(57)【要約】      （修正有）【課題】鑑別操作が比較的簡単で客観性を有し、検査員の経験やノウハウに頼ることなく鑑別でき、且つ、獣毛繊維に前処理や染色加工がなされている場合でも、正確な鑑別結果を得ることのできる獣毛繊維の鑑別方法を提供する。【解決手段】被検獣毛繊維から当該獣毛繊維を構成するタンパク質群を抽出する抽出工程、抽出したタンパク質群を電気泳動手段により分離して電気泳動パターンを得る電気泳動工程、及び、得られた電気泳動パターンを予め準備した起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の電気泳動パターンと比較して、被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別する鑑別工程を有する。更に高精度の鑑別を行うために、電気泳動パターンの特定バンドから得たペプチド群を分析する質量分析工程を組み合わせる。【選択図】図１
2018185300.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検獣毛繊維から当該獣毛繊維を構成するタンパク質群を抽出する抽出工程、
抽出した前記タンパク質群を電気泳動手段により分離して電気泳動パターンを得る電気泳動工程、及び、
得られた前記電気泳動パターンを予め準備した起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の電気泳動パターンと比較して、前記被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別する第１鑑別工程を有する獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項２】
電気泳動パターンを得る前記電気泳動工程おいて、
起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の電気泳動パターンのうち、少なくともカシミヤを起源とする単一獣毛繊維の電気泳動パターンに対して、分子量が２５ｋＤａ以下の領域における分解能が、１０個以上のバンドに分解可能な電気泳動ゲルを使用することを特徴とする請求項１に記載の獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項３】
タンパク質群を抽出する前記抽出工程において、
タンパク質の分子内或いは分子間のジスルフィド結合を開裂するために還元剤を使用し、当該還元剤は、容量％濃度で６％より濃い濃度の２−メルカプトエタノール、又は、モル濃度で８〜１２ｍＭ（ミリモル／リッター）のジチオスレイトールであることを特徴とする請求項１又は２に記載の獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項４】
被検獣毛繊維から当該獣毛繊維を構成するタンパク質群を抽出する抽出工程、
抽出した前記タンパク質群を電気泳動手段により分離して電気泳動パターンを得る電気泳動工程、
前記電気泳動パターンを形成する複数のバンドのうち所定のバンドを切出す切出工程、
切出した前記バンド内のタンパク質を所定の消化酵素により消化して一連のペプチド群とする消化工程、
得られた前記ペプチド群を質量分析手段により分析して前記ペプチド群の質量分析パターンを得る質量分析工程、及び、
得られた前記質量分析パターンを予め準備した起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の質量分析パターンと比較して、前記被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別する第５鑑別工程を有する獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項５】
前記切出工程において、前記所定のバンドは、前記起源となる動物の種類が既知の獣毛繊維の電気泳動パターンと共通する分子量域に存在するバンドであって、且つ、分子量が１０ｋＤａ付近にあるタンパク質濃度の濃いバンドであることを特徴とする請求項4に記載の獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項６】
前記消化工程において、前記所定の消化酵素は、タンパク質を構成するアミノ酸であるリシンのＣ側末端から当該タンパク質を切断するエンドプロテアーゼであることを特徴とする請求項４又は５に記載の獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項７】
前記質量分析工程において、前記質量分析手段は、液体クロマトグラフィー質量分析手段であることを特徴とする請求項４〜６のいずれか１つに記載の獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項８】
前記被検獣毛繊維は、カシミヤ、ウール、ヤク、モヘア、アンゴラ、アルパカ、ビキューナ、キャメル、及び、リャマからなる群のうち少なくとも１つの獣毛繊維を含有することを特徴とする請求項１〜７のいずれか１つに記載の獣毛繊維の鑑別方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別する獣毛繊維の鑑別方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
市場には多くの獣毛繊維を用いた繊維製品が高級品として流通している。獣毛繊維の中でも特に高級品とされるカシミヤを用いた繊維製品には、他の獣毛繊維を混合しての偽装が多く行われている。従って、一般の消費者が繊維製品を購入する際に偽装を見分けることができず、公正取引上の大きな問題となっている。例えば、カシミヤ（ヤギ属）と見分けが付きにくいヤク（ウシ属）の毛を混合し、或いは、ウール（ヒツジ属）のスケールを除去（「脱スケール」という。）して混合するなど手の込んだ偽装が行われている。
【０００３】
そこで、繊維製品の輸出入の際には、各国の繊維関係の検査機関で鑑別して取引の安全を図っている。これらの検査機関では、例えば日本においては、ＪＩＳＬ １０３０‐１（繊維製品の混用率試験方法‐第１部：繊維鑑別）、及び、ＪＩＳＬ １０３０‐２（繊維製品の混用率試験方法‐第２部：繊維混用率）に基づいて鑑別を行っている。
【０００４】
この鑑別方法において獣毛繊維を鑑別するには、検査員が光学顕微鏡を用いて目視により検査対象の獣毛繊維を標準写真見本と対比させて行っている。また、この鑑別方法において獣毛繊維の混用率を求めるには、検査員が光学顕微鏡を用いて目視により検査対象の獣毛繊維に含まれる異種の獣毛繊維の本数や直径を求め、或いは、分別してそれぞれの重量を測定するなどの方法で行っている。
【０００５】
従って、これらの方法においては、各検査機関の検査員の経験とノウハウの違いによる鑑別結果のばらつきが生じるという問題があった。また、混用率を求める場合には、検査員による非常に煩雑で長時間に亘る作業が伴うという問題があった。更に、獣毛繊維に手の込んだ偽装が行われている場合には、上記方法のみでは正確な鑑別が行えないという問題があった。
【０００６】
これに対して、上記の光学顕微鏡を用いた目視による鑑別方法を補完する方法が提案されている。例えば、下記特許文献１においては、ＤＮＡによる獣毛繊維の同定方法が提案されている。この方法によれば、獣毛繊維試料から抽出したＤＮＡと動物種に特異的なプライマーを用いてポリメラーゼチェインリアクション（ＰＣＲ）によってＤＮＡを増幅し、この増幅成分の塩基配列を分析して獣毛繊維試料の起源となる動物種を鑑別するというものである。
【０００７】
また、下記特許文献２においては、獣毛繊維製品中の獣毛繊維の混用率鑑定法が提案されている。この方法によれば、獣毛繊維試料から抽出したＤＮＡと動物種に特異的なプライマーと当該プライマーによって増幅される配列を特異的に検出するプローブを用いてリアルタイムＰＣＲを行って、各動物種由来のＤＮＡ量の相対値の比率を求め、予め用意された一連の標準混合獣毛繊維のＤＮＡ量の相対値の比率との対応表に基づいて獣毛繊維の混用率を鑑別するというものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０００−２１００８４号公報
【特許文献２】特開２００４−１２１２２９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記特許文献１の同定方法、及び、上記特許文献２の混用率鑑定法は、いずれも獣毛繊維から抽出したＤＮＡの遺伝子配列により、獣毛繊維の起源となる動物種或いはその混用率を鑑別するものである。これらの方法は、動物種ごとに遺伝子配列が異なることを利用するものであり、生物学的に客観的な結果を与えることが期待される。
【００１０】
しかし、鑑別の試料となる獣毛繊維からＤＮＡを抽出し、これを増幅する操作は非常に煩雑であり、多くの繊維関係の検査機関で通常業務として行うことは容易ではない。また、市場に流通する繊維製品は、通常、種々の前処理や染色加工がなされている。これらの前処理や染色加工は、獣毛繊維に対して物理的或いは化学的な方法で行われ、獣毛繊維自体に何らかのダメージを与えている。従って、前処理や染色加工がなされた獣毛繊維から損傷のないＤＮＡを抽出することは困難であり、正確な鑑別を行うことができないという問題があった。
【００１１】
そこで、本発明は、上記問題に対処して、鑑別操作が比較的簡単で客観性を有し、検査員の経験やノウハウに頼ることなく鑑別でき、且つ、獣毛繊維に前処理や染色加工がなされている場合でも、正確な鑑別結果を得ることのできる獣毛繊維の鑑別方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記課題の解決にあたり、本発明者らは、鋭意研究の結果、獣毛繊維を構成するタンパク質に着目し、獣毛繊維から抽出したタンパク質群の組み合わせが、獣毛繊維の起源となる動物の種類により異なることを発見した。また、これらのタンパク質群から取り出した特定のタンパク質に由来するペプチド群の組み合わせが、獣毛繊維の起源となる動物の種類により異なることを発見した。これらの発見から、本発明者らは本発明の完成に至った。
【００１３】
即ち、本発明に係る獣毛繊維の鑑別方法は、請求項１の記載によると、
被検獣毛繊維から当該獣毛繊維を構成するタンパク質群を抽出する抽出工程、
抽出した前記タンパク質群を電気泳動手段により分離して電気泳動パターンを得る電気泳動工程、及び、
得られた前記電気泳動パターンを予め準備した起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の電気泳動パターンと比較して、前記被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別する第１鑑別工程を有している。
【００１４】
また、本発明は、請求項２の記載によると、請求項１に記載の獣毛繊維の鑑別方法であって、
電気泳動パターンを得る前記電気泳動工程おいて、
起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の電気泳動パターンのうち、少なくともカシミヤを起源とする単一獣毛繊維の電気泳動パターンに対して、分子量が２５ｋＤａ以下の領域における分解能が、１０個以上のバンドに分解可能な電気泳動ゲルを使用することを特徴とする。
【００１５】
また、本発明は、請求項３の記載によると、請求項１又は２に記載の獣毛繊維の鑑別方法であって、
タンパク質群を抽出する前記抽出工程において、
タンパク質の分子内或いは分子間のジスルフィド結合を開裂するために還元剤を使用し、当該還元剤は、容量％濃度で６％より濃い濃度の２−メルカプトエタノール、又は、モル濃度で８〜１２ｍＭ（ミリモル／リッター）のジチオスレイトールであることを特徴とする。
【００１６】
また、本発明に係る獣毛繊維の鑑別方法は、請求項４の記載によると、
被検獣毛繊維から当該獣毛繊維を構成するタンパク質群を抽出する抽出工程、
抽出した前記タンパク質群を電気泳動手段により分離して電気泳動パターンを得る電気泳動工程、
前記電気泳動パターンを形成する複数のバンドのうち所定のバンドを切出す切出工程、
切出した前記バンド内のタンパク質を所定の消化酵素により消化して一連のペプチド群とする消化工程、
得られた前記ペプチド群を質量分析手段により分析して前記ペプチド群の質量分析パターンを得る質量分析工程、及び、
得られた前記質量分析パターンを予め準備した起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の質量分析パターンと比較して、前記被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別する第５鑑別工程を有している。
【００１７】
また、本発明は、請求項５の記載によると、請求項４に記載の獣毛繊維の鑑別方法であって、
前記切出工程において、前記所定のバンドは、前記起源となる動物の種類が既知の獣毛繊維の電気泳動パターンと共通する分子量域に存在するバンドであって、且つ、分子量が１０ｋＤａ付近にあるタンパク質濃度の濃いバンドであることを特徴とする。
【００１８】
また、本発明は、請求項６の記載によると、請求項４又は５に記載の獣毛繊維の鑑別方法であって、
前記消化工程において、前記所定の消化酵素は、タンパク質を構成するアミノ酸であるリシンのＣ側末端から当該タンパク質を切断するエンドプロテアーゼであることを特徴とする。
【００１９】
また、本発明は、請求項７の記載によると、請求項４〜６のいずれか１つに記載の獣毛繊維の鑑別方法であって、
