(57)【要約】【課題】本発明は、トマト葉かび病に対して優れた防除効果を有する、新規な微生物を含有する植物病害防除資材を提供することを課題としている。【解決手段】トマト葉かび病に対する優れた植物病害防除資材およびそれを使用した植物病害の防除方法として好適な、新規のディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株を提供する。【選択図】図１
2018139533.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株（受託番号：ＮＩＴＥ  Ｐ−０２４１３）。
【請求項２】
ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株を含有する植物病害防除資材。
【請求項３】
植物病害が植物病原性糸状菌に起因する病害であることを特徴とする、請求項２記載の植物病害防除資材。
【請求項４】
植物病害が葉から感染することを特徴とする、請求項２または３に記載の植物病害防除資材。
【請求項５】
植物病害がトマト葉かび病であることを特徴とする、請求項２〜４いずれかに記載の植物病害防除資材。
【請求項６】
請求項２〜５いずれかに記載の植物病害防除資材を使用する植物病害防除方法。
【請求項７】
請求項２〜５いずれかに記載の植物病害防除資材を、植物に施用することを特徴とする、請求項６に記載の植物病害防除方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なディシーマ・プルビナータに属する菌株、それを含有する植物病害防除資材および植物病害防除資材を使用する植物病害の防除方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
植物病害防除を目的として販売される農薬は、農薬取締法により規定されており、有効な病害防除能を有する微生物は微生物農薬として、登録され販売されている。
微生物農薬として、登録・販売されているものとして、非病原性エルビニア・カロトボーラ、バチルス・ズブチリス、シュードモナス・フルオレッセンスなどの細菌類や、タラロマイセス・フラバス、トリコデルマ・アトロビリデなどの糸状菌類が挙げられ、これらは野菜、果樹、イネなどを防除対象として、灰色かび病、うどんこ病、炭疽病、軟腐病、イネ種子伝染性病害などの病害防除を目的として使用されている。
【０００３】
一方、野菜の中でもトマトは、病害虫による被害の多い作物であることが知られている。トマトの病害として、疫病、葉かび病、灰色かび病、うどんこ病、輪紋病等が知られているが、特に、葉かび病は重要病害の１つであり、世界的に問題となっている。
トマト葉かび病は、葉のみに発生する。初めに、葉の表面に淡黄色の不鮮明な病斑が形成され、裏面に灰黄色〜緑褐色のビロード状の菌叢が密生する。病勢が進むにつれて菌叢の色は褐色〜灰紫色に濃さを増していくとともに、病斑は拡大し、やがて枯死する。発病が激しいと、ほとんどの葉が侵されて多数の病斑を生じ、下位葉から枯れ上がるため、着果不良や果実の肥大不足、早期着色を引き起こし、収穫量が激減する。病原菌は空気伝染性の糸状菌であり、施設栽培等の多湿条件下で多発し、日本では全国的に発生が見られる病害である。
【０００４】
微生物農薬は、一般的に環境負荷が少ない、耐性菌の出現リスクがない、使用成分数にカウントされないなどの利点により、減農薬栽培の場面で普及している。また、耐性菌が発生した化学農薬の代替防除方法としても理想的である。
しかしながら、トマト葉かび病を対象として農薬登録されている微生物農薬は非常に少なく、バチルス剤を除けば、特許文献１、２等に報告されているタラロマイセス・フラバス（Talaromyces flavus）のみである。また、微生物農薬は、予防効果、治療効果、さらに病害防除効果の持続性において、未だ満足できる性能を有するものがないという問題もある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００２／０３５９３４号
【特許文献２】特開２０１５−０９３８５０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
トマト葉かび病対策の一環として、病原菌に対する抵抗性遺伝子を持つ品種が市販されている。しかしながら、これら抵抗性品種の抵抗性を打破する、レースと呼ばれる寄生性が分化した系統が現在１２種類も出現している。多様化したこれらのレースによって、国内で市販されている抵抗性品種は全て打破され、化学農薬に対する耐性菌の出現も報告される中、生産現場では環境負荷の少ない有効な防除方法が求められている。
