(57)【要約】【課題】動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有する植物性プロテオグリカンを提供すること。【解決手段】アカシア属植物（Ａｃａｃｉａ  ｓｅｎｅｇａｌ  ＷｉｌｌｄｅｎｏｗまたはＡｃａｃｉａ  ｓｅｙａｌ  Ｄｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムから得られる、多角度光散乱検出器及び示差屈折率検出器をオンライン接続したサイズ排除クロマトグラフィーを用いて得られたクロマトグラムの溶出開始点から溶出終了点までを結んだ直線をＰｂａｓｅＬとし、ＰｂａｓｅＬから上の全ピーク面積をＳとし、溶出開始点から分子量３００万までのピーク面積をＳ１とし、分子量３００万から分子量６０万までのピーク面積Ｓ２としたとき、ＳとＳ１とＳ２が、Ｓ１／Ｓ２＞０．６０、及び、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＞０．５５の関係を満足することを特徴とする植物性プロテオグリカン。【選択図】図１
2018168263.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アカシア属植物（Ａｃａｃｉａ  ｓｅｎｅｇａｌ  ＷｉｌｌｄｅｎｏｗまたはＡｃａｃｉａ  ｓｅｙａｌ  Ｄｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムから得られる、多角度光散乱検出器及び示差屈折率検出器をオンライン接続したサイズ排除クロマトグラフィーを用いて得られたクロマトグラムの溶出開始点から溶出終了点までを結んだ直線をＰｂａｓｅＬとし、ＰｂａｓｅＬから上の全ピーク面積をＳとし、溶出開始点から分子量３００万までのピーク面積をＳ１とし、分子量３００万から分子量６０万までのピーク面積Ｓ２としたとき、ＳとＳ１とＳ２が、Ｓ１／Ｓ２＞０．６０、及び、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＞０．５５の関係を満足することを特徴とする植物性プロテオグリカン。
【請求項２】
下記の工程（Ａ）及び工程（Ｂ）を含むことを特徴とする請求項１に記載の植物性プロテオグリカンの製造方法。
工程（Ａ）：アラビアゴム水溶液を濃度０．５〜２０％（ｗ／ｖ）に調製する工程
工程（Ｂ）：アラビアゴム水溶液を、公称孔径０．０５〜０．２５μｍの精密濾過膜または分画分子量５０万〜２５０万の限外濾過膜に供する工程
【請求項３】
請求項１に記載の植物性プロテオグリカンを含む細胞増殖促進剤。
【請求項４】
請求項３に記載の細胞増殖促進剤を含む化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は植物性プロテオグリカンに関する。詳しくは、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有する植物性プロテオグリカンに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、糖蛋白質が顕著な生理活性を有することが明らかになってきた。糖蛋白質のひとつである動物性プロテオグリカンは、グルコサミノグリカン糖鎖と蛋白質との共有結合化合物の総称であり、その高い保湿性や細胞増殖促進作用から化粧品成分として広く用いられている。動物性プロテオグリカンとしては、例えば、サケ鼻軟骨、サメ鰭軟骨及びイカ頭部軟骨を由来としたものが知られている。しかし、化粧品市場においては、動物由来成分よりも植物由来成分の方がイメージに優れるため、動物性プロテオグリカンも植物由来成分で代替することが求められていた。
【０００３】
植物には、動物性プロテオグリカンに類似する構造をもつアラビノガラクタン蛋白質（別名：植物性プロテオグリカン）が含まれている。アラビノガラクタン蛋白質はアラビノガラクタン糖鎖と蛋白質との共有結合化合物の総称である。アラビノガラクタン蛋白質のもつ効果として、乳化性が知られている（非特許文献１）。アラビノガラクタン蛋白質を含む物質の一つにアラビアゴムが挙げられる（特許文献１）。アラビアゴムはアカシア（Ａｃａｃｉａ）の滲出液より回収される樹液である。アラビアゴムは、増粘作用、乳化作用を有することから化粧品用途において広く応用されており、毎年２千トン程度が国内に輸入されている。アラビアゴムは国内で入手が容易で、かつ、化粧品原料として「医薬部外品原料規格２００６」に収蔵されている等の安全性等の面でも実績が多く、植物性プロテオグリカンの原料として有用といえる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０００−１６６４８９号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２４６（１９９３）ｐ．３０３−３１８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
