(57)【要約】      （修正有）【課題】様々な病因による仮性結核、百日咳、エルジニア症、肺炎等の様々な感染因子による細菌感染症、並びに急性気道感染症、様々な種類のインフルエンザ、急性ウイルス性肝炎Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、及び他の肝炎、ＨＩＶに関連する疾患及び状態等の急性及び慢性のウイルス性感染症を含む感染性疾患の治療及び予防における医薬組成物及びその使用方法の提供。【解決手段】ａ）少なくとも１つのサイトカインに対する抗体のＣ１２、Ｃ３０、及びＣ２００のホメオパシー希釈物の混合物、及び／又は、少なくとも１つのサイトカインに対する抗体のＣ１２、Ｃ３０、及びＣ５０のホメオパシー希釈物の混合物と、ｂ）少なくとも１つの受容体に対する抗体のＣ１２、Ｃ３０、及びＣ２００のホメオパシー希釈物の混合物、及び／又は、少なくとも１つの受容体に対する抗体のＣ１２、Ｃ３０、及びＣ５０のホメオパシー希釈物の混合物とを含む医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
感染性疾患の治療に使用するための組み合わせ医薬組成物であって、
ａ）少なくとも１つのサイトカインに対する抗体のＣ１２、Ｃ３０、及びＣ２００のホメオパシー希釈物の混合物、及び／又は、少なくとも１つのサイトカインに対する抗体のＣ１２、Ｃ３０、及びＣ５０のホメオパシー希釈物の混合物と、ｂ）少なくとも１つの受容体に対する抗体のＣ１２、Ｃ３０、及びＣ２００のホメオパシー希釈物の混合物、及び／又は、少なくとも１つの受容体に対する抗体のＣ１２、Ｃ３０、及びＣ５０のホメオパシー希釈物の混合物とを含み、
前記サイトカインが、γインターフェロン、αインターフェロン、及び腫瘍壊死因子αから選択される少なくとも１つであり、前記受容体が、ＣＤ４受容体及びＣＤ８受容体から選択される少なくとも１つであることを特徴とする組み合わせ医薬組成物。
【請求項２】
少なくとも１つのサイトカインに対する抗体が、固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０、及びＣ５０のホメオパシー希釈物の混合物の形態であり、少なくとも１つの受容体に対する抗体が、前記固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０、及びＣ５０のホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項３】
少なくとも１つのサイトカインに対する抗体が、固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０、及びＣ２００のホメオパシー希釈物の混合物の形態であり、少なくとも１つの受容体に対する抗体が、前記固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０、及びＣ２００のホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項４】
希釈物の混合物が、担体に浸透している請求項３に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項５】
抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、又は天然の抗体である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項６】
抗体が、ポリクローナル抗体である請求項５に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項７】
少なくとも１つのサイトカインが、γインターフェロンであり、少なくとも１つの受容体が、ＣＤ４受容体である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項８】
ヒスタミンに対する抗体のＣ１２、Ｃ３０及びＣ５０のホメオパシー希釈物の混合物を更に含む請求項７に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項９】
少なくとも１つのサイトカインが、γインターフェロン及びαインターフェロンであり、少なくとも１つの受容体が、ＣＤ４受容体及びＣＤ８受容体である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１０】
少なくとも１つのサイトカインが、αインターフェロンであり、少なくとも１つの受容体が、ＣＤ４受容体である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１１】
少なくとも１つのサイトカインが、腫瘍壊死因子αであり、少なくとも１つの受容体が、ＣＤ４受容体である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１２】
感染性疾患が、ウイルス感染性疾患である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１３】
ウイルス感染性疾患が、ＨＩＶによって引き起こされるか又はＨＩＶに関連する疾患又は状態である請求項１２に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１４】
ＨＩＶによって引き起こされるか又はＨＩＶに関連する疾患及び状態が、ＡＩＤＳである請求項１３に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１５】
ウイルス感染性疾患が、ウイルス性肝炎である請求項１２に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１６】
ウイルス性肝炎が、慢性Ｃ型肝炎である請求項１５に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１７】
ウイルス感染性疾患が、インフルエンザである請求項１２に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１８】
ウイルス感染性疾患が、急性気道感染症である請求項１２に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１９】
感染性疾患が、細菌感染性疾患である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項２０】
組み合わせ医薬組成物が、１つ〜３つの単位剤形として投与され、前記剤形のそれぞれが１日１回から１日６回投与される請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、様々な病因による仮性結核、百日咳、エルジニア症、肺炎等の様々な感染因子によって引き起こされる細菌感染症、並びに急性気道感染症、様々な種類のインフルエンザ、急性ウイルス性肝炎Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、及び他の種類の肝炎、ＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされるか又はＨＩＶに関連する疾患及び状態等の急性及び慢性のウイルス性感染症を含む感染性疾患を治療及び予防する医薬組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、医学分野に関し、様々な病因による仮性結核、百日咳、エルジニア症、肺炎等の様々な感染因子によって引き起こされる細菌感染症、並びに急性気道感染症、様々な種類のインフルエンザ、急性ウイルス性肝炎Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、及び他の種類の肝炎、ＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされるか又はＨＩＶに関連する疾患及び状態等の急性及び慢性のウイルス性感染症を含む感染性疾患を治療及び予防するために用いることができる。
【０００３】
超低用量のインターフェロンに対する抗体に基づくウイルス性疾患の治療は、当技術分野において公知である（特許文献１）。しかし、所与の医薬品は、ＨＩＶに関連する疾患を治療するのに十分な程度有効ではない場合がある。
【０００４】
ホメオパシー技術によって増強された極度に希釈された型（又は超低型）の抗体（活性化増強型）の治療効果は、Ｄｒ．Ｏｌｅｇ  Ｉ．Ｅｐｓｈｔｅｉｎによって発見された。例えば、特許文献２は、ホメオパシーによって活性化された型の前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）に対する抗体の投与によって、良性前立腺肥大症又は前立腺炎を治療するための医薬を開示している。超低用量のγインターフェロンに対する抗体は、ウイルス性病因の疾患の治療及び予防において有用であることが示されている。参照することにより全文が本願に援用される特許文献３を参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】露国特許第２１９２８８８号明細書
【特許文献２】米国特許第７，５８２，２９４号明細書
【特許文献３】米国特許第７，５７２，４４１号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、様々な病因による仮性結核、百日咳、エルジニア症、肺炎等の様々な感染因子によって引き起こされる細菌感染症、並びに急性気道感染症、様々な種類のインフルエンザ、急性ウイルス性肝炎Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、及び他の種類の肝炎、ＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされるか又はＨＩＶに関連する疾患及び状態等の急性及び慢性のウイルス性感染症を含む感染性疾患の治療及び予防における医薬組成物及びその使用方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
既存の問題に対する解決策を、ａ）サイトカインに対する活性化増強型抗体とｂ）受容体に対する活性化増強型抗体とを含む感染性疾患を治療及び防止（予防）するための組み合わせ医薬組成物の形態で提示する。
【０００８】
１つの態様では、本発明は、ａ）少なくとも１つのサイトカインに対する活性化増強型抗体と、ｂ）少なくとも１つの受容体に対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ医薬組成物を提供する。１つの実施形態では、医薬組成物は、固体担体を更に含み、活性化増強型抗体を前記固体担体に浸透させる。１つの変形例では、医薬組成物は、錠剤の形態である。
【０００９】
好ましくは、活性化増強型抗体を含む医薬組成物は、Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ２００のホメオパシー希釈物の混合物の形態である。具体的には、Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ２００のホメオパシー希釈物の混合物を固体担体に浸透させることが意図される。
【００１０】
活性化増強型抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、又は天然抗体の活性化増強型であってよい。具体的には、活性化増強型抗体は、ポリクローナル抗体の活性化増強型であることが意図される。本発明は、明細書に記載され、添付の特許請求の範囲に請求される配列を有する抗原に対する活性化増強型抗体を提供する。
【００１１】
１つの変形例では、医薬組成物は、希釈するごとに振盪しながら連続的に１００倍希釈することにより調製される活性化増強型抗体を含む。具体的には、垂直方向の振盪が意図される。
【００１２】
別の態様では、本発明は、感染性疾患を治療及び予防する方法であって、ａ）少なくとも１つのサイトカインに対する活性化増強型抗体と、ｂ）少なくとも１つの受容体に対する活性化増強型抗体とを、それを必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。好ましくは、活性化増強型抗体は、医薬組成物の形態で投与される。
【００１３】
１つの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容できる担体と、少なくとも１つのサイトカインに対する活性化増強型抗体と、少なくとも１つの受容体に対する活性化増強型抗体とを含み、前記活性化増強型が前記担体に浸透している固体経口剤形の形態で投与される。１つの変形例では、固体経口剤形は、錠剤である。変形例及び実施形態が提供される。
【００１４】
本発明の方法の態様によれば、医薬組成物は、１つ〜３つの単位剤形で投与してよく、前記剤形は、それぞれ１日１回〜１日６回投与される。変形例では、医薬組成物は、１日２回投与され、各投与は、２つの経口剤形からなる。変形例では、医薬組成物は、１つ〜２つの単位剤形で投与され、前記剤形は、それぞれ１日２回投与される。変形例では、医薬組成物は、１つ〜２つの単位剤形で投与され、前記剤形は、それぞれ１日４回投与される。本発明の組成物の態様に関して記載される全ての変形例及び実施形態を、本発明の方法の態様に使用してよい。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ／プラセボ投与を背景として、体温が３７．０℃以下に低下した患者の割合（％）を示すグラフである。
【図２】図２は、Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ／タミフル（登録商標）を背景として、体温が３７．０℃以下に低下した患者の割合（％）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、添付の特許請求の範囲と関連して定義される。特許請求の範囲に関して、以下の用語解説によって関連する定義がもたらされる。
【００１７】
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、別の分子の特定の空間的な極性の構成に特異的に結合し、それにより、それと相補的であると定義される免疫グロブリンを意味するものとする。特許請求の範囲において列挙されている抗体は、完全な免疫グロブリン又はその断片を含んでよく、天然、ポリクローナル又はモノクローナルであってよく、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３、ＩｇＭ等の種々のクラス及びアイソタイプを挙げることができる。その断片としては、Ｆａｂ、Ｆｖ及びＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’等を挙げることができる。単数形の「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、複数形の「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」を含む。
