(57)【要約】【課題】本発明は、ヘルペス感染症に対して高い効果を有する、天然物由来の抗ヘルペス剤を提供することを課題とする。【解決手段】本発明は、加熱乾燥マイタケ抽出物及び真空乾燥マイタケ抽出物を含むヘルペス感染症の治療及び／又は予防のための組成物、及び該組成物の製造方法等に関する。【選択図】図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
加熱乾燥マイタケ抽出物A及び真空乾燥マイタケ抽出物Bを含み、
抽出物Aを1としたときの抽出物Bの重量比が0.05〜10である、ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防のための組成物。
【請求項２】
抽出物Aを1としたときの抽出物Bの重量比が1〜5である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
抽出物A及び抽出物Bがいずれも水抽出物である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
外用剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
加熱乾燥マイタケ抽出物A重量比1に対し、真空乾燥マイタケ抽出物Bを重量比0.05〜10で混合する工程を含む、
ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防のための組成物の製造方法。
【請求項６】
抽出物A重量比1に対し、抽出物Bを重量比1〜5で混合する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
抽出物A及び抽出物Bがいずれも水抽出物である、請求項５又は６に記載の方法。
【請求項８】
外用剤である、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
抽出物Aが、以下の工程：
マイタケを加熱乾燥する工程、
得られた加熱乾燥マイタケに溶媒を加え、抽出画分を得る工程、及び
得られた抽出画分中の溶媒を除去し、乾燥物を得る工程
により得られる、請求項５〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
乾燥物を得る工程の前に、抽出画分にアルコールを添加し、析出する物質を除去する工程を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
抽出物Bが、以下の工程：
マイタケを真空乾燥する工程、
得られた真空乾燥マイタケに溶媒を加え、抽出画分を得る工程、及び
得られた抽出画分中の溶媒を除去し、乾燥物を得る工程
により得られる、請求項５〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
マイタケを真空乾燥する工程が、凍結乾燥により行われる、請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、加熱乾燥マイタケ抽出物及び真空乾燥マイタケ抽出物を含むヘルペス感染症の治療及び／又は予防のための組成物、及び該組成物の製造方法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘルペスウイルスは2本鎖DNAをゲノムとするDNAウイルスであり、ヒトに対して様々な病気を引き起こす。生体内に侵入したヘルペスウイルスは、特定の細胞、組織、又は臓器に潜伏感染する。潜伏感染部位はヘルペスウイルス種によって異なり、多様性を示す。ヘルペスウイルスはDNAの状態で潜伏しているが、宿主の体調変化により再活性化し、ウイルス粒子産生が開始される。ヘルペスウイルス感染症状は患者の免疫状態に大きく左右され、ほぼ無症状から致死的感染まで様々な病態を呈する。ヘルペスウイルスは潜伏及び再活性化を繰り返して、宿主に終生存在する。
【０００３】
細胞、組織、又は臓器においてDNAの状態で潜伏しているヘルペスウイルスを、体内から除去あるいは減少させることができる抗ウイルス薬は今のところ無い。この為、抗ウイルス薬は、再発時の不快感の緩和や再発回数の減少、病気の期間の短縮を目的に使用されている。しかしながら、アシクロビル（ACV）等の化学物質の抗ウイルス薬は、長期に渡って使用すると必然的に薬剤耐性ウイルスを生じるという問題がある。加えて、アシクロビルには重大な副作用として、急性腎不全、肝機能障害、間質性肺炎、肺炎、血小板減少症、せん妄（意識障害）、てんかん発作、無顆粒珠症、呼吸抑制、中毒性表皮壊死症等を生じることが知られている。
【０００４】
化学物質だけでなく、天然物に由来する抗ヘルペス剤についても研究がなされている。例えば、特許文献１にはLPS（リポポリサッカライド）を含む抗ヘルペス剤が開示されている。また、本願出願人は、長年の食経験から安全性が高いと考えられるマイタケ抽出物について研究を行い、これまでに、マイタケ抽出物がヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防に有効であることを見出している（特許文献２）。
【０００５】
