(57)【要約】      （修正有）【課題】生体膜および血漿リポタンパク質の主なリン脂質成分であるスフィンゴミエリンの工業的および経済的な代替合成法に関わる合成中間体のＤ−エリトロ−スフィンゴシンを合成する方法の提供。【解決手段】Ｌ−セリンエステルを出発原料として、Ｎ−Ｂｏｃ保護化後、ベンゼンスルホン酸の存在下で、前記Ｂｏｃ保護されたＬ−セリンエステルを、２，２−ジメトキシプロパンと反応させて（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸エステルを調製し、以降４工程を経てＤ−エリトロ−スフィンゴシンを合成する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを合成するための方法であって、
ａ）以下の構造：
【化１】
2018168171.tif 000055
（式中、Ｒが、Ｃ１〜５アルキル基、またはその塩である）を有するＬ−セリンエステルのアミノ基を、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で保護して、Ｂｏｃ保護されたＬ−セリンエステルを得る工程と；
ｂ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸の対応するＣ１〜Ｃ５アルキルエステルを得るのに有効な条件下で、ベンゼンスルホン酸の存在下で、前記Ｂｏｃ保護されたＬ−セリンエステルを、２，２−ジメトキシプロパンと反応させる工程と；
ｃ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシ−ホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを得るのに有効な条件下で、ｎ−ブチルリチウムの存在下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸の前記対応するＣ１〜Ｃ５アルキルエステルを、メチルホスホン酸ジメチルと反応させる工程と；
ｄ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを得るのに有効な条件下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシ−ホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを、１−テトラデカナールと反応させる工程と；
ｅ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを得るのに有効な条件下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを、水素化ホウ素ナトリウムおよび三塩化セリウムと反応させる工程と；
ｆ）Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンの前記ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基を除去する工程と
を含む方法。
【請求項２】
Ｒがメチル基である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを合成するための方法であって、
ａ）（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−エチル−（（２−ヒドロキシピナン−３−イレン）アミノ）アセテートを得るのに有効な条件下で、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−（＋）−２−ヒドロキシ−３−ピナノンを、エチルグリシネートと反応させる工程と；
ｂ）（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−エチル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエートの一方または両方を得るのに有効な条件下で、クロロチタントリイソプロポキシドおよびトリエチルアミンの存在下で、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−エチル−（（２−ヒドロキシピナン−３−イレン）アミノ）アセテート（化合物ＩＩＩｂ）を、２−（Ｅ）−ヘキサデセン−１−アールと反応させる工程と；
ｃ）（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−エチル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−プロピル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートの一方または両方を得るのに有効な条件下で、（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−エチル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエートの一方または両方を、塩酸と反応させる工程と；
ｄ）Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−エチル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−プロピル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートの一方または両方を、水素化ホウ素ナトリウムと反応させる工程と；
ｅ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、パルミチン酸と反応させる工程と
を含む方法。
【請求項４】
Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、脂肪酸と反応させる工程と；
ｂ）１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−セラミドを、トリチル化試薬と反応させる工程と；
ｃ）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、ベンゾイル化試薬と反応させる工程と；
ｄ）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドの前記トリチル基を除去して、Ｄ−エリトロ−３−Ｏ−ベンゾイル−セラミドを得る工程と；
ｅ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）と反応させる工程と；
ｆ）前記Ｎ−アシル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｇ）前記Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、Ｎ−アシル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの前記ベンゾイル基を除去する工程と
を含む方法。
【請求項５】
Ｄ−エリトロ−３−Ｏ−ベンゾイル−セラミドを合成するための方法であって、
ａ）１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−セラミドを、トリチル化試薬と反応させる工程と；
ｂ）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、ベンゾイル化試薬と反応させる工程と；
ｃ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドの前記トリチル基を除去する工程と
を含む方法。
【請求項６】
前記脂肪酸がパルミチン酸である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記Ｄ−エリトロ−セラミドが、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンである、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記トリメチルアミンが、液体として加えられる、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
工程ｂにより、約５％未満の１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドが得られる、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
工程ａにより、約５％未満の１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドが得られる、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）と反応させる工程と；
ｂ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを、トリメチルアミンと反応させて、前記３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得る工程と；
ｃ）前記Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドの前記ベンゾイル基を除去する工程と
を含む方法。
【請求項１２】
前記Ｄ−エリトロ−３−Ｏ−ベンゾイルセラミドが、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記トリメチルアミンが、液体として加えられる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記トリメチルアミンが、添加の前に、その沸点未満に冷却される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを、脂肪酸と反応させる工程と；
ｂ）１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを得るのに有効な条件下で、前記Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを、トリチル化剤と反応させる工程と；
ｃ）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを得るのに有効な条件下で、前記Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−トリチル−ジヒドロセラミドを、ベンゾイル化剤と反応させる工程と；
ｄ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドの前記トリチル基を除去する工程と；
ｅ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）ジヒドロセラミドを得るのに有効な条件下で、前記３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）と反応させる工程と；
ｆ）Ｎ−アシル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、前記３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）ジヒドロセラミドを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｇ）前記Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、前記Ｎ−アシル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの前記ベンゾイル基を除去する工程と
を含む方法。
【請求項１６】
Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−１−（（１，３，２−ジオキサホスホラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エン−２−イル）パルミトイルアミドを得るのに有効な条件下で、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、ハロ亜リン酸エチレンと反応させる工程と；
ｂ）２−ブロモエチル（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデカ−４−エン−１−イル）ホスホロブロミデートを得るのに有効な条件下で、Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−１−（（１，３，２−ジオキサホスホラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エン−２−イル）パルミトイルアミドを、臭素と反応させる工程と；
ｃ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、２−ブロモエチル（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデカ−４−エン−１−イル）ホスホロブロミデートを、トリメチルアミンと反応させる工程と
を含む方法。
【請求項１７】
前記ハロ亜リン酸エチレンが、クロロ亜リン酸エチレンである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（１，３，２−ジオキサホスホラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシオクタデカン−２−イル）パルミトアミドを得るのに有効な条件下で、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを、クロロ亜リン酸エチレンと反応させる工程と；
ｂ）２−ブロモエチル（（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデシル）ホスホロブロミデートを得るのに有効な条件下で、Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（１，３，２−ジオキサホスホラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシオクタデカン−２−イル）パルミトアミドを、臭素と反応させる工程と；
ｃ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、２−ブロモエチル（（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデシル）ホスホロブロミデートを、トリメチルアミンと反応させる工程と
を含む方法。
【請求項１９】
前記ハロ亜リン酸エチレンが、クロロ亜リン酸エチレンである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２０】
Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）と反応させる工程と；
ｂ）Ｎ−アシル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｃ）前記Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、前記Ｎ−アシル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの前記ベンゾイル基を除去する工程と
を含む方法。
【請求項２１】
前記３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドが、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
工程ａの前に：
１）Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、脂肪酸と反応させる工程と；
２）Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−トリチル−セラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−セラミドを、トリチル化剤と反応させる工程と；
３）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、ベンゾイル化剤と反応させる工程と；
４）Ｄ−エリトロ−３−Ｏ−ベンゾイル−セラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドの前記トリチル基を除去する工程と
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記脂肪酸がパルミチン酸である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２４】
前記トリメチルアミンが、液体として加えられる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
工程２）により、約５％未満の１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドが得られる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
構造：
【化２】
2018168171.tif 000056
【化３】
2018168171.tif 000057
【化４】
2018168171.tif 000058
【化５】
2018168171.tif 000059
【化６】
2018168171.tif 000060
【化７】
2018168171.tif 000061
（式中、Ａｃが、３〜３６個の炭素および０〜６個の炭素−炭素二重結合を有する脂肪酸残基であり；
Ｒが、Ｃ１〜５アルキル基である）を有する化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
先行出願の参照
本出願は、それぞれの全体が参照により本明細書に援用される、２０１３年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／８０１，６４１号、および２０１３年７月２３日に出願された欧州特許出願第１３３０６０５６．６号の利益を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
スフィンゴミエリンは、生体膜および血漿リポタンパク質の主なリン脂質成分である。スフィンゴミエリンは、セラミドコア（アミド結合を介して脂肪酸に結合されたスフィンゴシン）およびホスホリルコリン頭部基（式１、左）からなる。ジヒドロスフィンゴミエリンは、スフィンゴミエリンの飽和同族体であり、飽和セラミドコア、すなわち、アミド結合を介して脂肪酸に結合されたジヒドロスフィンゴシン（式Ｉ、右）を有する。
【化１】
2018168171.tif 000002
【０００３】
天然のスフィンゴミエリンに典型的に見られるスフィンゴシンは、Ｄ−エリトロの立体化学的配置を有する不飽和炭化水素鎖を有するＤ−エリトロ−スフィンゴシン１８−炭素アミノアルコールである。このスフィンゴシンのＩＵＰＡＣ名は、（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−２−アミノオクタデカ−４−エン−１，３−ジオール（化合物Ａ）である。ジヒドロスフィンゴシン、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンは、ＩＵＰＡＣ名（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノオクタデカン−１，３−ジオール（化合物Ｂ）を有するその飽和同族体である。
【０００４】
市販のスフィンゴミエリンは、通常、天然のスフィンゴミエリンの混合物を含む天然産物である。この混合物の実際の組成は、生物学的供給源に応じて変化し、様々な脂肪酸鎖長を含有する。Ｎ−パルミトイル−スフィンゴミエリンは、天然のスフィンゴミエリンの主成分である。
【０００５】
ＩＵＰＡＣ名Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−１，３−ジヒドロキシオクタデカ−４−エン−２−イル）パルミトアミドを有する、パルミトイルスフィンゴミエリンの異性体の１つであるＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｃ）は、主な天然の異性体であると考えられる。その対応するジヒドロスフィンゴミエリンである、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物Ｄ）は、ＩＵＰＡＣ名（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデシル（２−（トリメチルアンモニオ）エチル）ホスフェートを有する。
【化２】
2018168171.tif 000003
【０００６】
スフィンゴミエリンのこの天然源の工業的におよび経済的に関連する合成の代替手段は、まだ開発されていない。当該技術分野において公知の合成経路は、スフィンゴミエリンの大規模合成、特に、１２〜２５個の炭素を有する脂肪酸による大規模合成に有用ではなかった。
【０００７】
セラミドＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ｅ）およびＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物Ｆ）はそれぞれ、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンおよびＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンの合成の中間体である。
【化３】
2018168171.tif 000004
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の概要
一実施形態において、本発明は、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを合成するための方法であって、
ａ）以下の構造：
【化４】
2018168171.tif 000005
（式中、Ｒが、Ｃ１〜５アルキル基、またはその塩である）を有するＬ−セリンエステルのアミノ基を、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で保護して、Ｂｏｃ保護されたＬ−セリンエステルを得る工程と；
ｂ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸の対応するＣ１〜Ｃ５アルキルエステルを得るのに有効な条件下で、ベンゼンスルホン酸の存在下で、Ｂｏｃ保護されたＬ−セリンエステルを、２，２−ジメトキシプロパンと反応させる工程と；
ｃ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシ−ホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを得るのに有効な条件下で、ｎ−ブチルリチウムの存在下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸の対応するＣ１〜Ｃ５アルキルエステルを、メチルホスホン酸ジメチル（dimethyl methylphosponate）と反応させる工程と；
ｄ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを得るのに有効な条件下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシ−ホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを、１−テトラデカナールと反応させる工程と；
ｅ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを得るのに有効な条件下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを、水素化ホウ素ナトリウムおよび三塩化セリウムと反応させる工程と；
ｆ）Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンのｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基を除去する工程と
を含む方法を提供する。
【０００９】
さらなる実施形態において、本発明は、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを合成するための方法であって、
ａ）（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−エチル−（（２−ヒドロキシピナン−３−イレン）アミノ）アセテートを得るのに有効な条件下で、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−（＋）−２−ヒドロキシ−３−ピナノンを、エチルグリシネートと反応させる工程と；
ｂ）（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−エチル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエートの一方または両方を得るのに有効な条件下で、クロロチタントリイソプロポキシドおよびトリエチルアミンの存在下で、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−エチル−（（２−ヒドロキシピナン−３−イレン）アミノ）アセテート（化合物ＩＩＩｂ）を、２−（Ｅ）−ヘキサデセン−１−アールと反応させる工程と；
ｃ）（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−エチル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−プロピル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートの一方または両方を得るのに有効な条件下で、（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−エチル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエートの一方または両方を、塩酸と反応させる工程と；
ｄ）Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−エチル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−プロピル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートの一方または両方を、水素化ホウ素ナトリウムと反応させる工程と；
ｅ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、パルミチン酸と反応させる工程と
を含む方法を提供する。
【００１０】
さらに別の実施形態において、本発明は、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、脂肪酸と反応させる工程と；
ｂ）１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−セラミドを、トリチル化試薬と反応させる工程と；
ｃ）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、ベンゾイル化試薬と反応させる工程と；
ｄ）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドのトリチル基を除去して、Ｄ−エリトロ−３−Ｏ−ベンゾイル−セラミドを得る工程と；
ｅ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）と反応させる工程と；
ｆ）Ｎ−アシル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｇ）Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、Ｎ−アシル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンのベンゾイル基を除去する工程と
を含む方法を提供する。
【００１１】
特定の実施形態において、本発明は、Ｄ−エリトロ−３−Ｏ−ベンゾイル−セラミドを合成するための方法であって、
ａ）１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−セラミドを、トリチル化試薬と反応させる工程と；
ｂ）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、ベンゾイル化試薬と反応させる工程と；
ｃ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドのトリチル基を除去する工程と
を含む方法を提供する。
【００１２】
さらに別の実施形態において、本発明は、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）と反応させる工程と；
ｂ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｃ）Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドのベンゾイル基を除去する工程と
を含む方法を提供する。
【００１３】
さらに別の実施形態において、本発明は、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを、脂肪酸と反応させる工程と；
ｂ）１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを、トリチル化剤と反応させる工程と；
ｃ）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを、ベンゾイル化剤と反応させる工程と；
ｄ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドのトリチル基を除去する工程と；
ｅ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）ジヒドロセラミドを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）と反応させる工程と；
ｆ）Ｎ−アシル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）ジヒドロセラミドを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｇ）Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、Ｎ−アシル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンのベンゾイル基を除去する工程と
を含む方法を提供する。
【００１４】
さらに別の実施形態において、本発明は、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−１−（（１，３，２−ジオキサホスホラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エン−２−イル）パルミトイルアミドを得るのに有効な条件下で、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、ハロ亜リン酸エチレンと反応させる工程と；
ｂ）２−ブロモエチル（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデカ−４−エン−１−イル）ホスホロブロミデートを得るのに有効な条件下で、Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−１−（（１，３，２−ジオキサホスホラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エン−２−イル）パルミトイルアミドを、臭素と反応させる工程と；
ｃ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、２−ブロモエチル（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデカ−４−エン−１−イル）ホスホロブロミデートを、トリメチルアミンと反応させる工程と
を含む方法を提供する。
【００１５】
特定の実施形態において、本発明は、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（１，３，２−ジオキサホスホラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシオクタデカン−２−イル）パルミトアミドを得るのに有効な条件下で、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを、クロロ亜リン酸エチレンと反応させる工程と；
ｂ）２−ブロモエチル（（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデシル）ホスホロブロミデートを得るのに有効な条件下で、Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（１，３，２−ジオキサホスホラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシオクタデカン−２−イル）パルミトアミドを、臭素と反応させる工程と；
ｃ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、２−ブロモエチル（（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデシル）ホスホロブロミデートを、トリメチルアミンと反応させる工程と
を含む方法を提供する。
【００１６】
さらなる実施形態において、本発明は、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）と反応させる工程と；
ｂ）Ｎ−アシル−３−Ｄ−エリトロ−ベンゾイル−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｃ）Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−Ｄ−エリトロ−ベンゾイル−スフィンゴミエリンのベンゾイル基を除去する工程と
を含む方法を提供する。
【００１７】
さらに別の実施形態において、本発明は、本発明の方法のための中間体として有用な以下の化合物：
【化５】
2018168171.tif 000006
【化６】
2018168171.tif 000007
【化７】
2018168171.tif 000008
【化８】
2018168171.tif 000009
（式中、Ａｃが、３〜３６個の炭素および０〜６個の炭素−炭素二重結合を有する脂肪酸残基であり；
