(57)【要約】【課題】インフルエンザワクチンの安全性を適切に評価できる方法を提供する。【解決手段】被験動物に不活化インフルエンザワクチンを接種させた時に発現上昇する遺伝子セットに含まれる各遺伝子の発現量の平均値を測定する工程と、測定された平均値と、ロジスティック回帰モデルにより算出されたインフルエンザワクチンの副反応発症リスクをゾーン区分けする閾値と、を比較して、その比較結果に基づいて、前記不活化インフルエンザワクチンの安全性に関する情報を取得する工程と、を有することを特徴とする。【選択図】図９
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験動物に不活化インフルエンザワクチンを接種させた時に発現上昇する遺伝子セットに含まれる各遺伝子の発現量の平均値を測定する工程と、
測定された平均値と、ロジスティック回帰モデルにより算出されたインフルエンザワクチンの副反応発症リスクをゾーン区分けする閾値と、を比較して、その比較結果に基づいて、前記不活化インフルエンザワクチンの安全性に関する情報を取得する工程と、を有することを特徴とするインフルエンザワクチンの安全性評価方法。
【請求項２】
前記不活化インフルエンザワクチンを腹腔内接種させた時に発現上昇する遺伝子セットが、Irf7, Csf1, Zbp1及びTapbpであることを特徴とする請求項１に記載のインフルエンザワクチンの安全性評価方法。
【請求項３】
前記不活化インフルエンザワクチンを経鼻接種させた時に発現上昇する遺伝子セットが、Psme1, Timp1, Tap2, C2, Psmb9, Cxcl9, Csf1, Lgals9, Lgals3bp, Mx2, Ifi47及びTapbpであることを特徴とする請求項１に記載のインフルエンザワクチンの安全性評価方法。
【請求項４】
前記不活化インフルエンザワクチンを筋肉内接種させた時に発現上昇する遺伝子セットが、Psme1, C2, Trafd1, Irf7, Lgals9, Lgals3bp, Zbp1, Mx2, Ifi47及びTapbpであることを特徴とする請求項１に記載のインフルエンザワクチンの安全性評価方法。
【請求項５】
前記不活化インフルエンザワクチンを腹腔内接種させた時の閾値は、0.971以上が高リスクゾーンであり、0.308以上0.971より下が低リスクゾーンであり、0.308より下が安全ゾーンであることを特徴とする請求項２に記載のインフルエンザワクチンの安全性評価方法。
【請求項６】
前記不活化インフルエンザワクチンを経鼻接種させた時の閾値は、0.875以上が高リスクゾーンであり、0.367以上0.875より下が低リスクゾーンであり、0.367より下が安全ゾーンであることを特徴とする請求項３に記載のインフルエンザワクチンの安全性評価方法。
【請求項７】
前記不活化インフルエンザワクチンを筋肉内接種させた時の閾値は、0.751以上が高リスクゾーンであり、0.441以上0.751より下が低リスクゾーンであり、0.441より下が安全ゾーンであることを特徴とする請求項４に記載のインフルエンザワクチンの安全性評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インフルエンザワクチンの安全性評価方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザは、呼吸器飛沫感染を介して拡散するインフルエンザウイルスにより引き起こされる急性の伝染性呼吸器疾患である。インフルエンザは、世界的規模で流行することがあるウイルス感染疾患の一つであり、効果的な予防法の確立が望まれる。
【０００３】
インフルエンザの予防において、ワクチン接種は最も有効な予防手段の一つである。インフルエンザワクチンの安全性評価は、非臨床試験、臨床試験に加えて、ロットリリース試験として異常毒性否定試験及びマウス白血球数減少試験等が生物学的製剤基準として設定されている。
【０００４】
非特許文献１には、インフルエンザワクチン接種後のラット肺において、特異な発現上昇を示す複数のバイオマーカー遺伝子の同定が記載されている。
