(57)【要約】【課題】標的指向型送達および／または抗原表示系に使用するための担体系の提供。【解決手段】本発明は、１つまたは複数の生物活性リガンドにコンジュゲートし、担体系の表面に露出しているエーテル−脂質を含む担体系を提供する。１つまたは複数の別の生物活性剤が、担体系内に被包されもしくは埋め込まれ、または担体系に結合しもしくは担体系上に吸着していてもよい。本発明は、それらの調製方法、ならびに生物活性剤の特異的組織または細胞への標的指向型送達、ならびに前記生物活性剤に応答する形質、疾患および病状の研究、診断および治療のための抗原表示系などそれらの医療適用における使用をさらに提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物を含む担体系：
【化１】
2018141015.tif 000047
（式中、
Ｙは、Ｏ、Ｎ、Ｓまたは共有結合を表し、
Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、互いに独立して、共有結合またはスペーサー基を表し、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、互いに独立して、Ｈまたはリガンド基を表し、
Ｌは、式（ａ）の基であり：
【化２】
2018141015.tif 000048
（式中、破線はＮへの結合を表し、
Ｒ１は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｂ１の基を表し、
Ｒ１’は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｂ２の基を表し、
Ｒ２は、Ｈまたは式−ＣＨ２−ＯＲｃの基を表し、
Ｒ２’は、Ｈまたは式−ＯＲｄもしくは−ＣＨ２−ＯＲｄの基を表す。）
Ｒ３は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｅもしくは−（ＣＨ２）３−ＯＲｅの基を表し、
Ｒａ、Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅは、互いに独立して、飽和または不飽和で直鎖または分枝状の炭化水素鎖を表し、
ｍは、１、２または３であり、
ただし、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３の少なくとも１つはＨでなく、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の少なくとも１つはリガンド基である）。
【請求項２】
Ｒ３がＨであり、Ｌが式（ｂ）または（ｃ）の基である：
【化３】
2018141015.tif 000049
（式中、破線はＮへの結合を表し、
Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｙ、Ｒａ、およびｍは請求項１に記載の通りであり、
ただし、式（ｂ）において、Ｒ２およびＲ２’の一方はＨでなく、
式（ｃ）において、Ｒ１およびＲ１’の一方はＨでなく、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の少なくとも１つはリガンド基であることを条件とする）
請求項１に記載の担体系。
【請求項３】
Ｌが、式（ｂ１）、（ｂ２）、（ｂ３）または（ｂ４）の基である：
【化４】
2018141015.tif 000050
（式中、破線はＮへの結合を表し、
Ｒａ、ＲｃおよびＲｄは互いに独立して、飽和または不飽和で直鎖または分枝状の炭化水素鎖である）
請求項２に記載の担体系。
【請求項４】
Ｌが、式（ｃ１）または（ｃ２）の基である：
【化５】
2018141015.tif 000051
（式中、破線はＮへの結合を表し、
Ｒａ、Ｒｂ１、Ｒｂ２は互いに独立して、飽和または不飽和で直鎖または分枝の炭化水素鎖である）
請求項２に記載の担体系。
【請求項５】
Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’がＨであり、
Ｒ３が式−（ＣＨ２）２−ＯＲｅまたは−（ＣＨ２）３−ＯＲｅの基であり、
Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｙ、Ｒａおよびｍが請求項１に記載の通りである、請求項１に記載の担体系。
【請求項６】
Ｒａ、Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅが互いに独立して、直鎖または分枝状のＣ（１０〜２２）アルキル、Ｃ（１０〜２２）アルケニルまたはＣ（１０〜２２）アルキニルである、請求項１から５のいずれかに記載の担体系。
【請求項７】
Ｃ（１０〜２２）アルケニルおよびＣ（１０〜２２）アルキニルが、１、２、３または４個、好ましくは１または２個の不飽和結合を有する、請求項１から６のいずれかに記載の担体系。
【請求項８】
マイクロ微粒子またはナノ微粒子材料である、請求項１から７のいずれかに記載の担体系。
【請求項９】
マイクロ微粒子またはナノ微粒子材料が、リポソームもしくはミセルなどの脂質小胞、またはナノ粒子、ナノ球体および／もしくはナノロッドであり、式Ｉの少なくとも１つの化合物および任意選択で１つまたは複数の他の共脂質を含む、請求項８に記載の担体系。
【請求項１０】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の少なくとも１つが、標的指向リガンドもしくは抗原性リガンドもしくは治療用リガンドもしくは診断用リガンドまたはそれらの組合せである、請求項１から９のいずれかに記載の担体系。
【請求項１１】
スペーサー基が、ポリエチレングリコールまたはエンドキャップされたポリエチレングリコールである、請求項１から１０のいずれかに記載の担体系。
【請求項１２】
脂質小胞が、その内部空隙内に封入されもしくは埋め込まれまたはその表面に吸着するもしくは結合する少なくとも１つの生物活性剤をさらに含む、請求項９に記載の担体系。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれかに記載の担体系を含む医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１から１２のいずれかに記載の担体系の薬物送達系、診断系または抗原表示系としての使用。
【請求項１５】
請求項１から１４のいずれかに記載の担体系において使用するための式Ｉの化合物：
【化６】
2018141015.tif 000052
（式中、
Ｙは、Ｏ、Ｎ、Ｓまたは共有結合を表し、
Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、互いに独立して、共有結合またはスペーサー基を表し、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、互いに独立して、Ｈまたはリガンド基を表し、
Ｌは、式（ａ）の基であり：
【化７】
2018141015.tif 000053
（破線は、Ｎへの結合を表し、
Ｒ１は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｂ１の基を表し、
Ｒ１’は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｂ２の基を表し、
Ｒ２は、Ｈまたは式−ＣＨ２−ＯＲｃの基を表し、
Ｒ２’は、Ｈまたは式−ＯＲｄもしくは−ＣＨ２−ＯＲｄの基を表す。）、
Ｒ３は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｅもしくは−（ＣＨ２）３−ＯＲｅの基を表し、
Ｒａ、Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅは、互いに独立して、飽和または不飽和で直鎖または分枝状の炭化水素鎖を表し、
ｍは、１、２または３であり、
ただし、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３の少なくとも１つはＨではなく、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の少なくとも１つはリガンド基であること）。
【請求項１６】
治療剤に応答する疾患の治療において使用するための請求項１から１２のいずれかに記載の担体系であって、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の少なくとも１つが前記治療剤である、担体系。
【請求項１７】
疾患特異的診断剤を使用する疾患の診断において使用するための請求項１から１２のいずれかに記載の担体系であって、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の少なくとも１つが前記診断剤である、担体系。
【請求項１８】
免疫応答を調節する際に使用するための請求項１から１２のいずれかに記載の担体系であって、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の少なくとも１つが抗原剤である、担体系。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、標的指向型送達および／または抗原表示系に使用するための担体系であって、１つまたは複数の生物活性リガンドにコンジュゲートしている（かつ担体系の表面に露出している）エーテル−脂質を含み、１つまたは複数の別の生物活性剤を含んでもよい担体系を対象にする。本発明は、それらの調製方法、ならびに前記生物活性剤の特異的組織または細胞への標的指向型送達、ならびに前記生物活性剤に応答する形質、疾患および病状の研究、診断および治療のための抗原表示系などそれらの医療用途における使用をさらに対象とする。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
受容体−リガンド(receptor Ligand)、抗原−抗体、ＤＮＡ−タンパク質、糖質−レクチン、ＲＮＡ−リボソーム間などの分子認識は、多くの生物系を支える重要な原理であり、医療用途において、例えば、重合ビーズ、小胞型脂質、マイクロエマルションなどを含めた人工の（マイクロ−またはナノ−）微粒子系などにおいて使用するために人工的に創出される多くの生物系に適用されている。
【０００３】
分子認識に基づいた適用の重要な一例は、抗ウイルス剤、化学療法剤またはイメージン
グ剤などの診断用または治療用化合物の特異的部位への標的指向型送達の使用であり、こ
れは、非特異的送達に伴う限界（生体内クリアランス時間、潜在毒性、作用剤の膜輸送に
伴う問題など）を克服することを可能にし、したがって、それらの有用性が大幅に向上す
る。認識に基づいた様々な戦略を使用して、化合物の生物活性を発揮する標的細胞の細胞
内環境（すなわち、特異的細胞区画）への化合物の送達、例えば、ウイルスベクター、ポ
リリシンおよびポリアルギニンなどのカチオンポリマー（例えば、ＷＯ７９／００５１５
、ＷＯ９８／５２６１４を参照）、脂質担体ならびに様々な他のコンジュゲート系などの
生物担体または人工担体の使用を伴う特異的トランスポーターを介した送達が改良されて
きた。
【０００４】
広く使用されている一手法は、人工担体、例えば、リポソームおよびミセルとしての脂質小胞の使用を伴うものであり、それらの人工担体は、生物活性剤の全身曝露を低減し、それによって分解、溶解度などに伴う問題を克服し、血液循環時間の増加をもたらす能力のため、薬物送達担体として広範囲にわたって開発および分析されてきた。生物活性剤の能動的標的指向型送達は、生体内投与後に、がん細胞、または肝細胞など特定の組織および器官に特異的な細胞、などの特異的細胞型に小胞を向ける（または標的指向する）働きをする標的指向リガンドを用いた、（小胞形成の前または後に）脂質小胞の脂質の誘導体化を伴うものである（例えば、ＵＳ６，３１６，０２４およびＵＳ６，２１４，３８８；Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１２３７：９９−１０８（１９９５）（非特許文献１）；Ｂｌｕｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１１４９：１８０−１８４（１９９３）を参照）。これは、例えば(乳房腫瘍、卵巣腫瘍、頸部腫瘍、結腸直腸腫瘍、腎腫瘍、および鼻咽頭腫瘍(nasoparyngeal tumor)を含めて種々の腫瘍性組織に過剰発現している)葉酸受容体(ＦＲ)、(大部分の癌、肉腫、ならびに一部のリンパ腫および白血病の転移細胞および薬物耐性細胞に過剰発現している）トランスフェリン受容体(ＴｆＲ)、(組織非形成性甲状腺癌ならびに乳房腫瘍、肺腫瘍および結腸直腸腫瘍に過剰発現している）上皮増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)、(腫瘍新生血管の内皮細胞上で高発現している）血管内皮増殖因子受容体１および２(ＶＥＧＦＲ−１／２)、（甲状腺乳頭癌に過剰発現している）メタスチン受容体、(乳癌のかなりの部分に過剰発現している)ＥｒｂＢファミリー受容体チロシンキナーゼ、(乳癌に過剰発現している)ヒト上皮増殖因子受容体−２(Ｈｅｒ２／ｎｅｕ)、(肉腫様腎癌に過剰発現している)チロシンキナーゼ−１８−受容体(ｃ−キット)、（食道腺癌に過剰発現している）ＨＧＦ受容体ｃ−Ｍｅｔ、(乳癌に過剰発現している)ＣＸＣＲ４およびＣＣＲ７、(前立腺癌に過剰発現している)エンドセリン−Ａ受容体、(大部分の結腸直腸癌腫瘍に過剰発現している)ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体δ(ＰＰＡＲ−δ)、(卵巣癌に過剰発現している)ＰＤＧＦＲ  Ａ、(様々な肺癌に過剰発現している)ＢＡＧ−１、(膵癌に過剰発現している)可溶性ＴＧＦβＩＩ型受容体、(肝細胞上に過剰発現している)アシアロ糖タンパク質受容体、(増殖腫瘍血管系(growing tumor vascularture)に過剰発現している)αｖβ３インテグリン受容体、レグマイン(固形腫瘍組織に濃縮され、腫瘍関連マクロファージ(ＴＡＭｓ、tumor associated macrophages)上に過剰発現しているクランＣＤシステインプロテアーゼ)などを含めて、特異的細胞型に過剰発現している受容体を利用することによって行うことができる。
【０００５】
処理または分析対象のこのような特異的受容体細胞または組織に選択的に結合する作用剤であればいずれも、脂質小胞に結合し、標的指向リガンドまたは受容体リガンドとして働くことができる。典型的には、このような標的指向リガンドは、長鎖(例えば重合体)リンカーを介して脂質または脂質小胞の表面に結合するものである。例えば、葉酸に基づいたコンジュゲートを使用して、治療用化合物の必要用量の低減を可能にし、疾患の治療および／または診断に有用である治療用化合物の標的指向型送達手法を実現した(例えば、ＷＯ０２／０９４１８５（特許文献１）、ＵＳ６，３３５，４３４、ＷＯ９９／６６０６３、ＵＳ５，４１６０１６を参照)。同様に、ガラクトースに基づいたコンジュゲートおよびガラクトサミンに基づいたコンジュゲートを使用して、外因性化合物を細胞膜を通過させて輸送することにより、治療に必要とされた治療用化合物の必要用量の低減を可能にしながら、ＨＢＶ感染やＨＣＶ感染または肝細胞癌などの肝疾患の治療への標的指向型送達手法を実現することができる(例えば、ＵＳ６，０３０，９５４、・・・を参照)。
【０００６】
分子認識に基づいた適用の重要な別の例は、Ｔ細胞活性化、修飾または寛容を引き起こす、免疫系に対する「自己」と「外来」の両タンパク質(抗原)の提示を伴う抗原表示系の使用である。所望の免疫応答の有無に寄与する抗原提示系における受容体−リガンド相互作用は、リガンド密度、補助受容体の存在、受容体−リガンド親和性および表面状態などの様々なパラメータの影響を受けて、複雑であり、評価するのが困難である。したがって、広く使用されている手法は、主機能が抗原処理および提示であるヒト自然発生細胞(またはその一部分)を使用するものであった。しかし、生細胞に基づいた系は、所望の寛容誘発または免疫応答誘発を実現する細胞間相互作用を模倣するのに最適であり得るものの、多分追加の「同時刺激」分子および／または接着分子のその表面膜における十分な治療レベルの発現を含めて、表面分子の調節された発現に依存している。現在公知の人工系は、抗原提示およびＴリンパ球活性化または抑制に必要とされた分子を表面に有する遺伝子工学により作製された細胞内抗原提示小胞（ＷＯ０３／０３９５９４）から、細胞サイズの生分解性マイクロスフェアに基づいた抗原提示系を主体とする系(ＷＯ０７／０８７３４１)まで、多岐にわたる。
【０００７】
明らかに、上記の分子認識に基づいた技術には未だ欠点があり、当技術分野においては、標的指向型送達または抗原提示などの分子認識に基づいた応用に使用するための多用途で効率的な人工担体系が、それらの簡便で経済的な調製方法を含めて、依然として求められている。
【０００８】
本出願は、上述の限界を克服することが可能になる、１つまたは複数の共有結合している生物活性リガンドを有するエーテル−脂質を含むコンジュゲート、およびこれらのコンジュゲートを含む(任意選択で、１つまたは複数の生物活性剤をさらに含む)様々な担体系を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第０２／０９４１８５号パンフレット
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１２３７：９９−１０８（１９９５）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
発明の概要
本発明は、標的指向型送達および／または抗原表示系に使用するための担体系であって、１つまたは複数の生物活性リガンドとコンジュゲートしているエーテル−脂質を含む担体系を対象にする。１つまたは複数の生物活性リガンドは、一般式Ｉのエーテル−脂質に共有結合し、担体系の表面に露出している。任意選択で、少なくとも１つの生物活性剤が、担体系内に被包されもしくは埋め込まれ、または担体系の表面に結合しもしくは吸着していてもよい。
【００１２】
したがって、一態様において、本発明は、リポソームまたはミセルなどの小胞の形の脂質性担体系であって、任意選択で別の共脂質と混合させた式Ｉの少なくとも１つの脂質−リガンドコンジュゲートを含む担体系を対象とする。少なくとも１つの脂質−リガンドコンジュゲートは、抗原リガンド、標的リガンド、治療用リガンドまたは診断用リガンドなどの少なくとも１つの生物活性リガンドに共有結合している少なくとも１つのエーテル−脂質を含む。任意選択で、少なくとも１つの別の生物活性剤が、小胞の内部空隙もしくは二重層（膜）に被包されもしくは埋め込まれ、または小胞の表面に結合しもしくは吸着している。いくつかの実施形態において、小胞はリポソームまたはミセルである。
【００１３】
別の態様において、本発明は、内部空隙または中実コアを有する脂質被覆粒子の形のナノ微粒子担体系であって、粒子は、任意選択で別の共脂質と混合させた、式Ｉの少なくとも１つの脂質−リガンドコンジュゲートで被覆されている担体系を対象とする。式Ｉの少なくとも１つの脂質−リガンドコンジュゲートは、抗原リガンド、標的リガンド、治療用リガンドまたは診断用リガンドなどの少なくとも１つの生物活性リガンドに共有結合している少なくとも１つのエーテル−脂質を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、ナノ微粒子材料は、脂質被覆ナノ粒子またはナノ球体である。任意選択で、少なくとも１つの別の生物活性剤が、内部空隙に被包され、または中実コア中に埋め込まれもしくは分散されている。
【００１５】
別の態様において、本発明は、式Ｉの脂質−リガンドコンジュゲート自体であって、少なくとも２つのエーテル結合炭化水素鎖と、６個までの炭素原子を有する短い直鎖アミノ酸を有し、少なくとも１つの生物活性リガンドが共有結合できるカップリング部位を３個まで有する頭部基とを特徴とするエーテル−脂質を含む脂質−リガンドコンジュゲートも対象とする。
【００１６】
脂質−リガンドコンジュゲートは一般式Ｉの化合物に関する：
【００１７】
【化１】
2018141015.tif 000002
【００１８】
（式中、
Ｙは、Ｏ、Ｎ、Ｓまたは共有結合を表し、
Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、互いに独立して、共有結合またはスペーサー基を表し、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、互いに独立して、Ｈまたはリガンド基を表し、
Ｌは、式（ａ）の基であり：
【００１９】
【化２】
2018141015.tif 000003
【００２０】
式中、破線はＮへの結合を表し、
Ｒ１は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｂ１の基を表し、
Ｒ１’は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｂ２の基を表し、
Ｒ２は、Ｈまたは式−ＣＨ２−ＯＲｃの基を表し、
Ｒ２’は、Ｈまたは式−ＯＲｄもしくは−ＣＨ２−ＯＲｄの基を表す。）、
Ｒ３は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｅもしくは−（ＣＨ２）３−ＯＲｅの基を表し、
Ｒａ、Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅは、互いに独立して、飽和または不飽和の直鎖または分枝状の炭化水素鎖を表し、
ｍは、１、２または３であり、
ただし、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３の少なくとも１つはＨではなく、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の少なくとも１つはリガンド基である）。
【００２１】
特定の実施形態において、リガンド基は、標的指向リガンド、抗原性リガンド、治療用リガンドまたは診断用リガンドである。
【００２２】
好ましくは、標的指向リガンドは、プテロイン酸誘導体、ペプチドおよびその誘導体、ポリペプチド、タンパク質または炭水化物であり、抗原性リガンドは、ペプチド、タンパク質または炭水化物である。
【００２３】
別の態様において、本発明は、本発明の担体系の薬物送達系、診断系または抗原表示系としての使用も対象とする。また、本発明の脂質を含む担体系およびこれらの担体系を含む医薬製剤を調製するキットも提供する。
【００２４】
他の態様において、本発明は、有効量の本発明の担体系を投与するステップを含む、疾患の治療方法または診断方法も対象とする。
【００２５】
さらに別の態様において、本発明は、有効量の本発明の担体系を投与するステップを含む、免疫応答を調節する方法も対象とする。
【００２６】
本発明の他の態様は、本発明の担体系を使用して、生物活性化合物を膜を通して輸送する方法および／または生物活性化合物を細胞中に送達する方法を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】非標的指向リポソーム（ＤＭＡ−ＲＧＤを含まない）と比較したＲＧＤ標的指向リポソーム（５％ＤＭＡ−ＲＧＤを含む）の細胞取り込みを示す図である。
【図２】例２０による対照リポソーム（ＭＳ  １５−０）と比較したＲＲ１１ａ修飾リポソーム（ＭＳ  １５−４）のレグマイン標的指向実験の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
発明の詳細な説明
本発明は、少なくとも１つのエーテル−脂質、および前記エーテル−脂質にコンジュゲートして、本発明の脂質−リガンドコンジュゲートを形成する少なくとも１つの生物活性リガンドを含む担体系を提供する。他の脂質マトリクス化合物（または共脂質）と任意選択で組み合わせた一般式Ｉの脂質−リガンドコンジュゲートで形成または被覆することができる担体系はいずれも、本発明による担体系として働くことができる。典型的には、本発明の担体系は、内部空隙を有する小胞または球体、中実コアを有する粒子、ロッド、チューブ、クラスターなどの様々な形状および形態のマイクロ微粒子またはナノ微粒子材料をベースにする。いくつかの実施形態において、本発明による担体系は、脂質−リガンドコンジュゲートが、他のマトリクス脂質と任意選択で一緒になって、小胞の脂質壁を形成している、リポソーム、ミセルなどの脂質性担体系である。他の実施形態において、本発明による担体系は、脂質−リガンドコンジュゲートが、他のマトリクス脂質と任意選択で一緒になって、被覆としてナノ微粒子担体系の表面に吸着する、ナノ粒子、ナノ球体、ナノクラスター、ナノチューブ、重合ビーズなどのナノ微粒子担体系である。本発明による担体系の性質および所期の使用に応じて、１つまたは複数の生物活性剤が、担体系内に被包されもしくは埋め込まれ、または担体系の表面に結合しもしくは吸着していてもよい。
