(57)【要約】      （修正有）【課題】ＡｐｏＣＩＩＩのｍＲＮＡとタンパク質の発現を低下させる；心血管系の疾患、障害、病気もしくはその症状、または心血管系の疾患、障害、病気もしくはその症状の発症を予防する、遅らせる、または改善する、化合物及び組成物の提供。【解決手段】ａ）膵炎の治療、予防、遅延化、又は改善のための、ｂ）ＨＤＬレベルの上昇及び／又はＴＧのＨＤＬに対する比率の改善をし、それによって、動物において心血管系の疾患、障害、病気若しくはその症状、又は心血管系の疾患、障害、病気若しくはその症状の発症、を予防する、遅らせる、又は改善或いはリスクを軽減させるための、ｃ）脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランス、及び／又は食後トリグリセリドクリアランスを上昇させるための、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を含む医薬組成物。ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする前記化合物が修飾型オリゴヌクレオチドである、医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＤＬレベルを上昇させる、または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善する方法であっ
て、
（ａ）それを必要とする動物を選択すること、および
（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与すること、によるものであり、それにより、ＨＤＬレベルが上昇する、またはＨＤＬに対するＴＧの比率が高まる、前記方法。
【請求項２】
動物において心血管系の疾患、障害、病気もしくはその症状、または心血管系の疾患、障害、病気もしくはその症状の発症を予防する、遅らせる、または改善する方法であって、
（ａ）それを必要とする動物を選択すること、および
（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与し、
それにより前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることを含み、そこで前記の心血管系の疾患、障害、病気もしくは症状、または心血管系の疾患、障害、病気もしくはその症状の発症が予防される、遅れる、または改善される、前記方法。
【請求項３】
動物において心血管系の疾患、障害、病気または症状のリスクを軽減する方法であって、
（ａ）それを必要とする動物を選択すること、および
（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与し、
それにより前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させることを含み、そこで心血管系の疾患、障害、病気、またはその症状のリスクが軽減される、前記方法。
【請求項４】
動物にＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を投与することによりＣＥＴＰレベルが低下する、ＣＥＴＰレベルを低下させる方法。
【請求項５】
ＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランス、食後トリグリセリドクリアランスおよび／またはＨＤＬを上昇させる方法であって、
（ａ）それを必要とする動物を選択すること、および
（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与すること、
を含み、そこでＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランス、食後トリグリセリドクリアランスおよび／またはＨＤＬが上昇する、前記方法。
【請求項６】
膵炎を予防する、遅らせる、または改善する方法であって、
（ａ）膵炎の動物、または膵炎のリスクがある動物を選択すること、および
（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与すること、
を含み、そこで前記膵炎が予防、遅延化、または改善される、前記方法。
【請求項７】
膵炎を予防する、遅らせる、または改善する方法であって、
（ａ）膵炎の動物、または膵炎のリスクがある動物を選択すること、および
（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与し、
それによりカイロミクロンクリアランスを上昇させることを含み、そこで前記膵炎が予防、遅延化、または改善される、前記方法。
【請求項８】
ＨＤＬレベルの上昇またはＴＧのＨＤＬに対する比率の改善に使用されるＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物であって、
（ａ）それを必要とする動物を選択すること、および
（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を動物に投与すること
によるものであり、それによってＨＤＬレベルが上昇する、またはＨＤＬに対するＴＧの比率が高まる、前記化合物。
【請求項９】
動物において心血管系の疾患、障害、病気もしくはその症状、または心血管系の疾患、障害、病気もしくはその症状の発症を予防する、遅らせる、または改善するためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物であって、
（ａ）それを必要とする動物を選択すること、および
（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与し、
それにより前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることを含み、そこで前記の心血管系の疾患、障害、病気もしくは症状、または心血管系の疾患、障害、病気もしくはその症状の発症が予防される、遅れる、または改善される、前記化合物。
【請求項１０】
動物において心血管系の疾患、障害、病気または症状のリスクの軽減に使用されるＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物であって、その使用は、
（ａ）それを必要とする動物を選択すること、および
（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与し、
それにより前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させることを含み、そこで心血管系の疾患、障害、病気またはその症状のリスクが軽減される、前記化合物。
【請求項１１】
動物にＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を投与することによりＣＥＴＰレベルが低下する、ＣＥＴＰレベルの低下に使用されるＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物。
【請求項１２】
ＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランス、食後トリグリセリドクリアランスおよび／またはＨＤＬの上昇に使用されるＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物であって、その使用は、
（ａ）それを必要とする動物を選択すること、および
（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与すること
を含み、そこでＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランス、食後トリグリセリドクリアランスおよび／またはＨＤＬが上昇する、前記化合物。
【請求項１３】
膵炎の予防、遅延化、または改善に使用されるＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物であって、その使用は、
（ａ）膵炎の動物、または膵炎のリスクがある動物を選択すること、および
（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与すること
を含み、そこで前記膵炎が予防、遅延化、または改善される、前記化合物。
【請求項１４】
膵炎の予防、遅延化、または改善に使用されるＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物であって、その使用は、
（ａ）膵炎の動物、または膵炎のリスクがある動物を選択すること、および
（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与し、
それによりカイロミクロンクリアランスを上昇させることを含み、そこで前記膵炎が予防、遅延化、または改善される、前記化合物。
【請求項１５】
前記動物が高トリグリセリド血症を有する、または高トリグリセリド血症のリスクにある、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項１６】
前記動物が１００〜２００ｍｇ／ｄＬ、１００〜３００ｍｇ／ｄＬ、１００〜４００ｍｇ／ｄＬ、１００〜５００ｍｇ／ｄＬ、２００〜５００ｍｇ／ｄＬ、３００〜５００ｍｇ
／ｄＬ、４００〜５００ｍｇ／ｄＬ、５００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、６００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、７００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、８００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、９００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、５００〜１５００ｍｇ／ｄＬ、１０００〜１５００ｍｇ／ｄＬ、１００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１５０〜２０００ｍｇ／ｄＬ、２００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、３００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、４００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、５００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、６００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、７００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、８００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、９００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１０００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１１００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１２００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１３００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１４００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、または１５００〜２０００ｍｇ／ｄＬの間のトリグリセリドレベルを有する、請求項１５に記載の方法または使用法。
【請求項１７】
前記高トリグリセリド血症がフレデリクソンＩＩ型、ＩＶ型またはＶ型である、請求項１５に記載の方法または使用法。
【請求項１８】
前記動物が高トリグリセリド血症を引き起こす遺伝的欠陥を有する、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項１９】
前記遺伝的欠陥がヘテロ接合性ＬＰＬ欠損またはＡｐｏＣＩＩＩ多型である、請求項１８に記載の方法または使用法。
【請求項２０】
前記動物が５００ｍｇ／ｄＬ以上のトリグリセリドレベルとヘテロ接合性ＬＰＬ欠損を有する、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項２１】
前記のカイロミクロンクリアランスの上昇が食後トリグリセリドのクリアランスを増強する、および／または食後トリグリセリドを減少させる、請求項５、７、１２または１４に記載の方法または使用法。
【請求項２２】
ＡｐｏＣＩＩＩが配列番号１または配列番号２に示されるような核酸配列を有する、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項２３】
ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする前記化合物が修飾型オリゴヌクレオチドである、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項２４】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが、配列番号３の核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項２３に記載の方法または使用法。
【請求項２５】
前記修飾型オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１または配列番号２の核酸塩基配列に対して８０％相補的である、請求項２３に記載の方法または使用法。
【請求項２６】
前記修飾型オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１または配列番号２の核酸塩基配列に対して９０％相補的である、請求項２３に記載の方法または使用法。
【請求項２７】
前記修飾型オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１または配列番号２の核酸塩基配列に対して１００％相補的である、請求項２３に記載の方法または使用法。
【請求項２８】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが一本鎖修飾型オリゴヌクレオチドからなる、請求項２３〜２７のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項２９】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる、請求項２３〜２８のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項３０】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが２０個の連結したヌクレオシドからなる、請求項２９に記載の方法または使用法。
【請求項３１】
前記修飾型オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシド間結合が修飾型ヌクレオシド間結合である、請求項２３〜３０のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項３２】
前記修飾型オリゴヌクレオチドの各修飾型ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項３１に記載の方法または使用法。
【請求項３３】
前記修飾型オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドが修飾型糖を含む、請求項２３〜３２のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項３４】
少なくとも１つの修飾型糖が二環式糖である、請求項３３に記載の方法または使用法。
【請求項３５】
少なくとも１つの修飾型糖が２’−Ｏ−メチオキシエチルを含む、請求項３３に記載の方法または使用法。
【請求項３６】
前記修飾型オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドが修飾型核酸塩基を含む、請求項２３〜３３のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項３７】
前記修飾型核酸塩基が５‐メチルシトシンである、請求項３６に記載の方法または使用法。
【請求項３８】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが、
（ａ）連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
（ｂ）連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；
（ｃ）連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、そして、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが修飾型糖を含む、請求項２３に記載の方法または使用法。
【請求項３９】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが、
（ａ）８〜１２個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
（ｂ）１〜５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；
（ｃ）１〜５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが２’‐Ｏ‐メチオキシエチル糖を含み、各シトシンが５’‐メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合が．ホスホロチオエート結合である、請求項２３に記載の方法または使用法。
【請求項４０】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが、
（ａ）１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント;
（ｂ）５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；
（ｃ）５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、そして、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが２’‐Ｏ‐メチオキシエチル糖を含み、各シトシンが５’‐メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合が．ホスホロチオエート結合である、請求
項２３に記載の方法または使用法。
【請求項４１】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが、配列番号３の核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項３８〜４０のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項４２】
動物において心血管系疾患のリスクを軽減する方法であって、配列番号１または配列番号２に示されるようなＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物の治療上有効量を前記動物に投与することを含み、そして、そこで前記動物に投与された前記化合物がＨＤＬレベルを上昇させることにより心血管系疾患のリスクを軽減する、前記方法。
【請求項４３】
動物において心血管系疾患または膵炎のリスクを軽減する方法であって、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号３の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物の治療上有効量を前記動物に投与することを含み、そして、そこで前記動物に投与された前記化合物がＨＤＬレベルを上昇させることにより、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善すること
により心血管系疾患または膵炎のリスクを軽減する、前記方法。
【請求項４４】
動物において心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法であって、配列番号１または配列番号２に示されるようなＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物の治療上有効量を投与することを含み、そして、そこで前記動物に投与された前記化合物がＨＤＬレベルを上昇させることにより前記動物において前記心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する、前記方法。
【請求項４５】
動物において心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法であって、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号３の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物の治療上有効量を前記動物に投与することを含み、そして、そこで前記動物に投与された前記化合物が前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより前記動物で前記心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する、前記方法。
【請求項４６】
動物における心血管系疾患のリスクの軽減に使用される、配列番号１または配列番号２に示されるようなＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、ＨＤＬレベルを上昇させることにより心血管系疾患のリスクを軽減する前記化合物。
【請求項４７】
動物における心血管系疾患または膵炎のリスクの軽減に使用される、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号３の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、ＨＤＬレベルを上昇させることにより、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善することにより
．心血管系疾患または膵炎のリスクを軽減する前記化合物。
【請求項４８】
動物における心血管系疾患の少なくとも１つの症状の予防、治療、改善、または軽減に使用される、配列番号１または配列番号２に示されるようなＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、ＨＤＬレベルを上昇させることにより前記動物において前記心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する前記化合物。
【請求項４９】
動物における心血管系疾患の少なくとも１つの症状の予防、治療、改善、または軽減に使用される、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号３の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより前記動物において前記心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する前記化合物。
【請求項５０】
前記症状が、限定されないが、狭心症；胸部痛；息切れ；心悸亢進；虚弱；めまい；吐き気；発汗；頻脈；徐脈；不整脈；心房細動；下肢のむくみ；チアノーゼ；疲労；失神；顔面麻痺；四肢の麻痺；筋肉の跛行もしくは痙攣；腹部膨満；または発熱のいずれか１つであり得る、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項５１】
前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させる、および／または ＴＧのＨＤＬに対する
比率を改善する方法であって、前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させるために、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善するために、配列番号３からなる化合物を
前記動物に投与することによるものである、前記方法。
【請求項５２】
動物において心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法であって、前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより、および／または Ｔ
ＧのＨＤＬに対する比率を改善することにより前記動物において前記心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減するために、配列番号３からなる化合物を前記動物に投与することによるものである、前記方法。
【請求項５３】
配列番号３の配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドを動物に投与することにより前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させる、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を
改善する方法であって、前記修飾型オリゴヌクレオチドが、：
（ａ）１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント;
（ｂ）５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；
（ｃ）５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが２’‐Ｏ‐メチオキシエチル糖を含み、各シトシンが５’‐メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合であり、前記修飾型オリゴヌクレオチドが前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させる、および／または ＴＧの
ＨＤＬに対する比率を改善する、前記方法。
【請求項５４】
配列番号３の配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドを動物に投与することにより前記動物において心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法であって、前記修飾型オリゴヌクレオチドが、
（ａ）１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント;
（ｂ）５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；
（ｃ）５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが２’‐Ｏ‐メチオキシエチル糖を含み、各シトシンが５’‐メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合であり、前記修飾型オリゴヌクレオチドが前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより、および／または Ｔ
ＧのＨＤＬに対する比率を改善することにより前記心血管系疾患の前記動物において少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する、前記方法。
【請求項５５】
前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させる、および／または ＴＧのＨＤＬに対する
比率を改善する方法であって、前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させるために、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善するために、配列番号１または配列番号２
に示されるようなＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物を前記動物に投与することによるものである、前記方法。
【請求項５６】
前記動物において前記心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法であって、前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善することにより前記動物において心血管系疾患の
少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減するために、配列番号１または配列番号２に示されるようなＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物を前記動物に投与することによるものである、前記方法。
【請求項５７】
配列番号３の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する化合物を動物に投与することによりＣＥＴＰレベルが低下する、ＣＥＴＰレベルを低下させる方法。
【請求項５８】
配列番号３の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する化合物を動物に投与することによりＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランスまたはＨＤＬが上昇する、ＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランスまたはＨＤＬを上昇させる方法。
【請求項５９】
配列番号３からなる核酸塩基配列を有する化合物を動物に投与することによりＣＥＴＰレベルが低下する、ＣＥＴＰレベルを低下させる方法。
【請求項６０】
配列番号３の少なくとも８個の連続する核酸塩基からなる化合物を動物に投与することにより、ＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランスまたはＨＤＬが上昇する、ＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランスまたはＨＤＬを上昇させる方法。
【請求項６１】
動物におけるＨＤＬレベルの上昇および／またはＴＧのＨＤＬに対する比率の改善に使用される配列番号３からなる化合物。
【請求項６２】
動物においてＨＤＬレベルを上昇させることによる、および／または ＴＧのＨＤＬに
対する比率を改善することによる、前記動物における心血管系疾患の少なくとも１つの症状の予防、治療、改善、または軽減に使用される配列番号３からなる化合物。
【請求項６３】
動物におけるＨＤＬレベルの上昇および／またはＴＧのＨＤＬに対する比率の改善に使用される、配列番号３の配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドであって、
（ａ）１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント;
（ｂ）５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；
（ｃ）５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが２’‐Ｏ‐メチオキシエチル糖を含み、各シトシンが５’‐メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である、前記修飾型オリゴヌクレオチド。
【請求項６４】
動物のＨＤＬレベルを上昇させることによる、および／または ＴＧのＨＤＬに対する
比率を改善することによる、前記動物における心血管系疾患の少なくとも１つの症状の予防、治療、改善、または軽減に使用される、配列番号３の配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドであって、
（ａ）１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント;
（ｂ）５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；
（ｃ）５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが２’‐Ｏ‐メチオキシエチル糖を含み、各シトシンが５’‐メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である、前記修飾型オリゴヌクレオチド。
【請求項６５】
動物におけるＨＤＬレベルの上昇および／またはＴＧのＨＤＬに対する比率の改善に使用される、配列番号１または配列番号２に示されるようなＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項６６】
動物のＨＤＬレベルの上昇および／またはＴＧのＨＤＬに対する比率の改善による、動物における心血管系疾患の少なくとも１つの症状の予防、治療、改善、または軽減に使用される、配列番号１または配列番号２に示されるようなＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物。
【請求項６７】
動物におけるＣＥＴＰレベルの低下に使用される、配列番号３の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する化合物。
【請求項６８】
動物におけるＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランスまたはＨＤＬの上昇に使用される、配列番号３の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する化合物。
【請求項６９】
動物におけるＣＥＴＰレベルの低下に使用される、配列番号３からなる核酸塩基配列を有する化合物。
【請求項７０】
動物におけるＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランスまたはＨＤＬの上昇に使用される、配列番号３の少なくとも８個の連続する核酸塩基からなる化合物。
【請求項７１】
前記動物がヒトである、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項７２】
前記心血管系疾患が動脈瘤、狭心症、不整脈、アテローム性動脈硬化、脳血管系疾患、冠動脈性心疾患、高血圧、脂質異常症、高脂血症、高トリグリセリド血症または高コレステロール血症である、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項７３】
前記脂質異常症がカイロミクロン血症である、請求項７２に記載の方法または使用法。
【請求項７４】
前記動物に膵炎のリスクがある、請求項７３に記載の方法または使用法。
【請求項７５】
ＡｐｏＣＩＩＩレベルの低下が膵炎を予防、治療、または改善する、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項７６】
ＡｐｏＣＩＩＩレベルの低下が食後トリグリセリドのクリアランスを増強する、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項７７】
ＡｐｏＣＩＩＩレベルの低下が食後トリグリセリドを減少させる、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項７８】
前記化合物が非経口的に投与される、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項７９】
前記非経口投与が皮下投与である、請求項７８に記載の方法または使用法。
【請求項８０】
第２薬剤をさらに含む、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項８１】
前記第２薬剤がＡｐｏＣＩＩＩ低下薬剤、コレステロール低下薬剤、非ＨＤＬ脂質低下薬剤、ＬＤＬ低下薬剤、ＴＧ低下薬剤、コレステロール低下薬剤、ＨＤＬ上昇薬剤、魚油、ナイアシン、フィブラート、スタチン、ＤＣＣＲ（ジアゾキシドの塩）、グルコース低下薬剤または抗糖尿病剤から選択される、請求項８０に記載の方法または使用法。
【請求項８２】
前記動物が前記第２薬剤の最大忍容用量に応答することができない、請求項８１に記載の方法または使用法。
【請求項８３】
前記第２薬剤が前記化合物と同時または逐次的に投与される、請求項８０に記載の方法または使用法。
【請求項８４】
前記化合物が塩の形態である、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【請求項８５】
薬学的に許容可能な担体または希釈剤をさらに含む、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法または使用法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本願は電子形式の配列表と共に出願される。その配列表は、２０１２年４月２７日に作製されたＢＩＯＬ０１３０ＷＯＳＥＱ．ＴＸＴという表題の、サイズが８ｋｂであるファイルとして提供される。配列表の電子形式の情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
動物においてアポリポタンパク質ＣＩＩＩ（ＡｐｏＣＩＩＩ）のｍＲＮＡとタンパク質の発現を低下させるための方法、化合物および組成物、ならびにＨＤＬまたはＨＤＬ活性を上昇させるための方法、化合物および組成物が本明細書において提供される。また、動物においてＡｐｏＣＩＩＩに関係する疾患または健康状態を軽減するためのＡｐｏＣＩＩＩ阻害剤についての方法、化合物および組成物も本明細書において提供される。
【背景技術】
【０００３】
リポタンパク質は、タンパク質、リン脂質およびコレステロールからなる両親媒性被覆ならびにアシルグリセロールおよびコレステリルエステルからなる非極性コアから構成される球状のミセル様の粒子であり、前記非極性コアは前記両親媒性被覆によって覆われている。リポタンパク質はそれらの機能上の特性および物性に基づいて大きく５つの種類：カイロミクロン、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、中間密度リポタンパク質（ＩＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、および高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）に分類されている。カイロミクロンは小腸から組織まで食餌性脂質を輸送する。ＶＬＤＬ、ＩＤＬおよびＬＤＬは全て肝臓から組織までトリアシルグリセロールとコレステロールを輸送する。ＨＤＬは組織から肝臓まで内因性コレステロールを輸送する。
【０００４】
リポタンパク質粒子は絶え間なく代謝処理を受け、様々な特性および組成を有する。リポタンパク質の外被の密度は内部コアの密度よりも低いので、リポタンパク質の密度は、粒子の直径を増大することなく増加する。リポタンパク質のタンパク質成分はアポリポタンパク質として知られる。様々なヒトリポタンパク質の中で少なくとも９種のアポリポタンパク質が大量に分布している。
【０００５】
アポリポタンパク質Ｃ‐ＩＩＩ（ＡｐｏＣＩＩＩ）はＨＤＬと高トリグリセリド（ＴＧ）リポタンパク質の構成成分である。ＡｐｏＣＩＩＩの上昇は高トリグリセリド血症と関連する。したがって、ＡｐｏＣＩＩＩは冠動脈疾患のリスクファクターである高トリグリセリド血症に関与する(Davidsson et al., J. Lipid Res. 2005. 46: 1999-2006)。ＡｐｏＣＩＩＩは、リポタンパク質リパーゼの阻害とリポタンパク質の細胞表面グリコサミノグリカンマトリックスへの結合の干渉の両方を介して脂質分解を阻害することにより、高トリグリセリドリポタンパク質のクリアランスの速度を低下させる(Shachter, Curr. Opin. Lipidol., 2001, 12, 297-304)。
【０００６】
３つの研究グループが１９８４年にヒトアポリポタンパク質Ｃ‐ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３、ＡＰＯＣ‐ＩＩＩ、ＡｐｏＣＩＩＩ、およびＡＰＯＣ‐ＩＩＩとも呼ばれる）をコードする遺伝子をクローニングした (Levy-Wilson et al., DNA, 1984, 3, 359-364; Protter et al., DNA, 1984, 3, 449-456; Sharpe et al., Nucleic Acid s Res., 1984, 12, 3917-3932)。そのコード 配列は３つのイントロンによって分断されている(Protter et al., DNA, 1984, 3, 449-456)。ヒトＡｐｏＣＩＩＩ遺伝子はアポリポタンパク質Ａ‐１遺伝子の３’方向に対して約２．６ｋｂ離れて位置し、これらの２つの遺伝子は一点に収束するように転写される (Karathanasis, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 1985, 82, 6374-6378) 。通常の状態で高レベルの血清アポリポタンパク質Ｃ‐ＩＩＩを有する患者から、Ｔｈｒ７４からＡｌａ７４への変異を有するヒトアポリポタンパク質Ｃ‐ＩＩＩの異型体もクローニングされた。Ｔｈｒ７４はＯ‐グリコシル化されるので、Ａｌａ７４変異体では、したがって、炭水化物部分を欠くＡｐｏＣＩＩＩの血清中レベルが上昇することになる (Maeda et al., J. Lipid Res., 1987, 28, 1405-1409) 。ＡｐｏＣＩＩＩ発現を調節する他の異型または多型がその後特定された。その多形のいくつかはＡｐｏＣＩＩＩを増加させた。上昇したＡｐｏＣＩＩＩレベルには上昇したトリグリセリド（ＴＧ）レベル、ならびに心血管系疾患、メタボリックシンドローム、肥満および糖尿病などの疾患が伴った (Chan et al., Int J Clin Pract, 2008, 62:799-809; Onat et at., Atherosclerosis, 2003, 168:81-89; Mendivil et al., Circulation, 2011, 124:2065-2072)。
