(57)【要約】【課題】非経口的に生体適合可能な懸濁剤と組み合わせたシクロスポリンＡの製剤であって、無菌であり、加熱滅菌に格別に安定であり、優れた長期安定性を示す製剤を提供する。【解決手段】オートクレーブ可能なシクロスポリンＡ２型製剤と、このような製剤を作製する方法と、このような製剤で眼疾患を治療する方法とが本明細書に開示される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
シクロスポリンＡ２型と、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒアルロン酸、ポリビニルピロリドン、カーボポール  Ｕｌｔｒｅｚ  １０ＮＦ、およびプルロニックＦ１２７から選択されるビヒクルとを含む製剤。
【請求項２】
前記シクロスポリンＡ２型が、約０．０１〜約１０％の濃度で存在する、請求項２に記載の製剤。
【請求項３】
シクロスポリンＡの製剤の作製方法であって、
ａ）溶液中にシクロスポリンＡ2型を溶解させるステップと、
ｂ）前記溶液をオートクレーブに供するステップと、
ｃ）カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒアルロン酸、ポリビニルピロリドン、カーボポール  Ｕｌｔｒｅｚ  １０ＮＦ、およびプルロニックＦ１２７から選択されるビヒクルを添加するステップと、
を含む、方法。
【請求項４】
シクロスポリンＡの製剤の作製方法であって、
ａ）カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒアルロン酸、ポリビニルピロリドン、カーボポール  Ｕｌｔｒｅｚ  １０ＮＦ、およびプルロニックＦ１２７から選択されるビヒクルを溶液中に溶解するステップと、
ｂ）シクロスポリンＡ２型を、前記溶液に添加するステップと、
ｃ）結果として得られる混合物をオートクレーブに供するステップと、
を含む、方法。
【請求項５】
ドライアイ、眼瞼炎、マイボーム腺疾患、角膜知覚障害、アレルギー性結膜炎、アトピー性角結膜炎、春季カタル、および翼状片(ptyregia)から選択される状態を治療する方法であって、請求項１〜４のいずれか１項に記載の製剤を、このような状態を有する患者に投与するステップを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１１年１１月１５日出願の米国仮特許出願第６１／５５９，８４９号の優先権を主張し、当該出願の内容全体は、参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
シクロスポリンＡを含むヒアルロン酸培地（懸濁剤として使用されるヒドロゲル）の懸濁剤の無菌処理は、薬剤およびヒアルロン酸の両方を滅菌前処理する必要のあるという事実により複雑となっている。滅菌前処理したヒアルロン酸は非常に高価であり、数キログラムに対しておおよそ１００万ドル（１オンスあたりおおよそ１０，０００ドル）要する。さらに、以下ならびに図１および図２に示されるように、シクロスポリンＡを滅菌前処理する工程において、照射の際に薬剤が分解される。
【表１】
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以下の表２に示すように、照射の間、シクロスポリンを冷却してもこの結果が有意に改善しない。
【表２】
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【０００３】
さらなる段階の分解物を、前臨床の安全試験で認定する必要がある。さらに、規制当局が一般にラベルの９０％未満の貯蔵期間を禁止しているため、（滅菌前処理工程のために）ラベルされたシクロスポリンＡを９０〜９５％のみで調製した懸濁剤は、貯蔵期間の規制ガイドラインに適合していない可能性がかなり高い。
【０００４】
本発明は、これらの問題を解決する。本明細書では、非経口的に生体適合可能な懸濁剤と組み合わせたシクロスポリンＡの製剤であって、無菌であり、加熱滅菌に格別に安定であり、優れた長期安定性を示す製剤が開示される。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】結晶形および滅菌方法の変更によるシクロスポリンＡの効力の変化を示す。
【図２】結晶形および滅菌方法の変更によるシクロスポリンＡの効力の変化を示す。
【図３】オートクレーブ後のシクロスポリンＡ２型のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図４】８つの異なる製剤での細隙灯検査で見られるうっ血を示す。
【図５】（本明細書に２型として示される）新規の結晶形、（本明細書に１型として示される）正方晶形、および斜方晶形（本明細書に３型として示される）３型のＣｓＡ特徴的な粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンを表す。
