(57)【要約】【課題】非特異的な吸着による発色を低減でき、高濃度に発色する判定ラインが得られる検査装置の提供。【解決手段】検体を含む検査液を流すための多孔質の流路部材と、前記流路部材上の少なくとも一箇所に樹脂層と、前記樹脂層が水不溶性樹脂を含み、前記樹脂層の前記流路部材と対向する面に、前記検体と反応する抗体を含む固相化試薬と、水溶性樹脂及び前記固相化試薬を含む水溶性の試薬堆積部と、を有し、前記流路部材と前記樹脂層との間に、前記試薬堆積部が配置されている検査装置である。【選択図】図１
2018048850.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体を含む検査液を流すための多孔質の流路部材と、
前記流路部材上の少なくとも一箇所に設けられた樹脂層と、
前記樹脂層が水不溶性樹脂を含み、前記樹脂層の前記流路部材と対向する面に、前記検体と反応する抗体を含む固相化試薬と、水溶性樹脂及び前記固相化試薬を含む水溶性の試薬堆積部と、を有し、
前記流路部材と前記樹脂層との間に、前記試薬堆積部が配置されていることを特徴とする検査装置。
【請求項２】
検体を含む検査液を流すための多孔質の流路部材と、
前記流路部材上に第一の樹脂層と、第二の樹脂層と、を有し、
前記第二の樹脂層が、前記流路部材に対向する面に、標識抗体を有し、
前記第一の樹脂層が水不溶性樹脂を含み、前記第一の樹脂層の前記流路部材と対向する面に、捕捉抗体と、水溶性樹脂及び前記捕捉抗体を含む水溶性の試薬堆積部と、を有し、
前記流路部材と前記第一の樹脂層との間に、前記試薬堆積部が配置されている請求項１に記載の検査装置。
【請求項３】
前記試薬堆積部が、前記検査液によって溶出される請求項１から２のいずれかに記載の検査装置。
【請求項４】
前記樹脂層が、前記検査液によって溶出されない請求項１及び３のいずれかに記載の検査装置。
【請求項５】
前記第一の樹脂層が、前記検査液によって溶出されない請求項２から３のいずれかに記載の検査装置。
【請求項６】
請求項１から５のいずれかに記載の検査装置と、
検体を採取するための検体採取手段、及び前記検体を処理するための液体から選択される少なくとも１つと、
を有することを特徴とする検査キット。
【請求項７】
支持体と、
前記支持体上に設けられた剥離層と、
前記剥離層上に設けられた試薬固相化層と、を有し、
前記試薬固相化層の表面が、検体と反応する試薬及び試薬堆積部を有することを特徴とする検査装置製造用転写媒体。
【請求項８】
請求項１から５のいずれかに記載の検査装置を製造する方法であって、
請求項７に記載の検査装置製造用転写媒体の試薬固相化層と多孔質の流路部材とを接触させて、前記試薬固相化層を前記流路部材に転写する工程を含むことを特徴とする検査装置の製造方法。
【請求項９】
支持体と、
前記支持体上に設けられた剥離層兼試薬固相化層と、を有し、
前記剥離層兼試薬固相化層の表面が、検体と反応する試薬及び試薬堆積部を有することを特徴とする検査装置製造用転写媒体。
【請求項１０】
請求項１から５のいずれかに記載の検査装置を製造する方法であって、
請求項９に記載の検査装置製造用転写媒体の剥離層兼試薬固相化層と多孔質の流路部材とを接触させて、前記剥離層兼試薬固相化層を前記流路部材に転写する工程を含むことを特徴とする検査装置の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、検査装置及びその製造方法、並びに検査キット、及び検査装置製造用転写媒体に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫測定法は、抗原と抗体の反応を利用して抗原又は抗体を検出及び定量する方法として、例えば、血液、ＤＮＡ、食品、飲料等の検体の検査などに広く利用されている。
【０００３】
前記免疫測定法の代表例として、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｓｏｌｖｅｎｔ  Ａｓｓａｙ）法は、マイクロプレートと呼ばれる複数のウェルを有するプラスチック製の容器内に抗体や抗原を仕込み、専用の測定装置により反応物の吸光度などを読み取ることで定量的に分析する方法である。このような方法では、抗体はウェル内のマイクロプレート表面に高密度に固相化され、バッチ方式で数時間かけて抗原抗体反応を行うことで高感度に分析することができ、一般の研究室や医療機関の臨床検査室などで利用されている。
【０００４】
最近では、ＰＯＣＴ（Ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  Ｃａｒｅ  Ｔｅｓｔｉｎｇ；臨床現場即時診断）を目的とした測定方法が急速に普及している。代表例としてイムノクロマト法と呼ばれる、サンドイッチＥＬＩＳＡ法の原理とクロマトグラフィーの原理を組み合わせた測定方法を利用した検査装置が用いられている。
このような検査装置は、例えば、検査液の受液部としてのサンプルパッドと、前記サンプルパッドから供給された前記検査液を反応させるコンジュゲートパッドと、前記コンジュゲートパッドから供給された前記検査液を流すメンブレン膜と、を有するものが提案されている（例えば、特許文献１参照）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、非特異的な吸着による発色を低減でき、高濃度に発色する判定ラインが得られる検査装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
前記課題を解決するための手段としての本発明の検査装置は、検体を含む検査液を流すための多孔質の流路部材と、
前記流路部材上の少なくとも一箇所に設けられた樹脂層と、
前記樹脂層が水不溶性樹脂を含み、前記樹脂層の前記流路部材と対向する面に、前記検体と反応する抗体を含む固相化試薬と、水溶性樹脂及び前記固相化試薬を含む水溶性の試薬堆積部と、を有し、
前記流路部材と前記樹脂層との間に、前記試薬堆積部が配置されている。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によると、非特異的な吸着による発色を低減でき、高濃度に発色する判定ラインが得られる検査装置を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、本発明の検査装置の一例を示す上面図である。
【図２】図２は、図１の検査装置のＡ−Ａでの断面図である。
【図３】図３は、流路部材及び樹脂層の対向部における検査装置の一例を示す概略断面図である。
【図４Ａ】図４Ａは、流路部材及び樹脂層の対向部における検査装置の他の一例を示す概略断面図である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、流路部材及び樹脂層の対向部における検査装置の他の一例を示す概略断面図である。
【図４Ｃ】図４Ｃは、流路部材及び樹脂層の対向部における検査装置の他の一例を示す概略断面図である。
【図４Ｄ】図４Ｄは、流路部材及び樹脂層の対向部における検査装置の他の一例を示す概略断面図である。
【図５Ａ】図５Ａは、流路部材及び樹脂層の対向部における検査装置の他の一例を示す概略断面図である。
【図５Ｂ】図５Ｂは、流路部材及び樹脂層の対向部における検査装置の他の一例を示す概略断面図である。
【図５Ｃ】図５Ｃは、流路部材及び樹脂層の対向部における検査装置の他の一例を示す概略断面図である。
【図５Ｄ】図５Ｄは、流路部材及び樹脂層の対向部における検査装置の他の一例を示す概略断面図である。
【図６】図６は、従来の検査装置におけるコンジュゲートパッドの概念図である。
【図７】図７は、従来の検査装置におけるメンブレンの概念図である。
【図８Ａ】図８Ａは、本発明の検査装置製造用転写媒体の一例を示す概略断面図である。
【図８Ｂ】図８Ｂは、本発明の検査装置製造用転写媒体の他の一例を示す概略断面図である。
【図９】図９は、本発明の検査キットの一例を示す概略図である。
【図１０Ａ】図１０Ａは、実施例で用いた検査装置の一例を示す上面図である。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、図１０ＡのＤ−Ｄでの断面図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
（検査装置）
本発明の検査装置は、第１の形態では、検体を含む検査液を流すための多孔質の流路部材と、
前記流路部材上の少なくとも一箇所に設けられた樹脂層と、
前記樹脂層が水不溶性樹脂を含み、前記樹脂層の前記流路部材と対向する面に、前記検体と反応する抗体を含む固相化試薬と、水溶性樹脂及び前記固相化試薬を含む水溶性の試薬堆積部と、を有し、
前記流路部材と前記樹脂層との間に、前記試薬堆積部が配置されている。
前記樹脂層は、前記流路部材上に少なくとも一箇所設けられており、複数箇所設けられていることが好ましい。
【００１０】
本発明の検査装置は、第２の形態では、検体を含む検査液を流すための多孔質の流路部材と、
前記流路部材上に第一の樹脂層と、第二の樹脂層と、を有し、
前記第二の樹脂層が、前記流路部材に対向する面に、標識抗体を有し、
前記第一の樹脂層が水不溶性樹脂を含み、前記第一の樹脂層の前記流路部材と対向する面に、捕捉抗体と、水溶性樹脂及び前記捕捉抗体を含む水溶性の試薬堆積部と、を有し、
前記流路部材と前記第一の樹脂層との間に、前記試薬堆積部が配置されていることが好ましい。
前記第一の樹脂層は、検査装置内を検体が問題なく移動していることを確認する点から、複数有していることが好ましい。
【００１１】
本発明の検査装置は、従来のイムノクロマト法では、抗原に対して大過剰の標識抗体を流す必要があり、検査液を流した直後は特に反応しない標識抗体が高濃度で捕捉抗体部に到達し、前記標識抗体が疎水性相互作用により前記捕捉抗体部で非特異的に吸着を起こしてしまうという知見に基づくものである。
【００１２】
本発明の検査装置においては、水溶性の試薬堆積部を前記流路部材と前記樹脂層の間に設けることで、検査液を展開初期における非特異吸着を水溶性樹脂ごと溶出させることにより、捕捉抗体部（ライン）に残存させないことが可能となる。また、水溶性樹脂の内部に分散させた捕捉抗体を、水溶性樹脂の溶解と共にメンブレン側に徐々に放出させることにより、捕捉抗体の濃度を調整し、抗原抗体反応を制御することができる。抗原抗体反応物は、流路部材を構成する繊維に即座に吸着することから、検査液とともに流出せず、捕捉抗体部（ライン）直下のメンブレンに残存し、より感度の高い検出が可能となる。
また、水溶性樹脂を含む水溶性の試薬堆積部を前記流路部材と前記樹脂層の間に設けることにより、捕捉抗体部（ライン）の捕捉抗体を機械的ストレス（衝撃など）から守るクッション効果を奏し、作製時や保存時の安定性に優れる。
【００１３】
更に、前記樹脂層において、水不溶性樹脂と水溶性樹脂とを組み合わせることによって、両親媒性樹脂を用いる場合に比べて、前記水不溶性樹脂の機能、及び前記水溶性樹脂の機能をはっきりと分離でき、効果的な機能を発揮させることができる。即ち、前記水溶性樹脂を有することにより、前記樹脂層の非特異吸着の低減、検査液と前記樹脂層とのなじみやすさ、及び発色性が向上する。前記水不溶性樹脂を有することにより、前記樹脂層の表面での発色が効果的に向上する、という効果を奏することができる。
【００１４】
ここで、図面を参照して、本発明の検査装置について説明する。図１は、本発明の検査装置１０の一例を示す上面図である。図２は、図１の検査装置のＡ−Ａでの断面図である。図３は、流路部材及び樹脂層の対向部における検査装置の一例を示す概略断面図である。図４Ａ、図４Ｂ、図４Ｃ、図４Ｄ、図５Ａ、図５Ｂ、図５Ｃ、及び図５Ｄは、いずれも流路部材及び樹脂層の対向部における検査装置の他の一例を示す概略断面図である。
【００１５】
図１から図５Ｄに示すように、検査装置１０は、血液、髄液、尿、又は検体抽出液（例えば、スティック等の検体採取手段により採取した検体を含む液）等の親水性の検査液３０（検体の一例）を流すための流路が形成された多孔質の流路部材１２と、流路部材１２上に設けられた樹脂層（１５ａ，１５ｂ，１５ｃ）とを有している。
樹脂層（１５ａ，１５ｂ，１５ｃ）における流路部材１２に対向する面には、検査液３０に含まれる抗原と反応する試薬である標識抗体１６、捕捉抗体１７、又は捕捉抗体１８が固相化されている。これにより、樹脂層（１５ａ，１５ｂ，１５ｃ）毎に、樹脂層（１５ａ，１５ｂ，１５ｃ）と前記試薬との相互作用の強さを調整できるので、流路部材１２を目的に応じて任意に選択した場合でも、前記試薬の放出や固相化を制御しやすくなる。
【００１６】
検査装置１０において、流路部材１２は基材１１上に設けられており、基材１１及び流路部材１２上に、吸収部材１４が設けられている場合について説明するが、本発明はこのような形態に限定されるものではない。
ここで、流路部材１２上に設けるとは、検査装置１０を配置したときの向きとは関係なく、流路部材１２に接して設けることを意味する。また、樹脂層（１５ａ，１５ｂ，１５ｃ）のうち、任意の樹脂層を示す場合には、樹脂層１５と表す。なお、前記捕捉抗体は、共有結合、水素結合、金属結合等の任意の化学結合、付着、凝着、吸着、ファンデルワールス結合等の任意の相互作用により固相化されていればよい。
【００１７】
以下、検査液３０が、血液、髄液、尿、又は検体抽出液（例えば、スティック等の検体採取手段により採取した検体を含む液）等のように親水性の検査液３０である場合について説明する。
図３に示したように、検査装置１０において、樹脂層１５ａ（第二の樹脂層）は親水基１５２を多く有する両親媒性樹脂１５１を含有しており、好ましくは主成分（含有量が５０質量％以上）として構成されている。
ここで、前記親水基とは、水分子と水素結合などによる弱い結合を作る原子団であり、水との間に親和性があることを意味する。前記両親媒性とは、水及び有機溶媒の両方に親和性があることを意味する。
【００１８】
標識抗体１６は、親水性の部位１６ｇを有しており、これにより、樹脂層１５ａにおける流路部材１２に対向する面に固相化される。一方、流路部材１２及び樹脂層１５ａの対向部に形成される隙間に検査液３０が充填されたときには、標識抗体１６の親水性の部位１６ｇと親水性の検査液３０とが親和して、両親媒性樹脂１５１から、標識抗体１６が放出される。また、検査液に抗原３１が含まれている場合には、抗原抗体反応により、放出された標識抗体１６と抗原３１とが抗原抗体反応して結合する。
【００１９】
図４Ａから図４Ｄに示したように、検査装置１０において、樹脂層１５ｂ（第一の樹脂層）は疎水基１５３を有する樹脂層であることが好ましい。具体的には、樹脂層１５ｂは、疎水性樹脂１５５又は疎水基１５３を多く有する両親媒性樹脂１５４を含有しており、疎水性樹脂１５５又は両親媒性樹脂１５４を主成分（含有量が５０質量％以上）として構成されていることが好ましい。