【０００７】
前記遺伝子のプロモーター領域に５つの多型が特定されている：（前記遺伝子の位置−６４１の）ＣからＡへの塩基転移、（前記遺伝子の位置−６３０の）ＧからＡへの塩基転移、（前記遺伝子の位置−６２５の）Ｔの欠失、（前記遺伝子の位置−４８２の）ＣからＴへの塩基転移および（前記遺伝子の位置−４５５の）ＴからＣへの塩基転移。これらの多型の全てが３’非翻訳領域内のＳｓｔＩ多型と連鎖不平衡の関係にある。そのＳｓｔＩ多型部位がＳ１対立遺伝子およびＳ２対立遺伝子の区別となる。そして、Ｓ２対立遺伝子が血漿トリグリセリドレベルの上昇と関連付けられている (Dammerman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 1993, 90, 4562-4566) 。ＡｐｏＣＩＩＩプロモーターはインスリンによる下方制御を受けるが、この多型部位によってそのインスリン制御が消失する。したがって、インスリン制御の消失の結果として生じるＡｐｏＣＩＩＩの過剰発現の可能性が、Ｓ２対立遺伝子に関連付けられている高トリグリセリド血症の発生の原因因子であり得る (Li et al., J. Clin. Invest., 1995, 96, 2601-2605) 。ＴからＣへの多型（前記遺伝子の位置−４５５）は冠動脈疾患のリスクの上昇と関連付けられている (Olivieri et al., J. Lipid Res., 2002, 43, 1450-1457) 。ＡｐｏＣＩＩＩおよび／またはトリグリセリドの発現上昇と関連付けられているヒトＡｐｏＣＩＩＩ遺伝子の他の多型には（位置１１００の）ＣからＴへの塩基転移、（位置３１７５の）ＣからＧへの塩基転移、（位置３２０６の）ＴからＧへの塩基転移、（位置３２３８の）ＣからＧへの塩基転移、などが含まれる (Tilly et al., J. Lipid Res., 2003, 44:430-436; Waterworth et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2000, 20:2663-2669; Petersen et al., N Engl J Med, 2010, 362:1082-1089) 。
【０００８】
ＡｐｏＣＩＩＩ遺伝子発現の他の調節因子がインスリンに加えて特定されている。核内オーファン受容体ｒｅｖ−ｅｒｂαの応答エレメントが前記遺伝子の位置−２３〜−１８、すなわち、ＡｐｏＣＩＩＩプロモーター領域内に位置している。Ｒｅｖ−ｅｒｂαはＡｐｏＣＩＩＩプロモーター活性を低下させる (Raspe et al., J. Lipid Res., 2002, 43, 2172-2179) 。２つの核内因子ＣＩＩＩｂ１およびＣＩＩＩＢ２によって前記遺伝子の位置−８６から−７４までのＡｐｏＣＩＩＩプロモーター領域が認識される (Ogami et al., J. Biol. Chem., 1991, 266, 9640-9646) 。ＡｐｏＣＩＩＩ発現はまたレチノイドＸ受容体を介して作用するレチノイドによって上方制御されており、そして、レチノイドＸ受容体の存在量の変化がＡｐｏＣＩＩＩ転写に影響を及ぼす (Vu-Dac et al., J. Clin. Invest., 1998, 102, 625-632) 。特異性タンパク質１（Ｓｐ１）および肝細胞核内因子‐４（ＨＮＦ‐４）が相乗的に作用し、ＨＮＦ‐４結合部位を介してアポリポタンパク質Ｃ‐ＩＩＩプロモーターをトランス活性化することが示されている (Kardassis et al., Biochemistry, 2002, 41, 1217-1228) 。ＨＮＦ‐４はまたＳＭＡＤ３‐ＳＭＡＤ４と併せて作用してＡｐｏＣＩＩＩプロモーターをトランス活性化する (Kardassis et al., J. Biol. Chem., 2000, 275, 41405-41414)。
【０００９】
遺伝子導入マウスおよびノックアウトマウスにより脂質分解におけるＡｐｏＣＩＩＩの
役割がさらに明らかにされている。遺伝子導入マウスでのＡｐｏＣＩＩＩの過剰発現により高トリグリセリド血症およびＶＬＤＬ‐トリグリセリドのクリアランスの減損が引き起こされる (de Silva et al., J. Biol. Chem., 1994, 269, 2324-2335; Ito et al., Science, 1990, 249, 790-793) 。ＡｐｏＣＩＩＩタンパク質が全く存在しないノックアウトマウスは野生型マウスと比較して著しく低下した血漿中のコレステロールレベルおよびトリグリセリドレベルを示し、食後高トリグリセリド血から防護された (Maeda et al., J. Biol. Chem., 1994, 269, 23610-23616) 。
【００１０】
全血漿ＡｐｏＣＩＩＩレベルは血清中トリグリセリドの主要な決定因子として特定されており、ＡｐｏＣＩＩＩとＡｐｏＣＩＩＩを構成成分として有するＡｐｏＢリポタンパク質が独立して冠動脈性心疾患を予知することが疫学的な研究により示されている (Sacks et al., Circulation. 2000. 102: 1886-1892; Lee et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2003. 23: 853- 858) 。ＡｐｏＣＩＩＩは高トリグリセリドリポタンパク質のクリアランスにおける重要な決定因子であり、内臓肥満、インスリン抵抗性およびメタボリックシンドロームを含む高グリセリド血状態におけるそのレムナントであることも研究により示されている (Mauger et al., J. Lipid Res. 2006. 47: 1212-1218; Chan et al., Clin. Chem. 2002. 278-283; Ooi et al., Clin. Sci. 2008. 114: 611-624) 。
【００１１】
高トリグリセリド血症は心血管代謝疾患 (Hegele et al. 2009, Hum Mol Genet, 18: 4189-4194; Hegele and Pollex 2009, Mol Cell Biochem, 326: 35-43) ならびに最も重症の状態では急性膵炎の発生 (Toskes 1990, Gastroenterol Clin North Am, 19: 783-791; Gaudet et al. 2010, Atherosclerosis Supplements, 11: 55-60; Catapano et al. 2011, Atherosclerosis, 217S: S1-S44; Tremblay et al. 2011, J Clin Lipidol, 5: 37-44) のリスクの上昇と関連付けられている一般的な臨床的形質である。心血管代謝疾患の例には糖尿病、メタボリックシンドローム／インスリン抵抗性、ならびに家族性カイロミクロン血症、家族性複合型高脂血症および家族性高トリグリセリド血症などの遺伝的障害が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１２】
高トリグリセリド血症は、高トリグリセリド（ＴＧ）リポタンパク質であるＶＬＤＬと、程度が低いが、カイロミクロン（ＣＭ）の生産の上昇および／またはその代謝の低下もしくは遅延の結果である。ボーダーラインの高ＴＧ（１５０〜１９９ｍｇ／ｄＬ）は一般集団に通常見いだされ、そして、それはメタボリックシンドローム／インスリン抵抗性状態の一般的な要素である。血漿ＴＧレベルが上昇するつれ、背景にある遺伝的要因が益々重要な疫学的役割を果たすことを除いて、同じことが高ＴＧ（２００〜４９９ｍｇ／ｄＬ）についても当てはまる。非常に高いＴＧ（５００ｍｇ／ｄＬ以上）は、ほとんどの場合ＣＭレベルの上昇とも関連付けられており、それには急性膵炎のリスク上昇が伴う。ＴＧが８８０ｍｇ／ｄＬ（１０ｍｍｏｌ超）を超える場合、膵炎のリスクは臨床的に重大であると考えられており、欧州アテローム性硬化症学会／欧州心臓病学会（ＥＡＳ／ＥＳＣ）２０１１年大会に出されたガイドラインは急性膵炎を予防する行動が必須であると述べている (Catapano et al. 2011, Atherosclerosis, 217S: S1-S44) 。ＥＡＳ／ＥＳＣ２０１１のガイドラインによると、高トリグリセリド血症は膵炎の全ての症例の約１０％の原因であり、膵炎の発生は４４０〜８８０ｍｇ／ｄＬの間のＴＧレベルで起こり得る。ＴＧレベルの上昇はアテローム硬化性ＣＶＤの独立したリスクファクターであることを示す臨床試験の証拠に基づき、米国国立コレステロール教育プログラムの成人治療パネルＩＩＩのガイドライン(NCEP 2002, Circulation, 106: 3143-421)もアメリカ糖尿病協会のガイドライン(ADA 2008, Diabetes Care, 31: S12-S54.) も心血管系のリスクを低下させるために１５０ｍｇ／ｄＬ未満の目標ＴＧレベルを推奨している。
【００１３】
ＡｐｏＣＩＩＩノックアウトマウスでは腸での脂質吸収と肝臓でのＶＬＤＬトリアシルグリセロール分泌は正常であったが、血漿からのＶＬＤＬトリアシルグリセロールとＶＬＤＬコレステリルエステルのクリアランスが急速であり、そのことが観察された低脂血を説明し得る (Gerritsen et al., J. Lipid Res. 2005. 46: 1466-1473; Jong et al., J. Lipid Res. 2001. 42: 1578-1585) 。高トリグリセリド血症での冠動脈性心疾患の高いリスクの特定にＡｐｏＣＩＩＩを有するＶＬＤＬ粒子が主要な役割を果たすことが引証されている (Campos et al., J. Lipid Res. 2001. 42: 1239-1249) 。ゲノムワイド関連研究は、ランカスターのアーミッシュの人々にみられる自然発生のＡｐｏＣＩＩＩヌル変異は、明白な有害な作用がなく、良好な脂質プロファイルと明らかな心臓保護を示したことを見出した(Pollin et al., Science. 2008. 322: 1702-1705) 。その変異の保持者はより低いレベルの空腹時および食後の血清中トリグリセリドとＬＤＬ‐コレステロール、ならびにより高いレベルのＨＤＬ‐コレステロールを有することが観察される。
【００１４】
ＨＤＬクラスのリポタンパク質は、密度が最も高く、サイズが最も小さい粒子の不均一で多分散系の集団を含む (Havel and Kane. In, The Metabolic & Molecular Bases of Inherited Disease. 8th Edition. McGraw-Hill, New York, 2001:2705-16) 。ＨＤＬは脂質（コレステロール、トリグリセリドおよびリン脂質）とタンパク質（アポリポタンパク質（ａｐｏ）および酵素）からなる巨大分子複合体である。ＨＤＬの表面は主にアポリポタンパク質Ａ、ＣおよびＥを含有する。これらのアポタンパク質のうちのいくつかの機能は末梢組織から肝臓までＨＤＬを方向付けることである。血清ＨＤＬレベルは背景となる遺伝的原因により影響され得る (Weissglas-Volkov and Pajukanta, J Lipid Res, 2010, 51:2032-2057)。
【００１５】
ＨＤＬレベルの上昇が心血管系疾患または冠動脈性心疾患からの防護となることが疫学的研究により示されている (Gordon et al., Am. J. Med. 1977. 62: 707-714) 。ＨＤＬコレステロールのこれらの効果はトリグリセリドとＬＤＬコレステロールの濃度から独立している。臨床診療では、低血漿ＨＤＬコレステロールはより一般的に、血漿トリグリセリドを増加させる他の障害、例えば、中心性肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病および腎臓病（慢性腎不全またはネフローゼ性タンパク尿症）と関連付けられている (Kashyap. Am. J. Cardiol. 1998. 82: 42U-48U) 。
【００１６】
現在、ＡｐｏＣＩＩＩの機能に影響する公知の直接的な治療薬剤は存在しない。フィブラート系の薬品の低脂血性効果は、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ）がアポリポタンパク質Ｃ‐ＩＩＩプロモーターからのＨＮＦ‐４の転置を仲介し、アポリポタンパク質Ｃ‐ＩＩＩの転写が抑制されることになる機序を介して起こると仮定されている(Hertz et al., J. Biol. Chem., 1995, 270, 13470-13475) 。スタチン類の低脂血症用薬品も、未知の機序を介してトリグリセリドレベルを低下させ、その未知の機序はリポタンパク質リパーゼｍＲＮＡの増加とアポリポタンパク質Ｃ‐ＩＩＩの血漿中レベルの低下をもたらす (Schoonjans et al., FEBS Lett., 1999, 452, 160-164) 。したがって、アポリポタンパク質Ｃ‐ＩＩＩ機能を効果的に阻害することができるその他の薬剤について長らく感じられている必要性が残されている。
【００１７】
アンチセンス技術は特定の遺伝子産物の発現を減少させる有効な手段として現れつつあり、したがって、それは、ＡｐｏＣＩＩＩの調節について多数の治療上、診断上および研究上の応用で独特の有用性を証明し得る。 
【００１８】
我々は、以前、米国特許出願公開第２００４０２０８８５６号（米国特許第７，５９８，２２７号）、米国特許出願公開第ＵＳ２００６０２６４３９５号（米国特許第７，７５０，１４１号）および国際公開第２００４／０９３７８３号中でアンチセンス化合物によりＡｐｏＣＩＩＩを阻害するための組成物および方法を開示している。本願では、我々は、ＡｐｏＣＩＩＩのアンチセンス阻害がＨＤＬレベルの上昇と食後トリグリセリドレベルの低下をもたらしたという予期しなかった結果を開示する。この結果は、例えば、心血管系疾患（例えば、冠動脈性心疾患またはアテローム生成的疾患）など、任意の１つ以上の疾患を治療、予防、遅延化、軽減、または改善するのに有用となるであろう。例えば、食後（非空腹時）トリグリセリドレベルの上昇が心血管系疾患の重要なリスクファクターとして特定されている (Bansal et al., JAMA, 2007, 298:309-16; Nordestgaard et al., JAMA, 2007, 298:299-308) 。また、本願では、ＡｐｏＣＩＩＩ発現の阻害が、予期せぬことに、カイロミクロンクリアランスを上昇させることになり、したがって、それは、カイロミクロントリグリセリドの不適切なクリアランスを原因とする脂質異常状態であるカイロミクロン血症の予防にとって重要である (Chait et al., 1992, Adv Intern Med. 1992, 37:249-73) 。重症のカイロミクロン血症は生命にかかわる健康状態である膵炎を引き起こし得る。腸のＡｐｏＣＩＩＩを阻害すれば、リポタンパク質リパーゼの阻害が低下し、カイロミクロントリグリセリドクリアランスが増強され、それによって膵炎が予防されることとなるだろう。
【発明の概要】
【００１９】
ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を動物に投与することによりＨＤＬレベルを上昇させる方法が本明細書において提供される。
【００２０】
ある特定の実施形態は、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を動物に投与することを含む、前記動物において心血管系の疾患、障害または病気を予防する、治療する、改善する、その発症を遅らせる、またはそのリスクを軽減する方法を提供する。前記動物に投与された前記化合物は前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより心血管系の疾患、障害または病気を予防する、治療する、改善する、その発症を遅らせる、またはそのリスクを軽減する。
【００２１】
ある特定の実施形態は、動物において心血管系疾患のリスクを軽減する方法であって、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物の治療上有効量を前記動物に投与することを含む前記方法を提供する。ある特定の実施形態では、前記ＡｐｏＣＩＩＩ核酸は配列番号１または配列番号２に示されるとおりである。ある特定の実施形態では、前記化合物は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、ＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドを含む。さらなる実施形態では、前記動物に投与される前記化合物はＨＤＬレベルを上昇させることにより心血管系疾患のリスクを軽減する。
【００２２】
ある特定の実施形態は、動物において心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法であって、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物の治療上有効量を前記動物に投与することを含む前記方法を提供する。ある特定の実施形態では、前記ＡｐｏＣＩＩＩ核酸は配列番号１または配列番号２に示されるとおりである。ある特定の実施形態では、前記化合物は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、ＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドを含む。さらなる実施形態では、前記動物に投与される前記化合物は前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより前記動物で前記心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善または軽減する。
【００２３】
ある特定の実施形態は、動物のＨＤＬレベルを上昇させるためにＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）からなる化合物を前記動物に投与することにより前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させる方法を提供する。
【００２４】
ある特定の実施形態は、動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより前記動物において
心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減するためにＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）からなる化合物を前記動物に投与することによって前記動物における前記心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法を提供する。
【００２５】
ある特定の実施形態は、配列番号３（ＩＳＩＳ３０４８０１）の配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドを動物に投与することにより前記動物のＨＤＬレベルを上昇させる方法であって、前記修飾型オリゴヌクレオチドが１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントを含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、そして、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが２’‐Ｏ‐メチオキシエチル糖を含み、各シトシンが５’‐メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合であり、前記修飾型オリゴヌクレオチドが前記動物のＨＤＬレベルを上昇させる、前記方法を提供する。
【００２６】
ある特定の実施形態は、ＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドを動物に投与することにより前記動物における心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法であって、前記修飾型オリゴヌクレオチドが１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントを含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、そして、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが２’‐Ｏ‐メチオキシエチル糖を含み、各シトシンが５’‐メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合であり、前記修飾型オリゴヌクレオチドが前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより前記心血管系疾患の前記動物における少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する、前記方法を提供する。
【００２７】
ある特定の実施形態は、動物のＨＤＬレベルを上昇させるために配列番号１または配列番号２に示されるようなＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物を前記動物に投与することにより前記動物のＨＤＬレベルを上昇させる方法を提供する。
【００２８】
ある特定の実施形態は、動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより前記動物における心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減するために配列番号１または配列番号２に示されるようなＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物を前記動物に投与することによって前記動物における前記心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法を提供する。
【００２９】
ある特定の実施形態は、動物にＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を投与することによりＣＥＴＰレベルを低下させる方法を提供する。ある特定の実施形態では、前記化合物は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である核酸塩基配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、前記核酸塩基配列はＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む。ある特定の実施形態では、前記化合物はＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の前記核酸塩基からなる。
【００３０】
ある特定の実施形態は、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を動物に投与することによ
りＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランス、食後トリグリセリドクリアランスまたはＨＤＬを上昇させる方法を提供する。ある特定の実施形態では、前記化合物は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的な核酸塩基配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、前記核酸塩基配列はＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む。ある特定の実施形態では、前記化合物はＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の前記核酸塩基からなる。
【００３１】
ある特定の実施形態は、膵炎を予防、遅延化、または改善する方法であって、（ａ）膵炎の動物、または膵炎のリスクがある動物を選択すること、および（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与することを含み、そこで前記膵炎が予防、遅延化、または改善される前記方法を提供する。
【００３２】
ある特定の実施形態は、膵炎を予防、遅延化、または改善する方法であって、（ａ）膵炎の動物、または膵炎のリスクがある動物を選択すること、および（ｂ）ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与し、それによりカイロミクロンクリアランスを上昇させることを含み、そこで前記膵炎が予防、遅延化、または改善される前記方法を提供する。
【００３３】
ある特定の実施形態では、前記動物は高トリグリセリド血症である、または高トリグリセリド血症のリスクがある。ある特定の実施形態では、前記高トリグリセリド血症はフレデリクソンＩＩ型、ＩＶ型またはＶ型である。ある特定の実施形態では、前記動物は高トリグリセリド血症を引き起こす遺伝的欠陥を有する。ある特定の実施形態では、前記遺伝的欠陥はヘテロ接合性ＬＰＬ欠損またはＡｐｏＣＩＩＩ多型である。ある特定の実施形態では、前記動物は５００ｍｇ／ｄＬ以上のトリグリセリドレベルおよびヘテロ接合性ＬＰＬ欠損を有する。
【００３４】
ある特定の実施形態では、前記動物は１００〜２００ｍｇ／ｄＬ、１００〜３００ｍｇ／ｄＬ、１００〜４００ｍｇ／ｄＬ、１００〜５００ｍｇ／ｄＬ、２００〜５００ｍｇ／ｄＬ、３００〜５００ｍｇ／ｄＬ、４００〜５００ｍｇ／ｄＬ、５００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、６００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、７００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、８００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、９００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、５００〜１５００ｍｇ／ｄＬ、１０００〜１５００ｍｇ／ｄＬ、１００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１５０〜２０００ｍｇ／ｄＬ、２００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、３００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、４００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、５００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、６００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、７００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、８００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、９００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１０００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１１００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１２００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１３００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１４００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、または１５００〜２０００ｍｇ／ｄＬの間のトリグリセリドレベルを有する。
【００３５】
ある特定の実施形態では、カイロミクロンクリアランスの上昇が食後トリグリセリドのクリアランスを増強する、および／または食後トリグリセリドを減少させる。
【００３６】
ある特定の実施形態は、ＨＤＬレベルを上昇させることにより心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減するためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。
【００３７】
ある特定の実施形態は、動物においてＨＤＬレベルを上昇させるための ＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法  を提供する。
【００３８】
ある特定の実施形態は、動物においてＨＤＬレベルを上昇させるための医薬の調製のためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。
【００３９】
ある特定の実施形態は、ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善するための医薬の調製のためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
特許請求の範囲で請求されるように、前述の概要および下記の詳細な説明の両方が例示および説明のみを目的とし、本発明を限定するものではないことが理解されるものとする。本明細書において、単数形の使用は、別途特に明言されない限り、複数形を包含する。本明細書で使用される場合、「または（ｏｒ）」の使用は、別途明言されない限り、「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味する。さらに、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含んだ（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の語形の使用は非限定的である。また、「要素（ｅｌｅｍｅｎｔ）」または「成分（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」などの用語は、別途特に明言されない限り、１つの単位を含む複数の要素および成分ならびに１つより多い副単位を含む複数の要素および成分の両方を包含する。
【００４１】
本明細書で使用されている表題部は文書の構成のみを目的としており、記載内容を限定するものと解釈されてはならない。本願で引用される、特許、特許出願、記事、書籍および学術論文を含むが、これらに限定されないあらゆる文書、または文書の一部が、本明細書で考察される文書の一部ならびにそれらの全体についての参照により明示的に本明細書に組み込まれる。
【００４２】
定義
特定の定義が提供されない限り、本明細書に記載される、分析化学、合成有機化学および医化学および薬化学に関連して使用される命名法、およびそれらの方法および技術は周知であり、当技術分野において一般に使用される。化学合成および化学分析に標準的な技法を使用することができる。許される場合、あらゆる特許、特許出願、特許出願公開、および他の論文発表、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号、および国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）などのデータベースから得ることができる関連の配列情報、および本開示を通して参照される他のデータが、本明細書で考察される文書の一部ならびにそれらの全体について、参照により本明細書に組み込まれる。
【００４３】
別途指示されない限り、以下の用語は次の意味を有する。
【００４４】
「２’‐Ｏ‐メトキシエチル」（２’−ＭＯＥ、２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３および２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）とも）はフロシル環の２’位のＯ−メトキシ‐エチル修飾を指す。２’‐Ｏ‐メトキシエチル修飾型糖は修飾型糖である。
【００４５】
「２’‐Ｏ‐メトキシエチルヌクレオチド」は２’‐Ｏ‐メトキシエチル修飾型糖部分を含むヌクレオチドを意味する。
【００４６】
「３’標的部位」は、特定のアンチセンス化合物の最も３’側にあるヌクレオチドに相補的である標的核酸のヌクレオチドを指す。
【００４７】
「５’標的部位」は、特定のアンチセンス化合物の最も５’側にあるヌクレオチドに相補的である標的核酸のヌクレオチドを指す。
【００４８】
「５‐メチルシトシン」は、５’位に結合したメチル基で修飾されたシトシンを意味す
る。５‐メチルシトシンは修飾型核酸塩基である。
【００４９】
「約」はある値の±１０％以内を意味する。例えば、「マーカーが約５０％増加し得る」と述べられる場合、それは、そのマーカーが４５％から５５％の間の値だけ増加し得ることを暗に意味する。
【００５０】
「活性薬剤」は、個体に投与されると治療上の利益をもたらす医薬組成物中の単数の物質または複数の物質を意味する。例えば、ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドが活性薬剤である。
【００５１】
「活性標的領域」または「標的領域」は１つ以上の活性アンチセンス化合物が標的とする領域を意味する。「活性アンチセンス化合物」は、標的核酸レベルまたはタンパク質レベルを低減させるアンチセンス化合物を意味する。
【００５２】
「同時に投与される」は、２つの薬剤の両方の薬理学的効果が同時に患者で現れるあらゆる方法でのそれらの薬剤の共投与を指す。同時投与は、両方の薬剤が単一の医薬組成物、同一の剤形または同一の投与経路で投与されることを必要としない。両方の薬剤の効果が同時に発現することを必要としない。ある期間効果が重なっているだけでよく、同一の期間に効果が存在する必要は無い。
【００５３】
「投与」は個体に医用薬剤を提供することを意味し、そして、医療従事者による投与および自己投与を含むがこれらに限定されない。
【００５４】
「薬剤」は、動物に投与されると治療上の利益を提供し得る活性物質を意味する。「第１薬剤」は、本発明の治療用化合物を意味する。例えば、第１薬剤はＡｐｏＣＩＩＩを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドであり得る。「第２薬剤」は本発明の第２治療用化合物（例えば、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする第２アンチセンスオリゴヌクレオチド）および／または非ＡｐｏＣＩＩＩ治療用化合物を意味する。
【００５５】
「改善」は、関連の疾患、障害または健康状態の少なくとも１つの指標、徴候または症状の減少を指す。指標の重症度は当業者に知られている主観的測定方法または客観的測定方法により決定され得る。
【００５６】
「動物」はヒトまたは非ヒト動物を指し、非ヒト動物はマウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタおよび非ヒト霊長類を含むが、これらに限定されず、非ヒト霊長類はサルおよびチンパンジーを含むが、これらに限定されない。
【００５７】
「アンチセンス活性」は、アンチセンス化合物のその標的核酸へのハイブリダイゼーションに帰することができるあらゆる検出可能または測定可能な活性を意味する。ある特定の実施形態では、アンチセンス活性は、標的核酸またはそのような標的核酸によりコードされるタンパク質の量または発現の低下である。
【００５８】
「アンチセンス化合物」は、水素結合を介して標的核酸にハイブリダイゼーションすることができるオリゴマー性化合物を意味する。本明細書で使用される場合、「アンチセンス化合物」という用語は、本明細書に記載される化合物の薬学的に許容可能な誘導体を包含する。
【００５９】
「アンチセンス阻害」は、標的核酸に相補的であるアンチセンス化合物の存在下で、そのアンチセンス化合物が存在しないときの標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルと比較した、標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルの低下を意味する。
【００６０】
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、標的核酸の対応する領域または区域へのハイブリダイゼーションを可能とする核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。本明細書で使用される場合、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、本明細書に記載される化合物の薬学的に許容可能な誘導体を包含する。
【００６１】
「ＡｐｏＣＩＩＩ」は、ＡｐｏＣＩＩＩをコードする任意の核酸またはタンパク質を意味する。例えば、ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩは、ＡｐｏＣＩＩＩをコードするＤＮＡ配列、ＡｐｏＣＩＩＩをコードするＤＮＡから転写されるＲＮＡ配列（イントロンおよびエクソンを含むゲノムＤＮＡを包含する）、ＡｐｏＣＩＩＩをコードするｍＲＮＡ配列、またはＡｐｏＣＩＩＩをコードするペプチド配列を包含する。
【００６２】
「ＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡ」はＡｐｏＣＩＩＩタンパク質をコードするｍＲＮＡを意味する。
【００６３】
「ＡｐｏＣＩＩＩタンパク質」はＡｐｏＣＩＩＩをコードする任意のタンパク質配列を意味する。
【００６４】
「アテローム性動脈硬化」は大動脈および中等動脈を冒す動脈の硬化を意味し、脂肪性沈着物の存在を特徴とする。その脂肪性沈着物は「アテローム」または「プラーク」と呼ばれ、主にコレステロールとその他の脂肪、カルシウムおよび瘢痕組織からなり、動脈の裏層を損傷する。
【００６５】
「二環式糖」は、２個の非ジェミナル環原子の架橋により修飾されたフロシル環を意味する。二環式糖は修飾型糖である。
【００６６】
「二環式核酸」または「ＢＮＡ」は、ヌクレオシドまたはヌクレオチドのフラノース部分がフラノース環上の２個の炭素原子を連結する架橋を含み、それにより二環式系を形成しているヌクレオシドまたはヌクレオチドを指す。
【００６７】
「キャップ構造」または「末端キャップ部分」は、アンチセンス化合物のどちらかの末端に組み込まれている化学修飾を意味する。
【００６８】
「心血管系疾患」または「心血管系障害」は、心臓、血管、または循環に関連する一群の健康状態を指す。心血管系疾患の例には動脈瘤、狭心症、不整脈、アテローム性動脈硬化、脳血管系疾患（脳卒中）、冠動脈性心疾患、高血圧、脂質異常症、高脂血症、高トリグリセリド血症および高コレステロール血症が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６９】
「化学的に異なる領域」は、あるアンチセンス化合物の別の領域と何らかの点で化学的に異なる同一のアンチセンス化合物のある領域を指す。例えば、２’‐Ｏ‐メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は２’‐Ｏ‐メトキシエチル修飾が無いヌクレオチドを有する領域と化学的に異なる。
【００７０】
「キメラアンチセンス化合物」は、少なくとも２つの化学的に異なる領域を有するアンチセンス化合物を意味する。
【００７１】
「コレステロール」はあらゆる動物組織の細胞膜に見出されるステロール分子である。コレステロールは、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、中間密度リポタンパク質（ＩＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）を含むリポタンパク質によって動物の血漿中に輸送されなければならない。「血漿コレステロー
ル」は血漿または血清中に存在する全てのリポタンパク質（ＶＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ）エステル化および／または非エステル化コレステロールの総計を指す。
【００７２】
「コレステロール吸収阻害剤」は食事から得た外来性のコレステロールの吸収を阻害する薬剤を意味する。
【００７３】
「共投与」は２つ以上の薬剤の個体への投与を意味する。その２つ以上の薬剤は単一の医薬組成物の形状であり得るし、別々の医薬組成物の形状でもあり得る。２つ以上の薬剤のそれぞれが同一の、または異なる投与経路を介して投与され得る。共投与は並行投与または順次投与を包含する。
【００７４】
「相補性」は第１核酸と第２核酸の核酸塩基間で対合する能力を意味する。ある特定の実施形態では、第１核酸と第２核酸の間の相補性は２つのＤＮＡ鎖の間、２つのＲＮＡ鎖の間、またはＤＮＡ鎖とＲＮＡ鎖の間の相補性であり得る。ある特定の実施形態では、一方の鎖の核酸塩基のいくつかが他方の鎖の相補的で水素結合を行う塩基と合致する。ある特定の実施形態では、一方の鎖の核酸塩基の全てが他方の鎖の相補的で水素結合を行う塩基と合致する。ある特定の実施形態では、第１核酸がアンチセンス化合物であり、第２核酸が標的核酸である。ある特定のそのような実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドが第１核酸であり、標的核酸が第２核酸である。
【００７５】
「連続核酸塩基」は互いに直ぐ隣接する核酸塩基を意味する。
【００７６】
「拘束エチル」または「ｃＥｔ」は、４’炭素原子および２’炭素原子の間にメチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）架橋を含むフラノース糖を有する二環式ヌクレオシドを指す。
【００７７】
「交差反応性」は、１つの核酸配列を標的とするオリゴマー性化合物が異なる核酸配列にハイブリダイズすることができることを意味する。例えば、いくつかの例では、ヒトＡｐｏＣＩＩＩを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドはマウスＡｐｏＣＩＩＩと交差反応することができる。オリゴマー性化合物がその指定された標的以外の核酸配列に交差反応するかどうかは、その化合物が非標的核酸配列と有する相補性の程度に依存する。オリゴマー性化合物と非標的核酸の間の相補性が高いほど、そのオリゴマー性化合物がその核酸と交差反応する可能性がより高い。
【００７８】
「治癒」は、健康を回復する方法、または病気に処方された治療を意味する。
【００７９】
「冠動脈性心疾患（ＣＨＤ）」は、心臓に血液と酸素を供給する小血管の狭窄を意味し、それは多くの場合アテローム性動脈硬化の結果である。
【００８０】