しかしながら、これらの特許文献に開示される天然物由来の抗ウイルス剤のヘルペスウイルス感染症に対する効果は、必ずしも満足できるものではなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平０４−０４９２４２号公報
【特許文献２】特開２０１４−８０３７３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ヘルペス感染症に対して高い効果を有する、天然物由来の抗ヘルペス剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、加熱乾燥マイタケ抽出物と真空乾燥マイタケ抽出物を含む組成物が、加熱乾燥マイタケ抽出物又は真空乾燥マイタケ抽出物単独と比べて、ヘルペス感染症に対して高い効果を有することを見出した。
【０００９】
本発明は上記知見に基づくものであり、以下の態様を包含する。
（１）加熱乾燥マイタケ抽出物A及び真空乾燥マイタケ抽出物Bを含み、
抽出物Aを1としたときの抽出物Bの重量比が0.05〜10である、ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防のための組成物。
（２）抽出物Aを1としたときの抽出物Bの重量比が1〜5である、（１）に記載の組成物。
（３）抽出物A及び抽出物Bがいずれも水抽出物である、（１）又は（２）に記載の組成物。
（４）外用剤である、（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
（５）加熱乾燥マイタケ抽出物A重量比1に対し、真空乾燥マイタケ抽出物Bを重量比0.05〜10で混合する工程を含む、
ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防のための組成物の製造方法。
（６）抽出物A重量比1に対し、抽出物Bを重量比1〜5で混合する、（５）に記載の方法。
（７）抽出物A及び抽出物Bがいずれも水抽出物である、（５）又は（６）に記載の方法。
（８）外用剤である、（５）〜（７）のいずれかに記載の方法。
（９）抽出物Aが、以下の工程：
マイタケを加熱乾燥する工程、
得られた加熱乾燥マイタケに溶媒を加え、抽出画分を得る工程、及び
得られた抽出画分中の溶媒を除去し、乾燥物を得る工程
により得られる、（５）〜（８）のいずれかに記載の方法。
（１０）乾燥物を得る工程の前に、抽出画分にアルコールを添加し、析出する物質を除去する工程を含む、（９）に記載の方法。
（１１）抽出物Bが、以下の工程：
マイタケを真空乾燥する工程、
得られた真空乾燥マイタケに溶媒を加え、抽出画分を得る工程、及び
得られた抽出画分中の溶媒を除去し、乾燥物を得る工程
により得られる、（５）〜（１０）のいずれかに記載の方法。
（１２）マイタケを真空乾燥する工程が、凍結乾燥により行われる、（１１）に記載の方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の加熱乾燥マイタケ抽出物と真空乾燥マイタケ抽出物を含む組成物は、ヘルペス感染症に対して高い効果を示す。また、本発明の組成物は、長年の食経験を有するマイタケから製造される為、安全性が高く、副作用が少ないと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図1は、実施例1で得られた加熱乾燥マイタケ抽出物のHPLCによる分析結果を示す。
【図２】図2は、実施例2で得られた真空乾燥マイタケ抽出物のHPLCによる分析結果を示す。
【図３】図3は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-1の接種14日後までの症状の程度（スコア）の平均値を示す。（陰性）対照としてPBS、陽性対照としてアシクロビル（ACV）を用い、サンプルとしては実施例1で調製したMD Fr、及び実施例3で調製したMD FrとYM-6Aの混合物（MD Fr：YM-6A比＝1:1混合物）を用いた。
【図４】図4は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-1の接種3日後のウイルス力価の測定結果を示す。用いた対照及びサンプルについては図3と同様である。*は、t検定における有意差（*p<0.05）を示す。
【図５】図5は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種14日後までの症状の程度（スコア）の平均値を示す。（陰性）対照としてPBS、陽性対照としてアシクロビル（ACV）を用い、サンプルとしては実施例1で調製したMD Fr、実施例2で調製したYM-6A、及び実施例5で調製したMD FrとYM-6Aの混合物（MD Fr：YM-6A比＝1:0.1、1:0.2、1:1、1:5、及び1:10混合物）を用いた。
【図６】図6は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種3日後のウイルス力価の測定結果を示す。用いた対照及びサンプルについては図5と同様である。*は、t検定における有意差（*p<0.05、**p<0.01）を示す。
【図７】図7は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種14日後までの症状の程度（スコア）の平均値を示す。（陰性）対照としてPBS、陽性対照としてアシクロビル（ACV）を用い、サンプルとしては、実施例7で調製したMD FrとYM-6Aの混合物（MD Fr：YM-6A比＝1:1、1：3、及び1:5混合物）を用いた。
