(57)【要約】【課題】自閉症スペクトラム（ＡＳＤ）のバイオマーカーの提供【解決手段】miR-6126、miR-1227-5p、miR-3156-5p、miR-6780a-5p、miR-328-3p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡの、ＡＳＤのバイオマーカーとしての使用。【選択図】図３
2018064470.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p、hsa-miR-328-3p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡの、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）のバイオマーカーとしての使用。
【請求項２】
血液試料の判定方法であって、
血液試料におけるhsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡの発現量と基準値とを比較すること、並びに、
前記発現量が前記基準値よりも低い場合に、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）が陽性と判定することを含む、方法。
【請求項３】
血液試料の判定方法であって、
血液試料におけるhsa-miR-328-3pの発現量と基準値とを比較すること、及び、
前記発現量が前記基準値よりも高い場合に、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）が陽性と判定することを含む、方法。
【請求項４】
前記基準値は、健常者の発現量に基づき設定された値である、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
請求項１に記載の使用、又は、請求項２から４のいずれかに記載の方法のためのキットであって、
hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p、hsa-miR-328-3p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡの発現量を測定可能なデバイス又は試薬を含む、キット。
【請求項６】
マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む医薬組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つである、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療のための医薬組成物。
【請求項７】
マイクロＲＮＡのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-328-3pである、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、自閉症スペクトラム障害のバイオマーカーに関する。
【背景技術】
【０００２】
自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）をはじめとする発達障害は、近年その患者数が急増しており、大きな社会問題になっている。
【０００３】
自閉症の診断やバイオマーカーについては、酵素、タンパク質、及びペプチドなどに着目した方法が開示されている（特許文献１から３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１４−２２４７５９号公報
【特許文献２】特開２０１４−５０６２４４号公報
【特許文献３】特開２０１５−１８０８９７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）をはじめとする発達障害は、成長過程において、心理・精神面での不適応につながりやすいことから、医療や教育の場においても早急な対応が必要である。上記特許文献１から３の開示はあるものの、現時点でのＡＳＤ診断のゴールデンスタンダードはＤＳＭ−５であり、診断バイオマーカーは実用化に至っていない。
ＤＳＭ−５に基づく診断は時間がかかるため、少しでも早急な患者サポートができる診断マーカーが必要とされている。
【０００６】
そこで、本開示は、ＡＳＤのバイオマーカーを提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、一態様において、hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p、hsa-miR-328-3p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡの、ＡＳＤのバイオマーカーとしての使用に関する。
【０００８】
本開示は、その他の態様において、血液試料におけるhsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡの発現量と基準値とを比較すること、並びに、前記発現量が前記基準値よりも低い場合にＡＳＤが陽性と判定することを含む、血液試料の判定方法に関する。
【０００９】
本開示は、その他の態様において、血液試料におけるhsa-miR-328-3pの発現量と、基準値とを比較すること、及び、前記発現量が前記基準値よりも高い場合に、ＡＳＤが陽性と判定することを含む、血液試料の判定方法に関する。
【００１０】
本開示は、その他の態様において、本開示に係る使用、又は、本開示に係る方法のための、hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p、hsa-miR-328-3p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡの発現量を測定可能なデバイス又は試薬を含むキットに関する。
