(57)【要約】      （修正有）【課題】癌を検出、予後を判定、抑制、治療、及び／または予防するための組成物及び方法の提供。【解決手段】その方法は、治療上有効な量の少なくとも１つのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子、及び少なくとも１つの細胞傷害性分子を患者に投与する工程を有する。そのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子は、その細胞傷害性分子に結合されていても良い。その方法は、少なくとも１つの他の化学療法剤の投与、腫瘍切除、及び／または放射線治療の投与などの少なくとも１つの他の抗癌手段をさらに有する。【選択図】図１−１
2018083813.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を治療するための組成物であって、治療上有効な量の少なくとも１つのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子、及び少なくとも１つの細胞傷害性分子を有する、組成物。
【請求項２】
請求項１記載の組成物において、前記少なくとも１つのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子は、前記少なくとも１つの細胞傷害性分子に結合されている、組成物。
【請求項３】
請求項１記載の組成物において、前記少なくとも１つのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子及び少なくとも１つの細胞傷害性分子は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体をさらに有する組成物内に含有される、組成物。
【請求項４】
請求項１記載の組成物において、前記癌は、皮膚癌、肉腫、及び横紋筋肉腫からなる群から選択される、組成物。
【請求項５】
請求項４記載の組成物において、前記皮膚癌は、扁平上皮癌または悪性黒色腫である、組成物。
【請求項６】
請求項１記載の組成物であって、さらに、少なくとも１つの別の化学療法剤を有する、組成物。
【請求項７】
請求項１項記載の組成物において、前記Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子は、Ｇ８抗原に特異的に結合する、組成物。
【請求項８】
請求項１記載の組成物において、前記細胞傷害性分子は、補体、光熱波またはラジオ波により活性化されるナノ粒子、熱感受性炭素ナノ結晶、細胞傷害性抗生物質、カチオン性両親媒性溶解性ペプチド、放射性核種、化学療法剤、及び毒素からなる群から選択される、組成物。
【請求項９】
請求項７記載の組成物において、前記Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子はＧ８抗体である、組成物。
【請求項１０】
請求項１記載の組成物において、前記Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子は、Ｇ８抗原、シンデカン、またはヘパラン硫酸プロテオグリカンに特異的な抗体である、組成物。
【請求項１１】
請求項１記載の組成物において、前記Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子は、シンデカンまたはヘパラン硫酸プロテオグリカンに特異的な抗体である、組成物。
【請求項１２】
患者における上昇した皮膚癌へのリスクまたは転移可能性を検出する方法であって、患者から得られた生体試料中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞を検出する工程を有し、
前記生体試料中の、健常者中の対応する生体試料と比較したＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の増加が、前記患者における上昇した皮膚癌のリスクまたは転移可能性の指標である、方法。
【請求項１３】
請求項１２記載の方法であって、さらに、少なくとも１つの検出分子に結合された少なくとも１つのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子に前記生体試料を接触させる工程を有し、
前記Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子は、Ｇ８抗原、シンデカン、またはヘパラン硫酸プロテオグリカンに特異的な抗体である、方法。
【請求項１４】
請求項１２記載の方法において、前記皮膚癌は、扁平上皮癌または悪性黒色腫である、方法。
【請求項１５】
請求項１３記載の方法において、前記Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子は、シンデカンまたはヘパラン硫酸プロテオグリカンに特異的な抗体である、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１２年３月９日に出願された米国出願第６１／６０８，９７１号に対する優先権を主張し、その出願全体が本参照により本出願に組み込まれるものである。
【０００２】
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈにより授与された助成金第ＡＲ０５２３２６号及び第ＣＡ０７０７３９号下の政府支援でなされた。政府は、本発明において一定の権利を有しうる。
【０００３】
本発明は、癌治療の分野に関する。具体的には、癌を検出、診断、抑制、治療、及び／または予防するための組成物及び方法が開示される。
【背景技術】
【０００４】
本発明が関係する技術水準を開示するために、いくつかの刊行物及び特許資料が本明細書の至るところで引用される。これらの引用物は、あたかも全文が記載されるかのように、本参照により本明細書に組み込まれる。
【０００５】
現在の形態の化学療法の殆どは、腫瘍細胞自体を標的とする。しかしながら、腫瘍間質内の細胞が腫瘍の進行に役割を担う。したがって、これらの細胞を標的とする薬剤が、腫瘍量を軽減するための治療方式の有用な構成要素となりうる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明に則り、患者において癌を抑制、治療、及び／または予防する方法が提供される。一定の実施形態においては、その方法は、治療上有効な量の少なくとも１つのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子及び少なくとも１つの細胞傷害性分子を患者に投与する工程を有する。そのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子は、その細胞傷害性分子に結合されても良い。特定の実施形態においては、その方法は、少なくとも１つの他の化学療法剤の投与、腫瘍切除、及び／または放射線治療の投与などの、少なくとも１つの他の抗癌手段をさらに有する。
【０００７】
本発明の別の側面に則り、患者において上昇したリスクを検出し、診断し、または癌の予後もしくは転移の可能性を提供する方法が提供される。一定の実施形態においては、その方法は、患者から得られた生体試料中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞を検出する工程を有し、それにおいては、健常者における対応する生体試料と比較してのその生体試料中でのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の増加及び／または局在化は、その被験者における上昇した癌のリスクまたは転移可能性の暗示である。特定の実施形態においては、その方法は、少なくとも１つの検出分子に結合された少なくとも１つのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子で生体試料に接触する工程を有する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、正常の及び擦過されたネズミ科の皮膚におけるＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の画像を提供する。皮膚切片は、Ｈ&Ｅで染色され（図１Ａ及び１Ｆ）、またはＧ８、及びＭｙｏＤ  ｍＲＮＡ、ｎｏｇｇｉｎ  ｍＲＮＡ（Ｎｏｇ）もしくはｎｏｇｇｉｎタンパク質に対して二重標識された（図１Ｃ中の挿入図）。核は、Ｈｏｅｃｈｓｔ色素で染色された。毛幹は自家蛍光性である（＊）。擦過されていない皮膚においては、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は毛包（ｆ）の毛球に位置していた（図１Ｂ及び１Ｃ）。図１Ｂ中の挿入図は、横方向に薄切された毛包内のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞を示す。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、毛包間の真皮（ｄ）または表皮（ｅ）中には観察されなかった（図１Ｂ−１Ｅ）。擦過後、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は毛包内及び周囲の真皮中で増加し（図１Ｇ及び１Ｈ）、創面に存在した（図１Ｉ及び１Ｊ）。図１Ｋ（Ｈ&Ｅで染色）及び１Ｌ（Ｇ８及びｎｏｇｇｉｎ  ｍＲＮＡに対して二重標識）は、成長期の皮膚の画像を提供する。図１Ａ及び１Ｆ中の挿入図は、蛍光顕微鏡写真中の高倍率で示された領域を図示する。縮尺バーは、図１Ａ、１Ｆ、及び１Ｋにおいては５６μｍ、また図１Ｂ−１Ｅ、１Ｇ−１Ｊ、及び１Ｌにおいては９μｍである。
【図２】図２は、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞、ｎｏｇｇｉｎ、及びネズミ科上皮癌細胞の画像を提供する。Ｋｅｒ／Ｒａｓ腫瘍を含有するネズミ科の皮膚切片が、Ｈ&Ｅで染色され（図２Ａ）、またはＧ８、及びＴＵＮＥＬ、ＭｙｏＤ  ｍＲＮＡ、ｎｏｇｇｉｎ  ｍＲＮＡ（Ｎｏｇ）、Ｆ４／８０、もしくはα−ＳＭＡに対して二重標識された。Ｋｅｒ／Ｒａｓ細部内のケラチン及び毛幹は、自家蛍光性である（＊）。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、腫瘍の間質中に存在していた（図２Ｂ−２Ｄ及び２Ｇ−２Ｉ）。いくらかのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、ＴＵＮＥＬ陽性細胞に隣接していた（図２Ｂ）。Ｋｅｒ／Ｒａｓ腫瘍を覆っている毛包は、より増加した数のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞を含有した（図２Ｅ及び２Ｆ）。Ｇ８、Ｆ４／８０、α−ＳＭＡ、及びＣＤ４４に対する抗体は、間質中において別々の細胞を標識した（図２Ｇ−２Ｊ）。図２Ｉ中の挿入図は、α−ＳＭＡで染色された血管を示す。縮尺バーは、図２Ａにおいては１３５μｍ、また図２Ｂ−Ｊにおいては９μｍである。培養されたＫｅｒ／Ｒａｓ細胞は、ＢＭＰ−４及び／またはｎｏｇｇｉｎで処理され、その後［３Ｈ］チミジンと共に培養された（図２Ｋ）。Ｎｏｇｇｉｎは、ＢＭＰ−４のＤＮＡ中への［３Ｈ］チミジン取り込み阻害を覆した。
【図３】図３は、正常なヒトの皮膚及び腫瘍中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の画像を提供する。正常な真皮（図３Ａ及び３Ｂ）、基底細胞癌（図３Ｃ及び３Ｄ）、扁平上皮癌（図３Ｅ−３Ｈ、及び３Ｍ−３Ｐ）、及び悪性黒色腫（図３Ｉ−３Ｌ）の切片が、Ｈ&Ｅで染色され、またはＧ８、及びＭｙｏＤ  ｍＲＮＡ、ｎｏｇｇｉｎタンパク質（Ｎｏｇ）、Ｆ４／８０、α−ＳＭＡ、もしくはサイトケラチン（ＣＫ）に対して二重標識された。Ｈ&Ｅ染色された切片中の矢印は、高倍率の蛍光画像で表示されたおおよその領域を示す。図３Ｉ−３Ｋは、ＤＩＣ及び蛍光画像の併合である。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、毛球及び真皮乳頭中（矢印）（図３Ｂ）、並びに基底細胞癌細胞の下（図３Ｄ）に存在していた。扁平上皮癌においては、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は間質中（図３Ｆ）及び癌細胞の間（図３Ｈ）に存在していた。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、色素性黒色腫細胞（図３Ｉ中の矢印）を包囲していた。いくらかのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、色素沈着していた（図３Ｊ中の矢印）。Ｇ８、Ｆ４／８０、α−ＳＭＡ、サイトケラチン（ＣＫ）、及びＣＤ４４に対する抗体は、腫瘍組織中の別々の細胞を標識した（図３Ｋ−３Ｑ）。図３Ｌ及び図３Ｍ中の挿入図：Ｇ８ではなくＦ４／８０に対して標識された細胞。縮尺バーは、図３Ａ、３Ｃ、３Ｅ、３Ｇにおいては２７μｍ、また図３Ｂ、３Ｄ、３Ｆ、３Ｈ−３Ｐにおいては９μｍである。
【図４】図４は、胞巣型横紋筋肉腫（ＡＲＭＳ）の遺伝子改変マウスモデルにおいてＰａｘ３／ＦＯＸＯ１転座を発現しているＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の画像を提供する。矢印は、その転座及びＧ８を共発現している細胞を示す。挿入図は、Ｇ８及びｎｏｇｇｉｎに対する二重標識を示す。
【図５】図５は、Ｇ８及びｎｏｇｇｉｎに対する抗体で染色されたヒト胎児型及び胞巣型横紋筋肉腫の細胞（それぞれ、ＥＲＭＳ及びＡＲＭＳ）の画像を提供する。
【図６】図６は、ＥＲＭＳ及びＡＲＭＳ細胞の培養物中におけるＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の標的化を示す。ＥＲＭＳ及びＡＲＭＳ培養物は、Ｇ８抗体（図６Ａ及び６Ｄ）、補体（図６Ｂ及び６Ｅ）、または両方（図６Ｃ及び６Ｆ）と共に培養された。その細胞はその後Ｇ８及びＴＵＮＥＬに対して標識された。
