(57)【要約】【課題】作業室内を汚染しているＤＮＡを不活化処理し、その不活化処理によってＤＮＡが充分に分解又は除去されたことを知ることができる、作業室内のＤＮＡ不活化方法、及びその方法に適用可能なＤＮＡインジケータを提供する。【解決手段】担持体と、前記担持体に担持された標準ＤＮＡと、を有するＤＮＡインジケータを作業室に設置するステップと、前記作業室において、前記ＤＮＡインジケータが担持する標準ＤＮＡと、前記作業室に予め存在したＤＮＡとを同時に分解又は除去するＤＮＡ不活化処理を施すステップと、前記作業室からＤＮＡインジケータを回収し、前記ＤＮＡインジケータに担持された標準ＤＮＡの残留量を測定するステップと、を有する、作業室内のＤＮＡ不活化方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
担持体と、前記担持体に担持された標準ＤＮＡと、を有するＤＮＡインジケータを作業室に設置するステップと、
前記作業室において、前記ＤＮＡインジケータが担持する標準ＤＮＡと、前記作業室に予め存在したＤＮＡとを同時に分解又は除去するＤＮＡ不活化処理を施すステップと、
前記作業室からＤＮＡインジケータを回収し、前記ＤＮＡインジケータに担持された標準ＤＮＡの残留量を測定するステップと、を有する、作業室内のＤＮＡ不活化方法。
【請求項２】
前記ＤＮＡ不活化処理が、前記作業室の少なくとも前記ＤＮＡインジケータを設置した領域に対して、ＤＮＡを分解する薬剤を散布する処理である、請求項１に記載の作業室内のＤＮＡ不活化方法。
【請求項３】
前記薬剤が次亜塩素酸を含む液体薬剤である、請求項２に記載の作業室内のＤＮＡ不活化方法。
【請求項４】
前記標準ＤＮＡの残留量を測定する際にＰＣＲ法を用いる、請求項１〜３の何れか一項に記載の作業室内のＤＮＡ不活化方法。
【請求項５】
前記作業室がクリーンルームである、請求項１〜４の何れか一項に記載の作業室内のＤＮＡ不活化方法。
【請求項６】
担持体と、前記担持体に担持された標準ＤＮＡとを有し、請求項１〜５の何れか一項に記載の＜作業室内のＤＮＡ不活性化方法＞用の、ＤＮＡインジケータ。
【請求項７】
前記標準ＤＮＡが既知の塩基配列を含むＤＮＡである、請求項６に記載のＤＮＡインジケータ。
【請求項８】
前記標準ＤＮＡの塩基数が１０〜２００塩基対（ｂｐ）である、請求項６又は７に記載のＤＮＡインジケータ。
【請求項９】
前記担持体の単位面積（ｃｍ２）当たりに担持された前記標準ＤＮＡの合計の質量が０．００３μｇ／ｃｍ２〜０．３μｇ／ｃｍ２である、請求項６〜８の何れか一項に記載のＤＮＡインジケータ。
【請求項１０】
前記標準ＤＮＡがヒトを含む哺乳類、魚類、鳥類、爬虫類、菌類、酵母、及びウイルスのうち少なくとも１つ以上に由来する、請求項６〜９の何れか一項に記載のＤＮＡインジケータ。
【請求項１１】
前記担持体の形状がシートであり、前記シートの外部からアクセス可能な表面に前記標準ＤＮＡが担持されている、請求項６〜１０の何れか一項に記載のＤＮＡインジケータ。
【請求項１２】
前記担持体が、セルロース含有繊維、ガラス繊維及び合成樹脂繊維のうち少なくとも１つ以上を含む、請求項６〜１１の何れか一項に記載のＤＮＡインジケータ。
【請求項１３】
前記担持体が濾紙、布、又はフィルムである、請求項６〜１２の何れか一項に記載のＤＮＡインジケータ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、作業室内のＤＮＡ不活化方法、及びＤＮＡインジケータに関する。
【背景技術】
【０００２】
ｉＰＳ細胞やＥＳ細胞に代表される万能細胞を取り扱う再生医療の施設では、組織や器官を製造することが試みられている。万能細胞を取り扱うクリーンルーム内が、作業者の皮膚、皮脂、唾、汗等に由来するＤＮＡや、空気中のカビ、細菌、ウイルス等の微生物に由来するＤＮＡ、或いは、他の生体材料に由来するＤＮＡで汚染されていた場合、万能細胞に混入したり、製品の品質を低下させたりする恐れがある。特に、万能細胞に混入した場合には、万能細胞が癌化する懸念もある。
