(57)【要約】      （修正有）【課題】検体試料内の微粒子を正確に検出することができる画像サイトメータを提供すること。【解決手段】光源１３は、粒子容器１１内の検体試料に光を照射する。検出部（１４、１５）は、検体試料に光を照射した際に生じる散乱光や蛍光を検出する。粒子容器位置制御部２１は、光源１３から検体試料内の粒子に複数回の照射が行われるように、検体試料が格納された粒子容器１１を動かす。【選択図】図１
2018116060.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体試料に光を照射する光源と、
前記検体試料に光を照射した際に生じる散乱光や蛍光を検出する検出部と、
前記光源から前記検体試料内の粒子に複数回の照射が行われるように、前記検体試料が格納された粒子容器を動かす粒子容器位置制御部と、
を備える、画像サイトメータ。
【請求項２】
前記粒子容器位置制御部は、前記粒子容器内に含まれる粒子に略均一にレーザー光が照射されるように前記粒子容器を動かす、ことを特徴とする請求項１に記載の画像サイトメータ。
【請求項３】
前記粒子容器位置制御部は、円運動を行うように前記粒子容器を動かす、ことを特徴とする請求項１または請求項２に記載の画像サイトメータ。
【請求項４】
前記粒子容器位置制御部は、直線的な往復運動を行うように前記粒子容器を動かす、ことを特徴とする請求項１または請求項２に記載の画像サイトメータ。
【請求項５】
前記粒子容器位置制御部は、等速運動を行うように前記粒子容器を動かす、ことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の画像サイトメータ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は画像サイトメータに関し、特に細胞等の分析に用いる画像サイトメータに関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞等を分析する場合、サイトメトリーと呼ばれる手法が用いられる。サイトメトリーを大まかに分類すると、フローサイトメトリーとイメージングサイトメトリーに大別される。
【０００３】
フローサイトメトリーは、懸濁させた細胞をセンシングゾーンに導き、高速で散乱光と蛍光などを測定する手法である。イメージングサイトメトリーは、分析対象の細胞に対して撮像処理を行うことにより、画像化して解析する手法である。
【０００４】
サイトメータの一例として本願発明者が発明した分類装置（特許文献１）がある。特許文献１には、前方散乱光と側方散乱光に加えて後方散乱光を検出して分析を行う分類装置が開示されている。当該分類装置は、後方散乱光を検出することによって非常に小さな細胞であっても正確に検出し、細胞の分類を精度良く行っている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平８−１２８９４４号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Inami N, Nomura S, et al,”P-selectin and platelet-derived microparticles associated with monocyte activation markers in patients with pulmonary embolism.”, Clin Appl Thromb Hemost. 2003 Oct;9(4):309-16
【非特許文献２】巽典之  編、「計測技術ティーチング −自動血球分析装置の基本原理−」、宇宙堂八木書店
【非特許文献３】「５．ＨＩＶ感染症の経過観察」、[平成２６年６月２０日検索]、インターネット<URL:http://api-net.jfap.or.jp/library/MeaRelDoc/03/htmls/doc_03_01_05.htm>
【非特許文献４】[平成２６年６月２０日検索]、インターネット<URL: http://www.juntendo.ac.jp/hospital/support/rinsyo_kensabu/patient14.html>
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ここでフローセルに検体試料を流して粒子を分析する手法（特許文献１に記載の技術も含む）では、粒子がフローセルを移動した瞬間のみが分析の対象となる。この場合、フローセル中を微粒子が移動した場合、粒径が小さいために散乱光や蛍光が十分に検出できず、誤検出や検出ミスが生じる恐れがあった。
【０００８】
すなわち、微粒子を含む検体試料を分析対象とする場合には正確に検出を行うことが難しいという問題があった。
【０００９】
本発明は上述した課題に鑑みてなされたものであり、検体試料内の微粒子を正確に検出することができる画像サイトメータを提供することを主たる目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明にかかる画像サイトメータの一態様は、
