(57)【要約】【課題】ワクチンアジュバントおよび治療剤としての短鎖オリゴヌクレオチドを提供すること。【解決手段】本発明は、有効量のヌクレオシド、短鎖オリゴヌクレオチド化合物もしくはその類似体、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体を投与することにより、被験体の微生物感染症を処置する方法、ならびにその疾患、状態、感染またはウイルスに対する被験体の免疫機構の応答を改善する方法を提供する。さらに、本発明は、被験体（例えば、ヒト）のウイルス感染、細菌感染、寄生虫感染、または真菌感染の処置または予防のための方法を提供する。本発明の化合物は、例えば、本明細書に提供されるとおりのジヌクレオチド化合物およびトリヌクレオチド化合物を含む。本発明の化合物は、例えば、予防および治療を含めた種々の治療適用に有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書中に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の引用
本願は、２０１３年２月１８日に出願した米国仮特許出願第６１／７６６，０１１号の優先権の利益を主張する。米国仮特許出願第６１／７６６，０１１号の開示はその全体が本明細書中に参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
自然免疫は、原核生物および真核生物の病原体、例えば、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫などに対する身体の防御に極めて重要な役割を果たしている。実際、ウイルスによって引き起こされる急性および慢性の感染は主要な世界的公衆衛生危機を構成しており、まだ対処されていない大きな医学的必要性が存在している（１，２）。感染性疾患に加え、ウイルスは、世界中のすべてのがんの１５〜２０％、例えば、肝臓、頸部および膵臓のがん（各々は相当な死亡率および疾病率をもたらす）の原因である。
【０００３】
ヒトを苦しめることに加え、ウイルス疾患は、計り知れない保健医療費および生産性の低下をもたらす。例えば、世界中で５〜６億人がＨＢＶおよびＨＣＶに慢性的に感染しており、ウイルス誘導性の肝硬変および肝臓がんによる死亡が毎年、１００万〜２００万例発生している。世界中で何万人もの患者が肝臓移植を切望している。ヒト乳頭腫ウイルス感染は頸部がんに至り、ＨＩＶ感染と関連しているカポジ肉腫の発症はすべて文献に充分説明されている。パンデミックインフルエンザはヒトにおける高レベルの疾病率および死亡率を特徴とするものであり、その新規な亜型抗原に対して既存の免疫がないことによる感染レベルの増大および病因と関連している。抗ウイルス薬は、パンデミックインフルエンザ広がりを潜在的に遅滞させ得るだけでなく、最終的に解決策となり得る。ヒト型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（Ｍｔｂ）によって引き起こされる結核で死亡する人は、今日、任意の他の細菌感染の場合よりも多い。９０を超える国々の人口のほぼ３分の１がＭｔｂに感染しており、毎年、２００万人がこの疾患で死亡している。
【０００４】
ワクチンは、限られた数のウイルスに対して予防薬として利用可能であるが、既に感染している人には現実的な治療有益性がない。さらに、一部の特定のウイルスに対するワクチン（例えば、インフルエンザワクチン）は、新しいヒト型株が同定された後、それに対する適当なワクチンを充分な用量で作製するのに必要とされる時間のため、パンデミックでの死亡率に有意な影響を及ぼすことはおそらくない。アジュバントの使用によりワクチンの効力が増大し、広範なウイルスに対する保護がもたらされ得る。
【０００５】
そのため、本発明者らの抗ウイルス防御は、ほぼ排他的に抗ウイルス薬の使用に依存するものである。残念ながら、医学的に重要な多くのウイルス、特にＲＮＡウイルスは危険であり、モデル系で試験することができないか、または潜在的候補薬物の試験用に増殖させることができない。
【０００６】
現在使用されている抗ウイルス薬の多くはウイルス系ポリメラーゼ、プロテアーゼ、インテグラーゼ、侵入阻害薬として開発されたものである。しかしながら、ウイルスの増殖を阻害するために設計された薬物は、ウイルスの生活環が正常な宿主細胞機能に関与するため宿主細胞にも有害な影響を及ぼし得る。抗ウイルス介入に適した限定的なウイルス標的で、さらなる抗ウイルス薬の発見が行なわれている。そのため、ほぼ５０年の抗ウイル
ス研究にもかかわらず、抗ウイルス薬の保有量は依然として危険なほど少なく、世界中の市場で約３４種類の抗ウイルス薬しかなく、ほとんどがＨＩＶおよびヘルペスウイルスに対するものである。
【０００７】
さらに、ＨＣＶおよびＨＢＶなどのいくつかの慢性ウイルス疾患に対して現在使用されている処置選択肢は、依然として極めて限られており、課題がある。実際、治療の中止によるウイルスのリバウンド、薬物誘導性毒性、および抗ウイルス薬の選択的圧力下での耐性株の出現は、現在使用されている抗ウイルス療法における深刻な問題であり続けている。現在使用されている抗ウイルス療法でもたらされる抗ウイルス応答は不充分で持続不可能であるため、ウイルスの完全な根絶が達成されることは稀であり、よくても非常に少数の患者コホートにおいてである。宿主にコードされた機能を標的化する薬物の開発により、抗微生物薬の発見のための代替ストラテジーが得られる。
【０００８】
また、ウイルスは、宿主免疫応答を逃れるため、および薬物に対する耐性を発現するための利口なストラテジーを、さまざまな機構によって進化させ続けている。細胞は自身を微生物感染から、細胞内センサー、例えば、レチノイン酸誘導性遺伝子（ＲＩＧ−Ｉ）および他のＲＩＧ様タンパク質（ＲＬＲ）、ＭＤＡ５、ヌクレオチドオリゴマー化ドメインタンパク質−２（ＮＯＤ２および他のＮｏｄ様タンパク質（ＮＬＲ）によって保護している。病原体認識受容体（ｒｅｃｅｐｔｉｏｒ）と微生物の核酸またはペプチドとの相互作用によるこれらのタンパク質の活性化により、インターフェロンシグナル伝達経路で細胞を感染から保護するＩＦＮ産生がもたらされることが引き起こされる。実際、ＤＮＡウイルスおよびＲＮＡウイルスはどちらもＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）産生を阻害することが認識されており、それにより、ＩＦＮ応答を制御することが広範なウイルスの生存に必須であることが示唆される（３，４）。したがって、有効な抗ウイルス療法薬の開発は、各々が新規な多重作用機序を有する新しい類型の薬物（例えば、ウイルスの根絶のために宿主免疫応答を刺激するもの）の組合せの使用を伴うものでなければならない。同様に、細菌は、抗菌剤に対する耐性をもたらす特殊な機構を進化させている。したがって、有効な抗菌療法薬の開発は、各々が新規な多重作用機序を有する新しい類型の薬物（例えば、細菌の根絶のために宿主免疫応答を刺激するもの）の使用を伴うものでなければならない。多くの異なる型のがんが、抗がん剤に対する耐性を発現するために種々の機構を進化させている。したがって、有効な抗がん療法薬の開発は、各々が新規な多重作用機序を有する新しい類型の薬物（例えば、がんの根絶のために宿主免疫応答を刺激するもの）の組合せの使用を伴うものでなければならない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】WHO  REPORT:  Global  prevalence  of  hepatitis  A,  B,  C.  Weekly  Epidemiological  Record,  Vol  77,  6,  2002
【非特許文献２】Delwaide,  J.,  Gerard,  C.  Evidence-based  medicine  treatment  of  chronic  hepatitis  C.  Liege  study  Group  on  Viral  hepatitis.  Revue  medicale  de  Liege  55,  337,  2000
【非特許文献３】Sorrell,  M.  F.,  Belongia,  E.  A.,  Costa,  J.,  Gareen,  I.  F.,  Grem,  J.  L.,  Inadomi,  J.  M.,  Kern,  E.  R.,  McHugh,  J.  A.,  Peterson,  G.  M.,  Rein,  M.  F.,  Strader,  D.  B.,  Trotter,  H.  T.  National  Institutes  of  Health  Consensus  Development  Conference  Statement:  Management  of  Hepatitis  B.  Ann.  Int.  Med.  150,  204,  2009
【非特許文献４】Wild,  C.  P.,  Hall,  A.  J.  Primary  prevention  of  hepatocellular  carcinoma  in  developing  countries.  Mutation  Res.  462,  381,  2000
【非特許文献５】Liang,  T.  J.,  Rehermann,  B.,  Seeff,  L.  B.,  Hoofnagle,  J.  H.  Pathogenesis,  natural  history,  treatment,  and  prevention  of  hepatitis  C.  Ann.  Intern.  Med.  132,  296,  2000
【非特許文献６】Akira,  S.,  Uematsu,  S.,  Takeuchi,  O.  Pathogen  recognition  and  Innate  immunity.  Cell,  24,  783-801,  2006
【非特許文献７】Katze,  M.  G.,  He,  Y.,  Gale,  M.  Viruses  and  interferon:  A  fight  for  supremacy.  Nature  Reviews,  2,  675,  Sept  2002.
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
発明の要旨
一態様において、本発明により、予防剤として有用なヌクレオシド、短鎖オリゴヌクレオチド化合物もしくはその類似体、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体（以下、本明細書において「本発明の化合物」と称する）を提供する。別の態様では、本発明により、ワクチンアジュバントとして有用なヌクレオシド、短鎖オリゴヌクレオチド化合物もしくはその類似体、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体を提供する。
【００１１】
本発明の化合物には、例えば、式（Ｉ）：
【化１】
2018087243.tif 000002
（式中：
Ｒ１およびＲ２は各々、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アルキル（ａｋｙｌ）、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、複素環式、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリールアリール、または複素環式であり；
Ｒ３は、水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキルおよびＣ（Ｏ）ＮＨ−アリールから選択され；
ＹおよびＺは各々、独立してＯまたはＳであり；
Ｂ１およびＢ２は各々、独立して、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルまたは改変ヌクレオシドであり；
ｍ＝１〜６．
Ｒ４は独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキルおよびＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール、一リン酸基、二リン酸基、または三リン酸基である）
の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体が包含される。
【００１２】
一実施形態では、本発明の化合物は式（ＩＩ）：
【化２】
2018087243.tif 000003
（式中：
Ｘ＝非存在、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ、またはＳ；
Ｘ１＝非存在、Ｏ、またはＮＨ；
Ａ＝非存在、アリール、またはアラルキル；
ｎ＝０、１、２、３、４、または５；
Ｒ＝アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、複素環式（ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｉｃ）、Ｏ−アルキル、Ｏ−ヘテロアリール、またはステロイド系；
Ｒ１およびＲ２は各々、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アルキル、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、複素環式、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリールアリール、または複素環式であり；
Ｒ３は、水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキルおよびＣ（Ｏ）ＮＨ−アリールから選択され；
ＹおよびＺは各々、独立してＯまたはＳであり；
Ｂ１およびＢ２は各々、独立して、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルまたは改変ヌクレオシドであり；
ｍ＝１〜６；
Ｒ４は独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキルおよびＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール  一リン酸基、二リン酸基、または三リン酸基である）
の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である。
【００１３】
一実施形態では、本発明の化合物は下記の構造：
【化３】
2018087243.tif 000004
の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である。
【００１４】
別の実施形態では、本発明の化合物は下記の構造：
【化４】
2018087243.tif 000005
の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である。
【００１５】
また、本発明により、微生物感染症の処置の必要があると確認された被験体（または宿主）に有効量の本発明の化合物を投与することにより、被験体（または宿主）の微生物感染症を処置する方法を提供する。
【００１６】
別の態様では、本発明により、疾患、状態、感染またはウイルスに対する被験体（または宿主）の免疫機構の応答を改善する方法を提供する。該方法は、被験体に有効量の本発明の化合物をワクチンアジュバントとして投与することを含むものである。
【００１７】
該方法の一部の特定の実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｉ）の短鎖オリゴヌクレオチド化合物もしくはその類似体、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である。
【００１８】
他の実施形態では、本発明の化合物は、式（ＩＩ）の短鎖オリゴヌクレオチド化合物もしくはその類似体、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である。
【００１９】
一実施形態では、本発明の化合物は
【化５】
2018087243.tif 000006
または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である。
【００２０】
また、本発明により、宿主（または被験体）、例えばヒトのウイルス感染の予防および処置のための方法を提供する。該方法は有効量の本発明の化合物を投与することを含むものである。
【００２１】
さらに別の態様では、本発明により、有効量の本発明の化合物を投与することを含む、宿主（または被験体）、例えばヒトの細菌感染の予防および処置のための方法を提供する。
【００２２】
さらに、本発明により、宿主（または被験体）、例えばヒトの寄生虫感染の予防方法および処置方法であって、有効量の本発明の化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００２３】
なおさらには、本発明により、宿主に有効量の本発明の化合物を投与することによる宿主（被験体）、例えばヒトの真菌感染の予防および処置のための方法を提供する。
【００２４】
本発明の方法によれば、本発明の化合物は、ワクチン（ＢＣＧワクチンなど）または１種類以上のさらなる薬剤と一緒に投与され得る。すなわち、本発明の方法によれば、本発明の化合物は単独で、あるいはワクチンまたはさらなる薬剤（１種類もしくは複数種）と併用して、または逐次的に投与され得る。
【００２５】
一実施形態では、本発明の化合物とワクチンが、微生物感染症を処置または予防するために投与される。
【００２６】
別の実施形態では、本発明の化合物は、微生物感染症を処置または予防するための他の抗微生物剤と併用して投与される。
【００２７】
別の実施形態では、本発明の方法および化合物はウイルスに対して使用される。
【００２８】
さらなる一実施形態では、該方法および化合物はがんを処置または予防するために使用される。
【００２９】
さらに、本発明により、本明細書に示した状態、疾患、感染またはウイルスの処置または予防のための医薬組成物およびキットを提供する。医薬組成物は、治療有効量の本発明の化合物および薬学的に許容され得る賦形剤を含むものである。本発明のキットは、治療有効量の本発明の化合物、および該化合物を本明細書に示した状態、疾患、感染またはウ
イルスの処置または予防のために投与するための書面の使用説明書を含むものである。また、本発明により、本明細書における状態、疾患、感染またはウイルスの処置または予防のためのパッケージ化医薬品および物品を提供する。
