(57)【要約】      （修正有）【課題】がんの免疫治療で使用するための新規ペプチドの提供。【解決手段】特定のアミノ酸配列を含んでなるペプチド、あるいは前記配列と少なくとも８８％相同的な変異配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるペプチドであって、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）と結合し、および／またはＴ細胞と前記ペプチドまたはその薬学的に許容可能な塩との交差反応を誘導し、その中で前記ペプチドは、基礎となる完全長ポリペプチドでない、ペプチド。前記ペプチドは単独のまたは他の腫瘍関連ペプチドと組み合わされた、腫瘍関連Ｔ細胞ペプチドエピトープにさらに関し、それは、例えば、抗腫瘍免疫応答を刺激し、または生体外でＴ細胞を刺激して患者に移入する、ワクチン組成物の活性医薬品成分の役割を果たし得る。ＭＨＣの分子と結合しているペプチド、またはペプチドそれ自体もまた、抗体、可溶性Ｔ細胞受容体、およびその他の結合分子の標的になり得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３２３、および配列番号３２３と少なくとも８８％相同的なその変異配列の群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるペプチドおよびその薬学的に許容可能な塩であって；前記変異体が、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子と結合し、および／またはＴ細胞を前記変異体ペプチドと交差反応させ；前記ペプチドが完全長ポリペプチドでない、ペプチド。
【請求項２】
ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子に結合する能力を有し、前記ＭＨＣに結合すると、ＣＤ４および／またはＣＤ８Ｔ細胞によって認識されることができるようになる、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
そのアミノ酸配列が、配列番号３２３のいずれか１つに記載の一続きのアミノ酸を含んでなる、請求項１または２に記載のペプチドまたはその変異型。
【請求項４】
前記ペプチドまたはその変異型が、８〜１００、好ましくは８〜３０、より好ましくは８〜１６のアミノ酸の全長を有し、最も好ましくは前記ペプチドが、配列番号３２３のいずれかに記載のアミノ酸配列からなり、またはそれから本質的になる、請求項１〜３のいずれか一項に記載のペプチドまたはその変異型。
【請求項５】
前記ペプチドが、修飾され、および／または非ペプチド結合を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のペプチドまたはその変異型。
【請求項６】
前記ペプチドが、特にＨＬＡ−ＤＲ抗原関連不変鎖（Ｉｉ）のＮ末端アミノ酸を含んでなる融合タンパク質の一部である、請求項１〜５のいずれか一項に記載のペプチドまたはその変異型。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチドまたはその変異型をエンコードする核酸であって、任意選択的に異種プロモーター配列と結合する、核酸。
【請求項８】
請求項７に記載の核酸を発現できる、発現ベクター。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチド、請求項７に記載の核酸または請求項８に記載の発現ベクターを含んでなり、好ましくは樹状細胞などの抗原提示細胞である、組換え宿主細胞。
【請求項１０】
医療用である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチドまたはその変異型、請求項７に記載の核酸、請求項８に記載の発現ベクター、または請求項９に記載の宿主細胞。
【請求項１１】
請求項１〜６に記載のペプチドを提示し、または請求項７に記載の核酸を発現し、または請求項８に記載の発現ベクターを発現する、請求項９に記載の宿主細胞を培養するステップと、前記ペプチドまたはその変異型を前記宿主細胞またはその培養液から単離するステップとを含んでなる、請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチドまたはその変異型を製造する方法。
【請求項１２】
Ｔ細胞を、適切な抗原提示細胞の表面に、または抗原提示細胞を模倣する人工コンストラクトの表面に発現される抗原負荷ヒトクラスＩまたはＩＩ  ＭＨＣ分子に、前記Ｔ細胞を抗原特異的様式で活性化するのに十分な時間にわたり、生体外で接触させるステップを含んでなり、前記抗原が、請求項１〜４のいずれか一項に記載のペプチドである、活性化Ｔリンパ球を製造するインビトロ法。
【請求項１３】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを提示する細胞を選択的に認識する、請求項１２に記載の方法によって製造される活性化Ｔリンパ球。
【請求項１４】
請求項１３で定義される活性Ｔ細胞の有効数を患者に投与する、その標的細胞が、請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを提示する患者において、標的細胞を死滅させる、活性化Ｔリンパ球。
【請求項１５】
ＭＨＣ分子と結合すると、請求項１〜５のいずれか一項に記載のペプチドまたはその変異型である、請求項１〜５のいずれか一項に記載のペプチドまたはその変異型を特異的に認識する、可溶性または膜結合抗体である、抗体。
【請求項１６】
がんの診断および／または治療用の、またはがんに対する薬剤の製造において使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチド、請求項７に記載の核酸、請求項８に記載の発現ベクター、請求項９に記載の細胞、請求項１３に記載の活性化Ｔリンパ球または請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
がんが、ペプチド配列番号３２３がそれに由来するタンパク質の過剰発現を示す、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、または子宮がんおよびその他の腫瘍の群から選択される、請求項１６に記載のペプチド、核酸、発現ベクター、細胞、活性化Ｔリンパ球または抗体。
【請求項１８】
（ａ）請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチド又はその変異型、請求項７に記載の核酸、請求項８に記載の発現ベクター、請求項１０に記載の細胞、請求項１３に記載の活性化Ｔリンパ球、または請求項１５に記載の抗体を含有する医薬組成物を溶液または凍結乾燥形態で含んでなる容器；
（ｂ）任意選択的に、前記凍結乾燥製剤のための希釈剤または再構成溶液を含有する第２の容器；
（ｃ）任意選択的に、配列番号１〜配列番号３２２、配列番号３２４〜配列番号４１７からなる群から選択される少なくとももう１つのペプチド、および
（ｄ）任意選択的に、（ｉ）溶液の使用、または（ｉｉ）凍結乾燥製剤の再構成および／または使用のための取扱説明書
を含んでなるキット。
【請求項１９】
（ｉｉｉ）緩衝液、（ｉｖ）希釈剤、（ｖ）フィルター、（ｖｉ）針、または（ｖ）シリンジの１つまたは複数をさらに含んでなる、請求項１８に記載のキット。
【請求項２０】
前記ペプチドが、配列番号３２３である、請求項１８または１９に記載のキット。
【請求項２１】
ａ）前記個々の患者からの腫瘍サンプルによって提示される腫瘍関連するペプチド（ＴＵＭＡＰ）を同定するステップと；
ｂ）ａ）で同定された前記ペプチドを、正常組織との比較で腫瘍における免疫原性および／または過剰提示について予備選別されたペプチド貯蔵庫と比較するステップと；
ｃ）少なくとも１つのペプチドを、前記患者において同定されたＴＵＭＡＰと一致する前記貯蔵庫から選択するステップと；
ｄ）ステップｃ）に基づいて、個別化ワクチンまたは化合物ベースのまたは細胞療法を構築するステップと
を含んでなる、個々の患者のための化合物ベースのおよび／または細胞療法のための個別化抗がんワクチンを製造する方法。
【請求項２２】
前記ＴＵＭＡＰが、
ａ１）前記腫瘍サンプルからの発現データを前記腫瘍サンプルの組織型に対応する正常組織サンプルからの発現データと比較して、前記腫瘍サンプルにおいて過剰発現されまたは異常に発現されるタンパク質を同定するステップと；
ａ２）前記発現データを、前記腫瘍サンプル中のＭＨＣクラスＩ／またはクラスＩＩ分子と結合しているＭＨＣリガンドの配列と相関させて、前記腫瘍によって過剰発現されまたは異常に発現されるタンパク質に由来するＭＨＣリガンドを同定するステップと
によって同定される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
結合ペプチドを前記腫瘍サンプルから単離されたＭＨＣ分子から溶出させて、前記溶出したリガンドを配列決定することで、ＭＨＣリガンドの配列が同定される、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記腫瘍サンプルの組織型に対応する前記正常組織が、前記同一患者から得られる、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記貯蔵庫に包含される前記ペプチドが、
ａａ．正常組織または組織群と比較して悪性組織で過剰発現される遺伝子を同定するステップを含んでなる、マイクロアレイまたは配列決定ベース発現プロファイリングなどの高度並列法によって、ゲノム規模メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）発現解析を実施するステップと；
ａｂ．ステップａａで検出された、選択的に発現されまたは過剰発現される遺伝子によってコードされる、ペプチドを選択するステップと；
ａｃ．健常ドナーまたは前記患者からのヒトＴ細胞を使用した生体外免疫原性アッセイを含んでなる、前記選択されたペプチドによる生体内Ｔ細胞応答の誘導を判定するステップ；または
ｂａ．ＨＬＡリガンドを前記腫瘍サンプルから質量分析を使用して同定するステップと；
ｂｂ．正常組織または組織群と比較して悪性組織で過剰発現される遺伝子を同定するステップを含んでなる、マイクロアレイまたは配列決定ベース発現プロファイリングなどの高度並列法によって、ゲノム規模メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）発現解析を実施するステップと；
ｂｃ．前記同定されたＨＬＡリガンドを前記遺伝子発現データと比較するステップと；
ｂｄ．ステップｂｃで検出された、選択的に発現されまたは過剰発現される遺伝子によってコードされる、ペプチドを選択するステップと；
ｂｅ．ステップｂｄから選択されたＴＵＭＡＰを腫瘍組織上で再検出し、健常組織上の検出欠如または希な検出が、ｍＲＮＡレベルにおける過剰発現の関連性を裏付けるステップと；
ｂｆ．健常ドナーまたは前記患者からのヒトＴ細胞を使用した生体外免疫原性アッセイを含んでなる、前記選択されたペプチドによる生体内Ｔ細胞応答の誘導を判定するステップとに基づいて同定される、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記貯蔵庫に包含される前記ペプチドの免疫原性が、生体外免疫原性アッセイ、個々のＨＬＡ結合についての患者免疫モニタリング、ＭＨＣ多量体染色、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイおよび／または細胞内サイトカイン染色を含んでなる方法によって判定される、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記貯蔵庫が、配列番号３２３と、配列番号１〜３２１及び配列番号３２４〜４１７からなる群から選択される複数のペプチドを含んでなる、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記個々の患者からの正常な対応する組織と比較して前記腫瘍サンプルに特有の少なくとも１つの変異を同定するステップと、前記ワクチンに包含するために、または細胞療法を作成するために、前記変異に関連があるペプチドを選択するステップとをさらに含んでなる、請求項２１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記少なくとも１つの変異が、全ゲノム配列決定によって同定される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
Ｔ細胞受容体、好ましくは可溶性または膜結合Ｔ細胞受容体であって、ＨＬＡリガンドと反応性であり、前記リガンドが配列番号３２３であるアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有する、Ｔ細胞受容体。
【請求項３１】
前記アミノ酸配列が、配列番号３２３と少なくとも８８％同一である、請求項３０に記載のＴ細胞受容体。
【請求項３２】
前記アミノ酸配列が、配列番号３２３である、請求項３０または３１に記載のＴ細胞受容体。
【請求項３３】
前記Ｔ細胞受容体が可溶性分子として提供され、任意選択的に、免疫刺激ドメインまたは毒素などのさらなるエフェクター機能を保有する、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載のＴ細胞受容体。
【請求項３４】
請求項３０〜３３のいずれか一項に記載のＴＣＲをエンコードする核酸であって、任意選択的に異種プロモーター配列と結合する、核酸。
【請求項３５】
請求項３４に記載の核酸を発現できる、発現ベクター。
【請求項３６】
請求項３４に記載の核酸、または請求項１５に記載の抗体をコードする核酸、または請求項３５に記載の発現ベクターを含んでなる、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である、宿主細胞。
【請求項３７】
請求項３６に記載の宿主細胞を培養するステップと、前記Ｔ細胞受容体を前記宿主細胞および／またはその培養液から単離するステップとを含んでなる、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載のＴ細胞受容体を製造する方法。
【請求項３８】
ａ）配列番号３２３であるペプチド
ｂ）ａ）に記載のペプチドおよび／またはペプチドＭＨＣ複合体と反応性のＴ細胞受容体；
ｃ）ａ）に記載のペプチドと、ＨＬＡ−ＤＲ抗原関連不変鎖（Ｉｉ）のＮ末端のアミノ酸１〜８０とを含んでなる融合タンパク質；
ｄ）ａ）〜ｃ）のいずれかをコードする核酸、または前記核酸を含んでなる発現ベクター；
ｅ）ｄ）の発現ベクターを含んでなる宿主細胞；
ｆ）Ｔ細胞を、抗原特異的様式でＴ細胞を活性化するのに十分な時間にわたり、適切な抗原提示細胞の表面に発現されるａ）に記載のペプチドと生体外で接触させるステップを含んでなる方法、ならびにこれらの活性化Ｔ細胞を自己または他の患者に移入する方法によって得られる、活性化Ｔリンパ球；
ｇ）ａ）に記載のペプチドおよび／またはペプチド−ＭＨＣ複合体および／またはａ）に記載のペプチドを提示する細胞と反応性であり、例えば、免疫活性化ドメインまたは毒素との融合によって潜在的に修飾される、抗体、または可溶性Ｔ細胞受容体；
ｈ）配列番号３２３であるペプチドを認識し、および／または配列番号３２３であるペプチドとＭＨＣ分子との複合体を認識する、アプタマー；
ｉ）ａ）〜ｈ）のいずれかに記載の結合または標識ペプチドまたはスキャフォールドからなる群から選択される、少なくとも１つの活性成分と、薬学的に許容できる担体、および任意選択的に、薬学的に許容可能な賦形剤および／または安定剤とを含んでなる医薬組成物。
【請求項３９】
請求項１〜５のいずれか一項に記載のペプチドまたはその変異型、好ましくはＭＨＣ分子と結合している請求項１〜５のいずれか一項に記載のペプチドまたはその変異型を特異的に認識する、アプタマー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫療法において使用するためのペプチド、タンパク質、核酸、および細胞に関する。特に、本発明は、がんの免疫療法に関する。本発明は、単独のまたはその他の腫瘍関連ペプチドと組み合わされた、腫瘍関連Ｔ細胞ペプチドエピトープにさらに関し、それは、例えば、抗腫瘍免疫応答を刺激し、または生体外でＴ細胞を刺激して患者に移入する、ワクチン組成物の活性医薬品成分の役割を果たし得る。主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）の分子と結合しているペプチド、またはペプチドそれ自体もまた、抗体、可溶性Ｔ細胞受容体、およびその他の結合分子の標的になり得る。
【０００２】
本発明は、ヒト腫瘍細胞のＨＬＡクラスＩ分子に由来する、いくつかの新規ペプチド配列およびそれらの変異型に関し、それらは抗腫瘍免疫応答を引き起こすためのワクチン組成物中で、または薬理的／免疫学的活性化合物および細胞の開発のための標的として、使用され得る。
【背景技術】
【０００３】
世界保健機関（ＷＨＯ）によると、がんは、２０１２において世界の４つの主要な非伝染性致死性疾患の１つであった。同じ年、結腸直腸がん、乳がん、および気道がんは、高所得国における１０大死亡原因の１つに挙げられた（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉａｃｅｎｔｒｅ／ｆａｃｔｓｈｅｅｔｓ／ｆｓ３１０／ｅｎ／）。
【０００４】
疫学
２０１２年には、１４１０万件の新規がん症例、３２６０万人のがん患者（診断の５年以内）、および８２０万件のがん死亡が世界的に推定された（Ｆｅｒｌａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｂｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０００５】
脳がん、白血病、および肺がんのグループ中で、本出願は、特に、神経膠芽腫（ＧＢ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、および非小細胞細胞および小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）に重点を置く。
【０００６】
肺がんは世界で最も一般的なタイプのがんであり、多くの国々でがんによる主な死亡原因である。
【０００７】
乳がんは免疫原性がん実体であり、原発性腫瘍内の浸潤性免疫細胞の異なる型は、特徴的な予後および予測的有意性を示す。多数の初期免疫療法治験が、乳がん患者において実施されている。完了したワクチン接種研究のほとんどは、ＨＥＲ２と、ＭＵＣ−１のような炭水化物抗原とを標的とし、かなり期待外れの結果が明らかにされた。乳がん患者における、イピリムマブおよびその他のＴ細胞活性化抗体による免疫チェックポイント調節の効果に関する臨床データが、浮上している（Ｅｍｅｎｓ，２０１２）。
【０００８】
慢性リンパ球性白血病
ＣＬＬは現在治療可能ではないが、多くの患者は、遅い疾患進行または症状悪化のみを示す。患者が治療の早期開始の恩恵を受けることはないので、最初のアプローチは「経過観察」である（Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。症候性のまたは迅速に進行する疾患がある患者に対しては、いくつかの治療選択肢が利用できる。これらとしては、化学療法；標的療法；モノクローナル抗体、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および能動的免疫療法のような免疫ベース治療法；および幹細胞移植が挙げられる。
【０００９】
モノクローナル抗体は、血液悪性疾患において広く使用されている。これは、免疫細胞表面分子のはっきりした特徴と、血液または骨髄中の腫瘍細胞へのアクセスしやすさに基づく、適切な抗原の知識によるものである。ＣＬＬ療法で使用される一般的なモノクローナル抗体は、ＣＤ２０またはＣＤ５２のいずれかを標的とする。元来、ＮＨＬの治療のためにＦＤＡによって承認された最初のモノクローナル抗ＣＤ２０抗体であるリツキシマブは、現在、ＣＬＬ療法に広く使用されている。リツキシマブ／フルダラビン／シクロホスファミドによる併用療法は、フルダラビン／シクロホスファミドの併用と比較してＣＲ率が高くなり、全生存期間（ＯＳ）が改善され、好ましい治療選択肢となった（Ｈａｌｌｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。オファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｏｍａｂ）はＣＤ２０を標的とし、難治性ＣＬＬ患者の治療に使用されている（Ｗｉｅｒｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。オビヌツズマブはクロラムブシルとの併用で第一選択治療において使用される、別のモノクローナル抗ＣＤ２０抗体である（Ｇｏｅｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【００１０】
アレムツズマブは、化学療法抵抗性疾患を有する患者、またはｄｅｌ  １７ｐまたはｐ５３変異として予後不良因子を有する患者の治療に用いられる抗ＣＤ５２抗体である（Ｐａｒｉｋｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【００１１】
新規モノクローナル抗体は、ＣＤ３７（オルトルツズマブ、ＢＩ８３６８２６、ＩＭＧＮ５２９および（１７７）Ｌｕ−テツロマブ）またはＣＤ４０（ダセツズマブおよびルカツムマブ）を標的化して、前臨床設定で試験される（Ｒｏｂａｋ  ａｎｄ  Ｒｏｂａｋ，２０１４）。
【００１２】
いくつかの完了したおよび進行中の治験は、ＣＤ１９特異性がある、遺伝子操作自己由来キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞に基づく（Ｍａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。これまでのところ、少数の患者のみが、検出可能なまたは持続性のＣＡＲを示した。
【００１３】
Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．およびＫａｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｋａｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）によって、ＣＡＲ  Ｔ細胞治験における１例の部分寛解（ＰＲ）および２例の完全寛解（ＣＲ）が検出されている。
活性免疫療法としては、遺伝子治療、全修飾腫瘍細胞ワクチン、ＤＣベースのワクチン、および腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）由来ペプチドワクチンのストラテジーが挙げられる。
【００１４】
遺伝子治療におけるアプローチは、自己由来の遺伝子修飾された腫瘍細胞を利用する。これらのＢ−ＣＬＬ細胞は、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＤ８０、ＣＤ４０Ｌ、ＬＦＡ−３、およびＩＣＡＭ−１のような免疫（同時）刺激遺伝子で形質移入されて、抗原提示およびＴ細胞活性化が改善される（Ｃａｒｂａｌｌｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。特異的なＴ細胞応答および腫瘍細胞の減少が容易に観察される一方で、免疫応答は単に一過性である。
【００１５】
いくつかの研究は、自己由来ＤＣを抗原提示細胞として使用して、抗腫瘍応答を引き起こす。ＤＣには、腫瘍関連ペプチド、全腫瘍細胞溶解産物、および腫瘍由来のＲＮＡまたはＤＮＡが、生体外で負荷された。もう一つのストラテジーは、ＤＣとの融合およびＤＣ−Ｂ−ＣＬＬ細胞ハイブリッドの生成のために、全腫瘍細胞を使用する。形質移入されたＤＣは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞応答の双方を開始した（Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。腫瘍細胞溶解物またはアポトーシス小体がが負荷された融合ハイブリッドおよびＤＣは、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を増加させた。臨床的奏効を示した患者は、ＩＬ−１２血清レベルが上昇し、Ｔｒｅｇの数が減少した（Ｐａｌｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【００１６】
異なるアプローチでは、改変された腫瘍細胞を用いて、ＣＬＬ特異的免疫応答を開始または増加させる。このストラテジーの一例は、トリオーマ細胞の生成であり：Ｂ−ＣＬＬ細胞は、抗ＡＰＣ特異性を有する抗Ｆｃ受容体発現ハイブリドーマ細胞に融合される。トリオーマ細胞は、生体外でＣＬＬ特異的Ｔ細胞応答を誘導した（Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【００１７】
別のストラテジーは、アジュバントとしてのカルメット・ゲラン桿菌と共に、照射された自己ＣＬＬ細胞をワクチンとして利用する。幾人かの患者は、白血球レベルの減少または安定した疾患を示した（Ｈｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【００１８】
単離されたＣＬＬ細胞意外に、ＣＬＬ患者由来の全血も、血液処理ユニット内での調製後にワクチンとして使用されている。このワクチンは、ＣＬＬ特異的Ｔ細胞応答を引き起こし、幾人かの患者において部分的な臨床的奏効または安定した疾患をもたらした（Ｓｐａｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。
【００１９】
いくつかのＴＡＡはＣＬＬにおいて過剰発現され、ワクチン接種に適する。これらとしては、フィブロモジュリン（Ｍａｙｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）、ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８（Ｇｉａｎｎｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）、ＭＤＭ２（Ｍａｙｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）、ｈＴＥＲＴ（Ｃｏｕｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）、がん胎児性抗原未熟ラミニン受容体タンパク質（ＯＦＡｉＬＲＰ）（Ｓｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）、アディポフィリン（Ｓｃｈｍｉｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）、サバイビン（Ｇｒａｎｚｉｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）、ＫＷ１ｔｏＫＷ１４（Ｋｒａｃｋｈａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）、および腫瘍由来のＩｇＶＨＣＤＲ３領域が挙げられる。（Ｈａｒｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｃａｒｂａｌｌｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。第Ｉ相臨床試験は、ワクチンとしてＲＨＡＭＭ由来Ｒ３ペプチドを使用して実施された。６人の患者の内５人が、検出可能なＲ３特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を有した（Ｇｉａｎｎｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【００２０】
結腸直腸がん
結腸直腸がん（ＣＲＣ）の病期次第で、異なる標準的治療法が、結腸および直腸がんに対して利用できる。標準手順としては、外科手術、放射線療法、化学療法、およびＣＲＣ標的療法が挙げられる（Ｂｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ａ；Ｂｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ｂ）。
【００２１】
化学療法剤に加えて、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ、セツキシマブ、パニツマブ）または血管内皮増殖因子−Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ、ベバシズマブ）を標的とするいくつかのモノクローナル抗体が、高ステージ疾患を有する患者に投与される。第二選択および後期治療のために、ＶＥＧＦアフリベルセプトに対する阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤レゴラフェニブ、およびチミジル酸シンセターゼ阻害剤ＴＡＳ−１０２、およびｄＵＴＰアーゼ阻害剤ＴＡＳ−１１４が使用され得る（Ｓｔｉｎｔｚｉｎｇ，２０１４；Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【００２２】
最近の臨床試験では、ＣＲＣに対する治療選択肢として能動免疫療法が分析されている。これらのストラテジーとしては、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）由来ペプチド、全腫瘍細胞、樹状細胞（ＤＣ）ワクチン、およびウイルスベクターによるワクチン接種が挙げられる（Ｋｏｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【００２３】
ペプチドワクチンは、これまでに、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ムチン１、ＥＧＦＲ、Ｔ細胞３（ＳＡＲＴ３）によって認識される扁平上皮がん抗原、β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（β−ｈＣＧ）、ウィルムス腫瘍抗原１（ＷＴ１）、サバイビン−２Ｂ、ＭＡＧＥ３、ｐ５３、リングフィンガータンパク質４３、およびミトコンドリア外膜３４（ＴＯＭＭ３４）のトランスロカーゼ、または変異ＫＲＡＳに向けられている。いくつかの第ＩおよびＩＩ相臨床試験において、患者は、抗原特異的ＣＴＬ応答または抗体産生を示した。免疫学的応答とは対照的に、多くの患者は、臨床的レベルでペプチドワクチンの恩恵を受けなかった（Ｋｏｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｍｉｙａｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｍｏｕｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｏｋｕｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【００２４】
樹状細胞ワクチンは、ＴＡＡ由来ペプチド、腫瘍細胞溶解産物、アポトーシス腫瘍細胞、または腫瘍ＲＮＡまたはＤＣ腫瘍細胞融合産物のいずれかでパルス処理されたＤＣを含んでなる。第Ｉ／ＩＩ相試験にある多くの患者が、特異的免疫学的応答を示した一方で、少数のみが臨床上の便益を有した（Ｋｏｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【００２５】
全腫瘍細胞ワクチンは、照射細胞によって改変された、ＧＭ−ＣＳＦを分泌するように改変された自己由来腫瘍細胞、またはウイルスに感染した照射細胞からなる。ほとんどの患者は、いくつかの第ＩＩ／ＩＩＩ相試験において臨床的有用性を示さなかった（Ｋｏｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【００２６】
ＣＥＡならびにＢ７．１、ＩＣＡＭ−１、およびＬＦＡ−３をコードする、ワクシニアウイルスまたは複製欠損鶏痘ウイルスが、第Ｉ相臨床試験におけるウイルスベクターワクチンのビヒクルとして使用されている。別の研究では、ＣＥＡおよびＢ７．１をコードする非複製カナリア痘ウイルスが使用された。ＣＥＡ特異的Ｔ細胞応答の誘導に加えて、４０％の患者が客観的な臨床的奏効を示した（Ｈｏｒｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｋａｕｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【００２７】
食道がん
食道がんの一次治療ストラテジーは、腫瘍病期と部位、組織型、および患者の医学的状態に左右される。扁平上皮がん患者の小さなサブグループを除いて、手術のみでは十分でない。
【００２８】
非常に限られた数の初期臨床試験のみが実施されていることから、食道がんにおける免疫療法アプローチに関するデータは乏しい。３つの異なるがん精巣抗原（ＴＴＫタンパク質キナーゼ、リンパ球抗原６複合遺伝子座Ｋ、およびインスリン様成長因子（ＩＧＦ）−ＩＩ  ｍＲＮＡ結合タンパク質３）から誘導される、３つのペプチドからなるワクチンが、第Ｉ相試験において、進行した食道がんを有する患者に投与され、中程度の成績が得られた。自己由来悪性細胞を用いた生体外攻撃後の活性化Ｔ細胞の腫瘍内注射は、第Ｉ／ＩＩ相試験にある１１人の患者の内４人で、完全または部分的腫瘍応答を誘導した（Ｔｏｏｍｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【００２９】
胃がん
胃がん（ＧＣ）は、粘膜層を覆う細胞内で始まり、増殖するにつれて外層を通して広がる。外科手術は胃がんの一次治療法であり、唯一の根治的治療法である。進行したＧＣに対する現行の薬剤投与計画は有効性に劣り、低い５年生存率をもたらす。免疫療法は、ＧＣ患者の生存率を改善する代替アプローチであるかもしれない。腫瘍関連リンパ球およびサイトカイン誘導キラー細胞の養子免疫伝達；ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ−３または血管内皮成長因子受容体１および２を標的とするペプチドベースのワクチン；およびＨＥＲ２／ｎｅｕを標的とする樹状細胞ベースのワクチンが、臨床ＧＣ治験において有望な結果を示した。免疫チェックポイント阻害および遺伝子操作Ｔ細胞は、追加的な治療の選択肢に相当するかもしれず、それは現在前臨床および臨床試験で評価中である（Ｍａｔｓｕｅｄａ  ａｎｄ  Ｇｒａｈａｍ，２０１４）。
【００３０】
神経膠芽腫
神経膠芽腫（ＷＨＯグレードＩＶ）に対する療の選択肢は、非常に限られている。ドイツ神経学会によって発表された指針によれば、若年患者の標準的治療法には、腫瘍の切除または生検、限局性放射線療法、およびテモゾロミドまたはＣＣＮＵ／ロムスチンによる、またはプロカルバジンとＣＣＮＵおよびビンクリスチン（ＰＣＶ）との併用による、化学療法が含まれる。米国、カナダ、スイスでは、ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ抗体）による治療も、再発治療のために承認されている（Ｌｅｉｔｌｉｎｉｅｎ  ｆｕｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ  ｕｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｉｅ  ｉｎ  ｄｅｒ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｅ，２０１４）。
【００３１】
ＧＢの治療のために、免疫チェックポイント阻害、ワクチン接種、および遺伝子操作Ｔ細胞の養子免疫伝達をはじめとする、異なる免疫療法のアプローチが調査されている。
【００３２】
阻害性Ｔ細胞受容体またはそれらのリガンドに対する抗体は、黒色腫および膀胱がんをはじめとする、様々ながん型におけるＴ細胞媒介抗腫瘍免疫応答を効率的に増強することが示された。したがって、イピリムマブおよびニボルマブのようなＴ細胞活性化抗体の効果は、臨床的ＧＢ試験で評価されるが、予備的データは、自己免疫関連の有害事象を示唆する。
【００３３】
ペプチドベースのワクチン、熱ショックタンパク質ワクチン、自己由来腫瘍細胞ワクチン、樹状細胞ベースのワクチン、およびウイルスタンパク質ベースのワクチンをはじめとする、ＧＢ患者のための異なるワクチン接種ストラテジーが、現在調査されている。これらのアプローチでは、自己由来腫瘍細胞溶解産物またはサイトメガロウイルス成分を用いてパルス処理された、上皮成長因子受容体変異型ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）または熱ショックタンパク質または樹状細胞のようなＧＢ関連タンパク質から導かれるペプチドが適用されて、ＧＢ患者において抗腫瘍免疫応答が誘導される。これらの研究のいくつかは、優れた安全性および耐容性プロファイル、ならびに有望な有効性データを示す。
【００３４】
遺伝子修飾されたＴ細胞の養子免疫伝達は、ＧＢ治療のための追加的な免疫療法のアプローチである。現在、異なる臨床試験が、ＨＥＲ２、ＩＬ−１３受容体α２、およびＥＧＦＲｖＩＩＩに向けられた、キメラ抗原受容体を有するＴ細胞の安全性および有効性を評価している（Ａｍｐｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【００３５】
肝臓がん
疾病管理は、診断時の腫瘍段階、および肝臓の全体的な状態に左右される。手術が治療選択肢ではない場合、異なるその他の治療法が利用できる。
【００３６】
最近、ＨＣＣのための限定数の免疫療法治験が実施されている。免疫細胞のサブセットを活性化し、および／または腫瘍免疫原性を増大させるために、サイトカインが使用されている（Ｒｅｉｎｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｓａｎｇｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。その他の治験は、腫瘍浸潤性リンパ球または活性化末梢血リンパ球の輸液に焦点を合わせている（Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；Ｔａｋａｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１；Ｔａｋａｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００ｂ）。
【００３７】
これまでに、少数の治療用ワクチン接種治験が実行されている。Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．は、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）に由来するペプチドをワクチンとして、または生体外でＡＦＰペプチドが負荷されたＤＣを使用して、２つの治験を実施した（Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。２つの異なる研究において、自己樹状細胞（ＤＣ）が、自己由来腫瘍溶解産物（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）または肝芽細胞腫細胞株ＨｅｐＧ２の溶解産物（Ｐａｌｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）によって生体外でパルス処理パルスされた。これまでに、ワクチン接種治験は、臨床転帰の限定的改善のみを示している。
【００３８】
黒色腫
黒色腫の標準的治療は、周囲の健常組織を含めた完全外科的切除である。切除が完全ではない、または全く不可能な場合、患者は一次放射線療法を受け、これは進行期のインターフェロンα投与と組み合わせされ得る（ステージＩＩＢ／ＣおよびＩＩＩＡ−Ｃ）。
【００３９】
抗腫瘍免疫応答を増強することは、進行性黒色腫の治療のための有望なストラテジーのようである。米国では、免疫チェックポイント阻害剤であるイピリムマブ、ならびにＢＲＡＦキナーゼ阻害剤であるベムラフェニブおよびダブラフェニブ、およびＭＥＫ阻害剤であるトラメチニブは、進行性黒色腫の治療のために既に承認されている。イピリムマブは直接的にＴ細胞阻害を減少させることによって、キナーゼ阻害剤は間接的にメラノサイト分化抗原の発現を増強することによって、どちらのアプローチも患者の抗腫瘍免疫を増加させる。追加的なチェックポイント阻害剤（ニボルマブおよびランブロリズマブ）インヒビターが、最初の有望な結果をもって臨床研究で現在調査されている。さらに、イピリムマブとニボリュマブ、イピリムマブとｇｐ１００由来ペプチドワクチン、イピリムマブとダカルバジン、イピリムマブとＩＬ−２、およびイプリムマブとＧＭ−ＣＳＦをはじめとする、抗腫瘍免疫応答を標的とする異なる併用療法が、臨床試験において試験されている（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ａｎｄ  ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ，２０１４）。
【００４０】
いくつかの異なるワクチン接種アプローチが、進行性黒色腫がある患者において既に評価されている。これまでのところ、第ＩＩＩ相試験では、かなり期待外れの結果が明らかになり、ワクチン接種ストラテジーは明らかに改善を要する。そのため、ＯｎｃｏＶＥＸ  ＧＭ−ＣＳＦ治験またはＤＥＲＭＡ治験のような新規臨床試験は、耐容性を低下させることなく臨床効果を改善することを目指す（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｕｋ．ｏｒｇ）。
【００４１】
養子Ｔ細胞移入は、進行期黒色腫治療のために極めて有望である。生体外増殖された自己由来腫瘍浸潤性リンパ球、ならびにがん精巣抗原ＮＹ−ＥＳＯ−１に対する高親和性Ｔ細胞受容体を有するＴ細胞は、黒色腫患者への移入時に、有意な有益かつ低毒性の効果を有した。不運にも、メラノサイト特異的抗原ＭＡＲＴ１およびｇｐ１００およびがん精巣抗原ＭＡＧＥＡ３に対する高親和性Ｔ細胞受容体があるＴ細胞は、臨床試験においてかなりの毒性効果を引き起こした。したがって、養子Ｔ細胞移入は、高い治療的可能性を有するが、これらの治療の安全性と耐容性をさらに高める必要がある（Ｐｈａｎ  ａｎｄ  Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，２０１３；Ｈｉｎｒｉｃｈｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｔｉｆｏ，２０１３）。
【００４２】
非小細胞肺がん
治療選択肢は、がん型（小細胞または非小細胞）および病期によって決定され、外科手術、放射線療法、化学療法、およびベバシズマブやエルロチニブやゲフィチニブなどの標的生物学的療法が挙げられる
【００４３】
ＮＳＣＬＣに対する治療の選択肢を拡大するために、異なる免疫療法アプローチが試験されており、あるいはなおも調査中である。Ｌ−ＢＬＰ２５またはＭＡＧＥＡ３を用いたワクチン接種は、ＮＳＣＬＣ患者におけるワクチン媒介延命効果を実証できなかった一方で、同種異系細胞株由来ワクチンは、有望な臨床試験結果を示した。さらに、上皮成長因子受容体であるガングリオシドと、いくつかのその他の抗原とを標的とするさらなるワクチン接種治験が、現在進行中である。患者の抗腫瘍Ｔ細胞応答を高める代案のストラテジーは、特異的抗体によって阻害Ｔ細胞受容体またはそれらのリガンドをブロックすることからなる。ＮＳＣＬＣにおける、イピリムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、およびＭＥＤＩ−４７３６をはじめとする、これらの抗体のいくつかの治療的可能性が、現在臨床試験で評価されている（Ｒｅｉｎｍｕｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【００４４】
卵巣がん
外科的切除は、初期ならびに進行期卵巣がんにおける一次治療である術後化学療法の適応対象でない非常に低悪性度の卵巣がん（ＩＡ期、グレード１）を除いて、外科的除去には、白金類似体による全身化学療法が続く。
【００４５】
炎症促進性腫瘍浸潤性リンパ球、特にＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在は、予後良好と相関し、腫瘍関連抗原に対して特異的なＴ細胞が、がん組織から単離され得ることから、免疫療法は、卵巣がん患者の治療を改善する有望なストラテジーのようである。
【００４６】
したがって、卵巣がんにおける様々な免疫療法の調査に、多くの科学的努力がなされている。かなりの数の前臨床および臨床試験が既に実施済みであり、さらなる研究が現在進行中である。サイトカイン療法、ワクチン接種、モノクローナル抗体治療、養子細胞移入、および免疫調節に関する臨床データが利用できる。
【００４７】
インターロイキン２、インターフェロンα、インターフェロンγまたは顆粒球マクロファージコロニー刺激因子によるサイトカイン療法は、患者自身の抗腫瘍免疫応答を増強することを目指目しており、これらの治療法は既に小規模な治験コホートにおける有望な結果を示している。
【００４８】
いくつかの腫瘍関連タンパク質（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、ウィルムス腫瘍−１）に由来する単一または複数のペプチド、または自己由来腫瘍細胞に由来する全腫瘍抗原を使用した、第ＩおよびＩＩ相ワクチン接種研究により、優れた安全性および耐容性プロファイルが明らかにされたが、低から中程度の臨床効果しか示されなかった。
【００４９】
腫瘍関連タンパク質を特異的に認識するモノクローナル抗体は、免疫細胞が媒介する腫瘍細胞の死滅を増強すると考えられている。抗ＣＡ−１２５抗体オレゴボマブおよびアバゴボマブならびに抗ＥｐＣＡＭ抗体カツマキソマブは、第ＩＩ相および第ＩＩＩ相試験で有望な結果を達成した。対照的に、抗ＭＵＣ１抗体ＨＭＦＧ１は、第ＩＩＩ相試験で生存率を明確に高められなかった。
【００５０】
代案のアプローチでは、モノクローナル抗体を用いて、腫瘍細胞上の増殖因子および生存受容体を標的化しブロックする。トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体）およびＭＯｖ１８およびＭＯＲＡｂ−００３（抗葉酸受容体α抗体）の投与が、卵巣がん患者に限られた臨床的有用性のみをもたらした一方で、標準的な化学療法へのベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ抗体）の追加は、進行した卵巣がんにおいて有利なようである。
【００５１】
免疫細胞の養子免疫伝達は、臨床試験で不均一な結果をもたらした。自己由来の生体外増幅腫瘍浸潤性Ｔ細胞の養子免疫伝達は、パイロット試験において有望なアプローチであることが示された。対照的に、葉酸受容体に対して特異的なキメラ抗原受容体を有するＴ細胞の移入は、第Ｉ相試験で有意な臨床的奏効を引き起こさなかった。腫瘍細胞溶解産物または腫瘍関連タンパク質を用いて生体外でパルス処理された樹状細胞は、移入時に抗腫瘍Ｔ細胞応答を促進することが示されたが、Ｔ細胞活性化の程度は臨床効果と相関しなかった。ナチュラルキラー細胞の移入は、第ＩＩ相試験で顕著な毒性を引き起こした。
【００５２】
内在性抗腫瘍免疫ならびに免疫療法は、免疫抑制的な腫瘍微小環境によって妨げられる。この障害を克服するために、シクロホスファミド、抗ＣＤ２５抗体、およびＰＥＧ化リポソーム性ドキソルビシンのような免疫調節薬が、免疫療法との組み合わせで試験されている。Ｔ細胞活性を高める抗ＣＴＬＡ４抗体であるイピリムマブについて、最も信頼できるデータが現在利用できる。イピリムマブは、卵巣がん患者において有意な抗腫瘍効果を発揮することが示された（Ｍａｎｔｉａ−Ｓｍａｌｄｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【００５３】
膵臓がん
膵臓がん患者のための治療の選択肢は、非常に限られている。効果的治療のための１つの大きな問題は、診断時における典型的に進行した腫瘍病期である。さらに、膵臓がんは化学療法薬に対してかなり抵抗性であり、それは、緻密で乏血管性の線維形成性腫瘍間質によって引き起こされるかもしれない。
【００５４】
Ｇｅｒｍａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｇｅｒｍａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ａｉｄ、およびＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ  ｉｎ  Ｇｅｒｍａｎｙによって発表された指針によると、腫瘍の切除術が唯一の利用可能な根治的治療選択肢である。
【００５５】
ワクチン接種ストラテジーは、膵臓がんの治療のためのさらに革新的で有望な代案として調査されている。ＫＲＡＳ変異体、反応性テロメラーゼ、ガストリン、サバイビン、ＣＥＡ、およびＭＵＣ１を標的とするペプチドベースのワクチンが臨床試験で既に評価されており、ある程度有望な結果が得られている。さらに、膵臓がん患者における、樹状細胞ベースのワクチン、同種異系ＧＭ−ＣＳＦ分泌ワクチン、およびアルゲンパンツセルＬの臨床試験もまた、免疫療法の有益な効果を明らかにした。異なるワクチン接種プロトコルの効率をさらに調べるための追加的な臨床試験が、現在進行中である（Ｓａｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【００５６】
前立腺がん
前立腺がんのための治療ストラテジーは、主にがん病期に左右される。樹状細胞ベースのワクチンであるシプロイセルＴは、ＦＤＡによって承認された最初の抗がんワクチンであった。ＣＲＰＣがある患者の生存期間に対するその好ましい効果のために、さらなる免疫療法の開発に向けた多大な努力がなされている。ワクチン接種ストラテジーについては、ペプチドワクチンである前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）−ＴＲＩＣＯＭ、個別化ペプチドワクチンであるＰＰＶ、ＤＮＡワクチンであるｐＴＶＧ−ＨＰ、およびＧＭ−ＣＳＦ発現全細胞ワクチンであるＧＶＡＸが、異なる臨床試験で有望な結果を示した。さらに、シプロイセルＴ以外の樹状細胞ベースのワクチン、すなわちＢＰＸ−１０１およびＤＣＶＡＣ／Ｐａは、前立腺がん患者において臨床的奏効を引き起こすことが示された。イピリムマブおよびニボルマブのような免疫チェックポイント阻害物質が、単剤療法として、ならびにアンドロゲン奪取療法、局所放射線療法、ＰＳＡ−ＴＲＩＣＯＭ、およびＧＶＡＸをはじめとするその他の治療法との併用で、現在臨床試験で評価されている。第ＩＩ相試験で進行を有意に遅延させ、無憎悪生存期間を延長させた免疫調節物質タスキニモドは、現在第ＩＩＩ相試験でさらに調査されている。もう一つの免疫修飾物質であるレナリドミドは、初期臨床試験で有望な効果をもたらしたが、第ＩＩＩ相試験では生存率を改善できなかった。これらの期待外れな結果にもかかわらず、さらなるレナリドミド治験が継続されている（Ｑｕｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【００５７】
腎細胞がん
初期治療は、最も一般的には、罹患した腎臓の部分的または完全除去のどちらかであり、依然として根治的治療の主流である（Ｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。ＲＣＣの既知の免疫原性（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｔｙ）は、進行したＲＣＣにおける免疫療法およびがんワクチンの使用を支持する基礎に相当する。リンパ球ＰＤ−１発現と、ＲＣＣの進行期、グレード、および予後との間の興味深い相関、ならびにＲＣＣ腫瘍細胞による選択的ＰＤ−Ｌ１発現と、より芳しくない臨床転帰との潜在的関連性は、単独での、または抗血管新生薬またはその他の免疫療法アプローチと併用される、ＲＣＣ治療のための新規抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１薬の開発をもたらした（Ｍａｓｓａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。進行したＲＣＣでは、ＴＲＩＳＴ試験と称される第ＩＩＩ相がんワクチン治験が、第一選択標準的治療に追加された、ＴｒｏＶａｘ（ポックスウイルスベクターと共に腫瘍関連抗原５Ｔ４を使用したワクチン）が、局所的進行またはｍＲＣＣがある患者の生存期間を延長するかどうかを評価する。いずれの群でも生存期間中央値に達しておらず、３９９人の患者（５４％）が試験に残っているが、データの解析は、ＴｒｏＶａｘが免疫学的に活性であり、５Ｔ４特異的抗体応答の強度と改善された生存期間との間に相関があることの双方を実証する、以前の臨床結果を裏付けている。さらにＲＣＣにおいて過剰発現されるエピトープを使用してペプチドワクチンを検索する、いくつかの研究がある。
【００５８】
腫瘍ワクチンの様々なアプローチが、調査されている。腫瘍細胞溶解産物、樹状細胞と腫瘍細胞の融合物、または全腫瘍ＲＮＡをはじめとする、全腫瘍アプローチを使用した研究が、ＲＣＣ患者において実施され、これらの治験のいくつかで腫瘍病変の寛解が報告された（Ａｖｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；Ｈｏｌｔｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｍａｒｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；Ｗｉｔｔｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。
【００５９】
小細胞肺がん
ＳＣＬＣの治療および予後は、診断されたがん病期に大きく左右される。免疫療法は、過度に調査されたがん療法の分野に相当する。ＳＣＬＣの治療には、様々なアプローチが点在する。アプローチの１つは、天然ヒト免疫抑制剤であるＣＴＬＡ−４のブロックを標的とする。ＣＴＬＡ−４の阻害は、がんと戦うために免疫系を増強することを意図する。近年、ＳＣＬＣの治療のための有望な免疫チェックポイント阻害剤の開発が始まっている。もう一つのアプローチは抗がんワクチンに基づき、それは現在臨床試験においてＳＣＬＣ治療のために利用できる（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，２０１５；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２０１５）。
【００６０】
急性骨髄性白血病
ＡＭＬの１つの治療選択肢は、ＣＤ３３を抗体薬物コンジュゲート（抗ＣＤ３３＋カレキアマイシン、ＳＧＮ−ＣＤ３３ａ、抗ＣＤ３３＋アクチニウム−２２５）、二重特異性抗体（ＣＤ３３＋ＣＤ３（ＡＭＧ３３０）またはＣＤ３３＋ＣＤ１６の認識）およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）で標的化することである（Ｅｓｔｅｙ，２０１４）。
【００６１】
非ホジキンリンパ腫
ＮＨＬの治療は、組織型および病期に左右され（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２０１５）：リンパ腫患者では、自然腫瘍退縮が観察され得る。したがって、能動免疫療法が治療選択肢である（Ｐａｌｏｍｂａ，２０１２）。
【００６２】
重要なワクチン接種選択肢としては、Ｉｄワクチンが挙げられる。Ｂリンパ球は、それらの重鎖および軽鎖の可変領域内に、各細胞クローンに特有の（＝イディオタイプ、Ｉｄ）特異的アミノ酸配列がある、表面免疫グロブリンを発現する。イディオタイプは、腫瘍関連抗原として機能する。
【００６３】
受動免疫化は、組換えマウス抗Ｉｄモノクローナル抗体を単独で、またはＩＦＮα、ＩＬ２またはクロランブシルとの組み合わせで、注射することを含む。
【００６４】
活性免疫化としては、免疫アジュバントとしてＧＭ−ＣＳＦと共に投与される、アジュバント（ＫＬＨ）にコンジュゲートされた、組換えタンパク質（Ｉｄ）の注射が挙げられる。腫瘍特異的Ｉｄは、ハイブリドーマ培養によって、または細菌、昆虫または哺乳類細胞培養による組換えＤＮＡ技術（プラスミド）を使用して、製造される。
【００６５】
３つの第ＩＩＩ相臨床試験が実施されている（Ｂｉｏｖｅｓｔ、Ｇｅｎｉｔｏｐｅ、Ｆａｖｒｉｌｌｅ）。２つの試験では、患者にリツキシマブが投与された。ＧＭ−ＣＳＦは、３つの試験の全てで投与された。Ｂｉｏｖｅｓｔは、ハイブリドーマ産生タンパク質を使用し、ＧｅｎｉｔｏｐｅおよびＦａｖｒｉｌｌｅは、組換えタンパク質を使用した。３つの試験全てにおいて、ＩｄはＫＬＨにコンジュゲートされた。Ｂｉｏｖｅｓｔのみが有意な結果を有した。
【００６６】
Ｉｄ以外のワクチンには、がん精巣抗原ＭＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ１およびＰＡＳＤ−１、Ｂ細胞抗原ＣＤ２０または細胞性ワクチンが含まれる。最近言及されたものは、アポトーシス腫瘍細胞で、腫瘍細胞溶解物で、ＤＣ腫瘍細胞融合体でパルス処理されたＤＣ、または腫瘍由来ＲＮＡでパルス処理されたＤＣからなる。
【００６７】
原位置ワクチン接種は、化学療法と、またはＧＭ−ＣＳＦの存在下で増殖させた照射腫瘍細胞との組み合わされた、腫瘍内ＣｐＧによるワクチン接種、およびＴ細胞の回収／増殖／再注入を伴う。
【００６８】
免疫チェックポイントを変化させる抗体によるワクチン接種は、抗ＣＤ４０、抗ＯＸ４０、抗４１ＢＢ、抗ＣＤ２７、抗ＧＩＴＲ（抗腫瘍応答を直接増強する作動薬抗体）または抗ＰＤ１、抗ＣＴＬＡ−４（免疫応答を妨げるチェックポイントを阻害する抗体をブロックする）から構成される。例は、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４）およびＣＴ−０１１（抗ＰＤ１）である（Ｐａｌｏｍｂａ，２０１２）。
【００６９】
子宮がん
子宮内膜がんの治療は、病期に依存的する。子宮内膜（ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｃａｌ）がんの大部分は、通常は診断時に子宮体に限定されて、子宮摘出によって治癒され得る、高度から中程度に分化した類内膜腺がんを含んでなる（Ｗｏｒｌｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｐｏｒｔ，２０１４）。
【００７０】
子宮頸がんの治療法もまた、病期に依存する。初期段階では摘出が標準的治療であり、それは放射線（化学）療法と併用されるかもしれない。一次放射線（化学）療法は、後期（ＩＩＩ期以上）、リンパ節浸潤の場合、または腫瘍が摘出され得ない場合に選択される。
【００７１】
いくつかの免疫療法アプローチもまた、現在試験されている。第Ｉ／ＩＩ相臨床試験では、子宮がんに罹患している患者が、ウィルムス腫瘍遺伝子１（ＷＴ１）ｍＲＮＡによって電気穿孔された自己由来樹状細胞（ＤＣ）で、ワクチン接種された。アジュバントに対する局所アレルギー反応の１症例を除いて、有害な副作用は観察されず、６人の患者の内３人が免疫学的応答を示した（Ｃｏｏｓｅｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【００７２】
上記のように、ＨＰＶ感染は、最終的に子宮頸がんにつながることもある病変を誘発する。そのため、高悪性度病変およびがんにおいて構成的に発現され、悪性表現型の発症および維持に必要なＨＰＶウイルス腫瘍性タンパク質Ｅ６およびＥ７は、免疫療法アプローチの有望な標的と見なされる（Ｈｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｖｉｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。一研究では、転移性子宮頸がんを有する患者において、養子Ｔ細胞療法（ＡＣＴ）が実施された。患者は、Ｅ６およびＥ７反応性腫瘍浸潤性Ｔ細胞（ＴＩＬ）で点滴を受け、９人の患者のうち、２人に完全な退縮が、１人に部分的反応がもたらされた（Ｓｔｅｖａｎｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。さらに、Ｅ７を標的とする細胞内抗体は、マウスにおいて腫瘍増殖を妨げることが報告された（Ａｃｃａｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。また、ＨＰＶＥ６およびＥ７を標的とするペプチド、ＤＮＡおよびＤＣベースのワクチンが、臨床試験中である（Ｖｉｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【００７３】
胆嚢腺がんおよび胆管細胞がん
胆管がんは診断が困難なため、大部分が進行期に同定されている。胆管がんは治療が困難であり、通常は致死性である。
【００７４】
胆嚢がんは、世界的に最も頻度が高く悪性度が高い、胆管の病変である。
【００７５】
膀胱がん
膀胱がんの標準的治療法としては、外科手術、放射線療法、化学療法、および免疫療法が挙げられる。
【００７６】
０期およびＩ期では、膀胱がんは典型的に経尿道的切除と、場合によってはそれに続く、膀胱内化学療法によって治療され、必要に応じて、ＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）による膀胱内免疫療法が併用される。
【００７７】
効果的免疫療法アプローチが、高悪性度の筋層非浸潤性膀胱がん（ＮＭＩＢＣ）の治療において確立されている。その方法によって、弱毒化形態の細菌、マイコバクテリウム・ボービス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ）（カルメット・ゲラン桿菌＝ＢＣＧ）が、膀胱内溶液として適用される。ＢＣＧ処置の主要な効果は、がん再発からの有意な長期（最大１０年間）保護と、進行速度の低下である。原則的に、ＢＣＧによる処置は局所炎症応答を誘導し、それが細胞性免疫応答を刺激する。ＢＣＧの免疫応答は、以下の主要ステップに基づく：ＢＣＧによる尿路上皮および膀胱がん細胞の感染と、それに続く抗原提示分子の発現増大、サイトカイン放出が媒介する免疫応答の誘導、様々な免疫細胞（その下に細胞傷害性Ｔリンパ球、好中球、ナチュラルキラー細胞、およびマクロファージがある）の関与を通じた抗腫瘍活性の誘導（Ｆｕｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｇａｎｄｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【００７８】
ＢＣＧ治療は、一般に患者に十分に耐容されるが、特に免疫不全患者では致死的であり得る。ＢＣＧ難治性は、患者の約３０?４０％で観察される（Ｆｕｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６ａ）。ＢＣＧ療法に失敗した患者の治療は、困難である。ＢＣＧ治療に失敗した患者は、筋肉浸潤性疾患を発症するリスクが高い。根治的膀胱切除術は、非応答者にとって好ましい治療選択肢である（Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６ｂ；ｖｏｎ  Ｒｕｎｄｓｔｅｄｔ  ａｎｄ  Ｌｅｒｎｅｒ，２０１５）。ＦＤＡは、膀胱保存を望む患者のためのＢＣＧが失敗したＮＭＩＢＣの第二選治療が、バルルビシンによる化学療法であると認定した。併用ＢＣＧ−インターフェロンまたはＢＣＧ−チェックポイント阻害剤治療、プレＢＣＧ経皮ワクチン接種のような免疫療法アプローチ；マイコバクテリウム・フレイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｈｌｅｉ）細胞壁核酸（ＭＣＮＡ）複合体による治療；マイトマイシンＣ、ゲムシタビン、ドセタキセル、ナブ−パクリタキセル、エピルビシン、マイトマイシン／ゲムシタビン、ゲムシタビン／ドセタキセルのような様々な薬剤による単一または併用化学療法；および熱化学療法、放射化学療法、起電力療法または光線力学療法のような装置支援化学療法などのその他のいくつかの第二選択治療もまた利用可能でき、または現在調査中である（Ｆｕｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６ｂ；ｖｏｎ  Ｒｕｎｄｓｔｅｄｔ  ａｎｄ  Ｌｅｒｎｅｒ，２０１５）。利用可能な治療法の臨床試験におけるさらなる評価が、依然として必要である。
【００７９】
進行性膀胱がんに対する代替治療の選択肢は、進行中の臨床試験で調査されている。現在の臨床試験は、分子標的療法および免疫療法の開発に焦点を合わせている。標的療法は、膀胱がんの治療における発がん関連経路阻害剤（すなわち、ｍＴＯＲ、血管内皮、線維芽細胞、または上皮成長因子受容体、抗血管新生または細胞周期阻害剤）の効果を調べる。分子標的療法の開発は、膀胱がんの高度な遺伝的多様性のために依然として困難である。現在の免疫療法の主な焦点は、抗ＰＤ１モノクローナル抗体および養子Ｔ細胞移入のようなチェックポイント妨害剤の開発である（Ｋｎｏｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５Ｂ；Ｇｒｉｖａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；Ｒｏｕａｎｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【００８０】
