(57)【要約】【課題】種子や植物体の破砕を経ることなく、また有機溶媒処理を行うことなく、安価かつ簡便にソヤサポニン類を製造する方法の提供。【解決手段】マメ科植物の植物体を、水性液体を用いて培養または栽培しながら、該植物体の少なくとも一部を該水性液体と接触させること；および、該水性液体を回収するか、または該水性液体からソヤサポニン類を分離することを含む、ソヤサポニン類の製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
マメ科植物の植物体を、水性液体を用いて培養または栽培しながら、該植物体の少なくとも一部を該水性液体と接触させること；および、
該水性液体を回収するか、または該水性液体からソヤサポニン類を分離することを含む、ソヤサポニン類の製造方法。
【請求項２】
前記培養または栽培が、水耕栽培、噴霧栽培、砂耕栽培、礫耕栽培または養液土耕栽培による培養または栽培である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記ソヤサポニン類が、ソヤサポゲノールＢをアグリコンとする配糖体、ソヤサポゲノールＥをアグリコンとする配糖体、およびソヤサポゲノールＡをアグリコンとする配糖体からなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
前記回収された水性液体または前記分離で得られた生成物中におけるソヤサポニン類のイソフラボン類に対する質量比が２．０以上であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
前記マメ科植物が、ダイズ属植物、ササゲ属植物、エンドウ属植物、ウマゴヤシ属植物およびソラマメ属植物からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
前記マメ科植物が、ヒヨコマメ属植物およびインゲンマメ属植物からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
マメ科植物の植物体を、水性液体を用いて培養または栽培しながら、該植物体の少なくとも一部を該水性液体と接触させること、および該水性液体を回収することにより製造されるソヤサポニン類含有液。
【請求項８】
前記培養または栽培が、水耕栽培、噴霧栽培、砂耕栽培、礫耕栽培または養液土耕栽培による培養または栽培である、請求項７記載のソヤサポニン類含有液。
【請求項９】
前記ソヤサポニン類が、ソヤサポゲノールＢをアグリコンとする配糖体、ソヤサポゲノールＥをアグリコンとする配糖体、およびソヤサポゲノールＡをアグリコンとする配糖体からなる群から選択される少なくとも１種である、請求項７又は８記載のソヤサポニン類含有液。
【請求項１０】
ソヤサポニン類のイソフラボン類に対する質量比が２．０以上であることを特徴とする、請求項７〜９のいずれか１項記載のソヤサポニン類含有液。
【請求項１１】
前記マメ科植物が、ダイズ属植物、ササゲ属植物、エンドウ属植物、ウマゴヤシ属植物およびソラマメ属植物からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項７〜１０のいずれか１項記載のソヤサポニン類含有液。
【請求項１２】
ソヤサポニンβｇ、ソヤサポニンβａ、ソヤサポニンαａおよびソヤサポニンγｇのそれぞれの含有量が０．０５μｇ／Ｌ未満である、請求項７〜１１のいずれか１項記載のソヤサポニン類含有液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ソヤサポニン類を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ソヤサポニン類は、ダイズ等のマメ科植物に含まれる特徴的な代謝産物であり、乳化剤として食品産業において広く利用されている。さらに近年では、ソヤサポニン類の抗炎症作用、抗変異原性作用、抗腫瘍作用、肝臓保護作用、肺保護作用等の生理活性作用も注目されている。ソヤサポニン類を得る方法としては、マメ科植物の種子など（例えば、ダイズ種子）を粉砕、脱脂した後、有機溶媒抽出し、必要に応じてさらにカラム精製する方法が一般的である。さらに特許文献１には、マメ科植物を粉砕、酸処理、アルコール抽出、脱脂した後、吸着樹脂カラム処理する方法が、特許文献２には、ダイズ胚軸をアルコール抽出し、陰イオン交換樹脂にかけた後、溶出液を無極性の合成吸着剤に吸着させる方法が開示されている。
【０００３】
ソヤサポニン類をダイズ種子などから抽出する際には、通常、イソフラボン類も同時に抽出される。ダイズ抽出物におけるイソフラボン類の含有量は、一般的にソヤサポニン類の含有量よりも多い。例えば、非特許文献１では、複数のダイズ品種から抽出したイソフラボン類に対するソヤサポニン類の比（質量比）は、平均で０．５程度であった。イソフラボン類の混入は、不妊症をはじめとした副作用を引き起こす可能性があるため、イソフラボン類の含有量のより少ないより高純度なソヤサポニン類が望まれている。特許文献３には、脱脂ダイズの抽出物を、pH4.5付近に調節して遠心分離し、残渣をアルコール水溶液で抽出することで、生成物中のイソフラボンに対するソヤサポニン類の重量比を最大で１７．３に高めたことが記載されている。しかし、特許文献３に記載の方法は、有機溶媒の使用、抽出、洗浄処理や遠心分離などの操作が必要であるため、煩雑である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平１−２７５５９２号公報
【特許文献２】特開２００６−１２４３２４号公報
【特許文献３】特開平４−３６２４２号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｇｏｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｏｏｄ  Ｈｙｇｉｅｎｅ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ, ４３, ３３９−３４７, ２００２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従来のソヤサポニン類の製法は、主に収穫された種子（豆）を使用するものであるため、食糧供給と競合する。また従来のソヤサポニン類の製法は、植物体の破砕や有機溶媒抽出を行うための重装な設備や、抽出溶媒の処理を必要とするため、コスト面および環境面でも課題が存在する。
【０００７】
