(57)【要約】【課題】尿路結石、猫特発性膀胱炎、またはＦＬＵＴＤを含む、低水和から生じる疾患または状態についての進行のリスクが増加したネコを特定する方法を提供する。【解決手段】(i)ネコが、リスクの増加と関係するＰＴＧＥＳ３遺伝子内での変異または一塩基変異多型（ＳＮＰ）を示すかどうかを試験すること、及び、(ii)ネコの尿比重を測定すること、の１種以上を含む。【選択図】図１
2018075042.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
低水和から生じる疾患または状態の進行のリスクが増加したネコの特定方法であって、
ネコが、リスクの増加と関係するＰＴＧＥＳ３遺伝子内での変異または一塩基変異多型（ＳＮＰ）を示すかどうかを試験すること、及び、
ネコの尿比重を測定すること、
の１種以上を含む、方法。
【請求項２】
前記疾患または状態が、尿路結石、猫特発性膀胱炎、及びＦＬＵＴＤの進行から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
少なくとも１．０５前後であるか、１．０６より大きいか、または１．０７より大きい尿比重を有するネコはリスクが増加したと考える請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ネコが１種以上のＳＮＰを示すかどうかを試験することは、ネコが、ｃｈｒＢ４．１０１４６４６７７、ｃｈｒＢ４．１０１３４１３０４及びｃｈｒＢ４．１０１４３８７４１から選択される１種以上のＳＮＰを示すどうかを試験することを含む請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
ネコが１種以上のＳＮＰを示すかどうかを試験することは、ＳＮＰを測定することを含み、ＳＮＰを測定することは、配列特異的オリゴヌクレオチドプローブを利用するハイブリダイゼーション法、酵素系技術、及び、ＤＮＡの物理的性質に基づくポスト増幅法のうちの１種以上を含む請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
イエネコ（Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）は砂漠条件で正常に生息し、他の多くの動物と比較して、非常に濃縮した尿を生成することにより水を保持することに適応している。しかし、非常に濃縮した尿を生成することは、尿路結石、及び猫特発性膀胱炎等の、明確でない他の尿路状態の進行の促進等の悪影響を有する可能性がある。不十分な水和によるネコの尿路状態は、猫下部尿路疾患（ＦＬＵＴＤ）と呼ばれることもある。ＦＬＵＴＤはネコの生命を脅かす状態となる場合がある。特に、ネコの飼い主がＦＬＵＴＤで直面する問題は、症状に飼い主が気づく時までに、この疾患はネコの生命を脅かしているということである。結晶がネコの尿路中で石として沈殿し、尿路を遮断する可能性がある。石の種類としてはスツルバイト、シュウ酸カルシウム、尿酸、シスチン、リン酸カルシウム、及びケイ酸塩が挙げられる。スツルバイト及びシュウ酸カルシウム石が、ネコにおいて群を抜いて最も一般的である。未治療のままでいると、尿が滞り腎臓を損傷し、毒素が血中に蓄積するため、「ブロックされた」ネコは死に至る。 
【０００２】
ネコに一層水を飲ませるようにすることができると、これにより尿を希釈することにより、低水和により生じるネコの尿路状態を緩和することができる。この希釈は２つの段階：まず、尿内の電解質濃度を低下させることにより（ネコがより多くの食塩を補うために、それ以上水を飲まないと仮定する）、及び次に、排尿頻度を増加させることによって膀胱中の尿を消化するのにかかる時間を減少させることにより、作用する。ネコは１日あたり、体重１ｋｇあたりわずか約３０ミリリットルの水しか飲まず、自然に飲水を増加させることは難しい。湿性食物を提供することは、水を大変多く飲まない動物の水分摂取の増加に役立つが、依然として摂取する水が十分でない、または利尿を十分に増加させないといういずれかの理由により、湿性食物の提供は不十分である。加えて、泌尿器症候群を示すネコは多くの場合肥満であるか、または過剰体重を有している。したがって、尿路障害、及び特にＦＬＵＴＤを治療するのが望ましい場合、湿性食物を提供することは好ましい場合があるが、十分ではない。即ち、その食物は十分な水和をもたらさず、ネコには許容されない場合があるか、または分配される水分量が十分に制御されない場合、更なる過剰体重及び／もしくは肥満を誘発する場合がある。 
【０００３】
ドコサヘキサエン酸（「ＤＨＡ」）及びエイコサペンタエン酸（「ＥＰＡ」）等の、ある種のω−３ポリ不飽和脂肪酸を含有するある種のキャットフードは、例えば米国特許第８，２５２，７４２号に記載されているように、既知である。米国特許第６，９４６，４８８号に記載されているように、ある種のキャットフードもまた、ω−３及びω−６ポリ不飽和の両方を、特定の量及び比率で含有することが知られている。しかし、水和に関する、食事におけるかかる脂肪酸の任意の効果について、先行技術では開示が存在しない。
【０００４】
したがって、ネコの水和を増加させることにより、ＦＬＵＴＤ等の尿路状態を治療、低下、阻害または緩和するための方法及び組成物の必要性が、今日存在する。
【発明の概要】
【０００５】