【００３０】
また、さらに本発明により、本明細書に記載のような種々の治療的用途に有用な化合物の設計および合成を提供する。本発明の他の特長および利点は、詳細な説明および特許請求の範囲から自明となろう。
【００３１】
本発明の前述の、および他の目的、特長および利点は、添付の図面に示したような本発明の好ましい実施形態の以下のより具体的な説明から自明となろう。図面中、同様の参照文字は、異なる図において同じ部分を示す。図面は必ずしも一定の縮尺ではなく、本発明の原理の実例を示すことに重点を置いている。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
微生物感染症の処置の必要があると確認された被験体に有効量の予防剤を投与することにより、微生物感染症を処置する方法であって、前記予防剤が短鎖オリゴヌクレオチド化合物もしくはその類似体、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、方法。
（項目２）
被験体に有効量のワクチンアジュバントを投与することを含む、疾患、状態、感染またはウイルスに対する該被験体の免疫機構の応答を改善する方法であって、該ワクチンアジュバントが短鎖オリゴヌクレオチド化合物もしくはその類似体、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、方法。
（項目３）
前記短鎖オリゴヌクレオチド化合物またはその類似体が式（Ｉ）：
【化１８】
2018087243.tif 000007
（式中：
Ｒ１およびＲ２は各々、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アルキル（ａｋｙｌ）、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、複素環式、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリールアリール、または複素環式であり；
Ｒ３は、水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキルおよびＣ（Ｏ）ＮＨ−アリールから選択され；
ＹおよびＺは各々、独立してＯまたはＳであり；
Ｂ１およびＢ２は各々、独立して、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルまたは改変ヌクレオシドであり；
ｍ＝１〜６；
Ｒ４は独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキルおよびＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール  一リン酸基、二リン酸基、または三リン酸基である）
の化合物である、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記短鎖オリゴヌクレオチド化合物またはその類似体が式（ＩＩ）：
【化１９】
2018087243.tif 000008
（式中
Ｘ＝非存在、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ、またはＳ；
Ｘ１＝非存在、Ｏ、またはＮＨ；
Ａ＝非存在、アリール、またはアラルキル；
ｎ＝０、１、２、３、４、または５；
Ｒ＝アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、複素環式、Ｏ−アルキル、Ｏ−ヘテロアリール、またはステロイド系；
Ｒ１およびＲ２は各々、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アルキル（ａｋｙｌ）、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、複素環式、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリールアリール、または複素環式であり；
Ｒ３は、水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキルおよびＣ（Ｏ）ＮＨ−アリールから選択され；
ＹおよびＺは各々、独立してＯまたはＳであり；
Ｂ１およびＢ２は各々、独立して、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルまたは改変ヌクレオシドであり；
ｍ＝１〜６；
Ｒ４は独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキルおよびＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール  一リン酸基、二リン酸基、または三リン酸基である）
の化合物である、項目１または２に記載の方法。
（項目５）
前記短鎖オリゴヌクレオチド化合物またはその類似体が、下記の構造：
【化２０】
2018087243.tif 000009
の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、項目１または２に記載の方法。
（項目６）
前記短鎖オリゴヌクレオチド化合物またはその類似体が、下記の構造：
【化２１】
2018087243.tif 000010
の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、項目１または２に記載の方法。
（項目７）
前記方法がワクチンを投与することを含む、項目１または２に記載の方法。
（項目８）
前記ワクチンがＢＣＧワクチンである、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記予防剤またはワクチンアジュバントが式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記予防剤またはワクチンアジュバントが式（ＩＩ）の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、項目８に記載の方法。
（項目１１）
前記予防剤またはワクチンアジュバントが下記の構造：
【化２２】
2018087243.tif 000011
の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、項目８に記載の方法。
（項目１２）
前記予防剤またはワクチンアジュバントが下記の構造：
【化２３】
2018087243.tif 000012
の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、項目８に記載の方法。
（項目１３）
前記ワクチンアジュバントが、微生物感染症を処置または予防するためのワクチンとともに投与される、項目２に記載の方法。
（項目１４）
前記方法が、ウイルスに対する前記被験体の免疫機構の応答を改善するために使用される、項目７に記載の方法。
（項目１５）
前記方法が、がんに対する免疫機構の応答を改善するために使用される、項目７に記載の方法。
（項目１６）
被験体のウイルス感染症の予防および処置のための方法であって、有効量の化合物を該被験体に投与することを含み、該化合物が式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、方法。
（項目１７）
ワクチンまたは１種類以上のさらなる薬剤を前記化合物と併用して、または逐次的に投与することを含む、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
該化合物が
【化２４】
2018087243.tif 000013
または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
被験体の細菌感染症の予防および処置のための方法であって、有効量の化合物を該被験体に投与することを含み、該化合物が式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、方法。
（項目２０）
ワクチンまたは１種類以上のさらなる薬剤を前記化合物と併用して、または逐次的に投与することを含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記化合物が
【化２５】
2018087243.tif 000014
または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
被験体の真菌感染症の予防および処置のための方法であって、有効量の化合物を該被験体に投与することを含み、該化合物が式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、方法。
（項目２３）
ワクチンまたは１種類以上のさらなる薬剤を前記化合物と併用して、または逐次的に投与することを含む、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記化合物が
【化２６】
2018087243.tif 000015
または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
被験体の寄生虫感染症の予防および処置のための方法であって、有効量の化合物を該被験体に投与することを含み、該化合物が式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、方法。
（項目２６）
該方法が、ワクチンまたは１種類以上のさらなる薬剤を前記化合物と併用して、または逐次的に投与することを含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記化合物が
【化２７】
2018087243.tif 000016
または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である、項目２５に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、未処理（ＵＴ）およびＳＭＮＨ化合物処理ヒト肺上皮細胞（ＨＬＥ  Ａ５４９細胞）におけるインターフェロン調節因子−３（ＩＲＦ３）−ルシフェラーゼレポーター遺伝子の活性化を示す。
【図２】図２は、ＳＭＮＨ化合物（ＳＢ  ４０およびＳＢ  １Ｂ［ＳＢ  ４４−１］）によるＩＲＦ３活性化がＮＯＤ２活性化によって媒介されることを示す。
【図３】図３は、ＨＬＥ細胞でのＳＢ  ４４によるＲＩＧ−Ｉの活性化後のＩＲＦ３誘導を示す。
【図４】図４は、ＳＢ  ４４によるＲＩＧ−ＩとＮＯＤ２の活性化後の転写因子ＮＦ−ＫＢの誘導を示す。
【図５】図５は、ＩＲＦ３の誘導により、ＩＦＮシグナル伝達カスケードの重要中間体であるリン酸化ＩＲＦ３の形成がもたらされることを示す。
【図６】図６は、ＳＢ  １ＢによるＩＲＦ３誘導がＮＯＤ２活性化によって媒介されることを示す；ＳＢ  ４０はＳＢ  ４４の活性代謝産物である。
【図７】図７は、ＳＭＮＨ化合物（ＳＢ  ４４およびＳＢ  ３０２，ａ，オキサレート形態）がヒト肺上皮Ａ５４９細胞でインターフェロン−β（ＩＦＮ−β）の産生を誘導することを示す。
【図８】図８は、ＳＢ  １Ｂ（「ＳＢ−４４−１−Ｄ」と示している）処理により肺上皮Ａ５４９細胞でＩＦＮ−βの産生がもたらされることを示す。
【図９】図９は、ＳＢ  １Ｂ（「ＳＢ−４４−１−Ｄ」と示している）による応答遺伝子ＲＩＧ−ＩとＮＯＤ２の誘導を示す；ＳＢ  ５０はＮＯＤ２を活性化させず、陰性対照として使用している。
【図１０Ａ】図１０（ａ〜ｄ）は、ＳＭＮＨ化合物がマクロファージにおいてペプチド抗原−８５Ｂのインビトロ提示を増強することを示し、これはＭＨＣ−ＩＩ発現の増大と相関する（ＳＢ  ４４はＳＢ  １Ａと示している）。
【図１０Ｂ】図１０（ａ〜ｄ）は、ＳＭＮＨ化合物がマクロファージにおいてペプチド抗原−８５Ｂのインビトロ提示を増強することを示し、これはＭＨＣ−ＩＩ発現の増大と相関する（ＳＢ  ４４はＳＢ  １Ａと示している）。
【図１０Ｃ】図１０（ａ〜ｄ）は、ＳＭＮＨ化合物がマクロファージにおいてペプチド抗原−８５Ｂのインビトロ提示を増強することを示し、これはＭＨＣ−ＩＩ発現の増大と相関する（ＳＢ  ４４はＳＢ  １Ａと示している）。
【図１０Ｄ】図１０（ａ〜ｄ）は、ＳＭＮＨ化合物がマクロファージにおいてペプチド抗原−８５Ｂのインビトロ提示を増強することを示し、これはＭＨＣ−ＩＩ発現の増大と相関する（ＳＢ  ４４はＳＢ  １Ａと示している）。
【図１１Ａ】図１１（ａ〜ｅ）：ａ）はマウスでのワクチン実験のモデルを示す；ｂ〜ｅ）は、ＮＯＤ２活性化化合物ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂが、マウスにおいて結核に対するＢＣＧワクチンの有効性追加刺激するためのアジュバントとしてムラミルジペプチド（ＭＤＰ）よりも良好であることを示すグラフである。
【図１１Ｂ】図１１（ａ〜ｅ）：ａ）はマウスでのワクチン実験のモデルを示す；ｂ〜ｅ）は、ＮＯＤ２活性化化合物ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂが、マウスにおいて結核に対するＢＣＧワクチンの有効性追加刺激するためのアジュバントとしてムラミルジペプチド（ＭＤＰ）よりも良好であることを示すグラフである。
【図１１Ｃ】図１１（ａ〜ｅ）：ａ）はマウスでのワクチン実験のモデルを示す；ｂ〜ｅ）は、ＮＯＤ２活性化化合物ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂが、マウスにおいて結核に対するＢＣＧワクチンの有効性追加刺激するためのアジュバントとしてムラミルジペプチド（ＭＤＰ）よりも良好であることを示すグラフである。
【図１１Ｄ】図１１（ａ〜ｅ）：ａ）はマウスでのワクチン実験のモデルを示す；ｂ〜ｅ）は、ＮＯＤ２活性化化合物ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂが、マウスにおいて結核に対するＢＣＧワクチンの有効性追加刺激するためのアジュバントとしてムラミルジペプチド（ＭＤＰ）よりも良好であることを示すグラフである。
【図１１Ｅ】図１１（ａ〜ｅ）：ａ）はマウスでのワクチン実験のモデルを示す；ｂ〜ｅ）は、ＮＯＤ２活性化化合物ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂが、マウスにおいて結核に対するＢＣＧワクチンの有効性追加刺激するためのアジュバントとしてムラミルジペプチド（ＭＤＰ）よりも良好であることを示すグラフである。
【図１２Ａ−１】図１２は、ＮＯＤ２活性化化合物ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  ４４のＲｐ異性体）が、ＭＤＰまたはインタクトなＢＣＧ桿菌のいずれかとの併用で、マクロファージにおいてカスパーゼ依存性機構によってＩＬ−１βのみを誘導することを示す。
【図１２Ａ−２】図１２は、ＮＯＤ２活性化化合物ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  ４４のＲｐ異性体）が、ＭＤＰまたはインタクトなＢＣＧ桿菌のいずれかとの併用で、マクロファージにおいてカスパーゼ依存性機構によってＩＬ−１βのみを誘導することを示す。
【図１２Ｂ−１】図１２は、ＮＯＤ２活性化化合物ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  ４４のＲｐ異性体）が、ＭＤＰまたはインタクトなＢＣＧ桿菌のいずれかとの併用で、マクロファージにおいてカスパーゼ依存性機構によってＩＬ−１βのみを誘導することを示す。
【図１２Ｂ−２】図１２は、ＮＯＤ２活性化化合物ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  ４４のＲｐ異性体）が、ＭＤＰまたはインタクトなＢＣＧ桿菌のいずれかとの併用で、マクロファージにおいてカスパーゼ依存性機構によってＩＬ−１βのみを誘導することを示す。
【図１３】図１３（ａ〜ｂ）は、ＮＯＤ２活性化ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  ４４のＲｐ異性体）がＢＣＧワクチンとの併用で、マウスにおいて結核の再抗原刺激に対する保護を誘導することを示し、長期保護が示唆される。
【図１４】図１４は、ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  ４４のＲｐ異性体）に誘導されたＭＰＥＣが、マウスにおいて強力なエフェクターＴ細胞として再生されることにより長期保護をもたらし得ることを確認するために開発したモデルを示す。
【図１５】図１５（ａ〜ｂ）は、ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）またはＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  ４４のＲｐ異性体）とＢＣＧワクチンとの併用により、結核での再抗原刺激に対してより良好なリコール応答を生じさせる能力が保持されることを示す。
【図１６Ａ】図１６は、ＮＯＤ２活性化ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  ４４のＲｐ異性体）化合物がＢＣＧワクチンとの併用で、結核再抗原刺激したマウスの肺において抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞のロバストな増殖を誘導することを示す。
【図１６Ｂ】図１６は、ＮＯＤ２活性化ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  ４４のＲｐ異性体）化合物がＢＣＧワクチンとの併用で、結核再抗原刺激したマウスの肺において抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞のロバストな増殖を誘導することを示す。
【図１６Ｃ】図１６は、ＮＯＤ２活性化ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  ４４のＲｐ異性体）化合物がＢＣＧワクチンとの併用で、結核再抗原刺激したマウスの肺において抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞のロバストな増殖を誘導することを示す。
