(57)【要約】【課題】本発明は、新たなプロバイオティクス乳酸菌の増殖促進及び／又は生残性向上組成物の提供を課題とする。【解決手段】本発明は、ストレプトコッカス属の乳酸菌と、含硫アミノ酸と、を含むプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物、並びにプロバイオティクス乳酸菌の生残性及び/又は増殖促進方法を提供する。また、ストレプトコッカス属の乳酸菌と、含硫アミノ酸と、を含むプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物とプロバイオティクス乳酸菌とを含む飲食品、並びに当該飲食品の製造方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ストレプトコッカス属の乳酸菌と、含硫アミノ酸と、を含むことを特徴とするプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物。
【請求項２】
前記ストレプトコッカス属の乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルス種であることを特徴とする請求項１に記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物。
【請求項３】
前記含硫アミノ酸が、メチオニンであることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物。
【請求項４】
前記プロバイオティクス乳酸菌が、ラクトバチルス・ガセリ種及びラクトバチルス・ヘルベティカス種から選択される１つ以上であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物。
【請求項５】
プロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進は、ヨーグルト又は発酵乳中の生残性向上及び/又は増殖促進である、請求項１〜４のいずれかに記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物。
【請求項６】
プロバイオティクス乳酸菌と、請求項１〜５のいずれかに記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物と、を含む飲食品。
【請求項７】
飲食品がヨーグルト又は発酵乳である、請求項６に記載の飲食品。
【請求項８】
プロバイオティクス乳酸菌の生残性及び/又は増殖促進方法であって、
プロバイオティクス乳酸菌と、請求項１〜５のいずれかに記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物と、を接触させる工程を含む前記方法。
【請求項９】
プロバイオティクス乳酸菌を含む飲食品の製造方法であって、
プロバイオティクス乳酸菌と、請求項１〜５のいずれかに記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物と、を混合する工程を含む前記方法。
【請求項１０】
プロバイオティクス乳酸菌と、請求項１〜５のいずれかに記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物と、を混合した後、発酵する工程を含む請求項９に記載の飲食品の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び／又は増殖促進用組成物、並びに、プロバイオティクス乳酸菌の生残性及び/又は増殖促進方法に関する。
また、本発明は、プロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物と、プロバイオティクス乳酸菌とを含む飲食品、並びに、当該飲食品の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の健康志向の高まりにより、ヒトや動物の健康の維持増進や、疾病の改善・治療に有用なプロバイオティクス乳酸菌が注目され、これに伴い、プロバイオティクス乳酸菌の菌数を増殖促進させたり、その生菌数を維持したりする方法の重要性が高まっている。
【０００３】
特許文献１は、酸性（ｐＨが低い）環境にあるプロバイオティクスの乳酸菌およびビフィズス菌の生残性を向上させることができる、乳酸菌および／またはビフィズス菌の生残性向上剤、それを用いた食品組成物、およびその製造方法の提供を目的とし、酸性（ｐＨが低い）環境にあるプロバイオティクスの乳酸菌およびビフィズス菌に対して、アミノ酸を使用することで、それらの保存中における生残性（生存性）を大幅に改善できること、Ｚｎ、葉酸、ＭｇＣＯ３のような無機塩類についてもアミノ酸と同様に、プロバイオティクスの乳酸菌およびビフィズス菌の生残性を改善させることを開示している。
【０００４】
特許文献２は、腸内有用菌（ビフィズス菌及び/又は乳酸菌）を増加もしくは増殖させることを目的とし、その解決手段としてシクロジペプチド化合物を開示している。
【０００５】
非特許文献１は、発酵乳中でのビフィズス菌、アシドフィルス菌の生残性を向上させるために、５０ｍｇ／Ｌのシステインを発酵乳に添加することを報告している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第６０８８８２１号公報
【特許文献２】ＷＯ２０１７／０３４０１１号パンフレット
