(57)【要約】      （修正有）【課題】自己免疫疾患および代謝障害を含む、メモリーＴ細胞が関与する疾患および障害に関連する症状を、治療、予防、および／または緩和するためのＳｈＫベースの薬学的組成物の提供。【解決手段】特定の配列を有するＳｈＫポリペプチドの薬学的に許容される塩を含み、該ＳｈＫポリペプチドは、検出可能な標識と、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質とに結合し、Ｃ末端は、酸またはアミドである、ｉｎ  ｖｉｖｏでの診断用途に好適な薬学的組成物。更に、前記ＳｈＫポリペプチドの薬学的に許容される塩を含み、前記ＳｈＫポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合し、Ｃ末端は、酸またはアミドである、薬学的組成物。【選択図】図２−１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｘａａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（配列番号１）を有するＳｈＫポリペプチドの薬学的に許容される塩を含み、前記ＳｈＫポリペプチドは、検出可能な標識と、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質とに結合し、Ｃ末端は、酸またはアミドである、ｉｎ  ｖｉｖｏでの診断用途に好適な薬学的組成物。
【請求項２】
前記検出可能な標識は、インジウム−１１１（Ｉｎ１１１）のキレートである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記検出可能な標識は、インジウム−１１１（Ｉｎ１１１）の１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）−キレートである、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記検出可能な標識は、ガドリニウム（Ｇｄ）のキレートである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記検出可能な標識は、ガドリニウム（Ｇｄ）のＤＯＴＡ−キレートである、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記ＳｈＫポリペプチドは、配列Ｔｙｒ−ＡＥＥＡ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２  （ＳｈＫ−１９８）を有し、前記検出可能な標識はアミノ末端に存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記検出可能な標識は、インジウム−１１１（Ｉｎ１１１）の１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）−キレートである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
配列Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｘａａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（配列番号１）を有するＳｈＫポリペプチドの薬学的に許容される塩を含み、前記ＳｈＫポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合し、Ｃ末端は、酸またはアミドである、薬学的組成物。
【請求項９】
水性担体中の、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
５〜７のｐＨを有する、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記ＳｈＫポリペプチドを前記水性担体に溶解するのに有効な量の界面活性剤をさらに含む、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記ＳｈＫポリペプチドは、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜５００ｍｇ／ｍｌの量で存在する、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記界面活性剤は、ポリソルベート２０である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記界面活性剤は、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０である、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記ｐＨは、６．０である、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
０．０１、０．１、０．５、０．７５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、または５００ｍｇ／ｍｌの前記ＳｈＫポリペプチドを含む、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記ＳｈＫポリペプチドは、天然の源から得られる、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記ＳｈＫポリペプチドは、合成である、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
前記化学物質は、前記ＳｈＫポリペプチドのＮ末端に結合している、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
前記化学物質は、結合分子または結合基を介して前記ＳｈＫポリペプチドの前記Ｎ末端に結合している、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
前記化学物質は、アミノエチルオキシエチルオキシ−アセチルリンカーによって前記ＳｈＫポリペプチドの前記Ｎ末端に結合している、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
前記化学物質は、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ、Ｅｔ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（ＰＯ３Ｈ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＣＯ２Ｈ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−グルタミン酸塩、およびＡＥＥＡｃ−Ｄ−グルタミン酸塩からなる群から選択される、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
式ｐ−ホスホ−Ｔｙｒ−ＡＥＥＡ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２を有するＳｈＫポリペプチドの薬学的に許容される塩を含む、薬学的組成物。
【請求項２４】
水性担体中に存在し、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０をさらに含み、５〜７のｐＨを有する、請求項２３に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．５ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌのＳｈＫ−１８６をさらに含み、６．０のｐＨを有する、請求項２４に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
式Ｔｙｒ−ＡＥＥＡ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２を有するＳｈＫポリペプチドの薬学的に許容される塩を含む、薬学的組成物。
【請求項２７】
０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０および０．５ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌの範囲のＳｈＫ−１９８をさらに含む水性担体中に存在し、５〜７のｐＨを有する、請求項２６に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．５ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌのＳｈＫ−１９８をさらに含み、６．０のｐＨを有する、請求項２７に記載の薬学的組成物。
【請求項２９】
１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐ−ホスホ−Ｔｙｒ−ＡＥＥＡに結合した式Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−  Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２（配列番号１、ＸａａはＭｅｔである）を有するポリペプチドの薬学的に許容される酢酸塩（０．５ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ）、および０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０を含み、６．０のｐＨを有する、薬学的組成物。
【請求項３０】
前記薬学的に許容される塩は、酢酸カリウムまたは酢酸ナトリウムである、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項３１】
薬学的組成物を製造するためのプロセスであって、（ａ）所定濃度の水性担体中でポリソルベート２０の０．０５％溶液を調製することと、（ｂ）ステップ（ａ）の前記溶液に、配列番号１を有するポリペプチドであって、Ｃ末端は、酸またはアミドであり、前記ポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合している、ポリペプチドの薬学的に許容される塩を所定量加えることと、（ｃ）前記ポリペプチドが前記溶液に溶解するまで、ステップ（ｂ）の前記溶液のｐＨを調整することと、（ｄ）必要に応じて、ステップ（ｃ）の前記溶液の前記ｐＨを５〜７のｐＨに調整し、それによって前記薬学的組成物を製造することと、を含む、プロセス。
【請求項３２】
請求項３１に記載のプロセスによって調製される、薬学的組成物。
【請求項３３】
配列番号１のポリペプチドの薬学的に許容される塩を含み、Ｃ末端は、酸またはアミドであり、前記ポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合している、凍結乾燥した薬学的組成物。
【請求項３４】
前記薬学的に許容される塩は、酢酸カリウムまたは酢酸ナトリウムである、請求項３３に記載の凍結乾燥した薬学的組成物。
【請求項３５】
前記薬学的に許容される塩は、酢酸ナトリウムである、請求項３３に記載の凍結乾燥した薬学的組成物。
【請求項３６】
８〜１２重量％のアセテート含有量を含む、請求項３３に記載の凍結乾燥した薬学的組成物。
【請求項３７】
１０〜１１重量％のアセテート含有量を含む、請求項３６に記載の凍結乾燥した薬学的組成物。
【請求項３８】
梱包材料内に提供される、請求項３３に記載の凍結乾燥した薬学的組成物。
【請求項３９】
前記薬学的組成物の水分含有量は、５％未満である、請求項３３に記載の凍結乾燥した薬学的組成物。
【請求項４０】
前記薬学的組成物の水分含有量は、４．０％未満である、請求項３３に記載の凍結乾燥した薬学的組成物。
【請求項４１】
前記薬学的組成物の水分含有量は、３．５％未満である、請求項３３に記載の凍結乾燥した薬学的組成物。
【請求項４２】
長期保存用に調合される、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４３】
滅菌ガラスバイアルに収容され、−７０℃で保存されるように指示される、請求項４２に記載の薬学的組成物。
【請求項４４】
皮下投与用に調合される、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項４５】
滅菌注射器に収容される、請求項４４に記載の薬学的組成物。
【請求項４６】
請求項１、１６、１９、または２２のいずれか１項に記載の薬学的組成物を収容する滅菌条件下で調製された少なくとも１つのガラスバイアルを備える、薬学的用途のための製造ユニットであって、前記ガラスバイアル内の前記薬学的組成物は、−７０℃で少なくとも６か月間安定であり、ヒトに投与するために前記薬学的組成物を希釈および調製するための指示をさらに備える、製造ユニット。
【請求項４７】
請求項１、１６、１９、または２２のいずれか１項に記載の薬学的組成物を収容する少なくとも１つの滅菌注射器を備える、薬学的用途のための製造ユニットであって、ヒトに薬学的組成物を投与するための指示をさらに備える、製造ユニット。
【請求項４８】
治療または症状の緩和を必要とするヒトにおいて、自己免疫障害の症状を予防、治療、または緩和する方法であって、前記疾患を予防もしくは治療するため、または前記症状を緩和するために効果的な量で、請求項８、２３、２６、または２９のいずれかに記載の薬学的組成物を前記ヒトに投与することを含む、方法。
【請求項４９】
前記障害は、多発性硬化症、１型糖尿病、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、接触性皮膚炎、乾癬性関節炎、喘息、アレルギー、再狭窄、全身性硬化症、繊維症、強皮症、糸球体腎炎、シェーグレン症候群、炎症性骨吸収、移植拒絶、移植片対宿主病、および紅斑性狼瘡からなる群から選択される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記障害は、多発性硬化症であり、前記方法は、請求項１６に記載の組成物を投与することを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
