(57)【要約】【課題】新たな、涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制する薬剤の提供。【解決手段】（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩及び（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩を含有する、涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制するための、ドライアイ治療剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩及び（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩を含有する、涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制するための、ドライアイ治療剤。
【請求項２】
成分（Ａ）の含有量が、０．００１〜０．７重量／容量％である請求項１記載のドライアイ治療剤。
【請求項３】
成分（Ｂ）の含有量が、０．００１〜０．７重量／容量％である請求項１又は２記載のドライアイ治療剤。
【請求項４】
（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩が、ジクロフェナクナトリウムである請求項１〜３のいずれか１項記載のドライアイ治療剤。
【請求項５】
（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩が、ヒアルロン酸ナトリウムである請求項１〜４のいずれか１項記載のドライアイ治療剤。
【請求項６】
（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩及び（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩を含有する、涙液の高浸透圧によるアポトーシスの抑制剤。
【請求項７】
成分（Ａ）の含有量が、０．００１〜０．７重量／容量％である請求項６記載のアポトーシス抑制剤。
【請求項８】
成分（Ｂ）の含有量が、０．００１〜０．７重量／容量％である請求項６又は７記載のアポトーシス抑制剤。
【請求項９】
（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩が、ジクロフェナクナトリウムである請求項６〜８のいずれか１項記載のアポトーシス抑制剤。
【請求項１０】
（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩が、ヒアルロン酸ナトリウムである請求項６〜９のいずれか１項記載のアポトーシス抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ドライアイ治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ドライアイは、様々な要因による涙液及び角結膜上皮の慢性疾患であり、眼不快感や視機能異常を伴う疾患であり、我が国のドライアイ患者数は約２２００万人とも言われており、増加傾向にある。また加齢によって有病率は上昇する。
【０００３】
ドライアイは、涙液の分泌減少・蒸発増加によって涙液の高浸透圧化が生じ、角膜、結膜において炎症反応、細胞傷害が起こり、涙液層が不安定化する結果、発症進行すると考えられている（非特許文献１）。
【０００４】
現在のドライアイの治療法としては、ヒアルロン酸ナトリウム、ジクアホソルナトリウム（ムチン分泌促進）、レバミピド（ムチン産生促進）等の涙液補充療法や眼鏡やゴーグルの装用、涙点プラグ法等が用いられている。
また、特許文献１には、ジクロフェナクが涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制し、ドライアイ治療用点眼剤として有用であることが報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１５／０９９０１９号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】日本眼科学会ホームページ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、前記の涙液の高浸透圧によるアポトーシス抑制に対するジクロフェナクの作用は未だ十分満足できるものではなく、さらに優れた高浸透圧によるアポトーシス抑制剤が望まれていた。
従って、本発明の課題は、新たな、涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制する薬剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
そこで本発明者は、種々の薬物について涙液の高浸透圧によるアポトーシスに対する作用を検討したところ、ヒアルロン酸は単独でこのアポトーシス抑制作用を示さないにもかかわらず、ジクロフェナクとヒアルロン酸とを併用すると、ジクロフェナク単独の場合に比べてアポトーシス抑制作用が顕著に増強され、涙液の高浸透圧によるアポトーシス抑制作用を介したドライアイ治療剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔１６〕を提供するものである。
【００１０】
