(57)【要約】      （修正有）【課題】アミロイド線維の形成を抑制する化合物、当該化合物を含むアミロイド線維形成抑制剤および神経変性疾患の治療薬または予防薬の提供。【解決手段】式（Ｉ）で表される化合物。2018168083.tif 000019［Ｘは−（ＣＨ２）ｎ−；ｎは０〜３の整数；Ｙは単結合又はアルキル基等の２価の連結基；Ａｒは置換／非置換のフェニル基又はピリグル基；Ｒ１は置換／非置換のアルキル基；Ａｒ及びＲ１、Ａｒ及びＹ又はＲ１及びＹは、共同して環を形成してもよい；Ｒ２〜Ｒ４は夫々独立にＨ、Ｃ１−２０アルキル基等］【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2018168083.tif 000017
［式中、
Ｘは、−（ＣＨ２）ｎ−
（式中、ｎは、０〜３の整数である）
であり、
Ｙは、単結合、または、主鎖が炭素原子、窒素原子および酸素原子からなる群から選択される１種または２種以上の原子から構成される、原子数が１〜４である２価の連結基であり、
Ａｒは、置換もしくは非置換のフェニル基またはピリジル基であり、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１−６アルキル基または置換もしくは非置換のＣ３−７シクロアルキル基であり、
ここで、ＡｒおよびＲ１、ＡｒおよびＹ、またはＲ１およびＹは、共同して環を形成してもよく、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−２０アルキル基、Ｃ１−２０ヒドロキシアルキル基、Ｃ１−２０アルコキシ基またはハロゲン原子である］
で表される化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を含んでなる、アミロイド線維形成抑制剤。
【請求項２】
前記化合物が、一般式（Ｉａ）：
【化２】
2018168083.tif 000018
［式中、
Ｙは、単結合、または、置換もしくは非置換のＣ１−２０アルキル基、アミド基、アミン基、エーテル基および置換もしくは非置換のＣ３−２０シクロアルキル基からなる群から選択される２価の連結基であり、
Ａｒは、置換もしくは非置換のフェニル基であり、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１−４アルキル基または置換もしくは非置換のＣ３−６シクロアルキル基であり、
ここで、ＡｒおよびＲ１、ＡｒおよびＹ、またはＲ１およびＹは、共同して環を形成してもよく、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−２０アルキル基またはハロゲン原子である］
で表される、請求項１に記載のアミロイド線維形成抑制剤。
【請求項３】
表１Ａおよび表１Ｂに記載の化合物番号１〜２９の化合物からなる群から選択される１以上の化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を含んでなる、アミロイド線維形成抑制剤。
【請求項４】
前記化合物が、化合物番号１、２、４、７、９、１０、１３、１５、１８、２１、２３〜２５、２７および２８の化合物からなる群から選択される、請求項３に記載のアミロイド線維形成抑制剤。
【請求項５】
前記化合物が、化合物番号１、２、７、９、２３および２５の化合物からなる群から選択される、請求項３に記載のアミロイド線維形成抑制剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のアミロイド線維形成抑制剤を含有する神経変性疾患の治療薬または予防薬。
【請求項７】
前記神経変性疾患がアルツハイマー病である、請求項６に記載の治療薬または予防薬。
【請求項８】
表１Ａおよび表１Ｂに記載の化合物番号１〜２９の化合物からなる群から選択される化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイド線維形成抑制剤に関する。本発明は、特には、アミロイド線維形成抑制による神経変性疾患の治療薬または予防薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、日本はかつて無いスピードで人口の高齢化が進展しており、それと共にアルツハイマー病を中心とする認知症患者の数も増えつつある。現時点での日本における認知症患者数は約４５０万人と推定され、今後高齢化とともに患者数は増加すると見積もられている。これらの認知症の患者の介護は、経済的にも大きな負担となることから、一日も早い有効な治療法の確立が急務である。
【０００３】
アルツハイマー病患者に共通してみられる病理学的特徴としては、（１）神経細胞の脱落、（２）斑状のアミロイド蓄積物（老人斑）の形成、（３）神経細胞内における繊維状の塊（神経原繊維変化）の蓄積の３つがあり、これらがアルツハイマー病の臨床症状である認知障害（アルツハイマー型認知症）を引き起こす。アルツハイマー型認知症の治療としては、コリンエステラーゼ阻害薬やＮＭＤＡ阻害薬などを用いて、一時的に認知症の症状を改善する対症療法が行われている。しかし、その効果は極めて限定的であり、アルツハイマー病の発症および進行を抑制する根本療法の確立が強く望まれている。
【０００４】
アルツハイマー病の根本療法が確立されるためには、アルツハイマー病の発症機序が解明されることが必要である。アルツハイマー病には、遺伝的要因によって引き起こされる家族性（遺伝性）アルツハイマー病と、遺伝的背景を持たない孤発性アルツハイマー病が知られており、現在、家族性アルツハイマー病については、その原因遺伝子や危険因子が明らかにされつつある。家族性アルツハイマー病と孤発性アルツハイマー病は、その病理所見と臨床症状が共通していることから、その発症過程においても共通のメカニズムが存在することが予測されており、家族性アルツハイマー病の発症機序の研究が、孤発性アルツハイマー病の発症メカニズムの解明につながることが期待されている。
【０００５】
家族性アルツハイマー病の原因遺伝子の一つに、アミロイド前駆体タンパク質（Ａｍｙｌｏｉｄ  Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ：以降、本明細書ではＡＰＰと記載する）をコードする遺伝子がある。ＡＰＰは、βセクレターゼおよびγセクレターゼによって切断され、アミロイドβ（以降、本明細書ではＡβと記載する）を生成する。Ａβには、ＡＰＰにおける切断点の違いにより、４０アミノ酸からなるＡβ４０と、Ａβ４０のＣ末端に２アミノ酸が付加されたＡβ４２とが存在するが、生理的な生産量ではＡβ４０が優位であるのに対し、老人斑にはＡβ４２が多く含まれる。さらに、変異ＡＰＰはＡβ４２の発現比率を増大させることや、Ａβ４２はＡβ４０に比べて凝集しやすいことが明らかになっている。これらの事実から、Ａβ４２が最初に凝集し、それを核としてＡβ４０が凝集・蓄積していくことにより、アミロイド線維の形成が進行し、アルツハイマー病が発症するという説が提唱されている。
【０００６】
脳内におけるＡβの凝集は、神経細胞膜を構成するＧＭ１ガングリオシド（以降、本明細書ではＧＭ１と記載する）に対してＡβが結合して複合体（ＧＭ１結合型Ａβ：以降、本明細書ではＧＡβと記載する）が形成されることから開始されるとの知見が得られている（非特許文献１、２）。また、ＧＭ１は神経細胞膜中でコレステロール濃度依存的に集合してクラスターを形成すること、および、ＡβはこのＧＭ１クラスターに対して特異的に結合することによりＧＡβを形成することが、人工脂質膜小胞を用いた解析等により確認されている（非特許文献３）。さらに、ＧＡβを特異的に認識する抗体を用いた解析により、ＧＡβは可溶性Ａβとは異なる構造を有するものであることが確認されている（非特許文献４）。これらの知見から、ＡβがＧＭ１クラスターに結合すると、異なる構造を有するＧＡβへと変化し、このＧＡβが「種（シード）」となってＡβの凝集が促進されるとする仮説が提唱されており、その後、この仮説を支持する多数の研究結果が得られている（非特許文献５〜９）。
【０００７】
