(57)【要約】【課題】関節軟骨の分解を抑制し、関節軟骨の分解に起因する関節障害の予防又は改善に有用な、医薬品、食品等を提供する。【解決手段】エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を組み合わせてなる関節軟骨分解抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を組み合わせてなる関節軟骨分解抑制剤。
【請求項２】
エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を有効成分とする関節軟骨分解抑制剤。
【請求項３】
エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を有効成分とする関節軟骨分解抑制用食品。
【請求項４】
エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を組み合わせてなる変形性関節症の予防又は改善剤。
【請求項５】
エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を有効成分とする変形性関節症の予防又は改善剤。
【請求項６】
エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を有効成分とする変形性関節症の予防又は改善用食品。
【請求項７】
エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類の組み合わせの割合が、エラグ酸類１質量部に対してカテキン類が０．０１〜１００質量部である、請求項１又は２記載の関節軟骨分解抑制剤、又は請求項３記載の関節軟骨分解抑制用食品。
【請求項８】
エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類の組み合わせの割合が、エラグ酸類１質量部に対してカテキン類が０．０１〜１００質量部である、請求項４又は５記載の変形性関節症の予防又は改善剤、又は請求項６記載の変形性関節症の予防又は改善用食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は関節軟骨の分解を抑制する関節軟骨分解抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢者の健康寿命を損ねる要因の１つである骨関節疾患の罹患人口が近年増加している。骨関節疾患の多くは、加齢とともに発症者数が増加する傾向にあり、近年の高齢化に伴って、今後さらに罹患人口の急速な増加が予想される。
【０００３】
骨関節疾患の１つである変形性関節症（Osteoarthritis）は、関節軟骨の破壊、変性、消失を特徴とする進行性の疾患である。例えば、変形性膝関節症は、軟骨や半月板が徐々に磨り減り、関節の変形、痛みの発生、関節の曲げ伸ばしが困難になる疾患である。変形性膝関節症の日本全国の患者総数は約８００万人と推測されており、同じ骨関節疾患の１つである慢性関節リウマチとくらべてはるかに患者数が多い。
【０００４】
現在のところ、変形性関節症の薬物治療法は疼痛緩和を目的とした対症療法であり、疾患の進行そのものを抑える治療法はほとんど確立されていない。また、従来の治療薬には副作用等の問題があるものが多く、より安全で効果の高い予防・改善薬が望まれている。
【０００５】
変形性関節症は、軟骨組織の破壊が原因とされる。軟骨組織は軟骨細胞とそれを取り囲む細胞外基質から構成されており、関節軟骨細胞外基質（以下、単に軟骨基質ともいう）の主成分はII型コラーゲンとアグリカン（プロテオグリカン）である。コラーゲンは軟骨の形態維持に寄与する一方、アグリカンは軟骨の粘弾性に寄与する。健常人の軟骨組織では、コラーゲン及びアグリカンの産生と、軟骨基質分解酵素による軟骨基質分解との代謝バランスが適正に保たれている。これに対し、変形性関節症患者では、発症初期において関節軟骨基質の分解・変性が観察されることから、軟骨基質の代謝バランスが分解に傾いていると考えられている。
【０００６】
軟骨基質を分解する酵素としては、ＡＤＡＭＴＳ（A  Disintegrin  And  Metalloproteinase  with  ThoromboSpondin  motifs）ファミリーに属するメタロプロテアーゼ群や、及びＭＭＰ（Matrix  Metalloproteinase）ファミリーに属するメタロプロテアーゼ群が知られている。これらのファミリーには、アグリカンを分解する酵素アグリカナーゼや、コラーゲンとアグリカンを分解する酵素ＭＭＰが含まれる。
【０００７】
変形性関節症の発症及び進行は、アグリカンとコラーゲンを中心とする軟骨基質の分解を担うタンパク質分解酵素が関与していると考えられている。近年の研究で、軟骨基質の破壊は、まずアグリカンの酵素的分解と消失が先行して起こり、次いでコラーゲンの酵素的分解が起こること、アグリカンの存在によりコラーゲンが分解から守られることが示唆されている（例えば、非特許文献１参照）。
【０００８】