【００１１】
本開示は、その他の態様において、hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡ又は細胞内で該マイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む医薬組成物、あるいは、hsa-miR-328-3pのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、ＡＳＤの予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療のための医薬組成物に関する。
【発明の効果】
【００１２】
本開示によれば、一又は複数の実施形態において、ＡＳＤに関する判定や診断を提供できるという効果を奏しうる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、網羅的マイクロRNA発現解析を行った結果の一例である。統計的に有意な５つのマイクロRNAの名前（ID）を示す。
【図２】図２は、リアルタイムRT-PCR法を用いて３つのマイクロRNA（hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p及びhsa-miR-3156-5p）の発現変動を確認した結果の一例である。
【図３】図３は、リアルタイムRT-PCRを用いていて３つのマイクロRNA（hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、及びhsa-miR-3156-5p）についてROC曲線（受信者動作特性曲線）を描出した結果の一例である。
【図４】図４は、３つのマイクロRNA（hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、及びhsa-miR-3156-5p）の発現を、血液及び脳組織で確認した結果の一例である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本開示において、「マイクロＲＮＡ（miRNA）」とは、低分子non-codingRNAの一種をいい、当該技術分野において使用される通常の意味を示す。本開示においてＩＤ（名称）を用いて言及するマイクロＲＮＡは、miRBase (http://www.miRbase.org/)のRelease 21（2014年6月）のデータに登録されるマイクロＲＮＡである。本開示においてマイクロＲＮＡは、特に言及がない場合、ヒトのマイクロＲＮＡである。また、本開示においてマイクロＲＮＡは、特に言及がない場合、成熟型の１７〜２５塩基からなるマイクロＲＮＡを意味しうる。
【００１５】
本開示において自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）とは、発達障害の１つで、社会的コミュニケーション及び相互関係における持続的障害は、限定された反復する様式の行動、興味、活動がみられる障害をいう。ＤＳＭ−５などの診断基準で診断されている。
【００１６】
［バイオマーカー］
本開示は、５つのマイクロＲＮＡ（表１、hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p、及びhsa-miR-328-3p）が、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）の診断バイオマーカーとして利用できるという知見に基づく。
【００１７】
【表１】
2018064470.tif 000003
【００１８】
したがって、本開示は、一態様として、hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p、hsa-miR-328-3p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡの、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）のバイオマーカーとしての使用に関する。
【００１９】
本開示において、「自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）のバイオマーカーとしての使用」とは、一又は複数の実施形態において、マイクロＲＮＡの発現変動を、ＡＳＤの診断又はＡＳＤの判定における指標若しくは指標の１つとすることが挙げられる。
本開示においてＡＳＤの判定とは、一又は複数の実施形態において、予め定められた基準と比較して、対象試料若しくは対象者に対して機械的又は客観的にＡＳＤに関する評価をすることをいい、医師による診断を含まない。本開示においてＡＳＤに関する評価とは、一又は複数の実施形態において、ＡＳＤが陽性か陰性か、ＡＳＤ陽性である可能性、及びＡＳＤ陰性である可能性が挙げられ、さらなる詳細な評価区分や、その他の評価があってもよい。
【００２０】
マイクロＲＮＡの発現変動とは、一又は複数の実施形態において、対象者のマイクロＲＮＡの発現量が、健常者のそれと比較して高い、又は低いことが挙げられる。
hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、及びhsa-miR-6780a-5pは、ＡＳＤ患者では健常者よりも発現量が低くなる発現変動を示し、hsa-miR-328-3pは、ＡＳＤ患者で健常者よりも発現量が高くなる発現変動を示す。
【００２１】
マイクロＲＮＡの発現量の測定方法は特に限定されず、従来公知の方法や今後開発される方法が採用でき、一又は複数の実施形態において、マイクロアレイ法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法などが採用できる。
