(57)【要約】      （修正有）【課題】転移性がんの早期検出または診断のための有望な方法またはキットを提供する。【解決手段】対象の血液試料、組織液試料または検査試料中のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を検出することを含む、再発性または転移性がんを発症する危険性を有する対象を同定する方法が開示される。また、対象の血液試料、組織液試料または検査試料中のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を検出することにより、一以上の循環腫瘍細胞を有する対象を同定すること、および該対象の治療を行うことを含む、がんを処置する方法が開示される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の血液試料、組織液試料または検査試料中のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を検出することを含む、再発性または転移性がんを発症する危険性を有する対象を同定する方法であって、ここで、一以上のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞の存在は、該対象が再発性または転移性がんを発症する危険性を有することを示し、該対象は消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんを有し、該血液試料、該組織液試料または該検査試料は、該消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんの治療前、または治癒的切除手術中の該対象に由来する、方法。
【請求項２】
がんを処置する方法であって、対象の血液試料、組織液試料または検査試料中のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を検出することにより、ＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を有する対象を同定すること、ここで、該対象は消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんを有し、該血液試料、該組織液試料または該検査試料は、該消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんの治療前、または治癒的切除手術中の該対象に由来する、および該対象を治療することを含む方法。
【請求項３】
該がんが再発性または転移性がんである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
該処置が免疫療法を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
該処置が免疫療法を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
該がんが消化管がんである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
該がんが消化管がんである、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
該消化管がんが大腸がんである、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
該消化管がんが大腸がんである、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
該血液試料が腸間膜静脈血試料である、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
該血液試料が腸間膜静脈血試料である、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
患者の血液試料、組織液試料または検査試料中のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を検出することを含む、消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんを有する患者の予後を予測する方法であって、ここで、一以上のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞の存在は、該患者の予後不良を示し、該組織液試料または該検査試料は、該消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんの治療前、または治癒的切除手術中の該患者に由来する、方法。
【請求項１３】
該患者が消化管がんを有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
該消化管がんが大腸がんである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