これまで、アルツハイマー病の根本的治療・予防方法の開発を目的として、種々の化合物が開発され、臨床試験に供されてきた。従来よく知られたものでは、例えば、Ａβを生成する際にＡβのＮ末端側を切断するβセクレターゼに対する阻害剤、および、ＡβのＣ末端側を切断するγセクレターゼに対する阻害剤が挙げられる（特許文献１、非特許文献１０）。これらの阻害剤は、Ａβの産生を阻害することによってアミロイド線維の形成を抑制できることが期待された。しかし、βセクレターゼとγセクレターゼは、いずれもＡＰＰのみを特異的な基質とする酵素ではなく、その結果、特にγセクレターゼは、発生・分化に深く関与するＮｏｔｃｈシグナルを阻害してしまうことにより、またＡＰＰの生理的代謝を阻害すること自体による重篤な副作用が生じることが問題となる。また、Ａβの重合を阻害する低分子化合物も、多数開発されている（特許文献２〜６）。これらの化合物は、Ａβの重合を阻害することにより、アミロイド線維の伸長を阻止または線維を分断する。しかし、化合物の投与を停止すれば、Ａβの重合が再開されることが示唆されており、また線維の分断自体が新たな重合のシードを生む可能性も考えられ、アミロイド線維の形成に対し十分な抑制効果を得るには至っていない。
【０００８】
一方、ＧＡβに対して特異的に結合する抗体（４３９６Ｃ抗体）を用いてアミロイド線維形成を抑制する方法が報告された（特許文献７）。４３９６Ｃ抗体は、ＧＡβを特異的に認識して結合し、ＧＡβによるＡβ重合を阻害することにより、アミロイド線維の形成を根本的に抑制する。しかし、抗体の作製には多大な時間的・経済的コストがかかるという問題があり、また、抗体を用いた薬剤は、その投与方法が限定され、脳への送達性の問題があるため、臨床における使用が困難であるという問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１００２３３１５６号
【特許文献２】国際公開第２００９／１０３６５２号
【特許文献３】国際公開第２００３／０４５９２３号
【特許文献４】米国特許第７６８７５１２号
【特許文献５】米国特許出願公開第２０１０００６３０７７号
【特許文献６】米国特許出願公開第２００６０２２３８１２号
【特許文献７】特許第４１０２８５０号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｙａｎａｇｉｓａｗａ，Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，  Ｖｏｌ．１，  ｐｐ．１０６２−１０６６  （１９９５）
【非特許文献２】Ｙａｎａｇｉｓａｗａ，Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ，  Ｖｏｌ．１９，  ｐｐ．Ｓ６５−６７  （１９９８）
【非特許文献３】Ｋａｋｉｏ，Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．２７６，  ｐｐ．２４９８５−２４９９０  （２００１）
【非特許文献４】Ｙａｎａｇｉｓａｗａ，Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，  Ｖｏｌ．４２０，  ｐｐ．４３−４６  （１９９７）
【非特許文献５】ＭｃＬａｕｒｉｎ，Ｊ．，  ａｎｄ  Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｔｙ，Ａ．，  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．２７１，  ｐｐ．２６４８２−２６４８９  （１９９６）
【非特許文献６】Ｃｈｏｏ−Ｓｍｉｔｈ，Ｌ．Ｐ．，  ａｎｄ  Ｓｕｒｅｗｉｃｚ，Ｗ．Ｋ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，  Ｖｏｌ．４０２，  ｐｐ．９５−９８  （１９９７）
【非特許文献７】Ｃｈｏｏ−Ｓｍｉｔｈ，Ｌ．Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．２７２，  ｐｐ．２２９８７−２２９９０  （１９９７）
【非特許文献８】Ｍａｔｓｕｚａｋｉ、Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ．３８，  ｐｐ．４１３７−４１４２  （１９９９）
【非特許文献９】Ｋｏｐｐａｋａ，Ｖ．  ａｎｄ  Ａｘｅｌｓｅｎ，Ｐ．Ｈ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ．３９，  ｐｐ．１００１１−１００１６  （２０００）
【非特許文献１０】Ｓｈｕｔｏ，Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，  Ｖｏｌ．１３，  ｐｐ．４２７３−４２７６  （２００３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、従来技術の諸問題を解消し、アルツハイマー病をはじめとする神経変性疾患の根本的な予防・治療方法を提供することを目的としてなされたものであり、Ａβの重合を特異的に阻害でき、かつ、臨床応用に優れたアミロイド線維形成抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、鋭意研究の結果、ＧＡβに対して特異的に結合することによりＡβの重合を阻害する低分子化合物を得ることに成功した。
【００１３】
すなわち、本発明は、一実施形態によれば、一般式（Ｉ）：
【化１】
2018168083.tif 000002
［式中、
Ｘは、−（ＣＨ２）ｎ−
（式中、ｎは、０〜３の整数である）
であり、
Ｙは、単結合、または、主鎖が炭素原子、窒素原子および酸素原子からなる群から選択される１種または２種以上の原子から構成される、原子数が１〜４である２価の連結基であり、
Ａｒは、置換もしくは非置換のフェニル基またはピリジル基であり、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１−６アルキル基または置換もしくは非置換のＣ３−７シクロアルキル基であり、
ここで、ＡｒおよびＲ１、ＡｒおよびＹ、またはＲ１およびＹは、共同して環を形成してもよく、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−２０アルキル基、Ｃ１−２０ヒドロキシアルキル基、Ｃ１−２０アルコキシ基またはハロゲン原子である］
で表される化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を含んでなる、アミロイド線維形成抑制剤を提供するものである。
【００１４】
一般式（Ｉ）で表される化合物は、一般式（Ｉａ）：
【化２】
2018168083.tif 000003
［式中、
Ｙは、単結合、または、置換もしくは非置換のＣ１−２０アルキル基、アミド基、アミン基、エーテル基および置換もしくは非置換のＣ３−２０シクロアルキル基からなる群から選択される２価の連結基であり、
Ａｒは、置換もしくは非置換のフェニル基であり、
Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１−４アルキル基または置換もしくは非置換のＣ３−６シクロアルキル基であり、
ここで、ＡｒおよびＲ１、ＡｒおよびＹ、またはＲ１およびＹは、共同して環を形成してもよく、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−２０アルキル基またはハロゲン原子である］
で表されるものであることが好ましい。
【００１５】
また、本発明は、一実施形態によれば、表１Ａおよび表１Ｂに記載の化合物番号１〜２９の化合物からなる群から選択される１以上の化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を含んでなる、アミロイド線維形成抑制剤を提供するものである。
【００１６】
前記化合物は、化合物番号１、２、４、７、９、１０、１３、１５、１８、２１、２３〜２５、２７および２８の化合物からなる群から選択されることが好ましい。
【００１７】
または、前記化合物は、化合物番号１、２、７、９、２３および２５の化合物からなる群から選択されることが好ましい。
【００１８】
また、本発明は、一実施形態によれば、上記アミロイド線維形成抑制剤を含有する神経変性疾患の治療薬または予防薬を提供するものである。
【００１９】
前記神経変性疾患は、アルツハイマー病であることが好ましい。
【００２０】
また、本発明は、一実施形態によれば、化合物番号１〜２９からなる群から選択される化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を提供するものである。
【００２１】
