(57)【要約】      （修正有）【課題】痩身効果を有し、かつ、天然物由来の生体安全性にすぐれた皮膚外用剤又は経口組成物に配合可能な機能性素材の提供。【解決手段】ハイビスカス、ヒマワリ及びクズから選択される１又は２以上の植物の抽出物若しくはその加水分解物、又はそれらの植物の発酵物を有効成分として含有し、脂肪滴蓄積抑制効果を発揮する痩身用組成物、並びに当該痩身用組成物を配合してなる皮膚外用剤又は経口組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハイビスカス、ヒマワリ及びクズからなる群より選択される１又は２以上の植物の抽出物若しくはその加水分解物、又は当該植物の発酵物を有効成分として含有する痩身用組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の痩身用組成物を配合する皮膚外用剤。
【請求項３】
請求項１に記載の痩身用組成物を配合する経口組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物から得られる抽出物、加水分解物又は発酵物を有効成分とする痩身用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、体内の過剰な脂肪蓄積の抑制や、体内に蓄積された脂肪の分解を目的として、様々なスリミング剤（痩身剤）が提案されている。例えば、脂肪は体内の脂肪細胞中に中性脂肪（トリグリセリド）として蓄えられ、これがリパーゼとよばれる酵素により脂肪酸とグリセリンに分解されることが知られており、このことから、リパーゼ活性を高める効果を有する脂肪分解促進剤の研究及び開発が行われている（例えば、特許文献１，２）。しかし、従来の脂肪分解促進剤は、有効性及び安全性の点で課題があり、より、安全で有効性の高い痩身効果を有する機能性素材が求められている。
【０００３】
【特許文献１】特開2005-060366号公報
【特許文献２】特開2005-060366号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、上記背景に鑑みてなされたもので、その課題は、天然物由来で、かつ、より痩身用の機能性素材を見出すことである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、ハイビスカス、ヒマワリ及びクズからなる群より選択される１又は２以上の植物の抽出物若しくはその加水分解物又は当該植物の発酵物を有効成分とする痩身用組成物である。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、天然物由来で生体安全性にすぐれ、かつ、脂肪滴蓄積抑制効果を有する痩身用組成物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
以下、本発明の好ましい実施の形態について詳細に説明する。
本発明に係る抽出物、加水分解物又は発酵物を得るために使用するハイビスカス、ヒマワリ及びクズは以下のとおりである。
【０００８】
本発明において、「ハイビスカス」とは、アオイ科フヨウ属の植物であって、例えばローゼル（Hibiscus sabdariffa L.)、ムクゲ（Hibiscus syriacus)、フヨウ（Hibiscus mutabills)、モミジアオイ(Hibiscus coccineus）、オオハマボウ（Hibiscus tiliaceus）、ブッソウゲ（Hibiscus schizopetalus)などが挙げられる。使用部位としては、全草、葉、花部、茎、根、子実等が挙げられる。なお、花部を使用する場合は、の開花時期及び大きさ等は特に限定されるものではなく、又花弁、萼等のいずれかまたはそれらの全部を含むものを使用してもよい。
【０００９】
本発明において、「ヒマワリ」とは、キク科（Asteraceae）ヒマワリ属（Helianthus）のヒマワリ（Helianthus annuus）である。本発明において使用可能な部位としては、全草、葉、花部、茎、新芽、根又は種子等が挙げられる。ここで「新芽」とは、ヒマワリの幼若期のものを指し、２枚〜１０枚の葉を有することが好ましい。なお、本発明で用いるヒマワリの「新芽」の大きさは５ｃｍ〜２０ｃｍのものが好ましい。
【００１０】
また、本発明において、「クズ」とは、また、本発明に係る化粧料はマメ科（Fabaceae）クズ属（Pueraria）の植物である。本発明において使用可能な部位としては、その全草、花、種子、茎、葉、根（カッコン）等が挙げられる。
【００１１】
以下に本発明に係る抽出物若しくはその加水分解物、又は発酵物を得るための方法を示す。まず、本発明において、上記各植物の抽出を行う場合には、必要ならば使用部位を予め水洗して異物を除いた後、そのまま又は乾燥した上、必要に応じて細切又は粉砕し、抽出溶媒と接触させる処理を行う。抽出方法は、浸漬法等の常法に従って抽出溶媒と接触させることで行うことが可能であるが、超臨界抽出法や水蒸気蒸留法を用いることも可能である。
【００１２】
抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール等の低級アルコール類；エチレングリコール、１，３−プロパンジオール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等の多価アルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル等のエステル類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；エチルエーテル、イソプロピルエーテル等のエーテル類；ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルム等の炭化水素系溶媒等が挙げられ、それらは単独で又は二種以上混合して用いられる。
【００１３】
それら抽出溶媒のうちでも、得られる抽出物の有効性、さらには、皮膚刺激性の観点から、又皮膚外用組成物等への幅広い適用が可能であるという点からも、本発明においては、水、低級アルコール類又は多価アルコール類等の親水性溶媒が好適である。この親水性溶媒を用いる場合の好ましい例としては、例えば、水、低級アルコール類（特にエタノール）、又は多価アルコール（特に、１，３−プロパンジオール、１，３−ブチレングリコール）の単独使用、或いは、水と低級アルコール類（特にエタノール）との混合溶媒、又は水と多価アルコール類（特に１、３−ブチレングリコール、１，３−プロパンジオール、グリセリン）との混合溶媒の使用等が挙げられる。
【００１４】
混合溶媒を用いる場合の混合比は、例えば水と１、３−ブチレングリコール若しくは１，３−プロパンジオールとの混合溶媒であれば、容量比（以下同じ）で１：５〜２０：１、水とエタノールとの混合溶媒であれば、１：３〜２５：１、水とグリセリンとの混合溶媒であれば１：１〜２０：１の範囲とすることが好ましい。
【００１５】
また、乾燥部位と抽出溶媒との重量比は好ましくは１：１〜１：５０の範囲であり、より好ましくは、１：５〜１：２０の範囲である。
【００１６】
抽出物の調製に際して、そのｐＨに特に限定はないが、一般には３〜９の範囲とすることが好ましい。かかる意味で、必要であれば、前記抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ性調整剤、又はクエン酸、塩酸、リン酸、硫酸等の酸性調整剤を配合し、所望のｐＨとなるように調整してもよい。
【００１７】
抽出温度、抽出時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やｐＨによっても異なるが、例えば、水、１，３−ブチレングリコール、若しくは１，３−プロパンジオールを単独で溶媒とする場合、又は水と１，３−プロパンジオール若しくは１，３−プロパンジオールとの混液を溶媒とする場合であれば、抽出温度は好ましくは０℃〜９０℃の範囲であり、又抽出時間は好ましくは１時間〜１週間である。