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】R.I.Dave et al. ”Effect of Cysteine on the Viability of Yoghurt and Probiotic Bacteria in Yoghurts Made with Commercial Starter Cultures” Int. Dairy Journal 7,537-545(1997)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上記したような従来の解決手段とは異なる新たなプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び／又は増殖促進用組成物を提供することを課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本願の発明者らは、鋭意検討の結果、特定の乳酸菌と含流アミノ酸を組み合わせることによりプロバイオティクス乳酸菌の増殖が促進され、また生残性が向上することを見いだし発明を完成させた。具体的には、本発明は以下の構成を含むものである。
（１）ストレプトコッカス属の乳酸菌と、含硫アミノ酸と、を含むことを特徴とするプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物。
（２）前記ストレプトコッカス属の乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルス種であることを特徴とする（１）に記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物。
（３）前記含硫アミノ酸が、メチオニンであることを特徴とする（１）又は（２）に記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物。
（４）前記プロバイオティクス乳酸菌が、ラクトバチルス・ガセリ種及びラクトバチルス・ヘルベティカス種から選択される１つ以上であることを特徴とする（１）〜（３）のいずれかに記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物。
（５）プロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進は、ヨーグルト又は発酵乳中の生残性向上及び/又は増殖促進である、（１）〜（４）のいずれかに記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物。
（６）プロバイオティクス乳酸菌と、（１）〜（５）のいずれかに記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物と、を含む飲食品。
（７）飲食品がヨーグルト又は発酵乳である、（６）に記載の飲食品。
（８）プロバイオティクス乳酸菌の生残性及び/又は増殖促進方法であって、
プロバイオティクス乳酸菌と、（１）〜（５）のいずれかに記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物と、を接触させる工程を含む前記方法。
（９）プロバイオティクス乳酸菌を含む飲食品の製造方法であって、
プロバイオティクス乳酸菌と、（１）〜（５）のいずれかに記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物と、を混合する工程を含む前記方法。
（１０）プロバイオティクス乳酸菌と、（１）〜（５）のいずれかに記載のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物と、を混合した後、発酵する工程を含む（９）に記載の飲食品の製造方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、従来にないプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び／又は増殖促進用組成物を提供するものである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び／又は増殖促進用組成物について説明する。
本発明のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び／又は増殖促進用組成物は、生残性向上作用及び増殖促進用の両方の作用、あるいは、少なくとも１つの作用を有し、有効量のストレプトコッカス属の乳酸菌と含硫アミノ酸と、を含むものである。
【００１２】
（生残性向上及び／又は増殖促進用組成物に用いるストレプトコッカス属の乳酸菌）
本発明のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び／又は増殖促進用組成物に用いるストレプトコッカス属の乳酸菌は、ストレプトコッカス属に属するものであればどのようなものでも用いることができるが、このうちでもストレプトコッカス・サーモフィルス種（Streptococcus thermophilus）が好ましく、SBT10137(FERM P-19531)がさらに好ましい。  
上記したストレプトコッカス属の乳酸菌は、脱脂粉乳や合成培地等の適当な培地で培養したものを用いることができる。また、適当な培地で培養したものを、濃縮および凍結、または凍結乾燥したものを用いることができる。
ストレプトコッカス属の乳酸菌の含有量は、プロバイオティクス乳酸菌組成物中において、１０５ｃｆｕ／ｇ以上が好ましい。
【００１３】
（生残性向上及び／又は増殖促進用組成物に用いる含硫アミノ酸）
本発明のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び／又は増殖促進用組成物に用いる含硫アミノ酸は、分子中に硫黄を含むアミノ酸であればどのようなものでも用いることができる。そのようなアミノ酸としては、メチオニン、システイン、シスチン、グルタチオン、シスタチオニン、ホモシステイン、タウリンが挙げられ、このうちでもメチオニン、システイン、シスチンが好ましく、メチオニンが最も好ましい。これらは単独、又は２つ以上を組み合わせて用いることができる。上記した含硫アミノ酸は、ヒトや動物が摂取できるものであればどのようなものでもよく、精製により純度を高くしたものや、これらの含硫アミノ酸を多く含むアミノ酸製剤やエキス等を用いてもよい。
