(57)【要約】【課題】アンジオテンシンIIを投与しても、中膜肥厚及び高血圧症を生じない非ヒト動物を提供する。【解決手段】平滑筋特異的にTRPV2（transient receptor potential, vanilloid family type 2）の機能を抑制した非ヒト動物による。より具体的には、平滑筋特異的にTRPV2をコードする遺伝子の全部又は一部の発現を抑制してなる非ヒト動物による。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる非ヒト動物。
【請求項２】
平滑筋特異的にTRPV2遺伝子の全部又は一部の発現が抑制されており、平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる、請求項１に記載の非ヒト動物。
【請求項３】
前記非ヒト動物が中膜肥厚抑制マウスである、請求項１又は２に記載の非ヒト動物。
【請求項４】
前記非ヒト動物が高血圧症抑制マウスである、請求項１又は２に記載の非ヒト動物。
【請求項５】
平滑筋特異的に発現可能なプロモーターが搭載されたベクターを用いて平滑筋特異的にTRPV2の全部又は一部の発現を抑制させる工程を含む、平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる非ヒト動物の作製方法。
【請求項６】
前記発現が抑制されるTRPV2の全部又は一部が、NCBI Reference Sequence: NP_035836.2に開示されるアミノ酸配列のうち、少なくとも第63番目〜第756番目のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の非ヒト動物の作製方法。
【請求項７】
平滑筋特異的にTRPV2の全部又は一部の発現を抑制させる工程が、Cre発現依存的遺伝子欠損システムを用いてTRPV2をコードする遺伝子の全部又は一部をノックアウトする工程を含む、請求項６に記載の作製方法。
【請求項８】
TRPV2をコードする遺伝子の全部又は一部が、NCBI Reference Sequence: NP_035836.2に開示されるアミノ酸配列のうち、少なくとも第63番目〜第756番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子である、請求項７に記載の作製方法。
【請求項９】
平滑筋特異的に発現可能なプロモーターが、SM22α遺伝子プロモーターである、請求項５〜８のいずれかに記載の作製方法。
【請求項１０】
請求項５〜９のいずれかに記載の作製方法により作製された、平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる非ヒト動物。
【請求項１１】
請求項５〜９のいずれかに記載の作製方法により作製された、請求項１〜４のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項１２】
請求項１〜４、１０又は１１に記載の非ヒト動物を用いた抗高血圧剤のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アンジオテンシンIIを投与しても、中膜肥厚及び高血圧症を生じない非ヒト動物に関する。
【背景技術】
【０００２】
高血圧症には、腎臓や副腎等の明らかな原因疾患が存在する高血圧症と明らかな原因疾患がない高血圧症に分類される。原因疾患がない高血圧症は本態性高血圧症という。高血圧症の約90％以上は本態性高血圧症といわれており、国内の患者は約750万人を超えるといわれている。本態性高血圧症に関しては、多くの研究が進められているものの、その発生プロセス等については解明されていない。
【０００３】
高血圧症のモデル動物は数多く知られており、様々なタイプの降圧剤の評価に用いられている。高血圧症モデル動物として、食塩や水負荷に依存する低／正常レニン型の高血圧症モデルと、食塩や水負荷に依存しないレニン−アンジオテンシン系の活性化を伴う高レニン型の高血圧症モデルが挙げられる。例えばDahl SS/jrCtrラットは食塩感受性の低／正常レニン型高血圧症モデルであり、食塩負荷により週齢と共に血圧が上昇する。アルドステロン／食塩負荷誘発性モデルとして知られる高血圧症モデルは、片側の腎臓を摘出したラットに対して食塩負荷を行い、さらにアルドステロンの持続投与を行うことでNa+の体内貯留を引き起こし、その結果水の体内貯留により高血圧症が発症していると考えられる。遺伝的高血圧症モデルである脳卒中易発症性自然発症高血圧症ラット（SHRSP）は、レニン-アンジオテンシン系の活性化を伴う食塩非感受の抗レニン型遺伝的高血圧症モデルである。11-β-hydroxysteroid dehydrogenase2（11-β-HSD2）阻害高血圧症モデルは、糖質コルチコイドによる鉱質コルチコイド受容体刺激が継続的に起こり、重度高血圧症を伴う高アルドステロン症に似た病態に至る。
