(57)【要約】【課題】本発明は、新たな小胞体ストレスを軽減する組成物、該組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供することを課題とする。【解決手段】本発明は、ホエイタンパク質及び／又はホエイタンパク質加水分解物を有効成分とする小胞体ストレス軽減用組成物、該組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホエイタンパク質及び／又はホエイタンパク質加水分解物を有効成分とする小胞体ストレス軽減用組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の小胞体ストレス軽減用組成物を含むことを特徴とする小胞体ストレス軽減用食品。
【請求項３】
請求項１に記載の小胞体ストレス軽減用組成物を含むことを特徴とする小胞体ストレス軽減用医薬品。
【請求項４】
請求項１に記載の小胞体ストレス軽減用組成物を含むことを特徴とする小胞体ストレス軽減用飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、小胞体ストレス軽減用組成物及び該組成物を含む食品、医薬品、飼料に関する。
【背景技術】
【０００２】
小胞体とは、細胞内に存在する膜の約半分を占める小器官であり、タンパク質合成、膜脂質合成、カルシウム貯蔵など、多岐にわたる生理機能を有している。
分泌タンパク質や膜タンパク質は小胞体膜に結合したリボソームにおいて合成され、小胞体に挿入される。これらのタンパク質は、小胞体において分子シャペロンなどの作用により様々な化学修飾を受け、糖鎖の付与、ジスルフィド結合の形成などを経て適正な立体構造が与えられる。
このとき、正常な立体構造を持ったタンパク質のみがゴルジ装置以降の分泌経路に進み、細胞膜や細胞外へと輸送され、異常な立体構造を持ったタンパク質は小胞体関連分解により処分される。
【０００３】
虚血、低酸素、熱ショック、遺伝子変異などの要因により、小胞体内に正常な高次構造を持たないタンパク質（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）が蓄積し、小胞体の機能障害を引き起こすことが知られている（小胞体ストレス）。
細胞はこの小胞体ストレスに対して、小胞体の状態を正常に向かわせるための防御システムである小胞体ストレス応答（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を働かせる。
小胞体ストレス応答は、ストレスが軽度のときは、タンパク質翻訳の抑制による小胞体への流入量の抑制、分子シャペロンの誘導による変性タンパク質の修復、修復できないタンパク質の小胞体外への排出と分解を行うことにより細胞機能を維持する方向へと向かわせるが、過度なストレスを受けたときにはアポトーシスが誘導され個体の保護が優先される。
【０００４】
近年、小胞体ストレスおよび小胞体ストレス応答の破綻は、パーキンソン病やアルツハイマー病、ポリグルタミン病、プリオン病、筋萎縮生側索硬化症（ＡＬＳ）等に代表される神経変性疾患、糖尿病、脂肪肝など非常に多様な疾患の発症に関わっていることが報告されている。
従って、小胞体ストレスを軽減することは、上記疾患の予防または治療に有効であることが期待される。
【０００５】
上記のことから、小胞体ストレスを軽減する食品、医薬品、飼料の開発が望まれている。特許文献１は黒米を有効成分とする小胞体ストレス軽減剤を開示している。    
特許文献２はポリヌクレオチドを有効成分とする小胞体ストレス軽減剤を開示している。  
また、非特許文献１は、乳由来リン脂質混合物が小胞体ストレスにより誘導される神経細胞死を抑制することを開示している。
しかし、小胞体ストレスを軽減する組成物として、ホエイタンパク質を含む組成物を開示した文献等はない。さらに該組成物を含む食品、医薬品、飼料を開示した文献等もない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１３−１５１４５９号公報
【特許文献２】ＷＯ２０１３／０４７８１５号パンフレット
