(57)【要約】【課題】  生物学的インジケータ内の生物学的活性を検出するための方法を提供すること。【解決手段】  この方法は、酵素の一定数のコピーを含む既知量の芽胞及び酵素の基質を含む液体増殖培地を提供する工程を含む。酵素基質は第１の放射スペクトルを有し、酵素によって第２の放射スペクトルを有する基質誘導体に変換されるように構成されている。芽胞は液体増殖培地に曝露され、液体増殖培地は第２の放射スペクトルについて測定され、第２の放射スペクトルに変化がみられないこと、又は第２の放射スペクトルが直線的に増加していること、のいずれかが時間に応じて検出される。【選択図】  図１
2018138021.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的インジケータ内の生物学的活性を検出する方法であって、
（ａ）酵素の一定数のコピーを含む既知量の芽胞を提供することと、
（ｂ）第１の放射スペクトルを有し、前記酵素によって第２の放射スペクトルを有する基質誘導体に変換されるように構成された前記酵素の基質を含む液体増殖培地を提供することと、
（ｃ）前記芽胞を前記液体増殖培地に曝露することと、
（ｄ）前記液体増殖培地を前記第２の放射スペクトルについて測定することと、
（ｅ）時間に応じて、
（ｉ）前記第２の放射スペクトルに変化がみられないこと、又は
（ｉｉ）前記第２の放射スペクトルが直線的に増加していること、のいずれかを検出することと、を含む、方法。
【請求項２】
前記第２の放射スペクトルの直線的な増加が検出され、前記方法が、前記第２の放射スペクトルを、前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化について監視することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記芽胞が、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞、バチルス・サブチルスの芽胞、バチルス・アトロフェウスの芽胞、バチルス・メガテリウムの芽胞、バチルス・コアギュランスの芽胞、クロストリジウム・スポロゲネスの芽胞、バチルス・プミルスの芽胞、及びこれらの組み合わせから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記酵素が、β−Ｄ−グルコシダーゼ、α−Ｄ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、ブチレートエステラーゼ、カプリレートエステラーゼリパーゼ、ミリステートリパーゼ、ロイシンアミノペプチダーゼ、バリンアミノペプチダーゼ、キモトリプシン、ホスホヒドロラーゼ、α−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、チロシンアミノペプチダーゼ、フェニルアラニンアミノペプチダーゼ、β−Ｄ−グルクロニダーゼ、α−Ｌ−アラビノフラノシダーゼ、Ｎ−アセチル−β−グルコサミノダーゼ、β−Ｄ−セロビオシダーゼ、アラニンアミノペプチダーゼ、プロリンアミノペプチダーゼ、脂肪酸エステラーゼ、及びこれらの組み合わせから選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記液体増殖培地がインジケータ色素を実質上含まない、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約２時間よりも短い時間で生じる、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約１時間よりも短い時間で生じる、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約３０分間よりも短い時間で生じる、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
生物学的インジケータを使用する方法であって、前記生物学的インジケータが、
（ｉ）第１の液体が入れられた脆弱性アンプルであって、前記第１の液体が、液体増殖培地と、第１の放射スペクトルを有する蛍光発生酵素基質と、を含み、前記蛍光発生酵素基質が、前記酵素によって第２の放射スペクトルを有する蛍光誘導体に変換されるように構成された、脆弱性アンプルと、
（ｉｉ）酵素の一定数のコピーを含む既知量の細菌芽胞を支持する担体と、を含み、
前記方法が、
（ａ）前記脆弱性アンプルを破損することと、
（ｂ）前記液体増殖培地を前記細菌芽胞に曝露して第２の液体を形成することと、
（ｃ）前記第２の液体をインキュベートすることと、
（ｄ）前記第２の液体を監視し、時間に応じて、
（ｉ）前記第２の放射スペクトルに変化がみられないこと、又は
（ｉｉ）前記第２の放射スペクトルが直線的に増加していること、のいずれかを検出することと、を含む、方法。
【請求項１０】
前記第２の放射スペクトルの直線的な増加が検出され、前記方法が、前記第２の放射スペクトルを、前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化について監視することを更に含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１の液体及び第２の液体がインジケータ色素を実質上含まない、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の液体及び第２の液体が無色である、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約２時間よりも短い時間で生じる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約１時間よりも短い時間で生じる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約３０分間よりも短い時間で生じる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約５分間よりも短い時間で生じる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
前記生物学的インジケータが、インジケータ試薬を吸収及び／又は選択的に濃縮するように構成された基質を含まない、請求項９に記載の方法。
【請求項１８】
前記芽胞が、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞、バチルス・サブチルスの芽胞、バチルス・アトロフェウスの芽胞、バチルス・メガテリウムの芽胞、バチルス・コアギュランスの芽胞、クロストリジウム・スポロゲネスの芽胞、バチルス・プミルスの芽胞、及びこれらの組み合わせから選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
前記酵素が、β−Ｄ−グルコシダーゼ、α−Ｄ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、ブチレートエステラーゼ、カプリレートエステラーゼリパーゼ、ミリステートリパーゼ、ロイシンアミノペプチダーゼ、バリンアミノペプチダーゼ、キモトリプシン、ホスホヒドロラーゼ、α−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、チロシンアミノペプチダーゼ、フェニルアラニンアミノペプチダーゼ、β−Ｄ−グルクロニダーゼ、α−Ｌ−アラビノフラノシダーゼ、Ｎ−アセチル−β−グルコサミノダーゼ、β−Ｄ−セロビオシダーゼ、アラニンアミノペプチダーゼ、プロリンアミノペプチダーゼ、脂肪酸エステラーゼ、及びこれらの組み合わせから選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項２０】
芽胞の滅菌の有効性を確認する方法であって、
（ａ）αグルコシダーゼを含む芽胞殻を有するゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞を含む生物学的インジケータを提供することと、
（ｂ）第１の放射スペクトルを有し、前記αグルコシダーゼによって第２の放射スペクトルを有する蛍光誘導体に変換される４−メチルウンベリフェリル−α−Ｄ−グルコシドを含み、インジケータ色素を実質的に含まない液体増殖培地を提供することと、
（ｃ）前記液体増殖培地を前記ゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞に曝露することと、
（ｄ）時間に応じて、前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化を検出することと、を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
一部の手術器具、内視鏡などの再利用型医療機器は、汚染された機器が患者で使用されることで患者の感染につながる可能性を最小限に抑えるよう、再利用に先立って滅菌することができる。ガスプラズマ又はエチレンオキシド（ＥｔＯ）の有無にかかわらず、蒸気、過酸化水素、過酢酸、及び気相殺菌などの様々な滅菌法を使用することができる。これらの方法はそれぞれ、滅菌される医療機器上又は医療機器内部への滅菌流体（例えば、ガス）の拡散率にある程度依存し得る。
【０００２】
滅菌前に、半透性のバリアの付いた容器又は袋内に医療機器が包装されている場合があり、この半透性のバリアは、滅菌流体（滅菌剤とも称される）を送達させるが、汚染微生物の侵入を防止する（とりわけ滅菌後に、医療従事者が容器を開けるまで）。滅菌サイクルを生き残った微生物はいずれも、増殖し医療機器を再汚染する恐れがあるので、滅菌サイクルを効果的にするには、パッケージ内の汚染微生物を死滅させなければならない。滅菌サイクルが効果的となり得る可能性は、中に拡散が制約された空間によって低減する場合があるため、拡散が制約された空間が中にある医療機器の場合、滅菌剤の拡散が、とりわけ問題となり得る。例えば、一部の内視鏡は、滅菌サイクルを成功させるのに十分な時間にわたって滅菌剤が十分な濃度で拡散する必要のある１本以上の長く狭いルーメンを有する。
【０００３】
医療機器の滅菌は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｉｒｖｉｎｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）によるＳＴＥＲＲＡＤ（登録商標）システムなどの自動滅菌システムによって実施可能である。自動滅菌システムの例は、参照により開示が本明細書に援用される２００５年９月６日発行の「Ｐｏｗｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ  Ｌｏｗ  Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  Ｐｌａｓｍａ」と題される米国特許第６，９３９，５１９号、参照により開示が本明細書に援用される２００５年２月８日発行の「Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ−Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  Ｐａｔｈ」と題される米国特許第６，８５２，２７９号、参照により開示が本明細書に援用される２００５年２月８日発行の「Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ  ａ  Ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ  Ｍｏｄｕｌｅ  Ａｄａｐｔｅｒ  ｔｏ  Ｐｕｌｓａｔｅ  ｔｈｅ  Ｌｏｗ  Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  Ｐｏｗｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  ｔｏ  ａ  Ｐｌａｓｍａ」と題される米国特許第６，８５２，２７７号、参照により開示が本明細書に援用される２００２年９月１０日発行の「Ｐｏｗｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ  Ｌｏｗ  Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  Ｐｌａｓｍａ」と題される米国特許第６，４４７，７１９号、及び参照により開示が本明細書に援用される２０１６年４月１日出願の「Ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅｓ」と題される米国特許出願第６２／３１６，７２２号において記載されている。
【０００４】
