(57)【要約】【課題】新規な形質を有するホウレンソウを一方の親として使用することで雑種強勢を示す新規なホウレンソウ種子を生産する。【解決手段】収穫期において葉柄が中実であるホウレンソウを一方の親とし、収穫期において葉柄が中空であるホウレンソウを他方の親として、雑種強勢を示すホウレンソウを作出する。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
収穫期の葉柄が中実である第１の親ホウレンソウと収穫期の葉柄が中空である第２の親ホウレンソウとを交配する、雑種強勢を示す雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
【請求項２】
上記雑種強勢が、収量性の増加であることを特徴とする請求項１記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
【請求項３】
上記雑種強勢が、一株あたりの重量の増加であることを特徴とする請求項１記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
【請求項４】
上記雑種強勢が、最大葉長の増加であることを特徴とする請求項１記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
【請求項５】
上記雑種強勢は、収穫期の葉柄が中空であるホウレンソウ同士の交配による雑種強勢を超えることを特徴とする請求項１記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
【請求項６】
上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向に交差する切断面において、中実度（中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）が８０％以上であることを特徴とする請求項１記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
【請求項７】
上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向に交差する切断面において、中実度（中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）が９０％以上であることを特徴とする請求項１記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
【請求項８】
上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向に交差する切断面において、中実度（中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）が９５％以上であることを特徴とする請求項１記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
【請求項９】
上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向の長さに対して、８０％以上が中実であることを特徴とする請求項１記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
【請求項１０】
上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向の長さに対して、９０％以上が中実であることを特徴とする請求項１記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
【請求項１１】
上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向の長さに対して、９５％以上が中実であることを特徴とする請求項１記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
【請求項１２】
上記第１の親ホウレンソウは、受託番号FERM BP-22292である、又は受託番号FERM BP-22292の後代であることを特徴とする請求項１記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
【請求項１３】
請求項１〜１２いずれか一項記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法により得られる雑種ホウレンソウ種子。
【請求項１４】
収穫期の葉柄が中実である第１の親ホウレンソウと収穫期の葉柄が中空である第２の親ホウレンソウとを交配する、ホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
【請求項１５】
上記交配により得られた雑種ホウレンソウは、上記第１の親ホウレンソウ及び上記第２の親ホウレンソウと比較して収量性が増加したものであることを特徴とする請求項１４記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
【請求項１６】
上記交配により得られた雑種ホウレンソウは、上記第１の親ホウレンソウ及び上記第２の親ホウレンソウと比較して一株あたりの重量が増加したものであることを特徴とする請求項１４記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
【請求項１７】
上記交配により得られた雑種ホウレンソウは、上記第１の親ホウレンソウ及び上記第２の親ホウレンソウと比較して最大葉長が増加したものであることを特徴とする請求項１４記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
【請求項１８】
上記交配により得られた雑種ホウレンソウは、収穫期の葉柄が中空であるホウレンソウ同士の交配による雑種強勢を超える雑種強勢を示すことを特徴とする請求項１４記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
【請求項１９】
