(57)【要約】【課題】新規の血糖低下剤を提供すること。【解決手段】本発明のＧＬＰ−１産生促進剤は、シルクフィブロインを有効成分として含有する。シルクフィブロインは安全で副作用もなく、安全な血糖低下剤や機能性食品として、極めて効果的に糖尿病の予防や症状の改善を図ることができる。また、本発明のインスリン分泌促進剤、血糖低下剤又は飲食品は、該ＧＬＰ−１産生促進剤を含有する。該血糖低下剤は、特に高血糖状態の対象の血糖値を低下させる効果を有し、糖尿病による高血糖状態を極めて顕著に改善する効果を有する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
シルクフィブロインを有効成分として含有することを特徴とするＧＬＰ−１産生促進剤。
【請求項２】
請求項１に記載のＧＬＰ−１産生促進剤を含有することを特徴とするインスリン分泌促進剤。
【請求項３】
請求項１に記載のＧＬＰ−１産生促進剤を含有することを特徴とする血糖低下剤。
【請求項４】
請求項１に記載のＧＬＰ−１産生促進剤を含有することを特徴とする飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＬＰ−１産生促進剤、及び該ＧＬＰ−１産生促進剤を含有するインスリン分泌促進剤、血糖低下剤若しくは飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
シルクフィブロインは、シルク（絹）を構成するタンパク質であり、シルクタンパク質の約７０％以上を占める。特許文献１には、シルクから高収率かつ高品質のシルクフィブロインを得る方法が開示されている。
【０００３】
シルクフィブロインの機能性については、これまでにいくつか報告されている。例えば、非特許文献１には、シルクフィブロイン飲用による血清脂質、糖代謝能への効果について記載されている。また、非特許文献２には、血糖及び脂質に対するシルクフィブロインの臨床的効果が記載されている。
【０００４】
上述のように、シルクフィブロインは血糖値を低下させる作用を有することは知られているが、どのような分子メカニズムで血糖値を低下させるかはわかっていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平１１−１８０９９９号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】上野ら、FOOD Style 21、Vol.15、No.5、2011年5月号
【非特許文献２】上野ら、FOOD Style 21、Vol.19、No.5、2015年5月号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記背景技術に鑑みてなされたものであり、その課題は、新規の血糖低下剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記の課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、意外なことに、シルクフィブロインがＧＬＰ−１（glucagon-like peptide-1；グルカゴン様ペプチド−１）の産生を促進させることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、シルクフィブロインを有効成分として含有することを特徴とするＧＬＰ−１産生促進剤を提供するものである。
【００１０】
また、本発明は、上記ＧＬＰ−１産生促進剤を含有することを特徴とするインスリン分泌促進剤、血糖低下剤又は飲食品を提供するものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、前記問題点や前記課題を解決し、血糖低下のために用いることができるＧＬＰ−１産生促進剤を提供することができる。特に高血糖状態の対象の血糖値を低下させる効果を有し、糖尿病による高血糖状態を極めて顕著に改善する効果を有する。すなわち、本発明の血糖低下剤は、特に、機能性食品用途に極めて効果的である。
【００１２】
また、本発明のＧＬＰ−１産生促進剤の有効成分であるシルクフィブロインは安全で副作用もなく、安全な血糖低下剤や機能性食品として、極めて効果的に糖尿病の予防や症状の改善を図ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】シルクフィブロインによるＧＬＰ−１濃度の測定結果を示すグラフである。
【図２】各群の血漿中のトリグリセライド濃度の測定結果を示すグラフである。
【図３】各群の血漿中の総コレステロール濃度の測定結果を示すグラフである。
【図４】各群の血漿中のグルコース濃度の測定結果を示すグラフである。
