(57)【要約】【課題】リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）に関する治療および診断方法の提供。【解決手段】リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）に結合し、それを阻害し、かつ／またはそれを検出する作用物質を使用した、線維症と関連する疾患およびがんを含めた疾患に対する治療、診断、および予後判定方法、ならびにそのような方法で使用するための作用物質、組成物、キット、アッセイ系、およびデバイスが提供される。いくつかの実施形態において、疾患または状態は、肝臓の疾患または状態、たとえば、線維症と関連する肝臓の疾患または状態である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２０１２年１１月９日に出願された米国仮特許出願第６１／７２４，８５８号、および２０１２年１０月３０日に出願された米国仮特許出願第６１／７２０，３５０号の利益を主張し、この米国仮特許出願の全体の内容は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
配列表に関する記述
本出願に付随する配列表は、紙コピーの代わりにテキスト形式で提供され、これによって参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称はＧＩＬＥ−０７７＿０３ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは６６ＫＢであり、２０１３年１０月３０日に作成されたものであり、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
【０００３】
技術分野
本開示は、いくつかの態様において、リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）の阻害剤であり、かつ／またはそれに結合する作用物質を使用した、肝疾患などの線維症と関連する疾患を含めた疾患の処置およびその症状の好転、ならびに当該疾患に対する診断および予後判定方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）は、種々の線維症性の疾患および状態ならびに腫瘍において誘導される細胞外マトリックスのタンパク質である。ＬＯＸＬ２は、活性化された線維芽細胞、疾患と関連する平滑筋細胞、内皮細胞、および上皮から分泌される。肝疾患および線維症と関連する肺疾患を含めた、線維症性の疾患および状態ならびにＬＯＬＸ２と関連する他の疾患および状態に対する処置および診断が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は、いくつかの態様において、疾患および状態の検出、診断および処置方法、ならびにそのような方法において使用するための組成物、作用物質、デバイス、キット、およびアッセイ系に関する。
【０００６】
肝臓の疾患または状態、線維症性の疾患または状態、たとえば、線維症性肝疾患などの疾患または状態の１つ以上の症状を処置するまたは好転させるための方法が提供される。そのような方法は、一般に、ＬＯＸＬ２に結合し、かつ／またはそれを阻害する作用物質を肝臓の疾患または状態を有する被験体に投与し、それにより、疾患または状態を処置するまたは好転させることによって実行される。
【０００７】
いくつかの実施形態において、疾患または状態は、肝臓の疾患または状態、たとえば、線維症と関連する肝臓の疾患または状態である。いくつかの態様において、疾患または状態は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎）、ＰＳＣ（原発性硬化性胆管炎）、硬変、肝線維症、門脈圧亢進症からなる群から選択される。いくつかの態様において、疾患または状態は、ＰＢＣ（原発性胆汁性肝硬変）、自己免疫性肝炎、アルコール性硬変、アルファ１アンチトリプシン欠損症、遺伝性ヘモクロマトーシス、ウィルソン病、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、およびＨＩＶ関連脂肪性肝炎からなる群から選択される。いくつかの態様において、肝臓の疾患または状態は、ＨＣＶまたはＨＢＶなどのウイルス性肝炎である。いくつかの態様において、肝疾患は代償性（ｃｏｍｐｅｎｓｔａｔｅｄ）肝疾患である。他の態様において、肝疾患は、腹水症、食道静脈瘤、脳障害、および／または黄疸と関連する肝疾患などの非代償性（ｄｅｃｏｍｐｅｎｓｔａｔｅｄ）肝疾患である。
【０００８】
いくつかの実施形態において、作用物質は、ＬＯＸＬ２に特異的に結合する抗体である。いくつかの態様において、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの態様において、抗体は、抗体断片、たとえば、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）２またはＦａｂ２断片である。いくつかの態様において、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの態様において、作用物質は、ＬＯＸＬ２の阻害剤、たとえば、非競合的阻害剤である。いくつかの態様において、作用物質は、ＬＯＸＬ２のＳＲＣＲ３−４ドメイン内のエピトープに結合するなど、ＬＯＸＬ２の触媒ドメイン外に結合する。
【０００９】
いくつかの実施形態において、抗体は、ＬＯＸＬ２との結合について、配列番号８の重鎖可変領域配列および／もしくは配列番号９の軽鎖可変領域配列を有し、かつ／またはそのような配列のＣＤＲを１つ以上有する抗体と競合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号６、８、１０、１１、１２に記載されている配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性または約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および／または配列番号７、９、１３、もしくは１４の配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号８に記載されている配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性または約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９の配列に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性または約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号８に記載されている重鎖可変領域配列の重鎖ＣＤＲおよび／または配列番号９に記載されている軽鎖可変領域配列の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの態様において、そのようなＣＤＲはＣＤＲ３を含む、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／もしくはＣＤＲ３、たとえば、そのような重鎖配列および軽鎖配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／もしくはＣＤＲ３を含む。
【００１０】
いくつかの実施形態において、作用物質を、１０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇもしくは約１０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇあるいは少なくとも１０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇもしくは約１０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇあるいは約１０〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する、作用物質を、少なくとも２００ｍｇまたは７００ｍｇもしくは約２００ｍｇまたは７００ｍｇあるいは２００ｍｇまたは７００ｍｇもしくは約２００ｍｇまたは７００ｍｇあるいは約２００〜７００ｍｇの用量で投与する、作用物質を、少なくとも７５ｍｇまたは１２５ｍｇもしくは約７５ｍｇまたは１２５ｍｇあるいは７５ｍｇまたは１２５ｍｇもしくは約７５ｍｇまたは１２５ｍｇあるいは７５〜１２５ｍｇまたは約７５〜１２５ｍｇの用量で投与する。他の実施形態において、作用物質を、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、６５ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２２５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、２７５ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３２５ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、３７５ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４２５ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、４７５ｍｇ／ｋｇ、または５００ｍｇ／ｋｇもしくは約１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、６５ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２２５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、２７５ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３２５ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、３７５ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４２５ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、４７５ｍｇ／ｋｇ、または５００ｍｇ／ｋｇあるいは少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、６５ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２２５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、２７５ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３２５ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、３７５ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４２５ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、４７５ｍｇ／ｋｇ、または５００ｍｇ／ｋｇもしくは約１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、６５ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２２５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、２７５ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３２５ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、３７５ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４２５ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、４７５ｍｇ／ｋｇ、または５００ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。そのような実施形態のいくつかの態様において、作用物質を、静脈内に、たとえば、注入によって投与する（ａａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ）。そのような実施形態のいくつかの態様において、作用物質を皮下に投与する。そのような実施形態のいくつかの態様において、作用物質を毎週または隔週投与する。別の実施形態において、作用物質を１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、または６週間毎に投与する。さらに別の実施形態において、作用物質を１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、または１０か月の期間にわたって複数回投与する。
いくつかの実施形態において、方法により、被験体の生存が増加するまたは延長され、架橋線維化の増加が低下するまたは予防され、アルファ平滑筋アクチン（αＳＭＡ）レベルの増加が低下するまたは予防され、星細胞活性化の増加が低下するまたは予防され、かつ／またはアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の増加が低下するまたは予防される。いくつかの実施形態において、方法は、架橋線維化、アルファ平滑筋アクチン（αＳＭＡ）レベル、星細胞活性化、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、ならびに／または、炎症および／もしくは壊死、たとえば、病気のまたは線維症性の組織、たとえば、肝臓の炎症および／または壊死を評価するステップをさらに含む。いくつかの態様において、方法は、そのようなパラメータが減少すること、または処置していない場合もしくは処置前のパラメータの測定値と比較してパラメータの増加が予防されることを決定するステップを含む。いくつかの場合において、方法により、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＧＧＴ、またはＡＬＴ／ＡＳＴ比が、基準値上限（ｔｈｅ  ｕｐｐｅｒ  ｌｉｍｉｔ  ｏｒ  ｎｏｒｍａｌ）（ＵＬＮ）未満まで、または基準値上限（ｔｈｅ  ｕｐｐｅｒ  ｌｉｍｉｔ  ｏｆ  ｎｏｒｍａｌ）（ＵＬＮ）の２倍未満、５倍未満、もしくは１０倍未満まで低下する。いくつかの場合において、方法により、たとえば、線維症性または病気の組織における炎症および／または壊死が低下する。
【００１１】
いくつかの態様において、方法は、ＬＯＸＬ２遺伝子産物、たとえば、タンパク質またはｍＲＮＡのレベルを検出するステップなどの、検出またはモニタリングステップをさらに含む。いくつかの態様において、そのような検出およびモニタリングステップにより、処置の効力が示される。
【００１２】
リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）、たとえば、ＬＯＸＬ２ポリペプチドを検出する方法、および診断、予後判定、予測、および治療方法におけるそれらの使用も提供される。たとえば、ＬＯＸＬ２を検出および／または定量化するためのアッセイ、たとえば、個体における循環リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）ポリペプチドを検出および／または定量化するためのアッセイが提供される。診断、予後判定、および予測適用におけるそのようなアッセイの方法および使用、ならびにそれに使用するためのアッセイデバイスおよびキットも提供される。
【００１３】
個体におけるＬＯＸＬ２、典型的に循環ＬＯＸＬ２を検出するための方法が、提供される。提供される方法の中には、検出、診断、予測、モニタリング、および予後判定方法がある。いくつかの実施例において、方法が、個体から得られるサンプル、一般に液体サンプルを、ＬＯＸＬ２に対して特異的な抗体と接触させ、かつサンプルに存在するポリペプチド、たとえばＬＯＸＬ２ポリペプチドへの抗体の結合を検出することによって実行される。いくつかの実施例において、アッセイが、３００、２５０、２００、１７５ｐｇ／ｍｌ、もしくはそれ未満までの、液体サンプルにおけるＬＯＸＬ２を検出するまたはわずか３００、２５０、２００、１７５ｐｇ／ｍｌ、たとえば、わずか約１５０ｐｇ／ｍｌ〜約１７５ｐｇ／ｍｌ、約１２５ｐｇ／ｍｌ〜約１５０ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ〜約１２５ｐｇ／ｍｌ、約７５ｐｇ／ｍｌ〜約１００ｐｇ／ｍｌ、約５０ｐｇ／ｍｌ〜約７５ｐｇ／ｍｌ、もしくは約４０ｐｇ／ｍｌ〜約５０ｐｇ／ｍｌの濃度の、サンプルにおけるＬＯＸＬ２を検出する。
【００１４】
いくつかの実施例において、検出されるＬＯＸＬ２レベルが、疾患または状態の存在または非存在を示す。いくつかの実施例において、それが、個体がその疾患のための特定の処置に対して応答する確度（ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ）を示すまたは処置の効力を示す。方法が予後判定方法であるなどのいくつかの実施例において、ＬＯＸＬ２の検出レベルが、疾患または状態についての転帰、イベント、またはエンドポイントの確度を示す。いくつかの態様において、疾患または状態が、循環ＬＯＸＬ２または循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられるまたはそれと関連する。いくつかの態様において、個体が、疾患または状態を有し、いくつかの態様において、個体が、疾患または状態を有することが疑われる。いくつかの態様において、方法が、個体が疾患または状態を有するかもしくは有していないか、特定の処置に対して応答する可能性があるかもしくはないか、または特定の転帰もしくはイベントを有する可能性があるかもしくはないかまたは処置が有効であったかもしくはなかったかを決定することをさらに含む。
【００１５】
いくつかの実施例において、個体が、疾患または状態に対する処置を受けており、処置前レベルなどの初期の時点で決定されたレベルよりも低いＬＯＸＬ２の検出レベルが、処置の効力を示す。
【００１６】
サンプルは、典型的に、血液などの液体サンプル、血清もしくは血漿などの血液画分、尿、唾液、痰、または気管支肺胞洗浄液である。
【００１７】
いくつかの実施例において、抗体が、検出可能な標識を含み、例示的な標識は、化学発光剤、微粒子標識、比色剤（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ａｇｅｎｔ）、エネルギー伝達剤、酵素、蛍光剤、および放射性同位体を含む。いくつかの実施例において、サンプルに存在するＬＯＸＬ２が、液体サンプルを、ＬＯＸＬ２に対して特異的な第２の抗体と接触させることによって、不溶性支持体に対して固定され、第２の抗体−ＬＯＸＬ２複合体を形成する。一実施例において、第２の抗体が、不溶性支持体に対して固定される。他の実施例において、第２の抗体−ＬＯＸＬ２複合体が、サンプルを抗体と接触させる前に形成される。固定された抗体は、ポリクローナルであってもモノクローナルであってもよい。いくつかの実施例において、ＬＯＸＬ２が、ＬＯＸＬ２酵素活性のアロステリック阻害剤などの、ＬＯＸＬ２の酵素活性を阻害する作用物質（ａｇｅｎｔ）、たとえば、ＳＲＣＲ３−４ドメイン内のエピトープに結合するものなどの抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体に結合する場合に、抗体が、ＬＯＸＬ２に結合する。
【００１８】
提供される方法および実施形態に関連する使用のための例示的な抗ＬＯＸＬ２抗体は、たとえば、ＡＢ００２３、ＡＢ００２４、配列番号８において記載される可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／もしくはＣＤＲ３または全配列を有する重鎖ならびに配列番号９において記載される可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／もしくはＣＤＲ３または全配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体などの、配列番号６、８、１０、１１、もしくは１２において記載されるまたは配列番号６、８、１０、１１、もしくは１２に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、もしくは９９％以上の相同性を有するまたは配列番号６、８、１０、１１、もしくは１２において記載される可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／もしくはＣＤＲ３を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有するならびに／または配列番号７、９、１３、もしくは１４において記載されるまたは配列番号７に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、もしくは９９％以上の相同性を有するまたは配列番号７、９、１３、もしくは１４において記載される可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／もしくはＣＤＲ３を有するアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域を有する抗体を含む。
【００１９】
いくつかの実施例において、方法が、検出レベルを正常コントロール値と比較するステップをさらに含み、正常コントロール値よりも高い検出レベルが、疾患または状態の存在、個体が疾患もしくは状態に対する処置に応答する確度、または病的転帰の確度を示す。たとえば、いくつかの実施例において、方法が、循環ＬＯＸＬ２の病的レベルを検出する。そのような方法は、検出レベルを、正常コントロール値または他の参照値と比較するステップを含むことができ、正常コントロール値または参照値よりも高い検出レベルが、病態を示す。
【００２０】
個体が、循環リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）の上昇によって特徴付けられるまたはそれと関連する疾患または状態を有するかどうかを決定する、そのような疾患もしくは状態を診断する、またはそのような疾患もしくは状態に関する予測決定もしくは予後判定の決定をなすための方法もまた、提供される。実施例において、そのような方法が、たとえば、上記に記載されるものなどの、本明細書において提供されるアッセイおよび方法に従って、個体由来のサンプル、たとえば液体サンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベルを検出することによって実行される。典型的に、正常コントロールレベル、参照レベルよりも高いまたはいくつかの場合において、ベースラインよりも高いＬＯＸＬ２のレベルは、個体が、循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられる疾患を有することを示すまたは特定の転帰の確度もしくは個体が特定の疾患処置に対して応答する確度を予測するなどの、疾患もしくは状態についての予後判定情報もしくは予測情報を示す。
【００２１】
提供される方法のいくつかの態様において、疾患または状態が、線維症またはがんまたはそれと関連する疾患である。例として、肺線維症（特発性肺線維症（ＩＰＦ）など）、肝線維症、腎線維症、心線維症（ｃａｒｄｉａｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、骨髄線維症、硬変、慢性ウイルス性肝炎、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、およびＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）を含む。いくつかの態様において、疾患または状態が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。一態様において、疾患または状態は肝線維症である。ある特定の態様において、疾患または状態は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症または慢性Ｃ型肝炎ウイルス感染症である。他の態様において、疾患または状態は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症または慢性Ｂ型肝炎ウイルス（ＣＨＢ）感染症である。さらに他の態様において、疾患または状態は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。いくつかの他の態様において、疾患または状態は原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）である。
【００２２】
方法は、個体を、肺機能検査、心機能検査、および肝機能検査を含むことができる１つ以上のさらなる診断試験にかけるステップをさらに含むことができる。
【００２３】
線維症性疾患を有する個体が線維症性疾患に対する処置への有益な臨床応答を示す確度および／または個体が硬変などの特定の疾患転帰に関して増悪もしくは後退を示す確度を決定するための方法も提供される。そのような方法は、上記に記載される方法によってなどの、たとえば、個体から得られる液体サンプルにおいて、リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）の循環レベルを決定するステップを含むことができる。一態様において、正常コントロールレベルよりも高いＬＯＸＬ２の循環レベルが、個体が線維症性疾患に対する処置への有益な臨床応答を示す確度が増加していることを示す。いくつかの実施例において、報告が、決定された確度に基づいて生成される。いくつかの実施例において、方法が、線維症性疾患について個体を処置するステップをさらに含む。いくつかの実施例において、個体が、ＭＥＴＡＶＩＲ  Ｆ１もしくはＦ２肝線維症などの活動性線維症性疾患および／またはＭＥＴＡＶＩＲ  Ｆ４肝線維症などの進行期線維症性疾患を有する。
【００２４】
個体におけるリシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）の上昇によって特徴付けられる疾患に対する処置の効力を決定するための方法もまた、提供される。いくつかの実施例において、そのような方法が、上記および本明細書において記載される検出方法に従って、疾患に対する処置を受けている個体におけるある時点の循環ＬＯＸＬ２レベルを決定することによって実行される。典型的に、個体から、処置前レベルなどの初期の時点で得られるレベルよりも低い、サンプルにおける循環ＬＯＸＬ２のレベルが、処置の効力を示す。その代わりに、サンプルにおける循環ＬＯＸＬ２のレベルは、最初に増加し、その後、身体によるクリアランスが後続してもよい。
【００２５】
提供される方法の中には、特発性肺線維症（ＩＰＦ）についての予測および予後判定方法もまた、存在する。いくつかの実施例において、そのような方法が、個体からサンプルを得、かつ本明細書において記載される方法の使用などの、サンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベルを検出することによって実行される。一般に、ＬＯＸＬ２のレベルは、個体におけるＩＰＦ疾患転帰またはイベントの確度を示す。肝線維症に対する予測および予後判定方法も提供される。いくつかの実施例において、そのような方法は、本明細書に記載の方法を使用してなどで、個体からサンプルを得、かつサンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベルを検出することによって実行される。一般に、ＬＯＸＬ２のレベルにより、個体における肝線維症の転帰またはイベント（たとえば、線維症の増悪、後退、進行期）の確度が示される。
【００２６】
これらおよびその他の提供される方法は、検出レベルをＬＯＸＬ２の正常コントロールレベルと比較するステップも含んでよく、ＬＯＸＬ２レベルが正常コントロールレベルと比較して上昇していることにより、個体においてＩＰＦ疾患転帰またはイベントが出現する確度の増加が示される。提供される方法のいくつかの実施形態において、閾値ベースラインレベルよりも高いＬＯＸＬ２のレベルは被験体における負の転帰または死亡率と相関する。したがって、いくつかの実施形態において、方法は、サンプルにおけるＬＯＸＬ２レベルが閾値レベルを上回るか下回るか、および／またはサンプルが低レベルのＬＯＸＬ２を含有するか高レベルのＬＯＸＬ２を含有するかを決定するステップを含む。一実施例において、サンプルにおける閾値ＬＯＸＬ２レベルは、１ミリリットル（ｍＬ）当たり少なくとも８００ピコグラム（ｐｇ）、少なくとも７００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも７５０ｐｇ／ｍＬ、少なくとも７００〜８００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも６００ｐｇ／ｍＬ、少なくとも４００ｐｇ／ｍＬ、または少なくとも２００ｐｇ／ｍＬである。別の実施例において、サンプルにおける閾値ＬＯＸＬ２レベルは少なくとも４４０ｐｇ／ｍＬである。一実施例において、方法により、個体におけるＩＰＦ疾患転帰の確度が正常コントロールＬＯＸＬ２レベルまたはベースラインと同等のＬＯＸＬ２レベルを有する被験体と比較して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、または７倍に増加していることが示される。一実施例において、ＬＯＸＬ２レベルが閾値レベル以上、たとえば、７００以上、７１０以上、７２０以上、７３０以上、７４０以上、７５０以上、７６０以上、７７０以上、７８０以上、７９０以上、８００以上、もしくは約７００以上、７１０以上、７２０以上、７３０以上、７４０以上、７５０以上、７６０以上、７７０以上、７８０以上、７９０以上、８００以上、または７００〜８００であることにより、個体におけるＩＰＦ疾患転帰の確度が正常コントロールＬＯＸＬ２レベルまたはベースラインと同等のＬＯＸＬ２レベルを有する被験体と比較して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、または７倍に増加していることが示される。
【００２７】
いくつかの実施形態において、ＬＯＸＬ２の検出レベルは、約７００ｐｇ／ｍＬを超える、約７００〜約８００ｐｇ／ｍＬを超える（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｈａｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ａｂｏｕｔ  ７００  ａｎｄ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ａｂｏｕｔ  ８００  ｐｇ／ｍＬ）、約７００〜約８００ｐｇ／ｍＬである、または約８００ｐｇ／ｍＬを超える。
【００２８】
提供される方法によって予測され得る転帰およびイベントとしては、これらに限定されないが、生存、硬変、その増悪または後退、線維症のさらに進行期への増悪、非代償性肝疾患への増悪、ＡＳＴ、ＡＬＴ、炎症、壊死、処置の効力、感染症の抑制、慢性疾患または進行疾患、たとえば線維症への増悪、線維症性のステージ、あらゆる原因からの死亡率、呼吸器系の入院、または肺機能の無条件の減少）、肺機能低下、呼吸器系の入院、移植なしの生存、死、および処置への応答性、および／または１つ以上の症状の好転が挙げられる。
【００２９】
方法によって検出することまたは確度を決定することができる症状としては、たとえば、本明細書の方法のいずれかによって決定される線維症性のステージまたはスコア、硬変、非代償性肝疾患、炎症、ＡＳＴ、ＡＬＴなどの酵素のレベル、壊死、肺機能または肝機能の程度、生存、入院、および移植なしの生存が挙げられる。
【００３０】
いくつかの実施形態において、レベル、たとえば、検出されたＬＯＸＬ２の閾値レベルにより、そのような疾患もしくは状態の症状または転帰の確度またはそのような疾患もしくは状態の症状または転帰の存在もしくは非存在が決定または予測される。
【００３１】
ＩＰＦ疾患転帰およびイベントの中には、ＩＰＦ疾患増悪（あらゆる原因からの死亡率として定義されるもの、呼吸器系の入院、または肺機能の無条件の減少（ｃａｔｅｇｏｒｉｃａｌ  ｄｅｃｒｅａｓｅ）など）、肺機能低下、呼吸器系の入院、移植なしの生存、死、および処置への応答性がある。いくつかの場合において、上記方法により、個体におけるＩＰＦと関連する転帰、イベント、もしくはエンドポイントまたはその確度を予測する。いくつかの場合において、上記方法により、個体臨床分子死亡率指数（Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ）（ＰＣＭＩ）もしくはＭＭＰ７、ＩＣＡＭ１、ＩＬ８、ＶＣＡＭ１、およびＳ１００Ａ１２などの１つ以上の他のバイオマーカーのレベルに基づくなどの、他の方法もしくはアッセイによって、そのようなアウトプット、エンドポイント、もしくは確度について「陰性である」と見なされた（または他のそのような方法もしくはアッセイが、その転帰、イベント、エンドポイント、もしくは確度を検出しないもしくは検出することができない）個体におけるその転帰、エンドポイント、または確度を予測する。
【００３２】
予測または予後判定ＩＰＦ方法は、予測努力肺活量（ＦＶＣ）のパーセント、予測一酸化炭素拡散能（ＤＬＣＯ）のパーセント、６分間の歩行距離（６ＭＷＤ）、平均肺動脈圧（ｍＰＡＰ）、最低安静時酸素飽和度（ｌｏｗｅｓｔ  ｒｅｓｔｉｎｇ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ）（ＳｐＯ２）、複合生理学指数（ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｉｎｄｅｘ）（ＣＰＩ）、セントジョージ呼吸器質問票スコア（Ｓｔ．
Ｇｅｏｒｇｅ’ｓ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ  ｓｃｏｒｅ）（ＳＧＲＱ）、および遷移呼吸困難指数（Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  Ｄｙｓｐｎｅａ  Ｉｎｄｅｘ）（ＴＤＩ）スコア、処置への応答性、およびＩＰＦ疾患のバイオマーカーからなる群から選択される、個体におけるＩＰＦ疾患重症度または機能的ステータスの量（ｍｅａｓｕｒｅ）を検出するステップをさらに含むことができる。いくつかの実施例において、方法が、予測モデルを使用して、ＬＯＸＬ２レベルおよび／または疾患重症度もしくは機能的ステータスの量を分析するステップをさらに含む。
【００３３】
ＩＰＦ処置への個体の応答をモニターするまたは個体が処置に応答する確度を決定するための方法もまた、提供される。一実施例において、そのような方法が、ＩＰＦに対する処置を受けている個体からサンプルを得、かつサンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベルを検出することによって実行される。典型的に、ＬＯＸＬ２のレベルは、処置への個体の応答性または個体が処置に応答する確度を示す。
【００３４】
いくつかの場合において、方法は、さらに、個体においてＩＰＦ処置を開始する、改変する、または中止するステップを含む。いくつかの実施例において、処置が、ＬＯＸＬ２のレベルもしくは相対的なレベルまたは予後判定情報もしくは予測情報などの、方法によって決定される情報に基づいて開始される、改変される、または中止される。いくつかの実施例において、処置が、ＬＯＸＬ２レベルの決定前に開始される。
【００３５】
個体から得られる液体生物学的サンプルにおけるリシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）ポリペプチドのレベルを決定するのに使用するためのなどの、提供される方法において使用するためのアッセイデバイスおよびキットもまた、提供される。一実施形態において、そのようなデバイスが、軸流路を定めるマトリックスを含み、マトリックスが、ｉ）流動サンプルを受け入れる流路の上流の端にサンプル受け入れゾーン、ｉｉ）流路内に、かつサンプル受け入れゾーンの下流に位置する１つ以上の試験ゾーンであって、１つ以上の試験ゾーンのそれぞれがＬＯＸＬ２に特異的な抗体を含み、ＬＯＸＬ２に特異的な抗体のそれぞれが、液体サンプルに存在するＬＯＸＬ２ポリペプチドに結合し、抗ＬＯＸＬ２抗体／ＬＯＸＬ２複合体を形成することができる、１つ以上の試験ゾーン、およびｉｉｉ）流路内に、かつサンプル受け入れゾーンの下流に位置する１つ以上のコントロールゾーンを含む。
【００３６】
１つ以上のコントロールゾーンは、２つの試験ゾーンが存在する場合、試験ゾーンの間に位置することができる。試験ゾーンおよびコントロールゾーンは、任意のコントロールゾーンの上流に位置する試験ゾーンから始まる流路内に交互の様式（ａｌｔｅｒｎａｔｉｎｇ  ｆｏｒｍａｔ）で位置することができる。一実施例において、１つ以上の抗ＬＯＸＬ２抗体が、試験ゾーン中のマトリックスに固定される。
【００３７】
いくつかの実施例において、デバイスが、ＬＯＸＬ２に特異的な抗体に対して特異的な標識抗体を含む標識ゾーンをさらに含む。一般に、標識抗体は、抗ＬＯＸＬ２抗体／ＬＯＸＬ２複合体に存在する抗ＬＯＸＬ２抗体に結合し、標識抗ＬＯＸＬ２抗体／ＬＯＸＬ２を形成することができ、標識抗体は、液体サンプルの存在下で移動可能（ｍｏｂｉｌｉｚａｂｌｅ）である。標識抗体は、化学発光剤、微粒子標識、比色剤、エネルギー伝達剤、酵素、蛍光剤、および放射性同位体の中から選択される標識構成成分を含むことができる。
【００３８】
デバイスについてのいくつかの実施例において、マトリックスが、支持体および必要に応じてカバーを含むハウジング内に位置し、ハウジングが、適用開口部（ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ａｐｅｒｔｕｒｅ）および１つ以上の観察窓（ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ  ｐｏｒｔ）を含有する。提供されるデバイスの中には、試験ストリップおよびディップスティックアッセイデバイスがある。
【００３９】
個体から得られる生物学的サンプルにおけるリシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）ポリペプチドのレベルを決定するための、提供されるキットの中には、ＬＯＸＬ２に対して特異的な第１の抗体およびＬＯＸＬ２に対して特異的な第２の抗体を含むものがある。キットはまた、標準曲線を生成するのに使用される精製ＬＯＸＬ２を含むことができる。一実施例において、キットにおける抗体の少なくとも１つが、化学発光剤、微粒子標識、比色剤、エネルギー伝達剤、酵素、蛍光剤、および放射性同位体などの、検出可能な標識を含む。
本発明は、例えば、以下を提供する。
（項目１）
肝臓の疾患または状態を有する被験体に、ＬＯＸＬ２に結合し、かつ／またはそれを阻害する作用物質を投与し、それにより、該疾患または状態を処置するまたは好転させるステップを含む方法。
（項目２）
前記疾患または状態が、線維症と関連する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記肝臓の疾患または状態が、ＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎）、ＰＳＣ（原発性硬化性胆管炎）、硬変、門脈圧亢進症、ＰＢＣ（原発性胆汁性肝硬変）、自己免疫性肝炎、アルコール性硬変、アルファ１アンチトリプシン欠損症、遺伝性ヘモクロマトーシス、ウィルソン病、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、およびＨＩＶ関連脂肪性肝炎からなる群から選択される、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記作用物質が、ＬＯＸＬ２に特異的に結合する抗体である、項目１から３のいずれかに記載の方法。
（項目５）
前記抗体が、ＬＯＸＬ２との結合について、配列番号８の重鎖可変領域配列および／または配列番号９の軽鎖可変領域配列を有する抗体と競合する、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記抗体が、配列番号６、８、１０、１１、１２に記載されている配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および／または配列番号７、９、１３、もしくは１４の配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、項目４または５に記載の方法。
（項目７）
前記抗体が、配列番号８に記載されている重鎖可変領域配列の重鎖ＣＤＲおよび／または配列番号９に記載されている軽鎖可変領域配列の軽鎖ＣＤＲを含む、項目４から６のいずれかに記載の方法。