本発明は、種子または植物体の破砕や有機溶媒処理を経ることなく、安価かつ簡便に、ソヤサポニン類を製造する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、生育中のマメ科植物の植物体からソヤサポニン類が滲出していること、したがって、マメ科植物を培養または栽培し、その滲出物を回収することにより、植物体や種子を破砕や有機溶媒抽出で消費することなく、安価かつ簡便にソヤサポニン類を製造可能であることを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、マメ科植物の植物体を、水性液体を用いて培養または栽培しながら、該植物体の少なくとも一部を該水性液体と接触させること；および、該水性液体を回収するか、または該水性液体からソヤサポニン類を分離すること、を含む、ソヤサポニン類の製造方法を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、安価かつ簡便にソヤサポニン類を製造することができる。本発明の方法は、マメ科植物の種子や植物体を破砕したり、有機溶媒抽出することを要しないため、ソヤサポニン類の製造と並行して、食用として有用なマメ科植物の供給を可能にする。したがって、本発明の方法はまた、付加価値の高い植物栽培系を提供し得る。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明のソヤサポニン類の製造方法は、マメ科植物の植物体を、水性液体を用いて培養または栽培しながら、該植物体の少なくとも一部を該水性液体と接触させること；および、該水性液体を回収するか、または該水性液体からソヤサポニン類を分離すること、を含む。
【００１２】
本発明の方法において製造される、「ソヤサポニン類」としては、ソヤサポゲノールＢをアグリコンとする配糖体（以下、Ｂグループともいう）、ソヤサポゲノールＥをアグリコンとする配糖体（以下、Ｅグループともいう）、およびソヤサポゲノールＡをアグリコンとする配糖体（以下、Ａグループともいう）が挙げられる。本発明の方法において製造されるソヤサポニン類は、上記Ｂグループ、ＥグループおよびＡグループのソヤサポニン類からなる群より選択される化合物の少なくとも１種、いずれか２種以上もしくはその全部を含む。
【００１３】
Ｂグループのソヤサポニン類の例としては、下記式（I）で示される、ソヤサポゲノールＢのアグリコンのＣ−３位に糖残基が結合した配糖体が挙げられる。Ｅグループのソヤサポニン類の例としては、下記式（II）で示される、ソヤサポゲノールＥのアグリコンのＣ−３位に糖残基が結合した配糖体が挙げられる。Ａグループのソヤサポニン類の例としては、下記式（III）で示される、ソヤサポゲノールＡのアグリコンのＣ−３位に糖残基が結合した配糖体が挙げられる。
【００１４】
【化１】
2018024629.tif 000002
【００１５】
式（I）〜（III）中、各々のＲ1は、独立して、糖残基もしくは糖鎖を示し、各々のＲ2は、独立して、糖残基もしくは糖鎖、または水素原子を示す。
【００１６】
式（I）〜（III）中、Ｒ1で示される糖残基の例としては、グルクロン酸、ガラクトース、グルコース、ラムノース、アラビノースなどが挙げられ、Ｒ1で示される糖鎖の例としては、ラムノース（１→２）ガラクトース（１→２）グルクロン酸（１→３）などが挙げられ、Ｒ2で示される糖残基の例としては、アラビノース、グルコース（または２，３，４，６−テトラアセチル体）、キシロース（または２，３，４−トリアセチル体）などが挙げられ、Ｒ2で示される糖鎖の例としては、グルコース（１→３）アラビノース（１→２２）などが挙げられる。
【００１７】
式（I）で示される化合物の例としては、好ましくはソヤサポニンＩ、ソヤサポニンIIおよびソヤサポニンＶ、より好ましくはソヤサポニンＩが挙げられる。式（II）で示される化合物の好ましい例としては、デヒドロソヤサポニンＩが挙げられる。式（III）で示される化合物の例としては、好ましくはソヤサポニンＡ１およびソヤサポニンＡ２、より好ましくはソヤサポニンＡ２が挙げられる。
【００１８】
好ましくは、本発明の方法において製造されるソヤサポニン類は、Ｂグループのソヤサポニン類を含み、より好ましくは式（I）で示される化合物を含む。
【００１９】
本発明の方法において用いられる「マメ科植物」は、少なくともソヤサポゲノールＢのアグリコンを基本骨格とするソヤサポニン類（Ｂグループ）を植物体外に滲出するものであればよい。本発明の方法において用いられるマメ科植物の例としては、ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ）属植物、ササゲ（Ｖｉｇｎａ）属植物、エンドウ（Ｐｉｓｕｍ）属植物、ウマゴヤシ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ）属植物、インゲンマメ（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ）属植物、ソラマメ（Ｖｉｃｉａ）属植物、ヒヨコマメ（Ｃｉｃｅｒ）属植物、ミズオジギソウ（Ｎｅｐｔｕｎｉａ）属植物、フェヌグリーク（Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ）属植物、ヒラマメ（Ｌｅｎｓ）属植物、ラッカセイ（Ａｒａｃｈｉｓ）属植物、シカクマメ（Ｐｓｏｐｈｏｃａｒｐｕｓ）属植物、などが挙げられ、好ましい例としては、ダイズ属植物、ササゲ属植物、エンドウ属植物、ウマゴヤシ属植物、インゲンマメ属植物、ソラマメ属植物、およびヒヨコマメ属植物が挙げられ、より好ましい例としては、ダイズ属植物、ササゲ属植物、エンドウ属植物、ウマゴヤシ属植物およびソラマメ属植物が挙げられ、さらに好ましい例としては、ダイズ属植物、エンドウ属植物およびソラマメ属植物が挙げられ、なお好ましい例としては、エンドウ属植物およびソラマメ属植物が挙げられる。ダイズ属植物の例としては、ダイズ（Glycine max）が、ササゲ属植物の例としては、ヤエナリ（緑豆）（Vigna radiata）が、エンドウ属植物の例としては、エンドウ（豆苗）（Pisum sativum）が、ウマゴヤシ属植物の例としては、ムラサキウマゴヤシ（アルファルファ）（Medicago sativa）が、インゲンマメ属植物の例としては、インゲンマメ（Phaseolus vulgaris）が、ソラマメ属植物の例としては、ソラマメ（Vicia faba）が、ヒヨコマメ属植物の例としては、ヒヨコマメ（Cicer arietinum）が、ミズオジギソウ属植物の例としては、ミズオジギソウ（Neptunia oleracea）が、フェヌグリーク属植物の例としては、フェヌグリーク（Trigonella foenum-graecum）が、ヒラマメ属植物の例としては、レンズマメ（Lens culinaris）が、ラッカセイ属植物の例としては、ラッカセイ（Arachis hypogaea）が、シカクマメ属植物の例としては、シカクマメ（Psophocarpus tetragonolobus）が、それぞれ挙げられる。本発明の方法においては、上記に挙げたマメ科植物のいずれか１種またはいずれか２種以上を用いることができる。