「デオキシリボヌクレオチド」は、ヌクレオチドの糖部分の２’位に水素を有するヌクレオチドを意味する。デオキシリボヌクレオチドは様々な置換基のうちのいずれかにより修飾され得る。
【００８１】
「真性糖尿病」または「糖尿病」は、不十分なレベルのインスリンまたはインスリン感受性の低下に起因する代謝乱調および異常高血糖（高血糖症）を特徴とする症候群である。特徴的な症状は、高血糖レベルが原因の大量の尿の産生（多尿症）、排尿の増加を補償しようとする多渇と水分摂取の増加（多飲症）、眼の光学系への高血糖の影響が原因の霞視、原因不明の体重減少および気力、活力の欠如である。
【００８２】
「糖尿病性脂質異常症」または「脂質異常症併発２型糖尿病」は、２型糖尿病、ＨＤＬ
‐Ｃ低下、トリグリセリド上昇および高密度小ＬＤＬ粒子の増加を特徴とする健康状態を意味する。
【００８３】
「希釈剤」は、薬理学的活性は無いが、薬学的に必要な、または望ましい組成物中の成分を意味する。例えば、注射組成物中の希釈剤は液体、例えば、生理食塩水であり得る。
【００８４】
「脂質異常症」は、脂質および／またはリポタンパク質の過剰産生または欠乏を含む、脂質代謝および／またはリポタンパク質代謝の障害を指す。脂質異常症は、カイロミクロン、コレステロールおよびトリグリセリドなどの脂質ならびに低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールなどのリポタンパク質の増加が徴候として現れ得る。脂質異常症の例はカイロミクロン血症である。
【００８５】
「投薬単位」は、医薬が提供される形状、例えば、丸剤、錠剤、または当技術分野において公知の他の投薬単位を意味する。ある特定の実施形態では、投薬単位は凍結乾燥アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。ある特定の実施形態では、投薬単位は加水して再構成したアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。
【００８６】
「用量」は、単回投与で、または特定の期間に提供される医薬の特定の量を意味する。ある特定の実施形態では、１、２、またはそれ以上の単位のボーラス、錠剤または注射で用量が投与され得る。例えば、皮下投与が望ましいある特定の実施形態では、所望の用量が単回注射では容易に処理されない体積を必要とし、それ故、所望の用量を達成するために２回以上の注射が用いられ得る。ある特定の実施形態では、医薬が長時間にわたる点滴によって、または持続的に投与される。用量は１時間、１日、１週間または１か月当たりの医薬の量と述べることができる。用量はｍｇ／ｋｇまたはｇ／ｋｇとして記述することもできる。
【００８７】
「有効量」または「治療上有効量」は、活性医薬の、その薬剤を必要とする個体において所望の生理的結果を生じさせるのに十分な量を意味する。有効量は、治療される個体の健康状態および生理状態、治療される個体の分類群、組成物の剤形、個体の医学的状態の評価、および他の妥当な要因に応じて個体間でまちまちであり得る。 
【００８８】
「フレデリクソン」系は、脂質異常症の主因（遺伝的原因）をいくつかの亜群または型に分類するために使用される。本明細書において開示される化合物を用いる治療法を受けることができる脂質異常症の型にはフレデリクソンＩＩ型、ＩＶ型およびＶ型が含まれるが、これらに限定されない。
【００８９】
「フレデリクソンＩ型」はいくつかの形態で存在する。１ａ型はＬＰＬの欠損または変異型ａｐｏＣ‐ＩＩに起因する欠損である。Ｉｂ型は家族性アポプロテインＣＩＩ欠損であり、リポタンパク質リパーゼ活性化因子の欠如に起因する健康状態である。そして、Ｉｃ型はリポタンパク質リパーゼの循環阻害剤に起因するカイロミクロン血症である。Ｉ型は通常小児期に存在するまれな障害である。それは、腹痛、再発性急性膵炎、発疹状皮膚黄色腫および肝脾腫というエピソードと共に非常に高いカイロミクロンレベルと非常に高いＴＧレベル（常に、１０００ｍｇ／ｄＬを優に超え、１０，０００ｍｇ／ｄＬ以上まで上昇することも少なくない）を特徴とする。おそらく、患者の血漿リポタンパク質粒子が動脈内皮に入り込むには大きすぎるので、患者がアテローム性動脈硬化を発生することはまれである(Nordestgaard et al., J Lipid Res, 1988, 29:1491-1500; Nordestgaard et al., Arteriosclerosis, 1988, 8:421-428)。Ｉ型は通常ＬＰＬ遺伝子かその遺伝子の補因子であるａｐｏＣ‐ＩＩのどちらかの変異を原因とし、それに冒された個体は機能的に活性型のＬＰＬを産生することができなくなる。患者はそのような変異についてホモ接合型であるか、複合ヘテロ接合型である。有病率は、一般集団について１，０００，０００
人につき約１人であり、南アフリカとケベック東部では創始者効果のため有病率はそれよりずっと高い。患者はＴＧ低下薬へ軽微な程度で反応するか、全く反応せず (Tremblay et al., J Clin Lipidol, 2011, 5:37-44; Brisson et al., Pharmacogenet Genom, 2010, 20:742-747) 、したがって、このまれな障害を管理するために１日２０グラム以下の食餌性脂肪の制限が用いられる。
【００９０】
「フレデリクソンＩＩ型」は原発性高脂血症の最も一般的な形態である。それは主に、ＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ‐Ｃ）に加えてＶＬＤＬの上昇が存在するかどうかに応じて、ＩＩａ型とＩＩｂ型にさらに分類される。ＩＩａ型（家族性高コレステロール血症）は（食餌性要因のため）孤発性、多因子性、または１９番染色体状のＬＤＬ受容体遺伝子の変異（集団の０．２％）かアポリポタンパク質Ｂ（ａｐｏＢ）遺伝子の変異（０．２％）のどちらかの結果として真に家族性であり得る。家族性型は腱黄色腫、黄色板症および早発性心血管系疾患を特徴とする。この疾患の発生率は、ヘテロ接合体については５００人につき約１人であり、ホモ接合体については１，０００，０００人につき約１人である。ＩＩｂ型（家族性複合型高リポタンパク質血症としても知られる）は、ＬＤＬ‐ＣとＶＬＤＬの上昇を原因とする複合型の高脂血症（高コレステロールレベルおよび高ＴＧレベル）である。高ＶＬＤＬレベルはＴＧ、アセチルＣｏＡを含む基質の過剰生産とＢ‐１００合成の増大を原因とする。それらはＬＤＬのクリアランスの低下によっても引き起こされ得る。集団内の有病率は約１０％である。
【００９１】
「フレデリクソンＩＩＩ型」（異常βリポタンパク質血症としても知られる）はレムナント除去病（ｒｅｍｎａｎｔ  ｒｅｍｏｖａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）またはブロードβ病（ｂｒｏａｄ−ｂｅｔａ  ｄｉｓｅａｓｅ）である (Fern et al., J Clin Pathol, 2008, 61:1174-118)。それは高コレステロールＶＬＤＬ（β‐ＶＬＤＬ）を原因とする。通常、この健康状態を有する患者は、カイロミクロンとＶＬＤＬレムナント（例えば、ＩＤＬ）のクリアランスの減損のため上昇した血漿コレステロールレベルおよびＴＧレベルを有する。その減損したクリアランスはアポリポタンパク質Ｅ（ａｐｏＥ）の欠陥に起因する。レムナントに含まれる正常に機能するａｐｏＥならＬＤＬ受容体への結合と循環からの除去が可能だろう。それに冒されている個体はレムナントの蓄積の結果として、黄色腫症と早発性冠状血管系疾患および／または末梢血管系疾患になり得る。ＩＩＩ型の最も一般的な原因はａｐｏＥ  Ｅ２／Ｅ２遺伝子型の存在である。その有病率は１０，０００人につき約１人であると推定されている。
【００９２】
「フレデリクソンＩＶ型」（家族性高トリグリセリド血症としても知られる）は集団中に約１％の頻度で生じる常染色体優性健康状態である。肝臓によるＶＬＤＬの過剰生産またはヘテロ接合性ＬＰＬ欠損の結果としてＴＧレベルが上昇するが、それはほとんど常に１０００ｍｇ／ｄＬ未満である。血清中コレステロールレベルは通常正常な限度内にある。その障害はヘテロ接合性であり、その表現型は環境要因、特に、炭水化物とエタノールの消費に大いに影響される。
【００９３】
「フレデリクソンＶ型」は高ＶＬＤＬと高カイロミクロンを有する。それは、少なくとも２０％のＬＰＬ活性（すなわち、フレデリクソンＩ型と対照的な部分的ＬＰＬ欠損症）と関連付けられている機能欠失型ＬＰＬ遺伝子異型の保因者を特徴とする。これらの患者は、カイロミクロンとＶＬＤＬが原因で、乳状の血漿と重症の高トリグリセリド血症を示す。ＴＧレベルは常に１０００ｍｇ／ｄＬを越え、総コレステロールレベルは常に高い。ＬＤＬ‐Ｃレベルは通常低い。それは急性膵炎、耐糖能障害および高尿酸血症のリスク上昇とも関連がある。症状は一般に成人（３５歳よりも上）に現れ、有病率は比較的に低いが、それはホモ接合性ＬＰＬ欠損患者または複合ヘテロ接合性ＬＰＬ欠損患者よりもずっと一般的である。
【００９４】
「完全に相補的な」または「１００％相補的な」は、第１核酸の核酸塩基配列の各核酸塩基が第２核酸の第２核酸塩基配列中に相補的な核酸塩基を有することを意味する。ある特定の実施形態では、第１核酸はアンチセンス化合物であり、そして、第２核酸が標的核酸である。 
【００９５】
「ギャップマー」は、１つ以上のヌクレオシドを有する外部領域の間にＲＮａｓｅ  Ｈ切断を助ける複数のヌクレオシドを有する内部領域が位置し、内部領域を含むヌクレオシドが外部領域を含む単数のヌクレオシドまたは複数のヌクレオシドと化学的に明確に異なるキメラアンチセンス化合物を意味する。その内部領域を「ギャップ」または「ギャップセグメント」と呼称することができ、そして、その外部領域を「ウイング」または「ウイングセグメント」と呼称することができる。
【００９６】
「ギャップが拡張した」は、１個から６個までのヌクレオシドを有する５’および３’ウイングセグメントの間に、およびそれらに直ぐに隣接して位置する１２個以上の連続する２’−デオキシリボヌクレオシドのギャップセグメントを有するキメラアンチセンス化合物を意味する。 
【００９７】
「グルコース」はエネルギー源および炎症性中間物として細胞によって使用される単糖である。「血漿グルコース」は血漿中に存在するグルコースを指す。
【００９８】
「高密度リポタンパク質‐Ｃ（ＨＤＬ‐Ｃ）」は高密度リポタンパク質粒子と結合したコレステロールを意味する。血清（または血漿）中のＨＤＬ‐Ｃの濃度は通常ｍｇ／ｄＬまたはｎｍｏｌ／Ｌ単位で定量される。「ＨＤＬ‐Ｃ」および「血漿ＨＤＬ‐Ｃ」は、それぞれ、血清中および血漿中のＨＤＬ‐Ｃを意味する。
【００９９】
「ＨＭＧ‐ＣｏＡレダクターゼ阻害剤」は、酵素ＨＭＧ‐ＣｏＡレダクターゼの阻害により作用する、アトルバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチンおよびシンバスタチンなどの薬剤を意味する。
【０１００】
「ハイブリダイゼーション」は相補的な核酸分子のアニーリングを意味する。ある特定の実施形態では、相補的な核酸分子にはアンチセンス化合物と標的核酸が含まれる。
【０１０１】
「高コレステロール血症」は、成人での高コレステロールの検出、治療の評価についての米国国立コレステロール教育プログラム（ＮＣＥＰ）の専門化パネル報告のガイドライン(Arch. Int. Med. (1988) 148, 36-39を参照のこと）によれば、コレステロール、すなわち、循環（血漿）コレステロール、ＬＤＬ−コレステロールおよびＶＬＤＬ−コレステロールの上昇を特徴とする健康状態を意味する。
【０１０２】
「高脂質血症」または「高脂肪血症」は、血清中脂質または循環（血漿中）脂質の上昇を特徴とする健康状態である。この健康状態は異常に高濃度の脂肪を示す。循環血液中の脂質画分はコレステロール、低密度リポタンパク質、超低密度リポタンパク質、カイロミクロン、およびトリグリセリドである。高脂血症のフレデリクソン分類は、電気泳動または超遠心分離により測定されるようなＴＧと高コレステロールリポタンパク質粒子のパターンに基づき、高トリグリセリド血症などの高脂血症の主因を特徴づけるために通常使用される (Fredrickson and Lee, Circulation, 1965, 31:321-327; Fredrickson et al., New Eng J Med, 1967, 276 (1): 34-42) 。
【０１０３】
「高トリグリセリド血症」はトリグリセリドレベルの上昇を特徴とする健康状態を意味する。その病因には一次的要因（すなわち、遺伝的原因）および二次的要因（糖尿病、メタボリックシンドローム／インスリン抵抗性、肥満、運動不足、喫煙、過剰なアルコール
および炭水化物が非常に多い食事などの他の遠因）、または、最も頻度が高いが、両方の組合せが含まれる(Yuan et al. CMAJ, 2007, 176:1113-1120)。 
【０１０４】
代謝性疾患または心血管系疾患を有する動物を「特定すること」または「選択すること」は、代謝性疾患、心血管系疾患もしくはメタボリックシンドロームになりやすい対象、もしくは代謝性疾患、心血管系疾患もしくはメタボリックシンドロームと診断されている対象を特定もしくは選択すること、または、高コレステロール血症、高血糖症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高血圧、インスリン抵抗性の上昇、インスリン感受性の低下、正常値を超える体重、および／もしくは正常値を超える体脂肪、もしくはこれらのあらゆる組合せを含むが、これらに限定されない代謝性疾患、心血管系疾患もしくはメタボリックシンドロームの任意の症状を有する対象を特定もしくは選択することを意味する。そのような特定は、血清または循環（血漿）コレステロールの測定、血清または循環（血漿）血糖の測定、血清または循環（血漿）トリグリセリドの測定、血圧の測定、体脂肪量の測定、体重測定などのような標準的な臨床試験または臨床評価を含むが、これらに限定されない任意の方法により達成され得る。
【０１０５】
「心血管系の転帰の改善」は有害な心血管系事象の発生、またはそのリスクの低下を意味する。有害な心血管系事象の例には死、再梗塞、脳卒中、心原性ショック、肺浮腫、心停止、および心房律動異常が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０６】
「直ぐ隣接する」は、直ぐ隣接する要素の間、例えば、領域、セグメント、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシドの間に介在性要素が存在しないことを意味する。
【０１０７】
「ＨＤＬの増加」または「ＨＤＬの上昇」は、いずれの化合物も投与していない動物におけるＨＤＬレベルと比較した、本発明の少なくとも１つの化合物の投与後の動物におけるＨＤＬレベルの上昇を意味する。
【０１０８】
「個体」または「対象」または「動物」は処置または治療に選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【０１０９】
「誘導する」、「阻害する」、「増強する」、「上昇させる」、「増加させる」、「減少させる」、「低下させる」などは、２つの状態の間の定量的な差異を表す。例えば、「ＡｐｏＣＩＩＩの活性または発現を阻害するのに有効な量」は、処理試料でのＡｐｏＣＩＩＩの活性または発現のレベルが未処理試料でのＡｐｏＣＩＩＩの活性または発現のレベルと異なることを意味する。そのような用語は、例えば、発現レベルおよび活性レベルに応用される。
【０１１０】
「発現または活性の阻害」は、ＲＮＡまたはタンパク質の発現または活性の低下または妨害を指し、発現または活性の完全な排除を必ずしも表さない。
【０１１１】
「インスリン抵抗性」は、正常量のインスリンが脂肪細胞、筋肉細胞および肝細胞から正常なインスリン応答を引き出すのに不十分である健康状態と定義される。脂肪細胞におけるインスリン抵抗性は貯蔵トリグリセリドの加水分解を引き起こし、それが血漿中の遊離脂肪酸を上昇させる。筋肉でのインスリン抵抗性はグルコース取込を低下させ、一方、肝臓でのインスリン抵抗性はグルコース貯蔵を低下させ、両方の効果が血糖を上昇させるように働く。インスリン抵抗性が原因のインスリンとグルコースの高い血漿中レベルが、多くの場合、メタボリックシンドロームと２型糖尿病を引き起こす。
【０１１２】
「インスリン感受性」は、個体がどれくらい効果的にグルコースを処理するかということの尺度である。高インスリン感受性を有する個体は効果的にグルコースを処理し、一方
、低インスリン感受性を有する個体は効果的にグルコースを処理することがない。
【０１１３】
「ヌクレオシド間結合」はヌクレオシド間の化学結合を指す。
【０１１４】
「静脈内投与」は静脈への投与を意味する。
【０１１５】
「連結ヌクレオシド」は共に結合している隣接ヌクレオシドを意味する。
【０１１６】
「脂質低下」は、対象での１種以上の脂質の低下を意味する。「脂質上昇」は対照での脂質（例えば、ＨＤＬ）の上昇を意味する。脂質低下または脂質上昇はある期間の１回以上の投薬により起こり得る。
【０１１７】
「脂質低下治療」または「脂質低下薬剤」は、対象において１つ以上の脂質を低下させるために対象に提供される治療計画を意味する。ある特定の実施形態では、ＣＥＴＰ、ＡｐｏＢ、総コレステロール、ＬＤＬ‐Ｃ、ＶＬＤＬ‐Ｃ、ＩＤＬ‐Ｃ、非ＨＤＬ‐Ｃ、トリグリセリド、高密度小ＬＤＬ粒子およびＬｐ（ａ）のうちの１つ以上を対象で低下させるために、脂質低下治療が提供される。脂質低下治療の例にはスタチン類、フィブラート類、ＭＴＰ阻害剤が挙げられる。
【０１１８】
ＶＬＤＬ、ＬＤＬおよびＨＤＬなどの「リポタンパク質」は、血清、血漿およびリンパ液中に見出される一群のタンパク質を指し、それらは脂質輸送に重要である。各リポタンパク質の化学組成は、ＨＤＬでは脂質に対するタンパク質の割合がより高い一方、ＶＬＤＬでは脂質に対するタンパク質の割合がより低いという点で異なる。
【０１１９】
「低密度リポタンパク質‐コレステロール（ＬＤＬ‐Ｃ）」は低密度リポタンパク質粒子に担持されるコレステロールを意味する。血清（または血漿）中のＬＤＬ‐Ｃの濃度は通常ｍｇ／ｄＬまたはｎｍｏｌ／Ｌ単位で定量される。「血清ＬＤＬ‐Ｃ」および「血漿ＬＤＬ‐Ｃ」は、それぞれ、血清中および血漿中のＬＤＬ‐Ｃを意味する。
【０１２０】
「主要リスクファクター」は、特定の疾患または健康状態の高いリスクに寄与する要因を指す。ある特定の実施形態では、冠動脈性心疾患の主要リスクファクターには、喫煙、高血圧、低ＨＤＬ‐Ｃ、冠動脈性心疾患の家族歴、年齢、および本明細書で開示される他の要因が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２１】
「代謝性障害」または「代謝性疾患」は、代謝機能の異常または障害を特徴とする健康状態を指す。「代謝性」および「代謝」は当技術分野において周知の用語であり、そして、生物内で起こる生化学的処理の全範囲を一般に包含する。代謝性障害は高血糖症、前糖尿病、糖尿病（１型および２型）、肥満、インスリン抵抗性、メタボリックシンドローム、および２型糖尿病性脂質異常症を包含するが、これらに限定されない。
【０１２２】
「メタボリックシンドローム」は、代謝起源の脂質性および非脂質性心血管系リスクファクターの集積を特徴とする健康状態を意味する。ある特定の実施形態では、メタボリックシンドロームは、次の要因のうちのいずれか３つにより特定される：男性では１０２ｃｍ、または女性では８８ｃｍを超える腹囲；少なくとも１５０ｍｇ／ｄＬの血清中トリグリセリド；男性では４０ｍｇ／ｄＬ未満、または女性では５０ｍｇ／ｄＬ未満のＨＤＬ‐Ｃ；少なくとも１３０／８５ｍｍＨｇの血圧；および少なくとも１１０ｍｇ／ｄＬの空腹時グルコース。これらの決定要素は臨床診療で容易に測定され得る (JAMA, 2001, 285: 2486-2497)。
【０１２３】
「ミスマッチ」または「非相補的核酸塩基」は、第１核酸の核酸塩基が第２核酸または
標的核酸の対応する核酸塩基と対合することができない場合を指す。
【０１２４】
「混合型脂質異常症」はコレステロールの上昇とトリグリセリドの上昇を特徴とする健康状態を意味する。
【０１２５】
「修飾型ヌクレオシド間結合」は天然のヌクレオシド間結合からの置換またはあらゆる変化を指す。例えば、ホスホロチオエート結合は修飾型ヌクレオシド間結合である。
【０１２６】
「修飾型核酸塩基」はアデニン、シトシン、グアニン、チミジンまたはウラシル以外のあらゆる核酸塩基を指す。例えば、５‐メチルシトシンは修飾型核酸塩基である。「非修飾型核酸塩基」はプリン塩基であるアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）ならびにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）を意味する。
【０１２７】
「修飾型ヌクレオシド」は、少なくとも１つの修飾型糖部分および／または修飾型核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。
【０１２８】
「修飾型ヌクレオチド」は少なくとも１つの修飾型糖部分、修飾型ヌクレオシド間結合および／または修飾型核酸塩基を有するヌクレオチドを意味する。
【０１２９】
「修飾型オリゴヌクレオチド」は少なくとも１つの修飾型ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを意味する。
【０１３０】
「修飾型糖」は天然糖からの置換または変化を指す。例えば、２’‐Ｏ‐メトキシエチル修飾型糖は修飾型糖である。
【０１３１】
「モチーフ」はアンチセンス化合物内の化学的に異なる領域のパターンを意味する。
【０１３２】
「天然ヌクレオシド間結合」は３’‐５’ホスホジエステル結合を意味する。
【０１３３】
「天然糖部分」はＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）に見出される糖を意味する。
【０１３４】
「核酸」は単量体のヌクレオチドから構成される分子を指す。核酸にはリボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸（ｓｓＤＮＡ）、二本鎖核酸（ｄｓＤＮＡ）、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が含まれる。核酸はまた一つの分子にこれらの要素の組み合わせを含むこともできる。
【０１３５】
「核酸塩基」は別の核酸の塩基と対合することができる複素環部分を意味する。
【０１３６】
「核酸塩基相補性」は別の核酸塩基と塩基対合することができる核酸塩基を指す。例えば、ＤＮＡでは、アデニン（Ａ）はチミン（Ｔ）に相補的である。例えば、ＲＮＡでは、アデニン（Ａ）はウラシル（Ｕ）に相補的である。ある特定の実施形態では、相補的な核酸塩基は、その標的核酸の核酸塩基と塩基対合することができるアンチセンス化合物の核酸塩基を指す。例えば、アンチセンス化合物のある特定の位置の核酸塩基が標的核酸のある特定の位置の核酸塩基と水素結合することができる場合、そのオリゴヌクレオチドとその標的核酸はその核酸塩基対で相補的であると見なされる。
【０１３７】
「核酸塩基配列」はあらゆる糖、結合または核酸塩基修飾から独立した連続する核酸塩基の順序を意味する。
【０１３８】
「ヌクレオシド」は糖に結合した核酸塩基を意味する。
【０１３９】
「ヌクレオシド模倣物」は、例えば、モルホリノ糖模倣物、シクロヘキシニル糖模倣物、シクロヘキシル糖模倣物、テトラヒドロピラニル糖模倣物、ビシクロまたはトリシクロ糖模倣物、例えば、非フラノース糖単位を有するヌクレオシド模倣物など、糖、または糖と塩基を置換するために使用され、必ずしもオリゴマー性化合物の１つ以上の位置の結合を置換するために使用されるわけではない構造を包含する。
【０１４０】
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分に共有結合したリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。
【０１４１】
「ヌクレオチド模倣物」は、例えば、ペプチド核酸またはモルホリノ類（−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または他の非ホスホジエステル結合によって連結したモルホリノ類）など、オリゴマー性化合物の１つ以上の位置のヌクレオシドと結合を置換するために使用される構造を包含する。
【０１４２】
「オリゴマー性化合物」または「オリゴマー」は、核酸分子のある領域にハイブリダイズすることができる連結した単量体性サブユニットの重合体を意味する。ある特定の実施形態では、オリゴマー性化合物はオリゴヌクレオシドである。ある特定の実施形態では、オリゴマー性化合物はオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、オリゴマー性化合物はアンチセンス化合物である。ある特定の実施形態では、オリゴマー性化合物はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、オリゴマー性化合物はキメラオリゴヌクレオチドである。
【０１４３】
「オリゴヌクレオチド」は、ヌクレオシドのそれぞれが互いに独立して修飾型または非修飾型であり得る、連結したヌクレオシドからなる重合体を意味する。
【０１４４】
「非経口投与」は注射または点滴による投与を意味する。非経口投与には皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与または頭蓋内投与、例えば、髄腔内投与もしくは脳室内投与が含まれる。投与は順次投与、長期投与、短期投与、または断続的投与であり得る。
【０１４５】
「ペプチド」は、アミド結合により少なくとも２つのアミノ酸を結合して形成された分子を意味する。ペプチドはポリペプチドおよびタンパク質を指す。
【０１４６】
「医薬」は、個体に投与されると治療上の利益を提供する物質を意味する。例えば、ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは医薬である。
【０１４７】
「医薬組成物」または「組成物」は個体への投与に適切な物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は１つ以上の活性薬剤および無菌水溶液などの医薬担体を含み得る。 
【０１４８】
「薬学的に許容可能な担体」は、化合物の構造に干渉しない媒体または希釈剤を意味する。そのような担体のある特定のものによって、医薬組成物は、例えば、対象による経口摂取用の錠剤、丸剤、糖衣剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤およびトローチ剤として製剤され得る。そのような担体のある特定のものによって、医薬組成物は注射用、点滴用、または局所投与用に製剤され得る。例えば、薬学的に許容可能な担体は無菌水溶液であり得る。
【０１４９】
「薬学的に許容可能な誘導体」または「塩」は、溶媒和化合物、水和物、エステル、プ
ロドラッグ、多形体、異性体、同位体で標識された異型体、薬学的に許容可能な塩、および当技術分野において公知の他の誘導体など、本明細書に記載される化合物の薬学的に許容可能な誘導体を包含する。
【０１５０】
「薬学的に許容可能な塩」はアンチセンス化合物の生理学的および薬学的に許容可能な塩、すなわち、親化合物の所望の生物活性を保持し、望ましくない毒性をそれに加えない塩を意味する。「薬学的に許容可能な塩」または「塩」という用語には、無機または有機の酸および塩基を包含する薬学的に許容可能な毒性が無い酸または塩基から調製された塩が含まれる。当技術分野において周知の方法によって本明細書に記載される化合物の「薬学的に許容可能な塩」を調製することができる。薬学的に許容可能な塩の概説については、 Stahl and Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)を参照のこと。アンチセンスオリゴヌクレオチドのナトリウム塩はヒトへの治療用投与に有用であり、十分に許容される。したがって、１つの実施形態では、本明細書に記載される化合物はナトリウム塩の形態である。
【０１５１】
「ホスホロチオエート結合」は、非架橋酸素原子のうちの１つをイオウ原子で置換することによりホスホジエステル結合が修飾されているヌクレオシド間の結合を意味する。ホスホロチオエート結合は修飾型ヌクレオシド間結合である。
【０１５２】
「部分」は、核酸の限定した数の連続する（すなわち、連結した）核酸塩基を意味する。ある特定の実施形態では、部分は、標的核酸の限定した数の連続する核酸塩基である。ある特定の実施形態では、部分は、アンチセンス化合物の限定した数の連続する核酸塩基である。
【０１５３】
「予防する」は、数分から無限までの期間、疾患、障害または病気の発症または発生を遅らせること、または未然に防ぐことを指す。「予防する」は疾患、障害または病気の発生のリスクを低減することも意味する。
【０１５４】
「プロドラッグ」は、不活性型で調製され、内在性の酵素または他の化学物質または条件によって体内または細胞内でその活性型（すなわち、薬品）に変換される治療薬を意味する。
【０１５５】
「上昇させる」は量の増加を意味する。例えば、血漿ＨＤＬレベルを上昇させることは血漿中のＨＤＬ量の増加させることを意味する。
【０１５６】
「ＴＧのＨＤＬに対する比率」はＨＤＬレベルに対するＴＧレベルを意味する。高ＴＧおよび／または低ＨＤＬの発生率は心血管系疾患の発生率、転帰および死亡率に関連している。「ＴＧのＨＤＬに対する比率の改善」はＴＧレベルの低下および／またはＨＤＬレベルの上昇を意味する。
【０１５７】
「低下させる」はより小さい程度、サイズ、量または数に下げることを意味する。例えば、血漿トリグリセリドレベルを低下させることは血漿中のトリグリセリドの量を下げることを意味する。
【０１５８】
「領域」または「標的領域」は、少なくとも１つの特定可能な構造、機能または特徴を有する標的核酸の部分として定義される。例えば、標的領域は３’ＵＴＲ、５’ＵＴＲ、エクソン、イントロン、エクソン／イントロンジャンクション、コード領域、翻訳開始領域、翻訳終止領域、または他の限定的な核酸領域を包含し得る。ＡｐｏＣＩＩＩの構造的に限定された領域を、ＮＣＢＩなどの配列データベースから受託番号によって入手することができ、そして、そのような情報は参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実
施形態では、標的領域は標的領域内の１つの標的セグメントの５’末端部位から標的領域内の別の標的セグメントの３’標的部位までの配列を包含することができる。
【０１５９】
「リボヌクレオチド」はヌクレオチドの糖部分の２’位にヒドロキシを有するヌクレオチドを意味する。リボヌクレオチドは様々な置換基のいずれかにより修飾され得る。
【０１６０】
「第２薬剤」または「第２治療薬」は「第１薬剤」と併用され得る薬剤を意味する。第２治療薬には、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むｓｉＲＮＡまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれ得るが、これらに限定されない。第２薬剤は抗ＡｐｏＣＩＩＩ抗体、ＡｐｏＣＩＩＩペプチド阻害剤、コレステロール低下薬剤、脂質低下薬剤、グルコース低下薬剤および抗炎症剤も含み得る。
【０１６１】
「セグメント」は核酸内の領域のより小さい、副部分として定義される。例えば、「標的セグメント」は、１つ以上のアンチセンス化合物が標的とする標的核酸のヌクレオチド配列を意味する。「５’標的部位」は標的セグメントの最も５’側のヌクレオチドを指す。「３’標的部位」は標的セグメントの最も３’側のヌクレオチドを指す。
【０１６２】
本明細書において教示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは標的核酸の「短縮型」または「切断型」は１、２またはそれ以上のヌクレオシドが欠失されている。
【０１６３】
「副作用」は、ある処置に帰することができる、所望の効果以外の生理的反応を意味する。ある特定の実施形態では、副作用には注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、筋障害および倦怠感が含まれる。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの上昇は肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの増加は肝毒性または肝機能異常を示し得る。
【０１６４】
「一本鎖オリゴヌクレオチド」は、相補鎖にハイブリダイズされていないオリゴヌクレオチドを意味する。
【０１６５】
「特異的にハイブリダイズ可能な」は、インビボ測定および治療の場合に、所望の効果を誘導するのに十分な程度の相補性を標的核酸に対して有しているが、特異的な結合が望ましい条件、すなわち、生理的条件では、非標的核酸に対して最小の効果を示す、または全く効果を示さないアンチセンス化合物を指す。
【０１６６】
「スタチン」はＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの活性を阻害する薬剤を意味する。
【０１６７】
「皮下投与」は皮膚のすぐ下への投与を意味する。
【０１６８】
「対象」は処置または治療に選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【０１６９】
「心血管系疾患または障害の症状」は、心血管系疾患または障害から生じ、そして、心血管系疾患または障害に付随し、そして、その指標として役に立つ現象を意味する。例えば、狭心症；胸部痛；息切れ；心悸亢進；虚弱；めまい；吐き気；発汗；頻脈；徐脈；不整脈；心房細動；下肢のむくみ；チアノーゼ；疲労；失神；顔面麻痺；四肢の麻痺；筋肉の跛行もしくは痙攣；腹部膨満；または発熱が心血管系疾患または障害の症状である。
【０１７０】
「標的とする」または「標的とした」は、標的核酸に特異的にハイブリダイズし、そして、所望の効果を誘導するアンチセンス化合物の設計および選択の過程を意味する。 
【０１７１】
「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」および「標的ＲＮＡ転写物」は全てアンチセンス化合物
によって標的とされ得る核酸を指す。
【０１７２】
「治療のための生活習慣の変更（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｌｉｆｅｓｔｙｌｅ  ｃｈａｎｇｅ）」は、脂肪／脂肪組織質量および／またはコレステロールの低減を目的とした食事および生活習慣の変更を意味する。そのような変更は心臓疾患の発生のリスクを低下させることができ、そして、１日の総カロリー、総脂肪、飽和脂肪、多価不飽和脂肪、一価不飽和脂肪、炭水化物、タンパク質、コレステロール、不溶性繊維の食事による摂取に対する勧告ならびに身体活動に対する勧告を包含する。
【０１７３】
「治療する」は、疾患、障害または健康状態の変化または改善をもたらすために動物に本発明の化合物を投与することを指す。
【０１７４】
「トリグリセリド」または「ＴＧ」は、３つの脂肪酸分子と組み合わさったグリセロールからなる脂質または中性脂肪を意味する。
【０１７５】
「２型糖尿病」（「２型真性糖尿病」または「真性糖尿病、２型」、「非インスリン依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）」、「肥満関連糖尿病」または「成人発症性糖尿病」としても知られている）は、インスリン抵抗性、相対的インスリン欠乏および高血糖症を主な特徴とする代謝性障害である。
【０１７６】
「非修飾型ヌクレオチド」は天然の核酸塩基、糖部分およびヌクレオシド間結合から構成されるヌクレオチドを意味する。ある特定の実施形態では、非修飾型ヌクレオチドはＲＮＡヌクレオチド（すなわち、β−Ｄ−リボヌクレオシド）またはＤＮＡヌクレオチド（すなわち、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド）である。
【０１７７】
「ウイングセグメント」は、増強された阻害活性、標的核酸への結合親和性の向上、またはインビボ核酸分解酵素による分解への耐性などの特性をオリゴヌクレオチドに付与するために修飾された１つの、または複数のヌクレオシドを意味する。
【０１７８】
特定の実施形態
ある特定の実施形態は、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を動物に投与し、それによりＡｐｏＣＩＩＩレベルを低下させることによって前記動物におけるＡｐｏＣＩＩＩレベルを低下させる方法を提供する。ある特定の実施形態では、肝臓または小腸でＡｐｏＣＩＩＩレベルが低下する。
【０１７９】
ある特定の実施形態は、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とし、ＨＤＬレベルを上昇させる、および／またはＴＧのＨＤＬに対する比率を改善する化合物を動物に投与することにより前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させる、および／またはＴＧのＨＤＬに対する比率を改善する方法を提供する。
【０１８０】
ある特定の実施形態は、動物において心血管系の疾患、障害、病気、またはその症状を予防する、遅らせる、または改善する方法であって、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与することを含み、前記動物に投与された前記化合物が前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善することにより前記動物において心血管系の疾患、障害、病気、または症状を予防、治療、または改善する、前記方法を提供する。
【０１８１】
ある特定の実施形態は、動物において膵炎を予防する、遅らせる、または改善する方法であって、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与することを含み、前記動物に投与された前記化合物が前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより、および／
または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善することにより前記動物において膵炎を予防、
治療、または改善する、前記方法を提供する。ある特定の実施形態では、前記膵炎は急性膵炎である。
【０１８２】
ある特定の実施形態は、動物において心血管系の疾患、障害または病気を予防する、治療する、改善する、その発症を遅らせる、またはそのリスクを軽減する方法であって、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を前記動物に投与することを含み、前記化合物が前記動物のＨＤＬレベルを上昇させることにより、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善することにより前記動物において心血管系の疾患、障害または病気を予防する、治療する、改善する、その発症を遅らせる、またはそのリスクを軽減する、前記方法を提供する。
【０１８３】
ある特定の実施形態は、動物にＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を投与することによりＣＥＴＰレベルを低下させる方法を提供する。
【０１８４】
ある特定の実施形態は、動物にＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を投与することによりＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランスおよび／またはＨＤＬを上昇させる方法を提供する。ある特定の実施形態は ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善するための方法を提供する。
【０１８５】
ある特定の実施形態では、前記ＡｐｏＣＩＩＩ核酸は、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿００００４０．１（配列番号１として本明細書に組み込まれる）、およびＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０３３８９９．８から切り出されたヌクレオチド２０２６２６４０から２０２６６６０３まで（配列番号２として本明細書に組み込まれる）に示される配列のうちのいずれか１つである。
【０１８６】
ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩを標的とする前記化合物は修飾型オリゴヌクレオチドである。さらなる実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは配列番号１または配列番号２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも１００％相補的である。
【０１８７】
ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは一本鎖修飾型オリゴヌクレオチドからなる。
【０１８８】
ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる。
【０１８９】
ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは２０個の連結したヌクレオシドからなる。
【０１９０】
ある特定の実施形態では、前記化合物は少なくとも１つの修飾型ヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態では、前記ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０１９１】
ある特定の実施形態では、前記化合物は修飾型糖を含む少なくとも１個のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、前記の少なくとも１つの修飾型糖は二環式糖である。ある特定の実施形態では、前記の少なくとも１つの修飾型糖は２’‐Ｏ‐メトキシエチルを含む。
【０１９２】
ある特定の実施形態では、前記化合物は修飾型核酸塩基を含む少なくとも１個のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、前記修飾型核酸塩基は５‐メチルシトシンである。
【０１９３】
ある特定の実施形態では、修飾型オリゴヌクレオチドを含む前記化合物は：
（ｉ）連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；（ｉｉ）連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；（ｉｉｉ）連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントを含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、そして、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが修飾型糖を含む。
【０１９４】
ある特定の実施形態では、修飾型オリゴヌクレオチドを含む前記化合物は：