【図６】ＣｓＡ結晶２型のＸＲＰＤ回折を表す。
【図７】ＣｓＡ２型の水吸収／脱離プロファイルを表す。
【図８】１％のＰＳ８０を有する０．０４％製剤から収集したＣｓＡ２型のＭＤＳＣ解析を表す。
【図９】ニュージーランドのホワイトラビットに、ＣＭＣ、ＨＥＣ、ＨＰＭＣ、プルロニック、およびＰＶＰを含むリン酸緩衝食塩水１００μｌを結膜下に注射した後の眼球全体のうっ血を示す。ラビットは７日間観察された。
【図１０】図９に示した実験における眼球全体の目脂（ｄｉｓｃｈａｒｇｅ）を示す。
【図１１】図９に示した実験における眼球全体の膨張を示す。
【図１２】シクロスポリンＡの形態のシミュレーションされたＸＲＰＤパターンを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
シクロスポリンＡ
シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）は、以下の化学構造
【化１】
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を有する環状ペプチドである。
【０００７】
当該物質の化学名は、シクロ［（Ｅ）−（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−２−（メチルアミノ）−６−オクテノイル］−Ｌ−２−アミノブチリル−Ｎ−メチルグリシル−Ｎ−メチル−Ｌロイシル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｄ−アラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｎメチル−Ｌ−バリル］である。また、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、シクロスポリン（ｃｉｃｌｏｓｐｏｒｉｎ）、およびシクロスポリン（ｃｉｃｌｏｓｐｏｒｉｎ）Ａとしても知られている。これは、Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）（アラガン、カリフォルニア州アーバイン）の活性成分であり、Ｒｅｓｔａｓｉｓは、０．０５％（ｗ／ｖ）のシクロスポリンを含むエマルジョンである。Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）は、乾性角結膜炎に関連する眼の炎症により涙の産生が抑制されていると考えられる患者の涙の産生を増加させるため、米国で承認されている。
【０００８】
シクロスポリンＡ２型
シクロスポリンＡは、非晶質形、液晶形、正方晶形（１型）および斜方晶形（３型）で存在することが知られている。新規の結晶形である、シクロスポリン２型は近年発見された。
【０００９】
ＣｓＡ２型のＸＲＰＤパターンは、正方晶形および斜方晶形と顕著に異なる（図１）。
λ＝１．５４Å、３０ｋＶ／１５ｍＡ：７．５、８．８、１０．２、１１．３、１２．７、１３．８、１４．５、１５．６および１７．５（図２において、それぞれ約１１．８、１０．０、８．７、７．８、７．０、６．４、６．１、５．６および５．１Åでの結晶格子中の面間隔ｄ）のＣｕＫα照射としてのＸ線源を備えたＸ線解析計によりスキャンする際、（２θ）でＣｓＡ２型の主要な結晶ピークが現れる。これらの主要なピークは、天然に存在するものの５倍以上の強度を有するピークであると共に、斜方晶形または正方晶形に対して２型が特有であることを示すものである。
【００１０】
一実施形態において、ＣｓＡの新規の結晶形（２型）は、シクロスポリンＡの非化学量論的水和物である。別の実施形態において、この結晶２型は、式
【化２】
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により表され、式中、
Ｘは、水分子の数であり、０〜３の値をとる。一実施形態において、上記の式中のＸは２である。
【００１１】
２型は、水性懸濁剤中で、ＣｓＡの速度論的に安定な形として存在する。２型を含む懸濁剤は、保存する際に他の知られている多形体または仮晶体に変換しない。１型、すなわち非晶形は、水が存在する際に２型へと変換することが見いだされる。
【００１２】
ＣｓＡ２型の水和物形の単結晶構造が決定され、この結晶構造パラメータを表２に挙げる。これらの結果から、２型は他の知られているシクロスポリンＡの結晶形と比較して独特であることが示される。
【表３】
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【００１３】
ＣｓＡ２型の非対称単位は、１つのシクロスポリンＡ分子と２つの水分子とを含む。水に結合した水素が、空間充填剤の役割を果たすことにより、斜方晶二水和物から歪められた単斜晶系二水和物へ作用する潜在的な構造範囲を得ることができる可能性がある。この単結晶構造から計算されたＸＲＰＤパターンを図１２に示し、このパターンは図２に示される実験のパターンと一致した。これらの一致したパターンは、２型がシクロスポリンＡの独特かつ純粋な結晶形であることをさらに裏付ける。
