(57)【要約】      （修正有）【課題】膵臓癌の発病可能性有無の判断のために用いることができる、蛋白質またはその遺伝子の発現水準を測定する製剤を含む膵臓癌診断用組成物、キット、これを用いた膵臓癌診断方法の提供。【解決手段】対象の試料での、ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ １、ＬＲＧ１）を含む膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ ｐａｐｉｌｌａｒｙ ｍｕｃｉｎｏｕｓ ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）マーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物であって、前記試料が対象から分離された血液、血清または血漿である、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物。【選択図】図１１
2018141795.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、（ｂ）ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＬＲＧ）および（ｃ）ＴＴＲ（Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ、ＡＴＴＲ、Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎ、ＴＢＰＡ）；Ｃ１Ｒ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ１ｒ  ｓｕｂｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）、ＣＬＵ（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ  ｐｒｅｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）およびＫＬＫＢ１（Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ；）からなる群より選択された一つ以上のマーカーを含む膵臓癌診断用マーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、膵臓癌診断用組成物。
【請求項２】
前記膵臓癌診断は、正常群と区別して膵臓癌を選別的に検出するか、多様な癌のうちの膵臓癌を選別的に検出するか、ＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ未満である膵臓癌を検出することである請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記膵臓癌は、膵管腺癌腫または高危険群膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）である請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記膵管腺癌腫は、１期または２期の膵管腺癌腫である請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
膵管腺癌腫は、ＩＰＭＮ由来したものではない請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記ＬＲＧ１蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿４４３２０４．１のアミノ酸配列を含み、前記ＴＴＲ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿０００３６２．１のアミノ酸配列を含み、前記Ｃ１Ｒ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿００１７２４．３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＬＵ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿００１８２２．３のアミノ酸配列を含み、前記ＫＬＫＢ１蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿０００８８３．２アミノ酸配列を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記マーカー蛋白質の発現水準を測定する製剤が前記蛋白質に特異的に結合する抗体、オリゴペプチド、リガンド、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）またはアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を含むことを特徴とする、請求項１に記載の膵臓癌診断用組成物。
【請求項８】
前記マーカーｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤が前記遺伝子に特異的に結合するプライマー、プローブまたはアンチセンスヌクレオチドを含むことを特徴とする、請求項１に記載の膵臓癌診断用組成物。
【請求項９】
請求項１乃至８のうちのいずれか一項による組成物を含む、膵臓癌診断用キット。
【請求項１０】
前記キットがＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）キット、ＤＮＡチップキット、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）キット、蛋白質チップキット、ラピッド（ｒａｐｉｄ）キットまたはＭＲＭ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）キットであることを特徴とする、請求項９に記載の膵臓癌診断用キット。
【請求項１１】
対象の試料での少なくとも３種以上の膵臓癌マーカー蛋白質の発現水準またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準を測定する段階、
前記測定された各マーカーの発現水準を、それぞれ正常対照群試料から得られたマーカーの発現水準と比較する段階、および
前記発現水準の比較結果を用いて前記対象の膵臓癌発病危険性を決定する段階を含み、  前記少なくとも３種以上の膵臓癌マーカーは、（ａ）ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、（ｂ）ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＬＲＧ）および（ｃ）ＴＴＲ（Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ、ＡＴＴＲ、Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎ、ＴＢＰＡ）；Ｃ１Ｒ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ１ｒ  ｓｕｂｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）、ＣＬＵ（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ  ｐｒｅｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）およびＫＬＫＢ１（Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ；）からなる群より選択された一つ以上のマーカーを含む膵臓癌診断用マーカーである、膵臓癌の診断方法。
【請求項１２】
前記決定段階は、前記マーカーの発現水準を比較した結果、測定対象の試料での（ａ）ＣＡ１９−９および（ｂ）ＬＲＧ１発現水準がそれぞれ正常対照群での発現水準より高く、測定対象の試料での（ｃ）ＴＴＲ、ＣＬＵ、およびＫＬＫＢ１発現水準が正常対照群での発現水準より低いか、測定対象の試料でのＣ１Ｒの発現水準が正常対照群での発現水準より高い場合、膵臓癌と決定する、請求項１１に記載の膵臓癌の診断方法。
【請求項１３】
前記膵臓癌の決定段階は、前記マーカーの発現水準を下記関数式１に代入して膵臓癌発病可能性を判定する段階を含む、請求項１１に記載の膵臓癌の診断方法：
＜関数式１＞
【数１】
2018141795.tif 000026
上記の式において、
ｘは膵臓癌マーカーのうちのいずれか一つの発現水準測定値、
αｉはＳＶＭ（Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｍａｃｈｉｎｅ）におけるラグランジュ乗数、
ｙｉは正常群／膵臓癌群の識別子、
ｘｉは基準測定値、そして
ｂは補正値を意味する。
【請求項１４】
前記試料が血液、血清または血漿である、請求項１１に記載の膵臓癌の診断方法。
【請求項１５】
前記マーカーの発現水準測定が該当蛋白質にそれぞれ特異的に結合する抗体、オリゴペプチド、リガンド、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）またはアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を用いることである、請求項１１に記載の膵臓癌の診断方法。
【請求項１６】
前記マーカーの発現水準測定または比較が、
蛋白質チップ分析、免疫測定法、リガンドバインディングアッセイ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｍａｔｒｉｘ  Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｓｕｌｆａｃｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、放射免疫測定、放射免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動、組織免疫染色、補体結合分析法、二次元電気泳動分析、液体クロマトグラフィー−質量分析（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、ＬＣ−ＭＳ）、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ／Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ウエスタンブロット法およびＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）からなる群より選択されるものを用いて行われる、請求項１１に記載の膵臓癌の診断方法。
【請求項１７】
前記ｍＲＮＡ発現水準測定が、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、競合的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ（ＲＰＡ）、ノーザンブロッティングまたはＤＮＡチップによって行われる、請求項１１に記載の膵臓癌の診断方法。
【請求項１８】
前記膵臓癌は膵管腺癌腫（ＰＤＡＣ）可能性を有する対象である請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記膵管腺癌腫は、ＩＰＭＮ由来の膵管腺癌腫である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記膵臓癌診断は、正常群および癌以外の膵臓関連疾患と区別して膵臓癌を選別的に検出するか、多様な癌のうちの膵臓癌を選別的に検出するか、ＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ未満である膵臓癌を検出することである請求項１１に記載の方法。
【請求項２１】
前記膵臓癌診断は、膵臓炎および胆嚢炎からなる群れより選択された１種以上の膵臓関連疾患から膵臓癌を選別的に検出することである請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記膵臓癌は、膵管腺癌腫または高危険群膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）である請求項１１に記載の方法。
【請求項２３】
ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ１、ＬＲＧ１）を含む膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）マーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、
高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物。
【請求項２４】
前記組成物は、低危険群ＩＰＭＮと区別して高危険群ＩＰＭＮを選別するものである請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ＩＰＭＮマーカーは、ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種以上のマーカーを追加的に含むものである請求項２３に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ＩＰＭＮマーカーは、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種マーカーとＬＲＧ１を含むマーカーである請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ＩＰＭＮマーカーは、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された２種のマーカーとＬＲＧ１を含む組み合わせマーカーである請求項２５に記載の組成物。
【請求項２８】
ＣＬＵ（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ  ｐｒｅｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）；および
ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＬＲＧ１）、ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、ＴＴＲ（Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ、ＡＴＴＲ、Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎ、ＴＢＰＡ）、Ｃ１Ｒ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ１ｒ  ｓｕｂｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）およびＫＬＫＢ１（Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ；）からなる群より選択された一つ以上のマーカーを含むＩＰＭＮマーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物。
【請求項２９】
前記ＩＰＭＮマーカーは、ＬＲＧ１、ＣＡ１９−９、ＴＴＲ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種マーカーとＣＬＵを含む組み合わせマーカーである請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記ＩＰＭＮマーカーは、ＬＲＧ１、ＣＡ１９−９、ＴＴＲ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された２種のマーカーとＬＲＧ１を含む組み合わせマーカーである請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
前記ＬＲＧ１蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿４４３２０４．１のアミノ酸配列を含み、前記ＴＴＲ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿０００３６２．１のアミノ酸配列を含み、前記Ｃ１Ｒ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿００１７２４．３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＬＵ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿００１８２２．３のアミノ酸配列を含み、前記ＫＬＫＢ１蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿０００８８３．２アミノ酸配列を含む請求項２６乃至３０のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
前記蛋白質の発現水準を測定する製剤が、前記蛋白質に特異的に結合する抗体、オリゴペプチド、リガンド、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）またはアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を含む請求項２３または２８に記載の組成物。
【請求項３３】
前記ｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤が、前記遺伝子に特異的に結合するプライマー、プローブまたはアンチセンスヌクレオチドを含む請求項２３または２８に記載の組成物。
【請求項３４】
請求項２６乃至３０のうちのいずれか一項による組成物を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用キット。
【請求項３５】
前記キットが、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）キット、ＤＮＡチップキット、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）キット、蛋白質チップキット、ラピッド（ｒａｐｉｄ）キットまたはＭＲＭ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）キットである請求項３４に記載の高危険群ＩＰＭＮの選別診断用キット。
【請求項３６】
対象の試料に対して、請求項２６乃至３０のうちのいずれか一項による高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物による膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）マーカー蛋白質の発現水準またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準をそれぞれ測定する段階、
前記測定されたマーカーの発現水準を、対照群マーカーの発現水準と比較する段階、および
前記マーカー発現水準の比較結果を用いて前記対象の高危険ＩＰＭＮ有無を決定する段階を含む、
高危険群ＩＰＭＮを診断する方法。
【請求項３７】
前記マーカーの発現水準を測定する段階以前に、対象がＩＰＭＮを有するか否かを確認する段階を追加的に含む請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記確認する段階は、画像診断法、組織検査法または遺伝子マーカーを用いた方法によって行われる請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記対象は、外科的切除術によってＩＰＭＮ組織が除去された患者である請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記対照群は、正常群、ＩＰＭＮと膵管腺癌腫を除いた膵臓疾患を有する患者、または低危険ＩＰＭＮを有する対象である請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
前記高危険群ＩＰＭＮは、高異形成（Ｈｉｇｈ  ｇｒａｄｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）と侵襲型（ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｔｙｐｅ）のＩＰＭＮを含む請求項３６に記載の方法。
【請求項４２】
前記方法は、対象の高危険ＩＰＭＮと決定された場合、外科的切除術または薬物投与の処置段階遂行する段階を追加的に含む請求項３６に記載の方法。
【請求項４３】
前記方法は、対象の低危険ＩＰＭＮと決定された場合、薬物投与または予後モニタリングを遂行する段階を追加的に含む請求項３８に記載の方法。
【請求項４４】
前記高危険ＩＰＭＮの決定段階は、
前記マーカーの発現水準を比較した結果、測定対象の試料での（ａ）ＣＡ１９−９および（ｂ）ＬＲＧ１発現水準が対照群での発現水準より高く、測定対象の試料での（ｃ）ＴＴＲ、ＣＬＵ、およびＫＬＫＢ１発現水準が正常対照群での発現水準より低いか、測定対象の試料でのＣ１Ｒの発現水準が正常対照群での発現水準より高い場合、対象の高危険ＩＰＭＮと決定する請求項３６に記載の方法。
【請求項４５】
前記高危険ＩＰＭＮは、ＩＰＭＮ由来膵管腺癌腫を含む請求項３６に記載の方法。
【請求項４６】
前記試料が、血液、血清または血漿であることを特徴とする、請求項３６に記載の方法。
【請求項４７】
前記マーカーの発現水準測定が、該当蛋白質にそれぞれ特異的に結合する抗体、オリゴペプチド、リガンド、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）またはアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を用いることを特徴とする請求項３６に記載の方法。
【請求項４８】
前記マーカーの発現水準測定または比較が、
蛋白質チップ分析、免疫測定法、リガンドバインディングアッセイ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｍａｔｒｉｘ  Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｓｕｌｆａｃｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、放射免疫測定、放射免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動、組織免疫染色、補体結合分析法、二次元電気泳動分析、液体クロマトグラフィー−質量分析（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、ＬＣ−ＭＳ）、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ／Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ウエスタンブロット法およびＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）からなる群より選択されるものを用いて行われることを特徴とする請求項３６に記載の方法。
【請求項４９】
前記ｍＲＮＡ発現水準測定が、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、競合的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ（ＲＰＡ）、ノーザンブロッティングまたはＤＮＡチップによって行われることを特徴とする請求項３６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、膵臓癌の発病または発病可能性の判断に用いることができる、特定マーカー遺伝子の蛋白質発現水準またはｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む膵臓癌診断用組成物とキット、およびこれを用いた膵臓癌診断方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
現代人の主要疾患のうち、癌の治療方法と診断方法に関する研究は発病頻度の高い肺ガン、肝癌、胃ガンなどを中心に比較的に活発に行われている。しかし、発病頻度の低い食道癌、大腸癌、膵臓癌などに対する研究は相対的に低調であることが実情である。
【０００３】
特に、膵臓癌は、初期には別に症状を感じなく、全身転移が起こった後に痛みと体重減少などの症状が現れることが普通であり、さらに治癒率が低い方であるので、定期的な診断が非常に重要である。臨床症状は大部分が徐々に発病し、虚弱になりやすく、食欲減退、体重減少は最もありふれた症状である。膵臓癌は５年生存率が１−４％、生存期間中央値５ヶ月に達する致命的な癌であって、人体の癌のうちの最も不良な予後を示している。また、８０−９０％患者において診断時に完治を期待する根治的切除が不可能な状態で発見されるため予後が不良であり、治療は主に抗癌療法に依存しているので、どんな人体癌よりも早期診断法開発が切実に要望されている。
【０００４】
現在まで膵臓癌に効果があると知られた５−フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、タルセバ（ｔａｒｃｅｖａ）を含むいくつかの抗ガン剤の治療効果は極めて低調であり、抗ガン治療に対する反応率は１５％内外に過ぎず、このような事実は、膵臓癌患者の予後を向上させるためにはより効果的な早期診断法および治療法の開発が切実に要求されていることを示唆する。致命的な膵臓癌に進行する前段階である膵臓癌の前駆病変に対する適切な診断と治療が膵臓癌治療成績向上に非常に重要である。
【０００５】
膵臓癌または膵臓癌前駆病変の診断は、血液検査（ＣＡ１９−９）、胃、十二指腸のＸ線造影検査、皮膚および肝を通じた胆道撮影と逆行性内視鏡胆道撮影術が使用されている。これら方法によって疾病の病変を発見したが、最近は超音波撮影およびコンピュータ断層撮影が最も多く使用される。より精密な組織検査を行って比較的に正確な検査結果を得ることもできる。しかし、前記診断方法は、正確度が落ちたり、患者の苦痛が伴われるなどその遂行方法が非常に不便であるため被検字らに敬遠されているのが実情である。したがって、簡便で速かに膵臓癌または膵臓癌前駆病変を診断することができる検査方法の開発が要求されてきた。
【０００６】
最近、健康検診や膵臓以外の他の疾患の診断のために腹部超音波（ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ、ＵＳ）、腹部コンピュータ断層撮影（ｃｏｍｐｕｔｅｄ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ、ＣＴ）、磁気共鳴画像診断（ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｉｍａｇｉｎｇ、ＭＲＩ）などの画像診断検査が多く施行されることにより膵臓の悪性病変が頻繁に発見される。画像診断において嚢胞性病変の形態を示す病変は病理所見では良性病変から前癌病変（ｐｒｅｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｌｅｓｉｏｎ）と悪性病変に至るまで多様な疾患を含んでいるので臨床的に重要である。
【０００７】
しかし、ＣＴ、ＭＲＩのような画像診断検査の発展にもかかわらず良性病変から前癌、嚢胞性病変まで多様な病理所見を有する膵臓の嚢胞性病変を手術前に正確に鑑別することはまだ難しいのが実情である。したがって、臨床的には、膵臓の嚢胞性病変が悪性化する可能性がある腫瘍病変であるか否か、そして悪性化可能性があればまだ前癌段階の病変であるか或いはすでに悪性病変を伴っているか鑑別することが重要である。