また、微量なＤＮＡの混入が作業に悪影響を及ぼすことは、万能細胞の取り扱いに限らず、例えば、リアルタイムＰＣＲを用いたサンプル中の微量ＤＮＡ分析の場合にも起こり得る（例えば、非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】大楠清文、石和田稔彦、江崎孝行、「検査と技術、増刊号  一線診療のための臨床検査  第ＩＩ章  各論−検査編（２）特定菌検出−ウイルス」株式会社医学書院、２００５年１０月、第３３巻、第１１号、ｐ．１２１８−１２２２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ＤＮＡによる汚染が限られた領域、例えばクリーンベンチ内だけであれば、クリーンベンチ内を入念に洗浄することによって、ＤＮＡ汚染を排除できたと経験的に確信することができる。しかしながら、クリーンルーム（作業室）を対象とした場合、領域が広いので、洗浄したとしても、果たしてＤＮＡ汚染を排除できたか否かを知る術が無かった。
【０００５】
本発明は、作業室内を汚染しているＤＮＡを不活化処理し、その不活化処理によってＤＮＡが充分に分解又は除去されたことを知ることができる、作業室内のＤＮＡ不活化方法、及びその方法に適用可能なＤＮＡインジケータを提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
［１］  担持体と、前記担持体に担持された標準ＤＮＡと、を有するＤＮＡインジケータを作業室に設置するステップと、前記作業室において、前記ＤＮＡインジケータが担持する標準ＤＮＡと、前記作業室に予め存在したＤＮＡとを同時に分解又は除去するＤＮＡ不活化処理を施すステップと、前記作業室からＤＮＡインジケータを回収し、前記ＤＮＡインジケータに担持された標準ＤＮＡの残留量を測定するステップと、を有する、作業室内のＤＮＡ不活化方法。
［２］  前記ＤＮＡ不活化処理が、前記作業室の少なくとも前記ＤＮＡインジケータを設置した領域に対して、ＤＮＡを分解する薬剤を散布する処理である、［１］に記載の作業室内のＤＮＡ不活化方法。
［３］  前記薬剤が次亜塩素酸を含む液体薬剤である、［２］に記載の作業室内のＤＮＡ不活化方法。
［４］  前記標準ＤＮＡの残留量を測定する際にＰＣＲ法を用いる、［１］〜［３］の何れか一項に記載の作業室内のＤＮＡ不活化方法。
［５］  前記作業室がクリーンルームである、［１］〜［４］の何れか一項に記載の作業室内のＤＮＡ不活化方法。
［６］  担持体と、前記担持体に担持された標準ＤＮＡとを有し、［１］〜［５］の何れか一項に記載の＜作業室内のＤＮＡ不活性化方法＞用の、ＤＮＡインジケータ。
［７］  前記標準ＤＮＡが既知の塩基配列を含むＤＮＡである、［６］に記載のＤＮＡインジケータ。
［８］  前記標準ＤＮＡの塩基数が１０〜２００塩基対（ｂｐ）である、［６］又は［７］に記載のＤＮＡインジケータ。
［９］  前記担持体の単位面積（ｃｍ２）当たりに担持された前記標準ＤＮＡの合計の質量が０．００３μｇ／ｃｍ２〜０．３μｇ／ｃｍ２である、［６］〜［８］の何れか一項に記載のＤＮＡインジケータ。
［１０］  前記標準ＤＮＡがヒトを含む哺乳類、魚類、鳥類、爬虫類、菌類、酵母、及びウイルスのうち少なくとも１つ以上に由来する、［６］〜［９］の何れか一項に記載のＤＮＡインジケータ。
［１１］  前記担持体の形状がシートであり、前記シートの外部からアクセス可能な表面に前記標準ＤＮＡが担持されている、［６］〜［１０］の何れか一項に記載のＤＮＡインジケータ。
