(57)【要約】【課題】βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いを抑制する物質の提供。【解決手段】メチルジヒドロジャスモネートを有効成分とする、βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いの抑制剤。メチルジヒドロジャスモネートを有効成分とする、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
メチルジヒドロジャスモネートを有効成分とする、βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いの抑制剤。
【請求項２】
メチルジヒドロジャスモネートを有効成分とする、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤。
【請求項３】
メチルジヒドロジャスモネートを有効成分とする、嗅覚受容体ＯＲ１０Ｇ７、ＯＲ１０Ｇ４、またはそれらと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腐敗尿臭抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、下水道整備の向上により、トイレにおける尿由来の強烈なアンモニア臭の問題は減少傾向にある。尿のアンモニア臭の原因は、尿素からウレアーゼによって生じるアンモニアである。アンモニアは悪臭成分としては閾値が高い（高濃度でないと臭いを感じない）ため、水洗式トイレの普及により排泄物が即時的に屋外へ排出されるようになった現在においては、尿由来のアンモニア臭が強く感じられる場面は稀である。
【０００３】
その反面、近年では、トイレに飛び散った尿や、使用済みのおむつなどの尿の吸収に関わる吸収性物品から発せられる、アンモニア臭とは異なる尿臭が問題にされている。このような尿臭は、尿に酵素βグルクロニダーゼが作用することにより発生する。βグルクロニダーゼは、各種のアルコール類、フェノール類、アミン類等がグルクロン酸抱合された化合物（グルクロニド）を加水分解する酵素であり、尿中に含まれる菌に含有されている。
【０００４】
特許文献１、２には、菌が産生するβ−グルクロニダーゼが尿に作用すると、フェノール、ｐ−クレゾール、２−メトキシ−４−ビニルフェノール、４−ビニルフェノール、２−メトキシ−１，３−ベンゼンジオール、１，４−ベンゼンジオール、１，３−ベンゼンジオール、インドール等の成分が尿中に増加し、尿臭強度を顕著に増加させることが記載されている。また、特許文献３には、ｐ−クレゾールと、それ以外の炭素数６〜１０のフェノール化合物、例えば、フェノール、ジメチルフェノール、メトキシフェノール、メトキシビニルフェノール、ジヒドロキシベンゼンとの組成物により、使用済みおむつから発する尿臭を再現できることが記載されている。これらの成分は、トイレに飛び散った尿や使用済みおむつなどから発せられる、βグルクロニダーゼの働きにより生じたアンモニア臭とは異なる尿臭に対して寄与の高い成分であると考えられている。
【０００５】
一方で、フェノール、２−メトキシ−４−ビニルフェノール、４−ビニルフェノール等の一部のフェノール系化合物は、放尿直後の初期尿にも微量に含まれていることがある（特許文献２）。したがって、放尿直後の尿であっても、上述したアンモニア臭とは異なる尿臭を、わずかではあるが、発する可能性がある。
【０００６】
尿の吸収に関わる吸収性物品としては、乳幼児や被介護者用おむつだけでなく、軽失禁用おむつや尿とりパッドなどの軽失禁用品、さらには女性用の生理用品など、結果的に尿を吸収する可能性がある製品もこれに含まれる。特に近年では、乳幼児や被介護者用おむつだけでなく、高齢者、経産婦、病中もしくは病後者などの軽度な失禁をケアするための軽失禁用おむつもしくはパッド等の軽失禁用品の需要が高まっている。これら軽失禁用品は、日常生活の中で使用されるため、使用後だけでなく、装着中における尿臭の防止も重要な課題である。
【０００７】
最近、標的とする悪臭に対する嗅覚受容体の活性を特異的に阻害することによって、該悪臭を抑制する方法が提供された（例えば、特許文献４）。こうしたアンタゴニスト物質による受容体活性阻害に基づくにおいの抑制または変調のメカニズムは、嗅覚受容体アンタゴニズムと呼ばれる。嗅覚受容体アンタゴニズムによるにおいの抑制または変調は、香水や芳香剤等の別の強いにおいを付加することによる消臭方法と異なり、標的とする悪臭の認識を特異的に失くしてしまうことができ、また芳香剤の強いにおいによる不快感が生じることもないことから、好ましい消臭手段である。
【０００８】
特許文献４には、β−グルクロニダーゼ処理された尿の臭いの原因物質である２−メトキシ−４−ビニルフェノールに応答する嗅覚受容体として、ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ５Ｋ１、ＯＲ５Ｐ３、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ１０Ｇ４及びＯＲ１０Ｇ７が開示され、これらの嗅覚受容体の応答を抑制することによって、βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いを抑制することができることが記載されている。
【０００９】
