(57)【要約】【課題】測定再現性が良好な、体外診断薬等に使用される凍結乾燥状態の検体希釈試薬を提供する。【解決手段】凍結乾燥濃度３０．０〜９０．０（好ましくは３５．０〜８０．０）ｍｇ／ｃｍ３の糖アルコール（好ましくはマンニトール等）、および凍結乾燥濃度３０．０〜１００．０（好ましくは４０．０〜９０．０）ｍｇ／ｃｍ３の蛋白質（好ましくはウシ血清アルブミン等）を含有する、凍結乾燥状態の検体希釈試薬により、前記課題を解決する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
凍結乾燥濃度３０．０〜９０．０ｍｇ／ｃｍ３の糖アルコール、および凍結乾燥濃度３０．０〜１００．０ｍｇ／ｃｍ３の蛋白質を含有することを特徴とする、凍結乾燥状態の検体希釈試薬。
【請求項２】
糖アルコールがマンニトールである、請求項１に記載の検体希釈試薬。
【請求項３】
蛋白質がウシ血清アルブミンである、請求項１又は２に記載の検体希釈試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体外診断薬等に使用される凍結乾燥状態の検体希釈試薬であって、糖アルコールおよび蛋白質を含有することにより測定再現性を向上させることに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
体外診断薬等に使用される検体希釈試薬は、液状形態である検体希釈液として、臨床検査等の分野で広く利用されている。この液状形態である検体希釈液はそのまま使用できる点で測定者への負担は軽いものの、体積と重さの点で運送面においては不利である。また通常はバルク品として供給および使用されているので、環境温度や環境湿度の影響を受けやすい。つまり、開封された状態で使用されるので濃縮の影響を避けることができず、使用継続時間毎に検体希釈液中の有効成分濃度が変動し、使用継続時間毎に正確な測定値から変動していくことが危惧される。よってこれらの問題を解決するための方法が提案されている。
【０００３】
特許文献１では、自動分析装置で使用する凍結乾燥状態の検体希釈試薬が報告されている。しかしながら特許文献１においては、検体希釈試薬の組成や製法に関しては、何ら記載されていない。凍結乾燥形態の各種試薬においては、賦形剤としての糖や蛋白質などが使用されている。糖や蛋白質などが少ない場合には形状を維持することが困難であり、輸送中に凍結乾燥物が剥離、破砕され容器の壁や蓋に付着することに起因して測定時の有効成分濃度が変動してしまい、正確な測定値から逸脱することが問題となっている。糖や蛋白質などが多い場合には形状を維持することが可能となるが、その成分や濃度が適切でない場合には再溶解した後の溶解性が悪く、その結果、測定再現性が悪くなり測定対象成分を高精度に測定することが妨げられることが問題となっていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第５８１１２４４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
臨床検査の分野において、試薬の測定時における再現性は種々の試薬で求められている。そこで本発明の目的は、測定再現性が良好な、体外診断薬等に使用される凍結乾燥状態の検体希釈試薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意検討を行なった結果、凍結乾燥状態の検体希釈試薬に存在する糖および蛋白質の濃度を最適化することにより、測定再現性が良好となることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
即ち本発明は以下のとおりである。
（１）凍結乾燥濃度３０．０〜９０．０ｍｇ／ｃｍ３の糖アルコール、および凍結乾燥濃度３０．０〜１００．０ｍｇ／ｃｍ３の蛋白質を含有することを特徴とする、凍結乾燥状態の検体希釈試薬。
（２）糖アルコールがマンニトールである、（１）に記載の検体希釈試薬。
（３）蛋白質がウシ血清アルブミンである、（１）又は（２）に記載の検体希釈試薬。
【０００８】
以下、本発明を詳細に説明する。
【０００９】
本発明の検体希釈試薬は、測定範囲を超える濃度で存在する測定対象や過剰な妨害成分を含む検体を希釈するために使用される。使用にあたって、溶解液を加えて溶解させて検体希釈液として使用する。
【００１０】
本発明の検体希釈試薬が用いられる測定対象としては、特に限定されるものではないが、例えばヒトイムノグロブリン、β２−ミクログロブリン、フェリチン、α−フェトプロテイン、癌胎児性抗原、ＣＡ１９−９、ＳＣＣ抗原、ＣＡ１５−３、ＣＡ１２５、前立腺特異抗原、甲状腺刺激ホルモン、抗甲状腺ペルオキシターゼ抗体、抗サイログロブリン抗体、肝炎ウイルス抗原、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、トリヨードサイロニン、サイロキシン、エストラジオール、プロゲステロン、コルチゾール、テストステロン、デヒドロエピアンドロステロンサルフェイト、インスリン、脳性ナトリウム利尿ペプチド、心房性ナトリウム利尿ペプチド、２５−ヒドロキシビタミンＤ、ビタミンＢ１２又は葉酸等があげられる。
【００１１】
本発明において糖アルコールとしてはマンニトール、キシリトール、ソルビトール、ガラクチトール、リビトール等が好ましく、中でもマンニトールが好ましい。糖アルコールは、本発明の凍結乾燥状態の検体希釈試薬において、凍結乾燥濃度３０．０〜９０．０ｍｇ／ｃｍ３含有されるものであり、好ましくは３５．０〜８０．０ｍｇ／ｃｍ３、更に好ましくは３７．５〜７５．０ｍｇ／ｃｍ３である。ここで凍結乾燥濃度とは、［凍結乾燥状態の検体希釈試薬に含有される糖アルコールの重量］／［凍結乾燥状態の検体希釈試薬の見かけ体積］で表わされる値である。なお、凍結乾燥状態の検体希釈試薬は、内部が緻密ではなく微小な空隙を有するが、その空隙を含めて１つの固体として見た場合の体積をここでは見かけ体積とした。
