(57)【要約】【課題】抗ＩＬ−１β結合メンバーに、および特に、高安定性および可溶性である一価の高効力ＩＬ−１β結合抗体断片を提供すること。【解決手段】そのような結合メンバーは、炎症および他の疾患の処置ならびに診断にも使用することができる。関連核酸、ベクター、細胞および組成物も提供する。ヒト線維芽細胞からのＩＬ−６のＩＬ−１β刺激性放出を阻害することによって決定して、ヒトＩＬ−１βの生物学的作用を阻害することに関して５ｐＭより低い、好ましくは約１ｐＭより低い効力（ＩＣ５０）を有する、ＩＬ−１βに対する一価抗体断片。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト化抗ＩＬ−１β抗体、特に、一価の非常に強力な抗ＩＬ−１β抗体断片に関する。本発明は、そのような抗体をコードする核酸、ベクター、そのような配列を含有する宿主細胞、前記抗体または核酸を含む医薬組成物および診断用組成物、およびそれらの使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）は、活性化マクロファージによって前駆体として生成される炎症促進性サイトカインである。タンパク質分解切断されると、その活性形態がＩＬ−１受容体Ｉ型（ＩＬ−１Ｒ１）に結合し、次にはまた膜貫通型ＩＬ−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲＡＰ）と会合することにより、シグナル伝達が開始される。形成される複合体は、シグナル伝達能力がある。炎症応答における重要な媒介因子であるサイトカインは、多数の細胞活性、例えば、細胞増殖、分化およびアポトーシスに影響を及ぼす。したがって、ＩＬ−１βは、様々な医薬の重要な標的と考えられている。
【０００３】
ヒトＩＬ−１βに対する、高い治療可能性を有する抗体が、当該技術分野において必要とされている。治療に成功するためには、そのような抗体が、望ましい生物物理学的および生化学的特性を提示することが重要である。例えば、標的ＩＬ−１βは、極低濃度で強力である非常に効率のよいインターロイキンであり、それ故、包括的に遮断する必要があるので、そのような抗体は、非常に強力であるとともに非常に安定性かつ可溶性である必要がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
発明の概要
第一の態様において、本発明は、ヒトＩＬ−１βの生物学的作用を阻害することに関して最大半量阻害濃度ＩＣ５０によって決定して、５０ピコモル濃度（ｐＭ）より低い効力を有するＩＬ−１βに対する一価抗体断片を提供する。
【０００５】
ヒト化されていようと、いなかろうと、ｐＭ範囲の効力値を有する一価抗体断片は特殊であり、日常的に得られない。加えて、および典型的に、抗体は、親非ヒト抗体と比較したとき、ヒト化によりその標的に対する親和性を失う。したがって、親和性パラメータが親抗体に近くなるまたは親抗体に等しくなるように抗体をヒト化することは、難題である。これは、１本の可変軽鎖および重鎖しか含まず、したがって、２本の軽鎖および重鎖を提示する二価抗体ほど強くは標的に結合しない一価抗体断片に、特に当てはまる。
【０００６】
さらに、完全長抗体をより小さい断片に変換すると、その効力は、通常、減少されことになる。これは、付随する結合価変化（例えば、抗体断片は一価でしかないが、完全長免疫グロブリンは二価または多価である）のためであるばかりでなく、立体的理由に起因することもあり得る。
【０００７】
強力な抗体は、患者へのより少ない薬量の投与を可能にし、その結果、処置費用全般を減少させるので、特に有用である。加えて、疾患の分子標的のより完全な中和を実行可能にする。
【０００８】
さらに、最高効力の抗体を適用するとき、動物モデルならびにヒト治療において様々な適用経路を構想することができる。例えば、局所薬については、上皮層のバリア機能のため送達が限定されることがあるが、この生理的バリアを通過する限られた量の薬物分子の高い効力によって処置の有効性を回復する。
【０００９】
多くの場合、同様の薬力学的効果を達成するために投与する必要がある、効力の低い薬物の多い量は、効力の高い薬を用いるよりはるかに多い静脈内または皮下適用体積になる。そのようなより多い適用体積は、次の２つの理由から動物およびヒトでの使用に不利である：第一に、多い薬物体積で患者を処置することの非実際性、および第二に、抗体は質量単位あたり非常に高価であるため。
【００１０】
したがって、処置に使用される抗体の量が少ないほど、薬の生産費用が安くなる。特に、抗体断片は、例えば、ＩｇＧなどの完全長免疫グロブリンの生成に典型的に使用される哺乳動物発現系より比較的低い費用のものである細菌または酵母培養系を使用する生産に適している。投与すべきより少ない薬量とより安価な製造プロセスの組み合わせは、患者１人あたりの費用効率がより高い医薬品の可能性を開く。したがって、より大量の患者がそのような薬物の恩恵に浴することができる。
【００１１】
安定性および溶解度パラメータは、実行可能な医薬を提供するために非常に重要な別の因子である。抗体薬の安定性および溶解度が高いほど、投与体積は少なく、有効期間の半減期は長くなる。本明細書に提供する抗体は、高安定性かつ可溶性である。すなわち、それらは、長期間にわたっておよび高濃度でも単量体のままである。
【００１２】
１つの態様では、
（ａ）それぞれ配列番号１、２および３またはそれらのバリアントで示される可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２もしくはＣＤＲ−Ｈ３のうちの少なくとも１つ；および／または
（ｂ）それぞれ配列番号４、５および６またはそれらのバリアントで示される可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ配列ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２もしくはＣＤＲ−Ｌ３のうちの少なくとも１つ
を含む抗体、特に、上記一価抗体断片を提供する。
【００１３】
別の実施形態において、前記抗体、および特に前記一価抗体断片は、
（ａ）それぞれ配列番号１５５、１５６および１５７またはそれらのバリアントで示される可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２もしくはＣＤＲ−Ｈ３のうちの少なくとも１つ；および／または
（ｂ）（ｉ）それぞれ配列番号１５８、１５９および１６０、もしくはそれらのバリアントで示されるか、または
（ｉｉ）それぞれ配列番号１６１、１６２および１６３、もしくはそれらのバリアントで示される、可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ配列ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２もしくはＣＤＲ−Ｌ３のうちの少なくとも１つ
を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、前記抗体は、
（ａ）配列番号７および配列番号１４６から成る群より選択される配列との少なくとも８５％の同一性を有するＶＨ；および／または
（ｂ）配列番号８、配列番号１３６および配列番号１４５から成る群より選択される配列との少なくとも８５％の同一性を有するＶＬ
を含む。
【００１５】
前記抗体は、配列番号９であるまたは配列番号９から誘導されるリンカー配列を含むことができる。いくつかの実施形態において、そのような抗体は、配列番号１０、配列番号７３および配列番号８２から成る群より選択される配列との少なくとも８５％の配列同一性を有する抗体断片である。
【００１６】
１つの態様において本発明は、ＩＬ−１βに結合する結合メンバーであって、本明細書に記載する抗体と結合について競合する結合メンバーを提供する。前記結合メンバーは、一価または多価であることができる。好ましい多価結合メンバーは、二価である。多価結合メンバーは、二重特異性であることができる。
【００１７】
１つの態様において、本発明は、本明細書に開示する抗体または結合メンバーをコードする、単離された核酸配列を提供する。
【００１８】
１つの態様では、前記核酸配列を含むベクターを提供する。
【００１９】
１つの態様において、本発明は、上記核酸配列または上記ベクターを含む宿主細胞を提供する。
【００２０】
１つの態様では、上記抗体、上記結合メンバー、上記核酸配列、上記ベクターまたは上記宿主細胞を含み、および適するキャリア、希釈剤または賦形剤をさらに含む組成物。前記組成物は、好ましくは、医薬的に許容され得るキャリア、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物である。そのような医薬組成物は、好ましくは、局所、皮内、経皮、静脈内、皮下、筋肉内、非経口、舌下、口腔、経口、鼻、鼻腔内、直腸、局部または眼投与に適する形態でのものである。
【００２１】
ＩＬ−１β媒介疾患の処置方法をさらに提供し、この方法は、それを必要とする被験体に上記医薬組成物を投与することを含む。
【００２２】
（ｉ）ＩＬ−１β媒介疾患の処置に使用するための、
（ｉｉ）診断に使用するための、
（ｉｉｉ）化粧品に使用するための、および／または
（ｉｖ）検出目的のための、
上記抗体、上記結合メンバー、上記核酸配列、上記ベクター、または本明細書に開示する宿主細胞も提供する。
【００２３】
さらに別の態様において、本発明は、本明細書に記載する抗体または結合メンバーの生成方法を提供し、この方法は、（ｉ）それぞれ、上記宿主細胞を培養する工程ならびに抗体断片もしくは結合メンバーを回収する工程および精製する工程；または（ｉｉ）無細胞系の使用、のいずれかを含む。加えて、または代替的に、前記方法は、少なくとも１つの化学的タンパク質合成工程を含むことができる。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
ヒト線維芽細胞からのＩＬ−６のＩＬ−１β刺激性放出を阻害することによって決定して、ヒトＩＬ−１βの生物学的作用を阻害することに関して５ｐＭより低い、好ましくは約１ｐＭより低い効力（ＩＣ５０）を有する、ＩＬ−１βに対する一価抗体断片。
（項目２）
ＩＬ−１βに対する抗体であって、
ａ．（ｉ）それぞれ配列番号１、２および３、もしくはそれらのバリアント、または
（ｉｉ）それぞれ配列番号１５５、１５６および１５７、もしくはそれらのバリアント
で示される可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ配列ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２またはＣＤＲ−Ｈ３のうちの少なくとも１つ；および／または
ｂ．（ｉ）それぞれ配列番号４、５および６、もしくはそれらのバリアント；または
（ｉｉ）それぞれ配列番号１６１、１６２および１６３、もしくはそれらのバリアント
で示される可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ配列ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２またはＣＤＲ−Ｌ３のうちの少なくとも１つ
を含む、抗体。
（項目３）
ヒト線維芽細胞からのＩＬ−６のＩＬ−１β刺激性放出を阻害することによって決定して、ヒトＩＬ−１βの生物学的作用を阻害することに関して５０ｐＭより低い効力（ＩＣ５０）を有する、項目２に記載の抗体。
（項目４）
前記ＩＣ５０が、約３０、２０、１０、５、４、３、２ｐＭより低い、好ましくは約１ｐＭより低い、項目３に記載の抗体。
（項目５）
項目１の一価抗体断片である、項目２〜４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６）
Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、Ｆｖ断片、ナノボディ、ＶＨＨまたは最小認識単位である、項目５に記載の抗体。
（項目７）
完全長免疫グロブリンまたは二価抗体断片、好ましくはＦ（ａｂ’）２である、項目２〜４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８）
ａ．全体として見ると前記バリアントのＶＨ  ＣＤＲ配列が、
（ｉ）配列番号１、２および３で示されるか；もしくは
（ｉｉ）配列番号１５５、１５６および１５７で示される
ＶＨ  ＣＤＲ配列に少なくとも８５％類似している；および／または
ｂ．全体として見ると前記バリアントのＶＬ  ＣＤＲ配列が、
（ｉ）配列番号４、５および６で示されるか；もしくは
（ｉｉ）配列番号１６１、１６２および１６３で示される
ＶＬ  ＣＤＲ配列に少なくとも８５％類似している、
項目２から７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９）
ａ．全体として見ると前記バリアントのＶＨ  ＣＤＲ配列が、
（ｉ）配列番号１、２および３で示され；もしくは
（ｉｉ）配列番号１５５、１５６および１５７で示される
ＶＨ  ＣＤＲ配列と少なくとも８０％同一である；および／または
ｂ．全体として見ると前記バリアントのＶＬ  ＣＤＲ配列が、
（ｉ）配列番号４、５および６で示され；もしくは
（ｉｉ）配列番号１６１、１６２および１６３で示される
ＶＬ  ＣＤＲ配列と少なくとも７５％同一である、
項目２から８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０）
前記バリアントが、
（ａ）以下のアミノ酸配列を有する、可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ配列ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２またはＣＤＲ−Ｈ３のうちの少なくとも１つ：
ＣＤＲ−Ｈ１：ＦＳＬＳＸ１Ｘ２ＡＭＡ（配列番号１１）（ここで、
Ｘ１は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹであり；および／または
Ｘ２は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹである）；
ＣＤＲ−Ｈ２：ＩＩＸ１Ｘ２ＳＡＳＴＸ３ＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号１２）（ここで、
Ｘ１は、Ａ、Ｃ、Ｇ、ＭもしくはＹであり；
Ｘ２は、Ｄ、ＮもしくはＰであり；および／または
Ｘ３は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、ＷもしくはＹである）；
ＣＤＲ−Ｈ３：ＥＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０（配列番号１３）（ここで、
Ｘ１は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹであり；
Ｘ２は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹであり；
Ｘ３は、Ａ、Ｃ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＶもしくはＹであり；
Ｘ４は、ＦもしくはＩであり；
Ｘ５は、Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｓ、ＴもしくはＶであり；
Ｘ６は、Ａ、Ｇ、ＭもしくはＮであり；
Ｘ７は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｎ、ＳもしくはＴであり；
Ｘ８は、Ａ、Ｃ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹであり；
Ｘ９は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹであり；および／または
Ｘ１０は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹである）；および／または
（ｂ）以下のアミノ酸配列を有する、可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ配列ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２またはＣＤＲ−Ｌ３のうちの少なくとも１つ：
ＣＤＲ−Ｌ１：ＱＡＳＱＳＩＸ１Ｘ２Ｘ３ＬＳ（配列番号１４）（ここで、
Ｘ１は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹであり；
Ｘ２は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹであり；および／または
Ｘ３は、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＷもしくはＹである）；
ＣＤＲ−Ｌ２：Ｘ１ＡＳＸ２ＬＡＳ（配列番号１５）（ここで、
Ｘ１は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、（Ｉ）、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、ＷもしくはＹであり；および／または
Ｘ２は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹである）；
ＣＤＲ−Ｌ３：ＱＮＸ１ＧＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＩＡ（配列番号１６）（ここで、
Ｘ１は、Ａ、Ｃ、Ｉ、Ｎ、Ｓ、ＴもしくはＶであり；
Ｘ２は、Ａ、Ｇ、ＰもしくはＳであり；
Ｘ３は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹであり；
Ｘ４は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹであり；および／または
Ｘ５は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＷもしくはＹである）
を含む、項目２から９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１）
少なくとも１つの、配列番号１８の軽鎖可変フレームワーク領域ＦＲ−Ｌ１、配列番号１９の軽鎖可変フレームワーク領域ＦＲ−Ｌ２、配列番号２０の軽鎖可変フレームワーク領域ＦＲ−Ｌ３および／または配列番号２１の軽鎖可変フレームワーク領域ＦＲ−Ｌ４を含む、項目２から１０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２）
少なくとも１つの、配列番号２２、２６もしくは３０の重鎖可変フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ１；配列番号２３、２７もしくは３１の重鎖可変フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ２；配列番号２４、２８もしくは３２の重鎖可変フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ３；および／または配列番号２５、２９もしくは３３の重鎖可変フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ４を含む、項目２から１１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１３）
ａ．配列番号７および配列番号１４６から成る群より選択される配列との少なくとも８５％の同一性を有するＶＨ配列；および／または
ｂ．配列番号８、配列番号１３６および配列番号１４５から成る群より選択される配列との少なくとも８５％の同一性を有するＶＬ配列
を含む、ＩＬ−１βに対する抗体、特に項目２から１２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１４）
ａ．配列番号７および配列番号１４６から成る群より選択される配列との少なくとも８５％の類似性を有するＶＨ配列；および／または
ｂ．配列番号８、配列番号１３６および配列番号１４５から成る群より選択される配列との少なくとも８５％の類似性を有するＶＬ配列
を含む、項目２から１３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１５）
ａ．配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２６、配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、配列番号１３４、配列番号１３８、配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４４、配列番号１４６、配列番号１４８、配列番号１５０、配列番号１５２から成る群より選択されるＶＨ配列；および／または
ｂ．配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１２５、配列番号１２７、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３９、配列番号１４１、配列番号１４３、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５１および配列番号１５３から成る群より選択されるＶＬ配列
を含む、項目２から１４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１６）
配列番号９のリンカー配列を含む、項目２から１５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１７）
配列番号１０、配列番号７３および配列番号８２から成る群より選択される配列との少なくとも８５％の配列類似性を有する、項目２から１６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１８）
配列番号１０、配列番号７３および配列番号８２から成る群より選択される配列との少なくとも８５％の配列同一性を有する、項目２から１７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１９）
配列番号３４から６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８から７０、配列番号７１から７６、配列番号７７から８８、配列番号８９から９５および配列番号１５４から成る群より選択される配列を含む、項目１７または１８に記載の抗体。
（項目２０）
以下の残基：
ａ．重鎖アミノ酸位置１２（ＡＨｏ番号付けによる）におけるセリン（Ｓ）；
ｂ．重鎖アミノ酸位置１０３（ＡＨｏ番号付けによる）におけるセリン（Ｓ）またはトレオニン（Ｔ）；および／または
ｃ．重鎖アミノ酸位置１４４（ＡＨｏ番号付けによる）におけるセリン（Ｓ）またはトレオニン（Ｔ）
の少なくとも１つを含む、項目２から１９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２１）
ヒト化されている、項目２から２０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２２）
カニクイザルＩＬ−１β、アカゲザルＩＬ−１βおよび／またはラットＩＬ−１βと交差反応性である、項目２から２１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２３）
項目１から２２のいずれか一項に記載の抗体の可変軽鎖および重鎖の配列を含む結合メンバー。
（項目２４）
ヒトＩＬ−１βへの結合について項目１から２２のいずれか一項に記載の抗体または項目２３に記載の結合メンバーと競合する結合メンバー。
（項目２５）
項目１から２２のいずれか一項に記載の抗体とヒトＩＬ−１β上の同じまたはオーバーラップするエピトープに結合する結合メンバー。
（項目２６）
一価または多価である、特に、多価および多重特異性である、項目２３から２５のいずれか一項に記載の結合メンバー。
（項目２７）
Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、Ｆｖ断片、ナノボディまたはＶＨＨである、項目２６に記載の一価結合メンバー。
（項目２８）
完全長免疫グロブリン、ダイアボディまたはビス−ＳｃＦｖである、項目２６に記載の多価結合メンバー。
（項目２９）
項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバーを含むＴボディ。
（項目３０）
化学的にまたは生物学的に改変される、項目２から２２のいずれか一項に記載の抗体、項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバー、または項目２９に記載のＴボディ。
（項目３１）
血清中でのインビボ半減期滞留時間を延長するように改変される、項目３０に記載の抗体、項目３０に記載の結合メンバーまたは項目３０に記載のＴボディ。
（項目３２）
項目１から２２のいずれか一項に記載の抗体、項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバー、または項目２９に記載のＴボディをコードする、単離された核酸配列。
（項目３３）
配列番号１７を含む、項目３２に記載の核酸配列。
（項目３４）
項目３２または３３に記載の核酸配列を含むベクター。
（項目３５）
クローニングベクターまたは発現ベクターである、項目３４に記載のベクター。
（項目３６）
項目３２もしくは３３に記載の核酸配列または項目３４もしくは３５に記載のベクターを含む宿主細胞。
（項目３７）
原核細胞または真核細胞である、項目３６に記載の宿主細胞。
（項目３８）
項目１から２２、３０もしくは３１のいずれか一項に記載の抗体、項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバー、項目２９に記載のＴボディ、項目３２もしくは３３に記載の核酸配列、項目３４もしくは３５に記載のベクターまたは項目３６もしくは３７に記載の宿主細胞を含み、適するキャリア、希釈剤または賦形剤をさらに含む組成物。
（項目３９）
化粧品組成物、診断用組成物または医薬組成物である、項目３８に記載の組成物。
（項目４０）
医薬的に許容され得るキャリア、希釈剤または賦形剤を含み；好ましくは、非経口、経口、直腸、尿生殖器、局所、硝子体内、静脈内、眼内、耳、鼻腔内、吸入、皮膚、舌下または口腔での投与用に製剤化される、項目３９に記載の医薬組成物。
（項目４１）
（ｉ）ＩＬ−１β媒介疾患の処置に使用するための、
（ｉｉ）診断に使用するための、
（ｉｉｉ）化粧品に使用するための、および／または
（ｉｖ）検出目的のための、
項目１から２２、３０もしくは３１のいずれか一項に記載の抗体、項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバー、項目２９に記載のＴボディ、項目３２もしくは３３に記載の核酸配列、項目３４もしくは３５に記載のベクターまたは項目３６もしくは３７に記載の宿主細胞。
（項目４２）
前記ＩＬ−１β媒介疾患が、増殖性糖尿病性網膜症、通風性関節炎、シュニッツラー症候群、全身性若年性特発性関節炎、関節リウマチ、急性通風性関節炎、慢性通風性関節炎、蕁麻疹、脈管炎、１型糖尿病、２型糖尿病、強直性脊椎炎、再発性多巣性骨髄炎、再発性多発性軟骨炎、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、ベーチェット病、家族性地中海熱、慢性閉塞性肺疾患、リウマチ性多発性筋痛症、ＮＡＬＰ３−変異、壊疽性膿皮症、慢性特発性蕁麻疹、変形性関節症、滲出型加齢性黄斑変性、ドライアイ症候群、膿疱性乾癬、滑膜炎−ざ瘡−膿疱症−骨化過剰症−骨炎症候群、マクロファージ活性化症候群、周期性発熱・腺炎・咽頭炎・アフタ性潰瘍症候群、成人発症スティル病、メバロン酸キナーゼ欠損症、アテローム性動脈硬化症、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）、尋常性ざ瘡および／または反対型ざ瘡である、項目４１に記載の抗体、結合メンバー、Ｔボディ、核酸配列、ベクターまたは宿主細胞。
（項目４３）
項目１から２２、３０もしくは３１のいずれか一項に記載の抗体、項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバーまたは項目２９に記載のＴボディの生成方法であって、
（ｉ）前記抗体、前記結合メンバーまたはＴボディを発現するように、項目３６または３７に記載の宿主細胞を培養する工程；
（ｉｉ）回収する工程；および
（ｉｉ）前記抗体、前記結合メンバーまたは前記Ｔボディをそれぞれ精製する工程
を含む方法。
（項目４４）
項目１から２２、３０もしくは３１のいずれか一項に記載の抗体、項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバーまたは項目２９に記載のＴボディの生成方法であって、
（ｉ）無細胞系を供給する工程；
（ｉｉ）核酸産物テンプレートを供給する工程；
（ｉｉｉ）前記核酸産物テンプレートの転写および翻訳を可能にする工程；
（ｉｖ）回収する工程；および
（ｖ）必要に応じて、前記抗体、前記結合メンバーまたは前記Ｔボディをそれぞれ精製する工程
を含む方法。
（項目４５）
化学合成の少なくとも１つの工程を含む、項目１から２２、３０もしくは３１のいずれか一項に記載の抗体、項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバーまたは項目２９に記載のＴボディの生成方法。
（項目４６）
前記化学合成の工程が、項目４４に記載の方法に含まれる、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