（ｉ）８〜１２個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；（ｉｉ）１〜５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；（ｉｉｉ）１〜５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントを含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが２’‐Ｏ‐メトキシエチル糖を含み、各シトシンが５’‐メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である。
【０１９５】
ある特定の実施形態では、修飾型オリゴヌクレオチドを含む前記化合物は：
（ｉ）１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；（ｉｉ）５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；（ｉｉｉ）５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントを含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが２’‐Ｏ‐メトキシエチル糖を含み、各シトシンが５’‐メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である。 
【０１９６】
ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
【０１９７】
ある特定の実施形態は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物の治療上有効量を動物に投与することにより前記動物における心血管系疾患のリスクを軽減する方法であって、前記修飾型オリゴヌクレオチドがＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的であり、前記修飾型オリゴヌクレオチドがＨＤＬレベルを上昇させる、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善する、前記方法を提供する。
ある特定の実施形態では、前記ＡｐｏＣＩＩＩ核酸は配列番号１または配列番号２のどちらかである。ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは配列番号１または配列番号２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも１００％相補的である。さらなる実施形態では、前記修飾型ヌクレオチドはＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む。
【０１９８】
ある特定の実施形態は、動物において心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法であって、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、そして、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物の治療上有効量を前記動物に投与することを含む前記方法を提供する。ある特定の実施形態では、前記ＡｐｏＣＩＩＩ核酸は配列番号１または配列番号２のどちらかである。ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは配列番号１または配列番号２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも１００％相補的である。さらなる実施形態では、前記動物に投与された前記化合物がＨＤＬレベルを上昇させることにより、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善することにより前記心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する。さらなる実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドはＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む。
【０１９９】
さらなる実施形態では、心血管系疾患の症状には狭心症；胸部痛；息切れ；心悸亢進；虚弱；めまい；吐き気；発汗；頻脈；徐脈；不整脈；心房細動；下肢のむくみ；チアノーゼ；疲労；失神；顔面麻痺；四肢の麻痺；筋肉の跛行もしくは痙攣；腹部膨満；または発熱が含まれるが、これらに限定されない。
【０２００】
ある特定の実施形態は、ＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の核酸塩基配列からなる化合物を動物に投与することにより前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させる、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善する方法を提供する。さらなる実施形態は、
ＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の核酸塩基配列からなる化合物を動物に投与し、それにより前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させることによって、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善することによって前記動物において心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法を提供する。
【０２０１】
ある特定の実施形態は、ＩＳＩＳ３０４８０１の配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドであって、（ｉ）１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；（ｉｉ）５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；（ｉｉｉ）５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントを含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが２’‐Ｏ‐メトキシエチル糖を含み、各シトシンが５’‐メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である前記修飾型オリゴヌクレオチドを動物に投与することによって前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させる、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善する方法を提供する。
【０２０２】
ある特定の実施形態は、ＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の配列を有する修飾型オリゴヌクレオチドであって、（ｉ）１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；（ｉｉ）５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；（ｉｉｉ）５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントを含み、前記ギャップセグメントが前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが２’‐Ｏ‐メトキシエチル糖を含み、各シトシンが５’‐メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である前記化合物の前記修飾型オリゴヌクレオチドを動物に投与することによって前記動物において心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法を提供する。
【０２０３】
ある特定の実施形態は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドであって、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である前記修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物を動物に投与することにより前記動物においてＨＤＬレベルを上昇させる、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善する方法を提供する。ある特定
の実施形態では、前記ＡｐｏＣＩＩＩ核酸は配列番号１または配列番号２のどちらかであ
る。ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは配列番号１または配列番号２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも１００％相補的である。
【０２０４】
ある特定の実施形態は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドであって、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的であり、動物においてＨＤＬレベルを上昇させる前記修飾型オリゴヌクレオチドを含む化合物を前記動物に投与することにより前記動物において心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減する方法を提供する。ある特定の実施形態では、前記ＡｐｏＣＩＩＩ核酸は配列番号１または配列番号２のどちらかである。ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは配列番号１または配列番号２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも１００％相補的である。
【０２０５】
ある特定の実施形態は、動物にＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を投与することによりＣＥＴＰレベルを低下させる方法を提供する。ある特定の実施形態では、前記化合物は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である修飾型オリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、前記ＡｐｏＣＩＩＩ核酸は配列番号１または配列番号２のどちらかである。ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは配列番号１または配列番号２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも１００％相補的である。ある特定の実施形態では、前記化合物は１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含み、そして、ＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。ある特定の実施形態では、前記化合物はＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の核酸塩基からなる。
【０２０６】
ある特定の実施形態は、動物にＡｐｏＣＩＩＩを標的とする化合物を投与することによりＡｐｏＡ１、ＰＯＮ１、脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランスおよび／またはＨＤＬを上昇させる方法を提供する。ある特定の実施形態では、前記化合物は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸に対して相補的である修飾型オリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、前記ＡｐｏＣＩＩＩ核酸は配列番号１または配列番号２のどちらかである。ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは配列番号１または配列番号２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも１００％相補的である。ある特定の実施形態では、前記化合物は１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾型オリゴヌクレオチドを含み、そして、ＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。ある特定の実施形態では、前記化合物はＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の核酸塩基からなる。
【０２０７】
ある特定の実施形態では、前記動物はヒトである。
【０２０８】
ある特定の実施形態では、前記心血管系疾患は動脈瘤、狭心症、不整脈、アテローム性動脈硬化、脳血管系疾患、冠動脈性心疾患、高血圧、脂質異常症、高脂血症、高トリグリセリド血症または高コレステロール血症である。ある特定の実施形態では、前記脂質異常症はカイロミクロン血症である。
【０２０９】
ある特定の実施形態では、前記動物は膵炎のリスクがある。ある特定の実施形態では、肝臓および／または小腸でのＡｐｏＣＩＩＩレベルの低下が膵炎を予防する。ある特定の
実施形態では、ＨＤＬレベルの上昇、および／またはＴＧのＨＤＬに対する比率の改善が膵炎を予防する。
【０２１０】
ある特定の実施形態では、肝臓および／または小腸でのＡｐｏＣＩＩＩレベルの低下が食後トリグリセリドのクリアランスを増強する。ある特定の実施形態では、ＨＤＬレベルの上昇、および／またはＴＧのＨＤＬに対する比率の改善が食後トリグリセリドのクリアランスを増強する。ある特定の実施形態では、肝臓および／または小腸でのＡｐｏＣＩＩＩレベルの低下が食後トリグリセリドを減少させる。ある特定の実施形態では、ＨＤＬレベルの上昇、および／またはＴＧのＨＤＬに対する比率の改善が食後トリグリセリドを減少させる。
【０２１１】
ある特定の実施形態では、肝臓および／または小腸でのＡｐｏＣＩＩＩレベルの低下がＨＤＬのＴＧに対する比率を高める。
【０２１２】
ある特定の実施形態では、前記化合物は非経口的に投与される。さらなる実施形態では、前記非経口投与は皮下投与である。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、前記化合物は第２薬剤と共投与される。ある特定の実施形態では、前記第２薬剤はグルコース低下薬剤である。ある特定の実施形態では、前記第２薬剤はＬＤＬ低下薬剤、ＴＧ低下薬剤またはコレステロール低下薬剤である。
【０２１４】
ある特定の実施形態では、前記化合物と前記第２薬剤が同時に、または逐次的に投与される。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、前記化合物は塩の形態である。さらなる実施形態では、前記化合物は薬学的に許容可能な担体または希釈剤をさらに含む。
【０２１６】
ある特定の実施形態は、動物においてＡｐｏＣＩＩＩレベルを低下させるための医薬の調製におけるＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、動物においてＡｐｏＣＩＩＩレベルを低下させるためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩレベルは肝臓または小腸で低下する。ある特定の実施形態は、ＨＤＬレベルを上昇させることにより、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善することにより心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減するための医薬の調製におけるＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、ＨＤＬレベルを上昇させることにより、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善することにより
心血管系疾患の少なくとも１つの症状を予防、治療、改善、または軽減するためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、動物においてＨＤＬレベルを上昇させるための、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善す
るためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、動物においてＨＤＬレベルを上昇させるための、および／または ＴＧのＨＤＬに対する比率を改善するための医薬の調製のためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態では、前記化合物はＡｐｏＣＩＩＩ核酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも１００％相補的である。ある特定の実施形態では、前記ＡｐｏＣＩＩＩ核酸は配列番号１または配列番号２のどちらかである。ある特定の実施形態では、前記化合物は修飾型オリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の少なくとも８核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。ある特定の実施形態では、前記修飾型オリゴヌクレオチドはＩＳＩＳ３０４８０１（配列番号３）の核酸塩基配列を有する。ある特定の実施形態は、膵炎の動物、または膵炎のリスクがある動物を治療するための医薬の調製におけるＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、膵炎の動物、または膵炎のリスクがある動物を治療するためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、肝臓および／または小腸でＡｐｏＣＩＩＩレベルを低下させるための医薬の調製におけるＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、肝臓および／または小腸でＡｐｏＣＩＩＩレベルを低下させるためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、膵炎を予防するための医薬の調製におけるＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、膵炎を予防するためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。
【０２１７】
ある特定の実施形態は、高トリグリセリド血症の動物の肝臓および／または小腸でＡｐｏＣＩＩＩレベルを低下させるための医薬の調製におけるＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、高トリグリセリド血症の動物の肝臓および／または小腸でＡｐｏＣＩＩＩレベルを低下させるためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、食後トリグリセリドのクリアランスを増強するための医薬の調製におけるＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、食後トリグリセリドのクリアランスを増強するためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、食後トリグリセリドを減少させるための医薬の調製におけるＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。ある特定の実施形態は、食後トリグリセリドを減少させるためのＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物の使用法を提供する。
【０２１８】
アンチセンス化合物
オリゴマー性化合物にはオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド模倣物、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびｓｉＲＮＡが含まれるが、これらに限定されない。オリゴマー性化合物は標的核酸に対して「アンチセンス」であり得るが、それは、水素結合を介した標的核酸へのハイブリダイゼーションを行うことができることを意味する。
【０２１９】
ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物は、５’‐３’方向で記述されると、それが標的とする標的核酸の標的セグメントの逆相補的配列を含む核酸塩基配列を有する。特定のそのような実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’‐３’方向で記述されると、それが標的とする標的核酸の標的セグメントの逆相補的配列を含む核酸塩基配列を有する。
【０２２０】
ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするアンチセンス化合物は長さが１２〜３０ヌクレオチドである。言い換えれば、アンチセンス化合物は１２個から３０個までの連結した核酸塩基である。他の実施形態では、前記アンチセンス化合物は、８〜８０個、１０〜８０個、１２〜５０個、１５〜３０個、１８〜２４個、１９〜２２個、または２０個の連結した核酸塩基からなる修飾型オリゴヌクレオチドを含む。特定のそのような実施形態では、前記アンチセンス化合物は、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個、もしくは８０個の長さの、または上記の値のいずれか２つにより限定される範囲の連結した核酸塩基からなる修飾型
オリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、前記アンチセンス化合物はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０２２１】
ある特定の実施形態では、前記アンチセンス化合物は短縮化または切断化修飾型オリゴヌクレオチドを含む。短縮化または切断化修飾型オリゴヌクレオチドは、５’末端から１個以上のヌクレオシドを欠失させることができ（５’切断）、３’末端から１個以上のヌクレオシドを欠失させることができ（３’切断）、または中央部分から１個以上のヌクレオシドを欠失させることができる。あるいは、例えば、５’末端から１個のヌクレオシドが欠失し、３’末端から１個のヌクレオシドが欠失したアンチセンス化合物において、欠質したヌクレオシドは前記修飾型オリゴヌクレオチド中に散在し得る。
【０２２２】
延長型オリゴヌクレオチドに１個の追加のヌクレオシドが存在するとき、その追加のヌクレオシドは前記オリゴヌクレオチドの中央部分、５’末端または３’末端に位置することができる。２個以上の追加のヌクレオシドが存在するとき、例えば、オリゴヌクレオチドの中央部分、５’末端（５’付加）、または代わりに３’末端（３’付加）に２個のヌクレオシドが付加されているオリゴヌクレオチドでは、その付加されたヌクレオシドは互いに隣接することができる。あるいは、例えば、１個のヌクレオシドが５’末端に付加され、および１つのサブユニットが３’末端に付加されているオリゴヌクレオチドでは、その付加されたヌクレオシドをそのアンチセンス化合物中に散在させることができる。
【０２２３】
活性を損なうことなく、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス化合物の長さを増加もしくは減少することができ、および／または、ミスマッチ塩基を導入することができる。例えば、Ｗｏｏｌｆら (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992) では、卵母細胞注入モデルで標的ＲＮＡの切断を誘導する能力について１３〜２５核酸塩基長の一連のアンチセンスオリゴヌクレオチドが試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドの末端付近に８または１１箇所のミスマッチ塩基を有する２５核酸塩基長のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、ミスマッチを含まないアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも程度が低いものの標的ｍＲＮＡの特異的な切断を行うことができた。同様に、１または３箇所のミスマッチを有するものを含む、１３核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して標的特異的切断が達成された。 
【０２２４】
Ｇａｕｔｓｃｈｉら (J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001) は、ｂｃｌ−２  ｍＲＮＡに対して１００％の相補性を有し、および、ｂｃｌ−ｘＬ  ｍＲＮＡに対して３か所のミスマッチを有するオリゴヌクレオチドがｂｃｌ−２とｂｃｌ−ｘＬの両方の発現をインビトロとインビボで低下させる能力を示した。さらに、このオリゴヌクレオチドは強力な抗腫瘍活性をインビボで示した。
【０２２５】
ＭａｈｅｒおよびＤｏｌｎｉｃｋ (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358,1988) は、ウサギ網状赤血球アッセイでヒトＤＨＦＲの翻訳を停止させる能力について一連の１４核酸塩基のタンデムアンチセンスオリゴヌクレオチド、ならびに、それぞれ、２つまたは３つのそのタンデムアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列から構成される２８核酸塩基および４２核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドを試験した。２８核酸塩基または４２核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも控えめなレベルではあったが、前記の３つの１４核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドのそれぞれだけでも翻訳を阻害することができた。 
【０２２６】
アンチセンス化合物モチーフ
ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、強化された阻害活性、標的核酸への上昇した結合親和性、または生体内核酸分解酵素による分解に対する抵抗性などの特性を前記アンチセンス化合物に付与するための、パターンま
たはモチーフとして配列されている化学的に修飾されたサブユニットを有する。
【０２２７】
キメラアンチセンス化合物は通常、上昇した核酸分解酵素による分解に対する抵抗性、増加した細胞内取込、上昇した標的核酸への結合親和性、および／または上昇した阻害活性を付与するように修飾された少なくとも１つの領域を含有する。キメラアンチセンス化合物の第２領域は、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞性エンドヌクレアーゼＲＮａｓｅ  Ｈの基質として働いても働かなくてもよい。
【０２２８】
ギャップマーモチーフを有するアンチセンス化合物はキメラアンチセンス化合物とみなされる。ギャップマーでは、ＲＮａｓｅ  Ｈ切断を助ける複数のヌクレオチドを有する内部領域はその内部領域のヌクレオシドと化学的に異なる複数のヌクレオチドを有する外部領域の間に位置する。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合、ギャップセグメントは一般にエンドヌクレアーゼ切断の基質として働くが、ウイングセグメントは修飾型ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態では、ギャップマーの領域は、それぞれの別個の領域を含む糖部分の種類が様々である。ギャップマーの領域に差異を生じさせるために使用される糖部分の種類には、いくつかの実施形態では、β−Ｄ−リボヌクレオシド、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−修飾型ヌクレオシド（そのような２’−修飾型ヌクレオシドは、中でも２’−ＭＯＥおよび２’−Ｏ−ＣＨ３を含み得る）、および二環式糖修飾型ヌクレオシド（そのような二環式糖修飾型ヌクレオシドには、ｎ＝１またはｎ＝２である、４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋を有するヌクレオシドが含まれ得る）が含まれ得る。好ましくは、それぞれの別個の領域は均一な糖部分を含む。ウイング−ギャップ−ウイングモチーフはしばしば「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と記述され、それでは「Ｘ」は５’ウイング領域の長さを表し、「Ｙ」はギャップ領域の長さを表し、そして「Ｚ」は３’ウイング領域の長さを表す。本明細書で使用される場合、「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と記述されるギャップマーは、ギャップセグメントが５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントのそれぞれに直ぐに隣接して位置するような配置を有する。したがって、５’ウイングセグメントとギャップセグメントの間、またはギャップセグメントと３’ウイングセグメントの間に介在性ヌクレオチドが存在しない。本明細書に記載されるアンチセンス化合物のいずれもギャップマーモチーフを有し得る。いくつかの実施形態では、ＸとＺが同一であり、他の実施形態では、それらは異なる。好ましい実施形態では、Ｙは８ヌクレオチドと１５ヌクレオチドの間である。Ｘ、ＹまたはＺは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０またはそれ以上のヌクレオチドのいずれかであり得る。したがって、ギャップマーには、例えば、５−１０−５、４−８−４、４−１２−３、４−１２−４、３−１４−３、２−１３−５、２−１６−２、１−１８−１、３−１０−３、２−１０−２、１−１０−１、２−８−２、６−８−６、５−８−５、１−８−１、２−６−２、２−１３−２、１−８−２、２−８−３、３−１０−２、１−１８−２または２−１８−２が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、「ウイングマー」モチーフとしての前記アンチセンス化合物はウイング‐ギャップ配置またはギャップ‐ウイング配置、すなわち、ギャップマー配置について上で説明したようなＸ−Ｙ配置またはＹ−Ｚ配置を有する。したがって、ウイングマー配置には、例えば、５−１０、８−４、４−１２、１２−４、３−１４、１６−２、１８−１、１０−３、２−１０、１−１０、８−２、２−１３または５−１３が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３０】
ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするアンチセンス化合物は５−１０−５ギャップマーモチーフを有する。
【０２３１】
ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするアンチセンス化合物はギャ
ップ拡張モチーフを有する。
【０２３２】
標的核酸、標的領域およびヌクレオチド配列
ＡｐｏＣＩＩＩをコードするヌクレオチド配列には以下のもの：ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿００００４０．１（配列番号１として本明細書に組み込まれる）、およびＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０３３８９９．８から切り出されたヌクレオチド２０２６２６４０から２０２６６６０３まで（配列番号２として本明細書に組み込まれる）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３３】
本明細書に含まれる実施例中の各配列番号で示される配列は糖部分、ヌクレオシド間結合、または核酸塩基に対する任意の修飾と無関係であることが理解される。したがって、配列番号によって限定されるアンチセンス化合物は糖部分、ヌクレオシド間結合または核酸塩基に対して１つ以上の修飾を独立して含み得る。Ｉｓｉｓ番号（Ｉｓｉｓ番号）で記述されるアンチセンス化合物は核酸塩基配列とモチーフの組合せを示す。 
【０２３４】
ある特定の実施形態では、標的領域は標的核酸の構造的に限定された領域である。例えば、標的領域は３’ＵＴＲ、５’ＵＴＲ、エクソン、イントロン、エクソン／イントロンジャンクション、コード領域、翻訳開始領域、翻訳終止領域、または他の限定的な核酸領域を包含し得る。ＡｐｏＣＩＩＩの構造的に限定された領域は、ＮＣＢＩなどの配列データベースから受託番号によって入手することができ、そして、そのような情報が参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、標的領域は標的領域内の１つの標的セグメントの５’末端部位から標的領域内の別の標的セグメントの３’標的部位までの配列を包含することができる。
【０２３５】
ある特定の実施形態では、「標的セグメント」は核酸内の標的領域のより小さい副部分である。例えば、標的セグメントは、１つ以上のアンチセンス化合物が標的とする標的核酸のヌクレオチド配列であり得る。「５’標的部位」は標的セグメントの最も５’側のヌクレオチドを指す。「３’標的部位」は標的セグメントの最も３’側のヌクレオチドを指す。
【０２３６】
標的領域は１つ以上の標的セグメントを含み得る。標的領域内の複数の標的セグメントが重なり合っていてよい。あるいは、それらは重なり合っていなくてよい。ある特定の実施形態では、標的領域内の標的セグメントは約３００を超えないヌクレオチドによって分断されている。ある特定の実施形態では、標的領域内の標的セグメントは標的核酸上の２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、もしくは１０ヌクレオチドの、約２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、もしくは１０ヌクレオチドの、２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、もしくは１０ヌクレオチドを超えない、約２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、もしくは１０ヌクレオチドを超えない数のヌクレオチドによって分断されている、または前述の値のうちのいずれか２つによって限定される範囲にあるヌクレオチドによって分断されている。ある特定の実施形態では、標的領域内の標的セグメントは標的核酸上の５ヌクレオチドを超えないまたは約５ヌクレオチドを超えないヌクレオチドによって分断されている。ある特定の実施形態では、標的セグメントは連続している。本明細書に記載される５’標的部位または３’標的部位のいずれかである出発核酸を有する範囲によって限定される標的範囲が企図されている。 
【０２３７】
標的化には、所望の効果が生じるように、アンチセンス化合物がハイブリダイズする少なくとも１つの標的セグメントの決定が含まれる。ある特定の実施形態では、所望の効果はｍＲＮＡ標的核酸レベルの低下である。ある特定の実施形態では、所望の効果は、標的
核酸によってコードされるタンパク質のレベルの低下または標的核酸と関連する表現型の変化である。
【０２３８】
適切な標的セグメントを、５’ＵＴＲ、コード領域、３’ＵＴＲ、イントロン、エクソン、またはエクソン／イントロンジャンクション内に見つけることができる。開始コドンまたは終止コドンを含む標的セグメントも適切な標的セグメントである。適切な標的セグメントは、開始コドンまたは終止コドンなどの特定の構造的に限定された領域を特異的に排除することができる。
【０２３９】
適切な標的セグメントの決定には、標的核酸の配列のゲノム中の他の配列に対する比較が含まれ得る。例えば、様々な核酸の間で似ている領域を特定するためにＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用することができる。この比較によって、選択された標的核酸以外の配列（すなわち、非標的配列または標的外配列）に非特異的にハイブリダイズし得るアンチセンス化合物配列の選択を防ぐことができる。
【０２４０】
活性標的領域内におけるアンチセンス化合物の（例えば、標的核酸レベルのパーセント減少で定義されるような）活性は様々であり得る。ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡレベルの低下はＡｐｏＣＩＩＩ発現の阻害を示す。ＡｐｏＣＩＩＩタンパク質レベルの低下は標的とするｍＲＮＡの発現の阻害を示し得る。さらに、表現型の変化がＡｐｏＣＩＩＩ発現の阻害を示し得る。例えば、ＨＤＬレベルの上昇、ＬＤＬレベルの低下、またはトリグリセリドレベルの低下は、ＡｐｏＣＩＩＩ発現について測定することができる表現型の変化の中に入る。他の表現型の表出、例えば、心血管系疾患に関連する症状、例えば、狭心症；胸部痛；息切れ；心悸亢進；虚弱；めまい；吐き気；発汗；頻脈；徐脈；不整脈；心房細動；下肢のむくみ；チアノーゼ；疲労；失神；顔面麻痺；四肢の麻痺；筋肉の跛行もしくは痙攣；腹部膨満；または発熱を評価することもできる。
【０２４１】
ハイブリダイゼーション
いくつかの実施形態では、ハイブリダイゼーションが本明細書で開示されるアンチセンス化合物とＡｐｏＣＩＩＩ核酸の間で起こる。ハイブリダイゼーションの最も一般的な機序には核酸分子の相補的な核酸塩基の間の水素結合（例えば、ワトソン‐クリック型水素結合、フーグスティーン型水素結合または逆フーグスティーン型水素結合）が関わる。
【０２４２】
ハイブリダイゼーションは様々な条件下で起こり得る。ストリンジェントな条件は配列依存的であり、ハイブリダイズされる核酸分子の性質と組成によって決定される。 
【０２４３】
配列が標的核酸に特異的にハイブリダイズすることが可能であるかどうか判定する方法は当技術分野で周知である (Sambrooke and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rdEd., 2001) 。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるアンチセンス化合物はＡｐｏＣＩＩＩ核酸に特異的にハイブリダイズすることが可能である。
【０２４４】
相補性
アンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合することができるとき、前記のアンチセンス化合物と標的核酸は互いに相補的であり、所望の効果（例えば、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸などの標的核酸のアンチセンス阻害）が生じる。
【０２４５】
アンチセンス化合物がＡｐｏＣＩＩＩ核酸の１つ以上のセグメントに、介在性セグメントまたは隣接セグメントがハイブリダイゼーション事象に関わらないように、ハイブリダイズすることができる（例えば、ループ構造、ミスマッチ構造またはヘアピン構造）。 
【０２４６】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるアンチセンス化合物、またはそれらの
特定の部分はＡｐｏＣＩＩＩ核酸、その標的領域、標的セグメントまたは特定の部分に対して７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％相補的である、または少なくとも、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％相補的である。日常的方法を用いてアンチセンス化合物の標的核酸とのパーセント相補性を決定することができる。
【０２４７】
例えば、アンチセンス化合物の２０核酸塩基のうちの１８核酸塩基が標的領域に相補的であり、それ故、特異的にハイブリダイズするだろうアンチセンス化合物なら９０パーセントの相補性を表すだろう。この例では、残りの非相補的核酸塩基はクラスターを形成していても相補的な核酸塩基がそれらの間に点在していてもよく、互いに対して、または相補的な核酸塩基に対して連続していなくてよい。したがって、標的核酸と完全に相補的な２つの領域が隣接する４個の非相補的核酸塩基を有する１８核酸塩基長のアンチセンス化合物なら標的核酸と全体で７７．８％の相補性を有し、したがって、本発明の範囲内に収まるだろう。当技術分野において公知のＢＬＡＳＴ（基本的局所アラインメント検索ツール（ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌｓ））プログラムとＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラムを使用して標的核酸の領域を有するアンチセンス化合物のパーセント相補性を日常的に決定することができる (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656) 。例えば、初期設定を用いる、ＳｍｉｔｈとＷａｔｅｒｍａｎのアルゴリズム (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489)を使用するＧａｐプログラム(Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.)によりパーセント相同性、配列同一性または相補性を決定することができる。
【０２４８】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるアンチセンス化合物またはそれらの特定の部分は標的核酸またはその特定の部分に対して完全に相補的である（すなわち、１００％相補的である）。例えば、アンチセンス化合物はＡｐｏＣＩＩＩ核酸、または標的領域、またはその標的セグメントもしくは標的配列に対して完全に相補的であり得る。本明細書で使用される場合、「完全に相補的な」は、アンチセンス化合物の各核酸塩基が標的核酸の対応する核酸塩基と正確に塩基対合することができることを意味する。例えば、２０核酸塩基のアンチセンス化合物は、そのアンチセンス化合物に対して完全に相補的である対応する２０核酸塩基部分が標的核酸に存在する限り、４００核酸塩基長の標的配列に対して完全に相補的である。第１核酸および／または第２核酸の特定の部分への言及において「完全に相補的な」を使用することもできる。例えば、３０核酸塩基のアンチセンス化合物の２０核酸塩基部分が４００核酸塩基長の標的配列に対して「完全に相補的」であり得る。前記標的配列が対応する２０核酸塩基部分を有し、その各核酸塩基が前記のアンチセンス化合物の２０核酸塩基部分に相補的である場合、前記の３０核酸塩基のオリゴヌクレオチドの前記２０核酸塩基部分は前記標的配列に対して完全に相補的である。同時に、前記アンチセンス化合物の残りの１０核酸塩基も前記標的配列に相補的であるかどうかによって、前記の３０核酸塩基のアンチセンス化合物の全体が前記標的配列に対して完全に相補的である場合もあれば、完全には相補的ではない場合もある。 