【００１８】
以上のように抽出した抽出物には、酵素により加水分解処理を施しても良い。酵素としては、蛋白分解酵素、澱粉分解酵素、ペクチン質分解酵素、及びリパーゼ等の脂肪分解酵素のいずれかの酵素群から選ばれた１種又は２種以上を用いてもよいが、それらの酵素群からそれぞれ選ばれた１種又は２種以上の酵素を組み合わせて用いることがより好ましい。
【００１９】
ここで蛋白分解酵素としては、例えば、アクチナーゼ等のアクチナーゼ類、ペプシン等のペプシン類、トリプシン、キモトリプシン等のトリプシン類、パパイン、キモパパイン等のパパイン類、グリシルグリシンペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、アミノペプチダーゼ等のペプチダーゼ類、ブロメライン等を用いることができる。
【００２０】
また。糖質分解酵素としては、例えば、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、β−ガラクトシダーゼ等を用いることができる。
【００２１】
また、ペクチン質分解酵素としては、例えば、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンデポリメラーゼ、ペクチンデメトキシラーゼ、ペクチンリアーゼ、ペクチンエステラーゼ、ポリガラクチュロナーゼ等を用いることができる。
【００２２】
酵素の使用量は、懸濁液中の各植物の固形分に対して、合計で０．０００１〜１０重量％が好ましく、より好ましくは０．００１〜２．０重量％である。
【００２３】
また、本発明においては、上記各植物を発酵しても良い。それら植物の発酵に用いる微生物としては、乳酸菌、ビフィズス菌、麹菌、納豆菌、テンペ菌、酵母等が挙げられ、一般にはそれら各菌種のいずれかから選ばれた１種又は２種以上を用いるが、場合によっては、又相互に発酵の妨げとならない限り、別の菌種に属するもの同士を組み合せて用いるようにしてもよい。
【００２４】
例えば、乳酸菌としては、例えばラクトバシルス プランタラム（Lactobacillus plantarum)、ラクトバシルス ブレビス（L. brevis)、ラクトバシルス カゼイ（L. casei)、ラクトバシルス デルブルッキー（L. delbrueckii）等のラクトバシルス（Lactobacillus）属の乳酸菌；カルノバクテリウム ディバージェンス（Carnobacterium divergens)、カルノバクテリウム ピシコーラ(Carnobacterium piscicola)等のカルノバクテリウム（Carnobacterium）属の乳酸菌；ロイコノストック メセンテロイズ（Leuconostoc mesenteroides)、ロイコノストック シトレウム（Leuconostoc citreum)等のロイコノストック（Leuconostoc）属の乳酸菌； ストレプトコッカス フェーカリス（Streptococcus faecalis)、ストレプトコッカス ピオジェネス（Streptococcus pyogenes)等のストレプトコッカス属の乳酸菌；エンテロコッカス カゼリフラバス（Enterococcus caseliflavus)、エンテロコッカス サルフレウス（Enterococcus sulfreus)等のエンテロコッカス（Enterococcus）属の乳酸菌；ラクトコッカス プランタラム（Lactococcus plantarum)、ラクトコッカス ラフィノラクティス（Lactococcus rafinolactis)等のラクトコッカス属の乳酸菌；ヴェイセラ コンフューザ（Weissella confusa)、ヴェイセラ カンドウレリ（Weissella kandleri)等のヴェイセラ属の乳酸菌；アトポビウム ミニュタム（Atopobium minutum)、アトポビウム パービュラス（Atopobiumparvulus)等のアトポビウム（Atopobium）属の乳酸菌；バゴコッカス フルビアリス（Vagococcus fluvialis）、バゴコッカス サーモニナラム（Vagococcus salmoninarum)等のバゴコッカス（Vagococcus）属の乳酸菌；ペディオコッカス ダムノサス（Pediococcus damnosus)、ペディオコッカス ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus)等のペディオコッカス（Pediococcus）属の乳酸菌、マリニラクトバシルス・フィコロトレランス（Marinilactobacillus phychrotolerans）のような海洋起原の乳酸菌等が挙げられる。
【００２５】
例えば、ビフィズス菌としては、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）等が挙げられるが、ビフィズス菌に分類されるものであれば、いずれも使用可能である。
【００２６】
麹菌としては、例えばアスペルギルス オリゼー（Aspergillus oryzae）、アスペルギルス フラバス（Aspergillus flavus）、アスペルギルス ポリオキソジェネス（Aspergillus polyoxogenes）、アスペルギルス ソーヤ（Aspergillus sojae）等の黄麹菌、アスペルギルス アワモリ（Aspergillus awamori）、アスペルギルス カワウチ（Aspergillus kawauchii）、アスペルギルス ウサミ（Aspergillus usami）、アスペルギルス ニガー（Aspergillus niger）等の黒麹菌、モナスカス アンカ（Monascus anka）、モナスカス ピロサス（Monascus pilosus）等の紅麹菌等が挙げられる。
【００２７】
納豆菌としては、例えばバシルス ナットー(Bacillus natto)、バシルス サブチルス(Bacillus subtilis)、バシルス サーキュランス(Bacillus circulans)等のバシルス属の細菌等が挙げられる。なかでも、食品に広く使用されており、安全性が高い点でバシルス ナットー(Bacillus natto)が最も好ましい。
【００２８】
テンペ菌としては、リゾプス アジゴスポラス(Rhizopus azygosporus)、リゾプス ミクロスポラス チネンシス(Rhizopus microsporus chinensis)、リゾプス ミクロスポラス オリゴスポラス(Rhizopus microsporus oligosporus)、リゾプス ニベウス(Rhizopus niveus)、リゾプス オリゼー(Rhizopus oryzae)等のリゾプス属の真菌（カビ）が挙げられる。
【００２９】
酵母としては、例えばサッカロミセス セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、サッカロミセス アワモリ(Saccharomyces awamori)、サッカロミセス チェバリエリ(Saccharomyces chevalieri)、サッカロミセス カールスバージェンシス(Saccharomyces carlsbergensis)、サッカロミセス バヨナス（Saccharomyces bayon us)等のサッカロミセス属の酵母、トルラスポラ デルブルエキ(Torulaspora delbruekii)、トルラスポラ ファーメンタチ(Torulaspora fermentati)、トルラスポラ ロゼイ(Torulaspora rosei)等のトルラスポラ属の酵母、ジゴサッカロミセス ローキシ(Zygosaccharomyces rouxii)、ジゴサッカロミセス ソーヤ(Zygosaccharomyces soya)、ジゴサッカロミセス サケ(Zygosaccharomyces sake)、ジゴサッカロミセス ミソ(Zygosaccharomyces miso)、ジゴサッカロミセス ラクティス(Zygosaccharomyces lactis)等のジゴサッカロミセス属の酵母、カンディダ ベルサチリス(Candida versatilis)、カンディダ エチェリシイ(Candida etchellsii)、カンディダ ケフィール（Candida kefyr）、カンディダ サケ（Candida sake）、カンディダ スコッティ（Candida scottii）等のカンディダ属の酵母、オーレオバシディウム プルランス（Aureobasidium Pullulans）、オーレオバシディウム マンソニー（Aureobasidium mansonii）、オーレオバシディウム マイクロスティクタム（Aureobasideium microstictum）等のオーレオバシディウム属の酵母等が挙げられる。上述の酵母のうち、安全性及び有効性の観点から、サッカロミセス セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)が好ましいが、サッカロミセス セレビシエとしては、清酒、サクラの花等の植物由来のものや、海洋起源のもの等、いずれの由来のものでも使用することができる。
