(57)【要約】【課題】本発明は、非ヒト霊長類のＡＭＤモデル動物を作製する方法、並びに当該方法により作製されたＡＭＤモデル動物を用いて、被験物質のＡＭＤの予防又は治療に対する効果の評価方法及びＡＭＤの予防又は治療効果を有する物質のスクリーニング方法を提供することを課題とする。【解決手段】非ヒト霊長類の動物個体の硝子体内に、ヨウ素酸ナトリウムを投与することを特徴とする、ＡＭＤモデル動物の作製方法、及び、前記ＡＭＤモデル動物の作製方法により非ヒト霊長類のＡＭＤモデル動物を作製し、作製されたＡＭＤモデル動物を用いて、被験物質のＡＭＤの予防又は治療効果について評価する、被験物質のＡＭＤの予防又は治療に対する効果の評価方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ヒト霊長類の動物個体の硝子体内に、ヨウ素酸ナトリウムを投与することを特徴とする、加齢黄斑変性モデル動物の作製方法。
【請求項２】
硝子体１個当たりのヨウ素酸ナトリウムの投与量が０．５〜２．５ｍｇである、請求項１に記載の加齢黄斑変性モデル動物の作製方法。
【請求項３】
ヨウ素酸ナトリウムを水又はリン酸生理食塩水に溶解させたヨウ素酸ナトリウム溶液を、硝子体内に注入する、請求項１又は２に記載の加齢黄斑変性モデル動物の作製方法。
【請求項４】
前記動物個体が、カニクイザル又はアカゲザルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の加齢黄斑変性モデル動物の作製方法。
【請求項５】
作製された加齢黄斑変性モデル動物において、網膜の外顆粒層の菲薄化及び網膜色素上皮の変性が、黄斑中心窩周辺に観察される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の加齢黄斑変性モデル動物の作製方法。
【請求項６】
作製された加齢黄斑変性モデル動物の眼底に、地図状萎縮が生じている、請求項１〜４のいずれか一項に記載の加齢黄斑変性モデル動物の作製方法。
【請求項７】
作製された加齢黄斑変性モデル動物が、萎縮型加齢黄斑変性モデル動物である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の加齢黄斑変性モデル動物の作製方法。
【請求項８】
黄斑中心窩周辺に、網膜のＯＮＬの菲薄化及びＲＰＥの変性を有する、非ヒト霊長類の加齢黄斑変性モデル動物。
【請求項９】
眼底に地図状萎縮が生じている、非ヒト霊長類の加齢黄斑変性モデル動物。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の加齢黄斑変性モデル動物の作製方法により非ヒト霊長類の加齢黄斑変性モデル動物を作製し、
作製された加齢黄斑変性モデル動物を用いて、被験物質の加齢黄斑変性の予防又は治療効果について評価する、被験物質の加齢黄斑変性の予防又は治療に対する効果の評価方法。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の加齢黄斑変性モデル動物の作製方法により非ヒト霊長類の加齢黄斑変性モデル動物を作製し、
作製された加齢黄斑変性モデル動物を用いて、被験物質の加齢黄斑変性の予防又は治療効果について評価し、
網膜の外顆粒層の菲薄化及び網膜色素上皮の変性からなる群より選択される１種以上が、前記被験物質を摂取する前と比較して前記被験物質を摂取した後のほうが改善されている場合に、当該被験物質を、加齢黄斑変性の予防又は治療効果を有する物質として選抜する、加齢黄斑変性の予防又は治療効果を有する物質のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非ヒト霊長類の加齢黄斑変性（ＡＭＤ）のモデル動物を作製する方法、当該方法により作製されたＡＭＤモデル動物を用いて被験物質のＡＭＤの予防又は治療に対する効果を評価する方法、及び前記ＡＭＤモデル動物を用いてＡＭＤの予防又は治療効果を有する物質をスクリーニングする方法に関する。