【０００５】
近年、様々な剤型のインフルエンザワクチンが開発され、更に、アジュバント等の使用が検討されているが、これらの多様なワクチン種・アジュバントの安全性を評価するには、更なる新しい安全性を評価方法が求められる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Mizukami et al., 2014, PLoS One; 9: e101835, Momose et al.,2015, PLoS One; 10: e0124392.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明はかかる問題点に鑑みてなされたものであって、新規且つ有用なインフルエンザワクチンの安全性評価方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明にかかるインフルエンザワクチンの安全性評価方法は、被験動物に不活化インフルエンザワクチンを接種させた時に発現上昇する遺伝子セットに含まれる各遺伝子の発現量の平均値を測定する工程と、測定された平均値と、ロジスティック回帰モデルにより算出されたインフルエンザワクチンの副反応発症リスクをゾーン区分けする閾値と、を比較して、その比較結果に基づいて、前記不活化インフルエンザワクチンの安全性に関する情報を取得する工程と、を有することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、インフルエンザワクチンの安全性を適切に評価できる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】SA, HA, 各種濃度MF59+HA, RE接種時の各種遺伝子の発現量を示す図である。
【図２】SA, HA, 各種濃度Poly I:C+HA, RE接種時の各種遺伝子の発現量を示す図である。
【図３】腹腔内投与時のRE分類率を、その分類率に従い色分けしたものを示す図である。
【図４】経鼻投与時のRE分類率を、その分類率に従い色分けしたものを示す図である。
【図５】筋肉内投与時のRE分類率を、その分類率に従い色分けしたものを示す図である。
【図６】腹腔内投与時のぞれぞれの遺伝子を用いた際の順序ロジスティック回帰分析の結果を示す図である。
【図７】経鼻投与時のぞれぞれの遺伝子を用いた際の順序ロジスティック回帰分析の結果を示す図である。
【図８】筋肉内投与時のぞれぞれの遺伝子を用いた際の順序ロジスティック回帰分析の結果を示す図である。
【図９】腹腔内投与時のぞれぞれの遺伝子を用いた際の各個体別の分類率を示す図である。
【図１０】経鼻投与時のぞれぞれの遺伝子を用いた際の各個体別の分類率を示す図である。
【図１１】筋肉内投与時のぞれぞれの遺伝子を用いた際の各個体別の分類率を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、添付の図面を参照して本発明の実施形態について具体的に説明するが、当該実施形態は本発明の原理の理解を容易にするためのものであり、本発明の範囲は、下記の実施形態に限られるものではなく、当業者が以下の実施形態の構成を適宜置換した他の実施形態も、本発明の範囲に含まれる。
【００１２】
本実施形態にかかるインフルエンザワクチンの安全性評価方法は、被験動物に不活化インフルエンザワクチンを接種させた時に発現上昇する遺伝子セットに含まれる各遺伝子の発現量の平均値を測定する工程と、測定された平均値と、ロジスティック回帰モデルにより算出されたインフルエンザワクチンの副反応発症リスクをゾーン区分けする閾値と、を比較して、その比較結果に基づいて、不活化インフルエンザワクチンの安全性に関する情報を取得する工程と、を有する。
【００１３】
被験動物は、特に限定されるものではなく、例えばヒト、サル、マウス、ラット、イヌ等である。
【００１４】
不活化インフルエンザワクチンは、インフルエンザウイルスをホルマリン等で処理して感染性を失わせたものを材料に調整されたワクチンである。インフルエンザウイルスは特に限定されるものでなく、A型又はB型の何れの型も含まれる。
