(57)【要約】【課題】  本発明は、副作用の懸念が少なく、ビタミンＣの標的組織への取り込みを顕著に促進させるビタミンＣトランスポーター産生促進剤を提供することを目的とする。【解決手段】  ビタミンＣトランスポーター産生促進剤は、ポリフェノールを、ビタミンＣ若しくはビタミンＣ誘導体に対してモル濃度比で０．０２〜１の範囲で含む、構成としている。【選択図】  図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリフェノールを、ビタミンＣ若しくはビタミンＣ誘導体に対してモル濃度比で０．０２〜１の範囲で含む、ビタミンＣトランスポーター産生促進剤。
【請求項２】
前記ポリフェノールが、没食子酸、カルノソール、ケイ皮酸、バニリン、エラグ酸からなる群より選択される少なくとも一種以上を含有することを特徴とする請求項１に記載のビタミンＣトランスポーター産生促進剤。
【請求項３】
ポリフェノールと、ビタミンＣあるいはビタミンＣ誘導体とをモル濃度比で１：１〜５０の範囲で含むビタミンＣ吸収促進用組成物。
【請求項４】
前記ポリフェノールが、没食子酸、カルノソール、ケイ皮酸、バニリン、エラグ酸からなる群より選択される少なくとも一種以上を含有することを特徴とする請求項３に記載のビタミンＣ吸収促進用組成物。
【請求項５】
ビタミンＣ誘導体が、２−Ｏ−（α‐Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスコルビン酸である請求項４に記載のビタミンＣ吸収促進用組成物。
【請求項６】
請求項３〜５のいずれか１項に記載のビタミンＣ吸収促進用組成物を含む美白用組成物。
【請求項７】
請求項３〜５のいずれか１項に記載のビタミンＣ吸収促進用組成物を含む表皮分化促進用組成物。
【請求項８】
請求項３〜５のいずれか１項に記載のビタミンＣ吸収促進用組成物を含む飲食品。
【請求項９】
請求項３〜５のいずれか１項に記載のビタミンＣ吸収促進用組成物を含む医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビタミンＣトランスポーター産生促進作用を有する化合物に関する。また、その化合物を利用したビタミンＣ吸収促進用組成物、該ビタミンＣ吸収促進用組成物を含む美白用組成物又は表皮分化促進用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビタミンＣは、体内で発生する活性酸素の働きを抑えるという優れた抗酸化作用を持ち、細胞内における過酸化脂質の生成を抑える。また、風邪のような感染症の防御に重要な免疫刺激効果、アレルギー反応時に発現する物質であるヒスタミンの抑制因子としての効果、コラーゲン合成におけるプロリン残基のヒドロキシル化、紫外線によりメラニン色素を合成する律速酵素として知られるチロシナーゼの活性制御、キレート作用による鉄運搬の調整、酸化と還元の調節による様々な酵素反応への関与といった、多くの機能を有している。このように多くの機能を有するビタミンＣであるが、モルモット及びヒトを含む霊長類は、代謝過程で必要となる酵素（Ｌ−グロノラクトンオキシターゼ）が遺伝子的に欠損しているためビタミンＣを合成する能力がなく、更にビタミンＣは、水溶性の性質を持ち、他の脂溶性ビタミンに比べ生体保持時間が短いことから、ビタミンＣの機能不足に陥りやすいことが問題である。
【０００３】
ビタミンＣが欠乏することによって、壊血病、創傷治癒能の低下、骨や結合組織の障害、血管運動の不安定化などの様々な疾患が起こる。そのため、ビタミンＣは、心疾患、癌、白内障、風邪などの様々な疾患に対する予防や治療を目的として用いられてきた（非特許文献１）。また疾患以外にも、コラーゲンの生成を促し、美白効果や肌のうるおいを強化する効果があり、更には抗老化作用を目的としたビタミンＣ含有製剤が数多く提供されてきた。
【０００４】
このようにビタミンＣの機能やその有効性に関する知見は数多く報告されている一方で、ビタミンＣの各組織への取り込み機構に関しては、未だに解明されていない点が多く、研究が行われている。例えば、１９９９年Ｔｓｕｋａｇｕｃｈｉらは、ビタミンＣを各組織へ輸送するビタミンＣトランスポーターを見出した。具体的にはラットからビタミンＣの取り込みを担う膜タンパク質のクローニングに成功し、ナトリウムイオン：ビタミンＣ＝２：１の割合にて細胞内へ輸送するナトリウム依存性ビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ）を見出した（非特許文献２）。その後の研究で、ヒトにおいてもビタミンＣトランスポーターが存在することが明らかとなり、また、ビタミンＣトランスポーターには１型（ＳＶＣＴ１）と２型（ＳＶＣＴ２）の２種類のアイソフォームがあることが明らかとなった。ＳＶＣＴ１は、主に小腸、肝臓、腎臓、大腸、子宮、前立腺などの上皮組織に分布し、ＳＶＣＴ２は肺、骨格筋、目、骨、脳などの内皮組織に広く分布している。
【０００５】
また、Ａｌｅｘａｎｄｅｒらは、ラットの肝臓において、加齢に伴うビタミンＣ保有量とビタミンＣトランスポーターの発現量の関係について調査し、ビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ１）の発現量が低下すること及びビタミンＣ保有量が減少することを報告した（非特許文献３）。ビタミンＣ保有量低下の予防あるいは改善の方法として、ビタミンＣの継続的な摂取が挙げられるが、ＭａｃＤｏｎａｌｄらは、過剰にビタミンＣを摂取することによって、ビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ１）の発現が低下し、さらにビタミンＣの取り込み能力を低下させることを、ヒト腸管モデルを用いて推測している（非特許文献４）。また、紫外線照射によって皮膚細胞におけるビタミンＣトランスポーターの発現量が低下することも明らかとなっており、加齢及び紫外線暴露、つまり自然老化及び光老化によって皮膚におけるビタミンＣ取り込み量が減少すると考えられている。これらの知見からビタミンＣ保有量低下に起因するビタミンＣの機能低下に関する予防あるいは改善に、ビタミンＣトランスポーター産生促進剤が効果的であることが考えられた。
【０００６】
ところで、現在までＳＶＣＴ１及びＳＶＣＴ２の発現を高める化合物や植物に関して、数々の検討が行われてきた。Ｆｕｊｉｔａらはマウス骨芽細胞を用いてデキサメタゾンがＳＶＣＴ２の発現を高め、ビタミンＣの取り込み量を上昇させることを報告している（非特許文献５）。しかし、デキサメタゾンはホルモン様作用を示すため、副作用という観点から使用にあたって大きな制約となる。また、ＳＶＣＴの発現を増強する化合物あるいは植物に関する報告として、グレープフルーツエキスがＳＶＣＴ１発現増強作用を有し、ビタミンＣと併用することにより、メラニン生成を強く抑制し、シミの予防、改善に効果的であることが報告されている（非特許文献６及び７）。