本願は、２０１７年３月２３日に、日本に出願された特願２０１７−５７５１５号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
【背景技術】
【０００２】
ＡＭＤは、眼底中央にあたる黄斑の網膜視細胞が障害される疾患であり、中途失明疾患の原因の一つである。ＡＭＤは主に、萎縮型（ドライ型）と滲出型（ウェット型）に分けられる。萎縮型は、視細胞とそれに隣接する網膜色素上皮細胞、脈絡膜毛細血管が徐々に変性萎縮する。滲出型は、脈絡膜から新生血管が発生して、出血や浮腫により比較的急激に病状が進行する。ヒトの萎縮型ＡＭＤでは、網膜において、網膜色素上皮（ＲＰＥ）の変性（菲薄化や縮小）、外顆粒層（ＯＮＬ）の菲薄化や消失が観察される。
【０００３】
萎縮型ＡＭＤ様モデル動物としては、光網膜障害モデルが知られている（例えば、非特許文献１参照。）。強い光は網膜の障害を引き起こす。実際に、マウスの光網膜障害モデルでは、網膜に変性が生じていることが確認されている。その他、ＡＭＤ様モデル動物としては、ヨウ素酸ナトリウムを全身投与又は硝子体に投与することによりＲＰＥを変性させたげっ歯類及びウサギのモデル動物が知られている（例えば、非特許文献２又は３参照。）。
【０００４】
一般的に、疾患の治療薬の開発においては、被験物質の治療効果を調べるために、当該疾患のモデル動物が利用されている。モデル動物により適正な薬効評価を得るためには、使用するモデル動物が対象とする疾患の病態を精確に反映していることが肝要である。非ヒト霊長類は、遺伝的にも、神経解剖学的にも、薬物動態学的にも、げっ歯類よりもヒトに近いため、よりヒトに投与した際の作用効果と近似した作用効果が得られると期待できる。このため、ヒトに対して有効な治療薬の開発のためには、モデル動物として、げっ歯類よりも、ヒト以外の霊長類を用いることが好ましい。特に、黄斑があるのは霊長類のみであることから、げっ歯類又はウサギのＡＭＤモデル動物は、ヒトのＡＭＤの病態を反映できていない。そこで、ＡＭＤの予防薬や治療薬の開発のため、ＡＭＤの病態をより精確に反映した非ヒト霊長類のＡＭＤモデル動物が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】奥野勉、他３名、労働安全衛生総合研究所特別研究報告、２０１４年、第４４巻、第６７〜７０ページ。
【非特許文献２】石田順子、他２名、川崎医学会誌、２０１６年、第４２巻、第２号、第８５〜９３ページ。
【非特許文献３】Cho et al.，Japanese Journal of Ophthalmology，2016，vol.60，p.226−237．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、非ヒト霊長類のＡＭＤモデル動物を作製する方法、非ヒト霊長類のＡＭＤモデル動物、並びに当該方法により作製されたＡＭＤモデル動物を用いて、被験物質のＡＭＤの予防又は治療に対する効果の評価方法及びＡＭＤの予防又は治療効果を有する物質のスクリーニング方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、非ヒト霊長類の硝子体内に直接ヨウ素酸ナトリウムを投与することによって、全身に対するヨウ素酸ナトリウムの影響を抑えつつ、ヒトの加齢黄斑変性と同様の網膜のＯＮＬの菲薄化及びＲＰＥの変性を、視機能の大半を担っている黄斑中心窩周辺に引き起こすことができることを見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
