(57)【要約】【課題】本発明の目的は、トランスグルタミナーゼの発現を促進させるトランスグルタミナーゼ発現促進剤を提供することを提供することである。【解決手段】(A)ヘパリン類似物質と、(B)アラントイン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、それらの誘導体、及び／又はそれらの塩とを併用することによって、表皮細胞におけるトランスグルタミナーゼの発現を効果的に促進できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
(A)ヘパリン類似物質、並びに(B)アラントイン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、それらの誘導体、及びそれらの塩よりなる群から選択される少なくとも１種を含有する、トランスグルタミナーゼ発現促進剤。
【請求項２】
前記(B)成分として、(B-1)アラントイン及びその誘導体よりなる群から選択される少なくとも１種、並びに(B-2)グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、それらの誘導体、及びそれらの塩よりなる群から選択される少なくとも１種を含有する、請求項１に記載のトランスグルタミナーゼ発現促進剤。
【請求項３】
皮膚外用剤である、請求項１又は２に記載のトランスグルタミナーゼ発現促進剤。
【請求項４】
アトピー性皮膚炎又は尋常性魚鱗癬の予防又は治療に使用される、請求項１〜３のいずれかに記載のトランスグルタミナーゼ発現促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、表皮細胞におけるトランスグルタミナーゼの発現を促進できるトランスグルタミナーゼ発現促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
トランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）は、タンパク質中のグルタミン残基と異種又は同種タンパク質のリジン残基にイソペプチド結合形成を触媒する架橋化酵素であり、生体においてさまざまな作用を示すことが知られている。血漿中のＴＧａｓｅは、血液凝固時にフィブリン、フィブリノーゲン等を架橋化することで血餅構造を安定化させ、出血の抑制に寄与している。また、ＴＧａｓｅは、フィブリンとフィブロネクチンとの架橋反応、又はフィブロネクチンとコラーゲンとの架橋反応等を担っており、創傷治癒過程にも寄与している。更に、ＴＧａｓｅは、表皮では、ロリクリンやインボルクリン等の角質膜（ｃｏｒｎｉｆｉｅｄ ｃｅｌｌ ｅｎｖｅｌｏｐｅ）構成因子のタンパク質を架橋する役割を担っており、角質膜を形成する角化に必要不可欠な因子であることが明らかにされている。また、近年、皮膚疾患である魚鱗癬は、表皮のＴＧａｓｅ1遺伝子異常が大きな原因の一つであることが報告されている。このように、ＴＧａｓｅは、健常な皮膚形成、創傷治癒等の生体機能の維持に重要な役割を担っている。
【０００３】
従来、ＴＧａｓｅの発現や活性を向上させる成分について種々報告されている。例えば、特許文献１には、ハグロソウ（Ｐｅｒｉｓｔｒｏｐｈｅ ｊａｐｏｎｉｃａ）の抽出物にＴＧａｓｅを活性化する作用があることが報告されている。特許文献２には、ソラヤシンにＴＧａｓｅの発現を促進する作用があることが報告されている。特許文献３には、人参の種子抽出物及び人参の花抽出物にＴＧａｓｅの発現を促進する作用があることが報告されている。
【０００４】
しかしながら、製剤処方の多様化、ＴＧａｓｅ発現促進作用の更なる向上等に対応するために、ＴＧａｓｅの発現を促進させる新たな製剤技術の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１４−６２０８９号公報
【特許文献２】特開２０１６−６０７３５号公報
【特許文献３】国際公開第２００９／１５１２１２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ＴＧａｓｅの発現を促進させるＴＧａｓｅ発現促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、前記課題を解決すべく鋭意検討を行ったところ、(A)ヘパリン類似物質と、(B)アラントイン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、それらの誘導体、及び／又はそれらの塩とを併用することによって、表皮細胞におけるＴＧａｓｅの発現を効果的に促進できることを見出した。また、本発明者は、(A)ヘパリン類似物質と、(B-1)アラントイン、及び／又はそれらの誘導体と、(B-2)グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、それらの誘導体、及び／又はそれらの塩とを組み合わせることによって、ＴＧａｓｅの発現促進効果が飛躍的に向上することをも見出した。本発明は、これらの知見に基づいて更に検討を重ねることにより完成したものである。
