(57)【要約】【課題】汚染を回避しつつ任意の場所に幹細胞含有液を提供し速やかに当該幹細胞含有液を被投与動物に対し投与可能な注射用容器、上記注射用容器を備える幹細胞注射セット、および上記注射用容器に収容可能である注射用幹細胞含有液を提供する。【解決手段】幹細胞含有液１２を収容可能な容器本体１６を有し注射針に連結可能な注射用容器１０は、密封容器３２に収容されており、容器本体１６に動物から採取された幹細胞を含有する幹細胞含有液１２が収容されており、幹細胞含有液１２が注射用容器１０から漏出することを防止する封止部（針結合部１７）を備え、幹細胞注射セット１００は、注射用容器１０と、注射用容器１０に収容された幹細胞含有液１２と同一の組成である生細胞数確認用サンプル１２０が収容されている容器３０と、を備える。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
幹細胞含有液を収容可能な容器本体を有し注射針に連結可能な注射用容器であって、
密封容器に収容されており、
前記容器本体に幹細胞を含有する幹細胞含有液が収容されており、
前記幹細胞含有液が前記注射用容器から漏出することを防止する封止部を備えることを特徴とする注射用容器。
【請求項２】
前記注射針に直接または間接に連結可能であるとともに前記容器本体から前記注射針に対し前記幹細胞含有液を流通可能とする針結合部を有し、
前記封止部により、前記注射針と連結する前の状態である前記針結合部が封止されている請求項１に記載の注射用容器。
【請求項３】
前記幹細胞が、ウマ科の動物の幹細胞である請求項１または２に記載の注射用容器。
【請求項４】
前記ウマ科の動物が、競走馬または競技馬である請求項３に記載の注射用容器。
【請求項５】
前記注射用容器の付帯要素として、前記競走馬または前記競技馬の馬名を確認可能な馬名情報を備える請求項４に記載の注射用容器。
【請求項６】
前記幹細胞含有液に含まれる前記幹細胞の生細胞数が８００万個以上であり、前記幹細胞の総細胞数に対する前記生細胞数の割合が６０％以上である請求項１から５のいずれか一項に記載の注射用容器。
【請求項７】
前記幹細胞含有液が、サイトカインを含有する請求項１から６のいずれか一項に記載の注射用容器。
【請求項８】
前記サイトカインとしてＣＸＣＬ１２またはその誘導体を含むとともに、前記ＣＸＣＬ１２の受容体であるＣＸＣＲ４またはその誘導体を含む請求項７に記載の注射用容器。
【請求項９】
請求項１から８のいずれか一項に記載の注射用容器と、前記注射用容器に収容された幹細胞含有液と同一の組成である生細胞数確認用サンプルが収容されている容器と、を備える幹細胞注射セット。
【請求項１０】
競走馬または競技馬から採取された幹細胞を含有する注射用幹細胞含有液。
【請求項１１】
前記幹細胞が、前記競走馬または前記競技馬の臍帯、臍帯血または胎盤由来の臍帯幹細胞である請求項１０に記載の注射用幹細胞含有液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、幹細胞含有液が収容された注射容器、幹細胞注射セットおよび注射用幹細胞含有液に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、種々の幹細胞を動物に投与する技術が提案されている。
たとえば特許文献１には、ヒト間葉系幹細胞を有効性成分として含んでなるアトピー性皮膚炎治療剤の発明が開示されている。
【０００３】
また特許文献２には、ウマ科動物の羊水から分離した幹細胞を培地で培養し、培養された細胞を回収する工程を含み、所定の特性を示しかつ培養前の幹細胞より均質度が改善されたウマ科動物の羊水由来多分化能幹細胞の製造方法の発明が開示されている。同文献の明細書の実施例には、上記羊水由来多分化能幹細胞の、軟骨細胞、骨細胞、および脂肪細胞への分化能を確認する試験を実施したことが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００９−２４２２６５号公報
【特許文献２】特表２０１３−５４１３２９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ところで、従来の幹細胞の投与は、幹細胞含有液を調製する施設（以下、幹細胞調製施設ともいう）と、当該幹細胞含有液を動物に投与する施設（以下、投与施設ともいう）が同一施設であるか、または並設されていることが一般的であった。即ち、衛生環境の整った研究室または病院などで幹細胞含有液を調製し、これと同一または並設される施設である投与施設に幹細胞が投与される動物（以下、被投与動物ともいう）を連れてきて、投与を行うことが一般的であった。これにより、幹細胞含有液の汚染を良好に回避し、幹細胞の取扱いを充分に把握した手技者（以下、単に手技者ともいう）により速やかに幹細胞含有液を被投与動物に投与することが可能である。
【０００６】
しかし、本発明者の検討によれば、被投与動物を上記投与施設に連れてきて幹細胞を投与することは、被投与動物の健康状態等を鑑みた場合に、必ずしも最適であるとは言えないことが明らかになった。
【０００７】
たとえば競走馬は、競走馬特有の怪我や障害が生じることが知られており、競走馬の健康を維持し、怪我を未然に防ぎ、また怪我を早期に治療することについて強い要望がある。そこで、競走馬に幹細胞を投与することにより、上記要望の少なくとも一部を満たすことが期待される。
ここで競走馬は、病気などで動物病院に連れてこられるペット動物や、病院または研究室で使用されるマウスなどと異なり、大型の動物であるため、移動させることが容易ではない。幹細胞投与のために、所定期間内に１回または複数回、馬房と、上記投与施設と、を往復させることによって、競走馬に精神的な疲労を与える虞もある。そのため、競走馬の健康維持や怪我の防止、治療などを日常の居所である馬房または馬房に近い病院などの施設（以下、馬房等ともいう）で行いたいという事情があった。特に、競走馬を、連闘、または中１週もしくは中２週程度の比較的短い間隔でレースに出走させる場合には、馬房等と幹細胞調製施設またはこれに並設された投与施設等との往復を避け、馬房等にて適切な処置を受けさせたいという要望があった。しかしながら、これまで幹細胞を馬房等で競走馬に投与することについての具体的な検討は行われていなかった。上述する競走馬に関する特有の課題は、競技馬に関しても同様のことがいえる。
【０００８】
また以上に述べる事情は、競走馬または競技馬に限ったものではない。本発明者は、現在の幹細胞投与技術において、任意の場所で上記手技者以外の者により幹細胞含有液を被投与動物に対し容易に投与することを可能とするという課題が存在することを見出した。
【０００９】
本発明は上記課題に鑑みてなされたものである。即ち、本発明は、汚染を回避しつつ任意の場所に幹細胞含有液を提供し速やかに当該幹細胞含有液を投与可能な注射用容器、上記注射用容器を備える幹細胞注射セット、および上記注射用容器に収容可能である注射用幹細胞含有液を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の注射用容器は、幹細胞含有液を収容可能な容器本体を有し注射針に連結可能な注射用容器であって、密封容器に収容されており、前記容器本体に動物から採取された幹細胞を含有する幹細胞含有液が収容されており、前記幹細胞含有液が前記注射用容器から漏出することを防止する封止部を備えることを特徴とする。