【００２０】
本発明で使用するマメ科植物の「植物体」としては、いずれの成長期もしくはいずれの状態のものであってもよく、例えば、種子；発芽種子；子葉展開期、初生葉展開期、本葉展開期もしくはそれ以降の成長期の全草；これらの種子、発芽種子もしくは全草の一部；カルス細胞、などが挙げられる。好ましくは、発芽期以降の植物体が用いられる。より好ましくは、初生葉展開期の植物体が用いられる。
【００２１】
本発明の方法においては、水性液体を用いてマメ科植物の植物体を培養または栽培する。培養または栽培の手法としては、種々の栽培手法が包含され、対象とする植物の種または成長期に応じて適宜選択することができる。培養または栽培手法の例としては、水耕栽培、噴霧栽培、砂耕栽培、礫耕栽培などの養液栽培、土耕栽培、および養液土耕栽培が挙げられ、このうち養液栽培が好ましく、水耕栽培がより好ましい。
【００２２】
上記培養または栽培に用いる水性液体としては、マメ科植物の培養または栽培に用いることができる栽培養液が挙げられ、好ましくは、マメ科植物の養液栽培に用いることができる栽培養液が挙げられる。そのような栽培養液としては、例えば、ムラシゲ・スクーグ（ＭＳ）培地、ガンボーグ（Ｇａｍｂｏｒｇ）のＢ５培地、ブロウトン・ディルワース（Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ＆Ｄｉｌｗｏｒｔｈ（Ｂ＆Ｄ））培地（Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｌｗｏｒｔｈ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１２５，１０７５−１０８０，１９７１）、園試処方、大塚処方ならびにハイポネックスといった公知の液体培地、および水が挙げられる。このうち、水、または植物の栄養要求性に応じて濃度を調整したＢ＆Ｄ培地を用いることが好ましい。これらの水性液体には、窒素（Ｎ）や、リン（Ｐ）、カリウム（Ｋ）、カルシウム（Ｃａ）、マグネシウム（Ｍｇ）、硫黄（Ｓ）、鉄（Ｆｅ）、マンガン（Ｍｎ）、亜鉛（Ｚｎ）、ホウ素（Ｂ）、銅（Ｃｕ）、ニッケル（Ｎｉ）、モリブデン（Ｍｏ）、塩素（Ｃｌ）などのミネラルを添加してもよい。水性液体の組成は、特に限定されるものではなく、対象とする植物や栽培方式に適したものを選択することが好ましい。
【００２３】
本発明においては、上記培養または栽培の際、マメ科植物の植物体の少なくとも一部を上記水性液体と接触させておく。該植物体の少なくとも一部と水性液体との接触時間は、好ましくは１２時間以上である。接触は、断続的であってもよいが、好ましくは連続的である。水性液体と接触させる植物体の部位は、根（地下茎、根茎、塊根、不定根なども含む）が好ましい。根とともにその他の部位（例えば、茎など）が水性液体に接触していてもよい。したがって、本発明の好ましい実施形態においては、マメ科植物の植物体を、少なくとも根の一部もしくは全部を上述した栽培養液に浸した状態で、該栽培養液を用いて培養または栽培する。
【００２４】
好ましい実施形態において、本発明の方法で培養または栽培されるマメ科植物の植物体は、根を有する植物体（例えば、根の発生した発芽種子；子葉展開期以降の全草；根を含むそれらの一部、根に分化したカルス、など）である。本発明の方法においては、最初から根を有する植物体を培養または栽培してもよいが、根を有する前の種子、発芽種子、カルスなどを培養または栽培し、根を発生させてから、さらに培養または栽培してもよい。
【００２５】
栽培環境の安定性の観点からは、本発明のマメ科植物の培養または栽培は、屋内で行われることが好ましい。培養または栽培における温度、照度等の条件は必ずしも制御しなくてもよいが、安定したソヤサポニン類の品質や生産性を担保するためには、閉鎖系施設（例えば温室や植物工場）において人工的に栽培環境を制御することが望ましい。
【００２６】
上記培養または栽培の間、マメ科植物の植物体からソヤサポニン類が滲出し、該植物体の少なくとも一部と接触する水性液体中へと放出される。なお本明細書において、植物体からの物質の「滲出」とは、木部圧、拡散、または輸送の促進（すなわち分泌）の結果として、植物がその生体の全部または一部分から物質を放出する（している）ことである。したがって、本発明によれば、所定の期間の培養または栽培の後には、マメ科植物の植物体から滲出したソヤサポニン類を含有する該水性液体を得ることができる。
【００２７】
本発明の一実施形態においては、水性液体を用いてマメ科植物の植物体を培養または栽培し、該植物体を該水性液体と接触させた後、該植物体から滲出したソヤサポニン類を含む該水性液体を回収する。該水性液体中からソヤサポニン類を分離することにより、目的のソヤサポニン類を製造することができる。マメ科植物の植物体と水性液体との接触、該植物体から滲出したソヤサポニン類を含む水性液体の回収、および該水性液体からの目的のソヤサポニン類の分離は、連続的に行われても、またはバッチ方式で行われてもよい。バッチ方式の場合は、水性液体の全部を回収し、入れ換える回分方式であっても、水性液体の一部を回収し、入れ換える半回分方式であってもよい。連続方式の場合、例えば、水性液体を循環させて連続的に疎水性樹脂カラムを通過させ、カラムに吸着したソヤサポニン類を回収すればよい。
【００２８】
水性液体からのソヤサポニン類の分離の手段としては、水性液体を回収し、ろ過して不純物を除去した後、凍結乾燥する方法が挙げられる。あるいは、水性液体から酢酸エチル、ヘキサン等を用いて液液分配を行う方法、吸着剤として疎水性樹脂を用いて水性液体からソヤサポニン類を分離する方法（特開平５−５８９０３号公報）、などを用いることもできる。疎水性樹脂としては、ダイヤイオンＨＰ２０（三菱化学株式会社）などが挙げられる。
【００２９】
本発明の別の一実施形態においては、マメ科植物の植物体と接触している水性液体から、目的のソヤサポニン類を直接分離する。例えば、水性液体を用いてマメ科植物の植物体を培養または栽培しながら、該水性液体中に上述したような疎水性樹脂担体を投入して目的のソヤサポニンを吸着させ、一定期間後に回収することで、水性液体からソヤサポニン類を分離することができる。水性液体に担体を投入する場合、担体への目的物質の吸着率を高めるため、該水性液体を撹拌することが好ましい。
【００３０】
必要に応じて、水性液体から分離された目的のソヤサポニン類をさらに加熱乾燥または凍結乾燥等にかけることにより、高濃度ソヤサポニン類の粉末を得ることができる。
【００３１】