上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向に交差する切断面において、中実度（中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）が８０％以上であることを特徴とする請求項１４記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
【請求項２０】
上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向に交差する切断面において、中実度（中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）が９０％以上であることを特徴とする請求項１４記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
【請求項２１】
上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向に交差する切断面において、中実度（中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）が９５％以上であることを特徴とする請求項１４記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
【請求項２２】
上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向の長さに対して、８０％以上が中実であることを特徴とする請求項１４記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
【請求項２３】
上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向の長さに対して、９０％以上が中実であることを特徴とする請求項１４記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
【請求項２４】
上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向の長さに対して、９５％以上が中実であることを特徴とする請求項１４記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、雑種強勢を示すホウレンソウ種子の生産方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホウレンソウSpinacia oleracea L.は、アカザ科ホウレンソウ属の一年草又は多年草であって、アジア西部原産で広く栽培され、日本には江戸時代に中国から伝えられたと考えられている。主に根生葉(ロゼット状)を食用とし、ビタミン類や鉄、カルシウム分の含有量は野菜の中でも特に高く、栄養価値はきわめて高い。
【０００３】
ホウレンソウの生育段階は、播種後３４〜４０日の青果物で通常食用されるロゼット葉を形成するロゼットステージと、その後、茎の伸長生長（抽台）を起こし開花する抽台ステージとを含む。通常、食用されるホウレンソウにおいては、抽台ステージの前までを収穫期としている。ホウレンソウは、播種後５〜７日で発芽し、生育適温（１５〜２０℃）では３０日前後（低温下では４０〜１００日前後）で収穫期に達するとされている。収穫期に達するまでの日数は温度や季節により、大きく変動する。
【０００４】
ホウレンソウの用途は、生鮮品向けと業務加工向けがある。生鮮品向けホウレンソウとしては、草丈約１０cm前後まで栽培したものをベビーリーフ用とし、草丈約２０〜３０cmまで栽培したものを青果用としている。また、業務加工向けホウレンソウとしては、主に草丈約４０〜５０cmまで栽培したものを用いている。いずれの用途においても、収量性が求められている。
【０００５】
非特許文献１によれば、「交配ホウレンソウは、交配親の系統によって異なるが両親系統のほぼ中間型を示」すとされており、早晩性については、「一般的に西洋系品種は生育が比較的おそく晩生に属し、雑種系は早生である。東洋系品種のなかでは‘禹城’は早生で、日本在来種は中間型である。交配ホウレンソウは雑種強勢もあって、早生から極早生の表示のものが多くなっている」とされる。しかし、ホウレンソウ主要品種の特性（第１表）では、全２０１品種中の極早生１１品種の内訳は、東洋×西洋（または、西洋×東洋）７品種、西洋×西洋３品種、東洋×東洋１品種となり、西洋×西洋、東洋×東洋という分類内でも、極早生を示す品種も見られる。このように、ホウレンソウでは、例えば早生性の形質に着目しても雑種強勢の発現は顕著ではない。基本的に交配ホウレンソウでは、雑種強勢の影響よりも、両親系統の中間的形質となる傾向が強く、実際上は交配で組合わされる両親系統の形質自体が重要となる。
【０００６】
また、ホウレンソウは、非特許文献２に記載されるように、葉が十分に展開した段階では、葉柄が中空であるという特徴が記載されている。すなわち、収穫期におけるホウレンソウは、中空の構造を有する葉柄を備えている。
【０００７】
ところで、雑種強勢とは、ヘテロシス（heterosis）やハイブリッドビガー（Hybrid vigor）とも呼ばれ、一代雑種（F1）が両親よりも形質、例えば、大きさ、環境適応性、収量、多産性等の性質が優れていることを意味する。植物における雑種強勢については、非特許文献３に記載されるように、古くから着目され、種々の野菜においても確認され、ブラシカ属のブロッコリーでは雑種強勢により平均で26％〜58％の花蕾重増加となっている。一方、ホウレンソウについては、20%の雑種強勢が見られ、在来種であるサボイ（savoy）ホウレンソウを利用した場合で、非特許文献３の表３２に示されている在来種であるヴィロフレイとの特徴的な組合せ交配によって60％の雑種強勢が見られると記載されている。しかしながら、実際には商品価値のある一代雑種になりにくい。
【０００８】
つまり、ホウレンソウにおいて、従来の交配組合せでは両親系統の中間的となる傾向が強く、雑種強勢を利用した交配組合せは実用的ではなかった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】農業技術大系  野菜編第7巻ホウレンソウ（基礎編−品種特性と作型適応性）基49〜56ページ  農文協