操作者のエラーによって、除染されたものと勘違いされた医療装置が業務に戻される場合がある。滅菌サイクルが有効であることを確認することは、医療従事者が汚染された医療機器を患者に使用するのを防止するうえで一助となり得る。汚染微生物について、滅菌後の医療機器自体を確認しない場合があるが、それは、そのような行為によって、別の汚染微生物を医療機器にもたらして、医療機器を再度汚染する恐れがあるからである。したがって、生物学的インジケータを使って、間接的な確認を実施することができる。生物学的インジケータとは、医療機器と同じ滅菌サイクルが行われるように、滅菌サイクルが行われる医療機器の横、又はその近くに配置することができる装置である。例えば、所定量の微生物を有する生物学的インジケータを、滅菌室内で医療機器の横に配置し、滅菌サイクルを受けさせることができる。サイクル完了後、生物学的インジケータ内の微生物を培養して、サイクルを生き残った微生物が存在するか否かを判定することができる。生物学的インジケータ内の生存する微生物の存在又は不在は、滅菌サイクルが効果的であったか否かを示す。
【０００５】
これまでに、医療機器滅菌に対して様々な装置及び方法が作られ、使用されてきたが、本発明者より以前に、本明細書に記載される技術を作った者又はこれを用いた者は誰もいないと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
本発明は、特定の実施例に関する以下の説明を添付の図面と併せ読むことによってよりよく理解できるものと考えられ、添付の図面では、同様の参照番号が、同じ要素を特定している。
【図１】例示的な医療機器用滅菌庫の概略図を示す。
【図２】図１の滅菌庫によって実施される滅菌サイクルの一部として実行され得る工程の例示的なセットのフローチャートを示す。
【図３】図１の滅菌庫内の医療機器と共に配置することが可能な例示的な生物学的インジケータアセンブリの概略図を示す。
【図４】図１の滅菌庫内で図３の生物学的インジケータアセンブリが滅菌サイクルを行った後の、生物学的インジケータアセンブリを処理するのに使用され得る例示的なインジケータアナライザの概略図を示す。
【図５】図３の生物学的インジケータアセンブリの分析のための準備として、図４のインジケータアナライザのユーザにより実行可能な工程の例示的なセットを示すフローチャートを示す。
【図６】図３の生物学的インジケータアセンブリの一変型形態を用いた滅菌サイクルの有効性を検出するための例示的な方法のフローチャートを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本技術の特定の実施例に関する以下の説明は、本技術の範囲を限定するために用いられてはならない。本技術の他の実施例、特徴、態様、実施形態、及び利点は、実例として、本技術を実施するうえで想到される最良の態様の１つである以下の説明より当業者には明らかとなろう。理解されるように、本明細書に述べられる技術は、いずれもその技術から逸脱することなく、他の異なる明らかな態様が可能である。したがって、図面及び説明は、限定的な性質のものではなく、例示的な性質のものと見なされるべきである。
【０００８】
本明細書に述べられる教示、表現、実施形態、実施例などの任意の１つ以上のものを、本明細書に述べられる他の教示、表現、実施形態、実施例などの任意の１つ以上のものと組み合わせることができる点も更に理解されよう。したがって、以下に述べられる教示、表現、実施形態、実施例などは、互いに対して個別に考慮されるべきではない。本明細書の教示に照らして、本明細書の教示を組み合わせることができる様々な適切な方法が、当業者には容易に明らかとなろう。かかる改変例及び変形例は、「特許請求の範囲」内に含まれるものとする。
【０００９】
Ｉ．例示的な滅菌庫
図１は、内視鏡などの医療機器を滅菌するように動作可能である例示的な滅菌庫（１５０）を示している。本例の滅菌庫（１５０）は滅菌室（１５２）を含み、滅菌室（１５２）は、滅菌のために１つ以上の医療機器を受容するように構成されている。図示されていないものの、滅菌庫（１５０）はまた、蹴板の作動に応答して滅菌室（１５２）を開閉する扉を含む。これにより、操作者は、手を使わずに滅菌室（１５２）開閉することができる。言うまでもなく、滅菌室への選択的なアクセスを提供するために、任意のその他の好適な機構が用いられてよい。滅菌庫（１５０）はまた、滅菌室（１５２）に格納されている医療機器を滅菌するために、滅菌剤を滅菌室（１５２）内に分配するように動作可能である滅菌モジュール（１５６）を含んでいる。本例において、滅菌モジュール（１５６）は、ある量の滅菌剤を収容する交換式滅菌剤カートリッジ（１５８）を受容するよう構成されている。単に一例として、各滅菌剤カートリッジ（１５８）は、５回の滅菌処理を実行するのに十分な滅菌剤を収容し得る。
【００１０】
本例において、滅菌モジュール（１５６）は、滅菌室（１５２）内において蒸気の形態で滅菌剤を適用するよう動作可能である。単に一例として、滅菌モジュール（１５６）は、蒸発器と凝縮器との組み合わせを備えてもよい。蒸発器は、特定の濃度の滅菌溶液（例えば、公称約５９％、又は約５８％〜約５９．６％の濃度の液体過酸化水素溶液）を受容する室を含んでもよく、ここで滅菌溶液は液相から気相へと変化する。凝縮器は、必要に応じて滅菌溶液蒸気の凝縮をもたらし得、したがってその滅菌溶液の濃度は、水蒸気の除去によって（例えば、公称約５９％から、公称約８３％〜公称約９５％までの間に）増加され得る。あるいは、滅菌室（１５２）内で蒸気の形態で滅菌剤を適用するために、任意のその他の好適な方法及び構成要素が用いられてもよい。いずれにせよ、蒸気の形態での滅菌剤の適用を補足するために、滅菌剤はまた、医療機器が滅菌室（１５２）内に置かれる前に、医療機器内のルーメン及び／若しくは他の内部空間の内側、並びに／又は医療機器の外側に（液体の形態で）適用されてもよい。そのような変型形態では、減圧が滅菌室（１５２）に適用されている間、また更には減圧が適用された後も、滅菌剤が蒸発することがあり、医療機器の浸透しにくい範囲の部分に、より高い濃度の滅菌剤が供給され、これによって効果的な滅菌が更に促進される。
【００１１】
本例の滅菌庫（１５０）は、タッチスクリーンディスプレイ（１６０）を更に含む。タッチスクリーンディスプレイ（１６０）は、米国仮特許出願第６２／３１６，７２２号に記載されているものなど、種々のユーザインターフェースディスプレイスクリーンをレンダリングするように動作可能である。言うまでもなく、タッチスクリーンディスプレイ（１６０）は、他の様々な画面も同様に表示できる。タッチスクリーンディスプレイ（１６０）は更に、従来型タッチスクリーン技術に従って、ユーザがタッチスクリーンディスプレイ（１６０）と接触する形態でユーザ入力を受信するように構成されている。更に、又は代替として、滅菌庫（１５０）は、これらに限定されないが、ボタン、キーパッド、キーボード、マウス、トラックボールなど、他の様々な種類のユーザ入力機能を含み得る。
【００１２】
本例の滅菌庫（１５０）は、プロセッサ（１６２）を更に含み、このプロセッサは、滅菌モジュール（１５６）及びタッチスクリーンディスプレイ（１６０）と通信している。プロセッサ（１６２）は、ユーザ入力に従って、滅菌モジュール（１５６）を駆動する制御アルゴリズムを実行するよう動作可能である。更に、プロセッサ（１６２）は、様々なスクリーンをタッチスクリーンディスプレイ（１６０）上で表示し、更に、タッチスクリーンディスプレイ（１６０）を介して（及び／又はその他のユーザ入力機能を介して）、ユーザから受信した指示を処理する指示を実行するようにも動作可能である。プロセッサ（１６２）はまた、滅菌庫（１５０）の様々なその他の構成要素と通信しており、これにより、それらの構成要素を駆動し、かつ／又はそれらの構成要素からの入力及び／若しくはその他のデータを処理するように動作可能である。プロセッサ（１６２）を形成するのに使用できる様々な適切な構成要素及び構成が、本明細書の教示を鑑みれば当業者には明らかとなろう。
【００１３】
本例の滅菌庫（１５０）は、通信モジュール（１５４）を更に含む。通信モジュール（１５４）は、滅菌庫（１５０）と、通信ハブ（図示せず）、サーバ、及び／又はその他の装置と、の間の双方向通信を可能とするよう構成されている。いくつかの変型形態では、通信モジュール（１５４）は、その開示内容を参照により本明細書に援用するところの２０１６年８月１８日出願の発明の名称が「Ａｐｐａｒａｔｕｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｔｏ  Ｌｉｎｋ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ」である米国特許出願６２／３７６，５１７号の教示の少なくとも一部に従って、ハブと通信するように構成されている。単に一例として、通信モジュール（１５４）は、Ｅｔｈｅｒｎｅｔ、Ｗｉ−Ｆｉ、Ｂｌｕｅｔｏｏｔｈ、ＵＳＢ、赤外線、ＮＦＣ、及び／又はその他の技術などを介して有線及び／又は無線通信を提供するよう構成可能である。本明細書の教示を鑑みて、通信モジュール（１５４）を形成するのに使用できる種々の適切な構成要素及び構成が、当業者に明らかとなるであろう。通信モジュール（１５４）を通して送信された又は受信された通信は、プロセッサ（１６２）を介して処理される。
【００１４】
本例の滅菌庫（１５０）は、識別タグリーダー（１６６）を更に含み、この識別タグリーダーは、本明細書で記載されるように、生物学的インジケータの識別タグを読み取るよう動作可能である。単に一例として、識別タグリーダー（１６６）は、生物学的インジケータの光学識別タグ（例えば、バーコード、データマトリックスコード、ＱＲコードなど）を読み取るよう動作可能な光学リーダーを含み得る。更に、又は代替として、識別タグリーダー（１６６）は、生物学的インジケータのＲＦＩＤ識別タグを読み取るよう動作可能なＲＦＩＤリーダーを含み得る。識別タグリーダー（１６６）がＲＦＩＤリーダーを含むいくつかの変型形態では、識別タグリーダー（１６６）は更に、生物学的インジケータのＲＦＩＤタグに情報を書き込むよう動作可能である。識別タグリーダー（１６６）を形成するのに使用できる種々の適切な構成要素及び構成は、本明細書の教示を鑑みれば当業者には明らかとなろう。識別タグリーダー（１６６）を通じて受信されたデータは、プロセッサ（１６２）を介して処理される。
【００１５】
本例の滅菌庫（１５０）はメモリ（１６８）を更に含み、このメモリは、滅菌モジュール（１５６）、タッチスクリーンディスプレイ（１６０）、通信モジュール（１５４）、及び識別タグリーダー（１６６）などの構成要素を駆動するために、プロセッサ（１６２）により実行される制御ロジック及び指示を格納するよう動作可能である。メモリ（１６８）は、滅菌サイクルの設定、負荷調整サイクルの性能、滅菌サイクルの性能、及び／又は様々なその他の種類の情報に関連する結果を格納するのにも使用できる。メモリ（１６８）が取り得る様々な適切な形態、並びにメモリ（１６８）を使用できる様々な方法が、本明細書の教示を鑑みれば当業者には明らかとなろう。
【００１６】
本例の滅菌庫（１５０）は、滅菌サイクルの設定、負荷調整サイクルの性能、滅菌サイクルの性能、及び／又は様々なその他の種類の情報に関連する結果などの情報を印刷するのに動作可能なプリンタ（１７０）を更に含む。単に一例として、プリンタ（１７０）は熱プリンタを含み得るが、ただし、言うまでもなく、その他の適切な種類のプリンタも使用可能である。プリンタ（１７０）が取り得る様々な適切な形態、並びにプリンタ（１７０）を使用できる様々な方法が、本明細書の教示を鑑みれば当業者には明らかとなろう。また、プリンタ（１７０）が任意にすぎず、いくつかの変型形態では省かれている場合もあることも理解されたい。
【００１７】
本例の滅菌庫（１５０）は、減圧源（１８０）と通気弁（１８２）とを更に含む。減圧源（１８０）は滅菌室（１５２）と流体連通しており、プロセッサ（１６２）とも通信している。したがって、プロセッサ（１６２）は、１つ以上の制御アルゴリズムに従って減圧源（１８０）を選択的に作動させるように動作可能である。減圧源（１８０）が作動されているとき、減圧源（１８０）は、以下で更に詳細に説明するように、滅菌室（１５２）内の圧力を低減するように動作可能である。通気弁（１８２）も、滅菌室（１５２）と流体連通している。加えて、通気弁（１８２）は、プロセッサ（１６２）が１つ以上の制御アルゴリズムに従って通気弁（１８２）を選択的に作動させるように動作可能となるように、プロセッサ（１６２）と通信している。通気弁（１８２）が作動されているとき、通気弁（１８２）は、以下で更に詳細に説明するように、滅菌室（１５２）を大気に通気するように動作可能である。減圧源（１８０）及び通気弁（１８２）を設けるために使用され得る様々な好適な構成要素が、本明細書の教示を鑑みれば当業者には明らかとなろう。
【００１８】
上記に加えて、滅菌庫（１５０）は、参照により開示が本明細書に援用される米国特許第６，９３９，５１９号、参照により開示が本明細書に援用される米国特許第６，８５２，２７９号、参照により開示が本明細書に援用される米国特許第６，８５２，２７７号、参照により開示が本明細書に援用される米国特許第６，４４７，７１９号、参照により開示が本明細書で援用される米国特許第６，３６５，１０２号、参照により開示が本明細書で援用される米国特許第６，３２５，９７２号、及び／又は参照により開示が本明細書で援用される米国仮特許出願第６２／３１６，７２２号の教示の少なくとも一部に従って、構成することができ動作可能であり得る。
【００１９】
ＩＩ．例示的な滅菌プロセス