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｎａｇａｉ，Ｊ．Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｅｎｇ．，１１４，４６６−４７１，２０１２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、新たな小胞体ストレスを軽減する組成物、該組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題を解決するため、本発明者らは、小胞体ストレスを軽減する有用な方法について検討を進めた結果、ホエイタンパク質が生体内の小胞体ストレスを軽減させることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明には以下の構成が含まれる。
（１）ホエイタンパク質及び／又はホエイタンパク質加水分解物を有効成分とする小胞体ストレス軽減用組成物。
（２）（１）に記載の小胞体ストレス軽減用組成物を含むことを特徴とする小胞体ストレス軽減用食品。
（３）（１）に記載の小胞体ストレス軽減用組成物を含むことを特徴とする小胞体ストレス軽減用医薬品。
（４）（１）に記載の小胞体ストレス軽減用組成物を含むことを特徴とする小胞体ストレス軽減用飼料。
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、新たな小胞体ストレスを軽減する組成物として、ホエイタンパク質を含む組成物と該組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供するものである。本発明の組成物の摂取により小胞体ストレスを安全かつ簡易に軽減することが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ヒト肝癌由来細胞を各培地で処理した場合の細胞障害性（％）を示すグラフである。Ｎｏｒｍａｌ：無血清培地。Ｃｏｎｔｒｏｌ：小胞体ストレス誘導剤（ツニカマイシン）＋無血清培地。ＷＰＩ８８５５：ＷＰＩ８８５５＋ツニカマイシン＋無血清培地。ＷＰＩ８９５：ＷＰＩ８９５＋ツニカマイシン＋無血清培地。Ｐｒｏｖｏｎ１９０：Ｐｒｏｖｏｎ１９０＋ツニカマイシン＋無血清培地。Ｌａｃｐｒｏｄａｎ  ＤＩ  ９２２４：Ｌａｃｐｒｏｄａｎ  ＤＩ  ９２２４＋ツニカマイシン＋無血清培地。ＷＰＣ９０２：ＷＰＣ９０２＋ツニカマイシン＋無血清培地。ＯＶＡ：オボアルブミン＋ツニカマイシン+無血清培地。
【図２】ヒト肝癌由来細胞を各培地で処理した場合の細胞障害性（％）を示すグラフである。Ｎｏｒｍａｌ：無血清培地。Ｃｏｎｔｒｏｌ：ツニカマイシン＋無血清培地。ＷＰＩ：ＷＰＩ８８５５＋ツニカマイシン＋無血清培地。数値は、培地中のＷＰＩ濃度（ｍｇ／ｍｌ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の小胞体ストレス軽減用組成物について以下に詳細に説明する。
【００１３】
（ホエイタンパク質）
本発明の小胞体ストレス軽減用組成物に用いるホエイタンパク質ついて説明する。
本発明の小胞体ストレス軽減用組成物に用いるホエイタンパク質は、ウシ、馬、羊、山羊等の獣乳中に存在するホエイタンパク質を用いることができ、前記獣乳から得られたものを用いることが好ましい。
また、ホエイタンパク質をタンパク質分解酵素で処理したホエイタンパク質分解物も用いることができる。ホエイタンパク質分解物の分子量は２００Ｄａ程度以上１０００ＫＤａ程度以下であればよく、２００Ｄａ程度以上１０ｋＤａ程度以下がより好ましい。
【００１４】
本発明の小胞体ストレス軽減用組成物に用いるホエイタンパク質は、ホエイタンパク質濃縮物等のホエイタンパク質以外の成分の少ないものだけでなく、ホエイタンパク質を含む乳素材等を用いることもできる。
前記乳素材はホエイタンパク質を含むものであればどのようなものでも用いることができ、脱脂粉乳、甘性ホエイ粉、酸ホエイ粉、脱塩ホエイ粉などを例示できる。