【図８】図8は、各サンプルで処理したマウスにおける、HSV-2の接種3日後のウイルス力価の測定結果を示す。用いた対照及びサンプルについては図7と同様である。*は、t検定における有意差（*p<0.05、**p<0.01、*** p<0.001）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
１．ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防のための組成物
一態様において、本発明は、加熱乾燥マイタケ抽出物及び真空乾燥マイタケ抽出物を含む、ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防のための組成物に関する。
【００１３】
本明細書において、「マイタケ」とは、マイタケ属〔Grifola〕キノコを意味する。マイタケ属キノコには、狭義のマイタケ〔Grifola frondosa〕のみならず、シロマイタケ〔Grifola albicans〕、チョレイマイタケ〔Grifola umbellata〕、及びトンビマイタケ〔Grifola gigantea〕等が含まれるが、好ましくは、本明細書におけるマイタケは、狭義のマイタケ〔Grifola frondosa〕を指す。本発明の抽出物の原料としては、マイタケの子実体及び菌糸体のいずれも用いることができるが、子実体を用いることが好ましい。最近ではマイタケ〔Grifola frondosa〕及びシロマイタケ〔Grifola albicans〕の子実体の人工栽培が可能となっているため、安定した原料確保の点から上記二者の子実体を使用するのが好ましい。
【００１４】
本明細書において、「乾燥マイタケ抽出物」とは、マイタケを加熱乾燥又は真空乾燥により乾燥させ、圧搾又は溶媒抽出するなどして、有効成分の含有量を高めたものを指す。具体的には、乾燥マイタケ抽出物には、乾燥マイタケを抽出原料として得られる抽出液、及びこれらの乾燥物のいずれもが含まれ、好ましくはマイタケ抽出液の乾燥物である。
【００１５】
マイタケ抽出物を得るための溶媒の種類は限定しないが、例えば、水又は低級アルコール等のアルコール、例えばメタノール、エタノール、及びプロパノール等が挙げられる。これらの抽出溶媒は単独で又は2種以上を適切な混合比で組み合わせて使用することができる。マイタケ抽出物を得るための溶媒は、好ましくは水を主とする溶媒であり、例えば抽出溶媒中の水分重量が、70%以上、80%以上、90%以上、95%以上、98%以上、99%以上、又は100%であることが好ましい。水としては、蒸留水、イオン交換水、水道水、及び天然水のいずれも使用し得る。抽出溶媒は、抽出効率を著しく損なわない範囲で添加剤、例えば緩衝剤を含んでいてもよい。
【００１６】
本発明の組成物において、加熱乾燥マイタケ抽出物Aを1としたときの真空乾燥マイタケ抽出物Bの重量比は、0.05以上、0.08以上、0.1以上、0.2以上、0.5以上、0.8以上、好ましくは1以上、1.5以上、2以上、2.5以上、又は3以上であってよく、また10以下、9以下、8以下、7以下、6以下、好ましくは5以下、4.5以下、4以下、3.5以下、又は3以下であってよい。抽出物Aを1としたときの抽出物Bの重量比は、例えば、0.05〜10、0.1〜5、好ましくは1〜5、2〜4、2.5〜3.5、又は3であってよい。
【００１７】
加熱乾燥マイタケ抽出物は、当業者に公知の方法により製造することができる。例えば、マイタケの菌糸体又は子実体、好ましくは子実体を加熱乾燥し、必要に応じて細断又は粉末化した後に、溶媒を加え、抽出を行うことができる。
【００１８】
マイタケの加熱乾燥方法は特に限定せず、公知の加熱乾燥法、例えば、熱風乾燥を用いることができる。加熱温度は、低すぎると乾燥効率が低下し、高すぎるとマイタケの成分に化学変化が生じる恐れがあるため、適切な範囲に設定することが好ましい。乾燥は、40℃以上、50℃以上、60℃以上、好ましくは70℃以上、又は80℃以上、また150℃以下、120℃以下、100℃以下、好ましくは90℃以下又は80℃以下の条件で、例えば40℃〜100℃、50℃〜90℃、又は60℃〜80℃の条件で、例えば熱風を目的の物質に送風することによって行うことができる。加熱時間はマイタケ中の水分が除かれる限り特に限定されず、例えば1時間以上、2時間以上、4時間以上、6時間以上、終夜、又は一昼夜とすることができる。
【００１９】
マイタケ抽出物を得るための溶媒については、上記の通りであるからここでは記載を省略する。抽出工程は、上記溶媒を乾燥マイタケに加えることにより行うことができる。抽出溶媒の添加量は特に限定しないが、例えば乾燥マイタケに対して抽出溶媒を1〜100倍、2〜50倍又は4〜30倍重量使用することができる。
【００２０】