ことを特徴とする。
【００１１】
本発明の幹細胞注射セットは、本発明の注射用容器と、上記注射用容器に収容された幹細胞含有液と同一の組成である生細胞数確認用サンプルが収容されている容器と、を備える。
【００１２】
また本発明の注射用幹細胞含有液は、競走馬または競技馬から採取された幹細胞を含有する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の注射用容器によれば、幹細胞含有液を無菌状態で任意の場所に提供することを可能とするとともに、提供された場所において注射という汎用の手段で速やかに被投与動物に対し幹細胞含有液を投与することを可能とする。
【００１４】
本発明の幹細胞注射セットは、本発明の注射用容器とともに、当該注射用容器に収容された幹細胞含有液と同一の組成の生細胞数確認用サンプルが収容されている容器を備える。そのため、任意のタイミングで生細胞数確認用サンプルの生細胞数を測定することによって、幹細胞含有液における幹細胞の生細胞数を把握することができる。
【００１５】
本発明の注射用幹細胞含有液は、本発明の注射用容器に収容可能である。競走馬から採取された幹細胞を含有する本発明の幹細胞含有液は、血統が重んじられる競走馬に対し、非競走馬の幹細胞が競走馬に混入することを回避し、競走馬の血統の維持に疑念が生じることを回避することができる。
また同様に、競技馬から採取された幹細胞を含有する本発明の幹細胞含有液は、血統を維持する競技馬に対し、血統を有しない競技馬の幹細胞が血統を維持する競技馬に混入することを回避し、競技馬の血統の維持に疑念が生じることを回避することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明の第一実施形態にかかる注射容器を含む幹細胞注射セットの一例を示す説明図である。
【図２】競走馬の第４世代までの血統を示す説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の実施形態について説明する。説明には適宜、図面を用いる。以下に述べる本発明の実施形態は、競走馬を例に説明するが、当該説明は競走馬に限定されるものではなく、適宜、競技馬に関する本発明の説明として参照され、また適宜、競走馬を競技馬と読み替えることができる。本発明に関し幹細胞とは、動物から採取された幹細胞自体、または動物から採取された幹細胞を継代培養して得た継代幹細胞のいずれかまたは混合を含む。また上記幹細胞は、動物から採取され、または継代培養された後、速やかに幹細胞含有液として調製されてもよいし、凍結保存され解凍された後に幹細胞含有液に調製されてもよい。
【００１８】
本発明に関し、競走馬とは、競走馬用の馬を意味し、少なくとも父馬および母馬の血統が明らかである馬を意味する。
本発明に関し、競技馬とは、競技を行うために大会に出場することが可能な馬を指す。競技馬には、血統を有し、血統情報を付して登録されている競技馬、および血統情報を有さずに登録された競技馬を含む。たとえば、オリンピックや国体、国際試合へ参加できる競技馬の年齢は１０歳以上と規定されており、種々の症状を改善し、また健康状態を良好に維持するために、競技馬に本発明を適用することは非常に有効である。
ここで競技とは、乗馬競技、馬術競技、牛追い、ロデオ、ポロ、ホルター等を含み、複数の競技馬が参加して、種々の観点で優劣を競うことを趣旨とする。
【００１９】
＜第一実施形態＞
以下に本発明の注射用容器について図１を用いて説明する。図１は、本発明の第一実施形態にかかる注射用容器１０を含む幹細胞注射セット１００の一例を示す説明図である。
【００２０】
注射用容器１０は、幹細胞含有液１２を収容可能な容器本体１６を有し注射針（図示せず）に連結可能である。注射用容器１０は、密封容器３２に収容されている。容器本体１６には、幹細胞を含有する幹細胞含有液１２が収容されており、幹細胞含有液１２が注射用容器１０から漏出することを防止する封止部（キャップ１９）を備える。本実施形態における幹細胞含有液１２に含有される幹細胞は、動物から採取されたもの、および動物から採取された幹細胞を継代培養して得た継代培養幹細胞を含む。
【００２１】
上述のとおり注射用容器１０の容器本体１６には、幹細胞含有液１２が予め収容されているとともに、注射用容器１０に封止部（キャップ１９）が設けられている。そのため、本実施形態の注射用容器１０によれば、速やかに注射可能な状態で、幹細胞含有液１２を運搬または輸送することができる。また注射用容器１０は、密封容器３２に収容されているため、衛生状態を良好に維持しつつ幹細胞含有液１２を運搬または輸送することができる。そのため、幹細胞調製施設から任意の場所（例えば馬房等）まで、幹細胞含有液１２を汚染することなく提供することが可能であり、提供された場所で、注射という容易な方法で、速やかに被投与動物に対し幹細胞含有液１２を投与することが可能である。
したがって、従来のように、被投与動物を投与施設に移動させて幹細胞を投与することで当該被投与動物に移動の負荷を与えることを抑制することができ、被投与動物に対し幹細胞投与による効果を充分に供与することが可能である。
また本実施形態の注射用容器１０によれば、幹細胞含有液１２を投与する場所を任意に選択することが可能であるとともに上記手技者以外の者が投与操作を行うことを可能とするため、幹細胞投与技術の汎用性を高めることができる。
【００２２】
以下に注射用容器１０の詳細について説明する。
注射用容器１０は、幹細胞含有液１２を収容可能な容器本体１６を有し注射針（図示せず）に連結可能な容器である。図示省略する注射針に連結することで、容器本体１６に収容された幹細胞含有液１２を被投与動物に注入することが可能である。注射用容器１０は、注射筒に限定されず、たとえば点滴バック、または点滴ボトルなどの注射針に対し連結可能な容器を広く包含する。
本発明は、このように幹細胞含有液１２を注射用容器１０に収容したことで幹細胞をたとえば切開等して被投与動物の体内に設置するなどの高度な医療行為を必要とせず、容易かつ速やかに投与することを可能とする。また予め注射用容器１０に幹細胞含有液１２が収容されていることによって、投与の現場において、衛生的かつ迅速に、幹細胞含有液１２の投与を実施することができる。
【００２３】
本実施形態における注射用容器１０は、図１に示すように注射筒である。注射用容器１０は、幹細胞含有液１２を収容可能な容器本体１６と、ピストン１８とを備える注射筒である。注射筒である注射用容器１０は、容器本体１６に対し相対的にピストンヘッド１８０の位置を固定するための、ストッパ１５が設けられている。これによって、容器本体１６に収容された幹細胞含有液１２に対し、ピストン１８の圧力がかからないようになっている。ストッパ１５は注射用容器１０から取り外し可能であり、幹細胞含有液１２を投与する前にストッパ１５を容易に取り外すことができる。ストッパ１５の取り外し手段は特に限定されない。