特許文献１には、アラビアゴムを６０〜１４０℃で３０分以上加熱することによって乳化力が増強した変性アラビアゴムとなることが示されている。この変性アラビアゴムは、変性前のアラビアゴムに比べてアラビノガラクタン蛋白質（分子量３０万以上）の分子量に相当する高分子量成分が増加しており、生理活性も優れるものと予想されたが、本発明者の研究によれば、この方法で得られる変性アラビアゴムの生理活性は低く、動物性プロテオグリカンの代替えにはならないことが分かった。また、この方法で得られる変性アラビアゴムは臭いを生じることがある。従って、動物性プロテオグリカンと同等の生理活性を有する植物性プロテオグリカンは未だ見出されていない。
【０００７】
本発明は上記の事情に鑑みて成されたものであり、使用感に優れ、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有する植物性プロテオグリカンを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、アカシア属植物（Ａｃａｃｉａ  ｓｅｎｅｇａｌ  ＷｉｌｌｄｅｎｏｗまたはＡｃａｃｉａ  ｓｅｙａｌ  Ｄｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムから、動物性プロテオグリカンと同等の生理活性を有する植物性プロテオグリカンを得ることができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は以下の通りである。
［１］  アカシア属植物（Ａｃａｃｉａ  ｓｅｎｅｇａｌ  ＷｉｌｌｄｅｎｏｗまたはＡｃａｃｉａ  ｓｅｙａｌ  Ｄｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムから得られる、多角度光散乱検出器及び示差屈折率検出器をオンライン接続したサイズ排除クロマトグラフィーを用いて得られたクロマトグラムの溶出開始点から溶出終了点までを結んだ直線をＰｂａｓｅＬとし、ＰｂａｓｅＬから上の全ピーク面積をＳとし、溶出開始点から分子量３００万までのピーク面積をＳ１とし、分子量３００万から分子量６０万までのピーク面積Ｓ２としたとき、ＳとＳ１とＳ２が、Ｓ１／Ｓ２＞０．６０、かつ、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＞０．５５の関係を満足することを特徴とする植物性プロテオグリカン。
［２］  下記の工程（Ａ）及び工程（Ｂ）を含むことを特徴とする上記［１］に記載の植物性プロテオグリカンの製造方法。
工程（Ａ）：アラビアゴム水溶液を濃度０．５〜２０％（ｗ／ｖ）に調製する工程
工程（Ｂ）：アラビアゴム水溶液を、公称孔径０．０５〜０．２５μｍの精密濾過膜または分画分子量５０万〜２５０万の限外濾過膜に供する工程
［３］  上記［１］に記載の植物性プロテオグリカンを含む細胞増殖促進剤。
［４］  上記［３］に記載の細胞増殖促進剤を含む化粧料。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の植物性プロテオグリカンは、既知の動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有し、ヒトの皮膚に対して優れた保湿効果及び細胞増殖促進効果を発揮する。また、植物性であるため、化粧料原料に使用することで、優れた保湿効果及び細胞増殖促進効果を有し、イメージもよい化粧料を実現できる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は実施例３（植物性プロテオグリカン）のサイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムを示す図である。
【図２】図２は比較例１（原料のアラビアゴム）のサイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムを示す図である。
【図３】図３は比較例４（熱変性された変性アラビアゴム）のサイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明を実施形態に即して説明する。
本発明でいう「植物性プロテオグリカン」とは、アカシア属植物（Ａｃａｃｉａ  ｓｅｎｅｇａｌ  ＷｉｌｌｄｅｎｏｗまたはＡｃａｃｉａ  ｓｅｙａｌ  Ｄｅｌｉｌｅ）の幹または枝から得られたアラビアゴムの分離精製物であり、有効量のアラビノガラクタン蛋白質成分を含むことによって、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を示すものを指す。