抽出工程は、常温で行ってもよいが、加熱を行って抽出効率を高めてもよい。マイタケ中の成分に影響を与えるような酵素は60℃を超える温度では働きが衰えるので、60℃以上、好ましくは70℃以上、又は80℃以上で抽出を行うのが好ましい。また、加圧加熱によりさらに抽出効率を高めることが好ましく、加圧加熱の場合の加熱条件は、110℃以上、115℃以上、又は120℃以上、また140℃以下、130℃以下、又は125℃以下であってよい。加圧条件は、限定しないが、例えば、圧力釜等を用いて1.2気圧〜3気圧、1.5気圧〜2.5気圧、1.8気圧〜2.2気圧、1.9気圧〜2.1気圧又は2気圧にすることができる。抽出時間は抽出条件に応じて適宜設定することができるが、例えば5分〜1日、10分〜6時間、15分〜1時間、又は20分〜40分であってよい。抽出は、好ましくは加圧下100℃以上で短時間、例えば加圧下115℃〜125℃で5分〜1時間行う。
【００２１】
抽出物は、必要に応じて濾過による清澄化及び／又はアルコールによる析出物の除去によって、さらに純度を高めることができる。濾過による清澄化は公知の方法により行うことができる。アルコールによる析出物の除去は、例えば以下の工程により行うことができる。すなわち、上記抽出工程によって得られた抽出液又は必要に応じてこれを濃縮した溶液に対し、アルコールを、最終容量で50容量％以上、60容量％以上、又は70容量％以上になるように加え、例えば1〜25℃又は常温で、放置することによって液面若しくは液中、又は容器の壁等に析出する物質を除去して抽出物の純度を高めることができる。析出物の除去は、例えば濾過又は網等で掬うことによって行い得る。アルコールとしては、低級アルコール、例えばメタノール、エタノール、及びプロパノール等を単独で、又は二以上組み合わせて用いることができ、エタノールを単独で用いることが特に好ましい。
【００２２】
上記の様にして得られた抽出液は、常法により、例えば加熱乾燥、減圧乾燥、真空乾燥、スプレードライ等を単独で、又は二以上組み合わせて用いることによって乾燥させることができる。このとき、溶媒を完全に除去することが好ましい。
【００２３】
真空乾燥マイタケ抽出物は、当業者に公知の方法により製造することができる。例えば、マイタケの子実体部分を真空乾燥し、必要に応じて細断又は粉末化した後に、溶媒を加え、抽出を行うことができる。
【００２４】
マイタケの真空乾燥方法は特に限定せず、公知の真空乾燥法、例えば、凍結乾燥を用いることができる。真空乾燥は、マイタケを加熱する必要がなく、低温で乾燥を行うことから、マイタケの成分に化学変化が生じる恐れが少ない。真空乾燥は、完全な真空下で行ってもよいし、実質的な真空下、例えば100Pa以下、50Pa以下、又は20Pa以下等で行ってもよい。真空乾燥は、当業者に公知の方法により、例えば市販の真空乾燥機を用いて行うことができ、真空乾燥の時間は、マイタケから水分が除かれる限り特に限定されず、例えば1時間以上、2時間以上、4時間以上、6時間以上、終夜、又は一昼夜行うことができる。
【００２５】
真空乾燥を行ったマイタケについて、マイタケ抽出物を得るための溶媒、抽出工程、清澄化及び／又はアルコールによる析出物の除去、抽出液の乾燥については、上記加熱乾燥マイタケ抽出物について記載したものと同様であるからここでは記載を省略する。
【００２６】
本発明の組成物によって治療及び／又は予防され得るヘルペスウイルスの種類は限定しないが、単純ヘルペスウイルス（HSV-1：単純ヘルペスウイルス1型、又はHSV-2：単純ヘルペスウイルス2型に分けられる）、水痘帯状疱疹ウイルス、エプステインバールウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス6、ヒトヘルペスウイルス7、及びヒトヘルペスウイルス8が挙げられる。本発明の組成物によって治療及び／又は予防され得るヘルペスウイルスは、好ましくはHSV-1及びHSV-2である。本発明の組成物により治療及び／又は予防され得るヘルペス感染症の例として、限定するものではないが、ヘルペス性皮膚炎、ヘルペス性角膜炎、ヘルペス性結膜炎、口唇ヘルペス、口腔ヘルペス、咽頭ヘルペス、性器ヘルペス、ヘルペス性脳炎、及び新生児ヘルペス等が挙げられる。本発明の組成物は、これらのヘルペス感染症に罹患した患者に対して、ヘルペス感染症又はそれに伴う症状、例えば痒み及び痛み等の自覚症状、並びに／又は水疱及び紅斑等の皮膚症状を治療、緩和、又は低減するものであってもよい。また、本発明の組成物は、ヘルペス感染症に罹患するリスクのある患者に対して、例えば、ヘルペス感染症に罹患し、治療された再発のおそれがある患者に対して、予防的に用いられてもよい。
【００２７】
本発明の組成物の使用態様は特に限定されず、例えば健康補助食品等の食品、サプリメント、及び医薬組成物等のいずれであってもよいが、好ましくは医薬組成物である。
【００２８】
本発明の組成物は、常法により製剤化され得る。製剤化は、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences（Merck Publishing Co．，Easton，Pa．）に記載の方法を参照することができる。
【００２９】
投与形態は特に制限されず、必要に応じ適宜選択されるが、一般には錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、及びエリキシル剤等の経口剤、又は注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、外用剤、例えば経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、貼付剤、及び軟膏剤等の非経口剤として投与され、好ましくは経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、貼付剤、及び軟膏剤等の外用剤又は局所投与剤として投与される。