前記質量分析工程において、前記質量分析手段は、液体クロマトグラフィー質量分析手段であることを特徴とする。
【００２０】
また、本発明は、請求項８の記載によると、請求項１〜７に記載の獣毛繊維の鑑別方法であって、
前記被検獣毛繊維は、カシミヤ、ウール、ヤク、モヘア、アンゴラ、アルパカ、ビキューナ、キャメル、及び、リャマからなる群のうち少なくとも１つの獣毛繊維を含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００２１】
上記構成によれば、本発明は、抽出工程及び電気泳動工程を有しており、被検獣毛繊維からタンパク質群を抽出し、このタンパク質群から得られた電気泳動パターンを、起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の電気泳動パターンと比較する。獣毛繊維を構成するタンパク質群の組合せが、動物の種類により異なることを根拠とする。
【００２２】
従って、客観的な鑑別をすることができ、被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を正確に鑑別することができる。これらの操作は比較的簡単であり、また、機器分析であることから、検査員の経験とノウハウの違いによる鑑別結果のばらつきが生じるということがない。
【００２３】
また、獣毛繊維に脱スケールなどの偽装が行われている場合であっても、本発明においては、タンパク質を対象とすることから、従来のＤＮＡの抽出のように偽装によるダメージから抽出に困難性が伴うということがない。
【００２４】
また、上記構成によれば、電気泳動工程に使用する電気泳動ゲルは、カシミヤの電気泳動パターンに対して、分子量が２５ｋＤａ以下の領域における分解能が、１０個以上のバンドに分解可能なものを使用するようにしてもよい。このことにより、被検獣毛繊維の電気泳動パターンが明瞭となってより正確な鑑別をすることができる。
【００２５】
また、上記構成によれば、抽出工程においてタンパク質のジスルフィド結合を開裂するために使用する還元剤は、容量％濃度で６％より濃い濃度の２−メルカプトエタノール、又は、モル濃度で８〜１２ｍＭ（ミリモル／リッター）のジチオスレイトールを使用するようにしてもよい。このことにより、被検獣毛繊維からのタンパク質の抽出効率が向上し、電気泳動パターンが明瞭となってより正確な鑑別をすることができる。
【００２６】
一方、上記構成によれば、電気泳動工程で得られた電気泳動パターンから所定のバンドを切出し、このバンド内のタンパク質を所定の消化酵素により消化して一連のペプチド群とする。更に、このペプチド群から得られた質量分析パターンを、起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の質量分析パターンと比較する。獣毛繊維を構成するタンパク質から分割できるペプチド群の組合せが、動物の種類により異なることを根拠とする。
【００２７】
従って、更に客観的な鑑別をすることができ、被検獣毛繊維の起源となる動物の種類をより正確に鑑別することができる。これらの操作は比較的簡単であり、また、機器分析であることから、検査員の経験とノウハウの違いによる鑑別結果のばらつきが生じるということがない。
【００２８】
よって、本発明においては、鑑別操作が比較的簡単で客観性を有し、検査員の経験やノウハウに頼ることなく鑑別でき、且つ、獣毛繊維に前処理や染色加工がなされている場合でも、正確な鑑別結果を得ることのできる獣毛繊維の鑑別方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】本発明に係る第１実施形態において、カシミヤ（ヤギ属）、キャメル（ラクダ属）、ウール（ヒツジ属）及びヤク（ウシ属）の獣毛繊維の電気泳動パターンを示すゲル画像である。
【図２】図１の電気泳動パターンのうち、カシミヤ（ヤギ属）とヤク（ウシ属）のゲル画像を解析して移動度と濃度との関係を示す解析チャートである。
【図３】図１の電気泳動パターンのうち、カシミヤ（ヤギ属）とウール（ヒツジ属）のゲル画像を解析して移動度と濃度との関係を示す解析チャートである。
【図４】本発明に係る第２実施形態において、カシミヤ（ヤギ属）及びヤク（ウシ属）の獣毛繊維を異なる混用率で混合した一連の電気泳動パターンを示すゲル画像である。
【図５】本発明に係る第３実施形態において、複数の標準試料の電気泳動パターンから作成したデータベースの一部を可視化したグラフである。
【図６】本発明に係る第４実施形態において、カシミヤ（ヤギ属）、ウール（ヒツジ属）及びヤク（ウシ属）の獣毛繊維に対して分解能の異なる２種類のゲルを使用して得られた電気泳動パターンを示すゲル画像である。
【図７】図６の電気泳動パターンのうち、カシミヤ（ヤギ属）に対して分解能の異なる２種類のゲルを使用して得られた電気泳動パターンを比較するゲル画像である。
【図８】本発明に係る第４実施形態において、抽出液中の還元剤の濃度或いは種類を変化させた際のヤク（ウシ属）に対する電気泳動パターンを比較するゲル画像である。
【図９】本発明に係る第４実施形態において、「確かめ算試験」における２種類の被検獣毛繊維に対する電気泳動パターンの変化を示すゲル画像である。
【図１０】本発明に係る第５実施形態において、カシミヤ（ヤギ属）とウール（ヒツジ属）の混用率を変化させた標準試料及び被検獣毛繊維の電気泳動パターンを示すゲル画像である。
【図１１】図１０の標準試料及び被検獣毛繊維のゲル画像を解析した解析チャートである。
【図１２】本発明に係る第６実施形態において、カシミヤ（ヤギ属）、キャメル（ラクダ属）、ウール（ヒツジ属）及びヤク（ウシ属）の獣毛繊維の質量分析パターンを示すグラフである。
【図１３】本発明に係る第８実施形態において、複数の標準試料の質量分析パターンから作成したデータベースの一部を可視化したグラフである。
【図１４】実施例１における、被検獣毛繊維（カシミヤ）の電気泳動パターンを示すゲル画像と解析チャートである。
【図１５】実施例１における、被検獣毛繊維（ヤク）の電気泳動パターンを示すゲル画像と解析チャートである。
【図１６】実施例１における、被検獣毛繊維（カシミヤとヤクの混合）の電気泳動パターンを示すゲル画像と解析チャートである。
【図１７】実施例３における、被検獣毛繊維（カシミヤ）の質量分析パターンを示すグラフである。
【図１８】実施例３における、被検獣毛繊維（ヤク）の質量分析パターンを示すグラフである。
【図１９】実施例３における、被検獣毛繊維（カシミヤとヤクの混合）の質量分析パターンを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明において、獣毛繊維とは、動物より得られる天然ケラチン質を主成分とする毛繊維の全てを含むものである。従って、羊の羊毛（本発明においては「ウール」という。）を含み、羊以外の動物の毛、例えば、カシミヤ山羊の毛「カシミヤ」、アンゴラ山羊の毛「モヘア」、アンゴラ兎の毛「アンゴラ」、牛の一種ヤクの毛「ヤク」、ラクダの毛「キャメル」、小型こぶなしラクダのアルパカの毛「アルパカ」、同じく小型こぶなしラクダのビクーニャの毛「ビキューナ」、同じく小型こぶなしラクダのリャマの毛「リャマ」などが挙げられる。
【００３１】
また、本発明における獣毛繊維には、これら以外にも毛皮やファーとして使用されるものも含まれる。例えば、キツネの毛「フォックス」、イタチの一種ミンクの毛「ミンク」、ネズミの一種チンチラの毛「チンチラ」、ウサギの毛「ラビット」などが挙げられる。これらの例から分かるように、本発明においては、動物の名前と獣毛の名前に同じ呼び名を使用することがある。
【００３２】
本発明において、獣毛繊維を用いた繊維製品とは、例えば、獣毛繊維を紡績した糸を用いた織物や編物或いはフェルトなどの不織布を挙げることができる。しかし、これらに限らず、毛皮やファーなども含み、更に、毛繊維のまま詰め物などに使用される場合も含むものとする。また、これらの繊維製品には、染色加工或いは各種仕上加工が施されたものも含む。特に、本発明においては、カシミヤなどの高級な獣毛繊維に他の安価な獣毛繊維を混合した繊維製品、及び、各種加工で偽装した獣毛繊維を混合した繊維製品を鑑別する場合も対象とするものである。
【００３３】
また、本発明において、動物の種類とは、生物学上の分類単位としての「種」のみを意味するものではなく、「属」或いは「科」まで遡った広い意味でも使用するものとする。従って、本発明に係る獣毛繊維の鑑別方法で鑑別する動物の種類とは、当該獣毛繊維の起源となる動物の「種」を鑑別することに限らず、起源となる動物の「属」を鑑別すること、或いは、起源となる動物の「科」を鑑別することを意味する場合もある。
【００３４】
以下、本発明に係る獣毛繊維の鑑別方法について、各実施形態により詳細に説明する。
【００３５】
《第１実施形態》
本第１実施形態に係る獣毛繊維の鑑別方法は、抽出工程、電気泳動工程、及び、第１鑑別工程を有している。本第１実施形態においては、まず、検査対象である獣毛繊維（以下、「被検獣毛繊維」という。）から当該獣毛繊維を構成するタンパク質群を抽出する（抽出工程）。次に、抽出したタンパク質群を電気泳動装置で分離して各タンパク質の分子量の違いによる電気泳動パターン（タンパク質パターン）を得る（電気泳動工程）。
【００３６】
なお、動物の種類ごとに遺伝子の配列は異なり、タンパク質は遺伝子にコードされている。従って、動物の種類ごとにタンパク質のアミノ酸配列は異なるため、獣毛繊維から抽出されたタンパク質群の電気泳動パターンは動物の種類固有のものとなる。このことを根拠として、得られた被検獣毛繊維の電気泳動パターンを、起源となる動物の種類が既知の数種類の単一獣毛繊維の電気泳動パターンと比較することにより、被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別する（第１鑑別工程）。
【００３７】
以下、本第１実施形態における各工程を詳細に説明する。
【００３８】
（１−１）抽出工程
獣毛繊維の主要構成タンパク質は、ケラチン及びケラチン関連タンパク質であり、これらのタンパク質には、構造の良く似た多種類の分子種が存在する。これらのタンパク質群は、動物の種類によりその組み合わせが異なっている。本発明においては、これらのタンパク質群の構成、即ち複数のタンパク質の組合せを解析することにより、獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別するものである。
【００３９】
本発明においては、獣毛繊維からこれを構成するタンパク質群を抽出する。このように、獣毛繊維を構成するタンパク質群に着目することにより、獣毛繊維の表面に脱スケールなどの偽装加工がなされていても、獣毛そのものが残っている限りタンパク質を抽出することができる。この点において、偽装加工がなされた獣毛繊維からＤＮＡを抽出することが非常に困難であることと対照的である。
【００４０】
本発明者らは、獣毛繊維の原毛そのもの、粉砕した原毛、漂白した獣毛、及び、脱スケールした獣毛について、それぞれ同様にしてタンパク質群を抽出して電気泳動パターンを検討した。その結果、これらの電気泳動パターンには大きな変化がないことを確認した。従って、本発明においては、被検獣毛繊維を粉砕してからタンパク質を抽出するようにしてもよく、或いは、粉砕することなく獣毛の形状を維持したままタンパク質を抽出するようにしてもよい。但し、脱スケールした獣毛繊維については、脱スケールの程度が不明なため、被検獣毛繊維をある程度粉砕してからタンパク質を抽出するようにすることが好ましい。
【００４１】
具体的なタンパク質の抽出操作は、以下のようにして行う。まず、被検獣毛繊維に染色加工などがなされている場合には、電気泳動パターンが乱れることがある。本発明においては、染料、仕上剤及び補助剤などの除去操作をタンパク質抽出前に行うことが好ましい。このことにより、続く電気泳動工程において染料等の影響を受けることがなく、電気泳動パターンの精度が上がり正確な鑑別を行うことができる。
【００４２】
この洗浄操作には、タンパク質を抽出することのないように、例えば、デオキシコール酸とラウロイルサルコシ酸とを含有する洗浄液などを用いて、７０℃〜１００℃、好ましくは９０℃〜９５℃程度の温度で数回洗浄を行うなどの方法が好ましい。また、染色された被検獣毛繊維に対しては、染料種別に合わせた脱色処理を行うようにしてもよい。例えば、酸化処理、還元処理、酸処理、アルカリ処理或いはキレート処理などが挙げられる。これらの場合、タンパク質が破壊されず且つ抽出されない条件で行うことが好ましい。
【００４３】
次に、タンパク質の抽出操作を行う。タンパク質の抽出液としては、一般に各種界面活性剤を含有する水溶液などを使用することができる。使用する界面活性剤は、タンパク質にダメージを与えずに可溶化するものであれば特に限定するものではないが、例えば、ケラチンタンパク質の溶解性を高める界面活性剤として、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を使用することが好ましい。
【００４４】
また、タンパク質の抽出に際しては、タンパク質内のジスルフィド結合（Ｓ−Ｓ結合）を還元して開裂し、システイン残基とすることで可溶化が容易となる。そのため、抽出液には還元剤を併用することが好ましい。これらの還元剤としては、例えば、２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）などが挙げられる。
【００４５】
この抽出操作においては、界面活性剤と還元剤を併用した抽出液に被検獣毛繊維を浸漬し、７０℃〜１００℃、好ましくは９０℃〜９５℃程度の温度で抽出して抽出液を回収する操作を数回繰り返す。これらの抽出液を回収後、所定濃度に濃縮して続く電気泳動工程に使用する。