頭頸部扁上皮がん
頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）は、疫学、病因、および治療において差異を有する不均一腫瘍である（Ｅｃｏｎｏｍｏｐｏｕｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【００８１】
ＨＮＳＣＣは免疫抑制疾患と考えられ、免疫担当細胞の調節不全およびサイトカイン分泌の障害を特徴とする（Ｅｃｏｎｏｍｏｐｏｕｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。免疫療法ストラテジーは、ＨＰＶ陰性およびＨＰＶ陽性腫瘍の間で異なる。
【００８２】
ＨＰＶ陽性腫瘍では、ウイルス腫瘍性タンパク質Ｅ６およびＥ７が優れた標的に相当するが、これは、それらが腫瘍細胞によって連続的に発現され、ＨＰＶ陽性がん細胞の形質転換状態を維持するために不可欠なためである。ＤＮＡワクチン、ペプチドワクチン、および樹状細胞（ＤＣ）が関与するワクチンをはじめとする、いくつかのワクチン接種療法が、ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおいて、現在調査中であるさらに、進行中の第ＩＩ相臨床試験は、ＨＰＶ陽性腫瘍を有する患者におけるリンパ枯渇と、それに続くＴＩＬの自己由来注入の有効性を調査する（Ｅｃｏｎｏｍｏｐｏｕｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【００８３】
ＨＰＶ陰性腫瘍では、現在、いくつかの免疫療法ストラテジーが使用され、調査中である。キメラＩｇＧ１抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブは、再発性／転移性ＨＮＳＣＣのための標準的な第一選択治療として、化学療法と組み合わせてＦＤＡにより承認されている。パニツマブ、ニモツズマブ、およびザルツムマブをはじめとする抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体が、ＨＮＳＣＣにおいて評価されている。いくつかの免疫チェックポイント阻害剤が、ＨＮＳＣＣにおける使用に関する臨床試験において調査されている。それらとしては、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４）、トレメリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４）、ペンブロリズマブ（抗ＰＤ−１）、ニボルマブ（抗ＰＤ−１）、デュルバルマブ（抗ＰＤ１）、抗ＫＩＲ、ウレルマブ（抗ＣＤ１３７）、および抗ＬＡＧ−３抗体が挙げられる。
【００８４】
ＨＮＳＣＣ患者を対象とした２つの臨床試験では、ｐ５３ペプチドまたはアポトーシス腫瘍細胞を負荷したＤＣの使用が評価された。免疫学的反応は満足できるものであり、副作用は許容可能であった。
【００８５】
いくつかの研究が、養子Ｔ細胞療法（ＡＣＴ）を用いて行われている。Ｔ細胞は、照射された自己由来腫瘍細胞またはＥＢＶのどちらかに対して誘導された。疾病抑制および全生存期間における結果は、有望であった（Ｅｃｏｎｏｍｏｐｏｕｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００８６】
がん治療に関連する重篤な副作用および費用を考慮すると、がん治療全般、特に、肝細胞がん（ＨＣＣ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、神経膠芽腫（ＧＢ）、胃がん（ＧＣ）、食道がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、膵臓がん（ＰＣ）、腎細胞がん（ＲＣＣ）、良性前立腺肥大（ＢＰＨ）、前立腺がん（ＰＣＡ）、卵巣がん（ＯＣ）、黒色腫、乳がん、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、メルケル細胞がん（ＭＣＣ）、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、胆嚢がんおよび胆管がん（ＧＢＣ、ＣＣＣ）、膀胱がん（ＵＢＣ）、子宮がん（ＵＥＣ）、頭頸部扁上皮がん（ＨＮＳＣＣ）で使用され得る要素を同定する必要性がある。がんのより良い診断、予後の評価、および治療成功の予測につながる、がん全般、特に上述のがん型のためのバイオマーカーに相当する要素を同定する必要性もまたある。
【００８７】
がんの免疫療法は、がん細胞を特異的に標的化しながら副作用を最小化する選択肢に相当する。がん免疫療法は、腫瘍関連抗原の存在を利用する。
【００８８】
腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の現行の分類は、次の主要群を含んでなる：
ａ）がん精巣抗原：Ｔ細胞によって認識され得る初めて同定されたＴＡＡはこのクラスに属し、元々はがん精巣（ＣＴ）抗原と称されたが、それは、そのメンバーが組織学的に異なるヒト腫瘍において発現し、正常組織では精巣の精母細胞／精原細胞のみに存在し、時として胎盤に存在するためであった。精巣の細胞は、クラスＩおよびＩＩ  ＨＬＡ分子を発現しないので、これらの抗原は正常組織のＴ細胞によって認識され得ず、したがって免疫学的に腫瘍特異的と見なされる。ＣＴ抗原の周知の例は、ＭＡＧＥファミリーメンバーおよびＮＹ−ＥＳＯ−１である。
ｂ）分化抗原：これらのＴＡＡは、腫瘍と、それから腫瘍が生じる正常組織との間で共有される。既知の分化抗原のほとんどは、黒色腫および正常メラノサイトに見いだされる。これらのメラノサイト系関連タンパク質の多くは、メラニン生合成に関与し、したがって腫瘍特異的でないが、それでもなおがん免疫療法のために広く利用されている。例としては、黒色腫に対するチロシナーゼとＭｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、または前立腺がんに対するＰＳＡが挙げられるが、これに限定されるものではない。
ｃ）過剰発現ＴＡＡ：広範に発現されるＴＡＡをエンコードする遺伝子は、組織学的に異なる型の腫瘍において検出され、多数の正常組織においても概してより低い発現レベルで検出されている。正常組織によってプロセスされて潜在的に提示さるエピトープの多くは、Ｔ細胞認識の閾値レベル未満であり得る一方で、腫瘍細胞におけるそれらの過剰発現は、以前確立された免疫寛容を破壊することにより、抗がん応答を始動し得る。このクラスのＴＡＡの顕著な例は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ、サバイビン、テロメラーゼまたはＷＴ１である。
ｄ）腫瘍特異的抗原：これらのユニークなＴＡＡは、正常な遺伝子（β−カテニン、ＣＤＫ４など）の変異から生じる。これらの分子変化のいくつかは、腫瘍性形質転換および／または進行に関連している。腫瘍特異的抗原は、通常、正常組織に対する自己免疫反応のリスクなしに、強力な免疫応答を誘導できる。他方、これらのＴＡＡは、ほとんどの場合、その上でそれらが同定されたまさにその腫瘍のみと関係があり、通常は、多くの個々の腫瘍間で共有されない。腫瘍特異的（関連）イソ型を有するタンパク質では、ペプチドの腫瘍特異性（または関連性）はまた、ペプチドが腫瘍（関連）エクソンに由来する場合に生じてもよい。
ｅ）異常な翻訳後修飾から生じるＴＡＡ：このようなＴＡＡは、特異的でなく腫瘍において過剰発現もされないタンパク質から生じてもよいが、それでもなお、腫瘍において主に活性である翻訳後プロセスによって腫瘍関連になる。このクラスの例は、腫瘍にＭＵＣ１のような新規エピトープをもたらす改変グリコシル化パターン、または腫瘍特異的であってもなくてもよい分解中のタンパク質スプライシングのような事象から生じる。
ｆ）オンコウイルスタンパク質：これらのＴＡＡはウイルスタンパク質であり、それらは発がん過程において重要な役割を果たしてもよく、外来性である（ヒト由来でない）ため、それらはＴ細胞応答を誘起し得る。このようなタンパク質の例は、子宮頸がんにおいて発現されるヒト乳頭腫１６型ウイルスタンパク質Ｅ６およびＥ７である。
【００８９】
Ｔ細胞ベースの免疫療法は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）の分子によって提示される、腫瘍関連または腫瘍特異的タンパク質由来ペプチドエピトープを標的とする。腫瘍特異的Ｔリンパ球によって認識される抗原、すなわちそれらのエピトープは、酵素、受容体、転写因子などの全てのタンパク質クラスに由来する分子であり得て、それはそれぞれの腫瘍細胞において発現されて、同一起源の非改変細胞と比較して、通常、上方制御される。
【００９０】
ＭＨＣ分子には、ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩの２つのクラスがある。ＭＨＣクラスＩ分子はα重鎖およびβ２ミクログロブリンから構成され、ＭＨＣクラスＩＩ分子はαおよびβ鎖から構成される。それらの三次元立体構造は、ペプチドとの非共有結合相互作用のために使用される、結合溝をもたらす。
【００９１】
ＭＨＣクラスＩ分子は、ほとんどの有核細胞上に見いだされる。それらは、主に内因性タンパク質、欠陥リボソーム産物（ＤＲＩＰ）、およびより大型のペプチドのタンパク質切断から得られる、ペプチドを提示する。しかし、エンドソームコンパートメントまたは外因性起源に由来するペプチドもまた、ＭＨＣクラスＩ分子上に頻繁に見いだされる。この非古典的様式のクラスＩ提示は、文献中で交差提示と称される（Ｂｒｏｓｓａｒｔ  ａｎｄ  Ｂｅｖａｎ，１９９７；Ｒｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、大部分はプロフェショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）に見いだされ、例えば、エンドサイトーシス中にＡＰＣに取り込まれて引き続きプロセシングされる、外因性または膜貫通タンパク質のペプチドを主に提示する。
【００９２】
ペプチドとＭＨＣクラスＩの複合体が、適切なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有するＣＤ８陽性Ｔ細胞によって認識される一方で、ペプチドとＭＨＣクラスＩＩ分子の複合体は、適切なＴＣＲを有するＣＤ４陽性ヘルパーＴ細胞によって認識される。その結果、ＴＣＲ、ペプチド、およびＭＨＣは、化学量論的に１：１：１の量で存在することが良く知られている。
【００９３】
ＣＤ４陽性ヘルパーＴ細胞は、ＣＤ８陽性細胞傷害性Ｔ細胞による、効果的な応答の誘導と維持する上で重要な役割を果たす。腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に由来するＣＤ４陽性Ｔ細胞エピトープの同定は、抗腫瘍免疫応答を始動させる医薬品の開発に非常に重要である（Ｇｎｊａｔｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。腫瘍部位では、Ｔヘルパー細胞が、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＴＬ）親和的サイトカイン環境を維持して（Ｍｏｒｔａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）、例えば、ＣＴＬ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、および顆粒球などのエフェクター細胞を引きつける（Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【００９４】
炎症不在下では、ＭＨＣクラスＩＩ分子の発現は、免疫系細胞、特に、例えば、単球、単球由来細胞、マクロファージ、樹状細胞などのプロフェショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）に主に限定される。がん患者においては、腫瘍細胞がＭＨＣクラスＩＩ分子を発現することが判明している（Ｄｅｎｇｊｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。
【００９５】
伸長された本発明のペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ活性エピトープとして作用し得る。
【００９６】
ＭＨＣクラスＩＩエピトープによって活性化されたＴヘルパー細胞は、抗腫瘍免疫におけるＣＴＬのエフェクター機能を統合するのに重要な役割を果たす。ＴＨ１型のＴヘルパー細胞応答を始動するＴヘルパー細胞エピトープは、それらの細胞表面に腫瘍関連ペプチド／ＭＨＣ複合体を提示する腫瘍細胞に向けられた細胞傷害機能をはじめとする、ＣＤ８陽性キラーＴ細胞のエフェクター機能を支持する。このようにして腫瘍関連Ｔヘルパー細胞ペプチドエピトープは、単独で、またはその他の腫瘍関連ペプチドとの組み合わせで、抗腫瘍免疫応答を刺激するワクチン組成物の活性医薬品成分の役割を果たし得る。
【００９７】
例えば、マウスなどの哺乳類動物モデルにおいて、ＣＤ８陽性Ｔリンパ球の不在下であっても、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）の分泌による血管新生阻害を通じて腫瘍発現を阻害するには、ＣＤ４陽性Ｔ細胞で十分であることが示された（Ｂｅａｔｔｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｅｒｓｏｎ，２００１；Ｍｕｍｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。ＣＤ４  Ｔ細胞が、直接抗腫瘍エフェクターであるという証拠がある（Ｂｒａｕｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｔｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【００９８】
ＨＬＡクラスＩＩ分子の構成的発現は、通常、免疫細胞に限定されるので、原発性腫瘍からクラスＩＩペプチドを直接単離する可能性があり得るとは、これまで考えられなかった。しかし、Ｄｅｎｇｊｅｌ  ｅｔ  ａｌ．は、いくつかのＭＨＣクラスＩＩエピトープを腫瘍から直接成功裏に同定した（国際公開第２００７／０２８５７４号パンフレット、欧州特許第１７６００８８Ｂ１号明細書）。
【００９９】
ＣＤ８およびＣＤ４依存性の双方のタイプの応答は、抗腫瘍効果に共同して相乗的に寄与するので、ＣＤ８＋Ｔ細胞（リガンド：ＭＨＣクラスＩ分子＋ペプチドエピトープ）、またはＣＤ４陽性Ｔヘルパー細胞（リガンド：ＭＨＣクラスＩＩ分子＋ペプチドエピトープ）のどちらかによって認識される、腫瘍関連抗原の同定および特性解析は、腫瘍ワクチンの開発にとって重要である。
【０１００】
ＭＨＣクラスＩペプチドが、細胞性免疫応答を始動（惹起）するためには、それはまた、ＭＨＣ分子に結合しなくてはならない。この過程は、ＭＨＣ分子の対立遺伝子と、ペプチドのアミノ酸配列の特定の多型性とに依存する。ＭＨＣクラスＩ結合ペプチドは、通常は８〜１２アミノ酸残基長であり、通常は、ＭＨＣ分子の対応する結合溝と相互作用するそれらの配列中に、２つの保存残基（「アンカー」）を含有する。このようにして、各ＭＨＣ対立遺伝子は、どのペプチドが結合溝と特異的に結合し得るかを決定する、「結合モチーフ」を有する。
【０１０１】
ＭＨＣクラスＩ依存免疫反応においては、ペプチドは腫瘍細胞によって発現される特定のＭＨＣクラスＩ分子に結合できるだけでなく、それらはまた、引き続いて特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を有するＴ細胞によって認識されなくてはならない。
【０１０２】
タンパク質が、Ｔリンパ球によって腫瘍特異的または腫瘍関連抗原として認識され、治療で利用されるためには、特定の必要条件が満たされなくてはならない。抗原は、主に腫瘍細胞によって発現され、健常組織によって発現されず、または比較的少量発現されるべきである。好ましい実施形態では、ペプチドは、健常組織と比較して、腫瘍細胞によって過剰提示されるべきである。それぞれの抗原は、ある種の腫瘍に存在するだけでなく、高い濃度（すなわち、それぞれのペプチド細胞当たりのコピー数）で存在することもさらに望ましい。腫瘍特異的および腫瘍関連抗原は、例えば、細胞周期調節またはアポトーシス抑制における機能のために、正常細胞から腫瘍細胞への形質転換に直接関与するタンパク質に由来することが多い。さらに、形質転換の直接原因となるタンパク質の下流標的が、上方制御されてもよく、（ｕｎｄ）したがって間接的に腫瘍関連であってもよい。このような間接的腫瘍関連抗原もまた、ワクチン接種アプローチの標的であってもよい（Ｓｉｎｇｈ−Ｊａｓｕｊａ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。このようなペプチド（「免疫原性ペプチド」）が、腫瘍関連抗原に由来して、生体外または生体内Ｔ細胞応答をもたらすことを確実にするためには、抗原のアミノ酸配列内にエピトープが存在することが必須である。
【０１０３】
基本的に、ＭＨＣ分子に結合できるあらゆるペプチドが、Ｔ細胞エピトープとして機能してもよい。生体外または生体内Ｔ細胞応答誘導のための必要条件は、対応するＴＣＲを有するＴ細胞の存在、およびこの特定のエピトープに対する免疫寛容の不在である。
【０１０４】
したがって、ＴＡＡは、腫瘍ワクチンをはじめとするが、これに限定されるものではない、Ｔ細胞ベースの治療法開発の出発点である。ＴＡＡを同定し特性決定する方法は、通常は、患者または健常人から単離され得るＴ細胞の使用に基づき、またはそれらは、腫瘍と正常組織との間の示差的転写プロファイル、またはペプチド発現パターンの生成に基づく。しかし、腫瘍組織またはヒト腫瘍細胞株において過剰発現され、またはこのような組織または細胞株において選択的に発現される遺伝子の同定は、免疫療法においてこれらの遺伝子から転写される抗原の使用に関する、正確な情報を提供しない。これは、これらの抗原のエピトープの個々の亜集団のみが、このような用途に適するためであり、その理由は、対応するＴＣＲを有するＴ細胞が存在しなくてはならず、この特定のエピトープに対する免疫寛容が不在または最小でなくてはならないからである。したがって本発明の非常に好ましい実施形態では、それに対する機能性および／または増殖性Ｔ細胞が見いだされる、過剰にまたは選択的に提示されるペプチドのみを選択することが、重要である。このような機能性Ｔ細胞は、特異的抗原による刺激時にクローン増殖され得て、エフェクター機能を果たすことができるＴ細胞（「エフェクターＴ細胞」）と定義される。
【０１０５】
本発明による特異的ＴＣＲ（例えば、可溶性ＴＣＲ）および抗体またはその他の結合分子（スキャフォールド）によってペプチドＭＨＣを標的化する場合、基礎となるペプチドの免疫原性は二次的である。これらの場合には、提示が決定要因である。
【課題を解決するための手段】
【０１０６】
本発明の第１の態様では、本発明は、配列番号１〜配列番号３８８、または配列番号１〜配列番号３８８と少なくとも７７％、好ましくは少なくとも８８％相同的な（好ましくは少なくとも７７％または少なくとも８８％同一の）その変異配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるペプチドに関し、その中で前記変異型は、ＭＨＣと結合し、および／またはＴ細胞と前記ペプチドまたはその薬学的に許容可能な塩との交差反応を誘導し、その中で前記ペプチドは、基礎となる完全長ポリペプチドでない。
【０１０７】
ペプチドが、がん療法標的として機能するための最重要基準は、正常組織と比較した原発性腫瘍組織上のその過剰提示である一方で、対応遺伝子のＲＮＡ発現プロファイルもまた、適切なペプチドを選択するのを助け得る。特に、いくつかのペプチドは、それらの化学的特性または細胞上のそれらの低コピー数のどちらかのために、質量分析によって検出するのが困難であり、ペプチド提示の検出に重点を置くスクリーニングアプローチは、これらの標的を同定できないこともある。しかし、これらの標的は、正常組織中の遺伝子発現の解析から開始して、腫瘍におけるペプチド提示および遺伝子発現を二次的に評価する、代案のアプローチによって検出されてもよい。このアプローチは、さらなる遺伝子発現データ（腫瘍サンプルを含む）と組み合わせされた、ｍＲＮＡデータベース（Ｌｏｎｓｄａｌｅ，２０１３）、ならびにペプチド提示データを用いて、本発明において実現された。遺伝子のｍＲＮＡが、正常組織、特に生命臓器系にほとんど存在しなければ、非常に強力なストラテジー（二重特異性親和性最適化抗体またはＴ細胞受容体など）によって、対応するペプチドを標的化することでさえ、安全である可能性が高い。このようなペプチドは、たとえ腫瘍組織の小さな割合でしか同定されないとしても、興味深い標的に相当する。通例の質量分析法は、標的カバー度をペプチドレベルで評価するには、感度が十分でない。むしろ、腫瘍ｍＲＮＡ発現が、カバー度を評価するために使用され得る。ペプチドそれ自体の検出のためには、通例のスクリーニングよりも、感度の高い標的化質量分析アプローチが必要であってもよく、ペプチド提示レベルでカバー度のより良い推定がもたらされてもよい。
【０１０８】
本発明は、配列番号１〜配列番号３８８、または配列番号１〜配列番号３８８と少なくとも７７％、好ましくは少なくとも８８％相同的な（好ましくは少なくとも７７％または少なくとも８８％同一の）その変異型からなる群から選択される配列を含んでなる、本発明のペプチドにさらに関し、前記ペプチドまたはその変異型は、８〜１００、好ましくは８〜３０、最も好ましくは８〜１４アミノ酸の全長を有する。
【０１０９】
続く表は、本発明によるペプチド、それらの各配列番号、およびそれらのペプチドの予測される起源（基礎）遺伝子を示す。表１Ａおよび表２Ａの全てのペプチドは、ＨＬＡ−Ａ＊０２に結合する。表１Ｃおよび表２Ｂのペプチドは、ＨＬＡ−Ａ＊２４に結合する。表１Ｂのペプチドは、ＨＬＡクラスＩＩ対立遺伝子に結合する。表３のペプチドは、ＨＬＡ−Ａ＊２４結合である相加的なペプチドであり、本発明のその他のペプチドとの組み合わせで有用であってもよい。
【０１１０】
【表１Ａ−１】
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【表１Ａ−２】
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【表１Ａ−３】
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【表１Ａ−４】
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【０１１１】
【表１Ｂ】
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【０１１２】
【表１Ｃ−１】
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【表１Ｃ−２】
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【表１Ｃ−３】
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【表１Ｃ−４】
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【表１Ｃ−５】
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【表１Ｃ−６】
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【０１１３】
【表２Ａ】
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【０１１４】
【表２Ｂ−１】
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【表２Ｂ−２】
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【０１１５】
【表３】
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【０１１６】
本発明は、さらに、例えば、神経膠芽腫（ＧＢ）、乳がん（ＢＲＣＡ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、腎細胞がん（ＲＣＣ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、肝細胞がん（ＨＣＣ）、非小細胞細胞および小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ、ＳＣＬＣ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、卵巣がん（ＯＣ）、膵臓がん（ＰＣ）、前立腺がん（ＰＣＡ）、胃食道接合部がんを含む食道がん（ＯＳＣＡＲ）、胆嚢がんおよび胆管がん（ＧＢＣ、ＣＣＣ）、黒色腫（ＭＥＬ）、胃がん（ＧＣ）、精巣がん（ＴＣ）、膀胱がん（ＵＢＣ）、頭部および頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、および子宮がん（ＵＥＣ）などの増殖性疾患の治療において使用するための本発明によるペプチドに一般に関する。
【０１１７】
特に好ましいのは、配列番号１〜配列番号３８８からなる群から選択される、本発明による単独のまたは組み合わされたペプチドである。より好ましいのは、配列番号１〜配列番号２９５（表１Ａ、Ｂ、Ｃを参照されたい）からなる群から選択される単独のまたは組み合わせのペプチドと、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん、または子宮がんの免疫療法におけるそれらの使用である。
【０１１８】
特に好ましいのは、配列番号７０、８０、３２３、および３２５からなる群から選択される、本発明による単独のまたは組み合わされたペプチドである。より好ましいのは、配列番号７０、８０、３２３、および３２５からなる群から選択される単独のまたは組み合わせのペプチドと、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん、または子宮がんの免疫療法におけるそれらの使用である。
【０１１９】
これもまた好ましいのは、配列番号３９１、および４０３からなる群から選択される、本発明による単独のまたは組み合わされたペプチドである。より好ましいのは、配列番号３９１、および４０３からなる群から選択される単独のまたは組み合わせのペプチドと、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん、または子宮がんの免疫療法におけるそれらの使用である。
【０１２０】
実施例１に示されるように、本発明によるペプチドの多くは、様々な腫瘍型に見いだされ、したがって、様々な適応症の免疫療法にも用いられ得る。実施例２に示されるように、様々ながんの根底にあるポリペプチドの過剰発現は、様々なその他の腫瘍学的適応症における、これらのペプチドの有用性を示唆している。
【０１２１】
したがって、本発明の別の態様は、好ましくは、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん、または子宮がんの群から選択される増殖性疾患の併用治療のための、本発明によるペプチドの使用に関する。
【０１２２】
本発明は、ヒト主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩの分子に結合する能力を有し、または長さ変異型などの伸長形態では、ＭＨＣクラスＩＩに結合する能力を有する、本発明によるペプチドにさらに関する。
【０１２３】
本発明は、本発明によるペプチドにさらに関し、前記ペプチドは（それぞれ）配列番号１〜配列番号３８８に記載のアミノ酸配列からなり、またはそれから本質的になる。
【０１２４】
本発明は、本発明によるペプチドにさらに関し、前記ペプチドは、修飾され、および／または非ペプチド結合を含む。
【０１２５】
本発明は、本発明によるペプチドにさらに関し、前記ペプチドは、特にＨＬＡ−ＤＲ抗原関連不変鎖（Ｉｉ）のＮ末端アミノ酸に融合した、または例えば樹状細胞に対して特異的な抗体などの抗体（またはその配列中）に融合した、融合タンパク質の一部である。
【０１２６】
本発明の別の実施形態は、非天然ペプチドに関し、前記ペプチドは、配列番号１〜配列番号４８に記載のアミノ酸配列からなり、またはそれから本質的になり、薬学的に許容可能な塩として合成的に生産される（例えば、合成される）。ペプチドを合成的に生産する方法は、当該技術分野で周知である。生体内で生成されるペプチドは塩でないため、本発明によるペプチドの塩は、ペプチドの生体内での状態と実質的に異なる。ペプチドの非天然塩形態は、特に、ペプチドを含んでなる医薬組成物、例えば、本明細書で開示されるペプチドワクチンなどの文脈で、ペプチドの溶解性を媒介する。治療される対象にペプチドを効率的に提供するためには、ペプチドの十分で少なくとも実質的な溶解性が必要である。好ましくは、塩はペプチドの薬学的に許容可能な塩である。本発明によるこれらの塩としては、ア二オンとしてのＰＯ４３−、ＳＯ４２−、ＣＨ３ＣＯＯ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−、ＮＯ３−、ＣｌＯ４−、Ｉ−、ＳＣＮ−、およびカチオンとしてのＮＨ４＋、Ｒｂ＋、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｃｓ＋、Ｌｉ＋、Ｚｎ２＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、Ｃｕ２＋、およびＢａ２＋を含んでなるホフマイスター系列の塩類などのアルカリ塩およびアルカリ土類塩類が挙げられる。特に塩類は、（ＮＨ４）３ＰＯ４、（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、（ＮＨ４）Ｈ２ＰＯ４、（ＮＨ４）２ＳＯ４、ＮＨ４ＣＨ３ＣＯＯ、ＮＨ４Ｃｌ、ＮＨ４Ｂｒ、ＮＨ４ＮＯ３、ＮＨ４ＣＩＯ４、ＮＨ４Ｉ、ＮＨ４ＳＣＮ、Ｒｂ３ＰＯ４、Ｒｂ２ＨＰＯ４、ＲｂＨ２ＰＯ４、Ｒｂ２ＳＯ４、Ｒｂ４ＣＨ３ＣＯＯ、Ｒｂ４Ｃｌ、Ｒｂ４Ｂｒ、Ｒｂ４ＮＯ３、Ｒｂ４ＣＩＯ４、Ｒｂ４Ｉ、Ｒｂ４ＳＣＮ、Ｋ３ＰＯ４、Ｋ２ＨＰＯ４、ＫＨ２ＰＯ４、Ｋ２ＳＯ４、ＫＣＨ３ＣＯＯ、ＫＣｌ、ＫＢｒ、ＫＮＯ３、ＫＣｌＯ４、ＫＩ、ＫＳＣＮ、Ｎａ３ＰＯ４、Ｎａ２ＨＰＯ４、ＮａＨ２ＰＯ４、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＣＨ３ＣＯＯ、ＮａＣｌ、ＮａＢｒ、ＮａＮＯ３、ＮａＣＩＯ４、ＮａＩ、ＮａＳＣＮ、ＺｎＣＩ２Ｃｓ３ＰＯ４、Ｃｓ２ＨＰＯ４、ＣｓＨ２ＰＯ４、Ｃｓ２ＳＯ４、ＣｓＣＨ３ＣＯＯ、ＣｓＣｌ、ＣｓＢｒ、ＣｓＮＯ３、ＣｓＣＩＯ４、ＣｓＩ、ＣｓＳＣＮ、Ｌｉ３ＰＯ４、Ｌｉ２ＨＰＯ４、ＬｉＨ２ＰＯ４、Ｌｉ２ＳＯ４、ＬｉＣＨ３ＣＯＯ、ＬｉＣｌ、ＬｉＢｒ、ＬｉＮＯ３、ＬｉＣｌＯ４、ＬｉＩ、ＬｉＳＣＮ、Ｃｕ２ＳＯ４、Ｍｇ３（ＰＯ４）２、Ｍｇ２ＨＰＯ４、Ｍｇ（Ｈ２ＰＯ４）２、Ｍｇ２ＳＯ４、Ｍｇ（ＣＨ３ＣＯＯ）２、ＭｇＣｌ２、ＭｇＢｒ２、Ｍｇ（ＮＯ３）２、Ｍｇ（ＣｌＯ４）２、ＭｇＩ２、Ｍｇ（ＳＣＮ）２、ＭｎＣｌ２、Ｃａ３（ＰＯ４），、Ｃａ２ＨＰＯ４、Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２、ＣａＳＯ４、Ｃａ（ＣＨ３ＣＯＯ）２、ＣａＣｌ２、ＣａＢｒ２、Ｃａ（ＮＯ３）２、Ｃａ（ＣｌＯ４）２、ＣａＩ２、Ｃａ（ＳＣＮ）２、Ｂａ３（ＰＯ４）２、Ｂａ２ＨＰＯ４、Ｂａ（Ｈ２ＰＯ４）２、ＢａＳＯ４、Ｂａ（ＣＨ３ＣＯＯ）２、ＢａＣｌ２、ＢａＢｒ２、Ｂａ（ＮＯ３）２、Ｂａ（ＣｌＯ４）２、ＢａＩ２、およびＢａ（ＳＣＮ）２から選択される。特に好ましいのは、例えば、塩化物塩または酢酸塩（トリフルオロ酢酸塩）などのＮＨ酢酸塩、ＭｇＣｌ２、ＫＨ２ＰＯ４、Ｎａ２ＳＯ４、ＫＣｌ、ＮａＣｌ、およびＣａＣｌ２である。
【０１２７】
一般に、ペプチドおよび変異型（少なくともアミノ酸残基間にペプチド結合を含有するもの）は、Ｌｕｋａｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｌｕｋａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１）によって、そしてその中で引用される参考文献によって開示される、Ｆｍｏｃ−ポリアミド様式の固相ペプチド合成によって合成されてもよい。一時的なＮ−アミノ基保護は、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基によってもたらされる。この高度に塩基不安定性の保護基の反復性切断は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンを使用して実施される。側鎖官能基は、それらのブチルエーテル（セリン、スレオニン、およびチロシンの場合）、ブチルエステル（グルタミン酸およびアスパラギン酸の場合）、ブチルオキシカルボニル誘導体（リジンおよびヒスチジンの場合）、トリチル誘導体（システインの場合）、および４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル誘導体（アルギニンの場合）として保護されてもよい。グルタミンまたはアスパラギンがＣ末端残基である場合、側鎖アミド官能基を保護するために、４，４'−ジメトキシベンズヒドリル基が活用される。固相担体は、ジメチルアクリルアミド（主鎖単量体）、ビスアクリロイルエチレンジアミン（架橋剤）、およびアクリロイルサルコシンメチルエステル（機能化因子）の３つの単量体から構成される、ポリジメチル−アクリルアミドポリマーをベースとする。使用されるペプチド−対−樹脂の切断可能な結合因子は、酸不安定性４−ヒドロキシメチル−フェノキシ酢酸誘導体である。逆転Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシル−カルボジイミド／１ヒドロキシベンゾトリアゾール媒介共役手順を使用して付加されるアスパラギンおよびグルタミンを除いて、全てのアミノ酸誘導体は、それらのあらかじめ形成された対称的な無水物誘導体として付加される。全ての共役および脱保護反応は、ニンヒドリン、トリニトロベンゼンスルホン酸またはイサチン（ｉｓｏｔｉｎ）試験手順を使用してモニターされる。合成完了時に、ペプチドは樹脂担体から切断され、同時に、５０％スカベンジャー混合物を含有する９５％トリフルオロ酢酸での処理によって、側鎖保護基が除去される。一般に使用されるスカベンジャーとしては、エタンジチオール、フェノール、アニソール、および水が挙げられ、正確な選択は、合成されるペプチドの構成アミノ酸に左右される。ペプチドの合成のための固相法と溶液相法の組み合わせもまた、可能である（例えば、（Ｂｒｕｃｋｄｏｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）、およびその中で引用される参考文献を参照されたい）。
【０１２８】
トリフルオロ酢酸は、真空蒸発によって除去され、引き続くジエチルエーテルを用いた磨砕は、粗製ペプチドをもたらす。存在するあらゆるスカベンジャーは、単純な抽出手順によって除去され、それは水相の凍結乾燥に際して、スカベンジャーを含まない粗製ペプチドを与える。ペプチド合成のための試薬は、通常、例えば、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ，ＵＫ）から入手できる。
【０１２９】
精製は、再結晶化、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、および（通常は）例えば、アセトニトリル／水勾配分離を使用した逆相高速液体クロマトグラフィーなどの技術の任意の１つまたは組み合わせによって実施されてもよい。
【０１３０】
本発明は、本発明によるペプチドをエンコードする核酸にさらに関する。本発明は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＰＮＡ、ＲＮＡ、またはそれらの組み合わせである、本発明による核酸にさらに関する。
【０１３１】
本発明は、本発明による核酸を発現でき、および／または発現する、発現ベクターにさらに関する。
【０１３２】
本発明は、疾患の治療においてそして医療において、特にがんの治療において使用するための本発明によるペプチド、本発明による核酸または本発明による発現ベクターにさらに関する。
【０１３３】
本発明は、本発明によるペプチドに対して、または前記本発明によるペプチドとＭＨＣの複合体に対して特異的な対抗と、それらを製造する方法とにさらに関する。
【０１３４】
本発明は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、特に、自己由来または同種異系Ｔ細胞に組み込まれた可溶性ＴＣＲ（ｓＴＣＲ）およびクローン化ＴＣＲ；これらを製造する方法；ならびに前記ＴＣＲを有するまたは前記ＴＣＲと交差反応する、ＮＫ細胞またはその他の細胞を製造する方法にさらに関する。
【０１３５】
抗体およびＴＣＲは、本発明によるペプチドの免疫療法用途の追加的な実施形態である。
【０１３６】
本発明は、前述のような本発明による核酸または発現ベクターを含んでなる、宿主細胞にさらに関する。本発明は、抗原提示細胞であり、好ましくは樹状細胞である、本発明による宿主細胞にさらに関する。
【０１３７】
本発明は、本発明による宿主細胞を培養するステップと、前記宿主細胞またはその培養液からペプチドを単離するステップとを含んでなる、本発明によるペプチドを製造する方法にさらに関する。
【０１３８】
本発明は、十分な量の抗原を抗原提示細胞に接触させることで、適切な抗原提示細胞または人工抗原提示細胞の表面に発現されるクラスＩまたはＩＩ  ＭＨＣ分子上に抗原が負荷される、本発明による方法にさらに関する。
【０１３９】
本発明は、抗原提示細胞が、配列番号１〜配列番号３８８を含有する、好ましくは配列番号１〜配列番号２９５、または変異アミノ酸配列を含有する、前記ペプチドを発現できるまたは発現する発現ベクターを含んでなる、本発明による方法にさらに関する。。
【０１４０】
本発明は、本発明による方法によって製造される活性化Ｔ細胞にさらに関し、前記Ｔ細胞は、本発明によるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを発現する細胞を選択的に認識する。
【０１４１】
本発明は、本発明によって製造されるＴ細胞の有効数を患者に投与するステップを含んでなる、患者において、本発明による任意のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを異常に発現する標的細胞を死滅させる方法にさらに関する。
【０１４２】
本発明は、薬剤としてのまたは薬剤の製造における、記載される任意のペプチド、本発明による核酸、本発明による発現ベクター、本発明による細胞、本発明による活性化Ｔリンパ球、Ｔ細胞受容体または抗体またはその他のペプチド−および／またはペプチド−ＭＨＣ−結合分子の使用にさらに関する。好ましくは、前記薬剤は、がんに対して有効である。
【０１４３】
好ましくは、前記薬剤は、可溶性ＴＣＲまたは抗体に基づく、細胞療法、ワクチンまたはタンパク質である。
【０１４４】
本発明は、本発明による使用にさらに関し、その中で前記がん細胞は、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん、または子宮がんである。
【０１４５】
本発明は、がん、好ましくは、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん、または子宮がんの診断において使用され得る、本明細書で「標的」と称される、本発明によるペプチドをベースとするバイオマーカーにさらに関する。マーカーは、ペプチドそれ自体の過剰提示、または対応遺伝子の過剰発現であり得る。マーカーはまた、好ましくは免疫療法、最も好ましくはバイオマーカーによって同定されるのと同じ標的を標的とする免疫療法である、治療の成功確率を予測するのに使用されてもよい。例えば、抗体または可溶性ＴＣＲを使用して腫瘍切片が染色され、ＭＨＣと複合体形成した目的ペプチドの存在が検出され得る。
【０１４６】
任意選択的に、抗体は、免疫刺激ドメインまたは毒素などのさらなるエフェクター機能を保有する。
【０１４７】
本発明はまた、がん治療の文脈におけるこれらの新規標的の使用に関する。
【０１４８】
追加的ながん性疾患に対する治療的および診断的使用の双方が、本発明によるペプチドの基本的発現産物（ポリペプチド）に関する、以下の説明で開示される。
【０１４９】
Ａ４ＧＮＴは膵臓がん細胞では頻繁に発現されるが、末梢血細胞では発現されず、末梢血の単核細胞画分中で発現されるＡ４ＧＮＴ  ｍＲＮＡの定量分析は、膵臓がんの検出に寄与するであろう（Ｉｓｈｉｚｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。がん細胞が胃粘膜に限定されている場合、初期胃がんの患者の８０％においてＡ４ＧＮＴ  ｍＲＮＡが検出され、Ａ４ＧＮＴ  ｍＲＮＡの発現レベルは、腫瘍進行に伴って増加した（Ｓｈｉｍｉｚｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。
【０１５０】
原発性ファロピウス管がん腫における上方制御されたＡＢＣＣ２の発現は、予後不良に関連する（Ｈａｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１５１】
ヒトがんでは、ＡＤＡＭ１０は上方制御され、レベルは一般に、腫瘍進行のパラメータおよび転帰不良に相関する。前臨床モデルにおいて、ＡＤＡＭ１０に対する選択的阻害剤は、腫瘍増殖の減少において、既存の治療と相乗作用することが示されている（Ｄｕｆｆｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０１５２】
ＡＨＣＹＬ２は、結腸がんおよび肺がんのサブセットにおいて下方制御されることが示された（Ｌｌｅｏｎａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。ＡＨＣＹＬ２のｍＲＮＡ発現は、ｐ５３機能ならびにｒａｓ−ＭＡＰＫ経路、メチル化および転写細胞プログラムの制御と潜在的に関連していると記載されており、したがって、ＡＨＣＹＬ２は、ヒト結腸および肺腫瘍に関与する腫瘍抑制遺伝子であってもよい（Ｌｌｅｏｎａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。
【０１５３】
ＡＫＲ１Ｃ１は、ミトコンドリア膜脱分極、ＲＯＳ産生、およびＪＮＫ経路の活性化をはじめとする、子宮頸がん、卵巣がん、および肺がん細胞におけるシスプラチン耐性に役割を果たす（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。非応答患者と比較して、有意により高いＡＫＲ１Ｃ１の腫瘍内レベルが、ネオアジュバント化学療法に対する応答者で見いだされた（Ｈｌａｖａｃ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０１５４】
ＡＫＲ１Ｃ３の発現は、前立腺がんにおける上昇したグリーソンスコアと正の相関があることが示され、ＡＫＲ１Ｃ３が前立腺がんの進行の有望なバイオマーカーの役割を果たし得ることが示された（Ｔｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＡＫＲ１Ｃ３は、それぞれホルモン依存性の前立腺がんおよび乳がん増殖を促進する、４−アンドロステン−３，１７−ジオンからテストステロンへの、そしてエストロンから１７β−エストラジオールへの還元を触媒することが示された（Ｂｙｒｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＡＫＲ１Ｃ３は、乳がん、前立腺がん、および皮膚扁平上皮がんにおいて上方制御されることが示された（Ｂｙｒｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｍａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＡＫＲ１Ｃ３は、局所的に進行した直腸がんを有する患者の放射線化学療法時における、応答性患者を非応答患者から識別できる、遺伝子シグネチャー内のマーカーであることが示された（Ａｇｏｓｔｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＡＫＲ１Ｃ３は、腫瘍抑制因子ＰＴＥＮの喪失を通じた抗アポトーシスＰＴＥＮ／Ａｋｔ経路の活性化によるヒト乳がんにおけるドキソルビシン耐性と関連することが示された（Ｚｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＡＫＲ１Ｃ３は、石炭排気ガスに曝された中国人における、より高い肺がんリスクに関連することが示された（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ａ）。ＡＫＲ１Ｃ３は、この疾患におけるメトトレキセート耐性の発生にも関連する、絨毛がんの潜在的治療用マーカーとして記載されている（Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ａ）。
【０１５５】
ＡＬＤＨ１Ｌ１の発現は、ＨＣＣおよび神経膠腫で下方制御されることが示された。これらのがんにおけるＡＬＤＨ１Ｌ１の下方制御は、芳しくない予後およびより侵襲性の表現型に関連した（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【０１５６】
ＡＬＯＸ１５は、正常組織と比較すると、前立腺がん（ＰＣＡ）、肺がん、乳がん、黒色腫、および結腸腺がんに高レベルで存在する（Ｋｅｌａｖｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。ＡＬＯＸ１５酵素活性は、ＰＣＡ開始および進行に寄与する（Ｋｅｌａｖｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０１５７】
ＡＲは、前立腺がん、去勢抵抗性前立腺がん、乳がん、多形性神経膠芽細胞腫、結腸がん、および胃がんなどの様々ながんの発生に関与するとされている（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００９Ｂ；Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５Ｂ；Ｍｅｈｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ａ；Ｓｕｋｏｃｈｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＡＲを通じたアンドロゲンシグナル伝達は、前立腺がんの増殖を促進することに加えて、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤であるｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）の発現を誘導することで、アポトーシスをもたらす（Ｙｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。
【０１５８】
ＡＲＭＣ５の変異は、大結節性コルチゾール産生新生物、両側性大結節性肥大、原発性大結節性副腎肥大、および髄膜腫を引き起こす（Ｅｓｐｉａｒｄ  ａｎｄ  Ｂｅｒｔｈｅｒａｔ，２０１５；Ｋｉｒｓｃｈｎｅｒ  ａｎｄ  Ｓｔｒａｔａｋｉｓ，２０１６；Ｅｌｂｅｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０１５９】
薬理ゲノミクスの研究は、ＡＴＡＤ５と抗がん剤の間の相関を示す（Ａｂａａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＡＴＡＤ５は、悪性末梢神経鞘腫瘍において有意に上方制御される（Ｐａｓｍａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。Ｂ型肝炎ウイルスタンパク質Ｘは、ＨＢＶ関連肝細胞がんにおけるＡＴＡＤ５の発現を有意に増強する（Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ＡＴＡＤ５の喪失は、マウスにおいて胚性致死的であり、マウスおよびヒトの双方において腫瘍抑制因子の役割を果たし、ヒトファンコーニ貧血経路の構成要素と相互作用する。さらに、それは、高い腫瘍増殖リスクを有する遺伝性疾患である神経線維腫症に関連する、表現型のいくつかの原因であってもよい（Ｇａｚｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｊｅｎｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。ＡＴＡＤ５遺伝子座の変異型は、上皮性卵巣がんリスクに関連する（Ｋｕｃｈｅｎｂａｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＡＴＡＤ５は、非小細胞肺がんの少なくとも１つの哺乳類表現型に関与している（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０１６０】
ＡＴＰ１０Ｂの発現は、高度に侵襲性の神経膠腫細胞において脱調節され、に浸潤性挙動に関連する（Ｔａｔｅｎｈｏｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。
【０１６１】
ＡＴＰ８Ｂ４は、多発性骨髄腫患者およびその他の実体における、予後マーカーおよび治療標的であってもよい（米国特許第２００７０２３７７７０Ａ１号明細書）（Ｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０１６２】
ＡＴＲは、ＰＩ３／ＰＩ４−キナーゼファミリーに属するＡＴＲセリン／スレオニンキナーゼをコードする。ＡＴＲ遺伝子のコピー数増加、増幅、または転座が、口腔扁平上皮がん細胞株において観察された（Ｐａｒｉｋｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。子宮内膜がんにおける短縮型ＡＴＲ変異は、無病生存期間短縮および全生存期間短縮に関連することが実証されている（Ｚｉｇｈｅｌｂｏｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０１６３】
Ｂ３ＧＮＴ５は、急性骨髄性白血病、およびマウス胚性がんにおいて過剰発現され、その発現は、神経膠芽腫におけるプロモーターメチル化と逆相関する（Ｏｇａｓａｗａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｅｔｃｈｅｖｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。ｍｉＲＮＡ−２０３を通じたＢ３ＧＮＴ５の下方制御は、下咽頭扁平上皮がんの悪性度に寄与してもよい（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ｇ）。Ｂ３ＧＮＴ５は、乳がん患者生存率に関連する（Ｐｏｔａｐｅｎｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０１６４】
Ｂｕｂ１発現は、リンパ腫、乳がん、胃がん、および前立腺がんのサブセットにおいて増加する。Ｂｕｂ１過剰発現は、臨床予後不良と相関する（Ｒｉｃｋｅ  ａｎｄ  ｖａｎ  Ｄｅｕｒｓｅｎ，２０１１）。Ｂｕｂ１突然変異は、染色体不安定性を示す結腸直腸がん腫において見いだされ得る（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０１６５】
Ｃ４Ａは、多嚢胞性卵巣症候群および子宮内膜がんのバイオマーカーとされており、実験データは、Ｃ４ががん増殖を媒介し得ることを示唆する（Ｇａｌａｚｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｒｕｔｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０１６６】
急性骨髄単球性白血病細胞株ＪＩＨ３では、染色体欠失にはＣ７ｏｒｆ１０が含まれる（Ｐａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０１６７】
Ｃ８はヒト肝腫瘍細胞株ＨｅｐＧ２によって構成的に発現され、発現は、サイトカインＩＬ−６、ＩＦＮ−γ、およびＩＬ−１βによる刺激の後に強く増強される（Ｓｃｈｅｕｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。
【０１６８】
がん精巣抗原特異的プライマーは、予後が非常に不良の最も悪性で侵襲性の腫瘍の１つである、多発性膠芽腫においてＣＡＳＣ５を検出し得る。ＣＡＳＣ５は、Ｎ末端（Ｂｕｂ１およびＢｕｂＲ１）およびＣ末端（Ｚｗｉｎｔ−１およびｈＭｉｓ１４／ｈＮｓｌ１）に特異的結合モチーフを有する。この結合の破壊は、腫瘍発生をもたらしてもよい（Ｋｉｙｏｍｉｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４Ｃ）。ＣＡＳＣ５は、腫瘍抑制因子ｐＲｂと相互作用する（Ｂｏｇｄａｎｏｖ  ａｎｄ  Ｔａｋｉｍｏｔｏ，２００８）。ＣＡＳＣ５は、増殖する体細胞、腫瘍、および健康なヒト精巣において高度に発現される（Ｂｏｇｄａｎｏｖ  ａｎｄ  Ｔａｋｉｍｏｔｏ，２００８；Ｓａｓａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。ＣＡＳＣ５は細胞増殖の抑制と成熟の増強に関連しており、したがってその破壊は白血病発生の重要要素であってもよい（Ｈａｙｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｂｏｇｄａｎｏｖ  ａｎｄ  Ｔａｋｉｍｏｔｏ，２００８；Ｃｈｉｎｗａｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；Ｋｕｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ａ）。
【０１６９】
ＣＣＲ４は、腎細胞がん、頭頸部扁上皮がん、胃がん、乳がん、結腸がん、およびホジキンリンパ腫などの様々な腫瘍の予後マーカーとして記載されている（Ｉｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；Ｏｌｋｈａｎｕｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｔｓｕｊｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ａｌ−ｈａｉｄａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ａ）。研究により、ＣＣＲ４陽性腫瘍を有する胃がん患者は、ＣＣＲ４陰性腫瘍を有する患者と比較して、有意により芳しくない予後を有したことが明らかにされている（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９ａ）。
【０１７０】
ＣＣＲ８発現は、尿路上皮および腎臓がんを有する患者の末梢血中の単球および顆粒球骨髄細胞のサブセットにおいて増加する。上方制御されたＣＣＲ８発現はまた、ヒト膀胱および腎臓がん組織内でも検出され、主に腫瘍関連マクロファージに限定される。ＣＣＬ１／ＣＣＲ８軸はがん関連炎症の構成要素であり、免疫回避に寄与してもよい（Ｅｒｕｓｌａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１７１】
ＣＤ１０１の一塩基多型は膵臓がんリスクと関連していることが示されたが、前立腺がんの症例対照およびコホート集団では結果を再現し得なかったため、膵臓がんにおけるＣＤ１０１の可能な役割について将来の研究を要する（Ｒｅｉｄ−Ｌｏｍｂａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＣＤ１０１は、ベイジアンモデル平均化アプローチを用いて、慢性期と急性転化慢性骨髄性白血病とを区別する、６遺伝子シグネチャーの１つの遺伝子として同定された（Ｏｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０１７２】
ＣＤ８４は、緩慢に進行する安定した慢性リンパ球性白血病と比較して、進行性の慢性リンパ性白血病において示差的に豊富なＣＤ抗原として記載された（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＣＤ８４発現は、慢性リンパ球性白血病の初期段階から有意に上昇することが示された（Ｂｉｎｓｋｙ−Ｅｈｒｅｎｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０１７３】
ＣＥＮＰＥ発現は、神経膠腫のグレードと有意に相関し、神経膠腫患者の生存時間を予測するためのその他のパラメータを補うかもしれない（Ｂｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＣＥＮＰＥは、化学療法感受性腫瘍と比較して、化学療法抵抗性上皮卵巣腫瘍において上方制御される（Ｊｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。ＣＥＮＰＥは、浸潤性および侵襲浸潤性プロラクチン脳下垂体腫瘍において上方制御される（Ｗｉｅｒｉｎｃｋｘ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０１７４】
ＣＬＤＮ１４は、胃がんにおいて上方制御されることが示された（Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＣＬＤＮ１４発現は、胃がんにおけるリンパ管転移に関連することが示された（Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＣＬＤＮ１４は、マウスにおける腫瘍血管の完全性および血管新生の調節において役割を果たすと記載された（Ｂａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１７５】
ＣＬＤＮ３は多くのヒト腫瘍において高度に差異的に発現され、ＣＬＤＮ３はクロストリジウム・パーフリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）エンテロトキシンの高親和性受容体であるため、生物学的に侵襲性のヒトがん細胞を特異的に同定して標的化するための効率的な分子ツールを提供してもよい（Ｂｌａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＣＬＤＮ３は、卵巣がん、乳がん、膵臓がん、および前立腺がんをはじめとする、いくつかの新生物において頻繁に過剰発現される（Ｍｏｒｉｎ，２００５）。ＣＬＤＮ３は、前立腺がんにおいて高度に発現されるので、前立腺がんバイオマーカーとして同定された（Ａｍａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＣＬＤＮ３の発現の低下は、完全に切除された肺扁平上皮がんにおける予後不良およびＥＭＴに関連する（Ｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＣＬＤＮ３は、Ｗｎｔ−ＥＭＴシグナル伝達を通じてがんの侵襲性を阻害し、肝細胞がんの潜在的予後バイオマーカーである（Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ｂ）。
【０１７６】
ＣＬＤＮ４は多くのヒト腫瘍において高度に差異的に発現され、ＣＬＤＮ４はクロストリジウム・パーフリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）エンテロトキシンの高親和性受容体であるため、生物学的に侵襲性のヒトがん細胞を特異的に同定し標的化するための効率的な分子ツールを提供してもよい（Ｂｌａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＣＬＤＮ４は、卵巣がん、乳がん、膵臓がん、および前立腺がんをはじめとする、いくつかの新生物において頻繁に過剰発現される（Ｍｏｒｉｎ，２００５）。ＣＬＤＮ４の細胞外ドメインに対する抗体は、膀胱がんにおいて化学療法増感効果を提供する（Ｋｕｗａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＣＬＤＮ４の高発現は、より分化した腸管型胃がんに関連し、低分化のびまん型では消失した。ＣＬＤＮ４の低発現はリンパ管形成に関連した（Ｓｈａｒｅｅｆ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０１７７】
ＣＬＤＮ６発現は、非小細胞肺がんにおけるリンパ節転移およびＴＮＭ期に関連することが示された（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ｆ）。さらに、ＣＬＤＮ６の低発現は、非小細胞肺がんを有する患者における、有意により低い生存率に関連することが示された（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ｆ）。したがって、低いＣＬＤＮ６発現は、非小細胞肺がんを有する患者のより芳しくない予後を示唆する、独立した予後バイオマーカーである（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ｆ）。ＣＬＤＮ６は、子宮頸がんおよび胃がんにおいて下方制御されることが示された（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＣＬＤＮ６は、ＢＲＣＡ１関連乳がんおよび卵巣乳頭状漿液がんにおいて上方制御されることが示された（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３Ｂ；ＨｅｅｒｍａｖａｎＶｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＣＬＤＮ６は、乳がんの腫瘍抑制因子として記載された（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。子宮頸がん細胞株ＨｅＬａおよびＣ３３ＡにおけるＣＬＤＮ６発現の増加は、生体外で細胞増殖、コロニー形成を、生体内で腫瘍増殖を抑制することが示され、ＣＬＤＮ６が子宮頸がん細胞の腫瘍抑制因子として機能してもよいことが示唆された（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＣＬＤＮ６は、卵巣がんの浸潤および転移において正の役割を果たしてもよい（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３ｂ）。ＣＬＤＮ６は、胚細胞腫瘍において一貫して発現されることが示され、したがって、原始胚細胞腫瘍の新規診断マーカーである（Ｕｓｈｉｋｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。ＣＬＤＮ６発現は、評価された中枢神経系の非定型奇形腫／ラブドイド腫瘍のセットのほとんどの腫瘍において陽性であることが示され、強いＣＬＤＮ６陽性は、潜在的独立予後因子であった（Ｄｕｆｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０１７８】
ＣＬＤＮ９は、転移性ルイス肺がん細胞株ｐ−３ＬＬ、およびこれらの細胞に由来する腫瘍、および下垂体オンコサイトーマにおいて、上方制御されることが示された（Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；Ｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。転移性ルイス肺がんｐ−３ＬＬ細胞におけるＣＬＤＮ９発現のノックダウンが、有意に低い運動性、生体外浸潤性、および生体内転移をもたらすことが示されたのに対し、これらの細胞における一過性の過剰発現は、それらの運動性を高めることが示された（Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。したがって、ＣＬＤＮ９は、肺がん転移の促進における重要な役割を果たしてもよい（Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ＣＬＤＮ９は、子宮頸がん組織において下方制御されることが示された（Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ａ）。ＣＬＤＮ９発現は、子宮頸がんのリンパ管転移と相関することが観察された（Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ａ）。ＣＬＤＮ９は、非侵襲性オンコサイトーマと比較して、侵襲性により高い発現レベルを有する下垂体オンコサイトーマにおいて、最も顕著に改変され上方制御される遺伝子として記載された（Ｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。したがって、ＣＬＤＮ９は、浸潤下垂体オンコサイトーマの重要なバイオマーカーであってもよい（Ｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。胃腺がん細胞株ＡＧＳにおけるＣＬＤＮ９の過剰発現は、浸潤能、細胞移動および増殖速度を増強することが示され、したがって胃腺がん細胞系の腫瘍発生特性を増強するのに十分である（Ｚａｖａｌａ−Ｚｅｎｄｅｊａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。強力なＣＬＤＮ９発現は、腸管型と比較してびまん型胃腺がんの死亡率が高いことと関連しており、その検出は、「腸管型」および「びまん型」胃腺がんにおける有用な予後マーカーとして記載されている（Ｒｅｎｄｏｎ−Ｈｕｅｒｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０１７９】