【０００８】
即ち、本発明は、以下に掲げる態様の発明を提供する。
項１．  (A)ヘパリン類似物質、並びに(B)アラントイン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、それらの誘導体、及びそれらの塩よりなる群から選択される少なくとも１種を含有する、ＴＧａｓｅ発現促進剤。
項２．  前記(B)成分として、(B-1)アラントイン及びその誘導体よりなる群から選択される少なくとも１種、並びに(B-2)グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、それらの誘導体、及びそれらの塩よりなる群から選択される少なくとも１種を含有する、項１に記載のＴＧａｓｅ発現促進剤。
項３．  皮膚外用剤である、項１又は２に記載のＴＧａｓｅ発現促進剤。
項４．  アトピー性皮膚炎又は尋常性魚鱗癬の予防又は治療に使用される、項１〜３のいずれかに記載のＴＧａｓｅ発現促進剤。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤によれば、表皮細胞におけるＴＧａｓｅの発現を効果的に促進できるので、ＴＧａｓｅの機能や発現量の低下が要因の一つになっている疾患や症状の予防又は治療に有効である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤は、ヘパリン類似物質（以下、(A)成分と表記することもある）と、アラントイン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、それらの誘導体、及びそれらの塩よりなる群から選択される少なくとも１種（以下、(B)成分と表記することもある）を含有することを特徴とする。以下、本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤について詳述する。
【００１１】
(A)成分
本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤は、(A)成分としてヘパリン類似物質を含有する。ヘパリン類似物質とは、コンドロイチン多硫酸等の多硫酸化ムコ多糖であり、保湿作用や血流量増加作用等を有することが知られている公知の薬剤である。
【００１２】
本発明で使用されるヘパリン類似物質の由来については、特に制限されないが、例えば、ムコ多糖類を多硫酸化することにより得られたもの、食用獣の組織（例えば、ウシやブタ等の気管軟骨を含む肺臓）から抽出したもの等が挙げられる。本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤では、ヘパリン類似物質として、日本薬局方外医薬品規格に収戴されているヘパリン類似物質が好適に使用される。
【００１３】
本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤における(A)成分の配合量については、該剤の製剤形態等に応じて適宜設定すればよいが、例えば０．０１〜５重量％、好ましくは０．０５〜３重量％、更に好ましくは０．１〜１重量％が挙げられる。
【００１４】
(B)成分
本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤は、(B)成分として、アラントイン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、それらの誘導体、及びそれらの塩よりなる群から選択される少なくとも１種を含有する。これらの(B)成分をヘパリン類似物質と併用することによって、優れたＴＧａｓｅ発現促進効果を奏することが可能になる。
【００１５】
アラントインは、５−ウレイドヒダントインとも称される化合物であり、抗炎症作用や鎮痒作用等を有することが知られている公知の薬剤である。
【００１６】
アラントインの誘導体としては、薬学的に許容できることを限度として特に制限されないが、具体的には、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、アラントインヒドロキシアルミニウム等が挙げられる。これらのアラントインの誘導体は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１７】
グリチルリチン酸は、抗炎症作用や抗アレルギー作用等を有することが知られている公知の薬剤である。
【００１８】
グリチルリチン酸の誘導体としては、薬学的に許容できることを限度として特に制限されないが、具体的には、グリチルリチン酸メチル、グリチルリチン酸ステアリル等が挙げられる。これらのグリチルリチン酸の誘導体は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１９】