すなわち、本発明に係るＡＭＤモデル動物の作製方法、非ヒト霊長類のＡＭＤモデル動物、並びに当該方法により作製されたＡＭＤモデル動物を用いる、被験物質のＡＭＤの予防又は治療に対する効果の評価方法及びＡＭＤの予防又は治療効果を有する物質のスクリーニング方法は、下記［１］〜［１１］の通りである。
［１］  非ヒト霊長類の動物個体の硝子体内に、ヨウ素酸ナトリウムを投与することを特徴とする、ＡＭＤモデル動物の作製方法。
［２］    硝子体１個当たりのヨウ素酸ナトリウムの投与量が０．５〜２．５ｍｇである、前記［１］のＡＭＤモデル動物の作製方法。
［３］  ヨウ素酸ナトリウムを水又はリン酸生理食塩水に溶解させたヨウ素酸ナトリウム溶液を、硝子体内に注入する、前記［１］又は［２］のＡＭＤモデル動物の作製方法。
［４］  前記動物個体が、カニクイザル又はアカゲザルである、前記［１］〜［３］のいずれかのＡＭＤモデル動物の作製方法。
［５］  作製されたＡＭＤモデル動物において、網膜のＯＮＬの菲薄化及びＲＰＥの変性が、黄斑中心窩周辺に観察される、前記［１］〜［４］のいずれかのＡＭＤモデル動物の作製方法。
［６］  作製されたＡＭＤモデル動物の眼底に、地図状萎縮が生じている、前記［１］〜［４］のいずれかのＡＭＤモデル動物の作製方法。
［７］  作製されたＡＭＤモデル動物が、萎縮型ＡＭＤモデル動物である、前記［１］〜［６］のいずれかのＡＭＤモデル動物の作製方法。
［８］  黄斑中心窩周辺に、網膜のＯＮＬの菲薄化及びＲＰＥの変性を有する、非ヒト霊長類のＡＭＤモデル動物。
［９］  眼底に地図状萎縮が生じている、非ヒト霊長類のＡＭＤモデル動物。
［１０］  前記［１］〜［７］のいずれかのＡＭＤモデル動物の作製方法により非ヒト霊長類のＡＭＤモデル動物を作製し、
作製されたＡＭＤモデル動物を用いて、被験物質のＡＭＤの予防又は治療効果について評価する、被験物質のＡＭＤの予防又は治療に対する効果の評価方法。
［１１］  前記［１］〜［７］のいずれかのＡＭＤモル動物の作製方法により非ヒト霊長類のＡＭＤモデル動物を作製し、
作製されたＡＭＤモデル動物を用いて、被験物質のＡＭＤの予防又は治療効果について評価し、
網膜のＯＮＬの菲薄化及びＲＰＥの変性からなる群より選択される１種以上が、前記被験物質を摂取する前と比較して前記被験物質を摂取した後のほうが改善されている場合に、当該被験物質を、ＡＭＤの予防又は治療効果を有する物質として選抜する、ＡＭＤの予防又は治療効果を有する物質のスクリーニング方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に係るＡＭＤモデル動物の作製方法により、ヒトのＡＭＤの特徴的な病態である網膜におけるＯＮＬの菲薄化とＲＰＥの変性を備える非ヒト霊長類のモデル動物を作製することができる。
当該作製方法により作製されたＡＭＤモデル動物を用いることによって、被験物質のＡＭＤの予防又は治療に対する効果の評価や、ＡＭＤの予防又は治療効果を有する物質のスクリーニングをより精度良く行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実施例１において、ヨウ素酸ナトリウム溶液の投与前（投与０日目）、投与後１０日目、及び投与後２６日目における、ヨウ素酸ナトリウム硝子体内投与モデル動物の網膜のＯＣＴ画像を示す。
【図２】実施例１において、ヨウ素酸ナトリウム溶液の投与前（投与０日目）及び投与後６６日目における、ヨウ素酸ナトリウム硝子体内投与モデル動物の網膜のＯＣＴ画像を示す。
【図３】実施例２において、ヨウ素酸ナトリウム溶液の投与前（投与０日目）、投与後３８日目、及び投与後６６日目における、ヨウ素酸ナトリウム硝子体内投与モデル動物の眼底所見（上段）及び眼底自発蛍光所見（下段）を示す。