［１２］  前記担持体が、セルロース含有繊維、ガラス繊維及び合成樹脂繊維のうち少なくとも１つ以上を含む、［６］〜［１１］の何れか一項に記載のＤＮＡインジケータ。
［１３］  前記担持体が濾紙、布、又はフィルムである、［６］〜［１２］の何れか一項に記載のＤＮＡインジケータ。
【発明の効果】
【０００７】
本発明にかかるＤＮＡ不活化方法及びＤＮＡインジケータによれば、作業室内のＤＮＡ汚染を確実に除去できたことを知ることができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】本発明のＤＮＡ不活化方法でＤＮＡ汚染を除去した、バイオロジカルクリーンルーム（ＢＣＲ）の一例である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の第一態様は、後述するように、担持体と、前記担持体に担持された標準ＤＮＡと、を有するＤＮＡインジケータを作業室内に設置するステップを有する、作業室内のＤＮＡ不活化方法である。
以下、先にＤＮＡインジケータを詳細に説明し、その後に、作業室内のＤＮＡ不活化方法の詳細を説明する。
【００１０】
《ＤＮＡインジケータ》
ＤＮＡインジケータは、担持体と、前記担持体に担持された標準ＤＮＡと、を有する。
【００１１】
［標準ＤＮＡ］
標準ＤＮＡは既知の塩基配列を含むＤＮＡであることが好ましい。既知の塩基配列に結合するプライマーを用いてＰＣＲ法（ポリメラーゼ連鎖反応法）を行うことにより、ＤＮＡインジケータに担持された微量のＤＮＡを検出することができる。前記プライマーとして、例えば、１６Ｓ  ｒＲＮＡ、２７ｆ、３５７ｆ、５３０ｆ、５１９ｒ、９０７ｒ、１１００ｒ、１３９２ｒ、１４９２ｒ等のユニバーサルプライマーが挙げられる。
【００１２】
標準ＤＮＡの塩基数は、例えば、１０〜２００塩基対（ｂｐ）であることが好ましく、１５〜１００ｂｐであることがより好ましく、２０〜５０ｂｐであることがさらに好ましい。
標準ＤＮＡの塩基数が１０ｂｐ以上であると、ＤＮＡ不活化処理によって標準ＤＮＡが分解又は除去されたことをより容易に検出し易くなる。例えば、ＰＣＲ法で増幅したＤＮＡの検出や取り扱いがより容易になる。
標準ＤＮＡの塩基数が２００ｂｐ以下であると、担持体に多数の標準ＤＮＡを担持させることがより容易なる。つまり、担持される標準ＤＮＡの単位質量当たりのコピー数を多くすることができる。このコピー数を多くするほど、ＤＮＡ不活化処理後に標準ＤＮＡの少なくとも一つが残留する可能性が高まる。したがって、コピー数を調整することによって、ＤＮＡインジケータの完全な不活化の困難度を調整することができる。
【００１３】
担持体に担持された標準ＤＮＡは、１種類であってもよいし、２種類以上であってもよい。
担持体の単位面積（ｃｍ２）当たりに担持された標準ＤＮＡの合計の質量は、０．００３μｇ／ｃｍ２〜０．３μｇ／ｃｍ２であることが好ましく、０．００４μｇ／ｃｍ２〜０．０５μｇ／ｃｍ２であることがより好ましく、０．００５μｇ／ｃｍ２〜０．０１μｇ／ｃｍ２であることがさらに好ましい。
標準ＤＮＡの前記質量が０．００３μｇ／ｃｍ２以上であると、ＤＮＡ不活化処理によって標準ＤＮＡが分解又は除去されたことをより容易に検出し易くなる。例えば、ＰＣＲ法で増幅したＤＮＡの検出や取り扱いがより容易になる。
標準ＤＮＡの前記質量が０．３μｇ／ｃｍ２以下であると、担持体に多数の標準ＤＮＡを担持させることがより容易なる。つまり、担持される標準ＤＮＡの単位質量当たりのコピー数を多くすることができる。このコピー数を多くするほど、ＤＮＡ不活化処理後に標準ＤＮＡの少なくとも一つが残留する可能性が高まる。したがって、コピー数を調整することによって、ＤＮＡインジケータの完全な不活化の困難度を調整することができる。
【００１４】
