(57)【要約】【課題】  核酸クロマト法を行うにあたって、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを防止することを可能とする。【解決手段】  遺伝子検査用のストリップ３を固定して備え、ストリップ３により標的核酸を検出するための核酸クロマトグラフィー検査器具であって、ストリップ３を固定するためのストリップ固定部１１を有する第一の本体部１と、第一の本体部１に嵌合して、第一の本体部１と共に内部に密閉空間を形成する第二の本体部２とを備え、ストリップ３の下端が、第二の本体部２内に位置する核酸クロマトグラフィー検査器具により核酸クロマト法を行う。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子検査用のストリップを固定して備え、前記ストリップにより標的核酸を検出するための核酸クロマトグラフィー検査器具であって、
前記ストリップを固定するためのストリップ固定部を有する第一の本体部と、
前記第一の本体部に嵌合して、前記第一の本体部と共に内部に密閉空間を形成する第二の本体部と、を備え、
前記ストリップの下端が、前記第二の本体部内に位置する
ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項２】
前記ストリップ固定部が、前記第一の本体部内の上端部に備えられたことを特徴とする請求項１記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項３】
前記ストリップが、前記第一の本体部に対して前記ストリップの検出領域が非接触で固定されたことを特徴とする請求項１又は２記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項４】
前記第一の本体部及び前記第二の本体部が、嵌め込み又はネジにより嵌合することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項５】
前記第一の本体部が、透明部材からなることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項６】
前記ストリップ固定部が、吸水性及び／又は吸湿性を有する部材からなることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項７】
前記第一の本体部及び／又は前記第二の本体部の内面に、防曇処理が施されたことを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項８】
前記第一の本体部及び／又は前記第二の本体部の少なくとも内面を、防曇剤を含有する樹脂を用いて形成した請求項１〜６のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項９】
前記第一の本体部が当該第一の本体部の開口部の外側周縁に挿入連結部を備えると共に、前記第二の本体部が当該第二の本体部の開口部の内側周縁に被挿入連結部を備え、前記挿入連結部が前記被挿入連結部に挿入されて嵌合することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項１０】
前記第一の本体部が当該第一の本体部の開口部の内側周縁に被挿入連結部を備えると共に、前記第二の本体部が当該第二の本体部の開口部の外側周縁に挿入連結部を備え、前記挿入連結部が前記被挿入連結部に挿入されて嵌合することを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項１１】
前記第一の本体部が、前記ストリップの検出領域に対して平行な平側面を備えたことを特徴とする請求項１〜１０のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項１２】
前記第二の本体部が、当該第二の本体部を自立可能とする平底を備えたことを特徴とする請求項１〜１１のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項１３】
前記第二の本体部が、ＰＣＲ用のチューブの本体部と同一の形状であることを特徴とする請求項１〜１１のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項１４】
前記第一の本体部における前記挿入連結部が、ＰＣＲ用のチューブに挿入されて当該チューブと嵌合することを特徴とする請求項９記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具と、
少なくとも、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを含むＰＣＲ用反応試薬と、
少なくとも標識用色素及び緩衝液を含むクロマトグラフィー展開液と、を含む
ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査用キット。
【請求項１６】
請求項１〜１４のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法であって、