該血液試料が腸間膜静脈血試料である、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんを診断および処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
循環系における循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）の存在は、転移の仲介において積極的な役割を果たす（非特許文献１）。ＣＴＣ数の計測は、転移性大腸がん（ｍＣＲＣ）患者にとっての予後指標として報告された（非特許文献２）。ほとんどの以前の研究では、ＣＴＣ数は前腕の静脈穿刺により採取された血液から計測された（非特許文献３、４）。ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）（ＰＤ−１阻害剤）処置から６ヶ月経った非小細胞肺がん患者では、ＰＤ−Ｌ１を発現している循環腫瘍細胞の存在が、治療逃避または予後不良に相当することが示唆された（非特許文献５）。
【０００３】
現在までのところ、転移性がんの早期検出または診断のための有望な方法またはキットは無い。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｐａｎｔｅｌ，Ｋ．，Ｃ．Ａｌｉｘ−ＰａｎａｂｉｅｒｅｓおよびＳ．Ｒｉｅｔｈｄｏｒｆ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ，２００９．６（６）：ｐ．３３９−５１．
【非特許文献２】Ｃｏｈｅｎ，Ｓ．Ｊ．ら，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ，２００８．２６（１９）：ｐ．３２１３−２１．
【非特許文献３】Ｔｈｏｒｓｔｅｉｎｓｓｏｎ，Ｍ．，Ｇ．ＳｏｌｅｔｏｒｍｏｓおよびＰ．Ｊｅｓｓ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２０１１．３１（２）：ｐ．６１３−７．
【非特許文献４】Ｓａｓｔｒｅ，Ｊ．ら，Ａｎｎ  Ｏｎｃｏｌ，２００８．１９（５）：ｐ．９３５−８．
【非特許文献５】Ｎｉｃｏｌａｚｚｏ，Ｃ．ら，Ｓｃｉ  Ｒｅｐ．２０１６Ａｕｇ２４；６：３１７２６．
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がん患者において、消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんの治療前、または治癒的切除手術中における、ＰＤ−Ｌ１を発現している循環腫瘍細胞（「ＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞」と呼ばれる）の存在／レベルが、がんの転移または患者の予後と相関するという予期せぬ知見に基づく。
【０００６】
従って、一態様において、本発明は、対象の血液試料、組織液試料または検査試料（ｓｐｅｃｉｍｅｎ）中のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を検出することを含む、再発性または転移性がんを発症する危険性を有する対象を同定するための方法であって、ここで、一以上のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞の存在は、該対象が再発性または転移性がんを発症する危険性を有する事を示し、該対象は消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんを有し、該血液試料、該組織液試料または該検査試料は、該消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんの治療前、または治癒的切除手術中の該対象に由来する、方法を提供する。
【０００７】
本発明の一実施形態において、該がんは、消化管がん、とりわけ大腸がんである。別の実施形態において、該がんは、頭頸部扁平上皮細胞がんである。
【０００８】
別の態様において、本発明は、がんを処置する方法であって、（ａ）対象の血液試料、組織液試料または、検査試料中のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を検出することによって、一以上のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を有する対象を同定すること、ここで、該対象は、消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんを有し、該血液試料、該組織液試料または該検査試料は、該消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんの治療前、または治癒的切除手術中の該対象に由来する、および（ｂ）該対象の治療を行うことを含む方法を提供する。
【０００９】
