(57)【要約】      （修正有）【課題】黄斑変性、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症、未熟児網膜症、弾力線維性仮性黄色腫、視神経乳頭ドルーゼン、極度の近視、又は悪性近視性変性を含む網膜の障害及び疾患を治療するための方法の提供。【解決手段】ＦＧＧＲＭＤＲＩ、ＦＧＬＫＬＤＲＩ、ＡＧＡＡＬＳＰＬ、ＦＫＮＬＬＤＨＬ、ＬＫＳＫＬＲＬ、ＦＧＫＲＭＤＲＩ、ＦＧＧＲＩＤＲＩ、ＡＧＡＡＬＳＰＬ、又はＡＧＫＡＬＳＰＬに代表されるモチーフを含むか、又は結合する１−１４２のアミノ酸残基を含む化合物を対象に投与することを含む方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療を必要としている対象において網膜の障害または疾患を治療する方法であって、前
記対象に化合物を投与することを含み、前記化合物が、保存されたモチーフである（Ｒｅ
ｓ１）−（Ｒｅｓ２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒｅｓ４）−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（
Ｒｅｓ７）−（Ｒｅｓ８）を含み、式中、
Ｒｅｓ１−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、１２個未満の炭素を有する、ベ
ンジル、アルキル、アルキレン、アルケニル、アルキルアリールから選択される、疎水性
、非極性、および非イオン性の側鎖から選択される側鎖を有する、アミノ酸またはその模
倣体であり、
Ｒｅｓ２−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、両親媒性側鎖、親水性側鎖、双
性イオン、グリシン（Ｇ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）、およ
びアスパラギン（Ｎ）である側鎖を有する、アミノ酸またはその模倣体であり、
Ｒｅｓ３−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、いかなる環も大きさが５員また
は６員であってもよいことを除き、５員未満の長さの側鎖、およびグリシン（Ｇ）、ヒス
チジン（Ｈ）  アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、ロイシン（Ｌ）、アラニン（Ａ）を
有する、アミノ酸またはその模倣体であり、
Ｒｅｓ４−は、１個から約１２個までの炭素を含む側鎖を有し、アミノ、ヒドロキシル
、アミド、カルボキシ、アリール、ヘテロアリールおよび天然に存在する２０種のアミノ
酸のうちのいずれかから選択される構成要素をその上に有する、５個以下の原子を有する
リンカーまたはアミノ酸、エーテル、エステル、ケトン、アルキル、アルキレン、アミド
のリンカーであり、
Ｒｅｓ５−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、疎水性、非極性、非イオン性、
脂肪族の、側鎖から選択される側鎖、およびロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、バリ
ン（Ｖ）、アラニン（Ａ）、またはメチオニン（Ｍ）を有する、アミノ酸またはその模倣
体であり、
Ｒｅｓ６−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、極性側鎖、またはアミノ酸のセ
リン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アルギニン（Ｒ）、およびグルタミン酸（Ｅ）を有
する、アミノ酸またはその模倣体であり、
Ｒｅｓ７−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、１個から約１２個までの炭素を
含む側鎖、ならびにアミノ、ヒドロキシル、アミド、カルボキシ、アリール、ヘテロアリ
ールおよび天然に存在する２０種のアミノ酸のうちのいずれかから選択される構成要素を
その上に有する、アミノ酸またはその模倣体であり、
Ｒｅｓ８−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、疎水性、非極性、および非イオ
ン性の側鎖、ならびにアミノ酸のアラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）
、バリン（Ｖ）を有し、Ｃ１からＣ１２のアルキル、アルキレン、およびアルケニルから
選択される側鎖を有する、アミノ酸またはその模倣体であり、
Ｒｅｓ１、Ｒｅｓ２、Ｒｅｓ３、Ｒｅｓ４、Ｒｅｓ５、Ｒｅｓ６、Ｒｅｓ７、およびＲ
ｅｓ８のそれぞれが、共有結合または非共有結合でそれぞれの隣接した残基に結合してお
り、前記化合物が、約３０未満の残基を有する、
方法。
【請求項２】
Ｒｅｓ１−が、フェニルアラニン（Ｆ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイ
シン（Ｉ）、およびバリン（Ｖ）から選択され、
Ｒｅｓ２−が、グリシン（Ｇ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）
、およびアスパラギン（Ｎ）から選択され、
Ｒｅｓ３が、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）  アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）
、ロイシン（Ｌ）、およびアラニン（Ａ）から選択され、
Ｒｅｓ４−が、任意のアミノ酸から選択され、
Ｒｅｓ５−が、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、アラニン（Ａ）
、およびメチオニン（Ｍ）から選択され、
Ｒｅｓ６−が、セリン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アルギニン（Ｒ）、およびグル
タミン酸（Ｅ）から選択され、
Ｒｅｓ７−が、任意のアミノ酸から選択され、
Ｒｅｓ８−が、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、およびバリン
（Ｖ）から選択される、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒｅｓ１−が、フェニルアラニン（Ｆ）、アラニン（Ａ）、およびロイシン（Ｌ）から
選択され、
Ｒｅｓ２−が、グリシン（Ｇ）およびリシン（Ｋ）から選択され、
Ｒｅｓ３が、グリシン（Ｇ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、ロイシン（Ｌ）お
よびアラニン（Ａ）から選択され、
Ｒｅｓ４−が、天然アミノ酸から選択され、
Ｒｅｓ５−が、ロイシン（Ｌ）およびメチオニン（Ｍ）から選択され、
Ｒｅｓ６−が、セリン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ）、およびアルギニン（Ｒ）から選
択され、
Ｒｅｓ７−が、天然アミノ酸から選択され、
Ｒｅｓ８−が、ロイシン（Ｌ）およびイソロイシン（Ｉ）から選択される、
請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒｅｓ４−が、アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）、アラニン（Ａ）、およびロイシン（
Ｌ）から選択され、かつ／またはＲｅｓ７−が、アルギニン（Ｒ）、プロリン（Ｐ）、ヒ
スチジン（Ｈ）、およびアラニン（Ａ）から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記化合物が、ＦＧＧＲＭＤＲＩ；ＦＧＬＫＬＤＲＩ、ＡＧＡＡＬＳＰＬ、ＦＫＮＬＬ
ＤＨＬ、ＬＫＳＫＬＲＡＬ、ＦＧＫＲＭＤＲＩ、ＦＧＧＲＩＤＲＩ、ＡＧＡＡＬＳＰＬ、
またはＡＧＫＡＬＳＰＬを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記化合物が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４
、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、
２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４
１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４
、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、
６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８
１、８２、８３、８４、８５６、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９
４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５
、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５
、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５
、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５
、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１または１４２のアミノ酸残基を含み
、前記アミノ酸残基が、前記（Ｒｅｓ１）−（Ｒｅｓ２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒｅｓ４）
−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅｓ７）−（Ｒｅｓ８）モチーフを含むか、または
共有結合もしくは非共有結合でＲｅｓ１、Ｒｅｓ２、Ｒｅｓ３、Ｒｅｓ４、Ｒｅｓ５、Ｒ
ｅｓ６、Ｒｅｓ７、もしくはＲｅｓ８部位のうちのいずれかに結合している、請求項１に
記載の方法。
【請求項７】
前記化合物が、約１５０未満の残基を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記化合物が、約１４０未満の残基を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記化合物が、約１０から１５０の残基を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記化合物が、約１０から１２５の残基を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記化合物が、約１０から１００の残基を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記化合物のＲｅｓ１、Ｒｅｓ２、Ｒｅｓ３、Ｒｅｓ４、Ｒｅｓ５、Ｒｅｓ６、Ｒｅｓ
７、またはＲｅｓ８部位のうちのいずれかが、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、天然に存在
しないアミノ酸、またはアミノ酸の誘導体もしくは類似体である、請求項１に記載の方法
。
【請求項１３】
前記網膜の障害または疾患が、黄斑変性、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞
症、未熟児網膜症、弾力線維性仮性黄色腫、視神経乳頭ドルーゼン、極度の近視、または
悪性近視性変性を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記黄斑変性が、「滲出型」加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を含む、請求項１３に記載の方法
。
【請求項１５】
前記網膜の障害または疾患が、前記網膜内への脈絡膜血管の伸長または増殖によって引
き起こされるまたはそれに関連する、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記網膜の障害または疾患が、前記既存の網膜脈管系の伸長、または前記網膜内への脈
絡膜血管の増殖（脈絡膜血管新生；ＣＮＶ）によって引き起こされるまたはそれに関連す
る、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記網膜の障害または疾患が次第に悪化する、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記網膜の障害または疾患が寛解傾向にある、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記化合物が、前記対象に局所的、局部的、または全身的に投与される、請求項１に記
載の方法。
【請求項２０】
前記化合物が、前記対象の眼または両眼に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記化合物が、注射、注入、経口または外用によって投与される、請求項１に記載の方
法。
【請求項２２】
前記化合物が、硝子体内注射を介して前記対象に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記治療が、前記網膜の障害もしくは疾患の１つもしくは複数の症状の重症度もしくは
期間を低減もしくは阻害する、または前記網膜の障害もしくは疾患の進行もしくは悪化を
低減もしくは阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記治療が、前記対象の前記網膜内への脈絡膜血管の伸長または増殖を低減または阻害
する、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象が、網膜障害の治療もしくは療法の候補である、それを受けている、またはそ
れを受けてきた、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象に血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたは阻害剤を前記対象に投
与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記化合物が、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたは阻害剤の投与の前
に、実質的にそれと同時に、それとの混合物として、またはその後に投与される、請求項
２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記対象が哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記対象がヒトである、請求項２８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ＡＮＰ、ＢＮＰおよびＣＮＰならびに他の構造的に関連するペプチドに基づ
いた、タンパク質、ペプチド、およびペプチド模倣体、ならびにそれらの誘導体、ならび
に網膜の障害および疾患を治療するための方法および使用に関する。
【０００２】
関連出願情報
本出願は、参照により本明細書にその全体が明白に組み込まれている、２０１１年１２
月１６日に出願された、米国特許出願第６１／５７６，７２０号の優先権を主張する。
【０００３】
導入
天然に存在するペプチド、特定の医薬、および天然物質は、２つ以上の観察される活性
を有し得ることが観察されている。例えば、多くの医薬は、副作用を有し、これは、意図
された主な薬剤の効果に対して、全く関連がなく時に有害であるように見え得る。しかし
、すべてのこうした副作用が、こうした薬剤を服用している患者の健康に有害であるとい
うわけではない。
【０００４】
いくつかの場合において、天然に存在する物質の効果についての知見により、こうした
物質がいくつかの新しい有用性を有し得ることが示されているが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおい
て、その物質の主な観察される効果が、何らかの観察される「新しい活性」を負かしてし
まうこともある。結果として、望ましい新しい活性／効果が単に活性物質の副作用にすぎ
ないので、こうした知見は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの域を出ないか、またはｅｘ  ｖｉｖｏで
も依然として稀である。
【０００５】
こうした知見の一例は、ヒトにおいて、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰ、およびウロジラチン
などの、ナトリウム利尿ペプチド（ＮＰ）が、それらの主要な心血管系効果（例えば、血
液量、血圧、および心機能の制御）に加えて、代謝的効果（例えば、脂肪代謝の調節）お
よび細胞増殖変調（例えば、抗増殖性）効果などの、生物学的活性を有するという発見で
ある［Potterら Endocrine Rev. 27:47(2006)およびその中の参考文献；Vesely, D.L.、C
urr Heart Fail Rep. 4(3):147(2007)。例えば、特定のＮＰは、ヒトの癌の培養物および
動物モデルの双方において癌細胞を死滅させるまたはそれらの増殖を減衰させる能力を有
することが報告されている［Baldiniら、Cell Death Diff.、11:S210〜S212(2004)；Bald
iniら、Melanoma Res. 16:501〜507(2006)；Lelievreら、J. Biol. Chem、276(47):43668
、(2001)；Levinら、Am. J. Physiol. 30:R453〜R457(1991)；Vesely, D.L.、Eur J Clin
Invest 38(8):562(2008)。
【０００６】
実際に、驚くべきことに、抗増殖性効果は、ＮＰ類似体およびそれらの後にモデル化さ
れた、ＮＰＲＣ特異的活性を示す傾向があるペプチド模倣体において見出されている。他
の既知の分子［Baldiniら、Cell Death Diff.、11:S210〜S212(2004)；Baldiniら、Melan
oma Res. 16:501(2006)；Gowerら、Mol. Cell Biochem、293:103(2006)；Lelievreら、J.
Biol. Chem、276(47):43668(2001)；Levin E.R.およびFrank, H.J.L.、Am. J. Physiol.
30:R453〜R457(1991)］もこの発見とよく相関している。さらに、ＮＰＲＣの刺激は、Ｍ
ＡＰキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路を変調させる［Hashim, S.、Li, Y、Anand-Srivastava, M
.B.、Am. J. Heart Cir. Physiol、291:H3144〜H3153(2006)；Lelievreら、J. Biol. Che
m、276(47):43668(2001)］。他の型のＭＡＰＫ阻害剤は、抗癌活性を有することが報告さ
れている［Dhillonら、Oncogen 26:3279(2007)］。
【０００７】
研究者は、ＮＰが、それらの受容体結合特性および生物学的活性の双方に寄与し得る共
通の構造的特徴を共有することを書き留めている［He, X-L.ら、Science 293:1657(2001)
；Moffattら、J. Biol. Chem. 282:36454(2007)；Potterら Endocrine Rev. 27:47(2006)
］。これらとしては、環構造および共有されたアミノ酸配列、またはモチーフなどが挙げ
られる。提唱されているこのモチーフの異なるバージョンとしては、ＣＦＧＸＸＸＤＲＩ
ＸＸＸＸＧＬＧＣ［Potterら、Endocrine Rev. 27:47(2006)］およびＣＦＧＸＸＸＤＲＩ
ＸＸＸＸＧＬＧＣＳ［Heら、Science 293:1657(2001)］などが挙げられる。それぞれの場
合において、２個のＣ残基は、ジスルフィド架橋によって連結される。ＦＧＸＸ（Ｌ／Ｍ
）ＤＲＩ（Ｇ／Ｓ）からなるＮＰモチーフも提唱されている［Moffattら、J. Biol. Chem
. 282:36454(2007)］。このモチーフは、他の内因性ペプチド、例えば、オステオクリン
およびムスクリン（Ｉ残基の置換を有し、後者の場合はＬ残基を有する）においても見出
され、これらは、ＮＰの代謝および細胞増殖変調の効果のうちのいくらかを共有するがそ
れらの心血管系効果を欠いている［Moffattら、J. Biol. Chem. 282:36454(2007)；Nishi
zawa, H.ら、J. Biol. Chem. 279:19391(2004)；Potterら、Endocrine Rev. 27:47(2006)
およびその中の参考文献］。このモチーフは、ナトリウム利尿ペプチドモチーフ（ＮＭ）
と呼ばれている［Moffattら、J. Biol. Chem. 282:36454(2007)］。ＮＰの環構造は、Ｎ
ＰＲＡおよびＮＰＲＢへの結合、ならびに心血管系の活動に必要なようであり［Collinso
n, P.O.、Bus. Brief. Eur. Cardiol、66(2005)およびその中の参考文献；Potterら Endo
crine Rev. 27:47(2006)］、提唱されているすべてのモチーフの要素である、（ＡＮＰに
よって番号付けされた）Ｒ１４残基は、ＮＰＲＣへの結合に必要であると考えられている
［Heら、Science 293:1657(2001)；Lanctotら、特許ＵＳ２００７／００４９２５１Ａ１
；Moffattら、J. Biol. Chem. 282:36454(2007)］。
【０００８】
ＮＰの場合には、３種の特定の型のＮＰ受容体（ＮＰＲ）がＮＰの作用を媒介すると考
えられている。Ａ型受容体（ＮＰＲＡ）およびＢ型受容体（ＮＰＲＢ）は、不可欠なグア
ニリルシクラーゼドメインを有するので、ＮＰシグナル伝達に関与すると考えられている
［Potterら、Endocrine Rev. 27:47(2006)］。Ｃ型受容体（ＮＰＲＣ）は、グアニリルシ
クラーゼドメインを有しておらず、主にクリアランス受容体である（すなわち、再取り込
みによってＮＰを非活性化する）と考えられているが、いくつかの細胞内シグナル伝達経
路に関連があることも示唆されている［Gowerら、Mol. Cell Biochem、293:103(2006)；H
ashimら Am. J. Heart Cir. Physiol、291:H3144〜H3153(2006)；Lelievreら、J. Biol. 