（項目８）
前記作用物質を、１０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇもしくは約１０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇあるいは少なくとも１０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇもしくは約１０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇあるいは約１０〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する、項目１から７のいずれかに記載の方法。
（項目９）
前記作用物質を、少なくとも２００ｍｇまたは７００ｍｇもしくは約２００ｍｇまたは７００ｍｇあるいは２００ｍｇまたは７００ｍｇもしくは約２００ｍｇまたは７００ｍｇあるいは約２００〜７００ｍｇの用量で投与する、項目１から７のいずれかに記載の方法。
（項目１０）
前記作用物質を、少なくとも７５ｍｇまたは１２５ｍｇもしくは約７５ｍｇまたは１２５ｍｇあるいは７５ｍｇまたは１２５ｍｇもしくは約７５ｍｇまたは１２５ｍｇあるいは７５〜１２５ｍｇもしくは約７５〜１２５ｍｇの用量で投与する、項目１から７のいずれかに記載の方法。
（項目１１）
前記作用物質を静脈内または皮下に投与する、項目１から１０のいずれかに記載の方法。
（項目１２）
前記被験体の生存を増加または延長させる、架橋線維化の増加を低下させるもしくは予防する、アルファ平滑筋アクチン（αＳＭＡ）レベルの増加を低下させるもしくは予防する、星細胞活性化の増加を低下させるもしくは予防する、かつ／またはアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）もしくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、もしくはガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）の増加を低下させるもしくは予防する、項目１から１１のいずれかに記載の方法。
（項目１３）
ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＧＧＴ、またはＡＬＴ／ＡＳＴ比を、基準値上限（ＵＬＮ）未満まで、または基準値上限（ＵＬＮ）の２倍未満、５倍未満、もしくは１０倍未満まで低下させる、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
疾患または状態を検出、予測、またはモニターするための方法であって、
ａ）個体から得られる液体サンプルを、リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）に特異的な抗体と接触させるステップと、
ｂ）該液体サンプルに存在するＬＯＸＬ２との該抗体の結合を検出し、それにより、該液体サンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベルを検出するステップと
を含み、
ＬＯＸＬ２の該検出レベルにより、該個体における該疾患または状態の存在または非存在、または該個体が該疾患または状態のための処置に対して応答する確度が示される方法。
（項目１５）
前記疾患または状態が、肺線維症、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、または骨髄線維症、硬変、慢性ウイルス性肝炎、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、または非代償性肝疾患である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記疾患または状態が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、ＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎）、ＰＳＣ（原発性硬化性胆管炎）、硬変、門脈圧亢進症、ＰＢＣ（原発性胆汁性肝硬変）、自己免疫性肝炎、アルコール性硬変、アルファ１アンチトリプシン欠損症、遺伝性ヘモクロマトーシス、ウィルソン病、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、およびＨＩＶ関連脂肪性肝炎である、項目１４または１５に記載の方法。
（項目１７）
ＬＯＸＬ２の前記検出レベルが約７００ｐｇ／ｍＬを超える、項目１４から１６のいずれかに記載の方法。
（項目１８）
ＬＯＸＬ２の前記検出レベルが約８００ｐｇ／ｍＬを超える、項目１４に記載の方法。
（項目１９）
ＬＯＸＬ２の前記検出レベルがＬＯＸＬ２の閾値レベルよりも高いことを決定し、それにより、前記個体における前記疾患または状態についての転帰、エンドポイント、またはイベントの確度を決定するステップをさらに含む、項目１４から１８のいずれかに記載の方法。
（項目２０）
前記抗体が、配列番号６、８、１０、１１、１２に記載されている配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および／または配列番号７、９、１３、もしくは１４の配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、項目１４に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１は、肝線維症のＣＣｌ４マウスモデルにおける阻害性抗ＬＯＸＬ２抗体（ＡＢ００２３）の投与の効果を示す図である。
【００４１】
【図２】図２は、処置前アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）が上昇している肝疾患の被験体における、抗ＬＯＸＬ２抗体（ＡＢ００２４）を投与した後、示されている時点でのＡＬＴレベルを示す図である（「ベースライン」＝処置前）。
【００４２】
【図３】図３は、処置前ＡＬＴが上昇している肝疾患の被験体における、抗ＬＯＸＬ２抗体（ＡＢ００２４）を投与した後、示されている時点でのアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベルを示す図である（「ベースライン」＝処置前）。
【００４３】
【図４】図４は、処置前ＡＬＴが上昇している肝疾患の被験体における、抗ＬＯＸＬ２抗体ＡＢ００２４を用いた４週間の処置の前（「ベースライン」）、抗ＬＯＸＬ２抗体ＡＢ００２４を用いた４週間の処置の後（「処置の終了時」）、および４週間の処置期間の終了時から始まる６週間の経過観察期間の終了時の平均ＡＬＴ（左側の棒）および平均ＡＳＴ（右側の棒）レベルを示す図である。
【００４４】
【図５】図５は、肝疾患の被験体１０人の来診によるベースラインおよび抗ＬＯＸＬ２抗体ＡＢ００２４を４週間投与した後の種々の示されている時点での平均ＡＬＴ、平均ＡＳＴ、および平均ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）レベルを示す図である。
【００４５】
【図６】図６は、処置前ＡＳＴ／ＡＬＴレベルが高い被験体における、ベースライン、処置の終了時、および経過観察期間の終了時の平均ＡＬＴ（左側の棒）および平均ＡＳＴ（右側の棒）レベルを示す図である。処置の終了時のＡＳＴ対ベースラインのＡＳＴについてｐ＝０．０２。
【００４６】
【図７】図７は、生のＥＣＬ（電気化学発光）カウントをＹ軸上にプロットし、ＬＯＸＬ２濃度（ｎＭ／Ｌ）をＸ軸上にプロットした、ＬＯＸＬ２イムノアッセイについての標準キャリブレータ曲線を示す図である。精製した組換え完全長ＬＯＸＬ２タンパク質を、プールした正常ヒト血清に添加し、その後、血清中で段階希釈し、キャリブレータ曲線を生成した。データポイントはそれぞれ、３つの反復ウェルの平均値を示し、４つの独立したプレートについての曲線を示す。
【００４７】
【図８】図８は、特発性肺線維症の患者由来の血清サンプルにおけるＬＯＸＬ２レベルを示す図である。
【００４８】
【図９Ａ】図９は、実施例５Ｂにおいて記載されるように、ベースラインＬＯＸＬ２レベル（図９Ａにおける非変換ＬＯＸＬ２レベルおよび図９ＢにおけるＬｏｇ１０Ｘ変換ＬＯＸＬ２レベルによる）と特発性肺線維症（ＩＰＦ）重症度および機能的ステータスのベースライン量（ｂａｓｅｌｉｎｅ  ｍｅａｓｕｒｅ）との間の相関を実証する散布図マトリックスを示す図である。それぞれのパネルにおいて、第１の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、ベースラインＬＯＸＬ２レベルを示し、第２の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、ベースライン予測努力肺活量（ＦＶＣ）を示し、第３の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、予測一酸化炭素拡散能（ＤＬＣＯ）のベースラインパーセントを示し、第４の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、ベースラインの６分間の歩行距離（６ＭＷＤ）を示し、第５の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、ベースライン複合生理学指数（ＣＰＩ）を示し、第６の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、ベースラインセントジョージ呼吸器質問票スコアを示し、第７の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、ベースライン遷移呼吸困難指数スコアを示す。ＬＯＸＬ２とＩＰＦ重症度のベースライン量およびパフォーマンスステータスとの間の相関は、パネル（ａ）および（ｂ）の上部の列の暗い色のボックス内で強調する。
【図９Ｂ】図９は、実施例５Ｂにおいて記載されるように、ベースラインＬＯＸＬ２レベル（図９Ａにおける非変換ＬＯＸＬ２レベルおよび図９ＢにおけるＬｏｇ１０Ｘ変換ＬＯＸＬ２レベルによる）と特発性肺線維症（ＩＰＦ）重症度および機能的ステータスのベースライン量（ｂａｓｅｌｉｎｅ  ｍｅａｓｕｒｅ）との間の相関を実証する散布図マトリックスを示す図である。それぞれのパネルにおいて、第１の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、ベースラインＬＯＸＬ２レベルを示し、第２の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、ベースライン予測努力肺活量（ＦＶＣ）を示し、第３の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、予測一酸化炭素拡散能（ＤＬＣＯ）のベースラインパーセントを示し、第４の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、ベースラインの６分間の歩行距離（６ＭＷＤ）を示し、第５の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、ベースライン複合生理学指数（ＣＰＩ）を示し、第６の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、ベースラインセントジョージ呼吸器質問票スコアを示し、第７の行および列のｘおよびｙ軸は、それぞれ、ベースライン遷移呼吸困難指数スコアを示す。ＬＯＸＬ２とＩＰＦ重症度のベースライン量およびパフォーマンスステータスとの間の相関は、パネル（ａ）および（ｂ）の上部の列の暗い色のボックス内で強調する。
【００４９】
【図１０Ａ】図１０は、疾患増悪（ＰＦＳ）（図１０Ａ）ならびにその構成成分：肺機能低下（図１０Ｂ）、呼吸器系の入院（図１０Ｃ）、および死（図１０Ｄ）に対して、低い（≦８００ｐｇ／ｍｌ）および高い（＞８００ｐｇ／ｍｌ）ＬＯＸＬ２レベルを比較するＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ曲線を示す図である。それぞれのパネルにおいて、上部の、より黒い線は、低い（≦８００ｐｇ／ｍｌ）ベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルを有する患者を示し、下部の、より明るい線は、高い（＞８００ｐｇ／ｍｌ）ベースラインＬＯＸＬ２レベルを有する患者を示す。患者はすべて、アンブリセンタンにより処置した。ｙ軸はそれぞれ、所定のイベントを伴わない患者のパーセントを示し（０、２５、５０、７５、および１００を軸に沿ってマークする）、Ｘ軸はそれぞれ、日における時間を示す（０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、および８００日を軸に沿ってマークする）。
【図１０Ｂ】図１０は、疾患増悪（ＰＦＳ）（図１０Ａ）ならびにその構成成分：肺機能低下（図１０Ｂ）、呼吸器系の入院（図１０Ｃ）、および死（図１０Ｄ）に対して、低い（≦８００ｐｇ／ｍｌ）および高い（＞８００ｐｇ／ｍｌ）ＬＯＸＬ２レベルを比較するＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ曲線を示す図である。それぞれのパネルにおいて、上部の、より黒い線は、低い（≦８００ｐｇ／ｍｌ）ベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルを有する患者を示し、下部の、より明るい線は、高い（＞８００ｐｇ／ｍｌ）ベースラインＬＯＸＬ２レベルを有する患者を示す。患者はすべて、アンブリセンタンにより処置した。ｙ軸はそれぞれ、所定のイベントを伴わない患者のパーセントを示し（０、２５、５０、７５、および１００を軸に沿ってマークする）、Ｘ軸はそれぞれ、日における時間を示す（０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、および８００日を軸に沿ってマークする）。
【図１０Ｃ】図１０は、疾患増悪（ＰＦＳ）（図１０Ａ）ならびにその構成成分：肺機能低下（図１０Ｂ）、呼吸器系の入院（図１０Ｃ）、および死（図１０Ｄ）に対して、低い（≦８００ｐｇ／ｍｌ）および高い（＞８００ｐｇ／ｍｌ）ＬＯＸＬ２レベルを比較するＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ曲線を示す図である。それぞれのパネルにおいて、上部の、より黒い線は、低い（≦８００ｐｇ／ｍｌ）ベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルを有する患者を示し、下部の、より明るい線は、高い（＞８００ｐｇ／ｍｌ）ベースラインＬＯＸＬ２レベルを有する患者を示す。患者はすべて、アンブリセンタンにより処置した。ｙ軸はそれぞれ、所定のイベントを伴わない患者のパーセントを示し（０、２５、５０、７５、および１００を軸に沿ってマークする）、Ｘ軸はそれぞれ、日における時間を示す（０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、および８００日を軸に沿ってマークする）。
【図１０Ｄ】図１０は、疾患増悪（ＰＦＳ）（図１０Ａ）ならびにその構成成分：肺機能低下（図１０Ｂ）、呼吸器系の入院（図１０Ｃ）、および死（図１０Ｄ）に対して、低い（≦８００ｐｇ／ｍｌ）および高い（＞８００ｐｇ／ｍｌ）ＬＯＸＬ２レベルを比較するＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ曲線を示す図である。それぞれのパネルにおいて、上部の、より黒い線は、低い（≦８００ｐｇ／ｍｌ）ベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルを有する患者を示し、下部の、より明るい線は、高い（＞８００ｐｇ／ｍｌ）ベースラインＬＯＸＬ２レベルを有する患者を示す。患者はすべて、アンブリセンタンにより処置した。ｙ軸はそれぞれ、所定のイベントを伴わない患者のパーセントを示し（０、２５、５０、７５、および１００を軸に沿ってマークする）、Ｘ軸はそれぞれ、日における時間を示す（０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、および８００日を軸に沿ってマークする）。
【００５０】
【図１１Ａ】図１１は、ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ被験体（図１１Ａ：プラセボおよびアンブリセンタン処置の被験体の組み合わせ；図１１Ｂ：アンブリセンタンのみ）ならびにＧＡＰコホート被験体におけるベースラインＬＯＸＬ２分布の比較を示す図である。
【図１１Ｂ】図１１は、ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ被験体（図１１Ａ：プラセボおよびアンブリセンタン処置の被験体の組み合わせ；図１１Ｂ：アンブリセンタンのみ）ならびにＧＡＰコホート被験体におけるベースラインＬＯＸＬ２分布の比較を示す図である。
【００５１】
【図１２Ａ】図１２Ａは、ＧＡＰコホート研究におけるベースラインの６か月（左上のパネル）、１２か月（右上のパネル）、１８か月（左下のパネル）、および２４か月（右下のパネル）後の、低い血清ＬＯＸＬ２レベル（上の線、≦４４０ｐｇ／ｍｌ）対高い（下の線、＞４４０ｐｇ／ｍｌ）血清ＬＯＸＬ２レベルに従う、すべての原因による死亡率についてのＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ曲線を示す図である。図１２Ｂは、ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ研究におけるベースラインの６か月（左上のパネル）、１２か月（右上のパネル）、１８か月（左下のパネル）、および２４か月（右下のパネル）後の、低い血清ＬＯＸＬ２レベル（上の線、≦８００ｐｇ／ｍｌ）対高い（下の線、＞８００ｐｇ／ｍｌ）血清ＬＯＸＬ２レベルに従う、すべての原因による死亡率についてのＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ曲線を示す図である。
【図１２Ｂ】図１２Ａは、ＧＡＰコホート研究におけるベースラインの６か月（左上のパネル）、１２か月（右上のパネル）、１８か月（左下のパネル）、および２４か月（右下のパネル）後の、低い血清ＬＯＸＬ２レベル（上の線、≦４４０ｐｇ／ｍｌ）対高い（下の線、＞４４０ｐｇ／ｍｌ）血清ＬＯＸＬ２レベルに従う、すべての原因による死亡率についてのＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ曲線を示す図である。図１２Ｂは、ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ研究におけるベースラインの６か月（左上のパネル）、１２か月（右上のパネル）、１８か月（左下のパネル）、および２４か月（右下のパネル）後の、低い血清ＬＯＸＬ２レベル（上の線、≦８００ｐｇ／ｍｌ）対高い（下の線、＞８００ｐｇ／ｍｌ）血清ＬＯＸＬ２レベルに従う、すべての原因による死亡率についてのＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ曲線を示す図である。
【００５２】
【図１３】図１３Ａは、血清ＬＯＸＬ２レベルが低い（下の線、≦８００ｐｇ／ｍＬ）ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ研究の被験体と、血清ＬＯＸＬ２レベルが高い（上の線、＞８００ｐｇ／ｍＬ）ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ研究の被験体における疾患の増悪（ＤＰ（肺機能（ＬＦ）の低下（ＦＶＣが１０％減少かつＤＬＣＯが５％減少またはＤＬＣＯが１５％減少かつＦＶＣが５％減少）、呼吸器系の入院（ＲＨ）および死亡率）を含む））についての曲線を示す図である。図１３Ｂは、血清ＬＯＸＬ２レベルが低い（下の線、≦７００ｐｇ／ｍＬ）ＧＡＰコホートの被験体と、血清ＬＯＸＬ２レベルが高い（上の線、＞７００ｐｇ／ｍＬ）ＧＡＰコホートの被験体における死亡率についての曲線を示す図である。
【００５３】
【図１４】図１４は、被験体の様々な群についての平均血清ＬＯＸＬ２レベル（ｐｇ／ｍＬ）を示す図である。図１４Ａは、ベースラインおよび２４０週目のサンプルについての平均血清ＬＯＸＬ２レベルを示す（対応する被験体のＩｓｈａｋ線維症スコア（０、１、２、３、４、５、６、左〜右）に従って群分けした合計１６２のサンプル（それぞれの８１人の被験体について、１回のベースラインおよび１回の２４０週目）。ＬＯＱ＝定量化のレベル。図１４Ｂは、ベースラインおよび２４０週目の、所定のＩｓｈａｋステージ（０、１、２、３、４、５、６、左〜右）を有する被験体についてのベースラインおよび２４０週目の平均血清ＬＯＸＬ２レベルを示す。図１４Ｃは、１〜３および４〜６の対応するＩｓｈａｋステージを有する患者についてのＬＯＸＬ２のベースライン、２４０週目、および全体的な血清レベルを示す。
【００５４】
【図１５】図１５は、所定のレベルの血清ＬＯＸＬ２（ｐｇ／ｍＬ）を有することが決定された、それぞれの所定のＩｓｈａｋステージ（１、２、３、４、５、６（個々のバー、左〜右）を有する、本研究における被験体のパーセンテージを示す。ＬＯＤ＝検出限界；ＬＯＱ＝定量化の限界。示すカテゴリーはそれぞれ、その前のカテゴリーの上限値からの範囲であった（ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｕｐｐｅｒ  ｌｉｍｉｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｉｏｕｓ  ｃａｔｅｇｏｒｙ）、たとえば１５００＝１００１〜１５００ｐｇ／ｍＬ。
【００５５】
【図１６−１】図１６は、個々のＣＨＢ被験体についてのベースラインおよび処置後の２４０週目の血清ＬＯＸＬ２レベル（ｐｇ／ｍＬ）を示す図である。図１６Ａ：持続性の硬変を有する被験体（ｎ＝１６）；図１６Ｂ：２４０週目までに硬変の逆転を有する被験体（ｎ＝４２）；図１６Ｃ：２４０週目までに線維症のステージ（Ｉｓｈａｋ）における変化を経験しなかった非硬変被験体；図１６Ｄ：研究の過程にわたって硬変までの進行を経験した被験体；および図１６Ｅ：線維症における２ステージ（Ｉｓｈａｋスコア）以上の低下を伴う非硬変被験体。ＬＯＱ（定量化の限界）＝４４０ｐｇ／ｍｌ、ＬＯＤ（検出限界）＝１８０ｐｇ／ｍｌ。
【図１６−２】図１６は、個々のＣＨＢ被験体についてのベースラインおよび処置後の２４０週目の血清ＬＯＸＬ２レベル（ｐｇ／ｍＬ）を示す図である。図１６Ａ：持続性の硬変を有する被験体（ｎ＝１６）；図１６Ｂ：２４０週目までに硬変の逆転を有する被験体（ｎ＝４２）；図１６Ｃ：２４０週目までに線維症のステージ（Ｉｓｈａｋ）における変化を経験しなかった非硬変被験体；図１６Ｄ：研究の過程にわたって硬変までの進行を経験した被験体；および図１６Ｅ：線維症における２ステージ（Ｉｓｈａｋスコア）以上の低下を伴う非硬変被験体。ＬＯＱ（定量化の限界）＝４４０ｐｇ／ｍｌ、ＬＯＤ（検出限界）＝１８０ｐｇ／ｍｌ。
【００５６】
【図１７】図１７は、所定のベースライン血清ＬＯＸＬ２レベル（＜１５００、＞１５００、１５００〜３０００、＜３０００、および＞３０００ｐｇ／ｍｌ）を有する、２４０週目に、組織学的改善を示した硬変ＣＨＢ被験体（「Ｙ」）のパーセンテージならびに同じ所定のベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルを有する、２４０週目に組織学的改善を有しないことが決定された硬変被験体（「Ｎ」）のパーセンテージを示す図である。
【００５７】
【図１８】図１８は、ベースライン、処置の１年後、および処置の５年後における、様々なＩｓｈａｋ線維症スコア（下から上に１〜６）を有するＣＨＢ被験体のパーセンテージを示す図である。
【００５８】
【図１９】図１９は、２４０週間の処置期間にわたるＣＨＢ被験体におけるｓＬＯＸＬ２レベルの平均値（四角）および中央値（三角形）を示す図である。点線はこの研究における定量化の限界を示す。
【００５９】
【図２０】図２０は、ＣＨＢ被験体についての、ベースラインＩｓｈａｋ線維症スコアに従ったベースラインｓＬＯＸＬ２レベルを示す図である。図２０Ａは、示されている線維症スコアの被験体についての個々のレベルを示す。図２０Ｂは、ビニングしたＩｓｈａｋ線維症スコアについてのデータを示す。
【００６０】
【図２１】図２１は、代償性肝疾患のＣＨＢ被験体におけるｓＬＯＸＬ２レベルと非代償性肝疾患のＣＨＢ被験体におけるｓＬＯＸＬ２レベルを示す図である。
【００６１】
【図２２】図２２は種々のＭＥＬＤスコアを有する非代償性ＣＨＢ被験体におけるｓＬＯＸＬ２レベルを示す図である。
【００６２】
【図２３】図２３は、ＰＳＣの患者由来の肝臓外植片（図２３Ａ）およびＰＢＣの患者由来の肝臓外植片（図２３Ｂ）、ならびにＭｄｒ２−／−マウス由来の肝組織（図２３Ｃ）および胆管結紮（ＢＤＬ）に供したマウス（外科手術後７日目）由来の肝組織（図２３Ｄ）の免疫組織化学的（ＩＨＣ）染色の結果を示す図である。
【００６３】
【図２４】図２４は、胆汁うっ滞性肝疾患の動物モデルの肝組織における相対的なＬＯＸＬ２  ｍＲＮＡ発現を示す図である。図２４Ａは、野生型マウス由来の肝組織と、Ｍｄｒ２−／−マウス由来の肝組織において測定された相対的なＬＯＸＬ２  ｍＲＮＡレベルを示す。図２４Ｂは、ニセ外科手術または胆管結紮（ＢＤＬ（外科手術後３日目および７日目））に供したマウス由来の肝組織において測定された相対的なＬＯＸＬ２  ｍＲＮＡレベルを示す。
【００６４】
【図２５】図２５は、ヒトＬＯＸＬ２のアミノ酸配列（配列番号１）を示す図である。
【００６５】
【図２６】図２６は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症の患者８７人についての、ＬＯＸＬ２血清中濃度対Ｉｓｈａｋ線維症スコアを示す図である。
【００６６】
【図２７】図２７は、肝線維症と診断された患者由来の血清サンプルにおけるＬＯＸＬ２レベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す図である。
【００６７】
【図２８】図２８は、慢性ＨＣＶ感染症の患者由来の肝組織の免疫組織化学的（ＩＨＣ）染色によって決定されたヒト線維症性肝組織におけるＬＯＸＬ２の発現を示す図である。左側のパネルでは（５×対物レンズ拡大率）、黒色の矢印は、門脈領域および門脈路への線維性の拡大のエリアを示す。白色の矢印は、肝小葉の周囲の短い線維性隔壁のエリアを示す。右側のパネル（４０×対物レンズ拡大率）は、類洞周囲腔内の、肝細胞（Ｈ）との境界面の線維性隔壁（Ｓ）（矢印）において、および肝実質内の筋線維芽細胞（矢印）において観察されたＬＯＸＬ２免疫反応性を示す。
【００６８】
【図２９】図２９は、ビニングしたベースラインＩｓｈａｋ線維症スコアおよび時間によるＬＯＸＬ２血清レベルを示す図である。各パネルは、示されている時点についての、Ｉｓｈａｋ線維症スコアに従って群分けした２つの患者群（それぞれ１〜３および５〜６）についてのＬＯＸＬ２濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。ＬＯＸＬ２濃度がプロット範囲外であった３つの外れ値（ＬＯＸＬ２濃度＝５５２９ｐｇ／ｍＬ、６６２１ｐｇ／ｍＬ、８８４５ｐｇ／ｍＬ）は全て、Ｉｓｈａｋ線維症スコアが５である同じ被験体に由来した。
【００６９】
【図３０】図３０は、Ｉｓｈａｋ線維症スコアに従って群分けした２つの患者群（それぞれ１〜３および５〜６）についての４週目〜３０週目にわたるＬＯＸＬ２血清中濃度の中央値として算出された被験体内のＬＯＸＬ２血清レベルの中央値を示す図である。被験体内の変動係数の平均は２２％であった。
【００７０】
【図３１】図３１は、９５％信頼区間を用いた、ビニングしたベースラインｉｓｈａｋ線維症スコアによる経時的（週）なＬＯＸＬ２血清中濃度の中央値（ｐｇ／ｍＬ）を示す図である。研究生検の間の２５〜２８週間にわたってＩｓｈａｋ線維症スコアが２以上変化した被験体は１人のみであった。
【００７１】
【図３２】図３２は、示されているＩｓｈａｋスコア（１〜６）を有する被験体についての、被験体内のＬＯＸＬ２のレベルの中央値対ヒアルロン酸（ＨＡ）のレベルの中央値（上のパネル）および被験体内のＬＯＸＬ２のレベルの中央値対組織メタロプロテアーゼ阻害物質１（ＴＩＭＰ１）のレベルの中央値（下のパネル）を示す図である。被験体内の発現の中央値は４週目〜３０週目にわたる発現の中央値として算出した。局所重み付けした散布図平滑化を使用して曲線を構築した。
【００７２】
【図３３−１】図３３Ａは、ＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスから得た異なるコラーゲン画分の総ヒドロキシプロリンのレベルを示す図である。図３３Ｂは、１２週目にＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスから得た、肝臓コラーゲンを示す総ヒドロキシプロリン（ｈｙｄｒｏｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ）のレベルを示す図である。図３３Ｃは、回復期の６週目および１２週目にＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスから得た、相対的な肝臓コラーゲンを示す総ヒドロキシプロリンのレベルを示す図である。図３３Ｄは、回復期にＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスにおけるコラーゲンゲル収縮アッセイを示す図である。  図３３Ａは、ＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスから得た異なるコラーゲン画分の総ヒドロキシプロリンのレベルを示す図である。図３３Ｂは、１２週目にＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスから得た、肝臓コラーゲンを示す総ヒドロキシプロリンのレベルを示す図である。図３３Ｃは、回復期の６週目および１２週目にＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスから得た、相対的な肝臓コラーゲンを示す総ヒドロキシプロリンのレベルを示す図である。図３３Ｄは、回復期にＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスにおけるコラーゲンゲル収縮アッセイを示す図である。
【００７３】
【図３３−２】図３３Ａは、ＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスから得た異なるコラーゲン画分の総ヒドロキシプロリンのレベルを示す図である。図３３Ｂは、１２週目にＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスから得た、肝臓コラーゲンを示す総ヒドロキシプロリン（ｈｙｄｒｏｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ）のレベルを示す図である。図３３Ｃは、回復期の６週目および１２週目にＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスから得た、相対的な肝臓コラーゲンを示す総ヒドロキシプロリンのレベルを示す図である。図３３Ｄは、回復期にＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスにおけるコラーゲンゲル収縮アッセイを示す図である。  図３３Ａは、ＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスから得た異なるコラーゲン画分の総ヒドロキシプロリンのレベルを示す図である。図３３Ｂは、１２週目にＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスから得た、肝臓コラーゲンを示す総ヒドロキシプロリンのレベルを示す図である。図３３Ｃは、回復期の６週目および１２週目にＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスから得た、相対的な肝臓コラーゲンを示す総ヒドロキシプロリンのレベルを示す図である。図３３Ｄは、回復期にＡＢ００２３、Ｍ６４、ＢＡＰＮ、またはビヒクルを投与したＴＡＡマウスにおけるコラーゲンゲル収縮アッセイを示す図である。
【００７４】
【図３４−１】図３４Ａは、パーセントコラーゲンエリア（ＰＣＡ）の変化を示す図である。集団全体について、平均ＰＣＡはベースラインにおいて７．１％、４８週目において５．３％および２４０週目において３．９％であった。図３４Ｂは、硬変被験体におけるＰＣＡの変化を示す図である。平均ＰＣＡは持続性の硬変を伴う硬変被験体において、組織学的後退を伴う硬変被験体におけるものよりも有意に高かった。後退群では、経時的なＰＣＡの低下も比例して大きかった。
【図３４−２】図３４Ａは、パーセントコラーゲンエリア（ＰＣＡ）の変化を示す図である。集団全体について、平均ＰＣＡはベースラインにおいて７．１％、４８週目において５．３％および２４０週目において３．９％であった。図３４Ｂは、硬変被験体におけるＰＣＡの変化を示す図である。平均ＰＣＡは持続性の硬変を伴う硬変被験体において、組織学的後退を伴う硬変被験体におけるものよりも有意に高かった。後退群では、経時的なＰＣＡの低下も比例して大きかった。
【発明を実施するための形態】
【００７５】
Ｉ．定義
別段定義されていなければ、本明細書で使用される技術分野の用語、表示法および他の科学用語または用語法は全て、本発明が関係する当業者に一般に理解される意味を有するものとする。いくつかの場合において、一般に理解される意味を有する用語は、明確にするためおよび／または即時参照のために本明細書で定義されており、そのような定義が本明細書に含まれることは、必ずしも当技術分野において一般に理解されているものに対する実質的な差異を示すと解釈されるべきではない。本明細書において記載または参照されている技法および手順の多くは、当業者により十分に理解され、たとえば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２ｎｄ．  ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９年）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙに記載の広範に利用される分子クローニング方法体系などの従来の方法体系を使用して一般に利用される。適切な場合、市販のキットおよび試薬の使用を伴う手順は、一般に、別段断りのない限り、製造者により定義されたプロトコールおよび／またはパラメータに従って実行される。
【００７６】
本明細書において商品名が使用される場合、その商品名への言及は、文脈により特に示されない限り、製品の製剤、ジェネリック薬、および商品名の製品の活性医薬成分（複数可）も指す。
【００７７】
「抗体」という用語は、明白に他の指示がなければ、最も広範な意味で使用され、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ナノボディ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、多特異性抗体（たとえば、二重特異性抗体）、ならびに、所望の生物活性を示す限りは、これらに限定されないが、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）２およびＦａｂ２を含めた抗体断片を具体的に包含する。「ヒト抗体」という用語は、可能性のある非ヒトＣＤＲ領域以外はヒト起源の配列を含有する抗体を指し、免疫グロブリン分子の完全な構造が存在することを意味するものではなく、単に、抗体がヒトにおける最小の免疫原性効果を有する（すなわち、それ自体に対する抗体の産生を誘導しない）ことを意味する。
【００７８】
「抗体断片」とは、全長抗体の一部、たとえば、全長抗体の抗原結合性領域または可変領域を含む。そのような抗体断片は、本明細書では、「機能性断片」または「抗原結合性断片」と称される場合もある。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖抗体（Ｚａｐａｔａら（１９９５年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  ８巻（１０号）：１０５７〜１０６２頁）；単鎖抗体分子；および抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられる。抗体をパパインによって消化することにより、「Ｆａｂ」断片と称され、それぞれが単一の抗原結合性部位を有する２つの同一の抗原結合性断片と、残りの、容易に結晶化できることが名称に反映されている「Ｆｃ」断片とが生じる。ペプシン処理により、２つの抗原結合性部位（ａｎｔｉｇｅｎ  ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  ｓｉｔｅ）を有し、依然として抗原を架橋することができるＦ（ａｂ’）２断片が生じる。
【００７９】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合性部位を含有する最小の抗体断片である。この領域は、密接に非共有結合で会合した重鎖可変ドメイン１つと軽鎖可変ドメイン１つの二量体からなる。この立体配置にあると、各可変ドメインの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）が相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上に抗原結合性部位が規定される。集合的に、６つのＣＤＲにより、抗体に抗原結合性の特異性が付与される。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な６つのＣＤＲのうちの３つのみを含む単離されたＶＨ領域もしくはＶＬ領域）であっても、一般にはＦｖ断片全体よりも親和性が低くはあるが、抗原を認識しそれに結合することができる。
【００８０】
「Ｆａｂ」断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域に加えて、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ断片は、最初に、抗体をパパインによって消化した後に観察された。Ｆａｂ’断片とＦａｂ断片は、Ｆ（ａｂ’）断片は重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含めたいくつかの追加的な残基を含有するという点で異なる。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域の近くでジスルフィド結合によってつながった２つのＦａｂ断片を含有し、最初に、抗体をペプシンによって消化した後に観察された。Ｆａｂ’−ＳＨとは、本明細書では、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離のチオール基を有するＦａｂ’断片についての名称である。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。
【００８１】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」を、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと称される２つの明白に異なる種類のうちの一方に割り付けることができる。免疫グロブリンは、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭに割り付けることができ、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。
【００８２】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。いくつかの実施形態において、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、それにより、ｓＦｖが抗原と結合するための所望の構造を形成することが可能になる。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻（ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２６９〜３１５頁（１９９４年）を参照されたい。
【００８３】
「ダイアボディ」という用語は、抗原結合性部位を２つ有する小さな抗体断片を指し、その断片は、同じポリペプチド鎖内に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ−ＶＬ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間での対合が可能になるには短すぎるリンカーを使用することによって、それらのドメインは、強制的に別の鎖の相補的なドメインと対合することになり、それにより、２つの抗原結合性部位が創出される。ダイアボディについては、たとえば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０巻：６４４４〜６４４８頁にさらに記載されている。