【非特許文献２】Spinach, Table Beets, and Other Vegetable Chenopods, V.E. Rubatzky et al., World Vegetable Chapman& Hall, 1997, P.457-458
【非特許文献３】Chapter 6 Heterosis in Vegetable Corps, Heterosis, Reappraisal of Theory and Practice, Pearson, O. H., Monographs on Theoretical and Applied Genetics, 1983, p.138-154, 179-188
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
一般に、雑種強勢は、遠縁の品種を両親としたときに見られる傾向がある。しかしながら、既存のホウレンソウを用いた交配によって雑種強勢を示す雑種を作出するのが非常に困難であるといった問題があった。
【００１１】
そこで、本発明は、新規な形質を有するホウレンソウを一方の親として使用することで雑種強勢を示す新規なホウレンソウ種子の生産方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者は、葉柄内の中空部が比較的に少ない系統を用いて多くの後代系統を長年に亘って作出した結果、驚くべきことに、収穫期において葉柄内部（内髄部と呼称する場合もある）が柔組織等で満たされ、葉柄が中実である新規ホウレンソウを作出している（特願2015-203506号）。そして、上述した目的を達成するため、本発明者は、収穫期において葉柄が中実であるホウレンソウを一方の親とし、収穫期において葉柄が中空であるホウレンソウを他方の親としたときに、雑種強勢を示すホウレンソウを作出できることを見いだし、本発明を完成するに至った。
【００１３】
本発明は以下を包含する。
（１）収穫期の葉柄が中実である第１の親ホウレンソウと収穫期の葉柄が中空である第２の親ホウレンソウとを交配する、雑種強勢を示す雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
（２）上記雑種強勢が、収量性の増加であることを特徴とする（１）記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
（３）上記雑種強勢が、一株あたりの重量の増加であることを特徴とする（１）記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
（４）上記雑種強勢が、最大葉長の増加であることを特徴とする（１）記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
（５）上記雑種強勢は、収穫期の葉柄が中空であるホウレンソウ同士の交配による雑種強勢を超えることを特徴とする（１）記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
（６）上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向に交差する切断面において、中実度（中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）が８０％以上であることを特徴とする（１）記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
（７）上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向に交差する切断面において、中実度（中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）が９０％以上であることを特徴とする（１）記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
（８）上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向に交差する切断面において、中実度（中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）が９５％以上であることを特徴とする（１）記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
（９）上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向の長さに対して、８０％以上が中実であることを特徴とする（１）記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
（１０）上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向の長さに対して、９０％以上が中実であることを特徴とする（１）記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
（１１）上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向の長さに対して、９５％以上が中実であることを特徴とする（１）記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
（１２）上記第１の親ホウレンソウは、受託番号FERM BP-22292である、又は受託番号FERM BP-22292の後代であることを特徴とする（１）記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法。
（１３）上記（１）〜（１２）いずれか記載の雑種ホウレンソウ種子の生産方法により得られる雑種ホウレンソウ種子。
（１４）収穫期の葉柄が中実である第１の親ホウレンソウと収穫期の葉柄が中空である第２の親ホウレンソウとを交配する、ホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
（１５）上記交配により得られた雑種ホウレンソウは、上記第１の親ホウレンソウ及び上記第２の親ホウレンソウと比較して収量性が増加したものであることを特徴とする（１４）記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