ここで、前記疎水基とは、水となじみにくい原子団のことであり、水に対する親和性が低く、水に溶解しにくい、あるいは水と混ざりにくいことを意味する。
疎水性樹脂１５５及び両親媒性樹脂１５４としては、いずれも前記水不溶性樹脂であることが好ましい。疎水性樹脂１５５及び両親媒性樹脂１５４が水不溶性樹脂であると、ラインの滲みを防ぐことができる点で有利である。
ここで、前記水不溶性樹脂における「水不溶性」とは、実質的に水に不溶であることを指す。前記実質的に水に不溶であるとは、２５℃で２４時間、大量の水中に浸漬した後、真空乾燥等の方法によって十分に乾燥した際の、樹脂の質量変化量が１質量％以下であることを意味する。これは、樹脂中に含まれる副生成物（モノマー成分など）が水中に溶け出して質量が減少するためである。
【００２０】
捕捉抗体１７は、疎水性の部位１７ｇを有しており、前記疎水性の部位１７ｇが分子間力により結合することにより、捕捉抗体１７は樹脂層１５ｂにおける流路部材１２に対向する面に固相化される。
【００２１】
更に、流路部材１２と樹脂層１５ｂの間に、捕捉抗体１７と水溶性樹脂を含む水溶性の試薬堆積部２０を配置することで、検査液３０が充填された時に、すぐ下の流路部材１２の方に水溶性樹脂が溶出され、捕捉抗体１７が流路部材１２に固定される。流路部材１２に固定された捕捉抗体１７が標識抗体１６に結合した状態の抗原３１を捕捉する。その上で、流路部材１２及び樹脂層１５ｂの対向部に形成される隙間に検査液３０が充填されたときに、捕捉抗体１７は、標識抗体１６に結合した状態の抗原３１を捕捉する。これにより、抗原３１及び標識抗体１６が固定化されて発色するので、樹脂層１５ｂを、抗原３１の有無を判定するためのテストラインとして用いることができる。また、樹脂層１５ｂのすぐ下の流路部材１２でも発色が起こり、抗原３１の有無を判定するためのラインがより強く認識できる。
【００２２】
図５Ａから図５Ｄに示したように、検査装置１０において、樹脂層１５ｃ（第一の樹脂層）は疎水性樹脂１５５又は疎水基１５３を多く有する両親媒性樹脂１５４を含有しており、前記疎水性樹脂１５５又は両親媒性樹脂１５４を主成分（含有量が５０質量％以上）として構成されていることが好ましい。
疎水性樹脂１５５及び両親媒性樹脂１５４としては、いずれも前記水不溶性樹脂であることが好ましい。疎水性樹脂１５５及び両親媒性樹脂１５４が水不溶性樹脂であると、ラインの滲みを防ぐことができる点で有利である。
樹脂層１５ｃにおける流路部材１２に対向する面には、捕捉抗体１８の疎水性の部位が分子間力により結合することにより、捕捉抗体１８が固相化されている。捕捉抗体１８としては、標識抗体１６を捕捉するものであれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、標識抗体１６と特異的に結合する抗体などが挙げられる。
【００２３】
更に、流路部材１２と樹脂層１５ｃの間に、捕捉抗体１８と水溶性樹脂を含む水溶性の試薬堆積部２０を配置することで、検査液３０が充填された時に、すぐ下の流路部材１２の方に水溶性樹脂が溶出され、捕捉抗体１８が流路部材１２に固定される。流路部材１２に固定された捕捉抗体１８が標識抗体１６を捕捉する。その上で、流路部材１２及び樹脂層１５ｃの対向部に形成される隙間に検査液３０が充填されたときに、捕捉抗体１８は、標識抗体１６を捕捉する。これにより、標識抗体１６が固定化されて発色するので、樹脂層１５ｃを、標識抗体１６が到達したことを示すコントロールラインとして用いることができる。また、樹脂層１５ｃのすぐ下の流路部材１２でも発色が起こり、ラインがより強く認識できる。
【００２４】
前記樹脂層は、非孔質体を使用することが好ましい。前記非孔質体とは、実質的に空隙を含まない非孔質の構造体であり、メンブレン等の液体の吸収を促進するために設けられた空隙を含む多孔質材料とは相反する構造体を指す。前記非孔質体としては、例えば、製造工程に偶発的に含まれてしまった気泡であって液体の吸収作用の促進に寄与しないような気泡を僅かに含むものについては前記非孔質体の範疇に含まれる。
【００２５】
従来のテストライン及びコントロールラインの形成は、親水性の多孔質材料からなる流路部材に、捕捉抗体が溶解した液を直接塗布することにより行われていた。したがって、前記捕捉抗体は液体の浸透に伴い前記多孔質材料の内部に拡散する。しかし、前記多孔質材料の内部に存在する前記捕捉抗体と結合する金コロイド粒子等の標識用粒子の発色は、光の散乱が起こるために実際には検知することはできない。つまり、前記捕捉抗体の殆どが有効に利用されていないことになる。
一般的に、多孔質材料で検知できる発色粒子は表面から５μｍ程度の深さまでとされる。前記５μｍの深さの領域に、検査に必要となる捕捉抗体を固定させるには、厚み方向への拡散を考慮して多量の捕捉抗体を塗布しなければならない。即ち、前記捕捉抗体の塗布量は、多孔質材料の厚みに比例して増加することになる。
【００２６】
本発明の検査装置においては、前記捕捉抗体の固定化には疎水基を多く含む非孔質体からなる前記樹脂層を使用するため、前記捕捉抗体は前記樹脂層の内部に入り込むことがなく、前記樹脂層表面のみに固定化される。前記樹脂層表面に固定化された捕捉抗体に標識用粒子が結合することにより発色するが、光の散乱が起きない非孔質体からなる樹脂層を通して検知することができるため、標識用粒子による発色の利用効率を大幅に向上させることができる。また、厚み方向に余分な発色粒子が存在しないので、前記捕捉抗体の塗布量が極めて少なくてよいというメリットが生じる。例えば、親水性多孔質材料からなる流路部材の厚みを１００μｍとした場合、表面から５μｍ部分の厚みの発色しか利用できていないと仮定すると、同じ発色強度を得るのに使用する捕捉抗体の塗布量を、１／２０に減らすことができる。即ち、前記捕捉抗体の固定化に疎水基を多く含む前記非孔質体からなる樹脂層を使用するため、前記標識用粒子による発色の利用効率を大幅に向上させることができ、厚み方向に余分な前記標識用粒子が存在することがないので、前記捕捉抗体の塗布量を従来よりも低減させることができる。
【００２７】
ここでは、検査液３０に含まれる抗原３１の有無を検査するための検査装置１０について説明するが、本発明の検査装置は、抗原抗体反応を用いたものに限定されない。例えば、検査装置は、試薬として、構造変化により色相が変化する試薬を用いることで、検査液３０に含まれる特定の成分を検査するものであってもよい。
【００２８】
以下、検査装置１０を構成する各部材について詳細に説明する。
【００２９】
＜基材＞
基材１１としては、特に制限はなく、目的に応じて選択することができ、例えば、有機、無機、又は金属製のものが挙げられる。
基材１１は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、少なくとも一の面が疎水性樹脂で覆われていることが好ましい。
検査装置１０をセンサチップに使用する場合には、軽量で柔軟性があり、かつ安価である合成樹脂を基材１１として用いることが好ましい。
本発明によると、プラスチックシート等の耐久性が高い基材１１を選択することができるので、結果として検査装置１０の耐久性も向上する。
【００３０】
基材１１の材質としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ポリ塩化ビニル、ポリエチレンテレフタレート、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ酢酸ビニル、ポリカーボネート、ポリアセタール、変性ポリフェニルエーテル、ポリブチレンフタレート、ＡＢＳ樹脂などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。これらの中でも、低価格で汎用性が高い点から、ポリエチレンテレフタレートが好ましい。
【００３１】
基材１１の形状としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、シート状が好ましい。
基材１１の平均厚みは、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．０１ｍｍ以上０．５ｍｍ以下が好ましい。前記平均厚みが、０．０１ｍｍ以上であると、基材１１としての強度が良好であり、０．５ｍｍ以下であると、基材のフレキシブル性が良好であり、センサとして好適に用いることができる。
ここで、前記平均厚みとは、例えば、測定対象物の厚みを長手方向に５箇所、幅方向に３箇所、測定箇所がほぼ均等の間隔となるように合計１５箇所をマイクロメーター（ＭＤＨ−２５Ｍ、株式会社ミツトヨ製）で測定したときの厚みの平均値とすることができる。また、前記厚みとは、基材１１と流路部材１２との接触面に対して垂直方向の対象物の長さとすることができる。
【００３２】
＜流路部材＞
流路部材１２としては、検査液３０を流すことが可能な部材であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、親水性多孔質材料などが挙げられる。
前記親水性多孔質材料によって構成される流路部材１２は、空隙（１２ａ，１２ｂ）を有しており、検査液３０が空隙（１２ａ，１２ｂ）内を流れることによって流路が形成される。
図３から図５Ｄにおいて、空隙１２ａは、各断面に形成された空隙であり、空隙１２ｂは、断面の奥側の空隙である。親水性多孔質材料の内部には、気泡が存在し、気泡同士が繋がって連続気泡となっていることが好ましい。
前記連続気泡とは、気泡同士が繋がっていない独立気泡とは区別されるものである。前記連続気泡においては、気泡同士の壁に小さな孔が開いているため、毛細管現象によって液体を吸い込んだり気体を通過させたりする機能を有する。流路部材１２は、空隙（１２ａ，１２ｂ）において、毛細管現象を利用して検査液３０を移送するので、ポンプ等の外部駆動装置が不要である。
【００３３】
前記親水性多孔質材料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、親水性を示し空隙率が高い基材が好適に用いられる。
前記親水性多孔質材料とは、水溶液が容易に浸透可能な多孔質材料を意味する。前記容易に浸透可能とは、１２０℃で１時間乾燥した板状試験片の表面に純水０．０１ｍＬを滴下する水浸透性の評価試験で、純水０．０１ｍＬが１０分間以内にすべて浸透することをいう。
【００３４】
前記親水性多孔質材料の空隙率は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、４０％以上９０％以下が好ましく、６５％以上８０％以下がより好ましい。前記空隙率が９０％以下であると、基材の強度が良好である。また、前記空隙率が４０％以上であると、検査液の浸透性が良好となる。
ここで、前記空隙率は、例えば、親水性多孔質材料の坪量（ｇ／ｍ２）、厚み（μｍ）、組成分比重から、下記の計算式１により求めることができる。
〔計算式１〕
空隙率（％）＝｛１−〔坪量（ｇ／ｍ２）／厚み（μｍ）／組成分比重〕｝×１００
【００３５】
前記親水性多孔質材料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メンブレン膜等のろ紙、普通紙、上質紙、水彩紙、ケント紙、合成紙、合成樹脂フィルム、コート層を有する専用紙、布地、繊維製品、フィルム、無機基板、ガラスなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。これらの中でも、メンブレン膜等のろ紙、布地が好ましく、高い空隙率及び良好な親水性の点から、メンブレン膜等のろ紙がより好ましい。
前記布地としては、例えば、レーヨン、ベンベルグ、アセテート、ナイロン、ポリエステル、ビニロン等の人造繊維、綿、絹等の天然繊維、又はこれらの混紡繊維、あるいはこれらの不織布などが挙げられる。
【００３６】
前記親水性多孔質材料の形状については、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、シート状が好ましい。
前記親水性多孔質材料の平均厚みは、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．０１ｍｍ以上０．３ｍｍ以下が好ましい。前記平均厚みが０．０１ｍｍ以上であると、基材の強度が良好である。また、前記平均厚みが０．３ｍｍ以下であると、検査液の必要量の適正化が図れる。
【００３７】
＜樹脂層＞
樹脂層１５の機能について、図６及び図７に示される従来の検査装置と対比しながら説明する。
図６は、従来の検査装置におけるコンジュゲートパッドの概念図である。図７は、従来の検査装置におけるメンブレンの概念図である。
従来の検査装置において、コンジュゲートパッドの親水性が高すぎると、コンジュゲートパッドに検査液が残り易くなり、メンブレンへ移行しにくくなっていた。逆にコンジュゲートパッドの疎水性が高すぎると、メンブレンへの検査液の移行は早くなるが、サンプルパッドからの検査液の吸水性が落ちることで、検査時間が長くなったり、多量の検査液を要するようになっていた。このため、コンジュゲートパッドとして使用可能な繊維Ｆ１は限定されていた。更に、従来の検査装置において、標識抗体１６は、コンジュゲートパッドを構成する繊維Ｆ１に固相化されていた（図６参照）。コンジュゲートパッドから放出させることが可能な標識抗体１６としては、繊維Ｆ１との結合力が弱いものに限定されることになる。即ち、従来の検査装置は、設計上、使用可能な繊維Ｆ１や標識抗体１６が限られたものになる。
【００３８】
また同様に、従来の検査装置において、捕捉抗体１７は、メンブレンを構成する繊維Ｆ２に固相化されていた（図７参照）。このため、メンブレンに固定化させることが可能な捕捉抗体１７は、繊維Ｆ２との結合力が強いものに限定されることになる。即ち、従来の検査装置は、設計上、使用可能な繊維Ｆ２や捕捉抗体１７が限られたものになる。
【００３９】
本発明の検査装置１０においては、樹脂層１５（１５ａ，１５ｂ，１５ｃ）に、標識抗体１６、捕捉抗体１７、捕捉抗体１８などの試薬を固相化させている。このため、樹脂層１５と、捕捉抗体との相互作用の強さや、検査液３０との親和性に応じて、捕捉抗体の放出、又は固定化を制御することができる。
特に、樹脂層（１５ｂ,１５ｃ）においては、水溶性の試薬堆積部２０を、樹脂層１５ｂ、１５ｃと流路部材１２との間に一定量設けることで、水溶性樹脂の内部に分散させた抗体を、水溶性樹脂の溶解と共にメンブレン側に徐々に放出させ、捕捉抗体の濃度を制御し、抗原抗体反応させることができる。抗原抗体反応物は、流路部材１２を構成する繊維に即座に吸着することから、検査液３０とともに流出せず、捕捉抗体部（判定ライン）直下のメンブレンに残存し、より感度の高い検出が可能となる。