驚くべきことに、キャットフードにおける、ある種のω−３及びω−６ポリ不飽和脂肪酸の比率、特に、ＥＰＡに対するアラキドン酸（「ＡＡ」）の比率を制御することにより、ネコの水和の増加をもたらすことが見出されている。我々は、子ネコ及び成熟した大人のネコの両方において、動物を脱水することなく尿の比重を測定することにより、ＥＰＡに対するＡＡの高い比率が尿の流れを増加させることを見出した。血液の浸透圧モル濃度は、動物が、殆どの場合水分摂取の増加により、増加した水和を有することを示す。  
【０００６】
我々の研究では、高いＡＡ：ＥＰＡ比を有する食事と低いＡＡ：ＥＰＡ比を有する食事の、尿比重及び相対過飽和度（ＲＳＳ）の両方を測定した。高いＲＳＳは、石が一層形成しやすい（石を形成する溶質が多い）ことを意味する。尿比重はＲＳＳと正に相関する。ＡＡ：ＥＰＡが高い食物を受けたネコは低い尿比重及び向上した（低下した）ＲＳＳを有し、これは石の形成のリスク低下に対応する。 
【０００７】
本発明はネコの水和レベルを向上させる方法であって、該方法は前記ネコにアラキドン酸及びエイコサペンタエン酸を含む食事を給餌することを含む、前記方法に関係し、ここで、エイコサペンタエン酸に対するアラキドン酸の比は３：１以上であり、かつアラキドン酸の量は０．０５〜０．５乾燥重量％である。
【０００８】
別の実施形態では、本発明は、低水和により生じるネコの疾患または状態の治療方法であって、該方法はアラキドン酸及びエイコサペンタエン酸を含む食物を前記ネコに給餌することを含む、前記方法に関し、ここで、エイコサペンタエン酸に対するアラキドン酸の比は３：１以上であり、かつアラキドン酸の量は０．０５〜０．５乾燥重量％である。
【０００９】
別の実施形態では、本発明はネコの水和を向上させるのに有効な量のアラキドン酸及びエイコサペンタエン酸を含む、味のよい、栄養が完全なキャットフード組成物に関し、ここで、食物組成物は水と組み合わせることで、味がよく、かつネコの単独の食事として栄養が完全であり、かつエイコサペンタエン酸に対するアラキドン酸の比率は、乾燥重量基準で３：１以上であり、かつ組成物中における、ω−３脂肪酸に対するω−６脂肪酸の乾燥重量基準での比率は、１０：１〜２０：１未満である。
【００１０】
本発明を適用可能な更なる領域は、本明細書において提供する詳細の説明より明らかとなるであろう。詳細の説明及び特定の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示しているものの、説明の目的のみとして意図されており、本発明の範囲を限定することを意図していないと理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
本発明は、詳細の説明及び添付図面より一層完全に理解されるであろう。
【００１２】
【図１】尿比重の単位あたりの、ネコの数の分布（実施例１を参照）。高い比重が異なる遺伝子型において、ネコを評価した（１．０５４超対１．０５４以下）。
【図２】高いＡＡ：ＥＰＡ比（約３：１）と低いＡＡ：ＥＰＡ比（約０．５：１）を有する食事を給餌された成熟ネコの、尿比重を比較した棒グラフ（実施例２を参照）。
【図３】高いＡＡ：ＥＰＡ比（約３：１）と低いＡＡ：ＥＰＡ比（約０．５：１）を有する食事を給餌された成熟ネコの、血液浸透圧を比較した棒グラフ（実施例２を参照）。
【図４】高いＡＡ：ＥＰＡ比（１６：１及び８：１）と低いＡＡ：ＥＰＡ比（０．４：１）を有する食事を給餌された、子ネコの尿比重を比較した棒グラフ （実施例３を参照）。
【図５】高いＡＡ：ＥＰＡ比（約１６：１及び８：１）と低いＡＡ：ＥＰＡ比（０．４：１）を有する食事を給餌された子ネコの、血液浸透圧を比較した棒グラフ（実施例３を参照）。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下の好ましい実施形態の説明は本質的に単に例示的なものであり、本発明、本願、又は使用をなんら限定するものではないものと意図される。
【００１４】
全体を通して使用されている通り、範囲は、その範囲内にある各値及び全ての値を示すための省略表現として使用される。範囲内の任意の値は、その範囲の末端として選択されることが可能である。更に、本明細書内で引用される参照文献は全て、それら全体が参考として本明細書に組み込まれる。本開示における定義と、引用参照文献における定義に矛盾がある場合、本開示が優先する。特に断らない限り、本明細書内及び本明細書の他の箇所で表現される割合及び量は全て、重量パーセントを指すものと理解されなければならない。別途特に明記しない限り、本明細書内で表現される割合は全て、乾物基準重量である。
【００１５】
本発明との関係において、用語「治療すること」または「治療」とは、本明細書で使用する場合、かかる用語が用いられる疾患もしくは状態の進行、またはかかる疾患もしくは状態の１つ以上の症状を逆転、緩和、軽減または阻害することを意味する。本発明で使用する場合、及び添付の特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が別様を明確に規定しない限り、複数形を含む。 
【００１６】
尿比重は尿希釈の測定値である。比重値が大きければ大きいほど、尿は一層濃い／濃縮されている。ネコにおける尿比重の通常の範囲は、典型的には１．０３０〜１．０６０である。非常に小さい比重は腎不全を示す一方で、高い尿比重は尿が更に濃縮されているため、石が沈殿し、問題を一層生じやすくなることを意味する。 
【００１７】
