(57)【要約】【解決手段】チラミン変性デキストラン；チラミン変性ヒアルロン酸、チラミン変性ヘパリン、チラミン変性ヘパラン硫酸、チラミン変性コンドロイチン硫酸、チラミン変性コラーゲン、チラミン変性キトサン、チラミン変性プルラン、およびチラミン変性ケラタン硫酸から選ばれる少なくとも１種のチラミン変性化合物；過酸化水素；酵素；並びに水；を含有することを特徴とする変形性関節症用注入剤。【効果】多糖類の定着率と粘度の低減の両立が可能であり、低浸襲性である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
チラミン変性デキストラン；
チラミン変性ヒアルロン酸、チラミン変性ヘパリン、チラミン変性ヘパラン硫酸、チラミン変性コンドロイチン硫酸、チラミン変性コラーゲン、チラミン変性キトサン、チラミン変性プルラン、およびチラミン変性ケラタン硫酸から選ばれる少なくとも１種のチラミン変性化合物；
過酸化水素；酵素；並びに水；を含有することを特徴とする変形性関節症用注入剤。
【請求項２】
前記チラミン変性デキストランの置換度が、５〜２０である請求項１に記載の変形性関節症用注入剤。
【請求項３】
前記チラミン変性化合物が、チラミン変性ヒアルロン酸、チラミン変性ヘパリン、およびチラミン変性プルランである、請求項１または２のいずれかに記載の変形性関節症用注入剤。
【請求項４】
前記チラミン変性化合物が、チラミン変性ヘパリンである、請求項１または２のいずれかに記載の変形性関節症用注入剤。
【請求項５】
前記チラミン変性ヘパリンの置換度が５〜２０である、請求項４に記載の変形性関節症用注入剤。
【請求項６】
前記チラミン変性デキストランおよび前記チラミン変性化合物が、０．１〜２０質量％含有する、請求項１〜５のいずれかに記載の変形性関節症用注入剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、変形性関節症の治療に用いられる潤滑油である、変形性関節症用注入剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
関節にある軟骨は、骨と骨との間にあって、クッションの役割や滑らかな動きを可能にするための潤滑油としての役割を担っている。
ところで、軟骨は他の生体組織と異なり、血管や神経が存在しないため、自己修復能をほとんど有していない。このため、加齢や強度のスポーツ等による関節の酷使によって、軟骨が摩耗して減少しても、軟骨は修復されることはなく、摩耗が進行すると、最終的には、関節の内側にある滑膜の炎症がおこり、水が溜まって腫れ上がり、変形性関節症（ＯＳｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ、略して「ＯＡ」）となる。
【０００３】
発症した変形性関節症の治療は、軟骨関節液の成分であるヒアルロン酸等の多糖類を含む変形性関節症用注入剤を、関節腔内に直接注入することで関節の潤滑機能を改善し、患部の疼痛や炎症の除去することにより行われている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００２−３４８２４３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
変形性関節症の治療では、関節腔内へ潤滑油となる変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率を上げることで、注入回数を減らし、さらに、注入剤の粘度を下げて取り扱いやすくし、治療を短時間で終えること、つまり、低浸襲性であることが求められている。
関節腔内での変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率は、通常、変形性関節症用注入剤に含まれる多糖類の分子量に依存し、多糖類の分子量が高ければ定着率が上がる。一方、多糖類の分子量が高ければ変形性関節症注入剤の粘度が上がり、取り扱いが困難になる。つまり、変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率と粘度の低減の両立は二律背反の関係にある。
【０００６】