ＰＣＲを行って得られた標的核酸とクロマトグラフィー展開液を含む反応液が封入されたＰＣＲ用のチューブを開封し、
前記核酸クロマトグラフィー検査器具の前記第一の本体部を前記チューブに挿入して嵌合させ、
前記反応液を前記ストリップに展開させて、前記反応液中の標的核酸を前記ストリップに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブと結合させ、前記展開液に含まれ、標的核酸に結合した前記標識用色素を検出することにより標的核酸を検出し、
前記第一の本体部が前記チューブに嵌合した状態で、前記第一の本体部及び前記チューブを廃棄する
ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法。
【請求項１７】
請求項１〜１４のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法であって、
ＰＣＲを行って得られた標的核酸を含む反応液が封入されたＰＣＲ用のチューブを開封し、
前記核酸クロマトグラフィー検査器具の前記第一の本体部を前記チューブに挿入して嵌合させ、前記反応液を前記ストリップに展開させて、前記反応液中の標的核酸を前記ストリップに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブと結合させ、
前記核酸クロマトグラフィー検査器具の前記第二の本体部にクロマトグラフィー展開液を注入し、前記第一の本体部を前記チューブから取り外して前記第二の本体部に挿入して嵌合させ、前記展開液を前記ストリップに展開させて、前記展開液に含まれる標識用色素をプローブに結合した標的核酸に結合させて、前記標識用色素を検出することにより標的核酸を検出し、
前記第一の本体部が前記第二の本体部に嵌合した状態で、前記第一の本体部及び前記第二の本体部を廃棄する
ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸クロマトグラフィー技術に関し、特に、プローブが固定化された遺伝子検査用のストリップを用いて標的核酸を検出する核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、核酸クロマト法を行うにあたっては、一般的に、プローブが固定化された遺伝子検査用のストリップを用いて、標的核酸をストリップに固定化されたプローブにハイブリダイズ（相補的に結合）させることによって、検出が行われていた。
具体的には、例えば、検査対象の試料からゲノムＤＮＡを抽出し、ＰＣＲ（polymerase chain reaction）法などにより標的核酸を増幅して得られた増幅産物を含む反応液に遺伝子検査用ストリップを浸漬して、増幅産物をストリップに展開させてプローブとハイブリダイズさせ、プローブとハイブリダイズした増幅産物に結合する標識用色素を目視で確認することによって、標的核酸の検出が行われていた。
【０００３】
このとき、抽出したゲノムＤＮＡをＰＣＲ反応試薬と共にＰＣＲチューブに入れてＰＣＲを行った後、標識用色素を含むクロマトグラフィー展開液をＰＣＲチューブに混合して、増幅産物の着色が行われていた。そして、このＰＣＲチューブ内の反応液に遺伝子検査ストリップを浸漬して、反応液を毛細管現象によってストリップに展開させ、ストリップに固定化されたプローブにハイブリダイズした増幅産物により示される着色されたラインを確認することが行われていた。
【０００４】
このような核酸クロマト法は、例えば、特許文献１に記載の検体検査用具を用いて行うことができる。すなわち、このような検体検査用具（遺伝子検査ストリップなど）を用いれば、一般に小型で逆円錐形状であるＰＣＲチューブに挿入する場合でも適用することが可能とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１０−１４５０７号公報
【特許文献２】特表２０１５−５１２２５０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、このような検体検査用具をＰＣＲチューブに挿入して、核酸クロマト法を行う場合、増幅産物のストリップへの展開が、開放形で行われることから、コンタミネーションの虞があるという問題があった。
【０００７】
コンタミネーションの虞としては、具体的には次の４つの場合が考えられ、手指、他の検体、実験器具、作業服、環境などのコンタミネーションが発生すると実験結果に悪影響を与える可能性がある。
（１）ＰＣＲチューブの開封時に、反応液が飛散する場合
（２）ストリップへの展開時に、反応液の揮発によって飛散する場合
（３）ストリップへの展開時に、手指や他のストリップへの接触が生じる場合
（４）検査終了後に、検査器具の廃棄によって飛散する場合
これらの中でも特に（４）の検査器具の廃棄によるコンタミネーションは、大きな悪影響を及ぼすと考えられることから、近年最も問題となっている。
【０００８】
ここで、コンタミネーションを抑制するための技術として、特許文献２に記載の分析物検出デバイスを挙げることができる。このデバイスによれば、準密閉系となるように構成されたデバイス内において、増幅産物をストリップに展開させることが可能とされている。