尿比重は、（ａ）腎臓の集合管への糸球体濾過による尿の生成、及び（ｂ）集合管から水を吸収し、血流に戻すことの組み合わせにより制御される。本プロセスは、部分的にはエイコサノイドプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）により制御されている。ＰＧＥ２は腎臓尿細管細胞のプロスタグランジンＥ受容体に結合し、セカンドメッセンジャーの活性化により、体内の水及びナトリウムバランスを調節する水及びナトリウムチャネルを制御する。  
【００１８】
発明者らは、ネコの遺伝子型と、それら個々の尿比重との間の全ゲノム関連研究を使用して、ＡＡからＰＧＥ２を作製する経路中での鍵となる酵素である、プロスタグランジンＥシンターゼ３遺伝子を含有する遺伝子座を発見した。更に、ネコの食事における、ＥＰＡに対するＡＡ（ＰＧＥ２の前駆体）の異なる比率は、ネコの尿比重と相関することも見出されている。したがって、食事におけるＡＡの量を制御することで、ネコの尿比重を低下させることができるということが見出されている。本発明の組成物を給餌されたネコは尿が一層薄いが、その血液浸透圧モル濃度もまた低下することが見出されており、このことは、これらの動物はより多くの水を飲み、全体の水のバランスが増加した、即ちより水和したことを示している。
【００１９】
高い相対過飽和度（「ＲＳＳ」）は、シュウ酸塩及びスツルバイト石の両方に関して、尿石を形成する傾向を示す。比重の低下はＲＳＳの低下と相関していることが見出されている。したがって、ネコにおける、一層水和した尿の生物学的メリットは、石形成のリスク低下である。
【００２０】
一実施形態では、本発明の組成物は栄養が完全な食料成分である。栄養が完全な組成物は、健康なネコにおける通常の健康を維持するのに十分な栄養素を含む食事を提供する。栄養が完全な組成物は味がよく、水と組み合わせることにより、健康なネコにおける通常の健康を維持するのに十分な全ての栄養素の、単一の供給源を提供する。栄養が完全な組成物は当業者によく知られている。例えば、動物用餌組成物に好適な、本明細書にて開示したもの、及び他のもの等の栄養素及び成分、並びにそれらの推奨量は、例えばＯｆｆｉｃｉａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｆｅｅｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｏｆｆｉｃｉａｌｓ（「ＡＡＦＣＯ」），Ｉｎｃ．，Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｏｆ  Ｄｏｇｓ  ａｎｄ  Ｃａｔｓ，２００６に見出されてよい。例えば、栄養が完全な食物はタンパク質、脂肪、炭水化物、食物繊維、アミノ酸、ミネラル、ビタミン、及び当業者に知られている量の他の成分を含有してよい。 
【００２１】
植物源、動物源、または両方を含む、当業者に既知の任意の種々の供給源により、タンパク質を供給してよい。動物源としては、例えば肉、食肉処理の副産物、魚介類、乳製品、卵等が挙げられる。肉としては例えば、家禽、魚、及び哺乳類（例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ等）の肉が挙げられる。食肉処理の副産物としては、例えば、肺、腎臓、脳、肝臓、並びに胃及び腸（取り出したもの全て、または本質的にこれらの内容全て）が挙げられる。タンパク質はインタクトであり、殆ど完全に加水分解されているか、部分的に加水分解されていることができる。本発明の組成物における典型的なタンパク質の量は、少なくとも約１５％（または約１５％〜約５５％、または約３０％〜約５５％、または約３３％〜約３６％）である。
【００２２】
肉、食肉処理の副産物、魚油、及び植物を含む、当業者に既知の任意の種々の供給源により、脂肪を供給することができる。植物性脂肪源としては、小麦、アマニン、ライ麦、大麦、コメ、サトウモロコシ、トウモロコシ、オート麦、雑穀、小麦胚、トウモロコシ胚、大豆、ピーナッツ、及び綿実、並びにこれら、及び他の植物性脂肪源由来の油が挙げられる。本発明の組成物は、典型的に少なくとも約９％（または約９％〜約３５％、または約１０％〜約２５％、または約１５％〜約２２％）の総脂肪を含有する。
【００２３】
ＡＡは種々の天然源に由来してよい。肝臓、例えばニワトリの肝臓は、ＡＡが比較的多い。他方、魚油はＥＰＡが比較的多いため、高いＡＡ：ＥＰＡ比を避けるために魚油を添加しないことが好ましい。ＡＡ及びＥＰＡに加えて、本発明の組成物中の脂肪成分の一部として含まれてよい脂肪酸としては、ＤＨＡ、 αリノレン酸、 γリノレン酸、 リノール酸、 オクタデカテトラエン塩（ステアリドン酸）等の、他のω−３及びω−６脂肪酸、またはこれらの混合物が挙げられる。本発明の組成物における、乾燥重量基準でのω−３脂肪酸に対するω−６脂肪酸の比は、通常は１０：１以上、別の実施形態では少なくとも１０：１〜２０：１未満、別の実施形態では約１０：１〜１８：１、別の実施形態では約１２：１〜１７：１である。 
【００２４】
オート麦繊維、セルロース、落花生殻、ビートパルプ、パーボイルド米、コーンスターチ、コーングルテンミール、及びこれらの供給源の任意の組み合わせを含む、当業者に既知の、任意の種々の供給源により、炭水化物を供給してよい。炭水化物を供給する穀物としては、小麦、トウモロコシ、大麦、及びコメが挙げられるが、これらに限定されない。食物における炭水化物の含有量は、当業者に既知の、任意の多数の方法により測定してよい。通常、炭水化物の割合は可溶性無窒素物（「ＮＦＥ」）として計算してよく、これは以下の通りに計算してよい：ＮＦＥ＝１００％−水分％−タンパク質％−脂肪％−灰分％−粗繊維％。 
