(57)【要約】【課題】表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害剤、および取り込まれたメラノソームの体外への排出促進剤を提供する。【解決手段】皮膚において色素細胞（メラノサイト）で産生されたメラニンは、メラノソームに内包された後、表皮細胞へ輸送されることで皮膚色の外観に影響を及ぼす。リノール酸誘導体は、表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込みを阻害し、および表皮細胞（ケラチノサイト）に取り込まれたメラノソームを皮膚のターンオーバーを促進することでの体外への排出を促進することを見出し、本発明を完成するに至った。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
リノール酸誘導体を有効成分とする表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害剤
【請求項２】
リノール酸誘導体を有効成分とする表皮細胞（ケラチノサイト）に取り込まれたメラノソームの体外への排出促進剤
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リノール酸誘導体を有効成分とした表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害剤、または取り込まれたメラノソームの体外への排出促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の色は、皮膚中に存在する色素細胞（メラノサイト）内において生成されるメラニ
ンによって決定する。メラニンは、細胞核のＤＮＡを破壊する紫外線を吸収し、皮膚ガンのリスクを減らす、医学上重要な因子である。しかしながら、皮膚内でメラニンが過剰に生成される現象はしばしば起こり、これがクスミ、シミ、ソバカスなど、美容上の大きな問題となる。このメラニンは、紫外線をはじめ様々なストレスによって誘導がなされ、色素細胞内のチロシナーゼによってチロシンより酸化生成される。実際には、チロシナーゼによるメラニン生成はメラノソームと呼ばれる小胞体の中で行われる。メラノソーム内でメラニンが生成されながら、メラノソーム自身は色素細胞の樹状突起の先端部分へと局在を変更する。色素細胞の樹状突起先端部に位置したメラノソームは、表皮細胞（ケラチノサイト）へと受け渡される（非特許文献１）。
【０００３】
メラノソームの受け渡し過程は、色素細胞（メラノサイト）からの放出（エキソサイトーシス）過程と、表皮細胞（ケラチノサイト）へ取り込み（ファゴサイトーシス）過程のおおきく二つに分類されるが、皮膚の色は色素細胞（メラノサイト）内のメラニンの量ではなく、表皮細胞（ケラチノサイト）へ受け渡されたメラニン量によって決定する（非特許文献２、３）。
さらに、表皮細胞（ケラチノサイト）へ受け渡されたメラノソームは、通常皮膚（表皮）のターンオーバーと共に垢となって皮膚より剥がれ落ち、体外へと排出されるが、メラノソームを取り込んだ表皮細胞においては、ターンオーバーが遅延することで老人性色素斑など色素沈着の原因となることが知られている（特許文献１）。
つまり、表皮細胞（ケラチノサイト）内のメラノソーム量を制御することは、クスミ、シミ、ソバカスをはじめとする色素沈着の制御に有効である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特願２０１０−５０２７８８
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ando et al: J Invest Dermatol 132(4):1222-1229,2012
【非特許文献２】Virador VM:FASEB J 16:105-107, 2002
【非特許文献３】正木仁:化粧品技術者のための素材開発実験プロトコール集, 株式会社シーエムシー出版,104-107,2015
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害、または取り込まれたメラノソームの体外への排出促進を介して表皮細胞（ケラチノサイト）内のメラノソーム量を制御することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害、または取り込まれたメラノソームの体外への排出促進を介した表皮細胞（ケラチノサイト）内のメラノソーム量の制御について鋭意研究した結果、リノール酸誘導体が顕著な有用性を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００８】
従来の美白剤は、色素細胞におけるメラニン産生、およびメラノソーム輸送に関するものが主体であり、皮膚色決定に寄与する表皮細胞（ケラチノサイト）内のメラノソーム量制御に効果を示すものではなかった。本発明者らは、表皮細胞（ケラチノサイト）の機能に着目し、メラノソーム取り込み阻害、および取り込まれたメラノソームの体外への排出促進を介した表皮細胞（ケラチノサイト）内のメラノソーム量を制御に対し、リノール酸誘導体に顕著な有用性を見出したことから、色素沈着に対して有効な表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害剤、または取り込まれたメラノソームの体外への排出促進剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明に係る表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害剤、または取り込まれたメラノソームの体外への排出促進剤は、リノール酸誘導体を有効成分とするもので、それを配合した化粧料および皮膚外用剤として皮膚表面に適用されることで、皮膚の色素沈着を改善する効果を発現するものである。
本発明で用いるリノール酸誘導体としては、リノール酸エチル、リノール酸イソプロピル等を、それぞれ単独でまたは混合して用いる事ができる。
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲がこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００１０】
（実施例１）表皮細胞（ケラチノサイト）への疑似メラノソーム取り込み阻害
１、試験の概要
表皮細胞（ケラチノサイト）への疑似メラノソーム取り込みに対する、リノール酸誘導体の阻害作用を評価した。
２、実験方法
表皮細胞（ケラチノサイト）に対して疑似メラノソームとして蛍光ビーズ（ＦｌｕｏＳｐｈｅｒｅｓ?  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ，  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加し、２４時間培養した。表皮細胞（ケラチノサイト）をＰＢＳ（Ｐｈｏｓｏｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｓａｌｉｎｅ）で洗浄した後、０．５％無蛍光ＴｒｉｔｏｎＸ−１００含有ＰＢＳにて溶解し、破砕液の蛍光強度（Ｅｘ／Ｅｍ＝３６５ｎｍ／４１５ｎｍ）を測定し、蛍光ビーズ取り込み量の指標とした。その後、ウェル当たりのタンパク量を算出し、単位タンパク当たりの蛍光強度として試料未処理コントロールを１００とした相対値で算出した。