治療有効量の項目１から２２、３０もしくは３１のいずれか一項に記載の抗体、項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバーまたは項目２９に記載のＴボディ、項目３２もしくは３３に記載の核酸配列、項目３４もしくは３５に記載のベクターまたは項目３６もしくは３７に記載の宿主細胞を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、ＩＬ−１β関連疾患の処置方法。
（項目４８）
前記ＩＬ−１β媒介疾患が、増殖性糖尿病性網膜症、通風性関節炎、シュニッツラー症候群、全身性若年性特発性関節炎、関節リウマチ、急性通風性関節炎、慢性通風性関節炎、蕁麻疹、脈管炎、１型糖尿病、２型糖尿病、強直性脊椎炎、再発性多巣性骨髄炎、再発性多発性軟骨炎、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、ベーチェット病、家族性地中海熱、慢性閉塞性肺疾患、リウマチ性多発性筋痛症、ＮＡＬＰ３−変異、壊疽性膿皮症、慢性特発性蕁麻疹、変形性関節症、滲出型加齢性黄斑変性、ドライアイ症候群、膿疱性乾癬、滑膜炎−ざ瘡−膿疱症−骨化過剰症−骨炎症候群、マクロファージ活性化症候群、周期性発熱・腺炎・咽頭炎・アフタ性潰瘍症候群、成人発症スティル病、メバロン酸キナーゼ欠損症、アテローム性動脈硬化症、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）、尋常性ざ瘡および／または反対型ざ瘡である、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記被験体がヒトである、項目４７または４８に記載の方法。
（項目５０）
項目１から２２、３０もしくは３１のいずれか一項に記載の抗体、項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバーまたは項目２９に記載のＴボディ、項目３２もしくは３３に記載の核酸配列、項目３４もしくは３５に記載のベクターまたは項目３６もしくは３７に記載の宿主細胞が、項目３９または４０のいずれか一項に記載の医薬組成物で提供される、項目４７から４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
前記抗体、前記結合メンバー、前記Ｔボディ、前記核酸配列、前記ベクターまたは前記宿主細胞が、非経口投与、経口投与、直腸投与、尿生殖器投与、局所投与、硝子体内投与、静脈内投与、眼内投与、耳投与、鼻腔内投与、吸入により投与、皮膚投与、舌下投与または口腔投与される、項目４７から５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記抗体、前記結合メンバー、前記Ｔボディ、前記核酸配列、前記ベクターまたは前記宿主細胞が、それぞれ、少なくとも１つのさらなる治療有効化合物とともに提供される、項目４７から５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記化合物が、前記抗体、前記結合メンバー、前記Ｔボディ、前記核酸配列、前記ベクターまたは前記宿主細胞と同時にまたは逐次的に投与される、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
生体試料中のＩＬ−１βの存在を検出する方法であって、
ａ．ＩＬ−１βへの結合を許容する条件下で、前記生体試料を項目１から２２、３０もしくは３１のいずれか一項に記載の抗体、項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバーまたは項目２９に記載のＴボディと接触させるステップ、および
ｂ．ＩＬ−１βとの複合体が形成されるかどうかを検出するステップ
を含む方法。
（項目５５）
インビトロまたはインビボでの方法である、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記生体試料が、ヒト起源のものである、項目５４または５５に記載の方法。
（項目５７）
前記生体試料が、血液、尿、脳脊髄液、生検材料および／またはリンパ液である、項目５４から５６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
項目１から２２、３０もしくは３１のいずれか一項に記載の抗体、項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバーまたは項目２９に記載のＴボディでの治療に適格である被験体を選択するために用いられる、項目５４から５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
パッケージ化された組み合わせの試薬および使用のための説明書とともに、項目１から２２、３０もしくは３１のいずれか一項に記載の抗体、項目２３から２８のいずれか一項に記載の結合メンバーまたは項目２９に記載のＴボディを含むキット。
（項目６０）
約１２５００ｎｇ／ｌ以下の関数Ｋについての値を有する、ＩＬ−１βに対するナイーブ結合メンバー。
（項目６１）
１２５０ｎｇ／ｌより低いＫ値を有する、項目６０に記載の結合メンバー。
（項目６２）
項目１から２２のいずれか一項に記載の抗体である、項目６０または６１に記載の結合メンバー。
（項目６３）
ｓｃＦｖである、項目６０から６２のいずれか一項に記載の結合メンバー。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、様々な濃度でのＤＬＸ２３２３の組換えヒト（ｒｈ）ＩＬ−１βへの結合を決定するためのＥＬＩＳＡの結果を示す。ｎｇ／ｍｌで与えたｓｃＦｖの濃度に対して４５０ｎｍの波長での吸光度差をプロットする。四角：ＤＬＸ２３２３；丸：対照。
【００２５】
【図２】図２は、ｒｈＩＬ−１βへの結合との比較で天然ヒトＩＬ−１βへのＤＬＸ２３２３結合の結果を描写するグラフである。天然ヒトＩＬ−１βは、活性化ＴＨＰ−１細胞の上清から得た。ｎｇ／ｍｌで与えたＩＬ−１βの濃度に対して４５０ｎｍの波長での吸光度差をプロットする。四角：ｒＩＬ−１β；丸：天然ＩＬ−１β。
【００２６】
【図３】図３は、２回の独立した実験からのヒト線維芽細胞アッセイにおけるｒｈＩＬ−１βの中和についてのＤＬＸ２３２３と数種の市販ＩＬ−１β阻害剤の比較を示す。図３Ａは、ＤＬＸ２３２３およびＭＡＢ２０１についての結果を示す。Ｙ軸は、ヒト線維芽細胞からのＩＬ−６の放出をｐｇ／ｍｌで示し；ｘ軸は、抗体濃度をｐＭで示す。四角：ＤＬＸ２３２３；丸：対照ＭＡＢ２０１。図３Ｂは、ＤＬＸ２３２３、ｒｈＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ｒａ）およびカナキヌマブ（Ｉｌａｒｉｓ（登録商標））についてのデータの要約である。Ｙ軸は、ヒト線維芽細胞からのＩＬ−６の放出をｐｇ／ｍｌで示し；ｘ軸は、抗体またはｒｈＩＬ−１ｒａの濃度をｐＭで示す。四角：ＤＬＸ２３２３；丸：カナキヌマブ；三角：ｒｈＩＬ−１ｒａ。
【００２７】
【図４】図４は、ヒトＩＬ−１β誘導マウス炎症モデルにおけるＤＬＸ２３２３のインビボ有効性を示す。ヒトＩＬ−１βと、ａ）５ｍｇ／ｍｌのＤＬＸ２３２３；ｂ）１５ｍｇ／ｍｌのＤＬＸ２３２３；ｃ）カナキヌマブ；ｄ）対照ｓｃＦｖ；またはｄ）ＰＢＳのいずれかとで処置した後、血清中のＩＬ−６（ｐｇ／ｍｌ）を定量した。
【００２８】
【図５】図５は、本明細書において用いる場合のＣＤＲ−Ｈ１の定義を図示する。矢印は、Ｋａｂａｔ定義による（上）または本明細書において用いる場合の（下）ＣＤＲ−Ｈ１残基を示す。
【００２９】
【図６】図６は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞において発現されたＤＬＸ２３２３バリアントの清澄化細胞溶解産物が、コーティングされているｒｈＩＬ−１βに結合する、ＥＬＩＳＡアッセイの結果を図示する。示されているｓｃＦｖタンパク質試料について観察された４５０ｎｍの波長での吸光度差をプロットする。アッセイ緩衝液での１：２倍（灰色カラム）または１：１０倍（黒色カラム）の試料希釈物を分析した。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
詳細な説明
本発明がより容易に理解され得るように、ある一定の用語を最初に定義する。本明細書中に別段の定義がない限り、本明細書において用いるすべての技術用語および科学用語は、それらの技術分野において認知されている意味を持つ。本明細書に記載するものと同様または等価の方法および材料を本発明の実施または試験の際に使用することはできるが、適する方法および材料を下に記載する。本明細書において言及するすべての出版物、特許出願、特許および他の参考文献は、それら全体を参照により援用している。矛盾がある場合、定義を含めて、本明細書が優先する。材料、方法および例は、単に例示のためのものであり、限定する意図はない。
【００３１】
本発明の範囲内で、用語「抗体」は、完全長免疫グロブリンならびにそれらの断片も指す。そのような完全長免疫グロブリンは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ベニアリングされた（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）抗体またはヒト抗体であってよい。
【００３２】
「抗体断片」は、前記免疫グロブリンのターゲティング特異性を保持する、完全長免疫グロブリンの部分を含む。すべてではないが多くの抗体断片には完全長免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ領域）が少なくとも部分的に無い。いくつかの実施形態では、抗体断片を完全長免疫グロブリンの消化によって生成する。抗体断片は、免疫グロブリンまたは免疫グロブリン鎖の一部を含む合成または組換え構築物であってもよい（例えば、ＨＯＬＬＩＧＥＲ，Ｐ．およびＨｕｄｓｏｎ，Ｊ．著、「Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ
ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｉｓｅ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２００５年、第２３巻、第９号、１１２６−１１３６頁を参照されたい）。抗体断片の例としては、これらに限定されないが、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｄＡｂ、ＶＨＨ、ナノボディ、Ｖ（ＮＡＲ）または最小認識単位が挙げられる。
【００３３】
「一本鎖可変断片」または「一本鎖抗体」または「ｓｃＦｖ」は、抗体断片の１つのタイプである。ｓｃＦｖは、リンカーによって接続された免疫グロブリンのＶＨとＶＬを含む融合タンパク質である。したがって、それらには完全長免疫グロブリン中に存在する定常Ｆｃ領域が無いが、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。
【００３４】
本明細書において用いる場合の「結合メンバー」は、完全長免疫グロブリン、抗体断片、非抗体スカフォールド、および／または他の結合化合物を指す。そのような結合メンバーは、一価または多価であることができ、すなわち、１つまたはそれより多くの抗原結合部位を有することができる。一価結合メンバーの非限定的な例としては、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ断片、ｄＡｂ、ＶＨＨ、ＤＡＲＰｉｎ、アフィリンおよびナノボディが挙げられる。多価結合メンバーは、２つ、３つ、４つまたはそれより多くの抗原結合部位を有することができ、その結果、１つまたはそれより多くの異なる抗原を認識することができる。完全長免疫グロブリン、Ｆ（ａｂ’）２断片、ビス−ｓｃＦｖおよびダイアボディは、多価結合メンバーの非限定的な例である。前記例示的多価結合メンバーには２つの結合部位が存在する、すなわち、前記結合メンバーは二価である。
【００３５】
１つの実施形態において、多価結合メンバーは、二重特異性であり、すなわち、前記結合メンバーは、２つの異なる標的に対して、または１つの標的分子上の２つの異なる標的部位に対して指向される。二重特異性抗体は、例えば、ＭＵＥＬＬＥＲ，Ｄ．およびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．Ｅ．著、「Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、ＤＵＥＢＥＬ，Ｓ．編集  Ｗｅｉｎｈｅｉｍ：Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００７年、ＩＳＢＮ
３５２７３１４５３９、３４５−３７８頁に総説されている。別の実施形態において、多価結合メンバーは、２つより多くの異なる結合部位を含み、例えば、３つまたは４つの異なる抗原のための、それぞれ、３つまたは４つの異なる結合部位を含む。そのような結合メンバーは、多価であり、多重特異性、特に、それぞれ、三重または四重特異性である。
【００３６】
「非抗体スカフォールド」は、例えば、ＦＩＥＬＤＥＲ，Ｍ．およびＳｋｅｒｒａ，Ａ．著、「Ｎｏｎ−ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｃａｆｆｏｌｄｓ」、ＤＵＥＢＥＬ，Ｓ．編集  Ｗｅｉｎｈｅｉｍ：Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００７年、ＩＳＢＮ  ３５２７３１４５３９、４６７−５００頁；またはＧＩＬＢＲＥＴＨ，Ｒ．Ｎ．およびＫｏｉｄｅ，Ｓ．編集、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｆｏｒ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｎｏｎａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｃａｆｆｏｌｄｓ」、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１２年、第２２巻、４１３−４２０頁に記載されている、抗原結合ポリペプチドである。非限定的な例としては、アフィボディ、アフィリン分子、アドネクチン、アンチカリン、ＤＡＲＰｉｎ、ノッチン、クニッツ型ドメイン、アビマー、テトラネクチンおよびトランスボディが挙げられる。
【００３７】
「結合化合物」は、標的に結合する化学的または生物学的分子であって、上で定義のクラスの完全長免疫グロブリン、抗体断片および非抗体スカフォールドに属していない分子である。結合化合物の例としては、これらに限定されないが、マクロライド（ＧＵＮＤＬＵＲＵ，Ｍ．Ｋ．ら著、「Ｄｅｓｉｇｎ，  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ  ａｎａｌｏｇ  ｓｃａｆｆｏｌｄ」、Ｍｅｄｃｈｅｍｃｏｍｍ、２０１１年、第２巻、９０４−９０８頁；Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｉ．ら著、「Ｔｏｔａｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ  ｈｙｂｒｉｄｓ  ａｎｄ  ａｎａｌｏｇｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｍｉｔｏｔｉｃ  ｎａｔｕｒａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｄｉｃｔｙｏｓｔａｔｉｎ，  ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ  ａｎｄ  ｔａｘｏｌ」、Ｃｈｅｍ  Ａｓｉａｎ  Ｊ．２０１１年、第６巻、４５９−４７３頁；Ｍｏｒｉｔａ，Ｈ．ら著、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｕｎｎａｔｕｒａｌ  ａｌｋａｌｏｉｄ  ｓｃａｆｆｏｌｄｓ  ｂｙ  ｅｘｐｌｏｉｔｉｎｇ  ｐｌａｎｔ  ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ」、ＰＮＡＳ  ２０１１年、第１０８巻、１３５０４−１３５０９頁）、分子鋳型ポリマー（ＨＯＳＨＩＮＯ，Ｙ．ら著、「Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ，ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  ｔａｒｇｅｔ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ  ｓｔｒｅａｍ  ｏｆ  ｌｉｖｉｎｇ  ｍｉｃｅ  ｂｙ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｍｐｒｉｎｔｅｄ  ｐｏｌｙｍｅｒ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ：ａ  ｐｌａｓｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２０１０年、第１９巻、６６４−６６４５頁）、アプタマー（ＳＴＲＥＨＬＩＴＺ，Ｂ．ら著、「Ａｐｔａｍｅｒｓ  ｆｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  ａｎａｌｙｔｉｃｓ」、Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ  ２０１２年、第４巻、１−３０頁；ＹＥ，Ｍ．ら著、「Ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ  Ａｐｔａｍｅｒｓ  ｂｙ  Ｃｅｌｌ−ＳＥＬＥＸ  ｆｏｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２０１２年、第１３巻、３３４１−３３５３頁）、シューピゲルマー（例えば、ＭＡＡＳＣＨ，Ｃ．ら著、「Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ−Ｐｏｌｙｐｌｅｘｅｓ  ｏｆ  Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ  ＮＯＸ−Ａ５０  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｈｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ１（ＨＭＧＡ１）  ｒｅｄｕｃｅ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｖｉｖｏ」、ＪＢＣ  ２０１０年、第２８５巻、４００１２−４００１８頁を参照されたい）、またはペプチド（環状もしくは線状；例えば、ＧＯＵＬＤ，Ａ．ら著、「Ｃｙｃｌｏｔｉｄｅｓ，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｕｌｔｒａｓｔａｂｌｅ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｃａｆｆｏｌｄ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」、Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ、２０１１年、第１７巻、４２９４−４３０７頁を参照されたい）が挙げられる。
【００３８】
「ＩＣ５０」または「最大半量阻害濃度」は、アンタゴニスト薬効の尺度であり、生物学的または生化学的機能を阻害する化合物の有効性を定量的に記述するものである。この尺度は、ある一定の生物学的または生化学的プロセスを５０％阻害するためにどれ程の量の化合物が必要とされるかを示す。親和性の直接的指標ではないが、両方の値は相関し、チェン−プルソフ式によって決定することができる（ＣＨＥＮＧ  Ｙ．およびＰｒｕｓｏｆｆ  Ｗ．Ｈ．著、「Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｃｏｎｓｔａｎｔ（Ｋｉ）ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｈｉｃｈ  ｃａｕｓｅｓ  ５０  ｐｅｒ  ｃｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（Ｉ５０）  ｏｆ  ａｎ  ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｒｅａｃｔｉｏｎ」、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １９７３年、第２２巻、３０９９−３１０８頁；ＲＡＭＭＥＳ，Ｇ．ら著、「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｄｏｍａｉｎ  ｗｈｉｃｈ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｃｙ  ｏｆ  ｃｌｏｚａｐｉｎｅ  ａｔ  ５−ＨＴ３  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」、ＰＬＯＳ  ｏｎｅ  ２００９年、第４巻、１−１４頁；ＺＨＥＮ，Ｊ．ら著、「Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ｌｉｇａｎｄ
ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ  ｉｎ  ａ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ  ｆｏｒ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄｓ：［３Ｈ］ｓｐｉｐｅｒｏｎｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  Ｄ２  ａｎｄ  Ｄ３  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ
Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０１０年、第１８８巻、３２−３８頁）。
【００３９】
本発明において用いる場合の用語「ＩＬ−１β特異的結合」は、結合メンバーが、抗ＩＬ−１β結合メンバーが結合する、ＩＬ−１βエピトープを含まない構造的に異なる抗原に対するよりも高い親和性でＩＬ−１βに結合することを記述する。特異的結合は、１マイクロモル濃度より低い解離平衡定数（ＫＤ）によって表される。この定数は、例えば、Ａｔｔａｎａ計器の水晶振動子マイクロバランス（ＱＣＭ）、またはＢＩＡＣＯＲＥ計器の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を用いて決定することができる。
【００４０】
本明細書において用いる場合、「ＩＬ−１β」は、例えば、Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ  Ｃ．Ａ．著、「Ｔｒｅａｔｉｎｇ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  ｉｎ  ａ  ｂｒｏａｄ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｏｆ  ｄｉｓｅａｓｅｓ」、Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  ２０１２年、第１１巻、６３３−６５２頁に記載されているような分子を指す。本明細書において用いる場合の「ｈＩＬ−１β」は、ヒトＩＬ−１βを指す。「ｒＩＬ−１β」は、組換えＩＬ−１βを指す。組換えＩＬ−１βは、それを調製する方法に依存して、アミノ末端メチオニン残基を有することもあり、または有さないこともある。「ｒｈＩＬ−１β」は、組換えヒトＩＬ−１βを指す。ｒｈＩＬ−１βを、例えば、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、米国（カタログ番号２００−０１Ｂ）から得てもよい。ＩＬ−１βをヒトまたは非ヒト由来の生体試料からの単離によって得てもよい。
【００４１】
「ヒト化」抗体は、非ヒト親抗体またはそのバリアントの１つまたはそれより多くの、典型的には６つすべてのＣＤＲ領域を含む抗体、およびフレームワークが、例えば、（ｉ）非ヒト親抗体の１つまたはそれより多くのフレームワーク残基を潜在的に含む、ヒトフレームワークまたは（ｉｉ）天然に生成するヒトフレームワークとの類似性を増加させるように改変された非ヒト抗体からのフレームワークである抗体を指す。抗体をヒト化する方法は、当該技術分野において公知である。例えば、ＬＥＧＥＲ，Ｏ．およびＳａｌｄａｎｈａ，Ｊ．著、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．」、ＷＯＯＤ，Ｃ．編集  Ｌｏｎｄｏｎ：Ｉｍｐｅｒｉａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｐｒｅｓｓ、２０１１年、ＩＳＢＮ  １８４８１６６２８１、１−２３頁を参照されたい。
【００４２】
「フレームワーク」（ＦＲ）は、それぞれのＣＤＲを取り囲む、可変軽鎖（ＶＬ）または可変重鎖（ＶＨ）いずれかの、可変免疫グロブリンドメインのスカフォールドを指す。ＶＬおよび／またはＶＨフレームワークは、典型的に、ＣＤＲ領域に隣接する４つのフレームワークの部分、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４を含む。したがって、当該技術分野において公知であるように、ＶＬは、一般構造：（ＦＲ−Ｌ１）−（ＣＤＲ−Ｌ１）−（ＦＲ−Ｌ２）−（ＣＤＲ−Ｌ２）−（ＦＲ−Ｌ３）−（ＣＤＲ−Ｌ３）−（ＦＲ−Ｌ４）を有し、これに対してＶＨは、一般構造：（ＦＲ−Ｈ１）−（ＣＤＲ−Ｈ１）−（ＦＲ−Ｈ２）−（ＣＤＲ−Ｈ２）−（ＦＲ−Ｈ３）−（ＣＤＲ−Ｈ３）−（ＦＲ−Ｈ４）を有する。
【００４３】
「ＣＤＲ」は、抗原結合に主として寄与する抗体の超可変領域を指す。典型的に、抗原結合部位は、フレームワークスカフォールドに組み込まれた６つのＣＤＲを含む。本明細書では、ＶＬのＣＤＲをＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３と呼び、これに対してＶＨのＣＤＲをＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３と呼ぶ。これらを、ＫＡＢＡＴ，Ｅ．Ａ．ら著、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、アメリカ合衆国保健福祉省（Ｕ．Ｓ．ＤＥＰＡＲＴＭＥＮＴ  ＯＦ  ＨＥＡＬＴＨ  ＡＮＤ  ＨＵＭＡＮ  ＳＥＲＶＩＣＥＳ）編、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、１９９１年、９１−３２４２頁に記載されているように同定することができる。しかし、本明細書において用いる場合のＣＤＲ−Ｈ１は、位置２７で開始して位置３６の前に終わるという点でＫａｂａｔ定義とは異なる（実例については図５を参照されたい）。
【００４４】
本明細書において用いる場合、抗体のＶＨおよびＶＬ内のアミノ酸残基位置を同定するための番号付けシステムは、ＨＯＮＥＧＧＥＲ，Ａ．およびＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ａ．著、「Ｙｅｔ  ａｎｏｔｈｅｒ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｃｈｅｍｅ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ：Ａｎ  ａｕｔｏｍａｔｉｃ
ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｔｏｏｌ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００１年、第３０９巻、６５７−６７０頁に記載されている「ＡＨｏ」システムに対応する。この出版物は、ＡＨｏとＫａｂａｔシステム（ＫＡＢＡＴ，Ｅ．Ａ．ら著、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、アメリカ合衆国保健福祉省（Ｕ．Ｓ．ＤＥＰＡＲＴＭＥＮＴ  ＯＦ  ＨＥＡＬＴＨ  ＡＮＤ  ＨＵＭＡＮ  ＳＥＲＶＩＣＥＳ）編、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、１９９１年、９１−３２４２頁）の間の変換表をさらに提供している。
【００４５】
「単離された」抗体または核酸は、その天然環境の少なくとも１つの成分から同定ならびに分離および／または回収されたものである。
【００４６】