グリチルリチン酸及びその誘導体の塩としては、薬理学上許容されるものである限り特に制限されないが、具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、ジカリウム塩等のアルカリ金属塩；アンモニウム塩等が挙げられる。これらのグリチルリチン酸及びその誘導体の塩は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２０】
グリチルレチン酸は、抗炎症作用や抗アレルギー作用等を有することが知られている公知の薬剤である。
【００２１】
グリチルレチン酸の誘導体としては、薬学的に許容できることを限度として特に制限されないが、具体的には、グリチルレチン酸ピリドキシン、グリチルレチン酸ステアリル、グリチルレチン酸グリセリル、グリチルレチン酸モノグルクロニド等が挙げられる。これらのグリチルレチン酸の誘導体は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２２】
グリチルレチン酸及びその誘導体の塩としては、薬理学上許容されるものである限り特に制限されないが、具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；アンモニウム塩等が挙げられる。これらのグリチルレチン酸及びその誘導体の塩は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２３】
本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤において、(B)成分として、アラントイン、アラントインの誘導体、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸の塩、グリチルリチン酸の誘導体、グリチルリチン酸の誘導体の塩、グリチルレチン酸、グリチルレチン酸の塩、グリチルレチン酸の誘導体、及びグリチルレチン酸の誘導体の塩の中から、１種を選択して使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２４】
これらの(B)成分の内、アラントイン及びその誘導体よりなる群から選択される少なくとも１種（以下、(B-1)成分と表記することもある）を使用する場合であれば、ＴＧａｓｅ発現促進効果をより一層向上させるという観点から、好ましくはアラントインが挙げられる。
【００２５】
また、これらの(B)成分の内、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、それらの誘導体、及びそれらの塩よりなる群から選択される少なくとも１種（以下、(B-2)成分と表記することもある）を使用する場合であれば、ＴＧａｓｅ発現促進効果をより一層向上させるという観点から、好ましくはグリチルリチン酸、その誘導体、及び／又はそれらの塩、より好ましくはグリチルリチン酸及び／又はその塩、更に好ましくはグリチルリチン酸ジカリウム、グリチルリチン酸モノアンモニウム、特に好ましくはグリチルリチン酸ジカリウムが挙げられる。
【００２６】
これらの(B)成分の中でも、より一層卓越したＴＧａｓｅ発現促進効果を奏させるという観点から、好ましくは(B-1)成分と(B-2)成分の組み合わせが挙げられる。
【００２７】
本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤において、(A)成分と(B)成分の比率については、特に制限されないが、例えば、(A)成分１重量部当たり、(B)成分が総量で０．００１〜２０重量部が挙げられる。ＴＧａｓｅ発現促進効果をより一層向上させるという観点から、(A)成分１重量部当たり、(B)成分が総量で、好ましくは０．０１〜１５重量部、更に好ましくは０．０５〜７重量部が挙げられる。
【００２８】
より具体的には、(B)成分として(B-1)成分を単独で使用する場合であれば、(A)成分１重量部当たり、(B-1)成分が０．００１〜１０重量部、好ましくは０．０１〜５重量部、更に好ましくは０．０５〜２重量部が挙げられる。(B)成分として(B-2)成分を単独で使用する場合であれば、(A)成分１重量部当たり、(B-2)成分が０．００１〜１０重量部、好ましくは０．０１〜１０重量部、更に好ましくは０．１〜５重量部が挙げられる。また、(B)成分として(B-1)成分及び(B-2)成分を組み合わせて使用する場合であれば、(A)成分１重量部当たり、(B-1)成分が０．００１〜１０重量部且つ(B-2)成分が０．００１〜１０重量部、好ましくは(B-1)成分が０．０１〜５重量部且つ(B-2)成分が０．０１〜１０重量部、更に好ましくは(B-1)成分が０．０５〜２重量部且つ(B-2)成分が０．１〜５重量部が挙げられる。
【００２９】
また、本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤における(B)成分の配合量については、該ＴＧａｓｅ発現促進剤の製剤形態、前述する(A)成分と(B)成分の比率等に応じて適宜設定すればよいが、例えば０．１〜１０重量％、好ましくは０．１〜８重量％、更に好ましくは０．１〜５重量％が挙げられる。
【００３０】
