(57)【要約】【課題】高効率で細胞を特定の領域に規則的に配置できる細胞パターニング用構造体及びその製造方法を提供する。【解決手段】細胞パターニング用構造体は、平面視して隣接しており、規則的に配置された領域Ａと領域Ｂとを有し、前記領域Ａ及び前記領域Ｂに配置された平面基板と、前記領域Ａに配置され、前記平面基板上に積層された細胞接着層と、前記領域Ｂに配置され、前記平面基板上に積層された生体分子非接着層と、を備え、前記細胞接着層は、金属又は金属酸化物を含む。【選択図】図１Ａ
2018201422.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
平面視して隣接しており、規則的に配置された領域Ａと領域Ｂとを有し、
前記領域Ａ及び前記領域Ｂに配置された平面基板と、
前記領域Ａに配置され、前記平面基板上に積層された細胞接着層と、
前記領域Ｂに配置され、前記平面基板上に積層された生体分子非接着層と、
を備え、
前記細胞接着層は、金属又は金属酸化物を含む細胞パターニング用構造体。
【請求項２】
前記細胞接着層を２層以上備える請求項１に記載の細胞パターニング用構造体。
【請求項３】
前記細胞接着層のうち、最上層が末端にカルボキシ基又はアミノ基を有するアルカンチオール化合物からなる自己組織化単分子層である請求項２に記載の細胞パターニング用構造体。
【請求項４】
前記生体分子非接着層がホスホリルコリン基を有するポリマーからなる請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞パターニング用構造体。
【請求項５】
前記金属又は金属酸化物は、金、白金、クロム、チタン、及び酸化チタンからなる群から選ばれる少なくとも１種である請求項１〜４のいずれか一項に記載の細胞パターニング用構造体。
【請求項６】
前記平面基板がガラス、シリコン、及びシリコン酸化物からなる群から選ばれる少なくとも１種である請求項１〜５のいずれか一項に記載の細胞パターニング用構造体。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の細胞パターニング用構造体の製造方法であって、
前記領域Ａにおいて、前記平面基板上に前記細胞接着層及び犠牲層をこの順に積層する工程１と、
前記領域Ａ及び前記領域Ｂにおいて、前記犠牲層上及び前記平面基板上に前記生体分子非接着層を積層する工程２と、
エッチング液を用いて、前記犠牲層を選択的に溶解し、除去する工程３と、
をこの順に備える細胞パターニング構造体の製造方法。
【請求項８】
前記犠牲層がアルミニウム、鉄、ニッケル、亜鉛、及びスズからなる群から選ばれる少なくとも１種からなる請求項７に記載の細胞パターニング構造体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞パターニング用構造体及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞のパターニング技術は、人工神経回路の形成や細胞間の相互作用の検討のために必要かつ重要な技術であり、これまで様々な研究がなされてきた。
【０００３】
細胞のパターニング方法としては、例えば、凹凸を有する構造体を用いる方法が従来から多く用いられてきた（例えば、非特許文献１参照）。この方法では、凹凸表面に対し、細胞が広い表面積で接着できるため、良好に成長することを利用している。数マイクロメートルの幅及び深さの凹凸のパターンを作製し、凹部に細胞を接着することで細胞のパターニングを行うものである。
しかしながら、凹凸を有する構造体を用いる方法では、細胞のパターニングは容易に行うことができるが、１）細胞が凹部を超えて成長することがある、２）凹凸のパターンを形成するために、基板のエッチング等の煩雑な工程が必要である、３）凹部の底面に細胞の生育に必要な栄養素が拡散しにくく、成長にばらつきができる、という課題があった。
【０００４】
これらの課題は、平面基板を用いた細胞のパターニング方法により克服できる。平面基板を用いて、細胞をパターニングするためには、細胞が接着する表面と、細胞が接着しない表面とを同一基板上に形成する必要がある。
【０００５】
細胞が接着しない表面を構成する材料としては、これまで、例えば、フッ素系の撥水性材料やポリエチレングリコールのポリマーブラシ等が用いられてきた。一方、近年、細胞が接着しない表面を構成する材料として、２−ｍｅｔｈａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙｅｔｈｙｌ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ（ＭＰＣ）ポリマーが注目されている（例えば、非特許文献２参照）。ＭＰＣポリマーは、リン脂質分子をベースにした高分子であり、紫外線によって分解される。そのため、例えば、ガラス、プラスチック、金属、シリコン等からなる基板上に容易にパターニングすることができる。さらに、ＭＰＣポリマーは高い親水性及び生体適合性を有し、タンパク質や細胞の付着を防止することができる。
また、ＭＰＣはホスホリルコリン基を有するモノマーであり、重合させて、基板上をコーティングすることで、基板表面を容易に改質することができる優れた材料である。
【０００６】
一方、細胞が接着する表面を構成する材料としては、例えば、細胞接着因子等のタンパク質が挙げられる。また、ポリリジン等の正の電荷を有するポリマーも細胞の接着を促進する材料として広く用いられている。
【０００７】
基板表面の特定の領域に細胞接着因子等のタンパク質を修飾する方法としては、例えば、ガラスやシリコンからなる平面基板上にシランカップリング剤を用いて、自己組織化単分子層（Ｓｅｌｆ−Ａｓｓｅｍｂｌｅｄ  Ｍｏｎｏｌａｙｅｒ：ＳＡＭ）を作製する方法が挙げられる。このとき、シランカップリング剤の分子構造を適宜選択することで、ＳＡＭを介して、平面基板上の特定の領域に細胞接着因子等のタンパク質、ペプチドやアミノ酸を修飾することができる。また、紫外線により分解されるシランカップリング剤を使用することで、不要な領域に紫外線を照射して、細胞が接着する表面と、細胞が接着しない表面とを同一基板上に形成することができる。
【０００８】
また、平面基板を用いた細胞のパターニング方法として、上記の他には、例えば、ガラスやシリコンからなる平面基板上において、特定の領域に金属又は金属酸化物からなる層を形成し、平面基板の構成材料であるガラスやシリコン等と金属又は金属酸化物との細胞接着性の違いを利用する方法等が挙げられる。中でも、金は、アルカンチオール化合物との共有結合によりＳＡＭを作製できることが知られている。そのため、このＳＡＭを介して、金属又は金属酸化物からなる層上に細胞接着因子等のタンパク質、ペプチドやアミノ酸を化学的に修飾することができる。また、このアルカンチオール化合物との共有結合によるＳＡＭの形成は、金以外にも、白金、銀、銅、半導体や金属酸化物を用いても行うことができる。
一方、金属又は金属酸化物の中でも、チタン及びチタン酸化物は親水性が高く、さらにチタン酸化物においては生体適合性が高いことが知られている。そのため、細胞パターニングに用いられる平面基板上に積層される材料として適した金属及び金属酸化物である。
これらの金属又は金属酸化物からなる層は、従来のフォトリソグラフィー技術を用いて、形成することができる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Li W et al., “Large-scale Topographical Screen for Investigation of Physical Neural-Guidance Cues”, nature, SCIENTIFIC REPORTS 5, Article number: 8644, 2015, doi:10.1038/srep08644.