Chem.、276:43668(2001)；Panayiotouら Proc. Brit. Pharm. Soc、41:abs 009P(2005)；
Prinsら、J. Bio. Chem. 271:14156(1996)；Segawaら、Naun.-Schmeid. Arch. Pharmacol
. 357:70(1998)］。
【０００９】
ＮＰのそれぞれは、ＮＰＲＡ、ＮＰＲＢおよびＮＰＲＣへのそれらの親和性はそれぞれ
異なるが、これらのＮＰ受容体と相互作用するようである。ＮＰの相対的な抗癌効力は、
ＮＰＲにおけるそれらの結合親和性に関連することが推測されている［Vesely, D.L.、Eu
r J Clin Invest 38:562(2008)］。
【００１０】
網膜における新しい血管の増殖は、視力に対してきわめて損傷を与える影響を有し得る
いくつかの障害の共通の特徴である［Alexander, L.J. Primary Care of the Posterior 
Segment. 第３版、McGraw Hill、New York、2002、94〜98ページ；Clinical ophthalmolo
gy：a systemic approach；Butterworth、Heinemann、Elsevier、New York、2007の中のK
anski, J.J. Age-related macular degeneration.］。これらの障害としては、増殖糖尿
病網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症、未熟児網膜症、「滲出型」加齢黄斑変性（ＡＭＤ
）、弾力線維性仮性黄色腫、視神経乳頭ドルーゼン、極度の近視、および悪性近視性変性
などが挙げられる。これらの障害の初めの３つにおいて、新しい血管は、既存の網膜脈管
系の伸長であり、残りにおいて、これらは、網膜内への脈絡膜血管の増殖から結果として
生じる（脈絡膜血管新生；ＣＮＶ）。
【００１１】
網膜または脈絡膜のいずれかの循環からの新しい網膜血管の増殖は、血管内皮増殖因子
（ＶＥＧＦ）によって刺激される［Ciulla, T.A.、Rosenfeld, P.J. Curr Opin Ophthalm
ol；20:158(2009)；Age related macular degeneration：A comprehensive textbook. Il
fara III, D.V.、Liggett, P.E.、Mieler, W.F.ら(編)2006；Lippincott, Williams and 
Wilkins、Philadelphia、23〜39ページにあるSpaide, R. Etiology of late-age-related
macular disease.］。網膜内への脈絡膜血管の侵入は、内側の脈絡膜および網膜色素上
皮（ＲＰＥ）細胞層を含む、脈絡膜と感覚網膜との間の障壁における破壊も必要とし得る
。ＶＥＧＦによってＲＰＥ細胞間の連結の弱化を促進することもできる［Ablonczy, Z.、
Crosson, C.E. Exp Eye Res 85:762(2007)］。ＶＥＧＦの阻害剤は、ＡＭＤ（「滲出型」
ＡＭＤ）から生じるＣＮＶのための承認された有効な治療薬であり、ＰＤＲの治療におけ
る初期の結果は、見込みを示している［Ciulla, T.A.、Rosenfeld, P.J. Curr Opin Opht
halmol；20:158(2009)；Simo, R.、Hernandez, C. Diabetologia 51:1570(2008)］。
【００１２】
特定の機構的原理に頼るまたはそれに本発明を制限することなく、本明細書中に記載の
本発明は、ナトリウム利尿ペプチド（ＮＰ）、アナログ、他のペプチドおよびそれらの誘
導体のさらなる活性／効果を目的とする。特に、ＡＮＰ、ＢＮＰおよびＣＮＰならびに他
の構造的に関連するタンパク質、ペプチド、ペプチド模倣体、およびそれらの誘導体は、
網膜の障害および疾患を治療するのに有用である。ＮＰの活性／効果は、ＮＰＲＣ選択的
なＮＰの類似体およびペプチド模倣体によっても生じ得る［Baldiniら、Cell Death Diff
.、11:S210〜S212(2004)；Baldiniら、Melanoma Res. 16:501(2006)；Gowerら、Mol. Cel
l Biochem、293:103(2006)；Lelievreら、J. Biol. Chem、276(47):43668(2001)；Levin 
E.R.およびFrank, H.J.L.、Am. J. Physiol. 30:R453〜R457(1991)］。
【００１３】
概要
本発明は、網膜の障害および疾患の治療に有用な化合物を提供する。本明細書中の化合
物は、これには、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰおよび他の構造的に関連するペプチドに基づい
た、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰのタンパク質、ペプチド、およびペプチド模倣体、ならびに
それらの誘導体および類似体などのＮＰなどが挙げられ、本明細書中で集合的に「ＮＰ化
合物」または簡単に「化合物」と呼ばれるが、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰおよび他の構造的
に関連するペプチドの間で共通の保存されたモチーフを場合によっては共有する。こうし
たＮＰ化合物は、場合によってはＮＰＲＣに結合することができ、または場合によっては
ＮＰＲＣ活性を変調させることができる。保存されたモチーフを含有するがＮＰまたはＮ
ＰＲＣの他の構造的要素を欠いた発明化合物は、網膜の疾患および障害の治療に選択的で
あってもよく、他の構造的要素によって引き起こされる１つまたは複数の副作用、例えば
、他のＮＰまたはＮＰＲによって媒介される心血管系または他の副作用の発生などを低減
する。
【００１４】
ＮＰ化合物は、抗細胞増殖活性を有するモチーフを含有する小さなペプチドを含む。こ
のモチーフは、Ｃ型ＡＮＰ受容体への結合を可能にし、これは、ＥＲＫ活性化の阻害にも
つながり得る。活性の組合せに基づき、ＮＰ化合物は、ＶＥＧＦの活性および／または効
果の阻害において有効であると予想され、これにより、新しい血管の増殖（例えば、血管
新生）に関連する網膜症などの網膜の障害および疾患の治療につながることになる。ＮＰ
化合物は、投与経路に関して現在利用可能なＶＥＧＦ阻害剤を超える利点を有する。現在
の阻害剤は大きなペプチドであり、したがって、硝子体内注射によって投与されなければ
ならず、これは、重篤な内科的合併症を引き起こす恐れがある侵襲性の処置である。より
小さなペプチド、例えば、ＮＰ化合物などは、潜在的には経口または外用によって投与さ
れることもあり得、そのため、硝子体内注射の合併症を低減または回避することによって
、より高頻度の投与が可能になるだけでなく、治療的使用に加えて予防的使用が可能にな
る。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ＶＥＧＦによって誘導される、培養物におけるＲＰＥ細胞間の連結の弱化を示す図であり、この弱化は、それらの細胞の経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）における低減として測定されるものである。この低減は、ＡＮＰによって減衰される。
【００１６】
詳細な説明
本明細書中に開示されているのは、ＡＮＰ、ＢＮＰ、ＣＮＰおよび他の構造的に関連す
るペプチドなど（集合的に「ＮＰ化合物」または簡単に「化合物」と呼ばれる）のＮＰに
基づいた、網膜の障害および疾患の治療に有用な、タンパク質、ペプチド、ペプチド模倣
体、およびその誘導体である。こうしたＮＰ化合物としては、網膜の障害および疾患の治
療に有用な抗細胞増殖活性に関連した保存されたモチーフを有するものなどが挙げられる
。したがって、本発明は、保存されたモチーフを有する化合物などの、ＮＰ化合物、なら
びに、例えば、網膜の障害および疾患を治療するための方法などの、こうした化合物の方
法および使用を提供する。
【００１７】
種々の実施形態において、ＮＰ化合物は、保存されたモチーフ、すなわち、（Ｒｅｓ１
）−（Ｒｅｓ２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒｅｓ４）−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅ
ｓ７）−（Ｒｅｓ８）［式Ｉ］［式中、それぞれの残基は、それらのそれぞれの隣接残基
に（共有結合または非共有結合で）連続および結合されている］と表される、８残基化合
物を含む。保存されたモチーフの主鎖は、直鎖状または環式の鎖、例えば、ペプチドまた
はペプチド模倣性の鎖など、典型的には１アミノ酸配列でありえ、これは、１種または複
数の天然に存在するアミノ酸または天然でないアミノ酸（ｄ−またはｌ−アミノ酸、アル
ファ、ベータまたはガンマアミノ酸など）からなっていてもよい。保存されたモチーフに
付加されているのは、さらなる部分および／または残基であってもよい。主鎖に付加され
ているのは、本明細書中に記載の側鎖であってもよい。したがって、（Ｒｅｓ１）−（Ｒ
ｅｓ２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒｅｓ４）−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅｓ７）−
（Ｒｅｓ８）は、主鎖に付加された側鎖と同様に、保存されたモチーフの残基のうちのい
ずれかに隣接するさらなる部分および／または残基（例えば、アミノ酸）を有し得る。
【００１８】
末端残基の欠失は、活性を完全には減衰させないが、比較的有意に低減させる。例えば
、式１のＲｅｓ１およびＲｅｓ８（両末端）の欠失は、活性を、それを完全に抹消するこ
となく、比例してより低減させると予想される。したがって、保存されたモチーフは、以
下の保存されたモチーフを含有する化合物、ペプチドおよびタンパク質も含む：（Ｒｅｓ
２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒｅｓ４）−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅｓ７）［式２
］；（Ｒｅｓ２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒｅｓ４）−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅ
ｓ７）−（Ｒｅｓ８）［式３；および（Ｒｅｓ１）−（Ｒｅｓ２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒ
ｅｓ４）−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅｓ７）［式４］。
【００１９】
（それぞれ、Ｒｅｓ１、Ｒｅｓ２、Ｒｅｓ３、Ｒｅｓ４、Ｒｅｓ５、Ｒｅｓ６、Ｒｅｓ
７およびＲｅｓ８として）本明細書中に言及されている、それぞれの残基（Ｒｅｓ）は、
より詳細に、以下にさらに定義される。明らかなように、保存されたモチーフの特定の部
位は、構造における有意な変化を可能にするが、他の部位は、より詳細に定義されること
が必要とされる。
【００２０】
Ｒｅｓ１−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、１２個未満の炭素を有する、ベ
ンジル、アルキル、アルキレン、アルケニル、アルキルアリールから選択される、疎水性
、非極性、および非イオン性の側鎖から選択される側鎖を有する、アミノ酸またはその模
倣体であり；
【００２１】
Ｒｅｓ２−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、両親媒性側鎖、親水性側鎖、双
性イオン、グリシン（Ｇ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）、およ
びアスパラギン（Ｎ）である側鎖を有する、アミノ酸またはその模倣体であり；
【００２２】
Ｒｅｓ３−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、いかなる環も大きさが５員また
は６員であってもよいことを除き、５員未満の長さの側鎖、およびグリシン（Ｇ）、ヒス
チジン（Ｈ）アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、ロイシン（Ｌ）、またはアラニン（Ａ
）を有する、アミノ酸またはその模倣体であり；
【００２３】
Ｒｅｓ４−は、１個から約１２個までの炭素を含む側鎖を有し、アミノ、ヒドロキシル
、アミド、カルボキシ、アリール、ヘテロアリールおよび天然に存在する任意のアミノ酸
から選択される構成要素をその上に有する、５個以下の原子を有するリンカーまたはアミ
ノ酸、エーテル、エステル、ケトン、アルキル、アルキレン、アミドのリンカーであり；
【００２４】
Ｒｅｓ５−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、疎水性、非極性、非イオン性、
脂肪族の、側鎖から選択される側鎖、およびロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、バリ
ン（Ｖ）、アラニン（Ａ）、またはメチオニン（Ｍ）を有する、アミノ酸またはその模倣
体であり；
【００２５】
Ｒｅｓ６−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、極性側鎖、またはアミノ酸のセ
リン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アルギニン（Ｒ）、およびグルタミン酸（Ｅ）を有
する、アミノ酸またはその模倣体であり；
【００２６】
Ｒｅｓ７−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、１個から約１２個までの炭素を
含む側鎖、ならびにアミノ、ヒドロキシル、アミド、カルボキシ、アリール、ヘテロアリ
ールおよび天然に存在する任意のアミノ酸から選択される構成要素をその上に有する、ア
ミノ酸またはその模倣体であり；
【００２７】
Ｒｅｓ８−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アル
キル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、疎水性、非極性、および非イオ
ン性の側鎖、およびアミノ酸のアラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、
バリン（Ｖ）を有し、Ｃ１からＣ１２のアルキル、アルキレン、およびアルケニルから選
択される側鎖を有する、アミノ酸またはその模倣体である。
【００２８】
特定のＮＰ化合物の保存されたモチーフは、本明細書中で定義されているように、「主
鎖」、および主鎖に付加された１個または複数の「側鎖」を含む。「主鎖」という用語は
、実例として、アルファアミノ酸からなるポリアミド主鎖を有する天然に存在するアミノ
酸からなるペプチドである。自然界において、これらは、Ｌ−アルファアミノ酸である傾
向がある。保存されたモチーフ、およびそれに付加された残基は、１個または複数のＤ−
アミノ酸を含んでいてもよく、天然でないアミノ酸、およびこれらのＤ−アナログ、なら
びに任意の天然でないアミノ酸の主鎖は、主鎖の定義の範囲内に含まれる。さらに、ベー
タアミノ酸、またはガンマ、デルタまたはイプシロンアナログ、も主鎖の定義に含まれる
。モチーフが、ペプチド模倣体、ポリアミド主鎖を模倣するための他の部分を含むので、
こうした模倣体は、例えば、生体系（例えば、対象）において、例えば、酵素的分解に対
する耐性を高めるため、循環半減期を長くするため、生物学的利用能を高めるため、有効
性を高めるため、効果の期間を長くするためなどに、改良された生物学的安定性およびよ
り大きな半減期をもたらし得る。もう１つの残基においてペプチド模倣体に言及するとき
、「主鎖」としては、例えば、好ましくは５個以下の原子を有する、エーテル、エステル
、ケトン、アルキル、アルキレンまたはアミドのリンカーなどが挙げられ、これに「側鎖
」が付加されている。
【００２９】
実例として、天然に存在するペプチドにおける「側鎖」という用語は、Ｌ−ポリアミド
主鎖に付加された基からなり、文献に記載の２０種の「側鎖」は、広く知られている。さ
らに、より一般的でない側鎖が自然界に存在し、そのうちのいくつかは、天然の側鎖の誘
導体である−これらは、「側鎖」の定義に含まれる。すべてが側鎖の定義に含まれるので
、側鎖が、Ｌ−またはＤ−立体配置で主鎖に付加されているかどうか、またはそれらが、
アルファ、ベータ、ガンマ、デルタ、またはイプシロンアミノ酸において特定の部位にあ
るかどうかは関係ない。側鎖という用語は、天然に存在するアミノ酸およびそれらの変種
で表されるひと揃いの官能性を含み、したがって、スフィドリル、スルホン、カルボキシ
、アニモ、アミド、ヒドロキシル、アルキル、アルキルアリール（またはヘテロアリール
）、アリールまたはヘテロアリール基は、すべてこの定義に含まれる。例えば、例示的な
疎水性側鎖としては、１２個未満の炭素を有する、ベンジル、アルキル、アルキレン、ア
ルケニル、アルキルアリールなどが挙げられるが、これらに限定されない。当業者は、本
明細書から見て、「側鎖」という用語についての幅および多様性を理解する。ペプチド模
倣体に関する場合、主鎖には、側鎖として上に定義されているような、１〜３つの基が付
加されている。典型的には、残基（例えば、Ｒｅｓ１、Ｒｅｓ、２、…など）あたり多く
とも２つ、より典型的には１つの側鎖が存在する。
【００３０】
保存されたモチーフを例示する目的で、既知のアミノ酸を使用するオリゴペプチドは、
本発明を制限するためではなく非限定的な実施形態を例示するために例証されている。例
えば、約８アミノ酸を含む、オリゴペプチドは、保存された抗細胞増殖モチーフを形成す
る。こうしたモチーフは、長さが長くなることによって高まった活性を示し得る（例えば
、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、８、１９、２０など、または
それよりも多くの残基）。当然、保存されたモチーフの内側もしくは外側にあるか、また
はそれに付加されているかどうかにかかわらず、配列の１つまたは複数の部位にある、天
然でないアミノ酸を含む、ペプチド模倣体、誘導体およびアナログが含まれる。
【００３１】
特定の実施形態において、ＡＮＰ関連ペプチド化合物は、以下のように表される保存さ
れたモチーフを有する：（Ｒｅｓ１）−（Ｒｅｓ２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒｅｓ４）−（
Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅｓ７）−（Ｒｅｓ８）［式中、Ｒｅｓ１からＲｅｓ８
のそれぞれは、以下のように定義される］：
【００３２】
Ｒｅｓ１−は、フェニルアラニン（Ｆ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイ
シン（Ｉ）、バリン（Ｖ）などのアミノ酸によって例示される、疎水性、非極性、および
非イオン性の側鎖である。例示的な側鎖としては、典型的には１２個未満の炭素を有する
、アルキル、アルキレン、アルケニル、アルキルアリールなど、より典型的にはＣ１〜Ｃ
５アルキル、またはアリール置換基をその上に有するＣ１〜Ｃ３アルキルが挙げられ得る
。
【００３３】
Ｒｅｓ２−は、グリシン（Ｇ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）
、アスパラギン（Ｎ）などのアミノ酸によって例示される、両親媒性または親水性の側鎖
であり、これには、双性イオンなどが挙げられる。
【００３４】
Ｒｅｓ３は、いかなる環も大きさが５員または６員であってもよいことを除き、典型的
には５員未満の長さの鎖、より好ましくはアルキルの場合は長さがＣ１からＣ３、より好