図２は、内視鏡などの使用済み医療機器に滅菌サイクルを行うために滅菌庫（１５０）により実施され得る例示的な工程を示す。具体的には、サイクルは、滅菌室（１５２）内で減圧が施される（ブロック３１０）ことで開始してもよい。そのような減圧をもたらすために、プロセッサ（１６２）は、制御アルゴリズムに従って減圧源（１８０）を作動させることができる。次いでプロセッサ（１６２）は、十分な圧力レベルが滅菌室（１５２）内で達成されているかどうかを判断する（ブロック３１２）。単に一例として、プロセッサ（１６２）は、判断工程（ブロック３１２）の一部として、滅菌室（１５２）内の１つ以上の圧力センサーからのデータを監視してもよい。あるいは、プロセッサ（１６２）は、単純に所定の期間にわたって減圧源（１８０）を作動させ、減圧源（１８０）が作動されている期間に基づいて適切な圧力が滅菌室（１５２）において達成されていると見なすことができる。十分な圧力レベルが滅菌室（１５２）内で達成されているかどうかをプロセッサ（１６２）が判断し得る（ブロック３１２）その他の好適な方法は、本明細書の教示を鑑みれば当業者には明らかとなろう。適切な圧力レベルが滅菌室（１５２）内で達成されるまで、減圧源（１８０）は作動されたままである。
【００２０】
滅菌室（１５２）が適切な圧力レベル（例えば、約０．０２７Ｐａ〜約１．３ｋＰａ（約０．２トル〜約１０トル））に到達すると、プロセッサ（１６２）は次いで、滅菌モジュール（１５６）を作動させて滅菌室（１５２）内に滅菌剤を適用する（ブロック３１２）。プロセスのこの段階は、「移送フェーズ」と呼ばれることがある。単に一例として、滅菌剤は、過酸化水素、ペルオキシ酸（例えば、過酢酸、過ギ酸など）、オゾン、又はそれらの混合物など、酸化剤の蒸気を含み得る。更に、滅菌剤は二酸化塩素を含んでもよい。滅菌剤が取り得る様々な他の好適な形態が本明細書に記載されているが、他の形態も、本明細書の教示を鑑みれば当業者には明らかとなろう。滅菌剤が滅菌室（１５２）に適用されると（ブロック３１４）、プロセッサ（１６２）は、十分な所定の期間が経過したかどうかを判断するために時間を監視する（ブロック３１６）。単に一例として、この所定の期間は、数秒間から数分間であり得る。所定の期間が経過するまで、滅菌室（１５２）は、依然として上記の所定の圧力レベルで密閉状態にあり、適用された滅菌剤は滅菌室（１５２）内に収容された医療機器に作用する。
【００２１】
所定の期間が経過した後、プロセッサ（１６２）は通気弁（１８２）を作動させて（ブロック３１８）滅菌室（１５２）を大気に通気する。いくつかの変型形態では、滅菌室（１５２）は、大気圧に到達してもよいが、他の変型形態では、滅菌室（１５２）は準大気圧にしか到達しない。プロセスの通気段階は、「拡散フェーズ」と呼ばれることがある。本例では、滅菌サイクルはその後、拡散フェーズの完了後に完了する（ブロック３２０）。いくつかの他の実例では、減圧は、拡散フェーズの完了後に滅菌室（１５２）に再び適用され、その後、プラズマが滅菌室（１５２）に適用される。図２に示す全滅菌サイクル（後続の減圧とその後の滅菌が適用される上記の変型形態を含む）は、１回完了した後に１回以上繰り返されてもよいことを理解されたい。換言すれば、医療機器は滅菌室（１５２）内に残留し、図２に示す全サイクル（後続の減圧及びそれに次いで滅菌が適用される上記の変型形態を含む）が２回以上繰り返されてもよい。
【００２２】
いくつかの変型形態では、滅菌室（１５２）内に収容された医療機器を加熱するために、プレプラズマが滅菌サイクルにおいて適用されてもよい。単に一例として、プラズマは、減圧の適用（ブロック３１０）と滅菌剤の適用（ブロック３１４）との間に適用されてよい。それに加えて又はそれに代わって、滅菌室（１５２）内に収容された医療機器の表面に吸着され得る残存滅菌剤を分解するために、ポストプラズマが滅菌サイクルの最後に適用されてもよい。ポストプラズマを適用する前に、まず減圧が滅菌室（１５２）に適用されることが必要となることを理解されたい。
【００２３】
単に一例として、図２に示すプロセスは、滅菌室（１５２）の壁が約３０℃〜約５６℃、又はより具体的には約４７℃〜約５６℃、又は更により具体的には約５０℃であり、滅菌室（１５２）内の医療機器の温度が約５℃乃至１０℃〜約４０℃乃至５５℃である温度で実行され得る。
【００２４】
上記に加えて、滅菌庫（１５０）は、開示が本明細書に援用される米国特許第６，９３９，５１９号、参照により開示が本明細書に援用される米国特許第６，８５２，２７９号、参照により開示が本明細書に援用される米国特許第６，８５２，２７７号、参照により開示が本明細書に援用される米国特許第６，４４７，７１９号、参照により開示が本明細書で援用される米国特許第６，３６５，１０２号、参照により開示が本明細書で援用される米国特許第６，３２５，９７２号、及び／又は参照により開示が本明細書で援用される米国仮特許出願第６２／３１６，７２２号の教示の少なくとも一部に従って、滅菌プロセスを実施するように構成され得る。
【００２５】
上記の例は、医療機器、特に内視鏡を滅菌する状況で説明されているが、本明細書の教示はまた、様々なその他の種類の物品を滅菌する状況で容易に適用され得ることを理解されたい。これらの教示は、内視鏡又はその他の医療機器に限定されるものではない。本明細書の教示に従って滅菌され得る他の好適な物品が、当業者には明らかとなろう。
【００２６】
ＩＩＩ．例示的な生物学的インジケータアセンブリ
いくつかの場合では、滅菌プロセスを確実に成功させるために、滅菌プロセス中に滅菌室（１５２）内に医療機器と共に生物学的インジケータを含めることが望ましい場合がある。図３は、そのような生物学的インジケータが取ることができる例示的な形態を示す。具体的には、図３は、筐体（７１０）、キャップ（７２０）、アンプル（７３０）、及び担体（７４０）を含む生物学的インジケータ（７００）を示す。筐体（７１０）は透明な材料（例えば、透明プラスチック、ガラスなど）で形成されており、筐体（７１０）がアンプル（７３０）を挿入式に受容できるよう中空である。アンプル（７３０）も、透明な材料（例えば、透明プラスチック、ガラスなど）で形成されており、流体（７３２）を収容する。単に一例として、流体（７３２）は液体増殖培地を含み得る。そのような液体増殖培地は、インキュベーションにより、接触する任意の生存微生物の増殖を促進することができる。流体（７３２）は更に、以下で詳しく述べるように、アンプル（７３０）が破損された後に、流体（７３２）の液体培地中に含まれ得る生きている微生物の数に依存して蛍光を発するフルオロフォアを含む。流体（７３２）はアンプル（７３０）内に密閉される。
【００２７】
担体（７４０）は、特定の滅菌プロセスに対する耐性を有する生物学的活性の供給源を提供する。「生物学的活性」なる語句は、生物細胞に関連した任意の特定の触媒プロセス又はプロセス群のことを一般に指す。生物学的活性の非限定的な例としては、異化酵素活性（例えば、炭水化物の発酵経路）、同化酵素活性（例えば、核酸、アミノ酸、又はタンパク質合成）、共役反応（例えば、代謝経路）、生体分子媒介レドックス反応（例えば、電子伝達系）及び生物発光反応が挙げられる。例示的な生物学的インジケータ（７００）としては、１つ以上の既知の生物学的活性の供給源（例えば、各種の微生物）の生存量又は培養物が挙げられる。かかる生物学的活性の供給源は、微生物の芽胞の形態であってよい。
【００２８】
生物学的インジケータ（７００）内の生物学的活性の供給源は、効果的な滅菌サイクルによって死滅するか、又は滅菌サイクルが何らかの理由で効果的でない場合には生存する。滅菌サイクルによって増殖性の細菌を比較的容易に死滅させることができるため、生物の増殖性の形態よりはむしろ、細菌の芽胞をある程度使用することができる。芽胞はまた、優れた保存特性も有し得、数年にわたってその休眠状態のままであることができる。その結果として、いくつかの例示的な生物学的インジケータ（７００）では、標準化された芽胞株の接種物の滅菌によって、滅菌室内のすべての微生物の不活性化が生じたことを高い信頼度で示すことができる。
【００２９】
本開示では、生物学的インジケータで使用される１つ以上の生物学的活性の供給源が「微生物」又は「芽胞」であるとして説明する。しかしながら、生物学的インジケータ（７００）の特定の実施形態で使用される供給源（例えば芽胞）の種類は、検討される特定の滅菌プロセスに対して高度の耐性を有するように選択される点を理解されたい。したがって、本開示の異なる例示的な生物学的インジケータ（７００）では、特定の生物学的インジケータ（７００）が用いられる滅菌プロセスに応じて異なる生物学的活性の供給源を使用することができる。説明を簡単にするため、「芽胞」なる用語が本開示の全体を通じて用いられているが、例えば、微生物（例えば、細菌、真菌類、ウイルスなど）、芽胞（例えば、細菌、真菌など）、酵素、酵素活性の基質、ＡＴＰ、微生物の代謝、又はこれらの組み合わせから選択されるものなどの任意の適切な生物学的活性の供給源を例示的な生物学的インジケータ（７００）において代わりに使用することができる点を理解されたい。
【００３０】
あくまで例としてであるが、担体（７４０）は、例えば、バチルス、ゲオバチルス、クロストリジウム属から得た芽胞を支持する（例えば芽胞を含浸させる）ことができる。担体（７４０）は吸水性であってよく、フィルター材料で形成することができる。担体（７４０）を形成するには、布、紙、不織ポリプロピレン、レーヨン又はナイロン、及び微孔性ポリマー材料などのシート状の材料も使用できる。金属（例えば、アルミニウム若しくはステンレス鋼）、ガラス（例えば、ガラスビーズ若しくはガラス繊維）、磁器又はプラスチックなどの非吸水性材料も、担体（７４０）を形成するのに使用することができる。当然ながら、上記の材料の組み合わせも、担体（７４０）を形成するのに使用することができる。
【００３１】
アンプル（７３０）は、生物学的インジケータ（７００）の脆弱性構成要素として構成され、そのため、アンプル（７３０）を筐体内で破損して、流体（７３２）を筐体（７１０）内で放出することができる。アンプル（７３０）の破損を補助するために、一組の破損機構（７５０）が筐体（７１０）の底部に配置される。破損機構（７５０）は図３ではスパイクとして示されているが、これは単に例であることが理解されよう。破損機構（７５０）は、任意のその他の好適な形態を取ってもよい。アンプル（７３０）の破損を更に補助するために、キャップ（７２０）は、筐体（７１０）に沿って下向きにスライドさせてアンプル（７３０）を破損機構（７５０）に対して押し付けるよう構成されている。これは、以下で詳しく述べるように、生物学的インジケータ（７００）をインジケータアナライザ（８００）に挿入する前に、正しく行うことができる。滅菌プロセス中に生物学的インジケータ（７００）が滅菌庫（１５０）内にある間は、アンプル（７３０）は無傷のままであることが理解されよう。キャップ（７２０）は、キャップ（７２０）が筐体（７１０）に対して下向きに押されてアンプル（７３０）を破損する前に、気体（例えば、空気又は滅菌剤など）を筐体（７１０）内へと通過させる、１つ以上の開口部を含み得る。よって、これらの開口部は、担体（７４０）上の微生物を滅菌プロセス（ブロック２０８）により破壊することを可能にし得る。しかしながら、キャップ（７２０）が筐体（７１０）に対して下向きに押されてアンプル（７３０）を破損した後は、これらの１つ以上の開口部を密閉して、放出された流体（７３２）を筐体（７１０）内に閉じ込めることができる。流体（７３２）がアンプル（７３０）から放出されると、この放出された流体は最終的に担体（７４０）に達し、これにより、担体（７４０）上に残っている生存微生物のインキュベーションプロセスを開始する。
【００３２】
図３には示されていないが、筐体（７１０）は更に、識別タグを含んでもよい。そのような識別タグは、機械読み取り可能な特徴を含んでよく、これは、滅菌庫（１５０）及びインジケータアナライザ（８００）の識別タグリーダー（１６６）により読み取られることができる。単に一例として、識別タグは、光学的コード（例えば、バーコード、データマトリックスコード、ＱＲコードなど）、ＲＦＩＤタグ、及び／又は任意のその他の好適な種類の機械読み取り可能な識別子を含み得る。更に、識別タグは、文字列、数字、カラーコードなどの人間が読み取り可能な特徴を含んでもよい。
【００３３】
キャップ（７２０）は更に、色変化機能を含み得る。そのような色変化機能は、生物学的インジケータ（７００）が滅菌庫（１５０）の滅菌剤に曝露されたときに色が変化する化学インジケータとして機能し得る。いくつかの変型形態において、この色変化機能は単に２つの異なる色の間で変化するが、１つの色は滅菌剤に曝露していないことを示し、他方の色は滅菌剤に少なくともある程度曝露したことを示す。いくつかの他の変型形態において、この色変化機能は、生物学的インジケータ（７００）が滅菌剤に曝露した度合に基づく色の範囲に沿って色を変化させる。換言すれば、この色変化は、滅菌剤曝露の度合に比例し得る。更に別の単なる例示的な例として、色変化機能は、２つ以上のパラメータの組み合わせに応じて色を変化させることができる（例えば、２つの利用可能な色のうちの一方から、２つの利用可能な色のうちの他方へと変化する、又は色の範囲に沿って変化する）。例えば、そのようなパラメータは、本明細書の教示を考慮することで当業者には明らかとなるように、滅菌剤の時間及び濃度、受け取った滅菌材の時間、温度、及び濃度若しくは量／用量、並びに／又はその他のパラメータを含み得る（しかしこれらに必ずしも制限されない）。
