(57)【要約】【課題】がんを処置するための医薬組成物を提供する。【解決手段】本発明は、ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩を含む、がんを処置するための医薬組成物に関する。本発明はまた、上記ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩と抗CTLA-4抗体との併用、および当該化合物またはその医薬上許容される塩と抗CTLA-4抗体および抗PD-1抗体との併用、に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩を含む、がんを処置するための医薬組成物。
【請求項２】
前記化合物が、2-（4-｛2-［5-（4-アセチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル］エチル｝フェニル）アセトヒドラジドである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記化合物が、4-｛2-［2-（アセチルアミノ）-1,3-チアゾール-4-イル］エチル｝ベンジルヒドラジンカルボキシレートである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
抗CTLA-4抗体と併用される、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
抗CTLA-4抗体がイピリムマブまたはトレメリムマブである、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
さらに抗PD-1抗体と併用される、請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
抗PD-1抗体が、ニボルマブまたはペンブロリズマブである、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記がんが、大腸癌、メラノーマ、腎癌、前立腺癌、乳癌、または肺癌である、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩と併用される、抗CTLA-4抗体を含む、がんを処置するための医薬組成物。
【請求項１０】
前記化合物が、2-（4-｛2-［5-（4-アセチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル］エチル｝フェニル）アセトヒドラジドである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記化合物が、4-｛2-［2-（アセチルアミノ）-1,3-チアゾール-4-イル］エチル｝ベンジルヒドラジンカルボキシレートである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
さらに抗PD-1抗体と併用される、請求項９〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１３】
ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩および抗CTLA-4抗体と併用される、抗PD-1抗体を含む、がんを処置するための医薬組成物。
【請求項１４】
前記化合物が、2-（4-｛2-［5-（4-アセチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル］エチル｝フェニル）アセトヒドラジドである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記化合物が、4-｛2-［2-（アセチルアミノ）-1,3-チアゾール-4-イル］エチル｝ベンジルヒドラジンカルボキシレートである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんを処置するための医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
血管接着タンパク質−１（vascular adhesion protein-1）（以下、ＶＡＰ−１と略記する）は、ヒト血漿中に豊富に存在するアミンオキシダーゼ（セミカルバジド感受性アミンオキシダーゼ、ＳＳＡＯ）であり、炎症部位の血管内皮および血管平滑筋中で、その発現が顕著な増加を示す。ＶＡＰ−１の生理的な役割は最近まで解明されていないが、ＶＡＰ−１遺伝子が１９９８年にクローン化され、また、ＶＡＰ−１は、炎症性サイトカインの発現の制御下で、接着分子としてリンパ球及びＮＫ細胞のローリングおよびマイグレーションを制御する膜タンパク質であることが報告されている。基質となるアミンは未知であるが、生体内の任意の部位で生成したメチルアミンであると考えられる。分子中のアミンオキシダーゼ活性に起因して生じる過酸化水素およびアルデヒドが接着活性の重要な因子であることもまた知られている。
【０００３】
国際公開第２００９／０９６６０９号および第２００９／１４５３６０号には、ＶＡＰ−１阻害活性を有する、チアゾール、ベンゼン、またはチオフェン誘導体が開示されている。しかしながら、これら化合物が抗腫瘍効果を有することは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００９／０９６６０９号
【特許文献２】国際公開第２００９／１４５３６０号
【特許文献３】米国特許出願公開第２０１１／００１５２４０号
【特許文献４】米国特許出願公開第２０１１／００５９９５７号
【特許文献５】特開昭６１−２３９８９１号
【特許文献６】米国特許第４，８８８，２８３号
【特許文献７】国際公開第１９９３／２３０２３号
【特許文献８】国際公開第２００２／０２０９０号
【特許文献９】国際公開第２００２／０２５４１号
【特許文献１０】米国特許出願公開第２００２／０１７３５２１号公報
【特許文献１１】国際公開第２００２／３８１５２号
【特許文献１２】国際公開第２００２／３８１５３号
【特許文献１３】国際公開第２００４／０８７１３８号
【特許文献１４】国際公開第２００４／０６７５２１号
【特許文献１５】国際公開第２００６／０１１６３１号
【特許文献１６】国際公開第２００６／０２８２６９号
【特許文献１７】国際公開第２００８／０６６１４５号
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Diabetologia，42（1999）233−237
【非特許文献２】Diabetes Medicine，16（1999）514−521
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、がんを処置するための医薬組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、鋭意研究の末、国際公開第２００９／０９６６０９号および第２００９／１４５３６０号に開示される化合物の一部が腫瘍モデルマウスにおいて腫瘍体積を減少させること、これら化合物を抗CTLA-4抗体と、あるいは抗CTLA-4抗体および抗PD-1抗体と併用すると、相乗的な抗腫瘍効果が得られることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
本発明は、以下を提供する：
１．ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩を含む、がんを処置するための医薬組成物。
２．前記化合物が、2-（4-｛2-［5-（4-アセチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル］エチル｝フェニル）アセトヒドラジドである、前記１に記載の医薬組成物。
３．前記化合物が、4-｛2-［2-（アセチルアミノ）-1,3-チアゾール-4-イル］エチル｝ベンジルヒドラジンカルボキシレートである、前記１に記載の医薬組成物。
４．抗CTLA-4抗体と併用される、前記１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
５．抗CTLA-4抗体がイピリムマブまたはトレメリムマブである、前記４に記載の医薬組成物。
６．さらに抗PD-1抗体と併用される、前記１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
７．抗PD-1抗体が、ニボルマブまたはペンブロリズマブである、前記６に記載の医薬組成物。
８．前記がんが、大腸癌、メラノーマ、腎癌、前立腺癌、乳癌、または肺癌である、前記１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
９．ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩と併用される、抗CTLA-4抗体を含む、がんを処置するための医薬組成物。
１０．前記化合物が、2-（4-｛2-［5-（4-アセチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル］エチル｝フェニル）アセトヒドラジドである、前記９に記載の医薬組成物。
１１．前記化合物が、4-｛2-［2-（アセチルアミノ）-1,3-チアゾール-4-イル］エチル｝ベンジルヒドラジンカルボキシレートである、前記９に記載の医薬組成物。
１２．さらに抗PD-1抗体と併用される、前記９〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
１３．ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩および抗CTLA-4抗体と併用される、抗PD-1抗体を含む、がんを処置するための医薬組成物。
１４．前記化合物が、2-（4-｛2-［5-（4-アセチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル］エチル｝フェニル）アセトヒドラジドである、前記１３に記載の医薬組成物。
１５．前記化合物が、4-｛2-［2-（アセチルアミノ）-1,3-チアゾール-4-イル］エチル｝ベンジルヒドラジンカルボキシレートである、前記１３に記載の医薬組成物。
【０００９】
本発明はまた、以下を提供する：
前記式ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩を哺乳動物に投与することを含む、がんを処置するための方法；
がんの処置における使用のための、前記ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩；
がんを処置するための医薬の製造のための、前記ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩の使用；
