(57)【要約】      （修正有）【課題】完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体を含む安定な製剤の提供。【解決手段】ＬＩＧＨＴ抗体又は結合する結合剤及び緩衝剤としての４．５〜５５ｍＭクエン酸塩とポリソルベートを含み、製剤のｐＨがｐＨ６以下である液体医薬品製剤及び凍結乾燥医薬品製剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩｇＧ４抗体のＦｃ領域の少なくとも一部を含む結合剤；および緩衝剤としての約５〜約５０ｍＭクエン酸塩を含む安定な製剤であって、該製剤のｐＨが約ｐＨ６以下かつ結合剤のｐＩ以下である、前記製剤。
【請求項２】
結合剤が抗体である、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
結合剤または抗体が、リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ヘルペスウイルス進入メディエータについてヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄと競合する、リンパ球上で発現される受容体（ＬＩＧＨＴ）に結合する、請求項１または２に記載の製剤。
【請求項４】
抗ＬＩＧＨＴ結合剤または抗体が重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が配列番号１、２および３のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖可変領域が配列番号４、５および６のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む、請求項３に記載の製剤。
【請求項５】
抗体が配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体である、請求項３または４に記載の製剤。
【請求項６】
結合剤または抗体がＣ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体５型（ＣＸＣＲ５）に結合する、請求項２に記載の製剤。
【請求項７】
抗ＣＸＣＲ５結合剤または抗体が重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が配列番号１５、１６および１７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖可変領域が配列番号１８、１９および２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む、請求項６に記載の製剤。
【請求項８】
抗体が配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体である、請求項６または７に記載の製剤。
【請求項９】
抗体濃度が約５〜約２８０ｍｇ／ｍＬである、請求項２〜８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０】
抗体濃度が約１５０ｍｇ／ｍＬである、請求項３〜５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１１】
抗体濃度が約５０ｍｇ／ｍＬである、請求項３〜５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１２】
抗体濃度が約２０ｍｇ／ｍＬである、請求項６〜８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１３】
抗体濃度が約１００ｍｇ／ｍＬである、請求項６〜８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１４】
クエン酸濃度が約５〜約１５ｍＭである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１５】
クエン酸濃度が約１０ｍＭである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１６】
クエン酸バッファーがクエン酸ナトリウム二水和物である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１７】
製剤のｐＨが約ｐＨ５〜約ｐＨ６である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１８】
製剤のｐＨが約ｐＨ５．０、約ｐＨ５．５、および約ｐＨ６．０からなる群から選択される、請求項１７に記載の製剤。
【請求項１９】
結合剤または抗体のｐＩが約６．８〜約７．２である、請求項１〜５、９〜１１、または１４〜１８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２０】
結合剤または抗体のｐＩが約７．６〜約８．４である、請求項１〜２、６〜９、または１２〜１８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２１】
界面活性剤をさらに含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２２】
界面活性剤の濃度が約０．００１％ｗ／ｖ〜約０．１％ｗ／ｖである、請求項２１に記載の製剤。
【請求項２３】
界面活性剤がポリソルベートである、請求項２１または２２に記載の製剤。
【請求項２４】
ポリソルベートがポリソルベート２０である、請求項２３に記載の製剤。
【請求項２５】
ポリソルベート２０の濃度が約０．００５％ｗ／ｖである、請求項２４に記載の製剤。
【請求項２６】
ポリソルベート２０の濃度が約０．０１％ｗ／ｖである、請求項２４に記載の製剤。
【請求項２７】
ポリソルベート２０の濃度が約０．０２％ｗ／ｖである、請求項２４に記載の製剤。
【請求項２８】
等張化剤をさらに含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２９】
等張化剤の濃度が約０．１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖである、請求項２８に記載の製剤。
【請求項３０】
等張化剤がサッカライドである、請求項２８または２９に記載の製剤。
【請求項３１】
サッカライドがマンニトールである、請求項３０に記載の製剤。
【請求項３２】
マンニトールの濃度が約１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖである、請求項３１に記載の製剤。
【請求項３３】
マンニトールの濃度が約４％である、請求項３２に記載の製剤。
【請求項３４】
サッカライドがスクロースである、請求項３０に記載の製剤。
【請求項３５】
スクロースの濃度が約１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖである、請求項３４に記載の製剤。
【請求項３６】
スクロースの濃度が約５％ｗ／ｖである、請求項３５に記載の製剤。
【請求項３７】
スクロースの濃度が約６％ｗ／ｖである、請求項３５に記載の製剤。
【請求項３８】
スクロースの濃度が約４．５％ｗ／ｖである、請求項３５に記載の製剤。
【請求項３９】
等張化剤が塩化ナトリウムである、請求項２８または２９に記載の製剤。
【請求項４０】
塩化ナトリウムの濃度が約０．０１％〜約１％である、請求項３９に記載の製剤。
【請求項４１】
塩化ナトリウムの濃度が約０．２％である、請求項４０に記載の製剤。
【請求項４２】
等張化剤がスクロースと塩化ナトリウムの組合せである、請求項２８または２９に記載の製剤。
【請求項４３】
スクロースの濃度が約１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖである、請求項４２に記載の製剤。
【請求項４４】
塩化ナトリウムの濃度が約０．０１％〜約１％である、請求項４２に記載の製剤。
【請求項４５】
スクロースの濃度が約６％ｗ／ｖであり、塩化ナトリウムの濃度が約０．２％である、請求項４２に記載の製剤。
【請求項４６】
スクロースの濃度が約４．５％ｗ／ｖであり、塩化ナトリウムの濃度が約０．２％である、請求項４２に記載の製剤。
【請求項４７】
アミノ酸をさらに含む、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項４８】
アミノ酸濃度が約０．１％ｗ／ｖ〜約５％ｗ／ｖである、請求項４７に記載の製剤。
【請求項４９】
アミノ酸がプロリンまたはアルギニンである、請求項４７または４８に記載の製剤。
【請求項５０】
プロリンまたはアルギニン濃度が約１％ｗ／ｖ〜約２％ｗ／ｖである、請求項４９に記載の製剤。
【請求項５１】
プロリン濃度が約１．５％ｗ／ｖである、請求項５０に記載の製剤。
【請求項５２】
アルギニン濃度が約１％ｗ／ｖである、請求項５０に記載の製剤。
【請求項５３】
液体製剤である、請求項１〜５２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５４】
凍結乾燥製剤である、請求項１〜５２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５５】
＋５℃で少なくとも６カ月間安定である、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５６】
＋５℃で少なくとも９カ月間安定である、請求項１〜５５のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５７】
ｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に抗ＬＩＧＨＴ抗体を含む参照抗ＬＩＧＨＴ製剤またはｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に抗ＬＩＧＨＴ抗体を含む参照抗ＣＸＣＲ５製剤と比較して、凝集体、半分子、分解産物、低分子量タンパク質、高分子量タンパク質、および抗体の酸性／塩基性／中性アイソフォームの再構成からなる群から選択される少なくとも１つの副産物の量の減少を示す、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項５８】
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖と
を含む、約１５０ｍｇ／ｍＬの完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．００５％のポリソルベート２０；および
ｄ）約４％のマンニトール
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、皮下投与にとって好適な安定な液体抗体製剤。
【請求項５９】
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約５０ｍｇ／ｍＬの完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；および
ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、静脈内投与にとって好適な安定な液体抗体製剤。
【請求項６０】
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約５０ｍｇ／ｍＬの完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０；
ｄ）約５％のスクロース；および
ｅ）約１．５％のプロリン
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、静脈内投与にとって好適な安定な凍結乾燥抗体製剤。
【請求項６１】
ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約２０ｍｇ／ｍＬのヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体５型）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０２％のポリソルベート２０；
ｄ）約６％のスクロース；および
ｅ）約０．２％の塩化ナトリウム
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤。
【請求項６２】
ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約１００ｍｇ／ｍＬのヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体５型）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０；
ｄ）約４．５％のスクロース；
ｅ）約０．２％の塩化ナトリウム；および
ｆ）約１％のアルギニン
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤。
【請求項６３】
１）請求項１〜６２のいずれか１項に記載の製剤と、２）該製剤の投与および使用に関するラベルまたは指示書とを含む容器を含むキット。
【請求項６４】
ラベルが以下：
製剤の投与のための指示書、
製剤の使用のための指示書、
製剤の保存条件に関する指示書、
製剤および／もしくはキットのロットおよびバッチ番号に関する情報、
製剤の組成に関する情報、
安全性情報、
製剤の投与と関連する、可能性のある有害反応、二次的効果、および／もしくは副作用に関する情報、または
製剤の可能性のある適応症および／もしくは禁忌に関する情報
のうちの１つまたは複数を含む、請求項６３に記載のキット。
【請求項６５】
請求項１〜６２のいずれか１項に記載の製剤を含むシリンジ、カートリッジ、バイアル、アンプル、またはオートインジェクターのような充填済みデバイスまたは充填済み容器。
【請求項６６】
請求項６５に記載の充填済みシリンジ、カートリッジ、バイアル、アンプル、またはオートインジェクターを含む、請求項６３または６４に記載のキット。
【請求項６７】
請求項１〜５、９〜１１、１４〜１９、２１〜２６、２８〜３６、４７〜５１、５３〜５７、および５８〜６０のいずれか１項に記載の製剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、炎症性腸疾患を処置するための方法。
【請求項６８】
請求項１〜２、６〜８、９、１２〜１３、１４〜１８、２０、２１〜２７、２８〜２９、３４〜３５、３７〜４６、４７〜５０、５２、５３〜５７、および６１〜６２のいずれか１項に記載の製剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、関節リウマチを処置するための方法。
【請求項６９】
ヒトまたは動物の身体の診断または処置の方法における使用のための請求項１〜６２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項７０】
炎症性腸疾患の処置における使用のための請求項１〜５、９〜１１、１４〜１９、２１〜２６、２８〜３６、４７〜５１、５３〜５７、および５８〜６０のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項７１】
関節リウマチの処置における使用のための請求項１〜２、６〜８、９、１２〜１３、１４〜１８、２０、２１〜２７、２８〜２９、３４〜３５、３７〜４６、４７〜５０、５２、５３〜５７、および６１〜６２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項７２】
請求項１〜６２のいずれか１項に記載の製剤を調製するための方法であって、該製剤の成分を混合すること、およびｐＨを調整することを含み、調製が滅菌条件下で行われるか、または製剤が成分の混合およびｐＨ調整もしくはその両方の後に滅菌される、前記方法。
【請求項７３】
ａ）抗ＬＩＧＨＴ結合剤を用意すること；
ｂ）約５〜約５０ｍＭのクエン酸バッファー中に抗ＬＩＧＨＴ結合剤を再懸濁すること；および
ｃ）製剤のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ６．０に調整すること
を含む、安定な抗体製剤を調製するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、全体が参照によって本明細書に組み入れられる２０１２年３月２６日に出願された米国仮特許出願第６１／６１５，５３９号の優先権を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
ヒトＬＩＧＨＴ抗原は、慢性炎症性自己免疫疾患のプロセスに関与してきた１つの潜在的なサイトカイン標的である。ＴＮＦスーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）のリガンドのメンバーとして、ＬＩＧＨＴはＴＮＦＳＦ１４またはＣＤ２５８としても知られる。ＬＩＧＨＴは、厳密に調節される様式で活性化の際にＴ細胞の表面上に発現される。しかしながら、ＬＩＧＨＴはまた、未熟な樹状細胞の表面上ならびに腸のＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上に検出可能なレベルで構成的に存在する。ＬＩＧＨＴは、リンホトキシンβ受容体（ＬＴβＲ）、ヘルペスウイルス進入メディエータ（ＨＶＥＭ）、およびデコイ受容体３（ＤｃＲ３）などの３つのＴＮＦスーパーファミリー受容体に結合することにより、その生物学的効果を媒介する。ＬＩＧＨＴを発現するリンパ球は、ヒトにおいてＩＢＤ様症状を誘導する可能性があり、ＬＩＧＨＴ発現の増加は、活動性クローン病および移植片対宿主疾患のような他の炎症障害を有する患者において観察された。
【０００３】
パーキットリンパ腫受容体（ＢＬＲ１）としても知られるＣＸＣＲ５、ＣＤ１８５、ＭＤＲ１５、およびＭＧＣ１１７３４７は、ＣＸＣケモカイン受容体ファミリーのメンバーであるＧタンパク質共役受容体である。プロセッシングされていないＣＸＣＲ５前駆体は、３７２アミノ酸の長さであり、４２ＫDの分子量を有する。ＣＸＣＲ５は、特定の解剖
学的区画内でのＢ細胞の移動および局在化における役割を有する。末梢リンパ節を欠くノックアウトマウスは、より少ないパイアー斑を有し、低下したＢ細胞レベルを有する。ＢＬＣとしても知られるＣＸＣＬ１３は、ＣＸＣＲ５のリガンドである。ＣＸＣＬ１３は、Ｂ細胞の化学誘引物質である。
【０００４】
抗ＬＩＧＨＴ結合剤および抗ＣＸＣＲ５結合剤はそれぞれ治療的に関連し、これらの結合剤のそれぞれを、炎症疾患の処置のために、対象、特に、ヒト対象に投与することができる医薬品に製剤化する必要がある。
【０００５】
静脈内または皮下投与にとって好適な抗ＬＩＧＨＴ結合剤または抗ＣＸＣＲ５結合剤を含有する医薬製剤を開発するためには、結合剤を約２０ｍｇ／ｍＬ以上、通常は約１００〜１５０ｍｇ／ｍＬ、およびさらには最大で２５０ｍｇ／ｍＬに濃縮しなければならない。そのような高濃度では、粘度の増加、ｐＨのシフト、溶液の色の変化、ならびに眼に見える、および眼に見えない粒子の形成などの多くの合併症が生じ得る。
【０００６】
これらの結合剤の製剤化は、これらの薬剤がそのような高濃度では凝集する傾向が高いという事実によってさらに複雑化される。
【０００７】
ＩｇＧ４抗体の製剤化は、ＩｇＧ４抗体は溶液中では高濃度で半分子を形成する傾向があるという事実によってさらに複雑化される。しかしながら、ＩｇＧ４抗体は、それらが低下したエフェクター機能を有するため、治療対象となる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
これらの必要性および他の必要性を満たすために、高度に安定なＩｇＧ４結合剤製剤が
本発明で提供される。高度に安定なＩｇＧ４結合剤製剤は、驚くべきことに、製剤のｐＨが約ｐＨ６以下かつ結合剤の等電点（ｐＩ）以下である、ＩｇＧ４結合剤とクエン酸バッファーとを含む液体および凍結乾燥粉末の形態で見出された。これらの製剤は、製剤中の抗体などの結合剤の濃度を増加させる際に抗体などの結合剤の二量体化をもたらすことが多い従来の製剤化を向上させる。特に、本発明の製剤は、製剤中の成分である、凝集体、半分子、分解産物、低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）、ならびに抗体などの結合剤の酸性、塩基性、および中性アイソフォームの再構成を含む望ましくない副産物の量を減少させる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
ある態様において、本発明は、ＩｇＧ４抗体のＦｃ領域の少なくとも一部を含む結合剤；および緩衝剤としての約５〜約５０ｍＭのクエン酸塩を含む安定な製剤であって、製剤のｐＨが約ｐＨ６以下かつ結合剤のｐＩ以下である、前記製剤を提供する。本発明のある実施形態においては、結合剤は抗体である。
【００１０】
本発明のある実施形態においては、結合剤または抗体がリンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ヘルペスウイルス進入メディエータについてヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄと競合する、リンパ球上で発現される受容体（ＬＩＧＨＴ）に結合する。本発明の特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ結合剤または抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号１、２および３のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖可変領域は配列番号４、５および６のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む。本発明の他の特定の実施形態においては、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体である。
【００１１】
本発明のある実施形態においては、結合剤または抗体は、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体５型（ＣＸＣＲ５）に結合する。本発明の特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤または抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号１５、１６および１７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖可変領域は配列番号１８、１９および２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む。本発明の他の特定の実施形態においては、抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体である。
【００１２】
本発明のある実施形態においては、抗体濃度は、約５〜約２８０ｍｇ／ｍＬである。本発明のある特定の実施形態においては、抗体濃度は、約１５０ｍｇ／ｍＬである。本発明の他の特定の実施形態においては、抗体濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬである。本発明のさらに特定の実施形態においては、抗体濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬである。本発明のまた、さらに特定の実施形態においては、抗体濃度は、約１００ｍｇ／ｍＬである。
【００１３】
本発明のある実施形態においては、クエン酸濃度は、約５〜約１５ｍＭである。本発明のいくつかの実施形態においては、クエン酸濃度は、約１０ｍＭである。本発明のいくつかの実施形態においては、クエン酸バッファーは、クエン酸ナトリウム二水和物である。
【００１４】
本発明のある実施形態においては、製剤のｐＨは、約ｐＨ５〜約ｐＨ６である。本発明の特定の実施形態においては、製剤のｐＨは、約ｐＨ５．０、約ｐＨ５．５、および約ｐＨ６．０からなる群から選択される。
【００１５】
本発明のある特定の実施形態においては、結合剤または抗体のｐＩは、約６．８〜約７．２である。本発明の代替的な特定の実施形態においては、結合剤または抗体のｐＩは、約７．６〜約８．４である。
【００１６】
本発明のある特定の実施形態においては、製剤は、界面活性剤をさらに含む。本発明のある特定の実施形態においては、界面活性剤の濃度は、約０．００１％ｗ／ｖ〜約０．１％ｗ／ｖである。本発明のある実施形態においては、界面活性剤はポリソルベートである。本発明のある特定の実施形態においては、ポリソルベートは、ポリソルベート２０である。本発明のいくつかの特定の実施形態においては、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００５％ｗ／ｖである。本発明の代替的な特定の実施形態においては、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０１％ｗ／ｖである。本発明のさらに代替的な特定の実施形態においては、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０２％ｗ／ｖである。
【００１７】
本発明のある実施形態においては、製剤は、等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ  ａｇｅｎｔ）をさらに含む。本発明のある特定の実施形態においては、等張化剤の濃度は、約０．１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖである。本発明のある特定の実施形態においては、等張化剤はサッカライドである。本発明のいくつかの特定の実施形態においては、サッカライドはマンニトールである。本発明の他の特定の実施形態においては、マンニトールの濃度は、約１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖである。本発明のまた、さらに他の特定の実施形態においては、マンニトールの濃度は約４％である。本発明の代替的な特定の実施形態においては、サッカライドはスクロースである。本発明のいくつかの特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖである。本発明のいくつかの特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約５％ｗ／ｖである。本発明の代替的な特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約６％ｗ／ｖである。本発明のまた、さらに他の特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約４．５％ｗ／ｖである。本発明のさらに特定の代替的な実施形態においては、等張化剤は塩化ナトリウムである。本発明のいくつかの特定の実施形態においては、塩化ナトリウムの濃度は、約０．０１％〜約１％である。本発明のいくつかの特定の実施形態においては、塩化ナトリウムの濃度は約０．２％である。本発明の他の特定の実施形態においては、等張化剤は、スクロースと塩化ナトリウムとの組合せである。本発明の特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖである。本発明の他の特定の実施形態においては、塩化ナトリウムの濃度は約０．０１％〜約１％である。本発明の代替的な特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約６％ｗ／ｖであり、塩化ナトリウムの濃度は約０．２％である。本発明のまた、さらに代替的な特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約４．５％ｗ／ｖであり、塩化ナトリウムの濃度は約０．２％である。
【００１８】
本発明のある実施形態においては、製剤はアミノ酸をさらに含む。本発明のある特定の実施形態においては、アミノ酸濃度は約０．１％ｗ／ｖ〜約５％ｗ／ｖである。本発明のある特定の実施形態においては、アミノ酸はプロリンまたはアルギニンである。本発明の特定の実施形態においては、プロリンまたはアルギニン濃度は約１％ｗ／ｖ〜約２％ｗ／ｖである。本発明の他の特定の実施形態においては、プロリン濃度は約１．５％ｗ／ｖである。本発明の代替的な特定の実施形態においては、アルギニン濃度は約１％ｗ／ｖである。
【００１９】
本発明のある実施形態においては、製剤は液体製剤である。本発明の他の特定の実施形態においては、製剤は凍結乾燥製剤である。
【００２０】
本発明のある実施形態においては、製剤は＋５℃で少なくとも６カ月間安定である。本発明の代替的な実施形態においては、製剤は＋５℃で少なくとも９カ月間安定である。
【００２１】
本発明のある実施形態においては、製剤は、ｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に抗ＬＩＧＨＴ抗体を含む参照抗ＬＩＧＨＴ製剤またはｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に抗ＬＩＧＨＴ抗体を含む参照抗ＣＸＣＲ５製剤と比較して、凝集体、半分子、分解産物
、低分子量タンパク質、高分子量タンパク質および抗体の酸性／塩基性／中性アイソフォームの再構成からなる群から選択される少なくとも１つの副産物の量の減少を示す。
【００２２】
本発明のある特定の実施形態においては、本発明は、
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約１５０ｍｇ／ｍＬの完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．００５％のポリソルベート２０；および
ｄ）約４％のマンニトール
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、皮下投与にとって好適な安定な液体抗体製剤を提供する。
【００２３】
本発明の他の特定の実施形態においては、本発明は、
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約５０ｍｇ／ｍＬの完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；および
ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、静脈内投与にとって好適な安定な液体抗体製剤を提供する。
【００２４】
本発明のまた、さらに他の特定の実施形態においては、本発明は、
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約５０ｍｇ／ｍＬの完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０；
ｄ）約５％のスクロース；および
ｅ）約１．５％のプロリン；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、静脈内投与にとって好適な安定な凍結乾燥抗体製剤を提供する。
【００２５】
本発明の代替的な特定の実施形態においては、本発明は、
ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約２０ｍｇ／ｍＬのヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体型５）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０２％のポリソルベート２０；
ｄ）約６％のスクロース；および
ｅ）約０．２％の塩化ナトリウム；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤を提供する。
【００２６】
本発明のさらなる代替的な特定の実施形態においては、本発明は、
ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約１００ｍｇ／ｍＬのヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体型５）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０；
ｄ）約４．５％のスクロース；
ｅ）約０．２％の塩化ナトリウム；および
ｆ）約１％のアルギニン；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤を提供する。
【００２７】
本発明のある実施形態においては、本発明は、１）請求項のいずれか一項に記載の製剤、ならびに２）製剤の投与および使用に関するラベルまたは指示書を含む容器を含むキットを提供する。本発明のある実施形態においては、ラベルは、以下のもの：製剤の投与のための指示書、製剤の使用のための指示書、製剤の保存条件に関する指示書、製剤および／もしくはキットのロット番号およびバッチ番号に関する情報、製剤の組成に関する情報、安全性情報、製剤の投与と関連する、可能性のある有害反応、二次的効果、および／もしくは副作用に関する情報、または製剤の可能性のある適応症および／もしくは禁忌に関する情報のうちの１つまたは複数を含む。
【００２８】
本発明のある実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を含むシリンジ、カートリッジ、バイアル、アンプル、またはオートインジェクターのような充填済みデバイスまたは充填済み容器を提供する。ある他の実施形態においては、本発明は、そのような充填済みシリンジ、カートリッジ、バイアル、アンプル、またはオートインジェクターを含むキットを提供する。
【００２９】
ある実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、炎症性腸疾患を処置するための方法を提供する。
【００３０】
他の実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、関節リウマチを処置するための方法を提供する。
【００３１】
ある実施形態においては、本発明は、ヒトまたは動物の身体の診断または処置の方法における使用のための製剤を提供する。特定の実施形態においては、製剤は、炎症性腸疾患の処置において用いられる。代替的な実施形態においては、製剤は、関節リウマチの処置において用いられる。
【００３２】
本発明のある実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を調製するための方法であって、製剤の成分を混合すること、およびｐＨを調整することを含み、調製が滅菌条件下で行われるか、または製剤が成分の混合およびｐＨ調整もしくはその両方の後に滅菌される、前記方法を提供する。
【００３３】
本発明のある特定の実施形態においては、本発明は、ａ）抗ＬＩＧＨＴ結合剤を用意すること；ｂ）約５〜約５０ｍＭのクエン酸バッファー中に抗ＬＩＧＨＴ結合剤を再懸濁すること；およびｃ）製剤のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ６．０に調整することを含む、安定な抗体製剤を調製するための方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】５．５ｍｇ／ｍＬの濃度でｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に製剤化された、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体の等電点（ｐＩ）を決定するために用いられた変性等電点電気泳動実験の結果を示すゲルの写真である（「元の製剤」、「ＰＢＳ製剤」、または「参照ロット」）。レーン１および５：ＩＥＦ  Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  Ｈｉｇｈ  Ｒａｎｇｅ  ｐＩ  ５〜１０．５；レーン２および４：参照ロットの第１のバッチ；レーン３および４：参照ロットの第２のバッチ。ｐＩ値は数値で示される。
