(57)【要約】      （修正有）【課題】２型糖尿病の治療のに有用な二重インクレチンペプチド模倣化合物の提供。【解決手段】式Ｉ：ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）ａ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２Ｈ（式中、ａは１〜２であり、ｂは１０〜２０である）によるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３はＰｈｅまたは１−Ｎａｌであり、Ｃ末端アミノ酸は任意にＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）の化合物を含み、その薬学的に許容可能な塩メトホルミン、チアゾリジンジオン、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ４阻害剤及びナトリウムグルコース共輸送体から選択される１種以上の薬剤の有効量と組み合わせて同時、別々または連続して投与される、医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
（式中、
Ｘ１はＡｉｂであり、
Ｘ２はＡｉｂであり、
２０位のＫは、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γ
Ｇｌｕ）ａ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２Ｈ（式中、ａは１〜２であり、ｂは１０〜２０
である）によるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、
Ｘ３はＰｈｅまたは１−Ｎａｌであり、
Ｃ末端アミノ酸は任意にＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号１１）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｘ３がＰｈｅである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘ３が１−Ｎａｌである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ｂが１４〜１８である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
ｂが１６〜１８である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
ｂが１８である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
ａが１である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
ａが２である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
前記Ｃ末端アミノ酸がＣ末端第一級アミドとしてアミド化される、請求項１〜８のいず
れか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘ１がＡｉｂであり、
Ｘ２がＡｉｂであり、
２０位のＫが、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γ
Ｇｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によ
って化学的に修飾され、
Ｘ３がＰｈｅであり、
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端第一級アミドとしてアミド化される（配列番号３）、
請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１１】
Ｘ１がＡｉｂであり、
Ｘ２がＡｉｂであり、
２０位のＫが、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γ
Ｇｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によ
って化学的に修飾され、
Ｘ３が１−Ｎａｌであり、
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端第一級アミドとしてアミド化される（配列番号４）、
請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１２】
前記式が、
【化１】
2018052933.tif 000019
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記式が、
【化２】
2018052933.tif 000020
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤ま
たは賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項１５】
２型糖尿病を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の請求項１〜１
３のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項１６】
メトホルミン、チアゾリジンジオン、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ４阻
害剤およびナトリウムグルコース共輸送体から選択される１種以上の薬剤の有効量と組み
合わせて同時、別々または連続して投与することをさらに含む、請求項１３に記載の方法
。
【請求項１７】
療法に使用するための請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
２型糖尿病の治療に使用するための請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
メトホルミン、チアゾリジンジオン、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ４阻
害剤およびナトリウムグルコース共輸送体から選択される１種以上の薬剤との同時、別々
または連続した組み合わせにおける請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬の分野に関する。より具体的には、本発明は、ヒトグルコース依存性イン
スリン分泌刺激ポリペプチド（ＧＩＰ）およびグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）
の両方に対する受容体を刺激し、２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）を治療するのに有用であり得る二
重インクレチンペプチド模倣化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｔ２Ｄは全ての糖尿病の中で約９０％を占める糖尿病の最も一般的な形態である。Ｔ２
Ｄはインスリン抵抗性によって引き起こされる高血糖値を特徴とする。Ｔ２Ｄに対する現
在の標準的な治療は利用可能な経口および注射可能なグルコース低下薬と共にダイエット
および運動を含む。それにも関わらず、Ｔ２Ｄを有する多くの患者は依然として不十分に
制御されているままである。現在市販されているインクレチン模倣薬またはジペプチジル
ペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤のみが、血糖管理についての作用の単一の確立
された機構を利用している。Ｔ２Ｄのための化合物は作用の二重機構を利用することを必
要とする。
【０００３】
ＧＩＰは、グルコースの存在下で膵臓ベータ細胞からインスリン分泌を刺激し、膵臓ベ
ータ細胞を保護することによってグルコース恒常性において生理的役割を果たす４２アミ
ノ酸胃腸調節ペプチドである。ＧＬＰ−１は、インスリン分泌を刺激し、膵臓ベータ細胞
を保護し、グルカゴン分泌、胃内容排出および食物摂取を阻害する３７アミノ酸ペプチド
であり、これにより体重減少がもたらされる。ＧＩＰおよびＧＬＰ−１はインクレチンと
して知られており、インクレチン受容体シグナル伝達はグルコース恒常性に重要である生
理的に関連する作用を及ぼす。正常な生理において、ＧＩＰおよびＧＬＰ−１は食後の胃
腸から分泌され、これらのインクレチンは、満腹の感覚、インスリン分泌および栄養分処
理を含む食物に対する生理反応を向上させる。Ｔ２Ｄ患者は正常に機能しないインクレチ
ン反応を有する。
【０００４】
ＧＬＰ−１類似体の投与は、吐き気および嘔吐などの副作用により制限されることが見
出されており、結果として、投与は、多くの場合、血糖管理および体重減少に対する十分
な効果を達成できない。ＧＩＰ単独では、２型糖尿病のヒトにおいて非常に低い程度のグ
ルコース低下能力を有する。天然のＧＩＰおよびＧＬＰ−１の両方は、遍在するプロテア
ーゼ、ＤＰＰ  ＩＶによって急速に不活性化されるので、短期間の代謝調節のために使用
されるだけであり得る。
【０００５】
グルカゴンは膵臓によって産生される２９アミノ酸ペプチドであり、グルカゴン受容体
と結合すると、血糖の増加を導くグルコースを放出するように肝臓にシグナル伝達する。
プログルカゴンのプロセシングから産生されるＧＬＰ−１と同様のペプチドであるＧＬＰ
−２は胃腸内の細胞増殖に関連することが知られている。したがって、グルカゴンおよび
ＧＬＰ−２受容体の刺激は、グルコース低下を最大化し、潜在的な長期間の発がんリスク
を減少させるために、Ｔ２Ｄ患者の長期間の処置の間、最小化されなければならない。
【０００６】
特定のＧＩＰ類似体は、特許文献１、特許文献２および特許文献３においてＧＩＰおよ
びＧＬＰ−１活性の両方を示すと記載されている。
【０００７】
ＤＰＰ  ＩＶはタンパク質分解酵素のエキソペプチダーゼクラスに存在する。配列内へ
の非天然アミノ酸の組み込みは任意の所与のペプチドのタンパク質分解安定性を増加させ
ることができる。非天然アミノ酸の使用はＤＰＰ  ＩＶタンパク質分解および分解の他の
形態に対するペプチドの安定性に役立ち得るが、非天然アミノ酸がＧＩＰとＧＬＰ−１と
の間のアゴニスト活性の平衡に対して予期しない効果を有し得ることが本発明の一部とし
て出願人によって発見された。非天然アミノ酸はまた、ペプチドが外来とみなされ得、ヒ
ト免疫原性および注射部位反応などの望ましくない免疫反応を引き起こす可能性を増加さ
せる。
【０００８】
それらのアルブミン結合モチーフを介して脂肪酸は、例えば半減期を延ばすことによっ
てペプチドの薬物動態を改善できる。脂肪酸の使用はペプチド半減期を改善できるが、脂
肪酸鎖およびペプチドと脂肪酸鎖との間のリンカーの長さ、組成および配置が、ＧＩＰお
よびＧＬＰ−１アゴニスト活性の平衡化に対して予期しない効果を有し得ることが本発明
の一部として出願人によって発見された。
【０００９】
特定のＧＬＰ−１類似体の耐容性は、血糖管理および体重減少に対する十分な効果を達
成するＧＬＰ−１類似体の用量を抑えることが見出されている。ＧＬＰ−１類似体が原因
である最も一般的な副作用は吐き気および嘔吐であるが、いくつかの化合物はまた、心拍
にも影響を及ぼし得る。ＨＰＡ軸は生理的ストレス反応の一部であり、ＧＬＰ−１はラッ
トにおいてＨＰＡ軸を刺激し、増加した心拍などの副作用に関連する可能性を示す、増加
したコルチコステロンレベルを生じることが見出されている。本発明の一部として、出願
人は予想外に、本発明の化合物が、ラットモデルにおいてセマグルチドで見られたように
向上したコルチコステロンレベルを生じなかったので、ＧＬＰ−１Ｒ選択的薬剤より高い
有効性レベルで投与できる可能性があることを見出した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２０１３／１６４４８３号
【特許文献２】国際公開第２０１４／１９２２８４号
【特許文献３】国際公開第２０１１／１１９６５７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