【００１８】
「活性化増強型」又は「増強型」という用語はそれぞれ、本明細書において列挙されている抗体に関しては、任意の抗体の最初の溶液のホメオパシーポテンタイゼーション（ｐｏｔｅｎｔｉｚａｔｉｏｎ）の生成物を示すために使用される。「ホメオパシーポテンタイゼーション」とは、ホメオパシーの方法を用いて最初の関連物質の溶液にホメオパシーポーテンシーを付与することを示す。そのように限定するものではないが、「ホメオパシーポテンタイゼーション」は、例えば、連続した希釈を、外部からの処理、特に垂直方向の（機械的な）振盪と組み合わせて繰り返すことを伴ってよい。言い換えれば、ホメオパシーの技術に従って、抗体の最初の溶液を連続して繰り返し希釈し、得られた溶液をそれぞれ多数回、垂直方向に振盪する。溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールとの混合物中の抗体の最初の溶液の好ましい濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬから約５．０ｍｇ／ｍＬまでにわたる。各成分、すなわち、抗体溶液を調製するための好ましい手順は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物（Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ２００）に相当する、抗体の一次マトリックス溶液（母液）を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００２００倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用することであるか、或いは、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物（Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ５０）に相当する、抗体の一次マトリックス溶液を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００５０倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用することである。ホメオパシーポテンタイゼーションの例は、その全体が参照により明示された目的で本明細書に組み込まれる、米国特許第７，５７２，４４１号及び同第７，５８２，２９４号に記載されている。特許請求の範囲では「活性化増強型」という用語が使用され、実施例では「超低用量」という用語が使用される。「超低用量」という用語は、ホメオパシーにより希釈され、増強された型の物質の研究及び使用によって創出された技術分野における専門用語になった。「超低用量（ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ｄｏｓｅ）」又は「超低用量（ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ｄｏｓｅｓ）」という用語は、特許請求の範囲において使用される「活性化増強」型という用語を完全に支持し、それと主に同義であるものとする。
【００１９】
言い換えれば、抗体は、３つの因子が存在すれば、「活性化増強」型又は「増強」型である。第１に、「活性化増強」型抗体は、ホメオパシーの技術分野では広く受け入れられている調製プロセスの生成物である。第２に、「活性化増強」型抗体は、現代薬理学において広く受け入れられている方法によって決定される生物活性を有さなければならない。第３に、「活性化増強」型抗体により示される生物活性は、ホメオパシーのプロセスの最終生成物に分子型抗体が存在することによっては説明することができない。
【００２０】
例えば、活性化増強型抗体は、最初の、単離された分子型抗体を、機械的な振盪等の外部からの衝撃と併せて連続して多数回希釈することによって調製することができる。濃度低下の過程における外部からの処理は、例えば、超音波、電磁気、又は他の物理的因子に曝露させることによって実現することもできる。その全体が参照により明示された目的で本明細書に組み込まれるＶ．Ｓｃｈｗａｂｅ“Ｈｏｍｅｏｐａｔｈｉｃ  ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ”Ｍ．，１９６７、米国特許第７，２２９，６４８号及び同第４，３１１，８９７号には、ホメオパシーの技術分野において広く受け入れられているホメオパシー増強の方法であるそのようなプロセスが記載されている。この手順により、最初の分子型抗体の分子濃度が均一に低下する。所望のホメオパシーポーテンシーが得られるまでこの手順を繰り返す。個々の抗体について、所要のホメオパシーポーテンシーは、中間希釈物を所望の薬理学的モデルにおいて生物学的試験に供することによって決定することができる。そのように限定するものではないが、「ホメオパシーポテンタイゼーション」は、例えば、外部からの処理、特に垂直方向の（機械的な）振盪と組み合わせて連続した希釈を繰り返すことを伴ってよい。言い換えれば、ホメオパシーの技術に従って、抗体の最初の溶液を連続して繰り返し希釈し、得られた溶液をそれぞれ多数回、垂直方向に振盪する。溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールとの混合物中の抗体の最初の溶液の好ましい濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬから約５．０ｍｇ／ｍＬにわたる。各成分、すなわち、抗体溶液を調製するための好ましい手順は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００に相当する、抗体の一次マトリックス溶液（母液）を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００２００倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用すること、又は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ５０に相当する、抗体の一次マトリックス溶液（母液）を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００５０倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用することである。所望のポーテンシーをどのように得るかの例も、例えば、明示された目的で参照により組み込まれる、米国特許第７，２２９，６４８号及び同第４，３１１，８９７号において提供される。本明細書に記載の「活性化増強」型抗体に適用可能な手順は、下に詳しく記載されている。
【００２１】
ヒト対象のホメオパシー治療に関してはかなりの量の議論がなされてきた。本発明は、「活性化増強」型抗体を得るために、受け入れられているホメオパシーのプロセスに依拠するが、本発明は、活性を証明するためにはヒト対象におけるホメオパシー単独に依拠するのではない。驚いたことに、本出願の発明者は、認められている薬理学的モデルにおいて、出発分子型抗体を連続して多数回希釈することから最終的に得られた溶媒が、標的希釈物中に分子型抗体の痕跡が存在することとは無関係の決定的な活性を有することを発見し、十分に実証した。本明細書で提供される「活性化増強」型抗体を、生物活性について、広く受け入れられている活性の薬理学的モデルにおいて、適切なインビトロ実験において、又は適切な動物モデルにおいてインビボで試験した。更に以下に提供される実験により、そのようなモデルにおける生物活性の証拠がもたらされた。同様にヒトの臨床研究は、動物モデルにおいて観察された活性が、ヒトの療法によく翻訳されるという証拠を提供する。ヒト研究によって、医科学において病的状態として広く認められている特定のヒトの疾患又は障害を治療するための、本明細書に記載の「活性化増強」型の利用可能性の証拠ももたらされる。
【００２２】
また、特許請求された「活性化増強」型抗体は、その生物活性が、最初の出発溶液から残っている分子型抗体が存在することによっては説明することができない溶液又は固体調製物のみを包含する。言い換えれば、「活性化増強」型抗体は、最初の分子型抗体の痕跡を含有してよいことが意図されているが、連続して希釈した後に残った分子型抗体は非常に低濃度であるので、当業者は、認められている薬理学的モデルにおいて観察される生物活性が、いかなる程度の妥当性でも残りの分子型抗体に起因すると考えることができない。本発明は特定の理論に限定されるものではないが、本発明の「活性化増強」型抗体の生物活性は、最初の分子型抗体には起因しない。その中に含まれる最初の分子型抗体の濃度が、認められている分析的な技法、例えば、キャピラリー電気泳動及び高速液体クロマトグラフィー等の検出限界を下回る、液体又は固体の形態の「活性化増強」型抗体が好ましい。その中に含まれる最初の分子型抗体の濃度がアボガトロ数未満である液体又は固体の形態の「活性化増強」型抗体が特に好ましい。分子型の治療用物質の薬理学において、薬理学的反応のレベルが、対象に投与される、又はインビトロで試験される活性薬物の濃度に対してプロットされた用量反応曲線を作成することは一般的である。任意の検出可能な反応を生じる薬物の最小レベルは、閾値用量として公知である。「活性化増強」型抗体は、もしあれば、所与の生物学的モデルにおける分子型抗体の閾値用量を下回る濃度で分子抗体を含有することが具体的に意図されており、それが好ましい。
【００２３】
本発明は、以下により詳細に記載する通り、連続した希釈と中間の振盪による外部からの処理とを繰り返すことによってホメオパシーポテンタイゼーションの技術に従って調製される、サイトカインに対する活性化増強型抗体と受容体に対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、様々な病因による仮性結核、百日咳、エルジニア症、肺炎等の様々な感染因子によって引き起こされる細菌感染症、並びに急性気道感染症、様々な種類のインフルエンザ、急性ウイルス性肝炎Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、及び他の種類の肝炎、ＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされるか又はＨＩＶに関連する疾患及び状態等の急性及び慢性のウイルス性感染症を含む感染性疾患の治療及び予防において特に有用である。実施例に示す通り、本発明の医薬組成物は、予想外の相乗治療効果を有し、これは、特に、様々な病因による仮性結核、百日咳、エルジニア症、肺炎等の様々な感染因子によって引き起こされる細菌感染症、並びに急性気道感染症、様々な種類のインフルエンザ、急性ウイルス性肝炎Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、及び他の種類の肝炎、ＡＩＤＳを含むＨＩＶによって引き起こされるか又はＨＩＶに関連する疾患及び状態等の急性及び慢性のウイルス性感染症を含む感染性疾患の治療及び予防における治療の有効性において現れる。
【００２４】
本発明の医薬組成物は、細菌性感染症及び急性及び慢性のウイルス性感染症を含む感染性疾患の治療、予防に利用可能な調製物の選択肢を広げる。
【００２５】
本発明のこの態様に従った組み合わせ医薬組成物は、液体形又は固体形とすることができる。医薬組成物に含まれる活性化増強型抗体は、ホメオパシー分野において受け入れられているプロセスを通して、抗体の最初の分子形態から調製する。開始抗体は、例えば、どちらも参照により本明細書に組み込まれている、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｇ．Ｆｒｉｍｅｌ，Ｍ．，“Ｍｅｄｉｔｓｙｎａ”，１９８７，ｐ．９−３３；“Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｄ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，３０ｙｅａｒｓ  ａｆｔｅｒ”ｂｙ  Ｌａｆｆｌｙ  Ｅ．，Ｓｏｄｏｙｅｒ  Ｒ．−２００５−Ｖｏｌ．１４．−Ｎ１−２．Ｐ．３３−５５において記載されている、既知のプロセスに従って調製されるモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体とすることができる。
【００２６】
モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術を用いて得ることができる。プロセスの最初の段階は、ポリクローナル抗血清の調製の過程で既に開発された原理に基づく免疫化を含む。作業の別の段階は、同一の特異性を有する抗体のクローンを生み出すハイブリッド細胞の作製を伴う。それらの別々の単離は、ポリクローナル抗血清の調製の場合と同じ方法を使用して行う。
【００２７】
ポリクローナル抗体は、動物の能動免疫化を通して得ることができる。この目的で、例えば、適切な動物（例えばウサギ）に、適切な抗原（サイトカイン及び受容体）の一連の注入を与える。動物の免疫系は、既知の様式で動物から採取される、対応する抗体を生み出す。この手順は、単一特異性の抗体を多量に含んだ血清の調製を可能にする。
【００２８】
所望であれば、抗体を含有する血清は、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、塩析による分画、又はイオン交換クロマトグラフィーを使用することによって精製することができる。得られた精製抗体濃縮血清を、活性化増強型の抗体を調製するための出発材料として使用することができる。得られた、溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールとの混合物中の抗体の最初の溶液の好ましい濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬから約５．０ｍｇ／ｍＬまでにわたる。
【００２９】