【００１４】
理論に拘束されるものではないが、ＫＦ滴定および蒸気収脱着解析（ＶＳＡ）と組み合わせた熱重量解析は、ＣｓＡ２型が、ＣｓＡの不定比水和物であることを示唆している。シクロスポリン２型の蒸気収着解析は、図７に示されるように、新規の結晶形内の水含量が、それぞれ相対湿度により変動することが示される。正方晶と同様に、新規のＣｓＡ形は、モジュレイテッド示差走査熱量測定（ＭＤＳＣ）解析により示される融点より前の１２４．４℃で、液晶または非晶形へと変換する段階を経験する（図８）。
【００１５】
シクロスポリンＡ２型は、０．０５％のシクロスポリンＡ（ｗ／ｖ）を含む１％のポリソルベート８０を懸濁し、６５℃までこの溶液を加熱し、２４時間、同一の温度で保存し、真空濾過により沈殿を回収することにより得られてもよい。その後、さらなる量を作製するために、種晶としてシクロスポリンＡ２型を使用して、シクロスポリンＡ２型を得ることができる。この方法では、約３０ｇのシクロスポリンＡを１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含む９００ｍｌの水に懸濁し、この溶液を６５℃まで加熱し、５２℃の温度で、０．２ｇのシクロスポリンＡ２型の種を得ることができる。その後、この溶液を、６１℃〜６５℃で約２２時間撹拌し、その結果として得られる沈殿を回収する。
【００１６】
ＣｓＡ２型に関するさらなる詳細は、米国特許出願第１３／４８０，７１０号に記載されており、その全内容は、参照により本明細書に援用される。
【００１７】
熱安定性な加熱滅菌されたシクロスポリンＡ２型の懸濁剤
本発明の組成物は、眼科的に許容可能なシクロスポリンＡ２型の懸濁剤である。本発明では「眼科的に許容可能な」は、ヒトなどのほ乳類の眼に投与される際に、非刺激性となるように、懸濁剤を製剤化することを意味する。
【００１８】
本発明の懸濁剤は、シクロスポリンＡ２型と、ヒアルロン酸、セルロース、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、酸化エチレンおよび酸化プロピレン系のプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）（登録商標）コポリマー、ならびにカーボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）（登録商標）ポリマーなどの懸濁剤を含むビヒクルとを含む。
【００１９】
一実施形態において、本懸濁剤は、約０．００１％〜約１０％（ｗ／ｖ）の濃度のシクロスポリンＡ２型を含む。一実施形態において、この懸濁剤は、約０．００１％〜約０．０１％（ｗ／ｖ）、約０．００１％〜約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．００１％〜約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．００１％〜約０．０２％（ｗ／ｖ）、または約０．００１％〜約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度でシクロスポリン２型を含む。別の実施形態において、この懸濁剤は、約０．０１％〜約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０１％〜約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．０１％〜約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０１％〜約０．０２％（ｗ／ｖ）、または約０．０１％〜約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度のシクロスポリンＡ２型を含む。別の実施形態において、この懸濁剤は、約０．０１％〜約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．１％〜約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．０１％〜約１％（ｗ／ｖ）、または約１％〜約１０％（ｗ／ｖ）の濃度のシクロスポリンＡ２型の濃度のシクロスポリンＡ２型を含む。
【００２０】