【図１６Ｄ】図１６は、ＮＯＤ２活性化ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４でもある）およびＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  ４４のＲｐ異性体）化合物がＢＣＧワクチンとの併用で、結核再抗原刺激したマウスの肺において抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞のロバストな増殖を誘導することを示す。
【図１７】図１７は、本発明の化合物と併用した場合のＢＣＧで処理したＰＢＭＣにおけるインターフェロンの誘導を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
発明の詳細な説明
一態様において、本発明は、本明細書に示した化合物および被験体の微生物感染症の処置のためのかかる化合物の使用方法を特色とする。別の態様では、本発明は、疾患、状態、感染またはウイルスに対する被験体の免疫機構の応答を改善するための化合物、組成物および方法に関する。
【００３４】
また、本発明により、宿主（または被験体）に有効量の本発明の化合物を投与することによる、宿主（または被験体）、例えばヒトのウイルス感染、細菌感染、寄生虫感染または真菌感染の予防および処置のための方法を提供する。
【００３５】
多剤耐性Ｍｔｂ（ＭＤＲ−Ｍｔｂ）は、現在使用されている抗ＴＢ薬の多く、例えば、イソニアジド、リファンピシン、カナマイシンなどに対して耐性である。ＷＨＯは、世界中で５０００万人にのぼる人がＭＤＲ−Ｍｔｂに感染しているであろうと推定している。薬物処置／薬物耐性における問題のため、結核を予防または抑制するためのワクチン接種が次第に重要になってきている。現在、ＢＣＧワクチンは、小児期ＴＢに対してのみ可変的に保護的であり、成人疾患には保護がもたらされない。したがって、より強力なＢＣＧワクチンが必要とされている。ＢＣＧの効力を追加刺激するためのアプローチの１つはアジュバントと併用することである。アジュバントは、ワクチンの免疫原性を向上、調節および改善し得る化合物である。また、アジュバントにより標的抗原の必要投薬量を低減させることができ、抗原特異的免疫応答（Ｔｈ１応答およびＴｈ２応答など）を定性的様式で調節することができる。自然免疫における最近の進歩により、ＴＬＲ、ＲＩＧ−ＩおよびＮＬＲ、特にＮＯＤ２は、自然免疫応答を刺激してアジュバント様活性を向上させるさまざまな核酸リガンドを認識することが示されている。
【００３６】
脊椎動物系は、絶えず微生物の侵入による攻撃下にあり、病原体の排除のため免疫媒介性防御が進化してきた。哺乳動物の免疫機構は自然免疫成分と獲得免疫成分を含む。自然免疫機構では、限られた数の生殖細胞系統にコードされた病原体認識受容体（ＰＲＲ）によって微生物が認識される（３，４）。マクロファージおよび樹状細胞などの食細胞が自然免疫応答を媒介している。獲得免疫応答は、遺伝子再編成などの機構によって生成した抗原特異的受容体を有するリンパ球が関与する特異性を特徴とする。自然免疫は、肝臓の損傷、線維症および再生の調節において重要な役割を果たす。例えば、インターフェロンによるナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）の活性化は肝線維症を処置するための新規なストラテジーであり得る。これは、ＮＫ細胞の活性化によって活性型肝星状細胞（ＨＳＣ）が特異的に死滅され得、それにより肝線維症および肝臓腫瘍形成が改善され得るためである。したがって、本発明において開示したオリゴヌクレオチド類似体は、肝線維症および肝臓がん進行の抑止において有用性を有し得る。
【００３７】
また、微生物は、宿主細胞を感染から保護する免疫応答を逃れるための利口なストラテジーを進化させている。実際、ＤＮＡウイルスおよびＲＮＡウイルスはどちらも細胞内ＩＦＮ産生（Ｉ型、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β）を阻害する。細胞内ＩＦＮは強力な抗ウイルスサイトカインであり、その発現／産生は非感染細胞の細胞質に存在する転写因子ＩＲＦ３（ＩＦＮ調節因子３）によって媒介される。ＩＲＦ３は、細胞が感染し、ウイルスの成分（病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰＳ，例えば、ウイルスゲノム、ウイルスタンパク質など）としても知られている）が特殊なウイルスセンサーまたはパターン認識受容体（ＰＲＲ）によって認識されると活性化される。活性型ＩＲＦ３は核に移行してＩＦＮ遺伝子発現をトランス活性化する。ＩＦＮ産生は、保護的抗ウイルス効果（パラクリンおよびオートクリン活性による）をさまざまな機構によって、例えば（ｉ）自然免疫応答および適応免疫応答の活性化、（ｉｉ）抗ウイルス因子および有益な炎症促進因子の産生による細胞内の抗ウイルス状態の誘導、ならびに（ｉｉｉ）ウイルス感染細胞のアポトーシスの制御によって誘導する。したがって、ＰＲＲはＩＦＮ応答の必須成分である。ごく最近、ヌクレオチドオリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）タンパク質ファミリーの構成員であるＮＯＤ２は、ＲＳＶおよびインフルエンザＡなどの一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）ウイルスを検出するＰＲＲであることがわかった。興味深いことに、ウイルスセンサーＲＩＧ−Ｉと同様、ＮＯＤ２の活性化によってもＩＦＮ産生のシグナル伝達カスケードの誘発およびＮＦ−κβの誘導がもたらされ、これにより炎症促進応答の制御が向上し、ＩＦＮの抗ウイルス作用が増強される。そのため、ＮＯＤ２は、広範なｓｓＲＮＡウイルス（ＲＳＶおよびインフルエンザＡなど）を検出するウイルスセンサーであり、抗ウイルス薬の発見のため、および抗ウイルス耐性に対処するための特化された宿主標的を提示する。
【００３８】
ＮＯＤ２と同様、ＲＩＧ−Ｉは、二本鎖ウイルスＲＮＡをＰＡＭＰとして認識して１型インターフェロン免疫防御を賦活し、それによりウイルスの複製を阻害し、またウイルス感染に対する細胞の許容を抑制する宿主のサイトゾルタンパク質である（６〜１５）。ＲＩＧ−Ｉは、広範なＲＮＡウイルス、例えば、フラビウイルス、例えばＣ型肝炎ウイルス、センダイウイルス、インフルエンザウイルスならびに水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルスおよび日本脳炎ウイルスを検出するウイルスセンサーであり、広域抗ウイルス活性のための特化された宿主標的を提示する。ＨＢＶはＤＮＡウイルスであるがＤＮＡ合成の開始のためにプレゲノムＲＮＡ鋳型を使用し、したがって、ＲＩＧ−ＩはおそらくＨＢＶ
ｐｇＲＮＡの受容体であり得ることは注目に値する。
【００３９】
一部の特定のジヌクレオチド組成物は、ＲＩＧ−Ｉ経路の活性化による自然免疫の刺激およびインターフェロン産生の誘導の潜在能を有することが見出された。また、かかる化合物はウイルス感染に対して予防的に有用であり得、およびワクチンのアジュバントとして有用であり得る。
【００４０】
ウイルスセンサーＲＩＧ−Ｉは、Ｃ末端調節ドメイン（ＲＤ）、２つの末端カスパーゼ活性化リクルートドメイン（ＣＡＲＤＳ）ならびに中央のＡＴＰアーゼドメインからなる多量体型サイトゾルタンパク質である。ウイルスの二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）および５’−三リン酸は、ＲＩＧ−Ｉが病原体のＲＮＡ（三リン酸を有する、または有しないｄｓＲＮＡ）を宿主のＲＮＡ（これは通常、末端に「Ｃａｐ」修飾を有する）と識別することを可能にする２つのＰＡＭＰである（６〜１４）。さらに、ＲＩＧ−Ｉは、ウイルスのＲＮＡを移行現象によって感知する能力を有する（Ｍｙｏｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２３，１０７０．２００９）。ＲＩＧ−Ｉ移行およびウイルスゲノムのｄｓＲＮＡでの反復シャトリングは、ＲＩＧ−Ｉがコンホメーションの変化を受け、そのＡＴＰアーゼを活性化させ、ユビキチン化のためにＣＡＲＤＳを曝す誘発因子である。次の工程では、ＣＡＲＤＳがミトコンドリア抗ウイルスシグナル伝達（ＭＡＶＳ）［インターフェロンβ刺激因子［（ＩＰＳ−１）またはＶＩＳＡとしても知られている］と相互作用し、Ｉ型ＩＦＮ発現（ＩＦＮ−α，β）をもたらす下流シグナル伝達を誘起する。
【００４１】
ＮＯＤ２およびＲＩＧ−Ｉは多量体型タンパク質であり、これらは構造的および組織的に非常に類似している。したがって、ＲＩＧ−Ｉと同様、ＮＯＤ２はＣＡＲＤドメインを含んでいる。また、ＲＩＧ−ＩとＮＯＤ２はどちらも、ＮＢＤ（ヌクレオチド結合ドメイン）（ＮＯＤ２の場合）およびヘリカーゼ（ＲＩＧ−Ｉの場合）ドメインに存在するヌクレオチド結合ポケットを有する。分子モデル設計試験は、一部の特定のジヌクレオチド組成物が、ＮＢＤに結合するヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）構造と構造的類似性を有することを示す。本発明者らは、短鎖オリゴヌクレオチドが、ＮＯＤ２（およびＲＩＧ−Ｉ）のＮＢＤに結合し、下流の抗ウイルス作用のための活性化を引き起こすＮＴＰ模倣物として作用するという仮説をたてている。
【００４２】
本発明者（ら）は、本発明のヌクレオシド、短鎖オリゴヌクレオチド化合物またはその類似体が、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、非ＴＬＲ受容体、例えばレチノイン酸誘導性遺伝子−１（ＲＩＧ−Ｉ）、およびヌクレオチドオリゴマー化タンパク質（ＮＯＤ）（集合的にＴＬＲ、ＲＬＲおよびＮＬＲとして知られている）が関与する免疫経路を調節し得ることを見出した。これらの経路がそのそれぞれのリガンドによって活性化されると、種々のサイトカインおよびケモカイン、例えば、インターロイキン、インターフェロン、ＮＦ−ＫＢ、ＴＮＦ−αなどの産生が誘導され得、また、抗微生物活性を有する一部の特定の細胞内タンパク質の誘導が引き起こされ、それにより抗微生物免疫がもたらされ得る。逆に、本発明者（ら）は、炎症経路の阻害を引き起こし、自己免疫疾患に有益な効果をもたらすための化合物を設計した。
【００４３】
本発明者（ら）は、予期せずに、本発明によるヌクレオシド、短鎖オリゴヌクレオチド化合物およびその類似体がワクチンのアジュバントとして使用され得ることを見出した。本発明の化合物は、細菌因子およびウイルス因子によって引き起こされるさまざまな感染性疾患に対して治療有用性を有する。また、本発明の化合物は、自己免疫疾患、例えばアレルギー、喘息、炎症性障害および他の疾患、例えばがんの処置または予防にも有用である。
【００４４】
したがって、本発明により、本明細書に示した種々の状態、疾患、感染またはウイルスを処置または予防するための方法を提供する。
【００４５】
定義
本発明がより容易に理解され得るように、まず、本明細書において便宜上、一部の特定の用語を定義し、まとめて示す。
【００４６】
本発明の化合物は、「天然」核酸、すなわち、天然ヌクレオシド間結合または核酸塩基Ｇ、Ｃ、Ｔ、Ｕ、Ａなどに１つ以上の改変を含むものである。改変としては、例えば、ヌクレオチド間結合、塩基または糖部分の改変が挙げられる。
【００４７】
ヌクレオシド単位は国際的に認められた線画表示法によって表される。以下の例において、２’−置換リボヌクレオシドを慣用的な構造および対応する線画形式の両方で表す。
【化６】
2018087243.tif 000017
【００４８】
Ｂ１およびＢ２に結合しておりαまたはβＮ−またはＣ−ヌクレオシドをもたらす糖単位としては、限定されないが、フラノース、デオキシリボフラノース、リボース、および
アラビノースが挙げられる。
【００４９】
用語「投与」および「投与する」には、意図した機能を発揮させるための化合物（１種類または複数種）を被験体に導入する経路が包含される。使用され得る投与経路の例としては、注射（皮下、静脈内、非経口、腹腔内、髄腔内）、経口、吸入、経直腸および経皮が挙げられる。医薬調製物には、もちろん、各投与経路に適した形態が付与される。例えば、本調製物は、錠剤またはカプセル剤の形態で、注射、吸入、ローション剤もしくは軟膏による局所的で；および坐剤による経直腸で投与される。経口投与が好ましい。注射はボーラスであってもよく、連続輸注であってもよい。投与経路に応じて、意図した機能の発揮能に有害な影響を及ぼし得る天然条件から保護するために、該化合物は、選択した物質でコーティングされ得るか、または選択した物質中に配設され得る。
【００５０】
該化合物は単独で、または上記のいずれかの別の薬剤（例えば、ワクチン）もしくは薬学的に許容され得る担体とともに、または両方で投与され得る。該化合物は該別の薬剤の投与前に投与してもよく、該薬剤と同時に投与してもよく、該薬剤の投与後に投与してもよい。また、さらに該化合物を、インビボで活性代謝産物に、またはより活性な代謝産物に変換されるプロフォーム（ｐｒｏｆｏｒｍ）で投与してもよい。
【００５１】
用語「アリール」は、本明細書で用いる場合、１つまたは２つの芳香族環を有する単環式または多環式の炭素環式の環系、例えば限定されないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、イデニル（ｉｄｅｎｙｌ）などをいう。
【００５２】
用語「ヘテロアリール」は、本明細書で用いる場合、５〜１０個の環内原子を有する単環式または多環式（例えば、二環式もしくは三環式もしくはそれ以上）の芳香族原子団または環をいい、該環内原子のうち１個以上の環内原子が、例えばＳ、ＯおよびＮから選択され；ゼロ個、１個または２個の環内原子が、例えばＳ、ＯおよびＮから独立して選択されるさらなるヘテロ原子であり；残りの環内原子が炭素であり、ここで、該環内に含まれたＮまたはＳ（あれば）は任意選択で酸化されていてもよい。ヘテロアリールとしては、限定されないが、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニルなどが挙げられる。
【００５３】
本発明によれば、本明細書に記載のアリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールはいずれも、任意の芳香族基であり得る。芳香族基は置換されていても非置換であってもよい。
【００５４】
用語「アルキル」は、本明細書で用いる場合、それぞれ１〜６個または１〜１２個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素原子団をいう。Ｃ１〜Ｃ６アルキル原子団の例としては、限定されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチルおよびｎ−ヘキシル原子団が挙げられ；Ｃ１〜Ｃ１２アルキル原子団の例としては、限定されないが、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシル原子団が挙げられる。
【００５５】
用語「アラルキル」または「アリールアルキル」は、アリール置換アルキル原子団、例えば、ベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、フェニルエチル、およびジフェニルエチルを包含している。
【００５６】
用語「複素環式」は、本明細書で用いる場合、非芳香族の５−、６−もしくは７−員の環または二環式もしくは三環式の縮合系の基をいい、このとき（ｉ）各環は、酸素、イオ
ウおよび窒素から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでおり、（ｉｉ）各５員環は０〜１つの二重結合を有し、各６員環は０〜２つの二重結合を有し、（ｉｉｉ）窒素およびイオウヘテロ原子は任意選択で酸化されていてもよく、（ｉｖ）窒素ヘテロ原子は任意選択で第４級化されていてもよく、（ｉｖ）上記の環のいずれかがベンゼン環と縮合していてもよく、（ｖ）残りの環内原子は炭素原子であり、これは任意選択でオキソ置換型であってもよい。代表的なヘテロシクロアルキル基としては、限定されないが、［１，３］ジオキソラン、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル、およびテトラヒドロフリルが挙げられる。かかる複素環式基は、さらに置換されていてもよい。
【００５７】
用語「シクロアルキル」は、本明細書で用いる場合、単環式または多環式の飽和炭素環式の環化合物から１個の水素原子を除去することによって誘導される一価基を表す。例としては、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、およびビシクロ［２．２．２］オクチルが挙げられる。
【００５８】
用語「置換アリール」、「置換アルキル」、「シクロアルキル」は、本明細書で用いる場合、先に定義したアリール、アルキルおよびシクロアルキル基の１、２または３個またはそれ以上の水素原子が置換基で、例えば限定されないが、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、保護ヒドロキシル、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＨ２、保護アミノ、−ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨ−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨ−アリール、−ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ジアルキルアミノ、−ジアリールアミノ、−ジヘテロアリールアミノ、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−Ｏ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−Ｏ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−Ｏ−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−ＣＯＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＣＯＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＣＯＮＨ−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−ＣＯＮＨ−アリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＣＯＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＯＣＯ２−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯ２−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯ２−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯ２−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−ＯＣＯ２−アリール、−ＯＣＯ２−ヘテロアリール、−ＯＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＯＣＯＮＨ２、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＯＣＯＮＨ−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−ＯＣＯＮＨ−アリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロアリール、−ＯＣＯＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣＯ２−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣＯ２−アリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＣＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロア
リール、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＣ（ＮＨ）−アリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロアリール、−ＮＨＣ（ＮＨ）−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−アリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロアリール、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ（Ｏ）−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）−アリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）−ヘテロシクロアルキル  −ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＳＯ２ＮＨ−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−ＳＯ２ＮＨ−アリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロアリール、−ＳＯ２ＮＨ−ヘテロシクロアルキル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−ＮＨＳＯ２−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−ＮＨＳＯ２−アリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロアリール、−ＮＨＳＯ２−ヘテロシクロアルキル、−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、−アリール、−アリールアルキル、−ヘテロアリール、−ヘテロアリールアルキル、−ヘテロシクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、ポリアルコキシアルキル、ポリアルコキシ、−メトキシメトキシ、−メトキシエトキシ、−ＳＨ、−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ１２−アルキル、−Ｓ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ−Ｃ２〜Ｃ１２−アルケニル、−Ｓ−Ｃ３〜Ｃ１２−シクロアルキル、−Ｓ−アリール、−Ｓ−ヘテロアリール、−Ｓ−ヘテロシクロアルキル、またはメチルチオメチルで独立して置き換えられることにより置換されたものをいう。該アリール、ヘテロアリール、アルキルなどは、さらに置換されていてもよいことは理解されよう。
【００５９】
用語「ステロイド系」は、本明細書で用いる場合、１７の炭素原子が４つの環内に配列された基本部分を有する天然に存在するか、または合成の数多くの任意の脂溶性有機化合物をいい、ステロールおよび胆汁酸、副腎ホルモンおよび性ホルモン、一部の特定の天然薬物、例えば、ジギタリス化合物、ならびに一部の特定のビタミン類の前駆体が挙げられる。ステロイド系構造の例としては、限定されないが、コレステロール、コレスタノール、３α−シクロ−５−α−コレスタン−６−β−オール、コール酸、コレステリルホルミエート（ｆｏｒｍｉａｔｅ）、コレスタニルホルミエートが挙げられる。
【００６０】
用語「改変ヌクレオシド」は、本明細書で用いる場合、改変された複素環式塩基、改変された糖部分またはその組合せを含む任意のヌクレオシドをいう。一部の実施形態では、改変ヌクレオシドは、本明細書に記載のような非天然のピリミジンまたはプリンヌクレオシドである。改変ヌクレオシドの例としては、限定されないが、２’−置換リボヌクレオシド  アラビノヌクレオシドまたは２’−デオキシ−２’−フロウロ（ｆｌｏｕｒｏ）アラビノシド、デアザ−アデニン、デアザグアニンが挙げられる。
【００６１】
本発明の解釈上、用語「短鎖オリゴヌクレオチド（１つまたは複数）」は、１〜約６つ
の連結されたヌクレオシド単位で形成されたモノ、ジまたはポリヌクレオシドをいう。かかる短鎖ヌクレオチドは、既に存在している核酸供給源から得たもの（例えば、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ）であってもよいが、好ましくは、合成方法によって作製したものである。ヌクレオシド残基は互いに、任意の既知の数多くのヌクレオシド間結合によってカップリングされ得る。かかるヌクレオシド間結合は、改変型であっても非改変型であってもよく、限定されないが、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホネート、アルキルホスホノチオエート、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、シロキサン、カーボネート、カルボアルコキシ、アセトアミデート（ａｃｅｔａｍｉｄａｔｅ）、カルバメート、モルホリノ、ボラノ、チオエーテル、架橋型ホスホルアミデート、架橋型メチレンホスホネート、架橋型ホスホロチオエートおよびスルホンヌクレオシド間結合が挙げられる。また、用語「短鎖ヌクレオチド」は、１つ以上の立体特異的ヌクレオシド間結合（例えば、（ＲＰ）−もしくは（ＳＰ）−ホスホロチオエート、アルキルホスホネートまたはホスホトリエステル結合）を有するポリヌクレオシドも包含している。本発明の短鎖ヌクレオチドは、かかる任意のヌクレオシド間結合（リン酸基を含むものであれ、含まないものであれ）を含むものである。一部の特定の好ましい実施形態では、このようなヌクレオシド間結合は、改変型であっても非改変型であってもよく、限定されないが、ホスホジエステル、ホスホロチオエートもしくはホスホロジチオエート結合、またはその組合せが挙げられる。
【００６２】
また、用語「短鎖ヌクレオチド（１つまたは複数）」は、さらなる置換基、例えば限定されないが、タンパク質基、親油性基、インターカレート剤、ジアミン、葉酸、コレステロールおよびアダマンタンも包含している。
【００６３】
また、用語「短鎖ヌクレオチド（１つまたは複数）」は、任意の他の核酸塩基を含有しているポリマー、例えば限定されないが、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、リン酸基を有するペプチド核酸（ＰＨＯＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）も包含している。
【００６４】
ＰＮＡおよびＬＮＡの例を以下に示す：
【化７】
2018087243.tif 000018
【００６５】
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシド間結合、糖鎖基および複素環式塩基を含む、核酸（ＤＮＡもしくはＲＮＡまたはその類似体、例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）およびロックド核酸（ＬＮＡ）のいずれであれ）のサブユニット、ならびにかかるサブユニットの類似体をいう。「ヌクレオシド」は、糖鎖基と複素環式核酸塩基を含む核酸サブユニットをいう。本明細書で用いる場合、用語「ヌクレオシド」および「ヌクレオチド」は、天然に存在するヌクレオチド間結合（「ヌクレオチド」に関して）、例えば、ホスホジエステルヌクレオチド間結合；天然に存在する糖部分、例えば、リボース部分およびデオキシリボー
ス部分；ならびに天然に存在する核酸塩基、例えば、プリン塩基およびピリミジン塩基、例えば、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）もしくはウラシル（Ｕ）を含む部分だけでなく、改変ヌクレオチド間結合、改変糖部分および改変されたプリン塩基およびピリミジン塩基もしくはその類似体または改変型および非改変のヌクレオチド間結合、糖部分ならびにプリン塩基およびピリミジン塩基の任意の組合せを含む部分も包含していることは認識されよう。改変ヌクレオシドの他の例としては、開環型のリボース部分およびデオキシリボース部分からなるアシクロヌクレオシドが挙げられる。相応して、かかる開環ヌクレオシドは改変ヌクレオチドの形成に使用され得る。改変ヌクレオシドの他の例としては、Ｃ−ヌクレオシド、例えばプソイド−イソシチジン、およびヌクレオシド模倣物、例えばヌクレオシドアイソスター、例えばペプチド核酸単量体、およびロックド核酸単量体が挙げられる。
【００６６】
核酸塩基としては天然に存在するプリンおよびピリミジン核酸塩基ならびに改変核酸塩基が挙げられ、改変核酸塩基としては、限定されないが、メチル化プリンもしくはピリミジン、アシル化プリンもしくはピリミジンなど、または保護基、例えば、アセチル、ジフルオロアセチル、トリフルオロアセチル、イソブチリル、ベンゾイルなどの付加が挙げられる。また、プリンまたはピリミジン塩基は前述のものの類似体であってもよく；好適な類似体は当業者にわかるであろうし、関連する教本および文献に記載されている。一般的な類似体としては、限定されないが、１−メチルアデニン、２−メチルアデニン、Ｎ６−メチルアデニン、Ｎ６−イソペンチルアデニン、２−メチルチオ−Ｎ−６−イソペンチルアデニン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアデニン、８−ブロモアデニン、２−チオシトシン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、５−エチルシトシン、４−アセチルシトシン、１−メチルグアニン、２−メチルグアニン、７−メチルグアニン、２，２−ジメチルグアニン、８−ブロモグアニン、８−メトキシグアニン、８−メトキシアデニン、８−クロログアニン、８−アミノグアニン、８−メチルグアニン、８−チオグアニン、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、５−エチルウラシル、５−プロピルウラシル、５−メトキシウラシル、５−ヒドロキシメチルウラシル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５−（メチルアミノメチル）ウラシル、５−（カルボキシメチルアミノメチル）−ウラシル、２−チオウラシル、５−メチル−２−チオウラシル、５−（２−ブロモビニル）ウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、プソイドウラシル、１−メチルプソイドウラシル、キューオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、イノシン、１−メチルイノシン、ヒポキサンチン、キサンチン、２−アミノプリン、６−ヒドロキシアミノプリン、６−チオプリン、２，６−ジアミノプリン  ５−トリフルオロメチルチミン、６−クロロ−アデニン、７−デアザ−アデニンが挙げられる。限定されない他の例としては、５−フルオロ−ウラシル、５−トリフルオロメチルチミン、６−クロロ（ｃｈｏｒｏ）−アデニン、２−シクロペンチルオキシ−アデニン、７−デアザ−アデニンが挙げられる。
【００６７】
一部の特定の実施形態では、塩基Ｂは非天然核酸塩基、例えばユニバーサル核酸塩基であり得る。限定されない塩基Ｂのかかる例としては、ジフルオロトリル、ニトロピロリルおよびニトロ−イミダゾリルなどが挙げられる。
【００６８】
また、「改変塩基」（「改変核酸塩基」とも称する）は、複素環式であってもそうでなくてもよい含窒素化合物も包含していることを理解されたい。かかる好ましい含窒素化合物としては、限定されないが−ＮＨＲ１８が挙げられ、ここで、Ｒ１８は水素、ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル、アリル、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のアラルキル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のヘテロアリール、または複素環式である。
【００６９】
用語「改変核酸塩基」はさらに、最も古典的な意味のヌクレオシドの塩基ではないがヌクレオシドの塩基としての機能を果たし得る複素環式化合物も包含していることを意図する。かかる化合物としては、当該技術分野で知られた「ユニバーサル塩基」が挙げられる。ユニバーサル塩基は芳香族環部分を含むものであってもよく、該芳香族環部分は窒素原子を含むものであってもそうでなくてもよい。一部の実施形態では、ユニバーサル塩基は、ヌクレオシドのペントース糖のＣ−１’炭素に共有結合したものであり得る。ユニバーサル塩基の例としては、３−メチル−プロピニルカルボスチリル（ＰＩＭ）、３−メチルイソカルボスチリル（ＭＩＣＳ）、および５−メチルイソカルボスチリル部分が挙げられる。さらなる例としては、イノシン誘導体、アゾールカルボキサミド類似体、ニトロアゾール、およびニトロイミダゾールが挙げられる。
【００７０】
改変されたヌクレオチドおよびヌクレオシドの糖部分の例としては、限定されないが：トレハロース、アラビノース、２’−デオキシ−２’−置換ペントース部分、２’−Ｏ−置換ペントース部分、リボース、リキソース、およびキシロース、またはヘキソース糖鎖基が挙げられる。本発明の解釈上、名前を挙げた任意の糖基、例えば、「２’−置換リボヌクレオシド」および「２’−置換アラビノシド」の用語「２’−置換」は、ペントース部分の２’位のヒドロキシル基が置換されて２’−置換型または２’−Ｏ−置換型のリボヌクレオシドまたはアラビノヌクレオシドとなっているリボヌクレオシドまたはアラビノヌクレオシドを包含している。好ましくは、かかる置換は、１〜６個の飽和もしくは不飽和炭素原子を含む低級アルキル基によるもの、または６〜１０個の炭素原子を有するアリール基によるものであり、ここで、かかるアルキルまたはアリール基は非置換であってもよく、例えば、ハロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、アシル、アシルオキシ、アルコキシ、カルボキシル、カルボアルコキシまたはアミノ基で置換されていてもよい。２’−Ｏ−置換リボヌクレオシドまたは２’−Ｏ−置換−アラビノシドの例としては、限定されないが、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオシド（また、本明細書では２’−ＯＭｅとも表示している）または２’−Ｏ−メチルアラビノシドおよび２’−Ｏ−メトキシエチルリボヌクレオシドまたは２’−Ｏ−メトキシエチルアラビノシドが挙げられる。また、用語「２’−置換リボヌクレオシド」または「２’−置換アラビノシド」は、２’−ヒドロキシル基が、１〜６個の飽和もしくは不飽和炭素原子を含む低級アルキル基またはアミノ基もしくはハロ基で置き換えられたリボヌクレオシドまたはアラビノヌクレオシドも包含している。かかる２’−置換リボヌクレオシドまたは２’−置換アラビノシドの例としては、限定されないが、２’−アミノ、２’−フルオロ、２’−アリル、および２’−プロパルギルリボヌクレオシドまたはアラビノシドが挙げられる。
【００７１】
改変ヌクレオチド間結合の例としては、限定されないが：置換および非置換のホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホネート、アルキルホスホノチオエート、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、シロキサン、カーボネート、カルボアルコキシ、アセトアミデート、カルバメート、モルホリノ、ボラノ、チオエーテル、架橋型ホスホルアミデート、架橋型メチレンホスホネート、架橋型ホスホロチオエートおよびスルホンヌクレオシド間結合が挙げられる。
【００７２】
本発明の化合物は１つ以上の不斉中心を含むものであり、したがって、ラセミ化合物およびラセミ混合物、単独のエナンチオマー、ジアステレオマー混合物ならびに個々のジアステレオマーとして存在し得る。本発明は、５員のフラノース環についてβ−Ｄ立体化学配置を有する短鎖ヌクレオチド化合物、すなわち、５員のフラノース環のＣ−１およびＣ−４における置換基がβ−立体化学配置（本明細書に示したいくつかの式において典型的には太線で表示している「上」向き）を有する短鎖ヌクレオチド化合物を包含していることを意図する。
【００７３】
用語「プロドラッグ」は、インビボで代謝され得る部分を有する化合物を包含している
