(57)【要約】      （修正有）【課題】皮膚外用組成物や飲食品用組成物に配合可能であり、抗酸化作用と美白作用とを併せ持ち、それら両作用の複合に基づく相乗的効果により、皮膚の老化や肌荒れ改善、シミ、ソバカスの改善、及び細胞の不健全化の改善に有用な新規有効成分の提供。【解決手段】イワベンケイソウ科イワベンケイ属に属する植物及び／又はその抽出物を、酵母、乳酸菌、麹菌又は枯草菌で発酵させて得られる発酵物、及びこの発酵物を配合してなる皮膚外用組成物や飲食品用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
イワベンケイソウ科（Crassulaceae）イワベンケイ属（Rhodiola）に属する植物を乳酸菌、酵母、麹菌又は枯草菌で発酵させて得られる発酵物。
【請求項２】
請求項１に記載の発酵物を有効成分として含む皮膚外用組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の発酵物を有効成分として含む飲食用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚（頭皮も含む）外用剤及び美容又は健康増進用の飲食品に配合可能な植物発酵物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、皮膚外用剤や飲食品に配合する有効成分として天然物由来の成分が研究開発されている。しかし、それらの天然物由来の成分は、皮膚外用剤や飲食品の有効成分として利用する場合に、有効性や安定性等の点で課題があった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、本発明者らは、イワベンケイソウ科（Crassulaceae）イワベンケイ属（Rhodiola）に属する植物の発酵物が、格段にすぐれた抗酸化効果及び美白効果を有することを新たに見出した。
【０００４】
従来、イワベンケイ属に属する植物の抽出物を皮膚外用剤等に使用することは、例えば、特許文献１〜３により知られていた。しかし、イワベンケイ属に属する植物又はその抽出物の発酵物を皮膚外用剤や飲食品用の有効成分として使用することは知られていなかった。
【特許文献１】特開2000-128729号
【特許文献２】特開2001-048768号
【特許文献３】特開2001-122757号
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、イワベンケイソウ科イワベンケイ属に属する植物を乳酸菌、酵母、麹菌又は枯草菌で発酵させて得られる発酵物である。
本発明は、上記発酵物を有効成分として含む皮膚外用組成物又は飲食用組成物である。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、格段にすぐれた抗酸化効果及び美白効果を発揮する植物発酵物、及びこの発酵物を配合した皮膚外用剤及び飲食用組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明で用いるイワベンケイソウ科イワベンケイ属の植物としては、例えば、大花紅景天（Rhodiola Crenulata）、紅景天（Rhodiola Rosea）、ホソバイワベンケイ（Rhodiola ishidae）、高山紅景天（Rhodiola.sachalinensis）、マイカイ紅景天（Rhodiola Rosea）等が挙げられる。
【０００８】
イワベンケイソウ科イワベンケイ属の植物又はその抽出物を微生物（酵母、乳酸菌、麹菌又は枯草菌）で発酵する場合、該植物の発酵部位には特に限定はなく、全草、花、葉、根、茎など適宜の部位を用いることができるが、根又は根を含む全草の使用が好ましい。
【０００９】
イワベンケイ属植物の発酵は、例えば以下のようにして行うことができる。まず、発酵の資化源としてはイワベンケイ属植物それ自体（以下、植物体ということがある）を用いてもよく、或いは植物体を適宜の媒体で抽出して得られる抽出物を用いてもよい。また、抽出物を用いる場合には、被抽出物の植物体を固液分離によって除去することなく、植物体を含んだままで発酵を行うことも可能である。ここで、イワベンケイ属植物は、生のままであっても、予め乾燥もしくは半乾燥したものであってもよい。また、形状としては採取したものをそのまま用いることも可能である。
【００１０】
植物体を資化源として発酵を行う場合は、まず植物体を溶媒に懸濁させる。植物体を懸濁させるための溶媒としては、水或いは水と低級アルコール類（メタノール、エタノール、イソプロパノールなど）又はグリコール類（エチレングリコール、１，３−プロパンジオール、１，３−ブチレングリコール、１，２−ペンタンジオール、グリセリン等）との混液を用いることができる。ここで、植物体と溶媒との混合比は、植物体の乾燥重量換算で一般に１：１〜１：１００、好ましくは１：１０〜１：５０の範囲である。
【００１１】
植物体の抽出物を発酵資化源として用いる場合、抽出物の調製方法としては、抽出対象部位、例えば全草又は根部を、必要に応じて予め水洗、乾燥し、好ましくはさらに細切或いは粉砕した上、浸漬法、向流抽出法など適宜の手段により抽出溶媒と接触せしめる方法等が採用できる。また、超臨界抽出法を用いてもよい。
【００１２】
抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノールなどの低級アルコール類、オレイルアルコール、ステアリルアルコール、オクチルドデカノールなどの高級アルコール類；エチレングリコール、１，３−プロパンジオール、１，２−ペンタンジオール、１，３−ブチレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル、トリオクタン酸グリセリルなどのエステル類；アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類；エチルエーテル、イソプロピルことができるが、エーテルなどのエーテル類；ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルムなどの炭化水素系溶媒等が挙げられ、それらは単独で又は二種以上混合して用いられる。
【００１３】
混合溶媒を用いる場合の混合比は、例えば水とエタノールとの混合溶媒であれば、容量比（以下同じ）で１：１〜２５：１、水とグリセリンとの混合溶媒であれば１：１〜１５：１、水と１，３−プロパンジオール若しくは１，３−ブチレングリコールとの混合溶媒であれば、１：１〜１５：１の範囲とすることが好ましい。抽出溶媒として水以外の溶媒又は水と水以外の溶媒との混合溶媒を用いた場合は、発酵工程に移行するに先立って、一旦水以外の溶媒を濃縮などの操作で留去した後、固形分として０．０１〜１０％程度となるように水に再溶解するか、又は水で希釈して発酵の資化源としてもよい。
【００１４】
上述のように調整した懸濁液又は抽出物溶液の発酵処理に使用する微生物としては以下のものが挙げられる。
【００１５】