そこで、本発明は、トマト葉かび病に対して優れた防除効果を有する、新規な微生物を含有する植物病害防除資材および、この植物病害防除資材を使用する植物病害の防除方法を提供することを課題としている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、トマト葉かび病に対する優れた植物病害防除資材として、新規のディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株を見出し、上記課題を解決するに至ったものである。
【０００８】
本発明は、具体的には次の事項を要旨とする。
１．ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株（受託番号：ＮＩＴＥ  Ｐ−０２４１３）。
２．ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株を含有する植物病害防除資材。
３．植物病害が植物病原性糸状菌に起因する病害であることを特徴とする、２．記載の植物病害防除資材。
４．植物病害が葉から感染することを特徴とする、２．または３．に記載の植物病害防除資材。
５．植物病害がトマト葉かび病であることを特徴とする、２．〜４．いずれかに記載の植物病害防除資材。
６．２．〜５．いずれかに記載の植物病害防除資材を使用する植物病害防除方法。
７．２．〜５．いずれかに記載の植物病害防除資材を、植物に施用することを特徴とする、６．に記載の植物病害防除方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株は、トマト葉かび病菌に寄生する菌寄生性を示すことが確認され、これによりトマト葉かび病に対して優れた病害防除活性を有する。また、室内におけるポット試験および温室内の圃場試験においても、トマト葉かび病に対して高い病害防除効果を発揮することが確認された。
さらに、ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株は、国内で発生しているトマト葉かび病菌の多様なレース全てに対して寄生するため、 いずれのレースに対しても、有効な防除効果を得ることができる。
本発明のディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株は、高湿度条件下において高い菌寄生性を示すことから、トマト葉かび病が発生しやすい栽培現場において効果的に使用できるほか、発病したトマトに適用することができ、さらに、二次感染を防ぐこともできる。
ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株は、高い分生子（胞子）形成能を有しており、トマト葉かび病に対して有効な防除効果を示す濃度を安価に得られるため、微生物農薬として製造する際にメリットがある。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＩＴＳ領域の塩基配列を基にした分子系統樹を示す図である。
【図２】ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株のＩＴＳ領域の塩基配列である。
【図３】実施例２、手法１によるディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株の寄生性を示す電子顕微鏡写真である。
【図４】実施例２、手法２によるディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株の寄生性を示す光学顕微鏡写真と蛍光顕微鏡写真である。
【図５】実施例３のディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株の胞子形成能確認試験結果を表すグラフである。なお、上記「ＩＴＳ」は「Internal transcribed spacer」の略で、「ＩＴＳの塩基配列」とは、細菌における16s rDNA配列と同様に、糸状菌において分子系統学的な解析に使用される塩基配列を意味する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、トマト葉かび病に対して優れた病害防除効果を有する、ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）に属する菌株に関する。
また本発明は、前記菌株を含有している植物病害防除資材、この植物病害防除資材を使用する植物病害防除方法に関する。
以下、本発明について詳細に説明する。
（新規な菌株）
本発明における新規のディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）に属する菌株は、トマト葉かび病に対して優れた病害防除効果を有するものである。
このディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株は、独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センターに寄託されており、その受託番号は、NITE P-02413である。
【００１２】
ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株の菌学的性質として、「植物病害防除に適した性質」を挙げることができ、具体的には、トマト葉かび病に対して優れた病害防除活性を有するものである。この優れた病害防除活性は、トマト葉かび病菌に対する高い菌寄生性により発揮されるものである。特に、国内で発生しているトマト葉かび病菌の多様なレース全てに対して寄生することが、後述する試験により確認されている。
本発明におけるディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株は、トマト葉かび病が発生した栽培施設内、具体的には、トマト葉かび病の拡散抑制現象がみられた栽培施設内において、トマト葉かび病の菌叢を覆う糸状菌を、素寒天培地に塗布し、単一の分生子（胞子）を複数回に渡って分離培養した後、菌株として単離し、病害抑制能や形態的性質、分子系統学的特性などを調べることで、選抜したものである。また、ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）は、トマト葉かび病菌に対する菌寄生菌として、トマト葉かび病の自然発病葉から稀に分離することができる。
分離したディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）菌株の中から、トマト葉かび病菌に対する寄生能が高く、トマト葉かび病に対する高い防除効果を示す菌株の選抜は、例えば、ポット試験等によって、当業者であれば容易に行うことができる。
本発明のディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株は、高いトマト葉かび病防除効果を有するが、植物体に対しては病原性を示さない菌寄生菌である。
【００１３】
ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株の培養方法は、特に限定されず、ディシーマ・プルビナータに属する微生物に一般的に適用されている方法によって培養することができる。
培地としては、例えば、ショ糖加用ジャガイモ煎汁寒天培地（ＰＳＡ培地）、ブドウ糖加用ジャガイモ煎汁寒天培地（ＰＤＡ培地）、オートミール寒天培地など糸状菌用一般培地を使用することができる。培養温度は２０〜２５℃とするのが好ましい。
【００１４】
（植物病害防除資材）
本発明の植物病害防除資材は、このディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株を含有するものであり、その植物病害防除資材について説明する。
植物病害防除資材は、ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株を、製剤化して使用することができる。製剤化の形態としては、ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株を凍結乾燥状態にして粉末状の形態、賦形剤等と混ぜて固形にした形態、カプセルに充填する形態、液体アンプルの形態、さらに、通常の微生物農薬と同様の製剤型、例えば、水和剤、フロアブル剤、乳剤、粉剤、粒剤、培土混合剤等とすることもできる。また、通常の微生物農薬と同様に、製剤化のための製剤助剤を使用してもよい。このような製剤助剤としては、例えば、担体、補助剤、界面活性剤、分散剤などを挙げることができる。
【００１５】
担体としては、通常微生物農薬に用いられている無機質あるいは有機質の素材を主材として用いることが可能であり、具体的には、固体担体として、赤玉土、焼成赤玉土、鹿沼土、黒ぼく土、酸性白土、タルク類、粘土、カオリンクレー、パイロフィライトクレー、ベントナイト、モンモリロナイト、珪藻土、合成含水酸化ケイ素、バーミキュライト、パーライト、ゼオライト、アタパルジャイト、大谷石、アンスラ石、石炭灰、石灰、食塩、炭酸塩、硫酸塩、硝酸塩、尿素などの無機質素材、籾殻、フスマ、小麦粉、トウモロコシ穂軸、落花生殻、ピートモス、パルプ、藁、バガス、木粉、米粕、粕粉、油粕、デンプン、魚粕、骨粉、乾燥畜糞、カニがら、エビがら、オキアミ微粉末、木炭、くん炭、バーク炭、籾殻くん炭、草木炭、活性炭、灰、貝化石、ソルビトール、ラクトース、マルチトース、グルコサミン、オリゴ糖類などの有機質素材を用いることができる。液体担体としては、水、植物油、動物油、鉱物油、合成水溶性高分子等を用いることができる。これらの成分は、１種類を単独で、あるいは２種以上の混合物として用いることが可能である。
【００１６】
さらに、本発明の植物病害防除資材は、補助剤として、カゼイン、ゼラチン、アラビアガム、アルギン酸、セルロース類、カルボキシメチルセルロース、キサンタンガム、キチン類、キトサン類等の天然多糖類、ポリビニルアルコール類、ポリアクリル酸類、ベントナイト等を増粘、固着、分散等を目的として、必要に応じて含有させることができる。   また、エチレングリコール、プロピレングリコール等の二価アルコール等を凍結防止の目的として、必要に応じて含有させることができる。さらに、アニオン型、カチオン型、両性型等の界面活性剤を分散安定、凝集防止、乳化等を目的として必要に応じて含有させることができる。
