(57)【要約】      （修正有）【課題】客観的に統合失調症関連疾患を診断することができる技術を提供する。【解決手段】抗シンシチン−１抗体からなる、統合失調症関連疾患の診断用マーカー。シンシチン−１タンパク質又はその断片を備える、統合失調症関連疾患の診断用キット。シンシチン−１タンパク質の断片は、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなるペプチドであるか、又は、配列番号９に記載のアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり且つ抗シンシチン−１抗体により認識されるペプチドである、統合失調症関連疾患の診断用キット。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗シンシチン−１抗体からなる、統合失調症関連疾患の診断用マーカー。
【請求項２】
シンシチン−１タンパク質又はその断片を備える、統合失調症関連疾患の診断用キット。
【請求項３】
ヒト抗体に対する特異的結合物質を更に備える、請求項２に記載の統合失調症関連疾患の診断用キット。
【請求項４】
シンシチン−１タンパク質の断片を備え、前記断片は、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなるペプチドであるか、又は、配列番号９に記載のアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり且つ抗シンシチン−１抗体により認識されるペプチドである、請求項２又は３に記載の統合失調症関連疾患の診断用キット。
【請求項５】
被験者が統合失調症関連疾患に罹患している可能性を血清学的に識別するためのデータを収集する方法であって、被験者由来の血液中に、抗シンシチン−１抗体が存在するか否かを検出する工程を備え、前記抗体の存在の有無が、前記被験者が統合失調症関連疾患に罹患している可能性を血清学的に識別するためのデータである方法。
【請求項６】
抗シンシチン−１抗体が存在するか否かを検出する前記工程がＥＬＩＳＡ法により行われる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
被験者由来の血液中に、抗シンシチン−１抗体が存在するか否かを検出する工程を備え、前記抗体が存在する場合には前記被験者は統合失調症関連疾患に罹患している可能性があり、前記抗体が存在しない場合には前記被験者は統合失調症関連疾患に罹患していないという基準と比較することにより、前記被験者が統合失調症関連疾患に罹患しているか否かを試験する方法。
【請求項８】
抗シンシチン−１抗体が存在するか否かを検出する前記工程がＥＬＩＳＡ法により行われる、請求項７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、統合失調症とその関連疾患の診断用マーカー及びその使用に関する。より詳細には、統合失調症関連疾患の診断用マーカー、統合失調症関連疾患の診断用キット、被験者が統合失調症関連疾患に罹患しているか否かを識別するためのデータを収集する方法、及び被験者が統合失調症関連疾患に罹患しているか否かを試験する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
統合失調症とは、幻覚や妄想等の症状が特徴的な精神疾患の１種であり、それに伴って人々と交流しながら家族や社会で生活を営む機能が障害を受け(生活の障害)、「感覚・思考・行動が病気のためにひずんでいる」ことを自分で振り返って考えることが困難になる（病識の障害）という特徴を併せ持っている。統合失調症は慢性の経過をたどりやすく、発症後数年で病状が進行して不可逆的な障害が引き起こされ、社会的機能の永続的な障害が生じると考えられている。
【０００３】
統合失調症の発症率は、人口の０．５〜１．０％にも達するため患者数は非常に多い。しかしながら、その診断は精神科医の固有の診断基準に大きく依存するため、経験を積んだ医師のスキルに頼っているのが現状である。このため、治療的介入が遅れ、その結果、難治化している症例が少なくない。
