(57)【要約】【課題】シワ、たるみ、炎症等を抑制するための、プラスミン抑制作用を示す新規の原料素材を含むプラスミン抑制剤を提供する。【解決手段】マイマイカ、および、シモン芋からなる群から選択される少なくとも１種の原料素材の抽出物を含む、プラスミン抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイマイカ、および、シモン芋からなる群から選択される少なくとも１種の原料素材の抽出物を含む、プラスミン抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プラスミン抑制剤に関する。より詳細には、本発明は、プラスミンの産生を抑えるか、または、プラスミンの活性を阻害することにより、シワ、たるみ、炎症等を抑制するための、プラスミン抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢や光老化で生じる肌のシワやたるみをもたらす主な原因は、真皮中のコラーゲン分解であると考えられている。コラーゲン分解は、Matrix Metalloproteinases（ＭＭＰｓ）という酵素群の活性が主たる要因として起こる。一方、ＭＭＰｓの活性化には、プラスミン等のセリンプロテアーゼ類が必要である。このように、コラーゲン分解を制御する因子は、ＭＭＰｓやプラスミン等、多岐にわたっている。また、プラスミンは表皮や多様な組織でも発現しており、その活性は皮膚に限らず炎症反応においても深く関わることが知られている。
【０００３】
このようなプラスミンの産生を抑制するためのプラスミン抑制剤として、特許文献１に記載の皮膚外用剤が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００３−２８２１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特許文献１に記載の皮膚外用剤は、オトギリソウ、ノバラ、カリン、ボタン、イチヤクソウ、キイチゴ、シモツケソウ、ジュウヤクの抽出物より調製され得る。しかしながら、これら以外に、プラスミンの産生を特異的に抑制し得る原料素材は、知られていない。
【０００６】
本発明は、このような従来の課題に鑑みてなされたものであり、シワ、たるみ、炎症等を抑制するための、プラスミン抑制作用を示す新規の原料素材を含むプラスミン抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決する本発明のプラスミン抑制剤には、以下の構成が主に含まれる。
【０００８】
（１）マイマイカ、および、シモン芋からなる群から選択される少なくとも１種の原料素材の抽出物を含む、プラスミン抑制剤。
【０００９】
このような構成によれば、本発明のプラスミン抑制剤は、上記原料素材が含まれていることにより、プラスミンの産生を抑制し得る。また、本発明のプラスミン抑制剤は、上記原料素材が含まれていることにより、プラスミンの活性を阻害し得る。そのため、このようなプラスミン抑制剤が用いられることにより、シワ、たるみ、炎症等の抑制効果が期待される。なお、本発明において、プラスミン抑制作用は、プラスミンの産生が抑制されることによって達成されてもよく、プラスミンの活性が阻害されることによって達成されてもよく、その両方によって達成されてもよい。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、シワ、たるみ、炎症等を抑制するための、プラスミン抑制作用を示す新規の原料素材を含むプラスミン抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
プラスミンは、前駆体であるプラスミノーゲンがプラスミノーゲンアクチベーターによって活性化されたプロテアーゼの一種である。プラスミンは、血液凝固系において血栓の形成を抑制する重要な働きを示す。しかしながら、プラスミンは、過剰に産生されると、組織や細胞のタンパクを非特異的に分解し、毛細血管の拡張や血管浸透性の亢進といった炎症を引き起こし、生体に悪影響を及ぼすことが知られている。一方、プラスミンは、皮膚において炎症に関与し、皮膚のバリア機能の低下、メラニン産生亢進による皮膚の黒化、ＭＭＰｓ活性化から真皮層の分解によるシワ、たるみの形成といった老化に関与することが知られている。本発明は、このようなプラスミンの産生を抑制するためのプラスミン抑制剤である。本発明の一実施形態のプラスミン抑制剤は、マイマイカ、および、シモン芋からなる群から選択される少なくとも１種の原料素材の抽出物を含む。
【００１２】
