(57)【要約】【課題】短時間でエージングを行うことのできる染色前処理方法、該染色前処理方法を用いる染色方法、及び該染色方法を実行するための染色装置を提供すること。【解決手段】２００〜２８０ｎｍの波長を有する紫外線を、染色体に６００秒以下の時間にわたって照射する、染色前処理方法を提供する。染色前処理を実行するエージング工程と、染色体を酵素に露出する酵素処理工程と、ギムザ染色を実行するギムザ染色工程とを含む、染色方法を提供する。２００〜２８０ｎｍの波長の紫外線を発光する紫外線ランプ１１と、スライドガラス８を把持するスライドガラスホルダ６と、酵素用液槽２と、ギムザ液用液槽４とを備える、染色装置１０を提供する。【選択図】図３
2018064544.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
染色体を染色するためにエージングを行う染色前処理の方法であって、
２００〜２８０ｎｍの波長を有する紫外線を、前記染色体に６００秒以下の時間にわたって照射することを特徴とする、染色前処理方法。
【請求項２】
照射される前記紫外線の総エネルギ量は、前記スライドガラスの面積１ｃｍ２当たり１０００〜３００００μＪであることを特徴とする、請求項１に記載の染色前処理方法。
【請求項３】
照射される前記紫外線の総エネルギ量は、前記スライドガラスの面積１ｃｍ２当たり５０００〜８０００μＪであることを特徴とする、請求項２に記載の染色前処理方法。
【請求項４】
照射される前記紫外線の強度は、前記スライドガラスの面積１ｃｍ２当たり５０〜８００μＷであることを特徴とする、請求項２又は３に記載の染色前処理方法。
【請求項５】
染色体検査のために染色体を染色する染色方法であって、
請求項１〜４のいずれか１項に記載の染色前処理を実行するエージング工程と、
染色体を酵素に露出する酵素処理工程と、
ギムザ染色を実行するギムザ染色工程とを含むことを特徴とする、染色方法。
【請求項６】
前記酵素はトリプシンであることを特徴とする、請求項５に記載の染色方法。
【請求項７】
請求項５又は６に記載の染色方法を実行する染色装置であって、
２００〜２８０ｎｍの波長の紫外線を発光する紫外線ランプと、
スライドガラスを把持するスライドガラスホルダと、
酵素用液槽と
ギムザ液用液槽とを備えることを特徴とする、染色装置。
【請求項８】
前記スライドガラスホルダによって把持される前記スライドガラスが配される箇所と前記紫外線ランプとの間に、紫外線を減衰させるフィルタを備えることを特徴とする、請求項７に記載の染色装置。
【請求項９】
前記フィルタは、紫外線を０．５以下の比率で減衰させることを特徴とする、請求項８に記載の染色装置。
【請求項１０】
前記スライドガラスホルダによって把持される前記スライドガラスが配される箇所と前記紫外線ランプとの距離が３０ｃｍ以下であることを特徴とする、請求項９に記載の染色装置。
【請求項１１】
前記スライドガラスホルダを移動させる移動手段を備え、
前記移動手段は、前記スライドガラスホルダによって把持される前記スライドガラスが、前記紫外線を照射される箇所、前記酵素用液槽に浸かる箇所、前記ギムザ液用液槽に浸かる箇所の順に移動するように、前記スライドガラスホルダを移動させることを特徴とする、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の染色装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、染色体検査に当たり、染色体を染色する染色方法、該染色方法に用いられる染色前処理方法、及び該染色方法に実行する染色装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
（用語についての註）
本明細書において、人体細胞中の「染色体」に色付けする「染色」について述べる。ここで、「染色体」に「染色」の文字が含まれ紛らわしいが、本明細書においては、「染色体」として「体」の文字を含むもののみが人体、動物細胞中の染色体であり、「体」の文字の付されていない「染色」は色付けすることを言う。
【０００３】
