(57)【要約】      （修正有）【課題】外科手術の重大な機能的影響の可能性及び既存の薬剤の欠点を回避した、ＩＢＤにおける新しい治療法の提供。【解決手段】状態の改善に十分な量及び間隔、具体的には、（ａ）７から２１日間毎に５から１４ｍｇ；（ｂ）１４から５６日間毎に１５から５４ｍｇ；（ｃ）４３から１２６日間毎に５５から１４９ｍｇ；（ｄ）１１２から１４７日間毎に１５０から２９９ｍｇ；及び（ｅ）１２６から２２４日間毎に３００から１０００ｍｇ；でアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体を対象に投与することを含む方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
状態に罹患した対象を治療する方法であって、状態は消化管にアルファ４ベータ７を発現する細胞の不適当な輸送と関連し：
（ａ）７から２１日間毎に５から１４ｍｇ；
（ｂ）１４から５６日間毎に１５から５４ｍｇ；
（ｃ）４３から１２６日間毎に５５から１４９ｍｇ；
（ｄ）１１２から１４７日間毎に１５０から２９９ｍｇ；および
（ｅ）１２６から２２４日間毎に３００から１０００ｍｇ
からなる群から選択される量および間隔でアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記量および間隔が：
（ａ）１１から１７日間毎に５から１０ｍｇ；
（ｂ）３０から５０日間毎に１５から３０ｍｇ；
（ｃ）７５から９５日間毎に５５から８５ｍｇ；
（ｄ）１２０から１３２日間毎に１６０から２６０ｍｇ；および
（ｅ）１６５から１８５日間毎に３００から７００ｍｇ
からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記量および間隔が：
（ａ）２週間毎に７ｍｇ；
（ｂ）６週間毎に２１ｍｇ；
（ｃ）１２週間毎に７０ｍｇ；
（ｄ）１８週間毎に２１０ｍｇ；および
（ｅ）６ヶ月毎に４２０ｍｇ
からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
状態に罹患した対象を治療する方法であって、状態は消化管にアルファ４ベータ７を発現する細胞の不適当な輸送と関連し、少なくとも約７５％の受容体占有の達成および／または維持に十分な量および間隔で、その量のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項５】
達成された前記受容体占有が少なくとも約８０％である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
達成された前記受容体占有が少なくとも約８５％である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
達成された前記受容体占有が少なくとも約９０％である、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
達成された前記受容体占有が少なくとも約９５％である、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
達成された前記受容体占有が少なくとも約９９％である、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
状態に罹患した対象を治療する方法であって、状態は消化管にアルファ４ベータ７を発現する細胞の不適当な輸送と関連し、血清の体積あたり１０ｎｇ／ｍｌから１０００ｎｇ／ｍｌの間のヘテロ二量体特異抗体の量を達成および／または維持するために十分な量および間隔で、その量のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１１】
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が少なくとも１０ｎｇ／ｍｌである
、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が：少なくとも２５ｎｇ／ｍｌ；少なくとも５０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも６０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも７０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも７５ｎｇ／ｍｌ；および少なくとも８０ｎｇ／ｍｌからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が８５ｎｇ／ｍｌから１００ｎｇ／ｍｌの間である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が７０ｎｇ／ｍｌから１５０ｎｇ／ｍｌの間である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が５０ｎｇ／ｍｌから２５０ｎｇ／ｍｌの間である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が４０ｎｇ／ｍｌから５００ｎｇ／ｍｌの間である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が２５ｎｇ／ｍｌから７５０ｎｇ／ｍｌの間である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が１０ｎｇ／ｍｌから１，０００ｎｇ／ｍｌの間である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１９】
前記アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体が１８Ａ１１である、請求項１から１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
１８Ａ１１が単離され、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗原結合タンパク質が配列番号５からＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号２からＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
１８Ａ１１が単離され、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗原結合タンパク質が、前記重鎖可変領域が配列番号５と少なくとも９０％同一であり、前記軽鎖可変領域がＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３から配列番号２と少なくとも９０％同一である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
１８Ａ１１が軽鎖定常領域（配列番号７）および重鎖定常領域（配列番号８）をさらに含む、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】
１８Ａ１１が１８Ａ１１可変領域における１から１０個のアミノ酸の置換、挿入または欠失により配列番号２および５のアミノ酸配列とアミノ酸配列の点で異なる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
１８Ａ１１が１８Ａ１１定常領域の１８Ａ１１における１から１０個のアミノ酸の置換、挿入または欠失により配列番号７および８のアミノ酸配列とアミノ酸配列が異なる、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記１８Ａ１１がいくつかの、ほとんどのまたは実質的に全てのＮ末端アミノ酸のピロ
グルタミン酸への変換；ならびに１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのＮ末端および／またはＣ末端アミノ酸の除去（翻訳後または組換え技術によってのいずれか）からなる群から選択される、１つ以上の修飾を含む、請求項２０から２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体で治療されているヒト対象におけるアルファ４ベータ７受容体占有を評価する方法であって：
ａ）前記対象に対して６本１組の試薬管を用意し、前記管には１から６の番号を付けられており、各管がアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体（管２；「スパイク」（ｓｐｉｋｅｄ）と称する）またはプラセボ対照（管１、３、４、５および６）を含み、そしてアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体で治療された対象から全血試料を得、
ｂ）前記全血試料の一部を前記６本の管それぞれの中に入れて試料混合物を形成し、前記得られた試料混合物をインキュベートし；
ｃ）１：１の割合の抗体カクテルとフィコエリスリン試薬を、前記試料混合物に加え、実質的に示したようなスキームにおいて、抗体カクテル／試料混合物を形成し：
−管１に、抗ＣＤ８＋ＣＤ１０３；ＦＩＴＣ、抗アルファ４ベータ７競合抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＣＲ７：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管２に、抗ＣＤ８＋ＣＤ１０３：ＦＩＴＣ、抗アルファ４ベータ７競合抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＣＲ７：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管３に、抗ＣＤ＋ＣＤ１０３：ＦＩＴＣ、非競合抗β７抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＣＲ７：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管４に、抗ＣＤ７＋ＣＤ１０３：ＦＩＴＣ、非競合抗β７抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管５に、抗ＣＬＡ：ＦＩＴＣ、非競合抗β７抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＤ４：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管６に、抗ＣＤ１９：ＦＩＴＣ、抗ＣＤ４：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＤ１６＋ＣＤ５６：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ８  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
ｄ）前記抗体カクテル／試料混合物をインキュベートし、
ｅ）前記抗体カクテル／試料混合物を処理してあらゆる赤血球を溶解して残りの細胞の混合物を形成し；
ｆ）残りの細胞の前記混合物を洗浄し、蛍光活性化セルソーターを用いてそれらを解析して、前記残りの細胞に存在する、前記アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体により占有されたアルファ４ベータ７受容体の割合を決定することを含む、方法。
【請求項２７】
前記試料混合物が室温で約３０分間インキュベートされ、前記抗体カクテル／試料が室温で約２０分間インキュベートされる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
各管に加えられる、前記全血試料の一部が１００マイクロリットルであり、前記抗体カクテルの体積が２０マイクロリットルであり、前記抗体：フィコレリスリン試薬の体積が６０マイクロリットルである、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項２９】
各集団に対して集められた前記ＣＤ４ナイーブＴ細胞のイベントの数を前記リンパ球イベントによって除算し、その後マイクロリットルあたりのリンパ球の血液学的結果によって乗算し、ナイーブＣＤ４  Ｔ細胞をＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ３＋ＣＤ８−ＣＤ１
０３−ＣＤ４５＋リンパ球として規定する、請求項２６から２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
スパイクおよび非スパイク状態に対する蛍光強度中央値が蛍光ビーズ検量線を用いて細胞あたりの結合分子（ＭＢＰＣ）に変換され、受容体占有を算出するために利用される、請求項２６から２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記対象が使用可能な２つの投与前試料があり、目標飽和度は以下の式：
【数１】
2018031780.tif 000018
を用いて算出される、請求項２６から３０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般にアルファ４ベータ７およびＭＡｄＣＡＭならびにその相互作用の阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は２種類の慢性腸疾患：クローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を含む。活動性ＩＢＤの特徴は、自然免疫細胞（好中球、マクロファージ、樹状細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞）および適応免疫細胞（Ｂ細胞およびＴ細胞）の、固有層への顕著な浸潤である。ナイーブおよびエフェクター／メモリーＴ細胞は、異なる解剖学的区画における特定の微小血管と相互作用する能力を限定する、輸送リガンドおよび受容体の特徴的レパートリーを有する。従って、これらは遊走の特徴的パターンを有する。
【０００３】
腸間膜リンパ節およびバイエル腺叢において活性化するＴ細胞は、インテグリンアルファ４ベータ７を発現し始めると「腸向性」細胞となる。アルファ４ベータ７は発現するが、種々のレベルにおいて、末梢血中のナイーブＴ細胞上でと同様に末梢性Ｔ細胞上で、Ｂ細胞上で、ナチュラルキラー細胞上で、および好酸球上で、アルファ４ベータ７はＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−メモリーＴ細胞の亜集団上において最も高度に発現し、ＩＢＤの病因として重要な役割を果たしていると考えられる（Ａｂｒａｈａｍ  ａｎｄ  Ｃｈｏ，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ２００９；６１：２０６６）。
【０００４】
アルファ４ベータ７に対するリガンドはアドレシン粘膜アドレシン細胞接着分子（ＭＡｄＣＡＭ−１）であって、免疫グロブリンスーパーファミリーの１つである。このアドレシンは腸管内固有層の後毛細管小静脈上で、腸間膜リンパ節上で、およびバイエル腺叢中で最初に発現し；発現は潰瘍性大腸炎およびクローン病に罹患した対象の慢性炎症性小腸および大腸内で上方制御される（Ｂｒｉｓｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．  １９９７；１５１：９７；  Ａｒｉｈｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ，  Ｐａｔｈｏｌ  Ｉｎｔ．  ２００２；５２：３６７）。