【００３０】
本発明の組成物が外用剤又は局所投与剤として投与される場合、その投与部位は特に限定しないが、例えば皮膚、角膜、結膜、口唇、口腔、咽頭、及び性器等が挙げられ、好ましくは口唇及び性器である。
【００３１】
本発明の組成物は、上記加熱乾燥マイタケ抽出物及び真空乾燥マイタケ抽出物に加えて、他の成分、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、及び香料等を含んでもよく、他の成分は上記投与形態に応じて適宜選択される。本発明の組成物が他の成分を含む場合、組成物中の加熱乾燥マイタケ抽出物及び真空乾燥マイタケ抽出物の割合は特に限定されず、例えば二つの抽出物の総量が、組成物全体の重量に対して、例えば1%〜99%、10%〜90％、又は20%〜80％であってよい。
【００３２】
賦形剤としては、デンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、及び無機塩類等が挙げられる。
【００３３】
結合剤としては、限定するものではないが、結晶セルロース、結晶セルロース・カルメロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルエチルセルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、及びトラガントが挙げられる。
【００３４】
崩壊剤としては、限定するものではないが、結晶セルロース、メチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、デンプン、及びトラガント等が挙げられる。
【００３５】
界面活性剤としては、限定するものではないが、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸ポリオキシル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、ポリソルベート、モノステアリン酸グリセリン、及びラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。
【００３６】
滑沢剤としては、限定するものではないが、デンプン、ステアリン酸、ステアリン酸塩、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸、タルク、ロウ類、水素添加植物油、及びポリエチレングリコールが挙げられる。
【００３７】
流動性促進剤としては、限定するものではないが、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、及びケイ酸マグネシウムが挙げられる。
【００３８】
本発明の組成物が投与され得る被験体としては、限定されるものではないが、哺乳動物、例えばヒト及びチンパンジー等の霊長類、ラット及びマウス等の実験動物、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、及びヤギ等の家畜動物、並びにイヌ及びネコ等の愛玩動物が挙げられ、好ましくはヒト又はマウス、最も好ましくはヒトである。
【００３９】
本発明の組成物の投与量、投与間隔、及び投与期間は、当業者であれば、被験体の性別、体重、年齢（月齢、週齢）、並びに疾患等の経過及び症状等の種々の要因を考慮して適宜定めることができる。例えば、組成物の投与量は、約0.1mg〜10g/kg体重、好ましくは1mg〜1000mg/kg体重、又は10〜100mg/kg体重であってよい。また、投与回数は、限定するものではないが、1日3回、1日2回、1日1回、2日に1回、3日に1回、1週間に1回、2週間に1回、1カ月に1回等であってよい。また、投与期間は、限定するものではないが、1日、2日、3日、1週間、2週間、1カ月、半年、一年、又はそれ以上であってよい。
【００４０】
一態様において、本発明は、被験体に上記組成物を投与することを含む、ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防方法に関する。本方法における被験体、ヘルペスウイルス感染症、組成物の投与量、投与間隔、及び投与期間は、上記の通りであるからここでは記載を省略する。
【００４１】
２．ヘルペスウイルス感染症の治療及び／又は予防のための組成物の製造方法
一態様において、本発明は、上記１に記載のヘルペスウイルス感染症の予防及び／又は治療のための組成物の製造方法に関する。
【００４２】
本発明の製造方法は、加熱乾燥マイタケ抽出物と真空乾燥マイタケ抽出物を混合する工程を、必須の工程として含む。本工程における混合比は、加熱乾燥マイタケ抽出物Aを1としたときの真空乾燥マイタケ抽出物Bの重量比が、0.05以上、0.08以上、0.1以上、0.2以上、0.5以上、0.8以上、好ましくは1以上、1.5以上、2以上、2.5以上、又は3以上であってよく、また10以下、9以下、8以下、7以下、6以下、好ましくは5以下、4.5以下、4以下、3.5以下、又は3以下であってよい。例えば抽出物Aを1としたときの抽出物Bの重量比は、例えば、0.05〜10、0.1〜5、好ましくは1〜5、2〜4、2.5〜3.5、又は3であってよい。