【００８４】
「単離された」抗体とは、その天然の環境の構成成分から同定および分離および／または回収された抗体である。その天然の環境の構成成分は、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性の溶質または非タンパク質性の溶質を含み得る。いくつかの実施形態において、単離された抗体を、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって決定して９５重量％超の抗体、たとえば、９９重量％超まで、（２）たとえば、スピニングカップシークエネーターを使用することによってＮ末端もしくは内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで、またはクーマシーブルーもしくは銀染色による検出を伴う還元条件もしくは非還元条件の下でのゲル電気泳動（たとえば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）による均一性まで、精製する。組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕ抗体は、その抗体の天然の環境の少なくとも１つの構成成分が存在しないので、「単離された抗体」という用語に含まれる。ある特定の実施形態において、単離された抗体を、少なくとも１つの精製ステップによって調製する。
【００８５】
本明細書において使用される場合、「免疫反応性」とは、アミノ酸残基の配列（「結合部位」または「エピトープ」）に特異的な抗体またはその断片を指し、他のペプチド／タンパク質に対して交差反応性であるにもかかわらず、ヒトへの投与に使用するために製剤化するレベルで毒性ではない。「エピトープ」とは、抗体またはその抗原結合性断片との結合性相互作用を形成することができる抗原の部分を指す。エピトープは、直鎖ペプチド配列（すなわち、「連続的」）であってもよく、連続していないアミノ酸配列（すなわち、「立体構造の」または「不連続な」）で構成されてもよい。「優先的に結合する」という用語は、結合剤が結合部位に、それが無関係のアミノ酸配列を結合するよりも大きな親和性で結合することを意味する。
【００８６】
「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性および結合親和性を付与する抗体可変領域内の連続していないアミノ酸の配列を指すことが当技術分野で公知である。一般に、重鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３）および軽鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）が存在する。
【００８７】
所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列の境界は、Ｋａｂａｔら（１９９１年）、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｃｈｅｍｅ）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら、（１９９７年）ＪＭＢ  ２７３巻、９２７〜９４８頁（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｃｈｅｍｅ）、ＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２６２巻：７３２〜７４５頁（１９９６年）、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：  Ｃｏｎｔａｃｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ」、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２６２巻、７３２〜７４５頁（「Ｃｏｎｔａｃｔ」ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｃｈｅｍｅ）、Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、「ＩＭＧＴ  ｕｎｉｑｕｅ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ  ａｎｄ  Ｉｇ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  Ｖ−ｌｉｋｅ  ｄｏｍａｉｎｓ」、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００３年１月；２７巻（１号）：５５〜７７頁（「ＩＭＧＴ」ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｃｈｅｍｅ）、ならびにＨｏｎｅｇｇｅｒ  ＡおよびＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎ  Ａ、「Ｙｅｔ  ａｎｏｔｈｅｒ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｃｈｅｍｅ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ：  ａｎ  ａｕｔｏｍａｔｉｃ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｔｏｏｌ」、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２００１年６月８日；３０９巻（３号）：６５７〜７０頁、（ＡＨｏ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｃｈｅｍｅ）に記載されているものを含めた、いくつもの周知のスキームのいずれかを使用して容易に決定することができる。
【００８８】
所与のＣＤＲの境界は、同定のために使用するスキームに応じて変動し得る。たとえば、Ｋａｂａｔスキームは構造的なアラインメントに基づき、Ｃｈｏｔｈｉａスキームは構造的な情報に基づく。ＫａｂａｔスキームとＣｈｏｔｈｉａスキームのどちらについても番号付けは最も一般的な抗体領域の配列の長さに基づき、挿入文字、たとえば、「３０ａ」によって適応させた挿入および一部の抗体に現れる欠失が伴う。この２つのスキームでは、ある特定の挿入および欠失（「インデル」）を異なる位置に置き、それにより示差的な番号付けがもたらされる。Ｃｏｎｔａｃｔスキームは、複雑な結晶構造の分析に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームと多くの点で類似している。以下の表１には、Ｋａｂａｔスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａスキーム、およびＣｏｎｔａｃｔスキームのそれぞれによって同定されたＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３およびＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３の位置が列挙されている。ＣＤＲ−Ｈ１については、残基の番号付けはＫａｂａｔ番号付けスキームとＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームの両方を使用して列挙されている。
【表１】
2018083845.tif 000002
【００８９】
したがって、別段の指定がない限り、所与の抗体またはその領域、例えば可変領域の「ＣＤＲ」および「相補性決定領域」という用語ならびに該抗体またはその領域の個々のＣＤＲ（たとえば、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２）は、本明細書の上記の公知のスキームのいずれかによって定義される相補性決定領域を包含するものと理解されるべきである。いくつかの実例において、Ｋａｂａｔ法、Ｃｈｏｔｈｉａ法、またはＣｏｎｔａｃｔ法によって定義されるＣＤＲなどの特定のＣＤＲまたは複数のＣＤＲを同定するためのスキームが明記されている。他の場合において、ＣＤＲの特定のアミノ酸配列が示されている。
【００９０】
本明細書において使用される場合、「処置する（ｔｒｅａｔ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、本明細書に記載の疾患または障害に関連する１つ以上の症状の発生を停止もしくは延期させること、または追加的な症状を予防すること、または症状の根源的な代謝的原因を好転させるもしくは予防することを意味する。したがって、この用語は、疾患もしくは症状を有する、またはそのような疾患もしくは症状が発生する潜在性がある哺乳動物被験体に有益な結果が付与されていることを示す。応答は、被験体が、これらに限定されないが、生存の延長、または腫瘍の増悪、腫瘍の成長、転移、浸潤、または血管新生、または他の症状の低下などの、疾患、状態、もしくは疾病の部分的もしくは完全な緩和、または該疾患、状態、もしくは疾病の１つ以上のサインもしくは症状の低下を経験したときに実現される。
【００９１】
本明細書において使用される場合、「好転する」または「好転」とは、制御されていないまたは望ましくない症状を含めた、本明細書に記載の疾患または障害に関連する１つ以上の症状の低下を意味する。したがって、この用語は、疾患または症状を有する哺乳動物被験体の臨床的状態の改善、たとえば、症状の重症度の低下を示す。応答の好転は、被験体が、これらに限定されないが、生存の延長、または腫瘍の増悪、腫瘍の成長、転移、浸潤、または血管新生、または他の症状の低下などの、疾患、状態もしくは疾病の１つ以上のサインもしくは症状の部分的な緩和、または低下を経験したときに実現される。
【００９２】
本明細書において使用される場合、別段の指定がない限り、「治療有効量」または「有効量」という用語は、被験体に投与した場合に（単独で、または明記され得る別の治療剤と組み合わせてのいずれかで）、疾患の状態もしくは疾患の増悪を予防もしくは好転するため、または症状の好転、たとえば、関連する医学的状態の処置、治癒、予防もしくは好転、もしくはそのような状態の処置、治癒、予防もしくは好転の速度の増大をもたらすために有効である作用物質または化合物または組成物の量を指す。単独で投与される個々の活性成分に適用する場合、治療有効用量とは、その成分単独を指す。組合せに適用する場合、治療有効用量とは、組み合わせて逐次的に投与するかまたは同時に投与するかにかかわらず、処置効果を生じる活性成分を組み合わせた量を指す。
【００９３】
本明細書において使用される場合、「被験体」という用語は、哺乳動物被験体を意味する。例示的な被験体としては、これらに限定されないが、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ヤギおよびヒツジが挙げられる。いくつかの実施形態において、被験体は、がん、炎症性疾患もしくは状態、または自己免疫疾患もしくは状態を有し、下記の通り本発明の作用物質を用いて処置することができる。
【００９４】
本明細書において使用される場合、用語「生物学的サンプル」は、検出、診断、予後判定、またはモニタリングアッセイにおいて使用することができる、個体から得られる様々なサンプルタイプを指すことができる。液体生物学的サンプルは、たとえば血液、血液画分（たとえば血清もしくは血漿）、尿、唾液、気管支肺胞洗浄液、痰、または脳脊髄液を含むことができる。定義はまた、タンパク質などのある種の構成成分についての試薬による処理、可溶化、または富化によってなどの、それらを入手した後に任意の方法で操作されたサンプルをも含む。
【００９５】
本明細書において使用される「軸流」は、１つ以上の試験ゾーンおよび／またはコントロールゾーンを含む、特定のマトリックスまたは物質を通る横方向の、垂直方向の、または横断する流れを指す。特定のデバイス、アッセイ、または方法において企図される流れのタイプは、デバイスの構造に従って変更される。理論によって拘束されないが、横方向の、垂直方向の、または横断する流れは、特定のマトリックスの一方の端または側（上流または近位の端）上の流動接触のポイントからこの接触の下流の（または遠位の）エリアまでの、流動サンプルの流れを指してもよい。下流のエリアは、流動接触のポイントからマトリックスの同じ側または反対側にあってもよい。たとえば、本発明のある実施形態の垂直方向のフローデバイスにおいて、軸流は、第１のメンバーから、それを通って（上部から下部に）、第２のメンバーまで、また、そこから吸収剤媒体まで垂直に進んでもよい。さらなる例として、また、当業者らによって十分に理解されるように、たとえばディップスティックとして配置された垂直方向のフローデバイスにおいて、流動サンプルは、文字通りに、デバイスの上の方に流れてもよく、しかしながら、その場合には、デバイスに対する流動サンプルの第１の接触のポイントは、それにもかかわらず、上流の（すなわち近位の）端と考えられ、フローの終結のポイントは、下流の（すなわち遠位の）端と考えられる。
【００９６】
本明細書において使用される場合、用語「上流の」および「下流の」は、軸流との関連において、本開示の代表的なデバイスとの流動サンプルの接触後の、流動サンプルフローの方向を指し、正常動作条件下で、流動サンプルフロー方向は、上流位置から下流位置に流れる。たとえば、流動サンプルがサンプル受け入れゾーンと最初に接触すると、その後、流動サンプルは、標識ゾーンなどを通って下流に流れる。
【００９７】
値の範囲が提供される場合、文脈が別段明確に指示しない限り、その範囲の上限値および下限値の間の、下限値の単位の１０分の１までのそれぞれの介在値ならびにその明示される範囲における任意の他の明示される値または介在値が、包含されることが理解されたい。これらのより小さな範囲の上限値および下限値は、そのより小さな範囲に独立して含まれてもよく、これらもまた、明示される範囲においてあらゆる明確に除かれる限界値を条件として、包含される。明示される範囲が、一方または両方の限界値を含む場合、それらの含まれる限界値のいずれかまたは両方を除く範囲もまた、含まれる。
【００９８】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される単数形「ａ（１つの）」、「ａｎ（１つの）」、および「ｔｈｅ（その）」は、文脈により明確に別段の指示がなされない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。したがって、たとえば、「ａ（１つの）ＬＯＸＬ２特異的抗体」への言及は、複数のそのような抗体を含む場合があり、「ｔｈｅ（その）ＬＯＸＬ２ポリペプチド」への言及は、１つ以上のＬＯＸＬ２ポリペプチドおよび当業者に公知のその等価物への言及を含む場合があるなどである。
【００９９】
明確にするために別々の実施形態の文脈において記載される本発明のある特徴はまた、単一の実施形態において組み合わせて提供されてもよいことが十分に理解されたい。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈において記載される様々な提供される特徴はまた、別々にまたは任意の適した下位の組み合わせで提供されてもよい。提供される実施形態の組み合わせはすべて、本開示によって明確に包含され、あたかも、それぞれのおよび全ての組み合わせが個々にかつ明示的に開示されるかのようにまさに本明細書において開示される。さらに、様々な実施形態およびそのエレメントの下位の組み合わせもまたすべて、本開示によって明確に包含され、あたかも、それぞれのおよび全てのそのような下位の組み合わせが個々にかつ明示的に本明細書において開示されるかのようにまさに本明細書において開示される。
ＩＩ．方法
【０１００】
ＬＯＸＬ２は、Ｉ型コラーゲンの架橋を促進し、また、種々の病因および器官の線維症における線維形成の中核となる調節因子である。Ｍｅｈａｌ  ＷＺ、Ｉｒｅｄａｌｅ  Ｊ、＆  Ｆｒｉｅｄｍａｎ  ＳＬ．、「Ｅｘｐｒｅｓｓｗａｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｃｏｒｅ  ｏｆ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ」、Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  ２０１１年、１７巻：５５２〜５５３頁を参照されたい。
【０１０１】
モノクローナル抗体、たとえばＡＢ００２４を使用したＬＯＸＬ２のアロステリック阻害は、肝線維症および肺（ｌｕｎｇ）（肺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ））線維症のモデルを含めた種々の疾患モデルにおける線維症の阻害において効果的である。ＬＯＸＬ２の阻害により、ＴＧＦβシグナル伝達およびいくつかの重要な線維症促進性（ｐｒｏ−ｆｉｂｒｏｔｉｃ）メディエーター（たとえば、ＴＧＦ−β１、ＣＴＧＦ、エンドセリン、ＣＸＣＬ１２）が下方制御される。ＬＯＸＬ２の循環レベルは線維症性のステージと相関する。ＬＯＸＬ２は、線維症性疾患における中核となる経路標的である。Ｍｅｈａｌ  ＷＺ、Ｉｒｅｄａｌｅ  Ｊ、＆  Ｆｒｉｅｄｍａｎ  ＳＬ．、「Ｅｘｐｒｅｓｓｗａｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｃｏｒｅ  ｏｆ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ」、Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  ２０１１年、１７巻：５５２〜５５３頁。
【０１０２】
リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）は、線維症性ヒト肝組織において発現され、そこでコラーゲンおよび他のマトリックス構成成分の架橋を行い、その結果、堅さの増加、病理的な線維芽細胞の活性化およびマトリックスリモデリングおよび線維形成の動的プロセスが生じる。Ｂａｒｒｙ−Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｖ、Ｓｐａｎｇｌｅｒ  Ｒ、Ｍａｒｓｈａｌｌ  Ｄら、「Ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ−ｌｉｋｅ−２  ｉｍｐｅｄｅｓ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ」、Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  ２０１０年、１６巻：１００９〜１０１７頁。ＬＯＸＬ２は、硬化性胆管炎のマウスモデルに加えて、Ｃ型肝炎感染症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）、ウィルソン病（Ｖａｄａｓｚ  Ｚ、Ｋｅｓｓｌｅｒ  Ｏ、Ａｋｉｒｉ  Ｇら、「Ａｂｎｏｒｍａｌ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ａｒｏｕｎｄ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  Ｗｉｌｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ  ａｎｄ  ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ−２」、Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．  ２００５年、４３巻：４９９〜５０７頁）、および原発性胆汁性肝硬変を含めた多様な病因のヒト疾患に由来する線維症性肝組織において発現される。Ｎａｋｋｅｎ  ＫＥ、Ｎｙｇａｒｄ  Ｓ、Ｈａａｌａｎｄ  Ｔら、「Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ−、ｔｉｓｓｕｅ  ｒｅｍｏｄｅｌｌｉｎｇ−  ａｎｄ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｇｅｎｅｓ  ａｒｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｉｖｅｒｓ  ｏｆ  Ａｂｃｂ４  （−  ／  −  ）  ｍｉｃｅ  ｈａｒｂｏｕｒｉｎｇ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ」、Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ．  ２００７年、４２巻：１２４５〜１２５５頁。
【０１０３】
肝実質におけるコラーゲンの緩やかな蓄積は、慢性肝疾患の最終的な共通の経路である。線維症のこの進行性の蓄積は、最終的に、肝臓の硬変および末期肝疾患につながり得る。ＬＯＸＬ２は、コラーゲン原線維の架橋を触媒し、線維形成の中核となる調節タンパク質である。ＬＯＸＬ２発現は、病気の肝組織において増加する。
【０１０４】
健康な成人組織においてＬＯＸＬ２発現はほとんどなく、正常な（たとえば非疾患）状態下で、循環ＬＯＸＬ２の量は、低い、または検出不可能である。ある疾患状態下で、循環ＬＯＸＬ２は、上昇する。たとえば、ＬＯＸＬ２は、慢性Ｃ型肝炎患者においてなど、慢性肝疾患の患者の血清において上昇し得、より進行型の線維症を有する患者においてレベルがより高い。循環ＬＯＸＬ２の検出は、したがって、個体が、循環ＬＯＸＬ２レベルの上昇をもたらす疾患を有するかどうかを決定するのに有用である。そのような疾患は、線維症およびがんを含む。
【０１０５】
循環ＬＯＸＬ２のレベルが、線維症のステージと相関することが分かった。循環ＬＯＸＬ２のレベルにより、線維症を有する個体に対して線維症に対する処置が適用可能であるかどうかに関して、指標（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）を提供することができ、また、疾患転帰または処置への応答性などの、特定のエンドポイント、転帰、またはイベントの確度などの、疾患に関する他の予後判定および予測情報を提供することができることもまた、分かった。本開示は、個体が、線維症性疾患に対する処置に応答する確度および／またはそのような転帰、エンドポイント、もしくはイベントの確度を決定するための方法を提供する。
【０１０６】
ＨＣＶ感染症を有する患者の処置の決定は、ますます、肝生検ではなく非侵襲性の血清試験に基づくものとなってきている。しかしながら、血清試験は、完全には最適ではなかった。Ｃａｓｔｅｒａ，  Ｌ．、  「Ｉｎｖａｓｉｖｅ  ａｎｄ  ｎｏｎ−ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ，」  Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ．  ２０１１．２５：２９１−３０３を参照されたい。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、ＬＯＸＬ２と関連する治療および診断方法が提供される。たとえば、個体が循環ＬＯＸＬ２レベルの上昇と関連する疾患を有するかどうかを決定するための検出、診断、予後判定、および予測方法が提供される。循環ＬＯＸＬ２の検出を他の診断方法で追跡し、診断を確認することまたは個体が特定の疾患を有する可能性を排除することができる。したがって、いくつかの実施形態において、本開示は、ＬＯＸＬ２、一般に、個体における循環リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）ポリペプチドを検出し、かつ／または定量化するためのアッセイを提供する。アッセイは、たとえば、同様に提供される診断および予後判定適用において有用である。
【０１０８】
線維症性の疾患または状態、たとえば、肝疾患または他のＬＯＸＬ２と関連する疾患または状態などの疾患または状態の１つ以上の症状を処置し、かつ／または好転させるための方法も提供される。一般に、方法は、リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）を阻害し、かつ／またはそれに結合する作用物質を投与することによって実行される。
ＩＩＩ．作用物質
【０１０９】
提供される方法は、一般に、１つ以上の作用物質、たとえば、ＬＯＸＬ２に特異的に結合し、それを検出し、かつ／またはそれを阻害する作用物質を使用して実行される。そのような作用物質としては、たとえば、抗体断片を含めたＬＯＸＬ２に特異的に結合する抗体、小分子阻害剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、およびアンチセンスポリヌクレオチドを挙げることができる。いくつかの態様において、作用物質、たとえば、抗体は、たとえば、ＬＯＸＬ２の非競合的阻害剤、不競合的阻害剤、または競合的阻害剤である。いくつかの実例において、作用物質は、ＬＯＸＬ２ポリペプチドの酵素活性を阻害する。ＬＯＸＬ２の酵素活性を阻害する作用物質としては、ＬＯＸＬ２酵素活性のアロステリック阻害剤が挙げられる。
Ａ．抗体
【０１１０】
したがって、いくつかの実施形態において、作用物質は、抗体断片、ポリクローナル抗体、およびモノクローナル抗体を含めた、ＬＯＸＬ２タンパク質に特異的に結合する抗体である。提供される方法において使用するための抗体の中には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ナノボディ、ダイアボディ、多特異性抗体（たとえば、二重特異性抗体）、および抗原結合性抗体断片がある。
【０１１１】
いくつかの態様において、抗体はＬＯＸＬ２ポリペプチドに特異的に結合し、たとえば、特異的な結合とは、親和性が少なくとも約１０−７Ｍ、少なくとも約１０−８Ｍ、少なくとも約１０−９Ｍ、少なくとも約１０−１０Ｍ、少なくとも約１０−１１Ｍ、または少なくとも約１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍ超である結合を指す。いくつかの態様において、非特異的な結合とは、親和性が約１０−７Ｍ未満である結合、たとえば、親和性が１０−６Ｍ、１０−５Ｍ、１０−４Ｍなどである結合を指す。
【０１１２】
ＬＯＸＬ２特異的抗体の非限定的な例としては、米国特許公開第２００９／０１０４２０１号、同第２００９／００５３２２４号、同第２０１２／００８７９１７号、同第２０１１／０２００６０６号、および国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／０９７５１３号、同第ＷＯ２００９／０１７８３３号、および同第ＷＯ２００９／０３５７９１号に開示されているＬＯＸＬ２特異的抗体が挙げられる。
【０１１３】
いくつかの態様において、抗体は、ＬＯＸＬ２の触媒ドメイン外のエピトープに特異的に結合するＬＯＸＬ２の非競合的阻害剤および／またはアロステリック阻害剤である。ある特定の態様において、抗体は、ＬＯＸＬ２内のエピトープに特異的に結合するＬＯＸＬ２の非競合的阻害剤および／またはアロステリック阻害剤である。ある特定の態様において、抗体は、ＬＯＸＬ２のＳＲＣＲ３−４ドメイン内、たとえば、配列番号１９（ＶＲＬＲＧＧＡＹＩＧＥＧＲＶＥＶＬＫＮＧＥＷＧＴＶＣＤＤＫＷＤＬＶＳＡＳＶＶＣＲＥＬＧＦＧＳＡＫＥＡＶＴＧＳＲＬＧＱＧＩＧＰＩＨＬＮＥＩＱＣＴＧＮＥＫＳＩＩＤＣＫＦＮＡＥＳＱＧＣＮＨＥＥＤＡＧＶＲＣＮＬＲＬＮＧＧＲＮＰＹＥＧＲＶＥＶＬＶＥＲＮＧＳＬＶＷＧＭＶＣＧＱＮＷＧＩＶＥＡＭＶＶＣＲＱＬＧＬＧＦＡＳＮＡＦＱＥＴＷＹＷＨＧＤＶＮＳＮＫＶＶＭＳＧＶＫＣＳＧＴＥＬＳＬＡＨＣＲＨＤＧＥＤＶＡＣＰＱＧＧＶＱＹＧＡＧＶＡＣＳ）と記載される配列を有する領域内のＬＯＸＬ２のエピトープに特異的に結合する非競合的阻害剤である。非限定的な例としては、ＡＢ００２３およびＡＢ００２４が挙げられる。別の態様において、抗体は、ＬＯＸＬ２の触媒ドメイン外のエピトープに特異的に結合する競合的または不競合的なＬＯＸＬ２の阻害剤である。ある特定の他の態様において、抗体は、ＬＯＸＬ２触媒ドメインのエピトープに特異的に結合する競合的または不競合的な阻害剤である。他の態様において、抗体は、ＬＯＸＬ２内のエピトープに特異的に結合する競合的なＬＯＸＬ２の阻害剤である。
【０１１４】
たとえば、いくつかの実施形態において、抗体は、ＡＢ００２３の可変重鎖領域を有する抗体である：
【化１】
2018083845.tif 000003
（配列番号６；ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列に下線が引かれている）。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号６に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の相同性を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号６に記載されている可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を有する。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、抗体は、ＡＢ００２３の可変軽鎖領域を有する抗体である：
【化２】
2018083845.tif 000004
（配列番号７、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列に下線が引かれている）。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号７に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の相同性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号７に記載されている可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号６に記載されている可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３を有する重鎖可変領域と、配列番号７に記載されている可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域とを有する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＡＢ００２３、ならびに／または、配列番号６の重鎖および／もしくは配列番号７の軽鎖を有する抗体と結合について競合する。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、抗体は、ＡＢ００２４と称される抗体、そのような抗体と結合について競合するもしくは同じエピトープに結合する抗体、および／またはそのような抗体の重鎖可変領域もしくは軽鎖可変領域を有するもしくはＡＢ００２４のＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を有する重鎖を有し、かつ／もしくはＡＢ００２４のＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を有する軽鎖を有する抗体などの抗体のヒト化バージョンである。
【０１１７】
たとえば、一実施形態において、抗体は、ＡＢ００２４の可変重鎖領域を有する抗体である：
【化３】
2018083845.tif 000005
（配列番号８、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列に下線が引かれている）。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号８に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の相同性を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号８に記載されている可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を有する。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号８、配列番号１０（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＹＹＬＩＥＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶＩＮＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＮＷＭＮＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ）、配列番号１１（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＹＹＬＩＥＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶＩＮＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＮＷＭＮＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ）、または配列番号１２（ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＹＹＬＩＥＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶＩＮＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＷＭＮＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ）に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号８、１０、１１、もしくは１２に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、もしくは９９％以上の相同性を有するアミノ酸を有する重鎖可変領域、および／または配列番号９、配列番号１３（ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＫＰＧＱＳＰＱＦＬＩＹＲＭＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ）、または配列番号１４（ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＦＬＩＹＲＭＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ）に記載のアミノ酸配列、もしくは配列番号９、１３、もしくは１４に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、もしくは９９％以上の相同性を有するアミノ酸を有する軽鎖可変領域を有する。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２２に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、もしくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する、または配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含有する。いくつかの態様において、軽鎖は、配列番号２０に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、もしくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する、または配列番号２０のアミノ酸配列を有する。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２６に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、もしくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する、または配列番号２６のアミノ酸配列を有する重鎖を含有する。いくつかの態様において、軽鎖は、配列番号２４に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、もしくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有する、または配列番号２４のアミノ酸配列を有する。たとえば、いくつかの場合において、抗体は、配列番号２２に対して同一性を有する軽鎖および配列番号２６に対して同一性を有する重鎖を有する。いくつかの場合において、抗体は、配列番号２０に対して同一性を有する軽鎖および配列番号２４に対して同一性を有する重鎖を有する。
【０１２１】
いくつかの態様において、軽鎖は、配列番号２１または配列番号２３によりコードされるアミノ酸配列を含有する。いくつかの態様において、重鎖は、配列番号２５または２７によりコードされるアミノ酸配列を含有する。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２８または２９のアミノ酸配列を含有する（または配列番号２８または２９のアミノ酸配列に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の同一性を有する）。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号３０として記載のアミノ酸配列に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の同一性を有するまたは配列番号３０として記載のアミノ酸配列を含有する定常領域を含有する。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、抗体は、ＡＢ００２４の可変軽鎖領域を有する抗体である：
【化４】
2018083845.tif 000006
（配列番号９、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列に下線が引かれている）。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号９に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、または９９％以上の相同性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号９に記載されている可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号８に記載されている可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３を有する重鎖可変領域と、配列番号９に記載されている可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域とを有する。いくつかの態様において、抗体は、配列番号２０または２２を含有する軽鎖および配列番号２４または２６を含有する重鎖を有する。
【０１２４】
作用物質がＬＯＸＬ２酵素活性を阻害するかどうかは、任意の知られているアッセイを使用して決定することができる。たとえば、ＬＯＸＬ２酵素活性についてのアッセイは、基質としてジアミノペンタン（ＤＡＰ）を使用してまたは基質としてコラーゲンを使用して実行することができる。両方のアッセイにおいて、ＬＯＸＬ２の酵素活性は、過酸化水素（基質の脱アミノに際してＬＯＸＬ２によって遊離される）の生成を、Ａｍｐｌｅｘ（登録商標）Ｒｅｄ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）のレゾルフィン（蛍光産物）へのホースラディッシュペルオキシダーゼ触媒による変換と共役するアッセイを使用して測定することができる。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、適した抗ＬＯＸＬ２抗体が、ＬＯＸＬ２ポリペプチドの酵素活性を阻害する。他の実施形態において、適した抗ＬＯＸＬ２抗体が、ＬＯＸＬ２ポリペプチドの酵素活性を阻害しない。
【０１２６】