ＣＬＥＣ５Ａ  ｍＲＮＡ発現は、健常ドナーからのマクロファージおよび顆粒球よりも、原発性急性骨髄性白血病患者サンプルにおいて、有意により低いことが示された（Ｂａｔｌｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＣＬＥＣ５Ａは、単球／マクロファージおよび顆粒球における腫瘍抑制因子ＰＵ．１の新規転写標的として記載された（Ｂａｔｌｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０１８０】
ＤＣＰ２は、メトトレキサート耐性ヒト結腸がん細胞において示差的に２倍を超えて発現されるｍｉＲ−２２４標的として同定された（Ｍｅｎｃｉａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０１８１】
ＤＣＳＴＡＭＰ発現は、乳頭状甲状腺がんで増加する（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９Ｂ；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０ｂ）。ＤＣＳＴＡＭＰの下方制御は、恐らくは増殖および細胞周期の進行の減少ならびにアポトーシスの増加のために、ＭＣＦ−７細胞のコロニー形成の減少をもたらす（Ｚｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＤＣＳＴＡＭＰは末梢マクロファージにおいて過剰発現され、樹状細胞および骨髄腫形質細胞はＤＣＳＴＡＭＰに対して高い感受性を示し、破骨細胞に分化転換できる。がん幹細胞表現型および高転移能を発現する悪性形質細胞は、ＥＲＫ１／２リン酸化および骨吸収活性開始をもたらすβ３転写経路を活性化する、破骨細胞マーカーを発現する（Ｓｉｌｖｅｓｔｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。エスクレチンおよびパルテノライドは、活性化Ｔ細胞ｃ１シグナル伝達経路のｃ−Ｆｏｓおよび核因子を抑制し、破骨細胞分化のマーカー遺伝子であるＤＣＳＴＡＭＰ発現の抑制をもたらす（Ｉｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｂａｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｃｉｃｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｃｏｕｒｔｉａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ａ）。
【０１８２】
ＤＥＮＮＤ１Ｂ中のＳＮＰは、膵臓がんのリスクと有意に関連した（Ｃｏｔｔｅｒｃｈｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０１８３】
ＤＮＥＬ２としても知られているＤＮＡＨ１７は、黒色腫患者において同定された腫瘍抗原のホモログとして記載された（Ｅｈｌｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。ＤＮＡＨ１７は、散発性の乳がんおよび卵巣の腫瘍発生、および常染色体優性疾患である遺伝性神経痛性筋萎縮症および胼胝腫における食道がんに関連する、小さな染色体間隔にマッピングされた、いくつかの候補遺伝子の１つとして記載された（Ｋａｌｉｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。
【０１８４】
ＤＮＡＨ２は、慢性骨髄単球性白血病を有する患者の＞１０％において変異した遺伝子の１つである（Ｍａｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＤＮＡＨ２のような微小管関連タンパク質をコードする遺伝子は、ＣｐＧアイランドメチル化酵素表現型陽性の腎明細胞がんにおける、１０％以上の遺伝子異常発生率を示した（Ａｒａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０１８５】
ＤＮＭＴ３Ｂの阻害によるメチル化発現停止腫瘍抑制遺伝子の再発現は、がんに対する有効なストラテジーとして出現した（Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１８６】
ＦＡＭ８３Ｂ  ｍＲＮＡ発現は、正常肺または腺がんよりも、扁平上皮がんで有意により高く、したがってＦＡＭ８３Ｂは、診断および予後のための新規バイオマーカーである（Ｏｋａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＦＡＭ８３Ｂは、ＣＲＡＦ／ＭＡＰＫシグナル伝達を活性化し、上皮細胞形質転換を駆動することに関与する発がん遺伝子として同定された。上昇した発現は、腫瘍グレードの上昇および全生存期間の減少に関連する（Ｃｉｐｒｉａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。上昇したＦＡＭ８３Ｂ発現はまた、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴシグナル伝達経路を活性化し、ＰＩ３Ｋ、ＡＫＴ、およびｍＴＯＲ阻害剤に対する感受性の低下を与える（Ｃｉｐｒｉａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１８７】
遺伝子変異に起因するＦＡＮＣＤ２の下方制御または機能不全が、乳がん、急性リンパ性白血病、および精巣セミノーマをはじめとする様々ながんで報告されており、がん発生に関連している。さもなければ、ＦＡＮＣＤ２の再発現および上方制御もまた、神経膠腫および結腸直腸がんにおける腫瘍の進行および転移に関連することが示された（Ｐａｔｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ａ；Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５Ｂ；Ｏｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｒｕｄｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０ａ；Ｓｍｅｔｓｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ／Ａｋｔ経路は、ＤＮＡ損傷応答としてＡＴＭ／Ｃｈｋ２チェックポイントを誘導するＦＡＮＣＤ２を促進し、モノユビキチン化（ｍｏｎｏｕｂｉｑｕｉｔｉｎｉｌａｔｅｄ）ＦＡＮＣＤ２は、腫瘍抑制因子ＴＡｐ６３の転写を活性化する（Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１８８】
ＦＯＸＪ１発現は上方制れされ、腫瘍病期、組織学的グレード、およびサイズに関連し、腎明細胞がんの患者における予後と相関する（Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ｂ）。減少したＦＯＸＪ１発現は、臨床病期（ｃｌｉｎｉｃ  ｓｔａｇｅ）、リンパ節転移、および遠隔転移と有意に相関し、ＦＯＸＪ１発現の低下は、胃がんにおけるより短い生存時間を独立して予測した（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５Ｃ）。ＦＯＸＪ１の過剰発現は、肝細胞がんにおける腫瘍細胞の増殖および細胞周期の移行を促進し得て、組織学的グレードおよび予後不良に関連する（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１８９】
高いＧＩＮＳ２転写産物レベルは、乳がん患者における予後不良を予測して、乳がん幹細胞による高い組織学的グレードおよび内分泌療法抵抗性と相関する（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＧＩＮＳ２は、肺腺がんに高レベルで存在し、ＴＮＭ期に関連すると報告された（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３ｂ）。ＧＩＮＳ２は、乳がん、黒色腫、および肝臓がんなどの多くの悪性固形腫瘍において、大量かつ異常に発現される。さらに、ＧＩＮＳ２の過剰発現は、白血病細胞株の増殖を促進し得る（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３ａ）。
【０１９０】
ＧＰＲ９８の発現は、正常組織と比較して原発性神経内分泌腫瘍において増加する（Ｓｈｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＧＰＲ９８は、多形性膠芽腫の生存に関連する遺伝子の１つであった（Ｓａｄｅｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。ＧＰＲ９８は、アポトーシスの誘導をもたらす急性リンパ芽球性白血病の治療に使用されるグルココルチコイドによって調節される、転写物を提示する（Ｒａｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０１９１】
ＧＴＰＢＰ１０は、神経膠芽腫におけるコピー数の変動、遺伝子発現、および患者の転帰と高度に相関する（Ｋｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０１９２】
ＧＴＳＥ１発現は、胃がん細胞においてアポトーシスシグナル伝達を抑制し、シスプラチン耐性を与える（Ｓｕｂｈａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＧＴＳＥ１は、子宮平滑筋肉腫（ＵＬＭＳ）において過剰発現され、細胞周期調節に関与する。
【０１９３】
Ｈ２ＢＦＳは、低リスクの急性リンパ芽球性白血病サブグループに関連する、重要なクラスターとして一貫して発現された（Ｑｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。
【０１９４】
ＨＩＳＴ１Ｈ２ＢＪは、脳腫瘍において下方制御されることが示され、診断または予後的重要性がある分子マーカーを開発するために潜在的に有用であると記載された（Ｌｕｎａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０１９５】
ＨＩＳＴＨ４Ａのアセチル化は、胚性腎臓がん（ウィルムス腫瘍）を不活性化するための潜在的標的かもしれない（Ｙａｎ−Ｆａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０１９６】
ＨＩＳＴ１Ｈ４Ｃは、治療関連骨髄性白血病の発症のリスクを識別する因子として機能してもよい（Ｂｏｇｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。
【０１９７】
ＨＩＳＴ１Ｈ４Ｆは、前立腺がんにおいて過剰メチル化されることが観察され、これはまた患者の老化とも相関するかもしれない（Ｋｉｔｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０１９８】
ＨＩＳＴ１Ｈ４Ｋの高いメチル化率は、高悪性度筋層非浸潤性膀胱がんならびに前立腺がんで観察され、したがって潜在的バイオマーカーに相当する（Ｐａｙｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｋａｃｈａｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０１９９】
ＨＩＳＴ１Ｈ４Ｌは、ＥＲＧ＋前立腺がんにおいて有意に上方制御されることが示された（Ｃａｍｏｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。ＨＩＳＴ１Ｈ４Ｌは、ヒストンＨ４ファミリーのメンバーである、複製依存性ヒストンクラスター１、Ｈ４ｌをコードする（ＲｅｆＳｅｑ，２００２）。
【０２００】
ＨＩＳＴ２Ｈ４Ｂは、レオウイルスサブタイプに感染した細胞内の重要な細胞病原性経路における新規タンパク質として同定され、それは抗がん腫瘍退縮剤として現在臨床試験中である（Ｂｅｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０２０１】
ＨＩＳＴ４Ｈ４は、α放射体と、変異ｄ９−Ｅ−カドヘリン発現細胞を特異的に標的化するモノクローナル抗体ｄ９ＭＡｂとから構成される免疫コンジュゲートによる治療後に、胃がん細胞において継続的下方制御を示した遺伝子の１つであった（Ｓｅｉｄｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。ヒストンＨ４ファミリーのその他のメンバーの過剰メチル化は、ステージＩ非小細胞肺がんにおける、より短い無再発生存期間と有意に関連していた（Ｓａｎｄｏｖａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０２０２】
ＨＩＶＥＰ１は、リンパ腫細胞株において、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型の組み込みによって破壊された細胞遺伝子として同定された（Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＨＩＶＥＰ１は、好ましくない１１ｑ欠失に関連し、また慢性リンパ球性白血病における好ましくないビネーステージＢおよびＣにも関連していた（Ａａｌｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。
【０２０３】
ＨＮＲＮＰＨ２は、膵臓がん、肝臓がん、および胃がんをはじめとする、様々ながん型において上方制御される（Ｈｏｎｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；Ｚｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。ＨＮＲＮＰＨ２は、がん細胞において高度に発現されて競合することで内因性テロメラーゼ活性を阻害する、ｈＴＥＲＴのβ欠失転写物のスプライシングに関与する（Ｌｉｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０２０４】
ＨＯＸＤ１１は、頭頸部扁上皮がんにおいて調節不全であり、細胞株および患者腫瘍サンプルにおいて顕著に高いレベルを示す。ＨＯＸＤ１１のノックダウンは、浸潤を減少させた（Ｓｈａｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＨＯＸＤ１１は、口腔扁平上皮がんにおいて有意に上方制御される（Ｒｏｄｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。ＨＯＸＤ１１は、ヒト乳がんにおいて異常にメチル化される（Ｍｉｙａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。ＴｈｅＨＯＸＤ１１遺伝子は、ｔ（２；１１）（ｑ３１；ｐ１５）を有する急性骨髄性白血病において、ＮＵＰ９８遺伝子に融合される（Ｔａｋｅｔａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。
【０２０５】
ＩＣＯＳは、Ｔ細胞上でプログラム死−１（ＰＤ−１）のリガンドの役割を果たし、がん細胞の免疫逃避を誘導し、そしてまたがん細胞に対する抗アポトーシス効果を媒介する受容体の役割も果たす（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５Ｃ）。マウス腫瘍モデルは、腫瘍増殖中のＩＣＯＳが関与する複数の免疫チェックポイントの標的化のために、重要なサポートを提供する（Ｌｅｕｎｇ  ａｎｄ  Ｓｕｈ，２０１４）。ＩＣＯＳ＋細胞浸潤は不利な患者予後と相関し、ＩＣＯＳはがん免疫療法の新規標的として同定される（Ｆａｇｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＩＣＯＳは、生体外および生体内の双方で、胆管がんに対するサイトカイン誘導キラー細胞の細胞毒性効果を増強し得る（Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０２０６】
ＩＦＮＧの腫瘍内発現は、ヒト黒色腫において、ＭＨＣクラスＩＩ分子と、より侵襲性の表現型との発現に関連することが示された（Ｂｒｏｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）。自己分泌ＩＦＮＧシグナル伝達は、ＩＦＮＧ遺伝子形質移入乳腺腺がん細胞の実験的転移能を増強することが示され、これはＮＫ細胞に対する抵抗性増加の結果であると考えられた（Ｌｏｌｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。
【０２０７】
トリプルネガティブ乳がんは、予後不良のマーカーに関連するＩＧＦＢＰ３の高い腫瘍発現を有する（Ｍａｒｚｅｃ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＩＧＦＢＰ３に特異的に結合する新規細胞死受容体が同定されており、乳がん治療に使用されるかもしれない（Ｍｏｈａｎｒａｊ  ａｎｄ  Ｏｈ，２０１１）。ＩＧＦＢＰ３は生体外で、生存促進性および増殖促進性を示す（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｆｉｒｔｈ，２０１４）。ＩＧＦＢＰ３は、尿路上皮細胞がんの再発の独立したマーカーである（Ｐｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０２０８】
ＩＧＦＢＰＬ１はインスリン増殖因子の調節因子であり、乳がん細胞株において、異常な過剰メチル化によって下方制御される。ＩＧＦＢＰＬ１のメチル化は、より芳しくない全生存期間および無病生存と明らかに関連する（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０２０９】
ＩＧＦＬＲ１は、結腸直腸がんにおいて変異する（Ｄｏｎｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＩＧＦＬＲ１は、腫瘍壊死因子受容体ファミリーとの構造類似性を有する（Ｌｏｂｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０２１０】
ＩＬ４Ｉ１タンパク質発現は、腫瘍において非常に頻繁である。ＩＬ４Ｉ１は、様々な腫瘍実体の腫瘍関連マクロファージで、リンパ腫由来の新生物細胞で、稀には主に中皮腫である固形がんで、検出された（Ｃａｒｂｏｎｎｅｌｌｅ−Ｐｕｓｃｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。ヒトＴｈ１７細胞におけるＩＬ４Ｉ１の上方制御は、ＩＬ−２プロモーターの活性化に関与する分子経路を遮断することで、そして細胞周期への移行を損なう高レベルのＴｏｂ１を維持することで、それらのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）媒介伸長を制限する（Ｓａｎｔａｒｌａｓｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２１１】
ＩＱＧＡＰ３は、肺がんにおいて過剰発現され、腫瘍細胞増殖、移動、および浸潤に関連する。さらに、それは肝細胞がんにおける染色体増幅によって上方制御され、ＩＱＧＡＰ３の発現は、低生存率を有するｐ５３変異大腸がん患者において増加する（Ｋａｔｋｏｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４Ｂ；Ｓｋａｗｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。ＩＱＧＡＰ３は、ＥＧＦＲ／Ｒａｓ／ＥＲＫシグナル伝達カスケードを調節し、Ｒａｃ／Ｃｄｃ４２と相互作用する（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ｂ；Ｋｕｎｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０２１２】
ＩＴＧＡ２のレベルの上昇は、正常な培養メラノサイトおよび非転移性黒色腫細胞株と比較して、高度に浸潤性および転移性の黒色腫細胞株で見いだされた（ｖａｎＭｕｉｊｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。接着分子ＩＴＧＡ２は、黒色腫において、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−１−βによって上方制御された（Ｇａｒｂｅ  ａｎｄ  Ｋｒａｓａｇａｋｉｓ，１９９３）。ＩＴＧＡ２を発現しないヒト横紋筋肉腫細胞へのＩＴＧＡ２のトランスフェクションは、様々な臓器における転移の頻度を増強した（Ｍａｔｓｕｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。
【０２１３】
ＫＣＮＵ１は、乳がんにおいて、複雑な染色体再配置に頻繁に関与する領域内の染色体８ｐ上に位置する（Ｇｅｌｓｉ−Ｂｏｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。ＫＣＮＵ１は、小児がんサンプルの肝芽細胞腫で過剰発現される、細胞外膜タンパク質の上位２５個のうちの１つである（Ｏｒｅｎｔａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０２１４】
ＫＩＡＡ０２２６Ｌは腫瘍抑制遺伝子であると考えられ、子宮頸がんにおいて過剰メチル化される。ＫＩＡＡ０２２６Ｌの再活性化は、細胞増殖、生存能力、およびコロニー形成を減少させる（Ｈｕｉｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｅｉｊｓｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｈｕｉｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＫＩＡＡ０２２６Ｌのメチル化パターンを用いて、前駆病変および通常の子宮頸部がんを分別し得る（Ｍｉｌｕｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＫＩＡＡ０２２６Ｌのメチル化パターンは、子宮頸がんの特異的バイオマーカーとしては使用され得ない（Ｓｏｈｒａｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＫＩＡＡ０２２６Ｌの再活性化は、そのプロモーター領域を部分的に脱メチル化し、また抑制性ヒストンメチル化を減少させる（Ｈｕｉｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０２１５】
ＫＩＡＡ１２４４の過剰発現は、乳がん細胞のホルモン関連増殖において、エストロゲン／ＥＲアルファシグナル伝達経路の活性化を引き起こす重要な機序の１つである（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。ＫＩＡＡ１２４４とＰＨＢ２との間の相互作用を阻害することは、管腔型乳がんの治療のための新規治療ストラテジーであってもよい（Ｙｏｓｈｉｍａｒｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０２１６】
ＫＩＡＡ１５２４は、タンパク質ホスファターゼ２Ａのがん性インヒビター（ＣＩＰ２Ａ）をコードする。ＣＩＰ２Ａの重要な役割は、特に、ＮＳＣＬＣ、ＨＣＣ、ＨＮＳＣＣ、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、乳がん、前立腺がん、卵巣がんん、および結腸直腸がんにおいて示されている（Ｖｅｎｔｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５Ｂ；Ｒｉｎｃｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５Ｃ；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｌｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４Ｃ；Ｆａｒｒｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｆａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｂｏｃｋｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０２１７】
ＫＩＦ１８Ａは、肝細胞がんにおいて過剰発現されることが示され、それはより短い無病および全生存期間と有意に相関した。したがって、ＫＩＦ１８Ａは、肝細胞がん診断のバイオマーカー、および外科的切除後び無病および全生存期間の独立予測因子かもしれない（Ｌｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＫＩＦ１８Ａ発現は、滑膜肉腫の特定のサブタイプにおいて上方制御される（Ｐｒｚｙｂｙｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。エストロゲンは、乳がんにおけるＫＩＦ１８Ａ発現を強く誘導し、それは増殖の増加およびアポトーシスの減少に関連する（Ｚｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２１８】
ＫＩＦ２０Ａの過剰発現は、膵管腺がん、黒色腫、膀胱がん、非小細胞肺がん、および胆管がんにおいて検出された（Ｉｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｙａｍａｓｈｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｓｔａｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。最近、ＫＩＦ２０Ａ由来のペプチドでワクチン接種された膵管腺がん患者は、対照群と比較して、より良好な予後を示したことが報告された（Ａｓａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。さらに、ＫＩＦ２０Ａのサイレンシングは、膵臓がん細胞株の増殖、運動性、および浸潤の阻害をもたらした（Ｓｔａｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０２１９】
乳がんにおけるＫＩＦ２６Ｂの高度発現は、予後不良と関連がある（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３Ｃ）。ＫＩＦ２６Ｂ上方制御は、ＣＲＣ腫瘍組織および対合させた隣接正常粘膜の分析により、腫瘍サイズと有意に相関した。ＫＩＦ２６Ｂは、結腸直腸発がんにおいて重要な役割を果たし、ＣＲＣの新規予後指標および潜在的治療標的として機能する（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５Ｄ）。
【０２２０】
ＫＩＦ２Ｃは、腫瘍細胞の方向性移動および浸潤に関与することが示された（Ｒｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＫＩＦ２Ｃの過剰発現は、胃および結腸直腸がん患者における、リンパ浸潤およびリンパ節転移に関連することが示された（Ｒｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＫＩＦ２Ｃは、口舌がんにおいて上方制御されることが示された（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ａ）。ＫＩＦ２Ｃの高度発現は、口舌の扁平上皮がんにおけるリンパ節転移および腫瘍病期に関連することが示された（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ａ）。ＫＩＦ２Ｃのサイレンシングは、ヒト口腔扁平上皮細胞がん細胞株Ｔｃａ８１１３の抑制増殖および移動をもたらすことが示された（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ａ）。ＫＩＦ２Ｃの変異は、結腸直腸がんに関連すると記載された（Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０２２１】
ＫＩＦＣ１は、形成された中心体の数（正常または過剰数の中心体（ｃｅｎｔｒｉｓｏｍｅｓ））とは無関係に、適切な紡錘体集合、安定した極集束、およびがん細胞の生存に必須であることが示された。ＫＩＦＣ１発現は、乳がん、特に、エストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性、およびトリプルネガティブ乳がん、および８つのヒト乳がん細胞株において、上方制御されることが示された。エストロゲン受容体陽性乳がん細胞では、ＫＩＦＣ１はエストロゲンによって強く誘導される１９種類のその他のキネシンの１つであった。乳がんでは、ＫＩＦＣ１の過剰発現およびその核内蓄積が組織学的グレードと相関して、芳しくない無進行生存期間および全生存期間を予測することが示された。乳がん細胞株では、ＫＩＦＣ１の過剰発現は、ドセタキセルに対する耐性を媒介することが示された。ＫＩＦＣ１サイレンシングは、乳がん細胞生存に負の影響を及ぼした（Ｚｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｐａｎｎｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ｂ）。ＫＩＦＣ１は卵巣がんにおいて過剰発現され、それは腫瘍侵襲性、進行した腫瘍グレードおよび病期に関連することが示された。ＫＩＦＣ１は、原発性ＮＳＣＬＣ腫瘍におけるそのより高い発現が、脳転移発生のより高いリスクを示唆した、３つの遺伝子の１つとして同定された（Ｇｒｉｎｂｅｒｇ−Ｒａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０２２２】
ＫＬは、子宮頸がんにおける上皮から間葉への転換を抑制する腫瘍抑制因子として記載され、それはインスリン／ＩＧＦ１、ｐ５３／ｐ２１、およびＷｎｔシグナル伝達を阻害することで、数種類のヒトがんにおける腫瘍抑制因子として機能する（Ｘｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｑｕｒｅｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＫＬは、乳がん、肺がん、および肝細胞がんをはじめとするいくつかのがんにおける、異常発現遺伝子として記載された（Ｚｈｏｕ  ａｎｄ  Ｗａｎｇ，２０１５）。ＫＬは、膵臓がん、肝細胞がん、およびその他の腫瘍において下方制御されることが記載された（Ｚｈｏｕ  ａｎｄ  Ｗａｎｇ，２０１５）。ＫＬは、がんの新規バイオマーカーとして記載され、その下方制御は、がん細胞の増殖促進およびアポトーシス減少をもたらすことが記載された。この文脈でＷｎｔ／ｓ−カテニンシグナル伝達は、いくつかの関連シグナル伝達経路の１つである（Ｚｈｏｕ  ａｎｄ  Ｗａｎｇ，２０１５）。ＫＬ遺伝子多型性は、結腸直腸がんのリスク増加に関連することが示された（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０２２３】
ＫＬＨＤＣ７Ｂは、子宮頸部扁平上皮がんに関連し、子宮頸部扁平上皮がんの潜在的バイオマーカーである（Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ａ）。
【０２２４】
ＫＬＨＬ遺伝子は、いくつかのメンデル疾患に関与し、がんに関連付けられている（Ｄｈａｎｏａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０２２５】
ＫＲＴ３１の限局性発現は、爪基質ケラチノサイト起源の浸潤性爪甲がんにおいて観察された（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ｅ）。毛母腫は、毛嚢のマトリックス細胞の分化を模倣し、皮質分化を示す腫瘍であり、ＫＲＴ３５およびＫＲＴ３１ケラチンの逐次過剰発現を有する（Ｂａｔｔｉｓｔｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２２６】
ＫＲＴ３５は、石灰化上皮腫において最も頻繁におよび最も強力に発現される、毛髪ケラチンの１つである。毛母腫は、毛嚢のマトリックス細胞の分化を模倣し、皮質分化を示す腫瘍であり、ＫＲＴ３５およびＫＲＴ３１ケラチンの逐次過剰発現を有する（Ｂａｔｔｉｓｔｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２２７】
ＬＣＴＬのノックダウンにより、ｈＴＥＲＴはヒト結腸上皮細胞を不死化させた（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０２２８】
研究者らは、ＲＮＡ干渉またはドミナントネガティブ変異によるＬＲＢＡ発現の阻害が、がん細胞の増殖阻害をもたらすことを観察した。これらの知見は、ＬＲＢＡの調節解除された発現が、がん細胞の変化した成長特性に寄与することを示唆する（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。
【０２２９】
ＬＲＲＣ８Ｅは、正常サンプルと比較して、骨肉腫および神経芽腫組織において過剰発現される（Ｏｒｅｎｔａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０２３０】
ＬＴＡ多型性は、がんのリスク増加に寄与した（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３ａ）。ＬＴＡのような骨吸収因子は、特定の固形がんおよび血液学的がんによって産生され、腫瘍誘発性高カルシウム血症にも関与している（Ｇｏｎｉ  ａｎｄ  Ｔｏｌｉｓ，１９９３）。ＬＴＡからＬＴβＲへのシグナル伝達軸と、がんの間には関連性がある（Ｄｒｕｔｓｋａｙａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。Ｂ細胞由来リンホトキシンは、去勢抵抗性前立腺がんを促進する（Ａｍｍｉｒａｎｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０２３１】
ＭＡＣＣ１は、胃がん、結腸直腸がん、肺がん、および乳がんをはじめとする多くのがん実体において過剰発現され、患者のがんの進行、転移、および低生存率に関連している（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３Ｂ；Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３ａ；Ｓｔｅｉｎ，２０１３；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５Ｂ；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ｈ；Ｉｌｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＭＡＣＣ１は、ｃ−Ｍｅｔおよびβカテニンの増加と、ｃ−Ｍｙｃ、サイクリンＤ１、カスパーゼ９、ＢＡＤ、およびＭＭＰ９をはじめとするそれらの下流標的遺伝子の増加とをもたらす、βカテニンおよびＰＩ３Ｋ／ＡＫＴシグナル伝達経路を標的化することを通じて、発がんを促進する（Ｚｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｙａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０２３２】
ＭＡＧＥＡ１０は、先天性角化異常症などのいくつかの遺伝性疾患に関与するＭＡＧＥファミリーメンバーＡ１０をコードする（ＲｅｆＳｅｑ，２００２）。いずれも細胞毒性Ｔリンパ球応答の標的であることが知られている、ＭＡＧＥＡ１０および２種のその他のがん精巣抗原に対するワクチンによって、乳がんの３分の２以上がカバーされる（Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。ＭＡＧＥＡ１０は、肝細胞がん患者の腫瘍組織の３６．７％で発現された；しかし、それは傍がん組織では発現されなかった（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。ＭＡＧＥＡ１０は、７９個の肺がん組織の１４％で発現された（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０２３３】
ＭＡＧＥＢ６は、精巣を除く正常組織で発現されず、様々な組織学的起源の腫瘍で発現される、新規ＭＡＧＥ遺伝子として同定された（Ｌｕｃａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。ＭＡＧＥＢ６は、頭頸部扁平上皮がんにおいて頻繁に発現されることが判明し、ｍＲＮＡ陽性は転帰不良の認知された臨床的特徴と有意な関連性を示した（Ｚａｍｕｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０２３４】
ＭＣＣは、結腸直腸がん細胞におけるβカテニンおよびＭＣＣ再発現と相互作用して、Ｗｎｔシグナル伝達を特異的に阻害する（Ｆｕｋｕｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。ＭＣＣ遺伝子は、結腸直腸がんにおいてヘテロ接合性喪失（ＬＯＨ）が頻繁に起こる領域で、染色体５上の大腸腺腫様ポリポーシス遺伝子と密接に結合している（Ｋｏｈｏｎｅｎ−Ｃｏｒｉｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。ＭＣＣ遺伝子のＬＯＨは、初期および進行期の双方の胃がん、肺がん、食道がん、および乳がんで見いだされ得た（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９ａ；Ｍｅｄｅｉｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。
【０２３５】
ＭＥＴは、脱分化型脂肪肉腫において上方制御されることが示され、メラノサイト腫瘍、肝細胞がん、非小細胞肺がん、遺伝性乳頭状腎臓がん、および胃腺がんに関連する（Ｐｅｔｒｉｎｉ，２０１５；Ｆｉｎｏｃｃｈｉａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｓｔｅｉｎｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｂｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｙｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０２３６】
ＭＭＰ１０の発現は、口腔扁平上皮がんにおいて強力であり、疣状がんでは中等度であった（Ｋａｄｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＭＭＰ１０は、間質由来因子１／ＣＸＣケモカイン受容体４軸との新規クロストークにおいて、肝がん発症に寄与する（Ｇａｒｃｉａ−Ｉｒｉｇｏｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）感染症は、ＭＭＰ１０の発現増加を通じて、胃がんの浸潤および転移を促進する（Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ａ）。ＭＭＰ１０は、頸部腫瘍において、血管新生およびアポトーシス経路の調節を通じて、腫瘍進行を促進する（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２３７】
術前ＭＭＰ−１３の上昇したレベルは、食道扁平上皮がんを有する患者における腫瘍進行および低生存率に関連することが見いだされた（Ｊｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ｍｉＲ−１４３の標的遺伝子であるＰＡＩ−１は、ヒト骨肉腫細胞におけるＭＭＰ−１３発現および分泌の増強を通じて浸潤および肺転移を調節し、これらの分子が骨肉腫患者における肺転移を予防するための潜在的治療標的遺伝子であり得ることが示唆される（Ｈｉｒａｈａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ＭＭＰ１３は、口腔扁平上皮がん（ＯＳＣＣ）の前悪性疾患として分類されている口腔扁平苔癬（ＯＬＰ）において、既に上方制御される（Ａｇｈａ−Ｈｏｓｓｅｉｎｉ  ａｎｄ  Ｍｉｒｚａｉｉ−Ｄｉｚｇａｈ，２０１５）。ＭＭＰ−１３は、骨芽細胞様細胞の再生において、潜在的にユニークな生理学的役割を果たす（Ｏｚｅｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０２３８】
ＭＵＣ５ＡＣは、結腸直腸、胃、肺、および膵臓がんをはじめとする様々ながん型において脱調節される。結腸直腸腫瘍および胃の腫瘍における枯渇または低発現は、より侵襲性の挙動および予後不良に関連する。肺がんにおける過剰発現は、再発および転移の可能性の増加をもたらす（Ｙｏｎｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｋｏｃｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４Ｂ；Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。
【０２３９】
ＭＵＣ５Ｂは、結腸直腸がん、肺がん、および乳がんをはじめとする様々ながん実体において過剰発現され、腫瘍進行に関連している（Ｓｏｎｏｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；Ｖａｌｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｎａｇａｓｈｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＭＵＣ５Ｂは、メチル化の影響下で抑制され得て、ＡＴＦ−１、Ｃ−Ｍｙｃ、ＮＦκＢ、Ｓｐ１、ＣＲＥＢ、ＴＴＦ−１１、およびＧＣＲによって上方制御され得る（Ｐｅｒｒａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｖａｎ、Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。
【０２４０】
ＭＵＣ６の遺伝的変異は、胃がんを発症するリスクを改変することが報告されている（Ｒｅｓｅｎｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。唾液腺腫瘍において、ＭＵＣ６の発現パターンは、病理組織学的腫瘍型と非常に密接に相関しているようであり、診断精度を改善するそれらの潜在的用途が示唆される（Ｍａｈｏｍｅｄ，２０１１）。研究により、非新生物乳房組織と比較した場合の、乳がん組織におけるＭＵＣ６の示差的発現が同定されている（Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０２４１】
中国の研究は、ＭＸＲＡ５を非小細胞肺がんにおいて２番目に頻繁に変異する遺伝子として同定した（Ｘｉｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。結腸がんにおいては、ＭＸＲＡ５は、過剰発現することが示され、早期診断および大網転移のバイオマーカーの役割を果たすかもしれない（Ｚｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３ａ）。
【０２４２】
ＭＹＢは、いくつかの突然変異を通じて、発がん性形質転換タンパク質に変換され得る（Ｚｈｏｕ  ａｎｄ  Ｎｅｓｓ，２０１１）。ＭＹＢは発がん遺伝子として知られており、シクロオキシゲナーゼ−２、Ｂｃｌ−２、ＢｃｌＸ（Ｌ）、およびｃ−Ｍｙｃなどの主要標的遺伝子の発現を調節することで、アポトーシス、細胞周期調節、細胞成長／血管新生および細胞接着に関連する（Ｒａｍｓａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；Ｓｔｅｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。発がん性融合タンパク質ＭＹＢ−ＮＦＩＢおよびＭＹＢの過剰発現は、唾液腺および乳房の腺様嚢胞がん、小児びまん性神経膠腫、急性骨髄性白血病、および膵臓がんにおいて見いだされる（Ｗａｌｌｒａｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｐａｔｔａｂｉｒａｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｏｎｄａ，２０１３；Ｎｏｂｕｓａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｃｈａｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｍａｒｃｈｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。Ｗｎｔシグナル伝達中のＭＹＢとβカテニンとの間の相乗作用により、ＭＹＢは結腸腫瘍発生と関連している（Ｂｕｒｇｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＭＹＢはエストロゲンシグナル伝達の直接標的であるので、ＥＲ陽性乳腺腫のために抗ＭＹＢ療法が検討される（Ｇｏｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【０２４３】
Ｎ４ＢＰ２は、鼻咽頭がんの発症における潜在的役割を有する。統計的に関連する差異が、散発性の鼻咽頭がんのリスクと相関する２つの異なるハプロタイプブロックにある。さらに、Ｎ４ＢＰ２は、これらの腫瘍組織において、対合させた正常組織と比較して過剰発現される（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０２４４】
１２，５１８件の前立腺がん症例の多段階、症例単独全ゲノム関連研究において、ＮＡＡＬＡＤＬ２は、疾患の侵襲性の病理学的尺度であるグリーソンスコアに関連する遺伝子座として同定された（Ｂｅｒｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＮＡＡＬＡＤＬ２は、前立腺がんおよび結腸がんにおいて過剰発現され、低生存率に関連する移動促進性および転移促進性の表現型を促進する（Ｗｈｉｔａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２４５】
ＮＣＡＰＧは、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病を有する患者、および血液または骨髄腫細胞に由来する白血病細胞において下方制御される（Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＮＣＡＰＧは、結腸直腸がんにおける多剤耐性遺伝子であってもよい（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２ａ）。ＮＣＡＰＧは、ヒト細胞がんの色素嫌性サブタイプにおいて高度に上方制御されるが、従来のヒト腎細胞がんでは上方制御されない（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０ａ）。ＮＣＡＰＧの上方制御は、黒色腫進行に関連している（Ｒｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。ＮＣＡＰＧは、ぶどう膜黒色腫に関連している（ＶａｎＧｉｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。ＮＣＡＰＧは、異なる腫瘍細胞において、変動する発現を示す（Ｊａｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。
【０２４６】
ＮＲＫは、後期胚形性におけるアクチン重合誘導に関与してもよいＪＮＫ活性化に必要なタンパク質キナーゼである、Ｎｉｋ関連キナーゼをコードする（ＲｅｆＳｅｑ，２００２）。ＮＲＫはｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼシグナル伝達経路を活性化し、コフィリンリン酸化を通じて骨格筋細胞におけるアクチン細胞骨格の組織化に関与してもよい（Ｎａｋａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。
【０２４７】
ＮＵＰ２１０は、結腸直腸がんのリスクに関連する多型性を有する、候補遺伝子であることが示された（Ｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。ＮＵＰ２１０が、子宮頸がんにおいて上方制御されることが示され、腫瘍発生初期において役割を果たすことが示唆された（Ｒａｊｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０２４８】
ＯＲＣ１は、腫瘍由来細胞株において過剰発現されることが示され、前立腺がんことが示されたならびに白血病におけるバイオマーカーであると予測される（Ｓｔｒｕｙｆ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｙｏｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＨＢＯ１などのヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｆｅｒａｓｅｓ）との相互作用を通じて、ＯＲＣ１は乳がんにおいて発がん機能を発揮する（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０２４９】
ＯＳＣＰ１中の２つのＳＮＰにおけるヘテロ接合性変異の非担体は、非ウイルス性肝臓がんに対する感受性のバイオマーカーであるかもしれない（Ｔｏｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２５０】
ＯＶＯＬ２は、間葉上皮転換を誘導し、転移を減少させる（Ｒｏｃａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＯＶＯＬ２は、Ｃ−ＭｙｃおよびＮｏｔｃｈ１を阻害する（Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。ＯＶＯＬ２は、結腸直腸がんにおいて過剰メチル化され、その結果、Ｗｎｔシグナル伝達を阻害できない（Ｙｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ＯＶＯＬ２の過剰発現は、細胞移動および浸潤を減少させ、上皮間葉転換のマーカーを減少させ、転移を抑制した（Ｙｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ＯＶＯＬ２は、結腸直腸がんにおいて下方制御され、腫瘍病期と逆相関する（Ｙｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ＯＶＯＬ２は、Ｗｎｔシグナル伝達経路によって調節される（Ｙｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０２５１】
ＯＸＴＲは、原発性小腸および膵臓神経内分泌腫瘍、非小細胞肺がん、卵巣がん、ならびに前立腺がんで著しく過剰発現され、細胞移動および転移を媒介する（Ｍｏｒｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；Ｚｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｃａｒｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｃａｒｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｐｅｑｕｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。しかし、ＯＸＴＲ１はまた、上皮性、神経性または骨起源いずれかの新生物細胞の増殖に対する抑制効果も有し、それは膜上の受容体局在化に依存すると考えられる（Ｃａｓｓｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。
【０２５２】
ＰＡＰＰＡは、増殖（ＶＥＧＦおよびＩＧＦ−Ｉ）および転写因子（ＮＦ−κＢｐ５０、ＮＦ−κＢｐ６５、ＨＩＦ−１α）に正の関連がある、ＮＳＣＬＣおよび肝細胞がんなどの一連のがん型に存在する転移関連遺伝子を表す。（Ｓａｌｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｉｕｎｕｓｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＰＡＰＰＡは、乳がんおよび卵巣がん細胞におけるＩＧＦ−１シグナル伝達経路の調節を通じて有糸分裂進行を調節し、そこでそれは、主に原発部位で見いだされる（Ｂｏｌｄｔ  ａｎｄ  Ｃｏｎｏｖｅｒ，２０１１；Ｌｏｄｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｂｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｉｕｎｕｓｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２５３】
ＰＧＡＰ１は、腺がん細胞株ＡｓＰＣ−１において下方制御される（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０２５４】
ＰＧＲは、乳がんの開始および進行と高度に関連しており、そこでそれは、ＭＡＰＫおよびＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路ならびに増殖因子受容体（ＧＦＲ）の発現を活性化する（Ｊａｉｓｗａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｐｉａｓｅｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＰＧＲ（ＨＥＲおよびエストロゲン受容体以外）は、乳がんの３つの異なるサブタイプを区別するのを助ける、分類因子の役割を果たす（Ｓａｆａｒｐｏｕｒ  ａｎｄ  Ｔａｖａｓｓｏｌｉ，２０１５）。
【０２５５】
ＰＬＡ２Ｇ７は、乳がん、卵巣がん、黒色腫、および前立腺がん細胞の脂質代謝に強い影響を及ぼし、この酵素の妨害はがんの病原性を損なう（Ｖａｉｎｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１ａ；Ｍａｓｓｏｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｋｏｈｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＰＬＡ２Ｇ７は前立腺がんと高度に関連し、したがって、この種のがんの潜在的バイオマーカーである（Ｖａｉｎｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１ｂ）。
【０２５６】
ＰＰＰ３Ｒ１は、肝細胞がん細胞において上方制御され、最大１０の異なるシグナル伝達経路に影響を及ぼす（Ｚｅｋｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【０２５７】
ＰＲＫＤＣは、子宮内膜症関連卵巣がんおよび乳がんにおいて、頻繁に変異する遺伝子である（Ｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；Ｗｈｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＰＲＫＤＣは、結腸直腸がん中の正常組織と比較して、がん組織において上方制御される。高いＰＲＫＤＣ発現を有する患者は、より芳しくない全生存期間を示す（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０２５８】
ＰＳＭＡ７Ｔの上方制御された発現は、転移性肺がん、去勢再発性前立腺がん（ＣＲＰＣ）、ならびに第原発性結腸直腸がんにおいて見いだされ、そこで肝転移のリスクを増加させる（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｒｏｍａｎｕｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｃａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。ＰＳＭＡ７Ｔの量は、アンドロゲン／ＡＲ媒介性前立腺腫瘍増殖において、アンドロゲン受容体（ＡＲ）のトランス活性化と相関することも示された（Ｏｇｉｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。
【０２５９】
ＰＳＭＣ１は細胞増殖に影響を及ぼすことができ、したがって、前立腺がん、多発性骨髄腫、および神経膠芽腫細胞における潜在的抗がん標的に相当する（Ｄａｈｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【０２６０】
ＲＡＤ１８は、ＤＮＡ損傷バイパス、複製後修復、および相同組換えにおけるその周知の機能のために、腫瘍形成に関与するとされる（Ｔｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。ＲＡＤ１８  Ａｒｇ３０２Ｇｌｎ多型性は、結腸直腸がんおよび非小細胞肺がんのリスクに関連している（Ｋａｎｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｋａｎｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。ＲＡＤ１８は、ヒト神経膠腫細胞の電離放射線に対する抵抗性を媒介し、ＲＡＤ１８のノックダウンは、相同組換え媒介修復を妨害して、二本鎖切断の蓄積増加をもたらす（Ｘｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。黒色腫組織マイクロアレイを使用して、原発性および転移性黒色腫において、核ＲＡＤ１８発現が、異形成性母斑と比較して上方制御されることが示された（Ｗｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０２６１】
ＲＡＤ５１ＡＰ１は、放射線曝露乳頭状甲状腺がんと関連することが示された（Ｈａｎｄｋｉｅｗｉｃｚ−Ｊｕｎａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ＲＡＤ５１ＡＰ１の増幅は、細胞不死性および卵巣がんにおけるより短い生存時間と相関することが示された（Ｓａｎｋａｒａｎａｒａｙａｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＲＡＤ５１ＡＰ１は、腫瘍細胞および組織において一般に過剰発現されると記載されており、ＲＡＤ５１ＡＰ１機能の妨害は、標的化腫瘍治療における有望なアプローチであることが示唆された（Ｐａｒｐｌｙｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＲＡＤ５１ＡＰ１転写は、腫瘍抑制因子ＭＥＮ１によって直接的に刺激されることが示された（Ｆａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＲＡＤ５１ＡＰ１は、散発性乳腺腫と比較して、肝内胆管がん、ヒトパピローマウイルス陽性頭頸部扁平上皮がん、およびＢＲＣＡ１欠損で上方制御されることが示された（Ｍａｒｔｉｎｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，２００７；Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７；Ｏｂａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。ＲＡＤ５１ＡＰ１の抑制は、肝内胆管がん細胞の増殖抑制をもたらすことが示され、肝内胆管がんの発症および／または進行に対するその関与が示唆された（Ｏｂａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【０２６２】
ＲＢＭ１４のノックダウンは、生体内での照射後の多形性膠芽腫再増殖を妨げることが示された（Ｙｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＲＢＭ１４は、腎細胞がんにおいて下方制御されることが示された（Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。ＲＢＭ１４は、腎臓がんおける潜在的腫瘍抑制因子として記載され、それは、ある程度はプロトオンコジーンＣ−ｍｙｃの下方制御によって、ヒト腎臓細胞におけるＧ（１）−Ｓ転移を阻害し、足場非依存性増殖および異種移植腫瘍形成を抑制する（Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。ＲＢＭ１４は、ＰＥＡ３およびＭＣＦ７ヒトがん細胞の移動促進作用に関与することが示された（Ｖｅｒｒｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＲＢＭ１４遺伝子は、非小細胞肺がん、扁平上皮細胞皮膚がんおよびリンパ腫をはじめとする、原発性ヒトがんのサブセットにおいて増幅されることが示された（Ｓｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０２６３】
ＲＢＭ４は、プレメッセンジャーＲＮＡの調節スプライシング機序に関与して、様々ながん細胞の増殖および移動を抑制する（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４Ｃ）。ＢＢＭ４活性の調節不全は、子宮頸がん、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、および直腸がんで見いだされた（Ｌｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｍａｒｋｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０２６４】
肝臓がん患者の血清ＲＣＯＲ３レベルは、中等度の慢性Ｂ型肝炎患者および軽度の慢性Ｂ型肝炎を有する患者よりも有意に低かった（Ｘｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０２６５】
ＲＦＷＤ２の下方制御は、胃がんにおける予後不良と相関する（Ｓａｗａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＲＦＷＤ２はｐ２７と直接相互作用し、この相互作用の調節解除は腫瘍発生に関与する（Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ｂ；Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ａ；Ｍａｒｉｎｅ，２０１２）。ＲＦＷＤ２の上方制御は、膀胱がん、胃がん、およびトリプルネガティブ乳がんにおける予後不良と相関する（Ｏｕｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２Ｃ）。
【０２６６】
ＲＩＦ１は、ヒト乳腺腫において高度に発現され、ＤＮＡ修復に必要な抗アポトーシス因子をコードして、がん治療の潜在的標的である（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００９ａ）。ゲノムの完全性の維持におけるＲＩＦ１の役割は、クロマチン構造、複製タイミング、およびＳ期内チェックポイントの調節を含むように拡大されている（Ｋｕｍａｒ  ａｎｄ  Ｃｈｅｏｋ，２０１４）。
【０２６７】
内臓多中心性小児筋線維腫症と診断された患者において、ＲＬＴＰＲ遺伝子中の新規ホモ接合変異型が同定された（Ｌｉｎｈａｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２６８】
ＲＮＦ２４は、食道腺がんにおいて上方制御されることが示され、バレット食道から食道腺がんへの進行において重要な役割を果たす（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ｂ）。ＲＮＦ２４は、口腔扁平上皮がんにおいて、特定のリスク因子次第で示差的に発現されることが示された（Ｃｈｅｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０２６９】
