(57)【要約】      （修正有）【課題】ヘムに依存しない直接的ｓＧＣ活性化剤を有効成分とする急性心不全の治療薬の提供。【解決手段】（−）−４−｛［Ｎ−（４−カルボキシブチル）−Ｎ−［（２Ｒ）−２−［４−（２−フェニルエチル）ベンジルオキシ］−２−フェニルエチル］アミノ］メチル｝安息香酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、当該有効成分の遊離体として０．００１〜１０μｇ／ｋｇ／分の投与速度で持続静脈内投与するための急性心不全治療薬。【選択図】図１
2018076303.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（−）−４−｛［Ｎ−（４−カルボキシブチル）−Ｎ−［（２Ｒ）−２−［４−（２−フェニルエチル）ベンジルオキシ］−２−フェニルエチル］アミノ］メチル｝安息香酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、当該有効成分の遊離体として０．００１〜１０μｇ／ｋｇ／分の投与速度で持続静脈内投与するための急性心不全治療薬。
【請求項２】
投与開始から３０〜１２０分間おきに投与速度を調節し、０．０１〜１０μｇ／ｋｇ／分の投与速度の範囲内で維持用量を決定する、請求項１記載の急性心不全治療薬。
【請求項３】
投与速度の調節が、患者の症状又は血行動態を観察しながら行われる請求項２記載の急性心不全治療薬。
【請求項４】
前記患者の症状が、動悸、息切れ、呼吸困難、喘鳴、起坐呼吸、悪心・嘔吐、チアノーゼ、四肢冷感、意識障害、めまい、頭痛、倦怠感、浮腫、肺うっ血、肺ラ音、頚静脈怒張及び酸素飽和度低下からなる群より選択される１以上である、請求項３記載の急性心不全治療薬。
【請求項５】
前記患者の血行動態が、血圧及び心拍数からなる群より選択される１以上である、請求項３記載の急性心不全治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘムに依存しない直接的ｓＧＣ活性化剤を有効成分とする急性心不全の治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
急性心不全は、放置した場合、生命が危険さらされることから、救命のため早期の治療が必要とされる疾患である。急性心不全の主な症状は呼吸困難であるが、この機序としては、心臓に対する前負荷と後負荷が増大することによって、心臓から血液が拍出されにくくなり、肺うっ血、肺水腫が発生するものと考えられている。急性心不全は、現行の治療薬により一定の治療効果が得られているものの、一時的に退院した後に、再び急性心不全の発症を繰り返すことで病態が進行していくため、医学的見地のみならず医療経済的にも大きな問題となっている。このように発症が繰り返される原因としては、急性心不全の発症時における肺水腫の改善が不十分である可能性や、神経体液性因子などの病態の増悪因子が関与する可能性などが考えられ、急性心不全に対する新しい治療薬の開発が望まれている。
【０００３】
可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）はグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）から環状グアノシン１リン酸（ｃＧＭＰ）を産生する酵素であり、αサブユニットとβサブユニットの二量体から構成されている。βサブユニットはヘムと結合しており、通常はヘムに配位している鉄と１０５番目のアミノ酸であるヒスチジン残基とが相互作用し、不活性化構造をとる。一酸化窒素（ＮＯ）は生体内の主たるｓＧＣの活性化因子と知られており、ｓＧＣのβサブユニットに存在するヘム鉄と相互作用し、ヘム鉄とβサブユニットのヒスチジン残基との相互作用を解除することで活性化型の構造へと移行させる。