本明細書において用いる場合の用語「同一性」は、２つのタンパク質または核酸間の配列マッチを指す。比較すべきタンパク質または核酸配列を、例えば、バイオインフォマティクスツール、例えばＥＭＢＯＳＳ  Ｎｅｅｄｌｅ（ペアワイズアラインメント：ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋで利用可能）を使用して、最大同一性が得られるようにアラインする。比較すべき配列内の同じ位置が、同じ核酸塩基またはアミノ酸残基によって占有されている場合には、それぞれの分子は、まさしくその位置で同一である。したがって、「同一性パーセント」は、比較した位置数で割って１００％を掛けたマッチング位置数の関数である。例えば、１０配列位置のうち６位置が同一である場合には、その同一性は６０％である。２つのタンパク質配列間の同一性パーセントは、例えば、ＥＭＢＯＳＳ  Ｎｅｅｄｌｅに組み込まれているニードルマンとウンシュのアルゴリズム（ＮＥＥＤＬＥＭＡＮ，Ｓ．Ｂ．およびＷｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．、「Ａ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｍｅｔｈｏｄ  ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｆｏｒ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」１９７０年、第４８巻、４４３−４５３頁）を使用して、ＢＬＯＳＵＭ６２行列、１０の「ギャップ開始ペナルティ」、０．５の「ギャップ伸長ペナルティ」、誤りの「エンドギャップペナルティ」、１０の「エンドギャップ開始ペナルティ」および０．５の「エンドギャップ伸長ペナルティ」用いて、決定することができる。同じ一次アミノ酸配列または核酸配列を有する２つの分子は、一切の化学的および／または生物学的改変に関係なく同一である。例えば、同じ一次アミノ酸配列を有するが、異なるグリコシル化パターンを有する２つの抗体は、この定義により同一である。核酸の場合、例えば、同じ配列を有するが、ホスフェートではなくチオホスフェートなどの異なる連結成分を有する２つの分子は、この定義により同一である。
【００４７】
「類似」タンパク質配列は、アラインしたとき、比較すべき配列の同じ位置に類似アミノ酸残基および、必須ではないが殆どの場合、同一アミノ酸残基を共有するものである。類似アミノ酸残基は、側鎖の化学特性によってファミリーに分類される。前記ファミリーは、下で「保存的アミノ酸置換」について記載する。配列間の「類似性パーセント」は、比較する位置の合計数で割って１００％を掛けた、比較すべき配列の同じ配列位置に同一または類似残基を含有する位置の数である。例えば、１０配列位置のうち６位置が、同一アミノ酸残基を有し、１０位置のうちの２位置が類似残基を含有する場合には、その配列は、８０％類似性を有する。２配列間の類似性は、例えば、ＥＭＢＯＳＳ  Ｎｅｅｄｌｅを使用して決定することができる。
【００４８】
「バリアント」は、１つまたはそれより多くのアミノ酸残基または核酸塩基の付加（挿入を含む）、欠失および／または置換に基づいて親配列とは異なるが、本明細書に開示する親配列の少なくとも１つの所望の活性を保持している、アミノ酸配列または核酸配列を指す。抗体の場合、そのような所望の活性は、特異的抗原結合を含み得る。類似して、バリアント核酸配列は、１つまたはそれより多くの核酸塩基の付加、欠失および／または置換に基づいて親配列と比較したとき改変されていることがあるが、コードされた抗体は、上記の所望の活性を保持する。バリアントは、天然に存在するもの、例えば対立遺伝子バリアントまたはスプライスバリアント、であることもあり、または人工的に構築されることもある。
【００４９】
本明細書において用いる場合、用語「保存的改変」は、対応する基準（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）に物理的に、生物学的に、化学的にまたは機能的に類似している、例えば、類似のサイズ、形状、電荷、化学的特性（共有結合または水素結合を形成する能力を含む）などを有する、改変を指す。そのような保存的改変としては、１つまたはそれより多くの核酸塩基およびアミノ酸置換、付加および欠失が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５０】
例えば、保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が、類似側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものを含む。例えば、抗原への結合に関して非必須であるアミノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換えることができ、例えば、セリンをトレオニンで置換してもよい。アミノ酸残基は、通常、共通の類似側鎖特性、例えば、
１．非極性側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン）、
２．無電荷極性側鎖（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、プロリン、システイン、トリプトファン）、
３．塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン、プロリン）、
４．酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、
５．β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および
６．芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）
に基づいてファミリーに分けられる。保存的置換は、非天然アミノ酸の使用を含むこともある。
【００５１】
非保存的置換、すなわち、あるファミリーのメンバーの別のファミリーのメンバーに対する交換は、例えば結合メンバーの電荷、双極子モーメント、サイズ、親水性、疎水性または高次構造に関して、実質的変化をもたらすことがあり、これは、特に、標的分子への結合について必須であるアミノ酸に作用する場合、結合活性の有意な降下をもたらすことがある。非保存的置換も非天然アミノ酸の使用を含み得る。
【００５２】
当該技術分野において公知の様々な標準的技法、例えば、コンビナトリアルケミストリー、部位特異的ＤＮＡ変異誘発、ＰＣＲ媒介および／またはカセット変異誘発、ペプチド／タンパク質化学合成、親結合メンバー中の反応性基を特異的に改変する化学反応によって、保存的および非保存的改変を親結合メンバーに導入することができる。バリアントをそれらの化学的、生物学的、生物物理学的および／または生化学的特性について常習的方法により試験することができる。
【００５３】
核酸ハイブリダイゼーション反応を異なるストリンジェンシーの条件下で行うことができる。「ストリンジェントな条件」は、当該技術分野において周知であり、発表されている。典型的に、ハイブリダイゼーション反応中、ＳＳＣ系緩衝液を使用することができ、ＳＳＣは、７．０のｐＨを有する、０．１５Ｍ  ＮａＣｌと１５ｍＭクエン酸塩の緩衝液である。緩衝液濃度の増加および変性剤の存在は、ハイブリダイゼーション工程のストリンジェンシーを増大させる。例えば、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、（ｉ）４２℃の、５０％（体積／体積）ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処理済みサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳおよび１０％硫酸デキストランと、０．２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ中での４２℃の洗浄；（ｉｉ）４２℃の、５０％（体積／体積）ホルムアミドと、０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）と、７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウム、または（ｉｉｉ）５５℃の、１０％硫酸デキストラン、２×ＳＳＣおよび５０％ホルムアミド、続いて、５５℃のＥＤＴＡを含有する０．１×ＳＳＣから成る高ストリンジェンシー洗浄の使用を含むことができる。加えて、または代替的に、低イオン強度かつ高温の洗浄溶液を使用する１工程、２工程またはそれより多くの洗浄工程を、例えば５０℃の０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを使用するハイブリダイゼーションプロトコルに含めることができる。
【００５４】
本発明の様々な態様を後続のサブセクションでさらに詳細に記載する。様々な実施形態、選好および範囲を思いのままに組み合わせてもよいことは理解される。さらに、具体的な実施形態に依存して、選択された定義、実施形態または範囲が当てはまらないこともある。
【００５５】
第一の態様において、本発明は、５０ｐＭより低いＩＣ５０でヒトＩＬ−１βの生物学的作用を阻害する、ＩＬ−１βに結合する一価抗体断片を提供する。前記ＩＣ５０は、好ましくは約４０ｐＭより低く、さらに好ましくは約３０、２０、１０、５、４、３、２または１ｐＭより低い。
【００５６】
好ましくは、前記一価抗体断片は、約５０ｋＤａ以下、例えば、約４５ｋＤａ、４０ｋＤａ、３５ｋＤａまたはそれより小さく、好ましくは約２５ｋＤａ、例えば、２３、２４、２５、２６または２７ｋＤａの分子量を有する。
【００５７】
１つの態様において、本発明は、
（ａ）それぞれ配列番号１、２および３またはそれらのバリアントで示されるＶＨ  ＣＤＲ配列ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２もしくはＣＤＲ−Ｈ３のうちの少なくとも１つ；および／または
（ｂ）それぞれ配列番号４、５および６またはそれらのバリアントで示されるＶＬ  ＣＤＲ配列ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２もしくはＣＤＲ−Ｌ３のうちの少なくとも１つ
を含む抗体を提供する。
【００５８】
そのような抗体は、
（ａ）それぞれ配列番号１５５、１５６および１５７またはそれらのバリアントで示されるＶＨ  ＣＤＲ配列ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２もしくはＣＤＲ−Ｈ３のうちの少なくとも１つ；および／または
（ｂ）
（ｉ）それぞれ配列番号１５８、１５９および１６０、もしくはそれらのバリアントで示されるか、または
（ｉｉ）それぞれ配列番号１６１、１６２および１６３、もしくはそれらの変異型で示される、ＶＬ  ＣＤＲ配列ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２もしくはＣＤＲ−Ｌ３のうちの少なくとも１つ
を含み得る。
【００５９】
好ましくは、前記抗体は、それぞれ、少なくとも、配列番号３のＣＤＲ−Ｈ３および配列番号６もしくは配列番号１５７のＣＤＲ−Ｌ３またはそのバリアントを含む。さらにいっそう好ましくは、前記抗体は、
（ｉ）配列番号１から６もしくはそれらのバリアント；
（ｉｉ）配列番号１５５から１６０もしくはそれらのバリアント；または
（ｉｉｉ）配列番号１５５から１５７および配列番号１６１から１６３もしくはそれらのバリアント
の６つすべてのＣＤＲを含む。
【００６０】
そのような抗体は、５０ｐＭより低い、さらに好ましくは約４０ｐＭ、３０、２０、１０より低い、さらにいっそう好ましくは５ｐＭより低い、および最も好ましくは約１ｐＭ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１βに対する非常に高い阻害効力を有する。
【００６１】
好ましくは、前記抗体は、少なくとも２ｐＭ、さらに好ましくは少なくとも１ｐＭのＩＣ５０でヒトＩＬ−１βに対する阻害効力を有する。
【００６２】
前記ＩＣ５０は、例えば、細胞ベースの効力アッセイを用いて決定することができる。１つの実施形態では、上記ＩＣ５０値を、ヒト線維芽細胞からのＩＬ−６のＩＬ−１β誘導放出の阻害によって決定する。そのようなアッセイは、ＩＬ−１βで刺激された線維芽細胞がＩＬ−６を放出するという観察に基づく。ＩＬ−１β阻害抗体の存在下では、放出されるＩＬ−６の濃度が低減される。好ましい実施形態では、正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ−Ｎｅｏ、例えば、Ｌｏｎｚａ、米国ウォーカーズビルから入手可能、カタログ番号ＣＣ−２５０９）細胞を使用する。ｈＩＬ−１βと対象の抗体との混合物をインキュベートして、上清を回収し、ＩＬ−６  ＥＬＩＳＡ、例えば、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−６  ＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＤＹ２０６）によって検査する。１つの実施形態において、前記アッセイは、実施例３において記載するようなＩＬ−１β中和アッセイである。好ましくは、ＩＣ５０値は、そのようなアッセイの少なくとも３回の独立した反復から得られる平均値である。
【００６３】
本明細書に記載する抗体は、完全長免疫グロブリンであることもあり、または抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ断片、ナノボディ、ＶＨＨもしくは最小認識単位であることもある。
【００６４】
好ましい実施形態において、上記抗体および特に一価抗体断片は、ｓｃＦｖである。ＶＨドメインおよびＶＬドメインを柔軟なリンカーにより、ＶＬ−リンカー−ＶＨまたはＶＨ−リンカー−ＶＬ、いずれかの配向で接続することができる。好ましい実施形態において、前記配向は、ＶＬ−リンカー−ＶＨであり、すなわち、軽鎖可変領域がそのポリペプチドのＮ末端にあり、重鎖可変領域がＣ末端にある。
【００６５】
前記抗体は、好ましくは、ヒト化されている。そのようなヒト化抗体は、例えば、可変軽鎖に配列番号１８のＦＲ−Ｌ１、配列番号１９のＦＲ−Ｌ２、配列番号２０のＦＲ−Ｌ３および／もしくは配列番号２１のＦＲ−Ｌ４、またはそれらのバリアントを含み得る。加えて、または代替的に、前記ヒト化抗体は、配列番号２２、２６もしくは３０の重鎖可変フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ１；配列番号２３、２７もしくは３１の重鎖可変フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ２；配列番号２４、２８もしくは配列番号３２の重鎖可変フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ３；および／または配列番号２５、２９もしくは３３の重鎖可変フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ４を含むことができる。
【００６６】
したがって、好ましい実施形態において、前記抗体は、それぞれ配列番号７もしくは配列番号１４６のＶＨ配列、またはそのバリアントを含む。そのようなバリアントは、配列番号７または配列番号１４６との少なくとも８５％、さらに好ましくは９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％および最も好ましくは１００％の配列同一性を有する。そのようなバリアントＶＨ配列の例としては、これらに限定されないが、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２６、配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、配列番号１３４、配列番号１４２、配列番号１４４、配列番号１４６、配列番号１４８、配列番号１５０または配列番号１５２が挙げられる。
【００６７】
加えて、または代替的に、本明細書に開示する抗体は、それぞれ配列番号８、配列番号１３６および配列番号１４５から成る群より選択されるＶＬ配列、またはそのバリアントを含む。そのようなバリアントは、配列番号８、配列番号１３６または配列番号１４５との少なくとも８５％、さらに好ましくは９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％および最も好ましくは１００％の配列同一性を有する。そのようなバリアントＶＬ配列の例としては、これらに限定されないが、配列番号１２３、配列番号１２５、配列番号１２７、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３９または配列番号１５３が挙げられる。
【００６８】
１つの実施形態において、前記抗体は、配列番号７または配列番号１４６との少なくとも８５％、さらに好ましくは９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％および最も好ましくは１００％の配列類似性を有するＶＨ配列を含む。さらに、または代替的に、前記抗体は、配列番号８、配列番号１３６または配列番号１４５との少なくとも８５％、さらに好ましくは９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％および最も好ましくは１００％の配列類似性を有するＶＬ配列を含む。
【００６９】
非常に好ましい実施形態において、前記抗体は、配列番号７で示されるＶＨおよび配列番号８で示されるＶＬを含む。配列番号７および配列番号８両方のフレームワーク配列は、国際公開第０３／０９７６９７号Ａ（ＥＳＢＡＴｅｃｈ  ＡＧ）に記載されているヒト免疫グロブリンに由来する。そのＶＨおよびＶＬフレームワーク配列は、ウサギ抗体のヒト化および安定性のために改変されている。例えば、国際公開第２００９／１５５７２６号Ａ（ＥＳＢＡＴｅｃｈ、ＡＮ  ＡＬＣＯＮ  ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ  ＲＥＳＥＡＲＣＨ
ＵＮＩＴ  ＬＬＣ）；ＢＯＲＲＡＳ，Ｌ．ら著、「Ｇｅｎｅｒｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ
ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔａｂｌｅ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉｎ  Ｆｖ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｆｒｏｍ  ｒａｂｂｉｔ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１０年、第２８５巻、第１２号、９０５４−９０６６頁を参照されたい。１つの実施形態において、本明細書に開示する抗体のＶＬフレームワークは、配列番号１８〜２１またはそれらのバリアントを含む。加えて、または代替的に、前記抗体のＶＨフレームワークは、それぞれ配列番号２２〜２５、配列番号２６〜２９もしくは配列番号３０〜３３またはそれらのバリアントを含む。
【００７０】
別の好ましい実施形態において、前記抗体は、配列番号１４６で示されるＶＨおよび配列番号８または配列番号１４５で示されるＶＬを含む。
【００７１】
別の好ましい実施形態において、前記抗体は、配列番号１４６で示されるＶＨおよび配列番号１３６で示されるＶＬを含む。
【００７２】
抗体は、特にｓｃＦｖの場合、リンカー配列を含み得る。そのようなリンカー配列は、典型的に１０から約２５のアミノ酸を有する。通常、そのようなリンカーペプチドは、柔軟性を付与するグリシン、ならびに溶解度向上のためのセリンおよび／またはトレオニンを多く含む。好ましい実施形態では、（ＧＧＧＧＳ）４リンカー（配列番号９）またはそのバリアントを使用する。３から５リピートを有する前記モチーフの異形（ｖａｒｉａｔｉｏｎ）を使用してもよい。さらなる適するリンカーは、例えば、ＡＬＦＴＨＡＮ，Ｋ．著、「Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ
ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｌｉｎｋｅｒ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １９９５年、第８巻、第７号、７２５−７３１頁に記載されている。
【００７３】
ある一定の実施形態では、本明細書に提供する抗体のバリアントが企図される。例えば、抗体の、抗原結合、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を改善すること、安定性もしくは溶解度を増加させること、免疫原性を減少させることおよび／または他の生物学的、生化学的もしくは生物物理学的特性を変更することが望ましいこともある。いくつかの実施形態において、前記バリアントは、親抗体を上回る改善を一切示さない。
【００７４】
本明細書に提供する抗体のバリアントを、タンパク質工学および／もしくは化学工学により、その抗体をコードする核酸配列への適切な改変の導入により、またはタンパク質／ペプチド合成により調製してよい。欠失、置換、付加および挿入の任意の組み合わせ（単数または複数）をフレームワークにまたはＣＤＲに施すことができるが、但し、産生される抗体が、適切な方法を用いてスクリーニングすることができる所望の特性を有することを条件とする。置換、好ましくは、上記の保存的置換は、特に興味深い。好ましい保存的置換は、
１．バリン（Ｖ）によるアラニン（Ａ）の置換；
２．リジン（Ｋ）によるアルギニン（Ｒ）の置換；
３．グルタミン（Ｑ）によるアスパラギン（Ｎ）の置換；
４．グルタミン酸（Ｅ）によるアスパラギン酸（Ｄ）の置換；
５．セリン（Ｓ）によるシステイン（Ｃ）の置換；
６．アスパラギン酸（Ｄ）によるグルタミン酸（Ｅ）の置換；
７．アラニン（Ａ）によるグリシン（Ｇ）の置換；
８．アルギニン（Ｒ）またはリジン（Ｋ）によるヒスチジン（Ｈ）の置換；
９．ロイシン（Ｌ）によるイソロイシン（Ｉ）の置換；
１０．ロイシン（Ｌ）によるメチオニン（Ｍ）の置換；
１１．チロシン（Ｙ）によるフェニルアラニン（Ｆ）の置換；
１２．アラニン（Ａ）によるプロリン（Ｐ）の置換；
１３．トレオニン（Ｔ）によるセリン（Ｓ）の置換；
１４．チロシン（Ｙ）によるトリプトファン（Ｗ）の置換；
１５．トリプトファン（Ｗ）によるフェニルアラニン（Ｆ）の置換；および／または
１６．ロイシン（Ｌ）によるバリン（Ｖ）の置換
を含み、逆もまた含む。
【００７５】
本明細書に記載する抗体は、１つまたはそれより多く、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれより多くのそのような保存的置換を含み得る。
【００７６】
非保存的置換は、例えばそのポリペプチドの電荷、双極子モーメント、サイズ、親水性、疎水性または高次構造に関して、より実質的な変化をもたらすし得る。１つの実施形態において、前記抗体は、１つまたはそれより多く、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれより多くのそのような非保存的置換を含む。
【００７７】
改変は、ＣＤＲに存在してもよいし、またはフレームワーク配列に存在してもよい。例えば、本明細書に提供するＣＤＲは、１、２、３、４、５またはさらにそれより多くの改変を含み得る。例えば、全体として見るとＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３配列は、本明細書に提供するＣＤＲと、特に、（ｉ）配列番号４、５および６と、または（ｉｉ）配列番号１６１、１６２および１６３と、少なくとも７５％、好ましくは少なくとも７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％またはさらに好ましくは９９％同一である。加えて、または代替的に、全体として見るとＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３配列は、本明細書に提供するＣＤＲと、特に、（ｉ）配列番号１、２および３と、または（ｉｉ）配列番号１５５、１５６および１５７と、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８１％、８２％、８３％、８４％、９５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％またはさらに好ましくは９９％同一である。
【００７８】
１つの実施形態において、全体として見るとＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３は、本明細書に提供するＣＤＲに、少なくとも８５％、好ましくは９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％またはさらに好ましくは９９％類似している。加えて、または代替的に、全体として見るとＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３は、本明細書に提供するＣＤＲに、少なくとも８５％、好ましくは９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％またはさらに好ましくは９９％類似している。
【００７９】
したがって、バリアントは、例えば、配列番号４に１、２、３、４または５つの置換を含み得る。配列番号１４におけるＸで印されている位置での置換は、非常に好ましい。前記バリアントは、例えば、
（ｉ）可変軽鎖のＡＨｏ位置３２にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）；
（ｉｉ）可変軽鎖のＡＨｏ位置３３にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）；および／または
（ｉｉｉ）可変軽鎖のＡＨｏ位置４０にグルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）
を含み得る。
【００８０】
加えて、または代替的に、バリアントは、配列番号５に１、２、３、または４つの置換を含む。配列番号１５におけるＸで印されている位置での置換は、非常に好ましい。そのようなバリアントは、例えば、
（ｉ）可変軽鎖のＡＨｏ位置５８にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）；および／または
（ｉｉ）可変軽鎖のＡＨｏ位置６９にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）
を含み得る。
【００８１】
加えて、または代替的に、バリアントは、配列番号６に１、２、３、４、５または６つの置換を含む。配列番号１６におけるＸで印されている位置での置換は、非常に好ましい。例えば、そのようなバリアントは、
（ｉ）可変軽鎖のＡＨｏ位置１０９にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、イソロイシン（Ｉ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）；
（ｉｉ）可変軽鎖のＡＨｏ位置１１１にアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）；
（ｉｉｉ）可変軽鎖のＡＨｏ位置１１２にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）；
（ｉｖ）可変軽鎖のＡＨｏ位置１３５にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）；および／または
（ｖ）可変軽鎖のＡＨｏ位置１３６にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）
を含み得る。
【００８２】
加えて、または代替的に、バリアントは、配列番号１または配列番号１５５に１、２、３または４つの置換を含む。配列番号１１におけるＸで印されている位置での置換は、非常に好ましい。そのようなバリアントは、例えば、
（ｉ）可変重鎖のＡＨｏ位置３３にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）；および／または
（ｉｉ）可変重鎖のＡＨｏ位置３９にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）
を含み得る。
【００８３】
加えて、または代替的に、バリアントは、配列番号２または配列番号１５６に１、２、３、４、５または６つの置換を含む。配列番号１２におけるＸで印されている位置での置換は、非常に好ましい。例えば、前記バリアントは、
（ｉ）可変重鎖のＡＨｏ位置５９にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）もしくはチロシン（Ｙ）；
（ｉｉ）可変重鎖のＡＨｏ位置６０にアスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）もしくはプロリン（Ｐ）；および／または
（ｉｉｉ）可変重鎖のＡＨｏ位置６９にアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、フェニルアラニン（Ｆ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、トリプトファン（Ｗ）もしくはチロシン（Ｙ）
を含み得る。
【００８４】
加えて、または代替的に、バリアントは、配列番号３または配列番号１５７に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１の置換を含む。配列番号１３におけるＸで印されている位置での置換は、非常に好ましい。そのようなバリアントは、例えば、
（ｉ）可変重鎖のＡＨｏ位置１１０にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）；
（ｉｉ）可変重鎖のＡＨｏ位置１１１にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）；
（ｉｉｉ）可変重鎖のＡＨｏ位置１１２にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、フェニルアラニン（Ｆ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、チロシン（Ｙ）；