【０００８】
大韓民国特許第１０−０８１９１２２号および大韓民国公開特許第２０１２−００８２３７２号には、マトリリン（ｍａｔｒｉｌｉｎ）、トランスサイレチン（ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ）、ストラチフィン（ｓｔｒａｔｉｆｉｎ）などを含む多様な膵臓癌マーカーを用いた技術を開示している。また、大韓民国公開特許第２００９−０００３３０８号は個体の血液試料からＲＥＧ４蛋白質の発現量を検出して膵臓癌を診断する方法を開示しており、大韓民国出願公開第２０１２−０００９７８１号は個体の膵臓癌診断に必要な情報を提供するために個体から分離した癌組織中のＸＩＳＴ  ＲＮＡの発現量を測定する分析方法を、大韓民国出願公開第２００７−０１１９２５０号は正常ヒトの膵臓組織と比較してヒト膵臓癌組織において異なる形態で発現された新規遺伝子ＬＢＦＬ３１３ファミリーを開示しており、米国出願公開第２０１１／０２９４１３６号はケラチン８蛋白質などのバイオマーカーを用いた膵臓癌診断方法を開示している。しかし、マーカーごとにその診断効率および正確性において大きな差を示すので、効果がさらに優れたマーカーを発掘しこれを用いた診断方法を開発する必要性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、膵臓癌の発病、発病可能性または危険度を簡便に早期診断することができる膵臓癌診断マーカーを提供することにある。
【００１０】
本発明の目的は、膵臓癌の発病、発病可能性または危険度を簡便に早期診断することができる膵臓癌診断用組成物を提供することである。
【００１１】
本発明の他の目的は、前記組成物を含む膵臓癌診断用キットを提供することである。
【００１２】
本発明の他の目的は、前記診断用組成物またはキットを用いて膵臓癌を診断する方法または膵臓癌の診断のための情報を提供する方法を提供することである。
【００１３】
本発明の追加の目的は、前記診断用組成物またはキットを用いて、探知対象において膵臓癌の存否または悪性度を決定する方法を提供することである。
【００１４】
本発明の目的は、膵臓癌の発病、発病可能性または危険度を簡便に早期診断することができる膵臓癌診断マーカーの膵臓癌診断用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
前記目的を達成するために、本発明は、膵臓癌診断用マーカー遺伝子の蛋白質の発現水準またはｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む膵臓癌または前駆病変の診断用組成物であって、前記診断用組成物を含む膵臓癌の診断用キット、および膵臓癌を有するか疑われる対象での膵臓癌の存否を決定する方法または悪性度を決定する方法を提供する。前記膵臓癌診断用組成物またはキットは分析方法に適した一種類またはそれ以上の追加成分、溶液または装置をさらに含むことができる。
【００１６】
本発明のまた他の実施形態において、前記膵臓癌診断は、正常群と区別して膵臓癌を選別的に検出するか、多様な癌のうちの膵臓癌を選別的に検出するか、ＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ未満である膵臓癌を検出することができる。具体的に、前記膵臓癌診断用組成物またはキットは、正常群と膵臓癌患者群を区別して膵臓癌群を検出または診断するだけでなく、比較的に初期診断が難しい１期および２期の膵臓癌（ＰＤＡＣ）を区別して検出または診断することができ、癌以外の多様な膵臓関連疾患、例えば、膵臓炎および胆嚢炎と区別して膵臓癌を選別することができ、他の種類の癌、例えば乳癌、大腸癌および／または甲状腺癌などと区別して膵臓癌を選別的に検出または診断することができ、知られた膵臓癌診断マーカー、例えばＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ未満である膵臓癌をＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ未満である正常、膵臓炎および胆嚢炎などの膵臓関連疾患と区別されるように検出することができる。
【００１７】
前記マーカー遺伝子は、少なくとも３種類またはそれ以上のマーカー遺伝子の組み合わせであって、具体的に、
（ａ）ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）；
（ｂ）ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＬＲＧ１）；および
（ｃ）ＴＴＲ（Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ、ＡＴＴＲ、Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎ、ＴＢＰＡ）、Ｃ１Ｒ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ１ｒ  ｓｕｂｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）、ＣＬＵ（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ  ｐｒｅｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）およびＫＬＫＢ１（Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ）からなる群より選択された一つ以上のマーカー遺伝子を
含む膵臓癌診断用マーカーを含む。
【００１８】
前記他の目的を達成するために、本発明は、前記膵臓癌診断用組成物を含む膵臓癌診断用キットを提供する。
【００１９】
前記他の目的を達成するために、本発明は、膵臓癌発病有無を診断しようとする対象から試料を得る段階；
前記試料から少なくとも３種類またはそれ以上のマーカー遺伝子の組み合わせであって、具体的に（ａ）ＣＡ１９−９；（ｂ）ＬＲＧ１；および（ｃ）ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択されたいずれか一つ以上のマーカー遺伝子を含む膵臓癌マーカーの蛋白質の発現水準またはｍＲＮＡ発現水準をそれぞれ測定する段階；
前記対象から得られたマーカー遺伝子の発現水準をそれぞれ正常対照群試料での発現水準と比較して、前記膵臓癌発病有無を診断しようとする対象を膵臓癌または発病可能性の高い対象群と決定する段階を含む、膵臓癌の診断方法または膵臓癌診断の情報を提供する方法に関するものである。
【００２０】
前記決定する段階において、マーカー遺伝子の発現水準比較結果、対象でのＣＡ１９−９の発現水準が正常対照群での発現水準より高く、ＬＲＧ１の発現水準が正常対照群での発現水準より高く、ＴＴＲ蛋白質の発現水準またはＴＴＲ蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準が正常対照群での発現水準より低いか、Ｃ１Ｒ蛋白質の発現水準またはＣ１Ｒ蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準が正常対照群での発現水準より高いか、ＣＬＵ蛋白質の発現水準またはＣＬＵ蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準が正常対照群での発現水準より低いか、ＫＬＫＢ１蛋白質の発現水準またはＫＬＫＢ１蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準が正常対照群での発現水準より低い場合、膵臓癌発病可能性が高いと判定する段階を含む、膵臓癌の診断方法または膵臓癌診断のための情報を提供する方法を提供する。
【００２１】
本発明の追加の一例は、ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＬＲＧ１）を含む膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）マーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物に関するものである。前記ＩＰＭＮマーカーは、ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種以上のマーカーを追加的に含むことができる。例えば、前記ＩＰＭＮマーカーは、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種のマーカーとＬＲＧ１を含むマーカーであるか、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された２種のマーカーとＬＲＧ１を含む組み合わせマーカーであり得る。
【００２２】
本発明の追加の一例は、ＣＬＵ（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ  ｐｒｅｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）；および
ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＬＲＧ１）、ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、ＴＴＲ（Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ、ＡＴＴＲ、Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎ、ＴＢＰＡ）、Ｃ１Ｒ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ１ｒ  ｓｕｂｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）およびＫＬＫＢ１（Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ；）からなる群より選択された一つ以上のマーカーを含むＩＰＭＮマーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物に関するものである。例えば、前記ＩＰＭＮマーカーは、ＬＲＧ１、ＣＡ１９−９、ＴＴＲ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種のマーカーとＣＬＵを含む組み合わせマーカー、またはＬＲＧ１、ＣＡ１９−９、ＴＴＲ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された２種のマーカーとＬＲＧ１を含む組み合わせマーカーであり得る。
【００２３】
本発明による一例は、対象の試料に対して、前記ＩＰＭＮマーカー蛋白質の発現水準またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準をそれぞれ測定する段階、
前記測定されたマーカーの発現水準を、対照群マーカーの発現水準と比較する段階、および
前記マーカー発現水準の比較結果を用いて前記対象の高危険ＩＰＭＮ有無を決定する段階を含む、
高危険群ＩＰＭＮを診断する方法に関するものである。
【発明の効果】
【００２４】
本発明は、膵臓癌の診断マーカーを提供することによって、膵臓癌の発病可能性、早期診断および病気程度を有意的に予測または把握することができ、膵臓癌の腫瘍形成研究に活用することができる。また、本発明の診断方法は、非侵襲的に血液などから簡単に膵臓癌を早期診断することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）による対照群および膵臓癌患者群でのＣＡ１９−９蛋白質の発現量を示すグラフである。
【図２】ＭＲＭ定量分析による対照群および膵臓導管腺癌腫患者群のＬＲＧ１蛋白質の発現量を示すグラフである。
【図３】ＭＲＭ定量分析による対照群および膵臓導管腺癌腫患者群のＴＴＲ蛋白質の発現量を示すグラフである。
【図４】ＭＲＭ定量分析による対照群および膵臓導管腺癌腫患者群のＣ１Ｒ蛋白質の発現量を示すグラフである。
【図５】ＭＲＭ定量分析による対照群および膵臓導管腺癌腫患者群のＣＬＵ蛋白質の発現量を示すグラフである。
【図６】ＭＲＭ定量分析による対照群および膵臓導管腺癌腫患者群のＫＬＫＢ１蛋白質の発現量を示すグラフである。
【図７】ＥＬＩＳＡ定量分析による対照群および膵臓導管腺癌腫患者群のＬＲＧ１蛋白質の発現量を示すグラフである。
【図８】ＥＬＩＳＡ定量分析による対照群および膵臓導管腺癌腫患者群のＴＴＲ蛋白質の発現量を示すグラフである。
【図９】ＥＬＩＳＡ定量分析による対照群および膵臓導管腺癌腫患者群のＣＬＵ蛋白質の発現量を示すグラフである。
【図１０】免疫比濁法（ｉｍｍｕｎｏｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ）による対照群および膵臓導管腺癌腫患者群のＴＴＲ蛋白質の発現量を示すグラフである。
【図１１】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図１２】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌初期病期診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図１３】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌とその他の癌の区分のための診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図１４】ＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ以下である実験群を対象にして、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図１５】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって測定された。
【図１６】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌初期病期診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって測定された。
【図１７】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌とその他の癌の区分のための診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって測定された。
【図１８】ＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ以下である実験群を対象にして、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって測定された。
【図１９】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって、ＴＴＲ蛋白質は免疫比濁法によって測定された。
【図２０】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌初期病期診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって、ＴＴＲ蛋白質は免疫比濁法によって測定された。
【図２１】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌とその他の癌の区分のための診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって、ＴＴＲ蛋白質は免疫比濁法によって測定された。
【図２２】ＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ以下である実験群を対象にして、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって、ＴＴＲ蛋白質は免疫比濁法によって測定された。
【図２３】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図２４】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌初期病期診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図２５】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌とその他の癌の区分のための診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図２６】ＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ以下である実験群を対象にして、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図２７】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図２８】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌初期病期診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図２９】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌とその他の癌の区分のための診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図３０】ＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ以下である実験群を対象にして、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図３１】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって測定された。
【図３２】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌初期病期診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって測定された。
【図３３】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌とその他の癌の区分のための診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって測定された。
【図３４】ＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ以下である実験群を対象にして、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって測定された。
【図３５】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図３６】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌初期病期診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図３７】ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌とその他の癌の区分のための診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図３８】ＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ以下である実験群を対象にして、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１蛋白質を同時に使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時とＣＡ１９−９およびＴＴＲの２種類マーカーの組み合わせ使用時の膵臓癌診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図３９】ＬＲＧ１蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図４０】（ＬＲＧ１＋ＣＡ１９−９）、（ＬＲＧ１＋ＴＴＲ）、（ＬＲＧ１＋ＣＬＵ）、（ＬＲＧ１＋Ｃ１Ｒ）、または（ＬＲＧ１＋ＫＬＫＢ１）の２種類組み合わせ蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、ＣＬＵ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図４１】図４０の続きである。
【図４２】図４１の続きである。
【図４３】図４２の続きである。
【図４４】図４３の続きである。
【図４５】（ＬＲＧ１＋ＣＡ１９−９＋ＴＴＲ）、（ＬＲＧ１＋ＣＡ１９−９＋ＣＬＵ）、（ＬＲＧ１＋ＣＡ１９−９＋Ｃ１Ｒ）および（ＬＲＧ１＋ＣＡ１９−９＋ＫＬＫＢ１）の３種類組み合わせ蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、ＣＬＵ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図４６】図４５の続きである。
【図４７】図４６の続きである。
【図４８】図４７の続きである。
【図４９】（ＬＲＧ１＋ＴＴＲ＋ＣＬＵ）、（ＬＲＧ１＋ＴＴＲ＋Ｃ１Ｒ）、（ＬＲＧ１＋ＴＴＲ＋ＫＬＫＢ１）、（ＬＲＧ１＋ＣＬＵ＋Ｃ１Ｒ）、（ＬＲＧ１＋ＣＬＵ＋ＫＬＫＢ１）、および（ＬＲＧ１＋Ｃ１Ｒ＋ＫＬＫＢ１）の３種類組み合わせ蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、ＣＬＵ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図５０】図４９の続きである。
【図５１】図５０の続きである。
【図５２】図５１の続きである。
【図５３】図５２の続きである。
【図５４】図５３の続きである。
【図５５】（ＣＬＵ＋ＣＡ１９−９）、（ＣＬＵ＋ＴＴＲ）および（ＣＬＵ＋ＫＬＫＢ１）の２種類組み合わせ蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＴＴＲ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図５６】図５５の続きである。
【図５７】図５６の続きである。
【図５８】（ＣＬＵ＋ＣＡ１９−９＋ＴＴＲ）、（ＣＬＵ＋ＣＡ１９−９＋Ｃ１Ｒ）、（ＣＬＵ＋ＣＡ１９−９＋ＫＬＫＢ１）、（ＣＬＵ＋ＴＴＲ＋Ｃ１Ｒ）、（ＣＬＵ＋ＴＴＲ＋ＫＬＫＢ１）、および（ＣＬＵ＋Ｃ１Ｒ＋ＫＬＫＢ１）の３種類組み合わせ蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、ＣＬＵ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図５９】図５８の続きである。
【図６０】図５９の続きである。
【図６１】図６０の続きである。
【図６２】図６１の続きである。
【図６３】図６２の続きである。
【図６４】ＬＲＧ１蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の低危険群ＩＰＭＮと区別される高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図６５】（ＬＲＧ１＋ＣＡ１９−９）、（ＬＲＧ１＋ＴＴＲ）、（ＬＲＧ１＋ＣＬＵ）、（ＬＲＧ１＋Ｃ１Ｒ）、および（ＬＲＧ１＋ＫＬＫＢ１）の２種類組み合わせマーカー蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の低危険群ＩＰＭＮと区別される高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、ＣＬＵ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図６６】図６５の続きである。
【図６７】図６６の続きである。
【図６８】図６７の続きである。
【図６９】図６８の続きである。
【図７０】（ＣＡ１９−９＋ＬＲＧ１＋ＴＴＲ）、（ＣＡ１９−９＋ＬＲＧ１＋Ｃ１Ｒ）、（ＣＡ１９−９＋ＬＲＧ１＋ＣＬＵ）、および（ＣＡ１９−９＋ＬＲＧ１＋ＫＬＫＢ１）の３種類組み合わせマーカー蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の低危険群ＩＰＭＮと区別される高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、ＣＬＵ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図７１】図７０の続きである。
【図７２】図７１の続きである。
【図７３】図７２の続きである。
【図７４】（ＬＲＧ１＋ＴＴＲ＋ＣＬＵ）、（ＬＲＧ１＋ＴＴＲ＋Ｃ１Ｒ）、（ＬＲＧ１＋ＴＴＲ＋ＫＬＫＢ１）、（ＬＲＧ１＋ＣＬＵ＋Ｃ１Ｒ）、（ＬＲＧ１＋ＣＬＵ＋ＫＬＫＢ１）および（ＬＲＧ１＋Ｃ１Ｒ＋ＫＬＫＢ１）の３種類組み合わせマーカー蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の低危険群ＩＰＭＮと区別される高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、ＣＬＵ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図７５】図７４の続きである。
【図７６】図７５の続きである。
【図７７】図７６の続きである。
【図７８】図７７の続きである。
【図７９】図７８の続きである。
【図８０】（ＣＬＵ＋ＣＡ１９−９）、（ＣＬＵ＋ＴＴＲ）、（ＣＬＵ＋Ｃ１Ｒ）および（ＣＬＵ＋ＫＬＫＢ１）の２種類組み合わせマーカー蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の低危険群ＩＰＭＮと区別される高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、ＣＬＵ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図８１】図８０の続きである。
【図８２】図８１の続きである。
【図８３】図８２の続きである。
【図８４】（ＣＬＵ＋ＣＡ１９−９＋ＴＴＲ）、（ＣＬＵ＋ＣＡ１９−９＋Ｃ１Ｒ）、（ＣＬＵ＋ＣＡ１９−９＋ＫＬＫＢ１）、（ＣＬＵ＋ＴＴＲ＋Ｃ１Ｒ）、（ＣＬＵ＋ＴＴＲ＋ＫＬＫＢ１）および（ＣＬＵ＋Ｃ１Ｒ＋ＫＬＫＢ１）の３種類組み合わせマーカー蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の低危険群ＩＰＭＮと区別される高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、ＣＬＵ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。
【図８５】図８４の続きである。
【図８６】図８５の続きである。
【図８７】図８６の続きである。
【図８８】図８７の続きである。
【図８９】図８８の続きである。
【図９０】ＬＲＧ１蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の低危険群ＩＰＭＮと区別される高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１蛋白質はＥＬＩＳＡ分析によって測定された。