遺伝的疾病の発見その他の目的で染色体を検査する染色体検査が行われる。非特許文献１には、染色体検査の方法が開示されている。染色体検査において、染色体中のアデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）、グアニン（Ｇ）及びシトシン（Ｃ）（以下、単にＡ，Ｔ，Ｇ，Ｃで表す）を区別するために、これら４つのヌクレオチドの一部のみを染色する。
【０００４】
非特許文献１及び特許文献１には、かかる染色の方法が開示されている。しかし、非特許文献１及び特許文献１に開示された染色方法は、以下の理由で、染色に要する時間が長いという問題を有していた。
【０００５】
染色に先立って、ヌクレオチドの一部のみを酵素に溶解させ、溶解しないヌクレオチドのみが染色されるようにする。すなわち、一部のヌクレオチドのみが酵素難溶となるようにエージングと呼ばれる操作を行い、その後に酵素に浸けることで、酵素難溶となったＡ，Ｔのみを染色する「分染」を可能とする。しかし、エージングは例えば３日の時間を要するものであった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１５−８７８６５号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】形態検査の意義（九州大学）  http://elc.shs.kyushu-u.ac.jp/anami/365fe69f93e889b2e4bd93e383bbe981bae4bc9de5ad90e6a49ce69fbb.pdf
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、短時間でエージングを行うことのできる染色前処理方法、該染色前処理方法を用いる染色方法、及び該染色方法を実行するための染色装置を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
出願人は、染色体に紫外線を照射することにより短時間でエージングが可能であることを見出した。なお、特許文献１に染色に先立って紫外線を照射する旨の記載があるが、架橋結合を形成するためであり、エージングを行っているものではない。「好ましくは２００ｍＪ」との記載があり、本発明によるエージングとしては適切ではないほど多くの紫外線を照射しているものである。
【００１０】
本発明の染色前処理方法は、
染色体を染色するためにエージングを行う染色前処理の方法であって、
２００〜２８０ｎｍの波長を有する紫外線を、前記染色体に６００秒以下の時間にわたって照射することを特徴とする。
【００１１】
この特徴によれば、短時間でエージングを行うことが可能である。出願人は、２００〜２８０ｎｍの波長を有する紫外線を１０００〜３００００μＪ／ｃｍ２だけ照射することによってエージングが可能であることを見出した。
【００１２】
本発明の染色前処理方法は、
照射される前記紫外線の総エネルギ量は、前記スライドガラスの面積１ｃｍ２当たり１０００〜３００００μＪであることを特徴とする。
【００１３】
この特徴によれば、エージングに適した量の紫外線が照射される。
【００１４】
本発明の染色前処理方法は、
照射される前記紫外線の総エネルギ量は、前記スライドガラスの面積１ｃｍ２当たり５０００〜８０００μＪであることを特徴とする。
【００１５】
この特徴によれば、エージングにより適した量の紫外線が照射される。なお、紫外線の照射量については理論的な最適値があるものではなく、分染後によってえられる画像の濃度、コントラストに係る検査者（ドクター）、臨床検査技師の嗜好によって調整されるものである。
【００１６】
本発明の染色前処理方法は、
照射される前記紫外線の強度は、前記スライドガラスの面積１ｃｍ２当たり５０〜８００μＷであることを特徴とする。
【００１７】
この特徴によれば、１０００〜３００００μＪ／ｃｍ２だけの照射が、１．２５〜６００秒で行われる。６００秒以下の短時間でエージングを行うことが可能である。また、高強度の紫外線を照射して例えば０．１秒程度で必要量を照射することも理論上は可能であるが、後述する移動手段の精度等により照射量のばらつきが発生し得る。１．２５秒以上の時間の照射とすることが好ましい。