【００２９】
本明細書では、「生物活性」という用語は、細胞、組織、系および／または（ヒトを含めて）対象において求められる生物学的応答を誘発する能力を指す。「生物学的応答」という用語は、細胞の刺激に対する生理的反応を指し、したがって対象による細胞性、神経性、化学的、炎症性、免疫性または病的な生物学的応答、プロセスまたは反応であり得る。応答、プロセスまたは反応は、化学的、細胞性、神経性、心理学的応答、プロセスまたは反応のいずれかであり得る。
【００３０】
したがって、本明細書では「生物活性リガンドまたは生物活性リガンド基」または単に「リガンド」もしくは「リガンド基」という用語は、そのような生物学的応答を誘発し、（標準化学的カップリング技法を使用した）一般式Ｉのエーテル−脂質への直接またはスペーサー基を介した共有結合のために使用されるリガンドを指す。生物活性リガンドは標的指向リガンド、抗原性リガンド、治療用リガンドまたは診断用リガンドであってもよい。
【００３１】
本明細書では「生物活性剤」または単に「剤」という用語は、標的指向剤、抗原剤、治療剤または診断剤など、生物活性を有する（遊離型、塩型または溶媒和物もしくは水和型の）合成または天然の化合物のいずれか、好ましくは治療剤または診断剤を指す。
【００３２】
様々な生物活性剤基および生物活性リガンド基の定義は、重複する可能性があることが理解される。
【００３３】
したがって、「標的指向(targeting)」を「剤」または「リガンド」と関連させて使用する表現（標的指向型送達系における使用の場合）は、相補的結合部分と所望の場所および／または所望の条件下で相互作用することができる化合物を指す。例えば、相補的結合部分は、リガンドと抗リガンド（例えば、ストレプトアビジンとビオチン、タンパク質ＡまたはＧと免疫グロブリンのＦｃ部）、リガンドと受容体（例えば、低分子リガンドとそれらの受容体、または糖−レクチン相互作用）、ファージディスプレイ誘導ペプチド、相補的核酸（例えば、ＤＮＡハイブリッド、ＲＮＡハイブリッド、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドなど）、およびアプタマーである。他の例示的な相補的結合部分としては、相補的電荷、疎水性、水素結合、共有結合、ファンデルワールス力、反応性の高い化学的性質、静電的相互作用、磁気相互作用などを示す部分が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
特定の受容体に特異的な「標的指向リガンド」または「標的指向剤」（受容体剤またはリガンド）は、特異的結合対の特異的結合相手である任意の化合物を指し、他方の結合相手は受容体である。受容体は、細胞膜もしくは表面に結合してまたは可溶型で存在することがあり、対象、好ましくは哺乳類の対象、例えばヒトまたは動物において、細胞内および／または細胞外に存在することがある。受容体の例としては、限定されるものではないが、膜受容体、可溶性受容体、クローン化または組換え受容体、クランＣＤシステインプロテアーゼならびに他のプロテアーゼおよび他の酵素、ホルモン受容体、薬物受容体、伝達物質受容体、オータコイド受容体、サイトカイン受容体、抗体、抗体断片、改変抗体、抗体模倣物、分子認識単位、接着分子、凝集素、インテグリン、ならびにセレクチンが挙げられる。典型的には、受容体リガンドのその受容体に対する結合親和性は、少なくとも１０−５Ｍ、好ましくは１０−７Ｍ以上、例えば約１０−８Ｍから約１０−１２Ｍであり得る。受容体剤またはリガンドの例としては限定されるものではないが、ペプチドまたはポリペプチドおよびその誘導体（アザ−ペプチド誘導体またはＤ−アミノ酸を部分的に含むもしくはそれのみを含む誘導体、糖ペプチドなど）、糖タンパク質もしくはホスホタンパク質を含めてタンパク質、炭水化物、糖脂質、リン脂質、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、アプタマー、スピーゲルマー(spiegelmer)、ビタミン（例えば、ビタミンＢ９または葉酸、ビタミンＢ１２）、抗原およびそれらの断片、ハプテン、受容体アゴニスト、部分アゴニスト、混合アゴニスト、アンタゴニスト、薬物、ケモカイン、ホルモン（例えば、ＬＨ、ＦＳＨ、ＴＲＨ、ＴＳＨ、ＡＣＴＨ、ＣＲＨ、ＰＲＨ、ＭＲＨ、ＭＳＨ、グルカゴンおよびプロラクチン；トランスフェリン；ラクトフェリン；アンジオテンシン；ヒスタミン；インスリン；レクチン）、伝達物質、オータコイド；増殖因子（例えば、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦａ、ＴＢＦβ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、ＩＧＦ、ボンベシン、トロンボポイエチン、エリスロポエチン、オンコスタチンおよびエンドセリン１）、インターロイキン（例えば、インターロイキン１〜１５）、リンホカインおよび腫瘍壊死因子（例えば、腫瘍壊死因子αおよびβ）およびインターフェロン（例えば、インターフェロンα、βおよびγ）などの細胞シグナル分子を含めてサイトカイン、補欠分子族、補酵素、補因子、制御因子、または受容体と特異的に結合することができる他の何らかの天然もしくは合成の有機分子ならびに同じ結合特性を保持するその断片、類似体および他の誘導体が挙げられる。本発明において使用する受容体剤またはリガンドの選択は、分析および／または治療対象の疾患、病状または感染の性質によって決まる。好ましい受容体剤またはリガンドとしては、ビタミン（例えば、葉酸またはその断片）、プテロイン酸誘導体、アザ−ペプチド誘導体などの誘導体を含めてペプチド、タンパク質および炭水化物が挙げられる。最も好ましいのは、プテロイル誘導体およびペプチド、特にアザ−ペプチド誘導体である。
【００３５】
本明細書では「プテロイル」または「プテロイン酸」という用語は、アミノベンゾイル部分に結合している縮合ピリミジンヘテロ環を表す。本明細書では「縮合ピリミジンヘテロ環」は、別の５員または６員ヘテロ環と縮合し、二環のプテリジンまたはピロロピリミジンを形成するピリミジンを包含する。プテロイル基がエーテル脂質の頭部基（Ｎ基またはＹ基）の反応部位の１つまたは複数にコンジュゲートすることによって、ホラート(folate)構造が生じる。ただし頭部基はグルタミン酸部分またはその誘導体を表す。例示的なホラート構造は、ホラート骨格、すなわちプテロイル−グルタミン酸（別の綴りでは、Ｎ−［４−［［（２−アミノ−１，４−ジヒドロ−４−オキソ−６−プテリジニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸）およびその誘導体を基礎とする。このようなホラート誘導体としては、任意選択の置換基を反応部位または非反応部位上に有し、および／または選択された原子が置換されている、例えば選択されたヘテロ原子が、好ましくは１もしくは２個、炭素原子で置換されているホラート（デアザおよびジデアザ類似体など）が挙げられる。
【００３６】
例としては、任意選択で置換されている葉酸、フォリン酸、プテロポリグルタミン酸、およびテトラヒドロプテリン、ジヒドロホラート、テトラヒドロホラートなどのホラート受容体結合プテリジン、ならびにそれらのデアザおよびジデアザ類似体が挙げられる。葉酸、５−メチル−(６Ｓ)−テトラヒドロ葉酸および５−ホルミル−(６Ｓ)−テトラヒドロ葉酸が、本発明の化合物に使用される好ましい基礎的構造である。「デアザ」および「ジデアザ」類似体という用語は、天然の葉酸構造の１または２個の窒素原子の代わりに置換された炭素原子を有する、当技術分野において認識されている類似体を指す。例えば、デアザ類似体としては、１−デアザ、３−デアザ、５−デアザ、８−デアザ、および１０−デアザ類似体が挙げられる。ジデアザ類似体としては、例えば１,５−ジデアザ、５,１０−ジデアザ、８,１０−ジデアザ、および５,８−ジデアザ類似体が挙げられる。
【００３７】
好ましいデアザ類似体化合物としては、Ｎ−［４−［２−［（６Ｒ）−２−アミノ−１，４，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］エチル］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸（ロメトレキソール）およびＮ−［４−［１−［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］プロピル］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸（エダトレキサート）が挙げられる。上記の各ホラート構造において、グルタミン酸部分は、エーテル脂質の頭部基に対応する部分であり、したがって、上記の各ホラート構造は、頭部基に対応する様々なグルタミン酸誘導体を含む構造を含むこともできる。
【００３８】
本明細書では「ペプチド」という用語は、１〜３０個、好ましくは２〜２０個、最も好ましくは３〜１０個のアミノ酸からなるオリゴペプチドを表す。
【００３９】
ペプチドは、典型的にはそのＮ末端、Ｃ末端および／または側鎖を経て、エーテル−脂質の頭部基(すなわち、Ｎ基および／またはＹ基)における反応部位に連結している。ペプチドは、ジスルフィド架橋およびエステル結合を含むことがある。さらに、ペプチドは、Ｎ末端、Ｃ末端および側鎖に保護基を有してもよい。「アミノ酸」という用語は、天然のＬ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、合成アミノ酸、βアミノ酸およびそれらの同族体を包含する。
【００４０】
本出願に使用するのに好ましい上記に定義したペプチドとしては、例えば、ＲＧＤ−ペプチド、ＮＧＲ−ペプチド、ＡＴＷＬＰＰＲ−ペプチド、ＡＰＲＰＧ−ペプチド、ＳＭＳＩＡＲＬ−ペプチド、ＴＡＡＳＧＶＲＳＭＨ−ペプチド、ＬＴＬＲＷＶＧＬＭＳ−ペプチド、ＣＤＳＤＳＤＩＴＷＤＱＬＷＤＬＭＫ−ペプチド、ＧＰＬＰＬＲ−ペプチド、ＨＷＧＦ−ペプチドなどの細胞特異的リガンド、およびそれらの誘導体(ただし、ペプチドの命名は単一文字のアミノ酸暗号で記載される)が挙げられ、ＲＧＤペプチド(すなわち、トリペプチドアミノ酸配列アルギニン−グリシン−アスパラギン酸またはＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ)およびその誘導体が好ましい。
【００４１】
ＲＧＤペプチドの誘導体としては、ＲＧＤ配列を含むペプチドおよびＲＧＤペプチドを含む非ペプチド性化合物を含めて、ペプチドに対する何らかの構造改変体が挙げられる。
【００４２】
本明細書では「アザ−ペプチド」という用語は、天然ペプチド構造の１個または複数の炭素原子の代わりに置換された窒素原子を有するペプチド類似体を指す。アザ−ペプチドは、ｓｐ３混成炭素の少なくとも１個、好ましくはアミノ酸のα位炭素原子、最も好ましくはＣ末端におけるアミノ酸のα位炭素原子の代わりに置換された窒素原子を有する、典型的には１〜３０個、好ましくは２〜２０個、最も好ましくは３〜１０個のアミノ酸からなる。アザ−ペプチドは、そのＮ末端、Ｃ末端および／または側鎖を経て、エーテル−脂質の頭部基（すなわち、Ｎ基および／またはＹ基）における反応部位に連結している。アザ−ペプチドは、ジスルフィド架橋およびエステル結合を含むことがある。さらに、アザ−ペプチドは、Ｎ末端、Ｃ末端および側鎖に保護基を有してもよい。好ましいアザ−ペプチドは、Ｃｂｚ−アラニルアラニル−２−アザアスパラギン（ＲＲ１１ａとも呼ばれる）などの２−アザアスパラギンの誘導体である（Ｅｋｉｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７，１８８９−１８９２；ＷＯ２０１２／０３１１７５Ａ９）。
【００４３】
他の実施形態において、標的指向剤またはリガンドは、少なくとも１つの遮断部分も表すまたは含むことができる。本明細書では「遮断部分」という用語は、相補的結合部分の活性、自己認識および／または自己アセンブリ(self−assembly)の、遮蔽、遮断、クローキングおよび／または立体阻害を行う部分を指す。例えば、遮断部分は、遮断部分が除去される所望の状態または時間より前に、相補的結合部分の互いと相互作用する能力を遮断することができる。遮断部分は、ポラキサミン(Polaxamine)；ポロキサマー；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ペプチド；合成ポリマーなどの重合体単位を含むことができる。
【００４４】
本明細書では、「抗原（の）」を「剤」または「リガンド」と関連させて使用する表現は、それ自体またはその一部分に対する免疫応答を誘発する化合物を指す。「免疫応答」という用語は、免疫エフェクター細胞による抗原またはその一部分の認識を指す。これには、Ｔ細胞共刺激の調節の影響を受けるＴ細胞媒介および／またはＢ細胞媒介免疫応答が含まれる。免疫応答という用語は、抗体産生（体液性応答）などのＴ細胞活性化、ならびに単球、マクロファージ、ＮＫ細胞および細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、例えば、ＣＴＬ株、ＣＴＬクローン、および腫瘍、炎症性浸潤または他の浸潤由来のＣＴＬを含むがこれらに限定されない他の免疫エフェクター細胞の活性化によって間接的に行われる免疫応答をさらに包含する。ある種の患部組織は特異的抗原を発現し、これらの抗原に特異的なＣＴＬが同定されている。
【００４５】
例えば、メラノーマの約８０％は、ｇｐ−１００と呼ばれている抗原を発現する。微生物感染および発病過程を防止し、したがってこのような疾患と戦うのに最も有効で望ましい手順の１つは、ワクチンである。ワクチンは、実際の感染の前または抗原もしくは免疫原の宿主有機体への導入による疾患の発症の前に、宿主有機体において免疫応答の刺激を引き起こす。
【００４６】
当業者は、生体分子（タンパク質、ペプチド、脂質、リポタンパク質、グリカン、糖タンパク質、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、ゲノムまたは組換えＤＮＡなどの核酸誘導体）であれば実質的にいずれも含めて、どの巨大分子も抗原として作用できることを理解する。抗原は、化学的もしくは生物学的に合成してもよく、または組換えもしくはゲノムＤＮＡに由来するものでもよく、または組織試料、腫瘍試料、細胞もしくは生体液などの生体試料に由来するものであってもよい。抗原としては、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌性抗原、原虫抗原および他の寄生虫抗原、腫瘍抗原、自己免疫疾患、嗜癖、アレルギーおよび移植片拒絶に関与する抗原、ならびに他の種々の抗原を挙げることができるが、これらに限定されない。抗原の代表例は、細菌、真菌、原虫もしくはウイルス起源のタンパク質もしくはペプチド、またはこれらの抗原に由来する断片とすることができ、ストレプトコッカス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ)種、カンジダ(Ｃａｎｄｉｄａ)種、ブルセラ(Ｂｒｕｃｅｌｌａ)種、サルモネラ(Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ)種、シゲラ(Ｓｈｉｇｅｌｌａ)種、シュードモナス(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ)種、ボルデテラ(Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ)種、クロストリジウム(Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ)種、ノーウォークウイルス(Ｎｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓ)、炭疽菌(Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ)、ヒト結核菌、ヒ
ト免疫不全ウイルス(ＵＶ)、クラミジア(Ｃｈｌａｍｙｄｉａ)種、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザウイルス、パラミクソウイルス種、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタイン−バーウイルス、肝炎ウイルス、プラスモジウム(Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ)種、トリコモナス(Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ)種、性行為感染症剤、ウイルス性脳炎剤、原虫感染症剤、真菌症剤、細菌症剤、癌細胞、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４７】
対象の免疫化は、複数の抗原複製物を多価表示として使用することによって増強することができ、ハプテン関連の大きさの問題により投与することが困難であり、一般的には有効な免疫応答を誘発することができない低分子ペプチドまたは炭水化物などの抗原リガンドの場合に望ましい。したがって、本明細書では「多価」という用語は、担体系における抗原の１つを超える複製または種類の表示を指す。
【００４８】
本明細書では「抗原提示系」または「抗原表示系」という用語は、（ｉ）少なくとも１つの抗原(またはその一部分)を、免疫エフェクター分子、例えばＴ細胞表面のＴ細胞抗原受容体、が認識または結合することができるように提示することができ、あるいは（ｉｉ）少なくとも１つの抗原(またはその一部分)を免疫系の特異的エフェクター細胞が認識できる抗原−ＭＨＣ複合体の形で提示し、それによって提示される抗原(またはその一部分)に対して有効な細胞免疫応答を誘導することができる天然系もしくは合成系を指す。本発明の文脈において、「認識」という用語は、（ｉ）免疫エフェクター細胞が認識および結合し、このような結合が有効な免疫応答を開始するのに十分である少なくとも１つの抗原性リガンドにコンジュゲートしている脂質化合物(またはその組成物または製剤)、または（ｉｉ）対応する受容体が認識および結合する少なくとも１つの標的指向リガンドにコンジュゲートしている脂質化合物(またはその組成物または製剤)、または（ａ）と（ｂ）の両方の組合せを指す。標的指向リガンドまたは抗原性リガンドがそれぞれ受容体または免疫エフェクター細胞に認識されているかどうかを決定する分析は、当技術分野において公知であり、本明細書に記載される。
【００４９】
本明細書では、「治療用」を「剤」または「リガンド」と関連させて使用する表現は、治療的性質を示す生体効果を試験管内および／または生体内で及ぼすことができる化合物を指す。治療用リガンドは、中性でもよく、正もしくは負に帯電していてもよい。
【００５０】
適切な生物活性剤の例としては、薬剤および薬物、合成有機分子、タンパク質、ビタミン、ステロイド、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アジュバントならびに遺伝物質が挙げられる。
【００５１】
「遺伝物質」という用語は、一般的に、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ）を含めて、ヌクレオシド、ヌクレオチドおよびポリヌクレオチドを指す。遺伝物質は、当業者に公知の合成化学方法で作製することができ、もしくは組換え技術の使用で作製することができ、またはそれら両方の組合せで作製することができる。ＤＮＡおよびＲＮＡは、非天然ヌクレオチドを任意選択で含むこともあり、一本鎖でも二本鎖でもよい。「遺伝物質」は、センスおよびアンチセンスＤＮＡおよびＲＮＡ、すなわちＤＮＡおよび／またはＲＮＡにおける特定のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列も指す。
【００５２】
「医薬」または「薬物」という用語は、患者における疾患または傷害の予防、診断、軽減、処置または治療で使用される任意の治療剤または予防剤を指す。本発明の脂質組成物に捕捉され、もしくは埋め込まれ、または本発明の脂質組成物の表面に結合し、もしくは吸着する生物活性剤は、物理化学的諸特性、分子サイズ、または出所、すなわち、合成材料、生物工学材料などの点から、いずれの特定のクラスの生物活性材料にも限定されないことが理解される。したがって、医薬は、例えば以下の治療剤クラスのいずれかから選択される：鎮痛剤、麻酔剤、抗アルツハイマー病薬、抗喘息剤、抗パーキンソン病薬、抗アレルギー薬、抗狭心症薬、抗不整脈薬、抗関節炎薬、抗喘息薬、抗菌薬、抗生物質、抗癌薬、抗凝血薬、抗うつ薬、抗糖尿病薬、制吐薬、抗てんかん薬、抗真菌薬、抗緑内障薬、抗痛風薬、抗ヒスタミン薬、抗高プロラクチン血症薬、抗高血圧薬、抗炎症薬、抗片頭痛薬、抗腫瘍薬、抗肥満薬、抗寄生虫薬、抗原虫薬、解熱薬(anti−phyretics)、抗乾癬薬、抗精神病薬、抗血栓薬、抗潰瘍薬、抗ウイルス薬、抗不安薬、良性前立腺肥大症、気管支拡張薬、カルシウム代謝、強心薬、心血管作動薬、キレート剤および解毒薬、化学予防剤、避妊、利尿薬、ドーパミン作動剤、胃腸剤、消化管運動促進薬(gastroprokinetic)、造血、血友病、ホルモン、ホルモン補充療法、催眠薬、コレステロール低下薬、脂質低下薬、免疫調節薬、免疫賦活薬、免疫抑制薬、脂質調節剤、男性性機能障害、多発性硬化症、筋弛緩薬、神経遮断薬、向知性薬、骨粗鬆症、植物エストロゲン、血小板凝集阻害薬、プロスタグランジン、放射線療法用の放射線増感剤(radioenhencer)、弛緩薬および刺激薬、呼吸窮迫症候群、尿失禁、血管拡張薬、ビタミン／栄養、傷薬およびキサンチン。これらのクラスに属する活性剤を既述の組成物中で使用することができる。
【００５３】
本明細書では「診断用」を「剤」または「リガンド」と関連させて使用する表現は、患者における疾患の有無を診断することができる化合物を指す。診断剤は、中性でもよく、正もしくは負に帯電していてもよい。適切な診断剤の例としては、患者の磁気共鳴映像、超音波またはコンピュータ断層撮影に関連して使用する造影剤などの合成有機分子および重金属錯体が挙げられる。
【００５４】
本発明の担体系と共に使用する標的指向もしくは抗原性または治療用もしくは診断用のリガンドまたは剤の選択は、分析および／または治療対象の疾患、病状もしくは感染の性質によって決まる。
【００５５】
本発明の上記およびさらなる態様を以下の段落に開示する：
Ａ．脂質−リガンドコンジュゲート
本明細書では「脂質−リガンドコンジュゲート」という用語は、線状２官能アミノ酸、さらに詳細には、アスパラギン酸、グルタミン酸などの２−アミノ−アルカン二酸（６個までの炭素原子を有する）を頭部基に含み、頭部基のカップリング部位において１つまたは複数の生物活性リガンドにコンジュゲートして、「脂質−リガンドコンジュゲート」を形成する本発明の化合物を指す。本明細書では「エーテル−脂質（化合物）」または「脂質（化合物）」という用語は、前駆体、すなわち１つまたは複数の生物活性リガンドにコンジュゲートする前の対応する脂質を指す。
【００５６】
したがって、本発明の一態様において、式Ｉによる脂質−リガンドコンジュゲートを対象にする：
【００５７】
【化３】
2018141015.tif 000004
【００５８】
（式中、
Ｙは、Ｏ、Ｎ、Ｓまたは共有結合を表し、
Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、互いに独立して、共有結合またはスペーサー基を表し、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、互いに独立して、Ｈまたはリガンド基を表し、
Ｌは、式（ａ）の基であり：
【００５９】
【化４】
2018141015.tif 000005
【００６０】
（式中、破線はＮへの結合を表し、
Ｒ１は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｂ１の基を表し、
Ｒ１’は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｂ２の基を表し、
Ｒ２は、Ｈまたは式−ＣＨ２−ＯＲｃの基を表し、
Ｒ２’は、Ｈまたは式−ＯＲｄもしくは−ＣＨ２−ＯＲｄの基を表す）
Ｒ３は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｅもしくは−（ＣＨ２）３−ＯＲｅの基を表し、