本発明に係る組み合わせ薬の各成分を調製するための好ましい手順は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ５０に相当する、抗体の一次マトリックス溶液を１００１２倍、１００３０倍及び１００５０倍に希釈した３種の水−アルコール希釈物の混合物、又はそれぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００に相当する、抗体の一次マトリックス溶液を１００１２倍、１００３０倍及び１００２００倍に希釈した３種の水−アルコール希釈物の混合物を使用することである。固体剤形を調製するために、固体担体を、ホメオパシーのプロセスによって得られた所望の希釈物で処理する。本発明の組み合わせの固体単位剤形を得るために、担体塊に各希釈物を浸透させる。どちらの浸透の階数も、所望の組み合わせ剤形を調製するために適している。
【００３０】
好ましい実施形態では、本発明の組み合わせ医薬組成物を含む活性化増強型を調製するための出発材料は、動物に産生させた、対応する抗原に対するポリクローナル抗体である。サイトカイン又は受容体に対するポリクローナル活性化増強型抗体を得るために、所望の抗原を免疫原として実験動物、好ましくはウサギに注射してよい。
【００３１】
ＣＤ４受容体に対するポリクローナル抗体は、以下の配列のヒトＣＤ４受容体の分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000002
2018135370.tif 000003
【００３２】
ＣＤ４受容体に対するポリクローナル抗体は、例えば、以下のアミノ酸配列から選択されるＣＤ４受容体のポリペプチド断片を用いて得ることができる。
2018135370.tif 000004
2018135370.tif 000005
2018135370.tif 000006
2018135370.tif 000007
2018135370.tif 000008
2018135370.tif 000009
【００３３】
ＣＤ４受容体に対する出発ポリクローナル抗体を調製するための例示的な手順は、以下の通り説明することができる。血液試料を採取する７日間〜９日間前に、所望の抗原を、ウサギに１回〜３回静脈内注射して、ウサギの血流中のポリクローナル抗体のレベルを上昇させる。免疫化したら、抗体レベルを検査するために血液試料を取得する。一般には、可溶性抗原の免疫応答の最大レベルは、抗原を最初に注射した後４０日間〜６０日間以内に実現される。第１の免疫化サイクルが完了したら、ウサギを３０日間のリハビリテーション期間におき、その後、更に１回〜３回静脈内注射して再免疫化を実施する。
【００３４】
所望の抗体を含有する抗血清を得るために、ウサギから、免疫化されたウサギの血液を採取し、５０ｍＬの遠心管に入れる。管の側面に形成された生成物である血餅を木べらで除去し、管の中心の血餅にロッドを入れる。次いで、血液を冷蔵庫に約４０℃の温度で一晩置く。次の日に、へらの上の血餅を除去し、残りの液体を１分間当たり１３，０００回転で１０分間遠心分離する。上清の流体が標的抗血清である。得られた抗血清は一般には黄色である。抗血清に、２０％のＮａＮ３（重量濃度）を最終濃度が０．０２％になるまで加え、使用する前に、−２０℃の温度で凍結した状態で保管するか又は、ＮａＮ３を添加せずに−７０℃の温度で保管する。γインターフェロンに対する標的抗体を抗血清から分離するためには、以下の固相吸収の連続が適している：
ウサギの抗血清１０ｍＬを０．１５ＭのＮａＣｌで２倍希釈し、その後、６．２６ｇのＮａ２ＳＯ４を加え、混合し、４℃で約１２時間〜１６時間インキュベートする。沈渣を遠心分離によって除去し、リン酸緩衝液１０ｍＬで希釈し、同じ緩衝液に対して周囲温度で一晩透析する。沈渣を除去した後、溶液をリン酸緩衝液によって平衡させたＤＥＡＥ−セルロースカラムに適用する。溶出液の２８０ｎｍにおける光学濃度を測定することによって抗体画分を決定する。
【００３５】
単離された粗製の抗体を、アフィニティークロマトグラフィー法を使用し、得られた抗体を、クロマトグラフィー媒体の不溶性マトリックス上にあるＣＤ４抗原に付着させることによって精製し、その後濃縮した水性塩類溶液により溶出させる。
【００３６】
得られた緩衝溶液を、活性化増強型抗体を調製するために用いるホメオパシー希釈プロセスの最初の溶液として使用する。ＣＤ４受容体に対する抗原精製ポリクローナルウサギ抗体の最初のマトリックス溶液の好ましい濃度は、０．５ｍｇ／ｍＬ〜５．０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは、２．０ｍｇ／ｍＬ〜３．０ｍｇ／ｍＬである。
【００３７】
また、γインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、アジュバントを用いてＣＤ４受容体抗体について記載した方法と同様の方法によって得ることができる。γインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のγインターフェロンの分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000010
【００３８】
γインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のγインターフェロンの分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000011
【００３９】
また、抗原としてγインターフェロンを使用することが意図されている。かかる抗原に対する好適な配列は、以下の通りである。
2018135370.tif 000012
2018135370.tif 000013
2018135370.tif 000014
2018135370.tif 000015
2018135370.tif 000016
2018135370.tif 000017
2018135370.tif 000018
2018135370.tif 000019
2018135370.tif 000020
【００４０】
γインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のうちの１つの組換えγインターフェロンの分子を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000021
2018135370.tif 000022
【００４１】
また、αインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、アジュバントを使用してＣＤ４受容体抗体について記載した方法と同様の方法によって得ることができる。αインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のヒトαインターフェロン８型の分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000023
【００４２】
αインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のヒトαインターフェロン２型の分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000024
【００４３】
αインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のヒトαインターフェロン１７型の分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000025
【００４４】
αインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のヒトαインターフェロン４型の分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000026
【００４５】
αインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のヒトαインターフェロン２１型の分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000027
【００４６】
αインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のヒトαインターフェロン１／１３型の分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000028
【００４７】
αインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のヒトαインターフェロン１０型の分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000029
【００４８】
αインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のヒトαインターフェロン５型の分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000030
【００４９】
αインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のヒトαインターフェロン７型の分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000031
【００５０】
αインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のヒトαインターフェロン１４型の分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000032
【００５１】
ＣＤ８受容体に対するポリクローナル抗体は、アジュバントを使用してＣＤ４受容体抗体について記載した方法と同様の方法によって得ることができる。ＣＤ８受容体に対するポリクローナル抗体は、以下の配列のＣＤ８受容体の分子全体を使用して得ることができる。
2018135370.tif 000033
【００５２】
また、抗原としてＣＤ８受容体断片を使用することも意図されている。かかる抗原に適した配列は、以下の通りである。
2018135370.tif 000034
2018135370.tif 000035
2018135370.tif 000036
2018135370.tif 000037
2018135370.tif 000038
【００５３】
腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）に対するポリクローナル抗体は、以下の配列の腫瘍壊死因子αの分子全体を使用して、上述のＣＤ４受容体に対する抗体を得る方法によって得ることができる。
2018135370.tif 000039
【００５４】
腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）に対するポリクローナル抗体を得るために、例えば、以下の配列から選択される腫瘍壊死因子のポリペプチド断片を使用することも可能である。
2018135370.tif 000040
2018135370.tif 000041
2018135370.tif 000042
2018135370.tif 000043
2018135370.tif 000044
2018135370.tif 000045
2018135370.tif 000046
2018135370.tif 000047
2018135370.tif 000048
2018135370.tif 000049
2018135370.tif 000050
【００５５】
生物起源のアミン（化学式Ｃ５Ｈ９Ｎ３の４（２−アミノエチル）−イミダゾール又はβ−イミダゾリルエチルアミン）であるヒスタミンに対するポリクローナル抗体は、アジュバントを使用してＣＤ４に対する抗体を得る上記方法によって得ることができ、ウサギを免疫化するための免疫原（抗原）として商業的に製造されているヒスタミン二塩酸塩であってもよい。
【００５６】
サイトカイン又は受容体の活性化増強型は、最初の溶液からホメオパシーポテンタイゼーションによって、好ましくは、約０．５ｍｇ／ｍＬから約５．０ｍｇ／ｍＬまでにわたる、溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールとの混合物中の抗体の最初の溶液の濃度から出発して、（最初の溶液から開始する）前の溶液のそれぞれの１部を９部（１０倍希釈）、又は９９部（１００倍希釈）、又は９９９部（１，０００倍希釈）の中性の溶媒で段階希釈することによる比例的な濃度低下の方法を外部からの衝撃と併せて用いて調製することができる。外部からの衝撃は、各希釈物を多数回垂直方向に振盪すること（ダイナマイゼーション）を伴うことが好ましい。その後の、所要のポーテンシーレベル、又は希釈因子に至るまでの希釈のそれぞれには別々の容器を使用することが好ましい。この方法は、ホメオパシーの技術分野では広く受け入れられている。例えば、明示された目的で参照により本明細書に組み込まれるＶ．Ｓｃｈｗａｂｅ“Ｈｏｍｅｏｐａｔｈｉｃ  ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ”，Ｍ．，１９６７，ｐ．１４−２９を参照されたい。
【００５７】
例えば、１２−１００倍単位希釈物（Ｃ１２と示される）を調製するために、３．０ｍｇ／ｍＬの濃度のＣＤ４受容体に対する抗体の最初のマトリックス溶液１部を、中性の、水を含む又は水−アルコールを含む溶媒（好ましくは、１５％エチルアルコール）９９部中に希釈し、次いで何回も（１０回以上）垂直方向に振盪して、第１の１００倍単位希釈物（Ｃ１と示される）を創出する。第１の１００倍単位希釈物Ｃ１から第２の１００倍単位希釈物（Ｃ２）を調製する。この手順を１１回繰り返して第１２の１００倍単位希釈物Ｃ１２を調製する。したがって、第１２の１００倍単位希釈物Ｃ１２は、異なる容器内で、３．０ｍｇ／ｍＬの濃度のγインターフェロンに対する抗体の最初のマトリックス溶液１部を中性の溶媒９９部中に１２回段階希釈することによって得られる溶液を表し、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２に相当する。関連する希釈因子を用いて同様の手順を実施して希釈物Ｃ３０、Ｃ５０及びＣ２００を得る。中間希釈物を所望の生物学的モデルにおいて試験して活性を確認することができる。本発明の組成物の好ましい活性化増強型は、Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ５０希釈物の混合物、又はＣ１２、Ｃ３０及びＣ２００希釈物の混合物である。活性な物質の種々のホメオパシー希釈物（主に１００倍単位希釈物）の混合物を生物活性のある液体成分として使用する場合、組成物の各成分（例えば、Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０、Ｃ２００）は、上記の手順に従って、最後から二番目の希釈物が得られるまで（例えば、それぞれＣ１１、Ｃ２９、及びＣ１９９まで）別々に調製し、次いで各成分１部を、混合物の組成に従って１つの容器に加え、所要量（例えば、１００倍希釈するためには９７部）の溶媒と混合する。