【０００４】
Trp（transient receptor potential）は、哺乳類では29種類の遺伝子、6つのグループ（TRPC、TRPV、TRPM、TRPA、TRPML及びTRPP）からなるTRPスーパーファミリーを形成していることが知られている。いずれも形質膜を6回貫通する非特異的陽イオンチャネルであり、四量体として働くポリモーダル受容器である。TRPV2及びそのアゴニストの2APBの存在は公知であり、Ca2+チャネルの電気生理学的な性質を利用したTRPV1、TRPV2、TRPV3の測定系について報告がある。TRPV2はストレッチ活性化Ca2+チャネルであり、正常組織では細胞内膜系に存在するが、筋ジストロフィー、心筋症などの筋変性疾患に伴って細胞膜に移行し、活性化されて細胞内への異常なCa2+流入に寄与するといわれている（J. Cell Biology; 161(5): 957-967 (2003)、Hum Mol Genet.; 18(5): 824-834 (2009)）。TRPV2の全身性ノックアウト（KO）マウスは胎生期に死に至る（非特許文献１）。
【０００５】
TRPV2を心筋特異的に発現抑制させ、心臓におけるTRPV2の機能を確認した報告がある（非特許文献２）。ここでは、TRPV2の心臓の構造や機能維持における生理的重要性について報告されているが、アンジオテンシン投与に関する記載はなく、TRPV2と血圧との関係を直接示す記載はない。
【０００６】
高血圧症の原因のひとつとして、アンジオテンシンIIの作用が知られている。アンジオテンシンIIは血管平滑筋細胞からなる中膜を肥厚、収縮させ、高血圧症の成因及び進行に重要な役割をはたしている。アンジオテンシンIIの作用に着目し、アンジオテンシンIIを投与しても中膜肥厚・高血圧症を生じないモデル動物はいくつか報告されている。例えば、アンジオテンシン受容体KOマウス（非特許文献３）やGタンパク質共役型受容体KOマウス（非特許文献４）等が報告されている。非特許文献３及び４に示すモデル動物はアンジオテンシン受容体やGタンパク質共役型受容体を対象としてKOしたものにすぎず、Ca2+チャネルを対象としたものではない。アンジオテンシンII投与による中膜肥厚は、平滑筋細胞内のCa2+上昇が引き金となることが知られているものの、Ca2+チャネルの分子実態は未だ不明である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】J. Neuteoscience; 31(32): 11425-11436 (2011)
【非特許文献２】Nature Comunications; NATURE COMMUNICATIONS | 5:3932 | DOI: 10.1038/ncomms4932
【非特許文献３】J. Biological Chemistry; 270: 18719-18722 (1995)
【非特許文献４】Science Signaling; 9(411): ra7.doi.1126/scisignal.aac9187 (2016)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、アンジオテンシンIIを投与しても、中膜肥厚及び高血圧症を生じない非ヒト動物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本願発明者らは、上記課題を解決するためにCa2+チャネルの機能に着目し、鋭意研究を重ねた結果、平滑筋特異的にTRPV2の機能を抑制した非ヒト動物によればアンジオテンシンIIを投与しても中膜肥厚及び高血圧症を生じない事を見出し、本発明を完成した。
【００１０】
すなわち本発明は、以下よりなる。
１．平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる非ヒト動物。
２．平滑筋特異的にTRPV2遺伝子の全部又は一部の発現が抑制されており、平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる、前項１に記載の非ヒト動物。