したがって、提供される方法および実施形態と関連して使用するための抗ＬＯＸＬ２抗体の例としては、たとえば、ＡＢ００２３、ＡＢ００２４、配列番号６、８、１０、１１、もしくは１２に記載のアミノ酸配列を有する、または配列番号６、８、１０、１１、もしくは１２に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、もしくは９９％以上の相同性を有する、または配列番号６、８、１０、１１、もしくは１２に記載されている可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／もしくはＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を有し、かつ／または配列番号７、９、１３、もしくは１４に記載のアミノ酸配列を有する、または配列番号７に対して７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、もしくは９９％以上の相同性を有する、または配列番号７、９、１３、または１４に記載されている可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／もしくはＣＤＲ３を有する可変軽鎖領域を有する抗体、たとえば、配列番号８に記載されている可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／もしくはＣＤＲ３または配列全体を有する重鎖と、配列番号９に記載されている可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／もしくはＣＤＲ３または配列全体を有する軽鎖可変領域を有する抗体などが挙げられる。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、抗体は、ＬＯＸＬ２  ＳＲＣＲ１ドメイン内、ＬＯＸＬ２  ＳＲＣＲ２ドメイン内、ＬＯＸＬ２  ＳＲＣＲ３ドメイン内、ＬＯＸＬ２  ＳＲＣＲ４ドメイン内、および／またはＬＯＸＬ２触媒ドメイン内のエピトープを特異的に結合する。いくつかの場合において、抗体は、たとえば、ＳＲＣＲ１−２、ＳＲＣＲ３−４、および触媒ドメインを含む、シグナル配列を有さない全長ＬＯＸＬ２ポリペプチドに結合する。いくつかの実例において、抗体は、ＳＲＣＲ３−４ドメインおよび触媒ドメインのみを含む、成熟ＬＯＸＬ２ポリペプチド（すなわち、シグナル配列を有さず、ＳＲＣＲ１−２を有さない）に結合する。他の実例おいて、抗体は、Ｎ末端ＬＯＸＬ２断片に結合し、Ｎ末端ＬＯＸＬ２断片はＳＲＣＲ１−２ドメインを含み、ＳＲＣＲ３−４または触媒ドメインを含まない。
【０１２８】
いくつかの実例において、適切な抗体は、ＬＯＸＬ２触媒ドメイン内のエピトープを特異的に結合し、たとえば、配列番号２、３、４、または５のアミノ酸配列を含む触媒ドメインに結合する抗体である。いくつかの実例において、適切な抗体（たとえば、ポリクローナル抗体）は、１つ、２つ、３つ、またはそれより多いＬＯＸＬ２ドメイン内の複数のエピトープを特異的に結合する。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＲＣＲ３−リンカー−ＳＲＣＲ４領域（「ＳＲＣＲ３−４」）、たとえば、配列番号１のアミノ酸３２５〜５４４に対して、アミノ酸３２５〜５４７に対して、アミノ酸３０３〜５４４に対して、またはアミノ酸３０３〜５４７に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＳＲＣＲ３−４領域内のエピトープ；リンカー−ＳＲＣＲ３−リンカー−ＳＲＣＲ４−リンカー領域内のエピトープ、たとえば、配列番号１のアミノ酸３０３〜５４４、アミノ酸３０３〜５４５、アミノ酸３０３〜５４６、またはアミノ酸３０３〜５４７に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列内のエピトープ；ＳＲＣＲ３−リンカー−ＳＲＣＲ４−リンカー領域内のエピトープ、たとえば、配列番号１のアミノ酸３２５〜５４４、アミノ酸３２５〜５４５、アミノ酸３２５〜５４６、またはアミノ酸３２５〜５４７に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列内のエピトープ；配列番号１のアミノ酸３２５〜４２５に対して、アミノ酸３０３〜４２５に対して、アミノ酸３０３〜４３４に対して、またはアミノ酸３２５〜４３４に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＳＲＣＲ３領域などのＳＲＣＲ３領域内の（ＳＲＣＲ４内ではない）エピトープ；リンカー−ＳＲＣＲ３領域内のエピトープ、たとえば、配列番号１のアミノ酸３０３〜４２５に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列内のエピトープ；ＳＲＣＲ３−リンカー領域内のエピトープ、たとえば、配列番号１のアミノ酸３２５〜４３４に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列内のエピトープ；リンカー−ＳＲＣＲ３−リンカー領域内のエピトープ、たとえば、配列番号１のアミノ酸３０３〜４３４に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列内のエピトープ；リンカー−ＳＲＣＲ４−リンカー領域内のエピトープ、たとえば、配列番号１のアミノ酸４２６〜５４４、アミノ酸４２６〜５４５、アミノ酸４２６〜５４６、またはアミノ酸４２６〜５４７に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列内のエピトープ；配列番号１のアミノ酸４３５〜５４４、アミノ酸４３５〜５４５、アミノ酸４３５〜５４６、またはアミノ酸４３５〜５４７に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＳＲＣＲ４領域などのＳＲＣＲ４領域内の（ＳＲＣＲ３内ではない）エピトープ；配列番号１に示されているアミノ酸配列のアミノ酸５８〜３０２、またはアミノ酸５８〜３２４に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＳＲＣＲ１−２領域などのＳＲＣＲ１−リンカー−ＳＲＣＲ２領域（「ＳＲＣＲ１−２」）内のエピトープ；配列番号１に示されているアミノ酸配列のアミノ酸５８〜３２４に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列内のエピトープ；配列番号１に示されているアミノ酸配列のアミノ酸５８〜１５９に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＳＲＣＲ１領域などのＳＲＣＲ１領域内の（ＳＲＣＲ２内ではない）エピトープ；配列番号１に示されているアミノ酸配列のアミノ酸５８〜１８７に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＳＲＣＲ１−リンカー領域などのＳＲＣＲ１−リンカー領域内のエピトープ；または、ＳＲＣＲ１領域内の（ＳＲＣ２内ではない）エピトープであって、ＳＲＣＲ２領域が配列番号１に示されているアミノ酸配列のアミノ酸１８８〜３０２に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得るエピトープに特異的に結合する。ある特定の態様において、抗体は、ヒトＬＯＸＬ２のＳＲＣＲ３−リンカー−ＳＲＣＲ４領域内、たとえば、配列番号１５（ＶＷＧＭＶＣＧＱＮＷＧＩＶＥＡ）、配列番号１７（ＶＥＡＭＶＶＣＲＱＬＧＬＧＦＡ）、または配列番号１８（ＧＦＡＳＮＡＦＱＥＴＷＹＷＨＧ）に記載されている配列を有する領域内のエピトープに特異的に結合する。
【０１３０】
他の非限定的な例としては、ＬＯＸＬ２触媒ドメイン内のエピトープに特異的に結合するモノクローナル抗体ＡＢ００３０（ＲＰＤＳ１−Ｍ２０）（たとえば、ＵＳ２００９／００５３２２４を参照されたい。そこでは抗体ＡＢ００３０はｐｒｏＢＭ２０に対応する）、ＲＰＤＳ−１Ｍ１、ＲＰＤＳ−１Ｍ３、ＲＰＤＳ−１Ｍ８、ＲＰＤＳ−１Ｍ９、ＲＰＤＳ−１Ｍ１１、ＲＰＤＳ−１Ｍ１５、ＲＰＤＳ−１Ｍ１７、ＲＰＤＳ−１Ｍ１９、ＲＰＤＳ−１Ｍ２０（ＡＢ００３０）、ＲＰＤＳ−１Ｍ２２、ＲＰＤＳ−１Ｍ２４、ＲＰＤＳ−１Ｍ２５、ＲＰＤＳ−１Ｍ２７、ＲＰＤＳ−１Ｍ２８、ＲＰＤＳ−１Ｍ２９、ＲＰＤＳ−１Ｍ３０、ＲＰＤＳ−１Ｍ３１、ＲＰＤＳ−１Ｍ３２、ＲＰＤＳ−２Ｍ１、ＲＰＤＳ−２Ｍ２、ＲＰＤＳ−２Ｍ３、ＲＰＤＳ−２Ｍ４、ＲＰＤＳ−２Ｍ５、ＲＰＤＳ−２Ｍ６、ＲＰＤＳ−２Ｍ７、ＲＰＤＳ−２Ｍ８、ＲＰＤＳ−２Ｍ９、ＲＰＤＳ−２Ｍ１０、ＲＰＤＳ−２Ｍ１１、ＲＰＤＳ−２Ｍ１２、ＲＰＤＳ−２Ｍ１３、ＲＰＤＳ−２Ｍ１４、ＲＰＤＳ−２Ｍ１５、ＲＰＤＳ−２Ｍ１６、ＲＰＤＳ−２Ｍ１７、ＲＰＤＳ−２Ｍ１８、およびＲＰＤＳ−２Ｍ１９が挙げられる。国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／０９７５１３号ならびに、モノクローナル抗体ＲＰＤＳ−１Ｍ１、ＲＰＤＳ−１Ｍ３、ＲＰＤＳ−１Ｍ８、ＲＰＤＳ−１Ｍ９、ＲＰＤＳ−１Ｍ１１、ＲＰＤＳ−１Ｍ１５、ＲＰＤＳ−１Ｍ１７、ＲＰＤＳ−１Ｍ１９、ＲＰＤＳ−１Ｍ２０（ＡＢ００３０）、ＲＰＤＳ−１Ｍ２２、ＲＰＤＳ−１Ｍ２４、ＲＰＤＳ−１Ｍ２５、ＲＰＤＳ−１Ｍ２７、ＲＰＤＳ−１Ｍ２８、ＲＰＤＳ−１Ｍ２９、ＲＰＤＳ−１Ｍ３０、ＲＰＤＳ−１Ｍ３１、ＲＰＤＳ−１Ｍ３２、ＲＰＤＳ−２Ｍ１、ＲＰＤＳ−２Ｍ２、ＲＰＤＳ−２Ｍ３、ＲＰＤＳ−２Ｍ４、ＲＰＤＳ−２Ｍ５、ＲＰＤＳ−２Ｍ６、ＲＰＤＳ−２Ｍ７、ＲＰＤＳ−２Ｍ８、ＲＰＤＳ−２Ｍ９、ＲＰＤＳ−２Ｍ１０、ＲＰＤＳ−２Ｍ１１、ＲＰＤＳ−２Ｍ１２、ＲＰＤＳ−２Ｍ１３、ＲＰＤＳ−２Ｍ１４、ＲＰＤＳ−２Ｍ１５、ＲＰＤＳ−２Ｍ１６、ＲＰＤＳ−２Ｍ１７、ＲＰＤＳ−２Ｍ１８、およびＲＰＤＳ−２Ｍ１９、たとえば、ＬＯＸＬ２の触媒ドメイン内に結合するモノクローナル抗体を参照されたい。いくつかの実施形態において、抗体は以下の表に列挙されている抗体および／またはそのような抗体と結合について競合する抗体を含む。
【数１】
2018083845.tif 000007
【０１３１】
いくつかの実施形態において、ＬＯＸＬ２特異的抗体は、ＬＯＸＬ２ポリペプチド以外の他のリシルオキシダーゼ様ポリペプチドのいずれにも実質的に結合せず、たとえば、ＬＯＸＬ２特異的抗体は、ＬＯＸＬ１ポリペプチド、ＬＯＸＬ３ポリペプチド、もしくはＬＯＸＬ４ポリペプチド、またはリシルオキシダーゼ（ＬＯＸ）ポリペプチドには実質的に結合しない。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、抗体は、ＬＯＸＬ２がＬＯＸＬ２の酵素活性を阻害する作用物質に結合している場合にＬＯＸＬ２に特異的に結合する。ＬＯＸＬ２の酵素活性を阻害する作用物質としては、ＬＯＸＬ２酵素活性のアロステリック阻害剤が挙げられる。いくつかの場合において、アロステリック阻害剤は、抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体、たとえば、ＬＯＸＬ２の「ＳＲＣＲ３−４」ドメイン内のエピトープを結合する抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体である。ＬＯＸＬ２の酵素活性を阻害し、ＳＲＣＲ３−４ドメイン内のエピトープを結合するモノクローナル抗体の非限定的な例は、ＡＢ００２３およびＡＢ００２４である；たとえば、ＵＳ２００９／００５３２２４を参照されたい。いくつかの実施形態において、適切な抗ＬＯＸＬ２抗体は、ａ）ＳＲＣＲ３−４内のエピトープを特異的に結合し、また、ｉｉ）ＡＢ００２３抗体および／またはＡＢ００２４抗体とＳＲＣＲ３−４内のエピトープとの結合について競合しない。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、ＬＯＸＬ２特異的抗体は、ＬＯＸＬ２ポリペプチドが液体生物学的サンプル中に存在する場合に結合に利用可能なエピトープ（複数可）を結合し、たとえば、ＬＯＸＬ２特異的抗体が結合したエピトープ（複数可）は表面で利用可能であり、かつ／または液体生物学的サンプル中に存在し得る１つ以上の非ＬＯＸＬ２タンパク質によって遮蔽されていない。
【０１３４】
いくつかの場合において、抗ＬＯＸＬ２抗体は検出可能な標識を含む。適切な検出可能な標識としては、これらに限定されないが、磁気ビーズ（たとえば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標））、蛍光色素（たとえば、フルオレセインイソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質など）、放射標識（たとえば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐ）、酵素（たとえば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、および酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）において一般に使用される他の酵素）、ならびにコロイド金または色ガラスまたはプラスチック（たとえば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）ビーズなどの比色標識が挙げられる。
【０１３５】
抗ＬＯＸＬ２抗体が検出可能な標識を含むいくつかの態様において、抗ＬＯＸＬ２抗体は、標識によって生成されるシグナル（たとえば、抗ＬＯＸＬ２抗体に結合した酵素の生成物として生成される発色団、発光団など；標識によって直接生成されるシグナルなど）を検出することによって検出することができる。いくつかの場合において、抗ＬＯＸＬ２抗体は検出可能な標識を含まないが、検出可能な標識を含む二次抗体を使用して検出することができる。適切な二次抗体としては、抗ＬＯＸＬ２抗体の定常領域ドメイン（複数可）内のエピトープ（複数可）に特異的なモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体が挙げられる。二次抗体は、これらに限定されないが、磁気ビーズ（たとえば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標））、蛍光色素（たとえば、フルオレセインイソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質など）、放射標識（たとえば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３２Ｐ）、酵素（たとえば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、および酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）において一般に使用される他の酵素）、ならびにコロイド金または色ガラスまたはプラスチック（たとえば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）ビーズなどの比色標識を含めた、種々の検出可能な標識のいずれかを含んでよい。ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  ＤｉｓｃｏｖｅｒｙのＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ（商標）標識も、検出可能な標識として使用するために適している。ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ（商標）標識は、ルテニウム（ＩＩ）トリス−ビピリジン−（４−メチルスルホン）Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）−エステルと第一級アミン（たとえば、リシンの側鎖）の反応によってポリペプチド（たとえば、二次抗体）に結合させることができるルテニウム（ＩＩ）トリス−ビピリダル（ｂｉｐｙｒｉｄａｌ）タグである。
【０１３６】
いくつかの実例において、たとえば、提供される検出またはアッセイ方法において使用するための抗ＬＯＸＬ２抗体は、不溶性支持体に固定される。適切な不溶性支持体は、これらに限定されないが、ポリビニルジフルオリド（ＰＶＤＦ）、セルロース、ニトロセルロース、ナイロン、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、二酸化ケイ素、ポリエチレン、ポリカーボネート、デキストラン、アミロース、天然セルロースおよび変性セルロース、ポリアクリルアミド、ポリアクリルアミドゲルに包埋したシリカ、アガロース、斑糲岩、磁鉄鉱などを含めた種々の材料を含んでよい。不溶性支持体は、さまざまな様式（たとえば、寸法、形状）、たとえば、試験ストリップに使用されるものなどのシート；ディップスティックアッセイ様式；マルチウェルプレート（たとえば、ＥＬＩＳＡにおいて使用されるものなど）などのいずれかであってよい。
ＩＶ．被験体
【０１３７】
いくつかの実施形態において、提供される方法は、たとえば、特定の疾患または状態を有する被験体、それを有する疑いがある被験体、その診断を受けた被験体、および／またはそれに対する処置を受けているもしくは受けていた被験体に作用物質を投与することによって実行される。いくつかの実施形態において、方法は、そのような被験体から得られるサンプルを使用して実行される。疾患および状態の中には、がん、線維症、線維症性の疾患および状態、肝疾患、ならびにＬＯＸＬ２と関連する疾患および状態がある。被験体の中には、疾患または状態を有するがまだその診断を受けていない被験体、および疾患または状態に対する処置を現在受けているまたは以前に受けていた被験体が存在する。
Ａ．線維症
【０１３８】
いくつかの実施形態において、疾患または状態は、線維症または線維症性の疾患または状態、たとえば、肝線維症、腎線維症、肺線維症、骨髄線維症、心臓線維症、または他のタイプの線維症である。いくつかの場合において、疾患または状態は線維増生と関連する。線維症は、たとえば、肉体的な傷害、炎症、感染、毒素への曝露、および他の原因に起因し得る、損傷を受けた組織における、たとえば、創傷治癒プロセスの一部として起こり得る線維組織の異常な蓄積を含み得る。線維症の例としては、皮膚の瘢痕形成、ケロイド、肝線維症、肺線維症（たとえば、珪肺症、石綿肺）、腎線維症（糖尿病性腎症を含む）、強皮症、および糸球体硬化症が挙げられる。
１．肝疾患および肝線維症
【０１３９】
いくつかの実施形態において、疾患または状態は、線維症性の肝臓の疾患または状態または肝線維症、たとえば、基礎肝疾患にかかわらずあらゆる肝線維症などの肝臓の疾患または状態である。肝（ｌｉｖｅｒ）（肝（ｈｅｐａｔｉｃ））線維症および線維症と関連する肝疾患は、これらに限定されないが、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎）、ＰＳＣ（原発性硬化性胆管炎）、硬変、肝線維症、および門脈圧亢進症を含み、ＰＢＣ（原発性胆汁性肝硬変）、自己免疫性肝炎、アルコール性硬変、アルファ１アンチトリプシン欠損症、遺伝性ヘモクロマトーシス、ウィルソン病、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、およびＨＩＶ関連脂肪性肝炎硬変（ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）、および関連する状態、たとえば、慢性ウイルス性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、アルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、および自己免疫性肝炎も含んでよい。ある特定の実施形態において、疾患または状態は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、または原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）である。いくつかの実施形態において、疾患または状態は、急性または慢性のウイルス性の肝臓の疾患または状態である。例示的な疾患および状態の中には、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症関連の肝損傷を伴うまたは伴わないＨＣＶ、ＨＢＶがある。したがって、提供される方法の中には、ウイルス性肝炎などの肝疾患を有する患者における抗線維症療法のための方法がある。いくつかの態様において、肝疾患は代償性肝疾患である。他の態様において、肝疾患は、腹水症、食道静脈瘤、脳障害、および／または黄疸と関連する肝疾患などの非代償性肝疾患である。
【０１４０】
肝線維症は、多数の肝疾患の病態に関係づけられ、慢性肝傷害に対する創傷治癒応答の一部として、ヘモクロマトーシス、ウィルソン病、アルコール依存症、住血吸虫症、ウイルス性肝炎、胆管閉塞症、毒素への曝露、および代謝障害の合併症として起こり得る。肝線維症は、正常な肝臓におけるものと定性的に区別することができる細胞外マトリックスの蓄積によって特徴付けられる。検査を受けずにいると、肝線維症は硬変（被包小結節が存在することによって定義される）、肝不全、および死に増悪する。寄生生物およびウイルス感染（たとえば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、ＨＣＶ、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、住血吸虫症）またはアルコール消費による長期ストレスを含めた原因からの肝臓に対する慢性傷害の結果、一般には、おそらく損傷を受けたエリアを封入し、残りの肝組織を損傷から保護するための肝臓のリモデリングが生じる（ＬｉおよびＦｒｉｅｄｍａｎ、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  Ｈｅｐａｔｏｌ．  １４巻：６１８〜６３３頁、１９９９年）。肝線維症の結果、総コラーゲン含量の３〜１０倍の増加および低密度基底膜の高密度マトリックスによる置き換えを含めた細胞外マトリックスの変化が生じ、それにより、肝細胞、肝星細胞および内皮細胞の代謝機能および合成機能が損なわれる（Ｇｉｒｏｇｅｓｃｕ、Ｍ．、Ｎｏｎ−ｉｎｖａｓｉｖｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  Ｌｉｖｅｒ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ、Ｊ．  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎ．  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ．、１５巻（２号）：１４９〜１５９頁（２００６年））。
【０１４１】
肝実質におけるコラーゲンの緩やかな蓄積は、慢性肝疾患の最終的な共通の経路である。線維症のこの増悪性の蓄積は、最終的に肝臓の硬変および末期肝疾患につながり得る。病気の肝組織ではＬＯＸＬ２発現が増加する。
【０１４２】
肝線維症に対する処置戦略としては、基礎をなす原因（たとえば、毒素または感染因子）の除去、炎症の抑制（たとえば、コルチコステロイド、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、または他の作用物質を使用する）、星細胞活性化の下方制御（たとえば、ガンマインターフェロンまたは抗酸化剤を使用する）、マトリックス分解の促進、または星細胞アポトーシスの促進が挙げられる。ＬｉおよびＦｒｉｅｄｍａｎ（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  Ｈｅｐａｔｏｌ．  １４巻：６１８〜６３３頁、１９９９年）。ただ単に炎症を抑制することとは対照的に、基礎をなす生化学的プロセスに対処する処置が必要とされている。提供される方法の複数の実施形態がこの必要性に対処する。
ａ．肝線維症スコアリングおよびステージング
【０１４３】
肝線維症の程度および重症度の定量的評価を提供する、多くの標準化されたスコアリングシステムが存在する。これらは、ＭＥＴＡＶＩＲ、Ｋｎｏｄｅｌｌ、Ｓｃｈｅｕｅｒ、Ｌｕｄｗｉｇ、およびＩｓｈａｋスコアリングシステムを含む。肝線維症を有する個体は、ＭＥＴＡＶＩＲ、Ｋｎｏｄｅｌｌ、Ｓｃｈｅｕｅｒ、Ｌｕｄｗｉｇ、およびＩｓｈａｋスコアリングシステムのいずれかに基づく、肝線維症の任意の程度または重症度を有する個体を含む。
【０１４４】
ＭＥＴＡＶＩＲスコアリングシステムは、線維症（門脈線維症（ｐｏｒｔａｌ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、小葉中心性線維症（ｃｅｎｔｒｉｌｏｂｕｌａｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、および硬変）；壊死（巣状および小葉壊死（ｐｉｅｃｅｍｅａｌ  ａｎｄ  ｌｏｂｕｌａｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ）、好酸性退縮（ａｃｉｄｏｐｈｉｌｉｃ  ｒｅｔｒａｃｔｉｏｎ）、ならびに気球状変性）；炎症（門脈路（ｐｏｒｔａｌ  ｔｒａｃｔ）炎症、門脈リンパ様集合体（ｐｏｒｔａｌ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ａｇｇｒｅｇａｔｅ）、および門脈炎症の分布）；胆管変化；ならびにＫｎｏｄｅｌｌ指数（門脈周囲の壊死、小葉壊死、門脈炎症、線維症、および全体的な疾患活性のスコア）を含む、肝生検の様々な特徴の分析に基づく。ＭＥＴＡＶＩＲシステムにおけるそれぞれのステージの定義は、以下のとおりである：スコア：０、線維症なし；スコア：１、門脈路の放射状の拡大（ｓｔｅｌｌａｔｅ  ｅｎｌａｒｇｅｍｅｎｔ）があるが、隔壁形成なし；スコア：２、まれに隔壁形成を伴う門脈路の拡大；スコア：３、硬変を伴わない多数の隔壁；およびスコア：４、硬変。
【０１４５】
組織学的活性指数（Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）とも呼ばれるＫｎｏｄｅｌｌのスコアリングシステムは、４つのカテゴリーの組織学的特徴におけるスコアに基づいて検体を分類する：Ｉ．門脈周囲のおよび／または架橋状壊死；ＩＩ．小葉内の変性および巣状壊死；ＩＩＩ．門脈炎症；ならびにＩＶ．線維症。Ｋｎｏｄｅｌｌステージングシステムにおいて、スコアは、以下のとおりである：スコア：０、線維症なし；スコア：１、軽度の線維症（線維性の門脈の拡大）；スコア：２、中程度の線維症；スコア：３、重度の線維症（架橋線維化）；およびスコア：４、硬変。スコアが高いほど、肝組織損傷がより重症である。Ｋｎｏｄｅｌｌ（１９８１年）Ｈｅｐａｔｏｌ．  １巻：４３１頁。Ｋｎｏｄｅｌｌ  ＲＧ、Ｃｏｎｒａｄ  ＭＥ、Ｉｓｈａｋ  ＫＧ．  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｆｔｅｒ  ａｃｕｔｅ  ｎｏｎ−Ａ、ｎｏｎ−Ｂ、ｐｏｓｔ  ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９７７年；７２巻：９０２〜９０９頁を参照されたい。いくつかの実施形態において、スコアリングは、Ｋｎｏｄｅｌｌ壊死性炎症性指数全体、および／またはＫｎｏｄｅｌｌ炎症スコアおよび／または壊死スコアなどのその個々の構成成分を分析することを含む。
【０１４６】
Ｓｃｈｅｕｅｒスコアリングシステムにおいて、スコアは、以下のとおりである：スコア：０、線維症なし；スコア：１、線維症性門脈路の拡大；スコア：２、門脈周囲または門脈間の（ｐｏｒｔａｌ−ｐｏｒｔａｌ）隔壁があるが、無傷の構造；スコア：３、構造に変形があるが、明らかな硬変がない線維症；スコア：４、ほぼ確実なまたは確実な硬変。Ｓｃｈｅｕｅｒ（１９９１）Ｊ．  Ｈｅｐａｔｏｌ．  １３：３７２。
【０１４７】
Ｉｓｈａｋスコアリングシステムは、Ｉｓｈａｋ（１９９５）Ｊ．  Ｈｅｐａｔｏｌ．  ２２：６９６−６９９において記載される。ステージ０、線維症なし；ステージ１、短い線維性隔壁を伴うまたは伴わないいくつかの門脈エリアの線維性の拡大；ステージ２、短い線維性隔壁を伴うまたは伴わないほとんどの門脈エリアの線維性の拡大；ステージ３、時々の、門脈から門脈への（ｐｏｒｔａｌ  ｔｏ  ｐｏｒｔａｌ）（Ｐ−−Ｐ）架橋を伴うほとんどの門脈エリアの線維性の拡大；ステージ４、（Ｐ−−Ｐ）および門脈から中心部への（ｐｏｒｔａｌ−ｃｅｎｔｒａｌ）（Ｐ−−Ｃ）著しい架橋を伴う門脈エリアの線維性の拡大；ステージ５、時々の、結節を伴う著しい架橋（Ｐ−−Ｐおよび／またはＰ−−Ｃ）（不完全な硬変）；ステージ６、ほぼ確実なまたは確実な硬変。
【０１４８】
いくつかの態様において、肝疾患または線維症を、末期肝疾患モデル（Ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  Ｅｎｄ−ｓｔａｇｅ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ）（ＭＥＬＤ）スコアを決定することによって評価する。いくつかの態様において、方法により、個体が特定のＭＥＬＤスコアを有するまたは少なくとも特定のＭＥＬＤスコアを有することを、または、個体が特定のＭＥＬＤスコアを有するまたは少なくとも特定のＭＥＬＤスコアを有する確度を予測または決定する。
【０１４９】
いくつかの態様において、肝疾患が代償性肝疾患であるか非代償性肝疾患であるかを決定する。たとえば、非代償性肝疾患は、腹水症、食道静脈瘤、脳障害、および／または黄疸と関連し得る。
２．腎線維症
【０１５０】
いくつかの実施形態において、疾患または状態は、腎線維症であるまたはそれと関連する。肝線維症のように、腎線維症は、様々な疾患および腎臓に対する傷害から結果として生じ得る。そのような疾患および傷害の例は、慢性腎疾患、メタボリックシンドローム、膀胱尿管逆流、尿細管間質性腎線維症（ｔｕｂｕｌｏｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｒｅｎａｌ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、糖尿病（糖尿病性腎症を含む）、ならびに巣状分節状糸球体硬化症および膜性糸球体腎炎、膜性増殖性ＧＮを含むが、これらに限定されない、結果として生ずる糸球体腎炎（ＧＮ）を含む。
【０１５１】
メタボリックシンドロームは、インスリン抵抗性ならびに中心性または内臓肥満および高血圧などの、糖尿病性の特徴を含む異常状態のクラスターであることが認識されるようになった。ほぼすべての場合において、グルコースの調節異常は、サイトカイン放出の刺激および細胞外マトリックス沈着のアップレギュレーションをもたらす。慢性腎疾患、糖尿病、メタボリックシンドローム、および糸球体腎炎の一因となるさらなる要因は、高脂血症、高血圧、およびタンパク尿を含み、これらはすべて、腎臓に対するさらなる損傷をもたらし、細胞外マトリックス沈着をさらに刺激する。したがって、原発性の原因に関係なく、腎臓に対する傷害は、腎線維症および腎機能の相伴う損失をもたらし得る（Ｓｃｈｅｎａ，  Ｆ．およびＧｅｓｕａｌｄｏ，  Ｌ．、Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．，  １６：Ｓ３０−３３（２００５）；Ｗｈａｌｅｙ−Ｃｏｎｎｅｌｌ，  Ａ．およびＳｏｗｅｒ，  Ｊ．Ｒ．、Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｃａｒｄｉｏｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｈｙｐｅｒｔ．，  ８（８）：５４６−４８（２００６））。
３．肺線維症
【０１５２】
いくつかの実施形態において、疾患または状態は、肺線維症であるまたはそれと関連する。肺の線維症は、多くの症候群および疾患を含む。例示的な疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、特発性間質性肺炎、および急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）を含む。肺線維症はまた、特発性線維化肺胞炎、慢性線維化間質性肺炎（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｎｇ  ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ）、およびびまん性実質性肺疾患（ＤＰＬＤ）をも含むが、これらに限定されない。
【０１５３】
上記の疾患を含む、ほとんどの肺線維症の病因は、十分に理解されておらず、しかしながら、すべて、炎症細胞の流入および引き続くコラーゲンに富む細胞外マトリックスの合成および沈着の増大によって特徴付けられる（Ｃｈｕａら、Ａｍ  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｅｌｌ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ３３：９−１３（２００５）；Ｔｚｏｒｔｚａｋｉら、Ｊ．  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．  ＆  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．，  ５４（６）：６９３−７００（２００６）；Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｒｉｔ．  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，  １６０：１９１０−１９１５（１９９９））。
【０１５４】
ＩＰＦは、肺組織の炎症および最終的に線維症によって特徴付けられるが、これらの２つの症状を分離することができる。ＩＰＦの原因は、知られておらず、それは、自己免疫障害からまたは感染症の結果として生じ得る。ＩＰＦの症状は、疾患が進行すると主な症状になる呼吸困難（すなわち息切れ）、および乾性咳嗽を含む。死は、低酸素血症、右心不全、心臓発作、肺塞栓症、卒中、または肺感染症から結果として生じ得、これらはすべて、その疾患によって引き起こされ得る。
４．骨髄線維症
【０１５５】
いくつかの実施形態において、疾患または状態は、骨髄線維症であるまたはそれと関連する。原発性骨髄線維症における発病のプロセスは、原発性巨核球増量クローン性骨髄増殖（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅ−ｗｅｉｇｈｔｅｄ  ｃｌｏｎａｌ  ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）ならびに骨髄線維症、骨硬化症、新脈管形成、および髄外造血を含む、腫瘍随伴性の間質反応を含む。骨髄反応は、線維性コラーゲンなどの細胞外マトリックスタンパク質の過剰沈着、低細胞性、骨髄線維芽細胞の活性化および動員、過度のサイトカインおよび増殖因子産生、ならびに造血能力の低下をもたらす他の変化を含む。二次性骨髄線維症は、真性赤血球増加症または本態性血小板増加症から結果として生じ得る。
Ｂ．がん
【０１５６】
いくつかの実施形態において、疾患または状態は、がんまたは腫瘍であるまたはそれと関連する。したがって、いくつかの実施形態において、被験体は腫瘍患者（ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｐａｔｉｅｎｔ）である。そのような疾患および状態およびがんとしては、癌腫、肉腫、良性腫瘍、原発腫瘍、腫瘍転移、固形腫瘍、非固形腫瘍、血液腫瘍、白血病およびリンパ腫、ならびに原発性腫瘍および転移性腫瘍が挙げられる。
【０１５７】
癌腫としては、これらに限定されないが、食道癌、肝細胞癌、基底細胞癌（皮膚がんの形態）、扁平上皮癌（さまざまな組織）、移行細胞癌を含めた膀胱癌（膀胱の悪性新生物）、気管支原性癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、肺の小細胞癌および非小細胞癌を含めた肺癌、副腎皮質癌、甲状腺癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、腎細胞癌、非浸潤性乳管癌または胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、骨原性癌腫（ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、上皮癌、および上咽頭癌などが挙げられる。
【０１５８】
肉腫としては、これらに限定されないが、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、脊索腫、骨原性肉腫、骨肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、および他の軟部組織肉腫が挙げられる。
【０１５９】
固形腫瘍としては、これらに限定されないが、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、希突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫が挙げられる。
【０１６０】
白血病としては、これらに限定されないが、ａ）慢性骨髄増殖性症候群（多分化能造血幹細胞の新生物疾患）、ｂ）急性骨髄性白血病（多分化能造血幹細胞または限られた系列への潜在性を有する造血細胞の腫瘍性形質転換；ｃ）Ｂ細胞ＣＬＬ、Ｔ細胞ＣＬＬ  前リンパ球性白血病、およびヘアリー細胞白血病を含めた慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ；免疫学的に未成熟であり機能的に無能な小リンパ球のクローン増殖）；ならびにｄ）急性リンパ芽球性白血病（リンパ芽球の蓄積によって特徴付けられる）が挙げられる。リンパ腫としては、これらに限定されないが、Ｂ細胞リンパ腫（たとえば、バーキットリンパ腫）；ホジキンリンパ腫などが挙げられる。
【０１６１】
良性腫瘍としては、たとえば、血管腫、肝細胞腺腫、海綿状血管腫、限局性結節性過形成、聴神経腫、神経線維腫、胆管腺腫、胆管嚢胞腺腫（ｂｉｌｅ  ｄｕｃｔ  ｃｙｓｔａｎｏｍａ）、線維腫、脂肪腫、平滑筋腫、中皮腫、奇形腫、粘液腫、結節性再生性過形成、トラコーマおよび化膿性肉芽腫が挙げられる。
【０１６２】
原発性腫瘍および転移性腫瘍としては、たとえば、肺がん（これらに限定されないが、肺腺癌、扁平上皮癌、大細胞癌、細気管支肺胞癌、非小細胞癌、小細胞癌、中皮腫を含めた）；乳がん（これらに限定されないが、腺管癌、小葉癌、炎症性乳がん、明細胞癌、粘液癌を含めた）；結腸直腸がん（これらに限定されないが、結腸がん、直腸がんを含めた）；肛門がん；膵がん（これらに限定されないが、膵臓腺癌、膵島細胞癌、神経内分泌腫瘍を含めた）；前立腺がん；卵巣癌（これらに限定されないが、漿液性腫瘍、類内膜腫瘍および粘液性嚢胞腺癌を含めた上皮性卵巣癌または表層上皮性・間質性腫瘍、性索間質性腫瘍を含めた）；肝臓・胆管癌（これらに限定されないが、肝細胞癌、胆管癌、血管腫を含めた）；食道癌（これらに限定されないが、食道腺癌および扁平上皮癌を含めた）；非ホジキンリンパ腫；膀胱癌；子宮の癌腫（これらに限定されないが、子宮内膜腺癌、子宮乳頭状漿液性癌（ｕｔｅｒｉｎｅ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｓｅｒｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、子宮明細胞癌（ｕｔｅｒｉｎｅ  ｃｌｅａｒ−ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、子宮肉腫および平滑筋肉腫、ミュラー管混合腫瘍を含めた）；神経膠腫、神経膠芽腫、髄芽腫、および他の脳の腫瘍；腎がん（これらに限定されないが、腎細胞癌、明細胞癌、ウィルムス腫瘍を含めた）；頭頸部がん（これらに限定されないが、扁平上皮癌を含めた）；胃がん（これらに限定されないが、胃腺癌、消化管間質腫瘍を含めた）；多発性骨髄腫；睾丸がん；胚細胞性腫瘍；神経内分泌腫瘍；子宮頸がん；胃腸管、乳房、および他の器官のカルチノイド；ならびに印環細胞癌が挙げられる。
Ｖ．治療方法
【０１６３】
提供される方法の中には、本明細書に記載の疾患または状態、たとえば、線維症性の疾患または状態、たとえば、肝疾患などの疾患または状態の１つ以上の症状を処置し、かつ／または好転させるための方法がある。一般に、方法は、リシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）を阻害し、かつ／またそれに結合する作用物質を投与することによって実行される。疾患および状態の中には、線維症性の疾患および状態ならびに線維症と関連する疾患および状態がある。そのような疾患および状態としては、たとえば、肝線維症（ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）（肝線維症（ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ））および線維症性肝疾患、たとえば、ウイルス性肝炎など、たとえば、慢性ウイルス性肝炎、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、およびＨＩＶ関連脂肪性肝炎硬変および関連する状態、たとえば、慢性ウイルス性肝炎、特発性肺線維症（ＩＰＦ）などの肺線維症（ｌｕｎｇ  ｏｒ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、腎線維症、心臓線維症、骨髄線維症、ならびに、膵臓腺癌および結腸直腸腺癌などのがんを挙げることができる。肝臓の線維症性の疾患または状態の他の例は、ＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎）、ＰＳＣ（原発性硬化性胆管炎）、硬変、門脈圧亢進症、ＰＢＣ（原発性胆汁性肝硬変）、自己免疫性肝炎、アルコール性硬変、アルファ１アンチトリプシン欠損症、遺伝性ヘモクロマトーシス、ウィルソン病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、およびアルコール性脂肪性肝炎（ａｎ  ｄａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）（ＡＳＨ）である。ある特定の実施形態において、疾患または状態は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、または原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）である。いくつかの実施形態において、疾患または状態は、ＭＥＴＡＶＩＲ  Ｆ１肝線維症またはＭＥＴＡＶＩＲ  Ｆ２肝線維症、初期肝線維症（たとえば、ＭＥＴＡＶＩＲ  Ｆ１またはＭＥＴＡＶＩＲ  Ｆ２）などの活動性線維症性疾患、および／またはＭＥＴＡＶＩＲ  Ｆ４肝線維症などの進行期線維症性疾患である。