前記化合物は、化合物番号２〜１２および１４〜２９の化合物からなる群から選択されることが好ましい。
【発明の効果】
【００２２】
本発明に係るアミロイド線維形成抑制剤は、既存の抗ＧＡβ抗体（４３９６Ｃ抗体）と同様に、ＧＡβに特異的に結合し、アミロイド線維の重合開始を遮断することにより、アミロイド線維の形成を確実に抑制することができる。また、本発明に係るアミロイド線維形成抑制剤の有効成分は低分子化合物であることから、（１）合成が容易であり、安価に大量に調製することができる、（２）抗原性を示さないため、安全性が高い、（３）分子の安定性が高く、種々の剤型において安定したＧＡβ結合能を確保できる、といった点で抗体よりも優れている。
【００２３】
また、本発明に係るアミロイド線維形成抑制剤を用いることにより、アルツハイマー病をはじめとする神経変性疾患の根本的な予防・治療方法を提供することが可能となる。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
以下、本発明を詳細に説明するが、本発明は本明細書中に説明した実施形態に限定されるものではない。
【００２５】
本発明は、第一の実施形態によれば、一般式（Ｉ）：
【化３】
2018168083.tif 000004
で表される化合物（以降、本明細書では、「化合物（Ｉ）」と記載する）もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を含んでなる、アミロイド線維形成抑制剤である。
【００２６】
「アミロイド線維」とは、Ａβが繊維状に凝集して形成される不溶性物質である。アミロイド線維は、最初に神経細胞膜を構成するＧＭ１に対してＡβが結合して複合体ＧＡβが形成され、ＧＡβを「種（シード）」としてＡβが凝集することにより形成される。本実施形態によるアミロイド線維形成抑制剤は、ＧＡβに対するＡβの凝集を阻害することにより、アミロイド線維の形成を抑制するものである。
【００２７】
「Ａβ」とは、ＡＰＰがβセクレターゼおよびγセクレターゼによって切断されて生成されるペプチドであり、ＡＰＰにおける切断点の相違により、アミノ酸数の異なるＡβ４０やＡβ４２などが含まれる。
【００２８】
「ＡＰＰ」には、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＲｅｆＳｅｑ／）において、ＲｅｆＳｅｑアクセッション番号ＮＰ＿００１１２９６０１．１、ＮＰ＿００１１２９６０２．１、ＮＰ＿００１１９１２３２．２、ＮＰ＿９５８８１７．１、ＮＰ＿００１１９１２３１．１、ＮＰ＿９５８８１６．１、ＮＰ＿００１１９１２３０．１、ＮＰ＿０００４７５．１、ＮＰ＿００１１２９４８８．１、ＮＰ＿００１１２９６０３．１として登録されているアミノ酸配列からなるヒトＡＰＰの他、βセクレターゼおよびγセクレターゼによって切断されてＡβを生成するものであることを限度として、上記アミノ酸配列と８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは約９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質が包含され得る。アミノ酸配列の同一性は、配列解析ソフトウェアを用いて、または、当分野で慣用のプログラム（ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴなど）を用いて算出することができる。
【００２９】
また、「ＡＰＰ」には、βセクレターゼおよびγセクレターゼによって切断されてＡβを生成するものであることを限度として、上記アミノ酸配列において、１〜数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質が包含され得る。ここで、「１〜数個」とは、例えば「１〜３０個」、好ましくは「１〜１０個」、特に好ましくは「１〜５個」である。
【００３０】
本実施形態のアミロイド線維形成抑制剤は、化合物（Ｉ）もしくはそれらの薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を含んでなる。
【００３１】
化合物（Ｉ）において、Ｘは、−（ＣＨ２）ｎ−である。前記式中、ｎは、０〜３の整数であり、好ましくは０である。
【００３２】
化合物（Ｉ）において、Ｙは、単結合、または、主鎖が炭素原子、窒素原子および酸素原子からなる群から選択される１種または２種以上の原子から構成される、原子数が１〜４である２価の連結基である。前記連結基の側鎖は、特に限定されず、例えば以下に記載するような置換基を有していてよい。好ましくは、化合物（Ｉ）において、Ｙは、単結合、または、置換もしくは非置換のＣ１−２０アルキル基、アミド基、アミン基、エーテル基および置換もしくは非置換のＣ３−１０シクロアルキル基からなる群から選択される２価の連結基である。
【００３３】
上記Ｃ１−２０アルキル基は、好ましくはＣ１−１０であり、特に好ましくはＣ１−６である。上記アルキル基には、直鎖状および分枝鎖状のいずれの形態のものも含まれる。また、上記Ｃ３−２０シクロアルキル基は、好ましくはＣ３−１０であり、特に好ましくはＣ３−６である。
【００３４】
本実施形態において、上記アルキル基およびシクロアルキル基は、置換されていなくてもよいし、１以上の水素原子が置換基によって置換されていてもよい。この場合における置換基は、Ｃ１−２０アルキル基、Ｃ１−２０ハロアルキル基、Ｃ１−２０アルコキシ基、Ｃ１−２０ハロアルコキシ基、Ｃ１−２０ヒドロキシアルコキシ基、Ｃ１−２０アルコキシアルキル基、Ｃ１−２０ハロアルコキシアルキル基、Ｃ１−２０アルコキシアルコキシ基、Ｃ１−２０ハロアルコキシアルコキシ基、Ｃ１−２０ヒドロキシアルキル基、Ｃ１−２０アミノアルキル基、Ｃ１−２０アルキルアミノアルキル基、Ｃ１−２０ジアルキルアミノアルキル基、Ｃ１−２０アルキルアミノ基、Ｃ１−２０アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−２０ジアルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−２０アルコキシカルボニル基、Ｃ１−２０アルコキシカルボニルアルキル基、Ｃ１−２０アシル基、Ｃ１−２０アシルアルキル基、Ｃ１−２０アルキルチオ基、Ｃ１−２０アルキレンジオキシ基、Ｃ１−２０ハロアルキレンジオキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、ニトロ基、アミノスルホニル基、Ｃ１−２０アルキルアミノスルホニル基、Ｃ１−２０アルキルスルホニルアミノ基、アリール基、ヘテロアリール基、シアノ基、チオール基および水酸基からなる群から選択される。置換基の数および置換位置は特に限定されないが、置換基の数としては、０〜３個が好ましい。
【００３５】
化合物（Ｉ）において、Ａｒは、置換もしくは非置換のフェニル基またはピリジル基である。本実施形態において、上記フェニル基は、置換されていなくてもよいし、１以上の水素原子が置換基によって置換されていてもよい。この場合における置換基は、上で定義したものと同様である。
【００３６】
化合物（Ｉ）において、Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１−６アルキル基または置換もしくは非置換のＣ３−７シクロアルキル基であり、好ましくは、置換もしくは非置換のＣ１−４アルキル基または置換もしくは非置換のＣ３−６シクロアルキル基である。本実施形態において、上記アルキル基およびシクロアルキル基は、置換されていなくてもよいし、１以上の水素原子が置換基によって置換されていてもよい。この場合における置換基は、上で定義したものと同様である。
【００３７】
化合物（Ｉ）において、ＡｒおよびＲ１、ＡｒおよびＹ、またはＲ１およびＹは、共同して環を形成してもよい。環は、単環または複環（例えば、ビシクロ環など）であってよい。
【００３８】
化合物（Ｉ）において、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−２０アルキル基、Ｃ１−２０ヒドロキシアルキル基、Ｃ１−２０アルコキシ基またはハロゲン原子であり、好ましくは、水素原子、Ｃ１−２０アルキル基またはハロゲン原子である。特に好ましくは、Ｒ４は水素原子である。
【００３９】
上記Ｃ１−２０アルキル基、Ｃ１−２０ヒドロキシアルキル基およびＣ１−２０アルコキシ基は、好ましくはＣ１−１０であり、特に好ましくはＣ１−６である。また、上記基におけるアルキル部分には、直鎖状および分枝鎖状のいずれの形態のものも含まれる。