【図９１】（ＬＲＧ１＋ＣＡ１９−９）、（ＬＲＧ１＋ＴＴＲ）および（ＬＲＧ１＋ＣＬＵ）の２種類組み合わせマーカー蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の低危険群ＩＰＭＮと区別される高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、ＣＬＵ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＥＬＩＳＡ分析によって測定された。
【図９２】図９１の続きである。
【図９３】図９２の続きである。
【図９４】（ＬＲＧ１＋ＣＡ１９−９＋ＴＴＲ）、（ＬＲＧ１＋ＣＡ１９−９＋ＣＬＵ）、（ＬＲＧ１＋ＣＡ１９−９＋ＴＴＲ＋ＣＬＵ）および（ＬＲＧ１＋ＴＴＲ＋ＣＬＵ）の組み合わせマーカー蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の低危険群ＩＰＭＮと区別される高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、ＣＬＵ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＥＬＩＳＡ分析によって測定された。
【図９５】図９４の続きである。
【図９６】図９５の続きである。
【図９７】図９６の続きである。
【図９８】（ＣＬＵ＋ＣＡ１９−９）、（ＣＬＵ＋ＴＴＲ）および（ＣＬＵ＋ＣＡ１９−９＋ＴＴＲ）の組み合わせマーカー蛋白質を使用した時とＣＡ１９−９蛋白質を単独で使用した時の低危険群ＩＰＭＮと区別される高危険群ＩＰＭＮの診断性能（ＡＵＣおよび検出敏感度）を比較したものである。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、ＣＬＵ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１蛋白質はＥＬＩＳＡ分析によって測定された。
【図９９】図９８の続きである。
【図１００】図９９の続きである。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明において、用語“膵臓癌（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）”とは、膵臓細胞に起源する癌（癌腫）または腫瘍を意味する。膵臓癌には様々な種類があり、手術的切除によって治療可能な良性腫瘍から予後が非常に良くない悪性腫瘍に至るまで多様な種類を含み、良性腫瘍、悪性腫瘍、そして良性や悪性に変化する場合などを含む。例えば、膵臓癌の悪性腫瘍としては膵管細胞から発生した膵管腺癌腫（Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｄｕｃｔａｌ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ、ＰＤＡＣ）が膵臓癌の約９０％程度を占めていて一般に膵臓癌といえば膵管腺癌腫を意味する狭い意味として使用される場合もあるが、それ以外の多様な種類の膵臓癌、例えば神経内分泌腫瘍（ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｔｕｍｏｒ）および腺房細胞癌腫（ａｃｉｎａｒ  ｃｅｌｌ  ｔｕｍｏｒ）を含む。また他の例として、代表的な嚢胞性腫瘍として漿液性嚢胞性腫瘍、粘液性嚢胞性腫瘍、膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）、固形偽乳頭腫瘍などを含む。
【００２７】
好ましくは、前記膵臓癌は、膵管腺癌腫またはＩＰＭＮであり得、前記膵管腺癌腫は多様な原因によって発生でき、例えば、ＩＰＭＮに由来した膵管腺癌腫であるかＩＰＭＮと関係なく発生でき、またはＩＰＭＮ−由来膵管腺癌腫を除くこともできる。
ＷＨＯの腫瘍分類ではＩＰＭＮを、主膵管またはその主要分枝から発生する腫瘍であって上皮が体腔内に乳頭状に成長し多様な程度に粘液を分泌して膵管が嚢胞性に拡張することが特徴である腫瘍であると定義している。
【００２８】
ＩＰＭＮは、形態学的に主膵管のびまん性拡張、粘液や腫瘤による非整形の陰影欠損、副膵管の嚢胞性拡張、乳頭開口部の拡大および多量の粘液が乳頭開口部から排出される所見などで特徴づけられ、組織学的には膵管内に粘液を分泌する細胞の乳頭状成長を特徴とし、良性から悪性まで多様なスペクトルを有する疾患である。ＩＰＭＮは、腫瘍が発生する位置と病変の範囲によって主膵管型（ｍａｉｎ  ｄｕｃｔ  ｔｙｐｅ）、分枝膵管型（ｂｒａｎｃｈ  ｄｕｃｔ  ｔｙｐｅ）、混合型（ｍｉｘｅｄ  ｔｙｐｅ）に分けられる。
【００２９】
ＩＰＭＮの予後を決定する因子は、侵襲性、リンパ節転移、血管侵襲、組織学的所見、切除縁の組織学的所見などであり、このうちの最も重要なものは侵襲性である。侵襲性癌が発生する前のＩＰＭＮは治癒可能な疾患であるが、侵襲性癌が発生した後のＩＰＭＮは残存膵臓や膵臓外組織に再発が５０−９０％で発生する。ＩＰＭＮは治癒的切除後にも残存膵臓に再発が可能であるため、長期的に追跡観察が必要であり、生存率を高めるためには適切な処置が必要である。
【００３０】
したがって、ＩＰＭＮの悪性度評価は以後予後観察および処置方法の選択において非常に重要であり、通常ＩＰＭＮの悪性度は手術後顕微鏡的組織検査を通じて区分され、軽異形成（Ｌｏｗ）、中等異形成（Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ）、高異形成（Ｈｉｇｈ  ｇｒａｄｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）、浸潤癌を伴うＩＰＭＮ（ＩＰＭＮ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｎ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）に分けられ、羅列した順に悪性度が高まる。周辺ｓｔｒｏｍａ（基質）の浸潤がある浸潤癌（ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）の部分は膵臓癌において最もありふれている形態の癌腫である導管腺癌（ｄｕｃｔａｌ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）の形態や粘液性非嚢胞性癌（ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｏｎｃｙｓｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）（膠様癌（ｃｏｌｌｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ））の形態を示すことができる。
【００３１】
本発明において、前記ＩＰＭＮの悪性度および／または浸潤性によって高異形成（Ｈｉｇｈ  ｇｒａｄｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）と侵襲型（ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｔｙｐｅ）を悪性亜型（ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｓｕｂｔｙｐｅ）または高危険（Ｈｉｇｈ  ｒｉｓｋ）ＩＰＭＮと定義し、軽異形成（（Ｌｏｗ）および中等異形成（Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｇｒａｄｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）を低危険（ｌｏｗ  ｒｉｓｋ）ＩＰＭＮに区分してこれら悪性度を区分する方法および組成物、キットを提供する。本発明による膵臓癌関連マーカーは低危険群ＩＰＭＮと区別して高危険群ＩＰＭＮを選別することができる。
【００３２】
また、本発明は前記膵臓癌診断用組成物を含む膵臓癌診断用キットを提供する。好ましくは、前記キットはＲＴ−ＰＣＲキット、ＤＮＡチップキット、ＥＬＩＳＡキット、蛋白質チップキット、ラピッド（ｒａｐｉｄ）キットまたはＭＲＭ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）キットであり得る。
【００３３】
本発明で使用された用語“診断”は、特定疾病または疾患に対する対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）の感受性（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ）を判定すること、対象が特定疾病または疾患を現在有しているかどうかを判定すること、特定疾病または疾患にかかった対象の予後（ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ）（例えば、前−転移性または転移性癌状態の同定、癌の段階決定または治療に対する癌の反応性決定）を判定すること、またはセラメトリクス（ｔｈｅｒａｍｅｔｒｉｃｓ）（例えば、治療効能に対する情報を提供するために客体の状態をモニターすること）を含む。好ましくは、本明細書において診断は膵臓癌発病有無または発病可能性（危険性）を確認することである。
【００３４】
本発明で使用された用語“マーカー”、“バイオマーカー”または“診断用マーカー”とは、正常または病的な状態を区分することができるか、治療反応を予測することができ、客観的に測定することができる標識子を意味する。特に、本発明において膵臓癌に関しては、正常対照群（膵臓癌でない個体）に比べて膵臓癌を有するか膵臓癌発病可能性（危険性）がある個体において蛋白質発現水準または遺伝子発現水準が有意的に増加するか減少する様相を呈する、ポリペプチドまたは核酸（例：ｍＲＮＡなど）、脂質、糖脂質、糖蛋白質、糖（単糖類、二糖類、オリゴ糖類など）などのような有機生体分子などを意味する。
【００３５】
本発明は、（ａ）ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）の発現水準を測定する製剤、（ｂ）ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １）の発現水準を測定する製剤、および（ｃ）ＴＴＲ（Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ、ＡＴＴＲ、Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎ、ＴＢＰＡ）；Ｃ１Ｒ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ１ｒ  ｓｕｂｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）、ＣＬＵ（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ  ｐｒｅｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）およびＫＬＫＢ１（Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ）からなる群より選択されたいずれか一つ以上のマーカー発現水準を測定する製剤を含む、膵臓癌診断マーカーの蛋白質発現水準または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む膵臓癌診断用組成物を提供する。
【００３６】
本発明は、少なくとも３種類以上のマーカーの組み合わせ、例えば（ａ）ＣＡ１９−９；（ｂ）ＬＲＧ１；および（ｃ）ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択されたいずれか一つとの組み合わせられたマーカー遺伝子を活用することによって、対象から膵臓癌の発病有無または発病可能性有無を効果的に診断するすることができる。
【００３７】
本発明で膵臓癌診断用マーカーとして使用されるＣＡ１９−９蛋白質は、従来使用されている膵臓癌マーカーであって、消化器系の癌の予後判定のための腫瘍標識子検査に用いることができる。
【００３８】
本発明で用いた他の膵臓癌診断用マーカーであるＬＲＧ１蛋白質は、血管形成に関与し、子宮内膜癌、肺ガンなどと関連がある。ＬＲＧ１は、ＮＣＢＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＃ＮＰ＿４４３２０４．１であり得る。
【００３９】
本発明で使用可能な膵臓癌診断用マーカーは、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種以上であり得る。ＴＴＲ蛋白質は、１２７個のアミノ酸残基から構成された小単位が血液中で４合体を形成する血漿蛋白質の一つであって甲状腺ホルモンを脳に輸送する役割を果たし、アルツハイマー、乳癌、卵巣ガン、胃ガンなどと関連がある。Ｃ１Ｒ蛋白質は、補体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）システムのうちの一番先に発見されたものであって、体内免疫作用と関連があり、アルツハイマーおよび腎臓癌と関連がある。ＣＬＵ蛋白質は、血液内蛋白質の凝固を防止する役割を果たすと知られており、アルツハイマー、肺ガンなどと関連がある。ＫＬＫＢ１蛋白質は、血液凝固に関与し、高血圧および肺ガンと関連がある。
【００４０】
具体的な例として、ＴＴＲはＮＣＢＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＃ＮＰ＿０００３６２．１であり、Ｃ１ＲはＮＣＢＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＃ＮＰ＿００１７２４．３であり、ＣＬＵはＮＣＢＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＃ＮＰ＿００１８２２．３であり、ＫＬＫＢ１はＮＣＢＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＃ＮＰ＿０００８８３．２であり得る。
【００４１】
本発明者らは膵臓導管腺癌腫（Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｄｕｃｔａｌ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ、ＰＤＡＣ）患者、膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）患者、および慢性胆嚢炎（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｉｔｉｓ）患者個体の血漿試料を分析し、下記表１のような方法でＣＡ１９−９およびＬＲＧ１とＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵ、ＫＬＫＢ１のうちの一つから構成される３種類のマーカー遺伝子の組み合わせを用いて、前記疾病がない個体である正常対照群の血漿試料を分析し、前記バイオマーカー組み合わせの有効性を確立した。
【００４２】
【表１】
2018141795.tif 000003
【００４３】
本発明に使用された用語、“蛋白質の発現水準測定”とは、膵臓癌を診断するために生物学的試料において膵臓癌診断用マーカー（蛋白質）またはこれを暗号化する遺伝子の存在有無と発現程度を確認する過程を意味する。
【００４４】
前記蛋白質の発現水準測定または比較分析方法としては、蛋白質チップ分析、免疫測定法、リガンド結合法、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｍａｔｒｉｘ  Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｓｕｌｆａｃｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、放射免疫測定、放射免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動、組織免疫染色、補体結合分析法、二次元電気泳動分析、液体クロマトグラフィー−質量分析（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、ＬＣ−ＭＳ）、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ／Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ウエスタンブロッティングおよびＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ）などがあるが、これに制限されるわけではない。
【００４５】
本発明による膵臓癌診断用組成物において、ＣＡ１９−９蛋白質、ＬＲＧ１蛋白質、ＴＴＲ蛋白質、Ｃ１Ｒ蛋白質、ＣＬＵ蛋白質またはＫＬＫＢ１蛋白質の発現水準を測定する製剤は、ＣＡ１９−９蛋白質、ＬＲＧ１蛋白質、ＴＴＲ蛋白質、Ｃ１Ｒ蛋白質、ＣＬＵ蛋白質またはＫＬＫＢ１蛋白質にそれぞれ特異的に結合する抗体、オリゴペプチド、リガンド、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）またはアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を含むことができる。
【００４６】
本発明に使用された用語“抗体”は抗原と特異的に結合して抗原−抗体反応を起こす物質を示す。本発明の目的上、抗体は、ＣＡ１９−９蛋白質、ＬＲＧ１蛋白質、ＴＴＲ蛋白質、Ｃ１Ｒ蛋白質、ＣＬＵ蛋白質またはＫＬＫＢ１蛋白質に対してそれぞれ特異的に結合する抗体を意味する。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体および組換え抗体を全て含む。前記抗体は当業界に広く公知された技術を用いて容易に製造することができる。例えば、ポリクローナル抗体は、前記膵臓癌マーカー蛋白質抗原を動物に注射し動物から採血して抗体を含む血清を収得する過程を含む当業界に広く公知された方法によって生産することができる。このようなポリクローナル抗体は、ヤギ、ウサギ、羊、猿、馬、豚、牛、犬などの任意の動物から製造することができる。また、モノクローナル抗体は、当業界に広く公知されたハイブリドーマ方法（ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ｍｅｔｈｏｄ；ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７６）Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ６：５１１−５１９参照）、またはファージ抗体ライブラリー技術（Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８、１９９１；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８、１−５９７、１９９１参照）を用いて製造することができる。前記方法で製造された抗体は、ゲル電気泳動、透析、塩沈殿、イオン交換クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィーなどの方法を用いて分離、精製することができる。また、本発明の抗体は２個の全長の軽鎖および２個の全長の重鎖を有する完全な形態だけでなく、抗体分子の機能的な断片を含む。抗体分子の機能的な断片とは、少なくとも抗原結合機能を有している断片を意味し、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖなどがある。
【００４７】
本発明に使用された用語“ＰＮＡ（Ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）”は人工的に合成された、ＤＮＡまたはＲＮＡと似た重合体を示し、１９９１年デンマークコペンハーゲン大学のＮｉｅｌｓｅｎ、Ｅｇｈｏｌｍ、ＢｅｒｇとＢｕｃｈａｒｄｔ教授によって始めて紹介された。ＤＮＡはリン酸−リボス糖骨格を有するに反して、ＰＮＡはペプチド結合によって連結された繰り返されたＮ−（２−アミノエチル）−グリシン骨格を有し、これによってＤＮＡまたはＲＮＡに対する結合力と安定性が大きく増加し、分子生物学、診断分析およびアンチセンス治療法に使用されている。ＰＮＡは、文献［Ｎｉｅｌｓｅｎ  ＰＥ，  Ｅｇｈｏｌｍ  Ｍ，  Ｂｅｒｇ  ＲＨ，  Ｂｕｃｈａｒｄｔ  Ｏ（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １９９１）．“Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＤＮＡ  ｂｙ  ｓｔｒａｎｄ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ａ  ｔｈｙｍｉｎｅ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｐｏｌｙａｍｉｄｅ”．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５４（５０３７）：１４９７−５００］に詳細に開示されている。
【００４８】
本発明において“アプタマー”はオリゴ核酸またはペプチド分子であり、アプタマーの一般的な内容は文献［Ｂｏｃｋ  ＬＣ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３５５（６３６０）：５６４６（１９９２）；Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ  Ｆ，  Ｂｕｔｚ  Ｋ  “Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｐｔａｍｅｒｓ：ｐｏｗｅｒｆｕｌ  ｎｅｗ  ｔｏｏｌｓ  ｆｏｒ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ”．  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ７８（８）：４２６３０（２０００）；Ｃｏｈｅｎ  ＢＡ，  Ｃｏｌａｓ  Ｐ，  Ｂｒｅｎｔ  Ｒ．  “Ａｎ  ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  ｃｅｌｌ−ｃｙｃｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｌｉｂｒａｒｙ”．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ９５（２４）：１４２７２７（１９９８）］に詳細に開示されている。
【００４９】
本発明に使用された用語“ｍＲＮＡの発現水準測定”とは、膵臓癌を診断するために生物学的試料において膵臓癌診断用蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ存在有無と発現程度を確認する過程であって、ｍＲＮＡの量を測定することを意味する。
【００５０】
そのための分析方法としては、逆転写重合酵素反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、競合的逆転写重合酵素反応（Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  ＲＴ−ＰＣＲ）、リアルタイム逆転写重合酵素反応（Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲ）、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ（ＲＰＡ；ＲＮａｓｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）、ノーザンブロッティング（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、ＤＮＡチップなどがあるが、これに制限されるわけではない。
【００５１】
本発明による膵臓癌診断用組成物において、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵまたはＫＬＫＢ１蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤は、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵまたはＫＬＫＢ１蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡにそれぞれ特異的に結合するプライマー、プローブまたはアンチセンスヌクレオチドを含む。本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１蛋白質の情報はＵｎｉＰｒｏｔなどに知られているので、当業者であればこれに基づいて前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡにそれぞれ特異的に結合するプライマー、プローブまたはアンチセンスヌクレオチドを容易にデザインすることができる。
【００５２】
本発明で使用された用語“プライマー”は標的遺伝子配列を認知する断片であって、正方向および逆方向のプライマー対を含むが、好ましくは、特異性および敏感性を有する分析結果を提供するプライマー対である。プライマーの核酸配列が試料内存在する非−標的配列と不一致な配列であるため、相補的なプライマー結合部位を含有する標的遺伝子配列のみ増幅し非特異的増幅を誘発しないプライマーである時、高い特異性が付与され得る。
【００５３】
本発明で使用された用語“プローブ”とは試料内の検出しようとする標的物質と特異的に結合できる物質を意味し、前記結合を通じて特異的に試料内の標的物質の存在を確認することができる物質を意味する。プローブの種類は当業界で通常使用される物質であって制限はないが、好ましくはＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）、ＬＮＡ（ｌｏｃｋｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）、ペプチド、ポリペプチド、蛋白質、ＲＮＡまたはＤＮＡであり得、最も好ましくはＰＮＡである。より具体的に、前記プローブはバイオ物質として生物に由来するかこれと類似しているものまたは生体外で製造されたものを含むものであって、例えば、酵素、蛋白質、抗体、微生物、動植物細胞及び器官、神経細胞、ＤＮＡ、およびＲＮＡであり得、ＤＮＡはｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、オリゴヌクレオチドを含み、ＲＮＡはゲノムＲＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴヌクレオチドを含み、蛋白質の例としては抗体、抗原、酵素、ペプチドなどを含むことができる。
【００５４】
本発明で使用された用語“アンチセンス”はアンチセンスオリゴマーがワトソン−クリック塩基対の形成によってＲＮＡ内の標的配列と混成化されて、標的配列内で典型的にｍＲＮＡとＲＮＡ：オリゴマーヘテロ二重体の形成を許す、ヌクレオチド塩基の配列およびサブユニット間バックボーンを有するオリゴマーを意味する。オリゴマーは標的配列に対する正確な配列相補性または近似相補性を有し得る。
【００５５】
また、本発明は前記膵臓癌診断用組成物を含む膵臓癌診断用キットを提供する。例えば、前記キットはＲＴ−ＰＣＲキット、ＤＮＡチップキット、ＥＬＩＳＡキット、蛋白質チップキット、ラピッド（ｒａｐｉｄ）キットまたはＭＲＭ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）キットであり得る。
【００５６】
本発明による膵臓癌診断用組成物またはこれを含む診断用キットは、ＣＡ１９−９とＬＲＧ１そしてＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択されたいずれか一つ以上のマーカーを含む膵臓癌マーカーを使用することによって、ＣＡ１９−９の単独マーカーを使用する組成物またはキットやＣＡ１９−９とＬＲＧ１の２個のマーカーを使用する組成物またはキットに比べて診断性能が非常に優れる。
