(57)【要約】【課題】経口摂取することにより、腸管に定着する新規な乳酸菌を提供する。【解決手段】ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantalum）IYO1401株（受託番号NITE P-02329）である、乳酸菌【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantalum）IYO1401株（受託番号NITE P-02329）である、乳酸菌。
【請求項２】
請求項１に記載の乳酸菌を含む、飲食品。
【請求項３】
発酵茶、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、味噌、キムチ、ぬか漬け、塩麹からなる群から選ばれる、請求項２に記載の飲食品。
【請求項４】
発酵茶を０〜３０℃の温度で煮出して得られる茶飲料である、請求項３に記載の飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規乳酸菌及びそれを含む飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビフィドバクテリウム属やラクトバチルス属などの腸内有用乳酸菌は、ヒトの腸管に生息して感染防御、腸内腐敗防止、腸管運動促進など、様々な生理活性を発揮していると考えられている。
【０００３】
しかしながら腸管内の菌叢は、ストレス、病気、老化などの影響を受けやすく、容易に有用細菌が減少し有害細菌が優勢になるといわれている。また、このような有用細菌を含む発酵乳を日常的に多く摂取している人々に、長寿者が多いことも疫学的調査で報告されている。このような観点から、最近では健康食品としての発酵乳や乳酸菌飲料を摂取する慣習が一般的に定着し、プレーンヨーグルトをはじめとする発酵乳の消費が伸びている。しかしながら、経口的に摂取したこれら有用乳酸菌が胃を生きたまま通過し、腸管に定着するかどうかについては定かではない。その理由は、経口的に摂取した乳酸菌が本来の成育環境である腸管に到達する前に、胃酸によって死滅してしまうためであると考えられている。そのために、酸度の高い培地の中でも成育できる耐酸性の乳酸菌をスクリーニングした発酵乳を製造する試みがなされている（特許文献１）が、経口摂取した乳酸菌は腸管に定着しないものが多い。特に植物より分離した植物性乳酸菌については、動物由来の乳酸菌よりも利用できる糖の種類が多いなどの特徴がある一方で、腸管付着性に乏しい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開昭58−224685号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、経口摂取することにより、腸管に定着する新規な乳酸菌を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、以下の乳酸菌を提供するものである。
項１．  ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantalum）IYO1401株（受託番号NITE P-02329）である、乳酸菌。
項２．  項１に記載の乳酸菌を含む、飲食品。
項３．  発酵茶、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、味噌、キムチ、ぬか漬け、塩麹からなる群から選ばれる、項２に記載の飲食品。
項４．  発酵茶を０〜３０℃の温度で煮出して得られる茶飲料である、項３に記載の飲食品。
【０００７】
本発明者は、伝統的に生産され、長期に亘る飲用経験がある石鎚黒茶から分離した乳酸菌L.plantarum IY1401株が腸管上皮細胞及びフィブロネクチンもしくはIV型コラーゲンに対して高い付着性を有することを見出した。
【０００８】
本発明は、植物由来で酸耐性かつ腸管付着性の乳酸菌および当該乳酸菌を含む食品を提供するものである。本発明で見出した腸管付着性乳酸菌は、菌液として摂取してもよく、凍結乾燥菌体またはタブレットとして加工し摂取してもよい。発酵茶、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、味噌、キムチ、ぬか漬け、塩麹の発酵食品を製造するためにこれらの原料に添加し、発酵に用いてもよい。また、乳酸菌が生存可能な温度で抽出した発酵茶を飲用してもよい。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の乳酸菌は、胃酸に強く腸管への付着性が高いので、高効率で腸管に定着、増殖し、腸内環境を整えることができる。また、本発明の乳酸菌は、愛媛県で生産されている石鎚黒茶から見出されたものであり、安全性が高い。
【００１０】
本発明の乳酸菌を含む飲食品は、有用な乳酸菌を腸管に定着させるのに有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】乳酸菌のコロニー形成に対するｐＨの影響。** p < 0.01 （pH6.2に対する）
【図２】マトリックスタンパク質に対する乳酸菌の付着性