【００５８】
例えば、１０倍単位及び／又は１００倍単位（Ｄ２０、Ｃ３０、Ｃ１００又はＣ１２、Ｃ３０、Ｃ５０又はＣ１２、Ｃ３０、Ｃ２００等）等、種々のホメオパシー希釈物の混合物として活性な物質を使用することが可能である。その効率は、適切な生物学的モデル、例えば、本明細書の実施例に記載するモデルにおいて希釈物を試験することによって実験的に決定される。
【００５９】
増強及び濃度低下の過程では、垂直方向に振盪する代わりに、超音波、電磁場又はホメオパシーの技術分野で受け入れられている任意の類似の外部からの衝撃手順に曝露してもよい。
【００６０】
好ましくは、本発明の医薬組成物は、液体の形態又は固体単位剤形とすることができる。好ましい液体担体は、水又は水とエチルアルコールとの混合物である。
【００６１】
本発明の医薬組成物の固体単位剤形は、活性化増強型の活性成分の水溶液又は水−アルコール溶液の混合物を、薬学的に許容される固体担体に浸透させることによって調製することができる。あるいは、必要な希釈物のそれぞれを継続的に担体に浸透させることができる。どちらの浸透の階数も受け入れられる。
【００６２】
好ましくは、固体単位剤形での医薬組成物は、少なくとも１つのサイトカインに対する活性化増強型抗体及び少なくとも１つの受容体に対する活性化増強型抗体の水希釈物又は水−アルコール希釈物を予め染み込ませた薬学的に許容される担体の顆粒剤から調製する。固体剤形は、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ、及びその他を含めた製薬技術分野で公知の任意の形態であってよい。不活性な医薬成分として、医薬品の製造において使用されるグルコース、スクロース、マルトース、デンプン、イソマルトース、イソマルト及び他の単糖、オリゴ糖及び多糖、並びに上記の不活性な医薬成分と、潤滑剤、崩壊剤、結合剤及び着色料を含めた他の薬学的に許容される賦形剤、例えばイソマルト、クロスポビドン、シクラミン酸ナトリウム、サッカリンナトリウム、無水クエン酸等）との技術的混合物を使用することができる。好ましい担体は、ラクトース及びイソマルトである。医薬剤形は、標準の製薬用賦形剤、例えば、結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム、及びクエン酸を更に含んでよい。
【００６３】
固体経口形態を調製するために、ラクトースの１００μｍ〜３００μｍの顆粒を、活性化増強型抗体の水溶液又は水−アルコール溶液に、ラクトース５ｋｇ又は１０ｋｇに対して抗体溶液１ｋｇ（１：５〜１：１０）の比率で浸透させる。浸透を行うために、ラクトース顆粒を、煮沸ベッドプラント（例えば、Ｈｕｔｔｌｉｎ  ＧｍｂＨの「Ｈｕｔｔｌｉｎ  Ｐｉｌｏｔｌａｂ」）中の流動煮沸ベッド中で染み込ませるための注水に曝露させ、その後、４０℃未満の加熱した空気の流れによって乾燥する。活性化増強型抗体を染み込ませた乾燥顆粒（１０重量部〜３４重量部）の推定量をミキサーに入れ、２５重量部〜４５重量部の「染み込ませていない」純粋なラクトース（処理効率を低下させることなく科学技術的なプロセスの費用を縮小し、それを単純化及び加速するために使用する）と、０．１重量部〜１重量部のステアリン酸マグネシウム、及び３重量部〜１０重量部の結晶セルロースと一緒に混合する。得られた錠剤集団を均一に混合し、（例えば、Ｋｏｒｓｃｈ−ＸＬ４００打錠機において）直接乾式プレスすることによって錠剤化して、１５０ｍｇ〜５００ｍｇ、好ましくは、３００ｍｇの丸剤を形成する。錠剤化した後、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ５０の混合物、又は１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００の混合物の形態の活性化増強型抗体の水−アルコール溶液（丸剤１粒当たり３．０ｍｇ〜６．０ｍｇ）を染み込ませた丸剤３００ｍｇを得る。
【００６４】
本発明は、任意の特定の理論に縛られるものではないが、本明細書に記載する抗体の活性化増強型抗体は、このような分子型に起因する生物活性を有するのに十分な量の分子型抗体を含有するものではないと考えられる。本発明の組み合わせ薬（医薬組成物）の生物活性は、添付の実施例に詳細に記載される。
【００６５】
好ましくは、治療目的のために、本発明の組み合わせ物は、１日１回〜１日６回、好ましくは１日２回又は１日４回投与され、各投与は、１つ又は３つの組み合わせ単位剤形を含む。
【００６６】
本発明は、添付の非限定的な実施例を参照して更に例示される。
【実施例】
【００６７】
実施例１
最初のマトリックス溶液（濃度：２．５ｍｇ／ｍＬ）を超希釈（ｓｕｐｅｒ−ｄｉｌｕｔｉｏｎ）（１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍）することによって得られ、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物（比率：１：１）に相当する、超低用量のＣＤ４受容体に対するポリクローナルアフィニティー精製ウサギ活性化増強型抗体（抗ＣＤ４）及びγインターフェロンに対するポリクローナルアフィニティー精製ウサギ活性化増強型抗体（抗ＩＦＮ−γ）を含有する複合調製物（＜＜抗ＣＤ４＋抗ＩＦＮ−γ＞＞）並びにその成分：最初のマトリックス溶液を超希釈（１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍）することによって得られ、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物に相当する、抗原に対して精製されたＣＤ４受容体に対するポリクローナルアフィニティー精製ウサギ活性化増強型抗体（抗ＣＤ４）、並びに、最初のマトリックス溶液を超希釈（１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍）することによって得られ、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物に相当する、γインターフェロンに対するポリクローナルウサギ活性化増強型抗体（「抗ＩＦＮ−γ」）の、標準のリガンドである［３Ｈ］ペンタゾシンとヒト組換え型σ１受容体との結合に対するインビトロにおける効果を、放射性リガンド法を用いて評価した。増強蒸留水（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）を試験調製物の対照として使用した。
【００６８】
シグマ−１（σ１）受容体は、中枢神経系の細胞、末梢組織の大部分の細胞及び免疫コンピテント細胞に局在する細胞内受容体である。この受容体は、細胞内カルシウムのホメオスタシスの制御を介して、細胞内のシグナル伝達事象を調節し、特に感染因子及びサイトカインに対して耐性である因子をコードする遺伝子ファミリー全体の対応する転写因子及び翻訳を活性化させる。この点について、リガンドとシグマ−１受容体との相互作用の効率に影響を及ぼす薬物の能力は、その薬理活性のスペクトルにおける抗ウイルス及び免疫調節成分の存在を示しており、これら調製物を、様々な感染性疾患を治療及び予防するための有効な調製物として考えることを可能にする。
【００６９】
（総結合を測定するための）試験の間、２０μＬの抗ＣＤ４＋抗ＩＦＮ−γ複合調製物又は１０μＬの抗ＣＤ４又は１０μＬの抗ＩＦＮ−γをインキュベーション培地に移した。したがって、複合調製物を試験する際に試験たらいに移したＵＬＤの抗ＣＤ４＋抗ＩＦＮ−γの量は、単一調製物として試験した抗ＣＤ４及びＵＬＤの抗ＩＦＮ−γの量と同一であり、それにより、調製物の効率を、その別々の成分と比較することが可能になる。増強水２０μＬ及び１０μＬをインキュベーション培地に移した。
【００７０】
更に、Ｊｕｒｋａｔ細胞株の膜のホモジネート（ヒト白血病Ｔリンパ球株）１６０μＬ（タンパク質約２００μｇ）、及び最後に、トリチウムで標識した放射性リガンド［３Ｈ］ペンタゾシン（１５ｎｍ）２０μＬを移した。
【００７１】
非特異的な結合を測定するために、標識されていないリガンド−ハロペリドール（１０μＭ）２０μＬを調製物又は増強水の代わりにインキュベーション培地に移した。
【００７２】
５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ＝７．４）中２２℃で１２０分間以内インキュベートし、ガラス繊維フィルター（ＧＦ／Ｂ、Ｐａｃｋａｒｄ）を使用して濾過した後、シンチロメーター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ、Ｐａｃｋａｒｄ）及びシンチレーションブレンド（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ０、Ｐａｃｋａｒｄ）を使用して放射活性を測定した。特異的な結合（試験中又は対照）を総結合（試験中又は対照）と非特異的な結合との差異として算出した。
【００７３】
結果は、対照（蒸留水を対照として使用した）における特異的結合の阻害の百分率（％）として示されている（表１）。
【表１】
2018135370.tif 000051
調製物及び増強水の、標準のリガンドである［３Ｈ］ペンタゾシンとヒト組換え型σ１受容体との結合に対する効果
注：対照における特異的な結合の百分率（％）＝（試験中の特異的な結合／対照における特異的な結合）＊１００％；
対照における特異的な結合の阻害の百分率（％）＝１００％−（試験中の特異的な結合／対照における特異的な結合）＊１００％）
【００７４】
５０％を超える阻害を反映する結果により被試験化合物の有意な効果が示され、２５％から５０％までの阻害により、軽度〜中程度の効果が確認され、２５％未満の阻害は、被試験化合物の効果は有意でなく、バックグラウンドレベルの範囲内であると考えられる。
【００７５】
したがって、この試験モデルにより、抗ＣＤ４＋抗ＩＦＮ−γ複合調製物が、標準の放射性リガンドである［３Ｈ］ペンタゾシンとヒト組換え型σ１受容体との結合を阻害することにおいて、その別々の成分（抗ＣＤ４及び抗ＩＦＮ−γ）よりも効率的であることが示された。試験たらいに移した、すなわち１０μＬの抗ＣＤ４により、標準の放射性リガンドである［３Ｈ］ペンタゾシンとヒト組換え型σ１受容体との結合が阻害されたが、効果の強さは、抗ＣＤ４＋抗ＩＦＮ−γ複合調製物の効果の強さよりも劣る。試験ウェルに移した、すなわち１０μＬの抗ＩＦＮ−γは、標準の放射性リガンドである［３Ｈ］ペンタゾシンとヒト組換え型σ１受容体との結合に対する効果を有さなかった。試験たらいに移した、すなわち、１０μＬ又は２０μＬの増強水は、標準の放射性リガンドである［３Ｈ］ペンタゾシンとヒト組換え型σ１受容体との結合に対する効果を有さなかった。
【００７６】
実施例２（単核細胞；逆転写酵素；「治療」モード）
略語の説明：
・ＴＣＩＤ５０は、５０％組織培養感染量を意味する。
【００７７】
１：１の比率で超低用量のＣＤ４に対するウサギポリクローナル抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）及び超低用量のインターフェロンγに対するウサギポリクローナル抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）を含有する複合薬（以後、複合薬と呼ぶ）、及びその一部を形成する成分（超低用量のＣＤ４に対するウサギポリクローナル抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０（以後、ＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢと呼ぶ）及び超低用量のインターフェロンγに対するウサギポリクローナル抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）（以後ＵＬＤのＩＦＮ−γに対するＡＢと呼ぶ））の抗レトロウイルス活性の評価を、インビトロでＨＩＶ−１−ＬＡＩ株に感染させたヒトの末梢血の単核細胞を使用して実施した。比較薬として、アジドチミジン（Ｓｉｇｍａ−ＡＺ１６９−１００ｍｇ、ロット１０７  Ｋ１５７８）を用いた。
【００７８】
密度勾配ｆｉｃｃｏｌ−ｇｉｐａｑｕｅ中で遠心分離することによって健常血清学的陰性ドナーの血液からヒトの末梢血の単核細胞を分離した。１０％ウシ胎児血清（５６℃以下の温度で４５分間加熱することにより補体を除去）、抗生物質の１％溶液（５０μｇ／ｍＬのペニシリン、５０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び１０μ／ｍＬのネオマイシンを含有するＰＳＮ  Ｇｉｂｃｏ）を添加したＲＰＭＩ１６４０（ＤＩＦＣＯ）培地中の１ｍｋｇ／ｍＬのフィトヘマグルチニンＰ及び５ＭＥ／ｍＬのヒト組換えインターロイキン−２を使用して、３日間細胞を活性化させた。
【００７９】
抗レトロウイルス活性を評価するために、１００ＴＣＩＤ５０の用量のＨＩＶ−１−ＬＡＩ株（５０ｍｋｌのＨＩＶ−１−ＬＡＩ株接種材料）を細胞に混入させた１５分間〜３０分間後、組み合わせ薬をウェルに入れた。細胞感染後７日目に、ＨＩＶの複製を阻害する医薬の影響を評価するために用いる上清を選択した。
【００８０】
１５０μＬの細胞培養物を含有するウェルに入れる前に、最終容積が５０μＬになるまで、ＲＰＭＩ１６４０（ＤＩＦＣＯ）培地で医薬を希釈した。ＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ及びＵＬＤのＩＦＮ−γに対するＡＢをＲＰＭＩ１６４０（ＤＩＦＣＯ）培地で８回希釈した（希釈度１／４）。したがって、複合薬の試験中に実験ウェルに入れられるＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ及びＵＬＤのＩＦＮ−γに対するＡＢの量は、単一成分として試験されるＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ及びＵＬＤのＩＦＮ−γに対するＡＢの量と同様であるので、複合薬とその個別の成分との有効性を比較することが可能になる。８ｎＭの濃度になるまで、アジドチミジンをＲＰＭＩ１６４０（ＤＩＦＣＯ）培地で希釈した。
【００８１】
ＨＩＶ  ＲＴ  ＲｅｔｒｏＳｙｓ作製セット（ＩＮＮＯＶＡＧＥＮ、ロット１０−０５９Ｃ）を使用して、ヒトの末梢血のマクロファージの上清におけるＨＩＶ逆転写酵素の酵素活性によって評価したＨＩＶ複製の阻害により、医薬の効率を定義した。ＨＩＶ複製の阻害割合（％）を計算するために、対照として、被試験薬が導入されていない細胞の上清を用いた（表２を参照されたい）。
【表２】
2018135370.tif 000052
インビトロでＨＩＶ−１−ＬＡＩ株に感染させたヒトの末梢血の単核細胞を使用した医薬の抗レトロウイルス活性
【００８２】
