(57)【要約】【課題】抗酸化能力を向上させた金刺梨発酵液を獲得する金刺梨の発酵方法を提供する。【解決手段】菌数の比率として０．３〜１：０．２〜０．９：１〜１．８であるラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液、及び出芽酵母の菌株の菌液が含まれる菌株の混合物を提供し、金刺梨のサンプルを提供し、前記ラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液と、前記ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液と、前記出芽酵母の菌株の菌液との総計の最終濃度が１．５×１０7CFU/ml〜３．５×１０7CFU/mlになるように、前記菌株の混合物により２２〜３３℃、６〜１５日で前記金刺梨のサンプルを発酵させ、金刺梨の発酵液を獲得する。【選択図】図１ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
菌数の比率として０．３〜１：０．２〜０．９：１〜１．８であるラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液、及び出芽酵母の菌株の菌液が含まれる菌株の混合物を提供する段階と、
金刺梨のサンプルを提供する段階と、
前記ラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液と、前記ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液と、前記出芽酵母の菌株の菌液との総計の濃度が混合後に１．５×１０7CFU/ml〜３．５×１０7CFU/mlになるように、前記菌株の混合物により２２〜３３℃、６〜１５日で前記金刺梨のサンプルを発酵させ、金刺梨の発酵液を獲得する段階と、
を含むことを特徴とする金刺梨の発酵方法。
【請求項２】
さらに、ラクトバチルス・カゼイの菌株BCRC 10697、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株BCRC 14604、及び出芽酵母の菌株BCRC 20579により、それぞれラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液、及び出芽酵母の菌株の菌液を形成する段階を含むことを特徴とする請求項１に記載の金刺梨の発酵方法。
【請求項３】
前記菌株の混合物により２８℃で金刺梨のサンプルを発酵させることを特徴とする請求項１または２に記載の金刺梨の発酵方法。
【請求項４】
前記菌株の混合物により１４日で金刺梨のサンプルを発酵させることを特徴とする請求項１または２に記載の金刺梨の発酵方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、金刺梨の発酵方法に関するもので、特に、抗酸化の能力を向上させる金刺梨の発酵液を獲得する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
工業化が進んでいる一方、我々の周りに工業の発展による工業汚染も溢れていて、我々はその工業汚染により、体にフリーラジカルが生じ、そのフリーラジカルがいろいろな都会病を起こすことがある。よって、抗酸化によりフリーラジカルを消去する保健方法が現代人に重視されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
中国特許出願公開第１０５２１９５９１Ａ号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
金刺梨（Rosa sterilis var. leioclada）はバラ科に属し、抗酸化の成分が含まれているが、十分な保健効果を達するには大量な金刺梨を食べなければならないので、現実的には難しいと考えられる。これに鑑みて、使用者に効率的な保健効果を提供するために、抗酸化能力を向上させた金刺梨発酵液を獲得する金刺梨の発酵方法を提供する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、上記の課題を解決するために、抗酸化能力を向上させた金刺梨発酵液を獲得する金刺梨の発酵方法を提供する。本発明の金刺梨の発酵方法は、菌数の比率として０．３〜１：０．２〜０．９：１〜１．８であるラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液、及び出芽酵母の菌株の菌液が含まれる菌株の混合物を提供する段階と、金刺梨のサンプルを提供する段階と、前記ラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液と、前記ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液と、前記出芽酵母の菌株の菌液との総計の濃度が混合後に１．５×１０7CFU/ml〜３．５×１０7CFU/mlになるように、前記菌株の混合物により２２〜３３℃、６〜１５日で前記金刺梨のサンプルを発酵させ、金刺梨の発酵液を獲得する段階を含む。