【００２４】
注射用容器１０は、図示省略する注射針に直接または間接に連結可能であるとともに容器本体１６から注射針に対し幹細胞含有液１２を流通可能とする針結合部１７を有している。
針結合部１７を注射針に連結させるとは、容器本体１６に収容された幹細胞含有液１２が針結合部１７を流通し、当該注射針より動物に注入可能な状態にすることをいう。本実施形態における針結合部１７は、容器本体１６の一方の端部に設けられ外方向に突出する筒状部である。筒状部である針結合部１７の外径は、注射筒である容器本体１６の外径よりも小さい。針結合部１７の内部には幹細胞含有液１２が流通可能な流路が設けられており図示省略する注射針の内部に設けられた注射液が流通する流路と直接または間接に連結され得る。針結合部１７と注射針とは直接または間接に連結される。
【００２５】
注射用容器１０は、封止部（キャップ１９）により、注射針と連結する前の状態である針結合部１７が封止されている。
針結合部１７が封止されているとは、針結合部１７を通じて容器本体１６に収容された幹細胞含有液１２が漏出しない程度に、針結合部１７を直接または間接に密封することをいう。これにより注射用容器１０は、幹細胞含有液１２を収容するとともに注射針を連結する前の状態で運搬または輸送することができ、取扱性が容易である。そのため任意の場所に幹細胞含有液１２を収容した注射用容器１０を運搬または輸送するとともに、当該任意の場所等において速やかに幹細胞含有液１２を被投与動物に対し投与することができる。
【００２６】
本実施形態において、封止部は、針結合部１７を覆うキャップ１９である。キャップ１９は、針結合部１７に対し嵌合した状態を維持することによって幹細胞含有液１２が針結合部１７から漏出することを防止するとともに、針結合部１７を通じて幹細胞含有液１２が汚染されること防止する。図示省略する封止部の変形例は、キャップ１９の替わりに、たとえば針結合部１７を覆うシール部材などであってもよい。また予め注射針が連結された注射用容器１０において、封止部は、当該注射針を覆うとともに当該注射針から幹細胞含有液１２の漏出を防止する注射針キャップであってもよい。
【００２７】
本実施形態の注射用容器１０は、密封容器３２に収容されている。ここで密封とは、目視で隙間が確認されない程度に封をされた状態を意味し、望ましくは、密封容器３２の内部が雑菌に汚染されない程度に厳重に封をされることが好ましい。即ち、密封容器３２は内容物の滅菌状態が維持可能な容器であることが好ましい。密封容器３２の形状は特に限定されず、注射用容器１０を収容可能な袋状、または所定形状などの任意の容器であってよい。
図１では、密封容器３２に１つの注射用容器１０が収容された態様を図示している。この変形例として、密封容器３２に２つ以上注射用容器１０が収容され、また注射用容器１０以外の物が収容されていてもよい。
【００２８】
次に幹細胞含有液１２の詳細について説明する。本実施形態において幹細胞含有液１２は注射用容器１０の容器本体１６に収容されている。幹細胞含有液１２は、動物から採取された幹細胞を含有する液状の剤である。幹細胞含有液１２は、注射器から被投与動物に注入可能な程度に粘度が低く調製されていることが好ましい。
【００２９】
本実施形態において、幹細胞は、自己複製能および多分化能（種々の細胞に分化する能力）を有する細胞である。本実施形態に用いられる幹細胞は、特に限定されないが、たとえば、脂肪由来の幹細胞（脂肪幹細胞）、臍帯、臍帯血、または胎盤血由来の幹細胞（臍帯幹細胞）、骨髄由来の幹細胞（骨髄幹細胞）などを挙げることができる。また幹細胞の調製方法も特に限定されず、動物における任意の組織から幹細胞のみを採取する方法、または幹細胞以外の任意の他の生体成分とともに幹細胞を採取する方法を含む。ここで生体成分とは、細胞、ホルモンまたは血液成分などの上記動物の生体物質または生体物質から構成される物質を意味し、幹細胞以外の任意の他の生体成分とは、幹細胞を除く生体成分を意味する。生体物質とは、生体を構成する生体高分子（多糖、核酸、またはタンパク質など）や、当該生体高分子を構成する各種の糖、脂質、ビタミン、ホルモンなどを意味する。幹細胞含有液１２には、動物由来の成分として実質的に幹細胞のみを含有していてもよいし、幹細胞と任意の他の生体成分を含んでいてもよい。尚、以下の説明において「臍帯、臍帯血、または胎盤」を「臍帯等」と称呼する場合がある。
【００３０】
幹細胞の継代培養方法は特に限定されず、幹細胞の培養方法として知られる公知の方法から適宜選択して実施することができる。継代培養における培地は、細胞培養に適した培地から適宜選択して用いることができる。たとえば細胞用の培地として一般的に知られる血清培地または無血清培地を用いることもできる。上記培地は、市販品または公知の培地組成に倣って調製されたものであってもよいし、あるいは幹細胞を継代培養するために新たに好適化された培地組成を適宜、調製して作成されたものであってもよい。無血清培地を用いた継代培養により得られた継代幹細胞は、幹細胞のドナーである動物と、被投与動物とが、異なる個体である場合（即ち、個体間投与を行う場合）に好ましい。継代培養は、動物から採取された幹細胞を播種して行ってもよいし、凍結保存し解凍した後の幹細胞を播種してもよい。
【００３１】
幹細胞含有液１２に含有される幹細胞は、凍結保存され、解凍された細胞であってもよい。
幹細胞の凍結保存は、細胞を凍結保存するための一般的な方法を適宜選択して実施することができる。凍結保存に用いる幹細胞は、幹細胞単体の状態であってもよいが、採取された幹細胞を含む採取物、当該採取物を遠心分離等して得られた幹細胞含有分画物、採取された幹細胞を継代培養して得られた継代培養物、当該継代培養物を遠心分離等して得られた幹細胞含有培養分画物など、任意の混合物であってもよい。上述する任意の状態の幹細胞は、たとえば、不凍液を含む凍結保存液に混合した状態で凍結保存される。凍結保存液としては、たとえば、１０〜２０％のジメチルスルホキシド (dimethylsulfoxide；DMSO)および、５〜１０％のグリセロールを含有することができるが、これに限定されない。
【００３２】
凍結保存における凍結温度および凍結方法は特に限定されず、幹細胞を所望の期間、良好に保存できる方法であればよい。良好に保存とは、保存中または保存後の生存率を高い状態（たとえば７０％以上９５％以下）に保つことをいう。保存期間が比較的短期間である場合には、設定温度が−２０℃前後であるフリーザ、または設定温度が−８０℃前後のディープフリーザを用いることができる。幹細胞の保存期間が数年以上となることが予想される場合には、設定温度が−８０℃前後のディープフリーザを用いることが好ましく、液体窒素保存（たとえば−１９６℃）がより好ましい。凍結保存される幹細胞の形態にもよるが、液体窒素保存（たとえば−１９６℃）を行う場合には、幹細胞を、まず−８０℃のディープフリーザにて２４時間程度保存して凍結し、次いで液体窒素タンクに移すことが好ましい。
【００３３】