【００４０】
樹脂層１５と捕捉抗体との相互作用の強さや、検査液３０との親和性を調整する方法としては、例えば、樹脂層１５を構成する樹脂の種類や樹脂の組成比を対応する捕捉抗体に応じて変更する方法などが挙げられる。例えば、樹脂層１５を構成する樹脂において疎水性の割合が多いほど、樹脂層１５は、疎水基を有する捕捉抗体を疎水性相互作用により固定化しやすくなる。
【００４１】
ここで、前記疎水性相互作用とは、水中で水になじめない疎水性分子や疎水基が集合する変化の原因（駆動力）を指す。詳細には、疎水性分子や疎水基を有する分子を水中に入れると、多くの場合、単に溶けないというだけではなく、疎水性分子や疎水基が互いに接した状態をとり、水分子との接触面積をできるだけ減らそうとする。その結果、疎水性分子種は互いに寄り集まるようになり、分子間に結合力が作用しているようにみえる現象のことを言う。
樹脂層１５を構成する樹脂において親水性の割合が多いと、樹脂層１５と、親水性の捕捉抗体との相互作用は強くなるが、結合部が親水性の検査液３０と接触したときに、試薬は検査液３０と親和して検査液３０中に放出されやすくなると推定している。
【００４２】
樹脂層１５を構成する樹脂は、水不溶性樹脂であることが好ましい。樹脂層１５に水不溶性樹脂を用いると、樹脂が検査液３０に溶解して、流路を詰まらせたり、コントロールライン又はテストラインが滲むことを防ぐことができる。
前記水不溶性樹脂としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、後述する樹脂層１５ｂ及び樹脂層１５ｃを構成する樹脂などが挙げられる。
【００４３】
樹脂層１５ａを構成する両親媒性樹脂としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ポリビニルアルコール類、ポリビニルアセタール樹脂、ポリアクリル酸、アクリル酸−アクリルニトリル共重合体、酢酸ビニル−アクリル酸エステル共重合体、アクリル酸−アクリル酸エステル共重合体、スチレン−アクリル酸共重合体、スチレン−メタクリル酸共重合体、スチレン−メタクリル酸−アクリル酸エステル共重合体、スチレン−α−メチルスチレン−アクリル酸共重合体、スチレン−α−メチルスチレン−アクリル酸−アクリル酸エステル共重合体、スチレン−マレイン酸共重合体、スチレン−無水マレイン酸共重合体、ビニルナフタレン−アクリル酸共重合体、ビニルナフタレン−マレイン酸共重合体、酢酸ビニル−マレイン酸エステル共重合体、酢酸ビニル−クロトン酸共重合体、酢酸ビニル−アクリル酸共重合体、又はこれらの塩などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
これらの中でも、疎水性官能基を有するモノマーと親水性官能基を持つモノマーとの共重合体、疎水性官能基と親水性官能基とを併せ持つモノマーからなる重合体が好ましい。  前記共重合体の形態としては、ランダム共重合体、ブロック共重合体、交互共重合体、及びグラフト共重合体のいずれの形態でも用いることができる。
【００４４】
樹脂層１５ｂ及び樹脂層１５ｃを構成する疎水性樹脂としては、例えば、ポリスチレン、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重合体等のポリスチレン系樹脂；ポリプロピレン樹脂、ポリエチレン樹脂、エチレン−プロピレン共重合体等のポリオレフィン系樹脂又は環状ポリオレフィン系樹脂；ポリカーボネート樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂、ポリメチルメタクリレート樹脂等のメタクリル系樹脂；ポリテトラフルオロエチレン等のフッ素系樹脂；ポリアクリロニトリル等のアクリル系樹脂、プロピオネート樹脂等の繊維素系樹脂、塩化ビニル樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリアリレート樹脂、ポリサルホン樹脂、ポリエーテルサルホン樹脂、ポリエーテルエーテルケトン樹脂、ポリエーテルイミド樹脂、ポリメチルペンテン樹脂などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
【００４５】
樹脂層１５ｂ及び樹脂層１５ｃを構成する疎水性樹脂以外の化合物としては、例えば、蜜ロウ、カルナバワックス、鯨ロウ、木ロウ、キャンデリラワックス、米ぬかロウ、モンタンワックス等の天然ワックス；パラフィンワックス、マイクロクリスタリンワックス、酸化ワックス、オゾケライト、セレシン、エステルワックス、ポリエチレンワックス、酸化ポリエチレンワックス等の合成ワックス；マルガリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、フロイン酸、ベヘニン酸等の高級脂肪酸；ステアリンアルコール、ベヘニルアルコール等の高級アルコール；ソルビタンの脂肪酸エステル等のエステル類；ステアリンアミド、オレインアミド等のアミド類などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
樹脂層１５ｂ、及び樹脂層１５ｃを構成する化合物の中でも、疎水性相互作用が強い点から、ポリスチレン樹脂、ポリオレフィン樹脂、カルナバワックス、ポリエチレンワックスが好ましい。
【００４６】
各樹脂層（１５ａ，１５ｂ，１５ｃ）を構成する樹脂としては、それぞれ同種の樹脂を用いることも可能である。この場合、樹脂層１５ａを構成する樹脂を、樹脂層（１５ｂ，１５ｃ）を構成する樹脂よりも、親水性の高いものとすることが好ましい。なお、同種の樹脂を用いる場合には、親水性を測定するまでなく、親水基の割合が高ければ、より親水性が高いと言うことができる。
【００４７】
樹脂層１５ａに固相化させる標識抗体１６としては、親水性の部位を有しており、抗原３１と反応するものであれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、金コロイド標識Ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ等の金コロイド標識抗体、各種アレルゲンに対する標識抗体、その他の抗体を標識する粒子などが挙げられる。
前記その他の抗体を標識する粒子としては、金コロイド以外にも特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、金コロイド以外の金属コロイド、酵素を含有する酵素標識粒子、色素を含有する着色粒子、蛍光物質を含有する蛍光粒子、磁性体を含有する磁性体内包粒子などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
前記抗体としては、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ抗体、（Ｆａｂ）２抗体などが挙げられる。
【００４８】
樹脂層１５ｂに固相化させる捕捉抗体１７としては、疎水性の部位を有しており、抗原３１と反応するものであれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、Ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ等の抗体、各種アレルゲンに対する抗体などが挙げられる。
前記抗体としては、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ抗体、（Ｆａｂ）２抗体などが挙げられる。
【００４９】
樹脂層１５ｃに固相化させる捕捉抗体１８としては、疎水基を有しており、標識抗体１６と反応するものであれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ等の標識抗体１６に対する抗体、又は上記で挙げた抗体などが挙げられる。
【００５０】
標識抗体１６、捕捉抗体（１７，１８）等の試薬を、樹脂層１５に固相化する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、捕捉抗体等の試薬を含む溶液を樹脂層１５に塗布した後、急速乾燥してドライアップする方法、試薬を含む溶液を樹脂層１５に塗布した後、塗布液が乾燥しないよう多湿環境下で静置（インキュベート）した後、蒸留水等で無機塩等の抗体以外の成分を洗浄後、乾燥する方法などが挙げられる。
【００５１】
前記捕捉抗体等の試薬を塗布液として取り扱う場合には、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、通常はバッファーと呼ばれる緩衝液（緩衝剤）で希釈することが好ましい。
前記緩衝液としては、前記捕捉抗体の抗原抗体反応を阻害しないバッファーであれば特に制限はなく、一般的に抗体の希釈に用いられる緩衝液などが挙げられる。前記緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）、トリスヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）−ＨＣｌ、グッドバッファーなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。これらの中でも、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、グッドバッファーが好ましい。
【００５２】
前記リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）としては、ｐＨ４〜１０が好ましく、ｐＨ６〜８がより好ましい。前記ＰＢＳの組成は、特に制限はなく、様々なものが存在する。前記ＰＢＳの組成の一例としては、ＮａＣｌが８．０ｇ／Ｌ、ＫＣｌが０．２ｇ／Ｌ、ＮａＨ２ＰＯ４が１．４４ｇ／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ４が０．２４ｇ／Ｌであるが、カリウムを含まない組成、又はカルシウムやマグネシウムを含む組成もある。
前記グッドバッファーとしては、例えば、２−（Ｎ−モノホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−２−スルホン酸（ＨＥＰＥＳ）などが挙げられる。
【００５３】
前記無機塩とは、イオンクロマト法等で測定可能な塩及びイオンを意味し、例えば、ナトリウムイオン、カリウムイオン、アンモニウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン等のカチオン；塩素イオン、ＰＯ４イオン、ＳＯ４イオン等のアニオン、又はこれらの塩などが挙げられる。
【００５４】
本発明において、樹脂層１５は流路部材１２上に固定されていることが好ましい。
樹脂層１５を流路部材１２上に固定する方法としては、検査時に試薬と検査液３０とが接触可能となるような状態で固定化する方法であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、熱転写プリンタ等を用いて樹脂層を構成する樹脂を流路部材１２上に熱転写する方法、ドットインパクトプリンタ等を用いて樹脂層を構成する樹脂に圧力を加えて転写する方法、樹脂層を構成する樹脂をテープや接着剤、粘着剤等で流路部材１２上に貼り付ける方法などが挙げられる。
【００５５】
＜試薬堆積部＞
試薬堆積部２０は、前記流路部材と樹脂層（１５ｂ,１５ｃ）との間に、配置されており、水溶性である。
ここで、前記水溶性とは、水不溶性ではないことを意味する。前記水不溶性とは、上述したとおりである。
試薬堆積部２０は、水溶性樹脂及び固相化試薬を含む。
前記水溶性樹脂としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ポリ（エチレンオキサイド）、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸、アクリル酸系共重合体などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
前記固相化試薬としては、例えば、前記捕捉抗体１７の説明で挙げた抗体などが挙げられる。
前記固相化試薬は、前記水溶性樹脂内に分散されていることが好ましい。また、前記固相化試薬は、試薬堆積部２０に５０質量％以上含まれていることが好ましく、７５質量％以上含まれていることがより好ましい。
【００５６】
試薬堆積部２０の平均厚みは、１μｍ以上２０μｍ以下が好ましく、２μｍ以上１０μｍ以下がより好ましい。試薬堆積部２０の平均厚みが２０μｍ以下であると、検査液が流れてきた際に水溶性樹脂が十分に溶出し、水溶性樹脂内に分散されている試薬及び水不溶性樹脂表面の固相化試薬が反応に寄与することができる。また、試薬堆積部２０の平均厚みが１μｍ以上であると、試薬堆積部の効果が十分にあり、かつ保護層としても機能することができる。
【００５７】
＜吸収部材＞
吸収部材１４は、水を吸収する部材であれば特に制限はなく、公知の材料の中から適宜選択することができる。
吸収部材１４としては、例えば、紙、布等の繊維、カルボキシル基又はその塩を有する高分子化合物、カルボキシル基又はその塩を有する高分子化合物の部分架橋体、多糖類の部分架橋体などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
【００５８】
＜その他の部材＞
前記その他の部材としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、保護部材、標識抗体保持パッド、サンプル滴下パッドなどが挙げられる。
【００５９】
前記保護部材は、流路部材に手が触れたときの汚染を防ぐ目的の部材である。
前記保護部材としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、検査装置の全体を覆うハウジングや、流路部材上に設けられるフィルムなどが挙げられる。
前記保護部材を設ける場合、流路部材１２の滴下部の上部には開口が設けられていることが好ましい。また、前記保護部材には、流路内の圧力を開放するための開口が設けられていることが好ましい。
【００６０】
上記のとおり、各種方法により流路部材１２上に樹脂層１５を設けることができるが、その一例として熱転写方式を用いる場合について説明する。以下、熱転写方式で用いられる本発明の検査装置製造用転写媒体、及び本発明の検査装置の製造方法について説明する。
【００６１】
（検査装置製造用転写媒体）