本発明の植物病害防除資材は、施用する際に、殺菌剤、殺虫剤、殺線虫剤、殺ダニ剤、除草剤、植物生長調節剤、肥料、及び土壌改良資材等の少なくとも１種を混合施用あるいは混合せず交互使用、または同時施用することも可能である。
【００１７】
本発明の植物病害防除資材における、ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株の濃度は特に限定されないが、分生子（胞子）濃度として０．０１〜１０×１０７個／ｍｌとするのが好ましく、０．５〜１．０×１０７個／ｍｌとすることがより好ましい。
本発明の植物病害防除資材の散布量は、植物の病害を防除できる範囲内であれば特に限定されないが、圃場１ｍ２当り、通常、１０５〜１０１０ｃｆｕ、好ましくは、１０６〜１０８ｃｆｕを散布する。
【００１８】
本発明における植物病害は、本発明のディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株が、防除効果を発揮する植物病害であれば特に制限はないが、病原菌が植物に感染することにより引き起こされる植物病害が好ましい。その中でも、病原菌が、茎、葉、花、果実等の植物の地上部に感染することにより引き起こされる植物の病害が好ましく、特に、病原菌が植物の葉に感染することにより引き起こされる植物の病害がより好ましい。
そのような植物の病害として、具体的には、クラドスポリウム フルバム（Cladosporium fulvum）により引き起こされるトマト葉かび病、ボトリチス シネレア（Botrytis cinerea）により引き起こされるトマト、ナス、ピーマン、イチゴ、キュウリ、レタス、インゲン等の灰色かび病、アルタナリア ブラシッシコーラ（Alternaria brassicicola）により引き起こされるキャベツ黒すす病、フィトフトラ インフェスタンス（Phytophthora infestans）により引き起こされるトマト疫病、サーコスポリディウム ペルソナツム（Cercosporidium personatum）により引き起こされるラッカセイ黒渋病、フザリウム オキシスポラム（Fusarium oxysporum）により引き起こされるトマト萎ちょう病、スファエロテカ フリジネア（Sphaerotheca fuliginea）により引き起こされるキュウリ、メロン等のうどんこ病、レベイルラ・タウリカ（Leveillula taurica）により引き起こされるトウガラシ、ピーマン等のうどんこ病、エリシフェ シコラセアラム（Erysiphe cichoracearum）により引き起こされるトマト、ナス等のうどんこ病、シュードペロノスポラ キュベンシス（Pseudoperonospora cubensis）により引き起こされるキュウリべと病、ピシウム属菌（Pythium sp.）により引き起こされるキュウリ立枯病、パクシニア  アリー（Puccinia allii）により引き起こされるネギさび病、スクレロチニア アリー（Sclerotinia allii）により引き起こされるネギ小菌核病、アルタナリア ブラシケ（Alternaria brassicae）により引き起こされるハクサイ黒斑病、アルタナリア ダウシ（Alternaria dauci）により引き起こされるニンジン黒葉枯病、リゾクトニア ソラニ（Rhizoctonia solani）により引き起こされるホウレンソウ株腐病、スクレロチニア スクレロチオラム（Sclerotinia sclerotiorum）により引き起こされるレタス菌核病、バーティシリウム ダーリエ（Verticillium dahliae）により引き起こされるナス半身萎ちょう病、スファエロテカ フムリ（Sphaerotheca humuli）により引き起こされるイチゴうどんこ病、グロメレラ シングラータ（Glomerella cingulata）により引き起こされるイチゴ炭疽病、アスコチータ ピシ（Ascochyta pisi）により引き起こされるエンドウ褐斑病、および、ボトリチス ファバエ（Botrytis fabae）により引き起こされるソラマメ赤色斑点病等の野菜類の病害が挙げられる。また、花卉類の病害としては、ボトリチス シネレア（Botrytis cinerea）により引き起こされるシクラメン、キク、バラ、スターチス等の灰色かび病、スファエロテカ パノッサ（Sphaerotheca pannosa）により引き起こされるバラのうどんこ病、パクシニア ホリアナ（Puccinia horiana）により引き起こされるキク白さび病等が挙げられる。