【０００４】
他方、ヒトのゲノム中には、ヒト内在性レトロウイルス（ＨＥＲＶ）と呼ばれるレトロウイルスに由来すると考えられるＤＮＡ配列が随所に存在する。そのほとんどの配列は長年の変異と分断の結果、不活化されている。しかしながら、約３０種類のＨＥＲＶの中の１つであるＨＥＲＶ−Ｗには、ウイルスのエンベロープタンパク質（ＥＮＶ）が翻訳可能な状態でコードされており、その翻訳産物であるシンシチン−１は胎盤形成時の細胞融合過程において重要な役割を果たしていることが知られている。
【０００５】
例えば、非特許文献１には、多発性硬化症や統合失調症等の疾患において、シンシチン−１が胎盤以外で異所発現していることが報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Perron H., et al., Endogenous retrovirus type W GAG and envelope protein antigenemia in serum of schizophrenic patients., Biol. Psychiatry, 64(12), 1019-1023, 2008.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
このような状況のもと、専門外の医師でも統合失調症の発症を正しく疑うことができる客観的な基準に基づく診断法が求められている。そこで、本発明は、客観的に統合失調症関連疾患を診断することができる技術を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は以下の態様を含む。
［１］抗シンシチン−１抗体からなる、統合失調症関連疾患の診断用マーカー。
［２］シンシチン−１タンパク質又はその断片を備える、統合失調症関連疾患の診断用キット。
［３］ヒト抗体に対する特異的結合物質を更に備える、請求項２に記載の統合失調症関連疾患の診断用キット。
［４］シンシチン−１タンパク質の断片を備え、前記断片は、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなるペプチドであるか、又は、配列番号９に記載のアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり且つ抗シンシチン−１抗体により認識されるペプチドである、［２］又は［３］に記載の統合失調症関連疾患の診断用キット。
［５］被験者が統合失調症関連疾患に罹患している可能性を血清学的に識別するためのデータを収集する方法であって、被験者由来の血液中に、抗シンシチン−１抗体が存在するか否かを検出する工程を備え、前記抗体の存在の有無が、前記被験者が統合失調症関連疾患に罹患している可能性を血清学的に識別するためのデータである方法。
［６］抗シンシチン−１抗体が存在するか否かを検出する前記工程がＥＬＩＳＡ法により行われる、［５］に記載の方法。
［７］被験者由来の血液中に、抗シンシチン−１抗体が存在するか否かを検出する工程を備え、前記抗体が存在する場合には前記被験者は統合失調症関連疾患に罹患している可能性があり、前記抗体が存在しない場合には前記被験者は統合失調症関連疾患に罹患していないという基準と比較することにより、前記被験者が統合失調症関連疾患に罹患しているか否かを試験する方法。
［８］抗シンシチン−１抗体が存在するか否かを検出する前記工程がＥＬＩＳＡ法により行われる、［７］に記載の方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、客観的に統合失調症関連疾患を診断することができる技術を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実験例３のエピトープマッピングの結果を示すグラフである。
【図２】実験例５における抗シンシチン−１抗体の検出結果を示すグラフである。
【図３】（ａ）〜（ｅ）は、実験例６における抗シンシチン−１抗体の検出結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
［統合失調症関連疾患の診断用マーカー］
