(57)【要約】【課題】本発明は、認知機能低下抑制又は予防作用を発揮することができる剤又はこれを含む組成物を提供することを目的とする。【解決手段】本発明は、フコキサンチノール含有卵、その少なくとも一部及びそれらの加工品からなる群より選ばれる少なくとも１つを有効成分とする認知機能低下抑制又は予防剤、及びこれを含む認知機能低下抑制又は予防用食品組成物を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
フコキサンチノール含有生卵を有効成分とする認知機能低下抑制又は予防剤。
【請求項２】
フコキサンチノール含有卵黄液を有効成分とする認知機能低下抑制又は予防剤。
【請求項３】
フコキサンチノール含有卵黄粉末を有効成分とする認知機能低下抑制又は予防剤。
【請求項４】
フコキサンチノール含有卵黄油を有効成分とする認知機能低下抑制又は予防剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の剤を含有する、認知機能低下抑制又は予防用食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、認知機能低下抑制又は予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
認知症患者は２０１２年時点で４６０万人程度、２０２５年には７００万人まで増えると言われている。高齢化社会に向かう日本においては極めて大きな社会的問題である。認知症の治療薬はいくつかあるものの根本的な治療法は無いのが現状である。従って認知症の発症や進行を抑える有効成分の開発が待望されている。
【０００３】
特許文献１及び２には、フコキサンチンの認知症およびその関連症状に対する効果が記載されている。また、フコキサンチンは体内で、フコキサンチノールとして吸収されることが知られているが、フコキサンチノール自体は光や熱に不安定で、数日で分解してしまうことが知られている。
【０００４】
非特許文献１には、ニワトリにフコキサンチンを含む海藻脂質を添加した飼料を与えると、卵黄中にフコキサンチノールが検出されたことが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−２３９５０５号公報
【特許文献２】特開２０１４−００９２１４号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】北水試だより（２００９）７７、２２−２５．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、フコキサンチン及びフコキサンチノールは脂溶性物質であることによる製剤化の難しさがあり、様々な食事場面にて汎用的に使用するには課題があった。また、フコキサンチノールを含む鶏卵の用途については知られていなかった。本発明は、フコキサンチノールの認知能力改善又は予防作用を体内で十分に発揮できる剤の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、フコキサンチンを給餌した鶏の鶏卵から卵黄粉末を調製した。鶏の摂取したフコキサンチンはフコキサンチノールの形態で卵黄中に含まれている。この鶏卵粉末をＳＡＭＰ８マウスに摂取させて認知機能を評価したところ、認知機能低下抑制効果が確認された。一方、フコキサンチノールを含まない通常の鶏卵粉末にフコキサンチンを添加しものを給餌した場合では、フコキサンチンはフコキサンチノールとして体内に摂取されているが、認知機能に対する効果は見られなかった。卵黄中に存在していること、または、その存在状態が、認知機能低下抑制効果に寄与しているものと推察されるが、詳細は不明である。
【０００９】
本発明は、下記の〔１〕〜〔５〕を提供する。
〔１〕フコキサンチノール含有生卵を有効成分とする認知機能低下抑制又は予防剤。
〔２〕フコキサンチノール含有卵黄液を有効成分とする認知機能低下抑制又は予防剤。
〔３〕フコキサンチノール含有卵黄粉末を有効成分とする認知機能低下抑制又は予防剤。
〔４〕フコキサンチノール含有卵黄油を有効成分とする認知機能低下抑制又は予防剤。