前記ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩と併用される、がんの処置における使用のための、抗CTLA-4抗体；
前記ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩および抗CTLA-4抗体と併用される、がんの処置における使用のための、抗PD-1抗体；
前記ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩と併用されるがんを処置するための医薬の製造のための、抗CTLA-4抗体の使用；および
前記ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩および抗CTLA-4抗体と併用されるがんを処置するための医薬の製造のための、抗PD-1抗体の使用。
【発明の効果】
【００１０】
本願の式（I）の化合物は優れた抗腫瘍効果を有し、さらに、抗CTLA-4抗体との併用において、また抗CTLA-4抗体と抗PD-1抗体との併用においても、相乗的な抗腫瘍効果を発揮する。よって、本発明は、がんの処置に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１Ａ】腫瘍モデルマウスにおける本願化合物（化合物A：2-（4-｛2-［5-（4-アセチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル］エチル｝フェニル）アセトヒドラジド）による腫瘍体積の減少を示す。図中、「VAP-1」は、本願化合物を意味する（以下の図において同じ）。
【図１Ｂ】腫瘍および所属リンパ節のCD8細胞による腫瘍抗原特異的なIFN-γ産生を示す。TIL：腫瘍浸潤リンパ球（tumor-infiltrating lymphocyte）；dLN：所属リンパ節（draining lymph node）。
【図１Ｃ】本願化合物（化合物A）のがん細胞への直接の影響を示す。
【図２】本願化合物（化合物A）と抗CTLA-4抗体との併用による腫瘍体積への影響を示す。
【図３】本願化合物（化合物A）による腫瘍モデルマウス血清中の遊離型VAP-1（sVAP-1）の減少を示す。
【図４】異なる腫瘍マウスモデルにおける本願化合物（化合物A）の作用を示す。
【図５】NOGマウスモデルおよびCD8デプレッションモデルにおける本願化合物（化合物A）の作用を示す。
【図６】腫瘍浸潤リンパ球のFACS解析結果を示す。
【図７】本願化合物（化合物A）による腫瘍浸潤リンパ球の構成の変化を示す。
【図８】本願化合物（化合物A）による腫瘍浸潤リンパ球における活性化T細胞の変化を示す。
【図９】本願化合物（化合物A）の所属リンパ節のT細胞集団に対する作用を示す。
【図１０】本願化合物（化合物A）による腫瘍における骨髄由来免疫抑制細胞の変化を示す。
【図１１】本願化合物（化合物A）の腫瘍における樹状細胞活性化に対する作用を示す。
【図１２】腫瘍モデルマウスにおける本願化合物（化合物B：（4-｛2-［2-（アセチルアミノ）-1,3-チアゾール-4-イル］エチル｝ベンジルヒドラジンカルボキシレート））による腫瘍体積の減少を示す。
【図１３】本願化合物（化合物A）と抗PD-1抗体との併用による腫瘍体積への影響を示す。
【図１４】本願化合物（化合物A）によるPD-1陽性細胞の増加を示す。
【図１５】本願化合物（化合物A）、抗CTLA-4抗体と抗PD-1抗体との2種併用、および本願化合物（化合物A）、抗CTLA-4抗体、および抗PD-1抗体の3種併用の抗腫瘍効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本願は、ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物またはその医薬上許容される塩を含む、がんを処置するための医薬組成物を提供する。このような化合物としては、例えば、次の式（Ｉ）で示されるような化合物が挙げられる。すなわち、次の式（Ｉ）、
Ｘ−Ｙ−Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｅ  （Ｉ）
［式中、
Ｘは、
【化１】
2018076236.tif 000002
であるか、または、Ｒ１−ＮＨ−Ａ２−であり；
ここで、
Ａ１は、ベンゼンまたは、少なくとも１つの窒素原子または硫黄原子を含む複素環から誘導される残基であり、
Ｂ１は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、シクロ低級アルキル、ハロゲン化低級アルキル、低級アルコキシ、アシル、アシルアミノ、置換されていても良いカルバモイル、低級アルキルスルホニルアミノ、または低級アルキルカルボニルオキシ（ただし、Ａ１がチアゾールから誘導される残基である場合、アシルアミノではない。）であり；
Ｂ２は、水素あるいは少なくとも１つの窒素原子を含む官能基（ただし、Ａ１がチアゾールから誘導される残基である場合、アシルアミノではない。）であり；
あるいは、Ｂ１とＢ２は、互いに結合して環状構造を形成してもよく；
Ａ２は、置換されていてもよいチアゾールから誘導された二価の残基であり；
Ｒ１は、アシルであり；
Ｙは、次の式（ＩＩ）
Ｊ−Ｌ−Ｍ      （ＩＩ）
｛式中、Ｊは結合、低級アルキレン、低級アルケニレン、低級アルキニレン、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２−（各式中、ｎは０から６の整数を示す。）；Ｌは結合、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−；Ｍは結合、低級アルキレン、低級アルケニレン、または低級アルキニレンである。ただし、Ｊが−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−の場合、Ｌは−Ｏ−、−ＮＨ−および−ＳＯ２−ではなく、Ｊが−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−の場合、Ｌは−Ｏ−および−ＮＨ−ではなく、Ｊが−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−の場合、Ｌは−ＣＯ−ではなく、Ｊが−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２−の場合、Ｌは−Ｏ−および−ＳＯ２−ではない（各式中、ｎは上記と同義を示す。）。｝；
Ａは、置換されていてもよいベンゼンから誘導された二価の残基、または置換されていてもよいチオフェンから誘導された二価の残基であり、
Ｂは、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＯ−または−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ２−ＣＯ−（式中、Ｒ２は水素、低級アルキル、またはアシルを示し、ｍは０から６の整数を示す。）であり；
Ｄは−ＮＲ３−（式中、Ｒ３は水素、低級アルキル、アルコキシカルボニルまたはアシルを示す。）；
Ｅは置換されていてもよいアミノを示す。｝；を示す。］で表される化合物、または医薬上許容される塩。
【００１３】
本明細書の上記及び以下の記載において、本発明について用いられる用語を、以下に詳細に説明する。
【００１４】
用語「ハロゲン」は、フッ素、臭素、塩素およびヨウ素を包含する。
【００１５】
用語「低級」は、他に定めない限り、１〜６個の、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する基を意図するのに用いられる。
【００１６】
「低級アルキル」には、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル（例、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチルおよびヘキシル）などが挙げられ、なかでもより好ましいものはＣ１−Ｃ４アルキルである。
【００１７】
「ハロゲン化低級アルキル」には、上記「ハロゲン」で置換された上記「低級アルキル」が挙げられる。複数個のハロゲンで置換されている場合、これらハロゲンは同一でも異なっていてもよい。具体例としては、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチルなどが挙げられる。
【００１８】
「低級アルキレン」には、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキレン（例、メチレン、エチレン、トリメチレン、プロピレン、エチリデンおよびプロピリデン）などが挙げられ、なかでもより好ましいものはＣ１−Ｃ４アルキレンである。
【００１９】
「低級アルケニレン」には、２〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルケニレン（例、ビニレン、１−プロペニレン、１−メチル−１−プロペニレン、２−メチル−１−プロペニレン、２−プロペニレン、２−ブテニレン、１−ブテニレン、３−ブテニレン、２−ペンテニレン、１−ペンテニレン、３−ペンテニレン、４−ペンテニレン、１，３−ブタジエニレン、１，３−ペンタジエニレン、２−ペンテン−４−イニレン、２−ヘキセニレン、１−ヘキセニレン、５−へキセニレン、３−ヘキセニレン、４−へキセニレン、３，３−ジメチル−１−プロペニレン、２−エチル−１−プロペニレン、１，３，５−ヘキサトリエニレン、１，３−ヘキサジエニレン、１，４−ヘキサジエニレン）などが挙げられ、なかでもより好ましいものはＣ２−Ｃ４アルケニレンである。
【００２０】
上記「低級アルケニレン」は、それぞれＥ体またはＺ体であってもよい。本発明の化合物が低級アルケニレン部分を有する場合は、本発明の化合物は該低級アルケニレン部分がＥ−構造およびＺ−構造である全ての幾何異性体を含む。
【００２１】
「低級アルキニレン」には、三重結合を１〜３個有する炭素数２〜６の直鎖又は分枝鎖のアルキニレン（例、エチニレン、１−プロピニレン、１−メチル−１−プロピニレン、２−メチル−１−プロピニレン、２−プロピニレン、２−ブチニレン、１−ブチニレン、３−ブチニレン、２−ペンチニレン、１−ペンチニレン、３−ペンチニレン、４−ペンチニレン、２−ペンチン−４−イニレン、２−ヘキシニレン、１−ヘキシニレン、５−ヘキシニレン、３−ヘキシニレン、４−ヘキシニレン、３，３−ジエチル−１−プロピニレン、２−エチル−１−プロピニレン）などが挙げられ、なかでもより好ましいのはＣ２−Ｃ４アルキニレンである。
【００２２】
「アリール」には、Ｃ６−Ｃ１０アリール（例、フェニルおよびナフチル）などが挙げられ、当該「アリール」は置換されていてもよく、置換位置は特に限定されない。該「置換基」としては、例えば、メチル、エチル、ヒドロキシ、メトキシ、アミノ、アセチル、ハロゲンなどが挙げられ、置換基が複数存在する場合、それらは同一であっても異なっていてもよい。