本発明の検査装置製造用転写媒体は、第１の形態では、支持体と、前記支持体上に設けられた剥離層と、前記剥離層上に設けられた試薬固相化層と、を有し、更に必要に応じてその他の部材を有する。
前記試薬固相化層の表面には、検体と反応する試薬及び試薬堆積部を有する。
【００６２】
本発明の検査装置製造用転写媒体は、第２の形態では、支持体と、前記支持体上に設けられた剥離層兼試薬固相化層と、を有し、更に必要に応じてその他の部材を有する。
前記剥離層兼試薬固相化層の表面には、検体と反応する試薬及び試薬堆積部を有する。
【００６３】
ここで、図面を参照して、流路部材上に、樹脂層を設けるときに用いられる検査装置製造用転写媒体について説明する。図８Ａ及び図８Ｂは、本発明の検査装置製造用転写媒体の一例を示す概略断面図である。
熱転写方式を用いる場合、予め捕捉抗体を均等に付着させた検査装置製造用転写媒体１００を用いることができるので、テストライン又はコントロールラインにおける捕捉抗体（１７，１８）の濃度差が小さくなる。また、従来の方法により、捕捉抗体を塗布して配置した場合には、塗布可能な程度の粘度（例えば、インクジェットプリンタによって吐出可能な程度）になるまで捕捉抗体を溶媒で希釈する必要があるが、熱転写により捕捉抗体を配置する場合には、予め、高濃度の捕捉抗体を付着させた検査装置製造用転写媒体を用いることで、高濃度の捕捉抗体を流路に配置できる。
【００６４】
図８Ａに示すように、検査装置製造用転写媒体１００は、支持体１０１と、支持体１０１上に設けられた剥離層１０２と、剥離層１０２上に設けられた試薬固相化層１０３とを有しており、試薬固相化層１０３の表面に、検体と反応する試薬と水溶性の試薬堆積部２０が固相化されている。また、検査装置製造用転写媒体１００は、更に必要に応じて、バック層１０４等のその他の層を有している。
図８Ｂの検査装置製造用転写媒体１１０に示すように、剥離層１０２と試薬固相化層１０３とは剥離層兼試薬固相化層１０５として兼ねることも可能である。
【００６５】
＜支持体＞
支持体１０１としては、その形状、構造、大きさ、材質等については、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記支持体の構造としては、単層構造であってもよいし、積層構造であってもよい。
前記支持体の大きさとしては、検査装置１０の大きさ等に応じて適宜選択することができる。
【００６６】
支持体１０１の材質としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリエチレンナフタレート（ＰＥＮ）等のポリエステル、ポリカーボネート、ポリイミド樹脂（ＰＩ）、ポリアミド、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリスチレン、スチレン−アクリロニトリル共重合体、セルロースアセテートなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。これらの中でも、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリエチレンナフタレート（ＰＥＮ）が特に好ましい。
【００６７】
支持体１０１の表面には、支持体１０１の上に設ける層との密着性を向上させるため、表面活性化処理を行うことが好ましい。前記表面活性化処理としては、例えば、グロー放電処理、コロナ放電処理などが挙げられる。
【００６８】
支持体１０１は、試薬固相化層１０３を流路部材１２に転写後、そのまま残しておいてもよく、また、試薬固相化層１０３を転写後、剥離層１０２で支持体１０１等を剥離し除去してもよい。剥離層兼試薬固相化層１０５を用いる場合は、剥離層兼試薬固相化層１０５は流路部材１２に完全に転写されるか、又は剥離層兼試薬固相化層１０５のうち、抗体が固相化された表面を含む部分は転写されるが、支持体１０１側の一部に剥離層兼試薬固相化層１０５が残ってもよい。
【００６９】
支持体１０１は、特に制限はなく、適宜合成したものであってもよいし、市販品を使用してもよい。
支持体１０１の平均厚みとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、３μｍ以上５０μｍ以下が好ましい。
【００７０】
＜剥離層＞
剥離層１０２は、転写の際に、支持体１０１と試薬固相化層１０３との剥離性を向上させる機能を有する。また、剥離層１０２は、サーマルヘッド等の加熱加圧手段で加熱すると熱溶融して低粘度の液体となり、加熱部分と非加熱部分との界面近傍で、試薬固相化層１０３の切断を容易にする機能を有する。
【００７１】
剥離層１０２は、ワックス及びバインダー樹脂を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含んでなる。
【００７２】
前記ワックスとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、蜜ロウ、カルナバワックス、鯨ロウ、木ロウ、キャンデリラワックス、米ぬかロウ、モンタンワックス等の天然ワックス；パラフィンワックス、マイクロクリスタリンワックス、酸化ワックス、オゾケライト、セレシン、エステルワックス、ポリエチレンワックス、酸化ポリエチレンワックス等の合成ワックス；マルガリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、フロイン酸、ベヘニン酸等の高級脂肪酸；ステアリンアルコール、ベヘニルアルコール等の高級アルコール；ソルビタンの脂肪酸エステル等のエステル類；ステアリンアミド、オレインアミド等のアミド類などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。これらの中でも、剥離性に優れている点から、カルナバワックス、ポリエチレンワックスが好ましい。
【００７３】
前記バインダー樹脂としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、エチレン−酢酸ビニル共重合体、部分ケン化エチレン−酢酸ビニル共重合体、エチレン−ビニルアルコール共重合体、エチレン−メタクリル酸ナトリウム共重合体、ポリアミド、ポリエステル、ポリウレタン、ポリビニルアルコール、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、デンプン、ポリアクリル酸、イソブチレン−マレイン酸共重合体、スチレン−マレイン酸共重合体、ポリアクリルアミド、ポリビニルアセタール、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、イソプレンゴム、スチレン−ブタジエン共重合体、エチレン−プロピレン共重合体、ブチルゴム、アクリロニトリル−ブタジエン共重合体などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
【００７４】
剥離層１０２の形成方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ホットメルト塗工法、前記ワックス及び前記バインダー樹脂を溶剤に分散させた塗布液を塗布する方法などが挙げられる。
剥離層１０２の平均厚みは、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．５μｍ以上５０μｍ以下が好ましい。
剥離層１０２の付着量は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．５ｇ／ｍ２以上５０ｇ／ｍ２以下が好ましい。
【００７５】
＜試薬固相化層＞
試薬固相化層１０３は、検査装置１０における樹脂層１５を構成する樹脂を含んでいればよく、その材料に特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
試薬固相化層１０３の形成方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ホットメルト塗工法や、樹脂層１５を構成する樹脂を溶剤に分散させた試薬塗布液を、グラビアコーター、ワイヤーバーコーター、ロールコーター等の一般的な塗布法により、試薬固相化層塗布液を支持体１０１上又は剥離層１０２上に塗布し、乾燥することにより形成することができる。
【００７６】
試薬固相化層１０３の平均厚みとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、２００ｎｍ以上５０μｍ以下が好ましい。前記平均厚みが２００ｎｍ以上であると、樹脂層の耐久性が向上し、摩擦や衝撃などによって樹脂層が破損することを防止できる。また、前記平均厚みが５０μｍ以下であると、サーマルヘッドからの熱を均一伝えることができ、鮮明性が良好となる。
【００７７】
試薬固相化層１０３における試薬塗布液の付着量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．２ｇ／ｍ２以上５０ｇ／ｍ２以下が好ましい。前記付着量が、０．２ｇ／ｍ２以上であると、塗布量が適切であり、樹脂層に欠損が生じることない。また、前記付着量が、５０ｇ／ｍ２以下であると、乾燥時間が適切であり、樹脂層にムラが生じない。
【００７８】
＜剥離層兼試薬固相化層＞
剥離層兼試薬固相化層１０５は剥離層と試薬固相化層の両方の機能を兼ね備えており、転写の際に支持体１０１と試薬固相化層１０３との剥離性を向上させ、かつ検査装置１０における樹脂層１５を構成する樹脂を含むことで、捕捉抗体１７、又は捕捉抗体１８などの試薬を固相化することが可能である。
【００７９】
剥離層兼試薬固相化層１０５は、サーマルヘッド等の加熱加圧手段で加熱すると支持体１０１に接している側面が熱溶融して低粘度の液体となる（加熱部分）。一方、試薬が固相化された側面は固体状態か又はそれに近い状態となり（非加熱部分）、加熱部分と非加熱部分との界面近傍での切断を容易にする機能を有する。
【００８０】
剥離層兼試薬固相化層１０５は、ワックス、及びバインダー樹脂を含有してなり、更に必要に応じて、その他の成分を含んでなる。
【００８１】
前記ワックスとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、剥離層１０２と同様のものが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。これらの中でも、剥離性と捕捉抗体の固定化能力（疎水性）に優れている点から、カルナバワックス、ポリエチレンワックスが好ましい。
【００８２】
前記バインダー樹脂としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、剥離層１０２と同様のものが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
【００８３】
剥離層兼試薬固相化層１０５の形成方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ホットメルト塗工法、前記ワックス及び前記バインダー樹脂を溶剤に分散させた塗布液を塗布する方法、などが挙げられる。
剥離層兼試薬固相化層１０５の平均厚みは、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．５μｍ以上５０μｍ以下が好ましい。前記平均厚みが、０．５μｍ以上であると、剥離層兼試薬固相化層１０５（樹脂層１５）の耐久性が向上し、摩擦や衝撃などによって樹脂層が破損することを防止できる。また、前記平均厚みが、５０μｍ以下であると、サーマルヘッドからの熱を均一に伝えることができ、鮮明性が良好となる。
剥離層兼試薬固相化層１０５の付着量は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．５ｇ／ｍ２以上５０ｇ／ｍ２以下が好ましい。前記付着量が、０．５ｇ／ｍ２以上であると、塗布量が適切であり剥離層兼試薬固相化層１０５（樹脂層１５）に欠損が生じることがない。また、前記付着量が、５０ｇ／ｍ２以下であると、乾燥時間が適切となり、剥離層兼試薬固相化層１０５にムラが生じることがない。
【００８４】
−試薬の固相化−
塗布液を乾燥して試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５が形成された後、試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５の表面に、標識抗体１６又は捕捉抗体（１７，１８）を含む溶液を塗布し、均一な塗膜を形成する。続いて、塗膜を乾燥させることにより、標識抗体１６又は捕捉抗体（１７，１８）を試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５の表面に固相化させることができる。
更に、捕捉抗体（１７、１８）を固相化させる場合は、前記捕捉抗体を固相化させた後、この表面に、試薬が分散された水溶性樹脂を塗布し乾燥させることで試薬堆積部２０を形成することができる。
【００８５】
−標識抗体の固相化−
前記標識抗体の固相化方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５表面に標識抗体による塗布液を塗布して水膜を形成し、自然乾燥、減圧下乾燥、凍結乾燥などによりドライアップして固相化する方法、などが挙げられる。
前記水膜は均一な厚みとなるように塗布されていることが好ましい。
前記標識抗体の塗布量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、標識抗体に金コロイド標識抗体を用いる場合は、ＯＤ（光学濃度）が１．０〜３０のものを樹脂層の単位面積（ｃｍ２）当り、２０μＬ以上６００μＬ以下塗布するのが好ましい。前記塗布量が、３０μＬ以上であると、金コロイド標識抗体の量が適切であり、ラインの発色強度が良好となる。また、前記塗布量が、６００μＬ以下であると、金コロイド標識抗体の量が適切であり、ラインの発色が良好となる。
乾燥方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、通気乾燥、真空乾燥、自然乾燥、凍結乾燥などが挙げられる。これらの中でも、低湿度下での自然乾燥、又は減圧下乾燥が好ましい。
乾燥時の湿度としては、相対湿度で３０％以下が好ましい。前記相対湿度が３０％以下であると、乾燥が適切であり、抗体を十分に固相化できる。
乾燥温度としては、室温（２０℃）〜５０℃下、乾燥時間としては３０分間以上２４時間以下乾燥させるのが好ましい。前記乾燥温度が、２０℃以上であると、乾燥時間が適正であり生産性が向上する。また、前記乾燥時間が、５０℃以下であると、試薬が熱により変性することを防止できる。前記乾燥時間が、３０分間以上であると、乾燥を適切に行え、２４時間以下であると、生産性が向上し変色を防止できる。