【００５７】
前記膵臓癌診断用キットは、分析方法に適した一種類またはそれ以上の他の構成成分組成物、溶液または装置をさらに含むことができる。
【００５８】
例えば、前記診断用キットは、逆転写重合酵素反応を行うために必要な必須要素をさらに含むことができる。逆転写重合酵素反応キットは、マーカー蛋白質を暗号化する遺伝子に対して特異的なプライマー対を含む。プライマーは前記遺伝子の核酸配列に特異的な配列を有するヌクレオチドであって、約７ｂｐ乃至５０ｂｐの長さ、より好ましくは約１０ｂｐ乃至３０ｂｐの長さを有し得る。また、対照群遺伝子の核酸配列に特異的なプライマーを含むことができる。その他、逆転写重合酵素反応キットは、テストチューブまたは他の適切な容器、反応緩衝液（ｐＨおよびマグネシウム濃度は多様）、デオキシヌクレオチド（ｄＮＴＰｓ）、Ｔａｑ−ポリメラーゼおよび逆転写酵素のような酵素、ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅ抑制剤ＤＥＰＣ−水（ＤＥＰＣ−ｗａｔｅｒ）、滅菌水などを含むことができる。
【００５９】
また、本発明の診断用キットは、ＤＮＡチップを遂行するために必要な必須要素を含むことができる。ＤＮＡチップキットは、遺伝子またはその断片に該当するｃＤＮＡまたはオリゴヌクレオチド（ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）が付着されている基板、および蛍光標識プローブを製作するための試薬、製剤、酵素などを含むことができる。また、基板は、対照群遺伝子またはその断片に該当するｃＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドを含むことができる。
【００６０】
また、本発明の診断用キットは、ＥＬＩＳＡを遂行するために必要な必須要素を含むことができる。ＥＬＩＳＡキットは前記蛋白質に対して特異的な抗体を含む。抗体はマーカー蛋白質に対する特異性および親和性が高く他の蛋白質に対する交差反応性が殆どない抗体であって、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体または組換え抗体である。また、ＥＬＩＳＡキットは対照群蛋白質に特異的な抗体を含むことができる。その他、ＥＬＩＳＡキットは結合された抗体を検出できる試薬、例えば、標識された２次抗体、発色団（ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｅｓ）、酵素（例：抗体とコンジュゲートされる）およびその基質または抗体と結合できる他の物質などを含むことができる。
【００６１】
また、本発明による膵臓癌診断用組成物またはこれを含む診断用キットは、膵臓癌患者と正常人を区分する用途以外にも、膵臓癌初期病期（１期または２期）の患者と正常人を区分する用途として使用することができる。
【００６２】
したがって、本発明は、（ａ）ＣＡ１９−９の発現水準を測定する製剤、（ｂ）ＬＲＧ１の発現水準を測定する製剤、および（ｃ）ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択されたいずれか一つ以上のマーカーの発現水準を測定する製剤を含む、膵臓癌初期病期、例えば１期または２期病期の膵臓癌診断用組成物を提供する。
【００６３】
また、本発明による膵臓癌診断用組成物またはこれを含む診断用キットは、膵臓癌患者と正常人を区分する用途以外にも、その他の癌患者から膵臓癌患者を選別的に検出する用途として使用することができる。したがって、本発明は、（ａ）ＣＡ１９−９の発現水準を測定する製剤、（ｂ）ＬＲＧ１の発現水準を測定する製剤、および（ｃ）ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択されたいずれか一つ以上のマーカーの発現水準を測定する製剤を含む膵臓癌とその他の癌を区分するための組成物を提供する。
【００６４】
さらに、本発明は、前記膵臓癌診断用組成物または前記膵臓癌診断用キットを用いて対象の膵臓癌診断する方法または膵臓癌診断の情報を提供する方法を提供する。前記診断方法は下記の段階を含む：
膵臓癌発病有無を診断しようとする対象から試料を得る段階；
前記対象試料から（ａ）ＣＡ１９−９、（ｂ）ＬＲＧ１および（ｃ）ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択されたいずれか一つ以上のマーカーを含む膵臓癌マーカーの蛋白質発現水準またはｍＲＮＡの発現水準を測定する段階；
前記対象試料の（ａ）ＣＡ１９−９、（ｂ）ＬＲＧ１および（ｃ）ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択されたいずれか一つ以上のマーカーを含む膵臓癌マーカーの発現水準を、それぞれ相応する正常対照群試料のマーカーの発現水準と比較する段階；および
前記マーカーの発現水準比較結果を用いて対象の膵臓癌有無を決定する段階。
【００６５】
本発明による対象の膵臓癌診断する方法または膵臓癌診断の情報を提供する方法に適用される前記“対象”は膵臓癌の発病有無を診断しようとする対象であって患者、患者疑い群または正常群を含み、例えば、癌診断を受けない健康人であって健康検診でＰＤＡＣを早期診断しようとする対象であるか、膵臓癌患者のうちの手術によって癌が除去された患者の同種癌再発を診断するための定期的な検査のための対象を含む。一実施形態では前記対象は哺乳類を、他の実施形態ではヒトを意味するものであり得る。
【００６６】
前記マーカーの発現水準比較結果を用いて対象の膵臓癌有無を決定する段階は、具体的に膵臓癌発病有無を診断しようとする対象でのＣＡ１９−９蛋白質の発現水準またはＣＡ１９−９蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準が正常対照群での発現水準より高く、ＬＲＧ１蛋白質の発現水準またはＬＲＧ１蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＮＲＡ発現水準が正常対照群での発現水準より高く、ＴＴＲ蛋白質の発現水準またはＴＴＲ蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準が正常対照群での発現水準より低いか、Ｃ１Ｒ蛋白質の発現水準またはＣ１Ｒ蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準が正常対照群での発現水準より高いか、ＣＬＵ蛋白質の発現水準またはＣＬＵ蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準が正常対照群での発現水準より低いか、ＫＬＫＢ１蛋白質の発現水準またはＫＬＫＢ１蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準が正常対照群での発現水準より低い場合に膵臓癌発病可能性が高いと判定することができる。
【００６７】
前記方法において“試料”とは、生物学的試料（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓａｍｐｌｅ）であって膵臓癌発病によって蛋白質発現水準または遺伝子発現水準に差がある組織、細胞、血液、血清、血漿、唾液、脳脊髄液または尿のような試料などを意味し、好ましくは血液、血清または血漿を意味する。
【００６８】
前記ＣＡ１９−９およびＬＲＧ１蛋白質または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡは膵臓癌患者での発現水準が正常対照群での発現水準と比較して増加し、ＴＴＲ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１蛋白質または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡは膵臓癌患者での発現水準が正常対照群での発現水準と比較して減少し、Ｃ１Ｒ蛋白質または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡは膵臓癌患者での発現水準が正常対照群での発現水準と比較して増加するので、膵臓癌発病有無を診断しようとする対象での前記（ａ）ＣＡ１９−９、（ｂ）ＬＲＧ１および（ｃ）ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択されたいずれか一つを含むマーカーの蛋白質または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準を測定することによって膵臓癌発病可能性を判定することができる。
【００６９】
例えば、ＣＡ１９−９およびＬＲＧ１蛋白質または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの膵臓癌患者での発現水準が正常対照群での発現水準と比較して増加し、ＴＴＲ蛋白質または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの膵臓癌患者での発現水準が正常対照群での発現水準と比較して減少する場合に、前記対象は膵臓癌発病可能性が高いと判定することができる。
【００７０】
前記‘膵臓癌発病有無を診断しようとする対象でのＣＡ１９−９蛋白質の発現水準または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準が正常対照群での発現水準より高い’とは、多様な方法によって測定される時、膵臓癌発病有無を診断しようとする対象でのＣＡ１９−９蛋白質の発現水準または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準が正常対照群での発現水準より１．０倍を超過、１．５倍を超過、２倍を超過、３倍を超過、５倍を超過または１０倍を超過することを意味する。前記表現は、ＬＲＧ１またはＣ１Ｒ蛋白質の発現水準または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準を称する時に同様に適用される。
【００７１】
また、前記‘膵臓癌発病有無を診断しようとする対象でのＴＴＲ蛋白質の発現水準または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準が正常対照群での発現水準より低い’とは、多様な方法によって測定される時、膵臓癌発病有無を診断しようとする対象でのＴＴＲ蛋白質の発現水準または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準が正常対照群での発現水準より０．１倍未満、０．２倍未満、０．３倍未満、０．５倍未満または１倍未満であることを意味する。前記表現は、ＣＬＵまたはＫＬＫＢ１蛋白質の発現水準または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準を称する時に同様に適用される。
【００７２】
一つの実施形態において、前記‘膵臓癌発病可能性が高いと判定すること’は、膵臓癌診断関数を用いて行うことができる。前記膵臓癌診断関数の例としては下記関数式１が挙げられる：
＜関数式１＞
【００７３】
【数１】
2018141795.tif 000004
【００７４】
上記の式において、
ｘは、膵臓癌診断用マーカーの発現水準測定値、
αｉは、ＳＶＭにおけるラグランジュ乗数、
ｙｉは、正常群／膵臓癌群の識別子、
ｘｉは、基準測定値を、そして
ｂは、補正値を意味する。
【００７５】
前記関数は、ＳＶＭ（Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｍａｃｈｉｎｅ）から導出される。ＳＶＭは、ラグランジュ最適化理論（Ｌａｇｒａｎｇｉａｎ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｔｈｅｏｒｙ）に基づいて与えられた条件を満足する関数を推定するアルゴリズムであって、このうちの最大マージン分類子（Ｍａｘｉｍｕｍ  ｍａｒｇｉｎ  ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ）を使用する分類分析方法を適用する場合をサポートベクター分類（Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ、ＳＶＣ）という。前記関数にＣＡ１９−９およびＬＲＧ１と、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１のうちのいずれか一つのＭＲＭ相対測定値を代入した時、関数値が１であれば膵臓癌発病可能性が高いと診断し、関数値が−１であれば正常と診断する。
【００７６】
本発明の方法は、膵臓癌発病可能性をＣＡ１９−９およびＬＲＧ１と、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１のうちのいずれか一つの蛋白質またはそのｍＲＮＡの発現数値を膵臓癌診断関数に代入してその結果で膵臓癌発病可能性を直ちに判定することができるところ、医師の臨床学的判断が必要でない。
【００７７】
本研究では診断関数をＳＶＭで構築したが、これは用途によってニューラルネットワーク（Ｎｅｕｒａｌ  Ｎｅｔｗｏｒｋ）、ランダムフォレスト（Ｒａｎｄｏｍ  Ｆｏｒｅｓｔ）などの様々な機械学習法（Ｍａｃｈｉｎｅ  Ｌｅａｒｎｉｎｇ）をはじめとする様々の種類の判別関数構築法（Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｎｔ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）で実現され得る。
【００７８】
また、（ａ）膵臓癌発病有無を診断しようとする対象から試料を得る段階；（ｂ）前記試料からＣＡ１９−９蛋白質の発現水準またはＣＡ１９−９蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準、およびＬＲＧ１蛋白質の発現水準またはＬＲＧ１蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準を測定する段階；（ｃ）前記試料からＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択されたいずれか一つの蛋白質の発現水準または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する段階；および（ｄ）前記（ｂ）および（ｃ）で測定された数値を下記関数式１に代入して膵臓癌発病可能性を判定する段階を含む、膵臓癌の診断方法を提供する：
＜関数式１＞
【００７９】
【数２】
2018141795.tif 000005
【００８０】
上記の式において、ｘはＣＡ１９−９およびＬＲＧ１と、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１のうちのいずれか一つの蛋白質の新規測定値を、αｉはＳＶＭにおけるラグランジュ乗数を、ｙｉは正常群／膵臓癌群の識別子を、ｘｉは基準測定値を、そしてｂは補正値を意味する。
【００８１】
本発明の方法において、前記蛋白質発現水準は、該当蛋白質にそれぞれ特異的に結合する抗体を用いて測定および比較することができる。前記抗体と生物学的試料内の該当蛋白質が抗原−抗体複合体を形成するようにして、これを検出する方法を用いる。
【００８２】
本発明で使用された用語“抗原−抗体複合体”は、生物学的試料中の該当遺伝子の存在または不存在を確認するための蛋白質抗原とこれを認知する抗体の結合物を意味する。前記抗原−抗体複合体の検出は、当業界に公知されたような方法、例えば分光学的、光化学的、生物化学的、免疫化学的、電気的、吸光的、化学的およびその他の方法を用いて検出することができる。
【００８３】
本発明の目的上、前記蛋白質発現水準測定または比較分析方法としては、蛋白質チップ分析、免疫測定法、リガンドバインディングアッセイ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｍａｔｒｉｘ  Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｓｕｌｆａｃｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、放射免疫測定、放射免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動、組織免疫染色、補体結合分析法、二次元電気泳動分析、液体クロマトグラフィー−質量分析（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、ＬＣ−ＭＳ）、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ／Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ウエスタンブロットおよびＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）などがあるが、これに制限されるわけではない。
【００８４】
本発明において、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１蛋白質それぞれの発現水準自体を測定および比較するために、ＬＣ−ＭＲＭ方法を用いることができる。
【００８５】
具体的に、生物学的試料中の蛋白質を体積％基準に９５％蒸留水、５％アセトニトリル、０．１％ホルム酸の溶液と５％蒸留水、９５％アセトニトリルおよび０．１％ホルム酸の溶液を５０分間９５：５乃至１５：８５の体積比率で濃度勾配を加えながらＬＣ分析カラムを通過させて分離することができる。溶液混合比率によって特定物質に対する分解能が変わり得るため濃度勾配を実施し、前記範囲は多様な蛋白質を同時に分離するための最適範囲である。先ず、カラムをＳｏｌ  Ａ（９５％蒸留水、５％アセトニトリル、０．１％ホルム酸）で１０分間平衡化した後、ＳｏｌＢ（５％蒸留水、９５％アセトニトリル、０．１％ホルム酸）で５０分間５％から８５％まで、５分間８５％の濃度勾配を通じてペプチドを溶出した。
【００８６】
質量分析ではＭＳ／ＭＳモードであるＭＲＭ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）で定量を実施できる。ＳＩＭ（Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｉｏｎ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）が質量分析器のソース部分で一度衝突して生じたイオンを用いる方法である反面、ＭＲＭは一度割れたイオンのうちの特定イオンをもう一度選択して連続的に連結された他のＭＳのソースをもう一度通過させて衝突させた後にこの中から得られたイオンを用いる方法である。ＳＩＭでは選択された定量イオンが血漿からも検出されるイオンである場合に定量の妨害になることがあるという問題点がある。反面、ＭＲＭを用いる場合、同一質量を有するイオンであってももう一度割れれば分子構造が変わりながら差別化された傾向を示すので、これを定量イオンとして使用すればバックグラウンドで妨害になるピークが除去されより一層きれいなベースラインを得ることができる。さらに、安定同位体標準（Ｓｔａｂｌｅ  ｉｓｏｔｏｐｅ  ｓｔａｎｄａｒｄ、ＳＩＳ）ペプチドを合成して測定し、これを標的ペプチドの測定値と比較することによって、より優れた分析感度で正確に所望の物質を同時に分析することができる。
【００８７】
前記分析方法を通じて、正常対照群での蛋白質発現水準と膵臓癌個体での蛋白質発現水準を比較することができ、膵臓癌マーカー遺伝子から蛋白質への有意の発現量増減有無を判断して、膵臓癌発病可能性の有無を診断することができる。
【００８８】
また、本発明の方法において、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１蛋白質を暗号化するそれぞれの遺伝子のｍＲＮＡ発現水準の測定または比較は、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、競合的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ、ノーザンブロッティングまたはＤＮＡチップなどを使用することができるが、これに制限されるわけではない。前記測定方法を通じて正常対照群でのｍＲＮＡ発現量と膵臓癌発病有無を診断しようとする対象のｍＲＮＡ発現量を確認することができ、これら発現量程度を比較することによって膵臓癌発病可能性の有無を診断または予測することができる。
【００８９】
一方、本発明は膵臓癌診断方法のための情報を提供するために、（ａ）膵臓癌発病有無を診断しようとする対象から試料を得る段階；（ｂ）前記試料からＣＡ１９−９蛋白質の発現水準またはＣＡ１９−９蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準、およびＬＲＧ１蛋白質の発現水準またはＬＲＧ１蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準をそれぞれ測定する段階；（ｃ）前記試料からＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択されたいずれか一つの蛋白質の発現水準または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する段階；（ｄ）前記ＣＡ１９−９蛋白質の発現水準またはＣＡ１９−９蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準、および前記ＬＲＧ１蛋白質の発現水準またはＬＲＧ１蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＮＲＡ発現水準をそれぞれ正常対照群試料での発現水準と比較する段階；および（ｅ）前記ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択されたいずれか一つの蛋白質の発現水準または前記蛋白質を暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準をそれぞれ正常対照群試料での発現水準と比較する段階を含む、膵臓癌マーカーの検出方法を提供する。
【００９０】
本発明の膵臓癌診断用マーカー、組成物、キットおよび診断方法において、前記膵臓癌はＩＰＭＮであり得、具体的には高危険群ＩＰＭＮであり得る。前記組成物は低危険群ＩＰＭＮと区別して高危険群ＩＰＭＮを選別するか、正常群、ＩＰＭＮと膵管腺癌腫を除いた膵臓疾患を有する患者、または低危険ＩＰＭＮを有する対象である対照群と区別して、高危険群ＩＰＭＮを選別的に診断することができる。高危険群ＩＰＭＮは高異形成（Ｈｉｇｈ  ｇｒａｄｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）と侵襲型（ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｔｙｐｅ）ＩＰＭＮを含むことができ、前記高危険ＩＰＭＮはＩＰＭＮ由来膵管腺癌腫を含むことができる。
【００９１】
本発明の追加の一実施形態において、ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ１、ＬＲＧ１）を含む膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）マーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物に関するものである。前記ＩＰＭＮマーカーは、ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種以上のマーカーを追加的に含むことができる。例えば、前記ＩＰＭＮマーカーは、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種マーカーとＬＲＧ１を含むマーカー、またはＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された２種のマーカーとＬＲＧ１を含む組み合わせマーカーであり得る。
【００９２】
本発明の他の一実施形態は、ＣＬＵ（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ  ｐｒｅｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）；および
ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＬＲＧ１）、ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、ＴＴＲ（Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ、ＡＴＴＲ、Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎ、ＴＢＰＡ）、Ｃ１Ｒ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ１ｒ  ｓｕｂｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）およびＫＬＫＢ１（Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ；）からなる群より選択された一つ以上のマーカーを含むＩＰＭＮマーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物に関するものである。
【００９３】
本発明のまた他の一実施形態は対象の試料に対して、前記ＩＰＭＮマーカー蛋白質の発現水準またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準をそれぞれ測定する段階、
前記測定されたマーカーの発現水準を、対照群マーカーの発現水準と比較する段階、および
前記マーカー発現水準の比較結果を用いて前記対象の高危険ＩＰＭＮ有無を決定する段階を含む、高危険群ＩＰＭＮを診断する方法に関するものである。
【００９４】
前記マーカーの発現水準を測定する段階以前に、対象がＩＰＭＮを有するか否かを確認する段階を追加的に含むことができる。前記確認する段階は、画像診断法、組織検査法または遺伝子マーカーを用いた方法によって遂行することができ、例えば、腹部超音波検査、腹部コンピュータ断層撮影（Ｃｏｍｐｕｔｅｄ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ、ＣＴ）、内視鏡的逆行性膵胆管造影術（ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ  ｒｅｔｒｏｇｒａｄｅ  ｃｈｏｌａｎｇｉｏｐａｎｃｒｅａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＥＲＣＰ）、磁気共鳴膵胆道造影術（ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｃｈｏｌａｎｇｉｏｐａｎｃｒｅａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＭＲＣＰ）、超音波内視鏡検査（Ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ  ｕｌｔｒａｓｏｎｏｇｒａｐｈｙ、ＥＵＳ）などを含むが、これに限定されるのではない。また、バイオマーカーを用いた診断は知られた膵臓癌診断マーカーであるＣＡ−１９−９などを用いて行うことができる。組織検査法はＦＮＡ（ｆｉｎｅ  ｎｅｅｄｌｅ  ａｓｐｉｒａｔｉｏｎ）生検などが挙げられる。
【００９５】
前記対照群は正常群、ＩＰＭＮと膵管腺癌腫を除いた膵臓疾患を有する患者、または低危険ＩＰＭＮを有する対象である場合、前記ＩＰＭＮマーカーを活用して正常人および多様な膵臓疾患と区別されるように高危険群ＩＰＭＮを診断することができ、また対照群が低危険群ＩＰＭＮ患者である場合、低危険群ＩＰＭＮと区別されるように高危険群ＩＰＭＮを選別的に診断することができる。
【００９６】