ＧＩＰおよびＧＬＰ−１受容体の平衡化されたコアゴニストであるが、関連するグルカ
ゴンおよびＧＬＰ−２受容体に対して選択的である化合物を提供する必要性が依然として
存在している。また、動物モデルにおいて見出される体重減少の所与の活性を与え得るＧ
ＩＰおよびＧＬＰ−１受容体の平衡化されたコアゴニスト活性を有する化合物を提供する
必要性が依然として存在している。さらに、ＤＰＰ  ＩＶおよび分解の他の形態に対して
適切な安定性を送達するＧＩＰおよびＧＬＰ−１受容体の平衡化されたコアゴニスト活性
を有するが、低い免疫原性の可能性を依然として維持している化合物を提供する必要性が
依然として存在している。また、ヒトにおいて１週間に１回の投与の可能性を支持するＧ
ＩＰおよびＧＬＰ−１受容体の平衡化されたコアゴニスト活性を有する化合物を提供する
必要性が依然として存在している。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
したがって、本発明の特定の化合物は、当該分野における特定のＧＩＰ−ＧＬＰ−１コ
アゴニスト化合物より、免疫原性および注射部位反応に対して低い可能性を有する。本発
明の特定の化合物は、動物エネルギー消費データに基づいて患者において体重減少を生じ
る可能性を有する。さらに、本発明の特定の化合物は、ＧＩＰおよびＧＬＰ−１受容体に
対して平衡化されたコアゴニスト活性ならびにグルカゴンおよびＧＬＰ−２受容体の両方
に対する選択性、低い免疫原性の可能性、ならびにヒトにおいて１週間に１回の投与を支
持する薬物動態（ＰＫ）特性を有する。
【００１３】
したがって、本発明の一実施形態は、式Ｉ：
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）ａ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−Ｃ
Ｏ２Ｈ（式中、ａは１〜２であり、ｂは１０〜２０である）によるＫ側鎖のε−アミノ基
との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３はＰｈｅまたは１−Ｎａｌであり、Ｃ末端アミ
ノ酸は任意にＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号１１）の化合物また
はその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１４】
さらなる実施形態において、本発明は、Ｘ１がＡｉｂであり、Ｘ２がＡｉｂであり、２
０位のＫが、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌ
ｕ）ａ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２Ｈ（式中、ａは１〜２であり、ｂは１０〜１８であ
る）によるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３がＰｈｅであ
り、Ｃ末端アミノ酸が任意にＣ末端第一級アミドとしてアミド化される、式Ｉの化合物ま
たはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１５】
さらなる実施形態において、本発明は、Ｘ１がＡｉｂであり、Ｘ２がＡｉｂであり、２
０位のＫが、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌ
ｕ）ａ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２Ｈ（式中、ａは１〜２であり、ｂは１０〜１８であ
る）によるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎａｌ
であり、Ｃ末端アミノ酸が任意にＣ末端第一級アミドとしてアミド化される、式Ｉの化合
物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１６】
さらなる実施形態において、本発明は、Ｘ１がＡｉｂであり、Ｘ２がＡｉｂであり、２
０位のＫが、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌ
ｕ）ａ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２Ｈ（式中、ａは１〜２であり、ｂは１４〜１８であ
る）によるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３はＰｈｅまた
は１−Ｎａｌであり、Ｃ末端アミノ酸が任意にＣ末端第一級アミドとしてアミド化される
、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。さらなる実施形態において
、本発明は、ｂが１６〜１８である化合物を提供する。さらに、本発明は、ｂが１８であ
る化合物を提供する。
【００１７】
さらなる実施形態において、本発明は、Ｘ１がＡｉｂであり、Ｘ２がＡｉｂであり、２
０位のＫが、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌ
ｕ）ａ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２Ｈ（式中、ａは１であり、ｂは１０〜１８である）
によるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３はＰｈｅまたは１
−Ｎａｌであり、Ｃ末端アミノ酸が任意にＣ末端第一級アミドとしてアミド化される、式
Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１８】
さらなる実施形態において、本発明は、Ｘ１がＡｉｂであり、Ｘ２がＡｉｂであり、２
０位のＫが、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌ
ｕ）ａ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２Ｈ（式中、ａは２であり、ｂは１０〜１８である）
によるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３はＰｈｅまたは１
−Ｎａｌであり、Ｃ末端アミノ酸が任意にＣ末端第一級アミドとしてアミド化される、式
Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１９】
さらなる実施形態において、本発明は、Ｘ１がＡｉｂであり、Ｘ２がＡｉｂであり、２
０位のＫが、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌ
ｕ）ａ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２Ｈ（式中、ａは１〜２であり、ｂは１０〜１８であ
る）によるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３はＰｈｅまた
は１−Ｎａｌであり、Ｃ末端アミノ酸がＣ末端第一級アミドとしてアミド化される、式Ｉ
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２０】
一実施形態において、本発明は、式：
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰ
Ｓ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ
酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号３）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２１】
一実施形態において、本発明は、式：
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎ
ａｌであり、Ｃ末端アミノ酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号４
）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２２】
一実施形態において、本発明は、式：
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰ
Ｓ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１６−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ
酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号５）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２３】
一実施形態において、本発明は、式：
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰ
Ｓ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１６−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ
酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号６）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２４】
一実施形態において、本発明は、式：
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰ
Ｓ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ
酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号７）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２５】
一実施形態において、本発明は、式：
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１６−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎ
ａｌであり、Ｃ末端アミノ酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号８
）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２６】
一実施形態において、本発明は、式：
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１６−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎ
ａｌであり、Ｃ末端アミノ酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号９
）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２７】
一実施形態において、本発明は、式：
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎ
ａｌであり、Ｃ末端アミノ酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号１
０）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２８】
一実施形態において、本発明は、本発明の化合物と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤
または賦形剤とを含む組成物を提供する。
【００２９】
一実施形態において、本発明は、２型糖尿病を治療する方法であって、有効量の本発明
の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。さらなる実