凍結保存された幹細胞を、適宜解凍した後、幹細胞含有液１２を調製することができる。このときの解凍方法は、特に限定されず、凍結された幹細胞になるべくダメージを与えない条件で解凍することを配慮した上で、適宜実施することができる。たとえば、ディープフリーザで約−８０℃で凍結保存された幹細胞の場合、当該ディープフリーザから当該幹細胞を取出し、水温が約４０℃程度に調製されたウォーターバスに容器ごと浸漬させた状態を数分間保持し解凍することができる。
【００３４】
次に、幹細胞を採取するための動物について説明する。当該動物は幹細胞を提供するドナーであり、以下において、当該動物を、適宜、ドナー動物とも称呼する。ドナー動物は、一般的に哺乳類である。従来は、自己の幹細胞を投与するという手法が一般的であったが、近年は、一の動物から採取された幹細胞を他の動物に投与する、所謂、固体間投与が可能となっている。そのため、幹細胞を投与される動物（即ち、被投与動物）と、ドナー動物とは同一の個体でなくてもよい。またドナー動物と被投与動物とは、生物の分類上、同一の種であってもよいし、異なる種であってもよい。たとえば競走馬は、上述するとおり、競走馬特有の事情を有するとともに幹細胞の投与が期待される動物であるため、本実施例に関する以下の説明では、被投与動物が、競走馬である例を主として説明する。以下において、被投与動物である競走馬を、適宜、被投与競走馬と称呼する場合がある。
【００３５】
たとえば本実施形態の注射用容器１０において、動物（ドナー動物）は、ウマ科の動物である。即ち、幹細胞含有液１２に含有される幹細胞は、ウマ科の動物の幹細胞である。
被投与競走馬に投与することを前提に調製される幹細胞含有液１２は、ウマ科の動物から採取された幹細胞を含有することにより被投与競走馬に対する生体適合性または親和性が良好であることが期待される。
上述するウマ科の動物としては、たとえばウマ、ロバ、シマウマ、およびノロバなどを挙げることができる。
【００３６】
ここで、上記ウマ科の動物（ドナー動物）が、競走馬であってもよい。以下に、ドナー動物である競走馬を、適宜、ドナー競走馬と称呼する。即ち、幹細胞を含有する幹細胞含有液１２は、ドナー競走馬から採取され、被投与競走馬に投与されてもよい。
尚、本実施形態において、ドナー競走馬とは、幹細胞を採取される、競走馬を意味し、現役の競走馬だけではなく、デビュー前の競走馬用の馬、および競馬を引退した馬を含む。競走馬の血統の維持という観点からは、血統の明らかである競馬用の馬であることが重要であって、現役の競走馬であるか否かは問題とならないためである。
【００３７】
ドナー競走馬から採取された幹細胞を被投与競走馬に投与することによって、競走馬ではない動物の幹細胞が被投与競走馬に混入することを回避し、被投与競走馬の血統の維持に疑念が生じることを回避する。
ドナー競走馬と被投与競走馬とは異なる競走馬であってもよいし、同一の競走馬であってもよい。
【００３８】
本実施形態の注射用容器１０において、ドナー動物がドナー競走馬である場合の好適な態様の一例として以下の態様を挙げることができる。即ち、幹細胞含有液１２に含有される幹細胞は、競走馬（ドナー競走馬）の臍帯等から採取された臍帯幹細胞、または前記臍帯幹細胞から継代培養されて増殖した継代幹細胞であることが好ましい。
幹細胞として骨髄幹細胞または脂肪幹細胞等を採取する場合には、適宜の医療行為が必要となり、ドナー競走馬に対し、体力的なダメージを与える虞がある。これに対し、臍帯等は、競走馬の出産において特段の外科的行為を必要とせずに入手することができるため、そのような虞がない。競走馬は脂肪率が数％程度と非常に低いことが一般的であるため、ドナー競走馬の臀部などを切開して脂肪を採取し、当該脂肪から幹細胞を採取した場合には、得られる幹細胞の量は充分ではない場合がある。本発明者の研究によれば、一度の出産時において得られる臍帯血および臍帯から得られる幹細胞の量は、ドナー競走馬の臀部の一度の切開により採取される脂肪に含まれる幹細胞の量より有意に多い。
尚、臍帯は母馬と子馬とを繋ぐものであるところ、本実施形態において、臍帯等から採取された幹細胞は、母馬側の幹細胞であると定義する。したがって本発明において、臍帯等から採取された幹細胞のドナー競走馬は、当該母馬である。
【００３９】
幹細胞を採取される動物が上述するとおりドナー競走馬である場合に、注射用容器１０は、付帯要素として、競走馬（ドナー競走馬）の馬名を確認可能な馬名情報２４を備えていることが好ましい。
上記付帯要素を備える注射用容器１０は、幹細胞含有液１２に含まれる幹細胞の由来を、競走馬（ドナー競走馬）の個体で認識することができ、幹細胞含有液１２の信頼性を向上させることができる。これによって、ドナー競走馬と被投与競走馬との血統の関係を確認することが容易となる。より具体的には、ドナー競走馬と、被投与競走馬と、が同一血統であるか否かを容易に判断することができる。
【００４０】
上記付帯要素は、注射用容器１０に付帯して運搬または輸送可能なものであればよく、その形態は特に限定されない。たとえば本実施形態において馬名情報２４は、注射用容器１０の容器本体１６外側面に貼り付けられたラベル１４に記されている。したがって本実施形態において付帯要素は、馬名情報２４が記され、注射用容器１０に貼り付けられたラベル１４である。ラベル１４に記された馬名情報２４は、馬名であってもよいし、馬名を確認するための整理番号、バーコードなどであってもよい。異なる上記付帯要素としては、注射用容器１０に添えられるマニュアル２０などの添付品であって馬名情報２４が記録されているものであってもよい。図１に、注射用容器１０とマニュアル２０とを同封する幹細胞注射セット１００を示す。付帯要素は、たとえば注射用容器１０を収容する密封容器３２の内部に注射用容器１０とともに収容されるか、あるいは密封容器３２の外側に配置される。
【００４１】
尚、本実施形態において馬名とは、競走馬として競馬に出走するにあたり登録された当該競走馬の正式名称を意味する。競走馬は馬名登録義務があり、たとえば日本では、所定の団体（平成２７年４月現在、公益財団法人ジャパン・スタッドブック・インターナショナル）による馬名審査を通過した名前が正式な馬名として登録される。
【００４２】
従来の競走馬の研究において、競走馬は、血統により引き継がれる性質を有する傾向にあることが知られており、一世代前（即ち、父母）の性質は３割強程度、引き継がれるとされている。競走馬において血統は重要な要素である。したがって被投与競走馬に対し、同一血統または兄弟であるドナー競走馬から採取された幹細胞を提供することは、被投与競走馬の血統の維持という観点で望ましい影響を与え得る。従来、同一血統または兄弟であるドナー競走馬から採取された幹細胞を被投与競走馬に対し提供することで血統を維持するという技術的思想は何ら報告されておらず、本発明者が初めてその有効性の示唆とともに実現可能な提供方法を示す。
【００４３】