ましくはＣ０〜Ｃ２であり、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）アスパラギン（Ｎ）、セ
リン（Ｓ）、ロイシン（Ｌ）、アラニン（Ａ）などのアミノ酸によって例示される、大き
さが小さいアミノ酸側鎖である。
【００３５】
Ｒｅｓ４−は、Ｃ１〜Ｃ１２で変化し得る側鎖を有し、２０種の天然に存在するアミノ
酸において見出される多様性によって表されるような、任意の構成要素を有する、およそ
アミノ酸の大きさのリンカーである。結果として、置換基をその上に有する、アミノ酸と
同様のいかなる大きさの、エーテル、エステル、ケトン、アルキル、アルキレンまたはア
ミドのリンカーも好適であり得る。
【００３６】
Ｒｅｓ５−は、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、アラニン（Ａ）
、またはメチオニン（Ｍ）などのアミノ酸によって例示されるように、疎水性、非極性、
非イオン性、脂肪族の、側鎖である。
【００３７】
Ｒｅｓ６−は、アミノ酸のセリン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アルギニン（Ｒ）、
およびグルタミン酸（Ｅ）によって例示される、極性側鎖である。
【００３８】
Ｒｅｓ７−は、Ｃ１〜Ｃ１２で変化し得る側鎖を有し、２０種の天然に存在するアミノ
酸において見出される多様性によって表されるような、任意の構成要素を有する、およそ
アミノ酸の大きさのリンカーである。結果として、置換基をその上に有する、アミノ酸と
同様のいかなる大きさの、エーテル、エステル、ケトン、アルキル、アルキレンまたはア
ミドのリンカーも好適であり得る。
【００３９】
Ｒｅｓ８は、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）な
どのアミノ酸によって例示される、疎水性、非極性、および非イオン性の側鎖である。例
示的な側鎖は、典型的には１２個未満の炭素を有する、アルキル、アルキレン、アルケニ
ルなど、より典型的にはＣ１〜Ｃ５アルキル、またはアリール置換基をその上に有するＣ
１〜Ｃ３アルキルである。
【００４０】
好適な側鎖は、既知の構造、および以下に選択および例示されているもののような既知
のパラメーターを使用して、大きさ、極性、酸性度または塩基性度、および疎水性に基づ
いて選択されてもよい：
【００４１】
【表１】
2018024674.tif 000002
【００４２】
さらに、１個または複数のアミノ酸の置換、本明細書中に記載の誘導体、類似体（ペプ
チド模倣体）での主鎖の変更、および他の変更も意図されている。
【００４３】
本明細書中に開示されるように、保存されたモチーフを含む発明ＮＰ化合物は、保存さ
れたモチーフの残基のうちのいずれか（例えば、（Ｒｅｓ１）−（Ｒｅｓ２）−（Ｒｅｓ
３）−（Ｒｅｓ４）−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅｓ７）−（Ｒｅｓ８）のうち
のいずれか１つ）に隣接するさらなる部分および／または残基（例えば、アミノ酸または
それらの模倣体）を含み得る。典型的には、発明化合物中の残基の数は、保存されたモチ
ーフを含めて、合計約１５０残基未満（例えば、アミノ酸またはそれらの模倣体）になる
ことになる。多様な特定の実施形態において、残基の数は、約８残基から約１４０残基ま
で（例えば、アミノ酸またはそれらの模倣体）を含む。さらなる実施形態において、残基
の数は、約８残基から約１２５残基まで（例えば、アミノ酸またはそれらの模倣体）を含
む。さらなる実施形態において、残基の数は、約８残基から約１００残基まで（例えば、
アミノ酸またはそれらの模倣体）を含む。さらに他の実施形態において、残基の数は、長
さが、約８残基から約９０残基まで（例えば、アミノ酸またはそれらの模倣体）、または
約１０から８０、１０から７０、１０から６０、１０から５０、１０から４０、１０から
３０、１０から２５、または１０から２０残基（例えば、アミノ酸またはそれらの模倣体
）を含む。特定の態様において、
【００４４】
いかなる特定の理論または機序によっても拘束しようとするものではないが、ＮＰＲＣ
受容体への結合は、活性を予測し得るようである。したがって、本発明の化合物は、モチ
ーフを有する種および有さない種、およびＮＰＲＣ受容体を結合することができない保存
されたモチーフを有する化合物を含むが、典型的には、保存されたモチーフを有する化合
物は、ＮＰＲＣ受容体を結合する能力がある。場合によっては選択的に、かつより典型的
には、少なくともマイクロモル範囲において、Ｋｉ値によって決定される、ＮＰＲＣ受容
体に対する平衡受容体結合親和性を有するＮＰＲＣ受容体を結合する能力がある。さらに
、保存されたモチーフを有する化合物が、環構造のためのＣ残基も、以前に同定されてい
るすべてのモチーフにおける活性にきわめて重要であるとみなされているＲ１４残基も必
要としないようである。
【００４５】
保存されたモチーフは、ＡＮＰ、ＣＮＰ、およびＢＮＰ、ならびに他の関連ペプチド、
例えば、ＬＡＮＰ、ＫＰ、ＶＤＬ、およびＡＮＰ類似体、ｃＡＮＦ、によって共有され、
これらのうちのすべてが活性を有する。ＣＮＰは、ＡＮＰ、ＬＡＮＰ、ＫＰまたはＶＤＬ
よりも活性が低く、モチーフの１つの残基上に少し大きなアミノ酸側鎖を有する（Ｇ、Ａ
、ＮまたはＳの代わりにＬ）。ＢＮＰは、この部位（Ｋ）にさらにより大きな側鎖を有し
、電気的な特性において異なるものである。小分子ＡＮＰ誘導体は、ＮＰＲＣにも結合し
、モチーフに基づいて説明可能な構造も有する。例えば、１種のこれらの分子におけるＲ
１４残基の等価物の排除は、活性を排除しなかった。したがって、こうしたタンパク質、
ペプチド、模倣体、誘導体および類似体はすべて、本明細書中に記載のＮＰ化合物のクラ
スの範囲内にあると考えられる。保存されたモチーフが、以前に記載されているＮＰモチ
ーフと有意に異なり、ＮＰモチーフが、これらのペプチドの心血管系効果の根底にあると
考えられているので、ＮＰモチーフ（複数可）を有さずに、保存されたモチーフを含有す
る化合物は、たとえあるとしてもより少ない天然のＮＰペプチドまたはタンパク質の心血
管系の副作用で、望ましい活性を有すると予測され、したがって、含まれる。
【００４６】
本発明における保存されたモチーフ「残基」（すなわち、アミノ酸またはその模倣体）
ならびにそれらのサブユニットは、ａ）天然に存在していても天然に存在していなくても
よい、ｂ）化学合成によって作製することができる、ｃ）組換えＤＮＡ技術によって作製
することができる、ｄ）より大きな分子の化学的、生化学的または酵素的な断片化によっ
て作製することができる、ｅ）上に列挙されているａ〜ｄの方法を組み合わせることによ
って生じる方法によって作製することができる、またはｆ）ペプチドまたはアミノ酸配列
を作製するための任意の他の手段によって作製することができる。化学合成を用いること
により、天然には存在しない種々のアミノ酸を構築物に導入する、Ｎ末端またはＣ末端を
修飾するなどし、それにより、安定性（棚上またはｉｎ  ｖｉｖｏにおける）および製剤
の改善、プロテアーゼ分解に対する抵抗性などをもたらすこと、および１つまたは複数の
代替アミノ酸を構築物に導入することが可能である。
【００４７】
「ペプチド」という用語は、本明細書で使用される場合、共有結合により連結したアミ
ノ酸の化学修飾体および誘導体を含めた、２つ以上のアミノ酸で構成される任意の構造を
包含する。ペプチドの全部または一部を形成するアミノ酸は、天然に存在するアミノ酸、
そのようなアミノ酸の立体異性体および修飾体、非タンパク質アミノ酸、翻訳後修飾され
たアミノ酸（例えば、グリコシル化、エステルまたはアミド切断などによって）、酵素的
に修飾されたアミノ酸、天然に存在する部分から修飾または誘導体化された、または完全
に合成である、または天然に存在しない側鎖部分のいずれかを有するアミノ酸であってよ
い。「ペプチド」という用語は、ペプチドの二量体または多量体も包含する。「製造され
た」ペプチドとは、化学合成、組換えＤＮＡ技術、より大きな分子の生化学的または酵素
的な断片化、前述のものの組み合わせによって作製される、または、一般に、人間の手に
よる操作を伴う任意の他の方法によって生成されるペプチドを包含する。
【００４８】
「アミノ酸側鎖部分」という用語は、本明細書で使用される場合、任意のアミノ酸の任
意の側鎖を包含し、「アミノ酸」という用語は本明細書において定義されている。したが
って、この用語は天然に存在するアミノ酸に存在する側鎖部分を包含する。この用語は、
修飾された天然に存在するアミノ酸の側鎖部分、例えば、天然に存在するタンパク質アミ
ノ酸の立体異性体および修飾体、非タンパク質アミノ酸、翻訳後修飾されたアミノ酸、酵
素的に合成されたアミノ酸、誘導体化されたアミノ酸、アミノ酸を模倣するために設計さ
れた構築物または構造などの側鎖部分などをさらに包含する。例えば、本明細書に開示さ
れているまたは当業者に知られている任意のアミノ酸の側鎖部分がこの定義に包含される
。「アミノ酸側鎖部分の誘導体」はアミノ酸側鎖部分の定義に包含される。
【００４９】
アミノ酸側鎖部分は、天然に存在するアミノ酸側鎖部分または天然でないアミノ酸側鎖
部分のいずれかにおける修飾または変異を含め、誘導体化することができ、修飾または変
異としては、例えば、これだけに限定されないが、（ａ）１つまたは複数の飽和炭素原子
または不飽和炭素原子を既存のアルキル鎖、アリール鎖、またはアラルキル鎖に付加する
こと、（ｂ）側鎖内の炭素を別の原子、好ましくは酸素または窒素で置換すること、（ｃ
）メチル（−−ＣＨ３）、メトキシ（−−ＯＣＨ３）、ニトロ（−−ＮＯ２）、ヒドロキ
シル（−−ＯＨ）、またはシアノ（−−Ｃ＝Ｎ）を含む側鎖の炭素原子に末端基を付加す
ること、（ｄ）ヒドロキシ基、チオール基またはアミノ基を含む側鎖部分に対して、適切
なヒドロキシ保護基、チオール保護基またはアミノ保護基を付加すること、または（ｅ）
環状構造を含む側鎖部分に対して、直接またはエーテル連結を通じて付着したヒドロキシ
ル基、ハロゲン基、アルキル基、またはアリール基を含めた１つまたは環状の置換基を付
加することが挙げられることが当業者には理解されよう。アミノ基に対する適切な保護基
は当業者に知られている。そのような誘導体化をもたらすことにより、最終的な化合物に
おいて少なくとも部分的な活性が保持され、そのような誘導体化は全て「アミノ酸側鎖部
分」の定義に包含される。
【００５０】
本明細書における「アミノ酸」とは、天然に存在するアミノ酸（残基）および天然に存
在しないアミノ酸（残基）、例えば、それぞれＬ型およびＤ型など、ならびにその誘導体
および類似体を包含する。天然に存在するタンパク質アミノ酸は、それらの一般的な３文
字の略語および１文字の略語の両方で称される（一般に、参照により本明細書に組み込ま
れるSynthetic Peptides: A User's Guide、G. A. Grant編、W.H. Freeman & Co.、New Y
ork (1992)を参照されたい）。「アミノ酸」とは、少なくとも１つの側鎖が本明細書で定
義されているアミノ酸側鎖部分である従来のアルファ−アミノ酸ならびにベータ−アミノ
酸、アルファ，アルファ二置換アミノ酸およびＮ−置換アミノ酸を包含する。「アミノ酸
」とは、Ｎ末端アミノ基がＣ１〜Ｃ６の直鎖アルキル置換基または分枝アルキル置換基を
有するＮ−アルキルアルファ−アミノ酸をさらに包含する。したがって、「アミノ酸」と
いう用語は、天然に存在するタンパク質アミノ酸の誘導体（例えば、立体異性体および修
飾体）、非タンパク質アミノ酸、翻訳後修飾されたアミノ酸、酵素的に合成されたアミノ
酸、誘導体化されたアミノ酸、アミノ酸を模倣するために設計された構築物または構造な
どを包含する。修飾された普通とは異なるアミノ酸は本発明の化合物に包含され、一般に
、例えば、上で引用されているSynthetic Peptides: A User's Guide; Hruby V. J.、Al-
obeidi F.、Kazmierski W.、Biochem. J. 268:249-262 (1990);およびToniolo C.、Int. 
J. Peptide Protein Res. 35:287 (1990)に記載されている。
【００５１】
さらに、以下のアミノ酸およびその保護基および修飾基が包含される：ガンマ−アミノ
酪酸、１２−アミノドデカン酸、アルファ−アミノイソ酪酸、６−アミノヘキサン酸、４
−（アミノメチル）−シクロヘキサンカルボン酸、８−アミノオクタン酸、ビフェニルア
ラニン、Ｂｏｃ−ｔ−ブトキシカルボニル、ベンジル、ベンゾイル、シトルリン、ジアミ
ノ酪酸、ピロールリジン、ジアミノプロピオン酸、３，３−ジフェニルアラニン、オルト
ニン（orthonine）、シトルリン、１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドールカルボン酸
（1,3-dihydro-2H-isoindolecarboxylic acid）、エチル、Ｆｍｏｃ-フルオレニルメトキ
シカルボニル、ヘプタノイル（ＣＨ３−−（ＣＨ２）５−−Ｃ（＝Ｏ）−−）、ヘキサノ
イル（ＣＨ３−−（ＣＨ２）４−−Ｃ（＝Ｏ）−−）、ホモアルギニン、ホモシステイン
、ホモリシン、ホモフェニルアラニン、ホモセリン、メチル、メチオニンスルホキシド、
メチオニンスルホン、ノルバリン（ＮＶＡ）、フェニルグリシン、プロピル、イソプロピ
ル、サルコシン（ＳＡＲ）、ｔｅｒｔ−ブチルアラニン、ベンジルオキシカルボニル。
【００５２】
本発明の化合物において、従来のアミノ酸残基はそれらの従来の意味を有する。したが
って、「Ｎｌｅ」はノルロイシンである、などである。Ｄ残基またはＬ残基のいずれかが
活性であり、本発明に包含されることが予想されるが、例示のため、および配列表の情報
における空間および時間を節約するために、実施例に列挙されている残基は、例えば、Ｄ
−アラニンに対して「Ｄ−Ａｌａ」または「Ｄ−Ａ」のようにＤ−異性体が指定されてい
る場合を除き、Ｌ−異性体立体配置にある。それにもかかわらず、本発明の化合物の任意
または全ての位置のＤ−アミノ酸が包含される。
【００５３】
前述のアミノ酸の全てを含めた、誘導体化されたアミノ酸、前述のアミノ酸のいずれか
に由来するアルファ，アルファ二置換アミノ酸（すなわち、少なくとも１つの側鎖が、そ
れが由来する残基の側鎖と同じであるアルファ，アルファ二置換アミノ酸）、前述のアミ
ノ酸のいずれかに由来するベータ−アミノ酸（すなわち、ベータ炭素が存在する以外はそ
れが由来する残基と同じであるベータ−アミノ酸）などを含めた、天然に存在するタンパ
ク質アミノ酸の立体異性体および修飾体、非タンパク質アミノ酸、翻訳後修飾されたアミ
ノ酸、酵素的に合成されたアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸を含めた単一のアミノ酸
を、本明細書では、「残基」と称することができる。適切な置換基は、アルファ−アミノ
酸の側鎖部分に加えて、Ｃ１〜Ｃ６の直鎖アルキルまたは分枝アルキルを含む。Ａｉｂは
アルファ，アルファ二置換アミノ酸の例である。アルファ，アルファ二置換アミノ酸は従
来のＬ−異性体およびＤ−異性体の表示を用いて称することができるが、そのような表示
は便宜上のものであり、アルファ位の置換基が異なる場合、そのようなアミノ酸を、必要
に応じて、互換的に、指定されたアミノ酸側鎖部分を有する残基のＬ−異性体またはＤ−
異性体に由来するアルファ，アルファ二置換アミノ酸と称することができることが理解さ
れるべきである。したがって（Ｓ）−２−アミノ−２−メチル−ヘキサン酸は、Ｌ−Ｎｌ
ｅに由来するアルファ，アルファ二置換アミノ酸、またはＤ−Ａｌａに由来するアルファ
，アルファ二置換アミノ酸のいずれかと称することができる。同様に、Ａｉｂは、Ａｌａ
に由来するアルファ，アルファ二置換アミノ酸と称することができる。アルファ，アルフ
ァ二置換アミノ酸が提供されるときはいつでも、その（Ｒ）立体配置および（Ｓ）立体配
置が全て包含されるものと理解されるべきである。
【００５４】
「Ｎ−置換アミノ酸」とは、アミノ酸側鎖部分が主鎖アミノ基に共有結合しており、場
合によってアルファ−炭素位にＨ以外の置換基が存在しない任意のアミノ酸を包含する。
サルコシンはＮ−置換アミノ酸の例である。例として、サルコシンは、サルコシンとＡｌ
ａのアミノ酸側鎖部分が同じメチルであるという点で、ＡｌａのＮ−置換アミノ酸誘導体
と称することができる。
【００５５】
「任意のアミノ酸」という用語は、本明細書で使用される場合、そのような天然に存在
するまたは天然に存在しないアミノ酸、例えば、Ｌ型およびＤ型など、ならびにその誘導
体、模倣体、修飾された形態、および類似体のいずれかを指す。したがって、例として、
「任意のアミノ酸」とは、以下の天然に存在する残基のいずれか１つ、例えば、ヒスチジ
ン、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、システイン、グリシン、グルタミン、ア
スパラギン酸、グルタミン酸、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、セリン、
チロシン、トレオニン、トリプトファン、イソロイシン、プロリン、およびバリンなど、
ならびに任意の非天然等価物、ならびにその誘導体、模倣体、修飾された形態、および類
似体を包含する。
【００５６】
「ペプチド模倣体」という用語は、これだけに限定されないが、ピペラジンコア分子、
ケト−ピペラジンコア分子およびジアゼピンコア分子を含めた、残基の模倣物である本明
細書に開示されている分子（「模倣体」と称される）を包含する。別段の指定がない限り
、本発明の化合物のアミノ酸模倣体は、カルボキシル基とアミノ基の両方、およびアミノ
酸側鎖に対応する基を含む、またはグリシンの模倣体の場合では水素以外の側鎖を含まな
い。
【００５７】
例として、これらは、天然に存在するアミノ酸の立体、表面電荷分布、極性などを模倣
するが、アミノ酸である必要はなく、生物系において安定性を与えるであろう化合物を包
含する。例えば、プロリンは、適切なサイズおよび置換の他のラクタムまたはラクトンで
置換することができ、ロイシンは、アルキルケトン、Ｎ−置換アミドで置換することがで
きる、ならびにアルキル、アルケニルまたは他の置換基を使用したアミノ酸側鎖の長さの
変異、他のものは当業者に明らかであり得る。そのような置換を行う必須要素は、サイズ
および電荷および立体配置が分子を設計するために使用する残基と大体同じである分子を
準備することである。これらの修飾の精密化を、化合物を結合アッセイまたは他のアッセ
イにおいて試験すること、および構造と活性の関連性の分析によって行う。そのような方
法は医薬品化学および薬剤の開発の当業者の範囲内に入る。
【００５８】
本発明のＮＰ化合物は２つ以上の非対称の中心を有してよく、したがって、２つ以上の
立体異性体の形態で存在することができる。化合物のいくつかは、幾何異性体および回転
異性体として存在していてもよい。さらに、本発明のいくつかの化合物は、コンフォメー
ションの軸方向のキラリティーも有してよい。本発明は、これらの形態のそれぞれに個別
に、およびラセミ化合物を含めたそれらの混合物にまで及ぶ。一態様では、異性体は、慣
習的にクロマトグラフィー法によって、または分解剤を使用することによって分離するこ
とができる。別の態様では、個々の異性体、または鏡像異性的に純粋な異性体は、本明細
書に開示されているものなどの合成スキーム、または、キラル中間体、試薬または触媒を
使用した非対称合成を用いるそのようなスキームの変形によって調製される。
【００５９】
保存されたモチーフの末端、または保存されたモチーフを含む任意のペプチドのいずれ
かを、任意の末端基によって分解から保護することができる。例えば、Ｃ末端において、
末端基が、それが付着する構築物のＣ末端の末端炭素原子、または、もたらされる場合に
は末端カルボキシル基を通じて付着した。末端環の炭素原子、または、もたらされる場合
には末端カルボキシル基は、残基の一部を形成してもよく、代替アミノ酸の一部を形成し
てもよい。例えば、Ｃ末端キャップ形成基は、構築物のＣ末端位にある代替アミノ酸の一
部を形成する。Ｃ末端キャップ形成基としては、これだけに限定されないが、前述の（Ｒ
）立体配置または（Ｓ）立体配置の全てを含めた、−−（ＣＨ２）ｎ−−ＯＨ、−−（Ｃ