【００８６】
−捕捉抗体の固相化−
前記捕捉抗体の固相化方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５表面に捕捉抗体による塗布液を塗布して水膜を形成し、自然乾燥、減圧下乾燥、凍結乾燥などによりドライアップして固相化する方法（ドライアップ法）、あるいは塗布液が乾燥しないよう多湿環境下で静置した後、試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５表面を蒸留水などで洗浄し、乾燥して固相化する方法（吸着後乾燥する方法）などが挙げられる。いずれも塗膜は均一な厚みとなるように塗布されていることが好ましい。
前記捕捉抗体を希釈するバッファーの濃度としては、特に制限はなく、一般的に抗体の希釈に用いられる緩衝液の組成で利用することできるが、１０μｇ／ｍＬ以上５，０００μｇ／ｍＬ以下が好ましく、１００μｇ／ｍＬ以上１，０００μｇ／ｍＬ以下がより好ましい。前記塗布濃度が１０μｇ／ｍＬ以上であると、試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５に単位面積（ｃｍ２）当りに塗布する液量が適切であるため、バッファーに含まれる無機塩等の成分が減少し、抗体を十分に固相化できる。また、前記塗布濃度が５，０００μｇ／ｍＬ以下であると、塗布液の濡れ性や粘度が適切であり、試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５への塗布が良好であり、塗布量が適切であるため均一な水膜を形成することができる。
【００８７】
前記捕捉抗体をドライアップ法により固相化する場合の乾燥方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、通気乾燥、真空乾燥、自然乾燥、凍結乾燥などが挙げられる。これらの中でも、低湿度下での自然乾燥、又は減圧下乾燥させることが好ましい。
乾燥時の湿度としては、相対湿度で３０％以下が好ましい。前記相対湿度が、３０％を超えると、乾燥が不足し抗体が十分に固相化できない恐れがある。
乾燥温度としては室温（２０℃）〜５０℃の下、乾燥時間としては３０分間以上２４時間以下乾燥させるのが好ましい。前記乾燥温度が、２０℃以上であると、乾燥時間が適切であり生産性が向上する。また、前記乾燥温度が、５０℃以下であると、試薬が熱により変性することがない。前記乾燥時間が、３０分間以上であると、乾燥を適切に行うことができ、２４時間以下であると、生産性が向上し変色を防止できる。
【００８８】
樹脂層（１５ｂ，１５ｃ）において捕捉抗体を吸着後乾燥する方法により固相化する場合の静置条件としては、温度が０℃以上４０℃以下、相対湿度は３０％以上が好ましい。前記温度が、０℃以上であると、捕捉抗体の固相化を適切に行うことができる。また、前記温度が、４０℃以下であると、捕捉抗体が変性することがない。前記相対湿度が３０％以上であると、静置している間の水分揮発が少ないので抗体以外の不要な成分が多量に固相化されることがない。
静置後の洗浄方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、振とう機等を利用して固相化表面に単位面積（ｃｍ２）当り、２０μＬ以上１００μＬ以下の蒸留水などを注いだ後、室温（２５℃）で緩やかに振とうして洗浄する方法などが挙げられる。
【００８９】
洗浄後の乾燥方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、通気乾燥、真空乾燥、自然乾燥、凍結乾燥などが挙げられる。これらの中でも、低湿度下での自然乾燥、又は減圧下乾燥させることが好ましい。
乾燥時の湿度としては、相対湿度で３０％以下が好ましい。前記相対湿度が３０％以下であると、乾燥が適切であり抗体が十分に固相化できる。乾燥温度としては、室温（２０℃）〜５０℃の下、乾燥時間としては３０分間以上２４時間以下乾燥させるのが好ましい。
前記乾燥温度が、２０℃以上であると、乾燥時間が適切であり生産性が向上する。また、前記乾燥温度が、５０℃以下であると、試薬が熱により変性することを防止できる。また、乾燥時間が、３０分間以上であると、乾燥を適切に行うことができ、２４時間以下であると、生産性が向上し、樹脂の変色を防止できる。
【００９０】
前記捕捉抗体の固相化量は、５００ｎｇ／ｃｍ２以上が好ましい。前記捕捉抗体の固相化量が５００ｎｇ／ｃｍ２以上であると、固相化量が適切であり、ラインの発色強度が十分に得られる。
ここで、前記樹脂層の表面に存在する抗体の固相化量の分析方法としては、例えば、Ｘ線光電子分光法（ＸＰＳ）などが挙げられる。
【００９１】
＜試薬堆積部＞
試薬堆積部２０は、表面に固相化試薬を有する樹脂層（樹脂層１５ｂ、１５ｃ）上に設けられる。
試薬堆積部２０を、表面に固相化試薬を有する樹脂層（樹脂層１５ｂ、１５ｃ）に堆積させる方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水溶性樹脂と捕捉抗体等の試薬を含む塗布液を樹脂層１５ｂ及び樹脂層１５ｃに塗布した後、急速乾燥してドライアップする方法などが挙げられる。
【００９２】
＜バック層＞
検査装置製造用転写媒体１００には、支持体１０１の剥離層１０２側の面とは反対側の面に、バック層１０４が設けられていることが好ましい。前記反対側の面には、転写時に、サーマルヘッド等で樹脂層の形状に合わせて熱が直接印加される。このため、バック層１０４は、高熱への耐性、サーマルヘッド等との摩擦への耐性を有することが好ましい。
【００９３】
バック層１０４は、バインダー樹脂を含有し、更に必要に応じて、その他の成分を含有する。
【００９４】
前記バインダー樹脂としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、シリコーン変性ウレタン樹脂、シリコーン変性アクリル樹脂、シリコーン樹脂、シリコーンゴム、フッ素樹脂、ポリイミド樹脂、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、ニトロセルロースなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
【００９５】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、タルク、シリカ、オルガノポリシロキサン等の無機微粒子、滑剤などが挙げられる。
【００９６】
バック層１０４の形成方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、グラビアコーター、ワイヤーバーコーター、ロールコーターなどが挙げられる。
バック層１０４の平均厚みとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．０１μｍ以上１．０μｍ以下が好ましい。
【００９７】
＜アンダー層＞
支持体１０１と剥離層１０２との間、剥離層１０２と試薬固相化層１０３との間、又は支持体１０１と剥離層兼試薬固相化層１０５との間には、アンダー層を設けることができる。
前記アンダー層は、樹脂を含有し、更に必要に応じて、その他の成分を含有してなる。  前記樹脂としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、試薬固相化層１０３、剥離層１０２、及び剥離層兼試薬固相化層１０５で用いた各種樹脂が使用可能である。
【００９８】
＜保護フィルム＞
試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５上には、貯蔵の際の汚染及び損傷から保護するために保護フィルムを設けることが好ましい。
前記保護フィルムの材料としては、試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５から容易に剥がすことができるものであれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、シリコーン紙、ポリプロピレン等のポリオレフィンシート、ポリテトラフルオロエチレンシートなどが挙げられる。
前記保護フィルムの平均厚みは、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、５μｍ以上１００μｍ以下が好ましく、１０μｍ以上３０μｍ以下がより好ましい。  
【００９９】
なお、前述した各層の平均厚みの測定方法としては、前述のマイクロメーターを用いた測定方法などが挙げられる。
【０１００】
＜検査液＞
検査液３０は検体を検査装置に展開させる際に、流路部材全体に検体をスムーズにクロマト乃至展開させ、樹脂層の固相化試薬と効率的に反応させる機能を有する。
検査液３０は、少なくとも検体を含み、好ましくは親水性であり、更に必要に応じて無機塩、界面活性剤、糖、タンパクなどのその他の成分を含んでなる。通常は、前述の緩衝液に界面活性剤、糖、タンパクなどが添加されたものを展開液とし、それに検体を含んだものを検査液として用いるが、これに制限されない。
【０１０１】
（検査装置の製造方法）
本発明の検査装置の製造方法は、第１の形態では、本発明の第１の形態の検査装置製造用転写媒体の試薬固相化層と多孔質の流路部材とを接触させて、前記試薬固相化層を前記流路部材に転写する工程（以下、「試薬固相化層の転写工程」と称することもある）を含み、更に必要に応じてその他の工程を含んでなる。
なお、前記試薬固相化層の転写により、前記試薬固相化層の表面に固相化されている検体と反応する試薬及び試薬堆積部も前記流路部材に転写される。
【０１０２】
本発明の検査装置の製造方法は、第２の形態では、本発明の第２の形態の検査装置製造用転写媒体の剥離層兼試薬固相化層と多孔質の流路部材とを接触させて、前記剥離層兼試薬固相化層を前記流路部材に転写する工程（以下、「剥離層兼試薬固相化層の転写工程」と称することもある）を含み、更に必要に応じてその他の工程を含んでなる。
なお、前記剥離層兼試薬固相化層の転写により、前記剥離層兼試薬固相化層の表面に固相化されている検体と反応する試薬及び試薬堆積部も前記流路部材に転写される。
【０１０３】
＜試薬固相化層の転写工程又は剥離層兼試薬固相化層の転写工程＞
試薬固相化層又は剥離層兼試薬固相化層を流路部材に熱転写する方法としては、試薬用転写媒体の試薬固相化層又は剥離層兼試薬固相化層と、流路部材とを接触させて、試薬固相化層又は剥離層兼試薬固相化層を流路部材に転写する方法などが挙げられる。
【０１０４】
前記熱転写に用いられるプリンタとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、シリアルサーマルヘッド、ライン型サーマルヘッド等を有するサーマルプリンタなどが挙げられる。
前記熱転写における印加エネルギーは、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．０５ｍＪ／ｄｏｔ以上０．５ｍＪ／ｄｏｔ以下が好ましい。前記印加エネルギーが、０．０５ｍＪ／ｄｏｔ以上であると、試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５の溶融を効率よく行うことができる。また、前記印加エネルギーが、０．５ｍＪ／ｄｏｔ以下であると、試薬の熱変性を防止でき、支持体１０１の溶解及びサーマルヘッドが汚れてしまうことがない。
【０１０５】
−検査装置の用途−
検査装置１０の用途としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、血液検査やＤＮＡ検査向けの生化学センサ（センシングチップ）、食品や飲料の品質管理用途等における小型の分析機器（化学センサ）などが挙げられる。
【０１０６】
生化学の分野の検査に用いる試料（検体）としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、細菌、ウイルス等の病原体、生体から分離された血液、唾液、組織病片等、糞尿等の排泄物などが挙げられる。更に、出生前診断を行う場合は、羊水中に存在する胎児の細胞、試験管内での分裂卵細胞の一部などであってもよい。また、これらの試料は、直接又は必要に応じて遠心分離操作等により沈渣として濃縮した後、例えば、酵素処理、熱処理、界面活性剤処理、超音波処理、又はこれらの組合せなどによる細胞破壊処理を予め施していてもよい。
【０１０７】
本発明の検査装置１０は、流路部材１２が固定相として働くため、検査液をクロマトグラフィー（分離、精製）する機能も有する。この場合、内壁が親水性を示す連続気泡を有する流路部材１２が固定相（担体）となる。検査液３０中の各成分は、流路内を浸透する過程で固定相との相互作用の違い、即ち、親疎水性の違いにより流路内を流れる速度に差が生じる。
これは、親水性の高い成分ほど、固定相である多孔質部に吸着しやすく、脱吸着を繰り返す回数が多いため、流路内を浸透する速度が遅い。反対に疎水性の高い成分は固定相に吸着することなく浸透するので、流路内をすばやく移動する。検査液中の移動速度の差を利用することで、検査液３０の対象成分を選択的に抽出し、反応させることで、検査装置１０を高機能な化学又は生化学用途のセンサとして用いることができる。
【０１０８】
＜検査方法＞
本発明に関する検査方法は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、本発明の検査装置の流路部材に、親水性の検査液を供給する工程と、樹脂層に固相化されている標識抗体（試薬の一例）を、検査液と接触させることにより、樹脂層から放出させる工程とを含み、更に必要に応じてその他の工程を含む。
【０１０９】
また、前記検査装置を用いて検査する方法としては、前記検査装置の流路部材に、検査液を供給する工程と、検査液に抗原が含まれる場合に、抗原（検体の一部の一例）を、樹脂層に固相化されている捕捉抗体により捕捉させる工程と、を含むものであってもよい。
【０１１０】
具体的な処理としては、まず、検査装置１０の流路部材１２に設けられた滴下部１２ｃ（図１参照）に親水性の検査液３０を滴下して供給する。次いで、供給された検査液３０と、樹脂層１５ａに固相化されている標識抗体１６とを接触させ、樹脂層１５ａから標識抗体１６を放出させる。検査液３０に抗原３１が含まれている場合、樹脂層１５ａから放出された標識抗体１６は抗原３１と反応して結合する（図３参照）。
【０１１１】
