(57)【要約】【課題】医薬品、食品等として有用なＧＩＰ上昇抑制剤の提供。【解決手段】ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＧＩＰ上昇抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＧＩＰ上昇抑制剤。
【請求項２】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＦＡＢＰ５阻害剤。
【請求項３】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＧＩＰ上昇抑制用食品。
【請求項４】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＦＡＢＰ５阻害用食品。
【請求項５】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするエネルギー代謝亢進剤。
【請求項６】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするエネルギー代謝亢進用食品。
【請求項７】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする肥満予防又は改善剤。
【請求項８】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする肥満予防又は改善用食品。
【請求項９】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする抗疲労剤。
【請求項１０】
ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする抗疲労用食品。
【請求項１１】
ＧＩＰ上昇抑制が、油脂や脂肪酸の摂取に起因するＧＩＰ上昇の抑制である、請求項１記載の剤又は請求項３記載の食品。
【請求項１２】
抽出物がエタノール又はエタノール水溶液抽出物である、請求項１、２、５、７若しくは９記載の剤、又は請求項３、４、６、８若しくは１０記載の食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＩＰ上昇抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＧＩＰ（ガストリックインヒビトリーポリペプチド又はグルコースディペンデントインスリノトロピックポリペプチド）は、グルカゴン・セクレチンファミリーに属する消化管ホルモンの１つである。ＧＩＰは、脂質や糖質の摂食により小腸に存在するＫ細胞から分泌され、膵β細胞においてインスリン分泌を促進し、また脂肪組織において糖質や脂質の取り込みを亢進する。ＧＩＰはまた、胃酸分泌抑制作用や胃運動抑制作用を有することが知られている（非特許文献１〜３）。さらに、ＧＩＰ受容体の欠損マウスは野生型マウスと比較して、エネルギー代謝が亢進することが示されている（非特許文献１１）。エネルギー代謝が低下することにより、疲労が取れにくくなることが報告されている（特許文献５）。
そのため、ＧＩＰの上昇抑制は、食後の消化促進、胃もたれの改善、エネルギー代謝亢進、肥満の予防又は改善、抗疲労等に有効であると考えられている。
【０００３】
また、近年、細胞内の脂肪酸結合蛋白質ファミリーとして知られているＦＡＢＰｓ（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ）のアイソフォームであるＦＡＢＰ４及び５が、ＧＩＰを分泌する腸細胞に局在しており、斯かるＦＡＢＰ５のノックアウトマウスにおいて脂質によるＧＩＰの分泌が低減すること（非特許文献４、特許文献１）、さらにＦＡＢＰ４又は５を阻害する物質がＧＩＰ上昇抑制剤となり得ることが報告されている（特許文献１）。
【０００４】
これまでの研究によって、ＧＩＰの機能を阻害する物質として、３−ブロモ−５−メチル−２−フェニルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オール（ＢＭＰＰ）が知られ、食後ＧＩＰの分泌を抑制するものとして、グアガム等が知られている（特許文献２、非特許文献５〜１０）。また、近年では、ＧＩＰ受容体アンタゴニストである（Ｐｒｏ３）ＧＩＰが知られている。しかし、これらの物質は、安全性や効果の面で十分とはいえない。
【０００５】
一方、ツクリタケ（学名：Agaricus bisporus）は、イネ科植物などの草本類の枯れ草を分解する腐植分解菌であり、マッシュルームとして広く食用利用されている。また、マッシュルームの抽出物には、ロイコトリエン遊離抑制作用を有し、抗アレルギー剤として使用できること（特許文献３）、脂肪細胞分化促進作用があること（特許文献４）等が報告されている。