本発明は、変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率と粘度の低減の両立が可能な、低浸襲性の変形性関節症用注入剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、例えば、以下の［１］〜［６］である。
［１］チラミン変性デキストラン；
チラミン変性ヒアルロン酸、チラミン変性ヘパリン、チラミン変性ヘパラン硫酸、チラミン変性コンドロイチン硫酸、チラミン変性コラーゲン、チラミン変性キトサン、チラミン変性プルラン、およびチラミン変性ケラタン硫酸から選ばれる少なくとも１種のチラミン変性化合物；
過酸化水素；酵素；並びに水；を含有することを特徴とする変形性関節症用注入剤。
【０００８】
［２］前記チラミン変性デキストランの置換度が、５〜２０である前記［１］に記載の変形性関節症用注入剤。
【０００９】
［３］前記チラミン変性化合物が、チラミン変性ヒアルロン酸、チラミン変性ヘパリン、およびチラミン変性プルランである、前記［１］または［２］のいずれかに記載の変形性関節症用注入剤。
【００１０】
［４］前記チラミン変性化合物が、チラミン変性ヘパリンである、前記［１］または［２］のいずれかに記載の変形性関節症用注入剤。
【００１１】
［５］前記チラミン変性ヘパリンの置換度が５〜２０であるである、前記［４］に記載の変形性関節症用注入剤
【００１２】
［６］前記チラミン変性デキストランおよび前記チラミン変性化合物が、０．１〜２０質量％含有する、前記［１］〜［５］のいずれかに記載の変形性関節症用注入剤。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の変形性関節症用注入剤によれば、変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率と粘度の低減の両立が可能であり、つまり、低浸襲性である。よって、本発明の変形性関節症用注入剤は、変形性関節症の治療において、患者への負担の少ない有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】デキストラン由来の構造とチラミン由来の構造が間接的に結合した構造を有するチラミン変性デキストランの模式図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の変形性関節症用注入剤は、
チラミン変性ヒアルロン酸、チラミン変性ヘパリン、チラミン変性ヘパラン硫酸、チラミン変性コンドロイチン硫酸、チラミン変性コラーゲン、チラミン変性キトサン、チラミン変性プルラン、およびチラミン変性ケラタン硫酸から選ばれる少なくとも１種のチラミン変性化合物；
過酸化水素；酵素；並びに水；を含有する。
【００１６】
関節腔内での潤滑油成分である変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率は、通常、その変形性関節症用注入剤に用いられる成分である多糖類の分子量の大きさに依存する。一方、多糖類の分子量が大きいと相乗的に変形性関節症用注入剤の粘度が上がる。よって、例えば、軟骨への定着率を上げるために多糖類の分子量を上げれば、変形性関節症用注入剤の粘度が上がり、粘度を下げるために変形性関節症用注入剤中に含まれる多糖類の含有量を下げれば、有効成分が少なくなることから、治療回数が増えるという、ジレンマに陥る。
【００１７】
ところで、チラミン変性デキストランとチラミン変性化合物との酸化カップリングにより形成されるハイドロゲルは、多糖類を単独で用いる場合や、それぞれを単独で用いる場合に比べ、相対的に膨潤度が高く、貯蔵弾性率が高く、その結果細胞播種密度が高い、つまり、軟骨などの生体内での保持率が高いことが知られている。さらに、ハイドロゲル中のコンドロイチンは軟骨への取り込まれやすいことが知られている。
また、チラミン変性デキストランと、チラミン変性化合物との酸化カップリングは、相対的にゲル化速度が速いことが知られている（米国特許９，１３２，２０１号公報参照）。
【００１８】
これは、チラミン変性デキストランと、チラミン変性化合物との酸化カップリングにより、これらの複合ゲルが形成されるためであり、この複合ゲルは、それぞれを単独で用いる場合に比べてそれぞれの長所をそれほど低下させることなく有するためであると考えられる。よって、これらの長所により関節腔内での軟骨への定着率を上げることができるものと推定される。