【００４０】
化合物（Ｉ）は、下記一般式（Ｉａ）で表されるものであることが好ましい。
【化４】
2018168083.tif 000005
一般式（Ｉａ）中、Ｙは、単結合、または、置換もしくは非置換のＣ１−２０アルキル基、アミド基、アミン基、エーテル基および置換もしくは非置換のＣ３−２０シクロアルキル基からなる群から選択される２価の連結基であり、Ａｒは、置換もしくは非置換のフェニル基であり、Ｒ１は、置換もしくは非置換のＣ１−４アルキル基または置換もしくは非置換のＣ３−６シクロアルキル基であり、ここで、ＡｒおよびＲ１、ＡｒおよびＹ、またはＲ１およびＹは、共同して環を形成してもよく、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−２０アルキル基またはハロゲン原子であることが好ましい。
【００４１】
本実施形態において使用される化合物（Ｉ）には、特に断らない限り、その互変異性体、幾何異性体（例えば、Ｅ体、Ｚ体など）、鏡像異性体などの立体異性体も含まれる。
【００４２】
本実施形態において使用される化合物（Ｉ）は、以下の実施例において記載する化学合成方法およびそれに準ずる化学合成方法に、適宜従来公知の種々の方法を組み合わせて行うことにより合成することができる。
【００４３】
または、本実施形態において使用される化合物（Ｉ）が市販化合物から選択される場合には、市販化合物を購入してもよい。市販化合物は、例えば、国内では、ナミキ商事株式会社もしくはキシダ化学株式会社を通して、Ａｍｂｉｎｔｅｒ社、Ｅｎａｍｉｎｅ社、Ａｕｒｏｒａ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＬＬＣ社、ＵＯＲＳＹ社、Ｖｉｔａｓ−Ｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ社、Ｉｎｔｅｒｂｉｏｓｃｒｅｅｎ社、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ社、Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、ＣｈｅｍＤｉｖ社などから購入することができる。
【００４４】
本実施形態のアミロイド線維形成抑制剤には、上記化合物（Ｉ）を含んでなるものの他、上記化合物（Ｉ）の薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を含んでなるものが包含される。
【００４５】
本実施形態において、「薬学的に許容される」とは、薬剤の使用に際して有害ではないことを意味する。本実施形態における薬学的に許容される塩とは、例えば、化合物（Ｉ）に酸性基が存在する場合には、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩などのアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩；アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ，Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）ピペラジン、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール、エタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、Ｌ−グルカミンなどのアミン付加塩；またはリジン、δ−ヒドロキシリジン、アルギニンなどの塩基性アミノ酸付加塩などが挙げられる。また、例えば、化合物（Ｉ）に塩基性基が存在する場合には、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩；メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸、酢酸、プロピオン酸塩、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、ケイ皮酸、乳酸、グリコール酸、グルクロン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、サリチル酸などの有機酸塩；アスパラギン酸、グルタミン酸などの酸性アミノ酸付加塩などが挙げられる。
【００４６】
本実施形態における薬学的に許容される「溶媒和物」とは、例えば、水和物、アルコール和物の他、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、クロロホルム、ジクロロエタン、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、メチルｔ−ブチルエーテル、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトン、メチルエチルケトン、イソブチルメチルケトン、トルエン、ベンゼン、ｏ−キシレン、ｍ−キシレン、ｐ−キシレン、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、炭酸プロピレン、炭酸ジエチル、炭酸ジメチル、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、オクタンおよびシクロヘキサンからなる群より選択される薬学的に許容される溶媒との溶媒和物などが挙げられ、好ましくは水和物である。
【００４７】
化合物（Ｉ）で表される化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物は、これらから選ばれる単独または２以上の混合物を、アミロイド線維形成抑制剤の有効成分とすることができる。本実施形態のアミロイド線維形成抑制剤は、有効成分のみから構成されてもよいが、一般的には、さらに任意の成分として、薬学的に許容される公知の希釈液、担体、賦形剤などを含んでもよい。
【００４８】
本実施形態のアミロイド線維形成抑制剤を製造するには、定法に従って、化合物（Ｉ）で表される化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を、必要に応じて上記公知の担体と組み合わせて製剤化すればよい。アミロイド線維形成抑制剤において、化合物（Ｉ）で表される化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物は、有効成分として、各形態に応じた範囲で適切な摂取量となるように含有されればよい。アミロイド線維形成抑制剤において、化合物（Ｉ）で表される化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物は、その投与量が、通常成人１日当たり０．００１ｍｇ／ｋｇ（体重）以上、好ましくは０．０１ｍｇ／ｋｇ（体重）以上となるように、薬剤中の含有量が決定されることが好ましいが、かかる範囲には限定されず、患者の症状、年齢、性別などにより適宜調整されることが可能である。投与量の上限は、１日当たり、１００ｍｇ／ｋｇ（体重）以下が好ましく、１０ｍｇ／ｋｇ（体重）以下がより好ましい。
【００４９】
本実施形態のアミロイド線維形成抑制剤は、種々の剤型に製剤化することができ、剤型としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、座剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤などが挙げられる。したがって、本実施形態のアミロイド線維形成抑制剤は、経口投与、腹腔内投与、皮内投与、静脈内投与、筋肉内投与、脳内投与など、種々の方法により投与することができる。
【００５０】
アミロイド線維形成抑制剤を経口用製剤とする場合は、例えば、錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤などの固形剤とすることができる。この場合には、適切な添加物、例えば、デンプン、乳糖、白糖、マンニトール、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩などの添加剤や、さらに所望により結合剤、崩壊剤、潤沢剤、着色剤、香料などを配合することができる。固形剤を錠剤または丸剤とする場合は、所望によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロースなどの糖衣または胃溶性もしくは腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。または、アミロイド線維形成抑制剤の経口用製剤は、例えばシロップ剤などの液剤とすることができ、この場合には、滅菌水、生理食塩水、エタノールなどを担体として使用し得る。さらに所望により、懸濁剤などの補助剤、甘味剤、風味剤、防腐剤などを添加してもよい。