【図５】各群の血漿中のＧＰＴ濃度の測定結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明について説明するが、本発明は、以下の具体的態様に限定されるものではなく、技術的思想の範囲内で任意に変形することができる。
【００１５】
［ＧＬＰ−１産生促進剤］
本発明のＧＬＰ−１産生促進剤は、シルクフィブロインを有効成分として含有することを特徴とする。本発明は、シルクフィブロインを、マトリックス、担持体、被吸着体等として含有するのではなく、有効成分として含有する。ここで、「有効成分」とは、ＧＬＰ−１の産生を促進する成分を言う。
【００１６】
シルクフィブロインは、セリシンと共にシルク（絹）を構成するタンパク質の１つであり、シルクタンパク質の約７０％以上を占める。
本発明に用いるシルクフィブロインの調製方法は、特に限定されないが、公知の方法を用いて調製することができる。例えば、特許文献１に記載の製造方法を用いることができる。
【００１７】
特許文献１に記載の製造方法は、以下のとおりである。
（ａ）屑繭、生糸、生糸屑または絹紡糸から得られる絹フィブロインを精製してセリシン及び油分を除去する工程と、
（ｂ）前記精製された絹フィブロインを塩水濃度３０〜６０％の塩水溶液に溶解させる工程と、
（ｃ）前記塩水溶液を、限外濾過装置を用いて濾過することにより脱塩すると共に分子量が８０００以下の低分子ペプチドを除去する工程と、
の各工程を有する飲食品用精製絹フィブロイン溶液の製造方法。
【００１８】
ＧＬＰ−１（glucagon-like peptide-1；グルカゴン様ペプチド−１）は、インクレチンの一種であり、炭水化物等を認識して消化管粘膜上皮から分泌される消化管ホルモンである。消化管インスリンの分泌を促し、同時に血糖値を上げるホルモンを抑制する働きがある。
本発明は、実施例に示した通り、シルクフィブロインがＧＬＰ−１の産生を促進させることを初めて見出してなされたものである。
【００１９】
本発明の「ＧＬＰ−１産生促進剤」中のシルクフィブロインの含有量は、ＧＬＰ−１の産生を促進することができれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、ＧＬＰ−１産生促進剤全体を１００質量部としたときに、シルクフィブロインが、０．００１〜１００質量部であることが好ましく、より好ましくは０．０１〜９９質量部、特に好ましくは０．１〜９５質量部、更に好ましくは１〜９０質量部である。
【００２０】
また、本発明のＧＬＰ−１産生促進剤は、シルクフィブロインに加えて、「その他の成分」を含有することができる。
【００２１】
前記ＧＬＰ−１産生促進剤における、上記「その他の成分」としては、特に制限はなく、本発明の効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、薬学的に許容され得る担体等が挙げられる。
かかる担体としては、特に制限はなく、例えば、後述する剤型等に応じて適宜選択することができる。また、前記ＧＬＰ−１産生促進剤中の前記「その他の成分」の含有量としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００２２】
［インスリン分泌促進剤］
本発明のインスリン分泌促進剤は、前記ＧＬＰ−１産生促進剤を含有する。
【００２３】
本発明のインスリン分泌促進剤全体に対する、前記ＧＬＰ−１産生促進剤の含有量は、特に制限がなく、目的に応じて適宜選択することができるが、インスリン分泌促進剤全体を１００質量部としたときに、ＧＬＰ−１産生促進剤が、０．００１〜１００質量部であることが好ましく、より好ましくは０．０１〜９９質量部、特に好ましくは０．１〜９５質量部、更に好ましくは１〜９０質量部である。
【００２４】
本発明のインスリン分泌促進剤の剤型としては、特に制限はなく、例えば、後述するような所望の投与方法に応じて適宜選択することができる。
具体的には、例えば、経口固形剤（錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等）、経口液剤（ゼリー剤、内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等）、注射剤（溶剤、懸濁剤等）、軟膏剤、貼付剤、ゲル剤、クリーム剤、外用散剤、スプレー剤、吸入散布剤等が挙げられる。
【００２５】
前記経口固形剤としては、例えば、前記ＧＬＰ−１産生促進剤に、賦形剤、更には必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味・矯臭剤等の添加剤を加え、常法により製造することができる。
前記賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。