【００３０】
上記の微生物を用いて、上記植物を発酵させる方法の好ましい具体例を挙げれば以下の通りである。まず、それら植物の発酵素材を発酵媒体中に浸漬又は懸濁させて、発酵のための懸濁液を調製する。この場合、植物は生のまま用いても、又予め乾燥若しくは半乾燥した上用いてもよい。又、形状としては、採取したものをそのまま用いることもできるが、細断或いは粉砕して微細化すれば発酵効率を上げることができる。
【００３１】
発酵素材を懸濁させるための発酵媒体としては、水或いは水と低級アルコール類（メタノール、エタノール、プロパノール等）若しくはグリコール類（エチレングリコール、プロピレングリコール（プロパンジオール）、１、３−ブチレングリコール、グリセリン等）との混液等が用いられ、又それら媒体中にはグルコース、フルクトース、シュークロース等の糖類を添加してもよいが、微生物が最もその作用を発揮しやすいことと、発酵素材である植物以外の資化成分が存在することによる発酵副産物の生成を避けるという意味から、水の単独使用が最も好ましい。
【００３２】
この発酵素材の懸濁液は、これを発酵工程に供する前に、殺菌を行って発酵の障害となる雑菌を除去する。この場合殺菌除去方法としては、発酵素材を予め殺菌用エタノール等で洗浄殺菌した上無菌水等の無菌媒体に懸濁する方法を用いてもよく、又発酵素材を媒体に懸濁した後、懸濁液を加熱殺菌する方法を用いるようにしてもよい。加熱殺菌法としては、懸濁液を１２０〜１３０℃で１０〜２０分間加熱するオートクレーブ殺菌法や、懸濁液を８０〜９０℃に６０〜１２０分間保持することを１日１回２〜３日間繰り返す間断殺菌法が一般に用いられる。
【００３３】
次に、この無菌化した懸濁液を発酵タンクに入れ、これに微生物を植菌して発酵処理を行う。 微生物の接種量は１０７〜１０８個／ｍＬが適量である。接種量が上記の範囲より多くなっても発酵の進行時間は殆ど変わらず、一方上記の範囲より少なくなると発酵完了までに長時間を要することとなって好ましくない。
【００３４】
発酵温度は一般に５〜５０℃の範囲、好ましくは各微生物の生育至適温度である３０〜４０℃（例えば、乳酸菌であれば３５℃〜４０℃）の範囲である。発酵日数は、至適温度に於いて一般に１〜１０日、好ましくは２〜５日の範囲である。発酵日数が上記の一般的範囲より短くなると発酵が十分に行われず発酵物の有効性が低下する傾向にあり、一方１０日を越えて長くしても有効性のそれ以上の上昇は認められないだけでなく、着色や発酵臭の増加が生ずることとなっていずれも好ましくない。
【００３５】
以上の発酵処理を行うに当たって、植物の成分が微生物によってより有効に利用されるようにするため、微生物の植菌前若しくは植菌時、或いは場合によっては植菌後発酵継続中に、前記の懸濁液に酵素を添加して、発酵素材である植物に酵素による加水分解処理を施すことが好ましい。この場合、酵素としては、上述したように、蛋白分解酵素、糖質分解酵素、ペクチン質分解酵素及び脂質分解酵素から選ばれた少なくとも１種の酵素を用いることができる。
【００３６】
ｐＨ、温度、時間等の処理条件としては、酵素処理を発酵の前に行うのであれば、使用する酵素の至適ｐＨ及び至適温度付近で１〜２４時間の処理を行うのがよく、一方発酵と並行して行うのであれば、当該発酵と同条件であって差し支えない。
【００３７】
以上の発酵処理が終ったならば、微生物の殺菌のため、又酵素処理を併用した場合であれば酵素の失活も兼ねて、発酵液に８０〜１００℃で１０〜１２０分程度の加熱殺菌処理を施す。殺菌処理を終わった発酵液は、これをそのまま、或いは一般かつ好適にはろ過或いは遠心分離等の固液分離手段によって液相を分取し、必要ならばｐＨを通常の化粧料のｐＨ領域であるｐＨ４〜９に調整し、さらに必要ならば希釈若しくは濃縮によって適宜の濃度とした上、化粧料の配合原料として供する。又、場合によっては、固液分離後の液相を、スプレードライ法、凍結乾燥法等常法に従って固体化し、さらに必要に応じて粉砕して粉末状にしてもよい。
【００３８】
本発明に係る抽出物、加水分解物又は発酵物を配合してなる皮膚外用剤（化粧料、医薬部外品も含む）としては、例えば、乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダー、ほほ紅、白粉、洗顔料、ボディシャンプー、スリミング剤、毛髪用シャンプー、石けん等が挙げられ、また、育毛剤、さらには浴剤等も挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。また、経口組成物としては、美容飲料、栄養ドリンク、スポーツドリンク、ニアウォーター、ビタミン飲料、ミネラル飲料、アルコール飲料等の飲料；各種スープ類（粉末スープも含む）、乳製品、ゼリー、キャンディ、錠菓、ガム等の食品；錠剤、液状、顆粒状又はゼリー状の健康食品・飲料等に配合することができるが、本発明はこれに限るものではなく、経口摂取できる飲食品等に配合することができる。
【００３９】
皮膚外用剤（化粧料や医薬部外品）における本発明に係る抽出物、加水分解物又は発酵物の配合量は、その固形分として、基礎化粧料の場合は、一般に０．００２〜１．０重量％（固形分重量％、以下同じ）、好ましくは０．０２〜０．２重量％の範囲、メイクアップ化粧料の場合は、一般に０．００２〜１．０重量％、好ましくは０．０２〜０．２重量％の範囲、又清浄用化粧料の場合は、一般に０．００２〜１０．０重量％、好ましくは０．０２〜７．０重量％の範囲である。また、毛髪用化粧料の場合は、抽出物の固形分として、一般的には０．００００１〜５．０重量％であり、好ましくは、０．０００１〜３．０重量％である。また、経口組成物における本発明の抽出物の配合量は、抽出物の固形分として、０．１〜１５重量％の範囲が好ましい。
【００４０】
皮膚外用剤（化粧料や医薬部外品）には、本発明に係る抽出物、加水分解物又は発酵物のほかに、通常、皮膚外用組成物に用いられる成分、例えば油性成分、界面活性剤（合成系、天然物系）、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。また、本発明に係る抽出物、加水分解物又は発酵物の有効性、特長を損なわない限り、他の生理活性成分を組み合わせて配合することも何ら差し支えない。
【００４１】
ここで、油性成分としては、例えば、オリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、ベルガモット油、ラベンダー油、バラ油、ベルガモット油、カミツレ油等の植物由来スクワラン等の植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油等の動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリン等のロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワラン等の炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、ｃｉｓ−１１−エイコセン酸等の脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール等の高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）等の合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００４２】