活性化されたｓＧＣにより産生されたｃＧＭＰは、次いでタンパク質キナーゼやイオンチャネルなどを活性化させ、血管平滑筋の弛緩や血小板活性化の抑制、細胞増殖の抑制、嗅覚の神経伝達など様々な役割を果たしている。病的な状態ではｓＧＣの活性低下及びｓＧＣの分解が生じることでｃＧＭＰ系が抑制され、血管平滑筋の収縮などにつながり、最終的に高血圧症、肺高血圧症、心不全などの原因となるとされることから、ｓＧＣ活性化剤は急性心不全の治療薬として期待されている（非特許文献１，２）。
【０００４】
ｓＧＣ活性化剤としてヘムに依存的な作用を有するリオシグアト（特許文献１）が知られており、肺高血圧症の治療などに使用されている。
【０００５】
ところで、病態下では酸化ストレスによりヘム鉄の酸化やヘムの分解が亢進しＮＯがヘムと相互作用できず、十分なｓＧＣの活性化を期待できないことが示唆されており、リオシグアトなどのヘムに依存した直接的なｓＧＣ活性化剤は、ヘム鉄の酸化条件下においてはｓＧＣ活性化能を十分に発揮できないことが示されている。従って、ヘムに依存しない直接的なｓＧＣ活性化作用を有する化合物が急性心不全の治療に有効であると考えられる（非特許文献３、非特許文献４）。
【０００６】
ヘムに依存しない直接的ｓＧＣ活性化剤としてシナシグアトが知られている。シナシグアトは、急性心不全患者の呼吸困難の症状を改善しうることが示されたが、低血圧の副作用により急性心不全治療薬としての開発が中止された。このため、ｓＧＣ活性化剤を有効成分とした急性心不全の治療薬は提供されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２００３／０９５４５１号
【特許文献２】国際公開第２０１３／１５７５２８号
【特許文献３】国際公開第２０１５／０５６６６３号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】ハンドブック・オブ・エクスペリメンタル・ファーマコロジー，ドイツ，シュプリンガー・フェアラーク（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ），２００９年，１９１巻，ｐ．３０９−３３９
【非特許文献２】ハンドブック・オブ・エクスペリメンタル・ファーマコロジー，ドイツ，シュプリンガー・フェアラーク（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ），２００９年，１９１巻，ｐ．２７７−３０８
【非特許文献３】ザ・ジャーナル・オブ・クリニカル・インヴェスティゲーション，米国，アメリカン・ソサイエティ・フォー・クリニカル・インヴェスティゲーション，２００６年，１１６巻，ｐ．２５５２−２５６１
【非特許文献４】ヨーロピアン・レスピラトリー・ジャーナル，スイス，ヨーロピアン・レスピラトリー・ソサイエティ，２００８年，３２巻，ｐ．８８１−８９１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ヘムに依存しない直接的ｓＧＣ活性化剤を有効成分とする急性心不全の治療薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本出願人は、ヘムに依存しない直接的ｓＧＣ活性化剤であって、ヘム酸化状態による活性変化の少ないｓＧＣ活性化剤を開発し、特許出願を行った（特許文献２及び３）。これらの化合物はシナシグアド同様に急性心不全治療薬としては使用できない可能性が高かった。しかし、本発明者らは、大変驚くべきことに、これら４−アミノメチル安息香酸誘導体のうち、（−）−４−｛［Ｎ−（４−カルボキシブチル）−Ｎ−［（２Ｒ）−２−［４−（２−フェニルエチル）ベンジルオキシ］−２−フェニルエチル］アミノ］メチル｝安息香酸は、作用効果の発現が早く、また作用の回復も早いことから、これを特定の投与速度の範囲で投与することで、ヘムに依存しない直接的ｓＧＣ活性化剤の急性心不全の治療薬として使用可能であることを見出し、本発明を完成させた。