一方、食品添加物（酸化防止剤）として用いられているエラグ酸は、コラーゲンを分解する酵素の１種であるゼラチナーゼの活性を阻害する作用を有し、関節炎の予防又は改善に有用であること（特許文献１）、また、アグリカン分解酵素であるアグリカナーゼの活性を阻害し、軟骨基質のアグリカン分解を効果的に抑制すること（特許文献２）が報告されている。また、緑茶由来のカテキン類には、ウシ及びヒト軟骨プロテオグリカンとII型コラーゲンの分解を阻害する作用を有し、軟骨破壊を抑制し関節炎の予防改善に有用であることが報告されている（非特許文献２）。
【０００９】
しかしながら、エラグ酸とカテキン類との組み合わせによる関節軟骨の破壊抑制に関する報告はなく、その組み合わせによる効果は全く知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００５−４７８１７号公報
【特許文献２】特開２０１３−２４５１６８号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Linda  Troeberg，et  al.，Biochimica  et  Biophysica  Acta  1824，2012，133-145
【非特許文献２】Adcocks C et al., J Nutr. 132(3), 2002, 341-346
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、関節軟骨の分解を抑制し、関節軟骨の分解に起因する関節障害の予防又は改善に有用な、医薬品、食品等を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、関節軟骨組織の分解を抑制する素材について検討したところ、エラグ酸とカテキン類とを組み合わせて使用した場合に、優れた軟骨分解抑制作用を発揮し、これが関節障害の予防又は改善に極めて有用であることを見出した。
【００１４】
すなわち、本発明は、以下の１）〜６）に係るものである。
１）エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を組み合わせてなる関節軟骨分解抑制剤。
２）エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を有効成分とする関節軟骨分解抑制剤。
３）エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を有効成分とする関節軟骨分解抑制用食品。
４）エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を組み合わせてなる変形性関節症の予防又は改善剤。
５）エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を有効成分とする変形性関節症の予防又は改善剤。
６）エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を有効成分とする変形性関節症の予防又は改善用食品。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、関節軟骨の破壊抑制、或いは関節軟骨の破壊によって引き起こされる関節障害の予防又は改善に有用な医薬品、医薬部外品又は食品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】関節軟骨分解阻害活性を示すグラフ。
【図２】関節軟骨分解阻害活性（濃度依存性）を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明において用いられるエラグ酸は、下記式（１）で示される化合物である。
【００１８】
【化１】
2018090528.tif 000002
【００１９】
本発明において、エラグ酸の誘導体としては、エラグ酸のメチル化物あるいはアセチル化物等が挙げられ、例えば、３，４−ジ−ｏ−メチルエラグ酸、３，３’−ジ−ｏ−メチルエラグ酸、３，３’４−トリ−ｏ−メチルエラグ酸、３，３’，４，４’−テトラ−ｏ−メチル−５−メトキシエラグ酸、３−ｏ−エチル−４−ｏ−メチル−５−ヒドロキシエラグ酸等が好適に例示される。
【００２０】
エラグ酸及びエラグ酸誘導体は、塩の形態をとってもよく、またそれらの水和物であってもよい。塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩等が好適に挙げられ、水和物としては二水和物が好適に挙げられる。
【００２１】
本発明において用いられるエラグ酸又はその誘導体は、公知の合成法により化学的に合成してもよいし、天然物から抽出してもよいし、市販品を用いてもよい。市販のエラグ酸としては、例えばザクロエラグ酸（サビンサジャパンコーポレーション）、エラグ酸二水和物（和光純薬工業(株)）、エラグ酸（関東化学(株)）等が挙げられる。
天然物からエラグ酸を抽出する方法としては、例えば、エラグ酸を含有する天然物の乾燥品を、酸性亜硫酸塩法によって蒸解した後、アルカリ水溶液に浸漬し、浸漬液を分取後、得られた浸漬液に酸を添加してエラグ酸を含む沈殿物を補集し、精製する方法が挙げられる。
【００２２】
