(57)【要約】【課題】ヒアルロン酸分解を抑制することによって筋膜の機能低下を防ぎ、ひいては筋肉又は関節の運動性を改善することができる素材の提供。【解決手段】カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種を含有する、ヒアルロン酸分解抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種を含有する、ヒアルロン酸分解抑制剤。
【請求項２】
請求項１記載のヒアルロン酸分解抑制剤を含有する、筋膜性状改善剤。
【請求項３】
請求項１記載のヒアルロン酸分解抑制剤を含有する、筋肉又は関節の運動性改善剤。
【請求項４】
請求項１記載のヒアルロン酸分解抑制剤を含有する、運動機能向上剤。
【請求項５】
請求項１記載のヒアルロン酸分解抑制剤を含有する、肩こり、腰痛、又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善剤。
【請求項６】
食品組成物である、請求項１〜５のいずれか１項記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒアルロン酸分解抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒアルロン酸（ＨＡ）は、Ｄ−グルクロン酸とＮ−アセチルＤ−グルコサミンとの繰り返し構造からなる直鎖のムコ多糖である。生体内において、ヒアルロン酸は、皮膚、眼、軟骨、滑膜、関節液等に広く存在する。皮膚のヒアルロン酸は真皮に存在し、皮膚の保湿や弾力性に寄与している。従来、皮膚の保湿やアンチエイジングを目的とした化粧品等にヒアルロン酸やその分解を抑制する素材が利用されている。また軟骨や関節液のヒアルロン酸は関節の動きに関与していると考えられる。関節の炎症及び疼痛の軽減のための関節内ヒアルロン酸注入療法が試みられている。
【０００３】
筋膜は、筋骨格系を覆う結合組織であり、タンパク質繊維、ヒアルロン酸等のムコ多糖、液性物質などから構成される膜状の弾力性の基質である。筋膜は、筋肉及び関節における動きの連動性や滑らかさに寄与していると考えられている。筋膜の弾力性の低下は、筋肉もしくは関節の強張りや運動性低下、痛みなどの原因となることが示唆されている。また廃用性筋委縮を起こした筋肉で、ヒアルロン酸量が低下したことが報告されている（非特許文献１）。
【０００４】
体内でヒアルロン酸の生成や分解を制御する機構については多くの報告がある。このうち、主要なものとして提唱されているのが、ヒアルロン酸分解酵素ヒアルロニダーゼであるHYAL1、HYAL2とヒアルロン酸受容体であるCD44が関与するモデルである。このモデルによれば、ヒアルロン酸は、HYAL2及びCD44の共同作用により細胞外でフラグメントに分解され、さらにCD44を介してエンドソーム／リソソーム経路中に組み込まれ、リソソーム中でHYAL1により分解される。
【０００５】
また、活性酸素種等により非酵素的にヒアルロン酸を分解するメカニズムも存在する。特許文献１には、メイラード反応の生成物が金属イオンと協働して非酵素的にヒアルロン酸分解を引き起こすことが開示されている。さらに特許文献１では、上記メイラード反応生成物と金属イオンによる非酵素的なヒアルロン酸の分解が、エラグ酸、プロアントシアニジン、ライチポリフェノール、緑茶ポリフェノール、及びジュンサイポリフェノール等のポリフェノール類によって抑制されることが開示されている。
【０００６】
ヒアルロン酸の生成や分解に関わるさらなる因子として、特許文献２には、KIAA1199遺伝子（GenBank Accession Number NM_018689）又はそれにコードされるKIAA1199タンパク（GenBank Accession Number EAW99111）が開示されている。細胞におけるKIAA1199の高発現はヒアルロン酸分解を促進し、そのノックダウンはヒアルロン酸分解を抑制する。KIAA1199によるヒアルロン酸分解は、ヒアルロニダーゼHYAL1及びHYAL2の発現量に影響を受けないことから、KIAA1199は、これら上記HYAL1、HYAL2及びCD44が関わるヒアルロン酸分解機構とは独立して働くヒアルロン酸分解因子である（特許文献２、非特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１３−２３７６６１号公報
【特許文献２】特許第５８５５８４９号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Connect Tissue Res, 2005, 46(2):101-106
【非特許文献２】Proc Natl Acad Sci U S A, 2013, 110(14):5612-5617
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
筋骨格系の動作、特に筋肉や関節の運動性において、筋膜は重要な役割を果たしていると考えられる。本発明は、ヒアルロン酸分解を抑制することによって筋膜の機能低下を防ぎ、ひいては筋肉や関節の運動性を改善することができる素材の提供に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、ヒアルロン酸分解因子KIAA1199遺伝子を高発現させた細胞におけるヒアルロン酸分解能の亢進を抑制する作用を有する素材を見出した。KIAA1199は、筋組織においても発現していることから、これらの素材は、筋組織におけるKIAA1199の作用に起因するヒアルロン酸分解の抑制に有効である。
【００１１】
したがって、本発明は、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種を含有する、ヒアルロン酸分解抑制剤を提供する。