Ｈ２）ｎ−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＯＨ、−−（ＣＨ２）ｍ−−ＯＨ、−−（ＣＨ２）ｎ−−Ｃ
（＝Ｏ）−−Ｎ（Ｖ１）（Ｖ２）、−−（ＣＨ２）ｎ−−Ｃ（＝Ｏ）−−（ＣＨ２）ｍ−
−Ｎ（Ｖ１）（Ｖ２）、−−（ＣＨ２）ｎ−−Ｏ−−（ＣＨ２）ｍ−−ＣＨ３、−−（Ｃ
Ｈ２）ｎ−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＮＨ−−（ＣＨ２）ｍ−−ＣＨ３、−−ＣＨ２）ｎ−−Ｃ（
＝Ｏ）−−ＮＨ−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｎ（Ｖ１）（Ｖ２）、−−（ＣＨ２）ｎ−−Ｃ（＝
Ｏ）−−Ｎ−−（（ＣＨ２）ｍ−−Ｎ（Ｖ１）（Ｖ２））−  ２、−−（ＣＨ２）ｎ−−
Ｃ（＝Ｏ）−−ＮＨ−−ＣＨ（−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＯＨ）−−（ＣＨ２）−  ｍ−−Ｎ（
Ｖ１）（Ｖ２）、−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＮＨ−−（ＣＨ２）ｍ−−ＮＨ−−Ｃ（＝Ｏ）−−
ＣＨ（Ｎ（Ｖ１）（Ｖ２））−  （（ＣＨ２）ｍ−−Ｎ（Ｖ１）（Ｖ２））、または−−
（ＣＨ２）ｎ−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＮＨ−−ＣＨ（−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＮＨ２）−−（ＣＨ
２）．−  ｍ−−Ｎ（Ｖ１）（Ｖ２）、（式中、Ｖ１およびＶ２は、それぞれ独立にＨ、
Ｃ１〜Ｃ７の直鎖アルキル鎖もしくは分枝アルキル鎖であり、ｍは０〜７であり、ｎは０
〜２である）、または、メチル、ジメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、
イソブチル、ペンチル、ヘキシル、アリル、シクロプロパンメチル、ヘキサノイル、ヘプ
タノイル、アセチル、プロピオノイル、ブタノイル、フェニルアセチル、シクロヘキシル
アセチル、ナフチルアセチル、シンナモイル、フェニル、ベンジル、ベンゾイル、７'−
アミノヘプタノイル、当技術分野において知られている他の基などの基を含む任意のオメ
ガアミノ脂肪族、末端アリールもしくはアラルキル、または、場合によって前述の非アミ
ノ酸キャップ形成基のいずれかと組み合わせた、前述のキラル立体配置の全てを含めた任
意の単一の天然もしくは天然でないアルファ−アミノ酸、ベータ−アミノ酸もしくはアル
ファ，アルファ二置換アミノ酸が挙げられる。
【００６０】
保存されたモチーフを含むＮＰ化合物、またはモチーフで構成される化合物のＮ末端を
、構築物のＮ末端の末端アミンを通じて付着させた末端基を通じて付着させた任意の末端
基によって分解から保護することができる。末端アミンは残基の一部を形成してもよく、
代替アミノ酸の一部を形成してもよい。例えば、Ｎ末端キャップ形成基は、構築物のＮ末
端位にある代替アミノ酸の一部を形成する。Ｎ末端キャップ形成基としては、これだけに
限定されないが、メチル、ジメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブ
チル、ペンチル、ヘキシル、アリル、シクロプロパンメチル、ヘキサノイル、ヘプタノイ
ル、アセチル、プロピオノイル、ブタノイル、フェニルアセチル、シクロヘキシルアセチ
ル、ナフチルアセチル、シンナモイル、フェニル、ベンジル、ベンゾイル、７'−アミノ
ヘプタノイル、当技術分野において知られている他の基などの基を含む任意のオメガアミ
ノ脂肪族、アシル基または末端アリールまたはアラルキルが挙げられる、あるいは、Ｎ末
端キャップ形成基は、−−（ＣＨ２）ｍ−−ＮＨ（Ｖ３）、−−（ＣＨ２）ｍ−−ＣＨ３
、−−Ｃ（＝Ｏ）−−（ＣＨ２）ｍ−−ＣＨ３、−−Ｃ（＝Ｏ）−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｎ
Ｈ（Ｖ３）、−−Ｃ（＝Ｏ）−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＯＨ、−−Ｃ（＝Ｏ）
−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｖ４）、−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｃ（＝Ｏ）−−ＯＨ
、−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｖ４）、Ｃ（＝Ｏ）−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｏ（Ｖ
３）、−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｏ（Ｖ３）、Ｃ（＝Ｏ）−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｓ（Ｖ３）、
または−−（ＣＨ２）ｍ−−Ｓ（Ｖ３）、（式中、Ｖ３は、ＨまたはＣ１〜Ｃ１７の直鎖
アルキル鎖または分枝アルキル鎖であり、Ｖ４は、Ｃ１〜Ｃ１７の直鎖アルキル鎖または
分枝アルキル鎖であり、ｍは０〜１７である）である。フェニル環は、フェニル環が、そ
れぞれ独立に、ヒドロキシル基、ハロゲン基、アルキル基、またはアリール基が直接また
はエーテル連結を通じて付着した１つまたは複数の置換基を含む場合、「置換された」。
フェニル環がそのように置換されている場合、アミノ酸残基は、置換されたＰｈｅ、置換
されたＨＰｈｅのように、置換されたと称することができる。
【００６１】
変異は、例えば、オリゴヌクレオチドを介した（部位特異的）変異導入法、アラニンス
キャニング、およびＰＣＲ変異導入法などの当業者に知られている方法を使用して生成す
ることができる。部位特異的変異導入法［Carterら、Nucl. Acids Res.、13:4331(1986);
Zollerら、Nucl. Acids Res.、10:6487(1987)］、カセット変異導入法［Wellsら、Gene
、34:315(1985)］、制限選択変異導入法［Wellsら、Philos. Trans. R. Soc. London Ser
A、317:415 (1986)］および他の技術をクローン化されたＤＮＡに対して行って、本発明
の化合物またはその変異体、誘導体、置換体もしくは修飾体を生成することができる。
【００６２】
化合物の共有結合性の修飾は本発明の範囲内に含まれる。共有結合性の修飾の１種とし
ては、標的アミノ酸残基をペプチドの選択された側鎖またはＮ末端残基もしくはＣ末端残
基と反応することができる有機誘導体化剤と反応させることが挙げられる。二官能性作用
剤を用いた誘導体化は、例えば、ペプチドを、抗ペプチド抗体を精製するための方法にお
いて使用するための水不溶性支持マトリックスまたは表面と架橋結合させるため、および
その逆のために有用である。一般に使用される架橋結合剤としては、例えば、１，１−ビ
ス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスク
シンイミドエステル、例えば、４−アジドサリチル酸を伴うエステル、３，３’−ジチオ
ビス（スクシンイミジルプロピオン酸）などのジサクシンイミジルエステルを含めた同種
二官能性（homobifunctional）イミドエステル、ビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタ
ンなどの二官能性マレイミド、およびメチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プ
ロピオイミデートなどの作用剤が挙げられる。
【００６３】
他の修飾としては、グルタミニル残基およびアスパラギニル残基の、対応する、それぞ
れグルタミル残基およびアスパルチル残基への脱アミド、プロリンおよびリシンのヒドロ
キシル化、セリル残基またはトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン側鎖、
アルギニン側鎖、およびヒスチジン側鎖のアルファ−アミノ基のメチル化［T. E. Creigh
ton、Proteins: Structure and Molecular Properties、W.H. Freeman & Co.、San Franc
isco、pp. 79-86 (1983)］、Ｎ末端アミンのアセチル化、任意のＣ末端カルボキシル基の
アミド化などが挙げられる。
【００６４】
本発明の化合物の１つまたは複数の残基の別の種類の共有結合性の修飾としてはグリコ
シル化が挙げられる。「グリコシル化」は、１つまたは複数の炭水化物部分を付加するこ
とまたは欠失させること（基礎をなすグリコシル化部位を除去することすること、または
化学的手段および／または酵素的手段によってグリコシル化を欠失させることのいずれか
によって）、および／またはネイティブな配列に存在していても存在していなくてもよい
１つまたは複数のグリコシル化部位を付加することを意味するものとする。さらに、この
句は、存在する種々の炭水化物部分の性質および割合の変化を伴う、ネイティブなタンパ
ク質のグリコシル化の定性的変化を包含する。
【００６５】
化合物へのグリコシル化部位の付加は、アミノ酸配列を変更することによって実現する
ことができる。変更は、例えば、１つまたは複数のセリン残基またはトレオニン残基（Ｏ
結合グリコシル化部位のために）またはアスパラギン（Ｎ結合グリコシル化部位）を化合
物に付加すること、またはそれで化合物を置換することによって行うことができる。当然
、場合によって、化合物を、ＤＮＡレベルの変化を通じて、特に、所望のアミノ酸に翻訳
されるコドンが生成されるように事前に選択した塩基においてペプチドポリペプチドをコ
ードするＤＮＡを突然変異させることによって変更することができる。ペプチドポリペプ
チド上の炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、配糖体とポリペプチドの化学的また
は酵素的なカップリングによるものである（例えば、ＷＯ８７／０５３３０；およびApli
nおよびWriston、CRC Crit. Rev. Biochem.、pp. 259 (1981)を参照されたい）。炭水化
物部分の除去は、化学的もしくは酵素的に、またはグリコシル化の標的としての機能を果
たすアミノ酸残基をコードするコドンを突然変異によって置換することによって、実現す
ることができる。化学的な脱グリコシル技術が知られている（例えば、Hakimuddinら、Ar
ch. Biochem. Biophys.、259:52 (1987)およびEdgeら、Anal. Biochem.、118:131 (1981)
を参照されたい）。種々のエンドグリコシダーゼおよびエキソグリコシダーゼを使用する
ことによってポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断を実現することができる（例え
ば、Thotakuraら、Meth. Enzymol. 138:350 (1987)を参照されたい）。
【００６６】
別の種類の共有結合性の修飾としては、化合物を種々の非タンパク質性ポリマー、例え
ば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、または
ポリオキシアルキレンのいずれかと連結することが挙げられる（例えば、米国特許第４，
６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６
７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号および同第４，１７９，３３７号を参照され
たい）。
【００６７】
本発明のＮＰ化合物を修飾して、キメラ分子を形成することもできる。本発明によると
、異種ドメインを含む化合物が提供される。異種ドメインは付加または挿入であってよい
。異種ドメインは、種々の異なる種類の小さなまたは大きな官能性部分のいずれかからな
ってよい。異種ドメインの特定の非限定的な例としては、例えば、タグ、検出可能な標識
および細胞傷害性作用剤が挙げられる。そのような部分としては、ペプチド、核酸、炭水
化物、脂質または小さな有機化合物、例えば、薬剤（例えば、細胞増殖性作用剤）、金属
（金、銀）などが挙げられる。
【００６８】
タグおよび検出可能な標識の特定の例としては、酵素（西洋ワサビペルオキシダーゼ、
ウレアーゼ、カタラーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ、クロラム
フェニコールトランスフェラーゼ）；酵素の基質；リガンド（例えば、ビオチン）；受容
体（アビジン）；放射性核種（例えば、Ｃ１４、Ｓ３５、Ｐ３２、Ｐ３３、Ｈ３、Ｉ１２
５、Ｉ１３１、ガリウム６７および６８、スカンチウム４７(scantium−47)、インジウム
１１１、ラジウム２２３）；Ｔ７タグ、Ｈｉｓタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグおよびＦＬＡ
Ｇタグ；高電子密度試薬；エネルギー移動分子；常磁性標識；フルオロフォア（フルオレ
セイン、ローダミン、フィコエルトリン(phycoerthrin)）；発色団；化学発光剤（イミダ
ゾール、ルシフェラーゼ）；および生物発光剤が挙げられる。細胞傷害性作用剤の特定の
例としては、ジフテリア、毒素、コレラ毒素およびリシンが挙げられる。
【００６９】
一実施形態では、異種ドメインは、化合物と融合したペプチド、異種ポリペプチドまた
はアミノ酸配列を含む。キメラ分子は、化合物と、抗タグ抗体が選択的に結合することが
できるエピトープをもたらすタグポリペプチドとの融合体を含んでよい。エピトープタグ
は、一般に化合物の最後、例えば、アミノ末端またはカルボキシル末端に位置づけられる
。エピトープタグが付いた形態は、タグポリペプチドに対する抗体を使用して検出するこ
とができる。また、エピトープタグにより、化合物を抗タグ抗体またはエピトープタグに
結合する別の種類の親和性マトリックスを使用したアフィニティー精製によって容易に精
製することが可能になる。種々のタグポリペプチドおよびそれらのそれぞれの抗体は当業
者に知られている。代替の実施形態では、キメラ分子は、化合物と、免疫グロブリンまた
は免疫グロブリンの特定の領域との融合体を含んでよい。二価の形態のキメラ分子（「イ
ムノアドヘシン」とも称される）については、そのような融合はＩｇＧ分子のＦｃ領域と
のものであってよい。
【００７０】
異種ドメインのさらなる例としては、例えば、抗細胞増殖剤が挙げられる。抗細胞増殖
剤の特定の非限定的な例は当業者に知られている。
【００７１】
化合物と異種ドメインの間に、２つの実体が少なくとも部分的に別個の機能または活性
を維持するようにリンカー配列を挿入することができる。リンカー配列は、柔軟な構造、
規則正しい二次構造を形成することができないこと、またはいずれかのドメインを促進す
るまたはそれと相互作用することができる疎水特性もしくは荷電特性を含む１つまたは複
数の性質を有してよい。柔軟なタンパク質領域に一般に見いだされるアミノ酸としては、
Ｇｌｙ、ＡｓｎおよびＳｅｒが挙げられる。他のほぼ中性のアミノ酸、例えば、Ｔｈｒお
よびＡｌａなどもリンカー配列に用いることができる。リンカー配列の長さは変異してよ
い（例えば、米国特許第６，０８７，３２９号を参照されたい）。リンカーは、化学的架
橋剤およびコンジュゲート剤、例えば、スルホ-スクシンイミジル誘導体（スルホ−ＳＭ
ＣＣ、スルホ−ＳＭＰＢ）、スベリン酸ジサクシンイミジル（ＤＳＳ）、グルタル酸ジサ
クシンイミジル（ＤＳＧ）および酒石酸ジサクシンイミジル（ＤＳＴ）などをさらに含む
。
【００７２】
「単離された」という用語は、化合物の修飾句として使用される場合、化合物が操作さ
れた、もしくは人間の手によって作出されたこと、または、それらが天然に存在するｉｎ
ｖｉｖｏ環境内の１つまたは複数の他の構成成分から分離されていることを意味する。
一般に、そのような化合物が天然に存在する場合、化合物は、天然でそれらが通常付随す
る１つまたは複数の材料、例えば、１つまたは複数のタンパク質、核酸、脂質、炭水化物
、細胞膜などを実質的に含まないように分離される。したがって、単離された化合物は、
化合物が天然に存在する生物体の細胞内の他の生物学的構成成分から、または化合物が作
製される（例えば、合成的にまたは細胞培養によって）人工的な媒体から実質的に分離さ
れている。例えば、単離されたポリペプチドは、他のポリペプチドおよび核酸から実質的
に分離されており、数百万のポリペプチドまたは核酸配列の中に存在するポリペプチドま
たはポリヌクレオチドのライブラリー、例えば、ポリペプチドライブラリー、ゲノムライ
ブラリーまたはｃＤＮＡライブラリーなどを含まない。
【００７３】
「単離された」という用語は、化合物の代替の物理的形態を排除せず、例えば、単離さ
れたペプチドとは、ペプチド多量体、他のペプチド内のまたは他のペプチドとのジスルフ
ィド結合、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化、リン酸化）および修飾または誘導体化さ
れた形態を含んでよい。単離されたという用語は、投与後に対象内に存在する本発明の化
合物も排除しないものとする。対象内のそのような化合物は、化合物を対象に投与するこ
と、またはプロドラッグを対象に投与した後にプロドラッグの形態から化合物に変換する
ことによって生じ得る。したがって、本発明の化合物は対象に投与した後に本発明の化合
物に変換されるプロドラッグを含むことが明白に意図されている。
【００７４】
「精製された」という用語は、化合物の修飾句として使用される場合、それが一般には
天然において付随する材料の大部分または全てを含まない化合物を指す。したがって、細
胞から分離された化合物は、細胞構成成分から分離されている場合に精製されたとみなさ
れ、一方、化学的に合成された化合物は、その化学的前駆体から分離されている場合に実
質的に精製されたとみなされる。したがって精製されたとは、絶対的な純度を必要としな
い。さらに、「精製された」化合物は、１つまたは複数の他の分子と組み合わせることが
できる。したがって、「精製された」という用語は、化合物の組み合わせを排除しない。
【００７５】
「精製された」化合物とは、標準の精製方法によって作製された化合物を包含する。こ
の用語は、宿主細胞における組換え発現ならびに化学合成によって作製されたタンパク質
および核酸も包含する。「精製された」とは、混入物のレベルが、ヒトまたは非ヒト動物
に投与するための規制当局、例えば、食品医薬品局（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄ
ｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）（ＦＤＡ）により許容されるレベルを下回る化合物を指して
もよい。
【００７６】
実質的な純度は、少なくとも約６０％以上の分子の質量であってよい。純度は、約７０
％または８０％以上であってもよく、また、それよりも高く、例えば、９０％以上であっ
てよい。純度はそれよりも低くてよく、例えば、医薬担体では、分子の量は重量％で６０
％未満であってよいが、化合物の、それが通常付随する他の構成成分と比較した相対的な
割合は高くなる。純度は、例えば、ＵＶ分光法、クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ
、気相）、ゲル電気泳動（例えば、銀染色またはクーマシー染色）および配列解析（ペプ
チドおよび核酸）を含めた任意の適切な方法によって決定することができる。
【００７７】
本発明は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける使用および方法を包含する。例えば、対象を、例え
ば、本発明の化合物を投与することによって治療することができる。
【００７８】
本発明によると、対象における網膜の障害または疾患を治療する方法が提供される。そ
のような方法は、本明細書に記載の本発明の化合物のいずれかを用いて行うことができる
。一実施形態では、方法は、対象に、保存されたモチーフを有する化合物を、対象におけ
