(57)【要約】【課題】皮膚の修復機能を、有効に促進でき、さらに副作用を生じず安全で、かつ服用や摂取が容易な、皮膚修復機能促進用組成物およびそれを用いた飲食品を提供する。【解決手段】ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有する皮膚修復機能促進用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有することを特徴とする皮膚修復機能促進用組成物。
【請求項２】
ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有する、血液凝固作用、角質形成作用および線溶作用を有することを特徴とする皮膚修復機能促進用組成物。
【請求項３】
ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有する、
（１）フィブリノーゲン遺伝子発現抑制、フィブロブラスト・グロース・ファクター９（ＦＧＦ−９）遺伝子発現促進、およびトロンボポエチン遺伝子発現促進による血液凝固作用
（２）フィラグリン遺伝子発現促進による角質形成作用
（３）マトリクス・メタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）遺伝子発現促進、およびプラスミノーゲン・アクチベーター・インヒビター１（ＰＡＩ−１）遺伝子発現促進による線溶作用を有することを特徴とする皮膚修復機能促進用組成物。
【請求項４】
前記多糖類が、ラムノース、ガラクトース、グルコースを１：１：３のモル比で含み、かつリン酸を3〜7質量％含有することを特徴とする請求項１〜３記載の皮膚修復機能促進用組成物。
【請求項５】
前記組成物が飲食品であることを特徴とする請求項１〜４記載の皮膚修復機能促進用組成物。
【請求項６】
前記組成物が、ヨーグルトであることを特徴とする請求項１〜５記載の皮膚修復機能促進用組成物。
【請求項７】
ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有することを特徴とする血液凝固作用促進用組成物。
【請求項８】
ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有することを特徴とする角質形成作用促進用組成物。
【請求項９】
ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有することを特徴とする線溶作用促進用組成物。
【請求項１０】
ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有することを特徴とする皮膚修復機能促進用ヨーグルト。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、損傷した皮膚の修復機能促進用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
生体は恒常性を維持するために内外からの刺激に対して種々の機能を備えている。その一つに皮膚修復機能がある。皮膚の修復は血液凝固・線溶系と組織を修復する系から成るといわれている。化学薬品や物理刺激、紫外線等により皮膚組織が損傷を受けると、組織周辺の血管が出血し、様々な血液凝固因子が関与して血液凝固反応が起こり、瘡蓋を形成して出血が食い止められる。その後、損傷した組織が修復されると共に、線溶系が機能して血流の再開や瘡蓋の脱落が起こる。
【０００３】
一方、表皮の表層にある角質層は、外界からの刺激から、皮下組織を保護する機能を担っている。角質層が保護機能を発揮するためには、角質細胞の細胞質内がフィラグリンやケラチン、それらの分解産物などにより満たされている必要がある。フィラグリンは角質細胞の細胞質内を満たす主要な蛋白であり、顆粒層においてはフィラグリンの分解産物が保湿因子としても働くことから、フィラグリンは保護機能だけでなく、肌の水分保持にも重要な役割を果たしている。
【０００４】
したがって、この角質層が化学薬品や物理刺激、紫外線等により過度に損傷すると、修復が追いつかず、フィラグリンの合成力が不足すると、保湿力が低下して角質層が硬くなり、亀裂が生じるとともに肌荒れや乾燥、炎症、化膿等が進行して出血を起こすなど、皮膚の状態が悪化する。
【０００５】