本発明において、酵母とは、例えば、サッカロミセス セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、サッカロミセス アワモリ(Saccharomyces awamori)、サッカロミセス チェバリエリ(Saccharomyces chevalieri)、サッカロミセス カールスバージェンシス(Saccharomyces carlsbergensis)、サッカロミセス バヨナス（Saccharomyces bayonus)等のサッカロミセス属の酵母；ガラクトミセス（Galactomyces）属の酵母；トルラスポラ デルブルエキ(Torulaspora delbruekii)、トルラスポラ ファーメンタチ(Torulaspora fermentati)、トルラスポラ ロゼイ(Torulaspora rosei)等のトルラスポラ属の酵母；ジゴサッカロミセス ローキシ(Zygosaccharomyces rouxii)、ジゴサッカロミセス ソーヤ(Zygosacchar omyces soya)、ジゴサッカロミセス サケ(Zygosaccharomyces sake)、ジゴサッカロミセス ミソ(Zygosaccharomyces miso)、ジゴサッカロミセス ラクティス(Zygosaccharomyces lactis)等のジゴサッカロミセス属の酵母；カンディダ ベルサチリス(Candida versatilis)、カンディダ エチェリシイ(Candida etchellsii)、カンディダ ケフィール（Candida kefyr）、カンディダ サケ（Candida sake）、カンディダ スコッティ（Candida scottii）等のカンディダ属の酵母；オーレオバシディウムプルランス（Aureobasidium Pullulans）、オーレオバシディウム マンソニー（Aureobasidium mansonii）、オーレオバシディウム マイクロスティクタム（Aureobasideium microstictum）等のオーレオバシディウム属の酵母が挙げられる。また、本発明に係る酵母としては、清酒酵母、ワイン酵母、ビール酵母、植物の花（バラ、サクラ、ササユリ等）由来の酵母、海由来の酵母の何れであってもよく、実際に、本発明においては、サクラ及びササユリの花由来の酵母、並びに醸造酒（日本酒、ワイン）由来酵母の発酵物が、後述する抗酸化効果及び美白効果を有することを確認した。
【００１６】
発酵に用いる乳酸菌としては、例えばラクトバシルス プランタラム（Lactobacillus plantarum)、ラクトバシルス ブレビス（Lactobacillus brevis)、ラクトバシルス カゼイ（Lactobacillus casei)、ラクトバチルス・デルブルッキー（Lactobacillus delbrueckii）等のラクトバシルス（Lactobacillus）属の乳酸菌；カルノバクテリウム ディバージェンス（Carnobacterium divergens)、カルノバクテリウム ピシコーラ(Carnobacterium piscicola)等のカルノバクテリウム（Carnobacterium）属の乳酸菌；ロイコノストック メセンテロイズ（Leuconostoc mesenteroides)、ロイコノストック ラクティス（Leuconostoc lactis)、ロイコノストック シトレウム（Leuconostoc citreum)等のロイコノストック（Leuconostoc）属の乳酸菌； ストレプトコッカス フェーカリス（Streptococcus faecalis)、ストレプトコッカス ピオジェネス（Streptococcus pyogenes)等のストレプトコッカス属の乳酸菌；エンテロコッカス カゼリフラバス（Enterococcus caseliflavus)、エンテロコッカス サルフレウス（Enterococcus sulfreus)等のエンテロコッカス（Enterococcus）属の乳酸菌；ラクトコッカス プランタラム（Lactococcus plantarum)、ラクトコッカス  ラクティス（Lactococcus lactis）、ラクトコッカス ラフィノラクティス（Lactococcus rafinolactis)等のラクトコッカス属の乳酸菌；ヴェイセラ コンフューザ（Weissella confusa)、ヴェイセラ カンドウレリ（Weissella kandleri)等のヴェイセラ属の乳酸菌；アトポビウム ミニュタム（Atopobium minutum)、アトポビウム パービュラス（Atopobiumparvulus)等のアトポビウム（Atopobium）属の乳酸菌；バゴコッカス フルビアリス（Vagococcus fluvialis）、バゴコッカス サーモニナラム（Vagococcus salmoninarum)等のバゴコッカス（Vagococcus）属の乳酸菌；ペディオコッカス ダムノサス（Pediococcus damnosus)、ペディオコッカス ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus)等のペディオコッカス（Pediococcus）属の乳酸菌が挙げられる。
【００１７】
発酵に用いる麹菌としては、例えば、アスペルギルス オリゼー（Aspergillus oryzae）、アスペルギルス フラバス（Aspergillus flavus）、アスペルギルス ポリオキソジェネス（Aspergillus polyoxogenes）、アスペルギルス ソーヤ（Aspergillus sojae）等の黄麹菌；アスペルギルス アワモリ（Aspergillus awamori）、アスペルギルス カワウチ（Aspergillus kawauchii）、アスペルギルス ウサミ（Aspergillus usami）、アスペルギルス ニガー（Aspergillus niger）等の黒麹菌；モナスカス アンカ（Monascus anka）、モナスカス ピロサス（Monascus pilosus）等の紅麹菌が挙げられる。
【００１８】
発酵に用いる枯草菌（Bacillus subtilis）としては、例えば、バシルス ナットー(Bacillus natto)、バシルス サブチルス(Bacillus subtilis)、バシルス サーキュランス(Bacillus circulans)が挙げられる。
【００１９】
上述の懸濁液又は抽出物を微生物により発酵させるときには、発酵工程前に、殺菌を行って発酵の障害となる雑菌を除去することが必要である。この雑菌の殺菌除去方法としては、発酵素材を予め殺菌用エタノール等で洗浄した後無菌水等の無菌溶媒に懸濁する方法を用いてもよく、又発酵素材を溶媒に懸濁した後、懸濁液を加熱殺菌等により殺菌するようにしてもよい。加熱殺菌処理としては、懸濁液を１２０〜１３０℃で１０〜２０分間加熱するオートクレーブ殺菌法や、８０〜９０℃に６０〜１２０分間保持することを１日１回２〜３日間繰り返す間断殺菌法といった加熱殺菌法が一般に用いられる。
【００２０】
また、発酵処理時には、炭素源としてグルコース、ガラクトース、フルクトース、シュクロース、マルトース、ラクトース等の糖類を添加してもよい。
【００２１】
無菌化した懸濁液と培養液を発酵タンクに入れ、これに微生物を植菌して発酵させる。微生物の接種量は１０７〜１０８個／ｍＬが適量である。接種量が上記の範囲より多くなっても発酵の進行時間は殆ど変わらず、一方上記の範囲より少なくなると発酵完了までに長時間を要することとなって好ましくない。
【００２２】
発酵温度は一般に５〜５０℃の範囲、好ましくは各微生物の生育至適温度の範囲である。発酵日数は、至適温度に於いて一般に１〜１０日、好ましくは２〜５日の範囲である。発酵日数が上記の一般的範囲より短くなると発酵が十分に行われず発酵物の有効性が低下する傾向にあり、一方１０日を越えて長くしても有効性のそれ以上の上昇は認められないだけでなく、着色や発酵臭の増加が生ずることとなっていずれも好ましくない。
【００２３】
以上の発酵処理を行うに当たって、イワベンケイ属植物の成分が微生物の資化源としてより有効に利用されるようにするため、微生物の植菌前もしくは同時に前記の懸濁液或いは抽出物溶液に酵素を添加して、加水分解処理を行ってもよい。
【００２４】
この場合、酵素としては、蛋白分解酵素、澱粉分解酵素、ペクチン質分解酵素及び繊維素分解酵素から選ばれた少なくとも１種の酵素が用いることができる。
【００２５】