。一般的に、プロドラッグは、インビボでエステラーゼまたは他の機構によって活性な薬物に代謝される。プロドラッグおよびその使用の例は当該技術分野でよく知られている（例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照のこと）。プロドラッグは、該化合物の最終の単離および精製中にインサイチュで調製してもよく、または別途、精製した遊離酸形態の該化合物またはヒドロキシルを適当なエステル化剤と反応させることにより調製してもよい。ヒドロキシル基はカルボン酸での処理によってエステルに変換され得る。プロドラッグ部分の例としては、置換および非置換の分枝または非分枝の低級アルキルエステル部分（例えば、プロピオン（ｐｒｏｐｉｏｎｏｉｃ）酸エステル）、低級アルケニルエステル、ジ−低級アルキル−アミノ低級アルキルエステル（例えば、ジメチルアミノエチルエステル）、アシルアミノ低級アルキルエステル（例えば、アセチルオキシメチルエステル）、アシルオキシ低級アルキルエステル（例えば、ピバロイルオキシメチルエステル）、アリールエステル（フェニルエステル）、アリール−低級アルキルエステル（例えば、ベンジルエステル）、置換（例えば、メチル、ハロまたはメトキシ置換基での）アリールおよびアリール−低級アルキルエステル、アミド、低級アルキルアミド、ジ−低級アルキルアミド、ならびにヒドロキシアミドが挙げられる。一部の特定のプロドラッグ部分は、例えば、プロピオン酸エステルおよびアシルエステルである。また、他の機構によってインビボで活性形態に変換されるプロドラッグも包含される。
【００７４】
略号
以下のスキームおよび実施例の説明に使用されている場合があり得る略号は：
ＡｃＯＨが、酢酸；
Ｂｏｃ２Ｏが、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート；
Ｂｏｃが、ｔ−ブトキシカルボニル；
Ｂｐｏｃが、１−メチル−１−（４−ビフェニルイル）エチルカルボニル；
Ｂｚが、ベンゾイル；
Ｂｎが、ベンジル；
ＢｏｃＮＨＯＨが、ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−ヒドロキシカルバメート；
ｔ−ＢｕＯＫが、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド；
Ｂｕ３ＳｎＨが、水素化トリブチルスズ；
ＣＤＩが、カルボニルジイミダゾール；
ＣＨ２Ｃｌ２が、ジクロロメタン；
ＣＨ３が、メチル；
ＣＨ３ＣＮが、アセトニトリル；
ＤＭＳＯが、ジメチルスルホキシド；
ＥｔＯＡｃが、酢酸エチル；
ＥｔＯＨが、エタノール；
Ｅｔ２Ｏが、ジエチルエーテル；
ＨＣｌが、塩化水素；
ＭｅＯＨが、メタノール；
ＭＯＭが、メトキシメチル；
Ｍｓが、メシルまたは−ＳＯ２−ＣＨ３；
Ｍｓ２Ｏが、メタンスルホン酸無水物またはメシル−無水物；
ＮａＣｌが、塩化ナトリウム；
ＮａＨが、水素化ナトリウム；
ＮａＨＣＯ３が、重炭酸ナトリウムまたは炭酸水素ナトリウム；
Ｎａ２ＣＯ３  炭酸ナトリウム；
ＮａＯＨが、水酸化ナトリウム；
Ｎａ２ＳＯ４が、硫酸ナトリウム；
ＮａＨＳＯ３が、重亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウム；
Ｎａ２Ｓ２Ｏ３が、チオ硫酸ナトリウム；
ＮＨ２ＮＨ２が、ヒドラジン；
ＮＨ４ＨＣＯ３が、重炭酸アンモニウム；
ＮＨ４Ｃ１が、塩化アンモニウム；
ＯＨが、ヒドロキシル；
ＯＭｅが、メトキシ
ＯＥｔが、エトキシ
ＴＥＡまたはＥｔ３Ｎが、トリエチルアミン；
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸；
ＴＨＦが、テトラヒドロフラン；
ＴＰＰまたはＰＰｈ３が、トリフェニルホスフィン；
Ｔｓが、トシルまたは−ＳＯ２−Ｃ６Ｈ４ＣＨ３；
Ｔｓ２Ｏが、トリルスルホン酸無水物またはトシル−無水物；
ＴｓＯＨが、ｐ−トリルスルホン酸；
Ｐｈが、フェニル；
ＴＢＳが、ｔｅｒｔ−ブチル  ジメチルシリル；
ＴＭＳが、トリメチルシリル；
ＴＭＳＣｌが、塩化トリメチルシリル
である。
【００７５】
本発明の化合物
本発明により、ヌクレオシド、短鎖オリゴヌクレオチド化合物もしくはその類似体、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体を提供する。また、本発明は、プロドラッグ形態および代謝産物形態の該化合物も包含している。
【００７６】
一部の特定の実施形態では、本発明により、ジ−、およびトリ−ヌクレオチド、例えば限定されないが、３−ｄＡｐｓＵ２’−ＯＭｅ、３’ｄＡｐｓＡ７デアザ、および３’−ｄＡｐｓＴｐｓＣならびにその類似体（ここで、「ｐｓ」はホスホロチオエートヌクレオチド間結合を示す）を提供する。
【００７７】
本発明の化合物には、例えば、式（Ｉ）：
【化８】
2018087243.tif 000019
（式中：
Ｒ１およびＲ２は各々、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アルキル、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、複素環式、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリールアリール、または複素環式であり；
Ｒ３は、水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキルおよびＣ（Ｏ）ＮＨ−アリールから選択され；
ＹおよびＺは各々、独立してＯまたはＳであり；
Ｂ１およびＢ２は各々、独立して、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルまたは改変ヌクレオシドであり；
ｍ＝１〜６；
Ｒ４は独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキルおよびＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール  一リン酸基、二リン酸基、または三リン酸基である）
の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体が包含される。
【００７８】
一実施形態では、本発明の化合物には、式（ＩＩ）：
【化９】
2018087243.tif 000020
（式中：
Ｘ＝非存在、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ、またはＳ；
Ｘ１＝非存在、Ｏ、またはＮＨ；
Ａ＝非存在、アリール、またはアラルキル；
ｎ＝０、１、２、３、４、または５；
Ｒ＝アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、複素環式、Ｏ−アルキル、Ｏ−ヘテロアリール、またはステロイド系；
Ｒ１およびＲ２は各々、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アルキル（ａｋｙｌ）、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、複素環式、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリールアリール、または複素環式であり；
Ｒ３は、水素、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキルおよびＣ（Ｏ）ＮＨ−アリールから選択され；
ＹおよびＺは各々、独立してＯまたはＳであり；
Ｂ１およびＢ２は各々、独立して、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシルまたは改変ヌクレオシドであり；
ｍ＝１〜６；
Ｒ４は独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキルおよびＣ（Ｏ）ＮＨ−アリール  一リン酸基、二リン酸基、または三リン酸基である）
の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体が包含される。
【００７９】
一実施形態では、本発明の化合物は下記の構造：
【化１０】
2018087243.tif 000021
の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である。
【００８０】
別の実施形態では、本発明の化合物は下記の構造：
【化１１】
2018087243.tif 000022
の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である。
【００８１】
本発明の他の実施形態では、以下の化合物または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体を提供する：
【化１２】
2018087243.tif 000023
【００８２】
さらに、本発明の化合物は、「天然」核酸、すなわち天然のヌクレオチド間結合または核酸塩基Ｇ、Ｃ、Ｔ、Ｕ、Ａなどに１つ以上の改変を含むものであってもよい。改変としては、例えば、ヌクレオチド間結合、塩基または糖部分の改変が挙げられる。
【００８３】
また、本発明により、本明細書に示した化合物の互変異性体、立体異性体、光学異性体、Ｎ−オキシド、水和物、溶媒和物、多形体、薬学的に許容され得るエステル、アミド、塩、プロドラッグ、および同位体誘導体も提供する。
【００８４】
一部の本発明の化合物の構造は不斉炭素原子を含むものである。したがって、かかる不斉により生じる異性体（例えば、すべてのエナンチオマーおよびジアステレオマー）は、特に記載のない限り本発明の範囲に含まれる。かかる異性体は、古典的な分離手法および／または立体化学的に制御された合成によって実質的に純粋な形態で得られ得る。
【００８５】
天然に存在するか、または合成の異性体は、当該技術分野で知られたいくつかの様式で分離され得る。２つのエナンチオマーのラセミ混合物の分離方法としては、キラル固定相を用いたクロマトグラフィーが挙げられる（例えば、“Ｃｈｉｒａｌ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ”、Ｗ．Ｊ．Ｌｏｕｇｈ編．Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ、ニューヨーク（１９８９）を参照のこと）。また、エナンチオマーは古典的な分割手法によっても分離され得る。
【００８６】
本発明の化合物を得る方法には、該化合物の購入、合成または別の方法での取得が包含される。本発明の化合物の合成は、当該技術分野の通常の技量である化学者の手段の範囲内であり；本発明の化合物の調製のための例示的な方法は本明細書に記載している。反応条件を最適化する（必要であれば、副生成物との競合を最小限にする）ための方法は当該技術分野で知られている。また、該方法にさらに、本明細書に具体的に記載した工程の前または後のいずれかにおいて、最終的に本明細書における化合物の合成を可能にするために適当な保護基を付加または除去する工程を含めてもよい。また、種々の合成工程は、所望の化合物が得られるように択一的なシーケンスまたは順序で行なってもよい。
【００８７】
方法および使用
本発明の化合物は、宿主の免疫成分が関与している広範な治療領域、例えば限定されないが：アレルギー、炎症、自己免疫疾患、ＣＯＰＤ、喘息などに有用である。この化合物はいくつかの機構によって免疫応答の調節因子として作用し得るという事実のおかげで、
該化合物は自己免疫疾患において治療的有用性を有する。例えば、該化合物は自然免疫応答を刺激する潜在能を有するため、単独または他の薬剤との併用のいずれかで、さまざまながん、例えば限定されないが、黒色腫、骨髄腫、癌腫、神経膠芽腫および肉腫の処置に使用され得る。例えば、一部の特定の該オリゴヌクレオチド組成物は免疫応答を阻害する潜在能を有するため、単独または他の薬剤との併用のいずれかで、さまざまな自己免疫疾患、例えば限定されないが、アレルギー、喘息、ＣＯＰＤおよび多発性硬化症の処置に使用され得る。
【００８８】
多くのインターフェロン関連遺伝子産物はアポトーシスを誘導し得るため、該化合物はがん細胞の選択的な細胞死を誘導し得るものである。したがって、本発明の組成物は単独で、あるいはワクチンまたは別の薬剤（１種類もしくは複数種）と併用または逐次的のいずれかで使用され得る。
【００８９】
したがって、本発明により、微生物感染症の処置の必要があると確認された被験体（または宿主）に有効量の本発明の化合物を投与することにより、被験体（または宿主）の微生物感染症を処置する方法を提供する。
【００９０】
別の態様では、本発明により、疾患、状態、感染またはウイルスに対する被験体の免疫機構の応答を改善する方法を提供する。該方法は、被験体に有効量の本発明の化合物をワクチンアジュバントとして投与することを含む。
【００９１】
また、本発明により、有効量の本発明の化合物を投与することによる宿主（または被験体）、例えばヒトのウイルス感染の予防および処置のための方法を提供する。本発明の化合物は単独で、あるいはワクチンまたは他の薬剤と併用して、または逐次的に投与され得る。
【００９２】
さらに別の態様では、本発明により、有効量の本発明の化合物を投与することによる宿主（または被験体）、例えばヒトの細菌感染の予防および処置のための方法を提供する。本発明の化合物は単独で、あるいはワクチンまたは他の薬剤と併用して、または逐次的に投与され得る。
【００９３】
さらに、本発明により、有効量の本発明の化合物を投与することによる宿主（または被験体）、例えばヒトの寄生虫感染の予防方法および処置方法を提供する。本発明の化合物は単独で、あるいはワクチンまたは他の薬剤と併用して、または逐次的に投与され得る。
【００９４】
また、宿主（または被験体）、例えばヒトの真菌感染の予防および処置のための方法も開示する。該方法は有効量の本発明の化合物を投与することを含むものであり、該化合物は単独で、あるいはワクチンまたは別の薬剤（１種類もしくは複数種）と併用して、または逐次的に投与され得る。
【００９５】
該方法の一部の特定の実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｉ）の短鎖オリゴヌクレオチド化合物もしくはその類似体、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である。
【００９６】
他の実施形態では、本発明の化合物は、式（ＩＩ）の短鎖オリゴヌクレオチド化合物もしくはその類似体、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である。
【００９７】
一実施形態では、本発明の化合物は
【化１３】
2018087243.tif 000024
または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体である。
さらに、本発明により、以下の図表に示す化合物、または薬学的に許容され得るその塩、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体もしくは互変異性体の使用を提供する：
【化１４】
2018087243.tif 000025
【００９８】
本発明の方法によれば、本発明の化合物は単独で、またはワクチン（ＢＣＧワクチンなど）もしくは１種類以上のさらなる薬剤と一緒に投与され得る。
【００９９】
一実施形態では、本発明の化合物とワクチンが、微生物感染症を処置または予防するために投与される。
【０１００】
別の実施形態では、本発明の方法はウイルスに対して使用される。
【０１０１】
さらなる一実施形態では、該方法はがんを処置または予防するために使用される。
【０１０２】
本発明の方法は、被験体に治療有効量または阻害量の本発明の化合物を、所望の成果が得られるのに必要な量と時間で投与することを含むものである。本発明のさらなる方法は
、本発明の組成物の阻害量の化合物での所望の成果が得られるのに必要な量と時間での生物学的試料の処理である。
【０１０３】
本発明の別の態様は、疾患の処置に有用な１種類以上の薬剤と併用した本発明の化合物での処置を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ  ｉｎ）ものである。例えば、ウイルスに対して活性なかかる薬剤としては、ラミブジン（３ＴＣ）、アデホビル、テノホビル、ガンシクロビル、アシクロビル、インターフェロン、リバビリン、テルビブジンが挙げられ；ＣＯＰＤ、喘息、アレルギー  アレルギー性鼻炎に対する他の薬剤としては、限定されないが、テオフィリン、アルベスコ（シクレソニド）、パタナーゼ（Ｐａｔａｎａｓｅ）（オラパチジン（Ｏｌａｐａｔｉｄｉｎｅ）塩酸塩）リタイリス（Ｌｉｔａｉｒｉｓ）（アンブレセンタン（Ａｍｂｒｅｓｅｎｔａｎ））（ギリアド（Ｇｉｌｅａｄ））ザイザル（レボセチリジン二塩酸塩）、ブロバナ（アルホルモテロール酒石酸塩）、スピリーバ（臭化チオトロピウム）クラリネックス、ジプロピオン酸デクロメトゾン（Ｄｅｃｌｏｍｅｔｈｓｏｎｅ）、レモズニル（Ｒｅｍｏｄｕｎｉｌ）（トレプロステニル）、ゾペネックス、デュオネブ（アルブテロールおよび臭化トリトロピウム（Ｔｒｉｔｒｏｐｉｕｍ））、ホルメテロールフマル酸塩、トラクリア（ボサンタン（ｂｏｓａｎｔａｎ））、トリアムシノロンアセトニド、ブデソニド、シングレア、セレベント、チラド（Ｔｉｌａｄｅ）（吸入器およびネブライザー）、ジフロ、アコレート、セダックス、ジルテック、ハーセプチンが挙げられる。抗がん剤の中では、例えば限定されないが、タキソール、パクリタキセル、シスプラチン、ハーセプチン、グリベック、インターフェロンなど。
【０１０４】
本発明のこの方法によれば、併用療法の個々の成分は、治療過程の異なる時点で別々に投与してもよく、分割または１回の併用形態で並行して投与してもよい。したがって、本発明は、かかるすべての同時または交互の処置レジメン（ｒｅｇｉｍｅ）を包含していると理解されたく、用語「投与する」は、それに応じて解釈されたい。本発明の化合物と他の薬剤との併用の範囲には、原則的に、ウイルス感染、細菌感染、寄生虫感染、真菌感染などの処置のための任意の医薬組成物との任意の組合せが包含されることは理解されよう。本発明の化合物または薬学的に許容され得るその塩を第２の治療用薬剤と併用して使用する場合、各化合物の用量は、該化合物を単独で使用する場合の用量と同じであるか、または異なるかのいずれかであり得る。
【０１０５】
本発明の化合物と他の薬剤との併用の範囲には、原則的に、ＣＯＰＤ、喘息、アレルギー性鼻炎、がんなどの処置のための任意の医薬組成物との任意の組合せが包含されることは理解されよう。本発明の化合物または薬学的に許容され得るその塩を第２の治療用薬剤と併用して使用する場合、各化合物の用量は、該化合物を単独で使用する場合の用量と同じであるか、または異なるかのいずれかであり得る。
【０１０６】
本発明の解釈上、抗微生物性とは、化合物がウイルス感染、細菌感染、真菌感染および寄生虫感染に対して有効であることを表すことを意図する。
【０１０７】