【００１５】
インフルエンザワクチンは、アジュバントを含むことが可能である。アジュバントとしては、特に限定されるものではないが、例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム等のアルミニウム塩、キトサン、オリゴデオキシヌクレオチド、水中油型エマルジョン等を用いることが可能である。
【００１６】
インフルエンザワクチンには、ウイルス粒子全体を不活性化した全粒子ワクチンと、全粒子ワクチン中に含まれる発熱に関係する物質をエーテル処理にて取り除いた成分ワクチンとが含まれる。
【００１７】
被験動物への不活化インフルエンザワクチンの接種経路は、特に限定されるものではないが、例えば、腹腔内接種、経鼻接種、又は、筋肉内接種である。
【００１８】
接種時に発現上昇する遺伝子セットは、例えば、ロジスティック回帰分析を用いて同定可能である。即ち、複数の候補遺伝子の中から評価に有用な遺伝子を選択するため順次ロジスティック回帰分析を実施し、回帰式を算出する。ロジスティック回帰分析は以下のロジスティックモデルの式で定義される。
【００１９】
【数１】
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【００２０】
ここで、(ip, nasal or im)は、腹腔内投与、経鼻投与又は筋肉内投与時の遺伝子発現を示し、pは分類率、β０は定数を示す。β1は(ip,nasal or im)の回帰係数を示す。それぞれ順序ロジスティック回帰分析を実行し、β０及びβ1を算出し、予測式を作成し、その後、作成した予測式に、遺伝子発現量を挿入し、各ワクチンへの分類率を算出し、実際の分類と予測された分類を比較し、予測精度を検討することにより、接種時に発現上昇する遺伝子セットが同定できる。
【００２１】
腹腔内接種時に発現上昇する遺伝子セットは、irf7, Csf1, Zbp1及びTapbpである。
【００２２】
経鼻接種時に発現上昇する遺伝子セットは、Psme1, Timp1, Tap2, C2, Psmb9, Cxcl9, Csf1, Lgals9, Lgals3bp, Mx2, Ifi47及びTapbpである。
【００２３】
筋肉内接種時に発現上昇する遺伝子セットは、Psme1, C2, Trafd1, Irf7, Lgals9, Lgals3bp, Zbp1, Mx2, Ifi47及びTapbpである。
【００２４】
尺度を一つにするため、発現上昇する遺伝子セットに含まれる各遺伝子の発現量の平均値が測定される。
【００２５】
そして、測定された平均値と、ロジスティック回帰モデルにより算出されたインフルエンザワクチンの副反応発症リスクをゾーン区分けする閾値と、が比較される。ここで、インフルエンザワクチンの副反応とは、免疫獲得以外の反応であり、特に限定されるものではないが、例えば、発熱、悪寒、頭痛、嘔吐、下痢、倦怠感、一過性の意識消失、めまい、リンパ節の腫れ等の軽微な副反応や、アナフィラキシー症状、急性散在性脳脊髄炎、ギランバレー症候群、肝機能障害等の重篤な副反応も含まれる。
【００２６】
副反応発症リスクをゾーン区分けする閾値は、下記のように算出される。即ち、遺伝子セットに含まれる遺伝子から算出されるぞれぞれの分類率を平均した平均分類率について、接種ルートごとにそれぞれ順序ロジスティック回帰分析を実行し、予測式を作成する。そして、作成した予測式に、遺伝子発現量を挿入し、各ワクチンへの分類率を算出する。更に各ワクチンの分類境界を以下の式に従い算出する。
【００２７】
【数２】
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【００２８】
β０及びβ1は上記のロジスティック回帰分析から得られた値を上記式に挿入し、分類率の境界線を算出する。分類境界は、高リスクゾーン（ゾーン１）、低リスクゾーン（ゾーン２）、安全ゾーン（ゾーン３）とした。
【００２９】
腹腔内接種時の閾値は、0.971以上が高リスクゾーンであり、0.308以上0.971より下が低リスクゾーンであり、0.308より下が安全ゾーンである。