（１６）上記交配により得られた雑種ホウレンソウは、上記第１の親ホウレンソウ及び上記第２の親ホウレンソウと比較して一株あたりの重量が増加したものであることを特徴とする（１４）記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
（１７）上記交配により得られた雑種ホウレンソウは、上記第１の親ホウレンソウ及び上記第２の親ホウレンソウと比較して最大葉長が増加したものであることを特徴とする（１４）記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
（１８）上記交配により得られた雑種ホウレンソウは、収穫期の葉柄が中空であるホウレンソウ同士の交配による雑種強勢を超える雑種強勢を示すことを特徴とする（１４）記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
（１９）上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向に交差する切断面において、中実度（中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）が８０％以上であることを特徴とする（１４）記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
（２０）上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向に交差する切断面において、中実度（中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）が９０％以上であることを特徴とする（１４）記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
（２１）上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向に交差する切断面において、中実度（中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）が９５％以上であることを特徴とする（１４）記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
（２２）上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向の長さに対して、８０％以上が中実であることを特徴とする（１４）記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
（２３）上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向の長さに対して、９０％以上が中実であることを特徴とする（１４）記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
（２４）上記第１の親ホウレンソウは、上記葉柄の軸方向の長さに対して、９５％以上が中実であることを特徴とする（１４）記載のホウレンソウに対する雑種強勢付与方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、収穫期の葉柄が中実である第１の親ホウレンソウと収穫期の葉柄が中空である第２の親ホウレンソウとを交配することで、雑種強勢を示す雑種ホウレンソウの種子を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ホウレンソウの葉を模式的に示す図である。
【図２】実施例１と比較例１を撮像した写真である。
【図３】実施例２と比較例２を撮像した写真である。
【図４】実施例１及び２、比較例１及び２について一株あたりの重量を測定した結果を示す特性図である。
【図５】実施例１及び２、比較例１及び２について最大葉長を測定した結果を示す特性図である。
【図６】実施例３及び比較例３を２０１７年２月２４日に撮像した写真である。
【図７】系統Ｃ及び既存系統のＫを２０１７年２月２７日に撮像した写真と、実施例３及び比較例３を２０１７年２月２７日に撮像した写真である。
【図８】系統Ｃ及び既存系統のＫを２０１７年３月３日に撮像した写真と、実施例３及び比較例３を２０１７年３月３日に撮像した写真である。
【図９】実施例３及び市販品種クロノスを２０１７年３月１７日に撮像した写真である。
【図１０】実験例で作出した試交Ｄ及び対照品種の葉柄を軸方向に交差するように切断した状態を撮像した写真である。
【図１１】実験例で作出した試交Ｄの葉柄を切断した切断面を撮像した写真である。
【図１２】対照品種であるリビエラの葉柄を切断した切断面を撮像した写真である。
【図１３】実験例で作出した試交Ｄ及びアクセラの葉柄の一部を撮像した写真である。
【図１４】実験例で作出した試交Ｄ及びアクセラを加熱処理した後、葉柄の切断面を撮像した写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明に係るホウレンソウ種子の生産方法及びホウレンソウに対する雑種強勢付与方法について詳細に説明する。
【００１７】
本発明に係るホウレンソウ種子の生産方法では、収穫期の葉柄が中実である第１の親ホウレンソウと収穫期の葉柄が中空である第２の親ホウレンソウとを交配する。得られた種子（F1、雑種第一代、一代雑種）は、定法に従って栽培することで、いわゆる雑種強勢を示すホウレンソウ（植物体、以下、本発明のホウレンソウと称する）となる。雑種強勢とは、特定の形質について、一代雑種が両親の系統のいずれと比べても優れることを意味する。
【００１８】
ここで、特定の形質としては、例えば、大きさ、環境適応性、収量及び多産性等の形質を意味する。本発明のホウレンソウには、特に、収量性に関係する形質について雑種強勢が表れる。収量性に関係する形質としては、特に限定されないが、ホウレンソウ一株あたりの重量及び最大葉長を挙げることができる。また、収量性に関する形質としては、これらに限定されず、例えば、根部の重量又は容量、地上部の重量又は容量、葉面積又は容量、及びこれらの項目の生育日数あたりの増加量等を挙げることができる。
【００１９】