１実施形態において、本発明は、抗シンシチン−１抗体からなる、統合失調症関連疾患の診断用マーカーを提供する。ここで、抗シンシチン−１抗体とは、シンシチン−１タンパク質に特異的な抗体である。シンシチン−１タンパク質とは、ＥＲＶＷ−１とも呼ばれるものである。シンシチン−１タンパク質のアミノ酸配列を配列番号１に示す。
【００１２】
本明細書において、統合失調症関連疾患とは、治療的介入が必要な精神疾患を意味し、より具体的には、統合失調症、統合失調症と躁うつ病の中間型、躁うつ病、及びパーソナリティー障害が挙げられる。
【００１３】
実施例において後述するように、発明者らは、一部の統合失調症関連疾患の患者の血液中には、抗シンシチン−１抗体が存在することを見出した。また、健常人の血液中には、実質的に抗シンシチン−１抗体が存在しないことを見出した。
【００１４】
統合失調症関連疾患の患者の中には、抗シンシチン−１抗体が存在しない患者もおり、そのような患者については統合失調症関連疾患であるか否かを判断することはできない。しかしながら、統合失調症関連疾患への罹患が疑われる患者の血液中に抗シンシチン−１抗体が検出された場合には、その患者は統合失調症関連疾患であると客観的に判断することができる。
【００１５】
本実施形態のマーカーにより、現在有用な診断法が存在しないために困難を極めていた統合失調症関連疾患の客観的な診断が、一部の患者についてではあるが可能となる。このため、本実施形態のマーカーは有用である。
【００１６】
抗シンシチン−１抗体は、例えば、固相上に固定したシンシチン−１タンパク質と被験者由来の血清又は血漿を接触させ、続いて、上記のシンシチン−１タンパク質に結合した被験者由来の抗体を検出すること等により検出することができる。被験者由来の抗体としては、例えばＩｇＧ抗体、ＩｇＭ抗体、ＩgＡ抗体等が挙げられる。
【００１７】
本実施形態は、抗シンシチン−１抗体の統合失調症関連疾患の診断用マーカーとしての使用を提供するものであるということもできる。
【００１８】
［統合失調症関連疾患の診断用キット］
１実施形態において、本発明は、シンシチン−１タンパク質又はその断片を備える、統合失調症関連疾患の診断用キットを提供する。本実施形態のキットにより、被験者が統合失調症関連疾患に罹患しているか否かを客観的に判断することができる。
【００１９】
シンシチン−１タンパク質としては、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質の全長を用いてもよいし、シンシチン−１タンパク質の断片を用いてもよい。また、シンシチン−１タンパク質は、Ｎ末端又はＣ末端にヒスチジンタグ、ＧＳＴ（グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ）タグ等のタグを有していてもよい。タグを有することにより、例えば、シンシチン−１タンパク質の調製を容易に行うことができる。
【００２０】
シンシチン−１タンパク質の断片は、例えば、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第３０〜５８番目のアミノ酸配列からなるペプチドであってもよいし、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第１９３〜２２１番目のアミノ酸配列からなるペプチドであってもよいし、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第４９３〜５２１番目（配列番号９）のアミノ酸配列からなるペプチドであってもよい。また、これらのペプチドの部分ペプチドであってもよい。
【００２１】
シンシチン−１タンパク質の断片は、上記のアミノ酸配列、すなわち、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第３０〜５８番目、第１９３〜２２１番目、第４９３〜５２１番目（配列番号９）のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、且つ抗シンシチン−１抗体により認識されるペプチドであってもよい。
【００２２】