【非特許文献２】Iwasaki Y et al., “Cell membrane-inspired phospholipid polymers for developing medical devices with excellent biointerfaces”, Sci. Technol. Adv. Mater., vol.13, Issue 6, 14pages, 2012, doi:10.1088/1468-6996/13/6/064101.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかしながら、上述の紫外線により分解されるシランカップリング剤を用いてＳＡＭを作製し、細胞をパターニングするための平面基板を製造する方法では、ＳＡＭが可視光等で認識することができないため、細胞がパターニングされていることを評価することが困難であった。
また、上述のガラスやシリコンからなる平面基板上において、特定の領域に金属又は金属酸化物からなる層を形成し、細胞をパターニングするための平面基板を製造する方法では、ガラスやシリコンは、金属又は金属酸化物と比較して細胞接着性は劣るが、細胞接着性を有する。そのため、金属又は金属酸化物からなる層上にのみ細胞を播種しても、培養時間の経過とともに、ガラスやシリコンからなる平面基板上にも細胞が接着してしまう場合があった。よって、播種する細胞密度の最適化を行う必要があり、細胞パターニングの制御が困難であった。
【００１１】
上記事情に鑑み、本発明は、高効率で細胞を特定の領域に規則的に配置できる細胞パターニング用構造体及びその製造方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
すなわち、本発明は、以下の態様を含む。
本発明の第１態様に係る細胞パターニング用構造体は、平面視して隣接しており、規則的に配置された領域Ａと領域Ｂとを有し、前記領域Ａ及び前記領域Ｂに配置された平面基板と、前記領域Ａに配置され、前記平面基板上に積層された細胞接着層と、前記領域Ｂに配置され、前記平面基板上に積層された生体分子非接着層と、を備え、前記細胞接着層は、金属又は金属酸化物を含む。
上記第１態様に係る細胞パターニング用構造体において、前記細胞接着層を２層以上備えてもよい。
前記細胞接着層のうち、最上層が末端にカルボキシ基又はアミノ基を有するアルカンチオール化合物からなる自己組織化単分子層であってもよい。
前記生体分子非接着層がホスホリルコリン基を有するポリマーからなってもよい。
前記金属又は金属酸化物は、金、白金、クロム、チタン、及び酸化チタンからなる群から選ばれる少なくとも１種であってもよい。
前記平面基板がガラス、シリコン、及びシリコン酸化物からなる群から選ばれるからなる群から選ばれる少なくとも１種であってもよい。
【００１３】
本発明の第２態様に係る細胞パターニング用構造体の製造方法は、上記第１態様に係る細胞パターニング用構造体の製造方法であって、前記領域Ａにおいて、前記平面基板上に前記細胞接着層及び犠牲層をこの順に積層する工程１と、前記領域Ａ及び前記領域Ｂにおいて、前記犠牲層上及び前記平面基板上に前記生体分子非接着層を積層する工程２と、エッチング液を用いて、前記犠牲層を選択的に溶解し、除去する工程３と、をこの順に備える方法である。
前記犠牲層がアルミニウム、鉄、ニッケル、亜鉛、及びスズからなる群から選ばれる少なくとも１種からなってもよい。
【発明の効果】
【００１４】
上記態様によれば、高効率で細胞を特定の領域に規則的に配置できる細胞パターニング用構造体及びその製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１Ａ】本発明の第１実施形態に係る細胞パターニング用構造体の拡大平面図及び拡大正面図である。
【図１Ｂ】本発明の第２実施形態に係る細胞パターニング用構造体の拡大平面図及び拡大正面図である。
【図２】本発明の第３実施形態に係る細胞パターニング用構造体の拡大正面図である。
【図３】本発明の第１実施形態に係る細胞パターニング用構造体の製造方法を模式的に示す工程図である。
【図４】本発明の第２実施形態に係る細胞パターニング用構造体の製造方法を模式的に示す工程図である。
【図５Ａ】（上）試験例１における製造例１で製造された細胞パターニング用構造体１を用いて、７日間培養した神経細胞の走査型電子顕微鏡（Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ；ＳＥＭ）像である。（下）上のＳＥＭ像を拡大した画像である。
【図５Ｂ】（上）試験例１における製造例２で製造された細胞パターニング用構造体２を用いて、７日間培養した神経細胞のＳＥＭ像である。（下）上のＳＥＭ像を拡大した画像である。
【図６】製造例３における細胞パターニング用構造体の拡大正面図である。
【図７Ａ】試験例２における製造例１で製造された細胞パターニング用構造体１を用いて、７日間培養した神経細胞の拡大ＳＥＭ像である。
【図７Ｂ】試験例２における製造例３で製造された細胞パターニング用構造体３を用いて、７日間培養した神経細胞の拡大ＳＥＭ像である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
≪細胞パターニング用構造体≫
本発明の一実施形態に係る細胞パターニング用構造体は、平面視して隣接しており、規則的に配置された領域Ａと領域Ｂとを有し、前記領域Ａ及び前記領域Ｂに配置された平面基板と、前記領域Ａに配置され、前記平面基板上に積層された細胞接着層と、前記領域Ｂに配置され、前記平面基板上に積層された生体分子非接着層と、を備え、前記細胞接着層は、金属又は金属酸化物からなる。
【００１７】
本実施形態の細胞パターニング用構造体によれば、細胞を特定の領域に規則的に配置することができる。
【００１８】
＜細胞パターニング用構造体の構造＞
本実施形態の細胞パターニング用構造体を構造の違いごとに、以下、図面を参照しながら説明する。なお、以下の説明で用いる図は、本発明の特徴を分かり易くするために、便宜上、要部となる部分を拡大して示している場合があり、各構成要素の寸法比率等が実際と同じであるとは限らない。
【００１９】
