(57)【要約】【課題】本発明は、細胞内のＡＴＰを増加させる効果を有する物質、そのうちでもイノシン単独、又はキサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤単独による増加効果を遥かに凌ぐような強力なＡＴＰ増加剤の提供を課題とする。【解決手段】以下のＡ）及びＢ）を組み合わせてなる、ヒト又は動物の細胞内ＡＴＰ増加剤。Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤Ｂ）ヒポキサンチン、又は体内でヒポキサンチンに変換され得る化合物【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のＡ）及びＢ）を組み合わせてなる、ヒト又は動物の細胞内ＡＴＰ増強剤。
Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤
Ｂ）ヒポキサンチン、又は体内でヒポキサンチンに変換され得る化合物
【請求項２】
Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット、アロプリノール、ヒドロキシアルカン、カルプロフェン、Ｙ−７００およびＫＵＸ−１１５１からなる群から選ばれるいずれか１以上である請求項１に記載の細胞内ＡＴＰ増強剤。
【請求項３】
Ｂ）の体内でヒポキサンチンに変換され得る化合物が、イノシン、イノシン酸、アデニン、アデノシン、ＡＭＰ、ＡＤＰ、ＡＴＰ、サクシニルアデノシン、Ｓ−アデノシルメチオニン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、メチルチオアデノシンおよびそれらの薬学的に許容される塩から選ばれるいずれか１以上の化合物である請求項１又は２に記載の細胞内ＡＴＰ増強剤。
【請求項４】
Ａ）及びＢ）の組み合わせが、Ａ）及びＢ）を含む合剤又はキット剤である、請求項１〜３のいずれかに記載のＡＴＰ増強剤。
【請求項５】
細胞内ＡＴＰ増強剤としてイノシンと組み合わせて使用される、アロプリノール又はトピロキソスタット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、Ｂ）ヒポキサンチンまたは体内でヒポキサンチンに変換され得る化合物と、を組み合わせてなるヒト又は動物の細胞内ＡＴＰ増強剤に関する。さらに詳しくは、Ａ）がアロプリノール又はトピロキソスタットである場合の前記細胞内ＡＴＰ増強剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＡＴＰ（adenosine triphosphate、以下単にＡＴＰということがある）は生物のエネルギーを蓄え、必要なときに供給する最も重要な化合物であり、ＡＴＰ減少は様々な疾患の病態に関連していると考えられている。例えば、各種の遺伝性溶血性貧血の原因として、赤血球内のＡＴＰ減少が溶血のメカニズムであると考えられている。例えば、鎌形赤血球症（非特許文献１）、ピルベートキナーゼ欠損症（非特許文献２）、球状赤血球症（非特許文献３）、楕円赤血球症（非特許文献３）、口唇状赤血球症（非特許文献４）、サラセミア（非特許文献５）などである。
また、虚血性心疾患による心筋障害のメカニズムとして細胞内ＡＴＰ低下が示唆されており（非特許文献６）、キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害薬であるアロプリノールの高用量投与により慢性安定性狭心症の症状が抑えられたと報告されている（非特許文献７）。著者他は、アロプリノールがＡＴＰを増加させたことにより虚血性心疾患に良好な影響があったと示唆している（非特許文献７）。
更に、ＡＴＰ増強療法は心不全に効果がある可能性が高い。米国では心不全患者にしばしば心臓移植が行われており、心不全の発生から死亡に至る期間ではなく、心不全の発生から心臓移植に至る期間が心不全進行の早さの目安になる。心臓移植に至る期間が短いことは心不全の進行が早いことを示す。欧米では遺伝性筋ＡＭＰ  deaminase（ＡＭＰＤ）欠損症の頻度が極めて高く、約２０％の一般人がヘテロ接合体欠損症である。研究により筋肉の遺伝的ＡＭＰＤ欠損者は、心不全発生から心臓移植に至る期間が長いことが知られている（非特許文献８）。また、ＡＭＰＤ阻害薬によりマウスの心不全が改善することが示唆されている（非特許文献９）。一般に運動をすると筋肉のＡＴＰは減少する。しかし、遺伝性筋ＡＭＰＤ欠損者は運動後も筋肉内ＡＴＰが減少しない、あるいは減少が抑制されていると報告されている（非特許文献１０）。即ち、ＡＭＰがＩＭＰ（inosine monophosphate、以下単にＩＭＰということがある）に変換されないためＡＭＰ減少が防止でき、ＡＴＰ減少も起きないのである（図６）。これより考えると、遺伝的筋ＡＭＰＤ欠損症では心筋細胞のＡＴＰ減少が起きにくく心不全の進行が抑えられたと考えられる。
このようにＡＴＰを増強することにより、ＡＴＰ低下が病態に関係する疾患の病態を改善することが期待できる。
【０００３】
また、イノシン投与によりＡＴＰ増加により筋肉運動の増強作用が起きることを期待し、イノシンが筋肉運動を増強するという報告があるが、最近はその効果を否定する報告もある（非特許文献１１）。しかし、イノシンによる筋運動増強作用が証明されない原因は、イノシンのみではＡＴＰ増強作用が不完全なためである可能性がある。
西野他は、筋萎縮性側索硬化症（以下、単にＡＬＳということがある）モデルマウスにフェブキソスタットなどのキサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害薬を投与し、疾患進行を抑制することを見出している（非特許文献１２）。西野他はフェブキソスタットの投与により神経細胞のＡＴＰが増加することが疾患進行を抑制させると推測している  （非特許文献１２）。実際に、ＡＬＳモデルマウスのＮａ／Ｋ−ＡＴＰａｓｅをknock-downすることにより神経細胞の変性が抑制されると報告されている（非特許文献１２）。また、ＡＬＳ患者ではＮａ／Ｋ−ＡＴＰａｓｅ活性が更新していると報告されている（非特許文献１３）。即ち、ＡＴＰを減少させるＮａ／Ｋ−ＡＴＰａｓｅの活性化がＡＬＳの発症あるいは進行を促進し、ＡＴＰ減少を抑えるＮａ／Ｋ−ＡＴＰａｓｅの抑制がＡＬＳの進行を抑えると考えられる。
更に、イノシン投与によりパーキンソン病（非特許文献１４）、多発性硬化症（非特許文献１５）の症状が軽減するという報告がある。著者他はいずれも血清尿酸値の低下が疾患に関係しているのではないかと考えている。イノシンを投与することにより血清尿酸値を上昇させ、治療効果を発揮することを目的として臨床試験を行っている。しかし、これまでの報告では効果は十分ではない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Palek J, Liu SC, Liu PA. Crosslinking of the nearest membrane protein neighbors in ATP depleted, calcium enriched and irreversibly sickled red cells. Prog Clin Biol Res. 1978;20:75-91.