【図２】還元および非還元条件下で異なる参照ロットバッチを比較したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。レーン１および１０：Ｂｉｏｒａｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｐｌｕｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔａｎｄａｒｄ；レーン５：空；レーン２：非還元条件下での参照ロットの第１のバッチ；レーン３および４：非還元条件下での参照ロットの第２のバッチ；レーン６：還元条件下での参照ロットの第１のバッチ；レーン７および８：還元条件下での参照ロットの第２のバッチ；ならびにレーン９：システム対照。サイズは行内の数値により示される。
【図３】参照ロットの第１および第２のバッチの抗原結合活性を決定するために用いられたＥＬＩＳＡグラフを示す図である。
【図４】参照ロットの第１のバッチのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）のクロマトグラムを示す図である。図４に示されるように、ＳＥＣは高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）、例えば、ダイマー／オリゴマー（ＲＲＴ０．８）または凝集体、および低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）または分解産物を検出した。参照ロットバッチの第１のバッチは、９７％の純度のモノマー含量を有していた。
【図５】参照ロットの第１のバッチに関する弱陽イオン交換クロマトグラムを示す図である。図５に示されるように、酸性、中性、および塩基性アイソフォームの再構成が安定性試験の間に起こった。参照ロットの第１のバッチは、４２．３／５５．６／１．９％の酸性／中性／塩基性アイソフォームの分布を有していた。
【図６】参照ロットの第１のバッチの示差走査熱量測定サーモグラムを示す図である。図６に示されるように、３つのドメインの抗体は、６８℃、７５℃および７８℃で開裂した。
【図７】濾過されていない参照ロットの第１のバッチの動的光散乱パターンを示す図である。ＤＬＳを用いて、参照ロット抗体モノマーの第１のバッチおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定した。
【図８】濾過された参照ロットの第１のバッチの動的光散乱パターンを示す図である。ＤＬＳを用いて、参照ロット抗体モノマーの第１のバッチおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定した。
【図９】高い抗体濃度の製剤のための医薬品製造プロセスのフローダイアグラムである。
【図１０】製剤１４の動的光散乱パターンを示す図である。ＤＬＳを用いて、抗体モノマーおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定した。
【図１１】リードＣＸＣＲ５抗体のｐＩ（等電点）を決定するための等電点電気泳動の結果を示すゲルの写真である。レーン１、６：ＩＥＦ  Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ  Ｈｉｇｈ  Ｒａｎｇｅ  ｐＩ  Ｋｉｔ；レーン２、４：参照標準リード抗体ＬＰ０８０３１；およびレーン３、５：リード抗体原薬、ＲＳＮ０１５１。
【図１２】還元および非還元条件下で異なる原薬バッチを比較したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。また、ゲルを用いて、リードＣＸＣＲ５抗体の分子量、および任意の凝集体の存在を決定した。
【図１３】ＣＸＣＲ５抗原の２８マーのペプチドへのリードＣＸＣＲ５抗体の抗原結合活性を決定するために用いられたＥＬＩＳＡグラフである。
【図１４】ストレスを加えたリードＣＸＣＲ５抗体のＳＥＣクロマトグラムである。ＳＥＣは、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）、例えば、ダイマー／オリゴマーまたは凝集体および低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）または分解産物を検出することができた。リードＣＸＣＲ５抗体は、９９％の純度のモノマー含量を有していた。
【図１５】リードＣＸＣＲ５抗体の酸性、中性、および塩基性アイソフォームを決定するために用いられたＷＣＸクロマトグラムである。リードＣＸＣＲ５抗体は、１４／８５／１％の酸性／中性／塩基性アイソフォームの分布を有していた。
【図１６】抗体モノマーおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定するために用いられたＤＬＳ測定である。
【図１７】酢酸バッファーｐＨ５．０（左）およびｐＨ５．５（右）中；それぞれのｖ．ＷＦＩ（注射用水）および熱ストレス後のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。この図面は、酢酸塩が好適なバッファー系であることを示す。
【図１８】ヒスチジンバッファーｐＨ６．０（左）、ｐＨ５．５（中央）、およびｐＨ５．０（右）中；それぞれのｖ．ＷＦＩ（注射用水）および熱ストレス後のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。この図面は、ヒスチジンが好適なバッファーであることを示す。
【図１９】ＵＦ／ＤＦ（左）後および濾過（右）後；それぞれのｖ．ＷＦＩ（注射用水）および熱ストレス後のＴＲＩＳバッファーｐＨ７．５中のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。この図面は、ＴＲＩＳが不適合バッファー系であることを示す。
【図２０】ＵＦ／ＤＦおよび濾過後のクエン酸バッファーｐＨ６．０中のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。
【図２１】ＵＦ／ＤＦおよび濾過後の酢酸バッファーｐＨ５．５中のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。
【図２２】ＵＦ／ＤＦおよび濾過後のコハク酸バッファーｐＨ５．０中のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。
【図２３】ＵＦ／ＤＦおよび濾過後のヒスチジンバッファーｐＨ５．０中のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。
【図２４】ＵＦ／ＤＦおよび濾過後のアルギニンバッファーｐＨ６．０中のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。
【図２５】機械的ストレス（３５０ｒｐｍ、２．５ｈ、ＲＴ）後の、異なる界面活性剤を含む（界面活性剤、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、Ｌｕｔｒｏｌ  Ｆ６８、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＲＨ４０、Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５、およびＳＤＳを含まない）リードＣＸＣＲ５抗体ＬＡ＿０９＿０１６溶液の外観の写真である。
【図２６】ＳＥＣにより分析された、加速条件下でのダイマーの増加を示すグラフである。４つ全部のヒスチジン製剤中での３カ月の保存後に最大で１０％のダイマー形成の増加を見ることができる。酢酸製剤は、最大で６％のダイマー含量の増加を示した。４つ全部のクエン酸製剤において、ダイマー濃度は、＋４０℃で３カ月後でも２％未満であった。
【図２７】ＷＣＸにより分析された、加速条件下での塩基性アイソフォームの増加を示すグラフである。ヒスチジンは、加速条件下ではリードＣＸＣＲ５抗体安定性に関してより悪い。４つ全部の酢酸製剤について、塩基性アイソフォームのわずかな増加を見ることができる。興味深いことに、４つのクエン酸製剤を識別することはできなかった。
【図２８】ＷＣＸにより分析された、加速条件下での中性アイソフォームの減少を示すグラフである。この図面は、ヒスチジン製剤に関する中性アイソフォームの強力な減少を示す。わずかな減少が酢酸塩において見られた。クエン酸塩はほとんど影響されなかった。
【図２９】加速条件下でのクエン酸バッファー中の４つ全部の製剤（Ａ〜Ｄ）のデルタｐＨを示す図である。最もｐＨを安定化する製剤はクエン酸緩衝化されたものであり、特に、製剤ＢおよびＤである。
【図３０】加速条件下での酢酸バッファー中の４つ全部の製剤（Ａ〜Ｄ）のデルタｐＨを示す図である。リードＣＸＣＲ５抗体の酢酸緩衝溶液中では、ｐＨはより高い値に向かってシフトした。
【図３１】加速条件下でのヒスチジンバッファー中の４つ全部の製剤（Ａ〜Ｄ）のデルタｐＨを示す図である。リードＣＸＣＲ５抗体のヒスチジン緩衝溶液中では、ｐＨはわずかに低下していた。
【図３２】４０℃で３カ月の保存後のＣＸＣＲ５  ＬＡ＿０９＿０２７  Ａ〜Ｄの流体力学直径を示すグラフである。クエン酸緩衝製剤は、製剤Ｃにおいては３週間後に、および製剤Ａにおいては保存の６週間後にほんのわずかな凝集体を示した。同様に、製剤Ｂにおいてもいくらかの凝集体を３カ月後に検出することができた。しかし、酢酸緩衝製剤と比較して、その量は非常に少なかった。
【図３３】４０℃で３カ月の保存後のＣＸＣＲ５  ＬＡ＿０９＿０２８  Ａ〜Ｄの流体力学直径を示すグラフである。酢酸緩衝製剤Ｃは、３週間後に２００ｎｍ未満のいくらかの凝集体を示した。製剤Ａは、３カ月後にいくらかの凝集体を示した。
【図３４】Ｚ平均に対する、リードＣＸＣＲ５抗体濃度の増加の効果を示すチャートである。リードＣＸＣＲ５抗体は、抗体の濃度を増加させることにより、流体力学直径（Ｚ平均）の有意な増加を示した。
【図３５】熱ストレス後の１００ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体でのＺ平均に対する異なる安定剤（添加剤）の効果を示すチャートである。熱ストレスの前後でＺ平均を測定した。安定化効果は試験した全ての添加剤と同様であったが、Ｚ平均の増加は、安定剤としてアミノ酸（アルギニン、リシン、またはグリシン）を用いることにより全体的に低下した。リシンは、ストレス後のより高い含量の凝集体のため排除された。アルギニンは、グリシンよりも良好な効果を示した。
【図３６】機械的ストレス後の１００ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体でのＺ平均に対する異なる安定剤の効果を示すチャートである。Ｚ平均を、機械的ストレスの前後で測定した。Ｚ平均の同じ低下が、アミノ酸の存在下で見られた。スクロースは、機械的ストレスに対する、トレハロースよりも良好な保護効果を有していた。アルギニンおよびグリシンは、ＮａＣｌと共により良好に機能した。
【図３７】機械的ストレスの前（Ａ）および機械的ストレスの後（Ｂ）のｐＨ６の１０ｍＭクエン酸バッファー中に製剤化されたリードＣＸＣＲ５抗体の、ＤＬＳにより測定された、粒径分布を示すグラフのセットである。ＤＳの機械的ストレスの後に、ＤＬＳによってより高分子量の種が測定された。
【図３８】機械的ストレスの前（Ａ）および後（Ｂ）のリードＣＸＣＲ５抗体医薬品プロトタイプ製剤（Ａ〜Ｄ；表１１１）の、ＤＬＳにより測定された、粒径分布を示すグラフのセットである。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
Ａ．定義
別途定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語および科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。
【００３６】
本明細書および添付の特許請求の範囲で用いられる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、本文が別途明確に記載しない限り、複数の参照も含むことが本明細書で指摘される。
【００３７】
用語「約」または「およそ」は、所与の値または範囲の５％以内（または１％以下）のような１０％以内を意味する。
【００３８】
用語「投与する」または「投与」は、粘膜、皮内、静脈内、皮下、筋肉内送達および／または本明細書に記載されるか、もしくは当業界で公知の物理的送達の任意の他の方法などにより、体外に存在するような物質（例えば、本発明の製剤）を患者に注入するか、またはさもなければ物理的に送達する動作を指す。ある疾患、またはその症状を処置しようとする場合、物質の投与は、典型的には、疾患またはその症状の開始後に行われる。疾患またはその症状を予防しようとする場合、物質の投与は、典型的には、疾患またはその症状の開始前に行われる。
【００３９】
ポリペプチドの文脈において、用語「類似体」は、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体と類似するか、もしくは同一の機能を有するが、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもし
くはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体の類似するか、もしくは同一のアミノ酸配列を含む必要はなく、またはＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体の類似するか、もしくは同一の構造を有するポリペプチドを指す。類似するアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、以下のこと：（ａ）本明細書に記載のＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド（例えば、それぞれ、配列番号９もしくは配列番号１４）、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体のアミノ酸配列と少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド；（ｂ）少なくとも５アミノ酸残基、少なくとも１０アミノ酸残基、少なくとも１５アミノ酸残基、少なくとも２０アミノ酸残基、少なくとも２５アミノ酸残基、少なくとも４０アミノ酸残基、少なくとも５０アミノ酸残基、少なくとも６０アミノ酸残基、少なくとも７０アミノ酸残基、少なくとも８０アミノ酸残基、少なくとも９０アミノ酸残基、少なくとも１００アミノ酸残基、少なくとも１２５アミノ酸残基、もしくは少なくとも１５０アミノ酸残基の本明細書に記載のＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体（またはそのＶＨもしくはＶＬ領域）をコードするヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチド（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．を参照されたい）；および（ｃ）本明細書に記載のＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体（またはそのＶＨもしくはＶＬ領域）をコードするヌクレオチド配列と少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチド、のうちの少なくとも１つを満たすポリペプチドを指す。ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体と類似する構造を有するポリペプチドとは、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体の類似する二次、三次または四次構造を有するポリペプチドを指す。ポリペプチドの構造を、限定されるものではないが、Ｘ線結晶学、核磁気共鳴、および結晶電子顕微鏡などの当業者には公知の方法により決定することができる。
【００４０】
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するために、配列を、最適な比較のために整列させる（例えば、第２のアミノ酸または核酸配列との最適なアラインメントのために第１のアミノ酸または核酸配列の配列中にギャップを導入することができる）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列中の位置が第２の配列中の対応する位置と同じ
アミノ酸残基またはヌクレオチドにより占有される場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、配列により共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同一の重複する位置の数／全位置数Ｘ１００％）。一実施形態においては、２つの配列は同じ長さである。
【００４１】
２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の同一性パーセントの決定を、数学的アルゴリズムを用いて達成することもできる。２つの配列の比較に用いられる数学的アルゴリズムの非限定例は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：５８７３〜５８７７頁として改変された、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ、１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：２２６４〜２２６８頁のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３頁のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム中に組込まれている。対象の核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得るために、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、ＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメータセット、例えば、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実施することができる。対象のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータセット、例えば、スコア５０、ワード長＝３を用いて実施することができる。比較のためのギャップ付アラインメントを得るために、ギャップ付ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９〜３４０２頁に記載のように用いることができる。あるいは、ＰＳＩ  ＢＬＡＳＴを用いて、分子間の距離関係を検出する反復検索を実施することができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、ギャップ付ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ  Ｂｌａｓｔプログラムを用いる場合、対応するプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを用いることができる（例えば、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖのワールドワイドウェブ上のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ
ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）を参照されたい）。配列の比較に用いられる数学的アルゴリズムの別の非限定例は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ、１９８８、ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１〜１７頁のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部である、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを用いる場合、ＰＡＭ１２０重み残基表（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを用いることができる。
【００４２】
２つの配列間の同一性パーセントを、可能なギャップを用いるか、または用いずに、上記のものと類似する技術を用いて決定することができる。同一性パーセントを算出する際に、典型的には、正確な一致だけを計数する。
【００４３】
「アンタゴニスト」または「阻害剤」とは、標的分子の１つまたは複数の生物活性を阻害することができる分子を指す。アンタゴニストは、リガンドによる活性化された細胞を無力化するか、もしくは殺傷することにより、および／または受容体もしくはリガンド活性化（例えば、チロシンキナーゼ活性化）または受容体へのリガンド結合後のシグナル伝達を妨害することにより、受容体のリガンドへの結合およびその逆を妨害することができる。アンタゴニストは、受容体−リガンド相互作用を完全に遮断するか、またはそのような相互作用を実質的に低下させることができる。アンタゴニストによる介入の全てのそのような点を、本発明の目的にとって等価であると考えるべきである。
【００４４】
例えば、ＬＩＧＨＴの「アンタゴニスト」または「阻害剤」とは、ＬＩＧＨＴを発現する細胞中またはＬＩＧＨＴ受容体のようなＬＩＧＨＴリガンドを発現する細胞中などにおける、ＬＩＧＨＴの１つまたは複数の生物活性を阻害するか、またはさもなければ減少さ
せることができる分子を指す。例えば、ある実施形態においては、本発明の抗体は、該抗体を、細胞表面に発現されるＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤｃＲ３）を有する細胞と接触させた場合に、該細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８、および／またはＲＡＮＴＥＳの分泌を阻害するか、またはさもなければ減少させるアンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態においては、ＬＩＧＨＴのアンタゴニスト（例えば、本発明のアンタゴニスト抗体）は、例えば、ＬＩＧＨＴ受容体を発現する細胞の活性化および／または細胞シグナリング経路を阻害するか、またはさもなければ減少させることにより作用し、それによって、アンタゴニストの非存在下でのＬＩＧＨＴ媒介性生物活性と比較して細胞のＬＩＧＨＴ媒介性生物活性を阻害することができる。本発明のある実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、完全ヒト、モノクローナル、アンタゴニスト抗ＬＩＧＨＴ抗体のような、完全ヒト、アンタゴニスト抗ＬＩＧＨＴ抗体である。
【００４５】
例えば、ＣＸＣＲ５の「アンタゴニスト」または「阻害剤」とは、ＣＸＣＲ５による、シグナリングのような１つまたは複数の生物活性を阻害することができる分子を指す。かくして、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＬ１３もしくはＣＸＣＲ５の他のリガンド、またはＣＸＣＲ５と、ＣＸＣＬ１３のようなそのリガンドとの複合体に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）；ＣＸＣＲ５と、ＣＸＣＬ１３のようなリガンドとの相互作用と拮抗するＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３のアミノ酸配列変異体または誘導体；場合により、免疫グロブリン領域（例えば、イムノアドヘシン）のような異種分子に融合された可溶性ＣＸＣＲ５；別の受容体または生物分子と関連するＣＸＣＲ５を含む複合体；ＣＸＣＲ５に結合する合成または天然の配列ペプチドなどが、本発明の範囲内に含まれる。
【００４６】
用語「抗体」、「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」は、本明細書で互換的に用いることができる。用語、抗体は、限定されるものではないが、合成抗体、モノクローナル抗体、組換え産生された抗体、多特異的抗体（二特異的抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、イントラボディ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、一特異的、二特異的などを含む）、ラクダ化抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、および上記のいずれかのエピトープ結合断片を含む。特に、抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、ＬＩＧＨＴ抗原（例えば、抗ＬＩＧＨＴ抗体の１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ））またはＣＸＣＲ５抗原（例えば、抗ＣＸＣＲ５抗体の１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ））に特異的に結合する抗原結合部位を含有する抗原結合ドメインまたは分子を含む。抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５抗体は、免疫グロブリン分子の任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ）のものであってもよい。いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、完全ヒトモノクローナル抗ＬＩＧＨＴ抗体のような完全ヒト抗体である。ある実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ＩｇＧ抗体、ヒトＩｇＧ４抗体である。あるいは、いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ヒト化モノクローナル抗ＣＸＣＲ５抗体のようなヒト化抗体である。ある実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＩｇＧ抗体、ヒト化ＩｇＧ４抗体である。
【００４７】
本明細書で用いられる用語「抗ＬＩＧＨＴ抗体」は、限定されるものではないが、ＬＩＧＨＴのそのリガンドへの結合を阻害するか、もしくは実質的に減少させるか、またはＬＩＧＨＴ活性を阻害する分子などの、本明細書に定義されるヒトＬＩＧＨＴに特異的に結合する抗体またはそれに由来するポリペプチド（誘導体）を意味する。
【００４８】
本明細書で用いられる用語「抗ＣＸＣＲ５抗体」は、限定されるものではないが、ＣＸＣＲ５のそのリガンドへの結合を阻害するか、もしくは実質的に減少させるか、またはＣ
ＸＣＲ５活性を阻害する分子などの、本明細書に定義されるヒトＣＸＣＲ５に特異的に結合する抗体またはそれに由来するポリペプチド（誘導体）を意味する。
【００４９】
用語「Ｂ細胞活性」は、局部的であってよい、正常より高いＢ細胞活性、または抗体発現、Ｂｒｕｔｏｎのチロシンキナーゼの存在もしくは活性、ＣＤ１９の発現もしくは存在、Ｂ細胞活性化因子の発現もしくは存在などのような、Ｂ細胞の生物学的顕在化もしくは機能の証拠を意味する。
【００５０】
用語「結合剤」は、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５、またはその変異体もしくは断片に結合するか、または特異的に結合する、抗体、ｓｉＲＮＡ、核酸、アプタマー、タンパク質、または低分子有機化合物のような任意の分子を意味する。
【００５１】
用語「副産物」は、所与の製剤中の、抗体のような治療的／予防的結合剤の割合を減少または縮小させる望ましくない生成物を含む。例えば、典型的な副産物としては、抗体の凝集体、例えば、脱アミド化もしくは加水分解による抗体の分解により産生された抗体の断片、またはその混合物が挙げられる。典型的には、凝集体は、モノマー抗体よりも大きい分子量を有する複合体である。抗体分解産物は、例えば、脱アミド化または加水分解によりもたらされた、例えば、抗体の断片を含んでもよい。典型的には、分解産物は、モノマー抗体よりも低い分子量を有する複合体である。ＩｇＧ抗体の場合、そのような分解産物は、約１５０ｋＤ未満である。
【００５２】
用語「組成物」および「製剤」は、場合により、特定量の特定構成成分（例えば、抗ＬＩＧＨＴ抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体）を含有する生成物、ならびに場合により特定量の特定構成成分の組合せから直接または間接に生じる任意の生成物を包含することが意図される。
【００５３】
用語「定常領域」または「定常ドメイン」とは、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用のような様々なエフェクター機能を示す軽鎖および重鎖のカルボキシ末端部分を指す。この用語は、抗原結合部位を含有する、免疫グロブリンの他の部分、可変ドメインと比較して、より多くの保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインと、軽鎖のＣＨＬドメインとを含有する。
【００５４】
用語「ＣＸＣＲ５」は、リンパ球、特に、Ｂ細胞、特に、ナイーブなＢ細胞上に見出される天然に存在する公知の分子；そのような細胞から単離されたそのような分子；公知の材料および手段を用いて、ＣＸＣＲ５をコードする核酸を用いて組換え的に製造されたそのような分子；ならびにＣＸＣＬ１３結合のような本発明の実施と関連する特徴および特性を保持する細胞外（ＥＣ）ドメインのようなＣＸＣＲ５の部分に関する。可溶性ＣＸＣＲ５分子は、一般に、分子の最初の約６０アミノ酸、すなわち、ＣＸＣＲ５のアミノ末端部分を含む、ＣＸＣＲ５のＥＣドメインから本質的になってもよい。
【００５５】
ＣＸＣＲ５は、非無差別受容体である。ＣＸＣＬ１３はＣＸＣＲ５のリガンドであり、濾胞樹状細胞のような間質細胞上、およびリンパ組織中で構成的に発現される。ＣＸＣＬ１３はＢ細胞およびＢ細胞濾胞性ヘルパーＴ細胞、ＴＦＨと呼ばれるＴ細胞の小サブセットを特異的に誘引する。免疫系におけるＴ細胞集団とＢ細胞集団との多くの相互作用を考慮すると、これは予想外のことではない。さらに、活性化Ｔ細胞は、ＣＸＣＲ５発現を誘導するか、または上方調節する。リンパ球の三次異所性胚中心（ＧＣ）への浸潤は、疾患重症度の増加およびそのような非定型リンパ節様構造と共に存在する特定の障害における寛容の破綻と良好に相関することがわかった。ＣＸＣＲ５−／−およびＣＸＣＬ１３−／−マウスのようなｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルを用いた場合、受容体またはリガンドの非
存在は、ＴおよびＢ細胞局在化の変化、およびことによると相互作用のため、ＧＣの微細な構造の変化をもたらす。これらのマウスはまた、発達中の重症コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）に対しても保護される。ＣＸＣＲ５は、ＲＡの発症と関連する成熟Ｂ細胞上で選択的に発現されるため、この受容体の遮断は罹患した個体における関節炎を発症させる応答を変調する。生物学的製剤（すなわち、抗ＴＮＦαおよび抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブ）を用いる関節リウマチの処置は、臨床的に有効であることを示した；特に、Ｂ細胞指向性療法にある患者は、臨床兆候および症状の長期間続く向上を示した。成熟Ｂ細胞およびＢ細胞ヘルパーＴ細胞上でのみ発現されるＣＸＣＲ５の選択的標的化は、Ｂ細胞の発生に影響しないか、または患者を免疫不全にしない。リツキシマブと違って、本発明の抗ＣＸＣＲ５抗体は、細胞傷害性を媒介しない中和抗体である。
【００５６】
「ＣＸＣＲ５疾患」は、ＣＸＣＬ１３もしくは他のＣＸＣＲ５リガンドの過剰発現もしくはレベルの増加、Ｂ細胞レベルの増加、Ｂ細胞活性のレベルの増加、ＣＸＣＲ５レベルの増加、またはＣＸＣＲ５の不適切な代謝および活性を特徴とするか、またはそれらにより引き起こされる、病気、障害、疾患、状態、異変などである。
【００５７】
用語「エピトープ」とは、抗体のような結合剤の１つまたは複数の抗原結合領域に結合することができ、免疫応答を惹起することができる、ヒトなどの哺乳動物のような動物における抗原性または免疫原性活性を有する、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、またはＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド断片のような抗原の表面上の局在化された領域を指す。免疫原性活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を惹起するポリペプチドの一部である。抗原性活性を有するエピトープは、例えば、免疫アッセイのような、当業界で周知の任意の方法により決定された場合、抗体が特異的に結合するポリペプチドの一部である。抗原性エピトープは、必ずしも免疫原性である必要はない。エピトープは通常、アミノ酸または糖側鎖のような化学的に活性な分子表面基からなり、特定の三次元構造特性、ならびに特定の電荷特性を有する。エピトープに寄与するポリペプチドの領域は、ポリペプチドの連続するアミノ酸であってもよく、またはエピトープはポリペプチドの２つ以上の非連続領域に由来してもよい。エピトープは、抗原の三次元表面特性であっても、またはなくてもよい。ある実施形態においては、ＬＩＧＨＴまたはＣＸＣＲ５エピトープは、三次元表面特性のＬＩＧＨＴまたはＣＸＣＲ５ポリペプチド（例えば、トリマー形態のＬＩＧＨＴポリペプチド）である。他の実施形態においては、ＬＩＧＨＴエピトープは、線状特性のＬＩＧＨＴまたはＣＸＣＲ５ポリペプチド（例えば、トリマー形態またはモノマー形態のＬＩＧＨＴポリペプチド）である。抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５抗体は、モノマー（変性）形態のＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５のエピトープ、トリマー（天然）形態のＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５のエピトープ、またはモノマー（変性）形態およびトリマー（天然）形態の両方のＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５に特異的に結合することができる。特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、トリマー形態のＬＩＧＨＴのエピトープに特異的に結合するが、モノマー形態のＬＩＧＨＴには特異的に結合しない。
【００５８】