【００１９】
また、多糖類を単独の場合に比べ、チラミン変性デキストランやチラミン変性化合物はチラミン由来のフェノール構造を有していることから、フェノールの酸化カップリングにより関節腔内で分子量を上げることができる。よって、同じ分子量で比べれば、多糖類を単独の場合に比べ、チラミン変性デキストランやチラミン変性化合物は関節腔内での分子量が高く、関節腔内での軟骨への定着率を上げることができるものと推定される。
【００２０】
さらに、ゲル化速度が速いということは、低分子量の、つまり、粘度の低い変形性関節症用注入剤であっても、関節腔内でこれらの化合物が流れ出る前に、チラミン変性デキストランやチラミン変性化合物がゲル化できる。よって、粘度の低い変形性関節症用注入剤であっても、関節腔内での軟骨への定着率を下げることはないものと推定される。
【００２１】
以上の理由により、チラミン変性デキストラン、チラミン変性化合物、および水を含有する本発明の変形性関節症用注入剤は、変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率と粘度の低減の両立という二律背反関係を打破できるものと推定される。
【００２２】
［チラミン変性デキストラン］
チラミン変性デキストランとは、デキストランとチラミンとが直接的および／または間接的に結合した構造を持つ化合物であり、デキストラン由来の糖鎖およびチラミン由来の構造を有する化合物である。
【００２３】
前記「直接的」とは、デキストランの水酸基と、チラミンのアミド基がウレタン結合を形成することで、デキストラン由来の糖鎖とチラミン由来の構造が直接的に結合した構造を有することを示す。
また、前記「間接的」とは、デキストランの水酸基、およびチラミンのアミド基と結合形成可能な化合物（以下、「リンカー形成化合物」ともいう）由来の構造（以下、「リンカー構造」ともいう）を介して、デキストラン由来の糖鎖とチラミン由来の構造が間接的に結合した構造を有することを示す（図１の模式図参照）。
これらの中でも、低浸襲性の点から、また、縮合構造の生体適合性の点から、デキストラン由来の糖鎖とチラミン由来の構造が直接結合した構造を有する化合物が好ましい。
【００２４】
チラミン変性デキストランは、例えば、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２８（２００７）２７９１−２８００に記載の方法で製造することができる。具体的には、デキストランとチラミンとが直接的に結合した構造を持つチラミン変性デキストランの場合、デキストランとクロロぎ酸４−ニトロフェニル等の縮合剤との結合体を形成後、前記結合体とチラミンとを反応させてウレタン結合を形成することで製造することができる。
また、デキストランとチラミンとが間接的に結合した構造を持つチラミン変性デキストランの場合、デキストランと無水ジグリコール酸等のリンカー形成化合物との結合体を形成後、前記結合体の反応性基（無水ジグリコール酸の場合、カルボキシル基）とチラミンのアミド基とを反応させてアミド結合を形成することで製造することができる。
【００２５】
チラミン変性デキストランの置換度（Ｔｈｅ  Ｄｅｇｒｅｅ  Ｏｆ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）は、５〜２０、好ましくは７〜１８である。前記置換度は変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率と粘度の低減の両立の点から好ましい。
なお、置換度とはチラミン変性デキストラン等の変性多糖の構成単糖１００単位あたりにチラミンに置換された基の平均数を示し、１Ｈ−ＮＭＲより求めることができる。
【００２６】
チラミン変性デキストランの静的光散乱法による絶対分子量は、１×１０５〜１×１０８、好ましくは６×１０５〜６×１０７であり、前記絶対分子量の範囲は変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率と粘度の低減の両立の点から好ましい。
【００２７】
変形性関節症用注入剤中に含まれるチラミン変性デキストランの含有割合は、通常、０．〜２０質量％、好ましくは０．５〜１０質量％である。
【００２８】