【００２３】
「アラルキル」には、アリール部分が６〜１０個の炭素原子を有し［すなわち、アリール部分が上記「アリール」のＣ６−Ｃ１０アリールである］、かつアルキル部分が１〜６個の炭素原子を有する［すなわち、アルキル部分が上記「低級アルキル」のＣ１−Ｃ６アルキルである］アラルキル（例、ベンジル、フェネチル、１−ナフチルメチル、２−ナフチルメチル、３−フェニルプロピル、４−フェニルブチルおよび５−フェニルペンチル）などが挙げられる。
【００２４】
「シクロ低級アルキル」には、炭素数３〜６個の炭素原子を有するシクロアルキル（例、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル）などが挙げられる。
【００２５】
「複素環」には、「芳香族複素環」および「非芳香族複素環」が挙げられる。「芳香族複素環」には、炭素原子に加えて窒素、酸素および硫黄原子から選択される１〜３個のヘテロ原子を含む５〜１０員の芳香族複素環などが挙げられ、例えば、チオフェン、フラン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンなどが挙げられる。「非芳香族複素環」には、炭素原子に加えて窒素、酸素および硫黄原子から選択される１〜３個のヘテロ原子を含む５〜１０員の非芳香族複素環などが挙げられ、例えば、ピロリジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、ホモピペラジン、トリエチレンジアミン、モルホリン、チオモルホリン、ジオキソラン、オキサゾリジン、チアゾリジン、トリアゾリジン、２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタンなどが挙げられる。
【００２６】
「アシル」には、低級アルキルカルボニル、シクロ低級アルキルカルボニル、アリールカルボニルなどが含まれる。
【００２７】
「低級アルキルカルボニル」には、低級アルキル部分が１〜６個の炭素原子を有する［すなわち、低級アルキル部分が上記「低級アルキル」のＣ１−Ｃ６アルキルである］アルキルカルボニル（例、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイル、およびヘキサノイル）などが挙げられる。
【００２８】
「シクロ低級アルキルカルボニル」には、シクロ低級アルキル部分が３〜６個の炭素原子を有する［すなわち、シクロ低級アルキル部分が上記「シクロ低級アルキル」のＣ３−Ｃ6シクロアルキルである］シクロアルキルカルボニル（例、シクロプロピルカルボニル、シクロブチルカルボニル、シクロペンチルカルボニル、およびシクロヘキシルカルボニル）などが挙げられる。
【００２９】
「アリールカルボニル」には、アリール部分が６〜１０個の炭素原子を有する［すなわち、アリール部分が上記「アリール」のＣ６−Ｃ１０アリールである］アリールカルボニル（例、ベンゾイルおよびナフトイル）などが挙げられる。
【００３０】
「アシルアミノ」には、アシル部分が上記「アシル」であるアシルアミノ（例、アセチルアミノ、プロピオニルアミノ、ブチリルアミノ、イソブチリルアミノ、バレリルアミノ、イソバレリルアミノ、ピバロイルアミノ、ヘキサノイルアミノ、シクロプロピルカルボニルアミノ、シクロブチルカルボニルアミノ、シクロペンチルカルボニルアミノ、シクロヘキシルカルボニルアミノ、ベンゾイルアミノ、ナフトイルアミノなど）などが挙げられる。
【００３１】
「低級アルコキシ」には、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルコキシ（例、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペントキシ、ｔｅｒｔ−ペントキシおよびヘキソキシ）などが挙げられ、なかでもより好ましいものはＣ１−Ｃ４アルコキシである。該「低級アルコキシ」は、置換されていてもよく、該「置換基」としては、ハロゲン、アシル、アミノカルボニルなどが挙げられ、該「ハロゲン」および「アシル」は、上記の定義の通りである。置換基が複数存在する場合、それらは同一であっても異なっていてもよい。
【００３２】
「アルコキシ」には、置換されていてもよいアルキルオキシ、シクロ低級アルコキシ、アラルキルオキシなどが含まれる。
【００３３】
該「置換されていてもよいアルキルオキシ」の「アルキルオキシ」には、アルキル部分が１〜１０個の炭素原子を有するアルキルオキシ（例、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、ｔｅｒｔ−ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、デシルオキシなど）などが挙げられる。該「置換されていてもよいアルキルオキシ」の置換基としては、ハロゲン、アシル、アミノカルボニルなどが挙げられ、該「ハロゲン」および「アシル」は、上記の定義の通りである。置換基の置換位置は特に限定されない。また、置換基が複数存在する場合、それらは同一であっても異なっていてもよい。
【００３４】
「シクロ低級アルコキシ」には、シクロ低級アルキル部分が３〜６個の炭素原子を有する［すなわち、シクロ低級アルキル部分が上記「シクロ低級アルキル」のＣ３−Ｃ６シクロアルキルである］シクロアルコキシ（例、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシなど）などが挙げられる。
【００３５】
「アラルキルオキシ」には、アリール部分が６〜１０個の炭素原子を有し［すなわち、アリール部分が上記「アリール」のＣ６−Ｃ１０アリールである］、かつアルキル部分が１〜６個の炭素原子を有する［すなわち、アルキル部分が上記「低級アルキル」のＣ１−Ｃ６アルキルである］アラルキルオキシ（例、ベンジルオキシ、フェネチルオキシ、１−ナフチルメチルオキシ、２−ナフチルメチルオキシ、３−フェニルプロピルオキシ、４−フェニルブチルオキシ、５−フェニルペンチルオキシなど）などが挙げられる。
【００３６】
「アルコキシカルボニル」には、アルキルオキシカルボニル、シクロ低級アルコキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニルなどが含まれる。
【００３７】
「アルキルオキシカルボニル」には、アルキル部分が１〜１０個の炭素原子を有するアルキルオキシカルボニル（例、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ｓｅｃ−ブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ペンチルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ペンチルオキシカルボニル、ヘキシルオキシカルボニル、デシルオキシカルボニルなど）などが挙げられる。
【００３８】
「シクロ低級アルコキシカルボニル」には、シクロ低級アルキル部分が炭素数３〜６個の炭素原子を有する［すなわち、シクロ低級アルキル部分が上記「シクロ低級アルキル」のＣ３−Ｃ６シクロアルキルである］シクロアルコキシカルボニル（例、シクロプロピルオキシカルボニル、シクロブチルオキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル）などが挙げられる。
【００３９】
「アラルキルオキシカルボニル」には、アリール部分が６〜１０個の炭素原子を有し［すなわち、アリール部分が上記「アリール」のＣ６−Ｃ１０アリールである］、かつアルキル部分が１〜６個の炭素原子を有する［すなわち、アルキル部分が上記「低級アルキル」のＣ１−Ｃ６アルキルである］アラルキルオキシカルボニル（例、ベンジルオキシカルボニル、フェネチルオキシカルボニル、１−ナフチルメチルオキシカルボニル、２−ナフチルメチルオキシカルボニル、３−フェニルプロピルオキシカルボニル、４−フェニルブチルオキシカルボニル、５−フェニルペンチルオキシカルボニルなど）などが挙げられる。
【００４０】
「置換されていてもよいカルバモイル」には、非置換のカルバモイル、及び１または２個の置換基で置換されたカルバモイルが含まれる。「置換されていてもよいカルバモイル」は、式−ＣＯＮＲ４Ｒ５で表される。
【００４１】
Ｒ４およびＲ５は、同一または異なってもよく、それぞれ水素、ヒドロキシ等で置換されていてもよい、低級アルキル、アシル（特に、低級アルキルカルボニル）、アルコキシカルボニル（特に、低級アルコキシカルボニル）、アリール、アラルキル、シクロ低級アルキル、スルフリル、スルフィニル、ホスホリル、複素環の基などを示す。当該「低級アルキル」、「アシル」（特に、低級アルキルカルボニル）、「アルコキシカルボニル」（特に、低級アルコキシカルボニル）、「アリール」、「アラルキル」、「シクロ低級アルキル」、および「複素環」は、上記の定義の通りである。
【００４２】
「低級アルキルスルホニルアミノ」には、低級アルキル部分が１〜６個の炭素原子を有する［すなわち、低級アルキル部分が上記「低級アルキル」のＣ１−Ｃ６アルキルである］アルキルスルホニルアミノ（例、メチルスルホニルアミノ、エチルスルホニルアミノ、プロピルスルホニルアミノ、イソプロピルスルホニルアミノ、ブチルスルホニルアミノ、イソブチルスルホニルアミノ、ｓｅｃ−ブチルスルホニルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニルアミノ、ペンチルスルホニルアミノ、ｔｅｒｔ−ペンチルスルホニルアミノ、ヘキシルスルホニルアミノなど）およびジ（アルキルスルホニル）アミノ（例、ジ（メチルスルホニル）アミノ、ジ（エチルスルホニル）アミノ、（メチルスルホニル）（エチルスルホニル）アミノなど）が挙げられる。
【００４３】
「低級アルキルカルボニルオキシ」には、低級アルキル部分が１〜６個の炭素原子を有する［すなわち、低級アルキル部分が上記「低級アルキル」のＣ１−Ｃ６アルキルである］アルキルカルボニルオキシ（例、メチルカルボニルオキシ、エチルカルボニルオキシ、プロピルカルボニルオキシ、イソプロピルカルボニルオキシ、ブチルカルボニルオキシ、イソブチルカルボニルオキシ、ｓｅｃ−ブチルカルボニルオキシ、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニルオキシ、ペンチルカルボニルオキシ、ｔｅｒｔ−ペンチルカルボニルオキシ、ヘキシルカルボニルオキシなど）が挙げられる。
【００４４】