Ａ．ＬＯＸＬ２に結合し、それを検出し、かつ／またはそれを阻害する作用物質
【０１６４】
一般に、方法は、本明細書に記載のＬＯＸＬ２ポリペプチドなどのＬＯＸＬ２の阻害剤であり、かつ／またはそれに結合し、かつ／またはそれを検出する作用物質を使用して実行される。いくつかの態様において、ＬＯＸＬ２は、全長またはプロセシングされた形態（タンパク質分解性の（ｐｒｏｔｙｏｌｉｔｉｃ）プロセシングまたは切断によって生じる）、プロ酵素形態または成熟形態、分泌形態、および／または活性形態である。他のリシルオキシダーゼとしては、ＬＯＸＬ１、ＬＯＸＬ３、およびＬＯＸＬ４が挙げられる。いくつかの実施形態において、作用物質は、活性なＬＯＸとＬＯＸＬ２をどちらも阻害し、かつ／またはどちらにも結合する。他の実施形態において、作用物質は、ＬＯＸまたはＬＯＸＬの１つの形態に対して特異的であり、たとえば、別のリシルオキシダーゼまたはリシルオキシダーゼ様タンパク質には実質的に結合しないまたはそれを実質的に阻害しないＬＯＸＬ２の阻害剤または結合剤などである。
【０１６５】
作用物質としては、たとえば、抗体断片を含めたＬＯＸＬ２に特異的に結合する抗体、小分子阻害剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、およびアンチセンスポリヌクレオチドが挙げられる。いくつかの態様において、作用物質、たとえば、抗体は、たとえばＬＯＸＬ２の非競合的阻害剤である。いくつかの実例において、作用物質はＬＯＸＬ２ポリペプチドの酵素活性を阻害する。ＬＯＸＬ２の酵素活性を阻害する作用物質としては、ＬＯＸＬ２酵素活性のアロステリック阻害剤が挙げられる。
【０１６６】
したがって、いくつかの実施形態において、ＬＯＸＬ２阻害剤および／または結合剤は、抗体断片およびモノクローナル抗体を含めた本明細書に記載の任意の抗体などの、ＬＯＸＬ２タンパク質を特異的に結合する抗体である。
【０１６７】
必要であれば、処置のために、方法は、追加的な療法をさらに含み得る。たとえば、いくつかの実施形態において、方法は、被験体を、抗ウイルス剤、たとえば、ＨＣＶまたはＨＢＶ感染症または他の肝炎ウイルス感染症を処置するために適した作用物質などの別の治療剤を用いて処置するステップをさらに含む。たとえば、ＨＣＶ感染症を、インターフェロン−アルファ（ＩＦＮ−α）、ビラミジン、リバビリン、レボビリン（ｌｅｖｏｖｉｒｉｎ）、ＨＣＶ  ＮＳ３阻害剤、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ阻害剤、または前述のものの１つ以上の組合せを用いて処置することができる。
Ｂ．投与量および投与
【０１６８】
一般に、作用物質は、治療有効量、たとえば、特定の疾患または状態の処置をもたらすための量、たとえば、その症状の低下または排除をもたらすための量、および／またはＬＯＸＬ２、たとえば、ＬＯＸＬ２活性を阻害するために有効な量で投与される。いくつかの実施例において、作用物質は、処置していない場合と比較して生存を増加または延長させるため、架橋線維化の増加を低下させるまたは予防するため、アルファ平滑筋アクチン（αＳＭＡ）レベルの増加を低下させるまたは予防するため、ならびに／または星細胞活性化の増加を低下させるまたは予防するため、線維症を低下させるため、ならびに／または病気のまたは線維症性の組織における炎症および／もしくは壊死を低下させるために有効な量で投与される。いくつかの実施例において、作用物質は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の増加を低下させるまたは予防するため、ならびに／または、たとえば、ＡＬＴ／ＡＳＴ比またはＡＳＴ／ＡＬＴ比を低下させるため、たとえば、そのようなパラメータを基準値上限（ＵＬＮ）未満まで、または基準値上限（ＵＬＮ）の２倍未満、５倍未満、もしくは１０倍未満まで低下させるために有効な量で投与される。
【０１６９】
選択される投与量レジメンは種々の因子に左右され、その因子としては、抗体の活性、投与経路、投与時間、利用される特定の化合物の排泄速度、処置の持続時間、他の薬物、使用する特定の組成物と組み合わせて使用する化合物および／または材料、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、全体的な健康および以前の病歴、ならびに医学の分野で周知の同様の因子を挙げることができる。
【０１７０】
当技術分野における通常の技術を有する臨床医は、必要な医薬組成物の有効量（ＥＤ５０）を容易に決定し、処方することができる。たとえば、医師または獣医師は、医薬組成物に利用する本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を実現するために必要なレベルよりも低いレベルで開始し、投与量を所望の効果が実現されるまで徐々に上昇させることができる。
【０１７１】
いくつかの態様において、作用物質、たとえば抗体は、用量当たり体重１ｋｇ当たり１ｎｇ〜体重１ｋｇ当たり２０ｍｇ、たとえば、体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ、たとえば、体重１ｋｇ当たり０．５ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり５ｍｇ、および／または毎分体重１キログラム当たり１μｇ〜１０ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施例において、投与量は、１０または２０ｍｇ／ｋｇもしくは約１０または２０ｍｇ／ｋｇあるいは少なくとも１０または２０ｍｇ／ｋｇもしくは約１０または２０ｍｇ／ｋｇ、あるいは最大で１０または２０ｍｇ／ｋｇもしくは約１０または２０ｍｇ／ｋｇ、たとえば、隔週で、１０または２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶもしくは約１０または２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶあるいは少なくとも１０または２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶもしくは約１０または２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、あるいは最大で１０または２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶもしくは約１０または２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶである。いくつかの実施例において、投与量は、２００ｍｇもしくは約２００ｍｇ、たとえば、２００ｍｇ、ＩＶもしくは約２００ｍｇ、ＩＶ、７００ｍｇもしくは約７００ｍｇ、たとえば、７００ｍｇ、ＩＶ（隔週）もしくは約７００ｍｇ、ＩＶ（隔週）、２００ｍｇもしくは約２００ｍｇ〜７００ｍｇまたは１０００ｍｇもしくは約７００ｍｇまたは１０００ｍｇ、たとえば、ＩＶ、隔週である。他の実施例において、投与量は、７５ｍｇ、１２５ｍｇもしくは約７５ｍｇ、１２５ｍｇ、または７５ｍｇ〜１２５ｍｇもしくは約７５ｍｇ〜１２５ｍｇ、たとえば、７５ｍｇ、１２５ｍｇ、皮下（ＳＣ）もしくは約７５ｍｇ、１２５ｍｇ、皮下（ＳＣ）である。別の実施例において、投与量は、ＩＶまたはＳＣにより投与される１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、または５００ｍｇもしくは約１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、または５００ｍｇである。作用物質は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、または６週間毎に、ＩＶまたはＳＣのいずれかによって投与される。同様に、作用物質は、ＩＶまたはＳＣのいずれかにより、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１２か月、１５か月、１８か月、２０か月、２４か月、３０か月、または３６か月の期間にわたって投与される。
【０１７２】
いくつかの場合において、処置方法は、抗体またはそれを含有する組成物の非経口投与、たとえば、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、もしくは皮下投与、または経口投与を含む。抗体は、局所的に投与することもできる。
Ｃ．組成物、デバイス、システム、およびキット
【０１７３】
本明細書では、ＬＯＸ／ＬＯＸＬの阻害剤を線維症の部位に局所的に送達するための組成物、デバイス、システム、およびキットも提供される。カテーテルおよびステントなどの医療デバイスを使用して、局所的に送達することができ、したがって、そのようなＬＯＸ／ＬＯＸＬの阻害剤の全身送達に関連する毒性または他の副作用の危険性を実質的に低下させることができる。
【０１７４】
たとえば、方法と関連して使用するための医薬組成物、たとえば、作用物質、たとえば本明細書に記載の抗体のいずれかを含有する医薬組成物が提供される。組成物は、任意の適切な経路によって局所的にまたは全身的に投与するために適したものであってよい。
Ｄ．検出およびモニタリング方法
【０１７５】
いくつかの態様において、治療方法は、ＬＯＸＬ２遺伝子産物（たとえば、ｍＲＮＡ、タンパク質）および／または線維症関連遺伝子の産物を検出するためのものなどの診断、検出、および／または予後判定ステップを含む。そのような方法は、たとえば、処置の効果をモニターするために、たとえば、提供される治療方法と併せて実施することができる。
【０１７６】
たとえば、いくつかの実施形態において、処置方法は、効力または活性をモニターするためならびに／または、対象の疾患もしくは状態のＬＯＸＬ２および／もしくは他のマーカーを含めたマーカーの存在、非存在、レベル、および／もしくは発現を検出または測定するためのものを含めた、処置をモニターするためのステップを含む。いくつかの実施例において、方法は、肝内のＬＯＸＬ２発現、たとえば、ｍＲＮＡもしくはタンパク質の発現を評価するステップを含み、かつ／または他の線維症関連遺伝子の処置前のレベルに対する処置後のレベルを評価する。
【０１７７】
いくつかの態様において、方法により、疾患または状態を有する個体が、ＬＯＸＬ２阻害剤または結合剤を用いた処置などの処置に対する有益な臨床応答を示す確度を決定し、かつ／または処置の効力を評価する。そのような方法は、たとえば、個体から得られる液体サンプルにおけるリシルオキシダーゼ様２（ＬＯＸＬ２）の循環レベルを決定するステップを含んでよい。一態様において、ＬＯＸＬ２の循環レベルが正常コントロールレベルよりも高いことにより、個体の疾患または状態に対する処置への有益な臨床応答を示す確度が増加していることが示される。いくつかの実施例において、決定された確度に基づいて報告を生成する。いくつかの実施例において、方法は、疾患または状態に対して個体を処置するステップ、または処置を改変もしくは中止するステップをさらに含む。いくつかの実施形態において、方法は、特定のエンドポイント、転帰、またはイベント、たとえば、疾患転帰または処置への応答性の確度などの疾患または状態に関する予測的な情報を提供する。
【０１７８】
いくつかの実施例において、方法は、個体を、肝機能のマーカー、たとえば、血清タンパク質（たとえば、アルブミン、凝固因子、アルカリホスファターゼ、アミノトランスフェラーゼ（たとえば、アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ）、５’−ヌクレオシダーゼ、γ−グルタミニルトランスペプチダーゼなど）などのタンパク質の合成、ビリルビンの合成、コレステロールの合成、および胆汁酸の合成；これらに限定されないが、炭水化物代謝、アミノ酸およびアンモニア代謝、ホルモン代謝、ならびに脂質代謝を含めた肝臓代謝機能；外因性の薬剤の解毒；内蔵および門脈の血行力学を含む血行力学機能について評価するステップを含む。一実施例において、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルは、標準のアッセイを使用して測定される。いくつかの実施例において、約４５国際単位未満、約５０未満、約５５未満、約６０未満、約６１未満、約６２未満、約６３未満、約６４未満、または約６５未満のＡＬＴレベルは、正常と考えられる。ＡＬＴレベルの上昇により、肝機能が損なわれていることが示され得る。機能的肝予備力の定量的試験も、肝機能を評価するために使用することができ、そのような試験としては、たとえば、インドシアニングリーンクリアランス（ＩＣＧ）、ガラクトース排泄能（ＧＥＣ）、アミノピリン呼気検査（ＡＢＴ）、アンチピリンクリアランス、モノエチルグリシン−キシリジド（ＭＥＧ−Ｘ）クリアランス、およびカフェインクリアランスが挙げられる。
Ｖ．検出、診断、予後判定、および予測方法
【０１７９】
提供される方法の中には、検出、診断、予後判定、および予測方法がある。いくつかの実施形態において、そのような方法は、個体（たとえば、本明細書に記載の被験体）における、および／または、そのような個体から得られるサンプルなどのサンプルにおけるＬＯＸＬ２、たとえば、ＬＯＸＬ２ポリペプチドの検出および／または定量化を含む。いくつかの態様において、ＬＯＸＬ２は循環ＬＯＸＬ２である。したがって、いくつかの態様において、循環ＬＯＸＬ２の検出および／または定量化についてのアッセイが提供される。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、サンプル、たとえば、試験される個体から得られる液体サンプルにおけるＬＯＸＬ２を検出する。液体サンプルは、血液または血漿もしくは血清などの血液画分であってもよく、他の液体サンプルであってもよい。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、提供される方法およびアッセイは、慢性ＨＣＶ感染症またはＨＢＶ感染症の患者におけるものなどの肝線維症の程度の非侵襲的な代理測定に有用である。
Ａ．ＬＯＸＬ２ポリペプチド
【０１８２】
「ＬＯＸＬ２ポリペプチド」とは、図２５に示されているアミノ酸配列の約１００アミノ酸（ａａ）〜約２００ａａ、約２００ａａ〜約３００ａａ、約３００ａａ〜約４００ａａ、約４００ａａ〜約５００ａａ、約５００ａａ〜約６００ａａ、約６００ａａ〜約７００ａａ、または約７００ａａ〜７７４ａａの連続したひと続きに対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。「ＬＯＸＬ２」とは、図２５に示されているヒトＬＯＸＬ２アミノ酸配列、およびその天然に存在するバリアント（多型）も指す。
【０１８３】
図２５にはヒトＬＯＸＬ２のアミノ酸配列が示されており、４つのスカベンジャー受容体システインリッチ（ＳＲＣＲ）ドメインが示されている。ＬＯＸＬ２ポリペプチドは、全長ポリペプチドであっても成熟（切断型；プロセシング型）ＬＯＸＬ２ポリペプチドであってもよい。予測されるシグナル切断は、Ａｌａ２５とＧｌｎ２６の間である。プレプロペプチドからのシグナルペプチドの切断により、ＬＯＸＬ２プロペプチドが生じる。ＬＯＸＬ２プロペプチドはＳＲＣＲ２とＳＲＣＲ３の間（たとえば、図２５に示されている配列のアミノ酸３０１からアミノ酸３２６の間）で切断され、ＳＲＣＲ３、ＳＲＣＲ４、およびリシルオキシダーゼ（触媒）ドメインを含むＬＯＸＬ２ポリペプチドが残る。
【０１８４】
ＬＯＸＬ２ポリペプチドは酵素的に活性であり得る。たとえば、ＬＯＸＬ２ポリペプチドにより、リシンおよびヒドロキシリシン残基のε−アミノ基の酸化的脱アミノ化を触媒し、ペプチジルリシンからペプチジル−α−アミノアジピン酸−δ−セミアルデヒド（アリシン）への変換ならびに化学量論的な量のアンモニアおよび過酸化水素の放出がもたらされ得る。この反応は、ほとんどの場合、細胞外、たとえばコラーゲンおよびエラスチンのリシン残基で起こる。
【０１８５】
いくつかの場合において、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して検出されるＬＯＸＬ２ポリペプチドは、たとえば、ＳＲＣＲ１−２、ＳＲＣＲ３−４、および触媒ドメインを含む、シグナル配列を有さない全長ＬＯＸＬ２ポリペプチドである。いくつかの実例において、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して検出されるＬＯＸＬ２ポリペプチドは、ＳＲＣＲ３−４ドメインおよび触媒ドメインのみを含む成熟ＬＯＸＬ２ポリペプチド（すなわち、シグナル配列を有さず、ＳＲＣＲ１−２を有さない）である。成熟ＬＯＸＬ２ポリペプチド（ＳＲＣＲ３−４および触媒ドメイン；シグナル配列およびＳＲＣＲ１−２ドメインを有さない）を検出する代わりに、またはそれに加えて、対象のＬＯＸＬ２アッセイにより、Ｎ末端ＬＯＸＬ２断片を検出することができ、そのＮ末端ＬＯＸＬ２断片はＳＲＣＲ１−２ドメインを含み、ＳＲＣＲ３−４または触媒ドメインを含まない。
Ｂ．サンプル
【０１８６】
いくつかの実施形態において、方法は、生物学的サンプル、たとえば液体生物学的サンプルなどのサンプルに対して実施される。そのようなサンプルとしては、これらに限定されないが、全血；これらに限定されないが、血清および血漿を含めた適切な血液画分（「血液製剤」とも称される）；唾液；尿；気管支肺胞洗浄液；脳脊髄液；痰などが挙げられる。生物学的サンプルは、新鮮な血液または保存血（たとえば、血液バンクにおいて）または血液画分であってよい。生物学的サンプルは、本開示のアッセイのために特別に得られる液体サンプルであってもよく、別の目的のために得られ、本開示のアッセイのためにサブサンプリングすることができる液体サンプルであってもよい。
【０１８７】
一実施例として、生物学的サンプルは全血であってよい。全血は、標準の臨床的手順を使用して被験体から得ることができる。別の実施形態において、生物学的サンプルは血漿である。血漿は、全血サンプルから、抗凝固処理した血液を遠心分離することによって得ることができる。そのようなプロセスにより、白色細胞構成成分のバフィコートおよび血漿の上清がもたらされる。別の実施形態において、生物学的サンプルは血清である。
【０１８８】
必要な場合、サンプルを、適切な緩衝溶液中に希釈すること、ヘパリン処理すること、所望であれば濃縮すること、または、これらに限定されないが、超遠心分離、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）による分画、もしくは沈殿を含めた任意の数の方法によって分画することによって前処理することができる。サンプルを、たとえば、免疫親和性法によって分画して、１つ以上の非ＬＯＸＬ２タンパク質または他の非ＬＯＸＬ２構成成分をサンプルから除去することができる。たとえば、抗アルブミン抗体を使用してアルブミンをサンプルから除去することができる。たとえば、リン酸塩、トリスなどの種々の緩衝剤の１つを利用するいくつもの標準の緩衝水溶液のいずれをも生理的ｐＨで使用することができる。
Ｃ．作用物質
【０１８９】
方法は、一般に、本明細書に記載の任意の抗体を含めた抗ＬＯＸＬ２抗体などのＬＯＸＬ２に結合し、かつ／またはそれを検出する作用物質を使用して実施される。いくつかの実施形態において、方法では、ＬＯＸＬ２に特異的な抗体を使用して、液体サンプル中のＬＯＸＬ２を固定および／または検出する。抗体は、本明細書に記載の抗体のいずれであってもよい。
Ｄ．アッセイ様式
【０１９０】
いくつかの態様において、個体における循環ＬＯＸＬ２を検出するための対象のアッセイは、ａ）個体から得られる液体サンプルをＬＯＸＬ２に特異的な抗体と接触させるステップ；およびｂ）液体サンプルに存在するＬＯＸＬ２への抗体の結合を検出するステップを伴う。適切なアッセイ方法としては、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫沈降アッセイ、ラテラルフローアッセイまたはアキシャルフローアッセイ、質量分析などが挙げられる。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、対象のアッセイ方法により、液体サンプル中のＬＯＸＬ２を、１７５ｐｇ／ｍｌ以下まで検出することができ、たとえば、対象のアッセイ方法により、液体サンプル中のＬＯＸＬ２を、約１５０ｐｇ／ｍｌ〜約１７５ｐｇ／ｍｌまで、約１２５ｐｇ／ｍｌ〜約１５０ｐｇ／ｍｌまで、約１００ｐｇ／ｍｌ〜約１２５ｐｇ／ｍｌまで、約７５ｐｇ／ｍｌ〜約１００ｐｇ／ｍｌまで、約５０ｐｇ／ｍｌ〜約７５ｐｇ／ｍｌまで、または約４０ｐｇ／ｍｌ〜約５０ｐｇ／ｍｌまで検出することができる。たとえば、対象のアッセイ方法により、液体サンプル中にＬＯＸＬ２が１０ｎｇ／ｍｌ未満の濃度、たとえば、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約５ｎｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ〜約１ｎｇ／ｍｌ、約１ｎｇ／ｍｌ〜約５００ｐｇ／ｍｌ、約５００ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、約４００ｐｇ／ｍｌ〜約３００ｐｇ／ｍｌ、約３００ｐｇ／ｍｌ〜約２００ｐｇ／ｍｌ、約２００ｐｇ／ｍｌ〜約１７５ｐｇ／ｍｌ、約２００ｐｇ／ｍｌ〜約１５０ｐｇ／ｍｌ、約１５０ｐｇ／ｍｌ〜約１００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ〜約７５ｐｇ／ｍｌ、約７５ｐｇ／ｍｌ〜約５０ｐｇ／ｍｌ、または約５０ｐｇ／ｍｌ〜約４０ｐｇ／ｍｌの濃度で存在する場合に、液体サンプル中のＬＯＸＬ２を検出することができる。いくつかの場合において、対象のアッセイ方法により、液体サンプル中にＬＯＸＬ２が約１７５ｐｇ／ｍｌ〜約５ｎｇ／ｍｌの濃度範囲で（または、５ｎｇ／ｍｌ超）存在する場合に、液体サンプル中のＬＯＸＬ２が検出される。いくつかの場合において、対象のアッセイ方法により、液体サンプル中にＬＯＸＬ２が約４０ｐｇ／ｍｌ〜約５ｎｇ／ｍｌの濃度範囲で（または、５ｎｇ／ｍｌ超）存在する場合に、液体サンプル中のＬＯＸＬ２が検出される。いくつかの場合において、対象のアッセイ方法により、液体サンプル中のＬＯＸＬ２が平均バックグラウンド＋２．５×ＳＤ（バックグラウンドの標準偏差）の検出限界まで検出される。
【０１９２】
いくつかの場合において、対象のアッセイ方法は、２つのＬＯＸＬ２特異的抗体の使用を伴う。２つのＬＯＸＬ２特異的抗体は両方がモノクローナル抗体であってもよく、２つのＬＯＸＬ２特異的抗体はポリクローナル抗体とモノクローナル抗体であってもよく、いくつかの他のそのような組合せであってもよい。
【０１９３】
たとえば、第１のＬＯＸＬ２特異的抗体を液体サンプルと接触させると、第１のＬＯＸＬ２特異的抗体が液体サンプルに存在するＬＯＸＬ２と複合体を形成する。第１のＬＯＸＬ２特異的抗体を不溶性支持体上に固定することができ、したがって、第１のＬＯＸＬ２特異的抗体／ＬＯＸＬ２複合体が不溶性支持体上に固定される。あるいは、第１のＬＯＸＬ２特異的抗体が溶液中に存在してよく、第１のＬＯＸＬ２特異的抗体／ＬＯＸＬ２複合体は不溶性であってよく、したがって、第１のＬＯＸＬ２特異的抗体／ＬＯＸＬ２複合体が免疫沈降する。第１のＬＯＸＬ２特異的抗体／ＬＯＸＬ２複合体は、第２のＬＯＸＬ２特異的抗体を使用して検出することができる。いくつかの場合において、第１のＬＯＸＬ２特異的抗体はポリクローナル抗体であり、第２のＬＯＸＬ２特異的抗体はモノクローナル抗体である。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、対象のアッセイ方法は、個体から得られる液体サンプルを固定されたＬＯＸＬ２特異的抗体と接触させるステップを伴い、固定されたＬＯＸＬ２特異的抗体は不溶性支持体に固定される。サンプル中に存在するあらゆるＬＯＸＬ２が固定されたＬＯＸＬ２特異的抗体に結合し、固定された抗ＬＯＸＬ２／ＬＯＸＬ２複合体が形成される。固定された抗ＬＯＸＬ２／ＬＯＸＬ２複合体は、第２の（固定されていない）ＬＯＸＬ２特異的抗体を使用して検出することができる。第２のＬＯＸＬ２特異的抗体は、検出可能に標識されていてもよく、検出可能に標識した二次抗体を使用して検出することもできる。
【０１９５】
したがって、いくつかの実施形態において、個体における循環ＬＯＸＬ２を検出する対象の方法は、ａ）個体から得られる液体サンプルを第１のＬＯＸＬ２に特異的な抗体と接触させ、したがって第１の抗体とＬＯＸＬ２が複合体を形成するステップ、ｂ）ＬＯＸＬ２−第１の抗体複合体を第２のＬＯＸＬ２に特異的な抗体と接触させるステップ、およびｃ）第２の抗体とＬＯＸＬ２−第１の抗体複合体の結合を検出するステップを伴う。
【０１９６】
不溶性支持体は、マルチウェルプレートの１つ以上のウェル、試験ストリップ、ディップスティック様式などであってよい。上記のアッセイ様式のいずれにおいても、１つ以上の洗浄ステップを行って、結合していない構成成分を除去することができる。
【０１９７】
本開示のアッセイ方法により、個体における病理学的なＬＯＸＬ２の循環レベルを検出することができる。たとえば、対象のアッセイ方法は、ａ）個体から得られる液体サンプルをＬＯＸＬ２に特異的な抗体と接触させるステップ、ｂ）液体サンプルに存在するＬＯＸＬ２への抗体の結合を検出するステップ、およびｃ）検出レベルを正常コントロール値と比較するステップを伴ってよい。検出レベルが正常コントロール値よりも高いことにより、病態（たとえば、がんまたは線維症）が示される。
Ｅ．コントロール値
【０１９８】
いくつかの実施形態において、試験被験体から得られるサンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベル（複数可）を正常コントロール値（複数可）または正常コントロール値の範囲と比較する。コントロール値は、コントロール集団、たとえば、ヒト被験体の一般集団または選抜集団から得られる比較可能なサンプル（たとえば、血液、血漿もしくは血清サンプル、または他の液体生物学的サンプル）におけるＬＯＸＬ２のレベルに基づくものであってよい。たとえば、選抜集団は、明らかに健康な被験体、たとえば、以前に、線維症やがんのいかなるサインも症状も有したことがない個体で構成され得る。明らかに健康な個体は、一般に、別段疾患の症状も示さない。言いかえれば、そのような個体は、医学の専門家によって検査された場合、健康であり、疾患の症状がないものとして特徴付けられることになる。
【０１９９】
コントロール値は、様々な形態を取ることができる。コントロール値は、中央値または平均値などの単一のカットオフ値とすることができる。正常コントロール値は正常コントロール範囲とすることができる。
【０２００】
いくつかの場合において、コントロールである基準値は、対象のアッセイ方法の検出限界未満であり、たとえば、基準値は、約１７５ｐｇ／ｍｌ未満、約１５０ｐｇ／ｍｌ未満、約１００ｐｇ／ｍｌ未満、約７５ｐｇ／ｍｌ未満、約５０ｐｇ／ｍｌ未満、または約４０ｐｇ／ｍｌ未満であり得る。
Ｆ．試験被験体
【０２０１】
上記の通り、いくつかの実施形態において、サンプル、たとえば、個体（たとえば、被験体）から得られる液体サンプルを、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して試験する。個体、たとえば、方法で試験するために適した被験体は、疾患または状態を有するとまだ診断されていないが、医師に症状および／または愁訴を示す個体（たとえば診断されていない障害または疾患を有する個体）；疾患または状態（たとえば、がん、線維症、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）などのＨＣＶ感染症、または慢性Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）（ＣＨＢ）などのＨＢＶ感染症、または本明細書に記載の他の疾患または状態）と診断された個体；疾患または状態を有する疑いがあるが、疾患または状態を有するとまだ診断されていない個体；明らかに健康であり、慣用のスクリーニングを受けている個体、ならびに疾患または状態に対する処置を受けている個体などの、本明細書に記載の被験体のいずれも含む。
【０２０２】
いくつかの態様において、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して試験するための被験体は、良性腫瘍を有する個体、原発腫瘍を有する個体、腫瘍転移を有する個体、および非固形腫瘍型のがんを有する個体を含めた、がんを有すると診断された個体を含む。対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して試験するために適した個体は、がんを有するが、がんを有するとまだ診断されていない個体を含む。したがって、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して試験するために適した個体は、癌腫、肉腫、白血病、およびリンパ腫を含めた多種多様ながんを有する個体を含む。
【０２０３】
いくつかの場合において、腫瘍患者は、がんに対する処置を現在受けている患者である。いくつかの実例において、処置は、ＬＯＸＬ２ポリペプチドの酵素活性を阻害する作用物質を投与することを含む。ＬＯＸＬ２の酵素活性を阻害する作用物質としては、ＬＯＸＬ２酵素活性のアロステリック阻害剤が挙げられる。いくつかの場合において、アロステリック阻害剤は、抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体、たとえば、ＬＯＸＬ２の「ＳＲＣＲ３−４」ドメイン内のエピトープを結合する抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体である。ＬＯＸＬ２の酵素活性を阻害し、ＳＲＣＲ３−４ドメイン内のエピトープを結合するモノクローナル抗体の非限定的な例は、ＡＢ００２３およびＡＢ００２４である；たとえば、ＵＳ２００９／００５３２２４を参照されたい。
【０２０４】
いくつかの態様において、対象のアッセイ方法を使用して試験するために適した個体は、上皮細胞の上皮間葉転換（ＥＭＴ）が起こっている個体を含む。対象のアッセイ方法を使用して試験するために適した個体は、線維増生および線維芽細胞の活性化（腫瘍および線維症性疾患の病理的な微小環境の生成に関する因子であると考えられる）が起こっている個体を含む。そのような個体は、前がん細胞を有し得、かつ／またはがん発達の初期であり得る。
【０２０５】
いくつかの態様において、対象のＬＯＸＬ２アッセイ方法を使用して試験するために適した個体は、線維症（線維症性疾患）、たとえば、肝線維症、腎線維症、肺線維症、骨髄線維症、心臓線維症、または他のタイプの線維症を有すると診断された個体を含む。対象のＬＯＸＬ２アッセイ方法を使用して試験するために適した個体は、線維症性疾患（たとえば、肝線維症、腎線維症、肺線維症、骨髄線維症、心臓線維症、または他の種類の線維症）を有するが、線維症性疾患を有するとまだ診断されていない個体を含む。
【０２０６】
いくつかの場合において、適した試験被験体は線維症の進行型の形態を有するが、線維症に対する処置レジメンによる処置になお適し得る。たとえば、適した試験被験体は、活動性（末期ではない）線維症を有する被験体を含む。いくつかの場合において、適した試験被験体は、線維症を有し、急速な疾患増悪を経験することが予測され得る被験体である。
【０２０７】
いくつかの場合において、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して試験されるべき個体は、線維症性疾患に対する処置を現在受けている個体である。いくつかの実例において、処置は、ＬＯＸＬ２ポリペプチドの酵素活性を阻害する作用物質を投与することを含む。ＬＯＸＬ２の酵素活性を阻害する作用物質としては、ＬＯＸＬ２酵素活性のアロステリック阻害剤が挙げられる。いくつかの場合において、アロステリック阻害剤は、抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体、たとえば、ＬＯＸＬ２の「ＳＲＣＲ３−４」ドメイン内のエピトープを結合する抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体である。ＬＯＸＬ２の酵素活性を阻害し、ＳＲＣＲ３−４ドメイン内のエピトープを結合するモノクローナル抗体の非限定的な例は、ＡＢ００２３およびＡＢ００２４である；たとえば、ＵＳ２００９／００５３２２４を参照されたい。
【０２０８】
いくつかの場合において、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して試験されるべき個体は、ＩＰＦに対する処置を現在受けている個体である。他の場合おいて、対象のＬＯＸＬ１アッセイを使用して試験されるべき個体は、肝線維症に対する処置を現在受けている個体である。いくつかの実例において、処置は、ＬＯＸＬ２ポリペプチドの酵素活性を阻害する作用物質を投与することを含む。ＬＯＸＬ２の酵素活性を阻害する作用物質としては、ＬＯＸＬ２酵素活性のアロステリック阻害剤が挙げられる。いくつかの場合において、アロステリック阻害剤は、抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体、たとえば、ＬＯＸＬ２の「ＳＲＣＲ３−４」ドメイン内のエピトープを結合する抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体である。ＬＯＸＬ２の酵素活性を阻害し、ＳＲＣＲ３−４ドメイン内のエピトープを結合するモノクローナル抗体の非限定的な例は、ＡＢ００２３およびＡＢ００２４である；たとえば、ＵＳ２００９／００５３２２４を参照されたい。
【０２０９】
いくつかの場合において、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して試験されるべき個体は、現在、線維症性疾患に対するまたはがんに対する処置を受けている個体である。いくつかの実例において、処置は、ＬＯＸＬ２ポリペプチドの酵素活性を阻害する作用物質の投与を含む。ＬＯＸＬ２酵素活性を阻害する作用物質は、ＬＯＸＬ２酵素活性のアロステリック阻害剤を含む。いくつかの場合において、アロステリック阻害剤は、抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体、たとえば、ＬＯＸＬ２のＳＲＣＲ３−４ドメイン内のエピトープに結合する、抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体である。ＬＯＸＬ２酵素活性を阻害し、ＳＲＣＲ３−４ドメイン内のエピトープに結合するモノクローナル抗体の非限定的な例は、ＡＢ００２３およびＡＢ００２４である；たとえば、米国特許出願公開第２００９／００５３２２４号明細書を参照されたい。
Ｇ．診断方法
【０２１０】
循環性ＬＯＸＬ２の上昇などのＬＯＸＬ２のレベルの上昇と関連するまたはそれによって特徴付けられる疾患および状態を含む、ＬＯＸＬ２と関連する疾患および状態に対する、様々な診断方法がとりわけ提供される。たとえば、個体が循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられる疾患を有するかどうかを決定するための方法が、提供される。そのような疾患または状態の活性または重症度を評価するための方法もまた、提供される。診断方法は、一般に、上記に記載されるように、対象のＬＯＸＬ２アッセイ方法を使用して、個体における循環ＬＯＸＬ２のレベルを検出するステップを含む。循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられる疾患は、がんおよび線維症を含む。
【０２１１】
所定のサンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベルは、濃度によって、重量、または本明細書において記載される検出アッセイの他の読み取り値によって表現されてもよい。一態様において、正常コントロールレベルまたは他の参照レベルよりも高い循環ＬＯＸＬ２のレベルが、個体が循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられる疾患を有することを示す。たとえば、正常コントロールレベルまたは他の参照レベルよりも、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％高い、または５０％超高い循環ＬＯＸＬ２のレベルは、個体が循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられる疾患を有することを示すことができる。他の実施例として、約４０ｐｇ／ｍｌよりも高い、約５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、約７５ｐｇ／ｍｌよりも高い、約１００ｐｇ／ｍｌよりも高い、約１５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、約１７５ｐｇ／ｍｌよりも高い、約２００ｐｇ／ｍｌよりも高い、約２５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、約３００ｐｇ／ｍｌよりも高い、約３５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、約４００ｐｇ／ｍｌよりも高い、約４５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、約５００ｐｇ／ｍｌよりも高い、約５５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、約６００ｐｇ／ｍｌよりも高い、約６５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、約７００ｐｇ／ｍｌよりも高い、約７５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、または約８００ｐｇ／ｍｌよりも高い、または７００ｐｇ／ｍｌもしくは約７００ｐｇ／ｍｌ〜８００ｐｇ／ｍｌもしくは約８００ｐｇ／ｍｌよりも高い、循環ＬＯＸＬ２のレベルは、個体が、循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられる疾患を有することを示すことができる、および／または活動性疾患または特定の活性レベルを示すことによってなどの、疾患または状態についての予後判定情報もしくは予測情報を示すことができる。したがって、いくつかの実施形態において、方法は、ＬＯＸＬ２の循環レベルが、４０ｐｇ／ｍｌもしくは約４０ｐｇ／ｍｌよりも高い、５０ｐｇ／ｍｌもしくは約５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、約７５ｐｇ／ｍｌよりも高い、１００ｐｇ／ｍｌもしくは約１００ｐｇ／ｍｌよりも高い、１５０ｐｇ／ｍｌもしくは約１５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、１７５ｐｇ／ｍｌもしくは約１７５ｐｇ／ｍｌよりも高い、２００ｐｇ／ｍｌもしくは約２００ｐｇ／ｍｌよりも高い、２５０ｐｇ／ｍｌもしくは約２５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、３００ｐｇ／ｍｌもしくは約３００ｐｇ／ｍｌよりも高い、３５０ｐｇ／ｍｌもしくは約３５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、４００ｐｇ／ｍｌもしくは約４００ｐｇ／ｍｌよりも高い、４５０ｐｇ／ｍｌもしくは約４５０ｐｇ／ｍｌよりも高い、５００ｐｇ／ｍｌもしくは約５００ｐｇ／ｍｌよりも高い、５５０ｐｇ／ｍＬもしくは約５５０ｐｇ／ｍＬよりも高い、６００ｐｇ／ｍＬもしくは約６００ｐｇ／ｍＬよりも高い、６５０ｐｇ／ｍＬもしくは約６５０ｐｇ／ｍＬよりも高い、７００ｐｇ／ｍｌもしくは約７００ｐｇ／ｍｌよりも高い、７５０ｐｇ／ｍＬもしくは約７５０ｐｇ／ｍＬよりも高い、８００ｐｇ／ｍＬもしくは約８００ｐｇ／ｍＬよりも高い、または７００ｐｇ／ｍＬもしくは約７００ｐｇ／ｍＬから８００ｐｇ／ｍＬもしくは約８００ｐｇ／ｍＬの間を超える量などの量以上であるかどうかまたはそうであることを決定するステップを含む。他の実施形態において、方法は、ＬＯＸＬ２の循環レベルが、約１００ｐｇ／ｍＬ、約２００ｐｇ／ｍＬ、約３００ｐｇ／ｍＬ、約４００ｐｇ／ｍＬ、約５００ｐｇ／ｍＬ、約６００ｐｇ／ｍＬ、約７００ｐｇ／ｍＬ、約８００ｐｇ／ｍＬ、約９００ｐｇ／ｍＬ、約１０００ｐｇ／ｍＬ、約１１００ｐｇ／ｍＬ、約１２００ｐｇ／ｍＬ、約１３００ｐｇ／ｍＬ、約１４００ｐｇ／ｍＬ、約１５００ｐｇ／ｍＬ、約１６００ｐｇ／ｍＬ、約１７００ｐｇ／ｍＬ、約１８００ｐｇ／ｍＬ、約１９００ｐｇ／ｍＬ、約２０００ｐｇ／ｍＬ、約２１００ｐｇ／ｍＬ、約２２００ｐｇ／ｍＬ、約２３００ｐｇ／ｍＬ、約２４００ｐｇ／ｍＬ、約２５００ｐｇ／ｍＬ、約２６００ｐｇ／ｍＬ、約２７００ｐｇ／ｍＬ、約２８００ｐｇ／ｍＬ、約２９００ｐｇ／ｍＬ、約３０００ｐｇ／ｍＬ、約３１００ｐｇ／ｍＬ、約３２００ｐｇ／ｍＬ、約３３００ｐｇ／ｍＬ、約３４００ｐｇ／ｍＬ、約３５００ｐｇ／ｍＬ、約３６００ｐｇ／ｍＬ、約３７００ｐｇ／ｍＬ、約３８００ｐｇ／ｍＬ、約３９００ｐｇ／ｍＬ、または約４０００ｐｇ／ｍＬのレベルである、それよりも高い、またはそれよりも低いかどうか、またはそうであることを決定するステップを含む。いくつかの場合において、レベルにより、被験体における活動性の線維形成、線維症ステージ、線維症の増悪または後退、硬変の増悪または後退、代償性もしくは非代償性のステージが示される。本明細書において使用される場合、ＬＯＸＬ２に関する「正常コントロールレベル」および「参照レベル」という用語は、サンプル、たとえば試験サンプルにおけるＬＯＸＬ２レベルが比較されるＬＯＸＬ２のレベルを指す。一実施形態において、ＬＯＸＬ２の循環レベルが３０００ｐｇ／ｍＬ以上であることにより、被験体が、硬変の後退を有する可能性が低いことが示される。他の実施形態において、ＬＯＸ２の循環レベルが１５００ｐｇ／ｍＬ以下であると、硬変の後退を有する可能性がより高い。