施形態において、本発明は、２型糖尿病を治療する方法であって、メトホルミン、チアゾ
リジンジオン、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ４阻害剤およびナトリウムグ
ルコース共輸送体から選択される１種以上の薬剤の有効量と組み合わせて同時、別々また
は連続して投与することをさらに含む、方法を提供する。
【００３０】
一実施形態において、本発明は、２型糖尿病を有する成人における血糖管理を改善する
方法であって、ダイエットおよび運動の補助として有効量の本発明の化合物を、それを必
要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。一実施形態において、本発明は、
開始肥満度指数≧２７および２型糖尿病を有する成人における長期間の体重管理のための
方法であって、低カロリーダイエットおよび増強させた身体活動の補助として有効量の本
発明の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００３１】
一実施形態において、本発明は、メタボリックシンドロームを治療する方法であって、
有効量の本発明の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法を提供す
る。さらなる実施形態において、本発明は、インスリン抵抗性および糖尿病に関連した脂
質異常症、肥満および／または脂肪肝を治療する方法であって、有効量の本発明の化合物
を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。さらに、本発明は、
フレイルを治療するかまたは骨強度を増加させる方法であって、有効量の本発明の化合物
を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００３２】
一実施形態において、本発明は、療法に使用するための本発明の化合物を提供する。さ
らなる実施形態において、本発明は、２型糖尿病の治療に使用するための本発明の化合物
を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、２型糖尿病の治療に使用するための
、メトホルミン、チアゾリジンジオン、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ４阻
害剤およびナトリウムグルコース共輸送体から選択される１種以上の薬剤と同時、別々ま
たは連続して組み合わせた本発明の化合物を提供する。
【００３３】
一実施形態において、本発明は、ダイエットおよび運動の補助として２型糖尿病を有す
る成人における血糖管理に使用するための本発明の化合物を提供する。一実施形態におい
て、本発明は、低カロリーダイエットおよび増強させた身体活動の補助として、開始肥満
度指数≧２７および２型糖尿病を有する成人における長期間の体重管理に使用するための
本発明の化合物を提供する。
【００３４】
一実施形態において、本発明は、２型糖尿病を治療するための医薬を製造するための本
発明の化合物の使用を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、２型糖尿病を治
療するための医薬を製造するための、メトホルミン、チアゾリジンジオン、スルホニル尿
素、ジペプチジルペプチダーゼ４阻害剤およびナトリウムグルコース共輸送体から選択さ
れる１種以上の薬剤と同時、別々または連続して組み合わせた本発明の化合物の使用を提
供する。
【００３５】
本発明は、平衡化したＧＩＰおよびＧＬＰ−１活性を示す化合物を提供する。本明細書
で使用される場合、ＧＩＰおよびＧＬＰ−１に対して平衡化した活性とは、１：１に近い
モル比、例えば１：１のＧＬＰ−１／ＧＩＰ、２：１のＧＬＰ−１／ＧＩＰ、３：２のＧ
ＬＰ−１／ＧＩＰ、１：２のＧＬＰ−１／ＧＩＰまたは２：３のＧＬＰ−１／ＧＩＰでイ
ンビトロ結合アッセイにおいてＧＩＰ受容体およびＧＬＰ−１受容体に対する親和性を有
する化合物を指す。
【００３６】
本発明は、グルカゴンおよびＧＬＰ−２についての受容体と比べてＧＩＰおよびＧＬＰ
−１受容体に対する選択性を示す化合物を提供する。グルカゴン活性と比較してＧＩＰお
よびＧＬＰ−１活性を参照して本明細書に使用される場合、「選択性」または「に対して
選択的」という用語は、データをそれぞれのインビトロ結合アッセイから正規化した場合
、グルカゴンより、ＧＩＰおよびＧＬＰ−１に対して１０００倍、５００倍または約１０
０倍高い有効性を示す化合物を指す。ＧＬＰ−２活性と比較してＧＩＰおよびＧＬＰ−１
活性を参照して本明細書に使用される場合、「選択性」または「に対して選択的」という
用語は、データをそれぞれのインビトロ機能アッセイから正規化した場合、ＧＬＰ−２よ
り、ＧＩＰおよびＧＬＰ−１に対して２５０倍、２００倍、１００倍または約５０倍高い
有効性を示す化合物を指す。
【００３７】
本発明は、患者における２型糖尿病を治療する方法であって、有効量の本発明の化合物
またはその薬学的に許容可能な塩を、そのような治療を必要とする患者に投与することを
含む、方法を提供する。本発明はまた、患者における２型糖尿病を治療する方法であって
、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、このような治療を必要と
する患者に投与することを含み、投与が皮下である、方法を提供する。本発明はまた、患
者における２型糖尿病を治療する方法であって、有効量の本発明の化合物またはその薬学
的に許容可能な塩と、同時、別々または連続して有効量の１種以上の他の有効成分とを、
そのような治療を必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。一実施形態に
おいて、他の有効成分（複数も含む）は、米国糖尿病学会などの業界のガイドラインによ
って決定される、標準的な治療を施す前に考慮される薬物のクラスからの現在利用可能な
経口グルコース低下薬である。
【００３８】
本発明の化合物は、リジン側鎖のε−アミノ基と化学的に結合した脂肪酸を利用する。
脂肪酸はリンカーを介してリジン側鎖のε−アミノ基と結合する。リンカーは、［２−（
２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）ａ（式中、ａは１〜
２である）を含む。脂肪酸およびリンカーにおけるγ−グルタミン酸はアルブミン結合剤
として作用し、長時間作用する化合物を生成する可能性を与える。本発明の化合物は、（
［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）ａ−ＣＯ−
（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２Ｈ（式中、ａは１〜２であり、ｂは１０〜２０である）によるＫ側
鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾される２０位のリジンを含む。実施例１
および２の化学構造に示されるように、［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−
アセチルの第１の単位はリジン側鎖のε−アミノ基に連結する。次いで［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチルの第２の単位は、［２−（２−アミノ−エトキシ
）−エトキシ］−アセチルの第１の単位のアミノ基に結合する。次いで、γＧｌｕの第１
の単位は、側鎖のγ−カルボキシル基を介して［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキ
シ］−アセチルの第２の単位のアミノ基に結合する。ａ＝２である場合、γＧｌｕの第２
の単位は、側鎖のγ−カルボキシル基を介してγＧｌｕの第１の単位のα−アミノ基に結
合する。最後に、対称脂肪酸が、γＧｌｕの第１（ａ＝１である場合）または第２（ａ＝
２である場合）の単位のα−アミノ基に結合する。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
本発明の化合物は、好ましくは、非経口経路（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内
または経皮）によって投与される医薬組成物として製剤化される。このような医薬組成物
およびそれを調製するプロセスは当該分野において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔ
ｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（
Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ，Ｅｄｉｔｏｒ，２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，
Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００６を参照のこと）。好ましい投与経路は
皮下である。
【００４０】
本発明の化合物は、多くの無機および有機酸のいずれかと反応して薬学的に許容可能な
酸付加塩を形成できる。薬学的に許容可能な塩およびそれらを調製する一般的な方法は当
該分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔ  ａｌ．  Ｈａｎｄｂｏｏｋ
ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅ
ｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ，２ｎｄ  Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ−
ＶＣＨ，２０１１）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃ
ａｌ  Ｓａｌｔｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ  １９７７を参照のこと。本発明の
薬学的に許容可能な塩は、トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩および酢酸塩を含む。
【００４１】
本明細書に使用される場合、「有効量」という用語は、患者に単回または複数回投与さ
れると、診断または治療下の患者に所望の効果を与える本発明の化合物またはその薬学的
に許容可能な塩の量または用量を指す。有効量は、公知の技術の使用によって、および同
様の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者としての担当診断医によって
容易に決定できる。患者にとっての有効量を決定する際に、限定されないが、哺乳動物の
種、その大きさ、年齢および全体的な健康、関与する特定の疾患または傷害、疾患または
傷害の関与の程度または重症度、個々の患者の反応、投与される特定の化合物、投与様式
、投与される製剤の生体利用特性、選択される投薬レジメン、併用薬の使用および他の関
連状況を含む、多くの要因が担当診断医によって考慮される。
【００４２】
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療すること」という用語は、既存
の症状または傷害の進行または重症度を抑制、遅延、停止または反転することを含む。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「セマグルチド」とは、ＣＡＳ登録番号９１０４６３−６
８−２に見出されるもののペプチド骨格および化合物全体の構造を有する化学的に合成さ
れたＧＬＰ−１類似体を指す。
【００４４】
本発明の特定の化合物は概して広範囲の投薬量にわたって効果的である。例えば、１週
間に１回の投与の投薬量は約０．０５〜約３０ｍｇ／ヒト／週の範囲内であり得る。本発
明の特定の化合物は１日に１回投与されてもよい。さらに、本発明の特定の化合物は１週
間に１回投与されてもよい。
【００４５】
本発明のアミノ酸配列は２０個の天然のアミノ酸についての標準的な一文字または三文