【０００５】
腸へのメモリーリンパ球ホーミングに対するアルファ４ベータ７とＭａｄＣＡＭ−１の相互作用の重要性はヒトと同様に前臨床モデルで示されている。アルファ４ベータ１およびアルファ４ベータ７ヘテロ二量体受容体のアルファ４構成要素を標的にする単クローン抗体であるＴｙｓａｂｒｉ（登録商標）は、活動性クローン病対象の集団において大幅に症状を改善した（Ｓａｎｄｂｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００５；３５３：１９１２；  Ｔａｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２００７；１３２：１６７２）。特にアルファ４ベータ７を標的にするヒト化単クローン抗体であるＭＬＮ０００２は、潰瘍性大腸炎およびクローン病に罹患した対象の両方において、疾患の寛解を誘導することが示された（Ｆｅａｇａｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｃｌｉｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ．  ２００８；６：１３７０；  Ｆｅａｇａｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ２００５；３５２：２４９９）。
【０００６】
しかしながら、これらの薬剤のどちらにも、ある欠点が存在する。Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）で治療された対象における進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）の発生は、おそらく脳への白血球輸送の抑制のためである。その上、ＭＬＮ０００２は、効力を低下させた抗体の早期排除の一因となった強い免疫応答を引き起こした。これにより、外科手術の重大な機能的影響の可能性およびＩＢＤ治療で用いられるその他の薬剤の欠点と共に、ＩＢＤ
における新しい治療法の開発が求められる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、健常対象（ＨＳ）における１８Ａ１１の漸増単回投与試験のＰＫ解析の結果を示す。結果を平均（＋／−ＳＤ）血清１８Ａ１１濃度時間特性として図示する。
【図２】図２は、健常対象（ＨＳ）における１８Ａ１１の漸増複数回投与試験のＰＫ解析の結果を示す。結果を平均（＋／−ＳＤ）血清１８Ａ１１濃度時間特性として図示する。
【図３】図３は、実施例４で説明するように、ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞（プラセボまたは１８Ａ１１）上におけるアルファ４ベータ７受容体のベースライン正規化自由率を示す。
【図４】図４は、実施例４で説明するように、複数回投与試験におけるコホート１から３および８（健常対象）に関して要約したアルファ４ベータ７受容体占有データを示す。
【図５−１】図５は、実施例５で説明するように、４週間ごとに計３用量（図５Ｂ）を投与した、２１０ｍｇ単一用量の１８Ａ１１またはプラセボ（図５Ａ）または２１ｍｇの１８Ａ１１またはプラセボで治療された患者に見られた、盲検個体メイヨーおよび部分的メイヨースコア特性を示す。
【図５−２】図５は、実施例５で説明するように、４週間ごとに計３用量（図５Ｂ）を投与した、２１０ｍｇ単一用量の１８Ａ１１またはプラセボ（図５Ａ）または２１ｍｇの１８Ａ１１またはプラセボで治療された患者に見られた、盲検個体メイヨーおよび部分的メイヨースコア特性を示す。
【図６】図６は、健常日本人対象（ＨＪＳ）および健常非日本人対象（ＨＮＪＳ）における、１８Ａ１１の予備的薬物動態（ＰＫ）特性を示す。ＰＫ特性は７０ｍｇの皮下投与計画下において健常日本人対象および健常非日本人対象間で、実質的に重ねることができた。
【図７】図７は、健常非日本人対象（ＨＮＪＳ、白色人種１４人、黒色人種７人、およびアジア人種３人；試験２００９０１０７より年齢２０から４２歳、体重６５から１０６ｋｇ）ならびに健常日本人対象およびＨＣＳ対象（試験２０１１０２５９）における、１８Ａ１１のオーバーレイＰＫ特性を示す。
【図８】図８は、健常非日本人対象（ＨＮＪＳ、白色人種１４人、黒色人種７人、およびアジア人種３人；試験２００９０１０７より年齢２０から４２歳、体重６５から１０６ｋｇ）ならびに健常日本人対象およびＨＣＳ対象（試験２０１１０２５９）における、１８Ａ１１のオーバーレイ薬物動力（遊離アルファ４ベータ７受容体率）特性を示す。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、消化管にアルファ４ベータ７を発現する細胞の不適当な輸送と関連した状態に罹患した対象を治療する方法であって、量および間隔が：７〜２１日間毎に５〜１４ｍｇ；１４〜５６日間毎に１５〜５４ｍｇ；４３〜１２６日間毎に５５〜１４９ｍｇ；１１２〜１４７日間毎に１５０〜２９９ｍｇ；および１２６〜２２４日間毎に３００〜１０００ｍｇ、からなる群から選択された、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体の量を対象に投与することを含む、方法を提供する。本発明の別の様態において、量および間隔は：１１〜１７日間毎に５〜１０ｍｇ；３０〜５０日間毎に１５〜３０ｍｇ；７５〜９５日間毎に５５〜８５ｍｇ；１２０〜１３２日間毎に１６０〜２６０ｍｇ；および１６５〜１８５日間毎に３００〜７００ｍｇ、からなる群から選択される。本発明のさらなる実施形態において、量および間隔は：２週間毎に７ｍｇ；６週間毎に２１ｍｇ；１２週間毎に７０ｍｇ；１８週間毎に２１０ｍｇ；および６ヶ月毎に４２０ｍｇからなる群から選択される。１つの実施形態において、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体は１８Ａ１１で
ある。
【０００９】
本発明はまた、消化管にアルファ４ベータ７を発現する細胞の不適当な輸送と関連した状態に罹患した対象を治療する方法であって、少なくとも約７５％；少なくとも約８０％；少なくとも約８５％；少なくとも約９０％；少なくとも約９５％；または少なくとも約９９％の受容体占有を達成および／または維持するために十分な量および間隔で、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体の量を対象に投与することを含む、方法を提供する。１つの実施形態において、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体は１８Ａ１１である。
【００１０】
さらに本発明は、消化管にアルファ４ベータ７を発現する細胞の不適当な輸送と関連した状態に罹患した対象を治療する方法であって、血清の体積あたり１０ｎｇ／ｍｌから１０００ｎｇ／ｍｌの間のヘテロ二量体特異抗体の量を達成および／または維持するために十分な量および間隔でアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体の量を対象に投与することを含む、方法を提供する。本発明の１つの様態において、血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の量は、少なくとも１０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも２５ｎｇ／ｍｌ；少なくとも５０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも６０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも７０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも７５ｎｇ／ｍｌ；少なくとも８０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも８５ｎｇ／ｍｌ；少なくとも９０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも９５ｎｇ／ｍｌ；少なくとも１００ｎｇ／ｍｌ；少なくとも１５０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも２００ｎｇ／ｍｌ；少なくとも５００ｎｇ／ｍｌまたは少なくとも９９０ｎｇ／ｍｌである。１つの実施形態において、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体は１８Ａ１１である。
【００１１】
本発明はまた、消化管にアルファ４ベータ７を発現する細胞の不適当な輸送と関連した状態に罹患した対象を治療する方法であって、血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の量を達成／維持するために十分な量および間隔でアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体の用量を対象に投与することを含み、血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の量が：少なくとも２５ｎｇ／ｍｌ；少なくとも５０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも６０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも７０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも７５ｎｇ／ｍｌ；および少なくとも８０ｎｇ／ｍｌからなる群から選択される、方法を提供する。あるいは、血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の量は、８５ｎｇ／ｍｌから１００ｎｇ／ｍｌの間；７０ｎｇ／ｍｌから１５０ｎｇ／ｍｌの間；５０ｎｇ／ｍｌから２５０ｎｇ／ｍｌの間；４０ｎｇ／ｍｌから５００ｎｇ／ｍｌの間；２５ｎｇ／ｍｌから７５０ｎｇ／ｍｌの間；または１０ｎｇ／ｍｌから１，０００ｎｇ／ｍｌの間である。
【００１２】
さらに本発明は、消化管にアルファ４ベータ７を発現する細胞の不適当な輸送と関連した状態に罹患した対象を治療する方法であって、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体の用量を対象に投与することを含み、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体が１８Ａ１１である、方法を提供する。さらなる実施形態において、１８Ａ１１は単離され、配列番号５からＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号２からＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗原結合タンパク質である。あるいは、１８Ａ１１は単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗原結合タンパク質であり、重鎖可変領域が配列番号５と少なくとも９０％同一であり、軽鎖可変領域がＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３から配列番号２と少なくとも９０％同一である。さらに方法は、１８Ａ１１を投与することを含み、１８Ａ１１が軽鎖定常領域（配列番号７）および重鎖定常領域（配列番号８）をさらに含み；加えて（または代替的に）、１８Ａ１１が１８Ａ１１可変領域における１から１０個のアミノ酸の置換、挿入または欠失により配列番号２および５のアミノ酸配列とアミノ酸配列が異なり；加えて（または代替的に）、１８Ａ１１が１８Ａ１１の１８Ａ１１定常領域における１から１０個のアミノ酸の置換、挿入または欠失により配列番号７お
よび８のアミノ酸配列とアミノ酸配列が異なり、加えて（または代替的に）、１８Ａ１１がいくつかの、ほとんどのまたは実質的に全てのＮ末端アミノ酸のピログルタミン酸への変換；ならびに１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのＮ末端および／またはＣ末端アミノ酸の除去（翻訳後または組換え技術によってのいずれか）からなる群から選択された、１つ以上の修飾を含む。
【００１３】
本発明ではまた、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体で治療されているヒト対象におけるアルファ４ベータ７受容体占有を評価する方法を提供し、方法は：対象に対して６本１組の試薬管を用意し、管には１から６の番号を付けられており、各管がアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体（管２；「スパイク」（ｓｐｉｋｅｄ）と称する）またはプラセボ対照（管１、３、４、５および６）を含み、そしてアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体で治療された対象から全血試料を得、全血試料の一部を６本の管それぞれの中に入れて試料混合物を形成し、得られた試料混合物をインキュベートし；１：１の割合の抗体カクテルとフィコエリスリン試薬を試料混合物に加え、実質的に示したようなスキームにおいて、抗体カクテル／試料混合物を形成し、（管１に、抗ＣＤ８＋ＣＤ１０３；ＦＩＴＣ、抗アルファ４ベータ７競合抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＣＲ７：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；管２に、抗ＣＤ８＋ＣＤ１０３：ＦＩＴＣ、抗アルファ４ベータ７競合抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＣＲ７：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；管３に、抗ＣＤ＋ＣＤ１０３：ＦＩＴＣ、非競合抗β７抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＣＲ７：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；管４に、抗ＣＤ７＋ＣＤ１０３：ＦＩＴＣ、非競合抗β７抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；管５に、抗ＣＬＡ：ＦＩＴＣ、非競合抗β７抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＤ４：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；管６に、抗ＣＤ１９：ＦＩＴＣ、抗ＣＤ４：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＤ１６＋ＣＤ５６：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ８  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え）；抗体カクテル／試料混合物をインキュベートし；抗体カクテル／試料混合物を処理してあらゆる赤血球を溶解して残りの細胞の混合物を形成し；残りの細胞の混合物を洗浄し、蛍光活性化セルソーターを用いてそれらを解析して、残りの細胞に存在する、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体により占有されたアルファ４ベータ７受容体の割合を決定することを、含む。
【００１４】