メチルジヒドロジャスモネート（ＭＤＪ）は、従来使用されているジャスミン系香料である。特許文献５〜７には、ＭＤＪが尿のアンモニア臭を抑制したことが記載されている。特許文献８には、基調香料成分にＭＤＪ等のジャスミン系香料を含む糞便臭抑制用フレグランスが記載されている。しかし、現在まで、ＭＤＪがβグルクロニダーゼが作用した尿の臭いや２−メトキシ−４−ビニルフェノールの臭いを抑制したという報告はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開公報第２００９／０３７８６１号
【特許文献２】特許第５７１９９５１号公報
【特許文献３】特許第５３６８６９６号公報
【特許文献４】特開２０１５−２１１６６７号公報
【特許文献５】特開２００２−１５９５６５号公報
【特許文献６】特開２００２−２５３６５１号公報
【特許文献７】特開２００２−２８５００１号公報
【特許文献８】国際公開公報第２０１３／０１８８０５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、トイレに飛び散った尿や、装着中もしくは使用済みのおむつ等の吸収性物品などから発せられる、βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いの抑制剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者は、メチルジヒドロジャスモネート（ＭＤＪ）が、２−メトキシ−４−ビニルフェノール受容体であるＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７の応答を抑制して、２−メトキシ−４−ビニルフェノールによる臭いを抑制し、さらにはそれを原因とするβグルクロニダーゼが作用した尿の臭いを抑制することを見出した。
【００１３】
したがって、本発明は、メチルジヒドロジャスモネートを有効成分とする、βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いの抑制剤を提供する。
また本発明は、メチルジヒドロジャスモネートを有効成分とする、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤を提供する。
また本発明は、メチルジヒドロジャスモネートを有効成分とする、嗅覚受容体ＯＲ１０Ｇ７、ＯＲ１０Ｇ４、またはそれらと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤を提供する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対する嗅覚受容体の応答を抑制することで、その臭いを抑制することができる。さらに、２−メトキシ−４−ビニルフェノールは、βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いの原因物質であるため、本発明によれば、βグルクロニダーゼが作用した尿の臭い、例えばトイレに飛び散った尿、使用済みおむつなどの吸収性物品などから発せられる尿の臭いを抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】種々の濃度の２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対する嗅覚受容体ＯＲ１０Ｇ４発現細胞（左）およびＯＲ１０Ｇ７発現細胞（右）の応答。ｎ＝３、エラーバー＝±ＳＥ。
【図２】ＯＲ１０Ｇ４発現細胞（左）およびＯＲ１０Ｇ７発現細胞（右）の２−メトキシ−４−ビニルフェノール応答に対するＭＤＪの抑制効果。横軸にＭＤＪの濃度を、縦軸に腐敗尿臭物質（２−メトキシ−４−ビニルフェノール）単独刺激への応答強度を１００％として、腐敗尿臭物質とＭＤＪとを併用したときの受容体発現細胞の応答（％）を表す。ｎ＝３、エラーバー＝±ＳＥ。
【図３】ＭＤＪの２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制効果の官能評価（ｎ＝９）。Ｃｏｎｔｒｏｌ：２−メトキシ−４−ビニルフェノールのみ、Ｖｅｈｉｃｌｅ：ミネラルオイルのみ。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本明細書において、「嗅覚受容体アンタゴニズムによる臭いの抑制」とは、目的の臭い分子と他の分子をともに適用することにより、当該他の分子によって目的の臭い分子に対する受容体活性を阻害し、結果的に個体に認識される臭いを抑制する手段である。嗅覚受容体アンタゴニズムによる臭いの抑制は、同様に他の分子を用いる手段であっても、芳香剤による消臭のように、目的の臭いを香料の香気によって隠蔽する手段とは区別される。嗅覚受容体アンタゴニズムによる臭いの抑制の一例は、アンタゴニスト等の嗅覚受容体の活性を阻害する物質を使用するケースである。特定の臭いをもたらす臭い分子の受容体にその活性を阻害する物質を適用すれば、当該受容体の当該臭い分子に対する活性が抑制されるため、最終的に個体に知覚される臭いを抑制することができる。
【００１７】
本明細書において、「尿の吸収に関わる吸収性物品」（または単に「吸収性物品」）とは、乳幼児や被介護者用おむつ、軽失禁用おむつ、尿とりパッド等の軽失禁用品、女性用の生理用品など、ヒトや動物に装着されて、結果的に尿を吸収する可能性がある製品をいう。
【００１８】