すなわち、本発明のホウレンソウは、第１の親ホウレンソウ及び第２の親ホウレンソウのそれぞれの収量性と比較して、いずれに対しても優れた収量性を示すこととなる。具体的に、本発明のホウレンソウは、第１の親ホウレンソウ及び第２の親ホウレンソウと比較して、一株あたりの重量が増加し、又は最大葉長が増加するといった特徴を示す。なお、収量性に関する形質を比較する際には、本発明のホウレンソウ、第１の親ホウレンソウ及び第２の親ホウレンソウの栽培条件（播種時期、施肥、栽培期間等）を合わせ、収量性に関する形質を観察する。
【００２０】
具体的に、本発明のホウレンソウは、第１の親ホウレンソウに関する一株あたりの重量と第２の親ホウレンソウに関する一株あたりの重量との平均値と比較すると、１０５％以上に増加するといった特徴を有し、好ましくは１１０％以上に増加するといった特徴を有し、より好ましくは１１５％以上に増加するといった特徴を有し、更に好ましくは１２０％以上に増加するといった特徴を有し、更に好ましくは１２５％以上に増加するといった特徴を有し、更に好ましくは１３０％に以上増加するといった特徴を有し、更に好ましくは１３５％以上に増加するといった特徴を有し、更に好ましくは１４０％以上に増加するといった特徴を有している。
【００２１】
ここで、上記数値は、比較する第１の親ホウレンソウにおける一株あたりの重量と第２の親ホウレンソウにおける一株あたりの重量との平均値を１００％としたときの数値である。
【００２２】
また、具体的に、本発明のホウレンソウは、第１の親ホウレンソウに関する最大葉長と第２の親ホウレンソウに関する最大葉長との平均値と比較すると、１０５％以上に増加するといった特徴を有し、好ましくは１１０％以上に増加するといった特徴を有し、より好ましくは１１５％以上に増加するといった特徴を有し、更に好ましくは１２０％以上に増加するといった特徴を有し、更に好ましくは１２５％以上に増加するといった特徴を有し、更に好ましくは１３０％以上に増加するといった特徴を有し、更に好ましくは１３５％以上に増加するといった特徴を有し、更に好ましくは１４０％以上に増加するといった特徴を有している。
【００２３】
ここで、上記数値は、比較する第１の親ホウレンソウにおける最大葉長（一株に含まれる葉のうち最大の葉について測定した葉長）と第２の親ホウレンソウにおける最大葉長との平均値を１００％としたときの数値である。
【００２４】
特に、本発明のホウレンソウは、収穫期の葉柄が中空であるホウレンソウ同士を交配することで得られる一代雑種（以下、比較対照ホウレンソウと称する）において見られる雑種強勢と比較して、より優れた雑種強勢を示す。例えば、本発明のホウレンソウを作出する際に使用した第２の親ホウレンソウ（収穫期の葉柄が中空）と、第２の親ホウレンソウとは異なる収穫期の葉柄が中空であるホウレンソウとを交配して得られた比較対照ホウレンソウと本発明のホウレンソウとを一株あたりの重量で比較すると、本発明のホウレンソウは、比較対照ホウレンソウに比べて１０３％以上の重量であり、好ましくは１０５％以上の重量であり、より好ましくは１１０％以上の重量であり、更に好ましくは１１５％以上の重量であり、更に好ましくは１２０％以上の重量であり、更に好ましくは１５０％以上の重量であり、更に好ましくは２００％以上の重量である。
【００２５】
ここで、上記数値は、比較対照ホウレンソウにおける一株あたりの重量を１００％としたときの数値である。
【００２６】
また、同比較対照ホウレンソウと本発明のホウレンソウとを最大葉長で比較すると、本発明のホウレンソウは、比較対照ホウレンソウに比べて１０５％以上の長さであり、好ましくは１１０％以上の長さであり、より好ましくは１１５％以上の長さであり、更に好ましくは１２０％以上の長さであり、更に好ましくは１２５％以上の長さであり、更に好ましくは１３０％以上の長さであり、更に好ましくは１５０％以上の長さである。
【００２７】
ここで、上記数値は、比較対照ホウレンソウにおける最大葉長（一株に含まれる葉のうち最大の葉について測定した葉長）を１００％としたときの数値である。
【００２８】
ところで、本発明のホウレンソウは、収量性に関する形質以外に、根部の重量又は容量、地上部の重量又は容量、葉面積又は容積、及びこれらの項目の生育日数あたりの増加量といった形質について雑種強勢が表れるといった特徴もある。より具体的に、根部の重量又は容積といった形質としては、収穫時に大きな根部の重量又は容積を示すこと等を挙げることができる。また、地上部の重量又は容量といった形質としては、収穫時に大きな地上部の重量又は容積を示すこと等を挙げることができる。さらに、これらの項目の生育日数あたりの増加量といった形質としては、収穫時にこれらの項目の生育日数あたりの平均増加量を比較すること等を挙げることができる。
【００２９】
なお、本発明に係るホウレンソウ種子の製造方法に使用できる、第２の親ホウレンソウ、すなわち収穫期における葉柄が中空であるホウレンソウとしては、特に限定されないが、例えば、例えば、禹城、日本、黒葉ミンスターランド、次郎丸、豊葉、アトラス、ソロモン、まほろば、サンライト、パルク、ミストラル、オシリス、プログレス、アグレッシブ、クロノス、トラッド７、ミラージュ、トリトン、カイト、アクセラ、ハンター、サイクロン及びサンホープセブン等を使用することができる。
【００３０】
なお、本発明のホウレンソウは、収穫期の葉柄が中実である第１の親ホウレンソウと、収穫期における葉柄は中空となる第２の親ホウレンソウとを交配することにより得られる。本発明のホウレンソウは、上述したように優れた雑種強勢を示すとともに、収穫期の葉柄が中実であるという劣性形質を保因するため、上述したように優れた形質とともに、収穫期における葉柄が中実である形質を表現型として示すホウレンソウの親系統を作出する際に使用できる。このとき、生産されるホウレンソウは、収穫期の葉柄が中空であるホウレンソウが本来有する形質を保持していることが好ましい。
【００３１】
以下、本発明に係るホウレンソウ種子の製造方法に使用できる、第１の親ホウレンソウ、すなわち収穫期における葉柄が中実であるホウレンソウ（以下、中実ホウレンソウと称する）について説明する。
【００３２】
