
いくつかの態様において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、哺乳動物における急性心筋梗塞傷害を処置するための方法において使用される。
【０２５４】
いくつかの態様において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、虚血および／または再灌流傷害哺乳動物のための方法において使用される。
【０２５５】
いくつかの態様において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、シクロスポリン誘発性腎毒性傷害哺乳動物の症状の処置、予防、または緩和のための方法において使用される。
【０２５６】
いくつかの態様において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、哺乳動物において血行再建術を実施するための方法において使用される。
【０２５７】
一実施形態において、血行再建術は、経皮的冠動脈形成術、バルーン血管形成術、バイパス移植片の挿入、ステントの挿入、および方向性冠動脈粥腫切除術からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、血行再建術は、閉塞の除去を含む。いくつかの実施形態において、血行再建術は、１つ以上の血小板溶解剤の投与を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の血小板溶解剤は、組織プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プラスミノーゲンのアシル化形態、プラスミンのアシル化形態、およびアシル化ストレプトキナーゼ−プラスミノーゲン錯体からなる群から選択される。
【０２５８】
別の態様において、本開示は、冠動脈血行再建の方法であって、（ａ）有効な量の（ｉ）ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）もしくは薬学的に許容される塩との組み合わせ、および（ｉｉ）追加の活性薬剤を、同時に、別々に、または経時的に投与することと、（ｂ）冠動脈バイパス移植手技を対象に実施することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、追加の活性薬剤は、シクロスポリンまたはシクロスポリン誘導体もしくは類似体を含む。
【０２５９】
別の態様において、本開示は、冠動脈血行再建の方法であって、（ａ）治療上有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）もしくはそれらの薬学的に許容される塩と組み合わせて、哺乳動物の対象に投与することと、（ｂ）治療上有効な量のシクロスポリンまたはシクロスポリン誘導体もしくは類似体を対象に投与することと、（ｃ）冠動脈バイパス移植手技を対象に実施することと、を含む、方法を提供する。
【０２６０】
一態様において、本発明は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）および状態の開始または進行を予防するシクロスポリンと組み合わせて、対象に投与することによって、対象において、急性心筋梗塞傷害を予防するための方法を提供する。予防的応用では、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）およびシクロスポリンとの組み合わせの薬学的組成物もしくは薬品は、疾患の発達の間に現れる疾患の生化学的、組織学的、および／または行動学的な症状、その合併症、ならびに中間の病理学的表現型を含む疾患の危険性を排除もしくは低減させるか、その重症度を低下させるか、またはその発症を遅延させるために十分な量で、疾患または状態の影響を受けやすいか、ないしはその危険性がある対象に投与される。予防的なＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）およびシクロスポリンとの組み合わせの投与は、疾患または障害が予防されるか、あるいは、その進行が遅延されるように、異常に特徴的な症状の顕在化より前に起こり得る。
【０２６１】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または、ＧＬＰ−１またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩などの、本明細書に開示される１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて用いる処置は、急性腎損傷（ＡＲＩ）から腎臓を保護すると予測される。本技術の別の態様は、任意の臓器または組織中の虚血を処置する方法を含む。例えば、本方法は、腎臓（または他の臓器）が適当な血液供給を受けられない状態（虚血）の処置に関連する。虚血は急性腎損傷（ＡＲＩ）の主な原因である。腎臓の一方または両方の虚血は、大動脈手術、腎移植、または心血管麻酔の間に経験される一般的な問題である。大動脈および／または腎動脈の締め付けを伴う外科手技、例えば、腎臓上および腎臓近傍の腹部大動脈瘤および腎移植のための手術はまた、著しい手術後の合併症および早期の同種移植片拒絶を引き起こす腎虚血を、特に生み出しやすい。これらの手術を受けている危険性が高い患者において、腎機能不全の発生率は５０％の高さまで報告されてきた。当業者であれば、虚血の上述の原因は腎臓に限定されず、外科手技の間に他の臓器中でも起こり得ることを理解するであろう。したがって、いくつかの実施形態において、かかる虚血は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩、およびシクロスポリンまたはその誘導体もしくは類似体などの活性薬剤との組み合わせの投与によって、処置、予防、寛解され得る（例えば、虚血の重症度が低下する）。
【０２６２】
本技術の別の態様は、シクロスポリン誘発性腎毒性を予防または寛解するための方法を含む。例えば、いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて含む薬学的組成物もしくは薬品は、シクロスポリン誘発性腎毒性を提示するか、またはその危険性がある対象に投与される。例えば、いくつかの実施形態において、シクロスポリンを、例えば、臓器もしくは組織移植後の免疫抑制剤として受ける対象はまた、治療上有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、ペプチドは、臓器もしくは組織移植より前、臓器もしくは組織移植の間、および／または臓器もしくは組織移植の後に、対象に投与される。いくつかの実施形態において、対象は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせと、シクロスポリンとの組み合わせを、臓器もしくは組織移植の前、その間、および／またはその後に受ける。ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）、単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせ、および任意にシクロスポリンを含む組成物または薬品は、その合併症および中間の病理学的表現型を含む腎毒性の症状を、治癒するか、または部分的に停止するために十分な量で投与される。例えば、いくつかの実施形態において、本組成物または薬品は、状態の生化学的、組織学的、および／または行動学的な症状、その合併症、ならびに中間の病理学的表現型を含む腎毒性の危険性を排除するか、その危険性を低減させるか、その重症度を低下させるか、またはその発症を遅延させるために十分な量で投与される。予防的なＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）およびシクロスポリンとの組み合わせの投与は、状態が予防されるか、あるいは、その進行が遅延されるように、異常に特徴的な症状の顕在化より前に起こり得る。典型的に、ペプチドを受ける対象は、より健康な移植された臓器もしくは組織を有する、ならびに／または、ペプチドを受けない対象と比較して、より長い期間にわたって、より高いおよび／もしくはより一貫したシクロスポリン薬用量またはレジメンを維持することができる。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または、１つ以上の活性薬剤（例���ば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩と組み合わせて、シクロスポリンと併用して受ける患者は、より長いおよび／もしくはより一貫したシクロスポリン処置レジメン、ならびに／またはシクロスポリンのより高い用量を耐えることができる。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩と組み合わせて、シクロスポリンと併用して受ける患者は、ペプチドを受けていない患者と比較したときに、シクロスポリンに対する上昇した耐性を有する。
【０２６３】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて用いる処置は、膵島細胞アポトーシスを減少させるのに有用であり、移植後の膵島細胞の生存率を向上させる。
【０２６４】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または本明細書に記載される１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、酸化的損傷の低減を必要とする哺乳動物における酸化的損傷を低減させるのに有用であり得る。酸化的損傷の低減を必要とする哺乳動物は、酸化的損傷に関連する疾患、状態、または処置を患っている哺乳動物である。典型的に、チック酸化的損傷は、活性酸素種（ＲＯＳ）および／または活性窒素種（ＲＮＳ）などのフリーラジカルによって引き起こされる。ＲＯＳおよびＲＮＳの例には、ヒドロキシルラジカル、超酸化物アニオンラジカル、一酸化窒素、水素、次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）、およびペルオキシナイトライトアニオンが含まれる。酸化的損傷は、有効な量の本明細書に記載されるＧＬＰ−１ペプチドの投与後に、哺乳動物、除去された臓器、または細胞における酸化的損傷の量が減少する場合に、「低減した」と見なされる。
【０２６５】
いくつかの実施形態において、処置される哺乳動物は、酸化的損傷に関連する疾患または状態を有する哺乳動物であり得る。酸化的損傷は、哺乳動物のいずれの細胞、組織、または臓器においても起こり得る。ヒトにおいて、酸化ストレスは多くの疾患に関与する。例には、アテローム性動脈硬化症、パーキンソン病、心不全、心筋梗塞、アルツハイマー病、統合失調症、双極性障害、脆弱Ｘ症候群、および慢性疲労症候群が含まれる。
【０２６６】
一実施形態において、哺乳動物は、酸化的損傷に関連する処置を受けている場合がある。例えば、哺乳動物は、再灌流を受けている場合がある。再灌流は、血流が減少またはブロックされている任意の臓器もしくは組織への、血流の回復を指す。再灌流の間の血流の回復は、呼吸性バーストおよびフリーラジカルの形成を引き起こす。
【０２６７】
一実施形態において、哺乳動物は、低酸素症または虚血に起因する減少もしくはブロックされた血流を有し得る。低酸素症または虚血の間の血液供給の損失もしくは重度の低減は、例えば、血栓塞栓性脳卒中、冠動脈アテローム性硬化症、または末梢血管疾患に起因し得る。多数の臓器および組織が、虚血または低酸素症に曝される。かかる臓器の例には、脳、心臓、腎臓、腸管、および前立腺が含まれる。影響を受ける組織は、典型的には、心筋、骨格筋、または平滑筋などの筋肉である。例えば、心筋の虚血または低酸素症は、一般的に、心臓の動脈および毛細管の血液供給による心臓組織への酸素送達の低減または損失を引き起こす、アテローム硬化性または血栓性の閉塞によって引き起こされる。かかる心虚血または低酸素症は、影響を受けた心筋の疼痛および壊死を引き起こし得、最終的に心不全を引き起こし得る。
【０２６８】
本方法はまた、任意の神経変性疾患または状態に関連する酸化的損傷の低減において使用され得る。神経変性疾患は、中枢神経系および末梢神経系のいかなる細胞、組織、または臓器にも影響を及ぼし得る。かかる細胞、組織、および臓器の例には、脳、脊髄、ニューロン、神経節、Ｓｃｈｗａｎｎ細胞、アストロサイト、オリゴデンドロサイト、およびミクログリアが含まれる。神経変性状態は、脳卒中または外傷性脳傷害もしくは脊髄傷害などの、急性状態であり得る。別の実施形態において、神経変性疾患または状態は、慢性神経変性状態であり得る。慢性神経変性状態において、フリーラジカルは、例えば、タンパク質への損傷を引き起こし得る。かかるタンパク質の一例は、アミロイドｐ−タンパク質である。フリーラジカルによる損傷に関連する慢性神経変性疾患の例には、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）が含まれる。
【０２６９】
処置され得る他の状態には、糖尿病、ならびに、黄斑変性および皺などの、加齢の症状およびそれに関連する状態が含まれる。
【０２７０】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または本明細書に記載される１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ミトコンドリア透過性転移（ＭＰＴ）に関連する任意の疾患または状態を処置するのに有用である。かかる疾患および状態には、組織もしくは臓器の虚血および／または再灌流、低酸素症、ならびにある数の神経変性疾患のうちのいずれかが含まれるが、それらに限定されない。ＭＰＴの阻害または予防を必要とする哺乳動物は、これらの疾患または状態を患っている哺乳動物である。
【０２７１】
したがって、本開示は、横隔膜では長期の人工呼吸（ＭＶ）の間、または他の骨格筋、例えば、ヒラメ筋もしくは足底筋では四肢不動化の間、または一般的には筋肉の活動停止において、ミトコンドリアＲＯＳ産生を低減させることができる、ミトコンドリア標的、抗酸化剤、ＧＬＰ−１ペプチドを含む方法および組成物を記載する。
【０２７２】
一態様において、本開示は、ミトコンドリア標的化抗酸化剤、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩との組み合わせを提供する。例えば、いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ミトコンドリア由来ＲＯＳによって引き起こされる衰弱、萎縮、機能不全などの筋肉虚弱を患っているか、または患う危険性がある対象において、治療的薬剤および／または予防的薬剤として使用される。いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、筋肉中のミトコンドリアＲＯＳ産生を減少させると予測される。さらに、またはあるいは、いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、骨格筋のミトコンドリア中で選択的に濃縮し、Ｈ2Ｏ2、ＯＨ−、およびＯＮＯＯ−のラジカル捕捉を提供すると予測され、いくつかの実施形態において、ラジカル捕捉は、用量依存性の基準で生じる。
【０２７３】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、筋肉虚弱（例えば、衰弱、萎縮、機能不全など）を処置するための方法において使用される。かかる治療応用では、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩と組み合わせて含む組成物または薬品は、虚弱の発達におけるその合併症および中間の病理学的表現型を含む筋肉虚弱の症状を予防、低減、緩和、または部分的に停止するために十分な量で、筋肉虚弱の疑いがあるか、または既に患っている対象に投与され得る。このため、本発明は、本明細書に記載される筋肉虚弱を患っているか、または患っていると疑われる個人を処置する方法を提供する。一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩と組み合わせて投与される。
【０２７４】
別の態様において、本開示は、本明細書に記載される通り、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または虚弱の開始もしくは進行を予防するか、またはその可能性を低減させる１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、対象に投与することによって、筋肉虚弱を予防するか、またはその可能性を低減させるための方法を提供する。筋肉虚弱を発症する危険性がある対象、例えば、ＭＶまたは医療従事者によって予想され得る関連する横隔膜筋の活動停止もしくは任意の他の骨格筋の活動停止（例えば、肢のギプス固定）を受ける準備中またはその直前の対象は、容易に特定され得る。
【０２７５】
予防的応用では、１つ以上のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩と組み合わせて含む薬学的組成物もしくは薬品は、虚弱の発症の間に現れる生化学的、組織学的、および／または行動学的な症状、その合併症、ならびに中間の病理学的表現型を含む筋肉虚弱の危険性を排除もしくは低減させるか、その重症度を低下させるか、またはその発症を遅延させるために十分な量で、筋肉虚弱の影響を受けやすいか、ないしはその危険性がある対象に投与される。ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または本明細書に開示される１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせのうちの１つ以上の投与は、障害が予防されるか、あるいは、その進行が遅延されるように、異常に特徴的な症状の顕在化より前に起こり得る。適切な化合物は、本明細書に記載されるスクリーニングアッセイに基づいて、または当該技術分野において周知の通りに決定され得る。一実施形態において、薬学的組成物は、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩と組み合わせて含む。
【０２７６】
いくつかの実施形態において、筋肉虚弱からの保護またはその処置を必要とする対象は、酸化的損傷に関連する疾患、状態、または処置を患っている対象も含む。典型的に、酸化的損傷は、活性酸素種（ＲＯＳ）および／または活性窒素種（ＲＮＳ）などのフリーラジカルによって引き起こされる。ＲＯＳおよびＲＮＳの例には、ヒドロキシルラジカル（ＨＯ．）、超酸化物アニオンラジカル（Ｏ２．−）、一酸化窒素（ＮＯ．）、過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）、次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）、およびペルオキシナイトライトアニオン（ＯＮＯＯ−）が含まれる。
【０２７７】
例えば、ギプス固定または他の活動停止に起因する、筋肉不動化に関連する筋肉虚弱を処置または予防するための、本明細書に開示されるＧＬＰ−１ペプチドを含む組成物は、不動化または活動停止の前、その間、またはその後のいずれのときに投与されてもよい。例えば、いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて含む組成物の１回以上の用量が、筋肉不動化もしくは活動停止の前、筋肉不動化もしくは活動停止の直後、筋肉不動化もしくは活動停止の経過の間、および／または筋肉不動化もしくは活動停止の後（例えば、ギプスの除去後）に投与され得る。制限としてではなく、例として、いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、不動化もしくは活動停止の持続時間にわたって、１日当たり１回、１日当たり２回、１日当たり３回、１日当たり４回、１日当たり６回、またはそれ以上投与され得る。他の実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、不動化もしくは活動停止の持続期間にわたって、毎日、１日おき、１週間当たり２回、３回、もしくは４回、または１ヶ月当たり１回、２回、３回、４回、５回、もしくは６回投与され得る。
【０２７８】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、筋量および筋力の損失に関連する、筋肉の活動停止もしくは非活動性萎縮に起因する筋肉虚弱を処置または予防するための方法において使用され得る。萎縮は、細胞レベルのアポトーシスを伴う、組織、例えば、線維性筋組織の再吸収および分解に関連する生理学的過程である。萎縮が栄養補助の損失または他の疾患から生じるとき、それは病理学的萎縮として知られる。かかる萎縮または病理学的萎縮は、四肢不動化、長期の四肢不動化、ギプス固定による四肢不動化、人工呼吸（ＭＶ）、長期のＭＶ、長時間の床上安静による悪液質、うっ血性心不全、肝疾患、筋肉減少症、消耗、乏しい栄養状態、血行不良、ホルモンの不規則性、神経機能の損失などに起因するか、またはそれらに関連する。したがって、本方法は、有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩と組み合わせて、予防および／または処置を必要とする対象に投与することを含む、骨格筋萎縮を含む対象における筋肉虚弱の予防および／または処置に関連する。
【０２７９】
本明細書に開示される組成物および製剤を投与することによって、処置、予防、または緩和され得る筋肉虚弱の追加の例には、制限なく、加齢性筋肉虚弱、長期の床上安静に関連する筋肉虚弱、宇宙飛行におけるような、微小重力に関連する衰弱および萎縮などの筋肉虚弱、ある特定の薬物の効果に関連する筋肉虚弱（例えば、スタチン、抗レトロウイルス薬、およびチアゾリジンジオン（ＴＺＤ））、ならびに悪液質などの筋肉虚弱、例えば癌または他の疾患によって引き起こされる悪液質が含まれる。
【０２８０】
一態様において、本技術は、ノーリフローの解剖学的ゾーンの処置または予防を必要とする対象への、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与による、ノーリフローの解剖学的ゾーンの処置または予防に関連する。一実施形態において、対象への、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与は、ノーリフローの解剖学的ゾーンの形成前に行われる。別の実施形態において、対象への、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与は、ノーリフローの解剖学的ゾーンの形成後に行われる。一実施形態において、本方法は、血行再建術と併用して実施される。心虚血−再灌流傷害の処置または予防のための方法も提供される。再灌流時の心臓への傷害を予防するように、対象における心筋梗塞を処置するための方法も提供される。一態様において、本技術は、治療上有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、哺乳動物の対象に投与することと、冠動脈バイパス移植（ＣＡＢＧ）手技を対象に実施することと、を含む、冠動脈血行再建の方法に関連する。
【０２８１】
一態様において、本発明は、対象におけるノーリフローの解剖学的ゾーンを予防するための方法であって、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または、状態の開始もしくは進行を予防する１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、対象に投与することを含む、方法を提供する。ノーリフローの解剖学的ゾーンの危険性がある対象は、本明細書に記載される通り、例えば、診断アッセイもしくは予後アッセイのいずれか、またはそれらの組み合わせによって特定され得る。予防的応用では、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの薬学的組成物もしくは薬品は、疾患または状態の発達の間に現れる疾患または状態の生化学的、組織学的、および／もしくは行動学的な症状、その合併症、ならびに中間の病理学的表現型を含む疾患または状態の危険性を排除もしくは低減させるか、その重症度を低下させるか、またはその発症を遅延させるために十分な量で、疾患または状態の影響を受けやすいか、ないしはその危険性がある対象に投与される。予防的なＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与は、疾患または障害が予防されるか、あるいは、その進行が遅延されるように、異常に特徴的な症状の顕在化より前に起こり得る。
【０２８２】
本技術の別の態様は、治療目的のために対象における血管閉塞損傷、ノーリフローの解剖学的ゾーン、または心虚血−再灌流傷害を処置する方法を含む。治療応用では、組成物または薬品は、疾患もしくは状態の発達におけるその合併症および中間の病理学的表現型を含む疾患もしくは状態の症状を治癒するか、または部分的に停止するために十分な量で、かかる疾患もしくは状態の疑いがあるか、または既に患っている対象に投与される。このため、本発明は、ノーリフローの解剖学的ゾーンを患う個人を処置する方法を提供する。
【０２８３】
ＩＶ．ペプチド合成およびＧＬＰ−１ペプチド
本開示の方法において有用なペプチド（例えば、ＧＬＰ−１、その変異体、類似体、または薬学的に許容される塩、およびＤ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）は、当該技術分野において既知の任意の方法によって合成され得る。タンパク質を化学的に合成するための例示的かつ非限定的な方法には、ＳｔｕａｒｔおよびＹｏｕｎｇによって、“Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（１９８４）、ならびに“Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２８９，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９７）に記載されるものが含まれる。
【０２８４】
本開示は、ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、ＧＬＰ−１の「生理活性」形態を含む、ＧＬＰ−１の１つ以上の誘導体の使用に関連する。さらに、またはあるいは、ＧＬＰ−１の他の形態が使用され得る。代替形態には、ＧＬＰ−１（１−３７）、ＧＬＰ−１（１−３６）、ＧＬＰ−１（１−３６）アミド、ＧＬＰ−１（７−３６）、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（９−３６）、ＧＬＰ−１（９−３７）、およびＧＬＰ−１（２８−３６）が含まれる。さらに、またはあるいは、同様に生物学的活性を有することが示されているＧＬＰ−１のＣ末端ペプチドが、本明細書に開示される方法および組成物において使用され得る。
【０２８５】
Ｖ．薬用量
治療的または予防的応用に即して、対象に投与される組成物の量は、疾患の種類および重症度、ならびに全体的な健康、年齢、性別、体重、および薬物への耐性などの個人の特徴に依存する。それは、疾患の度合、重症度、および種類にも依存する。当業者であれば、これらおよび他の要因によって適切な薬用量を決定することができるであろう。本組成物はまた、１つ以上の追加の治療的化合物と組み合わせて投与され得る。
ＶＩ．投与の様態
【０２８６】
細胞、臓器、または組織を、ペプチド（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）またはそれらの薬学的に許容される塩に接触させるための、当業者に既知の任意の方法が用いられ得る。好適な方法には、インビトロ、エクスビボ、またはインビボの方法が含まれる。
【０２８７】
インビトロの方法は、培養されたサンプルを典型的に含む。例えば、細胞は、リザーバ（例えば、組織培養プレート）内に配置され、所望の結果を得るのに好適な適切な条件下で、ペプチドと共にインキュベートされ得る。好適なインキュベーション状態は、当業者によって容易に決定され得る。
【０２８８】
エクスビボの方法は、ヒトなどの哺乳動物から除去された細胞、臓器、または組織を典型的に含む。この細胞、臓器、または組織は、例えば、適切な条件下でペプチドと共にインキュベートされ得る。接触された細胞、臓器、または組織は、典型的に、提供者に戻されるか、被移植者内に配置されるか、または将来の使用のために保管される。したがって、ペプチドは、一般的に、薬学的に許容される担体である。
【０２８９】
インビボの方法は、ヒトなどの哺乳動物に対する、本明細書に記載されるものなどのペプチドの投与を典型的に含む。本方法において有用なペプチドは、所望の結果を得ること、または哺乳動物を処置することにおいて有効な量で、哺乳動物に投与される。有効な量は、医師および臨床医によく知られる方法によって、前臨床治験および臨床治験の間に決定される。
【０２９０】
例えば薬学的組成物中の、有効な量の本方法において有用なペプチドは、薬学的化合物を投与するためのある数の周知の方法のいずれかによって、それを必要とする哺乳動物に投与され得る。ペプチドは、全身的または局所的に投与され得る。
【０２９１】
一実施形態において、ペプチドは静脈内に投与される。例えば、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、迅速な静脈内ボーラス注入によって投与され得る。いくつかの実施形態において、ペプチドは、定速静脈内注入として投与される。
【０２９２】
ペプチドは、経口的、局所的、鼻腔内、筋肉内、皮下的、または経皮的に投与されてもよい。一実施形態において、経皮投与は、荷電ペプチドが電流によって皮膚全体に送達される、イオン泳動によるものである。
【０２９３】
他の投与経路には、脳室内またはくも膜下腔内が含まれる。脳室内は、脳の脳室系内への投与に言及する。くも膜下腔内は、脊髄のくも膜下の空間内への投与に言及する。したがって、脳室内またはくも膜下腔内投与は、中枢神経系の臓器または組織に影響を及ぼすこれらの疾患および状態のために好ましい場合がある。
【０２９４】
本発明の方法において有用なペプチドはまた、当該技術分野において既知の通り、持続放出によって哺乳動物に投与され得る。持続放出投与は、特定の期間にわたって薬物のある特定のレベルを達成するための薬物送達の方法である。そのレベルは、典型的に、血清または血漿濃度によって測定される。制御放出によって化合物を送達するための方法の説明は、国際ＰＣＴ出願国際公開第０２／０８３１０６号に見い出すことができ、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２９５】
薬学の技術分野において既知の任意の製剤が、本方法において有用なＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与に好適である。経口投与では、液体製剤または固体製剤が使用され得る。製剤の例には、錠剤、ゼラチンカプセル、丸剤、トローチ剤、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、オブラート、チューインガムなどが含まれる。ペプチドは、当業者によって理解される通り、好適な薬学的担体（溶媒）または賦形剤と混合され得る。担体および賦形剤の例には、デンプン、乳、糖、ある特定の種類の粘土、ゼラチン、乳酸、ステアリン酸またはステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウムを含むその塩、タルク、植物性脂肪または油、ガム、およびグリコールが含まれる。
【０２９６】
全身性、脳室内、くも膜下腔内、局所的、鼻腔内、皮下的、または経皮的な投与については、本方法において有用なペプチドの製剤は、当該技術分野において既知のものなどの、ペプチドを送達するための従来の希釈剤、担体、または賦形剤などを使用し得る。例えば、本製剤は、安定剤、界面活性剤、好ましくは非イオン性界面活性剤、ならびに任意に塩および／または緩衝剤のうちの１つ以上を含み得る。ペプチドは、水溶液の形態、または凍結乾燥形態で送達され得る。
【０２９７】
安定剤は、例えば、アミノ酸（例えば、グリシンなど）、オリゴサッカライド（例えば、スクロース、テトラロース、ラクトースなど）、またはデキストランを含み得る。あるいは、安定剤は、マンニトールなどの糖アルコールを含み得る。いくつかの実施形態において、安定剤または安定剤の組み合わせは、ペプチドの重量の約０．１重量％〜約１０重量％を構成する。
【０２９８】
いくつかの実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベートなどの非イオン性界面活性剤である。好適な界面活性剤の例には、Ｔｗｅｅｎ  ２０、Ｔｗｅｅｎ  ８０、ポリエチレングリコール、または約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）のＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８などのポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコールが含まれる。
【０２９９】
塩または緩衝剤は、例えば、それぞれ、塩化ナトリウム、またはリン酸ナトリウム／カリウムなどの任意の塩または緩衝剤であり得る。いくつかの実施形態において、緩衝剤は、薬学的組成物のｐＨを約５．５〜約７．５の範囲内に維持する。塩および／または緩衝剤は、ヒトまたは動物への投与のために好適なレベルに浸透圧を維持するためにも有用である。いくつかの実施形態において、塩または緩衝剤は、約１５０ｍＭ〜約３００ｍＭのおよそ等張性の濃度で存在する。
【０３００】
本方法において有用なペプチドの製剤は、１つ以上の従来の添加剤をさらに含有し得る。かかる添加剤の例には、可溶化剤（例えば、グリセロールなど）、抗酸化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム（「ｑｕａｔｓ」として知られる四級アンモニウム化合物の混合物）、ベンジルアルコール、クロレトン、またはクロロブタノールなど）、麻酔剤（例えばモルヒネ誘導体など）、および本明細書に記載されるものなどの等張剤などが含まれる。酸化または他の損傷に対するさらなる予防措置として、薬学的組成物は、不透過性の栓で密封されたバイアル中の窒素ガス下で保管され得る。
【０３０１】
本発明に従い処置される哺乳動物は、例えば、ヒツジ、ブタ、ウシ、およびウマなどの家畜、イヌおよびネコなどの愛玩動物、ならびにラット、マウス、およびイエウサギなどの実験動物を含む、任意の哺乳動物であり得る。一実施形態において、哺乳動物はヒトである。
【０３０２】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または本方法において有用な１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）もしくはそれらの薬学的に許容される塩と組み合わせて、ＭＰＴを経験または予防しているミトコンドリアの数を減少させるのに有効な量で、哺乳動物に投与される。有効な量は、医師および臨床医によく知られる方法によって、前臨床治験および臨床治験の間に決定される。
【０３０３】
ペプチドは、全身的または局所的に投与され得る。一実施形態において、ペプチドは静脈内に投与される。例えば、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または本方法において有用な１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、迅速な静脈内ボーラス注入によって投与され得る。一実施形態において、ペプチドは、定速静脈内注入として投与される。
【０３０４】
ペプチドは、例えば、血管形成術もしくは冠動脈バイパス手術の間に冠動脈に直接注入されるか、または冠動脈ステント上に適用され得る。
【０３０５】
用量および薬用量レジメンは、疾患の重症度、使用される特定のＧＬＰ−１ペプチド（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの特徴、例えば、その治療指数、対象の特徴、および対象の診療歴に依存する。
【０３０６】
本明細書に記載されるペプチド（例えば、ＧＬＰ−１単独、またはＤ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドとの組み合わせ）は、本明細書に記載される障害の処置または予防のための、対象への単独または組み合わせでの投与のために、薬学的組成物中に組み込まれ得る。かかる組成物は、活性薬剤および薬学的に許容される担体を典型的に含む。本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」は、薬学的投与と適合性がある、食塩水、溶剤、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。補足的な活性化合物がまた、組成物中に組み込まれ得る。
【０３０７】
薬学的組成物は、典型的に、意図される投与経路と適合性があるように製剤化される。投与経路には、例えば、非経口的（例えば、静脈内、皮内、腹腔内、または皮下的）、経口的、呼吸性（例えば、吸入）、経皮的（局所的）、および経粘膜的な投与が含まれる。非経口、皮内、もしくは皮下応用に使用される溶液または懸濁液は、以下の構成成分を含み得る：注入のための水、食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶剤などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミンテトラ酢酸などのキレート剤；酢酸、クエン酸、またはリン酸などの緩衝液、および塩化ナトリウムまたは右旋糖などの浸透圧の調節のための薬剤。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基を用いて調節され得る。調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、またはガラスもしくはプラスチック製の複数用量バイアル内に封入され得る。患者または処置する医師の便宜のため、投薬製剤は、処置（例えば、７日間の処置）の過程にわたって、必要な全ての装置（例えば、薬物のバイアル、希釈剤のバイアル、シリンジ、および針）を収容するキットにおいて提供され得る。
【０３０８】
注入用の使用に好適な薬学的組成物は、無菌水溶液（水溶性の場合）または分散液、および無菌注入用溶液または分散液の即座の調製のための無菌粉末を含み得る。静脈内投与については、好適な担体には、生理食塩水、静菌性水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（登録商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．、ＵＳＡ）、またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。全ての場合において、非経口投与のための組成物は無菌でなければならず、シリンジ通過性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）を容易にするために製剤化されるべきである。本組成物は、製造および保管条件下で安定しているべきであり、細菌および真菌などの微生物による汚染から遮蔽されていなければならない。
【０３０９】
ＧＬＰ−１ペプチド組成物は、担体を含み得、これは例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、またはそれらの好適な混合物を含有する溶剤または分散媒体であり得る。適当な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合は必要な粒径の維持によって、または界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物の活動の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チオメラソール（ｔｈｉｏｍｅｒａｓｏｌ）などによって達成され得る。グルタチオンおよび他の抗酸化剤が、酸化を防止するための組成物中に含まれ得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトールなどのポリアルコール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含めることが望ましい。注入用組成物の長期の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを組成物中に含めることによってもたらされ得る。
【０３１０】
無菌注入用溶液は、必要に応じて、上に列挙した成分のうちの１つまたはそれらの組み合わせを有する適切な溶剤中に必要量の活性化合物を組み込み、その後に濾過滅菌することによって調製され得る。一般的に、分散液は、塩基性分散媒体、および上に列挙したものからの必要な他の成分を含有する無菌溶媒中に、活性化合物を組み込むことによって調製される。無菌注入用溶液の調製のための無菌粉末の場合、調製の典型的な方法には、真空乾燥および凍結乾燥が含まれ、これらは、活性成分の粉末に加え、それらの以前に無菌濾過された溶液からの任意の追加の所望の成分を生じさせることができる。
【０３１１】
経口組成物は、一般的に、不活性希釈剤または食用担体を含む。経口の治療的投与の目的のため、活性化合物は賦形剤と組み合わされ、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤、例えば、ゼラチンカプセルの形態で使用され得る。経口組成物はまた、口腔洗浄薬としての使用のための流体担体を使用して調製され得る。薬学的に適合性の結合剤、および／またはアジュバント材料が、組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分、または同様の性質の化合物のうちのいずれかを含有し得る：微結晶セルロース、トラガカントガム、もしくはゼラチンなどの結合剤；デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、もしくはコーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムもしくはＳｔｅｒｏｔｅｓなどの潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤；スクロースもしくはサッカリンなどの甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ香味料などの香味剤。
【０３１２】