アルファ４ベータ７受容体占有を評価する１つのそのような方法において、試料混合物は室温で約３０分間インキュベートされ、抗体カクテル／試料は室温で約２０分間インキュベートされる。代替的にまたは加えて、各管に加えられる全血試料の一部は１００マイクロリットルであり、抗体カクテルの体積は２０マイクロリットルであり、抗体：フィコエリスリン試薬の体積は６０マイクロリットルである。代替的にまたは加えて、各集団に対して集められたＣＤ４ナイーブＴ細胞のイベントの数はリンパ球イベントによって除算され、その後マイクロリットルあたりのリンパ球の血液学的結果によって乗算され、ナイーブＣＤ４  Ｔ細胞はＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ３＋ＣＤ８−ＣＤ１０３−ＣＤ４５＋リンパ球として規定され、代替的にまたは加えて、スパイクおよび非スパイク状態に対する蛍光強度中央値は蛍光ビーズ検量線を用いて細胞あたりの結合分子（ＭＢＰＣ）に変換され、受容体占有を算出するために利用される。代替的にまたは加えて、対象が使用可能な２つの投与前試料があり、目標飽和度は以下の式：
【００１５】
【数１】
2018031780.tif 000002
を用いて算出される。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本明細書で規定されない限り、本発明に関して用いられる科学および専門用語は当業者によって一般に理解される意味を有する。さらに、文脈によって必要とされない限り、単数形の用語は複数を含み、複数形の用語は単数を含む。一般的に、本明細書で記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学ならびにハイブリダイゼーションに関して用いられる命名法、およびその技術はよく知られ、当該技術分野で一般に用いられるものである。臨床試験の分野で一般的に用いられる用語の短縮形の一覧を、以下の表１に示す。
【００１７】
【表１】
2018031780.tif 000003
【００１８】
用語「効力」が本発明で投与計画の文脈に即して用いられる場合、特定の治療計画の有効性を指す。効力は、本発明の薬剤への応答における疾患の経過の変化に基づいて測定され得る。１つの実施形態において、抗原結合タンパク質（例えば、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体）は改善の誘導に十分な量および時間で対象に投与され、好適には改善は、治療されている障害の重症度を反映する少なくとも１つの指標における持続的改善である。対象の疾病、疾患または状態の程度を反映する種々の指標は、治療の量および時間が十分かどうかの決定に対して評価され得る。そのような指標として、例えば、対象の疾患重症度、症状、または障害の症状の臨床的に認められた指標が挙げられる。
【００１９】
１つの実施形態において、対象が２から４週間の間隔をおいた少なくとも２度の改善を示す場合、改善は持続性であると考えられる。別の実施形態において、対象が２から４ヶ月の間隔をおいた少なくとも２度の改善を示す場合、改善は持続性であると考えられる；さらなる実施形態において、対象が６から１２ヶ月の間隔をおいた少なくとも２度の改善
を示す場合、改善は持続性であると考えられる。改善の程度は一般的に、医師によって決定され、医師はこの決定を徴候、症状、生検、またはその他の検査結果に基づいて作成してもよく、医師はまた所与の疾患に関して作成された生活の質アンケートなどの、対象に実施されるアンケートを使用してもよい。
【００２０】
用語「治療すること」、および「治療」ならびに同類のものは本発明において、一般的に所望の薬理学的または生理学的効果を得ることを意味するために用いられる。効果は疾患、症状もしくはその状態を妨げることまたは部分的に妨げることという点で予防的であり得、および／または疾患、状態、症状または疾患が原因である有害作用の部分的な治癒または根治という点で治療的であり得る。用語「治療」が本発明で用いられる場合、ほ乳類、特にヒトにおける疾患のあらゆる治療を網羅し、（ａ）疾患に罹患し易いが、まだ罹患しているとは診断されていない対象に発生する疾患を予防すること；（ｂ）疾患を抑制すること、すなわち、疾患の発達を阻止すること；または（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患および／または疾患の症状もしくは状態の退行を引き起こすこと、を含む。本発明の目的は、病的炎症に関する疾患に罹患する患者を治療することである。本発明は、長期に渡る病的炎症が原因である有害作用を妨げること、抑制すること、もしくは軽減することおよび／または長期に渡り生命システムに存在する不適当な炎症への生理学的反応により引き起こされるそのような有害作用に関する。
【００２１】
値の範囲が記載されている場合、範囲の上限と下限の間の各中間的な値（文脈によりそうでないことが明らかな場合を除き下限の１／１０の単位）及びその記載された範囲内の他のあらゆる記載された若しくは中間的な値又はより狭い範囲が、本発明の範囲内に含まれると理解される。記載された範囲内に、あらゆる特に除外される限定がないという条件で、より狭い範囲の上限値および下限値は独立して狭い範囲に含まれてもよい。規定の範囲が限界の内の１つまたは両方を含む場合、限界を含むこれら両方のいずれかを排除する範囲もまた、本発明に含まれる。
【００２２】
本発明の方法および技術は一般的に、他に示されない限り、当該分野でよく知られた従来の方法に従って、および本明細書を通して引用され、考察される種々の概要およびより特定の参照において記載する通り、実施される。例として、参照により本明細書に組み込まれる、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ２ｄ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．  （１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  （１９９２）、およびＨａｒｌｏｗ
ａｎｄ  Ｌａｎｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．  （１９９０）を参照のこと。酵素反応および精製法は、当該技術分野で一般に達成されるように、または本発明に記載するように、製造者の仕様書に従って実施される。本発明で記載される分析化学、有機合成化学、ならびに医薬品化学および薬化学に関して用いられる専門用語、ならびにそれらの検査法および技術は、当該技術分野でよく知られ一般的に用いられるものである。標準的な方法を化学合成、化学分析、医薬品、製剤、および送達、ならびに患者の治療に用いてもよい。
【００２３】
用語「アルファ４ベータ７阻害剤」および「アルファ４ベータ７拮抗剤」は、互換的に用いられる。それぞれは、少なくとも１つのアルファ４ベータ７の作用を検出可能に抑制する分子である。アルファ４ベータ７阻害剤によって引き起こされる抑制は、例えばアッセイを用いることで、抑制が検出可能である限り完全である必要はない。アルファ４ベー
タ７の作用のあらゆるアッセイを用いてもよく、アッセイのいくつかは当該技術分野においてよく知られている。アルファ４ベータ７阻害剤により抑制され得るアルファ４ベータ７の作用の例として、リガンド結合（すなわち、ＭＡｄＣＡＭ−１への結合）、リガンド発現細胞への接着、腸などの特定の区画への輸送、サイトカイン、ケモカインおよび他の介在物の放出、炎症反応および組織障害の亢進または悪化などが挙げられる。アルファ４ベータ７阻害剤およびアルファ４ベータ７作動薬の種類の例として、これらに限定されないが、抗原結合タンパク質（例えば、アルファ４ベータ７抗原結合タンパク質）、抗体、抗体断片、および抗体誘導体などのアルファ４ベータ７結合ポリペプチドが挙げられる。さらなる例として、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体およびその変異体が挙げられる。
【００２４】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」はそれぞれ、ペプチド結合により互いに結合した２つ以上のアミノ酸残基を含む分子を指す。これらの用語は、例えば、天然のまたは人工のタンパク質、タンパク質断片およびタンパク質配列のポリペプチド類似体（変異タンパク質、変異体、および融合タンパク質など）ならびに翻訳後、または別の共有結合性もしくは非共有結合性、修飾タンパク質を含有する。ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質は、単量体または重合体であり得る。
【００２５】
ポリペプチドの「変異体」（例えば、抗体）はアミノ酸配列を含み、アミノ酸配列は、１つ以上のアミノ酸残基が、別のポリペプチド配列に対するアミノ酸配列に挿入され、該アミノ酸配列から除去され、および／または該アミノ酸配列と置換される。本発明の変異体は、融合タンパク質および生物学的に活性のある断片（例えば、抗原に結合する能力を保持する抗体の断片）を含む。ポリペプチドの「誘導体」は、例えば、別の化学的部分（例えばポリエチレングリコールまたは、例えばヒト血清アルブミンなどのアルブミン）との結合、リン酸化反応、および／または糖鎖付加などを介し、化学的に修飾されたポリペプチド（例えば、抗体）である。他に示されない限り、用語「抗体」は、２本の完全長の重鎖および２本の完全長の軽鎖を含む抗体に加えて、誘導体、変異体、断片、およびその変異タンパク質を含み、これらの例は以下に記載する。
【００２６】
本発明において有用なポリペプチドは、あらゆる手段であらゆる理由のために修飾されたポリペプチド（変異体を含む）を含み、例えば：（１）タンパク質分解に対する感受性を減少させるため、（２）酸化に対する感受性を減少させるため、（３）タンパク質複合体の形成に関する結合親和性を変更するため、（４）結合親和性を変更するため、および（４）他の物理化学的または機能的特性を与えるまたは変更するために修飾される。類似体はポリペプチドの変異タンパク質を含む。例えば、単一または多重のアミノ酸置換（例えば、保存アミノ酸置換）は、自然発生の配列（例えば、分子間接触を形成するドメイン外のポリペプチドの一部において）で作られ得る。コンセンサス配列が置換のためのアミノ酸残基を選択するために用いられてもよく、当業者はさらなるアミノ酸残基が置換され得ることを認識するであろう。
【００２７】
修飾は、保存アミノ酸置換もまた含む。「保存アミノ酸置換」は、元の配列の構造特性を実質的に変化させないものの１つである（例えば、置換アミノ酸は元の配列に発生するらせん体を切断する、または元の配列を特徴付けるもしくはその機能性にとって必要不可欠な二次構造の別種を破壊する傾向にあるべきではない）。当該技術分野において承認されているポリペプチド二次および三次構造の例は、参照により本明細書にそれぞれ組み込まれる、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  （Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，  Ｅｄ．，  Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ
ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８４））；  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  （Ｃ．  Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｊ．  Ｔｏｏｚｅ，  ｅｄｓ．，  Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｎｅ
ｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ．  （１９９１））；および、Ｔｈｏｒｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｔ．
Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５  （１９９１）に、記載されている。
【００２８】
１つの実施形態において、有用なポリペプチドは、本発明で開示されるポリペプチドと８５％、９０％、９２％、９５％、９８％、９９％または１００％同一なアミノ酸配列を有する。別の実施形態において、有用なポリペプチドは、本発明で開示されるポリペプチドと８５％から１００％同一である。２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド配列の「同一率」は、その初期パラメータを用いたＧＡＰコンピュータプログラム（ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅのバージョン１０．３（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、カリフォルニア州サンディエゴ）の一機能）を使用する配列を、比較することによって決定される。別の実施形態において、有用なポリペプチドは、１つから５つのアミノ酸の置換、欠失または挿入により本発明で開示されるポリペプチドと異なる。そのような置換、欠失または挿入は、開示されるポリペプチドの終端のいずれかで起こり得る（例えば、Ｎ末端メチオニンの追加、Ｃ末端リシンの欠失、内部アミノ酸の追加もしくは欠失、および／またはアミノ酸の異なるアミノ酸との置換）。有用なポリペプチドが１つ超のポリペプチド（例えば、２本の重鎖および２本の軽鎖を含む抗体）を含む場合、各ポリペプチドは１つから５つのアミノ酸の欠失、挿入または置換によって修飾され得る。さらなる実施形態において、１０個以下のアミノ酸は置換、除去または挿入され得る。有用なポリペプチドは、本発明に記載のアルファ４ベータ７拮抗剤の少なくとも１つの活性、例えば、１つ以上のリガンド結合の抑制、リガンド発現細胞との接着、腸などの特定の区画への輸送、サイトカイン、ケモカインおよびその他の介在物の放出、ならびに炎症反応または組織障害の追加のまたは代替的な寛解、などの活性を示すであろう。
【００２９】
「抗体」は、他に述べられない限り、無傷の免疫グロブリンまたは特異的結合について無傷の抗体と競合するその抗原結合部分を指す。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によってまたは無傷の抗体の酵素的もしくは化学的切断によって作製されてもよい。抗原結合部分は、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂｓ）、ならびに相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、可変領域断片、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、およびポリペプチドを含み、ポリペプチドに特異抗原結合を与えるために十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含有する。
【００３０】