Ｒが、Ｃ１〜５アルキル基である）を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】天然の卵スフィンゴミエリンの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図２】本発明の方法にしたがって合成されるＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図３】本発明の方法にしたがって合成されるＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図４】Ｒ−メトキシフェニル(methoxyphenil)酢酸と天然の卵スフィンゴミエリンとの反応混合物から採取された試料の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図５】Ｒ−メトキシフェニル(methoxyphenil)酢酸と本発明の方法にしたがって合成されるＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンとの反応混合物から採取された試料の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図６】Ｒ−メトキシフェニル酢酸と本発明の方法にしたがって合成されるＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンとの反応混合物から採取された試料の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図７】１当量の卵スフィンゴミエリンおよびＲ−（−）−ＭＰＡメトキシフェニル酢酸（Ｒ−ＭＰＡ）とＳ−（＋）−メトキシフェニル酢酸（Ｓ−ＭＰＡ）との１．２当量のラセミ混合物、１．２当量のジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、および触媒量の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（下部）の反応混合物から採取された試料の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルおよびＲ−ＭＰＡ（上部）およびＳ−ＭＰＡ（真ん中）エステルにおけるＨ２水素ピークの選択励起を示す１Ｄ−ＴＯＣＳＹ（１次元全相関分光法(1 Dimensional-Total Correlation Spectroscopy)）スペクトルである。
【図８】粗製のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＶＩｃ）の薄層クロマトグラフィープレートの写真である。「粗生成物」と記されたカラムにおいて、「Ａ」として特定されたスポットは、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ｅ）であり、「Ｂ」として特定されたスポットは、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＶＩｃ）であり、「Ｃ」として特定されたスポットは、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（ベンゾイル基の移動の生成物）であり、「Ｄ」として特定されたスポットは、トリフェニルメタノール（トリチル−ＯＨ）であり、「Ｅ」として特定されたスポットは、Ｎ−パルミトイル−１，３−Ｏ，Ｏ−ジベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
発明の詳細な説明
本発明は、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法を提供する。本発明は、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンの合成のための方法も提供する。本発明は、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを合成するための方法も提供する。本発明は、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンの合成のための方法も提供する。本発明は、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンおよびＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを合成するための方法も提供する。
【００２０】
本発明は、キログラム規模でＤ−エリトロ−スフィンゴシンを合成するための方法も提供する。特定の実施形態において、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンは、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンである。
【００２１】
本発明は、キログラム規模でＤ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを合成するための方法も提供する。特定の実施形態において、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンは、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンである。
【００２２】
本発明は、スフィンゴミエリンを合成するための方法を提供する。本方法は、実質的に鏡像異性的に純粋な化合物の大規模な合成および実質的に鏡像異性的に純粋な中間体の使用を可能にする。「実質的に鏡像異性的に純粋な」化合物は、約１０ｍｏｌ％以下のその対応する反対の鏡像異性体、別の実施形態において、約５ｍｏｌ％以下のその対応する反対の鏡像異性体、別の実施形態において、約２ｍｏｌ％以下のその対応する反対の鏡像異性体、別の実施形態において、約１ｍｏｌ％以下のその対応する反対の鏡像異性体、および別の実施形態において、約０．１ｍｏｌ％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。ある実施形態において、本発明は、１２〜２５個の炭素の脂肪酸鎖長を有するスフィンゴミエリンを調製するための方法を提供する。
【００２３】
本発明は、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法を提供する。本発明の特定の実施形態において、Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、好適なＬ−セリンエステル（メチル、エチル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチルなど）を用いて、大きい、商業的に関連する規模で合成され得る。本発明の方法は、Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成に有用である。
【００２４】
本発明は、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンの合成に有用な方法も提供する。
【００２５】
本発明は、中間体として有用な化合物を含む、本明細書に記載される方法を用いて合成可能な化合物も提供する。
【００２６】
本発明は、本明細書に開示される方法の中間体または生成物を合成するのに有用な、本明細書に開示される方法の各個別の工程をさらに提供する。
【００２７】
本明細書に記載されるように、スフィンゴミエリンは、極性頭部基に結合されたセラミドコアを有する。
【００２８】
セラミドコアは、アミド結合を介して脂肪酸に結合されたスフィンゴシンを含む。「セラミド−Ｃｎ」という用語が使用される場合、ｎは整数であり、脂肪酸残基中の炭素（Ｃ）の数を指し、例えば、セラミド−Ｃ１６は、パルミトイルなどの、１６−炭素脂肪酸残基を有するセラミドコアを指し、セラミド−Ｃ１８は、ステアロイルなどの、１８−炭素脂肪酸残基を有するセラミドコアを指す。
【００２９】
「セラミド」または「セラミドコア」が、脂肪酸炭素鎖の長さを特定せずに使用される場合、脂肪酸鎖炭素が、任意の好適な長さであり得ることが理解されるべきである。
【００３０】
本明細書において使用される際、「スフィンゴミエリン」という用語は、ホスホリルコリン官能基に結合されたセラミドコアを表す。
【００３１】
脂肪酸は、飽和または不飽和のいずれかであり得る長い脂肪族末端を有するカルボン酸である。不飽和脂肪酸は、１つまたは複数の炭素−炭素二重結合を有し、各炭素−炭素二重結合は、シスまたはトランス配置で存在し得る。脂肪酸残基は、脂肪酸から、脂肪酸のカルボキシル基の−ＯＨ基を差し引いたものである。本明細書において使用される際、「Ａｃ」という用語は、脂肪酸残基を指す。
【００３２】
本発明の特定の実施形態において、脂肪酸または脂肪酸残基は、３〜３６個の炭素および０〜６個の炭素−炭素二重結合を有する。本発明の特定の実施形態において、脂肪酸または脂肪酸残基は、４〜２８個の炭素および０〜６個の炭素−炭素二重結合を有する。本発明のさらなる実施形態において、脂肪酸または脂肪酸残基は、１１〜２５個の炭素および０〜６個の炭素−炭素二重結合を有する。本発明のさらに他の実施形態において、脂肪酸または脂肪酸残基は、１１〜２５個の炭素および１個または２個の炭素−炭素二重結合を有する。本発明のさらなる実施形態において、脂肪酸または脂肪酸残基は、１４〜２０個の炭素および０〜６個の炭素−炭素二重結合を有する。本発明のさらに他の実施形態において、脂肪酸または脂肪酸残基は、１５〜１７個の炭素および０〜６個の炭素−炭素二重結合を有する。本発明の特定の実施形態において、脂肪酸は、パルミチン酸であり、脂肪酸残基は、パルミトイルである。
【００３３】
また、好適な脂肪酸としては、以下に限定はされないが、ω−３、またはω−６、またはω−９脂肪酸などのオメガ脂肪酸；および以下に限定はされないが、リノール酸（ＬＡ）、α−リノレン酸（ＡＬＡ）、ｎ−３脂肪酸、例えば、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの必須脂肪酸が挙げられる。
【００３４】
本発明に有用な好適な脂肪酸としては、以下に限定はされないが、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデシル酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデシル酸、アラキジン酸、ヘンイコシル酸、ベヘン酸、トリコシル酸、リグノセリン酸、ペンタコシル酸(pentacosylic acid)、セロチン酸、ヘプタコシル酸(heptacosylic acid)、モンタン酸、ノナコシル酸(nonacosylic acid)、メリシン酸、ヘントリアコンチル酸(henatriacontylic acid)、ラッセル酸、フィリン酸(psyllic acid)、ゲダ酸、セロプラスチン酸、ヘキサトリアコンチル酸(hexatriacontylic acid)、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノエライジン酸、α−リノレン酸、およびエルカ酸が挙げられる。
【００３５】
脂肪酸が、一価不飽和脂肪酸である場合、脂肪酸は、以下に限定はされないが、オレイン酸、エライジン酸、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、およびエルカ酸などのシス−またはトランス−一価不飽和脂肪酸であり得る。
【００３６】
本明細書において使用される際、「Ｃ１３Ｈ２７−」および「Ｃ１５Ｈ３１−」はそれぞれ、ＣＨ３（ＣＨ２）１２−およびＣＨ３（ＣＨ２）１４−を意味する。
【００３７】
本明細書において使用される際、「アシル」という用語は、一般式−Ｃ（Ｏ）Ｒの基を指し、ここで、Ｒが、２〜３５個の炭素および０〜６個の炭素−炭素二重結合を有するアルキル基である。
【００３８】
本発明の特定の化合物は、塩の形態であり得る。ある実施形態において、塩は、薬学的に許容できる塩である。薬学的に許容できる塩は、例えば、酸−付加塩および塩基−付加塩を含む。酸−付加塩を形成する酸は、有機酸または無機酸であり得る。塩基−付加塩を形成する塩基は、有機塩基または無機塩基であり得る。ある実施形態において、薬学的に許容できる塩は、金属塩である。ある実施形態において、薬学的に許容できる塩は、アンモニウム塩である。
【００３９】
酸−付加塩は、本発明の化合物の遊離塩基形態への酸の付加から生じ得る。ある実施形態において、酸は、有機である。ある実施形態において、酸は、無機である。好適な酸の非限定的な例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、亜硝酸、硫酸、亜硫酸、リン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、乳酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、酒石酸、アスコルビン酸、ゲンチジン(gentisinic)酸、グルコン酸、グルクロン(glucaronic)酸、サッカリン(saccaric)酸、ギ酸、安息香酸、グルタミン酸、パントテン酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、フマル酸、コハク酸、クエン酸、シュウ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、グリコール酸、リンゴ酸、ケイ皮酸、マンデル酸、２−フェノキシ安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、エンボン酸、フェニル酢酸、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、４−メチルベンゼンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、２−ホスホグリセリン酸、３−ホスホグリセリン酸、グルコース−６−リン酸、およびアミノ酸が挙げられる。
【００４０】
好適な酸−付加塩の非限定的な例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、硫酸塩、亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、炭酸塩、重炭酸塩、ニコチン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、４−アミノサリチル酸塩、酒石酸塩、アスコルビン酸塩、ゲンチジン酸塩、グルコン酸塩、グルクロン(glucaronate)酸塩、サッカリン(saccarate)酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、パントテン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、メチルマレイン酸塩、グリコール酸塩、リンゴ酸、ケイ皮酸塩、マンデル酸塩、２−フェノキシ安息香酸塩、２−アセトキシ安息香酸塩、エンボン酸塩、フェニル酢酸塩、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、エタン−１，２−ジスルホン酸塩、４−メチルベンゼンスルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩、２−ホスホグリセリン酸塩、３−ホスホグリセリン酸塩、グルコース−６−リン酸塩、およびアミノ酸塩が挙げられる。
【００４１】
金属塩は、カルボキシル基を有する本発明の化合物への無機塩基の付加から生じ得る。無機塩基は、例えば、水酸化物イオン、炭酸イオン、重炭酸イオン、またはリン酸イオンなどの塩基性対イオンと対になった金属カチオンからなる。金属は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、遷移金属、または主族金属であり得る。好適な金属の非限定的な例としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、セシウム、セリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、カルシウム、ストロンチウム、コバルト、チタン、アルミニウム、銅、カドミウム、および亜鉛が挙げられる。
【００４２】
好適な金属塩の非限定的な例としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、セシウム塩、セリウム塩、マグネシウム塩、マンガン塩、鉄塩、カルシウム塩、ストロンチウム塩、コバルト塩、チタン塩、アルミニウム塩、銅塩、カドミウム塩、および亜鉛塩が挙げられる。
【００４３】
アンモニウム塩は、カルボキシル基を有する本発明の化合物へのアンモニアまたは有機アミンの付加から生じ得る。好適な有機アミンの非限定的な例としては、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、Ｎ−メチルモルホリン、ピペリジン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ジベンジルアミン、ピペラジン、ピリジン、ピラゾール(pyrrazole)、イミダゾール、ピラジン、ピペラジン(pipyrazine)、エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、プロカイン、クロロプロカイン、コリン、ジシクロヘキシルアミン、およびＮ−メチルグルカミンが挙げられる。
【００４４】
好適なアンモニウム塩の非限定的な例としては、トリエチルアンモニウム塩、ジイソプロピルアンモニウム塩、エタノールアンモニウム塩、ジエタノールアンモニウム塩、トリエタノールアンモニウム塩、モルホリニウム塩、Ｎ−メチルモルホリニウム塩、ピペリジニウム塩、Ｎ−メチルピペリジニウム塩、Ｎ−エチルピペリジニウム塩、ジベンジルアンモニウム塩、ピペラジニウム塩、ピリジニウム塩、ピラゾリウム(pyrrazolium)塩、イミダゾリウム塩、ピラジニウム塩、エチレンジアンモニウム塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアンモニウム塩、プロカイン塩、クロロプロカイン塩、コリン塩、ジシクロヘキシルアンモニウム塩、およびＮ−メチルグルカミン塩が挙げられる。
【００４５】
参照される数値表示に関連して使用される際の「約」という用語は、参照される数値表示プラスまたはマイナスその参照される数値表示の１０％以下を意味する。例えば、「約５０」という用語は、４５〜５５の範囲を包含する。
【００４６】
一般的な方法
「Ｔｒｔ」は、構造：
【化９】
2018168171.tif 000010
を有するトリチル（トリフェニルメチル）保護基を表す。
【００４７】
本明細書において使用される際、トリチル化試薬としては、以下に限定はされないが、塩化トリチルおよび臭化トリチルなどのハロゲン化トリチルが挙げられる。
【００４８】
トリチル保護基の除去は、典型的に、以下のように進行する：トリチル保護されたスフィンゴミエリンを、有機溶媒に溶解させ、酸を加える。反応は、１〜１６時間にわたって約２２℃の温度で進行する。反応混合物を、塩基の添加によって中和する。有機溶媒は、プロトン性極性溶媒、非プロトン性極性溶媒、またはそれらの混合物であり得る。一実施形態において、有機溶媒は、プロトン性極性溶媒であり、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、またはイソプロパノールである。一実施形態において、有機溶媒は、非プロトン性極性溶媒である。一実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、塩素化されており、塩化メチレン、クロロホルム、または四塩化炭素である。別の実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、塩素化されておらず、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、または酢酸エチルである。酸は、トリチル保護基の除去に好適であることが当業者に知られている任意の酸、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、塩酸およびｐ−トルエンスルホン酸であり得る。本発明の特定の実施形態において、酸は、ｐ−トルエンスルホン酸である。特定の実施形態において、塩基は、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基である。
【００４９】
「Ｂｚ」が、構造：
【化１０】
2018168171.tif 000011
を有するベンゾイル保護基を表す。
【００５０】
本明細書において使用される際、ベンゾイル化試薬としては、以下に限定はされないが、塩化ベンゾイルおよび臭化トリチルなどのハロゲン化ベンゾイルが挙げられる。
【００５１】
ベンゾイル保護基の除去は、典型的に、以下のように進行する：ベンゾイル保護されたスフィンゴミエリンを、プロトン性極性溶媒に溶解させ、塩基を加える。反応は、約２２℃で８〜２４時間にわたって進行する。一実施形態において、プロトン性極性溶媒は、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、またはそれらの混合物である。さらに別の実施形態において、塩基は、ナトリウムメトキシド、炭酸カリウム、水酸化リチウムである。特定の実施形態において、塩基は、ナトリウムメトキシドである。
【００５２】
Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
特定の実施形態において、本発明は、スキームＩ（式中、Ｒが、Ｃ１〜５アルキル基である）の化合物Ｉａのものなどの、Ｌ−セリンエステルを用いてＤ−エリトロ−スフィンゴシンを合成するための方法を提供する。特に定義されない限り、本明細書において使用される際の「アルキル」という用語は、アルカンからの水素原子の除去から得られる直鎖状、分枝鎖状、または環状の飽和基を指す。代表的な直鎖状アルキル基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、および−ｎ−ペンチルが挙げられる。代表的な分枝鎖状アルキル基としては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、−ネオペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピルおよび１，２−ジメチルプロピルが挙げられる。代表的な環状アルキル基としては、シクロペンチル、およびシクロプロピルが挙げられる。
【００５３】
本発明の特定の実施形態において、Ｌ−セリンエステルは、Ｌ−セリンメチルエステルである。別の実施形態において、Ｌ−セリンエステルは、Ｌ−セリンエチルエステルである。さらに別の実施形態において、Ｌ−セリンエステルは、Ｌ−ブチルエステルである。
【００５４】
本発明の一実施形態において、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンは、以下の工程：
ａ）Ｌ−セリンエステル（化合物Ｉａ）のアミノ基を、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で保護して、Ｂｏｃ保護されたＬ−セリンエステル（化合物Ｉｂ）を得る工程と；
ｂ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸（化合物Ｉｃ）の対応するＣ１〜Ｃ５アルキルエステルを得るのに有効な条件下で、ベンゼンスルホン酸の存在下で、Ｂｏｃ保護されたＬ−セリンエステルを、２，２−ジメトキシプロパンと反応させる工程と；
ｃ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシ−ホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｄ）を得るのに有効な条件下で、ｎ−ブチルリチウムの存在下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸（化合物Ｉｃ）の対応するＣ１〜Ｃ５アルキルエステルを、メチルホスホン酸ジメチルと反応させる工程と；
ｄ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｅ）を得るのに有効な条件下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシ−ホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを、１−テトラデカナールと反応させる工程と；
ｅ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｆ）を得るのに有効な条件下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを、水素化ホウ素ナトリウムおよび三塩化セリウムと反応させる工程と；
ｆ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンのｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基を除去して、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ａ）を得る工程と
を含む、スキームＩに示される方法によって合成される。
【化１１】
2018168171.tif 000012
【００５５】
本発明の一態様において、Ｌ−セリンエステル（スキームＩの化合物Ｉａ）のアミノ基を、トリエチルアミンまたはピリジンなどの塩基の存在下で、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基で保護して、Ｂｏｃ保護されたＬ−セリンエステル（化合物Ｉｂ）を得る。次に、反応を、水の添加によってクエンチすることができ、反応生成物、化合物Ｉｂを、有機層から回収する。
【００５６】
Ｂｏｃ保護基の上記の添加は、約６〜２４時間にわたって約２２℃の温度で、非プロトン性有機溶媒中で進行し得る。一実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、塩素化炭化水素、例えば、塩化メチレン、クロロホルムまたは四塩化炭素である。別の実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、塩素化されておらず、例えば、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、または酢酸エチルである。塩基は、典型的に、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基である。反応生成物、化合物Ｉｂを、上記の非プロトン性有機溶媒を含むがこれに限定されない有機溶媒で、有機層から抽出することができる。
【００５７】
本発明の別の態様において、Ｂｏｃ保護されたＬ−セリンエステル（化合物Ｉｂ）を、ベンゼンスルホン酸の存在下で、２，２−ジメトキシプロパンと反応させて、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸（化合物Ｉｃ）の対応するＣ１〜Ｃ５アルキルエステルを得る。反応は、有機溶媒中で、１〜３時間にわたって還流温度で進行し得る。一実施形態において、有機溶媒は、非極性であり、トルエン、ベンゼンまたはヘキサンである。別の実施形態において、有機溶媒は、極性有機溶媒であり、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、または酢酸エチルである。次に、反応物を、塩基で中和することができ、溶媒を蒸発させる。次に、水および有機溶媒を、残りの残渣に加えることができ、反応生成物を、有機溶媒を用いて、有機層から抽出することができる。塩基は、典型的に、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基である。反応生成物を、上記の有機溶媒を含むがこれらに限定されない有機溶媒で、有機層から抽出することができる。
【００５８】
本発明の別の態様において、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸エステル（化合物Ｉｃ）を、メチルホスホン酸ジメチルの存在下で、ｎ−ブチルリチウムと反応させて、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｄ）を得る。反応を、水でクエンチすることができ、ｐＨを、有機酸の添加によって調整する。生成物を、有機相から回収することができる。反応は、約２〜４時間にわたって約−７０〜−８０℃の温度で、有機溶媒中で進行し得る。特定の実施形態において、有機溶媒は、極性有機溶媒であり、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、または酢酸エチルである。特定の実施形態において、酸は、クエン酸または酢酸である。
【００５９】
本発明のさらなる実施形態において、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｄ）を、塩基の存在下で、テトラデカナールと反応させて、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｅ）を得る。一実施形態において、塩基は、炭酸カリウムである。反応は、室温、例えば、約２２℃で、有機溶媒および水の存在下で進行し得る。反応は、撹拌しながら８〜１４時間にわたって進行し得る。生成物、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｅ）を、有機相から回収することができる。特定の実施形態において、有機溶媒は、極性有機溶媒であり、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、または酢酸エチルである。
【００６０】
本発明のさらに別の実施形態において、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｅ）を、水素化ホウ素ナトリウムおよび塩化セリウム七水和物の存在下で還元して、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｆ）を得る。例えば、化合物Ｉｅおよび塩化セリウム七水和物を、有機溶媒中で撹拌し、混合物を、−２０〜−１５℃に冷却する。水素化ホウ素ナトリウムを、１〜６時間にわたって混合物に加える。水素化ホウ素ナトリウムの添加の後、反応は、１５〜９０分間にわたって進行することができ、その時点で、それを、１〜３時間にわたって約２２℃に温める。２２℃に達した後、混合物を、３０〜９０分間撹拌することができる。一実施形態において、有機溶媒は、プロトン性極性溶媒であり、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、またはイソプロパノールである。特定の実施形態において、水素化ホウ素ナトリウムを、固体として加える。他の実施形態において、水素化ホウ素ナトリウムを、水溶液として加える。本発明の特定の実施形態において、溶媒の少なくとも一部を、蒸発によって除去し、沈殿した塩をろ過し、有機溶媒で洗浄する。生成物、化合物Ｉｆを、得られたろ液の有機相から回収することができる。
【００６１】
本発明の特定の実施形態において、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｆ）を、脱保護して、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得る。反応は、以下のように進行し得る：メタノールを、約０℃に冷却し、塩化アセチルを、約１５〜６０分間にわたって加える。次に、溶液を温めて、メタノール塩酸塩溶液を生成する。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン）を、メタノールに溶解させ、メタノール塩酸塩溶液を、約１５〜６０分間にわたって加える。反応物を、塩基の添加によって中和することができる。次に、溶媒を、除去することができ、得られたＤ−エリトロ−スフィンゴシンを、残渣から回収することができる。塩基は、以下に限定はされないが、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基であり得る。
【００６２】
本発明の特定の実施形態において、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ａ）を、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【００６３】
本発明の特定の実施形態は、Ｌ−セリンメチルエステルを用いてＤ−エリトロ−スフィンゴシンを合成する方法も提供する。
【００６４】
本発明の特定の実施形態において、Ｌ−セリンメチルエステル（化合物Ｉａ、Ｒ＝メチルである）を、酢酸エチルに懸濁させ、約２℃に冷却し、約１．１５モル当量のトリエチルアミンを加えた後、酢酸エチル中の約１．１５モル当量の二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルを加える。反応混合物を、約２２℃に温め、８〜１２時間撹拌する。精製水を加え、相を分離する。反応生成物Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ（化合物Ｉｂ、Ｒ＝メチルである］を、有機層から酢酸エチルで抽出することができ、得られた画分を、減圧下で乾燥させる。
【００６５】
本発明の特定の実施形態において、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ（化合物Ｉｂ、Ｒ＝メチルである）を、テトラヒドロフランに溶解させ、３〜４当量の２，２−ジメトキシプロパンを加えた後、テトラヒドロフラン中の約０．１０当量のベンゼンスルホン酸の溶液を加え、テトラヒドロフランの一部を蒸留して取り除きながら、反応物を加熱還流させた。反応物を、約２２ＣでトリエチルアミンによってｐＨ６．５まで中和する。溶媒を蒸留して取り除き、水およびヘキサンを加える。反応生成物、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸メチルエステル（化合物Ｉｃ、Ｒ＝メチルである）を、ヘキサン層から単離することができる。
【００６６】
本発明の別の態様において、２当量のメチルホスホン酸ジメチルを、テトラヒドロフランに溶解させ、得られた混合物を、約−７０〜−８０℃に冷却する。混合物を約−７０〜−８０℃に保持しながら、ヘプタン中の約２当量のｎ−ブチルリチウムを、１〜３時間にわたって加える。約１時間撹拌した後、混合物を約−７０〜−８０℃に保持しながら、テトラヒドロフラン中の１当量の（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸メチルエステルを、３０〜９０分間にわたって加える。混合物を、３０〜６０分間にわたって約０℃に温め、次に、１５〜６０分間撹拌する。反応を、テトラヒドロフラン中の水の添加によってクエンチし、ｐＨを、クエン酸溶液の添加によってｐＨ６〜７に調整する。以下に限定はされないが、酢酸エチルまたはジエチルエーテルなどの有機溶媒を加え、生成物、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｄ）を、有機層から回収する。
【００６７】
本発明のさらなる態様において、１当量の（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｄ）および約２当量の炭酸カリウムを、約２２℃で、アセトニトリル中で撹拌した後、約０．５当量の１−テトラデカナールおよび水を加える。反応は、撹拌しながら８〜１４時間にわたって進行する。塩をろ過して取り除き、ヘキサンで洗浄し、生成物、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｅ）を、有機相から回収する。