吸入による投与では、本化合物は、好適な噴霧剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器もしくはディスペンサー、または噴霧器から、エアロゾルスプレーの形態で送達され得る。かかる方法には、米国特許第６，４６８，７９８号に記載のものが含まれる。
【０３１３】
本明細書に記載される通り、治療的化合物の全身性投与は、経粘膜的または経皮的手段によるものであってもよい。経粘膜または経皮投与では、透過される関門に適切な透過剤が製剤中に使用される。かかる透過剤は、当該技術分野において一般的に知られ、例えば、経粘膜的投与では、洗剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が含まれる。経粘膜的投与は、点鼻スプレーの使用を介して達成され得る。経皮投与では、活性化合物は、当該技術分野において一般的に知られる通り、軟膏、膏薬、ゲル、またはクリームへと製剤化される。一実施形態において、経皮投与はイオン泳動によって実施され得る。
【０３１４】
治療的なタンパク質またはペプチドは、担体系において製剤化され得る。担体はコロイド系であり得る。コロイド系は、リポソーム、リン脂質二重層溶媒であり得る。一実施形態において、治療的なタンパク質は、タンパク質の整合性を維持しながらリポソーム中にカプセル化される。当業者が理解する通り、リポソームを調製する様々な方法がある。（Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ａｎａｌ．３３：３３７−４６２（１９８８）；Ａｎｓｅｌｅｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９３）を参照されたい）。リポソーム製剤は、クリアランスを遅延させ、細胞取り込みを増加させることができる（Ｒｅｄｄｙ，Ａｎｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．３４（７８）：９１５−９２３（２０００）を参照されたい）。
【０３１５】
担体は、ポリマー、例えば、生分解性かつ生体適合性のポリマーマトリックスであってもよい。一実施形態において、治療的なタンパク質は、タンパク質の整合性を維持しながら、ポリマーマトリックス内に埋め込まれ得る。ポリマーは、ポリペプチド、タンパク質、もしくはポリサッカライドなどの天然のもの、またはポリα−ヒドロキシ酸などの合成のものであり得る。例には、例えば、コラーゲン、フィブロネクチン、エラスチン、酢酸セルロース、硝酸セルロース、ポリサッカライド、フィブリン、ゼラチン、およびそれらの組み合わせで作製された担体が含まれる。一実施形態において、ポリマーは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）またはコポリ乳酸／グリコール酸（ＰＧＬＡ）である。ポリマーマトリックスは、ミクロ球体およびナノ球体を含む、様々な形態および大きさで調製および単離され得る。ポリマー製剤は、治療効果の長期の持続期間をもたらし得る。（Ｒｅｄｄｙ，Ａｎｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．３４：９１５−９２３（２０００）を参照されたい）。ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）のためのポリマー製剤は、臨床治験において使用されてきた。（Ｋｏｚａｒｉｃｈ  ａｎｄ  Ｒｉｃｈ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２：５４８−５５２（１９９８）を参照されたい）。
【０３１６】
ポリマーミクロ球体の持続放出性製剤の例は、ＰＣＴ公報国際公開第９９／１５１５４号（Ｔｒａｃｙら）、米国特許第５，６７４，５３４号および同第５，７１６，６４４号（両方ともＺａｌｅらに対して）、ＰＣＴ公報国際公開第９６／４００７３号（Ｚａｌｅら）、ならびにＰＣＴ公報国際公開第００／３８６５１号（Ｓｈａｈら）に記載されている。米国特許第５，６７４，５３４号および同第５，７１６，６４４号、ならびにＰＣＴ公報国際公開第９６／４００７３号は、塩で凝集に対して安定化されるエリスロポエチンの粒子を含有する、ポリマーマトリックスを説明する。
【０３１７】
いくつかの実施形態において、治療的化合物は、移植組織およびミクロカプセル化送達系を含む、制御放出性製剤などの、治療的化合物を身体からの迅速な排除から保護する担体と共に調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ酢酸などの、生分解性かつ生体適合性のポリマーが使用され得る。かかる製剤は、既知の技術を使用して調製され得る。材料はまた、例えば、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ、ＵＳＡ）およびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｓｙｄｎｅｙ、ＡＵ）から商業的に取得され得る。リポソーム懸濁液（細胞特異性抗原に対するモノクローナル抗体を有する特異的細胞に標的化されるリポソームを含む）も、薬学的に許容される担体として使用され得る。これらは、当業者に既知の方法に従って、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載の通りに調製され得る。
【０３１８】
治療的化合物はまた、細胞内送達を向上させるように製剤化され得る。例えば、リポソーム送達系が当該技術分野において知られている。例えば、Ｃｈｏｎｎ  ａｎｄ  Ｃｕｌｌｉｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．６：６９８−７０８（１９９５）；Ｗｅｉｎｅｒ，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈ．４（３）：２０１−９（１９９４）；Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３（１２）：５２７−３７（１９９５）を参照されたい。Ｍｉｚｇｕｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．１００：６３−６９（１９９６）は、インビボおよびインビトロの両方でタンパク質を細胞に送達するための融合性リポソームの使用を説明する。
【０３１９】
治療剤の薬用量、毒性、および治療有効性は、例えば、ＬＤ５０（集合の５０％に対して致死性である用量）およびＥＤ５０（集合の５０％において治療上有効な用量）を決定するための、細胞培養または実験動物において、標準的な薬学的手順によって決定され得る。毒性効果と治療効果との間の用量比が治療指数であり、それは比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表され得る。高い治療指数を示す化合物が好ましい。毒性の副作用を示す化合物が使用され得るが、非感染細胞への潜在的な損傷を最小限に抑え、それによって副作用を低減させるために、罹患組織の部位に対してかかる化合物を標的化する送達系を設計するよう注意すべきである。
【０３２０】
細胞培養アッセイおよび動物実験から得られたデータは、ヒトにおける使用のための範囲の薬用量を製剤化するに当たって使用され得る。かかる化合物の薬用量は、好ましくは、毒性をほとんどまたは全く有しないＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内にある。薬用量は、用いられる投薬形態および使用される投与経路に依存して、この範囲内で変動し得る。本発明の方法において使用されるいずれの化合物についても、治療上有効な用量は、初めに細胞培養アッセイから推定され得る。用量は、細胞培養において判定されたときに、ＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量の阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む血中血漿濃度範囲を達成するように、動物モデルにおいて製剤化され得る。かかる情報は、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定するために使用され得る。血漿中のレベルは、例えば、高性能液体クロマトグラフィーによって測定され得る。
【０３２１】
典型的に、治療的もしくは予防的効果を達成するために十分な、有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または本明細書に開示される１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせは、約０．０００００１ｍｇ／体重１キログラム／日〜約１０，０００ｍｇ／体重１キログラム／日の範囲である。いくつかの実施形態において、薬用量範囲は、約０．０００１ｍｇ／体重１キログラム／日〜約１００ｍｇ／体重１キログラム／日である。例えば、薬用量は、１ｍｇ／体重ｋｇまたは１０ｍｇ／体重ｋｇを毎日、２日毎、もしくは３日毎か、または、１〜１０ｍｇ／ｋｇを毎週、２週間毎、もしくは３週間毎の範囲内であり得る。一実施形態において、ペプチドの単一薬用量は、体重１ｋｇ当たり０．１〜１０，０００マイクログラムの範囲である。一実施形態において、担体中のＧＬＰ−１ペプチド濃度は、送達量１ミリリットル当たり０．２〜２０００マイクログラムの範囲である。例示的な処置レジメンは、１日当たり１回または週１回の投与を伴う。間隔は、対象におけるグルコースまたはインスリンの血中レベルを測定すること、およびそれに従って薬用量または投与を調節することによって示される通り、不規則であり得る。いくつかの方法において、薬用量は、所望の空腹時グルコースまたは空腹時インスリン濃度を達成するように調節される。治療応用では、疾患の進行が低下もしくは停止するまで、または対象が疾患の症状の部分的もしくは完全な改善を示すまで、比較的短い間隔における比較的高い薬用量がしばしば必要とされる。その後、患者は予防的レジメンを投与され得る。
【０３２２】
いくつかの実施形態において、治療上有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、１０−１１〜１０−６モル、例えば、約１０−７モルの標的組織におけるペプチドの濃度として定義される。この濃度は、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇの全身性用量または体表面による等用量によって送達され得る。用量の計画は、例えば毎日１回または毎週１回の投与などだが、連続的投与（例えば、非経口注入または経皮的適用）も含む投与によって、標的組織における治療的濃度を維持するように最適化される。
【０３２３】
当業者であれば、疾患もしくは障害の重症度、以前の処置、対象の全体的な健康および／または年齢、ならびに他の疾患の存在を含むがそれらに限定されない、ある特定の要因が、対象を有効に処置するために必要な薬用量およびタイミングに影響を及ぼし得ることを理解するであろう。さらに、治療上有効な量の本明細書に記載される治療的組成物を用いた対象の処置は、単一の処置または一連の処置を含み得る。
【０３２４】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、急性腎損傷（ＡＲＩ）または急性肝不全（ＡＬＦ）から対象を保護するのに有効な量で、対象に投与される。また、本方法において有用なペプチドは、ＡＲＩまたはＡＬＦを処置するのに有効な量で対象に投与され得る。
【０３２５】
本明細書において使用される場合、組成物の「有効な量」または「薬学的に有効な量」または「治療上有効な量」という用語は、所望の治療的および／もしくは予防的効果を達成するために十分な量、例えば、ＡＲＩもしくはＡＬＦに関連する症状の予防または減少をもたらす量である。対象に投与される本発明の組成物の量は、疾患の種類および重症度、ならびに全体的な健康、年齢、性別、体重、および薬物への耐性などの個人の特徴に依存する。それは、疾患の度合、重症度、および種類にも依存する。当業者であれば、これらおよび他の要因によって適切な薬用量を決定することができるであろう。本発明の組成物はまた、１つ以上の追加の治療的化合物と組み合わせて投与され得る。本方法では、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、疾患もしくは状態によって引き起こされるＡＲＩの１つ以上の兆候を有する対象に投与され得る。有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与は、対象におけるＡＲＩの少なくとも１つの兆候または症状、例えば、代謝性アシドーシス（血液の酸性化）、高カリウム血症（上昇したカリウムレベル）、乏尿、または無尿（尿産生の減少もしくは休止）、体液バランスの変化、ならびに他の臓器系への影響を改善させ得る。例えば、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの「治療上有効な量」は、急性腎不全の生理学的効果が最小限に保たれるレベルを意味する。典型的に、生物学的効果の有効性は、ペプチドを投与されない対象または対象の組と比較して測定される。
【０３２６】
細胞、臓器、または組織を、ペプチドに接触させるための、当業者に既知の任意の方法が用いられ得る。好適な方法には、インビトロ、エクスビボ、またはインビボの方法が含まれる。インビボの方法は、ヒトなどの哺乳動物に対する、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または、本明細書に記載されるものなどの１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせの投与を典型的に含む。治療のためにインビボで使用されるとき、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、有効な量（すなわち、所望の治療効果を有する量）で、対象に投与される。ペプチドは、通常、非経口、局所的、または経口的に投与される。用量および薬用量レジメンは、疾患または傷害の種類および重症度、使用される特定のＧＬＰ−１ペプチド、およびＤ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの任意の芳香族カチオン性ペプチドの特徴、例えば、その治療指数、対象の特徴、ならびに対象の診療歴などに依存する。
【０３２７】
ペプチドは、薬学的に許容される塩として製剤化され得る。用語「薬学的に許容される塩」は、哺乳動物などの患者への投与のために許容可能な塩基または酸から調製された塩（例えば、所定の薬用量レジメンに対して許容可能な哺乳動物の安全性を有する塩）を意味する。しかしながら、塩は、患者への投与が意図されない中間化合物の塩などの、薬学的に許容される塩である必要はないと理解される。薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機または有機塩基および薬学的に許容される無機または有機酸に由来し得る。加えて、ペプチドが、アミン、ピリジン、またはイミダゾールなどの塩基性部分と、カルボン酸またはテトラゾールなどの酸性部分との両方を含有するとき、双性イオンが形成され得、本明細書において使用される用語「塩」の範囲内に含まれる。薬学的に許容される無機塩基に由来する塩には、アンモニウム塩、カルシウム塩、銅塩、第二鉄塩、第一鉄塩、リチウム塩、マグネシウム塩、マンガン塩、第一マンガン塩、カリウム塩、ナトリウム塩、および亜鉛塩などが含まれる。薬学的に許容される有機塩基に由来する塩には、置換アミン、環状アミン、天然に生じるアミンなど、例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ’ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ）、ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｄｉｎｅ）、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなどを含む、一級、二級、および三級アミンの塩が含まれる。薬学的に許容される無機酸に由来する塩には、ホウ酸、炭酸、ハロゲン化水素酸（臭化水素酸、塩酸、フッ化水素酸、またはヨウ化水素酸）、硝酸、リン酸、スルファミン酸、および硫酸の塩が含まれる。薬学的に許容される有機酸に由来する塩には、脂肪族ヒドロキシ酸（例えば、クエン酸、グルコン酸、グリコール酸、乳酸、ラクトビオン酸、リンゴ酸、および酒石酸）、脂肪族モノカルボン酸（例えば、酢酸、酪酸、ギ酸、プロピオン酸、およびトリフルオロ酢酸）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸およびグルタミン酸）、芳香族カルボン酸（例えば、安息香酸、ｐ−クロロ安息香酸、ジフェニル酢酸、ゲンチシン酸、馬尿酸、およびトリフェニル酢酸）、芳香族ヒドロキシ酸（例えば、ｏ−ヒドロキシ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、１−ヒドロキシナフタレン−２−カルボン酸、および３−ヒドロキシナフタレン−２−カルボン酸）、アスコルビン酸、ジカルボン酸（例えば、フマル酸、マレイン酸、シュウ酸、およびコハク酸）、グルコロン酸、マンデル酸、ムチン酸、ニコチン酸、オロト酸、パモン酸、パントテン酸、スルホン酸（例えば、ベンゼンスルホン酸、カンフォスルホン酸、エジシル酸、エタンスルホン酸、イセチオン酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２，６−ジスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸）、キシナホ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸などの塩が含まれる。
【０３２８】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、「低」、「中」、「高」用量レベルで提供される。いくつかの実施形態において、低用量は約０．００１〜約０．５ｍｇ／ｋｇ／時、または約０．０１〜約０．１ｍｇ／ｋｇ／時である。いくつかの実施形態において、中用量は約０．１〜約１．０ｍｇ／ｋｇ／時、または約０．１〜約０．５ｍｇ／ｋｇ／時である。いくつかの実施形態において、高用量は約０．５〜約１０ｍｇ／ｋｇ／時、または約０．５〜約２ｍｇ／ｋｇ／時である。
【０３２９】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または本明細書に記載される１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）（または薬学的に許容される塩、エステル、アミド、プロドラッグ、もしくは溶媒和化合物）と組み合わせて、別の治療剤と組み合わせて投与される。例として、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて受けている、炎症を経験する患者は、抗炎症剤を同時投与され得る。例として、本明細書に記載される化合物の治療有効性は、アジュバントの同時投与によって向上し得る。例として、患者への治療上の利益は、本明細書に記載される化合物を、特定の状態の予防もしくは処置を助けると知られるか、または助けると思われる別の治療剤と組み合わせて投与することによって増加し得る。
【０３３０】
併用療法の非限定的な例には、１つ以上のＧＬＰ−１ペプチド（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせを、一酸化窒素（ＮＯ）誘発因子、スタチン、負電荷を帯びたリン脂質、抗酸化剤、ミネラル、抗炎症剤、抗血管新生剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、またはカロテノイドと共に使用することが含まれる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物と組み合わせて使用される薬剤は、複数の区分に分類され得る（例えば、ルテインは抗酸化剤およびカロテノイドの両方である）。さらに、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、ほんの例としてシクロスポリンＡを含む、患者に利益を提供し得る追加の薬剤と共に投与され得る。
【０３３１】
加えて、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、例えば、体外のレオフェレーシス（ｒｈｅｏｐｈｅｒｅｓｉｓ）（膜分別濾過）、植え込み式微小望遠鏡、ドルーゼンのレーザー凝固、および微小刺激療法を含む、追加的または相乗的な利益を患者に提供し得る手順と組み合わせて使用されてもよい。
【０３３２】
抗酸化剤の使用は、黄斑変性およびジストロフィーを有する患者の利益になることが示されてきた。例えば、Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１１９：１４１７−３６（２００１）；Ｓｐａｒｒｏｗ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：１８２０７−１３（２００３）を参照されたい。少なくとも１つのＧＬＰ−１ペプチドと組み合わせた使用に好適な抗酸化剤の非限定的な例には、ビタミンＣ、ビタミンＥ、βカロチンおよび他のカロテノイド、補酵素Ｑ、４−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジンＮ−オキシル（テンポール）、ルテイン、ブチルヒドロキシトルエン、レスベラトロール、トロロクス類似体（ＰＮＵ−８３８３６−Ｅ）、ならびにビルベリー抽出物が含まれる。
【０３３３】
ある特定のミネラルの使用も、黄斑変性およびジストロフィーを有する患者の利益になることが示されてきた。例えば、Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．，１１９：１４１７−３６（２００１）を参照されたい。少なくとも１つのＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせと組み合わせて使用されるミネラルの非限定的な例には、銅含有ミネラル（例えば、酸化銅）、亜鉛含有ミネラル（例えば、酸化亜鉛）、およびセレン含有化合物が含まれる。
【０３３４】
ある特定の負電荷を帯びたリン脂質の使用も、黄斑変性およびジストロフィーを有する患者の利益になることが示されてきた。例えば、Ｓｈａｂａｎ  ＆  Ｒｉｃｈｔｅｒ，Ｂｉｏｌ．，Ｃｈｅｍ．３８３：５３７−４５（２００２）；Ｓｈａｂａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．７５：９９−１０８（２００２）を参照されたい。少なくとも１つのＧＬＰ−１ペプチドと組み合わせた使用に好適な負電荷を帯びたリン脂質の非限定的な例には、カルジオリピンおよびホスファチジルグリセロールが含まれる。正電荷を帯びたリン脂質および／または中性リン脂質も、ＧＬＰ−１ペプチドと組み合わせて使用されるとき、黄斑変性およびジストロフィーを有する患者に利益を提供し得る。
【０３３５】
ある特定のカロテノイドの使用は、光受容体細胞において必要な光保護の維持と相互関係があった。カロテノイドは、植物、藻類、細菌、ならびに鳥類および甲殻類などのある特定の動物に見い出すことができる、テルペノイド群の天然に生じる黄色から赤色の色素である。カロテノイドは、６００個の天然に生じる種が特定されている、分子の大きな分類である。カロテノイドは、炭化水素（カロチン）およびそれらの酸素化アルコール誘導体（キサントフィル）を含む。それらは、アクチニオエリトロール、アスタキサンチン、カンタキサンチン、カプサンチン、カプソルビン、ｐ−８’−アポカロテナール（アポ−カロテナール）、ｐ−１２’−アポ−カロテナール、ａ−カロチン、ｐ−カロチン、「カロチン」（ａ−カロチンおよびｐ−カロチンの混合物）、ｙ−カロチン、ｐ−シルプトキサンチン、ルテイン、リコピン、ビオールエリトリン、ゼアキサンチン、およびヒドロキシルまたはカルボキシル含有メンバーのエステルを含む。カロテノイドの多くはシスおよびトランス異性体形態として天然に生じ、一方で合成化合物はしばしばラセミ混合物として存在する。
【０３３６】
ヒトにおいて、網膜は、主に２つのカロテノイド、ゼアキサンチンおよびルテインを選択的に蓄積する。これらの２つのカロテノイドは強力な抗酸化剤であり、青色光を吸収するため、それらは網膜の保護を助けると考えられる。ウズラ類を用いた研究は、カロテノイド不足の食事で飼育された動物が、アポトーシス性光受容体細胞の非常に高い数によって証明される通り、低濃度のゼアキサンチンを有する網膜を発達させ、重度の光損傷を患うことを確証した。一方、高カロテノイド食で飼育された動物は、最小限の光損傷を維持する高いゼアキサンチン濃度の網膜を発達させる。少なくとも１つのＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせと組み合わせた使用に好適なカロテノイドの非限定的な例には、ルテインおよびゼアキサンチン、ならびに上述のカロテノイドのうちのいずれかが含まれる。
【０３３７】
一酸化窒素誘発因子には、インビボで内在性ＮＯを刺激するか、もしくは内在性の内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）のレベルを上昇させるか、または一酸化窒素シンターゼの基質である化合物が含まれる。かかる化合物には、例えば、それらのニトロソ化およびニトロシル化類似体（例えば、ニトロソ化Ｌ−アルギニン、ニトロシル化Ｌ−アルギニン、ニトロソ化Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン、ニトロシル化Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン、ニトロソ化Ｌ−ホモアルギニン、およびニトロシル化Ｌ−ホモアルギニン）を含む、Ｌ−アルギニン、Ｌ−ホモアルギニン、およびＮ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン、Ｌ−アルギニンの前駆体、ならびに／または、例えば、シトルリン、オルニチン、グルタミン、リジン、これらのアミノ酸のうちの少なくとも１つを含むポリペプチド、酵素アルギナーゼの阻害剤（例えば、Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニンおよび２（Ｓ）−アミノ−６−ボロノヘキサン酸）、ならびに一酸化窒素シンターゼ、サイトカイン、アデノシン、ブラジキニン、カルレティキュリン、ビサコジル、およびフェノールフタレインの基質を含む、生理学的に許容される塩が含まれる。ＥＤＲＦは、内皮によって分泌される血管弛緩因子であり、一酸化窒素またはその密接に関係した誘導体として特定されてきた（Ｐａｌｍｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２７：５２４−５２６（１９８７）；Ｉｇｎａｒｒｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：９２６５−９２６９（１９８７））。
【０３３８】
スタチンは、脂質低下剤および／または好適な一酸化窒素誘発因子として働く。加えて、スタチンの使用と、黄斑変性の遅延された発症または発達との間の関係が実証されてきた。Ｇ．ＭｃＧｗｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．８７：１１２１−２５（２００３）。したがってスタチンは、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせと組み合わせて投与されるとき、眼状態（黄斑変性およびジストロフィー、ならびに網膜ジストロフィーなど）を患っている患者に利益を提供し得る。好適なスタチンには、ほんの例として、ロスバスタチン、ピチバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、セリバスタチン、メバスタチン、ベロスタチン、フルバスタチン、コンパクチン、ロバスタチン、ダルバスタチン、フルインドスタチン、アトルバスタチン、アトルバスタチンカルシウム（これはアトルバスタチンのヘミカルシウム塩である）、およびジヒドロコンパクチンが含まれる。
【０３３９】
ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせと組み合わせて使用される好適な抗炎症剤には、ほんの例として、アスピリンおよび他のサリチル酸塩、クロモリン、ネドクロミル、テオフィリン、ジロートン、ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト、インドメタシン、リポキシゲナーゼ阻害剤、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、イブプロフェンおよびナプロキシン）、プレドニゾン、デキサメタゾン、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（すなわち、Ｎａｐｒｏｘｅｎ（商標）およびＣｅｌｅｂｒｅｘ（商標）などのＣＯＸ−ｌおよび／またはＣＯＸ−２阻害剤）、スタチン（例えば、ロスバスタチン、ピチバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、セリバスタチン、メバスタチン、ベロスタチン、フルバスタチン、コンパクチン、ロバスタチン、ダルバスタチン、フルインドスタチン、アトルバスタチン、アトルバスタチンカルシウム（アトルバスタチンのヘミカルシウム塩）、ジヒドロコンパクチン）、ならびに切り離されたステロイド（ｄｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｓｔｅｒｏｉｄ）が含まれる。
【０３４０】
マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）阻害剤も、黄斑変性または網膜変性に関連する眼状態もしくは症状の処置のために、本明細書に記載される組成物と組み合わせて投与され得る。ＭＭＰは、細胞外基質のほとんどの構成成分を加水分解することで知られる。これらのプロテイナーゼは、正常組織リモデリング、胚形成、創傷治癒、および血管新生などの、多くの生物学的過程において中心的な役割を果たす。しかしながら、高レベルのＭＭＰは、黄斑変性を含む多くの病状に関連する。多くのＭＭＰが特定されており、そのほとんどがマルチドメイン亜鉛エンドペプチダーゼである。ある数のメタロプロテイナーゼ阻害剤が知られている（例えば、Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９９（９）：２７３５−２７７６（１９９９）を参照されたい）。ＭＭＰ阻害剤の代表例には、メタロプロテイナーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ）（例えば、ＴＩＭＰ−ｌ、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、ＴＩＭＰ−４）、α−２−マクログロブリン、テトラサイクリン系（例えば、テトラサイクリン、ミノサイクリン、ドキシサイクリン）、ヒドロキサメート（例えば、ＢＡＴＩＭＡＳＴＡＴ（商標）、ＭＡＲＩＭＩＳＴＡＴ（商標）、およびＴＲＯＣＡＤＥ（商標））、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ、システイン、アセチルシステイン、Ｄ−ペニシラミン、金塩）、合成ＭＭＰ断片、サクシニルメルカプトプリン、ホスホンアミデート、ならびにヒドロキサム酸が含まれる。本明細書に記載される組成物と組み合わせた使用に好適なＭＭＰ阻害剤の非限定的な例には、上述の阻害剤のうちのいずれかが含まれる。
【０３４１】
抗血管新生薬または抗ＶＥＧＦ薬の使用も、黄斑変性およびジストロフィーを有する患者への利益を提供することが示されてきた。少なくとも１つのＧＬＰ−１ペプチドと組み合わせて使用される好適な抗血管新生薬または抗ＶＥＧＦ薬の例には、ｒｈｕｆａｂ  Ｖ２（Ｌｕｃｃｎｔｉｓ（商標））、トリプトファニル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＴｒｐＲＳ）、ｅｙｅ００１（抗ＶＥＧＦペグ化アプタマー）、スクアラミン、Ｒｅｔａａｎｅ（商標）（デポー懸濁液のための酢酸アネコルタブ）、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグ（ＣＡ４Ｐ）、Ｍａｃｕｇｅｎ（商標）、Ｍｉｆｅｐｒｅｘ（商標）（ミフェプリストン−ｒｕ４８６）、サブテノントリアムシノロンアセトニド、硝子体内結晶性トリアムシノロンアセトニド、プリノマスタット（ＡＧ３３４０）、フルオシノロンアセトニド（フルオシノロン眼内移植組織を含む）、ＶＥＧＦＲ阻害剤、およびＶＥＧＦ−トラップが含まれる。
【０３４２】
視力障害を軽減するために使用されてきた他の薬学的療法は、少なくとも１つのＧＬＰ−１ペプチドと組み合わせて使用され得る。かかる処置には、非熱的レーザーの使用を伴うＶｉｓｕｄｙｎｃ（商標）などの薬剤、ＰＫＣ４１２、エンドビオン、神経栄養因子（例えば、グリア由来神経栄養因子、毛様体神経栄養因子）、ジアタゼム、ドルゾラミド、光栄養生物、９−シス−レチナール、ホスホリンヨーダイドもしくはエコチオパートまたは炭酸脱水酵素阻害剤を含む眼の薬物療法（エコー療法を含む）、ＡＥ−９４１、Ｓｉｍａ−０２７、ペガプタニブ、ニューロトロフィン（例えば、ＮＴ−４／５）、ｃａｎｄ５、ラニビズマブ、ＩＮＳ−３７２１７、インテグリンアンタゴニスト、ＥＧ−３３０６、ＢＤＭ−Ｅ、サリドマイド、カルジオトロフィン−１，２−メトキシエストラジオール、ＤＬ８２３４、ＮＴＣ−２００、テトラチオモリブデート、ＬＹＮ−００２、微細藻類化合物、Ｄ−９１２０、ＡＴＸ−Ｓ１０、ＴＧＦ−β２、チロシンキナーゼ阻害剤、ＮＸ−２７８−Ｌ、Ｏｐｔ−２４、網膜細胞神経節神経保護薬、Ｎ−ニトロピラゾール誘導体、ＫＰ−Ｉ０２、およびシクロスポリンＡが含まれるが、それらに限定されない。
【０３４３】
複数の治療剤は、任意の順序で、または同時に投与されてもよい。同時の場合、薬剤は、単一の統合された形態で、または複数の形態で（すなわち、単一の溶液として、もしくは２つの別個の溶液として）提供され得る。治療剤のうちの１つが複数用量で与えられるか、または両方が複数用量で与えられてもよい。同時でない場合、複数用量の間のタイミングは、ゼロ週間超から約４週間未満、約６週間未満、約２ヶ月未満、約４ヶ月未満、約６ヶ月未満、または約１年未満まで変動し得る。加えて、組み合わせの方法、組成物、および製剤は、２つのみの薬剤の使用に限定されない。例として、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、少なくとも１つの抗酸化剤および少なくとも１つの負電荷を帯びたリン脂質と共に提供され得る。例として、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、少なくとも１つの抗酸化剤および一酸化窒素産生の少なくとも１つの誘発因子と共に提供され得る。例として、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、一酸化窒素産生の少なくとも１つの誘発因子および少なくとも１つの負電荷を帯びたリン脂質と共に提供され得る。
【０３４４】
加えて、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、追加的または相乗的な利益を患者に提供し得る手順と組み合わせて使用され得る。例えば、視力障害を軽減することが知られるか、そうと提案されるか、またはそうと見なされる手順には、「限定された網膜移動術」、光線力学療法（例えば、受容体標的化ＰＤＴ、ＰＤＴでの注入用のポルフィマーナトリウム、ベルテポルフィン、ＰＤＴでのロスタポルフィン、ＰＤＴでのタラポルフィンナトリウム、モテクサフィンルテチウム）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、Ｎｏｖａｇａｌｉ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡ，ＩＳＩＳ−１３６５０の製品）、レーザー凝固、ドルーゼンレーザー処置、黄斑円孔手術、黄斑移動手術、植え込み式微小望遠鏡、ファイモーション（ｐｈｉ−ｍｏｔｉｏｎ）血管造影（マイクロレーザー療法および栄養血管処置）、陽子線療法、微小刺激療法、網膜剥離および硝子体の手術、強膜バックル、黄斑下出血手術、経瞳孔温熱療法、光化学系Ｉ療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の使用、体外のレオフェレーシス（膜分別濾過およびレオセラピー（ｒｈｅｏｔｈｅｒａｐｙ））、マイクロチップ移植、幹細胞療法、遺伝子置換療法、リボザイム遺伝子療法（低酸素症応答エレメントの遺伝子療法、ＬＥＮＴＩＰＡＣ（商標）、ＰＤＥＦ遺伝子療法を含む）、光受容体／網膜細胞移植（移植可能な網膜上皮細胞、網膜細胞移植を含む）、ならびに鍼が含まれるが、それらに限定されない。
【０３４５】
個人の利益になるように使用され得るさらなる組み合わせには、その個人がある特定の眼状態と相互関係があることで知られる変異遺伝子の保有者であるかを決定するために遺伝子検査を使用することが含まれる。ほんの例として、ヒトＡＢＣＡ４遺伝子における欠損は、シュタルガルト病、錐体杆体ジストロフィー、加齢性黄斑変性、および網膜色素変性を含む、５つの明確に異なる網膜の表現型に関連すると考えられる。例えば、Ａｌｌｉｋｍｅｔｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７：１８０５−０７（１９９７）；Ｌｅｗｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．６４：４２２−３４（１９９９）；Ｓｔｏｎｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２０：３２８−２９（１９９８）；Ａｌｌｉｋｍｅｔｓ，Ａｍ．Ｊ  Ｈｕｍ．Ｇｅｎ．６７：７９３−７９９（２０００）；Ｋｌｅｖｅｒｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １１  １：５４６−５５３（２００４）を参照されたい。加えて、シュタルガルト病の常染色体優性形態は、ＥＬＯＶ４遺伝子における変異によって引き起こされる。Ｋａｒａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（２００５）を参照されたい。これらの変異のうちのいずれかを保有する患者は、本明細書に記載される治療的および／または予防的方法から利益を受けると予測される。
【０３４６】
いくつかの実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、心不全の予防または処置のための１つ以上の追加の薬剤と組み合わされる。心不全のための薬物処置は、利尿薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ジゴキシン（ジギタリス）、カルシウムチャネルブロッカー、およびβブロッカーを典型的に伴う。軽度の場合、チアジド系利尿薬、例えば２５〜５０ｍｇ／日のヒドロクロロチアジドまたは２５０〜５００ｍｇ／日のクロロチアジドなどが有用である。しかしながら、慢性利尿は低カリウム性アルカローシスを引き起こすため、補足的な塩化カリウムが必要な場合がある。さらに、チアジド系利尿薬は、通常、心不全の進行症状を有する患者において有効ではない。典型的な用量のＡＣＥ阻害剤には、２５５０ｍｇ／日のカプトプリルおよび１０ｍｇ／日のキナプリルが含まれる。
【０３４７】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、アドレナリン作動性β−２アゴニストと組み合わされる。「アドレナリン作動性β−２アゴニスト」は、例えば、アドレナリン作動性β−２アゴニスト生物学的活性を有する天然または合成の機能性変異体、ならびにアドレナリン作動性β−２アゴニスト生物学的活性を有するアドレナリン作動性β−２アゴニストの断片を含む、アドレナリン作動性β−２アゴニストならびにそれらの類似体および誘導体に言及する。用語「アドレナリン作動性β−２アゴニスト生物学的活性」は、対象におけるアドレナリンおよびノルアドレナリンの効果を模倣し、かつ心不全を有する患者における心筋収縮力を改善する活性を指す。一般的に知られるアドレナリン作動性β−２アゴニストには、クレンブテロール、アルブテロール、フォルメオテロール、レブアルブテロール、メタプロテレノール、ピルブテロール、サルメテロール、およびテルブタリンが含まれるが、それらに限定されない。
【０３４８】
一実施形態において、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）は、単独で、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）と組み合わせて、アドレナリン作動性β−１アンタゴニストと組み合わされる。アドレナリン作動性β−１アンタゴニストおよびアドレナリン作動性β−１ブロッカーは、例えば、アドレナリン作動性β−１アンタゴニスト生物学的活性を有する天然または合成の機能性変異体、ならびにアドレナリン作動性β−１アンタゴニスト生物学的活性を有するアドレナリン作動性β−１アンタゴニストの断片を含む、アドレナリン作動性β−１アンタゴニストならびにそれらの類似体および誘導体に言及する。アドレナリン作動性β−１アンタゴニスト生物学的活性は、β受容体に対するアドレナリンの効果をブロックする活性を指す。一般的に知られるアドレナリン作動性β−１アンタゴニストには、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、エスモロール、およびメトプロロールが含まれるが、それらに限定されない。
【０３４９】
例えば、クレンブテロールは、Ｓｐｉｒｏｐｅｎｔ、Ｂｒｏｎｃｏｄｉｌ（登録商標）、Ｂｒｏｎｅｏｔｅｒｏｌ（登録商標）、Ｃｅｓｂｒｏｎ、およびＣｌｅｎｂｕｔｅｒを含む多数の商品名で入手可能である。同じく、メトプロロールなどのアドレナリン作動性β−１アンタゴニストならびにそれらの類似体および誘導体を調製する方法は、当該技術分野において周知である。特に、メトプロロールは、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅａｓｔ  Ｈａｎｏｖｅｒ、Ｎ．Ｊ．、ＵＳＡ）によって製造されるＬｏｐｒｅｓｓｏｒ（登録商標）（メトプロロールタートレート）の商品名で市販されている。Ｌｏｐｒｅｓｓｏｒ（登録商標）のジェネリック版はまた、Ｍｙｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｃａｎｏｎｓｂｕｒｇ、ＰＡ、ＵＳＡ）、およびＷａｔｓｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｏｒｒｉｓｔｏｗｎ、Ｎ．Ｊ．、ＵＳＡ）から入手可能である。メトプロロールはまた、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ、ＬＰ（Ｌｏｎｄｏｎ、Ｇ．Ｂ．）によって製造されるＴｏｐｒｏｌ  ＸＬ（登録商標）の商品名で市販されている。