Ｒａ、Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅは、互いに独立して、飽和または不飽和で直鎖または分枝状の炭化水素鎖を表し、
ｍは、１、２または３であり、
ただし、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３の少なくとも１つはＨでなく、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の少なくとも１つはリガンド基である）。
【００６１】
本明細書では、「コンジュゲートした(conjugated)」（または「コンジュゲーション」）、「結合した(linked)」、「結合した(attached)」という用語は、２つ以上の部分に関連して使用される場合、（直接にまたはスペーサーを介した）２つ以上の部分の共有結合による物理的結合を指す。
【００６２】
頭部基（すなわち、Ｎ基およびＹ基）がリガンド基を有さず、遊離型、保護型または活性型をとる非誘導体化（脂質）化合物を含む対応する（エーテル−）脂質化合物、ならびに頭部基（すなわち、Ｎ基およびＹ基）が１つまたは複数のスペーサー基で誘導体化されている誘導体化（脂質）化合物は、同時出願された出願の一部であり、その全体が本明細書に組み込まれる。
【００６３】
Ｉの化合物の第１の実施形態において、Ｒ３基はＨである。さらに詳細には、（ｉ）Ｒ３はＨであり、Ｒ１およびＲ１’はＨであり、または（ｉｉ）Ｒ３はＨであり、Ｒ２およびＲ２’はＨである。
【００６４】
したがって、この第１の実施形態において、本発明は式Ｉａの化合物を対象にする：
【００６５】
【化５】
2018141015.tif 000006
【００６６】
（式中、Ｌは式（ａ）の基であり：
【００６７】
【化６】
2018141015.tif 000007
【００６８】
Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｙ、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒａ、およびｍは、式Ｉの化合物について上記に定義される通りである）。
【００６９】
さらに詳細には、本発明は、式Ｉａの化合物であって、Ｌは式（ｂ）または（ｃ）の基である化合物を対象にする：
【００７０】
【化７】
2018141015.tif 000008
【００７１】
（式中、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒａは、上記に定義される通りであり、
ただし、式（ｂ）において、Ｒ２およびＲ２’の一方はＨでなく、式（ｃ）において、Ｒ１およびＲ１’の一方はＨでなく、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の少なくとも１つはリガンド基である）。
【００７２】
（ｂ）基の好ましい一実施形態において、Ｒ２はＨであり、Ｒ２’は−ＯＲｄまたは−ＣＨ２−ＯＲｄである。（ｂ）基の別の好ましい実施形態において、Ｒ２は−ＣＨ２−ＯＲｃであり、Ｒ２’は−ＯＲｄまたは−ＣＨ２−ＯＲｄである。
【００７３】
したがって、本発明は、好ましくはＬが式（ｂ１）、（ｂ２）、（ｂ３）または（ｂ４）の基である化合物を対象にする：
【００７４】
【化８】
2018141015.tif 000009
【００７５】
（式中、Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｙ、ｍ、Ｒａ、Ｒｃ、Ｒｄは、上記に定義される通りである）。
【００７６】
（ｃ）基の好ましい一実施形態において、Ｒ１およびＲ１’の一方はＨである。（ｃ）基の別の好ましい実施形態において、Ｒ１もＲ１’もＨではない。
【００７７】
したがって、本発明は、好ましくは、Ｌが式（ｃ１）または（ｃ２）の基である化合物
も対象にする：
【００７８】
【化９】
2018141015.tif 000010
【００７９】
（式中、Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｙ、ｍ、Ｒａ、Ｒｂ１、Ｒｂ２は上記に定義した通りである）。
【００８０】
第２の実施形態において、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’はＨであり、Ｒ３は式−（ＣＨ２）２−ＯＲｅまたは−（ＣＨ２）３−ＯＲｅの基である。
【００８１】
したがって、この第２の実施形態において、本発明は、式Ｉｂの化合物を対象にする：
【００８２】
【化１０】
2018141015.tif 000011
【００８３】
（式中、Ｒ３は式−（ＣＨ２）２−ＯＲｅまたは−（ＣＨ２）３−ＯＲｅの基であり、
Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｙ、Ｒａ、Ｒｅおよびｍは、上記に定義される通りである）。
【００８４】
したがって、本発明の最も好ましい実施形態は、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物である式Ｉの化合物である：
【００８５】
【化１１】
2018141015.tif 000012
【００８６】
（式中、
Ｙは、Ｏ、Ｎ、Ｓまたは共有結合を表し、
Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、互いに独立して、共有結合またはスペーサー基を表し、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、互いに独立して、Ｈまたはリガンド基を表し、
Ｒ１は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｂ１の基を表し、
Ｒ１’は、Ｈまたは式−（ＣＨ２）２−ＯＲｂ２の基を表し、
Ｒ２は、Ｈまたは式−ＣＨ２−ＯＲｃの基を表し、
Ｒ２’は、Ｈまたは式−ＯＲｄもしくは−ＣＨ２−ＯＲｄの基を表し、
Ｒａ、Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｃ、Ｒｄは、互いに独立して、飽和または不飽和で直鎖または分枝状の炭化水素鎖を表し、
ｍは、１、２または３であり、
ただし、（ｉ）式ＩＩにおいて、Ｒ２およびＲ２’の一方はＨでなく、式ＩＩＩにおいて、Ｒ１およびＲ１’の一方はＨでなく、および（ｉｉ）Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の少なくとも１つはリガンド基である）。
【００８７】
式ＩＩの化合物のさらに特定の実施形態は、式ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｃまたはＩＩｄの化合物である：
【００８８】
【化１２】
2018141015.tif 000013
【００８９】
（式中、Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｙ、Ｒａ、Ｒｃ、Ｒｄおよびｍは、式ＩＩの化合物について上記に定義される通りである）。
【００９０】
式ＩＩＩの化合物のさらに特定の実施形態は、式ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物である：
【００９１】
【化１３】
2018141015.tif 000014
【００９２】
（式中、Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｙ、Ｒａ、Ｒｂ１、Ｒｂ２およびｍは、式ＩＩＩの化合物について上記に定義される通りである）。
【００９３】
式Ｉの化合物の他の最も好ましい実施形態は、式ＩＶａおよびＩＶｂの化合物である：
【００９４】
【化１４−１】
2018141015.tif 000015
【００９５】
【化１４−２】
2018141015.tif 000016
【００９６】
（式中、
Ｙは、Ｏ、Ｎ、Ｓまたは共有結合を表し、
Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３は、互いに独立して、共有結合またはスペーサー基を表し、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、互いに独立して、Ｈまたはリガンド基を表し、
Ｒａ、Ｒｅは、互いに独立して、飽和または不飽和で直鎖または分枝状の炭化水素鎖を表し、
ｍは、１、２または３であり、
ただし、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の少なくとも１つは、リガンド基である）。
【００９７】
当業者は、本発明のリガンド−脂質（または本発明の化合物）が１個または複数のキラル中心および／または二重結合を含み、したがって二重結合異性体（すなわち、幾何異性体、例えばＺ／Ｅ異性体もしくはシス／トランス異性体）、鏡像異性体またはジアステレオマーなどの立体異性体として存在する可能性があることを理解する。
【００９８】
したがって、キラル中心における立体化学が指定されていないとき、本明細書に示された化学構造は、立体異性体として純粋(例えば、幾何異性体として純粋、鏡像異性体として純粋またはジアステレオマーとして純粋)な形、富化(例えば、幾何異性体富化、鏡像異性体富化またはジアステレオマー富化)された形、ならびに鏡像異性体混合物および立体異性体混合物を含めて、キラル中心において考え得るすべての配置を包含する。個々の異性体は、出発材料の対応する異性体の形を使用して得ることができる。あるいは、当業者に周知である分割技法またはキラル合成技法を使用して、鏡像異性体混合物および立体異性体混合物を、それらの構成成分の鏡像異性体または立体異性体に分割することができる。本明細書に記載される本発明の化合物は、エノール形、ケト形およびそれらの混合物を含めていくつかの互変異性形として存在することもある。したがって、本明細書に示された構造は、示された化合物の考え得るすべての互変異性形を包含する。
【００９９】
本明細書では「飽和または不飽和で直鎖または分枝状の炭化水素鎖」という用語は、６〜３０個、好ましくは１０〜２２個の炭素原子を有する飽和または不飽和で直鎖または分枝状の炭化水素鎖を指す。
【０１００】
「飽和」という用語を炭化水素鎖と組み合わせて、６〜３０個、好ましくは１０〜２２個の炭素原子を含む直鎖または分枝状のアルキル鎖を指す。例としては、カプリル(デシル)、ウンデシル、ラウリル(ドデシル)、ミリスチル(テトラデシル)、セチル(ヘキサデシル)、ステアリル(オクタデシル)、ノナデシル、アラキジル(エイコシル)、ヘンエイコシル、ベヘニル(ドコシル)、トリコシル、テトラコシル、ペンタコシル、およびそれらの分枝状の異性体、例えば、イソラウリル、アンテイソラウリル、イソミリスチル、アンテイソミリスチル、イソパルミチル、アンテイソパルミチル、イソステアリル、アンテイソステアリルまたはフィタニル(３,７,１１,１５−テトラメチル−ヘキサデカニル)が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０１】
「不飽和」という用語を炭化水素鎖と組み合わせて、可能な最大限の数を下回る数の水素原子が鎖中の各炭素に結合し、１個または複数の炭素−炭素二重結合または三重結合を生じることを示す。好ましい実施形態において、不飽和炭化水素鎖中の不飽和結合の数は、１、２、３または４個、好ましくは１または２個である。
【０１０２】
アルケニル基の例としては、デセニル、ウンデセニル、ドデセニル、パルミトレイル、ヘプタデセニル、オクタデセニル(エライジル、オレイル、リシノレイル(ricinolenyl))、ノナデセニル、エイコセニル、ヘニコセニル、ドコセニル(エルシル)、トリコセニル、テトラコセニル、ペンタコセニル、およびその分枝鎖異性体などの一不飽和アルケニル、ならびにオクタデカ−９,１２−ジエニル(リノレイル、エライドリノレイル)、オクタデカ−９,１２,１５−トリエニル(リノレニル、エライドリノレニル)、９(Ｚ),１１(Ｅ),１３(Ｅ)−オクタデカトリエニル(エレオステアリル)、およびエイコサ−５,８,ｌｌ,１４−テトラエニルなどの多不飽和アルケニルが挙げられるが、これらに限定されない。アルキニル基の例としては、ヘキサデカ−７−イニルおよびオクタデカ−９−イニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０３】
炭化水素と組み合わせた「分枝状」という用語は、線状の一連の炭素原子を主鎖とし、１個または複数の炭素原子を有する少なくとも１つの置換基を側鎖(または分枝基)として有する炭化水素鎖を指す。側鎖の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルなど１つもしくは複数の(Ｃ１〜６)アルキル基、ビニル、アリル、プロペニル、イソプロペニル、２−ブテニルなど１つもしくは複数の(Ｃ１〜６)アルケニル基、またはエチニル、プロピニル、ブチニルなど１つもしくは複数の(Ｃ１−６)アルキニル基が挙げられる。好ましい側鎖は(Ｃ１〜６)アルキル基であり、最も好ましくはメチルおよびエチルである。
【０１０４】
本発明の化合物は、好ましくは少なくとも２つの炭化水素鎖、好ましくは２、３、４、５または６つの炭化水素鎖、最も好ましくは２または３つの炭化水素鎖を含み、炭化水素鎖の主鎖は同じであるか異なり、好ましくは同じであり、アルキル鎖、アルケニル鎖およびアルキニル鎖、好ましくはアルキル鎖およびアルケニル鎖から選択される。好ましい一実施形態において、本発明の化合物は２つのアルキル鎖を有し、それらのアルキル鎖は同じでも異なってもよく、好ましくは同じである。
【０１０５】
本発明の化合物の特定の実施形態において、炭化水素鎖Ｒａ、Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅは、好ましくはミリスチル、パルミチル、ステアリル、オレイル、リノレイルおよびフィタニル(phytanoyl)から選択される。
【０１０６】
本明細書で用いられる「アルキル」、「アルコキシ」、「アルケニル」、「アルキニル」という用語は、以下の意味を有する。
【０１０７】
「アルキル」という用語は、１〜１２個、好ましくは１〜８個の炭素原子を含む直鎖または分枝状のアルキル鎖を指す。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチルおよびｔ−ブチルが挙げられるが、これらに限定されない。「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキル基を指す。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシおよびブトキシが挙げられるが、これらに限定されない。「アルケニル」という用語は、１個または複数の炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分枝状の不飽和アルキル基を指す。上記のアルキル、アルケニルおよびアルコキシ基は、別の基で任意選択で置換されていてもよい。置換基の例としては、ハロ、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、メルカプト、アルコキシカルボニル、アミド、カルボキシ、アルキルスルホニル、アルキルカルボニル、カルバミド、カルバミル、カルボキシル、チオウレイド、チオシアナト、スルホンアミド、アリール、ヘテロアリール、シクリルおよびヘテロシクリルが挙げられるが、これらに限定されない。「アリール」という用語は、約６〜約１０個、好ましくは５〜７個の炭素原子を含む芳香族炭素環式基を指す。アリール基は、同じでも異なってもよい１つまたは複数のアリール基置換基で、任意選択で置換されていてもよく、「アリール基置換基」としては、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、カルボキシ、アロイル、ハロ、ニトロ、トリハロメチル、シアノ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、アシルオキシ、アシルアミノ、アロイルアミノ、カルバモイル、アルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、アリールチオ、アルキルチオ、アルキレンおよび−ＮＲＲ’（ただし、ＲおよびＲ’はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリールおよびアラルキルである）が挙げられる。例示的なアリール基としては、置換または非置換のフェニル、ナフチル、ピレニル、アントリルおよびフェナントリルが挙げられる。
【０１０８】
「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を有する上記に定義されたアリール部分を指す。ヘテロアリール部分の例としては、フリル、フリレン、フルオレニル、ピロリル、チエニル、オキサゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、キナゾリニル、キノリル、イソキノリルおよびインドリルが挙げられる。「(ヘテロ)アリールオキシ」という用語は(ヘテロ)アリール−Ｏ−基を指し、(ヘテロ)アリール基は以前に説明した通りである。例示的なアリールオキシ基としては、フェノキシおよびナフトキシが挙げられる。「(ヘテロ)アラルキル」という用語は(ヘテロ)アリール−アルキル基を指し、(ヘテロ)アリールおよびアルキルは以前に説明した通りである。例示的なアラルキル基としては、ベンジル、フェニルエチルおよびナフチルメチルが挙げられる。「(ヘテロ)アラルキルオキシ」という用語は(ヘテロ)アラルキル−Ｏ−基を指し、(ヘテロ)アラルキル基は以前に説明した通りである。例示的なアラルキルオキシ基はベンジルオキシである。
【０１０９】
「シクロアルキル」という用語は、シクロヘキシルまたはシクロヘキセン−３−イルなど６〜１０個の炭素原子を有する飽和または不飽和の非芳香族環式炭化水素部分を指す。「ヘテロシクロアルキル」という用語は、４−テトラヒドロピラニルまたは４−ピラニルなど少なくとも１個の環ヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を有する本明細書に定義されたシクロアルキルを指す。
【０１１０】
本明細書に記載されたアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキルは、別段の指定のない限り、置換部分と非置換部分の両方を含む。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール上の可能な置換基としては、(Ｃ１〜Ｃ１０)アルキル、(Ｃ２〜Ｃ１０)アルケニル、(Ｃ２〜Ｃ１０)アルキニル、(Ｃ３〜Ｃ８)シクロアルキル、(Ｃ５〜Ｃ８)シクロアルケニル、(Ｃ１〜Ｃ１０)アルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、アミノ、(Ｃ１〜Ｃ１０)アルキルアミノ(Ｃ１〜Ｃ２０)ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヒドロキシル、ハロゲン、チオ、(Ｃ１〜Ｃ１０)アルキルチオ、アリールチオ、(Ｃ１〜Ｃ１０)アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アシルアミノ、アミノアシル、アミジノ、グアニジン、ウレイド、シアノ、ニトロ、アシル、アシルオキシ、カルボキシル、およびカルボン酸エステルが挙げられる。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールは、互いに縮合していてもよい。
【０１１１】
Ｙ基はＯ、Ｎ、Ｓまたは共有結合であり、好ましくはＯまたはＮであり、最も好ましくはＮである。Ｙ基が共有結合である場合、−Ｓ１−Ｘ１はＣＯ−基に直接結合していることが理解される。
【０１１２】
本明細書で用いられる「スペーサー」または「スペーサー基」(またはＳ１、Ｓ２、Ｓ３基)という用語は、本発明のエーテル−脂質を、１つまたは複数の生物活性リガンドＸ１、Ｘ２、Ｘ３と、エーテル−脂質とリガンドとの望ましくない相互作用をいずれも除去しかつ／またはリガンドの生物活性(リガンドのそれらの標的との親和性結合など)に影響を及ぼす可能性がある(エーテル−脂質自体または他の何らかの隣接分子によって引き起こされる)立体障害をいずれも低減するのに十分な距離で、結合させることができる２価の分枝または非分枝状の化学基を指す。エーテル−脂質と生物活性リガンドのコンジュゲートの所期の使用に応じて、スペーサー基は長さが異なってもよく、(加水分解的、酵素的および化学的に)安定であってもよく、または切断可能な結合を含んでもよい。本発明の切断可能な結合は、何らかの形態、例えば化学的、酵素的、加水分解的などの切断可能な化学的挙動を経て切断するように選択することができる。例示的な切断可能なリンカーとしては、プロテアーゼ切断ペプチドリンカー、ヌクレアーゼ感受性核酸リンカー、リパーゼ感受性脂質リンカー、グリコシダーゼ感受性炭水化物リンカー、ｐＨ感受性リンカー、低酸素感受性リンカー、光切断リンカー、熱不安定性リンカー、酵素切断リンカー、超音波感受性リンカー、Ｘ線切断リンカーなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１３】
スペーサーは、スペーサーで改変された本発明の化合物が生物活性の基など別の部分に結合できるように活性化された末端基であってもなくてもよいことが理解される。
【０１１４】
特定の実施形態において、「スペーサー基」（またはＳ１、Ｓ２、Ｓ３基とも呼ばれる）は、短いスペーサー基、またはケトン、エステル、エーテル、アミノ、アミド、アミジン、イミド、カルバマートもしくはチオカルバマート官能基、グリセロール、尿素、チオ尿素、二重結合または芳香族環から選択される基の１つまたは複数を任意選択で含むアルキレン鎖から選択される長鎖スペーサー基を表す。
【０１１５】
さらに詳細には、短いスペーサー基（またはＳ１、Ｓ２、Ｓ３基）は、(Ｃ１〜Ｃ１２)アルキル、(Ｃ２〜Ｃ１２)アルケニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールから選択することができる。長鎖スペーサー基（またはＳ１、Ｓ２、Ｓ３基）は式−Ｗ−(ＣＨ２−)ｋ−Ｗ’−の重合体基から選択することができ、式中、ｋは１３から３０００の間の整数であり、ＷおよびＷ’はアミノ、カルボキシル、ヒドロキシまたはチオ基と反応することができる反応性基であり、非隣接ＣＨ２基の１つまたは複数は独立して、アリール、ヘテロアリール、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−；または−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＮＲ’−、−Ｎ’−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＮＲ’−ＣＯ−Ο−、−Ｏ−ＣＯ−ＮＲ’−、−ＮＲ’−ＣＯ−ＮＲ’−、および−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−から選択される親水性(または極性)基で置換されていてもよく、式中、Ｒ’は水素または(Ｃ１〜Ｃ１２)アルキルを表す。１つを超える非隣接ＣＨ２基の同じ基による置換は、特定の繰返し単位を有する重合体鎖（例えば、ポリエステル、ポリエーテル、ポリイミドなど）において行われることが理解される。好ましいスペーサー基としては、（水溶液に対して増大した親和性を有する）親水性重合体基、すなわちアルキレン主鎖中に上記の親水性（または極性）基の１つまたは複数を含む繰返し構造単位を含む重合体が挙げられる。親水性重合体基の典型的な例としては、ポリオキシ(Ｃ２〜Ｃ３)アルキレン（例えば、ポリエチレングリコール(ＰＥＧ)またはポリプロピレングリコール(ＰＰＧ)）、多糖（例えば、デキストラン、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸)、ポリアミド（例えば、ポリアミノ酸、半合成ペプチドおよびポリヌクレオチド）；ポリシアル酸、ポリエステル（例えば、ポリラクチド(ＰＬＡ）、ポリラクチド−コ−グリコリド(ＰＬＧＡ)）、ポリカルボナート、ポリエチレンイミン(ＰＥＩ)、ポリイミド、ポリ酢酸ビニル(ＰＶＡ)が挙げられる。好ましいスペーサーは、「ＰＥＧ」または「ポリエチレングリコール」であり、いずれの水溶性ポリ（エチレンオキシド）も包含する。典型的には、「ＰＥＧ」は−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−である副単位の大部分、例えば＞５０％を含む重合体を意味する。様々な形態のＰＥＧは、分子量、構造または幾何形状（例えば、分枝状、線状、櫛形ＰＥＧ、多機能性など）が異なる。本発明において使用するためのＰＥＧは、好ましくは次の２つの構造の一方を含むことができる：「−Ｏ(ＣＨ２ＣＨ２Ｏ)ｍ−」または「−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ(ＣＨ２ＣＨ２Ｏ)ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−」、ここで、ｍは３〜３０００であり、末端基およびＰＥＧ全体の構造は異なってもよい。以上に示したように、使用に応じて、ＰＥＧはエンドキャップされた形をとることができる。ＰＥＧが「−Ｏ(ＣＨ２ＣＨ２Ｏ)ｍ−」と定義される場合、エンドキャップ基は、典型的には１〜２０個の炭素を含む炭素含有基であることが一般的であり、好ましくはアルキル(例えば、メチル、エチルまたはベンジル)であるが、その飽和および不飽和の形、ならびにアリール、ヘテロアリール、シクリル、ヘテロシクリル、および前述のいずれかの置換された形も考えられる。ＰＥＧが「−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ(ＣＨ２ＣＨ２Ｏ)ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−」と定義される場合、エンドキャップ基は炭素含有基であることが一般的であり、典型的には１〜２０個の炭素原子および基に共有結合している酸素原子を含み、ＰＥＧの一端に共有結合するのに利用できる。この場合、基は典型的にはアルコキシ(例えば、メトキシ、エトキシまたはベンジルオキシ)であり、炭素含有基に関して、任意選択で飽和および不飽和であり、アリール、ヘテロアリール、シクリル、ヘテロシクリル、および前述のいずれかの置換された形とすることができる。(「エンドキャップされていない」)他端は、典型的にはヒドロキシル、アミン、またはＰＥＧが「−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ(ＣＨ２ＣＨ２Ｏ)ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−」と定義される場合に別の化学修飾を施すことができる活性基である。さらに、エンドキャップ基はシランとすることもできる。