ここで、数個とは、例えば、２〜１０個であってもよいし、２〜８個であってもよいし、２〜６個であってもよいし、２〜４個であってもよい。これは、通常、エピトープはアミノ酸残基数でいえば６〜８個からなるものであるためである。また、抗シンシチン−１抗体により認識されるとは、抗シンシチン−１抗体が結合するといいかえることができる。
【００２３】
また、シンシチン−１タンパク質の断片は、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第３０〜５８番目、第１９３〜２２１番目又は第４９３〜５２１番目（配列番号９）を含むアミノ酸配列を有するペプチドであってもよい。
【００２４】
実施例において後述するように、発明者らは、統合失調症関連疾患の患者の血液中に存在する、抗シンシチン−１抗体が、上記のシンシチン−１タンパク質の部分ペプチドをエピトープとしていることを明らかにした。したがって、上記のペプチドを抗原として抗シンシチン−１抗体を検出することができる。ペプチドは化学的に合成することが可能であるため取り扱いが容易である。
【００２５】
例えば、固相上にシンシチン−１タンパク質又はその断片を固定し、被験者由来の血清又は血漿を接触させて、シンシチン−１タンパク質又はその断片と、抗シンシチン−１抗体との結合を検出することにより、抗シンシチン−１抗体の存在を検出することができる。
【００２６】
シンシチン−１タンパク質又はその断片と、抗シンシチン−１抗体との結合は、例えば、ビアコア（商品名、ＧＥヘルスケア・ジャパン社）等を用いた表面プラズモン共鳴イムノアッセイ、ＡＦＦＩＮＩＸＱ（商品名、Ｉｎｉｔｉｕｍ社）等を用いた水晶振動子式免疫センサーシステム、Ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）法、ウエスタンブロッティング法等で検出することができる。
【００２７】
本実施形態の統合失調症関連疾患の診断用キットは、ヒト抗体に対する特異的結合物質を更に備えていてもよい。これにより、ＥＬＩＳＡ法やウエスタンブロッティング法等を実施するためにより好適な構成となる。例えば、固相上にシンシチン−１タンパク質又はその断片を固定し、被験者由来の血清又は血漿を接触させた後、ヒト抗体に対する特異的結合物質を反応させることにより、固相上のシンシチン−１タンパク質又はその断片に結合した抗シンシチン−１抗体を検出することができる。ＥＬＩＳＡ法やウエスタンブロッティング法はすでに多くの抗体測定において広く臨床検査法として用いられている。
【００２８】
ここで、ヒト抗体としては、ＩｇＧ抗体、ＩｇＭ抗体等が挙げられる。また、特異的結合物質としては、抗体、抗体断片、アプタマー等が挙げられる。抗体断片としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ等が挙げられる。上記の抗体は、モノクローナル抗体であってもよく、ポリクローナル抗体であってもよい。また、市販の抗体であってもよい。
【００２９】
［データ収集方法］
１実施形態において、本発明は、被験者が統合失調症関連疾患に罹患している可能性を血清学的に識別するためのデータを収集する方法であって、被験者由来の血液中に、抗シンシチン−１抗体が存在するか否かを検出する工程を備え、前記抗体の存在の有無が、前記被験者が統合失調症関連疾患に罹患している可能性を血清学的に識別するためのデータである方法を提供する。本実施形態の方法は、被験者が統合失調症関連疾患に罹患しているか否かを判断する工程を含まない。
【００３０】
本実施形態の方法において、シンシチン−１タンパク質又はその断片としては、上述したものと同様のものを使用することができる。
【００３１】
被験者由来の血液中に、シンシチン−１タンパク質又はその断片に特異的な抗体が存在するか否かを検出する上記工程は、被験者由来の血清又は血漿とシンシチン−１タンパク質又はその断片とを接触させる工程と、前記シンシチン−１タンパク質又はその断片に結合した被験者由来の抗体を検出する工程と、を備えていてもよい。
【００３２】