【０２４９】
非相補的核酸塩基の位置はアンチセンス化合物の５’末端または３’末端であり得る。あるいは、非相補的核酸塩基はアンチセンス化合物の内部にあり得る。２つ以上の非相補的核酸塩基が存在するとき、それらは連続していても（すなわち、連結されている）、連続していなくてもよい。１つの実施形態では、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウイングセグメントに非相補的核酸塩基が位置する。
【０２５０】
ある特定の実施形態では、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０核酸塩基長の、または最大で１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０核酸塩基長のアンチセンス化合物は、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸などの標的核酸またはその特定の部分に対して４個を超えない、３個を超えない、２個を超えない、または１個を超えない非相補的核酸塩基を含む。
【０２５１】
ある特定の実施形態では、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０核酸塩基長の、または最大で１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０核酸塩基長のアンチセンス化合物は、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸などの標的核酸またはその特定の部分に対して６個を超えない、５個を超えない、４個を超えない、３個を超えない、２個を超えない、または１個を超えないの非相補的核酸塩基を含む。
【０２５２】
本明細書で提供されるアンチセンス化合物は、標的核酸のある部分に相補的であるものも包含する。本明細書で使用される場合、「部分」は、標的核酸の領域またはセグメント内にある限定された数の連続する（すなわち、連結した）核酸塩基を指す。「部分」はアンチセンス化合物の限定された数の連続する核酸塩基も指すことができる。ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物は標的セグメントの少なくとも８核酸塩基からなる部分に相補的である。ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物は標的セグメントの少なくとも１０核酸塩基からなる部分に相補的である。ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物は標的セグメントの少なくとも１２核酸塩基からなる部分に相補的である。ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物は標的セグメントの少なくとも１５核酸塩基からなる部分に相補的である。標的セグメントの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、もしくはそれ以上の核酸塩基からなる部分、またはこれらの値のうちのいずれか２つによって限定される範囲の核酸塩基からなる部分に相補的であるアンチセンス化合物も企図されている。
【０２５３】
同一性
本明細書で提供されるアンチセンス化合物は、特定のヌクレオチド配列、配列番号、または特定のＩｓｉｓ番号で表される化合物、またはそれらの部分の配列に対する限定されたパーセント同一性を有することもできる。本明細書で使用される場合、アンチセンス化合物は、それが同一の核酸塩基対合能力を有する場合、本明細書で開示される配列に対して同一である。例えば、開示されるＤＮＡ配列中にチミジンの代わりにウラシルを含有するＲＮＡは、ウラシルとチミジンの両方がアデニンと対合するので、そのＤＮＡ配列に対して同一であるとみなされるだろう。本明細書に記載されるアンチセンス化合物の短縮型および延長型ならびに本明細書で提供されるアンチセンス化合物に対して同一ではない塩基を有する化合物もまた企図されている。同一ではない塩基は互いに隣接していてもアンチセンス化合物中に散在していてもよい。アンチセンス化合物のパーセント同一性は、それが比較される配列に対する同一の塩基対合を有する塩基の数にしたがって計算される。
【０２５４】
ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物またはその部分は、本明細書で開示されるアンチセンス化合物または配列番号またはそれらの部分のうちの１つ以上に少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。
【０２５５】
修飾
ヌクレオシドは塩基と糖の組合せである。ヌクレオシドの核酸塩基（塩基としても知られる）部分は通常は複素環塩基部分である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合したリン酸基をさらに含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むヌクレ
オシドでは、リン酸基は糖の２’、３’または５’ヒドロキシル部分に結合し得る。オリゴヌクレオチドは互いに隣接するヌクレオシドの、直鎖重合性オリゴヌクレオチドを形成するための共有結合により形成される。オリゴヌクレオチド構造内で、リン酸基がオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成すると一般に称される。 
【０２５６】
アンチセンス化合物に対する修飾はヌクレオシド間結合、糖部分または核酸塩基への置換または変更を包含する。修飾型アンチセンス化合物は、多くの場合、例えば、強化された細胞内取込、強化された核酸標的への親和性、核酸分解酵素存在下での上昇した安定性、または上昇した阻害活性などの望ましい特性のため、天然型よりも好まれる。 
【０２５７】
短縮化または切断化アンチセンスオリゴヌクレオチドのその標的核酸への結合親和性を上昇させるために化学的に修飾されたヌクレオシドを使用することもできる。その結果、そのような化学的に修飾されたヌクレオシドを有するより短いアンチセンス化合物を使用して、多くの場合、同等の結果を得ることができる。
【０２５８】
修飾型ヌクレオシド間結合
ＲＮＡおよびＤＮＡの天然のヌクレオシド間結合は３’‐５’ホスホジエステル結合である。１つ以上の修飾型の、すなわち、非天然型のヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物が、強化された細胞内取込、強化された核酸標的への親和性、および核酸分解酵素存在下での上昇した安定性などの望ましい特性のため、天然のヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物よりも頻繁に選択される。
【０２５９】
修飾型ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、リン原子を保持するヌクレオシド間結合ならびにリン原子を持たないヌクレオシド間結合を包含する。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合にはホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホナート、ホスホラミデートおよびホスホロチオエートが含まれるが、これらに限定されない。リン含有結合およびリン非含有結合の調製方法は周知である。
【０２６０】
ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１つ以上の修飾型ヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態では、修飾型ヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合である。ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物の各ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０２６１】
修飾型糖部分
本発明のアンチセンス化合物は、糖基が修飾されている１つ以上のヌクレオシドを任意に含有することができる。そのような糖修飾型ヌクレオシドは強化された核酸分解酵素安定性、上昇した結合親和性、または他のいくつかの有益な生物学的特性をアンチセンス化合物に付与することができる。ある特定の実施形態では、ヌクレオシドは化学的に修飾されたリボフラノース環部分を含む。化学的に修飾されたリボフラノース環の例には置換基の付加（５’ 置換基および２’置換基を含む）、二環式核酸（ＢＮＡ）を形成するための非ジェミナル環原子の架橋、リボシル環酸素原子のＳ、Ｎ（Ｒ）、またはＣ（Ｒ１）（Ｒ２）（Ｒ、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルまたは保護基である）による置換、およびそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。化学的に修飾された糖の例には２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（他の開示された５’，２’−ビス置換ヌクレオシドについては２００８年８月２１日に公開されたＰＣＴ国際特許出願公開第２００８／１０１１５７号を参照のこと）、または２’位にさらなる置換を有するリボシル環酸素原子のＳによる置換（２００５年６月１６日に公開された米国特許出願公開第２００５−０１３０９２３号を参照のこと）、または代わりに、ＢＮＡの５’置換（２００７年１１月２２日に公開されたＰＣＴ国際特許出願公開第２００７／１３４１８１号を参照のこと。そこでは、例えば、５’−メチル基または５’−ビニル基
でＬＮＡが置換されている）が挙げられる。
【０２６２】
修飾型糖部分を有するヌクレオシドの例には、５’−ビニル置換基、５’−メチル置換基（ＲまたはＳ）、４’−Ｓ置換基、２’−Ｆ置換基、２’−ＯＣＨ３置換基、２’−ＯＣＨ２ＣＨ３置換基、２’−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｆ置換基および２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を含むヌクレオシドが挙げられるが、これらに限定されない。２’位の置換基もアリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ‐アリル、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２Ｆ、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、およびＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｌ）−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択され得るが、式中、Ｒｌ、ＲｍおよびＲｎはそれぞれ独立してＨまたは置換型もしくは非置換型のＣ１〜Ｃ１０アルキルである。
【０２６３】
本明細書で使用される場合、「二環式ヌクレオシド」は二環式糖部分を含む修飾型ヌクレオシドを指す。二環式ヌクレオシドの例には、４’位と２’位のリボシル環原子間の架橋を含むヌクレオシドが挙げられるが、これに限定されない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるアンチセンス化合物は４’‐２’架橋を含む１個以上の二環式ヌクレオシドを包含する。そのような４’‐２’架橋二環式ヌクレオシドの例には、式：４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−ＣＨ（ＣＨ３）-−Ｏ−２’および４’−Ｃ-Ｈ（ＣＨ２ＯＣＨ３）-−Ｏ−２’（およびその類似体、２００８年７月１５日に発行された米国特許第７，３９９，８４５号を参照のこと）；４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）-−Ｏ−２’（およびその類似体、２００９年１月８日に公開されたＰＣＴ国際特許出願公開第２００９／００６４７８号を参照のこと）；４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’（およびその類似体、２００８年１２月１１日に公開されたＰＣＴ国際特許出願公開第２００８／１５０７２９号を参照のこと）；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（２００４年９月２日に公開された米国特許出願公開第２００４−０１７１５７０号を参照のこと）；ＲがＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルまたは保護基である４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（２００８年９月２３日に発行された米国特許第７，４２７，６７２号を参照のこと）；４’−ＣＨ２−Ｃ-（Ｈ）（ＣＨ３）−２’ (Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134を参照のこと）；ならびに４’−ＣＨ２−Ｃ-（＝ＣＨ２）−２’（およびその類似体、２００８年１２月８日に公開されたＰＣＴ国際特許出願公開第２００８／１５４４０１号を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６４】
二環式ヌクレオシドに関連するさらなる報告を公開された文献中にも見出すことができる（例えば、Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Elayadi et al., Curr. Opinion Invest. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; and Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; 米国特許第６，２６８，４９０号、同第６，５２５，１９１号、同第６，６７０，４６１号、同第６，７７０，７４８号、同第６，７９４，４９９号、同第７，０３４，１３３号、同第７，０５３，２０７号、同第７，３９９，８４５号、同第７，５４７，６８４号、および同第７，６９６，３４５号、米国特許出願公開第２００８−００３９６１８号、同第２００９−００１２２８１号、米国特許仮出願番号第６０／９８９，５７４号、同第６１／０２６，９９５号、同第６１／０２６，９９８号、同第６１／０５６，５６４号、同第６１／０８６，２３１号、同第６１／０９７，７８７号、および同第６１／０９９，８４４号、ＰＣＴ国際出願国際公開第１９９４／０１４２２６号、同第２００４／１０６３５６号、同第２００５／０２１５７０号、同第２００７／１３４１８１号、同第２００８／１５０７２９号、同第２００８／１５
４４０１号、および同第２００９／００６４７８号を参照のこと。前述の二環式ヌクレオシドのそれぞれは、例えば、α−Ｌ−リボフラノースおよびβ−Ｄ−リボフラノースを含む１つ以上の立体化学的糖配置を有するように調製され得る（国際公開第９９／１４２２６号として１９９９年３月２５日に公開されたＰＣＴ国際特許出願第ＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３号を参照のこと））。
【０２６５】
ある特定の実施形態では、ＢＮＡヌクレオシドの二環式糖部分には、ペントフラノシル糖部分の４’位と２’位の間に少なくとも１つの架橋を有し、そのような架橋が−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−、および−Ｎ（Ｒａ）−から独立して選択される１つの、または２つから４つまでの結合した基を独立して含む化合物であって；式中、
ｘが０、１または２であり；
ｎが１、２、３または４であり；
ＲａとＲｂがそれぞれ独立してＨ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換型Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換型Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換型Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換型Ｃ５〜Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換型複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換型ヘテロアリール、Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、置換型Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換型アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）、またはスルフオキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり；そして
Ｊ１とＪ２がそれぞれ独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換型Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換型Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換型Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換型Ｃ５〜Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換型アシル、複素環ラジカル、置換型複素環ラジカル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、置換型Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、または保護基である、
前記化合物が含まれるが、これらに限定されない。
【０２６６】
ある特定の実施形態では、二環式糖部分の架橋は-［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、-［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、-Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−または-Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−である。ある特定の実施形態では、前記架橋は４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’および４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−であり、式中、各Ｒは独立してＨ、保護基またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０２６７】
ある特定の実施形態では、異性体配置によって二環式ヌクレオシドをさらに限定する。例えば、４’−２’メチレンオキシ架橋を含むヌクレオシドはα‐Ｌ‐配置またはβ‐Ｄ‐配置であり得る。これまでに、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡがアンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれ、アンチセンス活性を示している (Frieden et al., 核酸s Research, 2003, 21, 6365-6372) 。
【０２６８】
ある特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドには、以下に図示されるような（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｇ）メチレン‐チオ（４’−
ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン‐アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ、および（Ｊ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡ
【化１】
2018168184.tif 000002
が含まれるが、これらに限定されず、式中、Ｂｘは塩基部分であり、Ｒは独立してＨ、保護基またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０２６９】
ある特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドは、式Ｉ：
【化２】
2018168184.tif 000003
を有して提供され、式中、
Ｂｘは複素環式塩基部分であり；
−Ｑａ−Ｑｂ−Ｑｃ−は−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒｃ）−、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−または−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−ＣＨ２であり；
ＲｃはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはアミノ保護基であり；そして
ＴａとＴｂはそれぞれ独立してＨ、ヒドロキシル保護基、複合体基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合である。
【０２７０】
ある特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドは式ＩＩ：
【化３】
2018168184.tif 000004
を有して提供され、式中、
Ｂｘは複素環式塩基部分であり；
ＴａとＴｂはそれぞれ独立してＨ、ヒドロキシル保護基、複合体基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり；
ＺａはＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、置換型Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換型Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換型Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アシル、置換型アシル、置換型アミド、チオール、または置換型チオである。
【０２７１】
１つの実施形態では、置換された基のそれぞれは、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪｃ、ＮＪｃＪｄ、ＳＪｃ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）ＪｃおよびＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄから独立して選択される置換基で独立して単一置換または多重置換されており、式中、Ｊｃ、ＪｄおよびＪｅはそれぞれ独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換型Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ＸはＯまたはＮＪｃである。
【０２７２】
ある特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドは式ＩＩＩ：
【化４】
2018168184.tif 000005
を有して提供され、式中、
Ｂｘは複素環式塩基部分であり；
ＴａとＴｂはそれぞれ独立してＨ、ヒドロキシル保護基、複合体基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり；
ＺｂはＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、置換型Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換型Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換型Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換型アシル（Ｃ（＝Ｏ）−）である。
【０２７３】
ある特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドは式ＩＶ：
【化５】
2018168184.tif 000006
を有して提供され、式中、
Ｂｘは複素環式塩基部分であり；
ＴａとＴｂはそれぞれ独立してＨ、ヒドロキシル保護基、複合体基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり；
ＲｄはＣ１〜Ｃ６アルキル、置換型Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換型Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニルまたは置換型Ｃ２〜Ｃ６アルキニルであり； 
ｑａ、ｑｂ、ｑｃおよびｑｄはそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換型Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換型Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換型Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、置換型Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アシル、置換型アシル、Ｃ１〜Ｃ６アミノアルキル、また
は置換型Ｃ１〜Ｃ６アミノアルキルである。 
【０２７４】
ある特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドは式Ｖ：
【化６】
2018168184.tif 000007
を有して提供され、式中、
Ｂｘは複素環式塩基部分であり；
ＴａとＴｂはそれぞれ独立してＨ、ヒドロキシル保護基、複合体基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり；
ｑａ、ｑｂ、ｑｅおよびｑｆはそれぞれ独立して水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換型Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換型Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換型Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、置換型Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋまたはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり；または
ｑｅとｑｆは一緒になって＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり；
ｑｇとｑｈはそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、または置換型Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０２７５】
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ単量体アデニン、シトシン、グアニン、５−メチル−シトシン、チミン、およびウラシルの合成および調製と共にそれらのオリゴマー化および核酸認識特性について記述されている（Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630を参照のこと）。ＢＮＡとその調製も国際公開第９８／３９３５２号および同第９９／１４２２６号に記載されている。
【０２７６】
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡおよび２’−チオ−ＢＮＡの類似体も調製されている (Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222) 。核酸ポリメラーゼの基質としてのオリゴデオキシリボヌクレオチド二重鎖を含むロックドヌクレオシド類似体の調製も記述されている (Wengel et al., WO 99/14226 ) 。さらに、新規の立体構造的に限定された高親和性オリゴヌクレオチド類似体である２’−アミノ−ＢＮＡの合成が当技術分野において記述されている (Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039)。さらに、２’−アミノ−ＢＮＡおよび２’−メチルアミノ−ＢＮＡが調製されており、相補的なＲＮＡ鎖およびＤＮＡ鎖とのそれらの二重鎖の熱安定性がこれまでに報告されている。
【０２７７】
ある特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドは式ＶＩ：
【化７】
2018168184.tif 000008
を有して提供され、式中、
Ｂｘは複素環式塩基部分であり；
ＴａとＴｂはそれぞれ独立してＨ、ヒドロキシル保護基、複合体基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり；
ｑｉ、ｑｊ、ｑｋおよびｑｌはそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換型Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換型Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換型Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシル、置換型Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシル、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋ、またはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり；そして 
ｑｉとｑｊ、またはｑｌとｑｋは一緒になって＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、式中、ｑｇとｑｈはそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、または置換型Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０２７８】
４’−（ＣＨ２）３−２’架橋を有する１つの炭素環二環式ヌクレオチドとアルケニル類似体である架橋４’−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−２’について記述されている (Freier et al., 核酸s Research, 1997, 25(22), 4429-4443 and Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740) 。炭素環二環式ヌクレオシドの合成および調製と共にそれらのオリゴマー化および生化学的試験についても記述されている (Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26), 8362-8379)。
【０２７９】
本明細書で使用される場合、「４’‐２’二環式ヌクレオシド」または「４’‐２’二環式ヌクレオシド」は、フラノース環の２’炭素原子と４’炭素原子を連結する、前記糖環の２つの炭素原子を連結する架橋を含むフラノース環を含む二環式ヌクレオシドを指す。
【０２８０】
本明細書で使用される場合、「単環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分ではない修飾型糖部分を含むヌクレオシドを指す。ある特定の実施形態では、ヌクレオシドの糖部分または糖部分類似体は任意の位置で修飾または置換されていてよい。 
【０２８１】
本明細書で使用される場合、「２’−修飾型糖」は２’位で修飾されたフラノシル糖を意味する。ある特定の実施形態では、そのような修飾は、ハライド、置換型および非置換型アルコキシ、置換型および非置換型チオアルキル、置換型および非置換型アミノアルキル、置換型および非置換型アルキル、置換型および非置換型アリル、ならびに置換型および非置換型アルキニルを含むが、これらに限定されない置換基から選択される置換基を包含する。  ある特定の実施形態では、２’修飾は、ｎとｍが１から約１０である、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＦ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２、を含むが、これらに限定されない置換基から選択される。他の２’−置換基もＣ１〜Ｃ１２アルキル、置換型アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリール、アラルキル、Ｏ−アルカリールまたはＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣ
Ｈ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、複素環アルキル、複素環アルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリ-アルキルアミノ、置換型シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、アンチセンス化合物の薬物動態特性を改善する基、またはアンチセンス化合物の薬力学特性を改善する基、および類似の特性を有する他の置換基から選択され得る。ある特定の実施形態では、修飾型ヌクレオシドは２’−ＭＯＥ側鎖を含む(Baker et al., J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000)。そのような２’−ＭＯＥ置換が、非修飾型ヌクレオシドならびに２’−Ｏ−メチル、Ｏ−プロピルおよびＯ−アミノプロピルなどの他の修飾型ヌクレオシドと比較して結合親和性を向上させたと記載されている。２’−ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドはインビボでの使用に有望な特徴を有する、遺伝子発現のアンチセンス阻害剤であることが示されてもいる (Martin, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann et al., Chimia, 1996, 50, 168-176; Altmann et al., Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637; and Altmann et al., Nucleosides ヌクレオチドs, 1997, 16, 917-926) 。 
【０２８２】
本明細書で使用される場合、「修飾型テトラヒドロピランヌクレオシド」または「修飾型ＴＨＰヌクレオシド」は、通常のヌクレオシドのペントフラノシル残基が置換された６員のテトラヒドロピラン「糖」（糖代用物）を有するヌクレオシドを意味する。修飾型ＴＨＰヌクレオシドには当技術分野においてヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、アニトール核酸（ＡＮＡ）、マニトール核酸（ＭＮＡ） (Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854を参照のこと) 、フルオロＨＮＡ（Ｆ‐ＨＮＡ）と称されるもの、または式ＶＩＩ：
【化８】
2018168184.tif 000009
を有する化合物が含まれるが、これらに限定されず、
式中、式ＶＩＩを有する前記の少なくとも１つのテトラヒドロピランヌクレオシド類似体のそれぞれについて独立して、
Ｂｘは複素環式塩基部分であり；
ＴａとＴｂはそれぞれ独立して、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に結合するヌクレオシド間結合基であり、または、ＴａとＴｂのうちの一方がテトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に結合するヌクレオシド間結合基であり、ＴａとＴｂのうちの他方がＨ、ヒドロキシル保護基、連結した複合体基、または５’末端基もしくは３’末端基であり； 
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６およびｑ７はそれぞれ独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換型Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換型Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換型Ｃ２〜Ｃ６アルキニルであり；そして Ｒ１
とＲ２のそれぞれが、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、置換型または非置換型アルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２およびＣＮから選択され、式中、ＸはＯ、ＳまたはＮＪ１であり、そして、Ｊ１、Ｊ２およびＪ３がそれぞれ独立してＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。
【０２８３】
ある特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６およびｑ７がそれぞれＨである式ＶＩＩの修飾型ＴＨＰヌクレオシドが提供される。ある特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６およびｑ７のうちの少なくとも１つがＨ以外である。ある特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６およびｑ７のうちの少
なくとも１つがメチルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１とＲ２の一方がフルオロである式ＶＩＩのＴＨＰヌクレオシドが提供される。ある特定の実施形態では、Ｒ１はフルオロでＲ２はＨであり、Ｒ１はメトキシでＲ２はＨであり、Ｒ１はメトキシエトキシでＲ２はＨである。
【０２８４】
本明細書で使用される場合、「２’−修飾型」または「２’−置換型」は、２’位にＨまたはＯＨ以外の置換基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。２’−修飾型ヌクレオシドには、糖環の２つの炭素原子を連結する架橋が、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ‐アリル、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、−ＯＣＦ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、式中のＲｍとＲｎがそれぞれ独立してＨ、または置換型もしくは非置換型のＣ１〜Ｃ１０アルキルであるＯ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）またはＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）などの非架橋２’置換基を有するヌクレオシドおよび糖環の２’炭素および別の炭素を連結している二環式ヌクレオチドが含まれるが、これらに限定されない。２’−修飾型ヌクレオシドは、例えば、糖の他の位置に、および／または核酸塩基に他の修飾をさらに含むことができる。
【０２８５】
本明細書で使用される場合、「２’−Ｆ」は２’位にフルオロ基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０２８６】
本明細書で使用される場合、「２’−ＯＭｅ」または「２’−ＯＣＨ３」または「２’−Ｏ−メチル」はそれぞれ糖環の２’位に−ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０２８７】
本明細書で使用される場合、「ＭＯＥ」または「２’−ＭＯＥ」または「２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３」または「２’‐Ｏ‐メトキシエチル」はそれぞれ、糖環の２’位に−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０２８８】
本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」は複数の連結したヌクレオシドを含む化合物を指す。ある特定の実施形態では、複数のヌクレオシドのうちの１個以上が修飾されている。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは１個以上のリボヌクレオシド（ＲＮＡ）および／またはデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）を含む。
【０２８９】