【００２５】
食物繊維とは、動物の消化酵素による消化に耐性を有する食物成分を意味する。食物繊維としては、可溶性及び不溶性繊維が挙げられる。可溶性繊維、例えばビートパルプ、グアーガム、チコリー、オオバコ、ペクチン、ブルーベリー、クランベリー、カボチャ、リンゴ、オート麦、マメ、柑橘、大麦、またはエンドウ豆は小腸での消化及び吸収に対して耐性があり、大腸で完全に、または部分的に発酵される。セルロース、全麦製品、オート麦（ｗｈｅａｔｏａｔ）、コーンブラン、亜麻仁、ブドウ、セロリ、インゲン豆、カリフラワー、ジャガイモの皮、果物の皮、野菜の皮、落花生殻、及び大豆繊維を含む不溶性繊維を、任意の種々の供給源により供給してよい。粗繊維としては、穀物、例えばコメ、トウモロコシ、及びマメ等の穀物の殻等の植物の細胞壁及び細胞含有物に含有される非消化性成分が挙げられる。本発明の組成物における典型的な繊維量は、約０〜１０％、または約１％〜５％である。
【００２６】
必須アミノ酸を含むアミノ酸を遊離アミノ酸として本発明の組成物に添加してよいか、または任意の数の供給源、例えば粗タンパク質により本発明の組成物に供給してよい。必須アミノ酸は、生命体により新規に合成できない、または不十分な量しか合成できないため、食事で供給しなければならないアミノ酸である。必須アミノ酸は、生命体の代謝に依存し、種間において異なる。例えば、イヌ及びネコ（並びにヒト）の必須アミノ酸はフェニルアラニン、ロイシン、メチオニン、リジン、イソロイシン、バリン、スレオニン、トリプトファン、ヒスチジン、及びアルギニンであると通常理解されている。また、専門的にはアミノ酸ではないがシステインの誘導体であるタウリンは、ネコの必須栄養素である。 
【００２７】
本発明の組成物はまた、欠乏症を回避し、健康を維持するのに必要な量の、１種以上のミネラル及び／または微量元素、例えばカルシウム、リン、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛、コリン、または鉄塩を含有してよい。これらの量は、例えばＯｆｆｉｃｉａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｆｅｅｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｏｆｆｉｃｉａｌｓ，Ｉｎｃ．（「ＡＡＦＣＯ」），Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｏｆ  Ｄｏｇｓ  ａｎｄ  Ｃａｔｓ，２００６で提供されているように、当業者に既知である。典型的なミネラル量は、約０．１〜約４％、または約１％〜約２％である。
【００２８】
本発明の組成物はまた、欠乏症を回避し、健康を維持するのに必要な量のビタミンを含んでよい。これらの量、及び測定方法は当業者に既知である。例えば、Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｆｅｅｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｏｆｆｉｃｉａｌｓ，Ｉｎｃ．（「ＡＡＦＣＯ」），Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｏｆ  Ｄｏｇｓ  ａｎｄ  Ｃａｔｓ，２００６は、イヌ及びネコ用のかかる成分の推奨量を規定している。本明細書で想到される通り、有用なビタミンとしては、これらに限定されない。ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＨ（ビオチン）、ビタミンＫ、葉酸、イノシトール、ナイアシン、及びパントテン酸が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の組成物における典型的なビタミンの量は、約０〜約３％、または約１％〜約２％である。
【００２９】
本発明の組成物は、当業者によく知られている量及び組み合わせで、更に食味増強剤及び安定剤等の他の添加剤を含んでよい。安定物質としては、例えば、組成物の貯蔵寿命を増加させる傾向にある物質が挙げられる。本発明の組成物が含む、場合によって好適なかかる他の添加剤の他の例としては、例えば、防腐剤、着色剤、酸化防止剤、風味剤、相乗剤及び隔離剤、充填用ガス、安定剤、乳化剤、増粘剤、ゲル化剤、及び湿潤剤が挙げられる。乳化剤及び／または増粘剤の例としては、例えば、ゼラチン、セルロースエーテル、デンプン、デンプンエステル、デンプンエーテル、及び修飾デンプンが挙げられる。組成物中のかかる添加剤の濃度は典型的には、最大約５重量％であってよい。いくつかの実施形態では、かかる添加剤の濃度（特に、かかる添加剤がビタミン及びミネラル等の主要な栄養バランス剤である場合）は、約０〜約２．０重量％である。いくつかの実施形態では、かかる添加剤の濃度（また特に、かかる添加剤が主要な栄養バランス剤である場合）は約０〜約１．０重量％である。
【００３０】
任意の濃度または含水量の食物が想到され、例えば本発明の組成物は例えば、乾燥、湿性または半湿性の動物食物成分であってよい。いくつかの実施形態では、含水量は組成物の総重量の約３％〜約９０％である。「半湿性」とは、約２５〜３５％の水分を含有する食物組成物を意味する。「湿性」食物とは、約６０〜約９０％以上の含水量を有する食物組成物を意味する。「乾燥」食物とは、約３〜約１１％の含水量を有する食物組成物を意味し、多くの場合小片またはキブル形態で製造される。