ところで、副腎皮質ホルモンには、損傷した皮膚の炎症を抑える抗炎症作用、血管の壁をち密にして出血を防ぐ止血作用などが知られている。こうした副腎皮質ホルモンの作用を化学的に合成した薬として、酢酸コルチゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸フルドロコルチゾン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、プロピオン酸ベクロメタゾンなどがこれまでに開発されてきた。
【０００６】
一方、皮膚の改善や治療等を目的とした組成物や飲食品に、乳酸菌やその培養物を含有したものがある。これら組成物や飲食品に関する先行技術として、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）やこれを用いた培養物、およびこれにより産生された多糖類に関して、ストレス由来の皮膚血流低下改善用組成物（特許文献１）や、免疫調節機能を介した、抗アレルギーによる皮膚炎症の抑制作用等（非特許文献１）が報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００６−０６９９４０公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】日本農芸化学会 2014年度大会講演要旨集  p1485
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、上述の化学薬品は、比較的安全性が高いものの、習慣性や副作用を併せ持つことから、日常生活における一般的な皮膚機能修復に対して、頻繁に服用するのは好ましくなく、また、服用後その使用を中止するとリバウンドが起こり、かえって症状が悪化する場合さえあり、理想的ではない。
【００１０】
また、上記先行技術では、乳酸菌、その発酵物、および産生物と皮膚修復機能との関係については検討されていなかった。
【００１１】
そして、上記乳酸菌、その発酵物、および産生物が皮膚組織における血液凝固、角質形成、線溶に関わる遺伝子発現の調節作用を介して損傷修復機能を促進することは知られておらず、これらを利用して皮膚の修復力を向上させ、肌の状態を健康に保つという試みはいまだ報告されていない。
【００１２】
本発明は、このような事情に鑑みなされたもので、皮膚疾患や皮膚の炎症、裂傷およびその悪化を有効に予防・治療する事ができ、さらにアレルギーや副作用を生ずることなく安全であり、かつ服用や摂取が容易である、皮膚修復促進機能を有する組成物の提供をその目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記の目的を達成するため鋭意研究した結果、乳酸菌の一種として本出願人が寄託した特殊な菌株［ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC）により産生された多糖類に、血液凝固作用、角質形成作用、線溶（瘡蓋の離脱）作用を促進すること、また血液凝固作用はフィブリノーゲン遺伝子発現抑制作用、ＦＧＦ−９遺伝子発現促進作用およびトロンボポエチン遺伝子発現促進作用により促進されること、角質形成作用はフィラグリン遺伝子発現促進作用により促進されること、また、線溶作用はＭＭＰ−９遺伝子発現促進作用およびＰＡＩ−１遺伝子発現促進作用により促進されること、更にこれらの総合的な作用により皮膚修復機能が有意に促進することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１４】
すなわち、本発明は、以下の（１）から（１０）の、皮膚修復機能促進用組成物を要旨とするものである。
（１）ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有する皮膚修復機能促進用組成物。
（２）ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有する、血液凝固作用、角質形成作用および線溶作用を有する皮膚修復機能促進用組成物。
（３）ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有する、フィブリノーゲン遺伝子発現抑制、フィブロブラスト・グロース・ファクター９（ＦＧＦ−９）遺伝子発現促進およびトロンボポエチン遺伝子発現促進による血液凝固作用、フィラグリン遺伝子発現促進による角質形成作用並びにマトリクス・メタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）遺伝子発現促進およびプラスミノーゲン・アクチベーター・インヒビター１（ＰＡＩ−１）遺伝子発現促進による線溶作用を有する皮膚修復機能促進用組成物。