【００１１】
すなわち、本発明は、次の［１］〜［５］を提供するものである。
［１］（−）−４−｛［Ｎ−（４−カルボキシブチル）−Ｎ−［（２Ｒ）−２−［４−（２−フェニルエチル）ベンジルオキシ］−２−フェニルエチル］アミノ］メチル｝安息香酸（以下、化合物（Ａ）という。）またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、当該有効成分の遊離体として０．００１〜１０μｇ／ｋｇ／分の投与速度で持続静脈内投与するための急性心不全治療薬。
［２］投与開始から３０〜１２０分間おきに投与速度を調節し、０．０１〜１０μｇ／ｋｇ／分の投与速度の範囲内で維持用量を決定する、前項［１］記載の急性心不全治療薬。
［３］投与速度の調節が、患者の症状又は血行動態を観察しながら行われる前項［２］記載の急性心不全治療薬。
［４］前記患者の症状が、動悸、息切れ、呼吸困難、喘鳴、起坐呼吸、悪心・嘔吐、チアノーゼ、四肢冷感、意識障害、めまい、頭痛、倦怠感、浮腫、肺うっ血、肺ラ音、頚静脈怒張及び酸素飽和度低下からなる群より選択される１以上である、前項［３］記載の急性心不全治療薬。
［５］前記患者の血行動態が、血圧及び心拍数からなる群より選択される１以上である、前項［３］記載の急性心不全治療薬。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の医薬によれば、低血圧などの問題を生じることなく、ヘムに依存しない直接的ｓＧＣ活性化剤を急性心不全の治療に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】化合物Ａ、参考化合物１及び参考化合物２の、正常ラット降圧作用測定試験の結果を示す。
【図２】イヌ高頻度心室刺激誘発心不全モデルにおける化合物Ａ及び参考化合物１のＬＶＥＤＰ（左室拡張末期圧）を示す。
【図３】イヌ高頻度心室刺激誘発心不全モデルにおける化合物Ａ及び参考化合物１のＳＢＰ（収縮期血圧）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１５】
本発明の急性心不全治療薬は、有効成分として化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩を含有する。化合物Ａは、特許文献３に開示されており、ヘムに依存しない直接的ｓＧＣ活性化剤であること、及びヘムの酸化状態による活性変化が小さいことが明らかとなっている。しかし、化合物Ａを急性心不全治療薬として用いた場合に、いかなる投与量で効果を奏するのかについては全く知られていない。また、シナシグアドと同様に低血圧の副作用が生じるのか否かも不明であった。
【００１６】
化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩は、国際公開第２０１５／０５６６６３号に記載された方法により製造することができる。
【００１７】
すなわち、２−アジド−１−フェニルエチル  ４−(２−フェニルエチル)−ベンジル  エーテルを有機リン化合物と反応させて得た２−［４−(２−フェニルエチル)−ベンジルオキシ］−２−フェニルエチルアミンとテレフタルアルデヒド酸アルキルエステルを、酸の非存在下又は存在下、溶媒の非存在下又は不活性溶媒中で反応させＳｃｈｉｆｆ塩基とした後、還元剤の存在下、反応させることで、４−｛［Ｎ−［（２Ｒ）−２−［４−(２−フェニルエチル)−ベンジルオキシ]−２−フェニルエチル］アミノ］メチル｝安息香酸アルキルエステルを得て、これと５−ブロモ吉草酸アルキルエステルを塩基と必要に応じて添加剤の存在下、溶媒の非存在下又は不活性溶媒中で反応させ、さらに脱エステル化反応によりカルボン酸を脱保護することにより、製造できるが、これに限らない。