さらに、果樹類の植物の病害としては、ロゼリニア ネカトリックス（Rosellinia necatrix）により引き起こされる果樹類の白紋羽病、ペニシリウム イタリカム（Penicillium italicum）により引き起こされるカンキツ類の青かび病、ディアポルテ シトリ（Diaporthe citri）により引き起こされるカンキツ類の黒点病、ギムノスポランギウム アジアティクム（Gymnosporangium asiaticum）により引き起こされるナシ赤星病、ベンチュリア イネエクアリス（Venturia inaequalis）により引き起こされるリンゴ黒星病、モニリニア フルクチコーラ（Monilinia fructicola）により引き起こされるモモ灰星病等が挙げられる。また、イネ科の植物の病害としては、リゾクトニア ソラニ（Rhizoctonia solani）により引き起こされるイネ紋枯病、ピリキュラリア オリゼー（Pyricularia oryzae）により引き起こされるイネいもち病、エリシフェ グラミニス（Erysiphe graminis）により引き起こされるオオムギうどんこ病、ゲウマノマイセス グラミニス（Gaeumannomyces graminis）により引き起こされるコムギ立枯病等が挙げられる。これらの植物の病害の中でも、葉かび病が、本発明における植物の病害として好ましく挙げられる。
【００１９】
本発明の植物病害防除資材は、トマト葉かび病、トマト、ナス、ピーマン、イチゴ、キュウリ、レタス、インゲン等の灰色かび病、キャベツ黒すす病、トマト疫病、ラッカセイ黒渋病、トマト萎ちょう病、キュウリ、メロン、トマト、ナス、トウガラシ、ピーマンのうどんこ病、キュウリべと病、キュウリ立枯病、ネギさび病、ネギ小菌核病、ハクサイ黒斑病、ニンジン黒葉枯病、ホウレンソウ株腐病、レタス菌核病、ナス半身萎ちょう病、イチゴうどんこ病、イチゴ炭疽病、エンドウ褐斑病、および、ソラマメ赤色斑点病等の野菜類の病害や、シクラメン、キク、バラ、スターチス等の灰色かび病、バラうどんこ病、キク白さび病等の花卉類の植物病害、果樹類の白紋羽病、カンキツ類の青かび病、カンキツ類の黒点病、ナシ赤星病、リンゴ黒星病、モモ灰星病等の果樹類の植物病害、イネ紋枯病、イネいもち病、オオムギうどんこ病、コムギ立枯病等のイネ科の病害等の植物病害の防除に用いることができる。
【００２０】
本発明の植物病害防除資材は、上記のような各種栽培植物の各種病害を防除する目的で、栽培植物に施用されるが、その方法は、剤型等の使用形態、作物や病害によって適宜選択され、例えば、地上液剤散布、地上固形散布、空中液剤散布、空中固形散布、液面散布、施設内施用、土壌混和施用、土壌灌注施用、表面処理（種子粉衣、塗布処理等）、育苗箱施用、単花処理、株元処理等の方法を挙げることができる。また、これらの施用方法の中では、栽培植物の茎葉に処理する、地上部病害への施用が好ましい。
【実施例】
【００２１】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明の技術範囲はこれらにより限定されるものではない。
【００２２】
＜実施例１＞ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株の分離と同定
（１）菌株の分離
トマト（Solanum lycopersicum）の葉かび病罹病葉から、病斑上に寄生した白い菌糸（寄生菌株）を素寒天培地上（２％）に分離し、室温で１日間培養した。培地上の発芽した単胞子を、実体顕微鏡下で、ＰＤＡ培地（ポテトデキストロース寒天）に分離、２５℃で培養した。同様の操作をさらに２度行い、４１４−３株を得た。ＰＤＡ培地で無菌的に１週間培養し、ＰＤＡプレートを滅菌水ですすぐことにより分生子（胞子）を回収した。
【００２３】
（２）菌株の性質
上記の培養物から分離した４１４−３株について、菌学的諸性質を調べた。
４１４−３株の分生子柄と分生子（胞子）の形態について光学顕微鏡を用いて観察し、これまでに報告されているディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）(Deighton, 1972; Hughes, 1951; Von Arx, 1981)といずれの特徴も一致した。またＩＴＳ領域の塩基配列の相同性解析においては、オランダ微生物株保存センター（CBS-KNAW Fungal Biodiversity Centre）のディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）株「222.63」と「254.59」およびＫＡＣＣ（Korean Agricultural Culture Collection）の「KACC44498」と「KACC44502」、およびHMQAU130012、LCC11、FMR12706の塩基配列を比較として使用し、高い相同性を示すことが明らかとなった。
図１に、ＩＴＳ領域の塩基配列を基にした系統樹を、図２および配列表に、本発明の４１４−３株のＩＴＳ領域の塩基配列を示す。
【００２４】