用語「添加剤」とは、薬物のための、賦形剤、ビヒクル、保存剤、結合剤、安定化剤などとして一般的に用いられる不活性物質を指し、限定されるものではないが、タンパク質（例えば、血清アルブミンなど）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、グリシン、ヒスチジンなど）、脂肪酸およびリン脂質（例えば、スルホン酸アルキル、カプリレートなど）、界面活性剤（例えば、ＳＤＳ、ポリソルベート、非イオン性界面活性剤など）、サッカライド（例えば、スクロース、マルトース、トレハロースなど）ならびにポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトールなど）が挙げられる。また、全体が参照により本明細書に組み入れられるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．も参照されたい。
【００５９】
ペプチドまたはポリペプチドの文脈において、用語「断片」とは、完全長より少ないアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを指す。そのような断片は、例えば、アミノ末端でのトランケーション、カルボキシ末端でのトランケーション、および／またはアミノ酸配列からの残基の内部的欠失から生じてもよい。断片は、例えば、代替的ＲＮＡスプライシングまたはｉｎ  ｖｉｖｏでのプロテアーゼ活性から生じてもよい。ある実施形態においては、ｈＬＩＧＨＴまたはｈＣＸＣＲ５断片は、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドまたはＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドに特異的に結合する抗体のアミノ酸配列の少なくとも５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも４０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも５０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも６０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも７０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも８０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも９０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１００個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１２５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１５０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１７５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２００個の連続するアミノ酸残基、または少なくとも２５０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。特定の実施形態においては、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドまたはＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５抗原に特異的に結合する抗体の断片は、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つの機能を保持する。
【００６０】
用語「完全ヒト抗体」または「ヒト抗体」は本明細書で互換的に用いられ、ヒト可変領域と、ことによると、ヒト定常領域を含む抗体を指す。特定の実施形態においては、この用語は、ヒト起源の可変領域と定常領域とを含む抗体を指す。「完全ヒト」抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ある実施形態においては、ＬＩＧＨＴポリペプチドに結合し、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン核酸配列の天然に存在する体細胞変異体である核酸配列によりコードされる抗体も包含してもよい。特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、完全ヒト抗体である。用語「完全ヒト抗体」は、Ｋａｂａｔらにより記載されたヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に対応する可変および定常領域を有する抗体を含む（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ
ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２頁を参照されたい）。完全ヒト抗体を製造する方法は、当業界で公知である。
【００６１】
語句「組換えヒト抗体」は、宿主細胞中にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックおよび／もしくはトランスクロモソーマルである動物（例えば、マウスもしくはウシ）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．ら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７〜６２９５頁を参照されたい）のような、組換え手段により調製、発現、作出、もしくは単離されたヒト抗体またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段により調製、発現、作出、もしくは単離された抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有してもよい（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２頁を参照されたい）。しかしながら、ある実施形態においては、そのような組換えヒト抗体を、ｉｎ  ｖ
ｉｔｒｏ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に関してトランスジェニックである動物を用いる場合、ｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞突然変異誘発）にかけ、かくして、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、それと関連するが、ｉｎ  ｖｉｖｏではヒト抗体生殖細胞系列レパートリー中に自然には存在しなくてもよい。
【００６２】
「ＩｇＧ４結合剤」または「ＩｇＧ４  Ｆｃ領域の少なくとも一部を含む結合剤」は両方とも、ＩｇＧ４  Ｆｃの少なくとも断片を含む本明細書に記載の結合剤を指す。ある実施形態においては、断片は、ＩｇＧ４  Ｆｃ領域の１０、２０、３０、４０、５０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０または２２０アミノ酸を含む。他の実施形態においては、断片は、ＩｇＧ４  Ｆｃ領域の１０〜５０、５０〜１００、１００〜１５０、または１５０〜２００アミノ酸を含む。他の実施形態においては、ＩｇＧ４  Ｆｃ領域の部分は、ＩｇＧ４  Ｆｃ領域に対する特定の相同性を有してもよい。例えば、ＩｇＧ４結合剤は、ＩｇＧ４  Ｆｃ領域に対する５０、６０、７０、８０、９０、９３、９５、９６、９７、９８、９９％より高い、または１００％の相同性を有するタンパク質の一部を含んでもよい。ＩｇＧ４の例示的なＦｃ領域は、本明細書を通じて記載される。
【００６３】
用語「重鎖」は、抗体を参照して用いられる場合、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、アルファ（α）、デルタ（Δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）およびミュー（μ）と呼ばれる５つの異なる型を指す。これらの異なる型の重鎖は当業界で周知であり、それぞれ、ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む、５つのクラスの抗体、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭを生じる。いくつかの実施形態においては、重鎖は、ヒト重鎖である。
【００６４】
「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、ヒト抗体と比較して、非ヒト免疫グロブリンに由来する配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（抗体のＦv、Ｆab、Ｆab'、Ｆ(ab')2または他の標的結合サブ配列など）である。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全部または実質的に全部が、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全部または実質的に全部が、ヒト免疫グロブリン鋳型配列のものである、１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全部を含む。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆc）の少なくとも一部、典型的には、選択されたヒ
ト免疫グロブリン鋳型のものを含んでもよい。一般に、目標は、ヒトにおける免疫原性が最小である抗体分子を有することである。かくして、１つまたは複数のＣＤＲ中の１つまたは複数のアミノ酸を、１つまたは複数のＣＤＲの、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３への特異的結合機能を実質的に最小化することなく、ヒト宿主に対する免疫原性が低いものに変化させることもできる。あるいは、ＦＲは、非ヒトであってもよいが、最も免疫原性であるこれらのアミノ酸を、免疫原性が低いものと置きかえる。それにも拘らず、上記で考察されたＣＤＲ移植は、ヒト化抗体を得るための唯一の方法ではない。例えば、ＣＤＲ領域だけの改変はＣＤＲループの三次元構造および抗体のそのリガンドに対する全体の親和性を決定する際に役割を果たすフレームワーク残基にとって一般的ではないため、ＣＤＲ領域だけの改変では不十分であり得る。従って、非ヒト親抗体分子が、ヒトに対する免疫原性が低いものとなるように改変され、ヒト抗体との全体的配列同一性が常に必要ではないような任意の手段を実施することができる。従って、例えば、ごくわずかの残基、特に、抗体分子上に露出され、分子内に埋まらず、従って、宿主免疫系にとって容易に接近可能ではない残基のわずかな置換により、ヒト化を達成することもできる。そのような方法は、抗体分子上の「可動性」または「可撓性」残基の置換に関して本明細書で教示されており、その目標は、抗体のそのエピトープまたは決定基に対する特異性を含むことなく、得られる分子の免疫原性を低下させるか、または削ぐことである。例えば、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇ  ７（６）８０５〜８１４頁、１９９４；Ｍｏｌ  Ｉｍｍ  
４４：１９８６〜１９８８頁、２００７；Ｓｉｍら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１：２２９６頁（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１頁（１９８７）；Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：４２８５頁（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１：２６２３頁（１９９３）、ＷＯ２００６／０４２３３３および米国特許第５，８６９，６１９号を参照されたい。
【００６５】
抗体のような、「単離された」または「精製された」結合剤は、結合剤が由来する細胞もしくは組織供給源に由来する細胞材料もしくは他の汚染タンパク質を実質的に含まないか、または化学的に合成された場合には化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない。例えば、用語「細胞材料を実質的に含まない」は、抗体が、それが単離されるか、または組換え的に産生される細胞の細胞成分から分離される抗体の調製物を含む。かくして、細胞材料の実質的に含まない抗体は、約３０％、２０％、１０％、または５％（乾燥重量で）未満の異種タンパク質（本明細書では「汚染タンパク質」とも呼ばれる）を有する抗体の調製物を含む。抗体が組換え産生される場合、それは培養培地を実質的に含まない、すなわち、培養培地がタンパク質調製物の約２０％、１０％、または５％未満の容量であるのも望ましい。抗体が化学的合成により産生される場合、いくつかの実施形態においては、それは化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない、すなわち、それはタンパク質の合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質から分離される。従って、抗体のそのような調製物は、約３０％、２０％、１０％、５％（乾燥重量で）未満の、対象の抗体以外の化学的前駆体または化合物を有する。いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５抗体は、単離または精製される。
【００６６】
用語「ヒトＬＩＧＨＴ」、「ｈＬＩＧＨＴ」または「ｈＬＩＧＨＴポリペプチド」および同様の用語は、配列番号９のアミノ酸配列を含むポリペプチド（「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は本明細書では互換的に用いられる）およびそのＳＮＰ変異体を含む関連ポリペプチドを指す。関連ポリペプチドは、いくつかの実施形態においては、ＬＩＧＨＴ活性を保持する、および／または抗ＬＩＧＨＴ免疫応答を生成するのに十分である、対立遺伝子変異体（例えば、ＳＮＰ変異体）；スプライス変異体；断片；誘導体；置換、欠失、および挿入変異体；融合ポリペプチド；ならびに種間相同体を含む。また、抗ＬＩＧＨＴ免疫応答を生成するのに十分である可溶性形態のＬＩＧＨＴも包含される。当業者であれば理解できるように、エピトープは、順に、より大きいポリペプチドの一部である、より大きいポリペプチド断片の一部である、より大きい抗原の一部であるため、抗体のような抗ＬＩＧＨＴ結合剤は、ＬＩＧＨＴポリペプチド、ポリペプチド断片、抗原および／またはエピトープに結合することができる。ｈＬＩＧＨＴは、トリマー（天然）またはモノマー（変性）形態で存在してもよい。
【００６７】
用語「ヒトＣＸＣＲ５」、「ｈＣＸＣＲ５」または「ｈＣＸＣＲ５ポリペプチド」および同様の用語は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むポリペプチド（「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は本明細書では互換的に用いられる）およびそのＳＮＰ変異体を含む関連ポリペプチドを指す。関連ポリペプチドは、いくつかの実施形態においては、ＣＸＣＲ５活性を保持する、および／または抗ＣＸＣＲ５免疫応答を生成するのに十分である、対立遺伝子変異体（例えば、ＳＮＰ変異体）；スプライス変異体；断片；誘導体；置換、欠失、および挿入変異体；融合ポリペプチド；ならびに種間相同体を含む。また、抗ＣＸＣＲ５免疫応答を生成するのに十分である可溶性形態のＣＸＣＲ５も包含される。当業者であれば理解できるように、エピトープは、順に、より大きいポリペプチドの一部である、より大きいポリペプチド断片の一部である、より大きい抗原の一部であるため、抗体のような抗ＣＸＣＲ５結合剤は、ＣＸＣＲ５ポリペプチド、ポリペプチド断片、抗原および／またはエピトープに結合することができる。
【００６８】
用語「Ｋａｂａｔ番号付け」および同様の用語は当業界で認識されており、抗体、またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基より可変性（すなわち、超可変性）であるアミノ酸残基の番号付けシステムを指す（Ｋａｂａｔら（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２〜３９１頁およびＫａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ
ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２頁）。重鎖可変領域については、超可変領域は、典型的には、ＣＤＲ１のアミノ酸３１位から３５位、ＣＤＲ２のアミノ酸５０位〜６５位、およびＣＤＲ３のアミノ酸９５位〜１０２位の範囲である。軽鎖可変領域については、超可変領域は、典型的には、ＣＤＲ１のアミノ酸２４〜３４位、ＣＤＲ２のアミノ酸５０〜５６位、およびＣＤＲ３のアミノ酸８９〜９７位の範囲である。
【００６９】
抗体を参照して用いられる場合、用語「軽鎖」とは、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）またはラムダ（λ）と呼ばれる２つの異なる型を指す。軽鎖アミノ酸配列は当業界で周知である。いくつかの実施形態においては、軽鎖はヒト軽鎖である。
【００７０】
用語「管理する」、「管理すること」および「管理」とは、感染の治癒をもたらさない、対象が治療（例えば、予防剤または治療剤）から導かれる有益な効果を指す。ある実施形態においては、対象は、疾患の進行または悪化を防止するために、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患（例えば、慢性腸疾患、ＩＢＤ、クローン病、潰瘍性大腸炎、もしくはＧＶＨＤ）またはＣＸＣＲ５媒介性疾患（例えば、関節リウマチ）、その１つまたは複数の症状を「管理する」ための１つまたは複数の治療（例えば、本発明の製剤のような、予防剤または治療剤）を投与される。
【００７１】
用語「モノクローナル抗体」とは、同種または実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、それぞれのモノクローナル抗体は、典型的には、抗原上の単一のエピトープを認識する。いくつかの実施形態においては、「モノクローナル抗体」は、単一のハイブリドーマまたは他の細胞により産生される抗体である。用語「モノクローナル」は、抗体を作製するための任意の特定の方法に限定されない。例えば、モノクローナル抗体を、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５頁（１９７５）に記載のハイブリドーマ法により作製するか、またはファージライブラリーから単離することができる。クローン細胞系およびそれにより発現されるモノクローナル抗体の調製のための他の方法は、当業界で周知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００２）第５版；Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの第１１章を参照されたい）。
【００７２】
用語「薬学的に許容される」とは、連邦もしくは州政府の規制当局によって認可されるか、または米国薬局方、欧州薬局方もしくは動物、より特には、ヒトにおける使用のための他の一般的に認識される薬局方に列挙されることを意味する。
【００７３】
「薬学的に許容される添加剤」とは、同意できるか、または都合のよい剤形を調製するための、モノクローナル抗体のような活性分子と組合わされる任意の不活性物質を意味する。「薬学的に許容される添加剤」は、用いられる用量および濃度でレシピエントに対して非毒性的であり、モノクローナル抗体を含む製剤の他の構成成分と適合する添加剤である。
【００７４】
用語「防止する」、「防止すること」および「防止」とは、本明細書に提供される治療または治療の組合せ（例えば、本発明の製剤のような、予防剤または治療剤の組合せ）の投与の結果生じる、ＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患および／またはそれ
と関連する症状の発生、再発、開始または拡散の全体的または部分的阻害を指す。
【００７５】
用語「予防剤」とは、対象におけるＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患および／またはそれと関連する症状の発生、再発、開始または拡散を全体的または部分的に阻害することができる任意の薬剤を指す。ある実施形態においては、用語「予防剤」とは、本発明の製剤を指す。ある他の実施形態においては、用語「予防剤」とは、本発明の製剤以外の薬剤を指す。いくつかの実施形態においては、予防剤は、ＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患および／またはそれと関連する症状を防止するか、またはＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患および／またはそれと関連する症状の開始、発生、進行および／もしくは重症度を妨げるために有用であることが知られるか、または用いられてきたか、または現在用いられている薬剤である。特定の実施形態においては、予防剤は、完全ヒト抗ＬＩＧＨＴモノクローナル抗体のような完全ヒト抗ＬＩＧＨＴ抗体、またはヒト化抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体のようなヒト化抗ＣＸＣＲ５抗体である。
【００７６】
用語「ＬＩＧＨＴ抗原」とは、抗体のような結合剤が特異的に結合するＬＩＧＨＴポリペプチドの部分を指す。ＬＩＧＨＴ抗原はまた、抗体のような結合剤が特異的に結合する、ＬＩＧＨＴポリペプチドの類似体もしくは誘導体またはその断片も指す。いくつかの実施形態においては、ＬＩＧＨＴ抗原は、モノマーＬＩＧＨＴ抗原またはトリマーＬＩＧＨＴ抗原である。エピトープに寄与するＬＩＧＨＴポリペプチドの領域は、ポリペプチドの連続するアミノ酸であってもよく、またはエピトープはポリペプチドの２つ以上の非連続的領域に由来してもよい。このエピトープは、抗原の三次元表面特性であってもよく、またはそうでなくてもよい。免疫応答を惹起することができるＬＩＧＨＴ抗原の表面上の局在化された領域は、ＬＩＧＨＴエピトープである。このエピトープは、抗原の三次元表面特性であってもよいか、またはそうでなくてもよい。
【００７７】
用語「ＣＸＣＲ５抗原」とは、抗体のような結合剤が特異的に結合するＣＸＣＲ５ポリペプチドの部分を指す。ＣＸＣＲ５抗原はまた、抗体のような結合剤が特異的に結合するＣＸＣＲ５ポリペプチドの類似体もしくは誘導体またはその断片も指す。エピトープに寄与するＣＸＣＲ５ポリペプチドの領域は、ポリペプチドの連続するアミノ酸であってもよく、またはエピトープはポリペプチドの２つ以上の非連続的領域に由来してもよい。このエピトープは、抗原の三次元表面特性であってもよく、またはそうでなくてもよい。免疫応答を惹起することができるＣＸＣＲ５抗原の表面上の局在化された領域は、ＣＸＣＲ５エピトープである。このエピトープは、抗原の三次元表面特性であってもよいか、またはそうでなくてもよい。
【００７８】
用語「ＬＩＧＨＴ媒介性疾患」および「ＬＩＧＨＴ媒介性障害」は、互換的に用いられ、ＬＩＧＨＴにより完全もしくは部分的に引き起こされるか、またはＬＩＧＨＴの結果である任意の疾患を指す。ある実施形態においては、ＬＩＧＨＴは、細胞の表面上に異常（例えば、高度に）発現される。いくつかの実施形態においては、ＬＩＧＨＴは特別な細胞型上で異常に上方調節され得る。他の実施形態においては、ＬＩＧＨＴのＬＩＧＨＴリガンドへの結合により、正常な、異常な、または過剰の細胞シグナリングが引き起こされる。ある実施形態においては、ＬＩＧＨＴリガンドは、例えば、結腸上皮細胞のような細胞の表面上に発現される、ＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、またはＤＣＲ３）である。ある実施形態においては、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患は、クローン病（ＣＤ）または潰瘍性大腸炎（ＵＣ）のような、慢性腸疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。他の実施形態においては、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患は、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）である。
【００７９】
用語「ＣＸＣＲ５媒介性疾患」および「ＣＸＣＲ５媒介性障害」は、互換的に用いられ、ＣＸＣＲ５により完全もしくは部分的に引き起こされるか、またはＣＸＣＲ５の結果で
ある任意の疾患を指す。ある実施形態においては、ＣＸＣＲ５は、細胞の表面上に異常（例えば、高度に）発現される。いくつかの実施形態においては、ＣＸＣＲ５は特別な細胞型上で異常に上方調節され得る。他の実施形態においては、ＣＸＣＲ５のＣＸＣＲ５リガンドへの結合により、正常な、異常な、または過剰の細胞シグナリングが引き起こされる。ある実施形態においては、ＣＸＣＲ５リガンドは、ＣＸＣＬ１３である。ある実施形態においては、ＣＸＣＲ５媒介性疾患は、関節リウマチ（ＲＡ）である。
【００８０】
用語「サッカライド」とは、多価アルコールの誘導体である分子のクラスを指す。サッカライドは、一般的には炭水化物と呼ばれ、異なる量の糖（サッカライド）単位、例えば、モノサッカライド、ジサッカライド、およびポリサッカライドを含有してもよい。
【００８１】
用語「特異的に結合する」または「特異的に結合すること」とは、ある抗原またはその断片には特異的に結合するが、他の抗原には特異的に結合しないことを意味する。例えば、抗原に特異的に結合する抗体は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ＢＩＡＣＯＲＥ、または当業界で公知の他のアッセイにより決定された場合、より低い親和性で他のペプチドまたはポリペプチドに結合することができる。抗原に特異的に結合する抗体またはその変異体もしくは断片は、関連する抗原と交差反応性であってもよい。いくつかの実施形態においては、抗原に特異的に結合する抗体またはその変異体もしくは断片は、他の抗原と交差反応しない。ＬＩＧＨＴまたはＣＸＣＲ５抗原に特異的に結合する抗体またはその変異体もしくは断片を、例えば、免疫アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ、または当業者には公知の他の技術により同定することができる。典型的には、特異的または選択的反応は、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍であり、より典型的には、バックグラウンドの１０倍を超える。例えば、抗体特異性に関する考察については、Ｐａｕｌ（編）、１９８９、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第２版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、３３２〜３３６頁を参照されたい。
【００８２】
「安定な」または「安定化された」製剤は、その中の抗体のような結合剤が、保存時にその物理的安定性、同一性、完全性、および／または化学的安定性、同一性、完全性、および／または生物活性を本質的に保持するものである。タンパク質安定性を測定するための様々な分析技術が当業界で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２４７〜３０１頁、Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ（編）、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９〜９０頁（１９９３）に概説されている。安定性を、選択された期間にわたって、選択された温度および他の保存条件で測定することができる。安定性を、視覚的検査、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＩＥＦ、ＨＰＳＥＣ、ＲＦＦＩＴ、およびカッパ／ラムダＥＬＩＳＡからなる群から選択される少なくとも１つの方法により決定することができる。例えば、抗体が、色および／もしくは透明度の視覚的検査の際に、またはＵＶ光散乱、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、もしくは（高速）サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）により測定された場合、凝集、沈降、および／または変性の兆候を示さない場合、それは医薬製剤中で「その物理的安定性を保持する」。いくつかの実施形態においては、本発明の製剤を用いる場合、ＨＰＳＥＣまたは凝集形成を測定するための任意の他の好適な方法により測定された場合、５％以下、典型的には、４％以下、典型的には、３％以下、より典型的には、２％以下、および特に１％以下の抗体が凝集体を形成する。例えば、抗体モノマーが特定の製剤中、特定の保存条件下で特定の所定の期間後に、約９０％、典型的には、約９５％、特に、約９８％の純度を有する場合、抗体は特定の製剤中で安定であると考えられる。化学的に変化した形態のタンパク質を検出および定量することにより、化学的安定性を評価することができる。化学的変化は、例えば、（ＨＰ）ＳＥＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および／またはマトリックス支援レーザー脱離イオン化／飛行時間質量分析（ＭＡＬＤＩ／Ｔ
ＯＦ  ＭＳ）を用いて評価することができるサイズ改変（例えば、クリッピング）を含んでもよい。他の型の化学的変化としては、例えば、イオン交換クロマトグラフィーにより評価することができる電荷変化（例えば、脱アミド化の結果として起こる）が挙げられる。例えば、抗原結合アッセイまたはウイルス中和アッセイにおいて決定された場合、所与の時間での抗体の生物活性が、医薬製剤が調製された時間で示された生物活性の少なくとも約９０％（アッセイの誤差の範囲内）である場合、抗体は所与の時間で医薬製剤中で「その生物活性を保持する」。
【００８３】
用語「対象」および「患者」は互換的に用いられる。本明細書で用いられる場合、対象は、典型的には、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）または霊長類（例えば、サルおよびヒト）、およびいくつかの実施形態においては、ヒトのような哺乳動物である。一実施形態においては、対象は、ＬＩＧＨＴ媒介性またはＣＸＣＲ５媒介性疾患を有する、ヒトのような哺乳動物である。別の実施形態においては、対象は、ＬＩＧＨＴ媒介性またはＣＸＣＲ５媒介性疾患を発症する危険性がある、ヒトのような哺乳動物である。
【００８４】
用語「治療上有効量」とは、所与の疾患および／またはそれと関連する症状の重症度および／または持続期間を軽減および／または改善するのに十分である治療（例えば、本発明の製剤）の量を指す。この用語はまた、所与の疾患の前進もしくは進行の軽減もしくは改善、所与の疾患の再発、発症もしくは開始の軽減もしくは改善、および／または別の治療（例えば、本発明の製剤以外の治療）の予防もしくは治療効果の改善もしくは増強にとって必要な量も包含する。いくつかの実施形態においては、本発明の抗体の治療上有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ（対象の体重１ｋｇあたりの抗体のｍｇ）〜約１００ｍｇ／ｋｇである。ある実施形態においては、本明細書で提供される抗体の治療上有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇまたは約１００ｍｇ／ｋｇ（またはその中の範囲）である。いくつかの実施形態においては、本明細書で用いられる「治療上有効量」はまた、特殊な結果（例えば、細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８、もしくはＲＡＮＴＥＳの分泌の阻害のような、細胞のＬＩＧＨＴ生物活性の阻害；またはＣＸＣＬ１３への結合のような、細胞のＣＸＣＲ５生物活性の阻害）を達成する本発明の抗体の量も指す。
【００８５】
用語「治療剤」とは、ＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患および／またはそれと関連する症状の処置、管理または改善において用いることができる任意の薬剤を指す。ある実施形態においては、用語「治療剤」とは、本発明の製剤を指す。ある他の実施形態においては、用語「治療剤」とは、本発明の製剤以外の薬剤を指す。いくつかの実施形態においては、治療剤は、ＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患またはそれと関連する１つもしくは複数の症状の処置、管理または改善にとって有用であることが知られるか、またはそのために用いられてきた、またはそのために現在用いられている薬剤である。
【００８６】
用語「治療」とは、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患（例えば、ＩＢＤもしくはＧＶＨＤ）またはＣＸＣＲ５媒介性疾患（例えば、関節リウマチ）の防止、管理、処置、および／または改善において用いることができる任意のプロトコール、方法、および／または薬剤を指す。ある実施形態においては、用語「複数の治療」および「治療」とは、生物学的治療、支持的治療、および／または医療関係者のような当業者には公知のＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患の防止、管理、処置、および／もしくは改善において有用な他の治療を指す。
【００８７】
用語「処置する」、「処置」および「処置すること」とは、１つまたは複数の治療の投与（限定されるものではないが、本発明の製剤のような１つまたは複数の予防剤または治療剤の投与など）の結果生じる、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患（例えば、慢性腸疾患、ＩＢＤもしくはＧＶＨＤ）またはＣＸＣＲ５媒介性疾患（例えば、関節リウマチ）の進行、重症度、および／または持続期間の軽減または改善を指す。ＬＩＧＨＴに関する特定の実施形態においては、そのような用語は、ＬＩＧＨＴのＨＶＥＭへの結合の減少もしくは阻害、ＬＩＧＨＴのＬＴβＲへの結合の減少もしくは阻害、ＬＩＧＨＴのＤｃＲ３への結合の減少もしくは阻害、対象のＬＩＧＨＴ受容体を発現する細胞からのＣＣＬ２０の産生もしくは分泌の減少もしくは阻害、対象のＬＩＧＨＴ受容体を発現する細胞からのＩＬ−８の産生もしくは分泌の減少もしくは阻害、対象のＬＩＧＨＴ受容体を発現する細胞からのＲＡＮＴＥＳの産生もしくは分泌の減少もしくは阻害、および／または慢性腸疾患、ＩＢＤもしくはＧＶＨＤのような、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患と関連する１つまたは複数の症状の阻害もしくは軽減を指す。ＣＸＣＲ５に関する特定の実施形態においては、そのような用語は、ＣＸＣＲ５のＣＸＣＬ１３への結合の減少もしくは阻害、および／または関節リウマチのような、ＣＸＣＲ５媒介性疾患と関連する１つまたは複数の症状の阻害もしくは軽減を指す。
【００８８】
用語「可変領域」または「可変ドメイン」とは、結合において用いられる抗体間で配列およびその特定の抗原に対するそれぞれの特定の抗体の特異性が大きく異なる、軽鎖および重鎖の一部、典型的には、重鎖中のアミノ末端の約１２０〜１３０アミノ酸および軽鎖中の約１００〜１１０アミノ酸を指す。配列の変動性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれるこれらの領域に集中するが、可変ドメイン中のより高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。軽鎖および重鎖のＣＤＲは主に、抗体の抗原との相互作用を担う。アミノ酸位置の番号付けは、Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）第５版（「Ｋａｂａｔら」）に記載のようなＥＵ指数によるものである。いくつかの実施形態においては、可変領域は、ヒト可変領域である。