より具体的には、(B)成分として(B-1)成分を単独で使用する場合であれば、(B-1)成分の配合量として、例えば０．１〜５重量％、好ましくは０．１〜３重量％、更に好ましくは０．１〜２重量％が挙げられる。(B)成分として(B-2)成分を単独で使用する場合であれば、(B-2)成分の配合量として、例えば０．１〜８重量％、好ましくは０．１〜５重量％、更に好ましくは０．１〜３重量％が挙げられる。また、(B)成分として(B-1)成分及び(B-2)成分を組み合わせて使用する場合であれば、(B-1)成分の配合量として、例えば(B-1)成分が０．１〜５重量％且つ(B-2)成分が０．１〜８重量％、好ましくは(B-1)成分が０．１〜３重量％且つ(B-2)成分が０．１〜５重量％、更に好ましくは(B-1)成分が０．１〜２重量％且つ(B-2)成分が０．１〜３重量％が挙げられる。
【００３１】
その他の成分
本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤は、前記(A)成分及び(B)成分の他に、必要に応じて、他の薬理成分を含有していてもよい。このような薬理成分としては、例えば、抗ヒスタミン剤（ジフェンヒドラミン、塩酸ジフェンヒドラミン等）、局所麻酔剤（プロカイン、テトラカイン、ブピパカイン、メピパカイン、クロロプロカイン、プロパラカイン、メプリルカイン又はこれらの塩、オルソカイン、オキセサゼイン、オキシポリエントキシデカン、ロートエキス、ペルカミンパーゼ、テシットデシチン等）、抗炎症剤（インドメタシン、フェルビナク、ジクロフェナクナトリウム、ロキソプロフェンナトリウム等）、皮膚保護剤（コロジオン、ヒマシ油等）、血行促進成分（ノニル酸ワニリルアミド、ニコチン酸ベンジルエステル、カプサイシン、トウガラシエキス等）、清涼化剤（メントール、カンフル等）、ビタミン類（ビタミンＡ等）、ムコ多糖類（コンドロイチン硫酸ナトリウム、グルコサミン等）等が挙げられる。
【００３２】
また、本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤は、所望の製剤形態にするために、必要に応じて、基材や添加剤が含まれていてもよい。このような基剤や添加剤については、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、水、低級アルコール（エタノール、イソプロパノール等）、多価アルコール（グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等）等の水性基剤；油類（オリーブ油、サフラワー油、大豆油、つばき油、とうもろこし油、なたね油、ひまわり油、綿実油、落花生油、ラード、スクワラン、魚油等）、鉱物油（流動パラフィン、パラフィン、ゲル化炭化水素、ワセリン等）、ワックス類・ロウ類（ミツロウ、カルナウバロウ、キャンデリラロウ、セレシン、ライスワックス、マイクロクリスタリンワックス等）、エステル油（ミリスチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、セバシン酸ジエチル、セバシン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、パルミチン酸セチル、オレイン酸エチル等）、脂肪酸アルキルエステル、脂肪酸（ステアリン酸、オレイン酸、パルミチン酸、ベヘン酸、リノール酸、ラノリン等）、脂肪酸エステル（パルミチン酸セチル、パルミチン酸イソプロピル、リノール酸エチル等）、高級アルコール（ステアリルアルコール、セタノール、ベヘニルアルコール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール、ヘキサデシルアルコール、ラノリンアルコール等）、コレステロール、トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル、２−エチルヘキサン酸セチル、シリコーンオイル（ジメチルポリシロキサン、環状シリコーン等）等の油性基剤；ＰＯＥ（１０〜５０モル）フィトステロールエーテル、ＰＯＥ（１０〜５０モル）ジヒドロコレステロールエーテル、ＰＯＥ（１０〜５０モル）２−オクチルドデシルエーテル、ＰＯＥ（１０〜５０モル）デシルテトラデシルエーテル、ＰＯＥ（１０〜５０モル）オレイルエーテル、ＰＯＥ（２〜５０モル）セチルエーテル、ＰＯＥ（５〜５０モル）ベヘニルエーテル、ＰＯＥ（５〜３０モル）ポリオキシプロピレン（５〜３０モル）２−デシルテトラデシルエーテル、ＰＯＥ（１０〜５０モル）ポリオキシプロピレン（２〜３０モル）セチルエーテルなどのポリオキシエチレンアルキルエーテル、これらのリン酸・リン酸塩（ＰＯＥセチルエーテルリン酸ナトリウムなど）、ＰＯＥ（２０〜６０モル）ソルビタンモノオレート、ＰＯＥ（１０〜６０モル）ソルビタンモノイソステアレート、ＰＯＥ（１０〜８０モル）グリセリルモノイソステアレート、ＰＯＥ（１０〜３０モル）グリセリルモノステアレート、ＰＯＥ（２０〜１００モル）・ポリオキシプロピレン変性シリコーン、ＰＯＥ・アルキル変性シリコーン、モノラウリン酸ポリエチレングリコール、モノパルミチン酸ポリエチレングリコール、モノステアリン酸ポリエチレングリコール、ジラウリン酸ポリエチレングリコール、ジパルミチン酸ポリエチレングリコール、ジステアリン酸ポリエチレングリコール、ジオレイン酸ポリエチレングリコール、ジリシノレイン酸ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（５〜１００）、ポリソルベート（２０〜８５）、グリセリン脂肪酸エステル（モノステアリン酸グリセリン等）、水素添加大豆リン脂質、水素添加ラノリンアルコール等の界面活性剤；清涼化剤（メントール、カンフル、ボルネオール、ハッカ水、ハッカ油等）、防腐剤（メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸等）、着香剤（シトラール、１，８−シオネール、シトロネラール、ファルネソール等）、着色剤（タール色素（褐色２０１号、青色２０１号、黄色４号、黄色４０３号等）、カカオ色素、クロロフィル、酸化アルミニウム等）、粘稠剤（カルボキシビニルポリマー、ヒプロメロース、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウム、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、キサンタンガム、カラギーナン等）、ｐＨ調整剤（リン酸、塩酸、クエン酸、クエン酸ナトリウム、コハク酸、酒石酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミン、トリイソプロパノールアミン等）、湿潤剤（ｄｌ−ピロリドンカルボン酸ナトリウム液、Ｄ−ソルビトール液、マクロゴール等）、安定化剤（ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、エデト酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アスパラギン酸、ＤＬ−アラニン、グリシン、エリソルビン酸ナトリウム、没食子酸プロピル、亜硫酸ナトリウム、二酸化硫黄、クロロゲン酸、カテキン、ローズマリー抽出物等）、酸化防止剤、紫外線吸収剤、キレート剤、粘着剤、緩衝剤、溶解補助剤、可溶化剤、保存剤等の添加剤が挙げられる。
【００３３】
本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤は、皮膚外用剤、内服剤等のいずれの剤型であってもよいが、ＴＧａｓｅの発現をより一層効果的に促進させるという観点から、好ましくは皮膚外用剤が挙げられる。
【００３４】
本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤を皮膚外用剤として使用する場合、その形状については、経皮適用できることを限度として特に制限されないが、例えば、液状、固形状、半固形状（ゲル状、軟膏状、ペースト状）等が挙げられる。
【００３５】
また、本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤を皮膚外用剤として使用する場合、その製剤形態については、経皮適用できることを限度として特に制限されないが、例えば、皮膚外用医薬品、皮膚外用医薬部外品、化粧料、皮膚洗浄料等が挙げられる。本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤を皮膚外用剤にする場合の製剤形態として、具体的には、クリーム剤、ローション剤、ジェル剤、乳液剤、液剤、貼付剤、エアゾール剤、軟膏剤、パック剤等の皮膚外用医薬品；クリーム剤、ローション剤、ジェル剤、乳液剤、液剤、貼付剤、エアゾール剤、軟膏剤、パック剤等の皮膚外用医薬部外品；クリーム剤、ローション剤、ジェル剤、乳液剤、液剤、軟膏剤、パック剤等の化粧料；ボディーシャンプー、ヘアシャンプー、リンス等の皮膚洗浄料等が挙げられる。これらの製剤形態の中でも、好ましくは皮膚外用医薬品、更に好ましくはクリーム剤、ローション剤、ジェル剤、乳液剤、パック剤が挙げられる。
【００３６】
用途・用量
本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤は、表皮細胞においてＴＧａｓｅのｍＲＮＡの発現量を増大させることにより、ＴＧａｓｅ量を増大させることができる。従って、本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤は、ＴＧａｓｅの機能や発現量の低下が要因の一つになっている疾患や症状の予防又は治療に有効である。ＴＧａｓｅの機能や発現量の低下が要因の一つになっている疾患や症状としては、具体的には、アトピー性皮膚炎、喘息、鼻炎、花粉症、金属アレルギー等のアレルギー疾患、尋常性魚鱗癬、ウイルスや細菌による皮膚感染症等が挙げられる。中でも、本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤は、アトピー性皮膚炎又は尋常性魚鱗癬の予防又は治療用途に好適に使用できる。
【００３７】