「免疫グロブリン」は多量体の分子である。自然発生の免疫グロブリンにおいて、各多量体はポリペプチド鎖の２対の相同対からなり、各対は１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１本の「重」鎖（約５０から７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部は、抗原認識に関して最も重要な約１００から１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部は、エフェクター機能に関して最も重要な定常領域を規定する。ヒト軽鎖はκまたはλ軽鎖として分類される。重鎖はμ、δ、γ、α、またはεとして分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥと規定する。軽鎖および重鎖内において、可変領域および定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により、約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域をまた含む重鎖と連結される。一般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．  ７
（Ｐａｕｌ，  Ｗ．，  ｅｄ．，  ２ｎｄ  ｅｄ．  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎ．Ｙ．  （１９８９））（全ての目的のためにその全てが参照により組み込まれる）を参照のこと。各軽／重鎖対の可変領域は、無傷の免疫グロブリンが２つの結合部を有するような抗体結合部を形成する。
【００３１】
自然発生の免疫グロブリン鎖の可変領域は、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域と連結した相対的保存フレームワーク領域（ＦＲ）と同様の全体構造を示す。Ｎ末端からＣ末端までは、軽鎖および重鎖はどちらも、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１
、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインに対するアミノ酸の割当は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．  ｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  ５ｔｈ  Ｅｄ．，  ＵＳ  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＰＨＳ，  ＮＩＨ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．  ９１−３２４２，  １９９１の定義に基づく。免疫グロブリン鎖におけるアミノ酸に対するその他の付番方式は、ＩＭＧＴ（登録商標）（ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ；  Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ，  Ｄｅｖ．  Ｃｏｍｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２９：１８５−２０３；  ２００５）およびＡＨｏ  （Ｈｏｎｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３０９（３）：６５７−６７０；  ２００１）を含む。
【００３２】
１ナノモル以下の解離定数で抗体が抗原と結合する場合、抗体は抗原（例えば、ヒトアルファ４ベータ７）と「特異的に結合する」。本発明で用いられる場合、抗体は第１ヘテロ二量体インテグリンと結合するが、１本の鎖を第１インテグリンと共有するその他のインテグリンとは結合しない場合に、抗体は「ヘテロ二量体特異的」である。例えば、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的である抗体はアルファ４ベータ７と結合するが、アルファ４ベータ１またはアルファＥベータ７とは結合しないであろう。１つの実施形態において、抗体は単クローン抗体であり；別の実施形態において、抗体は表２ａ（軽鎖可変領域）および２ｂ（重鎖可変領域）に示されるようなアミノ酸配列または本発明で説明される変異体を含む、選択単クローン抗体（ＭＡＢ）である。別の実施形態において単クローン抗体はさらに、軽鎖定常領域（配列番号７）および重鎖定常領域（配列番号８）を含む。以下の表における各ドメインに対するアミノ酸の割当は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．  ｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  ５ｔｈ  Ｅｄ．，  ＵＳ  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＰＨＳ，  ＮＩＨ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．  ９１−３２４２，  １９９１の定義に基づく。免疫グロブリン鎖におけるアミノ酸に対する他の付番方式はＩＭＧＴ（登録商標）（ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ；  Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ，  Ｄｅｖ．  Ｃｏｍｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２９：１８５−２０３；  ２００５）およびＡＨｏ  （Ｈｏｎｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３０９（３）：６５７−６７０；  ２００１）を含む。相補性決定領域とフレームワーク領域の間の境界は示された１から５個のアミノ酸と異なってもよいことを、当業者は理解する。
【００３３】
【表２】
2018031780.tif 000004
【００３４】
【表３】
2018031780.tif 000005
【００３５】
【表４】
2018031780.tif 000006
【００３６】
【表５】
2018031780.tif 000007
【００３７】
【表６】
2018031780.tif 000008
【００３８】
これら、およびその他のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗原結合タンパク質は、本発明に参照によりその開示が組み込まれる、米国特許出願第１２／７２５，０３１号（ＵＳ２０１００２５４９７５として出願）において開示されている。表２で開示された抗体は、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体と特に理解されるヒト抗体であるが、α４β１またはαＥβ７のいずれとも結合しない。１８Ａ１１はアルファ４ベータ７と高親和性に結合し、粘膜アドレシン細胞接着分子とのアルファ４ベータ７の相互作用を遮断する。１８Ａ１１は粘膜アドレシン細胞接着分子媒介Ｔ細胞接着を強く抑制するが、ＶＣＡＭ−１媒介Ｔ細胞接着は抑制しない。１８Ａ１１製剤はまた、皮下投与を可能にする。
【００３９】
本発明で用いられる場合、ペプチド、免疫グロブリン、抗体および同類のものの従来の定義に基づき、「アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗原結合タンパク質」は他に述べられない限り、無傷の免疫グロブリンまたはその抗原結合部分を指し、抗原結合部分は特異的結合について無傷の抗体と競合する。「１８Ａ１１」はまた、アミノ酸配列、特に可変領域またはその相補性決定領域（しかしながら、定常領域における変異体もまたよく考
慮される）における１８Ａ１１と、同一または同様の抗体（またはその断片）を、包含する。例えば、有用な１８Ａ１１ポリペプチドは、本発明で開示される１８Ａ１１ポリペプチド（例えば、表２ａおよび２ｂに記載のようなもの）と８５％、９０％、９２％、９５％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有する。別の実施形態において、有用なポリペプチドは、１８Ａ１１と８５％から１００％同一である。１つの実施形態において、１８Ａ１１は単離され、配列番号５からＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を有し、配列番号２からＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗原結合タンパク質である。別の実施形態において、１８Ａ１１は単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗原結合タンパク質であり、重鎖可変領域は配列番号５と少なくとも９０％同一であり、軽鎖可変領域はＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３から配列番号２と少なくとも９０％同一である。
【００４０】
さらなる様態において、１８Ａ１１は１８Ａ１１可変領域における１から１０個のアミノ酸の置換、挿入または欠失により、本発明で開示されるアミノ酸配列が異なり得る。本発明の１つの様態において、１から１０個のアミノ酸が１８Ａ１１の定常領域において除去、置換または挿入され得る。その上、前述の置換、挿入または欠失は併用されてもよい（すなわち、いずれかまたは両方の可変および定常領域で作成されてもよい）。さらなる実施形態は、いくつかの、ほとんどまたは実質的に全てのＮ末端アミノ酸のピログルタミン酸への変換、１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのＮ末端および／またはＣ末端アミノ酸の除去（翻訳後または組換え技術によってのいずれか）を含む、１つ以上の翻訳後修飾を組み込むポリペプチドを含む。
【００４１】
別の様態において、本発明は、緩衝剤、アスコルビン酸などの抗酸化剤、低分子量ポリペプチド（１０個未満のアミノ酸を有するものなど）、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロースまたはデキストリンなどの炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、グルタチオン、安定剤、および賦形剤からなる群から選択された抗体ならびに１つ以上の物質を含む、医薬組成物を提供する。中性緩衝食塩水または同種の血清アルブミンと混合された食塩水は、適切な希釈剤の例である。適切な業界標準に基づき、ベンジルアルコールなどの保存剤をまた加えてもよい。さらに医薬組成物の製剤は、適当な構成要素が、使用される用量および濃度で受容者に対して非毒性な投与経路に応じ得る。従って、組成物は適切な賦形剤溶液（例えば、スクロース）を用いた凍結乾燥物として、希釈剤として、または体温で溶けるが、室温では凝固する、カカオバター、カーボワックスおよびポリエチレングリコールなどの溶媒を含み得る座剤として、処方されてもよい。さらに、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体は、固体、半固体、液体またはガス状の形態（錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、懸濁剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、細粒剤、およびエアロゾルを含む）で処方されてもよい。製剤処方において使用してもよい構成要素のさらなる例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １６ｔｈ  Ｅｄ．  （１９８０）  ａｎｄ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．  （２０００），  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡに示されている。
【００４２】
医薬組成物は、限定されないが、非経口的、局所的、または吸入によるものを含むあらゆる適当な技術によって投与され得る。注射の場合、例えば、間接内、静脈内、筋肉内、病巣内、腹腔内または皮膚経路（皮内、経皮または真皮下、および皮下を含む）を介して、ボーラス注入、または継続注入により、医薬組成物は投与されてもよい。さらなる実施形態において、組成物は経口、口腔内、直腸内、気管内、胃内、または頭蓋内経路によって投与される。例えば疾患または傷害の部位での局所的投与は、例として、消化管に関する状態に対して浣腸または座剤による投与が考慮される。植込剤からの経皮的送達および叙放もまた、考慮される。吸入による送達として、例えば、経鼻または経口吸入、噴霧器
の使用、エアロゾル形態による拮抗剤の吸入、および同類のものが挙げられる。その他の代替案として、点眼剤；丸剤、シロップ剤、トローチまたはチューイングガムを含む経口剤；ならびにローション剤、ゲル剤、噴霧剤、および軟膏剤などの局所製剤、が挙げられる。
【００４３】
１つの様態において、本発明は対象を治療する方法を提供する。方法は例えば、一般的に健康によい効果を対象に有してもよく、例として、方法は対象の予想される寿命を延ばし得る。あるいは、方法は例えば、疾患、障害、状態、または疾病（「状態」）を治療、予防、治癒、軽減、または改善（「治療」）し得る。１つの実施形態において、本発明は、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、対象における状態を治療する方法を提供し、状態は対象におけるアルファ４ベータ７の活性を（部分的にまたは完全に）減少させることで、治療することができる。治療は、治療的投与（すなわち、疾患または状態の徴候および症状が明らかである場合の投与）ならびに予防的治療の両方、または寛解および／または寛解の維持を誘導する治療と同様の維持療法（すなわち、疾患または状態が静止状態である場合の投与）を含有する。従って、疾患または状態の重症度は（部分的に、大幅にまたは完全に）減少させられ得る、または徴候および症状は妨げられもしくは遅延させられ（発生の遅延、長期の寛解、または静止状態）得る。
【００４４】
本発明に基づく治療される状態において、状態はアルファ４ベータ７の不適当な発現または活性により特徴付けられる。そのような状態は細胞の不適当な輸送、例えば、消化管または（白血球と粘膜アドレシン細胞接着分子を発現する細胞の結合の結果として）粘膜アドレシン細胞接着分子を発現するその他の組織細胞への白血球（リンパ球または単球など）の輸送と、関連した状態を含む。治療され得る疾患は従って、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、セリアック病（非熱帯性スプルー）、血清反応陰性関節症と関連した腸疾患、顕微鏡的または膠原性大腸炎、好酸球性胃腸炎、などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、または直腸結腸切除および回腸肛門吻合により生じる嚢炎を含む。本発明に基づき治療され得るさらなる状態は、膵臓炎、インスリン依存性糖尿病、乳腺炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、喘息および移植片対宿主病を含む。
【００４５】