る網膜の障害または疾患を治療するために有効な量で投与することを含む。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「網膜の障害または疾患」という用語およびその文法上の
変形は、網膜に影響を及ぼす任意の望ましくない、または異常な状態を指す。網膜の障害
または疾患の非限定的な代表的な原因は、例えば、同じ組織のものであるが望ましいもの
を超えるまたは異常であるとはみなされない血管の参照量と比較して、望ましいものを超
えるまたは異常である、望ましくないまたは異常な血管の成長、増殖、生存、浸潤または
伸長であると思われる。
【００８０】
網膜の障害および疾患、網膜または他の組織内への細胞（血管）の成長、増殖および／
または浸潤もしくは伸長。そのような疾患および障害としては、望ましくない、過剰な、
もしくは異常な血管のサイズもしくは数、または血管の浸潤もしくは伸長、ならびに血管
の細胞数、細胞成長、細胞増殖、または細胞生存を特徴とする細胞過形成性の状態が挙げ
られる。そのような障害および疾患の特定の例としては、脈絡膜血管の網膜または周囲の
組織内への伸長または成長が挙げられる。そのような障害および疾患のさらなる例として
は、既存の網膜脈管系の伸長もしくは成長、または脈絡膜血管の網膜内への成長（脈絡膜
血管新生；ＣＮＶとも称される）が挙げられる。
【００８１】
種々の実施形態では、方法は、対象に、対象における網膜の障害または疾患を治療する
ために有効な量の本発明の化合物を投与することを含む。特定の態様では、障害または疾
患は、黄斑変性、増殖糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症、未熟児網膜症、弾力
線維性仮性黄色腫、視神経乳頭ドルーゼン、極度の近視、または悪性近視性変性である。
別の態様では、黄斑変性は「滲出型」加齢黄斑変性（ＡＭＤ）である。
【００８２】
本発明の方法を用いて、網膜の障害または疾患を低減または阻害する、網膜または近く
の組織内への血管の成長、生存または浸潤を低減または阻害する、網膜の障害または疾患
の症状を低減または阻害することができる。したがって、本発明の方法は、とりわけ、１
）網膜または近くの組織内への血管の成長、増殖、生存、移動性または浸潤性を低減また
は阻害すること、２）網膜または近くの組織内への血管の成長、増殖、生存、移動性また
は浸潤性を後退または安定化させること、３）網膜または近くの組織における新しい血管
の形成または確立を低減または阻害すること、および４）網膜の障害または疾患の１つま
たは複数の症状を低減または阻害することを含む。
【００８３】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、「治療」という用語お
よびその文法上の変形は、個々の患者を、その患者において生理的な応答または転帰が得
られることが望まれるプロトコール、レジメン、プロセスまたは療治に供することを意味
する。治療された患者の全てが特定の治療方法、プロトコール、レジメン、プロセスまた
は療治に応答するとは限らない可能性があるので、治療により、患者または患者集団の残
らず全てにおいて所望の生理的な応答または転帰が実現される必要はない。したがって、
所与の治療方法、プロトコール、レジメン、プロセスまたは療治により特定の患者に利益
がもたらされるが、特定の患者、または患者集団は治療に対して応答することができない
、または応答が最適ではないまたは不十分である可能性がある。
【００８４】
本発明の投与方法は、例えば、網膜の障害または疾患の部位またはその近傍におけるな
ど、全身性、局部的、局所的投与を包含する、任意の投与様式または任意の所望の経路に
より実施することができる。例えば、網膜の障害または疾患を患うまたはその治療を必要
としている対象の片目または両目は、注射（例えば、硝子体内注射）、注入または外用に
よる治療など、眼（複数可）の局所的または局部的治療により治療することができる。
【００８５】
例示的な投与経路として、注射（例えば、硝子体内注射）、注入、静脈内、動脈内、皮
内、筋肉内、皮下、胸膜内、外用、経粘膜、眼球内、経口（食事による）および粘膜が挙
げられる。特定の投与経路は、一部には、網膜の障害または疾患の種類と共に、化合物の
薬理、バイオアベイラビリティ、安定性などに基づくことができる。
【００８６】
本発明の方法として、とりわけ、網膜の障害または疾患に関連する１つまたは複数の原
因、有害（身体的）症状または結果の軽減または寛解、即ち、治療上の利益または有益な
効果など、所定の対象の状態における検出可能なまたは測定可能な改善をもたらす方法が
挙げられる。治療上の利益または有益な効果とは、網膜の障害または疾患における任意の
客観的または主観的な、一過的、一時的または長期の改善、あるいは網膜の障害または疾
患に関連するまたはこれに起因する有害症状の発病、重症度、持続時間または頻度の低下
である。本発明に従った治療方法の良好な臨床エンドポイントは、例えば、１つまたは複
数の関連病状、有害症状または合併症重症度、持続時間または頻度における漸進的なまた
は部分的な低下、あるいは網膜の障害または疾患の生理的、生化学的または細胞的な徴候
または特徴の１つまたは複数の阻害または逆転が存在するときに達成される。したがって
、治療上の利益または改善は、網膜の障害もしくは疾患の破壊または網膜の障害もしくは
疾患に関連するもしくはこれに起因する１つもしくは複数の病状、有害症状もしくは合併
症の大部分もしくは全部の切除など、治癒となり得る。しかし、治療上の利益または改善
は、網膜の障害または疾患に関連するまたはこれに起因する病状、有害症状または合併症
全ての完全治癒または切除である必要はない。例えば、本発明のＮＰ化合物により誘発さ
れる、網膜の障害または疾患の進行または悪化の緩徐化または遅延、網膜の障害または疾
患の進行または悪化の低下または阻害、網膜の障害または疾患の安定化、網膜（例えば、
網膜への脈絡膜血管の拡張もしくは成長）または他の組織などにおける、血管数または血
管の侵襲性もしくは拡張（血管新生）の低下または減少、あるいは血管細胞数、細胞成長
、細胞増殖または細胞生存の低下または阻害、あるいは前述のいずれかに関連する１つま
たは複数の症状の重症度、頻度または持続時間の低下または阻害は、本発明の方法および
使用に包含される。
【００８７】
したがって、様々な実施形態において、方法または使用は、網膜の障害または疾患の進
行または悪化を緩徐化または遅延させる、網膜の障害または疾患の進行または悪化を低下
または阻害する、網膜の障害または疾患を安定化させる、網膜（例えば、網膜への脈絡膜
血管の拡張もしくは成長）または他の組織などにおける、血管の数または血管の侵襲性も
しくは拡張（血管新生）を低下または減少させる、血管細胞数、細胞成長、細胞増殖また
は細胞生存を低下または阻害する、あるいは前述のいずれかに関連する１つまたは複数の
症状の重症度、頻度または持続時間を低下または阻害する。
【００８８】
発明の方法は、直ちに効果を生じない可能性もある。例えば、治療の後に、効果が生じ
ない、あるいはそれどころか、網膜の障害または疾患を増加または悪化させる可能性もあ
るが、本明細書において説明する通り、または当業者に公知の通り、時間と共に、応答性
対象において、網膜の障害または疾患における所望の効果または活性が生じるであろう。
【００８９】
網膜および／または脈管構造（血管密度、長さ、量など）の検査は、治療または本発明
の化合物の使用の任意の効果を確立することができる。網膜の疾患および障害の他の症状
は、治療の効果（あるとすれば）を決定するために確認することができる。ＣＮＶの発生
およびその治療の有効性は、蛍光血管造影法、網膜断層撮影法、眼底撮影法や、視野解析
またはアムスラーグリッドテストなどの機能的手段によりモニターすることができる。
【００９０】
発明の化合物および方法は、所望の効果をもたらす任意の他の治療または療法と組み合
わせることができる。特に、網膜の疾患および障害（その症状を包含する）の治療に有益
な活性または機能を有することが特徴付けられている治療および療法を適用できる。例示
的な治療および療法として、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の阻害剤およびアンタゴニス
ト、即ち、抗ＶＥＧＦレジメン、薬剤および薬物、ならびに抗細胞増殖性プロトコール、
レジメン、薬剤および薬物が挙げられる。係る治療および療法は、本発明の任意の他の方
法に先立ち、あるいはそれと実質的に同時期に行うことができる。
【００９１】
したがって、本発明は、組合せ方法および使用を提供し、この方法および使用において
、ＮＰ化合物のいずれかが、任意の治療上のレジメン、プロトコールまたは組成物と組み
合わせて用いられる、あるいはそれと組み合わせて（順次、逐次的に、または同時に）投
与される。一実施形態において、方法は、保存されたモチーフを有する化合物およびＶＥ
ＧＦアンタゴニストまたは阻害剤を対象に投与するステップを包含する。血管内皮増殖因
子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストもしくは阻害剤、または抗細胞増殖性治療、薬剤もしくは
薬物は、化合物の投与に先立ち、混合物においてそれと実質的に同時期に、あるいはその
後に投与することができる。
【００９２】
本明細書において使用される場合、「抗細胞増殖性」治療、療法、活性または効果は、
異常なまたは望ましくない細胞増殖（過剰増殖）、細胞過剰増殖性障害、腫瘍、癌または
新生物または転移に関連するまたはこれに起因する病状、有害症状または合併症の治療に
おいて有用な任意の療法、治療レジメン、薬剤、薬物、プロトコールまたはプロセスを意
味する。抗細胞増殖性治療および療法の例として、化学療法、免疫療法、放射線療法（電
離または化学）、局所的または局部的熱（温熱療法）療法および外科的切除が挙げられる
。
【００９３】
本発明の方法として、とりわけ、別の治療プロトコールまたは治療上のレジメン、プロ
セスもしくは医療の必要または使用の低下を生じる方法も挙げられる。例えば、網膜の障
害または疾患のため、所定の対象において、抗ＶＥＧＦ治療または療法など、別の治療の
頻度低下または用量低下または排除を生じるのであれば、本発明の方法は、治療上の利益
を有する。
【００９４】
治療の方法または使用における用量または「有効な量」または「十分な量」は、例えば
、網膜の障害または疾患に関連するまたはこれに起因する病状、有害症状または合併症の
１種、数種または全種の、測定可能なまたは検出可能な程度に達する任意の客観的または
主観的な軽減または寛解など、治療上の利益または改善など、効果を有することが望まれ
る量であるが、網膜の障害または疾患、有害症状または合併症の進行または悪化の予防、
阻害または遅延は、良好な成績である。よって、網膜の障害または疾患の場合、量は、所
定の対象に治療上の利益をもたらすのに、あるいは所定の対象における網膜の障害または
疾患の病状、有害症状または合併症を軽減または寛解するのに望ましく有効または十分と
なろう。用量は、治療の状況または特定の網膜の障害もしくは疾患または治療もしくは療
法の任意の副作用（複数可）により示される通り、比例的に増加または低下し得る。
【００９５】
例示的な非限定的な量（用量）は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲お
よび係る範囲内の任意の数値または範囲または値である。より多いまたは少ない量（用量
）、例えば、０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇおよび係る範囲内の任意の数値または範囲また
は値を投与することもできる。追加的な例示的な非限定的な量（用量）は、約０．５〜５
０ｍｇ／ｋｇ、１．０〜２５ｍｇ／ｋｇ、１．０〜１０ｍｇ／ｋｇおよび係る範囲内の任
意の数値または範囲または値に及ぶ。
【００９６】
本発明の方法は、１日、１週間、１ヶ月または１年間に１回または複数回（例えば、１
〜１０、１〜５または１〜３回）実施することができる。当業者であれば、投与の増加ま
たは低下、遅延または中断など、投与レジメンを修正するのに適切な時期が分かるであろ
う。例示的な非限定的な投薬スケジュールは、１週間に１〜７回を１、２、３、４、５、
６、７、８、９、１０、１５、２０週間以上および係る範囲内の任意の数値または範囲ま
たは値である。
【００９７】
当然ながら、任意の治療または療法に典型的なことに、異なる対象は、治療に対し異な
る応答を示し、一部は、特定の治療方法または使用に対し応答しないまたは不適切に応答
する可能性がある。したがって、有効または十分な量は、少なくとも一部には、治療され
る障害（例えば、網膜の障害または疾患の種類、重症度、ステージなど）、所望の治療上
の効果と共に、個々の対象（例えば、対象内のバイオアベイラビリティ、性別、年齢など
）ならびに遺伝的変異およびエピジェネティック変異（例えば、薬理ゲノミクス）に基づ
く治療に対する対象の応答、に依存するであろう。
【００９８】
用語「対象」および「患者」は、本明細書において互換的に用いられ、ヒト、非ヒト霊
長類（ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、マカク、テナガザル）、飼育動物（イヌ
およびネコ）、農場および牧場の動物（ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）、研究および
実験動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）など、動物、通常は哺乳動物を指す。
対象は、網膜の障害または疾患に対するｉｎ  ｖｉｖｏ効力を試験するための疾患モデル
動物（例えば、マウス、ラットおよび非ヒト霊長類など）を包含する。ヒト対象は、年齢
１〜５、５〜１０および１０〜１８歳の間の小児、例えば、新生児、乳児、幼児および１
０代、年齢１８〜２５歳の間の若年成人、２５〜６０歳の間の成人ならびに例えば、年齢
６０〜６５、６５〜７０および７０〜１００歳の間の高齢者を包含する。
【００９９】
対象は、治療を必要としている哺乳動物（例えば、ヒト）を包含する、即ち、対象は、
網膜の障害または疾患を有している。対象は、網膜の障害または疾患を有するリスクのあ
る対象も包含する。対象は、係る治療を保証する臨床または検査室診断により、網膜の障
害または疾患の治療または療法を必要としている対象、網膜の障害または疾患の治療また
は療法を行っている対象、網膜の障害または疾患から緩解しているが再燃リスクの可能性
がある対象など、網膜の障害または疾患の療法または治療を行ったことがあり再燃または
再発のリスクがある対象をさらに包含する。
【０１００】
リスクのある対象は、家族歴、遺伝的素因がある、あるいは以前に網膜の障害または疾
患に苦しんだことがあり、再燃または再発のリスクがある対象を包含する。リスクのある
対象は、高齢者対象を包含する。
【０１０１】
したがって、リスクのある対象は、網膜の障害または疾患を発症する尤度、あるいは網
膜の障害または疾患を治癒または治療した後に、同一または異なる網膜の障害または疾患
の再燃または再発を患う尤度を阻害または低下させるために治療することができる。係る
治療の結果は、網膜の障害または疾患を発症するリスクを低下させること、あるいは治療
されるリスク対象における網膜の障害もしくは疾患またはその病状、有害症状もしくは合
併症を予防することとなり得る。
【０１０２】
本発明は、場合によっては、キット構成成分を用いるための説明書、例えば、本発明の
方法を行うための説明書と組み合わせた、適した包装材料に包装された本発明の化合物、
修飾型および異型ならびに医薬品製剤を包含するキットをさらに提供する。様々な実施形
態において、キットは、網膜の障害または疾患を治療するための本発明の化合物および説
明書を包含する。
【０１０３】
用語「包装材料」は、キットの構成成分を収容する物理的構造を指す。包装材料は、構
成成分を無菌で維持することができ、係る目的のために一般に用いられる材料（例えば、
紙、段ボール材、ガラス、プラスチック、ホイル、アンプル等）で作製することができる
。ラベルまたは添付文書は、例えば、本発明の方法または使用を実施するための、例えば
、網膜の障害または疾患を治療するための適切な書面の説明書を包含することができる。
よって、追加的な実施形態において、キットは、溶液、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖ
ｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにおいて本発明の方法または使用を実施するための説明書を包含
するラベルまたは添付文書を包含する。
【０１０４】
したがって、説明書は、本明細書に記載されている本発明の方法のいずれかを実施する
ための説明書を包含することができる。例えば、網膜の障害または疾患を治療するために
対象に投与するための説明書と共に、発明のＮＰ化合物は、容器、パックまたはディスペ
ンサーに包含され得る。説明書は、そのうえ、生じ得る良好な臨床エンドポイントまたは
任意の有害症状もしくは合併症の指標、貯蔵情報、有効期限、あるいはヒト対象における
使用のために食品医薬局（Food and Drug Administration）などの規制当局に要求される
任意の情報を包含し得る。
【０１０５】
説明書は、「印刷物」上に、例えば、キット内の紙またはボール紙上に、キットもしく
は包装材料に添付されたまたはキットの構成成分を含有するバイアルもしくはチューブに
貼り付けられたラベル上に記されてよい。説明書は、音声またはビデオテープを含むこと
ができ、そのうえ、ディスク（ハードディスク）、ＣＤ−またはＤＶＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭ
などの光学ＣＤ、磁気テープ、ＲＡＭおよびＲＯＭなどの電気記憶媒体ならびに磁気／光
学記憶媒体などのこれらのハイブリッドなど、コンピュータ可読媒体に包含されてもよい
。
【０１０６】
発明のキットは、そのうえ、緩衝剤、保存料または安定化剤を包含することができる。
キットは、活性をアッセイするための対照構成成分、例えば、対照試料または標準を包含
することもできる。キットの各構成成分は、個々の容器内にまたは混合物において封入す
ることができ、これら様々な容器は全て、単一または複数包装内に入れることができる。
【０１０７】
本発明の化合物ならびに本発明の他の組成物および方法は、医薬品製剤に包含されるま
たは医薬品製剤を用いることができる。係る医薬品製剤は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  
ｖｉｖｏにおける対象の治療または対象への投与もしくは送達に有用である。
【０１０８】
医薬品製剤は、「薬学的に許容される」および「生理学的に許容される」担体、希釈剤
または賦形剤を包含する。本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容される
」および「生理学的に許容される」は、医薬品投与と適合性の溶媒（水性または非水性）
、溶液、エマルション、分散媒、コーティング、等張性および吸収促進または遅延剤を包
含する。係る製剤は、液体；エマルション、懸濁液、シロップもしくはエリキシル剤、ま
たは固形；錠剤（コーティングまたは非コーティング）、カプセル（硬または軟）、粉末
、顆粒、結晶もしくはマイクロビーズに含有され得る。補足化合物（例えば、保存料、抗
細菌、抗ウイルスおよび抗真菌剤）を製剤に取り込むこともできる。
【０１０９】
医薬品製剤は、特定の局所的、局部的、全身性または組織もしくは器官系投与または送
達様式または経路と適合性となるよう作製することができる。よって、医薬品製剤は、特
定の経路による投与に適した担体、希釈剤または賦形剤を包含する。本発明の組成物の投
与経路の特異的な非限定的な例は、注入によるまたは非経口的、例えば、静脈内、動脈内
、皮内、筋肉内、皮下、胸膜内、外用、経粘膜、頭蓋内、眼球内、網膜、経口（食事によ
る）、粘膜投与および方法または使用に適した任意の他の製剤である。
【０１１０】
非経口的適用に用いる溶液または懸濁液は、注射用の水、生理食塩水溶液、固定油、ポ
リエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒など、無
菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなど、抗細菌剤；アスコルビン酸ま
たは重亜硫酸ナトリウムなど、抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸など、キレート剤；酢
酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩など、緩衝液；および塩化ナトリウムまたはデキストロ
ースなど、浸透圧調整のための薬剤を包含することができる。ｐＨは、塩酸または水酸化
ナトリウムなど、酸または塩基により調整することができる。
【０１１１】
注射用の医薬品製剤は、無菌注射用溶液または分散の即時調製のための無菌水溶液（水
溶性である場合）または分散および無菌粉末を包含する。静脈内投与のため、適した担体
は、生理的食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、ニュージャ
ージー州パーシッパニー）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を包含する。担体は、例え
ば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび
液体ポリエチレングリコールなど）ならびにこれらの適した混合物を含有する溶媒または
分散媒となり得る。流動性は、例えば、レシチンなど、コーティングの使用により、分散
の場合は要求される粒子径の維持により、また、界面活性剤の使用により維持することが
できる。抗細菌および抗真菌剤は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、
アスコルビン酸およびチメロサールを包含する。等張剤、例えば、マンニトール、ソルビ
トールなど、糖、多価アルコール、塩化ナトリウムは、組成物中に包含され得る。吸収を
遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンの包含は、注射
用組成物の吸収を延長させることができる。
【０１１２】
無菌注射用製剤は、上述の成分の１つまたは組合せと共に、要求される量のＮＰ化合物
を適切な溶媒に取り込むことにより調製することができる。一般に、分散は、活性化合物
を、基本の分散媒および任意の他の成分を含有する無菌ビヒクルに取り込むことにより調
製される。無菌注射用溶液の調製のための無菌粉末の場合、調製方法は、例えば、先に調
製されたこれらの溶液から活性成分プラス任意の追加的な所望の成分の粉末を生じる、真
空乾燥および凍結乾燥を包含する。
【０１１３】
経粘膜または経皮投与のため、透過しようとする障壁に適切な浸透剤が、製剤において
用いられる。係る浸透剤は、当技術分野で公知のものであり、例えば、経粘膜投与のため
には、洗剤、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体を包含する。経粘膜投与は、鼻腔用スプレ
ー、吸入機器（例えば、アスピレーター）または坐剤の使用により達成することができる
。経皮投与のため、ＮＰ化合物は、軟膏、膏薬、ジェル、クリームまたはパッチへと処方
される。
【０１１４】
医薬品製剤は、モノステアリン酸グリセリルまたはステアリン酸グリセリルなど、放出
制御製剤または時間遅延材料など、身体からの急速な排出から保護する担体を用いて調製
することができる。製剤は、局所的、局部的もしくは全身性送達または放出制御もしくは
徐放を達成するためのインプラントおよびマイクロカプセル化送達系など、製造品を用い
て送達することもできる。
【０１１５】
エチレン酢酸ビニール、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエ
ステルおよびポリ乳酸など、生分解性、生体適合性ポリマーを用いることができる。係る
製剤を調製するための方法は、当業者に知られている。材料は、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒ
ａｔｉｏｎ（カリフォルニア州パロアルト）から商業的に入手することもできる。リポソ
ーム懸濁液（抗体またはウイルスコートタンパク質を用いて細胞または組織標的化された
リポソームを包含）を薬学的に許容される担体として用いることもできる。これらは、例
えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書に記載されている公知の方法に従って調製
することができる。
【０１１６】
投与に適切な追加的な医薬品製剤は、当技術分野で公知のものである（例えば、Gennar
o (編)、Remington: The Science and Practice of Pharmacy、第20版、Lippincott、Wil
liams & Wilkins (2000)；Anselら、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery S
ystems、第7版、Lippincott Williams & Wilkins Publishers (1999)；Kibbe (編)、Hand
book of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association、第3版(200
0);およびRemington’s Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms、Technonic
Publishing Co.、Inc.、Lancaster, Pa.、(1993)を参照）。
【０１１７】
医薬品製剤など、本発明に従って用いられる化合物は、投与を容易にし、投薬の統一性
を出すために、投薬単位形態で包装することができる。本明細書において使用される場合
「投薬単位形態」は、単位投薬治療に適した物理的に別個の単位を指す；各単位は、所望
の治療または治療上の（例えば、有益な）効果を生じるよう計算された、担体、賦形剤、
希釈剤またはビヒクルと関連した化合物の含量を含有する。単位投薬形態は、用いられる
特定の化合物、達成すべき効果ならびに治療しようとする対象の薬力学および薬理ゲノミ
クス等が挙げられるが必ずしもこれらに限定されない、種々の要因に依存するであろう。
【０１１８】
本発明において、活性を有する化合物を同定する方法と共に、化合物の活性を測定する
ための方法が提供される。一実施形態において、方法は、細胞増殖の阻害に関して化合物
をスクリーニングするステップを包含する。細胞増殖を阻害すると決定される化合物は、
抗細胞増殖性活性を有する化合物である。別の一実施形態において、方法は、ＮＰＲＣと
の結合またはＮＰＲＣの活性化に関して化合物をスクリーニングするステップを包含する
。ＮＰＲＣに結合するまたはＮＰＲＣを活性化すると決定される化合物は、抗細胞増殖性
活性を有する化合物である。さらに別の一実施形態において、方法は、血管細胞成長、増
殖、生存または浸潤の阻害に関して化合物をスクリーニングするステップを包含する。
【０１１９】
活性または活性の量に関して所定の化合物を計算、評価または同定するために、種々の
アッセイを用いることができる。例えば、細胞毒性および生存率（アポトーシス、溶解、
成長、増殖など）は、当技術分野で公知の比色分析、ルミネセンス、放射測定または蛍光
定量的アッセイに基づき測定することができる。比色分析技法、例えば、トリパンブルー
排除法は、細胞生存率を決定するために用いることができる。簡潔に説明すると、細胞は
、トリパンブルーで染色され、血球計数器を用いて計数される。生細胞は、色素を排除し
、一方、死細胞および瀕死の細胞は、青色色素を取り入れるため、光学顕微鏡下で容易に
区別される。ニュートラルレッドは、生細胞により吸着され、細胞リソソームにおいて濃
縮する；生細胞は、ニュートラルレッド染色細胞の数を定量化することにより、光学顕微
鏡を用いて決定することができる。
【０１２０】
細胞生存率を決定するための蛍光定量的技法は、例えば、蛍光ＤＮＡインターカレート
剤であるヨウ化プロピジウムを包含する。ヨウ化プロピジウムは、生細胞から排除される
が、死細胞の核を染色する。そこで、ヨウ化プロピジウム標識細胞のフローサイトメトリ
ーを用いて、生および死細胞を定量化することができる。乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の放
出は、細胞の構造的損傷および死を示し、分光光度的酵素アッセイにより測定することが
できる。ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）は、新たに合成されたＤＮＡに取り込まれ
、蛍光色素で標識された抗体により検出することができる。蛍光色素ヘキスト３３２５８
は、ＤＮＡを標識し、細胞の増殖の定量化に用いることができる（例えば、フローサイト
メトリー）。蛍光色素カルボキシフルオセイン二酢酸サクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ
またはＣＦＤＡ−ＳＥ）の定量的取り込みは、細胞分裂解析を達成することができる（例
えば、フローサイトメトリー）。この技法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの
いずれかで用いることができる。７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）は、ＤＮ
Ａとの会合によりスペクトルシフトを行う蛍光インターカレーターであり、細胞分裂解析
を達成することができる（例えば、フローサイトメトリー）。
【０１２１】
細胞増殖を確認するための放射測定技法は、例えば、［３Ｈ］−チミジンを包含し、こ
れは、生きている細胞の新たに合成されたＤＮＡに取り込まれ、細胞の増殖の決定に頻繁
に用いられる。死細胞からのクロム（５１Ｃｒ）放出は、細胞生存率を定量化するために
、シンチレーション計数により定量化することができる。
【０１２２】
細胞生存率を決定するためのルミネセンス技法は、例えば、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌ
ｏルミネセンス細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州マディソン）を
包含する。この技法は、生細胞の数を決定するために、存在するＡＴＰの量を定量化する
。
【０１２３】
細胞生存率および細胞増殖、したがって、本発明の化合物の抗細胞増殖性活性の程度を
決定するための市販のキットは、例えば、細胞増殖Ｂｉｏｔｒａｋ  ＥＬＩＳＡ（Ａｍｅ
ｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）；蛍光試薬
の差次的取込みに基づき迅速な細胞計数および生存率決定を提供するＧｕａｖａ  Ｖｉａ
Ｃｏｕｎｔ（商標）アッセイ（Ｇｕａｖａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カリフォルニア
州ヘイワード）；ＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）細胞増殖アッセイキット（Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｉｎｃ．、オレゴン州ユージーン）；ならびにＣｙｔｏＬｕｘアッ
セイキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．、マサチ
ューセッツ州ボストン）を包含する。ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）アッセイキット（Ｐｅｒ
ｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州ボスト
ン）は、時間分解蛍光定量的方法を用いて細胞増殖および生存率を決定することができる
。Ｑｕａｎｔｏｓ（商標）細胞増殖アッセイは、溶解細胞由来のＤＮＡ−色素複合体の蛍
光を測定する、蛍光に基づくアッセイである（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、カリフォルニア州
ラホヤ）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ細胞生存率アッセイは、細胞生存率を測定するた
めのルミネセンスアッセイである（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州マディソン）。
【０１２４】
用語「接触する」は、化合物（例えば、網膜の障害または疾患に治療活性を有する、保
存されたモチーフを有する化合物）などの組成物、材料、試料または治療に関して用いら
れる場合、化合物と他の参照される実体との間の直接的または間接的な相互作用を意味す
る。直接的な相互作用の特定の例は、ＮＰＲとの結合である。間接的な相互作用の特定の
例は、化合物が中間の分子に作用し、次いでこの中間の分子が参照される実体に作用する
相互作用である。よって、例えば、細胞と本発明の化合物との接触は、細胞に化合物を結
合させること、あるいは化合物を中間物（例えば、受容体）に作用させ、次いで中間物が
細胞に作用することを包含する。
【０１２５】
用語「アッセイする」および「測定する」ならびにこれらの文法上の変化は、本明細書
において互換的に用いられ、定性的もしくは定量的決定のいずれか、または定性的および
定量的決定の両方を指す。活性に関して用語が用いられる場合、本明細書において説明さ
れているおよび当技術分野で公知の様々な方法など、相対活性の任意の査定手段が企図さ
れる。
【０１２６】
本発明において、本発明の化合物を作製する方法がさらに提供される。一実施形態にお
いて、方法は、化合物をコードする核酸により宿主細胞を形質転換するステップと、コー
ドされている化合物の発現を可能にする条件下で宿主細胞を培養するステップと、形質転
換された細胞から化合物を場合によっては単離または精製するステップとを包含する。
【０１２７】
よって、本明細書に説明されている本発明の化合物を発現する宿主細胞も提供される。
特定の実施形態において、抗細胞増殖性活性を有する、保存されたモチーフを有する化合
物をコードする核酸で形質転換された宿主細胞は、この化合物を発現する。
【０１２８】
他に規定がなければ、本明細書に用いられているあらゆる技術および科学用語は、本発
明が関係する分野の当業者により一般に理解されている意義と同一の意義を有する。本明
細書に記載されている方法および材料と同様または均等の方法および材料を、本発明の実
施または検査において用いることができるが、適した方法および材料が、本明細書に記載
されている。
【０１２９】
本明細書に引用されているあらゆる刊行物、特許、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号および他の
参考文献は、これらの全体を参照によりここに援用する。矛盾がある場合は、定義を包含
する本明細書が支配的となろう。
【０１３０】
本明細書において、単数形（「ａ」、「ａｎｄ」および「ｔｈｅ」）は、文脈がそれ以
外のことを明らかに示さなければ、複数形の指示対象を包含する。よって、例えば、「化
合物」または「ペプチド」または「模倣体」の言及は、複数の化合物、ペプチドまたは模
倣体を包含し、「治療または療法」の言及は、同時多発的、継続的または逐次的な治療ま
たは療法などを包含し得る。
【０１３１】
本明細書において使用される場合、あらゆる数値または数的範囲は、文脈がそれ以外の
ことを明らかに示さなければ、係る範囲内のまたはそれを網羅する全整数を包含し、範囲
内のまたはそれを網羅する該値の分数または整数を包含する。よって、例えば、８〜５０
の範囲の言及は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１
９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０など、係る値
の内のまたはそれを網羅する任意の数値または範囲を包含する。
【０１３２】
本発明は、多数の実施形態を記載するために肯定的な言葉遣いを用いて、本明細書にお
いて全般的に開示されている。本発明は、特に、物質または材料、方法ステップおよび条
件、プロトコール、手順、アッセイまたは解析など、特定の対象物が完全にまたは部分的
に排除された実施形態も包含する。よって、本発明が、本発明が包含しないものの観点か
ら全般的に表現されていないとしても、それにもかかわらず、本発明に明確に包含されて
いない態様も開示されている。
【０１３３】
本発明の多くの実施形態を記載してきた。そうであっても、本発明の精神および範囲か
ら逸脱することなく、様々な修正を行ってよいことを理解されたい。したがって、次の実
施例は、特許請求の範囲に記載されている本発明の範囲の限定ではなく、例証を企図する
。例えば、次の非限定的な実施例は、活性を確認するための方法を包含すると共に、限定
された数の例示的ペプチドおよび使用の方法を記載する。これらの例示的な組成物および
治療の方法は、本発明を限定しないが、本発明の化合物、組成物および方法を調製および
使用するための一般的なガイダンスを提供する。
【０１３４】
したがって、本明細書における試験は、本発明を特異的に限定するものと解釈するべき
ではなく、当業者の技能範囲内にある現在公知のまたは後に開発される本発明の係る変形
形態は、本明細書に記載され下文に特許請求されている本発明の範囲内に収まると考慮さ
れる。例えば、下に示す例示的ペプチドの各事例において、本発明の化合物は、例示的ペ
プチドの代用となり得る。
【０１３５】
本明細書に用いられている商標は、単なる例であり、本発明の時点で用いられる例証的
材料を反映する。当業者であれば、ロット、製造プロセスなどにおける変動が予想される
ことを認識するであろう。したがって、実施例およびそこに用いられている商標は、非限
定的なものであり、これらは、限定を企図しないが、当業者が、本発明の実施形態の１ま
たは複数の実施に選ぶことのできる仕方の単なる例証である。
【実施例】
【０１３６】
実施例１
この実施例は、保存されたモチーフを含むペプチド、タンパク質、断片および模倣体を
生成する一般的な方法を記載する。
【０１３７】
望ましいペプチド断片は、化学的に合成することもできる。代替のアプローチは、酵素
的消化によって、例えば、特定のアミノ酸残基によって定義される部位でタンパク質を切
断する酵素でタンパク質を処理することによって、ペプチド断片を作成することに関与す
る。別の代替のアプローチは、遺伝的方法論に関与する。こうした技術としては、哺乳動
物細胞、ＨｅＬａ細胞もしくはＣｏｓ細胞または大腸菌（E. coli）などの宿主細胞内で
の化合物をコードしている遺伝子のすべてまたは一部の発現などが挙げられる。こうした
宿主細胞は、全長または断片、例えば、ｓｃＦｖ、を発現することができる（例えば、Me
thods：A Companion to Methods in Enzymology 2:97(1991)にあるWhitlowら；Birdら、S
cience 242:423(1988)；および米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい）。例え
ば、ペプチド化合物をコードしているＤＮＡを好適な制限酵素で消化すること、および望
ましい断片を単離してコードされたペプチド化合物の細胞発現用のベクター内にそれを挿
入すること。さらに、別の好適な技術は、望ましいポリペプチド断片をコードしているＤ
ＮＡ断片を、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、単離および増幅することに関与
する。ＤＮＡ断片の望ましい末端を定義するオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲにおいて５’
プライマーおよび３’プライマーで用いられる。
【０１３８】
ペプチドの調製において、例えば、オリゴヌクレオチドを介した（部位特異的）変異導
入法、アラニンスキャニング、およびＰＣＲ変異導入法などの当技術分野において知られ
ている方法を使用して変異を生成することができる。部位特異的変異導入法［Carterら、