【非特許文献２】Glader BE. Salicylate-induced injury of pyruvate-kinase-deficient erythrocytes. N Engl J Med. 1976 Apr 22;294(17):916-8.
【非特許文献３】de Jong K, Larkin SK, Eber S, Franck PF, Roelofsen B, Kuypers FA. Hereditary spherocytosis and elliptocytosis erythrocytes show a normal transbilayer phospholipid distribution. Blood. 1999 Jul 1;94(1):319-25.
【非特許文献４】Mentzer WC Jr, Smith WB, Goldstone J, Shohet SB. Hereditary stomatocytosis: membrane and metabolism studies. Blood. 1975 Nov;46(5):659-69.
【非特許文献５】Wiley JS. Increased erythrocyte cation permeability in thalassemia and conditions of marrow stress. J Clin Invest. 1981 Apr;67(4):917-22.
【非特許文献６】Vogt AM, Ackermann C, Yildiz M, Schoels W, Kubler W. Lactate accumulation rather than ATP depletion predicts ischemic myocardial necrosis: implications for the development of lethal myocardial injury. Biochim Biophys Acta. 2002 Mar 16;1586(2):219-26
【非特許文献７】Noman A, Ang DS, Ogston S, Lang CC, Struthers AD. Effect of high-dose allopurinol on exercise in patients with chronic stable angina: a randomised, placebo controlled crossover trial. Lancet. 2010 Jun 19;375(9732):2161-7.
【非特許文献８】Loh E, Rebbeck TR, Mahoney PD, DeNofrio D, Swain JL, Holmes EW. Common variant in AMPD1 gene predicts improved clinical outcome in patients with heart failure.  Circulation. 1999 Mar 23;99(11):1422-5.
【非特許文献９】Borkowski T, Slominska EM, Orlewska C, Chlopicki S, Siondalski P, Yacoub MH, Smolenski RT. Protection of mouse heart against hypoxic damage by AMP deaminase inhibition. Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids. 2010 Jun;29(4-6):449-52.
【非特許文献１０】Norman B, Sabina RL, Jansson E. Regulation of skeletal muscle ATP catabolism by AMPD1 genotype during sprint exercise in asymptomatic subjects. J Appl Physiol (1985). 2001 Jul;91(1):258-64.
【非特許文献１１】McNaughton L, Dalton B, Tarr J. Inosine supplementation has no effect on aerobic or anaerobic cycling performance. Int J Sport Nutr. 1999 Dec;9(4):333-44.
【非特許文献１２】Yasuko Abe, Shinsuke Kato, Takeshi Nishino. Therapeutic agent for amyotrophic lateral sclerosis. US Patent US 8318792 B2, European Patent EP2050467 A1
【非特許文献１３】Gallardo G, Barowski J, Ravits J, Siddique T, Lingrel JB, Robertson J, Steen H, Bonni A. An α2-Na/K ATPase/α-adducin complex in astrocytes triggers non-cell autonomous neurodegeneration. Nat Neurosci. 2014 Dec;17(12):1710-9.
【非特許文献１４】Parkinson Study Group SURE-PD Investigators, Schwarzschild MA, Ascherio A, Beal MF, Cudkowicz ME, Curhan GC, Hare JM, Hooper DC, Kieburtz KD, Macklin EA, Oakes D, Rudolph A, Shoulson I, Tennis MK, Espay AJ, Gartner M, Hung A, Bwala G, Lenehan R, Encarnacion E, Ainslie M, Castillo R, Togasaki D, Barles G, Friedman JH, Niles L, Carter JH, Murray M, Goetz CG, Jaglin J, Ahmed A, Russell DS, Cotto C, Goudreau JL, Russell D, Parashos SA, Ede P, Saint-Hilaire MH, Thomas CA, James R, Stacy MA, Johnson J, Gauger L, Antonelle de Marcaida J, Thurlow S, Isaacson SH, Carvajal L, Rao J, Cook M, Hope-Porche C, McClurg L, Grasso DL, Logan R, Orme C, Ross T, Brocht AF, Constantinescu R, Sharma S, Venuto C, Weber J, Eaton K. Inosine to increase serum and cerebrospinal fluid urate in Parkinson disease: a randomized clinical trial. JAMA Neurol. 2014 Feb;71(2):141-50.