次に、標識抗体１６及び抗原３１を含む検査液３０は、流路部材１２に沿って展開され樹脂層１５ｂが配置された領域に到達する。樹脂層１５ｂにおける流路部材１２に対向する面に固相化されている捕捉抗体１７は、標識抗体１６が結合した状態の抗原３１とも結合して捕捉する。更に、水溶性樹脂内部に分散された抗体が、樹脂の溶解と共に流路部材側に徐々に放出され、抗原抗体反応を起こす。抗原抗体反応物は、流路部材１２を構成する繊維に即座に結合することから、検査液とともに流出せず、捕捉抗体部（ライン）直下のメンブレンに残存する。なお、捕捉抗体１７は、一部は疎水基１７ｇにより樹脂層１５ｂに固相化されているので、検査液３０と接触しても検査液３０には親和せず放出されにくい。これにより、標識抗体１６は、樹脂層１５ｂの近傍に固定化されることになるのでテストラインが明瞭に発色する（図４Ａから図４Ｄ参照）。
【０１１２】
樹脂層１５ｂにおいて、捕捉されずに通過した標識抗体１６は、流路部材１２に沿って展開され樹脂層１５ｃが配置された領域に到達する。樹脂層１５ｃにおける流路部材１２に対向する面には、疎水基を有する捕捉抗体１８と、水溶性の試薬堆積部２０が固相化されている。標識抗体１６は、この捕捉抗体１８と結合することにより、捕捉される。更に、水溶性樹脂内部に分散された抗体が、樹脂の溶解と共に流路部材側に徐々に放出され、抗原抗体反応を起こす。抗原抗体反応物は、流路部材１２を構成する繊維に即座に結合することから、検査液３０とともに流出せず、捕捉抗体部（ライン）直下のメンブレンに残存する。なお、捕捉抗体１８は、疎水基により樹脂層１５ｃに固相化されているので、検査液３０と接触しても検査液３０には親和せず放出されにくい。これにより、標識抗体１６は、樹脂層１５ｃの近傍に固定化されることになるのでコントロールラインが明瞭に発色する（図５Ａから図５Ｄ参照）。
【０１１３】
（検査キット）
本発明の検査キットは、本発明の検査装置と、検体を採取するための検体採取手段、及び前記検体を処理するための液体から選択される少なくとも１つと、を有し、更に必要に応じてその他の部材を有してなる。
【０１１４】
図９に示したように、検査キット５０は、本発明の検査装置１０と、検体を採取するための器具（検体採取手段の一例）、及び検体を処理するための液体の少なくとも１つと、を有する。
前記検体を採取する器具としては、例えば、咽頭又は鼻腔等から検体を採取するための滅菌綿棒５１などが挙げられる。
前記検体を処理するための液体としては、例えば、検体を希釈するための希釈液５２、検体を抽出するための抽出液などが挙げられる。
前記その他の部材としては、例えば、取り扱い説明書などが挙げられる。
【０１１５】
前記実施形態では、樹脂層１５に固相化されている試薬が抗原又は抗体である場合について説明したが、本発明はこの実施形態に限定されるものではない。例えば、ケミカルアッセイで用いられる指示薬を利用した検査装置にも展開できる。
ここで、ケミカルアッセイで用いられる指示薬としては、溶液の化学的性質を指示する試薬を指し、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ｐＨ指示薬、鉛イオン、銅イオン、亜硝酸イオン等の各種イオンと反応して変色する各種イオノフォア、各種農薬と反応して変色する試薬などが挙げられる。
【０１１６】
前記実施形態では、転写の際に、検査装置製造用転写媒体１００における支持体１０１と試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５とを熱により剥離する例について説明したが、本発明はこの実施形態に限定されるものではない。例えば、支持体１０１と試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５とを光によって剥離してもよい。この場合、剥離層１０２又は剥離層兼試薬固相化層１０５に、カーボンブラック等の光吸収剤を混ぜておいて、それに光を吸収させて熱を生じさせることにより、剥離層１０２又は剥離層兼試薬固相化層１０５を溶融させ、試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５剥離してもよい。あるいは、剥離層１０２又は剥離層兼試薬固相化層１０５に、光照射によって変質する材料を混ぜておき、それに光を吸収させて剥離層１０２を脆くすることにより、試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５を剥離してもよい。
なお、前記熱転写以外の転写方法としては、例えば、試薬が固相化された試薬固相化層１０３又は剥離層兼試薬固相化層１０５からなるシートをテープなどで流路部材１２上に貼り付ける方法などが挙げられる。
【０１１７】
前記実施形態では、流路部材１２の全体に流路が形成されている例を示したが本発明はこれに限定されない。流路部材１２の一部に流路を形成する方法としては、例えば、公知の方法により、流路部材１２の空隙に、疎水性の材料を充填することにより、流路の外縁となる流壁を形成する方法などが挙げられる。
【０１１８】
前記実施形態では、流路部材１２上の複数個所に樹脂層１５が設けられている例を示したが、試薬の種類によっては、流路部材１２上の一箇所に樹脂層１５が設けられていてもよい。例えば、検査液３０中の成分Ａと特異的に結合する試薬が固相化された樹脂層１５ａ１と、それらを捕捉する試薬が固相化された樹脂層１５ｂ１及び１５ｃ１を設けた流路部材１２上に、更に、検査液３０中の成分Ｂと特異的に結合する試薬が固相化された樹脂層１５ａ２と、それらを捕捉する試薬が固相化された樹脂層１５ｂ２及び１５ｃ２を設けた場合、同時に多成分の検出が可能な検査装置を得ることができる。
【０１１９】
前記実施形態では、検査液３０が親水性の場合について説明したが、検査液は親水性に限定されない。検査液３０としては、例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、１−プロピルアルコール、２−プロピルアルコール等のアルコール類、アセトン、ＭＥＫ（メチルエチルケトン）等のケトン類などの有機溶媒を含む親溶媒性のものであってもよい。この場合、前記実施形態における、「親水性」は「疎水性」に置き換えられ、「疎水性」は「親水性」に置き換えられることになる。
【実施例】
【０１２０】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【０１２１】
（調製例１）
−バック層塗布液の調製−
シリコーン系ゴムのエマルション（信越化学工業株式会社製、ＫＳ７７９Ｈ、固形分３０質量％）１６．８質量部、塩化白金酸触媒０．２質量部、及びトルエン８３質量部を混合して、バック層塗布液を得た。
【０１２２】
（調製例２）
−剥離層兼試薬固相化層（固定用）塗布液の調製−
カルナバワックス９０質量部、エチレン−酢酸ビニル共重合体１質量部、スチレン−ブタジエン共重合体４質量部、ブタジエンゴム４質量部、アクリロニトリル−ブタジエン共重合体１質量部、及びトルエン／メチルエチルケトン（体積比７／３）溶媒６００質量部からなる塗布液（株式会社リコー製、Ｂ１１０ＡＸ剥離液）を、調製例２の剥離層兼試薬固相化層（固定用）塗布液とした。
【０１２３】
（調製例３）
−試薬固相化層（放出用）塗布液の調製−
ポリビニルブチラール樹脂（積水化学工業株式会社製、ＢＬ−１、ブチラール化度６４ｍｏｌ％）５質量部、及びエタノール９５質量部を混合し、調製例３の試薬固相化層（放出用）塗布液を調製した。
【０１２４】
（調製例４）
−テストライン用試薬塗布液の調製−
Ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（シグマ  アルドリッチ社製、Ｉ１８８６）に抗体希釈液としてダルベッコ  リン酸緩衝生理食塩水（Ｃａ、Ｍｇ不含、Ｄ−ＰＢＳ（−）、ナカライテスク株式会社製、１４２４９−９５）を加え、抗体濃度を５００μｇ／ｍＬとし、調製例４のテストライン用試薬塗布液を調製した。
【０１２５】
（調製例５）
−テストライン用試薬堆積液の調製−
ダルベッコ  リン酸緩衝生理食塩水で２ｍｇ／ｍＬに調製したＡｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  １ｍＬあたり、固形分で０．５ｍｇとなるように水溶性樹脂としてポリビニルピロリドン（ＰＶＰ、東京化成工業株式会社製、Ｋ９０）を加えて十分に攪拌し、調製例５のテストライン用試薬堆積液とした。
【０１２６】
（調製例６）
−コントロールライン用試薬塗布液の調製−
Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ（シグマ  アルドリッチ社製、Ｉ２５１１−１０ＭＧ）に希釈液としてダルベッコ  リン酸緩衝生理食塩水（Ｃａ、Ｍｇ不含、Ｄ−ＰＢＳ（−）、ナカライテスク株式会社製、１４２４９−９５）を加え、抗体濃度を５００μｇ／ｍＬとし、調製例６のコントロールライン用試薬塗布液を調製した。
【０１２７】
（調製例７）
−コントロールライン用試薬堆積液の調製−
ダルベッコ  リン酸緩衝生理食塩水で２ｍｇ／ｍＬに調製したＨｕｍａｎ  ＩｇＧを  ＩｇＧ  １ｍＬあたり、固形分で０．５ｍｇとなるように水溶性樹脂としてポリビニルピロリドン（ＰＶＰ、東京化成工業株式会社製、Ｋ９０）を加えて十分に攪拌し、調製例７のコントロールライン用試薬堆積液とした。
【０１２８】
（調製例８）
−テストライン用試薬堆積液の調製−
ダルベッコ  リン酸緩衝生理食塩水で２ｍｇ／ｍＬに調製したＡｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  １ｍＬあたり、固形分で０．５ｍｇとなるように水溶性樹脂としてポリエチレンオキサイド（明成化学工業株式会社製、アルコックスＬ−６）を加えて十分に攪拌し、調製例８のテストライン用試薬堆積液とした。
【０１２９】
（調製例９）
−コントロールライン用試薬堆積液の調製−
ダルベッコ  リン酸緩衝生理食塩水で２ｍｇ／ｍＬに調製したＨｕｍａｎ  ＩｇＧを、ＩｇＧ  １ｍＬあたり、固形分で０．５ｍｇとなるように水溶性樹脂としてポリエチレンオキサイド（明成化学工業株式会社製、アルコックスＬ−６）を加えて十分に攪拌し、調製例９のコントロールライン用試薬堆積液とした。
【０１３０】
（調製例１０）
−テストライン用試薬堆積液の調製−
ダルベッコ  リン酸緩衝生理食塩水で２ｍｇ／ｍＬに調製したＡｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  １ｍＬあたり、固形分で０．５ｍｇとなるように水溶性樹脂としてアクリル酸系共重合体（株式会社クラレ製、ジュリマーＡＣ  ０３ＡＰ）を加えて十分に攪拌し、調製例１０のテストライン用試薬堆積液とした。
【０１３１】
（調製例１１）
−コントロールライン用試薬堆積液の調製−
ダルベッコ  リン酸緩衝生理食塩水で２ｍｇ／ｍＬに調製したＨｕｍａｎ  ＩｇＧをＩｇＧ  １ｍＬあたり、固形分で０．５ｍｇとなるように水溶性樹脂としてアクリル酸系共重合体（株式会社クラレ製、ジュリマーＡＣ １０３ＡＰ）を加えて十分に攪拌し、調製例１１のコントロールライン用試薬堆積液とした。
【０１３２】
（調製例１２）
−剥離層兼試薬固相化層（固定用）塗布液の調製−
調製例２において、カルナバワックスをポリエチレンワックスに変更した以外は、調製例２と同様にして、作製した塗布液を、調製例１２の剥離層兼試薬固相化層（固定用）塗布液とした。
【０１３３】
（調製例１３）
−試薬固相化層（固定用）塗布液の調製−
ポリビニルブチラール樹脂（積水化学工業株式会社製、ＢＬ−１０、ブチラール化度７２ｍｏｌ％）５質量部、及びエタノール９５質量部を混合し、調製例１３の試薬固相化層（固定用）塗布液を調製した。
【０１３４】
（調製例１４）
−標識抗体用試薬塗布液の調製−
金コロイド標識Ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｂｉｏａｓｓａｙ  Ｗｏｒｋｓ社製、Ｇｏｌｄ、平均粒径４０ｎｍ、ＯＤ＝１５）を標識抗体用試薬塗布液として調製した。
【０１３５】
（調製例１５）
−テストライン用試薬塗布液の調製−
Ａｎｔｉ−ｈＣＧモノクローナル抗体（Ｍｅｄｉｘ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ社製、Ａｎｔｉ−Ａｌｐｈａ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ６６０１  ＳＰＲ−５）に抗体希釈液としてダルベッコ  リン酸緩衝生理食塩水（Ｃａ、Ｍｇ不含有、Ｄ−ＰＢＳ（−）、ナカライテスク株式会社製、１４２４９−９５）を加え、抗体濃度を５００μｇ／ｍＬとし、調製例１５のテストライン用試薬塗布液を調製した。
【０１３６】
（調製例１６）
−テストライン用試薬堆積液の調製−
ダルベッコ  リン酸緩衝生理食塩水で２ｍｇ／ｍＬに調製したＡｎｔｉ−ｈＣＧモノクローナル抗体１ｍＬあたり、固形分で０．５ｍｇとなるように水溶性樹脂としてポリビニルピロリドン（ＰＶＰ、東京化成工業株式会社製、Ｋ９０）を加えて十分に攪拌し、調製例１６のテストライン用試薬堆積液とした。
【０１３７】
（調製例１７）
−コントロールライン用試薬塗布液の調製−
Ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（和光純薬工業株式会社製、５６６−７０６２１）に抗体希釈液としてダルベッコ  リン酸緩衝生理食塩水（Ｃａ、Ｍｇ不含有、Ｄ−ＰＢＳ（−）、ナカライテスク株式会社製、１４２４９−９５）を加え、５００μｇ／ｍＬとし、調製例１７のコントロールライン用試薬塗布液を調製した。
【０１３８】
（調製例１８）
−コントロールライン用試薬堆積液の調製−
ダルベッコ  リン酸緩衝生理食塩水で２ｍｇ／ｍＬに調製したＡｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  １ｍＬあたり、固形分で０．５ｍｇとなるように水溶性樹脂としてポリビニルピロリドン（ＰＶＰ、東京化成工業株式会社製、Ｋ９０）を加えて十分に攪拌し、調製例１８のコントロールライン用試薬堆積液とした。
【０１３９】
（調製例１９）
−標識抗体用試薬塗布液の調製−
金コロイド溶液（ＢＢＩ社製、ＥＭＧＣ５０）９ｍＬに５０ｍＭに調製したＫＨ２ＰＯ４バッファー（ｐＨ７．０）１ｍＬを加えた後、更に５０μｇ／ｍＬに調製したＡｎｔｉ−ｈＣＧモノクローナル抗体（Ｍｅｄｉｘ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ社製、Ａｎｔｉ−ｈＣＧ  ５００８  ＳＰ−５）を１ｍＬ加え、攪拌した。これを１０分間静置した後、１質量％ポリエチレングリコール水溶液（和光純薬工業株式会社製、１６８−１１２８５）を５５０μＬ加え攪拌した後、更に、１０質量％ＢＳＡ水溶液（シグマ  アルドリッチ社製、Ａ−７９０６）を１．１ｍＬ加え攪拌した。