しかしながら、ツクリタケの圧搾物や抽出物とＧＩＰ分泌やＦＡＢＰｓ活性との関係については何ら報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１５−１９４４８１号公報
【特許文献２】国際公開第０１／８７３４１号
【特許文献３】特開平１１−２１７３３６号公報
【特許文献４】特開２００９−２６３３４４号公報
【特許文献５】特開２００７−３０８４６８号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Brown JC et al. Canadian J Physiol Pharmacol. 1969,47:113-114
【非特許文献２】Falko JM et al., J Clin Endocrinol Metab.1975,41:260-265
【非特許文献３】織田敏次ら，消化管 機能と病態，1981年，中外医学社，P205-216
【非特許文献４】Cesar A et al., Mol Endocrinol. 2014 Nov;28(11):1855-65
【非特許文献５】Gagenby S J et al., Diabet Med.1996 Apr;13(4):358-64
【非特許文献６】Ellis PR et al., Br J Nutr.1995 Oct;74(4):539-56
【非特許文献７】Simoes NunesC et al., Reprod Nutr Dev.1992;32(1):11-20
【非特許文献８】Morgan LM et al., Br J Nutr.1990 Jul;64(1):103-10
【非特許文献９】Requejo F et al., Diabet Med.1990 Jul;7(6):515-20
【非特許文献１０】Morgan et al., Br J Nutr.1985 May;53(3):467-75
【非特許文献１１】Miyawaki K et al., Nat Med. 2002 Jun;8(7):738-742
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、医薬品、食品等に利用することのできるＧＩＰ上昇抑制剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、ＧＩＰの上昇をコントロールできる素材について検討したところ、ツクリタケの圧搾物がＧＩＰの上昇を抑制すること及びＦＡＢＰ５阻害活性を有することを見出した。
【００１０】
すなわち、本発明は、以下を提供する。
（１）ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＧＩＰ上昇抑制剤。
（２）ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＦＡＢＰ５阻害剤。
（３）ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＧＩＰ上昇抑制用食品。
（４）ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＦＡＢＰ５阻害用食品。
（５）ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするエネルギー代謝亢進剤。
（６）ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするエネルギー代謝亢進用食品。
（７）ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする肥満予防又は改善剤。
（８）ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする肥満予防又は改善用食品
（９）ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする抗疲労剤。
（１０）ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする抗疲労用食品。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤又はＦＡＢＰ５阻害剤は、優れたＧＩＰ上昇抑制作用又はＦ
ＡＢＰ５阻害作用を有し、かつ安全性も高い医薬品、食品等として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ツクリタケ圧搾物のＧＩＰ上昇抑制作用（単回投与試験）。Ａ）血中ＧＩＰ濃度推移、Ｂ）投与後６０分までの血中ＧＩＰ濃度の曲線下面積。
【図２】ツクリタケ圧搾物のＧＩＰ上昇抑制作用（単回食餌試験）。Ａ）血中ＧＩＰ濃度推移、Ｂ）摂取後２４０分までの血中ＧＩＰ濃度の曲線下面積。
【図３】ツクリタケ圧搾物のＧＩＰ上昇抑制作用（用量依存性試験）。Ａ）血中ＧＩＰ濃度推移、Ｂ）摂取後１２０分までの血中ＧＩＰ濃度の曲線下面積。