【００１３】
本発明の植物性プロテオグリカンは、サイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムによって規定される。即ち、サイズ排除クロマトグラフィーにより得られたクロマトグラムの溶出開始点から溶出終了点までを結んだ直線をＰｂａｓｅＬとし、ＰｂａｓｅＬから上の全ピーク面積をＳとし、溶出開始点から分子量３００万までのピーク面積をＳ１とし、分子量３００万から分子量６０万までのピーク面積Ｓ２としたとき、ＳとＳ１とＳ２が、Ｓ１／Ｓ２＞０．６０、かつ、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＞０．５５となる関係を満足することが特徴である。
【００１４】
（ＳＥＣ測定）
ここで、ピーク面積は、多角度光散乱検出器と示差屈折率検出器をオンライン接続したゲル浸透クロマトグラフィーを使用することによって求めることができる。なお、本明細書において、多角度光散乱検出器を「ＭＡＬＳ検出器」、示差屈折率検出器を「ＲＩ検出器」とも称し、多角度光散乱検出器及び示差屈折率検出器をオンライン接続したサイズ排除クロマトグラフィーを「ＳＥＣ測定」と称する。当該ＳＥＣ測定によれば、測定対象の分離精製物中の各成分の組成比は当該ＲＩ検出器により検出でき、当該ＭＡＬＳ検出器により絶対分子量が算出され、ピーク面積を求めることができる。
【００１５】
本発明で採用されるＳＥＣ測定の条件は以下のとおりである。
システム：Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ  ＨＰＬＣシステム（島津製作所製）
カラム：Ｓｕｐｅｒｏｓｅ  ６  １０／３００  ＧＬ  （ＧＥヘルスケア・ジャパン製）
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
溶出溶媒：０．２Ｍ  塩化ナトリウム
試料調製：分析試料を溶出溶媒にて希釈後１時間混合し、２５℃で１８時間静置し、０．４５μｍセルロースアセテートメンブランフィルターにて不溶物を除去した液を測定する。
試料濃度：０．４％（ｗ／ｖ）
試料液注入量：１００μｌ
カラムオーブン温調：３０℃
ＲＩ検出器：Ｏｐｔｉｌａｂ  Ｔ−ｒＥＸ（温調２５℃）（ＷＹＡＴＴ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）
ＭＡＬＳ検出器：ＤＡＷＮ  ＨＥＬＥＯＳ  II  ８＋（ＷＹＡＴＴ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）
ｄｎ／ｄｃ：０．１４１
データプロットモデル：Ｂｅｒｒｙ
【００１６】
（ピーク面積）
上記条件で行ったＳＥＣ測定で得られたデータをＡｓｔｒａ  Ｖｅｒ．  ６．１．２．８４（ＷＹＡＴＴ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）等を用いて処理することにより、重量平均分子量、ピーク面積Ｓ、ピーク面積Ｓ１及びピーク面積Ｓ２が求められる。ＳＥＣ測定によりＲＩ検出器及びＭＡＬＳ検出器を用いて得られたクロマトグラムの溶出開始点から溶出終了点までを結んだ直線をＰｂａｓｅＬとし、本発明でいうピーク面積ＳはＰｂａｓｅＬから上の全ピーク面積、ピーク面積Ｓ１は溶出開始点から分子量３００万までのピーク面積、ピーク面積Ｓ２は分子量３００万から分子量６０万までのピーク面積を意味する。すなわち、ピーク面積Ｓ１はアラビノガラクタン蛋白質成分の面積に相当し、ピーク面積Ｓ２はアラビノガラクタン蛋白質成分（分子量３００万以上の高分子量成分）との分離が困難な中分子量成分の面積を意味する。ピーク面積Ｓ１とピーク面積Ｓ２との商をとったときにＳ１／Ｓ２を求めることができ、ピーク面積Ｓ１とピーク面積Ｓ２との和に対しピーク面積Ｓとの商をとったときに（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めることができる。
【００１７】
（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓは分離精製物中の生理活性に悪影響を及ぼす分子量が６０万よりも小さい低分子量成分の残存の程度を意味し、Ｓ１／Ｓ２は低分子量成分を除く精製物中の有効成分であるアラビノガラクタン蛋白質（分子量３００万以上の高分子量成分）の占める割合を意味する。
【００１８】