【００６８】
本発明のさらに他の態様において、１当量の（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｅ）および約１．１〜１．５当量の塩化セリウム七水和物を、メタノール中で撹拌し、混合物を−２０〜−１５℃に冷却する。約１．５当量の水素化ホウ素ナトリウムおよび約０．０１当量のＮａＯＨの水溶液を約０℃に冷却し、約４〜６時間にわたって（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン混合物に加える。約１５〜６０分間のさらなる撹拌の後、混合物を、１〜３時間にわたって約２２℃に加熱した後、３０〜９０分間撹拌する。メタノールを減圧下で除去し、得られた水性懸濁液をろ過する。得られた固体を、トルエンなどの有機溶媒で洗浄する。水層を、トルエンなどの有機溶媒で少なくとも２回抽出する。有機層を組み合わせて、生成物、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｆ）を、有機層から回収する。
【００６９】
本発明の特定の実施形態において、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｆ）を、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンに転化する。反応は、以下のように進行する：メタノールを約０℃に冷却し、約２当量の塩化アセチルを、約１５〜６０分間にわたって加えて、メタノール塩酸溶液を生成する。次に、溶液を室温に温める。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン）をメタノールに溶解させ、メタノール塩酸塩溶液を、約１５〜６０分間にわたって加える。反応物を、トリエチルアミンの添加によって中和する。次に、溶媒を除去することができ、得られたＤ−エリトロ−スフィンゴシンを、残渣から回収することができる。
【００７０】
特定の実施形態において、本発明は、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを合成するための方法であって、
ａ）Ｌ−セリンメチルエステルまたはその塩のアミノ基を、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で保護して、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅを得る工程と；
ｂ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸メチルエステルを得るのに有効な条件下で、ベンゼンスルホン酸の存在下で、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅを、２，２−ジメトキシプロパンと反応させる工程と；
ｃ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシ−ホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを得るのに有効な条件下で、ｎ−ブチルリチウムの存在下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸メチルエステルを、メチルホスホン酸ジメチルと反応させる工程と；
ｄ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを得るのに有効な条件下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシ−ホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを、１−テトラデカナールと反応させる工程と；
ｅ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを得るのに有効な条件下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを、水素化ホウ素ナトリウムおよび三塩化セリウムと反応させる工程と；
ｆ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンのｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基を除去して、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得る工程と
を含む方法を提供する。
【００７１】
Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン
特定の実施形態において、本発明は、化合物Ｉａのものなどの、好適なＬ−セリンエステルを用いてＤ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを合成するための方法を提供する。本発明の特定の実施形態において、Ｒが、１〜５個の炭素を有するアルキル基である。特に定義されない限り、本明細書において使用される際の「アルキル」という用語は、アルカンからの水素原子の除去から得られる直鎖状、分枝鎖状、または環状の飽和基を指す。代表的な直鎖状アルキル基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、およびｎ−ヘプチルが挙げられる。代表的な分枝鎖状アルキル基としては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、−ネオペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピルおよび１，２−ジメチルプロピルが挙げられる。代表的な環状アルキル基としては、シクロヘキシル、シクロペンチル、およびシクロプロピルが挙げられる。
【００７２】
本発明の特定の実施形態において、Ｌ−セリンエステルは、Ｌ−セリンメチルエステルである。別の実施形態において、Ｌ−セリンエステルは、Ｌ−セリンエチルエステルである。さらに別の実施形態において、Ｌ−セリンエステルは、Ｌ−セリンブチルエステルである。
【００７３】
本発明の一実施形態において、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンは、スキームＩＩに示される方法によって合成される。反応は、以下の工程を含む：
【化１２】
2018168171.tif 000013
【００７４】
化合物Ｉｆを還元剤と反応させて、その対応する飽和化合物、化合物ＩＩａを得る。Ｈ２、ならびに、以下に限定はされないが、パラジウム（０）／炭素触媒ルテニウム（ＩＩ）触媒、例えば、Ｒｕ（ＯＡｃ）２（ＢＩＮＡＰ）、［｛ＲｕＣｌ（μ−Ｃｌ）（η６−Ｃ６Ｍｅ６）｝２］、またはＲｕ（ＯＨ）ｘ／Ａｌ２Ｏ３などの触媒の存在下で、以下に限定はされないが、第一級または第二級アルコール、ＴＨＦ、または２−メチル−ＴＨＦなどの有機溶媒中で、反応を行う。
【００７５】
特定の実施形態において、化合物Ｉｆを、還流状態で、［｛ＲｕＣｌ（μ−Ｃｌ）（η６−Ｃ６Ｍｅ６）｝２］の存在下で、約８０℃で、イソプロピルアルコール中のＨ２と反応させる。反応混合物をクエンチし、出発アリルアルコール、化合物Ｉｆが、以下に限定はされないが、ＨＰＬＣ、薄層クロマトグラフィー、またはＩＲなどの、当業者に周知の方法を用いてもはや検出されないとき、後処理(work-up)にかける。特定の実施形態において、Ｈ２をガスとして加え、加圧下で、水素化容器中で反応を行う。
【００７６】
粗製または精製された、このように得られる化合物ＩＩａを、約０℃でメタノールに溶解させ、塩化アセチルを、約１５〜６０分間にわたって加え、メタノール塩酸を生成する。出発材料（または転化）が、クロマトグラフィー方法などの方法によってもはや検出されないとき、反応物を、以下に限定はされないが、トリエチルアミンもしくはピリジンなどの有機塩基、またはナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアンモニウムの重炭酸塩または炭酸塩などの、水溶液中の無機塩基であり得る塩基で処理する。さらに、反応混合物を、塩素化溶媒、酢酸エチルまたはジエチルエーテル、ＴＨＦ、ｔ−ブチルメチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテルなどの溶媒で抽出する。次に、溶媒を除去し、得られたＤ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを遊離塩基として回収する。塩基を塩酸で処理して、対応する塩酸塩を生成することができる。
【００７７】
Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
別の実施形態において、本発明は、スキームＩＩＩに示されるように、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを合成するための方法を提供する。
【００７８】
さらに別の実施形態において、本発明は、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを合成するための方法であって、
ａ）（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−エチル−（（２−ヒドロキシピナン−３−イレン）アミノ）アセテート（化合物ＩＩＩｂ）を得るのに有効な条件下で、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−（＋）−２−ヒドロキシ−３−ピナノン（化合物ＩＩＩａ）を、エチルグリシネートと反応させる工程と；
ｂ）クロロチタントリイソプロポキシドおよびトリエチルアミンの存在下で、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−エチル−（（２−ヒドロキシピナン−３−イレン）アミノ）アセテート（化合物ＩＩＩｂ）を、２−（Ｅ）−ヘキサデセン−１−アールと反応させて、（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−エチル−３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエート（化合物ＩＩＩｃ）および（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル−３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエート（化合物ＩＩＩｃ’）の一方または両方を得る工程と；
ｃ）（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−エチル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエート（化合物ＩＩＩｄ）および（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエート（化合物ＩＩＩｄ’）の一方または両方を得るのに有効な条件下で、（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−エチル−３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエート（化合物ＩＩＩｃ）および（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル−３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエート（化合物ＩＩＩｃ’）の一方または両方を、塩酸と反応させる工程と；
ｄ）Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ａ）を得るのに有効な条件下で、（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−エチル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートの一方または両方を、水素化ホウ素ナトリウムと反応させる工程と；
ｅ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ｅ）を得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、パルミチン酸と反応させる工程と
を含む方法を提供する。
【化１３】
2018168171.tif 000014
【００７９】
Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン
さらに別の実施形態において、本発明は、スキームＩＶに示されるように、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを合成するための方法であって、
ａ）（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−エチル−（（２−ヒドロキシピナン−３−イレン）アミノ）アセテート（化合物ＩＩＩｂ）を得るのに有効な条件下で、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−（＋）−２−ヒドロキシ−３−ピナノン（化合物ＩＩＩａ）を、エチルグリシネートと反応させる工程と；
ｂ）（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−エチル３−ヒドロキシ−２−（（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカノエート（化合物ＩＶｃ）および（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル３−ヒドロキシ−２（（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカノエート（化合物ＩＶｃ’）の一方または両方を得るのに有効な条件下で、クロロチタントリイソプロポキシドの存在下で、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−エチル−（（２−ヒドロキシピナン−３−イレン）アミノ）アセテート（化合物ＩＩＩｂ）を、ヘキサデカナールと反応させる工程と；
ｃ）（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−エチル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカノエート（化合物ＩＶｄ）および（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカノエート（化合物ＩＶｄ’）の一方または両方を得るのに有効な条件下で、（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−エチル３−ヒドロキシ−２−（（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカノエート（化合物ＩＶｃ）および（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル３−ヒドロキシ−２−（（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカノエート（化合物ＩＶｃ’）の一方または両方を、塩酸と反応させる工程と；
ｄ）Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物Ｂ）を得るのに有効な条件下で、（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−エチル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカノエート（化合物ＩＶｄ）および（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−［イソプロピル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカノエート（化合物ＩＶｄ’）の一方または両方を、水素化ホウ素ナトリウムと反応させる工程と；
ｅ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物Ｆ）を得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物Ｂ）を、パルミチン酸と反応させる工程と
を含む方法を提供する。
【化１４】
2018168171.tif 000015
【００８０】
Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成
さらなる実施形態において、本発明は、スキームＶに示されるように、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｄ−エリトロ−セラミド（化合物Ｖｂ）を得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、脂肪酸（化合物Ｖａ）と反応させる工程と；
ｂ）Ｄ−エリトロ−セラミド（化合物Ｖｂ）の第一級ヒドロキシル基を、第１の保護基で保護して、化合物Ｖｃを得る工程と；
ｃ）化合物Ｖｃの第二級ヒドロキシル基を、第２の保護基で保護して、化合物Ｖｄを得る工程と；
ｄ）化合物Ｖｄの第１の保護基を除去して、化合物Ｖｅを得る工程と；
ｅ）化合物Ｖｆを得るのに有効な条件下で、化合物Ｖｅを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）と反応させる工程と；
ｆ）化合物Ｖｇを得るのに有効な条件下で、化合物Ｖｆを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｇ）ナトリウムメトキシドを用いて、化合物Ｖｇの第２の保護基を除去して、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｖｈ）を得る工程と
を含む方法を提供する。
【化１５】
2018168171.tif 000016
【００８１】
Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−セラミドの合成
本発明の特定の実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るための、脂肪酸によるＤ−エリトロ−スフィンゴシンのＮ−アシル化は、スキームＶに示される工程を含む。工程は、以下のとおりである：Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ａ）、脂肪酸（化合物Ｖａ）、およびアミド形成剤を、非プロトン性有機溶媒に懸濁させ、混合物を約０〜５℃の温度で冷却する。一実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物である。本発明の特定の実施形態において、アミド形成剤は、Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）である。
【００８２】
以下に限定はされないが、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基を、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ａ）と、脂肪酸（化合物Ｖａ）と、アミド形成剤との混合物に加える。特定の実施形態において、有機塩基は、非プロトン性有機溶媒中であり、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物である。本発明のさらなる実施形態において、有機塩基を、約１５〜９０分間にわたって加える。次に、混合物を、約０〜２２℃の温度で１〜１５時間撹拌する。本発明の特定の実施形態において、反応は、約０〜５℃の温度で進行する。本発明の他の実施形態において、反応は約２２℃で進行する。本発明のさらに他の実施形態において、反応はおよそ室温で進行する。
【００８３】
約１〜１５時間撹拌した後、生成物、化合物Ｖｂを、酸の添加によって沈殿させる。本発明の特定の実施形態において、酸は、クエン酸、酢酸、またはシュウ酸などの有機酸である。酸を加えるとき、酸は水溶液中であり得る。酸を加えるとき、反応物は、約２２℃であり得る。得られた懸濁液を、約０〜５℃の温度で３０〜１２０分間撹拌することができる。本発明の特定の実施形態において、懸濁液を約２２℃で撹拌する。
【００８４】
撹拌した後、懸濁液をろ過する。次に、得られた生成物、化合物Ｖｂを、水に再懸濁させることができ、その後、それをろ過し、洗浄することができる。再懸濁を、少なくとももう１回繰り返すことができる。得られた生成物、Ｄ−エリトロ−セラミド（化合物Ｖｂ）を、水、アセトン、またはそれらの混合物で洗浄することができる。
【００８５】
保護されたＤ−エリトロ−セラミドの合成
本発明の特定の実施形態において、Ｄ−エリトロ−セラミドの第一級ヒドロキシル基を保護した後、第二級ヒドロキシルの保護、次に、第一級ヒドロキシルの脱保護を行う。本発明のさらなる実施形態において、保護および脱保護工程は、第一級ヒドロキシル保護されたＤ−エリトロ−セラミドの単離または精製を伴わずに進行する。
【００８６】
本発明の特定の実施形態において、Ｄ−エリトロ−セラミドを、以下に限定はされないが、塩化トリチルおよび臭化トリチルなどのハロゲン化トリチルなどのトリチル化試薬と反応させることによって、第一級ヒドロキシル基をトリチル基で保護する。本発明の特定の実施形態において、１−Ｏ−保護されたＤ−エリトロ−セラミドを、以下に限定はされないが、塩化ベンゾイルおよび臭化トリチルなどのハロゲン化ベンゾイルなどのベンゾイル化試薬と反応させることによって、第二級ヒドロキシル基をベンゾイル基で保護する。本発明のさらなる実施形態において、第一級ヒドロキシル基をトリチル基で保護し、第二級ヒドロキシルをベンゾイル基で保護する。
【００８７】
本発明の特定の実施形態において、第一級ヒドロキシル基の保護は、以下のように進行する：Ｄ−エリトロ−セラミド（化合物Ｖｂ）および塩化トリチルを、塩基の存在下で、有機溶媒に懸濁させる。反応は、約１０〜６０時間にわたって約２５〜５５℃の温度で進行して、トリチル保護されたＤ−エリトロ−セラミド（１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミド化合物Ｖｃ、ここで、ＰＧ１＝−Ｔｒｔである）が得られる。有機溶媒は、非極性または極性溶媒であり得る。本発明の一実施形態において、有機溶媒は、非極性溶媒であり、トルエン、ベンゼン、ヘキサンまたはそれらの混合物である。一実施形態において、有機溶媒は、非プロトン性極性溶媒である。一実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、塩化メチレン、クロロホルムまたは四塩化炭素である。別の実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、塩素化されておらず、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、または酢酸エチルである。塩基は、典型的に、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基である。
【００８８】
本発明の特定の実施形態において、例えば、塩化トリチルを用いた、第一級ヒドロキシル基の保護により、粗反応生成物の約１０ｍｏｌ％以下の１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドが得られる。本発明のさらなる実施形態において、例えば、塩化トリチルを用いた、第一級ヒドロキシル基の保護により、粗反応生成物の約７ｍｏｌ％以下の１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドが得られる。本発明のさらに他の実施形態において、例えば、塩化トリチルを用いた、第一級ヒドロキシル基の保護により、粗反応生成物の約５ｍｏｌ％以下の１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドが得られる。本発明のさらに他の実施形態において、例えば、塩化トリチルを用いた、第一級ヒドロキシル基の保護により、粗反応生成物の約１ｍｏｌ％以下の１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドが得られる。
【００８９】
本発明のさらなる実施形態において、第二級ヒドロキシル基の保護は、以下のように直接進行する：上記の反応混合物を約０〜５℃に冷却し、塩化ベンゾイルおよび塩基を加える。反応は、約１〜１６時間にわたって約０〜５℃の温度で進行する。反応生成物、３−ベンゾイルおよび１−トリチル保護されたＤ−エリトロ−セラミド（化合物Ｖｄ；ＰＧ１＝−Ｔｉｒであり；ＰＧ２＝−Ｂｚである）を、上記の非プロトン性有機溶媒を含むがこれに限定されない有機溶媒で有機層から抽出することができる。次に、蒸発、例えば、減圧下での濃縮を含むがこれに限定されない、当業者に公知の好適な方法によって、有機溶媒を除去する。特定の実施形態において、塩基は、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基である。
【００９０】
本発明のさらに他の実施形態において、第一級ヒドロキシル基の脱保護は、以下のように直接進行する：上記の反応からの残渣を、有機溶媒に溶解させ、酸を加える。反応は、１〜１６時間にわたって約２２℃の温度で進行する。反応混合物を、塩基の添加によって中和する。有機溶媒は、プロトン性極性溶媒、非プロトン性極性溶媒、またはそれらの混合物であり得る。一実施形態において、有機溶媒は、プロトン性極性溶媒であり、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、またはイソプロパノールである。一実施形態において、有機溶媒は、非プロトン性極性溶媒である。一実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、塩素化されており、塩化メチレン、クロロホルム、または四塩化炭素である。別の実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、塩素化されておらず、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、または酢酸エチルである。酸は、トリチル保護基の除去に好適であることが当業者に知られている任意の酸、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、塩酸およびｐ−トルエンスルホン酸であり得る。本発明の特定の実施形態において、酸は、ｐ−トルエンスルホン酸である。特定の実施形態において、塩基は、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基である。
【００９１】
本発明の特定の実施形態において、上記の脱保護生成物（化合物Ｖｅ；ＰＧ２＝−Ｂｚである）を、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【００９２】
ベンゾイル保護されたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るための、３−ベンゾイル保護されたＤ−エリトロ−セラミドのリン酸化およびアミノ化
本発明のさらなる実施形態において、３−ベンゾイル保護されたＤ−エリトロ−セラミド、（化合物Ｖｅ；ＰＧ２＝−Ｂｚである）を、以下のようにリン酸化する：３−ベンゾイル保護されたＤ−エリトロ−セラミドを、有機溶媒に溶解させ、有機塩基を加える。約４〜９℃に冷却した後、有機溶媒中の２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホランの溶液を加える。反応は、約２〜６時間にわたって約４〜２２℃の温度で進行して、３−Ｏ−ベンゾイル−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）−セラミド（化合物Ｖｆ、ここで、ＰＧ２＝Ｂｚである）が生成される。本発明の特定の実施形態において、反応は、約１５分間〜２時間にわたって約４〜９℃で進行し、次に、約２２℃に温められ、さらに２〜４時間にわたって進行する。有機溶媒は、非極性溶媒、極性溶媒、またはそれらの混合物であり得る。本発明の一実施形態において、有機溶媒は、非極性溶媒であり、トルエン、ベンゼン、ヘキサンまたはそれらの混合物である。一実施形態において、有機溶媒は、アセトニトリル、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、またはそれらの混合物などの非プロトン性極性溶媒である。有機塩基は、典型的に、テトラメチルエチレンジアミンまたはトリエチルアミンである。本発明の特定の実施形態において、有機塩基は、テトラメチルエチレンジアミンである。
【００９３】
特定の実施形態において、３−Ｏ−ベンゾイル−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）−セラミド（化合物Ｖｆ、ＰＧ２＝−Ｂｚである）のアミノ化を、リン酸化されたベンゾイル保護されたＤ−エリトロ−セラミド出発材料の精製または単離を伴わずに行う。上記の反応が約２〜６時間にわたって進行した後、さらなる有機溶媒およびトリメチルアミンを加え、反応混合物を６０〜７０℃に加熱し、反応を１０〜１６時間にわたって進行させたところ、３−ベンゾイル保護されたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｖｇ、ＰＧ２＝−Ｂｚである）が得られる。有機溶媒は、非極性溶媒、極性溶媒またはそれらの混合物であり得る。本発明の一実施形態において、有機溶媒は、非極性溶媒であり、トルエン、ベンゼン、ヘキサンまたはそれらの混合物である。一実施形態において、有機溶媒は、アセトニトリル、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、またはそれらの混合物などの非プロトン性極性溶媒である。特定の実施形態において、トリメチルアミンを液体として加える。他の実施形態において、トリメチルアミンを気体形態で加える。特定の実施形態において、液体トリメチルアミンは無水である。特定の実施形態において、トリメチルアミンを、その沸点未満に冷却し、液体として加える。特定の実施形態において、反応物を、液体トリメチルアミンの添加の前に、約−１０℃〜０℃に冷却する。さらなる実施形態において、反応物を、液体トリメチルアミンの添加の前に、約−１０℃に冷却する。
【００９４】
本発明の特定の実施形態において、３−ベンゾイル保護されたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【００９５】
Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るための、３−Ｏ−ベンゾイル保護されたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの脱保護
３−Ｏ−ベンゾイル保護されたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンからのベンゾイル保護基の除去は、以下のように進行する：３−Ｏ−ベンゾイル保護されたスフィンゴミエリンを、プロトン性極性溶媒に溶解させ、塩基を加える。反応は、約２２℃で８〜２４時間にわたって進行する。本発明の特定の実施形態において、非プロトン性溶媒および水を反応混合物に加え、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｖｈ）を有機層から回収する。一実施形態において、プロトン性極性溶媒は、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、またはそれらの混合物である。さらに別の実施形態において、塩基は、ナトリウムメトキシドである。
【００９６】
本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【００９７】
本発明の特定の実施形態において、得られたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約８５％の鏡像異性体純度を有し、約１５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約９０％の鏡像異性体純度を有し、約１０％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約９５％の鏡像異性体純度を有し、約５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約９８％の鏡像異性体純度を有し、約２％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。
【００９８】
別の実施形態において、本発明は、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、脂肪酸と反応させる工程と；
ｂ）１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−セラミドを、トリチル化試薬と反応させる工程と；
ｃ）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−Ｄ−エリトロ−ベンゾイル−セラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、ベンゾイル化試薬と反応させる工程と；
ｄ）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−Ｄ−エリトロ−ベンゾイル−セラミドのトリチル基を除去して、Ｄ−エリトロ−３−Ｏ−ベンゾイル−セラミドを得る工程と；
ｅ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミドを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）と反応させる工程と；
ｆ）Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−３−Ｏ−ベンゾイル−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）セラミドを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｇ）Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−３−Ｏ−ベンゾイル−スフィンゴミエリンのベンゾイル基を、ナトリウムメトキシドで除去して、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得る工程と
を含む方法を提供する。
【００９９】
Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成
さらに別の実施形態において、本発明は、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェートおよびトリエチルアミンの存在下で、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、パルミチン酸と反応させる工程と、