本明細書において、「腐敗尿臭」とは、特に断らない限り、βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いをいう。本明細書における、「βグルクロニダーゼが作用した尿」には、放尿もしくは採尿された尿に積極的にβグルクロニダーゼを添加し、作用させたものも含まれるが、一方、βグルクロニダーゼは放尿もしくは採尿された尿中に含まれており、当該尿に作用するため、放尿もしくは採尿された後時間が経った尿もまた、βグルクロニダーゼが作用した尿に含まれる。したがって、本明細書における「腐敗尿臭」（すなわち、βグルクロニダーゼが作用した尿の臭い）の具体的な例としては、放尿もしくは採尿後時間が経った尿から発せられる臭い、飛び散って乾燥した尿から発せられる臭い、使用後放置したおむつなど、装着中もしくは使用後の尿が付着した吸収性物品から発せられる尿の臭いなどが挙げられる。これらの尿中には、酵素βグルクロニダーゼの作用によって生成された２−メトキシ−４−ビニルフェノールが含まれている。２−メトキシ−４−ビニルフェノールは、該「腐敗尿臭」の原因物質である。
【００１９】
本明細書において、「２−メトキシ−４−ビニルフェノールによる臭い（または２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭）」とは、２−メトキシ−４−ビニルフェノールによりもたらされる臭いである。２−メトキシ−４−ビニルフェノールは、放尿もしくは採尿後時間が経った尿、飛び散って乾燥した尿、装着中もしくは使用後の尿が付着した吸収性物品、またはβグルクロニダーゼが作用した尿に含有されている。さらに、２−メトキシ−４−ビニルフェノールは、放尿直後の初期尿にも微量に含まれていることがある（特許文献２）。したがって、放尿直後の尿、または装着中の尿が付着した直後の吸収性物品であっても、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭を発することがあり得る。したがって、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制は、装着中または使用後の尿が付着してから時間が経った吸収性物品から発せられる尿臭だけでなく、装着中の尿が付着した直後の吸収性物品から発せられる尿臭の抑制にも効果的であり得る。
【００２０】
本明細書において、「嗅覚受容体ポリペプチド」とは、嗅覚受容体またはそれと同等の機能を有するポリペプチドをいい、嗅覚受容体と同等の機能を有するポリペプチドとは、嗅覚受容体と同様に、細胞膜上に発現することができ、匂い分子の結合によって活性化し、かつ活性化されると、細胞内のＧαｓと共役してアデニル酸シクラーゼを活性化することで細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる機能を有するポリペプチドをいう（Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００４，５：２６３−２７８）。
【００２１】
ＯＲ１０Ｇ７は、ヒト嗅細胞で発現している嗅覚受容体である。ＯＲ１０Ｇ７は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：５２２１８８２９として登録されている。ＯＲ１０Ｇ７は、配列番号１で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。本明細書において、「ＯＲ１０Ｇ７と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチド」とは、配列番号２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドをいう。
【００２２】
ＯＲ１０Ｇ４は、ヒト嗅細胞で発現している嗅覚受容体である。ＯＲ１０Ｇ４は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：５２３１７１７１として登録されている。ＯＲ１０Ｇ４は、配列番号３で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号４で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。本明細書において、「ＯＲ１０Ｇ４と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチド」とは、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドをいう。
【００２３】
本明細書において、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列に関する「少なくとも８０％の同一性」とは、８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性をいう。
【００２４】