（４）前記多糖類が、ラムノース、ガラクトース、グルコースを１：１：３のモル比で含み、かつリン酸を3〜7質量％含有する前記（１）〜（３）記載の皮膚修復機能促進用組成物。
（５）前記組成物が飲食品である前記（１）〜（４）皮膚修復機能促進用組成物。
（６）前記組成物が、ヨーグルトである皮膚修復機能促進用組成物。
（７）ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有することを特徴とする血液凝固作用促進用組成物。
（８）ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有することを特徴とする角質形成作用促進用組成物。
（９）ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有することを特徴とする線溶作用促進用組成物。
（１０）ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC, FERM AP-20185）により産生された多糖類を有効成分として含有することを特徴とする皮膚修復機能促進用ヨーグルト。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC）により産生された多糖類を有効成分として含有する組成物は、従来の化学薬品のように副作用や習慣性がなく、血液凝固作用、角質形成作用、線溶作用を促進し、且つこれらの総合的な作用により皮膚修復機能を促進できる。
【００１６】
特に、上記多糖類が、ラムノース、ガラクトース、グルコースを１：１：３のモル比で含み、かつリン酸を3〜7質量％含有するものであると、本発明品としての諸機能が、より有意に発現されるようになる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】陰イオン交換樹脂TOYOPEARL DEAR-650Mによる、EPSを酸性多糖と中性多糖に分離した結果を示す図である。
【図２】ガスクロマトグラフGC-17AによるＥＰＳの糖組成を示す図である。
【図３】DB-225カラムおよび、EI検出器を装備したGC-MS装置 によるＥＰＳの構成糖の結合様式を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下、本発明を実施するための形態について説明する。本発明は、以下の記載に限定されない。
【００１９】
本発明の皮膚修復促進用組成物は、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスFC（Lactococcus lactis subsp. cremoris FC）により産生された多糖類を含有する培養物、または当該培養物から精製した多糖類を有効成分として含有するものである。
【００２０】
本発明において、皮膚の修復とは、化学薬品や物理刺激、紫外線等による皮膚組織の損傷時に起こる、血液の凝固、角質層の形成、線溶による瘡蓋の剥離を意味する。そして、耳介組織の厚さの測定結果と併せて修復促進作用の指標とする事ができる。このような皮膚組織の損傷は、例えば、トリニトロクロロベンゼン（ＴＮＣＢ）やラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、アセトンエーテル混液（ＡＥＷ）、ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）などの薬剤塗布により引き起こすことができる。
【００２１】
本発明において、血液の凝固作用は、フィブリノーゲン遺伝子発現抑制作用、ＦＧＦ−９遺伝子発現作用、およびトロンボポエチン遺伝子発現作用により、損傷した皮膚組織における止血が促進される。
【００２２】
本発明において、角質の形成は、フィラグリン遺伝子の発現により、損傷した皮膚組織における、表皮角質層の保湿成分の前駆物質の生成が促進される。
【００２３】
本発明において、線溶は、ＭＭＰ−９遺伝子発現促進作用、および、ＰＡＩ−１遺伝子発現促進作用によって、損傷した皮膚組織における瘡蓋の脱落が促進される。
【００２４】