界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩等のアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ、Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩等のカチオン界面活性剤；Ｎ、Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′、Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタイン等の両性界面活性剤等を使用することができる。
【００４３】
乳化剤及び／又は乳化助剤としては、酵素処理ステビア等のステビア誘導体、サポニン又はその誘導体、カゼイン又はその塩（ナトリウム等）、糖と蛋白質の複合体、ショ糖又はそのエステル、ラクトース、大豆由来の水溶性多糖、大豆由来蛋白質と多糖の複合体、ラノリン又はその誘導体、コレステロール、ステビア誘導体（ステビア酵素処理物等）、ケイ酸塩（アルミニウム、マグネシウム等）、炭酸塩（カルシウム、ナトリウム等）サポニン及びその誘導体、レシチン及びその誘導体（水素添加レシチン等）、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀等）等を配合することもできる。
【００４４】
保湿剤としては、保湿剤としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１、３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース、ラフィノース等の糖類、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、ヒアルロン酸発酵液、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体等）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、コラーゲンペプチド、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、シラン根（白及）抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００４５】
増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻又は紅藻由来成分；シラン根（白及）抽出物；ペクチン、アロエ多糖体等の多糖類；トラガントガム、ローカストビーンガム、キサンタンガム、グアーガム等のガム類；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等のセルロース誘導体；カルボシキビニルポリマー、アルキル変性カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体；ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。
【００４６】
防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル等のパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、１、２−ペンタンジオール、プロパンジオール、各種精油類、樹皮乾留物、大根発酵液、サトウキビ、トウモロコシ等の植物由来のエタノール又は１、３−ブチレングリコール等がある。
【００４７】
粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビ等）のパウダー、豆類（大豆、アズキ等）のパウダー等がある。
【００４８】
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２、４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。
【００４９】
抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ビタミンＥ及びその誘導体（例えば、ビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等）等がある。
【００５０】
美白剤としては、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、４−メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン（5、5'−ジプロピル−ビフェニル−2、2’−ジオール）、ヒドロキシ安息香酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、α−ヒドロキシ酸、ＡＭＰ（アデノシンモノホスフェイト、アデノシン１リン酸）等が挙げられ、これらを単独で配合しても、複数を組み合わせて配合しても良い。
【００５１】
上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレート等のコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシド等のコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウム等のアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシド、アスコルビルトコフェリルマレイン酸、アスコルビルトコフェリルリン酸Ｋ、ミリスチル３−グリセリルアスコルビン酸、カプリリル２−グリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基等）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステル等のＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−Ｏ−パルミテートナトリウム、グリセリルアスコルビン酸又はそのアシル化誘導体、ビスグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸グルセリン誘導体、Ｌ−アスコルビン酸リン酸アミノプロピル、Ｌ−アスコルビン酸のヒアルロン酸誘導体、３−Ｏ−Ｄラクトース−Ｌ−アスコルビン酸、イソステアリルアスコルビルリン酸塩等が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド）、α−アルブチン（ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド）等が、トラネキサム酸誘導体としては、トラネキサム酸エステル（例えば、トラネキサム酸ラウリルエステル、トラネキサム酸ヘキサデシルエステル、トラネキサム酸セチルエステル又はその塩）、トラネキサム酸のアミド体（例えば、トラネキサム酸メチルアミド）等が挙げられ、レゾルシノール誘導体としては、例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２、５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２、５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。