検体試料に光を照射する光源と、
前記検体試料に光を照射した際に生じる散乱光や蛍光を検出する検出部と、
前記光源から前記検体試料内の粒子に複数回の照射が行われるように、前記検体試料が格納された粒子容器を動かす粒子容器位置制御部と、
を備える、ものである。
【００１１】
本発明では、検体試料をフローに流すのではなく、検体試料を容器に入れた状態で粒子に複数回のレーザー照射が行われるように移動させて粒子検出を行っている。粒子に複数回のレーザー照射が行われることにより、微粒子であっても精度良く検出を行うことができる。
【発明の効果】
【００１２】
本発明は、検体試料内の微粒子を正確に検出することができる画像サイトメータを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】実施の形態１にかかる分析システム１の構成を示すブロック図である。
【図２】粒径パラメータαと散乱光成分のパターンとの関係を示す概念図である。
【図３】実施の形態１にかかる粒子画像生成部１６の動作イメージを説明する概念図である。
【図４】実施の形態１にかかる粒子容器１１の位置変化を示す図である。
【図５】実施の形態１にかかる粒子容器１１の位置変化を示す図である。
【図６】実施の形態１にかかる分析部３４の動作を示すフローチャートである。
【図７】実施の形態２にかかる分析システム１の構成を示すブロック図である。
【図８】実施の形態３にかかる血球分析装置３０の構成を示すブロック図である。
【図９】実施の形態１にかかる分析システム１の構成を示すブロック図である。
【図１０】実施の形態１にかかる分析部３４の動作を示すフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
＜実施の形態１＞
以下、図面を参照して本発明の実施の形態について説明する。図１は、本実施の形態にかかる分析システムの構成を示すブロック図である。分析システム１は、イメージングサイトメータ１０（画像サイトメータ）と血球分析装置３０を有する。
【００１５】
イメージングサイトメータ１０は、粒子容器１１、撮像部１２（第１撮像部）、粒子位置検出部１７、粒子分類計測部１８、記憶部１９、通信部２０、及び粒子容器位置制御部２１を有する。イメージングサイトメータ１０は、検体試料に対して撮像処理を行って画像を生成し、当該画像を用いて分析する（詳細には粒子比率や粒子計測値等を検出する）ものである。イメージングサイトメータ１０は、粒子の画像化処理を行うために多量の検体試料の分析を行うことはできないが（換言すると必要な統計量を確保することが難しいが）、粒子形態情報の詳細が得られるという利点がある。
【００１６】
粒子容器１１は、分析対象となる検体試料（好適には血液）を保持する容器である。血球細胞内には、その種類により大きさの異なる顆粒又は粒子（以下、単に粒子と記載する。）が含まれている。本例では、粒子容器１１に粒子ｐ１１〜ｐ１ｎが保持されている。ここでイメージングサイトメータ１０の用途は、特に限定されないものの、マイクロパーティクルを含む血液の分析等に用いられると特に有用である。マイクロパーティクルとは、血小板膜の一部がちぎれて放出される微小な膜小胞体である。マイクロパーティクルの検出により、血栓準備状態を知ることができ、血管障害予知に有用とされている（非特許文献１）。
【００１７】
撮像部１２は、粒子容器１１内の粒子に対して撮像処理を行って画像化するものである。撮像部１２の構成は特に限定されないが、例えば図１のような構成になる。図１の構成では撮像部１２は、光源１３、後方散乱光検出部１４、蛍光検出部１５、及び粒子画像生成部１６を備える。光源１３は、粒子容器１１に対してレーザー光を照射する。レーザー光は、散乱光と蛍光をそれぞれ励起させる。粒子容器１１は、イメージングサイトメータ１０の分析中に位置制御が行われる。すなわち粒子容器１１は、イメージングサイトメータ１０の分析中に粒子ｐ１１〜粒子１ｎにレーザー光が当たるように移動する。粒子容器１１の位置制御の詳細については、図４及び図５を参照して後述する。
【００１８】
後方散乱光検出部１４は、光源１３が粒子容器１１にレーザー光を照射した際に生じる後方散乱光の強度を検出する。ここで散乱光の特性及び後方散乱光を検出する意義について簡単に説明する。
【００１９】
血球細胞内には、その種類により大きさの異なる顆粒又は粒子（以下、単に粒子と言う。）が含まれているので、これに光を照射した場合、粒子の大きさに応じて散乱光の角度分布が異なる。大きい粒子による散乱光は、ほとんどが前方に集中し、その強度は粒子の径の二乗に比例する（フラウンホーファの回析理論）。また、粒径（粒子の径）が小さい場合、その散乱光は四方八方に散らばり、散乱光の強度は粒径の六乗に比例する（レイリーの理論）。また、小さな粒子による散乱光は、入射光の振動方向で角度分布が異なり、粒子が凹凸する場合は、散乱による偏光現象が失われることが知られている。
【００２０】
直径ｄの粒子に対し、波長λのレーザー光を入射した場合、粒径パラメータαは以下の式（１）で示される。
α＝πｄ／λ  ――式（１）
【００２１】