アンチセンス化合物への組み込み用にヌクレオシドを修飾するために使用され得る他の多くの二環式および三環式の糖環代用物系もまた当技術分野において公知である (例えば、総説: Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854を参照のこと) 。そのような環系は様々な追加の置換を受けて活性を増強させることができる。 
【０２９０】
修飾型糖の調製方法は当業者に周知である。
【０２９１】
修飾型糖部分を有するヌクレオチドでは、適切な核酸標的とのハイブリダイゼーションのために核酸塩基部分（天然型、修飾型、またはそれらの組合せ）が維持される。
【０２９２】
ある特定の実施形態では、アンチセンス化合物は、修飾型糖部分を有する１個以上のヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、その修飾型糖部分は２’−ＭＯＥである。ある特定の実施形態では、その２’−ＭＯＥ修飾型ヌクレオチドはギャップマーモチーフ内に配置される。ある特定の実施形態では、その修飾型糖部分は、（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）架橋基を有する二環式ヌクレオシドである。ある特定の実施形態では、その（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）修飾型ヌクレオシドはギャップマーモチーフのウイング中に配置される。ある特定の実施形態では、その修飾型糖部分はｃＥｔである。ある特定の実施形態では、そのｃＥｔ修飾型ヌクレオチドはギャップマーモチーフのウイン
グ中に配置される。
【０２９３】
修飾型核酸塩基
核酸塩基（または塩基）修飾または置換は天然または合成の非修飾型核酸塩基と構造的に区別可能であるが、機能的には互換性がある。天然型核酸塩基と修飾型核酸塩基の両方が水素結合に関与することができる。そのような核酸塩基修飾はアンチセンス化合物に核酸分解酵素への安定性、結合親和性または他のいくつかの有益な生物学的特性を付与することができる。修飾型核酸塩基には、例えば、５‐メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）などの合成核酸塩基および天然核酸塩基が含まれる。５‐メチルシトシン置換を含む特定の核酸塩基置換はアンチセンス化合物の標的核酸への結合親和性の向上に特に有用である。例えば、５‐メチルシトシン置換は０．６〜１．２℃まで核酸二重鎖の安定性を上昇させることが示されている(Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. and Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278)。 
【０２９４】
さらなる修飾型核酸塩基には５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチル誘導体および他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピル誘導体および他のアルキル誘導体、２‐チオウラシル、２−チオチミンおよび２‐チオシトシン、５−ハロウラシルおよび５−ハロシトシン、５−プロピニル（−ＣoＣ−ＣＨ３）ウラシルおよび５−プロピニルシトシンならびにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、６−アゾシトシンおよび６−アゾチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４‐チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルおよび他の８−置換型アデニンおよびグアニン、５−ハロ特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換型ウラシルおよびシトシン、７‐メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニンおよび３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニンが含まれる。 
【０２９５】
複素環塩基部分は、プリン塩基またはピリミジン塩基が他の複素環、例えば、７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジンおよび２−ピリドンで置換されているものを包含することができる。アンチセンス化合物の結合親和性の増強に特に有用な核酸塩基は５−置換型ピリミジン、６−アザピリミジンならびに２アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシンを含むＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換型プリンを包含する。 
【０２９６】
ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするアンチセンス化合物は１個以上の修飾型核酸塩基を含む。ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするギャップ拡張型アンチセンスオリゴヌクレオチドは１個以上の修飾型核酸塩基を含む。ある特定の実施形態では、前記修飾型核酸塩基は５‐メチルシトシンである。ある特定の実施形態では、各シトシンは５‐メチルシトシンである。
【０２９７】
組成物および医薬組成物の製剤方法
医薬組成物の調製または製剤のためにアンチセンスオリゴヌクレオチドを薬学的に許容可能な活性物質または不活性物質と混合することができる。組成物および医薬組成物の製剤方法は、投与経路、疾患の程度または投与される用量を含むが、これらに限定されない多数の基準に依存する。 
【０２９８】
ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、そのアンチセンス化合物を適切な薬学的に許容可能な希釈剤または担体と組み合わせることにより医薬組成物として利用され得る。
【０２９９】
ある特定の実施形態では、「医薬担体」または「添加剤」は薬学的に許容可能な溶媒、懸濁剤または１つ以上の核酸を動物に送達するための他の任意の薬理学的に不活性なベヒクルである。添加剤は液体または固体であり得るし、所与の医薬組成物の核酸およびその他の成分と混合されると、所望の大きさ、硬度などを提供するように、念頭にある計画した投与方法に応じて選択され得る。典型的な医薬担体には結合剤（例えば、α化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）；充填剤（例えば、ラクトースおよび他の糖、マイクロクリスタリンセルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレートまたはリン酸水素カルシウムなど）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸、ステアリン酸金属塩、水素付加植物油、コーンスターチ、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなど）；崩壊剤（例えば、デンプン、グリコール酸デンプンナトリウムなど）；および湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３００】
非経口投与または経口投与に適切な、核酸と有害に反応することが無い薬学的に許容可能な有機添加剤または無機添加剤も、本発明の組成物を製剤するためにも使用され得る。適切な薬学的に許容可能な担体には、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが含まれるが、これらに限定されない。
【０３０１】
薬学的に許容可能な希釈剤にはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。ＰＢＳは非経口的に送達される組成物での使用に適切な希釈剤である。したがって、１つの実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするアンチセンス化合物と薬学的に許容可能な希釈剤を含む医薬組成物が本明細書に記載される方法に使用される。ある特定の実施形態では、薬学的に許容可能な希釈剤はＰＢＳである。ある特定の実施形態では、前記アンチセンス化合物はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０３０２】
アンチセンス化合物を含む医薬組成物は任意の薬学的に許容可能な塩、エステル、またはそのようなエステルの塩、またはヒトを含む動物に投与されると、生物学的に活性がある代謝物もしくはその残基を（直接的または間接的に）提供することができるオリゴヌクレオチドを包含する。したがって、例えば、本開示はまたアンチセンス化合物の薬学的に許容可能な塩、プロドラッグ、そのようなプロドラッグの薬学的に許容可能な塩、および他の生物学的等価物を対象とする。適切な薬学的に許容可能な塩にはナトリウム塩およびカリウム塩が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０３】
プロドラッグは、身体内の内在性核酸分解酵素によって切断されて活性型アンチセンス化合物を形成する、前記アンチセンス化合物の一端または両端での追加のヌクレオシドの組み込みを包含し得る。
【０３０４】
複合体化アンチセンス化合物
アンチセンス化合物は、結果生じるアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞内分布または細胞取込を増強する１つ以上の部分または複合体に共有結合することができる。典型的な複合体基にはコレステロール部分および脂質部分が含まれる。その他の複合体基には炭水化物、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、および色素が含まれる。 
【０３０５】
アンチセンス化合物は、例えば、核酸分解酵素への安定性などの特性を強化するために一般にアンチセンス化合物の一端または両端に結合する１つ以上の安定化基を有するよう
に修飾されることもできる。安定化基に含まれるものはキャップ構造である。これらの末端修飾はアンチセンス化合物をエクソヌクレアーゼによる分解から保護し、細胞内への送達および／または局在化を助けることができる。キャップは５’−末端（５’−キャップ）もしくは３’−末端（３’−キャップ）に存在し得る、または、両端に存在し得る。キャップ構造は当技術分野において周知であり、そして、例えば、逆方向デオキシ脱塩基キャップを包含する。核酸分解酵素への安定性を付与するためにアンチセンス化合物の一端または両端をキャップするために使用され得るさらなる３’安定化基および５’安定化基には、２００３年１月１６日に公開された国際公開第０３／００４６０２号に開示されるものが含まれる。
【０３０６】
細胞培養およびアンチセンス化合物処理
様々な細胞種でＡｐｏＣＩＩＩ核酸またはタンパク質のレベル、活性または発現へのアンチセンス化合物の効果をインビトロで試験することができる。そのような分析に使用される細胞種は供給業者から入手可能であり（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、マナッサス、バージニア州；Ｚｅｎ−Ｂｉｏ、Ｉｎｃ．、リサーチトライアングルパーク、ノースカロライナ州；Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ウォーカーズビル、メリーランド州）、供給業者の使用説明書に従って市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カールスバード、カリフォルニア州）を使用して細胞を培養する。例示的な細胞種にはＨｅｐＧ２細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、Ｈｕｈ７（肝細胞癌）細胞、初代培養肝細胞、Ａ５４９細胞、ＧＭ０４２８１線維芽細胞およびＬＬＣ−ＭＫ２細胞含まれるが、これらに限定されない。
【０３０７】
アンチセンスオリゴヌクレオチドのインビトロ試験 
アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用する細胞の処理方法が本明細書に記載されるが、それは、他のアンチセンス化合物を用いる処理のために適切に改変され得る。
【０３０８】
一般に、培養中に細胞がおよそ６０〜８０％の集密に至ったときにアンチセンスオリゴヌクレオチドでその細胞が処理される。
【０３０９】
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために一般的に使用される１つの試薬にはカチオン性脂質形質移入試薬リポフェクチン（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバード、カリフォルニア州）が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドはＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバード、カリフォルニア州）中のリポフェクチン（登録商標）と混合されて所望の最終濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと通常１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチド当たり２〜１２μｇ／ｍＬの範囲の濃度のリポフェクチン（登録商標）になる。
【０３１０】
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用される別の試薬にはリポフェクタミン２０００（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバード、カリフォルニア州）が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバード、カリフォルニア州）で希釈されたＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１中のリポフェクタミン２０００（登録商標）と混合されて所望の濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと通常１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチド当たり２〜１２μｇ／ｍＬの範囲の濃度のリポフェクタミン（登録商標）になる。 
【０３１１】
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用される別の試薬にはサイトフェクチン（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバード、カリフォルニア州）が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバード、カリフォルニア州）で希釈されたＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１中
のサイトフェクチン（登録商標）と混合されて所望の濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと通常１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチド当たり２〜１２μｇ／ｍＬの範囲の濃度のサイトフェクチン（登録商標）になる。
【０３１２】
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用される別の試薬にはオリゴフェクタミン（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カールスバード、カリフォルニア州）が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カールスバード、カリフォルニア州）で希釈されたＯｐｔｉ−ＭＥＭ（商標）−１中のオリゴフェクタミン（商標）と混合されて所望の濃度のオリゴヌクレオチドと１００ｎＭのオリゴヌクレオチドに対して約０．２〜０．８μＬのオリゴフェクタミン（商標）の比率になる。
【０３１３】
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用される別の試薬にはＦｕＧＥＮＥ６（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐ．、インディアナポリス、インディアナ州）が含まれる。アンチセンスオリゴマー性化合物は１ｍＬの無血清ＲＰＭＩ中のＦｕＧＥＮＥ６と混合されて所望の濃度のオリゴヌクレオチドと１００ｎＭのオリゴマー性化合物に対して１〜４μＬのＦｕＧＥＮＥ６の比率になった。
【０３１４】
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用される別の技術には電気穿孔法が含まれる (Sambrooke and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001)。
【０３１５】
日常的方法によりアンチセンスオリゴヌクレオチドで細胞を処理する。通常、細胞はアンチセンスオリゴヌクレオチド処理後１６〜２４時間で回収され、その時点で標的核酸のＲＮＡまたはタンパク質のレベルを当技術分野において公知の方法および本明細書に記載される方法により測定する (Sambrooke and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001)。一般に、複数回繰り返して処理を実施するときは、その繰り返した処理の平均としてデータが提示される。
【０３１６】
使用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は細胞株毎に異なる。特定の細胞株に最適なアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度を決定する方法は当技術分野において周知である(Sambrooke and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001)。通常、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リポフェクタミン２０００（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバード、カリフォルニア州）、リポフェクチン（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバード、カリフォルニア州）またはサイトフェクチン（商標）（Ｇｅｎｌａｎｔｉｓ、サンディエゴ、カリフォルニア州）を使用して形質移入されるとき、１ｎＭ〜３００ｎＭの範囲の濃度で使用される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、電気穿孔法を使用して形質移入されるとき、６２５〜２０，０００ｎＭの範囲にある、より高い濃度で使用される。
【０３１７】
ＲＮＡの単離
全細胞性ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋  ｍＲＮＡに対してＲＮＡ分析を実行することができる。ＲＮＡ単離の方法は当技術分野において周知である (Sambrooke and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001)。当技術分野において周知の方法を使用して、例えば、製造業者が勧めるプロトコルに従ってＴＲＩＺＯＬ（登録商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバード、カリフォルニア州）を使用してＲＮＡが調製さ
れる。 
【０３１８】
標的のレベルまたは発現の阻害の分析
当技術分野において公知の様々な方法(Sambrooke and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001)でＡｐｏＣＩＩＩ核酸のレベルまたは発現の阻害を測定することができる。例えば、ノーザンブロット分析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、または定量的リアルタイムＰＣＲにより、例えば、標的核酸レベルを定量することができる。全細胞性ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋  ｍＲＮＡに対してＲＮＡ分析を実施することができる。ＲＮＡ単離の方法は当技術分野において周知である。ノーザンブロット分析も当技術分野においては日常的方法である。好都合なことに、カリフォルニア州、フォスターシティのＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社から入手可能な市販のＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００、７７００、または７９００配列検出システムを使用し、製造業者の使用説明書に従って使用して定量的リアルタイムＰＣＲを行うことができる。
【０３１９】
標的ＲＮＡレベルの定量的リアルタイムＰＣＲ分析
製造業者の使用説明書に従ってＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００、７７００、または７９００配列検出システム（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、フォスターシティ、カリフォルニア州）を使用して、定量的リアルタイムＰＣＲによる標的ＲＮＡレベルの定量を達成することができる。定量的リアルタイムＰＣＲの方法は当技術分野において周知である。 
【０３２０】
リアルタイムＰＣＲの前に、単離されたＲＮＡに逆転写（ＲＴ）反応を行い、それが相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を作製し、その後、その相補性ＤＮＡがリアルタイムＰＣＲ増幅の基質として使用される。ＲＴとリアルタイムＰＣＲ反応は同一の試料ウェル中で連続して実行される。ＲＴとリアルタイムＰＣＲの試薬はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カールスバード、カリフォルニア州）から得られる。ＲＴ反応およびリアルタイムＰＣＲ反応は当業者に周知の方法により実施される。
【０３２１】
リアルタイムＰＣＲで得られた遺伝子（またはＲＮＡ）標的の量を、シクロフィリンＡなどの、その発現が一定である遺伝子の発現レベルを使用するか、リボグリーン（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．、カールスバード、カリフォルニア州）を使用して全ＲＮＡを定量することにより、正規化することができる。標的と同時に、試料を多重化して、または別々にリアルタイムＰＣＲを行うことによりシクロフィリンＡの発現を定量する。リボグリーン（登録商標）ＲＮＡ定量試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．、カールスバード、カリフォルニア州）を使用して全ＲＮＡを定量する。リボグリーン（登録商標）によるＲＮＡ定量の方法はＪｏｎｅｓ，  Ｌ．Ｊ．らにおいて教示される (Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374)。リボグリーン（登録商標）の蛍光を測定するためにＣＹＴＯＦＬＵＯＲ（登録商標）４０００機器（ＰＥ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、フォスターシティ、カリフォルニア州）が使用される。
【０３２２】
プローブとプライマーはＡｐｏＣＩＩＩ核酸にハイブリダイズするように設計される。リアルタイムＰＣＲプローブとプライマーを設計する方法は当技術分野において周知であり、ＰＲＩＭＥＲ  ＥＸＰＲＥＳＳ（登録商標）ソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、フォスターシティ、カリフォルニア州）などのソフトウェアの使用がそれに含まれ得る。 
【０３２３】
ＲＴリアルタイムＰＣＲにより得られる遺伝子標的量は、その発現が一定の遺伝子であるＧＡＰＤＨかシクロフィリンＡのどちらかの発現レベルを使用することができるか、ま
たはリボグリーン（商標）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．、ユージーン、オレゴン州）を使用する全ＲＮＡの定量による。標的と同時に、試料を多重化して、または別々にＲＴリアルタイムＰＣＲを行うことによりＧＡＰＤＨまたはシクロフィリンＡの発現を定量することができる。リボグリーン（商標）ＲＮＡ定量試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．、ユージーン、オレゴン州）を使用して全ＲＮＡを定量した。
【０３２４】
タンパク質レベルの分析
ＡｐｏＣＩＩＩのタンパク質レベルを測定することによりＡｐｏＣＩＩＩ核酸のアンチセンス阻害を検定することができる。ＡｐｏＣＩＩＩのタンパク質レベルを、免疫沈降、ウェスタンブロット分析（イムノブロッティング）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、定量的タンパク質アッセイ、タンパク質活性アッセイ（例えば、カスパーゼ活性アッセイ）、免疫組織化学、免疫細胞化学または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）など、当技術分野において周知の様々な方法(Sambrooke and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001)で評価または定量することができる。標的に対する抗体を、抗体のＭＳＲＳカタログ（Ａｅｒｉｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、バーミンガム、ミシシッピ州）などの様々な供給源で特定し、そこから入手することができる、または、当技術分野において周知の従来のモノクローナル抗体作製方法またはポリクローナル抗体作製方法により調製することができる。ヒトとマウスのＡｐｏＣＩＩＩの検出に有用な抗体は市販されている。
【０３２５】
アンチセンス化合物のインビボ試験
アンチセンス化合物、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドを動物で試験して、それらのＡｐｏＣＩＩＩの発現を阻害する能力および表現型の変化をもたらす能力を評価する。正常な動物または実験用疾患モデルで試験を実行することができる。動物への投与のため、リン酸緩衝生理食塩水などの薬学的に許容可能な希釈剤にアンチセンスオリゴヌクレオチドを製剤する。投与には非経口投与経路が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチド投与量と投与頻度の計算は、投与経路および動物の体重などの因子に依存する。アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置期間の後に組織からＲＮＡを単離し、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸の発現の変化を測定する。ＡｐｏＣＩＩＩのタンパク質レベルの変化も測定される。
【０３２６】
ある特定の適応症
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるような１つ以上の医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法が本明細書において提供される。ある特定の実施形態では、前記個体は心血管系疾患または代謝性障害を有する。
【０３２７】
ある特定の実施形態では、前記心血管系疾患は動脈瘤、狭心症、不整脈、アテローム性動脈硬化、脳血管系疾患、冠動脈性心疾患、高血圧、脂質異常症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、脳卒中などである。ある特定の実施形態では、前記脂質異常症はカイロミクロン血症である。
【０３２８】
下記の実施例に示されるように、本明細書に記載されるようなＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物が心血管系疾患の生理学的マーカーまたは表現型を調節することが示された。実験のいくつかでは、前記化合物が未処理の動物と比較してＨＤＬレベルを上昇させ、ＬＤＬレベルおよびトリグリセリドレベルを低下させた。ある特定の実施形態では、ＨＤＬレベルの上昇ならびにＬＤＬレベルおよびトリグリセリドレベルの低下が前記化合物によるＡｐｏＣＩＩＩの阻害と関連付けられた。
【０３２９】
ある特定の実施形態では、心血管系疾患の生理学的マーカーは定量可能であり得る。例えば、ＨＤＬレベルは、例えば、標準的な脂質検査によって測定および定量され得る。そのようなマーカーについて、ある特定の実施形態では、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５もしくは９９％、またはこれらの値のいずれか２つによって限定される範囲だけ前記マーカーが増加し得る。
【０３３０】
また、それを必要とする対象において心血管系疾患と関連する症状を予防、治療、または改善する方法も本明細書において提供される。ある特定の実施形態では、心血管系疾患に関連する症状の発症速度を低下させる方法が提供される。ある特定の実施形態では、心血管系疾患に関連する症状の重症度を軽減させる方法が提供される。そのような実施形態では、前記方法はＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とした化合物の治療上有効量を、それを必要とする個体に投与することを含む。
【０３３１】
心血管系疾患は多数の身体上の症状を特徴とする。心血管系疾患に関連すると当業者に知られている任意の症状を上で説明した方法において上で示したように予防、治療、改善、またはそうでない場合は、調節することができる。ある特定の実施形態では、前記症状は狭心症、胸部痛、息切れ、心悸亢進、虚弱、めまい、吐き気、発汗、頻脈、徐脈、不整脈、心房細動、下肢のむくみ、チアノーゼ、疲労、失神、顔面麻痺、四肢の麻痺、筋肉の跛行もしくは痙攣、腹部膨満、または発熱のうちのいずれかであり得るが、これらに限定されない。
【０３３２】
ある特定の実施形態では、前記症状は狭心症である。ある特定の実施形態では、前記症状は胸部痛である。ある特定の実施形態では、前記症状は息切れである。ある特定の実施形態では、前記症状は心悸亢進である。ある特定の実施形態では、前記症状は虚弱である。ある特定の実施形態では、前記症状はめまいである。ある特定の実施形態では、前記症状は吐き気である。ある特定の実施形態では、前記症状は発汗である。ある特定の実施形態では、前記症状は頻脈である。ある特定の実施形態では、前記症状は徐脈である。ある特定の実施形態では、前記症状は不整脈である。ある特定の実施形態では、前記症状は心房細動である。ある特定の実施形態では、前記症状は下肢のむくみである。ある特定の実施形態では、前記症状はチアノーゼである。ある特定の実施形態では、前記症状は疲労である。ある特定の実施形態では、前記症状は失神である。ある特定の実施形態では、前記症状は顔面麻痺である。ある特定の実施形態では、前記症状は四肢の麻痺である。ある特定の実施形態では、前記症状は筋肉の跛行または痙攣である。ある特定の実施形態では、前記症状は腹部膨満である。ある特定の実施形態では、前記症状は障害性の短期の発熱である。
【０３３３】
ある特定の実施形態では、前記代謝性障害には高血糖症、前糖尿病、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、肥満、インスリン抵抗性、メタボリックシンドロームおよび糖尿病性脂質異常症が含まれるが、これらに限定されない。
【０３３４】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるようなＡｐｏＣＩＩＩを標的とした化合物は代謝性障害の生理学的マーカーまたは表現型を調節する。ある特定の実施形態では、代謝性障害の生理学的マーカーは定量可能であり得る。例えば、当技術分野において公知の標準的な検査によりグルコースレベルまたはインスリン抵抗性を測定および定量することができる。そのようなマーカーについて、ある特定の実施形態では、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５もしくは９９％、またはこれらの値のいずれか２つによって限定される範囲だけ前記マーカーが減少し得る。別の例では、当技術分野において公知の標準的な検査によりインスリン感受性またはＨＤＬレベルを測定および定量することができる。そ
のようなマーカーについて、ある特定の実施形態では、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５もしくは９９％、またはこれらの値のいずれか２つによって限定される範囲だけ前記マーカーが増加し得る。
【０３３５】
また、それを必要とする対象において代謝性障害に関連する症状を予防、治療、または改善する方法も本明細書において提供される。ある特定の実施形態では、代謝性障害に関連する症状の発症速度を低下させる方法が提供される。ある特定の実施形態では、代謝性障害に関連する症状の重症度を軽減させる方法が提供される。そのような実施形態では、前記方法はＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とした化合物の治療上有効量を、それを必要とする個体に投与することを含む。
【０３３６】
代謝性障害は多数の身体上の症状を特徴とする。代謝性障害に関連すると当業者に知られているいかなる症状も、上で説明した方法において上で示したように予防、治療、改善、または別の様態で、調節することができる。ある特定の実施形態では、前記症状は大量の尿の産生（多尿症）、多渇と水分摂取の増加（多飲症）、霞視、原因不明の体重減少および活力の欠如のうちのいずれかであり得るが、これらに限定されない。
【０３３７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるような１つ以上の医薬組成物の治療上有効量を投与することを含む、個体を治療する方法が提供される。ある特定の実施形態では、前記個体は心血管系疾患を有する。ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするアンチセンス化合物の治療上有効量の投与には、前記アンチセンス化合物の投与に対する個体の反応を測定するために、ＡｐｏＣＩＩＩレベルまたは心血管系疾患、糖尿病、もしくはＡｐｏＣＩＩＩの発現と関連する他の疾病のマーカーのモニタリングが伴う。医師は、前記アンチセンス化合物の投与に対する個体の応答を用いて、治療介入の程度と期間を決定する。
【０３３８】
ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与によりＡｐｏＣＩＩＩ発現が少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５もしくは９９％、またはこれらの値のいずれか２つによって限定される範囲だけ低下することになる。ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ発現が５０ｍｇ／Ｌ以下、６０ｍｇ／Ｌ以下、７０ｍｇ／Ｌ以下、８０ｍｇ／Ｌ以下、９０ｍｇ／Ｌ以下、１００ｍｇ／Ｌ以下、１１０ｍｇ／Ｌ以下、１２０ｍｇ／Ｌ以下、１３０ｍｇ／Ｌ以下、１４０ｍｇ／Ｌ以下、１５０ｍｇ／Ｌ以下、１６０ｍｇ／Ｌ以下、１７０ｍｇ／Ｌ以下、１８０ｍｇ／Ｌ以下、１９０ｍｇ／Ｌ以下、または２００ｍｇ／Ｌ以下まで低下する。
【０３３９】
ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与によりＨＤＬレベルが少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５もしくは９９％、またはこれらの値のいずれか２つによって限定される範囲だけ上昇することになる。
【０３４０】
ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩ核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与により、ＴＧ（食後または空腹時）レベルが少なくとも約１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％、またはこれらの値のいずれか２つによって限定される範囲だけ低下することになる。ある特定の実施形態では、ＴＧ（食後または空腹時）が１００ｍｇ／ｄＬ以下、１１０ｍｇ／ｄＬ以下、１２０ｍｇ／ｄＬ以下、１３０ｍｇ／ｄＬ以下、１４０ｍｇ／ｄＬ以下、１５０ｍｇ／ｄＬ以下、１６０ｍｇ／ｄＬ以下、１７０ｍｇ／ｄＬ以下、１８０ｍｇ／ｄＬ以下、１９０ｍｇ／ｄＬ以下、２００ｍｇ／
ｄＬ以下、２１０ｍｇ／ｄＬ以下、２２０ｍｇ／ｄＬ以下、２３０ｍｇ／ｄＬ以下、２４０ｍｇ／ｄＬ以下、２５０ｍｇ／ｄＬ以下、２６０ｍｇ／ｄＬ以下、２７０ｍｇ／ｄＬ以下、２８０ｍｇ／ｄＬ以下、２９０ｍｇ／ｄＬ以下、３００ｍｇ／ｄＬ以下、３５０ｍｇ／ｄＬ以下、４００ｍｇ／ｄＬ以下、４５０ｍｇ／ｄＬ以下、５００ｍｇ／ｄＬ以下、５５０ｍｇ／ｄＬ以下、６００ｍｇ／ｄＬ以下、６５０ｍｇ／ｄＬ以下、７００ｍｇ／ｄＬ以下、７５０ｍｇ／ｄＬ以下、８００ｍｇ／ｄＬ以下、８５０ｍｇ／ｄＬ以下、９００ｍｇ／ｄＬ以下、９５０ｍｇ／ｄＬ以下、１０００ｍｇ／ｄＬ以下、１１００ｍｇ／ｄＬ以下、１２００ｍｇ／ｄＬ以下、１３００ｍｇ／ｄＬ以下、１４００ｍｇ／ｄＬ以下、１５００ｍｇ／ｄＬ以下、１６００ｍｇ／ｄＬ以下、１７００ｍｇ／ｄＬ以下、１８００ｍｇ／ｄＬ以下、または１９００ｍｇ／ｄＬ以下まで低下する。
【０３４１】
ある特定の実施形態では、ＡｐｏＣＩＩＩを標的としたアンチセンス化合物を含む医薬組成物は、心血管系疾患を患う患者、または心血管系疾患に罹りやすい患者の治療用医薬の調製に使用される。
【０３４２】
投与
本発明の化合物または医薬組成物は、局所的治療が望ましいか、または全身的治療が望ましいかということ、および治療される領域に応じて多数の方法で投与され得る。投与は経口投与または非経口投与であり得る。
【０３４３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるような化合物および組成物は非経口的に投与される。非経口投与には静脈内、動脈内、皮下、腹腔内または筋肉内の注射または点滴が含まれる。
【０３４４】
ある特定の実施形態では、非経口投与は点滴による。点滴は長期的、または逐次的、または短期的、または断続的であり得る。ある特定の実施形態では、点滴する医薬はポンプで送達される。ある特定の実施形態では、前記点滴は静脈内点滴である。
【０３４５】
ある特定の実施形態では、非経口投与は注射による。前記注射は注射筒またはポンプを用いて行われ得る。ある特定の実施形態では、前記注射はボーラス注射である。ある特定の実施形態では、前記注射は組織または器官に直接投与される。ある特定の実施形態では、非経口投与は皮下投与である。
【０３４６】
ある特定の実施形態では、非経口投与用の製剤は、緩衝剤、希釈剤ならびに浸透増強剤、担体化合物および他の薬学的に許容可能な担体または添加剤などの、しかし、これらに限定されない他の適切な添加物を含有することもできる無菌水溶液を含み得る。
【０３４７】
ある特定の実施形態では、本発明の化合物または組成物の経口投与用製剤には医薬担体、添加剤、粉剤または顆粒剤、マイクロ粒子、ナノ粒子、水または非水性媒体中の懸濁液または溶液、カプセル剤、ゲルカプセル剤、サシェ、錠剤またはミニ錠剤が含まれ得るが、これらに限定されない。増粘剤、着香剤、希釈剤、乳化剤、分散補助剤または結合剤が望ましい場合がある。ある特定の実施形態では、経口用製剤は、本発明の化合物が１つ以上の浸透増強剤、界面活性剤、およびキレート剤と併せて加えられたものである。
【０３４８】
投薬
ある特定の実施形態では、所望の効果を達成するように選択することができる投与計画（例えば、用量、投薬頻度、および期間）に従って医薬組成物が投与される。所望の効果は、例えば、ＡｐｏＣＩＩＩの減少、またはＡｐｏＣＩＩＩと関連する疾患もしくは健康状態の予防、軽減、改善、もしくはその進行の遅延化であり得る。
【０３４９】
ある特定の実施形態では、対象中で医薬組成物を所望の濃度にするために投与計画の可変項目を調節する。投与計画に関して使用される場合、「医薬組成物の濃度」は化合物、オリゴヌクレオチド、または医薬組成物の有効成分を指し得る。例えば、ある特定の実施形態では、所望の効果を達成するために十分な量の医薬組成物の組織中濃度または血漿中濃度をもたらすために用量および投薬頻度を調節する。
【０３５０】
投薬は、治療される疾患状態の重症度および反応性に依存し、治療期間は数日から数か月、または治癒がもたらされるまで、または疾患状態の消失が達成されるまで続く。投薬は薬品の力価および代謝にも左右される。ある特定の実施形態では、投薬量は体重１ｋｇ当たり０．０１μｇから１００ｍｇまでであり、または０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの投薬範囲内であり、そして、それは１日、１週間、１か月、または１年に１回以上の頻度で、または２〜２０年に１回の頻度でも投与され得る。治療の成功後に疾患状態の再発を防ぐために、体重１ｋｇ当たり０．０１μｇから１００ｍｇまでの範囲または０．００１ｍｇから１０００ｍｇまでの投薬範囲の維持用量のオリゴヌクレオチドが１日に１回以上〜２０年に１回投与される維持療法を患者に受けさせることが望ましい場合がある。
【０３５１】
特定の併用療法
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物を含む第１薬剤を１つ以上の第２薬剤と共投与する。ある特定の実施形態では、そのような第２薬剤は、本明細書に記載される第１薬剤が治療するものと同じ疾患、障害、または健康状態を治療するように企図されている。ある特定の実施形態では、そのような第２薬剤は、本明細書に記載される第１薬剤が治療するものと異なる疾患、障害、または健康状態を治療するように企図されている。ある特定の実施形態では、第１薬剤は、第２薬剤の望まれない副作用を治療するように企図されている。ある特定の実施形態では、第２薬剤は、第１薬剤の望まれない作用を治療するように第１薬剤と共投与される。ある特定の実施形態では、そのような第２薬剤は、本明細書に記載されるような１つ以上の医薬組成物の望まれない副作用を治療するように企図されている。ある特定の実施形態では、第２薬剤は、複合的効果をもたらすために第１薬剤と共投与される。ある特定の実施形態では、第２薬剤は、相乗的効果をもたらすために第１薬剤と共投与される。ある特定の実施形態では、第１薬剤と第２薬剤の共投与は、前記薬剤が独立した治療法として投与される場合に治療効果または予防効果を達成するために必要とされるであろう投薬量よりも少ない投薬量の使用を可能とする。