前記薬学的組成物は、毎日、毎週、毎月、２ヶ月毎、３ヶ月毎、または６か月毎に投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
前記薬学的組成物は、皮下投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
ヒト対象において代謝障害を予防、治療、または緩和する方法であって、前記ヒト対象における前記代謝障害の１つ以上の症状を予防、治療、または緩和するために効果的な量で、請求項８、２３、２６、または２９のいずれか１項に記載の薬学的組成物を前記ヒト対象に投与することを含む、方法。
【請求項５４】
前記代謝障害は、肥満、２型糖尿病、高コレステロール血症、冠動脈疾患、代謝症候群、代謝Ｘ症候群、インスリン抵抗性、高脂血症、リポジストロフィー、脂質異常症、高トリグリセリド血症、耐糖能障害、高血圧、体重過多、および、エネルギー代謝の障害のうちの１つ以上である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記薬学的組成物は、毎日、毎週、毎月、２ヶ月毎、３ヶ月毎、または６か月毎に投与される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記薬学的組成物は、皮下または静脈内に投与される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
配列Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｘａａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（配列番号１、ＸａａはＭｅｔまたはIｌｅである）を有するＳｈＫポリペプチドの薬学的に許容される塩、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０を含み、前記ＳｈＫポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合し、Ｃ末端は、酸またはアミドであり、６．０のｐＨを有する、薬学的組成物。
【請求項５８】
式Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２（配列番号１、ＸａａはＭｅｔである）を有するＳｈＫポリペプチドの薬学的に許容される塩、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０を含み、前記ＳｈＫポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合し、Ｃ末端は、酸またはアミドであり、６．０のｐＨを有する、薬学的組成物。
【請求項５９】
式ｐ−ホスホ−Ｔｙｒ−ＡＥＥＡ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔ
ｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２を有するＳｈＫポリペプチドの薬学的に許容される塩、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０を含み、６．０のｐＨを有する、薬学的組成物。
【請求項６０】
式Ｔｙｒ−ＡＥＥＡ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２を有するＳｈＫポリペプチド、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０を含み、６．０のｐＨを有する、薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１１年６月６日に出願された米国仮特許出願第６１／４９３，８６８号、および２０１２年４月１７日に出願された同６１／６２５，５７８号に対する優先権を主張するものであり、これらは両方とも、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本明細書に開示される組成物および方法は、概して、自己免疫疾患および代謝障害を含む、メモリーＴ細胞が関与する疾患および障害に関連する症状を、治療、予防、および／または緩和するためのＳｈＫベースの薬学的組成物の使用に関する。
【政府の関与】
【０００３】
米国政府は、国立衛生学研究所の国立アレルギー・感染症研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ）からの助成金番号Ｒ４３ＡＩ０８５６９１およびＮＩＨ  Ｒ０１  ＮＳ４８２５２に準じて、本開示において権利を有する。
【発明の概要】
【０００４】
多くの免疫関連ヒト疾患および代謝障害は、メモリーＴ細胞の作用に起因すると考えられる。そのような免疫関連疾患は、特に、多発性硬化症、１型糖尿病、関節リウマチ、乾癬等の自己免疫疾患を含む。代謝障害の例は、肥満、２型糖尿病、高コレステロール血症、冠動脈疾患、代謝症候群、代謝Ｘ症候群、インスリン抵抗性、高脂血症、リポジストロフィー、脂質異常症、高トリグリセリド血症、耐糖能障害、および高血圧を含む。
【０００５】
セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）およびエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）の２つのカテゴリーのメモリーＴ細胞が知られている。ＴＥＭ細胞は、活性化されると、Ｋｖ１．３Ｋ＋イオンチャネルを上方制御する。抗原によって駆動されるＴＥＭ細胞の増殖は、Ｋｖ１．３Ｋ＋イオンチャネル遮断薬に感受性を示し（Ｗｕｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１１：１７０３−１７１３，２００３）、元々はカリブ海イソギンチャク、スティコダクチラ・ヘリアンサスから単離されたポリペプチドＳｈＫが、そのような遮断薬として機能する。ＳｈＫは、Ｋｖ１．３チャネルを遮断することにより、ピコモル濃度でのＴＥＭ細胞の増殖を抑制する。
【０００６】
本明細書に開示される一実施形態は、配列Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｘａａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（配列番号１、ＸａａはＭｅｔまたはＮｌｅである）を有するＳｈＫポリペプチドを含む薬学的組成物を含む。
【０００７】
別の実施形態は、式Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２を有するＳｈＫポリペプチドを含む薬学的組成物を含む。
【０００８】
別の実施形態は、式ｐ−ホスホ−Ｔｙｒ−ＡＥＥＡ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２（ＳｈＫ−１８６）を有するＳｈＫポリペプチドを含む薬学的組成物を含む。
【０００９】
別の実施形態は、式Ｌ−システインアミド、４−ホスホ−Ｌ−フェニルアラニル−２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−セリル−Ｌ−システイニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−α−アスパルチル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リジル−Ｌ−セリル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−システイニル−Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−セリル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−リジル−Ｌ−チロシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−システイニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−リジル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−システイニルグリシル−Ｌ−スレオニル−、サイクリック（５→３７）、（１４→３０）、（１９→３４）−トリス（ジスルフィド）（本明細書においてＳｈＫ−１９２と称される、ＣＡＳ登録番号１１５９５２８−２６−３）を有するＳｈＫポリペプチドであって、ＳｈＫ−１９２ポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合し、Ｃ末端は、酸またはアミドであるＳｈＫポリペプチド、を含む薬学的組成物を含む。
【００１０】
別の実施形態は、式ＰｐＡ−Ｐｈｅ−ＡＥＥＡ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２（ＳｈＫ−１９８）を有するＳｈＫポリペプチドを含む薬学的組成物を含む。
【００１１】
別の実施形態において、ＳｈＫポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合している。別の実施形態において、Ｃ末端は、酸またはアミドである。別の実施形態において、ＳｈＫポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合し、Ｃ末端は、酸またはアミドである。
【００１２】
別の実施形態において、１つ以上の化学物質がＳｈＫポリペプチドのＮ末端に結合している。別の実施形態において、化学物質は、結合分子または結合基を介してＳｈＫポリペプチドのＮ末端に結合することができる。別の実施形態において、化学物質は、アミノエチルオキシエチルオキシ−アセチルリンカーによってＳｈＫポリペプチドのＮ末端に結合している。
【００１３】
別の実施形態において、化学物質は、Ｌ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨＥｔ）、Ｌ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、Ｄ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、Ｌ−Ｔｙｒ、Ｌ−Ｔｙｒ（ＰＯ３Ｈ２）、Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨ２）、Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＣＯ２Ｈ）、Ｌ−アスパラギン酸塩、Ｄ−アスパラギン酸塩、Ｌ−グルタミン酸塩、およびＤ−グルタミン酸塩からなる群から選択される。
【００１４】
別の実施形態において、化学物質／リンカーの組み合わせは、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨＥｔ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（ＰＯ３Ｈ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＣＯ２Ｈ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−グルタミン酸塩、およびＡＥＥＡｃ−Ｄ−グルタミン酸塩からなる群から選択される。
【００１５】
別の実施形態において、ＳｈＫポリペプチドは、薬学的組成物中に、その薬学的に許容される塩として提供される。別の実施形態において、薬学的に許容される塩は、アセテートである。別の実施形態において、薬学的に許容される塩は、酢酸カリウムまたは酢酸ナトリウムである。
【００１６】
別の実施形態において、薬学的組成物は、水性担体中に提供される。
【００１７】
別の実施形態において、薬学的組成物のｐＨは５〜７である。別の実施形態において、薬学的組成物のｐＨは６．０である。
【００１８】
別の実施形態において、薬学的組成物は、水性担体にＳｈＫポリペプチドを溶解するのに十分な量の界面活性剤をさらに含む。別の実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベート２０である。別の実施形態において、界面活性剤は、０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０である。
【００１９】
別の実施形態において、薬学的組成物は、１０ｍＭリン酸ナトリウムをさらに含む。別の実施形態において、薬学的組成物は、１５０ｍＭ  ＮａＣｌをさらに含む。
【００２０】
別の実施形態において、ＳｈＫポリペプチドは、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜５００ｍｇ／ｍｌの量で存在する。さらなる実施形態において、ＳｈＫポリペプチドは、０．０１、０．１、０．５、０．７５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００ｍｇ／ｍｌの量で提供されてもよい。
【００２１】
別の実施形態において、ＳｈＫポリペプチドは、天然の源から得られる。別の実施形態において、ＳｈＫポリペプチドは合成である。別の実施形態において、ＳｈＫポリペプチドは、天然および合成ＳｈＫポリペプチドの混合物を含む。
【００２２】
本明細書に記載される実施形態はまた、本明細書に記載される組成物から出発して生成される凍結乾燥した薬学的組成物も含む。一実施形態において、凍結乾燥した薬学的組成物は、８〜１２重量％のアセテート含有量を含む。別の実施形態において、凍結乾燥した薬学的組成物は、１０〜１１重量％のアセテート含有量を含む。