本発明のさらに別の一実施形態においては、回収されたマメ科植物の植物体から滲出したソヤサポニン類を含む該水性液体は、ソヤサポニン類の分離等の操作を行わずに、そのままソヤサポニン類を含む液体として、分離したソヤサポニン類同様、所期の用途で使用することが可能である。例えば、農業用資材、食品添加物、洗浄剤、または医薬、食品等の各種組成物にソヤサポニン類による生理活性機能を付与するための有効成分として、使用することができる。
【００３２】
本発明の方法によれば、上記回収された水性液体、または上記水性液体からの分離で得られたソヤサポニン類を含む生成物中における、ソヤサポニン類のイソフラボン類に対する質量比は、２．０以上であることを特徴とし、好ましくは２．０〜２０,０００、より好ましくは４．０〜２０,０００、さらに好ましくは１７．３〜２０,０００、さらに好ましくは２０〜２０，０００、さらに好ましくは３０〜２０,０００、さらに好ましくは４０〜２０,０００、さらに好ましくは１００〜２０,０００、さらに好ましくは２００〜２０,０００、さらに好ましくは５００〜２０,０００、さらに好ましくは８００〜２０,０００、さらに好ましくは９００〜２０,０００であり、なお好ましくは、前述の範囲の上限値が１１,０００、なお好ましくは５,０００、なお好ましくは３，０００、なお好ましくは１，０００である。尚、従来のダイズ種子抽出物におけるイソフラボン類に対するソヤサポニン類の質量比は、０．５程度である。したがって本発明によれば、複雑な抽出手順やカラム精製などを用いることなく、イソフラボン類の混入が少なく、不妊症などのイソフラボン類による副作用の懸念の低減したソヤサポニン類画分を提供することができる。
【００３３】
本発明におけるイソフラボン類の例としては、ダイゼイン、ゲニステイン、グリシテイン、ならびにこれら３種をアグリコンとするグルコシド体およびマロニル化グルコシド体、すなわちダイジン、ゲニスチン、グリシチン、マロニルダイジン、マロニルゲニスチン、マロニルグリシチンが挙げられる。
【００３４】
本発明の方法において製造されるソヤサポニン類には、上述したＡ、ＢおよびＥグループのソヤサポニンの他に、ソヤサポゲノールＢをアグリコンとする配糖体で、かつ２２位に２、３−ジヒドロ−２、５−ジヒドロキシ−６−メチル−４Ｈ−ピラン−４−オンがアセタール結合したソヤサポニン類（以下、ＤＤＭＰグループともいう）が含まれていてもよい。
【００３５】
ＤＤＭＰグループのソヤサポニン類の例としては、下記式（IV）で示される化合物が挙げられる。
【００３６】
【化２】
2018024629.tif 000003
【００３７】
式（IV）中、Ｒ1は、独立して、糖残基もしくは糖鎖を示す。
【００３８】
式（IV）中、Ｒ1で示される糖残基の例としては、グルクロン酸、ガラクトース、グルコース、ラムノース、アラビノースなどが挙げられ、Ｒ1で示される糖鎖の例としては、ラムノース（１→２）ガラクトース（１→２）グルクロン酸（１→３）などが挙げられる。
【００３９】
式（IV）で示される化合物の例としては、好ましくはソヤサポニンβｇ、ソヤサポニンβａ、ソヤサポニンαａおよびソヤサポニンγｇ、より好ましくはソヤサポニンβｇが挙げられる。
【００４０】
本発明の方法に従って、マメ科植物の植物体の培養または栽培に用いられた後に回収された該水性液体中における、ソヤサポニンβｇ、ソヤサポニンβａ、ソヤサポニンαａおよびソヤサポニンγｇのそれぞれの含有量は、好ましくは０．０５μｇ／Ｌ未満である。
【００４１】
ソヤサポニン類およびイソフラボン類の検出または定量は、薄層クロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィー等と、質量分析計を用いて、公知の方法で行うことができる。検出または定量法の具体例としては、逆相高速液体クロマトグラフィーによる分析（Ｊｅｒｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，６３，９８７９−９８８７，２０１５）、ＬＣ−ＭＳによる分析などが挙げられる。
【００４２】
好ましい実施形態において、本発明の方法で使用したマメ科植物の植物体は、培養または栽培に用いた水性液体から目的のソヤサポニン類を取得した後に死滅させられたり廃棄されたりすることなく、さらに培養または栽培したり、あるいは収穫することができる。したがって、本発明の方法の好ましい実施形態として、植物体を収穫好適期あるいは成長期間の上限に至るまで養液栽培するとともに、その過程において適宜養液から目的物質の回収を行う方法（例えば、特開昭６０−９２２１９号公報、特開平５−５８９０３号公報を参照）を採用することができる。ここで収穫好適期とは、植物体を収穫するのに好適な時期であり、例えば栄養成長期、花芽形成期、開花期、子実形成期および子実成熟期が挙げられる。マメ科植物をもやしやスプラウトとして利用する場合の収穫好適期としては、胚軸が伸長する時期を含む子葉展開期または初生葉展開期が挙げられる。
【００４３】
本発明の例示的実施形態として、以下の物質、製造方法、用途、方法等をさらに本明細書に開示する。但し、本発明はこれらの実施形態に限定されない。
【００４４】
〔１〕マメ科植物の植物体を、水性液体を用いて培養または栽培しながら、該植物体の少なくとも一部を該水性液体と接触させること；および、
該水性液体を回収するか、または該水性液体からソヤサポニン類を分離すること、
を含む、ソヤサポニン類の製造方法。
【００４５】
〔２〕前記培養または栽培が、
好ましくは、養液栽培、土耕栽培または養液土耕栽培による培養または栽培であり、
より好ましくは、水耕栽培、噴霧栽培、砂耕栽培、礫耕栽培または養液土耕栽培による培養または栽培である、〔１〕記載の方法。
【００４６】
〔３〕好ましくは、前記ソヤサポニン類が、ソヤサポゲノールＢをアグリコンとする配糖体、ソヤサポゲノールＥをアグリコンとする配糖体、およびソヤサポゲノールＡをアグリコンとする配糖体からなる群から選択される少なくとも１種である、〔１〕又は〔２〕に記載の方法。
【００４７】
〔４〕好ましくは、前記ソヤサポニン類が、下記式（I）〜（III）で示される化合物からなる群より選択される少なくとも１種である、〔１〕〜〔３〕のいずれか１項記載の方法。
【化３】
2018024629.tif 000004
（式（I）〜（III）中、各々のＲ1は、独立して、糖残基もしくは糖鎖を示し、各々のＲ2は、独立して、糖残基もしくは糖鎖、または水素原子を示す。）
【００４８】
〔５〕好ましくは、Ｒ1について、前記糖残基が、グルクロン酸、ガラクトース、グルコース、ラムノースおよびアラビノースからなる群より選択され、前記糖鎖が、ラムノース（１→２）ガラクトース（１→２）グルクロン酸（１→３）である、〔４〕記載の方法。
【００４９】