【０３５０】
一実施形態において、追加の治療剤は、相乗的な治療効果が生み出されるように、ＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）単独、または１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）との組み合わせと組み合わせて、対象に投与される。「相乗的な治療効果」は、２つの治療剤の組み合わせによって生み出され、かつ、いずれかの治療剤単独の個別の投与から別様に生じるものを超える、付加的を上回る治療効果を指す。したがって、特定の状態を処置するに当たって、治療剤の一方または両方のより低い用量が使用され得、上昇した治療有効性および減少した副作用をもたらす。
【０３５１】
一実施形態において、対象は、虚血の前に、本明細書に記載される組成物を投与される。一実施形態において、対象は、虚血組織の再灌流の前に、本組成物を投与される。一実施形態において、対象は、およそ虚血組織の再灌流のときに、本組成物を投与される。一実施形態において、対象は、虚血組織の再灌流の後に、本組成物を投与される。
【０３５２】
一実施形態において、対象は、ＣＡＢＧまたは血行再建術の前に、本明細書に記載される組成物を投与される。別の実施形態において、対象は、ＣＡＢＧまたは血行再建術の後に、本組成物を投与される。別の実施形態において、対象は、ＣＡＢＧまたは血行再建術の間および後に、本組成物を投与される。別の実施形態において、対象は、ＣＡＢＧまたは血行再建術の前、間、および後に、連続的に本組成物を投与される。
【０３５３】
一実施形態において、対象は、ＣＡＢＧまたは血行再建、すなわち、虚血組織の再灌流の少なくとも５分、少なくとも１０分、少なくとも３０分、少なくとも１時間、少なくとも３時間、少なくとも５時間、少なくとも８時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間前に、本明細書に記載される組成物を投与される。一実施形態において、対象は、ＣＡＢＧまたは血行再建術の約５〜３０分、約１０〜６０分、約１０〜９０分、または約１０〜１２０分前に、ペプチドを投与される。一実施形態において、対象は、ＣＡＢＧまたは血行再建術の約５〜３０分、約１０〜６０分、約１０〜９０分、約１０〜１２０分、または約１０〜１８０分後まで、ペプチドを投与される。
【０３５４】
一実施形態において、対象は、ＣＡＢＧ手技または血行再建術、すなわち、虚血組織の再灌流後、少なくとも３０分間、少なくとも１時間、少なくとも３時間、少なくとも５時間、少なくとも８時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間にわたって、本組成物を投与される。一実施形態において、本組成物は、ＣＡＢＧ手技または血行再建術、すなわち、虚血組織の再灌流の約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約８時間、約１２時間、または約２４時間後まで、投与される。
【０３５５】
一実施形態において、対象は、再灌流の約１分〜３０分前（すなわち、再灌流の約５分、約１０分、約２０分、または約３０分前）に開始し、再灌流後の約１時間〜約２４時間（すなわち、再灌流の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間後など）にわたって持続するように、ペプチド組成物を静脈内注入として投与される。一実施形態において、対象は、組織の再灌流の前に、静脈内ボーラス注入を受ける。一実施形態において、対象は、再灌流期間後に慢性的に、すなわち、再灌流期間後の約１〜７日、約１〜１４日、または約１〜３０日にわたって、本組成物を受け続ける。この期間の間、本組成物は、任意の経路によって、例えば、皮下的または静脈内に投与されてもよい。
【０３５６】
一実施形態において、ペプチド組成物は、麻酔の誘発の約５〜６０分、約１０〜４５分、または約３０分前に開始する、全身的な静脈内注入によって投与される。一実施形態において、ペプチド組成物は、心停止液と併用して投与される。一実施形態において、ペプチドは、心肺バイパス術の間の心肺装置におけるプライミング溶液の一部として投与される。
【０３５７】
様々な実施形態において、対象は、心筋梗塞、脳卒中を患っているか、または血管形成術を必要としている。一実施形態において、血行再建術は、バルーン血管形成術、ステントの挿入、経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）、経皮経管冠動脈形成術、または方向性冠動脈粥腫切除術からなる群から選択される。一実施形態において、血行再建術は、閉塞の除去を含む。一実施形態において、血行再建術は、１つ以上の血小板溶解剤の投与を含む。一実施形態において、１つ以上の血小板溶解剤は、組織プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プラスミノーゲンのアシル化形態、プラスミンのアシル化形態、およびアシル化ストレプトキナーゼ−プラスミノーゲン錯体からなる群から選択される。
【０３５８】
一実施形態において、血管閉塞は、心臓血管閉塞を含む。別の実施形態において、血管閉塞は、頭蓋内血管閉塞である。さらに他の実施形態において、血管閉塞は、深部静脈血栓症、末梢性血栓症、塞栓性血栓症、肝静脈血栓症、静脈洞血栓症、静脈血栓症、閉塞した動脈−静脈シャント、および閉塞したカテーテル装置からなる群から選択される。
【０３５９】
一態様において、本技術は、治療上有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせて、アテローム硬化性血管病（ＡＲＶＤ）の処置を必要とする対象に投与することを含む、アテローム硬化性血管病（ＡＲＶＤ）の処置に関連する。いくつかの実施形態において、処置は、１週間を超える期間にわたって投与される、慢性処置である。
【０３６０】
別の態様において、本技術は、組織再灌流の不在下の虚血傷害の処置または予防に関する。例えば、ペプチドは、例えば、血行再建術の好適な候補でないか、または血行再建術が容易に利用可能でない、１つ以上の組織または臓器における急性虚血を経験している患者に、投与され得る。さらに、またはあるいは、ペプチドは、血行再建術の必要を回避するために、１つ以上の組織における慢性虚血を有する患者に投与され得る。組織再灌流の不在下の虚血傷害の処置または予防のためにペプチドを投与される患者は、本明細書に記載される方法に従う血行再建術の前、間、およびその後に、ペプチドをさらに投与され得る。
【０３６１】
一実施形態において、腎臓の再灌流傷害の処置には、ペプチドを投与されない同様の対象と比較して、対象における組織灌流の量または面積を増加させることが含まれる。一実施形態において、腎臓の再灌流傷害の予防には、ペプチドを投与されない同様の対象と比較して、対象における再灌流によって引き起こされた微小血管の損傷の量または面積を低減させることが含まれる。いくつかの実施形態において、腎臓の再灌流傷害の処置または予防には、ペプチドを投与されない同様の対象と比較して、対象における再灌流時の影響を受けた血管に対する傷害を低減させること、血液細胞による閉塞の影響を低減させること、および／または内皮細胞膨張を低減させることが含まれる。予防または処置の程度は、腎臓体積、腎動脈圧、腎臓血流（ＲＢＦ）、および糸球体濾過率（ＧＦＲ）の測定を含むがそれらに限定されない、当該技術分野において既知の任意の技術によって、ならびに、ＣＴおよびマイクロＣＴを含むがそれらに限定されない、当該技術分野において既知の撮像技術によって、測定され得る。予防または処置の成功は、ペプチドを投与されない対照対象または対照対象の集合と比較して、これらの撮像技術のうちのいずれかによって観察される対象における腎臓の再灌流傷害の程度を比較することによって、決定され得る。
【０３６２】
一実施形態において、対象へのペプチド（複数可）の投与は、腎臓の再灌流傷害の発生の前である。例えば、いくつかの実施形態において、ペプチドは、虚血傷害の阻害、予防、もしくは処置を必要とする対象における虚血傷害を阻害、予防、もしくは処置するため、ならびに／または再灌流処置の回避および／もしくは再灌流傷害の緩和または寛解するために投与される。さらに、またはあるいは、いくつかの実施形態において、対象へのペプチド（複数可）の投与は、腎臓の再灌流傷害の発生の後である。一実施形態において、本方法は、血行再建術と併用して実施される。一実施形態において、血行再建術は、経皮的腎動脈形成術（ＰＴＲＡ）である。一態様において、本技術は、治療上有効な量の芳香族カチオン性ペプチドを哺乳動物の対象に投与することと、ＰＴＲＡを対象に実施することと、を含む、腎血行再建の方法に関連する。
【０３６３】
一実施形態において、対象は、血行再建術の前に、Ｄ−Ａｒｇ−２’，６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などのペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩を投与される。別の実施形態において、対象は、血行再建術の後に、ペプチドを投与される。別の実施形態において、対象は、血行再建術の間および後に、ペプチドを投与される。さらに別の実施形態において、対象は、血行再建術の前、間、および後に、連続的にペプチドを投与される。別の実施形態において、対象は、腎動脈狭窄および／または腎血行再建術の後に、規則的に（すなわち、慢性的に）ペプチドを投与される。
【０３６４】
いくつかの実施形態において、対象は、血行再建術の後に、ペプチドを投与される。一実施形態において、対象は、血行再建術後、少なくとも３時間、少なくとも５時間、少なくとも８時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間にわたって、ペプチドを投与される。いくつかの実施形態において、対象は、血行再建術の前に、ペプチドを投与される。一実施形態において、対象は、血行再建術の少なくとも８時間、少なくとも４時間、少なくとも２時間、少なくとも１時間、または少なくとも１０分前に、ペプチドを投与される。一実施形態において、対象は、血行再建術後、少なくとも１週間、少なくとも１ヶ月、または少なくとも１年間にわたって、投与される。いくつかの実施形態において、対象は、血行再建術の前および後に、ペプチドを投与される。いくつかの実施形態において、対象は、特定の期間にわたる注入として、ペプチドを投与される。いくつかの実施形態において、ペプチドは、ボーラスとして対象に投与される。
【０３６５】
いくつかの実施形態において、本方法は、１つ以上の血小板溶解剤と併用したペプチドの投与を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の血小板溶解剤は、組織プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プラスミノーゲンのアシル化形態、プラスミンのアシル化形態、およびアシル化ストレプトキナーゼ−プラスミノーゲン錯体からなる群から選択される。
Ｇｌｐ−１類似体
【０３６６】
いくつかの態様において、本開示は、安定性を上昇させるように修飾された、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を提供する。
【０３６７】
酵素分解に対してペプチドを安定化する１つの方法は、開裂を受けているペプチド結合におけるＬ−アミノ酸のＤ−アミノ酸での置換である。Ｇｌｐ−１ペプチド類似体は、既に存在するＤ−Ａｒｇ残基に加えて、１つ以上のＤ−アミノ酸残基を含有するように調製される。酵素分解を防止する別の方法は、ペプチドの１つ以上のアミノ酸残基におけるα−アミノ基のＮ−メチル化である。これは、いかなるペプチダーゼによるペプチド結合開裂も防止する。例には、Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ（ＮαＭｅ）−Ｐｈｅ−ＮＨ2、Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ（ＮＭｅ）−ＮＨ2、Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ（ＮαＭｅ）−Ｐｈｅ（ＮＭｅ）−ＮＨ2、およびＨ−Ｄ−Ａｒｇ（ＮαＭｅ）−Ｄｍｔ（ＮＭｅ）−Ｌｙｓ（ＮαＭｅ）−Ｐｈｅ（ＮＭｅ）−ＮＨ2が含まれる。Ｎα−メチル化類似体は、より低い水素結合能力を有し、改善した腸内透過性を有すると予測され得る。いくつかの実施形態において、Ｇｌｐ−１は、ペプチドの１つ以上のアミノ酸残基におけるα−アミノ基のＮ−メチル化によって修飾される。
【０３６８】
酵素分解に対してペプチドアミド結合（−ＣＯ−ＮＨ−）を安定化する代替の方法は、還元アミド結合（Ψ［ＣＨ2−ＮＨ］）でのその置換である。これは、固相ペプチド合成において成長するペプチド鎖のＢｏｃ−アミノ酸−アルデヒドとＮ末端アミノ酸残基のアミノ基との間の還元的アルキル化反応を用いて達成され得る。還元ペプチド結合は、低減した水素結合能力のため、改善した細胞透過性をもたらすと予測される。例には、Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ψ［ＣＨ2−ＮＨ］Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2、Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ψ［ＣＨ2−ＮＨ］Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2、Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−ＬｙｓΨ［ＣＨ2−ＮＨ］Ｐｈｅ−ＮＨ2、Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ψ［ＣＨ2−ＮＨ］Ｌｙｓ−Ψ［ＣＨ2−ＮＨ］Ｐｈｅ−ＮＨ2などが含まれる。いくつかの実施形態において、Ｇｌｐ−１は、還元アミド結合（Ψ［ＣＨ2−ＮＨ］）を含むように修飾される。
【０３６９】
安定化されたＧｌｐ−１類似体は、血漿、模擬胃液（ＳＧＦ）、および模擬腸液（ＳＩＦ）における安定性についてスクリーニングされ得る。ある量のペプチドを、１０ｍｌのペプシン（Ｃｏｌｅ−Ｐａｌｍｅｒ）を有するＳＧＦまたはパンクレアチン（Ｃｏｌｅ−Ｐａｌｍｅｒ）を有するＳＩＦに添加し、０、３０、６０、９０、および１２０分間にわたって混合してインキュベートする。このサンプルを、固相抽出後ＨＰＬＣによって分析する。ＳＧＦおよびＳＩＦの両方において安定している新たな類似体を、次いで、Ｃａｃｏ−２単層全体にわたるその分布について評価する。＞１０〜６ｃｍ／秒（良好な腸内吸収が予測可能）と判定される見かけの透過性係数を有する類似体は、次いで、その活性が細胞培養において決定されるミトコンドリア酸化ストレスにおいて低減する。ミトコンドリアＲＯＳを、超酸化物のためのＭｉｔｏＳｏｘ、およびＨｙＰｅｒ−ｍｉｔｏ（Ｈ2Ｏ2を感知するためのミトコンドリアに標的化される遺伝的にコードされた蛍光指示薬）を使用するＦＡＣＳによって定量化する。ミトコンドリア酸化ストレス要因には、ｔ−ブチルヒドロ過酸化物、アンチマイシン、およびアンジオテンシンが含まれ得る。これらの基準全てを満たすＧｌｐ−１類似体は、次いで、大規模合成を経ることができる。
【０３７０】
提案される手段は、経口生物学的利用能を有するＧｌｐ−１類似体を生成すると予測される。Ｃａｃｏ−２モデルは、薬物産業によって腸内吸収の良好な予測因子と見なされている。
【０３７１】
ＶＩＩ．製剤
いくつかの態様において、本開示は、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）の送達のための薬学的製剤を提供する。
【０３７２】
一態様において、本技術は、ＧＬＰ−１の経口送達のために適合された完成した薬学的製品に関連し、本製品は、（ａ）治療上有効な量の活性ペプチドと、（ｂ）少なくとも１つの薬学的に許容されるｐＨ低下剤と、（ｃ）活性薬剤の生物学的利用能の促進に有効な少なくとも１つの吸収促進剤と、を含み、該ｐＨ低下剤は、本製品が１０ミリリットルの０．１Ｍの水性炭酸水素ナトリウム溶液に添加された場合、該溶液のｐＨを５．５未満まで低下させるのに十分な量で、完成した薬学的製品中に存在し、本製品の外表面は、耐酸性保護溶媒を実質的に含まない。
【０３７３】
いくつかの実施形態において、ｐＨ低下剤は、本製品が１０ミリリットルの０．１Ｍの炭酸水素ナトリウム溶液に添加された場合、該溶液のｐＨを３．５未満まで低下させるのに十分な量で存在する。いくつかの実施形態において、吸収促進剤は、吸収性または生分解性の表面活性剤である。いくつかの実施形態において、表面活性剤は、アシルカルニチン、リン脂質、胆汁酸、およびスクロースエステルからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、吸収促進剤は、（ａ）コレステロール誘導体であるアニオン性薬剤、（ｂ）負電荷中和剤およびアニオン性表面活性剤の混合物、（ｃ）非イオン性表面活性剤、ならびに（ｄ）カチオン性表面活性剤からなる群から選択される表面活性剤である。
【０３７４】
いくつかの実施形態において、完成した薬学的製品は、Ｇｌｐ−１ペプチドの生物学的利用能を向上させるために有効な生理学的に活性なペプチドではない、ある量の第２のペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、完成した薬学的製品は、室温で１００ミリリットルの水当たり少なくとも３０グラムの水溶性を有する少なくとも１つのｐＨ低下剤を含む。いくつかの実施形態において、完成した薬学的製品は、薬学的結合剤と、結合剤中に均一に分散した、ｐＨ低下剤、吸収促進剤、およびＧｌｐ−１ペプチドとを含有する、顆粒を含む。
【０３７５】
いくつかの実施形態において、完成した薬学的製品は、少なくとも１つの薬学的に許容されるｐＨ低下剤を含む第１の層、および治療上有効な量の活性ペプチドを含む第２の層を有する積層を含み、本製品は、活性薬剤の生物学的利用能を促進するために有効な少なくとも１つの吸収促進剤をさらに含み、第１および第２の層は互いと合体されているが、少なくとも１つのｐＨ低下剤および該ペプチドは、第１の層の材料と第２の層の材料との間の実質的な混合を防止するため、約０．１％未満の該ペプチドがｐＨ低下剤に接触し、ひいてはｐＨ低下剤と該ペプチドとの間の積層内の相互作用を回避するように、積層内で実質的に分離している。
【０３７６】
いくつかの実施形態において、完成した薬学的製品は、クエン酸、酒石酸、およびアミノ酸の酸性塩からなる群から選択されるｐＨ低下剤を含む。いくつかの実施形態において、ｐＨ低下剤は、ジカルボン酸およびトリカルボン酸からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ｐＨ低下剤は、少なくとも３００ミリグラムの量で存在する。
【０３７７】
ＶＩＩＩ．疼痛管理／鎮痛
一態様において、本開示は、μオピオイド受容体の刺激を必要とする哺乳動物におけるμオピオイド受容体を刺激するための方法を提供する。本方法は、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせた有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を、哺乳動物に全身的に投与することを含む。一実施形態において、本方法は、哺乳動物におけるノルエピネフリンを阻害することを含む。
【０３７８】
用語「末梢神経障害」は、末梢神経系の神経への損傷を一般的に指す。この用語は、後天性神経障害、遺伝性神経障害、および特発性神経障害を含むがそれらに限定されない、様々な病因の神経障害を包含する。例示的な後天性神経障害には、外傷、代謝／内分泌障害（例えば、糖尿病）、炎症性疾患、感染症、ビタミン欠乏症、悪性疾患、ならびにアルコール、有機金属、重金属、放射線、および薬物毒性などの毒性によって引き起こされるか、それらに起因するか、ないしはそれらに関連する神経障害が含まれるが、それらに限定されない。本明細書において使用される場合、「末梢神経障害」は、運動性、感覚性、混合型感覚運動性、慢性、および急性の神経障害を包含する。本明細書において使用される場合、この用語は、単神経障害、多発単神経障害、および多発神経障害を包含する。
【０３７９】
薬物毒性は複数の形態の末梢神経障害を引き起こし、軸索変性が最も一般的である。明らかな例外は、いくつかの神経の周りの絶縁層の局在性変性である節性脱髄を引き起こし得る予防的な抗狭心症剤である、ペルヘキシリンである。
【０３８０】
末梢神経障害は、通常、感覚性症状を初めに提示し、しばしば運動性傷害に進行する。ほとんどの薬物誘発性の末梢神経障害は、純粋に感覚性または混合型感覚運動性の異常である。ここでの明らかな例外は、ほとんど排他的に運動性神経障害を引き起こすダプソンである。
【０３８１】
例えば、化学療法誘発性の末梢神経障害を含む、薬物誘発性の末梢神経障害は、１）筋肉痛、２）有痛性の焼けつく感覚異常、３）手袋靴下型感覚性神経障害、ならびに４）痛覚過敏およびアロディニアを含む、様々な用量制限性の神経障害状態を引き起こし得る。痛覚過敏は、通常、軽度に有痛性または刺激性である刺激によって引き起こされる過敏症および疼痛を指す。アロディニアは、通常、有痛性または刺激性でない刺激によって引き起こされる過敏症および疼痛を指す。
【０３８２】
用語「痛覚過敏」は、侵害受容器または末梢神経への損傷（すなわち、神経障害）によって引き起こされ得る、疼痛への上昇した感受性を指す。この用語は一時的および永久的な痛覚過敏を指し、一次性痛覚過敏（すなわち、損傷した組織中で直接的に疼痛感受性が起こる）および二次性痛覚過敏（すなわち、損傷した組織を包囲する未損傷の組織中で疼痛感受性が起こる）の両方を包含する。この用語は、遺伝性障害、代謝性／内分泌性合併症、炎症性疾患、ビタミン欠乏症、悪性疾患、ならびにアルコール、有機金属、重金属、放射線、および薬物毒性などの毒性によって引き起こされるか、それらに起因するか、またはそれらに関連する神経障害を含むがそれに限定されない、末梢神経障害によって引き起こされる痛覚過敏を包含する。いくつかの実施形態において、痛覚過敏は薬物誘発性末梢神経障害によって引き起こされる。
【０３８３】
いくつかの実施形態において、本開示は、痛覚過敏の処置または予防のための組成物を提供する。いくつかの実施形態において、痛覚過敏は薬物誘発性である。いくつかの実施形態において、痛覚過敏は、化学療法剤によって誘発される。いくつかの実施形態において、化学療法剤はビンカアルカロイドである。いくつかの実施形態において、ビンカアルカロイドはビンクリスチンである。
【０３８４】
抗菌薬、抗悪性腫瘍薬、心血管治療薬、睡眠薬および向精神薬、抗リウマチ薬、ならびに抗痙攣薬を含むがそれらに限定されない、幅広い医薬品が、薬物誘発性神経障害を引き起こすことで知られている。
【０３８５】
神経障害を引き起こすことで知られる例示的な抗菌薬には、イソニアジド、エタンブトール、エチオナミド、ニトロフラントイン、メトロニダゾール、シプロフロキサシン、クロラムフェニコール、チアンフェニコール、ジアミン、コリスチン、ストレプトマイシン、ナリジクス酸、クリオキノール、スルホンアミド、アンホテリシン、ペニシリンが含まれるが、それらに限定されない。
【０３８６】
神経障害を引き起こすことで知られる例示的な抗悪性腫瘍薬には、プロカルバジン、ニトロフラゾン、ポドフィルム、ムスチン、エトグルシド、シスプラチン、スラミン、パクリタキセル、クロラムブシル、アルトレタミン、カルボプラチン、シタラビン、ドセタキセル、ダカルバジン、エトポシド、メスナを伴うイホスファミド、フルダラビン、タモキシフェン、テニポシド、およびチオグアニンが含まれるが、それらに限定されない。ビンクリスチンなどのビンカアルカロイドは、特に神経毒性であると知られている。
【０３８７】
神経障害を引き起こすことで知られる例示的な心血管治療薬には、プロプラノロール、ペルヘキシリン、ヒドララジン、アミオダロン、ジソピラミド、およびクロフィブラートが含まれるが、それらに限定されない。
【０３８８】
神経障害を引き起こすことで知られる例示的な睡眠薬および向精神薬には、フェネルジン、サリドマイド、メタカロン、グルテチミド、アミトリプチリン、およびイミプラミンが含まれるが、それらに限定されない。
【０３８９】
神経障害を引き起こすことで知られる例示的な抗リウマチ薬には、金、インドメタシン、コルヒチン、クロロキン、およびフェニルブタゾンが含まれるが、それらに限定されない。
【０３９０】
神経障害を引き起こすことで知られる例示的な抗痙攣薬には、フェニトインが含まれるが、それに限定されない。
【０３９１】
神経障害を引き起こすことで知られる他の薬物には、カルシウムカルビミド、スルホキソン、エルゴタミン、プロピルチオウラシル、スルタイム（ｓｕｌｔｈａｉｍｅ）、クロルプロパミド、メチセルジド、フェニトイン、ジスルフィラム、カルブタミド、トルブタミド、メチマゾール、ダプソン、および抗凝固薬が含まれるが、それらに限定されない。
【０３９２】
本開示は、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）の、１つ以上の追加の治療的レジメンと合わせた投与を含む、併用療法を企図する。いくつかの実施形態において、追加の治療的レジメンは、神経障害もしくは痛覚過敏または神経障害もしくは痛覚過敏に関連する症状の処置または予防を対象とする。いくつかの実施形態において、追加の治療的レジメンは、神経障害もしくは痛覚過敏に関連しない疾患または状態の処置または予防を対象とする。いくつかの実施形態において、追加の治療的レジメンは、神経障害もしくは痛覚過敏または神経障害もしくは痛覚過敏に関連する症状に関連しない疾患、状態、または症状に加えて、神経障害もしくは痛覚過敏または神経障害もしくは痛覚過敏に関連する症状の処置または予防を対象とするレジメンを含む。いくつかの実施形態において、追加の治療的レジメンは、抗菌薬、抗悪性腫瘍薬、心血管治療薬、睡眠薬および向精神薬、抗リウマチ薬、ならびに抗痙攣薬を含むがそれらに限定されない、１つ以上の薬物の投与を含む。実施形態において、追加の治療的レジメンは、食事管理および生活習慣管理を含むがそれらに限定されない、非薬学的療法を含む。
【０３９３】
一態様において、本開示は、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせた有効な量のＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を対象に投与することを含む、疼痛の阻害または抑制を必要とする対象における疼痛を阻害または抑制するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、Ｇｌｐ−１ペプチドは、μオピオイド受容体の結合および阻害の間、疼痛を抑制する。
【実施例】
【０３９４】
Ｘ．実施例
以下の実施例は、本明細書に記載される厳選した実施形態を実証する。１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（もしくは変異体、類似体、またはそれらの薬学的に許容される塩）を含む組成物もまた、同じまたは同様の結果を得るために実施例に従い使用され得ることを理解されたい。
実施例１：酸化低密度リポタンパク質（ｏｘＬＤＬ）誘発性ＣＤ３６発現のＧＬＰ−１媒介抑制およびマウス腹腔マクロファージにおける泡沫細胞形成
【０３９５】
アテローム性動脈硬化症は、平滑筋細胞増殖をもたらす泡沫細胞の発生ならびにサイトカインおよびケモカインの産生を引き起こす血管壁マクロファージによる脂質取り込みの結果として発症すると考えられる。ＣＤ３６は、ｏｘＬＤＬのマクロファージへの取り込みおよびその後の泡沫細胞の発生を媒介するスカベンジャー受容体である。ＣＤ３６ノックアウトマウスは、減少したｏｘＬＤＬの取り込みおよび減少したアテローム性動脈硬化症を示した。ＣＤ３６発現を、グルコースおよびｏｘＬＤＬを含む様々な細胞刺激によって、転写レベルで調節する。
【０３９６】
マクロファージを、４８時間、ｏｘＬＤＬ（５０μｇ／ｍｌ）の不在または存在下で、一晩培養されたマウス腹腔から採取する。ｏｘＬＤＬを伴うインキュベーションは、ＣＤ３６ｍＲＮＡを著しく増加させると予測される。培地へのＧＬＰ−１（例えば、１０ｎＭまたは１μＭ）の包含は、ＣＤ３６の発現上昇を無効にすると予測される。
【０３９７】
ウェスタンブロットによって判定されるＣＤ３６タンパク質の発現はまた、溶媒対照（Ｖ）と比較したときに、２５μｇ／ｍｌのｏｘＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）を伴う４８時間のインキュベーション後、著しく増加すると予測される。他の対照は、マウスの心臓（Ｈ）およびＣＤ３６ノックアウトマウス（ＫＯ）から得られたマクロファージからのＣＤ３６発現を含む。ＣＤ３６タンパク質の量を、β−アクチンへと正規化する。ＧＬＰ−１（例えば、１μＭ）を伴うインキュベーションが、溶媒対照（Ｖ）に曝露されたマクロファージと比較してＣＤ３６タンパク質レベルを著しく減少させると予測される。ＧＬＰ−１（１μＭ）を伴う併用インキュベーションが、４８時間、２５μｇ／ｍｌのｏｘＬＤＬに曝露されたマクロファージ（ｏｘＬＤＬ／Ｓ）におけるＣＤ３６タンパク質レベルの発現上昇を著しく阻害することも予測される。
【０３９８】
４８時間のｏｘＬＤＬを伴うマクロファージのインキュベーションはまた、泡沫細胞形成を増加させると予測される。泡沫細胞を、脂質滴を赤色に染めるオイルレッドＯによって可視化する。ＧＬＰ−１（１μＭ）の包含が、ｏｘＬＤＬ誘発性泡沫細胞形成を予防すると予測される。
【０３９９】
ｏｘＬＤＬを伴うマクロファージのインキュベーションが、６．７％〜３２．８％のアポトーシス細胞を増加させると予測される。ＧＬＰ−１（１ｎＭ）での併用処置は、ｏｘＬＤＬによって誘発されるアポトーシス細胞の割合を２０．８％に著しく減少させると予測される。
【０４００】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、哺乳動物の対象におけるアテローム性動脈硬化症を処置または予防するための方法に有用であることを示す。
実施例２：急性脳虚血の影響からのＧＬＰ−１媒介保護
【０４０１】
脳虚血は、脳障害の原因となる一連の細胞および分子事象を引き起こす。１つのかかる事象は、虚血後の炎症である。脳虚血−再灌流のマウスモデルを使用して（２０分の中大脳動脈の閉塞）、ＣＤ３６が、活性酸素種産生の増加と共に、虚血後の脳におけるミクログリアおよびマクロファージにおいて発現上昇することが見出された。ＣＤ３６ノックアウトマウスは、野生型マウスと比較して、虚血後の活性酸素種の重大な減少および改善された神経性機能を有する。
【０４０２】
脳虚血を、３０分間の右中大脳動脈の閉塞によって誘発する。野生型（ＷＴ）マウスは、虚血後に０、６、２４、および４８時間時点で、食塩水溶媒（Ｖｅｈ）（ｉ．ｐ．、ｎ＝９）またはＧＬＰ−１（２ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｎ＝６）のいずれかを与えられる。マウスを、虚血の３日後に屠殺する。脳を、冷凍、切開、およびニッスル染色を用いて染色する。梗塞体積および大脳半球の膨張を、画像解析器を使用して判定する。データを、事後分析（ｐｏｓｔｈｏｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ）を伴う一元配置分散分析法（ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）によって解析する。
【０４０３】
中大脳動脈の３０分の閉塞後の０、６、２４、および４８時間時点でのＧＬＰ−１（２ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｎ＝６）での野生型マウスの処置は、食塩水対照と比較して、梗塞体積および大脳半球の膨張の著しい減少を引き起こすと予測される。野生型マウスにおける３０分の脳虚血が、溶媒処置された動物における対側と比較して、同側皮質および線条体における還元グルタチオン（ＧＳＨ）の著しい欠乏を引き起こすことが以前に示された。同側皮質におけるＧＳＨの欠乏は、マウスがＧＬＰ−１（２ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．、０、６、２４、および４８時間時点で）を伴い処置されるとき、著しく減少すると予測される。
【０４０４】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、哺乳動物の対象における急性脳虚血の影響を処置または予防するための方法に有用であることを示す。
実施例３：ＧＬＰ−１はＣＤ３６媒介急性脳虚血を防ぐ
【０４０５】
ＣＤ３６ノックアウト（ＣＤ３６ＫＯ）マウスは、実施例２に記載した通り急性脳虚血に曝される。ＣＤ３６ＫＯマウスは、３０分の期間の虚血後に、０、６、２４、および４８時間時点で食塩水溶媒（Ｖｅｈ）（ｉ．ｐ．、ｎ＝５）またはＧＬＰ−１（２ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｎ＝５）のいずれかを与えられる。ＣＤ３６ＫＯマウスにおける梗塞体積および大脳半球の膨張は、食塩水およびＧＬＰ−１を受けている対象と類似していると予測される。ＧＬＰ−１（２ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｎ＝５）でのＣＤ３６ＫＯマウスの処置は、虚血によって引き起こされる同側皮質におけるＧＳＨ欠乏をさらに予防することができないと予測される。データは、急性脳虚血におけるＧＬＰ−１の保護作用が、ＣＤ３６の発現上昇の阻害の機能であることを示す。
【０４０６】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、哺乳動物の対象におけるＣＤ３６媒介急性脳虚血の影響を予防または処置するための方法に有用であることを示す。
実施例４：虚血後の脳におけるＣＤ３６発現のＧＬＰ−１媒介抑制
【０４０７】
中大脳動脈の一過性閉塞は、虚血後の脳におけるミクログリアおよびマクロファージにおいてＣＤ３６ｍＲＮＡの発現を著しく増加させることを示した。野生型マウスは、３０分の期間の虚血後に、０および６時間時点で、食塩水溶媒（Ｖｅｈ、ｉ．ｐ．、ｎ＝６）またはＧＬＰ−１（５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｎ＝６）のいずれかを与えられる。虚血後の脳におけるＣＤ３６  ｍＲＮＡのレベルを、実時間ＰＣＲを使用して判定する。ＣＤ３６  ｍＲＮＡが、ＧＬＰ−１を受けているマウスの同側脳において著しく減少するにつれて、ＣＤ３６発現は、食塩水を受けているマウスの対側脳と比較して、同側脳において６倍も発現上昇すると予測される。
【０４０８】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、哺乳動物の対象における虚血後の脳においてＣＤ３６発現を抑制するための方法に有用であることを示す。
実施例５：片側尿管閉塞後の腎尿細管細胞におけるＧＬＰ−１媒介抑制ＣＤ３６発現上昇
【０４０９】
片側尿管閉塞（ＵＵＯ）は、尿細管細胞アポトーシス、マクロファージ浸潤、および間質性線維症に関連する一般的な臨床的障害である。間質性線維症は、低酸素環境を引き起こし、外科的矯正にも関わらず、腎機能の進行性の低下に寄与する。ＣＤ３６は、腎尿細管細胞において発現することが示された。
【０４１０】
ＵＵＯを、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットにおいて誘発する。ラットを、ＵＵＯ誘発後１４日間１日１回、およびＵＵＯの誘発より１日前に、食塩水（ｉ．ｐ．、ｎ＝６）またはＧＬＰ−１（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｎ＝６）で処置する。ラットを屠殺し、腎臓を除去し、パラフィンに埋め込み、切開する。その切片を、１．５時間、室温で抗−ＣＤ３６ポリクローナルＩｇＧ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ｓｃ−９１５４；ブロッキング血清で１：１００に希釈）で処置する。次いで、スライドを、３０分間、室温で、ビオチンと共役される第２の抗体（抗−イエウサギＩｇＧ−Ｂ１；ＡＢＣキット、ＰＫ−６１０１）と共にインキュベートする。次いで、スライドを、アビジンで処置し、ＤＡＢで展開させ、１０％のヘマトキシリンで対比染色する。対側非閉塞腎臓は、各動物の対照として働く。
【０４１１】
ＵＵＯは、尿細管拡張および食塩水で処置された対象の尿細管細胞におけるＣＤ３６の発現の著しい増加を引き起こすと予測される。尿細管拡張はまた、ＧＬＰ−１で処置されたラットにおいて予測されるが、ＣＤ３６発現の著しい減少があると予測される。
【０４１２】
ＧＬＰ−１がＵＵＯの後の腎臓における脂質過酸化を減少させることを実証するために、ラットを、ＵＵＯの後１４日間１日１回、およびＵＵＯの誘発より１日前に、食塩水（ｎ＝６）またはＧＬＰ−１（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｎ＝６）のいずれかで処置する。次いで、ラットを屠殺し、腎臓を除去し、パラフィンに埋め込み、切開する。スライドを、抗ＨＮＥイエウサギＩｇＧと共にインキュベートし、ビオチン結合抗イエウサギＩｇＧを二次抗体として使用する。スライドを、ＤＡＢで展開する。ＵＵＯによって増加する脂質過酸化は、ＧＬＰ−１処置によって低減されると予測される。ＨＮＥ染色（茶色）は、対側対照と比較して、閉塞した腎臓における尿細管細胞において、著しく増加すると予測される。ＧＬＰ−ｌで処置されたラットからの閉塞した腎臓は、食塩水で処置されたラットと比較して、ＨＮＥ染色が著しく少ないことを示すと予測される。
【０４１３】
ＧＬＰ−ｌがＵＵＯの後の閉塞した腎臓における尿細管細胞アポトーシスを減少させることを実証するために、ラットを、ＵＵＯの後１４日間１日１回、およびＵＵＯの誘発より１日前に、食塩水（ｎ＝６）またはＧＬＰ−１（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｎ＝６）のいずれかで処置する。次いで、ラットを屠殺し、腎臓を除去し、パラフィンに埋め込み、切開する。断片化されたＤＮＡで核を定量化するために、ＴＵＮＥＬアッセイを、原位置でのＴＵＮＥＬキットで実施する。スライドを、ＤＡＢで展開し、１０％のヘマトキシリンで対比染色する。尿細管細胞アポトーシスに関連する食塩水で処置された対照におけるＣＤ３６の発現上昇は、ＧＬＰ−１処置によって著しく阻害されると予測される。対側非閉塞対照と比較したときに、食塩水で処置された動物からの閉塞した腎臓で観察されるアポトーシス細胞の著しい増加があると予測される。アポトーシス細胞の数は、ＧＬＰ−１で処置された動物からの閉塞した腎臓において著しく減少すると予測される。
【０４１４】
マクロファージ浸潤および間質性線維症は、ＧＬＰ−１処置によって予防されると予測される。ラットを、ＵＵＯの後１４日間１日１回、およびＵＵＯの誘発より１日前に、食塩水（ｎ＝６）またはＧＬＰ−１（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｎ＝６）のいずれかで処置する。次いで、ラットを屠殺し、腎臓を除去し、パラフィンに埋め込み、切開する。スライドを、ＥＤ１マクロファージ（１：７５、Ｓｅｒｏｔｅｃ）のためにモノクローナル抗体で処置する。西洋ワサビペルオキシダーゼ結合イエウサギ抗マウス二次抗体（Ｄａｋｏ）を、マクロファージ検出のために使用する。次いで、切片を１０％のヘマトキシリンで対比染色する。食塩水で処置されたラットの閉塞した腎臓におけるマクロファージの数は、対側非閉塞対照と比較して、著しく増加すると予測される。マクロファージ浸潤は、ＧＬＰ−１で処置されたラットにおいて著しく減少すると予測される。
【０４１５】
ラットを、ＵＵＯの後１４日間１日１回、およびＵＵＯの誘発より１日前に、食塩水（１１＝６）またはＧＬＰ−１（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ｎ＝６）のいずれかで処置する。次いで、ラットを屠殺し、腎臓を除去し、パラフィンに埋め込み、切開する。スライドを、間質性線維症（青染色）のために、ヘマトキシリンおよびエオシンおよびマッソントリクロームで染色する。ＧＬＰ−１で処置されたラットからの閉塞した腎臓が著しく少ない線維症を示す一方で、食塩水で処置されたラットからの閉塞した腎臓は、対側非閉塞対照と比較して、線維症の増加を示すと予測される。
【０４１６】
これらの結果は、ＧＬＰ−１が、ＵＵＯによって誘発される腎尿細管細胞におけるＣＤ３６の発現上昇を抑制することを示す。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、哺乳動物の対象におけるＵＵＯによって誘発される腎尿細管細胞におけるＣＤ３６の発現上昇を抑制するための方法に有用であることをさらに示す。
実施例６：長期の冷虚血保管後の再灌流の際の、摘出された心臓におけるＣＤ３６発現上昇のＧＬＰ−１媒介抑制
【０４１７】
臓器移植は、被移植者への移植のために摘出された臓器の低体温保存を必要とする。現在、心臓移植は、冠動脈血流が重度に損なわれる前に（＜４時間）、耐えられ得る冷虚血保存の時間が短いために制限される。冠動脈内皮および心筋におけるＣＤ３６の発現が、長期の冷虚血保存および温かい再灌流に曝される摘出された心臓において発現上昇する。
【０４１８】
摘出されたモルモットの心臓を、３分間、セントトーマス液（Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）単独、または１〜１００ｎＭのＧＬＰ−１を含有するセントトーマス液（Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）で、灌流し、次いで、１８時間、４℃で同じ溶液内に保管する。虚血保存後、心臓を、９０分間、３４℃のクレブス−ヘンゼライト液で、再灌流する。モルモットから摘出されたばかりの心臓を、対照として使用する。
【０４１９】
心臓を、パラフィン中に固定し、抗ＣＤ３６イエウサギポリクローナル抗体で免疫染色をするためにスライスする。１８時間、４℃でセントトーマス液（Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）中に保存される代表的な心臓からの切片は、対照と比較して、増加したＣＤ３６染色を示すと予測される。ＣＤ３６染色は、１８時間セントトーマス液（Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）中に１〜１００ｎＭのＧＬＰ−１いずれかで保存される心臓において著しく減少すると予測される。
