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(57)【要約】【課題】  良好な細胞生存率で細胞を凍結させることができる細胞の凍結方法を提供する。【解決手段】電場をかけた状態のナノバブル水に細胞を浸して冷却することで前記細胞を凍結させる細胞の凍結方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
電場をかけた状態のナノバブル水に細胞を浸して冷却することで前記細胞を凍結させる細胞の凍結方法。
【請求項２】
前記ナノバブル水の電場が１〜５ｋＶ／ｍである請求項１に記載の細胞の凍結方法。
【請求項３】
前記ナノバブル水が窒素ナノバブル水または酸素ナノバブル水である請求項１または２に記載の細胞の凍結方法。
【請求項４】
前記ナノバブル水の電場の周波数が１〜５００ｋＨｚまたは１〜１０ＭＨｚである請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞の凍結方法。
【請求項５】
前記冷却を行う時間が６〜１２時間である請求項１〜４のいずれか一項に記載の細胞の凍結方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞の凍結方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
臓器の凍結等の細胞の凍結方法が従来盛んに研究・開発されている。例えば、特許文献１には、所定のゲルの存在下で生物試料を凍結して保存する方法において、当該ゲルを事前に所定の温度条件で処理し、さらに凍結圧力を制御することで、生物試料の損傷等を良好に抑制して凍結保存することができると記載されている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特表２０１５−５０３９２７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
細胞の凍結をする際、凍結速度が小さければ、凍結に時間がかかり過ぎる要因となり細胞生存率が低下するおそれがある。一方で、凍結速度を大きくして一気に細胞を凍結させようとしても、臓器の細胞は熱容量が大きく、急速凍結が困難となるという問題が生じる。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
そこで、本発明者らは、細胞を緩慢凍結で一様に凍結させ、細胞の温度分布を抑制した状態（平衡状態、過冷却状態）で最後に冷やして凍結させることができれば、良好な細胞生存率で細胞を凍結させることができることに着目した。そして、そのような細胞の凍結方法は、電場をかけた状態のナノバブル水に細胞を浸して冷却することで実現できることを見出した。
【０００６】
本発明は上記知見を基礎として完成したものであり、一側面において、電場をかけた状態のナノバブル水に細胞を浸して冷却することで前記細胞を凍結させる細胞の凍結方法である。
【０００７】
本発明の細胞の凍結方法は一実施形態において、前記ナノバブル水の電場が１〜５ｋＶ／ｍである。
【０００８】
本発明の細胞の凍結方法は別の一実施形態において、前記ナノバブル水が窒素ナノバブル水または酸素ナノバブル水である。
【０００９】
本発明の細胞の凍結方法は更に別の一実施形態において、前記ナノバブル水の電場の周波数が１〜５００ｋＨｚまたは１〜１０ＭＨｚである。
【００１０】
本発明の細胞の凍結方法は更に別の一実施形態において、前記冷却を行う時間が６〜１２時間である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の細胞の凍結方法によれば、良好な細胞生存率で細胞を凍結させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】実施例で用いた実験装置の模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の細胞の凍結方法は、電場をかけた状態のナノバブル水に細胞を浸して冷却することで細胞を凍結させる。細胞をナノバブル水で凍結させる、さらに冷却時に電場をかけることで、水の凝固点降下が発生し、細胞を緩慢凍結で一様に凍結させ、細胞の温度分布を抑制した状態（平衡状態、過冷却状態）で最後に冷やして凍結させることができ、その結果、良好な細胞生存率で細胞を凍結させることができる。
【００１４】
ナノバブル水は、粒径がナノメートルオーダーの気泡を含む水であり、気泡が電荷を帯びている。ナノバブル水としては、生理食塩水を用いることが好ましい。ナノバブル水は、窒素をバブリングして生成した窒素ナノバブル水であってもよい。この場合の上記粒径がナノメートルオーダーの気泡は窒素の気泡となっている。また、ナノバブル水は、酸素をバブリングして生成した酸素ナノバブル水であってもよい。この場合の上記粒径がナノメートルオーダーの気泡は酸素の気泡となっている。
【００１５】
ナノバブル水の電場は、１〜５ｋＶ／ｍであることが好ましい。ナノバブル水の電場が１〜５ｋＶ／ｍであると、水の凝固点降下をより良好に発生させることができる。ナノバブル水の電場は、２〜５ｋＶ／ｍであってもよく、３〜５ｋＶ／ｍであってもよい。
【００１６】
ナノバブル水の電場の周波数が１〜５００ｋＨｚまたは１〜１０ＭＨｚであることが好ましい。ナノバブル水の電場がこのような周波数に制御されていれば、水の凝固点降下をより良好に発生させることができる。ナノバブル水の電場の周波数は、１０〜５００ｋＨｚまたは３〜１０ＭＨｚであってもよく、１００〜５００ｋＨｚまたは５〜１０ＭＨｚであってもよい。
【００１７】
電場をかけた状態のナノバブル水に細胞を浸して凍結するまで冷却を開始するが、この冷却時間は６〜１２時間であるのが好ましい。当該冷却時間が６〜１２時間であると、水の凝固点降下をより良好に発生させることができる。当該冷却時間は８〜１２時間であってもよく、１０〜１２時間であってもよい。
【００１８】
本発明は、医療技術分野の臓器の細胞の凍結や、食品加工分野の細胞の凍結等の幅広い分野に利用可能である。