【０１１６】
様々な末端基官能化または活性化ＰＥＧの調製に関する概説は当技術分野において公知である(例えば、Ｚａｌｉｐｓｋｙ  Ｓ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．，６，１５０−１６５(１９９５)を参照)。
【０１１７】
生物活性リガンド(Ｘ１および／またはＸ２および／またはＸ３)をエーテル−脂質(すなわち、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３がＨである式Ｉの化合物)にコンジュゲートする方法は、１つまたは複数の生物活性リガンドＸ１、Ｘ２、Ｘ３の、１つまたは複数の個々のエーテル−脂質の頭部基（すなわち、Ｎ基および／またはＹ基）における反応部位の１つまたは複数への共有結合を含む。したがって、１つの生物活性リガンドは、１つの個々のエーテル−脂質の１つもしくは複数の部位、または１つを超える個々のエーテル−脂質の１つを超える部位に結合することができる。あるいは、２または３つの生物活性リガンドが、１つの個々のエーテル−脂質のカップリング部位に結合する。１つまたは複数の生物活性基は、エーテル−脂質に直接またはスペーサー基を介して結合することができる。
【０１１８】
典型的には、結合方法は、通常次のステップを含むことができる：
ａ）Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３基の１つまたは複数に１つまたは複数のカップリング部位を有する式Ｉの脂質化合物（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３はＨである）を用意するステップと、
ｂ）１つまたは複数のカップリング部位と反応するのに適した反応性基を有する抗原リガンドを用意するステップと、
ｃ）脂質化合物と抗原を反応させて、リガンド−脂質コンジュゲートを得るステップ。
【０１１９】
本明細書では「カップリング部位」または「カップリング基」という用語は、カップリング反応において対応する反応基または官能基（または２つのカップリング相手）と反応して、共有結合(Ｃ−Ｃ、Ｃ−Ｏ、Ｃ−Ｎ、Ｃ−Ｓ結合)を形成することができる反応基または官能基を指す。
【０１２０】
コンジュゲーション(またはカップリング)方法の選択は、結合させるべき生物活性リガンドの性質、すなわち物理的属性（例えば、大きさ、電荷など）、生物活性リガンドに存在する反応性基の性質など様々な要因によって決まる。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、コンジュゲーションは、２官能性剤（すなわち、２つの官能(末端)基を有する剤）、好ましくはヘテロ２官能性剤（すなわち、異なる２つの官能(末端)基を有する剤）の存在下に実施される。このような(ヘテロ)２官能性剤の使用によって、脂質−リガンドコンジュゲートが生じ、脂質とリガンドが互いに直接結合していてもよく、またはスペーサーで分かれていてもよい。典型的な官能基としては、スクシンイミジルエステル、マレイミド、およびピリジルジスルフィドなどの基が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、２官能性剤は、例えばカルボジイミド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸(ＮＨＳ−ＡＳＡ)、ピメリミド酸ジメチル二塩酸塩(ＤＭＰ)、スベリミド酸ジメチル(ＤＭＳ)、３，３’−ジチオビスプロピオンイミダート(ＤＴＢＰ)、Ｎ−スクシンイミジル３−［２−ピリジルジチオ］−プロピオンアミド(ＳＰＤＰ)、α−メチルブタン酸スクシンイミジル(ｓｕｃｃｉｍｉｄｙｌ)、ビオチンアミドヘキサノイル−６−アミノ−ヘキサン酸Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミドエステル(ＳＭＣＣ)、スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−ドデカエチレングリコール］エステル（ＮＨ  Ｓ−ＰＥＯ１２）、（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＩＡＢ）、Ｓ−アセチルチオ酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＡＴＡ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）およびＮ−γ−マレイミドブチリルオキシスクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）、スクシンイミジルジカルボニルペンタン(succinmidyl dicarbonyl pentane)またはスベリン酸ジスクシンイミジルから選択されるが、これらに限定されない。他の実施形態において、２官能性剤は、ＳＰＤＰと組み合わせたＴｒａｕｔ試薬（２−イミノチオラン）である。さらに別の実施形態において、リンカーはである。別の実施形態において、２官能性剤は、参照により本明細書に組み込まれるＰｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃａｔａｌｏｇｕｅ(Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、米国)およびＤｏｕｂｌｅ  Ａｇｅｎｔｓ(商標)Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  Ｇｕｉｄｅ(Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ)に開示されているもののうちから選択される。好ましいコンジュゲーション方法としては、カルボジイミド媒介アミド形成および活性エステルマレイミド媒介アミンおよびスルフヒドリルカップリングなどが挙げられる。
【０１２２】
例えば、チオール含有分子は、ヘテロ２官能性架橋試薬、例えばスクシンイミジルエステルとマレイミド、ピリジルジスルフィドまたはヨードアセトアミドとの両方を含む試薬を使用して、アミン含有分子と反応させてもよい。アミン−カルボン酸およびチオール−カルボン酸架橋、マレイミド−スルフヒドリルカップリング化学反応（例えば、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）法）などを使用することができる。
【０１２３】
ポリペプチドが、リシンもしくはシステイン側鎖中のそれぞれアミン基もしくはチオール基を介してまたはＮ末端アミノ基によって、エーテル脂質にコンジュゲートできることは好都合である。同様に、オリゴヌクレオチドが、３’または５’末端の独特の反応性基、例えばスルフヒドリル、アミノ、ホスファート基などを介して、エーテル脂質にコンジュゲートできることは好都合である。反応性スルフヒドリル基は、（ｉ）脂質とオリゴヌクレオチドもしくはポリペプチドの間に切断可能なジスルフィド結合を生じる、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸Ｎ−スクシンイミジル(ＳＰＤＰ)および長鎖ＳＰＤＰ(Ｉｃ−ＳＰＤＰ)、または（ｉｉ）脂質とオリゴヌクレオチドもしくはポリペプチドの間に切断不可能な結合を生じるヨード酢酸スクシンイミジルなどの試薬の使用を通して、遊離アミノ基（例えば、Ｎ基およびＹ基）を有する式Ｉの脂質とカップリングすることができる。上記その他のコンジュゲーション技法は当技術分野において公知である（例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，５１２，４３９；ＷＯ０１／２２９９５；Ｇｒｅｇ  Ｈｅｒｎａｎｓｏｎ  ”Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，”Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６；Ｇｏｒｄｏｎ  Ｂｉｃｋｅｒｓｔａｆｆ”Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｓ，”Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９７を参照）。
【０１２４】
当業者は、上記のコンジュゲーション方法に従って生物活性リガンドとのコンジュゲーションが起こるには、式Ｉのエーテル−脂質の頭部基のスペーサー基Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３上ののどの官能基（１つまたは複数）（例えば、アミン、カルボニルまたはカルボキシル基）を選択すべきか知っている。
【０１２５】
コンジュゲーション方法に関する追加の一般的情報は、例えばＰｉｅｒｃｅ社ウェブサイトで提供され、最初に１９９４−９５  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔａｌｏｇおよびその中に引用された参考文献で公表された”Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，”Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ；Ｗｏｎｇ  ＳＳ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９９１；およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，１９９６で見ることができる。１つまたは複数のリガンドを式Ｉのエーテル−脂質化合物にコンジュゲートさせる際に使用されるモル比は、当業者が容易に最適化することができる。典型的には、脂質化合物とリガンドが約１：１から約１０：１の範囲に及ぶことがある。
【０１２６】
上記の一般方法においては、分取逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、限外濾過または透析濾過などの膜濾過など適切な任意の方法を使用して、中間体のコンジュゲート化合物を精製することができる。未反応の反応剤は、ゲル濾過または平衡透析などのサイズ排除クロマトグラフィーにより除去することができる。最終のコンジュゲートは、例えばゲル濾過、限外濾過などの膜濾過、もしくはイオン交換クロマトグラフィー、またはそれらの組合せを含めて適切な任意の手段を用いて精製することもできる。
【０１２７】
本発明の脂質−リガンドコンジュゲートは、特にリポソーム、ミセルおよびナノ粒子などの脂質性またはナノ微粒子担体系の調製において使用するのに適している。
【０１２８】
Ｂ．脂質性担体系
別の態様において、本発明は、本発明の１つまたは複数の脂質−リガンドコンジュゲートを他の共脂質と任意選択で組み合わせて含む脂質性担体系を対象とする。
【０１２９】
例示的な脂質性担体系は、好ましくは脂質（性）小胞(lipid(ic) vesicles)を含む。「脂質（性）小胞」（または本小胞もしくは本発明の小胞）という用語は、脂質性担体系という表現と同義に使用され、内部空隙の存在を特徴とする球状単位を指す。典型的には、本発明の小胞は、他の合成または天然の脂質(共脂質)と任意選択で組み合わせた、１つまたは複数の脂質−リガンドコンジュゲートで形成される。本発明の所与の任意の小胞において、脂質は単層または二重層の形をとることができる。１つを超える単層または二重層の場合は、単層または二重層は略同心円状である。本小胞は、通常リポソーム（すなわち、内部空隙を有する同心円状に配置された１つまたは複数の脂質二重層を含む小胞）、ミセル（すなわち、内部空隙を有する単一の脂質単層を含む小胞）などと呼ばれるような単位を含む。したがって、脂質を使用して、ユニラメラ小胞（１つの単層または二重層を含む）、オリゴラメラ小胞（約２つまたは約３つの単層または二重層を含む）またはマルチラメラ小胞（約３つを超える単層または二重層を含む）を形成することができる。
【０１３０】
小胞の内部空隙は、一般的に、例えば、水性液体を含めた液体、気体、気体の前駆体、および／または例えば１つもしくは複数の生物活性剤を含めた固体材料、で充填される。以下も参照されたい。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、脂質−リガンドコンジュゲートのリガンドは、（標的指向化脂質性担体系または標的指向化リポソームを得るための）標的指向リガンドである。他の実施形態において、脂質−リガンドコンジュゲートのリガンドは、（抗原性脂質性担体系または抗原性リポソームを得るための）抗原性リガンドである。したがって、本発明は、詳細には標的指向化脂質小胞（標的指向化リポソームまたはミセルなど）であって、式Ｉの脂質−リガンドコンジュゲート（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３基の１つまたは複数が標的指向リガンドである）を他の共脂質と任意選択で組み合わせて含む小胞を対象とする。
【０１３２】
あるいは、本発明は、詳細には、抗原性脂質小胞（抗原性リポソームまたはミセルなど）であって、式Ｉの脂質−リガンドコンジュゲート（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３基の１つまたは複数が抗原性リガンドである）を他の共脂質と任意選択で組み合わせて含む小胞を対象とする。
【０１３３】
特定の実施形態において、本発明は、混合脂質小胞（混合リポソームまたはミセルなど）であって、式Ｉの脂質−リガンドコンジュゲート（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３基の１つまたは複数が抗原性リガンドおよび標的指向リガンドである）を他の共脂質と任意選択で組み合わせて含む小胞も対象とする。
【０１３４】
特定の実施形態において、本発明の脂質小胞（すなわち、標的指向化脂質小胞、抗原性脂質小胞または混合脂質小胞）は、（ａ）本発明の脂質小胞の内部空隙内に封入され、（ｂ）例えば本発明の脂質小胞の層もしくは壁内に含まれている脂質に散在させることによって、本発明の脂質小胞の層もしくは壁内に統合され、または（ｃ）静電的相互作用、水素結合、ファンデルワールス力もしくは共有結合などの様々な化学的相互作用により、本発明の脂質小胞の表面に曝露され、結合もしくは吸着などをする、治療剤または診断剤または抗原剤、好ましくは治療剤または診断剤など１つまたは複数の生物活性剤をさらに含む。
【０１３５】
当業者は、封入された抗原剤などを含む標的指向化脂質小胞など、すべての組合せが本発明の範囲内で考えられることを理解する。
【０１３６】
特定の実施形態において、抗原性リガンドおよび／または剤を含む本発明の脂質小胞は、（ａ）前記脂質小胞の内部空隙内に封入され、（ｂ）例えば前記脂質小胞の層もしくは壁内に含まれている脂質に散在させることによって、前記脂質小胞の層もしくは壁内に統合され、または（ｃ）静電的相互作用、水素結合、ファンデルワールス力もしくは共有結合などの様々な化学的相互作用により、前記脂質小胞の表面に曝露される、１つまたは複数、好ましくは１つのアジュバントをさらに含んでもよい。
【０１３７】
１つまたは複数のアジュバントが内部空隙に封入されることが好ましい。本明細書では「共脂質」または「小胞形成性（共）脂質」という用語は、本発明の脂質小胞において追加の脂質として任意選択で存在してもよい脂質を指し、非環式および環式の飽和または不飽和の天然または合成由来の脂質を包含することができる。本明細書では、共脂質は中性脂質、カチオン性脂質またはアニオン性脂質であってもよい。カチオン性脂質は正の実効電荷を有するものであり、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム塩、例えばメチル硫酸塩（ＤＯＴＡＰ）、ＤＤＡＢ、臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム；１，２−ジアシルオキシ−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ジオレオイル、ジミリストイル、ジラウロイル、ジパルミトイルおよびジステアロイルを含むが、これらに限定されない；また異なる２つのアシル鎖をグリセロール主鎖に結合させることができる）；Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ(dioloyloxy)）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミン（ＤＯＤＡＰ）；１，２−ジアシルオキシ−３−ジメチルアンモニウムプロパン（ジオレオイル、ジミリストイル、ジラウロイル、ジパルミトイルおよびジステアロイルを含むがこれらに限定されない；また異なる２つのアシル鎖をグリセロール主鎖に結合させることができる）；塩化Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）；１，２−ジアルキルオキシ−３−ジメチルアンモニウムプロパン（ジオレイル、ジミリスチル、ジラウリル、ジパルミチルおよびジステアリルを含むがこれらに限定されない；また異なる２つのアルキル鎖をグリセロール主鎖に結合させることができる）；ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）；３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノ−エタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）；２，３−ジオレオイルオキシ−Ｎ−（２−（スペルミンカルボキサミド）−エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロ酢酸塩（ＤＯＳＰＡ）；β−アラニルコレステロール；臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）；ジＣ１４−アミジン；Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ’−テトラデシル−３−テトラデシルアミノ−プロピオンアミジン；１４Ｄｅａ２；Ｎ−（α−トリメチルアンモニオアセチル）ジドデシル−Ｄ−グルタマートクロリド（ＴＭＡＧ）；Ｏ，Ｏ’−ジテトラデカノイル−Ｎ−（トリメチルアンモニオ−アセチル）ジエタノールアミンクロリド；１，３−ジオレオイルオキシ−２−（６−カルボキシ−スペルミル）−プロピルアミド（ＤＯＳＰＥＲ）；ヨウ化Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシルエチル）−２，３−ジオレオイルオキシ−１，４−ブタンジアンモニウム；塩化１−［２−（９（Ｚ）−オクタデセノイルオキシ）エチル］−２−（８（Ｚ）−ヘプタデセニル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウム（ＤＯＴＩＭ）、塩化１−［２−（ヘキサデカノイルオキシ）エチル］−２−ペンタデシル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウム（ＤＰＴＩＭ）などの塩化１−［２−（アシルオキシ）エチル］２−アルキル（アルケニル）−３−（２−ヒドロキシエチル）−イミダゾリニウム誘導体（Ｓｏｌｏｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．４３：１３５３７−１３５４４に記載）、臭化１，２−ジオレオイル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウム（ＤＯＲＩ）、臭化１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウム（ＤＯＲＩＥ）、臭化１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシプロピルアンモニウム（ＤＯＲＩＥ−ＨＰ）、臭化１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシブチルアンモニウム（ＤＯＲＩＥ−ＨＢ）、臭化１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシペンチルアンモニウム（ＤＯＲＩＥ−Ｈｐｅ）、臭化１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシルエチルアンモニウム（ＤＭＲＩＥ）、臭化１，２−ジパルミチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウム（ＤＰＲＩＥ）、臭化１，２−ジステアリルオキシプロピル(disteryloxypropyl)−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウム（ＤＳＲＩＥ）などの第四級アミン上にヒドロキシアルキル部分を含む２，３−ジアルキルオキシプロピル第四級アンモニウム化合物誘導体（例えば、Ｆｅｌｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９４，２６９，２５５０−２５６１を参照）；アシルカルニチンのカチオン性エステル（Ｓａｎｔａｎｉｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，４９８，６３３により報告されている）；ホスファチジルコリン(phospahtidylcholine)のカチオン性トリエステル、すなわち１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロール−３−エチルホスホコリンなどの脂質を挙げることができ、ただし炭化水素鎖は、鎖長Ｃ１２〜Ｃ２４で、飽和または不飽和であり、分枝状または非分枝状とすることができ、２つのアシル鎖は必ずしも同一ではない。中性またはアニオン性脂質はそれぞれ中性または陰イオンの実効電荷を有する。これらは、中性または負の実行電荷をもつコレステロール、リン脂質、リゾ脂質、リゾリン脂質、スフィンゴ脂質またはＰＥＧ化脂質などのステロールまたは脂質から選択することができる。それによって、有用な中性およびアニオン性脂質としては、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール（特定の糖に限定されない）、脂肪酸、ステロール（カルボン酸基を含む）、例えばコレステロール、コレステロール硫酸およびコレステロールヘミスクシナート；ＤＯＰＥを含むがこれに限定されない１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジアシル−グリセロ−３−ホスホコリン、およびスフィンゴミエリンが挙げられる。グリセロール主鎖に結合している脂肪酸は、特定の長さに限定されず、二重結合も特定の数に限定されない。リン脂質は異なる２つの脂肪酸を有するものであってもよい。