標準ＤＮＡの由来としては、例えば、ヒトを含む哺乳類、魚類、鳥類、爬虫類、菌類、酵母、及びウイルスのうち少なくとも１つ以上が挙げられる。ＤＮＡ不活化処理する対象の作業室の目的に応じて適宜選択される。ここで、「標準ＤＮＡの由来」とは、その標準ＤＮＡの塩基配列をゲノム中に有する生物種又は生物体の一部分を意味する。担持体に担持される標準ＤＮＡは、生物から抽出されたＤＮＡであってもよいし、ＤＮＡ合成装置によって化学的に合成されたＤＮＡであってもよい。
【００１５】
［担持体］
担持体の形状はシートであることが好ましい。担持体がシートであると、作業室内の床上、壁上、装置上、作業台上等にＤＮＡインジケータを容易に設置することができる。
担持体がシートである場合、標準ＤＮＡはシートの外部からアクセス可能な表面に担持されていることが好ましい。ここで、「アクセス可能な表面」は、平滑な表面だけでなく、微細な凹凸のある表面、複数の繊維が互いに絡み合った繊維構造における繊維の表面、多孔質構造における外部と連通した孔内の表面等を含む。
【００１６】
担持体の材料としては、ＤＮＡを担持し得る材料であれば特に限定されず、例えば、セルロース、ガラス、合成樹脂、及び金属等が挙げられる。担持体の材料は１種類であってもよいし、２種類以上であってもよい。
ここで、ＤＮＡを担持するとは、ＤＮＡが担持体に物理的又は化学的に吸着、付着若しくは結合した状態をいう。この際、ＤＮＡ分子が担持体に対して直に接していてもよいし、ＤＮＡ分子が、ＤＮＡ分子を分散する分散媒を介して、担持体に対して間接的に接していてもよい。前記分散媒としては、例えば、水、アルコール、ｐＨ緩衝剤、ＥＤＴＡ、増粘剤等を含む公知のＤＮＡ分散媒が挙げられる。
【００１７】
担持体の素材としては、例えば、セルロース含有繊維、ガラス繊維及び合成樹脂繊維のうち少なくとも１つ以上を含むことが好ましい。これらの繊維は標準ＤＮＡを担持し易く、ＤＮＡ不活化処理による変性や劣化が起こりにくい。
【００１８】
具体的な担持体としては、例えば、濾紙、布、フィルム等が挙げられる。
担持体のサイズは特に限定されず、ＤＮＡインジケータを設置する箇所に応じて適宜設定されるが、ＤＮＡ不活化処理後にＤＮＡインジケータを回収し、標準ＤＮＡの残留量を定量する際の取り扱いの容易さを考慮して、例えば、面積が１〜１０ｃｍ２程度の小片であることが好ましい。シート状のＤＮＡインジケータを用いる場合、そのサイズは、取り扱いの容易さを考慮して適宜設定される。例えば、取り扱いが容易で、ＤＮＡ不活化処理によって標準ＤＮＡを適切に分解又は除去できることから、２０×２０ｍｍ程度が好ましい。
【００１９】
ＤＮＡインジケータの製造方法の一例を説明する。まず、前述した分散媒に標準ＤＮＡを適当な濃度で分散させたＤＮＡ分散液を調製する。ＤＮＡ分散液を適当なサイズの担持体に塗布して、担持体の表面に付着させたり、担持体の内部に浸潤させたりする。次いで、必要に応じて、乾燥して分散媒を除去することにより、標準ＤＮＡが担持体に担持された目的のＤＮＡインジケータを得ることができる。
【００２０】
材料として使用する前の担持体が意図しないＤＮＡ分子で既に汚染されている可能性を考慮して、予め担持体を洗浄した後で標準ＤＮＡを担持させることが好ましい。
また、使用前の担持体のＤＮＡ汚染を防ぐ観点から、ＤＮＡ汚染が起こり難い材料からなる担持体を使用することが好ましい。
【００２１】
《作業室内のＤＮＡ不活化方法》
本発明の第二態様は、第一態様のＤＮＡインジケータを作業室に設置するステップ（設置ステップ）と、前記作業室において、前記ＤＮＡインジケータが担持する標準ＤＮＡと、前記作業室に予め存在したＤＮＡとを同時に分解又は除去するＤＮＡ不活化処理を施すステップ（不活化ステップ）と、前記作業室からＤＮＡインジケータを回収し、前記ＤＮＡインジケータに担持された標準ＤＮＡの残留量を測定するステップ（測定ステップ）と、を有する、作業室内のＤＮＡ不活化方法である。以下、各ステップを説明する。