【００１８】
化合物Ａの薬学的に許容される塩としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸や、ギ酸塩、酢酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩（４−メチルベンゼンスルホン酸塩）、アスパラギン酸塩又はグルタミン酸塩等の有機酸との酸付加塩；ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、アルミニウム塩等の無機塩基や、メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リシン、オルニチン等の有機塩基との塩基付加塩等が挙げられる。
【００１９】
後記実施例に示すように、化合物Ａ又はその薬学的に許容される塩は、化合物Ａ（遊離体）として０．００１〜１０μｇ／ｋｇ／分の投与速度で持続静脈内投与すれば、過度の低血圧を生じることなく、急性心不全を治療することができる。
【００２０】
本発明者らはｓＧＣ活性化剤の研究において、シナシグアトを含むヘムに依存しない直接的ｓＧＣ活性化剤に、種々の動物モデルにおいて左室拡張末期圧や全身血圧に対する作用発現が遅く、投薬中止後も作用が持続するものがあることを見出した。シナシグアトにおいては、この性質が副作用として低血圧が発生する原因の一つとなった可能性がある。
【００２１】
すなわち、一般的に急性心不全の薬物治療においては、患者ごとに投与量を細かに調節する必要がある。静脈内持続投与の医薬の場合、通常は患者の病態や血行動態を観察しながら、一定の間隔ごとに投与速度を調節することで投与量の調節を行うが、シナシグアトの場合、作用が緩徐に現れるため観察を行った時点の患者状態がその時点の投与速度による正確な薬効を示しておらず過量に薬剤が投与されることになる。また、投与中止しても作用が持続することにより、投与速度を下げても作用を抑える変化として反映されるまで時間がかかる。以上のことから、過剰に薬効が生じた結果、低血圧に至ったと考えられる。
【００２２】
化合物Ａは、シナシグアトと比較して速やかに作用が発現し、また投与中止後の作用消失も速やかであることから、このような問題は生じにくい。
【００２３】
本発明の医薬は持続静脈内投与される。その投与速度は、化合物Ａの遊離体として０．００１〜１０μｇ／ｋｇ／分であり、０．００５〜６μｇ／ｋｇ／分が好ましく、０．０１〜３μｇ／ｋｇ／分がより好ましく、０．０５〜１μｇ／ｋｇ／分がさらに好ましく、０．１〜０．３μｇ／ｋｇ／分が特に好ましい。投与速度が０．００１μｇ／ｋｇ／分を下回る場合、十分な作用効果が得られない可能性がある。また、１０μｇ／ｋｇ／分を上回る場合、全身血圧の低下が大きくなりすぎ、患者の病態に悪影響を来たす可能性がある。
【００２４】
さらに、本発明の医薬では、患者の状態により投与速度を調節し、投与量の調節を行うことが望ましい。具体的には患者の症状や血行動態を観察しながら、投与開始より３０〜１２０分間毎、好ましくは３０〜９０分間毎、特に好ましくは３０〜６０分間毎に投与速度を調節し、維持用量を決定することが望ましい。投与速度調節の間隔が３０分間より短いと、その投与速度における薬効が十分に現れていない可能性があり、低血圧などの副作用が発生する可能性がある。投与速度調節の間隔が１２０分間より長いと、不適切な状態に過度に患者をさらすことになることがあり、望ましくない。なお、本発明の医薬は、低血圧の副作用が発生した場合にも、直ちに投与速度を低下させるか、投与を中止することにより、速やかに低血圧状態から脱することができるので、安全に使用することができる。維持用量は、前記の０．００１〜１０μｇ／ｋｇ／分の範囲内である。
