(57)【要約】【課題】精子に与えるダメージが少なく、かつ比較的簡便にＹ精子を選別する方法等を提供すること。【解決手段】ヒアルロニダーゼ、プロゲステロン、及びポリビニルピロリドンを含む生理的水溶液中のヒト精子の運動速度を測定し、当該精子尾部の屈曲状態を検出し、運動速度がより速く、かつ、尾部屈曲レベルが低く、尾部振動数が小さい精子をＹ精子として選別する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒアルロニダーゼ、プロゲステロン、及びポリビニルピロリドンを含む生理的水溶液中のヒト精子の運動速度を測定し、当該精子の尾部の屈曲状態を検出することを特徴とするヒトＹ精子の選別方法。
【請求項２】
さらに、ヒト精子の頭部の大きさを測定することを特徴とする請求項１に記載の選別方法。
【請求項３】
運動速度が直線速度を含むことを特徴とする請求項１又は２に記載の選別方法。
【請求項４】
ヒアルロニダーゼ、プロゲステロン、及びポリビニルピロリドンを含む生理的水溶液を含むことを特徴とするヒトＹ精子の選別に用いるためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒアルロニダーゼ（Hyaluronidase）、プロゲステロン（progesterone）（「黄体ホルモン」ともいう）、及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ；Polyvinylpyrrolidone）の三成分（以下、「本件三成分」ということがある）を含む生理的水溶液（以下、「本件生理的水溶液」ということがある）中のヒト精子の直進速度を測定する工程と、当該精子の尾部の屈曲状態を検出する工程とを備えた、ヒトＹ精子の選別方法（以下、「本件選別方法」ということがある）や、本件生理的水溶液を含む、ヒトＹ精子の選別用キット（以下、「本件選別用キット」ということがある）に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト等の哺乳動物の性は、父親と母親に由来する２種類の性染色体（Ｘ染色体及びＹ染色体）の組合せによって決定される。女性の配偶子である卵子は、すべてＸ染色体を有するのに対して、男性の配偶子である精子は、Ｘ染色体を有するもの（Ｘ精子）と、Ｙ染色体を有するもの（Ｙ精子）の２種類がある。このため、Ｘ精子と卵子とが受精すれば、ＸＸ型（ホモ型）の女児が産まれることになり、Ｙ精子と卵子とが受精すれば、ＸＹ型（ヘテロ型）の男児が産まれることになる。
【０００３】
男児出産を望む声は、日本のみならず、外国においても少なくない。精子の中からＹ精子を選別する方法として、例えば、Ｘ精子とＹ精子における進行スピード及び生存期間の差による方法、膣内ｐＨの差による方法、比重の差による方法、無担体電気泳動法、モノクローナルＹ抗体を用いた方法等が報告されている。しかしながら、これら方法の有用性は認められていない。また、フローサイトメトリー法を用いて、Ｘ精子とＹ精子とを選別する方法が知られている。かかる方法の有用性は認められているものの、使用されるレーザー光の安全性や、ＤＮＡ結合色素による染色体異常、ＤＮＡ合成能の低下、細胞周期の遅延等により、精子にダメージを与える点が問題とされていた。さらに、精子に光を照射し、精子を透過した光のスペクトルや、精子から反射された光のスペクトルを分析することにより、精子にダメージを与えずにＹ精子を選別する方法が報告されている（特許文献１）。しかしながら、かかる文献には、Ｙ精子を選別したことが具体的に示されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００４−１０１３２３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、精子に与えるダメージが少なく、かつ比較的簡便にＹ精子を選別する方法等を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を続けている。その過程において、ヒアルロニダーゼ、プロゲステロン、及びＰＶＰを含む生理的水溶液中のヒト精子の運動速度を測定し、当該精子尾部の屈曲状態を検出すると、運動速度がより速く、かつ、尾部屈曲レベルが低く、尾部振動数が小さい精子が、９０％を超える高い確率でＹ精子であることを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