抽出物を得る際の抽出溶媒の種類は特に限定されない。抽出物は、極性溶媒として、水、低級アルコール、多価アルコール、高級アルコール等の有機溶媒を用いた抽出物であってもよい。また、抽出物は、非極性溶媒として、石油エーテル、或は炭素数４〜８の脂肪族炭化水素、炭素数１〜２の脂肪族炭化水素のハロゲン化物、炭素数６〜７の芳香族炭化水素等を用いた抽出物であってもよい。これらのうち、抽出物は、極性溶媒で抽出した抽出物であることが好ましく、水、または水とメタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、イソプロパノール等の低級アルコールとの混合物を用いた抽出物であることがより好ましい。中でも、抽出物は、エタノール抽出物であることが好ましい。エタノールの濃度は特に限定されない。一例を挙げると、エタノールの濃度は、５０（ｖ／ｖ）％以上であることが好ましく、１００（ｖ／ｖ）％（無水エタノール）であってもよい。エタノール濃度が５０（ｖ／ｖ）％以上であるエタノール溶液を用いることにより、抽出時に腐敗を生じにくく、安定して抽出することができる。
【００１３】
また、上記抽出時における抽出溶媒の量は特に限定されない。一例を挙げると、抽出溶媒の量は、原料素材１００質量部に対して、１００質量部以上であることが好ましく、５００質量部以上であることがより好ましい。また、抽出溶媒の量は、１０００００質量部以下であることが好ましく、１００００質量部以下であることがより好ましい。抽出溶媒の量が１００質量部未満である場合、抽出効率が悪くなる傾向がある。一方、抽出溶媒の量が１０００００質量部を超える場合、抽出効率の向上が望めない傾向があり、かつ、濃縮および精製に時間がかかり、製造効率が低下する傾向がある。
【００１４】
なお、抽出時間および抽出温度は特に限定されない。抽出は、低温抽出であってもよく、室温〜加温抽出であってもよい。抽出時間は、数分から２週間程度であってもよい。また、抽出操作は、２回以上であってもよい。
【００１５】
得られた抽出物は、適宜、不純物の除去や脱臭、脱色、濃縮などの精製操作が行われてもよい。精製操作は、ろ過、ゲルろ過、遠心分離、クロマトグラフィ、蒸留、分配法等が例示される。
【００１６】
また、得られた抽出物はそのまま用いられてもよく、希釈液としたり、濃縮エキスとして用いられてもよい。また、抽出物は、凍結乾燥等により乾燥粉末とされてもよく、ペースト状に調製されてもよい。これら乾燥粉末等は、上記原料素材の抽出を介して得られたものであることから、本実施形態では、これら乾燥粉末等も、本実施形態でいう抽出物に含む。乾燥粉末は、水または上記低級アルコール、多価アルコールにあらかじめ溶解して用いられるか、水を含む組成物中で可溶化して用いられてもよい。なお、本実施形態のプラスミン抑制剤は、取扱いが容易である点から、乾燥粉末とされることが好ましい。
【００１７】
得られた乾燥粉末は、プラスミン産生を抑制するか、または、プラスミンの活性を阻害するための活性成分を含んでいる。これら乾燥粉末がプラスミン産生を抑制するための活性成分を含んでいるかどうかは、たとえばコラーゲンゲル包埋培養法により、ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）をコラーゲンゲル中に分散、播種し、次いで、上記乾燥粉末を含む適宜の溶媒（たとえば無血清ダルベッコ変性イーグル培地（ＤＭＥＭ））を添加してプラスミンを産生させる場合において、プラスミン活性キット（ＡＮＡ  ＳＰＥＣ  ＡＳ−７２１２４）を用いて培地中に分泌されたプラスミンを定量することによって確認することができる。
【００１８】
・マイマイカ
マイマイカ（ハマナス）は、バラ科バラ属の落葉低木である。本実施形態で使用されるマイマイカの部位は特に限定されない。マイマイカは、葉、茎、幹、材、幼芽、花、種子、根等の一部位または複数部位が用いられ得る。茶葉など食用として利用され、食経験というある一定の安全性が担保されているという観点から、マイマイカの花が好適に使用される。この場合、マイマイカの花は、たとえば、抽出溶媒として５０（ｖ／ｖ）％エタノールを用いて抽出され、適宜精製された後に凍結乾燥されることにより、所定濃度の活性成分を含むマイマイカ乾燥粉末（マイマイカ抽出物）が得られる。
【００１９】
マイマイカ抽出物の使用量は、所望される用途や、所望されるプラスミン抑制効果の強弱等により適宜調整される。また、マイマイカ抽出物の使用量は、抽出溶媒の種類によっても最適使用量が異なる。一例を挙げると、５０（ｖ／ｖ）％エタノールによって抽出されて得られたマイマイカ乾燥粉末は、適宜の溶媒（たとえば無血清ＤＭＥＭ培地）を添加される場合において、１５μｇ／ｍＬ以上となるよう用いられることが好ましく、３０μｇ／ｍＬ以上となるよう用いられることがより好ましい。また、マイマイカ乾燥粉末は、１５０μｇ／ｍＬ以下となるよう用いられることが好ましい。
【００２０】
・シモン芋
シモン芋は、サツマ芋に近似するブラジル原産のヒルガオ科の植物であり、白甘藷、白サツマ芋、カイアポ芋等とも呼ばれる。シモン芋は、葉、茎、幹、材、幼芽、花、種子、根等の一部位または複数部位が用いられ得る。茶葉など食用として利用され、食経験というある一定の安全性が担保されているという観点から、シモン芋の葉が好適に使用される。この場合、シモン芋の葉は、たとえば、抽出溶媒として５０（ｖ／ｖ）％エタノールを用いて抽出され、適宜精製された後に凍結乾燥されることにより、所定濃度の活性成分を含むシモン芋乾燥粉末（シモン芋抽出物）が得られる。
【００２１】