字コードを含む。さらに、「Ａｉｂ」はαアミノイソ酪酸であり、「１−Ｎａｌ」は１−
ナフチルアラニンである。
【００４６】
本発明はまた、本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の合成に有用な新規中
間体およびプロセスを包含する。本発明の中間体および化合物は当該分野において公知の
様々な手順によって調製され得る。特に、化学合成を使用するプロセスが以下の実施例に
例示される。記載される経路の各々についての特定の合成工程は本発明の化合物またはそ
の塩を調製するために異なる方法で組み合わされてもよい。試薬および出発物質は当業者
に容易に入手可能である。これらの実施例は本発明の範囲を限定することを決して意図し
ていないことは理解される。
【実施例】
【００４７】
実施例１
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ
酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号３）
トリフルオロ酢酸塩
【００４８】
【化１】
2018052933.tif 000002
上記の構造は、アミノ酸残基の構造が拡張されている残基Ａｉｂ２、Ａｉｂ１３および
Ｋ２０を除いて標準的な一文字アミノ酸コードを含む。
【００４９】
本発明の配列番号３によるペプチドは、ＲＡＰＰ  ＡＭ−Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ樹脂か
ら開始して、２５℃にて９０分間のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のジイソプロピル
カルボジイミド（ＤＩＣ）およびヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（１：１：
１のモル比）で活性化した６当量のアミノ酸を使用するカップリングを用いたＳｙｍｐｈ
ｏｎｙ自動ペプチドシンセサイザー（ＰＴＩ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ
ｓ  Ｉｎｃ．）で実施されるＦｍｏｃ／ｔ−Ｂｕストラテジーを使用して固相ペプチド合
成によって生成される。
【００５０】
Ｐｒｏ３１、Ｔｒｐ２５、Ｇｌｎ２４、Ｖａｌ２３、Ｐｈｅ２２、ＬＹｓ２０、Ｇｌｙ
４、Ｇｌｕ３およびＡｉｂ２について延長したカップリング（各々４時間）は粗ペプチド
の質を改善するために必要である。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨ構成要素が、
合成プロセスにおいて後での脂肪酸部分の部位特異的結合を可能にするＬｙｓ２０カップ
リング（直交保護基）のために使用される。以下の条件が１２位のＦｍｏｃ−Ｉｌｅ−Ｏ
Ｈのカップリングのために使用される：２５℃にて２４時間、ＤＭＦ中のＦｍｏｃ−Ｉｌ
ｅ−ＯＨ（６当量）、ＰｙＢＯＰ（６当量）およびＤＩＥＡ（１２当量）。Ｎ末端残基が
、上記のＤＩＣ−ＨＯＢｔプロトコルを使用してＢｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨとして
組み込まれる。
【００５１】
上記のペプチド樹脂の伸長を終えた後、Ｌｙｓ２０に存在するＡｌｌｏｃ保護基は、捕
捉剤としてＰｈＳｉＨ３の存在下で触媒量のＰｄ（ＰＰｈ３）４を使用して取り除かれる
。Ｌｙｓ２０側鎖を伸長するためにＦｍｏｃ／ｔ−Ｂｕストラテジーを使用したさらなる
カップリング／脱保護サイクルは、Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ２−ＣＨ２ＣＯＯＨ（Ｃｈｅ
ｍＰｅｐカタログ番号２８０１０２）、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＨ）−ＯｔＢｕ（Ｃｈｅｍ
Ｐｅｐカタログ番号１００７０３）およびＨＯＯＣ−（ＣＨ２）１８−ＣＯＯｔＢｕを含
んだ。全てのカップリングにおいて、３当量の構成要素が、２５℃にて４時間、ＤＭＦ中
のＰｙＢＯＰ（３当量）およびＤＩＥＡ（６当量）と共に使用される。
【００５２】
樹脂および側鎖保護基の除去に付随する開裂は、２５℃にて２時間、９０：４：２：２
：２（ｖ／ｖ）のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）：トリイソプロピルシラン：１，２−エタ
ンジチオール：水：チオアニソールを含有する溶液中で実施され、続いて冷エタノールで
沈殿が起こる。粗ペプチドを、Ｃ１８カラムでの水／アセトニトリル（０．０５％ｖ／ｖ
のＴＦＡを含有する）勾配による逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーによって９９％超の純
度（１５〜２０％の精製した収率）に精製し、適切な画分をプールし、凍結乾燥する。
【００５３】
本質的に上記のように実施した合成において、実施例１の純度を分析的逆相ＨＰＬＣに
よって調べ、ＬＣ／ＭＳを使用して識別を確認した（観測値：Ｍ＋３Ｈ＋／３＝１６０５
．２；計算値Ｍ＋３Ｈ＋／３＝１６０５．５；観測値：Ｍ＋４Ｈ＋／４＝１２０４．３；
計算値：Ｍ＋４Ｈ＋／４＝１２０４．４）。
【００５４】
実施例２
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰ
ＰＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎ
ａｌであり、Ｃ末端アミノ酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号４
）
トリフルオロ酢酸塩
【００５５】
【化２】
2018052933.tif 000003
上記の構造は、アミノ酸残基の構造が拡張されている残基Ａｉｂ２、Ａｉｂ１３、Ｋ２
０および１−Ｎａｌ２２を除いて標準的な一文字アミノ酸コードを含む。
【００５６】
本発明の配列番号４によるペプチドは上記の実施例１に記載されるように同様に合成さ
れる。以下の条件が２２位のＦｍｏｃ−１Ｎａｌ−ＯＨのカップリングのために使用され
る：２５℃にて４時間、ＤＭＦ中のＦｍｏｃ−１Ｎａｌ−ＯＨ（６当量）、ＰｙＢＯＰ（
６当量）およびＤＩＥＡ（１２当量）。
【００５７】
実施例３
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１６−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ
酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号５）
トリフルオロ酢酸塩
【００５８】
本発明の配列番号５による化合物は上記の実施例１に記載されるように同様に合成され
る。
【００５９】
実施例４
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１６−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ
酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号６）
トリフルオロ酢酸塩
【００６０】
本発明の配列番号６による化合物は上記の実施例１に記載されるように同様に合成され
る。
【００６１】
実施例５
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ
酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号７）
トリフルオロ酢酸塩
【００６２】
本発明の配列番号７による化合物は上記の実施例１に記載されるように同様に合成され
る。
【００６３】
実施例６
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰ
ＰＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１６−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎ
ａｌであり、Ｃ末端アミノ酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号８
）
トリフルオロ酢酸塩
【００６４】
本発明の配列番号８による化合物は上記の実施例に記載されるように同様に合成される
。
【００６５】
実施例７
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰ
ＰＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１６−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎ
ａｌであり、Ｃ末端アミノ酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号９
）
トリフルオロ酢酸塩
【００６６】
本発明の配列番号９による化合物は上記の実施例に記載されるように同様に合成される
。
【００６７】
実施例８
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰ
ＰＰＳ
（式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎ
ａｌであり、Ｃ末端アミノ酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号１
０）
トリフルオロ酢酸塩
【００６８】
本発明の配列番号１０による化合物は上記の実施例１に記載されるように同様に合成さ
れる。
【００６９】
アッセイ
いくつかのアッセイ：インビトロ機能および選択性、免疫原性プロファイリング、薬物
動態およびインビボ２型糖尿病モデルにおける実施例についての条件およびデータが以下
に提供される。
【００７０】
インビトロ機能および選択性
ヒトＧＬＰ−１およびＧＩＰ受容体に対するインビトロ結合効力
ヒトＧＬＰ１Ｒ  ｃＤＮＡまたはヒトＧＩＰ−Ｒ  ｃＤＮＡのいずれかを過剰発現する
クローン細胞株から得た粗細胞膜を使用してＫｉとして結合親和性を測定することによっ
てヒトＧＩＰおよびＧＬＰ−１受容体に対する本発明の化合物のインビトロ結合効力を評
価する。
【００７１】
ヒトグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド受容体結合アッセイは、ｐｃＤ
ＮＡ３．１（Ｐｒｏｍｅｇａ）−ＮｅｏＲプラスミド内にクローニングしたｈＧＩＰ−Ｒ
（Ｕｓｄｉｎ，Ｔ．Ｂ．，Ｇｒｕｂｅｒ，Ｃ．，Ｍｏｄｉ，Ｗ．およびＢｏｎｎｅｒ，Ｔ
．Ｉ．，ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ８４４１８．１）を使用する。ｈＧＩＰ−Ｒ−ｐｃＤＮ
Ａ３．１／Ｎｅｏプラスミドを、懸濁培養のためのチャイニーズハムスター卵巣細胞、Ｃ
ＨＯ−Ｓ内にトランスフェクトし、５００μｇ／ｍＬのジェネティシン（Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎ）の存在下で選択する。
【００７２】
懸濁培養からの細胞を使用して粗細胞膜を調製する。細胞を、ＥＤＴＡを有さず、２５
ｍＭのＴｒｉｓ  ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１ｍＭのＭｇＣｌ２、ＤＮＡｓｅｌ、２０μ／ｍ
ＬのＲｏｃｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（商標）阻害剤を含有する低張緩衝液中で、氷上で溶
解する。細胞懸濁液を、２５ストロークでＴｅｆｌｏｎ（登録商標）乳棒を使用してガラ
スダウンス型ホモジナイザーで均質化する。ホモジネートを、４℃、１８００×ｇにて１
５分間、遠心分離する。上清を回収し、ペレットを低張緩衝液に再懸濁し、再均質化する
。混合物を１８００×ｇにて１５分間、遠心分離する。２番目の上清を最初の上清と合わ
せる。合わせた上清を１８００×ｇにて１５分間、再遠心分離して清澄化する。清澄化し
た上清を高速チューブに移し、４℃、２５，０００×ｇにて３０分間、遠心分離する。膜