〔５〕〔１〕〜〔４〕のいずれか１項に記載の剤を含有する、認知機能低下抑制又は予防用食品組成物。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、良好な認知機能低下抑制又は予防作用を発揮することができる認知機能低下抑制又は予防剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、実施例の受動回避試験の結果（実験１）を示す図である。
【図２】図２は、実施例の受動回避試験の結果（実験２）を示す図である。
【図３】図３は、実施例の受動回避試験の結果（実験３）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明において、フコキサンチノール含有卵は、トリの体内から移行したフコキサンチノールを卵黄中に含有する卵である。フコキサンチノール含有卵の卵黄粉末におけるフコキサンチノールの含有量は、通常は０．０１ｐｐｍ以上、好ましくは０．１ｐｐｍ以上、より好ましくは１．０ｐｐｍ以上、更に好ましくは３ｐｐｍ以上である。上限は、通常は３０ｐｐｍ以下、好ましくは２０ｐｐｍ以下、より好ましくは９．８ｐｐｍ以下である。
【００１３】
フコキサンチノール含有卵黄粉末の製法は特に限定されないが、例えば、フコキサンチンまたはフコキサンチノールを摂取したトリが産卵した卵の卵黄を粉末化することにより製造する方法が挙げられる。
【００１４】
トリは、メスの鳥類であればよく特に限定されないが、例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、ウズラ、アヒル、ガチョウ等の家禽である。トリの月齢は特に限定されないが、産卵能力を有するのであれば特に限定されない。
【００１５】
トリにフコキサンチンまたはフコキサンチノールを摂取させる方法（投与方法）は特に限定されず、例えば、経口投与、（例えば、口腔内投与、舌下投与など）、非経口投与（静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経皮投与、経鼻投与、経肺投与など）などが挙げられる。これらの中でも侵襲性の少ない投与形態が好ましく、通常は経口投与である。
【００１６】
フコキサンチンおよびフコキサンチノールの由来は特に限定されず、天然物（例えば、渇藻類等の海草、微細藻類）由来でもよいし、化学合成されたものでもよい。また、天然物由来の場合、その抽出程度は特に限定されず、粗抽出物、抽出物、精製物のいずれでもよい。
【００１７】
経口投与による場合、フコキサンチンまたはフコキサンチノールを飼料に混合して投与することが好ましい。飼料におけるフコキサンチンまたはフコキサンチノールの含有量は、通常は０．０００６質量％以上であり、好ましくは０．００３質量％以上であり、より好ましくは０．００６質量％以上である。上限は、通常は０．１５質量％以下であり、好ましくは０．０３質量％以下であり、より好ましくは０．０１８質量％以下である。
【００１８】
飼料は、フコキサンチンおよび／またはフコキサンチノールの他に他の成分を含んでいてもよい。他の成分は、トリの飼料に通常含まれる成分であればよく、特に限定されない。
【００１９】
飼料は、フコキサンチンまたはフコキサンチノールを含ませる、又は配合することができればよく、剤形は特に限定されないが、液状（液剤）、シロップ状（シロップ剤）、錠剤（錠剤、タブレット）、カプセル状（カプセル剤、ハードカプセル剤）、粉末状（顆粒、細粒）、ソフトカプセル状（ソフトカプセル剤）、通常は粉末である。飼料は、通常の配合飼料に含まれる成分を含んでいてもよい。
【００２０】
トリのフコキサンチンまたはフコキサンチノールの１日当たり摂取量は、摂取期間、トリの種類、健康状態等にもよるため特に限定されないが、通常は０．２ｎｇ／体重ｇ以上、好ましくは０．６ｎｇ／体重ｇ以上、より好ましくは１．２ｎｇ／体重ｇ以上である。上限は、通常は５００ｎｇ／体重ｇ以下、好ましくは３００ｎｇ／体重ｇ以下、より好ましくは１００ｎｇ／体重ｇ以下である。
【００２１】