【０４２０】
ＧＬＰ−１で処置された心臓における脂質過酸化の減少があることも予測される。モルモットの心臓を、３分間、心停止液（セントトーマス液（Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ））単独、または１〜１００ｎＭのＧＬＰ−１を含有するセントトーマス液（Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）で、灌流し、次いで、１８時間の冷虚血（４℃）に曝す。次いで、心臓を、９０分間、３４℃でクレブス−ヘンゼライト緩衝液で再灌流する。組織スライスからのパラフィン切片における４−ヒドロキシノネナール（ＨＮＥ）−修飾タンパク質の免疫組織学的分析は、抗ＨＮＥ抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）および蛍光性二次抗体を伴うインキュベーションによって実施される。ＨＮＥ染色は、非虚血心臓と比較して、セントトーマス液（Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）中の１８時間の冷保存に曝される心臓において著しく増加すると予測される。ＨＮＥ染色は、対照と比較して、ＧＬＰ−１において保存される心臓において減少すると予測される。
【０４２１】
さらに、ＧＬＰ−１は、内皮アポトーシスを劇的に減少させると予測される。モルモットの心臓を、３分間、セントトーマス液（Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）単独、または１〜１００ｎＭのＧＬＰ−１を含有するセントトーマス液（Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）で、灌流し、次いで、１８時間の冷虚血（４℃）に曝す。次いで、心臓を、９０分間、３４℃でクレブス−ヘンゼライト緩衝液で、再灌流する。脱パラフィン後、切片を、１時間、ジゴキシゲニン−ｄＮＴＰを伴うデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（Ｔｄｔ）と共にインキュベートする。反応を、停止緩衝液で停止する。次いで、蛍光性抗ジゴキシゲニン抗体が適用される。
【０４２２】
セントトーマス液（Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）中で１８時間の冷保存に曝された心臓は、突出した内皮アポトーシスを示し、一方では、非虚血対照心臓において内皮アポトーシスは観察されないと予測される。アポトーシス細胞はＧＬＰ−１中で保存された心臓において観察されないと予測される。心臓がＧＬＰ−１中に貯蔵されるとき、長期の冷虚血保存および温かい再灌流後の冠動脈血流の著しい改善が起こると予測される。
【０４２３】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、長期の冷虚血保存後の再灌流の際に、摘出された臓器においてＣＤ３６発現上昇を抑制するための方法に有用であることを示す。
実施例７：糖尿病のマウスにおける腎障害のＧＬＰ−１媒介予防
【０４２４】
ＣＤ３６発現は、単球、心臓、腎臓、および血液を含む糖尿病患者の様々な組織において、発現上昇する。高グルコースは、ＣＤ３６ｍＲＮＡの翻訳効率を改善することによって、ＣＤ３６の発現を発現上昇させることで知られる。糖尿病性腎症は、１型および２型糖尿病の一般的な合併症であり、尿細管上皮変性および間質性線維症と関連する。ＣＤ３６は、糖尿病性腎症における尿細管上皮アポトーシスの媒介物として識別されていた。高グルコースは、近位尿細管上皮細胞におけるＣＤ３６発現およびアポトーシスを刺激する。
【０４２５】
ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を使用して、マウスにおける糖尿病を誘発する。３つの群のＣＤ−ｌマウスを研究する。Ｉ群−ＳＴＺ処置なし、ＩＩ群−５日間、１日１回ＳＴＺ（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を与える、ＩＩＩ群−５日間、１日１回ＳＴＺ（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を与え、かつ１６日間、１日１回ＧＬＰ−１（３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を与える。ＳＴＺ処置は、血中グルコースの進行性の増加をもたらすと予測される。動物を３週間後に屠殺し、腎臓組織を病理組織学のために貯蔵する。腎臓切片を、腎尿細管刷子縁の過ヨウ素酸シッフ（Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｓｃｈｉｆｆ）（ＰＡＳ）染色によって検査する。
【０４２６】
ＳＴＺ処置は、腎皮質の近位尿細管における刷子縁の劇的な損失を引き起こし、尿細管上皮細胞が、小さい凝集核を示すと予測される。ＧＬＰ−１（３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）での毎日の処置は、ＳＴＺ処置マウスにおける刷子縁の損失を予防し、尿細管上皮核は正常であるらしいと予測される。
【０４２７】
ＳＴＺ処置は尿細管上皮細胞における有意なアポトーシスを誘発すると予測される。腎臓切片を、上述の通りＴＵＮＥＬアッセイを使用してアポトーシスについて検査する。ＳＴＺで処置されたマウスからの腎臓切片は、非処置対照と比較して、近位尿細管における多数のアポトーシス核を示すと予測される。ＧＬＰ−１での処置は、近位尿細管上皮細胞における近位尿細管ＣＤ３６発現におけるアポトーシス細胞を劇的に減少させると予測される。ＣＤ３６発現を減少させることによって、ＧＬＰ−１は、血中グルコースレベルに影響を及ぼすことなく、尿細管細胞アポトーシスおよびＳＴＺで処置されたマウスにおける刷子縁の損失を阻害すると予測される。
【０４２８】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、糖尿病の哺乳動物における腎障害を処置または予防するための方法に有用であることを示す。
実施例８：ＧＬＰ−１による細胞膜透過
【０４２９】
［３Ｈ］ＧＬＰ−１の細胞取り込みを、Ｃａｃｏ−２細胞（ヒト腸上皮細胞）を使用して研究し、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ（ヒト神経芽細胞腫）、ＨＥＫ２９３（ヒト胎児腎臓）、およびＣＲＦＫ（腎臓上皮）細胞を使用して確定する。細胞の単層を、３日間、コラーゲンでコーティングされた１２−ウェルプレート（５×１０５細胞／ウェル）中で培養する。４日目に、細胞を予め温めたＨＢＳＳで２回洗浄し、最大１時間の様々な時間、３７℃または４℃で、２５０ｎＭの［３Ｈ］ＧＬＰ−１を含有する０．２ｍｌのＨＢＳＳと共にインキュベートする。
【０４３０】
［３Ｈ］ＧＬＰ−１は、細胞可溶化物において観察され、定常レベルに１時間以内で到達すると予測される。［３Ｈ］ＧＬＰ−１取り込み速度は、３７℃と比較して、４℃では遅くなるが、取り込みは４５分で７６．５％飽和に到達し、１時間で８６．３％飽和に到達すると予測される。［３Ｈ］ＧＬＰ−１の内部移行は、Ｃａｃｏ−２細胞に限定されず、同様の結果が、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ、ＨＥＫ２９３、およびＣＲＦＫ細胞で到達されると予測される。ＧＬＰ−１の細胞内濃度は、１時間のインキュベーション後、細胞外濃度よりも約５０倍高いと予測される。
【０４３１】
別個の実験において、細胞を、３７℃で１時間、ＧＬＰ−１濃度（１μＭ〜３ｍＭ）の範囲で、インキュベートする。インキュベート期間の最後に、細胞を、ＨＢＳＳで４回洗浄し、１％のＳＤＳを含む０．２ｍｌの０．１ＮのＮａＯＨを各ウェルに添加する。次いで、細胞可溶化物を、シンチレーションバイアルに移動し、放射能を計算する。内部移行した放射能と表面関連放射能とを区別するために、酸洗浄ステップを含める。細胞溶解より前に、細胞を、氷上で５分間、０．２ｍｌの０．２Ｍの酢酸／０．０５ＭのＮａＣｌと共にインキュベートする。
【０４３２】
ＧＬＰ−１のＣａｃｏ−２細胞への取り込みを、ＧＬＰ−１の蛍光性類似体を使用して、共焦点レーザー走査顕微鏡法（ＣＬＳＭ）によって確認する。細胞は、上述の通りに成長し、２日間、（３５ｍｍ）ガラス皿（ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐ．、Ａｓｈｌａｎｄ、ＭＡ）上に蒔かれる。次いで、媒体を除去し、細胞を、１時間、３７℃で、０．１μＭ〜１．０μＭの蛍光性ペプチド類似体を含有する１ｍｌのＨＢＳＳと共にインキュベートする。細胞を、氷冷のＨＢＳＳで３回洗浄し、２００μＬのＰＢＳで被覆する。顕微鏡法を、１０分以内に、室温で、Ｃ−アポクロマート６３×／ｌ．２Ｗ補正環付対物レンズを備えるＮｉｋｏｎ共焦点レーザー走査顕微鏡を使用して、実施する。励起を、ＵＶレーザーによって、３４０ｎｍで実施し、放出を５２０ｎｍで測定する。ｚ−方向における光学切片のため、２．０μのｚ−ステップを伴う５〜１０フレームを回収する。
【０４３３】
１時間、３７℃で、０．１μＭの蛍光性ＧＬＰ−１と共にインキュベートした後、ＣＬＳＭを使用して、蛍光性ＧＬＰ−１のＣａｃｏ−２細胞への取り込みを確認する。蛍光性ペプチドの取り込みは、３７℃および４℃で類似すると予測される。蛍光は、細胞質じゅうに拡散するように見えるが、核から完全に排除されると予測される。
【０４３４】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、ＧＬＰ−１の細胞への進入を含む方法に有用であることを示す。
実施例９：インビボのミトコンドリアへのＧＬＰ−１の標的化
【０４３５】
ＧＬＰ−１の蛍光性類似体を調製する。細胞は、上述の通りに成長し、２日間、（３５ｍｍ）ガラス皿（ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐ．、Ａｓｈｌａｎｄ、ＭＡ）上に蒔かれる。次いで、媒体を除去し、細胞を、１５分〜１時間、３７℃で、０．１μＭの蛍光性ＧＬＰ−１を含有する１ｍｌのＨＢＳＳと共にインキュベートする。
【０４３６】
細胞はまた、１５分間、３７℃で、テトラメチルローダミンメチルエステル（ＴＭＲＭ、２５ｎＭ）、すなわち、ミトコンドリアを染色するための染料と共にインキュベートされる。細胞を、氷冷のＨＢＳＳで３回洗浄し、２００μＬのＰＢＳで被覆する。顕微鏡法を、１０分以内に、室温で、Ｃ−アポクロマート６３×／ｌ．２Ｗ補正環付対物レンズを備えるＮｉｋｏｎ共焦点レーザー走査顕微鏡を使用して、実施する。
【０４３７】
蛍光性ＧＬＰ−１では、励起を、ＵＶレーザーを使用して３５０ｎｍで実施し、放出を５２０ｎｍで測定する。ＴＭＲＭでは、励起を５３６ｎｍで実施し、放出を５６０ｎｍで測定する。
【０４３８】
ＣＬＳＭが、３７℃で１５分間のみのインキュベーション後、蛍光性ＧＬＰ−１のＣａｃｏ−２細胞への取り込みを示し、染色を核から排除すると予測される。蛍光性ＧＬＰ−１のミトコンドリア局在を、蛍光性ＧＬＰ−１およびＴＭＲＭの重複によって実証する。
【０４３９】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、ペプチドのインビボのミトコンドリアへの標的化を含む方法に有用であることを示す。
実施例１０：ＧＬＰ−１の単離ミトコンドリアへの標的化
【０４４０】
マウスの肝臓からミトコンドリアを単離するために、マウスを断頭によって屠殺する。肝臓を除去し、迅速に冷却肝臓均質化媒体内へと配置する。肝臓を、ハサミを使用して細かく切り刻み、次いで、ガラスホモジナイザーを使用して、手によって均質にする。
【０４４１】
均等質を、４℃で、１０００×ｇで、１０分間遠心分離する。上澄みを、吸引し、ポリカーボネートチューブへと移動し、３０００×ｇ、４℃で、１０分間、さらに遠心分離する。結果として生じる上澄みを除去し、チューブの側壁上の脂肪脂質を除去する。
【０４４２】
ペレットを肝臓均等質媒体において再懸濁し、均質化を２回繰り返す。最終精製ミトコンドリアペレットを媒体において再懸濁する。ミトコンドリア調製におけるタンパク質濃度を、ブラッドフォード手順によって判定する。
【０４４３】
４００μｌ緩衝液中の約１．５ｍｇのミトコンドリアを、５〜３０分間、３７℃で、［３Ｈ］ＧＬＰ−１と共にインキュベートする。次いで、ミトコンドリアを、遠心分離し、放射能の量を、ミトコンドリア分画および緩衝液分画において判定する。０．７μｌ／ｍｇのタンパク質のミトコンドリア基質体積を想定して（Ｌｉｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５４５：９６１−９７４（２００２））、ミトコンドリアにおける［３Ｈ］ＧＬＰ−１の濃度は、緩衝液におけるものより高いことが予測され、ＧＬＰ−１がミトコンドリア中に濃縮されていることを示す。
【０４４４】
ＧＬＰ−１が選択的にミトコンドリアに分布されることを実証するために、我々は、蛍光性ＧＬＰ−１および［３Ｈ］ＧＬＰ−１の摘出されたマウスの肝臓のミトコンドリア内への取り込みを検査する。蛍光性ＧＬＰ−１の迅速な取り込みが予測される。カルボニルシアニドｐ−（トリフルオロメトキシ）−フェニルヒドラゾン（ＦＣＣＰ）、ミトコンドリアの即座の脱分極をもたらす脱共役剤でのミトコンドリアの前処置は、蛍光性ＧＬＰ−１の取り込みを減少させると予測され、取り込みは膜電位に依存することを実証する。
【０４４５】
ミトコンドリア標的化が発蛍光団の人工産物でないことを実証するために、我々はまた、［３Ｈ］ＧＬＰ−１のミトコンドリア取り込みも検査する。単離ミトコンドリアを、［３Ｈ］ＧＬＰ−１と共にインキュベートし、放射能を、ミトコンドリアペレットおよび上澄みにおいて判定する。ペレットにおける放射能の量は、２分〜８分で変化せず、ＦＣＣＰでのミトコンドリアの処置は、ミトコンドリアペレットに関連する［３Ｈ］ＧＬＰ−１の量を減少させると予測される。
【０４４６】
ＧＬＰ−１のミトコンドリア取り込み上のＦＣＣＰの最小限の影響は、［３Ｈ］ＧＬＰ−１が、ミトコンドリア膜と、またはミトコンドリア基質においてよりも膜間の隙間において、関係がありそうであることを示す。我々はまた、外のミトコンドリア膜の膨張および破裂を誘発するためにアラメチシンを使用する蛍光性ＧＬＰ−１のミトコンドリア局在上のミトコンドリア膨張の影響を実証する。蛍光性ＧＬＰ−１の取り込みは、ミトコンドリア膨張によって部分的にのみ逆転されると予測される。この結果は、ＧＬＰ−１がミトコンドリア膜と関連していることを確定する。
【０４４７】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、ペプチドの単離ミトコンドリアへの標的化を含む方法に有用であることを示す。
実施例１１：ＧＬＰ−１はミトコンドリア呼吸または膜電位を変化させない。
【０４４８】
この実施例は、ＧＬＰ−１が、酸素消費およびミトコンドリア膜電位によって測定されるミトコンドリア機能を変化させないことを実証する。
【０４４９】
摘出されたマウスの肝臓のミトコンドリアを１００ｐＭのＧＬＰ−１と共にインキュベートし、酸素消費を測定する。ＧＬＰ−１は、状態３または状態４の間の酸素消費、または呼吸比（状態３／状態４）（６．２対６．０）を変化させないと予測される。ミトコンドリア膜電位を、ＴＭＲＭを使用して測定する。ミトコンドリアの添加は、ＦＣＣＰの添加によって容易に元に戻せるＴＭＲＭシグナルの即座の停止をもたらすことが予測され、ミトコンドリア脱分極を示す。Ｃａ２＋（１５０μＭ）の添加は、即座のミトコンドリア脱分極、続いて、ＭＰＴの表示の停止の進行性の損失をもたらすと予測される。ＧＬＰ−１の単独の添加は、２００μＭでさえ、ミトコンドリア脱分極またはＭＰＴを引き起こすと予測される。
【０４５０】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、ペプチドのミトコンドリアへの標的化を含む方法に有用であることを示す。
実施例１２：Ｃａ２＋および３ＮＰによって誘発されるＧＬＰ−１媒介保護ＭＰＴ
【０４５１】
この実施例は、ＧＬＰ−１が、Ｃａ２＋過負荷および３−ニトロプロピオン酸（３ＮＰ）によって誘発されるＭＰＴを防ぐことを実証する。
【０４５２】
Ｃａ２＋の添加より前の２分間の単離ミトコンドリアのＧＬＰ−１（１０μＭ）での前処置は、一過性の脱分極のみもたらし、ＭＰＴの開始を防止すると予測される。ＧＬＰ−１は、用量依存的に、蓄積Ｃａ２＋負荷へのミトコンドリアの耐性を増加させると予測されることがさらに予測される。
【０４５３】
３−ニトロプロピオン酸（３ＮＰ）は、電子伝達鎖の錯体ＩＩにおけるコハク酸デヒドロゲナーゼの不可逆的な阻害剤である。３ＮＰ（１ｍＭ）の単離ミトコンドリアへの添加はミトコンドリア膜電位の損失およびＭＰＴの開始を引き起こすと予測される。ミトコンドリアのＧＬＰ−１での前処置が、用量依存的に、３ＮＰによって誘発されるＭＰＴの開始を遅延させることがさらに予測される。
【０４５４】
Ｃａｃｏ−２細胞を、ＧＬＰ−１（０．１μＭ）の不在下または存在下で、４時間、３ＮＰ（１０ｍＭ）で処置し、次いで、ＴＭＲＭと共にインキュベートし、ＬＳＣＭによって検査する。３ＮＰ処置された細胞は、対照細胞と比較して、減少した蛍光を示すことが予測され、ミトコンドリア脱分極を示す。一方、ＧＬＰ−１での併用処置は３ＮＰによって起こるミトコンドリア脱分極を防ぐと予測される。
【０４５５】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、インビトロまたはインビボのＭＰＴからミトコンドリアを保護するための方法に有用であることを示す。
実施例１３：ＧＬＰ−１はミトコンドリア膨張およびチトクロムｃ放出を防ぐ
【０４５６】
ＭＰＴ孔開口はミトコンドリア膨張をもたらす。我々は、５４０ｎｍでの吸光度（Ａ５４０）における減少の測定によるミトコンドリア膨張上のＧＬＰ−１の影響を実証する。ミトコンドリア懸濁液を遠心分離し、ペレットおよび上澄みにおけるチトクロムｃの量を、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して判定する。単離ミトコンドリアのＧＬＰ−１での前処置は、Ｃａ２＋過負荷によって誘発される膨張およびチトクロムｃ放出を阻害すると予測される。Ｃａ２＋過負荷によって誘発されるＭＰＴを防止することに加えて、ＧＬＰ−１はまた、１−メチル−４−フェニルピリジウムイオン（ＭＰＰ＋）、ミトコンドリア電子伝達鎖の錯体Ｉの阻害剤によって誘発されるミトコンドリア膨張を防止するとさらに予測される。
【０４５７】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、ミトコンドリアをミトコンドリア膨張およびインビトロまたはインビボのチトクロムｃ放出を防ぐための方法に有用であることを示す。
実施例１４：ＧＬＰ−１は虚血−再灌流誘発性心筋気絶を防ぐ。
【０４５８】
モルモットの心臓は、迅速に摘出され、大動脈を原位置でカニューレ処置し、一定の圧力で（４０ｃｍＨ２０）、酸素化クレブス−ヘンゼライトを用いて逆行性様式で灌流する。収縮力を、小さなフックを左心室の心尖部に挿入し、絹の結紮糸を力変位トランスデューサーに連結して、測定する。冠動脈血流量を、肺動脈流出物の回収の時間を測ることによって測定する。
【０４５９】
心臓を、３０分間、ＧＬＰ−１（１−１００ｎＭ）で灌流し、次いで、３０分の全虚血に曝す。再灌流を、ＧＬＰ−１が欠如している灌流緩衝液を使用して、実施しない。
【０４６０】
二元配置分散分析法（ｔｗｏ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）は、対照と比較したＧＬＰ−１処置心臓における収縮力、心拍数、および冠動脈血流量の著しい差を実証すると予測される。対照心臓において、収縮力は、虚血前期間と比較して、再灌流期間の間著しく低いと予測される。ＧＬＰ−１処置心臓において、再灌流期間の間の収縮力は、対照と比較して改善されると予測される。ＧＬＰ−１は、心臓気絶の完全な阻害を提供するとさらに予測される。その上、冠動脈血流量は、再灌流期間全体を通してよく持続し、ＧＬＰ−１処置心臓における心拍数の減少がないと予測される。
【０４６１】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、虚血−再灌流誘発性心筋気絶の影響を処置または予防するための方法に有用であることを示す。
実施例１５：ＧＬＰ−１は、臓器貯蔵を向上させる
【０４６２】
移植のため、提供者の心臓は、移送の間、心停止液中で貯蔵される。貯蔵溶液は、心臓が拍動するのを効果的に停止し、エネルギーを温存する高カリウムを含有する。しかしながら、摘出された心臓の生存時間はかなり制限される。
【０４６３】
この実施例は、ＧＬＰ−１が移植のために保存される臓器の生存を延長することを実証する。摘出されたモルモットの心臓は、３４℃で酸素化クレブス−ヘンゼライト液を用いて逆行性様式で灌流される。３０分の安定化後、心臓は、３分間、１００ｎＭのＧＬＰ−１を伴いまたは伴わずに、心停止液（ＣＰＳ、セントトーマス（Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ））で灌流される。次いで、全虚血は、冠動脈血流量の完全な中断によって誘発され、９０分間維持される。再灌流を、６０分間、酸素化クレブス−ヘンゼライト液で実施する。収縮力、心拍数、および冠動脈血流量を、手順の間、監視し続ける。
【０４６４】
ＧＬＰ−１の心停止液への添加は長期の虚血後の収縮機能を著しく向上させると予測される。
【０４６５】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、臓器の貯蔵を向上させるための方法に有用であることを示す。
実施例１６：ＧＬＰ−１は過酸化水素を捕捉する
【０４６６】
Ｈ2Ｏ2へのＧＬＰ−１の影響を、ルミノール誘発性化学発光によって測定する。ルミノール（２５μＭ）および西洋ワサビペルオキシダーゼ（０．７ＩＵ）を、Ｈ2Ｏ2（４．４ｎｍｏｌ）およびＧＬＰ−１ペプチドの溶液に添加し、化学発光を、２０分間、３７℃でＣｈｒｏｎｏｌｏｇ  Ｍｏｄｅｌ５６０血小板凝集計（Ｈａｖｅｒｔｏｗｎ、ＰＡ）で、監視する。
【０４６７】
ＧＬＰ−１は、用量依存的に、ルミノール応答を阻害すると予測され、ＧＬＰ−１ペプチドがＨ2Ｏ2を捕捉し得ることを実証する。
【０４６８】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、Ｈ2Ｏ2捕捉のための方法に有用であることを示す。
実施例１７：ＧＬＰ−１は脂質過酸化を阻害する
【０４６９】
リノール酸過酸化を、水溶性イニシエータ２，２’アゾビス（２−アンルジノプロパン）（ＡＢＡＰ）を使用して誘発し、脂質過酸化を共役ジエンの形成によって検出し、２３６ｎｍで、分光測定で監視する（Ｅ．Ｌｏｎｇｏｎｉ，Ｗ．Ａ．Ｐｒｙｏｒ，Ｐ．Ｍａｒｃｈｉａｆａｖａ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２３３，７７８−７８０（１９９７））。
【０４７０】
５ｍｌの０．５ＭのＡＢＡＰおよび変動する濃度のＧＬＰ−１を、自動酸化速度が一定になるまで、２．４ｍｌのリノール酸懸濁液中にインキュベートする。ＧＬＰ−１は、用量依存的に、リノール酸の過酸化を阻害すると予測される。
【０４７１】
本明細書に記載の様々なペプチドを、単独およびＧＬＰ−１と併用して、１００μＭの濃度で試験する。
【０４７２】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、脂質過酸化を阻害するための方法に有用であることを示す。
実施例１８：ＧＬＰ−１はＬＤＬ酸化を阻害する
【０４７３】
ヒト低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を、保存血漿から新たに調製する。ＬＤＬ酸化は、１０ｍＭのＣｕ８Ｏ４の添加によって触媒的に誘発され、共役ジエンの形成を、５時間、３７℃で、２３４ｎｍで監視する（Ｂ．Ｍｏｏｓｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｃ．Ｂｅｈｌ，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６１：２６０−２６８（２００２）。
【０４７４】
ＧＬＰ−１は、用量依存的に、ＬＤＬ酸化の速度を阻害すると予測される。
【０４７５】
本明細書に記載の様々なペプチドを、単独およびＧＬＰ−１と併用して、１００μＭの濃度で試験する。
【０４７６】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、ＬＤＬ酸化を阻害するための方法に有用であることを示す。
実施例１９：ＧＬＰ−１は摘出されたマウス肝臓ミトコンドリアによる過酸化水素産生を抑制する
【０４７７】
この実施例は、単離ミトコンドリアにおけるＨ2Ｏ2形成へのＧＬＰ−１の影響を実証する。肝臓をマウスから採取し、氷冷の緩衝液中で均質化し、１０分間、１３８００×ｇで、遠心分離する。ペレットを１回洗浄し、０．３ｍｌの洗浄緩衝液中で再懸濁し、使用まで氷上に配置する。Ｈ2Ｏ2を、以前に記載した通りのルミノール化学発光を使用して、測定する（Ｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １４２８：１−１２（１９９９）。０．１ｍｇのミトコンドリアタンパク質を、ＧＬＰ−１ペプチド（１００μＭ）の不在下または存在下において、０．５ｍ１のリン酸カリウム緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ８．０）に添加する。２５ｍＭのルミノールおよび０．７ＩＵの西洋ワサビペルオキシダーゼを添加し、化学発光を、２０分間、３７℃で、Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ  Ｍｏｄｅｌ５６０血小板凝集計（Ｈａｖｅｒｔｏｗｎ、ＰＡ）で、監視する。産生されるＨ2Ｏ2の量を、２０分にわたる曲線下面積（ＡＵＣ）として定量化し、全てのデータは、ミトコンドリア単独によって産生されるＡＵＣに正規化される。
【０４７８】
Ｈ2Ｏ2産生の量は、１０μＭのＧＬＰ−１の存在下において、著しく減少すると予測される。
【０４７９】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、ミトコンドリアにおけるＨ2Ｏ2産生を抑制するための方法に有用であることを示す。
実施例２０：ＧＬＰ−１は摘出されたマウス肝臓ミトコンドリアによるアンチマイシン誘発性過酸化水素産生を抑制する
【０４８０】
肝臓をマウスから採取し、氷冷の緩衝液中で均質化し、１０分間、１３８００×ｇで、遠心分離する。ペレットを１回洗浄し、０．３ｍｌの洗浄緩衝液中で再懸濁し、使用まで氷上に配置する。Ｈ2Ｏ2を、以前に記載した通りのルミノール化学発光を使用して、測定する（Ｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ１４２８，１−１２（１９９９）。０．１ｍｇのミトコンドリアタンパク質を、ＧＬＰ−１の不在下または存在下において、０．５ｍｌのリン酸カリウム緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ８．０）に添加する。２５ｍＭのルミノールおよび０．７ＩＵの西洋ワサビペルオキシダーゼを添加し、化学発光を、２０分間、３７℃で、Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ  Ｍｏｄｅｌ５６０血小板凝集計（Ｈａｖｅｒｔｏｗｎ、ＰＡ）で、監視する。産生されるＨ2Ｏ2の量を、２０分にわたる曲線下面積（ＡＵＣ）として定量化し、全てのデータは、ミトコンドリア単独によって産生されるＡＵＣに正規化される。
【０４８１】
ＧＬＰ−１は、用量依存的に、単離ミトコンドリアによるＨ2Ｏ2の自然産生を減少させると予測される。
【０４８２】
ＧＬＰ−１は、用量依存的に、単離ミトコンドリアにおけるアンチマイシンによって誘発されるＨ2Ｏ2の産生を減少させると予測される。
【０４８３】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、ミトコンドリアにおけるアンチマイシン誘発性Ｈ2Ｏ2産生を抑制するための方法に有用であることを示す。
実施例２１：ＧＬＰ−１は細胞内活性酸素種（ＲＯＳ）を減少させ、細胞生存を増加させる
【０４８４】
全細胞に適用されるときに、本明細書に記載されるペプチドが効果的であることを実証するために、ニューロンＮ２Ａ細胞を、１×１０４／ウェルの密度で、９６−ウェルプレート中に蒔き、４０分間のｔＢＨＰ（０．５または１ｍＭ）での処置の前に、２日間成長させる。細胞を、２回洗浄し、媒体単独または変動する濃度のＧＬＰ−１を含有する媒体において、４時間インキュベートする。細胞内ＲＯＳを、カルボキシ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｐｏｒｔｌａｎｄ、ＯＲ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用して、測定する。細胞死を、ＭＴＳ細胞増殖アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して、測定する。
【０４８５】
ｔＢＨＰを伴うインキュベーションは、細胞内ＲＯＳの用量依存的増加および細胞生存率の減少をもたらすと予測される。ＧＬＰ−１を伴うインキュベーションは、用量依存的に、細胞内ＲＯＳを減少させ、ｎＭ範囲におけるＥＣ５０での細胞生存を増加させると予測される。
【０４８６】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、細胞内ＲＯＳレベル／産生を減少させ、細胞生存を増加させることを含む方法に有用であることを示す。
実施例２２：ＧＬＰ−１は細胞生存率の損失を防止する
【０４８７】
ニューロンＮ２ＡおよびＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、１×１０４／ウェルの密度で、９６−ウェルプレート中に蒔き、２４時間のＧＬＰ−１を伴うまたは伴わないｔ−ブチルヒドロ過酸化物（ｔＢＨＰ）（０．０５〜０．１ｍＭ）での処置の前に、２日間成長させる。細胞死を、ＭＴＳ細胞増殖アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して、評価する。
【０４８８】
２４時間の低用量のｔ−ＢＨＰ（０．０５〜０．１ｍＭ）でのＮ２ＡおよびＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の処置は、細胞生存率の減少をもたらすと予測される。細胞のＧＬＰ−１での併用処置は、ｔ−ＢＨＰ誘発性細胞毒性の用量依存的減少をもたらすと予測される。
【０４８９】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、細胞生存率の損失を減少させるための方法に有用であることを示す。
実施例２３：ＧＬＰ−１は、カスパーゼ活性を減少させる
【０４９０】
Ｎ２Ａ細胞は、９６−ウェルプレート上で成長し、ＧＬＰ−１の不在下または存在下において、１２〜２４時間、３７℃で、ｔ−ＢＨＰ（０．０５ｍＭ）で処置される。全ての処置を４連で実行する。Ｎ２Ａ細胞を、１２時間、３７℃で、ＧＬＰ−１を伴いまたは伴わずに、ｔ−ＢＨＰ（５０ｍＭ）と共にインキュベートする。細胞を、細胞脱離溶液（Ａｃｃｕｔａｓｅ、Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を用いて、プレートから優しく持ち上げ、ＰＢＳ中で、２回洗浄する。カスパーゼ活性を、ＦＬＩＣＡキット（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＬＬＣ、Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＮ）を使用して、アッセイする。製造業者の推奨に従い、細胞を、ＰＢＳにおいて再懸濁し（約５×１０６細胞／ｍｌ）、光から保護しながら、５％のＣＯ２下で、１時間、３７℃で、汎カスパーゼ阻害剤ＦＡＭ−ＶＡＤ−ＦＭＫで標識する。次いで、細胞を洗浄して、非結合試薬を除去し、固定する。細胞における蛍光強度を、緑色に対する標準放出フィルター（ＦＬｌ）を使用する、レーザー走査型血球計算器（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＸＬ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）によって測定する。それぞれの操作に対して、１０，０００の個々のイベントを収集し、オフライン分析のためにリストモードファイルに保存する。
【０４９１】
カスパーゼ活性化は、アポトーシスカスケードの開始誘因であり、用量依存的に、ＧＬＰ−１によって阻害される、５０ｍＭのｔ−ＢＨＰを伴う１２時間のＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞のインキュベーション後に、カスパーゼ活性の著しい増加があると予測される。
【０４９２】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、カスパーゼ活性を減少させるための方法に有用であることを示す。
実施例２４：ＧＬＰ−１は酸化的損傷に曝露された細胞における脂質過酸化を阻害する
【０４９３】
ＧＬＰ−１は、ｔ−ＢＨＰで処置されたＮ２Ａ細胞における脂質過酸化を阻害すると予測される。脂質過酸化を、４−ＨＮＥマイケル付加物を測定することによって評価する。４−ＨＮＥは、膜多価不飽和脂肪酸の過酸化の主な産物の１つである。Ｎ２Ａ細胞を、ＧＬＰ−１（１０−８〜１０−１０Ｍ）の不在下または存在下におけるｔ−ＢＨＰ処置（１ｍＭ、３時間、３７℃、５％のＣ０２）の１日前に、ガラス皿上に蒔く。細胞を、ＰＢＳで２回洗浄し、室温で、ＰＢＳにおいて４％のパラホルムアルデヒドで、３０分、固定し、ＰＢＳでさらに３回洗浄する。次いで、細胞を、透過処理し、イエウサギ抗ＨＮＥ抗体で処置し、続いて、二次抗体（ビオチンと共役されるヤギ抗イエウサギＩｇＧ）で処置する。細胞を、Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄに取り付け、４６０±２０ｎｍの励起波長および放出のため５０５ｎｍのロングパスフィルターを使用するＺｅｉｓｓ蛍光顕微鏡を使用して、映し出す。
【０４９４】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、酸化的損傷に曝露された細胞における脂質過酸化を阻害するための方法に有用であることを示す。
実施例２５：ＧＬＰ−１は過酸化水素に曝露された細胞におけるミトコンドリア膜電位の損失を阻害する
【０４９５】
Ｃａｃｏ−２細胞を、ＧＬＰ−１（０．１μＭ）の不在下または存在下で、４時間、ｔＢＨＰ（ｌｍＭ）で処置し、次いで、ＴＭＲＭと共にインキュベートし、ＬＳＣＭ下で検査する。ｔＢＨＰで処置された細胞において、ＴＭＲＭ蛍光は、対照細胞と比較してかなり減少すると予測され、全般性ミトコンドリア脱分極を示唆する。その一方、ＧＬＰ−１での併用処置は、ｔ−ＢＨＰによって引き起こされるミトコンドリア脱分極を防ぐと予測される。
【０４９６】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、過酸化水素に曝露された細胞におけるミトコンドリア膜電位の損失を阻害するための方法に有用であることを示す。
実施例２６：ＧＬＰ−１はミトコンドリア膜電位の損失およびｔ−ＢＨＰに曝露されたＮ２Ａ細胞における増加したＲＯＳ蓄積を防止する
【０４９７】
ガラス皿において培養されたＮ２Ａ細胞を、０．１ｍＭのｔ−ＢＨＰ単独で、または１ｎＭのＧＬＰ−１と組み合わせて、６時間、処置する。次いで、細胞を、３０分間、３７℃、５％のＣＯ２で、１０μＭのジクロロフルオレセイン（ｅｘ／ｅｍ＝４８５／５３０）で、充填する。細胞を、ＨＢＳＳで３回洗浄し、１５分間、３７℃で、２０ｎＭのＭｉｔｏｔｒａｃｋｅｒ  ＴＭＲＭ（ｅｘ／ｅｍ＝５５０／５７５ｎｍ）で、染色し、共焦点レーザー走査型顕微鏡法によって検査する。
【０４９８】
Ｎ２Ａ細胞のｔ−ＢＨＰでの処置は、ＴＭＲＭ蛍光の損失をもたらすと予測され、ミトコンドリア脱分極およびＤＣＦ蛍光における付随する増加を示し、細胞内ＲＯＳの増加を示す。１ｎＭのＧＬＰ−１での併用処置は、ミトコンドリア脱分極および減少したＲＯＳ蓄積の両方を防止するとさらに予測される。
【０４９９】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、ミトコンドリア膜電位の損失およびｔ−ＢＨＰに曝露された細胞における増加したＲＯＳ蓄積を阻害するための方法に有用であることを示す。
実施例２７：ＧＬＰ−１は酸化ストレスによって引き起こされるアポトーシスを防止する
【０５００】
ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞は、９６−ウェルプレート中で成長し、ＧＬＰ−１の不在下または存在下において、２４時間、３７℃で、ｔ−ＢＨＰ（０．０２５ｍＭ）で処置される。全ての処置を４連で実行する。次いで、細胞を、２０分間、２ｍｇ／ｍｌのＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２で染色し、４％のパラホルムアルデヒドで固定し、Ｚｅｉｓｓ  Ａｃｒｏｐｌａｎ×２０対物レンズを備えるＺｅｉｓｓ蛍光顕微鏡（Ａｘｉｏｖｅｒｔ２００Ｍ）を使用して映し出す。核形態を、３５０±１００ｍの励起波長および放出のための４００ｎｍのロングパスフィルターを使用して、評価する。全ての画像を、処理し、ＭｅｔａＭｏｒｐｈソフトウェア（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  撮像  Ｃｏｒｐ．、Ｗｅｓｔ  Ｃｈｅｓｔｅｒ、ＰＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用して解析する。均一に染色された核を、健康な生存可能なニューロンとして記録する。凝集または断片化された核を伴う細胞を、アポトーシスとして記録する。ＧＬＰ−１は、０．０２５ｍＭｔ−ＢＨＰによって誘発されるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞アポトーシスを予防すると予測される。
【０５０１】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、酸化ストレスによって引き起こされるアポトーシスを予防するための方法に有用であることを示す。
実施例２８：ＧＬＰ−１は虚血および再灌流に曝される心臓における脂質過酸化を防止する
【０５０２】
摘出されたモルモット心臓は、ランゲンドルフ装置において逆行性様式で灌流され、様々な間隔の虚血−再灌流に曝される心臓を即座に固定し、パラフィンに埋め込み、切開する。４−ヒドロキシ−２−ノネナール（ＨＮＥ）−修飾タンパク質の免疫組織学的分析を、抗ＨＮＥ抗体を使用して、実施する。
【０５０３】
ＧＬＰ−１は、未処置対照と比較して短い間隔の虚血および再灌流に曝される心臓における脂質過酸化を防止すると予測される。
【０５０４】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、虚血および再灌流に曝される臓器における脂質過酸化を防止するための方法に有用であることを示す。
実施例２９：ＧＬＰ−１は様々な単離膵島細胞の改善
【０５０５】
膵島細胞を、標準手順に従いマウスの膵臓から単離する。ＧＬＰ−１または対照溶媒を、単離手順全体を通して使用する単離緩衝液に添加する。ミトコンドリア膜電位を、ＴＭＲＭ（赤色）を使用して測定し、共焦点顕微鏡法により可視化し、アポトーシスを、アネキシンＶを使用する流動細胞計測法によって、ヨウ化プロピジウムによって壊死を測定する。
【０５０６】
ＧＬＰ−１は、ミトコンドリア膜電位によって測定される通り、アポトーシスを減少させ、膵島細胞生存率を増加させると予測される。
【０５０７】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、単離膵島細胞の生存率を改善するための方法に有用であることを示す。
実施例３０：ＧＬＰ−１は、膵島細胞における酸化的損傷を防ぐ
【０５０８】
単離マウス膵島細胞を、ＧＬＰ−１を伴いまたは伴わずに、２５μＭのｔＢＨＰで処置する。ミトコンドリア膜電位を、ＴＭＲＭ（赤色）によって測定し、活性酸素種を、共焦点顕微鏡法を使用して、ＤＣＦ（緑色）によって測定する。ＧＬＰ−１は、単離膵島細胞における酸化的損傷を防ぐと予測される。
【０５０９】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、膵島細胞における酸化的損傷を予防するための方法に有用であることを示す。
実施例３１：ＧＬＰ−１はパーキンソン病を防ぐ
【０５１０】
ＭＰＴＰは、線条体ドーパミン作動性ニューロンを選択的に破壊する神経毒であり、パーキンソン病の許容された動物モデルである。ＭＰＰ＋、すなわちＭＰＴＰの代謝物は、ミトコンドリアを標的とし、電子伝達鎖の錯体Ｉを阻害し、ＲＯＳ産生を増加させる。細胞は、ＭＰＴＰを代謝して、活性代謝物とすることができないので、ＭＰＰ＋を、インビトロ研究のために使用するが、一方で、ＭＰＴＰをインビボ（すなわち、動物）研究のために使用する。
【０５１１】
ＳＮ−４７４１細胞を、４８時間、緩衝液、５０μＭのＭＰＰ＋または５０μＭのＭＰＰ＋および１ｎＭのＧＬＰ−１で処置する。アポトーシスを、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２を用いて蛍光顕微鏡法によって測定する。凝集、断片化された核の数は、対照細胞におけるＭＰＰ＋処置によって著しく増加し、ＧＬＰ−１を用いた併用処置は、アポトーシス細胞の数を減少させると予測される。
【０５１２】
ＧＬＰ−１は、用量依存的に、ＭＰＴＰで処置されたマウスにおけるドーパミン作動性ニューロンの損失を防止するとさらに予測される。ＭＰＴＰ（１０ｍｇ／ｋｇ）の３回の投与を、２時間毎にマウスに与える（ｎ＝１２）。ＧＬＰ−１を、各ＭＰＴＰ注入の３０分前に、および最後のＭＰＴＰ注入の１時間後および１２時間後に投与する。動物を、１週間後に屠殺し、線条体脳領域を、チロシンヒドロキシラーゼ活性のため免疫染色する。ドーパミンのレベル、すなわちＤＯＰＡＣおよびＨＶＡレベルを、高圧液体クロマトグラフィーによって定量化する。
【０５１３】
ＧＬＰ−１は、用量依存的に、ＭＰＴＰで処置されたマウスにおける線条体ドーパミン、ＤＯＰＡＣ（３，４ヒドロキシフェニル酢酸）、およびＨＶＡ（ホモバニリン酸）レベルを増加させると予測される。
【０５１４】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、哺乳動物の対象におけるーキンソン病を処置または予防するための方法に有用であることを示す。