【０００６】
これによって、ラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株を含む菌株の混合物により、金刺梨のサンプルを発酵させることで、金刺梨のサンプルの抗酸化の能力及び抗酸化物質の含有量を向上させ、抗酸化の能力を向上させる金刺梨の発酵液を獲得し、抗酸化の健康食品或いは食品添加物として用いられ、消費者には養生する効果を達することができる。
【０００７】
また、さらに、ラクトバチルス・カゼイの菌株BCRC 10697、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株BCRC 14604、及び出芽酵母の菌株BCRC 20579により、それぞれにラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液及び出芽酵母の菌株の菌液を形成する段階を含む。これによって、抗酸化の能力を向上させる金刺梨の発酵液を獲得し、抗酸化の健康食品として用いられ、消費者には養生する効果を達することができる。
【０００８】
また、前記菌株の混合物により２８℃で金刺梨のサンプルを発酵させる。よって、抗酸化の能力を向上させる金刺梨の発酵液を獲得し、抗酸化の健康食品として用いられ、消費者には養生する効果を達することができる。
【０００９】
また、前記菌株の混合物により１４日で金刺梨のサンプルを発酵させる。よって、抗酸化の能力を向上させる金刺梨の発酵液を獲得し、抗酸化の健康食品として用いれ、消費者には養生する効果を達することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１ａ】第Ａ１〜Ａ３組のＡＢＴＳラジカルの消去率を示すヒストグラムである。
【図１ｂ】第Ａ１〜Ａ３組のSODの活性を示すヒストグラムである。
【図２ａ】第Ａ１〜Ａ３組のビタミンＣの含有量を示すヒストグラムである。
【図２ｂ】第Ａ１〜Ａ３組のカロテノイドの含有量を示すヒストグラムである。
【図３ａ】第Ｂ１〜Ｂ３組のＡＢＴＳラジカルの消去率を示すヒストグラムである。
【図３ｂ】第Ｂ１〜Ｂ３組のSODの活性を示すヒストグラムである。
【図３ｃ】第Ｂ１〜Ｂ３組のビタミンＣの含有量を示すヒストグラムである。
【図３ｄ】第Ｂ１〜Ｂ３組のカロテノイドの含有量を示すヒストグラムである。
【図４ａ】第Ｃ１〜Ｃ３組のＡＢＴＳラジカルの消去率を示すヒストグラムである。
【図４ｂ】第Ｃ１〜Ｃ３組のSODの活性を示すヒストグラムである。
【図４ｃ】第Ｃ１〜Ｃ３組のビタミンＣの含有量を示すヒストグラムである。
【図４ｄ】第Ｃ１〜Ｃ３組のカロテノイドの含有量を示すヒストグラムである。
【図５ａ】第Ｄ１〜Ｄ３組のＡＢＴＳラジカルの消去率を示すヒストグラムである。
【図５ｂ】第Ｄ１〜Ｄ３組のSODの活性を示すヒストグラムである。
【図５ｃ】第Ｄ１〜Ｄ３組のビタミンＣの含有量を示すヒストグラムである。
【図５ｄ】第Ｄ１〜Ｄ３組のカロテノイドの含有量を示すヒストグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の実施の一形態について、以下、図面を参照して説明する。
【００１２】
本発明の金刺梨の発酵方法においては、菌株の混合物及び金刺梨のサンプルを提供する段階と、菌株の混合物により金刺梨のサンプルを発酵させる段階とを含むことにより、優れる抗酸化能力を有する金刺梨発酵液を獲得することができる。菌株の混合物はラクトバチルス・カゼイ（Lactobacillus casei）と、ビフィドバクテリウム・ロングム（Bifidobacterium longum）と、出芽酵母（Saccharomyces cerevisiae）とが含まれる。
【００１３】
詳しく言うと、菌株の混合物は台湾の食品工業発展研究中心によるラクトバチルス・カゼイ（BCRC10697）と、ビフィドバクテリウム・ロングム（BCRC14604）と、出芽酵母（BCRC20579）からなるものであってもよい。
【００１４】
金刺梨のサンプルは、金刺梨の実を丸ごと使ってもよく、例えば金刺梨を蒸して柔らかくして、菌株の混合物が含まれる菌液を金刺梨に滲み込ませて金刺梨のサンプルを十分に発酵させることができ、或いは、金刺梨の実をカットし、金刺梨のサンプルとして発酵させる。例を挙げると、金刺梨の実の表面で裂け目を作ったり、或いは金刺梨の実を薄切りにしたりすることにより、金刺梨の実の果肉を露出させると共に、菌液と接触する表面積を増やすことにより、金刺梨の実を十分に発酵させることができる。本実施例では金刺梨の実の汁を搾って金刺梨の汁を金刺梨のサンプルとして発酵させる。これにより、金刺梨の実を果肉と皮そのままの形で発酵させるより、金刺梨の汁を金刺梨のサンプルとして発酵させることが、菌株の混合物が含まれる菌液を金刺梨のサンプルと十分に混合させることにより、効率的に発酵させることができる。
【００１５】