ＲＰＧＲＩＰ１Ｌは、部分的に有糸分裂チェックポイントタンパク質Ｍａｄ２を通じて足場非依存性増殖を抑制し、ヒト肝細胞がんにおける腫瘍抑制因子遺伝子候補である（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０２７０】
成体マウスの肝臓におけるＲｔｌ１の過剰発現は、浸透性の高い腫瘍形成をもたらし、ＲＴＬ１の過剰発現は、分析されたヒト肝細胞がんサンプルの３０％において検出された（Ｒｉｏｒｄａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。刷り込み遺伝子ＲＴＬ１の転写活性が、３２個のウィルムス腫瘍のパネルにおいて評価され、正常な腎組織と比較して大量の過剰発現が検出された（Ｈｕｂｅｒｔｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０２７１】
ＳＡＰＣＤ２（ｐ４２．３またはＣ９ｏｒｆ１４０とも称される）は、胃がんで発現するが正常な胃粘膜では発現しないことが最初に見いだされたタンパク質をコードする（Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。ＳＡＰＣＤ２は、結腸直腸、胃、肝細胞、および脳がんをはじめとする様々ながん実体において過剰発現され、高いＳＡＰＣＤ２レベルは腫瘍進行に関連する（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｗｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。胃がんのタンパク質調節ネットワークにおけるＳＡＰＣＤ２遺伝子の最適経路は、Ｒａｓタンパク質、Ｒａｆ−１タンパク質、ＭＥＫ、ＭＡＰＫキナーゼ、ＭＡＰＫ、チューブリン、紡錘体タンパク質、セントロメアタンパク質、および腫瘍である（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２ａ；Ｗｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２７２】
頭頸部扁上皮がんを有する患者において、ＳＥＭＡ３Ａ発現の低下は、より短い全生存期間と相関し、独立した予後の重要性を有することが示された（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ＳＥＭＡ３Ａの過剰発現は、移動、浸潤、および上皮間葉転換を抑制することが示されたが、これは、ある程度は、頭頸部扁上皮がん細胞株におけるＮＦ−κＢおよびＳＮＡＩ２の阻害に起因する（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。したがってＳＥＭＡ３Ａは、頭頸部扁上皮がんにおける腫瘍抑制因子の役割を果たし、この疾患の治療のための新規標的であってもよい（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ＳＥＭＡ３Ａ発現は、肝細胞がんにおける転移と有意に逆関連することが示された（Ｙａｎ−Ｃｈｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＳＥＭＡ３Ａは、前立腺がん、乳がん、神経膠腫、上皮性卵巣がんおよび胃がんをはじめとする多数のがん型において、下方制御されると記載されている（Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ａ；Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。低いＳＥＭＡ３Ａ発現は、胃がんにおける分化不良、血管浸潤、浸潤の深さ、リンパ節転移、遠隔転移、進行したＴＮＭ期、および予後不良と相関することが示された（Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＳＥＭＡ３Ａは、胃がん発症における候補腫瘍抑制因子および潜在的予後バイオマーカーとして記載された（Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２７３】
ＳＥＲＰＩＮＢ１０遺伝子のミスセンス変異は、腫瘍発生の特徴を有し、前立腺がんのリスクが増加することが示された（Ｓｈｉｏｊｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。さらに、ＳＥＲＰＩＮＢ１０発現は、転移性乳腺腫瘍において有意に上方制御される（Ｋｌｏｐｆｌｅｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０２７４】
ＳＬＣ１６Ａ１４の発現レベルは、無増悪生存期間と有意に関連し、上皮性卵巣がんの進行の新規推定マーカーを提示する（Ｅｌｓｎｅｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０２７５】
ＳＬＣ１８Ａ１は、好ましくない神経芽腫腫瘍型において、好ましいものと比較してより低い発現を示す（Ｗｉｌｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０２７６】
ＳＬＣ２５Ａ４３は、乳がん細胞株における推定ミトコンドリアチェックポイントを通じた、細胞周期の進行および増殖の調節因子として同定された（Ｇａｂｒｉｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ＳＬＣ２５Ａ４３は、乳がん細胞株における薬剤暴露に続く、薬剤有効性および細胞周期調節に影響を及ぼす（Ｇａｂｒｉｅｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｔｉｎａ，２０１３）。
【０２７７】
ＳＬＣ２８Ａ３は、膵管腺がんにおいて下方制御されることが示された（Ｍｏｈｅｌｎｉｋｏｖａ−Ｄｕｃｈｏｎｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＳＬＣ２８Ａ３は、パクリタキセルおよびゲムシタビン化学療法で治療された転移性乳がんの臨床転帰、ゲムシタビン治療された非小細胞肺がんにおける全生存期間、およびゲムシタビンベースの化学放射線療法で治療された膵臓腺がんにおける全生存期間に関連している（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２Ｂ；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４Ｂ；Ｍａｒｅｃｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。ＳＬＣ２８Ａ３は、慢性リンパ球性白血病におけるフルダラビン耐性と、Ｔ細胞白血病における薬剤耐性とに関連している（Ｋａｒｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｃａｌｏｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０２７８】
ＳＬＣ２Ａ１３は、口腔扁平上皮がんサンプルの初代培養における球形成細胞において一貫して増加し、共焦点顕微鏡法により、ＳＬＣ２Ａ１３を発現する細胞は、腫瘍組織の限られた領域にクラスターとして埋め込まれ、ＳＬＣ２Ａ１３ががん幹細胞の潜在的マーカーであり得ることが示唆された（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）ＳＬＣ２Ａ１３は、非小細胞肺がんの促進および進行に関連する遺伝子として同定された（Ｂａｎｋｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０２７９】
ＳＬＣ３５Ａ１の阻害は、がん細胞シアル酸付加を減少させ、がん細胞の転移能を低下させることが示された（Ｍａｇｇｉｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２８０】
ＳＬＣ７Ａ１１は、Ｗ１卵巣がん細胞株の薬剤耐性変異株において下方制御されることが示されており、したがって、がん細胞薬剤耐性において役割を果たすかもしれない（Ｊａｎｕｃｈｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＳＬＣ７Ａ１１は腫瘍微小環境を調節し、がんの増殖上の利点をもたらすことが記載された（Ｓａｖａｓｋａｎ  ａｎｄ  Ｅｙｕｐｏｇｌｕ，２０１０）。ＳＬＣ７Ａ１１は、神経膠腫の神経変性過程に関与することが報告された（Ｓａｖａｓｋａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＳＬＣ７Ａ１１は、フェロトーシスの文脈でｐ５３によって抑制されることが示され、ｐ５３−ＳＬＣ７Ａ１１軸は、ｐ５３（３ＫＲ）変異体中で保存されるとして記載され、古典的な腫瘍抑制機構の非存在下で腫瘍発生を抑制するその能力に寄与する（Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ｂ）。ＳＬＣ７Ａ１１は、ｓｙｓｔｅｍ  Ｘｃの機能的サブユニットとして記載されており、その機能は、攻撃的な乳がん細胞において増加する（Ｌｉｎｈｅｒ−Ｍｅｌｖｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。シスプラチン耐性膀胱がんにおけるＳＬＣ７Ａ１１の高い膜染色は、より芳しくない臨床転帰と関連することが示され、ＳＬＣ７Ａ１１阻害は、この疾患の治療に対する有望な治療アプローチとして記載された（Ｄｒａｙｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＳＬＣ７Ａ１１は、ベンゼンおよびその代謝産物に曝露されたヒト前骨髄球性白血病細胞株ＨＬ−６０において、示差的に発現されることが示されており、したがってＳＬＣ７Ａ１１と白血病発生との潜在的関連が強調される（Ｓａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＳＬＣ７Ａ１１の破壊は、リンパ腫、神経膠腫、前立腺がん、および乳がんをはじめとする、様々ながん腫の増殖阻害をもたらすと記載された（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。ＳＬＣ７Ａ１１の阻害は、食道がん細胞株ＫＹＳＥ１５０の生体外での細胞浸潤と、ヌードマウスにおけるその実験的転移を阻害することが示され、したがって腫瘍転移におけるＳＬＣ７Ａ１１の役割が確立される（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０２８１】
ＳＬＣＯ５Ａ１は原形質膜に位置し、薬物の細胞内輸送に影響を及ぼすことにより小細胞肺がんの化学療法抵抗性に寄与してもよい（Ｏｌｓｚｅｗｓｋｉ−Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＳＬＣＯ５Ａ１は、転移性小細胞肺がんにおいて最も顕著な有機アニオン輸送ポリペプチドであり、ＳＬＣＯ５Ａ１のｍＲＮＡレベルは、肝臓腫瘍および乳がんにおいて非常に増加する（Ｋｉｎｄｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｗｌｃｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｂｒｅｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。中咽頭扁平上皮がんにおける遺伝子融合は、ＳＬＣＯ５Ａ１の下方制御と関連している（Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０２８２】
ＳＰ５は、結腸直腸がん細胞株におけるβカテニンの枯渇後に下方制御され、Ｗｎｔシグナル伝達経路における新規直接下流標的である（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。ＳＰ５の過剰発現は、稀なヒト膵臓新生物におけるβ−カテニン経路の活性化を実証した（Ｃａｖａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。脱調節Ｗｎｔシグナル伝達を提示するヒト結腸直腸がん細胞において、モネンシンはβ−カテニンの細胞内レベルを低下させ、ＳＰ５などのＷｎｔシグナル伝達標的遺伝子の発現の減少と、細胞増殖速度の低下をもたらした（Ｔｕｍｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２８３】
ＳＴＩＬは、コルチゾールを分泌する１５種の副腎皮質腺腫において、コピー数変化およびヘテロ接合性のコピー中立性喪失を有する遺伝子の１つである（Ｒｏｎｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。この遺伝子と隣接する遺伝子座とを融合させる染色体欠失は、Ｔ細胞白血病において一般的に起こり、非正統的Ｖ−（Ｄ）−Ｊ組換え事象を通じて生じると考えられる（Ｋａｒｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ａｌｏｎｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０２８４】
ＴＢＣ１Ｄ７の上昇した発現は、大多数の肺がんにおいて見いだされ、免疫組織化学的染色は、ＮＳＣＬＣ患者のＴＢＣ１Ｄ７発現と予後不良との関連性を示唆した（Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。ＴＢＣ７の過剰発現は、ＴＳＣ１のユビキチン化を増強し、ｍＴＯＲシグナル伝達経路に位置するＳ６キナーゼによるＳ６タンパク質のリン酸化を増加させた（Ｎａｋａｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０２８５】
ＴＤＧは、転写因子ＴＣＦ４との相互作用を通じて上方制御様式でＷｎｔシグナル伝達経路に影響を及ぼし、結腸直腸がんのための潜在的バイオマーカーであると考えられる（Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。一方、ＴＤＧの発現の減少は、強力な発がん性特徴を有する損傷された塩基切除修復（ＢＥＲ）経路をもたらす（ｖａｎｄｅＫｌｕｎｄｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。タンパク質の下方制御は、初期乳がん、食道扁平上皮がん（ＥＳＣＣ）ｍおよび胃がんにおいて観察された（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｄｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５ａ）。
【０２８６】
４つの最も頻繁に変異した遺伝子の中には、原発性ＣＮＳリンパ腫においてタンパク質を変化させる変異を示すＴＥＮＭ４があった（Ｖａｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＭＤＡ−ＭＢ−１７５細胞株は、ＴＥＮＭ４とＥｒｂＢファミリーの受容体との融合をもたらす染色体転座を含有する。キメラ遺伝子はまた、神経芽腫でも見いだされた（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９Ｂ；Ｂｏｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０２８７】
ＴＥＴ２は造血幹細胞恒常性の重要な調節因子であり、その機能障害は悪性血液疾患をもたらす（Ｎａｋａｊｉｍａ  ａｎｄ  Ｋｕｎｉｍｏｔｏ，２０１４）。ＴＥＴ２突然変異は予後に悪影響を及ぼし、急性骨髄性白血病を有する患者のリスク適応治療ストラテジーを正当化するのを助けてもよい（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ｂ）。ＴＥＴ２の核局在化は、結腸直腸がん組織のかなりの部分において、転移に伴って失われた（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０２８８】
ＴＫＴＬ１は、食道扁平上皮がん、口腔扁平上皮がん、肺がん、結腸直腸がん、および非小細胞肺がんなどの複数の腫瘍型の発症および進行に関連する（Ｋａｙｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｂｅｎｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｇｒｉｍｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２８９】
ＴＭＥＭ６７は、頂端膜への中心粒移動および一次繊毛の形成において機能する。この遺伝子の欠陥は、メッケル症候群３型（ＭＫＳ３）およびジュベール症候群６型（ＪＢＴＳ６）の原因である（ＲｅｆＳｅｑ，２００２）。ＴＭＥＭ６７は繊毛の形成に関与しており、繊毛の欠陥は、眼球欠損、舌腫瘍、および髄芽腫を引き起こしてもよい（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５Ｂ；Ｐａｒｉｓｉ，２００９）。
【０２９０】
ＴＯＮＳＬは、発がんタンパク質ＭＭＳ２２Ｌを安定化することによって、肺および食道発がんに関与する（Ｎｇｕｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。さらなる相互作用がＴＯＮＳＬとＢＲＣＡ１との間で示された、これは乳がんおよび卵巣腫瘍抑制因子の役割を果たす（Ｈｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２９１】
ＴＰ６３転座は、未分化リンパ腫キナーゼ陽性未分化大細胞リンパ腫のサブセットにおける事象として記載され、それは疾患の侵襲性過程に関連する（Ｈａｐｇｏｏｄ  ａｎｄ  Ｓａｖａｇｅ，２０１５）。ＴＰ６３は、上皮分化、細胞周期停止、およびアポトーシスに関与するため、がんにおいて複雑な役割を果たすことが記載された（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＴＰ６３イソ型ＴＡｐ６３が、悪性血液疾患で過剰発現されると記載された一方で、ＴＰ６３ミスセンス変異は扁平上皮がんで、ＴＰ６３転座はリンパ腫および一部の肺腺がんにおいて報告されている（Ｏｒｚｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＴＰ６３イソ型ＤｅｌｔａＮｐ６３の過剰発現をもたらす異常なスプライシングは、皮膚の扁平上皮がんなどのヒトがんにおいて頻繁に見いだされ、そこで腫瘍の開始および進行を支援する（Ｍｉｓｓｅｒｏ  ａｎｄ  Ａｎｔｏｎｉｎｉ，２０１４；Ｉｎｏｕｅ  ａｎｄ  Ｆｒｙ，２０１４）。
【０２９２】
ＴＲＩＭ５９は、細胞周期関連タンパク質を上方制御することによって、非小細胞肺がん細胞の増殖および移動を促進する（Ｚｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。推定ユビキチンリガーゼＴＲＩＭ５９は、非腫瘍性組織と比較して、胃腫瘍において上方制御され、ＴＲＩＭ５９のレベルは、腫瘍進行および患者生存時間と相関する。ＴＲＩＭ５９はＰ５３と相互作用して、そのユビキチン化および分解を促進し、ＴＲＩＭ５９はこの機序を通じて、胃発がんを促進するかもしれない（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２９３】
ＴＲＰＣ４は、肺がん、卵巣がん、頭頸部がん、腎臓がん、および非小細胞肺がんにおいて上方制御されることが見いだされた（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０Ｂ；Ｚｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３ａ；Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０２９４】
ＵＬＢＰ３は、多くの腫瘍細胞において可溶性および膜結合イソ型として発現される。小児急性リンパ芽球性白血病芽球は、成人芽球と比較して、有意により高レベルのＵＬＢＰ３を発現する（Ｔｏｒｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＵＬＢＰ３のはるかにより高い発現レベルは、その他の白血病細胞株と比較して、白血病細胞株Ｋ５６２において見いだされた。さらに、それは、白血病細胞株および原発性悪性白血病細胞の双方で見いだされ得る（Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３ｂ）。ＵＬＢＰ３遺伝子座は、結腸直腸がん細胞株においてメチル化される（Ｂｏｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。増加したｍＲＮＡレベルおよびＵＬＢＰ３の表面発現レベルが、ヒト肺がん細胞株ＳＷ−９００において検出された（Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＵＬＢＰ３は、白血病細胞においてより高い表面発現を有する（Ｏｇｂｏｍｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。様々な腫瘍細胞株におけるＵＬＢＰ３レベルは、ＮＫ細胞の細胞毒性と相関するが、ＵＬＢＰ３は、バイオマーカーとしては適していないようである（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｌｉｎｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。ＵＬＢＰ３は、ヒト鼻咽頭がん細胞株ＣＮＥ２では発現されない（Ｍｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。ＵＬＢＰ３は卵巣がんにおいて発現され、患者生存率と逆相関する（Ｃａｒｌｓｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７；ＭｃＧｉｌｖｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。Ｂ細胞は、非ホジキンリンパ腫においてＵＬＢＰ３を発現し、またはそれは、末梢血、骨髄、またはリンパ節中に見いだされ得る（Ｃａｔｅｌｌａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。ＵＬＢＰ３は、乳がん、神経膠芽腫細胞株Ｕ２５１、ヒト脳腫瘍、および頭頸部扁上皮がんにおいて発現される（Ｅｉｓｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；Ｂｕｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｂｒｙａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；ｄｅＫｒｕｉｊｆ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。腫瘍細胞は、可溶性および表面ＵＬＢＰ３を発現し、ＮＫ細胞活性を調節する（Ｍｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＵＬＢＰ３は、特定の上皮性腫瘍において過剰発現される。さらに、がん患者血清におけるＵＬＢＰ３レベルは、健常ドナーと比較して上昇した（Ｍｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０２９５】
ＶＰＳ１３Ｂ対立遺伝子は、小細胞肺がんにおいて変異する（Ｉｗａｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＶＰＳ１３Ｂの変異は、胃がんおよび結腸直腸がんにおいて観察された（Ａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０２９６】
ＶＰＳ１３Ｃのフレームシフト変異は、マイクロサテライト不安定性を有する胃がんおよび結腸直腸がんにおいて見いだされた（Ａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０２９７】
ＷＤＲ６２の発現は、胃がん組織および細胞株において有意に増加し、分化不良および予後不良に関連した。さらに、ＷＤＲ６２発現は、多剤耐性細胞において上昇した（Ｚｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３ｂ）。ＷＤＲ６２過剰発現は、中心体増幅に関連し、新しい有用な分化バイオマーカーおよび卵巣がんの潜在的治療標的であってもよい（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３ｂ）。
【０２９８】
エキソソーム結合ＷＤＲ９２は、アンフィレグリンｍＲＮＡを分解することによって、乳がん細胞浸潤を阻害する（Ｓａｅｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＷＤＲ９２は、腫瘍壊死因子−αおよびシクロヘキシミドによって誘導されるアポトーシスを増強する（Ｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０２９９】
ＷＮＴ５Ａは、分泌シグナル伝達タンパク質をコードする構造的に関連した遺伝子からなる、ＷＮＴ遺伝子ファミリーに属する。これらのタンパク質は、発がんに、そして胚形成中の細胞運命およびパターン形成の制御をはじめとするいくつかの発達過程に、関与するとされている。ＷＮＴ５Ａ遺伝子は、正順および非正順ＷＮＴ経路の双方を通じてシグナル伝達する、ＷＮＴファミリーのメンバーをコードする。このタンパク質は、７回膜貫通受容体ｆｒｉｚｚｌｅｄ−５およびチロシンキナーゼオーファン受容体２のリガンドである。このタンパク質は、胚形成中に発生経路を制御する上で重要な役割を果たす。このタンパク質はまた、発がんにおいて役割を果たしてもよい（ＲｅｆＳｅｑ，２００２）。ＷＮＴ５ＡはＣＲＣで過剰発現され、原発腫瘍と転移部位との一致率は７６％であった（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ａ）。ＷＮＴ５Ａは上方制御され、ヒト胃がん細胞、鼻咽頭がん、および膵臓がんにおける、上皮間葉転換および転移の重要な制御因子である（Ｋａｎｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０３００】
ＸＲＮ１は、星状細胞および星状細胞腫細胞において、多数の調節性ｍＲＮＡ経路に関与する可能性が高い（Ｍｏｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。ＸＲＮ１のノックダウンは、前立腺がん細胞におけるアンドロゲン受容体発現を阻害し、前立腺腺がんにおけるｍｉＲ−２０４／ＸＲＮ１軸において重要な役割を果たす（Ｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０３０１】
ゲノムワイド関連解析は、ＸＸＹＬＴ１における遺伝子多型性を同定した。これらの多型性は、非小細胞肺がん発症の感受性遺伝子座であることが提案されている（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２ｂ）。
【０３０２】
ＺＢＴＢ２０は、ＦｏｘＯ１の抑制を通じて非小細胞肺がんにおいて細胞増殖を促進する（Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ｂ）。ＺＢＴＢ２０の発現は、肝細胞がんにおいて増加し、予後不良に関連する（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１Ｃ）。ＺＢＴＢ２０遺伝子における多型性は、胃がんと関連している（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０３０３】
ＺＦＨＸ４は細胞分化を調節すると考えられ、その抑制は神経膠腫のない生存と関連している（Ｃｈｕｄｎｏｖｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。松果体領域の乳頭状腫瘍は、ＺＦＨＸ４の高い発現レベルを示す（Ｆｅｖｒｅ−Ｍｏｎｔａｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。ＺＦＨＸ４は、基底細胞がん感受性遺伝子座であることが判明した（Ｓｔａｃｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０３０４】
ＺＭＹＭ１は、エストロゲンシグナル伝達および乳がん増殖において機能する、ＺＮＦ１３１の主要な相互作用物質である（Ｏｈ  ａｎｄ  Ｃｈｕｎｇ，２０１２；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【発明を実施するための形態】
【０３０５】
免疫応答の刺激は、宿主免疫系によって外来性として認識された抗原の存在に依存する。腫瘍関連抗原の存在の発見は、宿主の免疫系を用いて腫瘍増殖に介入する可能性を高めた。免疫系の体液性および細胞性アームの双方を活用する様々な機構が、がん免疫療法のために目下探求されている。
【０３０６】
細胞性免疫応答の特定の要素は、腫瘍細胞を特異的に認識して破壊できる。腫瘍浸潤性細胞集団からの、または末梢血からのＴ細胞の単離は、がんに対する自然免疫防御において、このような細胞が重要な役割を果たすことを示唆する。特に、細胞質ゾル内に位置するタンパク質または欠陥リボソーム産物（ＤＲＩＰＳ）に由来する、通常は８〜１０アミノ酸残基の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）保有ペプチドのクラスＩ分子を認識するＣＤ８陽性Ｔ細胞が、この応答において重要な役割を果たす。ヒトのＭＨＣ分子はまた、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とも称される。
【０３０７】
本明細書の用法では、別段の記載がない限り、全ての用語は下述のとおり定義される。
【０３０８】
「Ｔ細胞応答」という用語は、生体外または生体内でペプチドによって誘導される、エフェクター機能の特異的増殖および活性化を意味するものとする。ＭＨＣクラスＩ拘束性細胞毒性Ｔ細胞では、エフェクター機能は、ペプチドパルスされた、ペプチド前駆体パルスされたまたは天然ペプチド提示標的細胞の溶解；好ましくはペプチドによって誘導されるインターフェロン−γ、ＴＮＦ−α、またはＩＬ−２であるサイトカインの分泌；好ましくはペプチドによって誘導されるグランザイムまたはパーフォリンであるエフェクター分子の分泌；または脱顆粒であってもよい。
【０３０９】
「ペプチド」という用語は、典型的に、隣接するアミノ酸のα−アミノ基とカルボニル基との間のペプチド結合によって互いに連結する、一連のアミノ酸残基を命名するために、本明細書で使用される。ペプチドは、好ましくは９アミノ酸長であるが、８アミノ酸長程度に短くあり得て、１０、１１、１２、１３または１４アミノ酸以上に長くあり得て、ＭＨＣクラスＩＩペプチド（本発明のペプチドの伸長された変種）の場合、それらは１５、１６、１７、１８、１９または２０アミノ酸長以上に長くあり得る。
【０３１０】
さらに「ペプチド」という用語は、典型的に、隣接するアミノ酸のα−アミノ基とカルボニル基との間のペプチド結合によって互いに連結する、一連のアミノ酸残基の塩を含むものとする。好ましくは、塩は、例えば、塩化物塩または酢酸塩（トリフルオロ酢酸塩）などの、ペプチドの薬学的に許容可能な塩である。ペプチドは生体内で塩ではないので、本発明によるペプチドの塩は、それらの生体内の状態がペプチドと実質的に異なることに留意すべきである。
【０３１１】
「ペプチド」という用語は、「オリゴペプチド」もまた含むものとする。「オリゴペプチド」という用語は、典型的に、隣接するアミノ酸のα−アミノ基とカルボニル基との間のペプチド結合によって互いに連結する、一連のアミノ酸残基を命名するために、本明細書で使用される。オリゴペプチドの長さは、その中で正しいエピトープまたはエピトープが保持されれば、本発明には重要でない。オリゴペプチドは、典型的に、約３０アミノ酸残基長未満であり、約１５アミノ酸長を超える。
【０３１２】
「ポリペプチド」という用語は、典型的に、隣接するアミノ酸のα−アミノ基とカルボニル基との間のペプチド結合によって互いに連結する、一連のアミノ酸残基を指す。正しいエピトープが保持されれば、ポリペプチドの長さは本発明にとって重要でない。ペプチドまたはオリゴペプチドという用語とは対照的に、ポリペプチドという用語は、約３０を超えるアミノ酸残基を含有する分子を指すことが意図される。
【０３１３】
ペプチド、オリゴペプチド、タンパク質またはこのような分子をコードするポリヌクレオチドは、免疫応答を誘導できれば「免疫原性」である（したがって本発明における「免疫原」である）。本発明では、免疫原性は、より具体的には、Ｔ細胞応答を誘導する能力と定義される。したがって「免疫原」は、免疫応答を誘導できる分子であり、本発明では、Ｔ細胞応答を誘導できる分子である。別の態様では、免疫原は、それに対する特異的抗体またはＴＣＲを生じさせるのに使用される、ペプチド、ペプチドとＭＨＣの複合体、オリゴペプチド、および／またはタンパク質であり得る。
【０３１４】
クラスＩ  Ｔ細胞「エピトープ」は、クラスＩ  ＭＨＣ受容体に結合している短いペプチドを必要とし、三成分複合体（ＭＨＣクラスＩα鎖、β−２−ミクログロブリン、およびペプチド）を形成し、それは、適切な親和性でＭＨＣ／ペプチド複合体に結合する適合Ｔ細胞受容体を保有するＴ細胞によって、認識され得る。ＭＨＣクラスＩ分子に結合するペプチドは、典型的に８〜１４アミノ酸長であり、最も典型的には９アミノ酸長である。
【０３１５】
ヒトにおいては、ＭＨＣクラスＩ分子（ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）ともまた称されるヒトのＭＨＣ分子）をコードする、３つの異なる遺伝子座、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、およびＨＬＡ−Ｃがある。ＨＬＡ−Ａ＊０１、ＨＬＡ−Ａ＊０２、およびＨＬＡ−Ｂ＊０７は、これらの遺伝子座から発現され得る、異なるＭＨＣクラスＩ対立遺伝子の例である。
【０３１６】
【表４−１】
2018183174.tif 000017
【表４−２】
2018183174.tif 000018
【０３１７】
本発明のペプチドは、好ましくは、本明細書に記載の本発明のワクチンに包含される場合、指定されたＡ＊０２、Ａ＊２４またはクラスＩＩの対立遺伝子に好ましくは結合する。ワクチンはまた、汎結合ＭＨＣクラスＩＩペプチドを含んでもよい。したがって、本発明のワクチンを使用して、Ａ＊０２陽性の患者においてがんを治療し得る一方で、これらのペプチドの汎結合特性のために、ＭＨＣクラスＩＩアロタイプを選択する必要はない。
【０３１８】
本発明のＡ＊０２ペプチドが、例えばＡ＊２４などの別の対立遺伝子に結合するペプチドと組み合わされた場合、ＭＨＣクラスＩ対立遺伝子のいずれか単独による対処と比較して、任意の患者集団のより高い割合を治療し得る。大多数の集団では、対立遺伝子のいずれか単独によって、５０％未満の患者が対処され得た一方で、ＨＬＡ−Ａ＊２４およびＨＬＡ−Ａ＊０２エピトープを含んでなるワクチンは、任意の妥当な集団で、少なくとも６０％の患者を治療し得る。具体的には、以下の様々な地域において、これらの対立遺伝子の少なくとも１つが、以下の百分率の患者で陽性である：米国６１％、西欧６２％、中国７５％、韓国７７％、日本８６％。（ｗｗｗ．ａｌｌｅｌｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ．ｎｅｔから計算された）。
【０３１９】
好ましい実施形態では、「ヌクレオチド配列」という用語は、デオキシリボヌクレオチドのヘテロ重合体を指す。
【０３２０】
特定のペプチド、オリゴペプチド、またはポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、天然起源であってもよく、またはそれらは合成的に構築されてもよい。一般に、本発明のペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質をエンコードするＤＮＡ断片は、ｃＤＮＡフラグメントと短いオリゴヌクレオチドリンカーから構築され、またはひと続きのオリゴヌクレオチドから構築されて、微生物またはウイルスオペロンに由来する調節因子を含んでなる、組換え転写単位で発現できる合成遺伝子が提供される。
【０３２１】
本明細書の用法では「ペプチドをコーディング（またはコード）するヌクレオチド」という用語は、配列が、例えば、ＴＣＲの製造に有用な樹状細胞または別の細胞株によって発現される生体系と適合性である、人工（人造）開始および停止コドンを含むペプチドをコードする、ヌクレオチド配列を指す。
【０３２２】
本明細書の用法では、核酸配列への言及は、一本鎖および二本鎖の核酸の双方を含む。したがって、例えば、特異的配列は、文脈上明らかに別の意味が示唆されない限り、このような配列の一本鎖ＤＮＡ、このような配列とその補体との二本鎖（二本鎖ＤＮＡ）、およびこのような配列の補体を指す。
【０３２３】
「コード領域」という用語は、その天然ゲノム環境内で、遺伝子の発現産物を天然にまたは正常にコードする遺伝子の部分、すなわち、遺伝子の天然発現産物を生体内でコードする領域を指す。
【０３２４】
コード領域は、非変異（「正常」）、変異または改変遺伝子に由来し得て、またはＤＮＡ合成技術の当業者に周知の方法を使用して実験室で完全に合成された、ＤＮＡ配列または遺伝子にさえ由来し得る。
【０３２５】
「発現産物」という用語は、遺伝子の、そして遺伝コード縮重に起因する同等物をコードし、したがって同一アミノ酸をコードする任意の核酸配列の天然翻訳産物である、ポリペプチドまたはタンパク質を意味する。
【０３２６】
コード配列に言及する場合、「フラグメント」という用語は、その発現産物が、完全コード領域の発現産物と本質的に同一の生物学的機能または活性を保つ、完全未満のコード領域を含んでなるＤＮＡの部分を意味する。
【０３２７】
「ＤＮＡ断片」という用語は、別々のフラグメントの形態の、またはより大型のＤＮＡコンストラクトの構成要素としての、ＤＮＡポリマーを指し、それは、実質的に純粋な、すなわち、混入内因性物質を含まない形態で、例えばクローニングベクターを使用した標準生化学的方法によって、断片およびその構成ヌクレオチド配列が同定、操作、および回収できる量または濃度で、少なくとも１回単離されたＤＮＡに由来する。このような断片は、典型的に真核生物遺伝子内に存在する内部非翻訳配列またはイントロンによって中断されていない、読み取り枠の形態で提供される。非翻訳ＤＮＡ配列は、それがコード領域の操作または発現を妨げない、読み取り枠下流に存在してもよい。
【０３２８】
「プライマー」という用語は、短い核酸配列を意味し、それはＤＮＡの１本鎖と対合し得て、ＤＮＡポリメラーゼがそこでデオキシリボヌクレオチド鎖合成を開始する、遊離３'−ＯＨ末端を提供する。
【０３２９】
「プロモーター」という用語は、転写を開始するためのＲＮＡポリメラーゼ結合に関与する、ＤＮＡの領域を意味する。
【０３３０】
「単離」という用語は、物質が、その元の環境（例えば、それが天然起源であれば天然環境）から取り出されていることを意味する。例えば、生きている動物に存在する天然ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されていないが、天然システムで共存する物質の一部または全部から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されている。このようなポリヌクレオチドはベクターの一部であり得て、および／またはこのようなポリヌクレオチドまたはポリペプチドは組成物の一部であり得るが、このようなベクターまたは組成物がその天然環境の一部でないと言う意味では、なおも単離されている。
【０３３１】
本発明によって開示されるポリヌクレオチド、および組換えまたは免疫原性ポリペプチドは、「精製」形態であってもよい。「精製」という用語は、完全に純粋である必要はなく；むしろ、それは相対的定義であることが意図されて、これらの用語が当業者によって理解されるように、高度に精製された調製物、または部分的にのみ精製された調製物を含み得る。例えば、ｃＤＮＡライブラリーから単離された個々のクローンは、電気泳動的に均一に、従来法で精製されている。少なくとも１桁、好ましくは２または３桁、より好ましくは４または５桁までの、出発原料または天然物質の精製が明示的に検討される。さらに、重量基準で、好ましくは９９．９９９％、または少なくとも９９．９９％または９９．９％；さらに望ましくは９９％以上の純度を有する、特許請求されるポリペプチドが明示的に包含される。
【０３３２】
本発明によって開示される核酸およびポリペプチド発現産物、ならびにこのような核酸および／またはこのようなポリペプチドを含有する発現ベクターは、「富化形態」であってもよい。本明細書の用法では、「濃縮」という用語は、物質濃度が、（例えば）その天然濃度の少なくとも約２、５、１０、１００、または１０００倍であることを意味し、有利には重量基準で０．０１％、好ましくは重量基準で少なくとも約０．１％である。重量基準で約０．５％、１％、５％、１０％、および２０％の富化調製物もまた、検討される。本発明を構成する、配列、コンストラクト、ベクター、クローン、およびその他の物質は、有利には、富化または単離形態であり得る。「活性フラグメント」という用語は、通常は、単独で、または任意選択的に適切なアジュバントと共に、またはベクター中で、例えば、ウサギまたはマウスのようなそしてまたヒトをはじめとする哺乳類などの動物に投与すると免疫応答を生じる（すなわち、免疫原性を有する）ペプチド、ポリペプチドまたは核酸配列のフラグメントを意味し、このような免疫応答は、ヒトなどのレシピエント動物内でＴ細胞応答を刺激する形態を取る。代案としては、「活性フラグメント」はまた、生体外Ｔ細胞応答を誘導するのに使用されてもよい。
【０３３３】
本明細書の用法では、ポリペプチドとの関連で使用される場合、「部分」、「断片」、および「フラグメント」という用語は、アミノ酸残基などの連続する残基の配列を指し、その配列はより大型の配列のサブセットを形成する。例えば、ポリペプチドが、トリプシンまたはキモトリプシンなどの一般的エンドペプチダーゼのいずれかによって処理されれば、このような処理から得られるオリゴペプチドは、出発ポリペプチドの部分、断片またはフラグメントに相当するであろう。ポリヌクレオチドに関して使用される場合、これらの用語は、いずれかのエンドヌクレアーゼによる前記ポリヌクレオチドの処理によって生じる生成物を指す。
【０３３４】
本発明によると、配列に言及する場合、「同一性百分率」または「パーセント同一」という用語は、比較される配列（「比較配列」）と、記載されまたは特許請求される配列（「参照配列」）とのアライメント後に、配列が、特許請求されまたは記載される配列と比較されることを意味する。次に同一性百分率は、次式に従って判定される：
同一性百分率＝１００［１−（Ｃ／Ｒ）］
式中、Ｃは、参照配列と比較される配列との間のアライメント長にわたる、参照配列と比較配列の間の差異の数であり、
（ｉ）比較配列中に対応する整列塩基またはアミノ酸を有しない、参照配列中の各塩基またはアミノ酸、および
（ｉｉ）参照配列中の各ギャップ、および
（ｉｉｉ）比較配列中の整列塩基またはアミノ酸と異なる、参照配列中の各整列塩基またはアミノ酸が差異を構成して、
（ｉｉｉｉ）アライメントは、整合配列の１位から開始しなくてはならず；
Ｒは、比較配列とのアライメント長にわたる参照配列中の塩基またはアミノ酸の数であり、参照配列中に生じる任意のギャップもまた、塩基またはアミノ酸として数えられる。
【０３３５】
比較配列と、それに対して同一性百分率が上のように計算される参照配列との間に、特定の最小同一性百分率とほぼ同じまたはそれを上回るアライメントが存在すれば、その中に、上記のように計算された同一性百分率が特定の同一性百分率未満であるアライメントが存在したとしても、比較配列は、参照配列との特定の最小同一性百分率を有する。
【０３３６】
したがって上述したように、本発明は、配列番号１〜配列番号３８８、または配列番号１〜配列番号３８８と８８％相同的であるその変異型、またはＴ細胞を前記ペプチドと交差反応させるその変異型からなる群から選択される配列を含んでなる、ペプチドを提供する。本発明のペプチドは、ヒト主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子または前記ペプチドの伸長バージョンをクラスＩＩに結合する能力を有する。
【０３３７】
本発明では、「相同的」という用語は，２つのアミノ酸配列、すなわちペプチドまたはポリペプチド配列の配列間の同一性の程度を指す（上の同一性百分率を参照されたい）。前述の「相同性」は、比較される配列にわたり、最適条件下でアライメントされた２つの配列を比較することで判定される。このような配列相同性は、例えばＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズムを使用してアライメントを作成することで、計算され得る。一般に利用できる配列解析ソフトウェア、より具体的には、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ、ＧＥＮＥＴＹＸまたはその他のツールが、公共データベースによって提供される。
【０３３８】
当業者は、特定のペプチドの変異型によって誘導されるＴ細胞が、ペプチドそれ自体と交差反応できるかどうかを評価できるであろう（Ａｐｐａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；Ｃｏｌｏｍｂｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；Ｆｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｚａｒｅｍｂａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。
【０３３９】
所与のアミノ酸配列の「変異型」によって、本発明者らは、ペプチドが、配列番号１〜配列番号３８８からなる所与のアミノ酸配列からなるペプチドと実質的に同様に、ＨＬＡ分子となおも結合できるように、（例えば、それらを別の天然アミノ酸残基の側鎖で、またはその他の側鎖で置換することにより）例えば、アミノ酸の１つまたは２つの残基の側鎖が変化することを意味する。例えば、ペプチドは、それがＨＬＡ−Ａ＊０２または−ＤＲなどの適切なＭＨＣ分子の結合溝と相互作用して結合する能力を改善せずとも、少なくとも維持するように修飾されてもよく、このようにしてそれは、活性化ＣＴＬのＴＣＲに結合する能力を改善せずとも、少なくとも維持する。
【０３４０】
これらのＴ細胞は、引き続いて細胞と交差反応して、本発明の態様で定義される同族ペプチドの天然アミノ酸配列を含有するポリペプチドを発現する細胞を殺滅し得る。学術文献およびデータベース（Ｒａｍｍｅｎｓｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｇｏｄｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）から演繹され得るように、ＨＬＡ結合ペプチドの特定の位置は、典型的に、アンカー残基であり、結合溝を構成するポリペプチド鎖の極性、電気物理的、疎水性、および空間特性によって画定されるＨＬＡ受容体の結合モチーフと適合する、コア配列を形成する。したがって、当業者は、既知のアンカー残基を保つことで、配列番号１〜配列番号３８８に記載されるアミノ酸配列を修飾でき、このような変異型がＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子に結合する能力を維持するかどうかを判定できるであろう。本発明の変異型は、活性化Ｔ細胞のＴＣＲに結合する能力を維持し、それは引き続いて、本発明の態様で定義されるような同族ペプチドの天然アミノ酸配列を含有するポリペプチドを発現する細胞と交差反応して、それを殺滅し得る。
【０３４１】
本明細書で開示される元の（未修飾）ペプチドは、特に明記されない場合は、ペプチド鎖内の異なる、おそらくは選択的な部位における、１つまたは複数の残基の置換によって修飾され得る。好ましくはこれらの置換は、アミノ酸鎖の末端に位置する。このような置換は、保存的性質であってもよく、例えば、疎水性アミノ酸が別の疎水性アミノ酸によって置換されるなど、構造および特徴の類似したアミノ酸によってアミノ酸が置換される。さらにより保存的な置換は、ロイシンのイソロイシンによる置換などの、同一または類似サイズおよび化学的性質のアミノ酸の置換である。天然起源相同タンパク質ファミリーの配列多様性の研究では、特定のアミノ酸置換は、他よりも耐容されることが多く、これらは、元のアミノ酸とその置換物との間のサイズ、電荷、極性、および疎水性の類似性との相関を示すことが多く、これが「保存的置換」の定義の基礎である。
【０３４２】
保存的置換は、本明細書では、以下の５つのグループの１つの中の交換として定義される：グループ１−小型脂肪族、非極性またはわずかに極性の残基（Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ）；グループ２−極性の負に帯電した残基およびそれらのアミド（Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ）；グループ３−極性の正に帯電した残基（Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ）；グループ４−大型脂肪族非極性残基（Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ）；およびグループ５−大型芳香族残基（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）。
【０３４３】
より保存的でない置換は、アラニンのイソロイシン残基による置換などの、類似した特徴を有するがサイズがいくらか異なる別のアミノ酸による置換を伴うかもしれない。高度に非保存的な置換は、極性アミノ酸の、または塩基性アミノ酸の酸性アミノ酸による置換を伴うかもしれない。しかし化学効果は完全に予測可能でなく、過激な置換は単純な化学的原理からは予測できない偶然の効果を生じさせる可能性があるので、このような「過激な」置換は、潜在的に無効であるとして却下され得ない。
【０３４４】
もちろんこのような置換には、通常のＬ−アミノ酸以外の構造体が関与してもよい。したがってＤ−アミノ酸が、本発明の抗原性ペプチドに通常見いだされるＬ−アミノ酸を置換するかもしれず、依然として本明細書の開示に包含される。さらに、非標準アミノ酸（すなわち、一般的な天然タンパク質新生アミノ酸以外）もまた置換目的で使用して、本発明による免疫原および免疫原性ポリペプチドが製造されてもよい
【０３４５】
２つ以上の位置における置換が、以下に定義されるように実質的に同等のまたはそれを超える抗原活性のあるペプチドをもたらすことが判明した場合、これらの置換の組み合わせを試験して、置換の組み合わせが、ペプチドの抗原性に相加または相乗効果をもたらすかどうかが判定される。最大でも、ペプチド内の４つ以上の位置を超えて同時に置換されることはない。
【０３４６】
本明細書で示されるようなアミノ酸配列から本質的になるペプチドは、非修飾ペプチドと比較すると、ヒト主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩまたはＩＩ分子に結合する能力が、実質的に変化したり悪影響を受けたりすることなく交換される、１つまたは２つの非アンカーアミノ酸を有し得る（アンカーモチーフについては下記を参照されたい）。別の実施形態では、本明細書で示されるようなアミノ酸配列から本質的になるペプチドにおいては、ヒト主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩまたはＩＩ分子に結合する能力が非修飾ペプチドと比較して実質的に変化したり悪影響を受けることなく、１つまたは２つのアミノ酸が、それらの保存的交換パートナー（以下を参照されたい）で交換され得る。
【０３４７】
Ｔ細胞受容体との相互作用に実質的に寄与しないアミノ酸残基は、その組み込みが、Ｔ細胞反応性に実質的に影響を及ぼさず、関連ＭＨＣとの結合を排除しない、その他のアミノ酸での置換によって修飾され得る。したがって与えられた但し書きを除いて、本発明のペプチドは、与えられたようなアミノ酸配列またはそれらの部分または変異型を含む、任意のペプチド（本発明者らは、その用語にオリゴペプチドまたはポリペプチドを含める）であってもよい。
【０３４８】
【表５−１】
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【表５−２】
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【０３４９】
【表６】
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【０３５０】
より長い（伸長された）ペプチドもまた、適切であってもよい。ＭＨＣクラスＩエピトープは、通常は８〜１１アミノ酸長であるが、実際のエピトープを含むより長いペプチドまたはタンパク質から、ペプチドプロセッシングによって作製することが可能である。実際のエピトープ側面に位置する残基は、プロセッシング中に実際のエピトープを曝露させるのに必要なタンパク質分解切断に、実質的に影響を及ぼさない残基であることが好ましい。
【０３５１】
本発明のペプチドは、最大４個のアミノ酸によって伸長させ得て、すなわち４：０〜０：４の間のあらゆる組み合わせで、どちらかの末端に１，２、３または４個のアミノ酸が付加され得る。本発明による伸長の組み合わせは、表７にある。
【０３５２】
【表７】
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【０３５３】
伸長／延長のためのアミノ酸は、元のタンパク質配列のペプチドまたは任意のその他のアミノ酸であり得る。伸長を利用して、ペプチドの安定性または溶解度を高め得る。
【０３５４】
したがって本発明のエピトープは、天然起源腫瘍関連または腫瘍特異的エピトープと同一であってもよく、またはそれらが実質的に同一の抗原活性を有しさえすれば、４つ以下の残基が参照ペプチドと異なるエピトープを含んでもよい。
【０３５５】
代案の実施形態では、ペプチドは、４つを超えるアミノ酸で、好ましくは最大３０アミノ酸の全長まで、片側または両側で伸長される。これは、ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドをもたらしてもよい。ＭＨＣクラスＩＩへの結合は、当該技術分野で公知の方法によって試験される得る。
【０３５６】
したがって、本発明は、ＭＨＣクラスＩエピトープのペプチドおよび変異型を提供し、ペプチドまたは変異型は、８〜１００、好ましくは８〜３０、最も好ましくは８〜１４、すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４アミノ酸の全長を有し、伸長されたクラスＩＩ結合ペプチドの場合、長さはまた、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１または２２アミノ酸であり得る。
【０３５７】
もちろん、本発明によるペプチドまたは変異型は、ヒト主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩまたはＩＩの分子に結合する能力を有する。ペプチドまたは変異型のＭＨＣ複合体への結合は、当該技術分野で既知の方法によって試験されてもよい。
【０３５８】
好ましくは、本発明によるペプチドに特異的なＴ細胞を置換ペプチドについて試験する場合、置換ペプチドが背景に対して最大溶解増加の半分を達成するペプチド濃度は、約１ｍＭ以下、好ましくは約１μＭ以下、より好ましくは約１ｎＭ以下、さらにより好ましくは約１００ｐＭ以下、最も好ましくは約１０ｐＭ以下である。置換ペプチドが、２人以上、少なくとも２人、より好ましくは３人の個人からのＴ細胞によって認識されることもまた好ましい。
【０３５９】
本発明の特に好ましい実施形態では、ペプチドは、配列番号に１〜配列番号３８８に記載のアミノ酸配列からなり、またはそれから本質的になる。
【０３６０】
「から本質的になる」は、本発明によるペプチドが、配列番号１〜配列番号３８８のいずれかに記載の配列またはその変異型に加えて、ＭＨＣ分子エピトープのエピトープとして機能するペプチドの一部を必ずしも構成しない、追加的なＮおよび／またはＣ末端に位置するアミノ酸の一連の配列を含有することを意味するものとする。
【０３６１】
それでもなお、これらの一連の配列は、本発明によるペプチドの細胞への効率的な導入を提供するのに重要であり得る。本発明の一実施形態では、ペプチドは、例えば、ＮＣＢＩ、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｘ００４９７に由来する、ＨＬＡ−ＤＲ抗原関連不変鎖（ｐ３３、以下の「Ｉｉ」）の８０個のＮ末端アミノ酸を含んでなる、融合タンパク質の一部である。その他の融合物においては、本発明のペプチドは、本明細書に記載されるような抗体、またはその機能的部分に、特に抗体の配列に、前記抗体によって特異的に標的化されるように融合し得て、または例えば、本明細書に記載されるような樹状細胞に対して特異的な抗体に、またはその中に融合し得る。
【０３６２】
さらにペプチドまたは変異型は、より強力な免疫応答を引き起こすために、安定性および／またはＭＨＣ分子への結合を改善するようにさらに修飾されてもよい。ペプチド配列のこのような最適化方法は当該技術分野で周知であり、例えば、逆ペプチド結合または非ペプチド結合の導入が挙げられる。
【０３６３】
逆ペプチド結合においては、アミノ酸残基はペプチド（−ＣＯ−ＮＨ−）結合によって連結せず、ペプチド結合が逆転する。このようなレトロ−インベルソペプチド模倣剤は、例えば、参照により本明細書に援用される、Ｍｅｚｉｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ（１９９７）（Ｍｅｚｉｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）に記載されるものなどの当該技術分野で既知の方法を使用して製造されてもよい。このアプローチは、側鎖の方向でなく主鎖に関与する変化を含有する、擬ペプチドの生成を伴う。Ｍｅｚｉｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｅｚｉｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）は、ＭＨＣ結合およびＴヘルパー細胞応答のために、これらの擬ペプチドが有用であることを示す。ＣＯ−ＮＨペプチド結合の代わりにＮＨ−ＣＯ結合を含有するレトロインバースペプチドは、タンパク質分解に対してはるかにより高い抵抗性がある。
【０３６４】
非ペプチド結合は、例えば、−ＣＨ２−ＮＨ、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、および−ＣＨ２ＳＯ−である。米国特許第４，８９７，４４５号明細書は、標準手順によって合成されるポリペプチド、およびＮａＣＮＢＨ３の存在下でアミノアルデヒドとアミノ酸を反応させることで合成される非ペプチド結合が関与する、ポリペプチド鎖中の非ペプチド結合（−ＣＨ２−ＮＨ）を固相合成する方法を提供する。
【０３６５】
上述の配列を含んでなるペプチドは、それらのアミノおよび／またはカルボキシ末端に存在する追加的な化学基と共に合成して、ペプチドの安定性、生物学的利用能、および／または親和性を高めてもよい。例えば、カルボベンゾキシル、ダンシル、またはｔ−ブチルオキシカルボニル基などの疎水性基が、ペプチドのアミノ末端に付加されてもよい。同様に、アセチル基または９−フルオレニルメトキシ−カルボニル基が、ペプチドのアミノ末端に配置されてもよい。さらに、疎水性基、ｔ−ブチルオキシカルボニル、またはアミド基が、ペプチドのカルボキシ末端に付加されてもよい。
【０３６６】
さらに、本発明のペプチドは、それらの立体配置を改変するように合成されてもよい。例えば、通常のＬ異性体でなく、ペプチドの１つまたは複数のアミノ酸残基のＤ異性体が使用されてもよい。なおもさらに、本発明のペプチドのアミノ酸残基の少なくとも１つは、周知の非天然起源アミノ酸残基の１つで置換されてもよい。これらのような変化は、本発明のペプチドの安定性、生物学的利用能および／または結合作用の増加に役立ってもよい。
【０３６７】
同様に、本発明のペプチドまたは変異型は、ペプチド合成の前または後のどちらかに、特定のアミノ酸を反応させることで化学的に修飾されてもよい。このような修飾の例は、当該技術分野で周知であり、例えば、参照により本明細書に援用される、Ｒ．Ｌｕｎｄｂｌａｄ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ，３ｒｄ  ｅｄＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，２００４（Ｌｕｎｄｂｌａｄ，２００４）に要約される。アミノ酸の化学修飾としては、これに限定されるものではないが（ａｌｔｈｏｕｇｈ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒｅｔｏ）、アシル化、アミジン化、リジンのピリドキシル化、還元アルキル化、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるアミノ基のトリニトロベンジル化、システインのシステイン酸への過ギ酸酸化によるカルボキシル基のアミド修飾およびスルフヒドリル修飾、水銀誘導体形成、その他のチオール化合物との混合ジスルフィド形成、マレイミドとの反応、ヨード酢酸またはヨードアセトアミドによるカルボキシメチル化、およびアルカリ性ｐＨでのシアネートによるカルバモイル化による修飾が挙げられるが、これに限定されるものではない（ｉｓ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）。この点において、当業者は、タンパク質の化学修飾に関するより詳細な手順について、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｅｄｓ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  ＮＹ  １９９５−２０００）（Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）の第１５章を参照されたい。
【０３６８】
簡単に述べると、例えばタンパク質中のアルギニル残基の修飾は、付加体を形成するためのフェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、および１，２−シクロヘキサンジオンなどの隣接するジカルボニル化合物の反応に基づくことが多い。別の例は、メチルグリオキサールとアルギニン残基の反応である。システインは、リジンおよびヒスチジンなどのその他の求核性部位の同時の修飾なしに修飾され得る。その結果、システイン修飾のために多数の試薬が利用可能である。Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈなどの会社のウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ．ｃｏｍ）が、特定の試薬に関する情報を提供する。
【０３６９】
タンパク質中のジスルフィド結合の選択的還元もまた、一般的である。ジスルフィド結合は、生物医薬品の加熱処理中に形成されて酸化され得る。ウッドワード試薬Ｋを使用して、特定のグルタミン酸残基が修飾されてもよい。Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミドを利用して、リジン残基とグルタミン酸残基との間に分子内架橋が形成され得る。例えば、ジエチルピロ炭酸は、タンパク質中のヒスチジル残基修飾のための試薬である。ヒスチジンはまた、４−ヒドロキシ−２−ノネナールを使用して修飾され得る。リジン残基およびその他のα−アミノ基の反応物は、例えば、ペプチドの表面への結合またはタンパク質／ペプチド架橋で有用である。リジンはポリ（エチレン）グリコールの付着部位であり、タンパク質のグリコシル化の主要な修飾部位である。タンパク質中のメチオニン残基は、例えば、ヨードアセトアミド、ブロモエチルアミン、およびクロラミンＴによって修飾され得る。
【０３７０】
テトラニトロメタンおよびＮ−アセチルイミダゾールを使用して、チロシル残基が修飾され得る。ジチロシンの形成を通じた架橋は、過酸化水素／銅イオンによって達成され得る。
【０３７１】
トリプトファンの修飾に関する最近の研究では、Ｎ−ブロモサクシニミド、臭化２−ヒドロキシ−５−ニトロベンジルまたは３−ブロモ−３−メチル−２−（２−ニトロフェニルメルカプト）−３Ｈ−インドール（ＢＰＮＳ−スカトール）が使用されている。
【０３７２】
ＰＥＧによる治療用タンパク質およびペプチドの成功裏の修飾が、循環半減期の延長に関連することが多い一方で、タンパク質と、グルタルアルデヒド、ポリエチレングリコールジアクリレート、およびホルムアルデヒドとの架橋は、ハイドロゲル調製のために使用される。免疫療法のためのアレルゲンの化学修飾は、カリウムシアネートでのカルバミル化によって達成されることが多い。
【０３７３】