「低級アルキルアミノ」には、低級アルキル部分が１〜６個の炭素原子を有する［すなわち、低級アルキル部分が上記「低級アルキル」のＣ１−Ｃ６アルキルである］アルキルアミノ（例、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ブチルアミノ、イソブチルアミノ、ｓｅｃ−ブチルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルアミノ、ペンチルアミノ、ｔｅｒｔ−ペンチルアミノ、ヘキシルアミノなど）およびジアルキルアミノ（例、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、エチルメチルアミノ、メチルプロピルアミノ、エチルプロピルアミノなど）が挙げられる。
【００４５】
化合物（Ｉ）中、Ａ１は、ベンゼンまたは、少なくとも1つの窒素原子または硫黄原子を含む複素環から誘導される残基を示し、例えば、ベンゼン、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、チオフェンなどから誘導される残基が挙げられる。なお、残基としての置換位置、すなわちＹとの結合位置は特に限定されない。
【００４６】
Ａ1としては、ベンゼン、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、イミダゾール、チアゾールおよびチオフェンから誘導される残基が好ましい。
【００４７】
化合物（Ｉ）中、Ａ２は、置換されていてもよいチアゾールから誘導された二価の残基である。
【００４８】
式（Ｉ）においてＡ２で示される「置換されていてもよいチアゾールから誘導された二価の残基」としては、
【化２】
2018076236.tif 000003
が挙げられる。
【００４９】
「チアゾール」は置換基を有していてもよく、置換位置は特に限定されない。上記「置換されていてもよいチアゾール」の「置換基」には、例えば、以下（１）〜（１２）に記載の基などが挙げられる。
（１）ハロゲン（例、フッ素、塩素、臭素）；
（２）上記で定義したアルコキシカルボニル（例、エトキシカルボニル）；
（３）置換されていてもよいアリール（当該アリールは、上記で定義した通りであり、当該アリールは、−ＳＯ２−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）などで置換されていてもよく、置換位置は特に限定されない）（例、フェニルおよび４−（メチルスルホニル）フェニル）；
（４）式：−ＣＯＮＲａＲｂ（式中、Ｒａは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、Ｒｂは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、ここで、当該低級アルキル、アリールおよびアラルキルは、上記で定義した通りである）の基（例、Ｎ−メチルアミノカルボニル、Ｎ−フェニルアミノカルボニル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノカルボニルおよびＮ−ベンジルアミノカルボニル）；
（５）式：−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｋ−アリール［式中、ｋは、０〜６の整数であり；当該アリールは、上記で定義した通りであり、−ＮＯ２、−ＳＯ２−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）、−ＣＦ３および−Ｏ−アリール（式中、当該アリールは、上記で定義した通りである）からなる群から選択される１〜５個の置換基を有していてもよく、置換位置は特に限定されない］の基；
（６）式：−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｓ−複素環（式中、ｓは、０〜６の整数であり；当該複素環は、上記で定義した通り（例、ピリジン）である）の基；
（７）式：−ＣＯ−複素環［式中、当該複素環は上記で定義した通り（例、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、チオモルホリン）であり、当該複素環は、−ＣＯ−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）、−ＣＯ−Ｏ−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）、−ＳＯ２−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）、オキソ（すなわち、=Ｏ）および式：−ＣＯＮＲｃＲｄ（式中、Ｒｃは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、Ｒｄは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、当該低級アルキル、アリールおよびアラルキルは、上記で定義した通りである）の基からなる群から選択される１〜５個の置換基を有していてもよく、置換位置は特に限定されない］の基；
（８）式：−（ＣＨ２）ｔ−アリール［式中、ｔは、１〜６の整数であり；当該アリールは、上記で定義した通りであり、−Ｓ−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）、−ＳＯ２−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）、−ＳＯ２−ＮＲｖＲｗ（式中、Ｒｖは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、Ｒｗは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、当該低級アルキル、アリールおよびアラルキルは、上記で定義した通りである）、−ＣＯ２−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）、−ＮＨＣＯ−Ｏ−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）および式：−ＣＯＮＲｅＲｆ（式中、Ｒｅは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、Ｒｆは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、当該低級アルキル、アリールおよびアラルキルは、上記で定義した通りである）の基からなる群から選択される１〜５個の置換基を有していてもよく、置換位置は特に限定されない］の基；
（９）式：−（ＣＨ２）ｏ−複素環［式中、ｏは、０〜６の整数であり；当該複素環は、上記で定義した通り（例、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン）であり、オキソ（すなわち、=Ｏ）；−ＣＯ−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）；−ＣＯ−Ｏ−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）；−ＳＯ２−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）；−ＣＯ−（複素環）（式中、当該複素環は、上記で定義した通り（例、ピロリジン、ピペラジンおよびモルホリン）であり、低級アルキル（当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）およびハロゲン（例、フッ素、塩素、臭素）からなる群から選択される１〜５個の置換基を有していてもよく、置換位置は特に限定されない）；および式：−ＣＯＮＲｇＲｈ（式中、Ｒｇは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、Ｒｈは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、当該低級アルキル、アリールおよびアラルキルは、上記で定義した通りである）の基からなる群から選択される１〜５個の置換基を有していてもよく、置換位置は特に限定されない］の基；
（１０）式：−（ＣＨ２）ｐ−ＮＲｉＲｊ［式中、ｐは、０〜６の整数であり；Ｒｉは、水素、アシル、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、Ｒｊは、水素、アシル、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、当該アシル、低級アルキル、アリールおよびアラルキルは、上記で定義した通りであり、当該低級アルキルは、式：−ＣＯＮＲｋＲｌ（式中、Ｒｋは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、Ｒｌは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、当該低級アルキル、アリールおよびアラルキルは、上記で定義した通りである）の基からなる群から選択される１〜５個の置換基を有していてもよく、置換位置は特に限定されない］の基；
（１１）式：−ＣＯＮ（Ｈまたは低級アルキル）−（ＣＨＲｍ）ｑ−Ｔ［式中、ｑは、０〜６の整数であり；当該低級アルキルは、上記で定義した通りであり；Ｒｍは、水素、上記で定義したアラルキルまたは上記で定義したアルキル（特に低級アルキル）であり、これらは−ＯＨおよび−ＣＯＮＨ２からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、置換位置は特に限定されない；Ｔは、水素；式：−ＣＯＮＲｎＲｏ（式中、Ｒｎは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、Ｒｏは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、当該低級アルキル、アリールおよびアラルキルは、上記で定義した通りである）の基；−ＮＨ−ＣＯ−Ｒｐ（式中、Ｒｐは、上記で定義した低級アルキルまたは上記で定義したアラルキルである）の基；−ＮＨ−ＳＯ２−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）の基；−ＳＯ２−（低級アルキル）（式中、当該低級アルキルは、上記で定義した通りである）の基；−複素環（式中、当該複素環は、上記で定義した通り（例、ピリジン、ピロリジンおよびモルホリン）であり、１〜３個の置換基（例、オキソ（すなわち、=Ｏ））を有していてもよく、置換位置は特に限定されない）の基；または−ＣＯ−（複素環）（式中、当該複素環は、上記で定義した通り（例、ピペリジンおよびモルホリン）である）の基である］の基；ならびに
（１２）式：−（ＣＨ２）ｒ−ＣＯ−ＮＲｔＲｕ（式中、ｒは、１〜６の整数であり；Ｒｔは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、Ｒｕは、水素、低級アルキル、アリールまたはアラルキルであり、当該低級アルキル、アリールおよびアラルキルは、上記で定義した通りである）の基。