クローン病における疾患活動性はクローン病活性指数（ＣＤＡＩ）を用いて評価される。クローン病活性指数は８項目（排便回数、腹痛の重症度、一般的な健康状態の程度、腸管外発現またはフィステルの存在または非存在、止痢薬の使用または不使用、腹部腫瘤の存在または非存在、ヘマトクリット、および体重）の加重総合指数であり、約０から６００の範囲のスコアを有し、より高いスコアはより重度の疾患活動性を示す。典型的に、スコア＜１５０を有する患者は寛解にあると考えられる。そうでなければ疾患は、１５１から２１９、２２０から４４９、および４５０以上のスコアで、それぞれ軽度、中等度、または重度であると段階付けられる。軽度から中等度クローン病に罹患した患者に対する導入療法は、典型的に５−アミノサリチル酸またはスルファサラジンまたは抗菌剤を使用する。潰瘍性大腸炎における疾患活動性は、メイヨースコア（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ３１７：１６２５；  １９８７により最初に記述された）などのスコアを用いて評価され、メイヨースコアとは、各項目が最大総スコア１２に対し０から３のスコアで半定量的に段階付けられる、４項目（排便回数、直腸出血、内視鏡所見、および医師総合評価）の総合指数である。潰瘍性大腸炎における治療の目標は、前述のクローン病に対するものと同様であり、すなわち導入および維持療法である。利用可能な治療はクローン病に対するものと同様である。
【００４６】
アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体は、対象の状態において改善を達成するために投与され得る。改善は、臨床症状の寛解によるまたは疾患活動性のあらゆるその他の測定による、クローン病活性指数またはメイヨースコアなどの疾患活動性の指標の減少によ
り示され得る。１つの実施形態において、２から４週間の間隔をおいた少なくとも２度の改善を対象が示す場合、改善は持続性であると考えられる。別の実施形態において、２から４ヶ月の間隔をおいた少なくとも２度の改善を対象が示す場合、改善は持続性であると考えられ；さらなる実施形態において、６から１２ヶ月の間隔をおいた少なくとも２度の改善を対象が示す場合、改善は持続性であると考えられる。改善の程度は一般的に、医師によって決定され、医師はこの決定を徴候、症状、生検、またはその他の検査結果に基づいて作成してもよく、医師はまた所与の疾患に対して作成された生活の質アンケートなどの対象に実施されるアンケートを使用してもよい。
【００４７】
別の実施形態において、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体を用いた対象の治療は、受容体占有（ＲＯ）の一定のレベルを達成および／または維持するための量および／または十分な間隔で、例えば、本発明に記載のアッセイを用いて実施され得る。例えば、ヘテロ二量体特異抗体は少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の受容体占有を達成するために実施される。
【００４８】
さらなる実施形態において、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体を用いた対象の治療は、血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の一定の量の達成および／または維持するための量および／または十分な間隔で、例えば、本発明に記載のアッセイを用いて、実施され得る。例えば、ヘテロ二量体特異抗体は少なくとも１０ｎｇ／ｍｌ、２５ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ、６０ｎｇ／ｍｌ、７０ｎｇ／ｍｌ、７５ｎｇ／ｍｌ、８０ｎｇ／ｍｌ、８５ｎｇ／ｍｌ、９０ｎｇ／ｍｌ、９５ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、１５０ｎｇ／ｍｌ、２００ｎｇ／ｍｌ、５００ｎｇ／ｍｌ、または９９０ｎｇ／ｍｌを達成するために使用される。さらなる実施形態において、ヘテロ二量体特異抗体は１０ｎｇ／ｍｌから１０００ｎｇ／ｍｌを達成するために使用される。当業者は、本明細書に示される量が完全長抗体または免疫グロブリン分子に適用されること；その抗原結合断片が用いられる場合、絶対量は断片の分子量に基づいて算出され得る様式において示されるものとは異なるであろうことを、理解するであろう。
【００４９】
１つの実施形態において、１８Ａ１１を７ｍｇの用量で２週間毎に投与する。さらなる実施例において、１８Ａ１１を７〜２１日毎、１１〜１７日毎、１３〜１５日毎、または１４日毎に投与する。そのような実施形態の１つの例において、１８Ａ１１の用量は５〜１０ｍｇの範囲、または５〜１４ｍｇの範囲である。本発明で提供するさらなる例は、２１ｍｇの１８Ａ１１の６週間毎、または１４〜５６日毎、または３０〜５０日毎；または４０〜４４日毎の投与である。そのような実施形態の例としてまた、１５〜３０ｍｇ、または１５〜５４ｍｇの範囲の用量での投与も提供される。
【００５０】
さらなる実施形態において、１８Ａ１１を３ヶ月毎または１２週間毎に７０ｍｇの用量で投与する。例えば、１８Ａ１１を４３〜１２６日毎、または７５〜９５日毎、または８０〜８８日毎に投与する。そのような実施形態の別の様態において、１８Ａ１１の用量は、５５〜８５ｍｇの範囲、または５５〜９９ｍｇの範囲である。本発明で提供するさらなる様態は、２１０ｍｇの１８Ａ１１の１８週間（または４．５ヶ月）毎、または１１２〜１４７日毎、または１２０〜１３２日毎；または１２５〜１２９日毎の投与である。そのような実施形態の例として、１６０〜２６０ｍｇ、または１６０〜３００ｍｇの範囲の用量の投与が提供される。
【００５１】
よりさらなる実施形態において、１８Ａ１１を４２０ｍｇの用量で６ヶ月毎に投与する。しかし別の実施形態において、１８Ａ１１を１２６〜２２４日毎、または１６５〜１８５日毎、または１６０〜１７４日毎に投与する。そのような実施形態の１つの例において、１８Ａ１１の用量は３００〜７００ｍｇの範囲、または３００〜１０００ｍｇの範囲で
ある。１８Ａ１１のその他の用量の投与、およびさらなる投与間隔での投与もまた、企図される。
【００５２】
ＩＢＤの治療は生活習慣の変化、内科的管理、および外科的処置を含む。従って、別の様態において、本発明はアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体および１つ以上のその他の治療で対象を治療する方法を提供する。１つの実施形態において、そのような併用療法は、例えば、複数の部位もしくは分子標的の攻撃、または複数の経路の抑制による相乗または相加作用を達成する。本発明に関して用いられ得る併用療法の種類として、単一の疾患に関連する経路、標的細胞における複数の経路、および標的組織内の複数の細胞型における、複数の結節の（必要に応じた）抑制または活性化が挙げられる。
【００５３】
１つの実施形態において、併用療法は２つ以上のアルファ４ベータ７拮抗剤（例えば、直接的または間接的にアルファ４ベータ７媒介活性を共に抑制する２つ以上の治療）を対象に投与することを含む。そのような方法の例として、２つ以上のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体の併用、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体とアルファ４ベータ７もしくはそのサブユニットを結合する別の抗体（例えば、アルファ４を結合する抗体またはベータ７を結合する抗体）の併用、またはアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体と抗体などの拮抗剤の併用、アルファ４ベータ７の結合パートナー（例えば、粘膜アドレシン細胞接着分子）の併用が挙げられる。アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体とその他の生物製剤の組み合わせもまた、企図される。そのような生物製剤の例は、拮抗剤、または適切なサイトカイン（例えば、アンタゴニスト抗体、受容体の一部、および／またはその作動薬の変異体）としての作動薬であり、サイトカインの例は、インターロイキンＩＬ−１からＩＬ−３５、腫瘍壊死因子αおよびβ、インターフェロンα、βおよびγ、腫瘍成長因子β（ＴＧＦ−β）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）ならびに顆粒球単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）など、ならびにＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＲＡＮＴＥＳ、エキソタキシンおよびＩＬ−８などのケモカインのその他の拮抗剤などが挙げられる。本発明の薬剤は例えば、ウステキヌマブ、ブリアキヌマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴール、ナタリズマブおよびベトリズマブなどを含む。そのような薬剤は非経口的にまたは別の適当な経路により、当該技術分野において既知であり処方情報に記載されている用量および間隔で投与されてもよい。
【００５４】
さらなる組み合わせの種類として、本発明に記載のアルファ４ベータ７拮抗剤を使用してもよい。例として、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体と抗炎症性を有する１つ以上のその他の治療成分（例えば、非ステロイド性抗炎症薬、ステロイド類、および／または免疫調節薬）の併用、またはアルファ４ベータ７抑制抗原結合タンパク質と１つ以上のその他の治療（例えば、炎症を抑える効果のある外科手術、超音波、または治療）の併用が挙げられる。アルファ４ベータ７阻害剤と併用し得る有用な薬剤として、例えばクローン病または潰瘍性大腸炎の治療に用いられる薬剤が挙げられ、例としては、アミノサリチル酸（例えば、メサラミンまたはメサラミンへと代謝される、Ａｓａｃｏｌ（登録商標）、サロフォーク、Ｐｅｎｔａｓａ（登録商標）、Ｄｉｐｅｎｔｕｍ（登録商標）、コラザイド（ｃｏｌａｚｉｄｅ）、Ｌｉａｌｄａ（登録商標）およびＲｏｗａｓａ（登録商標）などを含む物質）、コルチコステロイド類／糖質コルチコイド（プレドニゾロンメタスルホ安息香酸、チキソコルトールピバレート、プロピオン酸フルチカゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、およびブデソニドを含む）、メトロニダゾールまたはシプロフロキサシンなどの抗生物質（または例えば、フィステルに罹患した患者の治療に有用なその他の抗生物質）、ならびにアザチオプリン（例えば、Ｉｍｕｒａｎ（登録商標）およびＡｚａｓａｎ（登録商標））、６−メルカプトプリン（例えば、Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキセート（例えば、Ｔｒｅｘａｌｌ（登録商標）、Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標））、タクロリムス（例えば、Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））ならびにシクロスポリン（例えば、Ｇｅｎｇｒａｆ（登録商標）、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、および
Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））などの免疫抑制剤が挙げられる。そのような薬剤の併用もまた、進歩性のあるアルファ４ベータ７阻害剤と一緒に使用されることが企図される。そのような薬剤は、経口または別の経路によって、例えば座剤または浣腸を介して、当該技術分野において既知であり処方情報に記載されている用量および間隔で投与されてもよい。
【００５５】
その上、抗アルファ４ベータ７抗体または抗体誘導体、もしくは前述の組み合わせは１つ以上の分子またはその他の治療と併用されてもよく、その他の分子および／または治療はアルファ４ベータ７と直接的に結合または影響しないが、この併用は治療されている状態の治療または予防に効果的である。例えば、アルファ４ベータ７阻害剤はプロバイオティック治療、または腸管内菌叢移植を含む、正常な腸管内菌叢の回復または維持に用いられるその他の治療と併用されてもよい。１つの実施形態において、１つ以上の分子および／または治療は、治療の経過において１つ以上のその他の分子または治療により引き起こされる状態を治療または予防し、状態は例えば、嘔気、疲労、脱毛症、悪液質、不眠症などである。そのような薬剤または治療は当該技術分野において既知であり処方情報に記載されている経路、用量および間隔で投与されてもよい。
【００５６】
さらなる支持療法は、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体抗体を用いた利用可能な併用療法を含み；そのような支持療法として（これらに限定されないが）、鎮痛剤、および抗コリンおよび止痢薬が挙げられる。そのような支持療法の組み合わせは治療計画の初期において、患者の症状の減退および患者の生活の質改善に有用であり得る。支持療法は経口鉄、葉酸、およびビタミンＢ１２の投与を含む。止痢薬は、これらに限定されないが、ジフェノキシラート、コデイン、ロペラミド、および抗コリン剤（またはその薬理学的等価物）を含み、これらは軽度疾患の患者に、便通の頻度を減少させて便意逼迫を再度経験させるために投与される。コレスチラミンは、すでに限定的な回結腸切除を受けた患者における胆汁酸塩誘発性結腸分泌を妨げるために、患者に対して用いられてもよい。抗コリン剤として、これらに限定されないが、臭化クリジニウム、塩酸ジサイクロミン、ベラドンナのチンキおよび同類のものが挙げられ、抗コリン剤は腹部痙攣、疼痛および便意逼迫を減少させるのに有用である。支持療法または治療は、当該技術分野において既知であり処方情報に記載されている経路、用量および間隔で投与されてもよい。
【００５７】
分子および／またはその他の治療が併用される全ての場合において、個別の分子および／または治療はあらゆる順序で、あらゆる時間の長さに渡り投与されてもよく、例えば、同時に、継続的に、または交互に有効である。１つの実施形態において、治療の方法は、１つの分子を用いた治療の第１過程または治療の第２過程を開始する前のその他の治療を、完了させることを含む。治療の第１過程の終了から治療の第２過程の開始までの時間の長さは、治療の全過程が有効である限りあらゆる時間の長さであってもよく、例えば、数秒、数分、数時間、数日、数週間、数ヶ月、または数年であってもよい。
【００５８】
別の実施形態において、方法は本発明に記載の１つ以上のアルファ４ベータ７拮抗剤の投与および１つ以上のその他の治療（例えば、治療的または対症的療法）を含む。方法が対象への１つ超の治療の投与を含む場合、投与の順序、タイミング、数、濃度、および量は治療の医学的要求および制限によってのみ限定され、換言すれば、２つの治療が例えば同時に、継続的に、交互に、またはその他のあらゆる計画に従って対象に投与されてもよいということを理解されたい。
【００５９】
下記の実施例は、実例および机上の例の両方において、本発明の具体的な実施形態または特徴を説明する目的で提供されるものであって、その範囲に限定されない。
【実施例】
【００６０】
実施例１
本実施例は、１８Ａ１１のＰＫ／ＰＤ特性の試験に用いた種々のアッセイについて述べる。
【００６１】
薬剤の定量
本実施例は、対象由来の血清における１８Ａ１１の量の測定に用いたアッセイについて述べる。簡単に述べると、捕捉抗体（例えば、マウス抗１８Ａ１１  １．３０．１ｍＡｂ）は、Ｍｕｌｔｉ−Ａｒｒａｙ（登録商標）９６ウェルＨｉｇｈＢｉｎｄマイクロプレートウェル（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）に受動的に吸着される。マイクロプレートウェルは過剰な捕捉抗体を除去した後に、Ｂｌｏｃｋｅｒ（商標）ＢＬＯＴＴＯ／ツイーン緩衝剤でブロックされる。既知の含量の１８Ａ１１を１００％の正常ヒト血清プールにスパイクすることにより調製した標準および品質管理試料は、Ｂｌｏｃｋｅｒ（商標）ＢＬＯＴＴＯ／ツイーン緩衝剤中で５０倍に希釈する前処理後に、検査される試料およびマトリックスブランクとしてマイクロプレートウェルに入れられる。試料中のあらゆる１８Ａ１１は、固定化捕捉抗体により捕捉される。非結合物質はマイクロプレートウェルの洗浄により除去される。洗浄後に、ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ（商標）結合検出抗体（例えば、抗１８Ａ１１  １．２．１ｍＡｂ）をマイクロプレートウェルに加えて、捕捉された１８Ａ１１と結合させる。非結合ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ（商標）結合捕捉抗体を、マイクロプレートウェルの洗浄で除去する。