【００２２】
［設置ステップ］
ＤＮＡインジケータを設置する作業室は密閉空間であってもよいし、非密閉空間であってもよい。作業室の大きさは特に限定されず、例えば、その床面積が１〜１００ｍ２程度の大きさが挙げられる。この床面積はクリーンルームの床面積として適している。
ＤＮＡインジケータを設置する箇所は、特に限定されず、例えば、床上、壁上、装置上、作業台上等が挙げられる。
設置するＤＮＡインジケータの個数は、特に限定されず、１箇所に複数のＤＮＡインジケータを設置してもよいし、複数箇所に１つ又は複数のＤＮＡインジケータを設置してもよい。複数のＤＮＡインジケータを設置する場合、個々のＤＮＡインジケータは同じであってもよいし、異なっていてもよい。
ＤＮＡインジケータの設置方法は、担持した標準ＤＮＡが露出するように設置することが好ましく、単に置くだけでもよいし、両面テープや接着剤等で固定してもよい。
【００２３】
［不活化ステップ］
作業室内の、ＤＮＡインジケータを設置した箇所を含む任意の領域に対して、ＤＮＡを分解又は除去することが可能なＤＮＡ不活化処理を行う。
【００２４】
ＤＮＡ不活化処理としては、例えば、ＤＮＡ分子を化学的に分解することが可能な薬剤を前記領域に対して散布する方法が挙げられる。
前記薬剤としては、例えば、次亜塩素酸、次亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸カルシウム、過酸化水素等の１つ以上を含む液体薬剤が挙げられる。なかでも、ＤＮＡの分解効率に優れ、換気によって作業室内から容易に除去できることから、次亜塩素酸を含む液体薬剤（ＤＮＡ不活化剤）が好ましい。
前記液体薬剤に含まれる次亜塩素酸の濃度は、当該液体薬剤に接触した標準ＤＮＡが分解される濃度であればよく、例えば、有効塩素濃度５０〜５００ｐｐｍが挙げられる。
前記液体薬剤を散布する機器としては、例えば、霧吹き器具、噴霧装置、散水装置、超音波霧発生装置、蒸気発生装置（加湿器）等が挙げられる。
作業室内に散布した霧状、エアロゾル状又はガス状の前記薬剤を、作業室内の所定箇所に向けて誘導するために送風機を併用してもよい。
【００２５】
他のＤＮＡ不活化処理としては、例えば、布、ペーパータオル、モップ等で前記領域を拭く方法が挙げられる。前記領域には、予め前記液体薬剤を塗布してもよいし、布等に予め前記液体薬剤を含ませておいてもよい。
【００２６】
［測定ステップ］
適切なＤＮＡ不活化処理によって、ＤＮＡインジケータに担持されていた標準ＤＮＡの少なくとも一部は分解又は除去されている。回収したＤＮＡインジケータに残留している、分解又は除去されていない標準ＤＮＡの量を測定する方法としては、ＰＣＲ法、ＤＮＡの吸収波長帯を測定する吸光光度分析法等が挙げられる。なかでも、微量のＤＮＡを精度良く分析することが可能なＰＣＲ法が好ましい。
【００２７】
ＰＣＲ法のうち、定量性に優れるリアルタイムＰＣＲ法の適用が好ましい。標準ＤＮＡの所定の塩基配列に対するプライマーを用いてＰＣＲを行うことにより、標準ＤＮＡを増幅することができる。リアルタイムＰＣＲ法によれば、回収したＤＮＡインジケータに担持された標準ＤＮＡを鋳型として、その経時的な増幅率を測定することによって、鋳型として使用した標準ＤＮＡを定量することができる。
【００２８】
ＤＮＡ不活化処理を施していないＤＮＡインジケータをコントロール（参照基準）として、回収したＤＮＡインジケータにおける標準ＤＮＡの残留量が低ければ低いほど、前記ＤＮＡ不活化処理が有効に行われたことが分かる。標準ＤＮＡの残留量が充分に低ければ、そのＤＮＡ不活化処理を施した領域におけるＤＮＡ汚染は除去されたといえる。
【実施例】
【００２９】
以下、本発明にかかる具体的な実施形態や手順について、幾つかの例を説明する。
【００３０】