菌株の混合物は金刺梨のサンプルを発酵させる前、発酵の効率を向上させるようにラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株を培養し増殖させ、ラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株及び出芽酵母の菌株を活性化することにより、健康な菌株を獲得することが好ましい。本実施例では、微生物間相互作用により微生物の増殖に影響を及ぼすことを避けるように、ラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株を別々に液体培地で対数期（log phase）になるまで培養し、それぞれラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液、及び出芽酵母の菌株の菌液を形成させる。例えば、菌株の品質を確保するためにラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株を適当な生長温度で増殖させるように、ラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株を別々に３７℃で培養し増殖させてもよい。又、血球計数方法により菌量を計算し、別々にラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液、及び出芽酵母の菌株の菌液を１×１０7CFU/mlに調整し、金刺梨のサンプルを発酵させるのに用いる菌株の混合物を形成する。特に、ラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株の間の相互作用の効率を向上させるために、菌数の比率として０．３〜１：０．２〜０．９：１〜１．８でラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液と、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液と、出芽酵母の菌株の菌液とを混合して、菌株の混合物を形成する。又、十分な発酵の効果を達するように、菌数の比率として０．８：０．８：１．６でラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液と、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液と、出芽酵母の菌株の菌液とを混合して、菌株の混合物を形成することが好ましい。
【００１６】
菌株の混合物と金刺梨のサンプルを混合した後、ラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液と、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液と、出芽酵母の菌株の菌液との総計の濃度が１．５×１０7CFU/ml〜３．５×１０7CFU/mlとなるようにし、かつその菌株の混合物が菌株の混合物と金刺梨のサンプルを混合した総体積の１０〜２５％となるようにすることで、十分な菌数を提供し発酵させ、所望の発酵の効率を確保する効果を達する。
【００１７】
次に、最適な条件で菌株の混合物により金刺梨のサンプルを発酵させ、金刺梨の発酵液を獲得する。詳しく言うと、２２〜３３℃で６〜１５日で菌株の混合物により金刺梨のサンプルを発酵させ、発酵の過程において、静置発酵法で発酵させてもよく、沈殿を起こさないように８０〜１１０ｒｐｍでの振盪培養で発酵させてもよい。本実施例では菌株の混合物により２８℃、１４日で金刺梨のサンプルを発酵させ、１００ｒｐｍの振盪培養により、発酵の効果を向上させる。
【００１８】
本発明の金刺梨の発酵方法により、抗酸化の能力を向上させる金刺梨の発酵液を獲得することができることを証明するために、以下に示す試験を行った。
【００１９】
菌数の比率として０．８：０．８：１．６でラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液と、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液と、出芽酵母の菌株の菌液とを混合して、菌株の混合物を獲得し、その菌株の混合物により２８℃、１４日で金刺梨のサンプルを発酵させて金刺梨の発酵液を形成した。そして、金刺梨の発酵液に対して遠心分離を行い、上澄み液を獲得し、実験組（Ａ１）とした。又、菌数の比率として０．８：０．８：１．６でラクトバチルス・カゼイと同属且つ異なる種である好酸性乳酸桿菌（Lactobacillus acidophilus）の菌株の菌液、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液、及び出芽酵母の菌株の菌液を混合して金刺梨のサンプルを発酵させた後、上記と同じ方法で処理を行い、上澄み液を獲得し、第一対照組（Ａ２）とし、又、発酵していない金刺梨のサンプルを第二対照組（Ａ３）とし、そして、Ａ１〜Ａ３の抗酸化の能力及び抗酸化物質の含有量をそれぞれ測定した。
【００２０】
（Ａ）抗酸化の能力の測定
【００２１】