被投与競走馬Ｘの血統を表す図２を示す。図２は、被投与競走馬Ｘの１代先祖から４代先祖までの血統を示す図であり、４代血統表である。本実施形態において同一血統とは、ドナー競走馬が被投与競走馬Ｘの先祖であるか、ドナー競走馬と被投与競走馬Ｘとが同一の競走馬である場合をいう。ドナー競走馬が、被投与競走馬Ｘの第９世代以下の範囲で同一血統であることが好ましく、第５世代以下の範囲で同一血統であることがより好ましい。たとえば、ドナー競走馬が図２における馬名ＡＢである場合には、当該ドナー競走馬は、被投与競走馬Ｘの父の父の父であり、３代先祖であって被投与競走馬Ｘと同一血統である。
本実施形態において競走馬に関し兄弟とは、両親が同じである全兄弟、父または母のいずれか一方が同じである半兄弟を含む。また兄弟は、姉妹、姉弟、兄妹、および双子を含む。
【００４４】
次に注射用容器１０に収容された幹細胞含有液１２における幹細胞の生細胞数について説明する。上述のとおり、幹細胞は、自己複製能および多分化能を有する細胞である。幹細胞含有液１２が投与されることで被投与動物の体内において幹細胞の自己複製能および多分化能が発現することを期待する場合には、幹細胞含有液１２に含有される幹細胞の少なくとも一部は、生きた細胞であることが好ましい。
【００４５】
一例としては、幹細胞含有液１２に含まれる幹細胞の生細胞数は、たとえば８００万個以上であり、上記幹細胞の総細胞数に対する上記生細胞数の割合が６０％以上であることが好ましい。
生細胞数とは、幹細胞含有液１２に含まれる幹細胞のうち、生きた幹細胞の数を意味する。幹細胞の生細胞の確認方法は特に限定されず、たとえば生細胞をトリパンブルーなどの染色液で特異的に染色する方法などを挙げることができる。トリパンブルーで幹細胞を染色すると、死んだ細胞が青く染色されるため、色の違いを確認することで生細胞を確認（測定）することができる。また生細胞の確認には、一般的には血球計算盤やマイクロプレートリーダーなどの公知の細胞数測定具を用いることができるが、これに限定されない。
【００４６】
投与される幹細胞含有液１２において生きた幹細胞の数（生細胞数）が８００万個以上であることにより、幹細胞投与の有意な効果が期待される。幹細胞投与の有意な効果を発揮せしめるという観点からは、当該生細胞数は、１０００万個以上であることが好ましく、２０００万個以上であることが好ましく、５０００万個以上であることがさらに好ましく８０００万個以上であることが好ましい。尚、多数の生細胞を投与したい場合には、１つの注射用容器１０に当該多数の生細胞を全部収容しなくてもよく、所定期間の間隔を空けて投与を複数回に分けて実施し、所定期間内に生細胞が希望数だけ投与することもできる。このように所定期間に連続的に投与する場合には、特に注射用容器１０を用いることが好ましい。被投与動物を繰り返し、投与のために移動させるのではなく、被投与動物が居る場所に注射用容器１０を運搬または輸送することができるからである。
【００４７】
また幹細胞含有液１２における幹細胞の総細胞数に対する生細胞数の割合が６０％以上であることが好ましい。死滅した幹細胞が被投与動物に投与された場合に、当該被投与動物の体内において死滅した幹細胞が変質し、当該被投与競走馬に対し望ましくない影響を与える虞があることが本発明者の研究でわかった。そのため、幹細胞含有液１２に含まれる死んだ幹細胞の数は少ない方がよく、この観点から上記生細胞数の割合は６０％以上であることが好ましく、７０％以上であることがより好ましい。
【００４８】
幹細胞含有液１２における幹細胞の総細胞数に対する生細胞数の割合は、幹細胞含有液１２またはこれと同一の組成のサンプルの幹細胞の総数と生細胞数とを測定して求めることができる。もちろん当該サンプルにおける死細胞数を測定し、上記総数から死細胞数を減じて生細胞数を確認してもよい。たとえば、幹細胞含有液１２において生細胞数が１０００万個であり、当該生細胞数を含む幹細胞の総数に対する生細胞数の割合が７０％である場合には、幹細胞の総数は、約１４３０万個である。このような生細胞数の数および比率であれば、幹細胞投与における有意な効果が充分に期待されるとともに、幹細胞含有液１２において含まれる死細胞が被投与動物に対して与える望ましくない影響を充分に小さく抑制することが可能である。
【００４９】
本実施形態における幹細胞含有液１２は、生体由来の物質として実質的に幹細胞のみを含んでいてもよいが、幹細胞に加えて任意の他の生体成分を含んでいてもよい。
【００５０】
たとえば、幹細胞含有液１２はサイトカインを含有していてもよい。
サイトカインは、細胞から産生される生理活性タンパク質であり、一般的には分子量８万以下、より多くは３万以下の低分子のものが多く知られる。生理活性とは、生体内において、化学物質が特定の生理的な調節機能に対して作用する性質を意味する。被投与動物に対し幹細胞とともにサイトカインが投与されることで、被投与動物の体内における幹細胞の自己複製能または多分化能の発現に対し、当該サイトカインが好適に関与し得る。
上記サイトカインは、幹細胞含有液１２に含まれる幹細胞から産生されたものであってもよいし、異なる細胞から産生されたものであってもよい。
【００５１】
たとえばサイトカインとしては、ケモカイン、細胞増殖因子、インターロイキン、若しくはインターフェロン、またはこれらの誘導体を例示することができるが、これに限定されない。
上記ケモカインは、ＣＣケモカイン、ＣＸＣケモカイン、ＣケモカインまたはＣＸ３Ｃケモカインに大別される８ｋＤａから約１４ｋＤａ程度の低分子量のタンパク質である。ケモカインは、ケモカイン受容体を介して作用する。
【００５２】
幹細胞含有液１２に含まれるサイトカインの好ましい例として、ＣＸＣＬ１２またはその誘導体を挙げることができる。
ＣＸＣＬ１２またはその誘導体は、被投与動物の体内において幹細胞の自己複製能または多分化能の発現を良好に促進し得る。
【００５３】
ＣＸＣＬ１２またはその誘導体を含む幹細胞含有液１２には、ＣＸＣＬ１２の受容体であるＣＸＣＲ４またはその誘導体が含まれることが好ましい。幹細胞と共に投与されたＣＸＣＬ１２を有効に作用させるためである。また、被投与動物に投与された幹細胞は、直接に、または肺、脾臓、肝臓などの臓器を経て順次、炎症などを起こしている患部に到達するホーミング効果があることが知られている。ここでＣＸＣＬ１２とその受容体であるＣＸＣＲ４を幹細胞とともに投与することによって、当該ホーミング効果を向上させ得る。
【００５４】
＜第二実施形態＞
次に本発明の第二実施形態として、本発明の注射用幹細胞含有液について説明する。本実施形態の注射用幹細胞含有液は、注射用容器１０の容器本体１６に収容され得る幹細胞含有液１２を包含する。注射用幹細胞含有液の詳細は、上述する幹細胞含有液１２の説明を適宜参照することができる。
本発明の注射用幹細胞含有液によれば、被投与動物に対し、口径投与や切開して体内に埋設する手段ではなく、注射という簡易な手段で幹細胞を投与することができる。ここで注射とは、動脈内注射、静脈内注射、皮下注射、筋肉注射などを含む。注射用幹細胞含有液とは、注射に適した粘度であって幹細胞を含有する注射用の剤である。
【００５５】
たとえば動物に対し、注射で幹細胞含有液１２を投与した場合、幹細胞含有液１２に含まれる幹細胞は、肺、脾臓、肝臓などの臓器を通過してその何割かが消費され、残余が炎症などを発生した患部に到達し得る。