【０００７】
このように、細胞のビタミンＣ、その誘導体やそれらの塩の取り込みを促進することによって、ビタミンＣの有する各種の効果増強が期待されるため、さらに有効な細胞のビタミンＣ、その誘導体やそれらの塩の吸収促進用組成物の開発が望まれていた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ２００１，  Ｖｏｌ．１８，  ８７−９５
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ，  １９９９，  Ｖｏｌ．３９９，  ７０−７５
【非特許文献３】Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，２００３，  Ｖｏｌ．４１０，１１２−１２０
【非特許文献４】Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，２００２，  Ｖｏｌ．８７，９７−１００
【非特許文献５】Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，２００１，  Ｖｏｌ．８６，１４５−１４９
【非特許文献６】第１２１回フレグランスジャーナルセミナー  ｐ．１５−１７
【非特許文献７】第７回  日本抗加齢医学会総会  抄録集  ｐ．１３２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、副作用の懸念が少なく、ビタミンＣの標的組織への取り込みを顕著に促進させるビタミンＣトランスポーター産生促進剤を提供することを目的とする。標的組織とは、人の体においてビタミンＣが作用しうるすべての部分をいい、例えば、組織や器官をつなぎ合わせる結合組織、血管、皮膚、粘膜、骨等を示す。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、ビタミンＣトランスポーター産生促進作用を有する化合物を見出し、ビタミンＣ吸収用組成物、美白用組成物、表皮分化促進用組成物として極めて有用であるという知見から本発明を完成するに至った。すなわち、ここで提案する解決手段は、次の構成をとる。
【００１１】
上記課題を解決するため、本発明に係るビタミンＣトランスポーター産生促進剤では、ポリフェノールを、ビタミンＣ若しくはビタミンＣ誘導体に対してモル濃度比で０．０２〜１の範囲で含む構成としている。
【００１２】
本発明に係るビタミンＣトランスポーター産生促進剤の一態様では、前記ポリフェノールが、没食子酸、カルノソール、ケイ皮酸、バニリン、エラグ酸からなる群より選択される少なくとも一種以上を含有する構成としている。
【００１３】
本発明に係るビタミンＣトランスポーター産生促進剤の一態様では、ポリフェノールと、ビタミンＣあるいはビタミンＣ誘導体とをモル濃度比で１：１〜５０の範囲で含むビタミンＣ吸収促進用組成物を提供する構成としている。
【００１４】
本発明に係るビタミンＣトランスポーター産生促進剤の一態様では、前記ポリフェノールが、没食子酸、カルノソール、ケイ皮酸、バニリン、エラグ酸からなる群より選択される少なくとも一種以上を含有する前記ビタミンＣ吸収促進用組成物を提供する構成としている。
【００１５】
本発明に係るビタミンＣトランスポーター産生促進剤の一態様では、ビタミンＣ誘導体が、２−Ｏ−（α‐Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスコルビン酸である前記ビタミンＣ吸収促進用組成物である構成としている。
【００１６】
本発明に係るビタミンＣトランスポーター産生促進剤の一態様では、前記ビタミンＣ吸収促進用組成物を含む美白用組成物を提供する構成としている。
【００１７】
本発明に係るビタミンＣトランスポーター産生促進剤の一態様では、前記ビタミンＣ吸収促進用組成物を含む表皮分化促進用組成物を提供する構成としている。
【００１８】
本発明に係るビタミンＣトランスポーター産生促進剤の一態様では、前記ビタミンＣ吸収促進用組成物を含む飲食品を提供する構成としている。
【００１９】
本発明に係るビタミンＣトランスポーター産生促進剤の一態様では、前記ビタミンＣ吸収促進用組成物を含む医薬品を提供する構成としている。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、ビタミンＣトランスポーターとして特にＳＶＣＴ１のタンパク質発現を顕著に促進する、副作用の懸念の少ないビタミンＣトランスポーター産生促進剤及びビタミンＣ吸収促進剤を提供することができる。こうしたビタミンＣトランスポーター産生促進剤やビタミンＣ吸収促進剤を、例えば皮膚外用剤、飲食品、医薬品にも使用することで、手軽にビタミンＣの吸収を高めることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】ポリフェノール添加時のヒト表皮角化細胞におけるビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ１）産生促進を示すグラフである。
【図２】ヒト表皮角化細胞における没食子酸のビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ１）産生促進を示すグラフである。
【図３】ヒト表皮角化細胞におけるビタミンＣ取り込み量を示すグラフである。
【図４】Ｂ１６メラノーマ細胞におけるビタミンＣ及びビタミンＣ誘導体取り込み量を示すグラフである。
【図５】Ｂ１６メラノーマ細胞におけるメラニン産生抑制試験を示すグラフである。
【図６】ヒト表皮角化細胞における分化促進効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下、本発明の詳細を説明する。本発明のビタミンＣトランスポーター産生促進剤に含まれる化合物としては、ポリフェノールである。ポリフェノールは、フラボノイド系ポリフェノールと非フラボノイド系ポリフェノールに分類され、特に非フラボノイド系ポリフェノールが好ましい。非フラボノイド系ポリフェノールとしては、フェニルカルボン酸系（没食子酸など）、リグナン系、クルクミン系、クマリン系、カルノソール、ケイ皮酸、バニリン、エラグ酸などがある。特に、没食子酸、カルノソール、ケイ皮酸、バニリン、エラグ酸からなる群より選択される少なくとも一種のポリフェノールが好ましく、最も好ましくは没食子酸である。また、これらの塩、水和物、誘導体を使用することもできる。また、これらの化合物を含有する植物、動物、鉱物、微生物の粉砕物、その抽出物、あるいは抽出加水分解物も使用できる。
【００２３】
本発明のビタミンＣ吸収促進剤は、美白用組成物、表皮分化促進用組成物として利用することができ、経口用、皮膚外用、注射、化粧品、医薬品などの形態としても使用できる。
【００２４】