図２は、粒径パラメータαと散乱光成分のパターンとの関係を示す概念図である。図２では、図中下方向から上方向に向かってレーザー光を照射した場合の散乱光パターンを示している。図２から明らかなように、粒径パラメータαが小から大へ、すなわち粒径が大きくなるにつれて後方散乱光成分が少なくなる。換言すると、粒径が小さくなるにつれて後方散乱光成分が多くなる。そのため、上述のマイクロパーティクルのように粒径が小さい粒子の分析には後方散乱光を分析することが非常に有用である。
【００２２】
なお粒径パラメータと散乱光との関係の詳細は、特許文献１の段落００１４〜００２０に記載されているため、適宜参照されたい。
【００２３】
後方散乱光検出部１４は、レーザー光を粒子容器１１に照射した際に生じる後方散乱光を検出するものであり、特許文献１と同様にミラー、レンズ、検出器（フォトダイオード等）から構成されれば良い。後方散乱光検出部１４は、検出した後方散乱光強度と、レーザー光の照射位置を示す位置情報（例えばｘ座標、ｙ座標）と、を関連付けて粒子画像生成部１６に供給する。
【００２４】
蛍光検出部１５は、複数の蛍光検出器１５１〜１５４から構成される。蛍光検出器１５１〜１５４は、レーザー光によって励起された蛍光を種別に応じてそれぞれ検出する。蛍光検出部１５は、各蛍光検出器１５１〜１５４が検出した蛍光強度と、レーザー光の照射位置を示す位置情報（ｘ座標、ｙ座標）と、を関連付けて粒子画像生成部１６に供給する。
【００２５】
粒子画像生成部１６には、位置情報（ｘ座標、ｙ座標）と関連付けられた散乱光強度情報と、位置情報（ｘ座標、ｙ座標）と関連付けられた蛍光強度情報と、が入力される。粒子画像生成部１６は、これらの情報を基に検体試料内に含まれる粒子の形状を示す画像（粒子画像）を生成する。粒子画像の生成方法を図３を参照して説明する。
【００２６】
図３は、粒子画像生成部１６の動作イメージを説明する概念図である。なお、図３においては説明の容易化のため、粒子の大きさ等については簡略化して記載している。粒子画像生成部１６には、レーザー光の照射幅に応じた散乱光強度情報及び蛍光強度情報が入力される。粒子画像生成部１６は、レーザー光の照射幅に応じた散乱光強度情報及び蛍光強度情報を基に、部分画像ａ１〜ａ６を生成する。そして粒子画像生成部１６は、座標情報を参照して部分画像ａ１〜ａ６を合成した粒子画像を生成する。
【００２７】
なおイメージングサイトメータ１０は、前方散乱光検出部及び側方散乱光検出部を備える構成であってもよい。この場合に粒子画像生成部１６は、後方散乱光検出部１４が検出した後方散乱光強度に加え、前方散乱光検出部が検出した前方散乱光強度、及び側方散乱光検出部が検出した側方散乱光強度、を基に粒子画像を生成する。
【００２８】
再び図１を参照する。粒子位置検出部１７は、粒子容器１１の位置を検出する位置検出センサ（図１には図示せず）から位置情報を取得する。粒子位置検出部１７が取得する位置情報は、例えば「ｘ座標＝ｘ１、ｙ座標＝ｙ１」（粒子容器１１の左上端を（０，０）とする。）といったようにレーザー光の照射位置を特定できるものである。粒子位置検出部１７は、検出したレーザー光の照射位置情報を記憶部１９に書き込む。
【００２９】
粒子分類計測部１８は、粒子画像生成部１６が生成した粒子画像を取得し、当該粒子画像の分析を行う。粒子分類計測部１８は、具体的には粒子画像を分析して粒子計測値や粒子比率等を算出する。粒子計測値とは、例えば画像化対象範囲内におけるＣＤ４陽性リンパ球数、ＣＤ４陰性リンパ球数等である。また粒子比率とは、例えば検体試料に含まれるＣＤ４陽性リンパ球数とＣＤ４陰性リンパ球数の比率やＣＤ４／ＣＤ８比率等である。粒子分類計測部１８は、これらの計測処理を一般的なカウント処理により実現する。
【００３０】
粒子分類計測部１８は、分析結果及び粒子画像を記憶部１９に書き込む。記憶部１９は、イメージングサイトメータ１０内における各種情報を記憶する。記憶部１９は、ハードディスクドライブ等の２次記憶装置であるが、ＵＳＢ（Universal Serial Bus）メモリのようにイメージングサイトメータ１０に着脱可能な装置であってもよい。
【００３１】
通信部２０は、上述の処理により得られた粒子計測値、粒子比率、粒子画像等を血球分析装置３０に送信する。通信部２０は、例えば無線通信規格に沿った各種回路等により構成されれば良い。また通信部２０は、後述する通信部３６とケーブル等により物理的に接続されていてもよい。なお通信部２０は、粒子画像をすべて送信してもよいが、粒子分類計測部１８によって偽陽性と判断された粒子が含まれる代表的な領域の画像のみを送付する方が通信量の観点から好ましい。
【００３２】
なお、イメージングサイトメータ１０と血球分析装置３０間のデータの受け渡しは、ＵＳＢ（Universal Serial Bus）メモリをはじめとする記録媒体を用いて行われてもよい。またユーザがイメージングサイトメータ１０の分析結果を目視確認し、その分析結果を血球分析装置３０に入力することによりデータの受け渡しを実現してもよい。
【００３３】