〔６〕好ましくは、Ｒ2について、前記糖残基が、アラビノース、グルコース（または２，３，４，６−テトラアセチル体）およびキシロース（または２，３，４−トリアセチル体）からなる群より選択され、前記糖鎖が、グルコース（１→３）アラビノース（１→２２）である、〔４〕又は〔５〕記載の方法。
【００５０】
〔７〕前記式（I）で示される化合物が、好ましくはソヤサポニンＩ、ソヤサポニンIIおよびソヤサポニンＶからなる群より選択され、より好ましくはソヤサポニンＩであり、
前記式（II）で示される化合物が、好ましくはデヒドロソヤサポニンＩであり、
前記式（III）で示される化合物が、好ましくはソヤサポニンＡ１およびソヤサポニンＡ２からなる群より選択され、より好ましくはソヤサポニンＡ２である、
〔４〕記載の方法。
【００５１】
〔８〕前記回収された水性液体または前記分離で得られた生成物中におけるソヤサポニン類のイソフラボン類に対する質量比が、
好ましくは２．０以上であり、
より好ましくは、２．０〜２０，０００、４．０〜２０，０００、１７．３〜２０，０００、２０〜２０，０００、３０〜２０，０００、４０〜２０，０００、１００〜２０，０００、２００〜２０，０００、５００〜２０，０００、８００〜２０，０００、または９００〜２０，０００であり、
さらに好ましくは、２．０〜１１，０００、４．０〜１１，０００、１７．３〜１１，０００、２０〜１１，０００、３０〜１１，０００、４０〜１１，０００、１００〜１１，０００、２００〜１１，０００、５００〜１１，０００、８００〜１１，０００、または９００〜１１，０００であり、
さらに好ましくは、２．０〜５，０００、４．０〜５，０００、１７．３〜５，０００、２０〜５，０００、３０〜５，０００、４０〜５，０００、１００〜５，０００、２００〜５，０００、５００〜５，０００、８００〜５，０００、または９００〜５，０００であり、
さらに好ましくは、２．０〜３，０００、４．０〜３，０００、１７．３〜３，０００、２０〜３，０００、３０〜３，０００、４０〜３，０００、１００〜３，０００、２００〜３，０００、５００〜３，０００、８００〜３，０００、または９００〜３，０００であり、
さらに好ましくは、２．０〜１，０００、４．０〜１，０００、１７．３〜１，０００、２０〜１，０００、３０〜１，０００、４０〜１，０００、１００〜１，０００、２００〜１，０００、５００〜１，０００、８００〜１，０００、または９００〜１，０００である、
〔１〕〜〔７〕のいずれか１項記載の方法。
【００５２】
〔９〕前記マメ科植物が、
好ましくは、ダイズ属植物、ササゲ属植物、エンドウ属植物、ウマゴヤシ属植物、およびソラマメ属植物からなる群より選択される少なくとも１つであり、
より好ましくは、ダイズ属植物、エンドウ属植物およびソラマメ属植物からなる群より選択される少なくとも１つであり、
さらに好ましくは、エンドウ属植物およびソラマメ属植物からなる群より選択される少なくとも１つである、
〔１〕〜〔８〕のいずれか１項記載の方法。
【００５３】
〔１０〕好ましくは、前記マメ科植物が、ヒヨコマメ属植物およびインゲンマメ属植物からなる群より選択される少なくとも１つである、〔１〕〜〔７〕のいずれか１項記載の方法。
【００５４】
〔１１〕前記植物体が、
好ましくは、種子；発芽種子；子葉展開期、初生葉展開期、本葉展開期もしくはそれ以降の成長期の全草；これらの種子、発芽種子もしくは全草の一部；またはカルス細胞であり、
より好ましくは、発芽期以降の全草、またはその一部であり、
さらに好ましくは、初生葉展開期の全草またはその一部である、
〔１〕〜〔１０〕のいずれか１項記載の方法。
【００５５】
〔１２〕好ましくは、前記水性液体と接触する植物体の少なくとも一部が根である、〔１〕〜〔１１〕のいずれか１項記載の方法。
【００５６】
〔１３〕好ましくは、前記水性液体が液体培地または水である、〔１〕〜〔１２〕のいずれか１項記載の方法。
【００５７】
〔１４〕好ましくは、前記植物体の少なくとも一部と水性液体との接触の時間が１２時間以上である、〔１〕〜〔１３〕のいずれか１項記載の方法。
【００５８】
〔１５〕好ましくは、前記回収された水性液体からソヤサポニン類を分離することをさらに含む、〔１〕〜〔１４〕のいずれか１項記載の方法。
【００５９】
〔１６〕好ましくは、前記水性液体からのソヤサポニン類の分離が、凍結乾燥によるか、または疎水性樹脂を用いて行われる、〔１〕〜〔１５〕のいずれか１項記載の方法。
【００６０】
〔１７〕前記回収された水性液体におけるソヤサポニンβｇ、ソヤサポニンβａ、ソヤサポニンαａおよびソヤサポニンγｇのそれぞれの含有量が０．０５μｇ／Ｌ未満である、〔１〕〜〔１６〕のいずれか１項記載の方法。
【００６１】
〔１８〕〔１〕〜〔１７〕のいずれか１項記載の方法により製造されるソヤサポニン類。
【００６２】
〔１９〕好ましくは、ソヤサポニン類含有水性液体の形態であるかまたは粉末の形態である、〔１８〕記載のソヤサポニン類。
【００６３】
〔２０〕マメ科植物の植物体を、水性液体を用いて培養または栽培しながら、該植物体の少なくとも一部を該水性液体と接触させること、および該水性液体を回収することにより製造されるソヤサポニン類含有液。
【００６４】
〔２１〕前記培養または栽培が、
好ましくは、養液栽培、土耕栽培または養液土耕栽培による培養または栽培であり、
より好ましくは、水耕栽培、噴霧栽培、砂耕栽培、礫耕栽培または養液土耕栽培による培養または栽培である、〔２０〕記載のソヤサポニン類含有液。
【００６５】
〔２２〕好ましくは、前記ソヤサポニン類が、ソヤサポゲノールＢをアグリコンとする配糖体、ソヤサポゲノールＥをアグリコンとする配糖体、およびソヤサポゲノールＡをアグリコンとする配糖体からなる群から選択される少なくとも１種である、〔２０〕又は〔２１〕に記載のソヤサポニン類含有液。
【００６６】
〔２３〕好ましくは、前記ソヤサポニン類が、下記式（I）〜（III）で示される化合物からなる群より選択される少なくとも１種である、〔２０〕〜〔２２〕のいずれか１項記載のソヤサポニン類含有液。
【化４】
2018024629.tif 000005
（式（I）〜（III）中、各々のＲ1は、独立して、糖残基もしくは糖鎖を示し、各々のＲ2は、独立して、糖残基もしくは糖鎖、または水素原子を示す。）
【００６７】
〔２４〕好ましくは、Ｒ1について、前記糖残基が、グルクロン酸、ガラクトース、グルコース、ラムノースおよびアラビノースからなる群より選択され、前記糖鎖が、ラムノース（１→２）ガラクトース（１→２）グルクロン酸（１→３）である、〔２３〕記載のソヤサポニン類含有液。
【００６８】
〔２５〕好ましくは、Ｒ2について、前記糖残基が、アラビノース、グルコース（または２，３，４，６−テトラアセチル体）およびキシロース（または２，３，４−トリアセチル体）からなる群より選択され、前記糖鎖が、グルコース（１→３）アラビノース（１→２２）である、〔２３〕又は〔２４〕記載のソヤサポニン類含有液。