本発明の化合物の「治療有効量」という用語は、本明細書で用いる場合、生物学的試料または被験体において有益な生物学的応答がもたらされるのに充分な化合物の量を意味する。医療技術で充分に理解されているように、本発明の化合物の治療有効量は、任意の医療処置に適用可能な妥当な便益／リスク比でのものである。
【０１０８】
本発明の化合物の阻害量または阻害用量は、約０．１ｍｇ／Ｋｇ〜約５００ｍｇ／Ｋｇ、あるいはまた約１〜約５０ｍｇ／Ｋｇの範囲であり得る。また、阻害量または阻害用量は、投与経路ならびに他の薬剤との同時使用の可能性に応じて異なる。
【０１０９】
用語「生物学的試料（１つまたは複数）」」は、本明細書で用いる場合、被験体への投
与が意図された生物学的起源の物質を意味する。生物学的試料の例としては、限定されないが、血液およびその成分、例えば、血漿、血小板、血液細胞亜群など；腎臓、肝臓、心臓、肺、脳などの臓器；精子および卵子；骨髄およびその成分；または幹細胞が挙げられる。したがって、本発明の別の実施形態は、生物学的試料を阻害量の本発明の化合物または医薬組成物と接触させることによる前記生物学的試料の処理方法である。
【０１１０】
被験体の状態が改善したら、必要であれば維持用量の本発明の化合物、組成物または組合せが投与され得る。続いて、投薬量または投与頻度または両方が、症状の関数として、状態の改善が保持されるレベルまで低減され得、症状が所望のレベルまで緩和された場合は処置を止めるのがよい。しかしながら、被験体は、疾患症状の再発（あれば）が起こったら長期ベースで間欠的処置が必要となる場合があり得る。しかしながら、本発明の化合物および組成物の１日の総使用量は、担当医師によって正しい医学的判断の範囲内で決定されることは理解されよう。特定の任意の患者に対する具体的な阻害用量は、さまざまな要素、例えば、処置対象の障害および障害の重症度；使用される具体的な化合物の活性；使用される具体的な組成物；患者の年齢、体重、一般健康状態、性別および食事；使用される具体的な化合物の投与期間、投与経路および排出速度；処置の持続期間；使用される具体的な化合物と併用して、または同時進行で使用される薬物；ならびに医療技術でよく知られた同様の要素に依存する。
【０１１１】
医薬組成物
本発明により、薬学的に許容され得る担体を伴った本発明の化合物およびその誘導体を含む医薬組成物を提供する。本発明の別の例は、上記のいずれかの化合物と薬学的に許容され得る担体を合わせることにより作製された医薬組成物である。
【０１１２】
本発明の医薬組成物は、活性成分としての少なくとも１種類の本発明の化合物または薬学的に許容され得るその塩を含むものであり、また、薬学的に許容され得る担体および賦形剤ならびに任意選択で他の治療用成分も含むものであり得る。「薬学的に許容され得る」により、担体、希釈剤または賦形剤は製剤のその他の成分と適合性でなければならず、そのレシピエントに対して有害であってはならないことを意図する。該組成物は、経口、経直腸、局所、非経口（例えば、皮下、筋肉内および静脈内）、接眼（経眼）、肺経由（鼻吸入もしくは口腔吸入）、または経鼻投与に適した組成物を包含しているが、任意の所与の場合で最も適当な経路は、処置対象の状態の性質および重症度ならびに活性成分の性質に依存する。該組成物は、単位投薬形態で簡便に提示され得、製薬学の技術分野でよく知られた任意の方法によって調製され得る。
【０１１３】
実際の使用では、本発明の化合物は活性成分として、慣用的な医薬品配合手法に従って医薬用担体と緊密混合された状態に合わされ得る。担体は、投与、例えば、経口または非経口（例えば、静脈内）に所望される調製物の形態に応じて多種多様な形態であり得る。経口投薬形態のための組成物の調製では、通常の任意の医薬用溶媒、例えば水、グリコール、油、アルコール、フレーバー剤、保存料、着色剤などが経口液状調製物、例えば、縣濁剤、エリキシル剤および液剤などの場合に使用され得；または例えば、デンプン、糖、微晶質セルロース、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などの担体が経口固形調製物、例えば、散剤、硬カプセル剤および軟カプセル剤ならびに錠剤などの場合に使用され得、固形経口調製物は液状調製物よりも好ましい。
【０１１４】
投与の容易性のため、錠剤およびカプセル剤が最も好都合な経口単位投薬形態であり、この場合、明らかに固形医薬用担体が使用される。所望により、錠剤を標準的な水性手法または非水性手法によってコーティングしてもよい。かかる組成物および調製物には、少なくとも０．１パーセントの活性化合物が含まれているのがよい。このような組成物中の活性化合物の百分率はもちろん種々であり得、簡便には該単位の重量の約２パーセント〜
約６０パーセントであり得る。かかる治療に有用な組成物中の活性化合物の量は有効な投薬量が得られるようなものである。また、活性化合物を、例えば液状滴剤またはスプレー剤として鼻腔内投与してもよい。
【０１１５】
また、錠剤、丸剤、カプセル剤などには、結合剤、例えば、トラガカントゴム、アカシア、コーンスターチまたはゼラチン；賦形剤、例えば、リン酸二カルシウム；崩壊剤、例えば、コーンスターチ、イモデンプン、アルギン酸；滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム；および甘味剤、例えば、スクロース、ラクトースまたはサッカリンが含有され得る。
【０１１６】
単位投薬形態がカプセル剤である場合、これには、上記の型の材料に加えて液状担体、例えば、脂肪油が含有され得る。種々の他の材料をコーティングとして、または投薬単位の物理的形態を改良するために存在させてもよい。例えば、錠剤はシェラック、糖または両方でコーティングされ得る。シロップ剤またはエリキシル剤には、活性成分に加えて、スクロースが甘味剤として、メチルパラベンおよびプロピルパラベンが保存料として、色素ならびにフレーバー剤、例えば、チェリーまたはオレンジフレーバーが含有され得る。活性医薬成分を分解に対して安定化させる種々の安定剤、例えば、アミノ酸またはポリアミンを添加してもよい。他の賦形剤としては、限定されないが、ＰＥＧ４００、グリシン、ビタミンＥ誘導体、ソルビタンモノオレエート、キトサン、クエン酸コリン、ソルビタンモノステアレート、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｉｇｅｐａｌ  ＣＡ６３０、Ｂｒｉｊ３５、ＮＰ−４０およびその類縁誘導体が挙げられ得る。
【０１１７】
また、本発明の化合物を非経口で投与してもよい。このような活性化合物の液剤または縣濁剤は、界面活性剤（例えば、ヒドロキシ−プロピルセルロース）と適切に混合した水で調製され得る。また、分散剤は、グリセロール、液状ポリエチレングリコールおよびその油との混合物で調製され得る。通常の保存および使用条件下では、このような調製物には、微生物の増殖を抑制するために保存料が含有される。注射用に適した医薬形態には、水性の滅菌液剤または分散剤および注射用の滅菌液剤または分散剤の即時調製（ｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）のための滅菌粉末剤が含まれる。すべての場合で、該形態は好ましくは滅菌されており、好ましくは易注射針通過性が存在する程度に流動性である。これは、製造条件下および保存条件下で安定でなければならず、微生物、例えば、細菌および真菌の汚染作用に対して保持されていなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液状ポリエチレングリコール）、その適当な混合物、ならびに植物油を含む溶媒または分散媒であり得る。
【０１１８】
任意の適当な投与経路が、哺乳動物、特にヒトに治療有効投薬量の本発明の化合物を提供するために使用され得る。化合物「の投与」および化合物「を投与する」という用語は、本発明の化合物をその必要がある個体に与えることを意味していると理解されたい。投与経路としては、例えば限定されないが、経口、舌下、経粘膜、静脈内、皮下、鼻腔内、局所、経膣などが挙げられる。
【０１１９】
選択される投与経路に関係なく、適当な水和形態で、および／または本発明の医薬組成物に使用され得る該化合物（１種類または複数種）は、当業者に知られた慣用的な方法によって薬学的に許容され得る投薬形態に製剤化される。
【０１２０】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投薬量レベルおよび投与のタイムコースは、特定の患者、組成物および投与様式で患者に毒性とならずに所望の治療応答がもたらされるのに有効な活性成分の量が得られるように変えてもよい。例示的な用量範囲は１日あたり体重１キログラムあたり約０．１μｇ〜２０ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ／日）（例えば、０．１μｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、０．３〜３μｇ／ｋｇ、０．１８〜０．５４ｍｇ／ｋ
ｇ）である。他の実施形態では、該量は約０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の間で種々である。さらに他の実施形態では、該量は約０．００１μｇ〜約１００μｇ／ｋｇ（例えば、体重の）の間で種々である。また、上記の値の中間である範囲も本発明の一部であることを意図する。
【０１２１】
被験体に単回用量、反復用量または分割用量で投与される本発明の化合物の１日の総阻害用量は、例えば０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重またはそれ以上、通常、０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ  体重の量であり得る。
【０１２２】
単回用量の組成物は、日用量を構成するかかる量またはその分割量を含むものであり得る。反復用量は種々の時間間隔で服用される単回用量であり得る。一般に、本発明による処置レジメンは、かかる処置を必要とする患者に１日あたり約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇの本発明の化合物（１種類または複数種）を単回用量または反復用量で投与することを含む。
【０１２３】
さらに、本発明の化合物を多くの送達経路、例えば、経口、静脈内、舌下、鼻腔内、局所などで投与してもよい。
【０１２４】
キット
本発明により、本明細書に示した疾患、状態または障害の処置または予防のためのキットを提供する。一実施形態では、キットは、有効量の本発明の化合物を含む単位投薬形態の治療用または予防用組成物を含むものである。一部の実施形態では、本発明の化合物はワクチンまたは慣用的な治療剤と併用して提供される。他の実施形態では、キットは、治療用または予防用組成物を内包する滅菌容器を備えたものである；かかる容器は、箱、アンプル、ビン、バイアル、チューブ、袋、パウチ、ブリスターパック、または当該技術分野で知られた他の適当な容器形態であり得る。かかる容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔、または医薬の保持に適した他の材料で作製されたものであり得る。
【０１２５】
所望により、本発明の化合物は、本明細書に示した具体的な疾患、状態または障害を有するか、またはそのリスクがある被験体に該化合物を投与するための使用説明書と一緒に提供される。使用説明書には、一般的に、疾患、状態、障害、感染またはウイルスの処置または予防のための該組成物の使用に関する情報が含まれている。他の実施形態では、使用説明書には、以下：治療剤の説明；投薬スケジュールおよび虚血またはその症状の処置または予防のための投与；注意事項；警告；適応症；禁忌；過剰投薬の情報；有害反応；動物への薬理作用；臨床試験；および／または問い合わせ先のうちの少なくとも１つが含まれている。使用説明書は、容器（存在させる場合）に直接印刷したものであってもよく、容器に適用されるラベルであってもよく、別個のシート、小冊子、カードであってもよく、容器内または容器とともに備えられた折り畳み印刷物であってもよい。
【実施例】
【０１２６】
以下の実施例は、当業者に本発明のアッセイ方法、スクリーニング方法および治療方法をどのようにして行ない、使用するかの完全な開示および説明がもたらされるように示したものであり、本発明者らが自身の発明とみなすものの範囲を限定することを意図するものではない。
【０１２７】
化合物の合成
本発明の実例としての実施例に記載したヌクレオチド類似体のフォーカストライブラリーは既報のようにして合成した（１７〜２２）。固相合成と液相ストラテジーの両方を相補的な様式で使用し、実例に示したフォーカストライブラリーを作製した。該方法は、糖核酸塩基およびヌクレオチド間結合に改変を有するライブラリーの合成のために使用され
得る。本発明者らの研究所でのいくつかの技術革新により、ヌクレオチドライブラリーの合成が容易になった：ａ）本発明者らは、以前に、固相ホスホルアミダイト技術およびＨ−ホスホネート技術を用いてジヌクレオチドライブラリーを合成するためのストラテジーを開発していた（１７〜２２）。また、本発明者らの研究所による最近の技術革新は、ジヌクレオチド化合物および類似体の固相合成にも使用された（１７〜２２）。（ｉ）マイクロ波アシスト法を用いたアミノ−、およびカルボキシ−官能化固相支持体の超高速作製（ｉｉ）固相支持体上へのヌクレオシドの負荷のための新規な方法。溶媒としてジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の使用を伴うヌクレオシド負荷支持体の大規模調製のための改善された方法を開発した。８０〜３００マイクロモル／ｇ支持体の高ヌクレオシド負荷量が得られる。（ｉｉｉ）ＬＯＴＵＳ（登録商標）と称する固相支持体の負荷のための新規な反応器およびジヌクレオチドの大規模合成を容易にする固相合成。ＬＯＴＵＳ（登録商標）は、反応体の制御送達のための空気弁が取り付けられた多目的反応器である（２０〜２２）。
【０１２８】
実施例１
ホスホロチオエート類似体３−ｄＡｐｓＵ２’−ＯＭｅ（１）のＲｐ，Ｓｐ混合物を大規模で（Ｉミリモルのヌクレオシドが負荷された細孔性ガラス（ＣＰＧ）支持体）、固相ホスホルアミダイト化学作用（Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．；Ｉｙｅｒ，Ｒ．Ｐ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９３，４９，１９２５）を特別に制作したＬＯＴＵＳ反応器（登録商標）とともに用いて合成した（Ｐａｄｍａｎａｂｈａｎ，Ｓ．；Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，Ｊ．Ｅ．；Ｉｙｅｒ，Ｒ．Ｐ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２００５，４６，３４３；Ｉｙｅｒ，Ｒ．Ｐ．；Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，Ｊ．Ｅ．；Ｐａｄｍａｎａｂｈａｎ，Ｓ．Ｏｒｇ．Ｐｒｅｐ．Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔｌ．２００５，３７，２０５）。ｄＡ結合ＣＰＧ支持体を、本発明者らが最近見出した固相支持体のための超高速官能化／負荷法を用いて作製した。ヌクレオチド間ジヌクレオシドホスファイトカップリング生成物の硫化には、３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン−１，１，−ジオキシド（乾燥ＣＨ３ＣＮ中０．４Ｍ）の溶液を使用した（Ｉｙｅｒ，Ｒ．Ｐ．；Ｒｅｇａｎ，Ｊ．Ｂ．；Ｅｇａｎ，Ｗ．；Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９０，１１２，１２５３）。
【０１２９】
作製、クロマトグラフィー精製および凍結乾燥後、Ｒｐ，Ｓｐ  ５（約６０：４０の混合物）のナトリウム塩が＞９６％純粋状態で得られ、これを３１Ｐおよび１Ｈ  ＮＭＲで特性評価した。したがって、ジヌクレオチド化合物および類似体のフォーカストライブラリーの固相合成が容易に行なわれた。相補的ストラテジーでは、液相合成も１の合成に使用した。このような方法論により、さまざまな化学修飾を有する化合物の合成が可能であった。
【０１３０】
実施例２：化合物３の合成
【化１５】
2018087243.tif 000026
目的化合物３は２工程で調製した。
【０１３１】
工程１．ヨードメチルイソプロピルカーボネートの調製：無水ヨウ化ナトリウム（６ｇ，４０ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル（２０ｍＬ）溶液に、クロロメチルイソプロピルカーボネート（２．９ｇ，１９ｍｍｏｌ）を含む無水アセトニトリル（１０ｍＬ）を２０分間かけて滴下した。アルミニウム箔で覆った（光から保護した）反応混合物を室温で一晩撹拌した。分離した固形物を濾過し、アセトニトリルで洗浄し、濾液を減圧濃縮した。残渣を水（１０ｍＬ）に溶解させ、有機液をエーテル（２５ｍＬ）中に抽出した。エーテル抽出物を重亜硫酸ナトリウム（５％，１０ｍＬ）、その後ブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、高真空乾燥下で乾燥させた。収量２．７２ｇ（５８％）；
【化１６】
2018087243.tif 000027
【０１３２】
工程２．化合物５のアルキル化：ジヌクレオチド１（６０ｍｇ，０．０９８ｍｍｏｌ）の水（ＨＰＬＣ，４００ｍＬ）溶液に撹拌下で、ヨードメチルイソプロピルカーボネート（８０ｍｇ，０．０１６６ｍｍｏｌ，３．３３当量）のアセトン（１ｍＬ）溶液を添加した。アルキル化剤の油性小球体の分離（あれば）を回避するためにさらなるアセトン（１ｍＬ）を添加し、透明な溶液を得た。アルミニウム箔で覆った反応混合物を３時間撹拌し、回転式エバポレーション条件下で、その後、高真空下で濃縮し、反応混合物を白色固形物として得た。これをシリカカラムクロマトグラフィーにより、最初はクロロホルム、およびゆっくり２％から最終的に８％のメタノールを含めたクロロホルムを用いて精製した。主要成分を含む画分を合わせ、濃縮し、高真空下で一晩乾燥させた。所望の純粋な生成物３をほぼ定量的収量（６８ｍｇ）で単離した；３１Ｐ−ＮＭＲ（ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ２７．７，２８．６．
【０１３３】
実施例３：ＮＯＤ２／ＲＩＧ−ＩリガンドとしてのＳＢ  ４０、ＳＢ  ４４、およびＳＢ
１Ｂの発見および活性