例えば、チラミン変性デキストラン（置換度＝１０）は以下のようにして製造することができる。
０℃の５ｇのデキストランを５００ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解した溶液に、２．２ｇのｐ−ニトロフェノールと、０．９ｇのピリジンを加え均一な溶液を準備した。次いで、各攪拌しながらこの溶液に、窒素雰囲気下、ジメチルホルムアミドに溶解したチラミン溶液（チラミンを０．７ｇ含有する）を加え、室温で２４時間攪拌した。攪拌後の溶液にエタノールを加えて析出した析出物をエタノールとジエチルエーテルで洗浄して置換度が１０のチラミン変性デキストランを製造することができる。
【００２９】
［チラミン変性化合物］
チラミン変性化合物は、チラミン変性ヒアルロン酸、チラミン変性ヘパリン、チラミン変性ヘパラン硫酸、チラミン変性コンドロイチン硫酸、チラミン変性コラーゲン、チラミン変性キトサン、チラミン変性プルラン、およびチラミン変性ケラタン硫酸から選ばれる少なくとも１種の化合物である。
これらチラミン変性化合物の中でも、チラミン変性ヒアルロン酸、チラミン変性ヘパリン、およびチラミン変性プルランが、より好ましくはチラミン変性ヘパリンが、変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率と粘度の低減の両立が可能であり、低浸襲性であることから好ましい。
【００３０】
チラミン変性ヒアルロン酸とは、チラミン変性デキストランと同様に、ヒアルロン酸とチラミンとが直接的および／または間接的に結合した構造を持つ化合物であり、ヒアルロン酸由来の糖鎖およびチラミン由来の構造を有する化合物である。
【００３１】
同様に、チラミン変性ヘパリンは、ヘパリン由来の糖鎖およびチラミン由来の構造を有する化合物；チラミン変性ヘパラン硫酸は、ヘパラン硫酸由来の糖鎖およびチラミン由来の構造を有する化合物；チラミン変性コンドロイチン硫酸は、コンドロイチン硫酸由来の糖鎖およびチラミン由来の構造を有する化合物；チラミン変性コラーゲンは、コラーゲン由来の蛋白構造およびチラミン由来の構造を有する化合物；チラミン変性キトサンは、キトサン由来の糖鎖およびチラミン由来の構造を有する化合物；チラミン変性プルランは、プルラン由来の糖鎖およびチラミン由来の構造を有する化合物；チラミン変性ケラタン硫酸は、ケラタン硫酸由来の糖鎖およびチラミン由来の構造を有する化合物；である。
【００３２】
チラミン変性コラーゲンを除くチラミン変性化合物は、デキストラン変性チラミンと同様に、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、キトサン、プルラン、およびケラタン硫酸から選ばれる糖類と、チラミンとを直接的に結合させることで、または前記糖類とリンカー形成化合物を介してチラミンと間接的に結合させることで製造することができる。
【００３３】
前記糖類とチラミンとの直接的結合に用いられる結合としては、糖類の水酸基とチラミンのアミノ基から形成されるウレタン結合；糖類のカルボキシル基とチラミンのアミノ基から形成されるアミド結合；糖類のスルホ基とチラミンのアミノ基から形成されるスルホンアミド結合；が挙げられる。
【００３４】
これらの結合を形成する際には、縮合剤を用いてもよく、縮合剤としては、例えば、ウレタン結合の形成には、クロロぎ酸４−ニトロフェニル；アミド結合の形成には、１，１−カルボニルジイミダゾール、ジシクロヘキシルカルボジイミド、および３−（３−ジメチルアミノプロピル）−１−エチルカルボジイミド・塩酸塩；が挙げられる。
【００３５】
前記糖類と、リンカー形成化合物を介して、チラミンと間接的に結合する際に用いられるリンカー形成化合物は、前記糖類の水酸基、カルボキシル基、およびスルホ基から選ばれる少なくとも１種の官能基と結合形成可能な基、並びにチラミンのアミノ基と結合可能な基の両方を有する化合物であればよい。
水酸基と結合形成可能な基としては、カルボキシル基、およびアミノ基が挙げられ；カルボキシル基と結合形成可能な基としては、水酸基、およびアミノ基が挙げられ；スルホ基と結合可能な基としては、アミド基が挙げられ；アミノ基と結合可能な基としては、水酸基、カルボキシル基およびスルホ基が挙げられる。
【００３６】
リンカー形成化合物としては、例えば、ジグリコール酸、無水ジグリコール酸、ポリアクリル酸、およびポリメタクリル酸等の（無水）カルボン酸含有化合物；