【図４】ツクリタケ抽出物のＧＩＰ上昇抑制作用（単回食餌試験）。摂取後３０分までの血中ＧＩＰ濃度の曲線下面積。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本明細書において、「ツクリタケ」とは、ハラタケ科（Ａｇａｒｉｃａｃｅａｅ）ハラタケ属（Ａｇａｒｉｃｕｓ）に属するＡｇａｒｉｃｕｓ  ｂｉｓｐｏｒｕｓを指し、わが国では、「マッシュルーム」とも称される。
【００１４】
ツクリタケは、ホワイト種、オフホワイト種、クリーム種、ブラウン種、Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｔｏｒｑｕｉｓ種等の品種が知られているが、本発明においては、当該品種は特に限定されることはなく、いずれも好ましく使用することができる。
【００１５】
本発明において、ツクリタケの使用部位は特に限定されることはなく、傘又は柄、子実体、菌糸体、菌核等の何れでもよいが、子実体を用いるのが好ましい。
【００１６】
ツクリタケの圧搾物としては、ツクリタケを圧搾することにより得られる圧搾汁（搾汁）が挙げられる。圧搾物の製造は特に限定されないが、例えばツクリタケを粗切し、スロージューサー等の圧搾機を用いて圧搾することにより行うことができる。
【００１７】
ツクリタケの抽出物としては、ツクリタケの子実体をそのまま、その破砕物、粉砕物、若しくは上記の圧搾物から抽出した抽出物が挙げられる。
抽出のための溶媒には、極性溶媒、非極性溶媒のいずれをも使用することができる。溶媒の具体例としては、例えば、水；１価、２価又は多価のアルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等の鎖状又は環状のエーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ヘキサン等の飽和又は不飽和の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ピリジン類；ジメチルスルホキシド；アセトニトリル；二酸化炭素、超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他のオイル類；ならびにこれらの混合物が挙げられる。好適には、水、アルコール類及びその水溶液が挙げられ、アルコール類としてはメタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔ−ブタノール等が挙げられ、好ましくはエタノールである。
【００１８】
上記アルコール類の水溶液におけるアルコールの濃度（２５℃における容量％）は、好ましくは３０容量％以上、より好ましくは５０容量％以上、さらに好ましくは７５容量％以上であり、且つ好ましくは９９．５容量％以下、より好ましくは９９容量％以下、さらに好ましくは９８容量％以下である。また、上記アルコール類の水溶液におけるアルコールの濃度は、好ましくは３０〜９９．５容量％、より好ましくは５０〜９９容量％、さらに好ましくは７５〜９８容量％である。好ましくは、３０〜９９．５容量％エタノール水溶液、より好ましくは５０〜９９容量％エタノール水溶液、さらに好ましくは７５〜９８容量％エタノール水溶液が挙げられる。
【００１９】
抽出における溶媒の使用量としては、ツクリタケ（乾燥質量換算）１ｇに対して１〜１００ｍＬが好ましい。抽出条件は、十分な抽出が行える条件であれば特に限定されないが、例えば、抽出時間は好ましくは１時間以上、より好ましくは３時間以上がより好ましく、他方、好ましくは２ヶ月以下、より好ましくは５週間以下、より好ましくは２週間以下である。抽出温度は０℃以上が好ましく、５℃以上がより好ましく、他方、溶媒沸点以下が好ましく、９０℃以下がより好ましい。通常、低温なら長時間、高温なら短時間の抽出を行う。
抽出手段は、特に限定されないが、例えば、固液抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、ソックスレー抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等の通常の手段を用いることができる。
【００２０】
本発明のツクリタケの圧搾物又は抽出物は、例えば食品や医薬品上許容し得る規格に適合し、本発明の効果を発揮するものであれば粗精製物であってもよい。また、必要に応じて、液々分配、固液分配、濾過膜、活性炭、吸着樹脂、イオン交換樹脂、澱出し等の公知の技術によって不活性な夾雑物の除去、脱臭、脱色等の処理を施すことができる。
また、さらに公知の分離精製方法を適宜組み合わせてこれらの純度を高めてもよい。精製手段としては、有機溶剤沈殿、遠心分離、限界濾過膜、高速液体クロマトグラフやカラムクロマトグラフ等が挙げられる。
【００２１】