【０３５２】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される１つ以上の組成物と１つ以上の他の医薬が同時点で投与される。ある特定の実施形態では、本発明の１つ以上の組成物と１つ以上の他の医薬が異なる時点で投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される１つ以上の組成物と１つ以上の他の医薬が単一の製剤中に一緒に調製される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される１つ以上の組成物と１つ以上の他の医薬は別々に調製される。
【０３５３】
ある特定の実施形態では、第２薬剤にはＡｐｏＣＩＩＩ低下薬剤、コレステロール低下薬剤、非ＨＤＬ脂質（例えば、ＬＤＬ）低下薬剤、ＨＤＬ上昇薬剤、魚油、ナイアシン、フィブラート、スタチン、ＤＣＣＲ（ジアゾキシドの塩）、グルコース低下薬剤および／または抗糖尿病薬が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、最大忍容用量の第２薬剤と組み合わせて第１薬剤が投与される。ある特定の実施形態では、最大忍容用量の第２薬剤へ反応することができない対象に第１薬剤が投与される。
【０３５４】
ＡｐｏＣＩＩＩ低下薬剤の例には第１薬剤と異なるＡｐｏＣＩＩＩアンチセンスオリゴヌクレオチド、ナイアシンまたはＡｐｏＢアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。
【０３５５】
グルコース低下薬剤および／または抗糖尿病薬の例には治療のための生活習慣の変更、ＰＰＡＲアゴニスト、ジペプチジルペプチダーゼ（ＩＶ）阻害剤、ＧＬＰ‐１類似体、インスリンまたはインスリン類似体、インスリン分泌促進物質、ＳＧＬＴ２阻害剤、ヒトアミリン類似体、ビグアニド、α‐グルコシダーゼ阻害剤、メトホルミン、スルホニル尿素、ロシグリタゾン、メグリチニド、チアゾリジンジオン、α‐グルコシダーゼ阻害剤などが挙げられるが、これらに限定されない。スルホニル尿素はアセトヘキサミド、クロルプロパミド、トルブタミド、トラザミド、グリメピリド、グリピジド、グリブリドまたはグリクラジドであり得る。メグリチニドはナテグリニドまたはレパグリニドであり得る。チアゾリジンジオンはピオグリタゾンまたはロシグリタゾンであり得る。α‐グルコシダーゼはアカルボースまたはミグリトールであり得る。
【０３５６】
コレステロール低下治療または脂質低下治療には治療のための生活習慣の変更、スタチン、胆汁酸分泌促進物質、ニコチン酸およびフィブラートが含まれ得るが、これらに限定されない。スタチンはアトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンなどであり得る。胆汁酸分泌促進物質はコレセベラム、コレスチラミン、コレスチポールなどであり得る。フィブラートはゲムフィブロジル、フェノフィブラート、クロフィブラートなどであり得る。
【０３５７】
ＨＤＬ上昇薬剤にはコレステリルエステル転移タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害薬（例えば、トルセトラピブ）、ペルオキシソーム増殖活性化受容体アゴニスト、Ａｐｏ‐Ａ１、ピオグリタゾンなどが含まれる。
【０３５８】
ある特定の治療集団
高ＴＧレベルを有する特定の対象は心血管系疾患および代謝性疾患のリスクが高い。高ＴＧ（例えば、高トリグリセリド血症）を有する多くの対象では、現行の治療はそれらのＴＧレベルを安全なレベルまで低下させることができない。ＡｐｏＣＩＩＩはＴＧ代謝に重要な役割を果たし、それは心血管系疾患の独立したリスクファクターである。ＡｐｏＣＩＩＩ阻害が、本明細書において示されるように、ＴＧレベルを著しく低下させるが、それにより心血管系疾患もしくは代謝性疾患、またはそのリスクを改善することができる。
【０３５９】
ボーダーラインの高ＴＧレベル（１５０〜１９９ｍｇ／ｄＬ）は一般集団に通常見出され、それはメタボリックシンドローム／インスリン抵抗性状態の一般的な要素である。２００ｍｇ／ｄＬ以上の高血漿ＴＧレベルは心血管系疾患のリスク上昇と関連する一般的な臨床上の形質である (Hegele et al., Hum Mol Genet 2009, 18:4189-4194; Hegele and Pollex, Mol Cell Biochem, 2009, 326:35-43) 。非常に高いＴＧレベル（５００ｍｇ／ｄＬ以上２０００ｍｇ／ｄＬ以下）はほとんどの場合カイロミクロンレベルの上昇とも関連付けられており、それには急性膵炎のリスク上昇が伴う。
【０３６０】
ある特定の実施形態では、１００〜２００ｍｇ／ｄＬ、１００〜３００ｍｇ／ｄＬ、１００〜４００ｍｇ／ｄＬ、１００〜５００ｍｇ／ｄＬ、２００〜５００ｍｇ／ｄＬ、３００〜５００ｍｇ／ｄＬ、４００〜５００ｍｇ／ｄＬ、５００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、６００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、７００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、８００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、９００〜１０００ｍｇ／ｄＬ、５００〜１５００ｍｇ／ｄＬ、１０００〜１５００ｍｇ／ｄＬ、１００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１５０〜２０００ｍｇ／ｄＬ、２００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、３００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、４００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、５００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、６００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、７００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、８００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、９００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１０００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１１００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１２００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１３００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、１４００〜２０００ｍｇ／ｄＬ、または１５００〜２０００ｍｇ／ｄＬの間にあるＴＧレベルを有する対象を治療するために、本明細書において開示される化合物、組成物および方法を使用する。ある特定の実施形態では、１００ｍｇ／ｄＬ以上、１１０ｍｇ／ｄＬ以上、１２０ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、１４０ｍｇ／ｄＬ以上、１５０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、１７０ｍｇ／ｄＬ以上、１８０ｍｇ／ｄＬ以上、１９０ｍｇ／ｄＬ以上、２００ｍｇ／ｄＬ以上、３００ｍｇ／ｄＬ以上、４００ｍｇ／ｄＬ以上、５００ｍｇ／ｄＬ以上、６００ｍｇ／ｄＬ以上、７００ｍｇ／ｄＬ以上、８００ｍｇ／ｄＬ以上、９００ｍｇ／ｄＬ以上、１０００ｍｇ／ｄＬ以上、１１００ｍｇ／ｄＬ以上、１２００ｍｇ／ｄＬ以上、１３００ｍｇ／ｄＬ以上、１４００ｍｇ／ｄＬ以上、１５００ｍｇ／ｄＬ以上、１６００ｍｇ／ｄＬ以上、１７００ｍｇ／ｄＬ以上、１８００ｍｇ／ｄＬ以上、１９００ｍｇ／ｄＬ以上、２０００ｍｇ／ｄＬ以上、２１００ｍｇ／ｄＬ以上、２２００ｍｇ／ｄＬ以上、２３００ｍｇ／ｄＬ以上、２４００ｍｇ／ｄＬ以上、または２５００ｍｇ／ｄＬ以上のＴＧレベルを有する対象に対して、本明細書において開示される化合物を使用する治療の必要性が示される。
【０３６１】
フレデリクソン分類システムまたはＴｒｅｍｂｌａｙによって記載される分類システム (Tremblay et al., J Clin Lipidol, 2011, 5:37-44)によっていくつかの型の高トリグ
リセリド血症を特徴づけることができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物、組成物および方法はフレデリクソンＩＩ型、ＩＶ型もしくはＶ型の高トリグリセリド血症の患者、またはそのリスクがある患者の治療に有用である。
【０３６２】
フレデリクソンＩＩｂ型（家族性複合型高リポタンパク質血症としても知られる）は、ＬＤＬ‐ＣとＶＬＤＬの上昇を原因とする複合型の高脂血症（高コレステロールレベルおよび高ＴＧレベル）である。高ＶＬＤＬレベルは、ＴＧ、アセチルＣｏＡを含む基質の過剰生産とＢ‐１００合成の増大を原因とする。それらはＬＤＬのクリアランスの低下によっても引き起こされ得る。集団内の有病率は約１０％である。
【０３６３】
フレデリクソンＩＶ型（家族性高トリグリセリド血症としても知られる）は集団中に約１％の頻度で生じる常染色体優性健康状態である。肝臓によるＶＬＤＬの過剰生産またはヘテロ接合性ＬＰＬ欠損の結果としてＴＧレベルが上昇するが、それはほとんど常に１０００ｍｇ／ｄＬ未満である。血清中コレステロールレベルは通常正常な限度内にある。その障害はヘテロ接合性であり、その表現型は環境要因、特に、炭水化物とエタノールの消費に大いに影響される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物、組成物および方法は、２００ｍｇ／ｄＬ以上のＴＧレベルおよびヘテロ接合性ＬＰＬ欠損またはＶＬＤＬの過剰生産を有する対象の治療に有用である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物、組成物および方法は、５００ｍｇ／ｄＬ以上のＴＧレベルおよびヘテロ接合性ＬＰＬ欠損またはＶＬＤＬの過剰生産を有する対象の治療に有用である。
【０３６４】
「フレデリクソンＶ型」は高ＶＬＤＬと高カイロミクロンを有する。それは、少なくとも２０％のＬＰＬ活性（すなわち、部分的ＬＰＬ欠損症）と関連付けられている機能欠失型ＬＰＬ遺伝子異型の保因者を特徴とする。これらの対象は、カイロミクロンとＶＬＤＬが原因で、乳状の血漿と重症の高トリグリセリド血症を示す。ＴＧレベルは常に１０００ｍｇ／ｄＬを越え、総コレステロールレベルは常に高い。ＬＤＬ‐Ｃレベルは通常低い。それは急性膵炎、耐糖能障害および高尿酸血症のリスク上昇とも関連がある。症状は一般に成人（３５歳よりも上）に現れ、有病率は比較的に低いが、それはホモ接合性ＬＰＬ欠損患者または複合ヘテロ接合性ＬＰＬ欠損患者よりもずっと一般的である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物、組成物および方法は、１０００ｍｇ／ｄＬ以上のＴＧを有する対象の治療に有用である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物、組成物および方法は、対象の高ＴＧレベルと関連する膵炎を有する対象、またはその膵炎のリスクがある対象の治療に有用である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物、組成物および方法は、対象の高ＴＧレベルと関連する心血管系疾患もしくは代謝性疾患を有する対象、またはその心血管系疾患もしくは代謝性疾患のリス
クがある対象の治療に有用である。ある特定の実施形態では、前記心血管系疾患は動脈瘤、狭心症、不整脈、アテローム性動脈硬化、脳血管系疾患、冠動脈性心疾患、高血圧、脂質異常症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、脳卒中などである。ある特定の実施形態では、前記脂質異常症はカイロミクロン血症である。ある特定の実施形態では、前記の代謝性疾患または障害には高血糖症、前糖尿病、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、肥満、インスリン抵抗性、メタボリックシンドロームおよび糖尿病性脂質異常症が含まれるが、これらに限定されない。
【０３６５】
ある特定の実施形態では、本明細書において開示される化合物を使用する治療は、ＡｐｏＣＩＩＩレベルおよび／またはトリグリセリドレベルを上昇させる遺伝的欠陥を有するヒト動物に対して適応される。ある特定の実施形態では、前記遺伝的欠陥は、ＡｐｏＣＩＩＩ発現を上昇させる対立遺伝子の異型または多型である。ある特定の実施形態では、前記多型は（位置７４の）ＴからＡへの塩基転移、（位置−６４１の）ＣからＡへの塩基転移、（位置−６３０の）ＧからＡへの塩基転移、（位置−６２５の）Ｔの欠失、（位置−４８２の）ＣからＴへの塩基転移、（位置−４５５の）ＴからＣへの塩基転移、（位置１１００の）ＣからＴへの塩基転移、（位置３１７５の）ＣからＧへの塩基転移、（位置３２０６の）ＴからＧへの塩基転移、（位置３２３８の）ＣからＧへの塩基転移などである。ある特定の実施形態では、前記遺伝的欠陥はヘテロ接合性ＬＰＬ欠損である。
【０３６６】
ある特定の実施形態では、本明細書において開示される化合物を使用する治療は、上昇したＡｐｏＣＩＩＩレベルを有するヒト動物に対して適応される。ある特定の実施形態では、前記の上昇したＡｐｏＣＩＩＩレベルは５０ｍｇ／Ｌ以上、６０ｍｇ／Ｌ以上、７０ｍｇ／Ｌ以上、８０ｍｇ／Ｌ以上、９０ｍｇ／Ｌ以上、１００ｍｇ／Ｌ以上、１１０ｍｇ／Ｌ以上、１２０ｍｇ／Ｌ以上、１３０ｍｇ／Ｌ以上、１４０ｍｇ／Ｌ以上、１５０ｍｇ／Ｌ以上、１６０ｍｇ／Ｌ以上、１７０ｍｇ／Ｌ以上、１８０ｍｇ／Ｌ以上、１９０ｍｇ／Ｌ以上、２００ｍｇ／Ｌ以上、３００ｍｇ／Ｌ以上、４００ｍｇ／Ｌ以上、または５００ｍｇ／Ｌ以上である。
【実施例】
【０３６７】
非限定的な開示および参照による組み込み
本明細書に記載される特定の化合物、組成物および方法は特定の実施形態に従って特定的に記述されているが、以下の実施例は本明細書に記載される化合物の例示のみのために用いられ、それらがその化合物を限定することは意図されていない。本願で引用される参照文献の各々の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３６８】
実施例１：ｈｕＡｐｏＣＩＩＩ遺伝子導入マウスでのヒトＡｐｏＣＩＩＩのインビボアンチセンス阻害の効果
本試験で利用されたヒトＡｐｏＣＩＩＩ導入遺伝子を有する遺伝子導入マウスはｈｕＡｐｏＣＩＩＩ遺伝子導入Ｆ１ハイブリッド（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カリフォルニア州）の子孫とＣ５７ＢＬ／６マウスであった。配列番号１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿００００４０．１）の部位５０８に開始部位を有し、配列番号２（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０３３８９９．８から切り出されたヌクレオチド２０２６３０４０から２０２６６２０３まで）の部位３１３９に開始部位を有し、配列５’−ＡＧＣＴＴＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＴＴＴＡＴ−３’（配列番号３）と５−１０−５ＭＯＥギャップマーモチーフを有するＩＳＩＳ３０４８０１（以前に、米国特許第７，５９８，２２７号において開示された）を本検定に利用した。５−１０−５ＭＯＥギャップマーモチーフを有し、配列番号１または配列番号２の別の領域を標的とする別のＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドである「化合物Ｘ」も本検定に含めた。５−１０−５ＭＯＥギャップマーモチーフを有し、げっ歯類ＡｐｏＣＩＩＩ配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０２３１１４．３；配列番号５）を標的とする別のＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチド
である「化合物Ｙ」も本検定に含めた。
【０３６９】
処置
ヒトＡｐｏＣＩＩＩ遺伝子導入マウスを１２時間明暗周期で飼育し、Ｔｅｋｌａｄ実験用飼料を自由に食べさせた。実験開始前に実験施設で動物を少なくとも７日間順応させた。ＰＢＳ中にアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過することにより滅菌した。注射のために、オリゴヌクレオチドを０．９％のＰＢＳに溶解した。
【０３７０】
オスマウスとメスマウスを別々に検定した。５匹ずつのマウスからなる３つの処置群にオスマウスを分けた。２つのそのような群は３７．５ｍｇ／ｋｇの用量でＩＳＩＳ３０４８０１または化合物Ｘの皮下注射を週２回２週間受けた。１群のマウスはＰＢＳの皮下注射を週２回２週間受けた。メスマウスを４〜５匹ずつのマウスからなる４つの処置群に分けた。３つのそのような群は３７．５ｍｇ／ｋｇの用量でＩＳＩＳ３０４８０１、化合物Ｘまたは化合物Ｙの皮下注射を週２回２週間受けた。１群のマウスはＰＢＳの皮下注射を週２回２週間受けた。処置前と最後の投薬後にそれぞれのマウスから血液を採取し、そして、血漿試料を分析した。最後の投薬の２日後にマウスを安楽死させ、器官を採取し、そして、分析を行った。
【０３７１】
コレステロールレベルおよびトリグリセリドレベル
ＢｌｉｇｈとＤｙｅｒの方法 (Bligh, E.G. and Dyer, W.J. Can. J. Biochem. Physiol. 37: 911-917, 1959)により血漿トリグリセリドと血漿コレステロールを抽出し、市販のトリグリセリドキット（ＤＣＬトリグリセリド試薬；Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｌｔｄ．）を使用してそれらを測定した。
【０３７２】
オスとメスでのトリグリセリド分析の結果が表１および２に提示され、ｍｇ／ｄＬで表される。観察されたように、全ての処置群でトリグリセリドレベルが対照群でのレベルと比較して著しく低かった。
【０３７３】
コレステロールの様々な画分（ＨＤＬ、ＬＤＬおよびＶＬＤＬ）の測定のため、メスの群に由来する血漿試料をＨＰＬＣにより分析したが、表３にそれらが提示される。観察されたように、ＡｐｏＣＩＩＩのアンチセンス阻害がＶＬＤＬを著しく減少させ、また、ＨＤＬレベルを著しく上昇させた。ＨＤＬの増加とＶＬＤＬレベルの低下はＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害の心血管系に有益な効果であり、脂質異常性疾患の動物、またはそのリスクがある動物にとって有益であり得る。
【０３７４】
【表１】
2018168184.tif 000010
【０３７５】
【表２】
2018168184.tif 000011
【０３７６】
【表３】
2018168184.tif 000012
【０３７７】
実施例２：ｈｕＡｐｏＣＩＩＩ遺伝子導入マウスにおけるヒトＡｐｏＣＩＩＩの用量依存的アンチセンス阻害
ヒトＡｐｏＣＩＩＩ遺伝子導入マウスを使用する用量依存性試験でＩＳＩＳ３０４８０１と化合物Ｘをさらに試験した。
【０３７８】
処置
ヒトＡｐｏＣＩＩＩ遺伝子導入マウスを１２時間明暗周期で飼育し、Ｔｅｋｌａｄ実験用飼料を自由に食べさせた。実験開始前に実験施設で動物を少なくとも７日間順応させた。ＰＢＳ中にアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過することにより滅菌した。注射のために、オリゴヌクレオチドを０．９％のＰＢＳに溶解した。
【０３７９】
３匹ずつのマウスからなる９つの処置群にメスマウスを分けた。８つのそのような群は１．５ｍｇ／ｋｇ／週、５ｍｇ／ｋｇ／週、１５ｍｇ／ｋｇ／週、または５０ｍｇ／ｋｇ／週の用量でＩＳＩＳ３０４８０１または化合物Ｘの皮下注射を２週間受けた。１群のマウスはＰＢＳの皮下注射を２週間受けた。処置前と最後の投薬後にそれぞれのマウスから血液を採取し、そして、血漿試料を分析した。最後の投薬の２日後にマウスを安楽死させ、器官を採取し、そして、分析を行った。
【０３８０】
コレステロールレベルおよびトリグリセリドレベル
ＢｌｉｇｈとＤｙｅｒの方法 (Bligh, E.G. and Dyer, W.J. Can. J. Biochem. Physiol. 37: 911-917, 1959)により血漿トリグリセリドと血漿コレステロールを抽出し、市販のトリグリセリドキット（ＤＣＬトリグリセリド試薬、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｌｔｄ．）を使用してそれらを測定した。
【０３８１】
前記マウスでのコレステロールとトリグリセリドの分析の結果が表４および５に提示され、ｍｇ／ｄＬで表される。観察されたように、より高い用量のＩＳＩＳ３０４８０１で処置されたマウスでＨＤＬレベルが著しく上昇したが、それは、前記オリゴヌクレオチドによるＡｐｏＣＩＩＩ阻害の有益な効果を表す。高用量処置群のＬＤＬレベルとトリグリセリドレベルは対照群のレベルと比較して低かった。ＨＤＬの増加とＬＤＬレベルおよびＴＧレベルの低下はＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害の心血管系に有益な効果であり、脂質異常性疾患の動物、またはそのリスクがある動物にとって有益であり得る。
【０３８２】
【表４】
2018168184.tif 000013
【０３８３】
【表５】
2018168184.tif 000014
【０３８４】
実施例３：ＣＥＴＰ遺伝子導入ＬＤＬ受容体ヌルマウスにおけるＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害の効果
高脂血症のマウスでの血漿脂質と血漿リポタンパク質の代謝に対するマウスＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害剤の効果を検討するため、ヒトＣＥＴＰ遺伝子導入ＬＤＬｒ−／−マウスモデルにおいて化合物Ｙをさらに試験した。
【０３８５】
処置
ヒトＣＥＴＰ遺伝子導入ＬＤＬｒ−／−遺伝子導入マウスを１２時間明暗周期で飼育し、ウエスタン飼料（カロリーの４２％が脂肪分から、０．２％のコレステロール）を自由に食べさせた。実験開始前に実験施設で動物をこの飼料に１０日間順応させた。ＰＢＳ中にアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過することにより滅菌した。注射のために、オリゴヌクレオチドを０．９％のＰＢＳに溶解した。
【０３８６】
８週齢のオスマウスを３つの処置群に分けた。６匹のマウスからなる１つのそのような群は１２．５ｍｇ／ｋｇ／週の用量で化合物Ｙの皮下注射を４週間受けた。４匹のマウスからなる１群は１２．５ｍｇ／ｋｇ／週の用量で対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３（配列番号４）の皮下注射を４週間受けた。５匹のマウスからなる１群はＰＢＳの皮下注射を４週間受けた。投薬の開始前の時点と処置の２週間と４種間の時点で血漿試料を採取した。
【０３８７】
コレステロールレベルおよびトリグリセリドレベル
ＢｌｉｇｈとＤｙｅｒの方法 (Bligh, E.G. and Dyer, W.J. Can. J. Biochem. Physiol. 37: 911-917, 1959)により血漿トリグリセリドと血漿コレステロールを抽出し、市販のトリグリセリドキット（ＤＣＬトリグリセリド試薬；Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｌｔｄ．）を使用してそれらを測定した。
【０３８８】
前記マウスでのコレステロールとトリグリセリドの分析の結果が表６〜７に提示され、ｍｇ／ｄＬで表される。処置群でのコレステロールレベルおよびトリグリセリドレベルは対照群でのレベルと比較して著しく低かった。コレステロールレベルとＴＧレベルの低下はＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害の心血管系に有益な効果であり、脂質異常性疾患の動物、またはそのリスクがある動物にとって有益であり得る。
【０３８９】
【表６】
2018168184.tif 000015
【０３９０】
【表７】
2018168184.tif 000016
【０３９１】
ＣＥＴＰタンパク質レベルと活性の阻害
血漿ＣＥＴＰタンパク質レベルを、市販のＥＬＩＳＡキット（ＡＬＰＣＯ、カタログ番号４７−ＣＥＴＨＵ−Ｅ０１）を使用して測定した。ＣＥＴＰタンパク質活性を、蛍光定量アッセイキット（Ｒｏａｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，Ｉｎｃ．カタログ番号ＲＢ−ＣＥＴＰ）を使用して測定した。表８に提示されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用する処置によりＣＥＴＰタンパク質の発現と活性が低下した。ＣＥＴＰ（コレステリルエステル転移タンパク質）は高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）とａｐｏＢ含有リポタンパク質、例えば、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、ＬＤＬおよびカイロミクロンとの間でトリグリセリドとコレステロールエステルの交換を促進する。ＣＥＴＰの低下はＨＤＬレベルの上昇およびＬＤＬレベルの低下と関連付けられている (Barter P.J. et al. Artherioscler. Thromb. Vasc. Biol. 23: 160-167, 2003) 。したがって、ＣＥＴＰタンパク質レベルと活性の阻害はＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害の心血管系に有益な効果であり、脂質異常性疾患の動物、またはそのリスクがある動物にとって有益であり得る。対照オリゴヌクレオチドは、予想されたように、ＣＥＴＰに対していかなる有意な効果も持たなかった。
【０３９２】
【表８】
2018168184.tif 000017
【０３９３】
ａｐｏＡ１タンパク質レベルとパラオキソナーゼ‐１（ＰＯＮ１）活性の上昇
血漿ＡｐｏＡ１タンパク質レベルをＥＬＩＳＡにより測定した。ＰＯＮ１タンパク質活性を、ＥｎｚＣｈｅｋ（登録商標）パラオキソナーゼ蛍光定量アッセイキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｅ３３７０２）を使用して測定した。表９および１０に提示されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用する処置によりＡｐｏＡ１タンパク質の発現が増強され、ＰＯＮ１タンパク質の活性が上昇した。ＡｐｏＡ１とＰＯＮ１は血漿中のＨＤＬの主要なタンパク質成分である (Aviram, M and Rosenblat, M. Curr. Opin. Lipidol. 16: 393-399, 2005) 。したがって、これらの２つのタンパク質成分のタンパク質レベルと活性の向上はＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害の心血管系に有益な効果であり、脂質異常性疾患の動物、またはそのリスクがある動物にとって有益であり得る。対照オリゴヌクレオチドは、予想されたように、どちらのタンパク質に対してもいかなる有意な効果も持たなかった。
【０３９４】
【表９】
2018168184.tif 000018
【０３９５】
【表１０】
2018168184.tif 000019
【０３９６】
実施例４：ＣＥＴＰ遺伝子導入ＬＤＬ受容体ヌルマウスにおけるＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害のＨＤＬコレステロールクリアランスに対する効果
高脂血症のマウスでのＨＤＬコレステロールのクリアランスと代謝に対するＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害剤の効果を検討するため、ヒトＣＥＴＰ遺伝子導入ＬＤＬｒ−／−マウスモデルにおいて化合物Ｙをさらに試験した。
【０３９７】
処置
ヒトＣＥＴＰ遺伝子導入ＬＤＬｒ−／−マウスを１２時間明暗周期で飼育し、ウエスタン飼料（カロリーの４２％が脂肪分から、０．２％のコレステロール）を自由に食べさせた。実験開始前に実験施設で動物をこの飼料に１０日間順応させた。ＰＢＳ中にアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過することにより滅菌した。注射のために、オリゴヌクレオチドを０．９％のＰＢＳに溶解した。
【０３９８】
８週齢のオスマウスを３つの処置群に分けた。６匹のマウスからなる１群は１５ｍｇ／ｋｇ／週の用量で化合物Ｙの皮下注射を６週間受けた。４匹のマウスからなる１群は１５ｍｇ／ｋｇ／週の用量で対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３の皮下注射を６週間受けた。５匹のマウスからなる１群はＰＢＳの皮下注射を６週間受けた。
【０３９９】
コレステロールレベルおよびトリグリセリドレベル
ＢｌｉｇｈとＤｙｅｒの方法 (Bligh, E.G. and Dyer, W.J. Can. J. Biochem. Physiol. 37: 911-917, 1959)により血漿トリグリセリドと血漿コレステロールを抽出し、市販のトリグリセリドキット（ＤＣＬトリグリセリド試薬；Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｌｔｄ．）を使用してそれらを測定した。
【０４００】
前記マウスでのコレステロールとトリグリセリドの分析の結果が表１１に提示され、ｍｇ／ｄＬで表される。処置群でのコレステロールレベルおよびトリグリセリドレベルは対照群でのレベルと比較して著しく低かった。コレステロールレベルとＴＧレベルの低下はＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害の心血管系に有益な効果であり、脂質異常性疾患の動物、またはそのリスクがある動物にとって有益であり得る。
【０４０１】
【表１１】
2018168184.tif 000020
【０４０２】
ＨＤＬクリアランス
尾部静脈を介して全ての群のマウスに１×１０６ｄｐｍの３Ｈ−コレステリルエーテル（３Ｈ−ＣＥｔｈ）で標識したＨＤＬを注射した。放射性標識化コレステリルエーテルはコレステロールに構造的に類似しているが、それを取り込む組織によって捕らえられる。したがって、コレステロールの逆輸送に対する効果の評価に血漿からの放射性標識化コレステリルエーテルのクリアランスとその肝臓中の蓄積を用いることができる。注射から５分、１．５時間、３時間、６時間および２４時間の後に血漿試料を採取し、液体シンチレーションカウンターを使用して放射活性を計測した。２４時間の時点で前記マウスを殺処
理し、そして、肝臓を採取した。２：１のクロロホルム／メタノール混液中で前記肝臓試料を抽出し、抽出物に窒素ガスを吹き付け、それをシンチレーションカクテルに溶解し、同一の液体シンチレーションカウンターを使用してその放射活性を計測した。
【０４０３】
表１２に提示されるような放射性標識の減少は血漿からのＨＤＬ‐Ｃｅｔｈのクリアランスと関連している。その結果は、化合物Ｙを使用する処置により血漿からのＨＤＬコレステロールのクリアランス速度が向上することになることを示している。このことは、表１３に提示されるように、化合物Ｙで処置されたマウスの肝臓での放射性標識化コレステリルエーテルの蓄積量の増加と関連している。したがって、そのデータは、これらの遺伝子導入マウスでのＡｐｏＣＩＩＩの阻害がコレステロールの逆輸送を向上し、したがって、それが脂質異常性疾患の患者のような心血管系疾患の患者に対して有益な効果を有することを示している。
【０４０４】
【表１２】
2018168184.tif 000021
【０４０５】
【表１３】
2018168184.tif 000022
【０４０６】
実施例５：ヒトＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害の効果のＣ５７ＢＬ／６マウスとＡｐｏＣＩＩＩノックアウトマウスモデルでの比較
Ｊａｃｋｓｏｎ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからＡｐｏＣＩＩＩノックアウトマウス（ストック番号００２０５７）を入手し、ＡｐｏＣＩＩＩアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置したＣ５７ＢＬ／６マウスと比較した。５−１０−５ＭＯＥギャップマーモチーフを有し、げっ歯類ＡｐｏＣＩＩＩ配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０２３１１４．３；配列番号５）を標的とする化合物Ｚを本試験で使用した。
【０４０７】
アンチセンスオリゴヌクレオチド処置
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを１２時間明暗周期で飼育し、高脂肪飼料（Ｈａｒｌａｎｄ社の番号８８１３７のＴｅｋｌａｄ実験用飼料）を１週間食べさせた。ＰＢＳ中にアンチセン
スオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過することにより滅菌した。注射のために、オリゴヌクレオチドを０．９％のＰＢＳに溶解した。全血漿コレステロールレベルおよびトリグリセリドレベルに基づきマウスを６〜８匹ずつのマウスからなる群に無作為に割り当てた。３群のＣ５７ＢＬ／６マウスは毎週３．１ｍｇ／ｋｇ、６．３ｍｇ／ｋｇ、または１２．５ｍｇ／ｋｇの用量で化合物Ｚの腹腔内注射を６週間の期間受けた。１群のＣ５７ＢＬ／６マウスは毎週ＰＢＳの腹腔内注射を６週間の期間受けた。ＰＢＳ群は、オリゴヌクレオチド処置群およびＡｐｏＣＩＩＩノックアウトマウスと比較される対照として用いた。
【０４０８】
最後の投薬から２日後に前記マウスを殺処理し、そして、器官を採取した。マウス用通常飼料を食べさせたマウスからなる同様の群も試験した。
【０４０９】
肝臓トリグリセリド
オリンパス臨床分析機（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ、メルビル、ニューヨーク州）を使用して肝臓トリグリセリドを測定した。表１４にそのデータが提示され、それは、ＡｐｏＣＩＩＩアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置されたマウスがＡｐｏＣＩＩＩノックアウトマウスと異なる表現型を有することを示している。高用量のＡｐｏＣＩＩＩアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置されたマウスはＰＢＳ対照のレベルに類似した肝臓トリグリセリドレベルを有した。ＡｐｏＣＩＩＩノックアウトマウスでの肝臓トリグリセリドレベルはＡｐｏＣＩＩＩアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置されたＣ５７ＢＬ／６マウスまたはＰＢＳ対照でのレベルよりも著しく高かった。したがって、ＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害はＡｐｏＣＩＩＩノックアウトマウスモデルと比較して脂肪肝のリスクを低下させる有益な効果を有した。
【０４１０】
【表１４】
2018168184.tif 000023
【０４１１】
実施例６：Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＡｐｏＣＩＩＩのインビボアンチセンス阻害の効果
血漿脂質レベルと脂肪クリアランスに対するＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害の効果が評価された。
【０４１２】
処置
オスＣ５７／ＢＬ６マウスを１２時間明暗周期で飼育し、ウエスタン飼料（Ｈａｒｌａｎｄ社のＴｅｋｌａｎｄ８８１３７）を自由に食べさせた。実験開始前に実験施設で動物を少なくとも７日間順応させた。ＰＢＳ中にアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）
を調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過することにより滅菌した。注射のために、オリゴヌクレオチドを０．９％のＰＢＳに溶解した。
【０４１３】
７〜８匹ずつのマウスからなる群は１２．５ｍｇ／ｋｇ／週の用量で化合物Ｚの腹腔内注射を６週間受けた。別の群のマウスは１２．５ｍｇ／ｋｇ／週の用量で対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３の腹腔内注射を６週間受けた。第３の群のマウスはＰＢＳの腹腔内注射を６週間受けた。最後の投薬から２日後に前記マウスを４時間絶食させ、殺処理し、そして、血漿と組織を採取した。
【０４１４】
ＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡの阻害
肝臓および小腸から全ＲＮＡを抽出し、ＡｐｏＣＩＩＩプライマープローブセットを使用するＲＴ‐ＰＣＲによりＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡを定量し、そして、シクロフィリンに対して正規化した。結果が表１５に提示され、ＰＢＳ対照と比較したＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡの阻害（％）として表される。ＩＳＩＳ１４１９２３は、予想されたように、ＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡレベルのいかなる低下も引き起こさなかった。そのデータは、ＰＢＳ対照と比較して、化合物Ｚによる肝臓および小腸におけるＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡの著しい阻害を示した。
【０４１５】
小腸でのＡｐｏＣＩＩＩ発現の阻害は、カイロミクロントリグリセリドの不適切なクリアランスが原因の脂質異常状態であるカイロミクロン血症の予防に重要であり得る (Chait et al., 1992, Adv Intern Med. 1992, 37:249-73) 。重症のカイロミクロン血症は生命を危うくする健康状態である膵炎を引き起こし得る。小腸のＡｐｏＣＩＩＩを阻害することによりリポタンパク質リパーゼの阻害が低減し、カイロミクロントリグリセリドクリアランスが増強され、それにより膵炎が予防される。さらに、小腸のＡｐｏＣＩＩＩの阻害が食後トリグリセリドのクリアランスを増強し、それにより、冠動脈性心疾患のリスクファクターとして知られる食後ＴＧを低下させる。
【０４１６】
【表１５】
2018168184.tif 000024
【０４１７】
コレステロールレベルおよびトリグリセリドレベル
ＢｌｉｇｈとＤｙｅｒの方法 (Bligh, E.G. and Dyer, W.J. Can. J. Biochem. Physiol. 37: 911-917, 1959) により血漿コレステロールを抽出し、オリンパス臨床分析機（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ、メルビル、ニューヨーク州）を使用して測定した。ＨＰＬＣによりＨＤＬコレステロールと非ＨＤＬコレステロールを個々に測定した。市販のトリグリセリドキット（ＤＣＬトリグリセリド試薬；Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｌｔｄ．、シャーロットタウン、カナダ）を使用してトリグリセリドレベルを測定した。結果が表１６に提示され、ｍｇ／ｄＬで表される。化合物Ｚを使用する処置によりＰＢＳ対照と比較して全コレステロールレベル、非ＨＤＬコレステロールレベルおよび血漿トリグリセリドレベルが著しく低下することになった。全コレステロールレベル、非ＨＤＬコレステロールレベルおよびＴＧレベルの低下はＡｐｏＣＩＩＩアンチセンス阻害の心血管系に有益な効果であり、脂質異常性疾患の動物、またはそのリスクがある動物にとって有益であり得る。
【０４１８】
【表１６】
2018168184.tif 000025
【０４１９】
脂肪クリアランス
注射から３０分、１時間、２時間、３時間および４時間の後の時点で血漿試料を採取し、オリンパス臨床分析機（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ、メルビル、ニューヨーク州）を使用して血漿全脂質含量を測定した。血漿中の脂質レベルは表１７に提示されるとおりであるが、それは血漿からの脂質クリアランスの逆指標であった。その結果は、化合物Ｚを使用する処置により血漿からの脂肪クリアランスの速度が向上することになることを示している。
【０４２０】
したがって、前記のデータは、これらの遺伝子導入マウスでのＡｐｏＣＩＩＩの阻害がコレステロールの逆輸送を向上させ、心血管系疾患の患者に対して有益な効果を有することを示している。
【０４２１】
【表１７】
2018168184.tif 000026
【０４２２】
実施例７：Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＡｐｏＣＩＩＩのインビボアンチセンス阻害の効果
ＡｐｏＣＩＩＩ発現レベルと脂肪クリアランスに対するＡｐｏＣＩＩＩのアンチセンス阻害の効果が評価された。
【０４２３】
処置
オスＣ５７／ＢＬ６マウスを１２時間明暗周期で飼育し、ウエスタン飼料（Ｈａｒｌａ
ｎｄ社のＴｅｋｌａｎｄ８８１３７）を自由に食べさせた。実験開始前に実験施設で動物を少なくとも７日間順応させた。ＰＢＳ中にアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過することにより滅菌した。注射のために、オリゴヌクレオチドを０．９％のＰＢＳに溶解した。
【０４２４】
５匹ずつのマウスからなる群は１２．５ｍｇ／ｋｇ／週の用量でＡｐｏＣＩＩＩを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドである化合物Ｚの腹腔内注射を６週間受けた。別の群のマウスは１２．５ｍｇ／ｋｇ／週の用量で対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３の腹腔内注射を６週間受けた。最後の投薬から２日後に前記マウスを一晩絶食させ、強制経口投与により２００μＬのオリーブ油をボーラス投与した。前記ボーラス投与後、４時間の一定の間隔で血漿トリグリセリドレベルを測定した。前記マウスを殺処理し、そして、血漿と組織を採取した。