【００２２】
ＡＳＤのバイオマーカーとして使用するマイクロＲＮＡは、ＡＳＤの診断又は判定の信頼性向上の点からhsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つであることが好ましい。組み合わせは、これら３つのなかから選ばれる２つ、又は３つの組み合わせが挙げられる。
【００２３】
対象者のマイクロＲＮＡは、対象者の組織試料又は体液試料から抽出されうる。対象者への負担軽減の点から、試料としては、一又は複数の実施形態において、体液試料が好ましく、血液試料がより好ましい。血液試料は、血液そのものであってもよく、マイクロＲＮＡが含まれる範囲でさらに前処理されてもよい。
【００２４】
［判定方法］
本開示に係るバイオマーカーとしての使用は、一態様として、血液試料の判定方法であって、血液試料におけるhsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡの発現量と基準値とを比較すること、並びに、前記発現量が前記基準値よりも低い場合に、ＡＳＤが陽性と判定することを含む方法に関する。
本開示に係るバイオマーカーとしての使用のその他の態様は、血液試料の判定方法であって、血液試料におけるhsa-miR-328-3pの発現量と基準値とを比較すること、及び、前記発現量が前記基準値よりも高い場合に、ＡＳＤが陽性と判定することを含む方法に関する。
【００２５】
本開示に係る判定方法における基準値は、一又は複数の実施形態において、健常者における対応マイクロＲＮＡの発現量に基づき設定することができる。該基準値は、血液試料を提供した対象者と同世代の複数の健常者の発現量を統計処理して設定することが好ましく、対象者と同世代かつ同性の複数の健常者の発現量を統計処理して設定することがより好ましい。該基準値は、偽陽性・偽陰性を抑制する等の目的に応じて適宜高低して調節してもよい。
【００２６】
［診断方法］
本開示に係るバイオマーカーとしての使用は、その他の態様として、ＡＳＤの診断方法に関する。本開示に係るＡＳＤの診断方法は、一又は複数の実施形態において、上述したマイクロＲＮＡの発現変動を指標の１つとすることを含む。本開示に係るＡＳＤの診断方法は、一又は複数の実施形態において、本開示に係る判定方法の結果を利用すること含む。
さらには、本開示に係るＡＳＤの診断方法は、一又は複数の実施形態において、従来の診断基準（ＤＳＭ−５等）と本開示に係る判定方法の結果とを組み合わせて診断することを含む。
【００２７】
［キット］
本開示は、その他の態様において、本開示に係る使用、又は、本開示に係る判定方法のためのキットであって、前記表１の全部又は一部のマイクロＲＮＡの発現量を測定可能なデバイス又は試薬を含むキットに関する。
本開示のキットの一実施形態として、本開示の判定方法に使用する定量ＰＣＲキットであって、血液試料中の１又は複数のマイクロＲＮＡの発現量を測定できるプライマー及び試薬を含むキットが挙げられる。前記１又は複数のマイクロＲＮＡは、一又は複数の実施形態において、前記表１に記載の全部又は一部が挙げられる。前記プライマーは、適宜選択できる。本実施形態のキットには、さらに、健常者の発現量を測定するためのコントロール試料が含まれていてもよい。
本開示のキットの一実施形態として、本開示の判定方法に使用するキットであって、前記表１の全部又は一部のマイクロＲＮＡの発現量を測定可能なプローブが固定されたマイクロアレイに関する。
【００２８】
［医薬組成物（第１の形態）］
本開示は、その他の態様において、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む医薬組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、miR-6126、miR-1227-5p、miR-3156-5p、miR-6780a-5p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つである、ＡＳＤの予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療のための医薬組成物に関する。
本形態の医薬組成物は、ＡＳＤ患者において発現が低下するマイクロＲＮＡを供給することで、ＡＳＤの予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療を達成するものである。
【００２９】
本開示において「マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物」とは、所期のマイクロＲＮＡを細胞内に導入し得る形態の組成物をいう。「マイクロＲＮＡを含む組成物」としては、一実施形態として、１本鎖又は２本鎖の成熟マイクロＲＮＡを直接細胞に導入するための組成物が挙げられ、「細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物」としては、一実施形態として、マイクロＲＮＡ前駆体をコードするポリヌクレオチドが発現可能に連結されたベクターを含む組成物が挙げられる。マイクロＲＮＡ又はベクターを細胞内に導入する方法は、公知の方法を採用し得る。
【００３０】
本形態の医薬組成物が、「マイクロＲＮＡを含む組成物」である場合、一実施形態として、上記表１のＲＮＡで表わされる成熟マイクロＲＮＡが１本鎖又は２本鎖の状態で含まれる。成熟マイクロＲＮＡが２本鎖の場合、頭頸部がん細胞の細胞生育抑制の点からは、前駆体がDicerに切断された後の状態を想定した２本鎖ＲＮＡ（すなわち、相補鎖との間にミスマッチを保ったよりネイティブ又はネイティブに近い２本鎖ＲＮＡ）とすることが好ましい。これらのマイクロＲＮＡは合成したものを使用できる。
【００３１】