ポリエチレングリコール、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリ乳酸、およびポリグリコール酸等のヒドロキシル基含有化合物；
アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、およびロイシン等のアミノ酸；
エタノールアミン、ヘプタノールアミン、およびスフィンゴシン等のアルカノールアミン；ならびに
乳酸、クエン酸、およびサリチル酸等のヒドロキシ酸；が挙げられる
リンカー形成化合物は、１種単独で用いてもよく、２種以上併用して用いてもよい。
【００３７】
前記糖類とリンカー形成化合物を介してチラミンと間接的に結合する場合も、直接結合する場合と同様に、縮合剤を用いて結合を形成してもよく、複数の結合を形成する場合、縮合剤を複数用いてもよい。
【００３８】
チラミン変性コラーゲンは、例えば、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ３０（２００９）３３７１−３３７７に記載の方法で製造することができる。具体的には、コラーゲンとチラミンとが直接的に結合した構造を持つチラミン変性コラーゲンの場合、コラーゲンとチラミンとを３−（３−ジメチルアミノプロピル）−１−エチルカルボジイミド・塩酸塩等の縮合剤を用いてアミド結合を形成することで製造することができる。
また、コラーゲンとチラミンとが間接的に結合した構造を持つチラミン変性コラーゲンの場合、上述に記載したリンカー形成化合物を用いて、コラーゲンとチラミンとを間接的に結合させることで製造することができる。
【００３９】
チラミン変性化合物の置換度は、通常、０．１〜１００である。チラミン変性ヘパリンについては、置換度が５〜２０が好ましく、７〜１８がより好ましい。前記置換度は変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率と粘度の低減の両立の点から好ましい。
なお、置換度の定義および測定方法は、前記［チラミン変性デキストラン］の項目に記載の置換度の定義および測定方法と同意である。
【００４０】
チラミン変性化合物の静的光散乱法による絶対分子量は、１×１０５〜１×１０８、好ましくは６×１０５〜６×１０７であり、前記絶対分子量の範囲は変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率と粘度の低減の両立の点から好ましい。
【００４１】
変形性関節症用注入剤中に含まれるチラミン変性化合物の含有量は、変形性関節症用注入剤中に含まれるチラミン変性デキストラン１００質量部に対して、１０〜９０質量部、好ましくは２０〜８０質量部、より好ましくは２５〜７５質量部であり、前記含有量は変形性関節症用注入剤の定着率と粘度の低減の両立の点から好ましい。
また、変形性関節症用注入剤中に含まれるチラミン変性デキストラン、およびチラミン変性化合物の合計の含有割合は、０．１〜２０質量％、好ましくは１〜１５質量％であり、前記含有割合は変形性関節症用注入剤の定着率と粘度の低減の両立の点から好ましい。
【００４２】
例えば、チラミン変性ヘパリン（置換度＝１５）は以下のようにして製造することができる。
２０ｇのヘパリンナトリウムを２００ｍｌの４−モルフォリノエタンスルホン酸に溶解した溶液に、２．９ｇのＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドと、２．３ｇのＮ−ヒドロキシコハク酸イミドを加え均一な溶液を準備した。次いで、各攪拌しながらこの溶液に、窒素雰囲気下、ジメチルホルムアミドに溶解したチラミン溶液（チラミンを０．７ｇ含有する）を加え、室温で７０時間攪拌した。攪拌後の溶液に１Ｍの水酸化ナトリウムを加え、ＮａＣｌ水溶液と、純水で洗浄し、残渣を凍結乾燥して置換度が１５のチラミン変性ヘパリンを製造することができる。
【００４３】
［水］
水は、変形性関節症注入剤に含まれる水以外の成分を均一に溶解または分散させるために用いられるだけでなく、変形性関節症注入剤の粘度調整に用いられる。さらに、関節腔内で形成されるゲルがハイドロゲルとなることで、ゲルの膨潤度や貯蔵弾性率を上げることができ、多糖類の軟骨への定着率を向上させることができる。