［１］ヒアルロニダーゼ、プロゲステロン、及びポリビニルピロリドンを含む生理的水溶液中のヒト精子の運動速度を測定し、当該精子の尾部の屈曲状態を検出することを特徴とするヒトＹ精子の選別方法。
［２］さらに、ヒト精子の頭部の大きさを測定することを特徴とする上記［１］に記載の選別方法。
［３］運動速度が直線速度を含むことを特徴とする上記［１］又は［２］に記載の選別方法。
［４］ヒアルロニダーゼ、プロゲステロン、及びポリビニルピロリドンを含む生理的水溶液を含むことを特徴とするヒトＹ精子の選別に用いるためのキット。
【０００８】
また本発明の実施の他の形態として、ヒトＹ精子の選別に用いるための、ヒアルロニダーゼ、プロゲステロン、及びＰＶＰを含む生理的水溶液や、ヒトＹ精子の選別に用いるための本件生理的水溶液の調製におけるヒアルロニダーゼ、プロゲステロン、及びＰＶＰの使用を挙げることができる。
【発明の効果】
【０００９】
本件選別方法や本件選別用キットを用いると、ヒト精子の中から、精子にほとんどダメージを与えることなく、比較的簡便かつ高効率でヒトＹ精子を選別することができる。このため、本発明は、人工授精（ＡＩＨ）、体外受精（ＩＶＦ）、顕微授精（ＩＣＳＩ）等による妊娠において、男児出産に資するものである。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ヒト精子が、Ａ地点からＢ地点まで進んだときの直線速度、曲線速度、及び進行方向性平均速度の模式図である。
【図２】５種類のサンプル（比較例１〜３サンプル［図中の１〜３］、実施例１サンプル［図中の４］、及び比較例４サンプル［図中の５］）中のヒト精子の運動性を解析した結果（ｎ＝２０）を示す図である。図２Ａ〜Ｇは、それぞれＶＳＬ（直線速度）、ＶＣＬ（曲線速度）、ＶＡＰ（進行方向性平均速度）、ＳＴＲ（直線性［＝直線速度／進行方向性平均速度］）、ＬＩＮ（直進性［＝直線速度／曲線速度］）、ＡＬＨ（頭部振幅）、及びＢＣＦ（頭部振動数）を測定した結果を示す。
【図３】図３Ａは、選別されたヒトＹ精子の核がＤＡＰＩ（4′,6-diamidino-2-phenylindole）により染色されたことを示す画像であり、図３Ｂは、選別されたヒトＹ精子がＸ染色体セントロメアＦＩＳＨプローブでは染色されなかったことを示す画像であり、図３Ｃは、選別されたヒトＹ精子がＹ染色体セントロメアＦＩＳＨプローブにより染色されたことを示す画像である。
【図４】実施例１サンプル中のヒトＹ精子の位相差顕微鏡画像（図４Ｂ）と、比較例１サンプル中のヒト精子（Ｘ精子及びＹ精子がほぼ１：１）の位相差顕微鏡画像（図４Ａ）である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本件選別方法としては、本件三成分を含む生理的水溶液中のヒト精子の運動速度を測定し、かつ、当該精子尾部の屈曲状態を検出することを含むインビトロでの方法であれば特に制限されず、選別したＹ精子を、子宮内に注入する工程等のいわゆる医師による医療行為は含まれない。
【００１２】
また、本件選別用キットとしては、「ヒトＹ精子の選別に用いるため」という用途が限定された、本件生理的水溶液を含むキットである。かかるキットには、一般にこの種のキットに用いられるもの、例えば、後述する任意成分の他、Ｙ精子の選別方法（例えば、運動速度がより速く、かつ、尾部屈曲レベルが低く、及び／又は尾部振動数が小さい精子をＹ精子として選別する旨）が記載された説明書等の添付文書が通常含まれる。
【００１３】
本明細書において、「Ｙ精子」とは、精子（１倍体）のうち、Ｙ染色体を有する精子を意味し、Ｘ染色体を有する精子（Ｘ精子）とは異なる。
【００１４】