たとえば、本懸濁剤は、約０．００１％（ｗ／ｖ）、約０．００２％（ｗ／ｖ）、約０．００３％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）、約０．００６％（ｗ／ｖ）、約０．００７％（ｗ／ｖ）、約０．００８％（ｗ／ｖ）、約０．００９％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）、約０．０１５％（ｗ／ｖ）、約０．０２％（ｗ／ｖ）、約０．０２５％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０３５％（ｗ／ｖ）、約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．０４５％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０５５％（ｗ／ｖ）、約０．０６％（ｗ／ｖ）、約０．０６５％（ｗ／ｖ）、約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０７５％（ｗ／ｖ）、約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０８５％（ｗ／ｖ）、約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０９５％（ｗ／ｖ）、約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．１５％（ｗ／ｖ）、約０．２（ｗ／ｖ）、約０．２５％（ｗ／ｖ）、約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．３５％（ｗ／ｖ）、約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．４５％（ｗ／ｖ）、約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．５５％（ｗ／ｖ）、約０．６％（ｗ／ｖ）、約０．６５％（ｗ／ｖ）、約０．７％（ｗ／ｖ）、約０．７５％（ｗ／ｖ）、約０．８％（ｗ／ｖ）、約０．８５％（ｗ／ｖ）、約０．９％（ｗ／ｖ）、約０．９５％（ｗ／ｖ）、または約１．０％（ｗ／ｖ）のシクロスポリンＡ２型を含んでもよい。
【００２１】
以下の表３に例を示す。
【表４】
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【表５】
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【表６】
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【００２２】
調製方法
本発明の懸濁剤は、シクロスポリンＡ２型および懸濁剤を含む。別の実施形態において、本懸濁剤は、生体適合可能な製剤を提供するために十分な量の水、緩衝剤、および塩のうちの１以上も含む。本発明では「生体適合可能」は、本懸濁剤が（たとえば、非経口的投与により）眼への投与に適していることを意味する。
【００２３】
本発明の製剤を、非経口的に生体適合可能な懸濁剤および他の賦形剤とシクロスポリン２型とを無菌的に混合し、加熱滅菌したスラリーを使用するか、または非経口的に生体適合可能な懸濁剤および他の賦形剤とシクロスポリン２型とを組み合わせ、製剤全体を加熱滅菌することにより製造してもよい。
【００２４】
これらの方法は、シクロスポリン製剤に伴う、１）固体のシクロスポリンは、薬剤の多量の分解および分解産物の形成を生じさせることなく、照射により滅菌前処理することができない、２）製剤が懸濁剤であるため、無菌濾過も行うことができない、および３）加熱による最終的な滅菌処理によりゲルの粘度が低下する、などの様々な重要な問題に対応する。また、一実施形態において、本製剤の最終粘度は、産物の貯蔵寿命の間懸濁されたシクロスポリンを十分に保存することができる。別の実施形態において、この粘度は、２２、２３、２４、２５、または２６ゲージまたはそれ以下の針など、細いゲージの注射器に最終製剤を流せるほど十分に低いものである。さらなる別の実施形態において、この製剤は、産物の貯蔵寿命の間懸濁されたシクロスポリンを十分に保存することができ、かつ、２２、２３、２４、２５、または２６ゲージの針またはそれ以下の針で注射器を介して最終産物を流すために十分に低い粘度を有する。
【００２５】
以下の方法１および２は、懸濁剤としてヒアルロン酸を使用するが、他の適切な懸濁剤を代用してもよい。
【００２６】
無菌性のヒアルロン酸は非常に高価であることは明らかであることから、方法２は固有の滅菌方法を提供するものであり、この方法により、目的となる粘度の範囲に達するように正しい分子量範囲でポリマーを熱還元することにより非滅菌性のヒアルロン酸を使用することが可能となる。したがって、方法２は、厳密な製造を必要とし、新規のヒアルロン酸のそれぞれのロットは、同一の製造条件の下、異なる粘度の範囲に変更されうる。結果として、この正しいとされる粘度の範囲が、各商業用バッチに一致することを保証するために、加熱周期を、適応させる必要がある。すなわち、加熱周期は、薬剤産物の製造前に、原材料のロットに関する一連のガイドラインおよび実験に従って調整される。