粒子容器位置制御部２１は、粒子容器１１の位置を制御する。より具体的には粒子容器位置制御部２１は、粒子に複数回のレーザー光の照射が行われるように粒子容器１１の位置を制御する。図４及び図５を参照して粒子容器位置制御部２１による粒子容器１１の位置制御について説明する。図４は、粒子容器位置制御部２１の位置制御の第１例を示す図である。図４（Ａ）〜図４（Ｄ）は、時間経過に伴う粒子容器１１の位置を示す図である。
【００３４】
図示するように光源１３から照射されるレーザー光の照射位置（絶対位置）は変化しない。図４（Ａ）では、レーザー光が粒子容器１１の最下部の粒子を照射している。図４（Ｂ）は、図４（Ａ）から一定時間経過した後のレーザー光の照射状態を示している。粒子容器位置制御部２１が粒子容器１１を図中の下方向に動かすように制御したため、図４（Ａ）の際よりも上部に位置する粒子が照射されている。図４（Ｃ）は、図４（Ｂ）から一定時間経過した後のレーザー光の照射状態を示している。粒子容器位置制御部２１が粒子容器１１を図中の下方向に動かすように制御したため、最も上部に位置する粒子が照射されている。図４（Ｄ）は、図４（Ｃ）から一定時間経過した後のレーザー光の照射状態を示している。粒子容器位置制御部２１が粒子容器１１を図中の上方向に動かすように制御したため、図４（Ｃ）と比べて下部に位置する粒子が照射されている。
【００３５】
このように粒子容器位置制御部２１は、粒子容器１１内に含まれる粒子に略均一にレーザー光が照射されるように粒子容器１１の位置を動かす。粒子容器位置制御部２１は、この往復運動を繰り返し行うことにより、各粒子に複数回の照射が行われるように制御する。なお図４（Ａ）〜（Ｄ）では説明の容易化のため、一方向に往復する例を説明したが、粒子容器位置制御部２１は、Ｘ軸方向とＹ軸方向の二次元の移動を伴うように制御してもよい。
【００３６】
なお粒子容器１１の移動は、例えば粒子容器１１を図示しない載置板上に固定して当該載置板を移動させることにより実現すればよい。この場合、載置板に位置検出センサ（エンコーダ、図１には図示せず。）を取り付け、当該位置検出センサがどの位置にレーザー光の照射が行われているかを検出するようにする。勿論、この他の方法により移動を実現してもよい。
【００３７】
図５は粒子容器位置制御部２１の位置制御の第２例を示す図である。図５（Ａ）〜図５（Ｄ）は、時間経過に伴う粒子容器１１の位置状態を示す図である。図示するように光源１３から照射されるレーザー光の照射位置（絶対位置）は変化しない。図５（Ａ）〜図５（Ｄ）は、それぞれ略一定期間経過した後のレーザー光と粒子容器１１の位置関係を示している。例えば図５（Ｂ）は、図５（Ａ）から一定時間経過した後の粒子容器１１に対するレーザー光の照射状態を示している。図示するように粒子容器位置制御部２１は、粒子に略均一にレーザー光が照射されるために、粒子容器１１が円を描くように位置を制御している。粒子容器位置制御部２１は、この円運動を繰り返し行うことにより、各粒子に何度も照射が行われるように制御する。
【００３８】
このように、本実施の形態にかかるイメージングサイトメータ１０は、検体試料を粒子容器１１に入れ、粒子容器１１を移動させることにより、各粒子にレーザー光が複数回照射されるようにする。
【００３９】
図５の位置制御は円運動であり、粒子容器１１は一時停止を行うことなく移動を繰り返す。図４の位置制御は、一方向に動かした後に一時停止を行い、略逆方向に移動を行う。すなわち図４の位置制御は一時停止を伴う運動である。そのため図５の位置制御は、高速に分析を行うことができるため、より好ましい。
【００４０】
なお図４及び図５の移動において、粒子容器位置制御部２１は、粒子容器１１に含まれる粒子に略均一にレーザー光が照射されるように移動させることが好ましい。ここで、略均一にレーザー光を照射させるために、移動運動（図４のような往復運動、図５の円運動）は等速運動であることが好ましい。これにより、各粒子にまんべんなくレーザー光が照射されることになり、より精度良く分析を行うことができる。
【００４１】
続いて図１を参照して血球分析装置３０の構成について説明する。血球分析装置３０は、計測部３１、分析部３４、出力部３５、及び通信部３６を有する。血球分析装置３０には、イメージングサイトメータ１０と同一の検体試料が入力される。例えば「被験者Ａさん」から取得した血液（検体試料）がイメージングサイトメータ１０と血球分析装置３０に入力される。血球分析装置３０は、電気抵抗法及び光学分析法の少なくとも一方の計測技術を用いて検体試料に含まれる粒子の定量分析を行う。ここで電気抵抗法や光学分析法とは、本願発明者の執筆文献である非特許文献２に記載の技術であるものであるため、適宜参照されたい（非特許文献２７２ページ１１３ページ）。
【００４２】
計測部３１は、一般的な電気抵抗法や光学分析法を用いて検体試料の血球分析を行う。例えば計測部３１は、図１に示すように電気抵抗計測部３２及び光学分析計測部３３を有する。図1の構成はあくまでも一例であり、電気抵抗計測部３２及び光学分析計測部３３の一方だけを有する構成であってもよい。また計測部３１は、検体試料の成分分析を行うことができる構成であれば他の構成であってもよい。
【００４３】