【００５２】
生理活性成分としては、例えば、胎盤抽出液、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、シソ抽出物、米糠抽出物又はその加水分解物、白芥子抽出物又はその加水分解物、白芥子の発酵物、シャクヤク抽出物又はその加水分解物、乳酸菌醗酵米、ムラサキシキブ抽出物、ハス種子抽出物又はその加水分解物、ハス種子発酵物、党参抽出物又はその加水分解物、ハトムギ加水分解物、ハトムギ種子発酵物、ローヤルゼリー発酵物、酒粕抽出物又はそれに含まれるセラミド、酒粕発酵物、パンダヌス・アマリリフォリウス抽出物、アルカンジェリシア・フラバ抽出物、カミツレ抽出物等が挙げられる。また、サンゴ草抽出物、イネの葉の抽出物又はその加水分解物、ナス（ハス、長ナス、賀茂ナス、米ナス等）抽出物又はその加水分解物、アンズ果実の抽出物、カタメンキリンサイ等の海藻の抽出物、アマモ等の海産顕花植物の抽出物、豆乳発酵物、クラゲ水、米抽出物又はその加水分解物、米醗酵エキス、発芽米抽出物又はその加水分解物、発芽米発酵物、黒豆抽出物又はその加水分解物、ダマスクバラの花の抽出物、タケノコの皮の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸等）、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、アラントイン、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナ抽出物、甘草抽出物、ニンジン抽出物、オタネニンジン抽出物又はその発酵物、紅参抽出物、ミツイシコンブ抽出物、ヘチマ抽出物、アナアオサ抽出物、モモ抽出物、桃仁抽出物、キウイ抽出物、ジュアゼイロ抽出物、パウダルコ樹皮抽出物、萱草（デイリリー）抽出物または発酵物、ハゴロモグサ抽出物、チェリモヤ抽出物、マンゴー抽出物、マンゴスチン抽出物、フノリ抽出物、烏龍茶抽出物、紅富貴抽出物、シラン抽出物、山椒果皮又は種皮の抽出物または加水分解物、ベニバナ花抽出物、カサブランカ抽出物、甘藷抽出物又はその発酵物、グアバ葉抽出物、ドクダミ抽出物、晩白柚抽出物、アロエ抽出物、イチジク花抽出物、リンゴ抽出物、ホワイトアスパラガス抽出物等がある。
【００５３】
次に、製造例、処方例及び試験例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下において、部はすべて重量部を、また％はすべて重量％を意味する。
【００５４】
製造例１．ハイビスカス抽出物の調製
ハイビスカス（Hibisucas sabdariffa L.）の花部５０ｇに精製水９５０ｇを加えて懸濁液を作り４０℃で２時間抽出して、抽出物溶液７２０ｇ（固形分濃度２．６５％） 
【００５５】
製造例２．ハイビスカス抽出物の加水分解物
ハイビスカス（Hibisucas sabdariffa L.）の花部５０ｇを加えて懸濁液を作り、この液にペクチンエステラーゼ１．０ｇ、グルコアミラーゼ０．１ｇ及びパパイン０．１ｇを加えた後４０℃で３時間、加水分解抽出処理を行った。その後、１時間加温して酵素を加熱失活させ、ろ過を行って酵素加水分解物溶液８１０ｇ（固形分濃度３．７８％）を得た。
【００５６】
製造例３．ハイビスカス発酵物の調製
ハイビスカス（Hibisucas sabdariffa L.）の花部５０ｇに精製水９５０ｇを加えて懸濁液を作り、８０〜９０℃で１時間加温して殺菌を行った。殺菌した懸濁液に乳酸菌（ラクトバシルス プランタラム）を１０８個／ｍＬ接種し、３７℃で３日間静置培養した。培養終了後培養液を加熱殺菌し、ろ過して乳酸菌発酵物溶液７３４ｇ（固形分濃度３．２４％）を得た。
【００５７】
製造例４．ヒマワリ新芽抽出物の調製
ヒマワリの新芽を乾燥し、乾燥物３６gに精製水と１,３−ブチレングリコールの混合溶媒（精製水と１,３−ブチレングリコール＝１：１）１０８０ｇを添加した。これを４℃で抽出を行った後ろ過し、褐色透明のヒマワリ新芽抽出物８８０ｇを得た（固形分濃度１．３％）。
【００５８】
製造例５．ヒマワリ新芽抽出物の調製
ヒマワリの新芽を乾燥し、乾燥物３６gに精製水と１,３−プロパンジオールの混合溶媒（精製水と１,３−ブチレングリコール＝１：１）１０８０ｇを添加した。これを４℃で抽出を行った後ろ過し、褐色透明のヒマワリ新芽抽出物８６４ｇを得た（固形分濃度１．１％）。
【００５９】
製造例６．クズの根の抽出物の調製
クズの根の粉末１ｋｇにエタノール１０Ｌに加えて加温抽出した。次に、得られた抽出液をろ過、濃縮後、合成吸着剤のカラムに吸着させ、エタノールで溶出することにより、プエラリンを高濃度含む溶液を回収した。さらに再結晶により、プエラリン濃度を高めた濃縮液を回収した。次に、濃縮液を乾燥して、褐色粉末４５ｇを得た。この粉末４０ｇに水とブチレングルコールの混合溶媒９６０ｇを加えて撹拌した後、ろ過し、濃褐色透明の抽出物溶液９２８ｇを得た（固形分量３．５１％）。
【００６０】
製造例７．クズの根の抽出物の調製
製造例６にて用いた抽出溶媒（エタノール）に代えてメタノールを用いるほかは、製造例６と同様の操作により、褐色粉末４３．０ｇを得た。この粉末４０ｇに水とブチレングルコールの混合溶媒９５８ｇを加えて撹拌した後、ろ過し、濃褐色透明の抽出物溶液９１５ｇを得た（固形分量：３．１０％）。
【００６１】
製造例８．クズの根の抽出物の調製
製造例６と同様の操作により、褐色透明の抽出物溶液９２０ｇを得た。この溶液に、活性炭６．７ｇを加え、１時間撹拌して溶液をろ過し、褐色透明の抽出物溶液８７６gを得た（固形分量３．１０％）。
【００６２】
処方例１．化粧水
［成分］                                                        部
オリーブ油                                                    １．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルアルコール                  ５．０
ブチルパラベン                                                ０．１
製造例１の抽出物                                              ５．０
エタノール                                                    ５．０
グリセリン                                                    ５．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
水酸化カリウム                                                  適量
精製水                                        全量が１００部となる量
香料                                                            適量
【００６３】
処方例２．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例２の加水分解物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６４】
処方例３．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例３の発酵物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６５】
処方例４．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例４の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６６】