Nucl. Acids Res.、13:4331(1986)；Zollerら、Nucl. Acids Res.、10:6487(1987)］、カ
セット変異導入法［Wellsら、Gene、34:315(1985)］、制限選択変異導入法［Wellsら、Ph
ilos. Trans. R. Soc. London SerA、317:415(1986)］または他の既知の技術を、バリア
ントＤＮＡを生成するためのクローン化されたＤＮＡ上で行うことができる。
【０１３９】
実施例２
この実施例は、保存されたモチーフを有する２種の例示的なペプチドが活性を有するこ
とを示しているデータを説明する。この実施例は、抗細胞増殖活性を確認するための例示
的な細胞に基づくアッセイについての説明も含む。
【０１４０】
ヒト膵臓腺癌細胞（ＨＰＡＣ）細胞を、ＡＴＣＣから得て、２．５ｍＭのグルタミン、
２ｍｇ／ｍＬのインスリン、５ｕｇ／ｍＬのトランスフェリン、１ｎｇ／ｍＬのＥＧＦ（
上皮増殖因子）に加えて５％のＦＢＳ（ウシ胎児血清）を含有するＤｕｌｂｅｃｃｏの改
変イーグル培地およびＨａｍのＦ１２培地（ＤＭＥ−Ｆ１２）（１：１）中で増殖させた
。細胞培養を、湿度１００％の雰囲気中、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。細
胞を、Ｔ−フラスコ内で通常通りにコンフルエンスにして、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢ
Ｓ）ですすぎ、トリプシンを用いて室温で５分間処理した。トリプシン処理した細胞を、
１０ｍＬの培地でプレートから洗い落とし、計数した。継代培養における生存率は、全体
的に≧９５％であった。
【０１４１】
１００ｕＬの培地中のおよそ１０，０００細胞を、９６ウェルプレートのそれぞれのウ
ェルに入れ、一晩インキュベートした。以下の配列を有するペプチドを使用した：Ａｒｇ
−１５−Ｃｙｓ（ＲＳＳＣＡＧＡＡＬＳＰＬＧＡＣ）；Ｐｒｏ−１５−Ｖａｌ（ＰＮＥＥ
ＡＧＡＡＬＳＰＬＰＥＶ）；Ａｌａ−８−Ｌｅｕ（ＡＧＡＬＳＰＬ）；Ｃ−ＡＮＰ４−２
３（ＲＳＳＣＦＧＧＲＩＤＲＩＧＡＣ）および、ＶＤＬ（ＥＶＶＰＰＱＶＬＳＥＰＮＥＥ
ＡＧＡＡＬＳＰＬＰＥＶＰＰＷＴＧＥＶＳＰＡＱＲ）。これらのペプチドをＰＢＳ中に溶
解し、滅菌濾過した。ペプチドを細胞培養培地中に以下の最終濃度まで希釈した：１、０
．３、０．１、０．０３、および０．０１ｕＭ。それぞれのペプチドを、同じものを５ウ
ェルずつで試験した。培養物を３７℃でさらに４８時間インキュベートした。
【０１４２】
Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ  Ｒａｐｉｄ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ
（カタログ番号ＱＩＡ１２７）を使用して、細胞の生存率を決定した。各ウェルに１０ｕ
ＬのＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ発色試薬を添加し、３７℃でさらに１．５時間インキュベート
した。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＴｈｅｒｍｏＭａｘマイクロプレートリー
ダーを使用して４５０ｎｍで光学濃度を読み取った。プレートのテンプレートを表Ｉ中に
示している（細胞を含有するがペプチドを含有しない非標識ウェルをブランクとして使用
した）。結果を、表Ｉ中に示しており、図１および図２中にグラフで例示している。
【０１４３】
【表２】
2018024674.tif 000003
【０１４４】
【表３】
2018024674.tif 000004
【０１４５】
実施例３
この実施例は、保存されたモチーフおよびそのモチーフにおいて機能的であると予測さ
れる保存されたアミノ酸を有するペプチドの活性を説明する。（表ＩＩＩ）。この実施例
は、活性を有すると予測される保存されたモチーフを有するさらなる例示的なペプチド配
列も説明する（表ＩＶ）。
【０１４６】
【表４】
2018024674.tif 000005
【０１４７】
表ＩＩＩ中の部位１５から２１は、保存されたモチーフのＲｅｓ１〜Ｒｅｓ８に相当す
る。残基１〜８のそれぞれにおける保存されたアミノ酸としては、例えば、以下が挙げら
れる：（１５）Ｆ、Ａ、Ｌ；（１６）Ｇ、Ｋ；（１７）Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ｌ、Ａ；（１８）任
意；（１９）Ｌ、Ｍ；（２０）Ｓ、Ｄ、Ｒ；（２１）任意；（２２）Ｉ、Ｌ。残基１〜８
のそれぞれにおける保存されたアミノ酸としては、例えば、Ｒｅｓ１：疎水性、非極性、
非イオン性の残基；Ｒｅｓ２  非疎水性（両親媒性または親水性）残基；Ｒｅｓ３、非イ
オン性残基または小さな側鎖を有する残基（０〜２炭素の主鎖、３個および４個の炭素を
有するものはより弱い）；Ｒｅｓ４、任意の残基；Ｒｅｓ５、疎水性、非極性、非イオン
性または脂肪族の残基；Ｒｅｓ６、極性残基；Ｒｅｓ７、任意の残基；ならびにＲｅｓ８
、疎水性、非極性、非イオン性または脂肪族の残基が挙げられる。
【０１４８】
「Ｒｅｓ１、Ｒｅｓ２」などの表記法は、本明細書において単一文字の略語によって例
示的な８ｍｅｒのペプチド中のアミノ酸を指す。「活性」は、細胞増殖アッセイ、例えば
、本明細書中に記載のアッセイまたは当業者に知られているアッセイによって決定するこ
とができる。当然、表ＩＶ中に例示されているペプチドは、より大きなタンパク質の部分
として保存されたモチーフペプチドを含み得る。配列番号は、ペプチド番号と同じである
。
【０１４９】
【表５−１】
2018024674.tif 000006
【表５−２】
2018024674.tif 000007
【表５−３】
2018024674.tif 000008
これらの例示的なペプチドのうちのそれぞれは、実施例１または４に記載の細胞に基づく
ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのような、アッセイを使用して抗細胞増殖活性についてｉｎ  
ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、およびｉｎ  ｖｉｖｏで解析することができる。
【０１５０】
実施例４
この実施例は、抗細胞増殖活性を決定するための別の例示的な細胞に基づくアッセイに
ついての説明を含む。
【０１５１】
ヒト卵巣癌細胞を培養して、以前に記載されている方法によってペプチドを試験した［
Veselyら、Cancer Ther. 5:97〜104(2007)］。ペプチドがＤＮＡ合成、および細胞増殖の
徴候を阻害するかどうかを調べるために、ヒト卵巣癌細胞内へのブロモデオキシウリジン
（ＢｒｄＵ）取り込みを以前に記載されているように用いた。［Vesely, D.L. Eur J Cli
n Invest. 38(8) 562:(2008)およびその中の参考文献）。ＢｒｄＵは、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃ
ｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａからのものであった。１μＭの血
管拡張薬ＶＤＬとの培養物、またはペプチドホルモンなしの培養物（すなわち、対照）に
おいて２４時間後に、ＢｒｄＵを１０μＭの最終濃度で４５分間かけて細胞培養培地中に
添加し、この時間は、細胞が細胞増殖の対数増殖期にある時間である。さらに、本発明の
ペプチドの添加によって２４時間で卵巣癌細胞の数が有意に減少した場合、対照と比較し
た。
【０１５２】
実施例５
この実施例は、活性についての代用物としてのＮＰＲ親和性についてのＡＮＰの試験に
ついての説明を含む。
【０１５３】
理論に拘束されることを望むものではないが、ＮＰの相対効力は、ＮＰＲにおける結合
親和性に関連すると予測されている［Vesely, D.L.、Eur J Clin Invest. 38(8) 562:(20
08)およびその中の参考文献］。例えば、ＣＮＰよりも大きなＡＮＰの観察される効力は
、ＮＰＲＡおよびＮＰＲＣにおけるＡＮＰのより高い結合親和性と相関するのに対して、
ＢＮＰよりも大きなＣＮＰの効力は、特異的にＮＰＲＣにおいてＢＮＰよりも高い結合親
和性を有するＣＮＰと一致する［Vesely, D.L.、Eur J Clin Invest. 38(8) 562:(2008)
およびその中の参考文献］。
【０１５４】
相同アッセイ系を使用した、ナトリウム利尿ペプチドファミリー（ＡＮＰ、ＢＮＰ、Ｃ
ＮＰ）の受容体選択性は、Sugaら、Endocrinol. 130:229〜239(1992)によって記載されて
いる。Ｃ受容体の結合親和性の順位は、実施例４の細胞に基づくアッセイの傾向に従って
いる。したがって、ＮＰＲＣなどのＮＰＲにおける結合親和性は、活性の良好な代用物と
なり得る。
【０１５５】
実施例６
この実施例は、保存されたモチーフを有するペプチド模倣体についての説明を含む。
【０１５６】
モチーフのペプチド模倣体であるように見える、文献化合物を、細胞増殖阻害活性につ
いてアッセイし（例えば、実施例１および４）、またはＮＰＲ結合についてアッセイし（
例えば、実施例５）、結合を実証する。予測されるペプチド模倣体としては、以下が挙げ
られる：
【０１５７】
【化１−１】
2018024674.tif 000009
【化１−２】
2018024674.tif 000010
【０１５８】
実施例７
この実施例は、全身、局部または局所の、投与の多様な許容される経路についての説明
を含む。
【０１５９】
注射による投与の場合、注射可能な溶液は、１０．０ｍｌの生理食塩水溶液およびｐＨ
＝７．４に調整した７．０ｍｇのペプチドを使用して従来法によって調製できる。１単位
の注射は、１日１回４日間、およそ７０キログラムの体重の患者に投与することができる
。
【０１６０】
注入による投与の場合、静脈内注入組成物は、１０００．０ｍｌの生理食塩水溶液およ
びｐＨ＝７．４に調整した４００．０ｍｇの実施例１のペプチドを使用して従来法によっ
て調製できる。１時間の注入は、１日１回４週間、およそ５８キログラムの体重の患者に
投与することができる。
【０１６１】
連続投与、例えば、ポンプを介した皮下注射による投与などの場合は、注射可能な溶液
は、１０００．０ｍｌの生理食塩水溶液およびｐＨ＝７．４に調整した４００．０ｍｇの
ペプチドを使用して従来法によって調製できる。Vesely, D.L.、In vivo 21:445〜452(20
07)に記載のように、患者は、時間をかけて組成物を供給するために埋め込まれたポンプ
を有する。埋め込まれた連続注入ポンプは、１日３回最高８週間、およそ４７キログラム
の体重の患者に、間をおいて組成物を供給する。
【０１６２】
実施例８
この実施例は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデル系を使用して網膜の障害および疾患の治療にお
けるＮＰ化合物の活性を示す試験についての説明を含む。
【０１６３】
ヒトＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）は、ＡＴＣＣから得られ、供給業者の説明書に従っ
て１０％のＦＢＳを含むＤＭＥＭ−Ｆ１２中で培養した。細胞を、６ウェルマイクロタイ
タープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中の２．４ｃｍ半径のトランスウェルインサート中に播
種して、コンフルエンスまで増殖させた。２〜３週間後、以前に記載されているようにＳ
ＴＸ２電極（Ｗｏｒｌｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を備えた上皮
ボルトオーム計（ＥＶＯＭ）を使用して使用して細胞層を横切る電圧（経上皮電気抵抗、
ＴＥＥＲ）を測定した［Ablonczy, Z.、Crosson, C.E. Exp Eye Res 85:762(2007)］。Ｖ
ＥＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）を用いた細胞の治療は、抵抗性を低下させ、ＡＭＤにおいて生
じるＲＰＥ層の破壊と似ていた（図１）。ＡＮＰ（１ｕＭ）を用いた併用治療は、ＶＥＧ
Ｆの効果を減衰させた。ＡＭＤにおける活性を確定するために、ＡＮＰの代わりに他のＮ
Ｐ化合物を評価することもできる。
【０１６４】
実施例９
この実施例は、げっ歯動物モデル系を使用して網膜の障害および疾患の治療におけるＮ
Ｐ化合物の活性を示す試験についての説明を含む［Noda, K.、Nakazawa, T.ら、FASEB J
；22:2928(2000)。
【０１６５】
ＣＮＶは、麻酔下でレーザー光を使用して細隙灯送達系、およびコンタクトレンズとし
てカバーガラスを用いて、動物、一般にマウスまたはラットにおいて誘導される。それぞ
れの網膜上にいくつかのレーザー火傷が配置される。レーザー損傷のスポットにおける気
泡の発生は、ブルッフ膜の断裂を確証する。レーザー損傷の７日後、細隙灯検査もしくは
眼底撮影を使用して、または脈絡膜フラットマウント法で、ｉｎ  ｓｉｔｕでＣＮＶ損傷
の大きさを測定することができる。ＣＮＶの形成を予防するまたは後退させる作用剤は、
損傷の大きさを小さくすることになる。
【０１６６】
実施例１０
この実施例は、遺伝学的げっ歯動物モデルを使用して網膜の障害および疾患の治療にお
けるＮＰ化合物の活性を示す試験についての説明を含む。
【０１６７】
特定の百分率の老化促進モデルマウス（ＳＡＭ）は、一生のうちの約１１ヶ月後に自発
的にＣＮＶならびに他のＡＭＤの発現を発達させる（Majji, A.B.、Cao, J.ら、Invest O
phthal Vis Sci；41:3936（2000）。ＮＰ化合物は、ＣＮＶを防ぐまたは後退させるため
に、これらの動物に投与することができる。代替的に、ＲＰＥ細胞は、それ自体で、ＶＥ
ＧＦを過剰発現させるように遺伝的に改変することができる。ラット眼内に網膜下で再導
入したときに、それらはＣＮＶを生産する（Spilsbury, K. Garrett, K.L.ら、Am J Path
ol；157:135(2000）。ここでも、ＮＰ化合物をこれらの動物に投与することができ、ＣＮ
Ｖの発生および残存に対するこれらの効果を決定することができる。
【図１】
2018024674.tif 000011
【手続補正書】
【提出日】平成29年9月12日(2017.9.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療を必要としている対象において網膜の障害または疾患を治療するのに使用するための医薬組成物であって、
網膜の障害または疾患が、黄斑変性、増殖糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症、未熟児網膜症、弾力線維性仮性黄色腫、視神経乳頭ドルーゼン、極度の近視、または悪性近視性変性を含み、
保存されたモチーフである（Ｒｅｓ１）−（Ｒｅｓ２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒｅｓ４）−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅｓ７）−（Ｒｅｓ８）を含む化合物を含み、式中、
Ｒｅｓ１−が、フェニルアラニン（Ｆ）、アラニン（Ａ）、およびロイシン（Ｌ）から選択され、
Ｒｅｓ２−が、グリシン（Ｇ）およびリシン（Ｋ）から選択され、
Ｒｅｓ３が、グリシン（Ｇ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、ロイシン（Ｌ）およびアラニン（Ａ）から選択され、
Ｒｅｓ４−が、いずれかのアミノ酸から選択され、ただしアルギニン（Ｒ）ではなく、
Ｒｅｓ５−が、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）およびメチオニン（Ｍ）から選択され、
Ｒｅｓ６−が、セリン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ）、およびアルギニン（Ｒ）から選択され、
Ｒｅｓ７−が、いずれかのアミノ酸から選択され、
Ｒｅｓ８−が、ロイシン（Ｌ）およびイソロイシン（Ｉ）から選択され、
Ｒｅｓ１、Ｒｅｓ２、Ｒｅｓ３、Ｒｅｓ４、Ｒｅｓ５、Ｒｅｓ６、Ｒｅｓ７、およびＲｅｓ８のそれぞれが、共有結合または非共有結合でそれぞれの隣接した残基に結合している、
医薬組成物。
【請求項２】
治療を必要としている対象において網膜の障害または疾患を治療するのに使用するための医薬組成物であって、
前記網膜の障害または疾患が、
（ｉ）前記網膜内への脈絡膜血管の伸長または増殖、または
（ｉｉ）前記既存の網膜脈管系の伸長、または前記網膜内への脈絡膜血管の増殖（脈絡膜血管新生；ＣＮＶ）
によって引き起こされるまたはそれに関連するものであり、
保存されたモチーフである（Ｒｅｓ１）−（Ｒｅｓ２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒｅｓ４）−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅｓ７）−（Ｒｅｓ８）を含む化合物を含み、式中、
Ｒｅｓ１−が、フェニルアラニン（Ｆ）、アラニン（Ａ）、およびロイシン（Ｌ）から選択され、
Ｒｅｓ２−が、グリシン（Ｇ）およびリシン（Ｋ）から選択され、
Ｒｅｓ３が、グリシン（Ｇ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、ロイシン（Ｌ）およびアラニン（Ａ）から選択され、
Ｒｅｓ４−が、いずれかのアミノ酸から選択され、ただしアルギニン（Ｒ）ではなく、
Ｒｅｓ５−が、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）およびメチオニン（Ｍ）から選択され、
Ｒｅｓ６−が、セリン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ）、およびアルギニン（Ｒ）から選択され、
Ｒｅｓ７−が、いずれかのアミノ酸から選択され、
Ｒｅｓ８−が、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、およびバリン（Ｖ）から選択され、
Ｒｅｓ１、Ｒｅｓ２、Ｒｅｓ３、Ｒｅｓ４、Ｒｅｓ５、Ｒｅｓ６、Ｒｅｓ７、およびＲｅｓ８のそれぞれが、共有結合または非共有結合でそれぞれの隣接した残基に結合している、
医薬組成物。
【請求項３】
Ｒｅｓ１−が、フェニルアラニン（Ｆ）、アラニン（Ａ）、およびロイシン（Ｌ）から選択され、
Ｒｅｓ２−が、グリシン（Ｇ）およびリシン（Ｋ）から選択され、
Ｒｅｓ３が、グリシン（Ｇ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、ロイシン（Ｌ）およびアラニン（Ａ）から選択され、
Ｒｅｓ４−が、天然アミノ酸から選択され、ただしアルギニン（Ｒ）ではなく、
Ｒｅｓ５−が、ロイシン（Ｌ）およびメチオニン（Ｍ）から選択され、
Ｒｅｓ６−が、セリン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ）、およびアルギニン（Ｒ）から選択され、
Ｒｅｓ７−が、天然アミノ酸から選択され、
Ｒｅｓ８−が、ロイシン（Ｌ）およびイソロイシン（Ｉ）から選択される、
請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