ｂ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを保護して、トリチル基と反応させて、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得る工程と；
ｃ）Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、ベンゾイル基で保護して、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得る工程と；
ｄ）パラ−トルエンスルホン酸の存在下で、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンのトリチル基を除去して、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得る工程と；
ｅ）Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）−スフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホランと反応させる工程と；
ｆ）Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）−スフィンゴシンを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｇ）Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンのベンゾイル基を、ナトリウムメトキシドで除去して、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得る工程と
を含む方法を提供する。
【０１００】
本発明の特定の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンが、スキームＶＩに示されるように合成される。
【０１０１】
１当量のパルミチン酸、１当量のＤ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ａ）、および１．１０当量のＯ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）を、テトラヒドロフランおよびジメチルホルムアミドに懸濁させ、約０〜５℃に冷却する。２〜３当量のトリエチルアミンを加え、混合物を、約０〜５℃で約１〜１２時間撹拌する。混合物を約２２℃に温める。クエン酸の水溶液を加え、混合物を約２２℃で１５〜９０分間撹拌する。得られた懸濁液をろ過し、ケーキを、室温で、水に懸濁させる。懸濁液をろ過し、水およびアセトンで洗浄する。次に、得られた生成物、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ｅ）を乾燥させることができる。
【０１０２】
第一ヒドロキシルの保護のため、１当量のＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ｅ）を、ピリジンおよび塩化メチレンに懸濁させる。塩化メチレン中の約１．０５当量の塩化トリチルの溶液を加えた後、さらなる塩化メチレンを加える。反応混合物を５０〜６０時間にわたって約２５℃で撹拌する。
【０１０３】
本発明の特定の実施形態において、第一級ヒドロキシル基の保護により、粗反応生成物の１０ｍｏｌ％未満のＮ−パルミトイル−１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが得られる。本発明のさらなる実施形態において、第一級ヒドロキシルの保護により、粗反応生成物の約７ｍｏｌ％以下のＮ−パルミトイル−１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが得られる。本発明のさらに他の実施形態において、第一級ヒドロキシルの保護により、粗反応生成物の約５ｍｏｌ％以下のＮ−パルミトイル−１，３−Ο，Ο−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが得られる。本発明のさらに他の実施形態において、第一級ヒドロキシルの保護により、粗反応生成物の約１ｍｏｌ％以下のＮ−パルミトイル−１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが得られる。
【０１０４】
第二ヒドロキシル基の保護のために、化合物ＶＩａを含む反応混合物を約２℃に冷却する。約０．１０当量のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン、約１．５０当量の塩化ベンゾイルおよびさらなる塩化メチレンを加える。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析が、約５％未満の出発材料Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−スフィンゴシンの存在を示すまで、反応を、撹拌しながら約２℃で進行させる。酢酸エチルおよびクエン酸水溶液および塩化ナトリウム溶液を、反応混合物に加え、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＶＩｂ）を有機相から回収する。
【０１０５】
トリチル保護基を除去するために、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＶＩｂ）を、メタノールおよび塩化メチレンに溶解させ、２℃に冷却する。メタノール中の０．５７当量のパラ−トルエンスルホン酸一水和物の溶液を用いて、ｐＨを２．５に調整する。ＴＬＣ分析が、５％未満の出発材料１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−スフィンゴシンの存在を示すまで、反応を、撹拌しながら約２２℃で進行させる。トリエチルアミンを加えて、ｐＨを約７．０に調整する。反応混合物を蒸発乾固させ、得られた粗製のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを約４０℃でヘキサンに懸濁させ、約０℃に冷却する。約３０〜６０分後、固体を、ろ過によって単離し、ヘキサンで洗浄する。次に、得られた生成物、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＶＩｃ）を、シリカゲルクロマトグラフィーなどの適切な方法によって精製することができる。
【０１０６】
１当量のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＶＩｃ）をトルエンに溶解させ、約０．６〜１当量のテトラメチルエチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ）を加え、混合物を約４〜９℃に冷却する。アセトニトリル中の約１〜２当量の２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）を加えた後、さらなるアセトニトリルを加える。反応物を約２２℃に温め、撹拌を１〜３時間にわたって続ける。さらなるアセトニトリルを加え、温度を約−１０〜０℃に低下させる。気体トリメチルアミンを、その沸点未満に冷却し、約４０〜６０当量のこの液体トリメチルアミンを加える。反応混合物を約６０〜７０℃に加熱し、１０〜１６時間にわたって進行させたところ、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物ＶＩｅ）が得られる。反応物を約−３０℃に冷却し、得られた懸濁液をろ過する。粗製のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを、シリカゲルクロマトグラフィーによってさらに精製する。
【０１０７】
１当量のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンをメタノールに溶解させ、約０．２当量のナトリウムメトキシドを加え、混合物を約２２℃で２０〜２６時間撹拌する。塩化メチレンおよび水を加え、塩酸の添加によって、ｐＨを約７に調整する。Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｃ）を有機層から回収する。
【０１０８】
本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１０９】
本発明の特定の実施形態において、得られたＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンは、少なくとも約８５％の鏡像異性体純度を有し、約１５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約９０％の鏡像異性体純度を有し、約１０％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約９５％の鏡像異性体純度を有し、約５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約９８％の鏡像異性体純度を有し、約２％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。
【０１１０】
本発明の方法に関連した、第二級アルコール（３−ＯＨ）を保護するためのベンゾイル基の使用が、第二級アルコール（３−ＯＨ）から第一級アルコール（１−ＯＨ）への保護基の移動の程度を最小限に抑えるという意外かつ予想外の利益を提供することが分かった。
【０１１１】
図８は、粗製のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＶＩｃ）の薄層クロマトグラフィープレートの写真である。Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンは、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＶＩｃ）の約１重量％未満であり、粗反応生成物の約０．５重量％未満である。本発明のさらなる実施形態において、本発明の方法から得られるＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンに対するＮ−パルミトイル−１−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンの重量比は、約１０：９０である。本発明のさらに他の実施形態において、本発明の方法から得られるＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンに対するＮ−パルミトイル−１−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンの重量比は、約５：９５である。本発明のさらに他の実施形態において、本発明の方法から得られるＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンに対するＮ−パルミトイル−１−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンの重量比は、約２：９８である。本発明のさらに他の実施形態において、本発明の方法から得られるＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンに対するＮ−パルミトイル−１−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンの重量比は、約１：９９である。
【０１１２】
本発明のさらなる実施形態は、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン、特に、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの大規模合成を可能にする。本発明の特定の実施形態において、本発明の方法は、約１キログラム規模でのＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成を可能にする。本発明の特定の実施形態において、本発明の方法は、約１〜約５キログラム規模でのＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成を可能にする。本発明のさらなる実施形態において、本発明の方法は、約１〜約１０キログラム規模でのＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成を可能にする。本発明のさらに他の実施形態において、本発明の方法は、約１〜約５０キログラム規模でのＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成を可能にする。本発明のさらに他の実施形態において、本発明の方法は、約１キログラム規模でのＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成を可能にする。本発明のさらに他の実施形態において、本発明の方法は、約１〜約５キログラム規模でのＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成を可能にする。本発明の他の実施形態において、本発明の方法は、約１〜約１０キログラム規模でのＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成を可能にする。本発明の特定の実施形態において、本発明の方法は、約１〜約５０キログラム規模でのＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成を可能にする。
【化１６】
2018168171.tif 000017
【０１１３】
Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンの合成
さらなる実施形態において、本発明は、スキームＶＩＩに示されるように、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミド（化合物ＶＩＩｂ）を得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを、脂肪酸（化合物ＶＩＩａ）と反応させる工程と；
ｂ）Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドＶＩＩｂの第一級ヒドロキシル基を、第１の保護基で保護して、化合物ＶＩＩｃを得る工程と；
ｃ）Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドの第二級ヒドロキシル基を、第２の保護基で保護して、化合物ＶＩＩｄを得る工程と；
ｄ）化合物ＶＩＩｄの第１の保護基を除去して、化合物ＶＩＩｅを得る工程と；
ｅ）化合物ＶＩＩｆを得るのに有効な条件下で、化合物ＶＩＩｅを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）と反応させる工程と；
ｆ）化合物ＶＩＩｇを得るのに有効な条件下で、化合物ＶＩＩｆを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｇ）化合物ＶＩＩｇの第２の保護基を、ナトリウムメトキシドで除去して、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＶＩＩｈ）を得る工程と
を含む方法を提供する。
【化１７】
2018168171.tif 000018
【０１１４】
Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドの合成
本発明の特定の実施形態において、Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを得るための、脂肪酸によるＤ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンのＮ−アシル化は、スキームＶＩＩに示されるように進行する。工程は、以下のとおりである：Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物Ｂ）、脂肪酸（化合物ＶＩＩａ）、およびアミド形成剤を、非プロトン性有機溶媒に懸濁させ、混合物を約０〜５℃の温度で冷却する。一実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物である。本発明の特定の実施形態において、アミド形成剤は、Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）である。
【０１１５】
以下に限定はされないが、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基を、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンと、脂肪酸と、アミド形成剤との混合物に加える。特定の実施形態において、有機塩基は、非プロトン性有機溶媒中であり、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物である。本発明のさらなる実施形態において、有機塩基を、約１５〜９０分間にわたって加える。次に、混合物を、約０〜２２℃の温度で１〜１５時間撹拌する。本発明の特定の実施形態において、反応は、約０〜５℃の温度で進行する。本発明の他の実施形態において、反応は約２２℃で進行する。本発明のさらに他の実施形態において、反応はおよそ室温で進行する。
【０１１６】
約１〜１５時間撹拌した後、生成物、化合物ＶＩＩｂを、酸の添加によって沈殿させる。本発明の特定の実施形態において、酸は、クエン酸、酢酸、またはシュウ酸などの有機酸である。酸を加えるとき、酸は水溶液中であり得る。酸を加えるとき、反応物は、約２２℃であり得る。得られた懸濁液を、約０〜５℃の温度で３０〜１２０分間撹拌することができる。本発明の特定の実施形態において、懸濁液を約２２℃で撹拌する。
【０１１７】
撹拌した後、懸濁液をろ過する。次に、得られた生成物、化合物ＶＩＩｂを、水に再懸濁させることができ、その後、それをろ過し、洗浄することができる。再懸濁を、少なくとももう１回行うことができる。得られた生成物、Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミド（化合物ＶＩＩｂ）を、水、アセトン、またはそれらの混合物で洗浄することができる。
【０１１８】
ベンゾイル保護されたＤ−エリトロ−ジヒドロセラミドの合成
本発明の特定の実施形態において、Ｄ−エリトロ−セラミドの第一級ヒドロキシル基を保護した後、第二級ヒドロキシルの保護、次に、第一級ヒドロキシルの脱保護を行う。本発明のさらなる実施形態において、保護および脱保護工程は、第一級ヒドロキシル保護されたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−セラミドの単離または精製を伴わずに進行する。
【０１１９】
本発明の特定の実施形態において、Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを、以下に限定はされないが、塩化トリチルおよび臭化トリチルなどのハロゲン化トリチルなどのトリチル化試薬と反応させることによって、第一級ヒドロキシル基をトリチル基で保護する。本発明の特定の実施形態において、１−Ｏ−保護されたＤ−エリトロ−ジヒドロセラミドを、以下に限定はされないが、塩化ベンゾイルおよび臭化トリチルなどのハロゲン化ベンゾイルなどのベンゾイル化試薬と反応させることによって、第二級ヒドロキシル基をベンゾイル基で保護する。本発明のさらなる実施形態において、第一級ヒドロキシル基をトリチル基で保護し、第二級ヒドロキシルをベンゾイル基で保護する。
【０１２０】
本発明の特定の実施形態において、第一級ヒドロキシル基の保護は、以下のように進行する：Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミド（化合物ＶＩＩｂ）および塩化トリチルを、塩基の存在下で、有機溶媒に懸濁させる。反応は、約１０〜６０時間にわたって約２５〜５５℃の温度で進行して、トリチル保護されたＤ−エリトロ−ジヒドロセラミド（１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−セラミド化合物ＶＩＩｃ、ここで、ＰＧ１＝−Ｔｒｔである）が得られる。有機溶媒は、非極性または極性溶媒であり得る。本発明の一実施形態において、有機溶媒は、非極性溶媒であり、トルエン、ベンゼン、ヘキサンまたはそれらの混合物である。一実施形態において、有機溶媒は、非プロトン性極性溶媒である。一実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、塩化メチレン、クロロホルムまたは四塩化炭素である。別の実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、塩素化されておらず、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、または酢酸エチルである。塩基は、典型的に、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基である。
【０１２１】
本発明の特定の実施形態において、例えば、塩化トリチルを用いた、第一級ヒドロキシル基の保護により、粗反応生成物の約１０ｍｏｌ％以下のＮ−パルミトイル−１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが得られる。本発明のさらなる実施形態において、例えば、塩化トリチルを用いた、第一級ヒドロキシル基の保護により、粗反応生成物の約７ｍｏｌ％以下のＮ−パルミトイル１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが得られる。本発明のさらに他の実施形態において、例えば、塩化トリチルを用いた、第一級ヒドロキシル基の保護により、粗反応生成物の約５ｍｏｌ％以下のＮ−パルミトイル−１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが得られる。本発明のさらに他の実施形態において、例えば、塩化トリチルを用いた、第一級ヒドロキシル基の保護により、粗反応生成物の約１ｍｏｌ％以下のＮ−パルミトイル−１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが得られる。
【０１２２】
本発明のさらなる実施形態において、第二級ヒドロキシル基の保護は、以下のように直接進行する：上記の反応混合物を約０〜５℃に冷却し、塩化ベンゾイルおよび塩基を加える。反応は、約１〜１６時間にわたって約０〜５℃の温度で進行する。反応生成物、１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミド（化合物Ｖｄ；ＰＧ１＝−Ｔｒｔであり；ＰＧ２＝−Ｂｚである）を、上記の非プロトン性有機溶媒を含むがこれに限定されない有機溶媒で有機層から抽出することができる。次に、蒸発、例えば、減圧下での濃縮を含むがこれに限定されない、当業者に公知の好適な方法によって、有機溶媒を除去する。特定の実施形態において、塩基は、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基である。
【０１２３】
本発明のさらに他の実施形態において、第一級ヒドロキシル基の脱保護は、以下のように直接進行する：上記の反応からの残渣を、有機溶媒に溶解させ、酸を加える。反応は、１〜１６時間にわたって約２２℃の温度で進行する。反応混合物を、塩基の添加によって中和する。有機溶媒は、プロトン性極性溶媒、非プロトン性極性溶媒、またはそれらの混合物であり得る。一実施形態において、有機溶媒は、プロトン性極性溶媒であり、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、またはイソプロパノールである。一実施形態において、有機溶媒は、非プロトン性極性溶媒である。一実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、塩素化されており、塩化メチレン、クロロホルム、または四塩化炭素である。別の実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、塩素化されておらず、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、または酢酸エチルである。酸は、トリチル保護基の除去に好適であることが当業者に知られている任意の酸、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、塩酸およびｐ−トルエンスルホン酸であり得る。本発明の特定の実施形態において、酸は、ｐ−トルエンスルホン酸である。特定の実施形態において、塩基は、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基である。
【０１２４】
本発明の特定の実施形態において、上記の脱保護生成物（化合物ＶＩＩｅ；ＰＧ２＝−Ｂｚである）を、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１２５】
ベンゾイル保護されたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得るための、ベンゾイル保護されたＤ−エリトロ−ジヒドロセラミドのリン酸化(Phosporylation)およびアミノ化
本発明のさらなる実施形態において、３−ベンゾイル保護されたＤ−エリトロ−ジヒドロセラミド、（化合物ＶＩＩｅ；ＰＧ２＝−Ｂｚである）を、以下のようにリン酸化する：３−ベンゾイル(beznoyl)保護されたＤ−エリトロ−ジヒドロセラミドを、有機溶媒に溶解させ、アミンを加え、約４〜９℃に冷却した後、有機溶媒中の２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホランの溶液を加える。反応は、約２〜６時間にわたって約４〜２２℃の温度で進行して、３−Ｏ−ベンゾイル−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）−ジヒドロセラミド（化合物ＶＩＩｆ；ＰＧ２＝−Ｂｚである）が生成される。本発明の特定の実施形態において、反応は、約１５分間〜２時間にわたって約４〜９℃で進行し、次に、約２２℃に温められ、さらに２〜４時間にわたって進行する。有機溶媒は、非極性溶媒、極性溶媒、またはそれらの混合物であり得る。本発明の一実施形態において、有機溶媒は、非極性溶媒であり、トルエン、ベンゼン、ヘキサンまたはそれらの混合物である。一実施形態において、有機溶媒は、アセトニトリル、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、またはそれらの混合物などの非プロトン性極性溶媒である。アミンは、典型的に、テトラメチルエチレンジアミンまたはトリエチルアミンである。本発明の特定の実施形態において、アミンは、テトラメチルエチレンジアミンである。
【０１２６】
特定の実施形態において、３−Ｏ−ベンゾイル−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）−ジヒドロセラミド（化合物ＶＩＩｆ、ＰＧ２＝Ｂｚである）のアミノ化を、リン酸化されたベンゾイル保護されたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドの精製または単離を伴わずに行う。上記の反応が約２〜６時間にわたって進行した後、さらなる有機溶媒を加え、反応物を約−１０〜０℃に冷却する。気体トリメチルアミンをその沸点未満に冷却し、約４０〜６０当量のこの液体トリメチルアミンを加える。反応混合物を約６０〜７０℃に加熱し、１０〜１６時間にわたって進行させたところ、ベンゾイル保護されたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＶＩＩｇ、ＰＧ２＝Ｂｚである）が得られる。有機溶媒は、非極性溶媒、極性溶媒またはそれらの混合物であり得る。本発明の一実施形態において、有機溶媒は、非極性溶媒であり、トルエン、ベンゼン、ヘキサンまたはそれらの混合物である。一実施形態において、有機溶媒は、アセトニトリル、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、またはそれらの混合物などの非プロトン性極性溶媒である。特定の実施形態において、トリメチルアミンを液体として加える。他の実施形態において、トリエチルアミンを気体形態で加える。特定の実施形態において、液体トリメチルアミンは無水である。特定の実施形態において、反応物を、液体トリメチルアミンの添加の前に、約−１０℃〜０℃に冷却する。他の実施形態において、反応物を、液体トリメチルアミンの添加の前に、約−１０℃に冷却する。
【０１２７】
本発明の特定の実施形態において、ベンゾイル保護されたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１２８】
Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得るための、ベンゾイル保護されたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンの脱保護
ベンゾイル保護されたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンからのベンゾイル保護基の除去は、以下のように進行する：ベンゾイル保護されたジヒドロスフィンゴミエリンを、プロトン性極性溶媒に溶解させ、塩基を加える。反応は、約２２℃で８〜２４時間にわたって進行する。本発明の特定の実施形態において、非プロトン性溶媒および水を反応混合物に加え、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＶＩＩｈ）を有機層から回収する。一実施形態において、プロトン性極性溶媒は、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、またはそれらの混合物である。さらに別の実施形態において、塩基は、ナトリウムメトキシドである。
【０１２９】
本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１３０】
本発明の特定の実施形態において、得られたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約８５％の鏡像異性体純度を有し、約１５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約９０％の鏡像異性体純度を有し、約１０％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約９５％の鏡像異性体純度を有し、約５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約９８％の鏡像異性体純度を有し、約２％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。
【０１３１】
さらに別の実施形態において、本発明は、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを、脂肪酸と反応させる工程と；
ｂ）１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを、トリチル化試薬と反応させる工程と；
ｃ）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを得るのに有効な条件下で、１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを、ベンゾイル化試薬と反応させる工程と；
ｄ）１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドのトリチル基を除去して、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを得る工程と；
ｅ）３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）−ジヒドロセラミドを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミドを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホランと反応させる工程と；
ｆ）Ｎ−アシル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）ジヒドロセラミドを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｇ）Ｎ−アシル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンのベンゾイル基を、ナトリウムメトキシドで除去して、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得る工程と
を含む方法を提供する。
【０１３２】
Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンの合成
さらに別の実施形態において、本発明は、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを、パルミチン酸と反応させる工程と；
ｂ）Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを、トリチル化試薬と反応させる工程と；
ｃ）Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを、ベンゾイル化試薬と反応させる工程と；
ｄ）Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンのトリチル基を除去して、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを得る工程と；
ｅ）Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）−ジヒドロスフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）と反応させる工程と；
ｆ）Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）−ジヒドロスフィンゴシンを、トリメチルアミンと反応させる工程と；
ｇ）Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンのベンゾイル基を、ナトリウムメトキシドで除去して、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得る工程と
を含む方法を提供する。
【０１３３】
本発明の特定の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンが、スキームＶＩＩＩに示されるように合成される。
【０１３４】
１当量のパルミチン酸、１当量のＤ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物Ｂ）、および１．１０当量のＯ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）を、テトラヒドロフランおよびジメチルホルムアミドに懸濁させ、約０〜５℃に冷却する。２〜３当量のトリエチルアミンを加え、混合物を、約０〜５℃で約１〜１２時間撹拌する。混合物を約２２℃に温める。クエン酸の水溶液を加え、混合物を約２２℃で１５〜９０分間撹拌する。得られた懸濁液をろ過し、ケーキを、室温で、水に懸濁させる。懸濁液をろ過し、水およびアセトンで洗浄する。次に、得られた生成物、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物Ｆ）を乾燥させることができる。