【０４２５】
ＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡの阻害
肝臓および小腸から全ＲＮＡを抽出し、ＡｐｏＣＩＩＩプライマープローブセットを使用するＲＴ‐ＰＣＲによりＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡを定量し、そして、シクロフィリンに対して正規化した。結果が表１８に提示され、前記オリゴヌクレオチド対照と比較したＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡの阻害（％）として表される。そのデータは、前記オリゴヌクレオチド対照と比較して、化合物Ｚによる肝臓および小腸におけるＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡの著しい阻害を示した。
【０４２６】
本明細書の別の部分で記されているように、小腸でのＡｐｏＣＩＩＩ発現の阻害は、カイロミクロントリグリセリドの不適切なクリアランスが原因の脂質異常状態であるカイロミクロン血症の予防に重要であり得る (Chait et al., 1992, Adv Intern Med. 1992, 37:249-73) 。重症のカイロミクロン血症は生命を危うくする健康状態である膵炎を引き起こし得る。小腸のＡｐｏＣＩＩＩを阻害することによりリポタンパク質リパーゼの阻害が低減し、カイロミクロントリグリセリドクリアランスが増強されることとなり、それにより膵炎が予防されることとなるであろう。さらに、小腸のＡｐｏＣＩＩＩの阻害が食後トリグリセリドのクリアランスを増強することとなり、それにより、冠動脈性心疾患のリスクファクターとして知られる食後ＴＧを低下させることとなるであろう。
【０４２７】
【表１８】
2018168184.tif 000027
【０４２８】
脂肪クリアランス
注射から０分後、３０分後、６０分後、１２０分後、１８０分後および２４０分後の時点で血漿試料を採取し、オリンパス臨床分析機（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ、メルビル、ニューヨーク州）を使用して血漿トリグリセリド濃度を測定した。その結果は、化合物Ｚを使用する処置により血漿からのトリグリセリドクリアランスの速度が向上することになることを示している。
【０４２９】
この試験は、高ａｐｏ‐ＣＩＩＩレベルを発現する患者が食後ＴＧ濃度の上昇を示した脂肪ボーラス臨床試験 (Petersen K.F. et al., N Engl J Med 2010; 362: 1082-1089) 
に比肩し得る。
【０４３０】
【表１９】
2018168184.tif 000028
【０４３１】
実施例８：Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＡｐｏＣＩＩＩのインビボアンチセンス阻害の効果
脂肪クリアランスに対するＡｐｏＣＩＩＩのアンチセンス阻害の効果を評価した。
【０４３２】
処置
オスＣ５７／ＢＬ６マウスを１２時間明暗周期で飼育し、ウエスタン飼料（Ｈａｒｌａｎｄ社のＴｅｋｌａｎｄ８８１３７）を自由に食べさせた。実験開始前に実験施設で動物を少なくとも７日間順応させた。ＰＢＳ中にアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過することにより滅菌した。注射のために、オリゴヌクレオチドを０．９％のＰＢＳに溶解した。
【０４３３】
６匹ずつのマウスからなる群は１２．５ｍｇ／ｋｇ／週、６．３ｍｇ／ｋｇ／週または３．１ｍｇ／ｋｇ／週の用量でＡｐｏＣＩＩＩを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドである化合物Ｙまたは化合物Ｚの腹腔内注射を６週間受けた。別の群のマウスは１２．５ｍｇ／ｋｇ／週の用量で対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３の腹腔内注射を６週間受けた。別の群のマウスはＰＢＳの腹腔内注射を６週間受けた。最後の投薬から２日後に前記マウスを一晩絶食させ、強制経口投与により２００μＬのオリーブ油をボーラス投与した。前記ボーラス投与後、４時間の一定の間隔で血漿トリグリセリドレベルを測定した。
【０４３４】
脂肪クリアランス
注射から０分後、３０分後、６０分後、１２０分後、１８０分後および２４０分後の時点で血漿試料を採取し、オリンパス臨床分析機（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ、メルビル、ニューヨーク州）を使用して血漿トリグリセリド濃度を測定した。その結果は、化合物Ｙおよび化合物Ｚを使用する処置により血漿からの脂肪クリアランスの速度が向上することになることを示している。未決は計算されなかったデータセットを表す。
【０４３５】
この試験は、高ａｐｏ‐ＣＩＩＩレベルを発現する患者が食後ＴＧ濃度の上昇を示した脂肪ボーラス臨床試験 (Petersen K.F. et al., N Engl J Med 2010; 362: 1082-1089) 
に比肩し得る。
【０４３６】
【表２０】
2018168184.tif 000029
【０４３７】
実施例９：高トリグリセリド血症のサルモデルにおけるヒトＡｐｏＣＩＩＩを標的とするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果
高果糖食で飼育したアカゲザルをＩＳＩＳ３０４８０１で処置した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの効力および忍容性ならびに薬理的効果を評価した。
【０４３８】
処置
前記サルの年齢は２〜４歳であり、体重は２ｋｇと５ｋｇの間であった。前記サルを、無作為に割り当てられた５匹ずつのオスのアカゲザルからなる６群に割り当てた。第１群〜第４群のそれぞれのサルに約６０ｇの飼料（認定済み霊長類用飼料  番号５０４８、ＰＭＩ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）を１日に２回与えた。アンチセンスオリゴヌクレオチドの投薬前の１６週間に、適切な果糖補助食品（すなわち、約１５％のＫｏｏｌ  Ａｉｄ（登録商標）ミックス）が午前中に与えられた。十分なトリグリセリドレベルの上昇を確認するために、投薬の１〜２週間前に血清化学用に血液試料を採取した。
【０４３９】
前記の群のサルに、適切なサイズのステンレス鋼の注射針と注射筒を前記のサルの背中の４か所の部位の１つに使用してＩＳＩＳオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを皮下注射した。各部位は投与毎に時計回りで使用された。前記の群のいくつかには、負荷投与として第１週の間は週３回（第１日、第３日および第５日）、その後、第２週〜第１２週の間は週２回５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３０４８０１が投薬された。５匹ずつのアカゲザルからなる２つの対照群にＰＢＳを第１週の間は週３回（第１日、第３日および第５日）、その後、第２週〜第１２週の間は週２回皮下注射した。投薬チャートが表２１に示されている。第１群〜第４群のサルを第８６日に殺処理した。
【０４４０】
ホイップクリームミルクセーキの形状でさらなる高脂肪曝露を第５群と第６群のサルに行った。体表面１ｍ２当たり７８２カロリーからなり、カロリーの７７．６％が脂肪に由来し、１９．２％が炭水化物に由来し、そして、３．１％がタンパク質に由来するように前記ミルクセーキを標準化した。第５群と第６群のサルを一晩絶食させ、そして、胃管を介して前記ミルクセーキを第８４日に１回与えた。トリグリセリドの行程を評価するため
に、脂肪負荷の摂取の直前（時間＝０時間）とその１時間後、２時間後、３時間後、４時間後および６時間後に血液を採取した。そうではない場合、前記のサルを休息させ、脂肪曝露後の６時間の間絶食させたままにした。この群のサルを第８７日に殺処理した。
【０４４１】
【表２１】
2018168184.tif 000030
【０４４２】
肝臓標的の減少
ＲＮＡ分析
殺処理時にＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡ分析のために第１群〜第４群から約１５０ｍｇの肝臓を採取した。肝臓を２分割し、１％のβ‐メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ緩衝液を含む２本のチューブ内でそれらを浸漬した。前記組織をホモジェネートし、ＲＴ‐ＰＣＲ分析によりＡｐｏＣＩＩＩの発現を定量した。表２２に示されるように、ＩＳＩＳ３０４８０１を使用する処置により、ＰＢＳ対照と比較して、ＡｐｏＣＩＩＩ  ｍＲＮＡが著しく減少することになった。
【０４４３】
【表２２】
2018168184.tif 000031
【０４４４】
タンパク質分析
第１群〜第４群の全ての実験動物から約１．５ｍＬの血液を採取し、Ｋ２‐ＥＤＴＡを含むチューブに入れ、その後、血漿を分離するため遠心分離にかけた。商業的に入手可能な濁度測定アッセイ（Ｋａｍｉｙａ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｏ．、シアトル、ワシントン州）を用いる臨床分析機でＡｐｏＣＩＩＩタンパク質レベルを定量した。表２３に示されるように、ＩＳＩＳ３０４８０１を使用する処置により、ＰＢＳ対照と比較して、ＡｐｏＣＩＩＩタンパク質レベルが著しく低下することになった。ＡｐｏＣＩＩＩタンパク質のレベル低下についての動態も分析されたが、それは表２４に提示されている。
【０４４５】
【表２３】
2018168184.tif 000032
【０４４６】
【表２４】
2018168184.tif 000033
【０４４７】
リポタンパク質粒子の分析
血漿ＡｐｏＣＩＩＩ抑制の動態を確証するために、投薬開始７日前ならびに投薬期間の第１６日、第３０日および第８６日に血漿試料を採取した。前記試料をＮＭＲリポタンパク質粒子分析（Ｌｉｐｏｓｃｉｅｎｃｅ、ライリー、ノースカロライナ州）にかけた。処置群（第２群〜第４群）の間でＡｐｏＣＩＩＩの低下に著しい差異がなかったので、第２群（１０ｍｇ／ｋｇ／週を受けた処置群）の分析結果のみが提示されている。表２５および２６にそのデータが提示されている。
【０４４８】
第３０日の時点で、前記処置群の全血漿トリグリセリド（ＴＧ）とＶＬＤＬおよびカイロミクロンＴＧについて、統計的に有意なベースラインからの平均変化が観察された。同
時に、前記対照のサルは同じパラメータの平均の増加を示した。これらの果糖を食べさせたサルでＩＳＩＳ３０４８０１を使用する持続的処置により約８μｍｏｌ／Ｌ（表２７）までＨＤＬコレステロール粒子数が時間依存的に上昇することになったが、これらの試験ではＬＤＬコレステロールの上昇は生じなかった（表２８）。ＰＢＳ対照と比較して、１２週間の処置期間にわたってＬＤＬコレステロール粒子量に重大な変化はなかった。
【０４４９】
殺処理の時点でＢｌｉｇｈとＤｙｅｒの抽出方法 (Bligh EG and Dyer WJ. Can J Biochem Physiol 1959; 37: 911-917) を用いて肝臓を抽出し、Ｗａｋｏ社の比色定量ＴＧアッセイを用いて定量を行った。ＰＢＳ対照群と比較して、前記処置群のいずれにおいてもＡｐｏＣＩＩＩのアンチセンス阻害が肝臓のＴＧ蓄積を増加させることはなかった（表２９）。
【０４５０】
【表２５】
2018168184.tif 000034
【０４５１】
【表２６】
2018168184.tif 000035
【０４５２】
【表２７】
2018168184.tif 000036
【０４５３】
【表２８】
2018168184.tif 000037
【０４５４】
【表２９】
2018168184.tif 000038
【０４５５】
食後血漿ＴＧクリアランス
第１０週の時点で、サルに食事を与えてから０時間後、１時間後、２時間後、３時間後および４時間後の時点で１０ｍｇ／ｋｇ／週の群（第２群）のサルの食後血漿ＴＧレベルを測定した。表３０および３１に示されるように、前記の１０ｍｇ／ｋｇ／週の群のサルでの食後ＴＧ曲線下面積（ＡＵＣ）の３８％減少によって示されるように、食後血漿ＴＧのクリアランスが著しく上昇した。
【０４５６】
第１２週の時点で、第５群と第６群（脂肪曝露後のＰＢＳ対照と４０ｍｇ／ｋｇ／週の群）でも食後ＴＧクリアランスを評価した。表３２にそのデータが提示され、そして、それも、前記対照と比較した、その群のサルでの食後ＴＧ曲線下面積（ＡＵＣ）の著しい減少を示す。
【０４５７】
【表３０】
2018168184.tif 000039
【０４５８】
【表３１】
2018168184.tif 000040
【０４５９】
【表３２】
2018168184.tif 000041
【０４６０】
第１０週の時点で、１０ｍｇ／ｋｇ／週の群のサルはＰＢＳ群よりも低い空腹時血漿ＴＧレベルを有した。非ヒト霊長類での結果は、ＡｐｏＣＩＩＩのアンチセンス阻害は脂質異常症の個体での血漿ＴＧとＶＬＤＬの減少にとり魅力的な治療戦略を表し、処置がＨＤＬ‐Ｃレベルを上昇させることができるが、同時にＬＤＬ‐Ｃに対して有害作用を持たないことを示している。
【０４６１】
実施例１０：ＩＳＩＳ３０４８０１の第Ｉ相臨床試験
二重盲検の単回投与（ＳＡＤ）第１相試験および反復投与漸増（ＭＡＤ）第１相試験で、１８歳〜５５歳の年齢の健康な対象をＩＳＩＳ３０４８０１またはプラセボ（通常の生理食塩水）を受容するように３：１の比率で無作為に割り当てた。
【０４６２】
治験センターでＳＡＤ対象に５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇまたは４００ｍｇの単回皮下（ＳＣ）注射（ｎ＝４／コホート）を行った。前記対象は、血液の試料採取と臨床評価のために第４日と第８日（±２４時間の枠）に通院して治験センターに戻ってきた。前記対象が電話インタビューによって評価される第１５日まで、彼らの経過を追った。
【０４６３】
治験センターでＭＡＤ対象に５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇおよび４００ｍｇの反
復ＳＣ注射を行った。前記対象は、第１週に３回の（第１日、第３日および第５日）負荷投薬とその後の３週間に週１回の（第８日、第１５日および第２２日）投薬を受けた。前記対象への試験薬品の最後の投薬から８週間の間、彼らの経過を追った。前記対象は、安全性評価および臨床評価のために、ならびにＰＫ分析用の血液の試料採取のために第２９日、第３６日および第５０日（±２４時間の枠）に通院して治験センターに戻ってきた。前記対象が電話インタビューによって評価される第７８日（±７日の枠）まで、彼らの経過を追った。
【０４６４】
前記ＭＡＤ対象は第−１日から第６日まで、および第２２日から第２３日まで治験センターに滞在し、彼らには表３３に示される食事が与えられた。第５、８、１５、２２、２３、２９、３６、４３および５０日（±２４時間の枠）の時点で血液試料を採取する前に、前記対象は少なくとも１２時間絶食した。
【０４６５】
【表３３−１】
2018168184.tif 000042
【表３３−２】
2018168184.tif 000043
【表３３−３】
2018168184.tif 000044
【表３３−４】
2018168184.tif 000045
【０４６６】
結果
全体では、ＩＳＩＳ３０４８０１は良好な安全性プロファイルを示し、臨床的に意味があるトランスアミナーゼ酵素の増加と有意な有害事象が無く、全ての対象でよく忍容された。
【０４６７】
ＭＡＤコホートのベースライン特性が表３４に示されている。ＭＡＤ対象は全ａｐｏＣ‐ＩＩＩレベルとＴＧレベルの用量依存的持続的低下を示したが、それらは表３５〜３６でベースラインからの変化（％）として表される。
【０４６８】
【表３４】
2018168184.tif 000046
【０４６９】
【表３５】
2018168184.tif 000047
【０４７０】
【表３６】
2018168184.tif 000048
【０４７１】
５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇおよび４００ｍｇの反復投与群でのベースラインからの変化（％）の中央値は最後の投薬から１週間後（第２９日）に、それぞれ、全ａｐｏＣ‐ＩＩＩについて２０％、１７％、７１％および７８％の低下ならびにＴＧについて２０％、２５％、４３％および４４％の低下を示した。より高い用量の群では最後の投薬から少なくとも４週間低下状態が持続した。
【０４７２】
プラセボ群ではＴＧレベルが第５日と第２３日に急激に上昇したが、これは前記対象の治験センターでの一泊の滞在と一致している。治験センターにより提供された食事が、治験センターに一泊滞在した対象のＴＧレベルを急激に上昇させることになったと考えられている。ＩＳＩＳ３０４８０１は用量依存的にＴＧの急激な上昇を低下させた。ＩＳＩＳ３０４８０１が食事によって誘発されるＴＧの急激な上昇を用量依存的に低下させたので、ある意味で、本明細書に示される結果は、（１２時間の絶食の後にＴＧレベルが評価されたけれども）ＩＳＩＳ３０４８０１によるＴＧへの食後効果を表す。
【０４７３】
ＬＤＬ‐Ｃ値は変化しなかった（データは示さず）が、ＨＤＬ‐Ｃ値は表３７に示されるように処置依存的に増加する傾向にあった。
【０４７４】
【表３７】
2018168184.tif 000049
【０４７５】
実施例１１：ＩＳＩＳ３０４８０１の第ＩＩ相臨床試験
空腹時のＶＬＤＬ関連ａｐｏＣ‐ＩＩＩレベルへの用量／反応薬力学的効果をＩＳＩＳ３０４８０１とプラセボの間で評価するために、無作為抽出二重盲検プラセボ対照用量反応試験を計画する。追加の評価エンドポイントには、空腹時の全ａｐｏＣ‐ＩＩＩ、ＴＧ、ａｐｏＣ−ＩＩ（全ａｐｏＣ−ＩＩおよびＶＬＤＬ関連ａｐｏＣ−ＩＩ）、アポリポタンパク質Ｂ−１００（ａｐｏＢ−１００）、アポリポタンパク質Ａ−１（ａｐｏＡ−１）、アポリポタンパク質Ａ−２（ａｐｏＡ−２）、アポリポタンパク質Ｅ（ａｐｏＥ）、全コレステロール（ＴＣ）、低密度リポタンパク質−コレステロール（ＬＤＬ‐Ｃ）、ＬＤＬ−ＴＧ、ＶＬＤＬ‐Ｃ、ＶＬＤＬ−ＴＧ、非高密度リポタンパク質−コレステロール（非ＨＤＬ‐Ｃ）、非ＨＤＬ−ＴＧ、ＨＤＬ‐Ｃ、ＨＤＬ−ＴＧ、カイロミクロン‐Ｃ（ＣＭ‐Ｃ）、ＣＭ−ＴＧ、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、およびグリセロールのレベルへのプラセボに対するＩＳＩＳ３０４８０１の薬力学的効果；食後脂質、アポリポタンパク質およびリポタンパク質の特性と動態、ならびに治験における一部分集合の患者のグルコースレベルと別の部分集合の患者（食後評価を受けた患者と同一ではない）のより詳細なＰＫの評価；ならびにＩＳＩＳ３０４８０１の安全性、忍容性およびＰＫが含まれる。
【０４７６】
それぞれの患者について、参加期間は５週間以内のスクリーニング期間（４週間の厳格な食餌制限下の準備適格性評価期間を含む）、１週間の治験適格性評価／ベースライン評価期間、１３週間の処置期間、および１３週間の処置後評価期間の総計で３２週間の治験参加期間からなる。付随する薬物投与および有害事象（ＡＥ）が治験期間の全てを通じて記録される。
【０４７７】
患者は少なくとも１８歳であり、スクリーニング時に５００ｍｇ／ｄＬ以上の空腹時ＴＧおよび４週間の厳格な食餌制限下の準備時に３００ｍｇ／ｄＬ以上で２０００ｍｇ／ｄＬ以下の空腹時ＴＧを有する。
【０４７８】
この治験に７２人の患者を計画している。投薬コホート（１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ）当たり２４人の患者が計画されており、コホート当たり１８人のＩＳＩＳ３０４８０１（実薬）投与患者および６人のプラセボ投与患者が計画されている。適格な患者を非拡張ＰＫ／食後群（第１群）または拡張ＰＫ／食後群（第２群）に等しく（１：１）登録する。第２群の患者を拡張ＰＫ群（第２ａ群）または食後評価群（第２ｂ群）に等し
く（１：１）無作為に割り当てる。第２ａ群の患者を３つの投薬コホート（１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ）のうちの１つに等しく（１：１：１）に無作為に割り当て、各投薬コホート内では実薬またはプラセボを受容するように５：１に無作為に割り当てる。第２ｂ群の患者を２つの投薬コホート（２００ｍｇ、３００ｍｇ）のうちの１つに等しく（１：１）無作為に割り当て、各投薬コホート内では実薬またはプラセボを受容するように２：１に無作に割り当てる。投薬コホート（１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ）に対して１：１：１の、および処置（実薬、プラセボ）に対して３：１の無作為割り当てを治験全体で達成するように第１群の患者を投薬コホートと処置に関して無作為に割り当てる。
【０４７９】
患者は、治験参加期間の間に（スクリーニング手順の実行後）厳格な食餌制限下に置かれる。食餌制限下の２８日後、患者はベースライン測定を受け、治験の処置段階への登録の適格性評価を受ける。食餌準備期間後に登録基準に合う患者を等しく（１：１）非拡張ＰＫ／食後群（第１群）または拡張ＰＫ／食後群（第２群）に登録し、そして、それらの群の割り当ての内部で彼らを無作為に割り当てる。
【０４８０】
治験薬および処置
２ｍＬの栓付きガラスバイアル瓶内に含まれるＩＳＩＳ３０４８０１の溶液（２００ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍＬ）を供給する。
【０４８１】
この治験のプラセボは０．９％の滅菌生理食塩水である。非盲検の薬剤師（または資格がある代表者）がＩＳＩＳ３０４８０１溶液とプラセボを調製する。バイアル瓶は使い捨てである。薬品の正体については知らない訓練を受けた専門家が治験薬を投与する。各投薬日に腹部、大腿、または上腕の外側の領域に治験薬をＳＣ注射で投与する。単回ＳＣ注射で１００ｍｇおよび２００ｍｇの用量を投与する。２回の当量の非連続ＳＣ注射で３００ｍｇの用量を投与する。
【０４８２】
患者は週に１回１３週間ＳＣ注射により投与される治験薬からなる１３回の投薬を受ける（第１、８、１５、２２、２９、３６、４３、５０、５７、６４、７１、７８および８５日）。
【０４８３】
患者は第１日（±０日）ならびに第８、１５、２２、２９、３６、４３、５０、５７、６４、７１、７８および８５日（±１日以内）に処置通院する。拡張ＰＫ群の患者も２４時間の採血のために第１日と第８５日に対して第２日と第８６日（±０日）に診療所に通院する。患者はスケジュールされた通院日のうちの第９２日と第９９日（±１日以内）、第１２７日（±３日以内）、第１７６日（±５日以内）に経過観察のために通院する。食後評価群の患者も２４時間の採血のために第１０３日（±２日以内）と第１０３日の次の日に診療所に通院する。
【０４８４】
薬力学的測定用の採血が含まれるそれぞれの通院日（第８、１５、２９、４３、５７、７１および８５日）の前に、彼らの通院前の晩に患者には（患者および時点当たりに等しく低下した脂肪取込を確実にするために）標準化された調理済みの食事が夕食に与えられ、その後、彼らは絶食し続ける。これらの診療所への通院前４８時間は、飲酒は禁止である。
【０４８５】
ＶＬＤＬ  ａｐｏＣ‐ＩＩＩおよび他の薬力学マーカーの測定のために第８、１５、２９、４３、５７、７１および８５日（治験薬の投与前）に血液を採取する。
【０４８６】
食後評価群の患者は食後評価前の２日間に標準化された調理済みの食事（（提供済みの）昼食と夕食および朝食とおやつについては指示）を消費する。それぞれの食後評価日で
は、患者は採血後に、１日のカロリー必要量の約３分の１に相当し、安定な放射性同位体トレーサーを含む標準化された流動食を消費し、その後に連続血液試料採取が続く。患者は流動食の消費から９時間後に標準化された調理済みの食事をとり、その後、彼らは翌日の２４時間採血まで絶食する。
【０４８７】
トラフ試料採取に加えて、拡張ＰＫ評価群の患者は彼らの治験薬の最初の投薬（第１〜２日）および最後の投薬（第８５〜８６日）の後に２４時間の連続血液試料採取を受ける。
【０４８８】
処置後評価期間
患者は治験第１７６日まで経過観察を受ける。この期間に、患者は、安全性評価および臨床評価（採血）、食餌カウンセリングおよびモニタリング、同時期の薬物使用の記録、ならびにＡＥ事象の収集のために治験第９２、９９、１２７および１７６日（および食後評価群の患者は第１０３日）に通院して治験センターに戻ってくる。
【０４８９】
処置後評価期間を通してＰＫおよびＰＤ分析のために血液試料を定期的に採取する。治験の様々な時点で血清化学、尿分析、凝血、補体、ヘマトロジー、免疫機能、甲状腺機能および全脂質パネルの臨床検査測定を実行する。
【０４９０】
以下に記載するように一部分集合の患者に食後評価を行う。
【０４９１】
食後の食事、試料採取スケジュールおよび評価
標識化トレーサーである３Ｈ‐パルミチン酸（３００μＣｉ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｉｎｃ．、ウッドリッジ、オンタリオ州、カナダ）を添加した放射性標識した食事を超音波処理して流動食にしたものを用いてリポタンパク質代謝の食後評価を実行する。パルミチン酸は脂肪酸であり、あらゆる食事の共通した構成成分である。３Ｈ‐パルミチン酸トレーサーはＸ線と同等の弱い放射活性を放出する。カイロミクロンが腸の腸細胞で形成されると、食餌性のパルミチン酸はカイロミクロンに取り込まれるので、このことが新規に形成されたカイロミクロンの循環系への出現とクリアランスをモニターすることを可能とする。カイロミクロンの出現とクリアランスの食後動態の検査に適用される方法論が確立している (Mittendorfer et al. 2003, Diabetes, 52: 1641-1648; Bickerton et al. 2007; Normand-Lauziere et al. 2010, PLoS. One, 5: e10956)。
【０４９２】
少量の（３００μＣｉ）放射標識脂肪酸（３Ｈ‐パルミチン酸）を含有する（ミルクセーキに類似した）流動食を提供する。その流動食は１日のカロリー必要量の約３分の１を提供する。その食事の摂取１時間前から９時間後まで、以前に記述されたように(Normand-Lauziere et al. 2010, PLoS. One, 5: e10956)、［Ｕ‐１３Ｃ］標識パルミチン酸カリウムの持続静注（１００ｍｌの２５％ヒト血清アルブミン中で０．０１μｍｏｌ／ｋｇ／分；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．、アンドーバー、マサチューセッツ州）と［１，１，２，３，３‐２Ｈ］‐グリセロール（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．）の初回刺激（１．６μｍｏｌ／ｋｇ）持続静注（０．０５μｍｏｌ／ｋｇ／分）を行う。それぞれ、分布容積を９０ｍｌ／ｋｇおよび２３０ｍｌ／ｋｇ (Gastaldelli et al. 1999, J Appl. Physiol, 87: 1813-1822) と仮定し、Ｓｔｅｅｌｅの非定常状態方程式を用いて血漿中のパルミチン酸とグリセロールの出現速度を計算する。
【０４９３】
下の表で言及されるように、処置段階の前および後の日に放射標識された食事を摂取する前と後の間に血液試料を採取する。９時間の採血後に参加者に標準化された食事が与えられる。インビトロでのトリアシルグリセロール脂質分解を防ぐためにＮａ２‐ＥＤＴＡとオルリスタット（３０μｇ／ｍｌ、Ｒｏｃｈｅ、ミシサガ、カナダ）を含むチューブに
血液を採取し、そして、血漿グルコース測定のためにＮａＦ入りのチューブに分離試料を採取する。
【０４９４】
各時点で次のものが測定される。
・３Ｈ‐トレーサーの血漿レベルとＣＭ画分レベル
・血漿［Ｕ‐１３Ｃ］標識パルミチン酸カリウムと［１，１，２，３，３‐２Ｈ］‐グリセロールの出現速度
・ＴＧ、ＴＣおよびａｐｏＢの血漿レベルとＣＭ画分レベル
・ａｐｏＣＩＩＩ、ａｐｏＣＩＩおよびａｐｏＥの血漿レベルおよびＶＬＤＬ画分レベル・グルコースの血漿レベル
【０４９５】
薬品結合タンパク質のプロファイリング、生体分析法バリデーションの目的、安定性および代謝物の評価のために、またはＩＳＩＳ３０４８０１の血漿成分との他の作用を評価するためにも血漿試料を使用することができる。
【配列表】
2018168184000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年8月1日(2018.8.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）膵炎の治療、予防、遅延化、または改善のための、
ｂ）HDLレベルの上昇および／またはTGのHDLに対する比率の改善をし、それによって、動物において心血管系の疾患、障害、病気もしくはその症状、または心血管系の疾患、障害、病気もしくはその症状の発症、を予防する、遅らせる、または改善するための、
ｃ）HDLレベルの上昇および／またはTGのHDLに対する比率の改善をし、それによって、動物において心血管系の疾患、障害、病気または症状のリスクを軽減させるための、および／または
ｄ）脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランス、および／または食後トリグリセリドクリアランスを上昇させるための、
ApoCIIIを標的とする化合物を含む医薬組成物。
【請求項２】
ａ）カイロミクロンクリアランスを上昇させるための、および／または
ｂ）カイロミクロン血症を治療、予防、遅延化、または改善するための、
ApoCIIIを標的とする化合物を含む医薬組成物。
【請求項３】
ａ）CETPレベルを減少させるための、および／または
ｂ）ApoA1および／またはPON1を増加させるための、
ApoCIIIを標的とする化合物を含む医薬組成物。
【請求項４】
ａ）ApoCIIIを標的とするアンチセンス化合物がHDLレベルの上昇および／またはTGのHDLに対する比率の改善をすることができ、および／または
ｂ）HDLレベルの上昇および／またはTGのHDLに対する比率の改善が膵炎を予防する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記動物が高トリグリセリド血症を有する、または高トリグリセリド血症のリスクにある、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記動物が100〜200mg／dL、100〜300mg／dL、100〜400mg／dL、100〜500mg／dL、200〜500mg／dL、300〜500mg／dL、400〜500mg／dL、500〜1000mg／dL、600〜1000mg／dL、700〜1000mg／dL、800〜1000mg／dL、900〜1000mg／dL、500〜1500mg／dL、1000〜1500mg／dL、100〜2000mg／dL、150〜2000mg／dL、200〜2000mg／dL、300〜2000mg／dL、400〜2000mg／dL、500〜2000mg／dL、600〜2000mg／dL、700〜2000mg／dL、800〜2000mg／dL、900〜2000mg／dL、1000〜2000mg／dL、1100〜2000mg／dL、1200〜2000mg／dL、1300〜2000mg／dL、1400〜2000mg／dL、または1500〜2000mg／dLの間のトリグリセリドレベルを有する、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記高トリグリセリド血症がフレデリクソンII型、IV型またはV型である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記動物が高トリグリセリド血症を引き起こす遺伝的欠陥を有し、前記遺伝的欠陥がヘテロ接合性LPL欠損またはApoCIII多型である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記動物が500mg／dL以上のトリグリセリドレベルおよび／またはヘテロ接合性LPL欠損を有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記のカイロミクロンクリアランスの上昇が、食後トリグリセリドのクリアランスを増強するか、および／または食後トリグリセリドを減少させる、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ApoCIIIが配列番号１または配列番号２に示される核酸配列を有する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ApoCIIIを標的とする前記化合物が修飾型オリゴヌクレオチドである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記修飾型オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号１または配列番号２の核酸塩基配列に対して80％、90％または100％相補的である、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが一本鎖修飾型オリゴヌクレオチドからなる、請求項１２または１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが２０個の連結したヌクレオシドからなる、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記修飾型オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシド間結合が修飾型ヌクレオシド間結合であり、ここで、修飾型オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドが修飾型糖を含み、および／または修飾型オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドが修飾型核酸塩基を含む、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記修飾型オリゴヌクレオチドの各修飾型ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
少なくとも１つの修飾型糖が二環式糖である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
少なくとも１つの修飾型糖が2'-O-メトキシエチルを含む、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記修飾型核酸塩基が5-メチルシトシンである、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが、
（ａ）連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
（ｂ）連結したヌクレオシドからなる5'ウイングセグメント；
（ｃ）連結したヌクレオシドからなる3'ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記5'ウイングセグメントと前記3'ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、そして、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが修飾型糖を含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが、
（ａ）8〜12個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
（ｂ）1〜5個の連結したヌクレオシドからなる5'ウイングセグメント；
（ｃ）1〜5個の連結したヌクレオシドからなる3'ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記5'ウイングセグメントと前記3'ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが2'-O-メトキシエチル糖を含み、各シトシンが5-メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合が．ホスホロチオエート結合である、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記修飾型オリゴヌクレオチドが、
（ａ）10個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント;
（ｂ）5個の連結したヌクレオシドからなる5'ウイングセグメント；
（ｃ）5個の連結したヌクレオシドからなる3'ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記5'ウイングセグメントと前記3'ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、そして、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが2'-O-メトキシエチル糖を含み、各シトシンが5-メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合が．ホスホロチオエート結合である、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記症状が、狭心症；胸部痛；息切れ；心悸亢進；虚弱；めまい；吐き気；発汗；頻脈
；徐脈；不整脈；心房細動；下肢のむくみ；チアノーゼ；疲労；失神；顔面麻痺；四肢の
麻痺；筋肉の跛行もしくは痙攣；腹部膨満；または発熱；のいずれか１つであり得る、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
ApoCIIIを標的とする修飾型オリゴヌクレオチドであって、
（ａ）10個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント;
（ｂ）5個の連結したヌクレオシドからなる5'ウイングセグメント；
（ｃ）5個の連結したヌクレオシドからなる3'ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記5'ウイングセグメントと前記3'ウイングセグメントに直ぐに隣接して、および、それらの間に位置し、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが2'-O-メトキシエチル糖を含み、各シトシンが5-メチルシトシンであり、そして、各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である、前記修飾型オリゴヌクレオチドを含み、
（１）膵炎の治療、予防、遅延化、または改善のための、
（２）HDLレベルの上昇および／またはTGのHDLに対する比率の改善をし、それによって、動物において心血管系の疾患、障害、病気もしくはその症状、または心血管系の疾患、障害、病気もしくはその症状の発症、を予防する、遅らせる、または改善するための；
（３）HDLレベルの上昇および／またはTGのHDLに対する比率の改善をし、それによって、動物において心血管系の疾患、障害、病気または症状のリスクを軽減させるための；
（４）脂肪クリアランス、カイロミクロントリグリセリドクリアランス、および／または食後トリグリセリドクリアランスを上昇させるための；
（５）カイロミクロンクリアランスを上昇させるための；
（６）カイロミクロン血症の治療、予防、遅延化、または改善のための； 
（７）CETPレベルを低下させるための；および／または
（８）ApoA1および／またはPON1を上昇させるための；
医薬組成物。
【請求項２７】
ａ）ApoCIIIを標的とするアンチセンス化合物がHDLレベルの上昇および／またはTGのHDLに対する比率の改善をすることができ、および／または
ｂ）HDLレベルの上昇および／またはTGのHDLに対する比率の改善が膵炎を予防する、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記動物がヒトである、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記心血管系疾患が動脈瘤、狭心症、不整脈、アテローム性動脈硬化、脳血管系疾患、冠動脈性心疾患、高血圧、脂質異常症、高脂血症、高トリグリセリド血症または高コレステロール血症である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記脂質異常症がカイロミクロン血症である、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記動物に膵炎のリスクがある、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
ApoCIIIレベルの低下が
ａ）膵炎を予防、治療、または改善する、
ｂ）食後トリグリセリドのクリアランスを増強する、または
ｃ）食後トリグリセリドを減少させる、
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記化合物が非経口的に投与される、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記非経口投与が皮下投与である、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
第２薬剤と組み合わせて使用するための、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記第２薬剤がApoCIII低下薬剤、コレステロール低下薬剤、非HDL脂質低下薬剤、LDL低下薬剤、TG低下薬剤、コレステロール低下薬剤、HDL上昇薬剤、魚油、ナイアシン、フィブラート、スタチン、DCCR（ジアゾキシドの塩）、グルコース低下薬剤または抗糖尿病剤から選択される、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記動物が前記第２薬剤の最大忍容用量に応答することができない、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記第２薬剤が前記化合物と同時または逐次的に投与される、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記化合物が塩の形態である、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
化合物が薬学的に許容可能な担体または希釈剤と組み合わされる、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記化合物が複合体化アンチセンス化合物である、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
前記化合物には、炭水化物複合体基が結合している、請求項４１に記載の医薬組成物。
【外国語明細書】
2018168184000001.pdf