【００２３】
凍結乾燥した薬学的組成物の別の実施形態において、薬学的組成物の水分含有量は５％未満である。凍結乾燥した薬学的組成物の別の実施形態において、水分含有量は４．０％未満である。凍結乾燥した薬学的組成物の別の実施形態において、水分含有量は３．５％未満である。
【００２４】
別の実施形態において、薬学的組成物は、梱包材料内に提供される。別の実施形態において、薬学的組成物は、長期保存用に調合される。別の実施形態において、薬学的組成物は、滅菌ガラスバイアルに収容され、−７０℃で保存されるように指示される。
【００２５】
別の実施形態において、薬学的組成物は、皮下投与用に調合される。別の実施形態において、薬学的組成物は、滅菌注射器に収容される。
【００２６】
一実施形態は、配列Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｘａａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（配列番号１、ＸａａはＭｅｔまたはＮｌｅである）を有するＳｈＫポリペプチドの薬学的に許容される塩、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０を含む薬学的組成物を含み、ＳｈＫポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合し、Ｃ末端は、酸またはアミドであり、組成物は、６．０のｐＨを有する。
【００２７】
別の実施形態は、式Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２（配列番号１、ＸａａはＭｅｔである）を有するＳｈＫポリペプチドの薬学的に許容される塩、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０を含む薬学的組成物を含み、ＳｈＫポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合し、組成物は、６．０のｐＨを有する。
【００２８】
別の実施形態は、式ｐ−ホスホ−Ｔｙｒ−ＡＥＥＡ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２（ＳｈＫ−１８６）を有するＳｈＫポリペプチドの薬学的に許容される塩、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０を含む薬学的組成物を含み、組成物は、６．０のｐＨを有する。
【００２９】
別の実施形態は、式Ｔｙｒ−ＡＥＥＡ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２（ＳｈＫ−１９８）を有するＳｈＫポリペプチド、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０５ｗ／ｖ％のポリソルベート２０を含む薬学的組成物を含み、組成物は、６．０のｐＨを有する。
【００３０】
本明細書に開示される実施形態はまた、薬学的用途のための製造ユニットを含む。そのような製造ユニットの一実施形態は、本明細書に記載される薬学的組成物を収容する、滅菌条件下で調製された少なくとも１つのガラスバイアルを備える。別の実施形態において、ガラスバイアル内の薬学的組成物は、−７０℃で少なくとも６か月間安定である。別の実施形態において、製造ユニットは、ヒトに投与するために薬学的組成物を希釈および調製するための指示をさらに備える。
【００３１】
別の実施形態において、薬学的用途のための製造ユニットは、本明細書に記載される薬学的組成物を収容する少なくとも１つの滅菌注射器を備える。別の実施形態において、製造ユニットは、ヒトに薬学的組成物を投与するための指示をさらに備える。
【００３２】
本明細書に開示される実施形態はまた、記載される薬学的組成物を製造する方法を含む。１つのそのような実施形態は、（ａ）所定濃度の水性担体中でポリソルベート２０の０．０５％溶液を調製することと、（ｂ）ステップ（ａ）の溶液に、配列番号１を有する所定量のポリペプチドまたはその薬学的に許容される塩を加えることであって、Ｃ末端は、酸またはアミドであり、ポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合している、加えることと、（ｃ）ポリペプチドが溶液に溶解するまで、ステップ（ｂ）の溶液のｐＨを調整することと、（ｄ）必要に応じて、ステップ（ｃ）の溶液のｐＨを５〜７のｐＨに調整し、それによって薬学的組成物を製造することと、を含む、薬学的組成物を製造するためのプロセスを含む。
【００３３】
本明細書に開示される実施形態はまた、自己免疫障害または代謝障害の症状を予防、治療、または緩和する方法を含む。一実施形態は、そのような自己免疫障害または代謝障害の予防、治療、または緩和を必要とするヒトに、その症状を予防、治療、または緩和するために効果的な量で、本明細書に記載される薬学的組成物を投与することを含む。
【００３４】
別の実施形態において、障害は、多発性硬化症、１型糖尿病、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、接触性皮膚炎、乾癬性関節炎、喘息、アレルギー、再狭窄、全身性硬化症、繊維症、強皮症、糸球体腎炎、シェーグレン症候群、炎症性骨吸収、移植拒絶、移植片対宿主病、および紅斑性狼瘡からなる群から選択される自己免疫障害である。
【００３５】
別の実施形態において、障害は、肥満、２型糖尿病、高コレステロール血症、冠動脈疾患、代謝症候群、代謝Ｘ症候群、インスリン抵抗性、高脂血症、リポジストロフィー、脂質異常症、高トリグリセリド血症、耐糖能障害、高血圧、体重過多、および、エネルギー代謝の障害からなる群から選択される代謝障害である。
【００３６】
別の実施形態において、薬学的組成物は、毎日、毎週、毎月、２ヶ月毎、３ヶ月毎、または６か月毎に投与される。
【００３７】
別の実施形態において、薬学的組成物は、皮下投与される。
【００３８】
さらなる実施形態において、ＳｈＫポリペプチドは、放射標識される。
【００３９】
一実施形態において、ＳｈＫポリペプチドは、１１１ｌｎで標識される。
【００４０】
さらなる実施形態において、ＳｈＫポリペプチドは、１１１ｌｎで標識したＳｈＫ−２２１である。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１−１】図１は、ラットおよびリスザルにおける、放射標識したＳｈＫを用いた体内分布試験を示す。１１１Ｉｎで標識したＳｈＫ−２２１を、各動物の肩甲部への単回皮下注射として、スプラーグドーリーラット（１００μｇ／ｋｇ、０．７ｍＣｉ）およびリスザル（３５μｇ／ｋｇ、０．８４ｍＣｉ）に投与した。最初の１時間（４×１５分間隔）、ならびに投与後４、８、２４、４８、７２、１２０、および１６０時間目に、ＳＰＥＣＴおよびＣＴスキャンを連続的に収集した。（Ａ）サルの場合、４、２４、７２、および１６０時間の時点、（Ｃ）ラットの場合、１、８、および２４時間の時点での３Ｄ再構成の平坦な２Ｄ画像が示される。両方の動物が、注射部位からの緩徐な薬剤の吸収、ならびに腎臓への顕著な初期および持続的な分布、ならびに肝臓へのそれよりも少ない分布を示している。ラットの画像から、１時間目に膀胱、４および８時間目に十二指腸および小腸、そして８および２４時間目に副腎における顕著な放射標識が明らかになった。両方の種における腎臓に関連する放射活性は、主として皮質において同定された（ＢおよびＤ）。サル（上）およびラット（下）の注射部位における１１１Ｉｎ−ＳｈＫ−２２１の定量化により、初期半減期約１〜１．５時間および後期半減期＞４８時間の二相性の減衰が明らかになった（Ｅ）。サル（上）およびラット（下）の全血中の薬物濃度は、初期半減期約１．５時間および後期半減期＞６４時間で、同様の二相性の減衰をたどった（Ｆ）。Ｋｖ１．３の血中濃度は、全試験期間を通してＫｄを上回ったままであり、最初の１２０時間は８０％飽和濃度（２３３ｐＭ）を上回っていた：全試験期間を通して注射部位からの緩徐な持続性の分布と一致する。
【図１−２】図１は、ラットおよびリスザルにおける、放射標識したＳｈＫを用いた体内分布試験を示す。１１１Ｉｎで標識したＳｈＫ−２２１を、各動物の肩甲部への単回皮下注射として、スプラーグドーリーラット（１００μｇ／ｋｇ、０．７ｍＣｉ）およびリスザル（３５μｇ／ｋｇ、０．８４ｍＣｉ）に投与した。最初の１時間（４×１５分間隔）、ならびに投与後４、８、２４、４８、７２、１２０、および１６０時間目に、ＳＰＥＣＴおよびＣＴスキャンを連続的に収集した。（Ａ）サルの場合、４、２４、７２、および１６０時間の時点、（Ｃ）ラットの場合、１、８、および２４時間の時点での３Ｄ再構成の平坦な２Ｄ画像が示される。両方の動物が、注射部位からの緩徐な薬剤の吸収、ならびに腎臓への顕著な初期および持続的な分布、ならびに肝臓へのそれよりも少ない分布を示している。ラットの画像から、１時間目に膀胱、４および８時間目に十二指腸および小腸、そして８および２４時間目に副腎における顕著な放射標識が明らかになった。両方の種における腎臓に関連する放射活性は、主として皮質において同定された（ＢおよびＤ）。サル（上）およびラット（下）の注射部位における１１１Ｉｎ−ＳｈＫ−２２１の定量化により、初期半減期約１〜１．５時間および後期半減期＞４８時間の二相性の減衰が明らかになった（Ｅ）。サル（上）およびラット（下）の全血中の薬物濃度は、初期半減期約１．５時間および後期半減期＞６４時間で、同様の二相性の減衰をたどった（Ｆ）。Ｋｖ１．３の血中濃度は、全試験期間を通してＫｄを上回ったままであり、最初の１２０時間は８０％飽和濃度（２３３ｐＭ）を上回っていた：全試験期間を通して注射部位からの緩徐な持続性の分布と一致する。
【図１−３】図１は、ラットおよびリスザルにおける、放射標識したＳｈＫを用いた体内分布試験を示す。１１１Ｉｎで標識したＳｈＫ−２２１を、各動物の肩甲部への単回皮下注射として、スプラーグドーリーラット（１００μｇ／ｋｇ、０．７ｍＣｉ）およびリスザル（３５μｇ／ｋｇ、０．８４ｍＣｉ）に投与した。最初の１時間（４×１５分間隔）、ならびに投与後４、８、２４、４８、７２、１２０、および１６０時間目に、ＳＰＥＣＴおよびＣＴスキャンを連続的に収集した。（Ａ）サルの場合、４、２４、７２、および１６０時間の時点、（Ｃ）ラットの場合、１、８、および２４時間の時点での３Ｄ再構成の平坦な２Ｄ画像が示される。両方の動物が、注射部位からの緩徐な薬剤の吸収、ならびに腎臓への顕著な初期および持続的な分布、ならびに肝臓へのそれよりも少ない分布を示している。ラットの画像から、１時間目に膀胱、４および８時間目に十二指腸および小腸、そして８および２４時間目に副腎における顕著な放射標識が明らかになった。両方の種における腎臓に関連する放射活性は、主として皮質において同定された（ＢおよびＤ）。サル（上）およびラット（下）の注射部位における１１１Ｉｎ−ＳｈＫ−２２１の定量化により、初期半減期約１〜１．５時間および後期半減期＞４８時間の二相性の減衰が明らかになった（Ｅ）。サル（上）およびラット（下）の全血中の薬物濃度は、初期半減期約１．５時間および後期半減期＞６４時間で、同様の二相性の減衰をたどった（Ｆ）。Ｋｖ１．３の血中濃度は、全試験期間を通してＫｄを上回ったままであり、最初の１２０時間は８０％飽和濃度（２３３ｐＭ）を上回っていた：全試験期間を通して注射部位からの緩徐な持続性の分布と一致する。
【図２−１】図２は、放射標識したＳｈＫ−１８６の類似体の発達を示す。ＳｈＫ−１８６の放射標識は、リンカーを介してＳｈＫ−１９８のアミノ末端にＤＯＴＡを固相カップリングしてＳｈＫ−２２１を形成することにより行った（Ａ）。酢酸ナトリウム（ｐＨ５）中、９５℃でインキュベーションすることにより、ＤＯＴＡ環へのインジウムの取り込みを行った。ＤＯＴＡで標識したＳｈＫ−２２１は、イオン交換クロマトグラフィーによる明確な移動パターンを生じ（Ｂ）、得られたキレートは、予想された質量を有していた（Ｃ）。
【図２−２】図２は、放射標識したＳｈＫ−１８６の類似体の発達を示す。ＳｈＫ−１８６の放射標識は、リンカーを介してＳｈＫ−１９８のアミノ末端にＤＯＴＡを固相カップリングしてＳｈＫ−２２１を形成することにより行った（Ａ）。酢酸ナトリウム（ｐＨ５）中、９５℃でインキュベーションすることにより、ＤＯＴＡ環へのインジウムの取り込みを行った。ＤＯＴＡで標識したＳｈＫ−２２１は、イオン交換クロマトグラフィーによる明確な移動パターンを生じ（Ｂ）、得られたキレートは、予想された質量を有していた（Ｃ）。
【図２−３】図２は、放射標識したＳｈＫ−１８６の類似体の発達を示す。ＳｈＫ−１８６の放射標識は、リンカーを介してＳｈＫ−１９８のアミノ末端にＤＯＴＡを固相カップリングしてＳｈＫ−２２１を形成することにより行った（Ａ）。酢酸ナトリウム（ｐＨ５）中、９５℃でインキュベーションすることにより、ＤＯＴＡ環へのインジウムの取り込みを行った。ＤＯＴＡで標識したＳｈＫ−２２１は、イオン交換クロマトグラフィーによる明確な移動パターンを生じ（Ｂ）、得られたキレートは、予想された質量を有していた（Ｃ）。