〔１〕（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩及び（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩を含有する、涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制するための、ドライアイ治療剤。
〔２〕成分（Ａ）の含有量が、０．００１〜０．７重量／容量％である〔１〕記載のドライアイ治療剤。
〔３〕成分（Ｂ）の含有量が、０．００１〜０．７重量／容量％である〔１〕又は〔２〕記載のドライアイ治療剤。
〔４〕（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩が、ジクロフェナクナトリウムである〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のドライアイ治療剤。
〔５〕（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩が、ヒアルロン酸ナトリウムである〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載のドライアイ治療剤。
〔６〕（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩及び（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩を含有する、涙液の高浸透圧によるアポトーシスの抑制剤。
〔７〕成分（Ａ）の含有量が、０．００１〜０．７重量／容量％である〔６〕記載のアポトーシス抑制剤。
〔８〕成分（Ｂ）の含有量が、０．００１〜０．７重量／容量％である〔６〕又は〔７〕記載のアポトーシス抑制剤。
〔９〕（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩が、ジクロフェナクナトリウムである〔６〕〜〔８〕のいずれかに記載のアポトーシス抑制剤。
〔10〕（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩が、ヒアルロン酸ナトリウムである〔６〕〜〔９〕のいずれかに記載のアポトーシス抑制剤。
〔11〕（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩及び（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩の、涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制するための、ドライアイ治療剤製造のための使用。
〔12〕涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制してドライアイを治療するための（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩と（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩との組み合わせ。
〔13〕（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩及び（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩を投与することを特徴とする、涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制してドライアイを治療する方法。
〔14〕（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩及び（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩の、涙液の高浸透圧によるアポトーシスの抑制剤製造のための使用。
〔15〕涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制するための、（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩と、（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩との組み合わせ。
〔16〕（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩及び（Ｂ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容可能な塩を投与することを特徴とする、涙液の高浸透圧によるアポトーシスの抑制方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のドライアイ治療剤を用いれば、抗炎症作用や涙液補充機能からは全く予想できない、涙液の高浸透圧による、角膜、結膜、涙腺におけるアポトーシスを抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】高浸透圧条件におけるヒト角膜上皮細胞の傷害に対するジクロフェナクナトリウム（Diclofenac）の効果を示す。
【図２】高浸透圧条件におけるヒト角膜上皮細胞の傷害に対するヒアルロン酸ナトリウム(Hyaluronic acid)の効果を示す。
【図３】高浸透圧条件におけるヒト角膜上皮細胞の傷害に対するジクロフェナクナトリウム(Diclofenac)とヒアルロン酸ナトリウム(Hyaluronic acid)の併用効果を示す。
【図４】涙腺摘出ラットの角膜傷害に対するヒアルロン酸ナトリウム(Hyaluronic acid)の効果を示す。