【００６２】
この洗浄後に、結合ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ（商標）結合検出抗体の検出を補助するために、Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｔ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を加える。マイクロプレートが電気的に刺激された場合、リードバッファ中のトリプロピルアミン共反応物（ＴＰＡ）の存在下におけるＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ（商標）標識は、６２０ｎｍで発光する。放射された光の量は、第１工程で捕捉抗体により結合された１８Ａ１１の量に比例する。発光は適切なプレート読み取り装置；例えばＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェアを備えるＳｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００、を用いて検出される。データは例えば、１／Ｙ２の重み係数を有する５ＰＬ（自動測定）（５−パラメータロジスティック）回帰モデルを用いる、Ｗａｔｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍデータ縮約パッケージを使用して、縮小される。所与の血清試料中の１８Ａ１１の量は、標準および品質管理試料により作成された検量線と比較して決定される。
【００６３】
抗１８Ａ１１結合抗体イムノアッセイ
本実施例は、対象由来の血清において１８Ａ１１を結合する抗体の存在を検出するために用いたアッセイについて述べる。このアッセイにおいて１８Ａ１１との結合抗体の検出は、電気化学発光（ＥＣＬ）ＭＳＤ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）技術基盤を利用し、抗体結合の多価特性に基づく。試験戦略は、スクリーニングアッセイおよび特異性アッセイからなる段階的な２つのアッセイアプローチを含む。スクリーニングアッセイにおけるアッセイカットポイントより大きな信号雑音比（Ｓ／Ｎ）を有する試料は、特異性アッセイにおいて試験前に過剰な１８Ａ１１で試料をインキュベートすることにより、さらに検査される。
【００６４】
抗体複合体の解離を可能にするため、試料の酸処理が解析に先立って実施される。酸処理した血清試料および対照を、ｐＨ９．５で１ＭのＴｒｉｓ中の等量のビオチン化１８Ａ１１（Ｂ−１８Ａ１１）およびルテニル化１８Ａ１１（Ｒｕ−１８Ａ１１）からなる溶液に加え、外気温でインキュベートして抗１８Ａ１１抗体をビオチン化１８Ａ１１分子およびルテニル化１８Ａ１１分子の両方と結合させ、それにより複合体を形成する。
【００６５】
インキュベーション後に、全ての試料および対照を、ウシ血清アルブミンでブロックさ
れた洗浄済ストレプトアビジン被覆標準結合ＭＳＤプレートに移動し、外気温でインキュベートしてビオチン化１８Ａ１１を捕捉させ、ストレプトアビジン表面上に複合体を形成した。プレートウェルを洗浄し、トリプロピルアミンを含有するＭＳＤリードバッファの溶液を加える。プレートはＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００プレート読み取り装置で読み取られる。装置内において、ルテニウムは電圧が印加された場合に誘発される電気化学発光反応に関与する。プレートのウェル上に捕捉されるルテニル化１８Ａ１１を含有する複合体は、試料中の抗１８Ａ１１抗体の濃度に比例する電気化学発光信号をもたらす。
【００６６】
抗１８Ａ１１中和抗体バイオアッセイ
本実施例は、対象由来の血清において１８Ａ１１を中和する抗体の存在を検出するために用いたアッセイについて述べる。抗１８Ａ１１中和抗体（ＮＡｂ）試験戦略は、スクリーニングアッセイおよび特異性アッセイからなる段階的な２つのアッセイアプローチを含む。スクリーニングアッセイの目的は、試験血清試料中における１８Ａ１１活性に対するあらゆる抑制を検出することである。特異性アッセイは試料を過剰な１８Ａ１１でインキュベートすることにより実施され、その後解析を行い、スクリーニングアッセイにおいて観察された１８Ａ１１活性の抑制が、中和抗１８Ａ１１抗体の存在に対して特異的であったことを確認する。スクリーニングおよび特異性アッセイの統合成績を用いて、抗１８Ａ１１中和抗体に対して試料が陽性または陰性であるかどうかを決定する。
【００６７】
このアッセイにおいて、細胞表面に発現したヒトアルファ４ベータ７インテグリンに安定して導入されたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ＣＨＯ−アルファ４ベータ７）を、ＭａｄＣＡＭ−１（Ｂｉ−ＭａｄＣＡＭ−１ＦＣ）および１８Ａ１１のヒトビチオン標識可溶型の決まった濃度の存在下において、インキュベートする。１８Ａ１１は、ＣＨＯ−アルファ４ベータ７細胞の表面に発現したアルファ４ベータ７と結合し、Ｂｉ−ＭａｄＣＡＭ−１ＦＣとアルファ４ベータ７の結合をブロックする。抗１８Ａ１１中和抗体が試料中に存在する場合、関連する蛍光単位（ＲＦＵ）として９６ウェルプレート蛍光読み取り装置を用いて測定された、フィコエリスリン結合ストレプトアビジン（ＳＡ−ＰＥ）の蛍光信号の増加によって検出される際に、アルファ４ベータ７と結合した１８Ａ１１が損なわれる。
【００６８】
免疫表現型検査および受容体占有
本実施例は、ヒト対象において受容体占有を評価するための、およびＣＤ４  Ｔ細胞サブセットを列挙するための、６色６管のフローサイトメトリーアッセイＩＰＲＯ（免疫表現型検査および受容体占有）アッセイについて述べる。アルファ４ベータ７受容体の遊離および全体レベルの両方が、下記の表３に示す管の型式を用いて、別々の管の中で測定される。アルファ４ベータ７の遊離および全体レベルの両方を同定する能力は、２つの試薬、アルファ４ベータ７との結合に関して１８Ａ１１と競合する抗体（下記の表３において「競合ａ４ｂ７」と称される）、およびアルファ４ベータ７のβ７サブユニットと結合するが、１８Ａ１１と競合しない抗体（下記の表３において「非競合ｂ７」と称される）を用いて達成され、それぞれがフィコエリスリンと結合する。試薬は、解析からαＥβ７（非競合ｂ７抗体を結合するであろう）を発現する細胞を排除するために用いられる、抗ＣＤ１０３（αＥ）もまた含む。約５００マイクログラム／ｍｌの１８Ａ１１  ｅｘ  ｖｉｖｏでの薬剤スパイク状態の追加は、完全飽和対照として働く。高品質な専用フローサイトメトリー試薬として、１：１の抗体と蛍光体の複合物、抗体カクテルならびに凍結乾燥した薬剤およびプラセボ緩衝剤（下記の表３における、溶解緩衝剤）が挙げられる。
【００６９】
【表７】
2018031780.tif 000009
ＦＩＴＣ：フルオレセインイソチオシアネート
ＰＥ：フィコエリスリン
ＰｅｒＣＰ：ペリジニンクロロフィルタンパク質
ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７：約６４７ｎｍの最大励起を有する合成蛍光色素
ＡＰＣ−Ｈ７：ラン藻類）−シアニン直列型蛍光色素において、付属の光合成色素が発見されたアロフィコシアニン
Ｖ４５０：青紫色レーザーにより励起されるクマリン色素
【００７０】
６本で１組の管を、解析される各対象（または対照）に対して準備する。薬剤またはプラセボ緩衝剤は、個々のキットとして凍結乾燥および調製されてもよい。各アッセイに関して、キットにおける６本の管のそれぞれ（表３に示されるように）は、２０マイクロリットルの水で再水和され、約５分間インキュベートされる。あるいは、薬剤またはプラセボは６本の管のそれぞれに設置される。各管に対して、その後解析される対象由来の末梢血１００マイクロリットルを加えた。続いて管を室温で約３０分間インキュベートし、その後、２０マイクロリットルの抗体カクテルと６０マイクロリットルの抗体：フィコエリスリンが１：１の試薬を各管に加えた。室温で約２０分間のさらなるインキュベーションの後、赤血球を溶解し、残りの細胞を洗浄し、再懸濁し、蛍光活性化セルソーターを用いて解析する。リンパ球を分化させるゲーティング戦略およびそのサブタイプの比較は、ＣＤ４エフェクターメモリーＴ細胞、ＣＤ４セントラルメモリーＴ細胞およびＣＤ４ナイーブＴ細胞の同定ならびに分化を促進する。二重プラットホームアプローチを使用して、ＣＤ４  Ｔ細胞サブセットを列挙する。例えば、各集団に対して集められたＣＤ４ナイーブＴ細胞イベントの数をリンパ球イベントによって除算し、その後マイクロリットルあたりのリンパ球の血液学的結果によって乗算する。式：
【００７１】
【数２】
2018031780.tif 000010
に続く実施例を使用し、ナイーブＣＤ４  Ｔ細胞をＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ３＋ＣＤ８−ＣＤ１０３−ＣＤ４５＋リンパ球として規定する。
【００７２】
競合抗アルファ４ベータ７−フィコエリスリンは遊離（非占有）アルファ４ベータ７標的受容体と全ての解析Ｔ細胞サブセット上で結合するが、非競合抗体（非競合ｂ７）は遊離（非占有）および占有アルファ４ベータ７の両方と結合する。完全目標飽和度と対応する信号は、各対象／時点で、飽和濃度の１８Ａ１１を有する「ｅｘ  ｖｉｖｏスパイク」試料を含めることにより得られる。スパイクおよび非スパイク状態に対する蛍光強度中央値を、蛍光ビーズ検量線を用いる細胞あたりの結合分子（ＭＢＰＣ）に変換し、その後受容体占有の算出に利用する。目標飽和度の計算は、対象の投与前値の平均に関する所与の対象／時点に対するスパイクと非スパイク試料間の競合抗アルファ４ベータ７フィコエリスリン信号において異なる。例えば、対象に関して利用可能な２つの投与前値がある場合、算出される目標飽和度は以下の式：
【００７３】
【数３】
2018031780.tif 000011
を用いる。
【００７４】
用語「管」は本発明において便宜的に用いられ；マイクロウェルプレート、キュベットおよび同類のものを含む、あらゆる適当な容器が使用されてもよいことは、当業者によって理解されたい。試料が加えられる直前に発生する再水和で、試料を得る前、および脱水する前に試薬管が調製されてもよいこともまた、理解されたい。あるいは、試薬管は試料が得られた後、または試料が得られるのと同時に調製されてもよい。
【００７５】
実施例２
本実施例は、健常対象（ＨＳ）および軽度から中等度の潰瘍性大腸炎（ＵＣ；ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ、識別子：ＮＣＴ０１１６４９０４）に罹患した対象における１８Ａ１１の安全性、耐用性、薬物動態（ＰＫ）および薬物動力（ＰＤ）を評価する、第１相、無作為抽出、二重盲検、プラセボ対照、漸増単回投与試験について述べる。次の用量を評価する：
【００７６】
【表８】
2018031780.tif 000012
【００７７】
コホート１から９の健常対象由来の予備ＰＫデータを解析し、ＰＫ特性を図１に示す。連続した血液試料は、予定した時点の８５日目に、コホート１、２、３、および４（それぞれ０．７、２．１、７、および２１ｍｇの１８Ａ１１を皮下投与）に対して；予定した時点の１２７、１９７、１２７、１９７および２２５日目に、コホート５、６、７、８および９（それぞれ７０および２１０ｍｇの１８Ａ１１を皮下投与；７０、２１０、および４２０ｍｇの１８Ａ１１の静脈内投与）に対して、利用可能であった。ＰＫおよび抗１８Ａ１１結合抗体試料を、それぞれ１０ｎｇ／ｍＬの定量化下限値（ＬＬＯＱ）および２０ｎｇ／ｍＬの高信頼検出下限値（ＬＬＲＤ）で、有効な電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬ）法を用いて定量した。名目時間をこの予備的解析に関してＰＫパラメータの計算に用いて、結果を表４に示した。
【００７８】
単回皮下投与の後、１８Ａ１１はすぐに吸収され、平均Ｃｍａｘ値に投与の２から１０日以内に到達し、個別対象ｔｍａｘ値は２から１４日の範囲であった。７０および２１０ｍｇの１８Ａ１１の静脈内投与と比較して、７０および２１０ｍｇの皮下投与はそれぞれ７８％と９２％の平均絶対生物学的利用能を示した。１８Ａ１１のＰＫは、０．７から２１ｍｇの低用量皮下投与に非線形動態を示したが、Ｃｍａｘ値は２１から２１０ｍｇの皮下投与用量範囲に渡り用量に比例した。７０から４２０ｍｇの静脈内投与用量範囲に渡り、Ｃｍａｘおよび薬物濃度時間曲線下面積の両方が用量に比例した。
【００７９】
標的被覆の期間もまた、２１０ｍｇの皮下または静脈内への１８Ａ１１の単回投与後の、皮下での≧２１ｍｇおよび＞１２８日の１８Ａ１１の単回投与後に＞２８日に到達した、循環ＣＤ４＋Ｔ細胞上におけるα４β７受容体の飽和（＞９９％）で、投与の皮下および静脈内経路の両方に関して用量に比例した。結果を表４に示す。
【００８０】
【表９】
2018031780.tif 000013
略語：ＡＵＣｉｎｆ＝０時間から無限までの濃度時間曲線下面積；ＡＵＣｌａｓｔ＝０時間から投与後最後の観測点までの濃度時間曲線下面積；Ｃｍａｘ＝最高観測濃度；ＩＶ＝静脈内（静脈内に）；ＳＣ＝皮下（皮下に）；ｔｍａｘ＝最高観測濃度までの時間；「−」＝該当なし。注：ｔｍａｘは中央値（範囲）を表す。
【００８１】
中央区画からの一次吸収ならびに平行線形および非線形排出による２区画モデルは、健常対象由来の血清１８Ａ１１濃度時間統合データを適切に記載することが分かった。利用可能な全てのＰＫデータを用いる同時ＰＫモデリングは、３９日の１８Ａ１１線形排出半減期を評価したモデルを産生した。血清中の１８Ａ１１の濃度が１０００ｎｇ／ｍＬを下回る際に、最終排出相で１８Ａ１１曝露の外挿のために３９日の半減期を用いる場合、１０００ｎｇ／ｍＬは１８Ａ１１ＰＫが非線形標的媒介配置相を示し始め得るレベルであって、従って排出がより速く、注意が必要である。結果を図１に示す。
【００８２】
２０ｎｇ／ｍＬの高信頼検出（ＬＬＲＤ）の下限値を有する有効な電気化学発光イムノアッセイ法を用いて、対象試料において抗１８Ａ１１結合抗体の存在を検査した。試験２００９０１０７のコホート１から９（試験終了まで）に登録の健常対象由来の試料、およびコホート１０（１５、８５および１２７日目まで）における３人の潰瘍性大腸炎対象由来の試料を検査し、抗１８Ａ１１結合抗体は検出されなかった。
【００８３】
実施例３
本実施例は、健常対象および軽度から中等度の潰瘍性大腸炎（ＵＣ；ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ、識別子：ＮＣＴ０１２９００４２）に罹患した対象（ＨＳ）における１８Ａ１１の安全性、耐用性、薬物動態学および薬物動力を評価する、第１相、無作為抽出、二重盲検、プラセボ対照、漸増複数回投与試験について述べる。予備ＰＫデータは、コホート１、２、３および８（７、２１、７０、および２１０ｍｇの１８Ａ１１の皮下投与）について、それぞれ予定した時点の１４１、１４１、１９７、および８５日まで
に、３回投与後の健常対象について利用可能であった。ＰＫ特性を図２に示し、ＰＫパラメータを表５に示す。
【００８４】
【表１０】
2018031780.tif 000014