また、本発明のツクリタケの圧搾物又は抽出物は、そのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、あるいは濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものでもよい。また、凍結乾燥し、用時に、通常抽出に用いられる溶剤、例えば水、エタノール、水・エタノール混液等の溶剤で希釈して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００２２】
後記実施例に示すように、ツクリタケの圧搾物は、ＧＩＰ上昇を有意に抑制する作用を有する。また、ツクリタケの圧搾物はＦＡＢＰ５活性を阻害する作用を有する。
したがって、ツクリタケの圧搾物又は抽出物は、ＧＩＰ上昇抑制剤、ＦＡＢＰ５阻害剤、エネルギー代謝亢進剤、肥満予防又は改善剤、さらには抗疲労剤（以下、ＧＩＰ上昇抑制剤等とも称する）となり得、またこれらを製造するために使用できる。
また、ツクリタケの圧搾物又は抽出物は、ＧＩＰ上昇抑制のため、ＦＡＢＰ５を阻害するため、エネルギー代謝を亢進するため、肥満を予防又は改善するため、さらには抗疲労のために使用することができる。ここで、当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。尚、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
【００２３】
本発明において「ＧＩＰ上昇抑制」とは、脂質及び糖質を含む食事、特に脂質を多く含む食事を摂取することにより小腸に存在するＫ細胞から分泌されたＧＩＰの上昇を抑制することをいう。すなわち、本明細書における「ＧＩＰ上昇抑制」とは、好ましくは、食後に生じるＧＩＰ上昇を抑制することをいう。また、本明細書における「ＧＩＰ上昇抑制作用」は、Ｋ細胞からのＧＩＰ分泌を抑制することでＧＩＰ上昇を抑制するＧＩＰ分泌抑制作用、及び血中ＧＩＰ濃度を低下させることによりＧＩＰ上昇を抑制するＧＩＰ低下作用のいずれをも含む概念である。
【００２４】
本発明において、「ＧＩＰ上昇抑制作用」は、任意の油脂又は脂肪酸のＧＩＰ上昇抑制作用を基準として判断することができる。例えば、被験物質と任意の油脂又は脂肪酸（例えばオレイン酸）を投与又は摂取した試験群における血中ＧＩＰ分泌量を、任意の油脂又は脂肪酸（例えばオレイン酸）を投与又は摂取した対照群の血中ＧＩＰ分泌量と比較する。対照群と比べて試験群で血中ＧＩＰ分泌量の減少が認められた場合、当該被験物質はＧＩＰ上昇抑制効果があると評価することができる。評価に際しては、必ずしも統計学的な手法を用いる必要はないが、統計学的に有意差の有無を検定して評価することが好ましい。
【００２５】
ＧＩＰの上昇抑制は、膵β細胞におけるインスリン分泌の促進及び脂肪組織における糖質や脂質の取り込み亢進を抑制し、胃酸分泌の抑制及び胃運動の抑制を軽減させる（前記非特許文献１〜３）、また、エネルギー代謝を亢進する（前記非特許文献１１）ことから、ツクリタケの圧搾物又は抽出物は、肥満の予防又は改善、食後の消化促進や胃もたれ改善、胃酸分泌能の改善、エネルギー代謝亢進、更には抗疲労（前記特許文献５）のために使用することができる。
【００２６】
本発明において、「ＦＡＢＰ５阻害」には、ＦＡＢＰ５の発現を阻害すること、ＦＡＢＰ５の活性を阻害することを意味し、ＦＡＢＰ５の発現にはＦＡＢＰ５遺伝子の発現又はＦＡＢＰ５蛋白質の発現が包含される。またＦＡＢＰ５の活性とは、ＦＡＢＰ５蛋白質の活性をいう。
ＦＡＢＰ５阻害活性は、例えば、疎水性環境下でＦＡＢＰ５との結合活性を有し、ＦＡＢＰ５と結合することで蛍光を発する基質である１−ａｎｉｌｉｎｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ−８−ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ（１，８−ＡＮＳ）を利用した方法により測定することが可能である（特許文献１参照）。
【００２７】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤又はＦＡＢＰ５阻害剤は、ＧＩＰの上昇抑制や肥満の予防又は改善、食後の消化促進、胃もたれ、胃酸分泌能の改善、エネルギー代謝亢進、さらには抗疲労等の各効果を発揮する、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品、食品となり、また当該医薬品、医薬部外品、食品に配合して使用される素材又は製剤となり得る。
なお、当該食品には、肥満の予防又は改善、食後の消化促進、胃もたれ、胃酸分泌能の改善、エネルギー代謝亢進、さらには抗疲労をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した食品、機能性表示食品、特定保健用食品、病者用食品、サプリメントが包含される。