【００５０】
化合物（Ｉ）における、Ａは、置換されていても良いベンゼンまたは、置換されていても良いチオフェンから誘導される二価の残基を示す。
【００５１】
「ベンゼン」または「チオフェン」は置換基を有していてもよく、置換位置は特に限定されない。上記、「置換されていてもよいベンゼン」、「置換されていてもよいチオフェン」の「置換基」としては、ハロゲン（例、フッ素、塩素、臭素）、低級アルキル（例、メチル、エチル）、低級アルコキシ（例、メトキシ）、アシル（例、アセチル）、ハロゲン化アルキル（例、トリフルオロメチル）などが挙げられる。置換基が複数存在する場合、それらは同一であっても異なっていてもよい。
【００５２】
上記「ベンゼン」、「チオフェン」に対するＸおよびＹの結合位置は特に限定されず、「ベンゼン」の場合、オルト位、メタ位またはパラ位いずれでもよく、「チオフェン」の場合、２位、３位、４位、５位のいずれでもよい。
【００５３】
「ベンゼン」の場合、下式に示す通りＸおよびＹが互いに対してメタ位またはパラ位で上記「ベンゼン環」に結合している化合物（Ｉ）が好ましく、「チオフェン」の場合は、下式に示す通りＸおよびＹが２位（または５位）および５位（または２位）、またはＸおよびＹが２位（または５位）および４位（または３位）で上記「チオフェン環」に結合している化合物（Ｉ）が好ましい。
【化３】
2018076236.tif 000004
【００５４】
式（Ｉ）においてＢ１およびＢ２は、Ａ１の置換基であり、その置換位置は特に限定されない。
【００５５】
化合物（Ｉ）中、Ｂ１は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、シクロ低級アルキル、ハロゲン化低級アルキル、低級アルコキシ、アシル、アシルアミノ、置換されていても良いカルバモイル、低級アルキルスルホニルアミノ、または低級アルキルカルボニルオキシを示す（ただし、Ａ１がチアゾールから誘導される残基である場合、アシルアミノではない。）。当該「ハロゲン」、「低級アルキル」、「シクロ低級アルキル」、「ハロゲン化低級アルキル」、「低級アルコキシ」、「アシル」、「アシルアミノ」、「置換されていても良いカルバモイル」、「低級アルキルスルホニルアミノ」、および「低級アルキルカルボニルオキシ」は、上記で定義したとおりである。
【００５６】
具体的なＢ１の例としては、水素；ヒドロキシ；フッ素、塩素、臭素などのハロゲン；メチル、エチル、イソプロピルなどの低級アルキル；シクロプロピルなどのシクロ低級アルキル；トリフルオロメチルなどのハロゲン化低級アルキル；メトキシ、エトキシ、トリフルオロメトキシ、アミノカルボニルメトキシなどの低級アルコキシ；アセチル、エチルカルボニルなどのアシル；アセチルアミノ、エチルカルボニルアミノなどのアシルアミノ；アミノカルボニル、Ｎ−メチルアミノカルボニル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノカルボニルなどの置換されていてもよいアミノカルボニル（カルバモイル）；メチルスルホニルアミノ、エチルスルホニルアミノ、シクロプロピルスルホニルアミノ、ビス（メチルスルホニル）アミノなどの低級アルキルスルホニルアミノ；メチルカルボニルオキシなどの低級アルキルカルボニルオキシなどがあげられる。
【００５７】
Ｂ１としては、水素、メチル、トリフルオロメチル、アセチルアミノ、アミノカルボニル（カルバモイル）、アミノカルボニルメトキシ、メチルスルホニルアミノ、エチルスルホニルアミノ、メチルカルボニルオキシなどが好ましい。
【００５８】
化合物（Ｉ）中、Ｂ２は、水素あるいは少なくとも１つの窒素原子を含む官能基を示す（ただし、Ａ１がチアゾールから誘導される残基である場合、アシルアミノではない。）。該「少なくとも１つの窒素原子を含む官能基」には、アシルアミノ；アミノまたはアセチルアミノで置換されていてもよい低級アルキルアミノ；置換されていてもよい少なくとも１つの窒素原子を含む複素環基；および低級アルキルアミノまたは置換されていてもよい少なくとも1つの窒素原子を含む複素環基で置換されたメチルが挙げられる。当該「アシルアミノ」および「低級アルキルアミノ」は、上記で定義したとおりである。該「置換されていてもよい少なくとも１つの窒素原子を含む複素環基」の「少なくとも１つの窒素原子を含む複素環基」とは、上記で定義した「複素環」のうち、少なくとも１つの窒素原子を含む複素環に由来する複素環基をいう。
【００５９】
その「置換されていてもよい少なくとも１つの窒素原子を含む複素環基」の置換基としては、例えば、低級アルキル（例えば、メチル）、低級アルキルカルボニル（例えば、アセチル）、ヒドロキシなどが挙げられる。置換基が複数存在する場合、それらは同一であっても異なっていてもよい。
【００６０】
具体的なＢ２の例としては、アセチルアミノ、エチルカルボニルアミノなどのアシルアミノ；メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、エチルメチルアミノ、メチルプロピルアミノ、エチルプロピルアミノ、エチル（アミノエチル）アミノ、エチル（アセチルアミノエチル）アミノなどのアミノまたはアセチルアミノで置換されていてもよい低級アルキルアミノ；メチル、アセチルなどで置換されていてもよいピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、ホモピペラジン、モルホリン、トリエチレンジアミン、ピラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピロール、イミダゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタンなどの少なくとも１つの窒素原子を含む複素環に由来する複素環基；ジメチルアミノメチル、ピロリジルメチル、ピペリジルメチル、ピペラジニルメチル、モルホリノメチルなどの、低級アルキルアミノまたは置換されていてもよい少なくとも1つの窒素原子を含む複素環基で置換されたメチルなどが挙げられる。
【００６１】
Ｂ２としては、水素、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、エチルメチルアミノ、メチルプロピルアミノ、エチルプロピルアミノ、アセチルアミノ、モルホリノ、ピペリジノ、ピペリジニル、ピペラジニル、ピロリジニル、ピラゾリル、Ｎ−メチルピペラジニル、Ｎ−アセチルピペラジニル、Ｎ−アセチルピペリジニル、モルホリノメチル、ピペラジニルメチル、２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル、５−アセチル−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルなどが好ましい。
【００６２】
あるいは、Ｂ１とＢ２は、互いに結合して環状構造を形成してもよい。該「環状構造」としては、環構成原子として少なくとも１個の窒素原子を含有する、５ないし７員の複素環（例、モルホリン、ピペラジン）等が挙げられる。該「環状構造」は、置換されていてもよく、該置換基としては、例えば、オキソ、低級アルキル（例、メチル）、低級ハロゲン化アルキル（例、トリフルオロメチル）、低級アシル（例、アセチル）などが挙げられる。置換基が複数存在する場合、それらは同一であっても異なっていてもよい。
【００６３】
化合物（Ｉ）中、Ｙは式（ＩＩ）:Ｊ−Ｌ−Ｍで表され、Ｊは結合、低級アルキレン、低級アルケニレン、低級アルキニレン、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２−であり、Ｌは結合、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−であり、Ｍは結合、低級アルキレン、低級アルケニレン、または低級アルキニレンである（ただし、Ｊが−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−の場合、Ｌは−Ｏ−、−ＮＨ−および−ＳＯ２−ではなく、Ｊが−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−の場合、Ｌは−Ｏ−および−ＮＨ−ではなく、Ｊが−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−の場合、Ｌは−ＣＯ−ではなく、Ｊが−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２−の場合、Ｌは−Ｏ−および−ＳＯ２−ではない（各式中、ｎは０から６の整数を示す。）。）。ＪおよびＭで示される「低級アルキレン」、「低級アルケニレン」および「低級アルキニレン」としては、上記で定義したものなどが挙げられる。
【００６４】
式（ＩＩ）：Ｊ−Ｌ−Ｍの具体的な例としては、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−ＳＯ２−（ＣＨ２）ｎ’−（各式中、ｎおよびｎ’は０から６の整数である。ｎは、０から３の整数が好ましく、ｎ’は、０から３の整数が好ましい。）、ビニル、エチニレンなどが挙げられる。これらのうち、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ’−およびエチニレンが好ましく、−（ＣＨ２）ｎ−およびエチニレンが特に好ましい。より具体的には、−（ＣＨ２）２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、エチニレンなどが挙げられる。
【００６５】
Ｙとしては、−（ＣＨ２）２−およびエチニレンが好ましい。
【００６６】
化合物（Ｉ）中、Ｂは−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＯ−、または−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ２−ＣＯ−（各式中、ｍは０から６の整数、Ｒ２は水素、低級アルキル、またはアシルを示す。）を示す。Ｒ２で示される「低級アルキル」および「アシル」としては、上記で定義したものなどが挙げられる。ｍは、好ましくは０から３の整数を示す。
【００６７】
具体的には、Ｂとしては、−ＣＯ―（−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ−においてｍが０）、−ＣＨ２−ＣＯ−、−（ＣＨ２）２−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）３−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）３−ＮＨ−ＣＯ−、−Ｓ−ＣＯ−、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＯ−および−（ＣＨ２）２−Ｓ−ＣＯ−などが挙げられる。