略語：ＡＲ＝３用量から１用量蓄積比；ＡＵＣｔａｕ＝参照用量後の各投与間隔以内の濃度時間曲線下面積；Ｃｍａｘ＝最高観測濃度；Ｑ４Ｗ＝４週間毎に１回（月々）；ＳＣ＝皮下（皮下に）；ｔｍａｘ＝最高観測濃度までの時間；「−」＝該当なし。注：ｔｍａｘは中央値（範囲）を表す。
【００８５】
３ヶ月間で月々７ｍｇの皮下投与後、１８Ａ１１のＣｍａｘの約１．２２倍の蓄積および１用量から３用量の１８Ａ１１の薬物濃度時間曲線下面積の１．４１倍の蓄積を観測した。対応する蓄積比は２１ｍｇの皮下投薬に対して１．７４および１．８３、７０ｍｇの皮下投薬に対して１．９４および１．８１、ならびに２１０ｍｇの皮下投薬に対して２．００および２．０３であった。２１から２１０ｍｇの初回皮下投与後の１８Ａ１１の２８日間平均ＰＫ特性は、試験２００９０１０７のものと同程度であった。
【００８６】
末梢血ＣＤ４＋Ｔ細胞上におけるα４β７受容体の標的占有率を、２１ｍｇの皮下投与、７０ｍｇの皮下投与、または２１０ｍｇの皮下投与で、１８Ａ１１の月々の投薬（×３）に応じて、＞９０％で＞９８日間維持し；標的占有率を、７ｍｇ（コホート１）で１８Ａ１１の月々の投薬（×３）に応じて、７０％から９０％で８４日間維持した。
【００８７】
２０ｎｇ／ｍＬの高信頼検出下限値を有する有効な電気化学発光イムノアッセイ法を用いて、対象試料における抗１８Ａ１１結合抗体の存在を検査した。２０１１年１２月１３日時点で、試験２０１０１２６１（コホート１および２に対して１４１日まで、コホート３に対して８５日まで、およびコホート８に対して５７日まで）に登録の健常対象由来の試料を検査し、抗１８Ａ１１結合抗体は検出されなかった。
【００８８】
実施例４
本実施例は、前述の試験に関する薬力学的分析について述べる。単回投与試験について、暫定的な１８Ａ１１のα４β７受容体占有データが健常対象：コホート１から４に対して８５日まで（０．７、２．１、７、および２１ｍｇの皮下投与）、コホート５および６に対して１２７日まで（７０および２１０ｍｇの皮下投与）、コホート７および８に対して１９７日まで（７０および２１０ｍｇの静脈内投与）、ならびにコホート９に対して２２５日まで（４２０ｍｇの静脈内投与）、に利用可能であった。
【００８９】
単回投与試験におけるコホート１から９（健常対象）に関するα４β７受容体占有データを図３に要約した。データは、循環ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞上におけるα４β７の用量との比例および可逆性の被覆を示す。同様の用量応答特性が、メモリーＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットに関して観測された。α４β７全体レベルは、１８Ａ１１の飽和用量への曝露において〜５０％可逆的に低下することが分かった。これらの対象におけるＣＤ４＋総、ナイーブ、またはメモリーＴ細胞の絶対値において、著しい変化は今日まで観測されていない。
【００９０】
図４は、複数回投与試験におけるコホート１から３および８（健常対象）について要約された、α４β７受容体占有データを示す。漸増単回投与試験に関して、データは循環ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞上におけるα４β７の可逆性および用量に比例した被覆を示す。同様の用量応答特性がメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットに関して観測され、ＣＤ４＋総、ナイーブ、またはメモリーＴ細胞の絶対値において著しい変化は今日まで観測されていない。
【００９１】
実施例５
本実施例は、患者における臨床観察について述べ、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）対象における２つの１８Ａ１１の第１相、無作為抽出、二重盲検、プラセボ対照試験において得られたさらなる結果を要約する。潰瘍性大腸炎（ＵＣ）に罹患した対象（患者）を、２１０ｍｇを単回（試験２００９０１０７）または２１ｍｇを月々３回（２０１０１２６１）の皮下投与（ＳＣ）用量の１８Ａ１１で治療した／治療する（ＮＩＨ臨床試験ウェブサイト、ＵＲＬ「ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ；」、それぞれ試験２００９０１０７および２０１０１２６１に対して試験識別子ＮＣＴ０１１６４９０４（ｈｔｔｐ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ０１１６４９０４）およびＮＣＴ０１２９００４２（ｈｔｔｐ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ０１２９００４２））。
【００９２】
４から１０（包括的）のメイヨースコアおよび１の直腸Ｓ状結腸鏡検査最小スコアを有する、活動性、軽度から中等度の疾患に罹患していると診断された潰瘍性大腸炎対象を登録した。１つのコホート（ＮＣＴ０１１６４９０４）において、現在投薬されている４人の白色人種対象（男性：女性が２：２；３２〜４３歳、５７〜７７ｋｇ）と共に、８人の潰瘍性大腸炎対象が２１０ｍｇの１８Ａ１１の単回投与またはプラセボの皮下投与（割合６：２）を受けなくてはならなかった。別のコホート（ＮＣＴ０１２９００４２）において、４人の白色人種潰瘍性大腸炎対象（男性：女性は３：１；２６〜５１歳、７３〜９２ｋｇ）が、３ヶ月間月々２１ｍｇの１８Ａ１１またはプラセボの皮下投与（割合３：１）を受けた。１８Ａ１１のＰＫ線形排出相半減期、予測α４β７受容体占有（ＲＯ）、および安全性監視要件に基づき、それぞれ２１および２１０ｍｇの投与計画下において、対象を５および７ヶ月間追跡調査しなければならなかった／しなければならない。
【００９３】
ＰＫ、抗薬剤抗体（ＡＤＡ）、安全性、受容体占有を含むＰＤ、ＣＤ４＋中央メモリーＴ細胞数（Ｔｃｍ）、血清高感度Ｃ反応性タンパク質（ｈｓＣＲＰ；Ｍａｈａｒｓｈａｋ
ｅｔ  ａｌ  Ｊ  Ｄｉｇ  Ｄｉｓ  ９：  １４０；  ２００８に記載の通りに、高感度
Ｃ反応性タンパク質（ｈｓ−ＣＲＰ）法を用いておおむね決定された）および糞便カルプロテクチン（ＦＣ；Ｖｉｅｉｒａ  ｅｔ  ａｌ  ＢＭＣ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｎｏｔｅｓ
２：２２１；  ２００９に記載の通りにおおむね決定される）バイオマーカー、ならびに部分的メイヨースコアを測定した。直腸Ｓ状結腸鏡検査の総メイヨースコアを、スクリーニング中、ならびに６、１２、および２８週間（２１０ｍｇのみ）の来診中に評価した。この解析の目的について、「寛解」を、１ポイント超の個々のサブスコアを有さない、２未満または２と同等のメイヨースコアとして規定する。「応答」を、３超または３と同等および３０％超または３０％と同等のベースラインからのメイヨースコアの減少と、少なくとも１ポイントの直腸出血スコアまたは０または１の絶対リーディングにおける減少として規定する。「粘膜治癒」を、０または１の直腸Ｓ状結腸鏡検査スコアとして規定する。それぞれ２１０ｍｇおよび２１ｍｇのコホートについて、結果を図５Ａおよび５Ｂに示す。
【００９４】
８人の潰瘍性大腸炎対象のデータ（スクリーニングメイヨースコア中央値＝７；少なくとも１人はプラセボ）の初期評価は、１８Ａ１１のＰＫ特性が、検出可能な抗薬物抗体を有さない同様の投与計画下において一般的に健常対象由来のものに含まれたことを示した。ＰＫおよび受容体占有特性は、幾人かの対象において〜２００％増加したＴｃｍと直接相関していた。Ｃ反応性タンパク質および糞便カルプロテクチンは幾人かの来診／対象において減少したが、小さな試料のサイズおよび可変性が決定的な評価を妨げていた。今日まで、３および４人の対象がそれぞれ６および１２週間で寛解し；５、５、および１人の対象がそれぞれ６、１２、および２８週間で応答を見せ；そして５人の対象が６および１２週間の両方で粘膜治癒をした。今日までの盲検安全性データは、大腸炎紅斑による１件の早期治療中止を除き、１８Ａ１１関連重篤有害事象または死亡を示していないが、大腸炎紅斑は研究者により治療と関係していないと見なされた。ＥＣＧまたは神経学的検査における異常性は観測されなかった。
【００９５】
実施例６
本実施例は、健常日本人対象（ＨＪＳ；試験識別子２０１１０２５９）における１８Ａ１１の安全性、耐用性、薬物動態（ＰＫ）および薬物動力（ＰＤ）を評価する、無作為抽出、二重盲検、プラセボ対照、単回漸増投与試験について述べる。健常白色人種対象（ＨＣＳ）のコホートを、日本人の対応対象と体重に従い±２０％で対に対応し、比較対象として含んだ。各健常日本人対象コホートは、少なくとも４人の第１世代日本人対象（すなわち、日本で生まれた４人の祖父母、実父母および対象）からなり、残りの健常日本人対象は第１世代、第２世代（日本で生まれた４人の祖父母および実父母）または第３世代（日本で生まれた４人の祖父母）のいずれかとなる。以下の用量を評価した：
【００９６】
【表１１】
2018031780.tif 000015
【００９７】
２４人の男性健常日本人対象（ＨＪＳ；２２〜４５歳、５０〜８１ｋｇ）および８人の男性健常白色人種対象（ＨＣＳ；２０〜４５歳、６０〜９２ｋｇ）を無作為抽出し、１８Ａ１１の単一皮下投与用量またはプラセボ（割合６：２）を２１（健常日本人対象）、７０（健常日本人対象および健常白色人種対象）、または２１０ｍｇ（健常日本人対象）（コホート１から４）で投与した。今日まで、連続した血液試料は予定した時点の８５、４
３、４３、および１４日にコホート１、２、３、および４に対して利用可能であった（それぞれ２１、７０、７０、および２１０ｍｇの１８Ａ１１の皮下投与またはプラセボ）。ＰＫおよび抗１８Ａ１１結合抗体試料を、それぞれ１０ｎｇ／ｍＬの定量化下限値（ＬＬＯＱ）および２０ｎｇ／ｍＬ高信頼検出下限値（ＬＬＲＤ）で、有効な電気化学発光（ＥＣＬ）イムノアッセイ法を用いて定量した。名目時間を、この予備的解析に関するＰＫパラメータの計算のために用いて、結果を表６に示した。血液を収集し、α４β７受容体占有およびＣＤ４＋Ｔ細胞数を、有効な全血６色フローサイトメトリーアッセイを用いて評価した。
【００９８】
予備ＰＫデータを解析してＰＫ特性を図６に示し、７０ｍｇの皮下投薬下において健常日本人対象と健常白色人種対象間で実質的に重ねることができる１８Ａ１１のＰＫ特性を示す。図７および８は、健常非日本人（ＨＮＪＳ、白色人種１４人、黒色人種７人およびアジア人種３人；年齢２０〜４２歳、体重６５〜１０６ｋｇ、試験２００９０１０７）ならびに健常日本人対象およびＨＣＳ対象（試験２０１１０２５９）における、１８Ａ１１のオーバーレイＰＫおよびＰＤ（遊離α４β７受容体比率）特性を示す。１８Ａ１１のＰＫ／ＰＤ特性は、健常日本人対象および健常非日本人対象間で比較可能なＰＫ／ＰＤ特性もまた示す２１および２１０ｍｇの皮下投与計画で、７０ｍｇの皮下投薬下において健常非日本人対象、健常日本人対象および健常白色人種対象間で実質的に重ねることができる。この試験において、１８Ａ１１のＣｍａｘは７（範囲：４から１４）日以内の皮下投薬を達成した。１８Ａ１１のＣｍａｘおよび推定ＡＵＣ（０−４週間）値の両方は、検査をした２１から２１０ｍｇの範囲に渡り用量に比例した。加えて、７０ｍｇの皮下投与を下回ると推定する１８Ａ１１のＣｍａｘおよびＡＵＣ（０−４週間）は、健常日本人対象および健常白色人種対象間で同様であった。ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞上におけるα４β７の受容体占有を、＞９０％で４、８、および４週間（今日までデータは利用可能である）、それぞれ２１ｍｇ、７０ｍｇ、および２１０ｍｇの皮下投与で維持した。今日まで、投薬後１および３ヶ月で陽性抗薬物抗体を検査した対象はいない。今日までの盲検安全性データは、１８Ａ１１関連重篤有害事象または死亡、用量制限毒性、または有害事象による早期治療中止を示していない。ＥＣＧまたは神経学的検査における異常性は観測されなかった。
【００９９】
【表１２】
2018031780.tif 000016
略語：ＡＵＣ（０−４週間）＝投与後０時間から２９日（４週間）の濃度時間曲線下面積；Ｃｍａｘ＝最高観測濃度；ＳＣ＝皮下（皮下に）；ｔｍａｘ＝最高観測濃度までの時間；注：ｔｍａｘは中央値（範囲）を表す。
【０１００】
単回固定皮下投与計画下における１８Ａ１１の安全性、免疫原性、およびＰＫ／ＰＤ性
は、日本人、白色人種、および非日本人対象の間で差異はない。中等度から重度のクローン病または潰瘍性大腸炎に罹患した日本人対象は、修飾されない１８Ａ１１の進行中の第２相試験において実行された投与計画で、適宜検査され得る（ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ．に記載される、試験識別子：ＮＣＴ０１６９６３９６およびＮＣＴ０１６９４４８５、現在進行中の第２相試験はＡｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．による提供である）。
【０１０１】
免疫原性に関して、全ての現在の試料を試験に登録した健常対象（白色人種および日本人の両方）由来および８人の潰瘍性大腸炎対象由来の全ての現在の試料を検査して、抗１８Ａ１１結合抗体（ＡＤＡ）は検出されなかった。
【０１０２】
これらの結果は、炎症性腸ホーミング細胞の不適当な輸送と関連する状態に罹患した個体への１８Ａ１１の投与について、いくつかの投与計画を支持し、状態は例えば、消化管または粘膜アドレシン細胞接着分子を発現する細胞を含むその他の組織への白血球（リンパ球または単球など）の輸送（すなわち、白血球と粘膜アドレシン細胞接着分子を発現する細胞の結合の結果としての、腸への輸送）である。適切な投与計画は、下記の表７に示される投与計画から選択してもよい。
【０１０３】
【表１３】
2018031780.tif 000017
【０１０４】
その他の投与計画は企図され、本発明に示されるデータに基づき決定され得る。
【図１】
2018031780.tif 000019
【図２】
2018031780.tif 000020
【図３】
2018031780.tif 000021
【図４】
2018031780.tif 000022
【図５−１】
2018031780.tif 000023
【図５−２】
2018031780.tif 000024
【図６】
2018031780.tif 000025
【図７】
2018031780.tif 000026
【図８】
2018031780.tif 000027
【手続補正書】
【提出日】平成29年9月29日(2017.9.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体で治療されているヒト対象におけるアルファ４ベータ７受容体占有を評価する方法であって：
ａ）前記対象に対して６本１組の試薬管を用意し、前記管には１から６の番号を付けられており、各管がアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体（管２；「スパイク」（ｓｐｉｋｅｄ）と称する）またはプラセボ対照（管１、３、４、５および６）を含み、そしてアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体で治療された対象から全血試料を得、
ｂ）前記全血試料の一部を前記６本の管それぞれの中に入れて試料混合物を形成し、前記得られた試料混合物をインキュベートし；
ｃ）１：１の割合の抗体カクテルとフィコエリスリン試薬を、前記試料混合物に加え、実質的に示したようなスキームにおいて、抗体カクテル／試料混合物を形成し：