【００２８】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を医薬品（医薬部外品を含む）として用いる場合、当該医薬品は任意の投与形態で投与され得る。投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられるが、好ましい形態は経口投与である。
このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、本発明のツクリタケの圧搾物又は抽出物を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００２９】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を食品として用いる場合、当該食品の形態は、パン類、ケーキ類、麺類、菓子類、ゼリー類、冷凍食品、アイスクリーム類、乳製品、飲料などの各種食品組成物の他、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）が挙げられる。
種々の形態の食品を調製するには、本発明のツクリタケの圧搾物又は抽出物を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００３０】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等におけるツクリタケの圧搾物又は抽出物の含有量（抽出物の乾燥物換算）は、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上、且つ好ましくは１０質量％以下、より好ましく５質量％以下であり、また好ましくは０．００１〜１０質量％、より好ましくは０．０１〜５質量％である。
【００３１】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等の投与量又は摂取量は、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与又は摂取の場合成人１人当たり、ツクリタケの圧搾物又は抽出物（抽出物の乾燥物換算）として、１日あたり好ましくは０．０１ｇ以上、より好ましくは０．１ｇ以上であり、且つ好ましくは１５ｇ以下、より好ましくは６ｇである。
【００３２】
また、本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等は、摂食・摂餌時或いは摂食・摂餌前に投与又は摂取するのが好ましく、特に摂食・摂餌前５分から３０分以内に投与又は摂取するのが好ましい。投与又は摂取対象者としては、空腹時血中ＧＩＰ値が３０ｐｇ／ｍＬ以上、または胃液分泌機能検査において、基礎分泌量が３０ｍＬ／時間以下のヒトが好ましい。また、エネルギー代謝が低下しているヒト、肥満症患者又はそれらの予備軍等の肥満の改善又は予防を望むヒト、或いは疲労症状（全身倦怠感、微熱、頭痛、リンパ節腫脹、筋肉痛、脱力感、思考力又は集中力に関する障害、抑うつ症状、睡眠障害等）がみられる患者やその疑いのあるヒト等が好ましい。
【００３３】
上述した実施形態に関し、本発明においてはさらに以下の態様が開示される。
＜１＞ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＧＩＰ上昇抑制剤。
＜２＞ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＦＡＢＰ５阻害剤。
＜３＞ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＧＩＰ上昇抑制用食品。
＜４＞ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするＦＡＢＰ５阻害用食品。
＜５＞ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするエネルギー代謝亢進剤。
＜６＞ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とするエネルギー代謝亢進用食品。
＜７＞ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする肥満予防又は改善剤。
＜８＞ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする肥満予防又は改善用食品。
＜９＞ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする抗疲労剤。
＜１０＞ツクリタケの圧搾物又は抽出物を有効成分とする抗疲労用食品。
【００３４】
＜１１＞＜１＞、＜３＞において、ＧＩＰ上昇抑制は、油脂や脂肪酸の摂取に起因するＧＩＰ上昇の抑制である。