本明細書において、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の同一性は、リップマン−パーソン法（Ｌｉｐｍａｎ−Ｐｅａｒｓｏｎ法；Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２７：１４３５−４１）によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアＧｅｎｅｔｙｘ−Ｗｉｎ（Ｖｅｒ．５．１．１；ソフトウェア開発）のホモロジー解析（Ｓｅａｒｃｈ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ）プログラムを用いて、Ｕｎｉｔ  ｓｉｚｅ  ｔｏ  ｃｏｍｐａｒｅ（ｋｔｕｐ）を２として解析を行うことにより算出される。
【００２５】
後述の実施例に示すとおり、嗅覚受容体ＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７は、２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対して濃度依存的な活性化を示す、２−メトキシ−４−ビニルフェノールの受容体である（図１）。したがって、ＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７の応答を抑制する物質は、２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対する該受容体の応答の抑制に基づく嗅覚受容体アンタゴニズムにより、個体の２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭またはβグルクロニダーゼが作用した尿の臭いの認識に変化を生じさせ、当該臭いを抑制することができる。
【００２６】
メチルジヒドロジャスモネート（Ｍｅｔｈｙｌ  Ｄｉｈｙｄｒｏｊａｓｍｏｎａｔｅ；ＭＤＪ）（Methyl 3-oxo-2-pentyl-1-cyclopentaneacetate）は、後述の実施例に示すとおり、嗅覚受容体ＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７の２−メトキシ−４−ビニルフェノール応答を抑制し（図２）、このことから、ＭＤＪがＯＲ１０Ｇ４、ＯＲ１０Ｇ７、またはそれらと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対するアンタゴニストであることが示された。さらに、ＭＤＪは、官能試験においても、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭を抑制した（図３）。ＭＤＪは、これまで香料素材として知られていたが、ＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７に対するアンタゴニスト作用により該受容体の２−メトキシ−４−ビニルフェノール応答を抑制することや、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭を抑制する機能があることは知られていなかった。
【００２７】
本発明の一態様において、ＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７のアンタゴニストであるＭＤＪは、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭を抑制するための有効成分として使用され得る。さらにＭＤＪは、２−メトキシ−４−ビニルフェノールを原因とするβグルクロニダーゼが作用した尿の臭いを抑制するための有効成分として使用され得る。したがって、一実施形態において、本発明は、ＭＤＪを有効成分とするβグルクロニダーゼが作用した尿の臭いの抑制剤を提供する。別の一実施形態において、本発明は、ＭＤＪを有効成分とする２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制剤を提供する。
【００２８】
ＭＤＪは、市販のものを購入することができ、例えば、日本ゼオン、東京化成工業株式会社、花王株式会社などから入手することが可能である（「合成香料  化学と商品知識」増補改訂版、印藤元一著、化学工業日報社、２００５年３月発行を参照）。あるいは、ＭＤＪは、化学合成によって、該市販品と同一物質またはそれを含む組成物を製造することが可能である。
【００２９】
一実施形態において、本発明の腐敗尿臭（βグルクロニダーゼが作用した尿の臭い、以下同じ）の抑制剤は、ＭＤＪを有効成分として含有する。一実施形態において、本発明の腐敗尿臭の抑制剤は、ＭＤＪから本質的に構成され得る。一実施形態において、本発明の２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤は、ＭＤＪを有効成分として含有する。一実施形態において、本発明の２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤は、ＭＤＪから本質的に構成され得る。
【００３０】
一実施形態において、ＭＤＪは、腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭を抑制するための化合物もしくは組成物に、該臭いを抑制するための有効成分として含有され得る。あるいは、ＭＤＪは、腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制剤の製造のため、または腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭を抑制するための化合物もしくは組成物の製造のために使用することができる。腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭を抑制するための化合物もしくは組成物の例としては、トイレ用の消臭剤または芳香剤、トイレ用洗浄剤、下着もしくはおむつ用の洗剤もしくは柔軟剤などが挙げられる。