【００６８】
化合物（Ｉ）中、Ｄは、−ＮＲ３―（式中、Ｒ３は、水素、低級アルキル、アシル、または低級アルコキシカルボニルを示す。）を示し、Ｒ３で示される「低級アルキル」、「アシル」および「低級アルコキシカルボニル」としては、上記で定義したものなどが挙げられる。Ｄとしては、具体的には、−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）−などが挙げられ、−ＮＨ−が好ましい。
【００６９】
化合物（Ｉ）中、Ｅは、置換されていてもよいアミノを示し、該「置換されていてもよいアミノ」には、非置換のアミノ、及び１または２個の置換基で置換されたアミノが含まれる。その「置換されていてもよいアミノ」は、式:−ＮＲ６Ｒ７で表される。
【００７０】
Ｒ６およびＲ７は、同一または異なってもよく、それぞれ水素、置換されていてもよい低級アルキル、アシル（特に、低級アルキルカルボニル）、アルコキシカルボニル、アリール、アラルキル、シクロ低級アルキル、スルフリル、スルフィニル、ホスホリル、複素環の基などを示す。当該「低級アルキル」、「アシル」（特に、低級アルキルカルボニル）、「アルコキシカルボニル」（特に、低級アルコキシカルボニル）、「アリール」、「アラルキル」、「シクロ低級アルキル」、および「複素環」は、上記の定義の通りである。
【００７１】
Ｒ６およびＲ７としては、具体的には、それぞれ、水素、低級アルキル（例、メチル、エチルなど）、アセチル、ブタノイル、デカノイル、３−ヒドロキシプロパノイル、６−ヒドロキシヘキサノイル、エトキシカルボニル、ブトキシカルボニル、デシルオキシカルボニル、２−ヒドロキシエトキシカルボニルなどが挙げられる。
【００７２】
Ｅとしては、−ＮＨ２が好ましい。
【００７３】
また、他にもＥで表される「置換されていてもよいアミノ」のアミノ部分は“Protective Groups in Organic Synthesis 3rd Edition”（John Wiley and Sons発行、1999年）に記載の方法などに従って保護（即ち、置換）されていてもよい（すなわち、Ｒ６およびＲ７がアミノ保護基であってもよい）。
【００７４】
化合物（Ｉ）において、−Ｂ−Ｄ―Ｅ部分（分子末端）としては、好ましくは、Ｂが−ＣＯ―、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＨ２−ＣＯ−、−（ＣＨ２）２−ＣＯ−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）３−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−、または−（ＣＨ２）３−ＮＨ−ＣＯ−であり；Ｄが、−ＮＨ−であり；および、Ｅが−ＮＨ２である態様などが挙げられる。具体的には、−Ｂ−Ｄ―Ｅ部分としては、−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２、−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２、−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）２−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）３−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２、−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２、および−（ＣＨ２）３−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２などが挙げられ、好ましい。
【００７５】
ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物が構造中に不斉炭素原子を有する場合、本発明は全てのエナンチオマーおよびジアステレオマーを包含する。
【００７６】
一態様において、前記ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物は、下記式の化合物
【化４】
2018076236.tif 000005
（2-（4-｛2-［5-（4-アセチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル］エチル｝フェニル）アセトヒドラジド）である。
【００７７】
一態様において、前記ＶＡＰ−１阻害活性を有する化合物は、下記式の化合物
【化５】
2018076236.tif 000006
（4-｛2-［2-（アセチルアミノ）-1,3-チアゾール-4-イル］エチル｝ベンジルヒドラジンカルボキシレート）である。
【００７８】
本発明における医薬上許容される塩としては、無機または有機塩基との塩、酸付加塩などが挙げられる。無機または有機塩基との塩には、アルカリ金属塩（例、ナトリウム塩、カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（例、カルシウム塩、マグネシウム塩など）、アンモニウム塩、およびアミン塩（例、トリエチルアミン塩、Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミン塩など）などが挙げられ、酸付加塩には、鉱酸（例、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸および硫酸）から誘導される塩、および有機酸（例、酒石酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸およびアリールスルホン酸（例、ｐ−トルエンスルホン酸））から誘導される塩などが挙げられる。
【００７９】
本願化合物は、国際公開第２００９／０９６６０９号および国際公開第２００９／１４５３６０号に記載の方法にしたがい、製造することができる。
【００８０】
本願化合物は、がんの処置に有用である。本明細書において、「処置」なる用語には、症状の予防、治療、症状の軽減、症状の減退、進行停止等、症状のあらゆる管理が含まれる。
【００８１】
がんには、白血病、リンパ腫、芽細胞腫、癌腫（上皮性細胞由来の悪性腫瘍）および肉腫（非上皮性細胞由来の結合組織細胞に発生する悪性腫瘍）が含まれる。がんとしては、大腸癌（結腸癌および直腸癌を含む）、メラノーマ（例えば、転移性悪性メラノーマ）、腎癌（例えば、透明細胞カルシノーマ）、前立腺癌（例えば、ホルモン難治性前立腺アデノカルシノーマ）、乳癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、骨癌、膵癌、皮膚癌、頭頚部癌、皮膚または眼窩内悪性メラノーマ、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管のカルシノーマ、子宮内膜カルシノーマ、子宮頚部カルシノーマ、膣カルシノーマ、外陰部カルシノーマ、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、柔組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含む慢性または急性白血病、小児固形癌、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管の癌、腎盂カルシノーマ、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍新脈管形成、脊椎腫瘍、脳幹グリオーム、下垂体アデノーマ、カポシ肉腫、扁平上皮癌、扁平細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベスト誘発癌を含む環境誘発癌および上記癌の組み合わせが挙げられる。本発明の医薬組成物は、例えば、癌種（上皮性細胞由来の悪性腫瘍）の処置に好適である。また、本発明の医薬組成物は、例えば、大腸癌（結腸癌および直腸癌を含む）、メラノーマ（例えば、転移性悪性メラノーマ）、腎癌、前立腺癌、乳癌、および肺癌（例えば、非小細胞肺癌）の処置に好適である。
【００８２】
本願化合物は、がんの処置に有効な他の薬剤および／または治療法と併用することができる。一態様において、本願化合物は、抗CTLA-4抗体と併用される。さらなる態様において、本願化合物は、抗CTLA-4抗体および抗PD-1抗体と併用される。
【００８３】
抗体には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、および抗体断片が含まれる。抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体であってよい。抗体断片としては、抗体の重鎖および軽鎖可変領域（VHおよびVL）、F(ab')2、Fab'、Fab、Fv、Fd、Single-Domain FV (sdFv) 、Single-Chain FV (scFV) およびこれらの重合体が挙げられる。
【００８４】
抗CTLA-4抗体としては、イピリムマブ（ipilimumab）およびトレメリムマブ（tremelimumab）が例示される。抗PD-1抗体としては、ニボルマブ（nivolumab）およびペンブロリズマブ（pembrolizumab）が例示される。
【００８５】
本発明における投与対象は、哺乳動物、例えばヒト、マウス、ラット、ブタ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシであり、好ましくは、ヒトである。
【００８６】
本発明の医薬組成物の剤形、投与量、投与回数などは、疾患の種類、対象の状態、標的部位などの条件に応じて適宜選択できる。経口投与に用いる製剤としては、固体剤形（例、カプセル、錠剤、散剤）または液体形態（例、溶液または懸濁液）などが挙げられる。非経口投与に用いる製剤としては、無菌溶液または懸濁液の形態である注射、点滴などが挙げられる。固体経口製剤は、通常の賦形剤などを含み得る。液体経口製剤は、種々の芳香剤、着色剤、保存剤、安定化剤、可溶化剤または懸濁剤などを含み得る。非経口製剤は、例えば、無菌の水性または非水性の溶液または懸濁液であり、特定の種々の保存剤、安定化剤、緩衝化剤、可溶化剤または懸濁化剤などを含み得る。必要に応じて、種々の等張化剤を添加してもよい。
【００８７】
本発明の医薬組成物は、任意の経路により投与することができる。投与経路としては、全身投与（例、経口投与または注射投与）および局所投与(例、点眼投与、眼内投与および経皮投与)などが挙げられる。本発明の医薬組成物は、鼻腔内、口腔内、膣内、直腸内、舌下などの粘膜投与経路により投与することもできる。
【００８８】