【００３１】
湿性形態、または缶に詰めた形態で本発明の組成物を調製する際、任意成分（例えばＡＡまたはＥＰＡ）は通常例えば、組成物の他の成分の混合中、及び／または混合後等の、配合物の加工中に組成物中に組み込まれてよい。これらの成分の組成物中への分配は、従来の手段により達成することができる。一実施形態では、すりつぶした動物及び家禽のタンパク質組織を、魚油、穀物、他の栄養的バランスする成分、特別目的の添加剤（例えばビタミンとミネラルの混合物、無機塩、セルロース及びビートパルプ、充填剤等）を含む他の成分と混合し、加工に十分な量の水もまた加える。これらの成分は、構成成分のブレンド中に加熱を行うのに好適な容器中で混合するのが好ましい。例えば直接蒸気注入、または熱交換器を備えた容器の使用等の、任意の好適な方法を使用して、混合物の加熱を行ってよい。最後の成分を加えた後、混合物を約５０°Ｆ（１０℃）〜約２１２°Ｆ（１００℃）の温度範囲で加熱する。いくつかの実施形態では、混合物を約７０°Ｆ（２１℃）〜約１４０°Ｆ（６０℃）の温度範囲で加熱する。これらの範囲外の温度は一般的に許容されるが、他の加工助剤を使用しない場合、商業的に非実用的となる場合がある。適切な温度まで加熱をすると、材料は通常、粘性液体の形態となるであろう。粘性液体を缶に詰める。蓋を付け、容器を密閉する。次いで、密閉した缶を、内容物を滅菌するために設計した従来の装置の中に配置する。これは通常、約２３０°Ｆ（１１０℃.）を超える温度まで、適切な時間加熱することにより達成することができ、この時間は例えば、使用する温度及び組成物に依存する。
【００３２】
あるいは、従来のプロセスを使用して、キャットフード組成物を乾燥形態で調製することができる。通常、動物性タンパク質、植物性タンパク質、穀物等を含む乾燥成分を粉砕して、共に混合する。次に、脂肪、油、動物性タンパク質、水等を含む湿性または液体成分をドライミックスに加え、混合する。次に、混合物をキブルまたは類似のドライピースに加工する。キブルは多くの場合、押出成形プロセスを使用して形成される。このプロセスでは、乾燥成分と湿性成分との混合物を、高圧及び高温にて機械操作にかけ、小径の開口部から押し出して、回転ナイフによりキブルに切断する。次に、湿性キブルを乾燥させて、所望により、例えばフレーバー、脂肪、油類、粉末等を含んでよい、１種以上の局所コーティング材でコーティングする。キブルはまた、押出成形ではなくベーキング法を用いてドウより作製することができ、この方法では、乾燥加熱プロセス前にドウをモールド内に配置する。
【００３３】
ネコを水和するため、またはネコの疾患もしくは状態を治療するための本発明の方法において、投与した食物は栄養が完全なキャットフードとすることができるか、または、消費される全食事が、本発明の有益な効果をもたらすのに必要な量及び比のＡＡ及びＥＰＡを満たすように、必要量及び比のＡＡ及びＥＰＡを、例えば別々の成分として、もしくは別々の成分の一部、通常は栄養補助食品として別々に投与することができる。ネコの疾患または状態を治療する本発明の方法において、前記疾患または状態は例えば、尿路結石、猫特発性膀胱炎、またはＦＬＵＴＤの進行であることができる。
【００３４】
したがって、一実施形態において、本発明は、有効量のアラキドン酸を含む食事を前記ネコに提供することを含む、ネコの水和レベルを向上させる方法を提供し、ここで、前記食事はエイコサペンタエン酸より多くの量のアラキドン酸を含む（方法１）。例えば、本発明は、
１．１  前記食事が水、及びネコにとって味がよく栄養が完全なキャットフード組成物からなり、前記食物組成物がアラキドン酸及びエイコサペンタエン酸を含み、エイコサペンタエン酸に対するアラキドン酸の比が３：１以上、例えば少なくとも５：１、例えば少なくとも１０：１であり、かつ前記組成物中のアラキドン酸の量が０．０５〜０．５乾燥重量％である、方法１。
１．２  前記食事が、栄養が完全なキャットフードと共に、アラキドン酸を含む有効量の栄養補助食品を含む、方法１。
１．３   前記食事が、乾燥質量において、重量比で１０：１以上の、ω−６及びω−３脂肪酸を含む、方法１、１．１、または１．２。
１．４  前記組成物中の、ω−３脂肪酸に対するω−６脂肪酸の、乾燥質量での比が１０：１〜２０：１、例えば１２：１〜１８：１である、方法１．３。
１．５  前記ネコが大人のネコである、前述の方法のいずれか。
１．６  前記ネコがオスネコである、前述の方法のいずれか。
１．７  前記ネコがかかる治療を必要とする、低水和より生じるネコの疾患または状態の治療方法である前述の方法のいずれか。
１．８  前記疾患または状態が、尿路結石（膀胱結石または腎臓結石を含む）、猫特発性膀胱炎、及びＦＬＵＴＤの進行から選択される、方法１．７。
１．９  前記ネコは低水和より生じる疾患または状態、例えば尿路結石（膀胱結石もしくは腎臓結石を含む）、猫特発性膀胱炎、及びＦＬＵＴＤの進行から選択される疾患または状態の、進行のリスクが増加したことが特定されており、前記リスクは（ａ）前記ネコの尿比重により評価され、少なくとも１．０５、例えば１．０６より大きい、例えば１．０７より大きい尿比重を有するネコはリスクが増加したと考えられ、かつ／または（ｂ）前記ネコはリスクの増加と関係するＰＴＧＥＳ３遺伝子内でＳＮＰもしくは変異を発現する、方法１．７または１．８。