【００３４】
上記に加えるか又は上記に代わるものとして、生物学的インジケータ（７００）は、その開示内容を本明細書に参照によって援用するところの２０１６年３月１日出願の発明の名称が「Ｓｅｌｆ−Ｃｏｎｔａｉｎｅｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ」である米国特許出願第１５／０５７，７６８号の教示の少なくとも一部に従って構成及び動作することが可能であり得る。本明細書の教示を鑑みて、生物学的インジケータ（７００）が取り得る他の適切な形態が、当業者に明らかになることであろう。
【００３５】
ＩＶ．例示的な生物学的インジケータアナライザ
図４は、滅菌庫（１５０）内で滅菌サイクルに供された生物学的インジケータ（７００）を分析するように機能し得る例示的な生物学的インジケータアナライザ（８００）を示す。したがって、生物学的インジケータアナライザ（８００）は、滅菌サイクルが効果的であったか否かを判定することが可能である。この例の生物学的インジケータアナライザ（８００）は複数のウェル（８１０）を含み、それぞれは、対応する生物学的インジケータ（７００）を挿入式に受容するよう構成されている。２つのウェル（８１０）が図示されているが、８個のウェル（８１０）、８個未満のウェル（８１０）、又は８個を超えるウェル（８１０）など、他の任意の適切な数のウェル（８１０）が設けられてもよいことが理解されよう。生物学的インジケータアナライザ（８００）は、指示及び制御アルゴリズムの実行、情報の処理などを実行するよう動作可能なプロセッサ（８２０）を更に含む。
【００３６】
各ウェル（８１０）は、関連する光源（８３０）及びセンサ（８４０）を有する。各光源（８３０）は、対応するウェル（８１０）に挿入された生物学的インジケータ（７００）の筐体（７１０）を通して、光を投射するよう構成され、各センサ（８４０）は、筐体（７１０）に収容された流体（７３２）により蛍光発光した光を検知するよう、動作可能である。単なる例示として、光源（８３０）は、紫外線を放射するよう構成されたレーザー形態であってよい。本明細書の教示を鑑みて、光源（８３０）が取り得るその他の様々な好適な形態が、当業者に明らかとなるであろう。更なる単なる一例として、センサ（８４０）は、電荷結合素子（ＣＣＤ）を含むことができる。本明細書の教示を鑑みて、センサ（８４０）が取り得るその他の様々な好適な形態が、当業者には明らかとなるであろう。流体（７３２）の蛍光は、流体（７３２）の媒体内に含まれる生存微生物の数で決まる。かくして、センサ（８４０）は、流体（７３２）が光源（８３０）からの光に応答して蛍光発光する度合に応じて、流体（７３２）中の生存微生物の存在を検出するように構成される。
【００３７】
本例の生物学的インジケータアナライザ（８００）は、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）を更に含む。タッチスクリーンディスプレイ（８５０）は、生物学的インジケータアナライザ（８００）の動作に関連する様々なユーザインターフェースディスプレイスクリーンをレンダリングするよう動作可能である。タッチスクリーンディスプレイ（８５０）は更に、従来型タッチスクリーン技術に従って、ユーザがタッチスクリーンディスプレイ（８５０）と接触する形態でユーザ入力を受信するように構成されている。更に、又は代替として、生物学的インジケータアナライザ（８００）は、これらに限定されないが、ボタン、キーパッド、キーボード、マウス、トラックボールなど、その他の様々な種類のユーザ入力機能を含み得る。タッチスクリーンディスプレイ（８５０）により供給されるディスプレイは、プロセッサ（８２０）によって駆動可能である。タッチスクリーンディスプレイ（８５０）を通じて受信されたユーザ入力は、プロセッサ（８２０）によって処理できる。
【００３８】
本例の生物学的インジケータアナライザ（８００）は、通信モジュール（８６０）を更に含む。通信モジュール（８６０）は、生物学的インジケータアナライザ（８００）と通信ハブ（図示せず）、サーバ、及び／又はその他の装置との間の双方向通信を可能にするよう構成されている。いくつかの変型形態では、通信モジュール（８６０）は、その開示内容を参照により本明細書に援用するところの２０１６年８月１８日出願の発明の名称が「Ａｐｐａｒａｔｕｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｔｏ  Ｌｉｎｋ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ」である米国特許出願第６２／３７６，５１７号の教示の少なくとも一部に基づいて、ハブと通信するように構成されている。単に一例として、通信モジュール（８６０）は、Ｅｔｈｅｒｎｅｔ、Ｗｉ−Ｆｉ、Ｂｌｕｅｔｏｏｔｈ、ＵＳＢ、赤外線、ＮＦＣ、及び／又はその他の技術を介した有線及び／又は無線通信を提供するよう構成可能である。本明細書の教示を鑑みて、通信モジュール（８６０）を形成するのに使用できる種々の適切な構成要素及び構成が、当業者に明らかとなるであろう。通信モジュール（８６０）から送信された又は通信モジュール（８６０）を通して受信された通信は、プロセッサ（８２０）を介して処理される。
【００３９】
本例の生物学的インジケータアナライザ（８００）は、識別タグリーダー（８７０）を更に含み、この識別タグリーダーは、本明細書に記載されるように、生物学的インジケータ（７００）の識別タグを読み取るよう動作可能である。生物学的インジケータ（７００）を分析する前に、識別タグリーダー（８７０）を使用して、生物学的インジケータ（７００）を特定できることが理解されよう。単に一例として、識別タグリーダー（８７０）は、生物学的インジケータの光学識別タグ（例えば、バーコード、データマトリックスコード、ＱＲコードなど）を読み取るよう動作可能な光学リーダーを含み得る。更に、又は代替として、識別タグリーダー（８７０）は、生物学的インジケータ（７００）のＲＦＩＤ識別タグを読み取るよう動作可能なＲＦＩＤリーダーを含み得る。識別タグリーダー（８７０）がＲＦＩＤリーダーを含むいくつかの変型形態では、識別タグリーダー（８７０）は更に、生物学的インジケータ（７００）のＲＦＩＤタグに情報を書き込むよう動作可能である。識別タグリーダー（８７０）を形成するのに使用できる種々の適切な構成要素及び構成が、本明細書の教示を鑑みれば当業者には明らかとなろう。識別タグリーダー（８７０）を通じて受信されたデータは、プロセッサ（８２０）を介して処理される。
【００４０】
本例の生物学的インジケータアナライザ（８００）はメモリ（８８０）を更に含み、このメモリは、光源（８３０）、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）、通信モジュール（８６０）、及び識別タグリーダー（８７０）などの構成要素を駆動するために、プロセッサ（８２０）により実行される制御ロジック及び指示を格納するよう動作可能である。メモリ（８８０）を使用して、生物学的インジケータ分析の性能に関連する結果、及び／又は様々なその他の種類の情報を格納することもできる。メモリ（８８０）が取り得る様々な適切な形態、並びにメモリ（８８０）を使用できる様々な方法が、本明細書の教示を鑑みれば当業者には明らかとなろう。
【００４１】
Ｖ．インジケータアナライザを使用して滅菌サイクルの有効性を検出する例示的方法
図５は、生物学的インジケータアナライザ（８００）による生物学的インジケータ（７００）分析サイクルを開始するのに使用可能な、例示的な工程のセットを示す。第１工程として、ユーザは、どのウェル（８１０）が空いているかを観察し（ブロック９００）、空いているウェルを選択できる（ブロック９０２）。一部の変型形態では、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）は、空いている各ウェル（８１０）の隣にある番号を提示し、そのため、操作者は、空いているウェルを選択するために、選択された空きウェル（８１０）に関連する番号に触れるだけでよい（ブロック９０２）。次に、識別タグリーダー（８７０）が生物学的インジケータ（７００）の識別タグを読み取れるようにするために、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）上のディスプレイスクリーンは、生物学的インジケータ（７００）の識別タグを識別タグリーダー（８７０）の近くに配置するようユーザに指示することができる。この指示の一部として、ユーザが識別タグリーダー（８７０）を見つけやすくするために、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）は、識別タグリーダー（８７０）の位置を提示できる。次いで、ユーザは、識別タグリーダー（８７０）を使用して、生物学的インジケータ（７００）の識別タグを読み取ることができる（ブロック９０４）。
【００４２】
次いで、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）上のディスプレイスクリーンは、自分自身を特定するようユーザに指示することができる。次に、ユーザは、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）を操作して、自分自身を特定することができる（ブロック９０６）。次に、生物学的インジケータ（７００）のキャップ（７２０）上の化学的インジケータの色が変化したか否かを示すよう、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）上のディスプレイスクリーンはユーザに指示することができる。次いで、ユーザは、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）を操作して、生物学的インジケータ（７００）のキャップ（７２０）上の化学的インジケータの色が変化したか否かを示すことができる（ブロック９０８）。
【００４３】
次いで、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）上のディスプレイスクリーンは、アンプル（７３０）を破損し、生物学的インジケータ（７００）を撹拌することによって、選択されたウェル（８１０）に装填するために生物学的インジケータ（７００）を準備するようユーザに指示することができる。次に、操作者は、キャップ（７２０）を押してアンプル（７３０）を破損してから、流体（７３２）を担体（７４０）と確実に適切に混合するよう、生物学的インジケータ（７００）を撹拌することができる（ブロック９１０）。次に、ユーザは、選択されたウェル（８１０）内に、生物学的インジケータ（７００）を迅速に入れることができる（ブロック９１２）。一部の場合では、アンプル（７３０）を破損し、生物学的インジケータ（７００）を撹拌した直後（ブロック９１０）に、選択されたウェル（８１０）内に生物学的インジケータ（７００）を挿入すること（ブロック９１２）が望ましい場合がある。
【００４４】
いくつかの変型形態では、生物学的インジケータ（７００）を選択されたウェル（８１０）内に挿入する（ブロック９１２）前に、ユーザがアンプル（７３０）を破損し、生物学的インジケータ（７００）を撹拌する工程（ブロック９１０）を適切に完了させたか否かを判定するよう、インジケータアナライザ（８００）が構成されている。単なる例示として、これは、選択されたウェル（８１０）内に生物学的インジケータ（７００）を挿入した後、光源（８３０）から放射された光をセンサ（８４０）がどのように検出するかに基づいて、決定することができる。インジケータアナライザ（８００）によって、ユーザが、選択されたウェル（８１０）内に生物学的インジケータ（７００）を挿入する（ブロック９１２）前に、アンプル（７３０）を破損し生物学的インジケータ（７００）を撹拌する工程（ブロック９１０）を適切に完了させることができなかったと判定された場合、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）は、生物学的インジケータ（７００）をウェル（８１０）から引き出し、アンプル（７３０）を破損し生物学的インジケータ（７００）を撹拌する工程（ブロック９１０）を適切に完了させるよう、ユーザに指示できる。
【００４５】
ユーザが、アンプル（７３０）を破損し生物学的インジケータ（７００）を撹拌する工程（ブロック９１０）を適切に完了させ、次いで選択されたウェル内に生物学的インジケータ（７００）を挿入（ブロック９１２）させたなら、生物学的インジケータ（７００）は、インキュベーション期間中、ウェル（８１０）内に静置される（ブロック９１４）。インキュベーション期間中（ブロック９１４）、選択されたウェル（８１０）に関連する光源（８３０）を起動し、センサ（８４０）は、インジケータ（７００）内の流体（７３２）の応答蛍光を監視する。更に、インキュベーション期間中（ブロック９１４）、ウェル（８１０）を加熱してもよい（例えば、約６０℃まで）。上述のとおり、蛍光が媒体に含まれる微生物の数に依存するフルオロフォアが、流体（７３２）に含まれる。したがって、センサ（８４０）は、流体（７３２）の蛍光に基づいて、流体（７３２）中の生存微生物（担体（７４０）から）の存在を検知できる。それ故、適切なインキュベーション期間が経った後、インジケータアナライザ（８００）は、センサ（８４０）により検知された流体（７３２）の蛍光に基づいて、担体（７４０）上に存在していた微生物のうち（すなわち、滅菌庫（１５０）内の滅菌サイクル前）、滅菌庫（１５０）内の滅菌サイクルを生き残ったものがあるか否かを結論付けることを理解されたい。