具体的には、液体サンプルが入った容器をデバイスの空洞に挿入することで、容器の下部が穿孔されて容器内のサンプルが放出されてストリップに到達し、展開されるようになっている。
【０００９】
しかしながら、このような容器の下部を穿孔する方法では、穿孔がうまくいかない場合には、容器内のサンプルをストリップに適切に展開できないという問題があった。
また、完全な密閉系ではないため、検査器具の廃棄によるコンタミネーションが生じる可能性があるという問題もあった。
【００１０】
そこで、本発明者らは、鋭意研究して、上記の４つのコンタミネーションの虞のうち、（２）〜（４）を解消可能な核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具を開発することに成功し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを防止することが可能な核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記課題を解決するために、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具は、遺伝子検査用のストリップを固定して備え、前記ストリップにより標的核酸を検出するための核酸クロマトグラフィー検査器具であって、前記ストリップを固定するためのストリップ固定部を有する第一の本体部と、前記第一の本体部に嵌合して、前記第一の本体部と共に内部に密閉空間を形成する第二の本体部とを備え、前記ストリップの下端が、前記第二の本体部内に位置する構成としてある。
【００１２】
また、本発明の核酸クロマトグラフィー検査キットは、上記の核酸クロマトグラフィー検査器具と、少なくとも、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを含むＰＣＲ用反応試薬と、少なくとも標識用色素及び緩衝液を含むクロマトグラフィー展開液とを含む構成としてある。
【００１３】
また、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法は、上記の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法であって、ＰＣＲを行って得られた標的核酸とクロマトグラフィー展開液を含む反応液が封入されたＰＣＲ用のチューブを開封し、前記核酸クロマトグラフィー検査器具の前記第一の本体部を前記チューブに挿入して嵌合させ、前記反応液を前記ストリップに展開させて、前記反応液中の標的核酸を前記ストリップに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブと結合させ、前記展開液に含まれ、標的核酸に結合した前記標識用色素を検出することにより標的核酸を検出し、前記第一の本体部が前記チューブに嵌合した状態で、前記第一の本体部及び前記チューブを廃棄する方法としてある。
【００１４】
また、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法は、上記の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法であって、ＰＣＲを行って得られた標的核酸を含む反応液が封入されたＰＣＲ用のチューブを開封し、前記核酸クロマトグラフィー検査器具の前記第一の本体部を前記チューブに挿入して嵌合させ、前記反応液を前記ストリップに展開させて、前記反応液中の標的核酸を前記ストリップに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブと結合させ、前記核酸クロマトグラフィー検査器具の前記第二の本体部にクロマトグラフィー展開液を注入し、前記第一の本体部を前記チューブから取り外して前記第二の本体部に挿入して嵌合させ、前記展開液を前記ストリップに展開させて、前記展開液に含まれる標識用色素をプローブに結合した標的核酸に結合させて、前記標識用色素を検出することにより標的核酸を検出し、前記第一の本体部が前記第二の本体部に嵌合した状態で、前記第一の本体部及び前記第二の本体部を廃棄する方法としてある。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、核酸クロマト法を行うにあたって、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを防止することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の外観を示す斜視図である。
【図２】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の上部カプセルと下部カプセルを別個に示す側面図である。
【図３】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の上部カプセルと下部カプセルを嵌合させた状態を示す側面図である。