【００４６】
ここで、タンパク質のシステイン残基が再度ジスルフィド結合を形成することのないよう、システイン残基を封鎖しておくことが好ましい。システイン残基の封鎖には、一般的な方法を使用すればよく、例えば、ヨードアセトアミド、ヨード酢酸、アクリルアミドなどを使用してアルキル化するなどの方法が挙げられる。なお、このようにして得られたタンパク質の総量は、定量しておくことが好ましい。
【００４７】
（１−２）電気泳動工程
次に、抽出工程で得られたタンパク質群に対して、電気泳動法を用いて構成タンパク質を分離する。使用する電気泳動法は、特に限定するものではなく、どのような方法であってもよいが、本発明においては、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を用いたポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法）を用いることが好ましい。
【００４８】
一般に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法に使用するポリアクリルアミドゲルは、アクリルアミドとその架橋剤であるＮ,Ｎ'−メチレンビスアクリルアミドとの共重合により三次元構造を有している。このアクリルアミドとＮ,Ｎ'−メチレンビスアクリルアミドとの総和をゲル濃度といい、一般に１０％〜２０％程度のゲルを使用することができる。本発明において使用するポリアクリルアミドゲルは、特にケラチンタンパク質等をより高分解能で分離するために、１５％〜２０％程度のゲルを使用することが好ましい。
【００４９】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法の操作は、特に限定するものではなく一般的な方法を使用すればよい。例えば、泳動用緩衝液や通電条件においても電気泳動パターンの分解能と鮮明性を考慮して条件設定することが好ましい。また、電気泳動パターンを得る際には、内部標準を併用することが好ましい。内部標準としては、例えば、牛の血清アルブミンなどを使用して、電気泳動パターンの移動度補正に使用する。
【００５０】
電気泳動後のゲルは、染色液を用いてタンパク質を染色する。染色には、染料染色或いは銀染色などが使用される。使用される染料としては、例えば、クマシーブリリアントブルー−Ｒ（ＣＢＢ−Ｒ）などが挙げられる。このようにして染色したゲルは、分子量によって移動度の異なる複数のバンドから構成される電気泳動パターン（「ゲル画像」ともいう。）を表している。
【００５１】
（１−３）第１鑑別工程
このようにして得られた電気泳動パターン（ゲル画像）は、獣毛繊維の起源となる動物の種類に固有のものとなる。本第１実施形態においては、電気泳動工程で得られた電気泳動パターンを、起源となる動物の種類が既知の数種類の単一獣毛繊維の電気泳動パターンと比較する。
【００５２】
このため、動物の種類が既知の数種類の単一獣毛繊維に対して、上記と同様の工程による電気泳動パターンを予め準備する。また、被検獣毛繊維の電気泳動パターンを作成する際に、起源となる動物の種類が既知の数種類の単一獣毛繊維の電気泳動パターンを同時に作成するようにしてもよい。このようにすることで、より正確な鑑別をすることができる。
【００５３】
一例として、具体的に作成した動物の種類が既知の４種類の獣毛繊維の電気泳動パターンを図１に示す。図１は、Ａ：カシミヤ（ヤギ属）、Ｂ：キャメル（ラクダ属）、Ｃ：ウール（ヒツジ属）及びＤ：ヤク（ウシ属）の電気泳動パターン（ゲル画像）を示している。図１において、染色された濃度の濃い部分がタンパク質を含むバンドである。図１において、上方のバンドほど移動度が小さく分子量が大きい。一方、下方のバンドほど移動度が大きく分子量が小さい。
【００５４】
図１において、Ａ：カシミヤ（ヤギ属）と他の獣毛繊維を比較すると、目視鑑別においても、Ｂ：キャメル（ラクダ属）は、Ａ：カシミヤ（ヤギ属）に比べ、バンドパターンが大きく異なる。また、Ｄ：ヤク（ウシ属）は、Ａ：カシミヤ（ヤギ属）に比べ、バンド３、４、５、７及びバンド８の濃度が薄く、また、バンド９及びバンド１２の濃度が濃い。また、Ｃ：ウール（ヒツジ属）は、Ａ：カシミヤ（ヤギ属）に比べ、バンド６とバンド７の間隔が狭く、また、バンド１２が無い。
【００５５】
ここで、得られた電気泳動パターンをより客観的に比較する方法について説明する。まず、得られた電気泳動パターンのゲル画像をスキャナーで取り込み、各バンドの位置（分子量に対応）を移動度Ｒｆとして数値化し、各バンドの濃度（タンパク質量に対応）を定量する。このとき、複数の試料間のバンドの移動度Ｒｆは、補正しておくことが好ましい。
【００５６】
図１に示す各電気泳動パターン（ゲル画像）をスキャナーで取り込み、各バンドの位置と濃度を定量し、移動度Ｒｆと濃度（ピーク）との関係として示した解析チャートを図２及び図３に示す。図２及び図３において、横軸は移動度Ｒｆ（分子量に対応）であり、右側ほど移動度Ｒｆが大きく分子量が小さい。縦軸は、各バンドの濃度（タンパク質量に対応）であり、ピークが高く面積が大きいほどタンパク質量が多い。
【００５７】
ここでは、偽装混合されることの多いヤク（ウシ属）とウール（ヒツジ属）の解析チャートをカシミヤ（ヤギ属）の解析チャートと比較する。図２は、Ａ：カシミヤ（ヤギ属）とＤ：ヤク（ウシ属）の電気泳動パターン（解析チャート）を比較したものである。Ｄ：ヤク（ウシ属）は、Ａ：カシミヤ（ヤギ属）に比べ、バンド３、４、５、７及びバンド８の濃度が薄く、また、バンド９及びバンド１２の濃度が濃いことが明確に示されている。
【００５８】
また、図３は、Ａ：カシミヤ（ヤギ属）とＣ：ウール（ヒツジ属）の電気泳動パターン（解析チャート）を比較したものである。Ｃ：ウール（ヒツジ属）は、Ａ：カシミヤ（ヤギ属）に比べ、バンド６とバンド７の間隔が狭く、また、バンド１２が無いことが明確に示されている。
【００５９】
このように、本第１実施形態においては、被検獣毛繊維の電気泳動パターンを、起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の電気泳動パターンと比較して、各バンドの位置と濃度、又は、移動度Ｒｆとピーク面積を確認することで、被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別することができる。特に、カシミヤ（ヤギ属）のような高級な獣毛繊維に対して、偽装して混合されることの多いヤク（ウシ属）やウール（ヒツジ属）を明確に区別することができる。
【００６０】
《第２実施形態》
本第２実施形態に係る獣毛繊維の鑑別方法は、上記第１実施形態と同様に、抽出工程、電気泳動工程、及び、第１鑑別工程を有し、更に第２鑑別工程を有している。本第２実施形態においても、まず、被検獣毛繊維から当該獣毛繊維を構成するタンパク質群を抽出する（抽出工程）。次に、抽出したタンパク質群を電気泳動装置で分離して分子量の違いによる電気泳動パターンを得る（電気泳動工程）。
【００６１】
なお、本第２実施形態においては、被検獣毛繊維が単一の動物を起源とするものではなく、２種以上の獣毛繊維が混合されている場合を対象とする。つまり、上記第１実施形態の第１鑑別工程において、被検獣毛繊維の電気泳動パターンに対して動物の種類が既知の複数の単一獣毛繊維の電気泳動パターンが適合せず、動物の種類を明確に鑑別できない場合に採用する。
【００６２】
本第２実施形態においては、起源となる動物の種類が異なる獣毛繊維を一連の混用率で混合した混合獣毛繊維を準備し、これらに対する一連の電気泳動パターンを予め準備する。その上で、第２鑑別工程において、得られた被検獣毛繊維の電気泳動パターンを予め準備した混合獣毛繊維の一連の電気泳動パターンと比較する。
【００６３】
このことにより、被検獣毛繊維が複数の動物を起源とすることを鑑別することができる。また、被検獣毛繊維がどのような動物の獣毛繊維を混合するものであるか、更に、それらの獣毛繊維をどの程度の混用率で混合するものであるかを鑑別することができる。
【００６４】
以下、本第２実施形態における各工程を詳細に説明する。但し、本第２実施形態における抽出工程、電気泳動工程及び第１鑑別工程については、上記第１実施形態と同様であり、ここではその説明を省略する。
【００６５】
（２−１）第２鑑別工程
得られた電気泳動パターン（ゲル画像）は、獣毛繊維の混用率に比例して変化する。本第２実施形態においては、電気泳動工程で得られた被検獣毛繊維の電気泳動パターンを予め準備した混合獣毛繊維の一連の電気泳動パターンと比較する。このため、起源となる動物の種類が異なる獣毛繊維を一連の混用率で混合した混合獣毛繊維を準備し、これらに対して上記と同様の工程による一連の電気泳動パターンを予め準備する。
【００６６】
一例として、具体的に作成した２種の獣毛繊維を混合した一連の電気泳動パターンを図４に示す。図４は、カシミヤ（ヤギ属）及びヤク（ウシ属）を起源とする獣毛繊維に対して、カシミヤ：ヤクの割合を、Ｅ：１００％対０％、Ｆ：７０％対３０％、Ｇ：５０％対５０％、Ｈ：３０％対７０％、Ｉ：０％対１００％、の混用率で混合した一連の混合獣毛繊維の電気泳動パターン（ゲル画像）を示している。図４において、上方のバンドほど移動度が小さく分子量が大きい。一方、下方のバンドほど移動度が大きく分子量が小さい。
【００６７】
上記第１実施形態で説明したように、カシミヤ（ヤギ属）１００％の電気泳動パターン（ゲル画像）とヤク（ウシ属）１００％の電気泳動パターン（ゲル画像）は、明確に異なっており、これらが混合された電気泳動パターン（ゲル画像）は、それぞれのバンドの濃度が混用率に比例して徐々に変化していることが分かる（図４参照）。
【００６８】
ここで、得られた電気泳動パターンをより客観的に比較するために、上記第１実施形態と同様にして、得られた電気泳動パターンのゲル画像をスキャナーで取り込み、各バンドの位置（分子量に対応）を移動度Ｒｆとして数値化し、各バンドの濃度（タンパク質量に対応）を定量するようにしてもよい。
【００６９】
このように、本第２実施形態においては、被検獣毛繊維の電気泳動パターンを一連の混合獣毛繊維の電気泳動パターンと比較して、各バンドの位置と濃度、又は、移動度Ｒｆとピーク面積を確認することで、被検獣毛繊維がカシミヤ（ヤギ属）とヤク（ウシ属）の獣毛繊維が混合されたものであることを鑑別することができる。また、カシミヤ（ヤギ属）とヤク（ウシ属）の獣毛繊維の混用率も鑑別することができる。
【００７０】
同様にして、カシミヤ（ヤギ属）とヤク（ウシ属）以外の混合獣毛繊維に対しても、それぞれ一連の電気泳動パターンを予め準備しておくことにより、起源となる動物の種類を鑑別することができる。特に、高級な獣毛繊維に対して偽装して混合されることの多いヤク（ウシ属）やウール（ヒツジ属）が混合されていることを確認することができる。
【００７１】
《第３実施形態》
本第３実施形態に係る獣毛繊維の鑑別方法は、多くの標準試料に対して、上記第１実施形態において説明した電気泳動パターンの解析データを測定し、これをデータベース化することにより、未知の被検獣毛繊維の鑑別を客観的に、且つ、安定して行うようにするものである。
【００７２】
本第３実施形態においては、まず、獣毛繊維の起源が明確な多くの標準試料（単一獣毛繊維）、及び、獣毛繊維の起源と混用率が明確な多くの標準試料（混合獣毛繊維）について、上記第１実施形態と同様にしてタンパク質群を抽出し（抽出工程）、次に、抽出したタンパク質群を電気泳動装置で分離して電気泳動パターンを得る（電気泳動工程）。
【００７３】
このようにして得られた多くの電気泳動パターンに対して、上記第１実施形態と同様にしてゲル画像をスキャナーで取り込み、各バンドの位置（分子量に対応）を移動度Ｒｆとして数値化し、各バンドの濃度（タンパク質量に対応）をピーク面積として定量する。このようにして得られた多くの数値データをその標準試料の履歴と共にデータベース化することにより、第３鑑別工程において客観的な鑑別を行うことができる。具体的な方法は、後述の実施例において説明する。
【００７４】
（３−１）第３鑑別工程
このようにして構築されたデータベースについて説明する。図５は、カシミヤ（ヤギ属）、キャメル（ラクダ属）、ウール（ヒツジ属）、ヤク（ウシ属）の原毛（単一獣毛繊維）、及び、カシミヤ（ヤギ属）とヤク（ウシ属）の混合（混合獣毛繊維）について、それぞれ複数の標準試料から作成したデータベースの一部を可視化したグラフである。この図５は、Ｊ：カシミヤ（ヤギ属）のグループ、及び、Ｋ：その他の獣毛繊維（混合獣毛繊維を含む）のグループという２つのグループに分類した場合の一例を示している。
【００７５】
この例においては、被検獣毛繊維の電気泳動パターンを解析して得られた数値データをこのデータベースと照合して、当該被検獣毛繊維がカシミヤ（ヤギ属）であるか、或いは、その他の獣毛繊維（混合獣毛繊維を含む）であるかを鑑別することができる。
【００７６】
同様にして、データベースの分類を変更することにより、カシミヤ（ヤギ属）以外の獣毛繊維についても同様の鑑別が可能である。更に、混合獣毛繊維の標準試料を多くすることにより、被検獣毛繊維がどのような獣毛繊維をどのような混用率で混合するものであるかを鑑別することができる。
【００７７】
《第４実施形態》
本第４実施形態に係る獣毛繊維の鑑別方法は、上記第１実施形態〜第３実施形態と同様の各鑑別方法において、更なる鑑別精度の向上を目的とするものである。具体的には、まず、電気泳動工程において分解能の高いポリアクリルアミドゲルを使用するものである。また、抽出工程において、タンパク質の抽出効率が向上する特定の還元剤を使用するものである。更に、これらによって得られた明瞭な電気泳動パターンを利用して、被検獣毛繊維の混用率の鑑別精度を向上させるために「確かめ算試験」を使用するものである。以下、これらについて説明する。