本発明において、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス  ＦＣとは、本願出願人であるフジッコ株式会社が、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託しているラクトコッカス属に属する乳酸生産能力を有す球菌、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス  ＦＣ(Lactococcus lactis subsp. cremoris FC ,FERM AP-20185)をいう。
【００２５】
そして、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス  ＦＣにより生産された多糖類とは、その菌をあらかじめ乳酸菌の培養の常法に従って、任意の方法により培養することにより、その菌が産生する多糖類で、いわゆる菌体外多糖をいう。なお、培養に使用する培地中に、乳を含有させて培養することにより、その菌体外多糖が安定して産生されるようになることから、本発明の効果がより発揮されるため、好ましい。
【００２６】
また、上記乳としては、例えば、牛乳などの動物性のもの（脱脂粉乳であってもよい）や、豆乳のような植物性のものが用いられる。これらは単独であるいは二種以上併せて用いてもよい。なお、上記豆乳は、その原料として、例えば、油脂を含有した丸大豆、脱皮大豆、フレーク大豆などを用い、それらを加工することによって得ることができる。
【００２７】
なお、上記乳として、豆乳のみを用いる場合、そのままでは発酵が促されにくいことから、その１〜５重量％程度の割合で、ブドウ糖や乳糖を添加することが好ましい。また、上記乳として、豆乳のみを用いる場合でなくても、適宜、上記乳に、ブドウ糖，乳糖、果糖等の糖類を必要に応じて加えてもよい。
【００２８】
本発明における組成物の形態としては、上記の培養法により、食品中に多糖類を含有させる方法で調製した、ヨーグルトの様な発酵乳、飲料等を挙げることができ、健康食品、特定保健用食品、栄養補助食品もしくは皮膚修復促進作用を表示した食品等として使用できる。
【００２９】
また、上記の培養法により得られた培養物から、常法により、抽出、精製した多糖類を、既存の食品に添加したり、食品衛生上許容できる配合物、例えば、安定化剤、保存料、着色料、香料、ビタミン等の配合物を適宜添加し、混合し、常法により、錠剤、粒状、顆粒状、粉末状、カプセル状、液状、ゼリー状、クリーム状、飲料等の食品とすることもできる。
【００３０】
このような形態の、皮膚修復促進用組成物を含む食品を摂取することにより、皮膚修復促進が図られるため、本発明で得られる飲食品は、化学薬品や物理刺激、紫外線等により損傷した皮膚組織の修復、アトピー性皮膚炎や尋常性魚鱗癬などの予防、進行の防止などに寄与することが可能である。
【実施例】
【００３１】
以下に実施例について比較例と合わせて示し、本発明の詳細を具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３２】
まず、実施例および比較例に先立ち、以下に示すラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス  ＦＣにより生産された多糖類（以下、ＥＰＳとする。）を準備した。
１、乳酸菌の培養
牛乳にラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス ＦＣを3％接種し、30℃、24時間の静置培養を行った。
２、ＥＰＳの分画
20kgの牛乳発酵物に対し4%量の100%トリクロロ酢酸を混和しタンパク質を遠心分離（18890 x g,4℃,20min）した後、回収した上清に、4%量の100%トリクロロ酢酸を混和し再度タンパク質を遠心除去（18890 x g,4℃,20min）した。得られた上清に対して1.5倍量の冷EtOHを添加した後、析出物をスパテラで回収し、10%トリクロロ酢酸に溶解してタンパク質を遠心除去（18890 x g,4℃,20min）した。
MilliQ水に対する透析、凍結乾燥を4℃,3日間行った後、50mM Tris-HCl(pH8.5)に溶解し、陰イオン交換樹脂TOYOPEARL DEAR-650M(東ソー)を用いたカラム（φ1cm×10cm）を使用して中性多糖と酸性多糖の分離を行った（図１）。中性多糖は通過画分として回収し、酸性多糖はNaClを用いて0-1Mイオン強度勾配による溶出で回収した。
３、ＥＰＳの組成の解析
３−１）、構成糖の分析