したがって、この実験モデルの条件では、複合薬の抗レトロウイルス活性が、その個別の成分（ＵＬＤのＩＦＮ−γに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ）の抗レトロウイルス活性を上回っていることが示されている。
【００８３】
実施例３（マクロファージ；逆転写酵素；「予防」モード）
略語の説明：
・ＴＣＩＤ５０は、組織培養物の５０％の細胞が感染する量。
【００８４】
１：１の比率で超低用量のＣＤ４に対するウサギポリクローナル抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）及び超低用量のインターフェロンγに対するウサギポリクローナル抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）を含有する複合薬（以後、複合薬と呼ぶ）、及びその一部を形成する成分（超低用量のＣＤ４に対するウサギポリクローナル抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）（以後、ＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢと呼ぶ）及び超低用量のインターフェロンγに対するウサギポリクローナル抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０（以後ＵＬＤのＩＦＮ−γに対するＡＢと呼ぶ））の抗レトロウイルス活性の評価を、インビトロでＨＩＶ−１−ＬＡＩ株に感染させたヒトの末梢血の単核細胞から採取したマクロファージを使用して実施した。比較薬として、アジドチミジン（Ｓｉｇｍａ−ＡＺ１６９−１００ｍｇ、ロット１０７  Ｋ１５７８）を用いた。
【００８５】
ヒトの末梢血の単核細胞から採取したドナーの末梢血のマクロファージを、密度勾配ｆｉｃｃｏｌ−ｇｉｐａｑｕｅ中で遠心分離することによって２人の健常血清学的陰性ドナーの血液から単離した。１０％ウシ胎児血清（５６℃以下の温度で４５分間加熱することにより補体を除去）、抗生物質の１％溶液（５０μｇ／ｍＬのペニシリン、５０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び１００μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有するＰＳＮ  Ｇｉｂｃｏ）、１５ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）を添加したＲＰＭＩ１６４０（ＤＩＦＣＯ）培地中で３日間ヒトの末梢血の単核細胞を増殖させた。次いで、細胞を培養プレートに入れ（４８ウェルプレートにおいて１５０，０００細胞／ウェル）、１ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）及び１０ｎｇ／ｍＬのＭ−ＣＳＦ（マクロファージコロニー刺激因子）と共に７日間増殖させて、細胞をマクロファージに完全に分化させることができた。
【００８６】
抗レトロウイルス活性を評価するために、１，０００ＴＣＩＤ５０の用量のＨＩＶ−１−ＬＡＩ株（１００ｍｋｌのＨＩＶ−１−Ｂａ−Ｌ株の接種材料）を細胞に混入させる２４時間前、及び混入後３日目、７日目、１０日目、１４日目、１７日目に、組み合わせ薬をウェルに入れた。細胞感染後３日目、７日目、１０日目、１４日目、１７日目に、ＨＩＶの複製を阻害する医薬の影響を評価するために用いる上清を選択した。
【００８７】
７５０μＬの細胞培養物を含有するウェルに入れる前に、最終容積が２５０μＬになるまで、ＲＰＭＩ１６４０（ＤＩＦＣＯ）培地で医薬を希釈した。ＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ及びＵＬＤのＩＦＮ−γに対するＡＢをＲＰＭＩ１６４０（ＤＩＦＣＯ）培地で８倍希釈した（希釈度１／４）。したがって、複合薬の試験中に実験ウェルに入れられるＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ及びＵＬＤのＩＦＮ−γに対するＡＢの量は、単一成分として試験されるＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ及びＵＬＤのＩＦＮ−γに対するＡＢの量と同様であるので、複合薬とその個別の成分との有効性を比較することが可能になる。８ｎＭの濃度になるまで、アジドチミジンをＲＰＭＩ１６４０（ＤＩＦＣＯ）培地で希釈した。
【００８８】
ＨＩＶ  ＲＴ  ＲｅｔｒｏＳｙｓ作製セット（ＩＮＮＯＶＡＧＥＮ、ロット１０−０５９Ｃ）を使用して、ヒトの末梢血の上清マクロファージの上清におけるＨＩＶ逆転写酵素の酵素活性によって評価したＨＩＶ複製の阻害により医薬の効率を定義した。ＨＩＶ複製の阻害割合（％）を計算するために、対照として、被試験薬又はアジドチミジンが導入されていない細胞の上清を用いた（表３及び４を参照されたい）。
【表３】
2018135370.tif 000053
インビトロでＨＩＶ−１−Ｂａ−Ｌ株を感染させたヒトの末梢血のマクロファージ（ドナーＮｏ．１）を使用した医薬の抗レトロウイルス活性
【表４】
2018135370.tif 000054
インビトロでＨＩＶ−１−Ｂａ−Ｌ株を感染させたヒトの末梢血のマクロファージ（ドナーＮｏ．２）を使用した医薬の抗レトロウイルス活性
【００８９】
したがって、この実験モデルの条件では、以下が示されている：
１．  複合薬の抗レトロウイルス活性は、その個別の成分（ＵＬＤのＩＦＮ−γに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ）の抗レトロウイルス活性を上回っている。
２．  複合薬の抗レトロウイルス活性は、その個別の成分（ＵＬＤのＩＦＮ−γに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ）の抗レトロウイルス活性とは対照的に、全実験期間中に亘って持続する。
３．  複合薬のみが、異なる血清学的陰性ドナーから採取したヒトの末梢血の感染マクロファージのインビトロモデルにおいて抗レトロウイルス活性を示した。これは、複合薬が、その成分（ＵＬＤのＩＦＮ−γに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ）に比べてより顕著な抗レトロウイルス効果を有する証拠であり、その抗レトロウイルス活性は、１人の血清学的陰性ドナーからのみ採取したヒトの末梢血の感染マクロファージのインビトロモデルで記録された。
【００９０】
実施例４（単核細胞；逆転写酵素；治療レジメン）
略語の説明：
・ＴＣＩＤ５０は、５０％組織培養感染量を意味する。
【００９１】
１：１：１：１の比率の超低用量のインターフェロンαに対するウサギポリクローナル抗体、超低用量のインターフェロンγに対するウサギポリクローナル抗体、超低用量のＣＤ４に対するウサギポリクローナル抗体、及び超低用量のＣＤ８に対するウサギポリクローナル抗体からなる複合生成物（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）（以後、複合生成物と呼ぶ）の抗レトロウイルス活性の評価を、インビトロでＨＩＶ−１ＬＡＩ株を感染させたヒトの末梢血の単核細胞を用いて実施した。比較生成物としてアジドチミジン（Ｓｉｇｍａ−ＡＺ１６９−１００  ｍｇ、ロット１０７  Ｋ１５７８）を用いた。
【００９２】
ヒトの末梢血の単核細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配中で遠心分離することによって健常血清学的陰性ドナーの血液から単離した。１０％ウシ胎児血清（５６℃の温度で４５分間加熱することにより補体を除去）、抗生物質の１％溶液（５０μｇ／ｍＬのペニシリン、５０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び１０μｇ／ｍＬのネオマイシンを含有するＰＳＮ  Ｇｉｂｃｏ）を添加したＲＰＭＩ１６４０（ＤＩＦＣＯ）培地中の１μｇ／ｍＬのフィトヘマグルチニンＰ及び５ＩＵ／ｍＬのヒト組換えインターロイキン−２を使用して、３日間細胞を刺激した。
【００９３】
抗レトロウイルス活性を評価するために、１００ＴＣＩＤ５０の用量のＨＩＶ−１−ＬＡＩ株（５０μＬのＨＩＶ−１−ＬＡＩ株接種材料）を細胞に感染させた１５分間〜３０分間後、生成物をウェルに入れた。また、細胞感染後７日目に、ＨＩＶの複製の阻害に対する生成物の影響を評価するために用いる上清流体を回収した。
【００９４】
１５０μＬの細胞培養物を含有するウェルに入れる前に、最終容積が５０μＬになるまで、ＲＰＭＩ１６４０（ＤＩＦＣＯ）培地で複合生成物を４倍（１／４希釈）希釈した。８ｎＭの濃度になるまで、アジドチミジンをＲＰＭＩ１６４０（ＤＩＦＣＯ）培地で希釈した。
【００９５】
ＩＮＮＯＶＡＧＥＮ製のＨＩＶ  ＲＴ  ＲｅｔｒｏＳｙｓキット（ロット１０−０５９Ｃ）を使用して、ヒトの末梢血の単核細胞由来の上清流体におけるＨＩＶ逆転写酵素活性によって評価したＨＩＶ複製の阻害により生成物の有効性を確立した。ＨＩＶ複製の阻害割合を計算するために、対照として、試験生成物又はアジドチミジンが接種されていない細胞の上清流体を用いた（表５を参照されたい）。
【表５】
2018135370.tif 000055
インビトロでＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を感染させたヒトの末梢血の単核細胞を使用した複合生成物の抗レトロウイルス活性
【００９６】
したがって、この実験モデルは、１：１：１：１の比率の超低用量のインターフェロンαに対するウサギポリクローナル抗体、超低用量のインターフェロンγに対するウサギポリクローナル抗体、超低用量のＣＤ４に対するウサギポリクローナル抗体、及び超低用量のＣＤ８に対するウサギポリクローナル抗体を含む複合生成物（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）の抗レトロウイルス活性を示した。
【００９７】
実施例５（単核細胞；ヌクレオカプシドタンパク質ｐ２４；予防及び治療レジメン）
超低用量のインターフェロンαに対するウサギポリクローナル抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）、超低用量のインターフェロンγに対するウサギポリクローナル抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）（ＵＬＤのＩＦＮ−γ）、超低用量のＣＤ４受容体に対するウサギポリクローナル抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）、及び超低用量のＣＤ８受容体に対するウサギポリクローナル抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）（ＵＬＤ  Ａｂ  ＩＦＮα＋ＩＦＮγ＋ＣＤ４＋ＣＤ８）の抗レトロウイルス活性の評価を、インビトロでＨＩＶ−１−ＬＡＩ株に感染させたヒトの末梢血の単核細胞を使用して実施した。
【００９８】
ヒトの末梢血の単核細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配中で遠心分離することによって健常血清学的陰性ドナーの血液から単離した。１μｇ／ｍＬのフィトヘマグルチニンＰ及び５ＩＵ／ｍＬの組換えヒトインターロイキン−２を使用して、３日間細胞を刺激した。
【００９９】
抗レトロウイルス活性を評価するために、１００ＴＣＩＤ５０の用量のＨＩＶ−１−ＬＡＩ株（５０μＬのＨＩＶ−１−ＬＡＩ株接種材料）を細胞に感染させる２４時間前又は１５分間後、１００μＬの活性化単核を含有するウェルに生成物を入れた。細胞感染後７日目に、ＨＩＶの複製を阻害する医薬の影響を評価するために用いる上清を選択した。ウェルに添加する前に、最終プローブ容積が５０μＬになるまで、ＵＬＤ  Ａｂ  ＩＦＮα＋ＩＦＮγ＋ＣＤ４＋ＣＤ８（１２．５μＬ）又はレファレンスのアジドチミジン（１，０００ｎＭ）をＲＰＭＩ１６４０（ＤＩＦＣＯ）培地と混合した。
【０１００】
細胞の感染後７日目に、上清流体を回収した。Ｒｅｔｒｏｔｅｋ  Ｅｌｉｓａキットを用いてヒトの末梢血の単核細胞由来の上清流体中でコアヌクレオカプシドタンパク質ｐ２４のレベルによって評価したＨＩＶ複製の阻害によって、生成物の活性を測定した。
【０１０１】
ＵＬＤ  Ａｂ  ＩＦＮα＋ＩＦＮγ＋ＣＤ４＋ＣＤ８は、感染の２４時間前にウェルに添加したときには９４±６％、ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を細胞に感染させた１５分間後にウェルに添加したときには４６±１３％、ＨＩＶの複製を阻害することが示された。１，０００ｎＭの用量のアジドチミジンは、それぞれ、ＨＩＶ−１−ＬＡＩ株を細胞に感染させる２４時間前及び１５分間後にウェルに添加したとき、ＨＩＶの複製を９９±０％及び９９±１％阻害した。
【０１０２】
したがって、この実験モデルは、ＵＬＤ  Ａｂ  ＩＦＮα＋ＩＦＮγ＋ＣＤ４＋ＣＤ８（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）に対する超低用量のウサギポリクローナル抗体の抗レトロウイルス活性を示した。
【０１０３】
実施例６
Ｂａｌｂ／ｃ系統の雌マウスをインフルエンザに感染させた場合の、超低用量のインターフェロンαに対する抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）（以後、ＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢと呼ぶ）及び超低用量のＣＤ４に対する抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）（以後、ＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢと呼ぶ）の組み合わせ使用と、ＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの個別使用との有効性を、２段階でＦＳＢＩ“ＳＲＩ  ｏｆ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ”Ｍｉｎｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｈｅａｌｔｈ  ｏｆ  ｓｏｃｉａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒｕｓｓｉａ（Ｓａｉｎｔ  Ｐｅｔｅｒｓｂｕｒｇ）に基づいて実施した。第１段階では、ＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの有効性を調べ、第２段階では、（１：１の比率の）ＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの組み合わせ使用（以後、組み合わせ医薬と呼ぶ）の有効性を調べた。組み合わせ医薬の試験中、並びにＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの試験中、比較薬としてオセルタミビルを使用した。