【００３１】
一実施形態において、ＭＤＪは、腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制が所望されるあらゆる化合物もしくは組成物に対して、または腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制が所望されるあらゆる環境下において、該臭いの抑制のための有効成分として使用され得る。あるいは、ＭＤＪは、腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制のための有効成分として、該臭いの抑制が所望される化合物もしくは組成物の製造のために使用することができる。腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制が所望される化合物もしくは組成物の例としては、吸収性物品（例えば、乳幼児や被介護者用おむつ、軽失禁用おむつや尿とりパッド等の軽失禁用品、女性用の生理用品）、ベッドパッド、ベッドマット、シーツ、ブランケット、下着、便器、便座シート、トイレ用マット、トイレの壁もしくは床材などが挙げられる。
【００３２】
上記腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制剤、および当該臭いの抑制が所望される化合物もしくは組成物は、ＭＤＪに加えて、他の消臭効果を有する成分を、その目的に応じて適宜含有していてもよい。当該消臭効果を有する他の成分としては、尿において２−メトキシ−４−ビニルフェノールを発生させる酵素βグルクロニダーゼを阻害する成分であるＣｙｃｌｏｈｅｘａｄｅｃ−８−ｅｎ−１−ｏｎｅ（グロバノン（登録商標））などが挙げられる。さらに、上記臭い抑制剤および臭いの抑制が所望される化合物もしくは組成物は、消臭剤や防臭剤に一般的に添加される任意の成分を含んでいてもよい。
【００３３】
さらなる態様として、本発明は、腐敗尿臭とＭＤＪとを共存させる工程を含む、腐敗尿臭の抑制方法を提供する。また本発明は、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭とＭＤＪとを共存させる工程を含む、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制方法を提供する。
【００３４】
上記本発明の方法の一実施形態においては、腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の存在下で対象にＭＤＪを適用することにより、該臭いとＭＤＪとを共存させる。それによって、該対象のＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７と、そのアンタゴニストであるＭＤＪとが結合して、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭に対する該嗅覚受容体の応答が抑制されるので、嗅覚受容体アンタゴニズムによって、腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭が抑制される。
【００３５】
上記本発明の方法において、対象としては、腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制を必要とする対象、好ましくは嗅覚受容体アンタゴニズムによる腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制を必要とする対象が挙げられる。当該対象は、哺乳動物であれば特に限定されないが、好ましくはヒトである。より詳細には、本発明の方法における、腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制を必要とする対象の例としては、病人、吸収性物品（例えば、乳幼児や被介護者用おむつ、軽失禁用おむつや尿とりパッド等の軽失禁用品、女性用の生理用品）の使用者、病人または高齢者の介護従事者、清掃員、ごみの収集作業に従事するヒトなどが挙げられる。
【００３６】
上記本発明の方法の一実施形態において、ＭＤＪは、腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の発生する可能性のある環境下に予め適用される。それにより、当該環境下で該臭いが発生した場合、対象に対して該臭い存在下でＭＤＪが適用されるので、嗅覚受容体アンタゴニズムによって腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭は抑制される。
【００３７】