蛋白分解酵素としては、例えばアクチナーゼ等のアクチナーゼ類、ペプシン等のペプシン類、トリプシン、キモトリプシン等のトリプシン類、パパイン、キモパパイン等のパパイン類、グリシルグリシンペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、アミノペプチダーゼ等のペプチダーゼ類、ブロメライン等を用いることができる。
【００２６】
澱粉分解酵素としては、例えばα−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、β−ガラクトシダーゼ等を用いることができる。
【００２７】
ペクチン質分解酵素としては、例えばペクチンデポリメラーゼ、ペクチンデメトキシラーゼ、ペクチンリアーゼ、ペクチンエステラーゼ、ポリガラクチュロナーゼなどを用いることができる。
【００２８】
繊維素分解酵素としては、例えばセルラーゼ、ヘミセルラーゼ、アガラーゼ、マンナーゼ、キチナーゼ、キトサナーゼ、カラゲナーゼ、アルギナーゼ、フコイダナーゼ、イヌラーゼ、キシラナーゼ、リグニナーゼなどを用いることができる。
【００２９】
酵素の使用量は、懸濁液中のイワベンケイ属植物の固形分に対して、合計で０．００１〜１０重量％が好ましい。また、イワベンケイ属植物の抽出物の固形分に対して、合計で０．０００１〜５重量％が好ましい。温度、時間等の処理条件としては、酵素処理を発酵前に行うのであれば、各酵素の至適温度付近で１〜２４時間の処理を行うのがよく、一方、発酵と同時に行うのであれば、前記の微生物による発酵と同条件が適用される。
【００３０】
以上の発酵終了後、微生物殺菌のため、また、酵素処理を併用した場合であれば微生物の殺菌と酵素の失活を兼ねて、発酵液に70〜100℃で10〜120分程度の加熱殺菌処理を施した後、これをそのまま、或いは一般且つ好適にはろ過又は遠心分離等の固液分離手段によって液相を分取し、必要ならばｐＨを通常の化粧料のｐＨ領域であるｐＨ6〜8に調整し、さらに必要ならば希釈又は濃縮によって適宜の濃度とした上、皮膚外用組成物又は飲食用組成物の配合原料として供する。また、場合によっては、固液分離後の液相をスプレードライ法、凍結乾燥法など常法に従って粉末化したものを上記組成物に配合してもよい。
【００３１】
本発明に係る発酵物は、皮膚外用組成物（化粧料、医薬部外品、外用医薬品）、美容用又は健康増進用の飲食用組成物に配合することができる。皮膚外用組成物としては、例えば、乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダー、ほほ紅、白粉、洗顔料、ボディシャンプー、頭皮，頭髪用シャンプー、頭髪用コンディショナー、育毛，養毛用のシャンプー又はトニック、石けん等の清浄用化粧料、さらには浴剤等が挙げられるが、本発明はこれらに限定されるものではない。また、美容用又は健康増進用の飲食品用組成物としては、美容飲料、栄養ドリンク、スポーツドリンク、ニアウォーター、ビタミン飲料、ミネラル飲料、アルコール飲料等の飲料；各種スープ類（粉末スープも含む）、乳製品、ゼリー、キャンディ、錠菓、ガム等の食品；錠剤、液状、顆粒状又はゼリー状の健康食品・飲料等に配合することができるが、本発明はこれらに限るものではなく、経口摂取できる飲食品等に配合することができる
【００３２】
本発明の発酵物の配合量は、その固形分として、基礎化粧料の場合は、0.002〜1.0重量％（固形分重量％、以下同じ）の範囲、メイクアップ化粧料の場合は、0.002〜1.0重量％の範囲、又清浄用化粧料の場合は、0.002〜10.0重量％の範囲である。また、毛髪用化粧料の場合は、発酵物の固形分量として、0.0001〜5.0重量％の範囲である。また、飲食用組成物おける本発明の発酵物の配合量は固形分量として、0.1〜15重量％の範囲が好ましい。
【００３３】
本発明に係る発酵物を皮膚外用組成物や飲食用組成物に利用する場合、発酵物に加えて、皮膚外用剤や飲食品に汎用される成分、例えば油性成分、界面活性剤（合成系、天然物系）、乳化剤、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、抗酸化剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。また、本発明の発酵物の有効性、特長を損なわない限り、他の生理活性成分と組み合わせて配合することも何ら差し支えない。
【００３４】
ここで、油性成分としては、例えばハス油、オリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米糠油、米胚芽油、ヤシ油、カミツレ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、ベルガモット油、ローズヒップ油、ランベンダー油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワラン等の植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油等の動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリン等のロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワラン等の炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、エイコセン酸等の脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール等の高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）等の合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００３５】
界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩等のアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩等のカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタイン等の両性界面活性剤等を使用することができる。
【００３６】
乳化剤又は乳化助剤としては、酵素処理ステビア等のステビア誘導体、サポニン又はその誘導体、カゼイン又はその塩（ナトリウム等）、糖と蛋白質の複合体、ショ糖又はそのエステル、ラクトース、大豆由来の水溶性多糖、大豆由来蛋白質と多糖の複合体、ラノリン又はその誘導体、コレステロール、ステビア誘導体（ステビア酵素処理物等）、ケイ酸塩（アルミニウム、マグネシウム等）、炭酸塩（カルシウム、ナトリウム等）、サポニン及びその誘導体、レシチン及びその誘導体（水素添加レシチン等）、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀等）等を配合することもできる。
【００３７】
保湿剤としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体等）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、シラン根（白及）抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００３８】
増粘剤としては、例えば、アルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻又は紅藻由来成分；シラン根（白及）抽出物；ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体、アルカリゲネス産生多糖体等の多糖類；キサンタンガム、トラガントガム、ローストビーンガム、グアーガム等のガム類；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体；ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。