【非特許文献１５】Markowitz CE, Spitsin S, Zimmerman V, Jacobs D, Udupa JK, Hooper DC, Koprowski H. The treatment of multiple sclerosis with inosine. J Altern Complement Med. 2009 Jun;15(6):619-25.
【非特許文献１６】Ogasawara N, Goto H, Yamada Y, Nishigaki I, Itoh T, Hasegawa I, Park KS.Deficiency of AMP deaminase in erythrocytes. Hum Genet. 1987 Jan;75(1):15-8.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
イノシンの単独投与によっても細胞内ＡＴＰは多少増加すると報告されている。実際に、Ogasawara他は２０−３０日低温で放置し、ＡＴＰが低下した赤血球にイノシンを加え１時間放置した後、ＡＴＰが上昇したことを報告している（非特許文献１６）。しかし、ヒト体内ではイノシンはヒポキサンチン、キサンチンを経て尿酸へと速やかに代謝される（図６）。従ってイノシンだけで十分なＡＴＰ増強作用を発揮するには不十分であった。また、フェブキソスタットの単独投与でも多少の細胞内ＡＴＰの増強は期待できるが、これだけでは不十分の可能性がある。
本発明は、細胞内のＡＴＰを増強させる効果を有する組成物、そのうちでもイノシン単独、又はフェブキソスタット単独による増強効果を凌ぐような細胞内ＡＴＰ増強剤の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、上記課題を解決するためのものであって、以下の構成を有する。
〔１〕以下のＡ）及びＢ）を組み合わせてなる、ヒト又は動物の細胞内ＡＴＰ増強剤。
Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤
Ｂ）ヒポキサンチン、又は体内でヒポキサンチンに変換され得る化合物
〔２〕Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット、アロプリノール、ヒドロキシアルカン、カルプロフェン、Ｙ−７００およびＫＵＸ−１１５１からなる群から選ばれるいずれか１以上である〔１〕に記載の細胞内ＡＴＰ増強剤。
〔３〕Ｂ）の体内でヒポキサンチンに変換され得る化合物が、イノシン、イノシン酸、アデニン、アデノシン、ＡＭＰ、ＡＤＰ、ＡＴＰ、サクシニルアデノシン、Ｓ−アデノシルメチオニン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、メチルチオアデノシンおよびそれらの薬学的に許容される塩から選ばれるいずれか１以上の化合物である〔１〕又は〔２〕に記載の細胞内ＡＴＰ増強剤。
〔４〕Ａ）及びＢ）の組み合わせが、Ａ）及びＢ）を含む合剤又はキット剤である、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のＡＴＰ増強剤。
〔５〕細胞内ＡＴＰ増強剤としてイノシンと組み合わせて使用される、アロプリノール又はトピロキソスタット。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の以下の、Ａ）及びＢ）の併用投与による細胞内ＡＴＰ増強効果により、ＡＴＰ減少が病態の一部を形成する様々な疾患、更にはＡＴＰの過剰供給により病態の進行が抑制される様々な疾患の治療薬を提供することが可能である。
Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤
Ｂ）ヒポキサンチン、又は体内でヒポキサンチンに変換され得る化合物
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】Ａ〜Ｅ群の投与を行った場合の血清尿酸値の推移を示すグラフである。横軸は測定期間（週）、縦軸は血清尿酸値（単位ｍｇ／ｄＬ）を示す。Ａ群：フェブキソスタット２０ｍｇ、１日２回、１４日間，Ｂ群：イノシン５００ｍｇ、１日２回、１４日間，Ｃ群：フェブキソスタット２０ｍｇ＋イノシン５００ｍｇ、１日２回、１４日間，Ｄ群：フェブキソスタット２０ｍｇ＋イノシン１０００ｍｇ、１日２回、１４日間，Ｅ群：フェブキソスタット３０ｍｇ、１日２回、１４日間（以下の図でも同様）
【図２】Ａ〜Ｅ群の投与を行った場合の尿中尿酸濃度／クレアチニン濃度の推移を示すグラフである。横軸は測定期間（週）、縦軸は尿中尿酸濃度／クレアチニン濃度（比）を示す。
【図３】Ａ〜Ｅ群の投与を行った場合の血液中ＡＴＰ及びＡＤＰの推移を示すグラフである。横軸は測定期間（週）、縦軸はＡＴＰ又はＡＤＰ濃度（単位μＭ）を示す。ＡＴＰ：実線、ＡＤＰ：破線。
【図４】Ａ〜Ｅ群の投与を行った場合の血液中Ｈｘ（ヒポキサンチン）、Ｘ（キサンチン）の推移を示すグラフである。横軸は測定期間（週）、縦軸はＨｘ又はＸ濃度（単位μＭ）を示す。Ｈｘ：実線、Ｘ：破線。
【図５】Ａ〜Ｅ群の投与を行った場合の尿中の各種プリン体の濃度（μＭ）の推移を示すグラフである。