また本発明は、当該ヒアルロン酸分解抑制剤を含有する筋膜性状改善剤、筋肉又は関節の運動性改善剤、運動機能向上剤、及び、肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善剤を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明のヒアルロン酸分解抑制剤は、ヒアルロン酸分解を抑制することによって筋膜の機能低下を防ぎ、ひいては筋肉や関節の運動性を改善し、又は肩こりや腰痛等を改善することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスのKIAA1199抑制によるヒアルロン酸分解の抑制作用。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本明細書において、「予防」とは、個体における疾患もしくは状態の発症の防止、抑制または遅延、あるいは個体の疾患もしくは状態の発症の危険性を低下させることをいう。本明細書において、「改善」とは、疾患もしくは状態の好転、疾患もしくは状態の悪化の防止、抑制または遅延、あるいは疾患もしくは状態の進行の逆転、防止、抑制または遅延をいう。
【００１５】
KIAA1199（GenBank Accession Number EAW99111）は、KIAA1199遺伝子（GenBank Accession Number NM_018689）にコードされるヒトタンパク質である。KIAA1199はヒアルロン酸結合性タンパク質である。細胞におけるKIAA1199の高発現は、ヒアルロン酸分解を促進し、一方、そのノックダウンによりヒアルロン酸分解は抑制される。このKIAA1199によるヒアルロン酸分解は、ヒアルロニダーゼHYAL1及びHYAL2の発現量に影響を受けないことから、KIAA1199は、これらHYAL1及びHYAL2、及びヒアルロン酸受容体CD44と独立して働くヒアルロン酸分解因子である（特許文献２、非特許文献２参照）。
【００１６】
本明細書において、カカオとは、アオギリ科カカオ（Theobroma cacao）をいう。本発明で用いられるカカオエキスとは、カカオの種子（カカオ豆）を発酵後、焙焼したものからの抽出物をいう。一般的には、本発明で用いられるカカオエキスは、発酵させ、焙焼したカカオ豆を粉砕又は粉末化した後、溶媒抽出することによって調製することができる。また本発明で用いられるカカオエキスには、市販のココアパウダー（好ましくは純ココアパウダー）の溶媒抽出物を使用することもできる。
をいう。
【００１７】
本明細書において、ウーロン茶とは、ツバキ科チャ（Camellia sinensis）の葉より製造した半発酵茶（ウーロン茶）をいう。本発明で用いられるウーロン茶エキスは、ウーロン茶を粉砕又は粉末化した後、溶媒抽出することによって調製することができ、又は市販品を用いてもよい。該市販品としては、例えば、三栄源エフエフアイ社の「ウーロン茶エキス」、佐藤食品工業「ウーロン茶エキスＵ１」、丸善製薬「ウーロン茶エキスＭ」などが挙げられる。
【００１８】
本明細書において、オリーブとは、モクセイ科オリーブ（Olea europaea）をいう。本発明で用いられるオリーブエキスは、オリーブ果汁の水溶性成分の抽出物であり、ヒドロキシチロソール、チロソール、オレウロペインなどのポリフェノールを含有する。本発明で用いられるオリーブエキスは、油脂精製に用いたオリーブ果汁の排液（水溶性成分）を溶媒抽出することによって調製することができる。また本発明で用いられるオリーブエキスには、市販品を使用することもできる（例えば、「Ｏｌｉｖｅｘ（登録商標）ＰＨＯ６」、「Ｏｌｉｖｅｘ（登録商標）ＨＴ６」、サンブライト株式会社）。
【００１９】
上記本発明で用いるエキスの溶媒抽出の手段としては、例えば、固液抽出、圧搾抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、ソックスレー抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等の通常の手段を用いることができる。これらの抽出手段は組み合わせてもよい。例えば、浸漬や固液抽出と液液抽出を組み合わせてもよく、または抽出時間を短縮する場合には、攪拌を伴う固液抽出をおこなってもよい。
【００２０】
抽出のための溶媒としては、極性溶媒、非極性溶媒のいずれをも使用することができ、またはこれらを混合して用いることもできる。該抽出溶媒の例としては、水；１価もしくは多価のアルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状および環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類；超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他オイル、などが挙げられる。上記に列挙した溶媒は、単独で又は２種以上を組み合わせて使用することができる。
【００２１】
溶媒の好ましい例としては、アルコール−水混合溶媒が挙げられ、例えば、一価アルコールもしくは多価アルコールと水との混合溶媒が挙げられる。一価アルコールの例としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アミルアルコール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール等が挙げられる。多価アルコールの例としては、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，４−ブタンジオール、１，５−ペンタンジオール、１，６−ヘキサンジオール等の２価アルコール、及びグリセリン等の３価以上のアルコールが挙げられる。このうち、炭素数１〜４の一価又は多価アルコールが好ましく、１価アルコール及び２価アルコールが好ましく、メタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール及びｔ−ブタノールがより好ましく、メタノール及びエタノールがさらに好ましい。