【図４】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の様々な形状の上部カプセルと下部カプセルを嵌合させた状態を示す側面図である。
【図５】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法１の工程を示す図である。
【図６】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法２の工程を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法の好ましい実施形態について、図面を参照して説明する。
まず、図１を参照して、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の概略について説明する。図１は、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の斜視図を示している。
【００１８】
本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具は、図１に示すように、遺伝子検査用のストリップ３を固定するためのストリップ固定部１１を有する上部カプセル１（第一の本体部）と、上部カプセル１に嵌合して、上部カプセル１と共に内部に密閉空間（以下、カプセル内と称する場合がある）を形成する下部カプセル２（第二の本体部）とを備えている。そして、上部カプセル１と下部カプセル２が嵌合した状態で、ストリップ３の下端が、下部カプセル２内に位置するようになっている。
【００１９】
上部カプセル１と下部カプセル２の形状は、図１に限定されず、内部に密閉空間を形成可能なものである限り、どのような形状であっても良い。例えば、カプセル剤の形状の他、円柱、角柱等であっても良く、また上部カプセル１又は下部カプセル２が、円錐形状やＰＣＲチューブの本体部と同一の形状であっても良い。
【００２０】
ストリップ固定部１１は、図１では、上部カプセル１内の上端部に備えられているが、これに限定されず、例えば上部カプセル１の側面の内壁に備えることもできる。
また、ストリップ固定部１１は、ストリップ３を固定可能であれば良く、その固定方法は特に限定されない。例えば、挟み込み、差し込み、接着、溶着、テープ止め、ピン止め、ストリップに穴を開けて吊す等の方法により、ストリップ３を固定することができる。
【００２１】
また、ストリップ３は、上部カプセル１に対してストリップ３の検出領域３２が非接触で固定されるのが好ましい。
ストリップ３の検出領域３２が、上部カプセル１と下部カプセル２のいずれか、又は両方に密着していると、ストリップ３の検出領域３２に展開してきた反応液が、検出領域３２とこれと密着する部位との界面に発現する毛細管現象によって、ストリップ３から浸み出して吸い上げられてしまい、標的核酸が検出できなくなってしまう虞がある。ストリップ３が、上部カプセル１に対してストリップ３の検出領域３２が非接触で固定され、かつ、ストリップ３の下端が、下部カプセル２内に位置するようになっていれば、このような不具合を有効に回避することができる。
【００２２】
ストリップ固定部１１は、吸水性及び／又は吸湿性を有するものであることが好ましい。ストリップ固定部１１を、吸水性を有するものとすれば、ストリップ３の吸水能力を高めることができ、ストリップ３における反応液の展開をより効率的に行わせることが可能となる。また、ストリップ固定部１１を、吸湿性を有するものとすれば、カプセル内の湿度を低減でき、カプセル内面に結露が生じて観察ができなくなることを防止することが可能となる。
このような観点から、ストリップ固定部１１は、例えば、セルロース、吸水樹脂、乾燥剤等の部材からなるものとすることができる。
【００２３】
上部カプセル１は、全部透明であっても、一部が透明であっても良く、少なくとも上部カプセル１の外部から上部カプセル１内のストリップ３の検出領域に示される検査結果を視認可能であれば良い。なお、コストや成形の観点からは、全部透明であることが好ましい。また、下部カプセル２も、全部透明であっても、一部が透明であっても良く、全部非透明であっても良い。なお、「透明」には、無色透明の他、有色透明も含まれ、光を透過可能であることを意味する。
このような透明部材としては、例えば、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、メチルメタクリレート（ＭＭＡ）などのアクリル樹脂、ポリエチレン、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）、ポリプロピレン、環状オレフィンなどのオレフィン系樹脂等を好適に用いることができる。
【００２４】
また、上部カプセル１及び／又は下部カプセル２の内面が曇り、検査結果が視認しづらくなることを防ぐために、上部カプセル１及び／又は下部カプセル２の内面を、防曇処理を施したものとすることも好ましい。このような防曇処理は、例えばカプセル内面への紫外線硬化型防曇塗料の塗布や防曇処理フィルムの貼付により行うことができる。また、上部カプセル１及び／又は下部カプセル２の少なくとも内面を、防曇剤を含有する樹脂を用いて成形することもできる。