前記方法は、対象が高危険ＩＰＭＮと決定された場合、外科的切除術、薬物投与などの処置方法を遂行する段階を追加的に含むことができる。
【００９７】
前記方法は、対象が低危険ＩＰＭＮと決定された場合、薬物投与、または予後のモニタリングなどの処理を遂行する段階を追加的に含むことができる。
【００９８】
その他、前記ＩＰＭＮマーカー、発現水準測定、および決定する段階などは前述のとおりである。
【００９９】
以下、本発明を実施例を通じてさらに詳しく説明する。しかし、下記実施例は本発明を例示するためのものであって、本発明がこれら実施例によって制限されるわけではない。
【実施例】
【０１００】
実施例１：実験のためのサンプルの準備
膵臓癌を効果的に診断するための蛋白質組み合わせを発掘するために、下記表２および表３のように、５ヶ病院の患者の同意下に膵臓癌、その他の癌、膵臓炎および胆嚢炎患者群（表２）と正常群（表３）を構成した。
【０１０１】
試験１は、ＰＤＡＣ区分試験のためのサンプル群として、対照群は正常、膵臓炎および胆嚢炎群から構成され、実験群は膵臓癌（ＰＤＡＣ）群から構成された。
【０１０２】
試験２は、ＰＤＡＣ初期病期区分試験のためのサンプル群として、対照群は正常、膵臓炎および胆嚢炎群から構成され、実験群は膵臓癌（ＰＤＡＣ）１期および２期群から構成された。
【０１０３】
試験３は、癌／膵臓癌選択性試験のためのサンプル群として、対照群はその他の癌群から構成され、実験群は膵臓癌群から構成された。その他の癌は乳癌５２例、大腸癌４５例、甲状腺癌５２例である。
【０１０４】
試験４はＣＡ１９−９が臨床的に性能を発揮しない状態でのＰＤＡＣ区分試験のためのサンプル群として、対照群はＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ未満である正常、膵臓炎および胆嚢炎群から構成され、実験群はＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ未満である膵臓癌（ＰＤＡＣ）群から構成された。
【０１０５】
【表２】
2018141795.tif 000006
【０１０６】
【表３】
2018141795.tif 000007
【０１０７】
−ＡＭＣ：Ａｓａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ（ソウルアサン病院）
−ＮＣＣ：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ（国立癌センター）
−ＳＭＣ：Ｓａｍｓｕｎｇ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ（三星ソウル病院）
−ＳＮＵＨ：Ｓｅｏｕｌ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（ソウル大学校病院）
−ＹＭＣ：Ｙｏｎｓｅｉ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ（セブランス病院）
＊訓練セットから導出された分類子（ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ）で全ての試験遂行
【０１０８】
実施例２：ＭＲＭ−ＭＳ方法による膵臓癌診断マーカー組み合わせの発掘および性能分析＜２−１＞血液試料前処理
各血液試料４０μｌを除去カラム（ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｃｏｌｕｍｎ）に通過させて血液の最も多い比率を占めている７個の蛋白質を欠失させ、３ｋＤａフィルターで濃縮した後、ＢＣＡ定量を行って、そのうちの２００μｇに該当する血漿を取って６Ｍウレア（ｕｒｅａ）で変性させ、２０ｍＭ  ＤＴＴおよび５０ｍＭ  ヨード酢酸（ｉｏｄｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）を使用して還元およびアルキル化させた。ここにトリプシンを５０：１（蛋白質：トリプシン、ｗ／ｗ）の比率で３７℃で１６時間処理して蛋白質をペプチドに作った後、前記ペプチドをＣ１８  ＯＡＳＩＳカラム（Ｗａｔｅｒｓ、ＵＳＡ）を用いて脱塩し凍結乾燥した。前記凍結乾燥されたペプチドを溶液Ａ（９８％蒸留水、２％アセトニトリル、０．１％ホルム酸）に溶かし、これに対してＭＲＭ分析を行った。
【０１０９】
＜２−２＞トランジション選定
ＭＲＭ分析を行うために、特定蛋白質の特徴的な電荷対質量比（ｍ／ｚ）を有するペプチドを選定し（Ｑ１）、このペプチドを電気的な衝撃で断片化させた時に発生する様々な切片イオンのうちの該当ペプチドに対して特徴的なｍ／ｚを有する断片イオンを選定した（Ｑ３）。このＱ１とＱ３の組み合わせは特定蛋白質に特異的なイオンの組み合わせであって、これをトランジションと称し、高分解能（ｔｒｉｐｌｅ  ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ）質量分光分析器でこの特徴的なＱ１とＱ３でイオンを順次に通過させた時に得られる信号を定量的情報に換算して定量分析を行った。米国ワシントン大学のＭａｃＣｏｓｓ研究チームで開発したスカイライン（ＳＫＹＬｉｎｅ）という公開ソフトウェアを用いてＮＩＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）ライブラリーのペプチドタンデム質量スペクトル（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔａｎｄｅｍ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒａ）を基盤にしてｍｓ／ｍｓデータが存在するペプチドに対して、総強度が高い順に１個の蛋白質当り最大１０個のペプチドを選定した。ペプチドの長さはアミノ酸最小７個から最大２４個に選定した。
【０１１０】
但し、トリプシンによって切断されて生成できる全体ペプチドのうちの下記に該当するアミノ酸を含むか特定モチーフ（ｍｏｔｉｆ）を有するペプチドは次の通り信号値が良くないと知られているため除いた：
(a)該当ペプチド内にメチオニンが存在する場合、生体内ＲＯＳ（ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ）によって酸化が発生し質量値が３２Ｄａ増加；
(b)該当ペプチド内にヒスチジンが存在する場合、Ｒ−グループの正電荷によって該当ペプチドの電荷状態が変わる；
(c)該当ペプチド内にＮｘＳ／Ｔモチーフが存在する場合、Ｎ−糖化が発生し質量値が移動（ｓｈｉｆｔ）する；
(d)該当ペプチド内にトリプシンによって切られるＲやＫの次にプロリンが存在する場合、未切断（ｍｉｓｓｅｄ  ｃｌｅａｖａｇｅ）が発生することがある。
【０１１１】
前駆体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）電荷は＋２価電荷を有するペプチドを選定し、イオン電荷は＋１価電荷、イオンタイプはｙ−イオンを使用した。蛋白質ブラスト（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂｌａｓｔ）Ｐおよびスカイライン（Ｓｋｙｌｉｎｅ）プログラムを用いて独特のトランジションおよびペプチドを選別し、最終選別されたトランジションは予測する停滞時間（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ、ＲＴ）範囲内に属したもののみを使用した。ＲＴ予測のために、６００個のＳＩＳペプチドＭＲＭ分析を行い、これを通じて疎水性図表（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ  ｓｃａｌｅ）とＲＴクロマトグラムに基づいた検量線（ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ  ｃｕｒｖｅ）を計算した。
【０１１２】
＜２−３＞ＬＣおよびＭＲＭ
ＬＣはアジレント社の１２６０−毛細管ＬＣを使用し、ペプチドの分離のために毛細管ＲＲ０．５×１５０の３．５ｕｍのカラムを使用した。試料は５μｌを注入し、流速は２０μｌ／分に設定した。先ず、カラムをＳｏｌ  Ａ（体積基準に９５％蒸留水、５％アセトニトリル、０．１％ホルム酸）で１０分間平衡化した後、Ｓｏｌ  ＡとＳｏｌ  Ｂ（体積基準に５％蒸留水、９５％アセトニトリル、０．１％ホルム酸）を５０分間９５：５から１５：８５まで、５分間１５：８５の体積比率で濃度勾配を加えてペプチドを溶出した。
【０１１３】
質量分析器（Ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）としてアジレント社のｔｒｉｐｌｅ  ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ  ６４９０−ＱＱＱ装備を用いて選定蛋白質に対するトランジションに対してＭＲＭモードでモニターした。バッチ（Ｂａｔｃｈ）間偏差を補正するために各試料にスパイキング（ｓｐｉｋｉｎｇ）された５ｆｍｏｌβ−ガラクトシダーゼペプチド（ＧＤＦＱＦＮＩＳＲ［Ｃ１３Ｎ１５］、５４７．３／６４６．４）も同時にモニターした。
【０１１４】
＜２−４＞データ定量分析
定量性を確認するために、内部標準ペプチドであるβ−ガラクトシダーゼペプチド（ＧＤＦＱＦＮＩＳＲ［Ｃ１３Ｎ１５］、５４７．３／６４６．４ｍ／ｚ）を０．０９、０．２７、０．８２、２．５、７．４、２２．２、６６．７および２００ｆｍｏｌにそれぞれ希釈した後、ここに標的ペプチド分析条件と同様に血漿１０ｕｇをマトリックスに入れて分析を行った。また、内因性（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ）信号を確認する目的で内部標準ペプチドを入れない場合も分析に含ませ、全ての９個の濃度点で３回繰り返してＭＲＭ定量し標準曲線（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｃｕｒｖｅ）を決定した。
【０１１５】
各個人別ＭＲＭ結果は、スカイライン（ＭａｃＣｏｓｓ  Ｌａｂ、ｖｅｒ１．４．１）を用いて該当ＭＲＭトランジションのイオン抽出クロマトグラフィー（ＸＩＣ、Ｅｘｔｒａｃｔ  ｉｏｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を生成し、各トランジションのピーク面積を計算しこれを再び時間経過によって図式化した。さらに、各標的ペプチドに対するＳＩＳ（Ｓｔａｂｌｅ  ｉｓｏｔｏｐｅ  ｓｔａｎｄａｒｄ）ペプチドを合成して測定し、該当標的ペプチド測定値との比率を計算して血液内の量を各蛋白質別に定量分析した。
【０１１６】
前記ＭＲＭ定量分析結果を用いて表１の方法で導出した４個の組み合わせマーカーに含まれている蛋白質の膵臓癌患者群での発現様相は次の通りである。
【０１１７】
図１および２に示されているように、ＣＡ１９−９およびＬＲＧ１蛋白質の発現が正常群に比べて膵臓癌患者群において特異的に増加するのを確認することができ、前記ＣＡ１９−９およびＬＲＧ１を膵臓癌診断用マーカーとして選抜した。
【０１１８】
図３乃至６に示されているように、ＴＴＲ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１蛋白質の発現が正常群に比べて膵臓癌患者群において特異的に減少するのを確認することができ、Ｃ１Ｒ蛋白質の発現が正常群に比べて膵臓癌患者群において特異的に増加するのを確認することができた。
【０１１９】
実施例３：ＥＬＩＳＡ方法による膵臓癌診断用蛋白質組み合わせの発掘および性能分析
膵臓癌患者群および正常群を対象にしてＬＲＧ１、ＴＴＲおよびＣＬＵ蛋白質の発現量をＥＬＩＳＡ法によって測定した。ＬＲＧ１の場合はＩＢＬ社のｈＬＲＧ１  ＥＬＩＳＡキットを使用し、ＴＴＲの場合はＡｓｓａｙＰｒｏ社のプレアルブミンＥＬＩＳＡキットを使用し、ＣＬＵの場合はＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社のＨｕｍａｎ  Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅキットを使用し、各ＥＬＩＳＡ測定は製造会社のプロトコルによって行った。
【０１２０】
具体的に、実験する前にＥＬＩＳＡキットと分析する検体を室温に置いた後、検体を専用希釈液で希釈（ＬＲＧ１：１，０００倍；ＴＴＲ：８０，０００倍；ＣＬＵ：２，０９１倍）した。各ウェルに標準、対照群および検体をそれぞれ５０μｌずつ分注した。各ウェルにカバーシーラーを覆って２時間室温に置いた後、各ウェルにある溶液を捨ててから蒸留水で洗浄する過程を４回繰り返した。その後、２００μｌのコンジュゲートを各ウェルに分注した。各ウェルに新たなカバーシーラーで覆って２時間室温に置いた後、蒸留水で洗浄する過程を４回繰り返した。その後、２００μｌの基質溶液を各ウェルに分注した後、室温に３０分間置いた。その後、５０μｌの反応中止溶液を各ウェルに分注した後、５４０ｎｍまたは５７０ｎｍで吸光度を測定し、濃度値を計算して結果を整理した。
【０１２１】
前記ＥＬＩＳＡ定量分析の結果、図７乃至９に示されているように、ＬＲＧ１蛋白質の発現が正常群に比べて膵臓癌患者群において特異的に増加し、ＴＴＲ蛋白質の発現が正常群に比べて膵臓癌患者群において特異的に減少し、ＣＬＵ蛋白質の発現が正常群に比べて膵臓癌患者群において特異的に減少することが確認され、これは実施例２のＭＲＭ−ＭＳ結果と同様であった。
【０１２２】
実施例４：免疫比濁法（ｉｍｍｕｎｏｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ）による膵臓癌診断用マーカーの発掘および性能分析
膵臓癌患者群および正常群を対象にしてＴＴＲ蛋白質の発現量を免疫比濁法（ｉｍｍｕｎｏｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ）によって測定した。前記測定は、ロシュダイアグノスティックス（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）社のＣＯＢＡＳ  ＩＮＴＥＧＲＡ  ８００  Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎを用いて製造社のプロトコルによって行った。
【０１２３】
具体的に、実験する前に機器と分析する検体を室温に置いた後、検体を５０μｌずつ分注した。分注した検体を専用希釈液で４倍希釈した。前記希釈した検体２００μｌを機器に投入し、機器から出力する濃度値で結果を整理した。
【０１２４】
前記免疫比濁法による定量分析の結果、図１０に示されているように、ＴＴＲ蛋白質の発現が正常群に比べて膵臓癌患者群において特異的に減少することが確認され、これは実施例２および３のＭＲＭ−ＭＳおよびＥＬＩＳＡ結果と同様であった。
【０１２５】
実施例５：ＭＲＭ−ＭＳ方法によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーの診断性能
＜５−１＞ＰＤＡＣ区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーの診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質はロシュダイアグノスティックス（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）社のＣＯＢＡＳ  Ｅｌｅｃｓｙｓ  ＣＡ  １９−９機器を用いた化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。
【０１２６】
膵臓癌診断関数を用いた場合、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせの膵臓癌診断マーカーとしての性能をＲＯＣグラフのＡＵＣとＳｎ|Ｓｐ＝０．９で示した。ＲＯＣグラフは敏感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）と特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）がどんな関係を有して変わるかを二次元平面上に表現したものであり、ＲＯＣグラフの下の面積（ＡＵＣ；０≦ＡＵＣ≦１）が広いほど正確であると判断することができる。Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９は特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）が０．９である時の敏感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）値であって、検出敏感度を示す数値であり、その値が大きいほど正確であると判断することができる。
【０１２７】
前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表４および図１１に示した。
【０１２８】
【表４】
2018141795.tif 000008
【０１２９】
上記表４および図１１に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＡＵＣが０．９３１２であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８２５０であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲをそれぞれ単独で使用または２個ずつ組み合わせて使用する時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１３０】
＜５−２＞ＰＤＡＣ初期病期区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーの診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの膵臓癌初期病期区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表５および図１２に示した。
【０１３１】
【表５】
2018141795.tif 000009
【０１３２】
上記表５および図１２に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＡＵＣが０．９０７０であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．７６００であって、膵臓癌初期病期区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より膵臓癌初期病期診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１３３】
＜５−３＞癌／膵臓癌区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーの診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの癌および膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表５および図１３に示した。
【０１３４】
前記表５および図１３に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＡＵＣが０．８９９４であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８２５０であって、癌と膵臓癌区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より癌／膵臓癌区分性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１３５】
＜５−４＞ＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群を対象にしたＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーのＰＤＡＣ区分診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能をＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群を対象に分析した。主に臨床では測定者のＣＡ１９−９測定値が３７Ｕ／ｍｌ以上である時に膵臓癌と判断する。したがって、ＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群ではＣＡ１９−９が膵臓癌診断マーカーとしての性能を発揮できない。前記ＣＡ１９−９蛋白質はロシュダイアグノスティックス（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）社のＣＯＢＡＳ  Ｅｌｅｃｓｙｓ  ＣＡ  １９−９機器を用いた化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。
【０１３６】
膵臓癌診断関数を用いた場合、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせの膵臓癌診断マーカーとしての性能をＲＯＣグラフのＡＵＣとＳｎ|Ｓｐ＝０．９で示した。ＲＯＣグラフは敏感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）と特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）がどんな関係を有して変わるかを二次元平面上に表現したものであり、ＲＯＣグラフの下の面積（ＡＵＣ；０≦ＡＵＣ≦１）が広いほど正確であると判断することができる。Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９は特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）が０．９である時の敏感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）値であって、検出敏感度を示す数値であり、その値が大きいほど正確であると判断することができる。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表５および図１４に示した。
【０１３７】
前記表５および図１４に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＡＵＣが０．８２９５であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．５１７２であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１３８】
実施例６：ＥＬＩＳＡ方法によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーの診断性能
実施例５でＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析したことをＥＬＩＳＡ方法で性能再現有無を確認し、ＥＬＩＳＡ方法でもＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは膵臓癌診断性能が優れているのを確認することができた。
【０１３９】
＜６−１＞ＰＤＡＣ区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーの診断性能
実施例３のＥＬＩＳＡ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって測定した。
【０１４０】
前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表６および図１５に示した。
【０１４１】
【表６】
2018141795.tif 000010
【０１４２】
上記表６および図１５に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＡＵＣが０．９３１５であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８２５０であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１４３】
＜６−２＞ＰＤＡＣ初期病期区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーの診断性能
実施例３のＥＬＩＳＡ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの膵臓癌初期病期区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表６および図１６に示した。
【０１４４】
前記表６および図１６に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＡＵＣが０．９１４４であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．７８００であって、膵臓癌初期病期区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より膵臓癌初期病期診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１４５】
＜６−３＞癌／膵臓癌区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーの診断性能
実施例３のＥＬＩＳＡ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの癌および膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表６および図１７に示した。
【０１４６】
前記表６および図１７に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＡＵＣが０．８９８１であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８２５０であって、癌と膵臓癌区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より癌／膵臓癌区分性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１４７】
＜６−４＞ＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群を対象にしたＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーのＰＤＡＣ区分診断性能
実施例３のＥＬＩＳＡ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能をＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群を対象にして分析した。主に臨床では測定者のＣＡ１９−９測定値が３７Ｕ／ｍｌ以上である時に膵臓癌と判断する。したがって、ＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群ではＣＡ１９−９が膵臓癌診断マーカーとしての性能を発揮できない。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表６および図１８に示した。
【０１４８】
前記表６および図１８に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＡＵＣが０．８２８７であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．５１７２であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１４９】
実施例７：免疫比濁法によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーの診断性能