【００４６】
単なる例示として、インキュベーション期間（ブロック９１４）は、約３０分間でよい。あるいは、このインキュベーション期間は、大幅に長くてもよいし（例えば、１時間以上）、短くてもよいし、又は任意のその他の適切な持続時間であってもよい。インキュベーション期間（ブロック９１４）中、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）は、インキュベーション期間の残り時間量のグラフ表記を提供し得る。１つを超えるウェル（８１０）が、対応する生物学的インジケータ（７００）によって占有されている場合、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）は、占有されているウェル（８１０）ごとに、インキュベーション期間の残り時間量のグラフ表記を提供することができる。
【００４７】
インキュベーション時間（９１４）の完了後、生物学的インジケータアナライザ（８００）は、センサ（８４０）により検知された流体（７３２）の蛍光に基づいて、担体（７４０）上に存在していた微生物のうち（すなわち、滅菌庫（１５０）内の滅菌サイクル前）、滅菌庫（１５０）内の滅菌サイクルを生き残ったものがあるか否かを判定することができる。したがって、生物学的インジケータアナライザ（８００）は、生物学的インジケータ（７００）が分析に合格したか又は不合格であるかを判定できる。この観点において、「合格」結果は、生物学的インジケータ（７００）内に生体微生物が存在しないことを示しており、つまり、滅菌庫（１５０）における滅菌サイクルが成功したことを示す。「不合格」結果は、生物学的インジケータ（７００）内に生体微生物が存在することを示しており、つまり、滅菌庫（１５０）における滅菌サイクルが失敗したことを示す。
【００４８】
「合格」結果の場合、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）は、生物学的インジケータ（７００）が分析に合格したことを示す画面をユーザに提示することができる。更に、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）は、生物学的インジケータ（７００）をウェル（８１０）から除去し、使用済みの生物学的インジケータ（７００）を適切に廃棄するよう、ユーザに指示することができる。「不合格」結果の場合、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）は、生物学的インジケータ（７００）が分析に不合格であったことを示す画面をユーザに提示することができる。次いで、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）は、自分自身を特定するよう、ユーザに指示する。次に、ユーザは、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）を操作して、自分自身を特定することができる。次に、タッチスクリーンディスプレイ（８５０）は、生物学的インジケータ（７００）をウェル（８１０）から除去し、使用済みの生物学的インジケータを適切に廃棄するよう、ユーザに指示することができる。「合格」の結果又は「不合格」の結果のいずれか、又は両方の場合で、通信モジュール（８６０）は結果を通信ハブ、サーバ、及び／又はその他の装置に送信することができる。
【００４９】
上記に加えて、インジケータアナライザ（８００）は、その開示内容を参照により本明細書に援用するところの２０１６年４月１日出願の発明の名称が「Ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅｓ」である米国特許出願第６２／３１６，７２２号の教示の少なくとも一部に従って、構成することができ動作可能であり得る。
【００５０】
ＶＩ．滅菌サイクルの有効性を検出するための例示的な代替的方法
上記で述べたように、滅菌サイクルの有効性は、滅菌庫（１５０）内で同じ滅菌サイクルに供される医療機器の横、又はその近くに生物学的インジケータ（７００）を配置することによって測定することができる。例えば、所定量の微生物を有する生物学的インジケータ（７００）を、滅菌室（１５２）内で医療機器の横に配置し、滅菌サイクルに供することができる。サイクル完了後、インジケータアナライザ（８００）を使用して生物学的インジケータ（７００）内の微生物を分析することで、サイクルで生き残った微生物が存在するか否かを判定することができる。あるいは、生物学的インジケータ（７００）内の微生物を培養することで、サイクルで生き残った微生物が存在するか否かを判定することもできる。生物学的インジケータ（７００）内の生存微生物の有無は、滅菌サイクルが効果的に医療機器を滅菌したか否かを示しているものと見なされる。
【００５１】
生物学的インジケータ（７００）内の生存微生物の有無は、微生物が滅菌サイクルに供された後、微生物をインキュベートするために使用される液体増殖培地（７３２）にｐＨインジケータ色素又はレドックス色素などのインジケータ色素を含めることにより判定することができる。充分なインキュベーション時間の後、生物学的インジケータ（７００）を、滅菌サイクルが生物学的インジケータ（７００）、更には医療機器内の生物学的活性の供給源をすべて破壊するには不充分であったことを示す微生物の代謝及び／又は増殖の証拠について観察する。滅菌サイクルが不充分であると判定された場合、医療機器を新たな生物学的インジケータ（７００）と共に次の滅菌サイクルに供し、その後、新たな生物学的インジケータ（７００）をインキュベートし、生存微生物の有無の証拠について観察する。このプロセスは、医療機器の滅菌が効果的であり、医療機器が使用できると判定されるまで繰り返すことができる。
【００５２】
インジケータ色素が液体増殖培地中の微生物のインキュベーション中に存在する場合、微生物の代謝及び／又は増殖の証拠としては、液体増殖培地の色変化を挙げることができる（例えば、液体増殖培地内のｐＨ変化の結果として）。滅菌が効果的であり、液体増殖培地内に生存微生物が存在しない場合は、液体増殖培地の色に検出可能な変化は認められないはずである。滅菌が効果的でなく、液体増殖培地内に生存微生物が存在する場合は、検出可能な色変化が生じるはずである。いくつかの場合において、色変化の評価は、液体増殖培地の吸収スペクトルの変化を分光光度的に測定するのではなく、視覚的に行われる。したがって、観測者が視覚的な評価にのみ頼っている場合、滅菌サイクルが効果的であったか否かの判定は主観的なものであり、したがって誤りが生じやすい。
【００５３】
微生物の代謝及び／又は増殖の証拠についてインジケータ色素に依存することに伴う別の問題点は、液体増殖培地の検出可能な色変化が生じるのに長いインキュベーション時間を必要とし得ることである。この理由のため、インジケータ色素の色変化に頼った方法は、インジケータ色素の評価ができるようになるまでに１８〜４８時間を上回るインキュベーション時間を必要とし得る。したがって、滅菌サイクルに供された医療機器は、特に滅菌サイクルが効果がないと判定された場合に、長時間にわたって使用できなくなる場合がある。場合によっては、医療器具は、インジケータ色素の評価の判定結果を受け取るまでの間、使用される可能性がある。このような場合に、インジケータ色素の評価が増殖について陽性であった場合、医療機関は患者に通知する必要が生じ、患者に予防的抗生物質を投与しなければならない可能性がある。いずれの場合も、滅菌サイクルが効果的でなかった場合、医療機器を別の滅菌サイクルに供さなければならないばかりか、別の生物学的インジケータ（７００）が更なるインキュベーション時間を経て次の滅菌サイクルが効果的であったか否かが判定される必要が生じる。
【００５４】
滅菌サイクルの有効性を評価するプロセスを加速するため、また、医療器具に別の滅菌サイクルを行う必要があるか否かを判定するため、いくつかの有効性評価方法では２種類のインジケータ試薬を使用することができる。例えば、第１のインジケータ試薬（例えば蛍光の検出に使用されるもの）を微生物の生存の検出に用い、第２のインジケータ試薬（例えばｐＨインジケータ）を（上記に述べたように）微生物の代謝及び／又は増殖を検出するために用いることができる。実際には、第１のインジケータは、生物学的インジケータ（７００）中に存在する微生物が滅菌サイクル後に依然生存しているか否かに関する比較的早期のシグナルを提供することができる。微生物が依然生存している場合は、医療器具を次の滅菌サイクルに供するよう進めることを決定することができる。しかしながら、第１のインジケータが微生物の生存を最終的に示さない場合は、第２のインジケータによって生物学的インジケータ（７００）内に微生物の代謝及び／又は増殖の証拠が認められるか否かが確認されるまで必要な長さの時間にわたってインキュベーションを継続する必要がある。
【００５５】
上記に述べたような複数のインジケータ試薬の使用は、時間がかかるばかりでなく、液体増殖培地中の１つ以上のインジケータ試薬の検出の干渉又は不一致を生じ得る。例えば、第２のインジケータ試薬がｐＨインジケータ（例えば以下に述べるｐＨインジケータの１つ以上）である場合、例えば、ｐＨインジケータが第１のインジケータ試薬の蛍光のスペクトル帯域と似た波長の電磁波を放射するような場合（例えばｐＨインジケータが色シフトを示す場合）には、ｐＨインジケータは第１のインジケータ試薬の蛍光読み取り値との不一致又は干渉のおそれがある。したがって、液体増殖培地と接触して配置された場合に第２のインジケータ試薬を吸収及び／又は選択的に濃縮することで液体増殖培地内の第２のインジケータ試薬の濃度を低下させるように構成された（例えば適当な材料で形成された）基質を生物学的インジケータ（７００）に含めて、第１のインジケータ試薬の蛍光を正確に評価できるようにする必要が生じ得る。
【００５６】
使用可能なｐＨインジケータの例としては、これらに限定されるものではないが、チモールブルー、トロペオリンＯＯ、メチルイエロー、メチルオレンジ、ブロモフェノールブルー、ブロモクレゾールグリーン、メチルレッド、ブロモチモールブルー、フェノールレッド、ニュートラルレッド、フェノールフタレイン、チモールフタレイン、アリザリンイエロー、トロペオリンＯ、ニトラミン、トリニトロ安息香酸、チモールブルー、ブロモフェノールブルー、テトラブロモフェノールブルー、ブロモクレゾールグリーン、ブロモクレゾールパープル、ブロモクレゾールブルー、メチルレッド、ブロモチモールブルー、フェノールレッド、コンゴレッド、及びクレゾールレッドが挙げられる。使用可能なレドックスインジケータ（すなわち酸化還元インジケータ）の例としては、これらに限定されるものではないが、２，２’−ビピリジン（Ｒｕ錯体）、ニトロフェナントロリン（Ｆｅ錯体）、Ｎ−フェニルアントラニル酸、１，１０−フェナントロリン（Ｆｅ錯体）、Ｎ−エトキシクリソイジン、２，２’−ビピリジン（Ｆｅ錯体）、５，６−ジメチルフェナントロリン（Ｆｅ錯体）、ｏ−ジアニジシン、ジフェニルアミンスルホン酸ナトリウム、ジフェニルベンジジン、ジフェニルアミン、ビオロゲン、２，６−ジブロモフェノールインドフェノールナトリウム、２，６−ジクロロフェノールインドフェノールナトリウム、ｏ−クレゾールインドフェノールナトリウム、チオニン（ラウスバイオレットの同意語）、メチレンブルー、インディゴテトラスルホン酸、インディゴトリスルホン酸、インディゴジスルホン酸、インディゴモノスルホン酸、フェノサフラニン、サフラニンＴ、及びニュートラルレッドが挙げられる。
【００５７】
本明細書に開示される滅菌サイクルの有効性を判定するためのいくつかの例示的な方法では、休眠状態にある場合に芽胞殻内に特定の酵素の一定数のコピーを含む芽胞を滅菌サイクルの有効性のインジケータとして用いることができる。いくつかの実施形態では、酵素は、酵素を含む芽胞よりも滅菌条件に対して耐性が高いものとすることができる。
【００５８】
いくつかの例示的な方法では、酵素基質を液体増殖培地（７３２）に加えて酵素の活性を測定することができる。酵素が作用すると、酵素で修飾された基質は、タンパク質検出の任意の適切な手段を用いて検出することができる検出可能な生成物を形成する。タンパク質検出の例示的な方法は、色素測定法、吸収測定法、免役原的測定法、リガンド結合測定法、及びこれらの組み合わせから選択することができる。
【００５９】
効果的な滅菌サイクルの後、芽胞が生存しておらず、芽胞内に含まれる酵素が不活性化されている場合、酵素基質は酵素によって修飾されず、検出可能な生成物の濃度に大きな変化は生じない。しかしながら、滅菌サイクルの後で芽胞が依然生存している場合、芽胞内の酵素のコピーの数は液体増殖培地（７３２）内で初期には一定に維持され、液体増殖培地（７３２）内の酵素による酵素基質の修飾も一定に維持される。その結果、液体増殖培地（７３２）内の検出可能な生成物の濃度の変化速度は、初期には時間に応じて直線的に増加する。液体増殖培地（７３２）内で、生存する芽胞は最終的に発芽、成長、及び指数関数的に増殖して、同時に酵素の複数のコピーを産生する。酵素のコピーが増えるにしたがって、酵素による酵素基質の修飾及び液体増殖培地内の検出可能な生成物の濃度は、時間に応じて指数関数的に増加する。短い滅菌サイクルの後、芽胞が生存していないが少なくとも一部の酵素が生き残っていれば、検出可能な生成物の濃度の直線的な増加が時間に応じて生じ得、時間に応じた検出可能な生成物の濃度の指数関数的な増加は認められなくなる。