【００７８】
（４−１）分解能の高いポリアクリルアミドゲルの使用
上記第１実施形態で説明したように、電気泳動工程においてはドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を支持体に用いたポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法）を用いることが好ましい。このＳＤＳ−ＰＡＧＥ法において、従来よりも分解能の高いポリアクリルアミドゲルを使用することにより、より正確な鑑別をすることができる。
【００７９】
ここで、より分解能の高いゲルとは、電気泳動法において獣毛繊維の起源となる動物種を鑑別するために特に重要と考えられる、分子量が２５ｋＤａ以下の領域（以下「動物種特有のタンパク質領域」ということもある。）における分解能が良好なものをいう。具体的には、少なくともカシミヤを起源とする単一獣毛繊維の電気泳動パターンに対して、分子量が２５ｋＤａ以下の領域における分解能が、１０個以上のバンドに分解可能な電気泳動ゲルをいう。
【００８０】
ポリアクリルアミドゲルの分解能を向上させる方法は、特に限定するものではないが、例えば、ゲル長（支持体距離に対応）を長くして分解能を向上させるようにしてもよい。一般にＳＤＳ−ＰＡＧＥ法に使用するポリアクリルアミドゲルは、ゲル長が８ｃｍ程度のゲル（以下「８ｃｍ長ゲル」という。）を使用する。本第４実施形態においては、このゲル長を８ｃｍのゲルから１２ｃｍのゲル（以下「１２ｃｍ長ゲル」という。）に変更することにより、ケラチンタンパク質等をより高分解能で分離することができる。
【００８１】
一例として、動物の種類が既知の３種類の獣毛繊維に対して８ｃｍ長ゲルと１２ｃｍ長ゲルとを使用して得られた電気泳動パターン（ゲル画像）を図６に示す。図６は、一般に使用される８ｃｍ長ゲルを使用して得られたＡ８：カシミヤ（ヤギ属）、Ｃ８：ウール（ヒツジ属）及びＤ８：ヤク（ウシ属）の電気泳動パターン（ゲル画像）、並びに、分解能の高い１２ｃｍ長ゲルを使用して得られたＡ１２：カシミヤ（ヤギ属）、Ｃ１２：ウール（ヒツジ属）及びＤ１２：ヤク（ウシ属）の電気泳動パターン（ゲル画像）を比較したものである。
【００８２】
なお、図６において、各ゲルの支持体距離を目視的に合わせるために、１２ｃｍ長ゲルを長さ方向に縮小して８ｃｍ長ゲルに対応させている。図６において、染色された濃度の濃い部分がタンパク質を含むバンドである。図６において、上方のバンドほど移動度が小さく分子量が大きい。一方、下方のバンドほど移動度が大きく分子量が小さい。
【００８３】
図６のゲル画像において、移動度が大きい下方の領域（分子量が小さい領域）を鑑別に有効な動物種特有のタンパク質領域（ＡＲＥＡ−１）として示している。この動物種特有のタンパク質領域（ＡＲＥＡ−１）は、分子量が２５ｋＤａ以下の領域である。図６において、８ｃｍ長ゲルに比べ１２ｃｍ長ゲルの方が動物種特有のタンパク質領域（ＡＲＥＡ−１）の分解能が向上していることが分かる。
【００８４】
図７は、図６の電気泳動パターン（ゲル画像）のうち、カシミヤ（ヤギ属）の電気泳動パターンを抜き出して８ｃｍ長ゲルと１２ｃｍ長ゲルを比較するものである。図７のゲル画像において、動物種特有のタンパク質領域（ＡＲＥＡ−１）の分解能を比較する。カシミヤ（ヤギ属）の電気泳動パターンにおいて、８ｃｍ長ゲルの場合には、バンド３〜９の７個のバンドに分解されている。これに対して、１２ｃｍ長ゲルの場合には、バンド３〜１２の１０個のバンドに分解されている。このことにより、例えば、１２ｃｍ長ゲルのような分解能の高いポリアクリルアミドゲルを使用することにより、被検獣毛繊維の鑑別精度を向上させることができる。
【００８５】
なお、動物種によって同じ１２ｃｍ長ゲルを使用しても２５ｋＤａ以下の領域のバンドの数は異なるものである。しかし、鑑別を特に必要とするカシミヤ（ヤギ属）において１０個以上のバンドに分解される分解能の高いゲルを各獣毛繊維に適用すれば、カシミヤと他の獣毛との識別が容易なものとなる。
【００８６】
（４−２）タンパク質の抽出効率が向上する還元剤の使用
上記第１実施形態で説明したように、タンパク質の抽出工程においては、タンパク質内のジスルフィド結合（Ｓ−Ｓ結合）を還元して開裂し、チオール基とするために、抽出液には還元剤を併用することが好ましい。また、上述のように、これらの還元剤としては、例えば、２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）などが挙げられる。
【００８７】
本第４実施形態においては、これらの還元剤の中でも、２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ）、或いは、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）を使用することが好ましい。また、２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ）を使用する際の抽出液中の還元剤濃度は、容量％濃度で６％より濃い濃度で使用することが好ましく、更に、１０％より濃い濃度で使用することがより好ましい。一方、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）を使用する際の抽出液中の還元剤濃度は、モル濃度で８〜１２ｍＭ（ミリモル／リッター）で使用することが好ましく、更に、略１０ｍＭ（ミリモル／リッター）で使用することがより好ましい。これらの還元剤をこのような濃度で使用することにより、抽出工程におけるタンパク質の抽出効率が向上し、続く電気泳動工程で得られる電気泳動パターンが明瞭となってより正確な鑑別をすることができる。
【００８８】
一例として、容量％濃度で６％（従来の濃度）と１５％（本第４実施形態の濃度）の２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ）、及び、モル濃度で１０ｍＭ（本第４実施形態の濃度）のジチオスレイトール（ＤＴＴ）をそれぞれ使用して得られたヤク（ウシ属）の電気泳動パターン（ゲル画像）を図８に示す（具体的には実施例で後述する）。
【００８９】
（４−３）「確かめ算試験」の使用
ここでいう「確かめ算試験」とは、上記第２実施形態又は第３実施形態の各鑑別工程で得られた被検獣毛繊維の混用率の鑑別精度を向上させる方法をいう。具体的には、まず、上記第２実施形態又は第３実施形態において被検獣毛繊維の電気泳動パターン（ゲル画像）を得る。例えば、２種類の被検獣毛繊維（Ｙ１、Ｙ２）に対して得られた電気泳動パターン（ゲル画像Ｙ１−１、Ｙ２−１）を図９に示す。これらのゲル画像（Ｙ１−１、Ｙ２−１）から上記第２鑑別工程又は第３鑑別工程において被検獣毛繊維の混用率を予測する（具体的には実施例で後述する）。次に、起源となる動物の種類が既知の複数の単一獣毛繊維を用いて、予測した混用率と同じ比率で混合した比較獣毛繊維を調製する。
【００９０】
次に、調製した比較獣毛繊維に対して上記第２実施形態又は第３実施形態と同様にして比較獣毛繊維の電気泳動パターン（図９のゲル画像Ｙ１−２、Ｙ２−２）を求める。これらのゲル画像（Ｙ１−２、Ｙ２−２）に対して、再度、第２鑑別工程又は第３鑑別工程の鑑別を行って比較獣毛繊維の混用率を得る（具体的には実施例で後述する）。このようにして得られた比較獣毛繊維の混用率が、比較獣毛繊維を調製する際の混用率（当初得られた被検獣毛繊維の混用率に同じ）とほぼ一致する場合には、当初得られた被検獣毛繊維の混用率の正確性が確認される。
【００９１】
一方、得られた比較獣毛繊維の混用率が、比較獣毛繊維を調製する際の混用率（当初得られた被検獣毛繊維の混用率に同じ）と大きく異なっている場合には、再度、混用率を変更した他の比較獣毛繊維を調製する。次に、この他の比較獣毛繊維の電気泳動パターン（図９のゲル画像Ｙ１−３、Ｙ２−３）を求める。これらのゲル画像（Ｙ１−３、Ｙ２−３）に対して、再度、第２鑑別工程又は第３鑑別工程の鑑別を行って他の比較獣毛繊維の混用率を得る（具体的には実施例で後述する）。このような操作を繰り返すことで、被検獣毛繊維の混用率の正確性を向上させることができる。このことにより、より正確な混用率の鑑別を比較的簡単、且つ、客観的に行うことができる。
【００９２】
《第５実施形態》
本第５実施形態に係る獣毛繊維の鑑別方法は、上記第２実施形態と同様の鑑別方法において、被検獣毛繊維が特定の２種類の獣毛繊維で構成されている際に鑑別する第４鑑別工程を有している。この第４鑑別工程においては、上記第３実施形態のようなデータベース化をすることなく、これらの獣毛繊維に特有なバンドに着目することにより、被検獣毛繊維の混用率の鑑別を簡単に、且つ、高い精度で行うことを目的とするものである。
【００９３】
なお、本発明においては、被検獣毛繊維を構成する特定の２種類の獣毛繊維は、特に限定するものではないが、各獣毛繊維の電気泳動パターンにおいて、これらを区別できる特定のバンドが存在することが必要である。本第５実施形態においては、カシミヤ（ヤギ属）とウール（ヒツジ属）の２種類の獣毛繊維が混合された被検獣毛繊維を例にして説明する。
【００９４】
被検獣毛繊維を構成するカシミヤ（ヤギ属）の電気泳動パターン（Ａ）とウール（ヒツジ属）の電気泳動パターン（Ｃ）とを図１０に示す。図１０において、２つの電気泳動パターン（Ａ、Ｃ）を比較すると、バンド１及びバンド２は、カシミヤ（ヤギ属）とウール（ヒツジ属）に特有なバンドであることが分かる。被検獣毛繊維がカシミヤ（ヤギ属）とウール（ヒツジ属）で構成されていることが既知である場合には、電気泳動パターンの全てのバンドを解析することなく、バンド１及びバンド２に着目することにより、被検獣毛繊維の混用率の鑑別を簡単、且つ、高い精度で行うことができる。
【００９５】
（５−１）第４鑑別工程
まず、カシミヤ（ヤギ属）とウール（ヒツジ属）の混用率を変化させた標準試料を調製し、これらの電気泳動パターン（ゲル画像Ｚ１）を求める。図１０に、カシミヤ：ウール＝２０：８０、３０：７０、４０：６０、５０：６０、６０：４０、７０：３０に調整した各標準試料のゲル画像（Ｚ１１〜Ｚ１６）を示す。これらのゲル画像（Ｚ１１〜Ｚ１６）において、２種類の獣毛繊維の混用率の変化に対応して、バンド１とバンド２の濃度が変化していることが分かる。
【００９６】
次に、これらのゲル画像（Ｚ１１〜Ｚ１６）を解析して移動度Ｒｆと濃度との関係を示す解析チャート（Ｚ２）を作成する（図１１参照）。図１１に、カシミヤ：ウール＝３０：７０、４０：６０、５０：６０、６０：４０、７０：３０に調整した各標準試料の解析チャート（Ｚ２２〜Ｚ２６）を示す。これらの解析チャート（Ｚ２２〜Ｚ２６）において、２種類の獣毛繊維の混用率の変化に対応して、バンド１とバンド２の濃度の変化が明確に判別できる。そこで、被検獣毛繊維に対する電気泳動パターンを解析して移動度Ｒｆと濃度との関係を示す解析チャートを求め、図１１の解析チャート（Ｚ２２〜Ｚ２６）と比較することにより、被検獣毛繊維の混用率の鑑別を簡単、且つ、高い精度で行うことができる（具体的には実施例で後述する）。
【００９７】
《第６実施形態》
本第６実施形態に係る獣毛繊維の鑑別方法は、抽出工程、電気泳動工程、切出工程、消化工程、質量分析工程、及び、第５鑑別工程を有している。本第６実施形態においては、上記第１実施形態と同様にして、まず、被検獣毛繊維からタンパク質群を抽出し（抽出工程）、抽出したタンパク質群を電気泳動装置で分離して電気泳動パターンを得る（電気泳動工程）。
【００９８】
更に、本第６実施形態においては、得られた被検獣毛繊維の電気泳動パターンから当該電気泳動パターンを形成する複数のバンドのうち所定のバンドを切出す（切出工程）。次に、切出したバンド内のタンパク質を所定の消化酵素により消化して一連のペプチド群に分割する（消化工程）。次に、得られたペプチド群を質量分析装置で分析して各ペプチドの分子量の違いによる質量分析パターン（ペプチドパターン）を得る（質量分析工程）。
【００９９】
なお、上述のように、獣毛から抽出されたタンパク質群の電気泳動パターンは動物の種類固有のものである。また、これらのタンパク質を特定のアミノ酸部分で切断した際に生じるペプチドの長さやアミノ酸配列も動物の種類固有のものとなる。このことを根拠として、得られた被検獣毛繊維の質量分析パターンを、起源となる動物の種類が既知の数種類の獣毛繊維の質量分析パターンと比較することにより、被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別する（第５鑑別工程）。
【０１００】
以下、本第６実施形態における各工程を詳細に説明する。但し、本第６実施形態における抽出工程及び電気泳動工程については、上記第１実施形態と同様であり、ここではその説明を省略する。なお、本第６実施形態においては、上記第１実施形態で得られた電気泳動パターン（ゲル試料）を利用して切出工程以下の工程を行うことができる。
【０１０１】
（６−１）切出工程
電気泳動工程で得られた電気泳動パターン（ゲル試料）から当該電気泳動パターンを形成する複数のバンドのうち所定のバンド（ゲル切片）を切出す。切出すバンドは、比較対象とする単一獣毛繊維が決まっている場合には、その単一獣毛繊維と共通の移動度Ｒｆに存在するバンドであることが必要である。従って、起源が未知の被検獣毛繊維に対しては、主要な複数の単一獣毛繊維に共通の移動度Ｒｆに存在するバンドであることが好ましい。
【０１０２】
本発明においては、特に、カシミヤ（ヤギ属）のような高級な獣毛繊維に対して、偽装して混合されることの多いヤク（ウシ属）やウール（ヒツジ属）を明確に区別する場合があることから、これらの単一獣毛繊維に共通の移動度Ｒｆに存在するバンドであることがより好ましい。