【００８９】
Ｂ．製剤および製剤成分
以前に述べた通り、本発明の製剤は驚くべきことに、製剤のｐＨが約ｐＨ６以下かつ結合剤の等電点（ｐＩ）以下である、ＩｇＧ４結合剤とクエン酸バッファーとを含む液体および凍結乾燥粉末の形態で見出された。本発明の製剤は、製剤中の結合剤の濃度を増加させる際に望ましくない副産物を形成する、従来のＩｇＧ４結合剤製剤（例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）製剤）と比較して有意な改良を提供する。特に、本発明の製剤は、製剤中に減少した量の凝集体、半分子、分解産物、低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）、ならびに酸性、塩基性、および中性アイソフォームの結合剤の再構成を有する。
【００９０】
ｉ．抗ＬＩＧＨＴ結合剤、ならびにその変異体および断片
ある実施形態においては、本発明の製剤は、抗ＬＩＧＨＴ結合剤を含む。結合剤は、ＬＩＧＨＴ、またはその変異体もしくは断片に結合するか、または特異的に結合する、抗体、ｓｉＲＮＡ、核酸、アプタマー、タンパク質、または低分子有機化合物のような任意の分子であってもよい。いくつかの実施形態においては、結合剤は、抗ＬＩＧＨＴ抗体、またはその変異体、またはその抗原結合断片である。抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）タンパク質、ポリペプチド断片、またはエピトープに特異的に結合する。ＬＩＧＨＴ分子は、任意の種に由来するものであってもよ
い。いくつかの実施形態においては、ＬＩＧＨＴ分子は、本明細書で「ｈＬＩＧＨＴ」として知られる、ヒトに由来するものである。ｈＬＩＧＨＴは以下のアミノ酸配列：
1   MEESVVRPSV FVVDGQTDIP FTRLGRSHRR QSCSVARVGL GLLLLLMGAG
51  LAVQGWFLLQ LHWRLGEMVT RLPDGPAGSW EQLTQERRSH EVNPAAHLTG
101 ANSSLTGSGG PLLWETQLGL AFLRGLSYHD GALVVTKAGY YYIYSKVQLG
150 GVGCPLGLAS TITHGLYKRT PRYPEELELL VSQQSPCGRA TSSSRVWWDS
200 SFLGGVVHLE AGEEVVVRVL DERLVRLRDG TRSYFGAFMV (配列番号9)
を有し、配列番号９として同定される。
【００９１】
ある例示的実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、またはその変異体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ＬＩＧＨＴのその受容体との結合を防止し、ＬＩＧＨＴ生物活性（例えば、ＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、および／またはＤｃＲ３）のようなＬＩＧＨＴリガンドを発現する細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８、またはＲＡＮＴＥＳのＬＩＧＨＴにより媒介される産生または分泌）を阻害する。
【００９２】
ある特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ＨＣＤＲ１−ＧＹＮＷＨ（配列番号１）；
ＨＣＤＲ２−ＥＩＴＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号２）；または
ＨＣＤＲ３−ＥＩＡＶＡＧＴＧＹＹＧＭＤＶ（配列番号３）
のいずれか１つまたは複数のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【００９３】
他の特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ＬＣＤＲ１−ＲＡＳＱＧＩＮＳＡＦＡ（配列番号４）；
ＬＣＤＲ２−ＤＡＳＳＬＥＳ（配列番号５）；または
ＬＣＤＲ３−ＱＱＦＮＳＹＰＬＴ（配列番号６）
のいずれか１つまたは複数のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【００９４】
１つの特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号１、２および３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【００９５】
別の特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号４、５および６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【００９６】
より特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号１、２および３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号４、５および６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００９７】
特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列：
1  QVQLQQWGAG LLKPSETLSL TCAVYGGSFS GYNWHWIRQP PGKGLEWIGE
51  ITHSGSTNYN PSLKSRVTIS VDTSKNQFSL KLSSVTAADT AVYYCVREIA
101  VAGTGYYGMD VWGQGTTVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL
151  VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT
201  KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFEGGP SVFLFPPKPK
251  DTLMISRTPE VTCVVVDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS
301  TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV
351  YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL
401  DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLG (配列番号7)
を含む重鎖を含む。
１〜１２２位：重鎖の可変領域（ＶＨ）。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔの定義による相補性決定領域）に下線を付ける。
１２３〜４４８位：ヒトＩｇＧ４の定常領域（Ｋａｂａｔの番号付けによる、２つの突然変異Ｓ２４１ＰおよびＬ２４８Ｅを含む、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ＩＧＨＧ４＿ＨＵＭＡＮ）。
【００９８】
他の特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号８のアミノ酸配列：
1  AIQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQGIN SAFAWYQQKP GKAPKLLIYD
51  ASSLESGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ FNSYPLTFGG
101  GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV
151  DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG
201  LSSPVTKSFN RGEC (配列番号8)
を含む軽鎖を含む。
１〜１０７位：軽鎖の可変領域（ＶＬ）。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔの定義による相補性決定領域）に下線を付ける。
１０８〜２１４位：ヒトＣκの定常領域。
【００９９】
さらなる実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０１００】
ある実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号１１の核酸配列によりコードされていてもよい、配列番号１０のアミノ酸配列に由来する重鎖を含む。
【０１０１】
【化１】
2018048174.tif 000002
【０１０２】
【化２】
2018048174.tif 000003
アミノ酸１〜１９：シグナルペプチド
アミノ酸２０〜１４１：１２４Ｆ１９ｋ２可変領域（ＶＨ）
アミノ酸１４２〜最後：ｈＩｇＧ４  ＰＥ定常領域
核酸１〜５７：シグナルペプチドをコードする核酸
核酸５８〜４２３：１２４Ｆ１９ｋ２可変領域（ＶＨ）をコードする核酸
核酸４２４〜最後：ｈＩｇＧ４  ＰＥ定常領域をコードする核酸。
【０１０３】
代替的な特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号１３の核酸配列によりコードされていてもよい、配列番号１２のアミノ酸配列に由来する軽鎖を含む。
【化３】
2018048174.tif 000004
アミノ酸１〜２２：シグナルペプチド
アミノ酸２３〜１２９：１２４Ｆ１９ｋ２可変領域（ＶＬ）
アミノ酸１３０〜最後：ｈカッパ定常領域
核酸１〜６６：シグナルペプチドをコードする核酸
核酸６７〜３８７：１２４Ｆ１９ｋ２可変領域（ＶＬ）をコードする核酸
核酸３８８〜最後：ｈカッパ定常領域をコードする核酸。
【０１０４】
本発明の一実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は完全ヒト抗体である。完全ヒト抗体アイソタイプの例としては、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが挙げられる。いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ＩｇＧ抗体である。４つの形態のＩｇＧが存在する。いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ＩｇＧ４抗体である。本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、完全ヒトＩｇＧ４抗体である。
【０１０５】
いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ定常領域をさらに含む。いくつかの実施形態においては、定常領域は、ヒトＩｇＧ４定常領域である。さらなる実施形態においては、定常領域は、改変されたヒトＩｇＧ４定常領域である。他の実施形態においては、定常領域は、ヒトＣκ定常領域である。
【０１０６】
本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗Ｌ
ＩＧＨＴ抗体（「リードＬＩＧＨＴ抗体」）である。本発明の代替的な実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が配列番号１、２および３のアミノ酸配列を含む３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖可変領域が配列番号４、５および６のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体である。配列番号７を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号８を含む軽鎖アミノ酸配列とを含む抗ＬＩＧＨＴ抗体などの、抗ＬＩＧＨＴ抗体の同定、単離、調製、および特性評価は、参照により本明細書に組み入れられるＰＣＴ公開ＷＯ２００８／０２７３３８に対応する、米国特許第８，０５８，４０２号に詳細に記載されている。
【０１０７】
本発明の製剤のある実施形態は、抗体のような、抗ＬＩＧＨＴ結合剤の変異体も含む。具体的には、本発明の製剤は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体である抗ＬＩＧＨＴ抗体の変異体を含む。抗ＬＩＧＨＴ抗体の変異体は、その高い類似性に基づいて類似する物理化学的特性を有し、従って、本発明の範囲内にも含まれる。変異体は、抗ＬＩＧＨＴ抗体と少なくとも９５％、少なくとも９７％、例えば、少なくとも９８％または９９％相同であり、ＬＩＧＨＴポリペプチド、ＬＩＧＨＴポリペプチド断片、またはＬＩＧＨＴエピトープへの結合について競合することができるアミノ酸配列を有する抗体と定義される。いくつかの実施形態においては、変異体は、ＬＩＧＨＴ生物活性（例えば、ＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、および／またはＤｃＲ３）のようなＬＩＧＨＴリガンドを発現する細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８、またはＲＡＮＴＥＳのＬＩＧＨＴにより媒介される産生または分泌）を改善する、中和する、またはさもなければ阻害する。結合に関する標的との競合の決定を、当業者には公知の日常的な方法により行うことができる。いくつかの実施形態においては、変異体はヒト抗体であり、いくつかの実施形態においては、ＩｇＧ４分子である。いくつかの実施形態においては、変異体は、リード抗体とアミノ酸配列において少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である。用語「変異体」とは、抗ＬＩＧＨＴ抗体のアミノ酸配列と比較して１つまたは複数のアミノ酸により変化したアミノ酸配列を含む抗体を指す。変異体は、アミノ酸置換、改変、付加、および欠失などの保存的配列改変を有してもよい。
【０１０８】
改変の例としては、限定されるものではないが、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／遮断基による誘導体化、タンパク質分解的切断、および細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結が挙げられる。アミノ酸改変を、抗体をコードする核酸中での部位特異的突然変異誘発、分子クローニング、オリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発、および無作為ＰＣＲ媒介性突然変異誘発のような、当業界で公知の標準的な技術により導入することができる。保存的アミノ酸置換としては、アミノ酸残基が類似する構造的または化学的特性を有するアミノ酸残基で置きかえられたものが挙げられる。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当業界で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ−分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン）が挙げられる。上記で用いられたもの以外のアミノ酸残基ファミリーの分類を用いることもできることが当業者には明らかであろう。さらに、変異体は、非保存的アミノ酸置換、例えば、あるアミノ酸の、異なる構造的または化学的特性を有するアミノ酸残基による置きかえを有してもよい。類似する小さい変異はまた、アミノ酸欠失もしくは挿入、またはその両方を含んでもよい。どのアミノ酸残基を、免疫学的活性を無効化することなく置換する、改変する、挿入する、または欠失させることができるかを
決定する際の指針を、当業界で周知のコンピュータプログラムを用いて見出すことができる。当業者には公知である、特にＧａｐまたはＢｅｓｔｆｉｔのようなコンピュータアルゴリズムを用いて、比較しようとするアミノ酸配列を最適に整列させ、類似するか、または同一のアミノ酸残基を定義することができる。変異体は、抗ＬＩＧＨＴ抗体と比較して、同じか、または異なる、より高いか、またはより低い結合親和性を有してもよいが、依然としてＬＩＧＨＴに特異的に結合することができ、抗ＬＩＧＨＴ抗体と同じであるか、より高いか、またはより低い生物活性を有してもよい。
【０１０９】
本発明の実施形態はまた、抗体のような、抗ＬＩＧＨＴ結合剤の抗原結合断片を含んでもよい。用語「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、「抗原結合断片」および同様の用語は、抗原と相互作用し、結合剤に、抗原に対するその特異性および親和性を付与するアミノ酸残基を含む抗体の部分（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を指す。抗原結合領域は、げっ歯類（例えば、ウサギ、ラットまたはハムスター）およびヒトのような任意の動物種に由来することができる。いくつかの実施形態においては、抗原結合領域は、ヒト起源のものである。抗原結合断片の非限定例としては：Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、ｄＡｂ断片、および抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。
【０１１０】
本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ結合剤（またはその変異体またはその抗原結合断片）は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＬＩＧＨＴ生物活性（例えば、ＬＩＧＨＴ受容体、例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、および／またはＤｃＲ３を発現する細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８、またはＲＡＮＴＥＳのＬＩＧＨＴにより媒介される産生または分泌）を改善する、中和する、またはさもなければ阻害する。
【０１１１】
本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ結合剤（またはその変異体またはその抗原結合断片）は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＬＩＧＨＴ生物活性（例えば、ＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、および／またはＤｃＲ３）のようなＬＩＧＨＴリガンドを発現する細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８、またはＲＡＮＴＥＳのＬＩＧＨＴにより媒介される産生または分泌）を改善する、中和する、またはさもなければ阻害するアンタゴニスト結合剤である。
【０１１２】
いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ結合剤（またはその変異体またはその抗原結合断片）は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２８０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、および約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在する。例えば、抗ＬＩＧＨＴ結合剤は、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約６５ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約８５ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約９５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０５ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１１５ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１３５ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１４５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５５ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１６５ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１８５ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約１９５ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２０５ｍｇ／ｍＬ、約２１０ｍｇ／ｍＬ、約２１５ｍｇ／ｍＬ、約２２０ｍｇ／ｍＬ、約２２５ｍｇ／ｍＬ、約２３０ｍｇ／ｍＬ、約２３５ｍｇ／ｍＬ、約２４０ｍｇ／ｍＬ、約２４５ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５５ｍｇ／ｍＬ、約２６０ｍｇ／ｍＬ、約２６５ｍｇ／ｍＬ、約２７０ｍｇ／ｍＬ、約２７５ｍｇ／ｍＬ、または約２８０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在してもよい。
【０１１３】
代替的な実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ結合剤は、約５〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５１〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約７６〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０１〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１２６〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５１〜約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１７６〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約２０１ｍｇ／ｍＬ〜約２２５ｍｇ／ｍＬ、約２２６ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５１〜約２８０ｍｇ／ｍＬ、約５〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約４０〜約６０ｍｇ／ｍＬ、約７５〜約８５ｍｇ／ｍＬ、または約１４０〜約１６０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在してもよい。
【０１１４】
ある例示的実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ結合剤は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１７０ｍｇ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１６０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約１５０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在する。あるいは、抗ＬＩＧＨＴ結合剤は、約５０ｍｇ／ｍＬの量で存在する。別の例示的実施形態においては、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体は、約１５０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在する。
【０１１５】
ｉｉ．抗ＣＸＣＲ５結合剤、ならびにその変異体および断片
ある実施形態においては、本発明の製剤は、抗ＣＸＣＲ５結合剤を含む。結合剤は、ＣＸＣＲ５に結合するか、もしくは特異的に結合する、抗体、ｓｉＲＮＡ、核酸、アプタマー、タンパク質、もしくは低分子有機化合物、またはその変異体もしくは断片のような任意の分子であってもよい。いくつかの実施形態においては、結合剤は、抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその変異体、またはその抗原結合断片である。抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＣＸＣＬ１３（ＢＬＣとしても知られる）タンパク質、ポリペプチド断片、またはエピトープに特異的に結合する。ＣＸＣＲ５分子は、任意の種に由来するものであってもよい。いくつかの実施形態においては、ＣＸＣＲ５分子は、本明細書で「ｈＣＸＣＲ５」として知られる、ヒトに由来するものである。ｈＣＸＣＲ５は、以下のアミノ酸配列：
MNYPLTLEMD LENLEDLFWE LDRLDNYNDT SLVENHLCPA TEGPLMASFK AVFVPVAYSL
IFLLGVIGNV LVLVILERHR QTRSSTETFL FHLAVADLLL VFILPFAVAE GSVGWVLGTF
LCKTVIALHK VNFYCSSLLL ACIAVDRYLA IVHAVHAYRH RRLLSIHITC GTIWLVGFLL
ALPEILFAKV SQGHHNNSLP RCTFSQENQA ETHAWFTSRF LYHVAGFLLP MLVMGWCYVG
VVHRLRQAQR RPQRQKAVRV AILVTSIFFL CWSPYHIVIF LDTLARLKAV DNTCKLNGSL
PVAITMCEFL GLAHCCLNPM LYTFAGVKFR SDLSRLLTKL GCTGPASLCQ LFPSWRRSSL
SESENATSLT TF (配列番号14)
を有し、配列番号１４として同定される。
【０１１６】
ある例示的実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、またはその変異体もしくはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＣＸＣＲ５のそのリガンドとの結合を防止し、ＣＸＣＲ５生物活性（例えば、ＣＸＣＲ５のＣＸＣＬ１３への結合）を阻害する。
【０１１７】
ある特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ＨＣＤＲ１−ＧＦＳＬＩＤＹＧＶＮ（配列番号１５）；
ＨＣＤＲ２−ＶＩＷＧＤＧＴＴＹ（配列番号１６）；または
ＨＣＤＲ３−ＩＶＹ（配列番号１７）
のいずれか１つまたは複数のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【０１１８】
他の特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ＬＣＤＲ１−ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＳＧＫＴＹＬＹ（配列番号１８）；
ＬＣＤＲ２−ＲＬＳＳＬＡ（配列番号１９）；または
ＬＣＤＲ３−ＭＱＨＬＥＹＰＹＴ（配列番号２０）
のいずれか１つまたは複数のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１１９】
１つの特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号１５、１６および１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【０１２０】
別の特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号１８、１９および２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１２１】
より特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号１５、１６および１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号１８、１９および２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１２２】
特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２１：
QVQLKESGPG LVAPSESLSI TCTVSGFSLI DYGVNWIRQP PGKGLEWLGV IWGDGTTYYN
PSLKSRLSIS KDNSKSQVFL KVTSLTTDDT AMYYCARIVY WGQGTLVTVS A (配列番号21)
のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０１２３】
別の特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２２：
DIVMTQAAPS VAVTPGASVS ISCRSSKSLL HSSGKTYLYW FLQRPGQSPQ LLIYRLSSLA SGVPDRFSGS
GSGTAFTLRI SRVEAEDVGV YYCMQHLEYP YTFGGGTKLE IK (配列番号22)
のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１２４】
より特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１２５】
いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ定常領域をさらに含む。いくつかの実施形態においては、定常領域は、ヒトＩｇＧ４定常領域である。さらなる実施形態においては、定常領域は、改変されたヒトＩｇＧ４定常領域である。いくつかの実施形態においては、ヒトＩｇＧ４定常領域は、以下の改変：Ｓ２４１Ｐ（配列番号２３中、太字で以下に示される）、Ｌ２４８Ｅ（配列番号２３中、太字で以下に示される）、および異種性を回避するための末端リシンの欠如を有する。いくつかの実施形態においては、ＩｇＧ４定常領域は、配列番号２３：
【化４】
2018048174.tif 000005
【０１２６】
他の実施形態においては、定常領域は、ヒトＣκ定常領域である。いくつかの実施形態においては、Ｃκ定常領域は、配列番号２４：
RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS
TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC (配列番号24)
のアミノ酸配列を含む。
【０１２７】
特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２５：
【化５】
2018048174.tif 000006
のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
１〜１１１位：重鎖の可変領域（ＶＨ）。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔの定義による、相補性決定領域）に下線を付ける。
１１２〜４３２位：ヒトＩｇＧ４の定常領域（以下の改変：Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、および異種性を回避するための末端リシンの欠如を含む、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ＩＧＨＧ４＿ＨＵＭＡＮ）。
【０１２８】
他の特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２６：
DIVMTQAAPS VAVTPGASVS ISCRSSKSLL HSSGKTYLYW FLQRPGQSPQ LLIYRLSSLA SGVPDRFSGS
GSGTAFTLRI SRVEAEDVGV YYCMQHLEYP YTFGGGTKLE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL
LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV
TKSFNRGEC (配列番号26)
のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
１〜１１２位：軽鎖の可変領域（ＶＬ）。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔの定義による、相補性決定領域）に下線を付ける。
１１３〜１８２位：ヒトＣκの定常領域。
【０１２９】
さらなる実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０１３０】
いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、リーダー配列をさらに含む。リーダー配列は、いくつかの実施形態においては、２５〜２５アミノ酸、典型的には、１９アミノ酸のような、１〜３０アミノ酸の長さのアミノ酸配列を含む。重鎖、軽鎖、または重鎖と軽鎖の両方が、リーダー配列を含んでもよい。いくつかの実施形態においては、リーダー配列は、配列番号１６：ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬ  ＶＡＴＡＴＧＶＨＳ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含む。
【０１３１】
特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２８：
【化６】
2018048174.tif 000007
のアミノ酸配列に由来する重鎖を含む。
１〜１９位：リーダー配列
２０〜１３０位：重鎖の可変領域（ＶＨ）。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔの定義による、相補性決定領域）に下線を付ける。
１３１〜４５６位：ヒトＩｇＧ４の定常領域（以下の改変：Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、および異種性を回避するための末端リシンの欠如を含む、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ＩＧＨＧ４＿ＨＵＭＡＮ）。
【０１３２】
他の特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２９：
MGWSCIILFL VATATGVHSD IVMTQAAPSV AVTPGASVSI SCRSSKSLLH SSGKTYLYWF LQRPGQSPQL
LIYRLSSLAS GVPDRFSGSG SGTAFTLRIS RVEAEDVGVY YCMQHLEYPY TFGGGTKLEI KRTVAAPSVF
IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY
EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC (配列番号29)
のアミノ酸配列に由来する軽鎖を含む。
１〜１９位：リーダー配列
２０〜１３１位：軽鎖の可変領域（ＶＬ）。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔの定義による、相補性決定領域）に下線を付ける。
１３２〜２３８位：ヒトＣκの定常領域。
【０１３３】
さらなる実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０１３４】
本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ヒト化または完全ヒト抗体である。ヒト化および完全ヒト抗体アイソタイプの例としては、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが挙げられる。いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＩｇＧ抗体である。４つの形態のＩｇＧが存在する。いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＩｇＧ４抗体である。本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ヒト化ＩｇＧ４抗体である。
【０１３５】
本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体である（「リードＣＸＣＲ５抗体」）。本発明の代替的な実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が配列番号１５、１６および１７のアミノ酸配列を含む３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖可変領域が配列番号１８、１９および２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、ヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体である。配列番号２５を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号２６を含む軽鎖アミノ酸配列とを含む抗ＣＸＣＲ５抗体などの、抗ＣＸＣＲ５抗体の同定、単離、調製、および特性評価は、参照により本明細書に組み入れられるＰＣＴ公開ＷＯ２００９／０３２６６１に詳細に記載されている。
【０１３６】
本発明の製剤のある実施形態は、抗体のような抗ＣＸＣＲ５結合剤の変異体も含む。特に、本発明の製剤は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体である、抗ＣＸＣＲ５抗体の変異体を含んでもよい。抗ＣＸＣＲ５抗体の変異体は、その高い類似性に基づいて、類似する物理化学的特性を有してもよく、従って、これも本発明の範囲内に含まれる。変異体は、抗ＣＸＣＲ５抗体と少なくとも９５％、少なくとも９７％、例えば、少なくとも９８％または９９％相同であり、ＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＣＸＣＲ５ポリペプチド断片、またはＣＸＣＲ５エピトープへの結合について競合することができるアミノ酸配列を有する抗体と定義される。いくつかの実施形態においては、変異体は、ＣＸＣＲ５生物活性（例えば、ＣＸＣＬ１３のＣＸＣＲ５への結合）を改善する、中和する、またはさもなければ阻害する。標的への結合に関する競合の決定を、当業者には公知の日常的な方法により行うことができる。いくつかの実施形態においては、変異体は、ヒト抗体であり、いくつか
の実施形態においては、ＩｇＧ４分子である。いくつかの実施形態においては、変異体は、リード抗体と、アミノ酸配列において少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。用語「変異体」は、抗ＣＸＣＲ５抗体のアミノ酸配列と比較して、１つまたは複数のアミノ酸により変化したアミノ酸配列を含む抗体を指す。変異体は、アミノ酸置換、改変、付加、および欠失などの、保存的配列改変を有してもよい。
【０１３７】
改変の例としては、限定されるものではないが、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／遮断基による誘導体化、タンパク質分解的切断、および細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結が挙げられる。アミノ酸改変を、抗体をコードする核酸における部位特異的突然変異誘発、分子クローニング、オリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発、および無作為ＰＣＲ媒介性突然変異誘発などの、当業界で公知の標準的な技術により導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似する構造的または化学的特性を有するアミノ酸残基で置きかえられたものを含む。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当業界で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ−分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン）が挙げられる。上記で用いられたもの以外のアミノ酸残基ファミリーの分類を用いることもできることが当業者には明らかであろう。さらに、変異体は、非保存的アミノ酸置換、例えば、あるアミノ酸と、異なる構造的または化学的特性を有するアミノ酸残基との置きかえを有してもよい。類似する小さい変異はまた、アミノ酸欠失もしくは挿入、またはその両方を含んでもよい。どのアミノ酸残基を、免疫学的活性を無効化することなく置換する、改変する、挿入する、または欠失させることができるかを決定する際の指針を、当業界で周知のコンピュータプログラムを用いて見出すことができる。当業者には公知である、特にＧａｐまたはＢｅｓｔｆｉｔのようなコンピュータアルゴリズムを用いて、比較しようとするアミノ酸配列を最適に整列させ、類似するか、または同一のアミノ酸残基を定義することができる。変異体は、抗ＣＸＣＲ５抗体と比較して、同じか、または異なる、より高いか、またはより低い結合親和性を有してもよいが、依然としてＣＸＣＲ５に特異的に結合することができ、抗ＣＸＣＲ５抗体と同じであるか、より高いか、またはより低い生物活性を有してもよい。
【０１３８】
本発明の実施形態は、抗体のような、抗ＣＸＣＲ５結合剤の抗原結合断片も含む。用語「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、「抗原結合断片」および同様の用語は、抗原と相互作用し、結合剤に、抗原に対するその特異性および親和性を付与するアミノ酸残基を含む抗体の部分を指す（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））。抗原結合領域を、げっ歯類（例えば、ウサギ、ラットまたはハムスター）およびヒトのような、任意の動物種に由来することができる。いくつかの実施形態においては、抗原結合領域は、ヒト起源のものである。抗原結合断片の非限定例としては：Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、ｄＡｂ断片、および抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。
【０１３９】
本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤（またはその変異体もしくはその抗原結合断片）は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＣＸＣＲ５生物活性（例えば、ＣＸＣＬ１３のＣＸＣＲ５への結合）を改善する、中和する、またはさもなければ阻害する。
【０１４０】
本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤（またはその変異体もし
くはその抗原結合断片）は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＣＸＣＲ５生物活性（例えば、ＣＸＣＬ１３のＣＸＣＲ５への結合）を改善する、中和する、またはさもなければ阻害するアンタゴニスト結合剤である。
【０１４１】
いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤（またはその変異体もしくはその抗原結合断片）は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２８０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、および約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在する。例えば、抗ＣＸＣＲ５結合剤は、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約６５ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約８５ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約９５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０５ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１１５ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１３５ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１４５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５５ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１６５ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１８５ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約１９５ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２０５ｍｇ／ｍＬ、約２１０ｍｇ／ｍＬ、約２１５ｍｇ／ｍＬ、約２２０ｍｇ／ｍＬ、約２２５ｍｇ／ｍＬ、約２３０ｍｇ／ｍＬ、約２３５ｍｇ／ｍＬ、約２４０ｍｇ／ｍＬ、約２４５ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５５ｍｇ／ｍＬ、約２６０ｍｇ／ｍＬ、約２６５ｍｇ／ｍＬ、約２７０ｍｇ／ｍＬ、約２７５ｍｇ／ｍＬ、または約２８０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在してもよい。
【０１４２】
代替的な実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤は、約５〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５１〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約７６〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０１〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１２６〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５１〜約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１７６〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約２０１ｍｇ／ｍＬ〜約２２５ｍｇ／ｍＬ、約２２６ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５１〜約２８０ｍｇ／ｍＬ、約５〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約４０〜約６０ｍｇ／ｍＬ、約７５〜約８５ｍｇ／ｍＬ、または約９０〜約１１０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在してもよい。
【０１４３】
ある例示的実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤は、約２０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在する。あるいは、抗ＣＸＣＲ５結合剤は、約１００ｍｇ／ｍＬの量で存在する。別の例示的実施形態においては、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体は、約２０ｍｇ／ｍＬまたは１００ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在する。
【０１４４】
ｉｉｉ．緩衝剤
本発明の製剤は、緩衝剤としてクエン酸バッファーを含む。緩衝剤は、生理的に好適なｐＨを維持する。さらに、緩衝剤は、製剤の等張性および化学的安定性を増強する。いくつかの実施形態においては、クエン酸バッファーは、約０．５ｍＭ〜約５０ｍＭ、例えば、約５ｍＭ〜約１５ｍＭの濃度で製剤中に存在する。例えば、クエン酸バッファーは、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、約３０ｍＭ、約３１ｍＭ、約３２ｍＭ、約３３ｍＭ、約３４ｍＭ、約３５ｍＭ、約３６ｍＭ、約３７ｍＭ、約３８ｍＭ、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４１ｍＭ、約４２ｍＭ、約４３ｍＭ、約４４ｍＭ、約４５ｍＭ、約４６ｍＭ、約４７ｍＭ、約４８ｍＭ、約４９ｍＭ、および約５０ｍＭの濃度で製剤中に
存在してもよい。いくつかの実施形態においては、クエン酸バッファーは、約９ｍＭ〜約１１ｍＭのような、約７ｍＭ〜約１３ｍＭの濃度で製剤中に存在する。いくつかの実施形態においては、クエン酸バッファーは、約１０ｍＭの濃度で存在する。
【０１４５】
ある実施形態においては、本発明の製剤は、ｐＨ６以下のｐＨを有する。いくつかの実施形態においては、製剤のｐＨは、約５．０〜約６．０の範囲である。例えば、製剤のｐＨは、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、および約６．０であってもよい。いくつかの実施形態においては、製剤のｐＨは、約５．５〜約６．０の範囲であってもよい。いくつかの実施形態においては、ｐＨは約５．５または約６．０である。製剤のｐＨを、当業者には公知の任意の手段により測定することができる。ｐＨを測定するための手段は、微小電極を含むｐＨメーターを用いることである。製剤のｐＨを、当業界で公知の任意の手段を用いて調整することができる。製剤のｐＨを変化させるための例示的化学物質は、塩酸（ＨＣｌ）および水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）である。
【０１４６】
ある実施形態においては、本発明の製剤は、抗体のような、結合剤の等電点（ｐＩ）以下のｐＨを有する。等電点は、特定の分子または表面が正味の電荷を担持しないｐＨである。抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５結合剤のｐＩを、当業者には公知の任意の手段により決定することができる。いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５抗体のｐＩは、変性等電点電気泳動により決定される。図１に示されるように、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体のｐＩは、６．８〜７．２である。図１１に示されるように、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体のｐＩは、７．６〜８．４である。
【０１４７】
ｉｖ．界面活性剤
本発明の製剤は、場合により、安定化剤としても知られる界面活性剤をさらに含んでもよい。界面活性剤／安定化剤は、製剤中の生物分子および／または一般的な医薬添加剤と相互作用し、これを安定化する化学化合物である。ある実施形態においては、界面活性剤を、より低い温度の保存と共に用いることができる。界面活性剤は一般に、空気／溶液境界面で誘導されるストレスおよび溶液／表面で誘導されるストレスから結合剤を保護し、そうでなければタンパク質凝集をもたらし得る。界面活性剤としては、限定されるものではないが、ポリソルベート、グリセリン、ジカルボン酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、フタル酸、およびその組合せが挙げられる。当業者であれば、それらが薬学的に許容される、すなわち、対象への投与にとって好適である限り、他の界面活性剤、例えば、非イオン性またはイオン性界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）を用いることができることを知っている。界面活性剤は、いくつかの実施形態においては、ポリソルベートである。ポリソルベートの例としては、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、およびポリソルベート８０が挙げられる。
【０１４８】
例示的実施形態においては、界面活性剤は、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．１％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在する。例えば、界面活性剤は、約０．００１％（ｗ／ｖ）、約０．００２％（ｗ／ｖ）、約０．００３％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）、約０．００６％（ｗ／ｖ）、約０．００７％（ｗ／ｖ）、約０．００８％（ｗ／ｖ）、約０．００９％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）、約０．０２％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０６％（ｗ／ｖ）、約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０９％（ｗ／ｖ）、および約０．１％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在してもよい。特定の実施形態においては、界面活性剤は、約０．００３％（ｗ／ｖ）〜約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％（ｗ／ｖ）、または約０．００５
％（ｗ／ｖ）〜約０．０２％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．００５％（ｗ／ｖ）で製剤中に存在する。例えば、ポリソルベート２０は、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００２％（ｗ／ｖ）〜約０．０１％（ｗ／ｖ）、約０．００３％（ｗ／ｖ）〜約０．００８％（ｗ／ｖ）、および約０．００４％（ｗ／ｖ）〜約０．００６％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．００５％（ｗ／ｖ）で製剤中に存在してもよい。代替的な実施形態においては、ポリソルベート２０は、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０５％（ｗ／ｖ）、および約０．００７５％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．０１％（ｗ／ｖ）の量で存在する。さらに代替的な実施形態においては、ポリソルベート２０は、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０５％（ｗ／ｖ）、および約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約０．０３％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．０２％（ｗ／ｖ）の量で存在する。
【０１４９】
ｖ．等張化剤
本発明の製剤は、場合により、等張化剤をさらに含んでもよい。典型的には、等張化剤は、製剤のオスモル濃度を、血液または血漿のような体液の浸透圧に近いものにするために調整または維持するために用いられる。等張化剤はまた、製剤中の結合剤レベルを維持することもできる。部分的には、等張化剤は、製剤中に存在する治療上活性な結合剤のレベル、比率、または割合を保つのに寄与する。本明細書で用いられる用語「等張化（ｔｏｎｉｃｉｔｙ）」とは、流体環境または溶液中の生物学的成分の挙動を指す。等張溶液は、血漿と同じ浸透圧を有し、対象の血漿の浸透圧を変化させることなく、対象中に静脈内注入することができる。実際、本発明のある実施形態においては、等張化剤は、製剤を静脈内注入にとって好適なものにするのに十分な量で存在する。等張化剤はその上、増量剤または安定化剤としての役割も果たすことが多い。そのようなものとして、等張化剤により、結合剤は凍結および剪断のような様々なストレスを克服することができる。等張化剤としては、限定されるものではないが、サッカライド、糖、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、および他の無機塩が挙げられる。当業者であれば、それらが薬学的に許容される、すなわち、対象への投与にとって好適である限り、他の等張化剤を用いることができることを知っている。
【０１５０】
ある実施形態においては、等張化剤は、約０．１％（ｗ／ｖ）〜１０％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在する。例えば、等張化剤は、約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．６％（ｗ／ｖ）、約０．７％（ｗ／ｖ）、約０．８％（ｗ／ｖ）、約０．９％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）、約２％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）、約４％（ｗ／ｖ）、約４．５％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）、約５．５％（ｗ／ｖ）、約６％（ｗ／ｖ）、約７％（ｗ／ｖ）、約８％（ｗ／ｖ）、約９％（ｗ／ｖ）、および約１０％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在してもよい。あるいは、等張化剤は、約２％（ｗ／ｖ）〜約８％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）〜約７％（ｗ／ｖ）、および約４％（ｗ／ｖ）〜約６％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在してもよい。さらに代替的な実施形態においては、等張化剤は、約０．１％〜約１％、約０．１％〜約０．５％、約０．１％〜約０．３％、および約０．２％の量で製剤中に存在してもよい。
【０１５１】
ある例示的実施形態においては、等張化剤は、サッカライドである。サッカライドの例としては、グルコース、スクロース（サッカロースとしても知られる）、マルトース、トレハロース、デキストロース、キシリトール、フルクトースおよびマンニトールが挙げられる。例えば、マンニトールは、約１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）、約２％（ｗ／ｖ）〜約８％（ｗ／ｖ）、または約３％（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ）、例えば、約４％（ｗ／ｖ）の量で存在してもよい。あるいは、スクロース（サッカロースとしても知られる）は、約１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）〜約８％（ｗ／ｖ）
、または約４％（ｗ／ｖ）〜約６％（ｗ／ｖ）、例えば、約４．５、５、５．５または６％（ｗ／ｖ）の量で存在してもよい。
【０１５２】
ある他の例示的実施形態においては、等張化剤は、塩化ナトリウムである。例えば、塩化ナトリウムは、約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．６％（ｗ／ｖ）、約０．７％（ｗ／ｖ）、約０．８％（ｗ／ｖ）、約０．９％（ｗ／ｖ）、および約１％（ｗ／ｖ）の量で存在してもよい。あるいは、塩化ナトリウムは、約０．１％〜約１％、約０．１％〜約０．５％、約０．１％〜約０．３％、および約０．２％の量で製剤中に存在してもよい。
【０１５３】
さらなる例示的実施形態においては、製剤は、１つまたは複数の等張化剤を含んでもよい。例えば、製剤は、上記濃度の１つまたは複数の上記等張化剤を含んでもよい。ある特定の実施形態においては、製剤はスクロースと塩化ナトリウムとを含んでもよく、スクロースと塩化ナトリウムのそれぞれの濃度は約０．１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）である。いくつかの実施形態においては、スクロース濃度は約６％であり、塩化ナトリウム濃度は約０．２％である。あるいは、スクロース濃度は約４．５％であり、塩化ナトリウム濃度は約０．２％である。
【０１５４】
本発明のある実施形態においては、製剤のオスモル濃度は約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、または約２９０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲、例えば、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇである。換言すれば、本発明の製剤は、いくつかの実施形態においては、ヒト血液と実質的に等張性である、すなわち、実質的に同じ浸透圧を有する。オスモル濃度を、蒸気圧または凍結型浸透圧計を用いるような、当業者には公知の任意の手段によって測定することができる。本発明の製剤のオスモル濃度を、例えば、本明細書に記載の１つまたは複数の等張化剤により調節することができる。
【０１５５】
ｖｉ．アミノ酸
本発明の製剤は、場合により、アミノ酸をさらに含んでもよい。アミノ酸の例としては、限定されるものではないが、グリシン、アラニン、アスパラギン酸、リシン、セリン、チロシン、システイン、グルタミン、メチオニン、アルギニン、およびプロリンが挙げられる。例示的実施形態においては、アミノ酸は、約０．１％（ｗ／ｖ）〜５％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在する。例えば、アミノ酸は、約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．６％（ｗ／ｖ）、約０．７％（ｗ／ｖ）、約０．８％（ｗ／ｖ）、約０．９％（ｗ／ｖ）、約１．０％（ｗ／ｖ）、約１．１％（ｗ／ｖ）、約１．２％（ｗ／ｖ）、約１．３％（ｗ／ｖ）、約１．４％（ｗ／ｖ）、約１．５％（ｗ／ｖ）、約１．６％（ｗ／ｖ）、約１．７％（ｗ／ｖ）、約１．８％（ｗ／ｖ）、約１．９％（ｗ／ｖ）、約２．０％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）、約４％（ｗ／ｖ）、および約５％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在してもよい。あるいは、アミノ酸は、約１．３％（ｗ／ｖ）〜約１．８％（ｗ／ｖ）、または約１．４％（ｗ／ｖ）〜約１．６％（ｗ／ｖ）、例えば、約１．５％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在する。さらに代替的な実施形態においては、アミノ酸は、約０．５％（ｗ／ｖ）〜約１．５％（ｗ／ｖ）、または約０．８％（ｗ／ｖ）〜約１．２％（ｗ／ｖ）、例えば、約１．０％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在する。例示的なアミノ酸は、プロリンまたはアルギニンである。例えば、プロリンは、約１％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ）、約１．３％（ｗ／ｖ）〜約１．８％（ｗ／ｖ）、約１．４％（ｗ／ｖ）〜約１．６％（ｗ／ｖ）、例えば、１．５％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在してもよい。あるいは、アルギニンは、約０．５％（ｗ／ｖ）〜約１．５％（ｗ／ｖ）、または約０．８％（ｗ／ｖ）〜約１．２％（ｗ／ｖ）、例えば、約１．０％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在してもよい。
【０１５６】
ｖｉｉ．他の添加剤
さらに、本発明の製剤は、限定されるものではないが、注射用水、賦形剤、可溶化剤、緩和剤、さらなるバッファー、無機または有機塩、酸化防止剤などの他の添加剤を含んでもよい。しかしながら、いくつかの実施形態においては、本発明の製剤は、上記のもの以外の他の添加剤を含まない。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．（編）（１９８０）に記載のもののような、他の薬学的に許容される担体、添加剤、または安定剤が製剤の所望の特性に有害に影響しないという条件で、それらを製剤中に含有させることができる。特定の実施形態においては、製剤は保存剤を実質的に含まないが、代替的な実施形態においては、必要に応じて保存剤を添加してもよい。例えば、凍結防止剤またはリオプロテクタントを、凍結乾燥製剤中に含有させることができる。
【０１５７】
ｖｉｉｉ．液体または凍結乾燥製剤
本発明の製剤は、液体製剤または凍結乾燥製剤であってもよい。いくつかの実施形態においては、製剤は液体製剤である。いくつかの実施形態においては、液体製剤は、すぐに注射できる。あるいは、製剤は凍結乾燥粉末であってもよい。いくつかの実施形態においては、凍結乾燥粉末は、投与の直前に溶媒とすぐに混合される。
【０１５８】
ｉｘ．製剤例
本発明の１つの例示的実施形態においては、本発明は、皮下投与にとって好適な安定な液体抗体製剤であって、
ａ）約８０ｍｇ／ｍｌを超える、例えば、約１５０ｍｇ／ｍｌの、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合し、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．００５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；および
ｄ）約４％（ｗ／ｖ）のマンニトール；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、前記製剤を提供する。
【０１５９】
ある例示的実施形態においては、この製剤を、
ａ）注射用水に約１０ｍＭのクエン酸ナトリウム二水和物を溶解し、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムを用いて、緩衝溶液のｐＨを約ｐＨ５．５に調整する工程；
ｂ）約８０ｍｇ／ｍｌを超える、例えば、約１５０ｍｇ／ｍｌの、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合し、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体、約４％（ｗ／ｖ）のマンニトール、および０．００５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、完全に溶解されるまで不活性材料から作られたベッセル中で撹拌しながら、工程ａ）の緩衝溶液に添加した後、塩酸または水酸化ナトリウムを用いて、得られる製剤のｐＨを約ｐＨ５．５に調整した後、工程ａ）の緩衝溶液を添加して、得られる製剤の最終重量を調整する工程；
ｃ）０．２μＭの公称孔径を有する滅菌された適合性膜フィルターを用いて無菌条件下で工程ｂ）の製剤を濾過した後、０．２μＭの公称孔径を有する滅菌された適合性膜フィルターを用いて、不活性材料から作られる滅菌容器中に、無菌条件下での濾過により製剤を滅菌する工程；
ｄ）ストッパおよびフランジを備えたフリップオフキャップで密閉される滅菌バイアル中に、無菌条件下で工程ｃ）に由来する製剤を充填する工程；ならびに場合により、
ｅ）粗い汚染物質、無傷の密封、および眼に見える粒子について、工程ｄ）に由来する容器を検査する工程
により製造することができる。
【０１６０】
本発明の別の例示的実施形態においては、本発明は、静脈内投与にとって好適な安定な液体抗体製剤であって、
ａ）約５〜約８０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５０ｍｇ／ｍＬの、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合し、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；および
ｃ）約０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、前記製剤を提供する。
【０１６１】
本発明の代替的な例示的実施形態においては、本発明は、静脈内投与にとって好適な安定な凍結乾燥抗体製剤であって、
ａ）約５〜約８０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５０ｍｇ／ｍＬの、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合し、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；
ｄ）約５％（ｗ／ｖ）のスクロース；および
ｅ）約１．５％（ｗ／ｖ）のプロリン；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、前記製剤を提供する。
【０１６２】
本発明の例示的実施形態においては、本発明は、
ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体型５）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０２％のポリソルベート２０；
ｄ）約６％のスクロース；および
ｅ）約０．２％の塩化ナトリウム；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤を提供する。
【０１６３】
本発明の代替的な例示的実施形態においては、本発明は、
ａ）約１００ｍｇ／ｍＬの、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体型５）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０；
ｄ）約４．５％のスクロース；
ｅ）約０．２％の塩化ナトリウム；