ペプチドが修飾されまたは非ペプチド結合を含む、ペプチドまたは変異型は、本発明の好ましい実施形態である。一般に、ペプチドおよび変異型（少なくともアミノ酸残基間にペプチド結合を含有するもの）は、Ｌｕｋａｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｌｕｋａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１）によって、そしてその中で引用される参考文献によって開示される、Ｆｍｏｃ−ポリアミド様式の固相ペプチド合成によって合成されてもよい。一時的なＮ−アミノ基保護は、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基によってもたらされる。この高度に塩基不安定性の保護基の反復性切断は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンを使用して実施される。側鎖官能基は、それらのブチルエーテル（セリン、スレオニン、およびチロシンの場合）、ブチルエステル（グルタミン酸およびアスパラギン酸の場合）、ブチルオキシカルボニル誘導体（リジンおよびヒスチジンの場合）、トリチル誘導体（システインの場合）、および４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル誘導体（アルギニンの場合）として保護されてもよい。グルタミンまたはアスパラギンがＣ末端残基である場合、側鎖アミド官能基を保護するために、４，４'−ジメトキシベンズヒドリル基が活用される。固相担体は、ジメチルアクリルアミド（主鎖単量体）、ビスアクリロイルエチレンジアミン（架橋剤）、およびアクリロイルサルコシンメチルエステル（機能化因子）の３つの単量体から構成される、ポリジメチル−アクリルアミドポリマーをベースとする。使用されるペプチド−対−樹脂の切断可能な結合因子は、酸不安定性４−ヒドロキシメチル−フェノキシ酢酸誘導体である。逆転Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシル−カルボジイミド／１ヒドロキシベンゾトリアゾール媒介共役手順を使用して付加されるアスパラギンおよびグルタミンを除いて、全てのアミノ酸誘導体は、それらのあらかじめ形成された対称的な無水物誘導体として付加される。全ての共役および脱保護反応は、ニンヒドリン、トリニトロベンゼンスルホン酸またはイサチン（ｉｓｏｔｉｎ）試験手順を使用してモニターされる。合成完了時に、ペプチドは樹脂担体から切断され、同時に、５０％スカベンジャー混合物を含有する９５％トリフルオロ酢酸での処理によって、側鎖保護基が除去される。一般に使用されるスカベンジャーとしては、エタンジチオール、フェノール、アニソール、および水が挙げられ、正確な選択は、合成されるペプチドの構成アミノ酸に左右される。ペプチドの合成のための固相法と溶液相法の組み合わせもまた、可能である（例えば、（Ｂｒｕｃｋｄｏｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）、およびその中で引用される参考文献を参照されたい）。
【０３７４】
トリフルオロ酢酸は、真空蒸発によって除去され、引き続くジエチルエーテルを用いた磨砕は、粗製ペプチドをもたらす。存在するあらゆるスカベンジャーは、単純な抽出手順によって除去され、それは水相の凍結乾燥に際して、スカベンジャーを含まない粗製ペプチドを与える。ペプチド合成のための試薬は、通常、例えば、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ，ＵＫ）から入手できる。
【０３７５】
精製は、再結晶化、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、および（通常は）例えば、アセトニトリル／水勾配分離を使用した逆相高速液体クロマトグラフィーなどの技術の任意の１つまたは組み合わせによって実施されてもよい。
【０３７６】
ペプチドの分析は、薄層クロマトグラフィー、電気泳動法、特にキャピラリー電気泳動法、固相抽出（ＣＳＰＥ）、逆相高速液体クロマトグラフィー、酸加水分解後のアミノ酸分析を使用して、高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量分光分析によって、ならびにＭＡＬＤＩおよびＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ質量分光分析によって、実施されてもよい。
【０３７７】
本発明のペプチドの同定のために、約３０００個の正常（健常）組織サンプルからのＲＮＡ発現データ（Ｌｏｎｓｄａｌｅ，２０１３）のデータベースが、生命臓器系ではほとんど発現されず、その他の重要な臓器系では低発現される遺伝子について、スクリーニングされた。次に、がん関連ペプチドが、これらの遺伝子のタンパク質産物から誘導され、本明細書に記載されるようなＸＰＲＥＳＩＤＥＮＴ（商標）プラットフォームを使用して、質量分析によって同定された。
【０３７８】
過剰提示ペプチドを選択するために、中央値サンプル提示ならびに反復試験変動を示す、提示プロファイルが計算された。プロファイルは、目的腫瘍実体のサンプルを正常なサンプルのベースラインに並置させる。次に、線形混合効果モデルのｐ値を計算し（Ｐｉｎｈｅｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）、偽発見率によって複数試験について補正することで（Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ  ａｎｄ  Ｈｏｃｈｂｅｒｇ，１９９５）、これらの各プロファイルが過剰提示スコアに統合され得る（実施例１参照）。
【０３７９】
質量分析によるＨＬＡリガンドの同定と相対的定量化のために、衝撃凍結サンプルからのＨＬＡ分子が精製されて、ＨＬＡ関連ペプチドが単離された。単離ペプチドを分離して、オンラインナノエレクトロスプレーイオン化（ｎａｎｏＥＳＩ）液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）実験によって配列を同定した。得られたペプチド配列は、がんサンプル（３７０人のドナーからのＮ＝３７７個のＡ＊０２陽性サンプル、Ｎ＝２０４個のＡ＊２４陽性サンプル）から記録された、天然腫瘍関連ペプチド（ＴＵＭＡＰ）のフラグメンテーションパターンと、同一配列の対応する合成標準ペプチドのフラグメンテーションパターンとの比較によって確認された。ペプチドは、原発性腫瘍のＨＬＡ分子のリガンドとして直接、同定されたので、これらの結果は、５７４人のがん患者から入手された原発性がん組織上における、同定されたペプチドの天然プロセッシングおよび提示の直接的証拠を提供する。
【０３８０】
発見パイプラインＸＰＲＥＳＩＤＥＮＴ（登録商標）ｖ２．１（例えば、その内容全体が参照により本明細書に援用される、米国特許第２０１３−００９６０１６号明細書を参照されたい）は、いくつかの異なる非がん性組織および臓器と比較した、がん組織上のＨＬＡ拘束性ペプチドレベルの直接相対定量化に基づく、妥当な過剰提示ペプチドワクチン候補の同定と選択ができるようにする。これは、独自仕様のデータ解析パイプラインで処理された獲得ＬＣ−ＭＳデータを使用して、配列同定のためのアルゴリズム、スペクトルクラスタリング、イオン計数、滞留時間アライメント、電荷状態のデコンボリューション、および正規化を組み合わせる、無標識示差定量化の開発によって達成された。
【０３８１】
各ペプチドおよびサンプルの誤差推定値を含む、提示レベルが確立された。腫瘍組織上で排他的に提示されるペプチド、および腫瘍において過剰提示されるペプチドが、非がん性の組織および臓器との比較で同定されている。
【０３８２】
組織サンプルからのＨＬＡペプチド複合体は精製されてＨＬＡ結合ペプチドが単離され、ＬＣ−ＭＳによって分析された（実施例を参照されたい）。本出願に含まれる全てのＴＵＭＡＰは、この原発性がんサンプルに対するアプローチを用いて同定され、それらの原発性神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん，、または子宮がん上の提示が確認された。
【０３８３】
複数のがんおよび正常組織上で同定されたＴＵＭＡＰは、無標識ＬＣ−ＭＳデータのイオン計数を使用して定量化された。方法は、ペプチドのＬＣ−ＭＳシグナル面積が、サンプル中のその存在量と相関すると仮定する。様々なＬＣ−ＭＳ実験におけるペプチドの全ての定量的シグナルは、中心傾向に基づいて正規化され、サンプルあたりで平均化されて、提示プロファイルと称される棒グラフにマージされた。提示プロファイルは、タンパク質データベース検索、スペクトルクラスタリング、電荷状態デコンボリューション（除電）、および滞留時間アライメントおよび正規化のような、異なる解析法を統合する。
【０３８４】
さらに、発見パイプラインＸＰＲＥＳＩＤＥＮＴ（登録商標）ｖ２．１．は、がんまたはその他の感染組織上で、ＭＨＣ拘束性、好ましくはＨＬＡ拘束性のペプチドレベルの直接絶対定量化ができるようにする。簡単に述べると、分析された組織サンプルの全ＤＮＡ含有量から、総細胞数が計算された。組織サンプル中のＴＵＭＡＰの全ペプチド量は、天然ＴＵＭＡＰと、既知量のＴＵＭＡＰの同位体標識バージョン、いわゆる内標準との比率として、ナノＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって測定された。ＴＵＭＡＰ単離の効率は、ＴＵＭＡＰ単離手順の可能な限り早い時点で、全ての選択されたＴＵＭＡＰのペプチド：ＭＨＣ複合体を組織溶解産物に添加して、ペプチド単離手順の完了に続く、ナノＬＣ−ＭＳ／ＭＳによるそれらの検出によって判定された。総細胞数および全ペプチド量は、組織サンプル当たり三連の測定から計算された。ペプチド単離効率は、それぞれ三連で測定された、１０回の添加実験からの平均として計算された（実施例６および表１４を参照されたい）。
【０３８５】
このＲＮＡ発現および質量分析データの複合解析は、本発明の４１７個のペプチドをもたらした。
【０３８６】
本発明は、本発明のペプチドを過剰にまたは排他的に提示する、がん／腫瘍、好ましくは、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん、および子宮がんの治療に有用なペプチドを提供する。これらのペプチドは、原発性ヒトがんサンプル上で、ＨＬＡ分子によって天然に提示されることが、質量分析法によって示された。
【０３８７】
それにペプチドが由来する、起源遺伝子／タンパク質の多く（「完全長タンパク質」または「基本的タンパク質」とも称される）は、正常組織と比較して、がんにおいて非常に過剰発現されることが示され、本発明との関連で「正常組織」とは、腫瘍と同じ臓器に由来する健常細胞または組織、またはその他の正常組織細胞のどちらかを意味するものとし、起源遺伝子の高度な腫瘍関連性が実証される（実施例２を参照されたい）。さらに、ペプチドそれ自体は、腫瘍組織上で強く過剰提示されるが正常組織上では過剰提示されず、「腫瘍組織」は本発明との関連で、がんに罹患している患者に由来するサンプルを意味するものとする（実施例１を参照されたい）。
【０３８８】
ＨＬＡ結合ペプチドは、免疫系、特にＴリンパ球によって認識され得る。Ｔ細胞は、例えば、由来するペプチドを提示する、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん、または子宮がん細胞などの認識されたＨＬＡ／ペプチド複合体を提示する細胞を破壊し得る
【０３８９】
本発明のペプチドは、Ｔ細胞応答を刺激でき、および／または過剰提示されることが示されおり、したがって本発明に従って、抗体および／または可溶性ＴＣＲなどのＴＣＲの製造のために使用され得る（実施例３を参照されたい）。さらに、ペプチドは、それぞれのＭＨＣと複合体化した場合に、本発明による抗体および／またはＴＣＲ、特にＴＣＲ製造のためにも使用され得る。それぞれの方法は当業者に良く知られており、それぞれの参考文献にもまた見られる。したがって本発明のペプチドは、それによって腫瘍細胞が破壊され得る、患者における免疫応答を生じさせるのに有用である。患者における免疫応答は、理想的には免疫原性を増強する薬剤（すなわちアジュバント）との組み合わせで、記載されるペプチド、または適切な前駆体（例えば伸長ペプチド、タンパク質、またはこれらのペプチドをコードする核酸）を患者に直接投与することで、誘導され得る。本発明の標的ペプチドは、正常組織上では同等のコピー数で提示されないので、このような治療的ワクチン接種から生じる免疫応答は、腫瘍細胞に対して高度に特異的であることが予測され得て、患者の正常細胞に対する望まれない自己免疫反応のリスクを防止する。
【０３９０】
本明細書は、鎖およびａβ鎖（「α／βＴＣＲ」）を含んでなるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）にさらに関する。ＭＨＣ分子によって提示された際に、ＴＣＲおよび抗体に結合できるペプチドもまた提供される。本明細書はまた、本明細書のＴＣＲおよびペプチドを発現するための核酸、ベクター、および宿主細胞；そしてそれを使用する方法にも関する。
【０３９１】
「Ｔ細胞受容体」（ＴＣＲと略記される）という用語は、αポリペプチド鎖（α鎖）およびａβポリペプチド鎖（β鎖）を含んでなるヘテロ二量体分子を指し、ヘテロ二量体受容体は、ＨＬＡ分子によって提示されるペプチド抗原と結合できる。本用語は、いわゆるγ／δＴＣＲもまた含む。
【０３９２】
一実施形態では、本明細書は、本明細書に記載されるようなＴＣＲを製造する方法を提供し、方法は、ＴＣＲの発現を促進するのに適した条件下でＴＣＲを発現できる、宿主細胞を培養するステップを含んでなる。
【０３９３】
別の態様における説明は、十分な量の抗原を抗原提示細胞に接触させることで、適切な抗原提示細胞または人工抗原提示細胞の表面に発現されるクラスＩまたはＩＩ  ＭＨＣ分子上に抗原が負荷され、または抗原／クラスＩまたはＩＩ  ＭＨＣ複合体モノマーを四量体化することで、クラスＩまたはＩＩ  ＭＨＣ四量体上に抗原が負荷される、本明細書に記載の方法に関する。
【０３９４】
α／βＴＣＲのαおよびβ鎖、そしてγ／δＴＣＲのγおよびδ鎖は、一般にそれぞれ２つの「領域」、すなわち可変および定常領域を有すると見なされる。可変領域は、可変領域（Ｖ）の連結と、連結領域（Ｊ）とからなる。可変領域はまた、リーダー領域（Ｌ）を含んでもよい。βおよびδ鎖はまた、多様性領域（Ｄ）を含んでもよい。αおよびβ定常領域はまた、αおよびβ鎖を細胞膜に固着させるＣ末端膜貫通（ＴＭ）領域を含んでもよい。
【０３９５】
γ／δＴＣＲに関して、「ＴＣＲγ可変領域」という用語は、本明細書の用法ではリーダー領域（Ｌ）のないＴＣＲγＶ（ＴＲＧＶ）領域とＴＣＲγＪ（ＴＲＧＪ）領域との連結を指し、ＴＣＲγ定常領域という用語は、細胞外ＴＲＧＣ領域を指し、またはＣ末端切断型ＴＲＧＣ配列を指す同様に「ＴＣＲδ可変領域」という用語は、リーダー領域（Ｌ）のないＴＣＲδＶ（ＴＲＤＶ）領域とＴＣＲδＤ／Ｊ（ＴＲＤＤ／ＴＲＤＪ）領域との連結を指し、「ＴＣＲδ定常領域」という用語は、細胞外ＴＲＤＣ領域を指し、またはＣ末端切断型ＴＲＤＣ配列を指す。
【０３９６】
本明細書のＴＣＲは、好ましくは、約１００μＭ以下、約５０μＭ以下、約２５μＭ以下、または約１０μＭ以下の結合親和性（ＫＤ）で、ペプチド−ＨＬＡ分子複合体に結合する。より好ましいのは、約１μＭ以下、約１００ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約２５ｎＭ以下の結合親和性を有する、高親和性ＴＣＲである。本発明のＴＣＲの好ましい結合親和性範囲の非限定的例としては、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ；約１０ｎＭ〜約２０ｎＭ；約２０ｎＭ〜約３０ｎＭ；約３０ｎＭ〜約４０ｎＭ；約４０ｎＭ〜約５０ｎＭ；約５０ｎＭ〜約６０ｎＭ；約６０ｎＭ〜約７０ｎＭ；約７０ｎＭ〜約８０ｎＭ；約８０ｎＭ〜約９０ｎＭ；および約９０ｎＭ〜約１００ｎＭが挙げられる。
【０３９７】
本明細書の用法では、本明細書のＴＣＲとの関連で、「特異的結合」およびそれらの文法的変種は、ペプチド−ＨＬＡ分子複合体に対して、１００μＭ以下の結合親和性（ＫＤ）を有するＴＣＲを意味するために使用される。
【０３９８】
本明細書のα／βヘテロ二量体ＴＣＲは、それらの定常領域の間に導入された、ジスルフィド結合を有してもよい。このタイプの好ましいＴＣＲとしては、ＴＲＡＣ定常領域配列とＴＲＢＣ１またはＴＲＢＣ２定常領域配列とを有するものが挙げられるが、ただし、ＴＲＡＣのＴｈｒ４８およびＴＲＢＣ１またはＴＲＢＣ２のＳｅｒ５７は、システイン残基によって置換されており、前記システインは、ＴＣＲのＴＲＡＣ定常領域配列とＴＲＢＣ１またはＴＲＢＣ２定常領域配列との間に、ジスルフィド結合を形成する。
【０３９９】
上述の導入された鎖間結合の存在下または不在下で、本明細書のα／βヘテロ二量体ＴＣＲは、ＴＲＡＣ定常領域配列とＴＲＢＣ１またはＴＲＢＣ２定常領域配列とを有してもよく、ＴＣＲのＴＲＡＣ定常領域配列と、ＴＲＢＣ１またはＴＲＢＣ２定常領域配列とが、ＴＲＡＣのエクソン２のＣｙｓ４と、ＴＲＢＣ１またはＴＲＢＣ２のエクソン２のＣｙｓ２との間の天然ジスルフィド結合によって連結されてもよい。
【０４００】
本明細書のＴＣＲは、放射性核種、フルオロフォア、およびビオチンからなる群から選択される、検出可能な標識を含んでなってもよい。本明細書のＴＣＲは、放射性核種、化学療法剤、または毒素などの治療的活性薬剤にコンジュゲートされてもよい。
【０４０１】
一実施形態では、α鎖に少なくとも１つの変異を有し、および／またはβ鎖に少なくとも１つの変異を有する本明細書のＴＣＲは、非変異ＴＣＲと比較して修飾されたグリコシル化を有する。
【０４０２】
一実施形態では、ＴＣＲα鎖および／またはＴＣＲβ鎖に少なくとも１つの変異を含んでなるＴＣＲは、ペプチド−ＨＬＡ分子複合体に対して、非変異ＴＣＲα鎖および／または非変異ＴＣＲβ鎖を含んでなるＴＣＲの少なくとも２倍の結合親和性および／または結合半減期を有する。腫瘍特異的ＴＣＲの親和性増強とその利用は、最適ＴＣＲ親和性のウィンドウの存在に依存する。このようなウィンドウの存在は、ＨＬＡ−Ａ２拘束性病原体に対して特異的なＴＣＲが、ＨＬＡ−Ａ２拘束性腫瘍関連自己抗原に対して特異的なＴＣＲと比較して、一般に約１０分の１のＫＤ値を有するという観察に基づく。腫瘍抗原は免疫原性である可能性を有するが、腫瘍は個人自身の細胞から生じるので、改変された翻訳プロセッシングのある変異型タンパク質またはタンパク質のみが、免疫系によって異質と見なされることが今や知られている。上方制御されまたは過剰発現される抗原（いわゆる自己抗原）は、腫瘍に対する機能性免疫応答を必ずしも誘導しない。これらの抗原に対して高度に反応性のＴＣＲを発現するＴ細胞は、中枢性免疫寛容として知られている過程、すなわち自己抗原に対する低親和性ＴＣＲを有するＴ細胞のみが残留する過程によって、胸腺において負選択される。したがって、発明によるペプチドに対する本明細書のＴＣＲまたは変異型の親和性は、当該技術分野で周知の方法によって増大され得る。
【０４０３】
本明細書は、本明細書に従ってＴＣＲを同定し単離する方法にさらに関し、前記方法は、ＨＬＡ−Ａ＊０２陰性健常ドナーからのＰＢＭＣをＡ２／ペプチドモノマーと共にインキュベートするステップと、ＰＢＭＣを四量体フィコエリトリン（ＰＥ）と共にインキュベートするステップと、高結合活性Ｔ細胞を蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）Ｃａｌｉｂｕｒ分析によって単離するステップとを含んでなる。
【０４０４】
本明細書は、本明細書に従ってＴＣＲを同定し単離する方法にさらに関し、前記方法は、そのＴ細胞がマウスＴＣＲ欠損を補償する多様なヒトＴＣＲレパートリーを発現する、全ヒトＴＣＲαβ遺伝子遺伝子座（１．１および０．７Ｍｂ）を有する遺伝子組換えマウスを得るステップと、マウスを目的ペプチドで免疫化するステップと、四量体フィコエリトリン（ＰＥ）を有する遺伝子組換えマウスから得られたＰＢＭＣをインキュベートするステップと、高結合活性Ｔ細胞を蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）Ｃａｌｉｂｕｒ分析によって単離するステップとを含んでなる。
【０４０５】
一態様では、本明細書のＴＣＲを発現するＴ細胞を得るために、本明細書のＴＣＲ−αおよび／またはＴＣＲ−β鎖をコードする核酸が、γレトロウイルスまたはレンチウイルスなどの発現ベクターにクローン化される。組換えウイルスが生成され、次に、抗原特異性および機能性結合活性などの機能について試験される。次に、最終生成物のアリコートを使用して、標的Ｔ細胞集団（一般に患者のＰＢＭＣから精製される）が形質導入され、それは患者への輸液前に増殖される。別の態様では、本明細書のＴＣＲを発現するＴ細胞を得るために、例えば、生体外転写システムなどの当該技術分野で公知の技術によって、ＴＣＲ  ＲＮＡが合成される。次に生体外で合成されたＴＣＲ  ＲＮＡは、健常ドナーから得られた原発性ＣＤ８＋Ｔ細胞内に電気穿孔によって導入され、腫瘍特異的ＴＣＲ−αおよび／またはＴＣＲ−β鎖が再発現される。
【０４０６】
発現を増加させるために、本明細書のＴＣＲをコードする核酸は、レトロウイルス長末端反復（ＬＴＲ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）Ｕ３、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）、β−アクチン、ユビキチン、およびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）／ＣＤ４３複合プロモーター、伸長因子（ＥＦ）−１ａ、および脾臓フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）プロモーターなどの強力なプロモーターと作動可能に連結されてもよい。好ましい実施形態では、プロモーターは、発現される核酸に対して異種である。強力なプロモーターに加えて、本明細書のＴＣＲ発現カセットは、レンチウイルスコンストラクトの核転座を促進する、中央ポリプリントラクト（ｃＰＰＴ）（Ｆｏｌｌｅｎｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）、およびＲＮＡ安定性を増大させることで導入遺伝子発現のレベルを高める、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節因子（ｗＰＲＥ）（Ｚｕｆｆｅｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）をはじめとする導入遺伝子発現を高め得る追加的な要素を含有してもよい。
【０４０７】
本発明のＴＣＲのαおよびβ鎖は、別々のベクターにある核酸によってコードされてもよく、または同一ベクターにあるポリヌクレオチドによってコードされてもよい。
【０４０８】
高レベルのＴＣＲ表面発現の達成には、導入されたＴＣＲのＴＣＲ−αおよびＴＣＲ−β鎖の双方が、高レベルで転写される必要がある。これを行うために、本明細書のＴＣＲ−αおよびＴＣＲ−β鎖は、この障害を克服できることが示されている、単一ベクター内のバイシストロニックコンストラクトにクローン化されてもよい。ＴＣＲ−αおよびＴＣＲ−β鎖は、翻訳中に２つのタンパク質に分かれて等モル比のＴＣＲ−αおよびＴＣＲ−β鎖の生成を確実にする単一転写物から生成されるので、ＴＣＲ−α鎖とＴＣＲ−β鎖との間のウイルス配列内リボソーム進入部位の使用は、双方の鎖の協調発現をもたらす（Ｓｃｈｍｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．２００９）。
【０４０９】
本明細書のＴＣＲをコードする核酸はコドン最適化されて、宿主細胞からの発現が増加されてもよい。遺伝コードの重複は、いくつかのアミノ酸が２つ以上のコドンによってコードされるようにするが、特定のコドンは、適合ｔＲＮＡの相対可用性ならびにその他の要因のために、他のものよりも「最適」でない（Ｇｕｓｔａｆｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。各アミノ酸が、哺乳類遺伝子発現のための最適コドンによってコードされるように、ＴＣＲ−αおよびＴＣＲ−β遺伝子配列を修飾すること、ならびにｍＲＮＡ不安定モチーフまたは潜在的なスプライス部位を除去することは、ＴＣＲ−αおよびＴＣＲ−β遺伝子発現を有意に高めることが示されている（Ｓｃｈｏｌｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。
【０４１０】
さらに、導入ＴＣＲ鎖と内因性ＴＣＲ鎖との間の誤対合は、重大な自己免疫リスクをもたらす特異性の獲得を引き起こすこともある。例えば、混合ＴＣＲ二量体の形成は、適切に対合するＴＣＲ複合体を形成するために利用できるＣＤ３分子の数を減少させてもよく、ひいては導入ＴＣＲを発現する細胞の機能性結合活性を有意に低下させ得る（Ｋｕｂａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０４１１】
誤対合を減少させるために、本明細書の導入ＴＣＲ鎖のＣ末端領域は、鎖間親和性を高める一方で、導入鎖が内因性ＴＣＲと対形成する能力を低下させるために、修飾されてもよい。これらのストラテジーは、ヒトＴＣＲ−αおよびＴＣＲ−βのＣ末端領域をそれらのマウス対応物（マウス化Ｃ末端領域）で置換する；導入ＴＣＲのＴＣＲ−αおよびＴＣＲ−β鎖の双方に第２のシステイン残基を導入することで、Ｃ末端領域に第２の鎖間ジスルフィド結合を生成する（システイン修飾）；ＴＣＲ−αおよびＴＣＲ−β鎖Ｃ末端領域内の相互作用残基を交換する（「ノブ・イン・ホール」）；そしてＴＣＲ−αおよびＴＣＲ−β鎖の可変領域をＣＤ３ζに直接融合させる（ＣＤ３ζ融合）を含んでもよい。（Ｓｃｈｍｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．２００９）。
【０４１２】
一実施形態では、宿主細胞は、本細書のＴＣＲを発現するように遺伝子操作される。好ましい実施形態では、宿主細胞は、ヒトＴ細胞またはＴ細胞前駆細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞またはＴ細胞前駆細胞は、がん患者から得られる。その他の実施形態では、Ｔ細胞またはＴ細胞前駆細胞は、健常ドナーから得られる。本明細書の宿主細胞は、治療される患者に関して、同種異系または自己由来であり得る。一実施形態では、宿主は、α／βＴＣＲを発現するように形質転換されたγ／δＴ細胞である。
【０４１３】
「医薬組成物」は、医学的状況においてヒトへの投与に適する組成物である。好ましくは、医薬組成物は無菌であり、ＧＭＰガイドラインに準拠して製造される。
【０４１４】
医薬組成物は、遊離形態または薬学的に許容可能な塩の形態のどちらかのペプチドを含んでなる（上記もまた参照されたい）。本明細書の用法では、「薬学的に許容可能な塩」は、開示されたペプチドの誘導体を指し、ペプチドは、薬剤の酸性または塩基性塩を生成することで修飾される。例えば、酸性塩は、適切な酸との反応を伴って、遊離塩基から調製される（典型的に、薬剤の中性形態が中性ＮＨ２基を有する）。酸性塩を調製するための適切な酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などの有機酸、ならびに例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸リン酸などの無機酸の双方が挙げられる。逆に、ペプチド上に存在してもよい酸部分の塩基性塩の調製物は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、トリメチルアミンなどの薬学的に許容可能な塩基を使用して調製される。
【０４１５】
特に好ましい一実施形態では、医薬組成物は、酢酸（酢酸塩）、トリフルオロ酢酸または塩酸（塩化物）の塩としてのペプチドを含んでなる。
【０４１６】
好ましくは、本発明の薬剤は、ワクチンなどの免疫療法剤である。それは、患者に直接、罹患臓器に、または全身的に、ｉ．ｄ．、ｉ．ｍ．、ｓ．ｃ．、ｉ．ｐ．、およびｉ．ｖ．投与され、または生体外で患者またはヒト細胞株に由来する細胞に適用されて、それが引き続いて患者に投与され、または生体外で使用されて患者に由来する免疫細胞の亜集団が選択され、次にそれが患者に再投与されてもよい。核酸が、生体外で細胞に投与される場合、インターロイキン２などの免疫刺激サイトカインを同時発現させるように、細胞を形質移入することが有用であってもよい。ペプチドは、実質的に純粋であり、または免疫刺激アジュバント（下記参照）と組み合わされ、または免疫賦活性サイトカインと組み合わせて使用され、または例えば、リポソームなどの適切な送達系によって投与されてもよい。ペプチドはまた、キーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）またはマンナンなどの適切な担体に共役されてもよい（国際公開第９５／１８１４５号パンフレットおよび（Ｌｏｎｇｅｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）を参照されたい）。ペプチドはまた、標識されてもよく、融合タンパク質であってもよく、またはハイブリッド分子であってもよい。その配列が本発明に記載されるペプチドは、ＣＤ４またはＣＤ８  Ｔ細胞を刺激することが予測される。しかし、ＣＤ８  Ｔ細胞の刺激は、ＣＤ４  Ｔヘルパー細胞によって提供される援助の存在下で、より効率的である。したがって、ＣＤ８  Ｔ細胞を刺激するＭＨＣクラスＩエピトープでは、ハイブリッド分子の融合パートナーまたはセクションは、適切にはＣＤ４陽性Ｔ細胞を刺激するエピトープを提供する。ＣＤ４およびＣＤ８刺激エピトープは、当該技術分野で周知であり、本発明で同定されたものが挙げられる。
【０４１７】
一態様では、ワクチンは、配列番号１〜配列番号３８８に記載されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドと、少なくとも１つの追加的なペプチド、好ましくは２〜５０、より好ましくは２〜２５、なおもより好ましくは２〜２０、最も好ましくは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８個のペプチドとを含んでなる。ペプチドは、１つまたは複数の特異的ＴＡＡから誘導されてもよく、ＭＨＣクラスＩ分子に結合してもよい。
【０４１８】
本発明のさらなる態様は、本発明のペプチドまたはペプチド変異型をエンコードする核酸（例えばポリヌクレオチド）を提供する。ポリヌクレオチドは、それがペプチドをコードしさえすれば、例えば、単鎖および／または二本鎖のいずれかのＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＰＮＡ、ＲＮＡまたはそれらの組み合わせであってもよく、または例えばホスホロチオエート主鎖を有するポリヌクレオチドなどのポリヌクレオチドの未変性または安定化形態であってもよく、それはイントロンを含有してもまたはしなくてもよい。もちろん、天然起源ペプチド結合によって連結する天然アミノ酸残基を含有するペプチドのみが、ポリヌクレオチドによってエンコードされ得る。本発明のなおもさらなる態様は、本発明によるポリペプチドを発現できる発現ベクターを提供する。
【０４１９】
例えば相補的付着端を通じて、ポリヌクレオチド、特にＤＮＡをベクターに連結する、多様な方法が開発されている。例えば、ベクターＤＮＡに挿入されるＤＮＡ断片に、相補的ホモポリマー配列が付加され得る。次に、相補的ホモポリマー尾部間の水素結合によって、ベクターおよびＤＮＡ断片が連結されて組換えＤＮＡ分子が形成する。
【０４２０】
１つまたは複数の制限酵素認識部位を含有する合成リンカーは、ＤＮＡ断片をベクターに連結する代替え方法を提供する。多様な制限エンドヌクレアーゼ部位を含有する合成リンカーは、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｈａｖｅｎ，ＣＮ，ＵＳＡをはじめとするいくつかの供給元から商業的に入手できる。
【０４２１】
本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡを修飾する望ましい方法は、Ｓａｉｋｉ  ＲＫ，ｅｔ  ａｌ．（Ｓａｉｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）で開示されるようなポリメラーゼ連鎖反応を用いる。この方法は、例えば、適切な制限酵素認識部位を改変することで、ＤＮＡを適切なベクターに導入するために使用されてもよく、またはそれは、当該技術分野で既知のその他の有用な様式でＤＮＡを修飾するために使用されてもよい。ウイルスベクターを使用するのであれば、ポックスウイルスまたはアデノウイルスベクターが好ましい。
【０４２２】
次にＤＮＡ（またはレトロウイルスベクターの場合はＲＮＡ）を適切な宿主において発現させ、本発明のペプチドまたは変異型を含んでなるポリペプチドが製造されてもよい。このようにして、本明細書に含まれる教示を考慮して適切に修正された既知の技術に従って、本発明のペプチドまたは変異型をコードするＤＮＡを使用して、発現ベクターが構築されてもよく、次にそれを使用して、本発明のポリペプチドの発現および製造のために、適切な宿主細胞が形質転換される。このような技術としては、例えば、米国特許第４，４４０，８５９号明細書、米国特許第４，５３０，９０１号明細書、米国特許第４，５８２，８００号明細書、米国特許第４，６７７，０６３号明細書、米国特許第４，６７８，７５１号明細書、米国特許第４，７０４，３６２号明細書、米国特許第４，７１０，４６３号明細書、米国特許第４，７５７，００６号明細書、米国特許第４，７６６，０７５号明細書、および米国特許第４，８１０，６４８号明細書で開示されるものが挙げられる。
【０４２３】
本発明の化合物を構成するポリペプチドをエンコードするＤＮＡ（またはレトロウイルスベクターの場合はＲＮＡ）は、適切な宿主への導入のために、多種多様なその他のＤＮＡ配列に連結されてもよい。コンパニオンＤＮＡは、宿主の性質、ＤＮＡの宿主への導入様式、およびエピソームの維持または組み込みが所望されるかどうかに左右される。
【０４２４】
一般に、ＤＮＡは、発現のための適切な方向および正しい読み枠で、プラスミドなどの発現ベクターに挿入される。必要ならば、ＤＮＡは、所望の宿主によって認識される適切な転写および翻訳調節制御ヌクレオチド配列に連結されてもよいが、このような制御は、一般に発現ベクター中で利用できる。次に、標準的な技術を通じて、ベクターが宿主に導入される。一般に、全ての宿主がベクターによって形質転換されるわけではない。したがって、形質転換された宿主細胞を選択することが必要になる。一選択技術は、抗生物質耐性などの形質転換細胞内で選択可能な形質をコードする、任意の必要な制御因子を有するＤＮＡ配列を発現ベクター内に組み込むことを伴う。
【０４２５】
代案としては、このような選択可能な形質の遺伝子は、所望の宿主細胞を同時形質転換するのに使用される、別のベクター上にあり得る。
【０４２６】
次に、本明細書で開示される教示を考慮して、当業者に知られている適切な条件下で十分な時間にわたり、本発明の組換えＤＮＡによって形質転換された宿主細胞が培養されてポリペプチドが発現され、次にそれが回収され得る。
【０４２７】
細菌（例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）およびバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、酵母（例えばサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、糸状菌（例えばアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ））、植物細胞、動物細胞、および昆虫細胞をはじめとする多数の発現系が知られている。好ましくは、発現系は、ＡＴＣＣ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手できるＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞であり得る。
【０４２８】
構成的発現のための典型的な哺乳類細胞ベクタープラスミドは、適切なポリＡ尾部と、ネオマイシンなどの耐性マーカーとを有する、ＣＭＶまたはＳＶ４０プロモーターを含んでなる。一例は、Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ，ＵＳＡから入手できるｐＳＶＬである。誘導性哺乳類発現ベクターの一例であるｐＭＳＧもまた、Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手できる。有用な酵母プラスミドベクターは、ｐＲＳ４０３−４０６およびｐＲＳ４１３−４１６であり、通常、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ  ９２０３７，ＵＳＡから入手できる。プラスミドｐＲＳ４０３、ｐＲＳ４０４、ｐＲＳ４０５、およびｐＲＳ４０６は、酵母組み込みプラスミド（ＹＩｐｓ）であり、酵母の選択可能なマーカーＨＩＳ３、ＴＲＰ１、ＬＥＵ２、およびＵＲＡ３が組み込まれている。プラスミドｐＲＳ４１３−４１６は、酵母セントロメアプラスミド（Ｙｃｐｓ）である。ＣＭＶプロモーターベースのベクター（例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製）は、一過性または安定性発現、細胞質内発現または分泌、およびＦＲＡＧ、３ｘＦＬＡＧ、ｃ−ｍｙｃまたはＭＡＴの様々な組み合わせでのＮ末端またはＣ末端標識付けを提供する。これらの融合タンパク質は、組換えタンパク質を検出、精製、および分析できるようにする。二重標識融合物は、検出に融通性を与える。
【０４２９】
強力なヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター調節領域は、ＣＯＳ細胞において、構成タンパク質発現レベルを１ｍｇ／Ｌ程度の高さに駆動する。効力がより低い細胞株では、タンパク質レベルは、典型的に約０．１ｍｇ／Ｌである。ＳＶ４０複製起点の存在は、ＳＶ４０複製許容ＣＯＳ細胞における高レベルのＤＮＡ複製をもたらす。ＣＭＶベクターは、例えば、細菌細胞におけるｐＭＢ１（ｐＢＲ３２２の誘導体）複製起点、細菌におけるアンピシリン耐性選択のためのｂ−ラクタマーゼ遺伝子、ｈＧＨポリＡ、およびｆ１起点を含有し得る。プレプロトリプシンリーダー（ＰＰＴ）配列を含有するベクターは、抗ＦＲＡＧ抗体、樹脂、およびプレートを使用した精製のために、培養液中へのＦＲＡＧ融合タンパク質分泌を誘導し得る。多様な宿主細胞において使用するためのその他のベクターおよび発現系が、当該技術分野で周知である。
【０４３０】
別の実施形態では、本発明の２つ以上のペプチドまたはペプチド変異型がコードされ、したがって順次発現される（「数珠玉構造」コンストラクトに類似する）。その際に、ペプチドまたはペプチド変異型は、例えばＬＬＬＬＬＬなどの一続きのリンカーアミノ酸によって、共に連結または融合されてもよく、またはそれらの間のいかなる追加的なペプチドもなしに連結されてもよい。これらのコンストラクトはまた、がん療法のために使用され得て、ＭＨＣ  ＩとＭＨＣ  ＩＩの双方が関与する免疫応答を誘導してもよい。
【０４３１】
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドベクターコンストラクトで形質転換された宿主細胞にも関する。宿主細胞は、原核または真核生物のどちらかであり得る。細菌細胞は、いくつかの状況では、好ましい原核宿主細胞であってもよく、典型的には、例えば、Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡから入手できる大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＨ５株、および米国微生物系統保存機関（ＡＴＣＣ）Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡから入手できるＲＲ１（ＡＴＣＣ番号３１３４３）などの大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株である。好ましい真核宿主細胞としては、酵母、昆虫、および哺乳類細胞、好ましくはマウス、ラット、サルまたはヒト線維芽および結腸細胞株に由来するものなどの脊椎動物細胞が挙げられる。酵母宿主細胞としては、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ  ９２０３７，ＵＳＡから一般に入手できる、ＹＰＨ４９９、ＹＰＨ５００、およびＹＰＨ５０１が挙げられる。好ましい哺乳類宿主細胞としては、ＡＴＣＣからＣＣＬ６１として入手できるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＡＴＣＣからＣＲＬ１６５８として入手できるＮＩＨ  Ｓｗｉｓｓマウス胚細胞ＮＩＨ／３Ｔ３、ＡＴＣＣからＣＲＬ１６５０として入手できるサル腎臓由来ＣＯＳ−１細胞、およびヒト胎児由来腎細胞である２９３細胞が挙げられる。好ましい昆虫細胞は、バキュロウイルス発現ベクターで形質移入され得るＳｆ９細胞である。発現のための適切な宿主細胞の選択に関する概説は、例えば、Ｐａｕｌｉｎａ  ＢａｌｂａｓおよびＡｒｇｅｌｉａ  Ｌｏｒｅｎｃｅの教科書、"Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｒｅｖｉｅｗｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，"Ｐａｒｔ  Ｏｎｅ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ  ９７８−１−５８８２９−２６２−９、および当業者に知られているその他の文献にある。
【０４３２】
本発明のＤＮＡコンストラクトによる適切な細胞宿主の形質転換は、典型的に使用されるベクターのタイプに左右される周知の方法によって達成される。原核宿主細胞の形質転換に関しては、例えば、Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９７２）および（Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，２０１２）を参照されたい。酵母細胞の形質転換は、Ｓｈｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｈｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６）に記載される。Ｂｅｇｇｓ（Ｂｅｇｇｓ，１９７８）の方法もまた有用である。脊椎動物細胞に関しては、このような細胞を形質移入するのに有用な、例えば、リン酸カルシウムおよびＤＥＡＥ−デキストランまたはリポソーム製剤などの試薬が、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｏｒ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ  ２０８７７，ＵＳＡから入手できる。電気穿孔もまた、細胞を形質転換および／または形質移入するのに有用であり、酵母細胞、細菌細胞、昆虫細胞、および脊椎動物細胞を形質転換する技術分野で周知である。
【０４３３】
成功裏に形質転換された細胞、すなわち本発明のＤＮＡコンストラクトを含有する細胞は、ＰＣＲなどの周知の技術によって同定され得る。代案としては、抗体を使用して、上清中のタンパク質の存在が検出され得る。
【０４３４】
例えば、細菌、酵母、および昆虫細胞などの本発明の特定の宿主細胞は、本発明のペプチドの調製において有用であることが理解されるであろう。しかしその他の宿主細胞が、特定の治療法において有用であってもよい。例えば、樹状細胞などの抗原提示細胞は、それらが適切なＭＨＣ分子中に負荷されてもよいように、本発明のペプチドを発現するために有用に使用されてもよい。したがって、本発明は、本発明による核酸または発現ベクターを含んでなる宿主細胞を提供する。
【０４３５】
好ましい実施形態では、宿主細胞は、抗原提示細胞、特に樹状細胞または抗原提示細胞である。前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）を含有する組換え融合タンパク質が負荷されたＡＰＣは、無症候性または微小症候性転移性ＨＲＰＣを治療するために、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって２０１０年４月２０日に認可された（シプロイセルＴ）（Ｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；Ｓｍａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。
【０４３６】
本発明のさらなる態様は、宿主細胞を培養するステップと、宿主細胞またはその培養液からペプチドを単離するステップとを含んでなる、ペプチドまたはその変異型を製造する方法を提供する。
【０４３７】
別の実施形態では、本発明のペプチド、核酸または発現ベクターは、医療において使用される。例えば、ペプチドまたはその変異体は、静脈内（ｉ．ｖ．）注射、皮下（ｓ．ｃ．）注射、皮内（ｉ．ｄ．）注射、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射、筋肉内（ｉ．ｍ．）注射のために調合されてもよい。ペプチド注射の好ましい方法としては、ｓ．ｃ．、ｉ．ｄ．、ｉ．ｐ．、ｉ．ｍ．、およびｉ．ｖ．が挙げられる。ＤＮＡ注射の好ましい方法としては、ｉ．ｄ．、ｉ．ｍ．、ｓ．ｃ．、ｉ．ｐ．、およびｉ．ｖ．が挙げられる。例えば、５０μｇ〜１．５ｍｇ、好ましくは１２５μｇ〜５００μｇのペプチドまたはＤＮＡの用量が投与されてもよく、それぞれのペプチドまたはＤＮＡに左右される。この範囲の用量は、以前の治験で成功裏に使用された（Ｗａｌｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０４３８】
活性ワクチン接種のために使用されるポリヌクレオチドは、実質的に純粋であってもよく、または適切なベクターまたは送達系に含有されてもよい。核酸は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＰＮＡ、ＲＮＡまたはそれらの組み合わせであってもよい。このような核酸をデザインして導入する方法は、当該技術分野で周知である。概説は、例えば、Ｔｅｕｆｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ｔｅｕｆｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）によって提供される。ポリヌクレオチドワクチンは調製が容易であるが、免疫応答誘導におけるこれらのベクターの作用機序は、完全には分かっていない。適切なベクターおよび送達系としては、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、レトロウイルス、ヘルペスウイルス、アデノ随伴ウイルス、または２つ以上のウイルスの構成要素を含有するハイブリッドベースのシステムなどのウイルスＤＮＡおよび／またはＲＮＡが挙げられる。非ウイルス送達系としては、カチオン性脂質およびカチオン性ポリマーが挙げられ、ＤＮＡ送達技術分野において周知である。「遺伝子銃」などを介した、物理的送達もまた使用してもよい。核酸によってコードされるペプチド（単数）またはペプチド（複数）は、例えば、上述のように、それぞれの逆ＣＤＲのＴ細胞を刺激する、エピトープとの融合タンパク質であってもよい。
【０４３９】
本発明の薬剤は、１つまたは複数のアジュバントもまた含んでもよい。アジュバントは、免疫応答（例えば、ＣＤ８陽性Ｔ細胞およびヘルパーＴ（ＴＨ）細胞によって媒介される抗原に対する免疫応答を非特異的に促進または増強する物質であり、したがって本発明の薬剤中で有用であると見なされる。適切なアジュバントとしては、１０１８  ＩＳＳ、アルミニウム塩、ＡＭＰＬＩＶＡＸ（登録商標）、ＡＳ１５、ＢＣＧ、ＣＰ−８７０，８９３、ＣｐＧ７９０９、ＣｙａＡ、ｄＳＬＩＭ、フラジェリンまたはフラジェリン由来ＴＬＲ５リガンド、ＦＬＴ３リガンド、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＣ３０、ＩＣ３１、イミキモド（ＡＬＤＡＲＡ（登録商標））、レシキモド、ＩｍｕＦａｃｔ  ＩＭＰ３２１、ＩＬ−２やＬ−１３やＩＬ−２１などのインターロイキン、インターフェロン−αまたは−βまたはそれらのＰＥＧ化誘導体、ＩＳパッチ、ＩＳＳ、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ、ＩＳＣＯＭ、ＪｕｖＩｍｍｕｎｅ（登録商標）、ＬｉｐｏＶａｃ、ＭＡＬＰ２、ＭＦ５９、モノホスホリルリピドＡ、モンタニドＩＭＳ１３１２、モンタニドＩＳＡ２０６、モンタニドＩＳＡ５０Ｖ、モンタニドＩＳＡ−５１、油中水型および水中油型エマルション、ＯＫ−４３２、ＯＭ−１７４、ＯＭ−１９７−ＭＰ−ＥＣ、ＯＮＴＡＫ、ＯｓｐＡ、ＰｅｐＴｅｌ（登録商標）ベクター系、ポリ（ラクチドコグリコリド）［ＰＬＧ］ベースおよびデキストラン微粒子、タラクトフェリンＳＲＬ１７２、ビロソームおよびその他のウイルス様粒子、ＹＦ−１７Ｄ、ＶＥＧＦトラップ、Ｒ８４８、β−グルカン、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、サポニンに由来するＡｑｕｉｌａ'ｓ  ＱＳ２１  ｓｔｉｍｕｌｏｎ、マイコバクテリア抽出物および合成細菌細胞壁模倣体、およびＲｉｂｉ'ｓ  ＤｅｔｏｘまたはＱｕｉｌまたはＳｕｐｅｒｆｏｓなどのその他の独自仕様の補助剤が挙げられるが、これに限定されるものではない。フロイントまたはＧＭ−ＣＳＦなどのアジュバントが好ましい。樹状細胞およびそれらの調製物に対して特異的な、いくつかの免疫学的アジュバント（例えばＭＦ５９）が、以前記載されている（Ａｌｌｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ｋｒｕｍｍｅｌ，１９９５）。サイトカインもまた、使用されてもよい。数種のサイトカインは、樹状細胞のリンパ組織（例えばＴＮＦ−）への移動に影響を与えること、Ｔリンパ球（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、およびＩＬ−４）のための効率的な抗原提示細胞への樹状細胞の成熟を加速すること（その内容全体が参照により本明細書に具体的に援用される、米国特許第５，８４９，５８９号明細書）、および免疫増強剤（例えば、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２３、ＩＬ−７、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β）として作用することと、直接関連付けられている（Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。
【０４４０】
ＣｐＧ免疫賦活性オリゴヌクレオチドもまた、ワクチン環境において、アジュバント効果を増強することが報告されている。理論により拘束されることなく、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、主にＴＬＲ９を通じた、内在的（非適応性）免疫系の活性化によって作用する。ＣｐＧ誘導性ＴＬＲ９活性化は、ペプチドまたはタンパク質抗原、生きたまたは死滅ウイルス、樹状細胞ワクチン、自己細胞ワクチン、そして予防的および治療的ワクチンの双方における多糖コンジュゲートをはじめとする多種多様な抗原に対する、抗原特異的体液性および細胞性応答を増強する。より重要なことには、それは樹状細胞の成熟と分化を増強し、ＣＤ４  Ｔ細胞援助の不在下であってさえも、ＴＨ１細胞の活性化の促進、および強力な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）生成をもたらす。ＴＬＲ９刺激によって誘導されるＴＨ１バイアスは、通常はＴＨ２バイアスを促進するミョウバンまたは不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）などのワクチンアジュバント存在下であってさえも、維持される。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、その他のアジュバントと調合されまたは同時投与された際に、または微粒子、ナノ粒子、脂質エマルションなどの配合物、または類似配合物中で、なおもより高いアジュバント活性を示し、それは、抗原が比較的弱い場合、強力な応答を誘導するのに特に必要である。それらは免疫応答もまた加速し、いくつかの実験では、ＣｐＧなしのワクチン総量と同等の抗体応答で、抗原用量のほぼ２桁分の低減を可能にする（Ｋｒｉｅｇ，２００６）。米国特許第６，４０６，７０５Ｂ１号明細書は、抗原特異的免疫応答を誘導するためのＣｐＧオリゴヌクレオチド、非核酸アジュバント、および抗原の併用を記載する。ＣｐＧ  ＴＬＲ９拮抗薬は、本発明の医薬組成物の好ましい構成要素である、Ｍｏｌｏｇｅｎ（Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）製のｄＳＬＩＭ（二重ステムループ免疫調節剤）である。ＲＮＡ結合ＴＬＲ７、ＴＬＲ８および／またはＴＬＲ９などのその他のＴＬＲ結合分子もまた、使用されてもよい。
【０４４１】
有用なアジュバントその他の例としては、化学修飾ＣｐＧ（例えば、ＣｐＲ、Ｉｄｅｒａ）；ポリ（Ｉ：Ｃ）などのｄｓＲＮＡアナログおよびそれらの誘導体（例えばＡｍｐｌｉＧｅｎ（登録商標）、Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標）、ポリ（ＩＣＬＣ）、ポリ（ＩＣ−Ｒ）、ポリ（Ｉ：Ｃ１２Ｕ）、非ＣｐＧ細菌ＤＮＡまたはＲＮＡ；ならびにシクロホスファミド、スニチニブ、ベバシズマブ（登録商標）、セレブレックス、ＮＣＸ−４０１６、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ソラフェニブ、テモゾロマイド、テムシロリムス、ＸＬ−９９９、ＣＰ−５４７６３２、パゾパニブ、ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ、ＺＤ２１７１、ＡＺＤ２１７１、抗ＣＴＬＡ４などの免疫活性小型分子および抗体；免疫系の重要な構造体を標的にするその他の抗体（例えば、抗ＣＤ４０、抗ＴＧＦβ、抗ＴＮＦα受容体）；ＳＣ５８１７５が挙げられるが、これに限定されるものではなく、これらは治療的におよび／またはアジュバントとして作用してもよい。本発明の文脈で有用なアジュバントおよび添加剤の量と濃度は、過度の実験を実施することなく、当業者によって容易に判定され得る。
【０４４２】
好ましいアジュバントは、抗ＣＤ４０、イミキモド、レシキモド、ＧＭ−ＣＳＦ、シクロホスファミド、スニチニブ、ベバシズマブ、インターフェロンα、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよび誘導体、ポリ（Ｉ：Ｃ）および誘導体、ＲＮＡ、シルデナフィル、およびＰＬＧまたはビロソーム微粒子調合物である。
【０４４３】
本発明による薬剤組成物の好ましい実施形態では、アジュバントは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ、サルグラモスチム）、シクロホスファミド、イミキモド、レシキモド、およびインターフェロンαなどのコロニー刺激因子からなる群から選択される。
【０４４４】
本発明による医薬組成物の好ましい実施形態では、アジュバントは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ、サルグラモスチム）、シクロホスファミド、イミキモド、およびレシキモドなどのコロニー刺激因子からなる群から選択される。本発明による薬剤組成物の好ましい実施形態では、アジュバントは、シクロホスファミド、イミキモドまたはレシキモドである。なおもより好ましいアジュバントは、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＭＳ  １３１２、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２０、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５０Ｖ、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標））、および抗ＣＤ４０ｍＡＢまたはそれらの組み合わせである。
【０４４５】
この組成物は、皮下、皮内、筋肉内などの非経口投与、または経口投与のために使用される。このためには、ペプチドおよび任意選択的にその他の分子が、薬学的に許容可能な、好ましくは水性担体に溶解され、または懸濁される。さらに組成物は、緩衝液、結合剤、ブラスチング剤、希釈剤、風味、潤滑剤などの賦形剤を含有し得る。ペプチドはまた、サイトカインなどの免疫刺激物質と共に投与され得る。このような組成物中で使用され得る賦形剤の詳細な一覧は、例えば、Ａ．Ｋｉｂｂｅ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（Ｋｉｂｂｅ，２０００）から採用され得る。組成物は、腺腫様またはがん性疾患の阻止、予防法および／または治療法のために使用され得る。例示的調合物は、例えば、欧州特許第２１１２２５３号明細書にある。
【０４４６】
本発明によるワクチンによって引き起こされる免疫応答は、異なる細胞分裂期および異なる発生段階のがんを攻撃することを理解することが重要である。さらに、異なるがん関連シグナル伝達経路が攻撃される。これは、１つまたは少数の標的のみに対処して、攻撃に対する腫瘍の容易な適応（腫瘍エスケープ）を引き起こすこともある、ワクチンに優る利点である。さらに個々の腫瘍の全てが、同一パターンの抗原を発現するとは限らない。したがって、いくつかの腫瘍関連ペプチドの組み合わせによって、ありとあらゆる腫瘍が標的の少なくとも一部を有することが確実になる。組成物は、それぞれの腫瘍が抗原のいくつかを発現することを予期して設計され、腫瘍の増殖と維持に必要ないくつかの独立した経路をカバーする。したがって、ワクチンは、より大きな患者集団のために、容易に「出来合」で使用され得る。これは、ワクチンで治療される患者の予備選択が、ＨＬＡタイピングに限定され得て、抗原発現に関する任意の追加的なバイオマーカーアセスメントを必要としないことを意味するが、いくつかの標的が誘導免疫応答によって同時に攻撃されることはなおも確実であり、これは有効性にとって重要である（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｗａｌｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０４４７】
本明細書の用法では、「スキャフォールド」という用語は、（例えば、抗原性）決定因子に特異的に結合する分子を指す。一実施形態では、スキャフォールドはまた、それが付着する実体（例えば、（第２の）抗原結合部分）を例えば、抗原決定基（例えば本出願書に記載のペプチドとＭＨＣの複合体）を有する特異的腫瘍細胞または腫瘍間質などの型標的部位に誘導できる。別の実施形態では、キャフォールドは、例えば、Ｔ細胞受容体複合体抗原などのその標的抗原を通じて、シグナル伝達を活性化できる。スキャフォールドとしては、抗体およびそれらのフラグメント、抗体重鎖可変領域および抗体軽鎖可変領域を含んでなる抗体の抗原結合ドメイン、少なくとも１つのアンキリンリピートモチーフと単一ドメイン抗原結合（ＳＤＡＢ）分子とを含んでなる結合タンパク質、アプタマー、（可溶性）ＴＣＲ、および同種または自己由来Ｔ細胞などの（改変）細胞が挙げられるが、これに限定されるものではない。分子が標的に結合するスキャフォールドであるかどうかを評価するために、結合アッセイが実施され得る。
【０４４８】
「特異的」結合は、特異的標的を保有する細胞を殺滅できる活性分子を装備したスキャフォールドが、特異的標的がないがその他のペプチド−ＭＨＣ複合体を提示する別の細胞を殺滅できない程度に、スキャフォールドがその他の天然ペプチド−ＭＨＣ−複合体よりもさらに良好に、目的ペプチド−ＭＨＣ−複合体に結合することを意味する。交差反応性ペプチド−ＭＨＣのペプチドが天然に存在せず、すなわち、ヒトＨＬＡ−ペプチドームに由来しない場合、その他のペプチド−ＭＨＣ複合体への結合は無関係である。標的細胞死滅を評価する試験は、当該技術分野で周知である。それらは、非改変ペプチド−ＭＨＣ提示を有する標的細胞（初代細胞または細胞株）、または天然に存在するペプチド−ＭＨＣレベルに達するようにペプチドを負荷された細胞を使用して、実施されるべきである。
【０４４９】
各スキャフォールドは標識を含んでなり得て、それは、標識によって提供されるシグナルの存在または不在を判定することで、結合スキャフォールドが検出され得ることを提供する。例えば、スキャフォールドは、蛍光染料または任意のその他の適用可能な細胞マーカー分子で標識され得る。このようなマーカー分子は、当該技術分野で周知である。例えば、蛍光染料によって提供される蛍光標識は、蛍光またはレーザー走査顕微鏡またはフローサイトメトリーによる、結合アプタマーの視覚化を提供し得る。
【０４５０】
各スキャフォールドは、例えば、ＩＬ−２１、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２８などの第２の活性分子にコンジュゲートされ得る。
【０４５１】
ポリペプチドスキャフォールドに関するさらなる情報については、例えば国際公開第２０１４／０７１９７８Ａ１号パンフレットの背景セクション、およびその中で引用された参考文献を参照されたい。
【０４５２】
本発明は、アプタマーにさらに関する。アプタマー（例えば、国際公開第２０１４／１９１３５９号パンフレット、およびその中で引用される文献を参照されたい）は、短い一本鎖核酸分子であり、それは、所定の三次元構造に折り畳まれて、特異的標的構造体を認識し得る。それらは、標的療法を開発するための適切な代案のようであった。アプタマーは、高い親和性および特異性で、多様な複合体標的と選択的に結合することが示されている。
【０４５３】
細胞表面に位置する分子を認識するアプタマーは、過去１０年内に同定されており、診断および治療的アプローチを開発する手段を提供する。アプタマーは、毒性および免疫原性がほぼ皆無であることが示されているので、それらは生物医学的用途のための有望な候補である。確かに、例えば、前立腺特異的膜抗原認識アプタマーなどのアプタマーは、標的療法のために成功裏に用いられており、異種移植片生体内モデルにおいて機能できることが示されている。さらに、特異的腫瘍細胞株を認識するアプタマーが同定されている。
【０４５４】
ＤＮＡアプタマーは、様々ながん細胞、特に固形腫瘍に由来するものに対して広域スペクトル認識特性を示す一方で、非腫瘍発生性および主要健常細胞を認識しないように選択され得る。同定されたアプタマーが、特異的腫瘍サブタイプを認識するだけでなく、むしろ一連の腫瘍と相互作用する場合、これは、アプタマーをいわゆる広域スペクトル診断薬および治療薬として応用可能にする。
【０４５５】
さらに、フローサイトメトリーによる細胞結合挙動の調査は、アプタマーがナノモル濃度範囲内の非常に良好な見かけの親和性を見せたことを示した。
【０４５６】
アプタマーは、診断および治療目的で有用である。さらに、アプタマーの一部は腫瘍細胞に取り込まれ、したがって腫瘍細胞内へのｓｉＲＮＡなどの抗がん剤の標的化送達のための分子ビヒクルとして、機能し得ることが示され得た。
【０４５７】
アプタマーは、細胞ＳＥＬＥＸ（試験管内進化法）技術を使用して、細胞および組織などの複合体標的に対して、および本発明による配列番号１〜配列番号３８８のいずれかに記載の配列とＭＨＣ分子とを含んでなり、好ましくはそれからなるペプチド複合体などに対して、選択され得る。
【０４５８】
本発明のペプチドを使用して、ＭＨＣ／ペプチド複合体に対する特異的抗体が生成され、開発され得る。これらは、毒素または放射性物質を患部組織に標的化する治療法のために、使用され得る。これらの抗体の別の用途は、ＰＥＴなどのイメージング目的の放射性核種の患部組織への標的化であり得る。この用途は、小規模な転移の検出、または病的組織の大きさと正確な位置確認の判定を助け得る。
【０４５９】
したがってＨＬＡ拘束性抗原と複合体化した、ヒト主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩまたはＩＩと特異的に結合する、組換え抗体を製造する方法を提供することが、本発明のさらなる態様であり、方法は、前記ヒト主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩまたはＩＩを発現する細胞を含んでなる、遺伝子操作された非ヒト哺乳類を前記ＨＬＡ拘束性抗原と複合体化した可溶性形態のＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子によって免疫化するステップと；ｍＲＮＡ分子を前記非ヒト哺乳類の抗体産生細胞から単離するステップと；前記ｍＲＮＡ分子によってコードされるタンパク質分子を提示する、ファージディスプレイライブラリーを作製するステップと；少なくとも１つのファージを前記ファージディスプレイライブラリーから単離するステップとを含んでなり、前記少なくとも１つのファージは、前記ＨＬＡ拘束性抗原と複合体化した前記ヒト主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩまたはＩＩと特異的に結合する、前記抗体を提示する。
【０４６０】