上記本発明の方法の一実施形態において、ＭＤＪは、腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノールを含有する化合物または組成物に配合される。これによって、当該化合物または組成物に含まれる２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対するＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７の活性を低下させ、対象における腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の認識を抑制し、結果として当該臭いを抑制する。また別の実施形態において、ＭＤＪは、腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノールを発生する可能性のある化合物または組成物に配合される。これによって、ＭＤＪは当該化合物または組成物から発生した２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対するＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７の活性を低下させ、対象における腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の認識を抑制し、結果として当該臭いを抑制する。腐敗尿臭もしくは２−メトキシ−４−ビニルフェノールを発生する可能性のある化合物または組成物の例としては、尿、吸収性物品（例えば、乳幼児や被介護者用おむつ、軽失禁用おむつや尿とりパッド等の軽失禁用品、女性用の生理用品）、ベッドパッド、ベッドマット、シーツ、ブランケット、下着、便器、便座シート、トイレ用マット、トイレの壁もしくは床材などが挙げられる。したがって、本発明のなお別の態様として、ＭＤＪを含有する、吸収性物品（例えば、乳幼児や被介護者用おむつ、軽失禁用おむつや尿とりパッド等の軽失禁用品、女性用の生理用品）、ベッドパッド、ベッドマット、シーツ、ブランケット、下着、便器、便座シート、トイレ用マット、トイレの壁もしくは床材、トイレ用の消臭剤または芳香剤、トイレ用洗浄剤、または、下着もしくはおむつ用の洗剤もしくは柔軟剤が提供される。
【００３８】
本発明の例示的実施形態として、さらに以下の物質、製造方法、用途、方法等を本明細書に開示する。但し、本発明はこれらの実施形態に限定されない。
【００３９】
〔１〕メチルジヒドロジャスモネートを有効成分とする、βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いの抑制剤。
【００４０】
〔２〕メチルジヒドロジャスモネートを有効成分とする、２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤。
【００４１】
〔３〕βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いの抑制のための、メチルジヒドロジャスモネートの使用。
【００４２】
〔４〕２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制のための、メチルジヒドロジャスモネートの使用。
【００４３】
〔５〕βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いの抑制剤の製造のための、メチルジヒドロジャスモネートの使用。
【００４４】
〔６〕２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制剤の製造のための、メチルジヒドロジャスモネートの使用。
【００４５】
〔７〕βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いの抑制方法であって、それを必要とする対象にメチルジヒドロジャスモネートを適用することを含む、方法。
【００４６】
〔８〕２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制方法であって、それを必要とする対象にメチルジヒドロジャスモネートを適用することを含む、方法。
【００４７】
〔９〕上記〔１〕、〔３〕、〔５〕および〔７〕において、βグルクロニダーゼが作用した尿の臭いは、放尿もしくは採尿後時間が経った尿から発せられる臭い、飛び散って乾燥した尿から発せられる臭い、または装着中もしくは使用後の尿が付着した吸収性物品から発せられる尿の臭いである。
【００４８】
〔１０〕メチルジヒドロジャスモネートを有効成分とする、ＯＲ１０Ｇ７、ＯＲ１０Ｇ４、またはそれらと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤。
【００４９】
〔１１〕ＯＲ１０Ｇ７、ＯＲ１０Ｇ４、またはそれらと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体拮抗剤としての、メチルジヒドロジャスモネートの使用。
【００５０】
〔１２〕上記〔１０〕又は〔１１〕において、
好ましくは、ＯＲ１０Ｇ７は、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなる嗅覚受容体ポリペプチドであり、
好ましくは、ＯＲ１０Ｇ７と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドは、配列番号２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドであり、
好ましくは、ＯＲ１０Ｇ４は、配列番号４で示されるアミノ酸配列からなる嗅覚受容体ポリペプチドであり、