【０１０３】
また、切出すバンドは、タンパク質の分子量がそれほど大きくないものが好ましく、例えば、分子量が３０ｋＤａ以下、好ましくは２０ｋＤａ以下、更に好ましくは１０ｋＤａ付近にあるバンドがよい。バンド内に存在するタンパク質の分子量が３０ｋＤａより大きい場合には、続く消化工程において、多くのペプチドが出現し質量分析工程において分解能が低下し、明確な鑑別ができなくなるからである。
【０１０４】
上記のことから、本発明においては、カシミヤ（ヤギ属）、ヤク（ウシ属）、ウール（ヒツジ属）、更にキャメル（ラクダ属）を加えた獣毛繊維に共通の移動度Ｒｆ値に存在するバンドであって、且つ、分子量が１０ｋＤａ付近にあるタンパク質濃度の濃いバンドを選択して切出すことが好ましい。
【０１０５】
（６−２）消化工程
切出したバンド（ゲル）の処理は通常の方法で行う。次に、この切出したゲル内のタンパク質に消化酵素を作用させてペプチド群に切断する。ゲル内のタンパク質に消化酵素を作用させる方法は、特に限定するものではないが、一般にゲル内消化を行うことが好ましい。このゲル内消化に使用する消化酵素は特に限定するものではなく、例えば、トリプシン、キモトリプシン、Ｌｙｓ−Ｃ、Ｇｌｕ−Ｃなどタンパク質の消化に一般的に使用される消化酵素を使用することができる。
【０１０６】
なお、本発明においては、ケラチンタンパク質、特に分子量の小さいタンパク質を対象とすることから、タンパク質を構成するアミノ酸の一種であるリシンのＣ側末端からタンパク質を切断するエンドプロテアーゼの一種であるＬｙｓ−Ｃを使用することが好ましい。Ｌｙｓ−Ｃを使用することにより、ペプチドの出現量が適切になり、続く質量分析工程において分解能が向上し、明確な鑑別をすることができる。
【０１０７】
このように、本第６実施形態においては、切出工程で比較的分子量の小さいタンパク質を切出し、更に、Ｌｙｓ−Ｃという特定の消化酵素を使用することにより、質量分析の精度が大幅に向上する。
【０１０８】
（６−３）質量分析工程
次に、得られた被検獣毛繊維のペプチド群に対して、各ペプチドの分離と質量分析を行う。この質量分析工程においては、種々のイオン化手法と質量検出法を組み合わせればよい。イオン化手法としては、例えば、ＭＡＬＤＩ（Ｍａｔｒｉｘ−ａｓｓｉｓｔｅｄｌａｓｅｒ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）、ＥＳＩ（Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）、ＮＳＩ（Ｎａｎｏ−ｓｐｒａｙ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）などが利用される。また、質量検出法としては、ＴＯＦ（Ｔｉｍｅ ｏｆ ｆｌｉｇｈｔ、飛行時間）法、イオントラップ（Ｉｏｎ ｔｒａｐ）法、四重極（Ｑｕａｄｒｏｐｏｌｅ）法などが利用される。
【０１０９】
本発明においては、一般にペプチド群の分析に使用される液体クロマトグラフィーと組み合わせた質量分析計（ＬＣ−ＭＳ）や飛行時間型質量分析計（ＴＯＦ−ＭＳ）を使用することができる。また、別な分離方法として再度、電気泳動法を使用するクリーブランド法などを使用することも可能である。
【０１１０】
なお、本発明においては、Ｓ／Ｎ比の高いＮＳＩと液体クロマトグラフィーとを組み合わせた、ナノ液体クロマトグラフィータンデム質量分析計（ｎａｎｏＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）などを使用することが好ましい。
【０１１１】
このようにして、被検獣毛繊維のペプチド群に対する分子量の違いによる質量分析パターンを得る。得られた質量分析パターンは、分子量によって保持時間の異なる複数のピークから構成されている。
【０１１２】
（６−４）第５鑑別工程
このようにして得られた質量分析パターンは、獣毛繊維の起源となる動物の種類に固有のものとなる。本第６実施形態においては、質量分析工程で得られた質量分析パターンを、起源となる動物の種類が既知の数種類の単一獣毛繊維の質量分析パターンと比較する。
【０１１３】
このため、動物の種類が既知の数種類の単一獣毛繊維に対して、上記と同様の工程による質量分析パターンを予め準備する。また、被検獣毛繊維の質量分析パターンを作成する際に、起源となる動物の種類が既知の数種類の単一獣毛繊維の質量分析パターンを同時に作成するようにしてもよい。このようにすることで、より正確な鑑別をすることができる。
【０１１４】
一例として、具体的に作成した動物の種類が既知の４種類の獣毛繊維の質量分析パターンを図６に示す。図６は、Ｌ：カシミヤ（ヤギ属）、Ｍ：キャメル（ラクダ属）、Ｎ：ウール（ヒツジ属）及びＯ：ヤク（ウシ属）の質量分析パターンを示している。図６において、左方のピークほど保持時間が短くペプチドの分子量が小さい。一方、右方のピークほど保持時間が長くペプチドの分子量が大きい。
【０１１５】
図６において、目視鑑別においても、Ｌ：カシミヤ（ヤギ属）、Ｍ：キャメル（ラクダ属）、Ｎ：ウール（ヒツジ属）及びＯ：ヤク（ウシ属）の質量分析パターンは、いずれも特徴的なピークを有し、動物の種類による差異は明確である。
【０１１６】
ここで、得られた質量分析パターンをより客観的に比較する方法について説明する。まず、得られた質量分析パターンについて各ピークの位置（保持時間：疎水性度及び分子量に対応）に対する各ピークの面積値（ペプチド量に対応）を定量する。
【０１１７】
これらの数値データを基に、例えば、特定の保持時間のピークの面積値と総面積値との関係を比較することにより、より客観的な鑑別が可能となる。或いは、特定の保持時間のピークの面積値と別の保持時間のピークの面積値との関係を比較するようにしてもよい。このとき、複数の試料間の保持時間は、補正しておくことが好ましい。
【０１１８】
このように、本第６実施形態においては、被検獣毛繊維の質量分析パターンを、起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の質量分析パターンと比較して、各ピークの位置と高さ、又は、保持時間と面積値の関係を確認することで、被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別することができる。特に、カシミヤ（ヤギ属）のような高級な獣毛繊維に対して、偽装して混合されることの多いヤク（ウシ属）やウール（ヒツジ属）を明確に区別することができる。
【０１１９】
《第７実施形態》
本第７実施形態に係る獣毛繊維の鑑別方法は、上記第６実施形態と同様に、抽出工程、電気泳動工程、切出工程、消化工程、質量分析工程、及び、第５鑑別工程を有し、更に第６鑑別工程を有している。本第７実施形態においても、まず、被検獣毛繊維から当該獣毛繊維を構成するタンパク質群を抽出する（抽出工程）。次に、抽出したタンパク質群を電気泳動装置で分離して分子量の違いによる電気泳動パターンを得る（電気泳動工程）。
【０１２０】
更に、得られた被検獣毛繊維の電気泳動パターンから当該電気泳動パターンを形成する複数のバンドのうち所定のバンドを切出す（切出工程）。次に、切出したバンド内のタンパク質を所定の消化酵素により消化して一連のペプチド群に分割する（消化工程）。次に、得られたペプチド群を分離すると共に質量分析装置で分析して各ペプチドの分子量の違いによる質量分析パターンを得る（質量分析工程）。
【０１２１】
なお、本第７実施形態においては、被検獣毛繊維が単一の動物の種類を起源とするものではなく、２種以上の獣毛繊維が混合されている場合を対象とする。つまり、上記第６実施形態の第５鑑別工程において、被検獣毛繊維の質量分析パターンに対して起源となる動物の種類が既知の複数の獣毛繊維の質量分析パターンが適合せず、動物の種類を明確に鑑別できない場合に採用する。
【０１２２】
本第７実施形態においては、起源となる動物の種類が異なる獣毛繊維を一連の混用率で混合した混合獣毛繊維を準備し、これらに対する一連の質量分析パターンを予め準備する。その上で、第６鑑別工程において、得られた被検獣毛繊維の電気泳動パターンを予め準備した混合獣毛繊維の一連の質量分析パターンと比較する。
【０１２３】
このことにより、被検獣毛繊維が複数の動物を起源とすることを鑑別することができる。また、被検獣毛繊維がどのような動物の獣毛繊維を混合するものであるか、更に、それらの獣毛繊維をどの程度の混用率で混合するものであるかを鑑別することができる。
【０１２４】
本第７実施形態における抽出工程及び電気泳動工程については、上記第１実施形態と同様であり、また、切出工程、消化工程、及び、質量分析工程については、上記第６実施形態と同様であるのでここではその説明を省略する。
【０１２５】
（７−１）第６鑑別工程
得られた質量分析パターンは、上記第５鑑別工程と同様に分子量によって保持時間の異なる複数のピークから構成されている。この質量分析パターンは、獣毛繊維の起源となる動物の種類の混用率に比例して変化する。上記第５鑑別工程と同様にして、得られた質量分析パターンについて各ピークの位置（保持時間：疎水性度及び分子量に対応）に対する各ピークの面積値（ペプチド量に対応）を定量する。
【０１２６】
これらの数値データを基に、例えば、特定の保持時間のピークの面積値と総面積値との関係を比較することにより、客観的な鑑別が可能となる。或いは、特定の保持時間のピークの面積値と別の保持時間のピークの面積値との関係を比較するようにしてもよい。
【０１２７】
このように、本第７実施形態においては、被検獣毛繊維の質量分析パターンを、一連の混合獣毛繊維の質量分析パターンと比較して、各ピークの保持時間と面積値の関係を確認することで、被検獣毛繊維が複数の動物を起源とすることを鑑別することができる。また、被検獣毛繊維がどのような動物の獣毛繊維を混合するものであるか、更に、それらの獣毛繊維をどの程度の混用率で混合するものであるかを正確に鑑別することができる。
【０１２８】
《第８実施形態》
本第８実施形態に係る獣毛繊維の鑑別方法は、多くの標準試料に対して、上記第６実施形態において説明した質量分析パターンの解析データを測定し、これをデータベース化することにより、未知の被検獣毛繊維の鑑別を客観的に、且つ、安定して行うようにするものである。
【０１２９】
本第８実施形態においては、まず、獣毛繊維の起源が明確な多くの標準試料（単一獣毛繊維）、及び、獣毛繊維の起源と混用率が明確な多くの標準試料（混合獣毛繊維）について、上記第６実施形態と同様にしてペプチド群を質量分析して質量分析パターンを得る（質量分析工程）。
【０１３０】
得られた多くの質量分析パターンに対して、上記第６実施形態と同様にして、各ピークの位置（保持時間：疎水性度及び分子量に対応）に対する各ピークの面積値（ペプチド量に対応）を定量する。このようにして得られた多くの数値データをその標準試料の履歴と共にデータベース化することにより、第７鑑別工程において客観的な鑑別を行うことができる。具体的な方法は、後述の実施例において説明する。
【０１３１】
（８−１）第７鑑別工程
このようにして構築されたデータベースについて説明する。まず、カシミヤ（ヤギ属）、キャメル（ラクダ属）、ウール（ヒツジ属）、ヤク（ウシ属）の原毛（単一獣毛繊維）、及び、カシミヤ（ヤギ属）とヤク（ウシ属）の混合（混合獣毛繊維）について、それぞれ複数の標準試料の数値データからデータベースを構築した。
【０１３２】
一例として、カシミヤ（ヤギ属）のグループ、カシミヤ（ヤギ属）とヤク（ウシ属）の混合グループ、及び、その他の獣毛繊維のグループという３つのグループに分類した。ここで、データを可視化するために、これらのグループの既知混用率を縦軸に、データベースから予測される混用率を横軸にとったグラフを図１３に示す。
【０１３３】
この図１３は、Ｐ：カシミヤ（ヤギ属）のグループ、Ｑ：カシミヤ（ヤギ属）とヤク（ウシ属）の混合グループ、及び、Ｒ：その他の獣毛繊維のグループという３つのグループに分類されている。更に、図１３では、カシミヤ（ヤギ属）とヤク（ウシ属）の混用率が直線上に正確に現れている。
【０１３４】
この例においては、被検獣毛繊維の質量分析パターンを解析して得られた数値データをこのデータベースと照合して、当該被検獣毛繊維がカシミヤ（ヤギ属）であるか、カシミヤ（ヤギ属）とヤク（ウシ属）の混合であるか、或いは、その他の獣毛繊維であるかを鑑別することができる。更に、被検獣毛繊維がカシミヤ（ヤギ属）とヤク（ウシ属）の混合である場合には、その混用率を精度よく鑑別することができる。
【０１３５】
同様にして、データベースの分類を変更することにより、カシミヤ（ヤギ属）以外の獣毛繊維、及び、カシミヤ（ヤギ属）とヤク（ウシ属）以外の混合獣毛繊維についても同様の鑑別が可能である。
【０１３６】
以下、上記各実施形態による獣毛繊維の鑑別方法を各実施例により、具体的に説明する。まず、各実施例のうち、実施例１〜実施例３においては、獣毛繊維として下記に示す９２種類の標準試料、及び、３種類の被検獣毛繊維（以下「被検試料」ともいう。）を準備した。
【０１３７】
まず、起源が明確な単一獣毛繊維の標準試料として、カシミヤ（６２種類）、ヤク（１０種類）、ウール（９種類）、及び、キャメル（３種類）の原毛（ＣＣＭＩＦｉｂｅｒ Ｂｏｘ：Ｃａｓｈｍｅｒｅａｎｄ Ｃａｍｅｌ Ｈａｉｒ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を準備した。また、起源及び混用率が明確な混合獣毛繊維の標準試料として、カシミヤとヤクの原毛（ＣＣＭＩ）を重量比で９：１、８：２、６：４、５：５、４：６、３：７、２：８、９：１になるように混合した試料を準備した。