実施例５でＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析したことを免疫比濁法で性能再現有無を確認し、免疫比濁法でもＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは膵臓癌診断性能が優れているのを確認することができた。
【０１５０】
＜７−１＞ＰＤＡＣ区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーの診断性能
実施例４の免疫比濁法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって、ＴＴＲ蛋白質は免疫比濁法によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表７および図１９に示した。
【０１５１】
【表７】
2018141795.tif 000011
【０１５２】
上記表７および図１９に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＡＵＣが０．９４０２であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８２５０であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１５３】
＜７−２＞ＰＤＡＣ初期病期区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーの診断性能
実施例４の免疫比濁法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの膵臓癌初期病期区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって、ＴＴＲ蛋白質は免疫比濁法によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表７および図２０に示した。
【０１５４】
前記表７および図２０に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＡＵＣが０．９１４６であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．７６００であって、膵臓癌初期病期区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より膵臓癌初期病期診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１５５】
＜７−３＞癌／膵臓癌区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーの診断性能
実施例４の免疫比濁法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの癌および膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって、ＴＴＲ蛋白質は免疫比濁法によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表７および図２１に示した。
【０１５６】
前記表７および図２１に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＡＵＣが０．８９６５であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８２５０であって、癌と膵臓癌区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より癌／膵臓癌区分性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１５７】
＜７−４＞ＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群を対象にしたＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲ組み合わせマーカーのＰＤＡＣ区分診断性能
実施例４の免疫比濁法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能をＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群を対象にして分析した。主に臨床では測定者のＣＡ１９−９測定値が３７Ｕ／ｍｌ以上である時に膵臓癌と判断する。したがって、ＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群ではＣＡ１９−９が膵臓癌診断マーカーとしての性能を発揮できない。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１蛋白質はＥＬＩＳＡ方法によって、ＴＴＲ蛋白質は免疫比濁法によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表７および図２２に示した。
【０１５８】
前記表７および図２２に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは、ＡＵＣが０．８４３９であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．５１７２であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用する時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１５９】
実施例８：ＭＲＭ−ＭＳ方法によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ組み合わせマーカーの診断性能
＜８−１＞ＰＤＡＣ区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ組み合わせマーカーの診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表８および図２３に示した。
【０１６０】
【表８】
2018141795.tif 000012
【０１６１】
上記表８および図２３に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒの組み合わせは、ＡＵＣが０．９２９６であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８３７５であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用する時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１６２】
＜８−２＞ＰＤＡＣ初期病期区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ組み合わせマーカーの診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒの組み合わせマーカーの膵臓癌初期病期区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表９および図２４に示した。
【０１６３】
【表９】
2018141795.tif 000013
【０１６４】
上記表９および図２４に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒの組み合わせは、ＡＵＣが０．９０９７であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．７８００であって、膵臓癌初期病期区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒの組み合わせはＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒをそれぞれ単独または２個ずつ組み合わせて使用する時より膵臓癌初期病期診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１６５】
＜８−３＞癌／膵臓癌区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ組み合わせマーカーの診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒの組み合わせマーカーの癌および膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１０および図２５に示した。
【０１６６】
【表１０】
2018141795.tif 000014
【０１６７】
上記表１０および図２５に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒの組み合わせは、ＡＵＣが０．９０８８であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８３７５であって、癌と膵臓癌区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒの組み合わせは商用膵臓癌マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用する時より癌／膵臓癌区分性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１６８】
＜８−４＞ＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群を対象にしたＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ組み合わせマーカーのＰＤＡＣ区分診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１０および図２６に示した。
【０１６９】
前記表１０および図２６に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒの組み合わせは、ＡＵＣが０．８１６０であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．５５１７であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣ１Ｒの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１７０】
実施例９：ＭＲＭ−ＭＳ方法によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ組み合わせマーカーの診断性能
＜９−１＞ＰＤＡＣ区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ組み合わせマーカーの診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１１および図２７に示した。
【０１７１】
【表１１】
2018141795.tif 000015
【０１７２】
上記表１１および図２７に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは、ＡＵＣが０．９３３８であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８５００であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせはＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵをそれぞれ単独または２個ずつ組み合わせて使用する時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１７３】
＜９−２＞ＰＤＡＣ初期病期区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ組み合わせマーカーの診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせマーカーの膵臓癌初期病期区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１２および図２８に示した。
【０１７４】
【表１２】
2018141795.tif 000016
【０１７５】
上記表１２および図２８に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは、ＡＵＣが０．９０２７であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．７８００であって、膵臓癌初期病期区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用する時より膵臓癌初期病期を診断する性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１７６】
＜９−３＞癌／膵臓癌区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ組み合わせマーカーの診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせマーカーの癌および膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１２および図２９に示した。
【０１７７】
前記表１２および図２９に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは、ＡＵＣが０．９０９３であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８５００であって、癌と膵臓癌区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは商用膵臓癌マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用する時より癌／膵臓癌区分性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１７８】
＜９−４＞ＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群を対象にしたＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ組み合わせマーカーのＰＤＡＣ区分診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１２および図３０に示した。
【０１７９】
前記表１２および図３０に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは、ＡＵＣが０．８３８４であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．５８６２であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１８０】
実施例１０：ＥＬＩＳＡ方法によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ組み合わせマーカーの診断性能
実施例９でＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析したことをＥＬＩＳＡ方法で性能再現有無を確認し、ＥＬＩＳＡ方法でもＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは膵臓癌診断性能が優れているのを確認することができた。
【０１８１】
＜１０−１＞ＰＤＡＣ区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ組み合わせマーカーの診断性能
実施例３のＥＬＩＳＡ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＥＬＩＳＡ定量分析によって測定された。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１３および図３１に示した。
【０１８２】
【表１３】
2018141795.tif 000017
【０１８３】
上記表１３および図３１に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは、ＡＵＣが０．９３９９であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８０００であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせはＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵをそれぞれ単独または２個ずつ組み合わせて使用する時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１８４】
＜１０−２＞ＰＤＡＣ初期病期区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ組み合わせマーカーの診断性能
実施例３のＥＬＩＳＡ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせマーカーの膵臓癌初期病期区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＥＬＩＳＡ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１４および図３２に示した。
【０１８５】
【表１４】
2018141795.tif 000018
【０１８６】
上記表１４および図３２に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは、ＡＵＣが０．９１９３であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．７０００であって、膵臓癌初期病期区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用する時より膵臓癌初期病期を診断する性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１８７】
＜１０−３＞癌／膵臓癌区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ組み合わせマーカーの診断性能
実施例３のＥＬＩＳＡ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせマーカーの癌および膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＥＬＩＳＡ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１４および図３３に示した。
【０１８８】
前記表１４および図３３に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは、ＡＵＣが０．９０７９であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８０００であって、癌と膵臓癌区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは商用膵臓癌マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用する時より癌／膵臓癌区分性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１８９】
＜１０−４＞ＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群を対象にしたＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵ組み合わせマーカーのＰＤＡＣ区分診断性能
実施例３のＥＬＩＳＡ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＣＬＵ蛋白質はＥＬＩＳＡ定量分析によって測定された。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１４および図３４に示した。
【０１９０】
前記表１４および図３４に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは、ＡＵＣが０．８４３５であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．４８２８であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＣＬＵの組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１９１】
実施例１１：ＭＲＭ−ＭＳ方法によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１組み合わせマーカーの診断性能
＜１１−１＞ＰＤＡＣ区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１組み合わせマーカーの診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１の組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１５および図３５に示した。
【０１９２】
【表１５】
2018141795.tif 000019
【０１９３】
上記表１５および図３５に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１の組み合わせは、ＡＵＣが０．９３８２であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８６２５であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１の組み合わせはＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１をそれぞれ単独または２個ずつ組み合わせて使用する時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１９４】
＜１１−２＞ＰＤＡＣ初期病期区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１組み合わせマーカーの診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１の組み合わせマーカーの膵臓癌初期病期区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定された。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１６および図３６に示した。
【０１９５】
【表１６】
2018141795.tif 000020
【０１９６】
上記表１６および図３６に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１の組み合わせは、ＡＵＣが０．９１４８であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８０００であって、膵臓癌初期病期区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１の組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用する時より膵臓癌初期病期診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１９７】
＜１１−３＞癌／膵臓癌区分のためのＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１組み合わせマーカーの診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１の組み合わせマーカーの癌および膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１６および図３７に示した。
【０１９８】
前記表１６および図３７に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１の組み合わせは、ＡＵＣが０．８９２４であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．８６２５であって、癌と膵臓癌区分のための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１の組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より癌／膵臓癌区分性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０１９９】
＜１１−４＞ＣＡ１９−９＜３７Ｕ／ｍｌの実験群を対象にしたＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１組み合わせマーカーのＰＤＡＣ区分診断性能
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１の組み合わせマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質は化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１６および図３８に示した。
【０２００】
前記表１６および図３８に示されているように、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１の組み合わせは、ＡＵＣが０．８３４９であり、Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９が０．６２０７であって、膵臓癌診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１の組み合わせは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より膵臓癌診断性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０２０１】
実施例１２：膵臓癌診断−データ統計分析
＜１２−１＞ＣＡ１９−９＋ＬＲＧ１＋ＴＴＲ
統計分析のためにＳＶＭ（Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｍａｃｈｉｎｅ）を用いた。ＳＶＭはラグランジュ最適化理論（Ｌａｇｒａｎｇｉａｎ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｔｈｅｏｒｙ）に基づいて与えられた条件を満足する関数を推定するアルゴリズムであって、この中の最大マージン分類子（Ｍａｘｉｍｕｍ  ｍａｒｇｉｎ  ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ）を使用する分類分析方法を使用する場合をサポートベクター分類（Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ、ＳＶＣ）という。本実施例では二つのサンプル群のうちの一つのサンプル群を使用し、該当サンプル群内の二つの集団（正常集団と癌患者集団）間差を最大にするＳＶＣを機械学習を通じて導出して下記のような膵臓癌診断関数を構成した。
【０２０２】
【数３】