トリがフコキサンチンまたはフコキサンチノールを摂取する期間は、摂取量、トリの種類、健康状態等にもよるため特に限定されないが、通常は１０日以上、好ましくは２０日以上、より好ましくは２９日以上である。上限は、通常は６０日以下、好ましくは５０日以下、より好ましくは４０日以下である。
【００２２】
本発明において、フコキサンチノール含有卵は、そのもの（生卵）、少なくとも一部（好ましくは、卵黄）を、または、フコキサンチノール含有卵もしくは／およびその少なくとも一部の加工品からなる群より選ばれる１種以上であってもよい。加工品としては例えば、粉末、油、溶液が挙げられ、好ましくは、卵黄粉末、卵黄油、卵黄液である。加工の方法は特に限定されない。卵黄粉末は、凍結乾燥により製造できる。卵黄油は、卵黄を加熱して固形分を除くことにより製造できる。卵黄液は、卵黄に水又は食塩水を適量添加することで製造できる。
【００２３】
フコキサンチノール含有卵は、生体が摂取することにより、認知機能低下抑制又は予防作用を発揮することができる。フコキサンチノール含有卵の成人における１日当たり摂取量（２種以上の組み合わせの場合合計量）は、卵黄粉末の場合、好ましくは０．１ｇ以上であり、より好ましくは、０．２ｇ以上であり、更に好ましくは０．３ｇ以上である。上限は、好ましくは２６ｇ以下であり、より好ましくは１２ｇ以下であり、更に好ましくは５．２５ｇ以下である。
【００２４】
フコキサンチノール含有卵は、単独で、又は他の成分と組み合わせて、剤として利用できる。上記のとおりフコキサンチノール含有卵は認知機能低下抑制又は予防作用を有することから、フコキサンチノール含有卵を含む剤は、認知機能低下抑制又は予防剤として利用できる。
【００２５】
認知機能とは、判断（実行機能、課題処理など）、計算、記憶（作業記憶、学習記憶、社会的認知など）、理解、学習（言語学習、視覚的学習など）、思考（論理的思考、問題解決能力など）、及び言語から選ばれる少なくとも１つの機能である。認知機能低下を抑制又は予防するとは、認知機能の低下又は退行を抑制又は予防すること、若しくは、正常な認知機能を維持することを意味する。認知機能低下の抑制及び予防は、認知症（例えば、アルツハイマー型認知症（若年性、家族性を含む）、レビー小体型認知症、脳血管性認知症、前頭側頭型認知症、若年性認知症、アルコール性認知症、正常圧水頭症、まだら認知症、微小梗塞性認知症、薬物関連認知症）、軽度認知障害、記憶障害、統合失調症、注意欠陥障害、ＡＤＨＤ等の疾患の予防又は抑制に役立つことから、本発明の剤はこれらの疾患の予防又は抑制剤としても有用である。
【００２６】
認知症の定義の代表的なものとして、ＩＣＤ−１０（国際疾患分類１０版）やＤＳＭ−ＩＶ（アメリカ精神医学会精神医学診断統計便覧第４版）がある。多少の相違はあるものの、概念的には、正常に達した知的機能が後天的な器質性障害によって持続的に低下し、日常生活や社会生活に支障をきたすようになった状態で、それが意識障害の無いときに見られることを認知症という。
【００２７】
すなわち、以下の（１）〜（６）の条件を満たす状態を持って認知症と診断することができる（認知症テキストブック／日本認知症学会編  中外医学社刊より）。
（１）認知症の中核は記憶障害を始めとした知的機能の障害であり、さらに失語、失行、失認および実行機能障害などの複数の知的機能の障害がみられる。
（２）これらの知的障害は、後天的な障害のため、一旦発達した知能が低下した状態がみられる。
（３）脳の器質性変化があり、脳の物質的な異常を基盤とした状態である。
（４）障害がある期間持続していることが必要で、ＩＣＤ−１０では「すくなくとも６ヶ月以上」持続するとしている。
（５）知的障害の結果、社会生活や日常正確活動に支障をきたした状態である。
（６）急性・一時的なものではなく、意識障害が無いときにも上記の状態がみられる。
【００２８】
軽度認知機能障害（ＭＣＩ）とは認知症の前駆状態であり、正常の生理的な老化過程で予想されるよりも認知機能が低下している状態である。すなわち、認知症とは診断されない、認知機能的には正常状態であるが、脳内にはアミロイドβは蓄積している状態である。
【００２９】