【０１３８】
次に、被検試料１としてカシミヤの染色加工された単一獣毛繊維（東洋紡糸工業株式会社）を、被検試料２としてヤクの染色加工された単一獣毛繊維（ダブルツリー株式会社）を準備した。また、被検試料３としてカシミヤとヤクの原毛（ＣＣＭＩ）を重量比で７：３となるように混合した混合獣毛繊維を準備した。なお、被検試料の起源は、検査員には分からないようにして試験した。
【実施例１】
【０１３９】
本実施例１は、上記第１実施形態及び第２実施形態に基づいて、３種類の被検試料を電気泳動パターンから鑑別するものである。
【０１４０】
（１）抽出工程
染色加工された被検試料１及び２（いずれも単一獣毛繊維）については、タンパク質抽出前に洗浄操作を行った。一方、被検試料３（混合獣毛繊維）については、洗浄操作を行うことなくタンパク質抽出を行った。まず、洗浄操作は、１０ｍｇの試料に対して２５０μＬの洗浄液（１２ｍＭ‐デオキシコール酸、１２ｍＭ‐ラウロイルサルコシ酸、１００ｍＭ‐トリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．０））を添加した。試料が洗浄液に浸かるように懸濁した後、試料を９５℃で２０分間、加熱した。その後、１５０００×ｇで１０分間、遠心分離した後、上清を除去した。上記の洗浄操作を計３回行った。
【０１４１】
タンパク質の抽出は、１０ｍｇの試料に対して２５０μＬの抽出液（２％‐ＳＤＳ、６％‐２−ＭＥ、１２５ｍＭ‐トリス塩酸緩衝液（ｐＨ６．８））を添加し、９５℃で２０分間、加熱した。その後、１５０００×ｇで１０分間、遠心分離し、上清をタンパク質抽出液として回収した。抽出操作は計２回繰り返した。
【０１４２】
電気泳動前にタンパク質を濃縮するためにアセトン沈殿を行った。アセトン沈殿は、まず、試料量に対して３倍量の冷アセトンを添加し攪拌した。試料を−８０℃で３時間静置した後、１５０００×ｇで１０分間、４℃で遠心分離を行った。上清を除去した後、試料を遠心濃縮機ＣＣ−１０５（株式会社トミー精工）で乾燥させた。タンパク質は、６０μＬの抽出液（２％‐ＳＤＳ、６％‐２−ＭＥ、１２５ｍＭ‐トリス塩酸緩衝液（ｐＨ６．８））で溶解した。
【０１４３】
その後、システイン側鎖をアルキル化するために、試料に６μＬの５００ｍＭのヨードアセトアミド（ＩＡＡ）を添加し、３０分間、室温、暗所でインキュベートした。抽出されたタンパク質の量は６６０ｎｍＰｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ （サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）を用いて定量した。なお、定量用標準試料（内部標準）としてウシの血清アルブミン（ＢＳＡ、和光純薬工業株式会社）を使用した。
【０１４４】
（２）電気泳動工程
次に、被検試料１〜３から抽出した各タンパク質群に対して、それぞれ、次のようにして電気泳動を行った。電気泳動には、２０ｕｇのタンパク質を使用した。電気泳動前に、試料は等量の電気泳動用試料調製液（４％‐ＳＤＳ、１２％‐２−ＭＥ、２５０ｍＭ‐トリス塩酸緩衝液（ｐＨ６．８）、２０％‐グリセロール、０．０２％‐ブロモフェノールブルー）、及び、１ｎｇのＢＳＡ（内部標準）と混和した後、９５℃で５分間加熱した。電気泳動槽はＢＥ−２１１（株式会社バイオクラフト）を使用し、２０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（テフコ株式会社：８ｃｍ長ゲル）を用いてタンパク質を分離した。
【０１４５】
１枚あたり２５ｍＡの定電流で電気泳動を行った。分子量マーカとして、３μＬのＢｌｕｅＳｔａｒＰｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍａｒｋｅｒ（日本ジェネティクス株式会社）を電気泳動に使用した。電気泳動後のゲルは７．５％‐酢酸溶液で１５分間振とうした後、染色液（０．２５％‐ＣＢＢ−Ｒ、５０％‐メタノール、１０％‐酢酸）で２０分間振とうした。脱色操作には、５％‐メタノール、７％‐酢酸溶液を用いた。
【０１４６】
このようにして、被検試料１〜３の電気泳動パターンを得た。得られた被検試料１の電気泳動パターンを図１４に示す。図１４において、ゲル画像をＳ１、解析チャートをＳ２で示す。また、得られた被検試料２の電気泳動パターンを図１５に示す。図１５において、ゲル画像をＴ１、解析チャートをＴ２で示す。また、得られた被検試料３の電気泳動パターンを図１６に示す。図１６において、ゲル画像をＵ１、解析チャートをＵ２で示す。
【０１４７】
（３）鑑別工程
次に、得られた被検試料１〜３の電気泳動パターンを標準試料の電気泳動パターンと比較した。標準試料の電気泳動パターンには、上述の図１〜図３に示したＡ：カシミヤ、Ｂ：キャメル、Ｃ：ウール及びＤ：ヤクの電気泳動パターンを使用した。被検試料１の電気泳動パターンにおいて、バンド７がバンド６よりも濃く、両バンドの間隔は標準試料Ｃ：ウールよりも広いことから、被検試料１は、カシミヤと判別された。
【０１４８】
また、被検試料２の電気泳動パターンにおいて、バンド３、４、５及び６の濃さはバンド７と同等であり、バンド８よりもバンド９の方が濃かったことから、被検試料２は、ヤクと判定された。一方、被検試料３の電気泳動パターンにおいて、バンド１、若しくはバンド２に対するバンド３、４、５及び６の濃さは標準試料Ａ：カシミヤより薄く、さらにバンド８に対してバンド９及びバンド１２が濃いことから、被検試料３は、カシミヤとヤクの混合と判別された。
【実施例２】
【０１４９】
本実施例２は、上記第３実施形態に基づいて、３種類の被検試料を電気泳動パターンのデータベースから鑑別するものである。
【０１５０】
まず、データベースの構築について説明する。上記標準試料９２種類について、それぞれ、ゲル画像をスキャナーで取り込んだ。ゲル画像はＢａｓｉｃＱｕａｎｔｉｆｉｅｒ（Ｂｉｏ ＩｍａｇｅＳｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ）で読み込み、各バンドの濃さ（Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）及びバンドの移動度Ｒｆを数値化した。各試料間における移動度Ｒｆの誤差を補正するために、ＢａｓｉｃＱｕａｎｔｉｆｉｅｒで取り込んだ数値をＥｘｃｅｌ ２０１０（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）で読み込んだ。
【０１５１】
その後、試料ごとに約７０ｋＤａ（ＢＳＡ：内部標準）、６０ｋＤａ、５０ｋＤａ、２０ｋＤａ、１５ｋＤａ、１０ｋＤａのバンドの移動度Ｒｆを抽出し、標準試料（カシミヤ−Ａ３、ＣＣＭＩ）の移動度Ｒｆと比較し、近似曲線（２次式）を作成した。近似曲線で得られた係数を用いて、各試料における移動度Ｒｆを補正した。バンドのＩｎｔｅｎｓｉｔｙは、各移動度ＲｆにおけるＩｎｔｅｎｓｉｔｙを総バンドのＩｎｔｅｎｓｉｔｙで補正した。
【０１５２】
９２種類の標準試料の数値データは、ＳＩＭＣＡ ｖｅｒ．１３．０（Ｕｍｅｔｒｉｃｓ）を用いて主成分分析により分類された。主成分分析の結果、カシミヤのグループとその他の獣毛繊維（非カシミヤ）のグループの２つのグループに分類した（図５参照）。
【０１５３】
次に、被検試料１〜３の電気泳動パターンから同様にして得られた数値データ（バンドの移動度Ｒｆ及びＩｎｔｅｎｓｉｔｙ）を上記データベースに構築されたモデルに与えたところ、被検試料１は、カシミヤのグループに分類された。一方、被検試料２及び被検試料３は、その他の獣毛繊維（非カシミヤ）のグループに分類された。
【実施例３】
【０１５４】
本実施例３は、上記第８実施形態に基づいて、３種類の被検試料をペプチド群の質量分析パターンのデータベースから鑑別するものである。なお、本実施例３においては、上記実施例１において標準試料及び被検試料の電気泳動工程で得られた各ゲル試料を使用した。
【０１５５】
（１）消化工程
上記実施例１及び実施例２の電気泳動工程で得られたゲルを脱色し、この脱色後のゲルから、１０ｋＤａ付近にあるバンドを切り出した。ゲルに１００μＬの固定液（５０％‐メタノール、５％‐酢酸）を添加し、ＤｅｅｐＷｅｌｌ Ｍａｘｉｍｉｚｅｒ（Ｍ／ＢＲ−０２２ＵＰ、タイテック株式会社）により攪拌した（１０分間、２５℃、１５００ｒｐｍ）。上清を除去した後、１００μＬのアセトニトリルをゲルに添加し、攪拌した。
【０１５６】
上層を除去した後、１００μＬの１０ｍＭ‐ジチオスレイトール（ＤＴＴ）を添加し、ＤｅｅｐＷｅｌｌ Ｍａｘｉｍｉｚｅｒで攪拌した（１０分間、５６℃、１５００ｒｐｍ)。上清を除去した後、１００μＬのＩＡＡを添加し、Ｄｅｅｐ Ｗｅｌｌ Ｍａｘｉｍｉｚｅｒで攪拌した（１０分間、２５℃、１５００ｒｐｍ）。
【０１５７】
上清を除去した後、１００μＬのアセトニトリルを添加し、Ｄｅｅｐ Ｗｅｌｌ Ｍａｘｉｍｉｚｅｒで攪拌した（１０分間、２５℃、１５００ｒｐｍ）。上清を除去した後、再度１００μＬのアセトニトリルを添加し、ＤｅｅｐＷｅｌｌ Ｍａｘｉｍｉｚｅｒで攪拌した（１０分間、２５℃、１５００ｒｐｍ）。上清を除去した後、遠心濃縮機ＣＣ−１０５で５分間、ゲルを乾燥させた。
【０１５８】
ゲルに２０μＬのＬｙｓ−Ｃ溶液（０．０１ｕｇ／μＬ、和光純薬工業株式会社）を添加し、４℃で３０分間静置させた。その後、７０μＬのＬｙｓ−Ｃ溶液を添加し、室温で６５分間静置させた。２０μＬの５０ｍＭ‐炭酸水素アンモニウム溶液を添加した後、３７℃で一晩静置させた。消化処理後に上清を回収し、ゲルに１００μＬの３０％‐アセトニトリル、３％‐トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を添加した。ゲルをＤｅｅｐＷｅｌｌ Ｍａｘｉｍｉｚｅｒで攪拌した（１０分間、２５℃、１５００ｒｐｍ）後、上清を回収した。この操作を再度行った。ゲルに１００μＬのアセトニトリルを添加した後、ＤｅｅｐＷｅｌｌ Ｍａｘｉｍｉｚｅｒで攪拌し（１０分間、２５℃、１５００ｒｐｍ）、上清を回収した。この操作を再度行った。
【０１５９】
上清は全て同じ容器に回収した。溶媒を遠心濃縮機ＣＣ−１０５で除去した後、ペプチドを５０μＬの１％ＴＦＡで溶解した。ペプチドはＳＤＢ−ＸＣ（３Ｍ社）を詰めたミニカラムで脱塩及び濃縮した。試料溶媒を遠心濃縮機ＣＣ−１０５で除去した後、ペプチドを１０μＬの６種類の合成ペプチド（２０ｆｍｏｌ／μＬ／ｐｅｐｔｉｄｅ）を含む５％‐アセトニトリル、０．１％‐ＴＦＡで溶解した。
【０１６０】
（２）質量分析工程
このようにして得られた各ペプチド群は、それぞれ、ナノ液体クロマトグラフィータンデム質量分析法（ｎａｎｏＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を用いて分析した。ｎａｎｏＬＣとしてＵｎｔｉｍａｔｅ３０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）、オートサンプラーとしてＨＴＣ−ＰＡＬ（ＣＴＣＡｎａｌｙｚｅｒ）を組み合わせたＬＴＱ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）を測定に使用した。ＲｅｐｒｏｓｉｌＣ１８ ｍａｔｅｒｉａｌｓ（３μｍ、ＤｒＭａｉｓｃｈ社）を充填した分析カラムを使用した。
【０１６１】
分析には５μＬの試料を用いた。移動相の流速は、５００ｎＬ／ｍｉｎとした。移動相Ａ及びＢは０．５％‐酢酸及び０．５％‐酢酸、８０％‐アセトニトリルをそれぞれ用いた。ＭａｓｓＮａｖｉｇａｔｏｒ ｖ１．２（三井情報株式会社）を用いて、質量分析データからペプチド及びフラグメンテーションイオンの情報をＭａｓｃｏｔＧｅｎｅｒｉｃ Ｆｏｒｍａｔ（ＭＧＦ）で抽出した。
【０１６２】
このようにして、上記標準試料９２種類、及び、被検試料１〜３の質量分析パターンを得た。得られた被検試料１の質量分析パターンを図１７に示す。得られた被検試料２の質量分析パターンを図１８に示す。得られた被検試料３の質量分析パターンを図１９に示す。
【０１６３】
（３）鑑別工程
まず、データベースの構築について説明する。上記標準試料９２種類について、それぞれ、ペプチドを同定するためにＭａｓｃｏｔｖ２．２（Ｍａｔｒｉｘ Ｓｃｉｅｎｃｅ社）を用い、同定されたペプチドの量（ピーク面積値）はＭａｓｓＮａｖｉｇａｔｏｒ ｖ１．２により算出した。試料間におけるペプチドの保持時間のバラツキは合成ペプチドの保持時間を用いて補正した。具体的には各試料で検出された合成ペプチドの保持時間を標準試料（カシミヤ−Ａ３、ＣＣＭＩ）において検出された保持時間と比較し、近似曲線（２次式）を作成した。近似曲線で得られた係数を用いて、各試料における保持時間を補正した。
【０１６４】
各ペプチドのピーク面積値は総ピーク面積値で補正した。９２種類の標準試料の数値データはＳＩＭＣＡｖｅｒ.１３．０を用いて主成分分析によりグループ分けを行った。主成分分析の結果、カシミヤのグループ、非カシミヤのグループ、及び、カシミヤと他の獣毛繊維の混合のグループ（本実施例３においては、カシミヤとヤクの混合のグループ）の３つのグループに分類された。
【０１６５】
次に、被検試料１〜３の質量分析パターンから同様にして得られた数値データ（保持時間及びピーク面積値）を上記データベースに構築されたモデルに与えたところ、被検試料１は、カシミヤのグループに分類された。また、被検試料２は、非カシミヤのグループに分類された。一方、被検試料３は、カシミヤとヤクの混合のグループに分類された。
【０１６６】
更に、既知混合比を縦軸に、モデルから予測される混合比を横軸にとったモデル（図１３参照）に対して、被検試料３の数値データを与えたところ、被検試料３は、重量比７：３の位置にプロットされた。