2018141795.tif 000021
ｘは、膵臓癌診断用マーカーの発現水準測定値、
αｉは、ＳＶＭにおけるラグランジュ乗数、
ｙｉは、正常群／膵臓癌群の識別子、
ｘｉは、基準測定値を、そして
ｂは補正値を意味する。
【０２０３】
上記の式において、関数値が１であれば膵臓癌と、−１であれば正常と判断する。前記関数を用いて膵臓癌有無を判断した。
【０２０４】
具体的に、３名の正常対照群からＣＡ１９−９測定値、ＴＴＲおよびＬＲＧ１のＭＲＭ定量値としてそれぞれ（７．４、１．４５１、３．２３５９）、（６．３、１．０７１８、２．１３６）および（２６．１、１．２０５３、３．１７９７）を得て、これを前記診断関数に代入した結果、関数値がそれぞれｆ（７．４、１．４５１、３．２３５９）＝−１、ｆ（６．３、１．０７１８、２．１３６）＝−１、ｆ（２６．１、１．２０５３、３．１７９７）＝−１と計算され、前記対象を正常と判別することができた。
【０２０５】
また、３名の膵臓癌患者からＣＡ１９−９測定値、ＴＴＲおよびＬＲＧ１のＭＲＭ定量値としてそれぞれ（４５３１８、４．８９８、１．２５１４）、（１４５、２．４６０８、１．６６１６）と（８８９、２．５１５３、１．５４７４）を得て、これを前記診断関数に代入した結果、関数値がそれぞれｆ（４５３１８、４．８９８、１．２５１４）＝１、ｆ（１４５、２．４６０８、１．６６１６）＝１、ｆ（８８９、２．５１５３、１．５４７４）＝１と計算され、前記対象を膵臓癌と判別することができた。
【０２０６】
＜１２−２＞ＣＡ１９−９＋ＬＲＧ１＋Ｃ１Ｒ
統計分析のためにＳＶＭ（Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｍａｃｈｉｎｅ）に基づいた関数式１を用いて膵臓癌有無を判断した。
【０２０７】
３名の正常対照群からＣＡ１９−９測定値、ＬＲＧ１およびＣ１ＲのＭＲＭ定量値としてそれぞれ（７．４、１．４５１、１．０７４８）、（６．３、１．０７１８、０．４５３１）および（２６．１、１．２０５３、１．０９２９）を得て、これを前記診断関数に代入した結果、関数値がそれぞれ（７．４、１．４５１、１．０７４８）＝−１、ｆ（６．３、１．０７１８、０．４５３１）＝−１、ｆ（２６．１、１．２０５３、１．０９２９）＝−１と計算され、前記対象を正常と判別することができた。
【０２０８】
また、３名の膵臓癌患者からＣＡ１９−９測定値、ＬＲＧ１およびＣ１ＲのＭＲＭ定量値としてそれぞれ（４５３１８、４．８９３、１．３７４２）、（１４５、２．４６０８、１．４８３）と（８８９、２．５１５３、１．４７４）を得て、これを前記診断関数に代入した結果、関数値がそれぞれｆ（４５３１８、４．８９３、１．３７４２）＝１、ｆ（１４５、２．４６０８、１．４８３）＝１、ｆ（８８９、２．５１５３、１．４７４）＝１と計算され、前記対象を膵臓癌と判別することができた。
【０２０９】
＜１２−３＞ＣＡ１９−９＋ＬＲＧ１＋ＣＬＵ
統計分析のためにＳＶＭ（Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｍａｃｈｉｎｅ）に基づいた関数式１を用いて膵臓癌有無を判断した。３名の正常対照群からＣＡ１９−９測定値、ＬＲＧ１およびＣＬＵのＭＲＭ定量値としてそれぞれ（７．４、１．４５１、３．３８０３）、（６．３、１．０７１８、３．１３２５）および（２６．１、１．２０５３、２．８６４２）を得て、これを前記診断関数に代入した結果、関数値がそれぞれｆ（７．４、１．４５１、３．３８０３）＝−１、ｆ（６．３、１．０７１８、３．１３２５）＝−１、ｆ（２６．１、１．２０５３、２．８６４２）＝−１と計算され、前記対象を正常と判別することができた。
【０２１０】
また、３名の膵臓癌患者からＣＡ１９−９測定値、ＬＲＧ１およびＣＬＵのＭＲＭ定量値としてそれぞれ（４５３１８、４．８９３、１．６８２１）、（１４５、２．４６０８、２．５４５）と（８８９、２．５１５３、１．５１０１）を得て、これを前記診断関数に代入した結果、関数値がそれぞれｆ（４５３１８、４．８９３、１．６８２１）＝１、ｆ（１４５、２．４６０８、２．５４５）＝１、ｆ（８８９、２．５１５３、１．５１０１）＝１と計算され、前記対象を膵臓癌と判別することができた。
【０２１１】
＜１２−４＞ＣＡ１９−９＋ＬＲＧ１＋ＫＬＫＢ１
統計分析のためにＳＶＭ（Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｍａｃｈｉｎｅ）に基づいた関数式１を用いて膵臓癌有無を判断した。３名の正常対照群からＣＡ１９−９測定値、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１のＭＲＭ定量値としてそれぞれ（７．４、１．４５１、１．２８０１）、（６．３、１．０７１８、０．９６１）および（２６．１、１．２０５３、１．５６５７）を得て、これを前記診断関数に代入した結果、関数値がそれぞれｆ（７．４、１．４５１、１．２８０１）＝−１、ｆ（６．３、１．０７１８、０．９６１）＝−１、ｆ（２６．１、１．２０５３、１．５６５７）＝−１と計算され、前記対象を正常と判別することができた。
【０２１２】
また、３名の膵臓癌患者からＣＡ１９−９測定値、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１のＭＲＭ定量値としてそれぞれ（４５３１８、４．８９３、０．５５５）、（１４５、２．４６０８、０．５３４７）と（８８９、２．５１５３、０．８０８４）を得て、これを前記診断関数に代入した結果、関数値がそれぞれｆ（４５３１８、４．８９３、０．５５５）＝１、ｆ（１４５、２．４６０８、０．５３４７）＝１、ｆ（８８９、２．５１５３、０．８０８４）＝１と計算され、前記対象を膵臓癌と判別することができた。
【０２１３】
実施例１３：膵臓癌初期病期診断−データ統計分析
統計分析のためにＳＶＭ（Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｍａｃｈｉｎｅ）に基づいた関数式１を用いて膵臓癌初期病期有無を判断した。３名の正常対照群からＣＡ１９−９測定値、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１のＭＲＭ定量値としてそれぞれ（７．４、１．４５１、１．２８０１）、（６．３、１．０７１８、０．９６１）および（２６．１、１．２０５３、１．５６５７）を得て、これを前記診断関数に代入した結果、関数値がそれぞれｆ（７．４、１．４５１、１．２８０１）＝−１、ｆ（６．３、１．０７１８、０．９６１）＝−１、ｆ（２６．１、１．２０５３、１．５６５７）＝−１と計算され、前記対象を正常と判別することができた。
【０２１４】
また、３名の膵臓癌初期病期患者からＣＡ１９−９測定値、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１のＭＲＭ定量値としてそれぞれ（１５４．５２、４．０９９４、１．２７２２）、（１９０．１６、４．５００８、０．７６４５）と（１０５２．８、３．５６９６、０．６７７５）を得て、これを前記診断関数に代入した結果、関数値がそれぞれｆ（１５４．５２、４．０９９４、１．２７２２）＝１、ｆ（１９０．１６、４．５００８、０．７６４５）＝１、ｆ（１０５２．８、３．５６９６、０．６７７５）＝１と計算され、前記対象を膵臓癌初期病期患者と判別することができた。
【０２１５】
実施例１４：膵臓癌とその他の癌の区分診断−データ統計分析
統計分析のためにＳＶＭ（Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｍａｃｈｉｎｅ）に基づいた関数式１を用いて膵臓癌初期病期有無を判断した。３名のその他の癌患者からＣＡ１９−９測定値、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１のＭＲＭ定量値としてそれぞれ（８、１．３９８５、０．７０８５）、（１０．６８、０．９８６４、０．７７６）および（７．３２、１．１４３１、０．９２１４）を得て、これを前記診断関数に代入した結果、関数値がそれぞれｆ（８、１．３９８５、０．７０８５）＝−１、ｆ（１０．６８、０．９８６４、０．７７６）＝−１、ｆ（７．３２、１．１４３１、０．９２１４）＝−１と計算され、前記対象をその他の癌患者と判別することができた。
【０２１６】
また、３名の膵臓癌患者からＣＡ１９−９測定値、ＬＲＧ１およびＫＬＫＢ１のＭＲＭ定量値としてそれぞれ（２８０．７２、４．０８４９、０．９１６５）、（４０００、５．７５５８、０．７２１６）と（１２０．３２、６．２９１７、０．５５５）を得て、これを前記診断関数に代入した結果、関数値がそれぞれｆ（１５４．５２、４．０９９４、１．２７２２）＝１、ｆ（１９０．１６、４．５００８、０．７６４５）＝１、ｆ（１０５２．８、３．５６９６、０．６７７５）＝１と計算され、前記対象を膵臓癌患者と判別することができた。
【０２１７】
実施例１５：実験のためのサンプルの準備
悪性亜型（ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｓｕｂｔｙｐｅ）のＩＰＭＮを効果的に探知するために、下記表１７のように、ソウル大学校病院の患者の同意下に正常群と実験群（高危険群）に区分した。
【０２１８】
試験５は、高異形成（Ｈｉｇｈ  ｇｒａｄｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）と侵襲型（ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｔｙｐｅ）を高危険（ｍａｌｉｇｎａｎｔ）亜型ＩＰＭＮ実験群として構成し、軽異形成（ｌｏｗ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）ＩＰＭＮ、中等異形成（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）ＩＰＭＮ、正常群および良性炎症同伴疾患者としての胆石症患者を対照群として構成した。
【０２１９】
試験６は、ＭＭＳ分析方法によって高危険群と低危険群を選別探知するかどうかを確認するために、高異形成（Ｈｉｇｈ  ｇｒａｄｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）と侵襲型（ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｔｙｐｅ）を、高危険（ｍａｌｉｇｎａｎｔ（悪性？））亜型ＩＰＭＮ実験群を軽異形成（ｌｏｗ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）ＩＰＭＮおよび中等異形成（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）ＩＰＭＮと選別探知するための実験群として構成した。
【０２２０】
試験７は、ＥＬＩＳＡ分析方法によって高危険群と低危険群を選別探知するかどうかを確認するために、高異形成（Ｈｉｇｈ  ｇｒａｄｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）と侵襲型（ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｔｙｐｅ）を、高危険（ｍａｌｉｇｎａｎｔ（悪性？））亜型ＩＰＭＮ実験群を軽異形成（ｌｏｗ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）ＩＰＭＮおよび中等異形成（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）ＩＰＭＮと選別探知するための実験群として構成した。
【０２２１】
【表１７】
2018141795.tif 000022
【０２２２】
実施例１６：ＭＲＭ−ＭＳ方法による高危険ＩＰＭＮの探知
実施例２のＭＲＭ−ＭＳ方法を用いて、下記表３２のマーカーの高危険ＩＰＭＮに対する診断性能を分析した。前記ＣＡ１９−９蛋白質はロシュダイアグノスティックス（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）社のＣＯＢＡＳ  Ｅｌｅｃｓｙｓ  ＣＡ  １９−９機器を用いた化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）によって、ＬＲＧ１およびＴＴＲ蛋白質はＭＲＭ定量分析によって測定した。
【０２２３】
膵臓癌診断関数のような方法で診断関数を用いた場合、ＣＡ１９−９、ＬＲＧ１およびＴＴＲの組み合わせの診断マーカーとしての性能をＲＯＣグラフのＡＵＣとＳｎ|Ｓｐ＝０．９で示した。ＲＯＣグラフは敏感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）と特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）がどんな関係を有して変わるかを二次元平面上に表現したものであり、ＲＯＣグラフの下の面積（ＡＵＣ；０≦ＡＵＣ≦１）が広いほど正確であると判断することができる。Ｓｎ|Ｓｐ＝０．９は特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）が０．９である時の敏感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）値であって、検出敏感度を示す数値であり、その値が大きいほど正確であると判断することができる。
【０２２４】
前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１８および図３９乃至図６３に示した。
【０２２５】
【表１８】
2018141795.tif 000023
【０２２６】
上記表１８および図３９乃至図６３に示されているように、本発明によるマーカーまたは２以上のマーカー組み合わせは、対照群と区別されるように高危険群ＩＰＭＮを選別的に探知するための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明による組み合わせマーカーは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より高危険群ＩＰＭＮ探知性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０２２７】
実施例１７：ＭＲＭ−ＭＳ方法による低危険ＩＰＭＮと高危険ＩＰＭＮの選別探知
低危険ＩＰＭＮと高危険ＩＰＭＮを区別して探知するために、実施例１５の試料試験６に対して、実施例１６のＭＭＳ分析法と実質的に同様な方法で下記表１９に示す試験を行った。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表１９および図６４乃至図８９に示した。
【０２２８】
【表１９】
2018141795.tif 000024
【０２２９】
上記表１９および図６４乃至図８９に示されているように、本発明によるマーカーまたは２以上のマーカー組み合わせは、低危険群ＩＰＭＮと区別されるように高危険群ＩＰＭＮを選別的に探知するための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明による組み合わせマーカーは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より高危険群ＩＰＭＮ探知性能がさらに優れているのを確認することができた。
【０２３０】
実施例１８：ＥＬＩＳＡ方法による低危険ＩＰＭＮと高危険ＩＰＭＮの選別探知
実施例１７でＭＲＭ−ＭＳ方法を用いてマーカーの膵臓癌区分に対する診断性能を分析したことをＥＬＩＳＡ方法で性能再現有無を確認し、ＥＬＩＳＡ方法でも表２０のマーカー組み合わせは高危険ＩＰＭＮの区別診断性能が優れているのを確認することができた。
【０２３１】
具体的に、低危険ＩＰＭＮと高危険ＩＰＭＮを区別して探知するために、実施例１５の試験７に対して、実施例６のＥＬＩＳＡ分析法と実質的に同様な方法で下記表２０に示す試験を行った。前記ＡＵＣおよびＳｎ|Ｓｐ＝０．９の測定結果を表３４および図９０乃至図１００に示した。
【０２３２】
【表２０】
2018141795.tif 000025
【０２３３】
上記表２０および図９０乃至図１００に示されているように、本発明によるマーカーまたは２以上のマーカー組み合わせは低危険群ＩＰＭＮと区別されるように高危険群ＩＰＭＮを選別的に探知するための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるマーカーは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より高危険群ＩＰＭＮ探知性能がさらに優れているのを確認することができた。
【図１】
2018141795.tif 000027
【図２】
2018141795.tif 000028
【図３】
2018141795.tif 000029
【図４】
2018141795.tif 000030
【図５】
2018141795.tif 000031
【図６】
2018141795.tif 000032
【図７】
2018141795.tif 000033
【図８】
2018141795.tif 000034
【図９】
2018141795.tif 000035
【図１０】
2018141795.tif 000036
【図１１】
2018141795.tif 000037
【図１２】
2018141795.tif 000038
【図１３】
2018141795.tif 000039
【図１４】
2018141795.tif 000040
【図１５】
2018141795.tif 000041
【図１６】
2018141795.tif 000042
【図１７】
2018141795.tif 000043
【図１８】
2018141795.tif 000044
【図１９】
2018141795.tif 000045
【図２０】
2018141795.tif 000046
【図２１】
2018141795.tif 000047
【図２２】
2018141795.tif 000048
【図２３】
2018141795.tif 000049
【図２４】
2018141795.tif 000050
【図２５】
2018141795.tif 000051
【図２６】
2018141795.tif 000052
【図２７】
2018141795.tif 000053
【図２８】
2018141795.tif 000054
【図２９】
2018141795.tif 000055
【図３０】
2018141795.tif 000056
【図３１】
2018141795.tif 000057
【図３２】
2018141795.tif 000058
【図３３】
2018141795.tif 000059
【図３４】
2018141795.tif 000060
【図３５】
2018141795.tif 000061
【図３６】
2018141795.tif 000062
【図３７】
2018141795.tif 000063
【図３８】
2018141795.tif 000064
【図３９】
2018141795.tif 000065
【図４０】
2018141795.tif 000066
【図４１】
2018141795.tif 000067
【図４２】
2018141795.tif 000068
【図４３】
2018141795.tif 000069
【図４４】
2018141795.tif 000070
【図４５】
2018141795.tif 000071
【図４６】
2018141795.tif 000072
【図４７】
2018141795.tif 000073
【図４８】
2018141795.tif 000074
【図４９】
2018141795.tif 000075
【図５０】
2018141795.tif 000076
【図５１】
2018141795.tif 000077
【図５２】
2018141795.tif 000078
【図５３】
2018141795.tif 000079
【図５４】
2018141795.tif 000080
【図５５】
2018141795.tif 000081
【図５６】
2018141795.tif 000082
【図５７】
2018141795.tif 000083
【図５８】
2018141795.tif 000084
【図５９】
2018141795.tif 000085
【図６０】
2018141795.tif 000086
【図６１】
2018141795.tif 000087
【図６２】
2018141795.tif 000088
【図６３】
2018141795.tif 000089
【図６４】
2018141795.tif 000090
【図６５】
2018141795.tif 000091
【図６６】
2018141795.tif 000092
【図６７】
2018141795.tif 000093
【図６８】
2018141795.tif 000094
【図６９】
2018141795.tif 000095
【図７０】
2018141795.tif 000096
【図７１】
2018141795.tif 000097
【図７２】
2018141795.tif 000098
【図７３】
2018141795.tif 000099
【図７４】
2018141795.tif 000100
【図７５】
2018141795.tif 000101
【図７６】
2018141795.tif 000102
【図７７】
2018141795.tif 000103
【図７８】
2018141795.tif 000104
【図７９】
2018141795.tif 000105
【図８０】
2018141795.tif 000106
【図８１】
2018141795.tif 000107
【図８２】
2018141795.tif 000108
【図８３】
2018141795.tif 000109
【図８４】
2018141795.tif 000110
【図８５】
2018141795.tif 000111
【図８６】
2018141795.tif 000112
【図８７】
2018141795.tif 000113
【図８８】
2018141795.tif 000114
【図８９】
2018141795.tif 000115
【図９０】
2018141795.tif 000116
【図９１】
2018141795.tif 000117
【図９２】
2018141795.tif 000118
【図９３】
2018141795.tif 000119
【図９４】
2018141795.tif 000120
【図９５】
2018141795.tif 000121
【図９６】
2018141795.tif 000122
【図９７】
2018141795.tif 000123
【図９８】
2018141795.tif 000124
【図９９】
2018141795.tif 000125
【図１００】
2018141795.tif 000126
【手続補正書】
【提出日】平成30年4月9日(2018.4.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の試料での、ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ １、ＬＲＧ１）を含む膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ ｐａｐｉｌｌａｒｙ ｍｕｃｉｎｏｕｓ ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）マーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物であって、
前記試料が対象から分離された血液、血清または血漿である、
高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物。
【請求項２】
前記組成物は、低危険群ＩＰＭＮと区別して高危険群ＩＰＭＮを選別するものである請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ＩＰＭＮマーカーは、ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種以上のマーカーを追加的に含むものである請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＩＰＭＮマーカーは、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種マーカーとＬＲＧ１を含むマーカーである請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＩＰＭＮマーカーは、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された２種のマーカーとＬＲＧ１を含む組み合わせマーカーである請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
対象の試料での、
ＣＬＵ（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ  ｐｒｅｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）；および
ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＬＲＧ１）、ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、ＴＴＲ（Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ、ＡＴＴＲ、Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎ、ＴＢＰＡ）、Ｃ１Ｒ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ１ｒ  ｓｕｂｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）およびＫＬＫＢ１（Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ；）からなる群より選択された一つ以上のマーカーを含むＩＰＭＮマーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物であって、
前記試料が対象から分離された血液、血清または血漿である、
高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物。
【請求項７】
前記ＩＰＭＮマーカーは、ＬＲＧ１、ＣＡ１９−９、ＴＴＲ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種マーカーとＣＬＵを含む組み合わせマーカーである請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＩＰＭＮマーカーは、ＬＲＧ１、ＣＡ１９−９、ＴＴＲ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された２種のマーカーとＣＬＵを含む組み合わせマーカーである請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