【０１３８】
当業者は、脂質−リガンドコンジュゲートと共脂質の比が、生物活性リガンドの性質、脂質小胞内に封入されもしくは埋め込まれ、または脂質小胞上に吸着しまたは脂質小胞に結合する任意選択の生物活性剤の性質、所期の使用（疾患の治療、診断分析など）、薬剤組成物としての製剤および投与経路によって決まることを理解する。
【０１３９】
一実施形態において、本発明の脂質小胞は、本発明の脂質−リガンドコンジュゲートおよび他の小胞形成性脂質（共脂質）を好ましくは１：１０００から１：１、好ましくは１：５００から１：５０の比で含んでもよい。
【０１４０】
本発明の別の実施形態において、脂質小胞は、１つまたは複数の脂質−リガンドコンジュゲートを含んでもよく、コンジュゲートのエーテル−脂質は架橋または重合して、重合脂質小胞を形成することができる不飽和炭化水素鎖を含む。
【０１４１】
本明細書では「重合脂質小胞」および（特に重合リポソーム）という用語は、構成要素の脂質同士が分子間相互作用により共有結合している脂質小胞を意味する。脂質は、脂質二重層の単層（小葉）内および／または二重層の２層間で結合することができる。
【０１４２】
脂質層構造を重合すると、そのアセンブリが生体内に存在する酸、胆汁酸塩または酵素による酵素的分解に対して示す抵抗性は劇的に高くなる。さらに、（切断可能または重合可能な炭化水素鎖を有する脂質−リガンドコンジュゲートの特定の比を選択することによる）重合度および分解率、安定性、ならびに（所望の大きさの細孔を作製することによる）「漏出性」の制御は、任意選択で封入された生物活性剤の所望のエスケープ率(escape rate)に従って調整することができる。したがって、脂質小胞の設計によって、例えば特異的免疫取り込み部位(specific immune uptake site)における被包された任意の抗原剤または特異的組織または細胞部位における被包された任意の治療剤などの最適エスケープ率を調節することが可能になる。
【０１４３】
当業者が認識するように、リポソーム、ミセルまたは他の小胞などの小胞の形の脂質性担体系は、当技術分野において公知である標準状態を用いて、本発明の脂質−リガンドコンジュゲートから容易に調製することができる。
【０１４４】
所望の物理的諸特性に応じて、脂質小胞は、安定化脂質を含めて１つまたは複数の共脂質と任意選択で組み合わせた脂質−リガンドコンジュゲートから調製してもよい。最終的に本脂質−リガンドコンジュゲートと組み合わせる特定の安定化化合物は、得られる脂質小胞の特性を最適化するように所望に応じて選択することができる（過度の実験なしに当業者が容易に特定可能である）。
【０１４５】
本発明によるミセル組成物は、当業者に明らかである通常の様々なミセル調製方法のいずれか１つを使用して調製することができる。これらの方法は、典型的には脂質−リガンドコンジュゲートの有機溶媒への懸濁、溶媒の蒸発、水性媒体への再懸濁、超音波処理および遠心を伴う。前述の方法および他の方法が、例えばＣａｎｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１８９，ｐｐ．４１８−４２２（１９９０）；Ｅｌ−Ｇｏｒａｂ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．３０６，ｐｐ．５８−６６（１９７３）；Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ，Ｓｈｉｎｏｄａ，  ｅｔ  ａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９６３）（特に、”Ｔｈｅ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｅｌｌｅｓ”，Ｓｈｉｎｏｄａ，Ｃｈａｐｔｅｒ  １，ｐｐ．１−８８）；Ｃａｔａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｅｌｌａｒ  ａｎｄ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｅｎｄｌｅｒ  ａｎｄ  Ｆｅｎｄｌｅｒ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９７５）に記載されている。前述の各刊行物の開示内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。脂質−リガンドコンジュゲートと組み合わせて、それから生成するミセル組成物を安定化させる任意選択の安定化材料としては、臭化ラウリルトリメチルアンモニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、臭化ミリスチルトリメチルアンモニウム、塩化（Ｃ１２〜Ｃ１６）アルキルジメチルベンジルアンモニウム、臭化および塩化セチルピリジニウム、ラウリル硫酸などが挙げられる。以上に例示した材料に加えて、ミセル組成物を安定化させる他の材料は、本開示に基づいて当業者に明らかである。
【０１４６】
本発明のリポソーム組成物は、特に生物活性剤の組織および細胞への送達用の担体または抗原提示担体として特に有効であるので、特に好ましい。
【０１４７】
リポソーム組成物は、１つもしくは複数の脂質−リガンドコンジュゲートを、１つもしくは複数の別の共脂質および／または１つもしくは複数の安定化化合物と任意選択で組み合わせて含んでもよい。脂質−リガンドコンジュゲート（および共脂質）は、単層または二重層の形をとることがあり、単層または二重層の脂質を使用して、１つまたは複数の単層または二重層を形成することができる。１つを超える単層または二重層の場合、単層または二重層は略同心円状である。したがって、脂質−リガンドコンジュゲート（および共脂質）を使用して、ユニラメラリポソーム（１つの単層または二重層を含む）、オリゴラメラリポソーム（２または３つの単層または二重層を含む）またはマルチラメラリポソーム（３つを超える単層または二重層を含む）を形成することができる。
【０１４８】
本発明のリポソーム脂質組成物の調製における適切な共脂質および安定化化合物の選択は当業者に明らかであるはずであり、過度の実験なしに本開示に基づいて実現することができる。
【０１４９】
以上に例示した材料に加えて、本発明のリポソーム脂質組成物の調製に使用する他の材料は、本開示に基づいて当業者に明らかである。
【０１５０】
本脂質−リガンドコンジュゲートと組み合わせられる例えば追加の両親媒性化合物などの安定化材料の量は、選択された本発明の特定の脂質−リガンドコンジュゲート、選択された特定の安定化材料、安定化材料の特定の使用、送達の様式などを含めて、種々の因子に応じて異なってもよい。本脂質−リガンドコンジュゲートと組み合わせられる安定化材料の量および安定化材料と脂質−リガンドコンジュゲートの比は様々であり、本開示に基づいて当業者が容易に決定できる。典型的には、脂質−リガンドコンジュゲートと安定化脂質の比は約４：１、３：１または２：１を超えることが好ましい。
【０１５１】
本発明のリポソーム組成物の調製に関して、多種多様な方法を利用できる。したがって、当業者に明らかな通常の種々のリポソーム調製技法のいずれか１つを使用して、リポソームを調製することができる。これらの技法としては、エタノール注射、薄膜法、均質化、溶媒透析、強制水和、逆相蒸発、マイクロ乳化、および例えば通常のマイクロ乳化機器を使用する単純な凍結融解が挙げられる。本発明のリポソーム組成物を本発明の脂質−リガンドコンジュゲートから調製する追加の方法としては、例えば超音波処理、キレート透析、均質化、溶媒注入、自発的形成、溶媒気化、制御界面活性剤透析などが挙げられ、それぞれ、リポソームを様々な方式で調製するものである。典型的には、本発明のリポソーム組成物の本発明の脂質−リガンドコンジュゲートからの調製に関して、エタノール注入、薄膜法、均質化および押出を伴う方法が好ましい。
【０１５２】
リポソームのサイズは、所望により、押出、濾過、超音波処理および均質化を含めて種々の技法で調整することができる。リポソームのサイズを調整し、得られたリポソームの生体内分布およびリポソームのクリアランスを調節する他の方法は、本開示に基づいて当業者に明らかである。好ましくは、リポソームのサイズは、加圧下で所定のサイズの細孔を通して押し出すことによって調整される。本発明のリポソーム組成物はいずれのサイズでもよく、好ましくは外径約２００ナノメートル（ｎｍ）未満である。
【０１５３】
当業者が認識するように、脂質−リガンドコンジュゲートおよび本発明の脂質−リガンドコンジュゲートを含む脂質性担体系のいずれかを、貯蔵のため凍結乾燥し、例えば水性媒体（滅菌水またはリン酸緩衝溶液または生理食塩水溶液）中、好ましくは激しい撹拌下で再構成することができる。必要なら、凍結乾燥の結果である脂質の凝集または融合を防止するために添加剤を含めてもよい。有用な添加剤としては制限なく、ソルビトール、マンニトール、塩化ナトリウム、グルコース、トレハロース、ポリビニルピロリドンおよびポリ（エチレングリコール）、例えばＰＥＧ４００が挙げられる。
【０１５４】
Ｃ．ナノ微粒子担体系
ナノ微粒子担体系は、任意の形状および任意の形態で存在することができる。ナノ微粒子担体系の例としては、ナノ粒子、ナノ粉末、ナノクラスター、ナノ結晶、ナノ球体、ナノ繊維、ナノチューブおよび他の幾何形状が挙げられる。ナノ微粒子小胞型組成物またはナノ粒子は、典型的には直径１ミクロン未満、好ましくは約２５〜１０００ｎｍの範囲、より好ましくは約５０〜３００ｎｍの範囲、最も好ましくは約６０〜２００ｎｍの範囲の小粒子であることが一般的である。ナノ球体は、形状がおよそ球状であり、中空コアを有する種類のナノ粒子を指す。典型的には、ナノ粒子は、金属などの無機材料および生理学的に許容される重合体を含めて重合体などの有機材料を含めて、すべての種類の材料および構造を用いて形成することができるマトリクスコア構造を有する。このような重合体の例として限定されるものではないが、例えば、ポリエステル（ポリ(乳酸)、ポリ(Ｌ−リシン)、ポリ(グリコール酸)およびポリ(乳酸−コ−グリコール酸)など）、ポリ(乳酸−コ−リシン)、ポリ(乳酸−グラフト−リシン)、ポリ酸無水物（ポリ(脂肪酸二量体)、ポリ(フマル酸)、ポリ(セバシン酸)、ポリ(カルボキシフェノキシプロパン)、ポリ(カルボキシフェノキシヘキサン)、これらの単量体の共重合体など）、ポリ(無水物−コ−イミド)、ポリ(アミド)、ポリ(オルトエステル)、ポリ(イミノカルボナート)、ポリ(ウレタン)、ポリ(オルガノホスファゼン(organophasphazene))、ポリ(ホスファート)、ポリ(エチレン酢酸ビニル)と他のアシル置換酢酸セルロースおよびそれらの誘導体、ポリ(カプロラクトン)、ポリ(カルボナート)、ポリ(アミノ酸)、ポリ(アクリラート)、ポリアセタール、ポリ(シアノアクリラート)、ポリ(スチレン)、ポリ(塩化ビニル)、ポリ(フッ化ビニル) (polyvinyl fluoride)）、ポリ(ビニルイミダゾール) (polyvinyl imidazole)）、クロロスルホン化ポリオレフィン、ポリエチレンオキシド、共重合体、ポリスチレン、ならびにそれらのブレンドまたは共重合体などが挙げられる。ナノ粒子としては、ヒドロキシプロピルセルロース(ＨＰＣ）、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド(ＮＩＰＡ)、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール(ＰＶＡ)、ポリエチレンイミン、キトサン、キチン、デキストラン硫酸、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、ゼラチンなど、ならびにそれらの誘導体、共重合体、および混合物も挙げることができる。ナノ粒子を作製する方法としては限定されるものではないが、例えばＵ．Ｓ．Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ２００３／０１３８４９０に記載されている。別の実施形態において、コア材料は、金属、合金、半金属、金属酸化物などの金属化合物、無機化合物、および炭素系材料、特にカーボンナノチューブ、１次元フラーレンＣ６０ナノ粒子、および３次元フラーレンＣ７０ナノ粒子から選択することができる。金属の適切な例としては、Ａｇ、Ａｕ、Ｐｄ、Ｐｔ、Ｒｈ、Ｉｒ、ＲｕおよびＯｓなどの貴金属または白金属、Ｔｉ、Ｃｒ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｚｒ、Ｎｂ、Ｍｏ、Ｔａ、Ｗ、Ｒｅなどの遷移金属、ならびにＡｌ、Ｇａ、Ｉｎ、Ｓｉ、Ｇｅ、Ｓｎ、Ｓｂ、Ｂｉ、Ｔｅなどの典型金属が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの典型金属、特にＳｉおよびＧｅは、よく半金属とも���ばれることを理解されたい。合金の適切な例としては、貴金属または白金属と遷移金属の合金、特にＡｇ／Ｎｉ、Ａｇ／Ｃｕ、Ａｇ／Ｃｏなどの銀と遷移金属の合金、およびＰｔ／Ｃｕなどの白金と遷移金属の合金、またはＲｕ／Ｐｔなどの貴金属もしくは白金合金が挙げられるが、これらに限定されない。無機化合物の非限定的な例としては、例えばＳｉＯ２、金属化合物、特にＴｉＯ２や酸化鉄などの金属酸化物などが挙げられるが、これらに限定されない。ナノ粒子は、検出可能な電気的、磁気的および／または光学的諸特性をこのようなナノ粒子に与える固有の蛍光または発光部分、プラズモン共鳴部分および磁気部分も含むことができる。
【０１５５】
当業者は、材料の選択がナノ粒子の所期の使用に依存することを知っている。
【０１５６】
一実施形態において、本発明は、１つまたは複数の脂質−リガンドコンジュゲートを含むナノ粒子を対象とする。１つまたは複数の脂質コンジュゲートは、表面に絡み、埋め込まれ、組み込まれ、被包され、吸着し、もしくは結合され、またはその他の方法でナノ粒子と会合することができる。
【０１５７】
特定の一実施形態において、脂質−リガンドコンジュゲートを他の共脂質と任意選択で組み合わせて、ファンデルワールス力、イオン相互作用、疎水相互作用などの分子間力によりナノ粒子に被覆の形で結合することができる。
【０１５８】
あるいは、ナノ粒子は、１つまたは複数の脂質−リガンドコンジュゲート（またはスペーサーなど他の化合物）をナノ粒子の表面に共有結合させるため、例えば、カルボキシル、スルフヒドリル(sulhydryl)、ヒドロキシルまたはアミノ基などの１つまたは複数の官能基を、他の共脂質と任意選択で組み合わせて、任意選択で含むことができる。
【０１５９】
本発明のナノ粒子を（任意選択で分散剤と共に）寄せ集めて、ナノクラスターを形成することもできる。クラスター形成前の各ナノ粒子型の独立した形態およびクラスター内のナノ粒子の特別な配置は、脂質−リガンドコンジュゲート、ひいては生物活性剤の保持および濃度の制御を可能にすることができる。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、ナノ粒子の中実マトリクスコア内に捕捉され、埋め込まれまたは被包された追加の生物活性剤をさらに含んでもよい。
【０１６１】
好ましい実施形態において、脂質−リガンド被覆ナノ粒子は、ナノサイズのコア粒子および本発明の１つまたは複数の脂質−リガンドコンジュゲートおよび任意選択で１つまたは複数の共脂質から形成することができる。所与の任意の脂質−リガンド被覆ナノ粒子において、脂質−リガンドコンジュゲートは、単層または二重層の形をとることができる。１つを超える単層または二重層の場合、単層または二重層は略同心円状である。ナノ粒子の被覆は、本発明の脂質−リガンドコンジュゲートを含む溶液中で、脂質−リガンドコンジュゲートがナノ粒子を被覆できるように十分な時間を与えることによって実施することが好ましい。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の脂質−リガンドコンジュゲートの１つまたは複数のリガンドは、１つまたは複数の抗原性リガンドである。
【０１６３】
免疫応答を誘発するための、ナノ粒子１個当たりの抗原性リガンドの量（または抗原性リガンドの表面密度）は、免疫応答自体の性質（体液性対細胞性）、抗原リガンドの免疫原性、曝露される有機体の免疫原性構成、ならびに抗原への投与経路および曝露期間など多くの要因によって決まる。
【０１６４】
明らかに、対象の免疫化は、複数の抗原複製物を多価表示として使用することによって増強することができ、それによって抗原濃度が部位特異的に高められ、したがって長期にわたる免疫応答が誘発される。これは、ハプテン関連の大きさの問題により投与することが困難であり、一般的には有効な免疫応答を誘発することができない低分子ペプチドまたは炭水化物などの抗原リガンドの場合に特に望ましい。
【０１６５】
したがって、いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、１つの抗原リガンドの唯一もしくは複数の複製物または異なる抗原リガンドの組合せをその表面に（多価表示の形で）表示する。本明細書では、「多価」という用語は、担体系における抗原の１つを超える複製または種類の表示を指す。
【０１６６】
さらに詳細には、本発明は、中実コアおよび任意選択で他のマトリクスまたは共脂質を含むナノ粒子であって、中実コアは式Ｉの少なくとも１つの脂質−リガンドコンジュゲートで被覆され、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の１つまたは複数は抗原性リガンドであるナノ粒子に関する。
【０１６７】
免疫化は、ナノ粒子を適切な免疫細胞または位置に向けるために標的指向リガンドを含めることによってさらに改善することができる。
【０１６８】
標的指向リガンドとして働くことができる化合物は、病原体の宿主細胞への付着ひいては定着成功に干渉する化合物である。このような化合物の例としては、破傷風トキソイド；大腸菌(Ｅ．ｃｏｌｉ)のＰ線毛；緑膿菌(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ)、ナイセリア(Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ)種、モラクセラ(Ｍｏｒａｘｅｌｌａ)種、ＥＰＥＣ、またはコレラ菌(Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ)のＩＶ型線毛；ＦＨＡ、パータクチン、百日咳菌(Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ)の百日咳毒素ＢｒｋＡを含めて、線毛遺伝子およびいくつかの線毛アドヘシン；およびネズミチフス菌(Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ)のＳｉｐＢ−Ｄ；およびアデノウイルスアドヘシン(ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  ａｄｈｅｓｉｏｎ)；Ｍ細胞を標的指向するレオウイルスσ１タンパク質などを挙げることができる。
【０１６９】
したがって、本発明は、中実コアおよび任意選択で他のマトリクスまたは共脂質を含むナノ粒子であって、中実コアは式Ｉの少なくとも１つの脂質−リガンドコンジュゲートで被覆され、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の１つまたは複数は抗原性リガンドおよび／または標的指向リガンドであるナノ粒子にも関する。
【０１７０】
他の実施形態において、脂質−リガンド被覆ナノ粒子は、ナノ粒子の中実コア内に封入され、または埋め込まれた単一の抗原剤または抗原剤の組合せ(多価)をさらに含む。
【０１７１】
したがって、本発明は、中実コアおよび任意選択で他のマトリクスまたは共脂質を含むナノ粒子であって、中実コアは式Ｉの少なくとも１つの脂質−リガンドコンジュゲートで被覆され、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３の１つまたは複数は抗原性リガンドおよび／または標的指向リガンドであり、中実コアは１つまたは複数の別の抗原剤を任意選択で含むナノ粒子にも関する。
【０１７２】
さらに他の実施形態において、ナノ粒子は、ナノ粒子の中実コア内に封入され、埋め込まれ、分散された１つまたは複数のアジュバントをさらに含む。
【０１７３】
本明細書では「アジュバント」という用語は、特異的抗原に対する体液性および／または細胞性免疫応答を向上させることができる任意の材料を指す。適切なアジュバントをナノ粒子の表面に表示し、ナノ粒子壁に装入し、またはナノ粒子内部に被包することができる。血清および／または粘膜抗体の産生ならびに共投与された抗原に対する細胞性免疫応答を促進するために使用することができるアジュバントの例としては、大腸菌(Ｅ．ｃｏｌｉ)易熱性エンテロトキシンホロ毒素(ＬＴ)およびコレラ菌(Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ)エンテロトキシン(ＣＴ)ならびに(サルモネラ・ミネソタ(Salmonella Minnesota)の細胞壁に由来する)ＫＰＬアジュバントが挙げられる。
【０１７４】
本明細書では、「表示された(displayed)」または「表面曝露された(surface  exposed)」という用語は、脂質性小胞またはナノ粒子などの担体系の外表に存在し、したがって認識に利用可能な任意のリガンドを指す。炎症性疾患、感染疾患、癌、遺伝性異常、臓器移植拒絶反応、自己免疫疾患および免疫障害を含めて様々な疾患および障害を、このようなナノ粒子ワクチンコンストラクトまたはアセンブリで治療することができる。
【０１７５】
したがって、本発明は、多価ナノ粒子を含むワクチンであって、ナノ粒子は、中実コアおよび表面曝露された１つまたは複数の脂質−リガンドコンジュゲートを含み、リガンドは１つまたは複数の抗原性および／または標的指向リガンドであり、ナノ粒子は、ナノ粒子の中実コアに埋め込まれたアジュバントおよび／または別の抗原剤を任意選択でさらに含むワクチンも包含する。
【０１７６】
別の実施形態において、１つまたは複数の脂質−リガンドコンジュゲートの１つまたは複数のリガンドは１つまたは複数の治療剤または診断剤である。
【０１７７】
表面曝露された脂質−リガンドコンジュゲートを含む本発明のナノ粒子の産生方法は、（ａ）ナノ粒子を用意するステップと、（ｂ）１つまたは複数の脂質−リガンドコンジュゲートを吸着または付着によりナノ粒子に結合させて、脂質−リガンド被覆ナノ粒子を形成するステップとを含む。あるいは、方法は、（ａ）ナノ粒子を用意するステップと、（ｂ）１つまたは複数のエーテル−脂質を吸着または付着によりナノ粒子に結合させて、脂質被覆ナノ粒子を形成するステップと、（ｃ）１つまたは複数の生物活性リガンドを、ナノ粒子の表面と結合している１つまたは複数のエーテル−脂質に共有結合させて、脂質−リガンド被覆ナノ粒子を形成するステップとを含む。（前もって形成された）脂質被覆ナノ粒子は、同時に出願された出願の一部であり、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０１７８】
適切な大きさのナノ粒子を作製する典型的な方法としては、気化方法（例えば、自由噴流膨張、レーザー気化、スパーク腐食、電気爆発および化学蒸着）、機械的摩砕（例えば、パールミリング技術、Ｅｌａｎ  Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ、アイルランド）を伴う物理的方法、および溶媒置換後の界面析出が挙げられる。
【０１７９】
別の実施形態において、本発明は、１つまたは複数の脂質−リガンドコンジュゲートを含むナノ球体も対象とする。ナノ粒子とは対照的に、中空内部としてのナノ球体は、１つまたは複数の生物活性剤を封入し、目的の細胞または組織にその後に送達するために、容易に使用することができる。このような被包された生物活性剤の放出速度は、例えば公知の技法で調節することができる。
【０１８０】
Ｄ．薬剤組成物および製剤