上記臓器の中で脾臓は、一般的にはリンパ器官として知られるが、運動時などに循環血流に放出するための大量の血液を貯蔵する機能も有している。特に競走馬は、競馬の試合中に大量に消費される血液を脾臓に貯蔵しているため、体重に対する脾臓重量が他の動物（たとえば牛）などよりも大きい傾向にある。競走馬の脾臓に貯蔵された血液は、試合中に大量に放出され消費されるため、試合後の競走馬の脾臓は顕著に疲労しており、また次の試合に向けて、速やかに大量の血液を貯蔵することが求められる。また、試合後の競走馬は、腱や筋肉の炎症を起こし易い。即ち、競走馬は、脾臓の疲労と腱などの炎症が同じタイミングで発生するという他の動物には見られない体調変化が生じる。これに対し、注射用幹細胞含有液を競走馬に注射することによって、これに含まれる幹細胞を脾臓および腱などの炎症部分のいずれにも好適に作用させ得る。即ち、本発明の注射用幹細胞含有液は、任意の動物に対し、簡易な手段で幹細胞を投与可能とするとともに、特に競走馬特有の体調変化に対し、好適に作用し良好な回復を実現し得る。
【００５６】
注射用幹細胞含有液は、たとえば、幹細胞を含有する細胞液に対し、リンゲル液や生理食塩水などの輸液製剤を混合して適度な粘度に調整することによって作成することができる。
【００５７】
本実施形態の注射用幹細胞含有液は、競走馬（ドナー競走馬）から採取された幹細胞を含有する態様を含む。
かかる態様によれば、競走馬向けに用いられる注射用幹細胞含有液として特に好ましい。ドナー競走馬から採取された幹細胞を被投与競走馬に投与することによって、競走馬ではない動物の幹細胞が被投与競走馬に混入することを回避し、被投与競走馬の血統の維持に疑念が生じることを回避するからである。ドナー競走馬および競走馬の血統については上述する第一実施形態での説明が適宜参照されるため、ここでは説明を割愛する。
【００５８】
競走馬（ドナー競走馬）から採取された幹細胞を含有する注射用幹細胞含有液において、幹細胞が、競走馬（ドナー競走馬）の臍帯、臍帯血または胎盤由来の臍帯幹細胞であることが好ましい。ここで、「臍帯、臍帯血または胎盤由来」とは、臍帯、臍帯血または胎盤から採取されたことを意味する。本発明に関し、臍帯幹細胞は、臍帯、臍帯血または胎盤から採取された臍帯幹細胞を用いて継代培養されて増殖した継代幹細胞を含む。
上記臍帯幹細胞が好ましい理由は、第一実施形態において述べる、幹細胞含有液１２に含有される幹細胞が、競走馬（ドナー競走馬）の臍帯等から採取された臍帯幹細胞、または上記臍帯幹細胞から継代培養されて増殖した継代幹細胞であることが好ましいと理由と同様であるため、ここでは説明を割愛する。
【００５９】
＜第三実施形態＞
【００６０】
次に本発明の第三実施形態として、幹細胞注射セットの発明の一例について図１を用いて説明する。
第三実施形態の幹細胞注射セット１００は、上述する本発明の注射用容器１０と、注射用容器１０に収容された幹細胞含有液１２と同一の組成である生細胞数確認用サンプル１２０が収容されている第一容器４０と、を備える。
幹細胞注射セット１００によれば、速やかに注射可能な状態で幹細胞含有液１２を運搬または輸送することができるとともに、任意の場所で幹細胞含有液１２を投与する際に、第一容器４０に収容された確認用サンプル１２０の生細胞数を測定することで幹細胞含有液１２の生細胞数を把握することができる。
【００６１】
幹細胞含有液１２と確認用サンプル１２０とが同一の組成とは、これらの液に含まれる幹細胞の濃度、輸液等が実質的に同一であることを意味する。たとえば、幹細胞含有液１２として用いた液の一部を第一容器４０に収容することによって確認用サンプル１２０を得ることができる。本実施形態において、確認用サンプル１２０と、幹細胞含有液１２とは、実質的に同一の液である。幹細胞含有液１２と同一の液を注射用容器１０とは異なる第一容器４０に収容することによって、幹細胞含有液１２を汚染することなく、確認用サンプル１２０の生細胞数を測定し、これによって幹細胞含有液１２の生細胞数を正しく把握することができ、幹細胞含有液１２の投与の確実性と信頼性を向上させることができる。
【００６２】
以下に幹細胞注射セット１００の詳細について説明する。本実施形態では、競走馬から採取された幹細胞を含む幹細胞含有液１２を備える例を用いて説明する。ただし、これは本発明の幹細胞注射セット１００における幹細胞含有液１２を何ら限定するものではない。尚、注射用容器１０は、第一実施形態において説明した内容と同様であるため、ここでの説明は割愛する。
本実施形態において、第一容器４０は、注射用容器１０に対し比較的小型である。第一容器４０の形状および構造は確認用サンプル１２０を収容可能な範囲において特に限定されないが、たとえば、第一容器４０は、容器本体４２と、容器本体４２に対し開閉が繰り返し可能な蓋部４４とを備える。第一容器４０には確認用サンプル１２０が収容されている。幹細胞含有液１２と確認用サンプル１２０とは、幹細胞含有液を調製する工程において得られた同一の幹細胞含有液であり、幹細胞の濃度が略等しく、一般的には、確認用サンプル１２０の量の方が少ない。本実施形態において第一容器４０は、密封容器３４に収容されている。密封容器３４は、密封容器３２と同様の密封容器である。これによって幹細胞注射セット１００が運搬または輸送されている間に、確認用サンプル１２０が雑菌から汚染されることが防止されている。本実施形態では、注射用容器１０と第一容器４０とは異なる密封容器（密封容器３２、密封容器３４）に収容されているが、これらは１つの密封容器にまとめて収容されてもよい。
【００６３】
幹細胞注射セット１００は、さらに任意で他の物品を有していてもよい。本実施形態の幹細胞注射セット１００は、注射用容器１０および第一容器４０に加え、鎮痛剤５２が収容された第二容器５０およびマニュアル２０を備える。
【００６４】
第二容器５０は、幹細胞含有液１２を注射投与する前に被投与動物に対し投与するための鎮痛剤５２を収容している。鎮痛剤５２は、幹細胞含有液１２を注射投与する前に、被投与動物に投与されるための剤である。鎮痛剤５２の事前投与により、幹細胞含有液１２を注射投与したときに、被投与動物の痛みを緩和させることができ、幹細胞含有液１２の投与作業をスムーズにする。
【００６５】
本実施形態の第二容器５０は、収容された液が鎮痛剤５２であること、およびラベル１４が容器本体１６の外表面に付されていないこと以外は、注射用容器１０と同様の構成であってよい。たとえば、予め被投与動物に打たれた留置針（図示省略）に対し、まず第二容器５０の針結合部１７を結合して鎮痛剤５２を被投与動物に投与する。次いで、第二容器５０を留置針から取り外し、注射用容器１０の針結合部１７を留置針に結合して、幹細胞含有液１２を投与することができる。ただし、幹細胞含有液１２の投与方法はこれに限定されるものではない。第二容器５０は、注射用容器１０と同様に、密封容器３６に収容されている。
【００６６】
マニュアル２０は、幹細胞含有液１２の投与に関連する情報を備える。本実施形態のマニュアル２０は、馬名情報２４、投与時間情報２２、馬名２６、投与方法２８等を備える。
【００６７】