中実ホウレンソウは、収穫期の葉柄が中実であるといった特徴を有する。中実ホウレンソウは、上記特徴を有するアカザ科ホウレンソウ属の植物、上記特徴を有するアカザ科ホウレンソウ属と他の植物との交雑植物の両者を意味する。ここで、他の植物としては、例えばアカザ科の植物であり、アカザ科ホウレンソウ属、フダンソウ属又はアカザ属に属する植物を挙げることができる。このような交雑植物であっても、収穫期の葉柄が中実であるといった特徴を有する場合には中実ホウレンソウに含まれる。
【００３３】
ここで、「葉柄が中実」であるとは、従来のホウレンソウの葉柄に形成されている中空部が従来のホウレンソウより有意に少ないか、好ましくは実質的にない形態を意味する。従来のホウレンソウの葉柄を軸方向に交差するように切断（すなわち横断面）すると、通常、外側に皮層、その内側に柔組織である髄が、そしてその髄の中心に中空部が存在する。また髄には数本の維管束が並ぶ。髄は、柔組織からなり、葉柄が生長するのに応じて、葉柄内に中空部が形成される。したがって、従来のホウレンソウにおいて、中空部は葉柄のほぼ中心を貫通する形で形成される。
【００３４】
中実ホウレンソウは、葉柄が生長して収穫期になっても髄の柔組織が保たれ、中空部が形成されず中実の状態を維持する。ここで、葉柄及び葉身を含むホウレンソウの葉の組織を図１に模式的に示す。中実ホウレンソウは、上述のように、葉柄の基部から葉身にかけて形成される中空部を有しないのであって、葉柄内に中空部とは異なる不規則な空隙や、葉柄の一部に中空部が形成されていても良い。
【００３５】
また、「葉柄が中実」であるとは、葉柄を軸方向と交差する方向で切断してなる切断面に占める組織面積に基づいて定義することもできる。例えば、当該切断面における組織面積の割合を中実度として、中実度の値により「葉柄が中実」であると定義することができる。一例として、中実度＝１００×（[総面積]−[空隙面積]）/[総面積]）とし、中実度が８０％以上である場合に中実であると定義できる。または、上述した中実度が８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上である場合に中実であると定義することもできる。
【００３６】
なお、中実度を計算する際、葉柄の切断面は、特に限定されないが、葉柄の横断面、つまり軸方向に対して直交又は直交に近い角度で切断した切断面が良い。また、切断面の総面積及び空隙面積は、特に限定されるものではなく、切断面を目視で観察して測定しても良いし、切断面の写真を用いて測定しても良いし、切断面の画像データとイメージ画像処理用ソフトウェアを用いて測定しても良い。
【００３７】
さらに、中実ホウレンソウは、上述のように、葉柄の基部から葉身にかけて形成される中空部とは異なり、葉柄の軸方向における一部に不規則に空隙が生じたものであっても良い。この場合、特に、葉柄の軸方向の長さに対して、８０％以上が中実であることが好ましく、９０％以上が中実であることがより好ましく、９５％以上が中実であることが最も好ましい。なお、葉柄の軸方向の長さとは、葉柄の基部から葉身の基部までの長さを意味する。
【００３８】
さらにまた、「収穫期」とは、ホウレンソウの生育段階において、草丈（地面から植物の最も高い部分までの長さ）が１５ｃｍ以上、又は最も長い葉柄の長さが５ｃｍ以上のいずれかに達した時期以降から、茎の伸長生長（抽台）を起こし開花する抽台ステージより前と定義する。
【００３９】
なお、上述のように定義した収穫期にあるホウレンソウは、中心部から新たに生長した３ｃｍ以下の新葉を有している場合がある。新葉は、従来のホウレンソウにおいても中実である場合がある。したがって、中実ホウレンソウが有している収穫期の葉柄が中実であるといった特徴は、新葉を除く葉について従来ホウレンソウと区別できる新規な特徴である。
【００４０】
ところで、中実ホウレンソウは、既存のホウレンソウ品種・系統のなかから葉柄内の中実度が高いものを選択し、選択した品種・系統の自殖種子を播種して多数の後代を生育し、中実度の高い個体を繰り返し選抜することで作出することができる。一例として、後述の実験例で作出した、収穫期の葉柄が中実であるといった特徴を有するホウレンソウについて、その種子を２０１５年８月２６日付けで、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター(千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8)に受託番号FERM BP-22292として国際寄託している。
【００４１】
また、中実ホウレンソウを任意のホウレンソウと交配することで中実ホウレンソウ又は中空ホウレンソウを生産することができる。ここで、任意のホウレンソウとは、収穫期における葉柄が中空であるホウレンソウ（従来のホウレンソウ）及び収穫期の葉柄が中実である中実ホウレンソウの両者を含む意味である。
【００４２】
すなわち、中実ホウレンソウ（一方の親ホウレンソウ）と中実ホウレンソウ（他方の親ホウレンソウ）とを交配して得られる種子は、収穫期の葉柄が中実であるという形質を遺伝したホウレンソウである。これにより、収穫期における葉柄が中実であるといった特徴を有するホウレンソウ種子を生産することができる。ここで、収穫期の葉柄が中実であるという形質は劣性形質である。したがって、中実ホウレンソウ（一方の親ホウレンソウと他方の親ホウレンソウ）を交配することで得られる種子は収穫期の葉柄が中実であるという形質を表現型として示す。
【００４３】
さらに、後述する実験例に示すように、収穫期における葉柄が中実となる形質は、劣性遺伝子（以降中実遺伝子と呼称する）によるものと示唆される。したがって、中実ホウレンソウを用いて作出され、収穫期における葉柄が中実であるといった特徴を有する交配雑種は、中実遺伝子をホモで有する（ホモ接合型）。例えば、受託番号FERM BP-22292で特定されるホウレンソウを交配母本又は交配父本として作出した、収穫期における葉柄が中実であるといった特徴を有する交配雑種は中実遺伝子のホモ接合型であるといった特徴を有する。
【実施例】
【００４４】
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は以下の実施例に限定されるものではない。
【００４５】
〔実施例１乃至３〕
本実施例では、詳細を後述する実験例１で作製したＣをメス親とし、収穫における葉柄が中空である既存系統をオス親として交配させ、Ｆ１種子を得た。具体的には、オス親として、Ｇ、Ｈ及びＪの３種類の既存系統を使用した。