【００４３】
本混合工程では、加熱乾燥マイタケ抽出物と真空乾燥マイタケ抽出物のみを混合してもよいし、加熱乾燥マイタケ抽出物と真空乾燥マイタケ抽出物に、他の成分を加えて混合してもよい。また、最終的に上記混合比で組成物が得られる限り、混合の工程を分けることも可能であり、例えば加熱乾燥マイタケ抽出物と他の成分を混合した後に、混合物に対して真空乾燥マイタケ抽出物を加えることもできる。
【００４４】
本発明の製造方法は、上記混合工程の前に、加熱乾燥マイタケ抽出物を得る工程を含んでよい。
【００４５】
加熱乾燥マイタケ抽出物は、（A）マイタケを加熱乾燥する工程、（B）得られた加熱乾燥マイタケに溶媒を加え、抽出画分を得る工程、及び（C）得られた抽出画分中の溶媒を除去し、乾燥物を得る工程により得ることができる。
【００４６】
（A）マイタケを加熱乾燥する工程は特に限定せず、公知の加熱乾燥法、例えば、熱風乾燥を用いることができる。加熱温度は、低すぎると乾燥効率が低下し、高すぎるとマイタケの成分に化学変化が生じる恐れがあるため、適切な範囲に設定することが好ましい。乾燥は、40℃以上、50℃以上、60℃以上、好ましくは70℃以上、又は80℃以上、また150℃以下、120℃以下、100℃以下、好ましくは90℃以下又は80℃以下の条件で、例えば40℃〜100℃、50℃〜90℃、又は60℃〜80℃の条件で、例えば前記温度の熱風を目的の物質に送風することによって行うことができる。加熱時間はマイタケ中の水分が除かれる限り特に限定されず、例えば1時間以上、2時間以上、4時間以上、6時間以上、終夜、又は一昼夜とすることができる。
【００４７】
マイタケ抽出物を得るための溶媒については、上記１において記載した通りであるからここでは記載を省略する。（B）抽出画分を得る工程は、上記溶媒を必要に応じて細断又は粉末化した乾燥マイタケに加えることにより行うことができる。抽出溶媒の添加量は特に限定しないが、例えば乾燥マイタケに対して抽出溶媒を1〜100、2〜50又は4〜30重量倍使用することができる。
【００４８】
（B）抽出画分を得る工程においては、加熱を行って抽出効率を高めることができる。マイタケ中の成分に影響を与えるような酵素は約60℃までは働くが、60℃を超える温度では働きが衰えるので、60℃以上、好ましくは70℃以上、又は80℃以上で抽出を行うのが好ましい。また、加圧加熱によりさらに抽出効率を高めることが好ましく、加圧加熱の場合の加熱条件は、110℃以上、115℃以上、又は120℃以上、また140℃以下、130℃以下、又は125℃以下であってよく、加圧条件は、限定しないが、例えば、圧力釜等を用いて1.2気圧〜3気圧、1.5気圧〜2.5気圧、1.8気圧〜2.2気圧、1.9気圧〜2.1気圧又は2気圧にすることができる。抽出時間は抽出条件に応じて適宜設定することができるが、例えば5分〜1日、10分〜6時間、15分〜1時間、又は20分〜40分であってよい。抽出は、好ましくは加圧下100℃以上で短時間、例えば加圧下115℃〜125℃で5分〜1時間行う。
【００４９】
（C）得られた抽出画分中の溶媒を除去し、乾燥物を得る工程は、常法により行うことができ、例えば加熱乾燥、減圧乾燥、真空乾燥、スプレードライ等を単独で、又は二以上組み合わせて用いることによって行うことができる。
【００５０】
本発明の製造方法は、任意に、（B）抽出画分を得る工程の後、（C）得られた抽出画分中の溶媒を除去し、乾燥物を得る工程の前に、（B'）濾過による清澄化及び／又はアルコールによる析出物の除去によって、さらに純度を高める工程を含んでよい。濾過による清澄化は公知の方法により行うことができ、アルコールによる析出物の除去は、例えば以下の工程により行うことができる。すなわち、（B）抽出画分を得る工程によって得られた抽出液又は必要に応じてこれを濃縮した溶液に対し、アルコールを、最終容量で50容量％以上、60容量％以上、又は70容量％以上になるように加え、例えば1〜25℃又は常温で、放置することによって液面若しくは液中、又は容器の壁等に析出する物質を除去して抽出物の純度を高めることができる。析出物の除去は、例えば濾過又は網等で掬うことによって行い得る。アルコールとしては、低級アルコール、例えばメタノール、エタノール、及びプロパノール等を単独で、又は二以上組み合わせて用いることができ、エタノールを単独で用いることが特に好ましい。
【００５１】
本発明の製造方法は、上記混合工程の前に、加熱乾燥マイタケ抽出物を得る工程に加えて、又は加熱乾燥マイタケ抽出物を得る工程とは別に、真空乾燥マイタケ抽出物を得る工程を含んでよい。本発明の製造方法が、加熱乾燥マイタケ抽出物を得る工程と真空乾燥マイタケ抽出物を得る工程の両方を含む場合、両工程の順序は特に限定しない。
【００５２】
真空乾燥マイタケ抽出物は、（D）マイタケを真空乾燥する工程、（E）得られた真空乾燥マイタケに溶媒を加え、抽出画分を得る工程、及び（F）得られた抽出画分中の溶媒を除去し、乾燥物を得る工程により得ることができる。
【００５３】