＜実施例２＞ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株の葉かび病菌に対する寄生性の確認 
ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株の寄生性を２つの手法を用いて確認した。
＜手法１＞
走査型電子顕微鏡を用いて、４１４−３株がトマト葉上で葉かび病菌の菌糸に巻きつき、寄生することを確認した（図３中の矢印部分を参照）。
＜手法２＞
緑色蛍光タンパク質（GFP）遺伝子を常時発現する葉かび病菌を作成し、その蛍光強度によって葉かび病菌の生死を判定する実験系を構築した。糸状菌（Aspergillus nidulans）で恒常的に発現するglyceraldehyde-3-phosphatase dehydrogenase遺伝子のプロモーター領域の下流にGFP遺伝子を連結させ、形質転換により葉かび病菌に導入した。生きている限り恒常的にGFPを産生する葉かび病菌と４１４−３株を、栄養源としての炭素源を含まない最小培地（10g KNO3, 5g KH2PO4, 2.5g MgSO4・7H2O, 0.02g FeCl3, １リットルあたり）で共培養した。
【００２５】
実施例２、手法２による寄生性の確認結果は、図４に示すように、培養３日目に４１４−３株が接触した葉かび病菌の菌糸において、GFP蛍光が部分的に弱くなり、培養４日目にはGFP蛍光が完全に消失したことから、４１４−３株が葉かび病菌に寄生し、栄養源を得ていることを確認した。図４において、左側は光学顕微鏡写真であり、右側が蛍光顕微鏡写真である。
手法１、２の結果から、４１４−３株は葉かび病菌に菌寄生性を示すことが確認された。
【００２６】
＜実施例３＞ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株の胞子形成能の確認
ＰＤＡ培地上で、ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株、CBS222.63株、CBS254.59株、KACC44498株、KACC44502株を無菌的に１週間培養し、ＰＤＡプレートを滅菌水ですすぐことにより分生子（胞子）を回収することで、各菌株の胞子形成能を確認する試験を行った。試験結果を図５に示す。
なお、図５中、「222.63」は「CBS222.63株」を、「254.59」は「CBS254.59株」を、「44498」は「KACC44498株」を、「44502」は「KACC44502株」を、「414-3」は本発明の「４１４−３株」を意味する。
【００２７】
図５に示すとおり、４１４−３株は、CBS222.63株、CBS254.59株、KACC44498株、KACC44502株に比べて、培地上に形成されたコロニー数あたりの胞子形成量が非常に多いことが明らかとなった。
微生物農薬は人工培養によって微生物を増殖し、製剤として使用することから、一般的な培養法で胞子を形成する能力が高い菌株ほど、安価に製剤化・工業化することが可能である。このことから、本発明の４１４−３株は、微生物農薬とする際の製造面において、有利であると考えられる。
【００２８】
＜実施例４＞ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株のトマト葉かび病に対するポット試験
接種試験植物は、トマト葉かび病抵抗性遺伝子を持たないトマト品種「桃太郎」を使用し、ポットに移植した３週齢のトマト幼苗を用いた。トマト葉かび病菌（Cladosporium fulvum）株「CF229」と「CF338」は、ＰＤＡ培地を用い、２５℃で２週間培養し、分生子（胞子）を蒸留水で回収し使用した。
上記試験植物の葉裏に、トマト葉かび病菌（Cladosporium fulvum）の胞子懸濁液（１０４個の分生子/ｍｌ）を約５ｍｌ噴霧し、トマト葉かび病に感染させた。湿度１００％の湿室内で２４時間育成した後、人工気象室（２５℃、１６時間明期−８時間暗期）に移した。約２週間後に葉かび病の病徴を確認後、下記に示すトマト葉かび病菌に対する分離寄生株の胞子懸濁液を、トマトに噴霧接種（１０５個/植物）し、さらに１２日後トマト葉かび病の病斑におけるコロニー形成を、目視で確認した。
使用したトマト葉かび病菌に対する寄生分離株は、本発明の４１４−３株と、CBS222.63株、CBS254.59株であり、本発明の４１４−３株は３回、CBS222.63株とCBS254.59株は２回試験を行った。
試験結果の評価は、表１に示す防除効果（％）と寄生指数により行った。
防除効果は、試験植物における全発病葉数に対する、分離寄生株に寄生された病斑のある発病葉数の比率（％）を表すものである。
寄生指数は、分離寄生株に寄生された病斑のある全発病葉について、分離寄生株による病斑への被覆状態を、下記基準により評価し、その平均値を表すものである。
寄生指数０：寄生糸状菌による葉かび病病斑への被覆なし
寄生指数１：病斑の１／４が被覆された状態