【００１４】
本発明のプロバイオティクス乳酸菌の増殖促進及び／又は生残性向上組成物とその使用の一態様を、ヨーグルトを製造する場合を例に示す。
乳原料等で調製したヨーグルトミックスに、ヨーグルトミックス中で１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇとなるように含流アミノ酸を添加する。その後、殺菌、４０℃程度に冷却し、ストレプトコッカス属の乳酸菌を１０５ｃｆｕ／ｇ以上程度となるよう添加し、これとともにプロバイオティクス乳酸菌を添加し、発酵させる。ここで、本発明のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上作用や増殖促進作用を阻害するものでなければ、ストレプトコッカス属の乳酸菌とプロバイオティクス乳酸菌以外のどのような菌を添加してもよい。
ヨーグルトミックス中に添加する含硫アミノ酸の濃度は、本発明の作用を示す有効量であればよく、好ましくは、前記１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇであり、より好ましくは３ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。
また、同様にヨーグルトミックス中に添加するストレプトコッカス属乳酸菌の濃度は、本発明の作用を示す有効量であればよい。
本発明によれば、プロバイオティクス乳酸菌の発酵中、本発明組成物中の含流アミノ酸とストレプトコッカス属乳酸菌の作用により、プロバイオティクス乳酸菌の菌数増加が促進される。
【００１５】
（本発明組成物によるプロバイオティクス乳酸菌の増殖促進作用）
プロバイオティクス乳酸菌の増殖促進作用は、プロバイオティクス乳酸菌の増殖率が本発明の組成物を添加していないコントロールに比して、高いかどうかにより評価できる。コントロールに対する、本発明組成物を添加した場合の増殖率の比は、１．２倍以上あればよく、１．５倍以上が好ましく、約２倍程度がさらに好ましい。
【００１６】
前記のプロバイオティクス乳酸菌の増殖率は、発酵前後のヨーグルトベースの生菌数を測定し、発酵後の生菌数を発酵前の生菌数で除することにより求めることができる。生菌数は、用いるプロバイオティクス乳酸菌に適した定法で測定すれば良い。発酵温度は、それぞれのプロバイオティクス乳酸菌に適した発酵温度であり、通常２５〜４５℃である。
増殖促進作用は、前記増殖率の評価の他に、酸度の上昇によって評価することもできる。
【００１７】
（本発明組成物によるプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上作用）  
発酵終了後、ヨーグルトを冷却し、賞味期限内は１０℃以下程度の温度で保存されるが、この間、プロバイオティクス乳酸菌の生菌数は、本発明組成物中の含流アミノ酸とストレプトコッカス属の乳酸菌の作用により、高く保持される。
プロバイオティクス乳酸菌の生残性向上作用は、プロバイオティクス乳酸菌の生残率が本発明の組成物を添加していないコントロールに比して、高いかどうかにより評価できる。コントロールに対する、本発明組成物を添加した場合の増殖率の比は、１．２倍以上あればよく、１．５倍以上が好ましく、約２倍程度がさらに好ましい。
【００１８】
前記のプロバイオティクス乳酸菌の生残率は、保存１日目、及び所望の保存日数での生菌数を測定し、所望の保存日数における生菌数を１日目の菌数で除することにより求めることができる。生菌数は、用いるプロバイオティクス乳酸菌に適した定法で測定すれば良い。
【００１９】
（プロバイオティクス乳酸菌）
本発明の生残性向上及び／又は増殖促進の対象とすることができるプロバイオティクス乳酸菌は、Lactobacillus属の菌である。具体的にはLactobacillus gasseri、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus delbrueckii、Lactobacillus casei、Lactobacillus paracasei、Lactobacillus  plantarum、Lactobacillus brevis、Lactobacillus helveticus、Lactobacillus rhamnosus、Lactobacillus lactis、Lactobacillus amylovorus、Lactobacillus johnsonii、Lactobacillus crispatus、Lactobacillus reuteriであり、より好ましくはLactobacillus gasseri、Lactobacillus helveticusであり、さらに好ましくはLactobacillus gasseri SBT2055(FERM BP-10953)、Lactobacillus helveticusSBT2161(NITE BP-01707)、Lactobacillus helveticus SBT2171（FERM BP-5445）である。
本発明のプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物の発明は、換言すれば、プロバイオティクス乳酸菌と、前記プロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物とを接触させる工程を含むプロバイオティクス乳酸菌の生残性及び/又は増殖促進方法である。
【００２０】
（プロバイオティクス乳酸菌を含む飲食品及び当該飲食品の製造方法）