ビタミンＣトランスポーター産生促進剤に含まれるポリフェノールと、ビタミンＣ若しくはビタミンＣ誘導体とのモル濃度比において、ビタミンＣ若しくはビタミンＣ誘導体を１とすると、ポリフェノールがモル濃度比で０．０２〜１の範囲で含有するように組み合わされることが好ましく、より好ましくは、０．０５以上であり、最も好ましくは、０．１以上である。
モル濃度比が０．０２以上であることにより、組成物中のビタミンＣの濃度を減ずることもでき、それによって乳化物及びジェルの安定化をはかることも可能となる。さらに、ビタミンＣ若しくはビタミンＣ誘導体が持つ抗酸化力によって、ビタミンＣ若しくはビタミンＣ誘導体を含む組成物が変色することを防ぐことができる。くわえて、ビタミンＣ若しくはビタミンＣ誘導体の保有量を増加させ、これらを効率的に皮膚へ取り込むことができ、コラーゲン産生に活用される可能性を高める。このように効率的にビタミンＣを摂取できることにより、美白、肌のうるおいの強化、抗老化作用等の効果を能率的に得ることができる。なお、上限については、１よりも多く存在していてもトランスポーター産生促進効果の向上が見られないため、コストの観点から１以下が好ましい。
【００２５】
没食子酸及びその塩は、植物の葉、果実、茎、根等に広く遊離状態で存在し、これらから単離することができる他、タンニン酸を加水分解することによっても得ることができる。また、没食子酸水和物は、市販品の没食子酸一水和物等を用いることができる。
【００２６】
没食子酸を含む植物としては、カキ、クリ、五倍子、タラ、タマリンド、ミモザ、ラズベリー、ブラックベリー、グレープ、茶、カカオ、クルミ、クローブ、スーマック、マンゴー、ホップ、カムカム、オーク、ウィッチヘーゼル、ワットル、ケブラチョ、チェストナット、ミラボラム、ガンビアなどが挙げられる。
【００２７】
カルノソールを含む植物としては、シソ科植物が挙げられる。より具体的な例としては、ローズマリー（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  Ｌ．）、セージ（Ｓａｌｖｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  Ｌ．）、ラベンダー（Ｌａｖａｎｄｕｌａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、タイム（Ｔｈｙｍｕｓ  ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ  Ｌ．，Ｔｈｙｍｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ  Ｌ．）およびシソ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ  Ｂｒｉｔｔｏｎ  ｖａｒ．  ａｃｕｔａ  Ｋｕｄｏ）などが挙げられる。
【００２８】
ケイ皮酸を含む植物としては、シナモンが挙げられる。
【００２９】
バニリンを含む植物としては、バニラが挙げられる。
【００３０】
本発明における「エラグ酸」として具体的には、エラグ酸、３，４−ジ−ｏ−
メチルエラグ酸、３，３’，４−トリ−ｏ−メチルエラグ酸、３，３’−ジ−ｏ−メチルエラグ酸、３，３’，４，４’−テトラ−ｏ−メチル−５−メトキシエラグ酸、３−ｏ−エチル−４−ｏ−メチル−５−ｏ−ハイドロキシエラグ酸、アムリトシド（Ａｍｕｒｉｔｏｓｉｄｅ）及びそれらの塩等を挙げることができ、また、エラグ酸の塩としてナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、アミン塩等が挙げられる。これらの中でも、エラグ酸のフェノール性水酸基の一部がアルカリ金属塩となったものが溶解性等の点から特に好ましい。
【００３１】
エラグ酸を含む植物としては、ユーカリ材（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ）、毒ウツギ（コリナリヤヤボニカ）、ラジアタ松、クマコケモモ、ザクロ、アンマロク、ウキュウヨウ、エンフヨウ、ガイジチャ、カコウジュヨウ、訶子、喜樹、ケンジン、コウナンカ、サンキュウコン、シュウフウボク、センクッサイ、ソウゲンロウカンソウ、ダイヒヨウソウ、ドウモウアンヨウ、ハオウベン、バンセキリュウカン、バンセキリュウヒ、ボウカ、モッショクシ、ヤトウセイカ、ヤトウセイヒ、ユカコン、ユカンボクヒ、ユカンヨウ、リュウガソウコン、バンセキリュウヨウ、ウキュウボクコンピ、シドコン、チンシュウソウ、ゲンノショウコなどが挙げられる。
【００３２】
上記列挙した本発明より見出された化合物を含む植物は、葉、茎、芽、花、木質部、木皮部（樹皮）等の地上部、及び、根、根茎等の地下部、種子、樹脂など全ての部位が使用可能である。また、上記列挙した本発明により見出された化合物を含む微生物は、例えば、液体培養物、固体培養物を用いることができ、菌類の場合には、菌糸体、子実体などいずれも使用可能である。
【００３３】
上記列挙した本発明より見出された化合物を含む植物、鉱物、微生物、動物は、原体、原体の加水分解物、抽出物、抽出物の加水分解物として使用可能である。また、これらの化合物は化学合成されたものであっても使用可能である。
【００３４】
本発明の化合物を植物、鉱物、微生物、動物から得るための抽出方法としては、例えば、カムカムの場合、カムカムの種子を乾燥させた乾燥物、その粉砕物、カムカム種子を圧搾して得られる搾汁等を適当な溶媒で抽出し、場合によっては加水分解処理を施し、不溶部分をろ過等で取り除きこの液から溶媒を除去した後にカラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段を用いて目的の化合物を得る方法が挙げられる。
【００３５】
本発明における「ビタミンＣトランスポーター産生促進剤」とは、ナトリウム依存性ビタミンＣトランスポーター１型（ＳＶＣＴ１）の発現を高めるもの、また換言すれば、ＳＬＣ２３Ａ１として表される遺伝子産物の発現を高めるものをいう。
【００３６】
本発明における「ビタミンＣ吸収促進用組成物」とは、ビタミンＣトランスポーター産生促進剤にビタミンＣあるいはその誘導体の少なくとも一種類以上を組み合わせたものをいい、経口あるいは塗布によって摂取したビタミンＣ、あるいはその誘導体の標的組織におけるビタミンＣ濃度が高まる組成物のことを指す。
【００３７】