【００２２】
アルコール−水混合溶媒のより好ましい例としては、上記に列挙した一価アルコールと水との混合溶媒、及び上記に列挙した多価アルコールと水との混合溶媒が挙げられ、好ましくは、メタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール及びｔ−ブタノールから選択されるアルコールと水との混合溶媒が挙げられ、より好ましくは、メタノールもしくはエタノールと水との混合溶媒が挙げられる。
【００２３】
アルコール−水混合溶媒におけるアルコールの濃度は、好ましくは１０容量％以上、より好ましくは２０容量％以上、さらに好ましくは３０容量％以上であり、かつ好ましくは９０容量％以下、より好ましくは８０容量％以下、さらに好ましくは７０容量％以下である。あるいは、当該アルコール−水混合溶媒におけるアルコールの濃度の例としては、１０〜９０容量％、１０〜８０容量％、１０〜７０容量％、２０〜９０容量％、２０〜８０容量％、２０〜７０容量％、３０〜９０容量％、３０〜８０容量％、及び３０〜７０容量％が挙げられる。
【００２４】
より詳細には、本発明に用いられるカカオエキス、ウーロン茶エキス、及びオリーブエキスの抽出のための溶媒としては、エタノール、水、及びエタノール水溶液が好ましい。該エタノール水溶液におけるエタノール濃度としては、１０〜９０容量％、１０〜８０容量％、１０〜７０容量％、２０〜９０容量％、２０〜８０容量％、２０〜７０容量％、３０〜９０容量％、３０〜８０容量％、および３０〜７０容量％が挙げられ、好ましくは３０〜７０容量％、より好ましくは４０〜６０容量％、さらに好ましくは５０容量％が挙げられる。
【００２５】
抽出における溶媒の使用量としては、材料１ｇ（乾燥質量換算）に対して１〜１００ｍＬが好ましい。抽出条件は、十分な抽出が行える条件であれば特に限定されない。通常、溶媒がより低温であればより長時間、溶媒がより高温であればより短時間の抽出を行う。例えば、抽出時間は１時間以上が好ましく、４時間以上がより好ましく、他方、２ヶ月以下が好ましく、４週間以下がより好ましい。また例えば、抽出温度は、好ましくは０℃以上、より好ましくは５℃以上であり、かつ好ましくは溶媒沸点以下であり、１０〜８０℃程度がさらに好ましいが、室温程度であってもよい。好ましい抽出条件の例としては、１５〜４０℃で３日〜４週間、５０〜７０℃で１〜１０時間、などが挙げられるが、これらに限定されず、当業者によって適宜選択され得る。
【００２６】
上述の手順で得られた抽出物に対して、必要に応じて、植物抽出物の製造に一般的に用いられる精製処理、例えば、有機溶剤沈殿、遠心分離、限界濾過膜、高速液体クロマトグラフ、カラムクロマトグラフ、液液分配、ゲルろ過分離、活性炭等を用いた処理を行うこともできる。
【００２７】
上述の手順で得られた抽出物は、抽出液やその画分を単独でまたは混合してそのまま用いてもよく、または適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、または濃縮エキス、乾燥粉末もしくはペースト状に調製して用いてもよい。
【００２８】
後述の実施例に示すとおり、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキス（以下、これらを本発明のエキスとも称する）は、ヒアルロン酸分解因子KIAA1199を高発現させた細胞におけるヒアルロン酸分解の亢進を抑制した（実施例２参照）。すなわち、これら本発明のエキスは、KIAA1199によるヒアルロン酸分解を抑制する作用を有する。したがって、本発明のエキスは、ヒアルロン酸分解抑制のための有効成分として使用することができる。また、上述したように、KIAA1199は、HYAL1及びHYAL2及びCD44によるヒアルロン酸分解機構とは独立して働くヒアルロン酸分解因子であることから、本発明のエキスは、HYAL1及びHYAL2によらないヒアルロン酸分解抑制、又はKIAA1199によるヒアルロン酸分解抑制のための有効成分として使用することができる。
【００２９】
また後述の実施例に示すとおり、KIAA1199は筋組織で発現していた（実施例１）。筋組織のヒアルロン酸は、主に筋膜の構成成分として存在する。したがって、筋組織におけるKIAA1199は、ヒアルロン酸分解作用を介して、筋膜の維持と分解に関与し、ひいては筋肉や関節の動きの連動性、筋肉もしくは関節の強張りや凝り、及びそれに伴う筋肉又は関節の痛みや運動性低下に関わっていると考えられる。したがって、本発明のエキスは、そのKIAA1199によるヒアルロン酸分解抑制作用に基づいて、筋膜の性状（例えば滑走性もしくは弾力性）改善のため、筋肉又は関節の運動性改善のため、運動機能向上のため、あるいは肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善のための有効成分として使用することができる。また、本発明のエキスは、そのKIAA1199によるヒアルロン酸分解抑制作用に基づいて、筋膜の滑走性もしくは弾力性の改善（例えば、筋膜リリース）のため、身体の柔軟性の改善のため、ならびに、筋肉の凝りや張りによる眼の疲れ、首、肩、背中もしくは腰の痛み、手足や指のつり、姿勢悪化等の改善のための有効成分として使用することができる。
【００３０】
本発明において、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスは、いずれか単独で使用されてもよいが、いずれか２種以上又は３種の組み合わせで使用されてもよい。
【００３１】
したがって、一態様において、本発明は、本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ヒアルロン酸分解抑制剤を提供する。さらに本発明は、該ヒアルロン酸分解抑制剤を有効成分とする、筋膜性状改善剤、筋肉又は関節の運動性改善剤、運動機能向上剤、あるいは肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善剤を提供する。