ペレットを均質化緩衝液中に再懸濁し、使用するまで、−８０℃のフリーザーにて凍結ア
リコートとして保存する。
【００７３】
ＧＩＰをＩ−１２５−ラクトペルオキシダーゼ手順（Ｍａｒｋａｌｏｎｉｓ，Ｊ．Ｊ．
，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１１３：２９９（１９６９））によって放射性ヨウ化し、逆相Ｈ
ＰＬＣ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ  ＮＥＸ−４０２）によって精製する。比放射能は２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌで
ある。飽和結合の代わりに冷ｈＧＩＰを使用した同種競合によってＫＤ測定を実施する。
１％脂肪酸不含ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ、７．５％ＢＳＡ）で以前に遮断したコムギ胚芽凝集
素（ＷＧＡ）ビーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃ
ａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いたシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を使用して
受容体結合アッセイを実施する。結合緩衝液は、ＥＤＴＡを有さず、２５ｍＭのＨＥＰＥ
Ｓ、ｐＨ７．４、２．５ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１％の脂肪酸不含
ＢＳＡ、０．００３％のＴｗｅｅｎ２０およびＲｏｃｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（商標）阻
害剤を含有する。ｈＧＩＰおよび本発明の化合物を１００％のＤＭＳＯに溶解し、−２０
℃で保存する。化合物を結合緩衝液中に連続希釈する。次に、１０μＬの希釈した化合物
または１００％のＤＭＳＯを、４０μＬのアッセイ結合緩衝液または冷ＧＩＰ（０．１μ
Ｍ最終にてＮＳＢ）を含有するＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）３６３２透明底アッセイプレ
ート内に移す。次いで、９０μＬの膜（３μｇ／ウェル）、５０μＬの［１２５Ｉ］ＧＩ
Ｐ（反応物中に０．１５ｎＭ最終にてＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａ
ｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、および５０μＬのＷＧＡビーズ（１５０μｇ
／ウェル）を加え、密封し、プレートシェーカー上で１分間混合する。室温にて１２時間
の設定時間後にＭｉｃｒｏＢｅｔａ（登録商標）シンチレーションカウンタでプレートを
読み取る。
【００７４】
化合物の存在下で特異的Ｉ−１２５−ＧＩＰ結合の百分率として結果を算出する。絶対
ＩＣ５０濃度を、加えた化合物の濃度に対するＩ−１２５−ＧＩＰの特異的結合パーセン
トの非線形回帰によって導く。Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式を使用してＩＣ５０濃度を
Ｋｉに変換する。
【００７５】
ＧＬＰ−１受容体結合アッセイは、２９３ＨＥＫ膜から単離したクローニングしたヒト
グルカゴン様ペプチド１受容体（ｈＧＬＰ−１Ｒ）（Ｇｒａｚｉａｎｏ  ＭＰ，Ｈｅｙ  
ＰＪ，Ｂｏｒｋｏｗｓｋｉ  Ｄ，Ｃｈｉｃｃｈｉ  ＧＧ，Ｓｔｒａｄｅｒ  ＣＤ，Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．１９６（１）：１４１−６，１９９
３）を使用する。ｈＧＬＰ−１Ｒ  ｃＤＮＡを、発現プラスミドｐｈＤ（十分にガンマ−
カルボキシ化された組換えヒトタンパク質Ｃのトランス−活性化発現、抗血栓因子）内に
サブクローニングする。Ｇｒｉｎｎｅｌｌ，Ｂ．Ｗ．，Ｂｅｒｇ．Ｄ．Ｔ．，Ｗａｌｌｓ
，Ｊ．  ａｎｄ  Ｙａｎ，Ｓ．Ｂ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５：１１８９−１１
９２，１９８７）。このプラスミドＤＮＡを２９３ＨＥＫ細胞内にトランスフェクトし、
２００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンで選択する。
【００７６】
懸濁培養物からの細胞を使用して粗細胞膜を調製する。細胞を、ＥＤＴＡを有さず、２
５ｍＭのＴｒｉｓ  ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１ｍＭのＭｇＣｌ２、ＤＮＡｓｅｌ、２０μ／
ｍＬおよびＲｏｃｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（商標）阻害剤を含有する低張緩衝液中で、氷
上で溶解する。細胞懸濁液を、２５ストロークでＴｅｆｌｏｎ（登録商標）乳棒を使用し
てガラスダウンス型ホモジナイザーで均質化する。ホモジネートを、４℃、１８００×ｇ
にて１５分間、遠心分離する。上清を回収し、ペレットを低張緩衝液に再懸濁し、再均質
化する。混合物を１８００×ｇにて１５分間、遠心分離する。２番目の上清を最初の上清
と合わせる。合わせた上清を１８００×ｇにて１５分間、再遠心分離して清澄化する。清
澄化した上清を高速チューブに移し、４℃、２５０００×ｇにて３０分間、遠心分離する
。膜ペレットを均質化緩衝液中に再懸濁し、使用するまで、−８０℃のフリーザーにて凍
結アリコートとして保存する。
【００７７】
グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）をＩ−１２５−ラクトペルオキシダーゼ手順に
よって放射性ヨウ化し、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉ
ｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＮＥＸ３０８）での逆相ＨＰＬＣによって精製する。比放射
能は２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌである。Ｉ−１２５ＧＬＰ−１物質中の高プロパノール含有
量に起因して飽和結合の代わりに同種競合によってＫＤ測定を実施する。ＫＤは０．３２
９ｎＭであると推定し、試験した全ての化合物についてのＫｉ値を算出するために使用す
る。
【００７８】
１％脂肪酸不含ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ）で以前に遮断したコムギ胚芽凝集素（ＷＧＡ）ビ
ーズを用いたシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を使用して受容体結合アッセイを
実施する。結合緩衝液は、ＥＤＴＡを有さず、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、２．
５ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１％の脂肪酸不含ＢＳＡ、０．００３％
のＴｗｅｅｎ２０およびＲｏｃｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（商標）阻害剤を含有する。グル
カゴン様ペプチド１を１ｍｇ／ｍＬにて１００％のＤＭＳＯに溶解し、３０μＬのアリコ
ート中で−２０℃にて凍結保存する。グルカゴン様ペプチド１アリコートを希釈し、１時
間以内に結合アッセイに使用する。ペプチド類似体を１００％のＤＭＳＯに溶解し、１０
０％のＤＭＳＯ中で連続希釈する。次に、１０μＬの希釈した本発明の化合物または１０
０％のＤＭＳＯを、４０μＬのアッセイ結合緩衝液または冷グルカゴン（１μＭ最終にて
ＮＳＢ）を含有するＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）３６３２透明底アッセイプレート内に移
す。次いで、９０μＬの膜（０．５μｇ／ウェル）、５０μＬのＩ−１２５グルカゴン様
ペプチド１（反応物中に０．１５ｎＭ最終）、および５０μＬのＷＧＡビーズ（１５０μ
ｇ／ウェル）を加え、密封し、プレートシェーカー上で１分間混合する。室温にて１２時
間の設定時間後にＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｔｒｉｌｕｘ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａ（登録商標）シンチレーションカ
ウンタでプレートを読み取る。
【００７９】
化合物の存在下で特異的Ｉ−１２５−グルカゴン様ペプチド１結合の百分率として結果
を算出する。化合物の絶対ＩＣ５０濃度を、加えた化合物の濃度に対するＩ−１２５−グ
ルカゴン様ペプチド１の特異的結合パーセントの非線形回帰によって導く。Ｃｈｅｎｇ−
Ｐｒｕｓｏｆｆ式を使用してＩＣ５０濃度をＫｉに変換する。
【００８０】
このアッセイにおいて本質的に記載されるように実施した実験において、本発明の特定
の化合物は約０．５〜４．０のｈＧＬＰ−１Ｒ／ｈＧＩＰＲ比を示す（表１）。結合分子
比を、天然ＧＩＰおよびＧＬＰ−１の混合物の対応する分子比に正規化する。この正規化
因子は、ＧＩＰ（Ｋｉ＝０．１７５ｎＭ）およびＧＬＰ−１（Ｋｉ＝０．７９３ｎＭ）に
ついての結合データに基づいて４．５３である。１．４８の値は実施例１の平衡化したコ
アゴニスト活性を実証する。
【００８１】
【表１】
2018052933.tif 000004
【００８２】
平均は標準誤差（ＳＥＭ）と共に幾何平均として表し、再現回数（ｎ）を丸括弧で示す
。修飾子（＞）は、データが５０％阻害に到達しなかったことを示し、Ｋｉは、アッセイ
において試験した最も高い濃度を使用して算出する。
【００８３】
機能的ｈＧＩＰ−Ｒ、ｈＧＬＰ−１ＲおよびｈＧＣＧＲアッセイ
本発明の化合物についてのヒトＧＩＰ、ＧＬＰ−１およびグルカゴン受容体に対するイ
ンビトロ機能活性を、これらの受容体を発現するＨＥＫ−２９３クローン細胞株において
決定する。各々の受容体を過剰発現する細胞株を、４０μｌアッセイ体積中の１×Ｇｌｕ
ｔａＭＡＸ（商標）（Ｇｉｂｃｏ  カタログ番号３５０５０）、０．２５％のＦＢＳ、０
．０５％の画分Ｖ  ＢＳＡ、２５０μＭのＩＢＭＸおよび２０ｍＭのＨＥＰＥＳを補足し
たＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号３１０５３）中の本発明の化合物で処理する。室温
にて６０分のインキュベーション後、生じた細胞内ｃＡＭＰの増加を、ＣｉｓＢｉｏ  ｃ
ＡＭＰ  Ｄｙｎａｍｉｃ  ２  ＨＴＲＦアッセイキット（Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）を使用
して定量的に決定する。簡潔に述べると、細胞溶解緩衝液（２０μｌ）中のｃＡＭＰ−ｄ
２結合体、続いてまた細胞溶解緩衝液（２０μｌ）中の抗体抗ｃＡＭＰ−Ｅｕ３＋−クリ
プテートを加えることによって細胞内のｃＡＭＰレベルを検出する。得られた競合アッセ
イを、室温にて少なくとも６０分間、インキュベートし、次いで３２０ｎｍの励起ならび
に６６５ｎｍおよび６２０ｎｍの発光を用いてＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏ
ｎ（登録商標）機器を使用して検出する。想定単位（６６５ｎｍ／６２０ｎｍ＊１０，０
００の発光）は、存在するｃＡＭＰの量に反比例し、ｃＡＭＰ標準曲線を使用してウェル
ごとにｎＭ  ｃＡＭＰに変換する。各ウェルにおける生成したｃＡＭＰの量（ｎＭ）を、
ヒトＧＩＰ（１−４２）ＮＨ２、ヒトＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ２またはヒトグルカゴ
ン対照のいずれかで観察された最大反応のパーセントに変換する。相対ＥＣ５０値および
最大パーセント（Ｅｍａｘ）を、４パラメーターロジスティック式に適合した、本発明の
化合物の濃度に対する最大反応パーセントを使用して非線形回帰分析によって導く。
【００８４】