本発明の担体系は、例えば生理的塩類溶液またはリン酸緩衝液など、投与経路および標準薬務に従って選択される薬剤的に許容される希釈剤、賦形剤または担体をさらに含む薬剤組成物として存在することができる。
【０１８１】
したがって、別の態様において、本発明は、１つまたは複数の脂質性またはナノ微粒子担体系を含む薬剤組成物であって、脂質性またはナノ微粒子担体系は、リガンド−脂質コンジュゲートを、他の共脂質および薬剤的に許容される希釈剤、賦形剤または担体と任意選択で組み合わせて、含む薬剤組成物を対象とする。
【０１８２】
好ましくは、脂質性担体系はリポソームまたはミセルなどの脂質小胞であり、ナノ微粒子担体系はナノ粒子またはナノ球体である。
【０１８３】
「１つまたは複数の脂質−リガンドコンジュゲート」という用語は、本明細書に開示される考え得るすべての実施形態、すなわちリガンドが標的指向化リガンド、抗原性リガンド、治療用リガンドおよび診断用リガンド、ならびにそれらの混合物の１つまたは複数であるコンジュゲートを指すことが理解される。任意選択で、別の１つまたは複数の生物活性剤が、脂質性もしくはナノ微粒子担体系内に封入されもしくは埋め込まれ、または脂質性もしくはナノ微粒子担体系上に吸着し、または脂質性もしくはナノ微粒子担体系に結合する。
【０１８４】
本発明の薬剤組成物は、細胞培養などの試験管内用途または生体内用途で使用することができる。生体内用途に関して、本発明の脂質製剤を非経口、経口または腹腔内投与を含めて選択された投与経路に適応した種々の形で患者に投与することができる。非経口投与としては、静脈内、筋肉内、間質内、動脈内、皮下、眼内、滑膜内、経上皮（経皮を含む）、肺吸入、眼(ophthalmic)、舌下および頬側、局所（眼、皮膚、眼球(ocular)、直腸を含む）、ならびにインサフレーション投与による鼻吸入が挙げられ、好ましくは静脈内投与が挙げられる。
【０１８５】
有用な投与用量および特定の投与方法は、当業者に容易に明らかなように、予想される治療または診断用途、使用される特定の生物活性剤および脂質化合物、ならびに担体系の形、例えばミセル、リポソームまたはナノ粒子、治療する対象の年齢、体重、健康状態などの要因に応じて様々である。本発明による標的指向化薬剤組成物の使用によって、投与用量を低減して、望ましい治療効果を実現することが可能になる。
【０１８６】
一般指針として、担体系中の脂質−リガンドコンジュゲートの比は０．０５〜５モル％に及び、０．１〜２モル％の比がより好ましく、特定の抗原剤、治療剤または診断剤はそれぞれ、患者の体重１キログラム当たり約０．０１ｍｇから約１０ｍｇの間を投与することが適切であり得るが、上回る量および下回る量を使用してもよい。
【０１８７】
Ｅ．使用方法
前に示したように、特定の一実施形態において、標的指向化脂質−リガンドコンジュゲート、特に標的指向化小胞（すなわち、リポソームおよびミセル）およびこれらを含む標的指向化ナノ粒子、ならびにそれらのそれぞれの薬剤組成物は、特に１つまたは複数の生物活性剤、好ましくは治療剤、診断剤および／または抗原剤の標的指向型送達用担体として使用するのに適している。
【０１８８】
したがって、本発明の標的指向化脂質−リガンドコンジュゲートは、１つまたは複数の特異的生物活性剤、好ましくは、治療剤、診断剤および／または抗原剤の組織または細胞への標的指向型送達が望ましくまたは必要とされる疾患の治療方法において特に試験管内および／または生体内での使用に適用可能である。
【０１８９】
標的指向化ナノ粒子およびそれらの薬剤組成物の場合、１つまたは複数の生物活性剤は、好ましくは中実コア内に捕捉されている。
【０１９０】
標的指向化脂質小胞およびそれらの薬剤組成物の場合、１つまたは複数の生物活性剤は、好ましくは、内部空隙内に封入されまたは脂質二重層に組み込まれている。
【０１９１】
別の態様において、本発明は、診断用化合物または生物活性化合物を、膜を通して輸送する方法、特に１つまたは複数の生物活性剤の細胞内送達方法であって、細胞と本発明の薬剤組成物を接触させるステップを含む方法も包含する。
【０１９２】
別の特定の実施形態において、抗原性小胞（すなわち、リポソームおよびミセル）およびこれらを含む抗原性ナノ粒子、ならびにそれらのそれぞれの薬剤組成物は、特に抗原表示系として使用するのに適している。したがって、本発明の抗原性脂質−リガンドコンジュゲートは、例えば免疫方法における使用および／または試験管内／生体内診断用途に特に適用可能である。任意選択で、抗原性小胞（すなわち、リポソームおよびミセル）および抗原性ナノ粒子は、１つまたは複数の生物活性剤をさらに含んでもよい。抗原性ナノ粒子の場合に、１つまたは複数の生物活性剤は、好ましくは中実コア内に捕捉されている。標的指向化脂質小胞およびそれらの薬剤組成物の場合に、１つまたは複数の生物活性剤は、好ましくは内部空隙内に封入され、または脂質二重層に組み込まれている。
【０１９３】
したがって、もう１つの態様において、本発明は、予防ワクチンおよび治療ワクチン用の抗原表示系であって、１つまたは複数の抗原性脂質−リガンドコンジュゲートを他の共脂質と任意選択で組み合わせて含む抗原性脂質小胞または抗原性ナノ粒子を含み、抗原性脂質小胞または抗原性ナノ粒子は、１つまたは複数のアジュバントおよび／または１つまたは複数の生物活性剤を任意選択で含む抗原表示系を対象にする。
【０１９４】
また、対象において抗原に対する免疫応答を引き起こしまたは調節する方法であって、抗原を抗原提示細胞、特に樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞および内皮細胞に表示するステップと、その後、前記抗原提示細胞を対象に投与するステップとを含む方法も、本発明に包含される。本発明の他の態様は、本発明の担体系を使用して、生物活性化合物を膜を通して輸送する方法および／または生物活性化合物を細胞中に送達する方法を含む。
【０１９５】
予想される別の用途としては、例えば細胞の成長促進および分化の試験管内用途ならびにバイオリアクターで製造された生物学的製剤の発現プロファイルおよび翻訳後修飾パターンの改変が挙げられる。
【０１９６】
Ｆ．キット
さらに別の態様において、本発明は、キットの様々な要素を保持するために区画化された容器を備えるキットに関する。一区画には、所定量の脂質−リガンドコンジュゲートまたはその調製された担体系を含めることができる。リポソームなどの担体系の場合、これらは、組成物のｐＨを生理的範囲の約７〜約８に調整するためのｐＨ緩衝剤を含みまたは含まず、あるいは凍結乾燥またはフリーズドライされた形をとり、使用時に再構成することができる。また、キット内に他の試薬および使用指示書も含める。
【実施例】
【０１９７】
本発明を下記の例でさらに説明する。
例
材料：１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）はＭｅｒｃｋ＆Ｃｉｅ（Ｓｃｈａｆｆｈａｕｓｅｎ、スイス）から入手する。コレステロール、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、ＰＯＰＣ、ＭＰＥＧ２０００−ＤＯＰＥ（８８０１３０）、ならびに蛍光脂質ＮＢＤ−ＤＯＰＥ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（７−ニトロ−２−１，３−ベンゾオキサジアゾール−４−イル）（アンモニウム塩））（８１０１４５Ｐ）およびＰｈＢ−ＤＯＰＥ（８１０１５０）は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ（Ａｌａｂａｓｔｅｒ、アルバニア）から購入する。官能化ＰＥＧプロピオン酸（ＰＡ）誘導体Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ１２−ＰＡ−ＣＯＯＨ（８５１０２４）はＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから入手し、Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ８−ＰＡ−ＣＯＯＨ（ＰＥＧ１８３０）、Ｆｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ３６−ＰＡ−ＣＯＯＨ（ＰＥＧ４４００）およびＭＰＥＧ（２ｋＤａ）−アミン（ＰＥＧ１１５２）は、ＩＲＩＳ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧｍｂＨから入手する。ジフェニルジアゾメタン樹脂（Ｄ−２２３０）はＢａｃｈｅｍ  ＡＧから入手し、Ｈ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−２−ＣＩＴｒｔ樹脂（ＲＲ
Ａ−１２５１）はＣＢＬ  Ｐａｔｒａｓから入手し、Ｈ−Ｇｌｙ−２−ＣＩＴｒｔ樹脂（８５６０５３）およびＳｉｅｂｅｒ樹脂（８５５００８）は、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから入手する。他の化学薬品および溶媒はすべて、Ａ．Ｒ．グレード以上である。
【０１９８】
アザ−ペプチドＭｉｃｈａｅｌ受容体トランス−Ｃｂｚ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ−２−アザ−Ａｓｎ−アクリル酸（ＲＲ１１ａ−ＯＨ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミドとのその活性型エステル（ＲＲ１１ａ−ＮＨＳ）は、ＷｕＸｉ  ＡｐｐＴｅｃ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．により合成される（Ｅｋｉｃｉ  ｅｔ  ａｌ，２００４，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７，１８８９−１８９２；Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ：Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ７，Ｉｓｓｕｅ  ６，２０１１，６６５−６７３）。
【０１９９】
２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロパン−１−アミンは、Ｋｏｋｏｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ａ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ，２０００，ｖｏｌ．６，＃２２，４２１１−４２１７に従って合成する。同様に、ビス（３−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エニルオキシ）プロピル）アミンは、メタンスルホン酸オレイルおよびビス（３−ヒドロキシプロピル）アミンから得られる（ＭａＧｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，ｖｏｌ．６５，＃２４，８３６７−８３７１を参照）。
【０２００】
細胞培養：Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｓｔｒａｉｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍｅｒ
ｃｋ  ＫＧａＡ、ダルムシュタット、独国）から入手したＭ２１ヒトメラノーマ細胞を、１０％ウシ胎仔血清を補充したＤＭＥＭ（Ｈｉｇｈ  Ｇｌｕｃｏｓｅ）培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カールスバッド、カリフォルニア）中で５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で維持する。細胞を定期的に継代し、実験の１６時間前に６ウェル培養プレートに培地２ｍｌ中０．３×１０６細胞で播種する。Ｍ２１細胞をＯｐｔｉ−ＭＥＭ血清不含培地中リポソームと共に３７℃で１時間インキュベートし、次いでＯｐｔｉ−ＭＥＭで１回洗浄した後、細胞解離緩衝液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カールスバッド、カリフォルニア）を使用して収穫する。ＮＢＤ−ＤＯＰＥの共局在は、Ｇｕａｖａ  ｅａｓｙＣｙｔｅ  ８ＨＴ（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．、ビレリカ、マサチューセッツ）によって決まる。
【０２０１】
統計分析：統計分析はスチューデントのｔ検定で行う。平均値間の差は、ｐ値＜０．０１で統計的に有意であると考えられる。
【０２０２】
例１：（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−グルタミン酸−α−ｔｅｒｔ−ブチルエステル−γ−２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル−アミドの合成
【０２０３】
【化１５】
2018141015.tif 000017
【０２０４】
１５ｇのＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＳｕ）ＯｔＢｕ（（２Ｓ）−Ｎα−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−グルタミン酸α−ｔｅｒｔ−ブチルエステルγ−Ν−ヒドロキシスクシンイミドエステル）を、ジクロロメタンに室温で溶解する。１５．３ｇの２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロパン−１−アミンを添加した後、混合物を１７時間撹拌し、蒸発乾固する。残渣を最少量のジクロロメタンに溶解し、カラムクロマトグラフィーで固相としてＳｉＯ２、および溶離液としてメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル／ヘキサン／７：３を使用して精製する。生成物画分の蒸発後、２５．５ｇの（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−グルタミン酸−α−ｔｅｒｔ−ブチルエステル−γ−２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル−アミドが無色固体として得られる。
【０２０５】
【数１】
2018141015.tif 000018
【０２０６】
例２：（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−グルタミン酸−γ−２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル−アミドの合成
【０２０７】
【化１６】
2018141015.tif 000019
【０２０８】
１００ｍｌのフラスコ中で、４．６ｇ（５．１ｍｍｏｌ）の（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−グルタミン酸−α−ｔｅｒｔ−ブチルエステル−γ−２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル−アミドを２５ｍｌのジクロロメタンに溶解し、２５ｍｌのトリフルオロ酢酸で処理する。１時間後、エステル基が完全に切断されると、溶液を５０ｍｌの冷水に注ぎ込む。有機層を抽出し、中性ｐＨになるまで水洗し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水する。有機層を濾取し、溶媒を蒸発させて、４．２ｇの所望の生成物を得る（５．０ｍｍｏｌ、収率９８％、ＴＬＣ：ＭｔＢＥ／ヘキサン  ７：３；Ｒｆ＝０．４３。
【０２０９】
例３：（２Ｓ）−グルタミン酸−γ−（２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル）アミドの合成
【０２１０】
【化１７】
2018141015.tif 000020
【０２１１】
５ｇの（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−グルタミン酸−α−ｔｅｒｔ−ブチルエステル−γ−２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル−アミドを、８５ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに添加する。この混合物に、２．６ｍｌのピペリジンを添加する。混合物を室温で３時間撹拌し、次いで真空下で蒸発乾固して、５．２ｇの（２Ｓ）−グルタミン酸−γ−（２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル）アミドを無色固体として得る。これを脂質小胞の調製または活性剤もしくはスペーサー基による前誘導体化に使用することができる。
【０２１２】
例４：（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ１−（２−（４−メトキシベンズアミド）エチル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（３−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エニルオキシ）プロピル）スクシンアミドの合成
（ａ）Ｎ−（２−アミノエチル）−４−メトキシベンズアミドの合成
【０２１３】
【化１８】
2018141015.tif 000021
【０２１４】
３．０ｇの塩化４−メトキシベンゾイルを−７８℃でジクロロメタン中３０ｍＬの１，２−ジアミノエタンに添加し、続いて２３℃まで温まらせた。水性酸−塩基ワークアップおよび真空下での蒸発乾固により、１．６５ｇのＮ−（２−アミノエチル）−４−メトキシベンズアミド（淡黄色油）が得られる。
【０２１５】
【数２】
2018141015.tif 000022
【０２１６】
（ｂ）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（２−（４−メトキシベンズアミド）エチルアミノ）−４−オキソブタノアートの合成
【０２１７】
【化１９】
2018141015.tif 000023
【０２１８】
３．０ｇのＮ−（２−アミノエチル）−４−メトキシベンズアミド（ステップ（ａ）で得られた）およびＤＭＦ中１．７０ｍＬのＮ−メチルモルホリン（０℃）を、６．３５ｇのＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、１．７０ｍＬのＮ−メチルモルホリンおよび酢酸エチル中２．００ｍＬのイソブチルクロロホルマート（−１２℃）の溶液に添加し、２３℃まで温まらせながら、３時間撹拌する。得られた懸濁液を酢酸エチルで希釈し、その後に続いて水性酸−塩基ワークアップおよび真空下で蒸発乾固すると、９．５５ｇの（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（２−（４−メトキシベンズアミド）エチルアミノ）−４−オキソブタノアートが得られる。この粗材料をイソプロピルエーテルに２３時間懸濁し、次いで濾取し、乾燥して、４．４７ｇの（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（２−（４−メトキシベンズアミド）エチルアミノ）−４−オキソブタノアートを白色結晶として得る。
【０２１９】
【数３】
2018141015.tif 000024
【０２２０】
（ｃ）（Ｒ）−３−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（２−（４−メトキシベンズアミド）エチルアミノ）−４−オキソブタン酸酢酸ナトリウムの合成
【０２２１】
【化２０】
2018141015.tif 000025
【０２２２】
ジクロロメタン中３．０ｇの（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（２−（４−メトキシベンズアミド）エチルアミノ）−４−オキソブタノアート（ステップ（ｂ）で得られた）に、３０．０ｍＬのトリフルオロ酢酸を、２３℃で添加する。反応が完了次第、ＮａＨＣＯ３水溶液を添加すると、白色沈澱物が得られる。これをジクロロメタンで洗浄し、乾燥して、２．５５ｇの（Ｒ）−３−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（２−（４−メトキシベンズアミド）エチルアミノ）−４−オキソブタン酸酢酸ナトリウムを白色粉末として得る。
【０２２３】
【数４】
2018141015.tif 000026
【０２２４】
（ｄ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（Ｒ，Ｚ）−１−（４−メトキシフェニル）−１０−（３−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エニルオキシ）プロピル）−１，６，９−トリオキソ−１４−オキサ−２，５，１０−トリアザドトリアコンタ−２３−エン−７−イルカルバマートの合成
【０２２５】
【化２１】
2018141015.tif 000027
【０２２６】
ジメチルホルムアミド中０．４８ｇの（Ｒ）−３−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（２−（４−メトキシベンズアミド）エチルアミノ）−４−オキソブタン酸酢酸ナトリウム（ステップ（ｃ）で得られた）を１０℃に冷却し、次いで０．４６ｇのビス（３−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エニルオキシ）プロピル）アミン、０．３７ｇのＣＯＭＵおよび０．２０ｇのＤＩＰＥＡを続けて添加する。２３℃で２０時間撹拌した後、溶液をＡｌｏｘパッドに通して濾過し、これをわずかなジメチルホルムアミドですすぐ。濾液を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄し、真空下で蒸発乾固して、１．１２ｇの橙色油を得る。この油をカラムクロマトグラフィー精製して、０．４１ｇの（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（Ｒ，Ｚ）−１−（４−メトキシフェニル）−１０−（３−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エニルオキシ）プロピル）−１，６，９−トリオキソ−１４−オキサ−２，５，１０−トリアザドトリアコンタ−２３−エン−７−イル−カルバマートを得た。
【０２２７】
【数５】
2018141015.tif 000028
【０２２８】
（ｅ）（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ１−（２−（４−メトキシベンズアミド）エチル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（３−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エニルオキシ）プロピル）スクシンアミドの合成
【０２２９】
【化２２】
2018141015.tif 000029
【０２３０】
ジクロロエタン中２．１２ｇの（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（Ｒ，Ｚ）−１−（４−メトキシフェニル）−１０−（３−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エニルオキシ）プロピル）−１，６，９−トリオキソ−１４−オキサ−２，５，１０−トリアザドトリアコンタ−２３−エン−７−イル−カルバマート（ステップ（ｄ）で得られた）に、０．７５ｇのジエチルアミンを添加し、２６時間撹拌し、その後に続いて真空下で蒸発乾固して、１．９０ｇの粗材料を得る。これを２０ｇのＤｏｗｅｘモノスフィアーへの吸着およびその後のエタノール中アンモニアによる脱着により精製して、１．０９ｇの（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ１−（２−（４−メトキシベンズアミド）エチル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（３−（（Ｚ）−オクタデカ−９−エニルオキシ）プロピル）スクシンアミドを得る。
【０２３１】
【数６】
2018141015.tif 000030
【０２３２】