本発明の剤は、フコキサンチノール含有卵を少なくとも１種含んでいればよく、製法、組成の異なる２種以上のフコキサンチノール含有卵の組み合わせを含んでいてもよい。
【００３０】
本発明の剤は、フコキサンチノール含有卵を有効成分としていればよく、必要に応じて他の成分を含有してよい。他の成分としては、本発明の効果を損なわない限り特に制限はなく、例えば、薬理学的に許容される担体が挙げられる。
【００３１】
薬理学的に許容される担体は、剤形などに応じて適宜選択してよく、例えば、エタノール、水、デンプンなどが挙げられる。
【００３２】
本発明においては、フコキサンチノール含有卵及び薬理学的に許される担体のほかに、他の成分を含んでいてもよい。他の成分としては、例えば、油性成分、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、発色剤、矯味剤、着香剤、酸化防止剤、防腐剤、呈味剤、酸味剤、甘味剤、強化剤、膨張剤、増粘剤、界面活性剤、フコキサンチノール含有卵及び薬理学的に許される担体以外の認知機能低下抑制又は予防作用を有する成分などが挙げられる。任意成分は、食品組成物の剤形、種類等に応じて選択すればよく、１種でもよいし２種以上の組み合わせでもよい。
【００３３】
油性成分としては、例えば、脂肪酸エステル、炭化水素、高級脂肪酸、高級アルコール等が挙げられる。
【００３４】
賦形剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等のセルロース及びその薬理学的に許容される誘導体、ポリビニルピロリドン、部分けん化ポリビニルアルコール等の合成高分子、ゼラチン、アラビアゴム末、プルラン、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、キタンサンガム等の多糖類、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、α化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ等のスターチおよびその薬理学的に許容される誘導体、乳糖、果糖、ブドウ糖、白糖、トレハロース、パラチノース、マンニトール、ソルビトール、エリスリトール、キシリトール、還元パラチノース、粉末還元麦芽糖水飴、マルチトール等の糖類および糖アルコール類、軽質無水ケイ酸、微粒酸化ケイ素、微粒二酸化ケイ素、酸化チタン、水酸化アルミニウムゲル等の無機賦形剤等が挙げられる。剤全量に対する賦形剤の含有量は、０．０１質量％以上が好ましい。上限は、７０質量％以下が好ましい。
【００３５】
崩壊剤としては、例えば、クロスポビドン、カルメロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルスターチナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、部分α化デンプン等が挙げられる。
【００３６】
結合剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、デキストリン、デンプン、アルファー化デンプン等が挙げられる。
【００３７】
滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステル、軽質無水ケイ酸、フマル酸ステアリルナトリウム、ポリエチレングリコール、タルク、ステアリン酸等が挙げられる。剤全量に対する滑沢剤の含有量は、０．０１質量％以上が好ましい。上限は、２５質量％以下が好ましい。
【００３８】
フコキサンチノール含有卵、及びこれを含む剤の投与形態は特に限定されない。例えば、経口投与（例えば、口腔内投与、舌下投与など）、非経口投与（静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経皮投与、経鼻投与、経肺投与など）などが挙げられる。これらの中でも侵襲性の少ない投与形態が好ましく、経口投与（内服）がより好ましい。
【００３９】
経口投与剤（内服剤）又は経口投与用組成物（内服用組成物）の剤形としては、例えば、液状（液剤）、シロップ状（シロップ剤）、錠剤（錠剤、タブレット）、カプセル状（カプセル剤）、粉末状（顆粒、細粒）、ソフトカプセル状（ソフトカプセル剤）、固形状、半液体状、クリーム状、ペースト状が挙げられる。