＜１２＞＜１＞〜＜１０＞において、抽出物はエタノール又はエタノール水溶液抽出物である。
＜１３＞＜１＞〜＜１０＞において、抽出物は３０〜９９．５容量％エタノール水溶液抽出物である。
【実施例】
【００３５】
以下、実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明する。
製造例１  ツクリタケ圧搾物の調製
ツクリタケ（Agaricus bisporus）の子実体１１．３ｋｇ、室温条件下で、スロージューサー（商品名：HuromスロージューサーHU-400）にて圧搾抽出を行った。得られた圧搾物を凍結乾燥して、圧搾物粉末３０８．２ｇを得た。
【００３６】
製造例２  ツクリタケ抽出物の調製
ツクリタケ圧搾物１００ｇに水１Ｌを加え、１００℃下、１時間撹拌し、熱水抽出した。得られた抽出液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、２５℃、５分、himac CF 7D2（Hitachi））し、上清を回収、凍結乾燥した。得られた乾燥粉末７４．７ｇのうち３０．０ｇを、水３００ｍＬに懸濁させた。懸濁液に、９８％エタノール９００ｍＬを加え、室温条件下、１２時間静置し、抽出した。得られた抽出液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、２５℃、５分、himac CF 7D2（Hitachi））し、上清を回収した。上清中のエタノールは、減圧留去した。残った水分を凍結乾燥し、エタノール抽出物２６．１ｇを得た。
【００３７】
実施例１  ツクリタケ圧搾物のＧＩＰ上昇抑制作用（単回投与試験）
（１）方法
製造例１で得たツクリタケ圧搾物を用いて、下記表１に示す組成の乳剤を調製し、試験サンプルとした。
【００３８】
【表１】
2018090583.tif 000002
【００３９】
８週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本クレア）を標準粉末飼料ＣＥ−２（日本クレア）において１週間予備飼育した。飼育環境は室温を２２±２℃、湿度を５５±１０％とし、照明時間を７時から１９時とした。１８時間絶食した後、１群６−１０匹として体重がほぼ同一になるように群分けした。イソフルラン麻酔下で試験サンプル（ツクリタケ圧搾物群、コントロール群）を０．０２ｇ／ｇ体重となるよう胃内投与した。投与前、投与３０分、６０分後にイソフルラン麻酔下で眼窩より採血し（ヘパリン処理ヘマトクリット微量採血管、ＶＩＴＲＥＸ製）、血中ＧＩＰを測定した。ＧＩＰは、ＥＬＩＳＡ法（Rat/Mouse GIP (total) ELISA（Millipore））により測定を行った。
【００４０】
（２）結果
血中ＧＩＰ濃度の経時変化を図１Ａに示す。６０分までの相対ＧＩＰ血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ：ａｒｅａ  ｕｎｄｅｒ  ｔｈｅ  ｃｕｒｖｅ）を図１Ｂに示す。
各値は平均±標準偏差で示した。群間の統計学的有意差については、コントロール群に対するＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔを行なった（＊：ｐ＜０．０５）。
【００４１】
コントロール群と比較して、ツクリタケ群において、サンプル投与後３０分の血中ＧＩＰ濃度が有意に低値であった（図１Ａ）。サンプル投与後６０分までのＧＩＰ濃度の曲線下面積はコントロール群と比較して、ツクリタケ群において有意に低値であった（図１Ｂ）。
【００４２】
実施例２  ツクリタケ圧搾物のＧＩＰ上昇抑制作用（単回食餌試験）
（１）方法
一晩絶食したマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、雄、８週齢、ｎ＝６−１０）に粉末飼料（表２）を各群でカロリーが等しくなるように量り取り、３０分間の自由摂餌の間に高脂肪食（ＨＦ）群は２００ｍｇ、ツクリタケ群は２５２．６ｍｇを摂取させた。なお、ツクリタケ圧搾物は製造例１のものを用い、カロリーは０と換算した。試験粉末飼料摂餌前、摂餌後３０、６０、１２０及び２４０分において、実施例１と同様に眼窩静脈叢採血し、血中ＧＩＰを測定した。
【００４３】
【表２】
2018090583.tif 000003
【００４４】
（２）結果
ＨＦ群と比較してツクリタケ群において、摂餌後３０分の血中ＧＩＰ濃度が有意に低値であった（図２Ａ）。粉末飼料摂取後２４０分までのＧＩＰ濃度の曲線下面積はＨＦ群と比較して、ツクリタケ群において有意に低値であった（図２Ｂ）。
各値は平均±標準偏差で示した。群間の統計学的有意差については、ＨＦ群に対するＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔを行なった（＊：ｐ＜０．０５）。
【００４５】
実施例３  ツクリタケ圧搾物のＧＩＰ上昇抑制作用（用量依存性試験）