本発明における「カテキン類」とは、カテキン、カテキンガレート、ガロカテキン及びガロカテキンガレート等の非エピ体カテキン類と、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート及びエピガロカテキンガレート等のエピ体カテキン類を併せた総称であり、本発明においてはこれらのうちの少なくとも１種の非重合体カテキン類を含有すればよい。なお、本発明おいて、カテキン類の含有量は、当該８種の非重合体カテキン類の合計量に基づいて定義される。
本発明に使用するカテキン類は、一般的には茶葉から抽出した茶抽出物、その濃縮物又はそれらの精製物に含まれているため、これらから得られるものが好ましく使用される。ここで、「茶抽出物」とは、茶葉から水又は親水性有機溶媒を用いて抽出したものであって、濃縮や精製操作が行われていないものをいう。なお、親水性有機溶媒として、例えば、エタノール等のアルコールを使用することができる。また、抽出にはニーダーやカラムを使用することができる。また、「茶抽出液の濃縮物」とは、茶葉から水又は親水性有機溶媒により抽出した茶抽出物から溶媒の少なくとも一部を除去してカテキン類の濃度を高めたものをいい、例えば、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報等に記載の方法により調製することができる。更に、「茶抽出物の精製物」は、溶剤や吸着剤を用いて茶抽出物又はその濃縮物を処理し固形分中のカテキン類の純度を高めたものをいい、例えば、特開２００４−１４７５０８号公報、特開２００７−２８２５６８号公報、特開２００６−１６０６５６号公報、特開２００８−０７９６０９号公報等に記載の方法により調製することができる。
抽出に使用する茶葉としては、例えば、Camellia属、例えばC.sinensis及びC.assamica、やぶきた種又はそれらの雑種から選ばれる茶樹が挙げられる。茶葉は、その加工方法により、不発酵茶、半発酵茶、発酵茶に大別することができる。不発酵茶としては、例えば、煎茶、番茶、碾茶、釜入り茶、茎茶、棒茶、芽茶等の緑茶が例示される。また、半発酵茶としては、例えば、鉄観音、色種、黄金桂、武夷岩茶等の烏龍茶が例示される。更に、発酵茶としては、ダージリン、アッサム、スリランカ等の紅茶が例示される。これらは単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００２３】
本発明のエラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩（以下、「エラグ酸類」と称する）と、カテキン類とを組み合わせてなる関節軟骨分解抑制剤は、配合剤として、それぞれの有効量を適当な配合比において一の剤型に製剤化したものでもよく、またそれぞれの有効量を含有する薬剤を単独に製剤化したものを同時に又は間隔を空けて別々に使用できるようにしたキットであってもよい。
【００２４】
本発明において、エラグ酸類とカテキン類の組み合わせの割合は、適宜選択することができるが、例えばエラグ酸類１質量部に対して、カテキン類は、好ましくは０．０１質量部以上、より好ましくは０．１質量部以上、より好ましくは０．２質量部以上、より好ましくは０．５質量部以上であり、且つ好ましくは１００質量部以下、より好ましくは１０質量部以下、より好ましくは５質量部以下、より好ましくは２質量部以下である。また、好ましくは０．０１〜１００質量部、より好ましくは０．１〜１０質量部、より好ましくは０．２〜５質量部、より好ましくは０．５〜２質量部である。
【００２５】
後記実施例に示すように、エラグ酸類とカテキン類の組み合わせは、ＩＬ−１により誘導される関節軟骨の破壊を有意に抑制し、その効果はエラグ酸とカテキン類をそれぞれ単独で投与した場合に得られる効果の相加を超え、相乗的効果であると云える。
したがって、エラグ酸類とカテキン類との組み合わせは、関節軟骨分解を抑制するために使用でき、関節軟骨分解抑制剤となり得、また関節軟骨分解抑制剤を製造するために使用できる。
【００２６】
軟骨は、軟骨組織と軟骨膜から成る弾性に富む支持組織であり、関節軟骨は関節をつくる二つの骨の骨端を薄く覆っている軟骨である。関節軟骨が分解し、破壊されることによって、変形性関節症、慢性関節リウマチ、骨関節症等の関節障害が引き起こされることが知られており、関節軟骨分解抑制剤は、斯かる関節軟骨分解に起因して生じる関節障害、例えば変形性関節症の予防又は改善のために有用である。ここで、変形性関節症とは、関節軟骨の変性、磨耗および軟骨下骨の硬化、増殖性変化を特徴とする疾患をいう。
【００２７】
したがって、本発明のエラグ酸類とカテキン類との組み合わせは、変形性関節症を予防又は改善するために使用でき、変形性関節症の予防又は改善剤となり得、また変形性関節症の予防又は改善剤を製造するために使用できる。
【００２８】
尚、上記のエラグ酸類とカテキン類との組み合わせを、関節軟骨分解抑制や変形性関節症の予防又は改善のために使用する場合の「使用」は、ヒト若しくは非ヒト動物における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。ここで、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
【００２９】
上記の関節軟骨分解抑制剤、変形性関節症の予防又は改善剤は、関節軟骨の分解抑制、変形性関節症を予防又は改善するための経口医薬品、医薬部外品、サプリメント又は食品となり、或いはこれらへ配合するための素材又は製剤となり得る。