【図３】ヒト腸管上皮細胞（Caco-2細胞）に対する乳酸菌の付着性
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の乳酸菌は、愛媛県で生産されている石鎚黒茶を水に含浸し、浸出液を培地で培養し、本発明の乳酸菌を含むコロニーを分離することにより得ることができる。石鎚黒茶は天狗黒茶などの商品名で販売されている。
【００１３】
ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantalum）IYO1401株は、2016年8月12日付で、独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8）に、受託番号NITE P-02329で寄託した。
【００１４】
本発明の乳酸菌は、乳酸菌標準株であるL. plantarum JCM1149株よりも低pHに耐性であり、ｐＨ３の生残性が高いので、飲食品として摂取した場合に胃を生きた状態で通過することができる。
【００１５】
本発明の乳酸菌は、フィブロネクチン、ＩＶ型コラーゲンなどのマトリックスタンパク質に親和性が高く、腸細胞に数多く付着することが確認されている。
【００１６】
本発明の飲食品は、本発明の乳酸菌を使用して製造することができる。例えば、ヨーグルト、チーズは、乳原料に本発明の乳酸菌を必要に応じて他の乳酸菌とともに添加して発酵させることで製造することができる。キムチは、白菜とニョンヤム、唐辛子などとともに、本発明の乳酸菌を加えて製造できる。ぬか漬けは、白菜、大根、キャベツ、ゴボウ、春菊、水菜、ほうれん草などの野菜と米ぬか、塩、酒粕、調味料などとともに本発明の乳酸菌を使用することで製造できる。
【００１７】
本発明の乳酸菌は、澱粉、乳糖、セルロースなどの賦形剤と混合し、タブレット、カプセルなどの形態で腸内環境を整えるためのサプリメントとしてもよい。
【実施例】
【００１８】
以下、実施例及び比較例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
実施例１
0.5ｇの石鎚黒茶を10mlの2％グルコースを含む10%スキムミルクに添加し、30℃で1日培養した。スキムミルクは、乳酸の産生によるpH の低下によって凝固することから、凝固が見られたスキムミルクを、２％寒天を含むMRS寒天平板に画線し、嫌気ジャー中で30℃で嫌気培養し、得られたコロニーから乳酸菌IYO1401株を得た。同様にして、徳島県の発酵茶から乳酸菌L.plantarum AWA1401株を得た。
試験例１
実施例１で得られた２種の乳酸菌と乳酸菌標準株であるL. plantarum JCM1149株について、以下の試験を行った。
（１）ｐＨ耐性(図１)
MRS液体培地中で一晩前培養した乳酸菌培養液を、塩酸によりｐＨ６．２、３．０、２．０に調整したのち、４％ペプシン溶液を１％添加したMRS液体培地に10％（v/v）となるように添加した。37℃で2時間培養した後、リン酸緩衝生理食塩水で希釈し、２％寒天を含むMRS寒天平板に塗抹した。37℃で一晩嫌気培養後、生じたコロニー数を数えた。生存率は、ｐＨ６．２の培地から得られたコロニー数に対する百分率で表した。
【００１９】
（２）フィブロネクチン、ＩＶ型コラーゲンの接着試験（図２）
MRS 液体培地中で前培養した乳酸菌株をリン酸緩衝生理食塩水で1回洗浄後、再度リン酸緩衝生理食塩水で懸濁しバクテリアカウンターにより菌数を数えた。リン酸緩衝生理食塩水で1×108個/mlに調製した。この菌液を、フィブロネクチンまたはＩＶ型コラーゲンをコーティングしたマルチウェルスライドガラスに20μl/ウェルとなるように添加した。室温で２時間保持した後、スライドガラスをリン酸緩衝生理食塩水で５分、３回洗浄した。スライドガラスを風乾後、グラム染色第一液で染色し、顕微鏡下で付着菌数を計数した。
【００２０】
（３）腸管上皮細胞への付着性(図３)
実施例１で得られた２種の乳酸菌と乳酸菌標準株であるL. plantarum JCM1149株をMRS液体培地中で前培養した。これらの乳酸菌株をリン酸緩衝生理食塩水で1回洗浄後、再度リン酸緩衝生理食塩水で懸濁しバクテリアカウンターにより菌数を数えた。菌懸濁液を、１０％ウシ胎児血清を含む細胞培養用培地（MEM、Minimum Essential Medium）で1×107個/mlに調製し、菌懸濁培地とした。１０％ウシ胎児血清を含むMEM中で前培養したヒト大腸がん由来Caco-2細胞を、2×105個/mlとなるように６ウェルプレートに植え、一晩培養した。培養上清を菌懸濁培地２mlと交換し、３７℃、２時間、５％CO2インキュベータ内で保持した。菌懸濁液を除去した後、リン酸緩衝生理食塩水で３回洗浄した。その後、２ml/ウェルの滅菌蒸留水を注ぎ、よく懸濁した後、リン酸緩衝生理食塩水で希釈し、MRS寒天平板に塗抹した。３７℃で一晩培養後、コロニー数を数えた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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