例５：Ｎ２，Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン−１０−ホルミル−葉酸−α−ｔｅｒｔ−ブチルエステル−γ−２，３ビス（テトラデシルオキシ）プロピルアミドの合成
【０２３３】
【化２３】
2018141015.tif 000031
【０２３４】
２．２ｇのＮ２，Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン−１０−ホルミル−プテロイン酸を、４６ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに添加する。３．２ｇのＯ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスファートを添加した後、混合物を室温で２０分間撹拌する。次いで、５．０ｇの（２Ｓ）−グルタミン酸−γ−（２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル）アミドと５０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの混合物を滴下する。室温で１７時間撹拌した後、固形物を濾過で除去し、濾液を真空中４０℃で蒸発乾固する。残渣を１００ｍｌのジクロロメタンに溶解する。ジクロロメタン溶液を、２５ｍｌのクエン酸水溶液、２５ｍｌの５％炭酸水素ナトリウム水溶液および２５ｍｌの水で洗浄する。各水相をジクロロメタンで抽出する。ジクロロメタン相を合わせて、硫酸マグネシウムで脱水し、蒸発乾固すると、黄色い泡が得られる。これをジクロロメタン／メタノール／９５：５の混合物に溶解し、４０℃で１５分間撹拌する。固形物を濾過で除去し、濾液をカラムクロマトグラフィーで固相としてＳｉＯ２、溶離液としてジクロロメタン／メタノール／９５：５を使用して精製する。生成物画分の蒸発後に、２．７ｇの黄色い泡が得られる。これを上述されたようにカラムクロマトグラフィーで再精製すると、淡黄色の泡のＮ２，Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン−１０−ホルミル−葉酸−α−ｔｅｒｔ−ブチルエステル−α−（２，３ビス（テトラデシルオキシ）プロピル）アミド２．２ｇが得られる。
【０２３５】
【数７】
2018141015.tif 000032
【０２３６】
例６：葉酸−γ−（２，３ビス（テトラデシルオキシ）プロピル）アミドの合成
【０２３７】
【化２４】
2018141015.tif 000033
【０２３８】
２．１ｇのＮ２，Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチレン−１０−ホルミル−γ葉酸−α−ｔ
ｅｒｔ−ブチルエステル−γ−２，３ビス（テトラデシルオキシ）プロピルアミドを、１
０５ｍｌのジクロロメタンに溶解する。１０５ｍｌのトリフルオロ酢酸を添加した後、混
合物を室温で１時間撹拌し、次いで４０℃で蒸発乾固すると、３．４ｇの黄色い泡が得ら
れる。この黄色い泡を１０５ｍｌのテトラヒドロフランに溶解し、１０５ｍｌの１Ｍ水酸
化ナトリウム水溶液を撹拌しながら滴下する。混合物を５０℃で２．５時間加熱する。室
温まで冷却した後、有機層を分離し、蒸発乾固する。残渣に１０５ｍｌのジクロロメタン
および１０５ｍｌの１Ｍ塩酸水溶液を添加する。混合物を室温で５分間撹拌し、沈殿生成
物を吸い取り、５００ｍｌの水で洗浄し、次いで真空中４０℃で乾燥させると、黄色固体
の葉酸−γ−（２，３ビス（テトラデシルオキシ）プロピル）アミド１．７６ｇが得られ
る。
【０２３９】
【数８】
2018141015.tif 000034
【０２４０】
例７：（２Ｓ，４７Ｓ）−４７−［２−Ｎ−（ジメチルアミノ）メチレン］−１０−ホルミルプテロイルアミノ−２−［３−［［２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル］アミノ］−３−オキソプロピル］−４，４４−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ドデカオキサ−３，４３−ジアザオクタテトラコンタン−１，４８−二酸の合成
【０２４１】
【化２５】
2018141015.tif 000035
【０２４２】
（ａ）Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂の合成
１００ｍｌのＳＰＰＳ反応器中３．８５ｇのジフェニルジアゾメタン樹脂（３．３ｍｍｏｌ）を３０ｍｌのＤＣＭで２回洗浄し、３０ｍｌのＤＣＭ中４．２ｇの（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−グルタミン酸−γ−２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル−アミド（例２を参照のこと、１．５当量、５．０ｍｍｏｌ）溶液で終夜処理する。溶液を濾取し、残渣をＤＣＭで４回洗浄する。最終的に未反応のジフェニルジアゾメタンを破壊するために、残渣を３０ｍｌのＤＣＭ中１２５μｌの酢酸（０．５当量、２．２ｍｍｏｌ）で１５分間処理し、その後３０ｍｌのジメチルホルムアミドおよびイソプロパノールで交互に３回洗浄する。残渣をジイソプロピルエーテルで２回洗浄し、真空で終夜乾燥する。所望の生成物が６．７ｇ得られる（＞理論値の１００％、理論上の収量６．５ｇ）。樹脂の負荷量をＦｍｏｃ切断生成物の３０４ｎｍにおけるＵＶ測定により０．４９ｍｍｏｌ／ｇに決定する（理論上の最大負荷量０．５１ｍｍｏｌ／ｇ）。
【０２４３】
（ｂ）Ｈ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ−ＮＨ−ＰＥＧ１２−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂の合成：
Ｈ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ−ＮＨ−ＰＥＧ１２−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂は、通常の固相合成により以下の反応順序で得られる：
（１）ＤＭＦ中ピペリジンによるＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂のＦｍｏｃ基の切断
（２）ＤＭＦおよびＤＩＰＥＡ中ＨＴＢＵを使用するＦｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ１２−ＰＡ−ＣＯＯＨとの縮合
（３）ＤＭＦ中ピペリジンによるＦｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ１２−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂のＦｍｏｃ基の切断
（４）ＤＭＦおよびＤＩＰＥＡ中ＨＢＴＵを使用するＦｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕとの縮合、最後に
（５）ＤＭＦ中ピペリジンによるＦｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ−ＮＨ−ＰＥＧ１２−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂のＦｍｏｃ基の切断。
【０２４４】
（ｃ）［２−Ｎ−（ジメチルアミノ）メチレン］−１０−ホルミルプテロイル−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ−ＮＨ−ＰＥＧ１２−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂の合成：
ＤＭＦ中のＨ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ−ＮＨ−ＰＥＧ１２−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂と［２−Ｎ−（ジメチルアミノ）メチレン］−１０−ホルミルプテロイン酸、ＨＡＴＵおよびＤＩＰＥＡを反応させることによって、通常の固相合成により［２−Ｎ−（ジメチルアミノ）メチレン］−１０−ホルミルプテロイル−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ−ＮＨ−ＰＥＧ１２−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂を得る。
【０２４５】
（ｄ）（２Ｓ，４７Ｓ）−４７−［２−Ｎ−（ジメチルアミノ）メチレン］−１０−ホルミルプテロイルアミノ−２−［３−［［２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル］アミノ］−３−オキソプロピル］−４，４４−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ドデカオキサ−３，４３−ジアザオクタテトラコンタン−１，４８−二酸の合成：
４．５ｇの［２−Ｎ−（ジメチルアミノ）メチレン］−１０−ホルミルプテロイル−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ−ＮＨ−ＰＥＧ１２−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂を４５ｍｌのジクロロメタンで洗浄し、濾取し、４５ｍｌのジクロロメタンに再懸濁する。次いで、４１．４ｍｌのトリフルオロ酢酸（ｔｒｉｆｌｕａｒｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、その後続いて２．２５ｍｌのトリイソプロピルシランを添加する。懸濁液を室温で１時間撹拌し、次いで濾過する。残渣を各ジクロロメタン４５ｍｌで３回洗浄する。濾液を合わせて、真空中で蒸発させると、５．７５ｇのコハク色の油が得られる。ＨＰＬＣ：９０．７面積％、ＥＳＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ計算値＝１７１８．１、Ｍｗ［Ｍ−Ｈ］−＝１７１８．０。
【０２４６】
例８：（２Ｓ，４７Ｓ）−４７−プテロイルアミノ−２−［３−［［２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル］アミノ］−３−オキソプロピル］−４，４４−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ドデカオキサ−３，４３−ジアザオクタテトラコンタン−１，４８−二酸の合成
【０２４７】
【化２６】
2018141015.tif 000036
【０２４８】
４．６ｇの（２Ｓ，４７Ｓ）−４７−［２−Ｎ−（ジメチルアミノ）メチレン］−１０−ホルミルプテロイルアミノ−２−［３−［［２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル］アミノ］−３−オキソプロピル］−４，４４−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ドデカオキサ−３，４３−ジアザオクタテトラコンタン−１，４８−二酸を、４６０ｍｌの１Ｎ  ＮａＯＨと共に５０℃で２時間撹拌する。３２％ｉｃのＮａＯＨを５９．２ｇ添加することによって、反応混合物のｐＨを１２．５にする。褐色溶液を、０．４６ｇの活性炭を用いて５０℃で１５分間処理し、熱濾過し、濾液に３７％ｉｃのＨＣｌを３．２ｇ添加することによって、ｐＨを１にする。生じた沈殿物を濾過で回収し、水で洗浄し、真空中室温で乾燥すると、１．２ｇの緑黄色固体が得られる。ＨＰＬＣ：８９．９面積％、ＥＳＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ計算値＝１６３５．０、Ｍｗ［Ｍ−Ｈ］−＝１６３４．１。
【０２４９】
例９：ＲＧＤ脂質ペンタペプチドであるシクロ［−Ａｓｐ−ｈＧｌｕ（ＤＭＡ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−］の合成：
【０２５０】
【化２７】
2018141015.tif 000037
【０２５１】
（ａ）Ｆｍｏｃ−ｈＧｌｕ（ＯＢｚｌ）−ＯＨの合成：
市販のホモグルタミン酸（Ｈ−ｈＧｌｕ−ＯＨ）は、公表されたプロトコル（Ｂｅｎｏｉｔｏｎ  Ｌ．，Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．，４０，５７０（１９６２））に従って側鎖がδ−ベンジルエステルとして保護されている（収量：１９．８ｇ、理論量の２６％、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／３２％酢酸５：３：１）Ｒｆ＝０．６２）。さらに精製を行うことなく、Ｈ−ｈＧｌｕ（ＯＢｚｌ）−ＯＨ（１９．７ｇ、７７．６ｍｍｏｌｅ）をジオキサン／水の混合物（１：２、３００ｍｌ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３（１２．８ｇ、１５５ｍｍｏｌｅ）およびＦｍｏｃ−ＯＳｕ（２６．２ｇ、７７．６ｍｍｏｌｅ）の添加によってＦｍｏｃを保護する。完了後に、反応混合物をジイソプロピルエーテルで３回抽出する。生成物を含有する水層をＨＣｌでｐＨ  ２に調整し、生成物を酢酸エチルで３回抽出する。有機層を合わせて、Ｈ２Ｏで洗浄して、中性のｐＨにする。酢酸エチルを蒸発させ、残存水をアセトニトリルとの共沸混合物として除去する。したがって、生成物は乾燥フォーム(foam)として得られる：３４．９ｇ、７３．７ｍｍｏｌｅ、理論量の９５％、ＥＳＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ計算値＝４７３．２、Ｍｗ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７４．１。
【０２５２】
（ｂ）Ｈ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ｈＧｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−ＯＨの合成：
固相ペプチド合成を、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ戦略（Ａｔｈｅｒｔｏｎ  Ｅ．，  ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，５３９（１９７８））に従って実施し、Ｈ−Ｇｌｙ−２−ＣＩＴｒｔ（４６ｇ、３４．５ｍｍｏｌｅ）を原樹脂として使用し、カップリングを、Ｆｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ／ＤＩＣ／ＨＯＢｔ（２当量：４当量：３当量）によって終夜行い、Ｆｍｏｃ保護の除去を５分および１０分後にＤＭＦ中２０％ピペリジンで実現する。ジメチルホルムアミド／イソプロパノールで交互に洗浄するステップを各カップリングおよび脱保護ステップの後にそれぞれ３回行う。経時的な順で使用されるアミノ酸誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｈｏｍｏＧｌｕ（ＯＢｚｌ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨである。Ｆｍｏｃ−ＳＰＰＳは７３．４ｇの直鎖ペプチド樹脂を生じる（樹脂の重量増加２７．４ｇ、理論量の８７％、理論量＝３１．５ｇ）。
【０２５３】
１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール／ジクロロメタン  １：４の混合物（７００ｍｌ）による、側鎖保護直鎖ペンタペプチドの樹脂（７２．０ｇ）からの切断は３回繰り返してされる。合わせた濾液の溶媒を減圧下で除去し、得られた油を冷メチル−ｔ−ブチルエーテル（１Ｌ）中で撹拌すると、灰白色沈殿物が得られる。これを濾取し、メチル−ｔ−ブチルエーテルで３回洗浄し、真空乾燥する：２３．６ｇ、２３．９ｍｍｏｌｅ、原樹脂の使用量に対して理論量の７０％、ＨＰＬＣで＞４０面積％、保持時間１４．１分（ＨＰＬＣ条件：カラム＝Ｈａｌｏ（登録商標）ペプチドＥＳ−Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、２．７μｍ、グラジエント：アセトニトリル２５％から９０％Ｂへ３０分のリニアグラジエント、緩衝液Ａ＝水中０．１％ＴＦＡおよび２％アセトニトリル、緩衝液Ｂ＝アセトニトリル中０．１％ＴＦＡ、波長＝２１０ｎｍ）、ＥＳＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ計算値＝９８６．５、Ｍｗ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９８７．６。
【０２５４】
（ｃ）シクロ［−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ｈＧｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−］の合成：
線状側鎖保護ペンタペプチドＨ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ｈＧｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−ＯＨ（２３．６ｇ、２３．９ｍｍｏｌｅ）および現場活性化試薬ＰｙＢＯＰ（１２．４ｇ、２３．９ｍｍｏｌ）を、１０Ｌのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、追加のＰｙＢＯＰ（２４．９ｇ、４７．８ｍｍｏｌｅ）およびヒューニッヒ塩基（１６．４ｍｌ、９５．６ｍｍｏｌｅ）のＤＭＦ（５Ｌ）溶液に３時間以内に滴下する。得られた溶液を終夜撹拌する。ＤＭＦを真空除去し、得られた油を１．８Ｌのエタノールに還流下で溶解し、３．２Ｌの水を−１８℃で添加することによって結晶化させる。沈殿物を濾取し、水およびエーテルで洗浄する。さらに、シリカゲルクロマトグラフィー（１５０ｇのシリカゲル６０、溶離液：ジクロロメタン／メタノール  ９：１）でさらに精製すると、３．６ｇの環式ペンタペプチドがＨＰＬＣによる純度＞９１面積％で得られる（ＨＰＬＣ条件：カラム＝Ｈａｌｏ（登録商標）ペプチドＥＳ−Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、２．７μｍ、グラジエント：アセトニトリル２５％から９０％Ｂへ３０分のリニアグラジエント、緩衝液Ａ＝水中０．１％ＴＦＡおよび２％アセトニトリル、緩衝液Ｂ＝アセトニトリル中０．１％ＴＦＡ、波長＝２１０ｎｍ）；３．７ｍｍｏｌｅ、理論量の１５％、保持時間１５．８分、ＥＳＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ計算値＝９６８．４、Ｍｗ［Ｍ＋Ｈ］＋＝９６９．５。
【０２５５】
（ｄ）シクロ［−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ｈＧｌｕ−Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−］の合成：
ベンジルエステルを水素化分解により特異的に切断する。このために、３．６ｇ（３．７ｍｍｏｌｅ）のシクロ［−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ｈＧｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−］を２０ｍｌのＤＭＦに溶解し、２Ｌのメタノールで希釈する。５ｇの５％パラジウム担持活性炭をこの溶液に添加した後、混合物を水素化する。完了次第、触媒を濾取し、溶液を減圧濃縮する。生成物はメチル−ｔ−ブチルエーテル中で沈澱し、３．０ｇの所望の生成物が得られる：３．４ｍｍｏｌｅ、理論量の９３％の収量、ＨＰＬＣによる純度：７５面積％（ＨＰＬＣ条件：カラム＝Ｈａｌｏ（登録商標）ペプチドＥＳ−Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、２．７μｍ、グラジエント：アセトニトリル２５％から９０％Ｂへ３０分のリニアグラジエント、緩衝液Ａ＝水中０．１％ＴＦＡおよび２％アセトニトリル、緩衝液Ｂ＝アセトニトリル中０．１％ＴＦＡ、波長＝２１０ｎｍ）、保持時間１３．８分。
【０２５６】
（ｅ）シクロ［−Ａｓｐ−ｈＧｌｕ（ＤＭＡ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−］の合成：
１．５ｇ（１．７ｍｍｏｌｅ）のシクロペンタペプチドであるシクロ［−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ｈＧｌｕ−Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−］を、ＰｙＢＯＰ／ＤＩＰＥＡ活性化（０．９ｇ、１．７ｍｍｏｌ／０．６ｍｌ、３．４ｍｍｏｌｅ）によって、１００ｍｌのＤＭＦ中２，３−ジミリスチル−１−アミノ−ｓｎ−グリセロール（ＤＭＡ；１．０ｇ、２．０ｍｍｏｌｅ）にコンジュゲートさせる。反応混合物を終夜撹拌する。次いで、２００ｍｌのジクロロメタンを添加し、有機相を５０ｍｌの２％ＫＨＳＯ４で３回、水で３回抽出する。有機層を減圧下で蒸発させ、残存水をアセトニトリルとの共沸混合物として除去する。得られた泡を最終切断カクテルＴＦＡ／Ｈ２Ｏ／トリイソプロピルシラン／ジチオエリトリトール（９２．５：２．５：２．５：２．５）で１．５時間直接処理し、その後所望の生成物を沈澱させるために溶液を冷ジイソプロピルエーテル（５℃）に滴下する。次いで、残渣を濾過で分離し、ジイソプロピルエーテルで２回洗浄し、さらに真空乾燥すると、０．５ｇの表題化合物が得られる：０．５ｍｍｏｌｅ、理論量の３０％、ＨＰＬＣによって＞９３．０面積％（ＨＰＬＣ条件：カラム＝Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ３、４．６×２５０ｍｍ、５μｍ、グラジエント：アセトニトリル３０％から１００％Ｂへ２５分のリニアグラジエント、緩衝液Ａ＝水中０．１％ＴＦＡおよび２％アセトニトリル、緩衝液Ｂ＝アセトニトリル中０．１％ＴＦＡ、波長＝２１０ｎｍ）、保持時間２２．０分、ＥＳＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ計算値＝１０３５．８、Ｍｗ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１０３７．１。
【０２５７】
例１０：ｐＶｉｓｉｏｎ−ＲＦＰ−Ｃベクターを含むホラート修飾リポソームの調製
４７８．２ｍｇのＰＯＰＣ、５８．８ｍｇのＣｈｏｌ、１３．５ｍｇのホラート−脂質（例８を参照）および２μｇの７−ニトロベンゾフラザン標識ＤＯＰＥを、６０℃で７５０μＬのエタノール（９６％）に溶解し、４．２５ｍＬのＲＦＰプラスミド含有ＰＢＳ、ｐＨ  ７．４（ＲＦＰ−プラスミド１．２７ｍｇ／ｍＬ）に注入する。脂質の使用モル比は、７７．９９：１８．８３：１．０２：０．２７である。２００ｎｍのポリカルボナート膜を５回、１００ｎｍのポリカルボナート膜を５回通して押し出し、透析濾過した後、リポソームの平均サイズは１６１ｎｍであり、ＰＤＩは０．１３である。ＨＰＬＣ分析によると、ＰＯＰＣ：Ｃｈｏｌのモル比は７７．９９：１５．７６であり、ホラート−脂質含有量は５０２μｇ／ｍｌ（目標７７０μｇ／ｍｌ）である。
【０２５８】
例１１：アニスアミドで修飾されたリポソームの調製
４７０ｍｇのＰＯＰＣ、６０ｍｇのＣｈｏｌおよび１３．５ｍｇのアニスアミド脂質（例４を参照）を、５５℃で７５０μｌのエタノール（９６％）に溶解し、４．２５ｍＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）に注入する。脂質の使用モル比は、７７．９９：１８．８３：１．０２：０．２７である。１００ｎｍのポリカルボナート膜を通して押し出した後、リポソームの平均サイズは１１０ｎｍであり、ＰＤＩは０．０６８である。ＨＰＬＣ分析によれば、アニスアミド脂質含有量は理論値の７２％である。
【０２５９】
例１２：ＲＧＤ修飾リポソームの調製
ＤＯＰＣ、Ｃｈｏｌ、ＮＢＤ−ＤＯＰＥ、および例９で得られたＲＧＤ−脂質のＤＯＰ
Ｃ：Ｃｈｏｌ：ＮＢＤ−ＤＯＰＥ：ＲＧＤ−脂質のモル比６６：３３：０．５：０〜５混合物を使用して、ＨＥＰＥＳ緩衝液中、乾燥塗膜方法によって、その後続いてＬｉｐｏｆａｓｔ押出機（Ａｖｅｓｔｉｎ、Ｉｎｃ．、オタワ、カナダ）を使用して、２００ｎｍのポリカルボナート膜を５回、１００ｎｍのポリカルボナート膜を２１回通して押し出すことによって、リポソームを調製する。得られたリポソームを、使用時まで４℃で貯蔵する。