【００２５】
前記患者の症状としては、例えば、一般症状や自覚症状が挙げられる。具体的には、動悸、息切れ、呼吸困難、喘鳴、起坐呼吸、悪心・嘔吐、チアノーゼ、四肢冷感、意識障害、めまい、頭痛、倦怠感、浮腫、肺うっ血、肺ラ音、頚静脈怒張、酸素飽和度低下などが挙げられる。
前記患者の血行動態としては、例えば、血圧、心拍数などが挙げられる。このうち、特に血圧の観察が好ましく、収縮期血圧、拡張期血圧、平均血圧などから適宜選択して観察することができる。また、前記患者にスワンガンツカテーテルが挿入されている場合には、肺動脈楔入圧や心拍出量、心係数、中心静脈圧、右房圧、右室圧、肺動脈圧なども参考とすることができる。
【００２６】
本発明の医薬は、持続静脈内投与に先立って、急速静脈内投与を行ってもよい。急速静脈内投与を行うことにより、化合物Ａ又はその薬学的に許容される塩の血中濃度を速やかに薬効が発現する濃度まで上昇させ、患者の症状をいち早く軽減させることができる。
【００２７】
急性心不全は、例えば日本循環器学会の２０１１年における急性心不全治療ガイドラインによれば、「心臓に器質的および／あるいは機能的異常が生じて急速に心ポンプ機能の代償機転が破綻し、心室拡張末期圧の上昇や主要臓器への灌流不全を来たし、それに基づく症状や徴候が急性に出現、あるいは悪化した病態」と定義され、急性非代償性心不全、高血圧性急性心不全、急性心原性肺水腫、心原性ショック、高拍出性心不全、急性右心不全の６つの病態に分類されるとされている。本発明の医薬は、急性心不全であれば、いずれの病態に対しても使用しうるが、全身血圧を低下させると共に左室拡張末期圧（臨床においては肺動脈楔入圧に相当）を低下させ、呼吸困難改善に効果があると考えられることから、急性非代償性心不全、高血圧性急性心不全及び／又は急性心原性肺水腫の病態に対して用いるのが特に好ましい。
【００２８】
本発明の医薬は、注射剤として通常の方法により製造することができる。具体的には、化合物Ａの薬学的に許容される塩を日局注射用水などの注射用蒸留水や生理食塩液などの溶媒に溶解または懸濁する。本発明の医薬は、必要により、塩化ナトリウム等の等張化剤；リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン等の緩衝剤；プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、エタノール等のアルコール類などの溶解補助剤などを含んでいてもよい。さらに、本発明の医薬は防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解剤等の通常、注射剤に用いられる添加剤を他に含むことができる。
【００２９】
本発明の医薬は、モルヒネ等の鎮静剤；フロセミド、アゾセミド、トラセミド等のループ利尿薬、スピロノラクトン、エプレレレノン等のアルドステロン拮抗薬、トルバプタン等のバソプレシン拮抗薬などの利尿薬；ミルリノン、オルプリノン、ピモベンダン、レボシメンダンなどのホスホジエステラーゼIII阻害剤、ドパミン、ドブタミン、ノルアドレナリン等のカテコラミン、コルホルシンダロパートなどのアデニル酸シクラーゼ活性化剤、ジギタリスなどの強心剤；カルペリチド、ネシリチドなどのナトリウム利尿ペプチド、ニコランジルなどのATP感受性カリウムチャネル開口剤、二カルジピン等のカルシウムチャネル拮抗剤、カプトプリル、エナラプリル等のアンジオテンシン変換酵素阻害薬、ロサルタン、バルサルタン、カンデサルタンシレキセチル等のアンジオテンシン受容体拮抗薬などの血管拡張剤などの他の急性心不全治療薬と併用して使用できる。
【実施例】
【００３０】
本発明について、以下の実施例によって説明するが、本発明は実施例の記載によって限定されない。