【００５１】
アミロイド線維形成抑制剤を非経口用製剤とする場合は、例えば、注射剤や直腸投与剤などの液剤とすることができる。この場合には、常法により、有効成分を注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、落花生油、大豆油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどの希釈剤に溶解ないし懸濁させ、必要に応じ、殺菌剤、安定剤、等張化剤、無痛化剤などを加えることにより調製することができる。また、固体組成物を製造し、使用前に無菌水または無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
【００５２】
また、アミロイド線維形成抑制剤の非経口用製剤は、例えば、マイクロカプセルなどの徐放性製剤することができ、脳内に直接投与することもできる。徐放性製剤は、体内から即時に除去されることを防ぎ得る担体を用いて調製することができる。好ましい担体としては、例えば、エチレンビニル酢酸塩、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸などの、生物分解性／生物適合性ポリマーを用いることができる。また、担体としてリポソームを用いることもできる。好ましいリポソームは、特に限定されないが、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いる逆相蒸発法によって精製され調製されたものであってよい。
【００５３】
さらに、本実施形態のアミロイド線維形成抑制剤には、所望により、着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤などの薬学的に許容される添加物や他の治療薬を含有させることができる。
【００５４】
また、アミロイド線維形成抑制剤の製剤化に際しては、安定化剤を配合することが好ましい。安定化剤としては、例えば、アルブミン、グロブリン、ゼラチン、マンニトール、グルコース、デキストラン、エチレングリコールなどが挙げられる。
【００５５】
製剤中に含有される有効成分の量は、種々の条件、例えば抽出溶媒の種類、使用した溶媒の使用量等によっても変動する。そのため、有効成分の量は、上記好ましい摂取量より少ない量で十分な場合もあるし、あるいは範囲を超えて必要な場合もある。
【００５６】
本実施形態のアミロイド線維形成抑制剤は、アミロイド線維の形成を根本的かつ確実に抑制することができる。そのため、アミロイド線維形成と関連する疾患の治療や予防などの用途に有用である。
【００５７】
本発明は、第二の実施形態によれば、化合物番号１〜２９の化合物からなる群から選択される１以上の化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を含んでなる、アミロイド線維形成抑制剤である。以下に示す化合物番号１〜２９の化合物は、ＧＡβに対するＡβの重合を阻害し、アミロイド線維の形成を抑制することができる。
【００５８】
【表１Ａ】
2018168083.tif 000006
【表１Ｂ】
2018168083.tif 000007
【００５９】
［１］４−［ベンジル（メチル）アミノ］−７−クロロ−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号１）、
［２］２−（７−クロロ−４−｛［（４−フルオロフェニル）メチル］（メチル）アミノ｝−８−メチルキノリン−３−イル）酢酸（化合物番号２）、
［３］４−（ベンジルアミノ）−７−クロロ−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号３）、
［４］７−クロロ−８−メチル−４−［メチル（２−フェニルエチル）アミノ］キノリン−３−カルボン酸（化合物番号４）、
［５］７−クロロ−８−メチル−４−｛メチル［（ピリジン−３−イル）メチル］アミノ｝キノリン−３−カルボン酸（化合物番号５）、
［６］７−クロロ−８−メチル−４−｛メチル［（ピリジン−２−イル）メチル］アミノ｝キノリン−３−カルボン酸（化合物番号６）、
［７］７−クロロ−４−｛［（４−フルオロフェニル）メチル］（メチル）アミノ｝−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号７）、
［８］７−クロロ−８−メチル−４−［（１−フェニルエチル）アミノ］キノリン−３−カルボン酸（化合物番号８）、
［９］７−クロロ−８−メチル−４−（フェニルアミノ）キノリン−３−カルボン酸（化合物番号９）、
［１０］７−クロロ−８−メチル−４−［メチル（フェニル）アミノ］キノリン−３−カルボン酸（化合物番号１０）、
［１１］４−［ベンジル（メチル）アミノ］−７−クロロキノリン−３−カルボン酸（化合物番号１１）、
［１２］４−［ベンジル（メチル）アミノ］−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号１２）、
［１３］７−クロロ−８−メチル−４−（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−２−イル）キノリン−３−カルボン酸塩酸塩（化合物番号１３）、
［１４］７−クロロ−８−メチル−４−［（１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アミノ］キノリン−３−カルボン酸塩酸塩（化合物番号１４）、
［１５］７−クロロ−４−｛［（４−クロロフェニル）メチル］（メチル）アミノ｝−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号１５）、
［１６］７−クロロ−４−｛［１−（４−クロロフェニル）エチル］アミノ｝−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号１６）、
［１７］７−クロロ−８−メチル−４−（３−フェニルアゼチジン−１−イル）キノリン−３−カルボン酸（化合物番号１７）、
［１８］７−クロロ−４−［（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アミノ］−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号１８）、
［１９］７−クロロ−４−（４−クロロベンズアミド）−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号１９）、
［２０］４−［ベンジル（メチル）アミノ］−７−フルオロ−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号２０）、
［２１］７−クロロ−４−｛［１−（４−クロロフェニル）エチル］（メチル）アミノ｝−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号２１）、
［２２］７−クロロ−４−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール−２−イル）−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号２２）、
［２３］７−クロロ−４−［（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）（メチル）アミノ］−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号２３）、
［２４］２−｛４−［ベンジル（メチル）アミノ］−７−クロロ−８−メチルキノリン−３−イル｝酢酸（化合物番号２４）、
［２５］７−クロロ−４−［４−（４−フルオロフェニル）ピペラジン−１−イル］−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号２５）、