【０１０４】
感染プロセスは、１０ＬＤ５０の用量のインフルエンザウイルスＡ／カリフォルニア／０７／２００９ｓｗｌ（Ｈ１Ｎ１）を鼻腔内に導入することにより刺激した。
【０１０５】
ＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢ、ＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ、及び組み合わせ医薬を、感染前５日間及び感染後１０日間、１日２回０．２ｍＬ／マウス（日用量０．４ｍＬ／マウス）でマウス（各群ｎ＝２０）に胃内導入した。更に、ＩＦＮαに対するＡＢ、ＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ、及び組み合わせ医薬を、対応する実験群の動物の飲水用ボウルに添加した（自由に摂取させた）。
【０１０６】
レファレンス薬であるオセルタミビルを、感染開始の１時間前に始めて、１０ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回（日用量２０ｍｇ／ｋｇ）、マウス（ｎ＝２０）に胃内導入した。オセルタミビルは、感染後５日間導入した。感染前４日間及び感染後最初の６日間、１日２回０．２ｍＬ／マウスの用量（日用量０．４ｍＬ／マウス）の蒸留水を、オセルタミビルの代わりにこの実験群のマウスに胃内導入した。１日２回０．２ｍＬ／マウスの用量（日用量０．４ｍＬ／マウス）の蒸留水を、対照群のマウス（ｎ＝２０）に胃内導入した。全実験期間中、これら２実験群の動物の飲水用ボウルは、蒸留水を含有していた（自由に摂取させた）。
【０１０７】
動物の生存率によって医薬の有効性を評価した。ＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの抗ウイルス活性の試験結果（段階１）については、表６を参照されたい。組み合わせ医薬の抗ウイルス活性の試験結果（段階２）については、表７を参照されたい。実験群と対照（蒸留水）との間の差の統計的有意性を、ノンパラメトリックなカイ二乗基準を用いて計算した。
【表６】
2018135370.tif 000056
１０ＬＤ５０の用量のインフルエンザウイルスＡ／カリフォルニア／０７／２００９ｓｗｌ（Ｈ１Ｎ１）を鼻腔内に導入することにより感染させた雌のＢａｌｂ／ｃマウスのインフルエンザ感染モデルにおけるＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの抗ウイルス活性（感染後１０日目）
【表７】
2018135370.tif 000057
１０ＬＤ５０の用量のインフルエンザウイルスＡ／カリフォルニア／０７／２００９ｓｗｌ（Ｈ１Ｎ１）を鼻腔内に導入することにより感染させた雌のＢａｌｂ／ｃマウスのインフルエンザ感染モデルにおけるＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢを含有する組み合わせ医薬の抗ウイルス活性（感染後１０日目）
【０１０８】
１０ＬＤ５０の用量のインフルエンザＡ／カリフォルニア／０７／２００９ｓｗｌ（Ｈ１Ｎ１）を感染させたマウスの生存率は、段階２よりも段階１の方が高いことが示された。蒸留水を投与した群の生存率は、それぞれ２０％及び５％であり、比較薬であるオセルタミビルの群の生存率は、それぞれ８０％及び７０％であった。これは、試験の段階２において、１０ＬＤ５０の用量のインフルエンザウイルスＡ／カリフォルニア／０７／２００９ｓｗｌ（Ｈ１Ｎ１）の鼻腔内導入によってより顕著な致死性作用が誘導された証拠である。
【０１０９】
しかし、対照と比較して、組み合わせ医薬は、１０ＬＤ５０の用量のインフルエンザウイルスＡ／カリフォルニア／０７／２００９ｓｗｌ（Ｈ１Ｎ１）に感染した実験動物の生存率を２５％増加させた。一方、ＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢを投与した群の生存率は、対照群の生存率よりも僅か５％しか高くなく、ＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢを投与した群の生存率は、対照群の生存率よりも僅か１０％しか高くなかった。
【０１１０】
したがって、実施した試験の結果として、組み合わせ医薬の一部としてのＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの用量が、個別の医薬として試験したＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの用量よりも２倍少ないという事実にも関わらず、ＵＬＤのＩＦＮαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの組み合わせ使用（組み合わせ医薬）が、個別の成分よりも顕著な抗ウイルス効果を提供することが示された。
【０１１１】
実施例７
Ｂａｌｂ／ｃ系統の雌マウスをインフルエンザに感染させた場合の、超低用量の腫瘍壊死因子αに対する抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）（以後、ＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢと呼ぶ）及び超低用量のＣＤ４に対する抗体（ホメオパシー希釈物の混合物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０）（以後、ＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢと呼ぶ）の組み合わせ使用と、ＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの個別使用との有効性を、２段階でＦＳＢＩ“ＳＲＩ  ｏｆ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ”Ｍｉｎｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｈｅａｌｔｈ  ｏｆ  ｓｏｃｉａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒｕｓｓｉａ（Ｓａｉｎｔ  Ｐｅｔｅｒｓｂｕｒｇ）に基づいて実施した。第１段階では、ＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの有効性を調べ、第２段階では、（１：１の比率の）ＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの組み合わせ使用（以後、組み合わせ医薬と呼ぶ）の有効性を調べた。組み合わせ医薬の試験中、並びにＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの試験中、比較薬としてオセルタミビルを使用した。
【０１１２】
感染プロセスは、１０ＬＤ５０の用量のインフルエンザウイルスＡ／カリフォルニア／０７／２００９ｓｗｌ（Ｈ１Ｎ１）を鼻腔内に導入することにより刺激した。
【０１１３】
ＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢ、ＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ、及び組み合わせ医薬を、感染前５日間及び感染後１０日間、１日２回０．２ｍＬ／マウス（日用量０．４ｍＬ／マウス）でマウス（各群ｎ＝２０）に胃内導入した。更に、ＴＮＦαに対するＡＢ、ＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢ、及び組み合わせ医薬を、対応する実験群の動物の飲水用ボウルに添加した（自由に摂取させた）。
【０１１４】
レファレンス薬であるオセルタミビルを、感染の１時間前から始めて１０ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回（日用量２０ｍｇ／ｋｇ）、マウス（ｎ＝２０）に胃内導入した。オセルタミビルは、感染後５日間導入した。感染前４日間及び感染後最初の６日間、１日２回０．２ｍＬ／マウスの用量（日用量０．４ｍＬ／マウス）の蒸留水を、オセルタミビルの代わりにこの実験群のマウスに胃内導入した。１日２回０．２ｍＬ／マウスの用量（日用量０．４ｍＬ／マウス）の蒸留水を、対照群のマウス（ｎ＝２０）に胃内導入した。全実験期間中、これら２実験群の動物の飲水用ボウルは、蒸留水を含有していた（自由に摂取させた）。
【０１１５】
動物の生存率によって医薬の有効性を評価した。ＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの抗ウイルス活性の試験結果（段階１）については、表８を参照されたい。組み合わせ医薬の抗ウイルス活性の試験結果（段階２）については、表９を参照されたい。実験群と対照（蒸留水）との間の差の統計的有意性を、ノンパラメトリックなカイ二乗基準を用いて計算した。
【表８】
2018135370.tif 000058
１０ＬＤ５０の用量のインフルエンザウイルスＡ／カリフォルニア／０７／２００９ｓｗｌ（Ｈ１Ｎ１）を鼻腔内に導入することにより感染させた雌のＢａｌｂ／ｃマウスのインフルエンザ感染モデルにおけるＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの抗ウイルス活性（感染後１０日目）
【表９】
2018135370.tif 000059
１０ＬＤ５０の用量のインフルエンザウイルスＡ／カリフォルニア／０７／２００９ｓｗｌ（Ｈ１Ｎ１）を鼻腔内に導入することにより感染させた雌のＢａｌｂ／ｃマウスのインフルエンザ感染モデルにおけるＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢを含有する組み合わせ医薬の抗ウイルス活性（感染後１０日目）
【０１１６】
１０ＬＤ５０の用量のインフルエンザＡ／カリフォルニア／０７／２００９ｓｗｌ（Ｈ１Ｎ１）を感染させたマウスの生存率は、段階２よりも段階１の方が高いことが示された。蒸留水を投与した群の生存率は、それぞれ２０％及び５％であり、比較薬であるオセルタミビルの群の生存率は、それぞれ８０％及び７０％であった。これは、試験の段階２において、１０ＬＤ５０の用量のインフルエンザウイルスＡ／カリフォルニア／０７／２００９ｓｗｌ（Ｈ１Ｎ１）の鼻腔内導入によってより明確な致死性作用が誘導された証拠である。
【０１１７】
しかし、対照と比較して、組み合わせ医薬は、１０ＬＤ５０の用量のインフルエンザウイルスＡ／カリフォルニア／０７／２００９ｓｗｌ（Ｈ１Ｎ１）に感染した実験動物の生存率を２５％増加させた。一方、ＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢを投与した群の生存率は、対照群の生存率よりも僅か５％しか高くなく、ＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢを投与した群の生存率は、対照群の生存率よりも僅か１０％しか高くなかった。
【０１１８】
したがって、実施した試験の結果として、組み合わせ医薬の一部としてのＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの用量が、個別の医薬として試験したＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの用量よりも２倍少ないという事実にも関わらず、ＵＬＤのＴＮＦαに対するＡＢ及びＵＬＤのＣＤ４に対するＡＢの組み合わせ使用（組み合わせ医薬）は、個別の成分よりも顕著な抗ウイルス効果を提供することが示された。
【０１１９】
実施例８
それぞれホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ２００の混合物の水アルコール溶液の形態でラクトースに浸透させた超低用量（ＵＬＤ）のインターフェロンγに対する活性化増強型抗体（Ａｂ  ＩＦＮγ）、ＣＤ４に対する活性化増強型抗体（Ａｂ  ＣＤ４）、ヒスタミンに対する活性化増強型抗体（Ａｂ  Ｈｉｓ）を含有する医薬組成物（錠剤）（Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ）を試験で用いた。
【０１２０】
現在実施されている二重盲検プラセボ対照試験には、中毒、カタル性徴候を伴うウイルス性ＵＲＩに罹患している１８歳〜６０歳の男性及び女性が登録されている。体温が３７．８℃以上（但し、体温は、疾患の発症時に測定する）であり、疾患期間が治療開始時間までに４８時間を超えておらず、重篤な合併症を有していない患者を試験に組み入れた。インフルエンザウイルス抗原を検出するための発現試験を実施した。試験結果が陽性であった患者は、試験に組み入れなかった。全ての手順を開始する前に、患者は、試験に参加するための説明に基づく同意書にサインした。患者に日記帳を配布し、１日２回の体温、併用療法等を記録させた。患者には、１日目には１日８錠及び２日目〜５日目には１日３錠の用量でＡｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ又はプラセボを患者に投与した。必要に応じて、患者に解熱剤を投与した。抗ウイルス剤、免疫調節剤、抗ヒスタミン剤、及び抗生物質は、服用させない。治療の開始前及び最後の来診時に、実施した治療の安全性をモニタする目的で実験パラメータを評価するために血液及び尿のサンプルを回収する。全治療期間は、５日間であり、フォローアップ観察期間は、２日間である。したがって、各患者の試験参加期間は、７日間である。
【０１２１】
体温が３７．０℃以下に低下するまでの時間を、治療効果の基準とみなした。更に、服用した解熱剤の数を比較した。
【０１２２】
分析を実施するまでに、７８人の患者が治療を終了した（４０人の患者にＡｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓを投与し、３８人の患者にプラセボを投与した）。体温が３７．０℃以下に低下した患者の比率を図１に示す。この図は、Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓの投与により、治療の開始から２日目の終わりまでに、プラセボ群と比較して患者の体温が１７．４％低下したことを示す（ｐ＜０．０５）。更に、両群における解熱剤の服用数は、抗Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ群で有意に少なかった（プラセボ群の３．９±０．３２個に対して、治療の２日目の終わりまでに３．５±０．２５個の解熱剤を服用、ｐ＜０．０５）。Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓがプラセボ群よりも優れていることは、治療の２日目の朝に早くもみられ、全治療期間に亘って持続した。