本願化合物は、通常、約０．０３ｎｇ／ｋｇ体重／日〜約３００ｍｇ／ｋｇ体重／日の用量、好ましくは、約０．００３μｇ／ｋｇ体重／日〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日の用量で投与することができる。１日あたりの投与回数および投与間隔は、特に限定はされない。１日量を１回で、数回（例えば２〜４回）にわけて、あるいは持続的に、連日投与してもよく、あるいは数日、１週、数週、１ヶ月、または数ヶ月おきに投与してもよい。
【００８９】
抗CTLA-4抗体および抗PD-1抗体は、それぞれ、通常、約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．３〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与することができる。例えば、投与量は、約０．３ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｍｇ／ｋｇ体重、約２ｍｇ／ｋｇ体重、約３ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重、約９ｍｇ／ｋｇ体重または約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。前記用量を１回で、または数回（例えば２〜４回）にわけて、持続的に、投与してもよい。投与間隔も限定されず、連日、あるいは数日、１週、数週、１ヶ月、または数ヶ月おきに投与してもよい。例えば、週１回投与、２週おきに１回投与、３週おきに１回投与、４週おきに１回投与、月１回投与、３ヶ月おきに１回投与または３〜６ヶ月おきに１回投与などが例示される。好適には、抗CTLA-4抗体および抗PD-1抗体は静脈内投与により投与される。
【００９０】
本明細書において、「約」なる用語は、±３０％、好ましくは±２０％まで、より好ましくは±１０％の誤差を意味する。
【００９１】
本発明において、本願化合物と併用薬とは、それぞれ別の製剤に含まれていても、単一の製剤に含まれていてもよい。また、本願化合物と併用薬とをキットとして提供することもできる。例えばキットは、本願化合物を含む医薬組成物と抗CTLA-4抗体を含む医薬組成物、所望によりさらに抗PD-1抗体を含む医薬組成物とを含む。本発明の医薬組成物およびキットは、本願化合物の用法・用量、場合により併用薬との併用における用法・用量等を記載した添付文書、包装容器、取扱説明書等とともに提供されうる。
【００９２】
本発明において、本願化合物と併用薬とは、同時に投与しても、別々に投与してもよい。本発明において「同時に投与する」とは、本願化合物と併用薬を同一の投与スケジュールで投与することを意味し、本願化合物と併用薬は単一の製剤に含まれていても、別の製剤に含まれていてもよい。「別々に投与する」とは、本願化合物と併用薬を異なる投与スケジュールで投与することを意味し、それぞれの投与スケジュールは任意である。
【００９３】
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本実施例は如何なる意味においても本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００９４】
１．方法
（１）本願化合物の投与
6週齢のメスC57/B6jマウス（日本クレア株式会社）の側腹部皮下に、大腸癌細胞株であるMC38 (5×105 細胞/100 μl)を移植した。5日後、腫瘍の生着を確認し、下記の換算式で腫瘍体積を求め、有意差がないようにマウスを2群に分けた。一方の群には、化合物A（2-（4-｛2-［5-（4-アセチルピペラジン-1-イル）ピリジン-2-イル］エチル｝フェニル）アセトヒドラジド）（10 mg/kg、生理食塩水（pH 6.0）100 μl中）を腹腔内に1日1回連日投与した。他方の群には、コントロール群として、溶媒である生理食塩水（pH 6.0）100 μlを腹腔内に投与した。腫瘍体積は、2日または3日ごとに測定した。腫瘍体積は、最大径×最小径×最小径/２の換算式で近似した。投与開始後2週間で投与中止し、解析を行った。
【００９５】
MC38を移植したNOGマウス（公益財団法人実験動物中央研究所）、および別の大腸癌細胞株であるCT26を移植した6週齢メスBALB/cマウス（日本クレア株式会社）でも同様に試験した。
【００９６】
また、MC38移植C57/B6jマウスにおいて、化合物B（4-｛2-［2-（アセチルアミノ）-1,3-チアゾール-4-イル］エチル｝ベンジルヒドラジンカルボキシレート）（100 mg/kgまたは500 mg/kg、0.5%メチルセルロース水溶液100 μl中）を、ゾンデを用いて1日1回連日経口投与し、同様に腫瘍体積を評価した。
【００９７】
（２）本願化合物と抗CTLA-4抗体または抗PD-1抗体との併用
抗CTLA-4抗体（InVivoMAb anti m CTLA4, Clone: 9D9, Isotype: Mouse IgG2b, BioXcell, カタログ番号BE0164）もしくはそのアイソタイプコントロール（InVivoMAb Mouse IgG2b Isotype control; Unknown Specificity, Clone: MPC-11, BioXcell, カタログ番号BE0086）、または抗PD-1抗体（InVivoMAb anti m PD-1, Clone: RMP1-14, Isotype: Rat IgG2a, BioXcell, カタログ番号BE0146）もしくはそのアイソタイプコントロール（InVivoMAb Polyclonal Rat IgG, Clone: Rat IgG, カタログ番号BE0094）（各100 mg/kg、生理食塩水（pH 6.0）100 μl中）を、上記１（２）の化合物Aの投与開始日（day1）、3日後(day4)、および6日後(day7)に、合計3回腹腔内投与し、同様に腫瘍体積の変化を確認した。コントロール群、単剤投与群、併用投与群の4群比較を行った。
【００９８】
（３）本願化合物、抗CTLA-4抗体、および抗PD-1抗体の3種併用
上記１（２）と同様にして、抗CTLA-4抗体および抗PD-1抗体、またはそれらのアイソタイプコントロール（各100 mg/kg、生理食塩水（pH 6.0）100 μl中）を、化合物Aまたはコントロール（生理食塩水）の投与開始日（day1）、3日後(day4)、および6日後(day7)に投与し、腫瘍体積の変化を確認した。コントロール群、化合物A単独投与群、抗CTLA-4抗体と抗PD-1抗体との2種併用投与群、化合物A、抗CTLA-4抗体、および抗PD-1抗体の3種併用投与群の4群比較を行った。
【００９９】
（４）CD8デプレッションモデル（CD8 depletion model）
抗CD8抗体（InVivoMAb anti m CD8a, Clone: 53.6.72, Isotype: RatIgG2a, BioXcell，カタログ番号BE0004-1）またはそのアイソタイプコントロール（InVivoMAb Polyclonal Rat IgG, Clone: Rat IgG, カタログ番号BE0094)）（100 mg/kg、生理食塩水（pH 6.0）100 μl中）を、上記１（２）の化合物Aの投与開始日（day1）、3日後(day4)、および6日後(day7)に、合計3回腹腔内投与し、同様に腫瘍体積の変化を確認した。コントロール群、単剤投与群、併用投与群の4群比較を行った。
【０１００】
（５）癌抗原特異的CD8細胞の誘導
腫瘍塊また所属リンパ節から、CD8a (Ly-2) マイクロビーズ, マウス (Miltenyi Biotec, 130-049-401)でCD8陽性細胞をソーティングした。健全マウスの脾臓から採取した細胞を32Gy照射して抗原提示細胞とした。前記CD8陽性細胞および抗原提示細胞を混合し、MC38特異的腫瘍抗原であるGp70（1 mg/ml）またはそのコントロールとしてβ-gal（1 mg/ml）を投与して、5日間培養して腫瘍特異的CD8陽性細胞を培養した。その後、細胞を回収し、再度Gp70（1 mg/ml）またはβ-gal（1 mg/ml）を投与して培養し、1日後に上清を回収した。上清中のIFN-γ量をIFN-γ ELISA Set（Mouse IFN-γ ELISA，SetBD OptEIATM，カタログ番号555138）で測定した。
【０１０１】
（６）FACS
腫瘍塊から単細胞懸濁液（single-cell suspension）を調製し、2.4G2抗体（Anti-mouse CD16/CD32, Clone: 2.4G2, Bay bioscience, カタログ番号40-0161）でブロッキングした後、下記抗体でそれぞれ染色した。Foxp3は核内染色のため、染色の過程でFOXP3 Fix/Perm Buffer Set（Biolegend, カタログ番号421403）を使用した。
CD4 (PE/Dazzle 594, RatIgG2a, RM4-5, Biolegend 100566)
Foxp3 (PC5.5, RatIgG2a, FJK-16s, eBioscience 35-5773-82)
CD25 (PC7, RatIgG2b, PC61, BD 552880)
CTLA-4 (APC, HamIgG, UC10-4B9, Biolegend 106310)
CD8 (Alexa700, RatIgG2a, 53-6.7 Biolegend 100730)
PD-1 (APCCY7, RatIgG1 29F.1A12, Biolegend 135224)
CD3 (BrilliantViolet421, HamIgG, 145-2c-11, Biolegend 100336)
CD45 (V500, RatIgG2b, 30-F11, BD 561487)
【０１０２】
（７）細胞増殖試験
96ウェルフラットタイプのプレートに、大腸癌細胞株MC38を5×103細胞／ウェルで播種した。上記（１）の実験において10 mg/kgの本願化合物をマウスに腹腔内投与すると血中濃度が10 μg/mlとなることから、この10倍の濃度（100 μg/ml）から段階的に希釈し、直接の細胞毒性を検討した。化合物Aを100 μg/mlでRPMI培地に添加し、2倍ずつ希釈して、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56 μg/ml、782、391、196、98 ng/mlの培地を準備した。化合物Aを添加していないRPIM培地をコントロールとして用いた。MC38を播種したプレートに培地を添加し、3日間培養した。実験はトリプリケートで行った。がん細胞の増殖能の測定は、Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System (タカラバイオ株式会社, 製品コードMK400)を使用した。
【０１０３】
（８）解析方法
２群間の比較はt検定を用い、p<0.05を統計学的に有意な差とした。