【００２７】
さらに、方法２は、単一の容器中で全ステップの製剤を調製する。これらの２つの方法は、薬剤産物を迅速に生成することができ、結果として、方法１にわたって１日以上の有用な製造時間を短縮するのに十分に有効となる。
【００２８】
これらの方法は、シクロスポリンＡ２型をオートクレーブに供し、その効力および安定性を保持するという発明者らの驚くべき発見に依存する。非晶質、１型および３型の他の型のシクロスポリンは、懸濁剤からの薬剤物質を許容できないほどの損失なしに、オートクレーブに供することができない。
【００２９】
方法１−水性スラリー方法
適切な量のシクロスポリンＡ２型を懸濁し、かつ、リン酸緩衝食塩水溶液中に混合し、オートクレーブによりスラリーを加熱滅菌する。無菌環境において、適切な量の滅菌前処理したヒアルロン酸を、滅菌したスラリーに添加し、混合し溶解させる。本薬剤産物は、無菌水により注入用の容量とされた。この最終産物は、長期間安定した懸濁剤を作製するための適切な範囲の粘度を有し、このことにより、２５ゲージまたはそれ以下の針などの細いゲージの針に適した注射器を介して製剤を流すことができる。
【００３０】
方法２  単一容器での方法
過度の非滅菌性のヒアルロン酸を、リン酸緩衝食塩水中に溶解させる。シクロスポリンＡ２型を懸濁し、混合する。この結果として得られる懸濁製剤を、適切な温度および時間で、（適応する加熱周期を使用して）オートクレーブにより加熱滅菌して、製剤を滅菌し、望ましい範囲の粘度とする。
【００３１】
非経口製剤では、産物の貯蔵期間にわたり懸濁したシクロスポリンの粘度が十分に高い値に維持され、同様に、２２、２３、２４、２５、または２６ゲージまたはそれ以下の針を有するシリンジを介して最終産物を流すために十分に低い粘度を得ることが望ましい。ヒドロゲル溶液は、一般に、局所使用に安全であると認識されており、非経口的投与に使用されることはほとんどなく、高いヒドロゲル濃度で、結膜下組織内に２５ゲージ（またはそれ以下の）針を介して安全に注射することはこれまで全く示されなかった。懸濁剤を高濃度（最大２５％）とすることは、本明細書に記載される５〜４０％の非経口製剤の懸濁性（ｓｕｓｐｅｎｄａｂｉｌｉｔｙ）を維持するために必要である。一実施形態において、結膜下組織での使用するための非経口製剤は、（１）２５ゲージまたはそれ以下の細いゲージの針を介して注入可能であり、この針により組織の損傷を最小化し、針の注入点の治癒を迅速化することができ、（２）滅菌であり、（３）生体適合性であり、かつ（４）本製剤の貯蔵寿命にわたり懸濁性を維持し、結膜下腔からの組織の逆流を予防するために十分に粘性がある。このような製剤の粘性は、本薬剤の長期間の懸濁性を維持するのに十分高いが、全体の製剤を細いゲージの針を介して容易に通過させることができるようには十分低いものである。
【００３２】
本発明の一実施形態において、本製剤は、非常に高い粘度（たとえば、≧１００，０００ｃｐｓ）を有し、さらに細いゲージの針を介して注射器から注入することが可能であってもよい。このような製剤の例を以下に示す。
【表７】
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【００３３】
治療方法
本発明の組成物を、（Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）などの）シクロスポリンＡでの局所治療に受け入れられることが知られているいずれかの眼の状態を治療するために本明細書に記載される濃度で使用してもよい。たとえば、本発明の組成物を使用して、ドライアイを患う患者を治療し、眼瞼炎およびマイボーム腺疾患を治療し、眼の屈折矯正手術のために損傷した角膜知覚を回復させ、アレルギー性結膜炎ならびにアトピー性角結膜炎および春季カタルを治療し、翼状片（ｐｔｙｒｅｇｉａ）、結膜および角膜の炎症、角結膜炎、移植片対宿主病、移植後の緑内障、角膜移植、真菌性角膜炎、タイゲソン点状表層角膜炎、ブドウ膜炎、およびセオドア性（Ｔｈｅｏｄｏｒｅ）上輪部角結膜炎や、その他の状態を治療してもよい。
【００３４】
国際ドライアイ研究会（ＤＥＷＳ）は、ドライアイを「涙液膜の浸透圧の増加および眼の表面の炎症により引き起こされる不快感、視覚障害、および眼の表面に対する潜在的な損傷を伴う涙液膜の不安定性の症状を起こす涙および眼の表面の多因子性疾患」と定義した。この定義は、涙の不足または過度の涙の蒸発により引き起こされる乾性角結膜炎などの状態を含む。
【００３５】
眼瞼炎は、皮膚および皮膚に関連する構造（髪および脂腺）、粘膜皮膚移行部、ならびにマイボーム腺に関与する前部および後部の瞼の境界の炎症を産生する慢性障害である。また、進行期では、結膜、涙液膜、および角膜表面にも影響を与えることができ、ドライアイに関連してもよい。眼瞼炎は、一般的に、前部眼瞼炎と後部眼瞼炎とに分類され、前部眼瞼炎は、瞼の睫毛固定領域に影響を与え、後部眼瞼炎は瞼板の腺開口部に影響を与える。