［２６］７−クロロ−４−［４−（４−フルオロフェニル）−４−ヒドロキシピペリジン−１−イル］−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号２６）、
［２７］４−［ベンジル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−７−クロロ−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号２７）、
［２８］４−［ベンジル（プロパン−２−イル）アミノ］−７−クロロ−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号２８）、および
［２９］７−クロロ−８−メチル−４−［（２Ｓ）−２−［（フェニルアミノ）メチル］ピロリジン−１−イル］キノリン−３−カルボン酸（化合物番号２９）。
【００６０】
本実施形態において使用される化合物は、より好ましくは、化合物番号１、２、４、７、９、１０、１３、１５、１８、２１、２３〜２５、２７および２８の化合物からなる群から選択される。上記化合物は、アミロイド線維形成に対して強い抑制効果を有する。
【００６１】
本実施形態において使用される化合物は、特に好ましくは、化合物番号１、２、７、９、２３および２５の化合物からなる群から選択される。上記化合物は、アミロイド線維形成に対して特に強い抑制効果を有する。
【００６２】
化合物番号１〜２９の化合物は、第一の実施形態における化合物（Ｉ）と同様に、以下の実施例において記載する化学合成方法およびそれに準ずる化学合成方法に、適宜従来公知の種々の方法を組み合わせて行うことにより合成することができる。または、市販化合物から選択される場合には、市販化合物を購入してもよい。
【００６３】
本実施形態のアミロイド線維形成抑制剤には、上記特定の化合物を含んでなるものの他、上記化合物の薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物を含んでなるものが包含される。本実施形態における「薬学的に許容される塩」および「溶媒和物」は、第一の実施形態において定義したものと同様である。
【００６４】
本実施形態のアミロイド線維形成抑制剤は、第一の実施形態における化合物（Ｉ）として上記特定の化合物を用いる以外は、第一の実施形態のアミロイド線維形成抑制剤と同様にして調製されてよい。なお、化合物１、２、４〜７、１０〜１３、１５、１７および２０〜２９は、一般式（Ｉ）で表される構造を有する化合物である。化合物３、８、９、１４、１６、１８および１９は、一般式（Ｉ）で表される構造と類似の構造を有する化合物であり、化合物（Ｉ）に代えて用いることができる。
【００６５】
本発明は、第三の実施形態によれば、上記アミロイド線維形成抑制剤を含有する神経変性疾患の治療薬または予防薬である。本実施形態による神経変性疾患の治療薬または予防薬は、化合物（Ｉ）で表される化合物もしくは化合物番号１〜２９から選択される化合物、もしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物から選ばれる、単独または２以上の混合物を含んでなるアミロイド線維形成抑制剤と、任意の成分とを含有する。ここでいう任意の成分は、通常の医薬品成分であってよく、通常用いられている各種形態、例えば、錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、液剤などとして調製される。また、本実施形態による神経変性疾患の治療薬または予防薬は、任意の成分として、神経変性疾患の治療または予防のための他の有効成分をさらに含有してもよい。
【００６６】
本実施形態において、「治療」とは、神経変性疾患に罹患した動物において、その疾患の病態の進行および悪化を阻止または緩和することを意味し、その疾患を完全に治癒することのみならず、その疾患の諸症状を緩和することをも含む。また、「予防」とは、神経変性疾患に罹患するおそれのある動物において、その疾患の罹患を未然に防ぐことを意味する。
【００６７】
本実施形態において、「神経変性疾患」とは、Ａβの凝集およびアミロイド線維の形成と関連する（もしくはそれに起因する）神経組織の変性を伴う疾患全般を意味する。神経変性疾患としては、特に限定されるものではないが、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ダウン症、脳アミロイド血管症、ハンチントン病などが挙げられる。
【００６８】
本実施形態の治療薬または予防薬の対象となる神経変性疾患は、好ましくはアルツハイマー病である。「アルツハイマー病」には、いわゆるアルツハイマー病（孤発性アルツハイマー病）の他、家族性（遺伝性）アルツハイマー病も包含される。
【００６９】
本実施形態の治療薬または予防薬の対象となる動物は、例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ウシ、ブタ、ヒツジ、非ヒト霊長類、ヒトなどの哺乳動物であり、好ましくはヒトである。
【００７０】
本実施形態による神経変性疾患の治療薬または予防薬は、アミロイド線維の形成と関連する神経変性疾患の根本的な治療または予防のために有用である。
【００７１】
本発明は、第四の実施形態によれば、化合物番号１〜２９の化合物からなる群から選択される化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物である。
【００７２】
本実施形態の化合物は、好ましくは、化合物番号２〜１２および１４〜２９の化合物からなる群から選択される。
【００７３】
本実施形態の化合物は、以下の実施例において記載する化学合成方法およびそれに準ずる化学合成方法に、適宜従来公知の種々の方法を組み合わせて行うことにより合成することができる。
【００７４】
本実施形態における「薬学的に許容される塩」および「溶媒和物」は、第一の実施形態において定義したものと同様である。
【００７５】
本実施形態による化合物もしくはその薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物は、ＧＡβに対するＡβの重合を阻害し、アミロイド線維の形成を抑制することができる。そのため、アミロイド線維形成と関連する疾患の治療や予防などの用途に有用である。
【実施例】
【００７６】
以下に実施例を挙げ、本発明についてさらに説明する。なお、これらは本発明を何ら限定するものではない。
【００７７】
＜１．アミロイド線維の形成を抑制する化合物のスクリーニング＞
ＧＡβを特異的に認識し、アミロイド線維の形成を抑制する化合物を見出すために、分子ドッキングシミュレーションプログラムＤＯＣＫ４（ｈｔｔｐ：／／ｄｏｃｋ．ｃｏｍｐｂｉｏ．ｕｃｓｆ．ｅｄｕ／）によるバーチャルスクリーニングを行った。バーチャルスクリーニングを行うにあたり、最初に分子動力学シミュレーションによるＧＡβ複合体モデルの構築を行った。ＧＭ１分子の中で、Ａβとの結合に関与すると考えられる糖鎖領域について分子軌道計算に基づいた構造最適化を施し、各原子に対して部分電荷を割り当てた。これらの最適化構造の各原子の３次元座標データおよび部分電荷の値を、ＡＭＢＥＲで用いられる経験的力場のｆｆ９９パラメータセットの中に取り込み、水分子を配置した分子系の中で５ｎｓの分子動力学計算を実施した。ＧＭ１の糖鎖領域についての分子動力学計算を行い、トラジェクトリポーズをサンプリングした。得られたトラジェクトリポーズを用いて、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋに登録されたＡβ４０の立体構造（ＰＤＢ  ＩＤ：１ＡＭＬ）とのドッキングを行った。ドッキングの結果、２００万個のドッキングポーズが得られた。この中から、構造的に歪みが少なく最もエネルギー的に安定なドッキングポーズを抽出し、ＧＡβの原子モデルとした。このＧＡβの原子モデルを初期構造として、２０ｎｓの分子動力学計算を実施し、Ａβの主鎖Ｃα原子の位置情報に基づいて構造クラスタリングを実施し、得られた代表構造の中から化合物の結合するポケットに有望なものを抽出した。
【００７８】