ｆ）約１％のアルギニン；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤を提供する。
【０１６４】
ｘ．安定性
本発明の製剤は、５℃で、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２カ月以上、典型的には、少なくとも約１２、１８または２４カ月以上にわたって安定である。例示的実施形態においては、それらは５℃で、少なくとも約６カ月以上にわたって安定である。他の例示的実施形態においては、それらは５℃で、少なくとも
約９カ月にわたって安定である。さらなる例示的実施形態においては、それらは５℃で、少なくとも約１年以上、典型的には約２年にわたって安定である。
【０１６５】
Ｃ．投与様式
本発明のある実施形態においては、製剤は、非経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、皮下投与、またはその組合せにとって好適である。本発明の製剤は、様々な技術による送達にとって好適である。
【０１６６】
本発明のいくつかの実施形態においては、製剤は静脈内投与される。例えば、抗体のような、８０ｍｇ／ｍＬ以下のＩｇＧ４結合剤を含有する製剤を静脈内投与するのが望ましい。従って、製剤は、典型的には滅菌される。無菌製剤を作製するための方法は当業界で周知であり、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過または約１２０℃で約３０分間の抗体を除く製剤の構成成分のオートクレーブが挙げられる。例えば、本発明は、静脈内投与にとって好適な安定な液体抗体製剤であって、ａ）約５〜約８０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５０ｍｇ／ｍＬの、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合し、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；およびｃ）約０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、前記製剤を提供する。あるいは、本発明は、ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体型５）抗体；ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；ｃ）約０．０２％のポリソルベート２０；ｄ）約６％のスクロース；およびｅ）約０．２％の塩化ナトリウムを含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤を提供する。
【０１６７】
本発明のいくつかの実施形態においては、製剤は皮下投与される。例えば、抗体のような、８０ｍｇ／ｍＬを超えるＩｇＧ４結合剤を含有する製剤を皮下投与するのが望ましい。特定の実施形態においては、ａ）約１５０ｍｇ／ｍＬの、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合し、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；ｃ）約０．００５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；ｄ）約４％（ｗ／ｖ）のマンニトールを含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、安定な液体抗体製剤を対象に皮下投与するのが望ましい。あるいは、本発明は、ａ）約１００ｍｇ／ｍＬの、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体型５）抗体；ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０；ｄ）約４．５％のスクロース；ｅ）約０．２％の塩化ナトリウム；およびｆ）約１％のアルギニンを含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤を提供する。
【０１６８】
Ｄ．用量および剤形
本発明の製剤の有効用量は、投与手段、標的部位、対象の生理的状態、対象がヒトまたは動物であるかどうか、投与される他の薬剤、および処置が予防的なものであるか、または治療的なものであるかなどの、多くの様々な因子に応じて変化する。通常、対象はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物などの非ヒト哺乳動物を処置することもできる。処置用量は安全性および効能を最適化するために滴定する必要がある。
【０１６９】
本発明の製剤を、複数回投与することができる。単回投与間の間隔は、１日、１週間、２週間、１カ月または１年であってもよい。間隔は不規則であってもよい。いくつかの方法においては、用量を、抗体のような結合剤の特定の血漿濃度を達成するために調整する
。用量および頻度は、対象中での、抗体のような、抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５結合剤の半減期に応じて変化するであろう。一般に、ヒト抗体は、最も長い半減期を示し、次いで、ヒト化抗体、キメラ抗体、および非ヒト抗体と続く。
【０１７０】
さらなる実施形態においては、本発明は、対象への剤形の投与による対象における１つまたは複数の疾患の処置のための、治療上有効量の本発明の製剤を含む医薬単位剤形を提供する。いくつかの実施形態においては、対象はヒトである。ヒトは、成人または幼児であってもよい。用語「医薬単位剤形」とは、それぞれの単位が、必要とされるクエン酸バッファーおよびｐＨと関連して所望の治療／予防効果をもたらすと算出された所定量の活性化合物を含有する、処置しようとする対象のための単位用量として好適な物理的に別々の単位を指す。
【０１７１】
単位剤形は、製剤を含む容器であってもよい。好適な容器としては、限定されるものではないが、密封されたアンプル、バイアル、ボトル、シリンジ、および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックのような様々な材料から形成されたものであってよく、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は皮下注射針により貫通可能なストッパを有するバイアルであってもよい）。いくつかの実施形態においては、容器はバイアルである。一般に、容器は、製剤の無菌性および安定性を維持するべきである。
【０１７２】
特定の実施形態においては、製剤は、透明な無色のＩ型ガラス製の２ｍＬのバイアル中に包装され、フランジ（ポリプロピレン）を備えたフリップオフキャップで密封されたストッパ（フルオロポリマー被覆ブロモブチル）で密閉される。バイアルは、いくつかの実施形態においては、バイアルが、バイアルあたり約０．２ｍＬの過充填容量、および１．０ｍＬの抽出可能容量を有するように、１．２ｍＬの製剤を充填される。例えば、これは、抗ＬＩＧＨＴ抗体の用量強度（例えば、１５０ｍｇ／ｍＬ）が１ｍＬの溶液中に含有されることを意味する。
【０１７３】
特定の実施形態においては、製剤は、バイアルを光から保護するカードボードボックスのような容器中に二次的に包装される。
【０１７４】
Ｅ．処置方法
対象に本発明の製剤を投与することを含む、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患または障害を処置するための方法が、本明細書でさらに提供される。本発明はさらに、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患または障害を処置するための本明細書に記載の方法における使用のための本発明の製剤に関する。ある実施形態においては、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患は、慢性腸疾患、またはクローン病（ＣＤ）もしくは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）のような炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。他の実施形態においては、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患は、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）である。
【０１７５】
また、対象に本発明の製剤を投与することを含む、ＣＸＣＲ５媒介性疾患または障害を処置するための方法も本明細書で提供される。本発明はさらに、ＣＸＣＲ５媒介性疾患または障害を処置するための本明細書に記載の方法における使用のための本発明の製剤に関する。ある実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤は、メトトレキサート（ＭＴＸ）またはＴＮＦαアンタゴニストのような、１つまたは複数の疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）に対して不十分に応答した、中程度から重篤な活動性関節リウマチ（ＲＡ）を有する成人患者における、兆候および症状の軽減、構造的損傷の進行の阻害、主要な臨床応答の誘導、および身体障害の防止のために用いられる。抗ＣＸＣＲ５結合剤を、ＤＭＡＲＤまたは抗ＴＮＦαアゴニストと共に用いることができる。
【０１７６】
ある実施形態においては、本発明の製剤を、１つまたは複数の治療（例えば、ＬＩＧＨ
Ｔ媒介性疾患またはＣＸＣＲ５媒介性疾患を防止、処置、管理、および／または改善するために現在投与されている本発明の製剤ではない治療と共に投与することができる。用語「と共に」の使用は、治療を対象に投与する順序を限定するものではない。第１の治療を、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患またはＣＸＣＲ５媒介性疾患を有していた、有する、またはそれが疑われる対象への第２の治療の投与の前（例えば、１分、４５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間）、それと同時、またはその後（例えば、１分、４５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間）に投与することができる。任意のさらなる治療を、他のさらなる治療と共に任意の順序で投与することができる。本発明の抗体と共に投与することができる治療の非限定例としては、米国薬局方および／または米医薬品便覧に列挙された認可された抗炎症剤が挙げられる。
【０１７７】
Ｆ．キット
本発明のある実施形態は、本発明の製剤を含むキットを含む。キットは、薬学的に許容される添加剤を含む１つまたは複数の容器をさらに含んでもよく、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料、例えば、フィルター、針およびシリンジなどを含んでもよい。例えば、適応症、使用、用量、製造、投与、禁忌、および／または治療用、予防用もしくは診断用製品の使用に関する警告に関する情報を含有する、治療用、予防用または診断用製品の商業的包装中に慣用的に含まれる指示書を、キットに添付してもよい。また、情報を含む任意の種類のデータ担体（例えば、リーフレット、ステッカー、チップ、プリントまたはバーコード）であってもよいラベルをキットに添付してもよい。ある実施形態においては、上記に列挙されたような指示書などは、ラベル中に、またはラベル上に含まれていてもよい。キットは、製剤の投与のためのデバイス、特に、製剤を含有するデバイス、すなわち、限定されるものではないが、充填済みシリンジまたは充填済みオートインジェクターのような、充填済みデバイスをさらに含んでもよい。キットはまた、製剤を含む容器、すなわち、充填済みバイアル、カルトゥーシュ、サチェット、またはアンプルのような、充填済み容器を含んでもよい。
【０１７８】
Ｇ．異なる実施形態の組合せ
本発明の文脈においては、本明細書に記載される実施形態のいずれかを、逆に明示的に記述しない限り、１つまたは複数の他の本明細書に記載される実施形態と組み合わせることができる。特に、本明細書に記載の結合剤および抗体ならびに本明細書に記載のその製剤のいずれかを、キット、充填済みデバイスもしくは充填済み容器のいずれかと共に用いるか、または対応する抗体と共に本明細書に記載の処置または医学的使用の方法において用いることができる（例えば、抗ＬＩＧＨＴ抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体を含む安定な製剤を、本明細書に記載のキット、容器またはデバイスのいずれかと組み合わせることができる）。抗原に特異的に結合する本明細書に記載の結合剤のいずれか（例えば、ＬＩＧＨＴに特異的に結合する結合剤またはＣＸＣＲ５に特異的に結合する結合剤）を、対応する抗体（すなわち、抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５）と共に本明細書に記載された処置の方法のいずれかにおいて用いることもでき、およびその逆も可能である。
【実施例】
【０１７９】
本発明を例示するのを助けるために、以下の実施例が提供される。実施例は、いかなる意味でも本発明の範囲を制限することを意図するものではない。一般に、本発明の実施は、別途指摘しない限り、医薬製剤、化学、分子生物学、組換えＤＮＡ技術、抗体技術のような免疫学の従来の技術、ならびに例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）；Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇ
ｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、第５１巻、Ｐａｕｌ  Ｓ．（編）、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  Ｓｅｒｉｅｓ、１６９）、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  Ｊ．ら（編）、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９９）；およびＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９９２）に記載されたポリペプチド調製の標準的な技術を用いる。
【０１８０】
抗ＬＩＧＨＴ
最適な製剤化条件を決定するために、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体（「リードＬＩＧＨＴ抗体」）を実施例１〜９において用いた。
【０１８１】
材料
原薬バッチ
５．５ｍｇ／ｍＬの濃度および７．３のｐＨのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に製剤化されたリード抗体（「元の製剤」、「ＰＢＳ製剤」または「参照ロット」）を、以下の実施例において用いた。
【０１８２】
添加剤
表１は、親生成物における使用のためのその許容性／好適性に従って選択された、以下の実施例において用いた添加剤を示す。
【０１８３】
【表１】
2018048174.tif 000008
【０１８４】
方法
以下の方法を用いて、実験製剤およびリードＬＩＧＨＴ抗体を含有する本発明の製剤を製造した。
【０１８５】
バッファーの製造および組成
全てのバッファーを、撹拌下で製造して、対応する添加剤を溶解した。ｐＨを、０．１
Ｍ  ＨＣｌまたは０．１Ｍ  ＮａＯＨを用いて調整した。全てのバッファーの一般的な濃度は１０ｍＭであった。
【０１８６】
添加剤ストック溶液の製造および組成
全てのストック溶液を、撹拌しながら製造して、添加剤を溶解した。濃度は、重量／重量（ｗ／ｗ）として与えた。
【０１８７】
試料の滅菌濾過
全ての試料、溶液、バッファーなどを、Ｓａｒｔｏｐｏｒｅ−２膜を用いて滅菌濾過した（０．２２μｍ）。試料をクリーンベンチの内部で無菌条件下で滅菌ボトルまたはバイアル中に濾過し、密閉して、微生物の汚染を防止した。
【０１８８】
機械的ストレス試験
室温で２．５時間、３５０回／分の撹拌速度を用いる機械的ストレスを、２６ｍｍ距離の水平実験室振とう器（Ｂｕｈｌｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙからの振とう器およびインキュベーションフード）を用いて実施した。２Ｒバイアルに、約２．５ｍＬのヘッドスペースで溶液１ｍＬを充填した。機械的ストレス試験を計画し、１回目の予備製剤化試験の間および界面活性剤選択のための関連試験の間に実施した。
【０１８９】
熱ストレス試験
予備製剤化プログラムの全工程の間に、ストレス試験として熱ストレスを用いた。研究に応じて、試料を＋４０℃で２４時間または７日間保存した。
【０１９０】
製剤の充填および完了における分析方法
以下の実施例において、製剤の充填および完了においては以下の分析方法を用いた。
【０１９１】
外観
抗体溶液の外観を、視覚的にチェックし、デジタルカメラで写真を撮影することによりさらに文書化した。
【０１９２】
ｐＨ
全てのｐＨ測定を、微小電極を有するｐＨメーターを用いて実施した。
【０１９３】
ＵＶを用いる濃度
全ての抗体溶液のタンパク質濃度を、ＮａｎｏＤｒｏｐ  ＮＤ１０００を用いてバッファーに対して測定した。５ｍｇ／ｍＬに近いか、またはそれより低いタンパク質濃度を１：３に希釈したが、２０ｍｇ／ｍＬに近いより高いタンパク質濃度は１：２０に希釈し、２１５ｎｍおよび２８０ｎｍで吸光度を測定した。
【０１９４】
動的光散乱（ＤＬＳ）
分子の流体力学直径を、レーザー光散乱を用いて測定した。混濁が観察された場合、分析の前に試料を滅菌濾過し、かくして、可溶性凝集体のみを検出することができた。
【０１９５】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＭｉｃｒｏｃａｌからのＶＰＣａｐｉｌｌａｒｙ  ＤＳＣを用いるＤＳＣにより、多くの予備製剤化試料のアリコートを試験し、２秒の濾過時間で９０℃／時間で自動サンプリング機器中で走査した。試料４００μｌを９６穴プレート中に入れ、アンフォールディング温度Ｔｍについて分析した。
【０１９６】
オスモル濃度
自動化Ｋｎａｕｒ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒを用いて、オスモル濃度を測定した。
【０１９７】
密度
製剤の密度を、落球粘度計ＤＭＡ４５００  Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒを用いて測定した。
【０１９８】
ＦＦの生物分析における分析方法
以下の実施例において、充填および完了の生物分析においては以下の分析方法を用いた。
【０１９９】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
リード抗体の凝集体、ならびに分解産物を、サイズ排除ＧＬクロマトグラフィーを用いて定量した。試験を、ＳＵＰＥＲＤＥＸ  ２００  １０／３００カラムを用いるアイソクラチックＨＰＬＣにより実行した。
【０２００】
還元的および非還元的ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を用いて、分子完全性（例えば、半分子）および純度を分析した。この電気泳動分析を、還元的および非還元的条件下で４〜１２％勾配のゲルを用いて実施した。電気泳動分離の後、クマシー染色によりタンパク質を可視化した。
【０２０１】
弱陽イオン交換（ＷＣＸ）
弱陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて、抗体の電荷不均一性をモニタリングした。塩基性、中性、および酸性アイソフォームの割合を報告した。ＰｒｏＰａｃ  ＷＣＸ１０カラムを用いる不連続高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、試験を実行した。
【０２０２】
抗原−酵素結合免疫吸着アッセイ（抗原−ＥＬＩＳＡ）
抗原−ＥＬＩＳＡを、抗体の機能を決定するために実施した。天然ＬＩＧＨＴタンパク質への結合特性を、現在の標準抗体と比較してモニタリングした。この効力を、相対的ＥＣ50として報告した。
【０２０３】
等電点電気泳動（ＩＥＦ）
ＩＥＦを実施した。等電点パターンは、リード抗体に特異的であり、同定試験として役立った。異なる電荷パターンにより、分解を見ることができた。
【０２０４】
保存
別途言及しない限り、全てのバッファー溶液、添加剤溶液、および試料を、５℃（±３℃）で保存した。
【０２０５】
調製および分析された全ての製剤の概要
以下の表２は、以下の実施例において調製および分析された全ての製剤の概要を示す。それぞれの製剤は、列挙された濃度のリードＬＩＧＨＴ抗体を含有していた。
【０２０６】
【表２】
2018048174.tif 000009
【０２０７】
〔実施例１〕
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）製剤の特性評価およびそれと関連する欠点
本実施例においては、参照ロットを特性評価した。上記の材料の節に記載されたように、参照ロットは、５．５ｍｇ／ｍＬの濃度および７．３のｐＨのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に製剤化され、研究溶液Ｖｉｔｒｙ（ＢｉｏＳＣＰ）中で産生されたリードＬＩＧＨＴ抗体を含有する。
【０２０８】
等電点電気泳動（ＩＥＦ）を用いて、リード抗体の等電点（ｐＩ）を決定した。リードＬＩＧＨＴ抗体のｐＩは６．２８と理論的に算出され、次いで、当業界で公知の標準的な
方法を用いる変性等電点電気泳動により測定された。図１に示されるように、主要バンドはリードＬＩＧＨＴ抗体のｐＩが６．８〜７．２であったことを示す。
【０２０９】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて、抗体モノマーの分子量、潜在的な凝集体、または半分子の存在を同定した。図２は、還元的および非還元的条件下で異なる参照ロットバッチを比較したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。ＥＬＩＳＡを用いて、リードＬＩＧＨＴ抗体の抗原結合活性を決定した。図３は、参照ロットの第１および第２のバッチの抗原結合活性を決定するのに用いられたＥＬＩＳＡグラフを示す。
【０２１０】
ＳＥＣを用いて、参照ロットの第１のバッチの凝集体、ならびに分解産物の存在を決定した。図４に示されるように、サイズ排除クロマトグラフィーは、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）、例えば、ダイマー／オリゴマー（ＲＲＴ０．８）または凝集体、および低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）または分解産物を検出した。参照ロットの第１のバッチは、９７％の純度のモノマー含量を有していた。
【０２１１】
ＷＣＸを用いて、参照ロットの第１のバッチの電荷不均一性をモニタリングした。図５に示されるように、酸性、中性、および塩基性アイソフォームの再構成が安定性試験の間に起こった。参照ロットの第１のバッチは、４２．３／５５．６／１．９％の酸性／中性／塩基性アイソフォームの分布を有していた。
【０２１２】
ＤＳＣを用いて、参照ロットの第１のバッチのアンフォールディング温度Ｔｍを分析した。図６に示されるように、抗体の３つのドメインは、６８℃、７５℃、および７８℃で開裂した。
【０２１３】
ＤＬＳを用いて、抗体モノマーおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定した。図７および８に示されるように、約１０ｎｍの流体力学直径が検出されたが、凝集体はＰＢＳ中に見られた。しかしながら、凝集体はクエン酸バッファー中には見られなかった（図１０）。
【０２１４】
〔実施例２〕
クエン酸緩衝製剤の開発、およびそれと関連する利点
元のバッファー、ｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）は、ｐＨに関しては、リード抗体の等電点（ｐＩ）に非常に近かった（実施例１を参照されたい）。さらに、元の製剤は、凝集体；半分子；分解産物；低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）；高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）；ならびに酸性、塩基性、および中性抗体アイソフォームの再構成を示した（実施例１を参照されたい）。かくして、これらの欠点に患わされない改良された製剤が必要であった。
【０２１５】
５、５．５および６のｐＨの、ポリソルベート２０を含む、および含まない１０ｍＭクエン酸バッファーを含有するリードＬＩＧＨＴ抗体（配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体）の製剤を試験した。表３は、参照ロットの第１のバッチ、ならびに５．０および５．５および６．０のｐＨの、ポリソルベート２０を含む、および含まない、クエン酸塩中に製剤化されたリードＬＩＧＨＴ抗体の様々な実験製剤の分析結果を示す。凝集体は、動的光散乱（ＤＬＳ）測定において、参照ロットについては見出されたが、他の全ての試験した製剤中では見出されなかった。示差走査熱量測定（μＤＳＣ）により測定された場合、Ｔｍは、ｐＨが高くなるほど、熱力学的安定性が高くなると推測できることを示していた。しかし、高い抗体濃縮製剤については、ｐＨを抗体のｐＩ以下で選択しなければならなかった。
【０２１６】
表４に示されるように、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）のデータは、参照ロット（ｐＨ７．３のリン酸バッファー）と比較して、クエン酸バッファー中のリードＬＩＧＨＴ抗体について有意に低下した量の高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）を示した。対照的に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いた場合には差異を検出することができなかった（表５）。
【０２１７】
【表３】
2018048174.tif 000010
【０２１８】
【表４】
2018048174.tif 000011
【０２１９】
【表５】
2018048174.tif 000012
【０２２０】
〔実施例３〕
高濃度抗体製剤の開発
実施例２のクエン酸緩衝抗体製剤による提供される改良を考慮して、クエン酸バッファー成分を、リードＬＩＧＨＴ抗体の濃度の増大のために最適化した。表６は、高濃度（約４０ｍｇ／ｍｌ）の抗体製剤：７．３のｐＨの高リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（製剤２）またはポリソルベート２０を含む５．５のｐＨのクエン酸塩（製剤４）の第１のバッチの分析結果を示す。
【０２２１】
【表６】
2018048174.tif 000013
【０２２２】
クエン酸バッファー中でタンパク質溶液を濃縮した後、モノマー含量のわずかな低下が観察された。さらに、ダイマー濃度は低下し、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）も同様に有意に低下し得た（表７を参照されたい）。対照的に、これらの不純物および副産物は、リン酸バッファー中の濃度を増加させることにより増加した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を用いた場合には差異は検出することができなかった（表８）。
【０２２３】
【表７】
2018048174.tif 000014
【０２２４】
【表８】
2018048174.tif 000015
【０２２５】
〔実施例４〕
凍結乾燥抗体製剤の開発
凍結乾燥の実現可能性を試験するために、様々な凍結乾燥実験製剤を製造し、安定性分析にかけた。リードＬＩＧＨＴ抗体の濃度は５０ｍｇ／ｍＬに増加した。
【０２２６】
表９は、本実施例において用いられたフリーズドライプログラムを示す。
【０２２７】
【表９】
2018048174.tif 000016
【０２２８】
表１０は、参照ロットの第１のバッチ、ならびにクエン酸バッファー、スクロース、ポリソルベート２０、およびプロリンの様々な組合せ中に製剤化されたリードＬＩＧＨＴ抗体の様々な実験凍結乾燥製剤の分析結果を示す。
【０２２９】
表１１に示されるように、クエン酸バッファーを用いることにより、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）を明確に減少させることができた。４０℃での長時間の保存についてはダイマー含量の差異は見られなかった。フリーズドライ後に低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）の増加が観察された。前記のように、これらの差異はＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を用いた場合には検出することができなかった（表１２）。
【０２３０】
【表１０】
2018048174.tif 000017
【０２３１】
【表１１】
2018048174.tif 000018
【０２３２】
【表１２】
2018048174.tif 000019
【０２３３】
〔実施例５〕
加速安定性試験
クエン酸およびヒスチジンバッファーを用いて、加速安定性試験を実施した。表１３は、参照ロットの第１のバッチ、ならびにクエン酸バッファーまたはヒスチジンバッファーの様々な組合せ中に製剤化されたリードＬＩＧＨＴ抗体の様々な実験製剤の分析結果を示す。注目すべきことに、本発明のクエン酸製剤は、全ての実験においてヒスチジンよりも良好に機能すると考えられた。特に、クエン酸製剤は、参照ロットバッチとヒスチジンの両方と比較して高いモノマー含量を有し（表１３）、低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）および高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）の含量も有意に低かった（表１４）。前記のように、これらの差異は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を用いた場合には検出することができなかった（表１５）。
【０２３４】
【表１３】
2018048174.tif 000020
【０２３５】
【表１４】
2018048174.tif 000021
【０２３６】
【表１５】
2018048174.tif 000022
【０２３７】
〔実施例６〕
皮下投与のための高抗体濃度製剤の開発
実施例２〜５のクエン酸緩衝製剤の結果の成功に基づいて、皮下投与にとって好適な高濃度（１５０ｍｇ／ｍｌ）抗体製剤を開発した。製剤開発を、＋２〜＋８℃で保存した場合の許容される保管可能期間を有する液体剤形を開発するためにリードＬＩＧＨＴ抗体に対して実施した。予備ストレス試験により、眼に見えない、および眼に見える粒子、高分子量種およびより塩基性の種の形成が示された。従って、これらのパラメータを、視覚的評価、動的光散乱、光遮蔽、サイズ排除クロマトグラフィー、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動、および弱陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて製剤候補のスクリーニング中にモニタリングした。様々な液体製剤を、臨床製剤の選択前に予備製剤化および製剤化試験において用いた。所見に従って、ｐＨ５．５に調整された１０ｍＭクエン酸バッファー中の製剤（製剤１４）を、さらなる開発のために選択した。製剤のｐＨは、原薬の最適な物理的および化学的安定性ならびに許容される生理学的寛容性（例えば、オスモル濃度）の領域中にある。
【０２３８】
表１６に示されるように、製剤１４は、注射用溶液であり、リードＬＩＧＨＴ抗体、クエン酸ナトリウム二水和物（緩衝剤）、ポリソルベート２０（安定化剤）、およびマンニトール（等張化剤）を含有する水性滅菌透明溶液である。水酸化ナトリウム溶液および塩酸を用いて、ｐＨ５．５に調整した。
【０２３９】
全ての添加剤は可溶性であり、非経口投与のための良好に許容される薬局方基準添加剤であり、Ｐｈ．Ｅｕｒ．およびＵＳＰに列挙されたものであった。
【０２４０】
【表１６】
2018048174.tif 000023
【０２４１】
〔実施例７〕
皮下抗体製剤のための製造方法
ＧＭＰ順守製造プロセスを、実施例６の皮下高濃度抗体製剤（製剤１４）のために開発した。製造手順は、溶解、ｐＨ調整、滅菌濾過、充填、および包装工程からなっていた。
【０２４２】
原薬（リードＬＩＧＨＴ抗体）は、製剤バッファー（１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ５．５）中の液体形態で提供される。添加剤は全て水溶性であり、製造中に製剤バッファーの最初の水性部分に溶解された。バルク原薬溶液を同じ製剤化バッファーでさらに希釈して、１５０ｍｇ／ｍＬのリードＬＩＧＨＴ抗体の濃度を達成した。バルク溶液をよく混合して、溶解プロセスを容易にし、均一性を確保した。
【０２４３】
濾過による滅菌を、０．２μｍの公称孔径を有する細菌保持フィルターを用いて実行した（Ｐｈ．Ｅｕｒ．およびＵＳＰによる）。「濾過による滅菌」の前にさらなる濾過手順を実施して、低いバイオバーデンを確保した。バイオバーデンのサンプリングを、予備濾過工程ならびに滅菌濾過工程の前に行った。
【０２４４】
好適な容器中への滅菌溶液の調製および充填を、無菌条件下で行った。これは、濾過による滅菌およびその後の無菌プロセッシングを必要とする、薬局方モノグラフおよび関連する指針に従うものであった。「濾過による滅菌」工程後に生成物と接触される装備を、検証された方法（Ｐｈ．Ｅｕｒ．／ＵＳＰによる）を用いて熱または蒸気により滅菌した。
【０２４５】
バイアルを約１．２ｍＬまで充填して、１．０ｍＬの抽出可能容量を確保した。２ｍＬのバイアルは、透明な無色のＩ型ガラスから作られ、フランジ（ポリプロピレン）を備えたフリップオフキャップで密封されるストッパ（フルオロポリマー被覆ブロモブチル）で密閉された。一次包装材料は、Ｐｈ．Ｅｕｒ．およびＵＳＰの要件を満たした。一次包装材料の好適性を、安定性試験の結果により立証した。用いられた一次包装材料に関する不適合性は観察されなかった。二次包装は光からの生成物の保護を提供する。
【０２４６】
適用シリンジに関する適合性を、医薬品溶液上で３つの異なるシリンジサイズおよび針直径（２５〜２８ゲージ）を用いて評価した。生成物の品質に関する差異は得られなかった。適合性を、８時間にわたって証明した。
【０２４７】
製剤１４を５Ｌバッチ中で作製したが、その組成を表１７に示す。しかしながら、バッチサイズは臨床要件に従って調整することができる。
【０２４８】
【表１７】
2018048174.tif 000024
【０２４９】
製剤１４の製造方法およびプロセス対照を、図９中のフローダイアグラムに示す。バッチ製造は、以下の工程を含んでいた：
Ｉ．完全に溶解するまで、不活性材料（例えば、ステンレススチールまたはガラス）から作られたベッセル中で撹拌しながら、クエン酸ナトリウム二水和物を注射用水に溶解した。必要に応じて、ｐＨ値を、希塩酸（例えば、０．１Ｍ塩酸）および／または水酸化ナトリウム溶液（例えば、０．１Ｍ水酸化ナトリウム）を用いて５．５に調整した。
ＩＩ．リード抗体、マンニトール、およびポリソルベート２０を、完全に溶解するまで、不活性材料（例えば、ステンレススチールまたはガラス）から作られたベッセル中で撹拌しながら、工程１からのバッファー溶液中に希釈した。必要に応じて、希塩酸（例えば、１Ｍ塩酸）または水酸化ナトリウム（例えば、１Ｍ水酸化ナトリウム）を用いてｐＨ値を５．５に調整した。工程１からのバッファー溶液（残り）を添加して最終重量を調整した。