（D）マイタケを真空乾燥する工程は特に限定せず、公知の真空乾燥法、例えば、凍結乾燥を用いることができる。真空乾燥は、マイタケを加熱する必要がなく、低温で乾燥を行うことから、マイタケの成分に化学変化が生じる恐れが少ない。真空乾燥は、完全な真空下で行ってもよいし、実質的な真空下、例えば100Pa以下、50Pa以下、又は20Pa以下等で行ってもよい。真空乾燥は、当業者に公知の方法により、例えば市販の真空乾燥機を用いて行うことができる。真空乾燥の時間は、マイタケから水分が除かれる限り特に限定されず、例えば1時間以上、2時間以上、4時間以上、6時間以上、又は終夜行うことができる。
【００５４】
（E）得られた真空乾燥マイタケに溶媒を加え、抽出画分を得る工程、及び（F）得られた抽出画分中の溶媒を除去し、乾燥物を得る工程については、上記加熱乾燥マイタケ抽出物を得る工程の（B）工程及び（C）工程において記載した通りであるから記載を省略する。
【００５５】
本発明の製造方法は、任意に、（E）抽出画分を得る工程の後、（F）得られた抽出画分中の溶媒を除去し、乾燥物を得る工程の前に、（E'）濾過による清澄化及び／又はアルコールによる析出物の除去によって、さらに純度を高める工程を含んでよい。（E'）工程については、上記加熱乾燥マイタケ抽出物を得る工程の（B'）工程において記載したのと同様であるからここでは記載を省略する。
【実施例】
【００５６】
［実施例1：加熱乾燥マイタケ抽出物の調製］
人工栽培により得られたマイタケの子実体（茎部及び傘部）を棚型乾燥室の棚にならべ、最初は70℃から段階的に温度を上げ最終的には80℃でほぼ1日かけて乾燥した。ついで乾燥マイタケ粉末を製粉機で粉砕し、微粉末の加熱乾燥マイタケを得た。
【００５７】
加熱乾燥マイタケ粉末13.5kgを、イオン交換水310Lに投入し、2気圧加圧下、121℃で30分間の熱水抽出を行った。抽出液は、フィルタープレスを用いて濾過し、黒褐色の抽出液約260Ｌを得た。該溶液を減圧下で60L程度まで濃縮して、室温でエタノール66Lを加え10℃以下で約数時間放置すると、液面、液中に浮遊又は壁面に付着する茶褐色の物質が生成した。これらの物質を金網で掬って除去し、褐色の溶液を得た。該溶液を減圧下でアルコールを除き、さらに減圧下で濃縮後、スプレードライ装置を用いて噴霧乾燥し、微細な褐色粉末5.2kgを得た。得られた物質をMD Frとした。
【００５８】
得られたMD Frにつき、以下の条件でHPLCを行ったところ、図1に示すピークが得られた。
溶離液    ：0.1M NaNO3(0.02% NaN3)水溶液
検出器    ：示差屈折計
分析カラム：SB-806M HQ
温度      ：40℃
流速      ：1.0mL/min
【００５９】
［実施例2：真空乾燥マイタケ抽出物の調製］
人工栽培により得られたマイタケの子実体（茎部及び傘部）を−30℃〜−40℃で凍結させ、真空凍結乾燥機を用いて乾燥した。乾燥機内は20Paまで減圧され、およそ1日で乾燥した。次いで、乾燥マイタケ粉末を製粉機で粉砕し、微粉末化した。
【００６０】
微粉末化した乾燥マイタケ粉末10kgを、あらかじめ80℃まで加熱しておいたイオン交換水210Lに投入し、2気圧加圧下、121℃で30分間の熱水抽出を行った。抽出液は、フィルタープレスを用いて濾過し、黒褐色の抽出液159Lを得た。該溶液を減圧下で濃縮後、スプレードライ装置を用いて噴霧乾燥し、微細な褐色粉末3.6kgを得た。得られた物質をYM-6Aとした。
【００６１】
得られたYM-6Aにつき、以下の条件でHPLCを行ったところ、図2に示すピークが得られた。
溶離液    ：0.1M NaNO3(0.02% NaN3)水溶液
検出器    ：示差屈折計
分析カラム：SB-806M HQ
温度      ：40℃
流速      ：1.0mL/min
【００６２】
［実施例3: 加熱乾燥マイタケ抽出物と真空乾燥マイタケ抽出物の混合物の調製1］
以下の重量割合で、実施例1で得られたMD Frと実施例2で得られたYM-6Aをブレンダーを用いて混合し、加熱乾燥マイタケ抽出物と真空乾燥マイタケ抽出物の混合物を調製した。
【００６３】
【表１】
2018070497.tif 000003
【００６４】
［実施例4：ヘルペスウイルス感染症に対する予防及び治療効果］
本実施例では、BALB/cマウスを用いて、実施例1、3で調製した各試料によるヘルペスウイルス感染症に対する効果を検証した。陽性対照としてはアシクロビル（ACV）を用いた。
【００６５】
＜方法＞
BALB/cマウス（6週齢、♀、n=5）にmedroxyprogesterone 17-acetate (3 mg/mouse)を、ウイルス接種6日前及び1日前に皮下注射した。マウスには、PBS、アシクロビル（0.2mg/40μL/日）又は実施例1又は3で調製したサンプル（1mg/40μL/日）を、ウイルス接種3日前から7日後までの間、1日2回（午前9時及び午後6時）、性器に局所投与した。
【００６６】
ウイルス（単純ヘルペスウイルス1型：HSV-1、KOS株、富山県衛生試験所からの分与株、1x106 PFU/20μL/mouse）を性器に局所接種した3日後に、局所をPBSで洗浄し、その中のウイルス力価をプラークアッセイ法によって測定した。
【００６７】
症状の程度（スコア）及び死亡例をウイルスの接種後2週間にわたって毎日記録した（2週間以降には死亡例はない）。症状の程度は表2のスコアで示す通りである。
【００６８】
【表２】