【図５】涙腺摘出ラットの角膜傷害に対するジクロフェナクナトリウムとヒアルロン酸ナトリウムの併用効果（フルオレセイン染色像）を示す。
【図６】涙腺摘出ラットと角膜傷害に対するジクロフェナクナトリウムとヒアルロン酸ナトリウムの併用効果（フルオレセイン染色スコア）を示す。
【図７】ジクロフェナクナトリウムのカスパーゼ３様活性の測定結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制するための、ドライアイ治療剤の有効成分は、（Ａ）ジクロフェナク又はその薬学的に許容可能な塩（成分（Ａ））及び（Ｂ）ヒアロルン酸又はその薬学的に許容可能な塩（成分（Ｂ））である。
【００１４】
成分（Ａ）のジクロフェナクは、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）の一種である。ジクロフェナクの薬学的に許容可能な塩としては、ジクロフェナクナトリウム、ジクロフェナクカリウム等が挙げられるが、ジクロフェナクナトリウムが好ましい。
【００１５】
成分（Ｂ）のヒアルロン酸は、グリコサミノグリカンの一種であり、Ｎ−アセチルグルコサミンとグルクロン酸の二糖単位が連結した構造を有する。ヒアルロン酸の薬学的に許容可能な塩としては、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム等が挙げられるが、ヒアルロン酸ナトリウムが好ましい。
ヒアルロン酸としては、ニワトリのとさか、臍帯等の他、乳酸菌や連鎖球菌により生産されたものでもよい。
【００１６】
後記実施例に示すように、ヒアルロン酸は、単独では涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制しない。ヒアルロン酸とジクロフェナクを併用した場合、ジクロフェナク単独の場合に比べて顕著に、涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制する。従って、成分（Ａ）と成分（Ｂ）とを併用すれば、涙液の高浸透圧によるアポトーシスの抑制剤として有用であり、かつ涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制するための、ドライアイ治療剤として有用である。
【００１７】
通常、ドライアイでは、涙液が減少し、涙液の浸透圧が上昇する。この上昇にともない、細胞内から水分が排出され、細胞が縮小するという浸透圧ストレスにさらされる。これに対して、細胞は外部のナトリウムイオン等を細胞内に取り込み、細胞内のイオン強度が上昇して、アポトーシスが生じる。アポトーシスが生じる眼組織として、角膜、結膜、涙腺が挙げられる。より具体的には、アポトーシスが生じる細胞として、角膜上皮細胞、結膜上皮細胞、涙液細胞が挙げられる。
従って、本発明のアポトーシス抑制剤又はドライアイ治療剤が、アポトーシスを抑制する組織は、角膜、結膜、涙腺、より具体的には角膜上皮細胞、結膜上皮細胞、涙腺細胞である。
【００１８】
本発明のアポトーシス抑制剤又はドライアイ治療剤中の成分（Ａ）の含有量は、高浸透圧によるアポトーシス抑制効果の点から、０．００１〜０．７重量／容量％であることが好ましく、０．０１〜０．５重量／容量％であることがより好ましい。
また、本発明のアポトーシス抑制剤又はドライアイ治療剤中の成分（Ｂ）の含有量は、高浸透圧によるアポトーシス抑制効果の点から、０．００１〜０．７重量／容量％であることが好ましく、０．０１〜０．５重量／容量％であることがより好ましい。
【００１９】
本発明のアポトーシス抑制剤及びドライアイ治療剤の投与形態としては、局所投与形態、特に点眼剤が好ましい。点眼剤の形態とする場合、前記成分（Ａ）及び（Ｂ）に加えて、緩衝剤、等張化剤、保存剤、増粘剤、溶解補助剤、清涼化剤、安定化剤、塩類等を含有させることができる。
【００２０】
緩衝剤としては、リン酸とリン酸塩との組み合わせ、ホウ酸とホウ砂との組み合わせ、クエン酸、酒石酸等の有機酸と有機酸塩との組み合わせ等が挙げられる。この中でも、ホウ酸とホウ砂との組み合わせが好ましい。点眼剤における緩衝剤の含有量は、０．０１〜１０重量／容量％であることが好ましく、０．１〜３重量／容量％であることがより好ましい。
【００２１】
等張化剤としては、ブドウ糖等の糖類、プロピレングリコール、グリセリン、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトール、ソルビトール、キシリトール等の糖アルコール等が挙げられる。この中でも、塩化ナトリウム、塩化カリウムが好ましい。点眼剤における等張化剤の含有量は、０．０１〜１０重量／容量％であることが好ましく、０．１〜３重量／容量％であることがより好ましい。
【００２２】
保存剤としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム及びグルコン酸クロルヘキシジン等の逆性石鹸類、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン及びブチルパラベン等のパラベン類、クロロブタノール、フェニルエチルアルコール及びベンジルアルコール等のアルコール類が挙げられる。この中でも、クロロブタノールが好ましい。点眼剤における保存剤の含有量は０．００１〜０．５重量／容量％であることが好ましい。
【００２３】
増粘剤としては、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。この中でも、ポリビニルピロリドンが好ましい。