尚、上記食品には、一般飲食品のほか、関節軟骨の分解抑制、変形性関節症の予防又は改善等をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した食品、機能性表示食品、特定保健用食品、病者用食品、栄養機能食品等が包含される。
【００３０】
エラグ酸類とカテキン類を配合した上記医薬品（医薬部外品を含む）は、任意の投与形態で投与され得る。投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられるが、好ましい形態は経口投与である。
このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、本発明のエラグ酸類とカテキン類をそれぞれ単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００３１】
また、エラグ酸類とカテキン類を配合した上記食品の形態は、パン類、ケーキ類、麺類、菓子類、ゼリー類、冷凍食品、アイスクリーム類、乳製品、飲料などの各種食品組成物の他、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）が挙げられる。
種々の形態の食品を調製するには、本発明のエラグ酸類とカテキン類を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００３２】
上記の医薬品（医薬部外品を含む）や食品中のエラグ酸類の含有量は、その使用形態により異なるが、通常、製剤全質量の０．０２質量％以上、好ましくは２質量％以上であり、且つ１００質量％以下、好ましくは９９．８質量％以下である。また、０．０２〜１００質量％、好ましくは２〜９９．８質量％である。また、カテキン類の含有量は、製剤全質量の０．００２質量％以上、好ましくは０．２質量％以上であり、且つ１００質量％以下、好ましくは９８質量％以下である。また、０．００２〜１００質量％、好ましくは０．２〜９８質量％ある。
【００３３】
本発明のエラグ酸類とカテキン類の組み合わせを医薬品や食品として、或いは医薬品や食品に配合して使用する場合の投与量は、患者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与の場合の成人１人当たりの１日の投与量は、通常、エラグ酸類として好ましくは０．０２５mｇ以上、より好ましくは２．８ｍｇ以上であり、そして好ましくは１４．４ｇ以下、より好ましくは３g以下である。また、好ましくは０．０２５mｇ〜１４．４ｇ、より好ましくは２．８mｇ〜３ｇである。また、カテキン類として、好ましくは０．００２４ｍｇ以上、より好ましくは０．２２ｍｇ以上であり、且つ好ましくは２．７ｇ以下、より好ましくは１．５ｇ以下である。また、好ましくは０．００２４mｇ〜２．７ｇ、より好ましくは０．２２mｇ〜１．５ｇである。
【００３４】
また、上記製剤は、任意の投与計画に従って投与され得るが、１日１回〜数回に分け、数週間〜数ヶ月間継続して投与することが好ましい。
また、投与又は摂取対象としては、それを必要としている若しくは希望している動物であれば特に限定されないが、関節障害、より好ましくは変形性関節症の予防又は改善を必要とする若しくは希望するヒトが挙げられる。
【００３５】
上述した実施形態に関し、本発明においてはさらに以下の態様が開示される。
＜１＞エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を組み合わせてなる関節軟骨分解抑制剤。
＜２＞エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を有効成分とする関節軟骨分解抑制剤。
＜３＞エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を有効成分とする関節軟骨分解抑制用食品。
＜４＞エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を組み合わせてなる変形性関節症の予防又は改善剤。
＜５＞エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を有効成分とする変形性関節症の予防又は改善剤。
＜６＞エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を有効成分とする変形性関節症の予防又は改善用食品。
【００３６】
＜７＞関節軟骨分解抑制に使用するための、エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類の組み合わせ。
＜８＞関節軟骨分解抑制剤を製造するための、エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類の組み合わせ。
＜９＞エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を組み合わせてその有効量を投与又は摂取する関節軟骨分解抑制方法。
【００３７】
＜１０＞変形性関節症の予防又は改善に使用するための、エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類の組み合わせ。