さらなる態様において、本発明は、患者の血液試料、組織液試料または検査試料中のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を検出することを含む、消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がん患者の予後を予測する方法であって、ここで、一以上のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞の存在は、該患者の予後不良または全生存率を示し、該血液試料、該組織液試料または該検査試料は、該消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんの治療前、または治癒的切除手術中の該対象に由来する、方法を提供する。
【００１０】
本発明の特定の好ましい実施形態によれば、前述の処置は免疫療法である。一部の他の実施形態において、該対象は化学療法または標的療法と併用して免疫療法を受ける。
【００１１】
本発明の特定の実施形態によれば、該がんは再発性または転移性がんである。
【００１２】
本発明の一実施形態において、該がんは消化管がん、とりわけ大腸がんである。別の実施形態において、該がんは頭頸部扁平上皮細胞がんである。
【００１３】
前述の一般的な説明と後述の詳細な説明は、ともに例示的かつ説明的であるのみであり、本発明を限定するものではないことが理解されるべきである。
【００１４】
本発明の後述の詳細な説明のみならず、前述の概要は、添付した図面と併せて読むとより理解されるだろう。本発明を説明するために、目下好ましい具体例を図面で示す。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ＭｉＳｅｌｅｃｔ  Ｒ  Ｓｙｓｔｅｍを用いた循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）数の計測のための試料調製を説明する図である。
【００１６】
【図２】典型的なＣＴＣ画像である。
【００１７】
【図３】末梢血（ＰＢ）と腸間膜静脈血（ＭＶＢ）中のＣＴＣ数の比較を示す図である。
【００１８】
【図４】図４Ａは、種々のステージの大腸がん（ＣＲＣ）患者のＰＢ中のＣＴＣ数計測結果を示す。図４Ｂは、種々のステージの大腸がん（ＣＲＣ）患者のＭＶＢ中のＣＴＣ数計測結果を示す。
【００１９】
【図５】ＣＴＣ上のＰＤ−Ｌ１発現の不均一性を示す図である。
【００２０】
【図６】ＰＢおよびＭＶＢ中のＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣ数を示す図である。
【００２１】
【図７】種々のステージのＭＶＢ中のＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣ数を示す図である。
【００２２】
【図８】種々のステージのＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣの出現頻度を示す図である。
【００２３】
【図９】ＣＴＣ上のＰＤ−Ｌ１発現の不均一性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明の詳細な記載
一態様において、本発明は、対象の血液試料、組織液試料または検査試料中のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を検出することを含む、再発性または転移性がんを発症する危険性を有する対象を同定する方法であって、ここで、ＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞の存在は、該対象が再発性または転移性がんを発症する危険性を有することを示し、該対象は、消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんを有し、該血液試料、該組織液試料または該検査試料は、消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんの治療前、または治癒的切除手術中の該対象に由来する、方法を提供する。
【００２５】
本発明によれば、ＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞のレベルが高い程、再発性または転移性がんを発症する危険性が高いことを示す。
【００２６】
本発明の一実施形態において、該がんは消化管がん、とりわけ大腸がんである。消化管がんに関して、該血液試料は好ましくは、腸間膜静脈血試料である。該腸間膜静脈血試料は、該消化管がんの治癒的切除手術中に採取されてもよい。該消化管がんは、食道がん、胃がん、消化管間質腫瘍、膵臓がん、肝臓がん、胆嚢がん、大腸がんおよび肛門がんを包含するが、この限りではない。本発明の特定の例において、該がんは大腸がんである。
【００２７】
別の実施形態において、該がんは、頭頸部扁平上皮細胞がんである。
【００２８】
別の態様において、本発明は、がんを処置する方法であって、（ａ）血液試料、組織液試料または検査試料中のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を検出することで、ＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を有する対象を同定すること、ここで、該対象は、消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんを有し、該血液試料、該組織液試料または該検査試料は、該消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんの治療前、または治癒的切除手術中の該対象に由来する、および（ｂ）該対象の治療を行うことを含む方法を提供する。