【００３６】
マイボーム腺疾患は、原発性マイボーム腺炎、二次マイボーム腺炎、およびマイボーム脂漏症といった３つの形の内の１つとして最もよく起こり得る。マイボーム脂漏症は、炎症の存在しない状態での過度のマイボーム腺の分泌（分泌過剰なマイボーム腺疾患）により特徴付けられる。対照的に、原発性マイボーム腺炎は、停滞し濃縮したマイボーム腺分泌（妨害型分泌過剰マイボーム腺疾患）により区別される。二次性マイボーム腺炎は、マイボーム腺が、前部の眼瞼縁の眼瞼炎から斑状の形で二次的に炎症が起こる。
【００３７】
角膜知覚の機能不全は、多くはレーザー屈折矯正角膜切除術、レーザー照射による角膜上皮下の切除（ＬＡＳＥＫ）、ＥＰＩ−ＬＡＳＥＫ、注文に応じた上皮の非接触式切除、または角膜の神経が重篤となる他の手順などの屈折矯正手術後に起こる。また、角膜知覚の機能不全は、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、およびＶＺＶウイルスなどのウイルス感染後に起こり得る。角膜知覚の機能不全を伴う患者は、涙の産生および蒸発は正常であるにも関わらず、角膜の神経が、外科手術またはウイルス感染の炎症により重篤となる際に起こる角膜の神経障害の急性的な形態であるような「乾き」を示唆する眼の乾燥感を感じる。
【００３８】
アレルギー性結膜炎は、１つ以上のアレルゲンに対する過敏症から生じる結膜の炎症であり、急性、断続性、または慢性であってもよい。季節性、すなわち、１年のうちの一定期間起こるか、または常時、すなわち通年で慢性的に起こる。季節性および通年性のアレルギー性結膜炎の症状は、結膜炎の炎症に加えて、流涙、涙（ｔｅａｒｉｎｇ）、結膜の血管拡張、痒み、乳頭増殖、結膜浮腫、眼瞼浮腫、および眼からの眼脂を含む。この眼脂は、就寝後、眼の上方にかさぶたを形成してもよい。
【００３９】
アトピー性角結膜炎は、しばしば視力障害を引き起こす、慢性的、重篤な形体のアレルギー性結膜炎である。症状は、痒み、炎症（ｂｕｒｎｉｎｇ）、疼痛、発赤、異物感、光知覚、およびかすみ目を含む。眼脂、特に、夜の睡眠から目覚めるほどの眼脂が症状として現れることが多い。この眼脂は、粘質であり、粘着性かつ粘液性であってもよい。下部の結膜は、しばしば上部の結膜よりも顕著に影響を受ける。この結膜は、乳頭増殖、上皮下線維症、結膜円蓋短縮化（ｆｏｒｍｉｘ  ｆｏｒｅｓｈｏｒｔｅｎｉｎｇ）、睫毛乱生、眼瞼内反および睫毛欠損を含む、進行性疾患の特徴を有する、蒼白であり、浮腫状の範囲であってもよい。一部の患者では、この疾患は、点状上皮性角膜症（ｐｕｎｃｔａｔｅ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｅｒｏｓｉｏｎｓ）、角膜血管新生、および視覚を損ない得る他の特性の角膜症へと進行する。概して、結膜の細胞増殖、上皮偽管状形成および上皮中の脱顆粒する好酸球およびマスト細胞数が増加する。ＣＤ２５＋Ｔリンパ球、マクロファージ、および樹状細胞（ＨＬＡ−ＤＲ．ｓｕｐ．＋，  ＨＬＡ−ＣＤ１＋）は、角膜固有質で優位に増加する。
【００４０】
アトピー性角結膜炎のように、春季カタルは、重篤な形のアレルギー性結膜炎であるが、下部結膜よりも上部結膜により顕著に影響を与える傾向がある。春季カタルは２つの形態で起こる。眼瞼の形態では、四角状であり、固く、平坦状に固まった乳頭が存在し、眼球（角膜縁）の形態では、角膜周囲の結膜が、肥大し、灰白色となる。両方の形が、粘液分泌によりしばしば得られる。角膜上皮の損失は、疼痛および羞明により発症または併発してもよく、同様に、中心の角膜プラーク形成およびトランタス点が発症または併発されてもよい。
実施例
【００４１】
本発明を、以下の実施例によりさらに詳細に示す。
【００４２】
本発明者らがシクロスポリンＡの懸濁剤をオートクレーブに供した際、この薬剤の粒子が凝集し、この産物が容認できないものとなった。さらに、本発明者らは、ヒアルロン酸もオートクレーブの際に分解し、著しく粘度が低下することを見出した。粘度が低くなる、すなわち薬剤の粒子の懸濁性が低下すると、沈殿が引き起こされる。急速に沈殿し、または不可逆的に沈殿する懸濁剤において薬剤粒子を有する製剤は、研究室の試験に有益となりうるが、商業的に利用可能ではない。
【００４３】
本発明者らは、非晶形、正方晶形（１型）、斜方晶形（３型）およびシクロスポリンＡ２型の、４種類のシクロスポリンＡ多形型の製剤を調べた。
【００４４】
１型の懸濁剤は非晶形に変換し、オートクレーブに供すると凝集する。シクロスポリンのクランプが観察される。結果として、１型および非晶形はオートクレーブ滅菌に適さない。さらに、３型を含む水の懸濁剤をオートクレーブに供すると、オートクレーブ中に効力を１１〜２８％失い（表４）、このことも容認できるものではない。対照的に、２型を含む水の懸濁剤は、オートクレーブに対して極めて安定しており、滅菌前処理した対照と比較しても分解に耐性を示した。また、２型の製剤から濾過された固体のＸ線解析により、２型が、オートクレーブに多様な形で安定することが確認された（図３）。これらの後半の２つの発見は、他の３つの型は化学的または多形的に安定しないことを考慮すると、極めて驚くべきものである。