＜１１＞変形性関節症の予防又は改善剤を製造するための、エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類の組み合わせ。
＜１２＞エラグ酸若しくはその誘導体又はそれらの塩とカテキン類を組み合わせてその有効量を投与又は摂取する変形性関節症の予防又は改善方法。
【００３８】
＜１３＞前記＜７＞又は＜１０＞において、使用は非治療的使用である。
＜１４＞前記＜９＞又は＜１２＞において、方法は非治療的方法である。
＜１５＞前記＜１＞〜＜１４＞において、エラグ酸類とカテキン類の組み合わせの割合は、例えばエラグ酸類１質量部に対して、カテキン類は、好ましくは０．０１質量部以上、より好ましくは０．１質量部以上、より好ましくは０．２質量部以上、より好ましくは０．５質量部以上であり、且つ好ましくは１００質量部以下、より好ましくは１０質量部以下、より好ましくは５質量部以下、より好ましくは２質量部以下である。また、好ましくは０．０１〜１００質量部、より好ましくは０．１〜１０質量部、より好ましくは０．２〜５質量部、より好ましくは０．５〜２質量部である。
【実施例】
【００３９】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
＜軟骨組織及び試験培地の調製＞
（１）組織の摘出
ブタ膝関節に損傷のない大腿骨（６カ月齢）をフナコシ（株）より購入した。大腿骨顆部側のブタ膝関節包を切開して軟骨を露出させ、直径３ｍｍのパンチバイオプシ―で円柱状の軟骨片を摘出した。軟骨面とは逆側の骨側に付着した組織をメスの裏側にて削ぎ落とした円盤状の組織重量を測定した。
【００４０】
（２）組織の培養
重量測定後、各ウェルにＤ−ＰＢＳ（−）（ライフテクノロジーズ、１４１９０−１４４）１体積％ＰＳ（ペニシリン・ストレプトマイシン：ライフテクノロジーズ、１５１４０−１２２）を入れた９６ｗｅｌｌマイクロプレートに１ウェルにつき１片を浸した。ＰＢＳ（−）１体積％ＰＳからＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地），１０体積％ＦＢＳ（ウシ胎児血清），１体積％ＰＳに切り替えた後（２００μｌ／ｗｅｌｌ）、更にＤＭＥＭ，１体積％ＦＢＳ，１体積％ＰＳに切り替えて５−６日間３７℃、５体積％ＣＯ２で培養してアッセイに供した。培地は２−３日毎に交換した。
【００４１】
（３）試験培地の調製
試験培地は、ＤＭＥＭ，１体積％ＰＳ（０体積％ＦＢＳ）に添加に各種サンプルを添加したものを使用した。添加サンプルは下記の通りである。
１）コントロール群
２）エラグ酸（１００ｎｇ／ｍｌ）
３）カテキン類（１００ｎｇ／ｍｌ）
４）エラグ酸（１００ｎｇ／ｍｌ）＋カテキン（１００ｎｇ／ｍｌ）
＊エラグ酸：和光純薬工業社
＊カテキン類：８種＜カテキン（Ｃ），エピカテキン（ＥＣ），ガロカテキン（ＧＣ），エピガロカテキン（ＥＧＣ），エピカテキンガレート（ＥＣｇ），カテキンガレート（Ｃｇ），エピガロカテキンガレート（ＥＧＣｇ），ガロカテキンガレート（ＧＣｇ）＞を混合したものを使用（各々１００ｎｇ／ｍｌ、カテキンとして計８００ｎｇ／ｍｌ）。
【００４２】
試験例１  関節軟骨分解阻害活性
（１）サンプル添加と分解刺激
組織重量の平均値に群間差がないように各群に軟骨組織を割り振り、上記（３）で調製した該当する試験培地（200μl/well）に置換して培養した。組織分解刺激については、試験培地にて培養開始１時間後、ｒｈ  ＩＬ−１α（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−１α 、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を終濃度８０ｎｇ／ｍｌとなるように添加した。さらに２４時間の培養の後、培地を回収した。
【００４３】
（２）分解指標の測定
軟骨組織中のアグリカンから培地中に遊離されたグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）をＢｌｙｓｃａｎ  Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ社）にて測定し、ＧＡＧ量／軟骨組織重量を軟骨組織分解の指標とした。
【００４４】
（３）結果
結果を図１に示す。
エラグ酸とカテキン類を併用して添加した群では、エラグ酸とカテキン類をそれぞれ単独で添加した群よりも軟骨分解が遥かに抑制され、その効果は相乗的であった。
【００４５】
試験例２  関節軟骨分解阻害活性（濃度依存的効果）
添加サンプルとして、エラグ酸（２０，１００，５００ｎｇ／ｍｌ）とカテキン類（２０，１００，５００ｎｇ／ｍｌ）を同じ濃度で組み合わせたものを用い、試験例１と同様に軟骨分解阻害活性を測定した。
その結果を図２に示す。図２より、エラグ酸、カテキン類ともに５００ｎｇ／ｍｌ以下の濃度では単独で軟骨分解を抑制する効果は認められなかった。しかしながら、１００ｎｇ／ｍｌから両者を併用した群では単独で添加した群よりも相乗的に軟骨分解を抑制することが確認された。
【図１】
2018090528.tif 000003
【図２】
2018090528.tif 000004