【図６】ＡＴＰ合成に関する経路を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の１つの有効成分は、Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤である。キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤としては、フェブキソスタット（商品名フェブリク（帝人ファーマ））、トピロキソスタット（商品名ウリアデック（三和化学研究所）、トピロリック（富士薬品））、アロプリノール（商品名ザイロリック（グラクソ・スミスクライン））、ヒドロキシアルカン、カルプロフェン、Ｙ−７００（田辺三菱製薬）、及びＫＵＸ−１１５１（キッセイ薬品）などが挙げられる。また、これらの化合物の薬学的に許容される塩も本発明のＡ）の有効成分に含まれる。
本発明のもう１つの有効成分は、Ｂ）ヒポキサンチン、又は体内でヒポキサンチンに変換され得る化合物である。体内でヒポキサンチンに変換され得る化合物としては、例えばイノシン、イノシン酸、アデニン、アデノシン、ＡＭＰ、ＡＤＰ、ＡＴＰ、サクシニルアデノシン、Ｓ−アデノシルメチオニン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、メチルチオアデノシン及びそれらの薬学的に許容される塩から選ばれるいずれか１以上の化合物が挙げられるが、これらの化合物も結局はヒポキサンチンに分解されるため、イノシンの代わりにこれらの物質を使用することが可能である（図６）。このうちでもイノシンが望ましい。
【００１０】
本発明の細胞内ＡＴＰ増強作用とは、本発明の有効成分が細胞内でＡＴＰの生成を増加させる効果をいう。増加には、定常からの増加、又は減少を抑制すること、あるいは減少した状態から定常に近づけること、のいずれをも含む意味で用いられる。本発明の効果の確認は、細胞内ＡＴＰ濃度の直接の測定の他、ＡＴＰ増加によってもたらされる他の代謝経路の産物の測定によって間接的に測定することもできる。
【００１１】
本発明の「Ａ）及びＢ）を組み合わせてなる」とは、Ａ）の成分とＢ）の成分が投与対象の体内でＡＴＰ増強作用を発揮するように組み合わされた態様をすべて含む意味で用いられる。したがって、Ａ）の成分とＢ）の成分が混合されて組成物を形成している合剤（配合剤ともいう）、あるいは混合されることなく、物理的に別々に存在するが、投与される際に同時期に投与されるようにまとめられて存在する薬剤のいずれをも含む。
合剤（配合剤）の例としては、混合されて製剤化されたものが挙げられる。製剤化の例としては、顆粒、粉体、固形剤、液体などの経口剤、吸入剤などが挙げられる。
物理的に別々に存在するが、投与される際に同時期に投与されるようにまとめられて存在する薬剤としては、いわゆるキット剤や、１つの袋に取りまとめられる形態が挙げられる。
同時期とは、必ずしも厳密な意味での同時を意味せず、本発明のＡＴＰ増強作用効果が発揮される範囲で間隔を置く場合も本発明の同時期に含むものとする。例えば、一方を食前、一方を食後に飲むような場合は本発明の同時期に投与される場合に相当する。
また、本発明は、Ａ）及びＢ）を併用投与する工程を含む細胞内ＡＴＰ増強方法、ＡＴＰ増加方法ともとらえることができる。
【００１２】
本発明のＡＴＰ増強剤の投与量は、例えば、Ａ）のアロプリノールは、約５０ｍｇ〜約８００ｍｇ／日、トピロキソスタットは、４０〜１６０ｍｇ／日、フェブキソスタットは、１０〜８０ｍｇ／日が望ましい。また、Ｂ）のイノシンは、０．５〜４．０ｇ／日が望ましく、Ｂ）ヒポキサンチン、または体内でヒポキサンチンに変換され得る化合物の有効量も前記イノシンの量に相当する量を分子量により換算して求めることができる。
【００１３】
投与方法は、上記投与量をそれぞれ１日１回又は２回以上に分けて投与することが可能である。このうちでも、フエブキソスタットは、従来のフェブキソスタットの用法のように１日１回投与ではなく、１日２回の投与を行うことが望ましい。また、イノシンも１日１回よりも２回の投与が望ましい。したがって、イノシン、フェブキソスタットともに１日２回にわけて投与することがさらに望ましい。また、アロプリノール、トピロキソスタットも同様に１日１回よりも２回の投与が望ましい。
合剤とする場合は、１日の投与量、投与方法を考慮して調整すればよく、アロプリノール１００ｍ、トピロキソスタット８０ｍｇ、フェブキソスタット２０ｍｇ、又は４０ｍｇにイノシン０．５ｇ、１ｇ、１．５ｇ、又は２ｇを加えたものなどが望ましい。
【００１４】
本発明医薬の投与形態は特に限定されず、経口又は非経口のいずれの投与形態でもよい。また、投与形態に応じて適当な剤形とすることができ、例えば注射剤、あるいはカプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、丸剤、細粒剤などの経口剤、直腸投与剤、油脂性坐剤、水性坐剤などの各種製剤に調製することができる。
本発明医薬は、有効成分Ａ）及びＢ）を含むことから、有効成分Ａ）の投与形態とＢ）の投与形態は同じであってもよいし、異なってもよい。同じ投与形態の例としては、両方を錠剤で経口投与する場合、両者を合わせた合剤として経口投与する場合、両者を混合した注射剤で投与する場合などが挙げられる。また、異なる投与形態の例としては、一方を経口剤、一方を注射剤などで投与する場合が挙げられる。