ＡＢＴＳ（2,2'-Azino-bis -〔3-ethylbenthiazoline sulfonic acid〕）は発色剤であり、過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）の存在下で、安定した青緑色のＡＢＴＳラジカルを形成し、７３４ｎｍにおける吸収を示す。サンプル中に抗酸化物質が含まれるとＡＢＴＳラジカルの形成が抑制されるので、ＡＢＴＳラジカルの吸光度が下がれば下がるほど抗酸化物質の抗酸化の能力が優れると考えられる。よって、実験組（Ａ１）、第一対照組（Ａ２）及び第二対照組（Ａ３）を５００倍希釈した後、各組のＡＢＴＳラジカルに対する消去率を比較する結果は図１ａに示した。図１ａに示すように、ラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株を含む菌株の混合物により発酵した金刺梨の発酵液（Ａ１）は、好酸性乳酸桿菌の菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株を含む菌株の混合物により発酵した金刺梨の発酵液（Ａ２）及び発酵していない金刺梨のサンプル（Ａ３）より、ＡＢＴＳラジカルの消去率が顕著に向上する効果があった。
【００２２】
又、上記Ａ１〜Ａ３を１００倍希釈した後、Ａ１〜Ａ３に含まれるスーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）の活性を測定した結果は図１ｂに示した。図１ｂに示すように、ラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株を含む菌株の混合物により発酵した金刺梨の発酵液（Ａ１）は、スーパーオキシドディスムターゼの活性がＡ２及びＡ３より、顕著に向上する効果があった。
【００２３】
（Ｂ）抗酸化物質の含有量の測定
【００２４】
上記のＡ１〜Ａ３を５００倍希釈した後、Ａ１〜Ａ３に含まれるビタミンＣ（Vitamin C）及びカロテノイド（Carotenoid）の含有量を測定した結果は図２ａ、２ｂに示した。図２ａ、２ｂに示すように、Ａ１のビタミンＣ及びカロテノイドの含有量はＡ２及びＡ３より多かった。よって、ラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株を含む菌株の混合物により発酵した金刺梨の発酵液に含有するビタミンＣ及びカロテノイドの含有量は、確実に増した。
【００２５】
よって、ラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株を含む菌株の混合物により発酵した金刺梨の発酵液の抗酸化の能力及び抗酸化物質の含有量は、発酵していない金刺梨のサンプルより、顕著に向上する効果があり、且つ、好酸性乳酸桿菌の菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株を含む菌株の混合物により発酵した金刺梨の発酵液の場合よりも多い。これによって、本発明において、ラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株により金刺梨のサンプルを発酵させることで、抗酸化の能力を向上させる金刺梨の発酵液を獲得することができる。
【００２６】
（Ｃ）発酵する菌株の濃度の影響
【００２７】
本実験では、菌数の比率として０．８：０．８：１．６でラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液と、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液と、出芽酵母の菌株の菌液とを混合して、菌株の混合物を獲得し、その菌株の混合物を金刺梨のサンプルと混合して、ラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液と、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液と、出芽酵母の菌株の菌液との総計の濃度が、菌株の混合物と金刺梨のサンプルを混合した後、それぞれ３×１０7CFU/ml及び１×１０7CFU/mlとなるように形成して、２８℃、１４日で金刺梨のサンプルを発酵させて二組の金刺梨の発酵液（Ｂ１及びＢ２）を形成し、且つ、発酵していない金刺梨のサンプルを対照組（Ｂ３）として、異なる濃度の菌株が金刺梨のサンプルの発酵に対する影響を比較するために、各組（Ｂ１〜Ｂ３）の抗酸化の能力及び抗酸化物質の含有量を測定した。その結果は図３ａ〜３ｄに示すように、Ｂ１のＡＢＴＳラジカルの消去率及びスーパーオキシドディスムターゼの活性が顕著に向上する効果があった。且つＢ１のビタミンＣ及びカロテノイドの含有量も増すことにより、菌株の混合物と金刺梨のサンプルを混合した後、ラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液と、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液と、出芽酵母の菌株の菌液との総計の最終濃度が３×１０7CFU/mlで金刺梨のサンプルを発酵させることにより、金刺梨のサンプルの抗酸化の能力を向上させることができることを示した。