なお、水は生理食塩水であってもよい。
【００４４】
［酵素および過酸化水素］
本発明の変形性関節症用注入剤には、酵素および過酸化水素を含有してもよい。酵素および過酸化水素を含有することにより、チラミン由来のフェノール構造の酸化カップリング反応を促進することができる。つまり、酵素と過酸化水素から発生したヒドロキシラジカルが、チラミン由来のフェノール構造に作用することで、フェノール同士が二量化する。二量化を繰り返すことで、チラミン変性デキストランおよびチラミン変性化合物が複合的に架橋ネットワークを形成したゲル（ハイドロゲル）を形成する。そして、このハイドロゲルの形成により、関節腔内で形成されるハイドロゲルの膨潤度や貯蔵弾性率を上げることができ、変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率を向上させることができる。
【００４５】
酵素としては、例えば、ラッカーゼ、チロシナーゼ、カタラーゼ、およびペルオキシダーゼが挙げられ、これらの起源としては、例えば、ウルシ、キノコ、カビ、ウシ肝臓、ウマ血球、ヒト血液、西洋ワサビ、大豆、大根、カブ、牛乳、および酵母が挙げられる。
酵素は、１種単独で用いてもよく、２種以上併用して用いてもよい。
【００４６】
変形性関節症用注入剤に用いられる酵素の含有量は、変形性関節症用注入剤に含まれるチラミン由来の構造１モルに対して、通常０．０１〜１００００ユニット、好ましくは０．１〜２０００ユニット、より好ましくは０．１〜２０００ユニットであり、前記酵素の含有量は変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率の点から好ましい。酵素は単独で用いてもよく、２種以上併用して用いてもよい。
なお、ユニットとは酵素活性の単位を示し、毎分１マイクロモルの基質を変化させることができる酵素量を示す。
【００４７】
過酸化水素とは、過酸化水素を生成する酵素と基質の系から、例えば、グルコースオキシダーゼとグルコースのような組み合わせから生成する過酸化水素であってもよい。
【００４８】
変形性関節症用注入剤に用いられる過酸化水素の含有量は、チラミン変性デキストランおよびチラミン変性化合物中のフェノール性水酸基１モルに対して、通常は０．０１〜１０００モル、好ましくは０．１〜５００モル、より好ましくは１〜２００モルであり、前記過酸化水素の含有量は変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率の点から好ましい。
【００４９】
［その他成分］
本発明の変形性関節症用注入剤は、前記チラミン変性デキストラン、チラミン変性化合物、水、酵素および過酸化水素以外にも、品質保持のための成分や、生体関連物質等を含有することができる。
【００５０】
品質保持のための成分としては、酸化防止剤等が挙げられる。
生体関連物質としては、グルコサミノグルカン、ポリカルボン酸、リン脂質、およびアミノ酸、タンパク質等が挙げられる。
【００５１】
前記グルコサミノグルカンとしては、例えば、ヒアルロン酸、コンドロイチン、硫酸コンドロイチン、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸およびヘパリン等が挙げられ；
前記ポリカルボン酸としては、例えば、ベルシカン、アグリカン、ポリウロン酸、ポリペクチン酸、ポリグルクロン酸、ペクチン、コロミン酸、アルギン酸塩、ポリアスパラギン酸、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸およびポリグルタミン酸等が挙げられ；
前記リン脂質としては、例えば、フォスファチジルコリン、フォスファチジルエタノールアミン、フォスファチジルセリン、フォスファチジルグリセロール、フォスファチジルイノシトール、およびスフィンゴミエリン、並びにそれらの誘導体等が挙げられ；
前記アミノ酸としては、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、およびロイシン等が挙げられ；
前記タンパク質としては、コラーゲン等が挙げられる。
これら生体関連物質の由来は、生体から抽出したものであっても、人工的に合成したものであってもよく、その起源には制限なく、また、生体関連物質は、１種単独で用いてもよく、２種以上併用して用いてもよい。