また、ＴＧａｓｅは、健常な皮膚形成に関与し、皮膚の保湿、皮膚バリア機能、創傷治癒能等を正常化又は向上させることができるので、本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤は、皮膚保湿機能改善剤、皮膚バリア機能改善剤、肌荒れ予防又は改善剤、創傷治癒剤等として使用することもできる。
【００３８】
本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤の用量については、剤形、製剤形態、適用する症状の程度等に応じて適宜設定すればよい。例えば、本発明のＴＧａｓｅ発現促進剤を皮膚外用剤として使用する場合であれば、その用量の一例として、１回当たり、皮膚１ｃｍ2当たり、(A)成分が０．１〜３ｍｇ程度となる量で、１日１〜数回程度の頻度が挙げられる。
【実施例】
【００３９】
以下に実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４０】
試験例１：ＴＧａｓｅ発現量の評価
ヘパリン類似物質、アラントイン、及びグリチルリチン酸ジカリウムが表皮細胞のＴＧａｓｅの発現量に与える影響を評価するために以下の実験を行った。
【００４１】
１．実験材料
［通常表皮モデル細胞（ＨａＣａＴ細胞）］
通常表皮モデル細胞として、ＨａＣａＴ細胞（ヒト表皮角化細胞（Ｄｅｕｔｓｃｈｅｓ  Ｋｒｅｂｓｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓｚｅｎｔｒｕｍ，Ｓｔｉｆｔｕｎｇ  ｄｅｓoｆｆｅｎｔｌｉｃｈｅｎ  Ｒｅｃｈｔｓ（ＤＫＦＺ），Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ））を使用した。
【００４２】
［培地］
Ｄ−ＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２（和光純薬工業株式会社）／１０％ＦＣＳ添加
【００４３】
［被験物質］
・ヘパリン類似物質
・アラントイン
・グリチルリチン酸ジカリウム
・ジメチルスルホキシド（ジメチルスルホキシドはアラントインを溶解させるために使用した。但し、条件統一のため、アラントイン以外の成分を使用する条件でもジメチルスルホキシドを使用した。）
【００４４】
２．実験方法
１２ウェルプレートの各ウェルにモデル細胞を１×１０5個／ウェルの濃度でそれぞれ播種し、３７℃、５％ＣＯ2条件下で培養した。翌日に、表１に示す所定量の各被験物質を各ウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ2条件下で培養した。その翌日に、モデル細胞を回収しＲＮｅａｓｙ  ｍｉｎｉ  ｋｉｔ（株式会社キアゲン製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。その後、ＲｅｖｅｒＴｒａ  Ａｃｅ（東洋紡株式会社製）を用いて逆転写を行い、ｃＤＮＡを合成した。次いで、Ｆａｓｔ  Ｓｔａｒｔ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ＤＮＡ  Ｇｒｅｅｎ  Ｍａｓｔｅｒ  ｏｎ  ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  Ｎａｎｏ  ｓｙｓｔｅｍ（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社製）を用いて、ｑＲＴ−ＰＣＲにてＴＧａｓｅ遺伝子の増幅を行った。β−アクチンを内部標準として使用し、ＴＧａｓｅ ｍＲＮＡの発現量を標準化した。このｍＲＮＡの発現量を、被験物質を添加しなかった以外は前記と同様にして確認したｍＲＮＡの発現量（コントロール、比較例１）で除算した。
【００４５】
得られた結果を表１に示す。ヘパリン類似物質を単独で添加した場合（比較例２）は、僅かにＴＧａｓｅ発現量が増大したが、アラントイン又はグリチルリチン酸ジカリウムを単独で添加した場合（比較例３〜６）では、ＴＧａｓｅ発現量の増大は殆ど認められなかった。これに対して、ヘパリン類似物質、アラントイン、及びグリチルリチン酸ジカリウムを組み合わせて添加した場合（実施例１〜３）では、各成分を単独で添加した場合に比して、ＴＧａｓｅ発現量が格段に増大した。
【００４６】
【表１】
2018193329.tif 000002
【００４７】
処方例
表２に示す組成のクリーム剤（処方例１〜８）、表３に示すローション剤（処方例９〜１４）、表４に示すジェル剤（処方例１５〜１９）、及び表５に示す乳液剤（処方例２０〜２９）を調製した。これらの製剤は、いずれも、前記試験例１の場合と同様に、表皮細胞のＴＧａｓｅ発現量を増大させる効果が期待され、ＴＧａｓｅの発現促進用途に有効である。
【００４８】
【表２】
2018193329.tif 000003
【００４９】
【表３】
2018193329.tif 000004
【００５０】
【表４】
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【００５１】
【表５】
2018193329.tif 000006