電気抵抗計測部３２は、体積計測方法のゴールデンスタンダードともいえる手法を実装する処理部である。電気抵抗計測部３２は、アパーチャと呼ばれる細管に検体試料を流し、その際に生じる電気抵抗を基に粒子の種別を分析し、それぞれの血球数を計測する。なお電気抵抗計測部３２の構成及び原理は、本願発明者の執筆文献である非特許文献２（７２ページ〜８６ページ）を参照されたい。
【００４４】
光学分析計測部３３は、光源（好適にはレーザー光源）を細く絞り、それと直行する方向に検体試料に含まれる粒子を一列に通過させるための細い流れの道（フローセル）を作る。そして光学分析計測部３３は、フローセルとレーザー光の交差点を粒子が通過する際の光を分析することにより細胞の特徴量の計測や分類を行う。なお光学分析計測部３３の構成及び原理は、本願発明者の執筆文献である非特許文献２（８６ページ〜１１３ページ）を参照されたい。
【００４５】
計測部３１は、イメージングサイトメータ１０とは異なり画像分析を行わないため、大量の粒子計測を行うことができる。計測部３１は、電気抵抗分析や光学分析によって取得した血球計測値（例えば１μＬあたりの各血球の計測値）、血球比率、異常細胞情報等を分析部３４及び記憶部（図示せず）に供給する。
【００４６】
通信部３６は、イメージングサイトメータ１０との通信インターフェイスであり、無線通信規格等を実装した回路等により構成される。通信部３６は、イメージングサイトメータ１０から取得した粒子計測値、粒子比率、粒子画像等を分析部３４や出力部３５に供給する。
【００４７】
分析部３４には、イメージングサイトメータ１０から粒子分析にかかる各種情報（粒子計測値、粒子比率、粒子画像等）、及び計測部３１から粒子分析にかかる各種情報（血球計測値（例えば１μＬあたりの各血球の計測値）、血球比率、異常細胞情報等）の少なくとも一方が入力される。分析部３４は、これらの情報を用いて新たな分析レポートの生成、又はこれらの情報（イメージングサイトメータ１０からの各種情報、計測部３１からの各種情報）を分析した結果を用いて分析システム１の制御を行う。以下、分析部３４の動作例について説明する。
【００４８】
（分析部３４の動作例１）
分析部３４は、イメージングサイトメータ１０からの各種情報、及び計測部３１からの各種情報、を用いて新たな分析レポートを生成する。以下、詳細を具体例を示して説明する。
【００４９】
以下の例では、ＨＩＶ（Human Immunodeficiency Virus）感染症に関する各種パラメータの算出を例とする。ＨＩＶの経過観察には、ＣＤ４陽性リンパ球の絶対数、ＣＤ４／ＣＤ８比、リンパ球中のＣＤ４陽性リンパ球の占める割合、好中球数、血小板数等を参照することが有用である（非特許文献３）。ここで、健常者の各値は以下のとおりである（非特許文献３、非特許文献４）。
白血球数（男性）＝３．９〜９．７×１０９／Ｌ
白血球数（女性）＝３．６〜９．７×１０９／Ｌ
好中球（Ｓｅｇ＋Ｂａｎｄ）＝３７〜７２％
リンパ球（Ｌｙｍｐｈｏ）＝２５〜４８％
リンパ球数＝（２０００個／μＬ）前後
ＣＤ４陽性リンパ球数＝（７００〜１３００個／μＬ）前後
ＣＤ４／ＣＤ８比＝１．０〜２．０
【００５０】
ここで、単位量（１μＬあたり）のＣＤ４リンパ球の絶対数は、イメージングサイトメータ１０または血球分析装置３０の単独処理だけでは算出できない。そこで、単位量（１μＬあたり）のＣＤ４陽性リンパ球をはじめとする特定パラメータの単位量当たりの絶対数（粒子量）を算出する例について説明する。
【００５１】
正常事例：
イメージングサイトメータ１０から以下の情報が分析部３４に入力されたとする。
＜粒子比率＞  
リンパ球中のＣＤ４陽性比率＝４０％
リンパ球中のＣＤ８陽性比率＝３０％
ＣＤ４／ＣＤ８＝１．３３３３３
ＣＤ４／ＣＤ４５＝１２％
ＣＤ８／ＣＤ４５＝８％
【００５２】
一方、計測部３１から以下の情報が分析部３４に入力されたとする。
＜粒子計測値＞  
ＷＢＣ（白血球数）＝６０００個／μＬ
リンパ球数＝１８００個／μＬ
【００５３】
分析部３４は、上記の情報を基に検体試料の単位量当たりの粒子量（例えば１μＬ当たりのＣＤ４陽性リンパ球の絶対数や１μＬ当たりのＣＤ８陽性リンパ球の絶対数）を以下の乗算式のように求める。
ＣＤ４＝６０００個／μＬ×（１８００／６０００）×０．４＝７２０（個／μＬ）
ＣＤ８＝６０００個／μＬ×（１８００／６０００）×０．３＝５４０（個／μＬ）
【００５４】
上述のＣＤ４及びＣＤ８の個数は、上述の正常範囲内と判定される。分析部３４は、算出した１μＬ中でのＣＤ４リンパ球陽性数や１μＬ中でのＣＤ８リンパ球陽性数を分析レポートとして出力部３５に供給する。なお分析レポートとは、イメージングサイトメータ１０や血球分析装置３０が単独で取得した情報（例えば単位量当たりの好中球の絶対数等）も含まれていることが好ましい。
【００５５】
異常事例：
イメージングサイトメータ１０から以下の情報が分析部３４に入力されたとする。
＜粒子比率＞  
リンパ球中のＣＤ４陽性比率＝２０％
リンパ球中のＣＤ８陽性比率＝３０％
ＣＤ４／ＣＤ８＝０．６６６６７
ＣＤ４／ＣＤ４５＝６％
ＣＤ８／ＣＤ４５＝９％
【００５６】