（ｉｖ）可変重鎖のＡＨｏ位置１１３にフェニルアラニン（Ｆ）もしくはイソロイシン（Ｉ）；
（ｖ）可変重鎖のＡＨｏ位置１１４にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）；
（ｖｉ）可変重鎖のＡＨｏ位置１１５にアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）もしくはアスパラギン（Ｎ）；
（ｖｉｉ）可変重鎖のＡＨｏ位置１３５にアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；
（ｖｉｉｉ）可変重鎖のＡＨｏ位置１３６にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）；
（ｉｘ）可変重鎖のＡＨｏ位置１３７にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）；および／または
（ｘ）可変重鎖のＡＨｏ位置１３８にアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）
を含み得る。
【００８５】
バリアントの特に好ましいタイプは、１つまたはそれより多くの全ＣＤＲが置き換えられているものである。典型的に、ＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ３は、抗原結合に最も有意に寄与する。例えば、全ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｈ１および／またはＣＤＲ−Ｈ２を、天然または人工起源の異なるＣＤＲによって置き換えてもよい。いくつかの実施形態では、１つまたはそれより多くのＣＤＲをアラニン−カセットによって置き換える。
【００８６】
１つの実施形態において、本明細書に記載するバリアントは、配列番号１０、配列番号７３および配列番号８２から成る群より選択される配列との少なくとも８５％、さらに好ましくは９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％および最も好ましくは１００％の配列同一性を有する。
【００８７】
１つの実施形態において、本明細書に記載するバリアントは、配列番号１０、配列番号７３および配列番号８２との少なくとも８５％、さらに好ましくは９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％および最も好ましくは１００％の配列類似性を有する。
【００８８】
加えて、または代替的に、前記抗体のＶＨは、溶解度向上性点変異を含む。国際公開第２００９／１５５７２５号（ＥＳＢＡＴｅｃｈ，ａ  Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ｃｏｍｐａｎｙ）には、抗体の全体の溶解度を増加させることが立証されたモチーフが記載されている。それらの残基は、抗体の可変ドメインと定常ドメインの界面にある位置に配置され、定常ドメインを欠く抗体断片、特にｓｃＦｖを安定させる。詳細には、以下の残基の１つ、好ましくは３つすべてが存在する：
（ｉ）重鎖アミノ酸位置１２（ＡＨｏ番号付けによる）にセリン（Ｓ）；
（ｉｉ）重鎖アミノ酸位置１０３（ＡＨｏ番号付けによる）にセリン（Ｓ）もしくはトレオニン（Ｔ）；および／または
（ｉｉｉ）重鎖アミノ酸位置１４４（ＡＨｏ番号付けによる）にセリン（Ｓ）もしくはトレオニン（Ｔ）。
【００８９】
好ましい実施形態において、前記抗体は、ＶＨ位置１２にセリン；ＶＨ位置１０３にセリン；およびＶＨ位置１４４にトレオニン（すべてＡＨｏ番号付け）を有する。
【００９０】
したがって、１つの実施形態において、本明細書に開示する抗体は、配列番号３０〜３３のＶＨフレームワーク配列またはそれらのバリアントを含む。
【００９１】
好ましくは、本明細書において用いる場合のバリアント抗体は、
（ｉ）ＩＬ−１βへの、特に、ｈＩＬ−１βへの特異的結合を保持する；
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１βの生物学的作用を阻害することに関して５００ｐＭより低い、好ましくは４００ｐＭ、３００ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭより低い、さらに好ましくは２５ｐＭより低い効力（ＩＣ５０）を有する；
（ｉｉｉ）カニクイザルＩＬ−１β、アカゲザルＩＬ−１βおよび／またはラットＩＬ−１βと交差反応性である；および／または
（ｉｖ）ＩＬ−１β、好ましくは、ヒトＩＬ−１β、カニクイザルＩＬ−１β、アカゲザルＩＬ−１βおよび／またはラットＩＬ−１β、最も好ましくはｈＩＬ−１βへの結合について、本明細書に開示する抗体と競合する。
【００９２】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１２５、配列番号１２７、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３９、配列番号１４１、配列番号１４３、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５１および配列番号１５３から成る群より選択されるＶＬ配列を含む。
【００９３】
加えて、または代替的に、前記バリアントは、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２６、配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、配列番号１３４、配列番号１３８、配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４４、配列番号１４６、配列番号１４８、配列番号１５０、配列番号１５２から成る群より選択されるＶＨ配列を含む。
【００９４】
バリアントを軽鎖および重鎖の鎖シャッフリングによって調製してもよい。単一軽鎖を重鎖のライブラリーと組み合わせて、バリアントのライブラリーを生じさせることができる。１つの実施形態において、前記単一軽鎖は、上に列挙したＶＬ配列の群から選択され、および／または前記重鎖ライブラリーは、上に列挙したＶＨ配列の１つまたはそれより多くを含む。同様に、単一重鎖を軽鎖のライブラリーと組み合わせることができる。好ましくは、前記単一重鎖は、上に列挙したＶＨ配列の群から選択され、および／または前記軽鎖ライブラリーは、上に列挙したＶＬ配列の１つまたはそれより多くを含む。
【００９５】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号１３５のＶＬおよび／または配列番号７、配列番号１４２、配列番号１４６、配列番号１５０もしくは配列番号１５２のＶＨを含む。好ましくは、前記バリアントは、配列番号６７、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７または配列番号８８を含む。
【００９６】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号１３６のＶＬおよび／または配列番号７、配列番号１４２、配列番号１４６、配列番号１５０もしくは配列番号１５２のＶＨを含む。好ましくは前記バリアントは、配列番号６８、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３または配列番号８４を含む。
【００９７】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号１３７のＶＬおよび／または配列番号７、配列番号１３８、配列番号１４２、配列番号１４６、配列番号１５０もしくは配列番号１５２のＶＨを含む。好ましくは、前記バリアントは、配列番号６９、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４または配列番号９５を含む。
【００９８】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号１３９のＶＬおよび／または配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４６、配列番号１５０もしくは配列番号１５２のＶＨを含む。好ましくは、前記変型は、配列番号７０、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９または配列番号８０を含む。
【００９９】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号１４１のＶＬおよび／または配列番号１４２のＶＨを含む。好ましくは前記バリアントは、配列番号７１を含む。
【０１００】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号１４３のＶＬおよび／または配列番号１４４のＶＨを含む。好ましくは前記バリアントは、配列番号７２を含む。
【０１０１】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号１４５のＶＬおよび／または配列番号１４６のＶＨを含む。好ましくは前記バリアントは、配列番号７３を含む。
【０１０２】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号１４７のＶＬおよび／または配列番号１４８のＶＨを含む。好ましくは前記バリアントは、配列番号７４を含む。
【０１０３】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号１４９のＶＬおよび／または配列番号１５０のＶＨを含む。好ましくは前記バリアントは、配列番号７５を含む。
【０１０４】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号１５１のＶＬおよび／または配列番号１５２のＶＨを含む。好ましくは前記バリアントは、配列番号７６を含む。
【０１０５】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号８のＶＬおよび／または配列番号１２１もしくは配列番号１２２のＶＨを含む。好ましくは前記バリアントは、配列番号５９または配列番号６０を含む。
【０１０６】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号１５３のＶＬおよび／または配列番号１４２、配列番号１４６もしくは配列番号１５２のＶＨを含む。好ましくは前記バリアントは、配列番号８９、配列番号９０または９１を含む。
【０１０７】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号８のＶＬおよび／または配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１４２、配列番号１４４、配列番号１４６、配列番号１４８、配列番号１５０もしくは配列番号１５２のＶＨを含む。
【０１０８】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号７のＶＨおよび／または配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３９もしくは配列番号１５３のＶＬを含む。
【０１０９】
１つの実施形態において、前記バリアントは、配列番号３４から９５および配列番号１５４から成る群より選択される配列を含む。
【０１１０】
結合メンバーは、上述のＶＬ配列および／またはＶＨ配列のいずれかを含むことができる。単一ドメイン形式を有する結合メンバー、例えば、ナノボディまたはＶＨＨは、上述のＶＬ配列またはＶＨ配列のいずれか一方のみを含み、好ましくはＶＨ配列を含む。多価結合メンバー、特に、Ｆ（ａｂ’）２断片、ビス−ｓｃＦｖまたはダイアボディ、好ましくは、二重特異性結合メンバーは、上述のＶＬ配列の１つまたはそれより多くおよび／または上述のＶＨ配列の１つまたはそれより多くを含み得る。
【０１１１】
本発明の抗体は、著しく安定である。本明細書において用いる場合、用語「安定性」は、長期インキュベーションおよび／または高温でのインキュベーション後に溶液中で単量体のままである抗体の生物物理学的特性を指す。不安定な抗体は、二量体化またはオリゴマー化およびさらには沈殿する傾向があり、その結果、有効期間を減少させ、薬学的応用にあまり適さなくなる。
【０１１２】
本明細書に提供する抗体および特に上記一価抗体断片は、１カ月間、３７℃で、ｐＨ７．２のＰＢＳ中１ｍｇ／ｍｌの濃度でインキュベートした後、少なくとも７５％まで、好ましくは少なくとも８０％、８５％までおよび最も好ましくは９３％まで単量体のままである。加えて、または代替的に、前記抗体は、１カ月間、室温で、ｐＨ７．２のＰＢＳ中１ｍｇ／ｍｌの濃度でインキュベートした後、少なくとも９０％まで、好ましくは少なくとも９２％、９４％、９６％、９８％までさらに好ましくは１００％まで単量体のままである。
【０１１３】
単量体度は、例えば、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ（サイズ排除クロマトグラフィー−高速液体クロマトグラフィー）によって決定することができる。そのような試験に適する移動相は、例えば、ｐＨ７．２のＰＢＳである。単量体含有率は、タンパク質クロマトグラフィー中に測定されるＵＶ２８０シグナルのピーク積分によって定量することができる。適するシステムは、例えば、Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ（登録商標）６．５ソフトウェアによって制御されるＤｉｏｎｅｘ  Ｓｕｍｍｉｔ  ＨＰＬＣであり、前記ソフトウェアは、その後のクロマトグラム分析およびピーク定量も可能にする。
【０１１４】
本明細書に開示する抗体および特に上記一価抗体断片は、より高濃度においても安定しており、例えば、それらは、２週間、室温および／または４℃で、ｐＨ７．２のＰＢＳ中、約５０ｍｇ／ｍｌの濃度でインキュベートした後、少なくとも５０％まで、好ましくは少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％までおよび最も好ましくは７５％まで単量体のままである。
【０１１５】
さらに、本明細書に提供する抗体および特に上記一価抗体断片は、著しく可溶性であり、したがって、凝集体形成による沈殿がないまま高度に濃縮することができる。好ましくは、前記抗体を、沈殿することなく、ｐＨ７．２のＰＢＳ中、２０ｍｇ／ｍｌより高い濃度に、さらに好ましくは、ｐＨ７．２のＰＢＳ中、３０ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌの濃度におよび最も好ましくは７０ｍｇ／ｍｌに濃縮することができる。
【０１１６】
非常に好ましい実施形態において、前記抗体は、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）によって決定して約６０℃、好ましくは６５℃、７０℃、７１℃、７２℃、７３℃および最も好ましくは７４℃の融解温度を有する。この方法は、疎水性環境においてのみ蛍光性である、ある一定の色素の特性に基づく。例えば、タンパク質アンフォールディングを、色素ＳＹＰＲＯ（登録商標）オレンジの熱変性タンパク質への結合による蛍光の増加として検出することができる（ＮＩＥＳＥＮ  Ｆ．Ｈ．ら著、「Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｙ  ｔｏ  ｄｅｔｅｃｔ  ｌｉｇａｎｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｔｈａｔ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ２００７年、第２巻、２２１２−２２２１頁）。かくしてタンパク質の安定性を熱変性によって分析することができる。
【０１１７】
好ましくは、前記抗体は、５から１０の範囲、好ましくは７から９の範囲、最も好ましくは約８．３の理論的等電点（ｐＩ）を有する。理論的ｐＩは、例えば、ＥｘＰＡＳｙサーバー上のＰｒｏｔＰａｒａｍツール（ｈｔｔｐ：／／ｗｅｂ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｐｒｏｔｐａｒａｍ／において利用可能；ＧＡＳＴＥＩＧＥＲ  Ｅ．ら著、「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｔｏｏｌｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ＥｘＰＡＳｙ  Ｓｅｒｖｅｒ」、Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、ＷＡＬＫＥＲ  Ｊ．Ｍ．編集  Ｔｏｔｏｗａ：Ｈｕｍａｎａ
Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．、２００５年、ＩＳＢＮ  ９７８１５８８２９５９３４、５７１−６０７頁も参照されたい）を使用することにより算出することができる。
【０１１８】
前記抗体は、非ヒト種からのＩＬ−１β、例えば、これらに限定されないが、カニクイザルＩＬ−１β、アカゲザルＩＬ−１β、ラットＩＬ−１β、マウスＩＬ−１β、イヌＩＬ−１β、ネコＩＬ−１β、マーモセットＩＬ−１β、ブタＩＬ−１βおよび／またはモルモットＩＬ−１βと交差反応性であり得る。好ましくは、前記抗体は、カニクイザルＩＬ−１β（例えば、組換え生成される、およびＳｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．から入手可能、カタログ番号９００１０−ＣＮＡＥ）、アカゲザルＩＬ−１β（例えば、組換え生成される、およびＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから入手可能、カタログ番号１３１８−ＲＬ／ＣＦ）および／またはラットＩＬ−１β（例えば、組換え生成される、およびＰｅｐｒｏｔｅｃｈから入手可能、カタログ番号４００−０１Ｂ）と交差反応性である。
【０１１９】
好ましくは、インビボおよび／またはインビトロ設定で、本明細書に開示する抗体で中和したとき、ＩＬ−１βの残留活性がない、すなわち、前記抗体がＩＬ−１βの作用を完全に阻害する。本明細書において用いる場合の「残留活性がない」は、６０ｎｇ／ｍｌの本明細書に記載する抗体の存在下で、同じ濃度の関連性のない特異性の抗体またはビヒクル対照と比較して、１０ｐｇ／ｍｌのＩＬ−１βによって誘導されたヒト線維芽細胞からのＩＬ−６放出に対応する２％未満の効力アッセイ（好ましくは、実施例３に記載のアッセイ）シグナルを指す。
【０１２０】
本発明は、ヒトＩＬ−１βへの結合について、本明細書に開示する抗体と競合する結合メンバーも提供する。
【０１２１】
本明細書において用いる場合、用語「競合すること」は、同じ標的への結合についての結合メンバー間の競合を指す。競合は、対象の結合メンバーが共通の抗原（ここではｈＩＬ−１βまたはその断片）への本明細書に開示する抗体の特異的結合を防止または阻害または低減する競合結合アッセイによって、決定することができる。そのような競合結合アッセイは、当該技術分野において公知であり、そのようなアッセイとしては、これらに限定されないが、固相直接または間接放射免疫測定（ＲＩＡ）および固相直接または間接酵素免疫測定（ＥＩＡ）が挙げられる。典型的に、そのようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原、試験すべき結合メンバーおよび本明細書に記載の参照抗体の使用を伴う。（ｉ）試験すべき結合メンバーの存在下で、固体表面に結合した参照抗体、または（ｉｉ）参照抗体の存在下で固体表面に結合した試験すべき結合メンバー、いずれかの量を決定することによって、競合阻害を測定する。競合結合メンバーは、（ｉ）抗体と同じエピトープに結合することができ、（ｉｉ）オーバーラップしているエピトープに結合することができ、または（ｉｉｉ）同じ標的分子上の異なるエピトープに結合するが、その標的への抗体の結合を立体的に障害することができる。
【０１２２】
通常、競合結合メンバーが過剰に存在すると、それは、本明細書に記載の抗体のＩＬ−１βへの特異的結合を少なくとも４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、または７５％もしくはそれより大きく低減する。好ましくは、抗体の結合を少なくとも８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、または９７％もしくはそれより大きく低減する。
【０１２３】
１つの実施形態において、前記競合結合メンバーは、少なくとも約１ｐＭ、１０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭの親和性ＫＤでｈＩＬ−１βに結合する。
【０１２４】
１つの実施形態において、前記結合メンバーは、一価、例えばｓｃＦｖ断片またはＦａｂ断片である。別の実施形態において、前記結合メンバーは、多価である。そのような多価分子は、二価（例えば、完全長免疫グロブリンまたはＦ（ａｂ’）２断片）であることができ、または少なくとも３つの標的結合部位を含む。
【０１２５】
前記多価結合メンバーは、二重特異性抗体、例えば、ダイアボディ、一本鎖ダイアボディまたはタンデムｓｃＦｖ（例えば、ＫＯＮＴＥＲＭＡＮＮ，Ｒ．Ｅ．著、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、ＬＯ，Ｂ．編集  Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．：Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、２００４年、ＩＳＢＮ  １５８８２９０９２１、２２７−２４２頁を参照されたい）であることができる。前記二重特異性抗体は、より短いリンカー、つまりｓｃＦｖについて上に記載したもの、すなわち、配列番号１４の基本モチーフの１から３リピートのみを有するものをうまく使用し得る（例えば、ＨＯＬＬＩＧＥＲ，Ｐ．ら著、「Ｄｉａｂｏｄｉｅｓ：ｓｍａｌｌ  ｂｉｖａｌｅｎｔ  ａｎｄ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」、ＰＮＡＳ  １９９３年、第９０巻、第１４号、６４４４−６４４８頁参照されたい）。別の実施形態において、前記多価結合メンバーは、トリアボディ、ミニボディまたはテトラボディである。
【０１２６】
本発明は、本明細書に記載する抗体を含むＴボディも提供する。Ｔボディは、抗体の抗原認識とＴ細胞受容体複合体のシグナルおよびエフェクター特性とを併せ持つ免疫グロブリンＴ細胞受容体（ｃＩｇＴＣＲ）である。そのような構築物において、抗体は、好ましくは抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖまたはｓｃＦｖ−Ｆｃ、最も好ましくはｓｃＦｖである。Ｔボディの一般設計およびそれらの適用のさらなる論考については、例えば、ＳＣＨＩＲＲＭＡＮＮ，Ｔ．およびＰｅｃｈｅｒ，Ｇ．著、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、ＤＵＥＢＥＬ，Ｓ．編集  Ｗｅｉｎｈｅｉｍ：Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００９年、ＩＳＢＮ  ３５２７３１４５３９、５３３−５６１頁を参照されたい。
【０１２７】
本発明は、
【数１】
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によって決定されるような、結合メンバーあたりの結合部位の数への正規化後にある一定の分子量（ｇ／ｍｏｌ）で（例えば、細胞ベースのアッセイ（ＩＣ５０）において親和性（ＫＤ）または生物学的効力としてｍｏｌ／ｌの単位で測定される）一価の効力を有する、ＩＬ−１βに対するナイーブ（すなわち、親和性または効力増加について操作されていない）結合メンバーをさらに提供する。
【０１２８】
上に記載したように、ピコモル濃度範囲の効力値を有する一価抗体断片は特別であり、日常的に得られない。効力は、多くの場合、結合メンバーのサイズと相関する：ピコモル濃度範囲の高い効力を完全長免疫グロブリンから得ることができるが、非常に小さい抗体断片、例えばナノボディもしくは最小認識単位、または小さい非抗体スカフォールド、例えばアフィリンは、多くの場合、より少ない効力値、すなわちナノモル濃度範囲の効力値を示す。見たところ、本明細書に記載のｓｃＦｖによって提供される前記関数Ｋには最小値がある：結合メンバーが小さいほど、およびその一価の効力または親和性が高いほど、および１分子あたりの結合部位が多いほど、Ｋは小さくなる。例えば、本明細書に記載のｓｃＦｖについて、Ｋの下限は約５０ｎｇ／ｌであるのに対して、Ｋの上限は約１２，５００ｎｇ／ｌであり；それぞれの完全長免疫グロブリンについて、下限は約１５０ｎｇ／ｌであり、Ｋ上限は約３７，５００ｎｇ／ｌであり；本明細書に記載のｓｃＦｖより小さい分子量を有する他の結合メンバーについて、Ｋ値は、Ｋ＞５００，０００ｎｇ／ｌである。好ましい実施形態において、Ｋ値は、約５０ｎｇ／ｌ、１００ｎｇ／ｌ、２００ｎｇ／ｌ、５００ｎｇ／ｌ、７５０ｎｇ／ｌ、１，０００ｎｇ／ｌ、１，２５０ｎｇ／ｌ、１，５００ｎｇ／ｌ、１，７５０ｎｇ／ｌ、２，０００ｎｇ／ｌ、２，２５０ｎｇ／ｌ、または２，５００ｎｇ／ｌである。
核酸、ベクター、宿主細胞および生成方法
【０１２９】
本明細書に記載する抗体は、単一の核酸または２つまたはそれより多くの核酸、例えば各々が少なくとも１つの可変領域をコードする核酸、によってコードされる。抗体またはその部分の配列が分かれば、ポリペプチド配列をコードするｃＤＮＡを、当該技術分野において周知の方法によって、例えば、遺伝子合成によって生成することができる。これらのｃＤＮＡを、標準的なクローニングおよび変異誘発法によって、適するベクター、例えば、発現ベクターまたはクローニングベクターにクローニングすることができる。必要に応じて、可変軽鎖は、その抗体の可変重鎖とは異なる核酸によってコードされる。さらに、追加の配列、例えば、タグ（例えば、Ｈｉｓタグ）；Ｆａｂまたは完全長免疫グロブリンの生成のための定常ドメイン；リンカー；融合構築物または二重特異性分子を生成するための第二の結合特異性または別の機能性ポリペプチド、例えば酵素、のコード配列を、遺伝子構築物に含めてもよい。
【０１３０】
選ばれるクローニング戦略に基づき、遺伝子構築物は、１つまたはそれより多くの追加の残基をＮ末端に有する抗体を産生してもよいし、またはＣ末端に有する抗体を産生してもよい。例えば、開始コドンに由来するＮ末端メチオニン、または追加のアラニンが、翻訳後に切除されてしまわない限り、発現されるポリペプチド中に存在し得る。したがって、本明細書に開示する抗体は、開示する配列から成るのではなく、開示する配列を含むことを理解されたい。
【０１３１】
１つの実施形態において、本発明は、少なくとも３００の核酸塩基、さらに好ましくは少なくとも３５０、４００、４５０または５００の核酸塩基を含み、かつ、配列番号１７との少なくとも８５％、さらに好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する、核酸配列を提供する。非常に好ましい実施形態において、前記核酸配列は、配列番号１７である。
【０１３２】
加えて、または代替的に、本発明は、高ストリンジェンシー条件下で配列番号１７の核酸とハイブリダイズする、少なくとも３００の核酸塩基、さらに好ましくは少なくとも３５０、４００、４５０または５００の核酸塩基を含む核酸配列を提供する。
【０１３３】
標準的なクローニング、変異誘発および分子生物学技法の基本プロトコルは、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（ＧＲＥＥＮ，Ｍ．およびＳａｍｂｒｏｏｋ著、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第４版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、２０１２年、ＩＳＢＮ  １９３６１１３４２２）に記載されている。
【０１３４】
遺伝子構築物の発現のための適切な宿主細胞は、原核性または真核性であることができる。適する原核宿主細胞は、グラム陰性またはグラム陽性であり、およびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｅｒｗｉｎｉｎａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓまたはＢａｃｉｌｌｕｓファミリーの種を含む。大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、特に、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）株（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（商標）、カタログ番号Ｃ６０００−０３）およびＯｒｉｇａｍｉ（商標）２（ＤＥ３）株（Ｎｏｖａｇｅｎ、カタログ番号７１３４５）は、非常に好ましい。
【０１３５】
翻訳後修飾、例えばグリコシル化またはリン酸化が望まれる場合、真核宿主細胞が好ましい。例えば、真核微生物、例えば、一般に用いられているＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ株は、宿主細胞として役立ち得る。宿主細胞としては、植物細胞または動物細胞、特に、昆虫細胞または哺乳動物細胞も挙げることができる。適する哺乳動物細胞としては、これらに限定されないが、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、ヒト胎児腎細胞（ＨＥＫ）、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）またはＮＳ０骨髄腫細胞が挙げられる。
