(57)【要約】【課題】新規なOSBP機能修飾剤を提供する。【解決手段】下記式で示されるOSBP機能修飾剤である。2018168086.tif 000011  Ｒ１又はＲ２は、それぞれ独立に、水素、又は、炭素数１〜６の直鎖若しくは枝鎖のアルキル基である。優れた抗ウイルス活性及び低細胞毒性を有する。【選択図】図２
2018168086.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化合物Ｉを有することを特徴とする、オキシステロール結合タンパク質の機能を修飾するタンパク質機能修飾剤（ここで、Ｒ１又はＲ２は、それぞれ独立に、水素、又は、炭素数１〜６の直鎖若しくは枝鎖のアルキル基である。）。
【化１】
2018168086.tif 000008
【請求項２】
前記化合物Ｉは、下記化合物ＩＩである請求項１記載のタンパク質機能修飾剤。
【化２】
2018168086.tif 000009
【請求項３】
前記化合物Ｉは、下記化合物ＩＩＩである請求項１記載のタンパク質機能修飾剤。
【化３】
2018168086.tif 000010
【請求項４】
抗ウイルス剤である請求項１乃至３の何れか１項に記載のタンパク質機能修飾剤。
【請求項５】
エンテロウイルスに対して使用される、請求項４に記載のタンパク質機能修飾剤。
【請求項６】
ポリオウイルスに対して使用される、請求項５に記載のタンパク質機能修飾剤。
【請求項７】
抗がん剤である請求項１乃至３の何れか１項に記載のタンパク質機能修飾剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質の機能を修飾するタンパク質機能修飾剤に関し、詳しくはオキシステロール結合タンパク質の機能を修飾するタンパク質機能修飾剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
低細胞毒性を示す抗ポリオウイルス薬候補化合物のうち、宿主因子を標的とすると考えられるものについて解析を進めた結果、宿主のホスファチジルイノシトール-4-キナーゼβ（PI4KB）若しくはオキシステロール結合タンパク質（oxysterol binding protein; OSBP）ファミリーI（OSBP及びOSBP2）が直接の標的であることが明らかとなっている（非特許文献１）。
【０００３】
PI4KBとOSBPのポリオウイルス複製における役割は、以下のように考えられている。即ち、ウイルスが細胞に感染して生じるウイルスタンパク質（3C, 2BC, 3AB及び3D）が、PI4KBと直接結合・活性化することでホスファチジルイノシトール-4-リン酸(PI4P)を蓄積し、そこに誘導されたOSBPによってフリーのコレステロールが蓄積されることで、ウイルスRNAの合成の場が形成される(非特許文献２)。同様の経路は、全く異なるウイルス科に属するC型肝炎ウイルス（HCV）の感染においても保存されており、OSBPは広い範囲のウイルス複製に利用されている。
【０００４】
OSBPは、宿主である細胞においては、小胞体からトランスゴルジ体へのコレステロールの輸送を行っており、その機能はゴルジ体膜のPI4Pの量の制御にも関与している。また、OSBPは、細胞増殖シグナルカスケードのERK1/2の活性化や、糖尿病血管病変と関連するSTAT3の活性化の制御因子としても機能し、OSBP結合化合物は抗がん作用を示すことも示されている（非特許文献３）。さらに、上述した抗ポリオウイルス活性だけでなく、エンテロウイルス、ライノウイルス及びHCVの細胞感染を阻害することが知られている（非特許文献４）。
【０００５】
そのため、OSBPの機能を修飾する低分子化合物（以下、OSBP機能修飾剤）は、抗がん剤や抗ウイルス薬への展開が期待できる化合物として注目されている。
【０００６】
OSBP機能修飾剤については、例えばAN-12-H5及びT-00127-HEV2がある（非特許文献５）。またOSW-1（非特許文献６）及び既知の抗真菌薬itraconazoleが見出されている（非特許文献７）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Arita et al., 2011, 2013 J Virol
【非特許文献２】Arita, 2014 Microbiol Immunol, Arita, 2016 ACS Infect Dis
【非特許文献３】Burgett et al., 2011 Nat Cell Biol
【非特許文献４】Arita et al., 2011, 2013 J Virol、Strating et al., 2015 Cell Rep
【非特許文献５】有田, ウイルス 第63巻 第1号，pp.93-102，2013
【非特許文献６】Burgett et al., 2011 Nat Cell Biol
【非特許文献７】Strating et al., 2015 Cell Rep
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、従来より優れた新規なOSBP機能修飾剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明にかかるOSBP機能修飾剤は、下記式で示される。
【００１０】
【化１】
2018168086.tif 000003
【００１１】
ここでＲ１又はＲ２は、それぞれ独立に、水素、又は、炭素数１〜６の直鎖若しくは枝鎖のアルキル基である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば新規なOSBP機能修飾剤が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明にかかるOSBP機能修飾剤を取得するためのスクリーニングの概略を示す図である。
【図２】本発明にかかるOSBP機能修飾剤について、PV(Poliovirus))擬似ウイルスに対する抗ウイルス活性及びRD細胞に対する細胞毒性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、添付の図面を参照して本発明の実施形態について具体的に説明するが、当該実施形態は本発明の原理の理解を容易にするためのものであり、本発明の範囲は、下記の実施形態に限られるものではなく、当業者が以下の実施形態の構成を適宜置換した他の実施形態も、本発明の範囲に含まれる。
【００１５】