本発明の植物性プロテオグリカンは、Ｓ１／Ｓ２＞０．６０、かつ、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＞０．５５の関係を満足する。すなわち、生理活性に悪影響を及ぼす低分子量成分の残存量が少なく、アラビノガラクタン蛋白質（分子量３００万以上の高分子量成分）が十分量存在することから、後述の実施例（実施例１〜４）から明らかなように、保湿性、細胞増殖活性効果及び官能試験結果のいずれにおいても優れた結果が得られ、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有する（表１参照）。
【００１９】
後述の比較例１、２は未精製のアラビアゴムであり、比較例１はＳ１／Ｓ２＞０．６０、及び、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＞０．５５の両方を満足せず、比較例２はＳ１／Ｓ２＞０．６０を満足するが、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＞０．５５を満足せず、いずれにおいても、生理活性に悪影響を及ぼす低分子量成分を多量に含むため、その生理活性は動物性プロテオグリカンに比べて遥かに低く、本発明の植物性プロテオグリカンになり得ないことを示している（表１参照）。
【００２０】
後述の比較例３はアラビアゴムの精製物であり、Ｓ１／Ｓ２＝０．０２、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＝０．８０である。比較例３は生理活性に悪影響を及ぼす低分子量成分の残存量が多く、低分子量成分を除く精製物中のアラビノガラクタン蛋白質の割合も少ないために、動物性プロテオグリカンと同等以上の生理活性を有さず、本発明の植物性プロテオグリカンになり得ないことを示している（表１参照）。
【００２１】
後述の比較例４は、特許文献１のアラビアゴムを６０〜１４０℃で３０分以上加熱する方法により変性されたアラビアゴムであり、比較例１、２の未精製のアラビアゴムよりも細胞増殖活性効果がさらに低くなっている（表１参照）。なお、Ｓ１／Ｓ２は０．９４であり、高分子量成分（ピーク面積Ｓ１）を多く含む結果になっているが、これは、加熱変性によって、分子量はアラビノガラクタン蛋白質（分子量３００万以上）のそれに相当するが、アラビノガラクタン蛋白質とは異なる化学特性の高分子量体（むしろ生理活性を阻害する高分子量体）が生成したものと推察される。また、（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓ＝０．５３であり、比較例１、２の未精製のアラビアゴムよりも分子量が６０万よりも小さい低分子量成分の含有量は減っているが、これも加熱によって生理活性を有しないか或いは阻害する分子量が６０万以上の中分子量体を生成した結果であると推察される。
【００２２】
（原料）
本発明の植物性プロテオグリカンの原料として用いるアラビアゴムは、マメ科植物であるＡｃａｃｉａ属に属するＡｃａｃｉａ  ＳｅｎｅｇａｌＷｉｌｌｄｅｎｏｗまたはＡｃａｃｉａ  ｓｅｙａｌ  Ｄｅｌｉｌｅの幹や枝から得られる天然滲出物である。特に、Ａｃａｃｉａ  Ｓｅｎｅｇａｌ  Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗから得られるアラビアゴムを原料とするのが好ましい。アラビアゴムはその由来を問うことなく、いずれの産地由来のものであってもよい。また、アラビアゴムは、脱塩物、塊状物、玉状物、粗粉砕物、顆粒状、粒状や粉末状（スプレードライ粉末を含む）の形態で入手することができるが、本発明ではこれらの形状を問わず、いずれの形態のものも処理対象のアラビアゴム原料として使用することができる。
【００２３】
本発明の植物性プロテオグリカンは、アラビアゴムを、膜分離処理、担体処理、サイズ排除クロマトグラフィー処理、有機溶媒沈殿処理等に供して、分離精製することによって得られる。特に、アラビアゴムを水系溶媒に溶解して水溶液とし、この水溶液を膜分離処理に供する方法が好ましい。
【００２４】
膜分離処理で使用する膜分離装置における、膜分離法（精密濾過、限外濾過、ナノ濾過、逆浸透、透析、電気透析等）、濾過方法（デッドエンド、クロスフロー等）、接触方法（平板状、管状、スパイラル状、中空糸状等）、ならびに分離環境条件（相対湿度、閉鎖系、循環系の有無）等は任意に選択できる。分離膜は、複数個を直列または並列に接続して使用することもできる。
【００２５】