【００１５】
本発明の投与対象は、ヒト又は動物であり、ＡＴＰの増強が必要な状態にあるヒト又は動物である。
対象疾患としては、ＡＴＰ減少が病態に関連していることが強く示唆される、以下の疾患（１）溶血性貧血（２）虚血性心疾患（３）心不全（４）筋萎縮性側索硬化症（５）パーキンソン病（６）ＡＤＳＬ欠損症が挙げられる。このうちでも特に、（２）虚血性心疾患（３）心不全（４）筋萎縮性側索硬化症に効果的である。
【００１６】
本発明のＡＴＰ増強剤は、本発明の作用を損なわない範囲で他の医薬とさらに組み合わせることも可能である。
以下、本発明を実施例をもとに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００１７】
〔試験例１〕臨床試験（フェブキソスタットとイノシンの併用投与）
１．各種測定方法
（１）臨床検査
下記項目以外は定法により測定した。
（２）血清尿酸値
臨床化学自動分析装置はアークレイ株式会社製の乾式臨床化学分析測定ユニットを用い、血清尿酸値の測定はウリカーゼーペルオキシダーゼ法を用いた。
（３）尿中尿酸濃度／クレアチニン濃度
尿中尿酸濃度は尿量により変化するため、尿中クレアチニン濃度で除した、尿中尿酸／クレアチニンの値を用い、尿中尿酸量を評価した。尿酸値の測定方法は血清尿酸値と同じ。
（４）血液中プリン体濃度
末梢血中の各種プリン体の測定は、文献によった。簡単に述べると、末梢血をＥＤＴＡ採血し、５００μＬ＋５００μＬ  ice cold ８％ＰＣＡと混合し、直ちに５秒Ｖｏｒｔｅｘ、１２，０００ ｘ ｇで４℃で１０分間遠心、上清を−８０度で保存した。サンプルが集まった状態で、溶解し、溶解液６５０μＬに４０μＬの２ＭＫ２ＣＯ３ｉｎ６ＭＫＯＨを加え、ＰＣＡの沈殿と中性化を同時に行った。これを、１２，０００ｘ  ｇで摂氏４度で１０分間遠心後、上清４０μＬに移動相１６０μＬを加えＨＰＬＣにかけた。ＨＰＬＣの条件も下記文献によった。プリン体の量は全血１Ｌ中に含まれるモル量で表した。
文献
Coolen EJ, Arts IC, Swennen EL, Bast A, Stuart MA, Dagnelie PC. Simultaneous determination of adenosine triphosphate and its metabolites in human whole blood by RP-HPLC and UV-detection. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2008 Mar 15;864(1-2):43-51.
（５）尿中プリン体濃度
上記（４）と同じ方法によりプリン体濃度を測定した。
【００１８】
２．投与試験
（１）投与対象
日本人の健康成人男性１６名を、I期は１名、第II期は１５名をＡ群〜Ｅ群に各群３名ずつに分けて下記投与試験を行った。
（２）投与内容及び投与スケジュール
（２−１）第Ｉ期
１名に対し、フェブキソスタット２０ｍｇとイノシン５００ｍｇ、１日２回の同時投与を１４日間行い、安全性を確認した。
（２）第ＩＩ期
第Ｉ期終了後、下記に示す内容で、各群３名に投与を行った。
Ａ群  フェブキソスタット２０ｍｇ、１日２回、１４日間
Ｂ群  イノシン５００ｍｇ、１日２回、１４日間
Ｃ群  フェブキソスタット２０ｍｇとイノシン５００ｍｇ、１日２回、１４日間
Ｄ群  フェブキソスタット２０ｍｇとイノシン１０００ｍｇ、１日２回、１４日間
Ｅ群  フェブキソスタット３０ｍｇ、１日２回、１４日間
【００１９】
３．結果
３−１．第Ｉ期
（１）有害事象
（１−１）身体所見等
被検者は自覚所見、及び身体所見で有害事象はなかった。
（１−２）臨床検査
８日目のＡＳＴが４９Ｕ／Ｌ（基準値１０〜４０）と異常値を示したが、１５日目に２９Ｕ／Ｌと基準値に復した。８日目のクレアチニンが１．０９ｍｇ／ｄＬ（基準値０．６１〜１．０４）と異常値を示したが、１５日目に０．９８ｍｇ／ｄＬと基準値に復した。８日目の血糖値が６６ｍｇ／ｄＬ、１５日目が６７ｍｇ／ｄＬ（基準値７０〜１０９）と異常値を示した。
（２）血清尿酸値の変化
血清尿酸値は、１日目４．９ｍｇ／ｄＬ、８日目２．５ｍｇ／ｄＬ、１５日目２．９ｍｇ／ｄＬであった。フェブキソスタット４０ｍｇ、イノシン１ｇの服用により、平均２．２ｍｇ／ｄＬ低下したことになる。
【００２０】
３−２．第ＩＩ期
（１）有害事象
（１−１）身体所見
年齢、身長、体重、ＢＭＩ、最高血圧、最低血圧、脈拍、体温に群間の著明な差はなかった。最高血圧、最低血圧、脈拍、体温も、被検者１名において脈拍数の著明な増加が見られた以外は、著明な変化は見られなかった。
（１−２）各検査値の有害事象（尿酸値を除く）
総蛋白、アルブミン、総ビリルビン、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬ−Ｐ、ＬＤ、γ−ＧＴ、総コレステロ−ル、中性脂肪、ＨＤＬコレステロ−ル、ＬＤＬコレステロール定量、尿酸、尿素窒素、クレアチニン、ナトリウム、クロ−ル、カリウム、カルシウム、血糖検査、ＨｂＡ１ｃ（ＮＧＳＰ）、白血球数ＷＢＣ、赤血球数ＲＢＣ、血色素量Ｈｂ、ヘマトクリツトＨｔ、血小板数ＰＬＴ、ＢＡＳＯ、ＥＯＳＩＮＯ、ＮＥＵＴＲＯ、ＬＹＭＰＨ、ＭＯＮＯについて測定した。