【００３０】
経鼻接種時の閾値は、0.875以上が高リスクゾーンであり、0.367以上0.875より下が低リスクゾーンであり、0.367より下が安全ゾーンである。
【００３１】
筋肉内接種時の閾値は、0.751以上が高リスクゾーンであり、0.441以上0.751より下が低リスクゾーンであり、0.441より下が安全ゾーンである。
【００３２】
なお、上述の実施例では分類境界を３つのゾーンに区分けしているが、本発明の実施形態はかかる例に限定されるものではなく、２つ又は４つ以上のゾーンに区分けすることも可能である。
【実施例】
【００３３】
（１）被検試料の投与
動物としては、マウス(Balb/c, 7週齢、メス、SPF) を使用した。被検試料として用いるワクチン・アジュバントとしては、以下のものを用いた。:毒性参照用インフルエンザワクチン (全粒子不活化インフルエンザワクチン、以下「RE」と記すことがある、Lot 4, 平成19年2月25日)。H1N1 (A/ニューカレドニア/20/99) インフルエンザHAワクチン (北里第一三共、以下「HA」と記すことがある)、Poly I:C (Sigma)、AdvaxTM InvivoGen (MF59相当品、以下「MF59」と記すことがある)、生理食塩水(「大塚生食注」、以下「SA」と記すことがある、大塚製薬)。
【００３４】
腹腔内投与の場合、ワクチン及びアジュバント含有ワクチン溶液を500 μL腹腔内投与し、経鼻投与の場合は左右の鼻腔からそれぞれ15 μLずつ、筋肉内投与の場合は左大腿部に100 μL投与した。各ワクチン・アジュバントについての投与量 (1匹あたりの投与量) を以下に示す。: REは0.75 U、HAは15 mg HA、Poly I:Cは1, 5, 10又は20 μg, MF59は最終濃度25%, 50%又は75% (経鼻においては12.5%, 25%又は50%) になるようにそれぞれ投与した。また、ワクチン・アジュバントの混合製剤については、あらかじめ混合させた後に投与した。
（２）組織からのRNA調製
ワクチン・アジュバント投与から16時間後に肺及び血液を採取した。血液はEDTA採血管に移した。肺は摘出後RNAlater中で一時保存し、その後ISOGEN (ニッポンジーン株式会社) 中でホモジナイズを行った。4℃にて1晩以上静置した後、2,400 gで10分間遠心し、上清を得た。この上清に0.2倍容量のクロロホルム (Wako) を加え、15秒間激しく撹拌した後、3分間室温で静置した。4℃にて10,000 gで15分間遠心 (クロロホルム抽出) したのち、上清(水相) を採取し、もう一度クロロホルム抽出を行った。得られた上清に0.5倍容量の2-プロパノール(Wako) を加え転倒混和し、10分間室温で静置した。その後、4℃にて10,000 gで15分間遠心し、RNAを沈殿させた。沈殿に氷冷70%エタノール (Wako) を加え、4℃にて10,000 gで5分間遠心し、沈殿RNAを洗浄した。RNAは注射用水 (「大塚蒸留水」、大塚製薬) に溶解させた。
（３）検出
精製したRNAにおけるターゲット遺伝子の相対RNA量はQunatiGene Plex (「QGP」、ベリタス社) を用いて行った。シグナルの検出はBio-Plex (Bio rad) を使用した。ターゲット遺伝子の発現量は、同一試料中のβ-actin発現量に対する比 (相対RNA量) で算出した。更に、実験間での測定誤差の影響を最小限にするため、各動物の遺伝子発現は、HAワクチン投与個体の平均発現値を1とした時の相対値として算出した (以下、遺伝子発現量と記載することがある)。得られた遺伝子発現量を、順序ロジスティック回帰分析等に適用した。
【００３５】
ターゲット遺伝子について、以下に示す。
【００３６】
【表１】
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【００３７】
QGPにはCapture extender (CE)、Label extender (LE) 及びblocking extender (BP) の３つのプローブがある。下記に各遺伝子におけるプローブ及びそのプローブに対応する配列を示す。