図１Ａは、本発明の第１実施形態に係る細胞パターニング用構造体の拡大平面図及び拡大正面図である。
図１Ａに示すように、本実施形態の細胞パターニング用構造体１０は、領域Ａ及び領域Ｂを有する。図１Ａの拡大平面図に示すように、領域Ａ及び領域Ｂは、平面視して隣接しており、規則的に配置されている。
また、本実施形態の細胞パターニング用構造体１０において、平面基板３上に、細胞接着層１と生体分子非接着層２とがそれぞれ積層されている。細胞接着層１は、領域Ａに配置されており、生体分子非接着層２は領域Ｂに配置されている。さらに、細胞接着層１は金属又は金属酸化物を含む。
よって、本実施形態の細胞パターニング用構造体１０に播種された細胞は、領域Ａに配置された細胞接着層１上にのみ接着する。このとき、領域Ａは平面視して縦方向に長く配置されており、さらに横方向に領域Ｂを挟みながら等間隔で配置されている。そのため、本実施形態の細胞パターニング用構造体１０を用いることで、細胞を領域Ａの配置に沿って規則的に配置することができる。
【００２０】
図１Ｂは、本発明の第２実施形態に係る細胞パターニング用構造体の拡大平面図及び拡大正面図である。なお、図１Ｂ以降の図において、既に説明済みの図に示すものと同じ構成要素には、その説明済みの図の場合と同じ符号を付し、その詳細な説明は省略する。
【００２１】
ここに示す細胞パターニング用構造体２０は、平面視した際の領域Ａ、すなわち平面基板３上に積層された細胞接着層１の平面形状がドット状である点以外は、図１Ａに示す細胞パターニング用構造体１０と同じものである。
すなわち、本実施形態の細胞パターニング用構造体２０は、領域Ａ及び領域Ｂを有する。図１Ｂの拡大平面図に示すように、領域Ａ及び領域Ｂは、平面視して隣接しており、規則的に配置されている。
また、本実施形態の細胞パターニング用構造体２０において、平面基板３上に、細胞接着層１と生体分子非接着層２とがそれぞれ積層されている。細胞接着層１は、領域Ａに配置されており、生体分子非接着層２は領域Ｂに配置されている。さらに、細胞接着層１は金属又は金属酸化物を含む。
よって、本実施形態の細胞パターニング用構造体２０に播種された細胞は、領域Ａに配置された細胞接着層１上にのみ接着する。このとき、領域Ａは平面視して円の形状で配置されており、さらに、平面基板３上に等間隔で複数配置されている。そのため、本実施形態の細胞パターニング用構造体２０を用いることで、細胞を領域Ａの配置に沿って規則的に配置することができる。
【００２２】
図２は、本発明の第３実施形態に係る細胞パターニング用構造体の拡大正面図である。
ここに示す細胞パターニング用構造体３０は、細胞接着層を３層備える点以外は、図１Ａに示す細胞パターニング用構造体１０と同じものである。
すなわち、本実施形態の細胞パターニング用構造体３０は、領域Ａ及び領域Ｂを有する。なお、領域Ａ及び領域Ｂは、平面視して隣接しており、規則的に配置されている。
また、本実施形態の細胞パターニング用構造体３０において、平面基板３上に、細胞接着層１と生体分子非接着層２とがそれぞれ積層されている。細胞接着層１は、領域Ａに配置されており、生体分子非接着層２は領域Ｂに配置されている。より具体的には、領域Ａにおいて、平面基板３上に、第１の細胞接着層１ａ、第２の細胞接着層１ｂ、及び第３の細胞接着層１ｃがこの順に積層されている。さらに、細胞接着層１は金属又は金属酸化物を含む。すなわち、第１の細胞接着層１ａ、第２の細胞接着層１ｂ、及び第３の細胞接着層１ｃのうち少なくともいずれか１層は金属又は金属酸化物からなる層である。
よって、本実施形態の細胞パターニング用構造体３０に播種された細胞は、領域Ａに配置された第３の細胞接着層１ｃ上にのみ接着する。そのため、本実施形態の細胞パターニング用構造体３０を用いることで、細胞を領域Ａの配置に沿って規則的に配置することができる。このとき、第３の細胞接着層１ｃが、後述する末端にカルボキシ基又はアミノ基を有するアルカンチオール化合物からなる自己組織化単分子層である場合、本実施形態のより優れた細胞接着性を有する。
【００２３】
本実施形態の細胞パターニング用構造体は、図１Ａ、図１Ｂ、及び図２に示すものに限定されず、本発明の効果を損なわない範囲内において、図１Ａ、図１Ｂ、及び図２に示すものの一部の構成が変更又は削除されたものや、これまでに説明したものにさらに他の構成が追加されたものであってもよい。
例えば、図１Ａ及び図１Ｂに示す細胞パターニング用構造体において、細胞接着層を２層以上備えていてもよい。
また、例えば、図２に示す細胞パターニング用構造体において、平面視した場合の領域Ａの形状、すなわち平面基板３上に積層された細胞接着層１の平面形状は、図１Ａに示すようにライン状であってもよく、図１Ｂに示すようにドット状であってもよい。
なお、平面視した場合の領域Ａの形状、すなわち平面基板３上に積層された細胞接着層１の平面形状は、ライン状、ドット状（円形状）に限定されず、例えば、多角形状（例えば、三角形状、四角形状、五角形上、六角形状、七角形状、八角形状、十二角形状等）、略円形状、楕円形状、略楕円形状、半円形状、扇形状等であってもよい。
【００２４】
＜細胞パターニング用構造体の各構成＞
以下、本実施形態の細胞パターニング用構造体の各構成について、詳細に説明する。
【００２５】
［細胞接着層］
細胞接着層は、金属又は金属酸化物を含む。
金属又は金属酸化物としては、例えば、金、白金、銀、銅、チタン、タングステン、クロム、酸化チタン等が挙げられ、これらに限定されない。細胞接着層は、これらの金属又は金属酸化物のうち１種類のみから構成されていてもよく、２種類以上の混合物により構成されていてもよい。
中でも、細胞接着層に使用される金属又は金属酸化物としては、金、白金、クロム、チタン、及び酸化チタンからなる群から選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。
【００２６】
細胞接着層は、１層（単層）からなるものであってもよく、２層以上の複数層からなるものであってもよい。また、細胞接着層が１層（単層）からなる場合、金属又は金属酸化物のみからなる層であってもよく、金属又は金属酸化物以外のその他構成成分を含む層であってもよい。また、細胞接着層が複数層からなる場合、これら複数層は、互いに同一の材料からなってもよく、異なる材料からなってもよく、これら複数層の組み合わせは特に限定されない。