１．１０  前記ネコが、ｃｈｒＢ４．１０１４６４６７７、ｃｈｒＢ４．１０１３４１３０４及びｃｈｒＢ４．１０１４３８７４１から選択される１種以上の一塩基変異多型（ＳＮＰ）を提示することに基づき、リスクが増加していると特定されている、方法１．９。
１．１１  前記ネコの初期尿比重が１．０５５より大きい、例えば１．０６より大きい、前述の方法のいずれか。
１．１２  前記方法の実践の１ヶ月後、例えば３ヶ月後、例えば６ヶ月後における前記ネコの尿比重が、例えば前記ネコの初期尿比重と比較して、例えば１．０５５未満に低下している、前述の方法のいずれか。
１．１３  前記ネコがＰＴＧＥＳ３遺伝子中に変異を有する、前述の方法のいずれか。
１．１４  前記ネコが、ｃｈｒＢ４．１０１４６４６７７、ｃｈｒＢ４．１０１３４１３０４及びｃｈｒＢ４．１０１４３８７４１から選択される１種以上の一塩基変異多型（ＳＮＰ）を示す、前述の方法のいずれか。
１．１５  前記ネコが少なくとも１ヶ月、例えば少なくとも３ヶ月、例えば少なくとも６ヶ月間、前記食事を維持する、前述の方法のいずれか。
１．１６  前記ネコにおける前記向上した水和が、尿比重の低下として測定される、前述の方法のいずれか。
１．１７  前記ネコにおける前記向上した水和が、血液浸透圧の低下として測定される、前述の方法のいずれか。
１．１８  前記方法がプロスタグランジンＥ２レベルの増加を引き起こす、前述の方法のいずれか。
１．１９  前記方法にしたがった食事を受ける前記ネコが水分摂取の増加を示すが、塩化ナトリウム摂取の増加を示さない、前述の方法のいずれか。
１．２０  前記食事を受ける前記ネコが、少なくとも２歳、例えば少なくとも５歳である、前述の方法のいずれか。
１．２１  前記ネコの食事が、以下で説明する組成物１（以下参照）のいずれかを含む、前述の方法のいずれか。
を提供する。
【００３５】
別の実施形態において、本発明は、ネコの水和を向上させるのに有効な量のアラキドン酸及びエイコサペンタエン酸を含むキャットフード組成物を提供し、ここでこの食物は、水と組み合わせることで、味がよく、かつネコの単独の食事として栄養が完全であり、かつエイコサペンタエン酸に対するアラキドン酸の比率は、乾燥重量基準で３：１またはそれ以上であり、かつ組成物中の、ω−３脂肪酸に対するω−６脂肪酸の比率は乾燥重量で、１０：１〜２０：１未満である（組成物１）。例えば、本発明は、
１．１  アラキドン酸の量が０．０５〜０．５乾燥重量％である、組成物１。 
１．２  前記組成物が少なくとも５％、例えば少なくとも７乾燥重量％の家禽肝、例えばニワトリの肝臓、及び１乾燥重量％未満の魚油を含む、組成物１または１．１。
１．３  以下の実施例３の食事Ｂで説明する実質的な成分を含む、前述の組成物のいずれか（「説明する実質的な」とは、一覧表に記載されている各成分が、乾燥重量基準で説明した量の±５％、例えば±２％の量で前記組成物中に存在することを意味する）。
１．４  乾燥食物、例えばキブル製品の形態の、前述の組成物のいずれか。
１．５  方法１のいずれか（以下参照）での使用のための組成物１または１．１。
を提供する。
【００３６】
別の実施形態において、本発明は、ネコの水和レベルを向上するため、例えば方法１（以下参照）のいずれかのための、アラキドン酸、またはアラキドン酸を含む成分または組成物、例えば組成物１（以下参照）の使用を提供する。 
【００３７】
別の実施形態において、本発明は、方法１（以下参照）のいずれかにしたがった方法で用いるための、キャットフード組成物の製造における、アラキドン酸、またはアラキドン酸を含む成分または組成物の使用を提供する。
【００３８】
本発明はまた、低水和より生じる疾患または状態、例えば尿路結石（膀胱結石もしくは腎臓結石を含む）、猫特発性膀胱炎、及びＦＬＵＴＤの進行から選択される、疾患または状態の進行のリスクが増加したネコを特定するための方法に関し、例えば、前記リスクは（ａ）前記ネコの尿比重を測定することにより評価され、少なくとも１．０５，例えば１．０６より大きい、例えば１．０７より大きい尿比重を有するネコはリスクが増加したと考えられ、 かつ／または（ｂ）前記ネコはリスクの増加と関係するＰＴＧＥＳ３遺伝子内でＳＮＰもしくは変異を発現する。  
【００３９】
例えば、一実施形態において、前記ネコは、ｃｈｒＢ４．１０１４６４６７７、ｃｈｒＢ４．１０１３４１３０４及びｃｈｒＢ４．１０１４３８７４１から選択される１種以上の一塩基変異多型（ＳＮＰ）を示すことに基づき、リスクが増加していると特定されている。ネコがこれらのＳＮＰの１つを有するかどうかは、従来のジェノタイピング手法により測定してよく、例えば、（ｉ）配列特異的オリゴヌクレオチドプローブを利用するハイブリダイゼーション法（例えば動的対立遺伝子特異的ハイブリダイゼーション、分子ビーコン、またはＳＮＰマイクロアレイ）、（ｉｉ）制限酵素断片長多型（ＲＦＬＰ）、ポリメラーゼ連鎖反応法（例えばＳＮＰの検出を可能にさせる特異的プライマーを用いるテトラプライマーＡＲＭＳ−ＰＣＲ）、単一のヌクレオチド不一致の検出を可能にするフラップエンドヌクレアーゼ、プライマー伸長技術（例えば、ＳＮＰヌクレオチドのすぐ上流の塩基にプローブをハイブリダイゼーションした後に、ＳＮＰヌクレオチドに対して相補的な塩基を添加することにより、ＤＮＡポリメラーゼがハイブリダイゼーションしたプライマーを伸長する「ミニシークエンシング」反応を行うこと）、ＳＮＰを含む領域を増幅するフォワード及びリバースＰＣＲプライマーを使用する５’−ヌクレアーゼ、及びオリゴヌクレオチドライゲーションアッセイ等の酵素系技術、並びに（ｉｉｉ）一本鎖高次構造多型、温度勾配ゲル電気泳動、変性高速液体クロマトグラフィー、増幅全体のＨＲＭ、ＤＮＡ不一致結合タンパク質の使用、及びＳＮＰｌｅｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）等の商業用システム等の、ＤＮＡの物理的性質に基づくポスト増幅法から選択される。一実施形態では、ＳＮＰは、実施例１に記載したＩｌｌｕｍｉｎａ  Ｆｅｌｉｎｅ  ＳＮＰ６０アッセイ等のＳＮＰマイクロアレイを使用して特定した。