本件生理的水溶液中のヒアルロニダーゼとしては、ヒト精子の運動速度の測定や当該精子尾部の屈曲状態の検出に適したものであれば特に制限されず、哺乳動物（例えば、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ）から精製されたヒアルロニダーゼであっても、組み換えヒアルロニダーゼであってもよいが、ヒト由来の組み換えヒアルロニダーゼが好ましい。ヒアルロニダーゼは、公知の方法、例えば、文献「Bookbinder LH, Hofer A, Haller MF, Zepeda ML, Keller GA, Lim JE, et al. Arecombinant human enzyme for enhanced interstitial transport of therapeutics. J Control Release. 2006 Aug 28; 114(2):230-41.」に記載の方法に従って調製することができる。また、SAGE IVF社製、JXエネルギー社製、ASTEC社製、COOK Medical社製、ORIGIO社製等のＡＲＴ（Assisted Reproductive Technology；生殖補助技術）用のヒアルロニダーゼの市販品を用いることもできる。
【００１５】
本件生理的水溶液中のヒアルロニダーゼの濃度としては、特に制限されないが、通常４（Ｕ／ｍＬ）以上、好ましくは１０（Ｕ／ｍＬ）以上、より好ましくは２０（Ｕ／ｍＬ）以上、さらに好ましくは３０（Ｕ／ｍＬ）以上である。また、費用対効果やヒト精子への悪影響を回避する観点から、通常８０（Ｕ／ｍＬ）以下、好ましくは７０（Ｕ／ｍＬ）以下、より好ましくは６０（Ｕ／ｍＬ）以下、さらに好ましくは５０（Ｕ／ｍＬ）である。
【００１６】
本件生理的水溶液中のプロゲステロンとしては、ヒト精子の運動速度の測定や当該精子尾部の屈曲状態の検出に適したものであれば特に制限されず、天然由来のプロゲステロンであっても、人工的に合成されたプロゲステロン（プロゲスチン［Progestin］）であってもよい。プロゲステロンは、公知の方法、例えば、特許文献（特表平１−５０３２１７号公報）に記載の方法に従って化学的に合成することや、特許文献（特表平４−５００３０３号公報、特開２００１−６９９９１号公報等）に記載の方法に従って酵素処理により調製することができる。また、あすか製薬社製、SIGMA-ALDRICH社製、持田製薬社製等のプロゲステロンの市販品を用いることもできる。
【００１７】
本件生理的水溶液中のプロゲステロンの濃度としては、特に制限されないが、通常１（μＭ）以上、好ましくは２（μＭ）以上、より好ましくは４（μＭ）以上、さらに好ましくは６（μＭ）以上である。また、費用対効果やヒト精子への悪影響を回避する観点から、通常１００（μＭ）以下、好ましくは６０（μＭ）以下、より好ましくは４０（μＭ）以下、さらに好ましくは２０（μＭ）である。
【００１８】
本件生理的水溶液中のＰＶＰとしては、ヒト精子の運動速度の測定や当該精子尾部の屈曲状態の検出に適したものであれば特に制限されず、天然由来のＰＶＰであっても、人工的に合成されたＰＶＰであってもよい。ＰＶＰは、公知の方法、例えば、特許文献（特開２００８−２５５１４７号公報）に記載の方法に従って合成することができる。また、SAGE IVF社製、JXエネルギー社製、ASTEC社製、COOK Medical社製、ORIGIO社製等のＡＲＴ用のＰＶＰの市販品を用いることもできる。
【００１９】
本件生理的水溶液中のＰＶＰの濃度としては、特に制限されないが、通常１（％）以上、好ましくは２（％）以上、より好ましくは３（％）以上、さらに好ましくは４（％）以上である。また、費用対効果やヒト精子への悪影響を回避する観点から、通常１５（％）以下、好ましくは１４（％）以下、より好ましくは１３（％）以下、さらに好ましくは１２（％）である。
【００２０】