膜分離処理は、アラビアゴム水溶液を、公称孔径０．０５μｍ〜０．２５μｍ（好ましくは０．０８μｍ〜０．１２μｍ、より好ましくは０．１μｍ）の精密濾過膜または分画分子量５０万〜２００万（好ましくは８０万〜１２０万、より好ましくは１００万）の限外濾過膜に供する方法で行うのが好ましい。さらに、当該精密濾過膜または限外濾過膜としてクロスフロー式の中空糸状膜を用いて、循環系で実施するのがより好ましい。また、膜分離における有効膜面積は１０〜１３０,０００ｃｍ２が好ましく、５０〜１００，０００ｃｍ２がより好ましく、１００〜７０，０００ｃｍ２が特に好ましい。
【００２６】
膜の材質としては、有機高分子（セルロース、ポリエチレン、ポリスルフォン、ＰＴＦＥ（ポリテトラフルオロエチレン）等）、これらの有機高分子を親水化した親水化高分子、セラミックス等が挙げられる。中でも、ポリエチレン膜、セラミックス膜が好ましい。ポリエチレン膜としては、例えば、「マイクローザ」（旭化成ケミカルズ社製、商品名）等が挙げられる。セラミックス膜としては、例えば、ＮＧＫモノリス型セラミックスフィルター（日本ガイシ社製）等が挙げられる。また、分離効率の調整のために、分離時に、アラビゴム水溶液の塩濃度を調整したり、アラビゴム水溶液に凝集剤、防腐剤等を添加してもよい。塩濃度調整のための塩としては、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム等が挙げられる。特に好ましい態様として、塩化ナトリウム濃度が０．０１〜１０重量％（好ましくは０．１〜５重量％）のアラビゴム水溶液が挙げられる。
【００２７】
アラビゴム水溶液の膜処理を行うに当たり、アラビゴム水溶液の温度は好ましくは０〜４０℃、より好ましくは２〜３０℃であり、アラビアゴム水溶液の濃度は好ましくは２０％（ｗ／ｖ）以下、より好ましくは０．５〜１０％（ｗ／ｖ）である。温度が４０℃を超えると、処理中にアラビアゴムが変性して凝集体が生じる。また、アラビアゴム水溶液の濃度が２０％（ｗ／ｖ）を超えると、溶液粘度が高くなり膜処理が困難になる。また、アラビゴム水溶液のｐＨが１０以上であるとアラビアゴムの分解が起こるため、アラビゴム水溶液のｐＨは１０未満とすることが重要である。
【００２８】
分離処理後に、植物性プロテオグリカンを含有する固形分または水溶液を得ることができる。この植物性プロテオグリカンを含有する固形分または水溶液を任意の有機溶媒や有機溶媒を含有する溶媒により精製処理してもよい。また、さらに担体処理、脱臭処理、脱塩処理、膜分離処理等を行って精製してもよい。植物性プロテオグリカンを含有する水溶液を得た場合は、さらに脱塩、滅菌等を目的として膜処理等を実施してもよい。水溶液を凍結乾燥処理することで、植物性プロテオグリカンを含有する固形分を得ることもできる。
【００２９】
サイズ排除クロマトグラフィー処理で使用するカラム、充填担体、ならびに分離環境条件（溶離液、温度、流速）等は任意に選択できる。カラムは、複数個を直列または並列に接続して使用することもできる。
【００３０】
サイズ排除クロマトグラフィー処理は、アラビアゴム水溶液を、平均粒子径１μｍ〜２００μｍ（好ましくは４０μｍ〜１７０μｍ、より好ましくは４７μｍ）のポリマー担体またはシリカ担体を充填したカラムに供する方法で行うのが好ましい。
【００３１】
サイズ排除クロマトグラフィー用の担体としては、ポリマー担体、シリカ担体等が挙げられる。中でも、ポリマー担体が好ましい。ポリマー担体を充填したカラムとしては、例えば、「Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ」（ＧＥヘルスケア・ジャパン社製）、「Ｓｕｐｅｒｄｅｘ」（ＧＥヘルスケア・ジャパン社製）、「Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ」（ＧＥヘルスケア・ジャパン社製）、「ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ」（東ソー社製）、「Ｃｅｌｌｕｆｉｎｅ」（ＪＮＣ製）等が挙げられる。また、アラビアゴムと担体との非特異相互作用の調整のために、分離時に、アラビゴム水溶液のｐＨや塩濃度を調整したり、溶離液の塩濃度やｐＨを調整したりしてもよい。塩濃度調整のための塩としては、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム等が挙げられる。特に好ましい態様として、塩化ナトリウム濃度が０．０１〜１０重量％（好ましくは１〜２重量％）の溶離液またはアラビゴム水溶液が挙げられる。
【００３２】
アラビゴム水溶液のサイズ排除クロマトグラフィー処理を行うに当たり、溶離液の温度は好ましくは０〜４０℃、より好ましくは２〜３０℃であり、アラビアゴム水溶液の濃度は好ましくは２０％（ｗ／ｖ）以下、より好ましくは０．５〜１０％（ｗ／ｖ）である。温度が４０℃を超えると、処理中にアラビアゴムが変性して凝集体が生じる。また、アラビアゴム水溶液の濃度が２０％（ｗ／ｖ）を超える、溶液粘度が高くなり膜処理が困難になる。また、アラビゴム水溶液のｐＨが１０以上であるとアラビアゴムの分解が起こるため、アラビゴム水溶液および溶離液のｐＨは１０未満である。