特に各群の背景に差は見られなかった。また、血清尿酸値以外は特に著明な変化は認められなかった。
【００２１】
（２）血清尿酸値の変化
図１にＡ〜Ｅの群ごとのグラフを示す。イノシンのみを投与したＢ群では血清尿酸値の著増が見られた（最高８．１ｍｇ／ｄＬ）。Ａ、Ｃ〜Ｅ群では血清尿酸値の低下が見られた。フェブキソスタット４０ｍｇ／日投与例では血清尿酸値が２ｍｇ／ｄＬ未満に低下した例は無かったが、フェブキソスタット６０ｍｇ／日投与群であるＥ群では血清尿酸値が２ｍｇ／ｄＬ未満になる例が見られた。
フェブキソスタット４０ｍｇ／ｄＬの投与により、血清尿酸値は２．５３ｍｇ／ｄＬ低下したが（Ａ群）、同時にイノシンを１日１ｇ投与した例では２．２３ｍｇ／ｄＬ低下（Ｃ群）、１日２ｇ投与した例では１．４７ｍｇ／ｄＬ低下（Ｄ群）した。
フェブキソスタット６０ｍｇ／ｄＬの投与により、血清尿酸値は３．９３ｍｇ／ｄＬ低下した（Ｅ群）。一日１ｇのイノシンにより血清尿酸値は平均２．５７ｍｇ／ｄＬ上昇した（Ｂ群）。これをフェブキソスタット投与下におけるイノシンの血清尿酸値増加効果から検討すると、フェブキソスタット４０ｍｇ／日の下ではイノシン１ｇ／日投与により血清尿酸値は０．３ｍｇ／ｄＬ、２ｇ／日投与により血清尿酸値は１．０６ｍｇ／ｄＬ増加したことになる。前述のように、フェブキソスタット非投与下では１ｇ／日のイノシン投与により血清尿酸値は２．５７ｍｇ／ｄＬ増加したのでフェブキソスタット投与下ではイノシンによる血清尿酸上昇作用が大幅に抑制されることになる。
【００２２】
（３）尿中尿酸濃度／クレアチニン濃度
各群ごとの尿中尿酸濃度／クレアチニン濃度の第０週から第２週までの変化を図２に示した。尿中尿酸／クレアチニンはＢ群のみがイノシン投与により著明に増加した。Ａ、Ｃ−Ｇ群はすべて尿中尿酸／クレアチニンが低下した。これらの尿中尿酸濃度／クレアチニン濃度の変化は、血清尿酸値の変化のパターンとほぼ同じであった。
【００２３】
（４）血液中プリン体濃度
各群ごとの血液中のプリン体の濃度の第０週から第２週までの変化を図３〜４に示した。
図３はＡ〜Ｅ群ごとの血液中ＡＴＰ／ＡＤＰの濃度を示す。Ａ、Ｂ群はＡＴＰ濃度は変化なし、Ｃ、Ｄ群ではＡＴＰが上昇した事を示唆している。Ｅ群は一定の傾向が見られない。即ち、フェブキソスタット、イノシン単独投与ではＡＴＰの上昇は見られないが、併用例、特にフェブキソスタット４０ｍｇ／日、イノシン１〜２ｇ／日の例ではＡＴＰの上昇が見られた。それらの量を超えたフェブキソスタット、イノシンの併用では一定の傾向が見られなかった。
図４はＡ〜Ｅ群ごとの血液中ヒポキサンチン（Ｈｘ）とキサンチン（Ｘ）の濃度を示す。フェブキソスタット４０ｍｇ／日のみの投与群（Ａ群）ではＨｘ濃度は不変であるが、Ｘは著明に増加した。イノシン１ｇ／日のみの投与群（Ｂ群）ではＨｘ、Ｘともに不変であった。なお、血液中イノシン濃度も測定したが、イノシン単独投与群を含め、イノシンの濃度の上昇は見られなかった（Ａ−Ｅ群）。これはイノシンをＨｘに変換する酵素、Purine nucleoside phosphorylase（ＰＮＰ）の濃度が血液中で極めて高く、イノシンは速やかにＨｘに分解され、更にはＨｘ、Ｘへと分解されると考えられる。フェブキソスタット４０ｍｇ／日にイノシンを１〜２ｇ／日併用した例ではＨｘとＸの両方の著明な上昇が認められた。即ち、フェブキソスタット単独でもイノシン単独でも見られなかった「血液中のＨｘの上昇」という効果が併用により見られた（図４）。
フェブキソスタット６０ｍｇ／日の単独投与例ではＸの上昇とともにＨｘの軽微な上昇が見られた（図４Ｅ）。
【００２４】
（５）尿中プリン体濃度
各群ごとの尿中イノシン、Ｈｘ、Ｘ、尿酸の濃度の第０週から第２週までの変化を図５に示す。尿中Ｈｘはフェブキソスタット単独投与例では中程度の上昇を示すが、フェブキソスタットとイノシンの併用例では著明な上昇を示した。イノシン単独使用例ではＨｘとＸの上昇は認められなかった。Ｘの濃度はフェブキソスタットの単独投与例でも著明に上昇したが、フェブキソスタットとイノシンの併用例では更に著明に上昇した。
尿中Ｘの各群での最大の濃度は、Ａ群５５６．０、Ｂ群６１．９、Ｃ群２０２３．３、Ｄ群１４７４．８、Ｅ群８６７．７μＭであった。即ち、フェブキソスタット４０ｍｇとイノシン１、２ｇを併用した例では、フェブキソスタット４０ｍｇ単独投与群に比較して最大尿中Ｘ濃度が３．６４、２．６５倍であった。
【００２５】
４．試験例４の考察
（１）フェブキソスタットとイノシンの併用は、２週間連続服用試験において、フェブキソスタット４０ｍｇ／日、イノシン２ｇ／日以下の用量で安全であった。また、これらの併用群で血液中ＡＴＰの増加が見られたが、それ以外の単独投与群ではそのような変化は観察されなかった。
（２）フェブキソスタット単独投与では血清尿酸値の著減、イノシンの単独投与では血清尿酸値の著増が見られ、併用療法では中程度の低下が見られた。
（３）どの群でもイノシンの増加は見られず、ＰＮＰによりＨｘに代謝されたと考えられた。
（４）イノシンの単独投与群では血液中も尿中もＨｘもＸも増加せず、尿酸に変化したと考えられた。
（５）フェブキソスタット単独投与群ではＸが中程度増加したが、Ｈｘは血液中、尿中を含め軽度−中程度増加した。