【０１２３】
試験に参加し、規定の期間内に治療を終えた７８人の患者全てのデータを安全性分析に組み入れた。患者の脱落は、記録されなかった。全観察期間に亘って良好な薬物耐容性がみられた。Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ投与に関連する有害事象は記録されなかった。治療の開始時及び終了時に実施した血液検査は、正常値からの病理的逸脱を全く示さなかった。試験の１日目及び最後の日に行った尿検査でも、全ての患者において病理学的変化はみられなかった。
【０１２４】
インフルエンザにおけるＡｂ  ＩＦＮγ投与の臨床的有効性及び安全性の二重盲検プラセボ対照無作為化試験中に得られた結果のデータと、２００５年に実施された他のウイルス性ＵＲＩ試験（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ＲＩ，ＲＡＭＳ，Ｓａｉｎｔ−Ｐｅｔｅｒｓｂｕｒｇ，２００５）の結果のデータとを比較したところ、Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓは、Ａｂ  ＩＦＮγよりも有効に体温を低下させることが明らかになった（図１、表１０、及び表１１）。
【表１０】
2018135370.tif 000060
Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ／プラセボ投与を背景として、体温が３７．０℃以下に低下した患者の割合
【表１１】
2018135370.tif 000061
治療群に依存する患者の体温の平均値（℃、Ｍ±ＳＤ）
【０１２５】
実施例９
それぞれホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ２００の水アルコール混合物の形態でラクトースに浸透させた超低用量（ＵＬＤ）のインターフェロンγに対する活性化増強型抗体（Ａｂ  ＩＦＮγ）、ＣＤ４に対する活性化増強型抗体（Ａｂ  ＣＤ４）、ヒスタミンに対する活性化増強型抗体（Ａｂ  Ｈｉｓ）を含有する医薬組成物（錠剤）（Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ）を試験で用いた。
【０１２６】
現在実施されているＡｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ及びタミフル（登録商標）（Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｌｔｄ−Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、オセルタミビル）の非盲検比較対照臨床試験には、中毒、カタル性徴候を伴うインフルエンザに罹患している１８歳〜６０歳の男性及び女性が登録されている。体温が３７．８℃以上（但し、体温は、疾患の発症時に測定する）であり、疾患期間が治療開始時間までに４８時間を超えておらず、重篤な合併症を有していない患者を試験に組み入れた。インフルエンザウイルス抗原を検出するための発現試験を実施した。試験結果が陽性であった患者を試験に組み入れた。全ての手順を開始する前に、患者は、試験に参加するために説明に基づく同意書にサインした。患者に日記帳を配布し、１日２回の体温、併用療法等を記録させた。患者の情報リーフレットに従って、患者には、１日目には１日８錠及び２日目〜５日目には１日３錠の用量のＡｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ又は７５ｍｇ  ２ＴＩＤの用量のタミフルを投与した。必要に応じて、患者に解熱剤を投与した。抗ウイルス剤、免疫調節剤、抗ヒスタミン剤、及び抗生物質は、服用させない。治療の開始前及び最後の来診時に、実施した治療の安全性をモニタする目的で実験パラメータを評価するために血液及び尿のサンプルを回収する。全治療期間は、５日間であり、フォローアップ観察期間は、２日間である。したがって、各患者の試験参加期間は、７日間である。
【０１２７】
体温が３７．０℃以下に低下するまでの時間を、治療効果の基準とみなした。更に、服用した解熱剤の数を比較した。
【０１２８】
分析を実施するまでに、１７人の患者が治療を終了した（６人の患者がＡｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ群であり、１１人の患者がオセルタミビル群である）。
【０１２９】
両群における体温が３７．０℃以下に低下した患者の割合は、治療過程において有意に異なってはいなかった。早くも治療の４日目までに、両群の患者は実質的に回復した（図２を参照されたい）。早くも治療の２日目までに、両群の患者の１／３において、体温の正常化が記録された。また、服用した解熱剤の平均数の差も有意ではなく、治療の４日目の朝までに、Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ投与群では７．６±０．８個、オセルタミビル群では７．４±０．９０個であった。
【０１３０】
試験に参加し、規定の期間内に治療を終えた１７人の患者全てのデータを安全性分析に組み入れた。患者の脱落は、記録されなかった。全観察期間に亘って良好な薬物耐容性がみられた。Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ投与に関連する有害事象は記録されなかった。治療の開始時及び終了時に実施した血液検査は、正常値からの病理的逸脱を全く示さなかった。試験の１日目及び最後の日に行った尿検査でも、全ての患者において病理学的変化はみられなかった。
【０１３１】
インフルエンザにおけるＡｂ  ＩＦＮγ投与の臨床的有効性及び安全性の二重盲検プラセボ対照無作為化試験中に得られた結果のデータと、２００５年に実施された他のウイルス性ＵＲＩ試験（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ＲＩ，ＲＡＭＳ，Ｓａｉｎｔ−Ｐｅｔｅｒｓｂｕｒｇ，２００５）の結果のデータを比較したところ、Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓは、Ａｂ  ＩＦＮγよりも有効に体温を低下させることが明らかになった（図２、表１２、及び表１３）。
【表１２】
2018135370.tif 000062
Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ／プラセボ投与を背景として、体温が３７．０℃以下に低下した患者の割合
【表１３】
2018135370.tif 000063
治療群に依存する患者の体温の平均値（℃、Ｍ±ＳＤ）
【０１３２】
実施例１０
それぞれホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ２００の水アルコール混合物の形態でラクトースに浸透させた超低用量（ＵＬＤ）のインターフェロンγに対する活性化増強型抗体（Ａｂ  ＩＦＮγ）、ＣＤ４に対する活性化増強型（Ａｂ  ＣＤ４）、ヒスタミンに対する活性化増強型抗体（Ａｂ  Ｈｉｓ）を含有する医薬組成物（錠剤）（Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓ）を試験で用いた。
【０１３３】
ウイルス性ＵＲＩにおけるＡｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓの有効性及び安全性の二重盲検プラセボ対照試験（実施例８）及びインフルエンザにおけるＡｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓの有効性及び安全性の非盲検比較試験（実施例９）において、急性感染プロセス背景として発現した細菌性疾患（細菌性の肺炎、気管炎、耳炎、糸球体腎炎等）を含む合併症の数を更に評価した。
【０１３４】
身体の防御系が適切に機能している場合、感染プロセスを阻止するか又は限局化することができるので、明らかな臨床的症状の発現には至らない。即ち、適切な防御反応は、速やかな感染因子の不活性化、損なわれた身体機能の修復、及び回復をもたらす。感染因子に対する感受性が高く、且つ適切な特異的及び非特異的な防御機構を有しない被験体（免疫不全患者）では、異なる状況がみられ得る。このような状況では、次々に複製される感染因子、並びに前記感染因子と上皮細胞及び免疫細胞との相互作用産物、並びに損傷した細胞が血液中に侵入して、重篤な疾患経過を発現させ、合併症を発現させ、且つ転帰不良を引き起こす可能性がある。
【０１３５】
インフルエンザ及びウイルス性ＵＲＩにおけるＡｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓの使用は、プラセボと比較して細菌性合併症の頻度を著しく低減し（表１４）、延いては、抗細菌治療を減少させた。薬物は、免疫調節効果を発揮し、身体の自然防御を強化する回復段階における続発性免疫不全の発現を阻害すると考えられる。Ａｂ  ＩＦＮγ＋Ａｂ  ＣＤ４＋Ａｂ  Ｈｉｓが細菌性合併症の発現頻度を低下させる能力は、Ａｂ  ＩＦＮγを上回っていた。
【表１４】
2018135370.tif 000064
細菌性合併症の頻度
【０１３６】
実施例１１
第１群の患者を治療するための医薬組成物の活性を試験するために、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物に相当する、最初のマトリクス溶液を１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍に超希釈することによって得られる超低用量（ＵＬＤ）のヒトインターフェロンγ（抗ＩＦＮγ）及びＣＤ４（抗ＣＤ４）に対する活性化増強型ウサギポリクローナルアフィニティー精製抗体の水アルコール溶液を含有する医薬組成物（６ｍｇ／錠）を浸透させた３００ｍｇの錠剤を用い；第２群の患者を治療するための医薬組成物の活性を試験するために、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物に相当する、最初のマトリクス溶液を１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍に超希釈することによって得られる超低用量（ＵＬＤ）のヒトインターフェロンγ（抗ＩＦＮγ）及びＣＤ４（抗ＣＤ４）及びヒスタミン（抗Ｈｉｓ）に対する活性化増強型ウサギポリクローナルアフィニティー精製抗体の水アルコール溶液を含有する医薬組成物（６ｍｇ／錠）を浸透させた３００ｍｇの錠剤を用い；第３群の患者を治療するための医薬組成物の活性を試験するために、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物に相当する、最初のマトリクス溶液を１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍に超希釈することによって得られる超低用量（ＵＬＤ）のヒトインターフェロンγ（抗ＩＦＮγ）に対する活性化増強型ウサギポリクローナルアフィニティー精製抗体の水アルコール溶液を含有する医薬組成物（３ｍｇ／錠）を浸透させた３００ｍｇの錠剤を用いた。
【０１３７】
医薬組成物ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４、及びＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓの抗レトロウイルス活性を、ＡＩＤＳ及び感染性疾患を予防及び治療するための地域センターにおけるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染患者が参加した非盲検比較臨床試験の過程において評価した。試験には、１８歳〜４８歳の、血漿中のＨＩＶ−１  ＲＮＡのウイルス量が１５０コピー／ｍＬ以上であり、且つＣＤ４リンパ球数が２５０細胞／μＬ以上（即ち、０．２５×１０９／Ｌ以上）である９７人の患者（男性６５人及び女性３２人）が組み入れられた。９７人の試験参加者のうちの３４人は、治療未経験患者であった。９７人の患者のうちの６３人は、１年間又は２年間、抗レトロウイルス治療（ＡＲＴ）を受けていた。肝硬変、ウイルス性Ｃ型肝炎、悪化期間中の重篤な随伴疾患を有する患者、妊婦、並びに静脈内に麻酔性物質が投与されている患者は、試験に組み入れなかった。季節性インフルエンザ及び急性呼吸器ウイルス感染症が流行する秋から冬にかけて試験を実施した。
【０１３８】
６週間に亘って１日１回１錠、ＡＲＶＩ予防に対応するレジメンにおいて試験医薬組成物（第１群及び第２群）又はレファレンス医薬組成物（第３群）のいずれかを処方する３群に、７５人の試験参加者を無作為に分けた。
・  第１群の患者（ｎ＝２５）には、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４（下位群１Ａ：治療未経験患者、ｎ＝１２）又はＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋ＡＲＴ（下位群１Ｂ：ｎ＝１３）を処方した；
・  第２群の患者（ｎ＝２３）には、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓ（下位群２Ａ：治療未経験患者、ｎ＝１１）又はＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓ＋ＡＲＴ（下位群２Ｂ：ｎ＝１２）を処方した；
・  第３群の患者（ｎ＝２７）には、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ（下位群３Ａ：治療未経験患者、ｎ＝１１）又はＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋ＡＲＴ（下位群３Ｂ：ｎ＝１６）を処方した。
【０１３９】
対照群（第４群、ｎ＝２２）には、以前の処方に従ってＡＲＴのみを継続して受ける患者が含まれていた（ＡＲＴ群）。
【０１４０】