【００３２】
別の態様において、本発明は、ヒアルロン酸分解抑制剤、筋膜性状改善剤、筋肉又は関節の運動性改善剤、運動機能向上剤、あるいは肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善剤の製造のための、本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種の使用を提供する。
【００３３】
一実施形態において、上記の剤は、本質的に本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種から構成され得る。
【００３４】
本発明のヒアルロン酸分解抑制剤、筋膜性状改善剤、筋肉又は関節の運動性改善剤、運動機能向上剤、あるいは肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善剤の応用の具体例としては、筋膜の滑走性もしくは弾力性の改善（例えば、筋膜リリース）、身体の柔軟性の改善、ならびに、筋肉の凝りや張りによる眼の疲れ、首、肩、背中もしくは腰の痛み、手足や指のつり、姿勢悪化等の改善、などが挙げられる。
【００３５】
また別の態様において、本発明は、ヒアルロン酸分解抑制、筋膜性状改善、筋肉又は関節の運動性改善、運動機能向上、あるいは肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善のための、本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種の使用を提供する。さらに別の態様において、本発明は、ヒアルロン酸分解抑制、筋膜性状改善、筋肉又は関節の運動性改善、運動機能向上、あるいは肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善に使用するための、本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種を提供する。当該使用は、治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
【００３６】
本発明による治療的使用の例としては、筋炎又は関節炎患者への適用が挙げられる。非治療使用の適用例としては、日常生活の動作の改善、運動能力向上、あるいは、肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善のための筋膜の性状改善や、筋肉又は関節の運動性の向上が挙げられる。また例えば、非治療的使用は、他者に、医療行為としてではなく本発明のエキスを投与または摂取させるために、ヒアルロン酸分解抑制、筋膜性状改善、筋肉又は関節の運動性改善、運動機能向上、あるいは肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善、等を謳ってそれらを提供することを含む。
【００３７】
本発明のエキスは、ヒト及び非ヒト動物のいずれに対しても使用することができる。非ヒト動物としては、非ヒト哺乳動物、鳥類などが挙げられ、非ヒト哺乳動物としては、例えば、類人猿、その他霊長類、マウス、ラット、ハムスター、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、およびコンパニオン動物などが挙げられる。
【００３８】
本発明はまた、本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種を含有する組成物、例えば医薬品、医薬部外品、化粧料、食品（非ヒト動物用食品を含む）等、を提供する。本発明の組成物は、ヒアルロン酸分解抑制のため、筋膜性状改善のため、筋肉又は関節の運動性改善のため、運動機能向上のため、肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善のため、筋膜の滑走性もしくは弾力性の改善（例えば、筋膜リリース）のため、身体の柔軟性の改善のため、筋肉の凝りや張りによる眼の疲れ、首、肩、背中もしくは腰の痛み、手足や指のつり、姿勢悪化等の改善のために用いることができる。
【００３９】
本発明により提供される医薬品（医薬部外品も含む）は、ヒアルロン酸分解抑制、筋膜性状改善、筋肉又は関節の運動性改善、運動機能向上、あるいは肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善のための医薬品であり、本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種を、当該機能のための有効成分として含有する。さらに、該医薬品は、該有効成分の機能が失われない限りにおいて、必要に応じて薬学的に許容される担体、または他の有効成分、薬理成分等を含有していてもよい。
【００４０】
該医薬品（医薬部外品も含む）の投与形態は、経口投与および非経口投与の何れであってもよい。該医薬品の剤形は、経口または非経口的に投与可能な剤形であれば特に限定されない。種々の剤形の製剤は、本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種を、薬学的に許容される担体、他の薬効成分等と適宜組み合わせて、定法に従って調製することができる。
【００４１】
該医薬品（医薬部外品も含む）における本発明のエキスの含有量（乾燥物換算）は、特に限定されないが、好ましくは全質量中０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、さらに好ましくは１．０質量％以上、さらにより好ましくは１０質量％以上、なお好ましくは１５質量％以上であり、かつ好ましくは９５質量％以下、より好ましくは８０質量％以下、さらに好ましくは６０質量％以下である。さらに、当該含有量の例として、０．０１〜９５質量％、０．０１〜８０質量％、０．０１〜６０質量％、０．１〜９５質量％、０．１〜８０質量％、０．１〜６０質量％、１．０〜９５質量％、１．０〜８０質量％、１．０〜６０質量％、１０〜９５質量％、１０〜８０質量％、１０〜６０質量％、１５〜９５質量％、１５〜８０質量％、及び１５〜６０質量％が挙げられる。