このうち、ホエイタンパク質の含量が高い前記ホエイタンパク質濃縮物としては、ＷＰＩ（Ｗｈｅｙ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｓｏｌａｔｅ、分離乳清タンパク質）やＷＰＣ（Ｗｈｅｙ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ、濃縮乳清タンパク質）を用いることが好ましい。
例えば、ＷＰＩ８８５５（ホエイタンパク質含量が９４％であり、β−ラクトグロブリンは、前記タンパク質中に約６４％の割合で含まれ、α−ラクトアルブミンは、前記タンパク質中に約２０％の割合で含まれ、ウシ血清アルブミンは、前記タンパク質中に約８％の割合で含まれ、免疫グロブリンは、前記タンパク質中に約６％の割合で含まれる。）、ＷＰＩ８９５（ホエイタンパク質含量が９２％であり、β−ラクトグロブリンは、前記タンパク質中に約７２％の割合で含まれ、α−ラクトアルブミンは、前記タンパク質中に約１４％の割合で含まれ、ウシ血清アルブミンは、前記タンパク質中に約７％の割合で含まれ、免疫グロブリンは、前記タンパク質中に約６％の割合で含まれる）、Ｐｒｏｖｏｎ１９０（ホエイタンパク質含量が９０％であり、β−ラクトグロブリンは、前記タンパク質中に約７１％の割合で含まれ、α−ラクトアルブミンは、前記タンパク質中に約１７％の割合で含まれ、ウシ血清アルブミンは、前記タンパク質中に約５％の割合で含まれ、免疫グロブリンは、前記タンパク質中に約５％の割合で含まれる）Ｌａｃｐｒｏｄａｎ  ＤＩ  ９２２４（タンパク質含量が８７％であり、β−ラクトグロブリンは、前記タンパク質中に約５９％の割合で含まれ、α−ラクトアルブミンは、前記タンパク質中に約２２％の割合で含まれ、ウシ血清アルブミンは、前記タンパク質中に約１０％の割合で含まれ、免疫グロブリンは、前記タンパク質中に約６％の割合で含まれる）ＷＰＣ９０２（ホエイタンパク質含量が８１％であり、β−ラクトグロブリンは、前記タンパク質中に約６１％の割合で含まれ、α−ラクトアルブミンは、前記タンパク質中に約２３％の割合で含まれ、ウシ血清アルブミンは、前記タンパク質中に約７％の割合で含まれ、免疫グロブリンは、前記タンパク質中に約７％の割合で含まれる）がある。
ホエイタンパク質の分解酵素は、ＷＰＩ、ＷＰＣ、あるいはホエイタンパク質を含む乳素材をタンパク質分解酵素で処理したものを用いればよい。タンパク質分解物はホエイタンパク質のペプチド結合を加水分解できるものであればどのようなものでも用いることができるが、食品製造に用いられるペプシン、トリプシン、パパイン等が好ましい。
【００１５】
（小胞体ストレス軽減用組成物）
本発明の小胞体ストレス軽減用組成物におけるホエイタンパク質の含量は、１重量％以上１００重量％以下であればよく、２０重量％以上１００重量％以下が好ましく、５０重量％以上１００重量％以下がさらに好ましく、７０重量％以上１００重量％以下が最も好ましい。
【００１６】
（小胞体ストレス軽減用組成物の摂取量）
本発明の小胞体ストレス軽減用組成物の有効摂取量は、ホエイタンパク質の摂取量として２ｍｇ／日以上となるように摂取すればよい。
また、本発明の小胞体ストレス軽減用組成物は、以下に記載のとおり、食品、医薬品、飼料に添加することができるが、その際の小胞体ストレス軽減用組成物の添加量は前記した有効量が摂取できるよう適宜調整すればよい。
【００１７】
（小胞体ストレス軽減用組成物を含む食品、医薬品、及び飼料）
本発明の小胞体ストレス軽減用組成物はそのまま使用してもよいが、食品、医薬品、及び飼料に通常含まれる他の原材料とともに使用できることから、常法に従い、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤等に用いることも出来る。また、ヨーグルト、乳飲料、ウエハース等の飲食品、及び飼料に配合することも可能である。
【００１８】
（小胞体ストレス軽減用組成物中のホエイタンパク質の定量方法）
本発明の小胞体ストレス軽減用組成物中のホエイタンパク質含量は、Ｂｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ.(２００１)９２８、１、６３―７６）により測定することができる。
【００１９】
（小胞体ストレス軽減用組成物の小胞体ストレス軽減作用の評価）