本発明者らは、抗ポリオウイルス活性を示す比較的低細胞毒性の化合物を化合物ライブラリーから選択すると、それらはウイルスタンパクの直接的阻害剤、PI4KB阻害剤、及びOSBP機能修飾剤であることを新知見として取得し、かかる事実に基づいて本発明を完成させた。即ち、本発明者らは、抗ポリオウイルス活性による一次スクリーニングを行い、その中の比較的低細胞毒性の化合物からOSBP局在変化能を指標に目的物を得ることに成功した。
【００１６】
本発明にかかるOSBP機能修飾剤は、下記式で示される。
【００１７】
【化２】
2018168086.tif 000004
【００１８】
ここで、Ｒ１又はＲ２は、それぞれ独立に、水素、又は、炭素数１〜６の直鎖若しくは枝鎖のアルキル基である。
【００１９】
具体的には、本発明にかかるOSBP機能修飾剤は、下記式で示されるT-00127-HEV3である。
【００２０】
【化３】
2018168086.tif 000005
【００２１】
また、本発明にかかるOSBP機能修飾剤は、下記式で示されるT-00127-HEV4である。
【００２２】
【化４】
2018168086.tif 000006
【００２３】
化合物T-00127-HEV3及びT-00127-HEV4は、構造的には比較的単純な構造であり、そのため化学合成展開が容易である。また、化合物T-00127-HEV3及びT-00127-HEV4は、既知のコレステロール代謝及びインターフェロン応答に関与する遺伝子群の発現への影響が既知のOSBP機能修飾剤と比べて低い。また、化合物T-00127-HEV3及びT-00127-HEV4は水溶性に優れており、特にT-00127-HEV4は優れている。
【００２４】
本発明は、化合物T-00127-HEV3又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する抗ウイルス剤である。また、本発明は、化合物T-00127-HEV4又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する抗ウイルス剤である。
【００２５】
これら抗ウイルス剤が使用されるウイルスは例えばＲＮＡウイルスである。ＲＮＡウイルスには、例えば、エンテロウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ライノウイルス、レオウイルス、ロタウイルス、日本脳炎ウイルス、風疹ウイルス、デングウイルス、ラッサウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、コロナウイルス、ラウス肉腫ウイルス、白血病ウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、狂犬病ウイルス、免疫不全ウイルス等が含まれる。また、エンテロウイルスには、例えば、ポリオウイルス、コクサッキーウイルスＡ群、コクサッキーウイルスＢ群、エコーウイルス等が含まれる。
【００２６】
これら抗ウイルス剤が使用されるウイルスは例えばＤＮＡウイルスである。ＤＮＡウイルスには、例えば、パルボウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、痘瘡ウイルス又はＢ型肝炎ウイルス等が含まれる。
【００２７】
本発明は、化合物T-00127-HEV3又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する抗がん剤である。また、本発明は、化合物T-00127-HEV4又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する抗がん剤である。
【００２８】
これら抗がん剤が使用されるがんには、例えば、大腸がん、胃がん、食道がん、結腸がん、肝臓がん、膵臓がん、乳がん、肺がん、胆嚢がん、胆管がん、胆道がん、直腸がん、卵巣がん、子宮がん、腎がん、膀胱がん、前立腺がん、骨肉腫、脳腫瘍、白血病、筋肉腫、皮膚がん、悪性黒色腫、悪性リンパ腫、舌がん、骨髄腫、甲状腺がん、皮膚転移がん、皮膚黒色腫等が含まれる。
【実施例】
【００２９】
（１）化合物のスクリーニング
東京大学創薬オープンイノベーションセンターが所有する大規模化合物ライブラリー(70,338化合物)を用いたスクリーニングを行った。スクリーニングの概略は図１に示される工程によるものであった。
【００３０】
（２）PV擬似ウイルスに対する抗ウイルス活性及びRD細胞に対する細胞毒性
ポリオウイルス擬似ウイルスに対する感染阻害効果及びヒト由来培養細胞であるRD細胞に対する細胞毒性を測定した。
【００３１】
50% effective concentration (EC50)の測定では、RD細胞にポリオウイルス擬似ウイルス（PV1pv：ルシフェラーゼ遺伝子を発現するポリオウイルスレプリコンをポリオウイルスのカプシドで覆ったもの。一過性の感染のみを生じる。その複製の指標としてルシフェラーゼ活性を用いることが出来る）800 infectious unitsを感染させ、T-00127-HEV3若しくはT-00127-HEV4存在下(20〜0.16 μM)で感染後7時間のルシフェラーゼ活性を指標としてEC50を測定した。
【００３２】
50% cytotoxic concentration (CC50) の測定では、RD細胞をT-00127-HEV3若しくはT-00127-HEV4存在下(100〜0.20 μM)で2日間培養し、細胞のATP量を指標として、CC50を測定した。
【００３３】
結果を図２に示す。図２に示されるように、T-00127-HEV3ではEC50= 2.1 μM, CC50= 83 μMであり、T-00127-HEV4ではEC50= 0.55 μM, CC50= 63 μMであった。
【００３４】
（３）エンテロウイルスに対する抗ウイルス活性
ヒトに感染しうるエンテロウイルスの代表的なウイルス株に対する抗ウイルス活性を測定した。各々のウイルス(ウイルス量100 50% cell culture infectious dose [CCID50])をT-00127-HEV3若しくはT-00127-HEV4（最終濃度50〜0.39 μM）の存在下でヒト由来培養細胞であるRD細胞に感染させ、感染後6日までの細胞変性効果を指標として、EC50を測定した。結果を下記表１に示す。表１に示されるようにT-00127-HEV3及びはT-00127-HEV4は代表的なエンテロウイルスに対して効果的な抗ウイルス活性を示した。
【００３５】
【表１】
2018168086.tif 000007
【産業上の利用可能性】
【００３６】
抗ウイルス剤として利用できる。
【図１】
2018168086.tif 000012
【図２】
2018168086.tif 000013