【００５２】
［変形性関節症用注入剤の製造方法］
本発明の変形性関節症用注入剤は、必須成分である、チラミン変性デキストラン、チラミン変性化合物、並びに酵素、過酸化水素、並びに任意成分であるその他成分を、必須成分である水で均一に溶解または分散することにより製造することができる。
【００５３】
本発明の変形性関節症用注入剤は、室温でもゲル化が進むため、例えば、（１）チラミン変性デキストラン、チラミン変性化合物を含み、過酸化水素および酵素のいずれかを含むが両方は含まない第１の溶液を用意し、（２）前述の過酸化水素および酵素のうち第１の溶液に含まれない方を含む第２の溶液を用意し、（３）治療の直前に、第１の溶液と第２の溶液とを混合して製造することができる。
【００５４】
本発明の変形性関節症用注入剤の粘度は、ＪＩＳ  Ｚ８８０３による粘度は、通常１００〜２０，０００ｍＰａ・ｓ、好ましくは１５０〜１５，０００ｍＰａ・ｓ、より好ましくは２００〜１０，０００ｍＰａ・ｓである。
【００５５】
各種成分を水で均一に溶解または分散した後、除菌処理やフィルター等を用いて異物除去処理を行ってもよい。また、変形性関節症用注入剤の製造においては、クリーンベンチで行うのが好ましく、エンドキシン除去剤等で滅菌処理した滅菌器具を使用してもよい。
【００５６】
変形性関節症用注入剤の製造方法の一例は以下のとおりである。
前記チラミン変性デキストラン（置換度＝１０）２５ｇ、前記チラミン変性ヘパリン（置換度＝１５）７５ｇを、水９００ｇに溶解させて水溶液を得た。次いでこの水溶液に、西洋ワサビペルオキシダーゼ水溶液（０．４質量％水溶液）を４００ユニット、および過酸化水素水（２００ｍＭの水溶液）を１モル加え、変形性関節症用注入剤を製造できる。
前記変形性関節症用注入剤を、レオメーターにて測定した、２９６Ｋで４００秒後の貯蔵弾性率は１０ｋＰａである。貯蔵弾性率測定の測定条件は、１％の一定変形および１Ｈｚの周波数で、動的振動モードにおいて測定したものである。
【００５７】
また、変形性関節症用注入剤の製造方法の別の例は以下のとおりである。
前記チラミン変性デキストラン（置換度＝１０）７５ｇ、前記チラミン変性ヘパリン（置換度＝１５）２５ｇを、水９００ｇに溶解させて水溶液を得た。次いでこの水溶液に、西洋ワサビペルオキシダーゼ水溶液（０．４質量％水溶液）を４００ユニット、および過酸化水素水（２００ｍＭの水溶液）を１モル加え、変形性関節症用注入剤を製造できる。
前記変形性関節症用注入剤を、レオメーターにて測定した、３００Ｋで４００秒後の貯蔵弾性率は４２ｋＰａである。貯蔵弾性率測定の測定条件は、１％の一定変形および１Ｈｚの周波数で、動的振動モードにおいて測定したものである。
【００５８】
［変形性関節症用注入剤の使用方法］
本発明の変形性関節症用注入剤は、関節腔内へ注入できるような形態で使用するため、シリンジ、ゲル用ピペット、または専用注射器などに封入して用いる。変形性関節症の治療に当たっては、関節腔内の広範にいきわたらせるように適用するのが好ましい。
【００５９】
本発明の変形性関節症用注入剤は、酸化カップリングによるハイドロゲル化により、膨潤度や貯蔵弾性率を上げることができ、変形性関節症用注入剤の軟骨への定着率を向上させることができることから、酸化カップリングを促進するために、患部を暖めてもよい。
【００６０】
本発明の変形性関節症用注入剤は、多糖類の定着率が高いことから、注入回数を減らすことができる。さらに、注入剤の粘度も低く取り扱いことから、１回の治療に必要な時間を短くすることができる。つまり、本発明の変形性関節症用注入剤を用いて治療すれば、低浸襲性の治療が可能となる。
【００６１】
本発明の変形性関節症用注入剤に含まれる、チラミン変性デキストラン、チラミン変性化合物および水、並びに酵素、水、およびその他成分は、すべて、生体由来の物質または生体適合性物質で構築されていることから、生体内で分解しても生体毒性は低いものと考えられる。よって、本発明の変形性関節症用注入剤は、変形性関節症の治療に有用に用いることができる。
【符号の説明】
【００６２】
１・・・・デキストラン由来の糖鎖
２・・・・リンカー
３・・・・チラミン
【図１】
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