【００４２】
本発明により提供される化粧料は、ヒアルロン酸分解抑制、筋膜性状改善、筋肉又は関節の運動性改善、運動機能向上、あるいは肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善のための化粧料であり、本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種を、当該機能のための有効成分として含有する。さらに、該化粧料は、該有効成分の機能が失われない限りにおいて、必要に応じて化粧料に許容される担体、または他の有効成分もしくは化粧成分を含有していてもよい。該化粧料の形態としては、皮膚外用投与、局所投与、または経口投与のための形態が挙げられる。
【００４３】
該化粧料は、本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種を、必要に応じて上記化粧料に許容される担体、他の有効成分、化粧成分などと組みあわせて、常法により製造することができる。
【００４４】
該化粧料における本発明のエキスの含有量（乾燥物換算）は、特に限定されないが、好ましくは全質量中０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、さらに好ましくは０．０１質量％以上、さらにより好ましくは０．１質量％以上、なお好ましくは１．０質量％以上であり、かつ好ましくは６０質量％以下、より好ましくは４０質量％以下、さらに好ましくは２０質量％以下、なお好ましくは１０質量％以下である。さらに、当該含有量の例として、０．０００１〜６０質量％、０．０００１〜４０質量％、０．０００１〜２０質量％、０．０００１〜１０質量％、０．００１〜６０質量％、０．００１〜４０質量％、０．００１〜２０質量％、０．００１〜１０質量％、０．０１〜６０質量％、０．０１〜４０質量％、０．０１〜２０質量％、０．０１〜１０質量％、０．１〜６０質量％、０．１〜４０質量％、０．１〜２０質量％、０．１〜１０質量％、１．０〜６０質量％、１．０〜４０質量％、１．０〜２０質量％、及び１．０〜１０質量％が挙げられる。
【００４５】
本発明により提供される食品は、ヒアルロン酸分解抑制、筋膜性状改善、筋肉又は関節の運動性改善、運動機能向上、あるいは肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善の機能を提供するための食品であり、本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種を、当該機能のための有効成分として含有する。該食品には、上記機能の提供をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した病者用食品、および栄養機能食品、特定保健用食品、機能性表示食品等の保健機能食品が包含される。これらの食品は、例えば「筋膜の滑走性や弾力性を改善する」、「筋膜リリースができる」、「身体の柔軟性を改善する」、「筋肉の凝りや張りによる眼の疲れ、首、肩、背中もしくは腰の痛み、手足や指のつり、姿勢悪化等を改善する」、「関節の動きを良くする」などの機能表示と共に提供されてもよい。
【００４６】
本発明により提供される食品は飲料を含む。したがって、当該食品を飲食品と言い換えることができる。該食品の形態は、固形、半固形または液状（例えば飲料）であり得る。食品の例としては、パン類、麺類、飯類、クッキー等の菓子類、ゼリー類、乳製品、スープ類、冷凍食品、インスタント食品、でんぷん加工製品、加工魚肉製品、その他加工食品、調味料、栄養補助食品、およびお茶やコーヒー飲料、果実飲料、炭酸飲料、ゼリー状飲料等の飲料、ならびにそれらの原料が挙げられる。あるいは、該食品は、錠剤、カプセル、顆粒、粉末、液剤、シロップなどの経口投与製剤の形態を有するサプリメントであってもよい。
【００４７】
該食品は、本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種を、任意の食品材料または食品に許容される添加物（例えば溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、甘味料、安定剤、着色剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤、固着剤、分散剤、湿潤剤等）と適宜組み合わせて、定法に従って調製することができる。
【００４８】
該食品中における、本発明のエキスの含有量（乾燥物換算）は、特に限定されないが、好ましくは全質量の０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、さらに好ましくは０．０１質量％以上であり、かつ好ましくは５０質量％以下、より好ましくは２０質量％以下、さらに好ましくは１０質量％以下である。さらに、当該含有量の例として、０．０００１〜５０質量％、０．０００１〜２０質量％、０．０００１〜１０質量％、０．００１〜５０質量％、０．００１〜２０質量％、０．００１〜１０質量％、０．０１〜５０質量％、０．０１〜２０質量％、及び０．０１〜１０質量％が挙げられる。
【００４９】
なお別の態様において、本発明は、ヒアルロン酸分解抑制方法を提供する。また本発明は、筋膜性状改善方法、筋肉又は関節の運動性改善方法、運動機能向上方法、あるいは肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善方法を提供する。当該方法は、それを必要とする対象に、本発明のエキスからなる群より選択される少なくとも１種を有効量で投与することを含む。当該方法は、治療的方法であっても非治療的方法であってもよい。