【０１３５】
第一ヒドロキシルの保護のため、１当量のＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミド（化合物Ｆ）を、ピリジンおよび塩化メチレンに懸濁させた。塩化メチレン中の約１．０５当量の塩化トリチルの溶液を加えた後、さらなる塩化メチレンを加える。反応混合物を５０〜６０時間にわたって約２５℃で撹拌した。
【０１３６】
本発明の特定の実施形態において、第一級ヒドロキシルの保護により、粗反応生成物の１０ｍｏｌ％未満のＮ−パルミトイル−１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンが得られる。本発明のさらなる実施形態において、第一級ヒドロキシルの保護により、粗反応生成物の７ｍｏｌ％未満のＮ−パルミトイル−１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンが得られる。本発明のさらに他の実施形態において、第一級ヒドロキシルの保護により、粗反応生成物の５ｍｏｌ％未満のＮ−パルミトイル−１，３−Ο，Ο−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンが得られる。本発明のさらに他の実施形態において、第一級ヒドロキシルの保護により、粗反応生成物の１ｍｏｌ％未満のＮ−パルミトイル−１，３−Ｏ，Ｏ−ジトリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンが得られる。
【０１３７】
第二ヒドロキシルの保護のために、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＶＩＩＩａ）を含む、第一ヒドロキシルの保護からの反応混合物を約２℃に冷却する。約０．１０当量のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン、約１．５０当量の塩化ベンゾイルおよびさらなる塩化メチレンを加える。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析が、約５％未満の出発材料Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＶＩＩＩａ）の含量を示すまで、反応を、撹拌しながら約２℃で進行させる。酢酸エチルおよびクエン酸水溶液および塩化ナトリウム溶液を、反応に加え、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾール−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＶＩＩＩｂ）を有機相から回収する。
【０１３８】
トリチル保護基を除去するために、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾール−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＶＩＩＩｂ）を、メタノールおよび塩化メチレンに溶解させ、２℃に冷却する。メタノール中の０．５７当量のパラ−トルエンスルホン酸一水和物の溶液を用いて、ｐＨを２．５に調整する。ＴＬＣ分析が、５％未満の出発材料、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾール−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＶＩＩＩｂ）の含量を示すまで、反応を、撹拌しながら約２２℃で進行させる。トリエチルアミンを加えて、ｐＨを約７．０に調整する。反応混合物を蒸発乾固させ、得られた粗製のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＶＩＩＩｃ）を、約４０℃でヘキサンに懸濁させ、約０℃に冷却する。約３０〜６０分後、固体を、ろ過によって単離し、ヘキサンで洗浄する。次に、得られた生成物を、シリカゲルクロマトグラフィーなどの適切な方法によって精製することができる。
【０１３９】
１当量のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＶＩＩＩｃ）をトルエンに溶解させ、約０．６〜１当量のテトラメチルエチレンジアミンを加え、混合物を約４〜９℃に冷却する。アセトニトリル中の約１〜２当量の２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホランを加えた後、さらなるアセトニトリルを加える。反応物を約２２℃に温め、撹拌を１〜３時間にわたって続ける。その後、さらなるアセトニトリルを加え、温度を約−１０〜０℃に低下させる。気体トリメチルアミンを、その沸点未満に冷却し、約４０〜６０当量のこの液体トリメチルアミンを加える。反応物を約６０〜７０℃に加熱し、１０〜１６時間にわたって進行させたところ、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイルＤ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＶＩＩＩｅ）が得られる。反応物を約−３０℃に冷却し、得られた懸濁液をろ過する。粗製のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイルＤ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを、シリカゲルクロマトグラフィーによってさらに精製する。
【０１４０】
１当量のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイルＤ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＶＩＩＩｅ）をメタノールに溶解させ、約０．２当量のナトリウムメトキシドを加え、混合物を約２２℃で２０〜２６時間撹拌する。塩化メチレンおよび水を加え、塩酸の添加によって、ｐＨを約７に調整する。Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物Ｄ）を有機層から回収する。
【０１４１】
本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１４２】
本発明の特定の実施形態において、得られたＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンは、少なくとも約８５％の鏡像異性体純度を有し、約１５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約９０％の鏡像異性体純度を有し、約１０％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約９５％の鏡像異性体純度を有し、約５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約９８％の鏡像異性体純度を有し、約２％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。
【化１８】
2018168171.tif 000019
【０１４３】
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｆ）の保護
本発明の別の実施形態において、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（スキームＩ中の化合物Ｉｆ）の第二級ヒドロキシル基を保護し、スフィンゴミエリンの合成が、スキームＩＸに示されるように進行する。
【０１４４】
本発明の特定の実施形態において、スキームＩＸに示されるように、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｆ）の第二級ヒドロキシル基を、ベンゾイル基で保護して、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ベンゾイル−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物ＩＸａ）を得る。次に、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ベンゾイル−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを、メタノールおよび２〜３当量の塩化アセチルに溶解させて、塩酸を生成し、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基を除去したところ、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＩＸｂ）が得られる。
【０１４５】
本発明の特定の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＩＸｃ）を得るための、パルミチン酸による３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンのＮ−アシル化は、スキームＩＸに示されるように進行する。工程は、以下のとおりである：３−Ｏベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＩＸｂ）、パルミチン酸、およびアミド形成剤を、非プロトン性有機溶媒に懸濁させ、混合物を約０〜５℃の温度で冷却する。一実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物である。本発明の特定の実施形態において、アミド形成剤は、Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）である。
【０１４６】
以下に限定はされないが、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基を、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンと、パルミチン酸と、アミド形成剤との混合物に加える。特定の実施形態において、有機塩基は、非プロトン性有機溶媒中であり、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物である。本発明のさらなる実施形態において、有機塩基を、約１５〜９０分間にわたって加える。次に、混合物を、約０〜２２℃の温度で１〜１５時間撹拌する。本発明の特定の実施形態において、反応は、約０〜５℃の温度で進行する。本発明の他の実施形態において、反応は約２２℃で進行する。本発明のさらに他の実施形態において、反応はおよそ室温で進行する。
【０１４７】
約１〜１５時間撹拌した後、生成物を、酸の添加によって沈殿させる。本発明の特定の実施形態において、酸は、クエン酸、酢酸、またはシュウ酸などの有機酸である。酸を加えるとき、酸は水溶液中であり得る。酸を加えるとき、反応物は、約２２℃であり得る。得られた懸濁液を、約０〜５℃の温度で３０〜１２０分間撹拌することができる。本発明の特定の実施形態において、懸濁液を約２２℃で撹拌する。
【０１４８】
撹拌した後、懸濁液をろ過する。次に、得られた生成物を、水に再懸濁させることができ、その後、それを、ろ過し、洗浄することができる。再懸濁を、少なくとももう１回行うことができる。得られた生成物、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＩＸｃ）を、水、アセトン、またはそれらの混合物で洗浄することができる。
【０１４９】
本発明の特定の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンまたはその中間体の１つまたは複数を、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１５０】
１当量のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物ＩＸｃ）をトルエンに溶解させ、約０．６〜１当量のテトラメチルエチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ）を加え、混合物を約４〜９℃に冷却する。アセトニトリル中の約１〜２当量の２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）を加えた後、さらなるアセトニトリルを加える。反応物を約２２℃に温め、撹拌を１〜３時間にわたって続ける。さらなるアセトニトリルを加え、温度を約−１０〜０℃に低下させる。気体トリメチルアミンを、その沸点未満に冷却し、約４０〜６０当量のこの液体トリメチルアミンを加える。反応混合物を約６０〜７０℃に加熱し、１０〜１６時間にわたって進行させたところ、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物ＩＸｅ）が得られる。反応物を約−３０℃に冷却し、得られた懸濁液をろ過する。粗製のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物ＩＸｅ）を、シリカゲルクロマトグラフィーによってさらに精製する。
【０１５１】
１当量のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物ＩＸｅ）をメタノールに溶解させ、約０．２当量のナトリウムメトキシドを加え、混合物を約２２℃で２０〜２６時間撹拌する。塩化メチレンおよび水を加え、塩酸の添加によって、ｐＨを約７に調整する。Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｃ）を有機層から回収する。
【０１５２】
本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｃ）を、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１５３】
本発明の特定の実施形態において、得られたＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンは、少なくとも約８５％の鏡像異性体純度を有し、約１５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約９０％の鏡像異性体純度を有し、約１０％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約９５％の鏡像異性体純度を有し、約５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約９８％の鏡像異性体純度を有し、約２％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。
【化１９】
2018168171.tif 000020
【０１５４】
本発明の特定の実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンが、以下に記載されるように調製される。
【０１５５】
本発明の一態様において、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｆ）の第二級ヒドロキシル基を、以下に限定はされないが、エステルまたはエーテルなどの保護基で保護することができる。本発明の特定の実施形態において、保護基は、以下に限定はされないが、ベンゾイルエステルまたはフルオレニルメチルオキシカルボニルエステルなどのエステルである。本発明のさらなる実施形態において、保護基は、以下に限定はされないが、ｔ−ブチルジフェニルシリルエーテルなどのエーテルである。
【０１５６】
本発明の特定の実施形態において、スキームＸに示されるように、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｉｆ）の第二級ヒドロキシル基を、ベンゾイル基で保護して、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ベンゾイル−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（化合物Ｘａ）を得る。次に、化合物Ｘａを、メタノールおよび２〜３当量の塩化アセチルに溶解させて、塩酸を生成し、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基を除去したところ、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ｘｂ）が得られる。次に、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、好適な脂肪酸およびアミド形成剤の添加によって、Ｎ−アシル化することができる。工程は、以下のとおりである：３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ｘｂ）、脂肪酸、およびアミド形成剤を、非プロトン性有機溶媒に懸濁させ、混合物を約０〜５℃の温度で冷却する。一実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物である。本発明の特定の実施形態において、アミド形成剤は、Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）である。
【０１５７】
以下に限定はされないが、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基を、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（化合物Ｘｂ）と、脂肪酸と、アミド形成剤との混合物に加える。特定の実施形態において、有機塩基は、非プロトン性有機溶媒中であり、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物である。本発明のさらなる実施形態において、有機塩基を、約１５〜９０分間にわたって加える。次に、混合物を、約０〜２２℃の温度で１〜１５時間撹拌する。本発明の特定の実施形態において、反応は、約０〜５℃の温度で進行する。本発明の他の実施形態において、反応は約２２℃で進行する。本発明のさらに他の実施形態において、反応はおよそ室温で進行する。
【０１５８】
約１〜１５時間撹拌した後、生成物（化合物Ｘｃ）を、酸の添加によって沈殿させる。本発明の特定の実施形態において、酸は、クエン酸、酢酸、またはシュウ酸などの有機酸である。酸を加えるとき、酸は水溶液中であり得る。酸を加えるとき、反応物は、約２２℃であり得る。得られた懸濁液を、約０〜５℃の温度で３０〜１２０分間撹拌することができる。本発明の特定の実施形態において、懸濁液を約２２℃で撹拌する。
【０１５９】
撹拌した後、懸濁液をろ過する。次に、得られた生成物を、水に再懸濁させることができ、その後、それを、ろ過し、洗浄することができる。再懸濁を、少なくとももう１回行うことができる。得られた生成物、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−セラミド（化合物Ｘｃ）を、水、アセトン、またはそれらの混合物で洗浄することができる。
【０１６０】
本発明の特定の実施形態において、化合物Ｘｃまたはその中間体の１つまたは複数を、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１６１】
１当量の化合物Ｘｃをトルエンに溶解させ、約０．６〜１当量のテトラメチルエチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ）を加え、混合物を約４〜９℃に冷却する。アセトニトリル中の約１〜２当量の２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）を加えた後、さらなるアセトニトリルを加える。反応物を約２２℃に温め、撹拌を１〜３時間にわたって続ける。さらなるアセトニトリルを加え、温度を約−１０〜０℃に低下させる。気体トリメチルアミンを、その沸点未満に冷却し、約４０〜６０当量のこの液体トリメチルアミンを加える。反応混合物を約６０〜７０℃に加熱し、１０〜１６時間にわたって進行させたところ、Ｎ−アシル−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｘｅ）が得られる。反応物を約−３０℃に冷却し、得られた懸濁液をろ過する。粗製のＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｘｅ）を、シリカゲルクロマトグラフィーによってさらに精製する。
【０１６２】
１当量のＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｘｅ）をメタノールに溶解させ、約０．２当量のナトリウムメトキシドを加え、混合物を約２２℃で２０〜２６時間撹拌する。塩化メチレンおよび水を加え、塩酸の添加によって、ｐＨを約７に調整する。Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｘｆ）を有機層から回収する。
【０１６３】
本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｘｆ）を、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１６４】
本発明の特定の実施形態において、得られたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンは、少なくとも約８５％の鏡像異性体純度を有し、約１５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約９０％の鏡像異性体純度を有し、約１０％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約９５％の鏡像異性体純度を有し、約５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、少なくとも約９８％の鏡像異性体純度を有し、約５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。
【化２０】
2018168171.tif 000021
【０１６５】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（（Ｒ）−１−ヒドロキシヘキサデシル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン−３−カルボキシレート（化合物ＩＩａ）の保護
スフィンゴシン前駆体（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（（Ｒ）−１−ヒドロキシヘキサデシル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン−３−カルボキシレート（スキームＩＩ中の化合物ＩＩａ）の第二級ヒドロキシルを保護し、ジヒドロスフィンゴミエリンの合成が、スキームＸＩに示されるように進行する。
【０１６６】
本発明の特定の実施形態において、スキームＸＩに示されるように、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（（Ｒ）−１−ヒドロキシヘキサデシル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン−３−カルボキシレート（化合物ＩＩａ）の第二級ヒドロキシル基を、ベンゾイル基で保護して、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（（Ｒ）−１−（ベンゾイルオキシ）ヘキサデシル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン−３−カルボキシレート（化合物ＸＩａ）を得る。次に、化合物ＸＩａを、メタノールおよび２〜３当量の塩化アセチルに溶解させて、塩酸を生成し、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基を除去したところ、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＸＩｂ）が得られる。
【０１６７】
本発明の特定の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＸＩｃ）を得るための、パルミチン酸による３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンのＮ−アシル化は、以下のように進行する：３−Ｏベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＸＩｂ）、パルミチン酸、およびアミド形成剤を、非プロトン性有機溶媒に懸濁させ、混合物を約０〜５℃の温度で冷却する。一実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物である。本発明の特定の実施形態において、アミド形成剤は、Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）である。
【０１６８】
以下に限定はされないが、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基を、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンと、パルミチン酸と、アミド形成剤との混合物に加える。特定の実施形態において、有機塩基は、非プロトン性有機溶媒中であり、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物である。本発明のさらなる実施形態において、有機塩基を、約１５〜９０分間にわたって加える。次に、混合物を、約０〜２２℃の温度で１〜１５時間撹拌する。本発明の特定の実施形態において、反応は、約０〜５℃の温度で進行する。本発明の他の実施形態において、反応は約２２℃で進行する。本発明のさらに他の実施形態において、反応はおよそ室温で進行する。
【０１６９】
約１〜１５時間撹拌した後、生成物を、酸の添加によって沈殿させる。本発明の特定の実施形態において、酸は、クエン酸、酢酸、またはシュウ酸などの有機酸である。酸を加えるとき、酸は水溶液中であり得る。酸を加えるとき、反応物は、約２２℃であり得る。得られた懸濁液を、約０〜５℃の温度で３０〜１２０分間撹拌することができる。本発明の特定の実施形態において、懸濁液を約２２℃で撹拌する。
【０１７０】
撹拌した後、懸濁液をろ過する。次に、得られた生成物を、水に再懸濁させることができ、その後、それを、ろ過し、洗浄することができる。再懸濁を、少なくとももう１回行うことができる。得られた生成物、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＸＩｃ）を、水、アセトン、またはそれらの混合物で洗浄することができる。
【０１７１】
本発明の特定の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンまたはその中間体の１つまたは複数を、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１７２】
１当量のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＸＩｃ）をトルエンに溶解させ、約０．６〜１当量のテトラメチルエチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ）を加え、混合物を約４〜９℃に冷却する。アセトニトリル中の約１〜２当量の２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）を加えた後、さらなるアセトニトリルを加える。反応物を約２２℃に温め、撹拌を１〜３時間にわたって続ける。さらなるアセトニトリルを加え、温度を約−１０〜０℃に低下させる。気体トリメチルアミンを、その沸点未満に冷却し、約４０〜６０当量のこの液体トリメチルアミンを加える。反応混合物を約６０〜７０℃に加熱し、１０〜１６時間にわたって進行させたところ、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＸＩｅ）が得られる。反応物を約−３０℃に冷却し、得られた懸濁液をろ過する。粗製のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＸＩｅ）を、シリカゲルクロマトグラフィーによってさらに精製する。
【０１７３】
１当量のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＸＩｅ）をメタノールに溶解させ、約０．２当量のナトリウムメトキシドを加え、混合物を約２２℃で２０〜２６時間撹拌する。塩化メチレンおよび水を加え、塩酸の添加によって、ｐＨを約７に調整する。Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物Ｄ）を有機層から回収する。
【０１７４】
本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物Ｄ）を、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１７５】
本発明の特定の実施形態において、得られたＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンは、少なくとも約８５％の鏡像異性体純度を有し、約１５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約９０％の鏡像異性体純度を有し、約１０％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約９５％の鏡像異性体純度を有し、約５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約９８％の鏡像異性体純度を有し、約２％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。
【化２１】
2018168171.tif 000022
【０１７６】
本発明の特定の実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンが、以下に記載されるように調製される。
【０１７７】
本発明の一態様において、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（（Ｒ）−１−ヒドロキシヘキサデシル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン−３−カルボキシレート（化合物ＩＩａ）の第二級ヒドロキシル基を、以下に限定はされないが、エステルまたはエーテルなどの保護基で保護することができる。本発明の特定の実施形態において、保護基は、以下に限定はされないが、ベンゾイルエステルまたはフルオレニルメチルオキシカルボニルエステルなどのエステルである。本発明のさらなる実施形態において、保護基は、以下に限定はされないが、ｔ−ブチルジフェニルシリルエーテルなどのエーテルである。
【０１７８】
本発明の特定の実施形態において、スキームＸＩＩに示されるように、化合物ＩＩａの第二級ヒドロキシル基を、ベンゾイル基で保護して、化合物ＸＩＩａを得る。次に、化合物ＸＩＩａを、メタノールおよび２〜３当量の塩化アセチルに溶解させて、塩酸を生成し、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基を除去したところ、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＸＩＩｂ）が得られる。次に、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを、好適な脂肪酸およびアミド形成剤の添加によって、Ｎ−アシル化することができる。工程は、以下のとおりである：３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＸＩＩｂ）、脂肪酸、およびアミド形成剤を、非プロトン性有機溶媒に懸濁させ、混合物を約０〜５℃の温度で冷却する。一実施形態において、非プロトン性有機溶媒は、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物である。本発明の特定の実施形態において、アミド形成剤は、Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（ＨＢＴＵ）である。
【０１７９】
以下に限定はされないが、トリエチルアミンまたはピリジンなどの有機塩基を、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシン（化合物ＸＩＩｂ）と、脂肪酸と、アミド形成剤との混合物に加える。特定の実施形態において、有機塩基は、非プロトン性有機溶媒中であり、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、２−メチルテトラヒドロフラン、またはそれらの混合物である。本発明のさらなる実施形態において、有機塩基を、約１５〜９０分間にわたって加える。次に、混合物を、約０〜２２℃の温度で１〜１５時間撹拌する。本発明の特定の実施形態において、反応は、約０〜５℃の温度で進行する。本発明の他の実施形態において、反応は約２２℃で進行する。本発明のさらに他の実施形態において、反応はおよそ室温で進行する。
【０１８０】
約１〜１５時間撹拌した後、生成物（化合物ＸＩＩｃ）を、酸の添加によって沈殿させる。本発明の特定の実施形態において、酸は、クエン酸、酢酸、またはシュウ酸などの有機酸である。酸を加えるとき、酸は水溶液中であり得る。酸を加えるとき、反応物は、約２２℃であり得る。得られた懸濁液を、約０〜５℃の温度で３０〜１２０分間撹拌することができる。本発明の特定の実施形態において、懸濁液を約２２℃で撹拌する。
【０１８１】
撹拌した後、懸濁液をろ過する。次に、得られた生成物を、水に再懸濁させることができ、その後、それを、ろ過し、洗浄することができる。再懸濁を、少なくとももう１回行うことができる。得られた生成物、３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミド（化合物ＸＩＩｃ）を、水、アセトン、またはそれらの混合物で洗浄することができる。
【０１８２】
本発明の特定の実施形態において、化合物ＸＩＩｃまたはその中間体の１つまたは複数を、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１８３】
１当量の化合物ＸＩＩｃをトルエンに溶解させ、約０．６〜１当量のテトラメチルエチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ）を加え、混合物を約４〜９℃に冷却する。アセトニトリル中の約１〜２当量の２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）を加えた後、さらなるアセトニトリルを加える。反応物を約２２℃に温め、撹拌を１〜３時間にわたって続ける。さらなるアセトニトリルを加え、温度を約−１０〜０℃に低下させる。気体トリメチルアミンを、その沸点未満に冷却し、約４０〜６０当量のこの液体トリメチルアミンを加える。反応混合物を約６０〜７０℃に加熱し、１０〜１６時間にわたって進行させたところ、Ｎ−アシル−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＸＩＩｅ）が得られる。反応物を約−３０℃に冷却し、得られた懸濁液をろ過する。粗製のＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＸＩＩｅ）を、シリカゲルクロマトグラフィーによってさらに精製する。