【００３９】
防腐・殺菌剤としては、例えば、尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル等のパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、ポリリン酸、プロパンジオール、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物、大根発酵液、サトウキビ等の植物由来のエタノール又は１，３−ブチレングリコール等がある。
【００４０】
粉体成分としては、例えば、セリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビ等）のパウダー、豆類（大豆、小豆等）のパウダー等がある。
【００４１】
紫外線吸収剤としては、例えば、パラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。
【００４２】
抗酸化剤としては、例えば、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ムラサキシキブの抽出物、シラン根の抽出物、シャクヤク抽出物、ビタミンＥ及びその誘導体（例えば、ビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等）等がある。
【００４３】
キレート剤としては、例えば、エチレンジアミンヒドロキシエチル三酢酸三ナトリウム、エデト酸又はその塩類、グルコン酸、フィチン酸、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、ヒドロキシエタンジホスホン酸四ナトリウムなどがある。
【００４４】
ｐＨ調整剤としては、例えば、クエン酸又はその塩類、乳酸又はその塩類、グリコール酸、コハク酸、塩酸、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどがある。
【００４５】
美白剤としては、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、４−メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン（5,5'−ジプロピル−ビフェニル−2,2’−ジオール）、ヒドロキシ安息香酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、α−ヒドロキシ酸、ＡＭＰ（アデノシンモノホスフェイト、アデノシン１リン酸）が挙げられ、これらを単独で配合しても、複数を組み合わせて配合しても良い。
【００４６】
上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレート等のコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシド等のコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウム等のアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシド、アスコルビルトコフェリルマレイン酸、アスコルビルトコフェリルリン酸Ｋ、ミリスチル３−グリセリルアスコルビン酸、カプリリル２−グリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基等）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステル等のＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−Ｏ−パルミテートナトリウム、グリセリルアスコルビン酸又はそのアシル化誘導体、ビスグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸グルセリン誘導体、Ｌ−アスコルビン酸リン酸アミノプロピル、Ｌ−アスコルビン酸のヒアルロン酸誘導体、３−Ｏ−Ｄラクトース−Ｌ−アスコルビン酸、イソステアリルアスコルビルリン酸塩等が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド）、α−アルブチン（ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド）等が、トラネキサム酸誘導体としては、トラネキサム酸エステル（例えば、トラネキサム酸ラウリルエステル、トラネキサム酸ヘキサデシルエステル、トラネキサム酸セチルエステル又はその塩）、トラネキサム酸のアミド体（例えば、トラネキサム酸メチルアミド）等が挙げられ、レゾルシノール誘導体としては、例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。
【００４７】
生理活性成分としては、例えば、胎盤抽出液、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、シソ抽出物、米糠抽出物又はその加水分解物、白芥子抽出物又はその加水分解物、白芥子の発酵物、シャクヤク抽出物又はその加水分解物、乳酸菌醗酵米、ムラサキシキブ抽出物、ハス種子抽出物又はその加水分解物、ハス種子発酵物、ハトムギ加水分解物、ハトムギ種子発酵物、ローヤルゼリー発酵物、酒粕抽出物又はそれに含まれるセラミド、酒粕発酵物、パンダヌス・アマリリフォリウス(Pandanus amaryllifolius Roxb.)抽出物、アルカンジェリシア・フラバ（Arcangelicia flava Merrilli）抽出物、カミツレ抽出物等が挙げられる。また、サンゴ草抽出物、イネの葉の抽出物又はその加水分解物、ナス（ハス、長ナス、賀茂ナス、米ナス等）抽出物又はその加水分解物、アンズ果実の抽出物、カタメンキリンサイ等の海藻の抽出物、アマモ等の海産顕花植物の抽出物、豆乳発酵物、クラゲ水、米抽出物又はその加水分解物、米醗酵エキス、発芽米抽出物又はその加水分解物、発芽米発酵物、黒豆抽出物又はその加水分解物、ダマスクバラの花の抽出物、タケノコの皮の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸等）、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、アラントイン、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナ抽出物、甘草抽出物、ニンジン抽出物、オタネニンジン抽出物又はその発酵物、紅参抽出物、ミツイシコンブ抽出物、ヘチマ抽出物、アナアオサ抽出物、モモ抽出物、桃仁抽出物、キウイ抽出物、ヒマワリ抽出物、ジュアゼイロ（Zizyphus joazeiro)抽出物、パウダルコ樹皮抽出物、萱草（デイリリー）抽出物または発酵物、ハイビスカスの花抽出物または発酵物、ハゴロモグサ抽出物、チェリモヤ抽出物、マンゴー抽出物、マンゴスチン抽出物、フノリ抽出物、烏龍茶抽出物、紅富貴抽出物、シラン抽出物、山椒果皮又は種皮の抽出物または加水分解物、ベニバナ花抽出物、カサブランカ抽出物、甘藷抽出物又はその発酵物、グアバ葉抽出物、ドクダミ抽出物、晩白柚抽出物、アロエ抽出物、イチジク花抽出物、リンゴ抽出物、ホワイトアスパラガス抽出物等がある。
【００４８】