実施例３２：ＧＬＰ−１は高脂肪食を与えられたラットにおけるミトコンドリア機能不全を減少させる
【０５１５】
食事誘発性肥満の骨格筋における細胞酸化還元バランスの制御への潜在的な影響を判定するために、透過処理した骨格筋線維束におけるミトコンドリアＨ2Ｏ2産生速度の測定への新たな取り組みを開発する。Ｓｅｅ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（ｄｏｉ：１０．１  １７２／Ｊ  Ｃ１３７０４８）。ＮＡＤＨ−結合錯体Ｉ基質によって支持される基礎（状態４）呼吸の間、超酸化物形成の速度は低く、０．１〜０．５％の合計Ｏ２利用を表す（Ａｎｄｅｒｓｏｎ＆Ｎｅｕｆｅｒ，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９０：Ｃ８４４−８５１（２００６）；Ｓｔ−Ｐｉｅｒｒｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：４４７８４−４４７９０（２００２））。しかしながら、コハク酸塩、ＦＡＤＨ−結合錯体ＩＩ基質によって独占的に支持される呼吸は、錯体Ｉに戻る電子の逆流を発生させることによって、超酸化物生成の高速度を促進する（Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＆  Ｎｅｕｆｅｒ，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ２９０：Ｃ８４４−８５１（２００６）；Ｓｔ−Ｐｉｅｒｒｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：４４７８４−４４７９０（２００２）；Ｌｉｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．８０：７８０−７８７（２００２）；Ｔｕｒｒｅｎｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９１：４２１−４２７（１９８０））。この実施例は、透過処理した筋線維におけるミトコンドリア機能を測定するための方法を記載し、高脂肪食のミトコンドリア機能への影響を検査する。
【０５１６】
動物および試薬。３０匹の雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットを、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から入手し、温度（２２℃）で、食事と水を自由にとれる光調節した部屋に収容する。２０匹の動物を、高（６０％）脂肪食（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｙｅｔｓ、Ｂｅｔｈｌｅｈｅｍ、ＰＡ）で維持する。骨格筋を、麻酔下の動物（１００ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．ケタミン−キシラジン）から得る。手術後、動物を、麻酔しながら、頸椎脱臼により屠殺する。Ａｍｐｌｅｘ  Ｒｅｄ  Ｕｌｔｒａ試薬を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）から入手する。スチグマテリンおよび西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を、Ｆｌｕｋａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｋａ（Ｂｕｃｈｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から入手する。全ての他の化学薬品をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入する。研究された全ての動物は、Ｅａｓｔ  Ｃａｒｏｌｉｎａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって認可される。
【０５１７】
透過処理された筋線維束の調製。手短に言えば、少量（２５ｍｇ）のヒラメ筋、赤色腓腹筋（ＲＧ）、および白色腓腹筋（ＷＧ）筋肉を切断し、６０ｍＭのＫ−ＭＥＳ、３５ｍＭのＫＣ１、７．２３ｍＭのＫ２ＥＧＴＡ、２．７７ｍＭのＣａＫ２ＥＧＴＡ、２０ｍＭのイミダゾール、０．５ｍＭのＤＴＴ、２０ｍＭのタウリン、５．７ｍＭのＡＴＰ、１５ｍＭのＰＣｒ、および６．５６ｍＭのＭｇＣｌ２．６  Ｈ２Ｏ（ｐＨ  ７．１、２９５ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇのＨ２Ｏ）を含有する氷冷の緩衝液Ｘ中に配置する。筋肉を、結合組織のトリムし、線維束（２×７ｍｍ、４〜８ｍｇ湿重量）に切断する。一組の針状先端の鉗子を使用して、解剖顕微鏡下で、線維を、互いから優しく分離して、線維束の表面積を最大限にし、接触の小さい領域のみを残す。筋線維を透過処理するために、各線維束を、５０μｇ／ｍｌのサポニンを含有する氷冷の緩衝液Ｘ中に配置し、３０分間、４℃で、ローテータ上でインキュベートする。透過処理した線維束（ＰｍＦＢｓ）を、１１０ｍＭのＫ−ＭＥＳ、３５ｍＭのＫＣ１、１ｍＭのＥＧＴＡ、１０ｍＭのＫ２ＨＰ０４、３ｍＭのＭｇＣｌ２．６  Ｈ２Ｏ、５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、０．１ｍＭのグルタミン酸塩、および０．０５ｍＭのリンゴ酸塩（ｐＨ７．４、２９５ｍＯｓｍ）を含有する氷冷の緩衝液Ｚ中で洗浄し、分析まで（＜２時間）、４℃で、ローテータ上で、緩衝液Ｚにおいてインキュベートする。
【０５１８】
ミトコンドリア呼吸およびＨ2Ｏ2産生測定。高解像呼吸計測測定値を、Ｏｒｏｂｏｒｏｓ  Ｏ２Ｋ  Ｏｘｙｇｒａｐｈ（Ｉｎｎｓｂｒｕｃｋ、Ａｕｓｔｒｉａ）を使用して、緩衝液Ｚにおいて、３０℃で得る。温度調節および＞１０００ｒｐｍでの磁気撹拌を伴うＳｐｅｘ  Ｆｌｕｏｒｏｍａｘ３（Ｊｏｂｉｎ  Ｙｖｏｎ，Ｌｔｄ．）分光蛍光光度計を使用して、Ａｍｐｌｅｘ  Ｒｅｄの酸化を監視し続けることによって、緩衝液Ｚ（１０μｇ／ｍｌオリゴマイシン）における状態４呼吸の間、３０℃で、ミトコンドリアＨ2Ｏ2産生を測定する。Ａｍｐｌｅｘ  Ｒｅｄ試薬は、ＨＲＰによって触媒された１：１化学量論においてＨ2Ｏ2と反応して、蛍光性化合物レゾルフィンおよびモル当量Ｏ２を生じさせる。レゾルフィンは、５６３ｎｍ／５８７ｎｍの励起／放出特性を有し、一旦形成されると非常に安定している。ベースライン後、蛍光（反応物質のみ）を確立し、反応は、３７℃で、コハク酸塩を伴う５μＭのＡｍｐｌｅｘ  Ｒｅｄおよび０．５Ｕ／ｍｌのＨＲＰを含有する３００μｌの緩衝液Ｚへの透過処理した線維束の添加によって開始する。コハク酸塩実験のため、線維束を、基質を伴わずに緩衝液Ｚにおいて簡単に洗浄して、残留ピルビン酸塩およびリンゴ酸塩を除去する。表される場合、１０μｇ／ｍｌのオリゴマイシンを反応緩衝液において誘発して、ＡＴＰシンターゼをブロックし、状態４呼吸を確保する。各実験の結果として、ＰｍＦＢｓを再蒸留（ｄｄ）Ｈ２Ｏにおいて洗浄して、塩を除去し、凍結乾燥器（ＬａｂＣｏｎｃｏ）において凍結乾燥させる。呼吸速度を、乾燥重量当たり毎秒ピコモルとして表し、ミトコンドリアＨ2Ｏ2産生を、乾燥重量当たり毎分ピコモルとして表す。
【０５１９】
統計分析。データを手段±ＳＥとして提示する。統計分析を、群の間での有意分析のため、スチューデント−ニューマン−コイルス法を用いて、一元配置分散分析法（ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）を使用して実施する。有意レベルをｐ＜０．０５に設定する。
【０５２０】
動物を６０％の脂肪食で３週間の期間維持することは、ミトコンドリアＨ2Ｏ2産生の最大速度の増加を引き起こすと予測される。コハク酸塩滴定の結果としてのロテノンの添加は、Ｈ2Ｏ2産生を除去すると予測され、錯体Ｉを、対照動物および高脂肪食を与えられたものの両方における超酸化物産生の源として確定する。ミトコンドリアＨ2Ｏ2産生はまた、高脂肪食を与えられた動物が、対照動物より高いＨ2Ｏ2産生の最大速度を有するという見込みで、アンチマイシン（錯体ＩＩＩ阻害剤）の存在下において、ピルビン酸塩／リンゴ酸塩を滴定することによって測定される。
【０５２１】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、高脂肪食を与えられた哺乳動物の対象におけるミトコンドリア機能不全を減少させるための方法に有用であることを示す。
実施例３３：ＧＬＰ−１は高脂肪食を与えられたラットにおけるＲＯＳ産生を減少させる
【０５２２】
超酸化物産生は、脂肪酸対炭水化物代謝によって支持される基礎呼吸の間高く、高脂肪食によって引き起こされるミトコンドリアＨ2Ｏ2産生の増加の可能性を上げることが、細胞のＨ2Ｏ2レベル（例えば、ＲＯＳ誘発性ＲＯＳ放出機構によるＲＯＳ）の上昇の結果となり得る。この仮説を試験するために、ＧＬＰ−１ペプチドの高脂肪食ラットにおけるミトコンドリア機能への影響を検査する。ＧＬＰ−１ペプチド抗酸化剤は、心筋気絶に曝された心臓、移植後の膵島細胞、ならびにパーキンソン病および筋萎縮性側索硬化症の動物モデルにおけるＲＯＳを効果的に減少させることを示した（Ｚｈａｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：３４６８２−３４６９０（２００４）；Ｔｈｏｍａｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒ．１６，ＴＨ−ＦＣ０６７（２００５）；Ｐｅｔｒｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．９８，１１４１−１１４８（２００６）；Ｓｚｅｔｏ，ｅｔ  ａｌ．，ＡＡＰＳ  Ｊ．８：Ｅ５２１−５３１（２００６））。
【０５２３】
高脂肪食で維持された１０匹のラットは、リン酸緩衝食塩水に溶解したＧＬＰ−１の腹腔内注入（１．５ｍｇ／ｋｇ）を毎日受ける。ＧＬＰ−１の用量反応曲線を、インビトロおよびインビボで確立する。ミトコンドリア機能を実施例１に記載の方法に従い測定する。両方の用量反応曲線は、コハク酸塩支持呼吸の間のミトコンドリアＨ2Ｏ2産生の減少を反映すると予測される。
【０５２４】
次に、ラットを、ＧＬＰ−１の毎日の投与を伴いまたは伴わずに、高脂肪食（６０％）で、６週間飼育する。透過処理した線維で実施されるコハク酸塩滴定実験は、高脂肪食を与えられたラットにおけるＨ2Ｏ2産生の最大速度の増加を明らかにすると予測される。高脂肪食を与えられたラットからの透過処理した線維は、パルミトイルカルニチンによって支持される基礎呼吸の間、より高いＨ2Ｏ2産生速度を示すとさらに予測される。ＧＬＰ−１で処置された高脂肪食を与えられたラットにおいて、コハク酸塩およびパルミトイルカルニチン両方の支持呼吸の間のミトコンドリアＨ2Ｏ2産生の増加が減少すると予測される。ピルビン酸塩／リンゴ酸塩によって支持される基礎呼吸は、高脂肪食を与えられたラットからの線維において少し増加するとさらに予測され、ある程度の脱共役を示唆する。しかしながら、高脂肪食を与えられたラットにおいて、ピルビン酸塩／リンゴ酸塩またはパルミトイルカルニチン支持呼吸の基礎速度は、ＧＬＰ−１処置によって影響されないことも予測され、ＧＬＰ−１処置と伴うＨ2Ｏ2産生の正常化が、プロトン漏出の増加によって媒介されないことを示す。ＧＬＰ−１処置は高脂肪食を与えられたラットにおける体重増加に影響しないことも予測される。
【０５２５】
まとめると、これらの発見は、本技術のＧＬＰ−１ペプチドなどのミトコンドリア標的化抗酸化剤の投与が、高脂肪食によって誘発されるミトコンドリアＨ2Ｏ2産生の増加を防止または補うことを実証する。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチドは、哺乳動物の対象におけるミトコンドリア機能不全によって引き起こされるインスリン抵抗性を予防または処置するための方法に有用である。
【０５２６】
細胞内局在および多くのタンパク質活動（例えば、受容体、キナーゼ／ホスファターゼ、転写因子など）は、チオール（−ＳＨ）含有残基の酸化状態によって調節されるという認識が高まっており、細胞内酸化還元環境における変化が、幅広い細胞機能に影響を及ぼし得ることを示唆する（Ｓｃｈａｆｅｒ  ａｎｄ  Ｂｕｅｔｎｅｒ，Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  ＢｉｏＩ  Ｍｅｄ  ３０，１１９１−１２１２（２００１）。グルタチオン（ＧＳＨ）、細胞における最も豊富な酸化還元緩衝液は、Ｈ2Ｏ2の存在下において、グルタチオンペルオキシダーゼによって、ＧＳＳＧに可逆的に酸化され、ＮＡＤＰＨによって提供される電子を伴うグルタチオンレダクターゼによってＧＳＨに減少される。ＧＳＨ／ＧＳＳＧの比率は、典型的には、非常に動的であり、細胞の全体の酸化還元環境を反映する。
【０５２７】
１００ｍｇの凍結した筋肉を、ｐＨ７．２で、１０ｍＭのトリス、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＥＧＴＡ、２ｍＭのＮａバナジン酸塩、２ｍＭのＮａピロリン酸塩、５ｍＭのＮａＦ、およびプロテアーゼ阻害剤カクテル（完全な）を含有する緩衝液において、均質化することによって、タンパク質均等質を調製する。均質化後、１％のトリトンＸ−１００を、タンパク質懸濁液に添加し、それを、ボルテックスし、５分間氷上でインキュベートする。サンプルを１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して、不溶性破片をペレットにする。ＧＳＳＧ測定のため、組織を、２０ｍＭのメチル−２−ビニルピリジニウムトリフレートを含有する溶液において、均質化して、サンプルにおける全ての還元チオールを除去する。合計ＧＳＨおよびＧＳＳＧを、市販のＧＳＨ／ＧＳＳＧアッセイ（Ｏｘｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｐｅｒｃｉｐｉｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ）を使用して測定する。
【０５２８】
高脂肪食を与えることは、ＧＬＰ−１処置に関係なく、合計細胞グルタチオン含有量（ＧＳＨｔ）の減少を引き起こすと予測され、高脂肪摂取が、骨格筋におけるＧＳＨ媒介酸化還元緩衝能力を損なうことを実証する。高脂肪食によってもたらされた増加したミトコンドリアＨ2Ｏ2産生と骨格筋の全体酸化還元環境へのその影響との関連を確立するために、ＧＳＨおよびＧＳＳＧの両方を、１）１０時間絶食後、および２）標準グルコース充填の投与の１時間後（経口経管栄養、１０時間絶食）に、標準の食事を与えられたラットおよび高脂肪食を与えられたラットからの骨格筋において、測定する。標準の食事を与えられた対照において、グルコース摂取は、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比率（ＧＳＨｔに正規化）の減少を引き起こすと予測され、インスリン促進グルコース代謝の増加に対応するより酸化した状態への変化を恐らく反映する。高脂肪食を与えられたラットにおいて、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比率が、標準の食事を与えられた対照と比較して、１０時間の絶食状態において減少し、グルコース摂取に対応してさらに減少すると予測される。ＧＬＰ−１処置は、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比率を、グルコース摂取後でさえ、対照レベル近くに維持すると予測される。
【０５２９】
これらの発見は、高脂肪食が、骨格筋における細胞内酸化還元環境を、対照と比較したときに、より酸化した状態に変化させることを実証する。ＧＬＰ−１での処置は、恐らく、一次酸化体を捕捉し、それによって、高脂肪食によって誘発される合計ＧＳＨ媒介酸化還元緩衝能力の減少を補うことによって、骨格筋における細胞内酸化還元状態を維持すると予測される。したがって、本技術のＧＬＰ−１ペプチドなどのミトコンドリア標的化抗酸化剤の投与は、高脂肪食を与えられたラットにおいて発症する代謝機能不全を予防または補うと予測される。
【０５３０】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、高脂肪食を与えられた哺乳動物の対象におけるＲＯＳ産生を減少させるための方法に有用であることを示す。
実施例３４：ＧＬＰ−１は高脂肪食を与えられたラットにおけるインスリン抵抗性を予防する
【０５３１】
細胞内酸化還元環境におけるミトコンドリアによる変化が、高脂肪食誘発性インスリン抵抗性の病因に関連し得ることを実証するために、経口グルコース耐性試験を、６週間の高脂肪食を受けたラットで実施する。試験の日、食事を、経口経管栄養による２ｇ／ｋｇのグルコース溶液の投与より１０時間に除去する。グルコースレベルを、全血液サンプル（Ｌｉｆｅｓｃａｎ、Ｍｉｌｐｉｔａｓ、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）で判定する。血清インスリンレベルを、ラット／マウスＥＬＩＳＡキット（Ｌｉｎｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｓｔ．Ｃｈａｒｌｅｓ、ＭＯ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用して判定する。空腹時データを使用して、空腹時インスリン（ｍＵ／ｍｌ）×空腹時グルコース（ｍＭ）／２２．５として計算したホメオスタシスモデル評価（ＨＯＭＡ）を判定する。
【０５３２】
経口グルコース負荷に対する血中グルコースおよびインスリン応答は、標準の食事を与えられたラットと比較して、高脂肪食を与えられたラットにおいてより高く、より持続すると予測される。高脂肪食を与えられたラットのＧＬＰ−１での処置は、経口グルコース負荷に対する血中グルコースおよびインスリン応答を正常化すると予期される。
【０５３３】
ホメオスタシスモデル評価（ＨＯＭＡ）は、高脂肪食を与えられたラットにおけるインスリン抵抗性の発症を確定し、高脂肪食を与えられたラットのＧＬＰ−１での処置は、インスリン抵抗性の発症を抑制すると予測される。
【０５３４】
インスリン感受性をさらに評価するために、骨格筋におけるインスリンシグナル伝達タンパク質Ａｋｔのリン酸化状態を、１）１０時間の絶食後、および２）経口グルコース充填を受けた１時間後に、測定する。グルコース摂取に対応して、Ａｋｔリン酸化は、標準の食事を与えられた対照の骨格筋において増加するが、高脂肪食を与えられたラットにおいて本質的に変化しないままであると予測され、インスリンシグナル伝達のレベルでのインスリン抵抗性の存在を確定する。高脂肪食を与えられたラットのＧＬＰ−１での処置は、グルコース摂取に対応して、Ａｋｔリン酸化を抑制するとさらに予測され、それは、インスリン感受性を示す。
【０５３５】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチドなどのミトコンドリア標的化抗酸化剤の投与が、高脂肪食を与えられたラットにおいて発症するインスリン抵抗性を予防することを示す。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩は、哺乳動物の対象におけるインスリン抵抗性を予防または処置する方法に有用である。
実施例３５：ＧＬＰ−１はヒト対象におけるミトコンドリア機能不全を予防する
【０５３６】
この実施例は、細胞内酸化還元環境におけるミトコンドリアによる変化とヒト対象におけるインスリン抵抗性との間の関連を示す。
【０５３７】
除脂肪からの透過処理した骨格筋線維束におけるミトコンドリアＨ2Ｏ2産生および呼吸、インスリン感受性（ＢＭＩ＝２１．６±１．２ｋｇ・ｍ−２、ＨＯＭＡ＝１．２±０．４）、および肥満／インスリン抵抗性（ＢＭＩ＝４３．０±４．ｌｋｇ・ｍ−２，ＨＯＭＡ＝２．５±０．７）雄対象を測定する。実験の日、対象を、一晩の絶食（約１２時間）後に、研究所に報告する。空腹時血液サンプルをグルコースおよびインスリンの判定のために得る。伸長および体重を記録し、骨格筋生検を、局所皮下麻酔下（１％リドカイン）で、経皮的針生検技法によって、外側広筋の外側面から得る。生検サンプルの一部を、タンパク質分析のために液体Ｎ２において急速冷凍し、別の部分を使用して、透過処理した線維束を調製する。
【０５３８】
ミトコンドリアＨ2Ｏ2産生は、コハク酸塩の滴定への除脂肪対象反応におけるものより肥満対象においてより高く、脂肪酸によって支持される基礎呼吸の間、より高いと予測される。基礎Ｏ２利用は、除脂肪および肥満対象において同様であると予測され、肥満対象におけるグルタミン酸塩／リンゴ酸塩／コハク酸塩およびパルミトイルカルニチン支持基礎呼吸が高い間、ミトコンドリアフリーラジカル漏出の速度が高い。最後に、合計細胞ＧＳＨ含有量およびＧＳＨ／ＧＳＳＧ比率は、肥満対象の骨格筋において低いと予測され、全体のより低い酸化還元緩衝液能力およびより酸化された細胞内酸化還元環境を示す。
【０５３９】
これらの結果は、ミトコンドリアＲＯＳ産生およびより酸化した骨格筋酸化還元環境への結果として生じる変化が、高脂肪食誘発性インスリン抵抗性の根本原因であることを示す。ミトコンドリアＨ2Ｏ2産生の予測された増加は、全体の細胞酸化還元環境における変化をもたらす主な要因であると予期される。したがって、本技術のＧＬＰ−１ペプチドなどのミトコンドリア標的化抗酸化剤の投与は、高脂肪食によって引き起こされる代謝機能不全を予防または補う。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩は、ヒト対象におけるインスリン抵抗性を予防または処置するための方法に有用である。
実施例３６：インスリン抵抗性の予防および処置におけるＧＬＰ−１
【０５４０】
インスリン抵抗性の予防および処置を実証するために、本技術のＧＬＰ−１ペプチドを、食事誘発性インスリン抵抗性の許容されたモデルである肥満（ｆａ／ｆａ）ズッカーラットに投与する。高脂肪食を与えられたＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラット（実施例１〜３で使用された通りの）と比較すると、肥満ズッカーラットは、同様の状態下で、かなりの度合の肥満およびインスリン抵抗性を発症すると予測される。実施例１〜３における通り、ミトコンドリア機能不全（例えば、増加したＨ2Ｏ2産生）は、ズッカーラットからの透過処理した線維に明確に現れると予測される。
【０５４１】
インスリン抵抗性の予防におけるＧＬＰ−１ペプチドの影響を実証するために、若いズッカーラット（約３〜４週間の年齢）は、約６週間、ＧＬＰ−１を投与される。これらの若いラットがインスリン抵抗性の兆候または症状を示していないときに、それらは、インスリン抵抗性を予防する方法の有効性を評価するための有用なモデルを提供する。ＧＬＰ−１（１．０〜５．０ｍｇ／ｋｇ体重）を、腹腔内に（ｉ．ｐ．）または経口的に（飲料水または経口経管栄養）、ラットに投与する。
【０５４２】
ＧＬＰ−１投与は、肥満ズッカーラットにおいて通常発症する全身および筋肉インスリン抵抗性の発症を軽減または予防すると予測される。測定される生理学的パラメータは、体重、空腹時グルコース／インスリン／遊離脂肪酸、経口グルコース耐性（ＯＧＴＴ）、インビトロ筋肉インスリン感受性（インビトロインキュベーション）、インスリンシグナル伝達のバイオマーカー（Ａｋｔ−Ｐ、ＩＲＳ−Ｐ）、透過処理した線維上で研究したミトコンドリア機能（呼吸、Ｈ2Ｏ2産生）、細胞内酸化ストレスのバイオマーカー（脂質過酸化、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比率、アコニターゼ活性）、およびミトコンドリア酵素活性を含む。対照動物は、ＧＬＰ−１を投与していない野生型ラットおよび肥満ラットを含む。本技術のＧＬＰ−１ペプチドによるインスリン抵抗性の予防の成功は、上に列挙したインスリン抵抗性またはミトコンドリア機能不全に関連するマーカーのうちの１つ以上の減少によって示される。
【０５４３】
ＧＬＰ−１ペプチドのインスリン抵抗性処置に対する影響を実証するために、ズッカーラット（約１２週間の年齢）は、約６週間、ＧＬＰ−１を投与される。これらのラットが、肥満およびインスリン抵抗性の兆候を示すとき、それらは、インスリン抵抗性を処置する方法の有効性を評価するための有用なモデルを提供する。ＧＬＰ−ｌ（１．０〜５．０ｍｇ／ｋｇ体重）を、腹腔内に（ｉ．ｐ．）、または経口的に（飲料水または経口経管栄養）、ラットに投与する。
【０５４４】
ＧＬＰ−１投与は、肥満ズッカーラットにおいて通常発症する全身および筋肉インスリン抵抗性の発症を減少させると予測される。測定されるパラメータは、体重、空腹時グルコース／インスリン／遊離脂肪酸、経口グルコース耐性（ＯＧＴＴ）、インビトロ筋肉インスリン感受性（インビトロインキュベーション）、インスリンシグナル伝達のバイオマーカー（Ａｋｔ−Ｐ、ＩＲＳ−Ｐ）、透過処理した線維上で研究したミトコンドリア機能（呼吸、Ｈ2Ｏ2産生）、細胞内酸化ストレスのバイオマーカー（脂質過酸化、ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比率、アコニターゼ活性）、およびミトコンドリア酵素活性を含む。対照は、ＧＬＰ−１を投与していない野生型ラットおよび肥満ラットを含む。本技術のＧＬＰ−１ペプチドによるインスリン抵抗性の処置の成功は、上に列挙したインスリン抵抗性またはミトコンドリア機能不全に関連するマーカーのうちの１つ以上の減少によって示される。
【０５４５】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、哺乳動物の対象におけるインスリン抵抗性を処置または予防するための方法に有用であることを示す。
実施例３７：ＧＬＰ−１は虚血−再灌流によって引き起こされる腎前性ＡＲＩを防ぐ
【０５４６】
この実施例は、虚血−再灌流（Ｉ／Ｒによって引き起こされる急性腎損傷（ＡＲＩ）から対象を保護することにおける本技術のＧＬＰ−１ペプチドの影響を実証する。
【０５４７】
８匹のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ系ラット（２５０〜３００ｇ）を、３つの群のうちの１つに割り当てる。（１）擬似手術（Ｉ／Ｒなし）、（２）Ｉ／Ｒ＋食塩水溶媒、および（３）Ｉ／Ｒ＋ＧＬＰ−１。ＧＬＰ−１（食塩水における３ｍｇ／ｋｇ）を、虚血の３０分前および再灌流の直前に投与する。対照動物に、同じ計画に従い、食塩水のみを与える。
【０５４８】
ラットを、ケタミン（９０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）およびキシラジン（４ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の混合物で、麻酔にかける。左腎臓血管茎を、マイクロクランプを使用して、３０〜４５分間閉塞させる。虚血期間の最後に、再灌流を、クランプを除去することによって、確立する。その時、対側腎臓を除去する。２４時間の再灌流後、動物を屠殺し、血液サンプルを、心臓穿刺によって得る。腎機能を、血中尿素窒素（ＢＵＮ）および血清クレアチニンのレベルを測定することによって、判定する（ＢｉｏＡｓｓａｙ  ＳｙｓｔｅｍｓＤＩＵＲ−５００およびＤＩＣＴ−５００）。
【０５４９】
腎臓形態学的検査：腎臓を、１０％の中性緩衝ホルマリンにおいて固定し、切開のためパラフィンワックスに埋め込む。３ミクロンの切片を、ヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）および過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）で染色し、光学顕微鏡法によって分析する。病変は、１）別個の細胞の有糸分裂および壊死、２）周囲の尿細管の生存を伴う近位曲尿細管に隣接する全ての細胞の壊死、３）内皮質を横切って広がる帯状の壊死を伴う遠位３番目の近位曲尿細管に限定された壊死、および４）近位曲尿細管の全ての３つのセグメントに影響を及ぼす壊死に基づいて、記録される。
【０５５０】
アポトーシスのＴＵＮＥＬアッセイ：腎組織切片を、脱パラフィンし、キシレン、段階的なアルコールシリーズ、および脱イオンしたＨ２Ｏで再水和し、２０μｇ／ｍｌのプロテイナーゼＫにおいて、２０分間、室温でインキュベートし、原位置での細胞死検出ＰＯＤキット（Ｒｏｃｈｅ、ＩＮ、ＵＳＡ）を、製造業者の指示に従い使用する。手短に言えば、腎臓切片における内在性ペルオキシダーゼ活性を、１０分間のメタノールにおける０．３％のＨ2Ｏ2を伴うインキュベーションにより、ブロックする。次いで、切片を、３０分間、３７℃で、暗がりで、加湿チャンバーにおいて、ＴＵＮＥＬ反応混合物と共にインキュベートする。洗浄後、スライドを、３０分間、室温で、加湿チャンバーにおいて、５０〜１００μｌのコンバーター−ＰＯＤと共にインキュベートする。スライドを、ＤＡＢ溶液において、インキュベートし（１〜３分）、ヘマトキシリンで対比染色し、段階的なシリーズのアルコールによって脱水し、顕微鏡法のため、Ｐｅｒｍｏｕｎｔ中に取り付ける。
【０５５１】
免疫組織化学的検査：腎臓切片をパラフィンブロックから切断し、スライドに取り付ける。キシレンでのパラフィンの除去後、スライドを、段階的なアルコールシリーズおよび脱イオンしたＨ２Ｏを使用して、再水和する。スライドを、抗原回復のため、クエン酸塩緩衝液（１０ｍＭのクエン酸、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、ｐＨ６．０）において加熱する。内在性ペルオキシダーゼを、メタノール中の過酸化水素０．３％でブロックする。次いで、免疫組織化学的検査を、１：２００希釈でのヘムオキシゲナーゼ−Ｉ（ＨＯ−１）（ラット抗ＨＯ−１／ＨＭＯＸ１／ＨＳＰ３２モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）に対する一次抗体、および二次抗体（ＨＲＰ共役ヤギ抗ラットＩｇＧ、ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ  ＡＢＣ（ＶＥＣＴＯＲ  Ｌａｂ  Ｉｎｃ．ＭＩ、ＵＳＡ））を使用して実施する。基質試薬３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ、Ｓｉｇｍａ、ＭＯ、ＵＳＡ）を使用して、スライドを、対比染色のために使用されるヘマトキシリンで、発展させる。
【０５５２】
ウェスタンブロット法：腎臓組織を、氷上の２ｍｌのＲＩＰＡ溶解緩衝液（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ、ＵＳＡ）において均質化し、３０分間、５００×ｇで、遠心分離して、細胞片を除去する。一定分量の上澄みを−８０℃で保存する。各サンプルからの３０μｇのタンパク質を含む一定分量を、添加液において懸濁し、５分間沸騰させ、１０％のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル電気泳動を受ける。タンパク質は、ＰＶＤＦ膜に移送され、１時間、１％のウシ血清アルブミンで、５％の脱脂粉乳においてブロックされ、１：２０００希釈の抗ＨＯ１／ＨＭＯＸｌ／ＨＳＰ３２または１：１０００で希釈された抗ＡＭＰＫα−１、モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）と共にインキュベートされる。特異的結合を、西洋ワサビペルオキシダーゼ共役二次抗体を使用して検出し、それは、強化化学発光検出法（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用して発達する。
【０５５３】
ＡＴＰ含有量アッセイ：採取の直後に、腎臓組織を、１０ｍＭのＤＴＴ、２ｍＭのＥＤＴＡを含む１０ｍｌの５％トリクロロ酢酸内に配置し、氷上で均質化し、１０分間氷上で、インキュベートし、１０分間、２０００×ｇで遠心分離し、１０ＮのＫＯＨを使用して、ｐＨ７．６で中和する。１０分間の２０００×ｇでの遠心分離後、一定分量の結果として生じる上澄みを、−８０℃で保存する。ＡＴＰを、市販のキット（ＡＴＰ生物発光キット、Ｓｉｇｍａ、ＭＯ、ＵＳＡ）を使用して、生物発光によって測定する。
【０５５４】
ミトコンドリア機能：腎臓ミトコンドリアを単離し、本明細書に記載される手順に従い酸素消費測定をする。
【０５５５】
ＧＬＰ−１処置は、虚血および再灌流後のラットにおけるＢＵＮおよび血清クレアチニン値を改善し、虚血および再灌流後の尿細管細胞アポトーシスを予防すると予測される。ＧＬＰ−１は、虚血および再灌流後の尿細管細胞傷害を予防するとさらに予測される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチドが、虚血−再灌流によって引き起こされるＡＲＩの発生率の減少に有効であることを示す。
【０５５６】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、虚血によって引き起こされるＡＲＩから対象を保護するための方法に有用であることを示す。
実施例３８：ＧＬＰ−１は尿管閉塞によって引き起こされる腎後性ＡＲＩを防ぐ
【０５５７】
尿管閉塞によって引き起こされるＡＲＩから対象を保護する本発明のＧＬＰ−１ペプチドの影響は、片側尿管閉塞（ＵＵＯ）の動物モデルにおい実証される。
【０５５８】
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットは、無菌条件下で、正中腹部切開による４〜０絹糸縫合で片側尿管結紮を受ける。尿管閉塞を、尿管膀胱移行部直上の左尿管の下端部を結紮することによって実行する。ＧＬＰ−１（ｌｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８）または対照溶媒（ｎ＝１６）を、ＵＵＯより一日前に、およびＵＵＯ後に１４日間続けて、腹腔内に投与する。
【０５５９】
腎臓組織学的検査：パラフィンに埋め込まれた検体のトリクローム切片を、有資格の病理医（ＳＶＳ、腎臓病理学専門家）によって検査し、０−＋＋＋の尺度で、線維症記録をする。
【０５６０】
免疫組織学的分析：マクロファージの免疫組織化学染色を、以前に記載した通りのＥＤ−ｌに対するモノクローナル抗体を使用して、実行する。マクロファージを、盲検様式において、２人の別個の研究者によって、１０高倍率視野（×４００）において計数する。アポトーシスを、実施例１に記載した通りのＴＵＮＥＬアッセイによって測定する。線維芽細胞の存在を、ＤＡＫＯ＃Ｓ１００−Ａ４抗体（１：１００希釈）を使用して、実施例１で記載された通りの免疫組織化学的検査を使用して検査する。抗原を、２０分間、プロテイナーゼＫで、細胞をインキュベートすることによって、回復する。残存免疫ペルオキシダーゼプロトコルを、通例の手順に従い実行する。
【０５６１】
Ｓ１００−Ａ４染色は、紡錘状間質細胞中および炎症細胞の周囲に存在すると予期される。紡錘状細胞のみを定量化する。８〜０Ｈ  ｄＧの染色を、抗原回復のためのプロテイナーゼ  Ｋおよび１：２００〜１：５００の希釈でのＪａｐａｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇによって提供された抗体を使用して行う。
【０５６２】
ポリメラーゼ連鎖反応分析：ヘムオキシゲナーゼ−ｌ（ＨＯ−ｌ）の腎臓発現を、以下に従いＲＴ−ＰＣＲによって測定する。ラット腎臓を、採取し、使用まで−８０℃で保存する。合計ＲＮＡを、トリゾール（Ｒ）−クロロホルム抽出手順を使用して、抽出し、ｍＲＮＡを、製造業者の指示に従いＯｌｉｇｏｔｅｘ  ｍＲＮＡ抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用して、精製する。ｍＲＮＡ濃度および純度を、２６０ｎｍで、吸光度を測定することによって、判定する。ＲＴ−ＰＣＲを、Ｑｉａｇｅｎ  Ｏｎｅ−ｓｔｅｐ  ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）および自動熱循環器（ＴｈｅｒｍｏＨｙｂｒｉｄ、ＰＸ２）を使用して、実施する。熱循環を、以下の通りに実行する。１５分間、９５℃での初期起動ステップに続いて、４５秒間、９４℃での３５回の変性、３０秒間、６０℃でのアニール、６０秒間、７２℃での拡張。増幅産物を、２％アガロースゲル電気泳動で分離し、臭化エチジウム染色によって可視化し、ＩｍａｇｅＪ濃度測定分析ソフトウェアを使用して、定量化する。ＧＡＰＤＨを、内部対照として使用する。
【０５６３】
非閉塞対側腎臓は、あるとすれば、尿細管、糸球体、または間質における非常に少ない炎症または線維症を示し、対照動物の閉塞した腎臓は、中程度の（１  ２＋）髄質トリクローム染色および限局性骨盤周囲（ｐｅｒｉｐｅｌｖｉｃ）１＋染色の領域を示すと予測される。皮質は、髄質よりも少ない線維症を示すと予測される。対照の閉塞した腎臓は、中程度の炎症を示すとも予測され、一般的に、皮質において１＋および髄質において２＋として記録される。ＧＬＰ−１で処置された閉塞した腎臓は、皮質において０−トレースおよび髄質においてｔｒ−１＋での、著しく少ないトリクローム染色を示すと予期される。したがって、ＧＬＰ−１処置は、ＵＵＯモデルにおける髄質の線維症を減少させると予測される。
【０５６４】
線維芽細胞を、線維芽細胞特異的タンパク質（ＦＳＰ−ｌ、別名Ｓ１００−Ａ４）のために免疫ペルオキシダーゼによって可視化する。ＦＳＰ−ｌの増加した発現が、閉塞した腎臓において見出されると予測される。ＧＬＰ−１（１ｍｇ／ｋｇ）は、閉塞した腎臓における線維芽細胞浸潤の量を著しく減少させるとも予測される。したがって、ＧＬＰ−１は、ＵＵＯモデルにおける線維芽細胞発現を減少させると予測される。
【０５６５】
未処置腎臓において、２週間のＵＵＯは、対側腎臓と比較したときに、アポトーシスの尿細管細胞の著しい増加をもたらすと予測される。ＧＬＰ−１（１ｍｇ／ｋｇ）は、閉塞した腎臓における尿細管アポトーシスを著しく減少させるとさらに予測される。したがって、ＧＬＰ−１は、ＵＵＯモデルにおける尿細管アポトーシスを減少させると予測される。
【０５６６】
２週間のＵＵＯ後の対側腎臓と比較したときに、閉塞した腎臓内へのマクロファージ浸潤の著しい増加があることが予測される。１ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−１での処置は、閉塞した腎臓におけるマクロファージ浸潤を著しく減少させるとさらに予期される。したがって、ＧＬＰ−１は、ＵＵＯモデルにおけるマクロファージ浸潤を減少させると予測される。
【０５６７】
閉塞した腎臓は、ＰＣＮＡの免疫ペルオキシダーゼによって可視化される通り、腎尿細管細胞の増殖の増加に関連すると予測される。ＧＬＰ−１は、閉塞した腎臓における腎臓尿細管増殖の著しい減少を引き起こすと予測される。尿細管細胞増殖は、１ｍｇ／ｋｇの用量で、減少し、３ｍｇ／ｋｇの用量で、３．５倍も減少すると予測される。したがって、ＧＬＰ−１は、ＵＵＯモデルにおける腎尿細管細胞増殖を抑制すると予測される。
【０５６８】
閉塞した腎臓は、ヘムオキシゲナーゼ−ｌ（ＨＯ−ｌ）および８−ＯＨｄＧの増加した発現によって測定されるときに、対側腎臓と比較して、酸化的損傷の上昇を示すと予測される。ＧＬＰ−１での処置は、閉塞した腎臓におけるＨＯ−ｌ発現を減少させると予測される。８−ＯＨｄＧ染色は、閉塞した腎臓の尿細管区画および間質区画の両方において検出され、８−ＯＨｄＧ陽性細胞の数は、対側腎臓と比較して、閉塞した腎臓において著しく増加し、８−ＯＨｄＧ陽性細胞の数は、ＧＬＰ−１処置によって著しく減少されると予測される。したがって、ＧＬＰ−１は、ＵＵＯモデルにおいて酸化的損傷を減少させると予測される。
【０５６９】
これらの結果は、ＧＬＰ−１が、ＵＵＯによって引き起こされるＡＲＩの動物モデルにおける、間質性線維症、尿細管アポトーシス、マクロファージ浸潤、および尿細管増殖を減少させるのに有効であることを示す。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、尿管閉塞によって引き起こされるＡＲＩから対象を保護するための方法に有用である。
実施例３９：造影剤誘発性腎症（ＣＩＮ）の予防および処置におけるＧＬＰ−１
【０５７０】
この実施例は、ＡＲＩの動物モデルにおける造影剤誘発性腎症（ＣＩＮ）の予防および処置における本技術のＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。
【０５７１】
動物モデル：Ａｇｍｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４：１０６９−１０７５（１９９４）によって記載される放射性造影剤誘発性腎不全のラットモデルを使用する。ヒトと同様に、放射性造影剤は、正常な腎機能を有する動物に投与したとき、一般的に、無毒性である。しかしながら、放射性造影剤は、腎機能障害を有する動物においてＡＲＩを誘発し得る。このモデルにおいて、腎機能障害を、インドメタシン（１０ｍｇ／ｋｇ）およびＬ−ＮＡＭＥ（１０ｍｇ／ｋｇ）の投与によって誘発する。動物を、３つの群のうちの１つに割り当てる。
１．  対照（ｎ＝８）
２．  インドメスチンおよびＬ−ＮＡＭＥを１５分毎に投与し、続いて、イオタラム酸塩（６ｍｌ／ｋｇ）（ｎ＝７）を投与する
３．  ２群においてインドメタシン／Ｌ−ＮＡＭＥ／イオタラム酸塩を投与する１５分前に、ＧＬＰ−１（３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を投与し、薬剤曝露直後に（ｎ＝９）、２回目の投与のＧＬＰ−１（３ｍｇ／ｋｇ）を投与する。
【０５７２】
腎機能：腎機能を、ベースライン時、および染料投与２４時間後に、ＧＦＲを判定することによって、評価する。ＧＦＲを、染料投与前および後に、２４時間間隔にかけて推定されるクレアチニンクリアランスによって判定する。クレアチニンクリアランスを、ラズマおよび尿クレアチニンレベル（Ｂｉｏａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＤＩＣＴ−５００）ならびに尿量を測定することによって、測定する。
【０５７３】
腎臓組織学的検査：腎臓を、１０％の中性緩衝ホルマリン中に固定し、切開のためにパラフィンワックス中に埋め込む。３ミクロン切片をヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）および過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）で染色し、有資格の病理医によって光学顕微鏡法により分析する。アポトーシスを、ＴＵＮＥＬ標識化によって可視化する。
【０５７４】
対照動物は、最初の２４時間の期間（約２３５．０±３０．５μｌ／分／ｇ）と２回目の２４時間の期間（約２２３．７±４４．０μｌ／分／ｇ）との間のＧＦＲにおける著しい差は示さないと予測される。造影剤を、インドメタシンおよびＬ−ＮＡＭＥで前処置された動物に投与するとき、ＧＦＲは、２４時間以内に低下し、染料投与前および後のＧＬＰ−１での処置は、腎機能の低下を減少させると予測される。