ＩＩＩ．ａ）予備濾過：
工程ＩＩからの溶液を、０．２μｍの公称孔径を有する滅菌された適合性膜フィルター（例えば、ポリエーテルスルホンまたはポリビニリデンジフルオリド）を用いて無菌条件下で濾過した。
ｂ）濾過による滅菌：
工程ＩＩＩ．ａからの溶液を、０．２μｍの公称孔径を有する滅菌された適合性膜フィルター（例えば、ポリエーテルスルホンまたはポリビニリデンジフルオリド）を用いて、不活性材料（例えば、ステンレススチールまたはガラス）から作られた滅菌容器中、無菌条件下での濾過により滅菌した。
ＩＶ．工程ＩＩＩ．ｂからの溶液を、ストッパおよびフランジを備えたフリップオフキャップで密閉された滅菌バイアル中に、無菌条件下で充填した。
Ｖ．工程ＩＶからの容器を、粗汚染物質、無傷の密封、および眼に見える粒子について検査した。
ＶＩ．工程Ｖからの検査された容器を、好適な容器（例えば、カードボードボックス）
中にさらに包装した。
【０２５０】
さらに、ＤＬＳを用いて、抗体モノマーおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定した。図１０に示されるように、凝集体はクエン酸バッファー中には見られなかった。しかしながら、図７および８に示されるように、ＰＢＳ中では凝集体が見られた。より高い抗体濃度に起因して、ＰＢＳ中の試料と比較して、２８ｎｍまでのＺＡｖｅの増加が観察された。
【０２５１】
〔実施例８〕
皮下抗体製剤の安定性プロファイル
実施例７の臨床バッチ（バッチ２）の安定性プロファイルを、ＩＣＨの指針に従う長期および加速試験条件下での保存について評価した。ストッパ（フルオロポリマー被覆ブロモブチル）およびフランジ（ポリプロピレン）を備えたフリップオフキャップで密閉される２ｍＬの無色透明のバイアル（Ｉ型ガラス）中で試料を包装および保存した。
【０２５２】
安定性の間に以下の試験：外観（透明度、色）、アッセイ（抗原ＥＬＩＳＡ、ＵＶ）、純度（ＳＥＣ、還元および非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、分子完全性（非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、電荷不均一性（弱陽イオン交換クロマトグラフィー、等電点電気泳動）、ｐＨ、無菌性、細菌内毒素、粒子状物質（眼に見える、および眼に見えない粒子）、および密閉完全性を実施した。
【０２５３】
試料を、逆転させた、および直立した位置で保存した。逆転させた保存の結果を、よりストリンジェントな条件として提示した。−２０℃、＋５℃および＋２５℃での安定性データを、それぞれ、表１８〜２０に提示する。長期試験条件下での保存の物理的、化学的および生物学的特性に関する調査により、５℃での医薬品の良好な安定性が確認された（表１９を参照されたい）。加速試験条件下（＋２５℃）では、サイズ排除クロマトグラフィーにより純度のほんのわずかな低下が検出された（表２０を参照されたい）。従って、医薬品は光から保護して＋２℃〜＋８℃で保存するべきであると結論付けられた。
【０２５４】
【表１８】
2018048174.tif 000025
【０２５５】
【表１９】
2018048174.tif 000026
【０２５６】
【表２０】
2018048174.tif 000027
【０２５７】
【表２１】
2018048174.tif 000028
【０２５８】
【表２２】
2018048174.tif 000029
【０２５９】
【表２３】
2018048174.tif 000030
【０２６０】
〔実施例９〕
皮下投与のための超高濃度抗体製剤の開発
実施例７における最大１５０ｍｇ／ｍＬの抗体濃度に関するクエン酸緩衝製剤の結果の成功に基づいて、皮下投与にとって好適なより高濃度（最大２５０ｍｇ／ｍｌ）の抗体製剤を開発した。
【０２６１】
予備データにより、１５０ｍｇ／ｍＬを超える抗体濃度の製剤は、製剤の使用に影響するより高い粘度をもたらし得ることが示された。
【０２６２】
【表２４】
2018048174.tif 000031
【０２６３】
表２１に見られるように、粘度は抗体濃度の低下と共に減少するが、製剤１４と共に製剤化されたより高い濃度でも依然として許容される範囲にある。他の全てのパラメータは、超高濃度によって影響されないか、またはほんのわずかに影響されると考えられた。
【０２６４】
表２２に示されるように、抗体濃度は、長期およびストレス条件での同一の１カ月安定性データにより示された、製剤の安定性に影響しなかった。
【０２６５】
【表２５】
2018048174.tif 000032
【０２６６】
抗ＣＸＣＲ５（２０ｍｇ／ｍＬ）予備製剤化試験
配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体（「リードＣＸＣＲ５抗体」）を実施例１０〜１
２において用いて、２０ｍｇ／ｍＬの製剤に関する最適製剤化条件を決定した。
【０２６７】
リード抗体は、ヒトＣＸＣＲ５に特異的なヒト化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）であり、半分子（Ｓ２４１Ｐ）およびエフェクター機能（Ｌ２４８Ｅ）の減少を目的とする２個のアミノ酸置換を含有する遺伝子操作されたＩｇＧ４フレームワークを含む。リードＣＸＣＲ５抗体タンパク質構造は、ジスルフィド架橋により連結された、それぞれ約２４ｋＤａの分子量を有する２つのカッパ軽鎖と、それぞれ約４８ｋＤａの分子量を有する２つのＩｇＧ４重鎖とから構成される。それぞれの軽鎖は２１９個のアミノ酸残基からなり、それぞれの重鎖は４３７個のアミノ酸残基からなる。
【０２６８】
実施例１０〜１２のデータは、リードＣＸＣＲ５抗体ならびに静脈内および皮下投与のためのその医薬品のための予備製剤化活動の間に収集されたものであった。リード抗体はＩｇＧ４サブクラスの抗体であり、凝集し、粒子を形成しやすいため、予備製剤化試験の目的は、リードＣＸＣＲ５抗体の凝集挙動および半分子を形成するその傾向に特に重点を置いて、２０ｍｇ／ｍＬの標的濃度を有する緩衝化リードＣＸＣＲ５抗体溶液の良好な安定性を提供することであった。
【０２６９】
材料
原薬（ＤＳ）
リードＣＸＣＲ５抗体バッチＲＳＮ０１５１を、５．１３ｍｇ／ｍＬの濃度でＰＢＳ  ｐＨ７．２中に製剤化した。
【０２７０】
添加剤
表２３は、予備製剤化試験中に用いられた添加剤を示す。
【０２７１】
【表２６】
2018048174.tif 000033
【０２７２】
方法
以下の方法を用いて、実験製剤およびリードＣＸＣＲ５抗体を含有する本発明の製剤を製造した。
【０２７３】
バッファーの製造および組成
全てのバッファーは、一定に撹拌して対応する添加剤を溶解することにより製造した。０．１Ｍ  ＨＣｌまたは０．１Ｍ  ＮａＯＨを用いてｐＨを調整した。全てのバッファーの全体濃度は１０ｍＭであった。
【０２７４】
添加剤ストック溶液の製造および組成
全てのストック溶液を、一定に撹拌して添加剤を溶解することにより製造した。濃度を、重量／重量（ｗ／ｗ）として与えた。
【０２７５】
ＵＦ／ＤＦ−小規模
ＵＦ／ＤＦ実験を、リン酸バッファーを除去し、それを適切なバッファーで置きかえ、
濃度を増加させるために、Ｈｙｄｒｏｓａｒｔ膜および３０ｋＤａカットオフを備えたＶｉｖａｓｐｉｎユニット（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｔｅｄｉｍ、Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて実施した。これらのユニットを一般的な実験室用遠心分離機（Ｍｕｌｔｉｆｕｇｅ  ３Ｓ、Ｈａｅｒｅｕｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に入れ、＋５℃、２０００ｒｐｍ（８６０Ｇ、ローター半径１９２ｍｍ）で遠心分離した。
【０２７６】
ＵＦ／ＤＦ−大規模
ＵＦ／ＤＦ実験を、リン酸バッファーを除去し、それを適切なバッファーで置きかえ、濃度を増加させるために、Ｈｙｄｒｏｓａｒｔ膜および３０ｋＤａカットオフを備えたＶｉｖａｆｌｏｗユニット（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｔｅｄｉｍ、Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて実施した。この装備を無菌条件下でクリーンベンチに入れ、室温でプロセスを実施した。
【０２７７】
試料の滅菌濾過
全ての試料、溶液、バッファーなどを、Ｓａｒｔｐｏｒｅ−２膜を用いて滅菌濾過（０．２２μｍ）した。試料を滅菌ボトルまたはバイアル中に濾過し、クリーンベンチの内部で無菌条件下で密閉して、微生物汚染を防止した。
【０２７８】
機械的ストレス試験
室温で２．５時間にわたる３５０ｒｐｍ／ｍｉｎの撹拌速度での機械的ストレスを、２６ｍｍ距離を有する水平実験室振とう器（Ｂｕｈｌｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙからの振とう器およびインキュベーションフード）を用いて実施した。２Ｒバイアルに、約２．５ｃｍ3
のヘッドスペースで溶液１ｍＬを充填した。
【０２７９】
機械的ストレス試験を計画し、１回目の予備製剤化試験の間に実施した。分析結果はバッファー選択またはｐＨ選択の間に、熱ストレス試験と比較していかなる追加情報も示さなかったため、この試験は界面活性剤選択の間にのみ用いた。
【０２８０】
熱ストレス試験
熱ストレスを、予備製剤化プログラムの全工程の間に加速ストレス試験として用いた。試験に応じて、試料を＋４０℃で２４ｈ、７日間、または３カ月間保存した。
【０２８１】
製剤の充填および完了における分析方法
以下の分析方法を、以下の実施例において用いた。
【０２８２】
外観
抗体溶液の外観を視覚的にチェックし、カメラで写真を撮影することによりさらに文書化した。
【０２８３】
ｐＨ
全てのｐＨ測定を、微小電極を有するｐＨメーターを用いて実施した。
【０２８４】
ＵＶを用いる濃度
全ての抗体溶液のタンパク質濃度を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ  ＮＤ１０００を用いてバッファーに対して測定した。５ｍｇ／ｍＬに近いか、またはそれより低いタンパク質濃度を１：３に希釈し、２０ｍｇ／ｍＬに近い、より高いタンパク質濃度を１：２０に希釈した後、２１５ｎｍおよび２８０ｎｍで吸光度を測定した。
【０２８５】
動的光散乱（ＤＬＳ）
分子の流体力学直径を、レーザー光散乱を用いて測定した。混濁が観察された場合、分
析の前に試料を滅菌濾過したところ、可溶性凝集体のみを検出することができた。
【０２８６】
チオフラビン−Ｔ試験
いくつかの予備製剤化試料の蛍光測定を、Ｔｅｃａｎ  ＧＥＮｉｏｓ  Ｐｌｕｓ、ＸＦＬＵＯＲ４を用いて実行した。試料に機械的にストレスをかけた（Ｂｕｈｌｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙからの振とう器およびインキュベーターフード中、３７℃で４ｈ、撹拌速度３００単位／分および２６ｍｍ距離）。チオフラビン−Ｔ蛍光スペクトルを、室温で測定した。１０μｌのチオフラビン−Ｔ溶液（超純水中で１０．１ｍＭ）を、製剤１ｍｌに添加し、穏やかに混合した。次いで、混合物を黒色のＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｖ型カップに分注した後、９６穴プレート中に分注した（ウェルあたり１００μＬ）。
【０２８７】
チオフラビン−Ｔ試験を、予備製剤化活動の開始時に用いて、不溶性凝集体を検出した。しかし、これらの凝集体は溶液の混濁として視覚的に見ることができるため、この方法は全予備製剤化プログラムについて用いなかった。
【０２８８】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
予備製剤化試料のアリコートを、ＭｉｃｒｏｃａｌからのＶＰＣａｐｉｌｌａｒｙ  ＤＳＣを用いるＤＳＣにより検査し、２ｓｅｃのフィルター時間を用いて９０℃／ｈで自動サンプリング機器中で走査した。４００μｌの試料を９６穴プレート中に入れ、アンフォールディング温度Ｔｍについて分析した。
【０２８９】
オスモル濃度
オスモル濃度を、自動化Ｋｎａｕｒ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒを用いて測定した。
【０２９０】
密度
製剤の密度を、落球粘度計ＤＭＡ４５００  Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒを用いて測定した。
【０２９１】
ＦＦの生物分析における分析方法
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
抗体のオリゴマー／ダイマーを、サイズ排除クロマトグラフィーを用いることにより定量した。試験を、ＳＵＰＥＲＤＥＸ２００  １０／３００カラムを用いるアイソクラチックＨＰＬＣにより実行した。
【０２９２】
還元的および非還元的ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を用いて、分子完全性（例えば、半分子）および分解産物の外観を分析した。この電気泳動分析を、還元的および非還元的条件下で１５％均一ゲルを用いて実施した。タンパク質を、電気泳動分離後に銀染色を用いて可視化した。
【０２９３】
ＷＣＸ
弱陽イオン交換クロマトグラフィー（ＷＣＸ）を用いて、抗体の電荷不均一性をモニタリングした。塩基性、中性、および酸性アイソフォームの割合を報告した。試験を、ＰｒｏＰａｃ  ＷＣＸ１０カラムを用いる不連続ＨＰＬＣにより実行した。
【０２９４】
抗原−ＥＬＩＳＡ
抗原−ＥＬＩＳＡを実施して、抗体の機能を決定した。ＣＸＣＲ５抗原の２８マーペプチドへの結合特性を、抗体の現在の基準と比較してモニタリングした。この効力を、相対的ＥＣ５０として報告した。
【０２９５】
等電点電気泳動（ＩＥＦ）
ＩＥＦを実施した。
【０２９６】
保存
別途記載しない限り、全てのバッファー溶液、添加剤溶液、および試料を＋５℃で保存した。
【０２９７】
調製および分析された全ての製剤の概要
以下の表２４は、実施例１０〜１２において調製および分析された全ての製剤の概要を示す。それぞれの製剤は、リードＣＸＣＲ５抗体を含有していた。ＰＢＳはリン酸緩衝生理食塩水を表す。ＰＢはリン酸バッファーを表す。ＰＳはポリソルベートを表す。ＬＡはリードＣＸＣＲ５抗体を表す。
【０２９８】
【表２７】
2018048174.tif 000034
【０２９９】
【表２８】
2018048174.tif 000035
【０３００】
【表２９】
2018048174.tif 000036
【０３０１】
【表３０】
2018048174.tif 000037
【０３０２】
〔実施例１０〕
リン酸バッファー製剤
以下は、リン酸バッファー中のリードＣＸＣＲ５抗体原薬の特性評価の結果に関する概説を与える。
【０３０３】
ＩＥＦ
リードＣＸＣＲ５抗体のｐＩ（等電点）は７．６と理論的に算出され、これを変性等電点電気泳動により確認した（７．６〜８．４のｐＩ）。図１１を参照されたい。
【０３０４】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて、抗体モノマーの分子量、潜在的な凝集体、または半分子の存在を決定した。図１２は、還元的および非還元的条件下で異なる原薬バッチを比較するためのＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの例を示す。
【０３０５】
ＥＬＩＳＡ
図１３は、リード抗体の抗原結合活性を決定するためのＥＬＩＳＡグラフの例を示す。
【０３０６】
ＳＥＣ
図１４に示されるように、サイズ排除クロマトグラフィーは、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）、例えば、ダイマー／オリゴマーまたは凝集体および低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）または分解産物を検出した。リードＣＸＣＲ５抗体バッチは、９９％の純度のモノマー含量を有していた。
【０３０７】
ＷＣＸ
図１５に示されるリード抗体に関する弱陽イオン交換クロマトグラフィーは、電荷不均一性を示す。安定性試験の間に、酸性ピークの配置が変化し、塩基性アイソフォームの割合が増加した。リードＣＸＣＲ５抗体は、１４／８５／１％の酸性／中性／塩基性アイソフォームの分布を有していた。
【０３０８】
動的光散乱
図１６に示されるように、ＤＬＳを用いて、抗体モノマーおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定した。
【０３０９】
結論として、リード抗体はＰＢＳ中で安定であり得るが、凝集体形成は剪断力または光ストレスによって容易に生成する。
【０３１０】
さらに、ＰＢＳのｐＨは、リードＣＸＣＲ５抗体のｐＩに近い。従って、製剤はｐＩよりも少なくとも１段階下のｐＨで製剤化するべきである。
【０３１１】
表２５は、リードＣＸＣＲ５抗体に関する３カ月安定性試験の結果を示す。リード抗体を異なる温度で保存し、１および３カ月後に分析した。
【０３１２】
【表３１】
2018048174.tif 000038
【０３１３】
ＰＢＳ中で緩衝化されたリードＣＸＣＲ５抗体に関する３カ月安定性データは、＋５℃と−２０℃での保存で関連する変化を示さなかった。加速条件（＋２５℃）で３カ月後、有意な変化を観察することができた。ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット分析により分析されたように、さらなるバンドは、塩基性アイソフォームの増加および酸性アイソフォームの減少を示し、これは分解産物を示唆する。
【０３１４】
〔実施例１１〕
バッファーおよびｐＨの最適化
ＰＢＳ  ｐＨ７．２は、凍結／解凍サイクル後および凍結保存後に凝集および分解を示した。かくして、別のバッファーおよびより良好なｐＨ範囲を見つけることが必要であった。さらに、ｐＨシフトが起こるため、ＰＢＳは溶液の凍結にとって好適ではない。
【０３１５】
様々なｐＨを有する３０種の異なるバッファーおよびバッファー系を用いて、最良のｐＨ範囲を選択した。これらの実験を、非常に小規模で実行し、集中的に分析した。
【０３１６】
最良のバッファーおよびｐＨの選択スクリーニング−小規模（収量５ｍＬ）
分析結果を、表４０、表４１、表４２、および表４３にまとめる。
【０３１７】
図１７および図１８に、熱ストレス後の２つの好適なバッファー系（酢酸塩およびヒスチジン）の外観を示す。さらなる評価のために、酢酸塩においてはｐＨ５．５およびヒスチジンにおいてはｐＨ５．０を選択した。対照として、図１９に、不適合バッファー系（ＴＲＩＳバッファー）の外観を示す。
【０３１８】
以下のバッファーを選択して、より大規模なＵＦ／ＤＦにおいて試験した：
・クエン酸塩１０ｍＭ、ｐＨ６
・酢酸塩１０ｍＭ、ｐＨ５．５
・コハク酸塩１０ｍＭ、ｐＨ５
・ヒスチジン１０ｍＭ、ｐＨ５
・アルギニン１０ｍＭ、ｐＨ６。
【０３１９】
最良のバッファーおよびｐＨの選択スクリーニング−大規模（収量約２０ｇ）
最良のバッファーおよびｐＨを選択した後、それぞれのバッファー系中のより大量のリードＣＸＣＲ５抗体を、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｖｉｖａｆｌｏｗシステムを用いることにより調製した。それぞれのバッチを分析的に試験し、結果を以下に記載する。
【０３２０】
クエン酸バッファー１０ｍＭ、ｐＨ６（ＬＡ＿０９＿０１６）
ＵＦ／ＤＦ工程は良好に機能し、ほんのわずかに濁った溶液が得られた；滅菌濾過中に困難に遭遇しなかった。ＤＬＳにより分析した場合、流体力学直径の増加は見られなかった。
【０３２１】
分析結果は、リードＣＸＣＲ５抗体バッチ材料と比較して、ダイマーの増加がなく、塩基性または酸性アイソフォームの変化がないことを示していた。表２６および図２０を参照されたい。
【０３２２】
【表３２】
2018048174.tif 000039
【０３２３】
酢酸バッファー１０ｍＭ、ｐＨ５．５（ＬＡ＿０９＿０１７）
ＵＦ／ＤＦ工程は良好に機能したが、濁った溶液が得られた；滅菌濾過中にフィルターが遮断された。
【０３２４】
分析結果は、リードＣＸＣＲ５抗体バッチ材料と比較して、ダイマーの増加がなく、塩基性または酸性アイソフォームの変化がないことを示していた。表２７および図２１を参照されたい。
【０３２５】
【表３３】
2018048174.tif 000040
【０３２６】
コハク酸バッファー１０ｍＭ、ｐＨ５（ＬＡ＿０９＿０１８）
フィルターの遮断のため、ＵＦ／ＤＦ後の滅菌濾過を実施することは困難であった。１２ｇの収量は非常に少なかった。
【０３２７】
分析結果は、リードＣＸＣＲ５抗体バッチ材料と比較して、ダイマーがわずかに減少し、塩基性または酸性アイソフォームの変化がないことを示していた。機械的ストレス後に、ダイマー濃度はわずかに増加し、ＷＣＸにおける酸性アイソフォームのピークは塩基性アイソフォームが増加するにつれて減少した。表２８および図２２を参照されたい。
【０３２８】
【表３４】
2018048174.tif 000041
【０３２９】
ヒスチジンバッファー１０ｍＭ、ｐＨ５（ＬＡ＿０９＿０１９）
フィルターの遮断のため、ＵＦ／ＤＦ後の滅菌濾過は実施することは困難であった。１０．５ｇの収量は非常に少なかった。
【０３３０】
分析結果は、リードＣＸＣＲ５抗体バッチ材料と比較して、ダイマーがわずかに減少し、塩基性または酸性アイソフォームの変化がないことを示していた。機械的ストレス後に、ダイマー濃度はわずかに増加し、ＷＣＸにおける酸性アイソフォームのピークは塩基性アイソフォームが増加するにつれて減少した。表２９および図２３を参照されたい。
【０３３１】
【表３５】
2018048174.tif 000042
【０３３２】
アルギニンバッファー１０ｍＭ、ｐＨ６（ＬＡ＿０９＿０２０）
ＵＦ／ＤＦ後の滅菌濾過は実施することが困難であった。ＤＬＳは、２１．０８ｎｍの流体力学直径でもたらされたピークを示したが、これはダイマー形成を示し得る。
【０３３３】
分析結果は、リードＣＸＣＲ５抗体バッチ中の０．２９％からアルギニン中の０．４９％までのダイマーのわずかな増加を示した。機械的ストレス後、０．６１％のダイマーが見出され、ＷＣＸにおける塩基性アイソフォームの増加が検出された。表３０および図２４を参照されたい。
【０３３４】
【表３６】
2018048174.tif 000043
【０３３５】
結論として、５つのバッチのうちの３つが、２０ｍｇ／ｍｌ濃度のリードＣＸＣＲ５抗体と適合する：
・クエン酸塩ｐＨ６．０
・酢酸塩ｐＨ５．５
・ヒスチジンｐＨ５．０。
これらのバッチを、適合性および安定性に関してより詳細に特性評価した。
【０３３６】
〔実施例１２〕
添加剤との適合性
上記のバッチの全部を、界面活性剤との適合性試験のために用いた。適合性試験を、リードＣＸＣＲ５抗体および４つの選択されたバッファーを用いて実施した。コハク酸塩ｐＨ５．０およびアルギニンｐＨ６．０は、リードＣＸＣＲ５抗体と適合しないため、これらのバッファーは添加剤についてこれ以上試験しなかった。添加剤を以下のように分類した：
・界面活性剤
・糖
・塩
・その他（アミノ酸、保存剤）。
機械的ストレス（撹拌速度３５０／ｍｉｎ、２．５ｈ、室温）を適用して、界面活性剤の効果を試験し、熱ストレス（＋４０℃、１週間）を用いて他の全ての添加剤を試験した。
【０３３７】
界面活性剤
界面活性剤の型（ＬＡ＿０８＿００１）および界面活性剤濃度（ＬＡ＿０９＿００３；０．０１％、０．０５％および０．１％）の選択に関する適合化試験は、眼に見える凝集体を防止するには０．０１％の濃度で十分であることを示した。以下の界面活性剤：ＰＶＰ  Ｋ１２およびＫ１７は両方とも機械的ストレスを印加する前に混濁を示したため、リードＣＸＣＲ５抗体にとって好適ではなかった。さらに、ドデシル硫酸ナトリウムのようなイオン性界面活性剤がリードＣＸＣＲ５抗体タンパク質溶液と適合しないことが示された。
【０３３８】
例として、図２５は、機械的ストレス後の、および界面活性剤を含まない溶液と比較した、様々な界面活性剤を含む異なるクエン酸緩衝溶液の外観を示す。分析結果を、表４４および表４５にまとめる。
【０３３９】
他の添加剤
＋４０℃で１週間の熱ストレスおよび分析決定の後、様々なバッファー系におけるリードＣＸＣＲ５抗体と適合する添加剤の選択を得ることができた。
【０３４０】
利用可能な試料容量がほんの少量であったため、いくつかの添加剤は４つのバッファー系の全部において試験することができなかった。
【０３４１】
全ての分析データを再検討した後、表３１中の添加剤はリードＣＸＣＲ５抗体と適合すると同定された。これらの添加剤は、ＳＥＣおよびＷＣＸにより分析されたダイマー、ＨＭＷＰまたは塩基性アイソフォームの有意な増加を示さなかった。
【０３４２】
全ての流体力学直径測定は、鋭いモノマーピークを示しており、好適な添加剤のＴｍは対応するバッファー系中のリードＣＸＣＲ５抗体と比較して低下していなかった。全ての分析データを、表４６、表４７、表４８および表４９にまとめた。
【０３４３】
【表３７】
2018048174.tif 000044
【０３４４】
結論として、界面活性剤との適合性試験は、ポリソルベート２０が、２０ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体と組み合わせた全ての選択されたバッファーにとって好適であることを明確に示す。界面活性剤は機械的ストレスの間、粒子の形成を防いだ。ほぼ全ての他の界面活性剤はＨＭＷＰの増加をもたらした。
【０３４５】
以下の添加剤を選択して、異なるプロトタイプ製剤を製剤化した：ＮａＣｌ、トレハロース（スクロースは安定性に関してトレハロースと多かれ少なかれ同等である）、およびアルギニン−ＨＣｌ。
【０３４６】
３カ月のプロトタイプ安定性試験
リードＣＸＣＲ５抗体の製剤開発を支援するために、１２種の異なるプロトタイプ製剤
を製造し、異なる条件（−２０℃、＋５℃および＋４０℃）で３カ月間、安定させた。
【０３４７】
以前に記載のバッファー、ｐＨおよび添加剤スクリーニングに基づいて、３つの異なるバッファー系を選択した。
【０３４８】
クエン酸塩ｐＨ６．０（製剤番号ＬＡ＿０９＿０２７）、酢酸塩ｐＨ５．５（ＬＡ＿０９＿０２８）、およびヒスチジンｐＨ５．０（ＬＡ＿０９＿０２９）を、２０ｍｇ／ｍＬのリード抗体および４つの異なる添加剤の組合せを含む１０ｍＭバッファー溶液として用いた（表３２）。
【０３４９】
これらの４つの添加剤は、添加剤スクリーニング後に有望な結果を示した。必要に応じて、オスモル濃度を調整するために、ＮａＣｌを選択し、等張化調整のために、および凍結乾燥選択肢のための糖を有するためにトレハロースを選択した。さらに、トレハロースは抗体を安定化させることができ、同様にアルギニン−ＨＣｌを安定剤として選択した。ポリソルベート２０は機械的ストレスの間の凝集を防止するのに役立つことがわかった。
【０３５０】
以下の段落は、製剤開発のための最良のバッファー系および最良の添加剤を選択するための安定性試験の間にコンパイルされた選択されたデータを示す。表３３に、全ての保存条件、時点および分析方法をまとめた。
【０３５１】
【表３８】
2018048174.tif 000045
【０３５２】
【表３９】
2018048174.tif 000046
【０３５３】
不運にも、ＰＢＳバッファー中でのリードＣＸＣＲ５抗体の３カ月安定性データは、バッチの差異のため、および異なる加速条件のため、プロトタイプの安定性と同等ではなかった。
【０３５４】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
図２６において、４つ全部のヒスチジン製剤中で３カ月の保存後に最大１０％のダイマー形成の増加を明確に見ることができる。酢酸製剤は、最大で６％のダイマー含量の増加を示した。４つ全部のクエン酸製剤において、ダイマー濃度は＋４０℃で３カ月後でも２％以下であった。
【０３５５】
弱陽イオン交換クロマトグラフィー（ＷＣＸ）
中性、塩基性および酸性アイソフォームの決定は様々な製剤の安定性に関する良好な指標であるため、これらの方法を用いてＳＥＣデータを修正した。
【０３５６】
図２７において、加速条件下ではリードＣＸＣＲ５抗体安定性についてヒスチジンがより悪いことを再度見ることができる。４つ全ての酢酸製剤について塩基性アイソフォームのわずかな増加を見ることができるが、興味深いことに、クエン酸製剤については、４つの製剤間の識別はここでは不可能である。さらに、図２８は、ヒスチジン製剤に関する中性アイソフォームの強力な減少、および酢酸製剤におけるわずかな減少を示す。再度、クエン酸塩中のリードＣＸＣＲ５抗体はほとんど影響されない。
【０３５７】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定の結果を、添付の結果表に見出すことができる。表３７〜６１を参照されたい。
【０３５８】
アンフォールディング温度（Ｔｍ）
アンフォールディング温度を用いて、異なる製剤の安定性を予測することができ、本明細書ではＭｉｃｒｏｃａｌの装備を用いて測定した。Ｔｍが高いほど、製剤はより有望であった。Ｔｍ測定の精度は＋／−０．４℃であった。
【０３５９】
クエン酸および酢酸製剤の間で、Ｔ０でのＴｍ間の差異はほぼ見られなかった。さらに、製剤Ａ、ＢおよびＤは、Ｃと比較してわずかにより高いＴｍを有していた。製剤Ａ、ＢおよびＤは全てトレハロースを含有する。
【０３６０】
ヒスチジン製剤は、全ての事例において有意により低いＴｍを有していた。
【０３６１】
【表４０】
2018048174.tif 000047
【０３６２】
ｐＨ
ｐＨは抗体溶液の安定性にとって主要な対象であり、重要であるため、ｐＨをモニタリングした。以下の図面は、加速された保存条件でのＴ０、Ｔ１、Ｔ２およびＴ３間のデルタｐＨを示す。
【０３６３】
多くのｐＨ安定化製剤はクエン酸緩衝化されたもの、特に、製剤ＢおよびＤである（図２９）。リードＣＸＣＲ５抗体の酢酸緩衝溶液中では、ｐＨはより高い値に向かってシフトした（図３０）。ヒスチジン緩衝溶液中では、ｐＨはわずかに低下していた（図３１）。
【０３６４】
ＤＬＳ
モノマーおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を、動的光散乱を用いて測定した。
【０３６５】
加速条件（＋４０℃）での保存後にのみ、２００ｎｍ未満の可溶性凝集体を観察することができた。これらの凝集体は主に、保存の３週間後に、ヒスチジン緩衝化製剤ＬＡ＿０９＿０２９Ａ、Ｃ、Ｄにおいて生じた。
【０３６６】
クエン酸緩衝製剤は、製剤Ｃ中で３週間後、および製剤Ａ中での保存の６週間後に、ほんのわずかな凝集体を示した（図３２）。同様に、製剤Ｂ中での保存の３カ月後に、いくらかの凝集体を検出することができた。しかし、酢酸緩衝製剤と比較して、その量は非常に少なかった。
【０３６７】
酢酸緩衝製剤ＬＡ＿０９＿０２８Ｃは、３週間後に、および同様に製剤Ａ中では３カ月後に２００ｎｍ未満のいくらかの凝集体を示した。図３３を参照されたい。
【０３６８】
ＵＶ
ＵＶ測定によりタンパク質濃度をモニタリングすることにより、全ての時点、試料、および製剤間の有意差は認められなかった。試料容量が非常に少なかったため、濃度をＮａｎｏｄｒｏｐ装備を用いて測定した。その結果は、＋／−５％で変化した。詳細な情報については、表５０〜６１を参照されたい。
【０３６９】
外観
３カ月の保存期間後、全ての試料はヒスチジン中であっても、濁ることなく無色透明のままであった。この観察は、ＤＬＳ中の全ての測定された凝集体が可溶性であったことを同様に示している。不溶性および眼に見えない凝集体を、ＨＩＡＣによる光遮断測定により検出することができた。
【０３７０】
ＨＩＡＣ
Ｔ０で、および＋５℃での保存の３週間後に、眼に見えない粒子が検出された。粒子の形成は酢酸バッファー中で主に観察されたことを表３６中に明確に見ることができる。興味深いことに、ヒスチジンは、４つ全部の異なる製剤について良好な結果を示した。クエン酸製剤Ａ、ＢおよびＣにおいても同様に良好である。全ての製剤における１０μｍを超える、および２５μｍを超える粒子のレベルならびに値はＰｈ．Ｅｕｒ．およびＵＳＰに規定された限界よりもはるかに下であるため、粒子形成は関係がない。
【０３７１】
オスモル濃度
実験を適合化させるのに利用できる試料容量がなかったため、オスモル濃度を調整するための添加剤の定量を、計算によって試料の製造前に行った。従って、オスモル濃度は、それがあるべきものよりも低かった（理想的には、２８０〜３２０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）。表３５。より良好な調整のためのさらなる試験を、製剤最適化試験の間に行う。
【０３７２】
【表４１】
2018048174.tif 000048
【０３７３】
【表４２】
2018048174.tif 000049
【０３７４】
結論
結論として、クエン酸バッファー、酢酸バッファー、およびヒスチジンバッファーは、＋５℃および−２０℃での保存後に変化を示さず、酢酸バッファーに関しては３カ月後に分解産物のほんのわずかな増加が見られた。
【０３７５】
加速条件下でのリードＣＸＣＲ５抗体の保存は、ＤＳの有意な変化をもたらした。クエン酸バッファー中では少しの変化が観察されたが、酢酸バッファーは分解産物および凝集産物の有意な増加ならびに酸性または塩基性アイソフォーム中の中性アイソフォームの減少を示した。
【０３７６】
加速条件下でリードＣＸＣＲ５抗体に対するとてつもない効果が観察された（最大２９．６％の高分子量タンパク質および最大８．２％のダイマー／オリゴマーおよび最大１．３％の低分子量タンパク質）。また、陽イオン交換クロマトグラフィーにより、中性アイソフォームの５０％への減少が示された。
【０３７７】
全ての試験したバッファー、例えば、クエン酸、酢酸、およびヒスチジンバッファーについて、２０ｍｇ／ｍＬの標的濃度を達成することができた。
【０３７８】
安定なＤＰのｐＨ範囲は、ｐＨ５〜６．５と規定することができた。
【０３７９】
３つの選択されたバッファーに関する２段階のスケールアップ（４ｍＬ〜１００ｍＬ〜１０００ｍＬ  ＵＦ／ＤＦ）を上手く実施した。
【０３８０】
機械的ストレス（撹拌速度３５０／ｍｉｎ、２．５ｈ、ＲＴ）後の全ての選択されたバッファー中での０．０１％ポリソルベート２０との凝集体形成の減少を評価し、分析的に確認した。
【０３８１】
ＨＭＷＰの非存在または減少を観察することができ、かくして、０．０１％のポリソルベート２０を添加することにより濾過可能性（０．２２μｍ）の増加を達成することができた。
【０３８２】
ダイマー／オリゴマーの量は、バッファーおよびｐＨに高度に依存し、ＳＥＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびＤＬＳを用いることにより分析した。
【０３８３】
原薬の特性評価
リードＣＸＣＲ５抗体分子は、分解または半分子形成に関して非常に安定しているが、予備製剤化活動の間に、ｐＨ７．２のＰＢＳに溶解したリードＣＸＣＲ５抗体は凝集傾向を有するということが分かった。従って、このバッファーは長期安定性にとって好適ではない。保存または凍結／解凍サイクル中の眼に見える、および眼に見えない粒子の形成を、製剤開発および安定性試験の間に注意深くモニタリングするべきである。
【０３８４】
最良のバッファーおよびｐＨの選択
最良のバッファーおよびｐＨの選択の後、ｐＨ６．０のクエン酸バッファー１０ｍＭは、２０ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体溶液にとって好適であると同定された。１０ｍＭヒスチジンバッファーｐＨ５または１０ｍＭ酢酸バッファーｐＨ５．５は、バックアップ選択肢として役立ち得る。
【０３８５】
添加剤との適合性試験
プロトタイプ製剤のためには以下の添加剤が推奨される：
・ポリソルベート２０
・トレハロース／スクロース
・ＮａＣｌ
・アルギニン−ＨＣｌ
開発のためには以下の添加剤が推奨されない：
・ベンジルアルコール
・マルトース
・マンニトール
・デキストラン
・リシン−ＨＣｌ。
【０３８６】
プロトタイプ製剤の３カ月安定性試験