【図７】図７は、Ｇ８及びｎｏｇｇｉｎに対する抗体で標識された、ヒト骨肉腫、ウィルムス及び横紋筋肉腫の腫瘍切片の画像を提供する。Ｇ８陽性／ｎｏｇｇｉｎ陽性細胞は、腫瘍内の亜集団であった。
【図８】図８は、標的エピトープの一覧を提供する。上から下まで、提供される配列はＳＥＱ  ＩＤ番号６−３３である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
骨形成タンパク質（ＢＭＰｓ）は、多くの胚及び成体組織における増殖、分化、及びアポトーシスの強力な制御因子である（Ｂｒａｇｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌ  ２３：６０９−６２０）。出生後の皮膚において、ＢＭＰ情報伝達は、正常な表皮のホメオスタシス、毛包の成長、及びメラニン形成を制御するのに重要な役割を果たす（Ｂｏｔｃｈｋａｒｅｖ，  Ｖ．Ａ．  （２００３）  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，  １２０：３６−４７；  Ｏｗｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，  １２８：７８３−７９０）。皮膚におけるＢＭＰ受容体１Ａ（ＢＭＰＲ−１Ａ）の標的ノックアウトは、毛幹を産生する細胞の分化を阻害する（Ｙｕｈｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １３１：１８２５−１８３３；  Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ，  ２４：２８２６−２８３９；  Ｋｏｂｉｅｌａｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  １０４：１００６３−１００６８；  Ａｎｄｌ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １３１：２２５７−２２６８；  Ｍｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｇｅｎｅｓｉｓ  ３９：１０−２５）。ＢＭＰｓは、創傷治癒、乾癬、及び腫瘍形成などの組織リモデリングの過程にもまた関与している（Ｍｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｇｅｎｅｓｉｓ  ３９：１０−２５；  Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，  １１１：１１４５−１１５２；  Ｂｌｅｓｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １３５：２２７−２３９；  Ｂｌｅｓｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｔｅｒａｔｏｇ．  Ｃａｒｃｉｎｏｇ．  Ｍｕｔａｇｅｎ．，  １５：１１−２１）。ＢＭＰ−６は、正常な創傷治癒の間の過剰増殖及び遊走の箇所の近隣の角化細胞中で上昇しており、また慢性創傷及び乾癬病巣のすべての基底上層の至るところで異常発現している（Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，  １１１：１１４５−１１５２；  Ｗａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １２０：４９３−５０２）。皮膚におけるＢＭＰ−６の過剰発現は、創傷治癒を著しく遅延させる（Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，  １１１：１１４５−１１５２）。その上、ＢＭＰ−６は、表皮細胞の増殖及び発癌性物質誘発性皮膚腫瘍の形成を抑制し（Ｂｌｅｓｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １３５：２２７−２３９；  Ｄｒｏｚｄｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ９１：５５２８−５５３２；  Ｗａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０：７７６１−７７６９）、また一方でＢＭＰＲ−１ＡまたはＳｍａｄ４のノックアウトによるＢＭＰ情報伝達の阻害は、毛包細胞由来の腫瘍形成をもたらす（Ｍｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｇｅｎｅｓｉｓ  ３９：１０−２５；  Ｂｌｅｓｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９��６）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １３５：２２７−２３９；  Ｂｌｅｓｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｔｅｒａｔｏｇ．  Ｃａｒｃｉｎｏｇ．  Ｍｕｔａｇｅｎ．，  １５：１１−２１；  Ｑｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２５：２０７−２１７；  Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ６５：８６７１−８６７８）。
【００１０】
ＢＭＰの活性は、ある程度は、ｎｏｇｇｉｎ、ｃｈｏｒｄｉｎ、ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ、及びＣｅｒｂｅｒｕｓ／ＤＡＮ／ｇｒｅｍｌｉｎを含むいくつもの分泌ＢＭＰ拮抗物質により制御されている（Ｂｒａｇｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌ  ２３：６０９−６２０；  Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｔｒｅｎｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  ２０：２４４−２５６）。Ｎｏｇｇｉｎは、成長期の皮膚における真皮乳頭及び毛包中に発現しており、そこで新たな毛の成長を促進する（Ｂｏｔｃｈｋａｒｅｖ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，  １５：２２０５−２２１４）。ｎｏｇｇｉｎを欠失したマウスは、毛包の誘導及び形態形成に欠陥を示す（Ｂｏｔｃｈｋａｒｅｖ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，  １５：２２０５−２２１４；  Ｊａｍｏｒａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｎａｔｕｒｅ  ４２２：３１７−３２２）。しかしながら、ＢＭＰ阻害剤の活性上昇もまた組織ホメオスタシスを崩壊させるため、ＢＭＰ情報伝達の量設定は堅固に制御されていなければならない。皮膚中でのｎｏｇｇｉｎの過剰発現は、毛包様腫瘍の自然発生的な発達をもたらす（Ｓｈａｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  １７５：１３０３−１３１４）。Ｇｒｅｍｌｉｎは、ＢＭＰにより成長が阻害される基底細胞癌細胞の増殖を促進する（Ｓｎｅｄｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  １０３：１４８４２−１４８４７）。総じて、これらの研究は、ＢＭＰ情報伝達の局所的な調節が、毛包の発達及び維持、表皮の創傷治癒、及び皮膚の腫瘍形成に影響することを示す。
【００１１】
ニワトリ胚においてＢＭＰ情報伝達を調節し創傷治癒に関与する細胞が発見された（Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３５９：１２−２５；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １７５：２８３−２９２；  Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  １０７：１３７３０−１３７３５；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３３６：３０−４１；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １６４：７３９−７４６）。「Ｍｙｏ／Ｎｏｇ」細胞は、その骨格筋特異的転写因子ＭｙｏＤ、ｎｏｇｇｉｎ、及びＧ８細胞表面抗原のためのｍＲＮＡの発現により同定された（Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３５９：１２−２５；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １７５：２８３−２９２；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３３６：３０−４１；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １５５：３８１−３９２；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １４９：８２５−８３４；  Ｓｔｒｏｎｙ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒ．  Ｐａｔｔｅｒｎｓ  ５：３８７−３９５）。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、外胚葉中に出現し、また３つの胚葉すべてに由来する様々な組織へと取り込まれる（Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３５９：１２−２５；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １７５：２８３−２９２；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３３６：３０−４１；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １４９：８２５−８３４；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １７８：６４９−６６０）。初期胚におけるＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の除去は、ＢＭＰ情報伝達を脱制御し、中枢神経系、目、及び体壁の重篤な形成異常を生じ、また筋形成を妨害する（Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３５９：１２−２５；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １７５：２８３−２９２；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３３６：３０−４１）。ニワトリ胚のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞はまた、迅速に増殖し、また損傷部位へと遊走することで、外胚葉中でアポトーシスが起こっている細胞、及び水晶体上皮の創傷に応答する（Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３５９：１２−２５；  Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  １０７：１３７３０−１３７３５）。
【００１２】
Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、ＭｙｏＤ  ｍＲＮＡ、及び骨形成タンパク質阻害物質ｎｏｇｇｉｎを発現する。ニワトリ胚において、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は正常な形態形成及び分化に必要であり、また創傷に応答する。ここでは、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞が正常な哺乳類の皮膚に存在するか、並びに表皮の擦過及び腫瘍形成に反応するかが定められた。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、毛包中のｎｏｇｇｉｎの供給源である。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、毛包間の真皮内では稀であり、またネズミ科及びヒトの皮膚の表皮中には存在しない。ネズミ科の皮膚を擦過して２４時間以内に、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は毛包中で数を増やし、また毛球及び創傷を包囲している真皮に出現する。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞はまた、Ｒａｓ形質転換角化細胞（Ｋｅｒ／Ｒａｓ）から形成された腫瘍の間質にも動員される。Ｎｏｇｇｉｎは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＢＭＰ−４のＫｅｒ／Ｒａｓ増殖に対する阻害効果を遮断する。ヒト扁平上皮癌及び悪性黒色腫は、基底細胞癌よりも著しく多くのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞を含有する。ヒト及びＫｅｒ／Ｒａｓ腫瘍中では、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞はマクロファージ、顆粒球、及びα平滑筋アクチンを発現する細胞とは異なる。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、皮膚ホメオスタシス及び創傷治癒の重要な制御因子であり、また皮膚癌における診断及び治療標的である。