前記結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。
前記崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。
前記滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。
前記着色剤としては、例えば、酸化チタン、酸化鉄等が挙げられる。
前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
【００２６】
前記経口液剤としては、例えば、前記ＧＬＰ−１産生促進剤に、ゲル化剤、矯味・矯臭剤、緩衝剤、安定化剤等の添加剤を加え、常法により製造することができる。
前記ゲル化剤としては、寒天、ペクチン、ゼラチン、カラギーナン、キサンタンガム、ローカストビーンガム、プルラン、アルギン酸及びその塩、アラビアガム、カードラン、グルコマンナン等、ゼリー剤、ゲル剤等の成分として用いられるものが挙げられる。
前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。前記安定化剤としては、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００２７】
前記注射剤としては、例えば、前記ＧＬＰ−１産生促進剤に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下用、筋肉内用、静脈内用等の注射剤を製造することができる。
前記ｐＨ調節剤及び前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。前記安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。前記等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。前記局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。
【００２８】
シルクフィブロインは、散剤（粉剤）にすると凝集し易く、また、内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等にするとダマになり易い（凝集し易い）ために、本発明の剤型は、ゼリー剤が好ましく、経口ゼリー剤が特に好ましい。
【００２９】
本発明のインスリン分泌促進剤は、例えば、インスリン分泌機構の活性化を必要とする個体（例えば、健康維持やインスリン分泌を必要とする個体；癌や生活習慣病の予防や治療を必要とする個体；細菌、真菌、ウイルス等に感染した個体；等）に投与することにより使用することができる。
【００３０】
本発明のインスリン分泌促進剤の投与対象動物としては、特に制限はないが、例えば、ヒト；マウス；ラット；サル；ウマ；ウシ、ブタ、ヤギ、ニワトリ等の家畜；ネコ、イヌ等のペット；等が挙げられる。
【００３１】
また、前記インスリン分泌促進剤の投与方法としては、特に制限はなく、例えば、前記インスリン分泌促進剤の剤型等に応じ、適宜選択することができ、経口投与、腹腔内投与、血液中への注射、腸内への注入等が挙げられる。
また、前記インスリン分泌促進剤の投与量としては、特に制限はなく、投与対象である個体の年齢、体重、所望の効果の程度等に応じて適宜選択することができるが、例えば、成人への１日の投与量は、有効成分の量として、１ｍｇ〜３０ｇが好ましく、１０ｍｇ〜１０ｇがより好ましく、１００ｍｇ〜３ｇが特に好ましい。
また、前記インスリン分泌促進剤の投与時期としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、予防的に投与されてもよいし、治療的に投与されてもよい。
【００３２】
［血糖低下剤］
本発明の血糖低下剤は、前記ＧＬＰ−１産生促進剤を含有する。
【００３３】
本発明の血糖低下剤は、本発明の効果を損なわない範囲内で、前記ＧＬＰ−１産生促進剤に加えて「その他の成分」を含有していてもよい。
また、その剤型も特に制限はなく、例えば、前述するような所望の投与方法に応じて適宜選択することができる。
【００３４】
［飲食品］
本発明の飲食品は、前記ＧＬＰ−１産生促進剤を含有する。
本発明の飲食品には、ヒトが摂取する全ての飲み物や食品が含まれる。また、本発明の飲食品には、家畜、家禽類、ペット等が摂取するための飼料も含まれる。
【００３５】
本発明の飲食品に配合するＧＬＰ−１産生促進剤の剤型には特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【実施例】
【００３６】
以下、実施例及び試験例に基づき本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例等の具体的範囲に限定されるものではない。「％」は、特に断りのない限り「質量％」を示す。