本発明における「ビタミンＣ誘導体」としては、２−Ｏ−（α‐Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスコルビン酸に加え、Ｌ―アスコルビン酸モノステアレート、Ｌ―アスコルビン酸モノパルミテート、Ｌ―アスコルビン酸モノオレート等のアスコルビン酸モノアルキルエステル類、Ｌ―アスコルビン酸モノリン酸エステル、Ｌ―アスコルビン酸―２―硫酸等のアスコルビン酸モノテステル誘導体、Ｌ―アスコルビン酸ジステアレート、Ｌ―アスコルビン酸ジパルミテート、Ｌ―アスコルビン酸ジオレート等のアスコルビン酸ジアルキルエステル類、Ｌ―アスコルビン酸ジリン酸エステル等のアスコルビン酸ジエステル誘導体、Ｌ―アスコルビン酸トリステアレート、Ｌ―アスコルビン酸トリパルミテート、Ｌ―アスコルビン酸トリオレート等のアスコルビン酸トリアルキルエステル類、Ｌ―アスコルビン酸トリリン酸エステル等のアスコルビン酸トリエステル誘導体等を挙げることができるがこれらに限定されるわけではない。塩としては、アスコルビン酸と各種塩基との塩が挙げることができる。例えば、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩等）が挙げることができるがこれらに限定されるわけではない。
【００３８】
本発明における「美白用組成物」とは既成のシミ・ソバカスに対する淡色化作用を示す組成物を指す。シミ・ソバカスはメラニン生成が過剰となりその沈着によって起こる結果であるが、ビタミンＣは、メラニン生成に深く関与するチロシナーゼの阻害物質であり、また、酸化型濃色メラニンから還元型淡色メラニンにする作用を亢進させることが知られている。臨床的に既成のシミ・ソバカス等の色素沈着を改善することが報告されている（臨皮１９６７, Ｖｏｌ  ２１（７），７２５−７２９）。本発明の美白用組成物は、皮膚細胞におけるビタミンＣ濃度を高めることによりビタミンＣの美白作用を増強する組成物のことを指す。本発明の美白用組成物は、本発明のビタミンＣ吸収促進用組成物を含むものであればよく、さらに、ビタミンＣ吸収促進作用を阻害しないものであれば他に添加物を添加して調整することもできる。
【００３９】
本発明における「表皮分化促進用組成物」とは、ビタミンＣが有する表皮への後期分化促進作用を、ビタミンＣ濃度を高めることによって増強するものをいう。例えば、ヒト表皮角化細胞の場合は、後期分化の指標となるフィラグリンタンパク質の産生を行うことでの、肌のうるおいを高める組成物のことを指す。本発明の表皮分化促進用組成物は、本発明のビタミンＣ吸収促進用組成物を含むものであればよく、さらに、表皮分化促進用組成物を阻害しないものであれば、他に添加物を添加して調整することもできる。
【００４０】
本発明の剤あるいは組成物は、食品、医薬品、化粧品等として使用できる。食品としては、通常の食品の他、栄養補助食品、機能性食品、健康食品、特定保健用食品等として使用しても良く、例えば、ジュースのような飲料に配合することもできる。
【００４１】
また、本発明の剤あるいは組成物は、皮膚外用として、薬事法のいう化粧品、医薬部外品、医薬品等に含まれる製品とすることができる。乳液、クリーム、ローションのようなスキンケア製品、軟膏等に用いられる。特に限定されるものではないが、その剤型は水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、油液系、ゲル系、軟膏系、エアゾール系、水―油２層系、水―油―粉末３層系等、幅広い剤型を取り得る。
【００４２】
本発明の剤あるいは組成物において、選定された化合物の皮膚外用における含有量は、症状の違いにより適宜選択されるが、例えば、没食子酸水和物の場合、全重量の０．００１〜１０重量％程度、好ましくは０．０１〜２重量％である。また、ビタミンＣ誘導体として２−Ｏ−（α‐Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスコルビン酸を用いた場合、全重量の０．００１〜５０重量％程度、好ましくは０．１〜５．０重量％である。これを１〜４回／日に分けて塗布することももちろん差し支えない。
【実施例】
【００４３】
以下に実施例及び比較例を挙げて、具体的に説明するが、これに限定されるものではない。
実施例１：
［ポリフェノール添加時のヒト表皮角化細胞におけるビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ１）産生促進］
ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ、クラボウ（株））を１２ウェルプレート（ファルコン社製）に１．０×１０５個／ｍＬとなるように播種し、正常ヒト表皮角化細胞増殖用無血清培地（ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２、クラボウ（株））にて３７℃、５％炭酸ガス存在下で４日間培養した。翌日、新しい培養液に置換し被験物質添加用の細胞とした。被験物質には、ポリフェノールとして、没食子酸（ＣＡＳ：５９９５−８６−８［没食子酸一水和物］,和光純薬工業（株））、カルノソール（ＣＡＳ：５９５７−８０−２,和光純薬工業(株)）、ケイ皮酸（ＣＡＳ：６２１−８２−９,和光純薬工業(株)）、バニリン（ＣＡＳ：１２１−３３−５,和光純薬工業(株)）、エラグ酸（ＣＡＳ：４７６−６６−４,和光純薬工業(株)）を用いた。被験物質はＰＢＳ（−）に溶解させ、最終濃度１０μＭとなるよう被験物質添加用の細胞に添加し、２４時間後、サンプルバッファーにて細胞を溶解し、プロテインアッセイキット（バイオ・ラッド社製）を用いてタンパク定量を行った。その後、ＳＤＳ−ＰＡＧＥに各細胞破砕液をアプライし、１次抗体として抗ＳＶＣＴ１抗体（ＳＶＣＴ１抗体（Ｎ−２０）： ｓｃ−９９２４）及び抗ＧＡＰＤＨ抗体（Ａｎｔｉ−ＧＡＰＤＨ Ｍｏｕｓｅ ｍＡｂ（６Ｃ５））を用いてＷｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ法によりＳＶＣＴ１タンパク質及びＧＡＰＤＨタンパク質の発現量を測定した。ＧＡＰＤＨは全ての細胞で恒常的に発現していることから、内部標準のコントロールタンパク質として広く用いられている。また、被験物質未添加（ＰＢＳ（−））をコントロール群とした。尚、画像解析にはＩｍａｇｅＪを用いた。コントロールを１００としてまとめた。結果を図１に示す。
【００４４】
図１より、コントロールと比較し、没食子酸、カルノソール、ケイ皮酸、バニリン、エラグ酸を添加した際、ＳＶＣＴ１発現量の上昇が認められた。
【００４５】
実施例２：
［ヒト表皮角化細胞における没食子酸のビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ１）産生促進］