【００１３】
Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、ニワトリ胚の形態形成及び分化の間のＢＭＰ情報伝達の必要不可欠な制御因子である（Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３５９：１２−２５；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １７５：２８３−２９２；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３３６：３０−４１）。ここでは、成体のマウス及びヒトの皮膚におけるＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の存在が決定された。細胞系譜解析は、成体マウスにおけるＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞が、胚の外胚葉中に出現するそれの直系子孫かどうかを明らかにするであろう。成体組織中のその起源にはよらず、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は毛包中のｎｏｇｇｉｎの主な供給源である。ＢＭＰ情報伝達のｎｏｇｇｉｎによる調節は、毛包の成長及び維持に必要であり（Ｂｏｔｃｈｋａｒｅｖ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，  １５：２２０５−２２１４；  Ｊａｍｏｒａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｎａｔｕｒｅ  ４２２：３１７−３２２）、また故に、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は毛包ホメオスタシスの重要な制御因子である。
【００１４】
未損傷のネズミ科及びヒトの皮膚中では、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は毛包中では少数で、また真皮内では稀に存在している。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏでは筋分化マーカーを発現しない多能性真皮乳頭細胞とは異なるが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは発現するように促進される（Ｒｕｆａｕｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，  ２０９：９５９−９６６；  Ｂｅｎ−Ｙａｉｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １３２：６８９−７０１；  Ｌａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｎａｔｕｒｅ  ４３３：８８４−８８７；  Ｒｅｎｄｌ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  ＰＬｏＳ  Ｂｉｏｌ．，  ３：ｅ３３１）。しかしながら、それらは、再生中の筋へと生着する皮膚線維芽細胞の亜集団に類似しているかもしれない（Ｍｏｎｔａｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｐｒｏｃ，  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ，，  １００：９３３６−９３４１；  Ｐｙｅ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ．  Ａｎａｔ．，  １９８：１６３−１７３）。表皮擦過の２４時間以内に、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は毛包中で増加し、毛包を包囲する真皮に集合し、そして創面に出現する。擦過された皮膚中でのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞のこれらの挙動は、ニワトリ胚の外胚葉中のアポトーシス及び水晶体の創傷への応答を連想させる（Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３５９：１２−２５；  Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  １０７：１３７３０−１３７３５）。理論に拘束されることなく、擦過処置の間の毛包に対する機械的張力や、損傷された組織内に放出されたサイトカイン及びケモカインは、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞を活性化させ誘引しうる。
【００１５】
生理的及び炎症性刺激はいずれも、創傷閉鎖を促進するために収縮する筋線維芽細胞の活性化因子及び動員因子として知られている（Ｇａｂｂｉａｎｉ，  Ｇ．  （２００３）  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  ２００：５００−５０３）。筋線維芽細胞はまた、腫瘍細胞の挙動も調節する（Ｄｅ  Ｗｅｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  １２３：２２２９−２２３８）。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞及び筋線維芽細胞はどちらも、ＭｙｏＤ、ビメンチン、α−ＳＭＡ、及びミオシンを合成することができる（Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  １０７：１３７３０−１３７３５；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １６４：７３９−７４６；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １５５：３８１−３９２；  Ｓｔｒｏｎｙ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒ．  Ｐａｔｔｅｒｎｓ  ５：３８７−３９５；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １７８：６４９−６６０）。損傷された及び担腫瘍皮膚中の筋線維芽細胞の由来には複数の起源が提唱されており、それは骨髄、血液、及び毛包を含む（Ｂａｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｃｕｒｒ．  Ｓｔｅｍ．  Ｃｅｌｌ．  Ｒｅｓ．  Ｔｈｅｒ．，  ２：２２１−２２７；  Ｄｉｒｅｋｚｅ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｈｅｍａｔｏｌ，  Ｏｎｃｏｌ．，  ２４：１８９−１９５；  Ｇｈａｒｚｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｅｘｐ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，  １２：１２６−１３６）。Ｇ８及びα−ＳＭＡは哺乳類の皮膚中の別々の細胞集団中において発見されたが、胚水晶体組織の培養中でα−ＳＭＡ発現が惹起されるとＧ８抗原が下方制御される（Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  １０７：１３７３０−１３７３５）。それゆえ、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、損傷された及び担腫瘍皮膚における少なくともいくらかのα−ＳＭＡ陽性筋線維芽細胞の起源である。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、外胚葉、水晶体、及び擦過された皮膚におけるその迅速な活性化及び遊走能力をふまえると、おそらく組織損傷及び腫瘍形成に対する最初の応答系のうちの１つである（Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３５９：１２−２５；  Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  １０７：１３７３０−１３７３５）。
【００１６】
Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、基底細胞癌よりも悪性黒色腫及び扁平上皮癌の切片中でより豊富であった。これは、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞が腫瘍に動員される度合いが転移の可能性と相関することを示唆している。黒色腫の腫瘍中では、少数のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞が細胞質内にメラニンを含有していた。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、メラニンを合成するように誘導され、アポトーシス性の黒色腫細胞を貪食し、またはメラノソームを飲み込んだかもしれない。あるいは、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは融合して多核性の筋線維を形成することが可能であるが（Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １５５：３８１−３９２）、黒色腫細胞によるリンパ球の喰殺に類似した現象において黒色腫細胞と異核共存体を形成しうる（Ｌｕｇｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ６６：３６２９−３６３８）。
【００１７】
Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞はおそらく、創傷及び腫瘍において複数の機能を有する。それらは、正常な、擦過された、及び担腫瘍皮膚中のｎｏｇｇｉｎの主要な供給源である。ＢＭＰは角化細胞の増殖を阻害し、また表皮中で過剰発現された場合、創傷治癒を遅延させる（Ｋａｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，  １１１：１１４５−１１５２；  Ｂｌｅｓｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １３５：２２７−２３９；  Ｄｒｏｚｄｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ９１：５５２８−５５３２）。この状況において、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は表皮の再生を調節するのに重要でありうる。ＢＭＰ情報伝達の遮断は、マウスにおいて皮膚腫瘍の発達を促進する（Ｍｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｇｅｎｅｓｉｓ  ３９：１０−２５；  Ｑｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２５：２０７−２１７；  Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ６５：８６７１−８６７８；  Ｓｈａｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  １７５：１３０３−１３１４；  Ｈｓｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ．，  ８８：８４２−８５５）。ｎｏｇｇｉｎのｉｎ  ｖｉｔｒｏでＫｅｒ／Ｒａｓ増殖を刺激する能力はこれらのｉｎ  ｖｉｖｏの結果と一致し、またＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞がｎｏｇｇｉｎを放出することで皮膚の上皮癌の成長を推進しうることを示唆する。しかしながら、ＢＭＰはｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで他の種類の上皮癌細胞の増殖を刺激する（Ｔｈａｗａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ６６：２３３−２４６）。従って、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞により放出されるｎｏｇｇｉｎの効果は、組織及び状況に依存的であるかもしれず、最終的には腫瘍及びＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞が複数の情報伝達経路からのそれらの入力をどのように統合するかを反映する。
【００１８】