【００２５】
防曇剤としては、例えば、グリセリンモノオレート，グリセリンラウレート，グリセリンカプレート，ジグリセリンオレート，ジグリセリンラウレート，トリグリセリンオレート等のグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪アルコール、ポリエチレングリコールオレート，ポリエチレングリコールラウレート等のポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルなどが挙げられる。
防曇剤を添加するにあたり、その添加量は０．１〜５質量％であるのが好ましく、より好ましくは１．２〜２．４質量％である。防曇剤の添加量が０．１質量％に満たないと、防曇剤を添加したことによる改善効果が十分に得られない傾向がある。一方、防曇剤の添加量が５質量％を超えると、それ以上の改善効果が認められず、また、上部カプセル１及び／又は下部カプセル２の透明性の低下や、ブリード量が多くなることによる金型清掃頻度の増加、ベント詰まりの発生につながり、連続成形性が低下する傾向がある。
【００２６】
上部カプセル１及び／又は下部カプセル２の透明性を高めるには、透明核剤を添加するのも有効である。透明核剤としては、リン酸エステル金属塩、ピメリン酸金属塩、ロジン金属塩、ベンジリデンソルビトール、キナクリドン、シアニンブルー、タルクなどが挙げられる。
透明核剤を添加するにあたり、その添加量は０．１〜１０質量％であるのが好ましい。透明核剤の添加量が０．１質量％に満たないと、透明核剤を添加したことによる改善効果が十分に得られない傾向がある。一方、透明核剤の添加量が１０質量％を超えると、それ以上の改善効果が認められず、臭気を発したり、ブリードアウトして表面物性に悪影響を与えたりしてしまう傾向がある。
【００２７】
上部カプセル１と下部カプセル２による嵌合の具体的な態様は、特に限定されず、図１に示すように、面接触による嵌合であっても良い。
また、上部カプセル１と下部カプセル２は、嵌め込み又はネジにより嵌合する構成にすることが好ましい。これにより、嵌合された上部カプセル１と下部カプセル２とが意図せずに分離することを防止することができる。図２には嵌め込みにより嵌合する構成の例が示されている。すなわち、上部カプセル１の開口部の外側周縁に突起部（挿入連結部１２）が形成され、下部カプセル２の開口部の内側周縁に溝部が（被挿入連結部２１）形成されており、挿入連結部１２を被挿入連結部２１に挿入して、突起部を溝部に嵌合させる構成となっている。なお、上部カプセル１の開口部の外側周縁に溝部を備え、下部カプセル２の開口部の内側周縁に突起部を備える構成としても良い。
なお、本明細書において、挿入連結部及び被挿入連結部の用語は、上部カプセル１と下部カプセル２が面接触により嵌合する場合にも適用される。
【００２８】
図２では、上部カプセル１の外側が、下部カプセル２の内側に挿入される形態（以下、上部カプセル内嵌め式）となっているが、下部カプセル２の外側が、上部カプセル１の内側に挿入される形態（以下、上部カプセル外嵌め式）であっても良い。すなわち、上部カプセル１の開口部の内側周縁に溝部（被挿入連結部）が形成され、下部カプセル２の開口部の外側周縁に突起部（挿入連結部）が形成され、挿入連結部を被挿入連結部に挿入して、突起部を溝部に嵌合させる構成とすることも好ましい。なお、上部カプセル１の開口部の内側周縁に突起部を備え、下部カプセル２の開口部の外側周縁に溝部を備える構成としても良い。
【００２９】
また、上部カプセル１は、ストリップ３の検出領域に対して平行な平側面を備えることが好ましい。上部カプセル１をこのような構成にすれば、検査結果をより視認し易く、またＣＣＤカメラなどの撮影手段によってストリップ３の検出領域を自動的に撮影する場合には、その撮影をより確実に行うことが可能となる。
【００３０】
遺伝子検査用のストリップ３は、増幅産物を捕捉するためのプローブが固定化された細長の部材であり、反応液が毛細管現象によって部材全体に浸透し、展開しやすいように形成される。このため、ストリップの部材としてはセルロースメンブランなどのセルロース等が好適に用いられる。また、ストリップに強度を持たせて取り扱いを容易にするために、その一方の面に樹脂を接着したものを用いても良い。
【００３１】
ストリップ３は、一又は二以上のプローブが、ストリップ３の特定の位置において、ストリップ３の短手方向にライン状に固定化された検出領域３２と、ＰＣＲ反応液やクロマトグラフィー展開液を浸透させ（染み込ませ）、展開させ始める部分である展開開始領域３１を有する。なお、展開開始領域３１がストリップ３におけるごく僅かな部分である場合もあり得る。
【００３２】
検出領域３２には、プローブが固定化された一又は二以上の領域（スポット）がストリップ３の短手方向にライン状に形成（スポッティング）されている。このプローブが固定化されたラインの数は、特に限定されず、例えば１〜１５個、好適には８〜１２個等のラインが形成されたものなどを用いることができる。