【図３】図３は、ＳｈＫ−１８６と、標識した２つの類似体ＳｈＫ−２２１−ガドリニウム（ＳｈＫ−２２１−Ｇｄ）およびＳｈＫ−２２１−インジウム（ＳｈＫ−２２１−Ｉｎ）とのＫｖ１．３チャネル遮断活性の比較を示す：（Ａ）ＳｈＫ−２２１−Ｇｄの非存在下および存在下における代表的な全細胞Ｋｖ１．３の電流（Ｂ）ＳｈＫ−１８６、ＳｈＫ−２２１−Ｇｄ、およびＳｈＫ−２２１−ＩｎがＫｖ１．３の電流に与える影響を示す用量反応曲線。この試験には、安定なＫｖ１．３−トランスフェクト細胞株を使用した（Ｂｅｅｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ６７：１３６９−１３８１（２００５）、それに関する教示のために、参照により本明細書に組み込まれる）。記載されるような全細胞構成のパッチクランプ技術（Ｂｅｅｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．２００５  ａｎｄ  Ｗｏｌｆｆ，Ｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９７：８１５１−６（２０００）、それに関する教示のために、参照により本明細書に組み込まれる）において電気生理学的記録を行った。外液は、ナトリウムリンゲル液であり、ピペット溶液はＫＦ（３００ｍＯｓｍ）であった。Ｋｖ１．３の電流は、−８０〜４０ｍＶの保持電位から２００ｍｓの脱分極パルスによって誘発した。ＳｈＫ−１８６、ＳｈＫ−２２１−Ｇｄ、およびＳｈＫ−２２１−Ｉｎを、それぞれいくつかの濃度で調べた。Ｏｒｉｇｉｎソフトウェア（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ  Ｃｏｒｐ．、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ，ＭＡ）を使用して、各濃度につき、４０ｍＶにおけるピーク電流の減少を用いて用量反応曲線を作成した。ＩＣ５０値は、ＳｈＫ−１８６＝６８．９９±４．０１ｐＭ（ｎ＝５）、ＳｈＫ−２２１−Ｇｄ＝５８．２３±１．３８ｐＭ（ｎ＝５）、およびＳｈＫ−２２１−Ｉｎ＝６３．８０±２．２５ｐＭ（ｎ＝３）であった。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本開示は、ＳｈＫベースの薬学的組成物、ならびにそれを製造および使用する方法を提供する。本明細書において使用される場合、用語「ＳｈＫポリペプチド」は、全ての天然および合成ＳｈＫポリペプチド、ならびにそれらの誘導体、類似体、および本明細書において企図される修飾を指す。そのような修飾および類似体は、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質がアミノエチルオキシエチルオキシ−アセチルリンカーを介して結合している配列番号１のポリペプチドを含む。本明細書において使用される場合、「薬学的組成物」は、本明細書に開示される少なくとも１つのＳｈＫポリペプチドを、選択される投与方法に適した１つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤とともに含む。「少なくとも１つのＳｈＫポリペプチド」は、天然および合成ＳｈＫポリペプチドの両方を含むことができる。
【００４３】
前述のように、多くの免疫関連ヒト疾患および代謝障害は、メモリーＴ細胞の作用に起因すると考えられる。セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）およびエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）の２つのカテゴリーのメモリーＴ細胞が知られている。ＴＥＭ細胞は、活性化されると、Ｋｖ１．３Ｋ＋イオンチャネルを上方制御する。抗原によって駆動されるＴＥＭ細胞の増殖は、Ｋｖ１．３Ｋ＋イオンチャネル遮断薬に感受性を示し（Ｗｕｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１１：１７０３−１７１３，２００３）、元々はカリブ海イソギンチャク、スティコダクチラ・ヘリアンサスから単離されたポリペプチドＳｈＫが、そのような遮断薬として機能する。Ｋｖ１．３チャネルを遮断することにより、ＳｈＫは、ピコモル濃度でのＴＥＭ細胞の増殖を抑制する。
【００４４】
ＭＳ患者におけるミエリン特異的自己反応性Ｔ細胞は、ほとんどが活性化ＴＥＭ細胞であることから（Ｗｕｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１１：１７０３−１７１３，２００３）、本明細書に開示される組成物は、特定の機構によって拘束されるものではないが、多発性硬化症患者の症状を治療、予防、または緩和する上で、ＴＥＭ細胞の活性化を低下させるまたは排除するために、Ｋｖ１．３遮断薬を薬学的組成物として調製することの確固たる根拠が存在する。
【００４５】
未変性ＳｈＫポリペプチドについては、例えば、Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ，Ｍ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．４６：３５４−３５８（１９９５）に記載されており、該文献は、それに関する教示のために、参照により本明細書に組み込まれる。本開示の範囲内である例示的なＳｈＫ構造は、Ｂｅｅｔｏｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  Ｋｖ１．３  Ｃｈａｎｎｅｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６７：１３６９（２００５）、および米国特許第８，０８０，５２３号（米国特許公開第２００８０２２１０２４号）にも記載されており、これらは全て、それに関する教示のために、参照により本明細書に組み込まれる。
【００４６】
本明細書に記載される組成物に使用されるポリペプチドの基礎を形成する例示的なポリペプチドは、配列番号１に示される。具体的な実施形態において、Ｃ末端は、酸（例えば、ＣＯＯＨ）またはアミド（例えば、ＣＯＮＨ２）であり、ポリペプチドは、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質に結合している。「アミド」とは、酸のＣ末端ヒドロキシル基（ＯＨ）のＮＨ２による置換を意味する。そのような置換は、本明細書において、用語「アミド」を用いて、または「−Ｃｙｓ−ＮＨ２」のようにＣ末端アミノ酸−ＮＨ２として表される。
【００４７】
ＳｈＫの安全性、効力、および特異性について検討し、アニオン電荷を有する有機または無機化学物質にポリペプチドを結合させることにより、薬学的組成物に使用されるＳｈＫの適合性が向上することが示された。
【００４８】
当業者は、既知のＳｈＫポリペプチド配列および／または分子モデルを使用したアラインメントによる突然変異誘発に基づく合理的設計であるアラニンスキャニング等の、改善された特徴を有するＳｈＫポリペプチドを設計するための技術を認識している。例えば、ＳｈＫポリペプチドは、ＳｈＫポリペプチド含有組成物においてプロテアーゼ切断部位（例えば、ＫもしくはＲ残基のトリプシン切断部位、および／またはＦ、Ｙ、もしくはＷ残基のキモトリプシン切断部位）を除去するように設計することができる。
【００４９】
配列番号１のポリペプチドの様々な修飾が好適である。ポリペプチドは、本明細書に開示される修飾の任意の組み合わせを有することができる。ＳｈＫ構造の薬物動態学的および薬力学的（ＰＫ／ＰＤ）特性を改善するために、分解特性に感受性を示す残基を交換または置換することができる。例えば、酸化に対する安定効果を付与するように、２１位のＭｅｔ残基が置換されてもよい。一実施形態において、２１位のＭｅｔがＮｌｅで置換される。Ｃ末端の酸性官能基をアミドで置換することによっても、安定性を付与することができる。ＳｈＫの一次構造に対するこれら２つの置換をＮ末端のアニオン部分と組み合わせて、安定した選択的なＫｖ１．３遮断薬を生成することができる。したがって、本明細書に開示される一実施形態は、２１位のメチオニンがＮｌｅで置換され、アミドがＣ末端に存在し、かつ／またはアニオン部分がＮ末端に存在する、配列番号１を含む。
【００５０】
加水分解抵抗性のリン酸塩置換も、リン酸基に安定効果を付与し、またホスファターゼ酵素に対する安定性を付与する。
【００５１】
前述のように、特定の実施形態は、有機または無機化学物質の結合を含む。結合の部位はＮ末端（配列番号１の最初のＡｒｇ）であり得るが、修飾はこの部位での結合に限定されない。例示的な化学物質は、アミノエチルオキシエチルオキシ−アセチルリンカー（本明細書においてＡｅｅａまたはＡＥＥＡｃと交換可能に言及される）等のリンカーによって、または他の好適な手段によって結合され得る。
【００５２】
適切な化学物質の非限定的な例は、Ｌ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨＥｔ）、Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、Ｄ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、Ｌ−Ｔｙｒ、Ｌ−Ｔｙｒ（ＰＯ３Ｈ２）（ｐ−ホスホ−チロシン）、Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨ２）、Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＣＯ２Ｈ）、Ｌ−アスパラギン酸塩、Ｄ−アスパラギン酸塩、Ｌ−グルタミン酸塩、およびＤ−グルタミン酸塩を含む。使用される略語は次のように定義される：Ｐｍｐ（ｐ−ホスホノメチル−フェニルアラニン）、およびＰｐａ（ｐ−ホスファチジル−フェニルアラニン）。ＰｍＰおよびＰｐａの代替物は、限定されないが、Ｐｆｐ（ｐ−ホスホノ（ジフルオロ−メチル）−フェニルアラニン）（Ｐｆｐ）およびＰｋｐ（ｐ−ホスホ−メチルケト−フェニルアラニン）を含む。
【００５３】
化学物質／リンカーの組み合わせの非限定的な例は、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（ＯＨＥｔ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−Ｐｍｐ（Ｅｔ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（ＰＯ３Ｈ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＨ２）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−Ｐｈｅ（ｐ−ＣＯ２Ｈ）、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｄ−アスパラギン酸塩、ＡＥＥＡｃ−Ｌ−グルタミン酸塩、およびＡＥＥＡｃ−Ｄ−グルタミン酸塩を含む。一般に、アミノ酸残基がキラル中心を有する化学物質では、アミノ酸残基のＤおよび／またはＬ鏡像異性体が用いられてもよい。
【００５４】
開示される薬学的組成物に使用するために、ＳｈＫポリペプチドは、天然由来もしくは合成であってもよいか、または天然由来および合成ＳｈＫの混合物として提供されてもよい。
【００５５】
ＳｈＫポリペプチドは、塩として調製することができる。本明細書における例示的な塩において、ＲＰ−ＨＰＬＣステップから得られた再び折り畳まれたポリペプチド（実施例１）をカラムに戻して溶出することができる。乾燥する前に、５０ｍＭの酢酸ナトリウムまたは酢酸カリウムがタンパク質溶液に加えられてもよい。このステップは、乾燥形態から再構成されると容易に溶解するタンパク質の塩形態を生じる。実施例で使用される例示的な調合物（ＳｈＫ−１８６）中に酢酸ナトリウムを加えたところ、化学分析による該調合物のアセテート含有量は１０．４重量％であった。ＳｈＫ−１８６は、スティコダクチラ毒素の３７アミノ酸合成ペプチド誘導体である。ＳｈＫ−１８６はまた、文献においてＳＬ５とも称され、ＣＡＳ登録番号１０８１１１０−６９−１により特定される。
【００５６】
薬学的組成物として使用するためのポリペプチド含有組成物の場合、安定性、溶解性、およびｐＨの点においていくつかの基準を満たさなければならず、また好ましくは、限定されないが、哺乳動物、特にヒトを含む動物に対する投与に合った材料のみを含有する。組成物は、皮下、静脈内等の投与方法に依存して異なり得る。
【００５７】
いくつかの治療用ＳｈＫポリペプチドの調合物は当該技術分野において既知であるが（例えば、上で参照したＢｅｅｔｏｎ，  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．、および米国特許第７，８３３，９７９号）、本明細書に開示されるＳｈＫベースの薬学的組成物の安定性および溶解性を有するものはない。本明細書に開示される安定した溶解性のＳｈｋベースの薬学的組成物は、界面活性剤の濃度、ｐＨ、以前の調合物に使用された構成成分の除去、および後に実施例においてさらに詳述する他のパラメータを含む多数の要因を変化させることによって得られた。
【００５８】
最適な安定性および溶解性を備えた具体的な調合物の１つとして、以下が挙げられる：
表１．Ｐ６Ｎ調合物の薬学的組成物
【００５９】
【表１】
2018008955.tif 000003
【００６０】
開示される薬学的組成物の治療的および予防的に有効な量、ならびに自己免疫障害または代謝障害の症状を治療、予防、および／または緩和するための投与計画は、患者の年齢、状態、体重、性別、および食生活、治療される状態の重症度、投与期間、ならびに他の臨床的要因等の種々の要因を考慮して、担当医師によって決定され得る。一般に、１日の量または投与計画は、ＳｈＫポリペプチドが、体重１キログラム（ｋｇ）当たり１〜１０，０００マイクログラム（μｇ）の範囲内、体重１キログラム当たり１〜５，０００μｇの範囲内、体重１キログラム当たり１〜１，０００μｇの範囲内、または体重１キログラム当たり１〜１００μｇの範囲内であるべきである。
【００６１】
本明細書に開示される薬学的組成物は、多発性硬化症、１型糖尿病、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、接触性皮膚炎、乾癬性関節炎、喘息、アレルギー、再狭窄、全身性硬化症、繊維症、強皮症、糸球体腎炎、シェーグレン症候群、炎症性骨吸収、移植拒絶、移植片対宿主病、および紅斑性狼瘡等の自己免疫関連疾患、ならびに肥満、２型糖尿病、高コレステロール血症、冠動脈疾患、代謝症候群、代謝Ｘ症候群、インスリン抵抗性、高脂血症、リポジストロフィー、脂質異常症、高トリグリセリド血症、耐糖能障害、高血圧、体重過多、および、エネルギー代謝の障害等の代謝障害を治療するために使用することができる。
【００６２】
薬学的組成物の長期保存の場合、乾燥形態でそれらを保存することが有用であり得る。本開示は、限定されないが、後述のプロセスによって調製されるものを含む、そのような凍結乾燥した薬学的組成物を包含する。