製造例１  被験化合物の製造
本発明では、（−）−４−｛［Ｎ−（４−カルボキシブチル）−Ｎ−［（２Ｒ）−２−［４−（２−フェニルエチル）ベンジルオキシ］−２−フェニルエチル］アミノ］メチル｝安息香酸（化合物Ａとする）、シナシグアト（参考化合物１とする）、及び４−｛Ｎ−（４−カルボキシブチル）−Ｎ−［２−［２−［４−（２−フェニルエチル）ベンジルオキシ］フェニル］エチル］アミノ｝クロマン−７−カルボン酸（参考化合物２とする）を用いて測定を行った。
【００３１】
化合物Ａ、参考化合物１、及び参考化合物２はそれぞれ、国際公開第２０１５／０５６６６３号、第０１／１９７８０号及び第２０１３／１５７５２８号パンフレットに記載の方法により製造した。
【００３２】
試験例１  正常ラット降圧作用測定試験
雄性wisterラットの左右大腿部を麻酔下で切開し、左大腿動脈に血圧測定用のカニューレを、右大腿静脈に薬剤投与用のカニューレを挿入した。血圧測定用カニューレは圧トランスデューサーに接続した。ラットをボールマンケージIII型に固定した後、最低１時間半の回復期間を設け、血行動態が安定したことを確認してから、被験物質の投与及び血行動態のデータ測定を開始した。
【００３３】
被験物質３０００ｎｍｏｌあたり、Ｔｒｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ  １ｍＬに溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌを２μＬ添加した後、Ｔｒｉｓ  ｂｕｆｆｅｒを用いて目的の濃度に希釈し、被験物質溶液とした。
【００３４】
被験物質溶液を投与用静脈カニューレより１ｍＬ／ｋｇの用量で投与した。各被験物質の濃度は、上記において投与後３０分間の平均の血圧低下量が同程度となるよう、化合物Ａについて５００ｎｍｏｌ／ｍＬ、参考化合物１について３００ｎｍｏｌ／ｍＬ、参考化合物２について１００ｎｍｏｌ／ｍＬとした。
【００３５】
平均血圧（ＭＢＰ）は、拡張期血圧（ＤＢＰ）に、収縮期血圧（ＳＢＰ）からＤＢＰを引いた値の３分の１を加えた値の、１分間の平均値として求め、投与開始前３０分間の平均値を基準値として変化値Δ値を算出した。結果を図１に示す。データは１群３例の平均値で示す。
【００３６】
化合物Ａは、正常ラットにおいて投与後急速に降圧作用を示し、投与後４分の時点で最大の降圧作用を示し、その後、速やかに作用を消失し、投与後約３０分で基準値まで血圧が回復した。一方、参考化合物１及び２は、投与後５〜１５分で最大の降圧作用を示した後、投与後１時間以上にわたって作用が持続し、投与後２〜３時間で基準値まで血圧が回復した。
【００３７】
試験例２  メトキサミン誘発イヌ急性心不全モデル
雄性ビーグルイヌ（体重約１０ｋｇ）に麻酔下、左右下肢静脈及び右上肢静脈にカニューレを設置し、左下肢静脈をメトキサミン投与用、右上肢静脈を被験薬投与用とした。さらに右頸動脈にヘパリンナトリウム溶液を満たしたカテーテルイントロデューサーを設置した。同イントロデューサーを介してＶｅｎｔｒｉカテーテルを左心室に誘導し、ＭＰＶＳ  Ｕｌｔｒａ圧容積マルチセグメントユニットを介して左室圧（ＬＶＰ）及び左心室容積を測定し、Ｐｏｗｅｒ  Ｌａｂに入力してそれらの値から左室拡張末期圧（ＬＶＥＤＰ）、１回拍出量（ＳＶ）及び心拍出量（ＣＯ）を得た。また、カテーテルイントロデューサーから圧トランスデューサー及び圧アンプを介して動脈圧（ＡＯＰ）を測定、Ｐｏｗｅｒ  Ｌａｂに入力して収縮期血圧（ＳＢＰ、ＡＯＰ最大値）、拡張期血圧（ＤＢＰ、ＡＯＰ最低値）また、脈波より心拍数（ＨＲ）を得た。右頚静脈より右心室にカテーテル（型式ＣＩ−２１２、ガデリウスメディカル株式会社製）を挿入し、圧トランスデューサー及び圧・容積アンプを介して右室圧（ＲＶＰ）を測定し、Ｐｏｗｅｒ  Ｌａｂに入力してそれらの値から右室拡張末期圧（ＲＶＥＤＰ）及び右室収縮期圧（ＲＶＳＰ、ＲＶＰ最大値）を得た。