一方、計測部３１から以下の情報が分析部３４に入力されたとする。
＜粒子計測値＞  
ＷＢＣ（白血球数）＝５０００個／μＬ
リンパ球数＝１５００個／μＬ
【００５７】
分析部３４は、上記の情報を基に検体試料の単位量当たりの粒子量（例えば１μＬ当たりのＣＤ４陽性リンパ球の絶対数や１μＬ当たりのＣＤ８陽性リンパ球の絶対数）を以下の乗算式のように求める。
ＣＤ４＝５０００個／μＬ×（１５００／５０００）×０．２＝３００（個／μＬ）
ＣＤ８＝５０００個／μＬ×（１５００／５０００）×０．３＝４５０（個／μＬ）
【００５８】
上述のＣＤ４及びＣＤ８の個数は、上述の正常範囲外（すなわち異常）と判定される。分析部３４は、算出した１μＬ中でのＣＤ４リンパ球陽性数や１μＬ中でのＣＤ８リンパ球陽性数を分析レポートとして出力部３５に供給する。
【００５９】
なお分析部３４は、算出した単位量当たりの特定パラメータの絶対数（ＣＤ４リンパ球陽性数等）を用いて各種の異常状態の検出を行ってもよい。例えばＣＤ４リンパ球陽性数が正常範囲内にない場合、分析部３４はＣＤ４絶対値減少フラグ等の設定を行い、出力部３５を介してユーザに報知する。また分析部３４は、複数のパラメータを考慮した異常検出を行ってもよい。例えば分析部３４は、ＣＤ４リンパ球陽性数とＣＤ８リンパ球陽性数が正常範囲内にあるものの、２つとも正常範囲外に近い値である場合には異常であるものとして判定してもよい。
【００６０】
（分析部３４の動作例２）
分析部３４の具体的な動作例２について図６のフローチャートを参照して説明する。動作当初にはイメージングサイトメータ１０は動作せず、血球分析装置３０内の計測部３１のみが計測処理を行い、計測処理の結果が分析部３４に入力される（Ｓ１１）。分析部３４は、計測部３１から異常細胞情報（一般的な血球分析装置で出力する異常フラグの情報）が入力された場合には検体試料が異常状態（何らかの疾病が疑われる状態）である恐れがあることを検出する。また分析部３４は、計測部３１から入力された各種情報（例えば単位量当たりの血小板や赤血球の数）を参照情報（例えば各パラメータの正常範囲等）と比較することによっても異常状態を検出する。
【００６１】
異常状態が検出されなかった場合（Ｓ１２：Ｎｏ）、分析部３４はイメージングサイトメータ１０に分析（後方散乱光検出、蛍光検出等）を行わせることなく、計測部３１の計測処理を出力部３５に出力させて処理を終了する（Ｓ１５）。
【００６２】
一方、異常状態が検出された場合（Ｓ１２：Ｙｅｓ）、分析部３４は、イメージングサイトメータ１０に分析指示を送信し、同一被験者から取得した検体試料を分析させる（Ｓ１３）。そして分析部３４は、各通信部（２０、３６）を介してイメージングサイトメータ１０が取得した各種情報（粒子計測値、粒子比率、粒子画像等）を取得し（Ｓ１４）、取得した各種情報を出力部３５に出力させる。なお分析部３４は、イメージングサイトメータ１０から各種情報（粒子計測値、粒子比率、粒子画像等）を取得した後に上述の動作例１で示す動作（例えば１μＬ中でのＣＤ４リンパ球陽性数の算出）を行って分析レポートを生成／出力してもよい。
【００６３】
以上、分析部３４の動作例である。再び図１を参照する。出力部３５は、分析部３４が生成した上述の分析レポートや粒子画像等を出力する。ここで出力とは、血球分析装置３０の表示用ディスプレイ（図示せず）に分析結果を表示することや、分析結果を内臓プリンタ（図示せず）により印刷すること等を含む。
【００６４】
例えば出力部３５は、上述のＨＩＶ感染に関する分析結果として、血球分析装置３０が電気抵抗法または光学分析法により取得した好中球や血小板数に加えて、上述の処理により算出した１μＬ中でのＣＤ４リンパ球陽性数や偽陽性粒子の画像を同一レポート用紙に印刷して出力する。また出力部３５は、イメージングサイトメータ１０から受信した粒子画像（特に偽陽性と判断された粒子の形態画像）を同一レポート用紙上に合わせて出力することが望ましい。これによりユーザは、粒子の形態情報と粒子計数情報を合わせて認識することができる。
【００６５】
続いて本実施の形態にかかる分析システム１の効果について説明する。従来のフローサイトメータでは、大量の粒子の定量分析を行うこと等については優れているものの、粒子形態の詳細情報を得ることが難しいという問題があった。一方で一般的なイメージングサイトメータは、粒子形態の詳細情報が得られるものの、処理速度が遅く十分な統計量を確保することが難しかった。
【００６６】
これに対し本実施の形態にかかる分析システム１は、従来のフローサイトメータとイメージングサイトメータの双方の利点を併せ持つ構成である。詳細にはイメージング（画像）サイトメータ１０が粒子を画像化して詳細情報（粒子計測値、粒子比率等）を取得し、血球分析装置３０が詳細な定量分析を行っている。この２つの装置の処理を組み合わせることにより、分析システム１は従来の装置では取得できなかった詳細情報を取得することや柔軟な検査を行うことができる。
【００６７】