３．前記非ヒト動物が中膜肥厚抑制マウスである、前項１又は２に記載の非ヒト動物。
４．前記非ヒト動物が高血圧症抑制マウスである、前項１又は２に記載の非ヒト動物。
５．平滑筋特異的に発現可能なプロモーターが搭載されたベクターを用いて平滑筋特異的にTRPV2の全部又は一部の発現を抑制させる工程を含む、平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる非ヒト動物の作製方法。
６．前記発現が抑制されるTRPV2の全部又は一部が、NCBI Reference Sequence: NP_035836.2に開示されるアミノ酸配列のうち、少なくとも第63番目〜第756番目のアミノ酸配列を含む、前項５に記載の非ヒト動物の作製方法。
７．平滑筋特異的にTRPV2の全部又は一部の発現を抑制させる工程が、Cre発現依存的遺伝子欠損システムを用いてTRPV2をコードする遺伝子の全部又は一部をノックアウト（KO）する工程を含む、前項６に記載の作製方法。
８．TRPV2をコードする遺伝子の全部又は一部が、NCBI Reference Sequence: NP_035836.2に開示されるアミノ酸配列のうち、少なくとも第63番目〜第756番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子である、前項７に記載の作製方法。
９．平滑筋特異的に発現可能なプロモーターが、SM22α遺伝子プロモーターである、前項５〜８のいずれかに記載の作製方法。
１０．前項５〜９のいずれかに記載の作製方法により作製された、平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる非ヒト動物。
１１．前項５〜９のいずれかに記載の作製方法により作製された、前項１〜４のいずれかに記載の非ヒト動物。
１２．前項１〜４、１０又は１１に記載の非ヒト動物を用いた抗高血圧剤のスクリーニング方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の平滑筋特異的にTRPV2の機能が抑制された非ヒト動物によれば、高血圧症の原因となるアンジオテンシンIIを投与した場合であっても、中膜肥厚は起こらず血圧も上昇しなかった。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ａ．平滑筋特異的TRPV2ノックアウト（KO）マウスの作製スキーム及び作製したマウス中膜細胞の発現タンパク質を確認した図である。ｂ．作製したマウスのゲノムDNAにおける遺伝子発現（ジェノタイピング）結果を示す図である。（実施例１）
【図２】平滑筋特異的TRPV2 KOマウスの作製用遺伝子の構成を示す図である。（実施例１）
【図３】平滑筋特異的TRPV2 KOマウスの大動脈におけるTRPV2発現抑制を確認した写真図である。（実施例２）
【図４】アンジオテンシンII投与前後の平滑筋特異的TRPV2 KOマウスの大動脈の形態変化を確認した結果図である。（実施例３）
【図５】アンジオテンシンII投与前後の平滑筋特異的TRPV2 KOマウスの血圧変化を確認した結果図である。（実施例４）
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、アンジオテンシンIIを投与しても中膜肥厚及び高血圧症を生じない非ヒト動物に関する。血管壁は、内腔側から内膜、中膜、外膜の三層構造からなり、本明細書における「中膜」とは血管壁の中膜を意味する。中膜は動脈でよく発達しており、弾性繊維と平滑筋が主成分である。筋肉には、平滑筋、横紋筋及び心筋の３種類が存在し、平滑筋は横紋筋とは異なりサルコメア（筋節）のない筋肉をいう。平滑筋は、血管、胃腸、膀胱、子宮などの内臓や血管の運動に携わる。骨格筋とは異なり、平滑筋の収縮は不随意性である。本発明において、平滑筋は特に血管壁由来平滑筋が最も好適である。本発明の「平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる非ヒト動物」によれば、アンジオテンシンIIの投与によっても当該非ヒト動物の中膜肥厚が抑制される。そして、アンジオテンシンIIの投与により通常は高血圧症を発症するが、本発明の非ヒト動物によれば高血圧症の発症が抑制される。
【００１４】