本形態の医薬組成物が、「細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物」の形態である場合、「細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系」の一実施形態として、ＲＮＡ前駆体又はその類似配列であって上記表１の成熟マイクロＲＮＡを発現するものを発現可能にコードするベクターを含む組成物があげられる。前記ＲＮＡ前駆体又はその類似配列を連結する発現ベクターは、公知のマイクロＲＮＡ発現用ベクターを使用してもよい。
【００３２】
［医薬組成物（第２の形態）］
本開示は、その他の態様において、マイクロＲＮＡのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、miR-328-3pである、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療のための医薬組成物に関する。
本形態の医薬組成物は、ＡＳＤ患者において発現が亢進するマイクロＲＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを供給することで、ＡＳＤの予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療を達成するものである。
【００３３】
本開示において「マイクロＲＮＡのアンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、標的とするマイクロＲＮＡと相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをいい、好ましい形態は、一本鎖のオリゴヌクレオチドである。本発明の一実施形態として、マイクロＲＮＡのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的とする成熟型マイクロＲＮＡ（miR-328-3p）の塩基配列の全部又は一部と相補的な塩基配列を含むオリゴヌクレオチドであり、より好ましくは、標的とする成熟型マイクロＲＮＡの塩基配列の全部又は一部と相補的な塩基配列からなるオリゴヌクレオチドである。
【００３４】
医薬組成物に含まれる「マイクロＲＮＡ」及び「マイクロＲＮＡのアンチセンスオリゴヌクレオチド」における塩基は、標的マイクロＲＮＡの機能を阻害できる範囲であれば、ＤＮＡ及びＲＮＡの塩基以外の非ＤＮＡ／ＲＮＡ塩基であってもよく、ＤＮＡ及びＲＮＡがフッ素などで置換された形態であってもよい。また、本開示における「マイクロＲＮＡのアンチセンスオリゴヌクレオチド」において、ヌクレオシド間の結合は、リン酸エステル結合の以外の結合であってもよく、安定性の点からは、硫黄（Ｓ）含有結合が好ましい。なお、本開示における「マイクロＲＮＡのアンチセンスオリゴヌクレオチド」は、公知のもの、及び、市販のものを利用できる。
【００３５】
本開示に係る医薬組成物は、第１の形態と第２の形態とが１つとなった組成物であってもよい。
【００３６】
本開示は、その他の態様において、ＡＳＤ又はＡＳＤの恐れのある対象者において、miR-6126、miR-1227-5p、miR-3156-5p、miR-6780a-5p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つを発現させること、及び／又は、miR-328-3pの発現を抑制することを含む、ＡＳＤの予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療の方法に関する。
該方法は、一又は複数の実施形態において、本開示に係る医薬組成物を該対象者に有効量投与することを含む方法である。該医薬組成物の投与方法は特に制限されないが、例えば、静脈投与又は皮下投与が挙げられる。
【００３７】
本開示は、以下の実施形態にも関しうる。
［１］  hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p、hsa-miR-328-3p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡの、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）のバイオマーカーとしての使用。
［２］  血液試料の判定方法であって、血液試料におけるhsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡの発現量と基準値とを比較すること、並びに、前記発現量が前記基準値よりも低い場合に、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）が陽性と判定することを含む、方法。
［３］  血液試料の判定方法であって、血液試料におけるhsa-miR-328-3pの発現量と、基準値とを比較すること、及び、前記発現量が前記基準値よりも高い場合に、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）が陽性と判定することを含む、方法。
［４］  前記基準値は、健常者の発現量に基づき設定された値である、［２］又は［３］に記載の方法。
［５］  ［１］に記載の使用、又は、［２］から［４］のいずれかに記載の方法のためのキットであって、hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p、hsa-miR-328-3p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡの発現量を測定可能なデバイス又は試薬を含む、キット。