【００１１】
３、結果
結果を表１に示した。試験試料未処理細胞での単位タンパク当たりの蛍光ビーズ取り込み量を比較対象として、各種リノール酸誘導体０．４〜１００μｍｏｌ／Ｌを処理した表皮細胞（ケラチノサイト）の取り込み量は、濃度依存的かつ有意に減少した。リノール酸誘導体の中でも、特にリノール酸エチルはその作用が顕著であった。
【００１２】
【表１】
2018090516.tif 000002
【００１３】
（実施例２）表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害
１、試験の概要
表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込みに対する、リノール酸誘導体の阻害作用を評価した。
２、実験方法
表皮細胞（ケラチノサイト）に対して、非特許文献３に記載の方法で色素細胞（メラノサイト）より単離したメラノソームとリノール酸誘導体を添加し、４８時間培養した。表皮細胞（ケラチノサイト）をＰＢＳで洗浄した後、冷メタノールで固定し、フォンタナ・マッソン染色により、メラノソームの染色を行った。グリセリンで包埋した後、顕微鏡下で観察した。
【００１４】
３、結果
結果を表２に示した。リノール酸誘導体処理により、表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込みが抑制された。
【００１５】
【表２】
2018090516.tif 000003
【００１６】
（実施例３）表皮細胞（ケラチノサイト）へ取り込まれたメラノソームの体外への排出促進
１、試験の概要
メラノソームを取り込んだ表皮細胞（ケラチノサイト）のターンオーバー遅延を改善することによるメラノソームの体外への排出促進に対する、リノール酸誘導体の作用を評価した。
２、実験方法
表皮細胞（ケラチノサイト）に対して、非特許文献３に記載の方法で色素細胞（メラノサイト）より単離したメラノソームを添加し、２４時間培養することで表皮細胞（ケラチノサイト）にメラノソームを取り込ませた。ＰＢＳで洗浄した後、リノール酸誘導体を添加し、７２時間培養した。その後、ＮＲ（ニュートラルレッド）法により、細胞数を簡易的に評価し、ターンオーバーの指標とした。試料未処理コントロールを１００とした相対値で算出した。
【００１７】
３、結果
結果を表３に示した。メラノソーム添加によりターンオーバーが遅延し、リノール酸誘導体処理によりターンオーバーが促進され、このことより表皮細胞（ケラチノサイト）に取り込まれたメラノソームを皮膚のターンオーバーを促進することでの体外への排出を促進した。
【００１８】
【表３】
2018090516.tif 000004
【００１９】
以下に、本発明の表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害剤、または取り込まれたメラノソームの体外への排出促進剤を配合した化粧料及び皮膚外用剤の応用例を示す。配合量は質量％である。
【００２０】
本表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害剤、または取り込まれたメラノソームの体外への排出促進剤の、化粧料および皮膚外用剤における配合量は、用途、剤型、配合目的等によって異なり、特に限定されるものではないが、一般的には、リノール酸誘導体として、化粧料及び皮膚外用剤中０．００１〜１０．０質量％が好ましく、より好ましくは０．０１〜５．０質量％である。
【００２１】
本表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害剤、または取り込まれたメラノソームの体外への排出促進剤を配合した化粧料および皮膚外用剤には、既存の抗炎症剤、肌荒れ予防／改善剤、色素沈着予防／改善剤を配合することができる。これらの成分を併用することは、本効果の相乗効果をもたらし、本効果を損なうものではない。
【００２２】
本表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害剤、または取り込まれたメラノソームの体外への排出促進剤を配合した化粧料および皮膚外用剤には、本発明の効果を損なわない範囲で化粧品、医薬部外品等に配合される成分として流動パラフィンなどの炭化水素油、植物油脂、ロウ類、合成エステル油、シリコーン系の油相成分、フッ素系の油相成分、高級アルコール類、脂肪酸類、増粘剤、紫外線吸収剤、粉体、顔料、色材、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、多価アルコール、糖、高分子化合物、生理活性成分、経皮吸収促進剤、溶媒、酸化防止剤、香料、防腐剤等を配合することができる。
【００２３】
本表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害剤、または取り込まれたメラノソームの体外への排出促進剤を配合した化粧料および皮膚外用剤に係る剤型は任意であり、化粧水、ローション、乳液、クリーム、パック、軟膏、分散液、固形物、ムース等の任意の剤型をとることができる。また、用途としては、化粧料の他、皮膚外用剤、医薬用軟膏等に好適に使用できる。
【００２４】
（応用例１）表皮細胞（ケラチノサイト）へのメラノソーム取り込み阻害剤を配合した化粧水
Ａ  １，３−ブチレングリコール                １．００（質量％）
グリセリン                                ５．００
ジプロピレングリコール                    １．００
ペンチレングリコール                      ２．５０
クエン酸                                  ０．０３
クエン酸ナトリウム                        ０．０４
精製水                                        残部
Ｂ  リノール酸エチル                          １．００
ＰＥＧ−２０水添ヒマシ油                  １．００
ジプロピレングリコール                    ０．３０
Ｃ  精製水                                  １０．００
（調製方法）Ｂ、Ｃを８０℃に加温後、ＢにＣを徐々に添加して室温まで冷却する。室温で均一混合したＡに（Ｂ＋Ｃ）を添加して撹拌する。
【産業上の利用可能性】
【００２５】
本発明品を美白化粧料に配合することで、より優れた効果を提供することができる。