【実施例】
【００１９】
以下に、本発明を実施例でさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２０】
電場をかけること、及び、ナノバブル水を使用することによる、細胞凍結のための水の凝固点降下を検討するために、以下の試験を行った。
まず、図１に示すような、実験装置を準備した。実験装置は、温度制御ユニット、及び、ファンクションジェネレータを備えている。温度制御ユニットでは、熱伝素子（ペルチェ素子）上にヒートシンクを設けた。ファンクションジェネレータでは、カバーガラスの両端部分上に電極（電極間距離２ｍｍ）を設け、さらにその上にサンプルを設けた。サンプルは、カバーガラス越しにハイスピードカメラで撮影した。
【００２１】
サンプルとしては、表１に示すように、生理食塩水、及び、酸素ナノバブル含有生理食塩水を用い、それぞれ所定の電圧をかけて所定の周波数の電場とした状態で、−３０℃で凍結するまで所定時間冷却した。
実験条件を表１に示す。
【００２２】
【表１】
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【００２３】
当該実験により、実施例１及び２は、それぞれ比較例１〜３に対して、凝固点降下が良好であった。このため、電場をかけた状態のナノバブル水を冷却して凍結させることで、水の凝固点が良好に低下していることがわかる。従って、このような凍結方法を用いることで、細胞を緩慢凍結で一様に凍結させ、細胞の温度分布を抑制した状態（平衡状態、過冷却状態）で最後に冷やして凍結させることができ、その結果、良好な細胞生存率で細胞を凍結させることができることがわかる。
【図１】
2018157793.tif 000004
(57)【要約】      （修正有）【課題】土の保水状態や根の張り具合が一目でわかるようにした植木鉢を提供する。【解決手段】側面の一部に縦長の透明部を形成し、透明部に透明板と不透明板の二枚の板を重ねセットするとともに、透明板を内側に、不透明板を外側に配置して、二枚の板とも抜き差しができるようにした植木鉢。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
植木鉢やプランターの側面の一部に縦長の透明部を形成し、内部の保水状態や根の張り具合を観察できるようにした植木鉢であって、透明部に透明板と不透明板の二枚の板を重ねセットした植木鉢。
【請求項２】
透明板を内側に、不透明板を外側に配置しており、二枚の板とも抜き差しができる。
【請求項３】
二枚の板は通常は植木鉢に差し込んでおき、内部を観察する際は外側の不透明板だけを抜き取る。内側の透明板も抜き取って洗浄などをすることができる。
【請求項４】
不透明板は、植木鉢の側面から光が入り込み植物の育成を害することを防ぐ役割をする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、内部の土の保水状態や植物の根の張り具合が一目でわかるようにした植木鉢に関する。
【背景技術】
【０００２】  従来、植木鉢の側面に縦長の透明部を設けることで、内部を観察できる植木鉢（例えば特許文献１参照）がある。
また、ハート型など面積の小さな透明部を設けて観察する植木鉢（例えば特許文献２参照）もある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】  実開昭６３−０７５１４４  公報
【０００４】
【特許文献２】  実登３２０１８４８  公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】  以上に述べた従来の植木鉢では、透明部を遮光する不透明板が無く、側面の透明部から光が差し込んでしまう問題があった。また、透明部の面積が小さく、内部が見づらい難点もあった。
【課題を解決するための手段】
【０００６】  本発明は、このような従来の方式が持つ問題を解決するものである。不透明板を上にスライドさせたり抜き取ったりすることで、いつでも植木鉢の内部を観察できる。水やりのタイミングは表面の土の乾き具合など感に頼っていたが、内部の観察が可能になることで的確な水やりができる。根の張り具合を見て、植え替え時期を判断することもできる。【０００７】  第２の解決手段は、透明部に内外二枚の板をセットし、二枚とも抜き差しができるようにしたことである。内部を観察したいときは外側の不透明板だけを外せばよく、内側の透明板も取り外して洗浄などができる。
【発明の効果】
【０００８】  花や植物を植木鉢で育て観賞する人にとって、水の管理や根の張り具合の確認は一番、気になるところ。内部が見える透明部分があれば、その問題が解消する。透明、不透明の二枚の板を抜き差しすることで、内部の観察が容易にできるうえ、不透明板の存在により外光が植木鉢の中に差し込むこともない。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】  本発明の形状と機能を示す植木鉢の外観。
【図２】  同植木鉢の断面図と側面図。
【発明を実施するための形態】
【００１０】  以下、本発明の実施の形態を図１〜図２に基づいて説明する。
【００１１】  図１は、不透明板を取り外した際の状態（上の図）と、植物の植わっているときの内部の観察状況（下の図）を示すものである。
【００１２】  図２は、植木鉢を上部から見た状態（上の図）と、側面から見た状態（下の図）を示すものである。
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【手続補正書】
【提出日】平成28年10月9日(2016.10.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
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【図２】
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