このようなライン状に固定化されたプローブにハイブリダイズした増幅産物に対して、例えば青色の標識用色素が結合すると、ストリップ３の検出領域上において、青色のラインを目視によって検出できる。また、検出領域３２には、プローブが固定化されたラインの位置を明確に確認できるようにするために、その他の色のライン、例えば赤色のラインが、位置決めマーカーとして好適に配置される。標識用色素は、特に限定されないが、例えばアビジン・ビオチンシステムによるものを好適に用いることができる。
【００３３】
展開開始領域３１は、ＰＣＲ反応液とクロマトグラフィー展開液を最初に染み込ませる部分である。展開開始領域３１は、検出領域３２に隣接して連続して形成されており、展開開始領域３１に染み込んだ液体は、毛細管現象によって検出領域３２へ展開する。
なお、液体をストリップに染み込み易くさせるため、吸水促進領域３３を展開開始領域３１と反対側の検出領域３２に隣接して連続して形成しても良い。吸水促進領域３３は、例えばストリップ上に吸水パッドやセルロース等の部材を積層して構成でき、このような吸水部材によってストリップに展開した水分の吸水を促進させることができる。また、このようにストリップに部材を積層して厚みを増加させた領域を形成することによって、ストリップをより取り扱い易くすることもできる。
【００３４】
本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具では、上部カプセル１と下部カプセル２が嵌合した状態で、ストリップ３の下端が、下部カプセル２内に位置するようになっており、これによって、ストリップ３の展開開始領域３１が、ＰＣＲ用のチューブ４内におけるＰＣＲ反応液や下部カプセル２内に注入された展開液に浸漬又は接触する。
ストリップ３の検出領域３２は、上部カプセル１及び下部カプセル２内に配置させることができるが、上部カプセル１内に配置させることが好ましい。
【００３５】
本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具は、図１及び図４に示すように、様々な形状の上部カプセル１と下部カプセル２からなるものとすることができる。
具体的には、図１に示すように、下部カプセル２を、ＰＣＲ用のチューブの本体部と同一の形状とすることが好ましい。下部カプセル２をこのような形状にすれば、上部カプセル１における挿入連結部を、ＰＣＲ用のチューブに挿入して当該チューブと嵌合させることができる。また、本検査器具を汎用のＰＣＲチューブ用ラックに収容することも可能となる。さらに、ＰＣＲ用のチューブの開口部の周縁に開口部を塞ぐための蓋などの突出部がない場合には、当該ＰＣＲ用のチューブを、上部カプセル１における被挿入連結部に挿入して嵌合させたりすることも可能となる。
【００３６】
また、図４（Ａ）に示すように、下部カプセル２に、当該下部カプセル２を自立可能とする平底を備えることも好ましい。下部カプセル２をこのような構成にすれば、上部カプセル１と下部カプセル２を嵌合させた状態で、自立させることができる。
また、図４（Ｂ）（Ｃ）に示すように、上部カプセル外嵌め式となるように、上部カプセル１と下部カプセル２を形成することも好ましい。
【００３７】
また、図４（Ｄ）に示すように、上部カプセル１を、ストリップ３の検出領域３２に対して平行な平側面を備えたものとすることも好ましい。上部カプセル１をこのような構成にすれば、ストリップ３の検出領域３２を視認し易くすることができ、また機器による発色測定や蛍光測定の精度を向上させることが可能となる。
また、図４（Ｅ）に示すように、上部カプセル１と下部カプセル２を、円柱又は角柱からなるものとすることも好ましい。
【００３８】
ここで、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具に適用可能な核酸クロマト法のプロトコルについて説明する。
核酸クロマト法は、標的核酸が遺伝子検査用のストリップ内を一定方向に移動（展開）することにより、ストリップにスポッティングされているプローブに補足されるとともに、プローブが固定化されたスポットにおいて標的核酸が濃縮されることで、その標的核酸に結合した標識用色素により目視できるレベルまでの発色を得て、標的核酸を検出するものである。
【００３９】
まず、標的核酸の増幅処理をＰＣＲ法などによって行う。すなわち、このＰＣＲ法などによる増幅産物は、標的核酸からなる。
具体的には、検査対象生物のゲノムＤＮＡにおける標的核酸を増幅させるためのプライマーセットを含むＰＣＲ反応試薬をＰＣＲチューブへ注入する。プライマーセットとしては、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを用いることができ、複数の標的核酸を同時に増幅するマルチプレックスＰＣＲを行うこともできる。
また、ＰＣＲ反応試薬には、プライマーセットの他、核酸合成基質（例えば、ｄＮＴＰｍｉｘｔｕｒｅ（dCTP、dATP、dTTP、dGTP））、核酸合成酵素（例えば、ＥＸ  Ｔａｑ  ＨｏｔＳｔａｒｔ  ＤＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）、緩衝液等が含まれる。
そして、ＰＣＲチューブには、このようなＰＣＲ反応試薬と、生体試料から抽出されたゲノムＤＮＡ、及び残りの成分として水を含む溶液が注入され、この溶液がＰＣＲに使用する反応液として用いられる。