【００６９】
〔２６〕前記式（I）で示される化合物が、好ましくはソヤサポニンＩ、ソヤサポニンIIおよびソヤサポニンＶからなる群より選択され、より好ましくはソヤサポニンＩであり、
前記式（II）で示される化合物が、好ましくはデヒドロソヤサポニンＩであり、
前記式（III）で示される化合物が、好ましくはソヤサポニンＡ１およびソヤサポニンＡ２からなる群より選択され、より好ましくはソヤサポニンＡ２である、
〔２３〕記載のソヤサポニン類含有液。
【００７０】
〔２７〕ソヤサポニン類のイソフラボン類に対する質量比が、
好ましくは２．０以上であり、
より好ましくは、２．０〜２０，０００、４．０〜２０，０００、１７．３〜２０，０００、２０〜２０，０００、３０〜２０，０００、４０〜２０，０００、１００〜２０，０００、２００〜２０，０００、５００〜２０，０００、８００〜２０，０００、または９００〜２０，０００であり、
さらに好ましくは、２．０〜１１，０００、４．０〜１１，０００、１７．３〜１１，０００、２０〜１１，０００、３０〜１１，０００、４０〜１１，０００、１００〜１１，０００、２００〜１１，０００、５００〜１１，０００、８００〜１１，０００、または９００〜１１，０００であり、
さらに好ましくは、２．０〜５，０００、４．０〜５，０００、１７．３〜５，０００、２０〜５，０００、３０〜５，０００、４０〜５，０００、１００〜５，０００、２００〜５，０００、５００〜５，０００、８００〜５，０００、または９００〜５，０００であり、
さらに好ましくは、２．０〜３，０００、４．０〜３，０００、１７．３〜３，０００、２０〜３，０００、３０〜３，０００、４０〜３，０００、１００〜３，０００、２００〜３，０００、５００〜３，０００、８００〜３，０００、または９００〜３，０００であり、
さらに好ましくは、２．０〜１，０００、４．０〜１，０００、１７．３〜１，０００、２０〜１，０００、３０〜１，０００、４０〜１，０００、１００〜１，０００、２００〜１，０００、５００〜１，０００、８００〜１，０００、または９００〜１，０００である、
〔２０〕〜〔２６〕のいずれか１項記載のソヤサポニン類含有液。
【００７１】
〔２８〕前記マメ科植物が、
好ましくは、ダイズ属植物、ササゲ属植物、エンドウ属植物、ウマゴヤシ属植物、およびソラマメ属植物からなる群より選択される少なくとも１つであり、
より好ましくは、ダイズ属植物、エンドウ属植物およびソラマメ属植物からなる群より選択される少なくとも１つであり、
さらに好ましくは、エンドウ属植物およびソラマメ属植物からなる群より選択される少なくとも１つである、
〔２０〕〜〔２７〕のいずれか１項記載のソヤサポニン類含有液。
【００７２】
〔２９〕好ましくは、前記マメ科植物が、ヒヨコマメ属植物およびインゲンマメ属植物からなる群より選択される少なくとも１つである、〔２０〕〜〔２６〕のいずれか１項記載のソヤサポニン類含有液。
【００７３】
〔３０〕前記植物体が、
好ましくは、種子；発芽種子；子葉展開期、初生葉展開期、本葉展開期もしくはそれ以降の成長期の全草；これらの種子、発芽種子もしくは全草の一部；またはカルス細胞であり、
より好ましくは、発芽期以降の全草、またはその一部であり、
さらに好ましくは、初生葉展開期の全草またはその一部である、
〔２０〕〜〔２９〕のいずれか１項記載のソヤサポニン類含有液。
【００７４】
〔３１〕好ましくは、前記水性液体と接触する植物体の少なくとも一部が根である、〔２０〕〜〔３０〕のいずれか１項記載のソヤサポニン類含有液。
【００７５】
〔３２〕好ましくは、前記水性液体が液体培地または水である、〔２０〕〜〔３１〕のいずれか１項記載のソヤサポニン類含有液。
【００７６】
〔３３〕好ましくは、前記植物体の少なくとも一部と水性液体との接触の時間が１２時間以上である、〔２０〕〜〔３２〕のいずれか１項記載のソヤサポニン類含有液。
【００７７】
〔３４〕ソヤサポニンβｇ、ソヤサポニンβａ、ソヤサポニンαａおよびソヤサポニンγｇのそれぞれの含有量が０．０５μｇ／Ｌ未満である、〔２０〕〜〔３３〕のいずれか１項記載のソヤサポニン類含有液。
【実施例】
【００７８】
以下、実施例に基づき本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００７９】
実施例１
（１．マメ科植物の栽培およびソヤサポニン類を含む水性液体の回収）
ウレタンマット（株式会社Ｍ式水耕研究所）に播種したダイズ種子（品種：フクユタカ（日光種苗株式会社））を、底面に水道水を張ったプラスチックのバット上に置き、蛍光灯照明（明期１６時間／暗期８時間、明期の照度約１０，０００ルクス）下で気温２５℃、湿度５０％の条件にて湛水栽培した。播種から１週間後（出芽期、ＶＥ）、２週間後（初生葉展開期、ＶＣ）および３週間後（第一本葉展開期、Ｖ１期）に、それぞれ３検体ずつを、５０ｍＬの脱イオン水を入れた５０ｍＬ容の遠沈管（１検体につき１本）に移した。この際、ウレタン部分は、遠沈管に移す直前に脱イオン水中に１分間程度浸漬して揉むことで水を置換したのち、完全に遠沈管内の水に浸かるようにこれを設置した。根を水中に浸しながら、暗所で気温２５℃、湿度５０％の条件にて１６時間静置した。以上の操作により根からの滲出物を含む水溶液が得られ、これを回収することによりソヤサポニン類を製造した。
【００８０】
（２．水性液体からのソヤサポニン類の分離）
１．で得られたソヤサポニン類を含む水性液体を０．４５μｍ孔径のフィルター（ミリポア  ＳＬＨＶ０３３ＲＳ）で濾過後、固相抽出を行い、ソヤサポニン類を濃縮した。
固相抽出では、担体にＳｅｐ−Ｐａｋ  Ｃ１８  ３ｃｃ  Ｖａｃ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ、２００ｍｇ  Ｓｏｒｂｅｎｔ  ｐｅｒ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（日本ウォーターズ株式会社）（メタノール３ｍＬでコンディショニング、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水（メルク株式会社）３ｍＬで洗浄）を用い、ここに濾過済み溶液を全量添加し、カラムに吸着させた後、メタノール３ｍＬで溶出することによりソヤサポニン類を分離した。
【００８１】
（３．ソヤサポニン類の同定および定量）