【図４】実施例２において、ヨウ素酸ナトリウム溶液の投与後６６日目のヨウ素酸ナトリウム硝子体内投与モデル動物のフルオレセイン蛍光眼底所見を示す。
【図５】実施例２において、ヨウ素酸ナトリウム溶液の投与後６６日目のヨウ素酸ナトリウム硝子体内投与モデル動物の中心窩周辺部位の組織のＨＥ染色像を示す。
【図６】参考例１において、光網膜障害モデル動物の中心窩周辺部位の組織のＨＥ染色像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明に係るＡＭＤモデル動物の作製方法は、非ヒト霊長類の動物個体の硝子体内に、ヨウ素酸ナトリウムを投与する。硝子体内に直接、ヨウ素酸ナトリウムを投与することにより、全身に対するヨウ素酸ナトリウムの影響を抑えつつ、ヒトのＡＭＤ、特にヒトの萎縮型ＡＭＤと同様の網膜の変性、すなわち、網膜のＯＮＬの菲薄化、ＲＰＥの変性、及び地図状萎縮を引き起こすことができる。
【００１２】
なお、本発明に係るＡＭＤモデル動物の作製方法により作製されたＡＭＤモデル動物の網膜の変性は、ヒトのＡＭＤ患者における観察と同様にして、光干渉断層計（ＯＣＴ）、眼底検査、眼底自発蛍光検査、フルオレセイン蛍光眼底造影、インドシアニングリーン蛍光眼底造影などの、一般的に網膜の状態を調べる各種検査を組み合わせることによって観察することができる。具体的には、本発明に係るＡＭＤモデル動物の作製方法により作製されたＡＭＤモデル動物の網膜のＯＮＬの菲薄化及びＲＰＥの変性は、ヒトのＡＭＤ患者における観察と同様にして観察することができる。例えば、光干渉断層計（ＯＣＴ）により、眼球の網膜のＯＮＬと黄斑とＲＰＥを、直接観察することができる。本発明に係るＡＭＤモデル動物の眼球のＯＣＴ画像では、ヒトの萎縮型ＡＭＤと同様に、ＯＮＬの菲薄化、外境界膜の途絶、脈絡膜信号の増強、並びに、視細胞内節／外節層ライン（ellipsoid zone）、錐体外節先端ライン（interdigitation zone）、及び外顆粒層の消失が観察される。また、ＡＭＤモデル動物の眼底の地図状萎縮は、ヒトの萎縮型ＡＭＤと同様に、眼底検査により観察される。この地図状萎縮の萎縮部位では、眼底自発蛍光検査では低蛍光を示し、フルオレセイン蛍光眼底所見では強い過蛍光を示す。
【００１３】
本発明において、硝子体内に投与するヨウ素酸ナトリウムの量は、網膜の変性を引き起すために充分な量であればよく、投与する非ヒト霊長類の種類や年齢等を考慮して適宜決定することができる。ヨウ素酸ナトリウムの投与量が多すぎる場合には、網膜等への障害が大き過ぎ、ＡＭＤモデル動物としては使用し難い場合がある。そこで、本発明においては、硝子体１個当たりのヨウ素酸ナトリウムの投与量は、０．５〜２．５ｍｇとすることが好ましく、１．０〜１．５ｍｇとすることがより好ましい。また、硝子体内へのヨウ素酸ナトリウムの投与は、単回投与であってもよく、適当な間隔で複数回に分けて投与してもよい。
【００１４】
硝子体内へヨウ素酸ナトリウムを投与する方法は特に限定されるものではない。例えば、ヨウ素酸ナトリウムを適当な溶媒に溶解させたヨウ素酸ナトリウム溶液を、硝子体内に直接注入することができる。本発明においては、ヨウ素酸ナトリウム溶液を溶解させる溶媒としては、硝子体への溶媒自体による影響を小さくできることから、水、リン酸生理食塩水（ＰＢＳ）、又は適当な緩衝液であることが好ましく、水又はリン酸生理食塩水がより好ましい。
【００１５】