Ｒｅｓ４−が、リシン（Ｋ）、アラニン（Ａ）、およびロイシン（Ｌ）から選択され、かつ／またはＲｅｓ７−が、アルギニン（Ｒ）、プロリン（Ｐ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびアラニン（Ａ）から選択される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記化合物が、ＦＧＬＫＬＤＲＩ、ＡＧＡＡＬＳＰＬ、ＦＫＮＬＬＤＨＬ、ＬＫＳＫＬＲＡＬ、またはＡＧＫＡＬＳＰＬを含む、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記化合物が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１または１４２のアミノ酸残基を含み、前記アミノ酸残基が、前記（Ｒｅｓ１）−（Ｒｅｓ２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒｅｓ４）−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅｓ７）−（Ｒｅｓ８）モチーフを含むか、または共有結合もしくは非共有結合でＲｅｓ１、Ｒｅｓ２、Ｒｅｓ３、Ｒｅｓ４、Ｒｅｓ５、Ｒｅｓ６、Ｒｅｓ７、もしくはＲｅｓ８部位のうちのいずれかに結合している、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記化合物が、１５０未満の残基を有する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記化合物が、１４０未満の残基を有する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記化合物が、１０から１５０の残基を有する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記化合物が、１０から１２５の残基を有する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記化合物が、１０から１００の残基を有する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記化合物のＲｅｓ１、Ｒｅｓ２、Ｒｅｓ３、Ｒｅｓ４、Ｒｅｓ５、Ｒｅｓ６、Ｒｅｓ７、またはＲｅｓ８部位のうちのいずれかが、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、または天然に存在しないアミノ酸である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記黄斑変性が、「滲出型」加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記網膜の障害または疾患が、前記網膜内への脈絡膜血管の伸長または増殖によって引き起こされる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記網膜の障害または疾患が、前記既存の網膜脈管系の伸長、または前記網膜内への脈絡膜血管の増殖（脈絡膜血管新生；ＣＮＶ）によって引き起こされる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記網膜の障害または疾患が次第に悪化する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記網膜の障害または疾患が寛解傾向にある、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記化合物が、前記対象に局所的、局部的、または全身的に投与される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記化合物が、前記対象の眼または両眼に投与される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記化合物が、注射、注入、経口または外用によって投与される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記化合物が、硝子体内注射を介して前記対象に投与される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記治療が、前記網膜の障害もしくは疾患の１つもしくは複数の症状の重症度もしくは期間を低減もしくは阻害する、または前記網膜の障害もしくは疾患の進行もしくは悪化を低減もしくは阻害する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記治療が、前記対象の前記網膜内への脈絡膜血管の伸長または増殖を低減または阻害する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記対象が、網膜障害の治療もしくは療法の候補である、それを受けている、またはそれを受けてきた、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記対象に血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたは阻害剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記化合物が、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたは阻害剤の投与の前に、実質的にそれと同時に、それとの混合物として、またはその後に投与される、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記対象が哺乳動物である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記対象がヒトである、請求項２７に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４１】
１００ｕＬの培地中のおよそ１０，０００細胞を、９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに入れ、一晩インキュベートした。以下の配列を有するペプチドを使用した：Ａｒｇ−１５−Ｃｙｓ（ＲＳＳＣＡＧＡＡＬＳＰＬＧＡＣ）（配列番号１２２）；Ｐｒｏ−１５−Ｖａｌ（ＰＮＥＥＡＧＡＡＬＳＰＬＰＥＶ）（配列番号１２１）；Ａｌａ−８−Ｌｅｕ（ＡＧＡＬＳＰＬ）（配列番号１２３）；Ｃ−ＡＮＰ４−２３（ＲＳＳＣＦＧＧＲＩＤＲＩＧＡＣ）（配列番号１２４）および、ＶＤＬ（ＥＶＶＰＰＱＶＬＳＥＰＮＥＥＡＧＡＡＬＳＰＬＰＥＶＰＰＷＴＧＥＶＳＰＡＱＲ）（配列番号１２５）。これらのペプチドをＰＢＳ中に溶解し、滅菌濾過した。ペプチドを細胞培養培地中に以下の最終濃度まで希釈した：１、０．３、０．１、０．０３、および０．０１ｕＭ。それぞれのペプチドを、同じものを５ウェルずつで試験した。培養物を３７℃でさらに４８時間インキュベートした。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４６】
【表４】
2018024674.tif 000012
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４９】
【表５−１】
2018024674.tif 000013
【表５−２】
2018024674.tif 000014
【表５−３】
2018024674.tif 000015
これらの例示的なペプチドのうちのそれぞれは、実施例１または４に記載の細胞に基づくｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのような、アッセイを使用して抗細胞増殖活性についてｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、およびｉｎ  ｖｉｖｏで解析することができる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６７】
特定の百分率の老化促進モデルマウス（ＳＡＭ）は、一生のうちの約１１ヶ月後に自発的にＣＮＶならびに他のＡＭＤの発現を発達させる（Majji, A.B.、Cao, J.ら、Invest Ophthal Vis Sci；41:3936（2000）。ＮＰ化合物は、ＣＮＶを防ぐまたは後退させるために、これらの動物に投与することができる。代替的に、ＲＰＥ細胞は、それ自体で、ＶＥＧＦを過剰発現させるように遺伝的に改変することができる。ラット眼内に網膜下で再導入したときに、それらはＣＮＶを生産する（Spilsbury, K. Garrett, K.L.ら、Am J Pathol；157:135(2000）。ここでも、ＮＰ化合物をこれらの動物に投与することができ、ＣＮＶの発生および残存に対するこれらの効果を決定することができる。
本発明は以下の態様を包含し得る。
［１］  治療を必要としている対象において網膜の障害または疾患を治療する方法であって、前記対象に化合物を投与することを含み、前記化合物が、保存されたモチーフである（Ｒｅｓ１）−（Ｒｅｓ２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒｅｓ４）−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅｓ７）−（Ｒｅｓ８）を含み、式中、
Ｒｅｓ１−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アルキル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、１２個未満の炭素を有する、ベンジル、アルキル、アルキレン、アルケニル、アルキルアリールから選択される、疎水性、非極性、および非イオン性の側鎖から選択される側鎖を有する、アミノ酸またはその模倣体であり、
Ｒｅｓ２−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アルキル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、両親媒性側鎖、親水性側鎖、双性イオン、グリシン（Ｇ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）、およびアスパラギン（Ｎ）である側鎖を有する、アミノ酸またはその模倣体であり、
Ｒｅｓ３−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アルキル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、いかなる環も大きさが５員または６員であってもよいことを除き、５員未満の長さの側鎖、およびグリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）  アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、ロイシン（Ｌ）、アラニン（Ａ）を有する、アミノ酸またはその模倣体であり、
Ｒｅｓ４−は、１個から約１２個までの炭素を含む側鎖を有し、アミノ、ヒドロキシル、アミド、カルボキシ、アリール、ヘテロアリールおよび天然に存在する２０種のアミノ酸のうちのいずれかから選択される構成要素をその上に有する、５個以下の原子を有するリンカーまたはアミノ酸、エーテル、エステル、ケトン、アルキル、アルキレン、アミドのリンカーであり、
Ｒｅｓ５−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アルキル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、疎水性、非極性、非イオン性、脂肪族の、側鎖から選択される側鎖、およびロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、アラニン（Ａ）、またはメチオニン（Ｍ）を有する、アミノ酸またはその模倣体であり、
Ｒｅｓ６−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アルキル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、極性側鎖、またはアミノ酸のセリン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アルギニン（Ｒ）、およびグルタミン酸（Ｅ）を有する、アミノ酸またはその模倣体であり、
Ｒｅｓ７−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アルキル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、１個から約１２個までの炭素を含む側鎖、ならびにアミノ、ヒドロキシル、アミド、カルボキシ、アリール、ヘテロアリールおよび天然に存在する２０種のアミノ酸のうちのいずれかから選択される構成要素をその上に有する、アミノ酸またはその模倣体であり、
Ｒｅｓ８−は、主鎖が、５個以下の原子を有する、エーテル、エステル、ケトン、アルキル、アルキレンまたはアミドのリンカーから選択され、疎水性、非極性、および非イオン性の側鎖、ならびにアミノ酸のアラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）を有し、Ｃ１からＣ１２のアルキル、アルキレン、およびアルケニルから選択される側鎖を有する、アミノ酸またはその模倣体であり、
Ｒｅｓ１、Ｒｅｓ２、Ｒｅｓ３、Ｒｅｓ４、Ｒｅｓ５、Ｒｅｓ６、Ｒｅｓ７、およびＲｅｓ８のそれぞれが、共有結合または非共有結合でそれぞれの隣接した残基に結合しており、前記化合物が、約３０未満の残基を有する、
方法。
［２］  Ｒｅｓ１−が、フェニルアラニン（Ｆ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、およびバリン（Ｖ）から選択され、
Ｒｅｓ２−が、グリシン（Ｇ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）、およびアスパラギン（Ｎ）から選択され、
Ｒｅｓ３が、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）  アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、ロイシン（Ｌ）、およびアラニン（Ａ）から選択され、
Ｒｅｓ４−が、任意のアミノ酸から選択され、
Ｒｅｓ５−が、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、アラニン（Ａ）、およびメチオニン（Ｍ）から選択され、
Ｒｅｓ６−が、セリン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アルギニン（Ｒ）、およびグルタミン酸（Ｅ）から選択され、
Ｒｅｓ７−が、任意のアミノ酸から選択され、
Ｒｅｓ８−が、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、およびバリン（Ｖ）から選択される、
上記［１］に記載の方法。
［３］  Ｒｅｓ１−が、フェニルアラニン（Ｆ）、アラニン（Ａ）、およびロイシン（Ｌ）から選択され、
Ｒｅｓ２−が、グリシン（Ｇ）およびリシン（Ｋ）から選択され、
Ｒｅｓ３が、グリシン（Ｇ）、アスパラギン（Ｎ）、セリン（Ｓ）、ロイシン（Ｌ）およびアラニン（Ａ）から選択され、
Ｒｅｓ４−が、天然アミノ酸から選択され、
Ｒｅｓ５−が、ロイシン（Ｌ）およびメチオニン（Ｍ）から選択され、
Ｒｅｓ６−が、セリン（Ｓ）、アスパラギン酸（Ｄ）、およびアルギニン（Ｒ）から選択され、
Ｒｅｓ７−が、天然アミノ酸から選択され、
Ｒｅｓ８−が、ロイシン（Ｌ）およびイソロイシン（Ｉ）から選択される、
上記［１］に記載の方法。
［４］  Ｒｅｓ４−が、アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）、アラニン（Ａ）、およびロイシン（Ｌ）から選択され、かつ／またはＲｅｓ７−が、アルギニン（Ｒ）、プロリン（Ｐ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびアラニン（Ａ）から選択される、上記［３］に記載の方法。
［５］  前記化合物が、ＦＧＧＲＭＤＲＩ；ＦＧＬＫＬＤＲＩ、ＡＧＡＡＬＳＰＬ、ＦＫＮＬＬＤＨＬ、ＬＫＳＫＬＲＡＬ、ＦＧＫＲＭＤＲＩ、ＦＧＧＲＩＤＲＩ、ＡＧＡＡＬＳＰＬ、またはＡＧＫＡＬＳＰＬを含む、上記［１］に記載の方法。
［６］  前記化合物が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５６、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１または１４２のアミノ酸残基を含み、前記アミノ酸残基が、前記（Ｒｅｓ１）−（Ｒｅｓ２）−（Ｒｅｓ３）−（Ｒｅｓ４）−（Ｒｅｓ５）−（Ｒｅｓ６）−（Ｒｅｓ７）−（Ｒｅｓ８）モチーフを含むか、または共有結合もしくは非共有結合でＲｅｓ１、Ｒｅｓ２、Ｒｅｓ３、Ｒｅｓ４、Ｒｅｓ５、Ｒｅｓ６、Ｒｅｓ７、もしくはＲｅｓ８部位のうちのいずれかに結合している、上記［１］に記載の方法。
［７］  前記化合物が、約１５０未満の残基を有する、上記［１］に記載の方法。
［８］  前記化合物が、約１４０未満の残基を有する、上記［１］に記載の方法。
［９］  前記化合物が、約１０から１５０の残基を有する、上記［１］に記載の方法。
［１０］  前記化合物が、約１０から１２５の残基を有する、上記［１］に記載の方法。
［１１］  前記化合物が、約１０から１００の残基を有する、上記［１］に記載の方法。
［１２］  前記化合物のＲｅｓ１、Ｒｅｓ２、Ｒｅｓ３、Ｒｅｓ４、Ｒｅｓ５、Ｒｅｓ６、Ｒｅｓ７、またはＲｅｓ８部位のうちのいずれかが、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、またはアミノ酸の誘導体もしくは類似体である、上記［１］に記載の方法。
［１３］  前記網膜の障害または疾患が、黄斑変性、増殖糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜静脈閉塞症、未熟児網膜症、弾力線維性仮性黄色腫、視神経乳頭ドルーゼン、極度の近視、または悪性近視性変性を含む、上記［１］に記載の方法。
［１４］  前記黄斑変性が、「滲出型」加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を含む、上記［１３］に記載の方法。
［１５］  前記網膜の障害または疾患が、前記網膜内への脈絡膜血管の伸長または増殖によって引き起こされるまたはそれに関連する、上記［１］に記載の方法。
［１６］  前記網膜の障害または疾患が、前記既存の網膜脈管系の伸長、または前記網膜内への脈絡膜血管の増殖（脈絡膜血管新生；ＣＮＶ）によって引き起こされるまたはそれに関連する、上記［１］に記載の方法。
［１７］  前記網膜の障害または疾患が次第に悪化する、上記［１］に記載の方法。
［１８］  前記網膜の障害または疾患が寛解傾向にある、上記［１］に記載の方法。
［１９］  前記化合物が、前記対象に局所的、局部的、または全身的に投与される、上記［１］に記載の方法。
［２０］  前記化合物が、前記対象の眼または両眼に投与される、上記［１］に記載の方法。
［２１］  前記化合物が、注射、注入、経口または外用によって投与される、上記［１］に記載の方法。
［２２］  前記化合物が、硝子体内注射を介して前記対象に投与される、上記［１］に記載の方法。
［２３］  前記治療が、前記網膜の障害もしくは疾患の１つもしくは複数の症状の重症度もしくは期間を低減もしくは阻害する、または前記網膜の障害もしくは疾患の進行もしくは悪化を低減もしくは阻害する、上記［１］に記載の方法。
［２４］  前記治療が、前記対象の前記網膜内への脈絡膜血管の伸長または増殖を低減または阻害する、上記［１］に記載の方法。
［２５］  前記対象が、網膜障害の治療もしくは療法の候補である、それを受けている、またはそれを受けてきた、上記［１］に記載の方法。
［２６］  前記対象に血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたは阻害剤を前記対象に投与することをさらに含む、上記［１］に記載の方法。
［２７］  前記化合物が、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストまたは阻害剤の投与の前に、実質的にそれと同時に、それとの混合物として、またはその後に投与される、上記［２６］に記載の方法。
［２８］  前記対象が哺乳動物である、上記［１］に記載の方法。
［２９］  前記対象がヒトである、上記［２８］に記載の方法。
【外国語明細書】
2018024674000001.pdf