２．で分離したソヤサポニン類を濃縮乾固後、２００μＬの５０ｖ／ｖ％メタノールに再溶解させ、再度フィルター濾過を行ってサンプルを調製した。次いで、ＬＣ−ＭＳにてサンプル中のソヤサポニン類を分析した。標準品（製品番号、入手先）として、ＡグループのソヤサポニンとしてソヤサポニンＡ１（ＮＰ−０００１０８、ＡｎａｌｙｔｉＣｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）およびＡ２（ＮＰ−００１６６６、ＡｎａｌｙｔｉＣｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）、ＢグループのソヤサポニンとしてソヤサポニンＩ（Ｐ２５０５、株式会社常磐植物化学研究所）、II（ＮＰ−０００１００、ＡｎａｌｙｔｉＣｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）およびＶ（Ｐ２５０６、株式会社常磐植物化学研究所）、ならびにＥグループのソヤサポニンとしてデヒドロソヤサポニンＩ（ＮＰ−０１７０４０、ＡｎａｌｙｔｉＣｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）の試薬をＬＣ−ＭＳ分析し、検量線を作成した。
【００８２】
＜ＬＣ−ＭＳ分析条件＞
ＨＰＬＣ装置および質量分析装置は、それぞれＡｇｉｌｅｎｔ  １２６０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  ＬＣシステム（アジレント・テクノロジー株式会社）およびＴｒｉｐｌｅＴＯＦ４６００システム（株式会社エービー・サイエックス）を使用した。カラムはＣＡＰＣＥＬＬ  ＣＯＲＥ  Ｃ１８（２．１×１００ｍｍ、２．７μｍ）（株式会社資生堂）を使用した。溶離液は、Ａ：０．１ｖ／ｖ％ギ酸水、Ｂ：０．１ｖ／ｖ％ギ酸含有アセトニトリルを用い、グラジエント条件を０分〜０．１分／１ｖ／ｖ％Ｂ→０．１分〜１３分／１ｖ／ｖ％Ｂ〜９９．５ｖ／ｖ％Ｂとし、流速は０．５ｍＬ／分とした。イオン化法は、ＥＳＩ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）、測定範囲はｍ／ｚ  １００−１５５０とした。
【００８３】
各サンプルについて、各試薬との保持時間、精密質量、ＭＳ／ＭＳスペクトルの一致からＡグループのソヤサポニンとしてソヤサポニンＡ１およびＡ２を、ＢグループのソヤサポニンとしてソヤサポニンＩ、IIおよびＶを、ＥグループのソヤサポニンとしてデヒドロソヤサポニンＩを同定した。また検量線から、サンプル中の各ソヤサポニンを定量し、定量値をＡ、ＢおよびＥグループごとに合算（ＥグループはデヒドロソヤサポニンＩのみ）して、植物個体当たりの各グループのソヤサポニン類の総量（ｐｍｏｌまたはｎｇ／ｐｌａｎｔ）または新鮮根質量当たりの各グループのソヤサポニン類の総量（ｐｍｏｌまたはｎｇ／ｇ ｒｏｏｔ）を求めた。ただし、ＤＤＭＰグループのソヤサポニン類、すなわちソヤサポニンβｇ、ソヤサポニンβａ、ソヤサポニンαａおよびソヤサポニンγｇについては、標準試薬が入手できなかったため、ソヤサポニンＩの試薬標準液で作成した検量線により近似的に定量を行った。
【００８４】
（４．イソフラボン類の定量）
イソフラボン類（製品番号、入手先）は、ダイゼイン（Ｄ２６６８、東京化成工業株式会社）、ゲニステイン（０７３−０５５３１、和光純薬工業株式会社）、グリシテイン（ＮＨ０１０２０２、長良サイエンス株式会社）、ならびにこれら３種をアグリコンとするグルコシド体、すなわちダイジン（Ｄ３９２０、東京化成工業株式会社）、ゲニスチン（７３８２２、シグマアルドリッチジャパン）、グリシチン（ａｂ１４２８８６、ａｂｃａｍＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）およびマロニル化グルコシド体、すなわちマロニルダイジン（１３２−１３８２１、和光純薬工業株式会社）、マロニルゲニスチン（１３６−１３８４１、和光純薬工業株式会社）、マロニルグリシチン（１３９−１３８３１、和光純薬工業株式会社）の計９種を試薬で購入し、上記３．と同様の手順でＬＣ−ＭＳにより定量分析をおこなった。
【００８５】
（５．結果）
分析結果を表１、表２および表３に示す。表中のデータは３検体の平均値±標準誤差を表す。出芽期（ＶＥ）において、ダイズ１植物体当り約１４０ｐｍｏｌ（約１５０ｎｇ）のソヤサポニン類（Ａグループ、Ｂグループ、Ｅグループの合計）が根から滲出していた。同様に初生葉展開期（ＶＣ期）には１植物体当り約２，０９０ｐｍｏｌ（約２，０７０ｎｇ）、および第一本葉展開期（Ｖ１期）の根からは１植物体当り約６，３００ｐｍｏｌ（約６，３２０ｎｇ）のソヤサポニン類が滲出物として得られた（表１）。また、ダイズ新鮮根質量当りに換算すると、出芽期（ＶＥ）においては、１ｇの根当たり約１，８４０ｐｍｏｌ（約１９６０ｎｇ）のソヤサポニン類（Ａグループ、Ｂグループ、Ｅグループの合計）が根から滲出していた。同様に初生葉展開期（ＶＣ期）には約２，５２０ｐｍｏｌ（約２，５００ｎｇ）、および第一本葉展開期（Ｖ１期）の根からは約４，４９０ｐｍｏｌ（約４，４９０ｎｇ）のソヤサポニン類が滲出物として得られた（表２）。ダイズ１植物体当りの滲出物中におけるイソフラボン類に対するソヤサポニン類の質量比は、ＶＥ期で５．７倍、ＶＣ期で１８．９倍、Ｖ１期で１１．５倍であった（表３）。
【００８６】
【表１】
2018024629.tif 000006
【００８７】
【表２】
2018024629.tif 000007
【００８８】
【表３】
2018024629.tif 000008
【００８９】
実施例２
ウレタンマット上に、インゲンマメ、ソラマメ、ヒヨコマメ、ムラサキウマゴヤシ、エンドウ、およびヤエナリ（日光種苗株式会社）の種子を播種し、蛍光灯照明（明期１６時間／暗期８時間、明期の照度約１０，０００ルクス）下で気温２５℃、湿度５０％の条件にて播種後１０日まで、脱イオン水を湛水したプラスチックのバット上で育成した。各植物種から５個体ずつ（但し、エンドウとヤエナリのみ３個体ずつ）を、５０ｍＬ容の遠沈管に移し、根元のウレタン部分が遠沈管の口に収まるように設置した。遠沈管内には、２分の１に希釈したＢｒｏｕｇｈｔｏｎ＆Ｄｉｌｗｏｒｔｈの液体培地（Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｌｗｏｒｔｈ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１２５，１０７５−１０８０，１９７１）に、終濃度０．５ｍＭとなるよう硝酸アンモニウムを添加した養液を４５ｍＬ入れた。栽培は人工気象器（ＬＰＨ−３５０ＳＰ、株式会社日本医化器械製作所）内で行い、栽培温度は明期２６℃／暗期２０℃、光条件は明期（約１５，０００ルクス）１６時間／暗期８時間とした。遠沈管に移植してから２〜３日後（但し、ムラサキウマゴヤシのみは７日後）に、各植物種から５検体ずつ（但し、エンドウとヤエナリのみ３検体ずつ）を、同養液４５ｍＬを満たした５０ｍＬ容遠沈管に移し、根を養液中に浸しながら、暗所で１６時間静置した。得られた根滲出物溶液を、実施例１と同様の手順で濾過、固相抽出して、ソヤサポニン類を濃縮した。