次に、製造例、試験例及び実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下において、部はすべて重量部を、また、％はすべて重量％を意味する。
【００４９】
製造例１．発酵物の調製（１）
イワベンケイソウ科イワベンケイ属の大花紅景天（Rhodiola Crenulata）の根を乾燥し、乾燥物１０gに精製水を１００ｇ添加し、加熱殺菌した。この抽出懸濁液に酵母（サッカロミセス・セレビシエ）を１０８個／ｍＬ接種し、窒素気流下に３０℃で３日間静置培養した。培養終了後加熱殺菌し、培養液をろ過して、大花紅景天の酵母発酵物溶液４００ｇ（固形分濃度１．０３％）を得た。
【００５０】
製造例２．発酵物の調製（２）
製造例１の大花紅景天に代えて、紅景天（Rhodiola Rosea）を用いる他は製造例１と同様にして、酵母発酵物溶液４００ｇ（固形分濃度１．０１％）を得た。
【００５１】
製造例３．発酵物の調製（３）
製造例１の大花紅景天に代えて、ホソイワベンケイ（Rhodiola ishidae）を用いる他は製造例１と同様にして、酵母発酵物溶液４００ｇ（固形分濃度１．００％）を得た。
【００５２】
製造例４．発酵物の調製（４）
大花紅景天の根を乾燥し、乾燥物１０gに精製水を１００ｇ添加し、加熱殺菌した。この抽出懸濁液に乳酸菌（ラクトコッカス・ラクティス）を１０８個／ｍＬ接種し、窒素気流下に３７℃で３日間静置培養した。培養終了後加熱殺菌し、培養液をろ過して、大花紅景天の乳酸菌発酵物溶液４００ｇ（固形分濃度１．０５％）を得た。
【００５３】
製造例５．発酵物の調製（５）
製造例４の大花紅景天に代えて、紅景天を用いる他は製造例４と同様にして、乳酸菌発酵物溶液４００ｇ（固形分濃度１．０４％）を得た。
【００５４】
製造例６．発酵物の調製（６）
製造例４の乳酸菌（ラクトコッカス・ラクティス）に代えて、ラクトバシルス プランタラム（Lactobacillus plantarum)を用いる他は製造例４と同様にして、乳酸菌発酵物溶液４００ｇ（固形分濃度１．０２％）を得た。
【００５５】
製造例７．発酵物の調製（７）
大花紅景天の根を乾燥し、乾燥物１０gに精製水を１００ｇとグルコース１ｇ添加し、加熱殺菌した。この抽出懸濁液に酵母（サッカロミセス・セレビシエ）を１０８個／ｍＬ接種し、窒素気流下に３０℃で３日間静置培養した。培養終了後加熱殺菌し、１，３−ブチレングリコール１００ｇを添加し、８０℃で静置した。これをろ過して、大花紅景天の酵母発酵物溶液４００ｇ（固形分濃度１．０７％）を得た。
【００５６】
製造例８．発酵物の調製（８）
大花紅景天の根を乾燥し、乾燥物１０gに精製水を１００ｇとグルコース１ｇ添加し、加熱殺菌した。この抽出懸濁液に乳酸菌（ラクトコッカス・ラクティス）を１０８個／ｍＬ接種し、窒素気流下に３７℃で３日間静置培養した。培養終了後加熱殺菌し、１，３−ブチレングリコール１００ｇを添加し、８０℃で静置した。これをろ過して、大花紅景天の乳酸菌発酵物溶液４００ｇ（固形分濃度１．０２％）を得た。
【００５７】
製造例９．発酵物の調製（９）
大花紅景天の根を乾燥し、乾燥物１０gに精製水を１００ｇとグルコース４ｇ添加し、加熱殺菌した。この抽出懸濁液に麹菌（アスペルギルス オリゼー）を１０８個／ｍＬ接種し、窒素気流下に３０℃で３日間静置培養した。培養終了後加熱殺菌し、培養液をろ過して、大花紅景天の麹菌発酵物溶液４００ｇ（固形分濃度０．９１％）を得た。
【００５８】
製造例１０．発酵物の調製（１０）
大花紅景天の根を乾燥し、乾燥物１０gに精製水を１００ｇとグルコース４ｇ添加し、加熱殺菌した。この抽出懸濁液に枯草菌（バシルス ナットー）を１０８個／ｍＬ接種し、窒素気流下に３０℃で３日間静置培養した。培養終了後加熱殺菌し、培養液をろ過して、大花紅景天の枯草菌発酵物溶液４００ｇ（固形分濃度０．８５％）を得た。
【００５９】
比較製造例１．抽出物の調製（１）
大花紅景天の根を乾燥し、乾燥物５gに精製水を５０ｇ添加し、加熱殺菌した。この抽出懸濁液を窒素気流下に３０℃で３日間静置培養した。抽出懸濁液を加熱殺菌し、ろ過して、大花紅景天の抽出溶液２００ｇ（固形分濃度１．０２％）を得た。
【００６０】
処方例１．化粧水
［成分］                                                      部
ホホバ油                                                    １．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルアルコール                ５．０
ブチルパラベン                                              ０．１
製造例１の発酵物                                            ５．０
グリセリン                                                  ５．０
１，３−ブチレングリコール                                  ５．０
水酸化カリウム                                                適量
精製水                                      全量が１００部となる量
香料  適量
【００６１】
処方例２．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の発酵物に代えて、製造例２の発酵物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６２】
処方例３．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の発酵物に代えて、製造例３の発酵物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６３】
処方例４．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の発酵物に代えて、製造例４の発酵物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６４】
処方例５．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の発酵物に代えて、製造例５の発酵物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６５】
処方例６．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の発酵物に代えて、製造例６の発酵物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６６】
処方例７．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の発酵物に代えて、製造例７の発酵物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６７】
処方例８．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の発酵物に代えて、製造例８の発酵物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６８】
処方例９．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の発酵物に代えて、製造例９の発酵物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６９】