本実施形態の方法において、抗シンシチン−１抗体が存在するか否かを検出する上記工程は、ＥＬＩＳＡ法により行われてもよい。実施例において後述するように、発明者らは、ウエスタンブロッティング法よりもＥＬＩＳＡ法のほうが、感度よく抗シンシチン−１抗体を検出することができることを明らかにした。ただし、特異度を考慮する場合には、ＥＬＩＳＡ法と共に、ウエスタンブロッティング法を併用することが推奨される。
【００３３】
被験者由来の血清又は血漿は、非特異的反応を防止するために、１／１００〜１／１００００に希釈することが好ましい。被験者由来の血清又は血漿の希釈倍率は、例えば１／１００〜１／５０００であってもよく、例えば１／１００〜１／１０００であってもよく、例えば１／１００〜１／５００であってもよい。
【００３４】
被験者由来の血液中に、抗シンシチン−１抗体が存在していた場合には、前記被験者が統合失調症関連疾患に罹患していると判断することができる。
【００３５】
［被験者が統合失調症関連疾患に罹患しているか否かを試験する方法］
１実施形態において、本発明は、被験者由来の血液中に、抗シンシチン−１抗体が存在するか否かを検出する工程を備え、前記抗体が存在する場合には前記被験者は統合失調症関連疾患に罹患している可能性があり、前記抗体が存在しない場合には前記被験者は統合失調症関連疾患に罹患していないという基準と比較することにより、前記被験者が統合失調症関連疾患に罹患しているか否かを試験する方法を提供する。本実施形態の方法は、前記被験者が統合失調症関連疾患に罹患しているか否かを臨床的に確認する工程を更に備えていてもよい。
【００３６】
本実施形態の方法において、シンシチン−１タンパク質又はその断片としては、上述したものと同様のものを使用することができる。
【００３７】
被験者由来の血液中に、シンシチン−１タンパク質又はその断片に特異的な抗体が存在するか否かを検出する上記工程は、被験者由来の血清又は血漿とシンシチン−１タンパク質又はその断片とを接触させる工程と、前記シンシチン−１タンパク質又はその断片に結合した被験者由来の抗体を検出する工程と、を備えていてもよい。被験者由来の血清又は血漿は上述したものと同様の希釈倍率で用いることができる。
【００３８】
本実施形態の方法において、抗シンシチン−１抗体が存在するか否かを検出する上記工程は、ＥＬＩＳＡ法により行われてもよい。実施例において後述するように、発明者らは、ウエスタンブロッティング法よりもＥＬＩＳＡ法のほうが、感度よく抗シンシチン−１抗体を検出することができることを明らかにした。しかしながら、ＥＬＩＳＡ法は感度は高いものの特異度がやや低下する場合がある。このため、ＥＬＩＳＡ法及びウエスタンブロッティング法を併用することが好ましい。通常は、まずＥＬＩＳＡ法で血清スクリーニングを行い、陽性を示した検体をウエスタンブロッティング法で確認することが好ましい。
【００３９】
［その他の実施形態］
１実施形態において、本発明は、被験者由来の血清又は血漿とシンシチン−１タンパク質又はその断片とを接触させる工程と、前記シンシチン−１タンパク質又はその断片に結合した被験者由来の抗体を検出する工程と、前記抗体が検出された場合に前記被験者は統合失調症関連疾患に罹患していると判断する工程と、を備える、統合失調症関連疾患の診断方法を提供する。
【００４０】
本実施形態の診断方法において、シンシチン−１タンパク質又はその断片としては、上述したものと同様のものを使用することができる。また、被験者由来の血清又は血漿は上述したものと同様の希釈倍率で用いることができる。
【００４１】
本実施形態の診断方法において、抗シンシチン−１抗体を検出する上記工程は、ＥＬＩＳＡ法により行われてもよい。実施例において後述するように、発明者らは、ウエスタンブロッティング法よりもＥＬＩＳＡ法のほうが、感度よく抗シンシチン−１抗体を検出することができることを明らかにした。しかしながら、上述したように、ＥＬＩＳＡ法は感度は高いものの特異度がやや低下する場合がある。このため、ＥＬＩＳＡ法及びウエスタンブロッティング法を併用することが好ましい。本実施形態の診断方法においても、まずＥＬＩＳＡ法で血清スクリーニングを行い、陽性を示した検体をウエスタンブロッティング法で確認することが好ましい。
【実施例】
【００４２】