【００３８】
血行動態が安定した時点で右下肢静脈より低分子デキストラン加乳酸リンゲル液をシリンジポンプを用いて０．３ｍｇ／ｋｇ／分（γ）で持続注入して容量負荷を行った。容量負荷開始より３０分後から左下肢静脈からメトキサミン溶液をシリンジポンプを用いて２γで持続静注し、末梢血管抵抗を増大させて体液を心肺系に集中させることで心不全状態を惹起した。メトキサミン溶液はメトキサミン塩酸塩を生理食塩液に溶解して０．１２ｍｇ／ｍＬとなるよう用時調製した。
【００３９】
メトキサミン溶液投与開始から６０分後、溶媒または各被験物質溶液を左上腕静脈よりシリンジポンプを用いて１ｍＬ／ｋｇ／時間で６０分間投与し、血行動態を観察した。投与終了後、さらに３０分間血行動態を観察した。被験薬物溶液は、化合物Ａを０．４ｍｇ／ｍＬとなるようにＴｒｉｓ  ｂｕｆｆｅｒに溶解した後、Ｔｒｉｓ  ｂｕｆｆｅｒで希釈し、投与速度が上記条件において０．０３〜１γとなるよう調製した。Ｔｒｉｓ  ｂｕｆｆｅｒは表１に従って調製した。
【００４０】
【表１】
2018076303.tif 000003
【００４１】
メトキサミンによるＬＶＥＤＰの上昇に対し、本願化合物を投与量別に１群５例で検討したところ、０．１γでは上昇抑制傾向を、０．３γ以上では低下作用を示した。
【００４２】
試験例３  イヌ高頻度心室刺激誘発心不全モデル
雄性ビーグルイヌ（体重約１０ｋｇ）に麻酔下、右頸静脈よりペーシングリードを挿入して電極を右心室壁に留置し、術後覚醒後に２８０ｂｅａｔｓ／分でペーシングを開始した。３週間ペーシングを継続した後、ペースメーカーを停止し、心血行動態測定を開始した。ペーシング期間中、ペースメーカー（ＯＳＹＰＫＡ社、ＰＡＣＥ１０１Ｈ）の作動は心電図（第II誘導）にて週に１回の頻度で確認した。
【００４３】
ペーシング期間終了後、麻酔及び人工呼吸（（１８回／分、１回換気量約２２ｍＬ／ｋｇ））下に、右頚動脈よりカテーテルイントロデューサーを挿入し、大腿動脈に挿入したカテーテルを圧トランスデューサに接続後、変換器用増幅ユニットにて血圧（ＢＰ）を測定し、脈波より心拍数（ＨＲ）を測定した。カテーテルイントロデューサーより圧・容積測定カテーテルを左心室に誘導し、左室圧、左室拡張末期圧（ＬＶＥＤＰ）及び左心室容積を測定、その測定値から心拍出量（ＣＯ）を算出した。
【００４４】
各薬物は６０μｇ／ｍＬとなるようにＴｒｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ及び０．５％０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＯＨに溶解した後、各濃度となるようにＴｒｉｓ  ｂｕｆｆｅｒで希釈し調製した。２〜３時間の安定化の後、本願化合物を０．３γ、参考化合物１は０．０１５γにてそれぞれ１８０分間持続静注した。心機能の解析は、１分間の平均値にて経時推移を算出した。結果を図２及び図３に示す。データは１群５例の平均値で示す。
【００４５】
高頻度心室刺激誘発慢性心不全イヌモデルにおいて、本願化合物は０．３γでＬＶＥＤＰの低下作用を示した。また、本願化合物は投与開始より速やかにＬＶＥＤＰ及びＳＢＰが低下し、３０〜６０分の時点でほぼ最大の降圧となって投与終了まで一定に推移し、投与終了後は直ちに作用消失に向かって推移したのに対し、参考化合物１（シナシグアト）はＬＶＥＤＰ及びＳＢＰ共に投与期間中持続的に低下を続け、投与終了後もさらに低下が継続した。
【図１】
2018076303.tif 000004
【図２】
2018076303.tif 000005
【図３】
2018076303.tif 000006