【０５７５】
ＰＡＳ染料は、対照腎臓における正常形態、ならびに造影剤に曝露された腎臓における腎臓刷子縁の損失および空胞形成を示すと予測される。これらの影響は、ＧＬＰ−１処置によって軽減されるとさらに予測される。したがって、ＧＬＰ−１は、放射性造影剤に曝露された対象における腎損傷を予防すると予測される。
【０５７６】
対照腎臓は、わずかなアポトーシス細胞を示すが、一方で、造影剤に曝露された腎臓は、多数のアポトーシス細胞を有すると予測される。ＧＬＰ−１での処置は、造影剤に曝露された腎臓におけるアポトーシス細胞の数を減少させるとさらに予測される。
【０５７７】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチドが、放射性造影剤曝露によって誘発される腎損傷を減少させるのに有効であることを示す。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、造影剤曝露によって引き起こされる急性腎損傷を処置または予防するための方法に有用である。
実施例４０：糖尿病の対象におけるＣＩＮの予防および処置におけるＧＬＰ−１
【０５７８】
この実施例は、糖尿病の対象における造影剤誘発性腎症（ＣＩＮ）の予防および処置における本技術のＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。
【０５７９】
動物モデル：糖尿病によって引き起こされる腎機能障害は、造影剤誘発性腎症の主な素因のうちの１つである（ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏ．，２００８，５１，１４１９−１４２８）。この実験において、合計５７匹のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットに、６週間、高脂肪食を与え、続いて、９週間の期間の間低用量のストレプトゾトシン（３０ｍｇ／ｋｇ）の投与。血中グルコース、血清クレアチニン、およびシスタチンＣを測定する。以下の基準を満たす動物（ｎ＝２０）は、ＣＩＮ研究に進む。Ｓｃｒ＞２５０μＭ、シスタチンＣ＞７５０ｎｇ／ｍｌ、および血中グルコース＞＝１６．７μＭ。
【０５８０】
動物は、イオヘキソールおよびＧＬＰ−１、またはイオヘキソールおよび食塩水対照溶媒を投与される。
【０５８１】
１日目、血清サンプルを回収し、合計尿タンパク質を、ブラッドフォードアッセイを使用して測定する。２および３日目、３ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ−１または対照溶媒を、造影剤注入（６ｍＬ／ｋｇ、静脈（尾静脈））の３０分前に、皮下に（ｓ．ｃ．）投与する。ＧＬＰ−１または溶媒投与を、染料投与後２時間および２４時間時点で繰り返す。血清および尿サンプルを、４および５日目に回収する。動物を５日目に安楽死させ、重要臓器を採取する。サンプルをスチューデントｔ検定によって分析し、差は、ｐ＜０．０５で有意であると考えられる。
【０５８２】
腎機能：腎機能を、ベースライン時、染料投与の４８時間および７２時間後に、血清および尿クレアチニンを判定することによって評価する。クレアチニンクリアランスを、血清および尿クレアチニンならびに尿量に基づいて計算する。尿タンパク質濃度を、ブラッドフォードタンパク質アッセイキット（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）によって判定し、シスタチンＣを、ＷｅｓｔａｎｇラットシスタチンＣキット（Ｓｈａｎｇｈａｉ、Ｐ．Ｒ．Ｃ．）を使用して、測定する。
【０５８３】
対照動物は、造影剤曝露後に、血清シスタチンＣ（ＡＫＩバイオマーカー）のレベルの上昇およびクレアチニンクリアランスの減少を示しＧＬＰ−１での処置がこれらの影響を軽減すると予測される。したがって、本技術のＧＬＰ−１ペプチドは、糖尿病の動物モデルにおける放射性造影剤によって引き起こされる腎機能不全を減少させると予測される。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩は、造影剤によって引き起こされる急性腎損傷から糖尿病の対象を保護するための方法に有用である。
実施例４１：グリセロール誘発性横紋筋融解症動物モデルにおけるＣＩＮの予防および処置におけるＧＬＰ−１
【０５８４】
この実施例は、グリセロール誘発性横紋筋融解症動物モデルにおけるＣＩＮの予防および処置における本技術のＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。
【０５８５】
動物モデル：この実施例は、以前に記載された通りのグリセロール誘発性横紋筋融解症を受ける動物を使用する。Ｐａｒｖｅｚ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．，２４：６９８−７０２（１９８９）；Ｄｕａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｒａｄｉｏｌｏｇｉｃａ，４１：５０３−５０７（２０００）。３００〜４００ｇの体重を有するＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットを、２４時間、脱水させ、続いて、１０ｍｌ／ｋｇの用量で２５％のグリセロール溶液（ｖ／ｖ）の筋肉内（ｉ．ｍ．）注入。２４時間後、動物は、ＧＬＰ−１または対照溶媒を含む造影剤を、以下に従い投与される。１）２５％グリセリン＋食塩水＋ＰＢＳ（ｎ＝６）、２）２５％グリセリン＋ジアトリゾ酸＋ＰＢＳ（ｎ＝７）、３）２５％グリセリン＋ジアトリゾ酸＋ＧＬＰ−１（ｎ＝７）。ＡＲＩにおけるＧＬＰ−１の影響を、各群からの動物における腎機能を比較することによって、実証する。サンプルをスチューデントｔ検定によって分析し、差は、ｐ＜０．０５で有意であると考えられる。
【０５８６】
腎機能：腎機能を、ベースライン時、脱水の２４時間後、および造影剤投与の４８時間後に血清および尿クレアチニンを投与することによって評価する。クレアチニンクリアランスを、血清および尿クレアチニンレベルならびに尿量に基づいて計算する。尿アルブミン濃度を、競合ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、判定する。
【０５８７】
造影剤を、グリセロール誘発性横紋筋融解症を有する対象に投与するとき、クレアチニンクリアランスは減少すると予測される。ＧＬＰ−１での処置は、クレアチニンクリアランスの減少を軽減または防止するとさらに予測される。
【０５８８】
アルブミン尿は、糸球体膜の透過性の増加の指標であり、造影剤への曝露に起因し得る。造影剤を、グリセロール誘発性横紋筋融解症を有する対象に投与するとき、アルブミン尿は増加すると予測される。ＧＬＰ−１での処置は、かかる対象におけるアルブミン尿を軽減または防止するとさらに予測され、ＧＬＰ−１が、このモデルにおける糸球体基底膜の透過性に対する保護効果を有することを示唆する。
【０５８９】
ＰＡＳ染色は、グリセロール誘発性横紋筋融解症、ならびに糸球体の膨張および尿細管タンパク質円柱沈着を有する対象への造影剤の投与後に、近位尿細管刷子縁の損失を示すと予測される。ＧＬＰ−１での処置は、かかる対象におけるこれらの影響を軽減または防止するとさらに予測される。
【０５９０】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、横紋筋融解症を有する対象におけるＣＩＮの予防および処置のための方法に有用であることを示す。
実施例４２：腎毒性ＣＣ１４慢性腎臓損傷の予防および処置におけるＧＬＰ−１
【０５９１】
この実施例は、四塩化炭素（ＣＣ１４）誘発性慢性腎毒性の予防および処置のための本技術のＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。
【０５９２】
動物モデル：反応性ラジカルの生成は、四塩化炭素誘発性腎毒性に関係し、それは、脂質過酸化および機能不全タンパク質の蓄積を特徴とする。Ｏｚｔｕｒｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｕｒｏｌｏｇｙ，６２：３５３−３５６（２００３）。この実施例は、四塩化炭素（ＣＣ１４）誘発性慢性腎毒性の予防のためのＧＬＰ−１ペプチドの投与の影響を実証する。
【０５９３】
設計および実験のプロトコルを研究する。２５０ｇの体重を有するＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットに、０．３５ｇ／Ｌのフェノバルビタール溶液（管腔水）を、２週間与え、以下の群のうちの１つに割り当てる。１）管腔水＋オリーブオイル、胃腸内（ｉ．ｇ．）に、１ｍｌ／ｋｇ、１周間に２回；ＰＢＳ皮下に（ｓ．ｃ．）、一週間に５日、２）管腔水＋５０％ＣＣ１４、ｉ．ｇ．、２ｍｌ／ｋｇ、一週間に２回；およびＰＢＳｓ．ｃ．一週間に５日、３）管腔水＋５０％ＣＣ１４．ｉ．ｇ．、２ｍｌ／ｋｇ、一週間２回；ＧＬＰ−１（１０ｍｇ／ｋｇ）ｓ．ｃ．一週間に５日。治験を合計７週間行う。
【０５９４】
５週間目の最後に、各群からの４匹の対象を、肝臓病理組織学切開および線維症実験のために屠殺する。７週間目の最後に、残りの対象を屠殺し、病理組織学実験のため腎臓および肝臓組織を採取する。
【０５９５】
腎臓組織学的検査：腎臓を、１０％の中性緩衝ホルマリン中に固定し、切開のためにパラフィンワックス中に埋め込む。３ミクロン切片を、ヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色し、公認の病理医によって光学顕微鏡法により分析する。
【０５９６】
ＧＬＰ−１は、腎尿細管をＣＣｌ４腎毒性から保護すると予測される。Ｈ＆Ｅ染色は、ＣＣｌ４曝露が、尿細管上皮細胞変性および壊死をもたらし、ＧＬＰ−１で処置された動物が、対照動物と比較して、著しい病理組織学的変化を示さないことを示す。したがって、本技術のＧＬＰ−１ペプチドは、ＣＣｌ４腎毒性を予防または処置するための方法に有用である。
実施例４３：シスプラチン誘発性ＡＲＩの予防におけるＧＬＰ−１
【０５９７】
この実施例は、シスプラチン誘発性ＡＲＩの予防における本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩の使用を実証する。
【０５９８】
実験のプロトコル：Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラット（３５０〜４００ｇ）は、１日目に、腹腔内に（ｉ．ｐ．）、シスプラチン（７ｍｇ／ｋｇ）を単回投与される。対象は、シスプラチン投与の直前に、さらに３日間、１日１回ＧＬＰ−１（３ｍｇ／ｋｇ）（ｎ＝８）または食塩水溶媒（ｎ＝８）を、皮下に受ける。対象を、尿採取のため、治験の最後の２４時間、代謝ケージに配置する。治験の最後に、血液サンプルを、尾静脈および採取された腎臓から取る。
【０５９９】
腎機能：腎機能を、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、血清クレアチニン、尿クレアチニン、および尿タンパク質を測定することによって評価する。ＧＦＲを、血清および尿クレアチニン、ならびに尿量から判定されるクレアチニンクリアランスから評価する。
【０６００】
腎臓組織学的検査：腎臓を、１０％の中性緩衝ホルマリン中に固定し、切開のためにパラフィンワックス中に埋め込む。３ミクロン切片を、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）で染色し、光学顕微鏡法によって分析する。
【０６０１】
溶媒対照対象は、シスプラチン投与より前の体重と比較したとき、シスプラチン投与後の体重の著しい減少を示し、ＧＬＰ−１処置は、この影響を軽減または防止すると予測される。血清クレアチニンは、溶媒対照対象を実質的に増加させ、ＧＬＰ−１処置はこの影響を軽減または防止するとさらに予測される。
【０６０２】
溶媒対照対象は、シスプラチン処置後のＢＵＮの著しい増加を示し、ＧＬＰ−１処置はこの影響を軽減または防止すると予測される。
【０６０３】
これらの結果は、ＧＬＰ−１がシスプラチン誘発性腎症から肝臓を保護することを示す。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、シスプラチンまたは同様の腎毒性薬剤によって引き起こされる急性腎損傷から対象を保護するための方法に有用である。
実施例４４：急性肝不全（ＡＬＦ）の予防および処置におけるＧＬＰ−１
【０６０４】
この実施例は、急性肝不全（ＡＬＦ）の予防および処置における本技術のＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。
【０６０５】
好適なＡＬＦの動物モデルは、外科手技、中毒性肝障害、またはそれらの組み合わせを使用する。Ｂｅｌａｎｇｅｒ＆Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｂｒａｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ，２０：４０９−４２３（２００５）を参照されたい。ＧＬＰ−１または対照溶媒を、毒性傷害または外科的傷害より前、または同時に投与する。肝機能を、血清肝酵素（トランスアミナーゼ、アルカリホスファターゼ）、血清ビリルビン、血清アンモニア、血清グルコース、血清乳酸塩、または血清クレアチニンを測定することによって評価する。ＡＬＦの予防における本発明のＧＬＰ−１ペプチドの有効性は、対照対象と比較したとき、上のマーカーによって示される通り、ＡＬＦの発生率または重症度の減少によって示される。
【０６０６】
毒性または外科的肝臓傷害は、肝機能の低下を引き起こし、ＧＬＰ−１での処置は、これらの影響を軽減または防止すると予測される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、ＡＬＦを予防または処置するための方法に有用であることを示す。
実施例４５：熱傷後の代謝亢進の予防または処置におけるＧＬＰ−１
【０６０７】
代謝亢進（ＨＹＰＭ）は、熱傷の代謝障害の顕著な特徴である。エネルギー消費（ＥＥ）の増加は、脂質酸化の全エネルギー産生への寄与の増加を伴い、基質酸化の加速および燃料利用の変化に関連する。ミトコンドリア機能不全は、ＨＹＰＭ発症と密接に関係する。この実施例は、ＨＹＰＭの予防および処置における本技術のＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。
【０６０８】
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ系ラットを３つの群へと無作為に選ぶ。擬似熱傷（ＳＢ）、食塩水処置を伴う熱傷（Ｂ）、およびペプチド処置を伴う熱傷（ＢＰ）。カテーテルを、頸静脈および頸動脈内に外科的に配置する。ＢＰ動物群は、即座の輸液蘇生を伴い、背部を、１００℃の水中に１２秒浸漬することによって、３０％の全身表面積全層熱傷を受ける。ＢＰ動物は、３日間ＧＬＰ−１（２ｍｇ／ｋｇ１２時間毎）の静脈内注入を受ける。動物のＥＥを、ＴＳＥ間接熱量測定システム（ＴＳＥ  Ｃｏ．、Ｇｅｒｍａｎｙ）において、１２時間監視する。
【０６０９】
Ｂ群の動物は、ＳＢ群の動物と比較して、ＥＥの著しい増加を示し、ＧＬＰ−１での処置は、この影響を軽減または防止すると予測される。これらの結果は、ＧＬＰ−１での処置が、熱傷誘発性ＨＹＰＭを予防または軽減することを示す。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩は、熱傷および二次合併症の処置を必要とする対象における熱傷および二次合併症を処置するための方法に有用である。
実施例４６：ＧＬＰ−１は熱傷誘発性肝臓アポトーシスを防ぐ
【０６１０】
全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）および多臓器不全（ＭＯＦ）は、重度の熱傷患者における罹患率および死亡率の主な原因である。この実施例は、これらの影響の防止におけるＧＬＰ−１の使用を実証する。
【０６１１】
６〜８週間の年齢の雄のＣ５７ＢＬマウスは、３０％の全身表面積（ＴＢＳＡ）熱傷を受け、続いて、食塩水溶媒またはＧＬＰ−１ペプチド（５ｍｇ／ｋｇ体重）を毎日注入される。微温（約３７℃）に曝露された体重および年齢が同等である擬似熱傷群を対照として提供する。肝臓組織を、熱傷処置の１、３、および７日後に回収し、アポトーシス（ＴＵＮＥＬ）、活性化カスパーゼレベル（ウェスタンブロット）、およびカスパーゼ活性（酵素アッセイ）のために分析する。
【０６１２】
熱傷は、検査した全ての日において対照対象の肝臓におけるアポトーシスの比率を増加させると予測され、最も劇的な増加は、熱傷後７日目に起こると予想される。ＧＬＰ−１ペプチドでの処置は、この影響を軽減または防止するとさらに予測される。
【０６１３】
ウェスタンブロット分析は、擬似対照群と比較したときに、熱傷後に、活性化カスパーゼ−３の進行性増加を明らかにすると予測される。ＧＬＰ−１での処置は、熱傷後、３および７日目に、カスパーゼ−３活性を軽減または抑制するとさらに予測され、擬似対照動物のものと同様の活性化カスパーゼ−３レベルをもたらす。カスパーゼ活性は、熱傷後７日目に著しく増加し、ＧＬＰ−１ペプチドでの処置は、カスパーゼ活性を、擬似対照群のそれと統計学的に異ならないレベルへと減少させると予測される。対照対象と比較したときに、熱傷後にＧＬＰ−１ペプチドで処置されたマウスにおけるタンパク質酸化の減少があるとさらに予測される。
【０６１４】
これらの結果は、ＧＬＰ−１がアポトーシスシグナル伝達経路の熱傷誘発性活性およびその後の肝臓アポトーシスを予防することを示す。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩は、熱傷に続発する肝損傷などの全身性臓器障害を予防または処置するための方法に有用である。
実施例４７：熱傷後の創傷収縮の予防におけるＧＬＰ−１
【０６１５】
この実施例は、創傷収縮の予防における本技術のＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。
【０６１６】
損傷が可逆的であり得る凝固組織周りの有意な領域を伴う、熱創傷は、典型的に、深さおよび重症度において不均一であり、炎症性組織損傷は予防され得る。創傷収縮は、全層開放創、および特に全層熱傷の大きさを縮小させる過程である。収縮および皮下線維組織の形成中に発生する張力は、組織奇形、関節の固定屈曲、または固定伸長（創傷が関節上の領域を含む場合）をもたらし得る。かかる合併症は、熱傷治癒に特に関連する。組織に損傷がない場合、創傷収縮は起こらず、生存可能な組織が創傷に残っておらず、かつ熱傷が全層である場合、最大収縮が起こる。
【０６１７】
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラット（雄、３００〜３５０ｇ）を、熱傷（６５℃の水、２５秒、下背部）の１時間前に、腹腔内への１ｍｇのＧＬＰ−１ペプチド投与（約３ｍｇ／ｋｇ）で前処置し、続いて、創傷（１ｍｇ）へのＧＬＰ−１の局所適用、および７２時間の１２時間毎に１回の腹腔内への１ｍｇのＧＬＰ−１ペプチド投与。創傷を、熱傷後に最大３週間観察する。
【０６１８】
創傷は、創傷の大きさの測定値として定量化される堅い瘡蓋のように見えてくると予測される。熱傷が、対照と比較して、この対象においてあまり重症でないので、緩徐な創傷収縮速度が、対照対象と比較したときに、ＧＬＰ−１処置群において観察されると予測される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、熱傷に関連する創傷を処置するための方法に有用であることを示す。
実施例４８：ＧＬＰ−１は熱傷の骨格筋機能不全を緩和する
【０６１９】
この実施例は、熱傷後の合併症の予防および処置におけるＧＬＰ−１の使用を実証する。
【０６２０】
熱傷における骨格筋ミトコンドリア機能不全の主な原因は、活性酸素種（ＲＯＳ）のミトコンドリア産生の刺激およびミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）への酸化的損傷による酸化的リン酸化（ＯＸＰＨＯＳ）における欠損の結果であると思われる。この仮説は、ＡＴＰ合成速度が、著しく減少し、ＲＯＳ産生が熱傷に応じて、骨格筋において増加することを示すデータによって支持される。この進行は、熱傷病態生理の根底にあり、それは骨格筋消耗および悪液質を誘発する。
【０６２１】
臨床的に関連するマウスの熱傷モデルを使用して、熱傷誘発性ミトコンドリア機能不全および小胞体（ＥＲ）ストレスへのＧＬＰ−１の影響を実証する。局所皮膚熱傷（３秒間９０℃）直下の腓腹筋の酸化還元状態を、窒素酸化物ＥＰＲによって評価する。筋肉における酸化還元状態は、熱傷によって損なわれ、熱傷後６時間時点で、最も劇的な影響を伴うと予測される。
【０６２２】
ＧＬＰ−１（３ｍｇ／ｋｇ）ペプチドを、熱傷３０分前、および熱傷直後に、腹腔内に投与する。６時間時点で、ペプチド処置は、窒素酸化物減少速度を著しく増加させると予測され、ＧＬＰ−１処置は、熱傷下筋肉における酸化ストレスを減少させることを実証する。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、骨格筋機能不全などの熱傷の二次合併症を予防または防止する方法に有用であることを示す。
実施例４９：ＧＬＰ−１は熱傷後の組織損傷の進行を軽減する
【０６２３】
この実施例は、熱傷後の組織損傷進行の防止におけるＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。結果は、ＧＬＰ−１が、
【０６２４】
部分層性熱創傷における創傷治癒（すなわち、治癒を加速し、瘢痕の減少を引き起こす）を改善することを示す。
【０６２５】
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ系ラットを３つの群へと無作為に選ぶ。擬似熱傷（ＳＢ）、食塩水処置を伴う熱傷（Ｂ）、およびペプチド処置を伴う熱傷（ＢＰ）。ＢＰ動物群は、即座の輸液蘇生を伴い、背脳体を、１００℃の水中に１２秒浸漬することによって、３０％の全身表面積全層熱傷を受ける。ＢＰ動物は、３日間のＧＬＰ−１（２ｍｇ／ｋｇ１２時間毎）の静脈内注入を受ける。創傷上皮再形成、収縮、および深さを、全体的な形態によって、および組織学的に２１日間の期間にわたって評価する。この目的のため、傷創直後、暗いマークを、創傷縁ならびに縁から１ｃｍ離れた所に、動物の皮膚の上に適用する。創傷を、２１日かけてデジタル撮影し、画像解析ソフトウェアを使用して、創傷の領域（瘡蓋として定義される）を測定する。創傷部位からマークの間隔の距離を使用して、創傷収縮を評価する。
【０６２６】
選択された時間の時点で、創傷を、動物から採取する。第２度から第３度創傷への進行が、熱傷後の最初の４８時間時点で主に起こると予期されるので、サンプルを、１２、２４、および４８時間時点で採取する。創傷治癒過程への長期の影響を監視するために、サンプルを、２、７、１４、および２１日時点で採取する組織を固定および埋め込み、創傷の中心を横切る切片を、Ｈ＆Ｅおよびトリクローム染色のために回収する。
【０６２７】
皮膚の毛包のアポトーシスを、ＴＵＮＥＬ標識化、および熱傷後０〜４８時間時点で得られた皮膚サンプルを使用して活性化したカスパーゼ−３免疫染色を使用して測定する。ＴＵＮＥＬおよびカスパーゼ−３染色の定量化を高出力で、デジタルで得られた画像で行う。高倍率視野当たりの陽性細胞の数を判定し、群の間で比較する。
【０６２８】
発光マッピングを、ドップラー撮像を使用して実施して、創傷血流を評価する。熱傷後２時間、動物の背側を、走査レーザードップラー装置で撮像して、熱傷領域内および外の皮膚における表在性血流分布を定量化する。発光マッピングのため、１００匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットを使用する。８０匹の動物は、背側に広範囲の（全身表面積の３０％を被覆する）全層熱傷を受ける。これは、確立したモデルである。それらを、２つの群に分割し、一方を、ＧＬＰ−１で処置し、他方を、偽薬（食塩水）で処置する。各群を、動物をさらなる分析のために屠殺する４つの時点からなる４つの亜群へとさらに分割する。屠殺より前に、発光撮像を実行し、続いて、安楽死およびその後の組織学的検査のための皮膚組織サンプリング。残りの２０動物は、「擬似熱傷」を受け、ＧＬＰ−１または食塩水で処置される。安楽死を、それぞれが４つの時点に対応する２匹の動物に実施する。平均で、各動物を、別個のケージで、１０日間（動物農場での予熱傷日を含む）収容する。
【０６２９】
ＧＬＰ−１投与は、創傷治癒を加速させ、このモデルにおける熱傷の進行を軽減すると予測される。ＧＬＰ−１処置は、熱傷誘発性アポトーシスおよび血流を減少させるとさらに予測される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、部分層性熱傷から全層熱傷への進行としての、熱傷後の組織損傷の進行を軽減するための方法に有用であることを示す。
実施例５０：ＧＬＰ−１は日焼けを防ぎ、日焼け後の組織損傷の進行を軽減する
【０６３０】
この実施例は、日焼けを防ぎ、マウスモデルにおける日焼け後の組織損傷の進行を軽減するためのＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。
【０６３１】
ヒトと同様の皮膚特徴を有する無毛マウスは、一週間にわたって過剰な紫外線照射に曝露される。対象を、３つの群に無作為に分割する。１）熱傷、食塩水溶媒、２）熱傷、ＧＬＰ−１（１日当たり４ｍｇ／ｋｇ、低用量群）、３）熱傷、ＧＬＰ−１（１日当たり４０ｍｇ／ｋｇ、高用量群）。ペプチドを、７日間、１日当たり２回、静脈内に投与する。測定されたパラメータは、創傷収縮、上皮再形成距離、細胞充実性、およびコラーゲン組織を含む。Ｋｉ６７増殖抗原、ならびにＴＵＮＥＬおよびカスパーゼ−３活性化を評価する。血流を、発光マッピングによって測定する。
【０６３２】
ＧＬＰ−１投与は、創傷治癒を加速させ、このモデルにおける日焼けの進行を軽減すると予測される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、日焼けを防ぎ、日焼け後の組織損傷の進行を軽減するための方法に有用であることを示す。
実施例５１：ＧＬＰ−１は褐色脂肪組織におけるＵＣＰ−ｌ発現の発現減少によって熱傷誘発性代謝亢進を軽減する
【０６３３】
代謝亢進は、熱傷後の代謝障害の顕著な特徴である。ミトコンドリア機能不全は、熱傷後に起こり、代謝亢進（および変更された基質酸化）の発症と密接に関係する。脱共役タンパク質１（ＵＣＰ−ｌ）を、褐色脂肪組織において発現し、熱生成において重要な役割を果たす。この実施例は、本技術のＧＬＰ−１ペプチドが、熱傷後にＵＣＰ−１発現を発現減少させることを示す。
【０６３４】
方法。Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ系ラットを、無作為に５つの群に分割する。擬似（Ｓ）、食塩水溶媒を伴う擬似（ＳＳａｌ）、ＧＬＰ−１処置を伴う擬似（ＳＰｅｐ）、食塩水溶媒を伴う熱傷（ＢＳａｌ）、およびＧＬＰ−１処置を伴う熱傷（ＢＰｅｐ）。熱傷対象の背側部を、ｌ００℃の水中に１２秒間浸漬して、全身麻酔下で、第３度の３０％ＴＢＳＡ熱傷を生じさせる。擬似熱傷を、微温の水中に浸漬することによって生じさせる。対象は、傷害後に、蘇生のため４０ｍｌ／ｋｇの腹腔内食塩水注入を受ける。静脈カテーテルを、擬似または熱傷の後で、右頸静脈内に外科的に配置する。ＧＬＰ−１（２ｍｇ／ｋｇ）または食塩水溶媒を、浸透圧ポンプ（Ｄｕｒｅｃｔ、ＣＡ）を使用して７日間（４ｍｇ／ｋｇ／日）注入する。間接熱量測定を、ＴＳＥ間接熱量測定システム（ＴＳＥ  Ｃｏ．、Ｇｅｒｍａｎｙ）において、熱傷後６日目に２４時間実施し、ＶＯ２、ＶＣＯ２、およびエネルギー消費を６分毎に記録する。肩甲骨間の褐色脂肪組織を間接熱量測定後に回収し、褐色脂肪組織におけるＵＣＰ−１発現をウェスタンブロットによって評価する。
【０６３５】
ＶＯ２、ＶＣＯ２、およびエネルギー消費は、ＳＳａｌ群と比較したときに、ＢＳａｌ群において著しく増加し、ＧＬＰ−１での処置は、著しくこの影響を軽減すると予測される。ＢＳａｌ群におけるＵＣＰ−１発現は、ＳＳａｌ群より高く、ＢＰｅｐ群におけるＵＣＰ−１レベルは、ＢＳａｌ群より低いとさらに予測される。
【０６３６】
これらの結果は、ＧＬＰ−１が褐色脂肪組織におけるＵＣＰ−１発現の発現減少によって、熱傷誘発性代謝亢進を軽減することを示す。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩は、熱傷を患っている対象を処置するための方法に有用である。
実施例５２：ＧＬＰ−１は熱傷後にＡＴＰ合成を誘発する
【０６３７】
この実施例は、ＧＬＰ−１ペプチドが、３１Ｐ  ＮＭＲおよびインビボの電子常磁性共鳴（ＥＰＲ）を使用して、熱傷後に、ＡＴＰ合成の速度を増加させることを実証する。
【０６３８】
熱傷における骨格筋ミトコンドリア機能不全の主な原因は、活性酸素種（ＲＯＳ）のミトコンドリア産生の刺激およびミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）への酸化的損傷による酸化的リン酸化（ＯＸＰＨＯＳ）における欠損の結果であると思われる。この仮説は、ＡＴＰ合成速度が、著しく減少し、ＲＯＳ産生が熱傷に応じて、骨格筋において増加することを示すデータによって支持される。この進行は、熱傷病態生理の根底にあり、それは骨格筋消耗および悪液質を誘発する。
【０６３９】
材料および方法。２０〜２５ｇの重量である雄で６週間の年齢のＣＤ１マウスを、４０ｍｇ／ｋｇのペントバルビタールナトリウムの腹腔内（ｉ．ｐ．）注入によって麻酔する。全群における全てのマウスの左後肢を剪毛する。熱傷対象は、左後肢を９０℃の水に３秒間浸漬することによって、３〜５％の全身表面積（ＴＢＳＡ）の非致死性熱湯傷を受ける。
【０６４０】
ＮＭＲ分光法は、Ｐａｄｆｉｅｌｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１０２：５３６８−５３７３（２００５）に詳細が記載される。手短に言えば、マウスを、１）熱傷＋対照溶媒、２）熱傷＋ＧＬＰ−１ペプチド、３）熱傷なし＋対照溶媒、４）および熱傷なし＋ＧＬＰ−１ペプチド群へと無作為に選ぶ。ＧＬＰ−１ペプチド（３ｍｇ／ｋｇ）を、熱傷の３０分前および熱傷直後に腹腔内に注入する。ＮＭＲ実験を、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｅｅコンソールを使用する水平ボア磁石（プロトン周波数４００ＭＨｚ、２１ｃｍ直径、Ｍａｇｎｅｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）において、実施する。９０°パルスを、リンスペクトル（繰り返し時間２秒、４００平均、４Ｋデータ点）の検出のために最適化する。飽和９０°−選択的パルス列（持続時間３６．５３４ｍｓ、バンド幅７５Ｈｚ）、続いて、破砕勾配を、使用して、γ−ＡＴＰピークを飽和させる。同じ飽和パルス列も、無機リン酸（Ｐｉ）共鳴のダウンフィールドに、γ−ＡＴＰ共鳴に対称的に、適用する。γ−ＡＴＰ飽和の存在下で、反転回復パルス配列を用いて、Ｐｉおよびホスホクレアチン（ＰＣｒ）のＴ１緩和時間を測定する。断熱パルス（４００スキャン、１０ＫＨｚで掃引、４Ｋデータ）を、１５２ｍｓ〜７６５１ｍｓの反転時間で、ＰｉおよびＰＣｒの反転に用いた。
【０６４１】
ＥＰＲ分光法は、Ｋｈａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｒｅｐ．１：８１３−８１９（２００８）に詳細が記載される。手短に言えば、マウスを、１）熱傷＋対照溶媒、２）熱傷＋ＧＬＰ−１ペプチド、３）熱傷なし＋対照溶媒、４）および熱傷なし＋ＧＬＰ−１ペプチド群へと無作為に選ぶ。ＧＬＰ−１ペプチド（３ｍｇ／ｋｇ）を、熱傷後、０、３、６、２４、および４８時間時点で腹腔内に注入する。ＥＰＲ測定を、マイクロ波ブリッジおよびインビボ実験のために設計された外部ループ共鳴装置を備える１．２−ＧＨｚＥＰＲ分光計で実施する。最適分光計パラメータは、入射マイクロ波出力が１０ｍＷ、磁場中心が４００ガウス、変調周波数が２７ｋＨｚである。静脈内に注入した窒素酸化物（１５０ｍｇ／Ｋｇ）の消失動態を、さまざまな時点で測定して、筋肉のミトコンドリアの酸化還元状態を評価する。
【０６４２】
対照対象は、熱傷後に著しく上昇した酸化還元およびＡＴＰ合成速度の著しい減少を示すと予測される。ＧＬＰ−１処置は、対照と比較したときに、熱傷したマウスにおけるＡＴＰ合成速度の著しい増加を誘発するとさらに予測される。
【０６４３】
これらの結果は、ＧＬＰ−１が、恐らく、ミトコンドリア酸化還元状態の回復によって、またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体−γコアクチベーター−１β（ＰＧＣ−１β）によって、ＡＴＰ合成速度を誘発することを示す。したがって、熱傷によって引き起こされるミトコンドリア機能不全は、ＧＬＰ−１ペプチドの投与によって軽減されると予想される。
【０６４４】
ＧＬＰ−１ペプチドの投与は、実質的に、対照の健康なマウスにおいてでさえ、ＡＴＰ合成速度を増加させるとも予想される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、骨格筋機能不全などの熱傷の二次合併症を予防または防止する方法に有用であることを示す。
実施例５３：ＧＬＰ−１はミトコンドリアアコニターゼ活性を減少させる
【０６４５】
ミトコンドリアアコニターゼは、ＴＣＡサイクルの一部であり、その活性はＴＣＡ流動と直接相関関係があった。さらに、その活性は、ＲＯＳによって阻害されるので、酸化ストレスの指標と考えられる。この実施例は、依然として、本技術のＧＬＰ−１ペプチドのミトコンドリアアコニターゼ活性への影響を実証する。
【０６４６】
マウス対象は、熱傷または擬似を受け、上述の通り、ＧＬＰ−１または対照溶媒を投与される。ミトコンドリアを、熱傷したおよび対照組織から単離し、ミトコンドリアアコニターゼ活性を、市販のキットを使用して、評価する。
【０６４７】
ミトコンドリアアコニターゼ活性は、熱傷した脚（局所熱傷影響）および熱傷した脚の対側（全身性熱傷影響）の両方において増加し、ほぼ確実に熱傷が誘発する代謝亢進に起因すると予測される。したがって、熱傷において生じることで知られる増加したＲＯＳ産生は、ミトコンドリアアコニターゼ活性を阻害し得、ミトコンドリアアコニターゼ活性およびＴＣＡ流動に対する代謝亢進影響を克服できない可能性が高い。ＲＯＳの増加がこの状況においても観察されるが、同様の結果が、無傷のヒトおよび摘出されたマウスの骨格筋における運動／繰り返し収縮の場合にも示された。
【０６４８】
したがって、ＧＬＰ−１処置は、ミトコンドリアアコニターゼ活性を、熱傷を受ける対象における対照レベルに減少させるとさらに予測される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、熱傷後にミトコンドリアアコニターゼ活性を減少させるための方法に有用であることを示す。
実施例５４：代謝症候群の予防または処置におけるＧＬＰ−１
【０６４９】
この実施例は、代謝症候群の予防または処置におけるＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。
【０６５０】
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ系ラットに、６週間、高脂肪食（ＨＦＤ）を与え、次いで、ＳＴＺ（３０ｍｇ／ｋｇ）を単回投与する。ラットを、ＳＴＺ投与後、１４週間、ＨＦＤで維持する。６週間、通常のラットの食事（ＮＲＣ）を与えられた対照対象に、ＳＴＺを含まないクエン酸塩緩衝液を投与する。５ヶ月後、糖尿病対象を、１０週間の間、ＧＬＰ−１（１０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、または１ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、ｑ．ｄ．（皮下に、１日１回）で、または１週間に５日、対照溶媒（食塩水）で処置する。研究群は以下の通りである。
Ａ群：ＨＦＤ／ＳＴＺ＋ＧＬＰ−１  １０ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、ｑ．ｄ．（月曜日〜金曜日）、ｎ＝１２。
Ｂ群：ＨＦＤ／ＳＴＺ＋ＧＬＰ−１  ３ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、ｑ．ｄ．（月曜日〜金曜日）、ｎ＝１２。
Ｃ群：ＨＦＤ／ＳＴＺ＋ＧＬＰ−１  １ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、ｑ．ｄ．（月曜日〜金曜日）、ｎ＝１０。
Ｄ群：ＨＦＤ／ＳＴＺ＋対照溶媒、ｓ．ｃ．、ｑ．ｄ．（月曜日〜金曜日）、ｎ＝１０。
Ｅ群：ＮＲＣ＋対照溶媒、ｓ．ｃ．、ｑ．ｄ．（月曜日〜金曜日）、ｎ＝１０。
【０６５１】
６週間のＨＦＤの摂食は、明らかな体重増加を提供し、ＳＴＺ摂取は、血中グルコースおよび高脂血症を増加させると予測され、これらの対象における代謝症候群同様の疾患を示す。それ故、プロトコルは、これらの対象における誘発された代謝症候群を有する。
【０６５２】
ｌ０週間の期間のペプチド処置の間、体重または血中グルコースレベルにおける明らかな変化は、ＧＬＰ−１を受けている対象において予期されない。ＮＲＣ群の血中グルコースは、正常範囲に留まると予期される一方で、ＳＴＺ処置群のものは、１０週間の期間の治験期間を通して、一番高いままであることが予期される。
【０６５３】
ＨＦＤ／ＳＴＺラットの血中トリグリセリド値は、ペプチド処置前のＮＲＣラットにおけるものよりかなり高く、１０週間のＧＬＰ−１投与後に、正常値に減少すると予測され、ＧＬＰ−１が、脂質代謝に有益な影響を及ぼすことを示す。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、代謝症候群を予防または処置するための方法に有用であることを示す。
実施例５５：ＧＬＰ−１はヒト網膜上皮細胞への高グルコース誘発性傷害を予防する
【０６５４】
この実施例は、ヒト網膜上皮細胞（ＨＲＥＣ）への高グルコース誘発性傷害の予防のためのＧＬＰ−１の使用を実証する。
【０６５５】
本発明の研究に有用なＨＲＥＣ培養の方法は既知である。一般的には、Ｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｏｐｈｔｈａｌ．Ｒｅｓ．２３：２０−２（２００５）；Ｐｒｅｍａｎａｎｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．４７：２１７９−８４（２００６）を参照されたい。手短に言えば、ＨＲＥＣ細胞を、３つの状態のうちの１つで培養する。１）正常対照、２）３０ｍＭのグルコース、３）３０ｍＭのグルコース＋ＧＬＰ−１。様々な濃度のＧＬＰ−１（１０ｎＭ、１００ｎＭ、１ｕＭ、１０μＭ）で共処置された高グルコースにおけるＨＲＥＣの生存を、アネキシンＶを使用して、流動細胞計測法によって測定する。一般的には、Ｋｏｏｐｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ８４：１４１５（１９９４）；Ｈｏｍｂｕｒｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  Ｘ５：５３２（１９９５）；Ｖｅｒｍｅｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１８４：３９（１９９５）；Ｆａｄｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２２０７（１９９２）を参照されたい。
【０６５６】
ＧＬＰ−１で共処置された高グルコースにおけるＨＲＥＣの生存を、２４時間および４８時間時点で試験する。ＨＲＥＣの生存は、対照と比較したときに、ＧＬＰ−１の投与で著しく改善し、アポトーシス細胞および壊死細胞の減少を伴うと予測される。ＧＬＰ−１での処置はまた、ＲＯＳの産生を減少させると予測される。
【０６５７】
ミトコンドリア媒介経路が、高グルコース誘発性細胞死に対するＧＬＰ−１保護において重要であることを実証するために、ミトコンドリア膜電位を、ＴＭＲＭを使用して、流動細胞計測法によって測定する。ＧＬＰ−１を伴わず高グルコースで、２４または４８時間、ＨＲＥＣを処置した後、ミトコンドリア膜電位の迅速な損失を検出し、１００ｎＭのＧＬＰ−１での処置が、この影響を防止または軽減することが予測される。これらの結果は、ＧＬＰ−１ペプチドが、高グルコース環境の曝露によって引き起こされるミトコンドリア膜電位損失を防止することを示す。
【０６５８】
グルコース（３０ｍｍｏｌ／Ｌ）は、ＨＲＥＣのミトコンドリアからチトクロムｃ放出を誘発すると予期される。固定されたＨＲＥＣを、チトクロムｃ抗体およびミトコンドリア特異的タンパク質抗体（ＨＳＰ６０）で免疫標識する。共焦点顕微鏡分析は、正常培養およびグルコースで共処置されたＧＬＰ−１におけるＨＲＥＣが、重複チトクロムｃ染色およびミトコンドリア染色を有することを示すと予想され、チトクロムｃおよびミトコンドリアの共局在を示す。２４または４８時間の３０ｍｍｏｌ／Ｌのグルコースでの処置後、チトクロムｃは、ＨＲＥＣの細胞質において観察されると予測され、グルコースが、ＨＲＥＣ細胞におけるミトコンドリアから細胞質へのチトクロムｃの放出を誘発し、ＧＬＰ−１での処置がこの影響を防止または軽減することを示す。
【０６５９】
これらの結果は、ＧＬＰ−１が、高グルコース環境におけるＨＲＥＣ細胞の生存を促進することを示す。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩は、糖尿病性網膜症の予防のための方法に有用である。
実施例５６：ＧＬＰ−１は高脂肪食を与えられたラットにおける糖尿病性網膜症を予防する
【０６６０】
この実施例は、高脂肪食（ＨＦＤ）を与えられたラットにおける糖尿病性網膜症の予防におけるＧＬＰ−１の使用を実証する。
【０６６１】
糖尿病のラットモデルを、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットにおける、６週間のＨＦＤ、および１）低用量ＳＴＺ（３０ｍｇ／ｋｇ）注入、または２）単回高用量のＳＴＺ（６５ｍｇ／ｋｇ）のいずれかの組み合わせによって確立する。一般的には、Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５２（４）：３１３−３２０（２００５）を参照されたい。対照を、通常のラットの食事（ＮＲＣ）で維持する。処置群は以下の通りである。
Ａ群：１２  ＨＦＤ／ＳＴＺ  ＧＬＰ−１  １０ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．
Ｂ群：１２  ＨＦＤ／ＳＴＺ  ＧＬＰ−１  ３ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．