【０１６７】
このように、上記実施例１〜実施例３においては、染色加工された被検試料１及び２に対して、その起源となる動物の種類を正確に鑑別することができた。また、２種類の獣毛繊維が混合された被検試料３に対して、混合された獣毛繊維の種類と混用率を正確に鑑別することができた。これらの操作は、比較的容易であり、また、機器分析であることから、検査員の経験やノウハウに頼ることなく客観的な鑑別をすることができた。
【０１６８】
これらのことから、本発明においては、鑑別操作が比較的簡単で客観性を有し、検査員の経験やノウハウに頼ることなく鑑別でき、且つ、獣毛繊維に前処理や染色加工がなされている場合でも、正確な鑑別結果を得ることのできる獣毛繊維の鑑別方法を提供することができる。
【０１６９】
次に、上記第４実施形態に基づいて、鑑別精度を向上する実施例４〜実施例６、並びに、第５実施形態に基づいて、被検獣毛繊維（以下「被検試料」ともいう。）の混用率の鑑別を簡単に行うことができる実施例７について説明する。
【実施例４】
【０１７０】
本実施例４は、上記第４実施形態に基づいて、分解能の高いポリアクリルアミドゲルを使用するものである（図６及び図７参照）。本実施例４においては、８ｃｍ長ゲルを使用して得られた９２種類の混用率既知試料の電気泳動パターンと、１２ｃｍ長ゲルを使用して得られた７９種類の混用率既知試料の電気泳動パターンとを使用して、それぞれデータベースを構築した。得られた各データベースを使用して、混用率が既知の５種類の被検試料に対する混用率を予測した。
【０１７１】
次に、得られた各データベースにおける平均予測精度を計算した。平均予測精度の計算には、下記の式（１）を使用した。
【０１７２】
平均予測精度＝Σ｜実際の混用率−予測混用率｜／データ数・・・（１）
その結果、一般に使用される８ｃｍ長ゲルを使用した際の平均予測精度（±標準偏差）は、１４．４±１０．１％であった。これに対して、１２ｃｍ長ゲルを使用した際の平均予測精度（±標準偏差）は、６．８±７．８％となり、分解能の高い１２ｃｍ長ゲルを使用することにより、従来に比べ平均予測精度が約２倍に向上した。  
【実施例５】
【０１７３】
本実施例５は、上記第４実施形態に基づいて、タンパク質の抽出効率が向上する還元剤を使用するものである。本実施例５においては、図８に示すように容量％濃度で６％の２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ）（以下「６％−２ＭＥ」という。）と、１５％の２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ）（以下「１５％−２ＭＥ」という。）、及び、モル濃度で１０ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）（以下「１０ｍＭ−ＤＴＴ」という。）をそれぞれ使用してヤク（ウシ属）の電気泳動パターン（ゲル画像）を得た（図８参照）。
【０１７４】
図８のゲル画像において、６％−２ＭＥで得られたゲル画像に対して、１５％−２ＭＥで得られたゲル画像においては、移動度が大きい下方の領域（動物種特有のタンパク質領域（ＡＲＥＡ−１））の分解能が向上しており、この領域が重点的に抽出されたことを示している。
【０１７５】
一方、１０ｍＭ−ＤＴＴで得られたゲル画像においては、動物種特有のタンパク質領域（ＡＲＥＡ−１）だけでなく、移動度が小さい上方の領域（共通のタンパク質領域（ＡＲＥＡ−２））を含め、全体的に抽出効率が向上している。
【０１７６】
次に、これらの電気泳動パターンから混用率を予測した。混用率を予測には、６％−２ＭＥを使用して１２ｃｍ長ゲルで作成したデータベースを使用した。それぞれの電気泳動パターンから予測した混用率の値を表１に示す。
【０１７７】
【表１】
2018185300.tif 000003
【０１７８】
本実施例５においては、被検試料の実際の混用率は、ヤク１００％であった。この被検試料に対して、６％−２ＭＥで得られた予測混用率は、ウール２４．８％であった。これに対して、１５％−２ＭＥで得られた予測混用率は、ウール２．８％と大幅に改善された。また、カシミヤの予測混用率が０％を下回り、ヤクの予測混用率が１００％を上回った。予測混用率が０％を下回る場合は、ほぼ例外なく実際の混用率は０％と判断できる。同様に、予測混用率が１００％を上回る場合は、ほぼ例外なく実際の混用率は１００％と判断できる。
【０１７９】
一方、１０ｍＭ−ＤＴＴで得られた予測混用率は、ヤクの予測混用率が１００％を上回り、カシミヤとヤクの予測混用率がいずれも０％を下回った。このことより、１０ｍＭ−ＤＴＴで得られた予測混用率から、ヤク１００％と判断できる。
【０１８０】
これらのことより、抽出液中の還元剤として１５％−２ＭＥ、又は、１０ｍＭ−ＤＴＴを使用することにより、被検試料の鑑別精度を向上させることができる。
【実施例６】
【０１８１】
本実施例６は、上記第４実施形態に基づいて、「確かめ算試験」を使用するものである。本実施例６においては、混用率既知の２種類の被検試料（Ｙ１、Ｙ２）に対して電気泳動パターンを得る。図９に被検試料（Ｙ１）の電気泳動パターンをゲル画像（Ｙ１−１）で示す。また、被検試料（Ｙ２）の電気泳動パターンをゲル画像（Ｙ２−１）で示す。
【０１８２】
本実施例６においては、これらのゲル画像（Ｙ１−１、Ｙ２−１）から上記第２実施形態の第２鑑別工程と同様にして被検試料（Ｙ１、Ｙ２）の混用率を予測した。次に、起源となる動物の種類が既知の複数の単一獣毛繊維を用いて、予測した混用率と同じ比率で混合した１回目の比較獣毛繊維（以下「第１比較試料」という。）を調製した。
【０１８３】
次に、調製した第１比較試料に対して上記第２実施形態と同様にして第１比較試料の電気泳動パターン（Ｙ１−２、Ｙ２−２）を求める（図９参照）。本実施例６においては、被検試料（Ｙ１、Ｙ２）の実際の混用率は既知である。しかし、実際の鑑別においては被検試料の混用率は不明である。そこで、実際の鑑別においては、第１比較試料から得られた電気泳動パターン（Ｙ１−２、Ｙ２−２）を被検試料の電気泳動パターン（Ｙ１−１、Ｙ２−１）と比較する。これらの電気泳動パターンがほぼ一致すれば、被検試料から最初に得られた予測混用率が正確であるものと判断できる。
【０１８４】
一方、第１比較試料から得られた電気泳動パターン（Ｙ１−２、Ｙ２−２）が被検試料の電気泳動パターン（Ｙ１−１、Ｙ２−１）と大きく異なっている場合には、再度、起源となる動物の種類が既知の複数の単一獣毛繊維を用いて、第１比較試料の混用率を参考にして修正した２回目の比較獣毛繊維（以下「第２比較試料」という。）を調製する。
【０１８５】
次に、調製した第２比較試料に対して上記第２実施形態と同様にして第２比較試料の電気泳動パターン（Ｙ１−３、Ｙ２−３）を求める（図９参照）。この第２比較試料から得られた電気泳動パターン（Ｙ１−３、Ｙ２−３）を被検試料の電気泳動パターン（Ｙ１−１、Ｙ２−１）と比較する。これらの電気泳動パターンがほぼ一致するまで、同様の操作を繰り返す。
【０１８６】
表２に本実施例６における被検試料（Ｙ１、Ｙ２）の実際の混用率、各第１比較試料の混用率、及び、各第２比較試料の混用率の値を示す。
【０１８７】
【表２】
2018185300.tif 000004
【０１８８】
表２において、被検試料Ｙ１の実際の混用率（％）は、カシミヤ：ヤク：ウール＝６０：２５：１５である。しかし、第１比較試料（カシミヤ：ヤク：ウール＝５５：１０：３５）から得られた電気泳動パターンは、ウールに特徴的なバンド（図９のバンド１）が被検試料よりも濃く、未だ精度が良好ではない。これに対して、第１比較試料の混用率（％）を参考に調製された第２比較試料の電気泳動パターンは被検試料と類似している（図９参照）。このように、被検試料の混用率（％）は、第１比較試料よりも第２比較試料（カシミヤ：ヤク：ウール＝６０：３０：１０）と近く、鑑別精度が向上したことが分かる。
【０１８９】
一方、被検試料Ｙ２の実際の混用率（％）は、カシミヤ：ヤク：ウール＝１００：０：０である。しかし、第１比較試料（カシミヤ：ヤク：ウール＝７０：５：２５）から得られた電気泳動パターンは、ウールに特徴的なバンド（図９のバンド１）およびヤクに多く存在するバンド（図９のバンド２）が被検試料よりも濃く、未だ精度が良好ではない。これに対して、第１比較試料の混用率（％）を参考に調製された第２比較試料の電気泳動パターンは被検試料と類似しており、実際の混用率（カシミヤ：ヤク：ウール＝１００：０：０）と一致した。
【０１９０】
このように、比較試料を調製する際に使用した混用率とその電気泳動パターンをもとに新たな比較試料を調製し、これらの電気泳動パターンと被検試料の電気泳動パターンとの一致性がほぼ得られるまで同様の操作を繰り返す。この「確かめ算試験」を使用することにより、被検試料の混用率の正確性を向上させることができる。このことにより、より正確な混用率の鑑別を比較的簡単、且つ、客観的に行うことができる。
【実施例７】
【０１９１】
本実施例７は、上記第５実施形態に基づいて、被検試料がカシミヤ（ヤギ属）とウール（ヒツジ属）の２種類の獣毛繊維で構成されている際に、データベース化をすることなく、被検試料の混用率の鑑別を簡単、且つ、高い精度で行うものである。本実施例７において、被検試料（Ｙ３）を構成するカシミヤ１００％の電気泳動パターン（Ａ）とウール１００％の電気泳動パターン（Ｃ）とを図１０に示す。図１０において、２つの電気泳動パターン（Ａ、Ｃ）を比較すると、バンド１及びバンド２は、カシミヤ（ヤギ属）とウール（ヒツジ属）に特有なバンドであることが分かる。
【０１９２】
そこで、カシミヤ（ヤギ属）とウール（ヒツジ属）の混用率を変化させた標準試料を調製し、これらの電気泳動パターン（図１０のゲル画像Ｚ１）を求める。図１０に、カシミヤ：ウール＝２０：８０、３０：７０、４０：６０、５０：６０、６０：４０、７０：３０に調整した各標準試料のゲル画像（Ｚ１１〜Ｚ１６）を示す。これらのゲル画像（Ｚ１１〜Ｚ１６）において、２種類の獣毛繊維の混用率の変化に対応して、バンド１とバンド２の濃度が変化していることが分かる。
【０１９３】
次に、これらのゲル画像（Ｚ１）を解析して移動度Ｒｆと濃度との関係を示す解析チャート（Ｚ２）を作成する（図１１参照）。図１１に、カシミヤ：ウール＝３０：７０、４０：６０、５０：６０、６０：４０、７０：３０に調整した各標準試料の解析チャート（Ｚ２２〜Ｚ２６）を示す。これらの解析チャート（Ｚ２２〜Ｚ２６）において、カシミヤとウールの混用率の変化に対応して、バンド１とバンド２の濃度の変化が明確に判別できる。
【０１９４】
本実施例７においては、混用率既知の被検試料（Ｙ３）に対して電気泳動パターンを得る（図１０のゲル画像Ｙ３−１）。次に、このゲル画像（Ｙ３−１）を解析して移動度Ｒｆと濃度との関係を示す解析チャート（Ｙ３−２）を得る（図１１参照）。次に、得られた被検試料（Ｙ３）の解析チャート（Ｙ３−２）を先に求めておいた各標準試料の解析チャート（Ｚ２２〜Ｚ２６）と比較する。
【０１９５】
図１１において、バンド１とバンド２の濃度（図１１の縦軸）がカシミヤとウールの混用率によって変化していることが確認できる。カシミヤの混用率が上昇するに従って、バンド１の濃度が薄くなり、これに伴い、バンド２の濃度が濃くなっていることが分かる。そこで、被検試料（Ｙ３）の解析チャート（Ｙ３−２）と各標準試料の解析チャート（Ｚ２２〜Ｚ２６）とを比較すると、被検試料（Ｙ３）の解析チャート（Ｙ３−２）は、カシミヤ：ウール＝４０：６０の標準試料の解析チャート（Ｚ２３）と重なることが確認できる。
【０１９６】
よって、本実施例７においては、電気泳動パターンの解析に当たり、移動度Ｒｆの補正や主成分分析による全てのバンドの解析をすることなく、バンド１及びバンド２に着目することにより、被検試料の混用率の鑑別を簡単、且つ、高い精度で行うことができる。
【０１９７】
これらのことから、本発明においては、鑑別操作が比較的簡単で客観性を有し、検査員の経験やノウハウに頼ることなく鑑別でき、且つ、獣毛繊維に前処理や染色加工がなされている場合でも、正確な鑑別結果を得ることのできる獣毛繊維の鑑別方法を提供することができる。
【０１９８】
なお、本発明の実施にあたり、上記各実施例に限らず次のような種々の変形例が挙げられる。
１．上記実施例２においては、バンドのＩｎｔｅｎｓｉｔｙの補正を総バンドのＩｎｔｅｎｓｉｔｙに対する比で補正したが、これに限るものではなく、特定のバンドのＩｎｔｅｎｓｉｔｙ（例えばＢＳＡ：内部標準）に対する比で補正するようにしてもよい。
２．上記実施例３においては、ピーク面積値の補正を総ピーク面積値に対する比で補正したが、これに限るものではなく、特定のペプチドのピーク面積値に対する比で補正するようにしてもよい。
３．上記実施例３においては、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳでペプチド群の分析を行っているが、これに限るものではなく、ＬＣの検出器として紫外可視分光検出器を採用するようにしてもよい。
４．上記実施例３においては、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳでペプチド群の分析を行っているが、これに限るものではなく、クリーブランド法などを利用するようにしてもよい。
５．上記実施例１においては、タンパク質の抽出の際に獣毛繊維を粉砕することなく抽出を行っているが、これに限るものではなく、獣毛繊維を粉砕してからタンパク質を抽出するようにしてもよい。特に、脱スケールされた獣毛繊維に関しては、タンパク質を抽出する前に細かく粉砕することで、明瞭な電気泳動パターンを容易に得ることができる。