例えば分析部３４は、イメージングサイトメータ１０と血球分析装置３０の双方の分析結果を用いて分析レポートを生成している（上述の動作例１）。この分析レポートを参照することにより、ユーザは従来のフローサイトメータとイメージングフローサイトメータの一方を使うだけでは把握できなかった情報（上述の例では１μＬ中でのＣＤ４リンパ球陽性数）を参照することができる。
【００６８】
また図６に示すように、血球分析装置３０で異常が検出された検体試料のみイメージングサイトメータ１０で再度計測を行うような柔軟なシステム制御も可能である（上述の動作例２）。必要な場合にのみイメージングサイトメータ１０を動作させることになるため、医療費の削減にもつながる。
【００６９】
上述のように粒径が小さい粒子の場合、レーザー光の照射時に後方散乱光が多くなる（図２）。これに対しイメージングサイトメータ１０は、後方散乱光検出部１４を備える構成である。そのためイメージングサイトメータ１０は、微小な粒子や破砕赤血球等についても正確に検出することができる。
【００７０】
次にイメージングサイトメータ１０単体の効果についても説明する。粒子容器位置制御部２１は、粒子容器１１に対してレーザー光が照射される位置が変化するように粒子容器１１を動かす。例えば粒子容器位置制御部２１は、粒子容器１１が往復運動するように動かしたり（図４）、粒子容器１１が円運動するように動かす（図５）。これにより、粒子に何度もレーザー光が照射されるようになり、粒子検出の最小感度を上げることができる。すなわち上述のイメージングサイトメータ１０は、一般的なフローサイトメータによる一度のレーザー光の照射では正確に検出できなかったような微小な粒子等であっても正確に検出することができる。
【００７１】
なお上述したが、粒子容器１１の移動は、図５に示すように円運動であることがより好ましい。これにより粒子容器１１が移動し続けたまま（一時停止することなく）分析を行うことができるため、より高速に分析を終了することができる。
【００７２】
また粒子画像生成部１６は、散乱光強度や蛍光強度を基に部分画像（図３のＡ１〜Ａ６）を生成し、その部分画像を組み合わせることにより大きな画像を生成している。つまり粒子画像生成部１６は、いわゆるスキャン処理を行って粒子検出を行っている。スキャンにより生成された部分画像は、いわゆる粗い画像（画質に劣る画像）ではあるものの、一般的な撮像画像と比べて素早く生成することができる。これにより本実施の形態にかかるイメージングサイトメータ１０は、一般的な画像生成機能を持つサイトメータと比べて多くの粒子を処理対象とすることができる。つまりイメージングサイトメータ１０は、処理対象範囲が広いために絶対数が少ないような微粒子であっても検出することができる。またスキャンによる撮像処理は一般的な撮像処理よりも高速であるため、イメージングサイトメータ１０は素早く粒子比率等を算出することができる。
【００７３】
＜実施の形態２＞
本実施の形態にかかる分析システム１は、イメージングサイトメータ１０内に撮像部２２（第２撮像部）を更に有することを特徴とする。実施の形態２にかかる分析システム１について、実施の形態１と異なる点を以下に説明する。
【００７４】
図７は、本実施の形態にかかる分析システム１である。なお、図中において図１と同様の符号及び名称を付した処理部は、特に説明しない限り実施の形態１と同様の動作を行うものとする。後述の実施の形態３についても同様である。
【００７５】
撮像部２２は、粒子容器１１内の粒子の状態を撮像し、粒子画像を取得する。ここで撮像部２２は、粒子画像生成部１６が生成するよりも高画質の粒子画像を生成できる撮像装置（カメラ）である。すなわち撮像部２２は、粒子画像生成部１６が生成する粒子画像よりも高解像度の画像を取得する。撮像部２２は、一般的な光学系の部材を有するものであれば良いが、粒子を撮像するための十分な機能を備えていることが望ましい。
【００７６】
なお撮像部２２の撮像タイミングは、粒子分類計測部１８が異常（陽性細胞）を検出したタイミングであってもよく、ユーザによるモード変更や撮像指示が筐体上のボタン等から指定されたタイミングであってもよい。異常（陽性細胞）を検出したタイミングに撮像を行う場合、撮像部２２は記憶部１９から撮像対象の位置情報を取得した後に撮像を行えばよい。
【００７７】
上述のように粒子画像生成部１６は、スキャンにより部分画像を生成し、部分画像を組み合わせることにより粒子形状を把握できる画像を生成する。上述のようにスキャン処理は高速で行うことができるものの、粒子の形状を正確に把握できるような高画質の画像を生成することは難しい。これに対し撮像部２２は、処理対象にできる粒子数は少ないものの（処理速度は遅いものの）、粒子の形状を正確に把握できるような高画質画像を得ることが出来る。
【００７８】
例えば撮像部２２は、粒子分類計測部１８によって偽陽性と判断された細胞の位置の高画質画像を撮像することができる。ユーザは、この高画質画像を参照することにより偽陽性となった細胞の詳細な形状を把握することができる。
【００７９】
＜実施の形態３＞
本実施の形態では、上述のイメージングサイトメータ１０の各構成が血球分析装置３０に内蔵されて一つの装置で実現することを特徴とする。当該構成を図８に示す。
【００８０】