［実施例１；標準ＤＮＡの検出］
標準ＤＮＡとして繊維芽細胞から抽出したＤＮＡ（例えば、ＴＩＧ１−２０ＤＮＡ）を使用し、ＰＣＲ用のプライマーとしてＬＩＮＥ１（Long Interspersed element-1）を使用する。ＤＮＡ不活性化処理後のＤＮＡインジケータに残留したＤＮＡを分散媒に溶出する等の方法で回収し、分解されずに残った標準ＤＮＡの定量をリアルタイムＰＣＲのＳＹＢＲ-ＧＲＥＥＮ法等の公知方法で行う。標準ＤＮＡとプライマーの組み合わせが上記であると、未分解の標準ＤＮＡが０．０００１ｐｇ（ピコグラム）程度で残留していれば、それを検出することができる。検出したＤＮＡの濃度は、ＤＮＡ濃度の対数スケールを横軸にとり、Ｃｔ値を縦軸にとって予め作成した検量線に基づいて求めることができる。
【００３１】
実施例１の標準ＤＮＡの変形例として、例えば、公知のヒト培養細胞の株種（strain）、酵母などの真菌、大腸菌などの細菌等に由来するＤＮＡ、対象となる施設の作業室内で使用する細胞株に由来するＤＮＡ等を標準ＤＮＡとして用いることもできる。標準ＤＮＡのサイズ（長さ）は、全ゲノムであってもよいし、各種の制限酵素を用いて細分化した断片であってもよい。
【００３２】
実施例１のプライマーの変形例として、例えば、１６Ｓ  ｒＲＮＡ、２７ｆ、３５７ｆ、５３０ｆ、５１９ｒ、９０７ｒ、１１００ｒ、１３９２ｒ、１４９２ｒ等のユニバーサルプライマーが挙げられる。使用する標準ＤＮＡの増幅率が高いものを予め選定して使用することが望ましい。
【００３３】
［実施例２；ＤＮＡインジケータの作製］
ＤＮＡ担持体を構成する材料を選定するために、耐熱温度、丈夫さ、水分（ＤＮＡ）保持力、ＤＮＡ様夾雑物なし、の４つ項目で評価し、さらに総合的な観点から評価した。評価は次の４段階で行った；◎：優れている、○：良好である、△：劣る、×：極めて劣る。
耐熱温度については、担持体（担体）のカタログ値を参照した。
丈夫さについては、担持体を両手で引き裂くことを試み、その難易度を主観で評価した。
水分保持力については、担持体に滴下した水の吸収の程度を目視で確認して評価した。
ＤＮＡ様夾雑物なしについては、担持体を所定量のイオン交換水で洗浄し、溶出された成分を吸光光度計で検出し、ＤＮＡに対応する紫外線波長域に観測されたピークの高さからＤＮＡ様夾雑物の溶出程度を評価した。上記の評価結果を表１に示す。
【００３４】
【表１】
2018143223.tif 000002
【００３５】
上述の評価項目等を参考にして担持体を選定し、適当なサイズ（例えば２０×２０ｍｍ）に成形する。ＤＮＡ様不純物（夾雑物）を除去するため、担持体を滅菌処理した後、７０％エタノール等で充分に洗浄し、乾燥させる。清浄な担持体の表面に、標準ＤＮＡの水溶液の１０μｌを滴下し、乾燥させることによって、目的のＤＮＡインジケータが得られる。
一例として、繊維芽細胞由来の標準ＤＮＡ水溶液（濃度：０．５μｇ／ｍｌ）を用いて以下の実施例で用いるＤＮＡインジケータを作製した。
【００３６】
［実施例３；ＤＮＡインジケータからの標準ＤＮＡの回収］
実施例２で作製したＤＮＡインジケータを汚染しないように、清浄なピンセットを用いて、清浄な１．５ｍｌのマイクロチューブに入れる。ＴＥ（Tris-EDTA）緩衝液１２０μｌをマイクロチューブ内のＤＮＡインジケータに浸み込ませ、ＤＮＡインジケータを丸めてＴＥ緩衝液に漬けた状態で５分間静置する。
次いで、丸めたＤＮＡインジケータの端部をマイクロチューブの蓋に挟み、マイクロチューブ内に吊り下げる。この状態で卓上遠心機に掛けて２０００Ｇ、３０秒間で遠心することにより、ＤＮＡインジケータに浸み込んでいたＴＥ緩衝液をマイクロチューブの底部に落とし、溶出液として回収する。
得られた溶出液１０μｌをリアルタイムＰＣＲに掛けて、ＤＮＡインジケータからの標準ＤＮＡの回収率を求める。
【００３７】