【０１８４】
１当量のＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＸＩＩｅ）をメタノールに溶解させ、約０．２当量のナトリウムメトキシドを加え、混合物を約２２℃で２０〜２６時間撹拌する。塩化メチレンおよび水を加え、塩酸の添加によって、ｐＨを約７に調整する。Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＸＩＩｆ）を有機層から回収する。
【０１８５】
本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＸＩＩｆ）を、再結晶化、シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは当業者に公知の他の方法によって精製することができる。
【０１８６】
本発明の特定の実施形態において、得られたＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンは、少なくとも約８５％の鏡像異性体純度を有し、約１５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約９０％の鏡像異性体純度を有し、約１０％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約９５％の鏡像異性体純度を有し、約５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。さらに他の実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンは、少なくとも約９８％の鏡像異性体純度を有し、約２％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有する。
【化２２】
2018168171.tif 000023
【０１８７】
第二級ヒドロキシル基の保護を伴わないＮ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成
本発明の特定の実施形態において、スキームＸＩＩＩに示されるように、Ｄ−エリトロ−セラミド（化合物Ｖｂ）を、ハロ亜リン酸エチレンで直接リン酸化する。反応は、大きい誘電率（＞２０）および大きい双極子モーメントを有する非プロトン性極性溶媒中で、約４〜１０当量の塩基の存在下で、約２．５〜３．５当量のハロ亜リン酸エチレンの存在下で進行する。特定の実施形態において、反応は、約−２０〜＋２０℃で進行する。特定の実施形態において、非プロトン性極性溶媒は、２０を超える誘電率を有する。特定の実施形態において、非プロトン性極性溶媒は、クロロホルム、ニトロメタン、アセトニトリル、アセトン、ジメチルスルホキシド、またはそれらの混合物である。特定の実施形態において、ハロホスファイトは、クロロホスファイトである。さらなる実施形態において、反応は、３当量のクロロ亜リン酸エチレンを用いて進行する。他の実施形態において、塩基は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンである。さらに他の実施形態において、反応は、５当量のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを用いて進行する。
【０１８８】
何らかの特定の機構に制約されるものではないが、このような溶媒は、例えば、ヒドロキシル部分の溶媒和によって、セラミド中の分子内水素結合を妨げるものと考えられる。好適な溶媒としては、以下に限定はされないが、クロロホルム、ニトロメタン、アセトニトリル、アセトン、またはジメチルスルホキシドが挙げられる。
【０１８９】
未反応のハロ亜リン酸エチレンをアルコールでクエンチした後、環状ホスフェート（化合物ＸＩＩＩａ）を、約−５０〜１０℃、一実施形態において、約−２０℃の温度で、臭素の存在下で、酸化し、開環させて、臭化セラミド誘導体（化合物ＸＩＩＩｂ）を生成し、そのＰ−Ｂｒ結合が水の添加によって加水分解される。本発明の特定の実施形態において、アルコールは、メタノールまたはエタノールである。化合物ＸＩＩＩｂを、無水液体トリメチルアミンで四級化して、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（化合物Ｖｈ）を得る。本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンは、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンである。
【化２３】
2018168171.tif 000024
【０１９０】
さらに別の実施形態において、本発明は、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−１−（（１，３，２−ジオキサホスホラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エン−２−イル）パルミトイルアミドを得るのに有効な条件下で、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、クロロ亜リン酸エチレンと反応させる工程と；
ｂ）２−ブロモエチル（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデカ−４−エン−１−イル）ホスホロブロミデートを得るのに有効な条件下で、Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−ｌ−（（１，３，２−ジオキサホスホラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エン−２−イル）パルミトイルアミドを、臭素と反応させる工程と；
ｃ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、２−ブロモエチル（（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデカ−４−エン−１−イル）ホスホロブロミデートを、トリメチルアミンと反応させる工程と
を含む方法を提供する。
【０１９１】
第二級ヒドロキシル基の保護を伴わない、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンの合成
本発明の特定の実施形態において、スキームＸＩＶに示されるように、Ｄ−エリトロ−ジヒドロセラミド（化合物ＶＩＩｂ）を、ハロ亜リン酸エチレンで直接リン酸化する。反応は、大きい誘電率（＞２０）および大きい双極子モーメントを有する非プロトン性極性溶媒中で、約４〜１０当量の塩基の存在下で、約２．５〜３．５当量のハロ亜リン酸エチレンの存在下で進行する。特定の実施形態において、反応は、約−２０〜＋２０℃で進行する。特定の実施形態において、非プロトン性極性溶媒は、２０を超える誘電率を有する。特定の実施形態において、非プロトン性極性溶媒は、クロロホルム、ニトロメタン、アセトニトリル、アセトン、ジメチルスルホキシド、またはそれらの混合物である。特定の実施形態において、ハロホスファイトは、クロロ亜リン酸エチレンである。さらなる実施形態において、反応は、３当量のクロロ亜リン酸エチレンを用いて進行する。他の実施形態において、塩基は、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンである。さらに他の実施形態において、反応は、５当量のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを用いて進行する。
【０１９２】
何らかの特定の機構に制約されるものではないが、このような溶媒は、ヒドロキシル部分の溶媒和によって、アシルジヒドロセラミド中の分子内水素結合を妨げるものと考えられる。好適な溶媒としては、以下に限定はされないが：クロロホルム、ニトロメタン、アセトニトリル、アセトン、またはジメチルスルホキシドが挙げられる。
【０１９３】
未反応のハロ亜リン酸エチレンをアルコールでクエンチした後、環状ホスファイト（化合物ＸＩＶａ）を、約−５０〜１０℃（好ましくは、約−２０℃）の温度で、臭素の存在下で、同時に、酸化し、開環させて、臭化ジヒドロセラミド誘導体（化合物ＸＩＶｂ）を生成し、そのＰ−Ｂｒ結合が水の添加によって加水分解される。本発明の特定の実施形態において、アルコールは、メタノールまたはエタノールである。化合物ＸＩＶｂを、無水液体トリメチルアミンで四級化して、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリン（化合物ＶＩＩｈ）を得る。本発明のさらなる実施形態において、Ｎ−アシル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンは、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンである。
【化２４】
2018168171.tif 000025
【０１９４】
さらに別の実施形態において、本発明は、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを合成するための方法であって、
ａ）Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（１，３，２−ジオキサホスホラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシオクタデカン−２−イル）パルミトアミドを得るのに有効な条件下で、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴシンを、クロロ亜リン酸エチレンと反応させる工程と；
ｂ）２−ブロモエチル（（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデシル）ホスホロブロミデートを得るのに有効な条件下で、Ｎ−（（２Ｓ，３Ｒ）−１−（（１，３，２−ジオキサホスホラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシオクタデカン−２−イル）パルミトアミドを、臭素と反応させる工程と；
ｃ）Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−ジヒドロスフィンゴミエリンを得るのに有効な条件下で、２−ブロモエチル（（２Ｓ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−パルミトアミドオクタデシル）ホスホロブロミデートを、トリメチルアミンと反応させる工程と
を含む方法を提供する。
【実施例】
【０１９５】
実施例１：Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの合成
工程１：２−（Ｅ）−ヘキサデセナールの合成
工程１．１：１−テトラデカナール
【化２５】
2018168171.tif 000026
−３０℃で、塩化メチレン（１５００ｍｌ）中の１−テトラデカノール（１１０．０ｇ；０．５１３ｍｏｌ）およびトリクロロイソシアヌル酸（１７８．１ｇ；０．７７ｍｏｌ）の溶液に、（２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−イル）オキシル（ＴＥＭＰＯ）（８００ｍｇ；０．０５１ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１．５時間撹拌し、セライト上でろ過した。次に、収集した有機相を、Ｎａ２ＣＯ３の飽和溶液（８００ｍｌ）、続いて、ＨＣｌ  １Ｎ（８００ｍＬ）で洗浄した。次に、それをＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮したところ、表題化合物、１−テトラデカナールが、白色の固体（９９．６ｇ；９１％）として得られた。
【０１９６】
工程１．２：２−ヘキサデセン酸エチル
【化２６】
2018168171.tif 000027
無水テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中のＮａＨ（２．４ｇ、０．０５９ｍｏｌ）の懸濁液に、ホスホノ酢酸トリエチル（９．４ｍＬ、０．０４７ｍｏｌ）を、０℃で滴下して加えた。０℃で３０分間撹拌した後、テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中のテトラデカナール（１０．０ｇ、０．０４７ｍｏｌ）の溶液を加え、反応混合物を室温に温め、さらに３時間撹拌した。次に、ＮａＣｌの飽和溶液（５０ｍＬ）を加え、水層をＥｔ２Ｏ（３×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を収集し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、溶媒を蒸発させた。得られた生成物を、シリカゲルにおけるフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン−酢酸エチル：９５／５）によって精製したところ、表題化合物、２−ヘキサデセン酸エチルが、無色の液体（１２．３ｇ；９２％）として得られた。
Ｒｆ＝０．２４（ヘキサン／Ｅｔ２Ｏ：９５／５）。
ＧＣ：ｔｒ＝１３．１３分間（ホスホノ酢酸トリエチル）；ｔｒ＝１５．８０分間（１−テトラデカナール）；ｔｒ＝２０．６０分間（２−ヘキサデセン酸エチル）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：０．８７（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３）；１．２５（ｂｒ，２０Ｈ）；１．２８（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３）；１．４４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．１８（ｑｄ，２Ｈ，ＣＨ２，３Ｊ＝６．５Ｈｚ、４Ｊ＝１．５Ｈｚ）；４．１８（ｑ，２Ｈ，ＣＨ２）；５．８０（ｄｔ，１Ｈ，３Ｊ＝１５．５Ｈｚ、４Ｊ＝１．５Ｈｚ）；６．９６（ｄｔ，１Ｈ，ＣＨ２，３Ｊ＝１５．５Ｈｚ、３Ｊ＝６．５Ｈｚ）。
【０１９７】
工程１．３：２−（Ｅ）−ヘキサデセン−１−オール
【化２７】
2018168171.tif 000028
水素化ジイソブチルアルミニウム（５４．５ｍＬ、シクロヘキサン中１Ｍ、０．０５４ｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中の２−ヘキサデセン酸エチル（６．４ｇ、０．０２３ｍｏｌ）の溶液に、０℃で、滴下して加えた。ＴＬＣによって監視した際に出発材料が完全に消費されるまで、反応混合物を０℃で撹拌した。Ｅｔ２Ｏ（５０ｍＬ）および酒石酸ナトリウムの飽和溶液（５０ｍＬ）を、別個の２つの層がはっきりと見えるまで、連続して加えた。水層を、Ｅｔ２Ｏ（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を組み合わせて、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去したところ、表題化合物、２−（Ｅ）−ヘキサデセン−１−オールが、白色のろう状の固体（５．３ｇ；９７％）として得られた。
Ｒｆ＝０．３１（ヘキサン／Ｅｔ２Ｏ：１／１）。
ＧＣ：ｔｒ＝１９．１分間
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：０．８７（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３）；１．２５（ｂｒ，２２Ｈ）；２．０３（ｑ，２Ｈ，ＣＨ２，３Ｊ＝６．０Ｈｚ）；４．０９（ｄ，１Ｈ，３Ｊ＝５Ｈｚ）；５．６６（ｍ，２Ｈ）。
【０１９８】
工程１．４：２−（Ｄ−ヘキサデセン−１−アール
【化２８】
2018168171.tif 000029
０℃で、アルゴン下で、塩化メチレン（３０ｍＬ）中の２−（Ｅ）−ヘキサデセン−１−オール（５．２ｇ；０．０２２ｍｏｌ）の溶液に、塩化メチレン（３０ｍＬ）中のクロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）（１６．３ｇ；０．０４３ｍｏｌ）の懸濁液、続いて、セライト（２０ｇ）を加えた。０℃で３時間撹拌した後、反応混合物を２０ｍＬのジエチルエーテルで希釈し、シリカのパッド上でろ過した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を、シリカゲルにおけるフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン−酢酸エチル：９５／５）によって精製したところ、表題化合物、２−（Ｅ）−ヘキサデセン−１−アールが、白色の固体（２．２ｇ；４３％）として得られた。
Ｒｆ＝０．１４（ヘキサン／Ｅｔ２Ｏ：９５／５）
ＧＣ：ｔｒ＝１８．９分間
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：０．８８（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３）；１．２６（ｂｒ，２０Ｈ）；１．５０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）；２．３５（ｑｄ，２Ｈ，３Ｊ＝７Ｈｚ、４Ｊ＝１．５Ｈｚ）；６．１（ｄｄｔ，１Ｈ，３Ｊ＝１５．５Ｈｚ、３Ｊ＝８Ｈｚ、４Ｊ＝１．５Ｈｚ）；６．８５（ｔｄ，１Ｈ，３Ｊ＝１５．５Ｈｚ、３Ｊ＝７Ｈｚ）；９．５（ｄ，１Ｈ，３Ｊ＝８Ｈｚ）。
【０１９９】
工程２：（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−（＋）−２−ヒドロキシ−３−ピナノンの合成
工程２．１：（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）−（−）−ピナンジオール
【化２９】
2018168171.tif 000030
１７．３ｍＬのピリジン、１０７ｍＬのアセトンおよび１１．９ｍＬの脱イオン水に溶解された、Ｓ−（−）−α−ピネン（２４．３ｇ；０．１８ｍｏｌ）、オスミウム酸カリウム二水和物（０．１３ｇ）、Ｎ−メチルモルホリン−Ｎ−オキシド（水中６０％；０．２１ｍｏｌ；４１．７ｇ）を、２５０ｍＬの三つ口フラスコ中で組み合わせた。反応混合物を６０時間還流させ、次に、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（３００ｍＬ）およびヘキサン（６０ｍＬ）で希釈した。次に、水（２００ｍＬ）を加え、有機層をデカントし、１０％のクエン酸（３×１００ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（１００ｍＬ）、塩水（１００ｍＬ）で連続して洗浄し、次に、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過した。溶媒を減圧下で除去したところ、表題化合物、１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）−（−）−ピナンジオールが、濃いオレンジ色の油（２４．５ｇ）として得られた。
ＧＣ：ｔｒ＝１２．０分間（ジオール）；ｔｒ＝１０．９分間（ｌＲ，２Ｒ，５Ｒ）−（＋）−２−ヒドロキシ−３−ピナノン；（５〜１０％）
【０２００】
工程２．２：（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−（＋）−２−ヒドロキシ−３−ピナノン
【化３０】
2018168171.tif 000031
トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）（８０．２ｍＬ；０．５８ｍｏｌ）を、１０℃で、ジメチルスルホキシド／塩化メチレン溶媒混合物（１５４ｍＬ；１／１）中の（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）−（−）−ピナンジオール（２４．５ｇ；１４３．９ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。次に、ＳＯ３・ピリジン（６８．７ｇ；０．４３ｍｏｌ）を、温度を２０℃未満に維持しながら、３０分間にわたって滴下して加えた。反応混合物を１０℃で２時間撹拌し、次に、酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈した。有機層を、ＨＣｌ  ０．５Ｎ（２＊１５０ｍＬ）、塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、次に、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過した。溶媒を減圧下で除去したところ、褐色の油が得られた。粗生成物を、シリカゲルにおけるフラッシュクロマトグラフィー（メチルシクロヘキサン−酢酸エチル：９／１）によって精製したところ、表題化合物、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−（＋）−２−ヒドロキシ−３−ピナノンが、黄色の油（１９．２ｇ；２工程にわたって６３％）として得られた。
ＧＣ：ｔｒ＝１０．９分間；
蒸留：沸点＝１００〜１０４℃（３〜４ｍｍＨｇ）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：０．９０（ｓ，３Ｈ）；１．３０（ｓ，３Ｈ）；１．４０（ｓ，３Ｈ）；１．７０（ｄ，１Ｈ，＝１２．０Ｈｚ）；２．１０（ｍ，２Ｈ）；２．３０（ｓ，１Ｈ）；２．５０（ｍ，１Ｈ）；２．６０（ｂｒｓ，２Ｈ）。
【０２０１】
工程３：Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン塩酸塩
工程３．１：（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−エチル−（（２−ヒドロキシピナン−３−イレン）アミノ）アセテート
【化３１】
2018168171.tif 000032
ＮＨ３ガスを、１時間にわたって、トルエン（１００ｍＬ）中のエチルグリシネート塩酸塩（１６．６ｇ；０．１３ｍｏｌ）の懸濁液に通してバブリングした。形成された塩化アンモニウムをろ過して取り除き、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−（＋）−２−ヒドロキシ−３−ピナノン（工程２．２）（１０．０ｇ；０．５９ｍｏｌ）を、数滴のＢＦ３．ＯＥｔ２とともに遊離塩基エチルグリシネートの溶液に加えた。次に、反応混合物を、ディーン・スターク装置を用いて、５時間にわたって還流させた。反応の完了の後、溶媒を蒸発させた。得られた生成物を、Ｅｔ３Ｎ（エーテル中５％）を含浸させたシリカゲルにおけるフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物、（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−エチル−（（２−ヒドロキシピナン−３−イレン）アミノ）アセテートを、Ｅｔ２Ｏで溶離した。
Ｒｆ＝０．３５（シクロヘキサン−酢酸エチル：１／１）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）；１．３０（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３、Ｊ＝７．０Ｈｚ）；１．３４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）；１．５３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）；１．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ）；２．０７（ｍ，２Ｈ）；２．３６（ｄｔｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ；Ｊ＝６．０Ｈｚ；Ｊ＝１．５Ｈｚ）；２．５０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．５Ｈｚ；Ｊ＝１．０Ｈｚ）；２．６１（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）；４．１７（ｓ，２Ｈ，＝Ｎ−ＣＨ２）；４．２３（ｑ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＨ３、Ｊ＝７．０Ｈｚ）。
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１８０．０（Ｃ−１クワットエステル）；１７０．２（Ｃ−１’クワットアミド）；７６．５（Ｃ−２’クワット）；６０．９（ＣＨ２−ＣＨ３）；５２．６（Ｃ−２）；５０．４（Ｃ−３’）；３８．６（Ｃクワット）；３８．３（Ｃ−５）；３３．７（Ｃ−６）；２８．２（ＣＨ３）；２８．１（Ｃ−４’）；２７．３（ＣＨ３）；２２．８（ＣＨ３）；１４．２（ＣＨ２−ＣＨ３）。
【０２０２】
工程３．２  （２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−エチル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエート
【化３２】
2018168171.tif 000033
塩化メチレン（１５ｍＬ）中のクロロチタントリイソプロポキシド（５．２ｇ；０．０２ｍｏｌ）の溶液、塩化メチレン（８ｍＬ）およびトリエチルアミン（６．１ｍＬ；０．０４４ｍｏｌ）中の２−（Ｅ）−ヘキサデセン−１−アール（４．３５ｇ；０．００１８）の溶液を、０℃で、アルゴン下で、塩化メチレン（９．６ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）−エチル−（（２−ヒドロキシピナン−３−イレン）アミノ）アセテート（５．０ｇ；０．０２０ｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を０℃で４時間撹拌した後、次に、それを、塩水（２５ｍＬ）でクエンチした。水層を、酢酸エチルで抽出し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ；溶媒を減圧下で除去したところ、黄色がかったオレンジ色の油（９．７ｇ）、７３／２７のイソプロピルおよびエチルエステルの混合物、（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−エチル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエートが得られた。
Ｒｆ＝０．７（シクロヘキサン−酢酸エチル：１／１）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）；１．５０〜１．１０（ｍ，２８Ｈ，（ＣＨ２）１２＋２ＣＨ３）；１．５０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）；１．５３（ｄ，１Ｈ）；２．１３（ｑ，２Ｈ）；２．１８〜１．９５（ｍ，２Ｈ）；２．３４（ｄｔｄ，１Ｈ）；２．５１（ｍ，１Ｈ）；３．２５（ｓ，１Ｈ）；３．７５（ｓ，１Ｈ）；４．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）；４．２０（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ；Ｊ＝４．０Ｈｚ）；４．５５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）；５．０５（ｈｅｐｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ、ＣＨ（ＣＨ３）２）；５．５５（ｄｄ，１Ｈ，＝１５．４Ｈｚ；Ｊ＝７．１Ｈｚ）；５．７０（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ；Ｊ＝６．５Ｈｚ）。
【０２０３】
工程３．３：（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−エチル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエート
【化３３】
2018168171.tif 000034
ＨＣｌ  １．２Ｍ（２０３ｍＬ）を、テトラヒドロフラン（５１ｍＬ）中の、前の工程からのイソプロピルおよびエチルエステルの粗混合物、（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−エチル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｓ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル３−ヒドロキシ−２−（（Ｅ）−（（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−３−イリデン）アミノ）オクタデカ−４−エノエート（１４．８ｇ；０．０３０ｍｏｌ）に滴下して加えた。次に、混合物を室温で７２時間撹拌した。テトラヒドロフランを蒸発させ、次に、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層は、溶媒の除去の後、および（＋）−２−ヒドロキシ−３−ピナノン（６．８ｇ）を含有していた。水層を乾燥させたところ、（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−エチル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートおよび（２Ｒ，３Ｒ，Ｅ）−イソプロピル２−アミノ−３−ヒドロキシオクタデカ−４−エノエートが、それらの塩酸塩（５．７ｇ）として得られた。
Ｒｆ＝０．４５（Ｅｔ２Ｏ−ＭｅＯＨ：９６／４）
【０２０４】
工程３．４：Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン塩酸塩
【化３４】
2018168171.tif 000035
水素化ホウ素ナトリウム（４．４０ｇ；０．１２ｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ（３／１）の４０ｍＬの溶媒混合物中の、上記の工程からのアミノエステル塩酸塩（２．２ｇ；０．００５８ｍｏｌ）の懸濁液に加えた。ＮＨ４Ｃｌの飽和溶液（４０ｍＬ）を加える前に、混合物を０℃で７２時間撹拌した。水層を、塩化メチレン（４＊１００ｍＬ）で抽出し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過した。溶媒を減圧下で除去したところ、表題化合物、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン塩酸塩が、白色の固体（１．５ｇ；８６％）として得られた。
Ｒｆ＝０．３（ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ：１３／６／１）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）０．９０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）；１．５０〜１．２０（ｍ，２２Ｈ，（ＣＨ２）１２）；２．００（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ）；３．１５（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）；３．７０（ｍ，４Ｈ）；４．３０（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）；５．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ；Ｊ＝６．３Ｈｚ）；５．８０（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ；Ｊ＝７．８Ｈｚ）；８．４６（ｂｒｓ，３Ｈ）。
【０２０５】
工程４：Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
【化３５】
2018168171.tif 000036
パルミチン酸（１．９ｇ；０．０７４ｍｏｌ）、およびテトラヒドロフラン（９９ｍＬ）中のＤ−エリトロ−スフィンゴシン（２．２ｇ；０．０７４ｍｏｌ）の溶液を、ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中のＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（３．１ｇ；８．１ｍｍｏｌ）の懸濁液に連続して加えた。得られた白色の懸濁液を０℃に冷却し、トリエチルアミン（２．５ｍＬ；０．０１８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。次に、５％のクエン酸の溶液（４００ｍＬ）を加え、懸濁液をろ過して取り除いた。白色の固体を、室温で水（６０ｍＬ）と混合し、ろ過して取り除き、水で洗浄した。次に、それを、４０℃で、減圧下で乾燥させたところ、表題化合物、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（３．５ｇ；８０％）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．９７（６Ｈ，ｔ）；１．１０〜１．４０（ｍ，４６Ｈ）；１．６２（２Ｈ，ｍ）；２．０４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２−ＣＨ）；２．２１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ、ＣＨ２ＣＯＮＨ）；２．７１（ｍ，２Ｈ）；３．６９（ｍ，１Ｈ）；３．８０〜４．００（ｍ，２Ｈ）；４．２８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ）；５．５２（ｄｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ；Ｊ＝６．４Ｈｚ；Ｊ＝１．０Ｈｚ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ）；５．７７（ｄｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ；Ｊ＝６．７Ｈｚ；Ｊ＝１．１Ｈｚ、ＣＨ２ＣＨ）；６．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ、ＮＨ）。
【０２０６】
工程５：Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
工程５．１：Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
【化３６】
2018168171.tif 000037