本発明の「平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる」とは、文言通り平滑筋においてTRPV2タンパク質の機能が抑制されていることをいう。平滑筋特異的なTRPV2タンパク質の機能の抑制は、例えば平滑筋特異的にTRPV2遺伝子の全部又は一部の発現が抑制されていればよい。TRPV2遺伝子の一部の発現が抑制とは、TRPV2遺伝子の一部の発現が抑制されていることで発現したTRPV2の部分配列からなるタンパク質がTRPV2タンパク質としての機能が発揮しなければよい。TRPV2タンパク質を構成するアミノ酸配列は、NCBI Reference Sequence: NP_035836.2に開示される（配列番号１）。TRPV2タンパク質としての機能を発揮するためには、配列番号１に示すアミノ酸配列のうち特に第63番目〜第756番目のアミノ酸配列が重要と考えられる。そこで、本明細書において「TRPV2遺伝子の一部の発現が抑制されている」とは、配列番号１に示すアミノ酸配列のうち少なくとも第63番目〜第756番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子の発現が抑制されていることが好適である。
【００１５】
本発明の平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる非ヒト動物は、平滑筋特異的にTRPV2の全部又は一部の発現を抑制させることで作製することができる。平滑筋特異的なTRPV2の全部又は一部の発現抑制は、TRPV2をコードする遺伝子の全部又は一部が欠損しており、TRPV2の全部又は部分が欠損した発現タンパク質であって、その機能抑制されていればよい。TRPV2の全部又は一部の発現抑制とは、TRPV2をコードする遺伝子の少なくとも第63番目〜第756番目のアミノ酸配列をコードする遺伝子を標的とし、当該部分がノックアウト（KO）されていればよい。遺伝子KOの方法は、自体公知又は今後開発されるあらゆる方法を適用することができる。本発明では、平滑筋特異的に遺伝子がKOされていることが必要である。発現タンパク質の機能が全身的に抑制されると致死となるからである。そのため、平滑筋特異的に遺伝子KOする方法は、例えばDNA組換え酵素Cre発現依存的遺伝子欠損システムを利用することができる。具体的には以下の方法によることができる。
【００１６】
TRPV2をコードする遺伝子の全部又は一部のKO非ヒト動物作製用Ｆ１動物を作製する。以降は、「TRPV2をコードする遺伝子の全部又は一部」を欠損させたい遺伝子として「対象遺伝子」ともいう。対象遺伝子を欠損させるためのKO用ベクターを「ターゲッティングベクター」という。対象遺伝子のターゲッティングベクターは、相同組換えを起こさせた後の組換え体のスクリーニングが容易となるように構築することができる。例えば、ポジティブ−ネガティブ選択をするために、ターゲッティングベクターに薬剤耐性遺伝子又は毒素遺伝子などの選択マーカーを連結してもよい。選択マーカー遺伝子は、ポジティブ選択用として例えばネオマイシン耐性遺伝子（neo）、ハイグロマイシンBホスホトランスフェラーゼ遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子などを使用することができ、ネガティブ選択用として例えばヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子（HSV-tk）、ジフテリア毒素Ａ遺伝子などを使用することができる。上記の方法により作製したターゲッティングベクターを用いて、相同組換えを行う。現在確立されている遺伝子ターゲティング法では、KO非ヒト動物を作製する場合には、例えばES細胞を使用することができる。
【００１７】
相同組換えを起こさせるために、ターゲティングベクターを例えばES細胞に導入する。ターゲティングベクターを細胞に導入する方法としては、例えばエレクトロポレーション法、リン酸カルシウム法、DEAE-デキストラン法、リポソーム法等の自体公知の方法又は今後開発されるあらゆる方法を用いることができる。
【００１８】
バクテリオファージP1由来の組換えシステムであるCre-loxPシステムを使用を用いた遺伝子ターゲッティングについて説明する。loxPはCreリコンビナーゼの標的配列である。Cre-loxPシステムによればloxPとCreを用いて特定の部位（臓器）で対象遺伝子を欠損させることができる。対象遺伝子を欠損させることで対象とする遺伝子がコードするタンパク質の発現が抑制され、又は発現してもタンパク質の機能が抑制される。
【００１９】