（６）フェブキソスタットとイノシンの併用ではＨｘ、Ｘが血液中、尿中ともに著明に増加した。血液中のＨｘの増加がＡＴＰの増加の原因であると考えられる。
（７）上記臨床試験により、イノシン、フェブキソスタットの単独投与では不可能な薬理作用がこれらの併用により認められた。本発明は、これまでには存在しなかった新規の薬理作用である血液中ヒポキサンチンとＡＴＰの増強を可能にするものである。
【００２６】
〔試験例２〕臨床試験（２）
上記試験例１により、フェブキソスタットとイノシンの併用により単独投与には認められないほどのＡＴＰ増強作用が認められた。そこで、フェブキソスタットと同じキサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤であるアロプリノール、トピロキソスタットについても同様の作用効果があるか確認するための試験を行った。
１．投与試験
（１）投与対象
日本人の健康成人男性１５名を５名ずつ、グループＡ，Ｂ，Ｃに分けて下記投与試験を行った。
（２）投与内容及び投与スケジュール
グループＡ
アロプリノール１００ｍｇとイノシン５００ｍｇを１日２回、１４日間
グループＢ
トピロキソスタット８０ｍｇとイノシン５００ｍｇを１日２回、１４日間
グループＣ
フェブキソスタット２０ｍｇとイノシン５００ｍｇを１日２回、１４日間
【００２７】
２．結果
（１）血清尿酸値の変化
グループＡ〜Ｃの試験開始前、試験終了後の血清尿酸値の平均値を下記表１に示す。
いずれのグループにおいても本発明のＡＴＰ増強剤の投与により血清尿酸値は低下した。
【００２８】
【表１】
2018087179.tif 000002
【００２９】
（２）ヒポキサンチン濃度
グループＡ〜Ｃの試験開始前、試験終了後のヒポキサンチン濃度の平均値を下記表２に示す。いずれのグループにおいても本発明のＡＴＰ増強剤の投与により血液中ヒポキサンチンは大幅に増加した。
【００３０】
【表２】
2018087179.tif 000003
【００３１】
（３）ＡＴＰ濃度
グループＡ〜Ｃの試験開始前、試験終了後の血液中ＡＴＰ濃度の平均値を下記表３に示す。いずれのグループにおいても本発明のＡＴＰ増強剤の投与により血液中ＡＴＰは増加した。
【００３２】
【表３】
2018087179.tif 000004
【００３３】
３．考察
フェブキソスタットとイノシンの併用、トピロキソスタットとイノシンの併用、及び、アロプリノールとイノシンの併用により、血液中ヒポキサンチンの増加、ＡＴＰの増加が確認された。これらはすべて、フェブキソスタット、トピロキソスタット、アロプリノールがキサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼを抑制し、そこにイノシンがプリンヌクレオシドホスホリラーゼにより分解されて出来たヒポキサンチンが体内に蓄積することにより、細胞内ＡＴＰが増加したと考えられる。このようなヒポキサンチンとＡＴＰの増加は、イノシンからの供給と、キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼの抑制の両方が同時に起きたときのみ起こる現象である。
なぜなら、ヒポキサンチンとＡＴＰの増加はキサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤単独の投与、あるいはイノシン単独の投与では起きなかったからである（試験例１）。すなわち、試験例１では、フェブキソスタット、イノシンのそれぞれの単独投与ではヒポキサンチンの増加も、ＡＴＰの増加も起きなかったが（図４Ａ、Ｂ、図３Ａ、Ｂ）、これらを併用投与したときは、ヒポキサンチンとＡＴＰの増加が起きたのである（図４Ｃ、Ｄ、図３Ｃ、Ｄ）。
従って、ヒポキサンチン及びＡＴＰの増加は、キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤とイノシンを併用投与したときのみに起きる現象であるといえる。
【００３４】
〔製剤例１〕合剤の例
１錠あたり下記を含む経口投与用の合剤（錠剤タイプ）を製造した。
アロプリノール                              １００ｍｇ
イノシン                                        ０．５ｇ
アルファ化デンプン（崩壊バンダー）            ７０ｍｇ
ケイ化微結晶セルロース（充填剤）              ３２．６５６ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム（崩壊剤）        １０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム（潤滑剤）              ０．８ｍｇ
【００３５】
〔製剤例２〕キット剤の例
アロプリノールを含む下記Ａ．の組成の錠剤とイノシンを含む下記Ｂの組成の医薬を製造し、それぞれ混ざらないように区切った同一袋に入れ、１回分を調整した。これを２回分すなわち１日分を同一の箱に梱包しキット剤を製造した。
Ａ．アロプリノール錠
アロプリノール                              １００ｍｇ