本発明に係るＡＭＤモデル動物の作製方法において、ＡＭＤ様の網膜の変性を生じさせる動物個体は、ヒト以外の霊長類であればよく、原猿類であってもよく、真猿類であってもよい。原猿類としては、キツネザル類、ロリス類、ガラゴ類、メガネザル類が挙げられ、真猿類としては、クモザル類、オマキザル類、マーモセット類、オナガザル類、コロブス類、類人猿が挙げられる。本発明に係るＡＭＤモデル動物の作製方法において、ＡＭＤモデル動物を作製する非ヒト霊長類としては、ＡＭＤ発症のメカニズムや薬剤に対する反応がよりヒトに近いことから、真猿類であることが好ましく、オナガザル類、コロブス類、又は類人猿であることがより好ましく、カニクイザル、アカゲザル、ニホンザル、シロテナガザル、ゴリラ、オランウータン、チンパンジー、又はボノボであることがさらに好ましく、カニクイザル又はアカゲザルであることがよりさらに好ましい。
【００１６】
硝子体内へのヨウ素酸ナトリウムの投与により、網膜のＯＮＬの菲薄化、ＲＰＥの変性、及び眼底の地図状萎縮を引き起こすことができる。ヨウ素酸ナトリウムの投与前及び投与後の動物個体は、通常の飼育の際に与えられる飼料と同様の飼料を摂取させて飼育することができる。
【００１７】
ヒトのＡＭＤ、特にヒトの萎縮型ＡＭＤでは、網膜において、ＯＮＬの菲薄化及びＲＰＥの変性からなる群より選択される１種以上の所見が観察される。本発明に係るＡＭＤモデル動物の作製方法により作製された非ヒト霊長類のＡＭＤモデル動物も、網膜に、ＯＮＬの菲薄化及びＲＰＥの変性からなる群より選択される１種以上の所見が観察される。
【００１８】
ヒトのＡＭＤ、特にヒトの萎縮型ＡＭＤでは、眼底に地図状萎縮が観察される。本発明に係るＡＭＤモデル動物の作製方法により作製された非ヒト霊長類のＡＭＤモデル動物も、眼底に地図状萎縮が観察される。地図状萎縮の判定は、ヒトの萎縮型ＡＭＤと同様の基準で行うことができる（例えば、高橋寛二、「ガイドライン  萎縮型加齢黄斑変性の診断基準」、日眼会誌、2015年10月10日、第119巻第10号、第671〜677ページ）。具体的には、地図状萎縮は、主に、眼底の中心窩を中心とする直径６０００ｍｍ以内の領域に生じる萎縮である。地図状萎縮は、一般的に、円形、卵円形、房状、又は地図状の形態であって、境界が鮮明であり、その直径は２５０μｍ（視神経乳頭縁での網膜静脈径の直径の約２倍）以上である。また、網膜色素上皮の低色素又は脱色素変化も観察されるため、脈絡膜中大血管が明瞭に透見可能であり、さらに、眼底自発蛍光所見では、明らかな低蛍光を示し、蛍光眼底所見では過蛍光を示す。
【００１９】
作製されたＡＭＤモデル動物は、ＡＭＤの病態解析や、被験物質のＡＭＤの予防又は治療に対する効果の評価や、ＡＭＤの予防又は治療効果を有する物質のスクリーニングに非常に有用である。当該ＡＭＤモデル動物は、ヒトの萎縮型ＡＭＤで観察される病態を備えているため、特に、萎縮型ＡＭＤの病態解析や、被験物質の萎縮型ＡＭＤの予防又は治療に対する効果の評価や、萎縮型ＡＭＤの予防又は治療効果を有する物質のスクリーニングに非常に有用である。
【００２０】
具体的には、本発明に係るＡＭＤモデル動物の作製方法により作製されたＡＭＤモデル動物に対して、ＡＭＤの治療剤の候補化合物である被験物質を投与し、眼、特に網膜におけるＡＭＤ特有の組織学的特徴に対する影響を調べ、被験物質のＡＭＤに対する治療効果について評価する。投与した被験物質によって、当該被験物質を摂取する前と比較して、網膜のＯＮＬの菲薄化、ＲＰＥの変性、及び眼底の地図状萎縮からなる群より選択される１種以上が改善されていた場合に、当該被験物質はＡＭＤに対する治療効果があると評価する。ＡＭＤモデル動物への被験物質の投与方法は特に限定されるものではなく、経口投与であってもよく、注腸投与であってもよく、経静脈投与であってもよく、経鼻投与であってもよく、硝子体等の眼の組織に直接注入してもよい。
【００２１】
複数の被験物質に対して同様にしてＡＭＤに対する治療効果又は予防効果があるかどうかを評価し、治療効果又は予防効果があると評価された被験物質を、ＡＭＤの予防又は治療効果を有する物質として選抜することにより、ＡＭＤの予防又は治療効果を有する物質のスクリーニングを行うこともできる。