本発明は、前記プロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物と、プロバイオティクス乳酸菌とを含む飲食品を提供する。飲食品としては、プロバイオティクス乳酸菌が含まれる飲食品であればいずれでもよく、ヨーグルト、発酵乳、乳酸菌飲料、清涼飲料、乳清飲料などが挙げられる。
プロバイオティクス乳酸菌を含む飲食品の製造は、プロバイオティクス乳酸菌と、前記プロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び/又は増殖促進用組成物とを接触させることにより行うことができる。飲食品がヨーグルトや発酵乳の場合は、プロバイオティクス乳酸菌と、前記生残性向上及び/又は増殖促進用組成物とを混合した後、発酵を行ってもよく、また、プロバイオティクス乳酸菌の発酵後に、前記生残性向上及び/又は増殖促進用組成物を添加してもよいが、増殖促進及び生残性向上の両作用を享受するためには、発酵を行う前に前記生残性向上及び/又は増殖促進用組成物をプロバイオティクス乳酸菌に添加することが望ましい。
【実施例】
【００２１】
以下、本発明の実施例を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２２】
（試作方法）
ヨーグルトミックスの調製方法は以下の通りである。
サーモフィルス菌凍結乾燥菌株、乳酸菌菌体濃縮液を除く原材料（表１）を溶解、混合した後、９５℃達温にて殺菌し、３０℃まで冷却した。サーモフィルス菌凍結乾燥菌株、乳酸菌菌体濃縮液を添加後、酸度が０．９８％に到達するまで３０℃で発酵したものをヨーグルトベースとした。ヨーグルトベースを殺菌水と７：３の比率で混合したものをヨーグルトミックスとした。
【００２３】
（供試菌株）
乳酸菌として、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）SBT2055(FERM BP-10953)の菌体濃縮液を使用した。ラクトバチルス・ガセリの凍結濃縮菌体を、滅菌処理した11%脱脂粉乳液で１０倍に希釈してラクトバチルス・ガセリ菌体濃縮液を調製した。
また、ストレプトコッカス属の乳酸菌として、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophilus）の凍結乾燥菌抹を使用した。
【００２４】
（保存方法）
ヨーグルトミックスは、ポリスチレン容器に充填し、ヒートシーラーを用いてアルミ蓋をした。充填したヨーグルトミックスは１０℃で１８日間保存した。
【００２５】
（増殖率測定方法）
発酵前後のヨーグルトベースにおけるガセリ菌の生菌数を測定し、発酵後の生菌数を発酵前の生菌数で割った値をパーセンテージで示した。
ガセリ菌数の測定は、平板培地に適宜希釈した菌液を１００μｌ塗抹して、３７℃７２時間嫌気培養後にコロニー数を計数して算出した。平板培地としては、滅菌したＭＲＳ培地に０．２ｍｇ／ｍｌクリンダマイシン溶解液を０．０５％、２ｍｇ／ｍｌシプロフロキサシン溶解液５ｍｌを添加した培地を２０ｍｌシャーレに流し固めた培地を使用した。製造環境によって値にばらつきが生じるため、それぞれの試験のコントロール水準との比較で評価を行った。
【００２６】
（生残性測定方法）
ヨーグルトミックス中でのガセリ菌の生残性は、保存１日目、１８日目の生菌数を測定し、１８日目の生菌数を１日目の菌数で割った値をパーセンテージで示した。製造環境によって値にばらつきが生じるため、それぞれの試験のコントロール水準との比較で評価を行った。ガセリ菌数の測定は、増殖率測定方法と同様に実施した。
【００２７】
［実施例１］
表１に記載の配合について、試作方法に従ってヨーグルトベースおよび、ヨーグルトミックスを調製した。各水準は、表１の配合に加えて含硫アミノ酸としてＬ−メチオニンをそれぞれ１．３ｍｇ／ｋｇ、３．８ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ配合した。
その結果、Ｌ−メチオニン１．３ｍｇ／ｋｇ添加水準ではガセリ菌の生残性向上効果が確認され、３．８ｍｇ／ｋｇと７．５ｍｇ／ｋｇ添加水準ではガセリ菌の増殖促進効果および生残性向上効果が確認された（表２）。
【００２８】
【表１】
2018201405.tif 000002
【００２９】
【表２】
2018201405.tif 000003
【００３０】
[実施例２]
表１に記載の配合について、試作方法に従ってヨーグルトベースおよびヨーグルトミックスを調製した。各水準は表１の配合に加えて、Ｌ−メチオニンを３％含むアミノ酸製剤を０．１％、０．０５％、０．０２５％添加した。
その結果、いずれの水準でもガセリ菌の増殖促進効果および生残性向上効果が確認された（表３）。
【００３１】
【表３】
2018201405.tif 000004
【００３２】
[実施例３]
表４、５に記載の配合について、試作方法に従ってヨーグルトベースおよびヨーグルトミックスを調製した。各水準は、アミノ酸を表４、５に記載の通り添加した。また、ストレプトコッカス・サーモフィルス添加水準および、無添加水準について試験を実施した。ストレプトコッカス・サーモフィルス添加水準かつ、メチオニン添加水準にのみ顕著な増殖促進効果が確認された（表６）。
【００３３】
【表４】
2018201405.tif 000005
【００３４】
【表５】
2018201405.tif 000006
【００３５】
【表６】
2018201405.tif 000007
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明によれば、新規なプロバイオティクス乳酸菌の生残性向上及び／又は増殖促進用組成物の提供が可能となり、プロバイオティクス乳酸菌の生残性に優れた飲食品を提供することが可能となる。