クエン酸バッファーｐＨ６．０、酢酸バッファーｐＨ５．５、およびヒスチジンバッファーｐＨ５．０中での２０ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体の優れた安定性が、＋５℃および−２０℃で３カ月の保存後に見られた。＋４０℃でのわずかな分解（モノマー含量の５％未満の低下）がクエン酸バッファーを用いた場合に観察されたが、酢酸バッファーは、低いが有意な、およびヒスチジンバッファーについては強力な人工物の増加を示した。
【０３８７】
全ての試験した製剤は、ＰＢＳ  ｐＨ７．２中の一般的な探索製剤と比較して保存中の粒子形成の有意な減少を示した。
【０３８８】
かくして、この予備製剤化試験の推奨は、リードＣＸＣＲ５抗体のＤＳおよびＤＰのために１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６を用いることである。２０ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体を含む滅菌濾過緩衝溶液、および安定性を増加させる添加剤は、バイアル中、＋５℃での保存推奨と共に実現可能であるべきである。
【０３８９】
等張化調整のため、トレハロースおよびＮａＣｌを用いることができ、凝集体の形成を防止するためにポリソルベート２０を用いるべきである。
【０３９０】
バッファー系を変化させる、および／またはｍＡＢ濃度を５ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬに増加させるためのＵＦ／ＤＦ実験の実現可能性を、様々な規模で示すことができた。
【０３９１】
【表４３】
2018048174.tif 000050
【０３９２】
【表４４】
2018048174.tif 000051
【０３９３】
【表４５】
2018048174.tif 000052
【０３９４】
【表４６】
2018048174.tif 000053
【０３９５】
【表４７】
2018048174.tif 000054
【０３９６】
【表４８】
2018048174.tif 000055
【０３９７】
【表４９】
2018048174.tif 000056
【０３９８】
【表５０】
2018048174.tif 000057
【０３９９】
機械的ストレス後に大きな差異は見られなかったため、試料ＬＡ＿０９＿０９〜１５に機械的ストレスをかけなかった。
【０４００】
【表５１】
2018048174.tif 000058
【０４０１】
【表５２】
2018048174.tif 000059
【０４０２】
Ｎ／Ａ、利用可能な試料容量があまりにも少なかったため、試料を分析的に試験しなかった。
【０４０３】
添加剤およびリードＣＸＣＲ５抗体（ＬＡ＿０９＿０２２）
【表５３】
2018048174.tif 000060
【０４０４】
添加剤およびクエン酸緩衝化（ＬＡ＿０９＿０２３）
【表５４】
2018048174.tif 000061
【０４０５】
添加剤および酢酸緩衝化（ＬＡ＿０９＿０２４）
【表５５】
2018048174.tif 000062
【０４０６】
添加剤およびヒスチジン緩衝化（ＬＡ＿０９＿０２５）
【表５６】
2018048174.tif 000063
【０４０７】
【表５７】
2018048174.tif 000064
【０４０８】
【表５８】
2018048174.tif 000065
【０４０９】
【表５９】
2018048174.tif 000066
【０４１０】
【表６０】
2018048174.tif 000067
【０４１１】
【表６１】
2018048174.tif 000068
【０４１２】
【表６２】
2018048174.tif 000069
【０４１３】
【表６３】
2018048174.tif 000070
【０４１４】
【表６４】
2018048174.tif 000071
【０４１５】
【表６５】
2018048174.tif 000072
【０４１６】
【表６６】
2018048174.tif 000073
【０４１７】
【表６７】
2018048174.tif 000074
【０４１８】
【表６８】
2018048174.tif 000075
【０４１９】
抗ＣＸＣＲ５（２０ｍｇ／ｍＬ）製剤試験
実施例１３〜１６のデータを、静脈内および皮下投与のためのリードＣＸＣＲ５抗体お
よびその医薬品について製剤化試験の間に収集した。製剤化試験の目的は、第Ｉ相のための注射のための、安定な、透明な、またはわずかに乳白色の、および無色またはわずかに黄色の、眼に見える粒子を含まないリードＣＸＣＲ５抗体溶液を提供することであった。
【０４２０】
材料
原薬（ＤＳ）
２つの原薬バッチを、これらの製剤化試験のために用いた。一方はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に製剤化されたものであり、他方はクエン酸バッファー中に製剤化されたものである。表６２を参照されたい。
【０４２１】
【表６９】
2018048174.tif 000076
【０４２２】
添加剤
表６３は、製剤化試験中に用いられた添加剤を示す。
【０４２３】
【表７０】
2018048174.tif 000077
【０４２４】
方法
試料の調製
Ｈｙｄｒｏｓａｒｔ膜および３０ｋＤａカットオフを備えたＶｉｖａＳｐｉｎデバイスを用いて、小規模で限外濾過／ダイアフィルトレーションを実施した。ＲＳＮ材料を５ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、リン酸（ＰＢＳ）バッファーを１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６．０、酢酸バッファーｐＨ５．５、またはヒスチジンバッファーｐＨ５．０のいずれかに交換した。ＶｉｖａＳｐｉｎユニットを室温（ＲＴ）で一般的な実験室用遠心分離に入れ、２０００ｒｐｍで遠心分離した。分析試験の前に、溶液を０．２μｍのＭｉｎｉｓａｒｔ上で濾過した。全ての試料を＋２℃〜＋８℃で保存し、固く密閉し、
Ｔ０での分析試験まで、および＋４０℃での１週間の熱ストレスの後またはＲＴで２．５時間、３００ｒｐｍの機械的ストレスの後、光から保護した（ポリソルベート２０濃度の評価のためだけに）。
【０４２５】
分析方法
以下の技術を試料分析のために用いた：
【０４２６】
【表７１】
2018048174.tif 000078
【０４２７】
〔実施例１３〕
さらなるｐＨ最適化
予備製剤化試験により、１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６．０がリードＣＸＣＲ５抗体凝集傾向が少ない最良のバッファーであると同定された。クエン酸バッファー中でのｐＨプロファイルを得るために、ｐＨ５．０〜７．０までの段階的ｐＨ依存的安定性を評価した。限られた原薬の利用可能性のため、綿密なｐＨスクリーニングは１０ｍＭクエン酸バッファーについてのみ行った。試料をＴ０で、および＋４０℃での１週間の熱ストレス後に取得した。表６５〜６９を参照されたい。
【０４２８】
【表７２】
2018048174.tif 000079
【０４２９】
【表７３】
2018048174.tif 000080
【０４３０】
【表７４】
2018048174.tif 000081
【０４３１】
【表７５】
2018048174.tif 000082
【０４３２】
【表７６】
2018048174.tif 000083
【０４３３】
結論として、データは、予備製剤化試験中に既に生成された結果を確認する：ｐＨの増加は、モノマー含量を減少させ、ダイマー率を増加させる。＋４０℃の試料は、ｐＨ６．０までのＨＭＷにおけるｐＨ値の低下および次いで、ｐＨ５．０までの増加を示した。
【０４３４】
〔実施例１４〕
さらなるバッファー最適化
次に、クエン酸、酢酸、およびヒスチジン（バックアップバッファーとして）バッファーを、選択されたｐＨ値で５／１０／２５／５０ｍＭでスクリーニングした。表７０〜８４を参照されたい。
【０４３５】
【表７７】
2018048174.tif 000084
【０４３６】
【表７８】
2018048174.tif 000085
【０４３７】
【表７９】
2018048174.tif 000086
【０４３８】
【表８０】
2018048174.tif 000087
【０４３９】
【表８１】
2018048174.tif 000088
【０４４０】
【表８２】
2018048174.tif 000089
【０４４１】
【表８３】
2018048174.tif 000090
【０４４２】
【表８４】
2018048174.tif 000091
【０４４３】
【表８５】
2018048174.tif 000092
【０４４４】
【表８６】
2018048174.tif 000093
【０４４５】
【表８７】
2018048174.tif 000094
【０４４６】
【表８８】
2018048174.tif 000095
【０４４７】
【表８９】
2018048174.tif 000096
【０４４８】
【表９０】
2018048174.tif 000097
【０４４９】
【表９１】
2018048174.tif 000098
【０４５０】
結論として、データは、予備製剤化試験中に生成された結果を確認する。緩衝剤としてクエン酸を用いた場合、モノマー含量は酢酸バッファーおよびヒスチジンバッファーよりもわずかに高い。ヒスチジンを用いた場合、Ｔ０でも高い凝集挙動が観察可能であり、分析試料の調製が困難である。試験したバッファー濃度間の有意差を測定することができず、従ってバッファー、クエン酸バッファー、ヒスチジンバッファー、および酢酸バッファーの３種全部を１０ｍＭの濃度で用いることができる。
【０４５１】
〔実施例１５〕
さらなる界面活性剤最適化
予備製剤化試験に基づいて、非イオン性界面活性剤ポリソルベート２０（０．０１％）の添加は、安定性に対する有益な効果を示し、従って、対応するバッファーに以下のポリソルベート２０濃度：０．００２５％／０．００５％／０．０１％／０．０２％を添加することにより、その濃度のさらなる評価を行った。表８５〜９４を参照されたい。
【０４５２】
【表９２】
2018048174.tif 000099
【０４５３】
【表９３】
2018048174.tif 000100
【０４５４】
【表９４】
2018048174.tif 000101
【０４５５】
【表９５】
2018048174.tif 000102
【０４５６】
【表９６】
2018048174.tif 000103
【０４５７】
【表９７】
2018048174.tif 000104
【０４５８】
【表９８】
2018048174.tif 000105
【０４５９】
【表９９】
2018048174.tif 000106
【０４６０】
【表１００】
2018048174.tif 000107
【０４６１】
【表１０１】
2018048174.tif 000108
【０４６２】
結論として、様々なポリソルベート濃度を有する酢酸またはクエン酸バッファーを含有する試料における有意差は測定できなかった。１５０ｍｉｎよりも長時間にわたり行われた機械的ストレスに対するｍＡｂ防止を確保するために、ポリソルベート濃度を０．２ｍｇ／ｍＬに設定した。この量は、予備製剤化試験に基づいても提唱された。
【０４６３】
〔実施例１６〕
さらなる等張性最適化
予備製剤化試験中に、ＮａＣｌ、トレハロース、およびアルギニン−ＨＣｌが、等張性および安定性のための添加物として同定された。次いで、ｍＡｂ安定性効果が低いため、アルギニン−ＨＣｌを脱落させた。バッファー濃度およびｐＨ値に応じて、等張剤（ｉｓｏｔｏｎａｎｔ）／安定剤の量を、Ｐｈ．Ｅｕｒ．に従って少なくとも２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのオスモル濃度を達成するために合わせる。
【０４６４】
トレハロースは公定添加剤ではなく、高価であるため、トレハロースの使用は課題であった。予備製剤化試験中に、スクロース（サッカロース）はわずかにより多い凝集を引き起こしたが、さらなる試験において追跡および検証されなかった。従って、＋５℃、＋２５℃、および＋４０℃の保存温度の１０ｍＭクエン酸および酢酸バッファーの両方の中のトレハロースならびにサッカロースを含む、４週間にわたる新しい短期安定性試験を設計した。表９５〜１０３を参照されたい。
【０４６５】
少なくとも２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのオスモル濃度の微調整を、ＮａＣｌを用いて実施した。
【０４６６】
【表１０２】
2018048174.tif 000109
【０４６７】
【表１０３】
2018048174.tif 000110
【０４６８】
【表１０４】
2018048174.tif 000111
【０４６９】
【表１０５】
2018048174.tif 000112
【０４７０】
【表１０６】
2018048174.tif 000113
【０４７１】
【表１０７】
2018048174.tif 000114
【０４７２】
【表１０８】
2018048174.tif 000115
【０４７３】
【表１０９】
2018048174.tif 000116
【０４７４】
【表１１０】
2018048174.tif 000117
【０４７５】
結論として、クエン酸バッファーと酢酸バッファーとの有意差は測定されず、トレハロースとサッカロースとの加速条件での差異は見えなかった。サッカロースを含むクエン酸バッファーを、さらなる試験のために選択した。
【０４７６】
ＤＰ製造プロセスパラメータの決定
クエン酸バッファー中のＤＳバッチを用いて、製造プロセスパラメータを決定した。予備製剤化試験により、ＤＳが酸化を受けにくく、製造中の光保護または窒素重層またはパージが必要であることが示された。標準的なガラス装備ならびにシリコン管（ＳａｎｉＴｅｃｈ６５）を用いた。
【０４７７】
添加順序
添加剤の添加順序を評価する実験は、ＤＳの小さい希釈容量のため限られていた。
【０４７８】
ＤＳをガラスボトル中で計量し、第１の添加剤としてのポリソルベート２０、第２の添加剤としてのサッカロース、および第３の添加剤としてのＮａＣｌを添加し、クエン酸バッファー１０ｍＭ  ｐＨ６．０ですすぎ、ＤＳの含量を２０ｍｇ／ｍＬに希釈した。
【０４７９】
撹拌速度および時間
撹拌速度を１００ｒｐｍに設定して、ＤＳに対する機械的ストレスを軽減した。全ての添加剤は良好に水溶性であったという事実のため、撹拌時間を５分間に設定した。
【０４８０】
モニタリングパラメータおよびＩＰＣ
外観、濁度、密度、および粘度のようなモニタリングパラメータ、ならびにｐＨ値およびオスモル濃度のようなＩＰＣを、以下の表１０４に従って試料製造中に日常的にチェックした：
【表１１１】
2018048174.tif 000118
【０４８１】
製造中に問題は観察されなかった。オスモル濃度の限界を、測定されたデータに基づいて設定した。
【０４８２】
濾過プロセス
予備製剤化試験によれば、ポリエーテルスルホンは滅菌濾過のための好適な膜であった（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、０．２２μｍ）。濾過の速度および時間は水性溶液の濾過に関する標準値を示したため、濾過後の潜在的なｐＨシフトを観察することはできなかった。フィルター完全性試験を、問題なく日常的に実施した。
【０４８３】
充填プロセス
充填ポンプおよび充填針のような、ステンレススチール製の標準的な投薬装備を調査した。また、持続時間および充填速度をモニタリングした。充填されたＤＰの抽出可能容量を決定した。１．５ｍＬの抽出可能容量を確保するためには、０．２ｍＬの過充填が必要であった。
【０４８４】
材料適合性
全ての予備製剤化および製剤化試験を、ＧＭＰ製造に用いられる装備のための推奨でもある、標準的な製造装備としてガラス中で実施した。
【０４８５】
洗浄剤
製造装備の洗浄を、標準的な洗浄剤Ｎｅｏｄｉｓｈｅｒ（登録商標）を用いる皿洗い機を用いて、対応するＳＯＰに従って実施した。注射用水を用いる手動での予備洗浄を、その前に日常的に行った。洗浄剤の有害な効果は観察されなかった。
【０４８６】
リードＣＸＣＲ５抗体（２０ｍｇ／ｍＬ）のためのさらなる製剤化試験の概要
第Ｉ相リードＣＸＣＲ５抗体ＤＰ製剤の選択のために、ヒスチジンおよび酢酸よりもクエン酸１０ｍＭ、ｐＨ６．０をバッファーとして選択した。ｐＨ値の増加または減少はモノマー含量の減少を意味するため、溶液のｐＨ値を６．０に設定した。バッファー濃度を１０ｍＭの媒体濃度に設定したが、５〜５０ｍＭの濃度間で有意差はなかった。
【０４８７】
機械的ストレスに対してＤＳを安定化させるのに十分な、０．２ｍｇ／ｍＬ（０．０２％）の界面活性剤としてポリソルベート２０を選択した。
【０４８８】
トレハロースを選ぶ熱ストレスに対する安定剤としてスクロース（サッカロース）を選択した。サッカロースの濃度を６０ｍｇ／ｍＬ（６％）に設定した。
【０４８９】
ＮａＣｌを２．０ｍｇ／ｍＬ（０．２％）の濃度で等張剤として用いて、約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのＤＰのオスモル濃度を達成した。
【０４９０】
抗ＣＸＣＲ５（１００ｍｇ／ｍＬ）製剤化試験
実施例１７〜２１のデータを、静脈内および皮下投与のためのリードＣＸＣＲ５抗体およびその医薬品のための製剤化試験の間に収集した。製剤化試験の目的は、第Ｉ相のための注射のための、安定な、透明またはわずかに乳白色の、および無色またはわずかに黄色の、眼に見える粒子を含まないリードＣＸＣＲ５抗体溶液を提供することであった。
【０４９１】
方法
試料調製
ＵＦ／ＤＦを、Ｈｙｄｒｏｓａｒｔ膜および３０ｋＤａカットオフを備えたＶｉｖａＳｐｉｎデバイスを用いて小規模で実施した。ＲＳＮ材料を、約２０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。全ての溶液は既に最終製剤バッファー（１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６．０）中にあった。
【０４９２】
ＶｉｖａＳｐｉｎユニットを、ＲＴで一般的な実験室用遠心分離機に入れ、２０００ｒｐｍで遠心分離した。分析試験の前に溶液を０．２μｍのＭｉｎｉｓａｒｔ上で濾過した。
【０４９３】
全ての試料を＋２〜＋８℃で保存し、固く密閉し、Ｔ０での分析試験まで、および＋４０℃での１週間の熱ストレス後または機械的ストレス後に、光から保護した。
【０４９４】
分析方法
以下の技術を、試料分析のために用いた：
【０４９５】
【表１１２】
2018048174.tif 000119
【０４９６】
〔実施例１７〕
添加剤スクリーニング
予備製剤化試験により、１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６．０がリードＣＸＣＲ５抗体凝集傾向が少ない最良のバッファーであると同定された。２０ｍｇ／ｍＬでの以前の試験において、１０ｍＭクエン酸バッファー、６０ｍｇ／ｍＬ（６％）スクロース、２ｍｇ／ｍＬ（０．２％）ＮａＣｌ、および０．２ｍｇ／ｍＬ（０．０２％）ポリソルベート２０を含有する製剤を選択した。これらの添加剤およびいくつかの選択肢を試験して、より高濃度（１００ｍｇ／ｍＬ）での選択された製剤の好適性を確認した。
【０４９７】
様々な製剤に、４０℃で７日間、熱ストレスを加え、１００ｒｐｍで５ｈ機械的にストレスを加えた。さらに、様々な製剤のアンフォールディング温度を、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）を用いて１００ｍｇ／ｍＬでスクリーニングした。
【０４９８】
以下の添加剤を試験した：
スクロース→６０ｍｇ／ｍＬ
トレハロース→６０ｍｇ／ｍＬ
アルギニン→３０ｍｇ／ｍＬ
リシン→３０ｍｇ／ｍＬ
グリシン→３０ｍｇ／ｍＬ。
【０４９９】
ＮａＣｌまたはマンニトールを等張剤として添加した。粘度低下（約２．１ｃＰ）のために塩は必要なかった。
【０５００】
Ｔ０およびＴ７日の結果を表１０６に示す。
【０５０１】
【表１１３】
2018048174.tif 000120
【０５０２】
熱ストレス
試料はいずれもストレスの前後で混濁を示さなかった。
【０５０３】
リシンは、９．８へのｐＨシフト、非常に高い凝集傾向、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける酸
性および塩基性アイソフォーム、ならびに高分子量バンドの非常に高い増加を示した。結果として、それはさらなる考慮から除外された。
【０５０４】
マンニトールを含む製剤は、ストレス後にＥＬＩＳＡアッセイにおいて不良な結合を示した。結果として、ＮａＣｌが好ましい等張剤である。
【０５０５】
スクロースは、トレハロースよりもわずかに良好な化学的安定性を示したが、ストレス後にＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいてさらなるバンドが見られた（両方について）。
【０５０６】
アルギニン（特に、ＮａＣｌの存在下）およびグリシンは、類似するＳＥＣプロファイルを有していたが、ストレス後にＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいてさらなるバンドが見られた。
【０５０７】
動的光散乱（ＤＬＳ）により測定されたタンパク質会合形成
リードＣＸＣＲ５抗体は、濃度を増加させることにより、流体力学直径（Ｚ平均）の有意な増加を示した（図３４）。この挙動は、希釈時に完全に可逆性であった。この効果のさらなる調査のために、分析的超遠心分離（ＡＵＣ）により様々なリードＣＸＣＲ５抗体濃度を測定し、凝集体を排除した。ＡＵＣ試験の結論は、この挙動がタンパク質会合の形成によるものであるということであった。
【０５０８】
この挙動に対する上記で列挙された添加剤の効果を試験し、結果を図３５に示す。Ｚ平均を熱ストレスの前後で測定した。安定化効果は、全ての試験した添加剤と類似していたが、Ｚ平均の増加は一般的には、安定剤としてアミノ酸（アルギニン、リシンまたはグリシン）を用いることにより減少した。リシンは、ストレス後の凝集体の含量がより高いため除外された。アルギニンは、グリシンよりも良好な効果を示した。両アミノ酸を、最良の添加剤の組合せを選択するための最終実験設計のために考慮した。
【０５０９】
機械的ストレス
リシン製剤ならびにマンニトールを含有する全製剤を除外した。ＳＥＣデータは、試験した試料に対するストレスの効果がないことを示した。表１０７を参照されたい。
【０５１０】
【表１１４】
2018048174.tif 000121
【０５１１】
アミノ酸の存在下でもＺ平均の同じ減少が認められた。スクロースは機械的ストレスに対する、トレハロースよりも良好な保護効果を有していた。アルギニンおよびグリシンはＮａＣｌと組み合わせた場合、より良好に機能した。図３６を参照されたい。
【０５１２】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）スクリーニング
リードＣＸＣＲ５抗体のアンフォールディング温度を決定するためのスクリーニング試験を、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を用いて実施した。スクロース、トレハロース、アルギニン、およびグリシンをスクリーニングした。
【０５１３】
Ｔｍの結果を表１０８に列挙する。
【０５１４】
【表１１５】
2018048174.tif 000122
【０５１５】
Ｔｍ１に基づいて、スクロースおよびトレハロースは最も高い値を示した。アルギニンはＮａＣｌと組み合わせた場合に良好に機能した。
【０５１６】
結論として、収集されたデータは、最終リードＣＸＣＲ５抗体１００ｍｇ／ｍｌ製剤が、等張剤としてのＮａＣｌの存在下で糖（いくつかの実施形態においては、スクロース）とアミノ酸（いくつかの実施形態においては、アルギニンまたはグリシン）との組合せを含有することを示唆している。
【０５１７】
〔実施例１８〕
界面活性剤のスクリーニング
安定剤としてのポリソルベートを、熱ストレスと機械的ストレスの両方に対するリードＣＸＣＲ５抗体の保護について評価した。
【０５１８】
ポリソルベート２０および８０を、２つの異なる濃度：０．１および０．２ｍｇ／ｍｌで試験した。
【０５１９】
熱ストレス
ＤＬＳにより、熱ストレス後のポリソルベートの添加による効果がないことが示された。ＳＥＣにより検出されたように、４０℃で７日間の保存後にＨＭＷおよび断片の形成が全試料において認められた。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおけるさらなるバンドは検出されなかった。熱ストレス後にわずかな変化が見られたが、ＰＳ２０とＰＳ８０との間、ならびに２
つの濃度の間の差異は見られなかった（データは示さない）。
【０５２０】
機械的ストレス
ＤＬＳにより、機械的ストレス後の変化は示されなかった。ポリソルベート２０は、機械的ストレス後に凝集体を示さなかった。ポリソルベート８０は、機械的ストレス後に凝集体形成を示した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおけるさらなるバンドは見られなかった（データは示さない）。
【０５２１】
結論として、ポリソルベート２０は、リードＣＸＣＲ５抗体の機械的安定化において優れているため、望ましい界面活性剤であった。
【０５２２】
〔実施例１９〕
ＤＳＣを用いるプロトタイプ製剤の予備選択
添加剤スクリーニングおよび界面活性剤スクリーニング試験に基づいて、１２種の異なる添加剤の組合せが示唆された（表１０９および１１０を参照されたい）。
【０５２３】
全ての製剤のアンフォールディング温度を、ＤＳＣを用いて決定し、それぞれの製剤に関する得られるＴｍならびにオスモル濃度を、表１０９および１１０に列挙する。
【０５２４】
【表１１６】
2018048174.tif 000123
【０５２５】
【表１１７】
2018048174.tif 000124
【０５２６】
製剤はＴｍにおいては大きな差異を示さなかったが、オスモル濃度は大きく変化した。プロトタイプ製剤の予備選択を、Ｔｍおよびオスモル濃度に基づいて行った。従って、それぞれの添加剤群（アルギニンおよびグリシン）において、最も高いＴｍを選択した（オスモル濃度とは無関係に）。さらに、等張領域における最も高いＴｍも選択した。
【０５２７】
〔実施例２０〕
プロトタイプ探査安定性試験
上記のプロトタイプ選択は４つのプロトタイプ製剤をもたらしたが、これらを表１１１に列挙する。これらの製剤を、機械的ストレス（１００ｒｐｍで５時間）、５回の凍結／解凍サイクルならびに５、２０および４０℃での等温ストレスについて試験した。
【０５２８】
【表１１８】
2018048174.tif 000125
【０５２９】
機械的安定性
いずれの添加剤も添加しない、１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６中のリードＣＸＣＲ５抗体（ＤＳ製剤）も、プロトタイプ製剤と平行してストレスを加えた。ＤＳの機械的ストレス、機械的ストレス後に全ての試験した製剤において変化が見られなかったストレス
後にＤＬＳによってより高分子量の種が測定された（図３７）。機械的ストレス後の凝集体の形成を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いて測定し、その結果を表１１２に示す。一般に、より多くのＨＭＷが機械的ストレス後にＳＥＣにより見出される製剤Ａを除いて、４つの製剤は機械的ストレスに対して同等に安定であった。図３８を参照されたい。
【０５３０】
【表１１９】
2018048174.tif 000126
【０５３１】
凍結／解凍安定性
５回の凍結／解凍サイクル後にＤＳまたはＤＰに関して有意差は検出されなかった。従って、凍結および解凍による不安定性の問題はないはずである（データは示さない）。
【０５３２】
探査プロトタイプ安定性試験
プロトタイプ製剤を、−２０、５、２０、および４０℃で保存した。それらを試験の開始時、１カ月後、３カ月後、および６カ月後に分析した。３カ月後の結果に基づいて製剤を選択した（表１１３〜１１５）。その結果は、特に４０℃で、ＳＥＣ、ＷＣＸ、および眼に見えない粒子に関して、製剤Ｂが最も良好に機能することを示していた。
【０５３３】
【表１２０】
2018048174.tif 000127
【０５３４】
【表１２１】
2018048174.tif 000128
【０５３５】
【表１２２】
2018048174.tif 000129
【０５３６】
結論として、試験は、製剤ＬＡ＿１０＿１０２＿Ｂに関するより良好な結果を示した。この製剤は、１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６中、１００ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体の濃度を有し、以下の添加剤：
スクロース            ４５ｍｇ／ｍＬ（４．５％）；
アルギニン            １０ｍｇ／ｍＬ（１％）；
ＮａＣｌ              ２ｍｇ／ｍＬ（０．２％）；および
ポリソルベート２０    ０．１ｍｇ／ｍＬ（０．０１％）
を含有していた。
【０５３７】
〔実施例２１〕
１００ｍｇ／ｍＬ製剤に関する安定性データの支援
実施例２０で同定された１００ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体製剤に対してさらなる安定性試験を行った。さらなる試験を、−２０、５、および２５℃で実施した。結果を表１１６〜１１８に示す。
【０５３８】
【表１２３】
2018048174.tif 000130
【０５３９】
【表１２４】
2018048174.tif 000131
【０５４０】
【表１２５】
2018048174.tif 000132
【０５４１】
【表１２６】
2018048174.tif 000133
【０５４２】
【表１２７】
2018048174.tif 000134
【０５４３】
【表１２８】
2018048174.tif 000135
【図１】
2018048174.tif 000136
【図２】
2018048174.tif 000137
【図３】
2018048174.tif 000138
【図４】
2018048174.tif 000139
【図５】
2018048174.tif 000140
【図６】
2018048174.tif 000141
【図７】
2018048174.tif 000142
【図８】
2018048174.tif 000143
【図９】
2018048174.tif 000144
【図１０】
2018048174.tif 000145
【図１１】
2018048174.tif 000146
【図１２】
2018048174.tif 000147
【図１３】
2018048174.tif 000148
【図１４】
2018048174.tif 000149
【図１５】
2018048174.tif 000150
【図１６】
2018048174.tif 000151
【図１７】
2018048174.tif 000152
【図１８】
2018048174.tif 000153
【図１９】
2018048174.tif 000154
【図２０】
2018048174.tif 000155
【図２１】
2018048174.tif 000156
【図２２】
2018048174.tif 000157
【図２３】
2018048174.tif 000158
【図２４】
2018048174.tif 000159
【図２５】
2018048174.tif 000160
【図２６】
2018048174.tif 000161
【図２７】
2018048174.tif 000162
【図２８】
2018048174.tif 000163
【図２９】
2018048174.tif 000164
【図３０】
2018048174.tif 000165
【図３１】
2018048174.tif 000166
【図３２】
2018048174.tif 000167
【図３３】
2018048174.tif 000168
【図３４】
2018048174.tif 000169
【図３５】
2018048174.tif 000170
【図３６】
2018048174.tif 000171
【図３７】
2018048174.tif 000172
【図３８】
2018048174.tif 000173
【配列表】
2018048174000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成29年10月25日(2017.10.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）に結合する結合剤または抗体であって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が配列番号１、２および３のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖可変領域が配列番号４、５および６のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む前記結合剤または抗体；および
緩衝剤としての４．５〜５５ｍＭクエン酸塩
を含む安定な製剤であって、
該製剤のｐＨがｐＨ６．６以下かつ結合剤または抗体のｐＩ以下である、前記製剤。
【請求項２】
結合剤または抗体が配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体である、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体５型）結合剤または抗体であって、重鎖可変領域が配列番号１５、１６および１７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖可変領域が配列番号１８、１９および２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む前記結合剤または抗体；
緩衝剤としての４．５〜５５ｍＭクエン酸塩；および
ポリソルベート
を含む安定な製剤であって、
該製剤のｐＨがｐＨ６．６以下かつ結合剤または抗体のｐＩ以下である、前記製剤。
【請求項４】
結合剤または抗体が配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体である、請求項３に記載の製剤。
【請求項５】
液体製剤である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項６】
凍結乾燥製剤である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項７】
＋５℃で少なくとも６カ月間安定である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項８】
＋５℃で少なくとも９カ月間安定である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項９】
ｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に抗ＬＩＧＨＴ抗体を含む参照抗ＬＩＧＨＴ製剤またはｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に抗ＣＸＣＲ５抗体を含む参照抗ＣＸＣＲ５製剤と比較して、凝集体、半分子、分解産物、低分子量タンパク質、高分子量タンパク質、および抗体の酸性／塩基性／中性アイソフォームの再構成からなる群から選択される少なくとも１つの副産物の量の減少を示す、請求項１〜８のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項１０】
１）請求項１〜９のいずれか１項に記載の製剤と、２）該製剤の投与および使用に関するラベルまたは指示書とを含む容器を含むキット。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の製剤を含むシリンジ、カートリッジ、バイアル、アンプル、またはオートインジェクターのような充填済みデバイスまたは充填済み容器。
【外国語明細書】
2018048174000001.pdf