【０１４０】
次に、この溶液を３０分間遠心した後、１ｍＬ程度を残して上清を取り除き、超音波洗浄機により金コロイドを再分散した。なお、遠心は遠心分離機（日立工機株式会社製、ｈｉｍａｃＣＦ１６ＲＮ）を用い、遠心加速度８，０００×ｇ、４℃の条件にて行った。その後、金コロイド保存液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ８．２）、０．０５質量％ポリエチレングリコール、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１質量％ＢＳＡ水溶液、０．１質量％ＮａＮ３水溶液）２０ｍＬに分散し、再び上記と同様の条件にて遠心した後、１ｍＬ程度を残して上清を取り除き、超音波洗浄機により金コロイドを再分散した。これらの操作を繰り返し、金コロイド保存液の光学濃度（ＯＤ）が１５になるように調整し、調製例１９の標識抗体用試薬塗布液とした。
【０１４１】
（実施例１）
＜テストライン用転写媒体の作製＞
−バック層形成−
支持体としての平均厚み４．５μｍのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（東レ株式会社製、ルミラーＦ５７）の片面に、前記調製例１のバック層塗布液を塗布し、８０℃で１０秒間乾燥して、平均厚み０．０２μｍのバック層を形成した。
【０１４２】
−剥離層兼試薬固相化層（固定用）形成−
次に、前記ＰＥＴフィルムにおけるバック層が形成された面とは反対側の面に、前記調製例２の剥離層兼試薬固相化層（固定用）塗布液を塗布し、４０℃で１０分間乾燥して、平均厚み２０μｍの剥離層兼試薬固相化層を形成した。
【０１４３】
−試薬の固相化−
次に、前記剥離層兼試薬固相化層（固定用）上に、前記調製例４のテストライン用試薬塗布液を単位面積（ｃｍ２）当り１２μＬになるように塗布し、水膜を形成した後、前記水膜が乾燥しないよう相対湿度８０％に保った容器内に転写媒体を設置して２５℃で１０分間静置した。静置後、転写媒体の剥離層兼試薬固相化層表面を下記条件で洗浄した。
【０１４４】
−洗浄−
振とう機（ＷＲ−３６３６を装着したＳｈａｋｅ−ＸＲ、共にタイテック株式会社製）に水膜から剥がした転写媒体を、試薬を固相化した側をおもて（表）にして貼り付けた。  次に、固相化表面に単位面積（ｃｍ２）当り１００μＬとなるように蒸留水を注いだ後、２５℃で振とう速度を２０ｒ／ｍｉｎとして１分間緩やかに振とうした。振とう終了後、洗浄後の上澄み液を除去した。この操作を合計で５回繰り返し、最後に、転写媒体表面から洗浄後の上澄み液をよく切り洗浄とした（洗浄回数３回）。洗浄後、温度２５℃、相対湿度２０％のデシケータ内で１５分間乾燥し、剥離層兼試薬固相化層（固定用）に試薬を固相化させた。
【０１４５】
−試薬堆積部の形成−
続いて、調製例５のテストライン用試薬堆積液を、試薬が固相化された剥離層兼試薬固相化層表面に単位面積（ｃｍ２）当り２００μＬとなるように塗布し、室温（２５℃）環境下で２時間真空乾燥して、平均厚み５μｍの試薬堆積部を形成した。以上により、実施例１のテストライン用転写媒体を得た。
【０１４６】
＜コントロールライン用転写媒体の作製＞
前記「テストライン用転写媒体の作製」における「試薬の固相化」から「試薬堆積部の形成」において、前記調製例４のテストライン用試薬塗布液を前記調製例６のコントロールライン用試薬塗布液に変更し、前記調製例５のテストライン用試薬堆積液を前記調製例７のテストライン用試薬堆積液に変更した以外は、前記「テストライン用転写媒体の作製」と同様にして、実施例１のコントロールライン用転写媒体を得た。
【０１４７】
＜標識抗体用転写媒体の作製＞
支持体としての平均厚み４．５μｍのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（東レ株式会社製、ルミラーＦ５７）の片面に、前記「テストライン用転写媒体の作製」と同様にして、バック層及び剥離層兼試薬固相化層（固定用）を形成した後、前記剥離層兼試薬固相化層（固定用）上に、前記調製例３の試薬固相化層（放出用）塗布液を塗布し、４０℃で１０分間乾燥して、平均厚み５μｍの試薬固相化層（放出用）を形成した。
次に、前記試薬固相化層（放出用）上に、前記調製例１４の標識抗体用試薬塗布液を３０μＬ／ｃｍ２となるように塗布し、真空乾燥機内で、２５℃で５時間乾燥して、試薬固相化層（放出用）に試薬を固相化させた。以上により、実施例１の標識抗体用転写媒体を得た。
【０１４８】
＜検査装置の作製＞
以下のようにして、図１０Ａ及び図１０Ｂに示す検査装置１０を作製した。図１０Ａは、実施例１の検査装置の上面図である。図１０Ｂは、図１０Ａの検査装置のＤ−Ｄ断面図である。
【０１４９】
−紙基板の作製−
幅４０ｍｍ×長さ８０ｍｍにカットした基材１１としてのＰＥＴフィルム（東レ株式会社製、ルミラーＳ１０、平均厚み５０μｍ）の上部に、熱可塑性樹脂としてポリエステル系ホットメルト系接着剤（東亜合成株式会社製、アロンメルトＰＥＳ３７５Ｓ４０）を、ロールコーターを用いて前記ＰＥＴフィルム上に厚みが５０μｍとなるように、１９０℃に加熱後、塗工して接着剤層を形成した。
前記接着剤層を形成した前記ＰＥＴフィルムを２時間以上静置した後、前記接着剤層表面に幅４０ｍｍ×長さ７０ｍｍにカットしたニトロセルロースメンブレン（メルクミリポア社製、ＨＦ１８０、空隙率７０％）を、前記接着剤層表面の長軸側の一端と各種部材の長軸側の一端（この端を上流端、反対側を下流端とする）を揃えるように重ね、１５０℃の温度で１０秒間、１ｋｇｆ／ｃｍ２の荷重をかけた。最後に長軸方向に沿って幅４ｍｍ×長さ８０ｍｍとなるように切断し、流路部材１２としての紙基板を得た。
【０１５０】
ここで、流路部材１２としての紙基板の空隙率は、紙基板の坪量（ｇ／ｍ２）、厚み（μｍ）、及び組成分比重から、下記の計算式１により求めたところ、前記紙基板の空隙率は７０％であった。なお、空隙率が、４０％以上９０％以下であると、前記紙基板は多孔質であるといえる。
［計算式１］
空隙率（％）＝｛１−［坪量（ｇ／ｍ２）／厚み（μｍ）／組成分比重］｝×１００
【０１５１】
−標識抗体の転写−
流路部材１２としての紙基板と前記標識抗体用転写媒体の試薬が固相化されている側とを対向させて重ね合わせた後、熱転写プリンタを用いて、図１０Ａ及び図１０Ｂに示したように、紙基板の上流端から２０ｍｍ離れた位置に、前記標識抗体用転写媒体を幅３ｍｍ×長さ１０ｍｍのパターン状に転写した（樹脂層１５ａ）。
前記熱転写プリンタは、ドット密度３００ｄｐｉ（ＴＤＫ株式会社製）のサーマルヘッドを有し、印字速度８．７ｍｍ／ｓｅｃ、印加エネルギー０．３５ｍＪ／ｄｏｔの評価系システムを構築したものである。
【０１５２】
−テストライン及びコントロールラインの転写−
図１０Ａ及び図１０Ｂに示したように、前記標識抗体用転写媒体の転写位置から１５ｍｍ離れた位置に、前記テストライン用転写媒体の試薬堆積部２０を重ね合わせて、高さ４ｍｍ×長さ１ｍｍのライン状に転写した（樹脂層（テストライン）１５ｂ）。更に、前記テストライン用転写媒体の転写位置から５ｍｍ離れた位置に前記コントロールライン用転写媒体の試薬堆積部２０を重ね合わせて、高さ４ｍｍ×長さ１ｍｍのライン状に転写した（樹脂層（コントロールライン）１５ｃ）。なお、各樹脂層（ライン）は、前記「標識抗体の転写」と同様の印字条件で形成した。
【０１５３】
−吸収部材の作製−
図１０Ａ及び図１０Ｂに示したように、吸収部材１４（メルクミリポア社製、Ｓｕｒｅｗｉｃｋ  Ｃ２４８）を設けることにより、実施例１のイムノクロマトアッセイ（検査装置１０）を得た。
【０１５４】
＜ライン評価＞
−検査液の調製−
展開液として、０．１質量％Ｔｗｅｅｎ２０（シグマ  アルドリッチ社製、Ｐ９４１６−５０ＭＬ）のＤ−ＰＢＳ（−）溶液を調製した。
次に、Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧに前記展開液を加え、抗体濃度を５００ｎｇ／ｍＬに調整し、検査液を得た。
【０１５５】
−反応１（シグナル）−
図１０Ａ及び図１０Ｂに示すイムノクロマトアッセイの上流端部に、前記検査液を１００μＬ滴下し、１５分間経過した後、テストラインを観察した。
次に、反応が終了したイムノクロマトアッセイを測定用ハウジングケースに収め、クロマトリーダー（大塚電子株式会社製、ＤｉａＳｃａｎ  １０）を用いてライン濃度を測定し、ラインの発色濃さを読み値として求め、下記基準で評価した。結果を表２に示した。なお、読み値が大きいほど、ラインの発色が濃く好ましい。
［評価基準］
◎：読み値が２３０以上である
○：読み値が２００以上２３０未満である
△：読み値が１００以上２００未満である
×：読み値が１００未満、又は測定不能
【０１５６】
−反応２（非特異的な吸着）−
図１０Ａ及び図１０Ｂに示すイムノクロマトアッセイの上流端部に、前記展開液を１００μＬ滴下し、１５分間経過した後、テストラインを観察した。
次に、展開が終了したイムノクロマトアッセイを測定用ハウジングケースに収め、クロマトリーダー（大塚電子株式会社製、ＤｉａＳｃａｎ  １０）を用いてライン濃度を測定し、非特異的な吸着による発色の有無を確認した。結果を表２に示した。
［評価基準］
○：発色していない（ライン未検出）
×：発色が確認された（読み値を読み取れた）
【０１５７】
―流路部材表面での発色評価―
反応が終了した検査装置１０のライン部分（樹脂層）を剥がして流路部材（メンブレン）側で発色しているかどうかを目視で観察し、下記基準で評価した。結果を表２に示した。
［評価基準］
○：発色している
×：殆ど発色が確認できない
【０１５８】
―樹脂層表面での発色評価―
反応が終了した検査装置１０のライン部分（樹脂層）を剥がして樹脂層の試薬固相化面に発色があるか否かを目視で観察し、下記基準で評価した。結果を表２に示した。
［評価基準］
○：発色がある
×：発色が殆ど無い
【０１５９】
（実施例２）
＜テストライン用転写媒体の作製＞
実施例１における、前記「テストライン用転写媒体の作製」のうち、「試薬堆積部の形成」において、調製例５のテストライン用試薬堆積液の代わりに、調製例８のテストライン用試薬堆積液を塗布した以外は、実施例１と同様にして、実施例２のテストライン用転写媒体を得た。
【０１６０】
＜コントロールライン用転写媒体の作製＞
更に、実施例１における、前記「コントロールライン用転写媒体の作製」のうち、「試薬堆積部の形成」において、調製例７のコントロールライン用試薬堆積液の代わりに、調製例９のコントロールライン用試薬堆積液を塗布した以外は、実施例１と同様にして、実施例２のコントロールライン用転写媒体を得た。
上記の工程以外は、実施例１と同様にして、実施例２のイムノクロマトアッセイ（検査装置１０）を作製し、実施例１と同様の評価を行った。結果を表２に示した。
【０１６１】
（実施例３）
＜テストライン用転写媒体の作製＞
実施例１における、前記「テストライン用転写媒体の作製」のうち、「試薬堆積部の形成」において、調製例５の試薬堆積液の代わりに、調製例１０の試薬堆積液を塗布した以外は、実施例１と同様にして、実施例３のテストライン用転写媒体を得た。
【０１６２】
＜コントロールライン用転写媒体の作製＞
更に、実施例１における、前記「コントロールライン用転写媒体の作製」のうち、「試薬堆積部の形成」において、調製例７のコントロールライン用試薬堆積液の代わりに、調製例１１のコントロールライン用試薬堆積液を塗布した以外は、実施例１と同様にして、施例３のコントロールライン用転写媒体を得た。
上記の工程以外は、実施例１と同様にして、実施例３のイムノクロマトアッセイ（検査装置１０）を作製し、実施例１と同様の評価を行った。結果を表２に示した。
【０１６３】
（実施例４）
＜テストライン用転写媒体の作製＞
実施例１における、前記「テストライン用転写媒体の作製」において、前記調製例４のテストライン用試薬塗布液を前記調製例１５のテストライン用試薬塗布液に変更し、前記調製例５のテストライン用試薬堆積液を前記調製例１６のテストライン用試薬堆積液に変更した以外は、前記「テストライン用転写媒体の作製」と同様にして、実施例４のテストライン用転写媒体を得た。
【０１６４】
＜コントロールライン用転写媒体の作製＞
次に、前記実施例１における前記「コントロールライン用転写媒体の作製」において、前記調製例６のコントロールライン用試薬塗布液を前記調製例１７のコントロールライン用試薬塗布液に変更し、前記調製例７のコントロールライン用試薬堆積液を前記調製例１８のコントロールライン用試薬堆積液に変更した以外は、前記「コントロールライン用転写媒体の作製」と同様にして、実施例４のコントロールライン用転写媒体を得た。
【０１６５】
＜標識抗体用転写媒体の作製＞
更に、実施例１における前記「標識抗体用転写媒体の作製」において、前記調製例１４の標識抗体用塗布液を、調製例１９の標識抗体用塗布液に変更した以外は、前記「標識抗体用転写媒体の作製」と同様にして、実施例４の標識抗体用転写媒体を得た。
上記の工程以外は、実施例１と同様にして、実施例４のイムノクロマトアッセイ（検査装置１０）を作製した。
【０１６６】
＜ライン評価＞
−検査液の調製−
展開液として、０．１質量％Ｔｗｅｅｎ２０（シグマ  アルドリッチ社製、Ｐ９４１６−５０ＭＬ）／Ｄ−ＰＢＳ（−）溶液を調製した。
次に、ｈＣＧ（アールアンドディーシステムス社製、リコンビナントｈＣＧ、７７２７−ＣＧ−０１０）に上述の展開液を加え、抗体濃度を５０ｍＩＵ／ｍＬに調整し、検査液を得た。
【０１６７】
−反応１（シグナル）−
図１０Ａ及び図１０Ｂに示すイムノクロマトアッセイの上流端部に、前記検査液を１００μＬ滴下し、１５分間経過した後、テストラインを観察した。
次に、実施例１と同様にして、ライン濃度評価を実施した。結果を表２に示した。
【０１６８】
−反応２（非特異的な吸着）−
図１０Ａ及び図１０Ｂに示すイムノクロマトアッセイの上流端部に、前記展開液を１００μＬ滴下し、１５分間経過した後、テストラインを観察した。
次に、実施例１と同様にして、ライン濃度を測定し、非特異的な吸着による発色の有無を確認した。結果を表２に示した。
【０１６９】
−流路部材表面での発色評価−
実施例１と同様にして、流路部材表面での発色評価を行った。結果を表２に示した。
【０１７０】
―樹脂層表面での発色評価―
実施例１と同様にして、樹脂層表面での発色評価を行った。結果を表２に示した。
【０１７１】
（実施例５）
＜テストライン用転写媒体の作製＞
実施例１における、前記「テストライン用転写媒体の作製」のうち、「剥離層兼試薬固相化層（固定用）形成」工程において、前記調製例２の剥離層兼試薬固相化層（固定用）塗布液を用いる代わりに、調製例１２の剥離層兼試薬固相化層（固定用）塗布液を用いた以外は、前記「テストライン用転写媒体の作製」と同様にして、実施例５のテストライン用転写媒体を得た。