【００４０】
したがって、本発明の一実施形態は、低水和から生じる疾患または状態、例えば尿路結石（膀胱結石または腎臓結石を含む）、猫特発性膀胱炎、及びＦＬＵＴＤの進行から選択される疾患または状態の、進行のリスクが増加したネコを特定する方法を提供し、上述のＳＮＰ検出方法のいずれかを用いて、前記ネコが、ｃｈｒＢ４．１０１４６４６７７、ｃｈｒＢ４．１０１３４１３０４及びｃｈｒＢ４．１０１４３８７４１から選択される１種以上の一塩基変異多型（ＳＮＰ）を示すかどうかを試験することを含む。更なる実施形態において、本発明は、低水和から生じる疾患または状態、例えば、尿路結石（膀胱結石もしくは腎臓結石を含む）、猫特発性膀胱炎、及びＦＬＵＴＤの進行から選択される疾患または状態、の進行のリスクが増加したネコを特定するための診断キットを提供し、使用取扱説明書と共に、ｃｈｒＢ４．１０１４６４６７７、ｃｈｒＢ４．１０１３４１３０４及びｃｈｒＢ４．１０１４３８７４１から選択される１種以上の一塩基変異多型（ＳＮＰ）を認識する配列特異的オリゴヌクレオチドプローブを含む。
【実施例】
【００４１】
実施例１：遺伝子研究
【００４２】
Ｉｌｌｕｍｉｎａ  Ｆｅｌｉｎｅ  ＳＮＰ６０アッセイを使用してジェノタイピングした５３３匹のネコについて、尿比重値を測定した（完全説明表１）。     
【表１】
2018075042.tif 000003
【００４３】
所与の尿比重あたりの動物の分布を図１にプロットした。正規分布からの偏差を量的形質座位（ＱＴＬ）分析に取ることを行った。マンハッタンプロットを構築し、ジェノタイピングした各一塩基変異多型（「ＳＮＰ」）を、尿比重の表現型との相関の有意性に対してプロットした。ＳＮＰの１個のみのピークが、１０（−６）の偽発見カットオフ上で有意に観察され、この遺伝子座は尿比重の決定に関与していることを示す。これらのＳＮＰはネコ染色体Ｂ４の遺伝子座内に位置する。３つの最も有意なＳＮＰに対する注及びｐ値を表２に示す。上述の生物学的関係性に基づくと、この遺伝子座内ではＰＴＧＥＳ３が一番の候補遺伝子となるようである。この遺伝子は、２つが転写開始の上流、及び１つが転写された配列の下流にある、３つのＳＮＰに隣接する。ＳＮＰの位置（複数）を、ＰＴＧＥＳ３の転写開始部位と比較して表３に示し、この分析に用いたネコゲノムアセンブリの構造を含む、ネコゲノム内でのＰＴＧＥＳ３遺伝子の位置を表４に記載する。  
表２：ネコの尿比重に関係する最も有意なＳＮＰ
【表２】
2018075042.tif 000004
表３：ネコの尿比重に関係する最も有意な３つのＳＮＰはプロスタグランジンＥシンターゼ遺伝子（ＰＴＧＥＳ３）に隣接する
【表３】
2018075042.tif 000005
表４：ネコゲノムにおけるプロスタグランジンＥシンターゼ３（ＰＴＧＥＳ３）遺伝子の説明
【表４】
2018075042.tif 000006
【００４４】
３つのＳＮＰ配列、及び２００個の塩基対フランキング配列を以下に示し、ＳＮＰ  ＩＤ番号、特異的ＳＮＰ、及びＳＮＰの配列に加えて２００ｂｐのフランキング配列を提供する
ｃｈｒＢ４．１０１４６４６７７  ［Ｔ／Ｃ］
ＡＴＴＴＴＡＧＡＡＡＴＣＴＡＣＣＡＣＣＧＴＡＴＧＧＡＧＧＣＡＡＧＴＧＴＡＧＡＧＧＧＡＴＴＣＴＴＡＧＣＣＧＡＧＧＧＴＡＧＡＡＧＡＡＣＴＡＴＴＡＧＧＡＡＡＴＧＡＴＡＧＣＡＡＴＡＧＣＣＴＧＴＴＣＡＧＧＴＧＧ［Ｔ／Ｃ］ＴＣＴＣＡＧＴＴＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＣＡＴＴＡＧＧＡＡＴＧＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＧＧＧＡＴＡＡＡＣＡＧＡＡＡＡＴＡＴＴＴＡＧＡＡＡＧＴＡＡＡＴＡＴＡＧＴＡＧＧＧＡＡＴＧＧＣＴＡＴＧＡＡＧＡＡＧＴＣＴＧＴ（配列番号：１）
ｃｈｒＢ４．１０１３４１３０４  ［Ａ／Ｇ］  
ＡＴＡＡＡＴＴＡＡＡＣＴＴＣＴＧＴＣＣＡＡＧＡＴＧＡＴＧＡＧＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＡＡＡＧＣＡＣＣＡＣＴＣＡＣＡＡＡＡＡＡＡＴＧＧＧＡＴＡＧＧＧＡＣＡＣＣＡＴＡＡＴＧＧＡＧＴＧＡＧＧＡＣＣＴＴＴＡＣＴＣ［Ａ／Ｇ］ＧＧＣＴＧＧＧＡＡＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＣＴＣＣＡＧＴＣＴＧＧＡＡＧＴＴＴＴＡＴＴＴＴＧＧＴＧＡＡＣＣＣＴＣＴＡＡＡＧＡＴＡＣＡＡＧＧＴＡＣＡＧＧＡＡＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣＣＡＧＣＡＣＣＡＴＡＡＡＡＡＴ（配列番号：２）
ｃｈｒＢ４．１０１４３８７４１  ［Ａ／Ｇ］  