このアッセイにおいて本質的に記載されるように実施した実験において、本発明の特定
の化合物はヒトＧＩＰおよびＧＬＰ−１受容体に対する活性を実証し、一方でグルカゴン
受容体に対する選択性も実証する。表２において、受容体に対する機能的効力が、天然ｈ
ＧＩＰ（１−４２）ＮＨ２、ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ２およびｈグルカゴン対照な
らびに本発明の特定の化合物について示される。
【００８５】
【表２】
2018052933.tif 000005
【００８６】
ＥＣ５０についての平均は幾何平均＋／−標準誤差（ＳＥＭ）として表し、再現回数（
ｎ）を丸括弧で示す。Ｅｍａｘについての平均は算術平均＋／−標準誤差として表す。Ｎ
Ｄはアゴニスト活性が検出されなかったことを示す。修飾子（＞）は、ＥＣ５０が決定で
きなかったことを示す。示される全ての値は有効数字３桁である。
【００８７】
インクレチン分泌細胞株において細胞内ｃＡＭＰを生成するためのｈＧＩＰ−Ｒ細胞の
機能的活性化
本発明の化合物についてのｈＧＩＰ−Ｒの機能的活性化は、プログルカゴン遺伝子を発
現し、調節された様式でグルカゴン様ペプチドを分泌する安定な不死化された比較的分化
したマウス腸内分泌細胞株である、ＧＬＵＴａｇ細胞において細胞内ｃＡＭＰを生成する
化合物の能力によって実証される。細胞を、５．５ｍＭのグルコース、１０％のＦＢＳお
よび２ｍＭのグルタミンを補足したＤＭＥＭ培地中で３７℃、５％ＣＯ２、９５％湿度に
て維持する。アッセイの前に、細胞をトリプシン処理し、ペレット化し、２０，０００細
胞／ウェルの密度で９６ウェル組織培養アッセイプレート内に播種する。細胞を付着させ
、３７℃、５％ＣＯ２にて４８時間インキュベートする。アッセイの日に、培地を細胞か
らデカントし、種々の化合物濃度（０．００１〜３μＭ）を含有する５０μｌのＥＢＳＳ
緩衝液（０．１％のＢＳＡ、２ｍＭのグルコースおよび０．２５ｍＭのＩＢＭＸ）を細胞
に加える。プレートを３７℃にて１時間インキュベートし、Ｃｉｓｂｉｏ  Ｄｙｎａｍｉ
ｃ  ２  ｃＡＭＰ  ＨＴＲＦキット（Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）を使用してｃＡＭＰレベル
を決定する。２５μｌの抗ｃＡＭＰクリプテートおよび２５μｌのｃＡＭＰ  ｄ２を各ウ
ェルに加え、プレートを室温にて１時間インキュベートする。プレートをＴｅｃａｎ  Ｇ
ｅｎｉｏｓ  Ｐｒｏにおいて６２０ｎｍおよび６６５ｎｍで読み取る。結果を６６５ｎｍ
／６２０ｎｍ比に１００００を掛けて算出し、ｃＡＭＰ標準曲線を使用してウェルごとに
ｎＭ  ｃＡＭＰに変換する。４−パラメーター非線形ロジスティックアルゴリズムを使用
してＧｒａｐｈＰａｄによりデータを分析する。
【００８８】
このアッセイにおいて本質的に記載されるように実施した実験において、本発明の特定
の化合物はＧＬＵＴａｇ細胞の用量依存性の向上したｃＡＭＰ蓄積を示す（表３）。天然
ＧＬＰ−１対照は、試験した全ての濃度にてｃＡＭＰにおいて変化を誘導できず、この細
胞系はＧＩＰ受容体のみを発現することを示し、したがって本発明の特定の化合物はＧＩ
Ｐ受容体を介して効果を発揮することが示され得る。
【００８９】
【表３】
2018052933.tif 000006
【００９０】
ヒトＧＬＰ−２受容体を一過的に発現するＨＥＫ２９３細胞における細胞内ｃＡＭＰの
測定
本発明の化合物の存在下でのｈＧＬＰ−２Ｒの機能活性はＨＥＫ２９３細胞において細
胞内ｃＡＭＰを測定することによって実証される。これらの細胞を完全培地中で継代し、
Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｆｕｇｅｎｅ６試薬およびｐｃＤＮＡ３．１発現ベクター内のヒト完全
長ＧＬＰ−２Ｒ  ｃＤＮＡを含む懸濁液中でトランスフェクトし、加湿した３７℃、５％
ＣＯ２環境において組織培養フラスコに付着させる。約４８時間の増殖後、細胞を持ち上
げ、染色し、制御した冷凍速度で、抗凍結剤として１０％のＤＭＳＯで凍結保存する。そ
の後のアッセイにおいて、同じ凍結細胞からの単回のアッセイの準備をしたバイアルを解
凍してアッセイ間変動を最小化する。細胞アッセイの日に、凍結培地を、０．５％のＦＢ
Ｓを含有するＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ３１０５３  ＤＭＥＭと交換する。
【００９１】
細胞を生存について計数し、処理前に３７℃にて約１〜２時間平衡化する。本発明の化
合物をＤＭＳＯ中で溶解し、０．１％の画分Ｖ  ＢＳＡおよび非特異的ホスホジエステラ
ーゼ阻害剤、ＩＢＭＸを含有するＤＭＥＭ培地中ですぐに希釈する。処理時間は３７℃に
て３０分である。最終ＤＭＳＯ濃度は１．１％を超えず、最終ＩＢＭＸ濃度は２５０μＭ
である。均質時間分解蛍光技術（Ｃｉｓｂｉｏ  Ｂｉｏａｓｓａｙｓ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、
ＭＡ）を用いた動的２アッセイを使用して環状ＡＭＰを測定する。それぞれのｃＡＭＰ濃
度を計算の比率法および外部標準から推定する。４パラメーターロジスティック式を使用
して試験化合物のシグモイド型の用量反応を調べ、天然Ｃ１８アシル化リガンドと比較す
る。
【００９２】
このアッセイにおいて本質的に記載されるように実施した実験において、Ｃ１８アシル
化ヒトＧＬＰ−２対照は１．７１ｎＭの受容体活性化についてのＥＣ５０値を有するのに
対して、本発明の特定の化合物は約１００倍〜１０００倍高いＥＣ５０値を有する。本発
明の特定の化合物についてのＥＣ５０値はＧＬＰ−２受容体に対する選択性を実証する。
【００９３】
【表４】
2018052933.tif 000007
【００９４】
齧歯動物膵島インスリン分泌
生理的ＧＬＰ−１ＲおよびＧＩＰ−Ｒ発現レベルインスリン分泌を表すシステムにおい
て本発明の化合物の作用を評価するために、野生型齧歯動物膵島からのインスリン分泌に
対する効果についての化合物を試験する。
【００９５】
オスのＣ５７Ｂｌ／６マウス（２２〜２６ｇ）またはオスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌ
ｅｙラット（約２５０ｇ）における総胆管カニューレ挿入の後、膵臓を、２％のＢＳＡお
よび０．７５ｍｇ／ｍｌのＣｌｚｙｍｅコラゲナーゼ（ＶｉｔａＣｙｔｅ）を含有するハ
ンクス緩衝液（Ｈａｎｋ’ｓ  ｂｕｆｆｅｒ）（マウスに対して３ｍｌまたはラットに対
して１０ｍｌ）で膨張させる。続いて、組織を３７℃にて１１〜１３分（マウス）または
ラット膵臓に対して１４〜１６分間、ハンクス緩衝液内で消化する。精製した膵島（Ｈｉ
ｓｔｏｐａｑｕｅ−１１００勾配［Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ］、７５０×重力にて１
８分）を、１０％のＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのスト
レプトマイシンを含有するＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で一晩培
養し、０．１％のＢＳＡおよび２．８ｍＭのグルコースを補足したアール平衡塩緩衝液（
Ｅａｒｌｅ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＥＢＳＳ））中で飢
餓によって前処理する。続いて、膵島を、０．１％のＢＳＡ、２．８〜１１．２ｍＭのグ
ルコースを補足したＥＢＳＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中でインキュベートし、化合物の
レベルを増加させる（１つの条件当たり４つの膵島の６バッチ）。ＧＬＰ−１（７−３６
）アミド（３０ｎＭ）を陽性対照として使用する。ＭＳＤインスリンアッセイ（Ｍｅｓｏ
Ｓｃａｌｅ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を使用して上清中でインスリンを９０
分にわたって測定する。
【００９６】
本発明の特定の化合物は、表５に示されるようにラットおよびマウスの膵島の両方から
インスリン分泌を用量依存的に増加させる。
【００９７】
【表５】
2018052933.tif 000008
【００９８】
免疫原性プロファイリング
本発明の化合物についての免疫原性の危険性を、インシリコ（ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ）予
測プログラム、例えばＥｐｉｖａｘインシリコ分析を使用して評価する。本発明の化合物
についての免疫原性の危険性もまた、本発明の化合物の存在下で培養Ｔ細胞反応（３Ｈ−
チミジン取り込みおよびＩＬ−２サイトカイン分泌）を測定するエキソビボ法によって評
価する。
【００９９】
Ｅｐｉｖａｘ免疫−インフォマティックツール（ｉｍｍｕｎｅ−ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ
ｔｏｏｌ）を用いて、投与後の免疫反応を予測するために本発明の化合物についてイン
シリコ評価を実施する。この分析は、所与のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）対立遺伝子に結合
する９量体フレームの可能性および次いでこれらのＥｐｉ−Ｂａｒｓの検出を利用する。
実施例１について、約＋１．１３のＥｐｉＭａｔｒｉｘスコアは、＋１５．４のＥｐｉＭ
ａｔｒｉｘスコアである天然ＧＩＰペプチド骨格と比較して免疫反応を誘導するかなり低
い可能性を示す。国際公開第２０１１／１１９６５７号からのＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴ
ニストの実施例は＋２９．５のスコアを有する。
【０１００】
予測される臨床的免疫原性の測定もまた、世界のＨＬＡアロタイプ集団を代表する５０
人の健常なドナーのコホートにおいてＣＤ４＋Ｔ細胞増殖およびＩＬ−２サイトカイン分
泌の特性付けを使用することによって本発明の化合物について調べる。本発明の特定の化
合物は、曝露後のＴ細胞刺激およびＩＬ−２分泌の程度が、公知または陽性の免疫原性化
合物に関連する閾値を超えないことを実証し、臨床的免疫原性を生じる低い危険性を示す
。
【０１０１】
薬物動態
カニクイザルにおける薬物動態
カニクイザルを使用して本発明の化合物についてのインビボ薬物動態特性を実証する。
化合物は、０．２１ｍｌ／ｋｇの体積にて２０ｍＭのクエン酸緩衝液（ｐＨ７．０）中で
単回の静脈内または皮下投与（０．２ｍｇ／ｋｇ）によって投与する。投与後２、４、８
、１２、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４、１６８、２０４、２４０および３１
２時間にて血液を各動物から回収する。本発明の化合物の血漿濃度をＬＣ／ＭＳ法によっ
て決定する。簡潔に述べると、本発明の化合物は、１×ＰＢＳ（１５０μｌ）で希釈し、
Ｎ−ブタノール（４００μｌ）と混合した１００％のサル血漿試料（５０μｌ）から抽出
される。３つの異なる液体層が上層に位置する化合物と共に形成される。２００μｌの体
積をｖ底９６ウェルプレートに移し、加熱した窒素ガスを使用してドライダウンし、１０
０μｌの３０％アセトニトリル／０．１％ギ酸で再構成する。２０μｌの再構成した試料
を、Ｓｕｐｅｌｃｏ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｂｉｏ  ｗｉｄｅ  
Ｃ５  ３μｍカラム上に注入する。カラム流出物を、検出および定量のためにＴｈｅｒｍ
ｏ  Ｑ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計に誘導する。
【０１０２】
このアッセイについて本質的に記載されるように実施される実験において、実施例１は
、皮下投与の約８時間後、平均最大血漿濃度に到達した。平均半減期は５５時間であり、
平均クリアランスは０．７３ｍＬ／ｈｒ／ｋｇである。生物学的利用能は約８３％である
。このデータは、実施例１について１週間に１回の投薬の可能性を支持する。本発明の他
の化合物についてのデータを表６にまとめる。
【０１０３】
【表６】