【００１８】
本発明の染色方法は、
染色体検査のために染色体を染色する染色方法であって、
上述の染色前処理を実行するエージング工程と、
染色体を酵素に露出する酵素処理工程と、
ギムザ染色を実行するギムザ染色工程とを含むことを特徴とする。
【００１９】
この特徴によれば、本発明の染色前処理方法を利用した染色方法が提供される。
【００２０】
本発明の染色方法は、
前記酵素はトリプシンであることを特徴とする。
【００２１】
この特徴によれば、広く用いられているトリプシンを用いることができる。
【００２２】
本発明の染色装置は、
上述の染色方法を実行する染色装置であって、
２００〜２８０ｎｍの波長の紫外線を発光する紫外線ランプと、
スライドガラスを把持するスライドガラスホルダと、
酵素用液槽と
ギムザ液用液槽とを備えることを特徴とする。
【００２３】
この特徴によれば、本発明の染色方法を実行するための染色装置が提供される。スライドガラスを把持するスライドガラスホルダを制御して、スライドガラスを、紫外線照射下に置き、酵素用液槽に浸け、ギムザ液用液槽に浸けて、分染することが可能となる。なお、酵素用液槽には温度調整機能を付けて酵素の反応を制御することが好ましい。
【００２４】
本発明の染色装置は、
前記スライドガラスホルダによって把持される前記スライドガラスが配される箇所と前記紫外線ランプとの間に、紫外線を減衰させるフィルタを備えることを特徴とする。
【００２５】
この特徴によれば、フィルタによって、スライドガラスへの紫外線照射量を調整することができる。広く用いられている紫外線ランプは、本発明の目的に鑑みて強い紫外線を発光する。紫外線ランプとスライドガラスとの距離を大きくすれば問題が解消するが、染色装置が大型になってしまう。フィルタによって紫外線を減衰させ、染色装置の大型化を防止することが好ましい。
【００２６】
本発明の染色装置は、
前記フィルタは、紫外線を０．５以下の比率で減衰させることを特徴とする。
【００２７】
この特徴によれば、染色装置を小型化するための紫外線の減衰がなされる。
【００２８】
本発明の染色装置は、
前記スライドガラスホルダによって把持される前記スライドガラスが配される箇所と前記紫外線ランプとの距離が３０ｃｍ以下であることを特徴とする。
【００２９】
この特徴によれば、フィルタによって紫外線を減衰させた結果としての小型化された染色装置が提供される。
【００３０】
本発明の染色装置は、
前記スライドガラスホルダを移動させる移動手段を備え、
前記移動手段は、前記スライドガラスホルダによって把持される前記スライドガラスが、前記紫外線を照射される箇所、前記酵素用液槽に浸かる箇所、前記ギムザ液用液槽に浸かる箇所の順に移動するように、前記スライドガラスホルダを移動させることを特徴とする。
【００３１】
この特徴によれば、移動手段によって自動的に染色を行う染色装置が提供される。
【発明の効果】
【００３２】
本発明の染色前処理方法によれば、短時間でエージングを行うことが可能となる。
【００３３】
本発明の染色方法によれば、エージングの時間を短縮し、短時間で染色を行うことが可能となる。
【００３４】
本発明の染色装置によれば、本発明の染色前処理方法を活用して、短時間の染色を自動的に行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１は、染色装置の構成を示す図である。
【図２】図２は、紫外線ランプ、フィルタ及びスライドガラスを示す図である。
【図３】図３は、染色方法を示す図である。
【図４】図４は、スライドガラスの移動を示す図である。
【図５】図５は、染色された染色体を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
以下、本発明の１実施例を説明する。図１は、染色装置の構成を示す図である。染色装置１０は、紫外線ランプ１１、フィルタ１２、酵素用液槽２、洗浄液用液槽３、ギムザ液用液槽４、ギムザ洗浄用液槽５、スライドガラスホルダ６及び移動手段７を含んで構成される。