【００４６】
そして、得られたＦ１種子を播種し栽培した。具体的には、２０１６年９月２８日に千葉県袖ヶ浦市の圃場においてホウレンソウ種子を播種した。そして、露地に幅１ｍ高さ約１０ｃｍのベッドを作り、条間１５ｃｍ、株間５ｃｍで５条播きとした。１反（１０ａ）当たりで、窒素１０ｋｇ・燐酸１０ｋｇ・カリ１０ｋｇを全量元肥で施した。
【００４７】
以上の方法により３種類のF1ホウレンソウを得ることができた。オス親としてＧを使用したF1ホウレンソウを実施例１と称し、オス親としてＨを使用したF1ホウレンソウを実施例２、オス親としてＪを使用したF1ホウレンソウを実施例３と称する。
【００４８】
また、比較のため、収穫における葉柄が中空である系統Ｆをメス親としＧをオス親として交配したものを比較例１、収穫における葉柄が中空である系統Ｉをメス親としＨをオス親として交配したものを比較例２及び収穫における葉柄が中空である系統Ｋをメス親としＪをオス親として交配したものを比較例３とし、これらを同条件で栽培した。
【００４９】
実施例１と比較例１を撮像した写真を図２に示し、実施例２と比較例２を撮像した写真を図３に示した。また、実施例１及び比較例１並びに実施例２及び比較例２について、一株あたりの重量を比較した結果を図４に示し、最大葉長を比較した結果を図５に示した。
【００５０】
図２、図４及び図５に示したように、実施例１は比較例１と比べて大きく成長し、収量性に関する形質（一株あたりの重量及び最大葉長）が顕著に優れることが分かる。具体的に、実施例１では、比較例１と比べて一株あたりの重量が５２％増加し、最大葉長が１５％増加した。すなわち、実施例１は、比較例１に表れた雑種強勢と比較して、より優れた雑種強勢を示すことが明らかとなった。
【００５１】
図３、図４及び図５に示したように、実施例２は比較例２と比べて大きく成長し、収量性に関する形質（一株あたりの重量及び最大葉長）が顕著に優れることが分かる。具体的に、実施例２では、比較例２と比べて一株あたりの重量が９９％増加し、最大葉長が３３％増加した。すなわち、実施例２は、比較例２に表れた雑種強勢と比較して、より優れた雑種強勢を示すことが明らかとなった。
【００５２】
また、上述のように得られた、Ｊをオス親として使用して得られたたF1種子（実施例３）を２０１７年１月１９日に播種し、上記と同様にして栽培した。比較のため、比較例３についても同様に栽培した。
【００５３】
２０１７年２月２４日に撮像した写真を図６に示した。また、このときに一株あたりの重量（ｎ＝３）を測定したところ、実施例３は１４ｇであり、比較例３は１１ｇであった。図６に示すように、実施例３は、徒長しているのではなく生産量が向上していることが分かる。
【００５４】
また、２０１７年２月２７日に撮像した写真を図７に、２０１７年３月３日に撮像した写真を図８に示した。なお、図７及び８には、詳細を後述する実験例１で作製した系統Ｃ及び既存系統のＫを同条件で栽培し、これらを撮像した写真を示した。図７及び８に示すように、系統Ｃは、既存系統のＫと比較して個体の大きさに差は殆ど無いことがわかる。これに対して、系統Ｃをメス親とした実施例３は、Ｋをメス親とした比較例３と比べて雑種強勢の程度が顕著に優れていることが分かる（なお、実施例３及び比較例３のオス親は共通したＪである）。
【００５５】
以上、本実施例の結果から、収穫期において葉柄が中実であるホウレンソウを一方の親とし、収穫期において葉柄が中空であるホウレンソウを他方の親としたときに、優れた雑種強勢を示すホウレンソウを作出できることが明らかとなった。
【００５６】
一方、上述のように得られた、Ｊをオス親として使用して得られたたF1種子（実施例３）と市販品種であるクロノスとを２０１７年１月１９日に播種し、上記と同様にして栽培した。なお、クロノスは、株式会社サカタのタネにより市販されており、一般的には他の市販品種と比べて収量性に優れるといった特徴がある。これら実施例３及びクロノスを２０１７年３月１７日に撮像した写真を図９に示した。図９に示すように、実施例３のホウレンソウは、クロノスと比較して、一株あたりの重量が約７０％増加したことが分かる（それぞれｎ＝５）。
【００５７】
＜実験例１＞
本実験例１では、比較的葉柄内髄部の中実度の高い系統と保有系統とを交配させた多数の系統を作出し、それらの中から葉柄の中実度の高い系統を選抜し、その後代について葉柄内の中空孔の大きさといった形質を検証した。
【００５８】
具体的には、２００３年１０月に播種し育成させた試作において、ロシアのバビロフ研究所(N.I.Vavilov Research Institute of Plant Industry) のジーンバンクからの複数の導入系統のうち、No.153中東由来の在来ホウレンソウ種において、比較的に葉柄内の中実度の高い個体が確認された。この系統について展開した２００個体から、相対的に葉柄内髄部の中実度の高い個体を選抜し、系統名ＭＥと命名した。ＭＥ系統の自殖種子を採種し、その後代ＭＥＢＣ１を得た。
【００５９】
次に、２００５年にＭＥＢＣ１を播種し、生育した２００個体中１個体のみにおいて、葉柄内髄部の中実度が１００％である個体を発見した。この個体を選抜し、その自殖種子を採種しＭＥＢＣ２を得た。そして、得られたＭＥＢＣ２を播種・展開したところ、生育した２００個体中に約２割程度まで葉柄内髄部の中実度が１００％である個体が増加し、これらからの系統採種を行った種子をＭＥＢＣ３とした。
【００６０】
次に、２００７年にＭＥＢＣ３を播種・展開し、生育した全個体の葉柄内髄部の中実度が１００％である系統Ａが完成した（ＭＥＢＣ３）。
【００６１】
そして、２００７年に系統Ａと濃緑丸葉の西洋系在来種を交配させた種子を採種し、そのF１を播種生育させてから系統内で自殖種子を採種しF2種子を得た。そのF2種子を播種生育させた２００個体中から葉柄における中実度の高い個体を選抜し、その後代を隔離し、自殖し、採種した。これを５世代にわたり繰り返して、葉柄中実性と、葉色が濃緑で、べと病抵抗性などその他の有用形質とを固定させた系統Ｂを作出した。また、２００７年に系統Ａと剣葉の東洋系在来種とを交配させ、上記系統Ｂと同様の選抜採種を繰り返して、葉柄における中実度が高く、且つその他の有用形質を保持した個体を選抜し、これら形質を固定した系統Ｃを作出した。
【００６２】