【００４０】
剤におけるフコキサンチノール含有卵の投与量は、上述のフコキサンチン含有卵の摂取量の目安を参照して適宜決定すればよい。
【００４１】
フコキサンチノール含有卵、及びこれを含む剤の投与対象は、ヒトを含む動物であればよく、通常はヒトである。投与対象は健常者でもよいが、上述の認知症、認知障害等の患者であってもよい。
【００４２】
対象者は、ヒトに限定されず、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ブタ、サルなどの哺乳類）であってもよい。
【００４３】
フコキサンチノール含有卵、およびこれを含む剤は、そのまま、又はさらに他の成分と組み合わせて、食品組成物、医薬、医薬部外品として利用できる。食品組成物としては例えば、飲料（清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、粉末飲料、果実飲料、乳飲料、ゼリー飲料など）、菓子類（クッキー、ケーキ、ガム、キャンディー、タブレット、グミ、饅頭、羊羹、プリン、ゼリー、アイスクリーム、シャーベットなど）、水産加工品（かまぼこ、ちくわ、はんぺんなど）、畜産加工品（ハンバーグ、ハム、ソーセージ、ウィンナー、チーズ、バター、ヨーグルト、生クリーム、チーズ、マーガリン、発酵乳など）、スープ（粉末状スープ、液状スープなど）、主食類（ご飯類、麺（乾麺、生麺）、パン、シリアルなど）、調味料（マヨネーズ、ショートニング、ドレッシング、ソース、たれ、しょうゆなど）が挙げられる。
【００４４】
食品組成物としては例えば、健康食品、機能性食品、健康補助食品（サプリメント）、栄養補助食品、特定保健用食品、医療用食品、病者用食品、乳児用食品、介護用食品、高齢者用食品等も挙げられる。
【００４５】
フコキサンチノール含有卵、およびこれを含む剤の投与時期は、特に限定されないが、好ましくは非空腹時であり、より好ましくは食後である。一般に、脂質系の成分は腸管に食物が存在しているほうが吸収され易いため、投与時期が上記の時期であることにより吸収が促進され得る。
【００４６】
フコキサンチノール含有卵を含む剤及びこれを含む組成物の認知機能低下抑制又は予防作用の確認方法としては例えば、実施例に示すとおり、認知症モデル動物を用いる方法が挙げられる。認知症モデル動物により評価する方法としては、例えば、通常食にサンプルを配合した餌を認知症モデル動物に与えつつ一定期間飼育し、飼育後の動物の受動回避試験を行う方法が挙げられる。認知症モデル動物としては、例えば、ＳＡＭＰ８マウスが挙げられる。通常食としてはＣＥ−２（日本クレア株式会社）などの市販品を用いてもよい。認知症モデル動物の飼育期間は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択してよい。
【００４７】
フコキサンチノール含有卵を含む剤の製造方法は、特に限定されず、剤型、組成等に応じて任意の方法にて製造すればよい。
【実施例】
【００４８】
以下、本発明を実施例により詳細に説明する。下記実施例は、本発明を好適に説明するためのものであって、本発明は、下記実施例に限定されるものではない。
【００４９】
［製造例１］フコキサンチノール含有卵黄粉末の作製
実施例で用いるフコキサンチノール含有卵黄粉末を以下の手順で製造した。
５％フコキサンチン溶液（オリザ油化製）を鶏用の餌に０．１％となるように混合し、４週間摂取させた。その間に生まれた鶏卵の卵黄を定法に従って粉末化を行った。卵黄粉末中のフコキサンチノール濃度は６ｐｐｍであった。
【００５０】
卵黄粉末中のフコキサンチノール濃度の確認は、高速液体クロマトグラフィー法により行った。測定条件は以下のとおりとした。
【００５１】
卵黄粉末５００ｍｇを１５ｍＬチューブに採り、エタノール５ｍＬを加え、高速振とう機（Ｃｕｔｅｍｉｘｅｒ、ＥＹＥＬＡ）で２０分間攪拌しながら室温で抽出した。１５００ｒｐｍで５分間遠心分離の後、上澄みを回収した。上澄みが透明になるまで前記工程を繰り返し（通常３回）、回収した上澄みを留去した。