ナミキ商事株式会社およびキシダ化学株式会社から提供される合計９００万個あまりの化合物からなる市販化合物ライブラリから、ドラッグライクネス・フィルタリングによって薬として好ましくない化合物を除外し、さらに、フィンガープリントを用いてクラスタリングされたグループから代表構造を抽出することにより、約５０万構造からなる市販化合物ライブラリを作成した。この市販化合物ライブラリに対して、上で抽出したスキャフォールドをクエリとして用い、類似構造検索を実施した。構造検索のためのフィンガープリントには、ＭＡＣＣＳ、Ｌｉｎｇｏ、Ｃｉｒｃｕｌａｒ、Ｐａｔｈ、Ｔｒｅｅの各フィンガープリントを用いた。上記５種類のフィンガープリントのうち、ＭＡＣＣＳフィンガープリントによる検索の結果、類似度が０．８以上で４，３４４個、０．９以上で１，２２０個の化合物がヒットした。他のフィンガープリントでは、化合物はヒットしなかった。ＭＡＣＣＳフィンガープリントでヒット化合物の中から、Ｔｒｐの側鎖に類似した芳香族性の置換基を持つ化合物を選択し、５４２個の化合物を抽出した。続いて、各化合物の２次元構造から、幾何異性体、光学異性体を含む複数のコンフォーメーションを発生させ、三次元の構造座標に変換し、ＧＡβに対するドッキングを実施した。それぞれのドッキングポーズから、Ｐｈｅ１９と芳香族性のスタッキングを形成するためのファーマコフォアを満たす化合物を選択し、２９９個までに絞り込んだ。さらに、各化合物の構造を目視によりチェックし、構造的に偏らないように１８５個の化合物を選んだ。
【００７９】
上記により市販化合物から絞り込まれた化合物について、後述するインビトロの再現系において、ＧＡβ依存性アミロイド線維形成に対する阻害活性を評価した。その結果、一連のヒット化合物群に含まれるものの中で最も優先度の高いヒット化合物として、下記の一般式（Ｉ）：
【化５】
2018168083.tif 000008
で表される化合物が、ＧＡβ依存性アミロイド線維形成に対して阻害活性を有することが示唆された。その後、阻害活性を有した化合物の類似（ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ）検索を行い、ＧＡβ依存性アミロイド線維形成に対する阻害活性を評価した結果、上記一般式（Ｉ）で表される化合物が、ＧＡβ依存性アミロイド線維形成に対して阻害活性を有することが明らかになった。
【００８０】
＜２．市販化合物の選択（化合物１および１３）＞
一般式（Ｉ）で表される構造を有する市販化合物、または、一般式（Ｉ）で表される構造と類似の構造を有する市販化合物は、主にＥｎａｍｉｎｅ社、ＵＯＲＳＹ社、Ａｍｂｉｎｔｅｒ社などより購入した。
【００８１】
＜３．新規化合物の合成（化合物２〜１２および１４〜２９）＞
次いで、上記一般式（Ｉ）で表される構造を有する新規化合物の合成を行った。使用機器および測定条件などは下記のものを採用した。
【００８２】
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡｖａｎｃｅまたはＢｒｕｋｅｒ  Ｖａｒｉａｎ（４００ＭＨｚ、５００ＭＨｚ、または６００ＭＨｚ）を使用して測定した。ＴＭＳ（テトラメチルシラン）を内部標準として使用した。
【００８３】
ＬＣ／ＭＳ分析は、四重極型質量分析計ＬＣＭＳ−２０１０（島津製作所）（カラム：Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ  ＸＲ−ＯＤＳ（３．０×３０ｍｍ，２．２μｍ））を用いて、ＥＳＩ（＋）イオンモードまたはＡＰＣＩ（＋）イオンモードおよび（−）イオンモードにて行った。流速条件：０．３〜０．８ｍＬ／分、取得時間：３〜５分、検出波長：２２０ｎｍ、オーブン温度：４０〜５０℃。
【００８４】
Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣは以下の条件にて行った。シリカゲルカラム：Ｆｕｊｉ  Ｃ１８（３００×２５）、ＹＭＣ  ２５０×２０；波長：２２０ｎｍ；移動層Ａ：アセトニトリル（０．１％ＨＣｌ）；移動層Ｂ：水；流速条件：２５ｍＬ／分、注入量：２ｍＬ、ランタイム：２０分；平衡化時間：３分。
【００８５】
≪４−［ベンジル（メチル）アミノ］−７−クロロ−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物１）の合成≫
【化６】
2018168083.tif 000009
【００８６】
（１−１）７−クロロ−４−ヒドロキシ−８−メチルキノリン−３−カルボン酸エチル（化合物１−１）の合成
７−クロロ−４−ヒドロキシ−８−メチルキノリン−３−カルボン酸エチル（化合物１−１）は、Ｒｅｖｉｓｔａ  ｄｅ  Ｃｈｉｍｉｅ  （Ｂｕｃｈａｒｅｓｔ，  Ｒｏｍａｎｉａ）、Ｖｏｌｕｍｅ６１、Ｉｓｓｕｅ８、Ｐａｇｅｓ７４５−７４９、Ｊｏｕｒｎａｌ  ２０１０を参考に合成した。
【００８７】
（１−２）４，７−ジクロロ−８−メチルキノリン−３−カルボン酸エチル（化合物１−２）の合成
化合物１−１（１３．６ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を塩化チオニル（９０ｍＬ）に溶解させ、その溶液を８０度で３時間反応させた。反応後、反応液を減圧濃縮し、炭酸水素ナトリウム水でｐＨ８に中和することにより、４，７−ジクロロ−８−メチルキノリン−３−カルボン酸エチル（化合物１−２）を白色固体として１４ｇ（収率１００％）で得た。
【００８８】
（１−３）４−［ベンジル（メチル）アミノ］−７−クロロ−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物番号１）の合成
化合物１−２（０．８５ｇ、７，０４ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．９１ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）の水溶液（６０ｍＬ）に、Ｎ−アミノベンジルアミン（1ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（８ｍＬ）溶液を加え、１２０度で１時間、マイクロウェーブを照射した。反応後、反応液を減圧留去し、残渣に酢酸エチル（５０ｍＬ）を加えた溶液を飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、濾液を濃縮し得られた粗精製物をカラムクロマトグラフィーにより精製しエステル中間体（１．２ｇ、９４％）を得た。
【００８９】
得られたエステル中間体（１．２ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）をメタノール（３０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）の混液に溶解させ、これに水酸化ナトリウム（０．３９ｇ、９．８１ｍｍｏｌ）を加えた。５０度で３時間反応を行った後、希塩酸を用いて反応液のｐＨ５〜６に中和した。粗精製物を逆層カラムクロマトグラフィー（１０〜７０％メタノール／水（０．０５％ＮＨ３））により精製し、４−［ベンジル（メチル）アミノ］−７−クロロ−８−メチルキノリン−３−カルボン酸（化合物１）（７００ｍｇ、６３％）を得た。
【００９０】
上記と同様の方法により、化合物３〜２３および２５〜２９を合成した。
【００９１】
≪２−（７−クロロ−４−｛［（４−フルオロフェニル）メチル］（メチル）アミノ｝−８−メチルキノリン−３−イル）酢酸（化合物２）の合成≫
【化７】
2018168083.tif 000010
【００９２】
（２−１）２−ホルミルコハク酸ジメチル（化合物２−１）の合成
金属ナトリウム（１６ｇ、６９０ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（４００ｍＬ）懸濁液に、ギ酸エチル（７１．４ｇ、９６５ｍｍｏｌ）とコハク酸ジメチル（１００ｇ、５７５ｍｍｏｌ）を攪拌しながらゆっくり加えた。反応を４０度で５時間行った後、反応液に水を注意深く加え反応を終了させた。得られた混液をジエチルエーテル（４００ｍＬ×２）で洗浄後、水層を６Ｎ塩酸で酸性にし、この水層をジエチルエーテル（４００ｍＬ×２）にて抽出した。ジエチルエーテル層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、濾液減圧下濃縮することによって２−ホルミルコハク酸ジメチル（化合物２−１）（１００ｇ、７２．３％）を黄色固体として得た。
【００９３】
（２−２）２−｛［（３−クロロ−２−メチルフェニル）アミノ］メチレン｝コハク酸ジメチル（化合物２−２）の合成