【００３７】
染色に際しては、スライドガラスホルダ６にスライドガラス８を把持させ、酵素用液槽２に酵素液２１を満たし、洗浄液用液槽３に洗浄液３１を満たし、ギムザ液用液槽４にギムザ液４１を満たし、ギムザ洗浄用液槽５にギムザ洗浄液５１を満たして使用する。
【００３８】
スライドガラス８は、培養され、収穫された染色体を載置するガラスである。
【００３９】
紫外線ランプ１１は、一定の強度で紫外線を発光するランプである。本発明の目的に合わせ、２００〜２８０ｎｍの波長を有する紫外線を発光するものとする。
【００４０】
フィルタ１２は、紫外線ランプ１１の発する紫外線を減衰するフィルタである。
【００４１】
酵素用液槽２は、酵素液２１を満たして保持するための層である。酵素液２１は、ヌクレオチドを溶融させる。ただし、ヌクレオチドの状況（エージングの度合）に依存して、溶融度及び溶融速度が相違する。
【００４２】
洗浄液用液槽３は、洗浄液３１を満たして保持するための層である。洗浄液３１は、酵素液２１に含まれる酵素を洗浄する、例えばエタノールを洗浄液３１として用いることができる。
【００４３】
ギムザ液用液槽４は、ギムザ液４を満たして保持するための層である。ギムザ液４１は、染色体を染色する。
【００４４】
ギムザ洗浄用液槽５は、ギムザ洗浄液５１を満たして保持するための層である。ギムザ洗浄液５１は、ギムザ液４１を洗浄する。例えば水をギムザ洗浄液５１として用いることができる。
【００４５】
スライドガラスホルダ６は、スライドガラス８を把持する。また、移動手段７により、染色装置１０内で移動する。
【００４６】
移動手段７は、スライドガラスホルダ６を染色装置１０内で移動させる機構である。カム７１が支持棒７２に沿って電気動力により図中黒矢印で示す図面左右方向に移動する。また、チェーン７３がカム７１から垂下され、スライドガラスホルダ６を電気動力により図中白矢印で示す上下方向に移動させる。
【００４７】
移動手段７の具体的構成はこれに限られない。スライドガラスホルダ６の下方に把持されたスライドガラス８が、紫外線ランプ１１の紫外線の照射を受ける位置、酵素用液槽２に浸かる位置、洗浄液用液槽３に浸かる位置、及びギムザ液用液槽に浸かる位置に置かれ、所定の時間の後に他の位置に移動することができれば、いかなる構成でもよい。かかる構成は、各種のものが容易に実施可能である。
【００４８】
紫外線ランプ１１とスライドガラス８（スライドガラスホルダ６に把持されたスライドガラス８が移動手段７によって配置される箇所）との間に、フィルタ１２が設けられている。
【００４９】
後述するように、スライドガラス８には、５０〜８００μＷ／ｃｍ２の紫外線を照射したい、しかし、広く流通している紫外線ランプをスライドガラス８から３０ｃｍ程度の箇所に配すると、スライドガラス８には８００μＷ／ｃｍ２以上の紫外線が照射されてしまう。紫外線ランプ１１とスライドガラス８との距離を大きくすれば照射される紫外線の強度を小さくすることが可能ではあるが、染色装置１０が不必要に大型化してしまい、好ましくない。
【００５０】
そこで、フィルタ１２による減衰を活用して、紫外線ランプ１１とスライドガラス８との距離ｄを小さくし、照射される紫外線の強度を５０〜８００μＷ／ｃｍ２の範囲とする。紫外線ランプ１１の発光強度に基づき、距離ｄ及びフィルタ１２の減衰率ｒ（透過光量／入射光量）を設計することができる。染色装置１０が医療機関の設置において不自由にならないよう、ｄ≦３０ｃｍとすることが好ましい。また、ｄ≦３０ｃｍとし、広く流通している紫外線ランプを紫外線ランプ１１として使用するため、ｒ≦０．５であることが必要である。
【００５１】
図２は、紫外線ランプ、フィルタ及びスライドガラスを示す図である。上述のフィルタ１２による減衰と照射強度の調整を実現しているものである。
【００５２】
ここで、スライドガラスホルダ６は、図に示すように、複数（図には５枚を示す）のスライドガラス８を把持することができる。複数のスライドガラス８（複数の染色体検査検体）を同時に処理することができるものであり、医療機関の染色体検査業務を、本発明によるエージング高速化と合わせて、効率化する。