【００６３】
ある凍結乾燥のプロセスは、（ａ）薬学的組成物の温度を−４０℃まで低下するステップと、（ｂ）温度を所定期間−４０℃に維持するステップと、（ｃ）溶液の温度を２０℃まで上昇させるステップと、（ｄ）温度を所定期間２０℃に維持するステップと、ｅ）ステップ（ｄ）の圧力を凍結乾燥に好適な圧力まで低下させ、温度を所定期間２０℃に維持し、それによって薬学的組成物を凍結乾燥するステップとを含むことができる。
【００６４】
この凍結乾燥のプロセスにおいて、ステップ（ａ）は、２時間以内に行うことができ、ステップ（ｂ）は３時間以内に行うことができ、ステップ（ｃ）は、１３時間にわたって１１０μバールの圧力で行うことができ、ステップ（ｄ）は、１３時間にわたって１１０μバールの圧力で行うことができ、ステップ（ｅ）は、５時間にわたって行うことができ、圧力が１０μバールに低下される。
【００６５】
薬学的組成物を凍結乾燥するプロセスはまた、（ａ）薬学的組成物の温度を−４５℃まで低下させるステップと、（ｂ）温度を所定期間−４５℃で維持するステップと、（ｃ）溶液の温度を−２０℃まで上昇させるステップと、（ｄ）溶液の温度を２５℃まで上昇させるステップと、（ｅ）温度を所定期間２５℃に維持し、それによって薬学的組成物を凍結乾燥するステップとを含むことができる。
【００６６】
このステップにおいて、ステップ（ａ）は、６時間以内に行うことができ、ステップ（ｂ）は３時間以内に行うことができ、ステップ（ｃ）は、１９時間にわたって１５０μバールの圧力で行うことができ、ステップ（ｄ）は、１３時間にわたって１５０μバールの圧力で行うことができ、ステップ（ｅ）は、８時間にわたって１５０μバールの圧力で行うことができる。
【００６７】
凍結乾燥した薬学的組成物は、梱包材料内に収容されてもよく、梱包は、医療従事者、患者、または研究者による末端での使用のために、薬学的組成物の再構成に関する指示をさらに備えることができる。
【００６８】
凍結乾燥した薬学的組成物は、５％未満、４％未満、または３．５％未満の水分含有量を有することができる。
【００６９】
後述の実施例に示すように、薬学的組成物は、例えば、滅菌ガラスバイアル内に、−７０℃、−２０℃、または４℃で、数か月保存することができる。バイアルが、（一実施形態において、酢酸塩として）１０ｍＭリン酸ナトリウムおよび１５０ｍＭ  ＮａＣｌに溶解した５０ｍｇのＳｈＫポリペプチドの溶液（０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を含み、最終ｐＨを６．０に調整した）を物理的に収容するように、バイアルは、１ｍｌの組成物Ｐ６Ｎ（表１を参照）または本明細書に開示される別の薬学的組成物を収容することができる。
【００７０】
バイアルは、医療従事者、患者、または研究者による末端での使用のために、保存ならびに薬学的組成物の希釈および投与に関する指示を含み得るまたは該指示が印刷され得るパッケージ内に１つ以上のバイアルを備える薬学的製造ユニットとして、さらに調製することができる。好適な希釈の様式は、本明細書においてＷＦＩと称される注射用水の使用を含む。好適な量の希釈剤は、例えば、任意選択的な使用説明書とともに、それ自体の滅菌容器内における製造ユニットの一部であり得る。
【００７１】
薬学的組成物は、０．１、０．５、０．７５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、もしくは５５、または最大５００ｍｇ／ｍｌの本開示によるＳｈＫポリペプチドまたはその薬学的に許容される塩を含むことができる。正確な濃度は、所望の用量および意図される治療的用途または研究用途に応じて、製造者および／または末端使用者の管理範囲内の要因に依存する。濃度は、上記範囲内のあらゆる中間の数値、例えば、１．５ｍｇ／ｍｌ、２．５ｍｇ／ｍｌ等も包含する。
【００７２】
薬学的組成物の投与の場合、好適な経路は皮下注射である。医師は、患者および治療の様式に応じて、皮下、静脈内等の投与の方法に精通しているであろう。米国特許第７，９１８，８２４号は、患者の使用に好適な注射器を開示しており、それに関する教示のために、参照により本明細書に組み込まれる。静脈内投与も企図される。例えば、予め充填した無針注射器、例えば、無針静脈内アクセスシステムを用いた使用のためのガラス製注射器を使用することができる。また、薬学的組成物の徐放のための植込みデバイスも企図される。組成物は、いずれか特定の投与の選択に限定されることは意図していない。
【００７３】
本開示は、例えば０．５ｃｃの液体形状の薬学的組成物を、２６Ｇ×５／８インチ針（ＢＤ部品番号３０９５９７）を装着したＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（ＢＤ）Ｓｌｉｐ−Ｔｉｐ  Ｓｕｂ−Ｑ  １ｃｃ注射器等の注射器内に吸引することを包含する。１つ以上の注射器が、梱包、および医療従事者、患者、または研究者による末端での使用のための任意選択的な指示を含む製造ユニット内に組み込まれてもよい。
【００７４】
薬学的組成物は、限定されないが、固体形態（顆粒剤、散剤剤、もしくは坐剤を含む）または液体形態（例えば、液剤、懸濁剤、もしくは乳剤）として構成されてもよい。薬学的組成物は、滅菌等の従来の薬学的操作に供されてもよく、かつ／または、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤等の従来の補助剤を含有することができる。
【００７５】
経口投与のための固体剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤を含むことができる。そのような固体剤形において、活性ＳｈＫポリペプチドは、スクロース、ラクトース、またはデンプン等の少なくとも１つの不活性希釈剤と混合することができる。そのような剤形はまた、通常の慣行において、不活性希釈剤以外のさらなる物質、例えば、ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤を含むことができる。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、剤形は緩衝剤を含むことができる。錠剤および丸剤は、さらに腸溶コーティングを用いて調製することもできる。
【００７６】
経口投与のための液体剤形は、当該技術分野で通常用いられる不活性希釈剤、例えば水を含む、薬学的に許容される乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、およびエリキシル剤を含むことができる。そのような組成物はまた、湿潤剤、甘味剤、香味剤、および芳香剤等の補助剤を含むことができる。薬学的組成物は、１つより多くの本開示の実施形態を含有することができる。経口投与のための製剤は、活性ＳｈＫポリペプチドの制御放出を提供するように好適に調合することができる。
【００７７】
頬側投与の場合、組成物は、従来様式で調合される錠剤またはロゼンジ剤の形態をとることができる。
【００７８】
ＳｈＫポリペプチドは、注射による、例えば、ボーラス注射または注入による非経口投与のために調合することができる。注射用の調合物は、単位剤形で、例えば、ガラスアンプルまたは複数回投与用の容器、例えばガラスバイアル内に提示することができる。注射用の組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、もしくは乳濁液等の形態をとることができ、懸濁剤、安定剤、保存剤、および／または分散剤等の調合用の薬剤を含有することができる。代替として、活性成分は、好適なビヒクル、例えば無菌パイロジェンフリー水、を用いて使用前に構成するための、粉末形態であってもよい。
【００７９】
上述の調合物に加えて、ＳｈＫポリペプチドはまた、デポー製剤として調合されてもよい。そのような長期作用性の調合物は、埋め込みによって、または筋肉内注射によって投与することができる。
【００８０】
経鼻もしくは経肺投与、または吸入によるいずれか他の投与の場合、本開示に従って使用されるＳｈＫポリペプチドは、好適な噴霧剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、もしくは他の好適なガス、またはガスの混合物）の使用を伴う加圧パックまたはネブライザー用のエアロゾルスプレー形態で都合よく送達される。
【００８１】
非限定的な例において、本明細書に開示されるＳｈＫポリペプチドは、ポリペプチド上でチロシンもしくはホスホチロシン部分にコンジュゲートされたインジウム−１１１（Ｉｎ１１１）または他の放射標識金属の１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）−キレートを使用して標識することができる。そのような方法は、例えば、Ｓｃｈｕｌｔｚ，Ｍ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，”Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａ  ＤＯＴＡ−Ｂｉｏｔｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｆｏｒ  Ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅ  Ｃｈｅｌａｔｉｏｎ  ｖｉａ  Ｃｕ−Ｆｒｅｅ  Ｃｌｉｃｋ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：２３９８−２４０１（２０１０）に記載されており、該文献は、それに関する教示のために、参照により本明細書に組み込まれる。ＭＲＩ等による診断に好適な例において、本明細書に開示されるＳｈＫポリペプチドは、インジウム（Ｉｎ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、または他の常磁性イオンのＤＯＴＡ−キレートを使用して標識することができる。他のキレート化またはコンジュゲーション化学を使用することもできる。
【００８２】
実施例６に記載され、図１〜３に示されるように、ＳｈＫの放射標識した類似体（ＳｈＫ−２２１）を用いて、全血中の総薬物濃度（非結合型および結合型）を測定した。以前の試験は、薬物の１０％のみが血漿中で非結合型として利用可能であることを示した（Ｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｎ  ５９：５２９−４６，２０１１）。このことは、リスザルに３５μｇ／ｋｇの用量の放射標識したＳｈＫ−２２１を投与してから１時間後に、約１５ｎＭの薬物が全血中に測定されたことと一致しており、本方法による非結合型画分が約７％であることを示唆している。薬物の遊離画分は、非ヒト霊長類と比較して実際はラットにおいてより低い可能性がある。ラットに１００μｇ／ｋｇの用量を投与してから１時間後、約１４ｎＭのＳｈＫ−２２１が全血中に観察された。これは、表面上にＫｖ１．３を発現する血小板等の他の血液成分に対する薬物の結合によるものである可能性があり、ラット全血中に著しく高い数値で存在することが分かっている（ヒトの５〜１０倍）（ＭｃＣｌｏｓｋｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５８８：１３９９−４０６，２０１０、Ｔｒｏｗｂｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｐｈｙｓ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｍｅａｓ．５：１４５−７０，１９８４）。
【００８３】
高感度の放射標識法は、ラットおよびリスザル種において、急速な初期相および非常に長い後期相によって特徴付けられるＳｈＫの二相性の末端消失プロファイルの検出を可能にする。１１１Ｉｎ−ＳｈＫ−２２１を用いて算出されたサルにおける後期半減期は＞６４時間であり、Ｋｄを上回る持続的な血中レベルが７日間見られた。血中濃度は、注射部位からの二相性の（急速な、次いで緩徐な）吸収を模倣する。要約すると、放射標識したＳｈＫ−２２１のラットおよびリスザルにおける体内分布は、注射部位からの非常に緩徐な分布、注射部位、腎臓、および肝臓における顕著な末梢性の薬物の集中、ならびに全血における長期末端消失によって特徴付けられる。サルにおいて約７日間、ラットにおいて３日間、約２００ｐＭを上回る血中薬物レベルが維持された。実施例１のデータは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの薬物分布を調べるために、放射標識したＳｈＫポリペプチドの使用の一実施形態を提供する。本明細書ではＤＯＴＡが例示されているが、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）等の他の金属キレート剤が使用されてもよい。よって、治療用途に加えて、本明細書に開示されるＳｈＫポリペプチドは、それらが関連する対象となるタンパク質の機能不全によって特徴付けられる疾患を診断または監視する上でも有用であり得る。一実施形態において、（ａ）試料をＳｈＫポリペプチドと接触させるステップと、（ｂ）ペプチドによって対象となるタンパク質に与えられる影響を検出することとを含む、影響されうる受容体またはイオンチャネル等の生物学的試料中の対象となるタンパク質を検出するための方法が提供される。生物学的試料は、組織標本、インタクトな細胞、またはその抽出物を含む。本明細書に開示される組成物は、それらが関連する生物学的試料中の対象となるタンパク質の存在を検出するための診断キットの一部として使用することができる。そのようなキットは、本明細書に開示される、検出を可能にするための結合した標識を有する組成物を用いることができる。ペプチドは、対象となる正常なまたは異常なタンパク質を同定するために有用である。
【００８４】