【０１０４】
２．結果
（１）本願化合物の抗腫瘍効果
上記１（１）に記載のように、MC38移植C57/B6jマウスにおける腫瘍体積を評価した。化合物Aの投与により、コントロールと比較して、腫瘍体積が有意に減少した（図１Ａ）。
【０１０５】
上記１（４）に記載のように、腫瘍塊および所属リンパ節から得たCD8陽性細胞の腫瘍抗原Gp70に対するIFN-γ産生を評価したところ、化合物Aの投与により、腫瘍抗原特異的IFN-γ産生の増強が観察された（図１Ｂ）。
【０１０６】
また、本願化合物が直接がん細胞の増殖能に影響を与えるかどうかを検討した。その結果、25 μg/mlまでは明らかな増殖抑制は観察されず、それより高い濃度では増殖抑制が認められた（図１Ｃ）。よって、化合物Aは、上記１（１）のインビボ実験で用いた濃度では、使用した癌細胞株の増殖能への影響は認められなかった。
【０１０７】
（２）本願化合物と抗CTLA-4抗体との併用による相乗的抗腫瘍効果
上記１（２）に記載のように、化合物Aと抗CTLA-4抗体との併用による腫瘍体積への影響を検討した。化合物Aと抗CTLA-4抗体のとの併用群（図中、「combination」）では、コントロール群(図中、「control」)および抗CTLA-4抗体投与群(図中、「CTLA4」)と比較して腫瘍体積が有意に減少し、化合物A投与群(図中、「VAP-1」)と比較しても腫瘍体積が減少する傾向が観察された（図２）。
【０１０８】
（３）本願化合物による遊離型VAP-1（sVAP-1）活性の減少
上記２（１）のMC38移植モデルマウスから、本願化合物の投与開始後2週間の時点で末梢血を採取し、後述の手順[VAP-1/SSAO活性測定]により、血清中のsVAP-1の活性を測定した。MC38移植モデルマウスでは、健全マウスと比較して血清中のsVAP-1活性が有意に減少しており、化合物Aの投与により血清sVAP-1活性はさらに減少した（図３）。
［VAP-1/SSAO活性測定］
［１］血漿を水中で手早く融解して攪拌した後、遠心分離（2,000×g，5 min，4℃）した。
［２］2 mL容ポリプロピレンチューブに測定試料（血漿）50 μLおよび反応液100 μL［終濃度：50 mM リン酸緩衝液（pH 7.4）、0.5 mM パルギリン（pargyline）］を加え、反応試料を調製した。
［３］振盪（600 rpm，20分間（min），室温）しながらプレインキュベーションを行った。
［４］基質溶液（終濃度：10 μL  14C-ベンジルアミン）50 μＬを加え、緩やかに混和した。
［５］振盪（750 rpm，24時間，27℃）しながら反応させた。
［６］2 M クエン酸 200 μLを加えて撹拌し、酵素反応を停止させた。
［７］トルエン／酢酸エチル混液（1:1，v/v）1 mLを加えて撹拌し、遠心分離（1,700×g，5分間，室温）を行った。
［８］上層の750 μLを分取し、シンチレーションカクテル（Ultima Gold）3 mLと混和して放射能測定試料とした。
［９］放射能測定試料中の放射能を液体シンチレーションカウンターで5分間測定した。
［１０］放射能測定試料中の放射能量を上層中の放射能量に換算し、14C-ベンジルアミンの比放射能で除して生成物量（14C-ベンズアルデヒド，pmol）を算出した。生成物量を測定に供した試料量（mL）及び反応時間（min）で除してVAP-1/SSAO活性値（pmol/mL/min）を算出した。
[１１］Bradford法により測定した各試料中総タンパク質濃度でVAP-1/SSAO活性（pmol/mL/min）を除し、総タンパクあたりのVAP-1/SSAO活性値（pmol/mg protein/min）を算出した。
【０１０９】
（４）異なる腫瘍マウスモデルにおける本願化合物の作用
上記２（１）のMC38移植C57/B6jマウスと同様に、CT26移植BALB/cマウスにおいても化合物Aの作用を検討した。化合物Aは、いずれのモデルマウスにおいても、対照と比較して腫瘍体積を有意に減少させた（図４）。
【０１１０】
（５）NOGマウスモデルおよびCD8デプレッションモデルにおける本願化合物の作用
免疫不全マウスであるNOGマウスを用いた腫瘍モデルおよびCD8デプレッションモデルにおいて、化合物Aの作用を検討した。図５は、NOGマウスモデルおよびCD8デプレッションモデルにおける本願化合物（化合物A）の作用を示す。MC38移植NOGマウス（図５左、コントール群（図中、「control」））では、MC38移植C57B6jマウス（図５右、コントロール群（図中、「control」））と比較して腫瘍の増殖速度が速かった。また、MC38移植NOGマウスは、本願化合物の投与の有無にかかわらず同様の増殖を示した。さらに、MC38移植C57B6jマウスにおいてCD8を抗体により欠損させたCD8デプレッションモデルでは、本願化合物の抗腫瘍効果は観察されず（図５右、併用投与群（図中、「VAP-1+dCD8」））、コントロール群（図中、「control」）と比較して抗CD8抗体投与群の腫瘍体積が増加した（図５右、「dCD8」、「VAP-1+dCD8」）。これらの結果から、MC38を移植したマウスでは、免疫応答、特にCD8T細胞を介した免疫応答により腫瘍の増殖がある程度抑制されており、本願化合物はこの抑制効果を増強する可能性が示唆された（図５）。
【０１１１】
（６）腫瘍浸潤リンパ球のFACS解析
MC38移植C57B6jマウスの腫瘍塊から単細胞懸濁液を調製し、FACS解析を行った。CD3およびCD45がともに陽性である細胞をゲートし、これらを腫瘍浸潤リンパ球（TIL）として解析した。まず、CD3およびCD45陽性細胞をCD4陽性細胞およびCD8陽性細胞にそれぞれに分け、さらにCD4、CD25、およびFoxp3がすべて陽性の細胞を制御性T細胞（Treg）と定義し解析した（図６、上段）。また、CD8陽性細胞において、活性化マーカーであるPD1およびCTLA-4の発現頻度を解析した（図６、下段）。
【０１１２】
（７）本願化合物による腫瘍浸潤CD8陽性細胞の増加
上記２（６）のFACS解析の結果から、MC38移植C57/B6jマウスにおける腫瘍浸潤リンパ球中のCD3、CD4、またはCD8陽性細胞の絶対数、Tregの絶対数、および各細胞の相対比を評価した。化合物Aにより、腫瘍浸潤リンパ球におけるCD8陽性細胞数が割合でも絶対値でも増加し、また、CD4陽性細胞中のTregの割合が減少した（図７）。
【０１１３】
（８）本願化合物によるT細胞活性化の誘導
上記２（６）のFACS解析の結果から、MC38移植C57/B6jマウスにおける腫瘍浸潤リンパ球中の活性化T細胞の絶対数および相対比を評価した。化合物Aにより、T細胞活性化マーカーであるPD-1陽性細胞およびCTLA-4陽性細胞の絶対数が増加した（図８）。
【０１１４】
（９）本願化合物の所属リンパ節のT細胞集団に対する作用
腫瘍浸潤リンパ球と同様に、MC38移植C57/B6jマウスにおける所属リンパ節のT細胞の構成および活性化T細胞数を評価した。所属リンパ節のT細胞集団では、化合物Aによる構成の変化は認められなかった（図９）。
【０１１５】
（１０）本願化合物による骨髄由来免疫抑制細胞の変化
MC38移植C57/B6jマウスにおいて、腫瘍における骨髄由来免疫抑制細胞（myeloid-derived suppressor cell, MDSC）の変化を評価した。化合物Aにより、免疫抑制作用の強い顆粒球系MDSC（granulocytic MDSC, G-MDSC）（CD11b+Gr-1high）の浸潤が減少していた（図１０）。本願化合物の抗腫瘍効果のメカニズムの一つとして、腫瘍へ浸潤するMDSCの性質変化が示唆された。
【０１１６】
（１１）本願化合物の腫瘍における樹状細胞活性化に対する作用
MC38移植C57/B6jマウスにおいて、腫瘍における樹状細胞（Dendritic cell, DC）の活性化を評価した。腫瘍におけるCD80、CD83、PD-L1、またはCD86陽性細胞の数は化合物Aの投与により変化せず、本願化合物はDC活性化に影響しなかった（図１１）。
【０１１７】
（１２）異なる本願化合物の抗腫瘍効果
上記２（１）と同様に、MC38移植C57/B6jマウスにおいて、化合物B（100 mg/kgまたは500 mg/kg、生理食塩水（pH 6.0）100 μl中）の経口投与による抗腫瘍効果を検討した。化合物Bの投与により、濃度依存的に腫瘍体積が減少する傾向が観察された（図１２）。
【０１１８】
（１３）本願化合物と抗PD-1抗体との併用による抗腫瘍効果
上記２（２）と同様にして、化合物Aと抗PD-1抗体との併用による腫瘍体積への影響を検討した。図１３は、本願化合物（化合物A）と抗PD-1抗体との併用による腫瘍体積への影響を示す。化合物A投与群（図中、「VAP-1」）、抗PD-1抗体投与群(図中、「PD-1」)、および化合物Aと抗PD-1抗体との併用群（図中、「combination」）のいずれにおいても、コントロール群(図中、「control」)と比較して腫瘍体積の減少傾向を示唆したものの、コントロール群と当該併用群と間で、腫瘍体積の減少における有意差は認められなかった（図１３）。
【０１１９】
（１４）本願化合物によるPD-1陽性細胞の増加
上記２（６）のFACS解析の結果から、化合物A投与群、抗CTLA-4抗体投与群、および化合物Aと抗CTLA-4抗体との併用投与群における腫瘍浸潤リンパ球中のPD-1陽性細胞を評価した。コントロール群、化合物A投与群、および抗CTLA-4抗体投与群と比較して、化合物Aと抗CTLA-4抗体との併用投与群ではCD8陽性細胞中のPD-1の発現が高い傾向となった（図１４、左上のグラフ）。この結果から、本願化合物と抗CTLA-4抗体とを併用することにより、いずれかを単独で投与した場合よりも腫瘍に浸潤するCD8細胞が活性化しやすい環境が形成されている可能性が示唆された。さらに、TregのマーカーであるFoxp3とPD-1との比では併用群で明らかな上昇を認め、免疫抑制環境の改善が併用群で認められていることが示された（図１４、左下のグラフ）。
【０１２０】
（１５）本願化合物、抗CTLA-4抗体、および抗PD-1抗体の3種併用の抗腫瘍効果
上記１（３）に記載のように、化合物A、抗CTLA-4抗体、および抗PD-1抗体の3種併用による腫瘍体積への影響を検討した。化合物A単独、抗CTLA-4抗体と抗PD-1抗体の2種併用、および化合物A、抗CTLA-4抗体、および抗PD-1抗体の3種併用により、腫瘍体積は有意に減少した（図１５）。なお、抗CTLA-4抗体と抗PD-1抗体の2種併用では治癒したマウスはいなかったが、化合物A、抗CTLA-4抗体、および抗PD-1抗体の3種併用により5匹中2匹のマウスで腫瘍治癒が認められた（データ非提示）。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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