中でも、細胞接着層は、２層以上の複数層からなるものであることが好ましい。また、細胞接着層が複数層からなる場合、基板への密着性を高められる点、及び、細胞接着層の最上層にのみ異なる特性を付与できる点から、互いに異なる材料からなることが好ましい。
【００２７】
また、細胞接着層が２層以上の複数層からなる場合、最上層が末端にカルボキシ基又はアミノ基を有するアルカンチオール化合物からなる自己組織化単分子層であることが好ましい。
末端にカルボキシ基又はアミノ基を有するアルカンチオール化合物は、一般式Ｒ（ＣＨ２）ｎＳＨで表される。前記Ｒはカルボキシ基又はアミノ基である。また、ｎは１以上の整数であればよく、長いほど疎水性が高くなることが好ましい。ｎとして具体的には、例えば、１以上２０以下であればよく、２以上１５以下であればよく、３以上１０以下であればよい。
この化合物は、チオール基を有するため、水系溶媒中で金属と強く反応して、強い金属−硫黄の共有結合を形成することができる。また、この化合物は炭化水素鎖を有するため、疎水性結合を通して同時に互いに会合することによって、炭化水素鎖の稠密な単層を形成することができる。これらの共有結合及び疎水性結合によって、自己組織化単分子層を形成することができる。
さらに、この化合物は、末端にカルボキシ基又はアミノ基を有するため、細胞接着因子等のタンパク質、ペプチド、又はアミノ酸を結合することができる。よって、本実施形態の細胞パターニング用構造体は前記化合物からなる自己組織化単分子層を備えることで、細胞接着因子等のタンパク質、ペプチド、又はアミノ酸を結合させるができ、より優れた細胞接着性を発揮することができる。前記細胞接着因子としては、例えば、コラーゲン、非コラーゲン性糖タンパク質、プロテオグリカン等の細胞外マトリックス（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍａｔｒｉｘ；ＥＣＭ）等が挙げられ、これらに限定されない。
【００２８】
また、細胞接着因子を結合させない場合においても、前記化合物が有するカルボキシ基又はアミノ基と、細胞表面に存在する膜タンパク質等とが相互作用する場合がある。よって、本実施形態の細胞パターニング用構造体は前記化合物からなる自己組織化単分子層を備えることで、より優れた細胞接着性を発揮することができる。
また、前記化合物からなる自己組織化単分子層を介して、本実施形態の細胞パターニング用構造体の細胞接着層上に細胞接着因子以外の任意の分子を結合させてもよい。これにより、本実施形態の細胞パターニング用構造体を、前記任意の分子と細胞との親和性を評価するために使用することもできる。
【００２９】
末端にカルボキシ基を有するアルカンチオール化合物として具体的には、例えば、チオグリコール酸、３−メルカプトプロピオン酸、４−メルカプトブタン酸、５−メルカプトペンタン酸、６−メルカプトヘキサン酸、７−メルカプトヘプタン酸、８−メルカプトオクタン酸、９−メルカプトノナン酸、１０−メルカプトデカン酸、１１−メルカプトウンデカン酸、１２−メルカプトドデカン酸等が挙げられ、これらに限定されない。
末端にアミノ基を有するアルカンチオール化合物として具体的には、例えば、２−アミノエタンチオール、３−アミノ−１−プロパンチオール、４−アミノ−１−ブタンチオール、５−アミノ−１−ペンタンチオール、６−アミノ−１−ヘキサンチオール、７−アミノ−１−ヘプタンチオール、８−アミノ−１−オクタンチオール、９−アミノ−１−ノナンチオール、１０−アミノ−１−デカンチオール、１１−アミノ−１−ウンデカンチオール、１２−アミノ−１−ドデカンチオール等が挙げられ、これらに限定されない。
自己組織化単分子層は、これらの末端にカルボキシ基又はアミノ基を有するアルカンチオール化合物のうち１種類のみから構成されていてもよく、２種類以上の混合物により構成されていてもよい。
【００３０】
細胞接着層の厚さは、特別な限定はないが、例えば、１ｎｍ以上１００μｍ以下であればよい。
ここで、「細胞接着層の厚さ」とは、細胞接着層全体の厚さを意味し、例えば、複数層からなる細胞接着層の厚さとは、細胞接着層を構成するすべての層の合計の厚さを意味する。
【００３１】
［生体分子非接着層］
生体分子非接着層を構成する材料としては、後述する製造方法において用いられるエッチング液に対する耐性を有するものであることが好ましい。生体分子非接着層を構成する材料としてより具体的には、例えば、ホスホリルコリン基を有するポリマー等が挙げられ、これらに限定されない。
ホスホリルコリン基は、生体親和性を有し、生体分子の非特異的な接着を抑制することができる。
なお、本明細書における「生体分子」としては、例えば、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、人工核酸（例えば、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ）、ＢＮＡ（Ｂｒｉｄｇｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ））等の核酸（天然由来であってもよく、化学合成したものであってもよい。）；リガンド、サイトカイン、ホルモン等のペプチド；受容体、酵素、抗原、抗体等のタンパク質；細胞、ウイルス、細菌、真菌等が挙げられる。
【００３２】
前記ホスホリルコリン基を有するポリマーを製造可能なモノマーとしては、例えば、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（２−ｍｅｔｈａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙｅｔｈｙｌ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ；ＭＰＣ）、６−メタクリロイルオキシヘキシルホスホリルコリン等の（メタ）アクリロイルオキシアルキルホスホリルコリン；２−メタクリロイルオキシエトキシエチルホスホリルコリンおよび１０−メタクリロイルオキシエトキシノニルホスホリルコリン等の（メタ）アクリロイルオキシアルコキシアルキルホスホリルコリン；アリルホスホリルコリン、ブテニルホスホリルコリン、ヘキセニルホスホリルコリン、オクテニルホスホリルコリン、デセニルホスホリルコリン等のアルケニルホスホリルコリン等が挙げられ、これらに限定されない。