ヒト表皮角化細胞を１２ウェルプレートに１．０×１０５個／ｍＬとなるように播種し、正常ヒト表皮角化細胞増殖用無血清培地にて３７℃、５％炭酸ガス存在下で４日間培養した。翌日、新しい培養液に置換し被験物質添加用の細胞とした。被験物質である没食子酸水和物は没食子酸一水和物（ＣＡＳ：５９９５−８６−８）であり、和光純薬工業より購入した。被験物質はＰＢＳ（−）に溶解させ、最終濃度を１〜２０μＭとなるよう被験物質添加用の細胞に添加し、２４時間後、サンプルバッファーにて細胞を溶解し、プロテインアッセイキット（バイオ・ラッド社製）を用いてタンパク定量を行った。その後、ＳＤＳ−ＰＡＧＥに各細胞破砕液をアプライし、１次抗体として抗ＳＶＣＴ１抗体（ＳＶＣＴ１抗体（Ｎ−２０）： ｓｃ−９９２４）及び抗ＧＡＰＤＨ抗体（Ａｎｔｉ−ＧＡＰＤＨ Ｍｏｕｓｅ ｍＡｂ（６Ｃ５））を用いてＷｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ法によりＳＶＣＴ１タンパク質及びＧＡＰＤＨタンパク質の発現量を測定した。ＧＡＰＤＨは全ての細胞で恒常的に発現していることから、内部標準のコントロールタンパク質として広く用いられている。また、被験物質未添加（ＰＢＳ（−））をコントロール群とした。尚、画像解析にはＩｍａｇｅＪを用いた。コントロールを１００としてまとめた。結果を図２に示す。
【００４６】
コントロール群と比べ、ヒト表皮角化細胞において没食子酸を添加した際、ＳＶＣＴ１タンパク質の発現量増加が没食子酸濃度に依存的な傾向があることが認められた。
【００４７】
実施例３：
［ヒト表皮角化細胞におけるビタミンＣ取り込み量］
６ウェルプレート（ファルコン社製）にヒト表皮角化細胞ＮＨＥＫを１．０×１０５個／ｍＬとなるように播種し、正常ヒト表皮角化細胞増殖用無血清培地３ｍＬを用いて３７℃、５％炭酸ガス存在下で４日間培養した。その後、没食子酸水和物を終濃度１０μＭに溶解させた培地、又は没食子酸水和物を含まない培地（コントロール）に交換した。２４時間培養後、Ｌ―アスコルビン酸をそれぞれ添加し（最終濃度５００μＭ）、さらに３時間後、細胞を回収した。回収した細胞を超音波破砕し、遠心後、上清中のビタミンＣ量をビタミンＣ定量キット(コスモ・バイオ（株）)により定量し、細胞のビタミンＣ取り込み量を算出した。プロテインアッセイキット（バイオラッド社製）でタンパク定量により各ウェルのタンパク量を測定し、タンパク質１ｍｇ当たりのビタミンＣ取り込み量を算出した。結果を図３に示す。
【００４８】
没食子酸水和物を添加した培地で培養した細胞では、ビタミンＣ単独での添加と比較して、ビタミンＣの取り込み量がおよそ１．５倍に増加することが認められた。
【００４９】
実施例４：
［Ｂ１６メラノーマ細胞におけるビタミンＣ及びビタミンＣ誘導体取り込み量］
６ウェルプレートにＢ１６メラノーマ細胞を１．０×１０５個／ｍＬとなるように播種し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地３ｍＬを用いて３７℃、５％炭酸ガス存在下で４日間培養した。その後、没食子酸水和物を１０μＭの濃度に溶解させた培地、又は没食子酸水和物を含まない培地（コントロール）に交換した。２４時間培養後、Ｌ―アスコルビン酸又は２−Ｏ−（α‐Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスコルビン酸（ビタミンＣ誘導体）をそれぞれ添加し（最終濃度５００μＭ）、さらに３時間後、細胞を回収した。回収した細胞を超音波破砕し、上清中のビタミンＣ又はビタミンＣ誘導体の量をビタミンＣ定量キットにより定量し、細胞のビタミンＣ取り込み量を算出した。プロテインアッセイキットでタンパク定量により各ウェルのタンパク量を測定し、タンパク質１ｍｇ当たりのビタミンＣ取り込み量を算出した。結果を図４に示す。
【００５０】
没食子酸水和物を添加した培地で培養した細胞では、ビタミンＣ単独添加と比較して、ビタミンＣ取り込み量がおよそ１．６倍に増加することが認められた。また、没食子酸水和物を添加した培地で培養した細胞では、ビタミンＣ誘導体単独添加時と比較して、ビタミンＣ誘導体取り込み量がおよそ３．１倍に増加することが認められた。
【００５１】
実施例５：
［Ｂ１６メラノーマ細胞におけるメラニン産生抑制試験］
Ｂ１６メラノーマ細胞を４８ウェルプレートに１．０×１０５個／ｍＬとなるように播種し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地０．２ｍＬを用いて３７℃、５％炭酸ガス存在下で３日間培養した後、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地に没食子酸水和物を１０μＭの濃度で添加した培地あるいはビタミンＣ及びビタミンＣ誘導体を１００μＭの濃度で添加した培地に交換し、同条件でさらに６日間培養を行った。次に培地を取り除き、細胞を回収した後、１Ｎ ＮａＯＨ含有１０％ＤＭＳＯ溶液を加えて細胞内容物を抽出した。この抽出液について、マイクロプレートリーダー（Ｂｅｎｃｈｍａｒｋ Ｐｌｕｓ、バイオラッド社製）を用いて波長４７５ｎｍでメラニン量を測定し、プロテインアッセイキットでタンパク質量を測定した。ここで得られた結果より、タンパク質１ｍｇ当たりのメラニン量を算出した。没食子酸、ビタミンＣに代えてコントロールとしてＰＢＳ（−）を添加した時のメラニン量も測定し、コントロールのメラニン量を１００とした時の試料添加時とコントロールとの相対値をメラニン量（％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ）として表した。結果を図５に示す。
【００５２】
没食子酸水和物とビタミンＣあるいはビタミンＣ誘導体を併用することにより、コントロールあるいはビタミンＣ単独添加と比較して、メラニン産生抑制効果の向上が見られた。
【００５３】
実施例６：
［ヒト表皮角化細胞における分化促進効果］
ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ、クラボウ（株））を１２ウェルプレートに１．０×１０５個／ｍＬとなるように播種し、正常ヒト表皮角化細胞増殖用無血清培地にて３７℃、５％炭酸ガス存在下で４日間培養した。翌日より、没食子酸水和物（終濃度１０μＭ）及びビタミンＣ（終濃度１００μＭ）を含む培地に交換し、４日間培養した。サンプルバッファーにて細胞を溶解後、タンパク定量を行い、抗フィラグリン抗体（Ａｎｔｉ Ｆｉｌａｇｇｒｉｎ（ＡＫＨ１）,Ｈｕｍａｎ（Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｎｏ））及び抗ＧＡＰＤＨ抗体（Ａｎｔｉ−ＧＡＰＤＨ Ｍｏｕｓｅ ｍＡｂ（６Ｃ５））を用いてＷｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ法により、フィラグリンタンパク質及びＧＡＰＤＨタンパク質の発現量を測定した。フィラグリンはヒト表皮角化細胞において角層特異的に発現するタンパク質であり、角化細胞の後期分化マーカーとして用いられている。また、ＧＡＰＤＨは全ての細胞で恒常的に発現していることから、内部標準のコントロールタンパク質として広く用いられている。また、被験物質未添加（ＰＢＳ（−））をコントロールとした。内部標準としてのＧＡＰＤＨ発現量で各被験物質添加サンプルのフィラグリン発現量を補正し、さらにコントロールの値を１００とした時の相対値をフィラグリン量（％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ）と表した。尚、画像解析はＩｍａｇｅＪを用いた。結果を図６に示す。