上記の方法によってＤＮＡ不活化処理を施していないＤＮＡインジケータからの標準ＤＮＡの回収率を求める試験を行ったところ、担持体が定量濾紙、定性濾紙、ポリエステル不織布である場合には約６０％、担持体がセルロースアセテート製シートである場合には約３５％の回収率であった。回収されなかった標準ＤＮＡは、担持体に固着して回収できなかったか、或いは試験中の操作で意図せずに失われたと考えられる。
ＤＮＡ不活化処理を施していないＤＮＡインジケータから回収した標準ＤＮＡの回収率を基準として、ＤＮＡ不活化処理を施したＤＮＡインジケータに残留した標準ＤＮＡも同様に回収し、定量することができる。
【００３８】
［実施例４；ＤＮＡ不活化処理］
実施例２で作製したＤＮＡインジケータを汚染しないように、清浄なピンセットを用いて、清浄な１．５ｍｌのマイクロチューブに入れる。試験対象の液体薬剤５０μｌをマイクロチューブ内のＤＮＡインジケータの全体に浸み込ませ、１．５時間静置する。このＤＮＡ不活化処理の後、ＴＥ緩衝液１２０μｌをマイクロチューブ内のＤＮＡインジケータに浸み込ませ、ＤＮＡインジケータを丸めてＴＥ緩衝液に漬けた状態で５分間静置する。
次いで、実施例３と同様に遠心処理によって溶出液を回収し、リアルタイムＰＣＲによって分解されずに残った標準ＤＮＡの量を定量する。
【００３９】
上記の方法に従って、有効塩素濃度を０〜２００ｐｐｍの範囲で調整した次亜塩素酸水溶液を液体薬剤として用い、ＤＮＡ不活化処理の試験を行ったところ、下記表の結果を得た。この結果から、１００ｐｐｍの次亜塩素酸水溶液を液体薬剤として対象領域に散布することによって、その対象領域のＤＮＡ汚染を充分に除去できることが理解される。
【００４０】
【表２】
2018143223.tif 000003
【００４１】
［実施例５；バイオロジカルクリーンルーム（ＢＣＲ）のＤＮＡ汚染の除去］
図１に示す、外部に通じる廊下に面した前室と、エアシャワーと、ＢＣＲに通じる廊下（ＢＣＲ廊下）と、ＢＣＲと、シャフトとが、それぞれ扉で仕切られたＢＣＲ施設を対象とした。
ＢＣＲの中央に次亜塩素酸水溶液（濃度２００ｐｐｍ）を散布する噴霧装置を設置し、ＢＣＲ全体に液体薬剤が充満するように２基のファン（送風機）を設置した。
噴霧装置の近くの床上、噴霧装置を設置したＳＵＳテーブル上、外部の廊下に面した窓際の床上、シャフトスペース側の壁際の床上、の４箇所に、ＤＮＡインジケータ（図中のＤＩ(1)〜(4)）を設置した。
噴霧装置から霧状の次亜塩素酸水溶液を噴霧し、ＢＣＲ内に充満させ、床に触れると湿り気を感じる程度まで散布した。ＤＮＡ不活化処理を完了するために２時間静置した後、各ＤＮＡインジケータを回収した。また、噴霧装置及びファンを撤収し、ＢＣＲ内を充分に換気して、原状を復帰させた。
回収した各ＤＮＡインジケータに残留した標準ＤＮＡの量をリアルタイムＰＣＲで測定したところ、いずれも検出限界以下であった。この測定結果から、ＢＣＲのＤＮＡ汚染が充分に除去されたことを確認できた。
【００４２】
以上の通り、本発明によれば、作業室を汚染していた非常に微量で、透明で無臭のＤＮＡ夾雑物の分解効率（除去の程度）を定量的に把握することができる。従来は、薬剤によって清掃した作業室における微量ＤＮＡの分解効率を把握することはできなかった。
【００４３】
以上で説明した各実施形態における各構成及びそれらの組み合わせ等は一例であり、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で、公知の構成の付加、省略、置換、およびその他の変更が可能である。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明は、ＤＮＡ取り扱い施設のＤＮＡ汚染を除去する用途に広く適用できる。
【図１】
2018143223.tif 000004