本件生理的水溶液における生理的水溶液としては、体液や細胞液の浸透圧とほぼ同じになるようにナトリウムやカリウムなどによって塩や糖濃度等調整した等張水溶液であれば特に制限されず、具体的には、血清含有又は無血清培養液、生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水、トリス緩衝化生理食塩水、ＨＥＰＥＳ緩衝化生理食塩水、リンゲル液（乳酸リンゲル液、酢酸リンゲル液、重炭酸リンゲル液等）、５％グルコース水溶液等を挙げることができる。かかる血清含有培養液としては、０．１〜３０（ｖ／ｖ）％の血清（ウシ胎児血清［Fetal bovine serum；ＦＢＳ］、子牛血清［Calf bovine serum；ＣＳ］等）を含有する動物細胞培養用培養液（ＤＭＥＭ、ＥＭＥＭ、ＩＭＤＭ、ＲＰＭＩ１６４０、αＭＥＭ、Ｆ−１２、Ｆ−１０、Ｍ−１９９、ＡＩＭ−Ｖ、Quinn’s Advantage Cleavage Medium等）を挙げることができ、また、上記無血清培養液としては、市販のＢ２７サプリメント（−インスリン）（Life Technologies社製）、Ｎ２サプリメント（Life Technologies社製）、Ｂ２７サプリメント（Life Technologies社製）、Knockout Serum Replacement（Invitrogen社製）等の血清代替物を適量（例えば、１〜３０％）添加した上記動物細胞培養用培養液などを挙げることができる。
【００２１】
本件生理的水溶液としては、本件三成分以外に、任意成分を含んだものであってもよい。かかる任意成分としては、例えば、ヒアルロニダーゼ以外のタンパク質分解酵素（例えば、アクロシン、エラスターゼ）、プロゲステロン以外のホルモン（例えば、エストロゲン、メラトニン）、ＰＶＰ以外の水溶性高分子化合物（例えば、ポリエチレングリコール、グリセロール、ヒアルロン酸）、等張剤（例えば、ブドウ糖、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、ラクトース、塩化ナトリウム等）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、クエン酸、サリチレート）、溶解補助剤、保存剤、酸化防止剤、アミノ酸（例えば、プロリン、グルタミン）、タンパク質（例えば、ヒト、ウシ等由来の血清又は血清由来成分［アルブミン］）などを挙げることができる。本明細書において「任意成分」とは、含んでもよいし含まなくてもよい成分のことを意味する。
【００２２】
上記運動速度としては、例えば、直線速度、曲線速度、及び進行方向性平均速度からなる群から選択される１種又は２種以上の速度を挙げることができ、直線速度を含むことが好ましい。ここで「直線速度」とは、ヒト精子が、本件生理的水溶液中のある地点（Ａ地点）から別の地点（Ｂ地点）まで進んだときに、単位時間当たりの、Ａ地点からＢ地点までの移動距離（図１の太線参照）を意味し、また、「曲線速度」とは、単位時間当たりの、Ａ地点からＢ地点までの道のり（図１の点線参照）を意味し、また、「進行方向性平均速度」とは、単位時間当たりの、Ａ地点からＢ地点までの進行方向性の道のり（図１の破線参照）を意味する。
【００２３】
本件生理的水溶液中のヒトＹ精子の運動速度は、本件生理的水溶液中のヒトＸ精子の運動速度と比べ速い。また、本件生理的水溶液中のヒトＹ精子の尾部屈曲レベルは、本件生理的水溶液中のヒトＸ精子の尾部屈曲レベルと比べ小さく、及び／又は、本件生理的水溶液中のヒトＹ精子の尾部振動数は、本件生理的水溶液中のヒトＸ精子の尾部振動数と比べ少ない。このため、本件選別方法としては、本件生理的水溶液中のヒト精子の運動速度の値と、当該精子の尾部屈曲レベルの値及び／又は当該精子の尾部振動数の値とを、それぞれのコントロール値（便宜上、それぞれ「コントロール値（i）」、「コントロール値（ii）」及び「コントロール値（iii）」ということがある）と比較するステップであって、本件生理的水溶液中のヒト精子の運動速度の値が、「コントロール値（i）」よりも大きく、かつ、当該ヒト精子の尾部屈曲レベルの値が、「コントロール値（ii）」よりも小さく、及び／又は当該ヒト精子の尾部振動数の値が、「コントロール値（iii）」よりも小さい場合、前記ヒト精子はＹ精子である可能性が高いことを示す、上記比較する工程を備えたものが好ましい。さらに、本件選別方法としては、本件生理的水溶液中のヒト精子の運動速度の値が、「コントロール値（i）」よりも大きく、かつ、尾部屈曲レベルの値が、「コントロール値（ii）」よりも小さく、及び／又は尾部振動数の値が、「コントロール値（iii）」よりも小さいヒト精子を、Ｙ精子として単離する工程を備えたものが好ましい。