【００２９】
さらに別の態様において、本発明は、患者の血液試料、組織液試料または、検査試料中のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞を検出することを含む、消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんを有する患者の予後を予測する方法であって、ここで、一以上のＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞の存在が、患者の悪い予後または全生存率の指標となり、該血液試料、該組織液試料または該検査試料は、該消化管がんまたは頭頸部扁平上皮細胞がんの治療前、または治癒的切除手術中の該患者に由来する、方法を提供する。
【００３０】
本発明によると、該ＰＤ−Ｌ１＋循環腫瘍細胞のレベルが高い程、該患者の予後不良が示される。
【００３１】
該処置は、免疫療法、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、およびそれらを組み合わせた方法を包含するが、この限りではない。
【００３２】
本発明の特定の好ましい実施形態によれば、前述の処置は免疫療法である。一部の他の実施形態において、該対象は化学療法または標的療法と併用して免疫療法を受ける。
【００３３】
本発明の特定の実施形態によれば、該がんは再発性または転移性がんである。
【００３４】
本発明の一実施形態において、該がんは消化管がん、とりわけ大腸がんである。別の実施形態において、該がんは頭頸部扁平上皮細胞がんである。
【００３５】
消化管がんに関して、該血液試料は好ましくは、腸間膜静脈血試料である。該腸間膜静脈血試料は、該消化管がんの治癒的切除手術中に採取されてもよい。
【００３６】
本発明の特定の実施形態において、該がんは消化管がんであり、限定するものではないが、食道がん、胃がん、消化管間質腫瘍、膵臓がん、肝臓がん、胆嚢がん、大腸がんおよび肛門がんを包含する。本発明の特定の例において、該がんは大腸がんである。
【００３７】
本発明の一部の他の実施形態において、該がんは頭頸部扁平上皮細胞がんである。
【００３８】
本発明は、限定よりむしろ実証することを目的として提供される以下の実施例によってさらに説明される。
【実施例】
【００３９】
材料および方法
【００４０】
１．患者特性
【００４１】
２０１６年４月から２０１７年９月までの間に台北栄民総医院で治癒的切除手術を受けた総勢１１６名の患者が登録された。２０１６年１０月から２０１７年９月までの間に台北栄民総医院で免疫療法を受けた２６名のＨＮＳＣＣ患者、９名のＨＣＣ患者、５名のＵＣ患者、および２名のＲＣＣ患者もまた登録された。登録手続きは、台北栄民総医院の内部審査委員会により承認を受けた手順書に従って行われた。全患者は書面によるインフォームド・コンセントを与えた。結腸内視鏡検査を受ける前の、または大腸がん（ＣＲＣ）の疑いがあるが臨床病期は明らかでない患者が採用された。組織学的な診断がされた管状腺腫を有する６名の患者もまた登録された。評価可能な患者の平均（±標準偏差）年齢は、６３．６±１２．５歳（中央値，６４）であった（以下の表１を参照）。原発腫瘍の病期分類は、切除した原発腫瘍の組織学的検査により確認された。組織学的検査に基づき、該対象は１１６名のＣＲＣ患者より構成された（それぞれ、ステージＩ２４名、ステージＩＩ３８名、ステージＩＩＩ４２名、ステージＩＶ１２名）。
【００４２】
【表１】
2018155752.tif 000002
【００４３】
２．血液試料採取
【００４４】
ＣＴＣ分析のための血液試料は、腫瘍の治癒的切除の前にＣＲＣ患者から得られた。ＣＲＣを有する患者の肘正中静脈からの血液のサンプリングは手術前に行なわれた。手術中、腸間膜静脈血試料は、結腸の患部の主要なドレナージ静脈、例えば、Ｓ字結腸または直腸のがんであれば下腸間膜静脈より、あるいは、腫瘍が結腸の右側に位置する場合には回結腸静脈より、採取された。機械的操作によってＣＴＣが遊離する可能性を最小限にするために、結腸内視鏡検査は、手術の少なくとも１日前に設定された。外科的アプローチでは、まず血管制御、すなわち、初めの栄養動脈の結紮、続く腸間膜静脈のカニューレ挿入および採血が必要であった。腫瘍は、手術の終盤まで手つかずのままにされた。ＣＴＣ分析のための末梢血（ＰＢ）試料および腸間膜静脈血（ＭＶＢ）試料は、１１６名の患者から得られた。ＣＴＣ分析のための血液試料は、薬物投与の前に他のがん患者からも得られた。
【００４５】
３．ＣＴＣ計測およびＣＴＣ上のＰＤ−Ｌ１発現試験
【００４６】