【００５２】
イソプロピルアルコールで５ｍＬにメスアップし、下記条件にて高速液体クロマトグラフィー分析を行った。
【００５３】
ＨＰＬＣ条件
・カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３（ＧＬ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ４．６×１５０ｍｍ）
・移動相：ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＝８５／１５、流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
・カラムオーブン：４０℃
【００５４】
［製造例２］コンブ由来フコキサンチンの製造
比較例で用いるコンブ由来フコキサンチン（Ｆｘ）を以下の手順で製造した。
１）抽出工程（粗製フコキサンチンの調製）
分液漏斗に、フコキサンチン１％オイル（株式会社サウスプロダクト製、コンブ由来）５００ｇ、ヘキサン５００ｇ、メタノール５００ｇおよび飽和食塩水５０ｇを入れ、１分間混合後、１０分間静置し、下層（濃赤色）を回収した。残った上層（濃緑色）に対し、メタノール２５０ｇおよび飽和食塩水２５ｇを入れて同様の操作を行い、下層を回収した。これら回収した下層とヘキサン２５０ｇとを分液漏斗にて混合し１０分間静置後、下層を回収してエバポレーターで濃縮乾固させ、固形分を得た。得られた固形分をジエチルエーテル２５０ｇに溶解して分液漏斗に入れ、水１００ｇを混合し１０分間静置した。上層（濃赤色）を集め、硫酸ナトリウムで乾燥させて濾紙で濾過後、得られる濾液をエバポレーターで濃縮乾固し、粗製フコキサンチンを得た（１７ｇ、フコキサンチン純度：２８％、フコキサンチン回収率：９５％）。粗製フコキサンチンを下記２の工程に供した。
【００５５】
２）クロマトグラフィー精製工程（精製フコキサンチンの調製）
粗製フコキサンチン（９ｇ）をヘキサン／アセトン＝５０／５０（ｖ／ｖ）  ５０ｍＬに溶解し、シリカゲルクロマトグラフィー（φ５０ｍｍ×Ｈ５００ｍｍ）にて精製した。展開はヘキサン／アセトン比率＝７０／３０で開始し、最終比率を５０／５０とした。濃赤色の画分を集め、エバポレーターにて濃縮乾固し、精製フコキサンチンを得た（３．５ｇ、フコキサンチン純度：６５％、フコキサンチン回収率：９２％）。精製フコキサンチンを下記３の工程に供した。
【００５６】
３）再結晶工程（高純度フコキサンチンの調製）
精製フコキサンチン（３．５ｇ）を最小量のアセトンに溶解させ、水を適量添加し、エバポレーターを用いて結晶が析出しない程度にアセトンを留去した。その後、溶液を氷冷して結晶が生成するまで静置した。ヘキサンを洗浄液として吸引濾過を行い、結晶を集乾燥させ、高純度フコキサンチン（２ｇ、フコキサンチン純度：９９％、フコキサンチン回収率：８３％）を得た。
【００５７】
各工程の結果物におけるフコキサンチンの純度の確認は、下記条件にて高速液体クロマトグラフィー法により行った。
【００５８】
ＨＰＬＣ条件
・試料：２０ｍｇを精秤し、エタノールで５０ｍＬまで希釈して得られた溶液を１０μＬ導入した。
・カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３  (５μｍ，４．６ｍｍ（Ｉ．Ｄ．）×１５０ｍｍ）
・移動相：メタノール／水＝８５／１５（０分〜）、１００／０（８分〜）、１００／０（３５分〜）
・流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
・オーブン：６０℃
・検出器：ＵＶ−ＶＩＳ（４４０ｎｍ）
【００５９】
各工程におけるフコキサンチンの回収率は、以下の式により算出した：
【００６０】
回収率＝各工程の結果物におけるフコキサンチン重量／各工程の処理前の試料におけるフコキサンチン重量
【００６１】
フコキサンチン重量は、試料の重量に、上記のとおり測定されたフコキサンチンの純度を乗じて算出した。なお、各精製工程における処理前の試料とは、それぞれフコキサンチン１％オイル、粗製フコキサンチン、精製フコキサンチンである。