【００２４】
上記「コントロール値（i）」としては、本件生理的水溶液中のヒト精子の運動速度が、本件生理的水溶液中のヒトＸ精子の運動速度よりも大きいか否かを判定（判断）するための指標（対照）値であればよく、例えば、本件生理的水溶液中のヒト精子（Ｘ精子及びＹ精子）の運動速度の平均値や、本件生理的水溶液中のヒトＸ精子の運動速度の平均値や、本件生理的水溶液中のヒトＸ精子及びＹ精子の運動速度に基づき、統計解析ソフトウェアを用いたＲＯＣ（Receiver Operating Characteristic）曲線等を用いて算出された閾値（カットオフ値）を挙げることができる。
【００２５】
上記「コントロール値（ii）」としては、本件生理的水溶液中のヒト精子の尾部屈曲レベルが、本件生理的水溶液中のヒトＸ精子の尾部屈曲レベルよりも小さいか否かを判定（判断）するための指標（対照）値であればよく、例えば、本件生理的水溶液中のヒト精子（Ｘ精子及びＹ精子）の尾部屈曲レベルの平均値や、本件生理的水溶液中のヒトＸ精子の尾部屈曲レベルの平均値や、本件生理的水溶液中のヒトＸ精子及びＹ精子の尾部屈曲レベルに基づき、統計解析ソフトウェアを用いたＲＯＣ曲線等を用いて算出された閾値を挙げることができる。
【００２６】
上記「コントロール値（iii）」としては、本件生理的水溶液中のヒト精子の尾部振動数が、本件生理的水溶液中のヒトＸ精子の尾部振動数よりも小さいか否かを判定（判断）するための指標（対照）値であればよく、例えば、本件生理的水溶液中のヒト精子（Ｘ精子及びＹ精子）の尾部振動数の平均値や、本件生理的水溶液中のヒトＸ精子の尾部振動数の平均値や、本件生理的水溶液中のヒトＸ精子及びＹ精子の尾部振動数に基づき、統計解析ソフトウェアを用いたＲＯＣ曲線等を用いて算出された閾値を挙げることができる。
【００２７】
本件選別方法において、測定した運動速度を基に、さらに直線性（直線速度／進行方向性平均速度）の割合や、直進性（直線速度／曲線速度）の割合を測定し、かかる値を基に、本件生理的水溶液中のヒト精子がＹ精子であるか否かを判断してもよい。
【００２８】
ヒトＹ精子の頭部は、ヒトＸ精子の頭部と比べ小さい。このため、本件選別方法としては、本件生理的水溶液中の運動速度を測定し、かつ精子尾部の屈曲状態を検出したヒト精子について、さらに、精子頭部の大きさを測定する工程を備えた方法が好ましく、さらに、測定したヒト精子の頭部直径の値と、コントロール値（以下、便宜上「コントロール値（iｖ）」ということがある）とを比較するステップであって、本件生理的水溶液中のヒト精子の頭部直径の値が、「コントロール値（iｖ）」よりも小さい場合、前記ヒト精子はＹ精子である可能性が高いことを示す、上記比較する工程を備えた方法がより好ましい。
【００２９】
上記「コントロール値（iｖ）」としては、測定対象のヒト精子の頭部の大きさが、ヒトＸ精子の頭部の大きさよりも小さいか否かを判定（判断）するための指標（対照）値であればよく、例えば、ヒト精子（Ｘ精子及びＹ精子）の頭部直径の平均値や、ヒトＸ精子の頭部直径の平均値や、ヒトＸ精子及びＹ精子の頭部直径に基づき、統計解析ソフトウェアを用いたＲＯＣ曲線等を用いて算出された閾値を挙げることができる。かかる閾値としては、例えば、ヒト精子（Ｘ精子及びＹ精子）の頭部直径の平均値を用いる場合、例えば５．３（μｍ）、好ましくは５．２（μｍ）、より好ましくは５．１（μｍ）、さらに好ましくは５．０（μｍ）、さらにより好ましくは４．９（μｍ）、特に好ましくは４．８（μｍ）、特により好ましくは４．７（μｍ）、最も好ましくは４．６（μｍ）である。
【００３０】