塩化メチレン（１４ｍｌ）中のＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（０．５８ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．２ｍｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（５ｍｇ）、および塩化トリチル（０．４５ｇ、１．６２ｍｍｏｌ）の懸濁液を、６０時間にわたって還流状態で加熱した。揮発性材料を蒸発させ、残渣を酢酸エチルに再溶解させ、混合物を、１Ｍの塩酸、ＮａＨＣＯ３水溶液および塩水で連続して洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。残渣を、ヘプタン／酢酸エチル（７：３）中のシリカゲルにおけるクロマトグラフィーにかけたところ、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（０．３９ｇ、４６％）が、ろう状の固体として得られた。
Ｒｆ＝０．４９（ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチル／Ｅｔ３Ｎ：９７／３／０．１）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ０．８８（６Ｈ，ｔ）、１．４０〜１．１５（４６Ｈ，ｍ）、１．６４（２Ｈ，ｍ）、１．９１（２Ｈ，ｍ）、２．２０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、３．２８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ、Ｊ＝４．０Ｈｚ）、３．４０〜３．３５（２Ｈ，ｍ）、４．０４（１Ｈ，ｍ）、４．１７（１Ｈ，ｍ）、５．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、５．６２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、６．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ、ＮＨ）、７．３５〜７．２０（９Ｈ，ｍ）、７．３５〜７．４５（６Ｈ，ｍ）。
【０２０７】
工程５．２：Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
【化３７】
2018168171.tif 000038
４−ジメチルアミノピリジン（１０ｍｇ）および塩化ベンゾイル（０．１ｍｌ、０．８５ｍｍｏｌ）を、窒素下で、ピリジン（５ｍｌ）中のＮ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（０．３９ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を２０時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を、ＮａＨＣＯ３水溶液と酢酸エチルとに分液した。有機相を塩水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させ、残渣を、ヘプタン／酢酸エチル−ヘキサン（８５：１５〜１：１）中でシリカゲルにおけるクロマトグラフィーにかけたところ、表題化合物、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（２０７ｍｇ、６０％）が、ろう状の固体として得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ０．８８（６Ｈ，ｔ）、１．３１〜１．２３（４６Ｈ，ｍ）、１．５６（２Ｈ，ｍ）、１．９９（２Ｈ，ｍ）、２．０８（２Ｈ，ｔ）、３．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ、Ｊ＝３．９Ｈｚ、ＣＨ（Ｈ’）ＯＨ）、３．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ、３．９Ｈｚ、ＣＨ（Ｈ’）ＯＨ］、４．４７（１Ｈ，ｍ，ＣＨ−（ＮＨＣＯＲ））、５．４３［１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、ＣＨ（ＯＣＯＰｈ）ＣＨ＝］、５．７５〜５．６０［２Ｈ，ｍ，ＮＨ，ＣＨ（ＯＣＯＰｈ）］、５．８６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、ＣＨ２ＣＨ＝）、７．２５〜７．１０（９Ｈ，ｍ）、７．４０〜７．３０（８Ｈ，ｍ）、７．５４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）、７．９２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）。
【０２０８】
工程５．３：Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
【化３８】
2018168171.tif 000039
塩化メチレン（１８ｍｌ）およびメタノール（１８ｍｌ）中のＮ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（１．１０ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）およびトルエン−ｐ−スルホン酸一水和物（０．２３ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）の溶液を、３時間にわたって窒素下で撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を、ＮａＨＣＯ３水溶液と酢酸エチルとに分液した。有機相を、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣を、シリカゲルにおけるクロマトグラフィーにかけ、ヘプタン／酢酸エチル（１：１）で溶離したところ、表題化合物、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（０．６４ｇ；８０％）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３／ＣＤ３ＯＤ）δ  ０．８７（６Ｈ，ｔ）、１．３０〜１．１０（４６Ｈ，ｍ）、１．５４（２Ｈ，ｍ）、１．９６（２Ｈ，ｍ）、２．１４（２Ｈ，ｍ）、２．７７（２Ｈ，ｂｒ  ｓ）、３．７１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｏ）、４．２４（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮ）、５．６０〜５．４０［２Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＯＣＯＰｈ）ＣＨ＝］、５．７９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、ＣＨ２ＣＨ＝）、６．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ、ＮＨ）、７．３８（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、７．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）。
【０２０９】
工程６：Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン
【化３９】
2018168171.tif 000040
乾燥トルエン（５ｍｌ）中のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（０．２ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）およびテトラメチルエチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ）（５１μＬ、０．５３ｍｍｏｌ）の溶液を、約８℃に冷却した。この溶液に、０．１ｍＬのアセトニトリル中の２−クロロ−２−オキソ−１，３，２ジオキサホスホラン（８２ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。次に、混合物を室温に温め、４時間撹拌した。アセトニトリル（５ｍＬ）を加えた後、無水トリメチルアミンを加えた。フラスコを１４時間にわたって６５〜７０℃に加熱した。次に、系を室温に冷まし、フラスコを開放した。溶媒を減圧下で除去した。
【０２１０】
得られた生成物、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを、メタノール（１．５ｍＬ）に溶解させた。ナトリウムメトキシド（メタノール中３０％、１５μＬ）を溶液に加えた。一晩撹拌した後、塩化メチレンおよび水を加えた。ｐＨを調整し、有機層を蒸発乾固させた。粗材料をカラムクロマトグラフィーによって精製したところ、表題化合物、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（６６ｍｇ、３工程にわたって３０％）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３／ＣＤ３ＯＤ）δ：０．９０（ｔ，Ｊ＝１．１Ｈｚ、６Ｈ）、１．２６（ｍ，４６Ｈ）、１．５６（ｍ，（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２，２Ｈ）、１．９９（ｍ，ＣＨ＝ＣＨＣＨ２，２Ｈ）、２．１４（ｔ，（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２，２Ｈ）、３．２４（ｓ，Ｎ（ＣＨ３）３，９Ｈ），）、３．６８（ｍ，ＰＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ，２Ｈ）、３．９１（ｍ，ＰＯＣＨ２ＣＨ，２Ｈ）、４．０４（ｔ，ＣＨＯ，４Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ）、４．１４（ｍ，ＣＨＮ，２Ｈ）、４．２８（ｍ，ＰＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ，２Ｈ）、５．４４（ｄｄｔ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、Ｊ＝１．５Ｈｚ、２Ｈ）、５．７１  ｄｄｔ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、Ｊ＝０．５Ｈｚ、１Ｈ）。
【０２１１】
実施例２：Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの実験室規模の合成
工程１：Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
【化４０】
2018168171.tif 000041
テトラヒドロフラン（８９０ｍｌ）中のパルミチン酸（１７．１２ｇ、６６．８ｍｍｏｌ）およびＤ−エリトロ−スフィンゴシン（２０ｇ、６６．８ｍｍｏｌ）を、１４０ｍｌのジメチルホルムアミド中のＯ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（２７．８４ｇ、７３．４ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。得られた白色の懸濁液を０〜５℃で冷却し、２２．５ｍｌ（１６０．７ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、３０〜６０分間にわたって加え、混合物を１２時間にわたって室温で撹拌した。この後、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析により、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンへの９９％を超える転化率が示された。クエン酸５％（４００ｍｌ）を加え、混合物を０〜５℃で３０分間撹拌し、得られた懸濁液をろ過した。白色ケーキを室温で水（６００ｍｌ）に懸濁させた。懸濁液をろ過し、水で洗浄した。４０℃で、減圧下で１２時間乾燥させることにより、３２．４ｇ（収率９０％）のＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが得られた。ＨＰＬＣによる純度は、９８．１％であり、ＨＰＴＬＣによる純度は、９９．２％であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（δｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）：０．９７（６Ｈ，ｔ）、１．１〜１．４（４６Ｈ，ｍ）、１．６２（２Ｈ，ｍ）、２．０４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＨ）、２．２１（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ８．２Ｈｚ、ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．７１（２Ｈ，ｍ）、３．６９（１Ｈ，ｍ）、３．８〜４．０（２Ｈ，ｍ）、４．２８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ）、５．５２（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ  １５．４、６．４、１．０Ｈｚ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ））、５．７７（１Ｈ，ｄｔｄ，Ｊ  １５．４、６．７、１．１Ｈｚ、ＣＨ２ＣＨ）、６．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ６．８Ｈｚ、ＮＨ）。
【０２１２】
工程２：Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
【化４１】
2018168171.tif 000042
工程２．１  Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
トルエン（１５０ｍｌ）中のＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（１６．３０ｇ、３０．３ｍｍｏｌ）、ピリジン（２５０ｍｌ）、および塩化トリチル（１０．１５ｇ、３６．４ｍｍｏｌ）の懸濁液を、１２時間にわたって５２℃で加熱した。１２時間後のＴＬＣ分析により、約５％の未反応のＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンおよび約２〜５％のＮ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−Ｓ−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシとともに、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンへの９０％を超える転化率が示された。懸濁液を０〜５℃に冷却し、ろ過して、いくらかの塩を除去した。
【０２１３】
工程２．２：Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
４−ジメチルアミノピリジン（５６０ｍｇ、４．５４ｍｍｏｌ）および塩化ベンゾイル（５．８ｍｌ、５０ｍｍｏｌ）を、上記の工程からの粗反応生成物の溶液に加え、混合物を１５時間にわたって０〜５℃で撹拌した。１５時間後、ＴＬＣ分析により、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンへの９７％を超える転化率が示された。反応混合物を、水（１３０ｍｌ）と酢酸エチル（５３０ｍｌ）とに分液した。有機相をｐＨ７に達するまで、水（１６０ｍｌ）で４回洗浄した。有機相を減圧下で蒸発させ、得られた油状の黄色の残渣（３４ｇ）を、５℃で、塩化メチレン（３００ｍｌ）およびメタノール（３００ｍｌ）に溶解させ、その後の脱トリチル化工程に直接使用した。
【０２１４】
工程２．３：Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
トルエン−ｐ−スルホン酸一水和物（２．８８ｇ、１５．１５ｍｍｏｌ）を、塩化メチレン／メタノール中のＮ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンの上記の溶液に加えた。混合物を、３時間にわたって１８〜２２℃で撹拌した。３時間後、ＴＬＣ分析により、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンへの９７％を超える転化率が示された。反応混合物を、２．５８ｍｌのトリエチルアミンを用いて、０〜５℃で中和し、塩化メチレンを蒸発させた（４０℃／３４０ミリバール）。得られた残渣を１時間にわたって０〜５℃で撹拌した。懸濁液をろ過して取り除き、メタノールで洗浄し、１２時間にわたって３５℃で乾燥させたところ、２１．９ｇ（１１３％）の粗生成物（Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン）が得られた。
【０２１５】
４２℃で、メタノール（５００ｍｌ）および塩化メチレン（５ｍｌ）を用いて、再結晶化を行い、溶液を１時間にわたって２０〜２２℃で撹拌し、次に、１時間にわたって０〜５℃に冷却した。ろ過の後、得られたケーキを、メタノール（２×５０ｍｌ）で洗浄し、減圧下で、３５℃で１２時間乾燥させたところ、１３％の非保護Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンで汚染された、１３．６ｇのＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが得られた。結晶化された材料を、１８５ｇのシリカゲルにおけるカラムクロマトグラフィーによってさらに精製した。それを、２．２Ｌのヘキサン／酢酸エチル５／１、２．２Ｌのヘキサン／酢酸エチル３／１および最後に４．４Ｌのヘキサン／酢酸エチル２／１で溶離した。生成物を含有する画分を組み合わせて、４０℃で蒸発乾固させたところ、１２．１ｇ（収率６２％）のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが得られた。ＨＰＬＣによる純度は、９７．７％であり、ＨＰＴＬＣによる純度は、９９．６％であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（δｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）：０．８７（６Ｈ，ｔ）、１．１〜１．３（４６Ｈ，ｍ）、１．５４（２Ｈ，ｍ）、１．９６（２Ｈ，ｍ）、２．１４（２Ｈ，ｍ）、２．７７（２Ｈ，ｂｒ  ｓ）、３．７１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｏ）、４．２４（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮ）、５．４〜５．６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＯＣＯＰｈ）ＣＨ＝）、５．７９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ  １５．０、６．８Ｈｚ、ＣＨ２ＣＨ＝）、６．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ９．６Ｈｚ、ＮＨ）、７．３８（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ７．６、７．２Ｈｚ）、７．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ７．６、７．６Ｈｚ）、７．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．２Ｈｚ）
【０２１６】
工程３：Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン
【化４２】
2018168171.tif 000043
工程３．１：Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）−スフィンゴシン
Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（９．４９ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）を、トルエン（２００ｍｌ）にほぼ完全に溶解させ、圧力反応器中に充填した。テトラメチルエチレンジアミン（２．４ｍｌ、１５．８ｍｍｏｌ）を混合物に加えた。混合物を７℃に冷却した後、アセトニトリル（５ｍｌ）中の２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）（３．９０ｇ、２７．３ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。７℃で２時間後、反応物を２時間にわたって２１℃に温めた。ＴＬＣ分析により、中間体Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）−スフィンゴシンへのＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンの９７％を超える転化率が示された。
【０２１７】
工程３．２：Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン
アセトニトリル（２００ｍｌ）を、反応器に導入した後、０．５〜０．７バールの定圧に達するまで、気体トリメチルアミンを導入した。６７℃に加熱する間、圧力を１．８〜２．０バールに上昇させた。１４時間後、ＴＬＣ分析により、中間体Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−１−Ｏ−（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン）−スフィンゴシンのほぼ完全な反応が示された。−５℃に冷却した後、懸濁液をろ過した。粗製の３−Ｏ−ベンゾイル−Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンを３５℃で乾燥させたところ、９．１ｇ（７６％）が得られた。粗材料を、９０ｇのシリカゲルにおけるカラムクロマトグラフィーによってさらに精製した。それを、１．１Ｌの塩化メチレン／メタノール６／１；１．１Ｌの塩化メチレン／メタノール４／１；および最後に４．３Ｌの塩化メチレン／メタノール３／１で溶離した。生成物を含有する画分を組み合わせて、３５℃で蒸発乾固させたところ、８．０ｇ（収率８８％）の３−Ｏ−ベンゾイル−Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンが得られた。ＨＰＬＣによる純度は、９４．８％であった。
【０２１８】
工程４：Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン
【化４３】
2018168171.tif 000044
３−Ｏ−ベンゾイル−Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（８．０ｇ、９．９ｍｍｏｌ）を、メタノール（４０ｍｌ）に溶解させた。ナトリウムメトキシド（メタノール中３０％、５．４Ｍ、３６７μｌ、２．０ｍｍｏｌ）を、溶液に加えて、ｐＨ１１にした。一晩撹拌した後、ＴＬＣ分析により、ベンゾイルエステルのほぼ完全な反応が示された。塩化メチレン（８０ｍｌ）を加えた後、３８ｍｌの水を加え、１．８ｍｌの１Ｍの塩酸を用いて、ｐＨを６〜７に調整した。下層を３５℃で蒸発乾固させ、残渣を８．５ｍｌのメタノールおよび８．５ｍｌの塩化メチレンに取り込んだ。アセトン（９５ｍＬ）を、透明の溶液に加えた。懸濁液を０℃で数時間撹拌し、ろ過した。得られた残渣を３０℃で乾燥させたところ、４．３ｇの表題生成物、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン、（６２％）が得られた。ＨＰＬＣによる純度は、９８．９％であった。ＮＭＲ分析に基づいて、シス異性体およびＬ−トレオ異性体の含量はそれぞれ、１％未満であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（δｐｐｍ、ＣＤＣｌ３／ＣＤ４ＯＤ）：０．８８（６Ｈ，ｔ，２×ＣＨ３）、１．２５（４６Ｈ，ｍ，２３×ＣＨ２）、１．５６（２Ｈ，ｍ，（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２）、１．９９（２Η，ｍ，ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）、２．１４（２Η，ｔ，（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２）、３．２４（９Ｈ，ｂｒ  ｓ，Ｎ（ＣＨ３）３）、３．６８（２Ｈ，ｍ，ＰＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ）、３．９１（２Η，ｍ，ＰＯＣＨ２ＣＨ）、４．０４（１Ｈ，ｔ，ＣＨＯ，Ｊ  ７．７Ｈｚ）、４．１４（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮ）、４．２８（２Ｈ，ｍ，ＰＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ）、５．４２〜５．４６（２Ｈ，ｄｄ，ＣＨＣＨ＝ＣＨＣＨ２，Ｊ  １５．３、７．４Ｈｚ）、５．６５〜５．７０（１Ｈ，ｄｔ，ＣＨＣＨ＝ＣＨＣＨ２，Ｊ  １４．６、７．２Ｈｚ）
【０２１９】
実施例３：パルミトイルスフィンゴミエリンのパイロット規模の合成
工程１：Ｂｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ
３２．２ｋｇのＬ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ・ＨＣｌ（２０６．９７ｍｏｌ）を、６３０Ｌの容器中で、２８８ｋｇの酢酸エチルに懸濁させ、２℃に冷却した。約２℃で液体トリエチルアミン（２４．１ｋｇ、２３８．１７ｍｏｌ、１．１５当量）を加えた後、２４ｋｇの酢酸エチル中のＢｏｃ２Ｏ（５１．９ｋｇ、２３７．８０ｍｏｌ、１．１５当量）の溶液を加えた。反応混合物を２２℃に温め、一晩撹拌した。ＴＬＣ分析により、１％未満のＬ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ・ＨＣｌの含量が示された。１１４Ｌの精製水を加え、相を分離した。洗浄を１１４Ｌの精製水で２回繰り返した。３つの水相を組み合わせて、１０２ｋｇの酢酸エチルで抽出した。ＴＬＣ分析により、水相中に生成物が存在しないことが示された。２つの有機相を組み合わせて、６０℃で蒸発乾固させた。８８ｋｇのトルエンを残渣に加え、６０℃で蒸留して取り除いた。この手順を繰り返した。粗製のＢｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの純度は、ＴＬＣ分析により９５〜９７％であった。
【０２２０】
工程２：（Ｓ）−３−（Ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸メチルエステル
粗製のＢｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ（約４５．４ｋｇ、２０６．９７ｍｏｌ）を、６３０Ｌの容器中で、２２℃で、２５６ｋｇのテトラヒドロフランに溶解させた。７１．８ｋｇの２，２−ジメトキシプロパン（６８９．３９ｍｏｌ、３．３３当量）を加えた後、２０ｋｇのテトラヒドロフラン中の３．３ｋｇのベンゼンスルホン酸（２０．８６ｍｏｌ、０．１０当量）の溶液を加え、２０ｋｇのテトラヒドロフランで洗浄した。反応混合物を加熱還流させ、２１０Ｌのテトラヒドロフランを３時間で蒸留して取り除いた。ＴＬＣ分析により、１〜２％のＢｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの含量が示された。２２℃で１．０ｋｇのトリエチルアミン（９．８８ｍｏｌ、０．０５当量）を用いて、ｐＨ６．５への中和を行った。反応混合物を、６０℃で蒸発乾固させた後、２５℃で、８２ｋｇのヘキサンおよび２６Ｌの精製水を加えた。有機相を４５Ｌの精製水で洗浄した。ＴＬＣ分析により、水相中に生成物が存在しないことが示された。有機相を、６０℃で蒸発乾固させた。トルエン（８８ｋｇ）を残渣に加え、６０℃で２回蒸留して取り除いた。生成物、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸メチルエステル、（４８．８９ｋｇ、１８８．５５ｍｏｌ、Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ・ＨＣｌからの９１％の収率）を、黄色の液体として単離した。ＴＬＣ分析により、純度が９７％であることが分かった。乾燥減量は、４．２％であり、含水量は、０．１％であった。同一性をＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲによって確認した。
【０２２１】
工程３：（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン
１００Ｌの容器を、１５ｋｇのテトラヒドロフランを用いて調整し、５０℃で、減圧下で乾燥させた。メチルホスホン酸ジメチル（４．６ｋｇ、３７．０７ｍｏｌ、２．００当量）を、容器中に導入し、２９ｋｇのテトラヒドロフランに溶解させた。混合物を−７５℃に冷却し、混合物を−７０〜−７５℃に保持しながら、ヘプタン（２．３４ｋｇのｎ−ブチルリチウム、３６．５８ｍｏｌ、１．９８当量）中の２５％のｎ−ブチルリチウムの、９．４ｋｇの溶液を、２時間わたって加えた後、５Ｌのヘプタンで洗浄した。１時間撹拌した後、混合物を−７０〜−７５℃に保持しながら、４ｋｇのテトラヒドロフラン中の４．８ｋｇの粗製の（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸メチルエステル（１８．５１ｍｏｌ）の溶液を、１時間にわたって加えた後、５Ｌのテトラヒドロフランで洗浄した。反応混合物を４０分間にわたって０℃に温め、３０分間撹拌した。
【０２２２】
ＴＬＣ分析により、１０〜１５％の（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸メチルエステルの含量が示された。２０℃未満で、４．８ｋｇのテトラヒドロフラン中の６００ｍＬの精製水の溶液で、クエンチを行った。２０℃未満で、精製水中の２０％のクエン酸一水和物の１３Ｌの溶液を用いて、ｐＨを６〜７に調整した。１０Ｌの酢酸エチルを加えた後、相を分離した。水相を１３ｋｇの酢酸エチルで抽出した。ＴＬＣ分析により、水相中に生成物が存在しないことが示された。２つの有機相を組み合わせて、６０℃で２０Ｌの体積になるまで蒸発させた。４０℃で、ロータリーエバポレータ中での最後の乾燥により、７．２ｋｇ（２０．４９ｍｏｌ、１１１％）の表題化合物、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンが、黄色の油として得られた。純度は、ＴＬＣ分析により約７０％であった。乾燥減量は、１４．４％であり、含水量は、１．４％であった。同一性をＭＳによって確認した。
【０２２３】
工程４：（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン
（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（２１．６ｋｇ、６１．４８ｍｏｌ）および１７．０ｋｇの炭酸カリウム（１２３．０ｍｏｌ、２．００当量）を、撹拌しながら、２５０Ｌの容器中で、２２℃で、２３９ｋｇのアセトニトリルに加えた。１−テトラデカナール（６．５３ｋｇ、３０．７５ｍｏｌ、０．５０当量）および３．１Ｌの精製水を加えて、９．０のｐＨを得た。反応を一晩進行させた後、ＴＬＣ分析により、５〜１０％の１−テトラデカナールおよび２％のホスホネートの含量が示された。塩をろ過して取り除き、２７０Ｌのヘキサンで何回かに分けて洗浄した。組み合わされた有機相を、６０℃で蒸発乾固させた。残渣を４８ｋｇのヘキサンに溶解させ、１８Ｌの精製水中の０．９ｋｇの塩化ナトリウムの溶液で２回洗浄した。ＴＬＣ分析により、水相中に生成物が存在しないことが示された。有機相を、６０℃で蒸発乾固させ、７５ｋｇのヘキサンに溶解させた。４０℃で、ロータリーエバポレータ中での最後の乾燥により、１６．９ｋｇ（３８．６１ｍｏｌ、ホスホネートを基準にして６３％）の表題化合物、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンが、褐色の油として得られた。純度は、検出方法に応じて、ＴＬＣにより約５０〜８６％であり、ＨＰＬＣ分析により８１％であった。乾燥減量は、２．２％であり、含水量は、０．０５％であった。同一性をＭＳによって確認した。
【０２２４】
工程５：（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン
粗製の（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（１６．９ｋｇ、３８．６１ｍｏｌ）および１５．８ｋｇの塩化セリウム七水和物（４２．４９ｍｏｌ、１．１０当量）を、１０００Ｌの容器中で、３０５ｋｇのメタノール中で撹拌し、−１８℃に冷却した。８．８Ｌの精製水（０．２％の苛性ソーダをもたらす）中の２．１９ｋｇの水素化ホウ素ナトリウム（５７．８９ｍｏｌ、１．５０当量）および５８ｇの３０％の苛性ソーダ（０．４４ｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却し、次に、５時間にわたってケトンに加えた。さらに３０分間撹拌した後、ＴＬＣ分析により、１％未満のケトンの含量が示された。反応混合物を２時間にわたって２２℃に温めた後、１時間撹拌することによって、過剰の水素化ホウ素ナトリウムを非活性化した。メタノール（３２０Ｌ）を、６０℃で蒸留して取り除いた。沈殿した塩をろ過し、４４ｋｇのトルエンで２回に分けて洗浄した。ろ液が２つの相に分離し、水相を３３ｋｇのトルエンで２回抽出した。ＴＬＣ分析により、水相および濾滓中に生成物が存在しないことが示された。組み合わされた有機相を７７Ｌの酢酸エチルで希釈し、３９Ｌの精製水と、３．９ｋｇのＥＤＴＡと、１．９Ｌの３０％の苛性ソーダとの混合物、続いて、３９Ｌの精製水中の１．９ｋｇの塩化ナトリウムで洗浄した。ＴＬＣ分析により、水相中に生成物が存在しないことが示された。有機相を、６０℃で蒸発乾固させ、１８ｋｇのトルエンに溶解させた。６０℃で、ロータリーエバポレータ中での最後の乾燥により、１５．９５ｋｇ（３６．２８ｍｏｌ、９４％）の表題化合物、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンが、黄色の油として得られた。純度は、検出方法に応じて、ＴＬＣにより約７０〜９０％であり、ＨＰＬＣ分析により９０％であった。乾燥減量は、５．２％であり、含水量は、０．０５％であった。同一性をＭＳによって確認した。
【０２２５】
工程６：Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
【化４４】
2018168171.tif 000045