【００６０】
例示的な方法では、液体増殖培地内の検出可能な生成物の存在の監視は、滅菌サイクルで生き残った芽胞及び／又は酵素が存在するか否かを判定する初期の手段を提供する。液体増殖培地（７３２）内に検出可能な生成物が存在しなければ、芽胞はもはや生存しておらず、酵素は不活性化されており、滅菌サイクルは効果的であったことになる。しかしながら、液体増殖培地（７３２）内の検出可能な生成物の濃度が、時間に応じて直線的に増加することが認められる場合、生存芽胞及び活性酵素の早期検出が可能であり、これにより滅菌サイクルが効果的でなかったことが示される。液体増殖培地内の検出可能な生成物の濃度を継続的に監視することにより、滅菌サイクルが効果的でなかったことを確認することが可能である。例えば、液体増殖培地（７３２）内の検出可能な生成物の濃度の変化速度が直線的な変化速度から指数関数的な変化速度に変化することが認められる場合、生物学的インジケータ（７００）内の芽胞が滅菌プロセス後に生存状態のままであるだけでなく、芽胞が増殖性であり、増殖していることの確認が提供される。有利な点として、滅菌サイクルが効果的であるか否かに関するこの判定は、液体増殖培地（７３２）内の検出可能な生成物の検出と干渉するおそれのあるインジケータ色素（例えばｐＨインジケータ色素）を一切使用せずに得ることができる。
【００６１】
検出可能な生成物の濃度の変化速度の移行を監視することにより、例示的な方法は、芽胞の代謝及び／又は増殖の証拠が、特に液体増殖培地（７３２）のｐＨの変化によって測定可能又は定量可能となるまでに長いインキュベーション時間を必要とする方法と比較して、滅菌サイクルが生物学的インジケータ（７００）内の芽胞のすべてを効果的に破壊したか否かをより速やかに確認することを可能にし得る。あくまで例としてであるが、時間に応じた検出可能な生成物の濃度の変化速度の直線的なものから指数関数的なものへの移行は、約５分間、約１５分間、約３０分間、約１時間、約２時間の早期から最大約１２時間までのインキュベーション期間中に測定することができる。
【００６２】
これに加えるか又はこれに代えて、検出可能な生成物の変化速度を測定することで、芽胞の成長及び増殖がなければ酵素のコピーの数は増加しないはずであるので、酵素を含む芽胞が滅菌サイクルで生き残らなかった場合に滅菌サイクルで生き残った酵素の活性を観測することにより生じる擬陽性を排除することができる。その結果、例示的な方法で使用される液体増殖培地（７３２）は、インジケータ色素を実質上含まずともよく、その場合、本明細書で使用するところの「実質上含まない」とは、含まれるインジケータ色素が、１体積％未満、０．５体積％未満、又は０体積％であることを意味する。
【００６３】
これに加えるか又はこれに代えて、本明細書に開示される例示的な方法では、互いに不一致又は干渉する可能性のある放射スペクトル及び／又は色変化を有する２種類のインジケータ試薬ではなく、１種類のインジケータ試薬を用いて滅菌サイクルの有効性を判定することができるため、２種類のインジケータを使用する方法よりも高い感度が得られる。これに加えるか又はこれに代えて、本明細書に述べられる例示的な方法による１種類のインジケータ試薬の使用により、１つのインジケータ試薬を吸収及び／又は選択的に濃縮する基質を生物学的インジケータ（７００）に含める必要をなくすことができるため、別のインジケータの測定と干渉することがない。これに加えるか又はこれに代えて、例示的な方法では、微生物の代謝及び／又は増殖の証拠を与えるためのインジケータ色素の使用を排除することができ、これにより、増殖培地が効果的でない滅菌サイクルに伴う色変化を経たか否かについての主観的な評価も行わなくてよくなる。これに加えるか又はこれに代えて、例示的な方法では、一定数の特定の酵素をその殻内に含むことが知られている芽胞を使用する。これらの酵素は酵素を含む芽胞よりも滅菌に対してより高い耐性を有し得ることから、本方法は、微生物の代謝及び／又は増殖についてアッセイを行うことにより有効性を検出する方法と比較して滅菌サイクルの有効性の検出における高い感度を与えることができる。
【００６４】
上記に述べたように、滅菌サイクルの有効性を検出するための例示的な方法で使用される生物学的活性の供給源は、滅菌サイクルにおいて使用される特定の滅菌プロセスに対する供給源の耐性に基づいて選択することができる。例えば、蒸気滅菌プロセスでは、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス、又はその芽胞を使用することができる。エチレンオキシド滅菌プロセスでは、バチルス・アトロフェウス（以前のバチルス・サブチルス）、又はその芽胞を使用することができる。いくつかの滅菌プロセスでは、滅菌プロセスに対する耐性を有する芽胞として、これらに限定されるものではないが、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞、バチルス・サブチルスの芽胞、バチルス・アトロフェウスの芽胞、バチルス・メガテリウムの芽胞、バチルス・コアギュランスの芽胞、クロストリジウム・スポロゲネスの芽胞、バチルス・プミルスの芽胞、及びこれらの組み合わせのうちの少なくとも１つが挙げられる。
【００６５】
滅菌サイクルの有効性を検出するために使用することができる酵素及び酵素基質は、その開示内容を本明細書に参照によって援用するところの１９９１年１２月１７日発行の発明の名称が「Ｒａｐｉｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｃｙｃｌｅ  ａｎｄ  Ｒａｐｉｄ  Ｒｅａｄ−Ｏｕｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ」である米国特許第５，０７３，４８８号、その開示内容を本明細書に参照によって援用するところの１９９５年５月２３日発行の発明の名称が「Ｒａｐｉｄ  Ｒｅａｄ−Ｏｕｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ」である米国特許第５，４１８，１６７号、その開示内容を本明細書に参照によって援用するところの１９９３年６月２９日発行の発明の名称が「Ｒａｐｉｄ  Ｒｅａｄ−Ｏｕｔ  Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ」である米国特許第５，２２３，４０１号、及びその開示内容を本明細書に参照によって援用するところの２０１６年４月２６日発行の発明の名称が「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ」である米国特許第９，３２２，０４６号に記載されている。
【００６６】
適当な酵素としては、加水分解酵素及び／又はバチルス・サブチルスなどの芽胞形成微生物由来の酵素を挙げることができる。例示的な生物学的インジケータにおいて有用であり得る芽胞形成微生物由来の酵素としては、β−Ｄ−グルコシダーゼ、α−Ｄ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、ブチレートエステラーゼ、カプリレートエステラーゼリパーゼ、ミリステートリパーゼ、ロイシンアミノペプチダーゼ、バリンアミノペプチダーゼ、キモトリプシン、ホスホヒドロラーゼ、α−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、チロシンアミノペプチダーゼ、フェニルアラニンアミノペプチダーゼ、β−Ｄ−グルクロニダーゼ、α−Ｌ−アラビノフラノシダーゼ、Ｎ−アセチル−β−グルコサミノダーゼ、β−Ｄ−セロビオシダーゼ、アラニンアミノペプチダーゼ、プロリンアミノペプチダーゼ、脂肪酸エステラーゼ、及びこれらの組み合わせを挙げることができる。
【００６７】
上記に述べたように、本明細書に開示される滅菌サイクルの有効性を判定するためのいくつかの例示的な方法では、酵素基質は検出可能な生成物に変換される。例えば、酵素基質は第１の放射スペクトル（例えば第１の蛍光放射スペクトル）によって特徴付けることができ、検出可能な生成物は第２の放射スペクトル（例えば第２の蛍光放射スペクトル）によって特徴付けることができる。
【００６８】
本明細書に開示される滅菌サイクルの有効性を判定するためのいくつかの例示的な方法では、使用に適した酵素基質として蛍光発生酵素基質を挙げることができる。有用な蛍光発生酵素基質は、蛍光発生４−メチルウンベリフェリル誘導体（４−メチルウンベリフェロンに加水分解可能）、７−アミド−４−メチル−クマリンの誘導体（例えば、それぞれの全容を本明細書に参照により援用するところの英国特許第１，５４７，７４７号（ナガツ（Nagatsu）ら）及び欧州特許第０，０００，０６３号（サカキバラ（Sakakibara））に開示される）、ジアセチルフルオレセイン誘導体、フルオレスカミン、及びこれらの組み合わせから選択することができる。
【００６９】
例示的な４−メチルウンベリフェリル誘導体は、４−メチルウンベリフェリル−２−アセトアミド−４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド、４−メチルウンベリフェリルアセテート、４−メチルウンベリフェリル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトサミニド、４−メチルウンベリフェリル−Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニド、４−メチルウンベリフェリル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド、２’−（４−メチルウンベリフェリル）−α−Ｄ−Ｎ−アセチルノイラミン酸、４−メチルウンベリフェリルα−Ｌ−アラビノフラノシド、４−メチルウンベリフェリルα−Ｌ−アラビノシド、４−メチルウンベリフェリルブチレート、４−メチルウンベリフェリル−１３−Ｄ−セロビオシド、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−Ｎ，Ｎ’−ジアセチルキトビオシド、４−メチルウンベリフェリルエライデート、４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−フコシド、４−メチルウンベリフェリルα−Ｌ−フコシド、４−メチルウンベリフェリルβ−Ｌ−フコシド、４−メチルウンベリフェリルα−Ｄ−ガラクトシド、４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−ガラクトシド、４−メチルウンベリフェリルα−Ｄ−グルコシド、４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−グルコシド、４−メチルウンベリフェリル（３−Ｄ−グルクロニド、４−メチルウンベリフェリルｐ−グアニジノベンゾエート、４−メチルウンベリフェリルヘプタノエート、４−メチルウンベリフェリルα−Ｄ−マンノピラノシド、４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−マンノピラノシド、４−メチルウンベリフェリルオレエート、４−メチルウンベリフェリルパルミテート、４−メチルウンベリフェリルホスフェート、４−メチルウンベリフェリルプロピオネート、４−メチルウンベリフェリルステアレート、４−メチルウンベリフェリルサルフェート、４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−トリアセチルキトトリオース、４−メチルウンベリフェリル−２，３，５−トリ−ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−アラビノフラノシド、４−メチルウンベリフェリル−ｐ−トリメチルアンモニウムシンナメートクロリド、４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−キシロシド、及びこれらの組み合わせから選択することができる。
【００７０】
４−メチルウンベリフェロン（４−ＭＵ）に加水分解可能な蛍光発生４−メチルウンベリフェリル誘導体が使用されるいくつかの例示的な方法では、差分吸収分光法を行って４−ＭＵの存在を検出することによっても、微生物の代謝及び／又は増殖の早期の検出を行うことができる。
【００７１】