ヒト精子の運動速度や頭部の大きさは、例えば、精子運動解析装置（ＳＭＡＳ；Sperm Motility Analysis System）（DITECT社製）を用いてヒト精子を顕微鏡にてリアルタイム観察し、得られる画像データを基に、コンピューターを用いた画像解析ソフトにて測定することができる。また、ヒト精子尾部の屈曲状態は、例えば、位相差顕微鏡に毎秒２００コマ撮影可能な高速度ビデオカメラを取り付け、撮影された画像を解析することにより測定できる。
【００３１】
以下に実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００３２】
ＷＨＯ（世界保健機構）の精子運動性基準（表１参照）により、ａ及びｂのグレードに該当するヒト精子を、４０Ｕ／ｍＬのヒアルロニダーゼ（SAGE IVF社製）、１０μＭのプロゲステロン（SIGMA-ALDRICH社製）、及び５％のＰＶＰ（JXエネルギー社製）を含む培養液（５％のＨＳＡ［Human serum albumin］を含有するQuinn’s Advantage Cleavage Medium）（実施例１サンプル）中に移した。なお、コントロールとして、ヒアルロニダーゼ、プロゲステロン及びＰＶＰ不含の培養液（比較例１サンプル）、４０Ｕ／ｍＬのヒアルロニダーゼを含む培養液（比較例２サンプル）、１０μＭのプロゲステロンを含む培養液（比較例３サンプル）、及び５％のＰＶＰを含む培養液（比較例４サンプル）中に、ヒト精子を移した。
【００３３】
【表１】
2018143102.tif 000002
【００３４】
精子運動解析装置（ＳＭＡＳ）（DITECT社製）を用いてヒト精子の運動速度を解析した。その結果、実施例１サンプル（図２の「４」参照）や比較例４サンプル（図２の「５」参照）中のヒト精子は、比較例１〜３サンプル（図２の「１〜３」参照）中のヒト精子と比べ、運動速度（直線速度、曲線速度、及び進行方向性平均速度）が低下し（図２Ａ〜Ｃ参照）、直線性及び直進性が上昇し（図２Ｄ及びＥ参照）、頭部振幅及び頭部振動数が減少すること（図２Ｆ及びＧ参照）が示された。
【００３５】
運動速度が低下した実施例１サンプル及び比較例４サンプルの両者は、運動速度がより速いヒト精子の選別に適していた。次に、実施例１サンプル及び比較例４サンプル中のヒト精子のうち、運動速度がより速いものについて、尾部の屈曲状態について観察したところ、比較例４サンプル中の精子の尾部は、一様に屈曲していたのに対して、実施例１サンプル中の精子の中には、尾部の屈曲レベルがより小さく、かつ尾部の振動数がより少ないもの（尾部の波形が略直線状のヒト精子）が観察された。かかるヒト精子を選別し、Ｘ精子及びＹ精子を検出するキット「Vysis CEP X SpectorumOrange/Y SpectorumGreen Direct Labeled Fluorescent DNA Probe Kit」（Abbott社製）を用いて、製品添付のプロトコールに従ってＦＩＳＨ解析したところ、９１．２±５．５％（５７１［Ｙ精子］／６２６［全精子］、ｎ＝４０）がＹ精子であることが示された（図３参照）。
【００３６】
また、上記選別したＹ精子の頭部直径４．６（μｍ）（３３６個精子の平均）は、比較例１サンプルから非選別のヒト精子（Ｘ精子及びＹ精子がほぼ１：１）の頭部直径５．３（μｍ）（２５１個精子の平均）と比べ、小さいことが示された（図４参照）。また、実施例１サンプル中のＹ精子の直線速度の平均は４０（μｍ／秒）であり（ｎ＝９０）、実施例１サンプル中のグレードａ＋ｂの精子の直線速度の平均（２５．９［μｍ／秒］）（図２Ａの「４」参照）よりも速いことを確認した。
以上の結果は、ヒアルロニダーゼ、プロゲステロン、及びＰＶＰを含む生理的水溶液中のヒト精子のうち、運動速度がより速く、かつ、尾部屈曲レベルがより低く、尾部振動数がより小さいものを選別すると、９０％を超える高い確率でＹ精子であることを示している。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明は、人工授精、体外受精、顕微授精等による妊娠において、男児出産に資するものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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