ＨＬＡ拘束性抗原と複合体化したヒト主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩまたはＩＩと特異的に結合する抗体を提供することも、本発明のさらなる態様であり、その中で抗体は、好ましくは、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、二重特異性抗体および／またはキメラ抗体である。
【０４６１】
このような抗体および一本鎖クラスＩ主要組織適合性複合体を製造するそれぞれの方法、ならびにこれらの抗体を製造するためのその他のツールは、本発明の目的で、その内容全体が参照により全て明示的に援用される、国際公開第０３／０６８２０１号パンフレット、国際公開第２００４／０８４７９８号パンフレット、国際公開第０１／７２７６８号パンフレット、国際公開第０３／０７０７５２号パンフレット、および文献（Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３ａ；Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３ｂ；Ｄｅｎｋｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）で開示される。
【０４６２】
好ましくは、抗体は，２０ナノモル濃度未満、好ましくは１０ナノモル濃度未満の結合親和性で複合体に結合し、それは本発明の文脈で「特異的」とも見なされる。
【０４６３】
本発明は、配列番号１〜配列番号３８８からなる群から選択される配列、または配列番号１〜配列番号３８８と少なくとも８８％相同的な（好ましくは同一の）その変異型を含んでなるペプチド、またはＴ細胞を前記ペプチドと交差反応させるその変異型に関し、前記ペプチドは、基礎となる完全長ポリペプチドでない。
【０４６４】
本発明は、配列番号１〜配列番号３８８からなる群から選択される配列、または、配列番号１〜配列番号３８８と少なくとも８８％相同的な（好ましくは同一の）その変異型を含んでなるペプチドにさらに関し、前記ペプチドまたは変異型は、８〜１００、好ましくは８〜３０、最も好ましくは８〜１４アミノ酸の全長を有する。
【０４６５】
本発明は、ヒト主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩまたはＩＩの分子に結合する能力を有する、本発明によるペプチドにさらに関する。
【０４６６】
本発明は、ペプチドが、配列番号１〜配列番号３８８に記載のアミノ酸配列からなり、またはそれから本質的になる、本発明によるペプチドにさらに関する。
【０４６７】
本発明は、ペプチドが（化学的に）修飾された、および／または非ペプチド結合を含む、本発明によるペプチドにさらに関する。
【０４６８】
本発明は、本発明によるペプチドにさらに関し、ペプチドは、融合タンパク質の一部であり、特にＨＬＡ−ＤＲ抗原関連不変鎖（Ｉｉ）のＮ末端アミノ酸を含んでなり、またはペプチドは、例えば樹状細胞特異的抗体などの抗体に（またその中に）融合する。
【０４６９】
本発明は、本発明によるペプチドをエンコードする核酸にさらに関するが、ただしペプチドは完全（完全長）ヒトタンパク質でない。
【０４７０】
本発明は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＰＮＡ、ＲＮＡまたはそれらの組み合わせである、本発明による核酸にさらに関する。
【０４７１】
本発明は、本発明による核酸を発現できる、または発現する発現ベクターにさらに関する。
【０４７２】
本発明は、医療において、特に、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん（ＧＣ）、精巣がん（ＴＣ）、膀胱がん（ＵＢＣ）、頭部および頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、または子宮がん（ＵＥＣ）などのがんの治療において使用するための本発明によるペプチド、本発明による核酸または本発明による発現ベクターにさらに関する。
【０４７３】
本発明は、本発明による核酸または本発明による発現ベクターを含んでなる、宿主細胞にさらに関する。
【０４７４】
本発明は、抗原提示細胞、好ましくは樹状細胞である、本発明による宿主細胞にさらに関する。
【０４７５】
本発明は、本発明による宿主細胞を培養するステップと、宿主細胞および／またはその培養液からペプチドを単離するステップとを含んでなる、本発明によるペプチドを製造する方法にさらに関する。
【０４７６】
本発明は、十分な量の抗原を抗原提示細胞に接触させることで、適切な抗原提示細胞の表面に発現されるクラスＩまたはＩＩ  ＭＨＣ分子上に、抗原が負荷される、本発明による方法にさらに関する。
【０４７７】
本発明は、抗原提示細胞が、配列番号１〜配列番号３８８または前記異アミノ酸配列を含有する、前記ペプチドを発現できる、発現ベクターを含んでなる、本発明による方法にさらに関する。
【０４７８】
本発明は、本発明による方法によって製造される活性化Ｔ細胞にさらに関し、前記Ｔ細胞は、本発明によるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを異常に発現する細胞を選択的に認識する。
【０４７９】
本発明は、本発明によるＴ細胞の有効数を患者に投与するステップを含んでなる、患者において、本発明による任意のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを異常に発現する標的細胞を死滅させる方法にさらに関する。
【０４８０】
本発明は、記載される任意のペプチド、本発明による核酸、本発明による発現ベクター、本発明による細胞、または本発明による活性化細胞傷害性Ｔリンパ球の、薬剤としての、または薬剤の製造における、使用にさらに関する。本発明は、薬剤ががんに対して有効である、本発明による使用にさらに関する。
【０４８１】
本発明は、薬剤がワクチンである、本発明による使用にさらに関する。本発明は、薬剤ががんに対して有効である、本発明による使用にさらに関する。
【０４８２】
本発明は、発明による使用にさらに関し、その中で前記がん細胞は、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、または子宮がんなどの固形または血液学的腫瘍細胞である。
【０４８３】
本発明は、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、または子宮がんの診断および／または予後診断において使用され得る、本明細書で「標的」と称される、本発明によるペプチドベースの特定の標識タンパク質およびバイオマーカーにさらに関する。本発明はまた、がん治療のためのこれらの新規標的の使用に関する。
【０４８４】
「抗体（単数）」または「抗体（複数）」という用語は、本明細書では広義に使用され、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の双方を含む。非損傷または「完全」免疫グロブリン分子に加えて、「抗体」という用語には、それらが本発明による所望の性質のいずれか（例えば、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、または子宮がんマーカー（ポリ）ペプチドの特異的結合、増加したレベルでがんマーカー遺伝子を発現するがん細胞への毒素の送達、および／またはがんマーカーポリペプチドの活性の阻害）を示しさえすれば、これらの免疫グロブリン分子のフラグメント（例えば、ＣＤＲ、Ｆｖ、Ｆａｂ、およびＦｃフラグメント）またはポリマー、および免疫グロブリン分子のヒト化バージョンもまた含まれる。
【０４８５】
可能な場合は常に、本発明の抗体は、商業的供給元から購入されてもよい。また本発明の抗体は、周知の方法を使用して生成されてもよい。当業者は、完全長の神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん，胃食道接合部のがんを含む食道がんる、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭頸部扁上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、または子宮がんマーカーポリペプチド、またはその断片のどちらかを使用して、本発明の抗体が生成されてもよいことを理解するであろう。本発明の抗体を製造するために使用されるポリペプチドは、天然原料から部分的にまたは完全に精製されてもよく、または組換えＤＮＡ技術を使用して製造されてもよい。
【０４８６】
例えば、配列番号１〜配列番号３８８ポリペプチドに記載のペプチドなどの本発明によるペプチドをコードするｃＤＮＡ、またはその変異型またはフラグメントが、原核細胞（例えば、細菌）または真核細胞（例えば、酵母、昆虫、または哺乳類細胞）で発現され得て、その後、組換えタンパク質が精製されて、本発明による抗体を生成するために使用される、上述のがんのマーカーポリペプチドに特異的に結合する、モノクローナルまたはポリクローナル抗体製剤を生成するために使用され得る。
【０４８７】
当業者は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体の２つ以上の異なるセットの生成が、その目的の用途（例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学的検査、生体内イメージング、免疫毒素療法）に必要な特異性および親和性を有する抗体を得る可能性を最大化することを理解するであろう。抗体は、それに対して抗体が使用される目的に従って、公知の方法によって、それらの所望の活性について試験される（例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学的検査、免疫療法など；抗体の生成と試験のさらなるガイダンスについては、例えば、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，２０１４（Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，２０１４））を参照されたい例えば、抗体は、ＥＬＩＳＡアッセイ、ウエスタンブロット、ホルマリン固定がんまたは冷凍組織切片の免疫組織化学染色で試験されてもよい。それらの最初の生体外特性解析後、治療または生体内診断用途を意図した抗体が、既知の臨床試験法によって試験される。
【０４８８】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書の用法では、実質的に均質な抗体集団から得られる抗体を指し；すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量で存在してもよい可能な自然発生突然変異以外は同一である。本明細書では、「モノクローナル抗体」は、それらが所望の拮抗活性を示しさえすれば、その中で重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来しまたは特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同的である一方、鎖の残部は、別の種に由来しまたは別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同的である、「キメラ」抗体、ならびにこのような抗体のフラグメントを特に含む（その内容全体が本明細書に援用される、米国特許第４，８１６，５６７号明細書）。
【０４８９】
本発明のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法を使用して調製されてもよい。ハイブリドーマ法においては、マウスまたはその他の適切な宿主動物が免疫剤によって典型的に免疫化されて、免疫剤と特異的に結合する抗体を産生するまたは産生できるリンパ球を生じさせる。代案としては、リンパ球は、生体外で免疫化されてもよい。
【０４９０】
モノクローナル抗体はまた、米国特許第４，８１６，５６７号明細書に記載されるものなどの組換えＤＮＡ法によって製造されるものであってもよい。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して、容易に単離および配列決定され得る（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合できる、オリゴヌクレオチドプローブの使用によって）。
【０４９１】
インビトロ法もまた、一価の抗体を調製するのに適する。抗体フラグメント、特にＦａｂフラグメントを作製するための抗体の消化は、当該技術分野で既知の通例の技術を使用して達成され得る。例えば、消化は、パパインを使用して実施され得る。パパイン消化の例は、国際公開第９４／２９３４８号パンフレットおよび米国特許第４，３４２，５６６号明細書に記載される。抗体のパパイン消化は、それぞれ単一抗原結合部位を有するＦａｂフラグメントと称される２つの同一の抗原結合フラグメントと、残りのＦｃフラグメントとを典型的に生じる。ペプシン処理は、Ｆ（ａｂ'）２フラグメントおよびｐＦｃ'フラグメントをもたらす。
【０４９２】
抗体フラグメントは、その他の配列に付着するかどうかに関わりなく、フラグメントの活性が非修飾抗体または抗体フラグメントと比較して顕著に変化せずまたは損なわれないという条件で、特定領域または特定アミノ酸残基の挿入、欠失、置換、またはその他の選択された修飾もまた含み得る。これらの修飾は、ジスルフィド結合できるアミノ酸の除去／付加、そのバイオ寿命増大、その分泌特性改変などのいくつかの追加的な特性を提供し得る。いずれにしても、抗体フラグメントは、結合活性、結合領域における結合調節などの生理活性特性を有しなくてはならない。抗体の機能性または活性領域は、タンパク質の特定領域の変異誘発と、それに続く発現と、発現したポリペプチドの試験によって同定されてもよい。このような方法は、当該技術分野の熟練した実務家には容易に分かり、抗体フラグメントをエンコードする核酸の部位特異的変異誘発を含み得る。
【０４９３】
本発明の抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体をさらに含んでなってもよい。非ヒト（例えばマウス）抗体などのヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそのフラグメント（抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'またはその他の抗原結合部分配列など）である。ヒト化抗体としては、その中でレシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する、マウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト生物種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置換される、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）が挙げられる。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体または移入ＣＤＲまたはフレームワーク配列のどちらにも見いだされない、残基を含んでなってもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つおよび典型的に２つの可変領域の実質的に全てを含んでなり、その中では、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン共通配列のものである。ヒト化抗体は、至適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部もまた含んでなる。
【０４９４】
非ヒト抗体をヒト化する方法は、当該技術分野で周知である。通常、ヒト化抗体は、非ヒト起源から導入された、１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば「移入」残基と称され、それは典型的に「移入」可変領域から得られる。ヒト化は、齧歯類ＣＤＲ（複数）またはＣＤＲ（単数）配列を対応するヒト抗体配列によって置換することで、基本的に実施され得る。したがって、このような「ヒト化」抗体は、キメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号明細書）であり、その中では、実質的に非損傷ヒト可変領域未満が、非ヒト生物種からの対応する配列によって置換されている。実際には、ヒト化抗体は典型的にヒト抗体であり、その中ではいくつかのＣＤＲ残基と、おそらくはいくつかのＦＲ残基とが、齧歯類抗体中の類似部位からの残基によって置換される。
【０４９５】
免疫化に際して、内因性免疫グロブリン生成不在下で、ヒト抗体の完全レパートリーを産生できる遺伝子組換え動物（例えばマウス）を用い得る。例えば、キメラおよび生殖細胞系変異マウスにおける、抗体重鎖連結領域遺伝子のホモ接合型欠失が、内因性抗体生成の完全阻害をもたらすことが記載されている。このような生殖細胞系変異マウスにおけるヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイの転写は、抗原チャレンジに際してヒト抗体の産生をもたらす。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリー中でも産生され得る。
【０４９６】
本発明の抗体は、好ましくは薬学的に許容できる担体中で、対象に投与される。典型的に、製剤中で適当量の薬理的に許容可能な塩が使用されて、製剤を等張にする。薬理的に許容可能な担体の例としては、生理食塩水、リンゲル液、およびデキストロース溶液が挙げられる。溶液のｐＨは、好ましくは約５〜約８、より好ましくは約７〜約７．５である。さらなる担体としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックス徐放性製剤が挙げられ、そのマトリックスは、例えば、フィルム、リポソームまたは微粒子などの造形品の形態である。当業者には、例えば、投与される抗体の投与経路と濃度次第で、特定の担体がより好ましくあってもよいことが明らかであろう。
【０４９７】
抗体は、注射（例えば、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内）によって、またはその有効形態での血流への送達を確実にする輸液などのその他の方法によって、対象、患者、または細胞に投与され得る。抗体はまた、腫瘍内または腫瘍周囲経路によって投与されて、局所性ならびに全身性の治療効果を発揮してもよい。局所注射または静脈注射が好ましい。
【０４９８】
抗体を投与するための有効投与量およびスケジュールは、経験的に判定されてもよく、このような測定の実施は、当該技術分野の技術範囲内である。当業者は、投与しなくてはならない抗体用量が、例えば、抗体を投与される対象、投与経路、使用される特定の抗体型、および投与されるその他の薬剤次第で変動することを理解するであろう。単独使用される抗体の典型的な１日量は、上述の要素次第で、１日あたり約１（μｇ／ｋｇ〜最大１００ｍｇ／ｋｇ体重またはそれ以上の範囲に及ぶかもしれない。好ましくは、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、または子宮がんを治療するための抗体投与に続いて、治療用抗体の有効性が、熟練した実務家に良く知られている様々な様式で評価され得る。例えば、標準腫瘍イメージング技術を使用して、治療を受ける対象におけるがんの大きさ、数、および／または分布がモニターされてもよい。抗体投与不在下で起こるであろう疾患経過と比較して、腫瘍成長を停止させ、腫瘍収縮をもたらし、および／または新規腫瘍の発生を予防する、治療的に投与された抗体は、がん治療のための有効な抗体である。
【０４９９】
特異的ペプチド−ＭＨＣ複合体を認識する可溶性Ｔ細胞受容体（ｓＴＣＲ）を製造する方法を提供することもまた、本発明のさらなる態様である。このような可溶性Ｔ細胞受容体は、特異的Ｔ細胞クローンから生成され得て、それらの親和性は、相補性決定領域を標的とする変異誘発によって増加させ得る。Ｔ細胞受容体の選択目的で、ファージディスプレイが利用され得る（米国特許第２０１０／０１１３３００号明細書、（Ｌｉｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２））。ファージディスプレイ中に、そして薬剤として実用する際に、Ｔ細胞受容体を安定化させる目的で、例えば、非天然ジスルフィド結合、その他の共有結合（一本鎖Ｔ細胞受容体）、または二量体化ドメインによって、αおよびβ鎖を連結させ得る（Ｂｏｕｌｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；Ｃａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；Ｗｉｌｌｃｏｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。Ｔ細胞受容体は、標的細胞上で特定機能を発揮させるために、毒素、薬剤、サイトカイン（例えば、米国特許第２０１３／０１１５１９１号明細書を参照されたい）、抗ＣＤ３ドメインのようなエフェクター細胞動員ドメインなどに、連結させ得る。さらにそれは、養子免疫伝達のために使用されるＴ細胞において発現され得た。さらなる情報は、国際公開第２００４／０３３６８５Ａ１号パンフレットおよび国際公開第２００４／０７４３２２Ａ１号パンフレットにある。ＴＣＲの組み合わせは、国際公開第２０１２／０５６４０７Ａ１号パンフレットに記載される。さらなる製造法は、国際公開第２０１３／０５７５８６Ａ１号パンフレットで開示される。
【０５００】
さらに本発明のペプチドおよび／またはＴＣＲまたは抗体またはその他の結合分子を使用して、病理学者の生検サンプルに基づくがん診断を確認し得る。
【０５０１】
抗体またはＴＣＲはまた、生体内診断アッセイのために使用されてもよい。通常、抗体は、腫瘍が位置確認され得るように、免疫シンチグラフィー（ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｏｇｒａｐｈｙ）を使用して、放射性ヌクレオチド（１１１Ｉｎ、９９Ｔｃ、１４Ｃ、１３１Ｉ、３Ｈ、３２Ｐまたは３５Ｓなど）で標識される。一実施形態では、抗体またはそれらのフラグメントは、上述のタンパク質からなる群から選択されるタンパク質の２つ以上の標的の細胞外ドメインに結合し、親和性（Ｋｄ）は１×１０μＭ未満である。
【０５０２】
診断用の抗体は、様々なイメージング法による検出に適するプローブで標識されてもよい。プローブの検出方法としては、蛍光、光学、共焦点および電子顕微鏡検査；磁気共鳴画像法および分光法；蛍光透視法、コンピュータ断層撮影および陽電子放射型断層撮影法が挙げられるが、これに限定されるものではない。適切なプローブとしては、フルオレセイン、ローダミン、エオジンおよびその他のフルオロフォア、放射性同位体、金、ガドリニウムおよびその他のランタニド、常磁性鉄、フッ素１８およびその他の陽電子放出放射性核種が挙げられるが、これに限定されるものではない。さらに、プローブは二官能価または多官能価であってもよく、列挙される方法の２つ以上によって検出可能であってもよい。これらの抗体は、前記プローブで直接または間接的に標識されてもよい。特に十分に技術分野で承認されている、プローブの抗体への付着としては、プローブの共有結合、プローブの抗体への組み込み、およびプローブ結合のためのキレート化合物の共有結合が挙げられる。免疫組織化学的検査では、疾患組織サンプルは、新鮮または冷凍であってもよく、またはパラフィン包埋されてホルマリンなどの保存料で固定されてもよい。サンプルを含有する固定または包埋切片は、標識一次抗体および二次抗体と接触されて、抗体を使用して原位置タンパク質発現が検出される。
【０５０３】
本発明の別の態様は、活性化Ｔ細胞を製造するインビトロ法を含み、方法は、生体外Ｔ細胞を、適切な抗原提示細胞の表面に発現される抗原負荷ヒトＭＨＣ分子に、Ｔ細胞を抗原特異的様式で活性化するのに十分な時間にわたり接触させるステップを含んでなり、抗原は本発明によるペプチドである。好ましくは、抗原提示細胞と共に、十分な量の抗原が使用される。
【０５０４】
好ましくは、哺乳類細胞は、ＴＡＰペプチド輸送体のレベルまたは機能が皆無でありまたは低下している。ＴＡＰペプチド輸送体が欠如している適切な細胞としては、Ｔ２、ＲＭＡ−Ｓ、およびショウジョウバエ細胞が挙げられる。ＴＡＰは、抗原プロセシングに関連している輸送体である。
【０５０５】
ヒトペプチド負荷欠乏細胞系Ｔ２は、カタログ番号ＣＲＬ１９９２の下に、米国微生物系統保存機関、１２３０１  Ｐａｒｋｌａｗｎ  Ｄｒｉｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ  ２０８５２，ＵＳＡから入手でき；ショウジョウバエ細胞株Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ株２は、カタログ番号ＣＲＬ１９８６３の下にＡＴＣＣから入手でき；マウスＲＭＡ−Ｓ細胞株はＬｊｕｎｇｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｌｊｕｎｇｇｒｅｎ  ａｎｄ  Ｋａｒｒｅ，１９８５）に記載される。
【０５０６】
好ましくは、移入前に、宿主細胞は、ＭＨＣクラスＩ分子を実質的に発現しない。刺激因子細胞が、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＣＡＭ−１、およびＬＦＡ３のいずれかなどのＴ細胞のための共刺激シグナルを提供するのに重要な分子を発現することもまた好ましい。多数のＭＨＣクラスＩ分子および共刺激因子分子の核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋおよびＥＭＢＬデータベースから公的に入手可能である。
【０５０７】
ＭＨＣクラスＩエピトープが抗原として使用される場合、Ｔ細胞はＣＤ８陽性Ｔ細胞である。
【０５０８】
抗原提示細胞が、このようなエピトープを発現するために形質移入される場合、好ましくは、細胞は、配列番号１〜配列番号３８８、またはその変異アミノ酸配列を含有するペプチドを発現する能力がある発現ベクターを含んでなる。
【０５０９】
生体外でＴ細胞を製造するために、その他のいくつかの方法が使用されてもよい。例えば、自己由来腫瘍浸潤性リンパ球が、ＣＴＬを生成するために使用され得る。Ｐｌｅｂａｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｌｅｂａｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）は、Ｔ細胞の調製において、自己由来末梢血リンパ球（ＰＬＢ）を利用した。さらに、樹状細胞をペプチドまたはポリペプチドでパルス処理する、または組換えウイルスで感染させることによる、自己由来Ｔ細胞の製造も可能である。Ｂ細胞もまた、自己由来Ｔ細胞の製造において使用され得る。さらに、ペプチドまたはポリペプチドでパルス処理された、または組換えウイルスで感染されたマクロファージが、自己ＣＴＬの調製において使用されてもよい。Ｓ．Ｗａｌｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｗａｌｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）は、人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を使用したＴ細胞の生体外プライミングを記載し、それはまた、選択されたペプチドに対するＴ細胞を製造するための適切な方法でもある。本発明では、ビオチン：ストレプトアビジン生化学によって、あらかじめ形成されたＭＨＣ：ペプチド複合体を表面ポリスチレン粒子（ミクロビーズ）に共役することで、ａＡＰＣが生成された。このシステムは、ａＡＰＣ上のＭＨＣ密度の正確な調節を可能にし、それは、血液サンプルから高効率で、高または低結合活性の抗原特異的Ｔ細胞応答を選択的に引き起こすことを可能にする。ＭＨＣ：ペプチド複合体の他に、ａＡＰＣは、それらの表面に共役する、抗ＣＤ２８抗体のような共刺激活性を有するその他のタンパク質を保有すべきである。さらに、このようなａＡＰＣベースのシステムは、例えばサイトカイン様インターロイキン１２などの適切な可溶性因子の付加を要することが多い。
【０５１０】
同種異系細胞はまた、Ｔ細胞の調製において使用されてもよく、方法は、参照により本明細書に援用される、国際公開第９７／２６３２８号パンフレットで詳述される。例えば、ショウジョウバエ細胞およびＴ２細胞に加えて、その他の細胞を使用して、ＣＨＯ細胞、バキュロウイルス感染昆虫細胞、細菌、酵母、ワクシニア感染標的細胞などの抗原を提示してもよい。さらに植物ウイルスが使用されてもよい（例えば、外来性ペプチド提示のための高収率システムとしてのササゲモザイクウイルス開発を記載するＰｏｒｔａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｏｒｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４を参照されたい）。
【０５１１】
本発明のペプチドに向けられた活性化Ｔ細胞は、治療法において有用である。したがって、本発明のさらなる態様は、前述の本発明の方法によって入手可能な活性化Ｔ細胞を提供する。
【０５１２】
上記方法によって製造される活性化Ｔ細胞は、配列番号１〜配列番号３８８のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを異常に発現する細胞を選択的に認識する。
【０５１３】
好ましくは、Ｔ細胞は、そのＴＣＲを通じた、ＨＬＡ／ペプチド複合体（例えば結合）との相互作用によって、細胞を認識する。Ｔ細胞は、その標的細胞が、本発明のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを異常に発現する患者において、標的細胞を死滅させる方法で有用であり、患者には有効数の活性化Ｔ細胞が投与される。患者に投与されるＴ細胞は、患者に由来して、上述のように活性化されてもよい（すなわち、それらは自己Ｔ細胞である）。代案としては、Ｔ細胞は、患者でなく別の個人に由来する。もちろん、個人が健常人であれば、それが好ましい。「健常人」によって、本発明者らは、個人が概して健康良好であり、好ましくは有能な免疫系を有して、より好ましくは容易に検査され検出され得るいかなる疾患にも罹患していないことを意味する。
【０５１４】
生体内で、本発明によるＣＤ８陽性Ｔ細胞の標的細胞は、（時にＭＨＣクラスＩＩを発現する）腫瘍細胞であり得て、および／または（時にＭＨＣクラスＩＩもまた発現する；（Ｄｅｎｇｊｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００６））腫瘍（腫瘍細胞）周囲の間質細胞であり得る。
【０５１５】
本発明のＴ細胞は、治療用組成物の活性成分として使用されてもよい。したがって、本発明は、その標的細胞が、本発明のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを異常に発現する患者において、標的細胞を死滅させる方法もまた提供し、方法は、上で定義されるようなＴ細胞の有効数を患者に投与するステップを含んでなる。
【０５１６】
「異常に発現される」によって、本発明者らは、正常組織における発現レベルと比較して、ポリペプチドが過剰発現されること、または腫瘍がそれに由来する組織においては遺伝子がサイレントであるが、腫瘍においてはそれが発現されることもまた意味する。「過剰発現」によって、本発明者らは、ポリペプチドが、正常組織に存在するレベルの少なくとも１．２倍のレベルで；好ましくは正常組織に存在するレベルの少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも５倍または１０倍のレベルで存在することを意味する。
【０５１７】
Ｔ細胞は、例えば上で記載されるものなどの当該技術分野で公知の方法によって得られてもよい。
【０５１８】
Ｔ細胞のこのいわゆる養子免疫伝達のためのプロトコルは、当該技術分野で周知である。レビューは、Ｇａｔｔｉｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．およびＭｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）にある。
【０５１９】
本発明の別の態様は、その核酸がクローン化されて、好ましくはＴ細胞である宿主細胞に導入されるＴ細胞受容体を生成するための、ＭＨＣと複合体形成するペプチドの使用を含む。次に、この遺伝子操作Ｔ細胞は、がん治療のために患者に移入され得る。
【０５２０】
本発明の任意の分子、すなわちペプチド、核酸、抗体、発現ベクター、細胞、活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞受容体またはそれをエンコードする核酸は、免疫応答を逃れた細胞によって特徴付けられる障害の治療に有用である。したがって本発明の任意の分子は、薬剤として、または薬剤の製造において使用されてもよい。分子は、単独で、または本発明のその他の分子または既知の分子との組み合わせで、使用されてもよい。
【０５２１】
本発明は、
（ａ）溶液中のまたは凍結乾燥形態の上述の医薬組成物を含有する容器；
（ｂ）任意選択的に、凍結乾燥製剤のための希釈剤または再構成溶液を含有する第２の容器；および
（ｃ）任意選択的に、（ｉ）溶液の使用、または（ｉｉ）凍結乾燥製剤の再構成および／または使用のための取扱説明書
を含んでなるキットをさらに目的とする。
【０５２２】
キットは、（ｉｉｉ）緩衝液、（ｉｖ）希釈剤、（ｖ）濾過、（ｖｉ）針、または（ｖ）シリンジの１つまたは複数をさらに含んでなってもよい。容器は、好ましくは、ボトル、バイアル、シリンジまたは試験管であり；それは、多回使用容器であってもよい。医薬組成物は、好ましくは凍結乾燥される。
【０５２３】
本発明のキットは、好ましくは、適切な容器内の本発明の凍結乾燥製剤と、その再構成および／または使用のための取扱説明書とを含んでなる。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル（例えば二重チャンバーバイアル）、シリンジ（二重チャンバーシリンジなど）、および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの多様な材料から形成されてもよい。好ましくは、キットおよび／または容器は、容器上の、または容器に付随する、取扱説明を含み、それは再構成および／または使用上の指示を示す。例えば、ラベルは、凍結乾燥製剤が、上述されるようなペプチド濃度に再構成されることを表示してもよい。ラベルは、製剤が皮下投与に有用であり、または皮下投与用であることをさらに表示してもよい。
【０５２４】
製剤を収容する容器は、多回使用バイアルであってもよく、それは再構成製剤の反復投与（例えば２〜６回の投与）を可能にする。キットは、適切な希釈剤（例えば、炭酸水素ナトリウム溶液）を含んでなる、第２の容器をさらに含んでなってもよい。
【０５２５】
希釈剤と凍結乾燥製剤の混合時に、再構成製剤中の最終ペプチド濃度は、好ましくは少なくとも０．１５ｍｇ／ｍＬ／ペプチド（＝７５μｇ）であり、好ましくは３ｍｇ／ｍＬ／ペプチド（＝１５００μｇ）以下である。キットは、その他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および取扱説明が掲載されるパッケージインサートをはじめとする商業的および使用者観点から望ましい、その他の物品をさらに含んでもよい。
【０５２６】
本発明のキットは、その他の構成要素（例えば、その他の化合物またはこれらのその他の化合物の医薬組成物）が添加されたまたは添加されない、本発明による医薬組成物製剤を含有する単回容器を有してもよく、または各構成要素のための別個の容器を有してもよい。
【０５２７】
好ましくは、本発明のキットは、第２の化合物（アジュバント（例えばＧＭ−ＣＳＦ）、化学療法剤、天然物、ホルモンまたは拮抗薬、抗血管新生因子または阻害剤、アポトーシス誘導剤またはキレート剤など）またはその医薬組成物の同時投与と合わせて使用するためにパッケージされた、本発明の製剤を含む。キットの構成要素は、あらかじめ混合されてもよく、または各構成要素は、患者への投与前に別個の異なる容器内にあってもよい。キットの構成要素は、１つまたは複数の液体溶液、好ましくは水溶液、より好ましくは無菌水溶液中で、提供されてもよい。またキットの構成要素は、固体として提供されてもよく、それは、好ましくは別の異なる容器内に提供される、適切な溶媒の添加によって液体に変換されてもよい。
【０５２８】
治療用キットの容器は、バイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジ、または固体または液体を封入するその他のあらゆる手段であってもよい。通常，２つ以上の構成要素がある場合、キットは、第２のバイアルまたはその他の容器を含有して、別々の投薬を可能にする。キットは、薬学的に許容可能な液体のための別の容器もまた、含有してもよい。好ましくは、治療用キットは、装置（例えば、１本または複数本の針、シリンジ、点眼器、ピペットなど）を含有して、本キットの構成要素である本発明の作用物質の投与を可能にする。
【０５２９】
本製剤は、経口（腸内）、経鼻、眼、皮下、皮内、筋肉内、静脈内または経皮などの任意の許容できる手段によるペプチド投与に適するものである。好ましくは、投与はｓ．ｃ．であり、最も好ましくはｉ．ｄ．投与であり、輸液ポンプによってもよい。
【０５３０】
本発明のペプチドは、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん，、または子宮がんから単離されたので、本発明の薬剤は、好ましくは、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、または子宮がんを治療するために用いられる
【０５３１】
本発明は、予備スクリーニングＴＵＭＡＰの貯蔵庫から選択される少なくとも１つのペプチドを含んでなる、医薬組成物を製造するステップを含んでなる、個々の患者のための個別化医薬品を製造する方法にさらに関し、医薬組成物中で使用される少なくとも１つのペプチドは、個々の患者における適切さについて選択される。一実施形態では、医薬組成物はワクチンである。方法はまた、ＴＣＲ単離などの下流用途、または可溶性抗体、およびその他の治療選択肢のためのＴ細胞クローンを製造するためにも適応され得る。
【０５３２】
「個別化医薬品」は、積極的個別化がんワクチンおよび自己由来患者組織を使用した養子細胞療法をはじめとするこのような個々の患者の治療のためにのみ使用される、一個人の患者のために特に調整された治療法を意味するものとする。
【０５３３】
本明細書の用法では、「貯蔵庫」という用語は、特定の腫瘍型における免疫原性および／または過剰提示について予備スクリーニングされている、一群のまたは一組のペプチドを指すものとする。「貯蔵庫」という用語は、ワクチンに含まれる特定のペプチドが、予備製造されて物理的設備内で貯蔵されることを暗示することは意図されないが、その可能性も検討される。ペプチドは、製造される各個別化ワクチンのために新規に製造されてもよく、または予備製造されて貯蔵されてもよいことが、明示的に検討される。貯蔵庫（例えば、データベースの形態）は、様々なＨＬＡ−ＡＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−Ｃ対立遺伝子と共に、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、または子宮がん患者の腫瘍組織において高度に過剰発現された腫瘍関連ペプチドから構成される。それは、ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩペプチドまたは伸長ＭＨＣクラスＩペプチドを含有してもよい。いくつかのがん組織から採取された腫瘍関連ペプチドに加えて、貯蔵庫は、ＨＬＡ−Ａ＊０２およびＨＬＡ−Ａ＊２４標識ペプチドを含有してもよい。これらのペプチドは、ＴＵＭＡＰによって誘導されるＴ細胞免疫の規模を定量的に比較できるようにし、したがって抗腫瘍応答を引き起こすワクチンの能力について、重要な結論が導かれるようにする。第２に、それらは、患者において、「自己」抗原に由来するＴＵＭＡＰに対するいかなるワクチン誘導Ｔ細胞応答も観察されない症例において、「非自己」抗原に由来する重要な陽性対照ペプチドとして機能する。第３に、それは、患者の免疫能力状態に関する結論が導かれるようにしてもよい。
【０５３４】
貯蔵庫のためのＴＵＭＡＰは、遺伝子発現解析、質量分析、およびＴ細胞免疫学（ＸＰｒｅｓｉｄｅｎｔ（登録商標））を組み合わせた、統合ゲノム機能解析アプローチを使用して同定される。アプローチは、高い割合の腫瘍上に真に存在するが、正常組織上では発現されず、または最小限にのみ発現されるＴＵＭＡＰだけが、さらなる分析のために選択されることを保証する。最初のペプチド選択のために、患者からの神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、および子宮がんサンプル、および健常ドナーからの血液が、段階的なアプローチで分析された。
１．悪性物質からのＨＬＡリガンドを質量分析法によって同定した
２．ゲノム規模メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）発現解析を使用して、一連の正常器官および組織と比較して悪性組織中の遺伝子過剰発現を同定した
３．同定されたＨＬＡリガンドを遺伝子発現データと比較した。好ましくは、ステップ２で検出されたような選択的に発現されまたは過剰発現される遺伝子によってコードされる、腫瘍組織上で過剰提示されまたは選択的に提示されるペプチドが、多重ペプチドワクチンのための適切なＴＵＭＡＰ候補と見なされた。
４．同定されたペプチドのＴＵＭＡＰとしての妥当性を支持する追加的な証拠を同定するために、文献調査を実施した
５．ｍＲＮＡレベルでの過剰発現の関連性をステップ３からの選択されたＴＵＭＡＰの腫瘍組織上における再検出と、健常組織における検出の欠如（またはまれな）検出によって確認した。
６．選択されたペプチドによる生体内Ｔ細胞応答の誘導が可能かどうかを評価するために、健常ドナーならびにがん患者からのヒトＴ細胞を使用して、生体外免疫原性アッセイを実施した。
【０５３５】
一態様では、貯蔵庫に含める前に、ペプチドが免疫原性について予備スクリーニングされる。制限を意図しない一例として、貯蔵庫に包含されるペプチドの免疫原性は、ペプチド／ＭＨＣ複合体および抗ＣＤ２８抗体が負荷された人工抗原提示細胞による、健常ドナーからのＣＤ８＋Ｔ細胞の反復刺激を通じた、生体外Ｔ細胞プライミングを含んでなる方法によって判定される。
【０５３６】
この方法は、稀ながんに、そして稀な発現プロファイルを有する患者にとって、好ましい。一定組成を有する多重ペプチド混合物とは対照的に、現在開発されている貯蔵庫は、腫瘍における抗原の実際の発現とワクチンとの顕著により高いマッチングを可能にする。多標的アプローチでは、各患者のために、選択された単一のまたは組み合わされた数種の「既製」ペプチドが利用される。理論上は、例えば５０個の抗原性ペプチドのライブラリーからの５個の異なる抗原性ペプチドの選択に基づくアプローチは、それだけでおよそ１７００万個の可能な医薬品（ＤＰ）組成物をもたらす。
【０５３７】
一態様では、ペプチドは、本明細書に記載される、または以下のような本発明による方法に基づく、個々の患者に対するそれらの適切さに基づいて、ワクチンへの包含のために選択される。
【０５３８】
ＨＬＡ表現型、トランスクリプトミクスおよびペプチドミクスデータが、患者の腫瘍材料および血液サンプルから収集されて、「貯蔵庫」および患者に特有の（すなわち変異）ＴＵＭＡＰを含有する、各患者に対して最も適切なペプチドが同定される。患者の腫瘍において選択的にまたは過剰発現されて、可能であれば、患者の個々のＰＢＭＣと共に試験すると、強力な生体外免疫原性を示すペプチドが選択される。
【０５３９】
好ましくは、ワクチンに含まれるペプチドは、（ａ）個々の患者からの腫瘍サンプルによって提示される腫瘍関連ペプチド（ＴＵＭＡＰ）を同定するステップと；（ｂ）（ａ）で同定されたペプチドを上述のペプチド貯蔵庫（データベース）と比較するステップと；（ｃ）少なくとも１つのペプチドを患者において同定された腫瘍関連ペプチドに関連がある貯蔵庫（データベース）から選択するステップとを含んでなる方法によって同定される。例えば、腫瘍サンプルによって提示されるＴＵＭＡＰは、（ａ１）前記腫瘍サンプルからの発現データを前記腫瘍サンプルの組織型に対応する正常組織サンプルからの発現データと比較して、前記腫瘍サンプルにおいて過剰発現されまたは異常に発現されるタンパク質を同定するステップと；（ａ２）発現データを腫瘍サンプル中のＭＨＣクラスＩおよび／またはクラスＩＩ分子と結合しているＭＨＣリガンドの配列と相関させて、腫瘍によって過剰発現されまたは異常に発現されるタンパク質に由来するＭＨＣリガンドを同定するステップとによって同定される。好ましくは、ＭＨＣリガンドの配列は、腫瘍サンプルから単離されたＭＨＣ分子から結合ペプチドを溶出させて、溶出したリガンドを配列決定することで同定される。好ましくは、腫瘍サンプルおよび正常組織は、同一患者から入手される。
【０５４０】
貯蔵庫（データベース）モデルを使用してペプチドを選択するのに加えて、またはその代案として、ＴＵＭＡＰを患者において新規に同定し、次に、ワクチンに含めてもよい。一実施例として、（ａ１）前記腫瘍サンプルからの発現データを前記腫瘍サンプルの組織型に対応する正常組織サンプルからの発現データと比較して、前記腫瘍サンプルにおいて過剰発現されまたは異常に発現されるタンパク質を同定するステップと；（ａ２）発現データを腫瘍サンプル中のＭＨＣクラスＩおよび／またはクラスＩＩ分子と結合しているＭＨＣリガンドの配列と相関させて、腫瘍によって過剰発現されまたは異常に発現されるタンパク質に由来するＭＨＣリガンドを同定するステップとによって、候補ＴＵＭＡＰが患者において同定されてもよい。別の実施例として、個々の患者からの正常な対応組織と比較して、腫瘍サンプルに特有の変異を含有するタンパク質が同定されてもよく、特異的に変異を標的とするＴＵＭＡＰが同定され得る。例えば、腫瘍のゲノム、および対応する正常組織のゲノムは、全ゲノム配列決定によって配列決定され得る。遺伝子のタンパク質コード領域における非同義の変異を発見するために、ゲノムＤＮＡおよびＲＮＡが腫瘍組織から抽出され、正常な非変異ゲノム生殖細胞系ＤＮＡが末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から抽出される。適用されたＮＧＳアプローチは、タンパク質コード領域の再配列決定（エクソーム再配列決定）に限定される。この目的で、供給業者が提供する標的富化キットを使用して、ヒトサンプルからのエクソンＤＮＡが捕捉され、例えばＨｉＳｅｑ２０００（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）による配列決定がそれに続く。それに加えて、遺伝子発現の直接定量化と、変異遺伝子が患者の腫瘍において発現されることの妥当性評価とのために、腫瘍ｍＲＮＡが配列決定される。結果として得られる数百万の配列読み取りは、ソフトウェアアルゴリズムを通じて処理される。出力一覧は、変異および遺伝子発現を含有する。ＰＢＭＣ由来生殖細胞系の多様性と比較することで腫瘍特異的体細胞変異が判定され、優先順位がつけられる。次に、新規に同定されたペプチドは、貯蔵庫について上述した免疫原性について試験され得て、適切な免疫原性を保持する候補ＴＵＭＡＰが、ワクチンへの包含のために選択される。
【０５４１】
例示的一実施形態では、ワクチンに包含されるペプチドは、（ａ）個々の患者からの腫瘍サンプルによって提示される腫瘍関連ペプチド（ＴＵＭＡＰ）を上述の方法（方法）によって同定するステップと；（ｂ）ａ）で同定されたペプチドを対応する正常組織との比較で腫瘍における免疫原性および過剰提示について予備選別されたペプチドの貯蔵庫と比較するステップと；（ｃ）少なくとも１つのペプチドを患者において同定された腫瘍関連ペプチドに関連がある貯蔵庫から選択するステップと；（ｄ）任意選択的に、（ａ）で新規に同定された少なくとも１つのペプチドを選択して、その免疫原性を確認するステップとによって同定される。
【０５４２】
例示的一実施形態では、ワクチンに包含されるペプチドは、（ａ）個々の患者からの腫瘍サンプルによって提示される腫瘍関連ペプチド（ＴＵＭＡＰ）を同定するステップと；（ｂ）（ａ）で新規に同定された少なくとも１つのペプチドを選択して、その免疫原性を確認するステップとによって同定される。
【０５４３】
ひとたび個別化ペプチドベースのワクチンのためのペプチドを選択したら、ワクチンを製造する。ワクチンは、好ましくは、約３３％ＤＭＳＯなどの２０〜４０％ＤＭＳＯ、好ましくは約３０〜３５％ＤＭＳＯに溶解された、個々のペプチドからなる液体製剤である。
【０５４４】
製品に包含される各ペプチドをＤＭＳＯに溶解する。単一ペプチド溶液の濃度は、製品に包含されるペプチド数に応じて選択しなくてはならない。単一ペプチドＤＭＳＯ溶液を等量で混合し、ペプチド当たり約２．５ｍｇ／ｍｌの濃度で、製品に包含される全てのペプチドを含有する溶液を得る。次に、混合溶液を注射用水で１：３に希釈して、３３％ＤＭＳＯ中でペプチド当たり０．８２６ｍｇ／ｍｌの濃度を得る。希釈溶液を０．２２μｍの無菌フィルターを通して濾過する。最終バルク溶液を得る。
【０５４５】
最終バルク溶液をバイアルに充填して、使用時まで−２０℃で保存する。１本のバイアルは、０．５７８ｍｇの各ペプチドを含有する７００μＬの溶液を含有する。この内、５００μＬ（ペプチド当たりおよそ４００μｇ）を皮内注射のために適用する。
【０５４６】
がんを治療するために有用であるのに加えて、本発明のペプチドは、診断法としてもまた有用である。ペプチドは、神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、または子宮がんサンプルから生成されたので、そしてこれらのペプチドは正常組織に存在せず、またはより低レベルで存在すると判定されたので、これらのペプチドを用いてがんの存在を診断し得る。
【０５４７】
特許請求されるペプチドの血液サンプル中の組織生検上の存在は、がん診断において病理学者を補佐し得る。抗体、質量分析法またはその他の当該技術分野で公知の方法の手段による特定のペプチドの検出は、組織サンプルが悪性、または炎症性または概して病的であり、または神経膠芽腫、乳がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、慢性リンパ球性白血病、肝細胞がん、非小細胞細胞および小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、胆嚢がんおよび胆管がん、黒色腫、胃がん、精巣がん、膀胱がん、頭部および頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、または子宮がんのためのバイオマーカーとして利用され得ることを病理学者に告げ得る。ペプチド基の存在は、病的組織の分類または下位分類を可能にし得る。
【０５４８】
患部組織検体上のペプチドの検出は、特にＴリンパ球が作用機序に関与することが知られておりまたは予測される場合に、免疫系が関与する治療法の利点を判定できるようにする。ＭＨＣ発現の喪失は、それによって感染悪性細胞が免疫監視を逃れる、十分に説明された機序である。したがってペプチドの存在は、この機序が、分析した細胞によって活用されていないことを示す。
【０５４９】
本発明のペプチドは、ペプチドまたはＭＨＣ分子と複合体化したペプチドに対するＴ細胞応答または抗体応答などの、これらのペプチドに対するリンパ球応答を分析するのに使用されるかもしれない。これらのリンパ球応答は、さらなる治療段階を決定するための予後マーカーとして使用され得る。これらの応答はまた、例えば、タンパク質、核酸、自己材料のワクチン接種や、リンパ球の養子免疫伝達などの異なる手段によるリンパ球応答の誘導を目指す、免疫療法アプローチにおける代理応答マーカーとして使用され得る。遺伝子治療の設定では、副作用の評価において、ペプチドに対するリンパ球応答が考慮され得る。リンパ球応答のモニタリングはまた、例えば移植片対宿主病および宿主対移植片病の検出など、移植治療の経過観察検査のための有益な手段かもしれない。
【０５５０】
本発明をここで、その好ましい実施形態を描写する以下の実施例において、添付図面を参照して説明するが、それでもなお、それらには限定されないものとする。本発明の目的で、本明細書で引用される全ての参考文献は、その内容全体が参照により援用される。
【図面の簡単な説明】
【０５５１】
【図１Ａ】正常組織（白色バー）および様々ながん（黒色バー）における様々なペプチドの過剰提示を示す。図１Ａ）遺伝子記号：ＩＧＦＢＰＬ１、ペプチド：ＬＬＰＬＬＰＰＬＳＰＳＬＧ（配列番号３３）−組織左から右：１細胞株（１膵臓）、１正常組織（１甲状腺）、２２がん組織（５脳がん、１乳がん、１結腸がん、１食道がん、１胆嚢がん、１肝臓がん、１０肺がん、１膵臓がん、１胃がん）；図１Ｂ）遺伝子記号：ＨＩＶＥＰ１、ペプチド：ＮＹＩＰＶＫＮＧＫＱＦ（配列番号１０３）−組織左から右：１１がん組織（１脳がん、１肝臓がん、８肺がん、１前立腺がん）；図１Ｃ）遺伝子記号：ＧＥＴ４、ペプチド：ＥＹＬＤＲＩＧＱＬＦＦ（配列番号１３１）−組織左から右：２正常組織（１腎臓、１肺）、４１がん組織（２脳がん、１腎臓がん、３肝臓がん、２９肺がん、２前立腺がん、４胃がん）；図１Ｄ）遺伝子記号：Ｎ４ＢＰ２、ペプチド：ＦＹＩＮＧＱＹＱＦ（配列番号１７６）−組織左から右：１細胞株（１前立腺）、３正常組織（１腎臓、１脳下垂体、１皮膚）、６７がん組織（４脳がん、２肝臓がん、４２肺がん、１２前立腺がん、７胃がん）。図１Ｅ）〜Ｚ）は、正常組織と比較した、種々のがん組織中の様々なペプチドの過剰提示である。分析は、４４０個を超える正常組織サンプル、および５２６個のがんサンプルからのデータを含んだ。示されているのは、ペプチドが提示されたと認められたサンプルのみである。図１Ｅ）遺伝子記号ＡＫＲ１Ｃ１、ＡＫＲ１Ｃ３、ペプチド：ＨＬＹＮＮＥＥＱＶ（配列番号１６）−組織左から右：１細胞株（膵臓）、１５がん組織（１胆管がん、１食道がん、６肝臓がん、５肺がん、２膀胱がん）；図１Ｆ）遺伝子記号ＲＰＳ２６Ｐ３９、ＲＰＳ２６Ｐ１１、ＲＰＳ２６、ＲＰＳ２６Ｐ２８、ＲＰＳ２６Ｐ２０，ＲＰＳ２６Ｐ１５、ＲＰＳ２６Ｐ５０、ＲＰＳ２６Ｐ２、ＲＰＳ２６Ｐ２５、ＲＰＳ２６Ｐ５８、ペプチド：ＹＶＬＰＫＬＹＶＫＬ（配列番号３５）−組織左から右：１正常組織（１白血球サンプル）、８がん組織（１頭頸部がん、３白血病、１骨髄性細胞がん、１胆嚢がん、１結腸がん、１リンパ節がん）；図１Ｇ）遺伝子記号ＣＬＤＮ４、ＣＬＤＮ３、ＣＬＤＮ１４、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ９、ペプチド：ＳＬＬＡＬＰＱＤＬＱＡ（配列番号４０）−組織左から右：２１がん組織（１胆管がん、１乳がん、３結腸がん、１直腸がん、６肺がん、２卵巣がん、１前立腺がん、３膀胱がん、３子宮がん）；図１Ｈ）遺伝子記号ＫＬＨＤＣ７Ｂ、ペプチド：ＶＬＳＰＦＩＬＴＬ（配列番号４２）−組織左から右：１８がん組織（１白血病、１骨髄性細胞がん、１乳がん、１腎臓がん、６肺がん、３リンパ節がん、２卵巣がん、２膀胱がん、１子宮がん）；図１Ｉ）遺伝子記号ＡＴＲ、ペプチド：ＳＬＬＳＨＶＩＶＡ（配列番号５３）−組織左から右：３細胞株（１血液細胞、２膵臓）、２１がん組織（１頭頸部がん、１胆管がん、２白血病、１乳がん、２食道がん、１胆嚢がん、１腎臓がん、１肝臓がん、２肺がん、４リンパ節がん、１卵巣がん、３皮膚がん、１膀胱がん）；図１Ｊ）遺伝子記号ＰＧＡＰ１、ペプチド：ＦＩＴＤＦＹＴＴＶ（配列番号６６）−組織左から右：１細胞株（皮膚）、１正常組織（１結腸）、１３がん組織（１頭頸部がん、６脳がん、１結腸がん、１肝臓がん、２皮膚がん、２膀胱がん）；図１Ｋ）遺伝子記号ＺＮＦ６７９、ＳＡＰＣＤ２、ペプチド：ＲＬＬＰＫＶＱＥＶ（配列番号３２５）−組織左から右：４細胞株（２血液細胞、１腎臓、１大腸）、２２がん組織（１骨髄性細胞がん、１乳がん、１食道がん、４結腸がん、１直腸がん、１０肺がん、２卵巣がん、１胃がん、１膀胱がん）；図１Ｌ）遺伝子記号ＺＤＨＨＣ２４、ペプチド：ＶＬＧＰＧＰＰＰＬ（配列番号３３９）−組織左から右：２細胞株（１腎臓、１膵臓）、１９がん組織（４白血病、１骨髄性細胞がん、１骨髄がん、２脳がん、１肝臓がん、２肺がん、６リンパ節がん、１皮膚がん、１子宮がん）；図１Ｍ）遺伝子記号ＯＲＣ１、ペプチド：ＶＹＶＱＩＬＱＫＬ（配列番号１１１）−組織左から右：１正常組織（１肝臓）、３２がん組織（２肝臓がん、２４肺がん、６胃がん）；図１Ｎ）遺伝子記号ＲＩＦ１、ペプチド：ＩＹＳＦＨＴＬＳＦ（配列番号１１３）−組織左から右：２８がん組織（１前立腺、１脳がん、２５肺がん、２胃がん）；図１Ｏ）遺伝子記号ＡＮＫＲＤ５、ペプチド：ＲＹＬＮＫＳＦＶＬ（配列番号１１５）−組織左から右：１正常組織（１胃）、２５がん組織（１脳がん、２肝臓がん、１７肺がん、２前立腺がん、３胃がん）；図１Ｐ）遺伝子記号ＩＧＦＬＲ１、ペプチド：ＲＹＧＬＰＡＡＷＳＴＦ（配列番号１２１）−組織左から右：２０がん組織（２肝臓がん、１７肺がん、１胃がん）；図１Ｑ）遺伝子記号ＣＣＲ８、ペプチド：ＶＹＡＬＫＶＲＴＩ（配列番号１４５）−組織左から右：２５がん組織（２５肺がん）；図１Ｒ）遺伝子記号ＣＬＥＣ５Ａ、ペプチド：ＳＹＧＴＶＳＱＩＦ（配列番号１４８）−組織左から右：５正常組織（１肝臓、３肺、１脳下垂体）、１００がん組織（１０脳がん、４肝臓がん、７４肺がん、１前立腺がん、１１胃がん）；図１Ｓ）遺伝子記号ＦＯＸＪ１、ペプチド：ＩＹＫＷＩＴＤＮＦ（配列番号１５５）−組織左から右：４正常組織（４腎臓）、５３がん組織（１０脳がん、１肝臓がん、２６肺がん、１前立腺がん、１５胃がん）；図１Ｔ）遺伝子記号ＩＦＮＧ、ペプチド：ＫＹＴＳＹＩＬＡＦ（配列番号１６２）−組織左から右：３細胞株（３前立腺）、４正常組織（１肝臓、１肺、１膵臓、１胃）、９５がん組織（１腎臓がん、５肝臓がん、７１肺がん、２前立腺がん、１６胃がん）；図１Ｕ）遺伝子記号ＫＬＨＬ１１、ペプチド：ＥＹＦＴＰＬＬＳＧＱＦ（配列番号１６５）−組織左から右：１０がん組織（１０肺がん）；図１Ｖ）遺伝子記号ＴＭＥＭ１８９、ペプチド：ＬＹＳＰＶＰＦＴＬ（配列番号１７５）−組織左から右：４２がん組織（４脳がん、１肝臓がん、３０肺がん、７胃がん）；図１Ｗ）遺伝子記号ＢＵＢ１、ペプチド：ＥＹＮＳＤＬＨＱＦＦ（配列番号３４５）−組織左から右：１３がん組織（３脳がん、１０肺がん）；図１Ｘ）遺伝子記号ＣＡＳＣ５、ペプチド：ＩＹＶＩＰＱＰＨＦ（配列番号３４６）−組織左から右：２１がん組織（３脳がん、１腎臓がん、１肝臓がん、１４肺がん、２胃がん）；図１Ｙ）遺伝子記号ＫＩＦ１８Ａ、ペプチド：ＶＹＮＥＱＩＲＤＬＬ（配列番号３５４）−組織左から右：１３がん組織（１脳がん、１１肺がん、１胃がん）；および図１Ｚ）遺伝子記号ＰＳＭＡ８、ＰＳＭＡ７、ペプチド：ＶＦＳＰＤＧＨＬＦ（配列番号３６０）−組織左から右：３３がん組織（４肝臓がん、２７肺がん、１前立腺がん、１胃がん）。
【図１Ｂ】同上
【図１Ｃ】同上
【図１Ｄ】同上
【図１Ｅ】同上
【図１Ｆ】同上
【図１Ｇ】同上
【図１Ｈ】同上
【図１Ｉ】同上
【図１Ｊ】同上
【図１Ｋ】同上
【図１Ｌ】同上
【図１Ｍ】同上
【図１Ｎ】同上
【図１Ｏ】同上
【図１Ｐ】同上
【図１Ｑ】同上
【図１Ｒ】同上
【図１Ｓ】同上
【図１Ｔ】同上
【図１Ｕ】同上
【図１Ｖ】同上
【図１Ｗ】同上
【図１Ｘ】同上
【図１Ｙ】同上
【図１Ｚ】同上
【図２Ａ】正常組織（白色バー）および種々のがんサンプル（黒色バー）のパネルにおいて、がんで高度に過剰発現されまたは排他的に発現される、本発明の起源遺伝子の例示的発現プロファイルを示す。図２Ａ）遺伝子記号ＭＸＲＡ５−組織左から右：６１正常組織サンプル（６動脈、１脳、１心臓、２肝臓、２肺、２静脈、１脂肪組織、１副腎、５骨髄、１軟骨、１結腸、１食道、２胆嚢、１腎臓、６リンパ節、１膵臓、１脳下垂体、１直腸、１骨格筋、１皮膚、１小腸、１脾臓、１胃、１胸腺、１甲状腺、５気管、１膀胱、１乳房、５卵巣、３胎盤、１前立腺、１精巣、１子宮）および７０がんサンプル（１０乳がん、１１肺がん、１２卵巣がん、１１食道がん、２６膵臓がん）；図２Ｂ）遺伝子記号ＫＩＦ２６Ｂ−組織左から右：６１正常組織サンプル（６動脈、１脳、１心臓、２肝臓、２肺、２静脈、１脂肪組織、１副腎、５骨髄、１軟骨、１結腸、１食道、２胆嚢、１腎臓、６リンパ節、１膵臓、１脳下垂体、１直腸、１骨格筋、１皮膚、１小腸、１脾臓、１胃、１胸腺、１甲状腺、５気管、１膀胱、１乳房、５卵巣、３胎盤、１前立腺、１精巣、１子宮）および５８がんサンプル（１０乳がん、１１肺がん、１１食道がん、２６膵臓がん）；図２Ｃ）遺伝子記号ＩＬ４Ｉ１−組織左から右：６１正常組織サンプル（６動脈、１脳、１心臓、２肝臓、２肺、２静脈、１脂肪組織、１副腎、５骨髄、１軟骨、１結腸、１食道、２胆嚢、１腎臓、６リンパ節、１膵臓、１脳下垂体、１直腸、１骨格筋、１皮膚、１小腸、１脾臓、１胃、１胸腺、１甲状腺、５気管、１膀胱、１乳房、５卵巣、３胎盤、１前立腺、１精巣、１子宮）および３４がんサンプル（１１肺がん、１２卵巣がん、１１食道がん）；図２Ｄ）遺伝子記号ＴＰ６３−組織左から右：６１正常組織サンプル（６動脈、１脳、１心臓、２肝臓、２肺、２静脈、１脂肪組織、１副腎、５骨髄、１軟骨、１結腸、１食道、２胆嚢、１腎臓、６リンパ節、１膵臓、１脳下垂体、１直腸、１骨格筋、１皮膚、１小腸、１脾臓、１胃、１胸腺、１甲状腺、５気管、１膀胱、１乳房、５卵巣、３胎盤、１前立腺、１精巣、１子宮）および１１食道がんサンプル
【図２Ｂ】同上
【図２Ｃ】同上
【図２Ｄ】同上
【図３】例示的免疫原性データを示す：ペプチド特異的多量体染色後の：フローサイトメトリー結果。
【図４−１】健常ＨＬＡ−Ａ＊０２＋ドナーのペプチド特異的生体外ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の例示的結果を示す。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、それぞれ配列番号２ペプチド（Ａ、左側パネル）、配列番号９ペプチド（Ｂ、左側パネル）および配列番号３３１ペプチド（Ｃ、左側パネル）と複合体形成する、抗ＣＤ２８ｍＡｂおよびＨＬＡ−Ａ＊０２で被覆された、人工ＡＰＣを用いてプライミングされた。３サイクルの刺激の後、ペプチド反応性細胞の検出は、Ａ＊０２／配列番号２（Ａ）、Ａ＊０２／配列番号９（Ｂ）またはＡ＊０２／配列番号３３１（Ｃ）を用いた２Ｄ多量体染色によって実施された。右パネル（Ａ、Ｂ、およびＣ）は、無関係のＡ＊０２／ペプチド複合体で刺激された細胞の対照染色を示す。生存一重細胞は、ＣＤ８＋リンパ球についてゲートされた。ブーリアンゲートは、異なるペプチドに対して特異的な多量体によって検出された、擬陽性事象の排除を助けた。ＣＤ８＋リンパ球の中の特異的多量体＋細胞の頻度が示される。
【図４−２】同上
【図５−１】健常ＨＬＡ−Ａ＊２４＋ドナーのペプチド特異的生体外ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の例示的結果を示す。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、それぞれ、配列番号９９ペプチド（Ａ、左側パネル）、配列番号１１９ペプチド（Ｂ、左側パネル）、配列番号１４２ペプチド（Ｃ、左側パネル）および配列番号１７４ペプチド（Ｄ、左側パネル）と複合体形成する、抗ＣＤ２８ｍＡｂおよびＨＬＡ−Ａ＊２４で被覆された、人工ＡＰＣを用いてプライミングされた。３サイクルの刺激の後、ペプチド反応性細胞の検出は、Ａ＊２４／配列番号９９（Ａ）、Ａ＊２４／配列番号１１９（Ｂ）、Ａ＊２４／配列番号１４２（Ｃ）またはＡ＊２４／配列番号１７４（Ｄ）を用いた２Ｄ多量体染色によって実施された。右パネル（Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤ）は、無関係のＡ＊２４／ペプチド複合体で刺激された細胞の対照染色を示す。生存一重細胞は、ＣＤ８＋リンパ球についてゲートされた。ブーリアンゲートは、異なるペプチドに対して特異的な多量体によって検出された、擬陽性事象の排除を助けた。ＣＤ８＋リンパ球の中の特異的多量体＋細胞の頻度が示される。
【図５−２】同上
【実施例】
【０５５２】
実施例１
細胞表面に提示される腫瘍関連ペプチドの同定および定量化
組織サンプル
患者の腫瘍組織は、外科手術または検死解剖に与えられた、全ての患者の告知に基づく同意書意のもとに得られた。組織は切除の直後に衝撃凍結されて、ＴＵＭＡＰの単離まで−７０℃未満で保存された。
【０５５３】
ペプチドは、２つの条件に当てはまれば選択された：（１）その基礎となる転写物および／またはエクソンは非常に低いレベルで発現され、すなわち、百万回読み取りあたりのキロベースあたりの中央値読み取り（ＲＰＫＭ）は２未満でなければならず、脳、血管、心臓、肝臓、肺、血液では、７５％四分位数が５未満であることが要求された。また、ＲＰＫＭの中央値は、膀胱、唾液腺、胃、副腎、結腸、小腸、脾臓、骨髄、膵臓、筋肉、脂肪組織、皮膚、食道、腎臓、甲状腺、下垂体、神経で１０未満であることが要求された。（２）ペプチドは、腫瘍関連であり、すなわち、正常組織のベースラインと比較して、腫瘍上で特異的に、または過剰発現された（実施例１参照）。
【０５５４】
ＨＬＡ−Ａ＊０２  ＴＵＭＡＰ選択のためのサンプル数：膵臓がんではＮ＝１６、腎臓がんではＮ＝２０、結腸直腸がんではＮ＝２８、胃食道接合部がんを含む食道がんではＮ＝１５、前立腺腫瘍ではＮ＝３５、肝細胞がんではＮ＝１６、非小細胞肺がんではＮ＝８８、胃がんではＮ＝２９、乳がんではＮ＝９、黒色腫ではＮ＝３、卵巣がんではＮ＝２０、慢性リンパ球性白血病ではＮ＝１３（１２人のドナー）、膀胱がんではＮ＝５、精巣がんではＮ＝１、小細胞肺がんではＮ＝１８（１３人のドナー）、胆嚢がんおよび胆管がんではＮ＝３、急性骨髄性白血病ではＮ＝５（４人のドナー）、神経膠芽腫ではＮ＝４０、および子宮がんではＮ＝５．