ＳＭＮＨ化合物のＮＯＤ２活性化に関する評価を１次、２次および３次アッセイによって行なった。１次アッセイでは、ＳＭＮＨ化合物を、ＨＬＥ  Ａ５４９細胞（これはＮＯＤ２を内因的に発現することが知られている）におけるＩＲＦ３発現の誘導について試験した。図１〜２に示すように、ジヌクレオチド類似体ＳＢ  ４０、ＳＢ  ４３、ＳＢ  ４４、およびＳＢ  １ＢはＩＲＦ３活性化を誘導したが、関連類似体、例えば、ジヌクレオチドＳＢ  ５０、ＳＢ  １１０、およびＳＢ  ６０は誘導しなかった。２つの異性体ＲｐとＳｐの混合物であるＳＢ  ４４はＳＢ  ４０のプロドラッグである。ＳＢ  １ＢはＳＢ
４４のＲｐ異性体であり、図１〜２ではＳＢ  ４４−１として示している。
【０１３４】
ＩＲＦ３−ルシフェラーゼトランスフェクト細胞をＤＭＳＯのみ（ＵＴ）またはＳＭＮＨ化合物（μＭ）のいずれかとともにインキュベートした。１２時間のインキュベーション後、ルシフェラーゼ活性を、Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造業者のプロトコルに従って用いて測定した。トランスフェクション効率を、ウミシイタケルシフェラーゼの発現を測定することにより正規化した。ルシフェラーゼ単位（すなわち、誘導倍率）を標準的な方法論によって測定した（平均±標準偏差；３回の独立した実験）。結果を図１に示す。
【０１３５】
ＨＥＫ  ２９３細胞をＮＯＤ２、ｐｃＤＮＡおよびＩＲＦ３−ルシフェラーゼでトランスフェクトした。次いで、細胞をｓｓＲＮＡ（０．５ｍｇ／ｍｌ）またはＳＭＮＨ化合物（１μＭ）とともにインキュベートした。１２時間のインキュベーション後、ルシフェラーゼ活性を前述のようにして測定した。ルシフェラーゼアッセイの結果を３回の独立した実験の平均±Ｓ．Ｄ．として示す（このアッセイで使用した詳細な材料および方法は：参考文献（２８）を参照のこと。結果を図２に示す。
【０１３６】
図３は、ＳＢ  ４４によるＲＩＧ−Ｉ活性化を示す。ＨＥＫ  ２９３細胞をＲＩＧＩ、ｐｃＤＮＡおよびＩＲＦ３−ルシフェラーゼでトランスフェクトした。次いで、細胞をＳＢ  ４４（１００または５００ｎＭ）とともにインキュベートした。８時間または１６時間のインキュベーション後、ルシフェラーゼ活性を前述のようにして測定した。ルシフェラーゼアッセイの結果を３回の独立した実験の平均±Ｓ．Ｄ．として示す。
【０１３７】
図４は、ＲＩＧＩおよびＮｏｄ２の活性化によるＳＢ  ４４によるＮＦ−ｋＢ活性の誘導を示す。ＨＥＫ  ２９３細胞をＲＩＧＩ、ｐｃＤＮＡ、Ｎｏｄ２およびＮＦ−ｋＢ−ルシフェラーゼでトランスフェクトした。次いで、細胞をＳＢ  ４４（１０μＭ）とともにインキュベートした。１２時間のインキュベーション後、ルシフェラーゼ活性を前述のようにして測定した。ルシフェラーゼアッセイの結果を３回の独立した実験の平均±Ｓ．Ｄ．として示す。
【０１３８】
図５は、ＳＢ  ４４処理ヒト肺上皮細胞（ＨＬＥＣ）における活性型ＩＲＦ３（リン酸化ＩＲＦ３またはホスホ−ＩＲＦ３）の検出を示す。ヒト肺上皮Ａ５４９細胞をＤＭＳＯまたはＳＢ  ４４（５００ｎＭ）のいずれかとともにインキュベートした。表示した処理後の時間点で、細胞溶解物を、リン酸化ＩＲＦ３（ホスホ−ＩＲＦ３）に特異的な抗体（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を用いたウエスタンブロッティングに供した。
【０１３９】
図６は、ＳＢ  ４４処理ヒト肺上皮細胞（ＨＬＥＣ）における活性型ＩＲＦ３（リン酸化ＩＲＦ３またはホスホ−ＩＲＦ３）の検出を示す。ヒト肺上皮Ａ５４９細胞をＤＭＳＯまたはＳＢ  ４４（５００ｎＭ）のいずれかとともにインキュベートした。表示した処理後の時間点で、細胞溶解物を、リン酸化ＩＲＦ３（ホスホ−ＩＲＦ３）に特異的な抗体（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を用いたウエスタンブロッティングに供した。
【０１４０】
さらなる試験結果を図７〜９に示す。
【０１４１】
結論および考察：上記の結果に基づいて、化合物ＳＢ  ４０、ＳＢ  ４４およびＳＢ  １ＢをＢＣＧワクチンとの併用でのアジュバント様活性について評価した。ＮＯＤ２／ＲＩＧ−Ｉを活性化させたジヌクレオチド化合物ＳＢ  ４０、ＳＢ  ４４およびＳＢ  １Ｂはまた、ＢＣＧとともに使用した場合、インビトロで抗原提示を増強し、ＭΦのＭＨＣ−ＩＩを増大させ、マウスの抗−ＴＢ  Ｔ細胞機能の劇的な増大を引き起こすこともわかった。前述のように、ＳＢ  ４４は２つの異性体（ＲｐとＳｐ）の混合物であり、そのうちＳＢ  １Ｂが、該混合物の約５５〜６０％を構成するＲｐ異性体である。
【０１４２】
実施例４：ＮＯＤ２およびＲＩＧ−Ｉの最適リガンドの設計
ＮＯＤ２およびＲＩＧ−Ｉの最適リガンドを見出すため、ジヌクレオチド構造ＳＢ  ４０およびＳＢ  ４４を、以下に実例としての実施例として示す塩基改変と糖鎖改変の両方を含むさらなる化合物の合成のための最初のリード化合物として使用する。その合成には、固相合成ストラテジーと液相合成ストラテジーの両方を、ホスホルアミダイト化学作用およびＨ−ホスホネート化学作用とともに使用する。多くの構成ブロックは市販のものであるか、または所内で合成されるものである。
【０１４３】
ＳＢ  ４０およびＳＢ  ４４に関連する化合物の代表例を以下に示す：
【化１７】
2018087243.tif 000028
【０１４４】
実施例５：マクロファージおよびマウスを用いたＢＣＧワクチンのアジュバントとしてのＮＬＲリガンドの試験
【０１４５】
ＳＢ  １Ｂのアジュバントの開発の理論的根拠：アジュバントは、ＭΦにおけるサイトカイン分泌を増強することが知られているが、ＭΦおよびＤＣが抗原を提示してＴ細胞を活性化させる能力に対するその効果はわかっていない。同様に、Ｔ細胞機能が長期有効性のために調節され得るかどうかも明らかでない。ＢＣＧは、結核を予防するために使用される、現在、世界中で最も広く使用されているワクチンである。これは、小児を結核から保護するが、成人ＴＢに対しては、おそらく長期有効性の欠如のため有効性は限定的である。このセクションにおいて、本発明者らは、ＳＢ  １ＡおよびＳＢ  １Ｂが、ＢＣＧワクチンを接種したときＭΦ機能を増強し、マウスに投与するときは一次ワクチンとして、および結核の再感染に対して保護する潜在能を有するブースターワクチンとしての両方でＢＣＧの活性を追加刺激することを示す。
【０１４６】
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの骨髄由来のマクロファージ（ＭΦ）を１０μｇ／ウェルのＳＭＮＨ化合物１〜４およびＬＰＳ陽性対照（１μｇ／ｍＬ）で４時間処理した後、ウシ型結核菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ  Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）細菌を４時間感染させた。抗原−８５Ｂエピトープに特異的なＢＢ７  Ｔ細胞を重層し、１８時間後に収集した上清をＩＬ−２についてサンドイッチＥＬＩＳＡ（ｐ値，ｔ検定）を用いて試験した。
【０１４７】
図１０（ａ〜ｄ）は：ａ）最も活性なＳＢ化合物の初期スクリーニングにより、ＳＢ  １（ＮＯＤ２アゴニスト）ならびにＳＢ  ３およびＳＢ  ４４（ＳＢ１に関連するジヌクレオチド）を、既知のＴＬＲ４アゴニストであるＬＰＳとともに評価した。ａ）ＳＢ  １と２が抗原提示を増強する；ｂ）ＳＢ  １Ａ（ＳＢ  ４４）とＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  １Ｂ，ＳＢ  ４４のＲｐ異性体）をＳＢ  ２およびＬＰＳと比較した。ＳＢ  ４４のＲｐ異性体（ＳＢ  １Ｂ）は充分な活性を保持している；ｃ）ＭΦを、シグナル伝達分子（ＡＰ−１、ＣＲＥＢ、およびＭＡＰＫ（ｐ３８、ＥＲＫ１／２およびＪＮＫ）の５μＭの各インヒビターで２時間処理した後、ＳＢ化合物で２時間活性化させ、ＢＣＧを２時間接種した。ＭΦを固定し、表面ＭＨＣ−ＩＩについてフローサイトメトリーを用いて解析した。ＳＢ
１ＡはＭＨＣ−ＩＩの表面発現を増強し、これは、ＭＡＰＫまたはＡＰ−１／ＣＲＥＢのいずれかのブロックによって阻害される（ＳＢ  １ＡとＢＣＧの併用と比べて＞０．５
ｌｏｇ１０のシフト）。ＳＢ  １Ｂは同様の活性を有していた（図示せず）；ｄ）ＭＡＰＫまたはＡＰ１／ＣＲＥＢのインヒビターは単独ではＭＨＣ−ＩＩに対して効果を有し
ない、を示す。
【０１４８】
実施例６：ＮＯＤ２−ＲＩＧ−Ｉ活性化ＳＢ  １Ａおよび１Ｂ化合物は実験的エアロゾル誘導性結核に対するＢＣＧワクチンの有効性を増強する
マウスでのワクチンの実験計画：Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにＢＣＧ単独、またはＳＢ  １Ａ、ＳＢ  １ＢおよびＭＤＰと混合したＢＣＧをワクチン接種した；この後、４週間後にヒト型結核菌での抗原エアロゾル刺激を行なった。４週間後に保護（ＭｔｂのＣＦＵ数の減少）の評価のためにマウスを致死させた。脾臓または肺のＴ細胞の表現型および機能をフローサイトメトリーを用いて測定した。図１１（ａ）
【０１４９】
図１１（ｂ）は、ＳＢ  １ＡおよびＳＢ  １Ｂが強力なアジュバントであり、ＢＣＧまたはＭＤＰ＋ＢＣＧのいずれかよりも良好に肺のＭｔｂ数を低減させることを示す（二元配置ＡＮＯＶＡによるｐ値）。バーの上部の数字はｌｏｇ１０細菌負荷量を示す（ＭＤＰ対ＳＢ  １Ａ／ＳＢ  １Ｂ＋ＢＣＧ；ｐ＜０．０２）。また、ＳＢ  １ＡおよびＳＢ  １Ｂは脾臓のＭｔｂ数の低減においてもＢＣＧワクチンよりも良好である。ＳＢ  １ＢはＢＣＧワクチンと比べて多機能性Ｔ細胞の数を増大させるが、ＳＢ  １ＡとＳＢ  １Ｂはどちらも同等レベルの四量体特異的ＣＤ８  Ｔ細胞を誘導する（図１１（ｃ〜ｄ））。
【０１５０】
ＳＢ  １ＡはＢＣＧワクチンよりも良好に記憶前駆Ｔ細胞（ＭＰＥＣ）を誘導する（図１１ｅ）。以下に示すヒストグラムは、脾臓における記憶マーカー発現Ｔ細胞集団のフローサイトメトリー解析を示す。
【０１５１】
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの骨髄由来の一次マクロファージをＳＢ  １ＡまたはＳＢ  １Ｂ
単独、ＭＤＰ単独、または表示したとおりの併用で４時間処理した。ＢＣＧを接種に４時間使用し、上清を１８時間後に収集し、成熟ＩＬ１βについてＥＬＩＳＡを用いて滴定した。マクロファージをまず、カスパーゼブロックのためにＺＶＡＤ−ｆｍｋで処理した（２時間）後、ＳＢ  １ＡおよびＳＢ  １Ｂで活性化させ（４時間）、ＢＣＧ接種した（４時間）。サイトカインを１８時間後に測定した。結果を図１２に示す。これは、ＮＯＤ２活性化化合物ＳＢ  １ＡおよびＳＢ  １Ｂが、ＭＤＰまたはインタクトなＢＣＧ桿菌のいずれかとの併用でマクロファージのカスパーゼ依存性機構によってＩＬ−１βのみを誘導することを示す。
【０１５２】
ＮＯＤ２活性化ＳＢ  １Ａ／１ＢとＢＣＧワクチンとの併用では、マウスにおいて、長期保護を示す結核の再抗原刺激に対する保護が誘導される。ＢＣＧワクチンは、ＴＢを予防するために使用される承認された唯一のワクチンであるが、マウスにおけるエアロゾル誘導性ＴＢに対する保護は弱く、誘導される中枢記憶は不充分である（２９）。これは、ＢＣＧがＭＰＥＣを誘導できないためであると考えられる。ＳＢ化合物は高ＭＰＥＣを誘導することがわかった（図１１（ｅ）参照）。しかしながら、マウスには中枢記憶をもたらすＭＰＥＣの存在数が少なく、その機能は、エフェクターＣＤ８  Ｔ細胞への強力なリコール増殖によってのみ確認され得る。
【０１５３】
したがって、マウスにおいてＳＢ  １ＡおよびＳＢ  １Ｂにより誘導されるＭＰＥＣが、強力なエフェクターＴ細胞として再生されることにより長期保護をもたらし得ることを確認するために、新しいモデルを開発した。このモデルを図１４に示す。ここでは、一次ワクチン接種および抗原刺激後、薬物療法によってＭｔｂならびにワクチンを除去し、ＭＰＥＣを休止させる。次いで、マウスに対し強毒Ｍｔｂで再抗原刺激し、保護を評価する。
【０１５４】
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにワクチン接種し、抗原刺激し、イソニアジドとリファンピシンを用いてワクチンとＭｔｂ生物体を３週間除去した後、休止させ、強毒Ｍｔｂのエアロゾ
ル投与で再抗原刺激した。４週間後、肺および脾臓のＣＦＵ数ならびに１群あたり３匹の別々のマウスのＴ細胞解析によって保護を評価した。最も重要なことには、ＳＢ  １Ｂ（ＳＢ  １Ｂ）とＢＣＧの併用では、一次および二次再抗原刺激後のどちらにおいても、ＢＣＧより２倍良好に保護される（二元配置ＡＮＯＶＡによるｐ値；各時点で１群あたり５匹のマウス）。
【０１５５】
図１５（ａ〜ｂ）は、ＳＢ  １ＡまたはＳＢ  １ＢとＢＣＧワクチンの併用により、結核での再抗原刺激に対してより良好なリコール応答を生じさせる能力が保持されることを示す。
【０１５６】
図１１に示した再抗原刺激後のマウスの肺（１６週目）をＣＤ８  Ｔ細胞についてフローサイトメトリーを用いて解析した。ヒストグラムの実施例はＣＤ８  Ｔ細胞の四量体染色を示す。機能性Ｔ細胞の測定には四量体＋ＩＦＮγ染色を使用し、肺における結核に対する記憶ＣＤ８  Ｔ細胞の測定には四量体＋ＣＤ４４染色を使用した。（図１６ａ〜ｂ）
【０１５７】
データは、ワクチン接種したマウスの肺に、同等の数のＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４４＋中枢記憶Ｔ細胞と機能性ＣＤ８  Ｔ細胞（パーフォリン＋グランザイムを発現する）が含まれていることを示す（図１６ｃ〜ｄ）。しかしながら、肺には高レベルの四量体＋ＩＦＮγ  ＣＤ８  Ｔ細胞が含まれており、これもまた記憶マーカーＣＤ６２ＬおよびＣＤ４４を発現する。これにより、ＳＢ  １ＡおよびＳＢ  １Ｂは、より長期の結核の封じ込めに極めて重要な抗原特異的記憶Ｔ細胞の大きさに追加刺激を加えることが示唆される。
【０１５８】
まとめると、マウスを用いた３つの独立した試験により、ＳＭＮＨとＢＣＧワクチンの併用により、結核での一次抗原刺激および二次抗原刺激の両方に対する保護が増強されることが既に示された。
【０１５９】
実施例７：ＳＢ  ４４の前臨床試験
ＳＢ  ４４およびＳＢ  ４０を用いていくつかの前臨床試験を行なった。これらの試験は、リードアジュバント候補であるＳＢ  １Ｂの転帰の実例を示すものである。
ＢＣＧを用いて試験で示されたように、ＳＢ  ４４およびＳＢ  ４０の作用機序は、「外来」核酸の存在下でのＲＩＧ−ＩとＮＯＤ２の誘導および活性化を伴う。ほとんどの外来核酸はその構造内に、該核酸がＲＩＧ−ＩとＮＯＤ２によって「外来」として選択的に認識される根拠を構成する印章パターン（ＰＡＭＰ，病原体関連分子パターン）を有する。作用機序におけるこの特殊な選択性の実例を示すため、いくつかのインビトロ試験を行ない、以下にまとめる：
【０１６０】
１）．ＳＢ  ４０およびＳＢ  ４４を、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）においてサイトカインを誘導するその能力について、２８種類のサイトカイン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７Ａ、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ  ＩＬ−８、ＭＣＰ−１、エオタキシン、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、およびＲＡＮＴＥＳについてのマルチプレックスアッセイを行なうことにより評価した。化合物は、ヒトＰＢＭＣ培養物において５０μＭまでサイトカイン誘導を引き起こさなかった。
【０１６１】
２）．ＳＢ  ４０およびＳＢ  ４４が、細胞内で細菌の核酸の存在下でＩＦＮの産生を増大させ得るかどうかを評価するため、ＰＢＭＣをＢＣＧ単独で、およびＢＣＧと２５μＭのＳＢ  ４４またはＳＢ  ４０のいずれかとを用いて処理した。ＢＣＧを細菌の核酸の供給源として使用した。ＰＢＭＣを、単独またはＢＣＧの存在下のいずれかの化合物とともに２４時間インキュベートし、上清を採取した。ＩＦＮレベルをＥＬＩＳＡを用いて測
定した。ＢＣＧの存在下では、化合物により控えめなＩＦＮ産生の増大が引き起こされた（同じ実験で、ＢＣＧにより他のサイトカイン、例えば、ＩＬ−１、６、８、１０およびＴＮＦ−αは誘導されなかった）。
【０１６２】
３）．ＩＳＧ５６ルシフェラーゼレポーターを使用し、受容体欠損細胞においてＲＩＧ−ＩとＮＯＤ２の外因性発現が誘導され得るかどうかを調べるために実験を行なった。この目的のため、ＰｏｌｙＩ−ＰｏｌｙＣを陽性対照に使用した。この細胞にＳＢ  ４０およびＳＢ  ４４を添加すると、ＲＩＧ−ＩとＮＯＤ２の活性化のため、ＰｏｌｙＩ−ＰｏｌｙＣによって誘導されるものと比べてＩＳＧ−５６発現の控えめな２倍の増強が引き起こされる。
【０１６３】
結果は、ＳＢ  ４０およびＳＢ  ４４によるＩＦＮ誘導（ＮＯＤ２／ＲＩＧ−Ｉ  シグナル伝達カスケードによって媒介される）が外来核酸の存在下で起こり得ることを示す。これらの化合物が、「サイトカインの嵐」および随伴する全身毒性を生じさせる免疫経路の非特異的刺激を引き起こす可能性は低い。このような作用機序の観察結果はＢＣＧとのＳＢ  ４４のアジュバント活性と整合しており、ＩＴＳ  ＩＳＯＭＥＲＳにも同様にあてはまるはずである。
【０１６４】
実施例８：ヒト肝臓由来のＳ９画分におけるＳＢ  ４４の代謝
ＳＢ  ４４（１０μＭ）を、Ｓ９画分（ヒトからプール）（１ｍｇ／ｍｌ）、ＮＡＤＰＨ（１．３ｍＭ）ＵＤＰＧＡ（５ｍＭ）、アラメチシン（１０μｇ／ｍｌ）（１ｍｌの１×ＰＢＳバッファー中）、Ｓ−（５’−アデノシル）−Ｌ−メチオニンヨージド（０．１ｍＭ）、アデノシン３’−リン酸５’−ホスホ硫酸リチウム塩水和物（０．１ｍＭ）およびアセチルＣｏＡ（１ｍＭ）を含むミックスとともにインキュベートした。代謝産物の試料をＨＰＬＣとＬＣ／ＭＳ解析によって評価した。
【０１６５】
プロドラッグＲｐ，ＳＰ−ＳＢ  ４４を肝臓ミクロソームに８時間まで曝露すると、そのジヌクレオチドＲｐ，ＳＰ−ＳＢ  ４０への立体特異的変換がもたらされた。ミクロソームインキュベーション物のＬＣ／ＭＳ評価により、代謝の主要生成物（１種類または複数種）がＲｐ，Ｓｐ−ジヌクレオチドＳＢ  ４０であることが明らかになった。また、ＭＳ解析による測定時、微量の脱硫生成物（＜５％）も検出された。また、いくつかの微量代謝産物（＜１０％）もみられた。しかしながら、このような代謝産物の実体は、分子イオンに基づいてしっかりと確立することはできなかった。すべての場合において、ミクロソーム代謝では、プロドラッグＳＢ  ４４のＲｐ異性体とＳｐ異性体の両方が活性ＳＢ  ４０への立体特異的変換を受け、わずかに微量の脱硫生成物［ＳＢ  ４０に対応］が観察された。それぞれ、ＳＢ  ４４の個々のＲｐ異性体およびＳｐ異性体からＳＢ  ４０のＲｐ異性体およびＳｐ異性体への変換において、有意な速度の差はみとめられなかった。