以下の実施例は、本明細書に開示される方法の最適化について記載する。以下の実施例は、本開示の具体的な実施形態を示すために含まれる。当業者は、本開示を考慮して、本明細書に開示される特定の実施形態に対して多くの変更を行うことができ、本開示の主旨および範囲から逸脱することなく、なおも同様のまたは類似する結果を得ることができることを認識されたい。
【実施例】
【００８５】
実施例１  （ｐＴｙｒ）−ＡＥＥＡ−Ａｒｇ−３５−Ｃｙｓ−ＮＨ２（ＳｈＫ−１８６）の合成
【００８６】
直鎖状ポリペプチド前駆物質の合成を次のように行った。直鎖状ペプチドをＲｉｎｋアミド（ＭＢＨＡ）Ｒｘ（ｓｕｂ：０．４ｍｍｏｌ／ｇ）上に構築し、以下の保護基をＦｍｏｃ化学のために使用した：Ａｒｇ（Ｐｂｆ）、Ｓｅｒ（ｔＢｕ）、Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）、Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）、Ｔｈｒ（ｔＢｕ）、Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ａｒｇ（Ｐｂｆ）、Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）、Ｔｙｒ（ｔＢｕ）、およびＴｙｒ（Ｐ（ＯＨ）Ｏ２Ｂｚｌ）。ＣＳ５３６自動合成機を使用して、２ｍｍｏｌスケールのＤＩＣ／ＨＯＢｔ活性化により全てのアミノ酸をカップリングした。これらのパラメータを２００ｍｍｏｌまでスケールアップした。
【００８７】
切断ステップでは、室温で撹拌しながら試薬「Ｋ」［ＴＦＡ／ＴＩＳ／１，２−エタンジチオール（ＥＤＴ）／Ｈ２Ｏ／フェノール（８９／２／２／２／５）］で４時間処理することにより、最終的に樹脂からＤｅＦｍｏｃペプチドを切断した（ＴＩＳはトリイソプロピルシランを指す）。切断が達成される限り比率は異なってもよく、任意選択的にフェノールが除外されてもよい。フェノールを含まない製剤中のＴＦＡ／ＴＩＳ／ＥＤＴ／Ｈ２Ｏの比率は、例えば、４７／１／１／１であった。ＳＰＥチューブで濾過することにより樹脂から粗ペプチドを分離し、最初の濾液と合わせたＴＦＡで連続的に樹脂をすすいだ。
【００８８】
濾液から（最初の切断カクテルの１／５の体積まで）ＴＦＡ溶媒を蒸発させた後、次いで冷エチルエーテルの添加により粗ペプチドを沈殿させ、真空乾燥し、さらなる酸化のための直鎖状ポリペプチドを得た。
【００８９】
直鎖状粗ポリペプチドを０．３ｍｇ／ｍＬの濃度まで水に溶解してから（製造に基づいて若干の変化が見られた）、次いでＮＨ４ＯＨを加え、ｐＨ８（後のバッチ記録はより低いｐＨ（７〜７．５）を示す）で３０時間酸化を実行した。酸化の終了はＥＳＩ質量スペクトルによって確認した。さらに、ＨＰＬＣ分析により、直鎖状ペプチドの酸化型への転換が示された。酸化は、ＴＦＡ（または酢酸）によりｐＨ（２〜）３まで酸性化した。空気酸化は、ジスルフィド架橋の形成を達成する１つの方法である。次の実施例２は、ジスフィルド結合を有するポリペプチドを得る代替の様式を示す。
【００９０】
精製については、調製用Ｃ−１８カラムに酸化ペプチドを直接負荷し、アセトニトリルを移動相として用いてＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。十分な純度を有する画分を合わせ、任意選択的に凍結乾燥して白色粉末（ＳｈＫ−１８６）、１．５ｇを得た（ＴＦＡ塩）。
【００９１】
続いて塩交換ステップを行った。２０ｍＭのＴＥＡＰ（トリエチルアミンホスフェート）で平衡化した調製用Ｃ−１８カラムに、再溶解したペプチド（ＴＦＡ塩）を負荷した。３×空隙容量のＴＥＡＰで洗浄した後、緩衝液をＮＨ４ＯＡｃ（５０ｍＭ）に変更した。３×空隙容量のＮＨ４ＯＡｃによる洗浄を行い、ｐＨを確認した後（ｐＨ６〜７）、緩衝液をＨＯＡｃ（０．５％）に変更した。３×空隙容量のＨＯＡｃ（０．５％）による洗浄を行い、ｐＨを確認した後（ｐＨ２〜３）、酢酸塩を含む最終ポリペプチド５００ｍｇを生じさせるために急な勾配を開始した。
【００９２】
任意選択的な精製ステップが行われてもよい。より高い収率で最終ポリペプチドを得るために、酢酸系を使用して直接ポリペプチドを精製することができる。上記プロセスにおける全ての個々のステップは、全体としてより高収量を生じるようにバッチで行うことができる。最終生成物は、凍結乾燥するか、または溶液中に維持することができる。
【００９３】
実施例２  ＳｈＫポリペプチドの調製
【００９４】
アニオン性アミノ酸残基は、アミノエチルオキシエチルオキシ−アセチルリンカー（Ａｅｅａ）等のリンカーによって、または任意の他の好適な手段によって、天然または合成ＳｈＫポリペプチドのＮ末端に結合させることができる。最初に、例えば、Ｂｅｅｔｏｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，２００５の方法により、Ｆｍｏｃ−Ａｅｅａ−ＯＨを天然または合成ＳｈＫ毒素のＮ末端に連結させる。
【００９５】
次いで、ＤＩＣおよびＨＯＢＴを用いて、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ＰＯ４Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｄ−Ｔｙｒ（ＰＯ４Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ＰＯ４Ｍｅ２）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｍｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｄ−Ｐｍｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｍｐ（Ｅｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｍｐ（Ｅｔ）２−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、またはＦｍｏｃ−Ａｍｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨのいずれかを連結させる。
【００９６】
次いで、非ブロック化したペプチド樹脂を切断し、Ｋｉｎｇ，Ｄ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．３６，２５５−２６６，１９９０（それに関する教示のために、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、５％トリイソプロピルシランを含有する試薬Ｋを用いて、室温で２時間脱保護する。ｔ−１５分の時点で切断カクテルに固体ＮＨ４Ｉを加えることによりＭｅｔ（Ｏ）を還元する（Ｎｉｃｏｌａｓ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ５１：５７０１−５７１０，１９９５、それに関する教示のために、参照により本明細書に組み込まれる）。Ｔｙｒ（ＰＯ４Ｍｅ２）−ＯＨを含有するペプチドについては、スカベンジャーとしてチオアニソールを含有するＴＦＡ中の１Ｍ  ＴＭＳＢｒを含有する切断カクテルが、４℃で１８時間用いられる（Ｔｉａｎ，Ｚ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．４２：１５５−１５８，１９９３、それに関する教示のために、参照により本明細書に組み込まれる）。この方法を用いるとメチル保護基の不完全な除去がよく見られ、種のうちの２つ（Ｔｙｒ（ＰＯ４）およびＴｙｒ（ＰＯ４Ｍｅ））がＲＰ−ＨＰＬＣによって容易に精製される。
【００９７】
Ｔｙｒ（ＰＯ４Ｍｅ２）を含有するポリペプチドを、標準的な試薬Ｋによる切断によって切断し、両方のＭｅ基をインタクトに維持する。いずれの場合でも、切断混合物を濾過し、粗ペプチドを氷冷ジエチルエーテル中に沈殿させる。沈殿物を収集し、２００ｍｇの樹脂から約７５ｍｇのペプチドを得る。２０ｍｌの５０％水性ＡｃＯＨに粗生成物を溶解し、０．７５ｌのＨ２Ｏに希釈する。ＮＨ４ＯＨを用いて溶液のｐＨを８．２に調整し、グルタチオン（２ｍＭ：１ｍＭ）（還元型：酸化型）を加えて一晩折り畳ませた。
【００９８】
Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．５４６：３５４−３５８，１９９５、Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３５：１６４０７−１６４１１，１９９６ａ、およびＰｅｎｎｉｎｇｔｏｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２１９：６９６−７０１，１９９６ｂ（これらの各々が、それに関する教示のために、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ＲＰ−ＨＰＬＣを用いて全てのポリペプチドを精製する。純粋な画分をプールして凍結乾燥する。ＲＰ−ＨＰＬＣ、ＡＡＡ（アミノ酸分析）、およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳにより各試料を確認し、バイオアッセイの前に調整してペプチド含有量を明らかにする。
【００９９】
以下の実施例において、ＳｈＫ−１８６として同定されたＳｈＫポリペプチド（（ホスホ−Ｔｙｒ）−ＡＥＥＡ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２、Ｃ末端にアミドを有し、Ｃｙｓ３−Ｃｙｓ３５、Ｃｙｓ１２−Ｃｙｓ２８、およびＣｙｓ１７−Ｃｙｓ３２の間にジスフィルド結合を有する）（配列番号２）を調製し、好適な薬学的組成物の構成成分を同定するために選択した：これらの構成成分は、限定されないが、ＳｈＫ−１９８およびＳｈＫ−１９２を含む、他のＳｈＫポリペプチドを含む薬学的組成物を調製するために使用することができる（ＣＡＳ登録番号１１５９５２８−２６−３）。
【０１００】
実施例３  界面活性剤のスクリーニング
【０１０１】
薬学的組成物に包含される可能性のある界面活性剤（複数可）を同定するために、緩衝液中でポリペプチドを調合し、試験界面活性剤を個別に加え、界面活性剤を有しない試料と比較する。検討される界面活性剤は、０．０１％の濃度から出発するポリソルベート２０、ポリソルベート８０、およびプルロニックＦ６８を含む。
【０１０２】
界面活性剤の効果を判定するために、試験試料および対照を撹拌または無撹拌に供する。次いで、試験試料および対照を分子ふるいＨＰＬＣ（ＳＥＣ−ＨＰＬＣまたはＳＥ−ＨＰＬＣ）により分析し、可溶性凝集物、およびモノマー回収率の減少を含む特徴の変化を監視する。
【０１０３】
この方法を用いて、ポリソルベート２０（０．０１％）、ポリソルベート８０（０．０１％）、またはプルロニックＦ６８（０．１０％）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の存在下、ＳｈＫ−１８６ポリペプチド製剤を、ｐＨ５．８で最長４時間、一定の撹拌に供した。意外なことに、界面活性剤を用いてもまたは用いなくても、全ての試料が濁度の増加を伴う混濁を示した。このことは、ＳｈＫ−１８６が、撹拌によって誘導される沈殿を受けやすいことを示唆していた。
【０１０４】
追加実験により、非典型的な濃度の界面活性剤がタンパク質を保護したことが示唆され、その後の実験には０．０５％濃度のポリソルベート２０を使用した。界面活性剤の濃度を増加させることに加えて、ｐＨを５．８から５．１に低下させることにより、ＳｈＫ−１８６の安定性がさらに向上した。ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより、可溶性凝集物が存在しないことが確認された。
【０１０５】
実施例４  保存中の安定性
【０１０６】
ポリペプチドの安定性を保護する薬学的組成物の構成成分を選択するために、いくつかのパラメータを調べる。本発明の方法によれば、これらのパラメータは、ｐＨ（４．０〜７．０）、緩衝液／溶媒（１０ｍＭ酢酸ナトリウムまたは１０ｍＭリン酸ナトリウム）、安定剤／可溶化剤（ＮａＣｌ０．８％、ソルビトール５．０％、Ｌ−アルギニン３．０％）、界面活性剤、保存およびストレス条件（温度、撹拌、凍結／融解、強制酸化）である。
これらのパラメータを調べるために、ＳｈＫ−１８６の試料を酢酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウムに溶解し、個々の調合物を上述の通りに調製した。次いで、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、イオン交換ＨＰＬＣ（ＩＥまたはＩＥＸ−ＨＰＬＣ）、および分子ふるいＨＰＬＣ（ＳＥ−ＨＰＬＣ）を用いて、ゼロ時にペプチドを分析した。２週間、４週間、および８週間の時点で、追加分析を行った。調合物の評価には、薬物濃度の監視、目視検査／濁度、ならびに１０および２５ｍｇ／ｍＬでの継時的なｐＨの確認が含まれた。
【０１０７】
ゼロ時には、アルギニンを含むリン酸緩衝液中で調製した試料（ｐＨ７）を除いて、試料は同様のＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラフを示した。
【０１０８】
２週目に、アルギニンを含有する調合物は、沈殿物を含む混濁した溶液を示した。アルギニンは、他のタンパク質生成物の溶解性を向上させるために使用されてきているため、この結果は予想外であった。他の温度でも同様の溶解性の問題が観察されたため、アルギニン含有調合物はさらなる分析から除外した。４週目には、ＳＥ−ＨＰＬＣ分析により、２５℃未満の温度では、残りの全ての調合物に可溶性凝集物または切断の兆候が見られないことが示された。
【０１０９】
８週目に、１つを除く全ての調合物が、−７０℃での保存中に良好な安定性を示した。
【０１１０】