馬名情報２４は、ラベル１４に付された馬名情報２４と同様の情報である。馬名情報２４を確認することによって、幹細胞含有液１２が特定の競走馬から採取されたことを容易に知ることができる。
【００６８】
投与時間情報２２は、幹細胞注射セット１００に収容された幹細胞含有液１２が被投与動物（被投与競走馬Ｘ）に投与されるまでの推奨される時間の情報である。幹細胞注射セット１００を提供する者は、出荷時の幹細胞含有液１２における幹細胞の生細胞数および輸送時等における当該幹細胞の生存率を把握し、望ましい生細胞数を確実に投与するために投与までの推奨時間を投与時間情報２２として伝達するとよい。具体的には、たとえば投与時間情報２２として「○月×日△時までに幹細胞含有液１２を投与してください」等の記載をマニュアル２０に設けることができる。
本発明者の検討によれば、幹細胞含有液１２の準備から投与までの間を、できるだけ幹細胞の生存に適した環境に維持することを前提として、以下のことがわかった。即ち、幹細胞注射セット１００の作成において、幹細胞含有液１２における幹細胞の生細胞数が確認された時から投与までの時間は７２時間未満であることが好ましく、４８時間以内であることがより好ましく、３０時間以内であることがさらに好ましい。上述する投与までの時間が７２時間以上を経過すると、幹細胞の生存率が顕著に低下するという弊害とともに、死滅した幹細胞が変質し、被投与動物に対し望ましくない影響を与える虞があることがわかった。そのため、投与時間情報２２はこれらの時間範囲を考慮して設定されることが好ましい。ここで幹細胞の生存に適した環境とは、幹細胞を０℃を超えて１０℃以下の温度環境である。
【００６９】
馬名２６は、幹細胞含有液１２が採取されたドナー競走馬の馬名を示す。例えば被投与競走馬Ｘに対し幹細胞含有液１２を投与することを予定する場合、図２に示す被投与競走馬Ｘの血統表において、馬名２６「ＡＢＣＤ」が、２代先祖であることを容易に確認することができる。ただしマニュアル２０において馬名２６が省略された場合であっても、馬名情報２４から確認される馬名によって同様に、被投与競走馬Ｘとドナー競走馬とが同一血統であるかどうかを容易に確認可能である。もちろん馬名２６を馬名情報２４として取り扱ってもよい。
投与方法２８は、幹細胞含有液１２を投与する方法、および、これに関連する作業についての情報を含む。本実施形態の幹細胞注射セット１００は、第一容器４０および鎮痛剤５２を収容する第二容器５０を備えるため、たとえば投与方法２８として「１．第一容器４０に収容され確認用サンプル１２０を用いて幹細胞の生細胞数を測定し、所定の数の生細胞数が含まれることを確認する。２．次に第二容器５０である注射用容器を留置針に連結し、被投与競走馬Ｘに対し鎮痛剤を投与する。３．注射用容器１０を留置針に連結し、鎮痛剤投与後に、幹細胞含有液１２を投与する。」といった情報を含んでよい。
【００７０】
幹細胞注射セット１００は、さらに任意の他の物品を備えていてもよい。たとえば、幹細胞注射セット１００は、図示省略する注射針、または幹細胞含有液１２を注射により投与した後に容器本体１６の内側面に付着した残余の幹細胞を洗浄し、次いで当該残余の幹細胞とともに上記競走馬に投与される洗浄液などをさらに備えてもよい。本実施形態の幹細胞注射セット１００は、幹細胞注射セット１００を構成する注射用容器１０、マニュアル２０、第一容器４０、第二容器５０を１つの容器３０に収容している。容器３０は、収容物の温度を所定範囲に管理可能な容器であることが好ましく、たとえば、断熱性を備える保冷容器などであることが好ましい。
【００７１】
尚、幹細胞注射セット１００が輸送により任意の場所に提供される場合には、幹細胞含有液１２に含まれる幹細胞の生存に適した環境となるよう配慮されることが好ましい。具体的には、上記輸送は、０℃を超えて１０℃以下の温度環境を維持した状態で実施されることが好ましい。これにより、輸送中の幹細胞の死滅や活性低下を抑制し、良質な幹細胞含有液１２を提供することが可能である。たとえば民営会社の有料サービスである低温温度管理可能な宅配便などを利用してもよい。尚、本明細書において輸送とは、道路、鉄道、船舶および航空などの公衆の利用できる公開された施設を利用する移動を意味する。利用可能な輸送の手段としては、郵便や宅配便などが挙げられるがこれに限定されず、幹細胞が凍結保存された施設から、上記公開された施設を用いて、幹細胞含有液を移動させる種々の手段を広く包含する。
【００７２】
幹細胞注射セット１００の輸送時におけるトラブルによって、予定していた輸送時間を超過し、また輸送時の温度管理が不徹底になる等して、幹細胞含有液１２が予定した以上に死滅してしまう場合も起こり得る。これに対し、幹細胞注射セット１００は、確認用サンプル１２０を備えるため、幹細胞含有液１２の投与前に、確認用サンプル１２０を用いて幹細胞の生細胞数を測定し、幹細胞含有液１２が生きた幹細胞を充分に含むか否かを把握することができる。そのため幹細胞含有液１２の信頼性が高い。
【００７３】
上述する各実施態様は、競走馬を例に説明したが、いずれも競技馬の実施態様として参照することができる。
競走馬および競技馬は、競馬の試合または各種の大会に出場するにあたり厳密なドーピング検査を受ける必要があり、治療等において規制物質を除く限定的な薬剤等の使用が余儀なくされている。これに対し、規制物質として定義されていない幹細胞を用いる本発明は、幹細胞の投与のタイミングを気にせずに競走馬または競技馬に対し実施可能（注射可能）である。そのため本発明は、適宜のタイミング（または所望のタイミング）で幹細胞を投与することによって、競走馬または競技馬の症状を改善し、または体調を良好に維持することが可能であり非常に有効である。また幹細胞が、将来的に規制物質として定義された場合であっても、本発明は、幹細胞の投与のタイミングを計ることで充分に競走馬または競技馬に対し実施することができ、その結果、競走馬または競技馬の症状改善等を図ることが可能である。
【実施例】
【００７４】
以下に、本発明の注射用幹細胞含有液、注射用容器、および幹細胞注射セットの実施例について説明する。
具体的には、ドナー競走馬からの幹細胞の採取から、採取された幹細胞を被投与競走馬に投与するまでの実施例を示す。
尚、本実施形態では、被投与競走馬への投与は、所定の時から投与までの推奨時間を４８時間、一回の投与における生きた幹細胞の希望投与数である希望生細胞数を約１×１０７個とした。また４℃の環境に幹細胞を保存した時の当該幹細胞の生存率を予め確認したところ、保存前の生細胞数に対する保存後の生細胞数の割合である生存率は、約７０％であった。
【００７５】
（幹細胞の採取）
馬の臀部を切開し脂肪細胞を約５ｇ採取した。次いで、上記サンプル前駆体をコラゲナーゼ溶液を用いて３７℃１時間処理し、次いで、処理後の当該サンプル前駆体を１０分間、４００×ｇにて遠心分離し、１００μｍのメッシュを備えたセルストレイナーで未消化の脂肪組織片を除去した後、脂肪由来間葉系幹細胞を含む間質血管画分（Ｓｔｒｏｍａｌ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ）を得た。
【００７６】
（幹細胞の培養）