CreはDNA組換え酵素であり、loxPと呼ばれる34塩基の配列を認識して、この部位で組換えを起こさせることができる。欠損させたい対象遺伝子をloxP配列とloxP配列との間にはさみこんだ非ヒト動物を作製する（flox動物）。また、Cre遺伝子を組織特異的プロモーター下流に組み込んだターゲッティングベクターを導入した非ヒト動物を作製する（Cre動物）。flox動物とCre動物を掛け合わせて所望の対象遺伝子を欠損したヘテロ型で非ヒト動物（Ｆ２）を作製し、Ｆ３でホモ型の非ヒト動物を作製することができる。
【００２０】
具体的には、まずTRPV2をコードする遺伝子の全部又は一部を対象遺伝子としてloxPで挟んだ非ヒト動物をflox動物として作製する（TRPV2flox/flox）。別途、平滑筋特異的に発現可能なプロモーターの制御下でCreを発現するCre動物を作製する。flox動物とCre動物を交配することでヘテロ型非ヒト動物（Ｆ２）が作製され、Ｆ３で平滑筋特異的プロモーターが働く部位でRPV2をコードする遺伝子の全部又は一部を欠損する非ヒト動物を作製することができる（図１ａ参照）。平滑筋特異的に発現可能なプロモーターは特に限定されないが、例えばSM22α遺伝子プロモーター、smooth muscle actin プロモーター、smooth muscle myosin heavy chain プロモーター等が挙げられる。特に好適にはSM22α遺伝子プロモーターである。
【００２１】
本発明の非ヒト動物は、上記平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる非ヒト動物である。本発明における非ヒト動物としては、ヒト以外の哺乳動物が挙げられ、例えばウシ、サル、ブタ、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウスなどが挙げられる。特にモルモット、ラット、マウスなどのげっ歯類の取扱いが容易であるため好ましく、中でもマウスが好ましい。その後PCR法やサザンブロット法等により、対象遺伝子がターゲッティングされているか否かを確認することができる。PCRにおいて、プライマーは、例えばターゲティングベクターの外側のゲノムDNA領域上、及びターゲティングベクターの配列のうち薬剤耐性遺伝子上から設計することができる。サザンブロット解析は、例えば以下の通り行うことができる。ターゲティングベクターに含まれないゲノム領域を認識する１又は２種類のプローブを設計し、目的遺伝子ゲノムを含むクローンを適当な制限酵素で処理することにより得られるDNA断片と、上記プローブとのハイブリダイゼーションを行なうことにより、目的遺伝子の破壊の有無を確認することができる。
【００２２】
上記のようにして得た非ヒト動物の中から、対象遺伝子欠損ヘテロ型KO非ヒト動物を繁殖させることができる。上記のようにして得た目的遺伝子ヘテロ型KO非ヒト動物同士を交配させて、遺伝子欠損ホモKO非ヒト動物を得ることができる。KO非ヒト動物が得られたことの確認は、組織から染色体DNAを抽出し、例えばサザンブロット法やPCR法で行うことができる。さらに組織からRNAを抽出し、ノーザンブロット解析により遺伝子の発現パターンを解析することもできる。目的遺伝子であるTRPV2に対する抗体を用いてウエスタンブロッティングを行なってもよい。
【００２３】
また、樹立した非ヒト動物系統について、ヘテロ型KO非ヒト動物及びホモ型KO非ヒト動物の表現型を解析することもできる。表現型の解析は、肉眼的観察、解剖による内部の観察、各臓器の組織切片、Ｘ線撮影による観察、行動や記憶の観察、血液検査や血清生化学検査行う。解析時期は、胎生期から成体までの任意の時期であってよく、特に限定されるものではない。
【００２４】
本発明は、平滑筋特異的にTRPV2タンパク質の機能が抑制されてなる非ヒト動物を用いた高血圧症治療薬のスクリーニング方法にも及ぶ。本発明の非ヒト動物は、アンジオテンシンIIを投与しても、中膜肥厚及び高血圧症を生じない非ヒト動物である。候補化合物を本発明の非ヒト動物と同野生型非ヒト動物に投与し、表現型を比較することで、候補化合物の効果を確認し、候補化合物の作用メカニズムを確認することができる。
【００２５】
発明を実施するための最良の形態及び具体的な実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々に修飾ができることは、当業者にとって明らかである。
【実施例】
【００２６】