アルファ化デンプン（崩壊バンダー）            ７０ｍｇ
ケイ化微結晶セルロース（充填剤）              ３２．６５６ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム（崩壊剤）        １０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム（潤滑剤）              ０．８ｍｇ
Ｂ．イノシン
イノシン                                        ０．５ｇ
【００３６】
〔製剤例３〕合剤の例
１錠あたり下記を含む経口投与用の合剤（錠剤タイプ）を製造した。
トピロキソスタット                            ８０ｍｇ
イノシン                                        ０．５ｇ
アルファ化デンプン（崩壊バンダー）            ７０ｍｇ
ケイ化微結晶セルロース（充填剤）              ３２．６５６ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム（崩壊剤）        １０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム（潤滑剤）              ０．８ｍｇ
【００３７】
〔製剤例４〕キット剤の例
トピロキソスタットを含む下記Ａ．の組成の錠剤とイノシンを含む下記Ｂの組成の医薬を製造し、それぞれ混ざらないように区切った同一袋に入れ、１回分を調整した。これを２回分すなわち１日分を同一の箱に梱包しキット剤を製造した。
Ａ．トピロキソスタット錠
トピロキソスタット                            ８０ｍｇ
アルファ化デンプン（崩壊バンダー）            ７０ｍｇ
ケイ化微結晶セルロース（充填剤）              ３２．６５６ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム（崩壊剤）        １０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム（潤滑剤）              ０．８ｍｇ
Ｂ．イノシン
イノシン                                      ０．５ｇ
【００３８】
〔製剤例５〕合剤の例
１錠あたり下記を含む経口投与用の合剤（錠剤タイプ）を製造した。
フェブキソスタット                            ２０ｍｇ
イノシン                                        ０．５ｇ
アルファ化デンプン（崩壊バンダー）            ７０ｍｇ
ケイ化微結晶セルロース（充填剤）              ３２．６５６ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム（崩壊剤）        １０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム（潤滑剤）              ０．８ｍｇ
【００３９】
〔製剤例６〕キット剤の例
フェブキソスタットを含む下記Ａ．の組成の錠剤とイノシンを含む下記Ｂの組成の医薬を製造し、それぞれ混ざらないように区切った同一袋に入れ、１回分を調整した。これを２回分すなわち１日分を同一の箱に梱包しキット剤を製造した。
Ａ．フェブキソスタット錠
フェブキソスタット                            ２０ｍｇ
アルファ化デンプン（崩壊バンダー）            ７０ｍｇ
ケイ化微結晶セルロース（充填剤）              ３２．６５６ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム（崩壊剤）        １０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム（潤滑剤）              ０．８ｍｇ
Ｂ．イノシン
イノシン                                        ０．５ｇ
【産業上の利用可能性】
【００４０】
アルプリノール、トピロキソスタット又はフェブキソスタットとイノシンの併用投与により細胞内ＡＴＰの増強が可能であった。これは、これまでの薬剤に無い、新たな薬理作用である。したがって、様々なＡＴＰ減少を病態とする疾患に効果があると考えられる。
また、イノシンが有する尿酸値上昇作用が、アルプリノール、トピロキソスタット又はフェブキソスタットとの併用により抑制された。したがって、高尿酸血症の治療のためにアルプリノール、トピロキソスタット又はフェブキソスタットを投与する患者に対して、高尿酸血症の治療効果を減じることなく、ＡＴＰの増加をすることができる。
【図１】
2018087179.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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