2018070497.tif 000004
【００６９】
＜結果＞
各群における死亡率及び死亡日数を表3に、スコアの平均値を、図3に示した。
【００７０】
【表３】
2018070497.tif 000005
【００７１】
表3及び図3から明らかな様に、MD Fr:YM-6A=1:1混合物において、ACVと同等の高い発症抑制効果がみられた。
【００７２】
また、ウイルス接種の3日後にウイルス量を測定したところ、MD Fr:YM-6A=1:1混合物において、対照群に比べて有意に低値であった（図4）。
【００７３】
以上の通り、加熱乾燥マイタケ抽出物（MD Fr）と真空乾燥マイタケ抽出物（YM-6A）の混合物が、ウイルス感染に対して優れた効果を有することが示された。
【００７４】
［実施例5: 加熱乾燥マイタケ抽出物と真空乾燥マイタケ抽出物の混合物の調製2］
以下の重量割合で、実施例1で得られたMD Frと実施例2で得られたYM-6Aをブレンダーを用いて混合し、加熱乾燥マイタケ抽出物と真空乾燥マイタケ抽出物の混合物を調製した。
【００７５】
【表４】
2018070497.tif 000006
【００７６】
［実施例6：ヘルペスウイルス感染症に対する予防及び治療効果］
本実施例では、BALB/cマウスを用いて、実施例1、2及び5で調製した各試料によるヘルペスウイルス感染症に対する効果を検証した。陽性対照としてはアシクロビル（ACV）を用いた。
【００７７】
＜方法＞
BALB/cマウス（6週齢、♀、n=5）にmedroxyprogesterone 17-acetate (3 mg/mouse)を、ウイルス接種6日前及び1日前に皮下注射した。マウスには、PBS、アシクロビル（0.2mg/40μL/日）又は実施例1、2及び5で調製したサンプル（1mg/40μL/日）を、ウイルス接種3日前から7日後までの間、1日2回（午前9時及び午後6時）、性器に局所投与した。
【００７８】
ウイルス（単純ヘルペスウイルス2型：HSV-2、UW 268株、富山県衛生試験所からの分与株、1x103 PFU/20μL/mouse）を性器に局所接種した3日後に、局所をPBSで洗浄し、その中のウイルス力価をプラークアッセイ法によって測定した。
【００７９】
症状の程度（スコア）及び死亡例をウイルスの接種後2週間にわたって毎日記録した（2週間以降には死亡例はない）。症状の程度は表2のスコアで示す通りである。
【００８０】
＜結果＞
各群における死亡率及び死亡日数を表5に、スコアの平均値を、図5に示した。
【００８１】
【表５】
2018070497.tif 000007
【００８２】
また、ウイルス接種の3日後にウイルス量を測定したところ、全ての投与群において、有意な増殖抑制効果がみられた。特にMD Fr：YM-6A＝1：1及び1：5の混合物で顕著な効果がみられた（図6）。
【００８３】
以上の通り、加熱乾燥マイタケ抽出物（MD Fr）と真空乾燥マイタケ抽出物（YM-6A）の混合物が、加熱乾燥マイタケ抽出物又は真空乾燥マイタケ抽出物単独よりも、ウイルス感染に対して優れた効果を有し、特にMD FrとYM-6Aの比が1:1〜1:5である場合に優れた効果を有することが示された。
【００８４】
［実施例7: 加熱乾燥マイタケ抽出物と真空乾燥マイタケ抽出物の混合物の調製3］
以下の重量割合で実施例1で得られたMD Frと実施例2で得られたYM-6Aをブレンダーを用いて混合し、加熱乾燥マイタケ抽出物と真空乾燥マイタケ抽出物の混合物を調製した。
【００８５】
【表６】
2018070497.tif 000008
【００８６】
［実施例8：ヘルペスウイルス感染症に対する予防及び治療効果］
本実施例では、MD Fr：YM-6Aの最適な混合比を検討するため、BALB/cマウスを用いて、実施例7で調製した各混合物によるヘルペスウイルス感染症に対する効果を検証した。陽性対照としてはアシクロビル（ACV）を用いた。
【００８７】
実験方法は、実施例7で調製した各混合物を用いる以外は、実施例6に記載の方法に従った。
各群における死亡率及び死亡日数を表7に、スコアの平均値を図7に示す。
【００８８】
【表７】
2018070497.tif 000009
【００８９】
表7及び図7から明らかな様に、MD Fr:YM-6A=1:3混合物において、特に優れたウイルス感染症に対する効果が認められた。
【００９０】
また、ウイルス接種の3日後にウイルス量を測定したところ、MD Fr:YM-6A=1:3混合物において、特に優れたウイルス増殖抑制効果が認められた（図8）。
【００９１】
以上の結果は、MD Fr:YM-6Aの混合比率を1:3とすることで、特に優れた効果が奏されることを示している。
【産業上の利用可能性】
【００９２】
本発明の加熱乾燥マイタケ抽出物と真空乾燥マイタケ抽出物を含む組成物は、ヘルペス感染症に対して高い効果を示す。また、本発明の組成物は、長年の食経験を有するマイタケから製造される為、安全性が高く、副作用が少ないと考えられる。したがって、本発明によって、ヘルペス感染症に対して有効であり、かつ副作用が少ないヘルペス感染症の治療及び／又は予防剤が提供され得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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