【００３３】
サイズ排除クロマトグラフィー処理後に、植物性プロテオグリカンを含有する固形分または水溶液を得ることができる。この植物性プロテオグリカンを含有する固形分または水溶液を、任意の有機溶媒や有機溶媒を含有する溶媒により精製処理してもよい。また、さらに担体処理、脱臭処理、脱塩処理、膜分離処理等を行って精製してもよい。植物性プロテオグリカンを含有する水溶液を得た場合は、さらに脱塩、滅菌等を目的として膜処理等を実施してもよい。水溶液を凍結乾燥処理することで、植物性プロテオグリカンを含有する固形分を得ることもできる。
【００３４】
不純物が吸着して能力が低下した分離膜は、通常の酸・アルカリ洗浄、酵素洗浄、界面活性剤洗浄、キレート洗浄、次亜塩素酸洗浄、過酸化水素洗浄等の化学的洗浄、ブラッシングや逆洗等の物理的洗浄等で分離能力を回復できる。
【００３５】
本発明の植物性プロテオグリカンは、その形状を特に制限するものではなく、水溶液、塊状物、玉状物、粗粉砕物、顆粒状、粒状、及び粉末状のいずれの形状をも有することができる。
【００３６】
上記のようにして得られた本発明の植物性プロテオグリカンは、高い生理活性、特に高い細胞増殖活性作用を有する。しかも、天然の植物由来であって非常に安全性が高い。したがって、本発明の植物性プロテオグリカンは細胞増殖促進剤として使用できる。
【００３７】
かかる本発明の細胞増殖促進剤は、医薬部外品、化粧品等に配合される成分、特に化粧品用の成分（化粧料）として好適に利用することができる。
【００３８】
本発明の細胞増殖促進剤は、そのまま、または必要に応じて一般的な添加剤を加えて、医薬部外品、化粧品等とすることができる。添加剤としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、被覆剤、基剤、溶剤、溶解補助剤、可溶化剤、懸濁化剤、分散剤、乳化剤、安定化剤、抗酸化剤、粘稠化剤、保存剤、ｐＨ調整剤、矯味剤、香料、着色剤等が挙げられ、これらは１種または２種以上を用いることができる。
【実施例】
【００３９】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。
〔実施例１〕
精密ろ過
２ｇのアラビアゴム（商品名  アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ  ＳｅｎｅｇａｌＷｉｌｌｄｅｎｏｗ）をイオン交換水に溶解し、１％（ｗ／ｖ）アラビアゴム水溶液２００ｍｌを調製した。アラビアゴム水溶液をタンクに入れ、ポンプを用いて５００ｍｌ／分の流速で、ポリエチレン系中空糸で構成された精密ろ過装置（商品名  マイクローザ  ＰＳＰ−００３（旭化成ケミカルズ社製）、有効膜面積：１５０ｃｍ２、公称孔径：０．１μｍ）中で循環させた（２５℃環境）。排出された濾液と同量のイオン交換水をタンクに加えて続けて循環させ、２，０００ｍｌの濾液が排出されるまで分離を実施した。濃縮液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分０．７５ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。
〔実施例２〕
精密ろ過
２ｇのアラビアゴム（商品名  アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ  Ｓｅｎｅｇａｌ  Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）をイオン交換水に溶解し、１％（ｗ／ｖ）アラビアゴム水溶液２００ｍｌを調製した。アラビアゴム水溶液をタンクに入れ、ポンプを用いて５００ｍｌ／分の流速で、ポリエチレン系中空糸で構成された精密ろ過装置（商品名  マイクローザ  ＰＳＰ−００３（旭化成ケミカルズ社製）、有効膜面積：１５０ｃｍ２、公称孔径：０．１μｍ）中で循環させた（２５℃環境）。排出された濾液と同量のイオン交換水をタンクに加えて続けて循環させ、6，０００ｍｌの濾液が排出されるまで分離を実施した。濃縮液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分０．４２ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。
【００４０】
〔実施例３〕
精密ろ過、塩添加