【００５４】
没食子酸水和物とビタミンＣを併用することにより、コントロールあるいはビタミンＣ単独添加時と比較して、フィラグリン発現量の増加が見られた。
【００５５】
以下に製剤実施例を挙げるが、本発明はこれらの実施例に限られるものではない。なお、下記の各処方において％とは、特に言及しない限り、重量（Ｗ／Ｗ）％を意味するものとする。
【００５６】
製剤実施例１（洗顔フォーム）
（１）ステアリン酸                                                １７．０
（２）ミリスチン酸                                                  ７．０
（３）ラウリン酸                                                    ３．０
（４）ジイソステアリン酸ＰＥＧ−６０グリセリル                      ３．０
（５）ステアリン酸グリセリル                                        １．６
（６）ステアリン酸ＰＥＧ−２０                                      ０．４
（７）ソルビトール                                                  ８．０
（８）ＰＥＧ−６                                                    ５．０
（９）ＰＥＧ−３２                                                  ５．０
（１０）ココベタイン                                                ５．０
（１１）グリセリン                                                １８．０
（１２）ＥＤＴＡ−４Ｎａ                                          ０．０５
（１３）水酸化カリウム                                              １．１ 
（１４）アスコルビルグルコシド                                      ２．０
（１５）没食子酸一水和物                                          ０．０５
（１６）精製水                                                        残余
【００５７】
製剤実施例２（クレンジング）
（１）１，３−ブチレングリコール                                  ３０．０
（２）グリセリン                                                  ３０．０
（３）カルボマー                                                    ０．５
（４）ペンチレングリコール                                          ２．０
（５）ラウリン酸ＰＥＧ−９グリセリル                              １０．０
（６）アスコルビン酸                                                ２．０
（７）没食子酸水和物                                              ０．０４
（８）防腐剤                                                          適量
（９）水酸化カリウム                                              ０．２３
（１０）精製水                                                        残余
【００５８】
製剤実施例３（化粧水）
（１）デカマカデミアナッツ脂肪酸ポリグリセリル−１０                ０．４
（２）ＰＰＧ−６デシルテトラデセス−２０                          ０．７５
（３）ＰＥＧ−６０硬化ヒマシ油                                    ０．７５
（４）テトラヘキシルデカン酸アスコルビル                            ０．２
（５）バニリン                                                    ０．０１
（６）パルミチン酸レチノール                                        ０．１
（７）酢酸ｄｌ−α−トコフェロール                                  ０．１
（８）カプリン酸グリセリル                                          ０．２
（９）ラウリン酸ポリグリセリル−２                                  ０．２
（１０）ラウリン酸ポリグリセリル−１０                              ０．１
（１１）グリセリン                                                  ３．０
（１２）ヒドロキシエチルセルロース（２％水溶液）                  １０．０
（１３）精製水                                                        残余
【００５９】
製剤実施例４（乳液）
（１）オリーブ油脂肪酸セテアリル                                    ２．０
（２）オリーブ油脂肪酸ソルビタン                                    ０．５
（３）パルミチン酸セチル                                            ０．５
（４）パルミチン酸ソルビタン                                        ０．５
（５）オリーブ油脂肪酸ソルビタン                                    １．０
（６）オリーブ油脂肪酸エチルヘキシル                                ２．０
（７）セテアリルアルコール                                          １．５