【００９０】
得られた濃縮物を２００μＬの５０ｖ／ｖ％メタノールに再溶解させ、再度フィルター濾過を行ってサンプルを調製した。次いで、実施例１と同様の手順で、ＬＣ−ＭＳにてサンプル中のソヤサポニン類を分析、定量して、各グループのソヤサポニン類について、植物個体当たりの総量（ｐｍｏｌまたはｎｇ／ｐｌａｎｔ）、および根新鮮質量１ｇ当たりの総量（ｐｍｏｌまたはｎｇ／ｇ  ｒｏｏｔ）を求めた。
【００９１】
分析結果を表４および５に示す。表中のデータは５検体（エンドウおよびヤエナリのみ３検体）の平均値±標準誤差を表す。供試したマメ科植物６種のいずれを使用した場合でも、根から滲出したソヤサポニン類（Ａ、Ｂ、Ｅグループのいずれか、またはその全て）が得られた（表４）。ソヤサポニン類とイソフラボン類の質量比は、植物種により大きく変動し、最小で０．０４から最大で約９００倍以上であった（表５）。最もソヤサポニン類とイソフラボン類の質量比が大きいエンドウについては、個体別のデータ（個体あたりの総量（ｎｇ／ｐｌａｎｔ）および質量比）を表６に示した。
【００９２】
【表４】
2018024629.tif 000009
【００９３】
【表５】
2018024629.tif 000010
【００９４】
【表６】
2018024629.tif 000011
【００９５】
実施例３
実施例１（１．マメ科植物の栽培およびソヤサポニン類を含む水性液体の回収）にて得られたダイズ根からの滲出物を含む水溶液、すなわちダイズＶＥ期、ダイズＶＣ期、およびダイズＶ１期のソヤサポニン液の各化合物の組成を、実施例１と同様の手順でＬＣ−ＭＳにて測定した（検出限界０．０５μｇ／Ｌ）。ただし、ＤＤＭＰグループのソヤサポニン類については、標準試薬が入手できなかったため、ソヤサポニンＩの試薬標準液で作成した検量線により近似的に定量を行った。結果を表７に示す。なお、表７中の数値は、平均値±標準誤差（ｎ＝５）を示しており、単位は、μｇ／Ｌを示す。ダイズの根滲出物溶液中からは、Ａグループ、ＢグループおよびＥグループのソヤサポニン類が検出されたが、ＤＤＭＰグループのソヤサポニン類は検出されなかった。
【００９６】
【表７】
2018024629.tif 000012
【００９７】
実施例４
実施例２にて得られたインゲンマメ、ソラマメ、ヒヨコマメ、ムラサキウマゴヤシ、エンドウ、およびヤエナリの根滲出物溶液、すなわちインゲンマメ、ソラマメ、ヒヨコマメ、ムラサキウマゴヤシ、エンドウ、およびヤエナリのソヤサポニン液の各化合物の組成を、実施例１と同様の手順でＬＣ−ＭＳにて測定した（検出限界０．０５μｇ／Ｌ）。ただし、ＤＤＭＰグループのソヤサポニン類については、標準試薬が入手できなかったため、ソヤサポニンＩの試薬標準液で作成した検量線により近似的に定量を行った。結果を表８に示す。なお、表８中の数値は、平均値±標準誤差（ｎ＝３）を示しており、単位は、μｇ／Ｌを示す。ダイズ以外のマメ科植物の根滲出物溶液中からは、Ｂグループ、またはＢおよびＥグループのソヤサポニン類が検出された。一方、ＤＤＭＰグループのソヤサポニン類は検出されなかった。
【００９８】
【表８】
2018024629.tif 000013
【００９９】
比較例１
ダイズ（フクユタカ）種子を乳鉢等で粉砕し、そのうち１０ｍｇを１ｍＬの８０ｖ／ｖ％メタノールでホモジナイズ抽出（５分、２０Ｈｚ（ボールミルＭＭ４００、Ｒｅｔｓｃｈ））した。抽出液は０．４５μｍフィルターでろ過し、ろ液の各化合物について、根滲出物溶液と同様の方法にてＬＣ−ＭＳにより組成を測定した。ただし、ＤＤＭＰグループのソヤサポニン類については標準試薬が入手できなかったため、ソヤサポニンＩの試薬標準液で作成した検量線により近似的に定量を行った。結果を表９に示す。なお、表９中の数値の単位は、乾燥種子重量当たりの各化合物の重量μｇ／ｇを示す。ダイズ種子中には、Ａグループのソヤサポニンは検出できなかったものの、ＢおよびＥグループのソヤサポニン類が検出された。加えてさらに、ＤＤＭＰグループのソヤサポニン類が検出された。
【０１００】
【表９】
2018024629.tif 000014
【０１０１】
比較例２
実施例１（１．マメ科植物の栽培およびソヤサポニン類を含む水性液体の回収）にて得られたダイズ根を凍結乾燥し、５０ｖ／ｗ倍量の８０ｖ／ｖ％メタノールでホモジナイズ抽出（５分、２０Ｈｚ（ボールミルＭＭ４００、Ｒｅｔｓｃｈ））した。すなわち１０ｍｇの乾燥根を秤量し、５００μＬの溶媒で抽出した。抽出液は０．４５μｍフィルターでろ過し、ろ液を適宜、８０ｖ／ｖ％メタノールで希釈した。ろ液中の各化合物について、根滲出物溶液と同様の方法にてＬＣ−ＭＳにより組成を測定した。ただし、ＤＤＭＰグループのソヤサポニン類については、標準試薬が入手できなかったため、ソヤサポニンＩの試薬標準液で作成した検量線により近似的に定量を行った。結果を表１０に示す。なお、表１０中の数値は、平均値±標準誤差（ｎ＝５）を示しており、単位は、乾燥根重量当たりの各化合物の重量μｇ／ｇを示す。ダイズＶＥ期〜Ｖ１基の根抽出物中では、Ａ、ＢおよびＥグループのソヤサポニン類の他、ＤＤＭＰグループのソヤサポニン類が検出された。
【０１０２】
【表１０】
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【０１０３】
比較例３
実施例１（１．マメ科植物の栽培およびソヤサポニン類を含む水性液体の回収）にて得られた各マメ科植物（ダイズ以外）の根を凍結乾燥し、２５０ｖ／ｗ倍量の８０ｖ／ｖ％メタノールでホモジナイズ抽出（５分、２０Ｈｚ（ボールミルＭＭ４００、Ｒｅｔｓｃｈ））した。すなわち３ｍｇの乾燥根を秤量し、７５０μＬの溶媒で抽出した。抽出液は０．４５μｍフィルターでろ過し、ろ液を適宜、８０ｖ／ｖ％メタノールで希釈した。ろ液中の各化合物について、根滲出物溶液と同様の方法にてＬＣ−ＭＳにより組成を測定した。ただし、ＤＤＭＰグループのソヤサポニン類については、標準試薬が入手できなかったため、ソヤサポニンＩの試薬標準液で作成した検量線により近似的に定量を行った。結果を表１１〜１２に示す。なお、表１１〜１２中の数値は、平均値±標準誤差（ｎ＝３）を示しており、単位は、乾燥根重量当たりの各化合物の重量μｇ／ｇを示す。ダイズ根の抽出物（比較例２）と同様に、ダイズ以外のマメ科植物根の抽出物中においてはＢおよびＥグループのソヤサポニン類の他、ＤＤＭＰグループソヤサポニン類が検出された。
【０１０４】
【表１１】
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【０１０５】
【表１２】
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