【００５０】
本発明の方法における対象としては、筋炎や関節炎を罹患している動物が挙げられる。あるいは、該対象としては、筋炎や関節炎には罹患していないが、日常生活の動作の改善、運動能力向上、あるいは肩こり、腰痛又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善のために、筋膜の性状改善や、筋肉又は関節の運動性の向上を必要とする動物が挙げられる。またあるいは、該対象としては、筋膜の滑走性もしくは弾力性の改善（例えば、筋膜リリース）、身体の柔軟性の改善、あるいは、筋肉の凝りや張りによる眼の疲れ、首、肩、背中もしくは腰の痛み、手足や指のつり、姿勢悪化等の改善を必要とする動物が挙げられる。該動物としては、上述したヒトおよび非ヒト動物が挙げられ、より好ましくはヒトである。該非ヒト動物としては、非ヒト哺乳動物、鳥類などが挙げられ、非ヒト哺乳動物としては、例えば、類人猿、その他霊長類、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、およびコンパニオン動物などが挙げられる。
【００５１】
本発明はさらに、インビトロでのヒアルロン酸分解抑制方法を提供する。当該インビトロ方法は、上述したヒトまたは非ヒト動物由来の組織もしくは細胞、例えば筋膜組織やその培養物などを対象として行うことができる。
【００５２】
本発明の方法における投与の有効量は、対象におけるKIAA1199によるヒアルロン酸分解を抑制できる量であればよい。好ましくは、有効量とは、投与群におけるKIAA1199によるヒアルロン酸分解量を、未投与群と比べて統計学的に有意に低下させることができる量である。また好ましくは、有効量とは、投与群におけるKIAA1199によるヒアルロン酸分解量を未投与群の７０％以下、好ましくは５０％以下に低下させることができる量である。ヒアルロン酸分解量は、蛍光標識ヒアルロン酸の分解による蛍光量の変化の検出（例えば、後述の実施例２で用いた方法）等、周知の方法に従って測定することができる。
【００５３】
本発明において、本発明のエキスの投与量及び投与計画は、対象の種、体重、性別、年齢、状態、又はその他の要因に従って、当業者により適宜決定されればよい。限定ではないが、本発明のエキスの投与量は、例えば成人１人１日当たり、好ましくは０．０００１ｍｇ以上、より好ましくは０．００１ｍｇ以上、さらに好ましくは０．０１ｍｇ以上であり、さらにより好ましくは０．１ｍｇ以上であり、なお好ましくは１ｍｇ以上であり、なお好ましくは０．１ｇ以上であり、なお好ましくは１ｇ以上であり、かつ好ましくは１０ｇ以下、より好ましくは５ｇ以下、さらに好ましくは１ｇ以下である。あるいは、本発明のエキス（乾燥物換算）の投与量（成人１人１日当たり）は、０．０００１ｍｇ〜１０ｇ、０．０００１ｍｇ〜５ｇ、０．０００１ｍｇ〜１ｇ、０．００１ｍｇ〜１０ｇ、０．００１ｍｇ〜５ｇ、０．００１ｍｇ〜１ｇ、０．０１ｍｇ〜１０ｇ、０．０１ｍｇ〜５ｇ、０．０１ｍｇ〜１ｇ、０．１ｍｇ〜１０ｇ、０．１ｍｇ〜５ｇ、０．１ｍｇ〜１ｇ、１ｍｇ〜１０ｇ、１ｍｇ〜５ｇ、１ｍｇ〜１ｇ、０．１ｇ〜１０ｇ、０．１ｇ〜５ｇ、０．１ｇ〜１ｇ、１ｇ〜１０ｇ、または１ｇ〜５ｇの範囲で選択され得る。上記の量を、例えば、１日に１回、２回または３回以上に分け、数週間〜数ヶ月間継続して投与することが好ましい。
【００５４】
本発明はまた、例示的実施形態として以下の物質、製造方法、用途、方法等を包含する。但し、本発明はこれらの実施形態に限定されない。
【００５５】
〔１〕カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種を含有する、ヒアルロン酸分解抑制剤。
〔２〕好ましくは、筋膜の滑走性もしくは弾力性の改善、身体の柔軟性の改善、あるいは、筋肉の凝りや張りによる眼の疲れ、首、肩、背中もしくは腰の痛み、手足や指のつり、又は姿勢悪化の改善のために使用される、〔１〕記載のヒアルロン酸分解抑制剤。
〔３〕好ましくは、前記ヒアルロン酸分解がKIAA1199によるヒアルロン酸分解である、〔１〕又は〔２〕記載のヒアルロン酸分解抑制剤。
〔４〕〔１〕〜〔３〕のいずれか１項記載のヒアルロン酸分解抑制剤を含有する、筋膜性状改善剤。
〔５〕〔１〕〜〔３〕のいずれか１項記載のヒアルロン酸分解抑制剤を含有する、筋肉又は関節の運動性改善剤。
〔６〕〔１〕〜〔３〕のいずれか１項記載のヒアルロン酸分解抑制剤を含有する、運動機能向上剤。
〔７〕〔１〕〜〔３〕のいずれか１項記載のヒアルロン酸分解抑制剤を含有する、肩こり、腰痛、又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善剤。
【００５６】
〔８〕ヒアルロン酸分解抑制剤の製造のための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の使用。
〔９〕好ましくは、前記ヒアルロン酸分解抑制剤が、筋膜の滑走性もしくは弾力性の改善、身体の柔軟性の改善、あるいは、筋肉の凝りや張りによる眼の疲れ、首、肩、背中もしくは腰の痛み、手足や指のつり、又は姿勢悪化の改善のために使用される、〔８〕記載の使用。
〔１０〕好ましくは、前記ヒアルロン酸分解がKIAA1199によるヒアルロン酸分解である〔８〕又は〔９〕記載の使用。
〔１１〕筋膜性状改善剤の製造のための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の使用。
〔１２〕筋肉又は関節の運動性改善剤の製造のための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の使用。
〔１３〕運動機能向上剤の製造のための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の使用。