【０１６６】
ＳＢ  ４４からＳＢ  ４０への血清媒介性変換と同様、ミクロソームの場合も、肝臓エステラーゼは、ＳＢ  ４４からＳＢ  ４０への加水分解的変換に関与している主要な代謝性酵素であると思われる。血清を用いたＲｐ−、ＳＰ−ＳＢ  ４４の先のバイオリバーシブル性（ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｉｌｉｔｙ）試験では、個々の異性体は、ほぼ等しい速度でＲＰ−ＳＢ  ４４、ＳＰ−ＳＢ  ４０に立体特異的に変換された。また、肝臓内および血漿中でのＳＢ  ４４からＳＢ  ４０への容易なバイオコンバージョンは、ユビキタスエステラーゼ酵素の広い基質特異性と整合している。
【０１６７】
実施例９：Ｓ９画分によるＳＢ  ４４のインビトロ代謝
精製ヒト肝臓ミクロソーム試験と同様、プロドラッグＳＢ  ４４をヒト肝臓Ｓ９画分に曝露すると、ＳＢ  ４４からジヌクレオチドＳＢ  ４０への立体特異的変換がもたらされた。ＬＣ／ＭＳによるインキュベーション物の評価により、主要生成物ＳＢ  ４０に加え
て、ＳＢ  ４０に対応する微量の脱硫生成物（＜５％）も形成されていることが明らかになった。また、いくつかの微量代謝産物も観察された。Ｓ９画分による代謝産物のパターンは、精製肝臓ミクロソームで観察されたものと同様であった。したがって、ＳＢ  ４４のフェーズＩＩの共役性反応（あれば）の明白な形跡または最初に形成される活性代謝産物ＳＢ  ４０の明白な形跡はない。
【０１６８】
実施例１０：ＳＢ  ４４のインビトロ前臨床毒物学試験
ＳＢ  ４４を、マディン−ダービーウシ腎臓（ＭＤＢＫ）、ＶｅｒｏおよびＨＦＦ（ヒト包皮線維芽細胞）を含む一群の細胞株に対する細胞毒性評価に供し、ＣＣ５０を調べた。標準的なＭｉｃｒｏｃｕｌｔｕｒｅ  Ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  Ａｓｓａｙ（ＭＴＴ）アッセイを９６ウェルプレートで、ＭＤＢＫ、ＶｅｒｏおよびＨＦＦ細胞株（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから取得）を用いて行なった。対照には、ヌクレオシド類似体３ＴＣ、ＡＺＴ、およびｄｄＣ、ならびに薬物なしの培地を含めた。ＳＤＳを細胞毒性の陽性対照として使用した。プロドラッグはすべて３連で、１００、３００、および１０００μＭの濃度で試験した。試験物質との細胞の２４時間のインキュベーション後、ＭＴＴアッセイを行なった。
【表１】
2018087243.tif 000029
【０１６９】
実施例１１：ＳＢ  ４４の細菌突然変異試験（スクリーニングバージョン）
この試験の目的は、細菌突然変異試験のスクリーニング（非ＧＬＰ）バージョンを用いて、試験物品の遺伝毒性を評価することであった。
【０１７０】
試験計画：試験は１回だけ行なった。試験用標準菌株（リスト菌株）のサブセットを使用し、試験物品の遺伝毒性の可能性を評価した。
【０１７１】
試験物品をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で製剤化し、５０００μｇ／プレート（このアッセイの標準限度用量）の最大濃度で近似半対数希釈物と一緒に、細菌突然変異試験のプレインキュベーションバージョンを用いて試験した。滅菌チェックプレート上のコロニーの非存在により微生物混入の非存在を確認した。ビヒクル対照の平均復帰突然変異体のコロニー数は過去の研究の対照データに近いか、またはその範囲内であった。適切な陽性対照化合物（＋／−Ｓ９ミックス）は、適切な細菌株で、同時進行のビヒクル対照レベルの少なくとも２倍（菌株ＴＡ  １００では１．５倍）の復帰突然変異体のコロニー数の増加を誘導し、試験系の感受性およびＳ９ミックスの活性が確認された。ＳＢ  ４４への曝露後、非復帰突然変異体細菌の背景細菌叢の視認可能な菲薄化は得られず、試験物品が、試験したレベルでは細菌に対して無毒性であることが示された。沈降は観察されなかった。
【０１７２】
Ｓ９ミックスの非存在下または存在下のいずれかの試験物品への曝露後、いずれの菌株でも復帰突然変異体のコロニー数の実質的な増加は得られなかった。したがって、このインビトロ変異原性アッセイでは、ＳＢ  ４４はなんら遺伝毒性活性の形跡を示さなかったと結論付けられる。
【０１７３】
実施例１２：インビトロ心血管安全性アッセイ（ｈＥＲＧ試験）
この試験の目的は、ＳＢ  ４０およびＳＢ  ４４のｈＥＲＧ（ヒトエーテル−ａ−ｇｏ−ｇｏ−関連遺伝子）カリウムチャネル電流（ＩＫｒ、急速活性型遅延整流心筋カリウム電流の代用）に対するインビトロ効果を調べることであった。
【０１７４】
この試験では、ｈＥＲＧチャネルを、内在性ＩＫｒが欠損しているヒト胚腎臓（ＨＥＫ２９３）細胞株において発現させた。ＨＥＫ２９３細胞をｈＥＲＧ  ｃＤＮＡで安定的にトランスフェクトし、ＱＰａｔｃｈ  ＨＴ（登録商標）（自動パラレルパッチクランプシステム）を用いて室温で評価を行なった。各試験物品を１０、５０、１００および２００μＭで評価し、各濃度を３つの細胞（ｎ＝３）で試験した。各試験物品濃度に対する曝露持続期間は３分間とした。
【０１７５】
試験した最高濃度でのｈＥＲＧ電流の阻害が５０％未満であったため、どちらの試験物品のＩＣ５０値も測定することができなかった。陽性対照Ｅ−４０３１によりｈＥＲＧ阻害に対する試験系の感受性を確認する。
【０１７６】
結論として、ＳＢ  ４０およびＳＢ  ４４はｈＥＲＧアッセイにおいてなんら活性を示さず、ＩＣ５０は＞２００μＭである。
【０１７７】
実施例１３：ＳＢ  ４４のインビボ前臨床毒物学試験
ＳＢ  ４４は２つのジアステレオマー（Ｒｐ，Ｓｐ）の混合物であり、そのうちＳＢ  １Ｂが、混合物中に５５〜６０％程度存在するＲｐ異性体である。強制経口投与によって投与したＳＢ  ４４を使用することによりいくつかの前臨床試験を実施した。試験の結果は、ＳＢ  １Ｂを単独で使用した場合に起こり得る転帰を示す。この試験は、解析方法論および生物分析方法論、毒物学試験の定式化、毒物学プロトコルなどがＳＢ  １Ｂに転用され得るためＳＢ  １Ｂでの前臨床試験のしっかりとした基盤を築いている。
【０１７８】
実施例１４：Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットにおけるＳＢ  ４４の用量範囲探索試験
この試験の目的は、潜在的毒性効果を調べること、毒性の潜在標的臓器を特定すること、および最大耐性量（ＭＴＤ）を調べることであり、成体の雄および雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに毎日ＳＢ  ４４を７日間連続で強制経口投与した後のエンドポイントについての無毒性量（ｎｏ  ｏｂｓｅｒｖａｂｌｅ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｆｆｅｃｔ
ｌｅｖｅｌ）（ＮＯＡＥＬ）を調べた。この試験の情報を用いてその後の毒性試験を設計し、ヒトでの用量案の好適性を判断した。この試験はフェーズＡとフェーズＢからなるものとした。フェーズＡは用量範囲探索試験とした。試験には２匹のラット（雄１匹および雌１匹）を含めた。動物に１０００ｍｇ／ｋｇの単回用量のＳＢ  ４４を強制経口投与（ｐｏ）によって投与し、３日間観察した。どちらの動物も予測された体重増加を有し、予定された致死まで試験全体をとおして見かけ上は正常であった。検死は行なわなかった。
【０１７９】
フェーズＢでは、ラット（３／性別／群）に毎日５０、２５０および１０００ｍｇ／ｋｇ／日の経口用量のＳＢ  ４４を７日間連続で投与した。また、対照群（３／性別）には毎日、等価容量の経口用量のビヒクル、５０％ＰＥＧ  ４００＋５０％ＨＰＭＣＴ（０．１％ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよび０．２％Ｔｗｅｅｎ  ８０（滅菌水中））を７日間投与した。８日目に動物を致死させた。以下のパラメータ：死亡率／疾病率、臨床観察結果、体重、臨床病理検査（血液検査および血清化学検査）、臓器重量、ならびに検死時に肝臓組織の肉眼による観察結果および顕微鏡による組織病理検査を評価した。
【０１８０】
フェーズＢの動物はすべて、予定された検死まで生存していた。「シャベリング（ｓｈｏｖｅｌｉｎｇ）」の用量依存性パターンが用量投与後の様々な日に、低用量群の雄以外、処置群のすべての動物においてみとめられた。神経系の機能または他の毒物学パラメータに関連する他の有害徴候がなかったため、この観察結果は、おそらく、ラットが試験物品の味および／または食感を不快と感じたことを示している。体重、臨床病理検査、臓器
重量、ならびに肉眼および顕微鏡による評価について他の薬物関連効果は見られなかった。結論として、ＳＢ  ４４を雄および雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに７日間連続で毎日、強制経口投与により投与しても、明白な生物学的または毒物学的に顕著な有害効果はもたらされなかった。ＳＢ  ４４を毎日経口投与にて７日間連続で投与した場合のＮＯＡＥＬは少なくとも１０００ｍｇ／ｋｇ／日であると考えられる。
【０１８１】
実施例１５：２週間の回復期間を伴うラットにおけるＳＢ  ４４の１４日間の毒性試験および骨髄小核評価
この試験の目的は、１４日間、毎日経口用量の投与後のＳＢ  ４４の潜在毒性効果を調べること、および小核評価によって判断されるＳＢ  ４４の遺伝毒性を評価することであった。雄および雌のＳｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットにＳＢ  ４４を毎日、５０、２００および５００ｍｇ／ｋｇ／日の用量で１４日間連続で投与した。毒物動態学的（ＴＫ）評価の目的で並行群を同様に処置し、血漿をＳＢ  ４４の活性代謝産物であるＳＢ  ４０のレベルについて解析した。ＳＢ  ４４の潜在遺伝毒性を調べるために小核評価を行なった。１５日目に主試験群のラットについて、２８日目に回復群のラットについて検死を行なった。
【０１８２】
動物はすべて、試験終了時まで生存しており、ＳＢ  ４４は、臨床観察結果、臨床病理検査、体重、尿パラメータ、検死および臓器重量による判断時、明白な毒性を引き起こさなかった。とはいうものの、組織の顕微鏡による評価では、試験物品に関連する胸腺の変化が明らかになった。胸腺リンパ球の破壊の増大を示す胸腺食細胞マクロファージの最小限ないし軽度の増加が、２００および５００ｍｇ／ｋｇ／日において雄と雌の両方に観察された。この胸腺の変化は主群と回復基の両方に存在していたが、胸腺萎縮の病理組織学的形跡または胸腺退縮の増大（あれば）とは関連していなかった。リンパ球破壊の増大の形跡は他の臓器には存在しない。この観察結果はＧＩストレス関連のものであり得、したがって毒物学的有意性は限定的であると考えられる。この試験の小核アッセイ部分では、ＳＢ  ４４はラット骨髄の赤血球内で小核を誘導しないことがわかった。
【０１８３】
実施例１６：毒物動態学的解析
ほとんどの試料のＳＢ  ４０血漿濃度がＬＬＯＱまたはその付近であり、すべてのＴＫパラメータの測定が疑わしかったため、経口投与後の最大血漿中濃度（Ｃｍａｘ）および最終試料採取時点までの血漿中濃度時間曲線下面積（ＡＵＣｌａｓｔ）のみを報告した。雄および雌ラットにおいて、１日目と１４日目の両方でＣｍａｘとＡＵＣｌａｓｔに非線形用量関係がみられた。最高全身曝露を最高用量（５００ｍｇ／ｋｇ）で雄と雌の両方について、１４日目に測定し、１４日目のＳＢ  ４０のＣｍａｘとＡＵＣｌａｓｔの値は各投与用量で１日目のものよりも高かった。ＳＢ  ４４を１４日間、毎日投与後のこのＳＢ
４０の蓄積は、肝臓への有意な分布と血漿中への低速放出による戻りが合わさって引き起こされたのかもしれない。一般的に雌は雄よりも多くの全身曝露を有しており、最大差は５００ｍｇ／ｋｇ用量群における１４日目で約２倍であった。胸腺の顕微鏡による所見およびＳＢ  ４４のこのような効果からの回復の形跡の非存在に基づき、この試験での無影響量（ｎｏ  ｏｂｓｅｒｖｅｄ  ｅｆｆｅｃｔ  ｌｅｖｅｌ）（ＮＯＥＬ）は５０ｍｇ／ｋｇ／日であると判断した。
【０１８４】
実施例１７：カニクイザルにおけるＳＢ  ４４の用量範囲探索試験
この試験の目的は、カニクイザルにＳＢ  ４４を４日間連続で毎日強制経口投与した後に調べたエンドポイントについての最大耐性量（ＭＴＤ）および無毒性量（ＮＯＡＥＬ）を調べることであった。この試験の情報を用いてその後の用量範囲毒性試験を設計し、ヒトでの用量案の好適性を判断した。
【０１８５】
ＳＢ  ４４を５００ｍｇ／ｋｇ／日でカニクイザルに連続して４日間経口投与した。こ
の用量は臨床的には充分に耐容性であったが、約２倍のＡＬＴの上昇および約６倍のＡＳＴの上昇を伴っており、これらは処置の中止後、約１週間でベースラインに戻った。血液検査パラメータはすべて正常と思われ、他の明白な毒性の形跡はなかった。
【０１８６】
結論：前述のように、ＳＢ  ４４は２つの異性体（Ｒｐ，Ｓｐ）の混合物であり、そのうちＳＢ  １Ｂが、５５％より多くで存在するＲｐ異性体である。ＳＢ  １Ｂは、マウスでの短期の一次Ｍｔｂ抗原刺激実験および長期Ｍｔｂ抗原刺激実験において、ＳＢ  ４４よりもアジュバントとして有効であると思われる。また、ＳＢ  ４４の第２の異性体（Ｓｐ異性体）のアジュバントとしての有効性に関しては多くは知られていない。ＳＢ  ４４を使用することにより、いくつかの前臨床試験を行なった。試験の結果は、ＳＢ  ４４が示すジヌクレオチド組成物の優れた安全性を示す。そのため、ＳＢ  １Ｂの皮下投与では優れた安全性プロフィールが予測される。
【０１８７】
実施例１８：ＢＣＧと化合物で処理したＰＢＭＣにおけるインターフェロンの誘導
このアッセイでは、ＰＢＭＣを１００万細胞／ｍｌで２４ウェルプレートにプレーティングした。プレート群をＢＣＧ、ＢＣＧ＋化合物で処理し、２４時間インキュベートした。細胞を溶解させ、上清を採取した。サイトカインおよびＩ型インターフェロンの産生を、標準的なキットによりＥＬＩＳＡアッセイを用いて評価した。同じ実験で、ＢＣＧは他のサイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０およびＴＮＦ）を誘導した。ＢＣＧと化合物で処理した細胞は、ＢＣＧ単独と比べて高いＩＦＮ産生を誘導した。結果を図１７に示す。
【０１８８】
同じ実験で、ＢＣＧは他のサイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０およびＴＮＦ）を誘導した。ＢＣＧと化合物で処理した細胞は、ＢＣＧ単独と比べて高いＩＦＮ産生を誘導した。
【０１８９】
まとめると、本発明の特許請求の範囲に記載の化合物は細胞内微生物センサーの活性化因子として作用し、免疫応答の賦活を引き起こす。ワクチンとともに使用した場合、該化合物はアジュバントとして作用し、ワクチンによって誘導される免疫応答を増強する。
【０１９０】
実施例１９．インビトロ細胞毒性試験
肝臓、腎臓、骨髄およびミトコンドリアへの毒性が予測される一群の細胞株を用いたリード化合物（１種類または複数種）のインビトロ細胞毒性試験（所内）。
【０１９１】
化合物１と３は優れた安全性プロフィールを有し、いくつかの細胞株ではＣＣ５０＞１０００マイクロモルである。標準的なＭＴＴアッセイを９６ウェルプレートで、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６  Ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔを９６−ｗｅｌｌ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＭａｘ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｄｅｖｉｃｅｓ）ならびにＭＤＢＫ、ＶｅｒｏおよびＨＦＦ細胞株（ＡＴＣＣから取得）とともに用いて行なった。いくつかの対照、例えば、ヌクレオシド類似体３ＴＣ、ＡＺＴおよびｄｄＣならびに薬物なしの培地を使用した。ＳＤＳを細胞毒性の陽性対照として使用した。化合物は３連で、１００、３００、および１０００μＭの濃度で試験した。試験物質との細胞の２４時間のインキュベーション後、ＭＴＴアッセイを行なった。試験化合物はすべてＣＣ５０＞１０００マイクロモルを示し、該化合物の高い安全性指標が示された。
【０１９２】
引用された参考文献
【表２−１】
2018087243.tif 000030
【表２−２】
2018087243.tif 000031
【表２−３】
2018087243.tif 000032
【図１】
2018087243.tif 000033
【図２】
2018087243.tif 000034
【図３】
2018087243.tif 000035
【図４】
2018087243.tif 000036
【図５】
2018087243.tif 000037
【図６】
2018087243.tif 000038
【図７】
2018087243.tif 000039
【図８】
2018087243.tif 000040
【図９】
2018087243.tif 000041
【図１０Ａ】
2018087243.tif 000042
【図１０Ｂ】
2018087243.tif 000043
【図１０Ｃ】
2018087243.tif 000044
【図１０Ｄ】
2018087243.tif 000045
【図１１Ａ】
2018087243.tif 000046
【図１１Ｂ】
2018087243.tif 000047
【図１１Ｃ】
2018087243.tif 000048
【図１１Ｄ】
2018087243.tif 000049
【図１１Ｅ】
2018087243.tif 000050
【図１２Ａ−１】
2018087243.tif 000051
【図１２Ａ−２】
2018087243.tif 000052
【図１２Ｂ−１】
2018087243.tif 000053
【図１２Ｂ−２】
2018087243.tif 000054
【図１３】
2018087243.tif 000055
【図１４】
2018087243.tif 000056
【図１５】
2018087243.tif 000057
【図１６Ａ】
2018087243.tif 000058
【図１６Ｂ】
2018087243.tif 000059
【図１６Ｃ】
2018087243.tif 000060
【図１６Ｄ】
2018087243.tif 000061
【図１７】
2018087243.tif 000062
【外国語明細書】
2018087243000001.pdf