【００３７】
実施例１
［ラット腸管細胞のＧＬＰ−１濃度の測定］
これまでのフィブロインタンパク質の消化性や吸収性に関する報告（例えば、阿部ら、第１６回国際個別化医療学会学術集会、２０１３年５月）から、フィブロインタンパク質は非常に消化及び吸収されにくいレジスタントタンパク質であると言える。
また、ヒト臨床試験において、シルクフィブロイン摂取により、メタボリックシンドロームを抑制することが報告されている（非特許文献１）。シルクフィブロインはナノレベルの多孔性構造を持ち、該構造によって体内での糖吸収に影響を及ぼすことにより、メタボリックシンドロームを抑制している可能性が考えられる。
本実施例では、上記のような「従来から知られたシルクフィブロインの効果」以外の（他の）効果を探るために、以下の実験を行った。
【００３８】
[[シルクフィブロイン溶液の調製]]
特許文献１に開示されている方法にしたがって、シルクフィブロイン（以下、「ＳＦＢ」と略記する場合がある）を調製した。調製したシルクフィブロイン溶液を凍結乾燥させて得られたパフを、細胞培地１００μｇの倍量のＨｅｐｅｓバッファー（１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、４．５ｍＭ  ＫＣｌ、２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、１．２ｍＭ  ＣａＣｌ２、１．２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  Ｄ−グルコース、０．１％ＢＳＡ、ｐＨ７．４）で溶かし、濃度を１μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、１０００μｇ／ｍＬに調製して、シルクフィブロイン溶液を得た。
【００３９】
[[ＧＬＰ−１濃度の測定]]
ラット下部消化管由来のＧＬＰ−１産生細胞（ＧＬＵＴａｇ細胞）を、１０％ＦＢＳと共に、３７℃、５％ＣＯ２存在下で培養した。トリプシン処理により回収したＧＬＵＴａｇ細胞を、４８ウェルプレートにサブコンフルエントになるまで２〜３日間培養した。
それぞれの濃度のシルクフィブロイン溶液の添加前に、Ｈｅｐｅｓバッファーでウェルを洗浄した。ウェル洗浄後、同バッファーに溶解したシルクフィブロイン溶液を８０μＬ添加し、３７℃にて６０分間インキュベーションした。
上清を回収後、遠心分離（８００×ｇ、５分間、４℃）し、その上清を７０μＬ回収し、凍結保存した。
上清中のＧＬＰ−１濃度は、市販のenzyme immunoassay kitを用いて測定した。
【００４０】
ＧＬＰ−１濃度の測定結果を図１に示す。図１の横軸は、各濃度のシルクフィブロイン溶液（０μｇ／ｍＬ（無処理）、１μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、１０００μｇ／ｍＬ）を示し、縦軸は、ＧＬＰ−１濃度を示す。
シルクフィブロイン溶液は、どの濃度においても高いＧＬＰ−１産生能力が見られ、特に１００μｇ／ｍＬ、１０００μｇ／ｍＬの濃度において、極めて高いＧＬＰ−１産生能力が見られた（ｎ＝２）。
【００４１】
以上の結果から、シルクフィブロインは、自身の構造による吸着性による効果だけでなく、直接腸管に作用することによって、ＧＬＰ−１の産生を促進させる効果があることがわかった。
そして、シルクフィブロインは、ＧＬＰ−１によるインスリン分泌増強作用、膵臓β細胞増殖、保護作用による糖代謝、脂質代謝に関与している可能性が示唆された。
【００４２】
実施例２
［シルクフィブロインのメタボリックシンドロームマウスへの影響］
非特許文献１や２に記載されているシルクフィブロインの剤型は、特許文献１に記載された製法により調製された溶液を乾燥させずに調製したものであり、ゼリー状（ゲル状）である。
そこで、粉末状に調製したシルクフィブロインの摂取による評価試験を行った。
本実施例は、北海道薬科大学動物実験委員会（承認番号第Ｈ２７−００８号）において定められた、「実験動物施設の設備及び管理の方法並びに具体的な実験方法を定めた規定」に則り、倫理審査委員の承認を得て行った。
【００４３】
[[シルクフィブロイン粉末の調製]]
特許文献１に記載された製法により調製されたシルクフィブロイン溶液を、４０℃前後の低温で遠赤外線乾燥させ、粉末化した。
【００４４】
[[ウエスタンダイエット食の調製]]
食餌によってメタボリックシンドローム（Ｍｅｔｓ）を誘発させる目的で、ショ糖と脂質を高配合したウエスタンダイエット（ＷＤ）食を調製した。
【００４５】
[[シルクフィブロイン粉末混合食の調製]]