ＣＡＧＴＧＧＡＧＡＧＴＣＧＡＡＧＴＴＴＧＴＧＧＧＡＡＴＧＧＧＧＡＧＡＴＧＡＧＡＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＣＣＴＴＧＴＣＴＴＣＡＧＧＣＡＣＡＴＣＡＴＴＡＧＧＧＧＧＡＧＡＡＧＧＴＴＡＣＣＣＡＴＣＴＧＴＴＴＴＣＡ［Ａ／Ｇ］ＣＣＡＴＴＡＴＣＴＣＴＴＧＡＡＣＴＧＣＣＧＣＴＴＴＧＴＣＣＣＴＴＧＡＡＣＧＴＧＧＴＴＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＧＡＧＧＧＡＴＡＧＴＡＡＣＣＡＡＧＡＧＡＡＴＧＡＡＡＡＣＡＧＴＡＣＴＴＡＣＴＧＣＣＴＡＴＴＧＴＡ（配列番号：３）
実施例２：ＥＰＡに対するＡＡの異なる比率を使用した、成熟ネコの調査 
【００４５】
食事１ではＥＰＡに対するＡＡの比率を３〜１にし、食事２ではＥＰＡに対するＡＡの比率を０．５〜１にした。食事１は２０．８４％の総脂肪、０．１０％のＡＡ（総脂肪の０．４８％）及び０．０３％のＥＰＡ（総脂肪の０．１４％）を含有する。試験食物は約３１．５％のタンパク質を含有していた。高いＡＡ比（脂肪濃度）は２０．８％である一方で、低いＥＰＡに対するＡＡの比は１５．７％（脂肪）であった。食事１のω−３脂肪酸に対するω−６脂肪酸の比率は１４．４である。動物には２つの食事を維持した（２７匹のネコには高いＡＡ：ＥＰＡ比を給餌し、５４匹のネコには低いＡＡ：ＥＰＡ比を給餌した）。０日目、及び１８０日目に尿を収集して尿比重を分析し、データを表５に示す（ｇ／ｍＬ）。
表５：高齢のネコにおける尿比重の変化 
【表５】
2018075042.tif 000007
【００４６】
高いＡＡ比の食事（高）のネコの群は、１８０日後に著しく低下した尿比重を示す。低いＡＡ比の食事（低）のネコの群では、尿比重の変化は示さなかった。尿比重に加えて、水和レベルの指標として血液浸透圧もまた測定し、データを表６に示す（ｍＭ／リットル）：  
表６：成熟したネコにおいて、ＥＰＡに対するＡＡの高い比率が血液浸透圧を低下させる
【表６】
2018075042.tif 000008
【００４７】
尿比重と同様に、高いＡＡの食事を給餌したネコでは血液浸透圧モル濃度が著しく低下しているが、小さなＥＰＡに対するＡＡの比を給餌したネコでは変化が見られない（図３）。このことは、高レベルのＡＡが尿を一層薄くするだけでなく、血液もまた一層薄くなるということを示しており、これは、ネコはより多くの水を摂取し、全体の水バランスが増加したことを示している。換言すれば、ネコは一層水和している。
実施例３：ＥＰＡに対するＡＡの異なる比率を用いた子ネコの給餌調査
【００４８】
対照食事では、ＥＰＡに対するＡＡの比は０．４：１であり、食事Ａ（ＡＡ／ＥＰＡが増加した食事）では、ＥＰＡに対するＡＡの比は８：１を超え、かつ食事Ｂ（更にＡＡ／ＥＰＡが増加した食事）では、ＥＰＡに対するＡＡの比は１６：１を超える。対照食事は１５．０６％の総脂肪、０．０９％のＡＡ（総脂肪の０．６％）、及び０．２３％のＥＰＡ（総脂肪の１．５３％）を含有し、食事Ａは１４．６７％の総脂肪、０．０８％のＡＡ（総脂肪の０．５５％）、及び０．０１％未満のＥＰＡ（総脂肪の０．０１％未満）を含有し、食事Ｂは１６．０１％の総脂肪、０．１６％のＡＡ（総脂肪の１％）、及び０．０１％未満のＥＰＡ（総脂肪の０．０１％未満）を含有した。ω−３脂肪酸に対するω−６脂肪酸の比率は、食事Ａでは１８．１であり、食事Ｂでは１７．５である。動物にはこれらの食事を与え続けた。０日目、２８日目、及び５６日目に尿を収集し、尿比重を分析した。結果を表３に記載する（ｇ／ｍＬ）：
表７：子ネコの尿比重の変化
【表７】
2018075042.tif 000009
【００４９】
食事Ａ及びＢの子ネコの群では、高いＡＡ比の食事は、２８日後に尿比重を著しく低下させた。対照食事の子ネコの群では、尿比重の変化がみられなかった。  
【００５０】
高齢のネコとは異なり、子ネコは血液浸透圧の有意差を示さなかった。表８を参照のこと（値はｍＭ／リットル）：
表８：子ネコでは、ＥＰＡに対するＡＡの高い比は血液浸透圧に影響を及ぼさない    
【表８】
2018075042.tif 000010
【００５１】
これらのデータは、通常の浸透圧値を維持する能力は、食事に関係なく若い動物において良好である場合があることを示唆しており、これは動物が歳を取るにつれて石が発生しやすくなる理由を説明する一助となり得る。このことは、食事は、高齢の動物での石の形成に一層大きな影響力を有し得ることを示唆している。 
【００５２】
対照食事、食事Ａ及び食事Ｂの配合は以下の通りである：
【表９】
2018075042.tif 000011
実施例４
ＡＡ及びＥＰＡと、シュウ酸カルシウムＲＳＳとの相関関係
ＣＯＲＲ手順
変数付き２つ：ＡＡ、ＥＰＡ
１つの変数：シュウ酸カルシウムＲＳＳ
ピアソン相関係数
Ｈ０：Ｒｈｏ＝０において、確率＞｜ｒ｜
観測結果の数
ＡＡ        −０．４４１８８
＜．０００１
９７
ＧＬＭの手順
従属変数：シュウ酸カルシウムＲＳＳ
変数付き１つ：比率
１つの変数：シュウ酸カルシウムＲＳＳ
ピアソン相関係数
Ｈ０：Ｒｈｏ＝０において、確率＞｜ｒ｜
観測結果の数
比率        −０．３８８８５
＜．０００１
９６
血液中のＡＡの増加はＲＳＳの低下と関係がある一方、ＥＰＡ濃度の増加はＲＳＳの増加と関係があるという点で、有意な関係が存在する。
【図１】
2018075042.tif 000012
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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