ｎｏｇｇｉｎの産生に加え、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、収縮タンパク質を合成し、またニワトリ胚において創傷及びアポトーシスに応答して増殖し遊走することができる（Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３５９：１２−２５；  Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  １０７：１３７３０−１３７３５；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １６４：７３９−７４６；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １５５：３８１−３９２；  Ｓｔｒｏｎｙ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒ．  Ｐａｔｔｅｒｎｓ  ５：３８７−３９５；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １７８：６４９−６６０）。マウス科及びヒトの皮膚の解析は、表皮擦過及び腫瘍増殖に伴う組織リモデリングの事象においてＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の数が増加することを明らかにした。故に、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、哺乳類の創傷治癒や腫瘍性病巣において役割を果たす。従って、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、癌を診断し、予後を判定し、また治療するための有用な標的である。
【００１９】
本明細書において上に述べた通り、ＭｙｏＤ、Ｇ８抗原、及び骨形成タンパク質（ＢＭＰ）阻害物質ｎｏｇｇｉｎを発現する細胞（Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞）は、上皮癌、黒色腫、及び肉腫を含む様々なヒトの腫瘍における癌細胞と関連づけられている。いくらかの癌細胞の増殖はＢＭＰによって抑制され、また故に、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞によるｎｏｇｇｉｎの放出は腫瘍成長を亢進させうる。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、創傷の最前線へと遊走しまた上皮細胞の移動を指揮する能力を有し、これはＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞が上皮癌細胞の侵襲を推進しうることを示す。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞はまた、腫瘍進行を促進できる筋線維芽細胞様細胞へと発達することもできる。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、免疫制御酵素インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）を発現するため、Ｔ細胞反応を抑制し、かつ／または腫瘍誘発性寛容及び免疫回避に貢献する。さらに、ヒト横紋筋肉腫腫瘍はＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の亜集団を含有し、またヒト横紋筋肉腫細胞株はｉｎ  ｖｉｔｒｏでＭｙｏＤ、Ｇ８、及びｎｏｇｇｉｎを発現することが判明している。これらの発見は、１）Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞が腫瘍及び周囲の間質細胞の挙動を調節し、また２）Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞が横紋筋肉腫幹細胞の直接の起源であることを示す。
【００２０】
本発明に則り、ヒトの癌におけるＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、腫瘍量を減少させるための補助または直接療法として標的化される。本発明は、補助的または直接的な化学療法として複数の種類の癌の治療に適用可能である。例えば（ヒト化版などの）Ｇ８抗体の投与は、ヒト腫瘍中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の破壊をもたらすだろう。抗体を用いたＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の減少は、例えば、内因性補体の結合の後、または内部移行後に細胞質中に放出される毒素に抗体を結合させることにより達成されうる。その抗体は、光熱波またはラジオ波により活性化されるナノ粒子に結合させても良い。本発明はまた、他の細胞種特異的な抗体、薬剤、及び低分子阻害物質などの、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞またはそれらが放出する分子を標的化するためのすべての他の方法も含む。
【００２１】
腫瘍組織中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の同定は、腫瘍悪性度及び標的療法の有効性のための有用な予後判定試験である。例えば、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、（例えばＧ８抗体（例えばマウスモノクローナル抗体）を用いて）生検組織及び切除腫瘍中において同定及び定量化されうる。組織切片中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の数は、腫瘍悪性度の予後指標、及びＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞を標的とする薬剤が適切な治療方式かどうかの指標として役立つ。
【００２２】
本発明に則り、癌を抑制し（例えば縮小させ）、予防し、及び／または治療する方法が提供される。特定の実施形態においては、癌は、肉腫（例えば、ユーイング肉腫、ウィルムス腫瘍、骨肉腫、平滑筋肉腫、及び横紋筋肉腫（例えば、胞巣型または胎児型横紋筋肉腫））、皮膚癌、膠芽腫、膀胱癌、乳癌、腎臓癌、骨癌、結腸癌、または膵臓癌である。特定の実施形態においては、癌はウィルムス腫瘍または横紋筋肉腫である。皮膚癌は、基底細胞癌、扁平上皮癌、及び黒色腫を含むがそれに限定されない。特定の実施形態においては、皮膚癌は扁平上皮癌または悪性黒色腫である。その方法は、標的組織または腫瘍中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞を減少させ、及び／または除去する工程を有しても良い。特定の実施形態においては、その方法は、それが必要な患者に、治療上有効な量の少なくとも１つの本発明のＭｙｏ／Ｎｏｇ標的化剤（例えば、抗体）を投与する工程を有する。特定の実施形態においては、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ標的化剤は少なくとも１つの毒素に結合している。その方法は、放射線療法、腫瘍を除去するための手術、及び／または少なくとも１つの他の化学療法剤の投与などの、少なくとも１つの他の癌治療法の施行を（同時及び／または順次（前及び／または後）に）さらに有しうる。特定の実施形態においては、その方法は、治療後に患者にＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞（例えば、 正常組織から採取したＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞、とくに自己のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞）を投与する工程をさらに有しうる。
【００２３】
Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞の除去は、様々な手法により実現されうる。本明細書において上で述べられたように、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、ＭｙｏＤ、ｎｏｇｇｉｎ、及びＧ８を発現し、また骨格筋を生じ、筋線維芽細胞様細胞に発達し、かつ／またはＮｏｇｇｉｎを放出するＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞のままでいることができる前駆細胞である。特定の実施形態においては、本発明の方法は、他の細胞よりもＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞が（例えば、形質膜において）異なった分子を有することを利用している。本発明の特定の実施形態においては、癌を抑制、予防、及び／または治療する方法は、任意で少なくとも１つの細胞傷害性分子を伴う（例えば、それと結合した）、少なくとも１つのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化部分を有する少なくとも１つの分子の投与を有する。本発明の分子は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体中に含有されても良い。特定の実施形態においては、標的化部分は細胞傷害性分子に、任意で連結ドメインを介して、共有結合で連結されている。別の実施形態においては、細胞傷害性分子は標的化部分に対する特異的な親和性を有する分子（例えば、Ｇ８抗体を認識する抗体）に結合されている。さらに別の実施形態においては、標的化部分及び細胞傷害性分子は、共有結合で連結されていない。例えば、本発明の方法は、Ｇ８抗体（Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞標的化分子）及び補体の、１つの医薬組成物中での、または順次もしくは同時に投与される別々の医薬組成物中での投与を有しうる。
【００２４】
Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞の特異的標的化は、例えばリガンド及び／または抗体などの、他の細胞（例えば腫瘍を包囲する細胞）と比べてＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞に特有の細胞表面分子に特異的に結合することにより実現されうる。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞のための細胞表面標的は、Ｇ８抗原、シンデカン類（シンデカン１−４（例えばシンデカン１）、つまり例えばＧｅｎｅＩＤ番号６３８２、６３８３、９６７２、及び６３８５、並びにＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＰ＿００１００６９４７、ＮＰ＿００２９８９、ＮＰ＿０５５４６９、及びＮＰ＿００２９９０）、またはヘパラン硫酸プロテオグリカンを含むがそれに限定されない（Ｂａｙｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８４）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  ９９：１４８６−１５０１）。特定の実施形態においては、その細胞表面標的はＧ８抗原である（Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １５５：３８１−３９２；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １６４：７３９−７４６；   Ｓｔｒｏｎｙ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒ．  Ｐａｔｔｅｒｎｓ  ５：３８７−３９５）。特定の実施形態においては、その細胞表面標的は、ＩＱ  ｍｏｔｉｆ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ＧＴＰａｓｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １（ＩＱＧＡＰ１、つまり例えばＧｅｎｅ  ＩＤ番号８８２６、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号Ｐ４６９４０、Ｑ６Ｐ１Ｎ４、Ｑ０５ＤＮ７、Ｑ５ＦＷＧ８、Ｑ９６ＰＡ３、ＡＫ３０４３３７、及びＡＫ２９８０００、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／ＴｒＥＭＢＬ番号Ｆ５Ｈ７Ａ１、Ａ４ＱＰＢ０、Ｂ４Ｅ２Ｍ０、及びＢ４ＤＮＰ４）である。特定の実施形態においては、その細胞表面標的はｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ｉｎｔｉａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ３  サブユニットＡ（Ｅｉｆ３Ａ、つまり例えば、ＧｅｎｅＩＤ番号８６６１、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＰ＿００３７４１．１及びＮＭ＿００３７５０．２、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ番号Ｑ１４１５２、Ｎａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｅｘｐ．  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．，  ３０９：１３７−１４８）である。特定の実施形態においては、その細胞表面標的はｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ｉｎｔｉａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ５Ｂ（Ｅｉｆ５Ｂ、つまり例えば、ＧｅｎｅＩＤ番号９６６９、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ＿０１５９０４．３及びＮＰ＿０５６９８８．３、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／ＴｒＥＭＢＬ番号Ｑ８Ｎ５Ａ０）である。特定の実施形態においては、その表面標的は、上記で特定されたタンパク質の変異体（例えば、選択的スプライシング変異体）またはサブユニットである。さらに別の実施形態においては、その標的化部分は、図８中に提供されるアミノ酸配列に対して免疫学的に特異的な抗体である。従って、本発明の標的化部分は、とくに他の細胞（例えば上皮細胞）、とくに治療される腫瘍／癌細胞の周囲の細胞を除く、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞の細胞表面標的に特異的に結合する。