【実施例】
【００２２】
次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２３】
なお、以降の実施例において行われた動物実験及び使用された動物の飼育等は、日本国における「動物の愛護及び管理に関する法律」（昭和４８年法律第１０５号）、「実験動物の飼養及び保管並びに苦痛の軽減に関する基準」（平成１８年環境省告示第８８号）、「厚生労働省の所管する実施機関における動物実験等の実施に関する基本指針」（平成１８年厚生労働省通知）、及び「動物実験の適正な実施に向けたガイドライン」（平成１８年日本学術会議策定）等を遵守して行われた。
【００２４】
［実施例１］
カニクイザルＡＭＤモデル動物を作製し、網膜におけるヒトＡＭＤ特有の組織学的特徴を備えているか否かを調べた。
【００２５】
＜カニクイザルのヨウ素酸ナトリウム硝子体内投与モデル動物の作製＞
カニクイザルの片眼の硝子体内に、ケタミン麻酔下で、５０μＬの２０ｍｇ／ｍＬ又は３０ｍｇ／ｍＬのヨウ素酸ナトリウム溶液（硝子体１個当たりのヨウ素酸ナトリウムの投与量が１ｍｇ又は１．５ｍｇ）を投与した。なお、ヨウ素酸ナトリウム溶液は、ヨウ素酸ナトリウムを注射用水に溶解させた溶液であり、予め０．２２μｍの孔径のフィルターを通すことにより滅菌処理を施した。
【００２６】
作製されたヨウ素酸ナトリウム硝子体内投与モデル動物について、ヨウ素酸ナトリウム溶液の投与前（投与０日目）、投与後１０日目、及び投与後２６日目に、網膜厚を測定した。測定により得られた、黄斑中心窩付近の網膜のＯＣＴ画像を図１に示す。上段は、網膜の膜厚を濃淡で表現した図であり、下段は網膜の断面図である。網膜の膜厚の測定は、ＯＣＴ画像上で網膜外層に当たる部分をトレースし、厚さを測定することにより行った。当該モデル動物をさらに飼育し、ヨウ素酸ナトリウム溶液投与後６６日目の網膜のＯＣＴ画像を図２に示す。図２中、上段がヨウ素酸ナトリウム溶液の投与前の網膜の断面図であり、下段がヨウ素酸ナトリウム溶液投与後６６日目の網膜の断面図である。
【００２７】
図１及び図２中、中心部の膜厚が薄くなっている領域が黄斑中心窩である。図１に示すように、ヨウ素酸ナトリウム溶液の投与後１０日目には、黄斑中心窩を中心に網膜厚が薄くなっており、この厚みの薄い部分は、ヨウ素酸ナトリウム溶液の投与後２６日目にはより広がっていた。この黄斑中心窩及びその近傍の膜厚の菲薄化は、主にＯＮＬが菲薄化していることを示している。さらに、図２の網膜の断面図から、投与から６６日目には、ＯＮＬの菲薄化に加えて、中心窩において、ＲＰＥ、視細胞層（視細胞内節／外節層ライン、錐体外節先端ライン）が消失しており、外境界膜の途絶及び脈絡膜信号の増強が観察された。これらの結果から、硝子体内へのヨウ素酸ナトリウムの投与により、ＯＮＬの菲薄化及びＲＰＥの変性が黄斑中心窩周辺に引き起こされること、及び、非ヒト霊長類のヨウ素酸ナトリウム硝子体内投与モデル動物は、ヒトの萎縮型ＡＭＤでみられる典型的な臨床所見を示すこと、がわかった。
【００２８】
［実施例２］
カニクイザルＡＭＤモデル動物を作製し、眼底と黄斑中心窩におけるヒトＡＭＤ特有の組織学的特徴を備えているか否かを調べた。
【００２９】
＜眼底検査、眼底自発蛍光検査、及びフルオレセイン蛍光眼底造影＞
具体的には、実施例１と同様にして、９歳のカニクイザルの右眼の硝子体１個当たり１．５ｍｇのヨウ素酸ナトリウムを投与して作製したヨウ素酸ナトリウム硝子体内投与モデル動物について、ヨウ素酸ナトリウム溶液の投与前（投与０日目）、投与後３８日目、及び投与後６６日目に、眼底を、眼底検査及び眼底自発蛍光検査により調べた。眼底検査及び眼底自発蛍光検査は、自発蛍光撮影機能が搭載された眼底カメラを用いて常法により行った。また、投与後６６日目のモデル動物については、フルオレセイン蛍光眼底造影も行った。フルオレセイン蛍光眼底造影は、モデル動物にフルオレセインを静注した後、蛍光観察可能な眼底カメラを用いて常法により行った。