【００３８】
Cxcl11について下記に示す。
【００３９】
【表２】
2018057291.tif 000006
【００４０】
Cxcl9について下記に示す。
【００４１】
【表３】
2018057291.tif 000007
【００４２】
Zbp1について下記に示す。
【００４３】
【表４】
2018057291.tif 000008
【００４４】
Mx2について下記に示す。
【００４５】
【表５】
2018057291.tif 000009
【００４６】
Irf7について下記に示す。
【００４７】
【表６】
2018057291.tif 000010
【００４８】
Lgals9について下記に示す。
【００４９】
【表７】
2018057291.tif 000011
【００５０】
Ifi47について下記に示す。
【００５１】
【表８】
2018057291.tif 000012
【００５２】
Tapbpについて下記に示す。
【００５３】
【表９】
2018057291.tif 000013
【００５４】
Csf1について下記に示す。
【００５５】
【表１０】
2018057291.tif 000014
【００５６】
Timp1について下記に示す。
【００５７】
【表１１】
2018057291.tif 000015
【００５８】
Trafd1について下記に示す。
【００５９】
【表１２】
2018057291.tif 000016
【００６０】
Lgals3bpについて下記に示す。
【００６１】
【表１３】
2018057291.tif 000017
【００６２】
Psmb9について下記に示す。
【００６３】
【表１４】
2018057291.tif 000018
【００６４】
C2について下記に示す。
【００６５】
【表１５】
2018057291.tif 000019
【００６６】
Tap2について下記に示す。
【００６７】
【表１６】
2018057291.tif 000020
【００６８】
Ifrd1について下記に示す。
【００６９】
【表１７】
2018057291.tif 000021
【００７０】
Psme1について下記に示す。
【００７１】
【表１８】
2018057291.tif 000022
【００７２】
Ngfrについて下記に示す。
【００７３】
【表１９】
2018057291.tif 000023
【００７４】
Actbについて下記に示す。
【００７５】
【表２０】
2018057291.tif 000024
【００７６】
（４）結果
Cxcl11, Cxcl9, Zbp1, Mx2, Irf7, Lgals9, Ifi47, Tapbp, Csf1, Timp1, Trafd1, Lgals3bp, Psmb9, C2, Tap2, Ifrd1, Psme1, Ngfrの遺伝子発現量を図1及び図2に示す。
【００７７】
ほぼすべての遺伝子において、またいずれの投与法においても全粒子不活化ワクチンにおいて、遺伝子発現の上昇が認められた。また、ヒトにおいて毒性発現が認められるPoly I:CにおいてもHAワクチンと比較して、高い遺伝子発現が認められた。
【００７８】
しかし、遺伝子発現の上昇幅は、遺伝子によって異なっており、例えばNgfrにおいてはREワクチンにおいても著明な遺伝子発現上昇は認められておらず、またTimp1についてはヒトにおいて安全性が高いとされているMF59アジュバントにおいては顕著な遺伝子発現の上昇が認められている。更に、遺伝子発現上昇の程度は、遺伝子によってことなっており、どの程度の発現上昇をもって安全性を評価するのかを考慮する必要がある。
【００７９】