（８）炭酸ジカプリリル                                              １．２
（９）ホホバ種子油                                                  １．５
（１０）グリセリン                                                  ２．０
（１１）ＥＤＴＡ−２Ｎａ                                            ０．１
（１２）キサンタンガム                                              ０．２
（１３）変性バレイショデンプン                                      １．２
（１４）トコフェロール                                              ０．５
（１５）アスコルビルグルコシド                                      ２．０
（１６）カルノソール                                              ０．０５
（１７）クエン酸                                                  ０．０２
（１８）クエン酸ナトリウム                                          ０．３
（１９）水酸化カリウム                                            ０．３９
（２０）防腐剤                                                        適量
（２１）精製水                                                        残余
【００６０】
製剤実施例５（クリーム）
（１）テトラヘキシルデカン酸アスコルビル                            １．０
（２）セテス−２０                                                  １．０
（３）テトラオレイン酸ソルベス−４０                                ０．５
（４）ステアリン酸グリセリル                                        １．０
（５）セタノール                                                    ５．０
（６）α−オレフィンオリゴマー                                    １０．０
（７）ミリスチン酸イソセチル                                        ６．０
（８）トリエチルヘキサノイン                                        ３．０
（９）ホホバ油                                                      １．０
（１０）メチルポリシロキサン                                        ０．２
（１１）天然ビタミン Ｅ                                             ０．１
（１２）防腐剤                                                        適量
（１３）キサンタンガム                                              ０．１
（１４）１，３−ブチレングリコール                                  ５．０
（１５）クエン酸                                                    ０．１
（１６）クエン酸ナトリウム                                          ０．４
（１７）ソルビトール発酵多糖                                        １．０
（１８）ケイ皮酸                                                  ０．０２
（１９）精製水                                                        残余
【００６１】
製剤実施例６（クリーム）
（１）ミネラルオイル                                              １０．０
（２）ミリスチン酸イソプロピル                                    １６．０
（３）ビス-ステアリル ＰＥＧ／ＰＰＧ−８／ ６ ＳＭＤＩ／ＰＥＧ−４００）
コポリマー                                                    ０．７
（４）ポリソルベート６０                                            ３．０
（５）１，３−ブチレングリコール                                    ３．０
（６）防腐剤                                                          適量
（７）リン酸アスコルビルＭｇ                                        ３．０
（８）エラグ酸                                                      １．０
（９）精製水                                                          残余
【００６２】
製剤実施例７（美容液）
（１）ジグリセリン                                                １５．０
（２）グリセリン                                                    ２．０
（３）ジプロピレングリコール                                        ５．０
（４）カルボマー                                                  ０．２５
（５）アクリレーツ/アクリル酸アルキル（Ｃ１０−３０））クロスポリマー
０．１
（６）ヒアルロン酸ナトリウム                                      ０．０５
（７）水酸化カリウム                                              ０．１５