【００５３】
図３は、染色方法を示す図である。染色工程Ｓ７は、エージング工程Ｓ７１、酵素処理工程Ｓ７２、洗浄工程Ｓ７３、ギムザ染色工程Ｓ７４、及びギムザ洗浄工程Ｓ７５を含む。ただし、洗浄工程Ｓ７３及びギムザ洗浄工程Ｓ７５は必ずしも必要ではなく、省略してもよい。
【００５４】
染色工程Ｓ７に先立ち、培養され収穫された染色体がスライドガラス８に載置されている。
【００５５】
エージング工程Ｓ７１は、移動手段７がスライドガラスホルダ６を図１に示す位置に置き、スライドガラス８に対して紫外線を照射させるものである。ここで、照射時間ｔは、エージングの度合いを定め、後述するとおりに設計される。
【００５６】
酵素処理工程Ｓ７２は、エージング後の染色体を酵素に晒すものである。移動手段７がスライドガラスホルダ６を図５（Ｂ）に示す位置に置き、スライドガラス８を酵素液２１に浸けるものである。
【００５７】
酵素液２１としては、トリプシン液を使用することが一般的である。本実施例においても、トリプシン液を使用する。
【００５８】
ヌクレオチドは、酵素（トリプシン）に溶解するが、エージングの結果として、Ａ及びＴが酵素に反応しづらくなっている。酵素（トリプシン）に３００秒間だけ晒された時、Ｇ及びＣは酵素（トリプシン）によって溶解し、Ａ及びＴはあまり溶解しない。
【００５９】
「３００秒」の時間は、設計事項として、１５０秒とする、４５０秒とする等適宜に増減させてよい。ただし、Ａ及びＴの溶解と、Ｇ及びＣの溶解とが有意に差があるようにすべきである。（極端に短時間であるとＧ及びＣが溶解しない、極端に長時間であるとＡ及びＴも溶解してしまう。）
【００６０】
洗浄工程Ｓ７３は、スライドガラス８に残存する酵素液（トリプシン液）２１を除去し、酵素（トリプシン）の作用を停止させるものである。
【００６１】
洗浄液３１としては、エタノールを使用することが一般的である。本実施例においても、エタノールを使用する。６０秒で十分に洗浄される。
【００６２】
なお、ギムザ液４１には溶媒としてのメタノールが含まれることが考えられる。その場合、ギムザ液４１によって洗浄され、洗浄工程Ｓ７３を省略することも可能である。
【００６３】
ギムザ染色工程Ｓ７４は、ヌクレオチドを染色するものである。４２０秒で十分に染色される。
【００６４】
酵素処理工程Ｓ７２において溶解されたＧ及びＣはあまり染色されず、溶解されないＡ及びＴが濃く染色される。染色された染色体を観察することで、Ｇ及びＣの多い（少ない）染色体を同定し、染色体検査を行うことができる。
【００６５】
ギムザ洗浄工程Ｓ７５は、スライドガラス８に残存するギムザ液５１を除去し、染色を完了させるものである。
【００６６】
ギムザ洗浄液５１としては、水を使用することが一般的である。本実施例においても、水を使用する。
【００６７】
図４は、スライドガラスの移動を示す図である。上述の染色手順を実施するための移動手段の動作を示す。
【００６８】
移動手段７は、まず、図４（Ａ）（図１と同様である）に示すように、スライドガラス８を紫外線照射を受ける位置に配置する。チェーン７３によってスライドガラスホルダ６を図面上方に移動し、カム７１を紫外線照射を受ける位置の上方に移動し、チェーン７３を緩めてスライドガラスホルダ６を図面下方（図４（Ａ）の位置）に移動すればよい。個このように、図面上方において図面左右方向の位置を調整し、そこから図面下方に移動することで、スライドガラス８の位置を染色手順の各工程のための位置とすることができる。
【００６９】
図４（Ａ）の状態で、エージング工程Ｓ７１が実行される。その後移動手段７は、時間ｔの後に図４（Ｂ）の状態として酵素処理工程Ｓ７２を実行し、３００秒後に図４（Ｃ）の状態として洗浄工程Ｓ７３を実行し、６０秒後に図４（Ｄ）の状態としてギムザ染色工程Ｓ７４を実行し、４２０秒後に図４（Ｅ）の状態としてギムザ洗浄工程Ｓ７５を実行し、その後スライドガラス８を上方に移動して染色を完了する。
【００７０】
以下、エージング工程Ｓ７１の時間ｔについて検討する。
【００７１】