生体分子非接着層は、これらのモノマーのうち１種類のみを重合させて得られるポリマーから構成されていてもよく、２種類以上のモノマーを共重合させて得られるポリマーにより構成されていてもよい。
【００３３】
生体分子非接着層は、１層（単層）からなるものであってもよく、２層以上の複数層からなるものであってもよい。生体分子非接着層が複数層からなる場合、これら複数層は、互いに同一の材料からなってもよく、異なる材料からなってもよく、これら複数層の組み合わせは特に限定されない。
【００３４】
生体分子非接着層の厚さは、特別な限定はないが、例えば１ｎｍ以上１００μｍ以下であればよい。
ここで、「生体分子非接着層の厚さ」とは、生体分子非接着層全体の厚さを意味し、例えば、複数層からなる生体分子非接着層の厚さとは、生体分子非接着層を構成するすべての層の合計の厚さを意味する。
【００３５】
［平面基板］
平面基板としては、一般に半導体の製造工程に用いられる材料や、プラスチック等を使用することができる。平面基板を構成する材料として具体的には、例えば、ガラス、シリコン、シリコン酸化物、アルミナ等が挙げられ、これらに限定されない。平面基板は、これらの材料のうち１種類のみから構成されていてもよく、２種類以上の混合物により構成されていてもよい。
中でも、本実施形態の細胞パターニング用構造体に用いられる平面基板を構成する材料としては、ガラス、シリコン、及びシリコン酸化物からなる群から選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。
なお、本明細書において、「シリコン」とは珪素を意味し、「シリコン酸化物」とは一酸化珪素、二酸化珪素及び珪酸塩等の珪素の酸化物を意味する。
【００３６】
平面基板は、１層（単層）からなるものであってもよく、２層以上の複数層からなるものであってもよい。平面基板が複数層からなる場合、これら複数層は、互いに同一でも異なっていてもよく、これら複数層の組み合わせは特に限定されない。
【００３７】
平面基板の厚さは、特別な限定はないが、例えば、１０μｍ以上１０００μｍ以下であればよい。
ここで、「平面基板の厚さ」とは、平面基板全体の厚さを意味し、例えば、複数層からなる平面基板の厚さとは、平面基板を構成するすべての層の合計の厚さを意味する。
【００３８】
＜使用方法＞
本実施形態の細胞パターニング用構造体は、例えば、細胞アレイ、細胞チップ等として使用することができる。
また、本実施形態の細胞パターニング用構造体は細胞接着層が金属又は金属酸化物を含むため、該金属又は金属酸化物からなる層の少なくとも一部を電極とすることができる。そのため、本実施形態の細胞パターニング用構造体に電圧を印加することで、細胞の電気的な応答を観察することができる。また、本実施形態の細胞パターニング用構造体を細胞センサとして使用することができる。
【００３９】
≪細胞パターニング用構造体の製造方法≫
＜第１実施形態＞
本発明の第１実施形態に係る細胞パターニング用構造体の製造方法は、上記第１態様に係る細胞パターニング用構造体の製造方法であって、前記領域Ａにおいて、前記平面基板上に前記細胞接着層及び犠牲層をこの順に積層する工程１と、前記領域Ａ及び前記領域Ｂにおいて、前記犠牲層上及び前記平面基板上に前記生体分子非接着層を積層する工程２と、エッチング液を用いて、前記犠牲層を選択的に溶解し、除去する工程３と、をこの順に備える方法である。
【００４０】
本実施形態の製造方法によれば、細胞を特定の領域に規則的に配置可能な細胞パターニング用構造体を簡便に製造することができる。
図３は、本発明の第１実施形態に細胞パターニング用構造体の製造方法を模式的に示す工程図である。本実施形態の細胞パターニング用構造体は、上述の各構成を対応する位置関係となるように、公知の方法を用いて、順次積層することで製造できる。本実施形態の細胞パターニング用構造体の製造方法について、具体的には、図３を参照しながら、以下に詳細を説明する。
【００４１】
［工程１］
まず、領域Ｂに配置された感光性組成物層４を備える平面基板上に細胞接着層を積層する。細胞接着層を積層する方法としては、細胞接着層が金属又は金属酸化物からなる層である場合、例えば、スパッタリング法、蒸着法、化学蒸着（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｖａｐｏｒ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ；ＣＶＤ）法等が挙げられ、これらに限定されない。必要に応じて、１層（単層）の細胞接着層を積層してもよく、又は、図３に示すように２層以上の複数層の細胞接着層（第１の細胞接着層１ａ及び第２の細胞接着層１ｂ）を積層してもよい。
【００４２】
（犠牲層）
次いで、前記細胞接着層上に犠牲層を積層する。
犠牲層を構成する材料としては、後述するエッチング液により溶解する金属又は金属酸化物であることが好ましい。
犠牲層を構成する材料として具体的には、例えば、アルミニウム、鉄、ニッケル、亜鉛、スズ等が挙げられ、これらに限定されない。犠牲層は、これらの材料のうち１種類のみから構成されていてもよく、２種類以上の混合物により構成されていてもよい。
【００４３】
犠牲層は、１層（単層）からなるものであってもよく、２層以上の複数層からなるものであってもよい。犠牲層が複数層からなる場合、これら複数層は、互いに同一の材料からなってもよく、異なる材料からなってもよく、これら複数層の組み合わせは特に限定されない。
【００４４】
犠牲層の厚さは、特別な限定はないが、例えば、１ｎｍ以上１０μｍ以下であればよい。
ここで、「犠牲層の厚さ」とは、犠牲層全体の厚さを意味し、例えば、複数層からなる犠牲層厚さとは、犠牲層を構成するすべての層の合計の厚さを意味する。
【００４５】
犠牲層の形成方法としては、上述の細胞接着層が金属又は金属酸化物からなる層である場合において例示された細胞接着層の形成方法と同様のものが挙げられる。