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００４３】
［実験例１］
（大腸菌を用いたシンシチン−１タンパク質の調製）
大腸菌のコドンに最適化したシンシチン−１遺伝子を化学合成し、大腸菌用タンパク質発現ベクターであるｐＥＴ（ノバジェン社）に挿入することにより、シンシチン−１の発現プラスミドを作製した。これをＢＬ２１−ＣｏｄｏｎＰｌｕｓ（ＤＥ３）−ＲＩＰＬコンピテントセル（アジレント・テクノロジー社）に導入し、１ｍＭ  ＩＰＴＧ（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  β−Ｄ−１−ｔｈｉｏｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）の存在下で２０℃、４時間培養してタンパク質発現を誘導した。発現したシンシチン−１タンパク質は、ヒスチジンタグをＮ末端に有していたため、ＨｉｓＴｒａｐ  ＦＦカラム（ＧＥヘルスケア・ジャパン社）を用いて部分精製した後、１０％アクリルアミドゲルを用いて電気泳動し、目的のバンドを切り出して精製し、シンシチン−１タンパク質を得た。
【００４４】
［実験例２］
（血清中の抗シンシチン−１抗体の検出）
ウエスタンブロッティング法により血清中の抗シンシチン−１抗体を検出した。具体的には、まず、精製したシンシチン−１タンパク質を１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）にて分離後、定法によりポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜に転写した。続いて、被験者由来の血清を１／３００に希釈して上記のＰＶＤＦ膜と反応させた。続いて、上記のＰＶＤＦ膜とセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識抗ヒトＩｇＧ抗体とを反応させ、更にＨＲＰの基質を反応させて抗シンシチン−１抗体を検出した。
【００４５】
被験者としては、経験豊かな医師により統合失調症であると診断された患者（４２例）、統合失調症と躁うつ病の中間型である患者（４例）、躁うつ病の患者（１５例）、パーソナリティー障害の患者（４例）、脳外科手術後バルプロ酸を投与された患者（９例）、健常者（２０例）、多発性硬化症の患者（１４例）を用いた。
【００４６】
なお、多発性硬化症は、疾患症状において統合失調症との臨床的な類似性は認められないが、最初にＨＥＲＶ−Ｗ（当初はＭＳＲＶと呼ばれた）が分離された疾患である。また、バルプロ酸は、統合失調症の興奮期にしばしば投与される薬物であり、脱アセチル化酵素の阻害作用があることが知られている。バルプロ酸はまた、交通外傷や脳腫瘍除去等で脳外科手術を受けた患者に抗痙攣薬として投与される場合もある。そこで、バルプロ酸の投与がゲノムに潜在的に存在するＨＥＲＶ−Ｗを活性化し、シンシチン−１タンパク質を発現させる可能性を考慮し、交通外傷や脳腫瘍除去等で脳外科手術を受け、バルプロ酸を投与された患者も被験者に加えた。
【００４７】
表１に、各被験者における抗シンシチン−１抗体の検出結果を示す。表１中、「Ｓ」は統合失調症患者を示し、「ＳＭ」は統合失調症と躁うつ病の中間型である患者を示し、「Ｍ」は躁うつ病の患者を示し、「ＰＤ」はパーソナリティー障害の患者を示し、「ＭＳ」は多発性硬化症の患者を示す。また、「抗シンシチン−１抗体（−）」は抗シンシチン−１抗体が検出されなかった被験者の数を示し、「抗シンシチン−１抗体（＋）」は抗シンシチン−１抗体が検出された被験者の数を示す。ここで、脳外科手術後患者を対象とした理由は、脳外科手術後では、通常、術後痙攣の予防のためにヒストン脱アセチル化阻害剤（ＨＤＡＣ阻害剤）を投与するからである。シンシチン−１遺伝子は全てのヒトのゲノムの中に存在し、ＨＤＡＣの作用によりその発現（蛋白質への翻訳）が抑制されているが、ＨＤＡＣ阻害剤の投与によりその発現が誘導される可能性があると考えられたからである。
【００４８】
【表１】
2018028538.tif 000002
【００４９】
その結果、相当数の統合失調症関連疾患の患者の血液中には、抗シンシチン−１抗体が存在することが明らかとなった。