【０１３６】
抗体を、適する宿主細胞における発現によって生成することができる。例えば、上記発現ベクターを標準的技法、例えば、エレクトロポレーションまたは化学的形質転換によって宿主細胞に導入する。その後、形質転換細胞を、組換えタンパク質発現に妥当な条件下で、典型的には、プロモーターの誘導、形質転換体の選択または対象のコード配列の増幅のために必要に応じて改変された適切な栄養培地において、培養する。抗体を培養物から回収し、必要に応じて、当該技術分野における標準的技法を用いて精製する。培地および培養条件、例えば温度または酸素供給量、を最適化することによって、組換えタンパク質の収率を改善し得る。原核生物の場合、抗体を周縁質において、細胞内に封入体として生成することができ、または培地に分泌することができる。回収し次第、当該技術分野において周知の方法、例えば、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、疎水性相互作用、混合モードクロマトグラフィーおよび／またはアフィニティクロマトグラフィーを用いて、タンパク質を精製することができる。
【０１３７】
１つの実施形態では、抗体を無細胞系において生成する。これは、典型的に、本明細書に記載するタンパク質をコードする核酸産物テンプレート、例えば、プラスミドＤＮＡまたはＰＣＲ産物テンプレートのインビトロ転写、それに続くインビトロ翻訳を含む。例えば、成長中の細胞からの粗溶解産物を使用し、それによって必要な酵素ならびに細胞のタンパク質合成機構も得る。必要な構築ブロック（ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ｂｌｏｃｋ）、例えば、アミノ酸または核酸塩基、ならびにエネルギー送達分子およびその他を外因的に供給することができる。無細胞発現系は、例えば、溶解ウサギ網状赤血球（例えば、Ｒａｂｂｉｔ  Ｒｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ  Ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｌ４５４０）、ＨｅＬａ細胞（例えば、１−Ｓｔｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号８８８８１）、昆虫細胞（例えば、ＥａｓｙＸｐｒｅｓｓ  Ｉｎｓｅｃｔ  Ｋｉｔ  ＩＩ、Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号３２５６１）、コムギ胚芽（例えば、Ｗｈｅａｔ
Ｇｅｒｍ  Ｅｘｔｒａｃｔ、Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｌ４３８０）、または大腸菌細胞（例えば、ＰＵＲＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ、ＮＥＢ、カタログ番号Ｅ６８００Ｓ）に基づくことができる。また、ジスルフィド結合生成改善のために最適化された無細胞抗体発現系を生成に使用することができる。市販のキットとしては、昆虫細胞溶解産物（例えば、ＥａｓｙＸｐｒｅｓｓ  Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ  Ｉｎｓｅｃｔ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号３２５８２）または大腸菌細胞溶解産物（例えば、ＥａｓｙＸｐｒｅｓｓ  Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ  Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号３２５７２）が挙げられる。無細胞タンパク質合成には、例えば、迅速である、高生成収率を達成する、反応条件の容易な改変を可能にする、副産物を低度にしか形成しないまたはさらには全く形成しないという利点がある。無細胞タンパク質合成は、純生物学的または化学的生成系では行うことができない生物学的および／または化学的工程を含み得る。例えば、非天然または化学修飾アミノ酸をタンパク質の所望の位置に組み込むことができる。ｓｃＦｖ−毒素融合タンパク質は、無細胞系での生成に成功している（ＮＩＣＨＯＬＬＳ，Ｐ．Ｊ．ら著、「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（ｓＦｖ）−ｔｏｘｉｎ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔ  ｒｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ  ｌｙｓａｔｅ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９３年、第２６８巻、５３０２−５３０８頁）。したがって、１つの実施形態では、本明細書に記載する抗体、上記結合メンバーまたは上記Ｔボディを生成する方法を提供し、この方法は、（ａ）無細胞系を提供する工程、（ｂ）本明細書に記載する抗体、上記結合メンバーまたは上記Ｔボディをコードする核酸産物テンプレートを提供する工程、（ｃ）前記核酸産物テンプレートの転写および翻訳を可能にする工程、（ｄ）回収する工程、および必要に応じて（ｅ）前記抗体、前記結合メンバーまたは前記Ｔボディをそれぞれ精製する工程を含む。
【０１３８】
加えて、または代替的に、本明細書に記載する抗体を生成する方法は、少なくとも１つの化学合成工程を含む。例えば、前記方法は、完全に化学的であってもよい。別の実施形態において、上に記載した細胞ベースまたは無細胞生成系は、そのような少なくとも１つの化学合成工程を含む。
【０１３９】
好ましい実施形態では、本明細書に記載する抗体を、大腸菌における細胞内発現のための発現ベクターを使用して細胞ベースの系で生成する。発現すると、ポリペプチドが細胞内で封入体として産生され、それらの封入体をさらなる細胞粒子から分離し、その後、グアニジン塩酸塩（ＧｎｄＨＣｌ）などの変性剤で可溶化し、当業者には周知の再生手順によってリフォールディングさせる。
【０１４０】
上に記載した核酸、ベクター、宿主細胞および生成方法が、本明細書に記載する結合メンバーにも（それらがタンパク質である限り）および／またはＴボディにも適用されることを理解されたい。
【０１４１】
化学的および／または生物学的改変
１つの態様では、本発明の抗体を化学的におよび／もしくは生物学的に改変する。そのような改変は、グリコシル化、ＰＥＧ化、ＨＥＳ化、アルブミン融合技術、ＰＡＳ化、色素および／または放射性同位元素での標識付け、酵素および／もしくは毒素とのコンジュゲーション、リン酸化、ヒドロキシル化ならびに／または硫酸化を含み得るが、これらに限定されない。同様に、上に記載した任意の結合メンバー、核酸配列、ベクターおよび／または宿主細胞をしかるべく改変することができる。
【０１４２】
タンパク質の薬力学もしくは水溶性を最適化するために、またはその副作用を低下させるために、化学的および／または生物学的改変を行ってもよい。例えば、ＰＥＧ化、ＰＡＳ化および／またはＨＥＳ化を利用して腎クリアランスを遅速させ、それによって抗体の血漿半減期の時間を増加させてもよい。加えて、または代替的に、改変により、タンパク質に異なる官能基が、例えば、より効率的に癌細胞と戦うための毒素、または診断目的のための検出分子が付加されることもある。
【０１４３】
グリコシル化とは、タンパク質に炭水化物を連結させるプロセスをいう。生物システムにおいて、このプロセスは、翻訳と同時および／または翻訳後の修飾の一形態として、細胞内で酵素的に行われる。タンパク質、ここでは抗体、を化学的にグリコシル化することもできる。典型的に、グリコシル化は、（ｉ）アスパラギンもしくはアルギニン側鎖の窒素へのＮ結合型であるか；（ｉｉ）セリン、トレオニン、チロシン、ヒドロキシリジンもしくはヒドロキシプロリン側鎖のヒドロキシ酸素へのＯ結合型であるか；（ｉｉｉ）キシロース、フコース、マンノースおよびＮ−アセチルグルコサミンのホスホセリンへの連結を含むか；または（ｉｖ）特異的認識配列内で見いだされるトリプトファン残基にマンノース糖が付加されるＣ−マンノシル化の形態であるが、これらに限定されない。グリコシル化パターンは、例えば、適切な細胞系統、培養培地、タンパク質工学製造モードおよびプロセス戦略を選ぶことによって制御することができる（ＨＯＳＳＬＥＲ，Ｐ．著、「Ｏｐｔｉｍａｌ  ａｎｄ  ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ」、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２００９年、第１９巻、第９号、９３６−９４９頁）。
【０１４４】
グリコシル化パターンを制御または改変するためのタンパク質工学は、１つまたはそれより多くのグリコシル化部位の欠失および／または付加を伴うことがある。抗体のアミノ酸配列に対応する酵素認識配列を導入することにより、または上に列挙したアミノ酸残基のうちの１つもしくはそれより多くを付加または置換することにより、グリコシル化部位の作製を便利に達成することができる。
【０１４５】
抗体をＰＥＧ化することが望ましいこともある。ＰＥＧ化は、タンパク質の薬力学的特性および薬物動態特性を改変することがある。適切な分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）をタンパク質骨格に共有結合で連結させる（例えば、ＰＡＳＵＴ，Ｇ．およびＶｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．著、「Ｓｔａｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｒｔ  ｉｎ  ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ：ｔｈｅ  ｇｒｅａｔ  ｖｅｒｓａｔｉｌｉｔｙ  ａｃｈｉｅｖｅｄ  ａｆｔｅｒ
ｆｏｒｔｙ  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ｒｅｓｅａｒｃｈ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２０１２年、第１６１巻、第２号、４６１−４７２頁を参照されたい）。ＰＥＧ化は、ＰＥＧ化されたタンパク質を免疫系から守ることにより免疫原性をさらに低減することがあり、ならびに／またはその薬物動態を、例えば、抗体のインビボ安定を増加させること、それをタンパク質分解性分解から保護すること、その半減期の時間を延長すること、およびその生体内分布を改変することにより、改変することがある。
【０１４６】
同様の効果がＰＥＧミメティックによって、例えば、抗体をＨＥＳ化またはＰＡＳ化することによって達成されることもある。ＨＥＳ化は、ヒドロキシエチルデンプン（「ＨＥＳ」）誘導体を利用するが、ＰＡＳ化中に抗体は、アミノ酸プロリン、アラニンおよびセリンで構成されている立体配座無秩序化ポリペプチド配列に結合されることとなる。前記ＰＥＧミメティックおよび関連化合物は、例えば、ＢＩＮＤＥＲ，Ｕ．およびＳｋｅｒｒａ，Ａ．著、「Ｈａｌｆ−Ｌｉｆｅ  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｖｉａ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｆｕｓｉｏｎ  ｔｏ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＰＥＧ  Ｍｉｍｅｔｉｃｓ，ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｔｏ  Ｍｏｄｕｌａｔｅ  Ｔｈｅｉｒ  Ｐｌａｓｍａ  Ｈａｌｆ−Ｌｉｖｅｓ」、ＫＯＮＴＥＲＭＡＮＮ，Ｒ．編集、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ：Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２０１２年、ＩＳＢＮ：９７８３５２７３２８４９９、６３−８１頁に記載されている。
【０１４７】
前記抗体は、エピトープおよび特にサルベージ受容体結合エピトープを含み得る。そのようなサルベージ受容体結合エピトープは、典型的に、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指し、前記分子のインビボ半減期を増加させる効果を有する。
【０１４８】
加えて、または代替的に、前記抗体を、標的結合後の補助機能の原因とされる第二の部分で標識するか、または前記第二の部分にコンジュゲーションする。前記第二の部分は、例えば、追加の免疫エフェクター機能を有することがあり、薬物標的化に有効であることがあり、または検出に有用であることがある。前記第二の部分は、例えば、当該技術分野において公知の方法を用いて前記抗体に化学的に結合または遺伝子的に融合させることができる。
【０１４９】
第二の部分としての機能を果たし得る分子としては、放射性同位元素（例えば、３５Ｓ、３２Ｐ、１４Ｃ、１８Ｆ、１２５Ｉ）とも呼ばれる、放射性核種；アポ酵素；酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアンジオゲニン）；補因子；ペプチド（例えば、ＨＩＳタグ）；タンパク質（レクチンを含む）；炭水化物（マンノース−６−リン酸タグを含む）；フルオロフォア（フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）；フィコエリトリン；緑色／青色／赤色および他の蛍光タンパク質；アロフィコシアニン（ＡＰＣ）を含む）；発色団；ビタミン（ビオチンを含む）；キレート剤；代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート）；リポソーム；タキソール、グラミシジンＤもしくはコルヒチンなどの細胞傷害性薬物を含む毒素；または放射性毒素が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５０】
標識抗体は、インビトロおよびインビボでの検出または診断の目的のために特に有用である。例えば、適する放射性同位元素、酵素、フルオロフォアまたは発色団で標識された抗体を、それぞれ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）またはフローサイトメトリーベースの単一細胞分析（例えば、ＦＡＣＳ分析）によって検出することができる。同様に、本明細書に開示する核酸および／またはベクターを、例えば、それらの標識断片をプローブとしてハイブリダイゼーションアッセイにおいて使用して、検出または診断の目的のために使用することができる。標識付けプロトコルは、例えば、ＪＯＨＮＳＯＮ，Ｉ．およびＳｐｅｎｃｅ，Ｍ．、Ｔ．Ｚ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ
Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、２０１０年、ＩＳＢＮ：０９８２９２７９１６において見い出され得る。
【０１５１】
組成物
本発明の抗体、任意の結合メンバー、本明細書に開示する核酸配列またはベクターを、適するキャリア、賦形剤または希釈剤をさらに含む組成物において提供することができる。本明細書に記載する抗体を含む組成物は、非常に好ましい。
【０１５２】
そのような組成物は、例えば、診断用組成物、化粧品組成物または医薬組成物であることができる。治療または化粧品目的では、前記組成物は、医薬キャリア、賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物であり、すなわち、用いられる投薬量および濃度で毒性でない。
【０１５３】
適する「キャリア」、「賦形剤」または「希釈剤」としては、（ｉ）緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩もしくは他の有機酸；（ｉｉ）抗酸化物質、例えば、アスコルビン酸およびトコフェロール；（ｉｉｉ）保存薬、例えば、３−ペンタノール、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、アルキルパラベン、カテコールもしくはシクロヘキサノール；（ｉｖ）アミノ酸、例えば、ヒスチジン、アルギニンなど；（ｖ）ペプチド、好ましくは、１０残基以下のペプチド、例えばポリリジン；（ｖｉ）タンパク質、例えば、ウシもしくはヒト血清アルブミン；（ｖｉｉ）親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；（ｖｉｉｉ）単糖類、二糖類、多糖類および／もしくは他の炭水化物（グルコース、マンノース、スクロース、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、アミノデキストランもしくはポリアミドアミンを含む）；（ｉｘ）キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；（ｘ）塩形成性イオン、例えば、ナトリウム；（ｘｉ）金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／または（ｘｉｉ）イオン性および非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１５４】
前記例示的化合物の多くは、異なる機能を有し、例えば、キャリアとしておよび希釈剤として作用することがある。前記組成物が、各キャリア、希釈剤または賦形剤のうちの１つより多くを含み得ることも理解されたい。
前記抗体、結合メンバー、核酸配列またはベクターを、固体支持材、例えばビーズおよび微粒子上に備えさせてもよい。典型的には、前記分子を、そのようなキャリアに、共有結合により（必要に応じて、リンカーを伴う）、非共有結合的に、または混合により結合させる。前記ビーズおよび微粒子は、例えば、デンプン、セルロース、ポリアクリレート、ポリラクテートポリグリコレート（polylacetate  polyglycolate）、ポリ（ラクチド−
ｃｏ−グリコリド）、ラテックスまたはデキストランを含み得る。
【０１５５】
治療的応用
本明細書に記載する分子、特に、抗体、結合メンバー、核酸またはベクターは、医薬として有用である。典型的に、かかる医薬は、治療有効量の本明細書に提供する分子を含む。したがって、前記分子を、ＩＬ−１β関連障害の処置に有用な医薬の生成のために使用することができる。
【０１５６】
１つの態様では、ＩＬ−１β関連障害を処置する方法を提供し、この方法は、薬学的に有効な量の本明細書に記載する分子、特に抗体を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む。１つの実施形態では、そのような薬学的に有効な量の抗体を含む上記医薬組成物（すなわち、医薬）を前記被験体に投与する。
【０１５７】
本明細書において用いる場合の用語「処置する」または「処置」は、ＩＬ−１β関連障害を予防する、治癒する、前記障害の発症および／または進行を遅らせる、前記障害の重症度を低下させる、前記障害の１つまたはそれより多くの症状を安定させる、調節する（modulate）、治癒するまたは改善するための、それを必要とする被験体への薬学的に有効な量の本発明の抗体、結合メンバー、核酸、ベクターまたは宿主細胞の投与を指す。典型的に、前記抗体、結合メンバー、核酸、ベクターまたは宿主細胞を、本明細書において前に記載したものを含む医薬組成物において提供する。
【０１５８】
「治療有効量」は、適用される投薬レジメンで、所望の治療効果をもたらす量、すなわち、上で定義の処置目標への到達をもたらす量を指す。投薬量は、患者および臨床的因子（例えば、年齢、体重、性別、患者の病歴、障害の重症度および／または処置に対する応答）、処置する障害の性質、投与する特定の組成物、投与経路ならびに他の因子を含む、様々な因子に依存する。
【０１５９】
そのような処置を必要とする被験体は、ヒトまたは非ヒト動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ウマ、ウシ、ニワトリ、モルモットもしくはブタであることができる。典型的に、前記被験体は、ＩＬ−１β関連障害と診断されるか、またはそのような障害を獲得し得る。
【０１６０】
ＩＬ−１βのアンタゴニストが治療効果を示したＩＬ−１β関連障害の例としては、増殖性糖尿病性網膜症、通風性関節炎、シュニッツラー症候群、全身性若年性特発性関節炎、関節リウマチ、急性通風性関節炎、慢性通風性関節炎、蕁麻疹、脈管炎、１型糖尿病、２型糖尿病、強直性脊椎炎、再発性多巣性骨髄炎、再発性多発性軟骨炎、クリオピリン（ｃｙｒｏｐｙｒｉｎ）関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、ベーチェット病、家族性地中海熱、慢性閉塞性肺疾患、リウマチ性多発性筋痛症（ｐｏｌｙｍｙａｌｇｉａ  ｒｈｅｕｍａｔｉｃ）、ＮＡＬＰ３−変異、壊疽性膿皮症、慢性特発性蕁麻疹（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｕｒｔｉｃａｒｉａｌ）、変形性関節症、滲出型加齢性黄斑変性、ドライアイ症候群、膿疱性乾癬、滑膜炎−ざ瘡−膿疱症−骨化過剰症−骨炎症候群、マクロファージ活性化症候群、周期性発熱・腺炎・咽頭炎・アフタ性潰瘍症候群、成人発症スティル病、メバロン酸キナーゼ欠損症、アテローム性動脈硬化症、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）、尋常性ざ瘡および／または反対型ざ瘡が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６１】
用語「ＣＡＰＳ」またはクリオピリン関連周期性症候群は、家族性寒冷自己炎症性症候群（ＦＣＡＳ）、マックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）および新生児期発症多臓器性炎症性疾患（慢性乳児神経皮膚関節（ＣＩＮＣＡ）症候群としても公知）の各々を含むと解されたい。
【０１６２】
前記医薬組成物を様々な投与経路によって適用してよい。投与は、例えば、限定されないが、非経口的に、例えば、筋肉内に、皮下に、ボーラスとしてもしくは持続注入により静脈内に、関節内に、滑液包内に、脳内に、脳脊髄内に、髄腔内に、硬膜外に、または腹腔内に；経口的に；直腸に；局所に；尿生殖器に；例えば、皮膚もしくは眼に、表面に（topically）；硝子体内に；静脈内に；眼内に；耳に；鼻腔内に；吸入により；皮膚的に
、例えば、皮内に、皮下にもしくは経皮的に；舌下に；例えば、口腔に（buccally）行うことができる。表面、直腸、局所、鼻腔内、静脈内および／または皮内の投与経路が好ましい。
【０１６３】
本発明の抗体、結合メンバー、核酸配列、ベクターまたは宿主細胞を、１つまたはそれより多くのさらなる治療有効化合物と併用することができる。前記化合物は、ＩＬ−１受容体を介するシグナル伝達を中断させることができることもあり、または代替的に、１つもしくはそれより多くの異なる標的、例えば、炎症応答の他の媒介因子などを阻害することもある。そのような化合物（単数または複数）を同時にまたは逐次的に投与することができる。
【０１６４】
治療的応用のために、前記抗体を放射性標識してもよく、または毒素に結合してもよく、または上記の別のエフェクター機能に結合してもよい。
【０１６５】
診断的応用および／または検出目的
本発明の抗体をインビボおよび／またはインビトロでの検出または診断の目的のために使用してもよい。例えば、特定の細胞または組織における発現を検出するために抗体を関与させる広範なイムノアッセイが当業者には公知である。同様に、前に記載した任意の結合メンバー、核酸配列、ベクターおよび／または宿主細胞を、このセクションで詳述するようにしかるべく使用することができる。
【０１６６】
そのような応用のために、本明細書に開示する抗体、結合メンバー、核酸配列、ベクターまたは宿主細胞を標識してもよいし、または標識しなくてもよい。例えば、未標識抗体を使用し、本明細書に記載する抗体上のエピトープを認識する二次抗体によって検出してもよい。
【０１６７】
別の実施形態では、前記抗体、結合メンバー、核酸配列、ベクターおよび／または宿主細胞を、ディテクター物質（単数または複数）によって認識され得る１つまたはそれより多くの物質とコンジュゲーションさせる。例えば、抗体を、ストレプトアビジンによって検出することができるビオチンとコンジュゲーションさせる。同様に、本明細書に開示する核酸および／またはベクターを、例えば、それらの標識された断片をプローブとしてハイブリダイゼーションアッセイにおいて使用することにより、検出または診断の目的のために使用することができる。
【０１６８】
一定の実施形態において、本明細書に提供するいずれの分子も、特に抗体は、試料（好ましくは、生体試料）中のＩＬ−１β（好ましくは、完全長ＩＬ−１β、その断片および／またはその前駆体を含む）の存在の検出に有用である。用語「検出すること」は、定量的および／または定性的な検出を包含する。ある一定の実施形態において、生体試料は、ヒト患者からの細胞または組織を含む。生体試料の非限定的な例としては、血液、尿、脳脊髄液、生検材料、リンパおよび／または非血液組織が挙げられる。
【０１６９】
一定の実施形態において、前記方法は、生体試料と本明細書に記載の抗ＩＬ−１β抗体とを、ＩＬ−１β（存在する場合）への前記抗体の結合を可能にする条件下で接触させるステップ、および前記抗体とＩＬ−１βとの複合体が形成されたかどうかを検出するステップを含む。そのような方法は、インビトロ法であってもよいし、またはインビボ法であってもよい。１つの実施形態では、抗ＩＬ−１β抗体を使用して、本明細書に記載する抗体での治療に適格な被験体を選択し、例えば、その場合、ＩＬ−１βが患者選択のためのバイオマーカーである。同様に、そのような方法は、抗体の代わりに、上記結合メンバーまたは本明細書に記載するＴボディの使用を含み得る。
【０１７０】
別の態様では、例えば、肌の審美的外観を向上させるために、前記抗体を化粧品への応用に使用する。
【０１７１】
さらなる態様では、前記抗体、試薬のパッケージ化された組み合わせとともに検出または診断アッセイを行うための説明書を含むキットを提供する。典型的に、前記試薬は、通常は凍結乾燥された、所定の量の乾燥粉末であって、溶解後に適切な濃度を有する試薬溶液を提供する賦形剤を含む粉末の状態で提供される。他の添加剤、例えば、安定剤および／または緩衝剤も含み得る。前記抗体を酵素で標識する場合、前記キットは、典型的に、相応の基質および補因子を含む。同様に、前に記載した任意の結合メンバー、核酸配列、ベクターおよび／または宿主細胞を、このセクションで詳述するようにしかるべく使用することができる。
【０１７２】
配列表
本明細書中に開示される配列は以下のとおりである：
【０１７３】
配列番号1  -  VH  CDR1  
FSLSSAAMA
【０１７４】
配列番号2  -  VH  CDR2  
IIYDSASTYYASWAKG
【０１７５】
配列番号3  −  VH  CDR3
ERAIFSGDFVL
【０１７６】
配列番号4  −  VL  CDR1
QASQSIDNWLS
【０１７７】
配列番号5  −  VL  CDR2
RASTLAS
【０１７８】
配列番号6  −  VL  CDR3
QNTGGGVSIA
【０１７９】
配列番号7  −  VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０１８０】
配列番号8  −  VL
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０１８１】
配列番号9  −  リンカー
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
【０１８２】
配列番号10  −  DLX2323
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０１８３】
配列番号11  −  VH  CDR1のCDRバリアント
FSLSXXAMA
【０１８４】
配列番号12  −  VH  CDR2のCDRバリアント
IIXXSASTXYASWAKG
【０１８５】
配列番号13  −  VH  CDR3のCDRバリアント
EXXXXXXXXXX
【０１８６】
配列番号14  −  VL  CDR1のCDRバリアント
QASQSIXXXLS
【０１８７】
配列番号15  −  VL  CDR2のCDRバリアント
XASXLAS
【０１８８】
配列番号16  −  VL  CDR3のCDRバリアント
QNXGXXXXIA
【０１８９】
配列番号17  −DLX2323のDNA配列