【０５５５】
ＨＬＡ−Ａ＊２４  ＴＵＭＡＰ選択のためのサンプル数：胃がんではＮ＝４４、前立腺腫瘍ではＮ＝３７、非小細胞肺がんではＮ＝８８、肝細胞がんではＮ＝１５、腎臓がんではＮ＝２、結腸直腸がんではＮ＝１、および神経膠芽腫ではＮ＝１７。
【０５５６】
組織サンプルからのＨＬＡペプチドの単離
ショック凍結組織サンプルからのＨＬＡペプチド貯留は、ＨＬＡ−Ａ＊０２特異的抗体ＢＢ７．２、ＨＬＡ−Ａ、−Ｂ、−Ｃ特異的抗体Ｗ６／３２、ＨＬＡクラスＩＩ特異的抗体Ｌ２４３、ＣＮＢｒ−活性化セファロース、酸処理、および限外濾過を用いて、わずかな修正を加えて、既報のプロトコル（Ｆａｌｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１；Ｓｅｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）に従って、固体組織からの免疫沈降によって得られた。
【０５５７】
質量分析
得られたＨＬＡペプチド貯留は、逆相クロマトグラフィー（ｎａｎｏＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬ  Ｃ  ｓｙｓｔｅｍ、Ｗａｔｅｒｓ）によってそれらの疎水性に従って分離し、ＥＳＩ源を装着したＬＴＱ−ｖｅｌｏｓおよびｆｕｓｉｏｎ  ｈｙｂｒｉｄ質量分光計（ＴｈｅｒｍｏＥｌｅｃｔｒｏｎ）内で溶出ペプチドを分析した。ペプチド貯留は、毎分４００ｎＬの流速を適用して、１．７μｍ  Ｃ１８逆相材料（Ｗａｔｅｒｓ）で充填された分析用融合シリカマイクロキャピラリーカラム（７５μｍ内径×２５０ｍｍ）上に直接挿入した。引き続いて、毎分３００ｎＬの流速で１０％から３３％へのＢの二段階１８０分間二成分勾配を用いて、ペプチドを分離した。勾配は、溶媒Ａ（水中の０．１％ギ酸）および溶媒Ｂ（アセトニトリル中の０．１％ギ酸）から構成された。ｎａｎｏＥＳＩ源への導入には、金被覆ガラス毛管（ＰｉｃｏＴｉｐ，Ｎｅｗ  Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ）を使用した。ＬＴＱ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分光計は、ＴＯＰ５ストラテジーを使用してデータ依存モードで操作した。手短に述べると、Ｏｒｂｉｔｒａｐ（Ｒ＝３００００）内の高質量精度の完全スキャンでスキャンサイクルを開始し、これもまたＯｒｂｉｔｒａｐ（Ｒ＝７５００）内の５種の最も豊富な前駆イオンのＭＳ／ＭＳスキャンがそれに続き、以前選択されたイオンは動的に排除された。タンデム質量スペクトルは、ＳＥＱＵＥＳＴおよび追加的な手動調節によって解釈した。同定されたペプチド配列は、生成された天然ペプチド断片化パターンと、配列が同一の合成参照ペプチドの断片化パターンとの比較によって確認した。
【０５５８】
イオン計数によって、すなわちＬＣ−ＭＳ特性の抽出と解析（Ｍｕｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）によって、無標識相対ＬＣ−ＭＳ定量化を実施した。この方法は、ペプチドのＬＣ−ＭＳシグナル面積がサンプル中のその存在量と相関すると仮定する。抽出された特性は、電荷状態デコンボリューションと滞留時間アライメント（Ｍｕｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｓｔｕｒｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）によってさらに処理した。最終的に、全てのＬＣ−ＭＳ特性を配列同定結果と相互参照して、異なるサンプルの定量的データと、組織からペプチドへの提示プロファイルとを組み合わせた。定量的データは、技術的および生物学的反復試験内の変動を考慮した中心傾向に従って、二段法で正規化された。このようにして、それぞれの同定されたペプチドが定量的データに関連付けられ得て、サンプルと組織との間の相対定量化ができるようになる。さらに、ペプチド候補について得られた全ての定量的データを手動で検査し、データ整合性を保証して自動解析の確度を確認した。各ペプチドについて提示プロファイルを計算し、平均サンプル提示ならびに反復試験変動を示した。プロファイルは、異なるがんサンプルを正常組織サンプルのベースラインに並置する。例示的過剰提示ペプチドの提示プロファイルは、図１に示される。
【０５５９】
表８（ＡおよびＢ）および９（ＡおよびＢ）は、選択されたペプチドについての多様ながん実体の提示を示し、したがって示されたがんの診断および／または治療に関して言及されたペプチドの特定の関連性を示す（例えば、膀胱がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、肝細胞がん、非小細胞肺がん、および膵臓がんではペプチド配列番号１；腎臓がん、胃食道接合部がんを含む食道がん、神経膠芽腫ではペプチド配列番号２．．．など）。
【０５６０】
【表８Ａ−１】
2018183174.tif 000023
【表８Ａ−２】
2018183174.tif 000024
【表８Ａ−３】
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【０５６１】
表８Ｂは、選択されたペプチドについての追加的ながん実体の提示を示し、したがって示されたがんの診断および／または治療に関して言及されたペプチドの特定の関連性を示す。
【０５６２】
【表８Ｂ−１】
2018183174.tif 000026
【表８Ｂ−２】
2018183174.tif 000027
【表８Ｂ−３】
2018183174.tif 000028
【０５６３】
【表９Ａ−１】
2018183174.tif 000029
【表９Ａ−２】
2018183174.tif 000030
【表９Ａ−３】
2018183174.tif 000031
【表９Ａ−４】
2018183174.tif 000032
【表９Ａ−５】
2018183174.tif 000033
【表９Ａ−６】
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【０５６４】
表９Ｂは、選択されたペプチドについての追加的ながん実体の提示を示し、したがって示されたがんの診断および／または治療に関して言及されたペプチドの特定の関連性を示す。
【０５６５】
【表９Ｂ−１】
2018183174.tif 000035
【表９Ｂ−２】
2018183174.tif 000036
【表９Ｂ−３】
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【０５６６】
実施例２
本発明のペプチドをコードする遺伝子発現プロファイリング
正常細胞と比較した腫瘍細胞上のペプチドの過剰提示または特異的提示は、免疫療法におけるその有用性にとって十分であり、いくつかのペプチドは、それらの起源タンパク質が正常組織にもまた存在するにもかかわらず、腫瘍特異的である。それでもなお、ｍＲＮＡ発現プロファイリングは、免疫療法のためのペプチド標的の選択において、安全性のレベルを高めることができる。特に、親和性成熟ＴＣＲのような安全性リスクが高い治療選択肢では、理想的な標的ペプチドは、腫瘍に特有であり正常組織には見られないタンパク質から誘導され、遺伝子発現の高い腫瘍対正常比は、治療濃度域を示唆する。さらに、ペプチド提示についてまだ分析されていない腫瘍実体における起源遺伝子の過剰発現は、特定のペプチドが各実体において重要であってもよいことを示唆する。
【０５６７】
本発明のＨＬＡクラスＩ結合ペプチドでは、３０００前後の正常組織サンプルをカバーするＲＮＡＳｅｑデータのデータベースに基づいて、全ての起源遺伝子の正常組織発現は、最小であることが示された（Ｌｏｎｓｄａｌｅ，２０１３）。さらに、腫瘍対正常組織からの遺伝子発現データを分析して、様々な腫瘍実体の標的カバー度を評価した。
【０５６８】
ＲＮＡ起源および調製
外科的に除去された組織標本は、告知に基づく同意書が各患者から入手された後に、上述の通り提供された（実施例１を参照されたい）。腫瘍組織標本を手術直後にスナップ凍結し、その後、液体窒素下で乳鉢と乳棒を用いて均質化した。ＴＲＩ試薬（Ａｍｂｉｏｎ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、これらのサンプルから全ＲＮＡを調製し、ＲＮｅａｓｙ（ＱＩＡＧＥＮ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）による精製がそれに続き；どちらの方法も製造業者のプロトコルに従って実施した。
【０５６９】
ＲＮＡＳｅｑ実験のための健常ヒト組織からの全ＲＮＡは、Ａｓｔｅｒａｎｄ（Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ，ＵＳＡ  ａｎｄ  Ｒｏｙｓｔｏｎ，Ｈｅｒｔｓ，ＵＫ）；Ｂｉｏ−Ｏｐｔｉｏｎｓ  Ｉｎｃ．（Ｂｒｅａ，ＣＡ，ＵＳＡ）；ＰｒｏｔｅｏＧｅｎｅｘ  Ｉｎｃ．（Ｃｕｌｖｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ，ＵＳＡ）；ＧｅｎｅｔｉｃｉｓｔＩｎｃ．（Ｇｌｅｎｄａｌｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）；Ｉｓｔｉｔｕｔｏ  Ｎａｚｉｏｎａｌｅ  Ｔｕｍｏｒｉ"Ｐａｓｃａｌｅ"（Ｎａｐｌｅｓ，Ｉｔａｌｙ）；Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ｏｆ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）；ＢｉｏＣａｔ  ＧｍｂＨ（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）；ＢｉｏＳｅｒｖｅ（Ｂｅｌｔｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）；Ｃａｐｉｔａｌ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅＩｎｃ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ、ＵＳＡ）から入手された。
【０５７０】
ＲＮＡＳｅｑ実験のための腫瘍組織からの全ＲＮＡは、Ａｓｔｅｒａｎｄ（Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ，ＵＳＡ  ＆  Ｒｏｙｓｔｏｎ，Ｈｅｒｔｓ，ＵＫ）、Ｂｉｏ−Ｏｐｔｉｏｎｓ  Ｉｎｃ．（Ｂｒｅａ，ＣＡ，ＵＳＡ）、ＢｉｏＳｅｒｖｅ（Ｂｅｌｔｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）、Ｇｅｎｅｔｉｃｉｓｔ  Ｉｎｃ．（Ｇｌｅｎｄａｌｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）、ＰｒｏｔｅｏＧｅｎｅｘ  Ｉｎｃ．（Ｃｕｌｖｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ，ＵＳＡ）、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｌｔｄ（Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｂｏｎｎ（Ｂｏｎｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｔｕｂｉｎｇｅｎ（Ｔｕｂｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手された。全てのＲＮＡサンプルの品質および量は、ＲＮＡ  ６０００  Ｐｉｃｏ  ＬａｂＣｈｉｐキット（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して、Ａｇｉｌｅｎｔ  ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｗａｌｄｂｒｏｎｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）上で評価した。
【０５７１】
ＲＮＡｓｅｑ実験
腫瘍および正常組織ＲＮＡサンプルの遺伝子発現解析は、ＣｅＧａＴ（Ｔｕｂｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって、次世代配列決定（ＲＮＡｓｅｑ）によって実施した。簡単に述べると、配列決定ライブラリーは、ＲＮＡ断片化、ｃＤＮＡ転換、および配列決定アダプターの付加を含む、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＨｉＳｅｑ  ｖ４試薬キットを使用して、販売業者（Ｉｌｌｕｍｉｎａ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）のプロトコルに従って作製される。複数のサンプルに由来するライブラリーは等モル混合され、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＨｉＳｅｑ  ２５００配列決定装置上で、製造会社の使用説明書に従って配列決定され、５０ｂｐのシングルエンドリードが生成された。処理された読み取りは、ＳＴＡＲソフトウェアを使用して、ヒトゲノム（ＧＲＣｈ３８）にマッピングされる。発現データは、ｅｎｓｅｍｂｌ配列データベース（Ｅｎｓｅｍｂｌ７７）の注釈に基づいて、ＲＰＫＭ（１００万個のマッピングされた読み取り当たりキロベース当たり読み取り、ソフトウェアＣｕｆｆｌｉｎｋｓによって生成される）として転写物レベルで、そしてエクソンレベルで（全読み取り、ソフトウェアＢｅｄｔｏｏｌｓによって生成される）提供される。エクソン読み取りは、エクソン長さおよびアライメントサイズについて正規化されて、ＲＰＫＭ値が得られる。
【０５７２】
様々ながんにおいて高度に過剰発現されまたは排他的に発現される本発明の起源遺伝子の代表的発現プロファイルは、図２に示される。自社内ＲＮＡＳｅｑ解析に基づくさらなる例示的標的の発現スコアは、表１０（ＡおよびＢ）に示される。ＴＣＧＡ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｎｅｔｗｏｒｋ（ｈｔｔｐ：／／ｃａｎｃｅｒｇｅｎｏｍｅ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）によって作製されたデータに基づく、その他の実体およびさらなる例示的ペプチドの発現データは、表１１に要約される。
【０５７３】
【表１０Ａ−１】
2018183174.tif 000038
【表１０Ａ−２】
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【表１０Ａ−３】
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【表１０Ａ−４】
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【表１０Ａ−５】
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【表１０Ａ−６】
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【表１０Ａ−７】
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【０５７４】
【表１０Ｂ−１】
2018183174.tif 000045
【表１０Ｂ−２】
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【表１０Ｂ−３】
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【表１０Ｂ−４】
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【表１０Ｂ−５】
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【０５７５】
【表１１−１】
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【表１１−２】
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【表１１−３】
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【表１１−４】
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【表１１−５】
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【表１１−６】
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【表１１−７】
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【表１１−８】
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【表１１−９】
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【表１１−１０】
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【表１１−１１】
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【表１１−１２】
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【表１１−１３】
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【表１１−１４】
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【表１１−１５】
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【表１１−１６】
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【表１１−１７】
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【０５７６】
実施例３
ＭＨＣクラスＩ提示ペプチドの生体外免疫原性
本発明のＴＵＭＡＰの免疫原性に関する情報を得るために、本発明者らは、ペプチド／ＭＨＣ複合体および抗ＣＤ２８抗体を負荷した人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）によるＣＤ８＋Ｔ細胞の反復刺激に基づく、生体外Ｔ細胞プライミングアッセイを用いて研究を実施した。このようにして、本発明者らは、本発明のＨＬＡ−Ａ＊０２：０１拘束性ＴＵＭＡＰの免疫原性を示し得て、これらのペプチドが、それに対するＣＤ０１＋前駆Ｔ細胞がヒトに存在する、Ｔ細胞エピトープであることを実証した（表９）。
【０５７７】
ＣＤ８＋Ｔ細胞の生体外プライミング
ペプチドＭＨＣ複合体（ｐＭＨＣ）および抗ＣＤ２８抗体を負荷した、人工抗原提示細胞による生体外刺激を実施するために、本発明者らは、最初に、告知に基づく同意後に、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｃｌｉｎｉｃｓ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙから得られた健常ドナーのＣＤ８ミクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ−Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用した正の選択を通じて、新鮮ＨＬＡ−Ａ＊０２白血球除去生成物からＣＤ８＋Ｔ細胞を単離した。
【０５７８】
ＰＢＭＣおよび単離ＣＤ８＋リンパ球またはＰＢＭＣは、１０％熱不活性化ヒトＡＢ血清（ＰＡＮ−Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｉｄｅｎｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン／１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｃａｍｂｒｅｘ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（ＣＣ  Ｐｒｏ，Ｏｂｅｒｄｏｒｌａ，Ｇｅｒｍａｎｙ），２０μｇ／ｍｌゲンタマイシン（Ｃａｍｂｒｅｘ）を添加した、ＲＰＭＩ−Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）からなるＴ細胞培地（ＴＣＭ）中で、使用時まで培養した。２．５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−７（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）および１０Ｕ／ｍｌのＩＬ−２（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ，Ｎｕｒｎｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）もまた、この段階でＴＣＭに添加した。
【０５７９】
ｐＭＨＣ／抗ＣＤ２８被覆ビーズの生成、Ｔ細胞刺激、および読み取りは、高度に定義された生体外システム内で、刺激条件当たり４種の異なるｐＭＨＣ分子と、読み取り条件当たり８種の異なるｐＭＨＣ分子を使用して実施した。
【０５８０】
製造会社（Ｐｅｒｂｉｏ，Ｂｏｎｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）が推奨する通りにスルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドビオチンを使用して、精製共刺激マウスＩｇＧ２ａ抗ヒトＣＤ２８  Ａｂ９．３（Ｊｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７）を化学的にビオチン化した。使用されたビーズは、直径５．６μｍのストレプトアビジン被覆ポリスチレン粒子（Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，ＵＳＡ）であった。
【０５８１】
陽性および陰性対照刺激のために使用されたｐＭＨＣは、それぞれ、Ａ＊０２０１／ＭＬＡ−００１（修飾Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１に由来するペプチドＥＬＡＧＩＧＩＬＴＶ（配列番号４１８））およびＡ＊０２０１／ＤＤＸ５−００１（ＤＤＸ５に由来するＹＬＬＰＡＩＶＨＩ、配列番号４１９）であった。
【０５８２】
４×１２．５ｎｇの異なるビオチンｐＭＨＣの存在下で、８００，０００個のビーズ／２００μｌを９６ウェルプレート内で被覆し、洗浄して、引き続いて２００μｌの容量中で６００ｎｇのビオチン抗ＣＤ２８を添加した。５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１２（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ）を添加した２００μｌのＴＣＭ中で、１×１０６のＣＤ８＋Ｔ細胞を２×１０５個の洗浄被覆ビーズと、３７℃で３日間にわたり同時インキュベートすることで、９６ウェルプレート内で刺激を開始した。次に８０Ｕ／ｍｌのＩＬ−２を添加した新鮮ＴＣＭで培地の半分を交換し、３７℃で４日間にわたり培養を継続した。この刺激サイクルを合計３回実施した。条件当たり８種の異なるｐＭＨＣ分子を使用したｐＭＨＣ多量体読み取りでは、５種の異なる蛍光色素への共役を包含するわずかな修正を加えて、以前記載されたような（Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）二次元コンビナトリアルコーディングアプローチを使用した。最後に、Ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ近赤外染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＣＤ８−ＦＩＴＣ抗体クローンＳＫ１（ＢＤ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、および蛍光性ｐＭＨＣ多量体による細胞の染色によって多量体解析を実施した。解析では、適切なレーザーおよびフィルターを装着したＢＤ  ＬＳＲＩＩ  ＳＯＲＰ血球計数器を使用した。ペプチド特異的細胞を全ＣＤ８＋細胞の百分率として計算した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，Ｏｒｅｇｏｎ，ＵＳＡ）を使用して、多量体解析の評価を実施した。陰性対照刺激と比較することで、特異的多量体＋ＣＤ８＋リンパ球の生体外初回刺激を検出した。１人の健常ドナーの少なくとも１つの評価可能生体外刺激ウェルが、生体外刺激後に、特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞株を含有することが判明したら、所与の抗原の免疫原性が検出された（すなわちこのウェルは、ＣＤ８＋Ｔ細胞内に少なくとも１％の特異的多量体＋を含有し、特異的多量体＋細胞の百分率は、陰性対照刺激の中央値の少なくとも１０倍であった）。
【０５８３】
様々ながんペプチドの生体外免疫原性
ＨＬＡクラスＩペプチドを試験するために、ペプチド特異的Ｔ細胞株の生成によって生体外免疫原性が実証され得た。本発明の２種のペプチドの、ＴＵＭＡＰ特異的多量体染色後の例示的フローサイトメトリー結果は、対応する陰性対照と共に図３に示される。本発明の５つのペプチドからの結果を表１２Ａに要約する。本発明の７種のペプチドに関する、ＴＵＭＡＰ特異的多量体染色後における例示的フローサイトメトリー結果は、対応する陰性対照と共に図４および図５に示される。本発明からの７４種のペプチドの結果は、表１２Ｂに要約される。
【０５８４】
【表１２Ａ】
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【０５８５】
【表１２Ｂ−１】
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【表１２Ｂ−２】
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【表１２Ｂ−３】
2018183174.tif 000070
【０５８６】
実施例４
ペプチドの合成
Ｆｍｏｃストラテジーを使用した標準的な十分に確立された固相ペプチド合成を使用して、全てのペプチドを合成した。個々のペプチドのアイデンティティーおよび純度は、質量分析および分析用ＲＰ−ＨＰＬＣによって判定された。ペプチドは、純度＞５０％の白色から灰白色の凍結乾燥物（トリフルオロ酢酸塩）として得られた。全てのＴＵＭＡＰは、好ましくはトリフルオロ酢酸塩または酢酸塩として投与され、その他の塩形態もまた可能である。
【０５８７】
実施例５
ＭＨＣ結合アッセイ
本発明によるＴ細胞ベースの治療法のための候補ペプチドを、それらのＭＨＣ結合能力（親和性）についてさらに試験した。個々のペプチド−ＭＨＣ複合体は、ＵＶリガンド交換によって生成され、ＵＶ感受性ペプチドはＵＶ照射に際して切断されて、分析される目的ペプチドで交換された。ペプチド受容性ＭＨＣ分子と効果的に結合して安定化し得るペプチド候補のみが、ＭＨＣ複合体の分離を防止する。交換反応の収率を判定するために、安定化ＭＨＣ複合体の軽鎖（β２ｍ）の検出に基づくＥＬＩＳＡを実施した。アッセイは、Ｒｏｄｅｎｋｏ  ｅｔ  ａｌ．（Ｒｏｄｅｎｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）に一般的に記載されるようにして実施した。
【０５８８】
９６ウェルＭＡＸＩＳｏｒｐプレート（ＮＵＮＣ）をＰＢＳ中の２μｇ／ｍｌストレプトアビジンにより室温で一晩被覆して４回洗浄し、ブロック緩衝液を含有する２％ＢＳＡ中で３７℃で１時間ブロックした。再折りたたみされたＨＬＡ−Ａ＊０２０１０２：０１／ＭＬＡ−００１単量体が、１５〜５００ｎｇ／ｍｌの範囲をカバーする標準物質の役割を果たした。ＵＶ交換反応のペプチド−ＭＨＣ単量体をブロック緩衝液で１００倍に希釈した。サンプルを３７℃で１時間インキュベートして４回洗浄し、２ｕｇ／ｍｌのＨＲＰ共役結合抗β２ｍと共に３７℃で１時間インキュベートして再度洗浄し、ＮＨ２ＳＯ４で停止させたＴＭＢ溶液で検出した。吸収は、４５０ｎｍで測定された。抗体またはそれらのフラグメント、および／またはＴ細胞受容体またはそれらのフラグメントの生成および製造のためには、高い交換収率（好ましくは５０％より高い、最も好ましくは７５％より高い）を示す候補ペプチドが、ＭＨＣ分子に対する十分な結合活性を示してＭＨＣ複合体の分離を防止することから、一般に好ましい。
【０５８９】
【表１３−１】
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【表１３−２】
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【表１３−３】
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【０５９０】
【表１４−１】
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【表１４−２】
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【表１４−３】
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【表１４−４】
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【表１４−５】
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【表１４−６】
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【表１４−７】
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【０５９１】
実施例６
細胞表面に提示される腫瘍関連ペプチドの絶対定量化
抗体および／またはＴＣＲなどのバインダーの生成は、骨の折れる工程であり、いくつかの選択された標的に対してのみ実施されてもよい。腫瘍関連および特異的ペプチドの場合、選択基準としては、提示の排他性および細胞表面に提示されるペプチドの密度が挙げられるが、これに限定されない。実施例１に記載されるペプチドの単離および相対定量化に加えて、本発明者らは、記載される細胞当たりの絶対的ペプチドコピー数も分析された。固形腫瘍サンプル中の細胞当たりのＴＵＭＡＰコピーの定量化は、単離されたＴＵＭＡＰの絶対定量化、ＴＵＭＡＰ単離の効率、および分析される組織サンプルの細胞計数を必要とする。
【０５９２】
ナノＬＣ−ＭＳ／ＭＳによるペプチド定量化
質量分析によるペプチドの正確な定量化のために、内標準法を使用して各ペプチドの検量線を作成した。内標準は各ペプチドの二重同位体標識変異型であり、すなわち、２つの同位体標識アミノ酸がＴＵＭＡＰ合成に含まれた。それは、腫瘍関連ペプチドとはその質量異なるのみであるが、他の物理化学的性質に差異を示さない（Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。内標準を各ＭＳサンプルに添加して、全てのＭＳシグナルを内標準のＭＳシグナルに対して正規化し、ＭＳ実験間の可能な技術的変動を平準化した。
【０５９３】
少なくとも３つの異なるマトリックス中、すなわち、ルーチンのＭＳサンプルと同様の天然サンプルからのＨＬＡペプチド溶出液中で検量線を作成し、各調製物を二連のＭＳ試験で測定した。評価のために、ＭＳシグナルを内標準のシグナルに対して正規化し、検量線をロジスティック回帰によって算出した。
【０５９４】
組織サンプルからの腫瘍関連ペプチドの定量化のためには、それぞれのサンプルにも内標準が添加され、ＭＳシグナルが、内標準に対して正規化され、ペプチド検量線を使用して定量化された。
【０５９５】
ペプチド／ＭＨＣ単離の効率
あらゆるタンパク質精製処理と同様に、組織サンプルからのタンパク質の単離には、目的タンパク質のいくらかの損失が伴う。ＴＵＭＡＰ単離の効率を判定するために、絶対定量化のために選択された全てのＴＵＭＡＰについて、ペプチド／ＭＨＣ複合体が生成された。添加されたものを天然ペプチド／ＭＨＣ複合体から識別できるように、ＴＵＭＡＰの単一同位体標識バージョンが使用され、すなわち、１つの同位体標識アミノ酸がＴＵＭＡＰ合成に含まれた。これらの複合体は、新鮮に調製された組織溶解産物に、すなわち、ＴＵＭＡＰ単離手順の可能な限り早い時点で添加され、次に、以下の親和性精製において、天然ペプチド／ＭＨＣ複合体のように捕捉された。したがって単一標識ＴＵＭＡＰの回収率を測定することで、個々の天然ＴＵＭＡＰの単離効率に関する結論が可能になる。
【０５９６】
少数のサンプルで単離効率が分析され、これらの組織サンプル間で同等であった。対照的に、単離効率は個々のペプチド間で異なる。これは、単離効率が、限定数の組織サンプルにおいてのみ判定されるが、任意のその他の組織標本に外挿されてもよいことを提案する。しかしながら、単離効率がペプチドからその他のペプチドに外挿されないこともあるので、各ＴＵＭＡＰは個別に分析する必要がある。
【０５９７】
固体冷凍組織中の細胞数測定
絶対ペプチド定量化に供した組織サンプルの細胞数を測定するために、本発明者らは、ＤＮＡ含量分析を適用した。この方法は、異なる起点の幅広いサンプルに、最も重要なことには、冷凍サンプルに適用できる（Ａｌｃｏｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｆｏｒｓｅｙ  ａｎｄ  Ｃｈａｕｄｈｕｒｉ，２００９；Ｓｉｌｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ペプチド単離プロトコル中に、組織サンプルを均質溶解産物に処理して、それから小さな溶解産物アリコートを取り出す。アリコートを３つに分割し、それからＤＮＡを単離する（ＱｉａＡｍｐＤＮＡＭｉｎｉＫｉｔ，Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。蛍光ベースのＤＮＡ定量化アッセイ（Ｑｕｂｉｔ  ｄｓＤＮＡ  ＨＳ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、少なくとも２つの反復試験において、各ＤＮＡ単離からの全ＤＮＡ含有量を定量化する。
【０５９８】
細胞数を計算するために、一連の定義された細胞数がある、単一健常血液細胞のアリコートから、ＤＮＡ標準曲線を作成した。標準曲線を使用して、各ＤＮＡ単離物からの全ＤＮＡ含有量から、全細胞含有量を計算する。既知の溶解産物アリコートの容量および全溶解産物容量を考慮して、ペプチド単離のために使用された組織サンプルの平均総細胞数を外挿する。
【０５９９】
細胞当たりペプチドコピー数
前述の実験のデータを用いて、本発明者らは、サンプルの全ペプチド量を総細胞数で除算して、それに続いて単離効率により除算することで、細胞当たりのＴＵＭＡＰコピー数を算出した。選択されたたペプチドのコピー細胞数は、表１５に示される。
【０６００】
【表１５】
2018183174.tif 000081
【０６０１】
参考文献一覧
Aalto, Y. et al., Leukemia 15 (2001): 1721-1728
Abaan, O. D. et al., Cancer Res 73 (2013): 4372-4382
Accardi, L. et al., Int.J Cancer 134 (2014): 2742-2747
Adams, D. J. et al., Mol.Cell Biol 25 (2005): 779-788
Agha-Hosseini, F. et al., Med.J Islam Repub.Iran 29 (2015): 218
Agostini, M. et al., Oncotarget. 6 (2015): 32561-32574
Akiyama, Y. et al., Oncol.Rep. 31 (2014): 1683-1690
Al-haidari, A. A. et al., Int.J Colorectal Dis. 28 (2013): 1479-1487
Alcoser, S. Y. et al., BMC.Biotechnol. 11 (2011): 124
Allison, J. P. et al., Science 270 (1995): 932-933
Alonso, C. N. et al., Leuk.Res. 36 (2012): 704-708
Amaro, A. et al., Cancer Metastasis Rev 33 (2014): 657-671
American Cancer Society, (2015), www.cancer.org
Ammirante, M. et al., Nature 464 (2010): 302-305
Ampie, L. et al., Front Oncol. 5 (2015): 12
An, C. H. et al., Hum.Pathol. 43 (2012): 40-47
Andersen, R. S. et al., Nat.Protoc. 7 (2012): 891-902
Anderson, N. L. et al., J Proteome.Res 11 (2012): 1868-1878
Appay, V. et al., Eur.J Immunol. 36 (2006): 1805-1814
Arai, E. et al., Int.J Cancer 137 (2015): 2589-2606
Armitage, J. O., Blood 110 (2007): 29-36
Armstrong, C. M. et al., Am.J Clin Exp.Urol. 3 (2015): 64-76
Asahara, S. et al., J Transl.Med. 11 (2013): 291
Atcheson, E. et al., Biosci.Rep. 31 (2011): 371-379
Avigan, D. et al., Clin Cancer Res. 10 (2004): 4699-4708
Azevedo, R. et al., J Control Release 214 (2015): 40-61
Baek, J. M. et al., Biochem.Biophys.Res Commun. 461 (2015): 334-341
Baker, M. et al., PLoS.One. 8 (2013): e62516
Banchereau, J. et al., Cell 106 (2001): 271-274
Bankovic, J. et al., Lung Cancer 67 (2010): 151-159
Barlin, J. N. et al., Neoplasia. 17 (2015): 183-189
Batliner, J. et al., Mol.Immunol. 48 (2011): 714-719
Battistella, M. et al., J Cutan.Pathol. 41 (2014): 427-436
Beatty, G. et al., J Immunol 166 (2001): 2276-2282
Becker, M. A. et al., Mol.Cancer Ther. 14 (2015): 973-981
Beggs, J. D., Nature 275 (1978): 104-109
Benada, J. et al., Biomolecules. 5 (2015): 1912-1937
Benjamini, Y. et al., Journal of the Royal Statistical Society.Series B (Methodological), Vol.57 (1995): 289-300
Bentz, S. et al., Digestion 88 (2013): 182-192
Berard, A. R. et al., Proteomics. 15 (2015): 2113-2135
Berman, R. S. et al., National Cancer Institute: PDQ(R) Colon Cancer Treatment (2015a)
Berman, R. S. et al., National Cancer Institute: PDQ(R) Rectal Cancer Treatment (2015b)
Berndt, S. I. et al., Nat Commun. 6 (2015): 6889
Bie, L. et al., PLoS.One. 6 (2011): e25631
Bill, K. L. et al., Lab Invest (2015)
Binsky-Ehrenreich, I. et al., Oncogene 33 (2014): 1006-1016
Black, J. D. et al., Toxins.(Basel) 7 (2015): 1116-1125
Bo, H. et al., BMC.Cancer 13 (2013): 496
Bockelman, C. et al., Cancer Biol Ther. 13 (2012): 289-295
Boeva, V. et al., PLoS.One. 8 (2013): e72182
Bogdanov, K. V. et al., Tsitologiia 50 (2008): 590-596
Bogni, A. et al., Leukemia 20 (2006): 239-246
Boldt, H. B. et al., Endocrinology 152 (2011): 1470-1478
Bormann, F. et al., Mol.Genet.Genomics 286 (2011): 279-291
Boulter, J. M. et al., Protein Eng 16 (2003): 707-711
Braumuller, H. et al., Nature (2013)
Bray, F. et al., Int J Cancer 132 (2013): 1133-1145
Brenner, S. et al., Cancer Lett. 356 (2015): 517-524
Bridgewater, J. et al., J Hepatol. 60 (2014): 1268-1289
Brocker, E. B. et al., Int.J Cancer 41 (1988): 562-567
Brossart, P. et al., Blood 90 (1997): 1594-1599
Bruckdorfer, T. et al., Curr.Pharm.Biotechnol. 5 (2004): 29-43
Bryant, N. L. et al., J Neurooncol. 101 (2011): 179-188
Burgess, A. W. et al., Exp.Cell Res 317 (2011): 2748-2758
Butler, J. E. et al., J Immunol. 182 (2009): 6600-6609
Butterfield, L. H. et al., Clin Cancer Res 12 (2006): 2817-2825
Butterfield, L. H. et al., Clin Cancer Res 9 (2003): 5902-5908
Byrd, J. C. et al., N.Engl.J Med. 369 (2013): 32-42
Byrns, M. C. et al., J Steroid Biochem.Mol.Biol 125 (2011): 95-104
Cai, C. J. et al., Sichuan.Da.Xue.Xue.Bao.Yi.Xue.Ban. 41 (2010): 941-945
Camoes, M. J. et al., PLoS.One. 7 (2012): e49819
Cao, S. et al., J Virol. 89 (2015): 713-729
Cao, W. et al., J Biol Chem 282 (2007): 18922-18928
Carballido, E. et al., Cancer Control 19 (2012): 54-67
Carbonnelle-Puscian, A. et al., Leukemia 23 (2009): 952-960
Card, K. F. et al., Cancer Immunol Immunother. 53 (2004): 345-357
Carlsten, M. et al., Cancer Res 67 (2007): 1317-1325
Carr, J. C. et al., Surgery 152 (2012): 998-1007
Carr, J. C. et al., Ann.Surg.Oncol 20 Suppl 3 (2013): S739-S746
Cassoni, P. et al., J Neuroendocrinol. 16 (2004): 362-364
Catellani, S. et al., Blood 109 (2007): 2078-2085
Cavard, C. et al., J Pathol. 218 (2009): 201-209
Chae, Y. K. et al., Oncotarget. 6 (2015): 37117-37134
Chang, Y. S. et al., Cancer Chemother.Pharmacol. 59 (2007): 561-574
Chanock, S. J. et al., Hum.Immunol. 65 (2004): 1211-1223
Chapiro, J. et al., Radiol.Med. 119 (2014): 476-482
Che, J. et al., Tumour.Biol 36 (2015): 6559-6568
Chen, H. S. et al., Zhonghua Gan Zang.Bing.Za Zhi. 11 (2003): 145-148
Chen, H. W. et al., Mol.Carcinog 52 (2013): 647-659
Chen, J. et al., Cancer Chemother.Pharmacol. 75 (2015): 1217-1227
Chen, R. S. et al., Oncogene 28 (2009): 599-609
Chen, W. L. et al., BMC.Cancer 12 (2012): 273
Chen, Y. et al., Am.J Physiol Lung Cell Mol.Physiol 306 (2014): L797-L807
Cheong, S. C. et al., Oral Oncol 45 (2009): 712-719
Chinwalla, V. et al., Oncogene 22 (2003): 1400-1410
Chisholm, K. M. et al., PLoS.One. 7 (2012): e30748
Choi, H. H. et al., Oncotarget. 6 (2015a): 19721-19734
Choi, H. H. et al., Oncotarget. 6 (2015b): 11779-11793
Chudnovsky, Y. et al., Cell Rep. 6 (2014): 313-324
Cicek, M. et al., PLoS.One. 6 (2011): e17522
Cipriano, R. et al., Oncotarget. 4 (2013): 729-738
Cipriano, R. et al., Mol.Cancer Res 12 (2014): 1156-1165
Cohen, C. J. et al., J Mol Recognit. 16 (2003a): 324-332
Cohen, C. J. et al., J Immunol 170 (2003b): 4349-4361
Cohen, S. N. et al., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 69 (1972): 2110-2114
Cohen, Y. et al., Hematology. 19 (2014): 286-292
Coligan, J. E. et al., Current Protocols in Protein Science (1995)
Colombetti, S. et al., J Immunol. 176 (2006): 2730-2738
Coosemans, A. et al., Anticancer Res 33 (2013): 5495-5500
Cotterchio, M. et al., PLoS.One. 10 (2015): e0125273
Counter, C. M. et al., Blood 85 (1995): 2315-2320
Courtial, N. et al., FASEB J 26 (2012): 523-532
Crawford, H. C. et al., Curr.Pharm.Des 15 (2009): 2288-2299
Cribier, B. et al., Br.J Dermatol. 144 (2001): 977-982
Cui, D. et al., Oncogene 33 (2014): 2225-2235
Dahlman, K. B. et al., PLoS.One. 7 (2012): e34414
Dai, X. et al., J Virol. 88 (2014): 12694-12702
de Kruijf, E. M. et al., BMC.Cancer 12 (2012): 24
De, S. et al., Cancer Res 69 (2009): 8035-8042
Dedes, K. J. et al., Sci.Transl.Med. 2 (2010): 53ra75
Dengjel, J. et al., Clin Cancer Res 12 (2006): 4163-4170
Denkberg, G. et al., J Immunol 171 (2003): 2197-2207
Dhanoa, B. S. et al., Hum.Genomics 7 (2013): 13
Ding, M. et al., Oncotarget. 6 (2015): 7686-7700
Donnard, E. et al., Oncotarget. 5 (2014): 9199-9213
Drayton, R. M. et al., Clin Cancer Res 20 (2014): 1990-2000
Drutskaya, M. S. et al., IUBMB.Life 62 (2010): 283-289
Du, C. et al., Gastric.Cancer 18 (2015): 516-525
Du, H. et al., Protein Pept.Lett. 16 (2009): 486-489
Duffy, M. J. et al., Clin Cancer Res 15 (2009): 1140-1144
Dufour, C. et al., Cancer 118 (2012): 3812-3821
Economopoulou, P. et al., Ann.Transl.Med. 4 (2016): 173
Ehlken, H. et al., Int.J Cancer 108 (2004): 307-313
Eichhorst, B. F. et al., Blood 107 (2006): 885-891
Eijsink, J. J. et al., Int.J Cancer 130 (2012): 1861-1869
Eisele, G. et al., Brain 129 (2006): 2416-2425
Elbelt, U. et al., J Clin Endocrinol.Metab 100 (2015): E119-E128
Elsnerova, K. et al., Oncol Rep. (2016)
Emens, L. A., Expert.Rev.Anticancer Ther. 12 (2012): 1597-1611
Engelmann, J. C. et al., PLoS.Comput.Biol 11 (2015): e1004293
Enguita-German, M. et al., World J Hepatol. 6 (2014): 716-737
Er, T. K. et al., J Mol.Med.(Berl) (2016)
Eruslanov, E. et al., Clin.Cancer Res. 19 (2013): 1670-1680
Espiard, S. et al., Endocrinol.Metab Clin North Am. 44 (2015): 311-334
Estey, E. H., Am.J Hematol. 89 (2014): 1063-1081
Etcheverry, A. et al., BMC.Genomics 11 (2010): 701
Faget, J. et al., Oncoimmunology 2 (2013): e23185
Falk, K. et al., Nature 351 (1991): 290-296
Fang, M. et al., Mol.Cell Biol 33 (2013): 2635-2647
Fang, Y. et al., Tumour.Biol 33 (2012): 2299-2306
Farrell, A. S. et al., Mol.Cancer Res 12 (2014): 924-939
Ferlay et al., GLOBOCAN 2012 v1.0, Cancer Incidence and Mortality Worldwide: IARC CancerBase No.11 [Internet], (2013), http://globocan.iarc.fr
Fernandez-Calotti, P. X. et al., Haematologica 97 (2012): 943-951
Fevre-Montange, M. et al., J Neuropathol.Exp.Neurol. 65 (2006): 675-684
Finocchiaro, G. et al., Ann.Transl.Med. 3 (2015): 83
Fiorito, V. et al., Biochim.Biophys.Acta 1839 (2014): 259-264
Fokas, E. et al., Cell Death.Dis. 3 (2012): e441
Fong, L. et al., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 98 (2001): 8809-8814
Ford-Hutchinson, A. W., Eicosanoids 4 (1991): 65-74
Forsey, R. W. et al., Biotechnol.Lett. 31 (2009): 819-823
Fremont, S. et al., EMBO Rep. 14 (2013): 364-372
Fritz, P. et al., Pathol.Res Pract. 208 (2012): 203-209
Fuge, O. et al., Res Rep.Urol. 7 (2015): 65-79
Fujita, H. et al., J Histochem.Cytochem. 63 (2015): 217-227
Fukuyama, R. et al., Oncogene 27 (2008): 6044-6055
Furman, R. R. et al., N.Engl.J Med. 370 (2014): 997-1007
Furukawa, T. et al., Sci.Rep. 1 (2011): 161
Gabrielson, M. et al., Biochem.Biophys.Res Commun. 469 (2016): 1090-1096
Gabrielson, M. et al., Oncol Rep. 29 (2013): 1268-1274
Gabrilovich, D. I. et al., Nat Med. 2 (1996): 1096-1103
Galazis, N. et al., Gynecol.Endocrinol. 29 (2013): 638-644
Gandhi, A. V. et al., Ann Surg.Oncol 20 Suppl 3 (2013): S636-S643
Gao, M. et al., Diagn.Pathol. 8 (2013): 205
Garbe, C. et al., J Invest Dermatol. 100 (1993): 239S-244S
Garcia-Irigoyen, O. et al., Hepatology 62 (2015): 166-178
Gattinoni, L. et al., Nat Rev.Immunol 6 (2006): 383-393
Gazy, I. et al., Mutat.Res Rev Mutat.Res 763 (2015): 267-279
Gelsi-Boyer, V. et al., Mol.Cancer Res 3 (2005): 655-667
Ghosh, A. et al., Int.J Biol Sci. 12 (2016): 30-41
Giannopoulos, K. et al., Leukemia 24 (2010): 798-805
Giannopoulos, K. et al., Int.J Oncol 29 (2006): 95-103
Gnjatic, S. et al., Proc Natl.Acad.Sci.U.S.A 100 (2003): 8862-8867
Godkin, A. et al., Int.Immunol 9 (1997): 905-911
Goede, V. et al., N.Engl.J Med. 370 (2014): 1101-1110
Gonda, T. J. et al., Expert.Opin.Biol Ther. 8 (2008): 713-717
Goni, M. H. et al., Anticancer Res 13 (1993): 1155-1160
Granziero, L. et al., Blood 97 (2001): 2777-2783
Green, J. et al., Cochrane.Database.Syst.Rev (2005): CD002225
Green, M. R. et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual 4th (2012)
Greenfield, E. A., Antibodies: A Laboratory Manual 2nd (2014)
Grimm, M. et al., J Transl.Med. 12 (2014): 208
Grinberg-Rashi, H. et al., Clin Cancer Res 15 (2009): 1755-1761
Grivas, P. D. et al., Semin.Cancer Biol 35 (2015): 125-132
Gruel, N. et al., Breast Cancer Res 16 (2014): R46
Gunawardana, C. et al., Br.J Haematol. 142 (2008): 606-609
Guo, P. et al., Onco.Targets.Ther. 8 (2015a): 73-79
Guo, T. et al., Int.J Cancer (2016)
Guo, Z. et al., Tumour.Biol 36 (2015b): 3583-3589
Guo, Z. et al., Tumour.Biol 36 (2015c): 4777-4783
Guyonnet, Duperat, V et al., Biochem.J 305 ( Pt 1) (1995): 211-219
Hallek, Michael et al., ASH Annual Meeting Abstracts 112 (2008): 325
Halon, A. et al., Arch.Gynecol.Obstet. 287 (2013): 563-570
Handkiewicz-Junak, D. et al., Eur.J Nucl.Med.Mol.Imaging (2016)
Hapgood, G. et al., Blood 126 (2015): 17-25
Harig, S. et al., Blood 98 (2001): 2999-3005
Hayette, S. et al., Oncogene 19 (2000): 4446-4450
He, H. et al., Diagn.Mol.Pathol. 21 (2012): 143-149
He, M. et al., J Dig.Dis. 12 (2011): 393-400
Heerma van Voss, M. R. et al., Histopathology 65 (2014): 814-827
Heishima, K. et al., PLoS.One. 10 (2015): e0137361
Hill, S. J. et al., Genes Dev. 28 (2014): 1957-1975
Hinrichs, C. S. et al., Nat.Biotechnol. 31 (2013): 999-1008
Hirahata, M. et al., Cancer Med. (2016)
Hirano, Y. et al., Genes Cells 11 (2006): 1295-1304
Hlavac, V. et al., Medicine (Baltimore) 93 (2014): e255
Holla, S. et al., Mol.Cancer 13 (2014): 210
Holtl, L. et al., Clin.Cancer Res. 8 (2002): 3369-3376
Hong, L. et al., Hum.Pathol. 45 (2014): 2423-2429
Honore, B. et al., Exp.Cell Res 294 (2004): 199-209
Horig, H. et al., Cancer Immunol Immunother. 49 (2000): 504-514
Hu, X. T. et al., Zhonghua Zhong.Liu Za Zhi. 30 (2008): 515-518
Hu, X. T. et al., Oncol Rep. 22 (2009): 1247-1252
Huang, P. Y. et al., Leuk.Lymphoma 55 (2014): 2085-2092
Huang, Y. et al., Clin Epigenetics. 8 (2016): 9
Huang, Y. et al., PLoS.One. 8 (2013a): e82519
Huang, Y. et al., Cell Biosci. 3 (2013b): 16
Huang, Y. X. et al., Nan.Fang Yi.Ke.Da.Xue.Xue.Bao. 29 (2009): 1329-1332
Hubertus, J. et al., Oncol Rep. 25 (2011): 817-823
Huisman, C. et al., Mol.Ther. (2015)
Huisman, C. et al., Mol.Oncol 7 (2013): 669-679
Hung, C. F. et al., Immunol.Rev 222 (2008): 43-69
Hus, I. et al., Oncol Rep. 20 (2008): 443-451
Hussein, S. et al., Sci.Rep. 5 (2015): 15752
Huu, N. T. et al., FEBS J 282 (2015): 4727-4746
Hwang, M. L. et al., J Immunol. 179 (2007): 5829-5838
Ihn, H. J. et al., Exp.Biol Med.(Maywood.) 240 (2015): 1690-1697
Ilm, K. et al., Mol.Cancer 14 (2015): 38
Imai, K. et al., Br.J Cancer 104 (2011): 300-307
Inoue, K. et al., Subcell.Biochem. 85 (2014): 17-40
Ishida, T. et al., Leukemia 20 (2006): 2162-2168
Ishizone, S. et al., Cancer Sci. 97 (2006): 119-126
Iunusova, N. V. et al., Izv.Akad.Nauk Ser.Biol (2014): 448-455
Iunusova, N. V. et al., Izv.Akad.Nauk Ser.Biol (2013): 284-291
Iwakawa, R. et al., Carcinogenesis 36 (2015): 616-621