【０１７２】
＜コントロールライン用転写媒体の作製＞
次に、実施例１における、前記「コントロールライン用転写媒体の作製」のうち、「剥離層兼試薬固相化層（固定用）形成」工程において、前記調製例２の剥離層兼試薬固相化層（固定用）塗布液を用いる代わりに、調製例１２の剥離層兼試薬固相化層（固定用）塗布液を用いた以外は、前記「コントロールライン用転写媒体の作製」と同様にして、実施例５のコントロールライン用転写媒体を得た。
【０１７３】
上記の工程以外は、実施例１と同様にして、実施例５のイムノクロマトアッセイ（検査装置１０）を作製し、実施例１と同様の評価を行った。結果を表２に示した。
【０１７４】
（実施例６）
＜テストライン用転写媒体の作製＞
実施例１における、前記「テストライン用転写媒体の作製」のうち、「試薬の固相化」までの工程を下記工程に変更した以外は、実施例１と同様にして、実施例６のテストライン用転写媒体を得た。
【０１７５】
−バック層形成−
支持体としての平均厚み４．５μｍのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（東レ株式会社製、ルミラーＦ５７）の片面に、前記調製例１のバック層塗布液を塗布し、８０℃で１０秒間乾燥して、平均厚み０．０２μｍのバック層を形成した。
【０１７６】
−剥離層兼試薬固相化層（剥離層）形成−
次に、前記ＰＥＴフィルムにおけるバック層が形成された面とは反対側の面に、前記調製例２の剥離層兼試薬固相化層（固定用）塗布液を塗布し、４０℃で１０分間乾燥して、平均厚み２０μｍの剥離層兼試薬固相化層（剥離層）を形成した。
【０１７７】
−試薬固相化層（固定用）形成−
次に、前記剥離層兼試薬固相化層（剥離層）が形成された面に、調製例１３の試薬固相化層（固定用）塗布液を塗布し、４０℃で１０分間乾燥して、平均厚み５μｍの試薬固相化層を形成した。
【０１７８】
次に、上記以外は、実施例１の前記「テストライン用転写媒体の作製」と同様にして、実施例６のテストライン用転写媒体を得た。
【０１７９】
＜コントロールライン用転写媒体の作製＞
実施例１における、前記「コントロールライン用転写媒体の作製」のうち、「試薬の固相化」までの工程を上述の工程に変更した以外は、実施例１と同様にして、実施例６のコントロールライン用転写媒体を得た。
【０１８０】
上記の工程以外は、実施例１と同様にして、実施例６のイムノクロマトアッセイ（検査装置１０）を作製し、実施例１と同様の評価を行った。結果を表２に示した。
【０１８１】
（比較例１）
＜テストライン用転写媒体の作製＞
−バック層形成−
支持体としての平均厚み４．５μｍのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（東レ株式会社製、ルミラーＦ５７）の片面に、前記調製例１のバック層塗布液を塗布し、８０℃で１０秒間乾燥して、平均厚み０．０２μｍのバック層を形成した。
【０１８２】
−剥離層兼試薬固相化層（固定用）形成−
次に、前記ＰＥＴフィルムにおけるバック層が形成された面とは反対側の面に、前記調製例２の剥離層兼試薬固相化層（固定用）塗布液を塗布し、４０℃で１０分間乾燥して、平均厚み２０μｍの剥離層兼試薬固相化層を形成した。
【０１８３】
−テストライン用転写媒体の作製−
次に、前記剥離層兼試薬固相化層（固定用）上に、前記調製例４のテストライン用試薬塗布液を単位面積（ｃｍ２）当り１２μＬになるように塗布し水膜を形成した後、前記水膜が乾燥しないように相対湿度８０％に保った容器内に転写媒体を設置して２５℃で１０分間静置した。静置後、転写媒体の剥離層兼試薬固相化層表面を下記条件で洗浄した。
【０１８４】
−洗浄−
振とう機（ＷＲ−３６３６を装着したＳｈａｋｅ−ＸＲ、共にタイテック株式会社製）に水膜から剥がした転写媒体を、試薬を固相化した側をおもて（表）にして貼り付けた。  次に、固相化表面に単位面積（ｃｍ２）当り１００μＬとなるように蒸留水を注いだ後、２５℃で振とう速度を２０ｒ／ｍｉｎとして１分間緩やかに振とうした。振とう終了後、洗浄後の上澄み液を除去した。この操作を合計で５回繰り返し、最後に、転写媒体表面から洗浄後の上澄み液をよく切り洗浄とした（洗浄回数３回）。洗浄後、温度２５℃、相対湿度２０％のデシケータ内で１５分間乾燥し、剥離層兼試薬固相化層（固定用）に試薬を固相化させた。以上により、比較例１のテストライン用転写媒体を得た。
【０１８５】
＜コントロールライン用転写媒体の作製＞
前記「テストライン用転写媒体の作製」において、前記調製例４のテストライン用試薬塗布液を前記調製例６のコントロールライン用試薬塗布液に変更した以外は、前記「テストライン用転写媒体の作製」と同様にして、比較例１のコントロールライン用転写媒体を得た。
【０１８６】
上記の工程以外は、実施例１と同様にして、比較例１のイムノクロマトアッセイ（検査装置１０）を作製し、実施例１と同様の評価を行った。結果を表２に示した。
【０１８７】
（比較例２）
＜テストライン用転写媒体の作製＞
−バック層形成−
支持体としての平均厚み４．５μｍのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（東レ株式会社製、ルミラーＦ５７）の片面に、前記調製例１のバック層塗布液を塗布し、８０℃で１０秒間乾燥して、平均厚み０．０２μｍのバック層を形成した。
【０１８８】
−剥離層兼試薬固相化層（固定用）形成−
次に、前記ＰＥＴフィルムにおけるバック層が形成された面とは反対側の面に、前記調製例２の剥離層兼試薬固相化層（固定用）塗布液を塗布し、４０℃で１０分間乾燥して、平均厚み２０μｍの剥離層兼試薬固相化層を形成した。
【０１８９】
−試薬堆積部の形成−
次に、前記剥離層兼試薬固相化層（固定用）上に、前記調製例５の試薬堆積液を、単位面積（ｃｍ２）当り２００μＬとなるように塗布し、室温（２５℃）環境下で２時間真空乾燥して、平均厚み５μｍの試薬堆積部を形成した。以上により、比較例２のテストライン用転写媒体を得た。
【０１９０】
上記の工程以外は、実施例１と同様にして、比較例２のイムノクロマトアッセイ（検査装置１０）を作製し、実施例１と同様の評価を行った。結果を表２に示した。
【０１９１】
次に、実施例１〜６及び比較例１〜２の検査装置の内容について、表１−１及び表１−２に、まとめて示した。
【０１９２】
【表１−１】
2018048850.tif 000003
＊ＰＶＰ：ポリビニルピロリドン；水溶性樹脂
＊ＰＥＧ：ポリエチレンオキサイド；水溶性樹脂
＊ＡＣ：アクリル酸系共重合体；水溶性樹脂
＊塗布液Ａ（調製例２）：水不溶性樹脂を含む塗布液、カルナバワックス９０質量部、エチレン−酢酸ビニル共重合体１質量部、スチレン−ブタジエン共重合体４質量部、ブタジエンゴム４質量部、アクリロニトリル−ブタジエン共重合体１質量部、及びトルエン／メチルエチルケトン（体積比７／３）溶媒６００質量部からなる塗布液（株式会社リコー製、Ｂ１１０ＡＸ剥離液）
＊塗布液Ｂ（調製例１２）：水不溶性樹脂を含む塗布液、ポリエチレンワックス９０質量部、エチレン−酢酸ビニル共重合体１質量部、スチレン−ブタジエン共重合体４質量部、ブタジエンゴム４質量部、アクリロニトリル−ブタジエン共重合体１質量部、及びトルエン／メチルエチルケトン（体積比７／３）溶媒６００質量部からなる塗布液
＊塗布液Ｃ（調製例１３）：水不溶性樹脂を含む塗布液、ポリビニルブチラール樹脂（積水化学工業株式会社製、ＢＬ−１０、ブチラール化度７２ｍｏｌ％）５質量部、及びエタノール９５質量部からなる塗布液
＊塗布液Ａ＋塗布液Ｃ（調製例２＋調製例１３）：前記塗布液Ａによる層と塗布液Ｃによる層との積層
【０１９３】
【表１−２】
2018048850.tif 000004
＊塗布液Ｄ（調製例３）：水不溶性樹脂を含む塗布液、ポリビニルブチラール樹脂（積水化学工業株式会社製、ＢＬ−１、ブチラール化度６４ｍｏｌ％）５質量部、及びエタノール９５質量部からなる塗布液
【０１９４】
【表２】
2018048850.tif 000005
【０１９５】
表１−１、表１−２、及び表２の結果から、実施例１〜６は、非特異的な吸着による発色を検出することなく、高濃度に発色するラインが得られた。
これに対して、比較例１は、試薬堆積部を有さないために、検査液を展開初期の高濃度な標識抗体による樹脂層表面への非特異的な吸着が見られた。また、流路部材表面に結合する抗体もなかったことから発色強度の低い結果となった。
また、比較例２は、テストラインにおいて、剥離層兼試薬固相化層表面に固相化試薬を有していないため、樹脂層（ライン）表面での発色が起こらなかったことから、発色強度の低い結果となった。
【０１９６】
本発明の態様は、例えば、以下のとおりである。
＜１＞  検体を含む検査液を流すための多孔質の流路部材と、
前記流路部材上の少なくとも一箇所に設けられた樹脂層と、
前記樹脂層が水不溶性樹脂を含み、前記樹脂層の前記流路部材と対向する面に、前記検体と反応する抗体を含む固相化試薬と、水溶性樹脂及び前記固相化試薬を含む水溶性の試薬堆積部と、を有し、
前記流路部材と前記樹脂層との間に、前記試薬堆積部が配置されていることを特徴とする検査装置である。
＜２＞  検体を含む検査液を流すための多孔質の流路部材と、
前記流路部材上に第一の樹脂層と、第二の樹脂層と、を有し、
前記第二の樹脂層が、前記流路部材に対向する面に、標識抗体を有し、
前記第一の樹脂層が水不溶性樹脂を含み、前記第一の樹脂層の前記流路部材と対向する面に、捕捉抗体と、水溶性樹脂及び前記捕捉抗体を含む水溶性の試薬堆積部と、を有し、
前記流路部材と前記第一の樹脂層との間に、前記試薬堆積部が配置されている前記＜１＞に記載の検査装置である。
＜３＞  前記試薬堆積部が、前記検査液によって溶出される前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の検査装置である。
＜４＞  前記樹脂層が、前記検査液によって溶出されない前記＜１＞及び＜３＞のいずれかに記載の検査装置である。
＜５＞  前記第一の樹脂層が、前記検査液によって溶出されない前記＜２＞から＜３＞のいずれかに記載の検査装置である。
＜６＞  前記試薬堆積部の平均厚みが、１μｍ以上２０μｍ以下である前記＜１＞から＜５＞のいずれかに記載の検査装置である。
＜７＞  前記試薬堆積部における水溶性樹脂が、ポリ（エチレンオキサイド）、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸、及びアクリル樹脂から選択される少なくとも１種である前記＜１＞から＜６＞のいずれかに記載の検査装置である。
＜８＞  前記＜１＞から＜７＞のいずれかに記載の検査装置と、
検体を採取するための検体採取手段、及び前記検体を処理するための液体から選択される少なくとも１つと、
を有することを特徴とする検査キットである。
＜９＞  支持体と、
前記支持体上に設けられた剥離層と、
前記剥離層上に設けられた試薬固相化層と、を有し、
前記試薬固相化層の表面が、検体と反応する試薬及び試薬堆積部を有することを特徴とする検査装置製造用転写媒体である。
＜１０＞  前記＜１＞から＜７＞のいずれかに記載の検査装置を製造する方法であって、
前記＜９＞に記載の検査装置製造用転写媒体の試薬固相化層と多孔質の流路部材とを接触させて、前記試薬固相化層を前記流路部材に転写する工程を含むことを特徴とする検査装置の製造方法である。
＜１１＞  支持体と、
前記支持体上に設けられた剥離層兼試薬固相化層と、を有し、
前記剥離層兼試薬固相化層の表面が、検体と反応する試薬及び試薬堆積部を有することを特徴とする検査装置製造用転写媒体である。
＜１２＞  前記＜１＞から＜７＞のいずれかに記載の検査装置を製造する方法であって、
前記＜１１＞に記載の検査装置製造用転写媒体の剥離層兼試薬固相化層と多孔質の流路部材とを接触させて、前記剥離層兼試薬固相化層を前記流路部材に転写する工程を含むことを特徴とする検査装置の製造方法である。
【０１９７】
前記＜１＞から＜７＞のいずれかに記載の検査装置、前記＜８＞に記載の検査キット、前記＜９＞及び＜１１＞のいずれかに記載の検査装置製造用転写媒体、並びに前記＜１０＞及び＜１２＞のいずれかに記載の検査装置の製造方法は、従来における前記諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。
【符号の説明】
【０１９８】
１０      検査装置
１１      基材
１２      流路部材
１４      吸収部材
１５      樹脂層
１５ａ      樹脂層
１５ｂ      樹脂層（テストライン）
１５ｃ      樹脂層（コントロールライン）
１６      標識抗体（試薬の一例）
１７      捕捉抗体（試薬の一例）
１８      捕捉抗体（試薬の一例）
１９      コンジュゲートエリア
２０      試薬堆積部
３０      検査液（検体の一例）
５０      検査キット
１００      検査装置製造用転写媒体
１０１      支持体
１０２      剥離層
１０３      試薬固相化層
１０５      剥離層兼試薬固相化層
１５１      両親媒性樹脂（親水性）
１５２      親水基
１５３      疎水基
１５４      両親媒性樹脂（疎水性）
１５５      疎水性樹脂
１５６      水溶性樹脂
【先行技術文献】
【特許文献】
【０１９９】
【特許文献１】特開２０１０−２５６３０９号公報
【図１】
2018048850.tif 000006
【図２】
2018048850.tif 000007
【図３】
2018048850.tif 000008
【図４Ａ】
2018048850.tif 000009
【図４Ｂ】
2018048850.tif 000010
【図４Ｃ】
2018048850.tif 000011
【図４Ｄ】
2018048850.tif 000012
【図５Ａ】
2018048850.tif 000013
【図５Ｂ】
2018048850.tif 000014
【図５Ｃ】
2018048850.tif 000015
【図５Ｄ】
2018048850.tif 000016
【図６】
2018048850.tif 000017
【図７】
2018048850.tif 000018
【図８Ａ】
2018048850.tif 000019
【図８Ｂ】
2018048850.tif 000020
【図９】
2018048850.tif 000021
【図１０Ａ】
2018048850.tif 000022
【図１０Ｂ】
2018048850.tif 000023