2018052933.tif 000009
【０１０４】
用量有効性予測
ラットにおける経静脈的グルコース耐性試験（ｉｖＧＴＴ）を使用して、セマグルチド
と比較した本発明の化合物の相対的有効性を推定する。０．１〜１０ｎｍｏｌ／ｋｇの各
化合物の単回皮下（ＳＣ）用量をラットに投与し、投与の１６時間後、ｉｖＧＴＴを各ラ
ットに投与する。曝露をｉｖＧＴＴのときに測定し、曝露反応モデリングについて、ｉｖ
ＧＴＴに対して反応するインスリンＡＵＣを主要エンドポイントとして使用する。
【０１０５】
Ｅｍａｘモデルを使用して、実施例１についての曝露反応プロファイルをセマグルチド
と比較する。このアッセイについて本質的に記載されるように実施される実験において、
曝露は、用量レベルに関して実施例１およびセマグルチドについて本質的に同様であり、
アッセイの定量の限界を上回る薬物レベルを有した。両方のデータセットを同時に適合し
、Ｅ０およびＥｍａｘ値は両方の化合物について同様であるように制限する。ＥＤ５０値
のみ、化合物について別々に適合する。セマグルチドについてのＥＤ５０値は０．６＋／
−０．２ｎｍｏｌ／ｋｇと推定する。実施例１の有効性はセマグルチドに対して相対的に
有効と推定され、セマグルチドの有効性の１．７＋／−０．６倍である。サルにおける２
つの分子間のＣＬ／Ｆ（見かけのクリアランス）差およびまた、分子量の差について調節
して、１ｍｇのセマグルチドに対する予測平均ヒト等価用量は実施例１について約１．３
ｍｇ／週である。
【０１０６】
２型糖尿病
経静脈グルコース（ＩＶＧＴＴ）後のラットのインビボでのインスリン分泌
オスのＷｉｓｔａｒラット（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉ
Ｎ）を体重により無作為化し、グルコース投与の１６時間前に１．５ｍｌ／ｋｇ  ｓ．ｃ
．投与し、次いで絶食させた。投与はビヒクル、０．１、０．３、１、３および１０ｎｍ
ｏｌ／ｋｇである。動物の体重を量り、次いでペントバルビタールナトリウム（ネムブタ
ルナトリウム溶液、Ｏｖａｔｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）をｉ．ｐ．投与
（６５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｍｌ）して麻酔する。０時の血液試料をＥＤＴＡチューブ
内に回収し、その後、グルコースを投与する（０．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｌ／ｋｇ）。血液
試料をグルコース後、２、４、６、１０、２０および３０分に回収する。Ｈｉｔａｃｈｉ
分析器（Ｒｏｃｈｅ）を使用して血漿グルコース値を決定し、ＭＳＤインスリンアッセイ
（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）によって血漿インスリンを
測定する。
【０１０７】
表７に示すように、本発明の特定の化合物は、グルコースのｉ．ｖ．注射後、インスリ
ン分泌を用量依存的に増加させる。インスリンについてのＥＤ５０およびインスリン分泌
の最大増加（インスリン曲線下面積として測定した）を表７に与える。
【０１０８】
【表７】
2018052933.tif 000010
【０１０９】
食餌性肥満（ＤＩＯ）マウスにおける体重減少、身体組成および脂肪肝に対する効果
本発明の化合物についてＤＩＯマウスにおける体重減少、身体組成および脂肪肝に対す
る効果を、Ｃ５７／ＢＬ６  ＤＩＯマウスにおいて評価する。糖尿病ではないが、これら
の動物は、１２週間の高脂肪（脂肪から６０％Ｋｃａｌ）食餌を受けた後、インスリン抵
抗性、脂質異常症および脂肪肝を示し、これらは全てメタボリックシンドロームの特徴で
ある。
【０１１０】
この研究において、２３〜２４週齢のオスの食餌性肥満（ＤＩＯ）Ｃ５７／Ｂｌ６オス
マウスを使用し、各々は４１〜４９ｇの体重であり、１０．５〜１７．５ｇの範囲の開始
脂肪質量を有する。動物を１２時間の明／暗サイクル（２２：００に点灯）で温度制御さ
れた（２４℃）施設内に個々に収容し、食餌および水を自由に取らせる。２週間施設に馴
化した後、マウスを体重に基づいて処置群（ｎ＝５／群）に無作為化したので、各群は同
様の開始平均体重を有する。
【０１１１】
ビヒクル対照、本発明の化合物（１０〜１００ｎｍｏｌ／ｋｇの範囲の用量）またはビ
ヒクル（ｐＨ７．０にて２０ｍＭのクエン酸緩衝液）に溶解した長時間作用するＧＬＰ１
類似体セマグルチド（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ）をＳＣ注射により投与し、１５日の間、３日
ごとに暗サイクルの開始前に３０〜９０分、ＤＩＯマウスに自由に食餌を取らせる。ＳＣ
注射を１、４、７、１０および１３日に行う。研究の間を通して毎日の体重および食餌摂
取を測定する。化合物の最初の注射前に同じ動物の体重を差し引くことによって体重の絶
対的変化を算出する。０および１４日目に、Ｅｃｈｏ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ（
Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ）機器を使用して核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって全脂肪質量を測定
する。
【０１１２】
１５日目に、Ａｃｃｕ−Ｃｈｅｋグルコメーター（Ｒｏｃｈｅ）を用いて尾静脈血液か
ら血糖を測定し、次いで動物を屠殺でき、肝臓を取り除き、凍結する。屠殺時に回収した
肝臓のホモジネートから決定した肝臓トリグリセリド、および血漿コレステロールをＨｉ
ｔａｃｈｉ  Ｍｏｄｕｌａｒ  Ｐ臨床分析器で測定する。一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗ
ａｙ  ＡＮＯＶＡ）、続いてダネット多重比較検定を使用して群間の統計比較を行う。体
重減少低下についてのＥＤ５０を、非線形適合ツールを使用してＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒ
ｉｓｍにおいて決定する。
【０１１３】
このアッセイにおいて本質的に記載されるように実施した実験において、本発明の特定
の化合物は体重および脂肪質量を用量依存的に減少させ（表８〜１３）、セマグルチドと
比較して、体重低下の有効性が３〜５倍高くなり得る。体重減少パーセントにおける実施
例１のＥＤ５０は５．４２２ｎｍｏｌ／ｋｇである（９５％信頼区間レベル［ｎｍｏｌ／
ｋｇ］＝２．２〜１３．６）。減少した体重は脂肪質量の減少に起因して一次的であると
見られる。
【０１１４】
【表８】
2018052933.tif 000011
【０１１５】
【表９】
2018052933.tif 000012
【０１１６】
【表１０】
2018052933.tif 000013
【０１１７】
【表１１】
2018052933.tif 000014
【０１１８】
【表１２】
2018052933.tif 000015
【０１１９】
【表１３】
2018052933.tif 000016
【０１２０】
ＤＩＯマウスにおけるエネルギー代謝に対する効果
本発明の化合物についてのＤＩＯマウスにおけるエネルギー代謝に対する効果を、４３
〜５０ｇの体重の２６週齢のＣ５７／Ｂｌ６  ＤＩＯオスマウスにおいて評価する。マウ
スを、１２時間の明／暗サイクル（２２：００に点灯）で温度制御された（２４℃）施設
に個々に収容し、食餌ＴＤ９５２１７（Ｔｅｋｌａｄ）および水を自由に取らせる。２週
間施設に馴化した後、マウスを体重に基づいて処置群（ｎ＝６／群）に無作為化したので
、各群は同様の開始平均体重を有する。動物を馴化の３日間、ＰｈｅｎｏＭａｓｔｅｒ／
ＬａｂＭａｓｔｅｒ熱量計（ＴＳＥ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃｈｅｓｔｅｒｆｉｅｌｄ、ＭＯ
）に置く。ビヒクル対照（ｐＨ７．０の２０ｍＭのクエン酸緩衝液、１０ｍｌ／ｋｇ）、
本発明の化合物または長時間作用するＧＬＰ１類似体、セマグルチド（３０ｎｍｏｌ／ｋ
ｇ）を皮下投与して、２２日の間、３日ごとに暗サイクルの開始の３０〜９０分前にＤＩ
Ｏマウスに自由に食餌を取らせた。開回路熱量測定システムを使用して記載されるように
間接熱量測定法によって熱量および呼吸商（ＲＥＲ）を測定する。ＲＥＲは、生成したＣ
Ｏ２の体積（Ｖｃｏ２）対消費したＯ２の体積（ＶＯ２）の比である。熱量は以下を考慮
して完全な体重で計算する：
ＶＯ２＝ＦｌｏｗＭＬ＊（Ｖ１＋Ｖ２）／Ｎ２Ｒｅｆ＊動物の体重＊１００）
ＶＣＯ２＝ＦｌｏｗＭＬ＊ｄＣＯ２／動物の体重＊１００）
熱量＝（ＣＶＯ２＊ＶＯ２＋ＣＶＣＯ２＊ＶＣＯ２）／１０００
（式中、ＣＶＯ２＝３．９４１；ＣＶＣＯ２＝１．１０６）
【０１２１】
このアッセイにおいて本質的に記載されるように実施した実験において、実施例１で処
置したマウスは、対照群と比較して、２週から開始してそれらの代謝率を１０〜１５％有
意に増加させ、処置期間全体にわたって効果を維持した。しかしながら、セマグルチドは
代謝率に対する効果を有さなかった。実施例１についての代謝率の増加は、セマグルチド
処置と比較して実施例１の処置で観察されたさらなる体重減少の部分的な原因である。
【０１２２】
ＤＩＯマウスにおける胃内容排出に対する効果
本発明の化合物についてのＤＩＯマウスにおける胃内容排出に対する効果を、２３週齢
の食餌性肥満（ＤＩＯ）オスマウス（Ｈａｒｌａｎ）において評価する。マウスを１６〜
１７週間絶食させる。絶食期間の開始の間、マウスにビヒクル対照（ｐＨ７．０の２０ｍ
Ｍのクエン酸緩衝液）を皮下投与し、本発明の化合物（３、１０、３０および１００ｎｍ
ｏｌ／ｋｇ）または長時間作用するＧＬＰ１類似体、セマグルチド（３０ｎｍｏｌ／ｋｇ
）の用量を増加させる。翌日、０．５ｍｌ（０．５グラム）の新たに調製した半液体食餌
（２分間隔）をマウスに強制経口により投与する。この時に投与した食餌の希釈を防ぐた
めに水を取り除く。食餌投与から２時間後、マウスを２分間隔のＣＯ２ガスにより安楽死
させる。心臓および幽門の両方を開きながら固定している間に胃を取り除き、次いでクラ
ンプを取り除き、完全な胃を秤量ボートで秤量する。次いで胃を切開し、内容物を取り除
く。胃を洗浄し、乾燥させ、再秤量して、胃内の食餌内容物を評価する。胃内容排出％は
１００×（１−（胃内に残存している食餌／経口投与した食餌））に等しい。
【０１２３】
このアッセイに本質的に記載されるように実施した実験において、実施例１は半液体食
餌の胃内容排出速度を用量依存的に遅延させた。胃内容排出の最大阻害は１０ｎｍｏｌ／
ｋｇ＋／−用量で観察した（表１４）。
【０１２４】
【表１４】
2018052933.tif 000017
【０１２５】
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおける血漿コルチコステロン測定
特定の公開された研究において示唆されているように、増加した血漿コルチコステロン
レベルはＧＩＰおよびＧＬＰ−１類似体についての起こり得る減少した耐容性の指標であ
る。操作前に約２２０ｇの体重で、少なくとも７２時間馴化させたＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａ
ｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ）を使用して血漿コルチコス
テロンレベルを評価する。次いで用量群あたり８匹のラットで、３、１０または３０ｎｍ
ｏｌ／ｋｇ  ｓ．ｃ．にて、ビヒクル（２０ｍＭのクエン酸緩衝液、ｐＨ７）、セマグル
チド（１０ｎｍｏｌ／ｋｇ）または本発明の化合物をラットに投与する。１６時間後にラ
ットの頭部を除去する。血液を氷上のＥＤＴＡチューブ内に回収し、次いで８０００ＲＰ
ＭにてＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  ５４０２卓上遠心分離器において５分間遠心分離する。分析
するまで血漿を−８０℃にて保存する。
【０１２６】
コルチコステロン分析のために、コルチコステロン標準物（Ｓｉｇｍａ、２７８４０）
を、ＨＰＬＣグレードのメタノール、Ｈ２Ｏ中での連続希釈によって調製し、５％活性炭