ＲＰ−ＨＰＬＣ、ＩＥ−ＨＰＬＣ、およびＳＥ−ＨＰＬＣによって観察される回収率および分解の点において最良の安定性を提供するために、８週目の完全解析の結果から、本明細書において「Ｐ６Ｎ」と称される調合物を選択した。この調合物は、ｐＨ６であり、緩衝液として１０ｍＭ酢酸ナトリウム、安定剤／浸透圧調整剤として０．８％  ＮａＣｌ、界面活性剤として０．０５％ポリソルベート２０、およびＲＰ−ＨＰＬＣによって測定された濃度１１．２ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含有していた。タンパク質の濃度は、５０ｍｇ／ｍＬまで増加させることができた。
【０１１１】
ＲＰ−ＨＰＬＣおよびＩＥＸ−ＨＰＬＣによって測定されたように、Ｐ６Ｎ調合物は、５回の凍結／融解サイクル後にも変化の兆候を示さなかった。ＲＰ−ＨＰＬＣおよびＩＥ−ＨＰＬＣを用いて測定されたように、激しいボルテックスによるストレスを３時間与えても、この調合物には分解の兆候は認められず、透明なままであった。
【０１１２】
実施例５．臨床的調合物の安定性
【０１１３】
臨床用途を再現するように設計された３セットの条件において、Ｐ６Ｎ中に調合したＳｈＫ−１８６の短期安定性を調べる：種々の温度で７２時間の保存、および滅菌プラスチック注射器に２４時間保存。長期安定性は、冷蔵（５℃等）および凍結（−７０℃、−２０℃等）温度で１、３、６、および１２ヶ月にわたって保存して検討する。
【０１１４】
短期試験では、５％（ｗ／ｖ）ブドウ糖、または０．９％（ｗ／ｖ）食塩水、またはＷＦＩ溶液のいずれかを用いて、最終濃度が１ｍｇ／ｍｌになるまでＳｈＫ−１８６を希釈する。短期安定性試験は、各希釈液中における冷蔵温度（５℃等）および高温（４０℃等）での７２時間に及ぶ保存である。保存剤なしでＷＦＩに希釈したＳｈＫ−１８６が、対照としての役割を果たす。長期試験では、Ｐ６Ｎ中に２５または５０ｍｇ／ｍｌのいずれかでＳｈＫ−１８６を調合し、次いで、アリコートを用いて、ｍｇ／ｍｌで示される最終濃度を有する試料を調製する。実験パラメータを表２および３に示す。表２．希釈液安定性試験（短期）
【０１１５】
【表２】
2018008955.tif 000004
表３．希釈液安定性試験（長期）
【０１１６】
【表３】
2018008955.tif 000005
【０１１７】
表３に示すように６ヶ月目に行われた安定性試験は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣに基づいて以下の結果をもたらした。６ヶ月目には、より早期の時点と比較して、ｐＨまたは濃度に有意な変化は認められなかった。全体的な結果から、ペプチド濃度が調合物の安定性にいずれの有意な影響も示さなかったことが示唆された。安定性は、５℃で、−２０℃および−７０℃と比較して非常にわずかな低下を示した。そのような結果は、低温（少なくも凍結温度未満）でのポリペプチド薬学的組成物の保存に関する業界標準と一致している。
【０１１８】
滅菌プラスチック１ｃｃ注射器等の送達デバイスにおける安定性が特徴付けられる。そのようなデバイスは、皮下送達に好適である。例示的な、非限定的なデバイスは、２６Ｇ×５／８インチ針（ＢＤ部品番号３０９５９７）を装着したＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（ＢＤ）Ｓｌｉｐ−Ｔｉｐ  Ｓｕｂ−Ｑ  １ｃｃ注射器である。表２に示される希釈液中のおよび濃度のＳｈＫ−１８６調合物の０．５ｍｌアリコートが吸引され、周囲条件において注射器中でインキュベートされる。例えば４時間目に、臨床用途を反映させて継時的に安定性を調べる。
【０１１９】
冷蔵および冷凍保存温度下で、１０、２５、および５０ｍｇ／ｍｌの３つの濃度のＳｈＫ−１８６の安定性を判定する。凍結乾燥したＳｈＫ−１８６をＰ６Ｎ調合物に溶解し、これらのＳｈＫ−１８６の最終濃度を実現する。調合した各溶液を０．２μｍフィルタで滅菌し、無菌条件下、バイアル当たり０．５ｍｌの充填体積でＩ型ホウケイ酸ガラス３ｃｃバイアル等の好適な滅菌バイアルに移す。０ヶ月、３ヶ月、および６ヶ月の時点で検査するために５℃、−２０℃、および−７０℃で保存する。
【０１２０】
表４に示すパラメータを用いて所定の時点で試料を検査した。表４．ＳｈＫ−１８６の安定性を監視するための分析法
【０１２１】
【表４】
2018008955.tif 000006
【０１２２】
要約：上記実施例は、治療用途のためにＳｈＫポリペプチドを含む薬学的に許容される組成物を調製するための好適な構成成分および条件を決定するための方法を提供する。該方法の妥当性は、良好な溶解性、長期保存（６ヶ月）、および安定性を提供する調合物中におけるＳｈＫ−１８６の調製が成功したことによって実証される。
【０１２３】
実施例６．１２ヶ月安定性試験
【０１２４】
０．８％ＮａＣｌおよび０．０５％ポリソルベート２０を含有する１０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．０）中に１０ｍｇ／ｍｌおよび２５ｍｇ／ｍｌでＳｋＨ−１８６を調合し、５℃、−２０℃、および−７０℃で１２ヶ月インキュベートした。ＳＥ−ＨＰＬＣ分析により、調合物の濃度は、それらの安定性に対する明らかな影響を有しなかったことが示唆された。インキュベーション温度は、両方の調合物の安定性に若干の影響を与えた。５℃でインキュベートした試料は、％ＨＭＶ（１．１９％）において、凍結試料（０．９５％）と比較してわずかな増加を示した。低分子量種の割合は、どちらの調合物にも全ての温度において比較的変化が見られなかった。ＳＥ−ＨＰＬＣの結果に基づいて、試験終了時の両方の調合物の全体的なモノマーの割合は約９８％であった。
【０１２５】
ＲＰ−ＨＰＬＣによる試料の分析からも、調合物の濃度が調合物の安定性に明らかな影響を有しなかったことが示唆された。５℃でインキュベートした試料は、凍結した調合物（０．３〜０．７％）と比較して、ピーク前およびピーク後の分解（０．８〜０．９％）に若干の増加を示した。このデータは、より高いインキュベーション温度により、ピーク前分解と比較してより高いピーク後分解の割合がもたらされたことを示唆した。ＲＰ−ＨＰＬＣの結果に基づいて、試験終了時の両方の調合物の全体的な純度は約９９％であった。
【０１２６】
表５は、１２ヶ月の試験期間を通じて収集されたｐＨおよび濃度のデータの概要を示す。ゼロ時の値は次の通りであった：１０Ｐ６Ｎ（１０ｍｇ／ｍＬのＳｈＫ−１８６）の場合、ｐＨは６．１、濃度（Ｃｏｎｃ、ｍｇ／ｍＬ）は９．９ｍｇ／ｍＬ、ｍＯｓｍｏで示される浸透圧は３１７であった。２５Ｐ６Ｎ（２５ｍｇ／ｍＬのＳｈＫ−１８６）の場合、ｐＨは６．０、濃度は２５．１ｍｇ／ｍＬ、浸透圧は２９３であった。この結果に基づいて、試料のｐＨおよび濃度には、インキュベーション温度にかかわらず、試験を通して比較的変化が見られなかった。表５．１、３、６、および１２ヶ月の調合物のｐＨおよび濃度
【０１２７】
【表５】
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【０１２８】
実施例７  放射標識したＳｈＫ−２２１の体内分布
【０１２９】
序論  ｉｎ  ｖｉｖｏ試験の感度を高めるために、ＳｈＫ−１８６の体内分布を測定し、全血中の総（結合型および非結合型）薬物濃度を評価し、放射標識したＳｈＫ−１８６の類似体を調製し、ラットおよびリスザルの２つのｉｎ  ｖｉｖｏ動物モデルにおいて調べた。この実施例では、用語「ＡＤＭＥ」は、吸収、分布、代謝、排泄を意味する。
【０１３０】
方法
【０１３１】
動物  スプラーグドーリー［Ｃｒｌ：ＣＤ（登録商標）ＳＤ］ラット（６〜９週齢）をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）から購入し、温度（６４〜７９℃）および湿度（３０〜７０％）を制御した設備に収容した。食餌および水は自由に与えた。
【０１３２】
実験に使用したことのあるリスザル（Ｓａｉｍｉｒｉ  ｂｏｌｉｖｉｅｎｓｉｓ）は、２〜５歳の年齢であり、ＭＰＩ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｍａｔｔａｗａｎ，ＭＩ，ＵＳＡ）ストックコロニーから移送された。このリスザルはボリビア起源であり、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  ＭＤ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ  ＵＳＡ）から提供された。動物は、環境的に管理された部屋のステンレススチール製ケージに個別に収容した。サルには改良された環境が提供され、１日当たり１２時間蛍光灯が提供された。温度は６４〜８４℃、湿度は３０〜７０％に維持した。動物には、１日２回Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ  Ｐｒｉｍａｔｅ  Ｄｉｅｔ（ＰＭＩ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）が提供された。Ｐｒｉｍａｔｒｅａｔｓ（登録商標）および他の補強食品が定期的に提供された。水は自由に入手可能であった。
【０１３３】
ＳｈＫ−１８６のＤＯＴＡコンジュゲート（ＳｈＫ−２２１）  「ＤＯＴＡ」は、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸を意味する。ＳｈＫ−２２１（ＭＷ４４４２）は、Ｆｍｏｃ−ｔＢｕ固相ストラテジーを用いて合成した。端的に述べると、０．２ｍｍｏｌスケールのＣｈｅｍ−Ｍａｔｒｉｘアミド樹脂を使用してペプチドを構築した。全てのカップリングステップは、ジイソプロピルカルボジイミドの存在下で６−Ｃｌ−ＨＯＢｔ（Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）を用いて媒介した。ピペリジンを緩衝化して６Ｃｙｓ残基における潜在的なラセミ化を最小限に抑えるために、０．１Ｍ  ＨＯＢｔを含有するＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）中２０％ピペリジンを用いてＦｍｏｃの除去を促進した。前述したものと同じカップリングプロトコルを用いてＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３−ＯＨをＮ末端にカップリングした。構築後、ペプチドを樹脂から切断し、同時に、芳香族カチオンスカベンジャーを含有するＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）切断カクテル試薬Ｋを用いて、室温で２時間脱保護した。使用済みの樹脂から粗ペプチドを濾過し、その後、氷冷ジエチルエーテル中に沈殿させることにより単離した。粗ペプチドを５０％酢酸に溶解し、その後、０．１ｍＭ  ＧＳＳＧおよび０．２ｍＭ  ＧＳＨを含有する３ＬのＨ２Ｏに希釈した。ＮＨ４ＯＨを用いてこのペプチド溶液のｐＨを８．０に調整し、一晩かけて徐々に撹拌した。ＳｈＫは、自発的に折り畳み、ペプチドの生物学的に活性な形態である熱力学的に望ましい大きな異性体になる。折り畳まれたペプチドを調製用ＲＰ−ＨＰＬＣカラムに負荷し、０．０５％  ＴＦＡを含有するＨ２Ｏに対するＭｅＣＮの勾配を用いて精製した。所望のペプチド純度を有する画分を合わせてプールし、凍結乾燥した。最終収率は、０．２ｍｍｏｌの合成から３５ｍｇであり、出発樹脂に基づいて、これは８％の収率を意味する。
【０１３４】
放射標識したＳｈＫ−２２１のＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャン  ５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）を含有する３００μＬの反応物中で、２ｍＣｉ  １１１インジウムクロリド（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ  Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＩＬ  ＵＳＡ）を用いて、９５℃で３０分間ＳｈＫ−２２１（１００μｇ）を放射標識した。ＥＤＴＡを加えることにより反応を停止して最終濃度５０ｍＭとし、ＩＮ／ＵＳ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社製Ｇａｍｍａ  ＲＡＭ  Ｍｏｄｅｌ  ４ラジオＨＰＬＣ検出器（ＬａｂＬｏｇｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｒａｎｄｏｎ，ＦＬ  ＵＳＡ）を使用して、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００システム上で逆相ＨＰＬＣ（Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）１００Ａ  ２５０×４．６ｍｍカラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ  ＵＳＡ）により放射標識効率を評価した。この方法による標識の効率は、８９〜９８％と異なっていた。麻酔下の動物にＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャン（ＮａｎｏＳＰＥＣＴ／ＣＴ  Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍａｇｅｒ、Ｍｅｄｉｓｏ、Ｂｕｄａｐｅｓｔ，Ｈｕｎｇａｒｙ）を行った（最初の１時間に１５分の走査を４回、投与後４、８、２４、４８、７２、１２０、および１６０時間に各１回の走査）。各ヘリカルＳＰＥＣＴの個々の投影フレーム時間は、各走査の期間が約１５〜４５分持続するように設定し（同位体の減衰が明らかになる時点によって異なる）、各フレーム内で有意な統計の収集ができるようにした。１１１Ｉｎのスペクトルから検出された特徴的なピークは、２４５および１７１ｋｅＶであった（それぞれ、一次および二次）。約２ｍｍの解像度を達成するために、ピンホール構造を利用する反復モデルを用いて、得られた投影データを各走査後に再構成した。
【０１３５】