α−４−ＭＵ結合の酵素切断によって生じる４−ＭＵを検出する１つの手段として、４−ＭＵを３４７ナノメートル（「ｎｍ」）の波長を有する光で励起し、同時に４４５ｎｍのその青色蛍光帯域で蛍光測定を行うことがある。しかしながら、これは、微生物の代謝及び／又は増殖を測定することが可能な速度を制限する律速段階である。したがって、いくつかの例示的な実施形態では、滅菌サイクルの有効性を検出するための方法は、α−４−ＭＵ結合が切断される前のα−４−ＭＵ結合のベースライン蛍光測定値を測定し、次いで、この測定値を、３４７ナノメートル（ｎｍ）の波長を有する光で４−ＭＵを励起した場合の蛍光測定値と比較することを含み、これにより、４４５ｎｍの４−ＭＵの青色蛍光帯域で蛍光測定を行う必要をなくすものである。理論によって束縛されるものではないが、４−ＭＵの蛍光強度はｐＨに依存するため（すなわち、４−ＭＵはｐＨ７．０で無色であり、ｐＨ７．５で青色の蛍光を示し、この青色の蛍光はｐＨ１０．７まで増大してそこでプラトーに達する）、差分吸収分光法を行って４−ＭＵの早期の存在を検出することが可能であると考えられる。ｐＨ１０．３における４−ＭＵの蛍光は、ｐＨ７．４における蛍光のおよそ１００倍であるため、液体増殖培地内の４−ＭＵの生成は、３４７ｎｍでの差分吸収分光法によって、又はｐＨ１０．８で測定した蛍光測定値によって容易に監視することができる。本明細書で使用するところの「ｐＨ〜における」とは、中心周波数〜を有する帯域における」を意味することは理解されるはずである。
【００７２】
例示的な７−アミド−４−メチルクマリン誘導体は、Ｌ−アラニン−７−アミド−４−メチルクマリン、Ｌ−プロリン７−アミド−４−メチルクマリン、Ｌ−チロシン−７−アミド−４−メチルクマリン、Ｌ−ロイシン−７−アミド−４−メチルクマリン、Ｌ−フェニルアラニン−７−アミド−４−メチルクマリン、７−グルタリルフェニルアラニン−７−アミド−４−メチルクマリン、及びこれらの組み合わせから選択することができる。
【００７３】
７−アミド−４−メチルクマリンの例示的なペプチド誘導体は、Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−１１ｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ  ７−アミド−４−メチルクマリン、Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ  ７−アミド−４−メチルクマリン、Ｎ−ＣＢＺ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ  ７−アミド−４−メチルクマリン、Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ  ７−アミド−４−メチルクマリン、Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ  ７−アミド−４−メチルクマリン、Ｎ−グルタリル−Ｇｌｙ−Ａｒｇ  ７−アミド−４−メチルクマリン、及びこれらの組み合わせから選択することができる。
【００７４】
例示的なジアセチルフルオロセイン誘導体は、フルオロセインジアセテート、フルオロセインジ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシド）、フルオロセインジラウレート、及びこれらの組み合わせから選択することができる。
【００７５】
検出される生物学的活性が、例えばゲオバチルス・ステアロサーモフィルス由来のα−Ｄ−グルコシダーゼ、キモトリプシン、又は脂肪酸エステラーゼである例示的な方法では、例示的な蛍光発生酵素基質は、４−メチルウンベリフェリル−α−Ｄ−グルコシド、７−グルタリルフェニルアラニン−７−アミド−４−メチルクマリン、４−メチルウンベリフェリルヘプタノエート、及びこれらの組み合わせから選択することができる。検出される生物学的活性が、例えばバチルス・サブチルス由来のα−Ｌ−アラビノフラノシダーゼである例示的な方法では、蛍光発生酵素基質は４−メチルウンベリフェリル−α−Ｌ−アラビノフラノシドであり得る。検出される生物学的活性が、例えばバチルス・サブチルス由来のβ−Ｄ−グルコシダーゼである例示的な方法では、蛍光発生酵素基質は４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルコシドであり得る。
【００７６】
酵素を含む生物学的活性を検出するには、検出する適当な酵素活性及び酵素と反応する酵素基質を、その蛍光、色などのいずれかによって検出することが可能な生成物を生成するように選択することが重要となり得る（その全容を参照により本明細書に援用するところのＭ．Ｒｏｔｈ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｖｏｌ．７，Ｄ．Ｇｌｏｃｋ，Ｅｄ．，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９６９を参照）。使用するのに適当な酵素基質は、検出される生物学的活性によって決めることができる。
【００７７】
上記で述べたように、図５は、生物学的インジケータアナライザ（８００）によって生物学的インジケータ（７００）分析サイクルを開始するために用いることができる例示的な工程のセットを示す。インキュベーション期間中（ブロック９１４）、あるいは所定のインキュベーション時間の後、生物学的インジケータ（７００）が入った選択されたウェル（８１０）に付随する光源（８３０）を作動し、センサ（８４０）によって、生物学的インジケータ（７００）内の流体（７３２）の応答蛍光を監視する。いくつかの例示的な実施形態では、生物学的インジケータ（７００）が入った選択されたウェル（８１０）に付随する光源（８３０）がインキュベーション時間の前に作動されることでベースライン読み取り値が得られる。
【００７８】
図６は、図５に示され図５に関連して説明したインキュベーション時間（ブロック９１４）に供された生物学的インジケータ（７００）を使用して滅菌サイクルの有効性を検出するための例示的な方法（１０００）を示す。本例では、生物学的インジケータ（７００）内の流体（７３２）は、酵素の一定数のコピー及び第１の蛍光放射スペクトルによって特徴付けられる酵素基質をそれぞれ含む芽胞を含んでいる。
【００７９】
所定のインキュベーション時間の後、又はインキュベーション中（ブロック９１４）、流体（７３２）の蛍光が、例えば生物学的アナライザ（８００）の選択されたウェル（８１０）内で監視される（ブロック１０１０）。時間に応じて流体（７３２）の蛍光の直線的な増加がみられるか否かについての問い合わせがなされる（ブロック１０２０）。時間に応じて流体の蛍光の直線的な増加がみられない場合、滅菌サイクルが効果的であり、医療機器が使用できるようになったと見なされる（ブロック１０５０）。時間に応じて流体の蛍光の直線的な増加がみられた場合、滅菌サイクルが効果的でなかった（すなわち、芽胞及び／又は酵素が依然として生存している）と見なされる。この時点で、滅菌サイクルが効果的でなかったと見なすことができ、ここで図２に示される例示的な工程に従って医療機器及び別の生物学的インジケータ（７００）を次の滅菌サイクルに供することができる（ブロック１０６０）。次いで、図５で生物学的アナライザ（８００）によって実行される工程を繰り返すことができる。あるいは、流体の蛍光を、時間に応じた流体の蛍光の増加の速度変化の検出について引き続き監視してもよい（ブロック１０３０）。時間に応じて流体の蛍光の変化速度が直線的な速度から指数関数的な速度に変化した場合、芽胞が増殖性であり、滅菌サイクルが効果的でなかったことが確認される（ブロック１０４０）。図２に示される例示的な工程に従って、医療機器及び別の生物学的インジケータ（７００）をここで次の滅菌に供することができる（ブロック１０６０）。次いで、図５で生物学的アナライザ（８００）によって実行される工程を繰り返すことができる。この後、生物学的インジケータは、医療機器と共に滅菌サイクルに供された生物学的インジケータ（７００）をインキュベートし、時間に応じて流体の蛍光の増加が示されなくなり、医療機器が使用できるようになるまで、監視（ブロック１０１０）及び問い合わせ（ブロック１０２０）に供される。
【００８０】
ＶＩＩ．例示的な組み合わせ
以下の実施例は、本明細書の教示を組み合わせるか又は適用することができる様々な非網羅的な方法に関する。以下の実施例は、本出願における又は本出願の後の出願におけるどの時点においても提示され得るいずれの請求項の適用範囲をも制限することを目的としたものではない点が理解されるべきである。一切の放棄を意図するものではない。以下の実施例は単なる例示の目的で与えられるものにすぎない。本明細書の様々な教示は、他の多くの方法で構成及び適用が可能であると企図される。また、いくつかの変形形態では、以下の実施例において言及される特定の特徴を省略してもよいことも企図される。したがって、本発明者によって、又は本発明者の利益となる継承者によって、後日、そうである旨が明示的に示されない限り、以下に言及される態様又は特徴のいずれも必須なものとしてみなされるべきではない。以下に言及される特徴以外の更なる特徴を含む請求項が本出願において、又は本出願に関連する後の出願において示される場合、これらの更なる特徴は、特許性に関連するいずれかの理由によって追加されたものとして見なされるべきではない。
【実施例】
【００８１】
（実施例１）
生物学的インジケータ内の生物学的活性を検出する方法であって、（ａ）酵素の一定数のコピーを含む既知量の芽胞を提供することと、（ｂ）第１の放射スペクトルを有し、酵素によって第２の放射スペクトルを有する基質誘導体に変換されるように構成された酵素の基質を含む液体増殖培地を提供することと、（ｃ）芽胞を液体増殖培地に曝露することと、（ｄ）液体増殖培地を第２の放射スペクトルについて測定することと、（ｅ）時間の関数として、
（ｉ）第２の放射スペクトルに変化がみられないこと、又は（ｉｉ）第２の放射スペクトルが直線的に増加していること、のいずれかを検出することと、を含む、方法。
【００８２】
（実施例２）
第２の放射スペクトルの直線的な増加が検出され、方法が、第２の放射スペクトルを、第２の放射スペクトルの直線的な増加から第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化について監視することを更に含む、実施例１の方法。
【００８３】
（実施例３）
芽胞が、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞、バチルス・サブチルスの芽胞、バチルス・アトロフェウスの芽胞、バチルス・メガテリウムの芽胞、バチルス・コアギュランスの芽胞、クロストリジウム・スポロゲネスの芽胞、バチルス・プミルスの芽胞、及びこれらの組み合わせから選択される、実施例１の方法。
【００８４】
（実施例４）
酵素が、β−Ｄ−グルコシダーゼ、α−Ｄ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、ブチレートエステラーゼ、カプリレートエステラーゼリパーゼ、ミリステートリパーゼ、ロイシンアミノペプチダーゼ、バリンアミノペプチダーゼ、キモトリプシン、ホスホヒドロラーゼ、α−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、チロシンアミノペプチダーゼ、フェニルアラニンアミノペプチダーゼ、β−Ｄ−グルクロニダーゼ、α−Ｌ−アラビノフラノシダーゼ、Ｎ−アセチル−β−グルコサミノダーゼ、β−Ｄ−セロビオシダーゼ、アラニンアミノペプチダーゼ、プロリンアミノペプチダーゼ、脂肪酸エステラーゼ、及びこれらの組み合わせから選択される、実施例３の方法。
【００８５】
（実施例５）
液体増殖培地がインジケータ色素を実質上含まない、実施例１の方法。
【００８６】
（実施例６）
第２の放射スペクトルの直線的な増加から第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約２時間よりも短い時間で生じる、実施例２の方法。
【００８７】
（実施例７）
第２の放射スペクトルの直線的な増加から第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約１時間よりも短い時間で生じる、実施例２の方法。
【００８８】
（実施例８）
第２の放射スペクトルの直線的な増加から第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約３０分間よりも短い時間で生じる、実施例２の方法。
【００８９】
（実施例９）
生物学的インジケータを使用する方法であって、生物学的インジケータが、（ｉ）第１の液体が入れられた脆弱性アンプルであって、第１の液体が、液体増殖培地と、第１の放射スペクトルを有する蛍光発生酵素基質と、を含み、蛍光発生酵素基質が、酵素によって第２の放射スペクトルを有する蛍光誘導体に変換されるように構成された、脆弱性アンプルと、（ｉｉ）酵素の一定数のコピーを含む既知量の細菌芽胞を支持する担体と、を含み、（ａ）脆弱性アンプルを破損することと、（ｂ）液体増殖培地を細菌芽胞に曝露して第２の液体を形成することと、（ｃ）第２の液体をインキュベートすることと、（ｄ）第２の液体を監視し、時間の関数に応じて、（ｉ）第２の放射スペクトルに変化がみられないこと、又は（ｉｉ）第２の放射スペクトルが直線的に増加していること、のいずれかを検出することと、を含む、方法。
【００９０】
（実施例１０）
第２の放射スペクトルの直線的な増加が検出され、方法が、第２の放射スペクトルを、第２の放射スペクトルの直線的な増加から第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化について監視することを更に含む、実施例９の方法。