ベースライン時及び６週間の治療後、ウイルス量、ＣＤ４及びＣＤ８のリンパ球数、ＣＤ４／ＣＤ８免疫調節指数を全ての患者において調べた。血漿中のＨＩＶ−１  ＲＮＡコピーを検出するために、ＣＯＢＡＳ  ＡＭＰＬＩＣＯＲ  ＨＩＶ−１  ＭＯＮＩＴＯＲキット（自動ＰＣＲ分析機СＯＢＡＳ  ＡＭＰＬＩＣＯＲ，Ｒｏｃｈｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄのバージョン１．５）を用いた。末梢血循環リンパ球の表現型解析は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８に対するＦＩＴＣ  ＰＥ蛍光色素標識抗体を含有するＦＡＣＳＣｏｕｎｔ試薬キットを用いてフローサイトフルオロメーターＦＡＣＳＣоｕｎｔ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＵＳＡ）において実施した。
【０１４１】
ウイルス量のデータ（ＨＣＶ  ＲＮＡのコピー数）を、メジアン（Ｍｅ）及び第１四分位数と第３四分位数との間の範囲［Ｑ１−Ｑ３］として表１５に表す。試験結果は、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４による６週間の治療が、５８％の治療未経験患者（下位群１Ａの１２人のうちの７人）においてＲＮＡ  ＨＩＶ−１コピー数を減少させたことを示し、平均ウイルス量減少率は１６．９％であった。ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４とＡＲＴとの組み合わせは、同等の効果を示し、６２％の患者（下位群１Ｂの１３人のうちの８人）においてＨＩＶ−１  ＲＮＡコピー数が減少し、ベースラインからの平均ウイルス量減少率は、１８．２％であった。ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓを投与した患者においても同様の結果が得られた：５５％のＨＩＶ感染治療未経験患者（下位群２Ａの１１人のうちの６人）及びＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗ＨｉｓとＡＲＴとの組み合わせを投与した患者の６７％（下位群２Ｂの１２人のうちの８人）において抗ウイルス活性が記録され；平均ウイルス量減少率は、それぞれ、１７．３％及び１８．９％であった。最初の２群でみられた抗レトロウイルス活性は、対照群における治療成績に比べて若干高かった。６週間に亘るＵＬＤの抗ＩＦＮγ単一療法は、３６％の治療未経験患者（下位群３Ａの１１人のうちの４人）においてＨＩＶ−１  ＲＮＡコピー数を減少させ、平均ウイルス量減少率は、９．５％であった。ＵＬＤの抗ＩＦＮγとＡＲＴとの組み合わせは、治療の有効性を改善した：患者の５０％（下位群３Ｂの１６人のうちの８人）でウイルス量の減少が記録され、平均ウイルス量減少率は、１４．２％であった。ＡＲＴのみを受けた患者（第４群）では、患者の３２％（２２人の患者のうちの７人）でウイルス量の減少が検出され、平均ウイルス量減少率は、１３．３％であった。
【０１４２】
試験中の循環リンパ球亜群の評価（表１６）により、対照群と比較して、治療未経験患者（群１Ａ、２Ａ、及び３Ａ）又はＡＲＴとの組み合わせ（下位群１Ｂ、２Ｂ、及び３Ｂ）におけるＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓ、及び単一療法としてのＵＬＤの抗ＩＦＮγによる６週間の治療後、ＣＤ４リンパ球数の増加がより顕著であることが明らかになった。（ＡＲＴを行わない又はＡＲＴと組み合わせた）６週間の治療後、ＣＤ８リンパ球数は、全ての試験群において変化していなかった。治療経過におけるＣＤ４リンパ球数の正の動態によって、ＣＤ４／ＣＤ８免疫調節指数が上昇し、これは、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４及びＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓ（ＡＲＴを行わない又はＡＲＴと組み合わせた、即ち、群１及び２）、及びＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋ＡＲＴ（下位群３Ｂ）を投与した患者の下位群において最も有意であった。
【０１４３】
試験期間中、薬物に関連する有害事象は記録されなかった。これは、耐容性が良好である証拠である。腎不全及び肝不全のマーカーを含む血液及び尿の分析における病理的逸脱が存在しないことにより、治療の安全性が確認された。
【０１４４】
したがって、本試験は、ＨＩＶの細胞への侵入をブロックし、且つ抗ウイルス性タンパク質のｍＲＮＡの転写の活性化に起因する細胞内部におけるＨＩＶ複製を抑制するＣＤ４受容体の機能活性を変化させることによって媒介される可能性がある、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４及びＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓ医薬組成物の抗レトロウイルス活性を実証した。１日１錠の用量のＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４及びＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓの６週間の経過の最後におけるウイルス量減少は、同一用量のＵＬＤの抗ＩＦＮγによる６週間の治療、又は以前の処方に従ってＡＲＴのみを継続して受けている患者と比べてより顕著であることが示された。ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓ、又はＵＬＤの抗ＩＦＮγ医薬とＡＲＴとの組み合わせでは、後者の抗ウイルス活性が若干上昇した。これは、より高い割合の患者で６週間後の平均ウイルス量が減少したことにより明らかになった。
【０１４５】
ＨＩＶ感染患者におけるＣＤ４／ＣＤ８リンパ球比に対するＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４及びＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓの影響（ＣＤ４細胞数の減少に起因する）が示され、これは、ＡＲＴと組み合わせたときに最も顕著であった。ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４及びＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓを投与している患者において同時にウイルス量が減少することを考慮して、ＣＤ４細胞数の増加は、健常（非感染）細胞を犠牲にする集団動員に関連していると推測することができる。ＡＲＴと、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓ、又はＵＬＤの抗ＩＦＮγとの組み合わせは、ＡＲＴのみよりもＣＤ４／ＣＤ８免疫調節指数をより効果的に回復させる。
【０１４６】
ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４及びＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓを含有する医薬組成物の抗レトロウイルス活性が観察されたことにより、治療未経験ＨＩＶ感染患者及びＡＲＴを受けている患者の両方において、ＨＩＶ感染の治療及び予防に前記医薬組成物を使用することが可能になる。
【表１５】
2018135370.tif 000065
治療に依存するウイルス量の動態
【表１６】
2018135370.tif 000066
試験群の患者における循環リンパ球亜群レベル
【０１４７】
実施例１２
第１群の患者を治療するための医薬組成物の活性を試験するために、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物に相当する、最初のマトリクス溶液を１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍に超希釈することによって得られる超低用量（ＵＬＤ）のヒトインターフェロンγ（抗ＩＦＮγ）及びＣＤ４（抗ＣＤ４）に対する活性化増強型ウサギポリクローナルアフィニティー精製抗体の水アルコール溶液を含有する医薬組成物（６ｍｇ／錠）を浸透させた３００ｍｇの錠剤を用い；第２群の患者を治療するための医薬組成物の活性を試験するために、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物に相当する、最初のマトリクス溶液を１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍に超希釈することによって得られる超低用量（ＵＬＤ）のヒトインターフェロンγ（抗ＩＦＮγ）及びＣＤ４（抗ＣＤ４）及びヒスタミン（抗Ｈｉｓ）に対する活性化増強型ウサギポリクローナルアフィニティー精製抗体の水アルコール溶液を含有する医薬組成物（６ｍｇ／錠）を浸透させた３００ｍｇの錠剤を用い；第３群の患者を治療するための医薬組成物の活性を試験するために、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０の混合物に相当する、最初のマトリクス溶液を１００１２倍、１００３０倍、１００５０倍に超希釈することによって得られる超低用量（ＵＬＤ）のヒトインターフェロンγ（抗ＩＦＮγ）に対する活性化増強型ウサギポリクローナルアフィニティー精製抗体の水アルコール溶液を含有する医薬組成物（３ｍｇ／錠）を浸透させた３００ｍｇの錠剤を用いた。
【０１４８】
比較並行群間試験の過程において、慢性ウイルス性Ｃ型肝炎の治療におけるＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓ、及びＵＬＤの抗ＩＦＮγを含有する３種の医薬組成物の効果について評価した。２７歳〜５２歳の１８人の患者（男性１４人及び女性４人）が登録された。Ｃ型肝炎の診断は、血清マーカー（抗ＨＶＣ及びＨＣＶ  ＲＮＡ）によって確認された。試験に組み入れられた患者は全て、疾患活性が低く慢性Ｃ型肝炎が穏やかに緩徐に進行する第２及び第３の遺伝子型のＨＣＶを有していた（血清アミノトランスフェラーゼが正常値の＜３倍、又は＜１００Ｕ／Ｉ）。患者はいずれも、以前に特定の抗ウイルス治療を受けていなかった。硬変、悪化段階の重篤な随伴疾患、サラセミア若しくは他の異常ヘモグロビン症、アルコール及び／又は医薬／薬物依存を有すると共に、ＨＩＶ、ＲＷ、抗ＨＣＡ、ＨＢｓＡｇ、又はＨＢｃｏｒＡｇのＡｂに関する血清学的分析の結果が陽性であった患者、常に免疫抑制薬を服用している臓器移植後の患者、並びに妊婦及び授乳婦は、試験に組み入れなかった。以下のレジメンに従って、３試験群の患者に医薬組成物を投与した：２４週間に亘って１日３回１錠：第１群の患者（ｎ＝５）−ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４；第２群の患者（ｎ＝４）−ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓ；第３群の患者（ｎ＝４）−ＵＬＤの抗ＩＦＮγ。対照群は、特定の治療を受けていない、持続性ウイルス血症及び安定な正常レベルのアミノトランスフェラーゼ（＜２０Ｕ／Ｉ）を有する５人の患者からなっていた。試験経過中、定期検査、ウイルス量の制御、及び実験レートを実施し、併用療法及び望ましくない有害事象を記録した。ＨＣＶ  ＲＮＡのウイルス量及びアラニン−アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の活性によって、２４週目に治療効果を評価した。
【０１４９】
ウイルス量に関するデータ（ＨＣＶ  ＲＮＡのコピー数）は、表中に、メジアン（Ｍｅ）及び第１四分位数と第３四分位数との間の範囲［Ｑ１−Ｑ３］として示し、２４週間の治療の最後までに第１群〜第３群の患者における治療の正の効果が証明された。ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４の医薬組成物の服用により、第１群の５人のうちの２人でＨＣＶ  ＲＮＡのコピー数が減少し、平均ウイルス量減少率は、７５％であった。ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓの医薬組成物を投与した患者においても同様の結果が得られた：その抗ウイルス活性は、全ての患者（第２群の４人の被験体のうちの４人）で記録され、平均ウイルス量減少率は、７０％であった。更に、治療の最後までに、２人の患者（第１群で１人及び第２群で１人）において完全なウイルスのクリアランスが記録された。単一成分ＵＬＤの抗ＩＦＮγの抗ウイルス活性は、若干低く、ＨＣＶ  ＲＮＡのコピー数の減少は、第３群の４人の患者のうちの３人で記録され、平均ウイルス量減少率は、５５％であった。対照群では、ウイルス量の正の変化は明らかにならなかった。
【０１５０】
抗ウイルス活性の試験において、２４週間の治療の最後までに、第１群〜第３群の患者において、医薬組成物は、ＡＬＴレベルの正の変化を伴っていた。ＡＬＴレベルの正常化は、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４群の２人の患者、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓ群の１人の患者、及びＵＬＤの抗ＩＦＮγの１人の患者でみられた。対照群の１人の患者では、２４週間の試験期間の最後に、ウイルス量の増加に起因してＡＬＴレベルが正常値の上限を超えていた（＞２０Ｕ／Ｉ）。
【０１５１】
試験期間中、薬物に関連する有害事象は記録されず、これは、薬物の耐容性が良好であることを証明する。腎不全及び肝不全のマーカーを含む血液及び尿の分析における病理的逸脱が存在しないことにより、治療の安全性が確認された。
【０１５２】
したがって、慢性Ｃ型肝炎の患者において、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓ、及びＵＬＤの抗ＩＦＮγを含有する医薬組成物の有効性及び安全性の試験を実施した。最も強い抗ウイルス効果は、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓについて記録され、これは、２人の患者における２４週間の治療の最後までのウイルス量及びウイルスクリアランスの正の動態によって確認された。ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４、ＵＬＤの抗ＩＦＮγ＋抗ＣＤ４＋抗Ｈｉｓ、及びＵＬＤの抗ＩＦＮγの抗ウイルス効果は、慢性Ｃ型肝炎の活性低下を伴っており、これは、２４週間の治療過程の最後における、一部の患者のＡＬＴレベルの低下及び更には正常化によって確認された。
【表１７】
2018135370.tif 000067
試験群におけるウイルス量の動態
【図１】
2018135370.tif 000068
【図２】
2018135370.tif 000069
【配列表】
2018135370000001.app