【００２５】
Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、細胞死を促進する試薬（例えば、細胞傷害性分子）に標的化部分を連結させることで除去／縮小されうる。細胞傷害性分子は、補体（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ウシ、ウマ、及びヒトの補体、補体を含有する血液／血清分画、補体成分／タンパク質、補体活性物質、及びその類似物）、ナノ粒子及びナノチューブ（例えば、光熱波またはラジオ波により活性化されるナノ粒子、熱感受性炭素ナノ結晶、例えばＣｈａｋｒａｖａｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  ＰＮＡＳ  １０５：８６９７−８７０２及びＣｈｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  １４：１３１０−１３１６を参照）、細胞傷害性抗生物質（例えば、カリケアマイシン）、カチオン性両親媒性溶解性ペプチド（例えば、ＫＬＡ（アミノ酸配列：ＫＬＡＫＬＡＫＫＬＡＫＬＡＫ（ＳＥＱ  ＩＤ番号４））及びＰＴＰ（ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ：  ＣＱＫＨＨＮＹＬＣ（ＳＥＱ  ＩＤ番号５）））、放射性核種、化学療法剤、及び毒素を含むがそれに限定されない。毒素は、植物、細菌、動物、及びヒトなど様々な産生源に由来しても、または合成毒素（薬剤）でも良く、また、ｓａｐｒｉｎ、ｒｉｃｉｎ（例えばｒｉｃｉｎ  Ａ）、ａｂｒｉｎ、臭化エチジウム、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素、ＰＥ４０、ＰＥ３８、ｓａｐｏｒｉｎ、ｇｅｌｏｎｉｎ、ＲＮＡｓｅ、ペプチド核酸（ＰＮＡｓ）、１型または２型リボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）、ヤマゴボウ抗ウィルスタンパク質（ＰＡＰ）、ｂｒｙｏｄｉｎ、ｍｏｍｏｒｄｉｎ、化学療法剤、及びｂｏｕｇａｎｉｎを含むがそれに限定されない。本発明の放射性核種は、陽電子放射同位体並びにアルファ−、ベータ−、ガンマ−、オージェ−、及び低エネルギー電子−放射体を含むがそれに限定されない。特定の実施形態においては、放射性核種は、アルファ−放射体またはオージェ−放射体である。放射性同位体は、１３Ｎ、１８Ｆ、３２Ｐ、６４Ｃｕ、６６Ｇａ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、６７Ｃｕ、７７Ｂｒ、８０ｍＢｒ、８２Ｒｂ、８６Ｙ、９０Ｙ、９５Ｒｕ、９７Ｒｕ、９９ｍＴｃ、１０３Ｒｕ、１０５Ｒｕ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１１３Ｓｎ、１２１ｍＴｅ、１２２ｍＴｅ、１２５ｍＴｅ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２６Ｉ、１３１Ｉ、１３３Ｉ、１６５Ｔｍ、１６７Ｔｍ、１６８Ｔｍ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９５ｍＨｇ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、及び２２５Ａｃを含むがそれに限定されない。さらに別の実施形態においては、放射性核種含有分子が放射線増感剤と共に投与されても良い。特定の実施形態においては、その標的化部分が放射線増感剤と結合されている。
【００２６】
本発明は、１）少なくとも１つの細胞毒を任意で伴う（例えば、結合した）少なくとも１つの標的化部分、及び２）少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体を有する組成物を含む。そのような組成物は、治療上有効な量で、それを必要とする患者に癌の治療のために投与されうる。その組成物は、さらに１つの他の化学療法剤を有しても良い。あるいは、その他の化学療法剤は、順次及び／または同時投与のために、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体を伴う別の組成物に含有されても良い。本発明の組成物は、キット内に含有されていても良い。
【００２７】
化学療法剤は、抗癌活性を示しかつ／または細胞に有害な化合物（例えば、毒素）である。ふさわしい化学療法剤は、以下を含むがこれに限定されない。毒素（例えば、ｓａｐｏｒｉｎ、ｒｉｃｉｎ、ａｂｒｉｎ、臭化エチジウム、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素、及び上に記載の他のもの、従って抗体に結合または融合されると免疫毒素を生成する）、アルキル化剤（例えば、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メクロレタミン、メルファラン、及びウラシルマスタードなどの窒素マスタード、チオテパなどのアジリジン、ブスルファンなどのメタンスルホン酸エステル、カルムスチン、ロムスチン、及びストレプトゾシンなどのニトロソウレア、シスプラチン及びカルボプラチンなどの白金錯体、マイトマイシン、プロカルバジン、ダカルバジン、及びアルトレタミンなどの生体内還元性アルキル化剤）、ＤＮＡ鎖切断剤（例えば、ブレオマイシン）、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、アムサクリン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、ドキソルビシン、エトポシド、及びテニポシド）、ＤＮＡ副溝結合剤（例えば、プリカマイシン）、代謝拮抗薬（例えば、メトテレキサート及びトリメトレキサートなどの葉酸拮抗薬、フルオロウラシル、フルオロデオキシウリジン、ＣＢ３７１７、アザシチジン、シタラビン、及びフロクスウリジンなどのピリミジン拮抗薬、メルカプトプリン、６−チオグアニン、フルダラビン、及びペントスタチンなどのプリン拮抗薬、アスパラギナーゼ、並びにヒドロキシウレアなどのリボヌクレオチド還元酵素阻害薬）、チューブリン相互作用剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、及びパクリタキセル（タキソール））、ホルモン剤（例えば、エストロゲン、結合型エストロゲン、エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、クロロトリアニセン、ジエンエストロール、またカプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、メドロキシプロゲステロン、及びメゲストロールなどのプロゲスチン、並びにテストステロン、プロピオン酸テストステロン、フルオキシメステロン、及びメチルテストステロンなどのアンドロゲン）、副腎皮質ステロイド（例えば、プレドニゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、及びプレドニゾロン）、黄体形成ホルモン放出剤またはゴナドトロピン放出ホルモン拮抗薬（例えば、酢酸リュープロリド及び酢酸ゴセレリン）、及び抗ホルモン抗原（例えば、タモキシフェン、フルタミドなどの抗アンドロゲン剤、並びにミトタン及びアミノグルテチミドなどの抗副腎剤）である。
【００２８】
本発明の組成物は、あらゆる適切な投与経路で投与されうる。例えば、注射（例えば、局所性（直接、腫瘍へまたは腫瘍内を含む）または全身性投与）、経口、経肺、局所、経鼻、または他の投与形態によってである。その組成物は、非経口、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、局所、吸入、経皮、肺内、動脈内、直腸内、筋肉内、及び鼻腔内投与を含むあらゆる適切な方法によって投与されうる。特定の実施形態においては、その組成物は皮膚に直接投与される。一般に、組成物の薬学的に許容可能な担体は、希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、補強剤、及び／または担体の群から選択される。組成物は、様々な緩衝液内容物（例えば、トリス塩酸、酢酸、リン酸）、ｐＨ、及びイオン強度の希釈剤、並びに、洗剤及び可溶化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、ピロ亜硫酸ナトリウム）、保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール）、及び膨化物質（例えば、ラクトース、マンニトール）などの添加剤を含んでも良い。組成物はまた、ポリエステル、ポリアミノ酸、ヒドロゲル、ポリラクチド／グリコリド共重合体、エチレン酢酸ビニル共重合体、ポリ乳酸、ポリグリコール酸などのポリマー化合物の粒子製剤に、またはリポソームに組み込まれても良い。そのような組成物は、本発明の医薬組成物の成分の物理的状態、安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ放出速度、及びｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス速度に影響を及ぼしうる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  ＰＡ．  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  &Ｗｉｌｋｉｎｓ．  ２００５を参照。本発明の医薬組成物は、例えば液体状に調剤されても良いし、または（例えば、後の再調製のために凍結乾燥された）乾燥粉末状であっても良い。
【００２９】
本明細書で用いられる「薬学的に許容可能な担体」は、上記の段落で例示されたように、医薬製剤の望ましい投与経路として適切でありうるあらゆる及び全ての溶剤、分散媒、及び類似物を含む。薬学的に活性のある物質のためのそのような媒体の使用は、当技術分野において公知である。いかなる従来型の媒体または薬剤も、投与される分子と不適合ではない限り、医薬製剤中でのその使用が想定される。
【００３０】
特定の患者への投与が適切な本発明の分子の投与量及び投薬計画は、患者の年齢、性別、体重、概ねの医学的状態、並びに抗体が投与されるその特定の症状及びその重症度を考慮して、医師により決定されうる。医師はまた、投与経路、薬剤担体、及びその分子の生物学的活性も検討しうる。
【００３１】
適切な医薬製剤の選択は、選ばれる投与方法に依存する。例えば、本発明の分子は、直接注射によりあらゆる癌組織内へまたは癌を包囲する領域内へ投与されうる。この場合には、医薬製剤は癌組織に適合する媒体中に分散した分子を有する。
【００３２】
本発明の分子はまた、血流中への静脈内注射により、または、皮下、筋肉内、髄腔内、もしくは腹腔内注射により、非経口的にも投与されうる。非経口注射のための医薬製剤は当技術分野において公知である。分子を投与する方法として非経口注射が選択される場合、生物学的効果を及ぼすのに十分な量の分子がその標的細胞に到達することを確実にするための措置が講じられるべきである。その分子がその標的部位に到達できるよう、その分子のまたはそれらが送達される医薬製剤の親油性は増強されなければならないかもしれない。分子の親油性を増強させる方法は、当技術分野において公知である。特定の実施形態においては、Ｆａｂフラグメント、Ｄａｂ、ｓｃＦｖ、またはダイアボディを含むがこれに限定されない抗体の小形態が投与される場合、（例えば血液中での）その貯留を延長するために、それはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはアルブミン結合性抗体またはペプチドなどだがこれに限定されない第二の分子に結合されても良い。
【００３３】
本発明の化合物を有効成分として薬剤担体とともに蜜な混合物中に含有する医薬製剤は、従来の薬剤配合技術に従い調剤されうる。例えば静脈内、経口、局所、または非経口の投与に望ましい調剤形態に応じて、担体は幅広い種類の形態をとりうる。経口投薬剤形の分子の調剤にあたっては、あらゆる通常の薬剤媒体が用いられうる。経口液体製剤（例えば、懸濁液、エリキシル剤、及び溶液など）の場合は、例えば、水、グリコール、油、アルコール、着香剤、保存剤、着色剤、及びその類似物など、あるいは、経口固体製剤（例えば、散剤、カブセル剤、及び錠剤など）の場合は、デンプン、糖、希釈剤、造流剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤、及びその類似物などの担体などである。投与におけるその容易性のため、錠剤及びカプセル剤は最も有利な経口投薬単位剤形を代表し、この場合は固形の薬剤担体が当然用いられる。望ましければ、錠剤は標準的な技術により、糖衣性または腸溶性であっても良い。非経口剤については、担体は、例えば溶解性を補助するためまたは保存目的で他の原料も含まれうるが、無菌の水を普通は有するであろう。また、注射可能な懸濁液も調剤されうる。この場合は、適切な液体の担体、懸濁化剤、及びその類似物が用いられうる。
【００３４】