化合物２−１（１００ｇ、４９５ｍｍｏｌ）と３−クロロ−２−メチルベンジルアミン（４９ｇ、３４６ｍｍｏｌ）をトルエン（３００ｍＬ）に溶解させ、１２０度で５時間反応させた。反応液を減圧濃縮して２−｛［（３−クロロ−２−メチルフェニル）アミノ］メチレン｝コハク酸ジメチル（化合物２−２）（１４０ｇ、８７％）を黄色油状物質として得た。
【００９４】
（２−３）２−（７−クロロ−４−ヒドロキシ−８−メチルキノリン−３−イル）酢酸（化合物２−３）の合成
ポリリン酸（４００ｍＬ）に化合物２−２（１４０ｇ、４３１ｍｍｏｌ）を加え１４０度で２時間反応させた。反応後、反応液を氷水（３０００ｍＬ）に注ぎ込み、１０分間攪拌した。沈殿物を濾取し、水（４００ｍＬ）で洗浄し、乾燥後、２−（７−クロロ−４−ヒドロキシ−８−メチルキノリン−３−イル）酢酸（化合物２−３）（１００ｇ、９２．４％）を淡黄色固体として得た。
【００９５】
（２−４）２−（７−クロロ−４−ヒドロキシ−８−メチルキノリン−３−イル）酢酸メチル（化合物２−４）の合成
２−（７−クロロ−４−ヒドロキシ−８−メチルキノリン−３−イル）酢酸（化合物２−３）（１００ｇ、３９８ｍｍｏｌ）のメタノール（４００ｍＬ）溶液に濃硫酸（７０ｍＬ）を加え、８０度で終夜反応させた。反応後、反応液に炭酸水素ナトリウム水溶液（２０００ｍＬ）を加え、１時間攪拌した。生じた沈殿物をろ取し、水（５００ｍＬ）で洗浄し、乾燥後、２−（７−クロロ−４−ヒドロキシ−８−メチルキノリン−３−イル）酢酸メチル（化合物２−４）（５０ｇ、４７．５％）を黄色固体として得た。
【００９６】
（２−５）２−（４，７−ジクロロ−８−メチルキノリン−３−イル）酢酸メチル（化合物２−５）の合成
化合物２−４（５０ｇ、１８８ｍｍｏｌ）を、オキシ塩化りん（２５０ｍＬ）に氷冷下で加えた。８０度で１６時間反応後、反応液を氷冷し、その後、激しく攪拌しながら氷水（２５００ｇ）へ注ぎ込んだ。混合液を４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で中和した後、酢酸エチル（４００ｍＬ×３）で抽出した。有機層を飽和食塩水（６００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過後、ろ液を濃縮し粗精製物を得た。これをカラムクロマトグラフィーにより精製を行い、２−（４，７−ジクロロ−８−メチルキノリン−３−イル）酢酸メチル（化合物２−５）（１５ｇ、２８％）を黄色固体として得た。
【００９７】
（２−６）２−（７−クロロ−４−｛［（４−フルオロフェニル）メチル］（メチル）アミノ｝−８−メチルキノリン−３−イル）酢酸（化合物番号２）の合成
化合物２−５（１５ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）のメタノール（１４０ｍＬ）溶液にＴＨＦ（６０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）および水酸化リチウム（１１．１ｇ、２６５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。反応後、混合物を減圧濃縮し、得られた残渣を水（１００ｍＬ）で希釈し、３Ｎ塩酸でｐＨ３〜４に酸性化した後、１０分間攪拌した。析出した沈殿物を濾取し、水で洗浄後乾燥によりカルボン酸中間体（１０．９ｇ、７６．４％）を黄色結晶として得た。
【００９８】
続いて、カルボン酸中間体（１０．９ｇ、４０．５ｍｍｏｌ）のｎ−ブタノール（９０ｍＬ）懸濁液に、攪拌しながらＮ−メチル−４−フルオロベンジルアミン（２２．５ｇ、１６２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２１ｇ、１６２ｍｍｏｌ）を加えた。反応は１４０度で２０時間行った。反応後、混合物を減圧濃縮し、得られた残渣に酢酸エチル（６０ｍＬ）を加え希釈した。この溶液を水（３０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥濾過後、濃縮して得られた粗精製物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、２−（７−クロロ−４−｛［（４−フルオロフェニル）メチル］（メチル）アミノ｝−８−メチルキノリン−３−イル）酢酸（化合物２）（２．５３ｇ、１６．８％）を得た。
【００９９】
上記と同様の方法により、化合物２４を合成した。
【０１００】
表２に、化合物１〜２９を示す。
【表２Ａ】
2018168083.tif 000011
【表２Ｂ】
2018168083.tif 000012
【表２Ｃ】
2018168083.tif 000013
【表２Ｄ】
2018168083.tif 000014
【表２Ｅ】
2018168083.tif 000015
【０１０１】
＜３．チオフラビンＴ（ＴｈＴ）アッセイによるアミロイド線維形成阻害活性の評価＞
上記化合物１〜２９のＧＡβ依存性アミロイド線維形成に対する阻害活性を、ＴｈＴアッセイにより評価した。
【０１０２】
（１）Ａβ溶液の調製
ヒトＡβ１−４０（ｃａｔ．＃  ４３０７−ｖ、ペプチド研究所製）を０．０２％のアンモニア溶液に溶解し（４００μＭ）、１００，０００ｒｐｍで３時間遠心分離した（Ｓ１１０ＡＴローター、日立社製）。上清の上層約３分の２を回収し、タンパク質濃度を計測した。Ａβ溶液は小分けして、使用時まで−８０℃に保存した。使用直前に融解し、リン酸緩衝液（ＰＢＳ：ｃａｔ．＃  １００１０、ライフテクノロジーズ社製）を用いて７５μＭに希釈した。
【０１０３】
（２）ＧＭ１含有リポソームの調製
クロロホルム／メタノール混合液（１：１）を溶媒として、各１００ｍＭのコレステロールおよびスフィンゴミエリン（ともにシグマアルドリッチ社製）の混合溶液を調製した。この混合溶液に、ＧＭ１（ｃａｔ．♯  １０６１、マトレヤ社製）を５０ｍＭ濃度になるように溶解した。この脂質混合溶液をガラス試験管に小分け分注し、使用時まで−２０℃に保存した。使用前に融解し、クロロホルム／メタノール混合液（１：１）を加えて混合した後、懸濁液に窒素ガスを当てることで溶媒を除去した。乾燥した脂質混合物を、ＧＭ１濃度が２．５ｍＭになるようにＰＢＳに再懸濁し、液体窒素を用いて５回凍結融解を行った。この脂質懸濁液を１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、沈殿物をＧＭ１が２．５ｍＭになるようにＰＢＳに再懸濁した。マイクロチップを備えた超音波破砕機（ＸＬ−２０００、ＭＩＳＯＮＩＸ社製）を用いて、この懸濁液が透明になるまで氷上で１０秒間の超音波処理を繰り返し、ＧＭ１含有リポソームを調整した。使用直前にＰＢＳを加え、ＧＭ１濃度が７５０μＭになるように希釈した。
【０１０４】
（３）化合物溶液の調製
化合物１〜２９は、ＤＭＳＯで１０ｍＭおよび２ｍＭ溶液をそれぞれ作製した。使用直前にＰＢＳで７５μＭまたは１５μＭに希釈した。
【０１０５】
（４）ＧＡβ依存性アミロイド線維形成
９６ウェルマイクロプレートに、上記（１）で調製された７５μＭのＡβ溶液と、（３）で調製された化合物溶液もしくは０．７５％ＤＭＳＯを５μｌずつ混合し、室温で１０分間インキュベートした。次いで、（２）で調製された７５０μＭのＧＭ１含有リポソームを各ウェルに５μｌずつ加え、３７℃で１８時間インキュベートした。
【０１０６】
（５）ＴｈＴアッセイ
ＴｈＴ（シグマアルドリッチ社製）を５０ｍＭのグリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ８．５）を用いて５μＭに調製した。測定直前に（４）の各ウェルから１０μｌを９６ウェルブラックプレートに移した。マルチプレートリーダー（ＡＲＶＯ−ＨＴＳ、パーキンエルマー社製）を用い、インジェクターから５μＭのＴｈＴ溶液を５０μｌずつ、各ウェルに加えた後、アミロイド線維に結合したＴｈＴの至適蛍光（励起波長４３０ｎｍ、蛍光波長４９０ｎｍ）を測定した。
【０１０７】
ＴｈＴの蛍光強度が、アミロイド線維の形成度合いを示す。化合物を添加しない場合のＴｈＴ蛍光強度に対する、化合物添加時のＴｈＴ蛍光強度の比を求めることにより、当該化合物によるアミロイド線維形成阻害率を算出した。化合物の最終濃度が２５μＭのときの阻害率が４０％以上８０％未満のものをＢ、８０％以上のものをＡと評価した。
【０１０８】
表３に、化合物１〜２９のアミロイド線維形成阻害活性についての評価を示す。化合物１〜２９はいずれもアミロイド線維形成に対する阻害活性を有することが確認された。
【０１０９】
【表３】
2018168083.tif 000016