【００３０】
眼底検査及び眼底自発蛍光検査の結果を図３に示す。図中、上段が眼底所見であり、下段が眼底自発蛍光所見である。投与前（図中、「Ｄａｙ  ０」）には萎縮は観察されなかったが、投与後３８日目（図中、「Ｄａｙ  ３８」）及び投与後６６日目（図中、「Ｄａｙ  ６６」）には、黄斑中心窩を中心に、直径が乳頭径（視神経乳頭縁での網膜静脈径の直径）の約２〜２．５倍の大きさの萎縮病巣（図中、矢印で示した領域）が認められた。また、この萎縮病巣は、眼底自発蛍光所見では著明な低蛍光を示した。この萎縮病巣は、地図状の形態及びその直径の大きさに加えて、境界が鮮明であること、及び眼底自発蛍光所見で明らかな低蛍光を示したことから、地図状萎縮であると判別された。この地図状萎縮は、中心窩に萎縮が及んでいたため、臨床では中心性地図状萎縮に分類された。
【００３１】
フルオレセイン蛍光眼底所見を図４に示す。この結果、ヒトの萎縮型ＡＭＤと同様に、萎縮病巣領域は、window defect（ＲＰＥに異常を来しており、脈絡膜の蛍光が透過している状態）により、強い過蛍光を示した。また、萎縮病巣領域の周辺には、ドルーゼン様の過蛍光部位が散在していた。これらの所見からも、この萎縮病巣領域が、地図状萎縮であると判別できた。
【００３２】
＜中心窩周辺部位の組織のＨＥ染色＞
ヨウ素酸ナトリウム溶液の投与後６６日目のヨウ素酸ナトリウム硝子体内投与モデル動物について、中心窩周辺部位の組織のＨＥ（ヘマトキシリン・エオジン）染色を行い、ＲＰＥ層の形態を調べた。動物を安楽殺後、眼球を摘出し、２．５％グルタールアルデヒド液で固定後、常法によりＨＥ染色を行った。
【００３３】
中心窩周辺部位の組織のＨＥ染色像を図５に示す。ＲＰＥ層（図中、黒枠内）の変性及び消失が確認できた。また、網膜全層が変性を起こしており、視細胞が消失していた。
【００３４】
これらの所見から、作製されたヨウ素酸ナトリウム硝子体内投与モデル動物は、ヒトの萎縮型ＡＭＤにおける特徴的な所見である地図状萎縮とＲＰＥの変性及び視細胞障害が生じており、よってヒト萎縮型ＡＭＤモデル動物として好適であることが確認された。
【００３５】
［参考例１］
カニクイザルで光網膜障害モデル動物を作製し、その網膜組織の形態を、ＨＥ染色で調べた。
【００３６】
＜カニクイザルの光網膜障害モデル動物の作製＞
ケタミン麻酔下で、上を向かせた状態で固定したカニクイザルの片眼に、波長可変光源を用いて１８００ｌｕｘの照度の波長４６０ｎｍの青色光を、眼の５ｃｍ上方から垂直に３０分間照射した。この照射を３日間行うことで、光網膜障害モデル動物を作製した。
【００３７】
＜中心窩周辺部位の組織のＨＥ染色＞
作製された光網膜障害モデル動物について、中心窩周辺部位の組織のＨＥ染色を行い、ＲＰＥ層の形態を調べた。ＨＥ染色は、実施例２と同様にして行った。
【００３８】
中心窩周辺部位の組織のＨＥ染色像を図６に示す。ＲＰＥ層はさほど変性は観察されなかった。視細胞層がＲＰＥ層から剥離している像は、標本作製時のアーチファクトである。図中、視細胞層中の長細い細胞が視細胞である。つまり、光網膜障害モデル動物は、網膜に障害を生じているものの、その病態はヒトの萎縮型ＡＭＤにおいて観察される所見とは異なっており、ヒト萎縮型ＡＭＤモデル動物としては適切とは言い難いことが判明した。
【図１】
2018157809.tif 000002
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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