【００４０】
ゲノムＤＮＡの抽出は、ＣＴＡＢ法（Cetyl  trimethyl  ammonium  bromide）による方法やＤＮＡ抽出装置を用いる方法など、一般的な手法により行うことができる。
また、ＰＣＲ装置としては、一般的なサーマルサイクラーなどを用いることができる。ＰＣＲ反応は、例えば以下のような反応条件で行うことができるが、適宜変更して実施可能であり、全体を１５〜３０分程度で行っても良い。
（ａ）９５℃  ２分、（ｂ）９５℃（ＤＮＡ変性工程）  １０秒、（ｃ）６０℃（アニーリング工程）  ２０秒、（ｄ）７２℃（ＤＮＡ合成工程）  ９０秒（（ｂ）〜（ｄ）を４０サイクル）、（ｅ）７２℃  ２分
【００４１】
次に、ＰＣＲによって得られた増幅産物（標的核酸）を含むＰＣＲ反応液を、遺伝子検査用のストリップに展開させる。すなわち、ストリップにおける展開開始領域に対して、ＰＣＲ反応液を染み込ませる。ＰＣＲ反応液は、展開開始領域から検出領域へ展開する。そして、検出領域に固定化されたプローブと相補的な塩基配列を有する増幅産物がＰＣＲ反応液に含まれている場合、そのプローブと増幅産物がハイブリダイズする。
また、複数種類のプローブがストリップ上に個別にライン状に固定化され、各プローブにそれぞれハイブリダイズする増幅産物がマルチプレックスＰＣＲにより得られてＰＣＲ反応液に含まれている場合も同様に、それぞれ対応するプローブと増幅産物がハイブリダイズする。
【００４２】
次に、遺伝子検査ストリップの展開開始領域に対して、クロマトグラフィー展開液を染み込ませる。クロマトグラフィー展開液は、ＰＣＲ反応液が検出領域に十分に展開した後に染みこませることが望ましい。クロマトグラフィー展開液を展開開始領域へ染み込ませるのは、ＰＣＲ反応液が検出領域へ展開した後、例えば５〜１０分程度経過した後に、行うことが好ましい。
【００４３】
このような核酸クロマト法のプロトコルによれば、増幅産物を含むＰＣＲ反応液を先にストリップに展開した後に、標識用色素を含むクロマトグラフィー展開液をストリップに後から展開して、プローブとハイブリダイズした増幅産物に対して着色を行うことができる。このため、着色されたラインを安定的に得ることができ、検出精度を向上させることが可能となる。
【００４４】
また、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法において、標的核酸を含むＰＣＲ反応液にクロマトグラフィー展開液を混合して、展開液に含まれる標識用色素を標的核酸に結合させ、この標識用色素が結合した標的核酸を含むＰＣＲ反応液（及び展開液）をストリップに展開させることも可能である。
【００４５】
クロマトグラフィー展開液には、少なくとも標識用色素（着色ビーズ、例えばアビジン・ビオチンシステムによるものなど）と緩衝液が含まれる。この標識用色素は、増幅産物と結合することができる。そして、展開液に含まれる標識用色素が増幅産物と結合することによって、プローブが固定化された位置に着色されたラインが現れる。
このように、ストリップ上の着色されたラインを確認することによって、標的核酸を検出することができる。
【００４６】
また、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査キットとしては、上述した核酸クロマトグラフィー検査器具と、少なくとも、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを含むＰＣＲ用反応試薬と、少なくとも標識用色素及び緩衝液を含むクロマトグラフィー展開液とを含むものとすることが好ましい。
このような核酸クロマトグラフィー検査キットによれば、核酸クロマト法を行うにあたって、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを好適に防止することが可能となる。
【００４７】
次に、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法１の工程について、図５を参照して、説明する。使用方法１は、標的核酸を含むＰＣＲ反応液にクロマトグラフィー展開液を混合して、標識用色素が結合した標的核酸を含むＰＣＲ反応液をストリップに展開させる方法である。
まず、ＰＣＲを行って得られた標的核酸とクロマトグラフィー展開液を含む反応液が封入されたＰＣＲ用のチューブ４を開封すると共に、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の上部カプセル１と下部カプセル２を分離する。このとき、展開液における標識用色素は、標的核酸に結合している。
次に、上部カプセル１をチューブ４に挿入して嵌合させる。
これによって、反応液がストリップ３に展開して、反応液中の標的核酸がストリップ３に固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブとハイブリダイズする。
【００４８】
このとき、チューブ４を下部カプセル２と同様にして、上部カプセル１と嵌め込み又はネジにより嵌合する構成とすることも好ましい。すなわち、チューブ４の開口部の外側周縁又は内側周縁に溝部、突起部、又はネジを備えて、上部カプセル１と嵌合させることも好ましい。