出願人は、２００〜２８０ｎｍの波長を有する紫外線を、１０００〜３００００μＪ／ｃｍ２だけ照射することで、Ａ及びＴが酵素（トリプシン）への反応を低下し、Ｇ及びＣの酵素（トリプシン）への反応があまり低下しないことを発見した。１０００μＪ／ｃｍ２未満の照射ではＡ及びＴが酵素（トリプシン）への反応をあまり低下させず、３００００μＪ／ｃｍ２を超える照射ではＧ及びＣも酵素（トリプシン）への反応を低下させてしまう。すなわち、Ａ及びＴとＧ及びＣを分染する（Ａ及びＴをＧ及びＣよりも濃く染色する）ためには、照射量を１０００〜３００００μＪ／ｃｍ２とすることが必要である。
【００７２】
１０００〜３００００μＪ／ｃｍ２の幅において、照射量の増減による効果を検討する。１０００μＪ／ｃｍ２に近い場合には、Ａ及びＴの酵素（トリプシン）への反応が残り、全体として薄い染色となる。３００００μＪ／ｃｍ２に近い場合にはＡ及びＴの酵素（トリプシン）への反応が減り、全体として濃い染色となるが、Ｇ及びＣの酵素（トリプシン）への反応も更に減るので、Ｇ及びＣも更に濃く染色される。
【００７３】
いかなる染色が好ましいかについては、染色体検査を行うドクターの嗜好、染色体検査の目的、その他の条件によって変動する。その中で、５０００〜８０００μＪ／ｃｍ２の照射量は、染色後におけるＡ及びＴとＧ及びＣとのコントラストが強く、広い利用が考えられる。
【００７４】
紫外線ランプ１１の単位長さ離れた箇所への照射強度をｉ（μｗ／ｃｍ２）、フィルタ１２の減衰係数をｒとすると、照射量ｑは、
ｑ＝ｉ×ｒ×ｔ／ｗ２
と求められる。
【００７５】
ここで、ｉ、ｒ及びｗの値は染色装置１０の構造で定まるので、目的とする照射量をＱとすると、照射時間ｔは、
ｔ＝Ｑ×ｗ２／（ｉ×ｒ）
と求められる。
【００７６】
Ｑ＝８０００μＪ／ｃｍ２、ｗ＝３０（ｃｍ）、ｉ（１ｃｍ離れた箇所への照射強度）＝１Ｗ／ｃｍ２、ｒ＝０．２５とすると、ｔ＝２８．８（秒）となる。３０秒程度の紫外線照射によって十分なエージング効果が得られる。
【００７７】
ここで、スライドガラス８への照射強度を示すＱ／ｔの値、すなわち（ｉ×ｒ）／ｗ２の値を、５０〜８００μＷ／ｃｍ２とすることが好ましい（上述では、２７８μＷ／ｃｍ２である）。Ｑ／ｔの値が大きいほど短時間でエージングできるが、移動手段の動作その他のばらつきによって照射量が不安定になってしまう。８００μＷ／ｃｍ２を超えることは好ましくない。また、Ｑ＝３００００μＪ／ｃｍ２とする場合においてｔ≦６００秒であること、すなわちＱ／ｔ≧５０μＷ／ｃｍ２であることが好ましい。
【００７８】
５０μＪ／ｃｍ２≦Ｑ／ｔ≦４００μＪ／ｃｍ２、１０００μＪ／ｃｍ２≦Ｑ≦３００００μＪ／ｃｍ２。以上の条件から、２．５秒≦ｔ≦６００秒となる。かかる時間でエージングが行われる。
【００７９】
図５は、染色された染色体を示す図である。このように、染色してＡ及びＴの多寡等を視認することができる。
【００８０】
以上詳細に説明したように、本実施例の染色前処理方法によれば短時間のエージングが可能となる。本実施例の染色方法によれば短時間で染色を行うことができる。本実施例の染色装置によれば短時間の染色を自動的に行うことができる。
【産業上の利用可能性】
【００８１】
短時間でエージングを行うことのできる染色前処理方法、該染色前処理方法を用いる染色方法、及び該染色方法を実行するための染色装置である。多くの染色体検査を実施する医療機関における利用が考えられる。
【符号の説明】
【００８２】
１０    染色装置
１１    紫外線ランプ
１２    フィルタ
２      酵素用液槽
２１    酵素液
３      洗浄液用液槽
３１    洗浄液
４      ギムザ液用液槽
４１    ギムザ液 
５      ギムザ洗浄用液槽
５１    ギムザ洗浄液
６      スライドガラスホルダ
７      移動手段
８      スライドガラス
Ｓ７    移動手順
Ｓ７１  染色前処理（エージング工程）
Ｓ７２  酵素処理工程
Ｓ７３  洗浄工程
Ｓ７４  ギムザ染色工程
Ｓ７５  ギムザ洗浄工程
【図１】
2018064544.tif 000003
【図２】
2018064544.tif 000004
【図３】