処方例１０．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の発酵物に代えて、製造例１０の発酵物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００７０】
処方例１１．乳液
［成分］                                                    部
流動パラフィン                                            ６．０
ヘキサラン                                                ４．０
ホホバ油                                                  １．０
ハス精油                                                  ０．０２５
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート      １．０
親油型ステアリン酸グリセリル                              １．０
水添大豆レシチン                                          １．５
製造例７の発酵物                                          ３．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド                        ２．０
水酸化カリウム                                            ０．５
グリセリン                                                ３．０
１，３−ブチレングリコール                                ２．０
カルボキシメチルセルロース                                ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム                                    ０．０１
水溶性コラーゲン                                          ０．１
精製水                                      全量が１００部となる量
香料                                                          適量
【００７１】
処方例１２．乳液
処方例１１に含まれる製造例７の発酵物に代えて、製造例８の発酵物５．０部を用いるほかは、処方例１１と同様にして乳液を得た。
【００７２】
処方例１３．乳液
処方例１１の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてトラネキサム酸２．０部を用いるほかは処方例１１と同様にして乳液を得た。
【００７３】
処方例１４．乳液
処方例１１の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてアルブチン３．０部を用いるほかは処方例１１と同様にして乳液を得た。
【００７４】
処方例１５．乳液
処方例１１の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてニコチン酸アミド５．０部を用いるほかは処方例１１と同様にして乳液を得た。
【００７５】
処方例１６．乳液
［成分］                                                      部
スクワラン                                                  ３．０
ベヘニルアルコール                                          ３．０
ヘキサラン                                                  ４．０
ホホバ油                                                    １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート        １．０
グリセリン脂肪酸エステル                                    １．０
大豆レシチン                                                １．５
製造例７の発酵物                                            ５．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド                          ２．０
水酸化カリウム                                              ０．５
グリチルリチン酸ジカリウム                                  ０．１
グリセリン                                                  ３．０
１，３−ブチレングリコール                                  ２．０
水溶性コラーゲン                                            ０．１
ヒアルロン酸ナトリウム                                      ０．０１
精製水                                      全量が１００部となる量
【００７６】
処方例１７．乳液
処方例１６の成分中、グリチルリチン酸ジカリウム１．０部に代えてトラネキサム酸１．０部を用いるほかは処方例１６と同様にして乳液を得た。
【００７７】
処方例１８．ローション
［成分］                                                    部
製造例２の発酵物                                        １０．０
エタノール                                              １０．０
グリセリン                                                ３．０
１、３−ブチレングリコール                                ２．０
メチルパラベン                                            ０．２
クエン酸                                                  ０．１
クエン酸ナトリウム                                        ０．３
カルボキシビニルポリマー                                  ０．１
キサンタンガム                                            ０．１
グアーガム                                                ０．１
香料                                                        適量
水酸化カリウム                                              適量