Ｃ群：１２  ＨＦＤ／ＳＴＺ  ＧＬＰ−１  １ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．
Ｄ群：１０  ＨＦＤ／ＳＴＺ対照溶媒、ｓ．ｃ．
Ｅ群：１０  ＮＲＣ対照溶媒、ｓ．ｃ．
【０６６２】
眼球を採取し、対象を、当該技術分野において既知の方法を用いて、白内障形成、上皮変化、血液網膜関門の健常性、網膜毛細血管構造、および網膜密着結合構造のために評価する。
【０６６３】
ＧＬＰ−１の投与は、糖尿病ラットの水晶体における白内障形成の予防または回復をもたらすと予測される。ＧＬＰ−１の処置は、ＳＴＺラットモデルおよびＨＦＤ／ＳＴＺラットモデルの両方における上皮細胞変化を減少させ、対照対象と比較して、改善した内部血液網膜関門機能をもたらすとさらに予測される。
【０６６４】
ＧＬＰ−１の処置は、ＳＴＺまたはＨＦＤ／ＳＴＺラットにおいて観察される網膜毛細血管変化を減少させると予測される。クローディン−５局在によって可視化される通りの密着結合は、対照対象における網膜血管に沿って均一に分布され、ＨＦＤ／ＳＴＺ対象においては不均一に分布されるとさらに予測される。ＧＬＰ−１（１０ｍｇ／ｋｇ）での処置は、この影響を防止し、逆戻りさせ、または軽減するとさらに予測される。
【０６６５】
これらの結果は、集合的に、ＧＬＰ−１ペプチドが、眼球における糖尿病の悪影響、例えば、白内障および毛細血管系損傷を予防または補うことを確立する。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩は、ヒト対象における糖尿病に関連する眼状態を予防または処置するための方法に有用である。
実施例５７：心不全の予防および処置におけるＧＬＰ−１
【０６６６】
この実施例は、高血圧性心筋症および心不全の予防および処置におけるＧＬＰ−１の使用を実証する。この実施例は、アンジオテンシンＩＩ（ＡｎｇＩＩ）誘発性心筋症における、およびヘテロトリマーのＧｑタンパク質（Ｇαｑ）のαサブユニットを過剰発現させる心筋症のマウスにおけるＮＡＤＰＨおよびミトコンドリアの役割をさらに実証する。
【０６６７】
７２時間より若いマウス新生仔からの心室を、解剖し、細かくし、ブレンド酵素（Ｂｌｅｎｄｚｙｍｅ）４（４５ｍｇ／ｍｌ、Ｒｏｃｈｅ）で酵素消化する。酵素消化後、心筋細胞を、２時間の微分予備プレーティング（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｐｒｅ−ｐｌａｔｉｎｇ）を使用して濃縮させ、２０％のウシ胎仔血清（Ｓｉｇｍａ）および２５μＭのアラビノシルシトシン（Ｓｉｇｍａ）を含むＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）において、２４時間、フィブロネクチンコーティングされた培養皿上に蒔く。心筋細胞を、０．５％のインスリントランスフェリン−セレン（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭのグルタミン、および１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含有する、スクラム非含有ＤＭＥＭにおいて、３時間、アンジオテンシンＩＩ（ｌμＭ）で刺激する。心筋細胞を、以下のうちのいずれかで同時に処置する。ＧＬＰ−１（ｌｎＭ）、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ：０．５ｍＭ）、またはＰＢＳ対照。ミトコンドリア超酸化物濃度を測定するために、Ｍｉｔｏｓｏｘ（５ｐＭ）を、３０分間、３７℃でインキュベートして、心筋細胞を充填し、続いて、ハンクス平衡塩類溶液で、２回洗浄する。サンプルを、流動細胞計測法によって、４８８／６２５ｎｍの励起／放出を使用して、分析する。流量データを、ＦＣＳ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｄｅ  Ｎｏｖｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用して分析し、Ｍｉｔｏｓｏｘ蛍光強度のヒストグラム分布として提示する。
【０６６８】
マウス実験、薬物送達、心エコー法、および血圧測定。６〜１０匹のマウスが、各実験群に含められる（食塩水、ＡｎｇＩＩ、ＡｎｇＩＩ＋ＧＬＰ−１、ＷＴ、Ｇαｑ、Ｇαｑ＋ＧＬＰ−１）。ＡｎｇＩＩ（１．１ｍｇ／ｋｇ／日）の昇圧用量を、４週間、ＧＬＰ−１（３ｍｇ／ｋｇ／日）を伴いまたは伴わずに、皮下Ａｌｚｅｔ１００４浸透圧ミニポンプを使用して、投与し続ける。心エコー法を、１３ＭＨｚプローブを備えるＳｉｅｍｅｎｓ  ＡｃｕｓｏｎＣＶ−７０を使用して、ポンプ移植の４週間後およびベースライン時に、実施する。興奮を低減するために０．５％のイソフルラン下で、標準Ｍ−モードの従来のおよび組織ドップラー画像を撮影し、機能計算を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈｙガイドラインに従って実施する。ＭＴＩを、等容性収縮および緩和時間の合計と左室駆出時間との比率として計算する。ＭＰＩの増加は、収縮期のより大きな分画を使って、等容性段階の間の圧力変化に対処するという指標である。ＡｎｇＩＩ処置マウスにおけるＧＬＰ−１ペプチドの影響の参考として、Ｒｏｓａ−２６誘導性−ｍＣＡＴの遺伝的マウスモデルが含まれ、そこでミトコンドリアカタラーゼが、ＡｎｇＩＩ処置の前に２週間過剰発現する。
【０６６９】
血圧を、血管内カテーテルＰＡ−Ｃ１０（ＤＳＩ、ＭＮ）を使用して、遠隔測定によって、別個の群のマウスにおいて測定し、そこでは、測定を、ポンプ配置の２日前から開始して、Ａｎｇポンプ配置の２日後まで、３時間毎に実施する。この後、ＡｎｇＩＩ＋ＧＬＰ−１で充填された新たなポンプを挿入し、続いて、さらに２日の記録をして、ＧＬＰ−１が血圧に影響を及ぼすかどうかを見る。
【０６７０】
定量的病理学。心室組織を、横行のスライスへと切断し、続いて、パラフィンで埋め込み、切開し、マッソントリクローム染色を受ける。線維症の定量的分析を、心室の総断面積に対する青色染色線維化組織の割合を測定することによって実施する。
【０６７１】
ミトコンドリアタンパク質カルボニル基の測定。ミトコンドリアタンパク質抽出のため、心室組織を、ミトコンドリア単離緩衝液（１ｍＭのＥＧＴＡ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、２５０ｍＭのスクロース、１０ｍＭのトリス−ＨＣＩ、ｐＨ７．４）において均質化する。可溶化物を、７分間、８００ｇで、４℃において、遠心分離する。次いで、上澄みを、３０分間、４０００ｇで、４℃において、遠心分離する。粗製ミトコンドリアペレットを、少量のミトコンドリア単離緩衝液において、再懸濁し、氷上で超音波処理して、膜を破裂させ、１％の硫酸ストレプトマイシンで処置して、ミトコンドリア核酸を沈殿させる。ＯｘｉＳｅｌｅｃｔ（商標）タンパク質カルボニルＥＬＩＳＡキット（Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ）を使用して、アッセイによって、１μｇのタンパク質サンプルを分析する。ＥＬＩＳＡを、少し変更を加え、取扱説明書に従って実施する。手短に言えば、タンパク質サンプルを、ジニトロフェニルヒドラジン（ＤＮＰＨ）と反応させ、抗ＤＮＰＨ抗体、続いて、ＨＲＰ共役二次抗体で調査する。抗ＤＮＰＨ抗体およびＨＲＰ共役二次抗体濃度は、１：２５００および１：４０００それぞれである。
【０６７２】
定量的ＰＣＲ。遺伝子発現を、オンデマンドのＴａｑｍａｎ遺伝子発現アッセイを備えるＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ７９００熱循環器を使用して、定量的リアルタイムＰＣＲによって定量化し、それはＰＧＣｌ−ａ（Ｍｍ００７３１２１６）、ＴＦＡＭ（Ｍｍ００４４７４Ｘ５）、ＮＲＦ−ｌ（Ｍｍ００４４７９９６）、ＮＲＦ−２（Ｍｍ００４８７４７１）、コラーゲン１ａ２（Ｍｍ００４８３９３７）、およびＡＮＰ（Ｍｍ０１２５５７４７）を含んだ。発現アッセイを、１８Ｓ  ＲＮＡへと正規化する。
【０６７３】
ＮＡＤＰＨオキシダーゼ活性ＮＡＤＰＨオキシダーゼアッセイを、別の所で記載した通りに実施する。手短に、１０μｇの心室タンパク質抽出物を、ジヒドロエチジウム（ＤＨＥ、１０μＭ）、精子ＤＮＡ（１．２５μｇ／ｍｌ）、およびＰＢＳ／ＤＴＰＡ（１００μＭのＤＴＰＡを含有）におけるＮＡＤＰＨ（５０μＭ）と共にインキュベートし、アッセイを、３０分間、暗所で、３７℃でインキュベートし、蛍光を、４９０／５８０ｎｍの励起／放出を使用して、検出する。
【０６７４】
ウェスタン免疫ブロット心臓タンパク質抽出物を、氷上でプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含有する溶解緩衝液（１．５ｍＭのＫＣＩ、５０ｍＭのトリスＨＣＩ、０．１２５％のデオキシコール酸ナトリウム、０．３７５％のＴｒｉｔｏｎＸ１００、０．１５％のＮＰ４０、３ｍＭのＥＤＴＡ）における均質化によって、調製する。サンプルを、超音波処理し、１０，０００×ｇで、１５分間、４℃で、遠心分離する。上澄みを回収し、タンパク質濃度を、ＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用して判定する。合計タンパク質（２５μｇ）を、ＮｕＰＡＧＥ  ４−１２％ビス−トリスゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で分離させ、０．４５μｍのＰＶＤＦ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に移動し、次いで、１時間、０．１％のＴｗｅｅｎ−２０を含むトリス−緩衝溶液における５％の脱脂粉乳においてブロックする。一次抗体を一晩インキュベートし、二次抗体を１時間インキュベートする。一次抗体は、イエウサギモノクローナル抗切断カスパーゼ−３（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、マウスモノクローナル抗ＧＡＰＤＨ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、イエウサギポリクローナルホスホ−ｐ３Ｘ  ＭＡＰキナーゼ（Ｃｅｌｌ  ｉｇｎａｌｉｎｇ）、およびマウスモノクローナル抗ｐ３８（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を含んだ。向上した化学発光方法（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、検出のために使用する。Ｉｍａｇｅ  Ｑｕａｎｔバーション２．０を使用して、ＧＡＰＤＨ（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｃｏｎｔｒｏｌ）への比率として相対バンド密度を定量化する。全てのサンプルを、同じ心臓タンパク質サンプルへと正規化する。
【０６７５】
Ａｎｇ−ＩＩは、新生仔心筋細胞におけるミトコンドリアＲＯＳを増加させ、それは、ミトコンドリア抗酸化剤ペプチドＧＬＰ−１によって緩和されると予測される。流動細胞計測法分析は、アンジオテンシンＩＩが新生仔心筋細胞におけるＭｉｔｏｓｏｘ蛍光（ミトコンドリア超酸化物の指標）を増加させたことを示すと予想される。Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）、非標的化抗酸化剤薬での処置は、ＡｎｇＩＩ後にミトコンドリアＲＯＳのレベルにいかなる影響も示さないと予想される。その一方、ＧＬＰ−１は、ＡｎｇＩＩ誘発性蛍光を、食塩水で処置した心筋細胞のものと同様のレベルに減少させると予測される。
【０６７６】
これらの予測される結果は、心筋細胞におけるＡｎｇＩＩ誘発性ミトコンドリア酸化ストレスは、ミトコンドリア標的化抗酸化剤によって緩和され得ることを示す。
【０６７７】
ＧＬＰ−１ペプチドは、血圧下降効果の不在にも関わらず、ＡｎｇＩＩ誘発性心筋症を寛解すると予測される。高血圧性心筋症を再現するために、ＡｎｇＩＩ（１．１ｍｇ／ｋｇ／日）の昇圧用量を、Ａｌｚｅｔ１００４浸透圧ミニポンプでの皮下持続的送達によって、４週間、投与する。血管内遠隔測定は、ＡｎｇＩＩのこの用量が、ベースラインを超える２５〜２８ｍｍＨｇで、収縮期血圧および拡張期血圧を著しく増加させることを明らかにすると予想される。ＧＬＰ−１（３ｍｇ／ｋｇ／日）の同時投与は、血圧にいかなる影響も及ぼさないと予想される。
【０６７８】
心臓病理学を、マッソントリクローム染色によって検査し、それは、４週間のＡｎｇＩＩ後に、血管周囲性線維症および間質性線維症を示す。心室線維症の定量的画像分析（トリクロームの青色染色）は、ＡｎｇＩＩが、ＧＬＰ−１によって完全に軽減されると予測される心室線維症を著しく増加させることを示すと予測される。心臓線維症の増加は、プロコラーゲンｌａ２遺伝子、線維症の主要構成要素の定量的ＰＣＲによって確定される。
【０６７９】
ＡｎｇＩＩが心筋細胞におけるミトコンドリアＲＯＳを誘発するという予想と一致して、４週間のＡｎｇＩＩの慢性的な投与は、タンパク質酸化的損傷の指標である心室ミトコンドリアタンパク質カルボニル含有量を著しく増加させると予想される。ミトコンドリア標的化抗酸化剤ＧＬＰ−１は、心臓ミトコンドリアタンパク質カルボニルを著しく減少させると予測される。
【０６８０】
ＧＬＰ−１は、ダウンストリームｏ｛ＮＡＤＰＨオキシダーゼのように働き、ＡｎｇＩｌに応じて、ｐ３８ＭＡＰＫおよびアポトーシスの活性化を減少させると予測される。以前の報告と一致して、４週間のＡｎｇＩＩは、心臓ＮＡＤＰＨオキシダーゼ活性を著しく減少させると予測されるが、これは、ＧＬＰ−１投与によって変化しないと予想され、これは、ＧＬＰ−１保護が、ＮＡＤＰＨオキシダーゼのダウンストリームのように働くことを示唆する。
【０６８１】
ＡｎｇＩＩは、ｐ３８などのいくつかのマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）を活性化すると示された。４週間のＡｎｇＩＩの投与は、ｐ３８ＭＡＰＫのリン酸化を増加させ、このリン酸化は、ＧＬＰ−１によって著しくおよびほぼ完全に軽減されると予測され、これは、ＭＡＰキナーゼが、ミトコンドリア−ＲＯＳ感受性機構によって活性化されることを示唆する。直接的または間接的のいずれかで、アポトーシスシグナル調整キナーゼを活性化することによるミトコンドリアＲＯＳは、アポトーシスを誘発し得る。ＡｎｇＩＩは、切断カスパーゼ−３の増加によって示される心臓アポトーシスを誘発すると予測される。ＧＬＰ−１はＡｎｇＩＩによって引き起こされるカスパーゼ−３の活性化を完全に防止することも予測される。
【０６８２】
ＧＬＰ−１は、Ｇαｑ過剰発現誘発性心不全を部分的に救援すると予測される。Ｇαｑタンパク質は、カテコラミンおよびＡｎｇＩＩのための受容体と結合され、その全ては、高血圧心血管疾患における主要媒介物であるとして知られる。慢性カテコラミン／ＡｎｇＩＩ刺激のモデルへとこれらの観察を拡張するために、Ｇαｑの心臓特異的過剰発現を伴う遺伝子マウスモデルを使用し、それは、１４〜１６週間の年齢でマウスの心不全を引き起こす。この研究におけるＧαｑマウスは、１６週間の年齢で収縮機能障害を有し、それは、ＬＶ心臓室の拡張、減少したＥａ／Ａａによって示される拡張機能の障害、および心筋作用指標（ＭＰＩ）の悪化を伴うＦＳにおける実質的な減少によって示される。ＧＬＰ−１を、１２〜１６週間の年齢（３ｍｇ／ｋｇ／日）から投与し、ＧＬＰ−１は、収縮機能を著しく寛解し、心筋作用を改善すると予想される。ＬＶ心臓室拡張は、ＧＬＰ−１処置から少し減少されると予測される。
【０６８３】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、哺乳動物の対象における心筋症または心不全を予防または処置するための方法に有用であることを示す。
実施例５８：ＧＬＰ−１は血管閉塞傷害を防ぐ
【０６８４】
この実施例は、血行再建時のＧＬＰ−１ペプチドの投与が、急性心筋梗塞の間の梗塞の大きさを制限することを実証する。
【０６８５】
胸痛の開始を示し、血行再建術（例えば、ＰＣＩまたは血栓溶解剤）で処置するために臨床的決定がなされる１８歳以上の年齢の男性および女性が、登録対象である。患者はＳＴＥＭＩ（ＳＴ−上昇型心筋梗塞）または非ＳＴＥＭＩであり得る。ＳＴＥＭＩ患者は、患者のＥＣＧがＳＴ上昇という典型的な心臓発作パターンも示す場合、心筋への血液供給の中断または暗示する症状を示す。したがって、診断を、純粋に症状、臨床検査、およびＥＣＧ変化に基づいて行う。非ＳＴ上昇心臓発作の場合では、胸痛の症状は、ＳＴＥＭＩの症状と同一であり得るが、患者のＥＣＧが心臓発作に伝統的に関連した典型的なＳＴ上昇変化を示さないことが重要な相違点であり、患者は、多くの場合、狭心症の病歴を有するが、疑わしい攻撃時のＥＣＧは、異常を全く示さない場合もある。診断は、病歴および症状において疑われ、かつ血液中の心筋酵素と呼ばれる物質の濃度の増加を示す血液試験によって確認される。
【０６８６】
左心室および冠動脈血管造影を、血行再建の直前に標準の技法を用いて実施する。血行再建を、直接ステント留置法を用いてＰＣＩによって実施する。代替の血行再建術には、バルーン血管形成、経皮経管冠動脈形成術、および方向性冠動脈粥腫切除術が含まれるが、それらに限定されない。
【０６８７】
冠動脈血管造影を実施した後であるが、ステントを埋め込む前に、登録基準を満たす患者を、対照群またはペプチド群のいずれかに無作為に割り当てる。無作為化を、コンピュータ生成された無作為化シーケンスを用いて実施する。直接ステント留置の１０分未満前に、ペプチド群の患者は、ＧＬＰ−１の静脈内ボーラス注入を受ける。患者を、以下の治療アームのうちのいずれかに平等に無作為化する（例えば、０、０．００１、０．００５、０．０１、０．０２５、０．０５、０．１０、０．２５、０．５、および１．０ｍｇ／ｋｇ／時間）。ペプチドを、再灌流の約１０分前から再灌流期間後のＰＣＬの約３時間後に、静脈内注入として投与し、対象は、あらゆる投与手段、例えば、皮下または静脈内注入によって、ペプチドを慢性的に投与され得る。
【０６８８】
主要エンドポイントは、心臓バイオマーカーの測定によって評価される梗塞の大きさである。血液サンプルを、入院時および翌３日間にわたって繰り返し入手する。冠動脈バイオマーカーを、各患者において測定する。例えば、クレアチンキナーゼおよびトロポニンＩ放出（Ｂｅｃｋｍａｎキット）の曲線下面積（ＡＵＣ）（任意の単位で表される）は、各患者において、コンピュータ化された面積測定法によって測定され得る。主な二次エンドポイントは、心臓磁気共鳴画像（ＭＲＩ）上で見られる遅延高度増強領域によって測定される梗塞の大きさであり、梗塞後５日目に評価される。遅延増強分析について、１キログラム当たり０．２ｍｍｏｌのガドリニウム−テトラアザシクロドデカン四酢酸（Ｇｄ．ＤＯＴＡ）を、１秒当たり４ｍＬの速度で注入し、１５ｍＬの食塩水で洗い流す。三次元反転回復勾配エコーシーケンスを用いて、ガドリニウムＧｄ．ＤＯＴＡの注入の１０分後に遅延高度増強を評価する。全左心室を被覆する短軸スライスにおいて画像を解析する。
【０６８９】
心筋梗塞は、同じスライス内の離れた非梗塞心筋の参照領域内の強度を２ＳＤ超える心筋の造影剤後信号の強度によって定量的に定義される、心筋内の遅延高度増強によって同定される。全てのスライスについて、梗塞領域の絶対質量を、以下の式に従って計算する。梗塞質量（組織のグラム単位）＝Σ（高度増強領域［平方センチメートル単位］）×スライスの厚さ（センチメートル単位）×心筋特定密度（１立方センチメートルあたり１．０５ｇ）。
【０６９０】
再灌流時のペプチドの投与は、偽薬の投与で見られるよりもある程度小さい梗塞に関連していると予測される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、急性心筋梗塞の間の梗塞の大きさを制限するために有用であることを示す。
実施例５９：ＧＬＰ−１はイエウサギモデルにおける急性心筋梗塞傷害を防ぐ
【０６９１】
この実施例は、イエウサギモデルにおける急性心筋梗塞傷害を防ぐことにおけるＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。
【０６９２】
ニュージーランドホワイト系イエウサギをこの研究に使用する。イエウサギは、雄および＞１０週間の年齢である。動物の部屋における環境調節を、６１°〜７２°Ｆの温度および３０％〜７０％の間の相対湿度を維持するように設定する。室温および湿度を１時間毎に記録し、毎日監視する。動物の部屋において１時間毎に約１０〜１５の空気交換をする。光周期は、投薬およびデータ回収を適応するのに必要である例外を除いて、１２時間明／１２時間暗（蛍光照明によって）である。日常の毎日の観察を実施する。Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ、Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ  Ｄｉｅｔ（２０３０Ｃ）、イエウサギの食事を、到着から施設まで、１日当たり約１８０グラム提供する。加えて、新鮮な果実および野菜を、イエウサギに、１週間に３回与える。
【０６９３】
ＧＬＰ−１ペプチドを、被験物質として使用する。投薬溶液を配合し、一定速度で（例えば、５０μＬ／ｋｇ／分）、持続注入（ＩＶ）によって送達する。生理食塩水（０．９％のＮａＣｌ）を対照として使用する。
【０６９４】
試験／溶媒物を、全身麻酔下で、ＡＭＩおよびＰＴＣＡの臨床的設定における投与の予期される経路を模倣するために、静脈内に与える。静脈内注入を、一定量（例えば、５０μＬ／ｋｇ／分）で、Ｋｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ注入ポンプ（Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、ＭＡ０１７４６）を使用して、末梢静脈を介して投与する。
【０６９５】
研究は、所定の偽薬および擬似制御されたデザインに従った。要するに、１０〜２０匹の健康な気候順応した雄のイエウサギを、３つの研究アームのうちの１つに割り当てる（群当たり約２〜１０匹の動物）。アームＡ（ｎ＝４、ＣＴＲＬ／ＰＬＡＣ）は、溶媒で処置された動物（溶媒；ＶＥＨ、ＩＶ）を含み、アームＢ（ｎ＝７、処置済）は、ペプチドで処置された動物を含み、アームＣ（ｎ＝２、擬似）は、溶媒（溶媒；ＶＥＨ、ＩＶ）またはペプチドで処置された擬似手術された時間対照を含む。
【０６９６】
全ての場合において、処置を、３０分の虚血性傷害（冠動脈閉塞）の開始の約３０分後に開始し、再灌流後最大３時間続く。全ての場合において、心血管系機能を、虚血より前およびその間の両方、ならびに再灌流後最大１８０分間（３時間）監視する。実験を再灌流の３時間後に停止し（研究の終わり）、この時点での不可逆性心筋傷害（組織形態計測による梗塞の大きさ）を評価し、研究の主要エンドポイントである。
【０６９７】
ＧＬＰ−１ペプチドの投与は、対照と比較して、減少した梗塞の大きさをもたらすと予測される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、哺乳動物の対象における急性心筋梗塞を予防および処置するための方法に有用であることを示す。
実施例６０：急性心筋梗塞傷害の処置における組み合わせたＧＬＰ−１およびシクロスポリン
【０６９８】
この実施例は、血行再建時のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩およびシクロスポリンの投与が、急性心筋梗塞の間、梗塞の大きさを制限することを実証する。
【０６９９】
研究群。胸痛の開始の６時間後以内に示し、２つの連続的なリードにおける０．１ｍＶ超のＳＴ−セグメント上昇を有し、経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）で処置するために臨床的決定がなされる１８歳以上の年齢の男性および女性が、登録対象である。患者は、彼らが一次ＰＣＩまたは救助ＰＣＩを受けるかどうかの研究対象である。入院時の影響を受けた冠動脈（心筋梗塞（ＴＩＭＩ）流れ階級０における血栓溶解）の閉塞もまた、包含の基準である。
【０７００】
血管造影および血行再建。左心室および冠動脈血管造影を、血行再建の直前に標準の技法を用いて実施する。血行再建を、直接ステント留置法を用いてＰＣＩによって実施する。代替の血行再建術には、バルーン血管形成、バイパス移植片の挿入、経皮経管冠動脈形成術、および方向性冠動脈粥腫切除術が含まれるが、それらに限定されない。
【０７０１】
実験のプロトコル。冠動脈血管造影を実施した後であるが、ステントを埋め込む前に、登録基準を満たす患者を、対照群またはペプチド群のいずれかに無作為に割り当てる。無作為化を、コンピュータ生成された無作為化シーケンスを用いて実施する。直接ステント留置の１０分未満前に、ペプチド群の患者は、ＧＬＰ−１およびシクロスポリンの静脈内ボーラス注入を受ける。ペプチドを食塩水（最終濃度、２５ｍｇ／ｍＬ）中で溶解し、肘正中静脈内に位置付けられるカテーテルを通して注入する。シクロスポリン（最終濃度、１ミリリットル当たり２５ｍｇを、カテーテルを通して、別々または同時のいずれかで注入する。生理食塩水（０．９％のＮａＣｌ）を対照として使用する。対照群の患者は、同等容量の生理食塩水を受ける。
【０７０２】
梗塞の大きさ。主要エンドポイントは、心臓バイオマーカーの測定によって評価される梗塞の大きさである。血液サンプルを、入院時および翌３日間にわたって繰り返し入手する。クレアチンキナーゼおよびトロポニンＩ放出（Ｂｅｃｋｍａｎキット）の曲線下面積（ＡＵＣ）（任意の単位で表される）は、各患者において、コンピュータ化された面積測定法によって測定される。主な二次エンドポイントは、心臓磁気共鳴画像（ＭＲＩ）上で見られる遅延高度増強領域によって測定される梗塞の大きさであり、梗塞後５日目に評価される。遅延増強分析について、１キログラムあたり０．２ｍｍｏｌのガドリニウム−テトラアザシクロドデカン四酢酸（Ｇｄ．ＤＯＴＡ）を、１秒あたり４ｍＬの速度で注入し、１５ｍＬの食塩水で洗い流す。三次元反転回復勾配エコーシーケンスを用いて、Ｇｄ．ＤＯＴＡの注入の１０分後に遅延高度増強を評価する。全左心室を被覆する短軸スライスにおいて画像を解析する。
【０７０３】
心筋梗塞は、同じスライス内の離れた非梗塞心筋の参照領域内の強度を２ＳＤ超える心筋の造影剤後信号の強度によって定量的に定義される、心筋内の遅延高度増強によって同定される。全てのスライスについて、梗塞領域の絶対質量を、以下の式に従って計算する。梗塞質量（組織のグラム単位）＝Σ（高度増強領域［平方センチメートル単位］）×スライスの厚さ（センチメートル単位）×心筋特定密度（１立方センチメートルあたり１．０５ｇ）。
【０７０４】
他のエンドポイント。ペプチドの全血濃度は、ＰＣＩの直前、ならびにＰＣＩの１、２、４、８、および１２時間後である。クレアチニンおよびカリウムの血圧および血清濃度を、入院時、ならびにＰＣＩの２４、４８、および７２時間後に測定する。ビリルビン、グルタミルトランスフェラーゼ、およびアルカリホスファターゼの血清濃度、ならびに白血球数を、入院時およびＰＣＩの２４時間後に測定する。
【０７０５】
死、心不全、急性心筋梗塞、脳卒中、再発性虚血、血行再建の反復の必要性、腎不全または肝不全、血管合併症、および出血を含む、再灌流後最初の４８時間以内に起こる主要な有害事象の累積発現率を記録する。心不全および心室細動を含む梗塞に関連した有害事象を評価する。加えて、急性心筋梗塞の３ヶ月後、心事象を記録し、全体の左心室機能を心エコー法（Ｖｉｖｉｄ７システム、ＧＥ  Ｖｉｎｇｍｅｄ）によって評価する。
【０７０６】
再灌流時のＧＬＰ−１ペプチドおよびシクロスポリンの投与が、偽薬の投与で見られるよりもある程度小さい梗塞に関連していることが予測される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、心筋梗塞の処置のための方法に有用なシクロスポリンとの組み合わせにおいて有用であることを示す。
実施例６１：移植患者における腎毒性の処置における組み合わされたＧＬＰ−１およびシクロスポリン
【０７０７】
この実施例は、移植患者における腎毒性の処置における組み合わされたＧＬＰ−１およびシクロスポリンの使用を実証する。
【０７０８】
移植後の臓器または組織拒絶を予防するために、患者は、多くの場合、免疫抑制薬シクロスポリンのレジメンを受ける。シクロスポリンレベルを、確立し、免疫系を有効に抑制するレベルで、対象において維持する。しかしながら、腎毒性は、これらの対象に対する懸念であり、対象の血中薬剤のレベルを注意深く監視する。シクロスポリン用量を、拒絶を予防するだけではなく、これらの有害な可能性のある副作用を阻止するために、適切に調節する。典型的には、大人の移植患者は、以下の通りに、シクロスポリンを受ける。ＩＶ：４〜６時間にわたる１日１回の２〜４ｍｇ／ｋｇ／日の静脈内注入、または４〜６時間にわたる１日２回の１〜２ｍｇ／ｋｇの静脈内注入、または２４時間にわたる２〜４ｍｇ／ｋｇ／日の持続静脈内注入。カプセル：２回の分割投与で、経口的に８〜１２ｍｇ／ｋｇ／日。溶液：１日１回、経口的に８〜１２ｍｇ／ｋｇ。一部の患者において、用量は時間と共に下方に滴定されて、３〜５ｍｇ／ｋｇ／日もの低い用量を維持する。一部の患者において、シクロスポリンに対する耐性が乏しく、シクロスポリン治療法を中断しなければならず、対象の腎臓の破壊を予防するために、薬用量を低減するか、または薬用量レジメンを循環させる。
【０７０９】
この実施例は、ＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩、およびシクロスポリンの、移植後臓器健康（例えば、移植後虚血−再灌流傷害および臓器拒絶）、ならびに腎臓健康（例えば、シクロスポリンの腎毒性作用）への影響を実証する。ＧＬＰ−１ペプチドの投与は、移植臓器または組織に対する保護効果、およびシクロスポリン処置の間の腎臓健康に対する保護効果を有すると予測される。
【０７１０】
移植前および移植後手順に準じてシクロスポリンを受ける移植対象は、群に分割される。治療上有効な量のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩は、移植前、移植の間、および／または移植後に、対象に投与される。対象を、移植された組織または臓器の機能、ならびに長期のシクロスポリン投与でよく見られる腎毒性の発生率および重症度のために監視する。
【０７１１】
ＧＬＰ−１ペプチドを受ける対象は、より健康な移植された臓器または組織を有し、および／またはペプチドを受けない対象と比較して、より長い期間、より高いおよび／またはより一定のシクロスポリン薬用量を維持することができると予想される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、移植患者における腎毒性を処置するための方法において有用であるシクロスポリンとの組み合わせにおいて有用であることを示す。
実施例６２：改善したＧＬＰ−１電子捕捉能力
【０７１２】
特定の天然アミノ酸は、酸化還元活性であり、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、およびＭｅｔを含む１つの電子酸化を受けることができ、Ｔｙｒが最も多用途である。Ｔｙｒは、Ｈ2Ｏ2およびヒドロキシルラジカルによって酸化を誘発する機構によって、１つの電子酸化を受けることができる。チロシルラジカルは、Ｏ２とあまり反応しないが、組み合わさって、ジチロシンダイマーを形成する。チロシルラジカルを、ＧＳＨによって捕捉して、チイルラジカル（ＧＳ）および超酸化物を生成する。超酸化物のフェノキシルラジカルとの反応は、親フェノールの修復またはヒドロ過酸化物を形成するための添加のいずれかをもたらし得る。Ｔｙｒヒドロ過酸化物の生成は、特定の状態、特に、Ｔｙｒが、Ｎ−末端または遊離アミンが近い場合に、有利に働く。現存のペプチドにおいて、電子捕捉は、２’，６’−Ｄｍｔを含むＴｙｒまたは置換Ｔｙｒによって提供された。ＴｙｒのＰｈｅでの置換は、捕捉活性を無効にする。
【０７１３】
ＧＬＰ−１ペプチドの電子捕捉能力は、酸化還元活性アミノ酸の数を増加させることによって改善され得、Ｔｙｒにおけるメチル基の取り込みが、Ｔｙｒと比較して、捕捉活性をさらに増加させると予想される。その上、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、またはＭｅｔの代わりに、ミトコンドリア標的化に置換され得る。超酸化物は、トリプトファンと反応して、ある数の反応生成物を形成し得、メチオニンとでは、メチオニンスルホキシドを形成し得る。これらの修飾ＧＬＰ−１ペプチドのＨ2Ｏ2、ヒドロキシルラジカル、超酸化物、ペルオキシナイトライトを捕捉する能力は、インビトロで判定され、次いで、細胞培養において確定される。
【０７１４】
ＧＬＰ−１ペプチドの捕捉能力は、酸化還元活性アミノ酸の数が増えるにつれ、直線的に増加すると予測される。細胞透過性を依然として維持しながら、ペプチド長さを６残基に増加させ、捕捉能力の３倍に到達することが可能であり得る。
【０７１５】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、電子捕捉を含む方法に有用であることを示す。
実施例６３：ＧＬＰ−１は電子移動を促進する
【０７１６】
電子伝達鎖（ＥＴＣ）におけるＡＴＰ合成は、一連の酸化／還元過程として記載され得るＥＴＣのタンパク質錯体を通って、電子流によって、引き起こされる。ＥＴＣを通る電子の迅速な入換は、電子脱出およびフリーラジカル中間体の生成を引き起こし得る短絡を防止するのに重要である。電子供与体と電子受容体との間の電子移動（ＥＴ）の速度は、それらの間の距離と共に急激に減少し、超交換ＥＴは、２０オングストロームに制限される。長距離ＥＴは、複数のステップの電子ホッピング過程において、到達され得、そこでは、供与体と受容体との間の全距離が、一連のより短い、したがってより速いＥＴステップに分割される。ＥＴＣにおいて、長距離にわたる効率的なＥＴを、ＦＭＮ、ＦｅＳクラスター、およびヘムを含むＩＭＭに沿って戦略的に局在化される補因子によって補助する。Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐなどの芳香族アミノ酸はまた、重複πクラウドを通るヘムへの電子移動を促進し得、これは、ｃｙｔ  ｃのために具体的に示された。好適な酸化電位（Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ）を伴うアミノ酸は、中間電子伝達体として働くことによって、足掛かりとなる。加えて、Ｔｙｒのヒドロキシル基は、それが電子を伝達するときに、プロトンを失う可能性があり、Ｌｙｓなどの近くの塩基性基の存在は、さらにより効率的であるプロトン結合ＥＴをもたらし得る。
【０７１７】
ＩＭＭにおけるタンパク質錯体の間のＧＬＰ−１ペプチドの分布は、それが追加の中継局として働くことを可能にして、ＥＴを促進すると仮定される。これは、モデル系として、ｃｙｔ  ｃ還元の動態（吸光度分光法によって監視）を使用して、実証され、ＧＬＰ−１ペプチドはＥＴを促進する。還元剤としてのＮ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）の添加は、５５０ｎｍでの吸光度における経時的な増加をもたらすと予測される。１００μＭ濃度でのＧＬＰ−１ペプチドの単独での添加は、ｃｙｔ  ｃを還元しないが、ＮＡＣ誘発性ｃｙｔ  ｃ還元の速度を、用量依存的に、増加させるとさらに予測され、ペプチドが、電子増加電子移動の速度を提供しないことを示唆する。
【０７１８】
この実施例は、ラットにおける虚血−再灌流（ＩＲ）傷害後のミトコンドリア呼吸の回復およびＡＴＰ合成に対するＧＬＰ−１ペプチドの影響をさらに実証する。動物は、４５分間の腎動脈の両側性閉塞を受け、続いて、２０分または１時間の再灌流。対象は、虚血の３０分前に、食塩水溶媒またはＧＬＰ−１ペプチド（２．０ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．）を受け、再灌流時にさらに受ける（各群においてｎ＝４−５）。ＧＬＰ−１ペプチドは、酸素消費およびＡＴＰ合成を改善すると予測される。
【０７１９】
これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、電子捕捉、電子移動を含む方法に有用であることを示す。
実施例６４：ＧＬＰ−１はミトコンドリア還元電位を強化する
【０７２０】
細胞の酸化還元環境は、その還元電位および還元能力に依存する。酸化還元電位は、細胞内に高度に区画化され、ミトコンドリア区画における酸化還元結合は、他の細胞区画におけるよりもより還元され、酸化をより起こしやすい。グルタチオン（ＧＳＨ）は、ミトコンドリアにおけるｍＭ濃度において存在し、主要な酸化還元結合と考えられる。還元チオール基−ＳＨは、タンパク質におけるジスルフィドＳ−Ｓ基を還元し、機能を復元する。ＧＳＨ／ＧＳＳＧ結合の酸化還元電位は、ＧＳＨおよびＧＳＳＧの量、ならびにＧＳＨとＧＳＳＧとの比率の２つの要因に依存する。ＧＳＨが、細胞において区画化されるとき、ＧＳＨ／ＧＳＳＧの比率は、各区画において独立して調節され、ミトコンドリアＧＳＨ（ｍＧＳＨ）は、ミトコンドリア酸化ストレスに対する主要防御である。ミトコンドリアＧＳＨ酸化還元電位は、老化と共により酸化し、これは、主にＧＳＳＧ含有量の増加およびＧＳＨ含有量の減少による。
【０７２１】
本技術のＧＬＰ−１ペプチドは、単離ミトコンドリアにおけるインビトロおよび培養細胞および動物の対象におけるインビボのミトコンドリア還元電位を強化すると予測される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、ミトコンドリア還元電位を強化させるための方法に有用であることを示す。
実施例６５：ＧＬＰ−１はＭＶ誘発性ミトコンドリア酸化を還元させる
【０７２２】
この実施例は、本技術のＧＬＰ−１ペプチドが、人工呼吸（ＭＶ）誘発性ミトコンドリア酸化を還元させることを示す。
【０７２３】
実験の設計マウス対象を以下の通りに処置する。
１．正常な移動性マウス：正常な移動性マウスを、１群当たり８匹で、ＡおよびＢの２つの群に分割する。Ａ群のマウスは、食塩水溶媒の注入を受け、Ｂ群のマウスは、ＧＬＰ−１の注入を腹腔内に受ける。
２．後肢ギプス固定されたマウス：マウスの後肢を、１４日間ギプス固定することによって、固定し、したがって、後肢筋萎縮を誘発する。ギプス固定されたマウスは、食塩水溶媒（０．３ｍｌ）またはＧＬＰ−１（０．３ｍｌ）の注入を腹腔内に受ける。未処置マウスの対照群も、この実験において使用する。
【０７２４】
ミトコンドリアＲＯＳ産生が、不動化誘発性骨格筋萎縮において役割を果たすことを実証するために、マウスを、３つの実験群のうちの１つに無作為に割り当てる（ｎ＝２４／群）。１）非処置（対照）群、２）１４日間の後肢不動化群（ギプス）、および３）ミトコンドリア標的化抗酸化剤ＧＬＰ−１で処置した１４日間の後肢不動化群（ＣａｓＨＳＳ）。対象は、不動化期間の間に１日１回投与される食塩水溶媒（０．３ｍＬ）またはＧＬＰ−１（１．５ｍｇ／ｋｇ）の注入を皮下に受ける。
【０７２５】
不動化。マウスを、気体のイソフルラン（３％導入、０．５〜２．５％）維持）で麻酔する。麻酔した動物を、足底を固定した位置において、足首関節で、両側で、ギプス固定不動化して、ヒラメ筋および足底筋の最大萎縮を誘発する。両方の後肢および身体の尾側４番目をプラスターギプスによって包囲する。擦過傷を予防するために、薄い層の詰め物を、ギプスの下に配置する。加えて、動物がギプスを噛むのを防止するために、一片のガラス繊維材料をプラスター上に適用する。マウスを、噛まれたプラスター、擦過傷、静脈閉塞、および擦過傷に伴う問題のため、日常的に監視する。
【０７２６】
透過処理した筋線維の調製。透過処理した筋線維を、以前に記載した通りに調製する。Ｋｏｒｓｈｕｎｏｖ，ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ４１６：１５−１８，１９９７；Ｔｏｎｋｏｎｏｇｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｆｌｉｉｇｅｒｓ  Ａｒｃｈ４４６：２６１−２６９，２００３。手短に言えば、筋肉を、結合組織のトリムし、線維束（４〜８ｍｇ湿重量）に切断する。顕微鏡下で、一組の非常に鋭利な鉗子を使用して、筋線維を、６０ｍＭのＫ−ＭＥＳ、３５ｍＭのＫＣ１、７．２３ｍＭのＫ２ＥＧＴＡ、２．７７ｍＭのＣａＫ２ＥＧＴＡ、２０ｍＭのイミダゾール、０．５ｍＭのＤＴＴ、２０ｍＭのタウリン、５．７ｍＭのＡＴＰ、１５ｍＭのＰＣｒ、および６．５６ｍＭのＭｇＣｌ２．６  Ｈ２Ｏ（ｐＨ７．１、２９５ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇのＨ２Ｏ）を含有する氷冷の緩衝液Ｘにおいて、優しく分離して、線維束の表面積を最大にする。筋線維を透過処理するために、各線維束を、ローテータ上で、３０分間、４℃で、５０μｇ／ｍｌのサポニンを含有する氷冷の緩衝液Ｘにおいてインキュベートする。透過処理した束を、１１０ｍＭのＫ−ＭＥＳ、３５ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＥＧＴＡ、５ｍＭのＫ２ＨＰ０４、および３ｍＭのＭｇＣｌ２、０．００５ｍＭのグルタミン酸塩、および０．０２ｍＭのリンゴ酸塩、および０．５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、ｐＨ７．１を含有する氷冷の緩衝液Ｚにおいて洗浄する。
【０７２７】
透過処理した線維におけるミトコンドリア呼吸。呼吸を、３７℃で維持される呼吸チャンバー（Ｈａｎｓａｔｅｃｈ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）において、ポーラログラフ式で測定する。呼吸チャンバーを較正した後、透過処理した線維束を、２０ｍＭのクレアチンを含有する１ｍｌの呼吸緩衝液Ｚと共にインキュベートして、クレアチンキナーゼを飽和する（Ｓａｋｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８４：８１−１００，１９９８；Ｗａｌｓｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３７：９７１−９７８，２００１）。錯体Ｉを通る流動を、５ｍＭのピルビン酸塩および２ｍＭのリンゴ酸塩を使用して、測定する。ＡＤＰの存在下における呼吸速度として定義される最大呼吸（状態３）を、０．２５ｍＭのＡＤＰを呼吸チャンバーに添加することによって、開始する。基礎呼吸（状態４）を、ＡＴＰ合成を阻害するために、１０μｇ／ｍｌのオリゴマイシンの存在下において、判定する。呼吸対照比率（ＲＣＲ）を、状態３を状態４呼吸で割ることによって計算する。
【０７２８】