Jager, D. et al., Cancer Res 60 (2000): 3584-3591
Jaiswal, A. S. et al., Bioorg.Med.Chem Lett. 24 (2014): 4850-4853
Januchowski, R. et al., Biomed.Pharmacother. 67 (2013): 240-245
Januchowski, R. et al., Biomed.Pharmacother. 68 (2014): 447-453
Jelinek, J. et al., PLoS.One. 6 (2011): e22110
Jenne, D. E. et al., Am.J Hum.Genet. 69 (2001): 516-527
Jiang, H. et al., Int.J Mol.Med. 35 (2015a): 1374-1380
Jiang, H. et al., Exp.Ther.Med. 8 (2014a): 769-774
Jiang, H. N. et al., PLoS.One. 8 (2013): e67637
Jiang, L. et al., Cell Cycle 14 (2015b): 2881-2885
Jiang, L. et al., Oncotarget. 5 (2014b): 7663-7676
Jiang, Y. et al., Mol.Cell 53 (2014c): 75-87
Jiao, X. L. et al., Eur.Rev Med.Pharmacol.Sci. 18 (2014): 509-515
Johnson, M. A. et al., Growth Horm.IGF.Res 24 (2014): 164-173
Jones, R. T. et al., Urol.Clin North Am. 43 (2016): 77-86
Ju, W. et al., Oncol.Res. 18 (2009): 47-56
Jung, G. et al., Proc Natl Acad Sci U S A 84 (1987): 4611-4615
Junttila, M. R. et al., Cell Cycle 7 (2008): 592-596
Kachakova, D. et al., J BUON. 18 (2013): 660-668
Kadeh, H. et al., Asian Pac.J Cancer Prev. 16 (2015): 6609-6613
Kalikin, L. M. et al., Genomics 57 (1999): 36-42
Kalos, M. et al., Sci.Transl.Med. 3 (2011): 95ra73
Kang, Y. K. et al., Cancer Res 68 (2008): 7887-7896
Kanthan, R. et al., J Oncol 2015 (2015): 967472
Kanzaki, H. et al., Oncol Rep. 18 (2007): 1171-1175
Kanzaki, H. et al., J Cancer Res Clin Oncol 134 (2008): 211-217
Kanzawa, M. et al., Pathobiology 80 (2013): 235-244
Karim, H. et al., Biochem.Biophys.Res Commun. 411 (2011): 156-161
Karrman, K. et al., Br.J Haematol. 144 (2009): 546-551
Kasiappan, R. et al., Mol.Cancer 9 (2010): 311
Katkoori, V. R. et al., PLoS.One. 7 (2012): e30020
Kato, S. et al., Int.J Oncol 29 (2006): 33-40
Kaufman, H. L. et al., Clin Cancer Res 14 (2008): 4843-4849
Kayser, G. et al., Pathology 43 (2011): 719-724
Kelavkar, U. et al., Curr.Urol.Rep. 3 (2002): 207-214
Kelavkar, U. P. et al., Prostaglandins Other Lipid Mediat. 82 (2007): 185-197
Khanna, A. et al., Int.J Cancer 138 (2016): 525-532
Khanna, A. et al., Cancer Res 73 (2013): 6548-6553
Khatamianfar, V. et al., BMJ Open. 2 (2012)
Kibbe, A. H., Handbook of Pharmaceutical Excipients rd (2000)
Kim, D. S. et al., J Proteome.Res 9 (2010a): 3710-3719
Kim, H. S. et al., Korean J Intern.Med. 25 (2010b): 399-407
Kim, J. et al., J Biol Chem 286 (2011): 43294-43300
Kim, J. H. et al., J Prev.Med.Public Health 49 (2016): 61-68
Kim, J. W. et al., Cancer Sci. 100 (2009): 1468-1478
Kim, J. Y. et al., BMB.Rep. 47 (2014a): 451-456
Kim, K. et al., Mol.Cancer Res 6 (2008): 426-434
Kim, S. M. et al., Int.J Cancer 134 (2014b): 114-124
Kim, Y. D. et al., Int.J Mol.Med. 29 (2012): 656-662
Kindla, J. et al., Cancer Biol Ther. 11 (2011): 584-591
Kirschner, L. S. et al., Horm.Cancer 7 (2016): 9-16
Kitchen, M. O. et al., Epigenetics. 11 (2016): 237-246
Kiyomitsu, T. et al., Mol.Cell Biol 31 (2011): 998-1011
Kleylein-Sohn, J. et al., J Cell Sci. 125 (2012): 5391-5402
Klopfleisch, R. et al., J Proteome.Res 9 (2010): 6380-6391
Knollman, H. et al., Ther.Adv.Urol. 7 (2015a): 312-330
Knollman, H. et al., Ther.Adv.Urol. 7 (2015b): 312-330
Kocer, B. et al., Pathol.Int. 52 (2002): 470-477
Kohnz, R. A. et al., ACS Chem Biol 10 (2015): 1624-1630
Kohonen-Corish, M. R. et al., Oncogene 26 (2007): 4435-4441
Koido, S. et al., World J Gastroenterol. 19 (2013): 8531-8542
Kong, D. S. et al., Oncotarget. (2016)
Krackhardt, A. M. et al., Blood 100 (2002): 2123-2131
Krieg, A. M., Nat Rev.Drug Discov. 5 (2006): 471-484
Kronenberger, K. et al., J Immunother. 31 (2008): 723-730
Krupenko, S. A. et al., Cell Growth Differ. 13 (2002): 227-236
Kubota, T. et al., Cell Cycle 12 (2013): 2570-2579
Kuchenbaecker, K. B. et al., Nat Genet. 47 (2015): 164-171
Kuefer, M. U. et al., Oncogene 22 (2003): 1418-1424
Kumar, A. et al., Cell Biochem.Biophys. 67 (2013): 837-851
Kumar, R. et al., DNA Repair (Amst) 15 (2014): 54-59
Kunimoto, K. et al., J Cell Physiol 220 (2009): 621-631
Kuwada, M. et al., Cancer Lett. 369 (2015): 212-221
Landi, D. et al., Cancer 118 (2012): 4670-4680
Lanier, M. H. et al., Mol.Biol Cell 26 (2015): 4577-4588
Lee, D. G. et al., Curr.Cancer Drug Targets. 11 (2011): 966-975
Lee, J. H. et al., Ann.Surg. 249 (2009a): 933-941
Lee, K. Y. et al., Yonsei Med.J 50 (2009b): 60-67
Lee, M. A. et al., BMC.Cancer 14 (2014a): 125
Lee, S. Y. et al., Eur.J Cancer 50 (2014b): 698-705
Lee, W. C. et al., J Immunother. 28 (2005): 496-504
Lei, N. et al., Oncol Rep. 32 (2014): 1689-1694
Leitlinie Endometriumkarzinom, 032/034, (2008)
Leitlinie Magenkarzinom, 032-009OL, (2012)
Leitlinien f?r Diagnostik und Therapie in der Neurologie, 030/099, (2014)
Leonetti, M. D. et al., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 109 (2012): 19274-19279
Leung, J. et al., Immune.Netw. 14 (2014): 265-276
Li, J. et al., Mol.Biol Rep. 41 (2014): 8071-8079
Li, J. et al., Zhongguo Fei.Ai.Za Zhi. 18 (2015a): 16-22
Li, J. et al., Tumour.Biol (2016)
Li, J. F. et al., Zhonghua Wei Chang Wai Ke.Za Zhi. 15 (2012a): 388-391
Li, L. et al., Pharmacogenet.Genomics 22 (2012b): 105-116
Li, W. Q. et al., Carcinogenesis 34 (2013): 1536-1542
Li, Y. et al., Cancer Biol Ther. 16 (2015b): 1316-1322
Li, Y. et al., Cancer Epidemiol. 39 (2015c): 8-13
Li, Y. F. et al., Int.J Biol Sci. 8 (2012c): 1168-1177
Liang, Y. C. et al., Oncotarget. 6 (2015): 38046-38060
Liao, W. et al., Oncotarget. 5 (2014): 10271-10279
Liddy, N. et al., Nat Med. 18 (2012): 980-987
Lin, C. et al., Oncotarget. 6 (2015): 8434-8453
Lin, J. C. et al., RNA. 20 (2014): 1621-1631
Lin, Y. W. et al., Eur.J Cancer 45 (2009): 2041-2049
Lin, Z. et al., Diagn.Pathol. 8 (2013): 133
Lindqvist, B. M. et al., Epigenetics. 7 (2012): 300-306
Linhares, N. D. et al., Eur.J Med.Genet. 57 (2014): 643-648
Linher-Melville, K. et al., Mol.Cell Biochem. 405 (2015): 205-221
Linkov, F. et al., Eur.Cytokine Netw. 20 (2009): 21-26
Listerman, I. et al., Cancer Res 73 (2013): 2817-2828
Liu, C. et al., Int.J Clin Exp.Pathol. 8 (2015): 7446-7449
Liu, L. et al., Biochem.J 451 (2013a): 55-60
Liu, M. et al., Asian Pac.J Cancer Prev. 14 (2013b): 6281-6286
Liu, Q. et al., Med.Oncol 31 (2014a): 882
Liu, T. et al., DNA Repair (Amst) 11 (2012): 131-138
Liu, W. J. et al., Leuk.Lymphoma 55 (2014b): 2691-2698
Liu, X. et al., Mol.Biol Rep. 41 (2014c): 7471-7478
Ljunggren, H. G. et al., J Exp.Med. 162 (1985): 1745-1759
Lleonart, M. E. et al., Oncol Rep. 16 (2006): 603-608
Llovet, J. M. et al., N.Engl.J Med. 359 (2008): 378-390
Lobito, A. A. et al., J Biol Chem 286 (2011): 18969-18981
Loddo, M. et al., J Pathol. 233 (2014): 344-356
Lollini, P. L. et al., Int.J Cancer 55 (1993): 320-329
Longenecker, B. M. et al., Ann N.Y.Acad.Sci. 690 (1993): 276-291
Lonsdale, J., Nat.Genet. 45 (2013): 580-585
Lu, G. et al., Cancer Cell 26 (2014): 222-234
Lucas, S. et al., Int.J Cancer 87 (2000): 55-60
Luhrig, S. et al., Cell Div. 8 (2013): 3
Luis, Espinoza J. et al., Cancer Sci. 104 (2013): 657-662
Lukas, T. J. et al., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 78 (1981): 2791-2795
Lukka, H. et al., Clin Oncol (R Coll.Radiol.) 14 (2002): 203-212
Luna, B. et al., Mol.Neurobiol. 52 (2015): 1341-1363
Lundblad, R. L., Chemical Reagents for Protein Modification 3rd (2004)
Ma, J. et al., Pathol.Oncol Res 19 (2013a): 821-832
Ma, L. D. et al., Zhongguo Shi Yan.Xue.Ye.Xue.Za Zhi. 21 (2013b): 1429-1434
Ma, T. et al., Zhonghua Yi.Xue.Za Zhi. 94 (2014): 3005-3007
Maggioni, A. et al., Protein Expr.Purif. 101 (2014): 165-171
Mahomed, F., Oral Oncol 47 (2011): 797-803
Mantel, A. et al., Exp.Dermatol. 23 (2014): 573-578
Mantia-Smaldone, G. M. et al., Hum.Vaccin.Immunother. 8 (2012): 1179-1191
Marchio, C. et al., J Clin Pathol. 63 (2010): 220-228
Marechal, R. et al., Clin Cancer Res 15 (2009): 2913-2919
Marine, J. C., Nat Rev Cancer 12 (2012): 455-464
Markus, M. A. et al., Genomics 107 (2016): 138-144
Marten, A. et al., Cancer Immunol.Immunother. 51 (2002): 637-644
Martin, R. W. et al., Cancer Res 67 (2007): 9658-9665
Martinez, I. et al., Eur.J Cancer 43 (2007): 415-432
Marzec, K. A. et al., Biomed.Res Int. 2015 (2015): 638526
Mason, C. C. et al., Leukemia (2015)
Massari, F. et al., Cancer Treat.Rev. 41 (2015): 114-121
Massoner, P. et al., PLoS.One. 8 (2013): e55207
Matsueda, S. et al., World J Gastroenterol. 20 (2014): 1657-1666
Matsuura, N. et al., Nihon Rinsho 53 (1995): 1643-1647
Maus, M. V. et al., Blood 123 (2014): 2625-2635
Mayr, C. et al., Exp.Hematol. 34 (2006): 44-53
Mayr, C. et al., Blood 105 (2005): 1566-1573
McGilvray, R. W. et al., Int.J Cancer 127 (2010): 1412-1420
Medeiros, A. C. et al., Cancer Epidemiol.Biomarkers Prev. 3 (1994): 331-333
Mehta, J. et al., PLoS.One. 10 (2015): e0120622
Mei, J. Z. et al., Nan.Fang Yi.Ke.Da.Xue.Xue.Bao. 27 (2007): 887-889
Mencia, N. et al., Biochem.Pharmacol. 82 (2011): 1572-1582
Mendoza-Maldonado, R. et al., PLoS.One. 5 (2010): e13720
Meziere, C. et al., J Immunol 159 (1997): 3230-3237
Migliorini, D. et al., J Clin Invest 121 (2011): 1329-1343
Milutin, Gasperov N. et al., PLoS.One. 10 (2015): e0129452
Missero, C. et al., Exp.Dermatol. 23 (2014): 143-146
Miyagi, Y. et al., Clin Cancer Res 7 (2001): 3950-3962
Miyamoto, K. et al., Int.J Cancer 116 (2005): 407-414
Mohanraj, L. et al., Recent Pat Anticancer Drug Discov 6 (2011): 166-177
Mohelnikova-Duchonova, B. et al., Cancer Chemother.Pharmacol. 72 (2013): 669-682
Molina, J. R. et al., Mayo Clin Proc. 83 (2008): 584-594
Morgan, R. A. et al., Science 314 (2006): 126-129
Mori, M. et al., Transplantation 64 (1997): 1017-1027
Morin, P. J., Cancer Res 65 (2005): 9603-9606
Morita, T. et al., Int.J Cancer 109 (2004): 525-532
Mortara, L. et al., Clin Cancer Res. 12 (2006): 3435-3443
Moser, J. J. et al., J Neurosci.Res 85 (2007): 3619-3631
Mou, X. et al., Sci.Rep. 4 (2014): 6138
Moulton, H. M. et al., Clin Cancer Res 8 (2002): 2044-2051
Mueller, L. N. et al., J Proteome.Res 7 (2008): 51-61
Mueller, L. N. et al., Proteomics. 7 (2007): 3470-3480
Mukhopadhyay, P. et al., Biochim.Biophys.Acta 1815 (2011): 224-240
Muller, M. R. et al., Blood 103 (2004): 1763-1769
Mumberg, D. et al., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 96 (1999): 8633-8638
Nagashio, R. et al., Sci.Rep. 5 (2015): 8649
Naito, T. et al., J Biol Chem 290 (2015): 15004-15017
Nakajima, H. et al., Cancer Sci. 105 (2014): 1093-1099
Nakano, K. et al., Exp.Cell Res 287 (2003): 219-227
Nakarai, C. et al., Clin Exp.Med. 15 (2015): 333-341
Nakashima, A. et al., Biochem.Biophys.Res Commun. 361 (2007): 218-223
National Cancer Institute, (5-6-2015), www.cancer.gov
Nguyen, M. H. et al., Int.J Oncol 41 (2012): 1285-1296
Ni, I. B. et al., Hematol.Rep. 4 (2012): e19
Ni, L. et al., J Cell Biochem. 106 (2009): 920-928
Nobusawa, S. et al., Brain Tumor Pathol. 31 (2014): 229-233
O'Brien, S. et al., Lancet Oncol 15 (2014): 48-58
O'Geen, H. et al., PLoS.Genet. 3 (2007): e89
Obama, K. et al., Clin Cancer Res 14 (2008): 1333-1339
Oehler, V. G. et al., Blood 114 (2009): 3292-3298
Ogasawara, N. et al., J Biochem. 149 (2011): 321-330
Ogbomo, H. et al., Neoplasia. 10 (2008): 1402-1410
Ogiso, Y. et al., Cancer Res 62 (2002): 5008-5012
Oh, Y. et al., J Biol.Chem 287 (2012): 17517-17529
Okabe, N. et al., Int.J Oncol 46 (2015): 999-1006
Okuno, K. et al., Exp.Ther Med. 2 (2011): 73-79
Olkhanud, P. B. et al., Cancer Res 69 (2009): 5996-6004
Olszewski-Hamilton, U. et al., Biomark.Cancer 3 (2011): 31-40
Orentas, R. J. et al., Front Oncol 2 (2012): 194
Orzol, P. et al., Histol.Histopathol. 30 (2015): 503-521
Ouyang, M. et al., BMC.Cancer 15 (2015): 132
Ozawa, H. et al., Ann.Surg.Oncol 17 (2010): 2341-2348
Ozeki, N. et al., Int.J Mol.Sci. 17 (2016)
Palma, M. et al., Cancer Immunol Immunother. 57 (2008): 1705-1710
Palmer, D. H. et al., Hepatology 49 (2009): 124-132
Palomba, M. L., Curr.Oncol Rep. 14 (2012): 433-440
Pan, J. et al., Leuk.Res 36 (2012): 889-894
Pannu, V. et al., Oncotarget. 6 (2015): 6076-6091
Parikh, R. A. et al., Genes Chromosomes.Cancer 53 (2014): 25-37
Parikh, S. A. et al., Blood 118 (2011): 2062-2068
Parisi, M. A., Am.J Med.Genet.C.Semin.Med.Genet. 151C (2009): 326-340
Park, E. et al., Mol.Cell 50 (2013): 908-918
Park, M. J. et al., Immunol.Invest 40 (2011): 367-382
Park, Y. R. et al., Cancer Genomics Proteomics. 13 (2016): 83-90
Parplys, A. C. et al., DNA Repair (Amst) 24 (2014): 87-97
Pasmant, E. et al., Mol.Med. 17 (2011): 79-87
Patil, A. A. et al., Oncotarget. 5 (2014): 6414-6424
Pattabiraman, D. R. et al., Leukemia 27 (2013): 269-277
Pawar, S. et al., J Ovarian.Res 7 (2014): 53
Payne, S. R. et al., Prostate 69 (2009): 1257-1269
Peng, B. et al., Mol.Biosyst. 11 (2015): 105-114
Pequeux, C. et al., Cancer Res 62 (2002): 4623-4629
Perrais, M. et al., J Biol Chem 276 (2001): 15386-15396
Petrini, I., Ann.Transl.Med. 3 (2015): 82
Phan, G. Q. et al., Cancer Control 20 (2013): 289-297
Phe, V. et al., BJU.Int. 104 (2009): 896-901
Piasecka, D. et al., Postepy Biochem. 61 (2015): 198-206
Pinheiro, J. et al., nlme: Linear and Nonlinear Mixed Effects Models (http://CRAN.R-project.org/packe=nlme) (2015)
Plebanski, M. et al., Eur.J Immunol 25 (1995): 1783-1787
Porta, C. et al., Virology 202 (1994): 949-955
Porter, D. L. et al., N.Engl.J Med. 365 (2011): 725-733
Potapenko, I. O. et al., Mol.Oncol 9 (2015): 861-876
Przybyl, J. et al., Int.J Biochem.Cell Biol 53 (2014): 505-513
Qian, M. X. et al., Cell 153 (2013): 1012-1024
Qiu, J. et al., Leukemia 17 (2003): 1891-1900
Quinn, D. I. et al., Urol.Oncol. (2015)
Qureshi, R. et al., Cancer Lett. 356 (2015): 321-331
Rainer, J. et al., Mol.Endocrinol. 26 (2012): 178-193
Raja, S. B. et al., J Cell Sci. 125 (2012): 703-713
Rajadhyaksha, A. M. et al., Am.J Hum.Genet. 87 (2010): 643-654
Rajkumar, T. et al., BMC.Cancer 11 (2011): 80
Rakic, M. et al., Hepatobiliary.Surg.Nutr. 3 (2014): 221-226
Rammensee, H. G. et al., Immunogenetics 50 (1999): 213-219
Ramsay, R. G. et al., Expert.Opin.Ther.Targets. 7 (2003): 235-248
RefSeq, The NCBI handbook [Internet], Chapter 18, (2002), http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21091/
Reid-Lombardo, K. M. et al., Cancer Epidemiol.Biomarkers Prev. 20 (2011): 1251-1254
Reinisch, W. et al., J Immunother. 25 (2002): 489-499
Reinmuth, N. et al., Dtsch.Med.Wochenschr. 140 (2015): 329-333
Relogio, A. et al., PLoS.Genet. 10 (2014): e1004338
Rendon-Huerta, E. et al., J Gastrointest.Cancer 41 (2010): 52-59
Resende, C. et al., Helicobacter. 16 Suppl 1 (2011): 38-44
Richards, S. et al., J Natl.Cancer Inst. 91 (1999): 861-868
Ricke, R. M. et al., Cell Cycle 10 (2011): 3645-3651
Rincon, R. et al., Oncotarget. 6 (2015): 4299-4314
Rini, B. I. et al., Curr.Opin.Oncol. 20 (2008): 300-306
Rini, B. I. et al., Cancer 107 (2006): 67-74
Riordan, J. D. et al., PLoS.Genet. 9 (2013): e1003441
Ritter, A. et al., Cell Cycle 14 (2015): 3755-3767
Robak, T. et al., Expert.Opin.Biol.Ther 14 (2014): 651-661
Roca, H. et al., PLoS.One. 8 (2013): e76773
Rock, K. L. et al., Science 249 (1990): 918-921
Rodenko, B. et al., Nat Protoc. 1 (2006): 1120-1132
Rodini, C. O. et al., Int.J Oncol 40 (2012): 1180-1188
Rodriguez, F. J. et al., J Neuropathol.Exp.Neurol. 67 (2008): 1194-1204
Romanuik, T. L. et al., BMC.Med.Genomics 3 (2010): 43
Ronchi, C. L. et al., Neoplasia. 14 (2012): 206-218
Rouanne, M. et al., Crit Rev Oncol Hematol. 98 (2016): 106-115
Rucki, A. A. et al., World J Gastroenterol. 20 (2014): 2237-2246
Rudland, P. S. et al., Am.J Pathol. 176 (2010): 2935-2947
Rutkowski, M. J. et al., Mol Cancer Res 8 (2010): 1453-1465
Ryu, B. et al., PLoS.One. 2 (2007): e594
S3-Leitlinie Exokrines Pankreaskarzinom, 032-010OL, (2013)
S3-Leitlinie Lungenkarzinom, 020/007, (2011)
S3-Leitlinie maligne Ovarialtumore, 032-035OL, (2013)
S3-Leitlinie Mammakarzinom, 032-045OL, (2012)
S3-Leitlinie Melanom, 032-024OL, (2013)
S3-Leitlinie Prostatakarzinom, 043/022OL, (2014)
S3-Leitlinie Zervixkarzinom, 032/033OL, (2014)
Sadeque, A. et al., BMC.Med.Genomics 5 (2012): 59
Saeki, M. et al., PLoS.One. 8 (2013): e67326
Safarpour, D. et al., Arch.Pathol.Lab Med. 139 (2015): 612-617
Saiki, R. K. et al., Science 239 (1988): 487-491
Salim, H. et al., Genes Chromosomes.Cancer 52 (2013): 895-911
Salman, B. et al., Oncoimmunology. 2 (2013): e26662
Sandoval, J. et al., J Clin Oncol 31 (2013): 4140-4147
Sangro, B. et al., J Clin Oncol 22 (2004): 1389-1397
Sankaranarayanan, P. et al., PLoS.One. 10 (2015): e0121396
Santarlasci, V. et al., Eur.J Immunol. 44 (2014): 654-661
Sarma, S. N. et al., Environ.Toxicol.Pharmacol. 32 (2011): 285-295
Sasao, T. et al., Reproduction. 128 (2004): 709-716
Satija, Y. K. et al., Int.J Cancer 133 (2013): 2759-2768
Sato, N. et al., Genes Chromosomes.Cancer 49 (2010): 353-367
Savaskan, N. E. et al., Ann.Anat. 192 (2010): 309-313
Savaskan, N. E. et al., Curr.Neuropharmacol. 13 (2015): 258-265
Sawada, G. et al., Oncol Rep. 30 (2013): 1971-1975
Schetelig, J. et al., J Clin Oncol 26 (2008): 5094-5100
Scheurer, B. et al., Immunopharmacology 38 (1997): 167-175
Schmidt, S. M. et al., Cancer Res 64 (2004): 1164-1170
Schreiber, M. et al., J Biol Chem 273 (1998): 3509-3516
Seeger, F. H. et al., Immunogenetics 49 (1999): 571-576
Seidl, C. et al., Invest New Drugs 28 (2010): 49-60
Seppanen, M. et al., Acta Obstet.Gynecol.Scand. 87 (2008): 902-909
Shareef, M. M. et al., Arab.J Gastroenterol. 16 (2015): 105-112
Sharma, R. K. et al., Clin Exp.Metastasis 33 (2016): 263-275
Sharpe, D. J. et al., Oncotarget. 5 (2014): 8803-8815
Shen, C. et al., Cancer Res 73 (2013): 3393-3401
Shen, Y. et al., Oncotarget. 6 (2015a): 20396-20403
Shen, Y. et al., Cancer Cell Microenviron. 2 (2015b)
Sherman, F. et al., Laboratory Course Manual for Methods in Yeast Genetics (1986)
Sherman, S. K. et al., Surgery 154 (2013): 1206-1213
Shi, M. et al., World J Gastroenterol. 10 (2004): 1146-1151
Shi, Z. et al., Tumour.Biol 36 (2015): 8519-8529
Shimizu, F. et al., Lab Invest 83 (2003): 187-197
Shioji, G. et al., J Hum.Genet. 50 (2005): 507-515
Showel, M. M. et al., F1000Prime.Rep. 6 (2014): 96
Siegel, S. et al., Blood 102 (2003): 4416-4423
Siew, Y. Y. et al., Int.Immunol. 27 (2015): 621-632
Silva, L. P. et al., Anal.Chem. 85 (2013): 9536-9542
Silvestris, F. et al., Adv.Exp.Med.Biol 714 (2011): 113-128
Singh, V. et al., Curr.Cancer Drug Targets. 13 (2013): 379-399
Singh-Jasuja, H. et al., Cancer Immunol.Immunother. 53 (2004): 187-195
Skawran, B. et al., Mod.Pathol. 21 (2008): 505-516
Small, E. J. et al., J Clin Oncol. 24 (2006): 3089-3094
Smetsers, S. et al., Fam.Cancer 11 (2012): 661-665
Smith, P. et al., Clin Cancer Res 13 (2007): 4061-4068
Sohrabi, A. et al., Asian Pac.J Cancer Prev. 15 (2014): 6745-6748
Song, H. R. et al., Mol.Carcinog 52 Suppl 1 (2013): E155-E160
Sonora, C. et al., J Histochem.Cytochem. 54 (2006): 289-299
Spaner, D. E. et al., Cancer Immunol Immunother. 54 (2005): 635-646
Srivastava, N. et al., Cancer Manag.Res. 6 (2014): 279-289
Stacey, S. N. et al., Nat Commun. 6 (2015): 6825
Stahl, M. et al., Ann.Oncol. 24 Suppl 6 (2013): vi51-vi56
Stangel, D. et al., J Surg.Res 197 (2015): 91-100
Stein, U., Expert.Opin.Ther.Targets. 17 (2013): 1039-1052
Steinberg, R. L. et al., Urol.Oncol (2016a)
Steinberg, R. L. et al., Urol.Oncol (2016b)
Steinway, S. N. et al., PLoS.One. 10 (2015): e0128159
Stenman, G. et al., Cell Cycle 9 (2010): 2986-2995
Stevanovic, S. et al., J Clin Oncol 33 (2015): 1543-1550
Stintzing, S., F1000Prime.Rep. 6 (2014): 108
Stratakis, C. A. et al., DNA Seq. 9 (1998): 227-230
Struyf, S. et al., Am.J Pathol. 163 (2003): 2065-2075
Sturm, M. et al., BMC.Bioinformatics. 9 (2008): 163
Su, Z. et al., Cancer Res. 63 (2003): 2127-2133
Subhash, V. V. et al., BMC.Cancer 15 (2015): 550
Sui, Y. et al., Oncogene 26 (2007): 822-835
Sukocheva, O. A. et al., World J Gastroenterol. 21 (2015): 6146-6156
Sun, S. et al., Gene 584 (2016): 90-96
Sun, W. et al., World J Gastroenterol. 19 (2013): 2913-2920
Sutherland, C. L. et al., Blood 108 (2006): 1313-1319
Suzuki, N. et al., J Orthop.Res 32 (2014): 915-922
Tabares-Seisdedos, R. et al., Mol.Psychiatry 14 (2009): 563-589
Takahashi, M. et al., Int.J Oncol 27 (2005): 1483-1487
Takatsu, H. et al., J Biol Chem 286 (2011): 38159-38167
Takayama, M. A. et al., Genes Cells 5 (2000a): 481-490
Takayama, T. et al., Cancer 68 (1991): 2391-2396
Takayama, T. et al., Lancet 356 (2000b): 802-807
Taketani, T. et al., Cancer Res 62 (2002): 33-37
Tang, C. et al., Int.J Clin Exp.Pathol. 7 (2014): 4782-4794
Tatenhorst, L. et al., J Neuropathol.Exp.Neurol. 63 (2004): 210-222
Taverniti, V. et al., Nucleic Acids Res 43 (2015): 482-492
Taylor, M. et al., Breast Cancer Res 9 (2007): R46
Terabayashi, T. et al., PLoS.One. 7 (2012): e39714
Teufel, R. et al., Cell Mol Life Sci. 62 (2005): 1755-1762
Thakkar, J. P. et al., Cancer Epidemiol.Biomarkers Prev. 23 (2014): 1985-1996
Tian, Y. et al., Diagn.Pathol. 9 (2014): 42
Ting, L. et al., DNA Repair (Amst) 9 (2010): 1241-1248
Toda, M. et al., Meta Gene 2 (2014): 686-693
Toomey, P. G. et al., Cancer Control 20 (2013): 32-42
Torelli, G. F. et al., Haematologica 99 (2014): 1248-1254
Tran, E. et al., Science 344 (2014): 641-645
Tsujikawa, T. et al., Int.J Cancer 132 (2013): 2755-2766
Tumova, L. et al., Mol.Cancer Ther. 13 (2014): 812-822
Urata, Y. N. et al., Sci.Rep. 5 (2015): 13676
Ushiku, T. et al., Histopathology 61 (2012): 1043-1056
Utrera, R. et al., EMBO J 17 (1998): 5015-5025
Vainio, P. et al., Am.J Pathol. 178 (2011a): 525-536
Vainio, P. et al., Oncotarget. 2 (2011b): 1176-1190
Valque, H. et al., PLoS.One. 7 (2012): e46699
van de Klundert, M. A. et al., PLoS.One. 7 (2012): e48940
Van Ginkel, P. R. et al., Biochim.Biophys.Acta 1448 (1998): 290-297
van Muijen, G. N. et al., Recent Results Cancer Res 139 (1995): 105-122
Van, Seuningen, I et al., Biochem.J 348 Pt 3 (2000): 675-686
Vater, I. et al., Leukemia 29 (2015): 677-685
Ventela, S. et al., Oncotarget. 6 (2015): 144-158
Verreman, K. et al., Biochem.J 439 (2011): 469-477
Vici, P. et al., J Exp.Clin Cancer Res 33 (2014): 29
Von Hoff, D. D. et al., N.Engl.J Med. 369 (2013): 1691-1703
von Rundstedt, F. C. et al., Transl.Androl Urol. 4 (2015): 244-253
Wallrapp, C. et al., Ann.Oncol 10 Suppl 4 (1999): 64-68
Walsh, M. D. et al., Mod.Pathol. 26 (2013): 1642-1656
Walter, S. et al., J Immunol 171 (2003): 4974-4978
Walter, S. et al., Nat Med. 18 (2012): 1254-1261
Walton, E. L. et al., Biology.(Basel) 3 (2014): 578-605
Wan, W. et al., World J Surg.Oncol 12 (2014): 185
Wang, C. et al., Nucleic Acids Res 43 (2015a): 4893-4908
Wang, C. Q. et al., Oral Surg.Oral Med.Oral Pathol.Oral Radiol. 117 (2014a): 353-360
Wang, D. et al., Chin Med.Sci.J 14 (1999a): 107-111
Wang, G. et al., Tumour.Biol 36 (2015b): 1055-1065
Wang, G. H. et al., Oncol Lett. 5 (2013a): 544-548
Wang, H. et al., Carcinogenesis 30 (2009a): 1314-1319
Wang, J. et al., Ann.Surg.Oncol 22 (2015c): 685-692
Wang, J. et al., J Exp.Clin Cancer Res 34 (2015d): 13
Wang, J. W. et al., Oncogene 23 (2004): 4089-4097
Wang, L. et al., J Cutan.Pathol. 42 (2015e): 361-367
Wang, L. et al., Mol.Biol Rep. 38 (2011a): 229-236
Wang, L. et al., Diagn.Pathol. 8 (2013b): 190
Wang, N. et al., Arch.Gynecol.Obstet. 283 (2011b): 103-108
Wang, Q. et al., Cell 138 (2009b): 245-256
Wang, Q. et al., BMC.Cancer 11 (2011c): 271
Wang, Q. et al., Onco.Targets.Ther. 8 (2015f): 1971-1977
Wang, Q. et al., PLoS.One. 8 (2013c): e61640
Wang, R. et al., Mol.Cell Biochem. 405 (2015g): 97-104
Wang, S. et al., J Cell Sci. 120 (2007): 567-577
Wang, W. Z. et al., J Exp.Clin Cancer Res 29 (2010): 140
Wang, X. W. et al., Gut Liver 8 (2014b): 487-494
Wang, X. Z. et al., Oncogene 18 (1999b): 5718-5721
Wang, Y. et al., Cancer Cell 26 (2014c): 374-389
Wang, Y. P. et al., Ai.Zheng. 27 (2008): 243-248
Wang, Z. et al., J Cancer Res Clin Oncol 141 (2015h): 1353-1361
Wang, Z. et al., Oncotarget. (2016)
Wang, Z. et al., Glycobiology 22 (2012): 930-938
Watanabe, N. et al., J Biol Chem 278 (2003): 26102-26110
Watts, C. A. et al., Chem Biol 20 (2013): 1399-1410
Wells, J. et al., J Biol Chem 284 (2009): 29125-29135
Weng, Y. R. et al., Carcinogenesis 35 (2014): 1389-1398
Wheler, J. J. et al., BMC.Cancer 15 (2015): 442
Whitaker, H. C. et al., Oncogene 33 (2014): 5274-5287
Wierda, W. G. et al., Blood 118 (2011): 5126-5129
Wierinckx, A. et al., Endocr.Relat Cancer 14 (2007): 887-900
Wilhelm, S. M. et al., Cancer Res 64 (2004): 7099-7109
Willcox, B. E. et al., Protein Sci. 8 (1999): 2418-2423
Williams, G. L. et al., Cell Cycle 6 (2007): 1699-1704
Wilson, P. M. et al., Nat Rev.Clin Oncol 11 (2014): 282-298
Wilzen, A. et al., Int.J Oncol 34 (2009): 697-705
Wittig, B. et al., Hum.Gene Ther. 12 (2001): 267-278
Wlcek, K. et al., Cancer Biol Ther. 11 (2011): 801-811
Wong, R. P. et al., Pigment Cell Melanoma Res 25 (2012): 213-218
World Cancer Report, (2014)
World Health Organization, (2014), http://www.who.int/en/
Wu, J. et al., ACS Chem Biol 8 (2013): 2201-2208
Wu, Y. et al., Cancer Lett. 356 (2015): 646-655
Xie, B. et al., Pathol.Oncol Res 19 (2013): 611-617
Xie, C. et al., Biochem.Biophys.Res Commun. 445 (2014): 263-268
Xiong, D. et al., Carcinogenesis 33 (2012): 1797-1805
Xu, X. et al., Oncogene 26 (2007): 7371-7379
Xu, X. et al., J Biol Chem 289 (2014): 8881-8890
Xue, J. H. et al., Acta Pharmacol.Sin. 32 (2011): 1019-1024
Yamada, T. et al., Br.J Cancer 108 (2013): 2495-2504
Yamashita, J. et al., Acta Derm.Venereol. 92 (2012): 593-597
Yamazoe, S. et al., J Exp.Clin Cancer Res 29 (2010): 53
Yan-Chun, L. et al., Appl.Immunohistochem.Mol.Morphol. (2015)
Yan-Fang, T. et al., PLoS.One. 10 (2015): e0126566
Yang, J. J. et al., Haematologica 99 (2014a): e11-e13
Yang, L. et al., J Biol Chem 291 (2016): 3905-3917
Yang, L. et al., PLoS.One. 10 (2015a): e0133896
Yang, T. T. et al., Sci.Rep. 5 (2015b): 14096
Yang, Y. et al., Oncol Lett. 9 (2015c): 1833-1838
Yang, Y. et al., PLoS.One. 9 (2014b): e97578
Yang, Y. M. et al., Cancer Sci. 102 (2011): 1264-1271
Yao, Y. et al., Cell Physiol Biochem. 35 (2015): 983-996
Ye, B. G. et al., Oncotarget. (2016)
Yeh, I. et al., Nat.Commun. 6 (2015): 7174
Yeh, S. et al., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 97 (2000): 11256-11261
Yonezawa, S. et al., Pathol.Int. 49 (1999): 45-54
Yoshimaru, T. et al., Nat Commun. 4 (2013): 2443
Yoshimaru, T. et al., Sci.Rep. 4 (2014): 7355
Young, A. et al., BMC.Cancer 14 (2014): 808
Yu, C. J. et al., Int.J Cancer 69 (1996): 457-465
Yu, H. et al., Nat Chem Biol 11 (2015a): 847-854
Yu, T. et al., Cell Res 24 (2014): 1214-1230
Yu, X. et al., Tumour.Biol 36 (2015b): 967-972
Yuan, M. et al., Oncotarget. 5 (2014): 2820-2826
Zaganjor, E. et al., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 111 (2014): 10568-10573
Zamuner, F. T. et al., Mol.Cancer Ther. 14 (2015): 828-834
Zaremba, S. et al., Cancer Res. 57 (1997): 4570-4577
Zavala-Zendejas, V. E. et al., Cancer Invest 29 (2011): 1-11
Zekri, A. R. et al., BMC.Res Notes 1 (2008): 106
Zeng, B. et al., Curr.Cancer Drug Targets. 13 (2013a): 103-116
Zeng, S. et al., Eur.J Cancer 49 (2013b): 3752-3762
Zeng, X. et al., Ai.Zheng. 26 (2007): 1080-1084
Zeng, X. X. et al., Eur.Rev Med.Pharmacol.Sci. 19 (2015): 4353-4361
Zhan, W. et al., PLoS.One. 10 (2015): e0142596
Zhang, B. et al., J Huazhong.Univ Sci.Technolog.Med.Sci. 30 (2010a): 322-325
Zhang, G. et al., BMC.Cancer 14 (2014): 310
Zhang, J. et al., Theor.Biol Med.Model. 9 (2012a): 53
Zhang, Q. et al., Zhongguo Fei.Ai.Za Zhi. 13 (2010b): 612-616
Zhang, W. et al., Clin Cancer Res 7 (2001): 822s-829s
Zhang, W. et al., Biochem.J (2016)
Zhang, X. et al., EMBO J 30 (2011): 2177-2189
Zhang, X. et al., Med.Oncol 32 (2015): 148
Zhang, X. et al., Int.J Med.Sci. 10 (2013a): 1795-1804
Zhang, Y. et al., Gene 497 (2012b): 93-97
Zhang, Y. et al., J Ovarian.Res 6 (2013b): 55
Zhao, J. et al., Int.J Med.Sci. 11 (2014a): 1089-1097
Zhao, J. G. et al., FEBS Lett. 588 (2014b): 4536-4542
Zhen, T. et al., Oncotarget. 5 (2014): 3756-3769
Zheng, M. et al., Breast Cancer Res Treat. 148 (2014): 423-436
Zheng, M. Z. et al., J Transl.Med. 5 (2007): 36
Zhong, M. et al., Mol.Cancer Res 8 (2010): 1164-1172
Zhong, T. et al., Biomed.Pharmacother. 69 (2015): 317-325
Zhou, X. et al., J Cancer Res Clin Oncol 141 (2015): 961-969
Zhou, Y. et al., Front Biosci.(Landmark.Ed) 16 (2011): 1109-1131
Zhou, Z. et al., Gastroenterology 147 (2014): 1043-1054
Zhu, H. H. et al., Asian Pac.J Trop.Med. 7 (2014): 488-491
Zhu, J. et al., Int.J Clin Exp.Pathol. 8 (2015a): 9479-9486
Zhu, P. et al., Oncol Lett. 10 (2015b): 1487-1494
Zighelboim, I. et al., J Clin Oncol 27 (2009): 3091-3096
Zimmerman, K. M. et al., Mol.Cancer Res 11 (2013): 370-380
Zocchi, M. R. et al., Blood 119 (2012): 1479-1489
Zou, J. X. et al., Mol.Cancer Res 12 (2014): 539-549
Zou, T. T. et al., Oncogene 21 (2002): 4855-4862
【図１Ａ】
2018183174.tif 000082
【図１Ｂ】
2018183174.tif 000083
【図１Ｃ】
2018183174.tif 000084
【図１Ｄ】
2018183174.tif 000085
【図１Ｅ】
2018183174.tif 000086
【図１Ｆ】
2018183174.tif 000087
【図１Ｇ】
2018183174.tif 000088
【図１Ｈ】
2018183174.tif 000089
【図１Ｉ】
2018183174.tif 000090
【図１Ｊ】
2018183174.tif 000091
【図１Ｋ】
2018183174.tif 000092
【図１Ｌ】
2018183174.tif 000093
【図１Ｍ】
2018183174.tif 000094
【図１Ｎ】
2018183174.tif 000095
【図１Ｏ】
2018183174.tif 000096
【図１Ｐ】
2018183174.tif 000097
【図１Ｑ】
2018183174.tif 000098
【図１Ｒ】
2018183174.tif 000099
【図１Ｓ】
2018183174.tif 000100
【図１Ｔ】
2018183174.tif 000101
【図１Ｕ】
2018183174.tif 000102
【図１Ｖ】
2018183174.tif 000103
【図１Ｗ】
2018183174.tif 000104
【図１Ｘ】
2018183174.tif 000105
【図１Ｙ】
2018183174.tif 000106
【図１Ｚ】
2018183174.tif 000107
【図２Ａ】
2018183174.tif 000108
【図２Ｂ】
2018183174.tif 000109
【図２Ｃ】
2018183174.tif 000110
【図２Ｄ】
2018183174.tif 000111
【図３】
2018183174.tif 000112
【図４−１】
2018183174.tif 000113
【図４−２】
2018183174.tif 000114
【図５−１】
2018183174.tif 000115
【図５−２】
2018183174.tif 000116
【配列表】
2018183174000001.app