精製水                                    全量が１００部となる量
上記の成分を混合してローションを得た。
【００７８】
処方例１９．ローション
処方例１８の成分中、製造例２の発酵物に代えて製造例５の発酵物１０．０部を用いるほかは処方例１８と同様にしてローションを得た。
【００７９】
処方例２０．エッセンス
［成分］                                                    部
エタノール                                                ２．０
グリセリン                                                ５．０
１，３−ブチレングリコール                                ５．０
メチルパラベン                                            ０．１
ヒアルロン酸                                              ０．１
加水分解ヒアルロン酸液                                    ０．１
製造例８の発酵物                                          ５．０
クエン酸                                                  ０．３
クエン酸ナトリウム                                        ０．６
精製水                                    全量が１００部となる量
【００８０】
実施例２１．リキッドファンデーション
［成分］                                                    部
ステアリン酸                                              ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール                      ２．０
セトステアリルアルコール                                  ０．２
液状ラノリン                                              ２．０
流動パラフィン                                            ３．０
ミリスチン酸イソプロピル                                  ８．５
プロピルパラベン                                          ０．０５
製造例７の発酵物                                          ５．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム                      ０．２
ベントナイト                                              ０．５
プロピレングリコール                                      ４．０
トリエタノールアミン                                      １．１
メチルパラベン                                            ０．１
酸化チタン                                                ８．０
タルク                                                    ４．０
着色顔料                                                    適量
精製水                                    全量が１００部となる量
【００８１】
処方例２２．ボディシャンプー
［成分］                                                    部
Ｎ−ラウロイルメチルアラニンナトリウム                  ２５．０
ヤシ油脂肪酸カリウム液（４０％）                        ２６．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                            ３．０
メチルパラベン                                            ０．１
製造例８の発酵物                                          ５．０
１，３−ブチレングリコール                                ２．０
精製水                                    全量が１００部となる量
【００８２】
処方例２３．ヘアシャンプー
［成分］                                                      部
Ｎ−ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム                  １０．０
ポリオキシエチレン（３）アルキルエーテル硫酸ナトリウム    ２０．０
ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン                        １０．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                              ４．０
メチルパラベン                                              ０．１
クエン酸                                                    ０．１
製造例４の発酵物                                          ２．０
１，３−ブチレングリコール                                  ２．０
精製水                                      全量が１００部となる量
【００８３】
実施例２４．ヘアコンディショナー
［成分］                                                      部
ポリオキシエチレン（１０）硬化ヒマシ油                      １．０
塩化ジステアリルジメチルアンモニウム                        １．５
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム                        ２．０
２−エチルヘキサン酸グリセリル                              １．０
セタノール                                                  ３．２
ステアリルアルコール                                        １．０
メチルパラベン                                              ０．１