２ｇのアラビアゴム（商品名  アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ  Ｓｅｎｅｇａｌ  Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）と２ｇの塩化ナトリウムを混合してイオン交換水に溶解し、１％（ｗ／ｖ）アラビアゴム水溶液（１．０重量％塩化ナトリウム含有、ｐＨ：４．５）２００ｍｌを調製した。アラビアゴム水溶液をタンクに入れ、ポンプを用いて５００ｍｌ／分の流速で、ポリエチレン系中空糸で構成された精密ろ過装置（商品名  マイクローザ  ＰＳＰ−００３（旭化成ケミカルズ社製）、有効膜面積：１５０ｃｍ２、公称孔径：０．１μｍ）中で循環させた（２５℃環境）。濾過装置より排出された濾液と同量の１重量％塩化ナトリウム水溶液をタンクに加えて続けて循環させ、８００ｍｌの濾液が排出されるまで分離を実施した。濃縮液を透析膜（商品名  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ｅｓｔｅｒ  （ＣＥ）  Ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ製）、分画分子量５００）へ入れて、タンクに入れたイオン交換水５Ｌ内で回転させた（２５℃環境）。１時間後にイオン交換水を排出し同量のイオン交換水をタンクに加えて続けて回転させ、この処理を１０回繰り返した。透析膜内部の液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分０．２８ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。図１はこのクロマトグラムを示す。
【００４１】
〔実施例４〕
精密ろ過、塩添加
２ｇのアラビアゴム（商品名  アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ  Ｓｅｎｅｇａｌ  Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）と２ｇの塩化ナトリウムを混合してイオン交換水に溶解し、１％（ｗ／ｖ）アラビアゴム水溶液（１．０重量％塩化ナトリウム含有、ｐＨ：４．５）２００ｍｌを調製した。アラビアゴム水溶液をタンクに入れ、ポンプを用いて５００ｍｌ／分の流速で、ポリエチレン系中空糸で構成された精密ろ過装置（商品名  マイクローザ  ＰＳＰ−００３（旭化成ケミカルズ社製）、有効膜面積：１５０ｃｍ２、公称孔径：０．１μｍ）中で循環させた（２５℃環境）。濾過装置より排出された濾液と同量の１重量％塩化ナトリウム水溶液をタンクに加えて続けて循環させ、１，２００ｍｌの濾液が排出されるまで分離を実施した。濃縮液を透析膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ製、商品名Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ｅｓｔｅｒ  （ＣＥ）  Ｍｅｍｂｒａｎｅ；  分画分子量５００）へ入れて、タンクに入れたイオン交換水５Ｌ内で回転させた（２５℃環境）。１時間後にイオン交換水を排出し同量のイオン交換水をタンクに加えて続けて回転させ、この処理を１０回繰り返した。透析膜内部の液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分０．２ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。
【００４２】
〔比較例１〕アラビアゴム
アラビアゴム（商品名  アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ  Ｓｅｎｅｇａｌ  Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。図２はこのクロマトグラムを示す。
【００４３】
〔比較例２〕アラビアゴム
脱塩アラビアゴム（商品名  サンアラビック（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ  Ｓｅｎｅｇａｌ  Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。
【００４４】
〔比較例３〕疎水担体