各走査後に約１０μＬの血液試料を収集し、Ｗａｌｌａｃ  Ｗｉｚａｒｄ  １４７０シンチレーションカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ  ＵＳＡ）を使用して試料中の放射活性の量を測定した。投与した用量の特異的活性、１１１Ｉｎの半減期（６７．３時間）、および機器のカウンティング効率を考慮して、薬物濃度を算出した。
【０１３６】
統計分析およびコンピュータ分析  対応ｔ検定を用いて統計分析を行った。Ｒ２統計を用いてモデルの適合性を判定した。薬物動態は次の通りに算出した：ＣｍａｘおよびＴｍａｘは、データセットに観察された通りであった。線形台形法を用いてＡＵＣを算出した。最適に調整したＲ２値を用いて回帰の傾斜から末端消失半減期を算出した。最後に観察された薬物濃度を末端消失の傾斜で除すことによりＡＵＣｔ−∞を算出した。
【０１３７】
放射標識したＳｈＫ−１８６の類似体を用いたＡＤＭＥ試験の結果  ＳｈＫ−１８６は、２３位に単一のヨウ素化可能なチロシンを含有する。しかしながら、環内へのヨウ素の取り込みは、Ｋｖ１．３チャネルのポア領域内で相互作用することが予想され（Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３５：１６４０７−１６４１１，１９９６）、薬物のチャネル結合特性の障害を引き起こす。したがって、ＤＯＴＡキレートのカルボン酸のうちの１つにペプチド結合を介して結合する６炭素リンカーでＳｈＫ−１９８のアミノ末端を修飾した（図２Ａ）。ＳｈＫ−２２１と表されるＤＯＴＡコンジュゲートは、インジウムまたはガドリニウムと容易に配位され（図２Ｂ〜Ｃ）、親分子の完全な活性を保持した（図３）。１１１Ｉｎで標識したＳｈＫ−２２１を調製し、皮下注射によりスプラーグドーリーラット（１．０ｍＣｉ、１００μｇ／ｋｇ）およびリスザル（０．８３ｍＣｉ、３５μｇ／ｋｇ）に投与した。ＨＰＬＣによって測定されたように、放射標識の効率は、一連の実験にわたり８９〜９８％の範囲であった。放射標識したＳｈＫ−２２１の体内分布は、ＳＰＥＣＴ画像により、投与後の最初の１時間、次いで、４、８、２４、４８、７２、１２０、および１６０時間目に連続的に評価した。検出システムのバックグラウンドレベルは、約０．１μＣｉ／ｍ３（最初の時点で約５ｎｇ／ｍ３のＳｈＫ−２２１、最後の時点では２６ｎｇ／ｍ３）であった。各走査後に血液試料を収集し、シンチレーションカウンターにより全血中の総放射活性を測定した。各時点でコンピュータ断層撮影を行い、放射標識と主要な解剖学的構造との共局在を可能にした。
【０１３８】
リスザルにおける１１１Ｉｎ−ＳｈＫ−２２１の体内分布は、全部で１６０時間の期間にわたる注射部位からの緩徐な吸収によって主として特徴付けられた（図１Ａおよび１Ｅ）。注射部位に存在する薬物の量は、初期半減期約１〜１．５時間および後期半減期＞４８時間の二相性の指数関数的減衰（Ｒ２＝０．９５）をたどった（図１Ｅ）。最初の１時間は、腎臓に有意な放射活性を観察することができ、１時間かけて強度が増加し（〜投与量の約１％（ＩＤ）／ｇ、表１）、徐々に減少して約４８時間目までにはベースラインとなった。サルの腎臓における放射活性は、全ての時点の間に皮質および髄質領域で主に観察され、最初の１時間を除いて、腎盂には比較的見られなかった（図１Ｂ）。膀胱に関連する有意な放射活性（Ｔｍａｘ＝０．７５〜１時間、０．３４％ＩＤ／ｇ）は、最初の４時間に観察されたのみであり、それ以降、膀胱には比較的少量の放射標識が検出された。肝臓以外に有意なレベルの放射活性を示した器官はなく、投与後０．７５〜１時間でピークを迎えた（０．１６６％ＩＤ／ｇ）。筋肉、心臓、および脳はみな、全ての時点で＜０．１％ＩＤ／ｇを有した（表６）。
表６：３５μｇ／ｋｇを皮下注射した後のリスザルの特異的組織における１１１Ｉｎ−ＳｈＫ−２２１の最大濃度
【０１３９】
【表６】
2018008955.tif 000008
【０１４０】
ラットにおける１１１Ｉｎ−ＳｈＫ−２２１の体内分布はサルと同様であり、注射部位からの若干早めの吸収と、最初の２４時間にわたって尿から排泄されることにより特徴付けられた（図１Ｃおよび１Ｅ）。最初の１時間に、ラットの膀胱（９．４％ＩＤ／ｇ）、腎臓（２．９％ＩＤ／ｇ）、および肝臓（０．４％ＩＤ／ｇ）に有意な放射活性標識が観察された（図１Ｃ）。後の時点では、膀胱内でわずかに標識が同定されたが、肝臓および腎臓内の薬物の量は、最初の２４時間を通して比較的一定であった。ラットの腎臓の断面図は、サルと同様に、最初の１時間を除いて、放射活性が主に皮質領域に集中していたことを示した（図１Ｄ）。
【０１４１】
各時点でのサルの血液に関連する放射活性の評価によっても、初期半減期約１時間および後期半減期＞６４時間の二相性の指数関数的減衰（Ｒ２＝０．９９）が示された（図１Ｆ）。サルにおいて、ほとんどの末端消失相は、以前の方法の定量化のレベルを下回るが、ＳｈＫ−１８６のＫｄを遥かに上回る血中濃度に反映された。投与から約５日後までの間、全血中のＫｖ１．３チャネルの８０％が薬物に結合されることが予想され、濃度は、全部で１６０時間の期間、Ｋｄを上回ったままであった。
【０１４２】
ラットの全血に関連する放射活性も、初期半減期約１．７時間および後期半減期＞７２時間の二相性の指数関数的減衰（Ｒ２＝０．９９）を示した（図１Ｆ）。ＳｈＫ−１８６の薬物濃度は、サルと同様に、投与後５日目までＫｄを遥かに上回っていた。投与から約３〜５日後に、全血中のＫｖ１．３チャネルの８０％が薬物によって結合されることが予想された。
【０１４３】
このデータは、ラットおよびリスザルにおける放射標識したＳｈＫ−２２１の体内分布が、注射部位からの非常に緩徐な分布、注射部位、腎臓、および肝臓における顕著な末梢性の薬物の集中、ならびに全血における長期末端消失によって特徴付けられることを示している。サルにおいて約７日間、ラットにおいて３日間、約２００ｐＭを上回る薬物レベルが維持された。
【０１４４】
１１１Ｉｎ−ＳｈＫ−２２１の投与後の早い時点で、ラット（投与量の約１７％）およびサル（投与量の１％）の両方の膀胱に有意な量の放射活性が観察されたことから、糸球体濾過が注射直後のペプチドの主な消失経路であることが示唆される。最初の１時間にラットによって排泄された大量の薬物は、サルと比較してラットの代謝が高いことを反映している可能性が高い。ラットでは１時間後、サルでは約４時間後に、膀胱でわずかな放射活性が観察されたのに対し、腎皮質ではなおも有意な量の放射活性が観察された。皮質の濃度は、オクトレオチド、ボンベシン、エキセンディン、およびガストリンを含むペプチド薬の多数の放射標識形態について報告されている（Ｇｏｔｔｈａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４８：５９６−６０１，２００７）。皮質における滞留の機構は、オクトレオチドについて最も詳細に記載されている。カチオン性オクタペプチドの尿細管からの再吸収は、腎近位尿細管で発現されるスカベンジャー受容体であるメガリンによって媒介される（ｄｅ  Ｊｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４６：１６９６−１７００，２００５）。該受容体の腎臓特異的分布を有するマウスには、野生型マウスに見られる放射標識オクトレオチドの皮質における滞留が認められない。オクトレオチドの腎取り込みは、電荷によって一部媒介され、正電荷を帯びたアミノ酸Ｌ−リジンおよびＬ−アルギニンの混注によって分布され得る（Ｂｏｄｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｍｏｌ．Ｉｍａｇｉｎｇ  ３０：２０７−２１６，２００３）。ＳｈＫ−１８６は、生理的ｐＨで正味＋６の電荷を帯びるため、その皮質における滞留は、同様の機構によって媒介される可能性がある。
【０１４５】
要約すると、放射標識したＳｈＫを用いたＡＤＭＥ試験により、単一用量の薬物が、ラットにおいて５日間、サルにおいて７日間まで治療的に意味のある血中濃度を提供することができることが示唆される。最適な投与頻度は、治療有効性を保証し、患者コンプライアンスを向上させ、慢性投与中の薬物堆積の可能性を低下させるため、これらの観察は、ＳｈＫ−１８６を含むＳｈＫベースのペプチド治療薬の臨床開発に関連性がある。
【０１４６】
別途指示されない限り、本明細書および特許請求の範囲中で用いられる、成分、特性、例えば、分子量、反応条件等の量を表す全ての数値は、全ての場合において「約」という用語で修飾されていると理解されるべきである。したがって、そうではないと指示されない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲に記載される数値パラメータは、近似値であり、本発明によって達成したい所望の特性に応じて変動し得る。少なくとも、特許請求の範囲への均等論の適用を制限するためではなく、各数値パラメータは、少なくとも報告された有効桁の数を考慮して、通常の四捨五入法を適用して解釈されるべきである。
【０１４７】
本発明の広い範囲を規定する数値範囲およびパラメータは近似値であるが、特定の実施例に記載される数値は可能な限り正確に報告されている。しかしながら、いずれの数値も、それらの各々の試験測定値に見られる標準偏差から必然的に生じる一定の誤差を本質的に含む。
【０１４８】
本発明を説明する文脈（特に、以下の特許請求の範囲に関する文脈で）用いられる用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」および同様の指示対象は、本明細書において別途指示されない限り、または前後関係からそうではないことが明らかでない限り、単数と複数の両方を包含すると解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の引用は、その範囲内に属するそれぞれ別個の値を個々に言及することを簡略化した方法としての役割を果たすに過ぎない。本明細書において別途指示されない限り、それぞれの個々の値は、あたかも本明細書に個々に引用されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書において別途指示されない限り、または前後関係からそうではないことが明らかでない限り、本明細書に開示される全ての方法は、いかなる好適な順序で行われてもよい。本明細書に提供されるあらゆる例または例示する言語（例えば、「等」）の使用は、本発明をより分かりやすく説明することを意図しているに過ぎず、別途請求されない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中の言語はいずれも、非請求要素が本発明の実施に必要不可欠であることを示唆すると解釈されるべきではない。
【０１４９】
本明細書に開示される本発明の代替要素または実施形態の分類は、限定的であると解釈されるべきではない。各グループのメンバーは、個別に、またはそのグループの他のメンバーもしくは本明細書に見出される他の要素との任意の組み合わせにおいて、言及および請求することができる。あるグループの１つ以上のメンバーを、便宜上、および／または特許性の理由から、あるグループに包含するか、または該グループから削除することができることが予想される。そのようないずれかの包含および削除が行われる場合、本明細書は、該グループを改変されたものとして含み、よって、添付の特許請求の範囲で用いられるすべてのマーカッシュグループの記述を満たすものと考えられる。
【０１５０】
本発明を実行するための、本発明者に既知の最良の形態を含む、本発明の特定の実施形態が、本明細書に開示される。当然、これまでの説明を読めば、当業者には、これらの記載される実施形態に対する変更は明白であろう。本発明者は、当業者がそのような変更を必要に応じて採用すると予想し、本発明者は、本明細書に具体的に開示される以外にも本発明が実施されることを意図する。したがって、適用法によって許容されるように、本発明は、本明細書に添付される特許請求の範囲に列挙される主題のすべての改変および均等物を含む。さらに、本明細書において別途指示されない限り、または前後関係からそうではないことが明らかでない限り、全ての可能な変更例における上述の要素のいかなる組み合わせも本発明に包含される。
【０１５１】
本明細書に開示される特定の実施形態は、〜からなる、または／および、本質的に〜からなるという言語を用いて、特許請求の範囲においてさらに限定することができる。特許請求の範囲で使用される場合、出願時または補正ごとに追加されるかを問わず、「〜からなる」は、特許請求の範囲に特定されていないいずれの要素、ステップ、または成分も除外する。「本質的に〜からなる」という移行語句は、特許請求の範囲の範囲を、指定される材料またはステップ、ならびに基本的および新規特徴（複数可）に著しく影響を与えないものに限定する。そのように請求される本発明の実施態様は、本明細書に本質的にまたは明白に記載され、可能にされる。
【０１５２】
最後に、本明細書に開示される本発明の実施形態は、本発明の原則の例示であることを理解されたい。用いられ得る他の変更例は、本発明の範囲の範囲内である。よって、限定ではなく、例示によって、本発明の代替の構成が本明細書における教示に従って用いられてもよい。したがって、本発明は、示されるおよび記載される通りに厳密に限定されるものではない。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図３】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年8月4日(2017.8.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
別の実施形態は、式Ｔｙｒ−ＡＥＥＡ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＮＨ２（ＳｈＫ−１９８）を有するＳｈＫポリペプチドを含む薬学的組成物を含む。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【外国語明細書】
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