EPS 0.25mgに90%ギ酸を加え(0.2w/v%)、加水分解（100℃、6時間）した。エバポレータで減圧乾固させてギ酸を除去した後、2MのTFAを加えて(0.2w/v%)加水分解（100℃、6時間）した。エバポレータで減圧乾固させてTFAを除去した。得られた加水分解物を水素化ホウ素ナトリウムで還元し、無水酢酸とピリジンを加えてアセチル化した。これをDB-225カラム（J&W Scientific,0.25mm×30ｍ）で分析した。装置はFID検出器を備えたガスクロマトグラフGC-17A（島津製作所）を用いた。
３−２）、リンの定量
前述の加水分解物したEPSを用いて、Fiske and Subbarow法により、リンの含有量を定量した。なお、リン酸 の重量％は(H2PO3)換算で算出した。
３−３）、メチル化分析
EPS 5mgをDMSO 0.5mLに懸濁し、オイルバス上で加熱（130℃、30min）と超音波処理（30min）を繰り返して溶解させた。水酸化ナトリウム50mgとよう化メチル0.25mLを加え、窒素ガス置換した後、加熱（110℃、2時間）してメチル化した。メチル化物はクロロホルム抽出により回収した。この工程を2回繰り返した後、Sephadex LH-20 (Pharmacia) カラムを用いてゲルろ過クロマトグラフィーを行い (溶離液: クロロホルム−メタノール＝2:1)、多糖画分を得た。得られたメチル化物は前述と同様の方法で加水分解物を行い、水素化ホウ素ナトリウムで還元した後、ピリジン0.2mLと無水酢酸0.2mLを加えて加熱（110℃、2時間）してアセチル化した。得られた部分メチル化アルジトールアセテートをクロロホルムに溶解し、1LをDB-225カラム (J&W Scientific, 0.25&#61549;m i.d.×30m) に導入し、EI検出器を装備したGC-MS装置 (GCMS-QP2010, 島津製作所)で分析した。キャリアガスはヘリウムを使用し、カラム入口圧100kPa (全流量34mL/min)、カラム温度は170℃ (1min)から210℃まで3℃ / minで昇温させ、気化室温度は230℃、検出器温度は230℃で分析した。
【００３３】
EPSの構成糖は、ラムノース、ガラクトース、グルコースで、構成糖は、ラムノース：ガラクトース：グルコース＝１：１：３であると推定された。(図２)。EPSのリンの定量を行った結果、リン酸 (H2PO3)量で、重量比で約3〜7%のリン酸を含むことが明らかとなった (表１)。
【表１】
2018168082.tif 000002
【００３４】
＜EPSを用いたマウスへの経口投与によるフィラグリン遺伝子発現促進作用確認試験＞
【００３５】
［実施例１］EPS投与群
TNCBの塗布、および、EPSの経口投与0.5 mg/kg を行った。（n=7）
【００３６】
［比較例１］Control群
TNCBの塗布のみ行い、EPSの経口投与を行わず、それに代えて、PBS 0.2mlを投与した（n=8）。
【００３７】
［参考例１］Positive Control群
TNCBの塗布、および、皮膚修復促進機能をもつ、プレドニゾロンの経口投与3mg/kgを行った（n=7）。
EPSおよびプレドニゾロンはそれぞれ、滅菌PBS 0.2mlに溶解して投与に用いた。
［対照群］Sham群
トリニトロクロロベンゼン（以下TNCB）の塗布およびEPSの経口投与を行わず、それに代えて、リン酸緩衝液（PBS） 0.2mlを投与した。（n=7）
【００３８】
実験スケジュール
Balb/cマウス（雄、6週齢、日本クレア社）２９匹を搬入後、AIN-93精製飼料を用いて7日間馴化してから体重の平均が均等になるようにして４群に分けた。試験開始から4日間、上記の投与物を連続してゾンデにより経口投与を行った。試験開始4日目に右耳に0.3% TNCBを20μlを塗布して耳介炎症を誘導した。また、左耳には対象としてアセトンを20μl塗布した。経口投与は6日目以降1日おきに、TNCB塗布は8日目以降1日おきに22日目まで実施した。23日目に解剖を行い、耳介組織を採取した。また試験期間中、皮膚の修復状態を評価するためにTNCB塗布前に耳介厚をノギスで測定した。
【００３９】
real-time PCRによる耳介フィラグリンmRNA発現量の測定
採取した耳介組織をRNA later（Ambion社）に浸漬した後、TRIzol試薬（Life Technologies社）によりRNAを回収した。回収したRNA0.5μgから、ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA remover（東洋紡）でcDNAを合成した。