GAAATTGTTATGACCCAGAGCCCGAGCACCCTGAGCGCAAGCGTTGGTGATCGTGTGATTATTACCTGTCAGGCAAGCCAGAGCATTGATAATTGGCTGAGCTGGTATCAGCAGAAACCGGGTAAAGCACCGAAACTGCTGATTTATCGTGCAAGCACCCTGGCAAGCGGTGTTCCGAGCCGTTTTAGCGGTAGCGGTAGTGGTGCAGAATTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCGGATGATTTTGCAACCTATTATTGTCAGAATACCGGTGGTGGTGTTAGCATTGCATTTGGTCAGGGCACCAAACTGACCGTTCTGGGTGGTGGCGGTGGATCCGGTGGGGGTGGTAGCGGAGGTGGTGGTTCAGGCGGTGGTGGCAGCGAAGTTCAGCTGGTTGAAAGTGGTGGTGGTCTGGTTCAGCCTGGTGGTAGCCTGCGTCTGAGCTGTACCGCAAGCGGTTTTAGCCTGAGCAGCGCAGCAATGGCATGGGTTCGTCAGGCACCTGGTAAAGGTCTGGAATGGGTTGGTATTATCTATGATAGCGCAAGCACCTATTATGCAAGCTGGGCAAAAGGTCGTTTTACCATTAGCCGTGATACCAGTAAAAATACCGTTTACCTGCAGATGAATAGTCTGCGTGCAGAGGATACCGCAGTGTATTATTGTGCACGTGAACGTGCAATTTTCAGCGGTGATTTTGTTCTGTGGGGTCAGGGAACCCTGGTTACCGTTAGCAGC
【０１９０】
配列番号18  −  FW1.4のFR-L1
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITC
【０１９１】
配列番号19  −  FW1.4のFR-L2
WYQQKPGKAPKLLIY  
【０１９２】
配列番号20  −  FW1.4のFR-L3
GVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYC  
【０１９３】
配列番号21  −  FW1.4のFR-L4
FGQGTKLTVLG
【０１９４】
配列番号22  −  rFW1.4のFR-H1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASG
【０１９５】
配列番号23  −  rFW1.4のFR-H2
WVRQAPGKGLEWVG
【０１９６】
配列番号24  −  rFW1.4のFR-H3
RFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
【０１９７】
配列番号25  −  rFW1.4のFR-H4
WGQGTLVTVSS
【０１９８】
配列番号26  −  rFW1.4(V2)のFR-H1
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSG
【０１９９】
配列番号27  −  rFW1.4(V2)のFR-H2
WVRQAPGKGLEWVG
【０２００】
配列番号28  −  rFW1.4(V2)のFR-H3
RFTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
【０２０１】
配列番号29  −  rFW1.4(V2)のFR-H4
WGQGTLVTVSS
【０２０２】
配列番号30  -  rFW1.4-SSTのFR-H1
EVQLVESGGGSVQPGGSLRLSCTASG
【０２０３】
配列番号31  -  rFW1.4-SSTのFR-H2
WVRQAPGKGLEWVG
【０２０４】
配列番号32  -  rFW1.4-SSTのFR-H3
RFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTASYYCAR
【０２０５】
配列番号33  -  rFW1.4-SSTのFR-H4
WGQGTTVTVSS
【０２０６】
配列番号34  -  CDR-L1_D32X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIXNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２０７】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２０８】
配列番号35  -  CDR-L1_N33X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDXWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２０９】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２１０】
配列番号36  -  CDR-L1_W40X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNXLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２１１】
好ましくは、Ｘは、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２１２】
配列番号37  -  CDR-L2_R58X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYXASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２１３】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２１４】
配列番号38  -  CDR-L2_T69X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASXLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２１５】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２１６】
配列番号39  -  CDR-L3_T109X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNXGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２１７】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、イソロイシン（Ｉ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）およびバリン（Ｖ）から成る群より選択される。
【０２１８】
配列番号40  -  CDR-L3_G111X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGXGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２１９】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）およびセリン  （Ｓ）から成る群より選択される。
【０２２０】
配列番号41  -  CDR-L3_G112X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGXVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２２１】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２２２】
配列番号42  -  CDR-L3_V135X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGXSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２２３】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２２４】
配列番号43  -  CDR-L3_S136X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVXIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２２５】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２２６】
配列番号44  -  CDR-H1_S33X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSXAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２２７】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２２８】
配列番号45  -  CDR-H1_A39X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSXAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２２９】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２３０】
配列番号46  -  CDR-H2_Y59X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIXDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２３１】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２３２】
配列番号47  -  CDR-H2_D60X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYXSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２３３】
好ましくは、Ｘは、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）およびプロリン（Ｐ）から成る群より選択される。
【０２３４】
配列番号48  -  CDR-H2_Y69X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTXYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２３５】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、フェニルアラニン（Ｆ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、プロリン（Ｐ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２３６】
配列番号49  -  CDR-H3_R110X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAREXAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２３７】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２３８】
配列番号50  -  CDR-H3_A111X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERXIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２３９】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、  フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２４０】
配列番号51  -  CDR-H3_I112X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAXFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２４１】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、フェニルアラニン（Ｆ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２４２】
配列番号52  -  CDR-H3_F113X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIXSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２４３】
好ましくは、Ｘは、フェニルアラニン（Ｆ）およびイソロイシン  （Ｉ）から成る群より選択される。
【０２４４】
配列番号53  -  CDR-H3_S114X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFXGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２４５】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）およびバリン（Ｖ）から成る群より選択される。
【０２４６】
配列番号54  -  CDR-H3_G115X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSXDFVLWGQGTLVTVSS
【０２４７】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）およびアスパラギン（Ｎ）から成る群より選択される。
【０２４８】
配列番号55  -  CDR-H3_D135X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGXFVLWGQGTLVTVSS
【０２４９】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）およびトレオニン（Ｔ）から成る群より選択される。
【０２５０】
配列番号56  -  CDR-H3_F136X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDXVLWGQGTLVTVSS
【０２５１】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２５２】
配列番号57  -  CDR-H3_V137X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFXLWGQGTLVTVSS
【０２５３】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２５４】
配列番号58  -  CDR-H3_L138X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVXWGQGTLVTVSS
【０２５５】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２５６】
配列番号59  -  DLX2464
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERQIFSGDMAGWGQGTLVTVSS
【０２５７】
配列番号60  -  DLX2465
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERNIFSGDMDLWGQGTLVTVSS
【０２５８】
配列番号61  -  DLX2466
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIGKYLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSDAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERNIFSGDMAGWGQGTLVTVSS
【０２５９】
配列番号62  -  DLX2467
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIHNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASNLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGSSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSRAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERMIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２６０】
配列番号63  -  DLX2468
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIGNYLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGGTSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSSAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERNIFSGDMVLWGQGTLVTVSS
【０２６１】
配列番号64  -  DLX2475
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDKWLSWYQQKPGKAPKLLIYQASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVHIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSYAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFKLWGQGTLVTVSS
【０２６２】
配列番号65  -  DLX2476
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSISSWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERDIFSGDFVGWGQGTLVTVSS
【０２６３】
配列番号66  -  DLX2480
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSDAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERQIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２６４】
配列番号67  -  DLX2543
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２６５】
配列番号68  -  DLX2529
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCRASQSIGNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASNLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPEDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２６６】
配列番号69  -  DLX2547
ADIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２６７】
配列番号70  -  DLX2528
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYQASNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGATTIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０２６８】
配列番号71  -  DLX2585
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFDYWGQGTLVTVSS
【０２６９】
配列番号72  -  DLX2545
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWIGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARERNIFSGDMVLWGQGTTVTVSS
【０２７０】
配列番号73  -  DLX2531
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSNSAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTATYYCARERAIFSGDFALWGQGTLVTVSS
【０２７１】
配列番号74  -  DLX2586
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARERQIFSGDMDGWGQGTLVTVSS
【０２７２】
配列番号75  -  DLX2530
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSDAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTFYASWAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCARERNIFSGDMALWGQGTTVTVSS
【０２７３】
配列番号76  -  DLX2548
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARERQIFSGDMDGWGQGTTVTVSS
【０２７４】
配列番号77  -  DLX2676
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYQASNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGATTIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSDAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTFYASWAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCARERNIFSGDMALWGQGTTVTVSS
【０２７５】
配列番号78  -  DLX2677
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYQASNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGATTIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSNSAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTATYYCARERAIFSGDFALWGQGTLVTVSS
【０２７６】
配列番号79  -  DLX2678
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYQASNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGATTIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARERQIFSGDMDGWGQGTTVTVSS
【０２７７】
配列番号80  -  DLX2679
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYQASNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGATTIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFDYWGQGTLVTVSS
【０２７８】
配列番号81  -  DLX2680
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCRASQSIGNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASNLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPEDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSDAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTFYASWAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCARERNIFSGDMALWGQGTTVTVSS
【０２７９】
配列番号82  -  DLX2681
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCRASQSIGNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASNLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPEDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSNSAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTATYYCARERAIFSGDFALWGQGTLVTVSS
【０２８０】
配列番号83  -  DLX2682
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCRASQSIGNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASNLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPEDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARERQIFSGDMDGWGQGTTVTVSS
【０２８１】
配列番号84  -  DLX2683
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCRASQSIGNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASNLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPEDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFDYWGQGTLVTVSS
【０２８２】
配列番号85  -  DLX2684
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSDAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTFYASWAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCARERNIFSGDMALWGQGTTVTVSS
【０２８３】
配列番号86  -  DLX2685
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSNSAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTATYYCARERAIFSGDFALWGQGTLVTVSS
【０２８４】
配列番号87  -  DLX2686
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARERQIFSGDMDGWGQGTTVTVSS
【０２８５】
配列番号88  -  DLX2687
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGGVSIAFGQGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFDYWGQGTLVTVSS
【０２８６】
配列番号89  -  DLX2689
ADIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNAGGGINIAFGQGTKVEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSNSAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTATYYCARERAIFSGDFALWGQGTLVTVSS
【０２８７】
配列番号90  -  DLX2690
ADIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNAGGGINIAFGQGTKVEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARERQIFSGDMDGWGQGTTVTVSS
【０２８８】
配列番号91  -  DLX2691
ADIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNAGGGINIAFGQGTKVEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFDYWGQGTLVTVSS
【０２８９】
配列番号92  -  DLX2692
ADIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSDAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTFYASWAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCARERNIFSGDMALWGQGTTVTVSS
【０２９０】
配列番号93  -  DLX2693
ADIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSNSAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTATYYCARERAIFSGDFALWGQGTLVTVSS
【０２９１】
配列番号94  -  DLX2694
ADIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARERQIFSGDMDGWGQGTTVTVSS
【０２９２】
配列番号95  -  DLX2695
ADIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFDYWGQGTLVTVSS
【０２９３】
配列番号96  -  VL  CDR-L1_D32X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIXNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０２９４】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２９５】
配列番号97  -  VL  CDR-L1_N33X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDXWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０２９６】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２９７】
配列番号98  -  VL  CDR-L1_W40X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNXLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０２９８】
好ましくは、Ｘは、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０２９９】
配列番号99  -  VL  CDR-L2_R58X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYXASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３００】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３０１】
配列番号100  -  VL  CDR-L2_T69X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASXLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３０２】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３０３】
配列番号101  -  VL  CDR-L3_T109X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNXGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３０４】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、イソロイシン（Ｉ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）およびバリン（Ｖ）から成る群より選択される。
【０３０５】
配列番号102  -  VL  CDR-L3_G111X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGXGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３０６】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）,グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）およびセリン（
Ｓ）から成る群より選択される。
【０３０７】
配列番号103  -  VL  CDR-L3_G112X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGXVSIAFGQGTKLTVLG
【０３０８】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３０９】
配列番号104  -  VL  CDR-L3_V135X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGXSIAFGQGTKLTVLG
【０３１０】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３１１】
配列番号105  -  VL  CDR-L3_S136X
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVXIAFGQGTKLTVLG
【０３１２】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３１３】
配列番号106  -  VH  CDR-H1_S33X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSXAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３１４】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３１５】
配列番号107  -  VH  CDR-H1_A39X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSXAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３１６】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、  グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３１７】
配列番号108  -  VH  CDR-H2_Y59X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIXDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３１８】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３１９】
配列番号109  -  VH  CDR-H2_D60X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYXSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３２０】
好ましくは、Ｘは、アスパラギン酸（Ｄ）、アスパラギン（Ｎ）およびプロリン（Ｐ）から成る群より選択される。
【０３２１】
配列番号110  -  VH  CDR-H2_Y69X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTXYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３２２】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、フェニルアラニン（Ｆ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、プロリン（Ｐ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３２３】
配列番号111  -  VH  CDR-H3_R110X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAREXAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３２４】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３２５】
配列番号112  -  VH  CDR-H3_A111X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERXIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３２６】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３２７】
配列番号113  -  VH  CDR-H3_I112X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAXFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３２８】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、フェニルアラニン（Ｆ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３２９】
配列番号114  -  VH  CDR-H3_F113X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIXSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３３０】
好ましくは、Ｘは、フェニルアラニン（Ｆ）およびイソロイシン（Ｉ）から成る群より選択される。
【０３３１】
配列番号115  -  VH  CDR-H3_S114X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFXGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３３２】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）およびバリン（Ｖ）から成る群より選択される。
【０３３３】
配列番号116  -  VH  CDR-H3_G115X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSXDFVLWGQGTLVTVSS
【０３３４】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、メチオニン（Ｍ）およびアスパラギン（Ｎ）から成る群より選択される。
【０３３５】
配列番号117  -  VH  CDR-H3_D135X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGXFVLWGQGTLVTVSS
【０３３６】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）およびトレオニン（Ｔ）から成る群より選択される。
【０３３７】
配列番号118  -  VH  CDR-H3_F136X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDXVLWGQGTLVTVSS
【０３３８】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３３９】
配列番号119  -  VH  CDR-H3_V137X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFXLWGQGTLVTVSS
【０３４０】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３４１】
配列番号120  -  VH  CDR-H3_L138X
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVXWGQGTLVTVSS
【０３４２】
好ましくは、Ｘは、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）およびチロシン（Ｙ）から成る群より選択される。
【０３４３】
配列番号121  -  VH  DLX2464
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERQIFSGDMAGWGQGTLVTVSS
【０３４４】
配列番号122  -  VH  DLX2465
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERNIFSGDMDLWGQGTLVTVSS
【０３４５】
配列番号123  -  VL  DLX2466
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIGKYLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３４６】
配列番号124  -  VH  DLX2466
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSDAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERNIFSGDMAGWGQGTLVTVSS
【０３４７】
配列番号125  -  VL  DLX2467
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIHNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASNLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGSSIAFGQGTKLTVLG
【０３４８】
配列番号126  -  VH  DLX2467
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSRAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERMIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３４９】
配列番号127  -  VL  DLX2468
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIGNYLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGGTSIAFGQGTKLTVLG
【０３５０】
配列番号128  -  VH  DLX2468
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSSAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERNIFSGDMVLWGQGTLVTVSS
【０３５１】
配列番号129  -  VL  DLX2475
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDKWLSWYQQKPGKAPKLLIYQASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVHIAFGQGTKLTVLG
【０３５２】
配列番号130  -  VH  DLX2475
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSYAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFKLWGQGTLVTVSS
【０３５３】
配列番号131  -  VL  DLX2476
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSISSWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３５４】
配列番号132  -  VH  DLX2476
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERDIFSGDFVGWGQGTLVTVSS
【０３５５】
配列番号133  -  VL  DLX2480
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLTVLG
【０３５６】
配列番号134  -  VH  DLX2480
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSDAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERQIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３５７】
配列番号135  -  VL  DLX2543
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３５８】
配列番号136  -  VL  DLX2529
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCRASQSIGNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASNLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPEDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLTVLG
【０３５９】
配列番号137  -  VL  DLX2547
ADIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGINIAFGQGTKLEIKR
【０３６０】
配列番号138  -  VH  DLX2547
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３６１】
配列番号139  -  VL  DLX2528
EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYQASNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQNAGGATTIAFGQGTKLTVLG
【０３６２】
配列番号140  -  VH  DLX2528
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３６３】
配列番号141  -  VL  DLX2585
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３６４】
配列番号142  -  VH  DLX2585
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFDYWGQGTLVTVSS
【０３６５】
配列番号143  -  VL  DLX2545
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３６６】
配列番号144  -  VH  DLX2545
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWIGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARERNIFSGDMVLWGQGTTVTVSS
【０３６７】
配列番号145  -  VL  DLX2531
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３６８】
配列番号146  -  VH  DLX2531
EVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSNSAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTATYYCARERAIFSGDFALWGQGTLVTVSS
【０３６９】
配列番号147  -  VL  DLX2586
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３７０】
配列番号148  -  VH  DLX2586
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARERQIFSGDMDGWGQGTLVTVSS
【０３７１】
配列番号149  -  VL  DLX2530
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３７２】
配列番号150  -  VH  DLX2530
EVQLVESGGGNVQPGGSLRLSCTASGFSLSDAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTFYASWAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCARERNIFSGDMALWGQGTTVTVSS
【０３７３】
配列番号151  -  VL  DLX2548
EIVMTQSPSTLSASVGDRVIITCQASQSIDNWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGAEFTLTISSLQPDDFATYYCQNTGGGVSIAFGQGTKLTVLG
【０３７４】
配列番号152  -  VH  DLX2548
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIYDSASTYYASWAKGRFTISKDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARERQIFSGDMDGWGQGTTVTVSS
【０３７５】
配列番号153  -  VL  DLX2544
ADIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNAGGGINIAFGQGTKVEIKR
【０３７６】
配列番号154  -  DLX2544
ADIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNAGGGINIAFGQGTKVEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSAAMAWVRQAPGKGLEWVGIIYDSASTYYASWAKGRFTISRDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARERAIFSGDFVLWGQGTLVTVSS
【０３７７】
配列番号155  -  DLX2531のCDR-H1
FSLSNSAMA
【０３７８】
配列番号156  -  DLX2531のCDR-H2
IIYDSASTYYASWAKG
【０３７９】
配列番号157  -  DLX2531のCDR-H3
ERAIFSGDFAL
【０３８０】
配列番号158  -  DLX2531のCDR-L1
QASQSIDNWLS
【０３８１】
配列番号159  -  DLX2531のCDR-L2
RASTLAS
【０３８２】
配列番号160  -  DLX2531のCDR-L3
QNTGGGVSIA
【０３８３】
配列番号161  -  DLX2681のCDR-L1
RASQSIGNWLS
【０３８４】
配列番号162  -  DLX2681のCDR-L2
RASNLAS
【０３８５】
配列番号163  -  DLX2681のCDR-L3
QNTGGGINIA
【実施例】
【０３８６】
（実施例１  −  ｒｈＩＬ−１β中和ｓｃＦｖの同定）
ウサギの免疫処置：組換えヒトＩＬ−１βタンパク質（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、米国、カタログ番号２００−０１Ｂ）でウサギに免疫した。最後の追加免疫後にリンパ節および脾細胞を単離し、それらの細胞を凍結保存した。
【０３８７】
ウサギＢ細胞のフローサイトメトリー選別および培養：ＦＡＣＳＡｒｉａ  ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＩＬ−１β特異的記憶Ｂ細胞を単一細胞として９６ウェルマイクロプレートに選別した。単一Ｂ細胞クローンをフィーダー細胞の存在下で培養した。
【０３８８】
Ｂ細胞クローンのスクリーニング：細胞培養上清をＥＬＩＳＡにより抗ＩＬ−１β特異的ＩｇＧの存在について分析した。簡単に言うと、ｒｈＩＬ−１β（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号２００−０１Ｂ）を、ＰＢＳ中、２ｍｃｇ／ｍｌの濃度で一晩、４℃でＭａｘｉｓｏｒｐ  ９６ウェルマイクロプレートにコーティングした。５％脱脂粉乳でブロックした後、細胞培養上清を添加した。ＩＬ−１β特異的ＩｇＧを抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号４０５０−０５）によって検出した。ＢＭ  Ｂｌｕｅ  ＰＯＤ基質（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）でＥＬＩＳＡを発色させた。ｒｈＩＬ−１βに特異的なＢ細胞クローンをヒト線維芽細胞アッセイでそれらの中和能力についてさらに分析した。
【０３８９】
ＩＬ−１β中和ＩｇＧのシークエンシング：中和抗ＩＬ−１β抗体を生成するすべてのウサギＢ細胞クローンを、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ  Ｇｅｒｍａｎｙ、カタログ番号７４１０６）を使用するｍＲＮＡ単離に供した。製造業者のプトロコル（ＯｎｅＳｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲキット、Ｑｉａｇｅｎ  Ｇｅｒｍａｎｙ、カタログ番号２１０２１２）に従って逆転写のためのテンプレートとしてｍＲＮＡを使用した。その後、ウサギＩｇＧの重鎖および軽鎖のコード配列を特異的に増幅するためのオリゴヌクレオチドを使用するＰＣＲ反応を行った（Ｂｉｏｍｅｔｒａ  Ｔｈｅｒｍｏｃｙｃｌｅｒ  Ｔ３）。重鎖および軽鎖のＰＣＲ断片を独立してシークエンシングし（ＡＢＩ、Ｓａｎｇｅｒ  ３７３０ｘｌ；Ｍｉｃｒｏｓｙｎｔｈ  ＡＧ、スイス、バルガッハ）、得られたＤＮＡ配列を、ＥＭＢＯＳＳ  Ｔｒａｎｓｅｑ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｓｔ／）を使用してタンパク質配列に翻訳し、ＣＬＵＳＴＡＬＷ２（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｃｌｕｓｔａｌｗ２／）を使用してアラインした。
【０３９０】
抗ＩＬ−１β  ｓｃＦｖ遺伝子の構築、およびｓｃＦｖタンパク質発現：上で定義の軽鎖および重鎖のウサギＩｇＧ  ＣＤＲ領域を同定し、配列番号１８〜２１および２２〜２５をそれぞれ含むヒト軽鎖および重鎖の受容体フレームワークにグラフトした。配列番号９の配列によってＣ末端可変重鎖に結合されたＮ末端可変軽鎖を有するｓｃＦｖタンパク質をコードする細菌発現ベクターを産生した。ｓｃＦｖタンパク質を大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）；Ｎｏｖａｇｅｎ、米国、カタログ番号６９４５０−３）において封入体として発現させ、それらを精製し、可溶化し、そしてタンパク質をリフォールディングした。リフォールディングされたｓｃＦｖを標準的なサイズ排除クロマトグラフィーによって精製し、単量体ピーク画分を収集した。精製されたｓｃＦｖをＥＬＩＳＡによりＩＬ−１β結合について分析した。ｒｈＩＬ−１βに特異的に結合することが見出されたｓｃＦｖをヒト線維芽細胞アッセイでＩＬ−１β中和について試験した。この手順により、ｓｃＦｖ  ＤＬＸ２３２３および他の抗ＩＬ−１β  ｓｃＦｖをＩＬ−１βの強力な阻害剤として同定した。
【０３９１】
（実施例２  −  ヒトＩＬ−１βの認識）
先ず、ＤＬＸ２３２３によるｒｈＩＬ−１βの特異的認識をＥＬＩＳＡによって確認した（図１）。簡単に言うと、ｒｈＩＬ−１β（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号２００−０１Ｂ）を、ＰＢＳ中、２ｍｃｇ／ｍｌの濃度で一晩、４℃でＭａｘｉｓｏｒｐ  ９６ウェルマイクロプレートにコーティングした。５％脱脂粉乳でブロックした後、漸増濃度のｓｃＦｖ（１０から３００ｎｇ／ｍｌ）を添加し、ｓｃＦｖをプロテインＬ−ＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ３２２６）によって検出した。ＢＭ  Ｂｌｕｅ  ＰＯＤ基質（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）でＥＬＩＳＡを発色させた。陰性対照として、関連性のない特異性のｓｃＦｖを使用した。この結果は、ＤＬＸ２３２３がｒｈＩＬ−１βに特異的に結合することを示す。