血球分析装置３０は、実施の形態１または実施の形態２に記載のイメージングサイトメータ１０を組み込んでいる構成である。なおイメージングサイトメータ１０の内部構成は図示しないものの、図１または図７の同等であればよい。
【００８１】
ユーザは、対象の検体試料を血球分析装置３０に配置する。入力部３７は、配置された検体試料の一部を抽出してイメージングサイトメータ１０に供給し、検体試料の残り（または検体試料から別途抽出したもの）を計測部３１に供給する。すなわち血球分析装置３０は、配置された検体試料の一部を抽出してイメージングサイトメータ１０の分析対象とし、検体試料の残り（または検体試料から別途抽出したもの）を計測部３１の分析対象とする。その他の処理については、実施の形態１と同様である。
【００８２】
本実施の形態では、イメージングサイトメータ１０と血球分析装置３０が一体化されているため、実施の形態１と同様の効果を単一の装置で実現することができる。また入力部３７は、配置された検体試料を抽出してイメージングサイトメータ１０と計測部３１の双方に供給する。そのためユーザは、検体試料を一回配置するのみで画像方式の分析と光学方式（または電気抵抗方式）の分析の双方を行うことができる。
【００８３】
以上、本発明者によってなされた発明を実施の形態に基づき具体的に説明したが、本発明は既に述べた実施の形態に限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において種々の変更が可能であることはいうまでもない。
【００８４】
例えば実施の形態１または２において、分析部３４の機能がイメージングサイトメータ１０内にあり、イメージングサイトメータ１０が上述の分析レポートを算出するような構成も可能である。図９は、当該構成を示すブロック図である。なお図９では撮像部１２の内部構成は省略化して記載しているが、図１と同等の構成であればよい。図示するようにイメージングサイトメータ１０内に分析部２３及び出力部２４が存在する。分析部２３は、図１の分析部３４と同様の動作を行うように構成されれば良い。すなわち分析部２３は、イメージングサイトメータ１０内の撮像部１２が撮像した画像と、血球分析装置３０内の計測部３１の計測結果と、を用いて分析レポートを出力する構成であればよい。出力部２４は、分析部２３が生成した分析レポートを任意の手法（印刷、ディスプレイに表示等）によって出力する。なお２装置間のデータの受け渡しは、無線により行われてもよく、ＵＳＢ（Universal Serial Bus）メモリ等の記憶媒体を用いて行われてもよく、手動でイメージングサイトメータに打ち込むことにより行われてもよい。
【００８５】
また撮像部１２は、上述の説明では散乱光や蛍光の強度を検出して、当該強度を基に画像を生成していたが必ずしもこれに限られない。撮像部１２は、例えば高速に粒子の比率等を検出できる撮像カメラ（撮像部２２よりも高速であるが画質に劣るカメラ）によって構成されていてもよい。
【００８６】
また図６に示す動作例では、血球分析装置３０が分析を行い、異常を検出した場合にイメージングサイトメータ１０が分析を行ったが必ずしもこれに限られない。図１０を参照し、イメージングサイトメータ１０が分析を行い、異常を検出した場合に血球分析装置３０が分析を行う動作例について説明する。
【００８７】
粒子分類計測部１８は、撮像部１２が生成した画像を基に粒子比率等を算出する（Ｓ２１）。ここで算出した粒子比率等が異常状態ではない場合（Ｓ２２：Ｎｏ）、粒子分類計測部１８が算出した粒子比率等の情報をイメージングサイトメータ１０の表示部等に出力して処理を終了する（Ｓ２５）。
【００８８】
一方、算出した粒子比率等が異常状態である場合（Ｓ２２：Ｙｅｓ）、イメージングサイトメータ１０は血球分析装置３０に対して分析指示と共に分析結果を送信する（Ｓ２３）。血球分析装置３０は、同一検体試料の分析を行って両装置での分析結果を出力する（Ｓ２４）。
【符号の説明】
【００８９】
１  分析システム
１０  イメージングサイトメータ
１１  粒子容器
１２  撮像部
１３  光源
１４  後方散乱光
１５  蛍光検出部
１５１〜１５４  蛍光検出器
１６  粒子画像生成部
１７  粒子位置検出部
１８  粒子分類計測部
１９  記憶部
２０  通信部
２１  粒子容器位置制御部
２２  撮像部
２３  分析部
２４  出力部
３０  血球分析装置
３１  計測部
３２  電気抵抗計測部
３３  光学分析計測部
３４  分析部
３５  出力部
３６  通信部
３７  入力部
【図１】
2018116060.tif 000003
【図２】
2018116060.tif 000004
【図３】
2018116060.tif 000005
【図４】
2018116060.tif 000006
【図５】
2018116060.tif 000007
【図６】
2018116060.tif 000008
【図７】
2018116060.tif 000009
【図８】
2018116060.tif 000010
【図９】
2018116060.tif 000011
【図１０】
2018116060.tif 000012