［６］  マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む医薬組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-6126、hsa-miR-1227-5p、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-6780a-5p及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つである、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療のための医薬組成物。
［７］  マイクロＲＮＡのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-328-3pである、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療のための医薬組成物。
【実施例】
【００３８】
［対象者］
研究参加に同意を得たASD患者・健常者を対象とした（表２）。Discovery群は、年齢性別を一致させたASD患者30名と健常者30名で構成した。また、Replication群は、Discovery群から独立したASD患者17名と健常者22名で構成した。DSM-5を用いて自閉症の診断を行い、さらに診断結果はADOS（自閉症診断観察法）、ASSQ-R（自閉症スクリーニング質問紙）を用いて確認した。
対象者から採取した血液検体から、マイクロRNAを含むRNAを抽出した。PAXgene Blood RNA Tubeに採取した2.5mlの対象者の血液検体から、PAXgene Blood miRNA Kitを用いて、マイクロRNAを含むRNAを抽出した。抽出したRNAは、Agilent RNA 6000 Nano KitをRIN値が8以上であることを確認し、Agilent Small RNA Kitを用いてマイクロRNAが含まれることを確認した。
【００３９】
【表２】
2018064470.tif 000004
【００４０】
［マイクロアレイを使用した網羅的マイクロＲＮＡ解析］
Discovery群（ASD患者=30名,健常群=30名）のサンプルを用いて、高解像度のマイクロアレイを用いて網羅的なマイクロRNA解析を行った。その結果、5個のマイクロRNAが有意な発現変動(p値<0.001)を示した（図１）。すなわち、miR-6126、miR-1227-5p、miR-3156-5p、miR-6780a-5p、及びmiR-328-3pである。miR-6126、miR-1227-5p、miR-3156-5p、及びmiR-6780a-5pは、ASD患者で発現量が減少する傾向を示し、miR-328-3pは、ASD患者で発現量が増加する傾向を示した。
【００４１】
［リアルタイムPCR法による発現変動の確認］
Discovery群とは独立したReplication群(ASD患者=17名, 健常群=22名)に対して、リアルタイムRT-PCR法を用いて、上記５個のうち３個のマイクロRNA（miR-6126、miR-1227-5p、及びmiR-3156-5p）の発現変動を確認した。その結果、有意な発現変動を示した（図２）。すなわち、これらのマイクロRNAは、異なる方法かつ2つの異なる独立したサンプル集団においても、有意な変動を示した。
【００４２】
［バイオマーカーとしての有用性の確認］
次に、3個のマイクロRNA（miR-6126、miR-1227-5p、及びmiR-3156-5p）について、ASD診断バイオマーカーとして有用かどうかを検討した。全集団（ASD患者=47名, 健常群=52名）に対して、リアルタイムRT-PCRを用いて、ROC曲線（受信者動作特性曲線）を描出した（図３）。３個のマイクロRNAはいずれもAUC（曲線下面積）が0.6-0.7以上であり、バイオマーカーとして有用性が認められた。
【００４３】
［脳組織における発現の確認］
３個のマイクロRNA（miR-6126、miR-1227-5p、及びmiR-3156-5p）が脳組織で発現しているかどうかをリアルタイムRT-PCR法で調べた。ASD患者脳組織は入手困難なため、脳サンプルは、市販されている健常脳組織（28名のドナー由来）を用いた。血液サンプルはDiscovery群の健常者サンプル（30名）を用いた（図４）。では、血液データを左側に示し、これを基準（＝１）として、脳組織データを右側に示した。３個のマイクロRNAはともに、脳組織で発現を認めた。３個のマイクロRNAはともに、脳組織で発現を認めた。
【００４４】
マイクロRNAは複数のターゲット遺伝子をコントロールすることで、多様な機能を持つことが知られている。３個のマイクロRNA（miR-6126、miR-1227-5p、及びmiR-3156-5p）がコントロールしている遺伝子を、データベースを用いて探索した。さらに、Ontology解析（GO biological process）、Pathway解析（KEGG）を施行した。その結果、いずれのマイクロRNAでもシナプスとの関連が示唆された。
【配列表フリーテキスト】
【００４５】
配列番号1〜5：miRBaseに登録されているマイクロＲＮＡの配列
Seq ID No.1: hsa-miR-6126 MIMAT0024599
Seq ID No.2: hsa-miR-1227-5p MIMAT0022941
Seq ID No.3: hsa-miR-3156-5p MIMAT0015030
Seq ID No.4: hsa-miR-6780a-5p MIMAT0027460
Seq ID No.5: hsa-miR-328-3p MIMAT0000752
【図１】
2018064470.tif 000005
【図２】
2018064470.tif 000006
【図３】
2018064470.tif 000007
【図４】
2018064470.tif 000008
【配列表】
2018064470000001.app