処理済（ｃｈａｒｃｏａｌ  ｓｔｒｉｐｐｅｄ）ラット血清（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉ
ｏｎ、ＲＡＴＳＲＭ−ＳＴＲＰＤ−ＨＥＶ）を添加する。ラット血漿試料をＰＢＳで希釈
し、冷メタノールで沈殿させ、−２０℃にて２０分間インキュベートし、次いで４℃にて
Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ５４１７Ｒを用いて１４，０００ＲＰＭにて遠心分離する。上清を
抽出し、Ｎ２ガスのストリーム下で蒸発させ、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：１）溶液中で再構
成する。ＸＳｅｌｅｃｔＣＳＨ  Ｃ１８  ３．５μｍ  ＨＰＬＣカラム（２．１ｍｍ×３
０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ＃１８６００５２５４）を備えたＬＣ／ＭＳで試料を分析する。
【０１２７】
このアッセイについて本質的に記載されるように実施した実験において、実施例１は、
試験した用量のいずれにおいても血漿コルチコステロンレベルの増加が実証されなかった
が、セマグルチドは対照より約４倍増加した。
【０１２８】
【表１５】
2018052933.tif 000018
【０１２９】
アミノ酸配列
配列番号１（ヒトＧＩＰ）
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮ
ＩＴＱ
【０１３０】
配列番号２（ヒトＧＬＰ−１）
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲ
【０１３１】
配列番号３
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ
酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される。
【０１３２】
配列番号４
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰ
ＰＰＳ
式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎ
ａｌであり、Ｃ末端アミノ酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される。
【０１３３】
配列番号５
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１６−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ
酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される。
【０１３４】
配列番号６
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１６−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ
酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される。
【０１３５】
配列番号７
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰ
ＰＳ
式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ
酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される。
【０１３６】
配列番号８
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰ
ＰＰＳ
式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１６−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎ
ａｌであり、Ｃ末端アミノ酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される。
【０１３７】
配列番号９
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰ
ＰＰＳ
式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１６−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎ
ａｌであり、Ｃ末端アミノ酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される。
【０１３８】
配列番号１０
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰ
ＰＰＳ
式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−
ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、Ｘ３は１−Ｎ
ａｌであり、Ｃ末端アミノ酸はＣ末端第一級アミドとしてアミド化される。
【０１３９】
配列番号１１
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰ
ＰＰＳ
式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミ
ノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）ａ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−Ｃ
Ｏ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、ａは１〜２であ
り、ｂは１０〜２０であり、Ｘ３はＰｈｅまたは１−Ｎａｌであり、Ｃ末端アミノ酸は任
意にＣ末端第一級アミドとしてアミド化される。
【配列表】
2018052933000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成29年10月23日(2017.10.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式
【化１】
2018052933.tif 000021
の化合物を含む医薬組成物であって、
前記化合物が、メトホルミン、チアゾリジンジオン、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ４阻害剤およびナトリウムグルコース共輸送体から選択される１種以上の薬剤の有効量と組み合わせて同時、別々または連続して投与される、医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３９】
配列番号１１
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ
式中、Ｘ１はＡｉｂであり、Ｘ２はＡｉｂであり、２０位のＫは、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）ａ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、ａは１〜２であり、ｂは１０〜２０であり、Ｘ３はＰｈｅまたは１−Ｎａｌであり、Ｃ末端アミノ酸は任意にＣ末端第一級アミドとしてアミド化される。
本発明は、以下の態様を含む。
［１］
式：
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＸ３ＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ
（式中、
Ｘ１はＡｉｂであり、
Ｘ２はＡｉｂであり、
２０位のＫは、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）ａ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ２Ｈ（式中、ａは１〜２であり、ｂは１０〜２０である）によるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、
Ｘ３はＰｈｅまたは１−Ｎａｌであり、
Ｃ末端アミノ酸は任意にＣ末端第一級アミドとしてアミド化される）（配列番号１１）
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
［２］
Ｘ３がＰｈｅである、［１］に記載の化合物。
［３］
Ｘ３が１−Ｎａｌである、［１］に記載の化合物。
［４］
ｂが１４〜１８である、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物。
［５］
ｂが１６〜１８である、［４］に記載の化合物。
［６］
ｂが１８である、［５］に記載の化合物。
［７］
ａが１である、［１］〜［６］のいずれかに記載の化合物。
［８］
ａが２である、［１］〜［６］のいずれかに記載の化合物。
［９］
前記Ｃ末端アミノ酸がＣ末端第一級アミドとしてアミド化される、［１］〜［８］のいずれかに記載の化合物。
［１０］
Ｘ１がＡｉｂであり、
Ｘ２がＡｉｂであり、
２０位のＫが、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）１−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、
Ｘ３がＰｈｅであり、
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端第一級アミドとしてアミド化される（配列番号３）、
［１］に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
［１１］
Ｘ１がＡｉｂであり、
Ｘ２がＡｉｂであり、
２０位のＫが、（［２−（２−アミノ−エトキシ）−エトキシ］−アセチル）２−（γＧｌｕ）２−ＣＯ−（ＣＨ２）１８−ＣＯ２ＨによるＫ側鎖のε−アミノ基との結合によって化学的に修飾され、
Ｘ３が１−Ｎａｌであり、
Ｃ末端アミノ酸がＣ末端第一級アミドとしてアミド化される（配列番号４）、
［１］に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
［１２］
前記式が、
【化３】
2018052933.tif 000022
である、［１］に記載の化合物。
［１３］
前記式が、
【化４】
2018052933.tif 000023
である、［１］に記載の化合物。
［１４］
［１］〜［１３］のいずれかに記載の化合物と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物。
［１５］
２型糖尿病を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の［１］〜［１３］のいずれかに記載の化合物を投与することを含む、方法。
［１６］
メトホルミン、チアゾリジンジオン、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ４阻害剤およびナトリウムグルコース共輸送体から選択される１種以上の薬剤の有効量と組み合わせて同時、別々または連続して投与することをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
［１７］
療法に使用するための［１］〜［１３］のいずれかに記載の化合物。
［１８］
２型糖尿病の治療に使用するための［１］〜［１３］のいずれかに記載の化合物。
［１９］
メトホルミン、チアゾリジンジオン、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ４阻害剤およびナトリウムグルコース共輸送体から選択される１種以上の薬剤との同時、別々または連続した組み合わせにおける［１］〜［１３］のいずれかに記載の化合物。
【外国語明細書】
2018052933000001.pdf