処方例５．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例５の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６７】
処方例６．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例６の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６８】
処方例７．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例７の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００６９】
処方例８．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例８の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００７０】
処方例９．乳液
［成分］                                                        部
流動パラフィン                                                ６．０
ヘキサラン                                                    ４．０
ホホバ油                                                      １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート          １．０
親油型ステアリン酸グリセリル                                  １．０
大豆レシチン                                                  １．５
製造例３の発酵物                                              ３．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド                            ２．０
水酸化カリウム                                                ０．５
グリセリン                                                    ３．０
１、３−ブチレングリコール                                    ２．０
カルボキシメチルセルロース                                    ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム                                        ０．０１
精製水                                        全量が１００部となる量
香料                                                            適量
【００７１】
処方例１０．乳液
処方例９の成分中、製造例３の発酵物３．０に代えて、製造例４の抽出物３．０部を用いるほかは処方例９と同様にして乳液を得た。
【００７２】
処方例１１．乳液
処方例９の成分中、製造例３の発酵物３．０に代えて、製造例５の抽出物３．０部を用いるほかは処方例１１と同様にして乳液を得た。
【００７３】
処方例１２．乳液
処方例９の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてアルブチン３．０部を用いるほかは処方例９と同様にして乳液を得た。
【００７４】
処方例１３．乳液
処方例９の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてトラネキサム酸２．０部を用いるほかは処方例９と同様にして乳液を得た。
【００７５】
処方例１４．乳液
処方例９の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてニコチン酸アミド３．０部を用いるほかは処方例９と同様にして乳液を得た。
【００７６】
処方例１５．ローション
［成分］                                                        部
製造例３の発酵物                                            １０．０
エタノール                                                  １０．０
グリセリン                                                    ３．０
１、３−ブチレングリコール                                    ２．０
メチルパラベン                                                ０．２
クエン酸                                                      ０．１
クエン酸ナトリウム                                            ０．３
カルボキシビニルポリマー                                      ０．１
キサンタンガム                                                ０．１
香料                                                            適量
水酸化カリウム                                                  適量
精製水                                        全量が１００部となる量
【００７７】
処方例１６．エッセンス
［成分］                                                        部
エタノール                                                    ２．０
グリセリン                                                    ５．０
１、３−ブチレングリコール                                    ５．０
メチルパラベン                                                ０．１
ヒアルロン酸                                                  ０．１
製造例４の抽出物                                              ５．０
クエン酸                                                      ０．３
クエン酸ナトリウム                                            ０．６
精製水                                        全量が１００部となる量
【００７８】
処方例１７．エッセンス
処方例１６の成分中、製造例４の抽出物に代えて製造例８の抽出物５．０部を用いるほかは処方例１６と同様にしてエッセンスを得た。
【００７９】
実施例１８．リキッドファンデーション
［成分］                                                        部