【００４６】
犠牲層を形成後、現像液を用いて、感光性組成物層４を除去することで、領域Ａにおいてのみ、平面基板３上に細胞接着層１及び犠牲層５がこの順に積層された構造体を得ることができる。
現像液としては、感光性組成物の種類に応じて、公知のものを適宜選択して用いればよい。
【００４７】
（フォトリソグラフィー）
なお、工程１の前に、公知のフォトリソグラフィー法を用いて、予め、平面基板上に感光性組成物層４を形成すればよい。
感光性樹脂組成物層４を構成する感光性樹脂組成物としては、例えば、樹脂成分、カチオン重合開始剤、及び溶剤を含有する感光性樹脂組成物等が挙げられる。感光性樹脂組成物は、ポジ型、ネガ型のいずれであってもよい。
【００４８】
感光性樹脂組成物は、樹脂成分、カチオン重合開始剤、及び溶剤の他に、従来から感光性樹脂組成物に使用されている種々の添加剤を含んでいてもよい。このような添加剤としては、付加的樹脂、増感剤、可塑剤、安定剤、着色剤、カップリング剤、レベリング剤等が挙げられる。
【００４９】
感光性樹脂組成物は、例えば、上記各成分を３本ロールミル、ボールミル、サンドミル等の撹拌機で混合（分散及び混練）し、必要に応じて５μｍメンブランフィルタ等のフィルタで濾過して調製することができる。
【００５０】
平面基板上に感光性組成物層４を形成する方法としては、例えば、平面基板上に、感光性樹脂組成物を塗布して感光性組成物層４を形成する塗布工程と、基板上の感光性組成物層４を露光して硬化させる露光工程と、を含む方法が挙げられる。
【００５１】
塗布工程において、平面基板上に、感光性樹脂組成物を塗布する方法としては、特に限定されず、所定量の感光性樹脂組成物を基板上に滴下する方法や、ロールコータ、リバースコータ、バーコータ等の接触転写型塗布装置を用いる方法や、スピンナー（回転式塗布装置）、カーテンフローコータ等の非接触型塗布装置を用いる方法が挙げられる。
【００５２】
感光性組成物層を形成した後は、感光性組成物層を備える基板を減圧条件下におき、感光性組成物層を脱気してもよい。
【００５３】
露光工程において、感光性組成物層を露光する方法は、感光性組成物層を良好に硬化できればよく、特に限定されない。露光には、例えば、高圧水銀灯、超高圧水銀灯、キセノンランプ、カーボンアーク灯等の紫外線を発する光源を用いればよい。感光性組成物層を露光する際の露光量は、感光性樹脂組成物の組成や、感光性組成物層の厚さ等を考慮して適宜定められる。典型的には、感光性組成物層を露光する際の露光量は、１０〜１０００００ｍＪ／ｃｍ２が好ましく、１００〜５００００ｍＪ／ｃｍ２がより好ましい。
【００５４】
感光性組成物層を露光する方法は特に限定されないが、最初に大気中で感光性組成物層を露光して部分的に感光性組成物層の硬化を進行させてもよい。これにより、露光工程において、感光性樹脂組成物が平面基板上からはみ出すことを防ぎ、後に、感光性組成物層を水中で露光することが可能となる。大気中での露光を行わずに、感光性組成物層を水中で露光すると、感光性組成物層が水に溶解する場合がある。大気中で感光性組成物層を露光した後に、水中で感光性組成物層を露光すると、酸素によるラジカル重合阻害を低減することが出来、良好な硬化層を得ることができる。
【００５５】
また、露光工程は、真空中での感光性組成物層の露光を含んでいてもよい。真空中での感光性組成物層の露光を行うと、感光性樹脂組成物の感光性組成物層を基板に密着させた状態で硬化させることができる。
【００５６】
また、露光されて硬化した感光性組成物層は、プラズマ処理してもよい。硬化した感光性組成物層に対して、プラズマ処理することにより、細胞が接着しやすい構造体を形成することができる。プラズマ処理に用いるプラズマは特に限定されないが、例えばＯ２プラズマ、Ｎ２プラズマ、ＣＦ４プラズマ等が挙げられる。
【００５７】
さらに、感光性組成物層が形成された平面基板は、リンス液によるリンスを行ってもよい。平面基板がリンス液によりリンスされることで、未反応の光重合性モノマーや光重合開始剤のような細胞毒性の原因となりうる化合物を基材の表面から除去することができる。リンス液としては、例えばプロピレングリコール−１−メチルエーテルアセテート（ＰＧＭＥＡ）、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、アセトン等の有機溶剤、水等が挙げられる。
【００５８】
［工程２］
次いで、工程１の後の構造体を用いて、領域Ａ及び領域Ｂの両方、すなわち、全面において、犠牲層上及び平面基板上に、生体分子非接着物質を塗布する。生体分子非接着物質としては、上述の細胞パターニング用構造体の生体分子非接着層を構成する材料として例示されたものと同様のものが挙げられる。
また、生体分子非接着物質の塗布方法としては、上述のフォトリソグラフィーにおいて平面基板上に、感光性樹脂組成物を塗布する方法として例示されたものと同様のものが挙げられる。
【００５９】
［工程３］
次いで、工程２の後の構造体をエッチング液に接触させることで、犠牲層を選択的に溶解させて除去する。
エッチング液としては、細胞接着層を構成する材料を溶解せず、犠牲層のみを溶解するものであることが好ましい。エッチング液として具体的には、例えば、水酸化ナトリウム又はテトラメチルアンモニウムヒドロキシド（ＴＭＡＨ）を主成分とする溶液等が挙げられ、これらに限定されない。ＴＭＡＨを主成分とするエッチング液の市販品としては、例えば、ＮＭＤ−３（２．３８％含有、東京応化工業社製）等が挙げられる。
【００６０】
エッチング液を用いて、犠牲層のみを選択的に溶解させて除去させることで、領域Ａにおいて平面基板上に細胞接着層が積層され、また、領域Ｂにおいて平面基板上に生体分子非接着層が積層された細胞パターニング用構造体を得ることができる。
【００６１】
＜第２実施形態＞
本実施形態の第２実施形態に係る細胞パターニング用構造体の製造方法は、前記工程３の後に、前記細胞接着層のうち、最上層に末端にカルボキシ基又はアミノ基を有するアルカンチオール化合物からなる自己組織化単分子層を積層させる工程４を備えていてもよい。
【００６２】