【００６２】
実験１〜３（実施例１〜２及び比較例１〜３）
［動物］
動物としてＳＡＭＰ８マウスの雄（日本エスエルシー株式会社）を用いた。ＳＡＭＰ８マウスは、Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ−Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  Ｍｏｕｓｅ（ＳＡＭ）の系統の一つである。ＳＡＭは、京都大学結核胸部疾患研究所病理学部門（現再生医化学研究所再生誘導研究分野）において、ＡＫＲ／Ｊ系マウスと未知の系統との不測の交雑が生じたマウスコロニーから、老化度評点の加齢依存的な急速な増加を指標として確立されたマウス系統である。ＳＡＭには促進老化・短寿命を示すP系統（ＳＡＭＰ）と正常老化を示すＲ系統  （ＳＡＭＲ）の２系統があり、それぞれがさらに細分化されていり、ＳＡＭＰ８マウスはＰ系統の１つである。ＳＡＭＰ８マウスは、学習・記憶障害、免疫機能不全、概日リズムの異常を示すことが知られている。３ヶ月齢で軽微な学習・記憶障害を示し始め、５ヶ月齢以上にいたるとその障害が顕著となる（老化促進モデルマウス（ＳＡＭ）研究協議会ホームページ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓａｍｒｃ．ｊｐ／ＳＡＭｍｏｕｓｅ．ｈｔｍ）より一部改変）
【００６３】
［投与物質］
試験対象である投与物質は、以下のとおりである。
・フコキサンチン（Ｆｘ）：製造例２にて製造
・卵黄粉末（コントロール卵）：ファーマフーズ社より入手
・フコキサンチノール含有卵黄粉末（Ｆｘｏｌ卵）：製造例１にて製造、６ｐｐｍ  Ｆｘｏｌ含有、ファーマフーズ社より入手
・低容量フコキサンチノール含有卵黄粉末（低Ｆｘｏｌ卵）：０．９７５ｐｐｍ  Ｆｘｏｌ含有、ファーマフーズ社より入手
【００６４】
［群設定］
動物を以下の群に分け、それぞれに対し以下の条件で投与物質を与えた。
・ＣＥ−２群（比較例１および１′）：ＣＥ−２粉末エサ（日本クレア株式会社）を６ｇ／ｄａｙで投与
・Ｆｘ群（比較例２）：Ｆｘを２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙとなるよう飲水に可溶化し投与
・コントロール卵群（比較例３および３′）：Ｆｘｏｌ不含の卵黄粉末をＣＥ−２粉末エサに１０％ｗ／ｗとなるよう混合し、６ｇ／ｄａｙで投与
・Ｆｘｏｌ卵群（実施例１）：Ｆｘｏｌ含有卵黄粉末をＣＥ−２粉末エサに１０％ｗ／ｗとなるよう混合し、６ｇ／ｄａｙで投与
・低Ｆｘｏｌ卵群（実施例２）：低Ｆｘｏｌ含有卵黄粉末をＣＥ−２粉末エサに１０％ｗ／ｗとなるよう混合し、６ｇ／ｄａｙで投与
【００６５】
［投与期間］
各群における投与期間は、７週齢より３ヶ月間とした。投与期間終了後、以下の受動回避試験による評価を行った。
【００６６】
［受動回避試験］
２０週齢時のＳＡＭＰ８マウスに対して、ステップスルー型の受動回避試験を行った。解析はソフトウェアＳｈｕｔＡｖｏｉｄ（ＰａｎＬａｂ社）を用いた。初日の予備学習は暗室に入るまでの時間（明室滞在時間）を最大２分に設定し、１分間の明室馴化後に遮蔽扉を開け、暗室移動後に扉を閉めて０．４ｍＡの電気刺激を２秒間与えた。電気刺激後は速やかにマウスをホームケージへ戻した。２日目の本試験は明室滞在時間上限を５分に設定し、明室に留まる時間を測定した。２日目に５分間明室に留まり続けた個体の測定値は５分として計算し、２日目の明室滞在時間を群ごとに平均した（表１、図１〜３）。群ごとの個体数はコントロール群、Ｆｘ卵群ともに９匹である。
【００６７】
【表１】
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【００６８】
〔表１の脚注〕
＊  体内におけるＦｘからＦｘｏｌへの変換効率が８０％程度である（Ｓｕｇａｗａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２００２，１３２：９４６−９５１）ことに基づき、Ｆｘ投与量２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（マウス体重を３０ｇとすると６００ｎｇ／ｄａｙ）から体内でＦｘｏｌに変換後の量を換算