上記ＷＤ食に、カロリーが同程度になるように調製しながら、上記シルクフィブロイン粉末を０．２％及び２％配合した飼料（シルクフィブロイン粉末混合食）を調製した。
【００４６】
[[実験動物の飼育]]
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウス（６週齢）を三協ラボサービス株式会社から購入し、３４匹を下記の４群に分けた。
（１）ＮＤ（標準飼料給餌ＣＥ２）群      ｎ＝８
（２）ＷＤ（ウエスタンダイエット食）群  ｎ＝８
（３）シルクフィブロイン粉末混合食（０．２％シルクフィブロイン）  ｎ＝８
（４）シルクフィブロイン粉末混合食（２％シルクフィブロイン）      ｎ＝８
各群の平均体重が１９．８１±０．０１ｇになるように群を分けた。以下、上記（３）群を「ＳＦＢ０．２％群」、（４）群を「ＳＦＢ２％群」と表記する場合がある。
【００４７】
各群２ケージずつに分け、北海道薬科大学実験動物センター内で、恒温恒湿（２３±１℃、５５±５％）、へパフィルターによる吸気、人工照明による１２時間毎の明暗環境下（明期６時〜１８時、暗期１８時〜６時）で飼育した。ケージあたりの餌摂取量を１週間に３回測定し、マウスの体重は１週間ごとに測定した。給餌及び給水は自由摂取とした。７７日間飼育し、翌日（７８日目）に２４時間絶食させ、その後血液を採取した。
【００４８】
[[血漿の抽出]]
採取した血液は、ヘパリン入りのＰＳＴチューブ（ＢＤ社）に回収し、３０００ｇ×５分で処理し、得られた血漿を−４０℃で保管した。
生化学検査測定装置ＤＲＩ−ＣＨＥＭ４０００（富士フイルムメディカル株式会社製）を用いて、血漿中のグルコース（ＧＬＵ）、総コレステロール（ＴＣＨＯ）、中性脂肪（ＴＧ）、肝逸脱酵素（ＧＰＴ及びＧＯＴ）を測定した。
何れの統計処理もｔ検定を用いた。
【００４９】
７７日間の飼育で、飼育最終日までに死亡した個体はなかった。上記（２）ＷＤ群は、肝臓重量、血漿中の中性脂肪（ＴＧ）、総コレステロール（ＴＣＨＯ）、グルコース量（ＧＬＵ）、ＧＯＴ、ＧＰＴの値が、（１）ＮＤ群に比べて優位に高かったことから（ｐ＜０．０１）、（２）群のマウスはメタボリックシンドロームを誘発したといえる。
【００５０】
血漿中の中性脂肪の測定結果を図２に示す。（２）ＷＤ群及び（３）ＳＦＢ０．２％群は、（１）ＮＤ群に比べ有意に増加した（ｐ＜０．０１）。一方、（４）ＳＦＢ２％群は（２）ＷＤ群と比べて有意に減少し（ｐ＜０．０１）した。
【００５１】
血漿中の総コレステロールの測定結果を図３に示す。（２）ＷＤ群は、（１）ＮＤ群に比べ有意に増加した（ｐ＜０．０１）。（３）ＳＦＢ０．２％群は、（２）ＷＤ群に比べ有意に減少した（ｐ＜０．０１）。（４）ＳＦＢ２％群は、（２）ＷＤ群と比べて有意差はないものの減少する傾向が見られた。
【００５２】
血漿中のグルコースの測定結果を図４に示す。（２）ＷＤ群及び（３）ＳＦＢ０．２％群は、（１）ＮＤ群に比べ有意に増加した（ｐ＜０．０１）。（４）ＳＦＢ２％群は（２）ＷＤ群と比べて有意に減少した（ｐ＜０．０５）。
【００５３】
血漿中のＧＰＴの測定結果を図５に示す。（２）ＷＤ群、（３）ＳＦＢ０．２％群及び（４）ＳＦＢ２％群は、（１）ＮＤ群に比べ有意に増加した（ｐ＜０．０１）。一方、（４）ＳＦＢ２％群は（２）ＷＤ群と比べて有意差はないものの減少する傾向が見られた。
【００５４】
以上の結果から、粉末化したシルクフィブロインでも、ゼリー状（ゲル状）のシルクフィブロインと同様の臨床的効果が得られることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明のＧＬＰ−１産生促進剤は安全であり、飲食品に含有させることが容易なので、糖尿病の予防、改善用の機能性食品として広く利用することができる。
【図１】
2018030781.tif 000003
【図２】
2018030781.tif 000004
【図３】
2018030781.tif 000005
【図４】
2018030781.tif 000006
【図５】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年12月20日(2017.12.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シルクフィブロインを有効成分として含有することを特徴とするＧＬＰ−１産生促進剤（但し、糖質の体内吸収抑制による血糖低下のために用いる場合を除く）。
【請求項２】
請求項１に記載のＧＬＰ−１産生促進剤を含有することを特徴とするインスリン分泌促進剤（但し、糖質の体内吸収抑制による血糖低下のために用いる場合を除く）。
【請求項３】
請求項１に記載のＧＬＰ−１産生促進剤を含有することを特徴とするＧＬＰ−１産生促進用飲食品（但し、糖質の体内吸収抑制による血糖低下のために用いる場合を除く）。