本実施形態の製造方法によれば、細胞接着層のうち、最上層に末端にカルボキシ基又はアミノ基を有するアルカンチオール化合物からなる自己組織化単分子層を備える細胞パターニング用構造体を得ることができる。前記自己組織化単分子層は、細胞と接触する側にの末端にカルボキシ基又はアミノ基を有するため、細胞接着因子等のタンパク質、ペプチド、又はアミノ酸を結合することができる。よって、本実施形態の製造方法により得られた細胞パターニング用構造体は前記化合物からなる自己組織化単分子層を備えることで、細胞接着因子等のタンパク質、ペプチド、又はアミノ酸を結合させるができ、より優れた細胞接着性を発揮することができる。
また、細胞接着因子を結合させない場合においても、前記化合物が有するカルボキシ基又はアミノ基と、細胞表面に存在する膜タンパク質等とが相互作用する場合がある。よって、本実施形態の製造方法により得られた細胞パターニング用構造体は前記化合物からなる自己組織化単分子層を備えることで、より優れた細胞接着性を発揮することができる。
また、前記化合物からなる自己組織化単分子層を介して、本実施形態の製造方法により得られた細胞パターニング用構造体の細胞接着層上に細胞接着因子以外の任意の分子を結合させることもできる。これにより、本実施形態の製造方法により得られた細胞パターニング用構造体を、前記任意の分子と細胞との親和性を評価するために使用することもできる。
【００６３】
図４は、本発明の第２実施形態に細胞パターニング用構造体の製造方法を模式的に示す工程図である。図４に示す工程１〜３は、図３に示す、上述の第１実施形態に係る細胞パターニング用構造体の製造方法と同様の工程である。続く、工程４について、図４を参照しながら、以下に詳細を説明する。
【００６４】
［工程４］
本実施形態の製造方法で得られる細胞パターニング用構造体が２層以上の複数層の細胞接着層を備える場合、金属又は金属酸化物からなる細胞接着層上に、末端にカルボキシ基又はアミノ基を有するアルカンチオール化合物からなる自己組織化単分子層を形成させればよい。
【００６５】
自己組織化単分子層の形成方法としては、例えば、前記化合物を含む溶液を、噴霧、ペインティング、浸漬、ロールコーティング、フローコーティング（流し塗り）等の公知の被覆技術を用いて、金属又は金属酸化物からなる細胞接着層上に塗布する方法等が挙げられる。中でも、自己組織化単分子層の形成方法としては、機械的撹乱なく自己組織化単分子層を形成できる点から、前記化合物を含む溶液を、浸漬により金属又は金属酸化物からなる細胞接着層上に塗布する方法が好ましい。
【００６６】
また、前記化合物を含む溶液を、浸漬により金属又は金属酸化物からなる細胞接着層上に塗布する場合、溶液中の前記化合物の濃度は、稠密な単層が短時間の浸漬によって金属又は金属酸化物からなる細胞接着層上に形成するのに十分な濃度であればよい。
溶液中の前記化合物の濃度として具体的には、例えば１ｍＭ以上であればよく、例えば１ｍＭ以上１００ｍＭ以下であればよい。
【００６７】
次いで、必要に応じて、乾燥させることで、領域Ａにおいて、細胞接着層のうち、最上層に末端にカルボキシ基又はアミノ基を有するアルカンチオール化合物からなる自己組織化単分子層が積層され、また、領域Ｂにおいて、生体分子非接着層が積層された細胞パターニング用構造体を得ることができる。
【００６８】
以上、この発明の実施形態について図面を参照して詳述してきたが、具体的な構成はこの実施形態に限られるものではなく、この発明の要旨を逸脱しない範囲の設計等も含まれる。
【実施例】
【００６９】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００７０】
［製造例１］
（１）平面基板の準備及びフォトレジストパターニング
図３に示す本実施形態の細胞パターニング用構造体の製造方法の概略工程図に従い、細胞パターニング用構造体を製造した。具体的には、まず、平面基板としてカバーガラス（松浪硝子工業社製、Ｎｏ．１）を用いて、該カバーガラスをピラニア溶液（９６％濃硫酸：３０％過酸化水素水＝４：１（体積比））に１分間浸漬し、純水（流水）で１分間洗浄した。次いで、４０％フッ化アンモニウム水溶液に１分間浸漬し、純水（流水）で１分間洗浄して、純水中で保管した。次いで、窒素ガスで風乾させた後、１２０℃、１５分間ホットプレート上で乾燥させた。次いで、フォトレジスト（Ｍｉｃｒｏｐｏｓｉｔ（登録商標）  Ｓ１８１３、Ｓｈｉｐｌｅｙ社製）をスピンコート（条件：５００ｒｐｍ  ３秒間、 ４０００ｒｐｍ  ４３秒間）した。次いで、１００℃、２分間ホットプレート上で焼成し溶媒を除去した。次いで、フォトマスクを密着させてＵＶ照射を行い、現像液（ＮＭＤ−３、東京応化工業社製）を用いて、約１分間現像をした。次いで、窒素ガスで風乾し、真空下で１０時間以上保管した。
【００７１】
（２）工程１：金属の被覆及び感光性組成物層の除去
次いで、金属の被覆には、真空蒸着機を用いた。１０−４Ｔｏｒｒにて、６０〜７０Ａにより、クロム、金をこの順にそれぞれ３０ｎｍｔ、７０ｎｍｔ、さらにアルミニウムを５０ｎｍｔ蒸着した。次いで、現像液（ＮＭＤ−３、東京応化工業社製）を用いて、約４分間リフトオフした後、窒素ガスで風乾した。
【００７２】
（３）工程２：ＭＰＣポリマーの被覆
次いで、２−ｍｅｔｈａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙｅｔｈｙｌ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ（ＭＰＣ）ポリマー（ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６、日油社製）を被覆した。具体的には、まず、工程１の後の基板に酸素プラズマを３０秒間照射した。次いで、モノマー溶液（ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６、日油社製）をスピンコートした（条件：５００ｒｐｍ  ３秒間、２０００ｒｐｍ  ３０秒間）。次いで、エタノール蒸気中で３０分間インキュベートし、７０℃で４時間焼成した。次いで、純水で洗浄した。
【００７３】
（４）工程３：犠牲層の除去