2018064544.tif 000005
【図４】
2018064544.tif 000006
【図５】
2018064544.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成28年12月12日(2016.12.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
【特許文献１】特表２０１３−５２０９６１号公報
【手続補正書】
【提出日】平成29年3月30日(2017.3.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
培養され収穫された染色体を、トリプシンに露出する酵素処理工程とギムザ染色を実行するギムザ染色工程とを経て染色するためにエージングを行う染色前処理の方法であって、
２００〜２８０ｎｍの波長を有する紫外線を、前記染色体に６００秒以下の時間にわたって照射することを特徴とする、染色前処理方法。
【請求項２】
照射される前記紫外線の総エネルギ量は、前記スライドガラスの面積１ｃｍ２当たり１０００〜３００００μＪであることを特徴とする、請求項１に記載の染色前処理方法。
【請求項３】
照射される前記紫外線の総エネルギ量は、前記スライドガラスの面積１ｃｍ２当たり５０００〜８０００μＪであることを特徴とする、請求項２に記載の染色前処理方法。
【請求項４】
照射される前記紫外線の強度は、前記スライドガラスの面積１ｃｍ２当たり５０〜８００μＷであることを特徴とする、請求項２又は３に記載の染色前処理方法。
【請求項５】
染色体検査のために染色体を染色する染色方法であって、
請求項１〜４のいずれか１項に記載の染色前処理を実行するエージング工程と、
染色体をトリプシンに露出する酵素処理工程と、
ギムザ染色を実行するギムザ染色工程とを含むことを特徴とする、染色方法。
【請求項６】
請求項５に記載の染色方法を実行する染色装置であって、
２００〜２８０ｎｍの波長の紫外線を発光する紫外線ランプと、
スライドガラスを把持するスライドガラスホルダと、
酵素用液槽と
ギムザ液用液槽とを備えることを特徴とする、染色装置。
【請求項７】
前記スライドガラスホルダによって把持される前記スライドガラスが配される箇所と前記紫外線ランプとの間に、紫外線を減衰させるフィルタを備えることを特徴とする、請求項６に記載の染色装置。
【請求項８】
前記フィルタは、紫外線を０．５以下の比率で減衰させることを特徴とする、請求項７に記載の染色装置。
【請求項９】
前記スライドガラスホルダによって把持される前記スライドガラスが配される箇所と前記紫外線ランプとの距離が３０ｃｍ以下であることを特徴とする、請求項８に記載の染色装置。
【請求項１０】
前記スライドガラスホルダを移動させる移動手段を備え、
前記移動手段は、前記スライドガラスホルダによって把持される前記スライドガラスが、前記紫外線を照射される箇所、前記酵素用液槽に浸かる箇所、前記ギムザ液用液槽に浸かる箇所の順に移動するように、前記スライドガラスホルダを移動させることを特徴とする、請求項６〜９のいずれか１項に記載の染色装置。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明の染色前処理方法は、
培養され収穫された染色体を、トリプシンに露出する酵素処理工程とギムザ染色を実行するギムザ染色工程とを経て染色するためにエージングを行う染色前処理の方法であって、
２００〜２８０ｎｍの波長を有する紫外線を、前記染色体に６００秒以下の時間にわたって照射することを特徴とする。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
染色に際しては、スライドガラスホルダ６にスライドガラス８を把持させ、酵素用液槽２に酵素液２１を満たし、洗浄液用液槽３に洗浄液３１を満たし、ギムザ液用液槽４にギムザ液４１を満たし、ギムザ洗浄用液槽５にギムザ洗浄液５１を満たして使用する。なお、本実施例において酵素液２１はトリプシン液であるが、酵素用液槽２はトリプシン液以外の酵素液でも使用可能であるので「酵素用液槽」と呼ぶ。