本発明の医薬製剤は、投与の容易性及び投薬の均一性のための投薬単位剤形に調剤されうる。本明細書において用いられる「投薬単位剤形」は、治療を受けている患者に適切な医薬製剤の物理的離散単位を意味する。それぞれの投薬は、選択した薬剤担体との関連で望ましい効果を生むために計算された量の有効成分を含有するべきである。適切な投薬単位を決定する手順は、当業者に十分公知である。投薬単位は、患者の体重に基づき比例的に増加または軽減されても良い。特定の病理学的症状の緩和のための適切な濃度は、当技術分野で公知であるように、投薬濃度曲線の計算により決定されうる。本発明の分子の投与のための適切な投薬単位は、動物モデルにおけるその分子の毒性を評価することにより決定されうる。ヒト腫瘍を移植されたマウスには様々な濃度の医薬製剤が投与されても良く、また最小及び最大投薬量は治療の結果としての腫瘍サイズの有意な減少及び副作用の結果に基づき決定されうる。適切な投薬単位は、他の標準的な化学療法との組み合わせでの治療の有効性を評価することによってもまた決定されうる。分子の投薬単位は、腫瘍のより大きな縮小及び／または成長速度の低下に従い、単独でまたは各化学療法との組み合わせで決定されうる。
【００３５】
本発明の分子を有する医薬製剤は、例えば、病理的症状が軽減または緩和されるまでは週に少なくとも２度またはそれ以上など、適切な間隔で投与されて良く、その後は投薬量が維持レベルまで減らされても良い。特定の場合における適切な間隔は、普通は患者の状況に依存するだろう。
【００３６】
本発明の別の側面に則り、患者において癌を検出、画像化、診断、及び／または上昇したリスクを決定する方法が提供される。特定の実施形態においては、その方法は、少なくとも１つの検出可能な標識に結合された本発明の標的化部分（例えば、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞を特異的に標的化する薬剤）を患者に投与する工程を有する。特定の実施形態においては、その方法は、本発明の分子を用いて生体試料中に（例えば、腫瘍細胞の中、間、及び／または周囲に）Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞の存在を検出する工程を有する。特定の実施形態においては、その方法は、任意で少なくとも１つの検出可能な標識を有する少なくとも１つ本発明の抗体と共に生体試料を培養する工程を有する。
【００３７】
検出可能な標識は、例えば、化学発光部分、生物発光部分、蛍光部分、造影剤、放射性核種、同位体（例えば、放射性同位体（例えば、３Ｈ（トリチウム）及び１４Ｃ）または安定同位体（例えば、２Ｈ（重水素）、１１Ｃ、１３Ｃ、１７Ｏ、及び１８Ｏ））、画像法のための光学剤、及び金属（例えば、金）を含む。検出可能な標識の例は、ＭＲＩ画像法による検出のための常磁性または超常磁性イオンを含むがそれに限定されない。常磁性イオンは、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｅｕ（ＩＩＩ）、Ｄｙ（ＩＩＩ）、Ｐｒ（ＩＩＩ）、Ｐａ（ＩＶ）、Ｍｎ（ＩＩ）、Ｃｒ（ＩＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｎｉ（ＩＩ）、Ｔｉ（ＩＩＩ）、及びＶ（ＩＶ）を含むがそれに限定されない。蛍光剤は、フルオレセイン及びローダミン、並びにそれらの誘導体を含むがそれに限定されない。光学剤は、フォルフィリン、アントラキノン、アントラピラゾール、ペリレンキノン、キサンテン、シアニン、アクリジン、フェノキサジン、及びフェノチアジンの誘導体を含むがそれに限定されない。
【００３８】
上記のように、本発明の分子は、１）患者において癌を診断する（例えば、その上昇したリスクを決定する）、２）Ａ）腫瘍の病期及び悪性度（とくにその癌が転移性であるかまたは転移性でありそうかどうか）、並びに／または、Ｂ）本発明のＭｙｏ／Ｎｏｇ治療に対する潜在的感受性を含む、患者の予後を決定する、３）腫瘍の由来を決定する、４）患者の治療の有効性を決定するのに用いられうる。一定の実施形態においては、その分子は患者からの生体試料中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の存在を検出するのに活用される。生体試料は、皮膚、筋肉、乳房、前立腺、子宮頸管、卵巣、精巣、及び肺を含むがそれに限定されない様々な組織の生検を含みうる。生体試料の細胞例は、腫瘍細胞、皮膚細胞、筋細胞、血液細胞、卵巣細胞、前立腺細胞、乳房細胞、精巣細胞、子宮頸細胞、及び肺細胞を含む。生体試料はまた、生体液であっても良い。多くの免疫分析は、一定のタンパク質（例えば、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ特異的表面タンパク質）の存在について生体試料を分析することについて、当技術分野において十分公知である。それは、免疫沈降、放射免疫測定、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、免疫染色測定、ウェスタンブロット、及びその類似物を含むがそれに限定されない。
【００３９】
生体試料中におけるＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の存在は、正常な健常者のそれよりも量的に多く存在している場合はとくに、癌の存在の指標及び転移の指標である。患者、とくに治療を受けている患者におけるＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の経時的な消失は、寛解（つまり治療の成功）の指標であり、一方で治療を受けている患者におけるＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞レベルの変化の欠如は、その治療に対する耐性の指標でありまた異なる治療戦略が用いられうることを示す。同様に、患者におけるＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の経時的な増加は、再発の指標でありうる。さらに、本明細書で上に開示された画像法技術は、治療の有効性を決定するべく、腫瘍の大きさを監視するために用いられても良い。本発明の特定の実施形態においては、本発明を用いて得られた結果を確認するために他の癌診断分析法が行われても良い。
【００４０】
本発明の別の側面に則れば、患者から生体試料（例えば、腫瘍試料）が得られ、またＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の存在が決定されても良い。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞の数は、腫瘍悪性度と相関するかもしれない。特定の実施形態においては、生体試料中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の数は、腫瘍中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の変調を決定するために、健常者からの対応する生体試料中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の数と比較される。腫瘍を有する患者は、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞の活性を正常な健常レベルへと調節するために薬剤で治療されうる。
【００４１】
定義
以下の定義は、本発明の理解を推進するために提供される。
【００４２】
単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないと指定しない限り複数形の参照対象を含む。
【００４３】
「抗体」または「抗体分子」は、特定の抗原に結合する、抗体及びその断片を含むあらゆる免疫グロブリンである。その用語は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、単一ドメイン（Ｄａｂ）、及び二重特異性抗体を含む。本明細書で用いられる抗体または抗体分子は、組み替えにより作成された免疫グロブリン分子そのもの、及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性のある部位を想定する。それは、Ｆａｂ、Ｆａｂ‘、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ｖ）、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ミニボディ、ダイアボディ、テトラボディ、単一可変領域（例えば、可変重鎖領域、可変軽鎖領域）、及び二重特異性などだがそれに限定されない。Ｄａｂは、単一の可変軽または重鎖領域により構成されうる。本発明はまた、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）分子（Ａｆｆｉｂｏｄｙ，  Ｂｒｏｍｍａ，  Ｓｗｅｄｅｎ）、及びペプタボディ（Ｔｅｒｓｋｉｋｈ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  ＰＮＡＳ  ９４：１６６３−１６６８）も含む。本発明の一定の実施形態においては、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞上の標的分子に特異的な可変軽鎖領域及び／または可変重鎖領域が、上記抗体のコンストラクトの骨格に挿入される。組み替えにより抗体を作成するための方法は、当技術分野において十分公知である。「Ｆｖ」は、抗原認識及び結合部位を含有する抗体フラグメントである。この部位は、１つの重鎖可変領域と１つの軽鎖可変領域とが堅い非共有結合にある二量体からなる。各可変領域の３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を定義するのは、この構造においてである。全体としては、６つのＣＤＲが抗体に抗原特異性を付与する。しかしながら、単一の可変領域（または、抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを有するＦｖの半分）さえも、しばしば結合部位全体よりも低い親和性でではあるものの、抗原を認識し結合する能力を有する。「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは抗体のＶＨ及びＶＬ領域を有し、これらの領域が単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般に、そのＦｖポリペプチドは、ＶＨ及びＶＬ領域の間に、ｓｃＦｖが抗原結合のために望ましい構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをさらに有する。用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体フラグメントを意味し、フラグメントは同一のポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）上の軽鎖可変領域（ＶＬ領域）に結合した重鎖可変領域（ＶＨ）を有する。同一鎖上の２つの領域間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、その領域は、別の鎖の相補的な領域と対形成せざるをえず、２つの抗原結合部位を生じる。ダイアボディは、例えば、ＥＰ  ４０４，０９７；  ＷＯ  ９３／１１１６１、及びＨｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９０：６４４４−６４４８においてより十分に開示されている。さらに別の実施形態においては、抗体はヒト化されている。
【００４４】
抗体に関しては、用語「免疫学的に特異的」は、着目するタンパク質または化合物の１つまたはそれ以上のエピトープに結合する抗体であるが、抗原性の生体分子の混合集団を含有する試料中の他の分子を実質的には認識及び結合しないものを意味する。用語「特異的に結合」は、着目するポリペプチドまたは化合物の、生体分子の混合集団を含有する試料中の他の分子を実質的には認識及び結合しないなかでの、標的ポリペプチドまたは化合物への結合を意味する。例えば、「特異的結合対」は、お互いに対して特定の特異性を有し、また通常の状態においては他の分子よりも好んでお互いと結合する、特定の結合要素と結合相手とを有する。
【００４５】
用語「結合された」は、共有性または非共有性の方法によって本発明の２つの分子または化合物が繋がることを意味する。その分子は、リンカー領域によって繋がれても良い。
【００４６】
用語「リンカー領域」は、標的化部位を細胞毒に共有的に付着させる共有結合または原子鎖を有する化学的部分を意味する。特定の実施形態においては、リンカーは、０（例えば、結合）から約５００原子、約１から約１００原子、または約１から約５０原子を含有しうる。典型的なリンカーは、少なくとも１つの、任意で置換をうけた、飽和または不飽和の、直鎖の、枝分かれの、または環式のアルキル、アルケニル、またはアリール基を有する。リンカーはまた、ポリペプチド（例えば、約１から約２０アミノ酸）であっても良い。
【００４７】
本明細書で用いられる用語「放射線増感剤」は、放射線に対する細胞の感受性を増加させるために治療上有効な量で動物に投与される分子と定義される。放射線増感剤は、放射線の毒性作用に対する細胞の感受性を増加させることが知られている。放射線増感剤は、２−ニトロイミダゾール化合物、及び、ベンゾトリアジンジオキシド化合物、ハロゲン化ピリミジン、メトロニダゾール、ミソニダゾール、デスメチルミソニダゾール、ピモニダゾール、エタニダゾール、ニモラゾール、マイトマイシンＣ、ＲＳＵ  １０６９、ＳＲ  ４２３３、ＥＯ９、ＲＢ  ６１４５、ニコチンアミド、５−ブロモデオキシウリジン（ＢＵｄＲ）、５−ヨードデオキシウリジン（ＩＵｄＲ）、ブロモデオキシシチジン、フルオロデオキシウリジン（ＦｕｄＲ）、ヒドロキシウレア、シスプラチン、及びこれらの治療上有効な類似体及び誘導体を含むがそれに限定されない。
【００４８】
「薬学的に許容可能な」は、連邦または州政府の規制局により認可されている、または米国薬局方もしくは他の一般に認知された薬局方において動物及びより具体的にはヒトにおいての使用のために収載されていることを示す。
【００４９】