（１）方法
一晩絶食したマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、雄、１１週齢、ｎ＝６−８）に粉末飼料（表３）を各群でカロリーが等しくなるように量り取り、３０分間の自由摂餌の間にＨＦ群は２００ｍｇ、２５％ツクリタケ添加群は２５０ｍｇ、１０％ツクリタケ添加群は２２０ｍｇ、５％ツクリタケ添加群は２１０ｍｇを摂取させた。なお、ツクリタケ圧搾物は製造例１のものを用い、カロリーは０と換算した。試験粉末飼料摂餌前、摂餌後３０、６０及び１２０分において、実施例１と同様に眼窩静脈叢採血し、血中ＧＩＰを測定した。
【００４６】
【表３】
2018090583.tif 000004
【００４７】
（２）結果
摂餌後３０分における血中ＧＩＰ濃度がＨＦ群と比較して５％ツクリタケ添加群及び１０％ツクリタケ添加群において低い傾向が認められ、２５％ツクリタケ添加群では有意に低値であり、用量依存性が認められた（図３Ａ）。摂餌後、１２０分までのＧＩＰ濃度の曲線下面積はＨＦ群と比較して、ツクリタケ添加群において有意に低値であった（図３Ｂ）。
各値は平均±標準偏差で示した。群間の統計学的有意差については、対照群に対するＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔを行なった（＊：ｐ＜０．０５）。
【００４８】
実施例４  ツクリタケ圧搾物のＦＡＢＰ５阻害作用
組換蛋白質発現用大腸菌株ＢＬ２１にＦｌａｇタグ付きのヒトＦＡＢＰ５遺伝子を挿入したｐＧＥＸ−６Ｐ２ベクターをトランスフォームし、シングルコロニーを得た。コロニーを１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含有するＬＢ液体培地にピックアップし３７℃で５時間振盪培養した。その後終濃度が１ｍＭとなるようにＩＰＴＧを添加し、３７℃で３時間振盪培養し、菌体を回収した。得られた菌体はＢ−ＰＥＲ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｒｅｇｅｎｔにより可溶化、可溶性画分を回収した。組換蛋白質を含む大腸菌可溶性画分は、ＧＳＴｒａｐ  ＨＰ及びＰｒｅＳｃｉｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅａｓｅを用い、ＧＳＴタグの切断及び組換蛋白質の精製を行った。９６穴プレートに、精製したＦＡＢＰ５蛋白質（２０μｇ）を含む溶媒（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、ｐＨ７．５）に製造例１で調製したツクリタケ圧搾物（凍結乾燥物）を終濃度０．０１％となるように添加した。その後、１−ａｎｉｌｉｎｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ−８−ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ（１，８−ＡＮＳ）を終濃度５μＭとなるように添加し、室温にて１５分間静置した後、プレートリーダーにて蛍光強度（励起波長：３５５ｎｍ、蛍光波長：４８０ｎｍ）を測定した。
ＦＡＢＰ５と１，８−ＡＮＳが共存した際に観察される蛍光強度を１００とし、サンプルを添加した際の蛍光消失について評価した。結果を表４に示す。
【００４９】
【表４】
2018090583.tif 000005
【００５０】
ツクリタケ圧搾物には、強いＦＡＢＰ５阻害活性が認められた。
【００５１】
実施例５
ツクリタケ抽出物のＧＩＰ上昇抑制作用（単回食餌試験）
（１）方法
一晩絶食したマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、雄、１３週齢、ｎ＝１０）に粉末飼料（表５）を各群でカロリーが等しくなるように量り取り、３０分間の自由摂餌の間に高脂肪食（ＨＦ）群は２００ｍｇ、ツクリタケ抽出物群は２３２．５ｍｇを摂取させた。なお、ツクリタケ抽出物は製造例２のものを用い、カロリーは０と換算した。試験粉末飼料摂餌前、摂餌後３０において、実施例１と同様に眼窩静脈叢採血し、血中ＧＩＰを測定した。
【００５２】
【表５】
2018090583.tif 000006
【００５３】
（２）結果
ＨＦ群と比較してツクリタケ抽出物群において、摂餌後３０分の血中ＧＩＰ濃度が有意に低値であった（図４）。
各値は平均±標準偏差で示した。群間の統計学的有意差については、ＨＦ群に対するＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔを行なった（＊：ｐ＜０．０５）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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