【００６９】
受動回避試験において、コントロール卵群に比較してＦｘｏｌ卵群で有意に明室滞在時間が増大した。一方で、ＣＥ−２群とＦｘ混合ＣＥ−２群では明室滞在時間に有意な差は検出されなかった。２日目の明室滞在時間が高いということはつまり、１日目の電気刺激を記憶しているということである。ＳＡＭＰ８マウスは本試験時週齢において認知能力が低下する、つまり本試験において２日目の明室滞在時間が低値を示すことが知られており（Ｓａｗａｎｏ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｓ，２０１３，９１（３）：３８２−９２，Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｌｏｃａｌ  Ｔｈｙｒｏｉｄ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＳＡＭＰ８  Ｍｏｕｓｅ  ａｔ  Ｙｏｕｎｇｅｒ  Ａｇｅｓ：Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｗｉｔｈ  Ｄｅｌａｙｅｄ  Ｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  Ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ．）、その認知能力の低下がＦｘｏｌ卵摂取によって抑制されたことが分かる。
【００７０】
げっ歯類を用いたＦｘの認知機能低下抑制効果評価におけるＦｘ有効投与量（Ｆｘ単独）は、０．００１〜２０ｍｇ／ｄａｙであり（特表２０１３−５４０１１０）、これをＦｘｎｏｌ投与量に換算すると、体内におけるＦｘのＦｘｏｌへの変換効率が８０％程度である（Ｓｕｇａｗａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２００２，１３２：９４６−９５１）ことから、８００ｎｇ／ｄａｙ〜１６ｍｇ／ｄａｙとなると考えられる。実施例のＦｘｏｌ卵群におけるＦｘｏｌ投与量は、およそ３６ｎｇ／ｄａｙである。このことから、Ｆｘｏｌ卵を投与することにより、Ｆｘ単独での有効投与量よりはるかに低濃度のＦｘｏｌ投与量でも、認知機能低下抑制効果が得られることが明らかとなった。
【００７１】
比較例のＦｘ群のＦｘ投与量は２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（マウス体重を３０ｇとすると６００ｎｇ／ｄａｙ）であり、これをＦｘｎｏｌ投与量に換算すると、体内におけるＦｘｏｌへの変換効率が８０％程度である（Ｓｕｇａｗａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２００２，１３２：９４６−９５１）ことから、４８０ｎｇ／ｄａｙ程度となると推察される。これに対し、実施例のＦｘｏｌ卵群におけるＦｘｏｌ摂取量はおおよそ３６ｎｇ／ｄａｙであり、Ｆｘ群のＦｘ投与量よりはるかに少量である。このことから、Ｆｘを直接ではなく卵を介して投与することによってはじめて、認知機能低下抑制又は予防効果を得ることができることが明らかとなった。
【００７２】
処方例１（錠剤）
以下の組成にて常法に従い錠剤を製造した。
フコキサンチノール含有卵黄粉末  ４０質量％
ステアリン酸カルシウム  ５質量％
結晶セルロース  １０質量％
乳糖  ４３質量％
微粒二酸化ケイ素  ２質量％
【００７３】
処方例２（ソフトカプセル）      
以下の組成にて常法に従いソフトカプセル剤を製造した。
［固形製剤／１個］
−外層−
ゼラチン・・・１３０ｍｇ
グリセリン・・・７０ｍｇ
パラオキシ安息香酸エチル・・・０．５ｍｇ
−内層−
フコキサンチノール含有卵黄油・・・１００ｍｇ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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