「担体」は、例えば、希釈剤、補強剤、保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、可溶化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０）、乳化剤、緩衝液（例えば、トリス塩酸、酢酸、リン酸）、抗微生物剤、膨化物質（例えば、ラクトース、マンニトール）、賦形剤、補助剤、または本発明の作用剤が共に投与される輸送体を意味する。薬学的に許容可能な担体は、石油、動物、野菜、または合成由来のものを含む、水及び油などの無菌の液体あっても良い。水、または水性の生理食塩水、並びに水性デキストロース及びグリセロール溶液は、とくに注射可能な溶液のために、好んで担体として用いられる。適切な薬剤担体は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  （Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ；  ２００５）、Ｌｉｂｅｒｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｄｓ．，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ．，  １９８０、及びＲｏｗｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｄｓ．，  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  （６ｔｈ  Ｅｄ．），  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒ，  ２００９に開示されている。
【００５０】
本明細書で用いられる用語「予防する」は、症状（例えば、癌）を発症する危険性がある患者の予防的な治療で、その患者がその症状を発症するであろう確率を結果として低下させることを意味する。
【００５１】
本明細書で用いられる「生体試料」は、組織、組織試料、細胞試料、腫瘍試料、及び生体液（例えば、血液、尿、または羊水）を含む、好ましくはヒト患者である、患者から得られた生体物質の試料を意味する。
【００５２】
本明細書で用いられる「診断する」は、患者における病気または障害を検出する工程、及び鑑定する工程を意味する。本用語はまた、その病気または障害を有することが判っている患者において、病気または障害の状態（進行、退行、安定化、治療への反応など）を査定する工程、または評価する工程も含みうる。
【００５３】
本明細書で用いられる用語「予後の判定」は、病気または障害の存在（例えば、本発明の診断方法により決定される）の、患者の将来の健康状態（例えば、予想される罹患率または死亡率、糖尿病を患う可能性、及び心血管系疾患のリスク）への影響に関する情報を提供する工程を意味する。言い換えれば、用語「予後の判定」は、病気／障害の予想される経過及び結果またはその病気／障害から回復する可能性の、予測を提供する工程を意味する。
【００５４】
本明細書で用いられる「治療する」は、患者の病状の改善（例えば、１つまたはそれ以上の症状において）、その病状の進行遅延などを含む、病気または障害で苦しむ患者への利益を付与するあらゆる種類の治療を意味する。
【００５５】
以下の実施例は、本発明を実行する例証的な方法を提供し、またそれらはいかなるようにも本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例１】
【００５６】
方法
皮膚解剖及び擦過
皮膚は、毛包が休止期にある９匹の７週齢のＦＶＢマウスの背側から切除された。成長期の皮膚は、１４週齢のマウスから切除された。再生表皮の成長は、６匹のＦＶＢマウスの背側の皮膚の擦過により誘発された（Ｈａｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ３２：１３４０−１３４８）。簡潔には、剪毛及び脱毛された乾燥背側の面積２ｃｍ２２つが、モーター式器具のフェルト製ホイールを用いて穏やかに擦過され、露出された真皮は光沢を示し桃色で出血はなかった。擦過された及び隣接する擦過されていない背側皮膚は、２４時間後に切除された。組織は４％パラホルムアルデヒド中で固定され、パラフィンに中に包埋され、そして５μｍで薄切された。
同系マウスへのｖ−Ｒａｓ感染角化細胞（Ｋｅｒ／Ｒａｓ細胞）の皮下注射
表皮の角化細胞の初代培養が、トリプシン浮遊法を用いて３−４日齢のＦＶＢマウス皮膚から作製された（Ｈｅｎｎｉｎｇｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８０）  Ｃｅｌｌ  １９：２４５−２５４；  Ｙｕｓｐａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７４）  Ｅｘｐ．  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．，  ８６：９５−１０５）。細胞は、８％キレックス処理されたウシ胎児血清及び０．０５ｍＭカルシウムが補充された低カルシウムＥａｇｌｅ‘ｓ  Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＥＭＥＭ）（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，  ＭＤ）中に、６０ｍｍシャーレ１つあたり３．５ｘ１０６細胞が蒔かれ、３５℃で５％ＣＯ２の下培養された。角化細胞はｖ−Ｒａｓでレトロウィルス性感染が施され、３日間培養された（Ｈａｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２５：１５４３−１５５３；  Ｃｌｉｆｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ，  （１９９５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ５５：１６８０−１６８６）。Ｋｅｒ／Ｒａｓ細胞は、ＦＶＢマウスの背側皮膚の下に皮下（ｓ．ｃ．）注射され（注射１回あたり４．０ｘ１０６細胞）、５週間後に処分されるまで腫瘍の発達について毎日観察された。腫瘍及び隣接する皮膚は１１匹のマウスから切除され、パラフィンに包埋された。
【００５７】
Ｉｎ  ｖｉｖｏ増殖検定
角化細胞の初代培養がｖ−Ｈａ−ｒａｓレトロウィルスで感染され、１００ｎｇ／ｍｌヒト組み替えＢＭＰ−４、及び／または１５０ｎｇ／ｍｌ  ｎｏｇｇｉｎ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，  Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，  ＮＪ）を含むまたは含まない、１％ウシ胎児血清を含有する低カルシウムＥＭＥＭ中で４８時間培養された。培養物は［３Ｈ］チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ、２μＣｉ／ｍｌ、最終濃度１μＭ）で６０分間標識され、ＰＢＳ中０．１％のチミジンを用いて追跡した。酸不溶分画中への放射標識取り込みは、最終過塩素酸抽出液の液体シンチレーション計数法により決定された。ＤＮＡ量は、ジフェニルアミン反応により決定された。細胞増殖は、ＤＮＡミリグラムあたりに標準化された［３Ｈ］チミジン取り込み量（ｃｐｍ）により評価された。
【００５８】
ヒト組織
ヒト組織アレイ（＃ＳＫ７２１，  ２４  ｃａｓｅｓ／７２  ｃｏｒｅｓ）は、ＵＳ  Ｂｉｏｍａｘ，  Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，  ＭＤ）から入手した。各アレイは、基底細胞癌、扁平上皮癌、及び悪性黒色腫のそれぞれ５、６、及び７症例、並びに癌に隣接する正常真皮組織及び正常真皮組織それぞれ３症例からの、３つの５μｍ切片を含有した。非アレイヒト皮膚組織は、乳房縮小手術を受けている患者、及び切除された扁平上皮癌から得られた。
【００５９】
免疫蛍光局在、及びｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション
組織は、Ｇ８  ＩｇＭモノクローナル抗体、及びＤｙＬｉｇｈｔ（登録商標）４８８と結合したヤギ抗マウスＩｇＭμ鎖抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，  Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，  ＰＡ）と共に温置し、次いでＭｙｏＤまたはｎｏｇｇｉｎ  ｍＲＮＡに対するアンチセンスｃＤＮＡ配列に結合されたＣｙ３標識３ＤＮＡＴＭデンドリマー（Ｇｅｎｉｓｐｈｅｒｅ，  ＬＬＣ，  Ｈａｔｆｉｅｌｄ，  ＰＡ）中で温置することにより、Ｇ８抗原及びｍＲＮＡについて二重標識された（Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １７５：２８３−２９２；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００９）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ３３６：３０−４１；  Ｇｅｒｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １６４：７３９−７４６）。以下のアンチセンス配列がデンドリマーに結合された。マウスＭｙｏＤ１（Ｍ８４９１８：  ５‘−ＧＡＡＡＣＡＣＧＧＡＴＣＡＴＣＡＴＡＧＡＡＧＴＣＧＴＣＴＧＣＴＧＴＣＴＣ−３’；  ＳＥＱ  ＩＤ番号：  １）（Ｐｉｎｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８８）  Ｃｅｌｌ  ５３：７８１−９３）、ヒトＭｙｏＤ１（ＮＭ＿００２４７８．４：  ５‘−ＣＴＧＴＣＣＧＧＣＣＴＧＡＴＴＴＧＴＧＧＴＴＡＡＧＧＡ−３’；  ＳＥＱ  ＩＤ番号：  ２）、及びマウスｎｏｇｇｉｎ（ＮＭ＿００８７１１．２：  ５‘−ＴＣＴＣＧＴＴＣＡＧＡＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＴＡＧＧＧＴＣＡＡＡ−３’；  ＳＥＱ ＩＤ番号：  ３）（Ｔｏｎｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．，  ２０２：１７２−１８２）。
【００６０】
二重標識はまた、Ｇ８モノクローナル抗体、及びマウスｎｏｇｇｉｎに対するヤギ抗血清（ＡＦ７１９，  Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）、Ｆ４／８０  ＩｇＧモノクローナル抗体（ＡｂＤ  ＳｅｒｏＴｅｃ，  Ｏｘｆｏｒｄ，  ＵＫ）、フルオレセインに結合されたアルファ平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）ＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）、抗酸性及び塩基性サイトケラチンＡＥ１／ＡＥ３  ＩｇＧモノクローナル抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，  Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，  ＭＡ）、フルオレセインに結合された抗ＣＤ４４（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）、及び末端デオキシヌクレオチド転移酵素ｄＵＴＰ切断末端標識化（ＴＵＮＥＬ）のためのキット（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いても行われた。二次抗体は、ヤギ抗マウスまたは抗ラットＩｇＧ−フルオレセイン（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）、ＤｙＬｉｇｈｔ（登録商標）４８８またはＤｙＬｉｇｈｔ（登録商標）５４９の付いたヤギ抗マウスＩｇＭμ鎖抗体、及びロバ抗ヤギＩｇＧ−ＤｙＬｉｇｈｔ（登録商標）４８８（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を含んだ。核は、Ｈｏｅｃｈｓｔ色素３３２５８（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて染色された。対応する切片が、バックグラウンドフルオレセインまたはヘマトキシリン７２１１及びエオジン−Ｙ（Ｒｉｃｈａｒｄ−Ａｌｌａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｋａｌａｍａｚｏｏ，  ＭＩ）のレベルを決定するために、二次抗体のみと温置された。切片は、Ｇｅｌｍｏｕｎｔ（Ｂｉｏｍｅｄｉａ，  Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，  ＣＡ）またはＥｌｖａｎｏｌ（Ｄｕｐｏｎｔ，  Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，  ＤＥ）中にマウントされた。
【００６１】
解析は、Ｎｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｅ８００落射蛍光顕微鏡（Ｏｐｔｉｃａｌ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ）を用いて行われた。画像はＥｖｏｌｕｔｉｏｎ  ＱＥ  Ｏｐｔｒｏｎｉｃｓビデオカメラ（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ）、及びＩｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ画像解析ソフトウェアプログラム（Ｐｈａｓｅ  ３  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて取り込まれた。図は、Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  ６．０ソフトウェアプログラムを用いて、注釈が付けられ、また明るさ及びコントラストが調節された。