試料調製を図１に示す。Ｋ２ＥＤＴＡチューブより、血液４ｍＬのアリコート２つをそれぞれラベルされた５０ｍＬコニカル遠心チューブ２本に移す。試料をＳｅｌｅｃｔＫｉｔのソーティング試薬（ＰＥ標識抗ＥｐＣＡＭ抗体）とともに、室温で２０分間インキュベートする。染色後、各４ｍＬの血液を２ｍＬのアリコート２つに分け、それらをそれぞれラベルされた５０ｍＬコニカル遠心チューブ２本に入れ、２４ｍＬのＩＳＯＴＯＮ  Ｄｉｌｕｅｎｔを各チューブに加える。該試料を、スイングバケット遠心分離機を用いて、ブレーキをオフにした状態で、８００×ｇで丸１０分間、室温で遠心分離する。遠心分離後、各チューブの上清２４ｍＬを取り除き、ＣＴＣ分析のために、２ｍＬのアリコート２つを４ｍＬのアリコートに回収後、試料を混合する。試料調製の１時間以内にＭｉＳｅｌｅｃｔ  Ｒ  Ｓｙｓｔｅｍ上で処理する。
【００４７】
ＳｅｌｅｃｔＣｈｉｐ  Ｄｕａｌを備えたＭｉＳｅｌｅｃｔ  Ｒ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＭｉＣａｒｅｏ  Ｔａｉｗａｎ株式会社）は、ＣＴＣを選別および濃縮することができる。ＣＴＣを含有するアリコートがＳｅｌｅｃｔＣｈｉｐに回収されると、オンチップ濾過システムによって、血液細胞、とりわけＲＢＣがＣＴＣから取り除かれる。ＣＴＣの濃縮後、ＳｅｌｅｃｔＫｉｔのＦｉｘａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｔａｉｎｉｎｇ  Ｒｅａｇｅｎｔ（固定および染色試薬）が自動的に加えられてＣＴＣが同定および計測される。抗ｐａｎＣＫ  ＡＰＣは細胞内タンパク質であるサイトケラチンを特異的に標的とし、ＤＡＰＩは細胞核を染色し、抗ＣＤ４５  ＦＩＴＣは白血球に特異的である。その形態学的な特徴が腫瘍細胞のものと一致し、その表現型ＥｐＣＡＭ＋、ＣＫ＋、ＰＡＰＩ＋およびＣＤ４５−を示す場合、事象は腫瘍細胞として分類される。
【００４８】
ＣＴＣ数は、操作者によって計測および分析され、直接記録されるだろう。ＣＴＣのさらなる免疫染色のために、ＭｉＳｅｌｅｃｔ  Ｒ  Ｓｙｓｔｅｍ上でＣＴＣを標識するためのＳｅｌｅｃｔＣｈｉｐ中に抗ＰＤ−Ｌ１が自動的に注入されるだろう。さらなる分析のために、ＣＴＣの各バイオマーカーの蛍光画像が撮られ、該バイオマーカーの強度が記録されるだろう。
【００４９】
４．統計解析
【００５０】
全てのデータはＳＳＰＳソフトウェア（Ｖ１９．０）およびＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｖ５．０）を用いて統計的に解析された。連続変数分布は、中央値およびレンジとして記載された。群間の違いを評価するために、マン・ホイットニーのＵ検定およびウィルコクソンの符号順位検定を適宜行った。全てのＰ値は両側検定によった。０．０５より小さいＰ値が統計的な差を示した。
【００５１】
結果
【００５２】
１．ＰＢおよびＭＶＢ中のＣＴＣの発生率（ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ）
【００５３】
ＣＴＣは無傷の核を有し、ＥｐＣＡＭおよびサイトケラチンを発現しているがＣＤ４５を発現しない細胞として定義された。典型的なＣＴＣ画像を図２に示す。該ＥｐＣＡＭの発現は、同じＣＲＣ患者内でも、ＣＴＣ間で不均一性を示した。ＣＴＣはＰＢ中にはほとんど見られなかったが（全血液８ｍＬあたり平均，０．１７±０．８９；レンジ＝０−８，ｎ＝１１６）、ＭＶＢ中にはより豊富であった（全血液８ｍＬあたり平均，７．１±４８．１；レンジ＝０−５１５，ｎ＝１１６）（図３；ｐ＜０．００１）。
【００５４】
２．ＣＴＣ数および検出率の分布
【００５５】
ＣＲＣ患者のＣＴＣ数を以下の表２および図４に示す。ＣＴＣ数は、ＰＢ中において、非転移性のＣＲＣには０から８の範囲に、転移性のＣＲＣには０から４の範囲にあった。ＭＶＢ中では、ＣＴＣ数は、非転移性のＣＲＣには０から５１５の範囲に、転移性のＣＲＣには０から２０の範囲にあった。ＣＴＣの全検出率は、ＰＢおよびＭＶＢ中に、それぞれ６％および４０．５％であった。各サブグループ内では、該検出率は該サブグループの状態の重篤度に伴って増加した。ＭＶＢ中では、ＣＴＣの検出率は、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶでは、それぞれ２０．８％、４２．１％、４５．２％および５８．３％であった。加えて、ＣＴＣの量は、初期ステージよりも後期ステージにおいて顕著により高かった（図４）。
【００５６】
【表２】
2018155752.tif 000003
【００５７】
３．ＣＴＣ数と臨床病理学的特性との関係
【００５８】
ＣＴＣ数（存在または非存在）と種々の臨床的および病理学的パラメーターとの間の二変量関係を調査した。結果を以下の表３に示す。臨床病期（ＴＮＭ）は、ＭＶＢ中のＣＴＣ数と正の相関関係にあり（表２）、手術前の血清中のＣＥＡレベルと腫瘍浸潤の深達度（ｐＴ）は、ＭＶＢ中のＣＴＣレベルと正の相関関係にあった。ＣＴＣ数と、肝臓または肺転移の存在、原発性ＣＲＣ分化、組織構造、結節状態（Ｎ）、リンパ節／静脈への浸潤／神経周囲の浸潤、がん腫周囲の炎症性変化、がん組織の浸潤様式、および手術前の血清中のＣＡ−１９−９レベルとの間には関係は見られなかった。
【００５９】
【表３】
2018155752.tif 000004