【００２８】
（Ｄ）発酵温度の影響
【００２９】
本実験では、菌数の比率として０．８：０．８：１．６でラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液、及び出芽酵母の菌株の菌液を混合して、菌株の混合物を獲得し、その菌株の混合物を金刺梨のサンプルと混合した後、ラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液と、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液と、出芽酵母の菌株の菌液との総計の濃度が３×１０7CFU/mlとなるように形成して、そして２８℃及び２０℃でそれぞれ、１４日で金刺梨のサンプルを発酵させて二組の金刺梨の発酵液（Ｃ１及びＣ２）を形成し、且つ、発酵していない金刺梨のサンプルを対照組（Ｃ３）として、異なる温度で金刺梨のサンプルの発酵に対する影響を比較するために、各組（Ｃ１〜Ｃ３）の抗酸化の能力及び抗酸化物質の含有量を測定した。その結果は図４ａ〜４ｄに示すように、Ｃ１のＡＢＴＳラジカルの消去率及びスーパーオキシドディスムターゼの活性が顕著に向上する効果があった。且つＣ１のビタミンＣ及びカロテノイドの含有量も増すことにより、２８℃での発酵が２０℃より、優れる抗酸化の能力を有する金刺梨のサンプルを獲得することができることを示した。
【００３０】
（Ｅ）発酵時間の影響
【００３１】
本実験では、菌数の比率として０．８：０．８：１．６でラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液、及び出芽酵母の菌株の菌液を混合して、菌株の混合物を獲得し、その菌株の混合物を金刺梨のサンプルと混合した後、ラクトバチルス・カゼイの菌株の菌液と、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株の菌液と、出芽酵母の菌株の菌液との総計の濃度が３×１０7CFU/mlとなるように形成して、そしてそれぞれ１４日及び５日で、２８℃で金刺梨のサンプルを発酵させて二組の金刺梨の発酵液（Ｄ１及びＤ２）を形成し、且つ、発酵していない金刺梨のサンプルを対照組（Ｄ３）として、異なる発酵時間で金刺梨のサンプルの発酵に対する影響を比較するために、各組（Ｄ１〜Ｄ３）の抗酸化の能力及び抗酸化物質の含有量を測定した。その結果は図５ａ〜５ｄに示すように、Ｄ１のＡＢＴＳラジカルの消去率及びスーパーオキシドディスムターゼの活性がＤ２及びＤ３より顕著に向上する効果があった。且つＤ１のビタミンＣ及びカロテノイドの含有量がＤ２及びＤ３よりも増し、さらに、わずか５日（Ｄ２）で金刺梨のサンプルを発酵させることによる金刺梨の発酵液の抗酸化の能力及び抗酸化物質の含有量が、対照組（Ｄ３）の抗酸化の能力及び抗酸化物質の含有量と比較すると明らかな変化がないため、本発明の金刺梨の発酵方法において、金刺梨のサンプルを６〜１５日で発酵させることで金刺梨のサンプルの抗酸化の能力を向上させることができることを示した。
【００３２】
上述した試験の結果を綜合すると、本発明の金刺梨の発酵方法において、ラクトバチルス・カゼイの菌株、ビフィドバクテリウム・ロングムの菌株、及び出芽酵母の菌株を含む菌株の混合物により、金刺梨のサンプルを発酵させることで、金刺梨のサンプルの抗酸化の能力及び抗酸化物質の含有量を向上させ、抗酸化の能力を向上させた金刺梨の発酵液を獲得し、抗酸化の健康食品或いは食品添加物として用いることができ、消費者には養生する効果を達することができる。
【００３３】
本発明は、その精神と必須の特徴事項から逸脱することなく他のやり方で実施することができる。従って、本明細書に記載した好ましい実施形態は例示的なものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
2018143233.tif 000004
【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図３ｃ】
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【図３ｄ】
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【図４ａ】
2018143233.tif 000011
【図４ｂ】
2018143233.tif 000012
【図４ｃ】
2018143233.tif 000013
【図４ｄ】
2018143233.tif 000014
【図５ａ】
2018143233.tif 000015
【図５ｂ】
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【図５ｃ】
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【図５ｄ】
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