【００６２】
統計分析
ヒト組織アレイにおいて正常真皮及び腫瘍組織切片中のＧ８陽性細胞数の対比較を実施するには、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ順位和検定が用いられた。Ｇ８陽性細胞数及び腫瘍侵襲性の程度（Ｔ値）の比較のためには、ノンパラメトリックＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定が適用された。
【００６３】
結果
ネズミ科皮膚においてＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞は毛包に付随している
Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞が、Ｇ８抗原、及びＭｙｏＤ  ｍＲＮＡ、ｎｏｇｇｉｎ  ｍＲＮＡ、またはｎｏｇｇｉｎタンパク質に対して組織切片を二重標識することにより、皮膚が静止した休止期にあるマウスにおいて同定された。Ｇ８陽性／ＭｙｏＤ陽性、及びＧ８陽性／ｎｏｇｇｉｎ陽性細胞は、毛包の毛球に付随していた（図１Ｂ及びＣ）。各切片においては、毛包の２５−５０％が、真皮鞘、真皮乳頭、及び毛根鞘の上皮細胞間内に存在する２〜４個のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞を含有していた（図１Ｂ）。成長期の毛包は、休止期の毛包よりも多くのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞を有していた（図１Ｌ）。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、毛球より上の毛包中または毛包間の真皮中においては稀にしか見つからず、表皮内では観察されるものはなかった（図１Ｄ及びＥ）。皮下組織内の脂肪組織及び皮下組織下の骨格筋は、いくつかのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞を含有していた。二重標識された切片中の染色された細胞の１％以下が、Ｇ８、ＭｙｏＤ  ｍＲＮＡ、またはｎｏｇｇｉｎ  ｍＲＮＡを単独で含有していた。Ｎｏｇｇｉｎ陽性／Ｇ８陰性細胞が、一重標識された集団の中では最も多かった。これらの結果は、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞が主に毛球に付随している休止期の皮膚中では、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞がｎｏｇｇｉｎの主要な供給源であることを明示する。
【００６４】
表皮擦過の後、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は迅速に蓄積する
表皮擦過から２４時間以内に、Ｇ８陽性／ＭｙｏＤ陽性／ｎｏｇｇｉｎ陽性細胞数は毛球中で劇的に増加していた（図１Ｇ及びＨ）。いくらかのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、毛包から周囲の真皮へと遊走しているようであった（図１Ｈ）。擦過された領域に隣接する毛包は、毛球中においてＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の増加を示し、一方で、擦過された領域から遠く離れた毛包中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞数は、創傷を受けていないマウスにおいて見られるそれと同程度であった。真皮の創面には、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞の群れが存在していた（図１Ｉ及びＪ）。染色された細胞の１％より少ない細胞が、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞マーカーの１つのみを発現していた。
【００６５】
Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞はＫｅｒ／Ｒａｓ腫瘍の間質中に存在する
ＦＶＢマウスは、上皮癌細胞に応答するＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の挙動を調べるため、Ｋｅｒ／Ｒａｓ細胞が皮下注射された。注射から５週間後、Ｋｅｒ／Ｒａｓ細胞は、１００から５００ｍｍ３の範囲にわたる様々な大きさのよく被包された腫瘍を形成していた。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、腫瘍を完全に包囲、あるいは、Ｋｅｒ／Ｒａｓ細胞の基底層下の腫瘍間質の一部において群れを形成していた（図２Ｂ−Ｄ）。腫瘍の上皮区画に侵襲しているＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞は殆どなかった。全てのＧ８陽性細胞がＭｙｏＤ及びｎｏｇｇｉｎを発現し、どちらかのマーカー一方に対して単独で標識された細胞はなかった（図２Ｃ及びＤ）。非担腫瘍皮膚とおよそ同じ数のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞を有する腫瘍の横の毛包と比較して、Ｋｅｒ／Ｒａｓ腫瘍を覆う毛包のおよそ７５％においてＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞数が上昇していた（図２Ｅ及びＦ）。
【００６６】
Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、腫瘍間質中のＴＵＮＥＬ陽性アポトーシス性細胞に隣接していた（図２Ｂ）。いくらかのＧ８陽性細胞は、ＴＵＮＥＬ試薬でも染色された。腫瘍間質中のＧ８陽性細胞には、単球／マクロファージ系統のマーカーであるＦ４／８０抗原が陽性のものはなかった（図２Ｇ）。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞の各は丸く（図２）、故に、Ｇ８陽性細胞は分葉核を有する顆粒球ではないようであった。Ｋｅｒ／Ｒａｓ腫瘍切片はまた、Ｇ８、並びに筋線維芽細胞及び平滑筋細胞のマーカーであるα−ＳＭＡに対しても二重標識された。腫瘍の基底層の隣及び血管壁中にあるα−ＳＭＡ陽性細胞においては、Ｇ８、ＭｙｏＤ、またはｎｏｇｇｉｎはいずれも検出されなかった（図２Ｉ）。
【００６７】
ｎｏｇｇｉｎ及びＢＭＰ−４は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＫｅｒ／Ｒａｓ増殖に対して反対の効果を有する
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＢＭＰ−４及びｎｏｇｇｉｎのＫｅｒ／Ｒａｓ細胞成長に対する影響を調べることにより、腫瘍間質中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の潜在的な役割が探究された（図２Ｋ）。培養液へのＢＭＰ−４の添加は、ＤＮＡへの［３H］チミジンの取り込みを減少させた。外因性のｎｏｇｇｉｎは、Ｋｅｒ／Ｒａｓ細胞中のＤＮＡ合成に対するＢＭＰ−４の阻害的効果を遮断したが、ＢＭＰ−４の非存在下ではその成長に影響しなかった。これらのデータは、間質Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞が、少なくとも部分的には、ＢＭＰ情報伝達を遮断することによりＫｅｒ／Ｒａｓ腫瘍の成長を促進するように機能することを示す。
Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は正常及び担腫瘍ヒト皮膚中に存在する
正常なヒト皮膚の切片中では、いくつかのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞が毛球に付随していた（図３Ｂ）。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、毛包間の真皮中では稀に検出され、また表皮内では見られなかった。Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、ヒト基底細胞癌、扁平上皮癌、及び悪性黒色腫の腫瘍組織中にも存在していた（表１及び図３）。組織アレイ１つ中の全てのＧ８陽性細胞が、ＭｙｏＤ  ｍＲＮＡを発現していた（図３Ｆ及びＩ）。Ｎｏｇｇｉｎタンパク質は、３つの組織アレイ中に存在したＧ８陽性細胞の７３％において検出された（図３D、Ｈ、及びＪ）。全３種類の腫瘍中の殆どのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞の核が、小さく丸かった（図３）。ネズミ科Ｋｅｒ／Ｒａｓ腫瘍においてそうであったように、Ｇ８、Ｆ４／８０、α−ＳＭＡ、及びサイトケラチンに対する抗体は、ヒト皮膚腫瘍において別々の細胞集団を標識した（図３Ｋ−Ｐ）。
【００６８】
【表１】
2018083813.tif 000003
【００６９】
Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は、その数は患者及び腫瘍の種類間で異なったが、全ての患者からの腫瘍切片中で見られた（表１）。意義深いことに、基底細胞癌及び正常な真皮組織よりも扁平上皮癌及び悪性黒色腫において（ｐ<０．０００１）、また悪性黒色腫よりも扁平上皮癌において（ｐ＝０．０１８５）、より多くのＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞が見つかった。同一患者からの切片においてもまたＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞数の変動が観察され、このことはＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞が腫瘍中で均一には分布していないことを示す。基底細胞癌または悪性黒色腫ではそうではなかったが、扁平上皮癌においてはＧ８陽性細胞数が腫瘍侵襲の程度（Ｔ値）と相関した（ｐ<０．０００１）。
【００７０】
正常真皮組織及び基底細胞癌中のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞数は有意には異ならなかったが、それらの分布には違いがあった。正常真皮中ではＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞は稀にしか見られないのに対し、それらは基底細胞癌細胞の下では様々な大きさの群れとして存在していた（図３D）。扁平上皮癌においては、Ｍｙｏ／Ｎｏｇ細胞は大部分が間質区画内に集中していたが、いくらかは腫瘍細胞自体の間に見られた（図３Ｅ−Ｈ）。上皮癌よりも悪性黒色腫において、より高い度合いの腫瘍細胞間のＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞浸潤が観察された（図３Ｉ−Ｋ）。濃色素性黒色腫組織においては、いくらかのＧ８陽性／Ｍｙｏ陽性、及びＧ８陽性／ｎｏｇｇｉｎ陽性細胞が細胞質中にメラニンを有しているようであった（図３Ｊ）。
【実施例２】
【００７１】
図４は、胞巣型横紋筋肉腫（ＡＲＭＳ）のマウスモデルにおいてＭｙｏ／Ｎｏｇ細胞がＰａｘ３／ＦＯＸＯ１転座を発現することを示す。Ｐａｘ３：ＦＯＸＯ１転座は、ＡＲＭＳを有する患者の８０％に存在する。マウスにおいてはＭｙｆ６がこの転座を推進する。その転座と共に蛍光タンパク質が共発現されており、また切片はＧ８抗体で染色された。他の切片は、Ｇ８及びｎｏｇｇｉｎｇに対して二重標識された（図４の挿入図）。データは、Ｇ８陽性細胞がｎｏｇｇｉｎを共発現し、またＡＲＭＳ細胞の亜集団がＧ８抗原及びＰａｘ３：ＦＯＸＯ１転座を共発現することを示す。
【００７２】
図５は、ヒト横紋筋肉腫細胞がＧ８及びｎｏｇｇｉｎを発現することを示す。より具体的には、ヒト胎児型及び胞巣型横紋筋肉腫細胞（それぞれ、ＥＲＭＳ及びＡＲＭＳ）がＧ８及びｎｏｇｇｉｎに対する抗体で染色された。ＥＲＭＳ及びＡＲＭＳ細胞培養物はＧ８陽性／ｎｏｇｇｉｎ陽性細胞を含有した。とりわけ、ＥＲＭＳにおけるＧ８陽性細胞率は１０％±５、またＡＲＭＳにおけるＧ８陽性細胞率は９１％±８であった。Ｇ８陽性ＥＲＭＳ及びＡＲＭＳ細胞はＧ８抗体及び補体を用いて殺された（図６）。具体的には、ＥＲＭＳ及びＡＲＭＳ培養物が、Ｇ８抗体、抗体結合細胞を溶解する補体、またはその両者と共に培養された。それから細胞はＧ８及びＴＵＮＥＬに対して標識された。図６に示される結果は、Ｇ８及び補体での処理がＧ８抗原を発現する細胞を特異的に死なせることを明示する。
【００７３】
図７は、様々な上皮癌中におけるＧ８陽性細胞の存在を示す。ヒト骨肉腫、ウィルムス、及び横紋筋肉腫の腫瘍の切片が、Ｇ８及びｎｏｇｇｉｎに対する抗体で標識された。Ｇ８陽性／ｎｏｇｇｉｎ陽性細胞は、腫瘍内における亜集団であった。実際、Ｇ８発現性細胞は、骨肉腫、ウィルムス、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、扁平上皮、黒色腫、基底細胞、及びユーイングの腫瘍において確認されている。
【００７４】
本発明の好ましい実施形態のうちのいくらかが上で開示され具体的に例証されたが、本発明がそのような実施形態に限定されるように意図されるものではない。以下の特許請求の範囲で述べられるように、本発明の範囲及び意図から外れることなく、様々な変更がそれに加えられうる。
【図１−１】
2018083813.tif 000004
【図１−２】
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【図１−３】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【外国語明細書】
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