【００９１】
（実施例１１）
第１の液体及び第２の液体がインジケータ色素を実質上含まない、実施例９の方法。
【００９２】
（実施例１２）
第１の液体及び第２の液体が無色である、実施例９の方法。
【００９３】
（実施例１３）
第２の放射スペクトルの直線的な増加から第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約２時間よりも短い時間で生じる、実施例１０の方法。
【００９４】
（実施例１４）
第２の放射スペクトルの直線的な増加から第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約１時間よりも短い時間で生じる、実施例１０の方法。
【００９５】
（実施例１５）
第２の放射スペクトルの直線的な増加から第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約３０分間よりも短い時間で生じる、実施例１０の方法。
【００９６】
（実施例１６）
第２の放射スペクトルの直線的な増加から第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約５分間よりも短い時間で生じる、実施例１０の方法。
【００９７】
（実施例１７）
生物学的インジケータが、インジケータ試薬を吸収及び／又は選択的に濃縮するように構成された基質を含まない、実施例９の方法。
【００９８】
（実施例１８）
芽胞が、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞、バチルス・サブチルスの芽胞、バチルス・アトロフェウスの芽胞、バチルス・メガテリウムの芽胞、バチルス・コアギュランスの芽胞、クロストリジウム・スポロゲネスの芽胞、バチルス・プミルスの芽胞、及びこれらの組み合わせから選択される、実施例９の方法。
【００９９】
（実施例１９）
酵素が、β−Ｄ−グルコシダーゼ、α−Ｄ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、ブチレートエステラーゼ、カプリレートエステラーゼリパーゼ、ミリステートリパーゼ、ロイシンアミノペプチダーゼ、バリンアミノペプチダーゼ、キモトリプシン、ホスホヒドロラーゼ、α−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、チロシンアミノペプチダーゼ、フェニルアラニンアミノペプチダーゼ、β−Ｄ−グルクロニダーゼ、α−Ｌ−アラビノフラノシダーゼ、Ｎ−アセチル−β−グルコサミノダーゼ、β−Ｄ−セロビオシダーゼ、アラニンアミノペプチダーゼ、プロリンアミノペプチダーゼ、脂肪酸エステラーゼ、及びこれらの組み合わせから選択される、実施例９の方法。
【０１００】
（実施例２０）
芽胞の滅菌の有効性を確認する方法であって、（ａ）αグルコシダーゼを含む芽胞殻を有するゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞を含む生物学的インジケータを提供することと、（ｂ）第１の放射スペクトルを有し、αグルコシダーゼによって第２の放射スペクトルを有する蛍光誘導体に変換される４−メチルウンベリフェリル−α−Ｄ−グルコシドを含み、インジケータ色素を実質的に含まない液体増殖培地を提供することと、（ｃ）液体増殖培地をゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞に曝露することと、（ｄ）時間に応じて、第２の放射スペクトルの直線的な増加から第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化を検出することと、を含む、方法。
【０１０１】
ＶＩＩＩ．その他
参照により本明細書に援用されると言及されたいかなる特許、刊行物、又はその他の開示内容も、全体的に又は部分的に、援用された内容が現行の定義、見解、又は本開示に記載されたその他の開示内容とあくまで矛盾しない範囲でのみ本明細書に援用されることを認識されたい。それ自体、また必要な範囲で、本明細書に明瞭に記載される開示内容は、参照により本明細書に援用されるいかなる矛盾する記載にも優先するものとする。参照により本明細書に援用されるものとするが、現行の定義、見解、又は本開示に記載されたその他の開示内容と矛盾する、任意の文献、又はそれらの部分は、援用文献と既存の開示内容との間に矛盾が生じない範囲においてのみ援用されるものとする。
【０１０２】
以上、本発明の様々な実施形態を図示及び説明したが、本発明の範囲から逸脱することなく、当業者による適切な改変により、本明細書に記載される方法及びシステムの更なる適合化を実現することができる。そのような可能な改変のうちのいくつかについて述べたが、他の改変も当業者には明らかとなるであろう。例えば、上記で論じた実施例、実施形態、形状、材料、寸法、比率、工程などは例示的なものであって、必須のものではない。したがって、本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲の観点から考慮されるべきものであり、本明細書及び図面において図示され説明された構造及び動作の細部に限定されないものとして理解されたい。
【０１０３】
〔実施の態様〕
（１）  生物学的インジケータ内の生物学的活性を検出する方法であって、
（ａ）酵素の一定数のコピーを含む既知量の芽胞を提供することと、
（ｂ）第１の放射スペクトルを有し、前記酵素によって第２の放射スペクトルを有する基質誘導体に変換されるように構成された前記酵素の基質を含む液体増殖培地を提供することと、
（ｃ）前記芽胞を前記液体増殖培地に曝露することと、
（ｄ）前記液体増殖培地を前記第２の放射スペクトルについて測定することと、
（ｅ）時間に応じて、
（ｉ）前記第２の放射スペクトルに変化がみられないこと、又は
（ｉｉ）前記第２の放射スペクトルが直線的に増加していること、のいずれかを検出することと、を含む、方法。
（２）  前記第２の放射スペクトルの直線的な増加が検出され、前記方法が、前記第２の放射スペクトルを、前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化について監視することを更に含む、実施態様１に記載の方法。
（３）  前記芽胞が、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞、バチルス・サブチルスの芽胞、バチルス・アトロフェウスの芽胞（Bacillus atrophaeus spores）、バチルス・メガテリウムの芽胞、バチルス・コアギュランスの芽胞、クロストリジウム・スポロゲネスの芽胞、バチルス・プミルスの芽胞、及びこれらの組み合わせから選択される、実施態様１に記載の方法。
（４）  前記酵素が、β−Ｄ−グルコシダーゼ、α−Ｄ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、ブチレートエステラーゼ、カプリレートエステラーゼリパーゼ（caprylate esterase lipase）、ミリステートリパーゼ、ロイシンアミノペプチダーゼ、バリンアミノペプチダーゼ、キモトリプシン、ホスホヒドロラーゼ、α−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、チロシンアミノペプチダーゼ、フェニルアラニンアミノペプチダーゼ、β−Ｄ−グルクロニダーゼ、α−Ｌ−アラビノフラノシダーゼ、Ｎ−アセチル−β−グルコサミノダーゼ、β−Ｄ−セロビオシダーゼ、アラニンアミノペプチダーゼ、プロリンアミノペプチダーゼ、脂肪酸エステラーゼ、及びこれらの組み合わせから選択される、実施態様３に記載の方法。
（５）  前記液体増殖培地がインジケータ色素を実質上含まない、実施態様１に記載の方法。
【０１０４】
（６）  前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約２時間よりも短い時間で生じる、実施態様２に記載の方法。
（７）  前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約１時間よりも短い時間で生じる、実施態様２に記載の方法。
（８）  前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約３０分間よりも短い時間で生じる、実施態様２に記載の方法。
（９）  生物学的インジケータを使用する方法であって、前記生物学的インジケータが、
（ｉ）第１の液体が入れられた脆弱性アンプルであって、前記第１の液体が、液体増殖培地と、第１の放射スペクトルを有する蛍光発生酵素基質と、を含み、前記蛍光発生酵素基質が、前記酵素によって第２の放射スペクトルを有する蛍光誘導体に変換されるように構成された、脆弱性アンプルと、
（ｉｉ）酵素の一定数のコピーを含む既知量の細菌芽胞を支持する担体と、を含み、
前記方法が、
（ａ）前記脆弱性アンプルを破損することと、
（ｂ）前記液体増殖培地を前記細菌芽胞に曝露して第２の液体を形成することと、
（ｃ）前記第２の液体をインキュベートすることと、
（ｄ）前記第２の液体を監視し、時間に応じて、
（ｉ）前記第２の放射スペクトルに変化がみられないこと、又は
（ｉｉ）前記第２の放射スペクトルが直線的に増加していること、のいずれかを検出することと、を含む、方法。
（１０）  前記第２の放射スペクトルの直線的な増加が検出され、前記方法が、前記第２の放射スペクトルを、前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化について監視することを更に含む、実施態様９に記載の方法。
【０１０５】
（１１）  前記第１の液体及び第２の液体がインジケータ色素を実質上含まない、実施態様９に記載の方法。
（１２）  前記第１の液体及び第２の液体が無色である、実施態様９に記載の方法。
（１３）  前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約２時間よりも短い時間で生じる、実施態様１０に記載の方法。
（１４）  前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約１時間よりも短い時間で生じる、実施態様１０に記載の方法。
（１５）  前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約３０分間よりも短い時間で生じる、実施態様１０に記載の方法。
【０１０６】
（１６）  前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化が約５分間よりも短い時間で生じる、実施態様１０に記載の方法。
（１７）  前記生物学的インジケータが、インジケータ試薬を吸収及び／又は選択的に濃縮するように構成された基質を含まない、実施態様９に記載の方法。
（１８）  前記芽胞が、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞、バチルス・サブチルスの芽胞、バチルス・アトロフェウスの芽胞、バチルス・メガテリウムの芽胞、バチルス・コアギュランスの芽胞、クロストリジウム・スポロゲネスの芽胞、バチルス・プミルスの芽胞、及びこれらの組み合わせから選択される、実施態様９に記載の方法。
（１９）  前記酵素が、β−Ｄ−グルコシダーゼ、α−Ｄ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、ブチレートエステラーゼ、カプリレートエステラーゼリパーゼ、ミリステートリパーゼ、ロイシンアミノペプチダーゼ、バリンアミノペプチダーゼ、キモトリプシン、ホスホヒドロラーゼ、α−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、チロシンアミノペプチダーゼ、フェニルアラニンアミノペプチダーゼ、β−Ｄ−グルクロニダーゼ、α−Ｌ−アラビノフラノシダーゼ、Ｎ−アセチル−β−グルコサミノダーゼ、β−Ｄ−セロビオシダーゼ、アラニンアミノペプチダーゼ、プロリンアミノペプチダーゼ、脂肪酸エステラーゼ、及びこれらの組み合わせから選択される、実施態様９に記載の方法。
（２０）  芽胞の滅菌の有効性を確認する方法であって、
（ａ）αグルコシダーゼを含む芽胞殻を有するゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞を含む生物学的インジケータを提供することと、
（ｂ）第１の放射スペクトルを有し、前記αグルコシダーゼによって第２の放射スペクトルを有する蛍光誘導体に変換される４−メチルウンベリフェリル−α−Ｄ−グルコシドを含み、インジケータ色素を実質的に含まない液体増殖培地を提供することと、
（ｃ）前記液体増殖培地を前記ゲオバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞に曝露することと、
（ｄ）時間に応じて、前記第２の放射スペクトルの直線的な増加から前記第２の放射スペクトルの指数関数的な増加への変化を検出することと、を含む、方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【外国語明細書】
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