ステアリン酸                                                  ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール                          ２．０
セトステアリルアルコール                                      ０．２
液状ラノリン                                                  ２．０
流動パラフィン                                                ３．０
ミリスチン酸イソプロピル                                      ８．５
プロピルパラベン                                              ０．０５
製造例６の抽出物                                              ５．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム                          ０．２
ベントナイト                                                  ０．５
プロピレングリコール                                          ４．０
トリエタノールアミン                                          １．１
メチルパラベン                                                ０．１
精製水                                        全量が１００部となる量
酸化チタン                                                    ８．０
タルク                                                        ４．０
着色顔料                                                        適量
【００８０】
処方例１９．ボディシャンプー
［成分］                                                        部
Ｎ−ラウロイルメチルアラニンナトリウム                      ２５．０
ヤシ油脂肪酸カリウム液（４０％）                            ２６．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                                ３．０
メチルパラベン                                                ０．１
製造例８の発酵物                                              ５．０
１，３−ブチレングリコール                                    ２．０
精製水                                        全量が１００部となる量
【００８１】
処方例２０．育毛料
［成分］                                                        部
グリチルリチン酸ジカリウム                                    ０．１
モノニトログアヤコールナトリウム                              ０．０２
塩酸ピリドキシン                                              ０．０３
ｌ−メントール                                                ０．８
タマサキツヅラフジ根エキス                                    ０．３
褐藻エキス                                                    ０．３
オタネニンジンエキス                                          ０．３
ゲンチアナエキス                                              ２．０
製造例４の抽出物                                              ３．５
トリメチルグリシン                                            ０．５
乳酸                                                          ０．２
１、３−ブチレングリコール                                  １０．０
フェノキシエタノール                                          ０．２
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                ０．４
Ｌ−アルギニン                                                  適量
エタノール                                                  ２０．０
精製水                                        全量が１００部となる量
【００８２】
処方例２１．ヘアシャンプー
［成分］                                                        部
Ｎ−ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム                    １０．０
ポリオキシエチレン（３）アルキルエーテル硫酸ナトリウム      ２０．０
ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン                          １０．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                                ４．０
メチルパラベン                                                ０．１
クエン酸                                                      ０．１
製造例３の発酵物                                              ２．０
１、３−ブチレングリコール                                    ２．０
精製水                                        全量が１００部となる量
【００８３】
実施例２２．ヘアコンディショナー
［成分］                                                        部
ポリオキシエチレン（１０）硬化ヒマシ油                        １．０
塩化ジステアリルジメチルアンモニウム                          １．５
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム                          ２．０
２−エチルヘキサン酸グリセリル                                １．０