【００２４】
溶解補助剤としては、ポリソルベート８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、商品名Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリオキシエチレンオキシステアリン酸トリグリセライド、ポリエチレングリコール、α又はβ−シクロデキストリン等が挙げられる。この中でも、ポリソルベート８０が好ましい。
【００２５】
塩類としては、カルシウム塩又はマグネシウム塩が挙げられる。このような塩としては、例えばパントテン酸カルシウム、塩化カルシウム、プロピオン酸カルシウム、酢酸カルシウム、乳酸カルシウム、グルコン酸カルシウム等のカルシウム塩、又は相当するマグネシウム塩が挙げられる。この中でも、パントテン酸カルシウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウムが好ましい。
清涼化剤としては、メントール、ボルネオール、カンフル等が挙げられる。
【００２６】
本発明の点眼剤は、高浸透圧によるアポトーシス抑制効果を増強するために、前記成分の中でも、ポリソルベート８０、ホウ砂、及びポリビニルピロリドンから選ばれる１種又は２種以上を含むことが好ましい。
【００２７】
高浸透圧によるアポトーシス抑制効果の増強のためには、点眼剤におけるポリソルベート８０の濃度は、０．１〜５．０重量／容量％であることが好ましく、０．３〜３．０重量／容量％であることがより好ましい。
【００２８】
高浸透圧によるアポトーシス抑制効果の増強のためには、点眼剤におけるホウ砂の濃度は、０．１〜２０．０重量／容量％であることが好ましく、０．３〜１５．０重量／容量％であることがより好ましい。
【００２９】
高浸透圧によるアポトーシス抑制効果の増強のためには、点眼剤におけるポリビニルピロリドンの濃度は、１．０〜１５．０重量／容量％であることが好ましく、２．０〜１０．０重量／容量％であることがより好ましい。
【００３０】
点眼剤のｐＨは、６．０〜８．５であることが好ましく、７．０〜８．０であることがより好ましい。
【００３１】
点眼剤の浸透圧比は０．９〜１．４が好ましい。なお、ここでいう浸透圧比は、生理食塩水と比較した場合の浸透圧比を意味する。
【００３２】
本発明の点眼剤を使用する際、１回あたりの片眼に対する点眼量は、１〜３滴であることが好ましく、１〜２滴であることがより好ましい。また、１回あたりの片眼に対する点眼量を容量で表すと、１０〜３００μＬであることが好ましく、２０〜２００μＬであることがより好ましく、３０〜１００μＬであることが更に好ましい。本発明の点眼剤の投与間隔は、１日１〜６回であることが好ましく、１日１〜３回であることがより好ましい。
【実施例】
【００３３】
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
【００３４】
実施例１（高浸透圧条件における細胞傷害の抑制効果）
ＨＣＥ細胞（ヒト角膜上皮細胞）を、被検化合物を含む高浸透圧培地で２４時間培養した。培地は、１５０ｍＭのＮａＣｌにより高浸透圧条件とした。生細胞数をＭＴＴ法により測定し、コントロール（等張圧条件）の吸光度に対する相対値を算出した。結果を図１〜図３に示した。数値は平均±ＳＤ（ｎ＝３）、＊＊Ｐ＜０．０１である。
【００３５】
図１より、ジクロフェナクナトリウム（Diclofenac）は、１μＭ以上で、高浸透圧条件におけるヒト角膜上皮細胞の傷害を抑制した。一方、図２より、ヒアルロン酸ナトリウム（Hyaluronic acid）は、高浸透圧条件におけるヒト角膜上皮細胞の傷害を抑制しなかった。これに対し、図３より、ジクロフェナクナトリウムとヒアルロン酸ナトリウムを併用すると、ヒト角膜上皮細胞の傷害抑制効果が顕著に増強された。
【００３６】
実施例２（ラットの角膜表面傷害治療効果）
ラットの涙腺を除去し、ドライアイモデルを作製した。涙腺除去後の１〜５週間の期間、被検化合物を含む水溶液５μＬを１日３回点眼投与した。ヒアルロン酸ナトリウムのフルオレセインスコアを図４に示した。ジクロフェナクナトリウムとヒアルロン酸ナトリウムの併用時のフルオレセインで染色された角膜の画像を図５に示した。フルオレセインのスコアを算出し、図６に示した。数値は平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．、＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１である。
【００３７】
図４より、ヒアルロン酸ナトリウムは、単独では涙腺摘出ラットの角膜傷害に対する作用が認められなかった。一方、図５及び図６より、ジクロフェナクナトリウムとヒアルロン酸ナトリウムを併用すると、涙腺摘出ラットの角膜傷害を顕著に抑制することがわかる。
【００３８】
実施例３（高浸透圧条件でのアポトーシス抑制効果）
ヒト角膜上皮細胞を、ジクロフェナク及び１５０ｍＭのＮａＣｌを含む高浸透圧培地で培養した。６時間培養後のカスパーゼ３様活性を蛍光ペプチド基質を使用して測定し、結果を図７に示した。
図７から、ジクロフェナクが高浸透圧条件でのアポトーシスを抑制することが確認された。
【図１】
2018035075.tif 000002
【図２】
2018035075.tif 000003
【図３】
2018035075.tif 000004
【図４】
2018035075.tif 000005
【図５】
2018035075.tif 000006
【図６】
2018035075.tif 000007
【図７】
2018035075.tif 000008