本発明の小胞体ストレス軽減用組成物の小胞体ストレス軽減作用は、例えば、小胞体ストレス誘導剤等により試験対象となる動物や細胞にストレスを与えた場合において、本発明組成物を付与した場合と付与しなかった場合におけるストレス応答を比較することにより評価できる。小胞体ストレス誘導剤には、例えばツニカマイシンが挙げられる。ツニカマイシンはタンパク質への糖鎖の付与を阻害することで、小胞体内に構造が異常なタンパク質を蓄積させ、小胞体ストレスを引き起こすことが知られており、小胞体ストレスを対象とした研究で広く用いられる。ストレス応答の評価指標は、細胞障害性、細胞生存率、小胞体ストレス応答関連遺伝子の発現などが挙げられる。より具体的には、実施例に示したｉｎ ｖｉｔｒｏにおける方法で評価することができる。
【実施例】
【００２０】
以下、本発明の実施例を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
〔試験例１〕小胞体ストレス軽減効果確認試験（１）
小胞体ストレス誘導剤により細胞にストレスを負荷した場合に、本発明のホエイタンパク質を含む組成物の添加により、前記ストレスによる細胞の障害性が抑制されることを確認するための試験を行った。
１．試験方法
細胞実験は、下記の手順により行なった。  
ヒト肝癌由来細胞を５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で９６ウェルプレートに播種し、３７℃で２４時間培養後、無血清培地（Ｎｏｒｍａｌ）、小胞体ストレス誘導剤（ツニカマイシン（４０μｇ／ｍｌ））を混合した無血清培地（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、ツニカマイシン（４０μｇ／ｍｌ）およびＷＰＩ８８５５（Ｆｏｎｔｅｒｒａ、１ｍｇ／ｍｌ（ホエイタンパク質０．９４ｍｇ／ｍｌ））あるいはＷＰＩ８９５（Ｆｏｎｔｅｒｒａ、１ｍｇ／ｍｌ（ホエイタンパク質０．９２ｍｇ／ｍｌ））あるいはＰｒｏｖｏｎ１９０（日成共益株式会社、１ｍｇ／ｍｌ（ホエイタンパク質０．９０ｍｇ／ｍｌ））あるいはＬａｃｐｒｏｄａｎ  ＤＩ  ９２２４（Ａｒｌａ  Ｆｏｏｄｓ、各１ｍｇ／ｍｌ（ホエイタンパク質０．８７ｍｇ／ｍｌ））あるいはＷＰＣ９０２（Ｔａｔｕａ、１ｍｇ／ｍｌ（ホエイタンパク質０．８１ｍｇ／ｍｌ））あるいはオボアルブミン（ＯＶＡ；Ｓｉｇｍａ、１ｍｇ／ｍｌ）を混合した無血清培地に培地交換した（各群ｎ＝３）。
その後、２４時間培養し、その培養上清を回収し、ＬＤＨアッセイ（細胞障害性検出キットplus（ＬＤＨ）、ロシュ・ライフサイエンス）に供し、細胞障害性を下記の式により求め評価した。
〔式〕
Ａ：各サンプル上清の吸光度
Ｂ：高コントロール（細胞溶解物と培養上清の吸光度）
Ｃ：低コントロール（細胞を培養していない培地の吸光度）
細胞障害性（％）＝{（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）}×１００
結果は、統計処理ソフトを用いて処理し、Ｄｕｎｎｅｔｔ型の多重比較によりコントロール群とそれ以外の群との差をそれぞれ検定した。
【００２１】
２．試験結果
図１に示すとおり、ＷＰＩであるＷＰＩ８８５５、ＷＰＩ８９５、Ｐｒｏｖｏｎ１９０、Ｌａｃｐｒｏｄａｎ  ＤＩ  ９２２４、ＷＰＣであるＷＰＣ９０２がツニカマイシン誘導性細胞障害に対する抑制作用があり、全てのＷＰＩ、ＷＰＣにツニカマイシン誘導性細胞障害に対する抑制作用があることが認められた。その一方で、ＯＶＡには抑制作用は認められなかった。
【００２２】
〔試験例２〕小胞体ストレス軽減効果確認試験（２）
試験例１により確認されたＷＰＩを含む組成物による細胞障害性抑制効果について、ＷＰＩ濃度による影響を確認するための試験を行った。
１．試験方法
細胞実験は、下記の手順により行なった。  