【００４５】
本発明者らは、一連の多様なポリマー（薬剤のない）濃縮溶液のオートクレーブ性（ａｕｔｏｃｌａｖａｂｉｌｉｔｙ）を調べ、注射器に充填する際に、細いゲージの針（２５ゲージまたはそれ以下）を介して流した。このポリマーは、以下の、架橋型ヒアルロン酸（Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標））、カルボマー、カルボキシメチルセルロース―中間分子量、カルボキシメチルセルロース―高分子量、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、プルロニックＦ１２７およびポリビニルピロリドンＫ９０として評価される。これら全ては、商業的供給源から容易に利用可能である。
【００４６】
炎症を引き起こす傾向を評価するために、それぞれのオートクレーブした溶液１００μｌをラビットの結膜に注入した。炎症反応を起こすポリマーを、考察から排除した（図４では、カルボマー、ＣＭＣおよびＨＰＭＣを排除した）。さらに、Ｊｕｖｅｄｅｒｍ（登録商標）が、ヒトにおいて、注入部位にわたり眼瞼が移動すると痛みを引き起こし得るため、これを排除した。ＨＰＭＣおよびプルロニックは、オートクレーブの間／オートクレーブ後にこの溶液から分離する結果となったことから、これらも排除した。商業的に有効なヒドロゲルである、ＨＥＣおよびＰＶＰのみが、オートクレーブ後ラビットの結膜に炎症を引き起こさないことが示された。これら２つのヒドロゲルを使用して、さらなる評価のためシクロスポリンＡ懸濁剤を配合した。この試験の結果を表５に示す。
【００４７】
まず、本発明者らは、（非晶形に変換する）シクロスポリン１型のスラリーを加熱滅菌する可能性を調べた。この手法により、薬剤の凝集作用をもたらし、結果として、この製剤は利用可能なものではなかった。さらなる試験において、１型／非晶形の凝集を抑制するＰＶＰを添加しても、利用可能なものは得られなかった。
【００４８】
シクロスポリンの水性懸濁剤の加熱滅菌は利用可能なものではなかったため、本発明者らは、滅菌前処理した固体のシクロスポリンを使用する無菌性の技術を使用することにより、懸濁剤を調製することを計画した。多様な固体のシクロスポリン（１型、２型、および３型、ならびに非晶質）を、γ線またはｅビームで処置した。全ての場合において、薬剤（３〜９％）を損失した（図２および表１）。さらに、薬剤の実質的な損失により、高レベルの分解産物（約３〜９％）が照射滅菌された物質中に産生されることが示される。これらの不純物は、否定的な毒性および／または規制される不純物を有する可能性があり、結果として、滅菌するためのこの手法は望ましいものではない。
【表８】
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【００４９】
その後、本発明者らは、上記の最良の条件下で、固体のシクロスポリン（１型、２型、および３型、ならびに非晶質）を低温で照射するよう試みた。いずれの型のシクロスポリンも顕著に改善しなかったことが明らかとなった（表２）。
【表９】
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【００５０】
固体のシクロスポリンの照射から、非常に多くの分解が発生することが明らかとなった後、本発明者らは、懸濁剤としてヒアルロン酸を使用する、シクロスポリンの水性懸濁剤を照射することを試みた。この手法は、本製剤内の薬剤の４〜１０％の分解をもたらした。
【表１０】
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【００５１】
最後に、本発明者らは、シクロスポリンのスラリーおよび完全製剤のスチーム滅菌に注目した。(非晶質に変換する)１型のスラリーは、加熱滅菌の間凝集する。３型のスラリーは、物理的に安定であり、かつ１型よりも化学的に安定であるが、加熱滅菌の間に著しく分解する。しかし、本発明者らも驚いたことに、２型のスラリーは、物理的にも化学的にも安定であった（表４および５）。
【表１１】
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【表１２】
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【表１３】
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【００５２】
眼のうっ血