セタノール                                                    ３．２
ステアリルアルコール                                          １．０
メチルパラベン                                                ０．１
製造例１の加水分解物                                          ２．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
精製水                                        全量が１００部となる量
【００８４】
処方例２３．飲料
［成分］                                                        部
製造例３の発酵物                                            １０．０
コラーゲン                                                    ８．０
クエン酸                                                      ０．１
甘味料（スクロース）                                          ０．０１
酸化防止剤（ビタミンＣ）                                      ０．０１
精製水                                        全量が１００部となる量
【００８５】
処方例２４．錠剤
［成分］                                                        部
製造例４の抽出物                                            ２０．０
ビタミンＣ                                                  ２０．０
脂肪酸エステル                                              １０．０
乳酸カルシウム                                              ２０．０
乳糖                                                        ３０．０
上記重量部の各成分を混合した後、加圧成形し、錠剤とした。
【００８６】
試験例１．ペリリピン合成抑制効果の評価
以下、本発明に係る抽出物、加水分解物又は発酵物の脂肪蓄積の抑制効果を、脂肪細胞内の脂肪滴周辺に存在するタンパク質［ペリリピン１（perilipin1）］の合成抑制効果により評価する。このペリリピン１が減少すると、脂肪滴数の減少及び脂肪滴サイズの縮小が生じることが知られていることから、ペリリピン１の合成抑制効果を評価する。
［試験方法］
マウス線維芽細胞(3T3-L1)を、10％FBS含有ダルベッコ変法イーグル最少必須培地（DMEM）［日水製薬株式会社］を入れた96穴マイクロプレートに1.5×104個／穴播種し、37℃、5.0％CO2の条件下で3日間プレ培養した後、分化誘導培地［10％FBS、0.5mM 3-イソブチル-1-メチルキサンチン(IBMX)、0.25μMデキサメタソン(DEX)、及び1.1μg/mLインスリンを混合したＤＭＥＭ］を添加後、さらに２日間培養した。その後、試料溶液として本発明に係る製造例２の酵素分解物、製造例３の発酵物、製造例４の抽出物のそれぞれを規定の濃度（溶液として）となるように調整した10％FBS含有DMEMに交換し、同条件でさらに５日間培養した。ここで、各試料溶液の濃度は、追添加するDMEMの全量に対して溶液として終濃度が1.0％となるように調整した。５日培養後、ペリリピン１の抗体を用いた免疫的検出を行った。すなわち、PBS(-)洗浄後、15％中性緩衝ホルマリン液を用いて細胞を３０分処理して固定、0.5％Triton X-100溶液で１時間浸透処理、５倍希釈ブロッキングワンＰ（ナカライテスク社）溶液で２時間処理によるブロッキングを行った後、ペリリピン１抗体を添加し、室温で１時間静置した。その後、PBS(-)洗浄し、蛍光ラベルした二次抗体を添加してさらに暗所で一定時間静置した。その後、PBS(-)洗浄し、蛍光強度の測定を行った。先ず二次抗体の蛍光ラベル（Alexa Fluor488）をEx＝485nm、Em＝520nmで、蛍光マイクロプレートリーダー（フルオロスキャンアセント、Thermo Fisher Scientific社製）を用いて測定し、その後、Hoechst33342によるＤＮＡ染色を行い、Ex＝355nm、Em＝460nmの測定を行った。それぞれの試験区のAlexa Fluor488の蛍光強度をHoechst33342の蛍光強度で割ることで、ペリリピン１の生成度合いを求めた。試料溶液に代えて30BGを添加した試料無添加の場合（対照）についても上記と同様の操作を行い、ここに得られたペリリピン１生成度合いに対する各試料添加時のペリリピン１生成度合いの相対値を求め、ペリリピン１生成量（％）とした。
【００８７】
試験例１の結果を表１に示す。
［表１］
2018008903.tif 000002
【００８８】
表１に示すように、本発明に係る製造例２の加水分解物、製造例３の発酵物及び製造例４の抽出物は、格段にすぐれたペリリピン合成抑制効果を有することが明らかになった。
【００８９】
試験例２．脂肪滴蓄積抑制評価
［実験方法］
マウス線維芽細胞(3T3-L1)を、10％FBS含有ダルベッコ変法イーグル最少必須培地(DMEM)[日水製薬株式会社]を入れた96穴マイクロプレートに1.5×104個／穴播種し、37℃、5.0％CO2の条件下で３日間プレ培養した後、分化誘導培地［10％FBS、0.5mM 3-イソブチル-1-メチルキサンチン(IBMX)、0.25μMデキサメタソン(DEX)、及び1.1μg/mLインスリンを混合したＤＭＥＭ］を添加後、さらに２日間培養した。その後、試料溶液として本発明に係る製造例２の酵素分解物、製造例３の発酵物、製造例４の抽出物及び製造例５の抽出物のそれぞれを規定の濃度（溶液として）となるように調整した10％FBS含有DMEMを追添加し、同条件でさらに５日間培養した。ここで、各試料溶液の濃度は、追添加するDMEMの全量に対して溶液として終濃度が0.5％、1.0％となるように調整した。５日培養後、オイルレッドO（和光純薬工業株式会社）を用いて細胞内の脂肪滴の染色を行った。すなわち、PBS(-)洗浄後、10％ホルマリン水溶液を用いて細胞を１０分処理して固定、60％イソプロパノール水溶液で１分間浸透処理を行った後、染色液（0.18％オイルレッドO含有60%イソプロパノール水溶液）を添加し、室温で30分間静置した。その後、60％イソプロパノール水溶液で洗浄し、100％イソプロパノールを加えてオイルレッドOを抽出し、吸光度ABS540nmをマイクロプレートリーダー(Model 680、バイオラッド社製)で測定し、これを脂肪滴蓄積量とした。また、別プレートでオイルレッドO染色をせずに同様の操作を行い、その後、Hoechst33342によるDNA染色を行い、Ex＝355nm、Em＝460nmの測定を行った。それぞれの試験区のABS540nmの吸光度をHoechst33342の蛍光強度で割ることで、脂肪滴の蓄積量を求めた。試料溶液に代えて30BGを添加した試料無添加の場合（対照）についても上記と同様の操作を行い、ここに得られた脂肪滴蓄積量に対する各試料添加時の脂肪滴蓄積量の相対値を求め、脂肪滴蓄積量（％）とした。
【００９０】
試験例２の結果を表２に示す。
［表２］
2018008903.tif 000003
【００９１】
表２に示すように、本発明に係る製造例２の加水分解物、製造例３の発酵物及び製造例４，５の抽出物は、格段にすぐれた脂肪滴蓄積抑制効果を有することが明らかになった。