〔１４〕肩こり、腰痛、又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善剤の製造のための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の使用。
【００５７】
〔１５〕ヒアルロン酸分解抑制のための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の非治療的使用。
〔１６〕好ましくは、筋膜の滑走性もしくは弾力性の改善、身体の柔軟性の改善、あるいは、筋肉の凝りや張りによる眼の疲れ、首、肩、背中もしくは腰の痛み、手足や指のつり、又は姿勢悪化の改善を目的としたヒアルロン酸分解抑制のために使用される、〔１５〕記載の使用。
〔１７〕好ましくは、前記ヒアルロン酸分解がKIAA1199によるヒアルロン酸分解である〔１５〕又は〔１６〕記載の使用。
〔１８〕筋膜性状改善のための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の非治療的使用。
〔１９〕筋肉又は関節の運動性改善のための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の非治療的使用。
〔２０〕運動機能向上のための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の非治療的使用。
〔２１〕肩こり、腰痛、又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善のための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種の非治療的使用。
【００５８】
〔２２〕ヒアルロン酸分解抑制に使用するための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種。
〔２３〕好ましくは、筋膜の滑走性もしくは弾力性の改善、身体の柔軟性の改善、あるいは、筋肉の凝りや張りによる眼の疲れ、首、肩、背中もしくは腰の痛み、手足や指のつり、又は姿勢悪化の改善を目的としたヒアルロン酸分解抑制のために使用される、〔２２〕記載のカカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種。
〔２４〕好ましくは、前記ヒアルロン酸分解がKIAA1199によるヒアルロン酸分解である〔２２〕又は〔２３〕記載のカカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種。
〔２５〕筋膜性状改善に使用するための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種。
〔２６〕筋肉又は関節の運動性改善に使用するための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種。
〔２７〕運動機能向上に使用するための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種。
〔２８〕肩こり、腰痛、又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善に使用するための、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種。
【００５９】
〔２９〕ヒアルロン酸分解抑制方法であって、それを必要とする対象に、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種を有効量で投与することを含む、方法。
〔３０〕好ましくは、前記対象が、筋膜の滑走性もしくは弾力性の改善、身体の柔軟性の改善、あるいは、筋肉の凝りや張りによる眼の疲れ、首、肩、背中もしくは腰の痛み、手足や指のつり、又は姿勢悪化の改善を必要とする対象である、〔２５〕記載の方法。
〔３１〕好ましくは、前記ヒアルロン酸分解がKIAA1199によるヒアルロン酸分解である〔２９〕又は〔３０〕記載の方法。
〔３２〕筋膜性状改善方法であって、それを必要とする対象に、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種を有効量で投与することを含む、方法。
〔３３〕筋肉又は関節の運動性改善方法であって、それを必要とする対象に、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種を有効量で投与することを含む、方法。
〔３４〕運動機能向上方法であって、それを必要とする対象に、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種を有効量で投与することを含む、方法。
〔３５〕肩こり、腰痛、又は筋肉もしくは関節の強張りの予防又は改善方法であって、それを必要とする対象に、カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスからなる群より選ばれる少なくとも１種を有効量で投与することを含む、方法。
【実施例】
【００６０】
以下、実施例に基づき本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００６１】
実施例１  筋組織におけるKIAA1199発現
１）方法