【０３９２】
ＤＬＸ２３２３および対照ｓｃＦｖがプロテインＬ−ＨＲＰによって認識されること、およびしたがって、上記ＥＬＩＳＡにおけるｒｈＩＬ−１β結合についてのシグナルの欠如が検出の問題のせいではなかったことを確認するために、別の実験を行った。ｓｃＦｖをプレートに直接コーティングし、上記のとおりプロテインＬ−ＨＲＰによって検出した。すべてのｓｃＦｖをＰＢＳ中、２ｍｃｇ／ｍｌの濃度でコーティングした。このＥＬＩＳＡ実験は、ＤＬＸ２３２３および対照ｓｃＦｖが検出剤プロテインＬ−ＨＲＰによって認識されることを示した。
【０３９３】
別のＥＬＩＳＡ（図２）において、ＤＬＸ２３２３によるヒト天然ＩＬ−１βの認識を確認した。一般に公知のように、ヒト細胞以外の細胞におけるヒトタンパク質の発現は、例えば、翻訳後修飾および／または高次構造の変化の原因となることがある。これは、抗体によって組換えタンパク質と天然タンパク質とが異なって認識されることにつながることがある。１０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ１５８５）、１ｍｇ／ｍｌのＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｌ４３９１）および２ｍＭのＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ａ６５５９−２５ＵＭＯ）での刺激後、ＴＨＰ−１細胞（ＤＳＭＺ  Ｇｅｒｍａｎｙ、カタログ番号ＡＣＣ１６）によって天然ヒトＩＬ−１βが分泌された。細胞上清を回収し、分泌された天然ヒトＩＬ−１βを、ヒトＩＬ−１β／ＩＬ−１Ｆ２  ＥＬＩＳＡ  ＤｕｏＳｅｔ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＤＹ２０１）を使用して定量した。ＤＬＸ２３２３を、ＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中５ｍｃｇ／ｍｌのコーティング密度で９６ウェルマイクロプレート（Ｍａｘｉｓｏｒｐ、Ｎｕｎｃ）にコーティングした。組換え発現バージョン（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号２００−０１Ｂ）または天然分泌バージョンいずれかとしてのヒトＩＬ−１βを０．５から４ｎｇ／ｍｌの範囲の最終濃度で適用した。結合したＩＬ−１βをビオチン化ヤギ抗ｈＩＬ−１β抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＤＹ２０１）およびストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、カタログ番号５５４０６０）によって検出した。ＢＭ  Ｂｌｕｅ  ＰＯＤ基質（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を使用してＥＬＩＳＡを発色させた。定量の目的のために、ＶｅｒｓａＭａｘマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、米国）を使用して４５０ｎｍで吸光度を測定した。結果（図２参照）は、組換え体および天然の両方のヒトＩＬ−１βが匹敵するレベルでＤＬＸ２３２３によって認識されることを示す。
【０３９４】
（実施例３  −  ｒｈＩＬ−１β生物学的活性の中和）
抗体およびｓｃＦｖを、ヒト皮膚線維芽細胞アッセイ（ＮＨＤＦ−Ｎｅｏ、カタログ番号ＣＣ−２５０９、Ｌｏｎｚａ、米国ウォーカーズビル）で、それらのＩＬ−１β中和能力について試験した。ＩＬ−１βでのそのような線維芽細胞の活性化は、特異的ＩＬ−６放出をもたらし、それをＥＬＩＳＡによって定量する。特異的抗体によるＩＬ−１βの阻害は、そのような線維芽細胞からのＩＬ−６放出量を減少させる。抗ＩＬ−１β抗体の阻害効力を、ＩＬ−１β誘導ＩＬ−６放出の最大半量低減（ＩＣ５０）を測定することによって定量する。ＩＬ−１β添加の１６〜２０時間前に、ヒト皮膚線維芽細胞を９６ウェルマイクロプレートに５，０００細胞／ウェルで播種した。線維芽細胞を、細胞供給業者（Ｌｏｎｚａ  米国ウォーカーズビル：Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ（商標）皮膚線維芽細胞系）による記載のとおりサプリメント（ｈＦＧＦ−Ｂ、インスリン、ＦＢＳ、ＧＡ−１０００）を有する線維芽細胞基本培地（ＦＢＭ；Ｌｏｎｚａ、カタログ番号ＣＣ−３１３１）で培養した。その後、ＦＢＭを除去し、細胞をダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ；Ｇｉｂｃｏ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１１８８０）で１回洗浄して、増殖因子を除去した。その後、細胞を７時間、ＤＭＥＭ培地中でインキュベートした。抗体またはｓｃＦｖおよびｒｈＩＬ−１βをＤＭＥＭ中で１時間、３７℃でプレインキュベートした。その混合物を細胞に１０ｐｇ／ｍｌのＩＬ−１β最終濃度で添加した。陰性対照として、１０ｐｇ／ｍｌのＩＬ−１βを、一切の抗ＩＬ−１β抗体なしで、細胞に添加した。陽性対照として、ＩＬ−１βに対するマウスモノクローナル抗体を適用した（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、米国、カタログ番号ＭＡＢ２０１）。細胞をＩＬ−１β／抗ＩＬ−１β抗体混合物とともに１８〜２４時間インキュベートし、Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−６  ＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔをその製造業者の説明書（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、米国、カタログ番号ＤＹ２０６）に従って使用して、細胞培養上清をＩＬ−６放出について分析した。
ＤＬＸ２３２３のＩＣ５０を、８回の独立したアッセイで３ｐＭ±１．０５であると決定した。
【０３９５】
（実施例４  −  市販ＩＬ−１β阻害剤との中和効力の比較）
ＤＬＸ２３２３をＩＬ−１β中和ｓｃＦｖとして同定した。ＤＬＸ２３２３および他の阻害剤の生物学的効力を、実施例３に記載のとおりヒト皮膚線維芽細胞アッセイで評価した。ウェルへの添加前に、組換えヒトＩＬ−１βを、漸増濃度のｓｃＦｖ  ＤＬＸ２３２３、抗ヒトＩＬ−１βモノクローナルＩｇＧ抗体ＭＡＢ２０１、ＩＬ−１β受容体アンタゴニスト（ｒｈＩＬ−１ｒａ）（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２８０−ＲＡ−０１０／ＣＦ）またはＦＤＡによって承認された市販のカナキヌマブＩｇＧ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｉｌａｒｉｓ（商標））とともにプレインキュベートした。２回の独立した実験を行った：図３Ａは、ＤＬＸ２３２３とＭＡＢ２０１との比較を描写するが、図３Ｂは、ＤＬＸ２３２３とｒｈＩＬ−１ｒａおよびカナキヌマブとの比較を示す。次のＩＣ５０値を決定した：ＭＡＢ２０１：２〜３ｐＭ；ＤＬＸ２３２３：２〜４ｐＭ；ｒｈＩＬ−１ｒａ：４０ｐＭ、およびカナキヌマブ：９０ｐＭ。結論として、一価単量体ｓｃＦｖ  ＤＬＸ２３２３は、二価モノクローナルマウス抗体ＭＡＢ２０１とほぼ同様に強力である。それは、ヒトＩＬ−１βを中和することについて市販の阻害剤カナキヌマブおよびｒｈＩＬ−１ｒａより明確に高い効力を示す。さらに、ＤＬＸ２３２３は、ＩＬ−１β誘導ＩＬ−６放出を完全に遮断することができた。
【０３９６】
（実施例５  −  溶解度）
ＤＬＸ２３２３をＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２（リン酸緩衝食塩水１×、Ｇｉｂｃｏ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（商標）、カタログ番号２００１２）中で保管した。その最大溶解度を決定するために、Ｖｉｖａｓｐｉｎ  ２０遠心濃縮機（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｔｅｄｉｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号ＶＳ２００１）を使用して室温でＤＬＸ２３２３を濃縮した。その濃縮プロセスを高い試料粘度のため７１ｍｇ／ｍｌで停止した。得られたＤＬＸ２３２３タンパク質溶液は、粘稠であり、透明であり、目視検査により沈殿は観察されなかった。
【０３９７】
（実施例６  −  安定性）
ｓｃＦｖの安定性に関しては、それらの不安定性の一因となる２つの異なるプロセスを観察することができる。第一に、ｓｃＦｖは、二量体化、しばしば、続いてオリゴマー化、そして最終的に凝集する傾向があり得る。第二に、より小さい断片をもたらすｓｃＦｖ分解が経時的に起こり得る。ＤＬＸ２３２３が安定しているかどうかを判断するために、ＨＰＬＣ（Ｄｉｏｎｅｘ、Ｓｕｍｍｉｔ  ｓｙｓｔｅｍ）サイズ排除クロマトグラフィー（Ｔｏｓｏｈ、ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ２０００ＳＷｘｌ、カタログ番号０８５４０）を展開して、ある時点での、異なるタンパク質濃度および温度（例えば、４℃、室温および３７℃）で、単量体の非分解ｓｃＦｖタンパク質の百分率を決定した。モノマーの百分率を、研究開始時点（Ｔ０）および１ｍｇ／ｍｌのＤＬＸ２３２３については１カ月後に、別の実験では５０ｍｇ／ｍｌのＤＬＸ２３２３溶液について２週間後に測定した。タンパク質をＰＢＳ、ｐＨ７．２中に配合した。安定性研究の結果を表１および２に列挙する。
【表１】
2018113988.tif 000003
【表２】
2018113988.tif 000004
【０３９８】
ＤＬＸ２３２３の熱安定性を示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）によって評価した。この測定のために、リアルタイムＰＣＲデバイス（Ｃｏｒｂｅｔｔ、Ｒｏｔｏｒ−Ｇｅｎｅ）によりＤＬＸ２３２３を３０℃から９５℃の温度勾配（１段階１℃ずつ上昇、１段階ごとに５秒の待ち時間）で加熱した。タンパク質試料は、ＰＢＳ中に０．５ｍｇ／ｍｌのＤＬＸ２３２３および２０×  ＳＹＰＲＯ（登録商標）オレンジ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｓ５６９２、５０００×）を含有した。タンパク質が融解し始めるとすぐに、Ｓｙｐｒｏオレンジは、蛍光を放つようになった。前記勾配実行中にこの蛍光をオンラインで測定した（４７０ｎｍの励起波長；５５５ｎｍの発光波長）。Ｒｏｔｏｒ−Ｇｅｎｅ  ６０００シリーズソフトウェア１．７を使用して、ＤＬＸ２３２３の中点融解温度（Ｔｍ）を７４℃であると算定した。
【０３９９】
（実施例７  −  交差反応性）
ヒト以外の種のＩＬ−１βホモログに対するＤＬＸ２３２３の交差反応性をＥＬＩＳＡで評価した。次の種の組換え発現ＩＬ−１βタンパク質への結合を調査した：カニクイザル（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．、米国、カタログ番号９００１０−ＣＮＡＥ）、アカゲザル（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、米国、カタログ番号１３１８−ＲＬ／ＣＦ）、ブタ（Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、米国、カタログ番号ＲＰ０２９７Ｓ−０２５）、イヌ（Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、米国、カタログ番号ＲＰ００８５Ｄ−０２５）、モルモット（Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号ＲＰ０３４３ＧＰ−０２５）、ラット（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号４００−０１Ｂ）およびマウス（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号５７５１０２）。ＤＬＸ２３２３の結合をＥＬＩＳＡ陽性対照抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、米国、ヤギ抗ヒトＩＬ−１βポリクローナルＩｇＧ、カタログ番号ＡＢ−２０１−ＮＡ；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｉｎｃ．、米国、ビオチン抗マウス／ラットＩＬ−１β抗体、カタログ番号５０３５０５）と比較した。簡単に言うと、タンパク質を、ＰＢＳ中、２ｍｃｇ／ｍｌの濃度で一晩、４℃でＭａｘｉｓｏｒｐ  ９６ウェルマイクロプレートにコーティングした。５％脱脂粉乳でブロックした後、漸増濃度（０．１ｍｃｇ／ｍｌ、０．３ｍｃｇ／ｍｌおよび１．０ｍｃｇ／ｍｌ）のＤＬＸ２３２３をウェルに添加した。ＩＬ−１β特異的対照抗体を利用して、すべてのタンパク質のコーティングの成功を別々に確認した。ＤＬＸ２３２３をプロテインＬ−ＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、米国、カタログ番号Ｐ３２２６）によって検出したが、対照抗体は、ストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、米国、カタログ番号５５４０６０）、またはＨＲＰで標識された他の適格な二次抗体、いずれかによって検出した。ＢＭ  Ｂｌｕｅ  ＰＯＤ基質（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を使用してＥＬＩＳＡを発色させ、４５０ｎｍで吸光度を測定した。ＤＬＸ２３２３は、４つの種のＩＬ−１βオルソログ、すなわち、ヒト、カニクイザル、アカゲザルおよびラットのＩＬ−１βを認識した。ブタ、モルモット、イヌおよびマウスのＩＬ−１βについては、交差反応性は観察できなかった。
【０４００】
ヒト以外の種のＩＬ−１βホモログに対するＤＬＸ２３２３の交差反応性に加えて、様々なヒトＩＬ−１ファミリーメンバーおよび他のサイトカインに関するＤＬＸ２３２３の認識パターンを測定した：ｒｈＩＬ−１ｒａ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、米国、カタログ番号２８０−ＲＡ−０１０／ＣＦ）、ｒｈＩＬ−１α（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、カタログ番号２００−０１Ａ）、ｒｈＩＬ−１８（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ、カタログ番号４１７９−２５）、ｒｈＩＬ−３３（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号２００−３３）、ＩＬ−３６ｒａ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号１２７５−ＩＬ／ＣＦ）、ｒｈＴＮＦα（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、ドイツ、ハンブルク、カタログ番号３００−０１Ａ）およびｒｈＩＬ−６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号２００−０６）。適用したＥＬＩＳＡアッセイにおいて、次の抗体が陽性対照として役立った：ビオチン抗ヒトＩＬ−１ｒａ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号５０９５０１）、ビオチン抗ヒトＩＬ−１α（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号５１５７０３）、抗ヒトＩＬ−１８ポリクローナル抗体（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ、カタログ番号５１７９−１００）、ビオチン抗ヒトＩＬ−３３抗体（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号５００−Ｐ２６１Ｂｔ）、抗ヒトＴＮＦα  ｓｃＦｖ  ＤＬＸ１０５（国際公開２００６／１３１０１３号Ａに記載されているＤｅｌｅｎｅｘ所有（ｐｒｏｐｒｉｅｔｙ）抗体）、ビオチン抗ヒトＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、ＤＹ２０６、カタログ番号８４０１１４）、抗ヒトＩＬ−３６ｒａ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＡＦ１２７５）。ＥＬＩＳＡは、本質的には上で説明したとおりに行った。これらの試験したヒトＩＬ−１ファミリーメンバーおよびサイトカインのいずれについても、ＤＬＸ２３２３の交差反応性は検出できなかった。
【０４０１】
（実施例８  −  インビボでの有効性）
この実施例では、ＤＬＸ２３２３によるヒトＩＬ−１β活性のインビボ阻害を実証する。ヒトＩＬ−１βは、マウスＩＬ−１受容体に結合することができ、そしてその受容体を活性化することができ、それによってマウスにおいてインビボで炎症応答を誘導することができる。この炎症は、マウスＩＬ−６（ｍＩＬ−６）を含む血清中のサイトカインのレベル上昇をもたらす。組換えヒトＩＬ−１β（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号２００−０１Ｂ）を１．５ｍｃｇ／ｋｇ体重の用量で、８週齢オスＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）に皮下投与した。２時間後、血清中のｍＩＬ−６レベルは、有意に上昇した。インビボでのＤＬＸ２３２３の中和能力を試験するために、ＩＬ−１β投与の２時間前にＤＬＸ２３２３を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。マウスの１つの群に５ｍｇ／ｋｇ用量のＤＬＸ２３２３を注射し、第二の群に１５ｍｇ／ｋｇ用量のＤＬＸ２３２３を注射した。陰性対照群は、ＰＢＳ  ｉ．ｐ．または関連性のない特異性のｓｃＦｖ、いずれかで処置した。マウスの第五の群には、１０ｍｇ／ｋｇのカナキヌマブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｉｌａｒｉｓ（登録商標））を陽性対照として静脈内注射した。ｒｈＩＬ−１β適用の２時間後、血液試料を採取し、Ｍｏｕｓｅ  ＩＬ−６  ＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡキットを製造業者の説明書（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＤＹ４０６）に従って使用してｍＩＬ−６の血清レベルを測定した。ＤＬＸ２３２３およびカナキヌマブで処置したマウスの群については、非常に少量のｍＩＬ−６しか検出できず、またはｍＩＬ−６を全く検出できないことさえあった（０．０〜２ｐｇ／ｍｌのｍＩＬ−６；図４）。ＰＢＳまたは対照ｓｃＦｖを受けたマウスは、５０から１７０ｐｇ／ｍｌの有意に上昇したＩＬ−６レベルを示した。ＤＬＸ２３２３は、５ｍｇ／ｋｇ用量においてさえ、インビボ設定でヒトＩＬ−１βを非常に効率的に中和していた。
【０４０２】
（実施例９  −  ＣＤＲライブラリー）
ＤＬＸ２３２３とヒトＩＬ−１βとの会合をよりよく特徴づけるために、アミノ酸変異を設計し、ＤＬＸ２３２３のＣＤＲ領域に部位特異的に挿入した。ＣＤＲ位置は、それらの表面露出、相同性モデルから演繹して予想されるヒトＩＬ−１βとの相互作用、または先行ウサギＩｇＧとの配列比較に基づいて、変異誘発のために選んだ。軽鎖においては、ＤＬＸ２３２３のバリアントの設計のために、ＣＤＲ−Ｌ１ではモチーフＤＮＷを選択し（配列番号１４）、ＣＤＲ−Ｌ２ではアミノ酸残基ＲおよびＴを選択し（配列番号１５）、ＣＤＲ−Ｌ３ではトレオニンおよびモチーフＧＧＶＳを選択した（配列番号１６）。重鎖においては、モチーフＳＡをＣＤＲ−Ｈ１において選び（配列番号１１）、ＣＤＲ−Ｈ２ではモチーフＹＤおよびその後のチロシンを選んだ（配列番号１２）。ＣＤＲ−Ｈ３では、Ｎ末端グルタミン酸（Ｅ）を除くすべての位置を置換のために選択した（配列番号１３）。すべての前記位置を配列番号１１〜１６中にそれぞれＸで示す。部位特異的変異誘発、クローンのシークエンシングおよびライブラリーのアセンブリを、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（商標）、ドイツ、レーゲンスブルク）によって行った。
【０４０３】
結果として得られたｓｃＦｖ変異体を大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ、米国、カタログ番号６９４５０−３）において１ｍｌ培養物中で９６ウェル形式で発現させる。この系の発現中、ｓｃＦｖタンパク質の大部分は、前記細胞内で不溶性封入体を形成するが、細胞溶解後に可溶性画分から相当な量のタンパク質を回収することができ、その量は、ｒｈＩＬ−１β  ＥＬＩＳＡによる分析（詳細については実施例２を参照されたい）に十分であることが判明した。細胞を溶解緩衝液（１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１ｍｇ／ｍｌ  リゾチーム、ＰＢＳ  ｐＨ７．２）中で、９６ウェル形式で、凍結およびその後の解凍によって溶解した。得られた粗抽出物を遠心分離によって清澄化した。１ウェルあたり５０ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ−１β（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）でコーティングしたマイクロタイタープレートのウェルに上清を添加した。洗浄後、結合したｓｃＦｖをプロテインＬ−ＨＲＰによって検出し、ｒｈＩＬ−１βへの結合をＢＭ  Ｂｌｕｅ  ＰＯＤ基質（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）によって定量する。
【０４０４】
表３は、ＥＬＩＳＡシグナルによって定義して陰性対照の少なくとも２倍大きいが０．１光学単位より小さくないｒｈＩＬ−１βの結合を明確に許容する一部位変異を列挙する。
【表３−１】
2018113988.tif 000005
【表３−２】
2018113988.tif 000006
【０４０５】
これらの結合データは、均一になるまで精製し、同様に精製したＤＬＸ２３２３タンパク質と一緒に細胞ベースの分析に供した、大規模形式での５つの例示的一部位変異体の発現によって検証したときの、ｒｈＩＬ−１β生物学的機能の中和にも関する予測値を有する。
【０４０６】
ＤＬＸ２３２３＿ＣＤＲ−Ｈ１＿Ａ３９Ｎ（Ｘ＝Ｎでの配列番号４５）、ＤＬＸ２３２３＿ＣＤＲ−Ｈ３＿Ａ１１１Ｎ（Ｘ＝Ｎでの配列番号５０）、ＤＬＸ２３２３＿ＣＤＲ−Ｈ３＿Ｆ１３６Ｎ（Ｘ＝Ｎでの配列番号５６）、ＤＬＸ２３２３＿ＣＤＲ−Ｈ３＿Ｖ１３７Ｄ（Ｘ＝Ｄでの配列番号５７）、ならびにＤＬＸ２３２３＿ＣＤＲ−Ｈ３＿Ｌ１３８Ｄ（Ｘ＝Ｄでの配列番号５８）および対応する親ｓｃＦｖであるＤＬＸ２３２３を大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ）細胞において２リットル規模で発現させた。超音波処理による細胞溶解後、封入体を遠心分離によって富化し、洗浄し、タンパク質をグアニジン緩衝液（６Ｍグアニジン／ＨＣｌ、１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８．５）に可溶化し、尿素緩衝液（４Ｍ尿素、５０ｍＭグリシン、２ｍＭシスチン、２ｍＭシステイン、ｐＨ１０）中でリフォールディングし、５０ｍＭグリシン、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ１０中で濃縮し、サイズ排除クロマトグラフィーによって均一になるまで精製した。この手順の単量体ピーク画分をおおよそ０．５〜５ｍｇ／ｍｌの最終タンパク質含量になるまで濃縮し、滅菌フィルターユニットに通し、そのまま実施例３に記載のとおりの細胞ベースの分析に供した。表４は、２つの独立した実行で決定したときの変異体各々についての中和効力ＩＣ５０を示す。
【表４】
2018113988.tif 000007
【０４０７】
上記ＥＬＩＳＡ結果と全体的によく一致して、低ｐＭ範囲のＩＣ５０値が、選択された５つすべての一部位変異体について観察された。選択された変異体サブセットの各メンバーは、親ｓｃＦｖ  ＤＬＸ２３２３のものに匹敵する、ｒｈＩＬ−１βに対する中和能力を有した。したがって、ＤＬＸ２３２３およびそのバリアントのｒｈＩＬ−１βへの結合は、重要な機能特徴を付随して保ちながら有意な配列変異度を許容することを示す。
【０４０８】
（実施例１０  −  コンビナトリアルバリアントの産生）
上記に基づき、前に調査したＣＤＲ一部位変化のうちの３つから９つを組み合わせて、ＤＬＸ２３２３のコンビナトリアル変異体を設計した。個々の残基変化を、（ｉ）親抗体ＤＬＸ２３２３のものに匹敵するまたはそれより良好な、強いＥＬＩＳＡ結合結果、（ｉｉ）複数のＣＤＲ領域に同時に影響を与える広範な一部位変化の組み合わせ、および（ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｈ３の蓄積調節のみに基づいて選択した。設計した変異体を大規模形式で発現させ、単一変異体について上で説明したように精製した後、実施例３のヒト線維芽細胞アッセイで中和能力を評価した。配列あたりの個々のアミノ酸変化および対応するｓｃＦｖタンパク質のＩＣ５０データを表５に詳述する。これらの単離されたｓｃＦｖタンパク質すべてが、インビトロでｒｈＩＬ−１βに対する中和活性を有した。上位５候補は、低ピコモル濃度の範囲のＩＣ５０値を提示した。したがって、これらは、親ｓｃＦｖ  ＤＬＸ２３２３に高度に匹敵する。
【表５】
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【０４０９】
可変軽鎖および／または可変重鎖のＣＤＲおよび隣接フレームワーク領域に６より多くのアミノ酸置換を有するバリアントを設計した。合計で１０のコンビナトリアル候補（４つＶＬおよび６つのＶＨ変異体配列）を生成し、発現させ、実施例３で説明したようにインビトロでｒｈＩＬ−１β結合（ＥＬＩＳＡ）および中和（ヒト線維芽細胞アッセイ）について機能分析した。表６は、それぞれの点変異、および各クローンについて２回の独立した実験で測定したときの中和効力をまとめる。
【表６−１】
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【表６−２】
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【０４１０】
１０すべてのｓｃＦｖタンパク質は、高いフェムトモル濃度から低いピコモル濃度の範囲のＩＣ５０値でインビトロのヒト線維芽細胞アッセイにおいてｒｈＩＬ−１βを有効に中和することが見出された。クローンＤＬＸ２５３１、ＤＬＸ２５４８、ＤＬＸ２５８５、ＤＬＸ２５３０、ＤＬＸ２５２９、およびＤＬＸ２５８６は、親ｓｃＦｖ  ＤＬＸ２３２３より低いＩＣ５０値を再現可能に生じさせた。
【０４１１】
最後に、上記ＶＬおよびＶＨの配列を鎖シャッフリングした。ｒｈＩＬ−１βへの結合を、１９の鎖シャッフリングしたＶＬおよびＶＨの変異体で形質転換させた大腸菌ＢＬ２１  ｏｒｉｇａｍｉ細胞の清澄化溶解産物について確認した。表７は、それらの置換をまとめる。
【表７−１】
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【表７−２】
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【表７−３】
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【０４１２】
陰性対照の少なくとも２倍である０．１光学単位以上のＥＬＩＳＡシグナルが得られた場合、結合を特異的と考えた。結果を図６に示す。例えば、ＤＬＸ２６９０およびＤＬＸ２６９１は、カットオフフィルターをかろうじて通過したが、試験結果は陽性であった。残りの集団のＶＬおよびＶＨの鎖シャッフリングした変異体は、ｒｈＩＬ−１βを結合し、ＤＬＸ２３２３に匹敵するまたはさらにはそれより高い絶対ＥＬＩＳＡシグナルを有する。
【０４１３】
ＤＬＸ２６８１およびＤＬＸ２６９３のＩＣ５０値を、上記のヒト線維芽細胞アッセイで決定した。ＤＬＸ２６８１は、０．６ｐＭのＩＣ５０値でｒｈＩＬ−１βを中和することが判明し、ＤＬＸ２６９３のＩＣ５０値は、１２．５ｐＭであると決定された。
【０４１４】
本発明の現在好ましい実施形態を示し、説明したが、本発明がそれらに限定されず、下記の特許請求の範囲の範囲内で別様に様々に具体化され、実施され得ることを理解されたい。本発明の非常に多数の変更および代替実施形態が当業者には容易に明らかであるので、この記載は、単に例示にすぎないと解釈すべきであり、本発明を実施するための最良の様式を当業者に教示する目的のものである。したがって、すべての適する変更および均等物は、下記の特許請求の範囲の範囲に入るとみなされ得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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