前記ＬＲＧ１蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿４４３２０４．１のアミノ酸配列を含み、前記ＴＴＲ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿０００３６２．１のアミノ酸配列を含み、前記Ｃ１Ｒ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿００１７２４．３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＬＵ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿００１８２２．３のアミノ酸配列を含み、前記ＫＬＫＢ１蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿０００８８３．２アミノ酸配列を含む請求項１乃至８のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記蛋白質の発現水準を測定する製剤が、前記蛋白質に特異的に結合する抗体、オリゴペプチド、リガンド、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）またはアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を含む請求項１または６に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤が、前記遺伝子に特異的に結合するプライマー、プローブまたはアンチセンスヌクレオチドを含む請求項１または６に記載の組成物。
【請求項１２】
請求項１乃至１１のうちのいずれか一項による組成物を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用キット。
【請求項１３】
前記キットが、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）キット、ＤＮＡチップキット、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）キット、蛋白質チップキット、ラピッド（ｒａｐｉｄ）キットまたはＭＲＭ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）キットである請求項１２に記載の高危険群ＩＰＭＮの選別診断用キット。
【請求項１４】
対象の試料に対して、請求項１乃至１１のうちのいずれか一項による高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物による膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）マーカー蛋白質の発現水準またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準をそれぞれ測定する段階、および
前記対象の高危険ＩＰＭＮ有無を決定するために、前記測定されたマーカーの発現水準を、対照群マーカーの発現水準と比較する段階を含み、
前記試料が対象から分離された血液、血清または血漿である、
高危険群ＩＰＭＮの診断の情報を提供する方法。
【請求項１５】
前記対象は、外科的切除術によってＩＰＭＮ組織が除去された患者である請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記対照群は、正常群、ＩＰＭＮと膵管腺癌腫を除いた膵臓疾患を有する患者、または低危険ＩＰＭＮを有する対象である請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記高危険群ＩＰＭＮは、高異形成（Ｈｉｇｈ  ｇｒａｄｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）と侵襲型（ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｔｙｐｅ）のＩＰＭＮを含む請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記比較する段階において、測定対象の試料での（ａ）ＣＡ１９−９および（ｂ）ＬＲＧ１発現水準が対照群での発現水準より高く、測定対象の試料での（ｃ）ＴＴＲ、ＣＬＵ、およびＫＬＫＢ１発現水準が正常対照群での発現水準より低いか、測定対象の試料でのＣ１Ｒの発現水準が正常対照群での発現水準より高い場合、高危険ＩＰＭＮと決定するために、前記マーカーの発現水準を比較する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記高危険ＩＰＭＮは、ＩＰＭＮ由来膵管腺癌腫を含む請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記マーカーの発現水準測定が、該当蛋白質にそれぞれ特異的に結合する抗体、オリゴペプチド、リガンド、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）またはアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を用いることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
前記マーカーの発現水準測定または比較が、
蛋白質チップ分析、免疫測定法、リガンドバインディングアッセイ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｍａｔｒｉｘ  Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｓｕｌｆａｃｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、放射免疫測定、放射免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動、組織免疫染色、補体結合分析法、二次元電気泳動分析、液体クロマトグラフィー−質量分析（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、ＬＣ−ＭＳ）、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ／Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ウエスタンブロット法およびＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）からなる群より選択されるものを用いて行われることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
前記ｍＲＮＡ発現水準測定が、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、競合的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ（ＲＰＡ）、ノーザンブロッティングまたはＤＮＡチップによって行われることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２３３】
上記表２０および図９０乃至図１００に示されているように、本発明によるマーカーまたは２以上のマーカー組み合わせは低危険群ＩＰＭＮと区別されるように高危険群ＩＰＭＮを選別的に探知するための診断マーカーとしての性能が非常に優れていることが確認された。特に、本発明によるマーカーは商用膵臓癌診断マーカーであるＣＡ１９−９を単独で使用した時より高危険群ＩＰＭＮ探知性能がさらに優れているのを確認することができた。
以下、本発明の実施形態を示す。
（１）（ａ）ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、（ｂ）ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＬＲＧ）および（ｃ）ＴＴＲ（Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ、ＡＴＴＲ、Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎ、ＴＢＰＡ）；Ｃ１Ｒ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ１ｒ  ｓｕｂｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）、ＣＬＵ（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ  ｐｒｅｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）およびＫＬＫＢ１（Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ；）からなる群より選択された一つ以上のマーカーを含む膵臓癌診断用マーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、膵臓癌診断用組成物。
（２）前記膵臓癌診断は、正常群と区別して膵臓癌を選別的に検出するか、多様な癌のうちの膵臓癌を選別的に検出するか、ＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ未満である膵臓癌を検出することである（１）に記載の組成物。
（３）前記膵臓癌は、膵管腺癌腫または高危険群膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）である（１）に記載の組成物。
（４）前記膵管腺癌腫は、１期または２期の膵管腺癌腫である（３）に記載の組成物。
（５）膵管腺癌腫は、ＩＰＭＮ由来したものではない（３）に記載の組成物。
（６）前記ＬＲＧ１蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿４４３２０４．１のアミノ酸配列を含み、前記ＴＴＲ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿０００３６２．１のアミノ酸配列を含み、前記Ｃ１Ｒ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿００１７２４．３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＬＵ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿００１８２２．３のアミノ酸配列を含み、前記ＫＬＫＢ１蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿０００８８３．２アミノ酸配列を含む（１）に記載の組成物。
（７）前記マーカー蛋白質の発現水準を測定する製剤が前記蛋白質に特異的に結合する抗体、オリゴペプチド、リガンド、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）またはアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を含むことを特徴とする、（１）に記載の膵臓癌診断用組成物。
（８）前記マーカーｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤が前記遺伝子に特異的に結合するプライマー、プローブまたはアンチセンスヌクレオチドを含むことを特徴とする、（１）に記載の膵臓癌診断用組成物。
（９）（１）乃至（８）のうちのいずれか一による組成物を含む、膵臓癌診断用キット。
（１０）前記キットがＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）キット、ＤＮＡチップキット、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）キット、蛋白質チップキット、ラピッド（ｒａｐｉｄ）キットまたはＭＲＭ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）キットであることを特徴とする、（９）に記載の膵臓癌診断用キット。
（１１）対象の試料での少なくとも３種以上の膵臓癌マーカー蛋白質の発現水準またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準を測定する段階、前記測定された各マーカーの発現水準を、それぞれ正常対照群試料から得られたマーカーの発現水準と比較する段階、および前記発現水準の比較結果を用いて前記対象の膵臓癌発病危険性を決定する段階を含み、前記少なくとも３種以上の膵臓癌マーカーは、（ａ）ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、（ｂ）ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＬＲＧ）および（ｃ）ＴＴＲ（Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ、ＡＴＴＲ、Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎ、ＴＢＰＡ）；Ｃ１Ｒ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ１ｒ  ｓｕｂｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）、ＣＬＵ（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ  ｐｒｅｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）およびＫＬＫＢ１（Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ；）からなる群より選択された一つ以上のマーカーを含む膵臓癌診断用マーカーである、膵臓癌の診断方法。
（１２）前記決定段階は、前記マーカーの発現水準を比較した結果、測定対象の試料での（ａ）ＣＡ１９−９および（ｂ）ＬＲＧ１発現水準がそれぞれ正常対照群での発現水準より高く、測定対象の試料での（ｃ）ＴＴＲ、ＣＬＵ、およびＫＬＫＢ１発現水準が正常対照群での発現水準より低いか、測定対象の試料でのＣ１Ｒの発現水準が正常対照群での発現水準より高い場合、膵臓癌と決定する、（１１）に記載の膵臓癌の診断方法。
（１３）前記膵臓癌の決定段階は、前記マーカーの発現水準を下記関数式１に代入して膵臓癌発病可能性を判定する段階を含む、（１１）に記載の膵臓癌の診断方法：
＜関数式１＞
【数４】
2018141795.tif 000127
上記の式において、
ｘは膵臓癌マーカーのうちのいずれか一つの発現水準測定値、
αｉはＳＶＭ（Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｍａｃｈｉｎｅ）におけるラグランジュ乗数、
ｙｉは正常群／膵臓癌群の識別子、
ｘｉは基準測定値、そして
ｂは補正値を意味する。
（１４）前記試料が血液、血清または血漿である、（１１）に記載の膵臓癌の診断方法。
（１５）前記マーカーの発現水準測定が該当蛋白質にそれぞれ特異的に結合する抗体、オリゴペプチド、リガンド、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）またはアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を用いることである、（１１）に記載の膵臓癌の診断方法。
（１６）前記マーカーの発現水準測定または比較が、蛋白質チップ分析、免疫測定法、リガンドバインディングアッセイ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｍａｔｒｉｘ  Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｓｕｌｆａｃｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、放射免疫測定、放射免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動、組織免疫染色、補体結合分析法、二次元電気泳動分析、液体クロマトグラフィー−質量分析（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、ＬＣ−ＭＳ）、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ／Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ウエスタンブロット法およびＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）からなる群より選択されるものを用いて行われる、（１１）に記載の膵臓癌の診断方法。
（１７）前記ｍＲＮＡ発現水準測定が、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、競合的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ（ＲＰＡ）、ノーザンブロッティングまたはＤＮＡチップによって行われる、（１１）に記載の膵臓癌の診断方法。
（１８）前記膵臓癌は膵管腺癌腫（ＰＤＡＣ）可能性を有する対象である（１１）に記載の方法。
（１９）前記膵管腺癌腫は、ＩＰＭＮ由来の膵管腺癌腫である（１８）に記載の方法。
（２０）前記膵臓癌診断は、正常群および癌以外の膵臓関連疾患と区別して膵臓癌を選別的に検出するか、多様な癌のうちの膵臓癌を選別的に検出するか、ＣＡ１９−９の数値が３７Ｕ／ｍｌ未満である膵臓癌を検出することである（１１）に記載の方法。
（２１）前記膵臓癌診断は、膵臓炎および胆嚢炎からなる群れより選択された１種以上の膵臓関連疾患から膵臓癌を選別的に検出することである（２０）に記載の方法。
（２２）前記膵臓癌は、膵管腺癌腫または高危険群膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）である（１１）に記載の方法。
（２３）ＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ１、ＬＲＧ１）を含む膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）マーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物。
（２４）前記組成物は、低危険群ＩＰＭＮと区別して高危険群ＩＰＭＮを選別するものである（２３）に記載の組成物。
（２５）前記ＩＰＭＮマーカーは、ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種以上のマーカーを追加的に含むものである（２３）に記載の組成物。
（２６）前記ＩＰＭＮマーカーは、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種マーカーとＬＲＧ１を含むマーカーである（２５）に記載の組成物。
（２７）前記ＩＰＭＮマーカーは、ＴＴＲ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＵおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された２種のマーカーとＬＲＧ１を含む組み合わせマーカーである（２５）に記載の組成物。
（２８）ＣＬＵ（Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ  ｐｒｅｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）；およびＬＲＧ１（Ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ａｌｐｈａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＬＲＧ１）、ＣＡ１９−９（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  １９−９）、ＴＴＲ（Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ、ＡＴＴＲ、Ｐｒｅａｌｂｕｍｉｎ、ＴＢＰＡ）、Ｃ１Ｒ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ１ｒ  ｓｕｂｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）およびＫＬＫＢ１（Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ；）からなる群より選択された一つ以上のマーカーを含むＩＰＭＮマーカー蛋白質またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物。
（２９）前記ＩＰＭＮマーカーは、ＬＲＧ１、ＣＡ１９−９、ＴＴＲ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された１種マーカーとＣＬＵを含む組み合わせマーカーである（２８）に記載の組成物。
（３０）前記ＩＰＭＮマーカーは、ＬＲＧ１、ＣＡ１９−９、ＴＴＲ、Ｃ１ＲおよびＫＬＫＢ１からなる群より選択された２種のマーカーとＬＲＧ１を含む組み合わせマーカーである（２８）に記載の組成物。
（３１）前記ＬＲＧ１蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿４４３２０４．１のアミノ酸配列を含み、前記ＴＴＲ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿０００３６２．１のアミノ酸配列を含み、前記Ｃ１Ｒ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿００１７２４．３のアミノ酸配列を含み、前記ＣＬＵ蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿００１８２２．３のアミノ酸配列を含み、前記ＫＬＫＢ１蛋白質はＮＣＰＩ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＰ＿０００８８３．２アミノ酸配列を含む（２６）乃至（３０）のうちのいずれか一に記載の組成物。
（３２）前記蛋白質の発現水準を測定する製剤が、前記蛋白質に特異的に結合する抗体、オリゴペプチド、リガンド、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）またはアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を含む（２３）または（２８）に記載の組成物。
（３３）前記ｍＲＮＡの発現水準を測定する製剤が、前記遺伝子に特異的に結合するプライマー、プローブまたはアンチセンスヌクレオチドを含む（２３）または（２８）に記載の組成物。
（３４）（２６）乃至（３０）のうちのいずれか一による組成物を含む、高危険群ＩＰＭＮの選別診断用キット。
（３５）前記キットが、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）キット、ＤＮＡチップキット、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）キット、蛋白質チップキット、ラピッド（ｒａｐｉｄ）キットまたはＭＲＭ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）キットである（３４）に記載の高危険群ＩＰＭＮの選別診断用キット。
（３６）対象の試料に対して、（２６）乃至（３０）のうちのいずれか一による高危険群ＩＰＭＮの選別診断用組成物による膵管内乳頭粘液性腫瘍（Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ  ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｎｅｏｐｌａｓｍ、ＩＰＭＮ）マーカー蛋白質の発現水準またはこれを暗号化する遺伝子のｍＲＮＡ発現水準をそれぞれ測定する段階、前記測定されたマーカーの発現水準を、対照群マーカーの発現水準と比較する段階、および前記マーカー発現水準の比較結果を用いて前記対象の高危険ＩＰＭＮ有無を決定する段階を含む、高危険群ＩＰＭＮを診断する方法。
（３７）前記マーカーの発現水準を測定する段階以前に、対象がＩＰＭＮを有するか否かを確認する段階を追加的に含む（３６）に記載の方法。
（３８）前記確認する段階は、画像診断法、組織検査法または遺伝子マーカーを用いた方法によって行われる（３７）に記載の方法。
（３９）前記対象は、外科的切除術によってＩＰＭＮ組織が除去された患者である（３６）に記載の方法。
（４０）前記対照群は、正常群、ＩＰＭＮと膵管腺癌腫を除いた膵臓疾患を有する患者、または低危険ＩＰＭＮを有する対象である（３６）に記載の方法。
（４１）前記高危険群ＩＰＭＮは、高異形成（Ｈｉｇｈ  ｇｒａｄｅ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）と侵襲型（ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｔｙｐｅ）のＩＰＭＮを含む（３６）に記載の方法。
（４２）前記方法は、対象の高危険ＩＰＭＮと決定された場合、外科的切除術または薬物投与の処置段階遂行する段階を追加的に含む（３６）に記載の方法。
（４３）前記方法は、対象の低危険ＩＰＭＮと決定された場合、薬物投与または予後モニタリングを遂行する段階を追加的に含む（３８）に記載の方法。
（４４）前記高危険ＩＰＭＮの決定段階は、前記マーカーの発現水準を比較した結果、測定対象の試料での（ａ）ＣＡ１９−９および（ｂ）ＬＲＧ１発現水準が対照群での発現水準より高く、測定対象の試料での（ｃ）ＴＴＲ、ＣＬＵ、およびＫＬＫＢ１発現水準が正常対照群での発現水準より低いか、測定対象の試料でのＣ１Ｒの発現水準が正常対照群での発現水準より高い場合、対象の高危険ＩＰＭＮと決定する（３６）に記載の方法。
（４５）前記高危険ＩＰＭＮは、ＩＰＭＮ由来膵管腺癌腫を含む（３６）に記載の方法。
（４６）前記試料が、血液、血清または血漿であることを特徴とする、（３６）に記載の方法。
（４７）前記マーカーの発現水準測定が、該当蛋白質にそれぞれ特異的に結合する抗体、オリゴペプチド、リガンド、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）またはアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を用いることを特徴とする（３６）に記載の方法。
（４８）前記マーカーの発現水準測定または比較が、蛋白質チップ分析、免疫測定法、リガンドバインディングアッセイ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｍａｔｒｉｘ  Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ（Ｓｕｌｆａｃｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｌａｓｅｒ  Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、放射免疫測定、放射免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動、組織免疫染色、補体結合分析法、二次元電気泳動分析、液体クロマトグラフィー−質量分析（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、ＬＣ−ＭＳ）、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ／Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ウエスタンブロット法およびＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）からなる群より選択されるものを用いて行われることを特徴とする（３６）に記載の方法。
（４９）前記ｍＲＮＡ発現水準測定が、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、競合的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リボヌクレアーゼプロテクションアッセイ（ＲＰＡ）、ノーザンブロッティングまたはＤＮＡチップによって行われることを特徴とする（３６）に記載の方法。