好ましくは、ＯＲ１０Ｇ４と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドは、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドである。
【実施例】
【００５１】
以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。
【００５２】
本実施例で用いた臭い物質および試験物質を下記表１に示す。
【００５３】
【表１】
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【００５４】
実施例１  ２−メトキシ−４−ビニルフェノール受容体の同定
１）嗅覚受容体発現細胞の作製
ヒト嗅覚受容体はＧｅｎＢａｎｋに登録されている配列情報を基に、ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ  ｆｅｍａｌｅ（Ｇ１５２１：Ｐｒｏｍｅｇａ）を鋳型としたＰＣＲ法によりクローニングした。ＰＣＲ法により増幅した遺伝子をｐＥＮＴＲベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にマニュアルに従って組込み、ｐＥＮＴＲベクター上に存在するＮｏｔＩ、ＡｓｃＩサイトを利用して、ｐＭＥ１８Ｓベクター上のＦｌａｇ−Ｒｈｏタグ配列の下流に作製したＮｏｔＩ、ＡｓｃＩサイトへと組換えた。また、培養細胞内で作られた嗅覚受容体タンパク質を細胞膜表面へ移行するタンパク質であるヒトＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子を別のｐＭＥ１８ＳベクターのＥｃｏＲＩ、ＸｈｏＩサイトへ組込んだ。
表２に示す組成の反応液を調製し、クリーンベンチ内で１５分静置した後、９６ウェルプレート（ＢＤ）の各ウェルに添加した。次いで、ＨＥＫ２９３細胞（２×１０5細胞／ｃｍ2）を１００μＬずつ各ウェルに播種し、３７℃、５％ＣＯ2を保持したインキュベータ内で２４時間培養した。対照として、嗅覚受容体を発現させない細胞（ｍｏｃｋ）を用意した。
【００５５】
【表２】
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【００５６】
２）ルシフェラーゼアッセイ
ＨＥＫ２９３細胞に発現させた嗅覚受容体は、細胞内在性のＧαｓと共役しアデニル酸シクラーゼを活性化することで、細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる。本研究での嗅覚受容体の２−メトキシ−４−ビニルフェノール応答測定には、細胞内ｃＡＭＰ量の増加をホタルルシフェラーゼ遺伝子（ｆｌｕｃ２Ｐ−ＣＲＥ−ｈｙｇｒｏ）由来の発光値としてモニターするルシフェラーゼレポータージーンアッセイを用いた。また、ＣＭＶプロモータ下流にウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を融合させたもの（ｈＲｌｕｃ−ＣＭＶ）を同時に遺伝子導入し、遺伝子導入効率や細胞数の誤差を補正する内部標準として用いた。
上記１）で作製した培養物から、培地を取り除き、新しい培地で調製した２−メトキシ−４−ビニルフェノールを所定の濃度で含む溶液を７５μＬ添加した。細胞をＣＯ2インキュベータ内で４時間培養し、ルシフェラーゼ遺伝子を細胞内で十分に発現させた。ルシフェラーゼの活性測定には、Ｄｕａｌ−ＧｌｏＴＭｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ａｓｓａｙ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用い、製品の操作マニュアルに従って測定を行った。２−メトキシ−４−ビニルフェノール刺激により誘導されたホタルルシフェラーゼ由来の発光値を２−メトキシ−４−ビニルフェノール刺激を行わない細胞での発光値で割った値を、ｆｏｌｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅとして算出し、応答強度の指標とした。
【００５７】
３）結果
３８７種類の嗅覚受容体それぞれを発現させた細胞について２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対する応答を測定した結果、２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対して活性化する嗅覚受容体としてＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７が見出された。ＯＲ１０Ｇ４発現細胞およびＯＲ１０Ｇ７発現細胞の２−メトキシ−４−ビニルフェノールに対する応答は濃度依存的であった（図１）。これらの結果から、ＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７を、２−メトキシ−４−ビニルフェノールを認識する２−メトキシ−４−ビニルフェノール受容体として同定した。
【００５８】
実施例２  ＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７アンタゴニストの同定
１）ルシフェラーゼアッセイ