安楽殺したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス雄（１７〜１８週齢）２匹より、ヒラメ筋、足底筋、長指伸筋及び大腿四頭筋をそれぞれ摘出し、RNAlater（商品名、Thermo Fisher Scientific社製）に浸漬保存した。保存した各検体サンプルから、RNeasy Lipid Tissue Mini Kit（商品名、Qiagen社製）を用いて、製品添付プロトコルに従いＴｏｔａｌ  ＲＮＡ抽出を行った。得られたＲＮＡサンプルは−８０℃で保存した。抽出した各Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡサンプルを、ＲＮＡ濃度が１２５ｎｇ／反応になるよう濃度を調整し、６５℃、１０分間の熱処理後、High Capacity RNA-to-cDNA kit（商品名、Thermo Fisher Scientific社製）を用いて、製品添付プロトコルに従いｃＤＮＡを合成した。得られたｃＤＮＡサンプルは−２０℃で保存した。合成したｃＤＮＡを鋳型とし、TaqMan（登録商標）Fast Universal PCR Master Mix（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて、ABI PRISM 7500（Thermo Fisher Scientific社製）により、KIAA1199遺伝子、及び参考として、全身にユビキタスに発現するハウスキーピング遺伝子であり、遺伝子発現解析において参考としてよく用いられるRplp0 (ribosomal protein, large, P0)遺伝子について定量ＰＣＲを行った。なお、定量ＰＣＲには、KIAA1199発現解析のためのCemip（cell migration inducing protein, hyaluronan binding）TaqMan（登録商標）プライマープローブセット（Mm00472921_m1、Thermo Fisher Scientific社製）、及び、Rplp0 TaqMan（登録商標）プライマープローブセット(Mm00725448_s1、Thermo Fisher Scientific社製）を用いた。
【００６２】
２）結果
結果を表１に示す。表１は定量ＰＣＲにおける各サンプルのＣＴ（Threshold Cycle）値を示す。２検体のいずれにおいても、４種の骨格筋の全てにおいてKIAA1199遺伝子の発現が確認された。
【００６３】
【表１】
2018135272.tif 000002
【００６４】
実施例２  各種エキスによるKIAA1199抑制活性の検討
１）エキス
（カカオエキス）アオギリ科カカオ（Theobroma cacao）の種子（カカオ豆）を発酵後、焙焼したものを粉砕又は粉末化してココアパウダーを得た。これを５０容量％エタノール水溶液で抽出し、濃縮後、乾燥又は粉末化してカカオエキスを調製した。
（ウーロン茶エキス）ツバキ科チャ（Camellia sinensis）の葉より製造した半発酵茶（ウーロン茶）より、熱水で抽出したものから得られたエキス（製品名「ウーロン茶エキス」；三栄源エフエフアイ社）を使用した。
（オリーブエキス）モクセイ科オリーブ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａｅａ）の果実から、オリーブオイルを製造する際に、排出される果汁より精製して得られたエキス（製品名「水溶性オリーブポリフェノールＯｌｉｖｅｘ（登録商標）ＰＨＯ６；サンブライト株式会社」を使用した。
各エキスは、５０容量％エタノール水溶液に溶解させて、下記実験で試験物質として使用した。
【００６５】
２）細胞培養
ＨＥＫ２９３細胞（ヒト胎児腎細胞由来、Human embryonic kidney (HEK) 293）は、ヒアルロン酸（ＨＡ）分解活性を持たない細胞である。これにKIAA1199遺伝子をトランスフェクトすることにより、KIAA1199安定発現細胞（KIAA1199/HEK293細胞）が得られ、この細胞はＨＡ分解活性を有する。一方、元々ＨＡ分解活性を有する皮膚線維芽細胞においては、KIAA1199をｓｉＲＮＡによりノックダウンさせるとＨＡ分解が抑制されるが、ヒアルロニダーゼHYAL1やHYAL2を一過性に発現させてもＨＡの量は影響を受けないことから、KIAA1199は、HYAL1、HYAL2、及びＨＡ受容体CD44と独立して働くＨＡ分解因子である（非特許文献２参照）。したがって、KIAA1199/HEK293細胞のＨＡ分解活性に影響を与える因子は、KIAA1199によるＨＡ分解を抑制する因子である。
【００６６】
KIAA1199/HEK293細胞を3.0×105 cells/wellになるよう、コラーゲンコートした４８穴プレート（Corning社製）に播種した。３日後、コンフルエントの状態の細胞に蛍光標識高分子ＨＡ（分子量１，２００〜１，６００ｋＤａ）（ＰＧリサーチ社：Cat No. FAHA-H1）（終濃度：１０μｇ／ｍＬ）及び培地で適宜希釈した試験物質（固形分換算による最終濃度：１、１０、及び１００μｇ／ｍＬ）を添加して培養した。試験物質非添加（０μｇ／ｍＬ）細胞を対照とした。
【００６７】
３）ＨＡ分解活性の測定
試験物質添加１日後、培養上清を回収してＨＡ分子量を測定した。ＨＡ分子量の測定では、ＨＰＬＣにて高分子ＨＡの蛍光のピーク高を測定した。培養上清は、ＨＰＬＣカラムに供する前にフィルター（Millex-HV Filter Unit ０．４５μｍ：Millipore社製）にて濾過した。ＨＰＬＣシステムはLaChrom Elite（日立ハイテクノロジーズ社製）を用い、検出は励起波長４９５ｎｍ、蛍光波長５２０ｎｍとした。溶媒には０．２Ｍ NaClを用い、流速は０．５ｍＬ／ｍｉｎにて実施した。カラムはＳＥＣカラム（TSK-GL G5000 PW-XL：東ソー社製）を用い、カラム温度は２５℃、インジェクション量は５μＬとした。ＨＰＬＣで測定した蛍光のピーク高から、次の式にてＨＡ分解率を算出した。
ＨＡ分解率（％）＝｛（細胞に添加する前の高分子ＨＡのピーク高  −  試験物質添加群の培養上清における高分子ＨＡのピーク高）／（細胞に添加する前の高分子ＨＡのピーク高  −  対照群の培養上清における高分子ＨＡのピーク高）｝×１００。
【００６８】
３）結果
結果を図１に示す。カカオエキス、ウーロン茶エキス及びオリーブエキスのいずれにおいても、濃度依存的な、KIAA1199によるＨＡ分解を抑制する作用が認められた。
【図１】
2018135272.tif 000003