【００６０】
４．ＣＲＣ患者におけるＣＴＣ上のＰＤ−Ｌ１バイオマーカー評価
【００６１】
ＰＢやＭＶＢから単離されたＣＴＣを、ＰＤ−Ｌ１タンパク質発現について調べた。該ＰＤ−Ｌ１バイオマーカー発現は、患者間で、および同じ血液試料内で、単離されたＣＴＣの間で不均一性を示した（図５）。ＰＢ中のＣＴＣのＰＤ−Ｌ１状態は、検出可能なＣＴＣを有する８名の患者において評価された（以下の表４を参照）。ＭＶＢ中のＣＴＣのＰＤ−Ｌ１状態は、検出可能なＣＴＣを有する４７名の患者において評価された。これらの４７名の患者の間で、３１名（６５．９％）がＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣを有する部分母集団であった（以下の図６および表５を参照）。ＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣ数は、１から３３まで（中央値＝３）であり、ＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣのフラクションは、検出可能なＣＴＣの総数の１６から１００％までの範囲にあった。ＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣ数は、ステージに伴って徐々に増加し（図７）、ＣＴＣの間でのＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣの頻度もまたステージに伴って増加した（図８）。
【００６２】
【表４】
2018155752.tif 000005
【００６３】
【表５−１】
2018155752.tif 000006
【００６４】
【表５−２】
2018155752.tif 000007
【００６５】
５．ＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣ数とＣＲＣ患者の臨床病理学的特性との関係
【００６６】
ＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣ数（存在または非存在）と種々の臨床的および病理学的パラメーターとの間の二変量関係を調査した。結果を以下の表６と表７に示す。臨床病期（ＴＮＭ）は、ＭＶＢ中のＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣ数と正の相関関係にあり（表６）、手術前の血清中のＣＥＡレベル、腫瘍浸潤の深達度（ｐＴ）、結節状態（Ｎ）は、ＭＶＢ中のＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣレベルと正の相関関係にあった。加えて、原発性ＣＲＣのリンパ管浸潤および静脈浸潤は、ＭＶＢ中のＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣレベルと相関関係にあった（表７）。ＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣ数と、原発性ＣＲＣ分化、神経周囲の浸潤、がん腫周囲の炎症性変化、がん組織の浸潤様式および手術前の血清中のＣＡ−１９−９レベルとの間には関係は見られなかった。
【００６７】
【表６】
2018155752.tif 000008
【００６８】
【表７】
2018155752.tif 000009
【００６９】
６．他のがん患者におけるＣＴＣ上のＰＤ−Ｌ１バイオマーカー評価
【００７０】
頭頸部扁平上皮細胞がん（ＨＮＳＣＣ）、肝細胞がん（ＨＣＣ）、子宮がん（ＵＣ）を有する患者において、ＣＴＣの全検出率はそれぞれ３１％、５５％および４０％であった（以下の表８を参照）。ＨＮＳＣＣ、ＨＣＣおよびＵＣ患者より単離したＣＴＣをＰＤ−Ｌ１タンパク質発現について試験した。ＰＤ−Ｌ１バイオマーカー発現は、患者間で、および同じ血液試料内で、単離されたＣＴＣの間で不均一性を示した（図９）。ＣＴＣのＰＤ−Ｌ１の状態は、検出可能なＣＴＣを有する患者において評価された。これらの患者間では、ＨＮＳＣＣの１００％、ＨＣＣの５０％およびＵＣの１００％が、ＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣを有する部分母集団であった（表８）。ＰＤ−Ｌ１＋ＣＴＣの存在は、ＨＮＳＣＣ患者における疾患の進行と有意に相関関係にあった（以下の表９を参照）。
【００７１】
【表８】
2018155752.tif 000010
【００７２】
【表９】
2018155752.tif 000011
【図１】
2018155752.tif 000012
【図２】
2018155752.tif 000013
【図３】
2018155752.tif 000014
【図４】
2018155752.tif 000015
【図５】
2018155752.tif 000016
【図６】
2018155752.tif 000017
【図７】
2018155752.tif 000018
【図８】
2018155752.tif 000019
【図９】
2018155752.tif 000020
【外国語明細書】
2018155752000001.pdf