実施例１と同様の手順で、ＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７発現細胞を用いたルシフェラーゼアッセイにより、ＯＲ１０Ｇ４またはＯＲ１０Ｇ７発現細胞の２−メトキシ−４−ビニルフェノール応答に対する試験物質の影響を調べた。２−メトキシ−４−ビニルフェノールの濃度は３００μＭとした。嗅覚受容体発現細胞の応答強度は以下のとおり算出した。各種刺激条件について、ホタルルシフェラーゼ由来の発光値をウミシイタケルシフェラーゼ由来の発光値で除した値ｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃを算出した。２−メトキシ−４−ビニルフェノール単独刺激により誘導されたｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｘ）を、同じ受容体を導入し刺激を行わなかった細胞でのｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｙ）で除し、２−メトキシ−４−ビニルフェノール単独刺激による受容体活性Ｆｏｌｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅ（Ｘ／Ｙ）を求めた。同様に、２−メトキシ−４−ビニルフェノールと試験物質との混合物での刺激によるｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｚ）を、刺激を行わない細胞でのｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｙ）で除し、試験物質添加時の受容体活性（Ｚ／Ｙ）を求めた。以下の計算式により、２−メトキシ−４−ビニルフェノール単独刺激による受容体活性（Ｘ／Ｙ）に対する試験物質添加時の受容体活性（Ｚ／Ｙ）の割合を算出し、試験物質存在下での応答強度（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ％）を求めた。独立した実験を２〜３回行い、各回の実験の平均値を得た。
Ｒｅｓｐｏｎｓｅ（％）＝（Ｚ／Ｙ）／（Ｘ／Ｙ）×１００
【００５９】
２）結果
メチルジヒドロジャスモネート（ＭＤＪ）は、濃度依存的にＯＲ１０Ｇ４発現細胞およびＯＲ１０Ｇ７発現細胞の２−メトキシ−４−ビニルフェノール応答を抑制し、ＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７のアンタゴニストであると判断された（図２）。
【００６０】
実施例３  ＭＤＪによる２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制能
実施例２で同定したＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７アンタゴニストであるＭＤＪによる２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制効果を、官能試験により確認した。
２−メトキシ−４−ビニルフェノールについては、蒸留水の１％（ｖ／ｖ）水溶液を調製した。ＭＤＪをミネラルオイル（Ｓｉｇｍａ）に溶解させて０．１％（ｖ／ｖ）溶液を調製し、試験物質溶液として用いた。
２０ｍＬ容のガラス瓶（マルエム、Ｎｏ．６）に２つの綿球を入れ、１つの綿球には２−メトキシ−４−ビニルフェノール水溶液３０μＬを、もう１つの綿球には試験物質溶液３０μＬを染み込ませた。綿球を入れたガラス瓶は蓋をして３７℃で１時間静置した後、試験サンプルとして試験に用いた。基準サンプル（Ｃｏｎｔｒｏｌ）として２−メトキシ−４−ビニルフェノールのみ、対照サンプル（Ｖｅｈｉｃｌｅ）としてミネラルオイルのみを準備した。
【００６１】
官能試験は、９名の評価者により単盲式にて行った。試験は、臭いの拡散を防ぐため、ドラフト付近で行った。臭いへの順応の影響を排除するため、試験中には適宜、基準サンプルからの悪臭の認知強度を確認させ、必要であれば休憩をとった。評価するサンプルはランダムに提示し、試験物質の２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭抑制効果を評価した。試験サンプルの評価では、次の５段階の基準「２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭が、１：わからない、２：弱く感じる、３：楽にわかる、４：強く感じる、５：耐えられないほど強く感じる」を設定し、基準サンプルでの悪臭強度を３としたときの各試験サンプルの悪臭強度を、１．０から０．５刻みで５．０までの９段階で評価した。
【００６２】
各評価者による官能試験の評価結果を図３に示す。ＭＤＪは、９人の被験者の全員に対して、２−メトキシ−４−ビニルフェノールを単独で嗅いだ場合と比較して弱い２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭強度（スコア３未満）を回答させるという抑制効果を示した。本実施例の結果から、ＯＲ１０Ｇ４およびＯＲ１０Ｇ７のアンタゴニストであるＭＤＪが、βグルクロニダーゼが作用した尿の臭い、または２−メトキシ−４−ビニルフェノール臭の抑制に有効であることが示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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