【００５０】
また、統合失調症患者（Ｓ）のうち、７例はバルプロ酸投与患者であった。また、これらの７例の患者のうち１例（１４．２％）で抗シンシチン−１抗体が検出された。これに対し、脳外科手術後バルプロ酸を投与された患者（これらの患者は統合失調症関連疾患には罹患していなかった。）の血液中には、抗シンシチン−１抗体が存在しないことが明らかとなった。このことは、統合失調症関連疾患の患者の血液中における抗シンシチン−１抗体の存在が、バルプロ酸の投与によるものではないことを示す。
【００５１】
また、健常者及び多発性硬化症患者の血液中からは、抗シンシチン−１抗体は検出されなかった。
【００５２】
以上の結果は、抗シンシチン−１抗体が存在する患者は、統合失調症関連疾患に罹患していると客観的に判断することができることを示す。
【００５３】
［実験例３］
（抗シンシチン−１抗体のエピトープマッピング）
統合失調症関連疾患の患者から検出された抗シンシチン−１抗体のエピトープをエピトープマッピングにより検討した。
【００５４】
具体的には、５３８アミノ酸からなるシンシチン−１タンパク質のアミノ酸配列に基づいて、２アミノ酸ずつずらした１２アミノ酸からなるペプチドを合計２６４個合成し、セルロース膜上に固定化した。続いて、このセルロース膜に、統合失調症関連疾患の患者由来の血清を反応させ、ＨＲＰ標識抗ヒトＩｇＧ抗体を用いて抗シンシチン−１抗体を検出した。
【００５５】
図１は、エピトープマッピングの代表的な結果を示すグラフである。図１では、Ｓ１〜７の識別番号を付与した７例の統合失調症関連疾患の患者の血清を用いた結果を示す。図１には、コントロールとして、患者の血清の代わりに、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第３３〜３１２番目のアミノ酸配列からなるペプチドに対するポリクローナル抗体を用いた結果も併せて示す。図１のグラフにおいて、縦軸は、検出された抗シンシチン−１抗体の量（相対値）を表す。
【００５６】
その結果、図１中の３ヶ所の網掛け部分には、７例の患者の抗シンシチン−１抗体が共通して認識するエピトープが存在すると考えられた。この結果は、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第３０〜５８番目のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第１９３〜２２１番目のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第４９３〜５２１番目のアミノ酸配列からなるペプチドを、抗シンシチン−１抗体検出用の抗原として使用できることを示す。
【００５７】
［実験例４］
（ウエスタンブロッティング法及びＥＬＩＳＡ法の比較）
被験者の血清中の抗シンシチン−１抗体をウエスタンブロッティング法及びＥＬＩＳＡ法により検出し、検出感度を比較した。
【００５８】
被験者としては、経験豊かな医師により統合失調症であると診断された患者（４６例）、及び躁うつ病の患者（２５例）を用いた。また、比較のために、健常者（３２例）及び多発性硬化症の患者（１３例）を用いた。
【００５９】
下記表２に、各被験者の男女比及び年齢分布を示す。表２中、「Ｓ」は統合失調症患者を示し、「Ｍ」は躁うつ病の患者を示し、「ＭＳ」は多発性硬化症の患者を示す。その結果、下記表２に示すように、各被検者の男女比及び年齢分布に有意差はないことが確認された。但し、多発性硬化症の患者には年齢分布に差が認められた。
【００６０】
《ウエスタンブロッティング法》
実験例１で精製したシンシチン−１タンパク質を用いて、実験例２と同様にして各被験者の血清中の抗シンシチン−１抗体を検出した。
【００６１】
《ＥＬＩＳＡ法》
まず、実験例１で精製したシンシチン−１タンパク質を９６ウェルプレートに固定化した。続いて、被験者由来の血清を１／１００に希釈して上記の各ウェルに添加して反応させた。続いて、ＨＲＰ標識抗ヒトＩｇＧ抗体を反応させ、更にＨＲＰの基質を反応させて抗シンシチン−１抗体を検出した。
【００６２】