そこで、これらの遺伝子の中から、遺伝子発現量によって、HAワクチン、REワクチン、FM59添加ワクチン及びPoly I:C添加ワクチンを高精度に分類する場合、その評価に有用な遺伝子を選択するため、順序ロジスティック回帰分析法により、その予測精度を検証した。即ち、Cxcl11, Cxcl9, Zbp1, Mx2, Irf7, Lgals9, Ifi47, Tapbp, Csf1, Timp1, Trafd1, Lgals3bp, Psmb9, C2, Tap2, Ifrd1, Psme1, Ngfrの遺伝子発現量について、それぞれ順序ロジスティック回帰分析を実行し、回帰式のβ０及びβ1を算出し、予測式を作成した。その後、作成した予測式に、遺伝子発現量を挿入し、各ワクチンへの分類率を算出し、実際の分類と予測された分類を比較し、予測精度を検討した。回帰分析には統計解析ソフト (「JMP」、SAS Institute Japan) を用いた。
【００８０】
解析条件を以下に示す。順序ロジスティック回帰分析におけるサンプルデータはHA, Poly I:C及びREとした。また、回帰分析における分類順序は各種ワクチンの毒性発現に従い、RE, Poly I;C, HAの順で毒性が高いワクチンとした。各ワクチンへの分類率におけるサンプルデータは、SA, HA, MF59, Poly I:C及びREとした。分類率は、各動物個体において実施した。これらの解析を腹腔内投与、経鼻投与ならびに筋肉内投与においてそれぞれ実施した。
【００８１】
結果を図3〜図5に示す。図3〜図5では、各遺伝子の順序ロジスティック回帰分析から得られた予測式のうち、RE (毒性参照ワクチン) への分類予測式を用い、REへの分類率を示したものである。RE接種個体においては、ほぼ全ての遺伝子が95%以上のRE分類率を示している一方、HAやMF59においては多くの遺伝子は50%以下のRE分類率を示している。更に、ヒトにおいて毒性を示ことが知られているPoly I:Cにおいては、多くの遺伝子でRE分類率が高値 (95%以上) を示した。REが毒性参照ワクチンであることを考慮すると、REヘの分類率評価によって、ワクチン・アジュバントの予測が可能であることを示している。即ち、これらの遺伝子の多くは、REヘの分類率を評価することで、アジュバント含有ワクチンの評価が可能であることを示唆している。
【００８２】
更に、上記の結果は腹腔内投与、経鼻投与及び筋肉内投与のいずれにおいても共通した結果が得られており、本評価系がワクチンの接種ルートに依存せず安定した試験結果を得られることを示している。
【００８３】
多くの遺伝子で、RE分類率がワクチン・アジュバントの毒性評価に有用であることが示されたものの、いくつかの遺伝子においては、ワクチンの分類予測に不向きであることが図3〜図5から示された。そこで、順序ロジスティック回帰分析により得られた、回帰係数の有意 (p値)、モデル全体の優位性 (r2値) を指標に、遺伝子の選択を行った。
【００８４】
結果を図6〜図8に示す。図6〜図8において枠で示す部分は、回帰式の有意性を満たさなかった部分を示す。r2値は0.5以上、p値は0.25未満の遺伝子においては、その回帰式が有意であるとし、安全性評価マーカー遺伝子として選択した。その結果、腹腔内ではirf7, Csf1, Zbp1及びTapbpが、経鼻投与ではPsme1, Timp1, Tap2, C2, Psmb9, Cxcl9, Csf1, Lgals9, Lgals3bp, Mx2, Ifi47及びTapbpが、筋肉内投与ではPsme1, C2, Trafd1, Irf7, Lgals9, Lgals3bp, Zbp1, Mx2, Ifi47及びTapbpが選択され、これらの遺伝子からなる遺伝子群を遺伝子セットとした。より包括的な安全性評価結果を導くため、遺伝子セットに含まれる遺伝子から算出されたぞれぞれの分類率を平均した。平均分類率について、接種ルートごとにそれぞれ順序ロジスティック回帰分析を実行し、予測式を作成した。その後、作成した予測式に、遺伝子発現量を挿入し、各ワクチンへの分類率を算出した。更に、各ワクチンの分類境界を上記した分類率の式に従い算出した。
【００８５】
β０及びβ1は上記の順序ロジスティック回帰分析から得られた値を上記の式挿入し、分類率の境界線を算出した。分類境界は、ゾーン１がREワクチン (高リスク)、ゾーン2がPoly I:C (中リスク)、ゾーン3をHA (安全域)とした。結果は以下に示す通りであった。
【００８６】