シモン芋抽出物の使用量は、所望される用途や、所望されるプラスミン抑制効果の強弱等により適宜調整される。また、シモン芋抽出物の使用量は、抽出溶媒の種類によっても最適使用量が異なる。一例を挙げると、５０（ｖ／ｖ）％エタノールによって抽出されて得られたシモン芋乾燥粉末は、適宜の溶媒（たとえば無血清ＤＭＥＭ培地）を添加される場合において、１００μｇ／ｍＬ以上となるよう用いられることが好ましく、２００μｇ／ｍＬ以上となるよう用いられることがより好ましい。また、シモン芋乾燥粉末は、１８００μｇ／ｍＬ以下となるよう用いられることが好ましい。
【００２２】
以上、本実施形態のプラスミン抑制剤は、上記原料素材が含まれていることにより、プラスミンの産生を抑制し得る。また、本実施形態のプラスミン抑制剤は、上記原料素材が含まれていることにより、プラスミンの活性を阻害し得る。そのため、このようなプラスミン抑制剤が用いられることにより、シワ、たるみ、炎症等の抑制効果が期待される。
【００２３】
また、本実施形態のプラスミン抑制剤は、適宜、公知の添加剤等が配合されてもよい。一例を挙げると、プラスミン抑制剤は、外用剤基剤に通常用いられる油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、低級アルコール類、高級アルコール類、多価アルコール類、エステル類、水溶性高分子、界面活性剤、保湿剤、抗炎症剤、紫外線吸収剤、防腐剤、防カビ剤、香料、顔料、賦形剤、酸化防止剤、美容成分、化粧料安定化剤等が配合されてもよい。より具体的には、本実施形態のプラスミン抑制剤は、たとえば、水、油脂類や界面活性剤といった添加剤を配合することにより、化粧料や皮膚外用剤の用途として利用し得る。
【実施例】
【００２４】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明する。本発明は、これら実施例に何ら限定されない。
【００２５】
＜マイマイカ５０（ｖ／ｖ）％エタノール抽出物（マイマイカ乾燥粉末）の調製＞
収穫したマイマイカの花１ｋｇを、２０Ｌの５０（ｖ／ｖ）％エタノールに浸漬し、４℃で１週間保持し、ろ過し、マイマイカ５０（ｖ／ｖ）％エタノール抽出原液を得た。次いで、溶媒留去し、凍結乾燥した。乾燥粉末として、４００ｇのマイマイカ乾燥粉末を得た。
【００２６】
＜シモン芋５０（ｖ／ｖ）％エタノール抽出物の調製（シモン芋乾燥粉末）＞
収穫したシモン芋の葉１ｋｇを、２０Ｌの５０（ｖ／ｖ）％エタノールに浸漬し、４℃で１週間保持し、ろ過し、シモン芋５０（ｖ／ｖ）％エタノール抽出原液を得た。次いで、溶媒留去し、凍結乾燥した。乾燥粉末として、４８ｇのシモン芋乾燥粉末を得た。
【００２７】
（実施例１）
実施例１は、プラスミンを発現することが既知であるコラーゲンゲル包埋培養法に沿って実施した。まず、９６ウェルプレートにヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）を２．５×１０3ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように、コラーゲンゲル中に分散、播種した。２４時間後に、ゲルをウェルから切り離し、マイマイカ乾燥粉末が１５μｇ／ｍＬとなるよう溶解させた無血清ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を添加した（プラスミン抑制剤もしくは活性抑制剤に相当）。さらに２４時間後に培養上清を回収し、培養上清中のプラスミン活性を測定した。プラスミン活性測定はプラスミン活性キット（ＡＮＡ ＳＰＥＣ社製  ＡＳ−７２１２４）を用い、基質溶液と培養上清を１：１の割合で混合した。混合後、初期値（Ｅｘ／Ｅｍ＝３８０／５００）を測定し、３７℃で６０分間反応させた後、再度Ｅｘ／Ｅｍ＝３８０／５００の蛍光強度を測定した。６０分後の蛍光強度と初期値の差をウェルごとに算出し、得られた値を元に、プラスミン抑制率（プラスミン阻害率）を算出した。なお、細胞増殖率（％）は別途単層培養細胞を用いて各ウェルの細胞からＢＣＡ法にてタンパク量をし、コントロールに対する相対タンパク量より算出した。なお、細胞増殖率は、約１００％以上であれば、細胞毒性がないと判断し得る。結果を表１に示す。
【００２８】
（実施例２〜４）
使用した乾燥粉末の種類または使用量を表１に記載のものに変更した以外は、実施例１と同様の方法により、プラスミン活性を測定し、細胞増殖率およびプラスミン阻害率を算出した。結果を表１に示す。
【００２９】
【表１】
2018070450.tif 000002
【００３０】
表１に示されるように、実施例１〜４で調製されたいずれのプラスミン抑制剤も、細胞毒性はなく、かつ、優れたプラスミン阻害率を示した。中でも、シモン芋の５０（ｖ／ｖ）％エタノール抽出物を用いた実施例３〜４では、優れたプラスミン阻害率を示した。なお、実施例２のマイマイカの５０（ｖ／ｖ）％エタノール抽出物（３０μｇ／ｍＬ）のプラスミン阻害率（１５．３％）と同程度のプラスミン阻害率を達成するために必要なトラネキサム酸の量は、２．５ｍＭ（３９３μｇ／ｍＬ）である。すなわち、実施例２は、トラネキサム酸と比較して、約１３分の１の量で同程度のプラスミン抑制作用を示すことが分かった。