下記表２に、抗シンシチン−１抗体が検出された被験者の数及び抗シンシチン−１抗体が検出された被験者の割合（％）を示す。
【００６３】
【表２】
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【００６４】
その結果、ウエスタンブロッティング法よりもＥＬＩＳＡ法のほうが、感度よく抗シンシチン−１抗体を検出することができることが明らかとなった。また、この結果は、健常者と比較して、統合失調症関連疾患患者の血清において、抗シンシチン−１抗体が検出される割合が高いことを更に支持するものである。
【００６５】
［実験例５］
（ＥＬＩＳＡ法における抗原ペプチドの検討）
シンシチン−１タンパク質の部分ペプチドを固相化したプレートを用いた点以外は実験例４のＥＬＩＳＡ法と同様にして、被験者の血清中の抗シンシチン−１抗体をＥＬＩＳＡ法により検出し、検出感度を比較した。ペプチドは１０μｇ／ｍＬの濃度で使用し、血清は１００倍希釈で使用した。
【００６６】
被験者としては、経験豊かな医師により統合失調症であると診断された患者（８例）を用いた。また、比較のために、健常者（３例）を用いた。
【００６７】
また、シンシチン−１タンパク質の部分ペプチドとしては、下記表３に示すペプチドを使用した。
【００６８】
【表３】
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【００６９】
図２は抗シンシチン−１抗体の検出結果を示すグラフである。図２中、「Ｃ１」〜「Ｃ３」はそれぞれ健常者の血清の結果であることを示す。また、「Ｓ１」〜「Ｓ８」はそれぞれ統合失調症患者の血清の結果であることを示す。また「ＯＤ（Ａ４５０）」は波長４５０ｎｍにおける吸光度を意味する。
【００７０】
その結果、シンシチン−１タンパク質の部分ペプチドとして、ペプチド＃８（配列番号９）を固相化してＥＬＩＳＡ法を行うことにより、特に高い検出感度を得ることができることが明らかとなった。また、ペプチド＃８に他のペプチドを混合すると抗シンシチン−１抗体の検出感度が低下することが明らかとなった。
【００７１】
［実験例６］
（ペプチドによるＥＬＩＳＡ反応の阻害）
ペプチド＃８（配列番号９）を固相化したプレートを用いたＥＬＩＳＡ法により、被験者の血清中の抗シンシチン−１抗体を検出した。この過程で、様々なシンシチン−１タンパク質の部分ペプチドを共存させ、ＥＬＩＳＡ反応の阻害効果を検討した。
【００７２】
シンシチン−１タンパク質の部分ペプチドとしては、終濃度０，０．０１，０．１，１及び１０μｇ／ｍＬにそれぞれ調製した、ペプチド＃１（配列番号２）、ペプチド＃３（配列番号４）、ペプチド＃５（配列番号６）、ペプチド＃７（配列番号８）又はペプチド＃８（配列番号９）を用いた。
【００７３】
また、被験者としては、経験豊かな医師により統合失調症であると診断された患者（２例）、及び躁うつ病の患者（２例）を用いた。また、比較のために、健常者（１例）を用いた。
【００７４】
図３（ａ）〜（ｅ）は抗シンシチン−１抗体の検出結果を示すグラフである。図３（ａ）〜（ｅ）中、「Ｃ１」は健常者の血清の結果であることを示す。また、「Ｓ１」、「Ｓ２」はそれぞれ統合失調症患者の血清の結果であることを示す。また、「Ｍ１」、「Ｍ２」はそれぞれ躁うつ病患者の血清の結果であることを示す。また「ＯＤ（Ａ４５０）」は波長４５０ｎｍにおける吸光度を意味する。
【００７５】
その結果、健常者の血清中には抗シンシチン−１抗体が検出されず、統合失調症関連疾患患者の血清中には抗シンシチン−１抗体が検出されることが確認されたた。また、ペプチド＃８を固相化したプレートを用いたＥＬＩＳＡ法では、ペプチド＃８を共存させた場合のみ抗シンシチン−１抗体の検出が阻害されることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００７６】
本発明によれば、客観的に統合失調症関連疾患を診断することができる技術を提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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