−管１に、抗ＣＤ８＋ＣＤ１０３；ＦＩＴＣ、抗アルファ４ベータ７競合抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＣＲ７：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管２に、抗ＣＤ８＋ＣＤ１０３：ＦＩＴＣ、抗アルファ４ベータ７競合抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＣＲ７：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管３に、抗ＣＤ＋ＣＤ１０３：ＦＩＴＣ、非競合抗β７抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＣＲ７：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管４に、抗ＣＤ７＋ＣＤ１０３：ＦＩＴＣ、非競合抗β７抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管５に、抗ＣＬＡ：ＦＩＴＣ、非競合抗β７抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＤ４：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管６に、抗ＣＤ１９：ＦＩＴＣ、抗ＣＤ４：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＤ１６＋ＣＤ５６：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ８  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
ｄ）前記抗体カクテル／試料混合物をインキュベートし、
ｅ）前記抗体カクテル／試料混合物を処理してあらゆる赤血球を溶解して残りの細胞の混合物を形成し；
ｆ）残りの細胞の前記混合物を洗浄し、蛍光活性化セルソーターを用いてそれらを解析して、前記残りの細胞に存在する、前記アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体により占有されたアルファ４ベータ７受容体の割合を決定することを含む、方法。
【請求項２】
前記試料混合物が室温で約３０分間インキュベートされ、前記抗体カクテル／試料が室温で約２０分間インキュベートされる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
各管に加えられる、前記全血試料の一部が１００マイクロリットルであり、前記抗体カクテルの体積が２０マイクロリットルであり、前記抗体：フィコレリスリン試薬の体積が６０マイクロリットルである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
各集団に対して集められた前記ＣＤ４ナイーブＴ細胞のイベントの数を前記リンパ球イベントによって除算し、その後マイクロリットルあたりのリンパ球の血液学的結果によって乗算し、ナイーブＣＤ４  Ｔ細胞をＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ３＋ＣＤ８−ＣＤ１０３−ＣＤ４５＋リンパ球として規定する、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
スパイクおよび非スパイク状態に対する蛍光強度中央値が蛍光ビーズ検量線を用いて細胞あたりの結合分子（ＭＢＰＣ）に変換され、受容体占有を算出するために利用される、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記対象が使用可能な２つの投与前試料があり、目標飽和度は以下の式：
【数１】
2018031780.tif 000028
を用いて算出される、請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０４】
その他の投与計画は企図され、本発明に示されるデータに基づき決定され得る。
本発明は、非限定的に以下の態様を含む。
［態様１］
状態に罹患した対象を治療する方法であって、状態は消化管にアルファ４ベータ７を発現する細胞の不適当な輸送と関連し：
（ａ）７から２１日間毎に５から１４ｍｇ；
（ｂ）１４から５６日間毎に１５から５４ｍｇ；
（ｃ）４３から１２６日間毎に５５から１４９ｍｇ；
（ｄ）１１２から１４７日間毎に１５０から２９９ｍｇ；および
（ｅ）１２６から２２４日間毎に３００から１０００ｍｇ
からなる群から選択される量および間隔でアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体を前記対象に投与することを含む、方法。
［態様２］
前記量および間隔が：
（ａ）１１から１７日間毎に５から１０ｍｇ；
（ｂ）３０から５０日間毎に１５から３０ｍｇ；
（ｃ）７５から９５日間毎に５５から８５ｍｇ；
（ｄ）１２０から１３２日間毎に１６０から２６０ｍｇ；および
（ｅ）１６５から１８５日間毎に３００から７００ｍｇ
からなる群から選択される、態様１に記載の方法。
［態様３］
前記量および間隔が：
（ａ）２週間毎に７ｍｇ；
（ｂ）６週間毎に２１ｍｇ；
（ｃ）１２週間毎に７０ｍｇ；
（ｄ）１８週間毎に２１０ｍｇ；および
（ｅ）６ヶ月毎に４２０ｍｇ
からなる群から選択される、態様１に記載の方法。
［態様４］
状態に罹患した対象を治療する方法であって、状態は消化管にアルファ４ベータ７を発現する細胞の不適当な輸送と関連し、少なくとも約７５％の受容体占有の達成および／または維持に十分な量および間隔で、その量のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体を前記対象に投与することを含む、方法。
［態様５］
達成された前記受容体占有が少なくとも約８０％である、態様４に記載の方法。
［態様６］
達成された前記受容体占有が少なくとも約８５％である、態様４に記載の方法。
［態様７］
達成された前記受容体占有が少なくとも約９０％である、態様４に記載の方法。
［態様８］
達成された前記受容体占有が少なくとも約９５％である、態様４に記載の方法。
［態様９］
達成された前記受容体占有が少なくとも約９９％である、態様４に記載の方法。
［態様１０］
状態に罹患した対象を治療する方法であって、状態は消化管にアルファ４ベータ７を発現する細胞の不適当な輸送と関連し、血清の体積あたり１０ｎｇ／ｍｌから１０００ｎｇ／ｍｌの間のヘテロ二量体特異抗体の量を達成および／または維持するために十分な量および間隔で、その量のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体を前記対象に投与することを含む、方法。
［態様１１］
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が少なくとも１０ｎｇ／ｍｌである、態様１０に記載の方法。
［態様１２］
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が：少なくとも２５ｎｇ／ｍｌ；少なくとも５０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも６０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも７０ｎｇ／ｍｌ；少なくとも７５ｎｇ／ｍｌ；および少なくとも８０ｎｇ／ｍｌからなる群から選択される、態様１０に記載の方法。
［態様１３］
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が８５ｎｇ／ｍｌから１００ｎｇ／ｍｌの間である、態様１０に記載の方法。
［態様１４］
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が７０ｎｇ／ｍｌから１５０ｎｇ／ｍｌの間である、態様１０に記載の方法。
［態様１５］
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が５０ｎｇ／ｍｌから２５０ｎｇ／ｍｌの間である、態様１０に記載の方法。
［態様１６］
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が４０ｎｇ／ｍｌから５００ｎｇ／ｍｌの間である、態様１０に記載の方法。
［態様１７］
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が２５ｎｇ／ｍｌから７５０ｎｇ／ｍｌの間である、態様１０に記載の方法。
［態様１８］
血清の体積あたりのヘテロ二量体特異抗体の前記量が１０ｎｇ／ｍｌから１，０００ｎｇ／ｍｌの間である、態様１０に記載の方法。
［態様１９］
前記アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体が１８Ａ１１である、態様１から１８のいずれか１項に記載の方法。
［態様２０］
１８Ａ１１が単離され、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗原結合タンパク質が配列番号５からＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号２からＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する、態様１９に記載の方法。
［態様２１］
１８Ａ１１が単離され、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗原結合タンパク質が、前記重鎖可変領域が配列番号５と少なくとも９０％同一であり、前記軽鎖可変領域がＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３から配列番号２と少なくとも９０％同一である、態様２０に記載の方法。
［態様２２］
１８Ａ１１が軽鎖定常領域（配列番号７）および重鎖定常領域（配列番号８）をさらに含む、態様２０または２１に記載の方法。
［態様２３］
１８Ａ１１が１８Ａ１１可変領域における１から１０個のアミノ酸の置換、挿入または欠失により配列番号２および５のアミノ酸配列とアミノ酸配列の点で異なる、態様２２に記載の方法。
［態様２４］
１８Ａ１１が１８Ａ１１定常領域の１８Ａ１１における１から１０個のアミノ酸の置換、挿入または欠失により配列番号７および８のアミノ酸配列とアミノ酸配列が異なる、態様２２または２３に記載の方法。
［態様２５］
前記１８Ａ１１がいくつかの、ほとんどのまたは実質的に全てのＮ末端アミノ酸のピログルタミン酸への変換；ならびに１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのＮ末端および／またはＣ末端アミノ酸の除去（翻訳後または組換え技術によってのいずれか）からなる群から選択される、１つ以上の修飾を含む、態様２０から２４のいずれか１項に記載の方法。
［態様２６］
アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体で治療されているヒト対象におけるアルファ４ベータ７受容体占有を評価する方法であって：
ａ）前記対象に対して６本１組の試薬管を用意し、前記管には１から６の番号を付けられており、各管がアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体（管２；「スパイク」（ｓｐｉｋｅｄ）と称する）またはプラセボ対照（管１、３、４、５および６）を含み、そしてアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体で治療された対象から全血試料を得、
ｂ）前記全血試料の一部を前記６本の管それぞれの中に入れて試料混合物を形成し、前記得られた試料混合物をインキュベートし；
ｃ）１：１の割合の抗体カクテルとフィコエリスリン試薬を、前記試料混合物に加え、実質的に示したようなスキームにおいて、抗体カクテル／試料混合物を形成し：
−管１に、抗ＣＤ８＋ＣＤ１０３；ＦＩＴＣ、抗アルファ４ベータ７競合抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＣＲ７：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管２に、抗ＣＤ８＋ＣＤ１０３：ＦＩＴＣ、抗アルファ４ベータ７競合抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＣＲ７：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管３に、抗ＣＤ＋ＣＤ１０３：ＦＩＴＣ、非競合抗β７抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＣＲ７：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管４に、抗ＣＤ７＋ＣＤ１０３：ＦＩＴＣ、非競合抗β７抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管５に、抗ＣＬＡ：ＦＩＴＣ、非競合抗β７抗体：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＤ４：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ４５  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
−管６に、抗ＣＤ１９：ＦＩＴＣ、抗ＣＤ４：フィコエリスリン、抗ＣＤ４５：ＰｅｒＣＰ、抗ＣＤ１６＋ＣＤ５６：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７、抗ＣＤ８  ＲＡ：ＡＰＣ−Ｈ７、および抗ＣＤ３：Ｖ４５０を加え；
ｄ）前記抗体カクテル／試料混合物をインキュベートし、
ｅ）前記抗体カクテル／試料混合物を処理してあらゆる赤血球を溶解して残りの細胞の混合物を形成し；
ｆ）残りの細胞の前記混合物を洗浄し、蛍光活性化セルソーターを用いてそれらを解析して、前記残りの細胞に存在する、前記アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異抗体により占有されたアルファ４ベータ７受容体の割合を決定することを含む、方法。
［態様２７］
前記試料混合物が室温で約３０分間インキュベートされ、前記抗体カクテル／試料が室温で約２０分間インキュベートされる、態様２６に記載の方法。
［態様２８］
各管に加えられる、前記全血試料の一部が１００マイクロリットルであり、前記抗体カクテルの体積が２０マイクロリットルであり、前記抗体：フィコレリスリン試薬の体積が６０マイクロリットルである、態様２６または２７に記載の方法。
［態様２９］
各集団に対して集められた前記ＣＤ４ナイーブＴ細胞のイベントの数を前記リンパ球イベントによって除算し、その後マイクロリットルあたりのリンパ球の血液学的結果によって乗算し、ナイーブＣＤ４  Ｔ細胞をＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ３＋ＣＤ８−ＣＤ１０３−ＣＤ４５＋リンパ球として規定する、態様２６から２８のいずれか１項に記載の方法。
［態様３０］
スパイクおよび非スパイク状態に対する蛍光強度中央値が蛍光ビーズ検量線を用いて細胞あたりの結合分子（ＭＢＰＣ）に変換され、受容体占有を算出するために利用される、態様２６から２９のいずれか１項に記載の方法。
［態様３１］
前記対象が使用可能な２つの投与前試料があり、目標飽和度は以下の式：
【数１】
2018031780.tif 000029
を用いて算出される、態様２６から３０のいずれか１項に記載の方法。
【外国語明細書】
2018031780000001.pdf