６０Ｌの容器中で、２４ｋｇのメタノールを０℃に冷却した。３０分間にわたって、５．６９ｋｇの塩化アセチル（７２．４８ｍｏｌ、２．００当量）を導入した。この後、２２℃に温めて、メタノール塩酸塩溶液を生成した。粗製の（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジン（１５．９５ｋｇ、３６．２８ｍｏｌ）を、２２℃で、１６０Ｌの容器中で、３１ｋｇのメタノールに溶解させた。メタノール塩酸塩溶液を３０分間にわたって加えた。７時間後、ＴＬＣ分析により、１％未満の出発材料が示された。反応物を、１０ｋｇのメタノール中の７．３４ｋｇのトリエチルアミン（７２．５４ｍｏｌ、２．００当量）の溶液で中和した。反応混合物を、６０℃で蒸発乾固させ、１０５ｋｇの塩化メチレン、３１ｋｇの２−プロパノール、および４０Ｌの精製水に溶解させた。相分離の後、有機相を、４０Ｌの精製水、続いて、４０Ｌの脱塩水および７ｋｇの２−プロパノールで洗浄した。ＴＬＣ分析により、最初の２つの水相中に生成物が存在せず、第３の水相中に生成物が存在することが示された。生成物を４０Ｌの塩化メチレンで抽出した。組み合わされた有機相を、６０℃で蒸発乾固させた。残渣を３３ｋｇの酢酸エチルに懸濁させ、再度、蒸発乾固させた。−２０℃で、３６Ｌの酢酸エチルと７．２Ｌのヘキサンとの混合物から結晶化を行った。得られた固体をろ過し、７．２Ｌの酢酸エチルと１．４Ｌのヘキサンとの混合物、続いて、７．２Ｌの純粋な酢酸エチルで何回かに分けて洗浄した。３０℃で乾燥させた後、得られた６．４５ｋｇを、−２０℃で、２４Ｌの酢酸エチルと８Ｌのヘキサンとの混合物から再結晶化させた。固体をろ過し、４．８Ｌの酢酸エチルと１．６Ｌのヘキサンとの混合物、続いて、６．４Ｌの純粋な酢酸エチルで何回かに分けて洗浄した。３０℃で乾燥させた後、得られた５．９０ｋｇを、−２０℃で、１６Ｌの酢酸エチルと１６Ｌのヘキサンとの混合物から、再度、再結晶化させた。固体をろ過し、３．２Ｌの酢酸エチルと３．２Ｌのヘキサンとの混合物、続いて、６．４Ｌの純粋な酢酸エチルで何回かに分けて洗浄した。３０℃での最後の乾燥により、５．６０ｋｇ（１８．７１ｍｏｌ、５２％）の表題化合物、Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが、褐色の固体として得られた。純度は、ＨＰＴＬＣにより８９．２％であり、ＨＰＬＣ分析により９５．６％であり、０．６１％のＬ−トレオ−スフィンゴシンを含んでいた。乾燥減量は、０．４％であり、含水量は、０．６％であった。同一性をＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲによって確認した。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、δｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）、位置：０．８８（３Ｈ，ｔ）１８、１．２〜１．３（２０Ｈ，ｍ）８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７；１．３７（２Ｈ，ｍ）７；２．０４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＨ）６；３．１７（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮＨ２）２；３．７７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＯＨ）１；４．３４（１Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ）３；５．４６（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ  １５．４、６．４、１．０Ｈｚ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ））４；５．７９（１Ｈ，ｄｔｄ，Ｊ  １５．４、６．７、１．１Ｈｚ、ＣＨ２ＣＨ）５。
【０２２６】
工程７：Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
【化４５】
2018168171.tif 000046
５．５０ｋｇのＤ−エリトロ−スフィンゴシン（１８．３６ｍｏｌ）、４．７１ｋｇのパルミチン酸（１８．３７ｍｏｌ、１．００当量）および７．６６ｋｇのＯ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェート（２０．２０ｍｏｌ、１．１０当量）を、２５０Ｌの容器中で、３６ｋｇのジメチルホルムアミドおよび１１８ｋｇのテトラヒドロフランに懸濁させ、２℃に冷却した。５Ｌのテトラヒドロフラン中のトリエチルアミン（５．０６ｋｇ、５０．００ｍｏｌ、２．７２当量）を加えて、ｐＨ９．０にした。９０分後、ＴＬＣ分析により、１％未満のＤ−エリトロ−スフィンゴシンの含量および１．５％未満のパルミチン酸の含量が示された。反応混合物を２２℃に温めた。８９ｋｇの精製水中の４．７ｋｇのクエン酸の溶液の添加によって、生成物を沈殿させた。２２℃で１時間後、反応混合物をろ過した。粗生成物を２２℃で１時間にわたって１５４Ｌの精製水に懸濁させた。ろ過の後、２８Ｌの精製水で３回および２８Ｌのアセトンで３回洗浄した。１２２ｋｇのアセトン中への懸濁を繰り返し、２８Ｌのアセトンで３回洗浄した。３５℃での最後の乾燥により、６．０８ｋｇ（１１．３１ｍｏｌ、６２％）の表題化合物、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンが、わずかに黄色がかった固体として得られた。純度は、ＨＰＴＬＣにより９６．２％であり、ＨＰＬＣ分析により９９．２％であった。乾燥減量は、０．２％であり、含水量は、０．３％であった。同一性をＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲによって確認した。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、δｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）：０．８８（６Ｈ，ｔ）１８、１６‘；１．２〜１．４（４４Ｈ，ｍ）８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、４‘、５‘、６‘、７‘、８‘、９‘、１０‘、１１‘、１２‘、１３‘、１４‘、１５‘；１．３７（２Ｈ，ｍ）７；１．６４（２Ｈ，ｍ）３‘；２．０４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＨ）６；２．２３（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２ＣＯ）２’；３．７１（１Ｈ，ｄｄ，ＣＨＮＨ２）２；３．９３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＯＨ）１；４．３１（１Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ）３；５．５３（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ  １５．４、６．４、１．０Ｈｚ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ））４；５．７９（１Ｈ，ｄｔｄ，Ｊ  １５．４、６．７、１．１Ｈｚ、ＣＨ２ＣＨ）５；６．２５（１Ｈ，ｄ）ＮＨ。
【０２２７】
工程８：Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン
【化４６】
2018168171.tif 000047
第１の保護のために、６．０８ｋｇのＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（１１．３１ｍｏｌ）を、６０Ｌの容器中で、１１．９１ｋｇのピリジンおよび２．５ｋｇの塩化メチレンに懸濁させた。９．５ｋｇの塩化メチレン中の塩化トリチル（３．３１ｋｇ、１１．８７ｍｏｌ、１．０５当量）の溶液を加えた後、２．５ｋｇの塩化メチレンを加えた。反応混合物を５６時間にわたって２５℃で撹拌した。ＴＬＣ分析により、３〜５％のＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンの含量が示された。
【０２２８】
第２の工程では、反応混合物を２℃に冷却した。Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（０．１３９ｋｇ、１．１４ｍｏｌ、０．１０当量）および２．３８ｋｇの塩化ベンゾイル（１６．９３ｍｏｌ、１．５０当量）を混合物に加えた後、５ｋｇの塩化メチレンを加えた。２℃で９０分後、ＴＬＣ分析により、１％未満の中間体Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチルＤ−エリトロ−スフィンゴシンの含量が示された。５５ｋｇの酢酸エチルおよび３３Ｌの精製水中の１．７ｋｇのクエン酸および３．０ｋｇの塩化ナトリウムの溶液を用いて、後処理を行った。有機相を、３３Ｌの精製水中の１．７ｋｇのクエン酸および３．０ｋｇの塩化ナトリウムの溶液で、および３０Ｌの精製水中の３．５ｋｇの塩化ナトリウムの溶液で２回、再度洗浄した。ＴＬＣ分析により、水相中に生成物が存在しないことが示された。有機相を、５０℃で蒸発乾固させた。生成物、Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを含有する残渣を、２７ｋｇのトルエンに溶解させ、続いて、５０℃で蒸発乾固させた。この手順を２回繰り返した。
【０２２９】
第３の工程では、前の反応からの残渣を、６７ｋｇのメタノールおよび１６１ｋｇの塩化メチレンに溶解させ、２℃に冷却した。２３ｋｇのメタノール中のパラ−トルエンスルホン酸一水和物（６．４１ｍｏｌ  ０．５７当量）の溶液によって、ｐＨを２．５に調整した。２２℃に温め、１４時間撹拌した後、ＴＬＣ分析により、１％未満の中間体Ｎ−パルミトイル−１−Ｏ−トリチル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンの含量が示された。９６９ｇのトリエチルアミン（９．５８ｍｏｌ、０．８５当量）の添加により、ｐＨを７．０に上昇させた。反応混合物を、５０℃で蒸発乾固させた。粗製のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、４０℃で、６９ｋｇのヘキサンに懸濁させ、０℃に冷却した。４０分後、固体をろ過によって単離し、２０ｋｇのヘキサンで洗浄した。３５℃での乾燥により、５．４０ｋｇが得られ、それを、３８ｋｇの塩化メチレンに溶解させた。この溶液を、１７５ｋｇのヘキサンと４９ｋｇの酢酸エチルとの混合物で調整した７６ｋｇのシリカゲルにおけるクロマトグラフィーによって精製した。１２ｋｇの塩化メチレン、５０２ｋｇのヘキサンと１３７ｋｇの酢酸エチルとの混合物および４８２ｋｇのヘキサンと６４７ｋｇの酢酸エチルと混合物での溶離を行った。収集した画分は、生成物を含有していなかった。生成物を、４５１ｋｇのヘキサンと２０５ｋｇの酢酸エチルとの混合物および８０２ｋｇのヘキサンと５４７ｋｇの酢酸エチルとの混合物で溶離した。溶媒を５０℃で蒸留して取り除いた。得られた残渣を、４０℃で２４Ｌのヘキサンに懸濁させ、０℃に冷却した。４５分後、表題生成物、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを、ろ過によって固体として単離し、４．８Ｌのヘキサンで何回かに分けて洗浄した。３５℃での乾燥により、３．１５ｋｇ（４．９１ｍｏｌ、４３％）の表題化合物が、白色の固体として得られた。純度は、ＨＰＴＬＣにより１００．０％であり、ＨＰＬＣ分析により９６．３％であった。乾燥減量は、０．０５％であり、含水量は、０．２％であった。同一性をＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲによって確認した。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、δｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）：０．８８（６Ｈ，ｔ）１８、１６‘；１．２〜１．４（４４Ｈ，ｍ）８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、４‘、５‘、６‘、７‘、８‘、９‘、１０‘、１１‘、１２‘、１３‘、１４‘、１５‘；１．３５（２Ｈ，ｍ）７；１．６１（２Ｈ，ｍ）３‘；２．０５（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＨ）６；２．１９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＯ）２’；３．７１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＯＨ）１；４．２７（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮＨ）２；５．５４（１Ｈ，ｔ，ＣＨ（ＯＣＯＰｈ）ＣＨ））３；５．６２（１Ｈ，ｄｄｔ，Ｊ  １５．４、６．４、１．０Ｈｚ、ＣＨ（ＯＣＯＰｈ）ＣＨ））４；５．８５（１Ｈ，ｄｔｄ，Ｊ  １５．４、６．７、１．１Ｈｚ、ＣＨ２ＣＨ）５；６．０５（１Ｈ，ｄ）ＮＨ；７．４６（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ７．６、７．２Ｈｚ）３‘‘、５‘‘；７．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  ７．６、７．６Ｈｚ）４‘‘；８．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．２Ｈｚ）２‘‘、６‘‘。
【０２３０】
工程９：Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン
【化４７】
2018168171.tif 000048
１．６０ｋｇのＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（２．５０ｍｏｌ）および０．２０ｋｇのテトラメチルエチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ）（１．７３ｍｏｌ、０．６９当量）を、３５℃で、１００Ｌの容器中で、３８Ｌのトルエンに溶解させた。６℃に冷却した後、１Ｌのアセトニトリル中の２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＣＰ）（０．４７ｋｇ、３．３０ｍｏｌ、１．３２当量）の溶液を、１５分間の間に加えた後、３Ｌのアセトニトリルを加えた。反応混合物を２２℃に温めた。２時間にわたって撹拌し続けた。ＴＬＣ分析により、０．５％未満のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンの含量が示された。３２Ｌのアセトニトリルの添加の後、温度を−１０℃に低下させた。気体トリメチルアミンを、その沸点未満に冷却し、得られた液体トリメチルアミン（７．４２ｋｇ、１２５．５３ｍｏｌ、５０．２１当量）を導入した。１５時間にわたって６５℃に加熱することによって、次の反応工程を開始させた。ＴＬＣ分析により、０．５％未満の中間体の環の含量が示された。生成物を、−３０℃に冷却することによって結晶化させ、ろ過によって単離し、その後、１３Ｌのアセトニトリルで洗浄した。３５℃で乾燥させることにより、１．８５ｋｇのオフホワイトの固体が得られた。１．５８ｋｇのＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシン（２．４５ｍｏｌ）を用いて反応を繰り返したところ、さらなる１．８２ｋｇの粗製のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンが得られた。両方の粗材料を組み合わせて、２９Ｌの塩化メチレンおよび１４．５Ｌのメタノールに溶解させた。この溶液を、３３７ｋｇの塩化メチレンと３３ｋｇのメタノールとの混合物で調整した７２ｋｇのシリカゲルにおけるクロマトグラフィーによって精製した。９６６ｋｇの塩化メチレンと９５ｋｇのメタノールとの混合物、１８６６ｋｇの塩化メチレンと２２３ｋｇのメタノールとの混合物、３２８ｋｇの塩化メチレンと８２ｋｇのメタノールとの混合物、１３４５ｋｇの塩化メチレンと２６８ｋｇのメタノールとの混合物、５３０ｋｇの塩化メチレンと１５８ｋｇのメタノールとの混合物および３７１ｋｇの塩化メチレンと２２１ｋｇのメタノールとの混合物での溶離を行った。収集した画分の体積は１４０Ｌであった。画分１７〜３８の溶媒を、５０℃で蒸留して取り除いた。４０℃で、ロータリーエバポレータ中での最後の乾燥により、３．３６ｋｇ（乾燥基準で２．９２ｋｇ、３．６１ｍｏｌ、７３％）の表題化合物、Ｎ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンが、わずかに黄色がかった固体として得られた。純度は、ＨＰＴＬＣにより９９．５％であり、ＨＰＬＣ分析により９８．７％であった。乾燥減量は、１１．５％であり、含水量は、１．７％であった。同一性をＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲによって確認した。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、δｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）：０．８８（６Ｈ，ｔ）１８、１６‘；１．２〜１．３（４６Ｈ，ｍ）７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、４‘、５‘、６‘、７‘、８‘、９‘、１０‘、１１‘、１２‘、１３‘、１４‘、１５‘；１．５６（２Ｈ，ｍ）３‘；１．９９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＨ）６；２．１６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＯ）２’；３．２１（９Ｈ，ｓ，Ｎ（ＣＨ３）３）Ｎ（ＣＨ３）３；３．６５（２Ｈ，ｍ，ＰＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）３）ＣＨ２Ｎ；３．９７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＯＰ）１；４．２１（２Ｈ，ｂｒ  ｓ，ＰＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）３）ＰＯＣＨ２；４．４５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮＨ）２；５．５０（１Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＯＣＯＰｈ）ＣＨ））３；５．５４（１Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＯＣＯＰｈ）ＣＨ））４；５．８２（１Ｈ，ｄｔ，ＣＨ２ＣＨ）５；７．３９（１Ｈ，ｄ）ＮＨ；７．４３（２Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．２Ｈｚ）３‘‘、５‘‘；７．５５（１Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．２Ｈｚ）４‘‘；７．９９（２Ｈ，ｄ，Ｊ  ７．２Ｈｚ）２‘‘、６‘‘。
【０２３１】
工程１０：Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン
【化４８】
2018168171.tif 000049
３．３６ｋｇのＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリン（乾燥基準で２．９２ｋｇ、３．６１ｍｏｌ）を、２２℃で、ロータリーエバポレータ中で、１０Ｌのメタノールに溶解させ、５Ｌのメタノールを含む７０Ｌの容器中に移した。メタノール中のナトリウムメトキシドの１３８ｍＬの溶液（３０％、０．７５ｍｏｌ、０．２１当量）を用いて、ｐＨを１１．５に調整した。２２℃で２３時間にわたって撹拌し続けた。ＴＬＣ分析により、０．５％未満のＮ−パルミトイル−３−Ｏ−ベンゾイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの含量が示された。３１Ｌの塩化メチレンおよび１３Ｌの精製水の導入の後、相分離が起こった。８Ｌのメタノール、８Ｌの精製水および５５ｍＬの１Ｍの塩酸を用いて、有機相をｐＨ７．０になるまで中和した。ＴＬＣ分析により、水相中に生成物が存在しないことが示された。有機相を、３５℃で蒸発乾固させた。残渣を、６Ｌの２−プロパノールで２回および１２Ｌの塩化メチレンで２回、同時蒸発させた。粗生成物を２．６Ｌのメタノールおよび２．６Ｌの塩化メチレンに溶解させ、１．２Ｌのメタノールおよび１．２Ｌの塩化メチレンで洗浄しながら、０．２μｍのフィルタに通してろ過した。４２Ｌのアセトンの添加および０℃への冷却によって結晶化を引き起こした。１５時間後、沈殿物を単離し、２４Ｌのアセトンで４回に分けて洗浄した。湿潤生成物を、２．５時間にわたって、２２℃で、１９Ｌのアセトンに懸濁させた。単離し、１２Ｌのアセトンで４回に分けて洗浄した後、４６時間にわたって３０℃で乾燥させることによって、プロセスを終了させた。白色の粉末としての２．２９ｋｇ（３．２５ｍｏｌ、９０％）のＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンが得られた。純度は、ＨＰＴＬＣにより９９．２％であり、ＨＰＬＣ分析により９９．０％であった。含水量は、０．７％であった。同一性をＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲによって確認した。
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、δｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）：０．８８（６Ｈ，ｔ）１８、１６‘；１．２〜１．３（４６Ｈ，ｍ）７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、４‘、５‘、６‘、７‘、８‘、９‘、１０‘、１１‘、１２‘、１３‘、１４‘、１５‘；１．５７（２Ｈ，ｍ）３‘；１．９９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＨ）６；２．１５（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＯ）２’；３．２３（９Ｈ，ｓ，Ｎ（ＣＨ３）３）Ｎ（ＣＨ３）３；３．６５（２Ｈ，ｍ，ＰＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）３）ＣＨ２Ｎ；３．９１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＯＰ）１；４．０５（１Ｈ，ｔ，Ｊ  ７．７Ｈｚ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ））３；４．１５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮＨ）２；４．２６（２Ｈ，ｍ，ＰＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）３）ＰＯＣＨ２；５．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ  １５．３Ｈｚ、７．４Ｈｚ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ））４；５．６９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ  １４．６Ｈｚ、７．２Ｈｚ、ＣＨ２ＣＨ）５。
【０２３２】
表１は、１２０ｇ規模（実施例２）における収率および／中間体／生成物の特性を示す。表２は、２ｋｇ規模（実施例３）についての結果を示す。
【０２３３】
【表１】
2018168171.tif 000050
【０２３４】
【表２】
2018168171.tif 000051
【０２３５】
実施例４：光学純度、天然産物卵スフィンゴミエリンとの同一性および絶対配置の確認
５ｍｍの三重共鳴プローブおよびｚ軸勾配を備えた、１Ｈについて５００ＭＨｚおよび１３Ｃについて１２５ＭＨｚで動作するVarian Inova分光計を用いて、ＮＭＲスペクトルを得た。溶媒は、クロロホルム−ｄであり、温度は２５℃であった。１Ｈおよび１３Ｃの化学シフトは、残留溶媒シグナルを基準とし、テトラメチルシラン基準で、１Ｈについて７．２７ｐｐｍおよび１３Ｃについて７７ｐｐｍであった。
【０２３６】
１８〜−１ｐｐｍのスペクトルウインドウで、９０°パルスで、４トランジェント(transient)で、プロトンスペクトルを取った。取得時間は５秒間であり、緩和遅延(relaxation delay)は５秒間であった。アポダイゼーションなしで、ＦＩＤにおける９４８４２ポイントを、スペクトルにおける１３１０７２ポイントに変換した。
【０２３７】
１Ｈ−１３Ｃ  ｇＨＭＢＣＡＤスペクトルを、１３Ｃにおける断熱パルスを用いて、標準的なVarianパルスシーケンスで取得し、それを、８Ｈｚの結合定数のために最適化した。プロトン次元において、４０９６ポイントを、３７５５Ｈｚ、１．２４〜８．７４ｐｐｍのスペクトルウインドウにわたって取得し、スペクトルにおける同じ数のポイントに変換し、シフトされたガウス関数（ｇｆ＝０．２７７、ｇｆｓ＝０．１２６）を用いて重み付けした。炭素次元において、２＊５１２の増分(increment)を、１０〜１９０ｐｐｍのスペクトルウインドウにわたって、それぞれ１トランジェントで取り、シフトされたガウス関数（ｇｆ＝０．０１９、ｇｆｓ＝０．００５）を用いて、４０９６ポイントに変換した。緩和遅延は１秒間であった。
【０２３８】
Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンにおける化学シフト帰属
化学シフト帰属は、ＤＱＣＯＳＹスペクトルに見られる１Ｈ−１Ｈカップリングおよび１Ｈ−１３Ｃカップリング、１Ｈ−１３Ｃ  ｇＨＳＱＣおよびｇＨＭＢＣスペクトルに見られる直接結合(one-bond)およびロングレンジ(long-range)に基づいていた。帰属は、スキームＸＶに示される。
【化４９】
2018168171.tif 000052
スキームＸＶ．２５℃でクロロホルム−ｄ中の、Ｎ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンにおける１Ｈおよび１３Ｃ化学シフトの帰属。
【０２３９】
帰属は、アミドプロトンである必要がある、炭素に結合していない、６．８０におけるプロトンから開始する。ｇＤＱＣＯＳＹスペクトルにより、スフィンゴシン骨格のシーケンス６．８０−３．９５−４．０５−５．４５−５．６５−１．９７が示された。ｇＨＳＱＣスペクトルに見られる３つのメチレン基のうち、１つは、６６．３で炭素を有し、それが、３．３３でトリメチルアミノプロトンと結合する。３．７９におけるそのプロトンは、４．２７および４．５３でプロトンと結合する。残りのメチレン基のプロトンの１つ、４．１６は、実際に、３．９５とのカップリングを示す。アミド炭素は、２．１４および２．１１でプロトンとのクロスピークを示す。
【０２４０】
卵スフィンゴミエリンおよび合成スフィンゴミエリンの比較
積分値の精度を最大にするために、３つの試料のプロトンスペクトルを、１４〜−１ｐｐｍのスペクトルウインドウにわたって、４５°パルスで、６４トランジェントで取った。取得時間は５秒間であり、緩和遅延は１５秒間であった。アポダイゼーションなしで、ＦＩＤにおける７９８７２ポイントを、スペクトルにおける１３１０７２ポイントに変換した。
【０２４１】
卵に由来するＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンおよび本発明の方法によって合成されるＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの１Ｈスペクトルが、図１〜３に対応して示される。積分値は、３．３３ｐｐｍ（９Ｈ）におけるトリメチルアンモニウム(trimethylamonium)基のシグナルを基準にしていた。図１中の２．５８ならびに図２および３中の３．００におけるシグナルは水である。２つの合成試料は、約１％の積分値の精度の範囲内で、同一である。天然の試料は、より短い平均アルキル鎖を有し、いくらかの不純物が、ＮＨおよびアルケンシグナルについて顕著である。
【０２４２】
スフィンゴシン骨格は、２つの不斉炭素を有し、ひいては、４つの立体異性体の可能性を有する。合成試料は、ジアステレオマーの混合物についての予測されるシグナルの倍増を示さない。卵スフィンゴミエリンは混合物であるため、卵スフィンゴミエリンに対してこのような評価を行うことはできない。鏡像異性体純度を確認するために、卵に由来するＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンおよび本発明の方法によって合成されるＮ−パルミトイル−Ｄ−エリトロ−スフィンゴミエリンの試料を、過剰なＲ−メトキシフェニル酢酸（Ｒ−ＭＰＡ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）で、管中で処理し、５．２０〜５．９５ｐｐｍの領域を調査し、これらは、対応して図４〜６に示される。５．４２における三重線（図５）は、Ｈ３（表３の説明を参照）であり、５．４９における二重線の二重線は、Ｈ４であり、５．７３における三重線の二重線は、Ｈ５である。図４は、反応混合物が熟成するにつれて、５．５３における二重線の増加を示し、この二重線は、図６においても見られる。他のこれらのシグナル、エステルのシグナルの５％を超えるシグナルが存在しないことが分かり、したがって、試料の鏡像異性体純度が、少なくとも９５％であるようであること、すなわち、試料が、約５％以下のその対応する反対の鏡像異性体を含有することが分かった。それらのＲ−ＭＰＡエステルにおけるＨ３〜Ｈ５のシグナルが同じ化学シフトを有するため、全ての３つの試料の絶対配置は同じである。
【０２４３】
絶対配置の決定
絶対配置を確認するために、１当量の、卵に由来するパルミトイルスフィンゴミエリンを、Ｒ−（−）−α−メトキシフェニル酢酸（Ｒ−ＭＰＡ）とＳ−（＋）−α−メトキシフェニル酢酸（Ｓ−ＭＰＡ）との１．２当量のラセミ混合物、１．２当量のジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、および触媒量の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）で、ＮＭＲ管中で処理した。図７（下部）は、この反応混合物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。図７は、Ｒ−ＭＰＡ（上部）およびＳ−ＭＰＡ（真ん中）エステルにおけるＨ２水素ピークの選択的励起が上部にあることを示す１Ｄ−ＴＯＣＳＹ（１次元全相関分光法）スペクトルも示す。１Ｄ−ＴＯＣＳＹスペクトルで測定されたＤｄＲＳが、表３に示される。
【化５０】
2018168171.tif 000053
【０２４４】
【表３】
2018168171.tif 000054
【０２４５】
Ｈ４〜Ｈ６のプラスのＤｄＲＳおよびＨ１ａ、Ｈ１ｂおよびＨ２のマイナスのＤｄＲＳは、Ｃ３における絶対配置がＲであることを示す。
【０２４６】
本発明は、本発明のいくつかの態様の例示として意図される実施例に開示される特定の実施形態によって範囲を限定されず、機能的に均等な任意の実施形態が、本発明の範囲内である。実際に、本明細書に示され、記載されるものに加えて、本発明の様々な変更が、当業者に明らかになり、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図される。
【０２４７】
本出願において開示される各参照文献は、全体が参照により本明細書に援用される。
【図１】
2018168171.tif 000062
【図２】
2018168171.tif 000063
【図３】
2018168171.tif 000064
【図４】
2018168171.tif 000065
【図５】
2018168171.tif 000066
【図６】
2018168171.tif 000067
【図７】
2018168171.tif 000068
【図８】
2018168171.tif 000069
【手続補正書】
【提出日】平成30年6月25日(2018.6.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを合成するための方法であって、
ａ）以下の構造：
【化１】
2018168171.tif 000070
（式中、Ｒが、Ｃ１〜５アルキル基、またはその塩である）を有するＬ−セリンエステルのアミノ基を、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で保護して、Ｂｏｃ保護されたＬ−セリンエステルを得る工程と；
ｂ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸の対応するＣ１〜Ｃ５アルキルエステルを得るのに有効な条件下で、ベンゼンスルホン酸の存在下で、前記Ｂｏｃ保護されたＬ−セリンエステルを、２，２−ジメトキシプロパンと反応させる工程と；
ｃ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシ−ホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを得るのに有効な条件下で、ｎ−ブチルリチウムの存在下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，２−ジメチル−４−オキサゾリジンカルボン酸の前記対応するＣ１〜Ｃ５アルキルエステルを、メチルホスホン酸ジメチルと反応させる工程と；
ｄ）（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを得るのに有効な条件下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメトキシ−ホスホリル）−１−オキソ−エチル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを、１−テトラデカナールと反応させる工程と；
ｅ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを得るのに有効な条件下で、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−オキソ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンを、水素化ホウ素ナトリウムおよび三塩化セリウムと反応させる工程と；
ｆ）Ｄ−エリトロ−スフィンゴシンを得るのに有効な条件下で、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（１−ヒドロキシ−ヘキサデカ−２−エニル）−２，２−ジメチルオキサゾリジンの前記ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基を除去する工程と
を含む方法。
【外国語明細書】
2018168171000001.pdf