次いで、工程２の後の基板を、現像液（ＮＭＤ−３、東京応化工業社製）に２０秒間浸漬することで、アルミニウムからなる犠牲層を除去した。次いで、純水で十分洗浄して、細胞パターニング用構造体１を得た。
【００７４】
［製造例２］
製造例１の（１）〜（２）と同様の方法を用いて、ＭＰＣポリマーが被覆された生体分子非接着層を有しない細胞パターニング用構造体２を製造した。
【００７５】
［試験例１］神経細胞の培養試験１
製造例１及び製造例２で得られた細胞パターニング用構造体１及び２について、培養の直前に、クリーンベンチ内で３分間ＵＶ照射して滅菌した。次いで、１．６×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの神経細胞を２０μＬ播種し、７日間、３７℃、５％二酸化炭素、飽和水蒸気下で培養した。次いで、培養開始から７日後の神経細胞の形態を、走査型電子顕微鏡（Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ；ＳＥＭ）を用いて観察した。結果を図５Ａ（細胞パターニング用構造体１）及び図５Ｂ（細胞パターニング用構造体２）に示す。なお、図５Ａ及び図５Ｂにおいて、下の画像は、上のＳＥＭ像を拡大した画像である。
【００７６】
図５Ａの上の画像から、ＭＰＣポリマーからなる生体分子非接着層上には、ほとんど細胞体も神経突起も接着及び成長しておらず、金からなる細胞接着層上においてのみ、細胞体及び神経突起が接着及び成長することが確かめられた。さらに、図５Ａの下の画像から、金からなる細胞接着層上においてのみ、神経突起が接着及び分岐して、成長していたが、ＭＰＣポリマーからなる生体分子非接着層上には、細胞体及び神経突起が接着せずに浮いていることが確認された。
一方、図５Ｂの上及び下の画像から、金からなる細胞接着層及びカバーガラス上のいずれにおいても、細胞体及び神経突起がランダムに成長していることが確かめられた。
以上のことから、細胞パターニング用構造体は、ＭＰＣポリマーからなる生体分子非接着層を備えることで、金からなる細胞接着層上においてのみ、細胞を配置できることが示唆された。
【００７７】
［製造例３］
図４に示す本実施形態の細胞パターニング用構造体の製造方法の概略工程図に従い、細胞パターニング用構造体を製造した。具体的には、以下に示すとおりである。
【００７８】
（１）平面基板の準備及びフォトレジストパターニング
まず、製造例１の（１）と同様の方法を用いて、平面基板上に感光性組成物層を形成した。
【００７９】
（２）工程１：金属の被覆及び感光性組成物層の除去
次いで、製造例１の（２）と同様の方法を用いて、金属を被覆し、感光性組成物層を除去した。これにより、カバーガラス上の一部の領域に、クロムからなる第１の細胞接着層、金からなる第２の細胞接着層、及びアルミニウムからなる犠牲層がこの順に積層された構造体を得た。
【００８０】
（３）工程２：ＭＰＣポリマーの被覆
次いで、製造例１の（３）と同様の方法を用いて、工程１の後に得られた基板にＭＰＣポリマーを被覆させた。
【００８１】
（４）工程３：犠牲層の除去
次いで、製造例１の（４）と同様の方法を用いて、工程２の後に得られた基板上の犠牲層を除去した。これにより、カバーガラス上の一部の領域に、ＭＰＣポリマーからなる生体分子非接着層が積層された構造体を得た。
【００８２】
（５）工程４：自己組織化単分子層（Ｓｅｌｆ−Ａｓｓｅｍｂｌｅｄ  Ｍｏｎｏｌａｙｅｒ：ＳＡＭ）の積層
次いで、工程３の後に得られた基板を、２ｍＭの６−メルカプトヘキサン酸含有ＤＭＳＯ溶液に、窒素雰囲気下で２０時間浸漬した。次いで、窒素ガスで風乾して、細胞パターニング用構造体３を得た。細胞パターニング用構造体３の拡大正面図を図６に示す。図６に示すように、金からなる第２の細胞接着層上にさらにＳＡＭが積層され、カバーガラス上にはＭＰＣポリマーからなる生体分子非接着層が積層されていた。
【００８３】
［試験例２］神経細胞の培養試験２
製造例１及び製造例３で得られた細胞パターニング用構造体１及び３について、培養の直前に、クリーンベンチ内で３分間ＵＶ照射して滅菌した。次いで、１．６×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの神経細胞を２０μＬ播種し、播種し、７日間、３７℃、５％二酸化炭素、飽和水蒸気下で培養した。次いで、培養開始から７日後の神経細胞の形態を、ＳＥＭを用いて観察した。結果を図７Ａ（細胞パターニング用構造体１）及び図７Ｂ（細胞パターニング用構造体３）に示す。
【００８４】
図７Ａ及び図７Ｂから、細胞パターニング用構造体１及び３のいずれを用いた場合においても、ＭＰＣポリマーからなる生体分子非接着層上には、細胞体も神経突起も接着せず、浮いた状態であることが確認された。一方、細胞パターニング用構造体１及び３のいずれを用いた場合においても、金からなる細胞接着層上で神経突起が分岐及び成長していることが確認された。特に、細胞パターニング用構造体３を用いた場合では、金からなる細胞接着層上での細胞体の接着及び神経突起の成長が多く観察された。これは、細胞パターニング用構造体３がＳＡＭを備えるため、より優れた細胞接着性を有することによるものであると推察された。
【産業上の利用可能性】
【００８５】
本実施形態の細胞パターニング用構造体によれば、細胞を特定の領域に規則的に配置することができる。
【符号の説明】
【００８６】
１…細胞接着層、１ａ…第１の細胞接着層、１ｂ…第２の細胞接着層、１ｃ…第３の細胞接着層、２…生体分子非接着層、２ａ…生体分子非接着物質、３…平面基板、４…感光性組成物層、５…犠牲層、１０，２０，３０…細胞パターニング用構造体、Ａ…領域Ａ、Ｂ…領域Ｂ
【図１Ａ】
2018201422.tif 000003
【図１Ｂ】
2018201422.tif 000004
【図２】
2018201422.tif 000005
【図３】
2018201422.tif 000006
【図４】
2018201422.tif 000007
【図５Ａ】
2018201422.tif 000008
【図５Ｂ】
2018201422.tif 000009
【図６】
2018201422.tif 000010
【図７Ａ】
2018201422.tif 000011
【図７Ｂ】
2018201422.tif 000012