非経口的に生体適合可能な懸濁剤を、結膜下腔内に滅菌的に濃縮した溶液を注入し、毒性反応を評価することにより同定した。以下のポリマーを含むリン酸緩衝食塩水１００μｌを、ニュージーランドのホワイトラビットの結膜下に投与し、７日間観察した。
・２％カルボマー（カーボポール、Ｕｌｔｒｅｚ  １０ＮＦ，  Ｌｕｂｒｉｚｏｌ）
・８％カルボキシメチルセルロース（低粘度、ＣＭＣ、Ｌｕｂｒｉｚｏｌ）
・６％カルボキシメチルセルロース（高粘度、ＣＭＣ、Ｌｕｂｒｉｚｏｌ）
・６％  ＨＥＣ  （Ａｓｈｌａｎｄ）
・６％  ＨＰＭＣ  （ダウケミカル）
・Ｊｕｖｅｄｅｒｍ  Ｕｌｔｒａ  （アラガン）
・プルロニック  Ｆ１２７  （ＢＡＳＦ）
・ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ  Ｋ９０，  ＢＡＳＦ）
【表１４】
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【表１５】
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【表１６】
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【表１７】
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【表１８】
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【００５３】
ＣＭＣ、ＨＥＣ、ＨＰＭＣ、プルロニック、およびＰＶＰの処置により、７日以内に眼球の総うっ血（ｇｒｏｓｓ  ｏｃｕｌａｒ  ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ）が消散することが示された。眼球の眼脂（ｏｃｕｌａｒ  ｄｉｓｃｈａｒｇｅ）は３日以内に消散することが示された。眼球の眼脂は、１群を除くすべての群で３日以内に消散することが示された。この実験の結果を、図９〜１１に示す。
【００５４】
不純物および効力の解析
本発明者らは、様々な製剤を調製し、その効力、純度、および粒度分布を評価した。
【表１９】
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【表２０】
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【表２１】
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【表２２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年8月6日(2018.8.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シクロスポリンＡの製剤の作製方法であって、
シクロスポリンＡ２型をオートクレーブに供するステップを含む、前記方法。
【請求項２】
ａ）溶液中にシクロスポリンＡ２型を溶解させるステップと、
ｂ）前記溶液をオートクレーブに供するステップと、
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ａ）シクロスポリンＡ２型を、溶液に添加するステップと、
ｂ）結果として得られる混合物をオートクレーブに供するステップと、
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ｃ）ビヒクルを添加するステップ
を更に含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
溶液中にビヒクルを溶解させるステップを更に含み、このステップはシクロスポリンＡ２型を前記溶液に添加する前に行われる、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記ビヒクルは、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒアルロン酸、ポリビニルピロリドン、カルボマー、並びに、酸化エチレンおよび酸化プロピレンをベースとするコポリマーから選択される、請求項４又は５に記載の方法。
【請求項７】
前記シクロスポリンＡ２型は、（２θ）：７．５、８．８、１０．２、１１．３、１２．７、１３．８、１４．５、１５．６および１７．５の主ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するか、又は以下：
空間群：Ｐ２1２1２1（Ｎｏ．１９）
格子パラメータ：ａ＝１２．６３９０Å、ｂ＝１９．７５８２Å、ｃ＝２９．５６８Å
セルの含量：Ｚ＝４
を満たす、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【外国語明細書】
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