腹腔内投与については、HAワクチン投与群が8匹で、分類率 (x100%) がぞれぞれ0.119, 0.112, 0.300, 0.065, 0.057, 0.038, 0.038及び0.174であり、Poly I:C投与群が4匹で、分類率 (x100%) がぞれぞれ0.965, 0.947, 0.946及び0.344であり、RE投与群が8匹で、分類率(x100%) がぞれぞれ0.996, 0.999, 0.998, 0.997, 0.995, 0.982, 0.991及び0.978であった。ゾーン分類の閾値は、ゾーン１が0.971以上, ゾーン2が0.308以上であった。これらの結果を図９に示す。図中の破線は、ロジスティック回帰分析より導き出された境界線 (P=0.5)を示す。REワクチン投与群においては、すべての個体がゾーン１(高リスク) に分類され、Poly I:Cはゾーン 2 (中リスク)に分類され、HAはゾーン3 (安全域) に分類され、ワクチンの持つ毒性と相関しており、評価精度も非常に高い結果が得られた。
【００８７】
経鼻投与については、HAワクチン投与群が14匹で、分類率 (x100%) がぞれぞれ0.049, 0.019, 0.030, 0.031, 0.023, 0.040, 0.029, 0.023, 0.021, 0.015, 0.012, 0.157, 0.025及び0.018であり、Poly I:C投与群が4匹で、分類率(x100%) がぞれぞれ0.431, 0.842, 0.518及び0.625であり、RE投与群が14匹で、分類率 (x100%) がぞれぞれ0.997, 0.999, 0.999, 0.999, 0.981, 0.980, 0.998, 0.983, 0.999, 0.909, 0.999, 0.945, 0.996及び0.999であった。ゾーン分類の閾値は、ゾーン１が0.875以上, ゾーン2が0.367以上であった。これらの結果を図１０に示す。図中の破線は、ロジスティック回帰分析より導き出された境界線 (P=0.5)を示す。REワクチン投与群においては、すべての個体がゾーン１(高リスク) に分類され、Poly I:Cはゾーン 2 (中リスク)に分類され、HAはゾーン3 (安全域) に分類され、ワクチンの持つ毒性と相関しており、評価精度も非常に高い結果が得られた。
【００８８】
筋肉内投与については、HAワクチン投与群が8匹で、分類率 (x100%) がぞれぞれ0.081, 0.164, 0.171, 0.132, 0.106, 0.113, 0.186及び0.158であり、Poly I:C投与群が4匹で、分類率 (x100%) がぞれぞれ0.730, 0.757, 0.673及び0.811であり、RE投与群が8匹で、分類率(x100%) がぞれぞれ0.876, 0.717, 0.517, 0.987, 0.997, 0.999, 0.973及び0.977であった。ゾーン分類の閾値は、ゾーン１が0.751以上, ゾーン2が0.441以上であった。これらの結果を図１１に示す。図中の破線は、ロジスティック回帰分析より導き出された境界線 (P=0.5)を示す。REワクチン投与群においては、ほぼすべての個体がゾーン１(高リスク) に分類され、Poly I:Cはゾーン 2 (中リスク)に分類され、HAはゾーン3 (安全域) に分類され、ワクチンの持つ毒性と相関しており、評価精度も非常に高い結果が得られた。
【産業上の利用可能性】
【００８９】
インフルエンザワクチンの安全性評価に利用できる。
【配列表フリーテキスト】
【００９０】
配列番号３３〜４５，５９〜７１，８４〜９５，１１２〜１２７，１３９〜１４９，１６６〜１８１，１９７〜２１１，２２６〜２３９，２５９〜２７７，２８９〜２９９，３１４〜３２７，３４２〜３５５，３７０〜３８３，４００〜４１５，４２８〜４３９，４５５〜４６９，４８５〜４９９，５１３〜５２５，５３６〜５４５：プローブ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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