ヒト肝癌由来細胞を５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で９６ウェルプレートに播種し、３７℃で２４時間培養後、無血清培地（Ｎｏｒｍａｌ）、小胞体ストレス誘導剤（ツニカマイシン（４０μｇ／ｍｌ））を混合した無血清培地（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、ツニカマイシン（４０μｇ／ｍｌ）およびＷＰＩ８８５５（０．１２５ｍｇ／ｍｌ（ホエイタンパク質０．１１７５ｍｇ／ｍｌ），０．２５ｍｇ／ｍｌ（ホエイタンパク質０．２３５ｍｇ／ｍｌ）、０．５ｍｇ／ｍｌ（ホエイタンパク質０．４７ｍｇ／ｍｌ）、１．０ｍｇ／ｍｌ（ホエイタンパク質０．９４ｍｇ／ｍｌ））を混合した無血清培地に培地交換した（各群ｎ＝３）。
その後、２４時間培養し、その培養上清を回収し、ＬＤＨアッセイ（細胞障害性検出キットplus（ＬＤＨ）、ロシュ・ライフサイエンス）に供し、細胞障害性を下記の式により求め評価した。
〔式〕
Ａ：各サンプル上清の吸光度
Ｂ：高コントロール（細胞溶解物と培養上清の吸光度）
Ｃ：低コントロール（細胞を培養していない培地の吸光度）
細胞障害性（％）＝{（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）}×１００
結果は、統計処理ソフトを用いて処理し、Ｄｕｎｎｅｔｔ型の多重比較によりコントロール群とそれ以外の群との差をそれぞれ検定した。
【００２３】
２．試験結果
図２に示すとおり、ＷＰＩ８８５５が用量依存的にツニカマイシン誘導性細胞障害に対する抑制作用を有することが認められた。
【００２４】
〔実施例品２〕小胞体ストレス軽減用カプセル剤
表１に示す配合で原材料を混合後、常法により造粒し、カプセルに充填して、小胞体ストレス軽減用カプセル剤を製造した。このカプセル剤にはホエイタンパク質が１８．８重量％含まれていた。
【００２５】
【表１】
2018145142.tif 000002
【００２６】
〔実施例品３〕小胞体ストレス軽減用栄養組成物
１ｋｇのＷＰＩ８８５５を４ｋｇの脱イオン水に添加し、５０℃まで加熱後、６，０００ｒｐｍで３０分間撹拌混合して、ＷＰＩ８８５５を１ｋｇ／５ｋｇ含有する溶液を得た。
この溶液５ｋｇに、表２の原材料の全量を混合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機で１２１℃、２０分間殺菌して、本発明の小胞体ストレス軽減用液状栄養組成物５０ｋｇを製造した。この栄養組成物にはホエイタンパク質が１．９重量％含まれていた。
【００２７】
【表２】
2018145142.tif 000003
【００２８】
〔実施例品４〕小胞体ストレス軽減用飲料
５０ｇのＷＰＩ８８５５を６６０ｇの脱イオン水に添加し、５０℃まで加熱後、９，５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合した。
前記混合物に表３の原材料を添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９５℃、１５秒間殺菌後、密栓し、小胞体ストレス軽減用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。この飲料にはホエイタンパク質が４．７重量％含まれていた。
【００２９】
【表３】
2018145142.tif 000004
【００３０】
〔実施例品５〕イヌ用小胞体ストレス軽減用飼料
２０ｋｇのＷＰＩ８８５５を８０ｋｇの脱イオン水に添加し、５０℃まで加熱後、３，６００ｒｐｍで４０分間撹拌混合して、ＷＰＩ８８５５を２０ｇ／１００ｇ含有する溶液を得た。この溶液２０ｋｇに、表４の原材料の全量を混合し、１２０℃、４分間殺菌して、本発明のイヌ用小胞体ストレス軽減用飼料１００ｋｇを製造した。この飼料にはホエイタンパク質が３．７６重量％含まれていた。
【００３１】
【表４】
2018145142.tif 000005
【産業上の利用可能性】
【００３２】
本発明は、新たな小胞体ストレスを軽減する組成物として、ホエイタンパク質を含む組成物と該組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供する。本発明の組成物等を摂取することにより小胞体ストレスを安全かつ簡易に軽減することが期待できる。
【図１】
2018145142.tif 000006
【図２】
2018145142.tif 000007