【０２６０】
例１３：ＲＧＤ修飾リポソームの細胞取り込み
Ｍ２１細胞における（例１２で得られた）ＲＧＤ修飾リポソームの細胞取り込みの程度を、Ｇｕａｖａ  ｅａｓｙＣｙｔｅ  ８ＨＴフローサイトメーターで検出されるＮＢＤ−ＤＯＰＥシグナルを基準として評価し、図１および表１に示す。
【０２６１】
【表１】
2018141015.tif 000038
【０２６２】
ＲＧＤ標的指向リポソーム（５％ＤＭＡ−ＲＧＤ）では、非標的指向リポソーム（０％ＤＭＡ−ＲＧＤ）に比べて、細胞取り込みが約１６倍増強していることが観察される。ｘ軸はリポソーム中のＤＭＡ−ＲＧＤのモル比（％）を表す。ｙ軸はＮＢＤ陽性細胞（％）を表す。図１は、ＲＧＤ部分がＭ２１細胞上で発現された標的受容体（インテグリンαｖβ３受容体）を認識できることを示す（＊ｐ＜０．０１）。
【０２６３】
例１４：（５Ｓ，８Ｓ，４５Ｓ，Ｅ）−１１−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４５−（３−（（２．３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル）アミノ）−３−オキソプロピル）−５，８−ジメチル−３，６，９，１２，１５，４３−ヘキサオキソ−１−フェニル−２，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ノナオキサ−４，７，１０，１１，１６，４４−ヘキサアザヘキサテトラコンタ−１３−エン−４６−酸の合成
【０２６４】
【化２８】
2018141015.tif 000039
【０２６５】
（ａ）Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂の合成（例７を参照、１．１当量、３．０５ｍｍｏｌ）
（ｂ）ＲＲ１１ａ−ＮＨ−ＰＥＧ８−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂の合成：
ＲＲ１１ａ−ＮＨ−ＰＥＧ８−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂は、通常の固相合成により以下の反応順序で得られる：
（１）ＤＭＦ中ピペリジンによるＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂のＦｍｏｃ基の切断、
（２）ＤＭＦおよびＤＩＰＥＡ中ＰｙＢＯＰを使用するＦｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ８−ＰＡとの縮合、
（３）ＤＭＦ中ピペリジンによるＦｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ８−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂のＦｍｏｃ基の切断、最後に
（４）ＤＭＦおよびＤＩＰＥＡ中ＰｙＢＯＰを使用するＲＲ１１ａ−ＯＨとの縮合。
（ｃ）（５Ｓ，８Ｓ，４５Ｓ，Ｅ）−１１−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４５−（３−（（２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル）アミノ）−３−オキソプロピル）−５，８−ジメチル−３，６，９，１２，１５，４３−ヘキサオキソ−１−フェニル−２，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ノナオキサ−４，７，１０，１１，１６，４４−ヘキサアザヘキサテトラコンタ−１３−エン−４６−酸の合成：
７．１５ｇのＲＲ１１ａ−ＮＨ−ＰＥＧ８−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ジフェニルメチル樹脂を、５０ｍｌのジクロロメタンでそれぞれ洗浄し、濾取し、５０ｍｌのジクロロメタンに再懸濁し、真空乾燥する。次いで、５％ｉｃトリフルオロ酢酸のジクロロメタン溶液７０ｍｌを添加した。懸濁液を室温で３．５時間撹拌し、次いで１００ｍｌの冷ジイソプロピルエーテルに濾過する。樹脂をジクロロメタン／ジイソプロピルエーテル（１／１）ですすぐ。濾液を合わせて、真空中で蒸発させ、ｔ−ＢｕＯＨから凍結乾燥すると、４．１５ｇ（９２％）のコハク色固体が得られる。ＥＳＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ計算値＝１４８１．９、Ｍｗ［Ｍ−Ｈ］−＝１４８０．２。
【０２６６】
例１５：（５Ｓ，８Ｓ，４５Ｓ，Ｅ）−１１−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４５−（３−（（２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル）アミノ）−３−オキソプロピル）−５，８−ジメチル−３，６，９，１２，１５，４３−ヘキサオキソ−１−フェニル−２，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ノナオキサ−４，７，１０，１１，１６，４４−ヘキサアザヘキサテトラコンタ−１３−エン−４６−酸の合成
【０２６７】
【化２９】
2018141015.tif 000040
【０２６８】
７．１５ｇのＲＲ１１ａ−ＮＨ−ＰＥＧ８−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ＯＨ（例１４の生成物）および１．５０ｍｌのＤＩＰＥＡを７０ｍｌのジクロロメタンに溶解する。次いで、４．３２ｇのＭｅＯ−ＰＥＧ−ＮＨ２および１．６７ｇのＰｙＢＯＰを添加し、溶液を終夜撹拌する。褐色溶液を蒸発させ、残渣を３００ｇのシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ  ６０、０．０４０〜０．０６３ｍｍ）でのカラムクロマトグラフィーで、酢酸エチル（ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔ）、メタノールおよびトリエチルアミンの１６：３．１の比と１７：２：１の比の混合物をそれぞれ使用して、２回精製する。生成物を含む画分を合わせ、蒸発させ、得られた粘性残渣をｔ−ＢｕＯＨから凍結乾燥すると、４．５ｇ（６０％）の黄色がかった固体が得られる。ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ計算値＝３４７６．２、Ｍｗ［Ｍ＋Ｎａ］＋＝３５００、Ｍｎ＝３３６３．２、Ｍｗ＝３３８４．５、ＰＤＩ＝１．０１。
【０２６９】
例１６：（（２Ｓ，５Ｓ，１４Ｓ，Ｅ）−８−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１４−カルバモイル−５−メチル−３，６，９，１２，１７−ペンタオキソ−２０−（テトラデシルオキシ）−２２−オキサ−４，７，８，１３，１８−ペンタアザヘキサトリアコンタ−１０−エン−２−イル）カルバミン酸ベンジルの合成
【０２７０】
【化３０】
2018141015.tif 000041
【０２７１】
（ａ）Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂の合成：
１００ｍｌのＳＰＰＳ反応器で、５．０ｇのＳｉｅｂｅｒ樹脂（３．１ｍｍｏｌ）を５０ｍｌのＤＭＦで２回洗浄し、２０％ｉｃピペリジンのＤＭＦ溶液で１５分にわたって処理し、５０ｍｌのＤＭＦと５０ｍｌのｉＰｒＯＨで交互に３回洗浄する。次いで、３．２ｇの（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−グルタミン酸−γ−２，３−ビス（テトラデシルオキシ）プロピル−アミド（例２を参照のこと、１．２５当量、３．８ｍｍｏｌ）と２．４８ｇのＰｙＢＯＰ（１．５当量）のＤＭＦ（５０ｍｌ）溶液、および１．６２ｍｌのＤＩＰＥＡ（２．５当量）、２．５時間。溶液を濾取し、残渣を５０ｍｌのＤＭＦと５０ｍｌのｉＰｒＯＨで交互に３回洗浄する。
（ｂ）ＲＲ１１ａ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂の合成：
ＲＲ１１ａ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂は、通常の固相合成により以下の反応順序で得られる：
（１）ＤＭＦ中ピペリジンによるＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂のＦｍｏｃ基の切断（真空乾燥後の樹脂５．６ｇ）。
（２）ＤＭＦ中ＤＩＰＥＡを使用するＲＲ１１ａ−ＮＨＳとの縮合。
（ｃ）生成物の樹脂からの切断：
２．６ｇのＲＲ１１ａ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂をジクロロメタン中５％ｉｃトリフルオロ酢酸２０ｍｌで２時間処理する。懸濁液を１００ｍｌの冷ジイソプロピルエーテルに濾過する。濾液を真空中で蒸発させ、ｔ−ＢｕＯＨから凍結乾燥すると、６６０ｍｇの黄色がかった固体が得られる。ＥＳＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ計算値＝１０５６．７、Ｍｗ［Ｍ−Ｈ］−＝１０５６．０。
【０２７２】
例１７：（（２Ｓ，５Ｓ，４２Ｓ，Ｅ）−８−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４２−カルバモイル−５−メチル−３，６，９，１２，４０，４５−ヘキサオキソ−４８−（テトラデシルオキシ）−１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，５０−ノナオキサ−４，７，８，１３，４１，４６−ヘキサアザテトラヘキサコンタ−１０−エン−２−イル）カルバミン酸ベンジルの合成
【０２７３】
【化３１】
2018141015.tif 000042
【０２７４】
（ａ）Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂の合成：（例１６を参照）
（ｂ）ＮＨ２−ＰＥＧ８−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂の合成：
ＮＨ２−ＰＥＧ８−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂は、通常の固相合成により以下の反応順序で得られる：
（１）ＤＭＦ中ピペリジンによるＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂のＦｍｏｃ基の切断
（２）ＤＭＦおよびＤＩＰＥＡ中ＨＴＢＵを使用するＦｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ８−ＰＡとの縮合、最後に
（３）ＤＭＦ中ピペリジンによるＦｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ８−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂のＦｍｏｃ基の切断
（ｃ）ＮＨ２−ＰＥＧ８−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−アミドの合成：
生成物は、ジクロロメタン中トリフルオロ酢酸を使用してＮＨ２−ＰＥＧ８−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂から切断される。ＥＳＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ（計算値）＝１０３４．８、Ｍｗ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１０３５．９。
（ｄ）（（２Ｓ，５Ｓ，４２Ｓ，Ｅ）−８−（２−アミノ−２−オキソエチル）−４２−カルバモイル−５−メチル−３，６，９，１２，４０，４５−ヘキサオキソ−４８−（テトラデシルオキシ）−１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，５０−ノナオキサ−４，７，８，１３，４１，４６−ヘキサアザテトラヘキサコンタ−１０−エン−２−イル）カルバミン酸ベンジルの合成：
メカニカルスターラを装備した５ｍｌの丸底フラスコに、２ｍｌのジクロロメタン中４２ｍｇのＮＨ２−ＰＥＧ８−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−アミド（４０．６ｍｍｏｌ）を加える。次いで、０．０１ｍｌのトリエチルアミン（９５ｍｍｏｌ）を加える。２〜３分間撹拌すると、明黄色溶液が生じ、２３ｍｇのＲＲ１１ａ−ＮＨＳ（４１ｍｍｏｌ）を３分かけて添加する。溶液を１時間撹拌し、減圧下で蒸発させると、灰白色固体生成物が得られる。生成物はＴＬＣで単一のスポットを示す。Ｍｗ計算値＝１４８０．０、Ｍｗ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４８２およびＭｗ［Ｍ＋Ｎａ］＋＝１５０４．０。
【０２７５】
例１８：（（２Ｓ，５Ｓ，１２６Ｓ，Ｅ）−８−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１２６−カルバモイル−５−メチル−３，６，９，１２，１２４，１２９−ヘキサオキソ−１３２−（テトラデシルオキシ）−１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５，８８，９１，９４，９７，１００，１０３，１０６，１０９，１１２，１１５，１１８，１２１，１３４−ヘプタトリアコンタオキサ−４，７，８，１３，１２５，１３０−ヘキサアザオクタテトラコンタヘクタ−１０−エン−２−イル）カルバミン酸ベンジルの合成
【０２７６】
【化３２】
2018141015.tif 000043
【０２７７】
（ａ）Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂の合成：（例１６を参照）。
（ｂ）ＲＲ１１ａ−ＮＨ−ＰＥＧ３６−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂の合成：
ＲＲ１１ａ−ＮＨ−ＰＥＧ３６−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂は、通常の固相合成により以下の反応順序で得られる：
（１）ＤＭＦ中ピペリジンによるＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂のＦｍｏｃ基の切断、
（２）ＤＭＦおよびＤＩＰＥＡ中ＰｙＢＯＰを使用するＦｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ３６−ＰＡとの縮合、
（３）ＤＭＦ中ピペリジンによるＦｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ３６−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂のＦｍｏｃ基の切断、最後に
（４）ＤＭＦ中ＤＩＰＥＡを使用するＲＲ１１ａ−ＮＨＳとの縮合。
（ｃ）（（２Ｓ，５Ｓ，１２６Ｓ，Ｅ）−８−（２−アミノ−２−オキソエチル）−１２６−カルバモイル−５−メチル−３，６，９，１２，１２４，１２９−ヘキサオキソ−１３２−（テトラデシルオキシ）−１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９，８２，８５，８８，９１，９４，９７，１００，１０３，１０６，１０９，１１２，１１５，１１８，１２１，１３４−ヘプタトリアコンタオキサ−４，７，８，１３，１２５，１３０−ヘキサアザオクタテトラコンタヘクタ−１０−エン−２−イル）カルバミン酸ベンジルの合成：
７．０ｇのＲＲ１１ａ−ＮＨ−ＰＥＧ３６−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂を２％ｉｃトリフルオロ酢酸のジクロロメタン溶液７０ｍｌで処理する。懸濁液を室温で３時間撹拌し、次いで７０ｍｌの冷ジイソプロピルエーテルに濾過する。濾液を真空中で蒸発させ、ｔ−ＢｕＯＨから凍結乾燥すると、１．２５ｇの白色固体が得られる。ＥＳＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ計算値＝２７１３．７、Ｍｗ［Ｍ＋Ｎａ＋Ｈ］２＋＝１３８０．１。
【０２７８】
例１９：ＲＲ１１ａ修飾リポソームの調製
ＲＲ１１ａ修飾リポソーム（ＭＳ  １５−４）および対照リポソーム（ＭＳ  １５−０）は、以下の脂質溶液から構成される：
【０２７９】
【表２】
2018141015.tif 000044
【０２８０】
３ｍｌのスクリューキャップガラスバイアル（Ｔｅｆｌｏｎライニングキャップ）に、上記の脂質を加え、短時間ボルテックスする。脂質の不透明な膜が得られるまで、クロロホルムをアルゴン気流下で蒸発させる。次いで、バイアルを真空下のデシケーターに１０分間入れる。乾燥塗膜に、１０００μＬのＤＰＢＳ  １Ｘを添加し、均質で乳状の懸濁液が得られるまで（３〜４分）内容物をボルテックスする。この後、Ｂｒａｎｓｏｎ  １５１０モデルの超音波槽で５分間超音波処理して、曇った懸濁液を得る。次いで、この懸濁液をＢｒａｎｓｏｎ  Ｍｏｄｅｌ  ４Ｃ１５で全振幅の３０％にて３０秒間プローブ超音波処理して（起泡を回避する）、ほぼ半透明のリポソーム懸濁液を得る。懸濁液を１００ｎｍのポリカルボナート膜（Ａｖａｎｔｉ  Ｎｏ  ６１０００５）を通して高圧押出する。最後に、懸濁液を０．２２μｍのＭｉｌｌｅｘ−ＧＶメンブランフィルターを通して無菌濾過し、無菌バイアル中、４℃で貯蔵する。ＭＳ−１５−０および１５−４のＺ平均流体力学的径はそれぞれ、１０１および９９μｍである（Ｍａｌｖｅｒｎ  ＺｅｔａＳｉｚｅｒ装置）。
【０２８１】
例２０：ＲＲ１１ａ修飾リポソームのレグマイン標的指向
例１９のリポソーム製剤を使用して、レグマイン標的指向実験を以下のプロトコルに従って行う：
１日目  ３．１２×１０４の４Ｔ１細胞／ｃｍ２を無処理のスライドガラスに播種する
２日目  １００μＭ  ＣｏＣｌ２を添加する；２４時間インキュベートする
３日目  １００μｌのリポソーム（１０１２ＮＰｓ／ｍｌ）を添加する；２時間インキュベートする；５μｇ／ｍｌ  Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２を添加する；２０分インキュベートする；蛍光顕微鏡に載せ、分析する。
細胞培地：１０％ＦＢＳ、１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、０．０７５％ｗ／ｖ炭酸水素ナトリウムおよび１ｍＭピルビン酸ナトリウムを補充した、Ｌ−グルタミン含有ＲＰＭＩ  １６４０（１倍）。
【０２８２】
写真は、６３倍の対物レンズを使用して、２×２ｂｉｎで、Ｈｏｅｃｈｓｔでは５００ｍｓ、ＲｈｏｄＢでは１０００ｍｓ、およびクリア視野では１００ｍｓで、各ポータオブジェクト（ｐｏｒｔａｏｂｊｅｃｔｓ）の各ランダム視野から取得され、２０〜３０の画像が、画像デコンボリューション分析のために、高さ０．５μｍのフォーカスステップで核焦点の周りに蓄積する。図２は、中間焦点を示す、デコンボリューション後のスタックからの２０〜３０画像の１つを表す。明らかに、データはＲｈＢ−ＤＯＰＥと細胞の共局在を示し、したがってＲＲ−１１ａ−８ＰＥＧ−ＰＡ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−アミドで作製されたリポソームは、非標的指向化対照に比べて効率的にこれらの細胞を標的にすることを示す。
【０２８３】
例２１：抗体（Ｆｃ単位）標的指向脂質、ジスルフィド架橋デカペンタペプチドＨ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨの合成
【０２８４】
【化３３】
2018141015.tif 000045
【０２８５】
（ａ）線状Ｈ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨの合成：
固相ペプチド合成は、固相合成装置ＡＢＩ  ４３１Ａを用いて、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ戦略（Ａｔｈｅｒｔｏｎ  Ｅ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，５３９（１９７８））に従って実施され、Ｈ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−２−ＣＩＴｒｔ（０．５ｇ、０．２５ｍｍｏｌｅ）が原樹脂として使用される。経時的な順で使用されるアミノ酸誘導体は、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−  Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ＯＨである。カップリングはＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ／トリメチルピリジン／ＨＢＴＵ（４当量：４当量：３．６当量）によって行われる。ただし、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−ＯＨはＤＩＰＥＡ／ＰｙＢＯＰを使用してカップリングされる（４．８当量：７．２当量：４．８当量）。Ｆｍｏｃ保護の除去は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンによって実現する。ジメチルホルムアミドで交互に洗浄するステップを、各カップリングおよび脱保護ステップの後にそれぞれ３回行う。Ｆｍｏｃ−ＳＰＰＳによって、１．４ｇの線状ペプチド樹脂が得られる。線状デカペンタペプチドは、トリフルオロ酢酸(trifluoroacetic acid)／トリイソプロピルシラン／ジチオエリトリトール／水（９２．５：２．５：２．５：２．５、１４ｍｌ）の混合物によって樹脂から２．５時間の間に切断される。濾過した後、濾液を１４０ｍｌのジイソプロピルエーテルで希釈する。褐色がかった固体を濾取し、真空乾燥する：４８５ｍｇ、理論量の３７％、ＥＳＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ計算値＝２１９８．２、Ｍｗ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１０９９．６。
（ｂ）ジスルフィド架橋  Ｈ−Ｇｌｕ（ＤＭＡ）−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨの合成：
例２１  ａ）の下で得られた１０ｍｇの褐色がかった固体を、１０ｍｌのメタノールに溶解し、ＤＩＰＥＡを添加することによってｐＨ８にする。溶液を酸素雰囲気中で終夜撹拌する。溶液を蒸発させると、最終生成物を褐色がかった固体として定量的収率で得られる。ＥＳＩ−ＭＳ：モノアイソトピック  Ｍｗ計算値＝２１９６．２、Ｍｗ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１０９８．６。
【０２８６】
例２２：押出を行わないＲＲ１１ａ修飾リポソームの調製
ＲＲ１１ａ修飾リポソーム（ＭＳ−３２−１〜ＭＳ−３２−１０）は以下の脂質溶液から構成される：
３ｍｌのスクリューキャップガラスバイアル（Ｔｅｆｌｏｎライニングキャップ）に、上記の脂質を加え、短時間ボルテックスする。脂質の不透明な膜が得られるまで、クロロホルムをアルゴン気流下で蒸発させる。次いで、バイアルを真空下のデシケーターに１０分間入れる。乾燥塗膜に、１０００μＬのＤＰＢＳ  １Ｘを添加し、均質で乳状の懸濁液が得られるまで（１０分）、内容物をボルテックスする。この後、Ｂｒａｎｓｏｎ  １５１０モデルの超音波槽で５分間超音波処理して、曇った懸濁液を得る。次いで、この懸濁液をＢｒａｎｓｏｎ  Ｍｏｄｅｌ  ４Ｃ１５で全振幅の４０％にて３０秒間プローブ超音波処理して（起泡を回避する）、ほぼ半透明のリポソーム懸濁液を得る。最後に、懸濁液を０．２２μｍのＭｉｌｌｅｘ−ＧＶメンブランフィルターを通して無菌濾過し、無菌バイアル中、４℃で貯蔵する。Ｚ平均流体力学的径およびＰＤＩは、Ｍａｌｖｅｒｎ  ＺｅｔａＳｉｚｅｒ装置を使用して決定される：
【０２８７】
【表３】
2018141015.tif 000046
【図１】
2018141015.tif 000054
【図２】
2018141015.tif 000055
【配列表】
2018141015000001.app