ミトコンドリアＲＯＳ産生。ミトコンドリアＲＯＳ産生を、Ａｍｐｌｅｘ（商標）Ｒｅｄ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用して、判定する。アッセイを、基質として、コハク酸塩を使用して、９６−ウェルプレートにおいて、３７℃で実施する。超酸化物不均化酵素（ＳＯＤ）を、４０単位／ｍｌで添加して、全ての超酸化物をＨ2Ｏ2へと転換する。レゾルフィン形成（Ｈ2Ｏ2によるＡｍｐｌｅｘ（商標）Ｒｅｄ酸化）を、マルチウェルプレートリーダー蛍光光度計（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用して、５４５ｎｍの励起波長および５９０ｎｍの放出波長で、監視する。レゾルフィン形成のレベルを、１５分間５分毎に、記録し、Ｈ2Ｏ2産生を、検量線で計算する。
【０７２９】
ＧＬＰ−１は、正常な骨格筋の大きさまたはミトコンドリア機能に影響を及ぼさず、ＧＬＰ−１は、酸化的損傷および後肢不動化によって誘発される関連する筋力低下（例えば、萎縮、収縮機能不全など）を予防すると予測される。
【０７３０】
ＧＬＰ−１は、移動性マウスにおける、正常なヒラメ筋筋肉重量、呼吸結合比（ＲＣＲ）、ミトコンドリア状態３呼吸、またはミトコンドリア状態４呼吸に影響を及ぼさないと予測される。ＲＣＲは、酸素消費によって測定される通りの状態３呼吸と状態４呼吸との呼吸商比である。同様に、ＧＬＰ−１は、正常なヒラメ筋における異なる大きさの筋線維に対して、または足底筋重量、呼吸結合比（ＲＣＲ）、ミトコンドリア状態３呼吸、もしくはミトコンドリア状態４呼吸に対して、可変の影響をもたらさないと予測される。同じく、ＧＬＰ−１は、正常な足底筋線維組織における異なる大きさの筋線維にいかなる可変の影響ももたらさないと予測される。
【０７３１】
７日間の後肢ギプス固定は、ヒラメ筋筋肉重量およびミトコンドリア状態３呼吸の著しい減少を引き起こすと予測され、その両方が、ＧＬＰ−１の投与によって逆戻りすると予測される。７日間のギプス固定は、ヒラメ筋からのミトコンドリア単離によって、Ｈ2Ｏ2産生を著しく増加させると予測され、それは、ＧＬＰ−１によって予防されると予測される。ギプス固定はまた、４−ヒドロキシノネナール（４−ＨＮＥ）による脂質過酸化によって測定される通りの、ヒラメ筋における酸化的損傷を著しく増加させると予測される。この影響は、ＧＬＰ−１の投与によって克服されると予測される。さらに、ギプス固定は、筋肉劣化および萎縮を促進させるヒラメ筋におけるプロテアーゼ活性を著しく増加させ、この影響が、ＧＬＰ−１投与によって、軽減または予防されると予測される。筋肉のカルパイン−ｌ、カスパーゼ−３、およびカスパーゼ−１２タンパク質分解は、それぞれ、ＧＬＰ−１によって全て防止されると予測される。
【０７３２】
これらの結果は、ミトコンドリアＲＯＳ産生におけるＭＶ誘発性または活動停止誘発性増加を伴う対象にＧＬＰ−１を投与することが、プロテアーゼ活性を減少させ、骨格筋萎縮および収縮機能不全を軽減することを示す。これらの結果は、ミトコンドリア標的化抗酸化剤ＧＬＰ−１を伴う動物の処置が、Ｉ型、ＩＩａ型、およびＩＩｘ／ｂ型骨格筋線維の萎縮を予防するのに有用であり、ミトコンドリアＲＯＳ産生におけるＭＶ誘発性および活動停止誘発性の増加の防止が、準最大および最大刺激周波数両方で、横隔膜特異的力産生におけるＭＶ誘発性減少から横隔膜を保護することを示す。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩は、横隔膜および他の骨格筋におけるＭＶ誘発性および活動停止誘発性ミトコンドリアＲＯＳ産生を処置または防止するための方法に有用である。
実施例６６：ＧＬＰ−１は脳における虚血／再灌流後のノーリフローの解剖的ゾーンを減少させる
【０７３３】
この実施例は、脳における虚血−再灌流によって引き起こされるノーリフローの解剖的ゾーンから対象を保護することにおける本技術のＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。
【０７３４】
脳虚血は、脳障害の原因となる一連の細胞および分子事象を引き起こす。１つのかかる事象は、ノーリフローの解剖的ゾーンである。脳虚血を、３０分間の右中大脳動脈の閉塞によって誘発する。野生型（ＷＴ）マウスは、虚血の０、６、２４、および４８時間後に、食塩水溶媒（Ｖｅｈ）またはＧＬＰ−１ペプチド（２〜５ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを、腹腔内に与えられる。マウスを、虚血の３日後に屠殺し、脳を、６〜８の切片に横行にスライスする。切片を、紫外線下で撮影して、ノーリフローの領域を識別する。各スライスにおけるノーリフローの領域を、ＩｍａｇｅＪ（ｓｕｐｐｌｉｅｒ  Ｒａｓｂａｎｄ  ＷＳ、ＩｍａｇｅＪ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、ｈｔｔｐ：／／ｒｓｂ．ｉｎｆｏ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ／）を使用して、デジタル化する。各スライスにおける領域を、スライスの重量で掛け、ノーリフロー領域の質量を得るために、結果を、合計する。
【０７３５】
ＧＬＰ−１ペプチドでの野生型マウスの処置は、梗塞体積の著しい減少をもたらし、ノーリフローの解剖的ゾーンを防止または減少すると予想される。これらの結果は、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩が、脳における虚血−再灌流によって引き起こされるノーリフローの発生率を減少させるための方法に有用であることを示す。
実施例６７：ＧＬＰ−１は腎臓における虚血／再灌流後のノーリフローの解剖的ゾーンを減少させる
【０７３６】
この実施例は、腎臓における虚血−再灌流によって引き起こされるノーリフローの解剖的ゾーンら対象を保護することにおける本技術のＧＬＰ−１ペプチドの使用を実証する。
【０７３７】
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ系ラット（２５０〜３００ｇ）を、３つの群に割り当てる。（１）Ｉ／Ｒを伴わない擬似手術群、（２）Ｉ／Ｒ＋食塩水溶媒処置、（３）Ｉ／Ｒ＋ＧＬＰ−１ペプチド処置。ＧＬＰ−１（３ｍｇ／ｋｇ、食塩水中に溶解）を、虚血の３０分前および再灌流の開始直前に、ラットに投与する。対照ラットに、同じ計画で、食塩水溶媒を与える。ラットを、ケタミン（９０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）およびキシラジン（４ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の混合物で、麻酔にかける。左腎臓血管茎を、マイクロクランプを使用して、３０または４５分間、一時的に、閉塞させる。虚血期間の最後に、再灌流を、クランプを除去することによって、確立する。その時、対側右腎臓を除去する。２４時間の再灌流後、動物を屠殺し、血液サンプルを、心臓穿刺によって得る。腎機能を、血中尿素窒素（ＢＵＮ）および血清クレアチニンによって測定することによって、判定する（ＢｉｏＡｓｓａｙ  ＳｙｓｔｅｍｓＤＩＵＲ−５００およびＤＩＣＴ−５００）。
【０７３８】
ノーリフローゾーンの分析および壊死。腎臓を、６〜８の切片に横行にスライスする。切片を、紫外線下で撮影して、ノーリフローの領域を識別する。各スライスにおけるノーリフローの領域を、ＩｍａｇｅＪ（ｓｕｐｐｌｉｅｒ  Ｒａｓｂａｎｄ  ＷＳ、Ｉｍａｇｅ  Ｊ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、ｈｔｔｐ：／／ｒｓｂ．ｉｎｆｏ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ／）を使用して、デジタル化する。各スライスにおける領域を、スライスの重量で掛け、ノーリフロー領域の質量を得るために、結果を、合計する。
【０７３９】
ＧＬＰ−１ペプチドでの処置は、腎臓におけるノーリフローの解剖的ゾーンを防止または減少させると予想される。ＢＵＮ、血清クレアチニン、および糸球体濾過率のうちの１つ以上が、対照対象と比較したときに、ＧＬＰ−１ペプチドで処置された対象において改善されるとさらに予想される。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩は、腎臓における虚血−再灌流によって引き起こされるノーリフローの発生率を減少させるための方法に有用である。
実施例６８：ＧＬＰ−１は、ヒトにおけるノーリフロー現象を防ぐ
【０７４０】
この実施例は、ヒト対象におけるノーリフローの解剖的ゾーンの大きさを制限するための虚血組織の血行再建時のＧＬＰ−１の使用を実証する。
【０７４１】
急性心筋梗塞（ＡＭＩ）の処置のため、影響を受けた動脈の機械的再疎通の使用は、患者の９０％超において虚血心筋（ＴＩＭＩ流れ階級３）への心外膜冠動脈血流を回復する。しかしながら、これらの再灌流方法は、毛細血管床のレベルで血流ダウンストリームの回復という重要な付属的問題に対処しない。一次経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）の間または後に、微小循環機能不全が、患者の２０〜４０％で観察される。ステント留置法での血管形成術後のＳＴ−セグメント上昇分解能の欠如は、毛細血管の問題のマーカーであり、臨床予後不良に関連する。ＳＴＥＭＩにおいて、開存性冠動脈の存在にも関わらず心筋再灌流に到達できないことが、「ノーリフロー」と称された。
【０７４２】
研究群。胸痛の開始の６時間後以内に示し、２つの連続的なリードにおける０．１ｍＶ超のＳＴ−セグメント上昇を有し、ＰＣＩで処置するために臨床的決定がなされる１８歳以上の年齢の男性および女性が、登録対象である。患者は、彼らが一次ＰＣＩまたは救助ＰＣＩを受けるかどうかの研究対象である。入院時の影響を受けた冠動脈（心筋梗塞［ＴＩＭＩ］流れ階級０における血栓溶解）の閉塞もまた、包含の基準である。
【０７４３】
血管造影および血行再建。左心室および冠動脈血管造影を、血行再建の直前に標準の技法を用いて実施する。血行再建を、直接ステント留置法を用いてＰＣＩによって実施する。代替の血行再建術には、バルーン血管形成、バイパス移植片の挿入、経皮経管冠動脈形成術、および方向性冠動脈粥腫切除術が含まれるが、それらに限定されない。
【０７４４】
実験のプロトコル。冠動脈血管造影を実施した後であるが、ステントを埋め込む前に、登録基準を満たす患者を、対照群またはＧＬＰ−１ペプチド群のいずれかに無作為に割り当てる。無作為化を、コンピュータ生成された無作為化シーケンスを用いて実施する。直接ステント留置の１０分未満前に、ペプチド群の患者は、ＧＬＰ−１ペプチドの静脈内ボーラス注入を受ける。ペプチドを食塩水（最終濃度、ミリリットル当たり２５ｍｇ）中で溶解し、肘正中静脈内に位置付けられるカテーテルを通して注入する。対照群の患者は、同等容量の正常食塩水を受ける。
【０７４５】
ノーリフローゾーン。主要エンドポイントは、ノーリフローの解剖的ゾーンの大きさである。ノーリフローを、１つ以上の撮像技法によって評価する。リフロー現象を、心筋コントラストエコー法、冠動脈血管造影、心筋紅潮、冠動脈ドップラー撮像、心電図検査、タリウムもしくはテクネチウム−９９ｍを使用する核撮像単一光子放射型ＣＴ、またはＰＥＴを使用して、評価する。１．５−Ｔの身体ＭＲＩスキャナーを使用して、心室機能、心筋の浮腫（危険性のある領域）、毛細血管の閉塞、および梗塞の大きさを評価するために、心臓ＭＲＩを実施する。造影剤後の遅延増強を、成功裏ＰＣＩおよびステント留置法の後４±１日目、３０±３日目、および６＋１．５ヶ月目に使用して、梗塞した心筋を定量化する。これは、同じスライス内の、離れた、非梗塞心筋の参照領域における強度を、２ＳＤを超えて上回る、心筋の造影剤後のシグナルの強度によって、定量的に定義される。標準的な細胞外のガドリニウムベースの造影剤が、０．２ｍｍｏｌ／ｋｇの用量で使用される。２Ｄ反転回復準備済みの高速勾配エコーシーケンスは、次の時点で使用する。（１）毛細血管の梗塞の評価では、早期（造影剤の注入後約２分）。利用可能な場合は単発技法を考慮し、（２）梗塞の大きさの評価では、後期（造影剤の注入後おおよそ１０分）。
【０７４６】
再灌流時のＧＬＰ−１ペプチドの投与は、偽薬の投与で見られるよりもある程度小さいノーリフローの解剖的ゾーンに関連していると予測される。このため、本技術のＧＬＰ−１ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩、例えば、酢酸塩もしくはトリフルオロ酢酸塩は、心臓における虚血−再灌流によって引き起こされるノーリフローの発生率を減少させるための方法に有用である。
実施例６９−ヒトにおける薬物誘発性痛覚過敏の処置におけるＧｌｐ−１の使用
【０７４７】
この実施例は、ヒト対象における痛覚過敏の処置における本技術の方法および組成物の使用を実証する。実施例は、ヒトにおけるビンクリスチン誘発性痛覚過敏の処置における、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）の使用を実証する。
【０７４８】
患者は、彼らが、慢性（＞６ヶ月の持続期間）の自然発症の進行中のビンクリスチン関連の疼痛で、診療所にいるときに、研究のために採用される。登録者は、視覚的アナログ尺度（ＶＡＳ）で、４以上の疼痛の毎日の最高レベルを評価する。患者は、研究への登録の意志のために審査され、説明と同意が得られる。健康な対象も、比較データの回収のため採用される。患者または比較群いずれにおける対象も、糖尿病、ＡＩＤＳ、慢性アルコール中毒、または以前の放射線被曝を含む末梢神経障害の任意の他の原因の既知の危険因子を有さない。
【０７４９】
患者の癌の病歴および処置についての集中的な問診後、理想的な種類の単語記述語のリストから選択することによって感覚的な症状を記述するように指示される。進行中および日常的な最大の疼痛強度を、底部に「疼痛なし」および頂部に「想像できる最大」のプロンプトを伴うＶＡＳで評価する。疼痛および感覚障害の領域は、各患者によって、標準化身体マップ上に描かれる。パクリタキセルで処置された患者における以前の観察と類似しているが、ビンクリスチン誘発性末梢神経障害を有する対象は、以下の感覚の３つのゾーンを識別すると予想される。
ａ）有痛領域：手指および／または足指の先端に位置する進行中の疼痛のゾーン。示指の先端は、全ての患者に関わると予期され、このゾーンの試験部位として使用される。
ｂ）境界領域：有痛領域とは異なるが、隣接し、および近位であり、無痛感覚障害で表され、手掌および／または足の裏に位置する。母指球は、全ての患者に関わると予期され、このゾーンの試験部位として使用される。
ｃ）無痛領域：境界領域とは異なるが、隣接し、および近位であり、患者によって「正常」に感じると報告される。この部位は、常に、手首および／または足首近位であると予期される。感覚試験を腕の掌側表面上で実施する。
【０７５０】
示指の先端、母指球、および掌側前腕を、比較のため、正常な対象において試験する。患者は、衣類、ベッド用リネン製品、入浴、および日常生活の通常の活動が引き起こす影響を含む、疼痛を引き起こすか、またはこれらの領域における進行中の疼痛の悪化を引き起こす刺激について具体的に質問される。各ゾーンを、拡大縮小、ばち状指、および紅斑などの任意の物理変化のために検査し、それを記述する。感覚障害を、ラクダ毛ブラシで軽い接触によって、および手動マッサージによって、物理的に精査して、異痛症または痛覚過敏の存在のため審査する。
【０７５１】
接触および鮮鋭度検出閾値-接触検出閾値を、以前に報告した通り、上げ／下げ法を用いて、ｖｏｎ  Ｆｒｅｙモノフィラメントで判定する。０．０２ｇの湾曲力で開始し、各モノフィラメントを、約１秒間、２ｍｍ未満の直径の皮膚上の点に適用する。４回連続で検出されたフィラメントの力を、接触検出閾値として割り当てる。鮮鋭度検出を、加重した３０−ゲージ金属製シリンダーを使用して、判定する。手短に言えば、３０−ゲージ針の先端（２００ｍｍの直径）を、やすりにかけて、平坦にし、円柱状終端およびルアーを、各刺激のため、所望の力（１００、２００、および４００ｍＮ）レベルで、較正された真鍮重量に適合させる。各負荷針を、それが自由に移動できる別個の１０ｃｃのシリンジ内へと配置する。各刺激を、擬似乱数順序における関心の各領域内で、１０回皮膚と垂直に、１秒間適用する。対象は、刺激が接触、圧力、鋭さ、またはその他として認知されるかどうかを示す。各応答の割合を、計算し、次いで、比較のため群全体平均値に組み合わせる。５０％鮮鋭度検出閾値を、１０回の連続刺激後に５以上の鋭さ応答を引き起こす加重した針として計算する。
【０７５２】
溝付ペグボード試験−手先の器用さを、溝付ペグボード試験で評価する。対象は、指示された様式で、５×５の溝付ペグボートを満たすように指示され、利き手と非利き手の両方の時間を記録する。
【０７５３】
熱検出閾値−熱疼痛を、マーストック（Ｍａｒｓｔｏｃｋ）技法を使用して判定する。線量計を、試験の初めに使用して、全ての試験部位でのベースライン皮膚温度を確認する。全ての試験および測定を室温２２℃で実施する。熱勾配を、３２℃のベースライン温度から３．６×３．６ｃｍのペルチェ熱極を使用して、適用した。皮膚加熱は、０．３０℃／秒の勾配であり、皮膚冷却は、−０．５℃／秒の勾配である。対象は、刺激が最初に温かくなり次いで痛いほど熱くなる、または最初に涼しくなり次いで痛いほど冷たくなるとして認知されるときに合図するように指示される。対象が、冷却試験において１０秒間維持される上行性勾配または３℃に対して、５１．５℃の遮断温度の前に所与の閾値に到達できない場合、遮断値は、到達していない任意のもののために割り当てられる。各患者における各皮膚感覚のための最終閾値を、３つの加熱および冷却治験の結果を平均することによって判定する。
【０７５４】
統計的分析−接触検出の閾値を、ノンパラメトリック法（ウィルコクソンの試験）を使用して、比較する。鮮鋭度検出、熱閾値、および溝付ペグボート試験における時間を、分散の分析およびダンカンの多重範囲検定を用いた平均値の事後比較（Ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ）を使用して、比較する。機械的閾値および熱閾値の比較を、試験された皮膚の異なる領域に対して、健康な対象と患者の間で実施する。さらなる分析を、患者群内の無毛の皮膚と掌側皮膚との間で実施する。本研究で実施されたあらゆる比較に関して、ｐ＜０．０５は有意であると考えられる。
【０７５５】
上の基準の初期評価後、対象を４つの群に分ける。
ａ）健康な対照
ｂ）非処置
ｃ）溶媒のみの偽薬、皮下に投与、１４日間１日１回
ｄ）１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）、１０ｍｇ／ｋｇ、皮下に投与、１４日間１日１回
【０７５６】
１４日間の処置期間後、対象を、上述の通りの統計学的分析で、上の基準に従って再評価する。
【０７５７】
結果-１４日間の期間Ｇｌｐ−１を投与された神経障害対象は、非処置または溶媒のみの偽薬を投与された対象と比較して、痛覚過敏症状の低減を報告すると予期される。痛覚過敏の低減は、対照対象と比較して、接触および鮮鋭度検出閾値、溝付ペグボート試験、および熱検出試験の改善された点数付けにおいて顕在化される。
【０７５８】
これらの結果は、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）などの本技術の芳香族カチオン性ペプチドが、ビンクリスチン誘発性痛覚過敏、および一般的に薬物誘発性痛覚過敏の処置で有用であることを示す。結果は、本明細書に記載される方法および組成物が、薬物誘発性末梢神経障害または痛覚過敏の処置に有用であることを示す。
実施例７０−ヒトにおける痛覚過敏の処置におけるＧｌｐ−１の使用
【０７５９】
この実施例は、痛覚過敏の処置における本技術の方法および組成物の使用を実証する。実施例は、ヒトにおける様々な原因の末梢神経障害に関連する痛覚過敏の処置における１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）の使用を実証する。
【０７６０】
患者は、彼らが、慢性（＞６ヶ月の持続期間）の自然発症の進行中の神経障害関連の疼痛で、診療所にいるときに、研究のために採用される。独立した研究は、遺伝性傷害、代謝性／内分泌性合併症、炎症性疾患、ビタミン欠乏症、悪性疾患、ならびにアルコール、有機金属、重金属、放射線、および薬物毒性などの毒性によって引き起こされるか、それらに起因するか、またはそれらに関連する神経障害に対処する。対象を、彼らが神経障害の単一の型を有し、かつ対象が登録される研究の範囲外の神経障害型の既知の危険因子を有さないように、選択する。登録者は、視覚的アナログ尺度（ＶＡＳ）で、４以上の疼痛の毎日の最高レベルを評価する。対象は、研究への登録の意志のために審査され、説明と同意が得られる。健康な対象も、比較データの回収のため採用される。
【０７６１】
診療歴についての集中的な問診後、理想的な種類の単語記述語のリストから選択することによって感覚的な症状を記述するように指示される。進行中および日常的な最大の疼痛強度を、底部に「疼痛なし」および頂部に「想像できる最大」のプロンプトを伴うＶＡＳで評価する。疼痛および感覚障害の領域は、各患者によって、標準化身体マップ上に描かれる。神経障害対象は、以下の感覚の３つのゾーンを識別すると予想される。
ａ）有痛領域：手指および／または足指の先端に位置する進行中の疼痛のゾーン。示指の先端は、全ての患者に関わると予期され、このゾーンの試験部位として使用される。
ｂ）境界領域：有痛領域とは異なるが、隣接し、および近位であり、無痛感覚障害で表され、手掌および／または足の裏に位置する。母指球は、全ての患者に関わると予期され、このゾーンの試験部位として使用される。
ｃ）無痛領域：境界領域とは異なるが、隣接し、および近位であり、患者によって「正常」に感じると報告される。この部位は、常に、手首および／または足首近位であると予期される。感覚試験を腕の掌側表面上で実施する。
【０７６２】
示指の先端、母指球、および掌側前腕を、比較のため、正常な対象において試験する。患者は、衣類、ベッド用リネン製品、入浴、および日常生活の通常の活動が引き起こす影響を含む、疼痛を引き起こすか、またはこれらの領域における進行中の疼痛の悪化を引き起こす刺激について具体的に質問される。各ゾーンを、拡大縮小、ばち状指、および紅斑などの任意の物理変化のために検査し、それを記述する。感覚障害を、ラクダ毛ブラシで軽い接触によって、および手動マッサージによって、物理的に精査して、異痛症または痛覚過敏の存在のため審査する。
【０７６３】
接触および鮮鋭度検出閾値-接触検出閾値を、以前に報告した通り、上げ／下げ法を用いて、ｖｏｎ  Ｆｒｅｙモノフィラメントで判定する。０．０２ｇの湾曲力で開始し、各モノフィラメントを、約１秒間、２ｍｍ未満の直径の皮膚上の点に適用する。４回連続で検出されたフィラメントの力を、接触検出閾値として割り当てる。鮮鋭度検出を、加重した３０−ゲージ金属製シリンダーを使用して、判定する。手短に言えば、３０−ゲージ針の先端（２００ｍｍの直径）を、やすりにかけて、平坦にし、円柱状終端およびルアーを、各刺激のため、所望の力（１００、２００、および４００ｍＮ）レベルで、較正された真鍮重量に適合させる。各負荷針を、それが自由に移動できる別個の１０ｃｃのシリンジ内へと配置する。各刺激を、擬似乱数順序における関心の各領域内で、１０回皮膚と垂直に、１秒間適用する。対象は、刺激が接触、圧力、鋭さ、またはその他として認知されるかどうかを示す。各応答の割合を、計算し、次いで、比較のため群全体平均値に組み合わせる。５０％鮮鋭度検出閾値を、１０回の連続刺激後に５以上の鋭さ応答を引き起こす加重した針として計算する。
【０７６４】
溝付ペグボード試験−手先の器用さを、溝付ペグボード試験で評価する。対象は、指示された様式で、５×５の溝付ペグボートを満たすように指示され、利き手と非利き手の両方の時間を記録する。
【０７６５】
熱検出閾値−熱疼痛を、マーストック（Ｍａｒｓｔｏｃｋ）技法を使用して判定する。線量計を、試験の初めに使用して、全ての試験部位でのベースライン皮膚温度を確認する。全ての試験および測定を室温２２℃で実施する。熱勾配を、３２℃のベースライン温度から３．６×３．６ｃｍのペルチェ熱極を使用して、適用した。皮膚加熱は、０．３０℃／秒の勾配であり、皮膚冷却は、−０．５℃／秒の勾配である。対象は、刺激が最初に温かくなり次いで痛いほど熱くなる、または最初に涼しくなり次いで痛いほど冷たくなるとして認知されるときに合図するように指示される。対象が、冷却試験において１０秒間維持される上行性勾配または３℃に対して、５１．５℃の遮断温度の前に所与の閾値に到達できない場合、遮断値は、到達していない任意のもののために割り当てられる。各患者における各皮膚感覚のための最終閾値を、３つの加熱および冷却治験の結果を平均することによって判定する。
【０７６６】
統計的分析−接触検出の閾値を、ノンパラメトリック法（ウィルコクソンの試験）を使用して、比較する。鮮鋭度検出、熱閾値、および溝付ペグボート試験における時間を、分散の分析およびダンカンの多重範囲検定を用いた平均値の事後比較（Ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ）を使用して、比較する。機械的閾値および熱閾値の比較を、試験された皮膚の異なる領域に対して、健康な対象と患者の間で実施する。さらなる分析を、患者群内の無毛の皮膚と掌側皮膚との間で実施する。本研究で実施されたあらゆる比較に関して、ｐ＜０．０５は有意であると考えられる。
【０７６７】
上の基準の初期評価後、対象を４つの群に分ける。
ａ）健康な対照
ｂ）非処置
ｃ）溶媒のみの偽薬、皮下に投与、１４日間１日１回
ｄ）１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）、１０ｍｇ／ｋｇ、皮下に投与、１４日間１日１回
【０７６８】
１４日間の処置期間後、対象を、上述の通りの統計学的分析で、上の基準に従って再評価する。
【０７６９】
結果−１４日の期間、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を投与した神経障害対象は、溶媒飲みの偽薬を投与した対象と比較して、痛覚過敏の低減を報告すると予期される。痛覚過敏の低減は、対照対象と比較して、接触および鮮鋭度検出閾値、溝付ペグボート試験、および熱検出試験の改善された点数付けにおいて顕在化される。
【０７７０】
これらの結果は、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）などの本技術の芳香族カチオン性ペプチドが、一般的に神経障害に関した痛覚過敏の処置に有用であることを示す。
実施例７１−ヒトにおける痛覚過敏の予防におけるＧｌｐ−１の使用
【０７７１】
この実施例は、痛覚過敏の予防における本技術の方法および組成物の使用を実証する。実施例は、ヒトにおける様々な原因の末梢神経障害に関連する痛覚過敏の予防における１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）の使用を実証する。
【０７７２】
痛覚過敏を発症する危険のある対象を、彼らが末梢神経障害または痛覚過敏の発症に関連する状態の処置のために診療所にいるときに採用する。独立した研究は、遺伝性傷害、代謝性／内分泌性合併症、炎症性疾患、ビタミン欠乏症、悪性疾患、ならびにアルコール、有機金属、重金属、放射線、および薬物毒性などの毒性によって引き起こされるか、それらに起因するか、またはそれらに関連する神経障害および痛覚過敏に対処する。対象を、神経障害または痛覚過敏に関連する症状をまだ有していないときに、対象が登録される研究の範囲外の危険因子を有さず、彼らが神経障害または痛覚過敏の単一の型を発症する危険性があるように、選択する。対象は、研究への登録の意志のために審査され、説明と同意が得られる。健康な対象も、比較データの回収のため採用される。
【０７７３】
診療歴についての集中的な問診後、接触および鮮鋭度検出閾値、溝付ペグボート試験、および熱検出閾値のベースライン測定を、上述の統計学的分析で、上述の方法に従って、判定する。
【０７７４】
上の基準の初期評価後、対象を４つの群に分ける。
ａ）健康な対照
ｂ）非処置
ｃ）溶媒のみの偽薬、皮下に投与、１日１回
ｄ）１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）、１０ｍｇ／ｋｇ、皮下に投与、１日１回
【０７７５】
対象を、鮮鋭度検出閾値、溝付ペグボート試験、および熱検出試験のため、治験の間毎週評価する。治験を、２８日の期間、または非処置および偽薬対照群が上の基準に従って、痛覚過敏を示すまで継続し、その時点で、対象は最終評価を受ける。
【０７７６】
結果-１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）を投与した神経障害または痛覚過敏を発症する危険性のある対象は、未処置および偽薬対照と比較して、神経障害または痛覚過敏の軽減された発症を示すと予期される。
【０７７７】
これらの結果は、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチドまたは第ＩＩ節および／または表１に示されるペプチドのうちの任意の１つ以上）と組み合わせたＧＬＰ−１（または変異体、類似体、もしくはそれらの薬学的に許容される塩）などの本技術の芳香族カチオン性ペプチドが、一般的に神経障害および痛覚過敏の予防  に有用であることを示す。結果は、本明細書に記載される方法および組成物が、一般的に神経障害または痛覚過敏の予防に有用であることを示す。
【０７７８】
均等物
本発明は、本発明の個々の態様の単なる例として意図される、本出願に記載の特定の実施形態の点に限定されるものではない。本発明の多数の変更および変形は、当業者には明らかであるように、その精神と範囲から逸脱することなく、なされてもよい。本発明の範囲内の、機能的に同等の方法および器具は、本明細書に列挙されたものに加えて、前述の記載から当業者には明らかであろう。かかる変更および変形は、添付の特許請求の範囲内に含まれるように意図される。本発明は、かかる特許請求が与える均等物の全範囲に加え、添付の特許請求の表現によってのみ制限される。本発明が、特定の方法、試薬、化合物、組成物、または生体系に限定されるものではなく、もちろん変形可能であることを理解されたい。本明細書に使用される専門用語は、特定の実施形態のみを記載する目的であり、限定する意図はないこともまた、理解されたい。
【配列表】
2018021033000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成29年8月23日(2017.8.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＬＰ−１またはその変異体、類似体、もしくは薬学的に許容される塩を、１種以上の活性薬剤と組み合わせて含む組成物であって、前記活性薬剤が、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2または第ＩＩ節もしくは表１に記載されている１種以上の芳香族カチオン性ペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩を含むことを特徴とする組成物。
【請求項２】
１種以上の追加の活性薬剤をさらに含み、前記追加の活性薬剤が、シクロスポリン、心臓病薬、抗炎症薬、降圧剤、抗体、点眼薬、抗酸化剤、金属錯体、および抗ヒスタミン薬から成る群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ミトコンドリア機能不全を治療または予防する必要のある対象において、ミトコンドリア機能不全を治療または予防するのに使用するための、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患または状態を治療する必要のある対象において、ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患または状態を治療するのに使用するための、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項５】
前記疾患または状態が、インスリン抵抗性、糖尿病、糖尿病の合併症、糖尿病性腎症、急性腎損傷、慢性腎損傷、腎毒性薬剤および／または放射性造影剤への曝露に起因する急性または慢性腎損傷、高血圧、代謝症候群、眼疾患または眼状態、例えば、ドライアイ、糖尿病性網膜症、白内障、網膜色素変性、緑内障、黄斑変性、脈絡膜血管新生、網膜変性、酸素誘発性網膜症、心筋症、虚血性心疾患、心不全、高血圧性心筋症、血管閉塞、血管閉塞損傷、心筋梗塞、冠動脈疾患、酸化的損傷、神経性または神経変性疾患または状態、虚血、再灌流、低酸素症、アテローム性動脈硬化症、尿管閉塞、関節炎、および肝損傷から成る群から選択される、請求項４に記載の、使用するための組成物。
【請求項６】
前記薬学的に許容される塩が、酢酸塩またはトリフルオロ酢酸塩を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記対象が、ヒトである、請求項３〜５のいずれか一項に記載の、使用するための組成物。
【請求項８】
前記疾患または状態が、インスリン抵抗性である、請求項４に記載の、使用するための組成物。
【請求項９】
前記対象が、食事誘発性インスリン抵抗性を患っている、請求項８に記載の、使用するための組成物。
【請求項１０】
前記対象が、薬物誘発性インスリン抵抗性を患っている、請求項８に記載の、使用するための組成物。
【請求項１１】
前記インスリン抵抗性が、ＩＩ型糖尿病に関連している、請求項８に記載の、使用するための組成物。
【請求項１２】
前記インスリン抵抗性が、肥満に関連している、請求項８に記載の、使用するための組成物。
【請求項１３】
前記インスリン抵抗性が、冠動脈疾患、腎機能不全、アテローム性動脈硬化症、高脂血症、本態性高血圧、または脂肪肝に関連している、請求項８に記載の、使用するための組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、ＩＩ型糖尿病の発症の前に投与されるものである、請求項８に記載の、使用するための組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、経口的、局所的、鼻腔内、筋肉内、皮下的、または経皮的に投与されるものである、請求項３〜５又は７〜１４のいずれか一項に記載の、使用するための組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０７７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０７７８】
均等物
本発明は、本発明の個々の態様の単なる例として意図される、本出願に記載の特定の実施形態の点に限定されるものではない。本発明の多数の変更および変形は、当業者には明らかであるように、その精神と範囲から逸脱することなく、なされてもよい。本発明の範囲内の、機能的に同等の方法および器具は、本明細書に列挙されたものに加えて、前述の記載から当業者には明らかであろう。かかる変更および変形は、添付の特許請求の範囲内に含まれるように意図される。本発明は、かかる特許請求が与える均等物の全範囲に加え、添付の特許請求の表現によってのみ制限される。本発明が、特定の方法、試薬、化合物、組成物、または生体系に限定されるものではなく、もちろん変形可能であることを理解されたい。本明細書に使用される専門用語は、特定の実施形態のみを記載する目的であり、限定する意図はないこともまた、理解されたい。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕ＧＬＰ−１を、単独で、あるいは、１つ以上の活性薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−２’６’−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2などの芳香族カチオン性ペプチド）または第ＩＩ節もしくは表１に記載されている１つ以上の芳香族カチオン性ペプチドと組み合わせて含むことを特徴とする組成物。
〔２〕シクロスポリン、心臓病薬、抗炎症薬、降圧剤、抗体、点眼薬、抗酸化剤、金属錯体、および抗ヒスタミン薬などの１つ以上の追加の活性薬剤をさらに含む、前記〔１〕に記載の組成物。
〔３〕ミトコンドリア機能不全を治療または予防するための方法であって、治療上有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔４〕ミトコンドリア機能不全を特徴とする疾患または状態を治療する方法であって、治療上有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔５〕前記疾患または状態が、神経性または神経変性疾患または状態、虚血、再灌流、低酸素症、アテローム性動脈硬化症、尿管閉塞、糖尿病、糖尿病の合併症、関節炎、肝損傷、インスリン抵抗性、糖尿病性腎症、急性腎損傷、慢性腎損傷、腎毒性薬剤および／または放射性造影剤への曝露に起因する急性または慢性腎損傷、高血圧、代謝症候群、眼疾患または眼状態、例えば、ドライアイ、糖尿病性網膜症、白内障、網膜色素変性、緑内障、黄斑変性、脈絡膜血管新生、網膜変性、酸素誘発性網膜症、心筋症、虚血性心疾患、心不全、高血圧性心筋症、血管閉塞、血管閉塞損傷、心筋梗塞、冠動脈疾患、酸化的損傷を含む、前記〔３〕または〔４〕に記載の方法。
〔６〕前記ミトコンドリア機能不全が、ミトコンドリア透過性転移を含む、前記〔３〕〜〔５〕に記載の方法。
〔７〕前記神経性または神経変性疾患または状態が、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、ハンチントン病、または多発性硬化症を含む、前記〔３〕〜〔６〕のいずれか１項に記載の方法。
〔８〕前記対象が、虚血を患っているか、または心血管組織、骨格筋組織、脳組織、および腎組織のうちの１つ以上においてノーリフローの解剖学的ゾーンを有する、前記〔３〕〜〔７〕のいずれか１項に記載の方法。
〔９〕ＣＤ３６の発現の減少を必要とする対象におけるＣＤ３６の発現を減少させるための方法であって、有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔１０〕ＣＤ３６の上昇を特徴とする疾患または状態の治療または予防を必要とする対象におけるＣＤ３６の上昇を特徴とする疾患または状態を治療または予防するための方法であって、有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔１１〕前記対象が、アテローム性動脈硬化症、炎症、血管新生異常、脂質代謝異常、アポトーシス細胞の除去異常、脳虚血および心筋虚血などの虚血、虚血−再灌流、尿管閉塞、脳卒中、アルツハイマー病、糖尿病、糖尿病性腎症、または肥満を有する、有すると疑われる、または有する危険性があると診断される、前記〔９〕または〔１０〕に記載の方法。
〔１２〕除去された臓器または組織における酸化的損傷を低減させるための方法であって、有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を前記除去された臓器または組織に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔１３〕前記除去された臓器が、心臓、肺、膵臓、腎臓、肝臓、または皮膚を含む、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１４〕ドーパミン産生ニューロンの損失の予防を必要とする対象におけるドーパミン産生ニューロンの損失を予防するための方法であって、有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔１５〕前記対象が、パーキンソン病またはＡＬＳを有する、有すると疑われる、または有する危険性があると診断される、前記〔１５〕に記載の方法。
〔１６〕神経変性疾患に関連する酸化的損傷の低減を必要とする対象における神経変性疾患に関連する酸化的損傷を低減させる方法であって、有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔１７〕前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、またはＡＬＳを含む、前記〔１６〕に記載の方法。
〔１８〕熱傷の予防または治療を必要とする対象における熱傷を予防または治療するための方法であって、有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔１９〕人工呼吸誘発性横隔膜機能不全の治療または予防を必要とする対象における人工呼吸誘発性横隔膜機能不全を治療または予防するための方法であって、有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔２０〕虚血−再灌流傷害後のノーリフローの治療または予防を必要とする対象における虚血−再灌流傷害後のノーリフローを治療または予防するための方法であって、有効な量の前記〔１〕に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔２１〕鎮痛剤を必要とする哺乳動物におけるノルエピネフリン取り込みを予防するための方法であって、有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔２２〕薬物誘発性末梢神経障害または痛覚過敏の治療または予防を必要とする対象における薬物誘発性末梢神経障害または痛覚過敏を治療または予防するための方法であって、有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔２３〕疼痛の阻害または抑制を必要とする対象における疼痛を阻害または抑制するための方法であって、有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔２４〕アテローム硬化性腎血管疾患（ＡＲＶＤ）の治療を必要とする対象におけるアテローム硬化性腎血管疾患（ＡＲＶＤ）を治療するための方法であって、有効な量の前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物を前記対象に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
〔２５〕１つ以上のＤ−アミノ酸の包含、１つ以上のＮ−メチル化部位の包含、および１つ以上の還元アミド結合（Ψ［ＣＨ2−ＮＨ］）の包含から選択される修飾を備えるＧｌｐ−１類似体を含む、前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物。
〔２６〕少なくとも１つの薬学的に許容されるｐＨ低下剤、および前記活性薬剤の生物学的利用能の促進に有効な少なくとも１つの吸収促進剤、および１つ以上の積層のうちの１つ以上をさらに含む、前記〔１〕または〔２〕に記載の組成物。
〔２７〕前記ｐＨ低下剤が、クエン酸、酒石酸、およびアミノ酸の酸性塩からなる群から選択される、前記〔２６〕に記載の組成物。
【外国語明細書】
2018021033000001.pdf