【０２１２】
一実施例において、正常コントロールレベルまたは参照レベルが、被験体の疾患または状態、たとえばＬＯＸＬ２関連疾患または状態を有していない個体などの健康な個体由来のサンプルにおいて一般に観察されるレベルである。他の実施例において、それが、それほど活動性でない疾患、比較的よりよい予後判定、または生存もしくは処置への応答性などの、特定の転帰、エンドポイント、もしくはイベントと関連するより好都合な可能性（ｃｈａｎｃｅ）を有する個体などの、ＬＯＸＬ２関連疾患または状態を有する個体において観察されるレベルである。たとえば、参照レベルまたは正常コントロールレベルは、好ましい転帰、エンドポイント、またはイベントを最終的に示した個体由来のサンプルにおける、ベースラインレベルなどの、特定の時点で観察されるレベルであってもよい。他の実施例において、正常コントロールレベルまたは参照レベルが、アッセイされているサンプルと比較した、異なる時点で、同じ個体から採取されるサンプルにおいて観察されるレベル、例えば、処置前のベースラインレベルまたは疾患増悪における、より初期のレベルもしくは疾患が検出される前のレベルである。他の実施例において、正常レベルまたは参照レベルが、あらかじめ決定された濃度のＬＯＸＬ２を有するように調製されたサンプルにおけるレベルなどの標準的なレベルまたは単純にあらかじめ決定されたレベルである。本明細書において使用される場合、「ベースライン」は、処置前のまたは疾患増悪をモニタリングする研究の開始前の時点などの、特定のイベントまたは期間前の時点での量、レベル、または特定の変数の測定値（ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ）を指す。したがって、一態様において、ＬＯＸＬ２の参照レベルまたは正常コントロールレベルが、同じ個体または他の個体由来のベースラインレベルなどのベースラインレベルである。
【０２１３】
１．コントロール値
試験被験体から得られる液体サンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベルは、正常コントロール値（複数可）または正常コントロール値の範囲と比較することができる。コントロール値は、コントロール集団、たとえば一般集団またはヒト被験体の選抜集団から得られる、比較可能なサンプル（たとえば血液、血漿、血清サンプル、または他の液体生物学的サンプル）におけるＬＯＸＬ２のレベルに基づくものとすることができる。たとえば、選抜集団は、明らかに健康な被験体（たとえば、以前に、線維症やがんのいかなるサインや症状をも有したことがない個体）から構成され得る。明らかに健康な個体はまた、一般に、別段疾患の症状を示さない。言いかえれば、そのような個体は、医学の専門家によって検査された場合、健康で、疾患の症状がないものとして特徴付けられることになる。その代わりに、評価される値は、平均値（ａｖｅｒａｇｅ  ｖａｌｕｅ）、平均値（ｍｅａｎ  ｖａｌｕｅ）、もしくは中央値などの他の参照値または特定の疾患もしくは状態を有する被験体の集団について観察される値と比較されてもよい。たとえば、そのような参照値は、その後、たとえば、参照値が得られた全部の患者コホートと比較して、より活動性疾患を有することが決定される、特定の個体について評価されるレベルに対する比較において使用されてもよい。
【０２１４】
コントロール値は、様々な形態を取ることができる。コントロール値は、中央値または平均値などの単一のカットオフ値とすることができる。正常コントロール値は、正常コントロール範囲とすることができる。
【０２１５】
２．試験されるべき個体
試験被験体は、上記に列挙される被験体を含む。対象のアッセイを使用して試験するのに適した個体は、これまで疾患を有すると診断されていないが、医師に症状および／または愁訴を示す個体（たとえば診断されていない障害または疾患を有する個体）；がんと診断された個体；がんを有することが疑われているが、これまでがんを有すると診断されていない個体；明らかに健康であり、慣用のスクリーニングを受けている個体；線維症を有すると診断された個体；線維症を有することが疑われているが、これまで線維症を有すると診断されていない個体；Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症を有すると診断された（および必要に応じて、また、ＨＣＶ感染症またはＨＢＶ感染症関連の肝損傷を有するとも診断された）個体；ならびにがんまたは線維症性疾患に対する処置を受けている個体を含むが、これらに限定されない。
【０２１６】
いくつかの場合において、試験されるべき個体は、診断されていない障害または疾患を有する個体、たとえば、症状および／または愁訴を示す個体である。対象の診断方法は、そのような個体が線維症性疾患またはがんを有し得るかどうかを決定するために使用することができる。対象の診断方法は鑑別診断の一部とすることができ、いくつかの場合において、たとえば、診断を確認するまたは除外するために、１つ以上の診断試験と共に使用することができる。
【０２１７】
３．報告の生成
対象の診断方法は、個体が線維症性疾患またはがんを有する可能性があるかどうかに関して指標を提供する報告を生成するステップを含むことができる。そのような報告は、さらなる評価に関する勧告、治療剤による処置に関する勧告などのような情報を含むことができる。
【０２１８】
対象の報告は、１）サービスプロバイダ情報；２）患者データ；３）ＬＯＸＬ２のレベルに関するデータ；４）追跡調査評価についての勧告；５）治療剤による処置；および６）他の特徴のうちの１つ以上をさらに含むことができる。
【０２１９】
４．さらなる評価
ＬＯＸＬ２のレベルの検出に基づいておよび／または報告に基づいて（上記に記載されるように）、医師または他の資格のある医療関係者は、試験被験体（患者）についてのさらなる評価が必要とされるかどうかを決定することができる。さらなる評価は、たとえば、肺機能試験（たとえば肺線維症が疑われる場合）；肝機能検査（たとえば肝線維症が疑われる場合）；およびがんについての様々な試験を含むことができ、これらの試験は、疑われるがんのタイプに依存して変更されてもよい。
【０２２０】
一実施例として、個体ががんを有することが疑われる場合、がんについての様々な試験のいずれかを実行することができ、そのような試験は、たとえば、がん性細胞の存在についての組織生検の組織化学的分析；腫瘍関連抗原の存在についての試験；などを含む。
【０２２１】
他の実施例として、個体が肺線維症性障害（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）を有することが疑われる場合、個体は、肺線維症性障害の症状について評価することができる。肺線維症性障害の症状は、体重の減少、肺重量の増加、肺線維症、異常な肺構造（たとえば「蜂巣」肺）、Ａｓｈｃｒｏｆｔスコアの増加、肺のコラーゲンレベル増加、ＣＤ４５＋／コラーゲン＋細胞の数の増加、肺胞細胞増殖および拡大、ならびに気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液における白血球数の増加を含むが、これらに限定されない。症状はまた、たとえば、以下の分子のうちの１つ以上の肺レベルの増加を含むことができる：ＬＯＸＬ２、α−平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）、形質転換増殖因子β−１（ＴＧＦβ−１）、間質由来因子−１（ＳＤＦ−１）（たとえばＳＤＦ−１α）、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、およびリン酸化ＳＭＡＤ２。
【０２２２】
さらなる実施例として、個体が肝線維症を有することが疑われる場合、個体は、肝機能のマーカーについて評価することができる。肝機能は、血清タンパク質などのタンパク質の合成（たとえばアルブミン、凝固因子、アルカリホスファターゼ、アミノトランスフェラーゼ（たとえばアラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ）、５’−ヌクレオシダーゼ、γ−グルタミニルトランスペプチダーゼなど）、ビリルビンの合成、コレステロールの合成、および胆汁酸の合成；炭水化物代謝、アミノ酸およびアンモニア代謝、ホルモン代謝、ならびに脂質代謝を含むが、これらに限定されない肝臓代謝機能；外因性の薬剤の解毒；内臓および門脈の血行力学を含む血行力学機能；などを含むが、これらに限定されない。たとえば、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルは、標準的なアッセイを使用して測定される。一般に、約４５国際単位未満のＡＬＴレベルは、正常と考えられる。ＡＬＴレベルの上昇は、損なわれた肝機能を示すことができる。機能的肝予備力の定量的試験もまた、肝機能を評価するために使用することができ、そのような試験は、たとえば、インドシアニングリーンクリアランス（ＩＣＧ）、ガラクトース排泄能（ｇａｌａｃｔｏｓｅ  ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ  ｃａｐａｃｉｔｙ）（ＧＥＣ）、アミノピリン呼気検査（ａｍｉｎｏｐｙｒｉｎｅ  ｂｒｅａｔｈ  ｔｅｓｔ）（ＡＢＴ）、アンチピリンクリアランス、モノエチルグリシン−キシリジド（ＭＥＧ−Ｘ）クリアランス、およびカフェインクリアランスを含む。腹水症、食道静脈瘤、脳障害、および／または黄疸の存在により、非代償性肝疾患が示され得る。
【０２２３】
５．療法
ＬＯＸＬ２のレベルの検出に基づいておよび／または報告に基づいて（上記に記載されるように）、医師または他の資格のある医療関係者は、適切な治療剤による処置が、たとえば、線維症性疾患を処置するため、がんを処置するためなどに勧められるかどうかを決定することができる。
【０２２４】
たとえば、ＬＯＸＬ２の循環レベルおよび必要に応じてさらなる評価（たとえば組織生検の組織化学的分析）に基づいて、早期のがんを有することが決定された個体は、がん化学療法薬レジメンを始めることができるおよび／または放射線療法により処置することができるおよび／またはがんの外科的な除去を受けることができる。
【０２２５】
がん化学療法剤（「化学療法剤」）は、細胞傷害性薬剤および細胞増殖抑制性薬剤を含む。化学療法剤は、形質転換状態から分化状態への逆転などの、細胞に対して他の効果を有するものまたは細胞複製を阻害するものを含んでいてもよい。たとえば、知られている細胞傷害性薬物の例は、Ｇｏｏｄｍａｎら、「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，」第６版，  Ａ．Ｂ．  Ｇｉｌｍａｎら編／Ｍａｃｍｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８０において列挙される。これらは、パクリタキセルおよびドセタキセルなどのタキサン；メクロレタミン、メルファラン、ウラシルマスタード、およびクロラムブシルなどのナイトロジェン；チオテパなどのエチレンイミン誘導体；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；ロムスチン、セムスチン、およびストレプトゾシンなどのニトロソ尿素；ダカルバジンなどのトリアゼン；メトトレキサートなどの葉酸アナログ；フルオロウラシル、シタラビン、およびアザリビンなどのピリミジンアナログ；メルカプトプリンおよびチオグアニンなどのプリンアナログ；ビンブラスチンおよびビンクリスチンなどのビンカアルカロイド；ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、およびマイトマイシンなどの抗生物質；シスプラチンなどの白金配位錯体（ｐｌａｔｉｎｕｍ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ）などの金属錯体；ヒドロキシ尿素などの置換尿素；プロカルバジンなどのメチルヒドラジン誘導体；ミトタンなどの副腎皮質抑制薬；副腎皮質ステロイド（ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｓｔｅｒｏｉｄ）（プレドニゾン）、プロゲスチン（カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸ヒドロキシプロゲステロン、および酢酸メゲストロール）、エストロゲン（ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオール）、ならびにアンドロゲン（プロピオン酸テストステロンおよびフルオキシメステロン）などの、ホルモンならびにアンタゴニストを含む。
【０２２６】
他の実施例として、たとえば、ＬＯＸＬ２の循環レベルおよび必要に応じてさらなる評価（たとえば肺機能試験）に基づいて、ＩＰＦを有することが決定された個体は、ＩＰＦに対する薬物処置および／またはＩＰＦに対する他の処置により処置することができる。ＩＰＦに対する一次処置は、医薬であり、ＩＰＦの処置に使用される最も一般的な薬剤は、コルチコステロイド（たとえばプレドニゾン）、ペニシラミン、ならびに様々な抗新生物薬（ａｎｔｉ  ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ）（たとえばシクロホスファミド、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｐｏｒｅｎｅ）、クロラムブシル、ビンクリスチン、およびコルヒチン）である。他の処置は、酸素投与および極端な場合は、肺移植を含む。
【０２２７】
さらなる実施例として、ＬＯＸＬ２の循環レベルおよび必要に応じてさらなる評価（たとえば、肝機能検査；ＨＣＶ、ＨＢＶによる感染症についての試験など）に基づいて、肝線維症を有することが決定された個体は、たとえば抗ウイルス剤、たとえば、ＨＣＶもしくはＨＢＶ感染症または他の肝炎ウイルス感染症を処置するのに適した作用物質により処置することができる。たとえば、ＨＣＶ感染症は、インターフェロン−アルファ（ＩＦＮ−α）、ビラミジン（ｖｉｒａｍｉｄｉｎｅ）、リバビリン、レボビリン（ｌｅｖｏｖｉｒｉｎ）、ＨＣＶ  ＮＳ３阻害剤、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ阻害剤、または前述のものの１つ以上の組み合わせにより処置することができる。
【０２２８】
Ｈ．処置の効力をモニターするための方法
本開示は、循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられる疾患などのＬＯＸＬ２関連疾患または状態に対する処置の効力をモニターするための方法であって、方法が、一般に、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して、ある時点の、個体における循環ＬＯＸＬ２レベルを決定するステップを含む方法を提供する。一態様において、個体から初期の時点で得られるレベルよりも低い、サンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベルにより、処置の効力が示される。他の態様において、コントロールまたは参照サンプルと比較して、より低いレベルにより、処置の効力が示される。他の態様において、ＬＯＸＬ２のレベル、たとえば高レベルのＬＯＸＬ２が、ＬＯＸＬ２標的療法による処置などの処置に対して個体が好都合に応答することを示す。
【０２２９】
たとえば、循環ＬＯＸＬ２レベルは、個体において、第１の時点および第２の時点で決定され、第２の時点が、第１の時点よりも後である。第１の時点は、処置の開始前とすることができ、第２の時点は、処置の間（たとえば処置レジメンが始まった後）とすることができる。第１の時点は、処置の間とすることができ、第２の時点は、処置の間のより後の時間とすることができる。第２の時点は、第１の時点の約１時間〜約１年間後とすることができる、たとえば、第２の時点は、第１の時点の約１時間〜約２時間後、約２時間〜約４時間後、約４時間〜約８時間後、約８時間〜約１６時間後、約１６時間〜約２４時間後、約２４時間〜約３６時間後、約３６時間〜約７２時間後、約７２時間〜約４日後、約４日〜約１週間後、約１週間〜約２週間後、約２週間〜約１ヶ月後、約１ヶ月〜約３ヶ月後、約３ヶ月〜約６ヶ月後、約６ヶ月〜約１年後、または１年を超える後とすることができる。
【０２３０】
したがって、たとえば、いくつかの実施形態において、循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられる疾患に対する処置の効力を決定する対象の方法は、ａ）第１の時点で個体におけるＬＯＸＬ２の循環レベルを決定するステップ（第１の時点で個体から得られる液体サンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベルを決定することによって）、ｂ）第２の時点で個体におけるＬＯＸＬ２の循環レベルを決定するステップ（第２の時点で個体から得られる液体サンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベルを決定することによって）、ならびに第１および第２の時点からのＬＯＸＬ２のレベルを比較するステップを含む。
【０２３１】
第２の時点での循環ＬＯＸＬ２レベルが、第１の時点での循環ＬＯＸＬ２レベルよりも低い場合、循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられる疾患に対する処置が有効であったことが結論付けられてもよく、これらの場合において、処置レジメンを継続する勧告がなされてもよい。第２の時点での循環ＬＯＸＬ２レベルが、第１の時点での循環ＬＯＸＬ２レベルよりも高い場合、循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられる疾患に対する処置が有効ではなかったことが結論付けられてもよく、これらの場合において、処置レジメンを中止する、処置レジメンにおいて使用される薬剤の用量を増加させる、投薬の頻度を増加させる、または代わりとなる処置レジメンを施す勧告がなされてもよい。第２の時点での循環ＬＯＸＬ２レベルが、第１の時点での循環ＬＯＸＬ２レベルと有意に異ならない場合、循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられる疾患に対する処置が有効ではなかったことがまたは処置レジメンを変更するべきであると結論付けられてもよく、これらの場合において、処置レジメンを中止する、処置レジメンにおいて使用される薬剤の用量を増加させる、投薬の頻度を増加させる、または代わりとなる処置レジメンを施す勧告がなされてもよい。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、動物モデルを使用して、循環ＬＯＸＬ２の上昇によって特徴付けられる疾患などのＬＯＸＬ２と関連する疾患および状態に対する処置（たとえば、その効力）および／または他の効果を評価するための方法が提供される。いくつかの態様において、疾患または状態は、ＰＳＣまたはＰＢＣなどの胆汁うっ滞性肝疾患である。いくつかのそのような態様において、動物モデルは、Ｍｄｒ２−／−マウスまたは胆管結紮（ＢＤＬ）マウスである。いくつかの実施形態において、方法は、動物モデルに処置を施すステップおよび処置の効力または他の転帰を評価するステップを含む。一実施例では、評価するステップは、たとえば本明細書に記載の検出方法を使用して、動物由来のサンプルにおけるＬＯＸＬ２レベルを測定することを含む。
１．試験被験体
【０２３３】
処置の効力をモニターするための対象の方法は、たとえば、がんと診断され、がんに対する処置を受けている個体；線維症を有すると診断され、線維症に対する処置を受けている個体；ＩＰＦを有すると診断され、ＩＰＦに対する処置を受けている個体；ＮＡＳＨを有すると診断され、ＮＡＳＨに対する処置を受けている個体；ＰＢＣを有すると診断され、ＰＢＣに対する処置を受けている個体；肝線維症を有すると診断され、肝線維症に対する処置を受けている個体；ＨＣＶまたはＨＢＶ感染症を有すると診断され、ＨＣＶまたはＨＢＶ感染症に対する処置を受けている個体；ＨＣＶまたはＨＢＶ感染症と関連する肝損傷を有すると診断され、ＨＣＶまたはＨＢＶ感染症および／または肝損傷に対する処置を受けている個体などを含む種々の個体のいずれを試験するためにも使用することができる。これらの被験体は、処置を必要とする被験体または診断を必要とする被験体と称することができる。
【０２３４】
いくつかの場合において、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して試験されるべき個体は、現在、がんに対する処置を受けている個体である。がん化学療法は、様々な細胞傷害性薬物のいずれかとすることができる。そのような細胞傷害性薬物は、パクリタキセルおよびドセタキセルなどのタキサン；メクロレタミン、メルファラン、ウラシルマスタード、およびクロラムブシルなどのナイトロジェン；チオテパなどのエチレンイミン誘導体；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；ロムスチン、セムスチン、およびストレプトゾシンなどのニトロソ尿素；ダカルバジンなどのトリアゼン；メトトレキサートなどの葉酸アナログ；フルオロウラシル、シタラビン、およびアザリビンなどのピリミジンアナログ；メルカプトプリンおよびチオグアニンなどのプリンアナログ；ビンブラスチンおよびビンクリスチンなどのビンカアルカロイド；ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、およびマイトマイシンなどの抗生物質；シスプラチンなどの白金配位錯体などの金属錯体；ヒドロキシ尿素などの置換尿素；プロカルバジンなどのメチルヒドラジン誘導体；ミトタンなどの副腎皮質抑制薬；副腎皮質ステロイド（プレドニゾン）、プロゲスチン（カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸ヒドロキシプロゲステロン、および酢酸メゲストロール）、エストロゲン（ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオール）、ならびにアンドロゲン（プロピオン酸テストステロンおよびフルオキシメステロン）などの、ホルモンならびにアンタゴニストを含む。
【０２３５】
いくつかの実例において、がん処置は、ＬＯＸＬ２ポリペプチドの酵素活性を阻害する作用物質の投与を含む。ＬＯＸＬ２酵素活性を阻害する作用物質は、ＬＯＸＬ２酵素活性のアロステリック阻害剤を含む。いくつかの場合において、アロステリック阻害剤は、抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体、たとえば、ＬＯＸＬ２の「ＳＲＣＲ３−４」ドメイン内のエピトープに結合する、抗ＬＯＸＬ２モノクローナル抗体である。ＬＯＸＬ２酵素活性を阻害し、ＳＲＣＲ３−４ドメイン内のエピトープに結合するモノクローナル抗体の非限定的な例は、ＡＢ００２３およびＡＢ００２４である；たとえば、米国特許出願公開第２００９／００５３２２４号明細書を参照されたい。
【０２３６】
他の実施例として、肝線維症に対する処置を受けているまたは肝線維症をもたらし得る疾患に対する処置を受けている個体は、対象の方法を使用して試験するのに適している。実施例として、ＨＣＶ感染症に対する処置を受けている個体は、対象の方法を使用して試験するのに適している。たとえば、ＨＣＶ感染症は、ＩＦＮ−α、ビラミジン、リバビリン、レボビリン、ＨＣＶ  ＮＳ３阻害剤、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ阻害剤、または前述のものの１つ以上の組み合わせにより処置することができる。
【０２３７】
他の実施例として、ＩＰＦに対する処置を受けている個体は、対象の方法を使用して試験するのに適している。ＩＰＦを処置するのに一般に使用される薬剤は、たとえば、コルチコステロイド（たとえばプレドニゾン）、ペニシラミン、ならびに様々な抗新生物薬（たとえばシクロホスファミド、アザチオプリン、クロラムブシル、ビンクリスチン、およびコルヒチン）である。
【０２３８】
２．コントロール値
試験被験体から得られる液体サンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベルは、正常コントロール値（複数可）もしくは正常コントロール値の範囲または本明細書において記載される他の参照値と比較することができる。コントロール値は、コントロール集団、たとえば一般集団またはヒト被験体の選抜集団から得られる、比較可能なサンプル（たとえば血液、血漿、血清サンプル、または他の液体生物学的サンプル）におけるＬＯＸＬ２のレベルに基づくものとすることができる。たとえば、選抜集団は、明らかに健康な被験体、たとえば、以前に、線維症やがんのいかなるサインや症状をも有したことがない個体）から構成され得る。明らかに健康な個体はまた、一般に、別段疾患の症状を示さない。言いかえれば、そのような個体は、医学の専門家によって検査された場合、健康で、疾患の症状がないものとして特徴付けられることになる。
【０２３９】
コントロール値は、様々な形態を取ることができる。コントロール値は、中央値または平均値などの単一のカットオフ値とすることができる。正常コントロール値は、正常コントロール範囲とすることができる。いくつかの場合において、コントロールの基準値は、対象のアッセイ方法の検出限界未満、たとえば、約１７５ｐｇ／ｍｌ未満、約１５０ｐｇ／ｍｌ未満、約１２５ｐｇ／ｍｌ未満、約１００ｐｇ／ｍｌ未満、約７５ｐｇ／ｍｌ未満、約５０ｐｇ／ｍｌ未満、または約４０ｐｇ／ｍｌ未満である。
【０２４０】
Ｉ．予後判定方法
様々な予後判定および予測方法もまた、提供される。たとえば、本開示は、線維症性疾患を有する個体が線維症性疾患に対する処置への有益な臨床応答を示す確度を決定することを提供する。他の実施例において、方法は、特定の疾患アウトプットもしくはエンドポイントまたは処置への応答性についての確度または危険性を決定する。方法は、一般に、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して、個体から得られる液体サンプルにおいてなどの、ＬＯＸＬ２の循環レベルを検出するステップを含む。一態様において、正常コントロールレベルまたは他の参照レベルよりも高いＬＯＸＬ２のレベルが、個体が線維症性疾患に対する処置への有益な臨床応答を示す、確度の増加を有することを示す。他の態様において、比較的低いレベルが、特定の疾患転帰もしくはエンドポイントを生じることの、比較的より低い確度もしくは危険性または他の予後判定情報を示す。同様に、比較的高いＬＯＸＬ２レベルは、特定の疾患もしくは状態のアウトプットを生じるまたは特定のエンドポイントに到達する危険性または確度の増加などの、より不良な予後判定を示すことができる。上記に記載されるように、線維症性疾患は、肺線維症、肝線維症、心線維症、および骨髄線維症を含む。いくつかの場合において、たとえば、被験体が線維症性疾患に対する処置への有益な臨床応答を示す可能性があるということを循環ＬＯＸＬ２レベルが示す場合、さらなる対象の方法は、線維症性疾患について個体を処置するステップを含む。
【０２４１】
対象のアッセイ方法を使用して試験するのに適した個体は、線維症、たとえば肝線維症、腎線維症、肺線維症、骨髄線維症、心線維症、または他のタイプの線維症を有すると診断された個体を含む。肝線維症は、硬変ならびに慢性ウイルス性肝炎（たとえばＨＣＶまたはＨＢＶ感染症から結果として生じる）、ＮＡＦＬＤ、ＡＳＨ、ＮＡＳＨ、胆汁うっ滞性肝疾患、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、および自己免疫性肝炎などの関連する状態を含むが、これらに限定されない。腎線維症は、様々な疾患および傷害から結果として生じ得、そのような疾患および傷害の例は、慢性腎疾患、メタボリックシンドローム、膀胱尿管逆流、尿細管間質性腎線維症、糖尿病（糖尿病性腎症を含む）、ならびに巣状分節状糸球体硬化症および膜性糸球体腎炎、膜性増殖性ＧＮを含むが、これらに限定されない、結果として生ずる糸球体腎炎（ＧＮ）を含む。肺の線維症は、多くの症候群および疾患を含み、例示的な疾患は、ＩＰＦ、特発性間質性肺炎、およびＡＲＤＳを含む。肺線維症はまた、特発性線維化肺胞炎、慢性線維化間質性肺炎、ＩＬＤ、およびＤＰＬＤをも含むが、これらに限定されない。いくつかの態様において、肝疾患は代償性肝疾患である。他の態様において、肝疾患は、腹水症、食道静脈瘤、脳障害、および／または黄疸と関連する肝疾患などの非代償性肝疾患である。
【０２４２】
いくつかの場合において、適した試験被験体は、線維症の進行型の形態を有するが、線維症に対する処置レジメンによる処置になお適し得る。たとえば、適した試験被験体は、活動性（末期ではない）線維症を有する被験体を含む。いくつかの場合において、適した試験被験体は、線維症を有し、急速な疾患増悪を経験することを予想し得る被験体である。例として、個体は、肝線維症の進行期、たとえばＭＥＴＡＶＩＲ  Ｆ４を有していてもよく、ＭＥＴＡＶＩＲ  Ｆ４線維症および陽性ＬＯＸＬ２（たとえば、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して決定するときに、液体サンプルにおけるＬＯＸＬ２の正常レベルよりも高い）を有する個体は、なお、線維症に対する処置のための候補であり得る。陰性ＬＯＸＬ２（たとえば、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して決定するときに、液体サンプルにおけるＬＯＸＬ２の正常レベル）を有するＭＥＴＡＶＩＲ  Ｆ４肝線維症患者は、線維症に対する処置のための候補と考えなくてもよい。他の実施例として、初期の肝線維症（たとえばＭＥＴＡＶＩＲ  Ｆ１またはＦ２）を有する、ＬＯＸＬ２が上昇した（たとえば、対象のＬＯＸＬ２アッセイを使用して決定するときに、液体サンプルにおけるＬＯＸＬ２の正常レベルよりも高い）個体は、線維症に対する処置のための候補と考えることができる。
【０２４３】
いくつかの態様において、方法により、個体が線維症の進行期、硬変、予後不良、非代償性肝疾患、炎症、壊死を有することもしくはその確度、および／または処置に対して応答することもしくはその確度が示される。
【０２４４】
１．コントロール値
試験被験体から得られる液体サンプルにおけるＬＯＸＬ２のレベルは、正常コントロール値（複数可）または正常コントロール値の範囲と比較することができる。コントロール値は、コントロール集団、たとえば一般集団またはヒト被験体の選抜集団から得られる、比較可能なサンプル（たとえば血液、血漿、血清サンプル、または他の液体生物学的サンプル）中のＬＯＸＬ２のレベルに基づくものとすることができる。たとえば、選抜集団は、明らかに健康な被験体、たとえば、以前に、線維症のいかなるサインも症状も有したことがない個体）から構成され得る。明らかに健康な個体はまた、一般に、別段疾患の症状を示さない。言いかえれば、そのような個体は、医学の専門家によって検査された場合、健康で、疾患の症状がないものとして特徴付けられることになる。
【０２４５】
コントロール値は、様々な形態を取ることができる。コントロール値は、中央値または平均値などの単一のカットオフ値とすることができる。正常コントロール値は、正常コントロール範囲とすることができる。いくつかの場合において、コントロールの基準値は、対象のアッセイ方法の検出限界未満、たとえば、約１７５ｐｇ／ｍｌ未満、約１５０ｐｇ／ｍｌ未満、約１２５ｐｇ／ｍｌ未満、約１００ｐｇ／ｍｌ未満、約７５ｐｇ／ｍｌ未満、約５０ｐｇ／ｍｌ未満、または約４０ｐｇ／ｍｌ未満である。
【０２４６】
２．報告の生成
患者が線維症性疾患に対する処置への有益な臨床応答を示す確度は、ＬＯＸＬ２の循環レベルを決定することによって評価される。線維症性疾患に対する処置への有益な臨床応答を示す患者の確度は、報告において提供される。その報告は、患者の応答の確度に関する情報をさらに含み得る。たとえば、対象の方法は、被験体の応答の確度についての評価の結果を提供する報告を生成するまたはアウトプットするステップをさらに含むことができ、この報告を、電子的媒体（たとえばコンピュータモニター上での電子的な表示）の形態でまたは有形媒体（たとえば紙もしくは他の有形媒体に印刷された報告）の形態で提供することができる。
【０２４７】
本明細書において記載される「報告」は、対象の確度についての評価およびその結果に関する、関心のある情報を提供する報告エレメントを含む、電子的なまたは有形の文書である。対象の報告は、線維症性疾患を有する患者が、線維症性疾患に対する処置への有益な臨床応答を示す確度に関して、少なくとも１つの、確度についての評価、たとえば指標を含む。対象の報告は、完全にまたは部分的に電子的に生成することができる。対象の報告は、１）試験施設に関する情報；２）サービスプロバイダ情報；３）患者データ；４）サンプルデータ；５）ａ）指標；ｂ）検査データ、たとえば循環ＬＯＸＬ２レベルを含む様々な情報を含むことができる説明的な報告（ｉｎｔｅｒｐｒｅｔｉｖｅ  ｒｅｐｏｒｔ）；および６）他の特徴のうちの１つ以上をさらに含むことができる。
【０２４８】
３．予後判定および予測ＩＰＦ方法
いくつかの実施形態において、特発性肺線維症（ＩＰＦ）についての診断方法、予後判定方法、および予測方法が、提供される。本明細書における実施例において示されるように、ＬＯＸＬ２の発現の増加は、正常コントロールサンプルと比較して、ＩＰＦ患者の血清において検出され、加えて、循環ＬＯＸＬ２レベルの増加は、活動性ＩＰＦ表現型および様々な疾患転帰の危険性の増加を示す。より高いＬＯＸＬ２発現はまた、ＩＰＦ患者の肺組織においても検出される。したがって、ＩＰＦ疾患活性または活動性ＩＰＦ表現型のマーカーなどのＩＰＦ疾患のマーカーとしてＬＯＸＬ２を使用する方法が、提供される。したがって、提供される方法のいくつかの実施形態において、ＬＯＸＬ２が、ＩＰＦについての診断、予後判定、および／または予測マーカーとして使用される。一態様において、ＬＯＸＬ２レベルが、特定の疾患転帰または処置への応答性の確度などの、線維形成および／または様々なＩＰＦステージ、重症度、もしくは転帰を評価するために使用される。
【０２４９】
他の態様において、ＬＯＸＬ２レベルが、活動性疾患または疾患活性のレベルを示す。他の態様において、コントロールサンプルまたは他の参照サンプルと比較してより高いＬＯＸＬ２レベル、典型的に、血清レベルが、特定の疾患転帰を生じるまたは特定の期間に特定の疾患転帰を生じる危険性を示す。他の態様において、ＬＯＸＬ２レベルが、患者が特定の処置に応答するまたはＬＯＸＬ２阻害剤による処置もしくは他の処置などの進行中の処置への応答性に関する情報を示す確度を示す。したがって、いくつかの実施形態において、方法が、予測または検出されるＬＯＸＬ２レベルに基づいて、疾患処置アプローチを開始する、中止する、または変更するステップをさらに含む。
【０２５０】
方法を使用して評価するまたは予測する例示的な疾患転帰は、ＩＰＦ疾患増悪（以下のうちの１つとして定義される複合エンドポイント：あらゆる原因由来の死亡率）、不良な無増悪生存期間（ＰＦＳ）、呼吸器系の入院、肺機能における減少、たとえば肺機能の無条件の減少（これは、一酸化炭素拡散能（ＤＬＣＯ）における５％の減少を伴う、努力肺活量（ＦＶＣ）における１０％の減少またはＦＶＣにおける５％の減少を伴うＤＬＣＯにおける１５％の減少として定義されてもよい）、および死を含む。
【０２５１】
方法は、一般に、患者サンプルを得るステップおよび／またはサンプルにおけるＬＯＸＬ２レベルを決定するステップ（たとえば、本明細書において記載される方法を使用して）ならびにこのおよび他の情報に基づいて、様々な統計分析を実行するステップを含む。一実施例において、患者またはサンプルが、高いまたは低いレベルのＬＯＸＬ２、たとえば、低いまたは高い循環もしくは血清ＬＯＸＬ２レベルを有するかどうかが決定される。この情報は、たとえば、サンプルの集合体などの、所定の集団における、決定されたＬＯＸＬ２レベルの分布に基づいて、ＬＯＸＬ２レベルを二種類に分け、ＬＯＸＬ２の「低」および「高」レベルについてのカットオフポイントを指定することによって決定することができる。たとえば、高レベルのＬＯＸＬ２は、１ミリリットル（ｍＬ）の血清当たり８００ピコグラム（ｐｇ）よりも高いまたは約８００ピコグラムのＬＯＸＬ２などの、所定のサンプルにおける、少なくとも特定の濃度のまたは特定の濃度を超えるレベルと見なすことができる。その代わりに、高いＬＯＸＬ２血清レベルは、集団内のサンプルについてのレベルの分布に基づいてまたはコントロールまたは参照サンプルと比較した特定の倍数変化に基づいて定義されてもよい。
【０２５２】
いくつかの態様において、方法は、疾患重症度または機能的ステータスのマーカー、たとえば、予測努力肺活量（ＦＶＣ）のパーセント、予測一酸化炭素拡散能（ＤＬＣＯ）のパーセント、６分間の歩行距離（６ＭＷＤ）、平均肺動脈圧（ｍＰＡＰ）、最低安静時酸素飽和度（ＳｐＯ２）、複合生理学指数（ＣＰＩ）、セントジョージ呼吸器質問票スコア（ＳＧＲＱ）、および遷移呼吸困難指数（ＴＤＩ）スコアなどの、ＩＰＦ重症度を反映するものなどの、ＩＰＦのベースライン量、処置への応答性、ならびに／または疾患もしくは疾患重症度の他のバイオマーカーなどの、他の測定値に関連してＬＯＸＬ２レベルを決定することによって実行される。したがって、予測モデルおよび方法のいくつかの態様において、ＬＯＸＬ２が、疾患重症度もしくは機能的ステータスおよび／または他のバイオマーカーの量と統合される、ＩＰＦ疾患転帰のバイオマーカーである。
Ｊ．診断方法、予後判定方法、および予測方法についての統計分析
【０２５３】
いくつかの実施例において、統計分析は、ＬＯＸＬ２レベルおよび他の測定量（ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｓ）に基づいて実行される。一実施例において、ＬＯＸＬ２のレベルが、たとえば、ＬＯＸＬ２の非変換またはｌｏｇ１０ｘ変換レベルを評価するために標準的なヒストグラムを使用して評価される。統計分析は、平均値、たとえば、個々のサンプルおよび／または患者についてのＬＯＸＬ２発現レベルおよび／またはベースライン変数についての幾何平均または中央値などの、様々な値を決定することならびに様々なサンプルまたは状態の間の標準偏差および倍数変化を計算することならびにたとえば、ベースライン変数およびＬＯＸＬ２発現レベルの分布を比較するために使用されてもよいｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定などの、多くのよく知られている検定のいずれかを使用して、発現レベルおよび／または他の変数を比較することを含むことができる。
【０２５４】
いくつかの態様において、Ｐｅａｒｓｏｎの相関（ＰＣ）が、ＬＯＸＬ２発現レベルおよび本明細書において記載されるようなベースラインＩＰＦ変数（複数可）などの他の変数の間のなどの、値のペアの間の直線関係（相関）を評価するために使用される（たとえばＰＣ係数を計算することによって）。そのような分析は、個々のペアの変数（実施例９において示されるように、個々のマトリックスのｘ−およびｙ−軸上にプロットされる）についてのＰＣ係数を計算することによって、発現パターンにおける分布を直線的に分離するために使用することができる。
【０２５５】
１．予測モデリング
いくつかの実施形態において、予測方法が、統計分析のさらなる使用ならびに予測モデルおよびシステムの使用をさらに含む。いくつかの態様において、そのようなモデルおよびシステムが、ＬＯＸＬ２レベルならびに典型的に、疾患重症度を示す変数および他のバイオマーカーなどの他の情報に基づいて、疾患転帰、エンドポイント、応答性、および／またはイベントを予測するために使用される。たとえば、生存モデルは、ＬＯＸＬ２レベルならびに他の共変数（ｃｏｖａｒｉａｔｅ）および１つ以上のイベント、エンドポイント、または疾患転帰、たとえばＩＰＦ転帰（複数可）などの転帰ならびに１つ以上の処置への応答性の間の関係を調査するために使用されてもよく、そのようなモデルは、特定の患者が、イベント、エンドポイント、もしくは転帰を有する確度またはそのような転帰が、特定の時間内に起こる確度を予測するために使用されてもよい。