市販の動物細胞用の無血清培地に抗生物質（ゲンタシン）を添加して調製した培地が収容されたフラスコを準備した。上記フラスコに上述で得た分画物を播種し、３７℃／５％ＣＯ２条件下で液体静置培養を行った。２日置きに培地の上澄みを全量収集してフレッシュな培地に交換し、位相差顕微鏡にてフラスコの底面の面積１００％に対し、約８０％以上９０％以下の範囲に細胞が付着したことが確認された段階で培養を終了し、プロテアーゼを含む剥離剤をフラスコに添加してフラスコの内側壁面（特に内側底面）に付着した細胞を回収した。回収された細胞の生細胞数を血球測定盤を用いて測定し、適当な細胞数となるまで上述と同様の方法で継代培養を繰り返した。ジメチルスルホキシを含有する無血清細胞凍結保存液に上記細胞を混合し、凍結用サンプルを得た。
【００７７】
（幹細胞の凍結保存）
上述のとおり得た凍結用サンプル１ｍｌ（生きた幹細胞を約２×１０７個を含む）を凍結保存容器に収容し、−８０℃に調整されたディープフリーザにて凍結保存した。
【００７８】
（凍結保存された幹細胞の解凍）
凍結保存工程終了後、凍結保存容器をディープフリーザから取出し、３７℃に調整されたウォーターバスにて凍結用サンプルを解凍し、幹細胞を含む解凍済サンプルを得た。
【００７９】
（生細胞数の測定および生細胞絶対数の算出）
上述のとおり解凍されて得た幹細胞（解凍済みサンプル）を、リンゲル液で洗浄した。洗浄後の幹細胞の一部にトリパンブルーを添加して、死滅した幹細胞を染色した上、生細胞数を測定したところ、解凍済サンプル１ｍｌには、約１．５×１０７個以上の生きた幹細胞が含まれていることが確認された。上述のとおり生細胞数の測定を行った時点を所定の時とした。
本実施例では、上記所定の時から被投与競走馬に投与されるまでの推奨される推奨時間が４８時間、希望生細胞数が１×１０７個、および事前に確認した４８時間における幹細胞の生存率が７０％である。これらの条件から、輸送の工程を経て、被投与競走馬に対し希望生細胞数を投与可能とするために注射用容器１０に含まれるべき生細胞絶対数Ｚを、以下の計算式（１）により求めた。その結果、生細胞絶対数Ｚは、約１４２９万個であった。
[数１]
生細胞絶対数Ｚ（万個）＝１０００（万個）÷７０（％）×１００  （１）
【００８０】
（注射用幹細胞含有液の調製）
上述にて生細胞数の測定された解凍済みサンプルを用い、生きた幹細胞約１．５×１０７個を含む解凍済サンプル１ｍｌに対し、リンゲル液を１．５ｍｌ添加して混合した。これにより、生細胞絶対数Ｚ（約１４２９万個）を満たす生きた幹細胞を含む注射用幹細胞含有液（幹細胞含有液）を得た。
【００８１】
（注射用容器および幹細胞注射セットの作成）
上述のとおり調製された注射用幹細胞含有液（幹細胞含有液）を、図１で示した注射用容器１０と同様の構成でありドナー競走馬の馬名情報を含むラベルが貼られた注射用容器に収容するとともに針結合部をキャップで封止した。また容器本体に対するピストンの相対的な位置を固定するためにストッパを当該ピストンに対し装着して注射用容器を作成した。幹細胞含有液が収容された上記注射用容器を密封容器に収容した。また、上記注射用容器に収容された幹細胞含有液と同一の液である生細胞数確認用サンプルを上記注射用容器とは異なる第一容器に収容し、当該第一容器を密封容器に収容した。
ドナー競走馬の馬名情報、および上記所定の時から被投与競走馬に投与されるまでの推奨される時間の情報（投与時間情報）が記載されたマニュアルを作成した。そして上述のとおり作成された注射用容器、第一容器、およびマニュアルを１つの保冷バックに梱包し、幹細胞注射セットを得た。
【００８２】
上述のとおり得た幹細胞注射セットをヤマト運輸のクール便（温度管理条件：０℃〜１０℃）で出荷した。出荷後、約２４時間後に、投与が実施される場所に幹細胞注射セットが到着し、幹細胞含有液の提供を完了した。投与まで幹細胞注射セット１００に含まれる注射用容器および第一容器を冷蔵保存した。マニュアルに記載された投与時間情報の範囲内において、確認用サンプル１２０を用いて生細胞数を測定し、希望生細胞数１×１０７個以上の生きた幹細胞が存在することを確認した。確認後、速やかに注射用容器を用いて、幹細胞含有液を被投与競走馬に投与した。投与は、被投与競走馬の首にまず留置針を留置し、当該留置針に注射用容器を連結して注射し、幹細胞含有液を被投与競走馬に注入する方法で実施した。
【００８３】
上記実施形態は、以下の技術思想を包含するものである。
（１）幹細胞含有液を収容可能な容器本体を有し注射針に連結可能な注射用容器であって、
密封容器に収容されており、
前記容器本体に幹細胞を含有する幹細胞含有液が収容されており、
前記幹細胞含有液が前記注射用容器から漏出することを防止する封止部を備えることを特徴とする注射用容器。
（２）前記注射針に直接または間接に連結可能であるとともに前記容器本体から前記注射針に対し前記幹細胞含有液を流通可能とする針結合部を有し、
前記封止部により、前記注射針と連結する前の状態である前記針結合部が封止されている上記（１）に記載の注射用容器。
（３）前記幹細胞が、ウマ科の動物の幹細胞である上記（１）または（２）に記載の注射用容器。
（４）前記ウマ科の動物が、競走馬または競技馬である上記（３）に記載の注射用容器。
（５）前記注射用容器の付帯要素として、前記競走馬または前記競技馬の馬名を確認可能な馬名情報を備える上記（４）に記載の注射用容器。
（６）前記幹細胞含有液に含まれる前記幹細胞の生細胞数が８００万個以上であり、前記幹細胞の総細胞数に対する前記生細胞数の割合が６０％以上である上記（１）から（５）のいずれか一項に記載の注射用容器。
（７）前記幹細胞含有液が、サイトカインを含有する上記（１）から（６）のいずれか一項に記載の注射用容器。
（８）前記サイトカインとしてＣＸＣＬ１２またはその誘導体を含むとともに、前記ＣＸＣＬ１２の受容体であるＣＸＣＲ４またはその誘導体を含む上記（７）に記載の注射用容器。
（９）上記（１）から（８）のいずれか一項に記載の注射用容器と、前記注射用容器に収容された幹細胞含有液と同一の組成である生細胞数確認用サンプルが収容されている容器と、を備える幹細胞注射セット。
（１０）競走馬または競技馬から採取された幹細胞を含有する注射用幹細胞含有液。
（１１）前記幹細胞が、前記競走馬または前記競技馬の臍帯、臍帯血または胎盤由来の臍帯幹細胞である上記（１０）に記載の注射用幹細胞含有液。
【符号の説明】
【００８４】
１０・・・注射用容器
１２・・・幹細胞含有液
１４・・・ラベル
１５・・・ストッパ
１６・・・容器本体
１７・・・針結合部
１８・・・ピストン
１９・・・キャップ
２０・・・マニュアル
２２・・・投与時間情報
２４・・・馬名情報
２６・・・馬名
２８・・・投与方法
３０・・・容器
３２・・・密封容器
３４・・・密封容器
３６・・・密封容器
４０・・・第一容器
４２・・・容器本体
４４・・・蓋部
５０・・・第二容器
５２・・・鎮痛剤
１００・・・幹細胞注射セット
１２０・・・確認用サンプル
１８０・・・ピストンヘッド
Ｘ・・・被投与競走馬
【図１】
2018110604.tif 000003
【図２】
2018110604.tif 000004