【００１２】
一方、本発明に用いられる蛋白質としては、例えばヒト血清、ヒト血清アルブミン、ウシ血清、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、コラーゲンペプチド、スキムミルク等を使用することができる。その中でもウシ血清アルブミンが好ましい。蛋白質は、本発明の凍結乾燥状態の検体希釈試薬において、凍結乾燥濃度３０．０〜１００．０ｍｇ／ｃｍ３で含有されるものであり、４０．０〜９０．０ｍｇ／ｃｍ３とすることが好ましく、特に４２．２〜８４．４ｍｇ／ｃｍ３とすることが好ましい。ここで凍結乾燥濃度とは、［凍結乾燥状態の検体希釈試薬に含有される蛋白質の重量］／［凍結乾燥状態の検体希釈試薬の見かけ体積］で表わされる値である。なお、見かけ体積とは前述のとおりである。
【００１３】
本発明の凍結乾燥状態の検体希釈試薬には、緩衝液の構成成分が含まれることが好ましい。また界面活性剤や塩類が含まれることも好ましい。それらは特に限定されるものではないが、界面活性剤であればアニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン性界面活性剤を使用することができる。緩衝液の構成成分としては、例えばＴｒｉｓ、ＭＯＰＳＯ、ＭＯＰＳやＭＥＳ等の構成成分をあげることができ、塩類としては、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化亜鉛等を使用することができる。凍結乾燥状態の検体希釈試薬にはこれら以外にも、必要に応じて他の試薬成分等を共存させることもできる。
【００１４】
本発明の凍結乾燥状態の検体希釈試薬は、必要な成分と共に糖アルコール及び蛋白質を共存させた溶液を凍結乾燥することにより、製造することができる。このとき、目的とする凍結乾燥濃度となるよう、溶液中の糖アルコール及び蛋白質の濃度や凍結乾燥条件を適宜設定すればよい。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の凍結乾燥状態の検体希釈試薬は、凍結乾燥した際の容器への適度な固着性を有し、また適当な硬さを有する凍結乾燥ケーキとして得られるため、溶解液を加えた際の溶解性に優れたものである。そのため、本発明の凍結乾燥状態の検体希釈試薬を体外診断薬等に用いれば、精度よく測定することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】実施例及び比較例で、２穴容器を用いて凍結乾燥ケーキの見かけ体積を測定する方法を示す図である。
【実施例】
【００１７】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例により限定されるものではない。なお、免疫測定装置として全自動エンザイムイムノアッセイ装置ＡＩＡ−ＣＬ２４００、東ソー社製を用い、免疫測定用試薬として当該装置用のＡＩＡ−パックＣＬ  プロゲステロンを用い、１ステップディレイ競合法により各測定を行った。
【００１８】
（実施例１，２、比較例１）
Ｔｒｉｓ緩衝液に、表１に記載の濃度となるよう、ＢＳＡ及びマンニトールを添加した溶液を調製し、表１に記載の量を、２穴を有する試薬容器の一方の穴に分注した。なおこの試薬容器は、同等の２穴を有するものである。
【００１９】
【表１】
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この結果、各試薬容器の一方の穴に存在するＢＳＡとマンニトールの絶対量は試薬容器間で差がなく、同一である。これらについて凍結乾燥を行った。凍結乾燥後、得られた凍結乾燥ケーキの見かけ体積を以下のようにして図１に示すように測定した。即ち、２穴試薬容器の空の１穴に、凍結乾燥ケーキと同一の高さまで純水を分注し、その純水の重量から体積を求め、凍結乾燥ケーキの見かけ体積とした。なお、図１では左から順に実施例１，２、比較例１の２穴試薬容器を示す。その結果、凍結乾燥ケーキはそれぞれ表１に記載の見かけ体積を有し、それをもとにそれぞれのＢＳＡとマンニトールの凍結乾燥濃度を求め、表１に示した。
【００２０】
（測定再現性試験）
プロゲステロン濃度３１．２ｎｇ／ｍＬであるヒト血清を検体として、実施例１，２、比較例１にて調製した凍結乾燥状態の検体希釈試薬に溶解液（アジ化ナトリウムを含む分注水）を７５μＬ加えて溶解し、検体希釈液を調製した。それを用いて検体を希釈し、プロゲステロン濃度を測定した。これら一連の操作は前記自動免疫測定装置で行った。検体の希釈倍率は１０倍と設定し、希釈操作は装置上の自動希釈で実施した。希釈をした後にプロゲステロン濃度を測定する一連の操作を１０回繰り返して、プロゲステロン測定値の平均値を求めた。さらにその測定値を基に、測定再現性を算出した。結果を表１に示す。
【００２１】
表１から明らかなように、実施例１，２、比較例１は、含有されるマンニトールの絶対量及びＢＳＡの絶対量はそれぞれ同一である。しかしながら、得られた凍結乾燥ケーキの見かけ体積が異なるため、ＢＳＡ凍結乾燥濃度やマンニトール凍結乾燥濃度は異なっている。それを一定量の分注水で溶解したので、得られた検体希釈液の濃度は同一のはずだが、凍結乾燥濃度によって溶解のしやすさが異なり、比較例１では飴状となった部分が固まって溶解しにくくなったり、溶解しても試薬容器内で均一にならず濃度勾配が生じたりして、測定の間差が大きくなり、ＣＶ１２．１％と測定値に大きなばらつきを生じたと考えられる。これに対し、実施例１，２では、ＣＶ４．０％、３．６％と測定再現性が良く、これはＢＳＡとマンニトールとがそれぞれ適切な凍結乾燥濃度で凍結乾燥状態の検体希釈試薬に含有されていたため、溶解性に優れていたと考えられる。
【図１】
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