（８）イソステアリン酸ポリグリセリル-１０                           ０．３
（９）エチルヘキサン酸セチル                                        １．０
（１０）スクワラン                                                  ０．６
（１１）ジメチコン                                                  ０．６
（１２）アスコルビン酸                                              ３．０
（１３）カルノソール                                              ０．０６
（１４）防腐剤                                                        適量
（１５）精製水                                                        残余
【００６３】
製剤実施例８（Ｗ／Ｓ美容液）
（１）ジメチコン                                                  １０．０
（２）シクロメチコン                                                ３．０
（３）ホホバ油                                                      ０．５
（４）ミリストイルメチルアミノプロピオン酸ヘキシルデシル            ２．０
（５）ジメチコンコポリオール/ジメチコン                             ４．０
（６）ジメチルシリル化シリカ                                      ０．２５
（７）アクリル酸/アクリル酸アルキル（Ｃ１０-３０））コポリマー    ０．０８
（８）酢酸トコフェロール                                            ０．１
（９）防腐剤                                                          適量
（１０）グリセリン                                                ３５．０
（１１）１,３−ブチレングリコール                                   １．０
（１２）ジプロピレングリコール                                      ５．０
（１３）酸化鉄                                                  ０．００１
（１４）硫酸Ｍｇ                                                    ０．２
（１５）尿素                                                        １．０
（１６）アスコルビン酸Ｍｇ                                          １．０
（１７）バニリン                                                  ０．０２
（１８）精製水                                                        残余
【００６４】
製剤実施例９（保湿ジェル）
（１）オリーブ油脂肪酸セテアリル                                    ２．０
（２）オリーブ油脂肪酸ソルビタン                                    １．５
（３）オリーブ油不けん化物                                          ０．５
（４）炭酸ジカプリリル                                              ３．０
（５）シア脂                                                        ０．５
（６）コムギ胚芽油                                                  ０．５
（７）シクロメチコン                                                ６．０
（８）ジメチコン                                                    １．０
（９）グリセリン                                                    １．５
（１０）ジプロピレングリコール                                      １．５
（１１）ポリアクリル酸ナトリウム                                    ０．７
（１２）キサンタンガム                                              ０．１
（１３）パルミチン酸アスコルビルリン酸３Ｎａ                        ０．５
（１４）没食子酸水和物                                             ０.０１
（１５）防腐剤                                                        適量
（１６）香料                                                          適量
（１７）メントール                                                  ０．３
（１８）エタノール                                                  ３．０
（１９）精製水                                                        残余
【図１】
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【図２】
2018138525.tif 000004
【図３】
2018138525.tif 000005
【図４】
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【図５】
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【図６】
2018138525.tif 000008