製造例３の発酵物                                            ２．０
１，３−ブチレングリコール                                  ５．０
精製水                                      全量が１００部となる量
【００８４】
処方例２４．育毛剤
［成分］                                                      部
グリチルリチン酸ジカリウム                                  ０．１
モノニトログアヤコールナトリウム                            ０．０２
塩酸ピリドキシン                                            ０．０３
ｌ−メントール                                              ０．８
タマサキツヅラフジ根エキス                                  ０．３
褐藻エキス                                                  ０．３
オタネニンジンエキス                                        ０．３
センブリエキス                                              ２．０
製造例７の発酵物                                            ３．５
トリメチルグリシン                                          ０．５
乳酸                                                        ０．２
１，３−ブチレングリコール                                １０．０
フェノキシエタノール                                        ０．２
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                              ０．４
Ｌ−アルギニン                                                適量
エタノール                                                ２０．０
精製水                                      全量が１００部となる量
上記の成分を十分攪拌混合して育毛料を得た。
【００８５】
試験例１．SOD様活性の評価試験
0.2Mトリス塩酸緩衝液50μL、1mMエチレンジアミン四酢酸(EDTA)二ナトリウム溶液20μL、0.75mMニトロブルーテトラゾリウムクロリド(NBT)溶液10μL、1mMキサンチン溶液20μL、0.06U/mLキサンチンオキシターゼ溶液50μL、製造例1〜10の発酵物1〜10及び比較製造例1の抽出物の50μL(それぞれの終濃度が0.1％になるように調製した)を混合して試料溶液を調製した。この試料溶液を37℃、5分間インキュベートし、スーパーオキシドを発生させた。そして、NBTがスーパーオキシドによって還元されて生成するホルマザン量を560nmにおける吸光度を測定した。また、コントロールとして50％1,3−ブチレングリコール水溶液を用いて上記と同様の操作を行い、ここに得られる吸光度に対する各試料添加時の吸光度の相対値を求め、スーパーオキシド残存率(％)とした。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、試料溶液の代わりに陽性対照として、スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)8.75units/mLを添加した場合についても、同様の試験を行った。
【００８６】
試験例１の結果を表１に示す。
［表１］
2018193341.tif 000002
【００８７】
表１に示す通り、本発明に係る発酵物は、格段にすぐれたSOD様活性を有することが確認された。
【００８８】
試験例２．DPPHラジカル消去作用の評価試験
DPPH(1,1−ジフェニル−2−ピクリルヒドラジル）2.4部をエタノール20部に溶解し、これに精製水20部を加えてDPPH溶液を調製した。このDPPH溶液24部に対して、18v/v％エタノール溶液を19.2部、2M酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)を4.8部加えて、DPPH添加溶液として調製した。また、抽出液そのものの色調が試験に及ぼす影響を差し引くため、DPPH溶液の代わりに50v/v％エタノール溶液を用いて、18v/v％エタノール溶液と2M酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液を混合した液を対照液とした。次に、製造例1〜10の発酵物1〜10及び比較製造例1の抽出物を精製水でそれぞれ希釈して12種の試料溶液を調製した。なお、各組成物は、試料溶液全量に対する溶液としての終濃度がそれぞれ0.1％となるように精製水で希釈した。この試料溶液とDPPH添加溶液又は対照液とを1：3の割合で混合し、37℃で20分静置後、各試料溶液をDPPH添加溶液と混合した場合の550nmにおける吸光度と、各試料溶液を対照液と混合した場合の550nmにおける吸光度との差を測定し、DPPHラジカルの残存量を確認した。また、コントロール（Control）として50％1,3−ブチレングリコール水溶液を使用した場合についても上記と同様の操作を行い、試料無添加時のDPPHラジカル残存率を100としたときの各試料添加時のDPPHラジカル残存率の相対値を求めた。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、試料溶液の代わりに陽性対照として水溶性ビタミンＥ［Trolox］(終濃度25μM)を添加した場合についても、同様の試験を行った。
【００８９】
試験例２の結果を表２に示す。
［表２］
2018193341.tif 000003
【００９０】
表２に示す通り、本発明に係る発酵物は、格段にすぐれたDPPHラジカル消去作用を有することが確認された。
【００９１】
試験例３．チロシナーゼ活性抑制の評価試験
マックイルベイン緩衝液(pH6.8)を用いて125U/mLのチロシナーゼ酵素液を調製した。次に、製造例1〜10の発酵物1〜10及び比較製造例1の抽出物を精製水により調製した試料溶液を96ウェルマイクロプレートに100μL/ウェルずつ添加した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例１の抽出物溶液の終濃度（溶液としての濃度）がそれぞれ0.5％となるように調製したものを使用した。次に、0.03％Ｌ−チロシン溶液を同じく100μL/ウェルずつ添加し、十分に混合した。これに上記チロシナーゼ酵素液を100μL/ウェルずつ添加して十分に混合し、室温で10分間静置した。そして、波長490nmにおける反応溶液の吸光値を測定した。また、試料溶液の代わりに精製水を用いて同様に操作したものをコントロールとし、チロシナーゼ活性率を、コントロールの吸光値を100としたときの相対値により求めた。
【００９２】
［表３］
2018193341.tif 000004
【００９３】
表３に示す通り、本発明に係る発酵物は、格段にすぐれたチロシナーゼ活性抑制作用を有することが確認された。