【００４９】
次に、標的核酸に結合した標識用色素を検出することにより、標的核酸を検出する。
すなわち、標識用色素が結合した標的核酸が、プローブとハイブリダイズすることによって、プローブが固定化された位置に着色されたラインが現れる。このストリップ上の着色されたラインを目視又は撮影して確認することにより、標的核酸が検出される。
【００５０】
そして、上部カプセル１がチューブ４に嵌合した状態で、上部カプセル１及びチューブ４を廃棄する。
このように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法によれば、上部カプセル１がチューブ４に嵌合してストリップと反応液が密閉された状態で標的核酸を検出でき、また当該検査器具をそのまま廃棄することができる。このため、核酸クロマト法を行うにあたって、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーションを防止でき、さらに検査器具の廃棄によるコンタミネーションを適切に防止することが可能となっている。
【００５１】
次に、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法２の工程について、図６を参照して、説明する。使用方法２は、標的核酸を含むＰＣＲ反応液を先にストリップに展開した後に、標識用色素を含むクロマトグラフィー展開液をストリップに後から展開する方法である。
まず、ＰＣＲを行って得られた標的核酸を含む反応液が封入されたＰＣＲ用のチューブ４を開封すると共に、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の上部カプセル１と下部カプセル２を分離する。
次に、上部カプセル１をチューブ４に挿入して嵌合させる。
これによって、反応液がストリップ３に展開して、反応液中の標的核酸が、ストリップ３に固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブとハイブリダイズする。
【００５２】
次に、下部カプセル２にクロマトグラフィー展開液を注入する。そして、上部カプセル１をチューブ４から取り外して、下部カプセル２に挿入して嵌合させる。
これによって、展開液がストリップ３に展開して、展開液に含まれる標識用色素が、プローブにハイブリダイズした標的核酸に結合する。
【００５３】
次に、標的核酸に結合した標識用色素を検出することにより、標的核酸を検出する。
すなわち、標識用色素が、プローブにハイブリダイズした標的核酸と結合することによって、プローブが固定化された位置に着色されたラインが現れる。このストリップ上の着色されたラインを目視又は撮影して確認することにより、標的核酸が検出される。
そして、上部カプセル１が下部カプセル２に嵌合した状態で、上部カプセル１及び下部カプセル２を廃棄する。また、チューブ４は、蓋をして密閉された状態で、廃棄することができる。
【００５４】
このように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法によれば、上部カプセル１が下部カプセル２に嵌合してストリップと反応液が密閉された状態で標的核酸を検出でき、当該検査器具をそのまま廃棄することができる。このため、核酸クロマト法を行うにあたって、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーションを防止でき、さらに検査器具の廃棄によるコンタミネーションを適切に防止することが可能となっている。
【００５５】
また、この方法によれば、増幅産物を含むＰＣＲ反応液を先にストリップに展開した後に、標識用色素を含むクロマトグラフィー展開液をストリップに後から展開して、プローブとハイブリダイズした増幅産物に対して着色を行うことができるため、着色されたラインを安定的に得ることができ、検出精度を向上させることが可能となる。
【００５６】
以上、本発明について、好ましい実施形態を示して説明したが、本発明は、上記実施形態に限定されるものではなく、本発明の範囲で種々の変更実施が可能であることは言うまでもない。
例えば、上部カプセル１と下部カプセル２の形状は、図１〜図４に示されたものに限定されず、その他の種々の形状にするなど適宜変更することが可能である。
【産業上の利用可能性】
【００５７】
本発明は、核酸クロマト法を行うにあたって、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを防止するために、好適に利用することが可能である。
【符号の説明】
【００５８】
１  上部カプセル（第一の本体部）
１１  ストリップ固定部
１２  挿入連結部
２  下部カプセル（第二の本体部）
２１  被挿入連結部
３  ストリップ
３２  検出領域
４  チューブ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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