寄生指数２：病斑の１／４〜１／２が被覆された状態
寄生指数３：病斑の１／２〜３／４が被覆された状態
寄生指数４：病斑の３／４以上が被覆された状態
【００２９】
【表１】
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【００３０】
表１に示すとおり、本発明の４１４−３株は、同じトマト葉かび病菌に対する分離寄生株「CBS222.63株」や「CBS254.59株」に比べて、極めて高いトマト葉かび病に対する防除効果を奏することが明らかとなった。これは、本発明の４１４−３株が有する、トマト葉かび病菌に対する菌寄生能の高さに由来するものと考えられる。
【００３１】
＜実施例５＞ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株のトマト葉かび病に対する圃場試験
接種試験植物は、トマト葉かび病抵抗性遺伝子を持たないトマト品種「桃太郎」を使用し、３週齢のトマト幼苗を温室内に移植し、２ヶ月を経過したトマト植物体を用いた。トマト葉かび病菌（Cladosporium fulvum）CF229株は、ＰＤＡ培地を用い、２５℃で２週間培養し、分生子（胞子）を蒸留水で回収し使用した。
上記試験植物の葉裏に、トマト葉かび病菌（Cladosporium fulvum）の胞子懸濁液（１０４個の分生子/ｍｌ）を噴霧し、トマト葉かび病に感染させた。約２週間後に葉かび病の病徴を確認後、分離寄生菌株４１４−３株の胞子懸濁液（実施例）および分離寄生菌株４１４−３株の胞子を含有しない蒸留水（比較例）を、トマト葉かび病の病斑に噴霧接種（４×１０４分生子/葉）し、さらに１２日後トマト葉かび病の病徴におけるコロニー形成を、目視で確認した。試験はそれぞれ２回行った。
試験結果の評価は、表２に示す防除効果（％）と寄生指数により行った。
この防除効果と寄生指数は、実施例４と同じ評価内容である。
【００３２】
【表２】
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表２に示すとおり、本発明の４１４−３株は、温室内においてもトマト葉かび病に対して高い防除効果を示した。
【００３３】
＜実施例６＞ディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株のトマト葉かび病のレースに対する防除効果の確認
上述のとおり、トマト葉かび病菌は日本国内において１２種類のレースが存在することが明らかとなっている。そこで、多様なレースに対するディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株の防除効果を確認した。
接種試験植物は、トマト葉かび病抵抗性遺伝子を持たないトマト品種「桃太郎」を使用し、ポットに移植した３週齢のトマト幼苗を用いた。トマト葉かび病菌（Cladosporium fulvum）株は、ＰＤＡ培地を用い、２５℃で２週間培養し、分生子（胞子）を蒸留水で回収し使用した。
上記試験植物の葉裏に、トマト葉かび病菌（Cladosporium fulvum）の胞子懸濁液（１０４個の分生子/ｍｌ）を約５ｍｌ噴霧し、トマト葉かび病に感染させた。湿度１００％の湿室内で２４時間育成した後、人工気象室（２５℃、１６時間明期−８時間暗期）に移した。約２週間後に葉かび病の病徴を確認後、４１４−３株の胞子懸濁液を、トマト葉かび病の病斑に噴霧接種（１０５個/植物）し、さらに１２日後トマト葉かび病の病徴におけるコロニー形成を、目視で確認した。
試験結果の評価は、表３に示す防除活性により行った。
この防除活性は、トマト葉かび病の病斑に対して寄生が５０％以上認められた場合に、活性あり「＋」と評価した
【００３４】
【表３】
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表３に示すとおり、本発明の４１４−３株は、トマト葉かび病菌のいずれのレースに対しても同様に高い防除活性を示した。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明のディシーマ・プルビナータ（Dicyma pulvinata）４１４−３株は、トマト葉かび病菌に寄生する菌寄生性を示し、室内におけるポット試験および温室内の圃場試験においても、トマト葉かび病に対して高い病害防除効果を発揮し、さらに、国内で発生しているトマト葉かび病菌の多様なレース全てに対しても、高い防除活性を示すので、栽培場面での利用が期待される。
さらに、本発明の４１４−３株は、高い分生子（胞子）形成能を有しているので、微生物農薬として製造する際に有利である。
【受託番号】
【００３６】
ＮＩＴＥ  Ｐ−０２４１３
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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