以下、本発明の理解を深めるために、実施例及び実験例を示して本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではないことはいうまでもない。
【００２７】
（実施例１）平滑筋特異的TRPV2ノックアウト（KO）マウスの作製
本実施例では、Cre-loxPシステムを用いた平滑筋特異的TRPV2 KOマウス（TRPV2flox/flox：TRPV2-Cre+/-（cKO））の作製方法について説明する。マウスはC57/BL6Jを用い、遺伝子はES細胞にエレクロトポーレーション法により導入した。
【００２８】
本実施例では、欠損させる対象遺伝子は、NCBI Reference Sequence: NP_035836.2に開示されるアミノ酸配列（配列番号１）をコードする遺伝子である。該対象遺伝子をloxP配列とloxP配列との間にはさみこんだTRPV2flox/floxマウス（Ｆ１）を作製した。また、Cre遺伝子をSM22α遺伝子プロモーター下流に組み込んだターゲッティングベクターを導入したSM22α-Cre+/-マウス（Ｆ１）を作製した。TRPV2のKOに係るターゲッティングベクター等の遺伝子の構成は図２に示す如くである。TRPV2flox/floxマウスとSM22α-Cre+/-マウスを交配し、ヘテロ型TRPV2flox/+：SM22α-Cre+/-マウス（Ｆ２）を作製した。TRPV2flox/+：SM22α-Cre+/-マウスをTRPV2flox/floxマウスとさらに交配し、TRPV2flox/+、TRPV2flox/flox、TRPV2flox/+：SM22α-Cre+/-(HET)及びTRPV2flox/flox：SM22α-Cre+/-(cKO)のＦ３マウスを作製した（図１ａ）。
【００２９】
上記得られたマウスのうち、TRPV2flox/flox：SM22α-Cre+/-(cKO)マウスを本発明の平滑筋特異的TRPV2 KOマウスとし、TRPV2flox/floxをコントロールとした。マウス尾から抽出したゲノムDNAにおける遺伝子発現の結果（ジェノタイピング）を図１ｂに示した。これをもとに、マウス個体の遺伝背景を確認することができる。
【００３０】
（実施例２）平滑筋特異的TRPV2 KOマウスの大動脈平滑筋細胞におけるTRPV2発現確認
本発明の平滑筋特異的TRPV2 KOマウスについて、大動脈の平滑筋細胞（中皮膜）でのTRPV2発現を確認した。実施例１でジェノタイピングを終えたマウスから、大動脈を単離し、凍結切片を作製し、TRPV2抗体にて免疫染色を行った。TRPV2抗体は、Alexa-Fluor 488が付加した2次抗体で可視化した。
その結果、コントロールでは平滑筋細胞にTRPV2の発現を認めたが、本発明の平滑筋特異的TRPV2 KOマウスではTRPV2の発現をほとんど認めなかった（図３）。
【００３１】
（実施例３）アンジオテンシンII投与による抗中皮膜肥厚
本発明の平滑筋特異的TRPV2 KOマウスにアンジオテンシンIIを一日当たり2mg/kgを4週間、皮下にオスモティックポンプを埋め込み投与した。コントロールマウスでは中膜が150mmHg以上に肥厚したが、本発明の本発明の平滑筋特異的TRPV2 KOマウスではアンジオテンシンII投与前と殆ど変わらず肥厚が認められなかった（図４）。
【００３２】
（実施例４）アンジオテンシンII投与による抗高血圧作用
本発明の平滑筋特異的TRPV2 KOマウスにアンジオテンシンIIを一日当たり2mg/kgを4週間、皮下にオスモティックポンプを埋め込み投与した。コントロールマウスでは平均血圧が150mmHg程度を示したが、本発明の平滑筋特異的TRPV2 KOマウスではアンジオテンシンII投与前と殆ど変わらず100mmHg程度を維持した（図５）。
【産業上の利用可能性】
【００３３】
以上説明したように、平滑筋特異的にTRPV2の機能が抑制された非ヒト動物、より具体的には平滑筋特異的にTRPV2をコードする遺伝子の全部又は一部の発現を抑制してなる本発明の非ヒト動物によれば、高血圧症の原因となるアンジオテンシンIIを投与した場合であっても、中膜肥厚は起こらず血圧も上昇しなかった。このことから、本発明の非ヒト動物を用いることで、本態性高血圧症の作用メカニズムの解明や本態性高血圧症に対する治療薬の開発に貢献しうる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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