【０２５６】
そのような一実施例において、Ｃｏｘ比例ハザードモデリング、たとえばステップワイズＣｏｘ比例ハザードモデリングが、ＬＯＸＬ２レベル（ならびに必要に応じて、本明細書において記載されるベースラインＩＰＦ変数などの他の共変数および他の疾患バイオマーカーなどの、疾患転帰と関連し得る他の変数）ならびにＩＰＦ転帰などの転帰の間の関係を調査するために実行される。よく知られている統計的方法を使用して、ハザード比（ＨＲ）が、計算され、共変数、たとえばＬＯＸＬ２レベルおよび被験体の転帰、エンドポイント、またはイベントの間の関係を示す。したがって、いくつかの態様において、提供される方法が、ＬＯＸＬ２レベルおよび他の共変数についての値に基づいて、個々の患者における、転帰、エンドポイント、および／またはイベント、たとえばＩＰＦ疾患転帰を予測するためにそのようなモデルを使用するステップを含む。一実施例において、モデルが、ＬＯＸＬ２レベル（たとえば「高い」ＬＯＸＬ２レベルの存在もしくは非存在）、６ＭＷＤ、および／またはＣＰＩを含む。
【０２５７】
そのようなモデリングにおいて使用されるＩＰＦ転帰、イベント、およびエンドポイントは、ＩＰＦ疾患増悪、肺機能低下、呼吸器系の入院、および死などの、ＩＰＦ臨床試験または処置レジメンにおいて典型的に特定される任意のエンドポイントなどの、疾患増悪または重症度を示すエンドポイントまたはイベントを含む。いくつかの態様において、疾患増悪が、以下のうちの１つとして定められる複合エンドポイントを示す：あらゆる原因由来の死亡率、呼吸器系の入院、または一酸化炭素の肺拡散能（ＤＬＣＯ）における５％の減少を伴う、努力肺活量（ＦＶＣ）における１０％の減少もしくはＦＶＣにおける５％の減少を伴うＤＬＣＯにおける１５％の減少として定義される肺機能の無条件の減少。肺機能エンドポイントは、肺機能検査を使用して決定されてもよい。いくつかの実施例において、少なくとも２つの試験が使用され、少なくとも４週間の間隔で、行われる。他の例示的なエンドポイントは、すべての原因の死亡率、移植なしの生存、および死である。転帰は、そのようなエンドポイントに到達する前に経過する時間として定めることができる。
【０２５８】
受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線は、システムの感度対特異度を評価するために使用されてもよい。曲線下面積（ＡＵＣ）は、よく知られている方法を使用して計算される。
【０２５９】
予測モデルのいくつかの実施例において、ＬＯＸＬ２が、たとえば、特定の閾値量、たとえば０．０５未満のＰ値に基づいて、たとえば、９５％信頼区間などの特定の信頼区間（ＣＩ）および信頼レベルで、疾患増悪などの、１つ以上の転帰またはイベントと有意に関連する。ハザード比は、高いＬＯＸＬ２レベルなどの、所定の共変数について、特定の転帰の危険性における倍数変化を決定するために使用されてもよい。いくつかの態様において、所定のＬＯＸＬ２レベルが、疾患増悪、入院、肺機能における減少、または本明細書において記載される他の転帰などの、特定の転帰の発生における、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、または７倍の危険性と関連する、たとえば、統計的に有意に関連する。危険性における倍数変化は、たとえば、ＬＯＸＬ２のレベルが上昇していない被験体または「低い」ＬＯＸＬ２レベルを有する被験体などの、正常な被験体に対する比較の点から表現することができる。一実施例において、ＬＯＸＬ２レベル、たとえば「高い」ＬＯＸＬ２レベルが、６ＭＷＤおよびＣＰＩなどの他の共変数がモデルに含まれる場合、転帰、たとえば疾患増悪と統計的に有意に関連する。
Ｋ．キットおよびアッセイデバイス
【０２６０】
本開示は、循環ＬＯＸＬ２についての対象のアッセイを実行するためなどの、検出、診断、予後判定、および予測方法を実行するためのキットおよびアッセイデバイスを提供する。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、対象のキットが、ａ）ＬＯＸＬ２に対して特異的な第１の抗体；およびｂ）ＬＯＸＬ２に対して特異的な第２の抗体を含む。いくつかの場合において、第１の抗体が、ポリクローナルＬＯＸＬ２−特異的抗体であり、第２の抗体が、モノクローナルＬＯＸＬ２−特異的抗体である。他の場合において、第１の抗体が、モノクローナルＬＯＸＬ２−特異的抗体であり、第２の抗体が、モノクローナルＬＯＸＬ２−特異的抗体である。他の場合において、第１の抗体が、ポリクローナルＬＯＸＬ２−特異的抗体であり、第２の抗体が、ポリクローナルＬＯＸＬ２−特異的抗体である。第１の抗体および／または第２の抗体が、いくつかの場合において、検出可能な標識を含む。いくつかの場合において、第１の抗体も第２の抗体も、検出可能な標識を含まない。
【０２６２】
第１の抗体が、いくつかの実施形態において、不溶性支持体に固定される。その代わりに、不溶性支持体は、キットと共に提供され、ユーザは、不溶性支持体上への第１の抗体の固定を行なう。したがって、いくつかの場合において、対象のキットが、ａ）ＬＯＸＬ２に対して特異的な第１の抗体；ｂ）ＬＯＸＬ２に対して特異的な第２の抗体；およびｃ）不溶性支持体を含む。不溶性支持体は、上記に記載されるように、様々な物質および様式のいずれかにおいて提供することができる。たとえば、いくつかの実例において、不溶性支持体が、プラスチックマルチウェルプレート、試験ストリップ、またはディップスティックである。
【０２６３】
上記に述べられるように、いくつかの実例において、第１の抗体も第２の抗体も、検出可能な標識を含まない。これらの場合において、検出可能な標識を含み、第２の抗体に結合する第３の抗体が、提供されてもよく、そのような抗体は、一般に、二次抗体と呼ばれる。検出可能な標識は、たとえば化学発光剤、微粒子標識、比色剤、エネルギー伝達剤、酵素、蛍光剤、または放射性同位体とすることができる。したがって、いくつかの実施形態において、対象のキットが、ａ）ＬＯＸＬ２に対して特異的な第１の抗体；ｂ）ＬＯＸＬ２に対して特異的な第２の抗体；およびｃ）第３の抗体を含み、第３の抗体が、検出可能な標識を含み、第２の抗体に結合する。いくつかの場合において、対象のキットが、ａ）ＬＯＸＬ２に対して特異的な第１の抗体；ｂ）ＬＯＸＬ２に対して特異的な第２の抗体；ｃ）第３の抗体であって、検出可能な標識を含み、第２の抗体に結合する第３の抗体；ならびにｄ）不溶性支持体を含む。不溶性支持体は、上記に記載されるように、様々な物質および様式のいずれかにおいて提供することができる。たとえば、いくつかの実例において、不溶性支持体が、プラスチックマルチウェルプレート、試験ストリップ、またはディップスティックである。
【０２６４】
対象のキットは、標準曲線を生成するのに使用するための精製ＬＯＸＬ２をさらに含むことができる。
【０２６５】
対象のキットは、１つ以上のさらなる構成成分、たとえばバッファー；プロテアーゼ阻害剤；検出可能な標識；洗浄試薬；ブロッキング剤などをさらに含むことができる。キットの様々な構成成分は、別々の容器に存在してもよいまたはある適合性の構成成分は、所望されるように、単一の容器中にあらかじめ組み合わせられていてもよい。
【０２６６】
上記の構成成分に加えて、対象のキットは、対象の方法を実施するためにキットの構成成分を使用するための指示を含むことができる。対象の方法を実施するための指示は、一般に、適した記録媒体に記録される。たとえば、指示は、紙またはプラスチックなどの基板に印刷されてもよい。そのため、指示は、添付文書としてキット中に、キットまたはその構成成分の容器の標識に（すなわち、パッケージまたはサブパッケージと関連する）、などに存在してもよい。他の実施形態において、指示は、適したコンピュータ読み取り可能な記憶媒体、たとえば、コンパクトディスクの読み出し専用メモリ（ＣＤ−ＲＯＭ）、デジタル多用途ディスク（ＤＶＤ）、ディスケットなどに存在する電子的記憶データファイルとして存在する。さらに他の実施形態において、実際の指示が、キットに存在しないが、たとえばインターネットを介して遠隔の供給源から指示を得るための手段が、提供される。この実施形態の例は、指示を調べることができるおよび／または指示をダウンロードすることができるウェブアドレスを含むキットである。指示と同様に、指示を得るためのこの手段は、適した基板に記録される。
【０２６７】
１．アッセイデバイス
本開示は、個体から得られる液体生物学的サンプルにおけるＬＯＸＬ２の検出において使用するためのアッセイデバイスをさらに提供する。デバイスは、軸流路を定めるマトリックスを含むことができる。
【０２６８】
マトリックスは、ｉ）液体サンプルを受け入れる流路の上流の端にサンプル受け入れゾーン；ｉｉ）流路内に、かつサンプル受け入れゾーンの下流に位置する１つ以上の試験ゾーンであって、１つ以上の試験ゾーンのそれぞれが、試験ゾーンのそれぞれにおいて固定されたＬＯＸＬ２に特異的な抗体を含み、固定された抗ＬＯＸＬ２／ＬＯＸＬ２複合体を形成する、１つ以上の試験ゾーン；およびｉｉｉ）流路内に、かつサンプル受け入れゾーンの下流に位置する１つ以上のコントロールゾーンであって、１つ以上のコントロールゾーンが、陽性および／または陰性コントロールを含むことができる、１つ以上のコントロールゾーンを含むことができる。試験ゾーンおよびコントロールゾーンは、任意のコントロールゾーンの上流に位置する試験ゾーンから始まる流路内に交互の様式で位置することができる。
【０２６９】
マトリックスは、ｉ）液体サンプルを受け入れる流路の上流の端にサンプル受け入れゾーン；ｉｉ）流路内に、かつサンプル受け入れゾーンの下流に位置する１つ以上の試験ゾーンであって、１つ以上の試験ゾーンのそれぞれが、ＬＯＸＬ２に特異的な抗体を含み、抗ＬＯＸＬ２／ＬＯＸＬ２複合体を形成する、１つ以上の試験ゾーン；およびｉｉｉ）流路内に、かつサンプル受け入れゾーンの下流に位置する１つ以上のコントロールゾーンであって、１つ以上のコントロールゾーンが、陽性および／または陰性コントロールを含むことができる、１つ以上のコントロールゾーンを含むことができる。試験ゾーンおよびコントロールゾーンは、任意のコントロールゾーンの上流に位置する試験ゾーンから始まる流路内に交互の様式で位置することができる。いくつかの実施形態において、ＬＯＸＬ２に対して特異的な抗体が、固定されず、抗ＬＯＸＬ２抗体が、サンプル中に存在する任意のＬＯＸＬ２に結合する場合、抗ＬＯＸＬ２抗体／ＬＯＸＬ２複合体が、移動可能である。たとえば、第１の試験ゾーンにおいて形成される抗ＬＯＸＬ２抗体／ＬＯＸＬ２複合体は、それが、固定された抗ＬＯＸＬ２抗体を含む第２の試験ゾーンに入るように、移動性を持たせることができ、抗ＬＯＸＬ２抗体／ＬＯＸＬ２複合体が、固定された抗ＬＯＸＬ２抗体に結合し、固定された抗ＬＯＸＬ２抗体／ＬＯＸＬ２複合体を形成する。
【０２７０】
そのようなアッセイデバイスを使用する際に、いくつかの実施形態において、ＬＯＸＬ２に対して特異的な標識抗体が、液体サンプルが、デバイスのサンプル受け入れゾーンに適用される前に、液体サンプルと最初に混合することができ、そのような混合が、標識抗体／ＬＯＸＬ２複合体をもたらす。これらの実施形態において、標識抗体／ＬＯＸＬ２複合体を含む液体サンプルが、アッセイデバイスのサンプル受け入れゾーンに適用される。液体サンプルが試験ゾーンに到達するまで、液体サンプルは、デバイスに沿って流れる。試験ゾーンに存在する抗体は、標識抗体／ＬＯＸＬ２複合体に存在するＬＯＸＬ２に結合し、その後、検出することができる。
【０２７１】
アッセイデバイスは、ＬＯＸＬ２に対して特異的な標識抗体を含む標識ゾーンをさらに含むことができ、標識抗体が、固定されたＬＯＸＬ２／抗ＬＯＸＬ２抗体複合体に存在するＬＯＸＬ２に結合することができ、標識ＬＯＸＬ２／抗ＬＯＸＬ２抗体複合体を形成し、標識抗体が、液体サンプルの存在下で移動可能である。そのようなアッセイデバイスを使用する際に、ＬＯＸＬ２を含み得る液体サンプルは、デバイスのサンプル受け入れゾーンに適用され、標識ゾーンに存在する抗ＬＯＸＬ２抗体は、ＬＯＸＬ２に結合し、標識抗体／ＬＯＸＬ２複合体を形成し、これは、標識抗体のように、移動可能であり、液体サンプルが試験ゾーンに到達するまで、標識抗体／ＬＯＸＬ２複合体は、デバイスに沿って（ａｌｏｎｅ  ｔｈｅ  ｄｅｖｉｃｅ）流れる。試験ゾーンに存在する抗ＬＯＸＬ２抗体は、標識抗体／ＬＯＸＬ２複合体に存在するＬＯＸＬ２に結合し、その後、検出することができる。
【０２７２】
その代わりに、アッセイデバイスは、抗ＬＯＸＬ２抗体に対して特異的な標識抗体を含む標識ゾーンを含むことができ、標識抗体が、試験ゾーン（複数可）において形成される任意の抗ＬＯＸＬ２抗体／ＬＯＸＬ２複合体に結合する。いくつかの場合において、標識抗体が、移動可能である。
【０２７３】
標識抗体は、化学発光剤、微粒子標識、比色剤、エネルギー伝達剤、酵素、蛍光剤、または放射性同位体などの標識を含むことができる。
【０２７４】
コントロールゾーンは、陽性コントロールゾーンおよび陰性コントロールゾーンを含む。
【０２７５】
マトリックスは、一般に、不溶性支持体であり、適した不溶性支持体が、ポリビニルジフルオリド（ＰＶＤＦ）、セルロース、ニトロセルロース、ナイロンなどを含むが、これらに限定されない。マトリックスは、可撓性とすることができる、または比較的非可撓性とすることができる。マトリックスは、支持体および必要に応じてカバーを含むハウジング内に位置し、ハウジングが、適用開口部および１つ以上の観察窓を含有する。アッセイデバイスは、様々な様式、たとえば試験ストリップ、ディップスティックなどのいずれかとすることができる。
【０２７６】
本発明の種々の態様は、以下の実施例によりさらに記載および例示され、その実施例はいずれも本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【０２７７】
以下の実施例は、本発明者らが本発明と見なすものの範囲を限定するように意図されず、それらは、下記の実験が、実行したすべてのまたはわずかな実験であるということを示すようにも意図されない。使用される数（たとえば量、温度など）に関して正確度を確実にするための努力がなされたが、いくらかの実験誤差および偏差については、説明されるはずである。別段示されない限り、一部は、重量による一部とし、分子量は、平均分子量とし、温度は、摂氏度とし、圧力は、大気圧またはその付近とする。標準的な略語、たとえば、ｂｐ、塩基対（複数可）；ｋｂ、キロベース（複数可）；ｐｌ、ピコリットル（複数可）；ｓまたはｓｅｃ、秒（複数可）；ｍｉｎ、分（複数可）；ｈまたはｈｒ、時間（複数可）；ａａ、アミノ酸（複数可）；ｋｂ、キロベース（複数可）；ｂｐ、塩基対（複数可）；ｎｔ、ヌクレオチド（複数可）；ｉ．ｍ．、筋肉内（筋肉内に）；ｉ．ｐ．、腹腔内（腹腔内に）；ｓ．ｃ．、皮下（皮下に）が、使用されてもよい。
（実施例１）
肝線維症のマウスモデルにおける抗ＬＯＸＬ２抗体の投与
Ａ．肝線維症の四塩化炭素マウスモデル
【０２７８】
ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおいて四塩化炭素（ＣＣｌ４）を使用して線維症を誘導した。マウス抗ＬＯＸＬ２抗体（ＡＢ００２３）を動物に３０ｍｇ／ｋｇの用量で週２回、３週間にわたって投与した。コントロールマウスは、ＣＣｌ４のみ（ビヒクル）またはニセ抗体（Ｍ６４）を受けた。図１に示されている通り、抗ＬＯＸＬ２抗体ＡＢ００２３を受けたマウスでは、コントロールマウスと比較して生存利益が示された。さらに、肝組織の免疫組織化学的検査により、抗ＬＯＸＬ２抗体を投与したマウスでは、架橋線維化の有意な低下（ビヒクルに対してｐ＝０．０１）（シリウスレッド染色による評価）ならびにＬＯＸＬ２およびアルファ平滑筋アクチンの減少（αＳＭＡ；星細胞活性化の低下が実証される）（ビヒクルに対してｐ＝０．００８）を示したことが実証された。Ｂａｒｒｙ−Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｖら  Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１０年；１６巻：１００９〜１７頁を参照されたい。
【０２７９】
同じ線維症モデルを使用して、マウスに３０ｍｇ／ｋｇのＢＡＰＮ（ＬＯＸ阻害剤）またはビヒクルを６週間にわたって投与した。８週間後、処置したマウスでは、ビヒクルで処置したマウスと比較してコラーゲン架橋および正味のコラーゲン沈着の低下が示された（データ示さず）。
Ｂ．線維症のＴＴＡマウスモデル
【０２８０】
異なるモデルでは、Ｃ５７Ｂ／６マウスにおいて、チオアセトアミド（ＴＡＡ）を週に３回、１２週間にわたって注射することによって肝線維症を誘導した。６週目に肝線維症が観察され、１２週間の研究期間を通して進行し続けた。ＬＯＸＬ２は正常な肝臓では検出されなかったが、肝線維症を示すマウスでは検出された。また、ＬＯＸＬ２のレベルは肝線維症が進行するにつれて上昇した。６週目から１２週目まで、マウスに週２回、抗ＬＯＸＬ２抗体ＡＢ００２３（３０ｍｇ／ｋｇ）、抗ＬＯＸ抗体Ｍ６４抗体（３０ｍｇ／ｋｇ）、ＢＡＰＮ（１００ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクルを投与した。
【０２８１】
処置の６週間後に、マウスを肝臓におけるコラーゲン含量および結合組織染色について検査した。Ｍ６４またはビヒクルで処置したマウスと比較して、ＡＢ００２３で処置したマウスでは、正味のコラーゲン減少の約２０％の低下（図３３Ａおよび図３３Ｂ）および架橋線維化の減弱（データ示さず）が示された。
【０２８２】
別の研究では、マウスを、ＴＡＡで６週間にわたって処置し、その後、６週目から１８週目まで、ＡＢ００２３（３０ｍｇ／ｋｇ）、Ｍ６４（３０ｍｇ／ｋｇ）、ＢＡＰＮ（１００ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクルで処置した。１０週目に、マウスは肝線維症からの回復を示す。また、ＡＢ００２３で処置したマウスは、ＢＡＰＮまたはビヒクルで処置したマウスと比較して早い回復を示した（図３３Ｃ）。ＡＢ００２３で処置したマウスでは、他のＬＯＸ阻害剤と比較して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて肝星細胞によるコラーゲンゲル収縮の用量依存的な方法での低下も示された（図３３Ｄ）。
（実施例２）
肝疾患を有するヒト被験体への抗ＬＯＸＬ２抗体の投与
【０２８３】
年齢が１８歳から６０歳の間であり、肝線維症を有し、Ｍｅｔａｖｉｒ線維症ステージが１から３の間であるヒト被験体の群に抗ＬＯＸＬ２抗体を投与した。被験体はそれぞれ、ＢＭＩが３６ｋｇ／ｍ２未満であり、非代償性肝疾患、肝疾患（種々の病因）の病歴がなく、クレアチニンレベルが２．０ｍｇ／ｄＬ未満であり、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）／アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）比が基準値上限（ＵＬＮ）の１０倍未満であり、全般的に健康状態が良好であった。処置時にウイルス性肝炎を有する被験体は排除した。全てのＭｅｔａｖｉｒ線維症スコアを同じ肝臓病理学者が評価した。
被験体１０人のコホート
【０２８４】
そのような被験体１０人の群には、男性９人と女性１人が含まれた。１０人のうち９人が慢性Ｃ型肝炎感染症を有し、そのうち４人がＨＩＶ共感染を有し、その他の人は非アルコール性脂肪性肝炎およびＨＩＶを有した。被験体１０人の平均年齢は５３歳（３６〜６０歳）であり、平均体重は８１．４ｋｇ（６４．５〜９８．９ｋｇ）であり、平均Ｍｅｔａｖｉｒ線維症ステージは２．１（ステージ１が３人、ステージ２が３人、ステージ３が４人）であった。
【０２８５】
抗ＬＯＸＬ２抗体（ＡＢ００２４、ＬＯＸＬ２に特異的に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体）を各被験体に、１０ｍｇ／ｋｇ（平均用量は注入当たり８０６．５ｍｇ（６３０〜９５３ｍｇ））の用量で静脈内注入により投与し、注入は１時間にわたり、４週間の期間にわたって２週間ごとに合計３回の注入を行った。その後、被験体を６週間にわたってモニタリングした。被験体は、スクリーニング時に肝生検を受け、１回目の注入の前および処置期間の最後に肝ＦＮＡＣを受けた。被験体１０人全員が、注入や投薬の中断をすることなく、早期終了することなく、および用量低下をすることなく、３回注入のレジメンを順調に完了した。
【０２８６】
死、重篤な有害事象（ＳＡＥ）、および投薬の中止に至る有害事象は報告されなかった。９人の被験体において報告された全部で２８の有害事象のうち、グレード３または４のものはなかった。最も頻繁に報告された有害事象は腹痛（５人の被験体、５０％；処置とは明らかに無関係、ＦＮＡ手順と関連する可能性がある）、疲労（２人の被験体、２０％）、筋骨格痛（２人の被験体、２０％）、および頭痛（２人の被験体それぞれ）であった。被験体１人につき以下のそれぞれを報告した：悪心、嘔吐、唾液腺肥大、胸痛、インフルエンザ様疾病、疼痛、唾液腺炎、体重増加、関節痛、感覚鈍麻、失神寸前状態（ｐｒｅｓｙｎｃｏｐｅ）、精巣上体嚢胞、精巣上体炎、咳、および皮疹。検査異常は認められなかった。
肝酵素、ＡＬＴ
【０２８７】
療法で肝酵素の悪化を経験した被験体はいなかった。薬物適用と関連するトランスアミナーゼ増加は観察されなかった。被験体１０人のうち６人で処置前に（ベースラインレベル）アミノトランスフェラーゼレベルの上昇（ＡＬＴ＞ＵＬＮ（上限（Ｕ／Ｌ）６３））が示された。これらの６人の被験体のうちの５人において、処置の終わりまでにＡＬＴの低下が示され、２回目の注入後に減退し、全員において、経過観察期間中にＡＬＴのベースラインレベルに向かうわずかな増加が示された（図２）。これらの被験体では処置後にＡＳＴ（４１Ｕ／Ｌ）レベルも同様に改善された（図３）。これらの被験体では、処置後に平均２２％のＡＬＴの低下が示された（図４）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、およびガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）の被験体１０人全員の平均値は処置に従って減少し、処置後にベースラインレベルに戻った（図５）。図６には、処置前ＡＳＴ／ＡＬＴレベルが上昇していた被験体における、ベースライン、処置の終了時、および経過観察期間の終了時の平均ＡＬＴレベルおよび平均ＡＳＴレベルが示されている。処置の終了時のＡＳＴ対ベースラインのＡＳＴについてｐ＝０．０２。
【０２８８】
したがって、この研究では、ウイルス性肝炎と関連する肝線維症を有する被験体において、最大９５３ｍｇ  ＩＶ（１０ｍｇ／ｋｇ）の用量で、隔週、４週間にわたって抗ＬＯＸＬ２抗体を投与することは、安全であり、忍容性が良好であった。処置前アミノトランスフェラーゼレベルが上昇していた被験体において、抗ＬＯＸＬ２抗体を投与することにより、トランスアミナーゼが有意に減少した。
ｓＬＯＸＬ２および炎症
【０２８９】
抗ＬＯＸＬ２処置により肝酵素が減少したことにより、ＬＯＸＬ２に関して、線維症におけるその役割に加えて、肝臓の炎症における機能的役割が示唆される。さらに、単変量解析においてＫｎｏｄｅｌｌ壊死性炎症性指数全体がＬＯＸＬ２と関連することが見いだされた（ｐ＝０．００１）。Ｋｎｏｄｅｌｌ壊死性炎症性指数の個々の構成成分の中で、Ｋｎｏｄｅｌｌ炎症スコアと壊死スコアはどちらも血清ＬＯＸＬ２レベルと有意に相関した（単変量解析において、どちらについてもｐ＝０．０２）。表２には、この研究における被験体についての多変量回帰分析の結果が示されている。
【表２】
2018083845.tif 000008
追加的な被験体
【０２９０】
ＡＢ００２４を３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４）、１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４）、または２０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４）で２週間ごとに３回注入した、またはＡＢ００２４を１２５ｍｇ（ｎ＝１５）または２００ｍｇ（ｎ＝１５）で２週間ごとに７回注入したＩＰＦ被験体において同様の安全性の結果が観察された。別の研究では、健康な被験体にＡＢ００２４を１２５ｍｇ／ｋｇで皮下投与（ｎ＝１８）またはＩＶ投与（ｎ＝１８）によって単回投薬した。重症の有害作用は検出されなかった。別の研究では、被験体に、抗ＬＯＸ２抗体（たとえば、ＡＢ００２４）を７００ｍｇ、ＩＶで隔週、６か月にわたって投与する。別の研究では、肝線維症の被験体にＡＢ００２４を２００ｍｇもしくは７００ｍｇ、ＩＶ、または７５ｍｇもしくは１２５ｍｇ、皮下（ＳＣ）の固定用量で投与する。
（実施例３）
ヒト血清または血漿サンプル中のＬＯＸＬ２を検出するためのイムノアッセイ
材料および方法
抗体
【０２９１】
ウサギポリクローナル抗体（「ウサギＡ」）は、組換え精製完全長ＬＯＸＬ２タンパク質に対して産生される。この抗体は、ＬＯＸＬ２のすべてのドメインにおける複数のエピトープを認識する。マウスモノクローナル抗体、ＡＢ００３０は、ＬＯＸＬ２の触媒ドメインに結合し、完全長ＬＯＸＬ２タンパク質および成熟ＬＯＸＬ２タンパク質（ＳＲＣＲ２およびＳＲＣＲ３のドメインの間で切断される）の両方を認識する。
ＭＳＤプラットフォームでのＬＯＸＬ２イムノアッセイ
【０２９２】
ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）（ｃａｔ  ＃Ｌ１５ＸＡ−３）からの標準的なシングルスポット非コーティング電極プレートを、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で調合した３μｇ／ｍｌウサギ抗ヒトＬＯＸＬ２ポリクローナル抗体の３０μｌ容量の溶液により、４℃で一晩、コーティングした。コーティングの後に、プレートのウェルは、ＰＢＳ中５％（ｗ／ｖ）Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ（ＭＳＤ  ｃａｔ＃Ｒ９３ＡＡ−１）の溶液の添加によってブロッキングした。ブロッキングステップの後に、プレートは、自動化プレート洗浄機を使用して、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０非イオン性界面活性剤を含有するＰＢＳで３回洗浄した。試験されるべきヒトサンプル（血清または血漿）は、それらをＰＢＳで１：４（血清１の割合にＰＢＳ３の割合）に希釈することによって別々に調製した。その後、サンプルを、プレートのそれぞれのウェルに添加した。サンプルは、室温で、２〜３時間、回転振盪しながら（３００〜６００ｒｐｍ）インキュベートした。サンプル結合の後に、プレートは、自動化プレート洗浄機を使用して、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０界面活性剤を含有するＰＢＳで３回、再度洗浄した。
【０２９３】
ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ中１μｇ／ｍｌ  ＡＢ００３０（一次抗体）の溶液を、それぞれのウェルに添加し、プレートは、その後、室温で、１時間、回転振盪しながら（３００〜６００ｒｐｍ）インキュベートした。ＡＢ００３０結合の後に、プレートは、自動化プレート洗浄機を使用して、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０界面活性剤を含有するＰＢＳで３回、再度洗浄した。
【０２９４】
二次抗体は、ＳｕｌｆｏＴａｇ色素（ＭＳＤ  ｃａｔ＃Ｒ３２ＡＣ−５）にコンジュゲートされたヤギ抗マウス−ＩｇＧ分子であった。ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ中１μｇ／ｍｌ二次抗体の溶液を、それぞれのウェルに添加し、プレートは、室温で、１時間、回転振盪しながら（３００〜６００ｒｐｍ）インキュベートした。二次抗体結合の後に、プレートは、自動化プレート洗浄機を使用して、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０界面活性剤を含有するＰＢＳで３回洗浄した。
【０２９５】
界面活性剤ありの１×Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｔ（ＭＳＤ  ｃａｔ＃Ｒ９２ＴＣ−２）を、それぞれのウェルに添加し、その後、ＭＳＤ  ＳｅｃｔｏｒＩｍａｇｅｒ  ２４００機器でプレートを即時、測定した。
【０２９６】
正常な健康なドナーからプールしたヒト血清または血漿に既知濃度で添加した精製組換えヒトＬＯＸＬ２タンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）から構成される同じアッセイプレートについてのキャリブレータ曲線に対する比較によって、試験ヒトサンプルに、ＬＯＸＬ２の相対的な定量的値を与えた。キャリブレータ曲線フィッティングおよび未知サンプル補間（ｉｎｔｅｒｐｏｌａｔｉｏｎ）は、標準的な技術を使用して実行した。
標準的な様式を使用するＬＯＸＬ２イムノアッセイ
【０２９７】
Ｃｏｓｔａｒ  ３９２２高結合マルチウェルプレートを使用した。ウサギポリクローナル抗体（Ａｂ）（ウサギ「Ａ」）は、ＣＢ２コーティングバッファー（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＣＢ２（６２４８））で０．６２５μｇ／ｍｌまで希釈した。希釈ポリクローナルＡｂを、５０μｌ／ウェルの容量でプレートのウェルに添加し、プレートを４℃で一晩保った。ポリクローナル抗体によりウェルをコーティングした後に、ウェルは、室温（ＲＴ）で、１〜３時間、２００μｌ／ウェルのＢＢ１ブロッキング溶液（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  製品＃６４０）によりブロッキングした。ブロッキングの後に、プレートは、ウェル当たり２００μｌのＰＢＳ−Ｔ（０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を含有するＰＢＳ）を使用して、３回洗浄した。
【０２９８】
２５μｌ  ＨｉＳｐｅｃ希釈剤（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ  ＢＵＦ０４９Ｂ）を、それぞれのウェルに添加した。等容量の試験血清を、その後、それぞれのウェルに添加し、プレートを２時間、室温で保った。血清サンプルを結合させた後に、プレートを３回洗浄した。
【０２９９】
一次抗体（ＡＢ００３０）を、ＰＢＳ−Ｔ＋０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で５μｇ／ｍｌまで希釈し、５０μｌの希釈した一次抗体を、それぞれのウェルに添加した。プレートは、１時間、室温で保ち、その後、ＰＢＳ−Ｔにより３回洗浄した。二次抗体（ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合体化ヤギ抗マウス抗体、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、０．８ｍｇ／ｍｌ）を、ＰＢＳ−Ｔ＋０．５％
ＢＳＡで１：１０，０００に希釈した。５０μｌの希釈した二次抗体を、それぞれのウェルに添加した。プレートは、１時間、室温で保ち、その後、ＰＢＳ−Ｔにより３回洗浄した。
（実施例４）
ヒト血清マトリックスにおけるＬＯＸＬ２イムノアッセイについてのキャリブレータ標準物質
【０３００】
実施例３において記載されるＬＯＸＬ２イムノアッセイ（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙプラットフォームで展開したサンドイッチイムノアッセイ）を使用すると、ＬＯＸＬ２は、健康な個体由来の血清において検出されなかった。キャリブレータ曲線を生成するために、精製した組換え完全長ＬＯＸＬ２タンパク質を、プールした正常ヒト血清に添加し、その後、血清で段階希釈を行なった。
結果
【０３０１】
結果を図７に示す。データポイントはそれぞれ、３つの反復ウェルの平均値を示し、４つの独立したプレートについての曲線を示す。
【０３０２】
表３は、ヒト血清マトリックスにおけるキャリブレータ標準物質の特徴を示す。表３において、検出の下限値（ＬＬＯＤ）は、ブランクウェルの平均値＋２．５＊標準偏差（ｓｔｄｅｖ）であり（生の値、外挿）、定量の下限値（ＬＬＯＱ）は、生の測定値に対して相対誤差＜３０％および変動係数＜３０％である、最低濃度のキャリブレータ標準物質（ｔｈｅ  ｌｏｗｅｓｔ  ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ  ｓｔａｎｄａｒｄ）である。アッセイ内およびアッセイ間の精度は、実試料（ｉｎｃｕｒｒｅｄ  ｓａｍｐｌｅ）を使用して決定した。
【表３】
2018083845.tif 000009
（実施例５）
特発性肺線維症（ＩＰＦ）の患者における血清ＬＯＸＬ２（ｓＬＯＸＬ２）レベル
Ａ：ＩＰＦ患者におけるｓＬＯＸＬ２
【０３０３】
特発性肺線維症（ＩＰＦ）と診断された患者１５人由来の血清サンプルをＬＯＸＬ２について試験した。図８に結果が示されている。個々の患者の識別番号が示されている。試験された患者１５人のうち１０人が陽性であり、他の５人は、検出限界未満であり、「検出されず」と報告されている。年齢を合わせた正常な被験体も試験し、全員が血清ＬＯＸＬ２について陰性（「検出されず」；検出限界未満）であった。
Ｂ：ＩＰＦ患者におけるＬＯＸＬ２ベースラインレベル
１．  ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ患者
【０３０４】
血清サンプルは、ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ治験に参加している被験体から収集した。ランダム化、二重盲検、プラセボコントロール、イベントドリブン試験（ｅｖｅｎｔ−ｄｒｉｖｅｎ  ｔｒｉａｌ）。被験体は、ＥＴＡ受容体の選択的なアンタゴニストであるアンブリセンタンまたはプラセボを受けるように２：１の比にランダム化した。この研究は、あまりにも早く終結し、６６０人の被験体が登録された。
【０３０５】
ＩＰＦ重症度および機能的ステータスを反映するベースライン変数を収集した。ベースライン変数は、予測努力肺活量（ＦＶＣ）のパーセント、予測一酸化炭素拡散能（ＤＬＣＯ）のパーセント、６分間の歩行距離（６ＭＷＤ）、平均肺動脈圧（ｍＰＡＰ）、最低安静時酸素飽和度（ＳｐＯ２）、複合生理学指数（ＣＰＩ）、セントジョージ呼吸器質問票スコア（ＳＧＲＱ）、および遷移呼吸困難指数（ＴＤＩ）スコアを含んだ。ｍＰＡＰは、右心カテーテル法を介して得、これは、ベースラインにあるすべての研究被験体について必要とされた。ＣＰＩは、患者の胸のコンピュータ断層撮影スキャンで認められた線維症の程度を評価するための、ＦＶＣ、努力呼気一秒量（ＦＥＶ１）、およびＤＬＣＯを組み込む検証された多次元のモデルであった。プライマリーエンドポイントは、ＩＰＦ疾患増悪までの時間とし、複合エンドポイントは、以下のうちの１つとして定義した：あらゆる原因由来の死亡率、呼吸器系の入院、または一酸化炭素の拡散能（ＤＬＣＯ）における５％の減少を伴う、努力肺活量（ＦＶＣ）における１０％の減少もしくはＦＶＣにおける５％の減少を伴うＤＬＣＯにおける１５％の減少として定義される、肺機能の無条件の減少。肺機能エンドポイントは、少なくとも４週間の間隔で行った２つの肺機能検査によって確認した。
【０３０６】
ＬＯＸＬ２のベースラインレベルは、実施例３において記載される抗ＬＯＸＬ２抗体を使用し、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙプラットフォームで展開したイムノアッセイを使用して、三連で定量化した。
【０３０７】
標準的なヒストグラムは、非変換およびｌｏｇ１０Ｘ変換ＬＯＸＬ２ベースラインレベルを評価するために使用した。Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定は、ベースライン変数の分布を比較するために使用した。Ｐｅａｒｓｏｎの相関係数は、ＬＯＸＬ２ベースラインレベルおよびベースライン変数の間の関係を検査するために使用した。ステップワイズＣｏｘ比例ハザードモデリングは、ＬＯＸＬ２ベースラインレベルおよびＩＰＦ転帰の間の関係を検査するために使用した。受診者動作曲線は、曲線下面積を推定するために使用した。
結果
【０３０８】
処置を意図したコホートにおける６９人の被験体由来の血清サンプルが、分析に利用可能であった。血清サンプルが利用可能でなかったＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦからの４２３人の被験体と比較して、ＩＰＦ重症度または機能的ステータスのベースライン量において統計的有意差はなかった（表４）。しかしながら、６９人の被験体の中で、アンブリセンタンおよびプラセボ処置群と比較すると、ＩＰＦ重症度および機能的ステータスのベースライン量において統計的有意差があった（表５）。アンブリセンタン群における被験体は、より低いベースラインＤＬＣＯ（ｐ＝０．０３５）、より低いベースライン６ＭＷＤ（ｐ＝０．００４）、より高いベースラインｍＰＡＰ（ｐ＝０．０１６）、より高いベースラインＣＰＩ（ｐ＝０．０５）、およびより高いベースラインＳＧＲＱ（ｐ＝０．０１１）を有した。平均ベースラインＬＯＸＬ２レベルは、アンブリセンタン被験体についてより高かった（ｐ＝０．０２６）。
【０３０９】
ＬＯＸＬ２ベースラインレベルの分布の分析は、約８８ｐｇ／ｍｌ未満のＬＯＸＬ２レベルを有する８人の被験体、約８８〜約４４０ｐｇ／ｍＬのＬＯＸＬ２レベルを有する３４人の被験体、および約４４０ｐｇ／ｍｌを超えるＬＯＸＬ２レベルを有する２８人の被験体を示した。ＬＯＸＬ２レベル中央値は、約１４７ｐｇ／ｍｌ〜約７７０ｐｇ／ｍｌの四分位数間範囲を有する約３２５ｐｇ／ｍｌであり、最小値が約１８ｐｇ／ｍｌであり、最大値が約５，４００ｐｇ／ｍｌであった。
【０３１０】
Ｐｅａｒｓｏｎの相関係数に基づいて、相関は、ＬＯＸＬ２ベースラインレベルとＩＰＦ重症度および機能的ステータスのこれらのベースライン量との間で弱かった。図９は、ＬＯＸＬ２ベースラインレベルとＦＶＣ、ＤＬＣＯ、６ＭＷＤ、ＣＰＩ、ＳＧＲＱ、およびＴＤＩとの間の関係を示す散布図マトリックスを示す。ＬＯＸＬ２とベースライン重症度量との間の相関は、パネル（ａ）および（ｂ）の上部の列の黒いボックス内で強調した。ＬＯＸＬ２と個々のベースライン重症度量との間の相関係数は、以下のとおりであった：−０．２１（ＦＣＶ）、−０．１１（ＤＬＣＯ）、０．０３（６ＭＷＤ）、０．１０（ｍＰＡＰ）、−０．０７（ＳｐＯ２）、０．１４（ＣＰＩ）、０．０６（ＳＧＲＱ）、および−０．０５（ＴＤＩ）。ＬＯＸＬ２ベースラインレベルのＬｏｇ１０Ｘ変換により分布が正規化されたが、ＬＯＸＬ２とＩＰＦ重症度および機能的ステータスのベースライン量との間の相関は、弱いままであった（図９ｂ）。
【０３１１】
大多数のベースラインＬＯＸＬ２レベルが約８００ｐｇ／ｍｌ未満であったことを考慮して、ＬＯＸＬ２ベースラインレベルを、残りの分析について、≦８００ｐｇ／ｍｌ（「低い」）対＞８００ｐｇ／ｍｌ（「高い」）として二種類に分けた。約４４０ｐｇ／ｍｌを超えるＬＯＸＬ２ベースラインレベルを有する２８人の被験体のうち、１２人が、約４４０〜８００ｐｇ／ｍＬの低いＬＯＸＬ２ベースラインレベルを有し、低い群に群分けされ、１６人が、８００ｐｇ／ｍＬを超えるＬＯＸＬ２ベースラインレベルを有し、高い群に群分けされた。
【０３１２】
「高い」および「低い」ＬＯＸＬ２ベースラインレベルの群の間の疾患増悪の比較を図１０に示す。プラセボ群において「高い」ＬＯＸＬ２ベースライン系（ｂａｓｅｌｉｎｅ
ｌｉｎｅ）を有する患者が２人しかいなかったので（どちらもいかなるイベントも有しなかった）、図１０は、アンブリセンタン群における「低い」および「高い」ＬＯＸＬ２ベースラインレベルのみを比較する。結果は、高いＬＯＸＬ２ベースラインレベルが、より多くの疾患増悪イベントと関連すること（図１０ａ）、ならびに、高いＬＯＸＬ２ベースラインレベルが、より多くの肺機能低下イベントと（図１０ｂ）、より多くの呼吸器系の入院と（図１０ｃ）、およびより多くの死と（図１０ｄ）関連することを示した。
【０３１３】
さらに、表６において示されるように、Ｃｏｘ比例ハザードモデリングは、高いＬＯＸＬ２ベースラインレベルの存在が、疾患増悪についての危険性における５倍の増加（ハザード比［ＨＲ］４．９５、９５％信頼区間［ＣＩ］１．５２〜１６．１８、ｐ＝０．００８）、肺機能低下についての危険性における７倍の増加（ＨＲ  ７．３６、９５％ＣＩ  １．１６＝４６．７４、ｐ＝０．０３４）、および呼吸器系の入院についての危険性における５倍の増加（ＨＲ  ４．８５、９５％ＣＩ  １．０９〜２１．６８、ｐ＝０．０３９）と関連したことを示した。これらの統計モデルはすべて、処置割り付けならびにベースライン６ＭＷＤおよびＣＰＩスコアについて調整した（ａｄｊｕｓｔｅｄ）。高いベースラインＬＯＸＬ２レベルは、死についての危険性における有意な増加と有意に関連しなかった（ＨＲ  １．５９、９５％ＣＩ  ０．２４〜１０．５３、ｐ＝０．６３３）。