６ｇのアラビアゴム（商品名  アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ  Ｓｅｎｅｇａｌ  Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）と１２．５ｇの塩化ナトリウムを混合してイオン交換水に溶解し、１０％（ｗ／ｖ）アラビアゴム水溶液（２５．０重量％塩化ナトリウム含有）６０ｍｌを調製した。２５重量％塩化ナトリウム水溶液をあらかじめ洗浄した疎水担体（商品名  ＲｅｌｉＳｏｒｂ  ４０５  ＥＢ、ＲＥＳＩＮＤＩＯＮ製）２０ｍｌおよび１０％（ｗ／ｖ）アラビアゴム水溶液（２５重量％塩化ナトリウム含有）６０ｍｌとを混合し、２５℃環境で２４時間振盪させた。疎水担体を２５重量％塩化ナトリウム水溶液４０ｍｌで３回洗浄した。続けて、疎水担体をイオン交換水２０ｍｌで５回洗浄し、洗浄液を回収した。洗浄液を透析膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ製、商品名Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ｅｓｔｅｒ  （ＣＥ）  Ｍｅｍｂｒａｎｅ；分画分子量５００）へ入れて、タンクに入れたイオン交換水５Ｌ内で回転させた（２５℃環境）。１時間後にイオン交換水を排出し同量のイオン交換水をタンクに加えて続けて回転させ、この処理を１０回繰り返した。透析膜内部の液を回収し凍結乾燥処理し、アラビノガラクタン蛋白質を含む固形分０．２１ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。
【００４５】
〔比較例４〕加熱変性
２ｇのアラビアゴム（商品名  アラビックコールＳＳ（三栄薬品貿易社製）、Ａｃａｃｉａ  Ｓｅｎｅｇａｌ  Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ）を１１０℃に設定したオーブンに入れ、４８時間加熱した。固形分１．９ｇを回収し、この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。図３はこのクロマトグラムを示す。
【００４６】
〔比較例５〕動物性プロテオグリカン
２００ｍｌのプロテオグリカンＩＰＣ（１重量％プロテオグリカン、３０重量％１，３−ブチレングリコール含有水溶液、一丸ファルコス製）を透析膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ製、商品名Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ｅｓｔｅｒ（ＣＥ）  Ｍｅｍｂｒａｎｅ；分画分子量５００）へ入れて、タンクに入れたイオン交換水５Ｌ内で回転させた（２５℃環境）。１時間後にイオン交換水を排出し同量のイオン交換水をタンクに加えて続けて回転させ、この処理を１０回繰り返した。透析膜内部の液を回収し凍結乾燥処理し、動物性プロテオグリカンを含む固形分１．９９ｇを回収した。この固形分をＳＥＣ測定した。得られたクロマトグラムにおいて、Ｓ１／Ｓ２と（Ｓ１＋Ｓ２）／Ｓを求めた。
【００４７】
〔評価〕
＜細胞増殖活性試験＞
ヒト正常表皮角化細胞（倉敷紡績（クラボウ）社製）を、１０μｇ／ｍｌインスリン、０．５μｇ／ｍｌハイドロコーチゾン含有ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地（クラボウ社製）を用いて２×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌ濃度で９６ｗｅｌｌ培養プレートに１００μｌずつ播種し、５％ＣＯ２、３７℃の条件にて２４時間培養した。その後、実施例、比較例で得られた各試料（終濃度２５０μｇ／ｍｌ）を含む培地（０．２０μｍセルロースアセテートメンブランフィルターにて不溶物を除去済み）を１００μｌ添加し７２時間培養した。培養後、細胞数をＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＣＫ０４、同仁化学製）により測定し、未添加時の細胞数を１００としたときの、表皮細胞増殖促進作用を解析した。
【００４８】
＜保湿性試験＞
実施例、比較例で得られた各試料を２％含む水溶液を用意し、各水溶液を５０μｌずつシャーレに滴下した。このシャーレを室温２２℃湿度２０％ＲＨ環境で９０分間放置し、放置後の重量（試料水溶液）を初期の重量（試料水溶液）で割った割合（％）を求めた。
【００４９】
＜官能試験＞
実施例、比較例で得られた各試料を１重量％含む水溶液について、専門パネラー２０名の前腕内側部に塗布したときの使用感を以下の判断基準で官能評価した。評価結果の平均値を、小数点以下四捨五入をして求めた。
・  すべすべ感
３：すべすべする、２：ややすべすべする、１：どちらともいえない、０：すべすべしない
・  臭い
３：無臭である、２：どちらともいえない、１：やや臭いがある、０：臭いがある
【００５０】
〔試験結果〕
試験結果を表１に示す。
【００５１】
【表１】
2018168263.tif 000003
【図１】
2018168263.tif 000004
【図２】
2018168263.tif 000005
【図３】
2018168263.tif 000006