６．上記実施例２においては、移動度Ｒｆの補正に２次式による近似式を用いているが、これに限るものではなく、正確に補正できるのであれば３次式その他であってもよい。
７．上記実施例３においては、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにおける保持時間の補正に２次式による近似式を用いているが、これに限るものではなく、正確に補正できるのであれば３次式その他であってもよい。
８．上記実施例６の「確かめ算試験」においては、上記第２実施形態と同様にして比較試料の電気泳動パターンを求めた。従って、比較試料と被検試料との一致性は、両試料の電気泳動パターンを比較して判断した。しかし、これに限るものではなく、上記第３実施形態と同様にしてデータベースから比較試料の混用率を予測するようにしてもよい。この場合には、データベースから得られた比較獣毛繊維の混用率と、比較獣毛繊維を調製する際の混用率（データベースから得られた被検獣毛繊維の混用率に同じ）との一致性を判断するようにする。
【産業上の利用可能性】
【０１９９】
カシミヤなどの高級な獣毛繊維に安価な他の獣毛繊維を混合した偽装繊維製品が市場に出回っている。特に、繊維製品の取引がグローバル化した現在において、輸出入の際に迅速、且つ、正確な鑑別方法が望まれている。
【０２００】
本発明は、このような市場の要求に対して的確な鑑別手段を提供するものであり、また、従来法のように検査員の経験やノウハウに頼ることがない。特に、偽装が巧妙になる現在において、獣毛繊維の起源となる動物の種類を客観的に鑑別できること、また、偽装がなされていても正確な鑑別結果が得られるということは、これまでにない画期的な鑑別手段となる。
【０２０１】
このことから、本発明は、市場の安定や国際間の公正取引に有効な鑑別手段を提供するものであり、単に従来法であるＪＩＳＬ １０３０‐１（繊維製品の混用率試験方法‐第１部：繊維鑑別）、及び、ＪＩＳＬ １０３０‐２（繊維製品の混用率試験方法‐第２部：繊維混用率）を補完する鑑別手段に留まらず、国際標準として利用可能な鑑別手段を提供することができる。
【符号の説明】
【０２０２】
Ａ…カシミヤの電気泳動パターン、
Ｂ…キャメルの電気泳動パターン、
Ｃ…ウールの電気泳動パターン、
Ｄ…ヤクの電気泳動パターン、
Ｅ…カシミヤ：ヤク＝１００％：０％の電気泳動パターン、
Ｆ…カシミヤ：ヤク＝７０％：３０％の電気泳動パターン、
Ｇ…カシミヤ：ヤク＝５０％：５０％の電気泳動パターン、
Ｈ…カシミヤ：ヤク＝３０％：７０％の電気泳動パターン、
Ｉ…カシミヤ：ヤク＝０％：１００％の電気泳動パターン、
Ｊ…電気泳動パターンのデータベースにおけるカシミヤのグループ、
Ｋ…電気泳動パターンのデータベースにおけるその他の獣毛繊維のグループ、
Ｌ…カシミヤの質量分析パターン、
Ｍ…キャメルの質量分析パターン、
Ｎ…ウールの質量分析パターン、
Ｏ…ヤクの質量分析パターン、
Ｐ…質量分析パターンのデータベースにおけるカシミヤのグループ、
Ｑ…質量分析パターンのデータベースにおけるカシミヤとヤクの混合獣毛繊維のグループ、
Ｒ…質量分析パターンのデータベースにおけるその他の獣毛繊維のグループ、
Ｓ…被検獣毛繊維（カシミヤ）の電気泳動パターン、
Ｔ…被検獣毛繊維（ヤク）の電気泳動パターン、
Ｕ…被検獣毛繊維（カシミヤとヤクの混合）の電気泳動パターン、
Ｖ…被検獣毛繊維（カシミヤ）の質量分析パターン、
Ｗ…被検獣毛繊維（ヤク）の質量分析パターン、
Ｘ…被検獣毛繊維（カシミヤとヤクの混合）の質量分析パターン、
Ｙ…被検獣毛繊維（混合）の電気泳動パターン、
Ｚ…標準試料（カシミヤとウールの混合）の電気泳動パターン、
ＡＲＥＡ−１…動物種特有のタンパク質領域、
ＡＲＥＡ−２…共通のタンパク質領域。
【図１】
2018185300.tif 000005
【図２】
2018185300.tif 000006
【図３】
2018185300.tif 000007
【図４】
2018185300.tif 000008
【図５】
2018185300.tif 000009
【図６】
2018185300.tif 000010
【図７】
2018185300.tif 000011
【図８】
2018185300.tif 000012
【図９】
2018185300.tif 000013
【図１０】
2018185300.tif 000014
【図１１】
2018185300.tif 000015
【図１２】
2018185300.tif 000016
【図１３】
2018185300.tif 000017
【図１４】
2018185300.tif 000018
【図１５】
2018185300.tif 000019
【図１６】
2018185300.tif 000020
【図１７】
2018185300.tif 000021
【図１８】
2018185300.tif 000022
【図１９】
2018185300.tif 000023
【手続補正書】
【提出日】平成30年5月9日(2018.5.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検獣毛繊維から当該獣毛繊維を構成するタンパク質群を抽出する抽出工程、
抽出した前記タンパク質群を電気泳動手段により分離して電気泳動パターンを得る電気泳動工程、及び、
得られた前記電気泳動パターンを予め準備した起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の電気泳動パターンと比較して、前記被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別する第１鑑別工程を有し、
前記電気泳動工程おいて、
起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の電気泳動パターンのうち、少なくともカシミヤを起源とする単一獣毛繊維の電気泳動パターンに対して、分子量が２５ｋＤａ以下の領域における分解能が、１０個以上のバンドに分解可能な電気泳動ゲルを使用することを特徴とする獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項２】
タンパク質群を抽出する前記抽出工程において、
タンパク質の分子内或いは分子間のジスルフィド結合を開裂するために還元剤を使用し、当該還元剤は、容量％濃度で６％より濃い濃度の２−メルカプトエタノール、又は、モル濃度で８〜１２ｍＭ（ミリモル／リッター）のジチオスレイトールであることを特徴とする請求項１に記載の獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項３】
被検獣毛繊維から当該獣毛繊維を構成するタンパク質群を抽出する抽出工程、
抽出した前記タンパク質群を電気泳動手段により分離して電気泳動パターンを得る電気泳動工程、
前記電気泳動パターンを形成する複数のバンドのうち所定のバンドを切出す切出工程、
切出した前記バンド内のタンパク質を所定の消化酵素により消化して一連のペプチド群とする消化工程、
得られた前記ペプチド群を質量分析手段により分析して前記ペプチド群の質量分析パターンを得る質量分析工程、及び、
得られた前記質量分析パターンを予め準備した起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の質量分析パターンと比較して、前記被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別する第５鑑別工程を有し、
前記切出工程において、前記所定のバンドは、前記起源となる動物の種類が既知の獣毛繊維の電気泳動パターンと共通する分子量域に存在するバンドであって、且つ、分子量が３０ｋＤａ以下、好ましくは２０ｋＤａ以下にあるバンドであることを特徴とする獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項４】
前記切出工程において、前記所定のバンドは、前記起源となる動物の種類が既知の獣毛繊維の電気泳動パターンと共通する分子量域に存在するバンドであって、且つ、分子量が１０ｋＤａ付近にあるタンパク質濃度の濃いバンドであることを特徴とする請求項３に記載の獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項５】
前記消化工程において、前記所定の消化酵素は、タンパク質を構成するアミノ酸であるリシンのＣ側末端から当該タンパク質を切断するエンドプロテアーゼであることを特徴とする請求項３又は４に記載の獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項６】
前記質量分析工程において、前記質量分析手段は、液体クロマトグラフィー質量分析手段であることを特徴とする請求項３〜５のいずれか１つに記載の獣毛繊維の鑑別方法。
【請求項７】
前記被検獣毛繊維は、カシミヤ、ウール、ヤク、モヘア、アンゴラ、アルパカ、ビキューナ、キャメル、及び、リャマからなる群のうち少なくとも１つの獣毛繊維を含有することを特徴とする請求項１〜６のいずれか１つに記載の獣毛繊維の鑑別方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
即ち、本発明に係る獣毛繊維の鑑別方法は、請求項１の記載によると、
被検獣毛繊維から当該獣毛繊維を構成するタンパク質群を抽出する抽出工程、
抽出した前記タンパク質群を電気泳動手段により分離して電気泳動パターンを得る電気泳動工程、及び、
得られた前記電気泳動パターンを予め準備した起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の電気泳動パターンと比較して、前記被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別する第１鑑別工程を有し、
前記電気泳動工程おいて、
起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の電気泳動パターンのうち、少なくともカシミヤを起源とする単一獣毛繊維の電気泳動パターンに対して、分子量が２５ｋＤａ以下の領域における分解能が、１０個以上のバンドに分解可能な電気泳動ゲルを使用することを特徴とする。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
また、本発明は、請求項２の記載によると、請求項１に記載の獣毛繊維の鑑別方法であって、
タンパク質群を抽出する前記抽出工程において、
タンパク質の分子内或いは分子間のジスルフィド結合を開裂するために還元剤を使用し、当該還元剤は、容量％濃度で６％より濃い濃度の２−メルカプトエタノール、又は、モル濃度で８〜１２ｍＭ（ミリモル／リッター）のジチオスレイトールであることを特徴とする。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
また、本発明に係る獣毛繊維の鑑別方法は、請求項３の記載によると、
被検獣毛繊維から当該獣毛繊維を構成するタンパク質群を抽出する抽出工程、
抽出した前記タンパク質群を電気泳動手段により分離して電気泳動パターンを得る電気泳動工程、
前記電気泳動パターンを形成する複数のバンドのうち所定のバンドを切出す切出工程、
切出した前記バンド内のタンパク質を所定の消化酵素により消化して一連のペプチド群とする消化工程、
得られた前記ペプチド群を質量分析手段により分析して前記ペプチド群の質量分析パターンを得る質量分析工程、及び、
得られた前記質量分析パターンを予め準備した起源となる動物の種類が既知の単一獣毛繊維の質量分析パターンと比較して、前記被検獣毛繊維の起源となる動物の種類を鑑別する第５鑑別工程を有し、
前記切出工程において、前記所定のバンドは、前記起源となる動物の種類が既知の獣毛繊維の電気泳動パターンと共通する分子量域に存在するバンドであって、且つ、分子量が３０ｋＤａ以下、好ましくは２０ｋＤａ以下にあるバンドであることを特徴とする。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
また、本発明は、請求項４の記載によると、請求項３に記載の獣毛繊維の鑑別方法であって、
前記切出工程において、前記所定のバンドは、前記起源となる動物の種類が既知の獣毛繊維の電気泳動パターンと共通する分子量域に存在するバンドであって、且つ、分子量が１０ｋＤａ付近にあるタンパク質濃度の濃いバンドであることを特徴とする。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
また、本発明は、請求項５の記載によると、請求項３又は４に記載の獣毛繊維の鑑別方法であって、
前記消化工程において、前記所定の消化酵素は、タンパク質を構成するアミノ酸であるリシンのＣ側末端から当該タンパク質を切断するエンドプロテアーゼであることを特徴とする。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
また、本発明は、請求項６の記載によると、請求項３〜５のいずれか１つに記載の獣毛繊維の鑑別方法であって、
前記質量分析工程において、前記質量分析手段は、液体クロマトグラフィー質量分析手段であることを特徴とする。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
また、本発明は、請求項７の記載によると、請求項１〜６に記載の獣毛繊維の鑑別方法であって、
前記被検獣毛繊維は、カシミヤ、ウール、ヤク、モヘア、アンゴラ、アルパカ、ビキューナ、キャメル、及び、リャマからなる群のうち少なくとも１つの獣毛繊維を含有することを特徴とする。