【０３１４】
サンプルはまた、ＭＭＰ７、ＩＣＡＭ１、ＩＬ８、ＶＣＡＭ１、およびＳ１００Ａ１２のレベルについても分析した。これらのタンパク質のどれも、処置転帰と有意に関連しなかった。結果は、高いベースラインＬＯＸＬ２レベルが、死ではなくＩＰＦ疾患増悪についての危険性における５〜７倍の増加と関連したことを示した。
【表４】
2018083845.tif 000010
【表５】
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【表６】
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２．ＧＡＰコホートＩＰＦ患者
【０３１５】
血清ＬＯＸＬ２レベルは、第２臨床ＩＰＦ前向き追跡調査研究における被験体において評価し、これにより、他の肺の病気についての病歴を有しなかった１１１人のＩＰＦ被験体（ＧＡＰコホートと見なされる）における疾患増悪を評価した。ＧＡＰコホート被験体はすべて、ＡＴＳ／ＥＲＳガイドラインに従ってＩＰＦと診断され、５５歳を超える、明確な病因を伴わない患者において、外科的な肺生検または胸膜下の蜂巣変化、牽引性気管支拡張症（ｔｒａｃｔｉｏｎ  ｂｒｏｎｃｈｉｅｃｔａｓｉｓ）、および最小肺胞充満（ｍｉｎｉｍａｌ  ａｌｖｅｏｌａｒ  ｆｉｌｌｉｎｇ）のＸ線撮影所見によって確認された。肺機能試験は、予測された４０〜７０％の努力肺活量を明らかにした。被験体は、臨床施設の継続している医療および追跡調査をすべて受けることができた。
【０３１６】
最初の訪問時に、参加者はそれぞれ、採血、肺機能試験、６分間の歩行試験（６ＭＷＴ）、心エコー図、およびＣＴスキャンならびに患者がどのように感じているかを測定するようにデザインされたいくつかの質問表を受けた。３〜８か月の間隔での追跡調査訪問時に、血液サンプルを収集し、ＰＦＴ、質問表、および６ＭＷＴを繰り返した。ＦＶＣ、ＦＥＶ１、およびＤＬＣＯの中央値は、それぞれ、６５．７±１７．５％、７６．８±１８．７％、および４７．３±１７．９％の予測値であった。
【０３１７】
ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ被験体について上記に記載されるように、ＬＯＸＬ２のベースライン血清レベルを定量化した。標準的なヒストグラムは、自然対数の形式でＬＯＸＬ２ベースライン血清レベルを評価するために使用した。１８０ｐｇ／ｍｌのＬＬＯＤおよび４４０ｐｇ／ｍｌのＬＬＯＱが、実験的に決定された。
【０３１８】
ＧＡＰコホートについてのＬＯＸＬ２レベルは、回帰法を使用して、自然対数変換した後にＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦデータに対して標準化した。結果を図１１に示す。
【０３１９】
すべての原因による死亡までの時間を評価し、肺移植は、死イベントと見なした（ほとんどの肺移植患者は死亡した）。分類木と回帰木（ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｔｒｅｅｓ）（ＣＡＲＴ）方法を、ベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルの二分化のための最適な閾値またはカットオフポイントを選択するための、不偏のアプローチとして適用した。ＧＡＰコホートにおいて、Ｌｏｇ（ＬＯＸＬ２）が唯一の変数であった場合、ＣＡＲＴ分析は、カットオフポイントとして４４０ｐｇ／ｍｌ（自然対数目盛で６．０８）を選択した。
【０３２０】
表７は、ＧＡＰコホートにおける被験体についてのベースラインおよび人口統計学的特徴を示し、表７は、このコホートにおける様々なベースライン値の間の相関を示す。
【表７】
2018083845.tif 000013
【表８】
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【０３２１】
二種類に分けられたＬＯＸＬ２レベルとすべての原因による死亡率との間の相関は、ベースラインの６（６）か月、１２（１２）か月、１８（１８）か月、および２４（２４）か月後に、Ｃｏｘ比例ハザードモデリングおよびＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存プロットを使用して評価した。ベースラインＬＯＸＬ２レベルと入院および肺機能低下との間の相関は、データが入手可能でなかったので、評価されなかった。
【０３２２】
ベースラインＬＯＸＬ２レベルの分布の分析は、ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦコホートについて観察されたものと同様に、より低い領域（ｔｈｅ  ｌｏｗｅｒ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ）に向かって非対称の分布を示した。ベースラインＬＯＸＬ２レベル中央値は、７１６．５ｐｇ／ｍＬ（四分位数間範囲３５８．３ｐｇ／ｍｌ、１４４６．６ｐｇ／ｍｌ）であった。相関は、ＬＯＸＬ２と、ベースラインの人口統計およびＩＰＦ重症度についてのベースラインの臨床指標との間で弱かった（相関係数は、年齢について−０．０７、ＦＶＣ  −０．０３、ＤＬＣＯ  −０．２８）。疾患重症度のさらなる臨床指標は、さらなる分析に入手可能ではなかった。
【０３２３】
結果は、閾値４４０ｐｇ／ｍｌのベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルが、すべての原因による死亡率についての危険性と相関していたことを示した。血清における４４０ｐｇ／ｍｌよりも高いベースラインＬＯＸＬ２レベルの存在は、ベースラインの１２、１８、および２４か月後のより多くの死と関連した（図１２ＡおよびＢ）。
【０３２４】
多変量Ｃｏｘ比例ハザードモデリング（共変数は年齢および性別を含んだ）は、４４０ｐｇ／ｍｌよりも高いベースラインＬＯＸＬ２レベルの存在が、ベースラインの１２、１８、および２４か月後の死についての危険性における２．３倍の増加と関連することを示唆した（表９および表１０を参照されたい）。
【表９】
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【表１０】
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【０３２５】
被験体のサブセットについて、さらなる血清サンプルを前向きに収集した。研究の期間にわたって、２（２）つのサンプルを６０人の被験体から収集し、３（３）つのサンプルを４２人の被験体から収集し、４（４）つのサンプルを３１人の被験体から収集し、５（５）つのサンプルを１７人の被験体から収集し、６（６）つのサンプルを１２人の被験体から収集し、７（７）つのサンプルを７（７）人の被験体から収集し、８（８）つのサンプルを２（２）人の被験体から収集した。サンプルのどれも、急性増悪と関連して収集されなかった。
【０３２６】
血清ＬＯＸＬ２レベルとすべての原因による死亡率との間の関係を評価するために、時間依存性の連続変数としてサンプルのそれぞれにおけるＬＯＸＬ２レベルを組み込む多変量コックス比例ハザードモデリング（年齢および性別を含む共変数あり）を使用した。経時的に測定した血清ＬＯＸＬ２レベルは、死亡率についての危険性と関連した（ｐ＝０．００３）。ＧＡＰコホートにおいて、本研究の間の任意の時間に採取した血清ＬＯＸＬ２レベルにおけるそれぞれの２．７倍の増加について、死亡率についての危険性は、１．６３倍、増加した（９５％信頼区間１．１９〜２．２５）。
【０３２７】
表１１は、ベースライン後の様々な時間での血清ＬＯＸＬ２レベルによる多変量解析の結果を示す。
【表１１】
2018083845.tif 000017
【０３２８】
ＧＡＰコホートの結果は、上記に記載されるＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ研究のものに類似していた。両方の研究は、閾値レベルよりも高いベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルがＩＰＦ患者において負の転帰の危険性の増加と関連することを示した。
Ｃ：ＩＰＦ患者における血清ＬＯＸＬ２レベル
【０３２９】
ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ治験（上記）に参加した被験体６７人およびＧＡＰコホート（上記）の被験体１０４人からの血清および臨床データを解析した。血清ＬＯＸＬ２（ｓＬＯＸＬ２）レベルを実施例３に記載の通りＬＯＸＬ２  ＥＬＩＳＡによって定量化した。肺機能（ＬＦ）の低下（ＦＶＣの１０％の減少およびＤＬＣＯの５％の減少またはＤＬＣＯの１５％の減少およびＦＶＣの５％の減少）、呼吸器系の入院（ＲＨ）ならびに死亡率）を含めた疾患の増悪（ＤＰ）が、ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ被験体についての主要エンドポイントとしての機能を果たした。呼吸器系の入院（ＲＨ）を伴わない疾患の増悪（ＤＰ）をＧＡＰコホートについての主要エンドポイントとして使用した。各研究において、分類木と回帰木（ＣＡＲＴ）方法を使用して、ｓＬＯＸＬ２レベルの二分化のための最適な閾値を選択した。
【０３３０】
ＧＡＰ被験体では、この研究で評価したＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ被験体と比較して高いｓＬＯＸＬ２レベルが測定された（それぞれ、中央値３２４ｐｇ／ｍＬ（四分位数間範囲［ＩＱＲ］１４７、７７０）および７１６ｐｇ／ｍＬ（ＩＱＲ３５８、１４４７））。どちらのコホートにおいても、ｓＬＯＸＬ２はベースラインのＦＶＣおよびＤＬＣＯとほんの弱く相関したが（ｒ範囲−０．２５〜０．０５）、ｓＬＯＸＬ２レベルはＩＰＦ転帰と有意に関連した。ｓＬＯＸＬ２レベルの二分化のためのＣＡＲＴにより決定された閾値は、ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦ被験体については８００ｐｇ／ｍＬであり、ＧＡＰ被験体については７００ｐｇ／ｍＬであった。
【０３３１】
ＡＲＴＥＭＩＳ−ＩＰＦでは、ｓＬＯＸＬ２が高いこと（＞８００ｐｇ／ｍＬ）はＤＰの危険性がより高いことと関連した（ＨＲ５．４、９５％信頼区間［ＣＩ］１．７〜１７．７、ｐ＝０．００５）。図１３Ａを参照されたい。この効果は、主に、肺機能低下（ＨＲ７．６、９５％ＣＩ  １．２〜４８．３、ｐ＝０．０３１）およびＲＨ（ＨＲ５．４、９５％ＣＩ  １．２〜２４．０、ｐ＝０．０２９）によって駆動され、死亡の危険性がより高い傾向があった（ＨＲ１．９、９５％ＣＩ  ０．３〜１２．４、ｐ＝０．５１７）。
【０３３２】
ベースラインのスパイロメトリーデータを有するＧＡＰ患者（ｎ＝７０）の中で、ｓＬＯＸＬ２レベルが高いこと（＞７００ｐｇ／ｍｌ）は、登録の２４か月後のＤＰイベントがより多いことと関連した（ＨＲ１．８、９５％ＣＩ  １．０〜３．１、ｐ＝０．０４５）。全てのＧＡＰ患者を含めた場合、ｓＬＯＸＬ２レベルが高いことは、登録の２４か月後の死亡率の危険性がより高いことと関連した（ＨＲ２．２、９５％ＣＩ  １．１〜４．２、ｐ＝０．０１９）。図１３Ｂを参照されたい。これらの結果により、血清ＬＯＸＬ２レベルをＩＰＦ疾患転帰についての予後判定バイオマーカーとして使用することができることが実証される。
（実施例６）
慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）の患者における血清ＬＯＸＬ２レベル
Ａ．ＣＨＢ被験体におけるｓＬＯＸＬ２レベル
【０３３３】
血清ＬＯＸＬ２レベルは、３００ｍｇテノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＴＤＦ）による処置の前におよび処置の２４０週間後の両方で、慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）および肝線維症を有する被験体において評価した。肝生検は、ＴＤＦによる処置の前におよび処置の２４０週間後に、ＣＨＢを有する３４８人のヒト被験体から採取した。生検は、線維症の評価のためにＩｓｈａｋスケールを使用して病理学者らによってスコア化した。本研究において、被験体の９６．３％が、肝線維症における改善を示したまたは進行なしを示した。生検で証明される硬変を有する、本研究を始めた９６人の被験体のうち、７４％が、処置の２４０週間後に硬変の後退を有した。
【０３３４】
血清ＬＯＸＬ２レベルを、線維症スコアにおける改善を示したいく人かの被験体を含む、３４８人の被験体のうち８１人について、ベースラインの時点および２４０週目にＥＬＩＳＡによって遡及的に評価した。処置後の２４０週目に、これらの８１人の被験体のうちの４２人は、硬変後退を有し、１６人は、持続性の硬変を有し、２人は、処置の経過にわたって硬変に進行し、１８人は、線維症における変化を伴わない非硬変被験体であり、３人は、Ｉｓｈａｋによって測定されるように、線維症における少なくとも２ポイントの低下を伴う非硬変被験体であった。
【０３３５】
ベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルは、８１人のＣＨＢ被験体のうちの９１％においておよび硬変被験体の９７％において上昇した。下記に示されるように、硬変を有する患者（Ｉｓｈａｋスコア５または６）は、それほど重度ではない肝線維症を有する患者と比較して、ベースラインにおけるＬＯＸＬ２血清レベル中央値が上昇していた。この観察は、慢性Ｃ型肝炎感染症を有する患者において観察されたＬＯＸＬ２血清レベルに類似している。さらに、組織学研究は、ＬＯＸＬ２タンパク質が活発な線維形成の部位で集中していることを示した（データ示さず）。これらの結果は、硬変を有する患者がなお肝臓における活発な線維形成を受けていることを示唆する。さらに、２４０週間の処置の経過にわたって、ベースライン硬変を有する６０人の患者の７２％は、後退または彼らのＩｓｈａｋ線維症スコアの改善を示した。さらに、これらの患者は、ベースラインと比較して、２４０週目に、より低い血清ＬＯＸＬ２レベル中央値を有した。結果は、全体的な線維症および線維形成の両方が抗ウイルス処置によって低下したことを示唆する。
【０３３６】
図１４Ａは、血清ＬＯＸＬ２レベル（ｐｇ／ｍＬ）が線維症スコアと相関したことを示し、図１４Ｂおよび１４Ｃは、血清ベースラインＬＯＸＬ２レベル（ｐｇ／ｍＬ）が、ベースラインＩｓｈａｋ線維症スコアと相関したことを示す。処置後の２４０週間の時点に、血清ＬＯＸＬ２レベル平均値は低下しており、Ｉｓｈａｋ線維症スコアともはや相関していなかった。表１２もまた参照されたい。
【表１２】
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【０３３７】
図１５において示されるように、１〜３のベースラインＩｓｈａｋステージを有する被験体はすべて、１５００ｐｇ／ｍｌ未満の血清ＬＯＸＬ２レベルを有し、４〜６のベースラインＩｓｈａｋステージを有する被験体の４９％は、１５００ｐｇ／ｍｌを超える血清ＬＯＸＬ２レベルを有した。
【０３３８】
８１人の被験体のうちの７９％は、血清ＬＯＸＬ２レベルにおける低下を経験した。被験体の１１％（それぞれ定量限界未満のベースラインレベルを有する）は、ＬＯＸＬ２レベルにおける変化を有しなかった。
【０３３９】
図１６は、以下の群における個々の被験体についてのベースラインおよび２４０週目の血清ＬＯＸＬ２レベル（ｐｇ／ｍＬ）を示す：２４０週目に持続性の硬変を有する被験体（ｎ＝１６、図１６Ａ）；２４０週目までに硬変の逆転を有する被験体（ｎ＝４２、図１６Ｂ）；週間２４０週目までに線維症性のステージ（Ｉｓｈａｋ）における変化を経験しなかった非硬変被験体（ｎ＝１８、図１６Ｃ）；本研究の過程にわたって硬変までの進行を経験した被験体（図１６Ｄ）；および２４０週目までに線維症における２ステージ以上の低下を有する非硬変被験体（図１６Ｅ）。
【０３４０】
表１３は、２４０週目に持続性の硬変を有する被験体、２４０週目に硬変の逆転を有する被験体、および本研究の過程にわたって線維症性の変化における変化を経験しなかった非硬変被験体（「非硬変、Δなし）におけるベースラインおよび２４０週目の血清ＬＯＸＬ２レベル（ｐｇ／ｍＬ）を比較する。
【表１３】
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【０３４１】
表１３において示されるように、硬変被験体のうちの８８％が、ＬＯＸＬ２レベルが低下した。さらに、ベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルは、２４０週目に持続性の硬変を有した被験体において最も高いということが決定された。
【０３４２】
図１７は、所定のベースライン血清ＬＯＸＬ２レベル（＜１５００、＞１５００、１５００〜３０００、＜３０００、および＞３０００ｐｇ／ｍｌ）を有する、２４０週目に、組織学的改善を有することが決定された硬変被験体（「Ｙ」）のパーセンテージならびに同じ所定のベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルを有する、２４０週目に組織学的改善を有しないことが決定された硬変被験体（「Ｎ」）のパーセンテージを示す。示されるように、１５００ｐｇ／ｍｌ未満のベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルを有する硬変被験体は、８８％の率の後退（ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）を有した。１５００ｐｇ／ｍｌ〜３０００ｐｇ／ｍｌのベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルを有する硬変被験体は、７０％の率の後退を有していたが、３０００ｐｇ／ｍｌを超えるベースライン血清レベルを有する硬変被験体は、わずか２９％の率の後退しか有しなかった。したがって、硬変患者の間で、１５００ｐｇ／ｍｌ未満のベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルは、８８％の後退の確度と関連したが、３０００ｐｇ／ｍＬを超えるベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルは、２９％の後退の確度と関連した。
【０３４３】
ベースライン血清ＬＯＸＬ２レベルは、ベースライン線維症ステージよりも２４０週目のＩｓｈａｋ線維症ステージとより相関した。これは、高い血清ＬＯＸＬ２レベルが、活発な線維形成を反映したことを示唆する。
【０３４４】
この研究の結果は、血清ＬＯＸＬ２レベルが、ＣＨＢを有する患者において上昇し、最高の線維症を有する患者において最も高いことを実証し、血清ＬＯＸＬ２と線維症スコアとの間の全般的な相関を実証した。血清ＬＯＸＬ２レベルは、活動性疾患および活発な線維形成を反映した（たとえば、より高いベースラインレベルが２４０週目の、より高い線維症ステージと関連したことを考慮して）。基礎をなすＣＨＢの処置は、ほとんどの患者においてＬＯＸＬ２の低下をもたらし、このことは、線維形成のダウンレギュレーションを示唆した。臨床的にうまくいっていた不変の線維症スコアを有する患者においてでさえ、５年後に血清ＬＯＸＬ２が減少した。結果は、活動性疾患のマーカーとしての血清ＬＯＸＬ２レベルを実証し、かつ高いＬＯＸＬ２が後退の欠如を予測するということを実証する。
Ｂ．ＣＨＢ被験体におけるｓＬＯＸＬ２レベル
【０３４５】
ＣＨＢに感染している被験体６４１人を、３００ｍｇのフマル酸テノホビルジソプロキシル（ＴＤＦ）／アデホビルを用いて１年にわたって処置し、オープンラベルＴＤＦで最大５年まで継続した。これらの被験体のうち３４４人に、ベースライン（処置前）ならびに処置開始の４８週後および２４０週後に肝生検を実施した。線維症を評価するために病理学者らがＩｓｈａｋスケールを使用して生検をスコア化した。合計９６人の被験体（２８％）がベースラインにおいて硬変を有した（Ｉｓｈａｋスコア≧５）。７４％は、処置の２４０週間後にはもはや組織学的硬変を有さなかった（Ｉｓｈａｋスコア＜５）。図１８を参照されたい。
１．代償性ＣＨＢ被験体８８人におけるｓＬＯＸＬ２レベル
【０３４６】
進行型線維症／硬変症を優先して、被験体３４８人のうち８８人について血清ＬＯＸＬ２レベルをＥＬＩＳＡによって遡及的に評価した。８８人の被験体は、７０％（８０人）が男性であり、６４％（７３人）が白人であり、１４％（１６人）がアジア系、８％（９人）がアフリカ系米国人／黒人であり、２４０週目に、これらの８８人の被験体のうち４２人は硬変の後退を有し、２２人は持続性の硬変を有し、３人は処置の経過にわたって硬変に増悪し、１８人は線維症における変化を伴わない非硬変被験体（研究時増悪）であり、３人は、Ｉｓｈａｋにより測定されるように、線維症における少なくとも２ポイントの低下を伴う非硬変被験体であった。
【０３４７】
血清ＬＯＸＬ２（ｓＬＯＸＬ２）はベースラインにおいて被験体全体の９２％および硬変被験体の９７％で検出可能であった。ウイルス抑制により、ｓＬＯＸＬ２レベルが低下した。図１９を参照されたい。
【０３４８】
ベースラインｓＬＯＸＬ２レベルは、より進行型の線維症の被験体においてより高かった。図２０を参照されたい。ビニングしたＩｓｈａｋ線維症スコアがＦ０〜Ｆ３およびＦ４〜Ｆ６である被験体の平均ＬＯＸＬ２レベルは、それぞれ６９８ｐｇ／ｍＬおよび１，６２９ｐｇ／ｍＬであった（Ｐ＜０．０００１、ウィルコクソン−マン・ホイットニー）。これらの結果により、ｓＬＯＸＬ２レベルを使用して、疾患のステージをモニターすることができることが実証される。この研究において、ｓＬＯＸＬ２の変化によって２４０週間にわたる線維症ステージの変化は予測されなかった。ベースラインｓＬＯＸＬ２レベルは、持続性の硬変を有する被験体（１，９９９ｐｇ／ｍＬ）において、硬変の後退を示した被験体（１，３３４ｐｇ／ｍＬ）と比較して高く、ｐ＝０．１３であった。
２．非代償性ＣＨＢ被験体８１人におけるｓＬＯＸＬ２レベル
【０３４９】
サンプルの第２のセットを非代償性肝疾患のＣＨＢ被験体８１人から取得した。表１４には、これらの８１人の被験体についての人口統計学的情報が上で考察した８８人の被験体と比較して示されている。
【表１４】
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【０３５０】
平均血清レベルは、非代償性被験体８１人について、代償性被験体８８人（１，４１８ｐｇ／ｍＬ）と比較して高く（２，３９６ｐｇ／ｍＬ）、ｐ＝０．００２（ウィルコクソン順位和検定）であった。図２１。さらに、非代償性疾患の被験体８１人の中で、平均ｓＬＯＸＬ２レベルは、末期肝疾患モデル（Ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  Ｅｎｄ−ｓｔａｇｅ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ）（ＭＥＬＤ）スコアが高い被験体の方が高かった。図２２。以下の表１５には、様々な程度の代償性疾患および非代償性疾患を含めた、種々の程度の疾患の重症度を有するＣＨＢ被験体についての平均ｓＬＯＸＬ２レベルが列挙されている。
【表１５】
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【０３５１】
結果により、ｓＬＯＸＬ２レベルは、より重症の疾患および／またはより進行型の線維症を有する患者においてより高いことが実証され、これにより、ｓＬＯＸＬ２の検出の、ＣＨＢに対する予後判定および診断マーカーとしての使用が実証される。
Ｃ．パーセントコラーゲンエリア（ＰＣＡ）
【０３５２】
ベースライン、４８週目、および２４０週目に取得した研究集団全体由来の組織サンプルからＰＣＡを決定した。平均ＰＣＡは、集団全体について、ベースラインにおいて７．１％であり、４８週目に５．３％であり、２４０週目に３．９％であった（図３４Ａ）。
【０３５３】
持続性の硬変を有する被験体および硬変の組織学的後退を示した被験体においてＰＣＡを決定した。平均ＰＣＡは、持続性の硬変を有する被験体において組織学的後退を伴う被験体よりも高かった。後退群では、経時的なＰＣＡの低下も比例して大きかった（図３４Ｂ）。
（実施例７）
原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）におけるＬＯＸＬ２レベル、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）におけるＬＯＸＬ２レベル、および胆汁うっ滞性肝疾患の動物モデルにおけるＬＯＸＬ２レベル
【０３５４】
ヒト原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）被験体由来のサンプルおよび原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）被験体由来のサンプルにおいて、ならびに胆汁うっ滞性肝疾患のマウスモデルにおいてＬＯＸＬ２発現を評価した。
【０３５５】
ＰＳＣの患者由来の肝臓外植片、ＰＢＣの患者由来の肝臓外植片、および非疾患肝組織由来の生検を免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）および免疫蛍光法（ＩＦ）によって評価した。ヒトＰＳＣ肝（図２３Ａ）およびＰＢＣ肝（図２３Ｂ）の病気の領域においてＬＯＸＬ２タンパク質が大量に発現されることが検出された。
【０３５６】
疾患の増悪の種々のステージにあるＭｄｒ２−／−由来の肝組織および胆管結紮（ＢＤＬ）マウス由来の肝組織に対してＩＨＣ、ＩＦ、およびｑＲＴ−ＰＣＲを実施し、野生型（ＷＴ）マウスおよびニセ外科手術に供したマウスをコントロールとして使用した。非疾患コントロールと比較して、Ｍｄｒ２−／−マウス（図２３Ｃ）とＢＤＬマウス（図２３Ｄ、外科手術の７日後）のどちらにおいてもＬＯＸＬ２タンパク質が誘導された。同様に、Ｍｄｒ２−／−マウス（図２４Ａ）およびＢＤＬマウスでは、外科手術の３日後および７日後にｍＲＮＡが誘導された（図２４Ｂ）。ヒト組織と動物モデル組織のどちらにおいても、ＬＯＸＬ２は線維症の領域に存在し、線維性コラーゲン沈着の広がりと共局在化し、タマネギ皮様（ｏｎｉｏｎ  ｓｋｉｎ−ｔｙｐｅ）線維症および線維症性隔壁と明白に関連する。ＬＯＸＬ２発現は、小管増殖の非線維症性領域ならびに門脈血管の内皮細胞においても観察された。
【０３５７】
増悪性線維症および早期発症型門脈圧亢進症の増加を伴うＰＳＣのマウスモデルを、線維症にかかりやすいバックグラウンド（ＢＡＬＢ／ｃ）にＭｄｒ２変異を戻し交配することによって生成した。Ｍｄｒ２−／−マウスでは、架橋線維化、自然に発生した小管周囲のタマネギ皮様線維症性病変および著しい小管反応、ならびに肝臓における高レベルのコラーゲン沈着のサインを伴う肝線維症の増悪の増加が示された（図ｘＡ  −３３Ｃを使用）。Ｍｄｒ２−／−ＢＡＬＢ／ｃでは、コントロールマウスと比較して早発性の重症の門脈圧亢進症も示された（データ示さず）。免疫組織化学的分析により、ＬＯＸＬ２は健康な肝臓には存在しないが、Ｍｄｒ２−／−ＢＡＬＢ／ｃマウスでは小管周囲の線維症性エリアにおいて誘導されることが示された（データ示さず）。４週齢のＭｄｒ２−／−ＢＡＬＢ／ｃマウスにＡＢ００２３（３０ｍｇ／ｋｇ）、Ｍ６４（３０ｍｇ／ｋｇ）、またはＢＡＰＮ（１００ｍｇ／ｋｇ）を週２回投与した（群当たりｎ＝１０）。処置の４週間後に、ＡＢ００２３で処置したマウスでは、肝臓コラーゲン沈着の減少：Ｍ６４で処置したマウス（ｐ＝０．００３２）およびＢＡＰＮで処置したマウス（ｐ＝０．００１２）と比較して、それぞれ約３１％および３４％の減少が示された。また、ＡＢ００２３で処置したマウスでは、プロコラーゲン、ＴＧＦｂ１、ＴＧＦｂ２、およびＭＭＰ−２などの線維形成促進性（ｐｒｏｆｉｂｒｏｇｅｎｉｃ）遺伝子の発現が減少した（データ示さず）。
【０３５８】
Ｃ５７Ｂｌ６マウスにおいて、３，５−ジエトキシカルボニル−１，４−ジヒドロコリジン（ＤＤＣ）を４週間にわたって与えることによって胆管線維症のマウスモデルを誘導した。ＤＤＣを与えることにより、著しい小管反応およびタマネギ皮様管周囲線維症を伴う胆管炎が引き起こされた。マウスを、ＡＢ００２３（３０ｍｇ／ｋｇ）、Ｍ６４（３０ｍｇ／ｋｇ）、またはＢＡＰＮ（１００ｍｇ／ｋｇ）を用いて、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって週２回、４週間にわたって処置した。ＡＢ００２３を投与した、ＤＤＣを与えたマウスでは、ビヒクル処置と比較して肝臓コラーゲン含量の３９％の減少（ｐ＝０．０１５１）が示された。また、免疫組織化学的分析により、ＡＢ００２３で処置したマウスが、ビヒクルで処置したマウスおよびＭ６４で処置したマウスと比較して管周囲のエリアにおいて少ないコラーゲン原線維を示したことが示された（データ示さず）。
【０３５９】
ＬＯＸＬ２のタンパク質レベルおよび他の候補疾患マーカーを、ＰＳＣ患者および健康なコントロールの独立したセットから抜き取った血漿のＥＬＩＳＡによって測定した。ＬＯＸＬ２タンパク質は、大多数のＰＳＣ患者由来の血漿において検出され、大多数の健康なドナーでは検出されず、フィッシャーの直接検定でｐ値は０．００５未満であった。
【０３６０】
結果により、ＰＳＣ肝臓外植片およびＰＢＣ肝臓外植片においてＬＯＸＬ２発現が誘導されること、ならびにＰＳＣ患者において血漿ＬＯＸＬ２レベルが有意に上昇することが実証される。結果により、胆汁うっ滞性疾患の病因におけるＬＯＸＬ２の機能的役割が示され、ＬＯＸＬ２が胆汁うっ滞性疾患の診断マーカーであることが確認される。結果により、Ｍｄｒ２−／−マウスおよびＢＤＬマウスの肝臓におけるＬＯＸＬ２発現の誘導およびパターンが、ＰＳＣのヒト被験体およびＰＢＣのヒト被験体由来の肝臓と比較して同様であることがさらに実証される。いくつかの実施形態において、そのような動物モデルを使用して、ＰＳＣおよびＰＢＣなどの胆汁うっ滞性肝疾患に対する処置の効力（たとえば、抗ＬＯＸＬ２処置）を評価する。
（実施例８）
ＨＣＶおよび他の肝疾患におけるＬＯＸＬ２の検出
Ａ．慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症の患者における肝線維症を推定するための血清ＬＯＸＬ２測定
【０３６１】
免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）によって線維症性肝組織を分析することにより、ＬＯＸＬ２発現が線維芽細胞、新脈管構造、炎症細胞および肝細胞で構成される線維形成の境界面に局在化することが明らかになり、これにより、ＬＯＸＬ２が活動性の線維形成性疾患と関連することが示唆される。血清ＬＯＸＬ２と線維症性肝疾患の関係をさらに探究するために、実施例３に記載のＬＯＸＬ２特異的ＥＬＩＳＡを使用した。慢性ＨＣＶ感染症の患者８７人から、血清サンプルを肝生検と一緒に収集した。ＬＯＸＬ２の血清レベル、ならびに確立されたバイオマーカーであるヒアルロン酸（ＨＡ）および組織メタロプロテアーゼ阻害物質１（ＴＩＭＰ１）の血清レベルをイムノアッセイによって測定し、各生検について、Ｉｓｈａｋスコアリングシステムを使用して肝線維症の組織学的ステージを評価した。別途、３０人超の健康なドナー由来の血清サンプルも収集し、血清ＬＯＸＬ２レベルについて評価した。血清バイオマーカーと線維症スコアの相関を、ＡＮＯＶＡ検定、ならびに線維症スコアによってビニングしたサンプルについてのマン・ホイットニーのＵ検定を使用して試験した。
結果
【０３６２】
結果が図２６および図２７に示されている。ＬＯＸＬ２タンパク質は、慢性ＨＣＶ感染症の患者の８３％の血清において検出されたが、正常な健康なドナーのいずれに由来する血清においても検出されなかった。ＨＡ、ＴＩＭＰ１、およびＬＯＸＬ２の血清レベルと線維症のステージとの間には正の相関があった。血清結果は、ＩＨＣ分析と一致し、活動性の線維症のエリアではＬＯＸＬ２タンパク質のレベルが高く、それに対して感染していないまたは健康な個体由来のサンプルにおけるレベルは低いまたは検出不可能であることが明らかになった。
Ｂ．慢性ＨＣＶ感染症の患者由来の肝組織、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）１の患者由来の肝組織、およびアルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）の患者由来の肝組織におけるＬＯＸＬ２発現
【０３６３】
免疫組織化学的（ＩＨＣ）染色により、慢性ＨＣＶ感染症を有する患者由来の肝組織におけるＬＯＸＬ２発現が実証された。スナップ凍結したヒト組織サンプルをＣｕｒｅｌｉｎｅ（Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）およびＡｓｔｅｒａｎｄ（Ｄｅｔｒｏｉｔ、ＭＩ）から入手し、連続切片を抗ＬＯＸＬ２で染色した。
結果
【０３６４】
慢性ＨＣＶ感染症の患者から得られる切片からの結果が図２８に示されており、それにより、この患者の肝組織におけるＬＯＸＬ２タンパク質の発現が示されている。図２８の左側のパネル（５×対物レンズ拡大率）では、黒色の矢印は門脈領域および門脈路への線維性の拡大のエリアを示す。白色の矢印は肝小葉の周囲の短い線維性隔壁のエリアを示す。図２８の右側のパネル（４０×対物レンズ拡大率）には、類洞周囲腔内の、肝細胞（Ｈ）との境界面の線維性隔壁（Ｓ）（矢印）において、および肝実質内の筋線維芽細胞（矢印）において観察されたＬＯＸＬ２免疫反応性が示されている。結果により、この研究では、慢性ＨＣＶ感染症の患者の肝組織においてＬＯＸＬ２が発現したこと、および、発現が、提供されるアッセイの複数の実施形態によって測定可能であることが示されている。別のＩＨＣ研究では、ＮＡＳＨ、ＨＣＶ関連線維症、およびＡＳＨにおいては活動性の疾患境界面の肝組織にＬＯＸＬ２発現が強力に局在化するが、健康な肝臓には局在化しない（データ示さず）。
Ｃ．軽度〜中程度の肝線維症を有する被験体と比較した、肝硬変を有する被験体における血清ＬＯＸＬ２レベルの上昇
【０３６５】
患者の血清サンプルを、臨床治験のプラセボ群（ａｒｍ）に登録された慢性Ｃ型肝炎感染症の成人２６人から収集した。被験体をＩｓｈａｋ線維症スコアによって群分けした（１〜３：軽度〜中程度の線維症；５〜６：硬変）。被験体の人口統計学的特徴が表１６に示されている。
【表１６】
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【０３６６】
血清サンプルを研究ベースラインに対して６つの時点：４週目、８週目、１６週目、２４週目、２６週目、および３０週目で取得した。対の肝生検（スクリーニングおよび２４週目）を中心的な病理学者らが盲検式で評価した。Ｍａｎｎｓ  Ｍ、Ｐａｌｍｅｒ  Ｒ、Ｆｌｉｓｉａｋ  Ｅら、Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．  ２０１１年、５４巻、補遺１：Ｓ５５〜Ｓ５６頁を参照されたい。血清ＬＯＸＬ２を、実施例３に記載のＬＯＸＬ２イムノアッセイ（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙプラットフォームで展開されるサンドイッチイムノアッセイ）を使用して測定した。
【０３６７】
統計解析のために、被験体をＩｓｈａｋ線維症スコアによって群分けした（１〜３：軽度〜中程度の線維症；５〜６：硬変）。本研究では、ベースラインＩｓｈａｋ線維症スコアが４である被験体は観察されなかった。アッセイの定量の下限値（ＬＬＯＱ）未満の検出可能なＬＯＸＬ２を有する血清サンプルをＬＬＯＱに設定した。バイオマーカーレベルの差異を説明的にグラフで要約した。群あたり観察されたサンプルサイズによる交換を伴うサンプル収集を使用した中央値の１０，０００ブートストラップによって９５％信頼区間（ＣＩ）を構築した。Ｐ値は、ある時点の中で群を比較する場合にはウィルコクソン順位和検定を使用して算出し、全ての時点にわたって群を比較する場合には被験体内の変量効果を用いた反復測定線形モデルによって算出した。
結果
【０３６８】
図２９には、ビニングしたベースラインＩｓｈａｋ線維症スコアおよび時間によるＬＯＸＬ２血清レベルが示されている。各パネルには、示された時点（４週目、８週目、１６週目、２４週目、２６週目、３０週目）について、Ｉｓｈａｋ線維症スコアに従って群分けした２つの患者群（それぞれ１〜３および５〜６）についてのＬＯＸＬ２濃度（ｐｇ／ｍＬ）が示されている。ＬＯＸＬ２濃度がプロット範囲外であった３つの外れ値（ＬＯＸＬ２濃度＝５５２９、６６２１、８８４５ｐｇ／ｍｌ）は全て、Ｉｓｈａｋ線維症スコアが５である同じ被験体に由来した。
【０３６９】
図３０には、Ｉｓｈａｋ線維症スコアに従って群分けした２つの患者群（それぞれ１〜３および５〜６）について、４週目〜３０週目にわたるＬＯＸＬ２血清中濃度の中央値として算出された被験体内のＬＯＸＬ２血清レベルの中央値が示されている。被験体内の変動係数の平均は２２％であった。
【０３７０】
図３１には、９５％信頼区間を用いた、ビニングしたベースラインＩｓｈａｋ線維症スコアによる経時的な（週）ＬＯＸＬ２血清中濃度の中央値（ｐｇ／ｍＬ）が示されている。研究生検の間の２５〜２８週間にわたってＩｓｈａｋ線維症スコアが２以上変化した被験体は１人のみであった。
【０３７１】
表１７には、各時点についてのＬＯＸＬ２濃度の中央値（ｐｇ／ｍＬ）が示されており、ｐ値は軽度〜中程度の肝線維症を有する被験体と比較した、肝硬変を有する被験体における上昇の統計的有意性を示す。
【表１７】
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【０３７２】
これらの結果により、提供されるイムノアッセイの実施形態により、ＬＯＸＬ２タンパク質の血清中濃度を測定できることが確認される。結果により、この研究では、肝硬変を有する被験体において、軽度〜中程度の肝線維症を有する被験体と比較して血清ＬＯＸＬ２タンパク質レベルが有意に上昇したこと、およびその上昇が、提供されるアッセイの複数の実施形態を使用して血清において測定可能であることも実証される。
Ｄ．血清ＬＯＸＬ２レベルは慢性ＨＣＶ感染症の被験体における血清ヒアルロン酸レベル  血清ＴＩＭＰ１レベルと相関した
【０３７３】
イムノアッセイおよび統計解析を上記のＣの一部として行った。さらに、ヒアルロン酸（ＨＡ）およびＴＩＭＰ１を、市販のイムノアッセイキットを使用して測定した。バイオマーカー（ＬＯＸＬ２およびＨＡまたはＴＩＭＰ１）間の関連性を、スピアマン順位相関を使用して評価した。
結果
【０３７４】
図３２には、示されているＩｓｈａｋスコア（１〜６）を有する被験体についての、被験体内のＬＯＸＬ２のレベルの中央値対ヒアルロン酸（ＨＡ）のレベルの中央値（上のパネル）および被験体内のＬＯＸＬ２のレベルの中央値対組織メタロプロテアーゼ阻害物質１（ＴＩＭＰ１）のレベルの中央値（下のパネル）が示されている。被験体内の発現の中央値は４週目〜３０週目にわたる発現の中央値として算出した。局所重み付けした散布図平滑化を使用して曲線を構築した。
【０３７５】
これらの結果により、この研究では、提供されるイムノアッセイのある実施形態を使用して測定される通り、血清ＬＯＸＬ２レベルが血清ＨＡレベルおよび血清ＴＩＭＰ１レベルと相関したことが実証される。
（実施例９）
腫瘍患者における血清ＬＯＸＬ２
【０３７６】
がんに対して抗ＬＯＸＬ２（ＡＢ００２４）抗体を用いた処置を受けているがん患者８人を試験した。患者の識別（「Ｐｔ  ＩＤ」）；がん診断；抗ＬＯＸＬ２抗体の用量レベル；増悪までの時間；および、元の原発腫瘍または関連するサンプルから単離した固定組織のサンプル（約５μｍの切片）における免疫組織化学的検査によって検査したＬＯＸＬ２発現が以下の表１８に提供される。
【表１８】
2018083845.tif 000024
【０３７７】
血液サンプルを、抗ＬＯＸＬ２処置開始の１日目（サンプルを抗ＬＯＸＬ２処置前に取得）；ならびに抗ＬＯＸＬ２処置の開始後２９日目および５７日目に得た。
結果
【０３７８】
ＬＯＸＬ２は、入手可能な全ての時点において、患者８人中８人の血漿および患者８人中５人の血清サンプルで検出された。ＡＢ００２４の投与によってＬＯＸＬ２シグナルは明瞭になることも遮蔽されることもなかった。
【０３７９】
本発明が、その特定の実施形態に関して記載されてきたが、様々な変化がなされてもよく、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく、等価物が代わりに用いられてもよいことが、当業者によって理解されるはずである。さらに、本発明の目的、精神、および範囲に、特定の状況、物質、材料の組成、プロセス、プロセスステップ（複数可）を適応させるために多くの変更がなされてもよい。そのような変更はすべて、本明細書に添付される特許請求の範囲内にあることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３−１】
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【図３３−２】
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【図３４−１】
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【図３４−２】
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【配列表】
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【外国語明細書】
2018083845000001.pdf