このcDNAを鋳型とし、表２に示したプライマーを用いてreal-time PCR解析を実施した。機器はライトサイクラー（ロシュ）、PCR酵素はTHUNDERBIRD SYBR qPCR Mix（東洋紡）を用い、cDNA2.0μl、酵素5.0μl、10μMプライマーFw、Rv各0.4μL、滅菌水2.2μlを混合して10μlの反応系で実施した。結果はGAPDH遺伝子の発現量で補正し、control群の発現量を1.0として相対比で示した。
【００４０】
【表２】
2018168082.tif 000003
【００４１】
その結果、Sham群に比べてControl群でフィラグリン遺伝子の発現が増加し、EPS投与群および Positive Control群においてさらに増加する傾向が見られた。(表３)。さらに耳介の厚さはSham群に比べてControl群で有意に増加し、EPS投与群および Positive Control群においてはControl群に対して有意に低値を示した。(表４)
【００４２】
【表３】
2018168082.tif 000004
【００４３】
【表４】
2018168082.tif 000005
【００４４】
＜多糖を用いたマウスへの経口投与による血液凝固、線溶促進関連遺伝子発現促進作用確認試験＞
［実施例２］EPS投与群１
TNCBの塗布、および、EPSの経口投与0.05 mg/kg を行った。（n=7）
【００４５】
［実施例３］EPS投与群２
TNCBの塗布、および、EPSの経口投与0.5 mg/kg を行った。（n=7）
【００４６】
［比較例２］Control群
TNCBの塗布のみ行い、EPSの経口投与を行わず、それに代えて、PBS 0.2mlを投与した（n=8）
【００４７】
［参考例２］Positive Control群
TNCBの塗布、および、プレドニゾロンの経口投与3mg/kgを行った（n=7）
上記EPSおよびプレドニゾロンはそれぞれ、滅菌PBS 0.2mlに溶解して投与に用いた。
【００４８】
［対照群］Sham群
トリニトロクロロベンゼン（以下TNCB）の塗布およびEPSの経口投与を行わず、それに代えて、リン酸緩衝液（PBS） 0.2mlを投与した。（n=7）
【００４９】
実験スケジュール
Balb/cマウス（雄、6週齢、日本クレア社）３６匹を搬入後、AIN-93精製飼料を用いて、6日間馴化してから実験を行った。動物の群分けは体重の平均が均等になるようにして５群に分けた。試験開始から4日間、上記の投与物を連続してゾンデにより経口投与を行った。試験開始4日目に右耳に0.3% TNCBを20μlを塗布して耳介炎症を誘導した。また、左耳には対象としてアセトンを20μl塗布した。経口投与は6日目以降1日おきに、TNCB塗布は8日目以降1日おきに14日目まで実施した。15日目に解剖を行い、耳介組織を採取した。また試験期間中、皮膚の修復状態を評価するためにTNCB塗布前に耳介厚をノギスで測定した。
【００５０】
＜採血、バイオマーカー検査＞
ジエチルエーテルによる麻酔後、26Gx1/2の注射針をつけてヘパリンNa処理をした1mlシリンジを用いて下大静脈より採血を行った。これを10,000rpm、10min、4℃で遠心し血漿を得た。血漿の保存は-80℃で行い、採取した血漿の一部を群ごとにプールした後、チャールスリバー社においてMAPs検査を行い、フィブリノーゲン遺伝子、ＦＧＦ−９遺伝子、トロンボポエチン遺伝子、ＭＭＰ−９遺伝子、および、ＰＡＩ−１遺伝子の含量を測定した。
【００５１】
その結果、Control群に対してEPS投与群１、およびEPS投与群２においてはフィブリノーゲン遺伝子の発現が低下する傾向が見られた。また、ＦＧＦ−９遺伝子、トロンボポエチン遺伝子、ＭＭＰ−９遺伝子、および、ＰＡＩ−１遺伝子は増加する傾向が認められた。(表５)。さらに耳介の厚さはSham群に比べてControl群で有意に増加し、EPS投与群および Positive Control群においてはControl群に対して有意に低値を示した。(表６)
【００５２】
【表５】
2018168082.tif 000006
【００５３】
【表６】
2018168082.tif 000007
【産業上の利用可能性】
【００５４】
本発明の組成物およびそれを用いた飲食品は皮膚修復機能促進作用用途において好適に用いられる。
【図１】
2018168082.tif 000008
【図２】
2018168082.tif 000009
【図３】
2018168082.tif 000010