次に、２０１２年に系統Ｂをメス親とし、系統Ｃをオス親として交配させ、そのF1種子を採種し試交Ｄを作出した。２０１３年に試交Ｄを２００個体播種して形質を確認したところ、全個体で葉柄における中実度が１００％であった。
【００６３】
このようにして得られた試交Ｄの親として使用した系統Ｃの種子(CHUTOU)は、２０１５年８月２６日付けで、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター(千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8)に国際寄託されている(寄託者が付した識別のための表示CHUTOU、受託番号FERM BP-22292)。
【００６４】
以上、本実験例で作出した系統Ａ、系統Ｂ及び系統Ｃ、並びに試交Ｄは、収穫期において葉柄が中実であるといった新規特徴を有するホウレンソウであることが確認された。
【００６５】
また、本実験例に記載したように、ホウレンソウの育成は、従来の病害に対する接種選抜育種や有用形質の選抜と同時に、劣性形質である葉柄が中実である形質を選抜する必要があり、長期間にわたる選抜育種が必要であったため、その作出には、２００３年から２０１３年まで１１年間の歳月を要した。
【００６６】
＜実験例２＞
本実験例２では、先ず、CHUTOU系統と、葉柄が太く皮層が厚いが中空である系統（SCOPE系統）とを交配し、F1集団を作出した。F1集団の個体の葉柄を確認したところ、すべて葉柄が中空であることが分かった。この結果から、葉柄が中実である形質に関与する中実遺伝子と、葉柄が太くなる形質に関与する遺伝子が異なる遺伝子であることが示された。
【００６７】
また、本実験例では、中実系統（CHUTOU系統）とSCOPE系統のF１集団を自殖してF2後代を作出した。そして、F2において、葉柄内が中空である形質と中実である形質の個体の割合を算出した結果を表１に示す。
【００６８】
【表１】
2018174831.tif 000003
【００６９】
表１に示すように、F2の分離データの結果から、葉柄が中実である形質に関与する中実遺伝子は劣性遺伝子であることが示唆される。このことから、葉柄が中実である形質に関与する中実遺伝子をホモに有する系統では、葉柄内が中実となり、また、ヘテロに有する系統では葉柄内が中空となる。
【００７０】
＜実験例３＞
本実験例３では、実験例１で作出した試交Ｄ及び対照品種について、青果物用収穫時点における収量、葉重、葉長及び葉柄内部の充実度を比較した。なお、本実験例では、播種：２０１３年１０月１０日とし、収穫：２０１４年２月２６日とした。
【００７１】
試交Ｄ及び対照品種（ハンター、アスパイアー、プログレス、リビエラ）の５品種の種子を播種後、草丈約25〜30cmまで栽培し、各試験区内から５株を収穫し、一株重量、１０枚葉重（５株から同程度の大きさの葉合計１０枚をサンプリングして合計重量を測定）、最大葉長（各株で最も長い葉の長さを測定）を測定した。その結果を表２に示した。
【００７２】
また、この５品種の平均的な大きさの葉２枚を並べ、その葉柄の基部から4〜5cmの位置を伸長方向に対して垂直方向に5mm幅で輪切りにして、各品種の葉及び横断面を比較した写真を図１０に示した。
【００７３】
横断面の葉柄内髄部の中実度（有形部分面積／葉柄横断面全体の面積）の測定は、ImageJにより行った。測定時の試交Ｄ、リビエラの断面図を図１１及び図１２にそれぞれ示した。
【００７４】
【表２】
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【００７５】
以上より、平均最大葉長は、比較例のアスパイアーが最も大きかったが、平均個体重量及び１０枚葉重は実験例１で作出した試交Ｄで最も大きく、試交Ｄのホウレンソウの収量性が高いことが分かった。また、葉柄内髄部の中実度についても、試交Ｄは100％と、比較例が61.0〜66.0％であることに比較して高いことが明らかとなった。
また、収穫、調整後に葉柄の折れていた葉について計測した結果を表３に示した。
【００７６】
【表３】
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【００７７】
表３に示すように、試交Ｄのホウレンソウは、比較例のホウレンソウと比較して葉柄が折れていた葉の枚数が少ない傾向があった。
【００７８】
以上の本実験例の結果から、実験例１で作出した試交Ｄのホウレンソウは、従来のホウレンソウと比較し、収穫時において葉柄の中実度が高く、全体として収量が多いことが示された。
【００７９】
＜実験例４＞
本実験例４では、実験例１で作出した試交Ｄのホウレンソウ及び既存の葉柄が太く充実すると言われているタイプのホウレンソウを栽培し収穫した。比較対照のアクセラでは収穫時に葉柄の一部に割れが生じる場合も見られたが、試交Ｄで割れが生じている葉柄は見られなかった（図１３）。２品種を収穫直後に水洗し、沸騰した湯に１分間浸漬し、加熱処理を行った。その後、水に1分間浸した後に水分を除去した。なお、本実験例では、播種：２０１４年４月１５日とし、収穫日及び調査日：２０１４年５月２３日とした。
【００８０】
先ず、収穫後の葉の断面図を比較すると、比較対照のアクセラでは、葉柄内の中空部分と葉面上部の表皮が近接し、葉柄の一部が薄かったのに対し、実験例１で作出した試交Ｄでは、葉柄内が柔細胞で満たされ、葉面上部の表皮及び葉柄の薄い部分は見られなかった。
【００８１】
次に、加熱処理後の葉の断面図を比較すると、比較対照のアクセラでは、葉柄内が中空であるのに対し、実験例１で作出した試交Ｄでは、葉柄内が全て中実であった（図１４）。なお、図１４に示したアクセラの写真には、上記加熱処理後の水分除去として絞ったために葉柄内の中空部分が潰れたように見えるものも示されている。また、加熱処理後の葉柄部分の食感は、比較対照のアクセラは歯ごたえが強かったのに対し、実験例１で作出した試交Ｄでは、比較的歯ごたえが柔らかく滑らかであった。この結果から、実験例１で作出した試交Ｄのホウレンソウは、従来公知のホウレンソウより比較的柔らかいといった特徴的な食感を有していることが分かった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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