(57)【要約】【課題】本発明の目的は、筋肉増強作用が高く、かつ、副作用の生じることが低減された成分を含有する筋肉増強用組成物を提供することにある。【解決手段】上記目的は、β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸及び／又はその塩と、赤ワイン及びその抽出物、黒ショウガ及びその抽出物、並びにオルニチン及びその塩からなる群から選ばれる２種以上の成分とを含有する、筋肉増強用組成物などにより解決される。本発明は、筋肉量の減少、筋肉の分解、筋肉疲労、運動能力の低下といった筋機能低下や該筋機能低下によってもたらされる種々の症状や疾患、例えば、サルコペニア、骨粗鬆症、皺、たるみなどを改善、緩和、回復、治療又は予防に加えて、筋肉量増大、筋力上昇、シェイプアップ、身体の引き締め、痩身、トレーニング時の効率的な栄養の摂取などの効果が期待できる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸及び／又はその塩と、
赤ワイン及びその抽出物、黒ショウガ及びその抽出物、並びにオルニチン及びその塩からなる群から選ばれる２種以上の成分と
を含有する、筋肉増強用組成物。
【請求項２】
β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸及び／又はその塩と、
赤ワイン及び／又はその抽出物と、
黒ショウガ及び／又はその抽出物と、
オルニチン及び／又はその塩と
を含有する、筋肉増強用組成物。
【請求項３】
β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸及び／又はその塩と、
赤ワイン及びその抽出物、並びに黒ショウガ及びその抽出物のいずれか１種以上の成分と
を含有する、筋肉増強用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、筋肉増強用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢、運動不足、運動の不能などにより筋機能が低下すると、歩行が困難になるなど、通常の生活を営む上で支障を来すことになる。さらに、筋肉量の減少は、皺やたるみなどの美容上の問題に発展する場合がある。
【０００３】
そこで、筋肉量の減少、筋肉の分解、筋肉疲労、運動能力の低下といった筋機能低下を予防改善又は緩和するものとして、筋肉増強作用を有する成分や該成分を含有する組成物が望まれている。例えば、筋肉増強作用を有する化合物としては、ステロイドホルモンが知られている。しかし、ステロイドホルモンを摂取することにより、循環器疾患などの重篤な副作用が生じることが知られている。
【０００４】
筋肉細胞の分化は、ミオゲニン、ｍｙｏＤなどの筋制御因子（ｍｕｓｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒｓ；ＭＲＦｓ）によって調節される。ＭｙｏＤを発端として、ミオゲニンが発現することにより、下流のカスケードが機能して、間葉系幹細胞は筋肉細胞へと分化する。筋肉細胞の分化を経た筋肉の再生は、老化又は慢性炎症に起因する筋委縮症を改善又は緩和することが期待できる。
【０００５】
筋肉の再生及び修復に有用な成分として、β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸（ＨＭＢ）が知られている。例えば、特許文献１には、ＨＭＢを摂取することにより、筋肉の再生及び修復に関与する筋肉前駆体細胞が活性化及び分化され、次いで筋線維へ融合することにより、新しい筋核が既存の筋線維内に見出されることが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２０１４−５０６２５４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、本発明者らが調べたところによれば、ＨＭＢが有する筋肉細胞への分化誘導などの筋肉増強作用は十分とはいえない。また、ステロイドホルモンとは異なり、筋肉増強作用が高いながらも、重篤な副作用が生じない成分はこれまでに知られていない。
【０００８】
そこで、本発明は、筋肉増強作用が高く、かつ、副作用の生じることが低減された成分を含有する筋肉増強用組成物を提供することを、本発明が解決しようとする課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために、種々の成分、とりわけ食経験のある成分について鋭意検討を積み重ねた結果、驚くべきことに、単独の摂取では筋肉増強作用が十分とはいえないＨＭＢを、特定の成分と組み合わせたところ、大きな筋肉増強作用を示すことを見出した。しかも、その作用の程度はＨＭＢを単独で用いた場合に比べて顕著に大きかったことから、ＨＭＢと特定の成分とを組み合わせることによって得られる筋肉増強作用は、相加的というよりもむしろ相乗的な作用であった。
【００１０】
その結果として、本発明者らは、筋肉増強用組成物として、ＨＭＢと、食経験のある特定の成分とを含有する組成物の創作に成功した。本発明は、かかる知見や成功例に基づいて完成された発明である。
【００１１】
したがって、本発明によれば、以下［１］〜［３］の筋肉増強用組成物が提供される。
［１］β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸及び／又はその塩と、赤ワイン及びその抽出物、黒ショウガ及びその抽出物、並びにオルニチン及びその塩からなる群から選ばれる２種以上の成分とを含有する、筋肉増強用組成物。
［２］β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸及び／又はその塩と、赤ワイン及び／又はその抽出物と、黒ショウガ及び／又はその抽出物と、オルニチン及び／又はその塩とを含有する、筋肉増強用組成物。
［３］β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸及び／又はその塩と、赤ワイン及びその抽出物、並びに黒ショウガ及びその抽出物のいずれか１種以上の成分とを含有する、筋肉増強用組成物。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の一態様の筋肉増強用組成物は、有効成分がいずれも食経験のある成分であり、摂取するに際して安全でありながら、高度な筋肉増強作用を示すことができる。本発明の一態様の筋肉増強用組成物は、このような作用を有することにより、筋肉量の減少、筋肉の分解、筋肉疲労、運動能力の低下といった筋機能低下や該筋機能低下によってもたらされる種々の症状や疾患、例えば、サルコペニア、骨粗鬆症、皺、たるみなどを改善、緩和、回復、治療又は予防することが期待できるばかりでなく、筋肉量増大、筋力上昇、シェイプアップ、痩身といった、筋機能の増強や身体の引き締めなどの要望にも応えることが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、後述する実施例に記載があるとおり、各被験物質及びコントロール溶液を用いて、ＧａｐｄｈのｍＲＮＡ発現量を内部標準として解析したミオゲニンのｍＲＮＡ発現量を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の一態様である筋肉増強用組成物の詳細について説明するが、本発明の技術的範囲は本項目の事項によってのみに限定されるものではなく、本発明はその目的を達成する限りにおいて種々の態様をとり得る。
【００１５】
筋肉増強用組成物は、β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸（ＨＭＢ）及び／又はその塩、すなわち、ＨＭＢ、ＨＭＢの塩又はこれらの両方を少なくとも含有する。
【００１６】
ＨＭＢは、通常知られているとおりの、３−ヒドロキシイソ吉草酸ともよばれ、３−メチルブタン酸のβ位の炭素にヒドロキシル基が付加した構造を有するものである。ＨＭＢの塩は、通常知られているとおりのＨＭＢの無機塩及び有機塩であれば特に限定されないが、例えば、ＨＭＢのカルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩といった金属塩などが挙げられ、好ましくはＨＭＢのカルシウム塩である。
【００１７】
筋肉増強用組成物は、ＨＭＢ及び／又はその塩に加えて、さらに特定の成分（以下、「副成分」ともよぶ。）を少なくとも含有する。筋肉増強用組成物は、含有する副成分が以下（１）〜（３）の態様をとり得ることによって、それぞれ互いに区別される：
（１）赤ワイン及びその抽出物、黒ショウガ及びその抽出物、並びにオルニチン及びその塩からなる群から選ばれる２種以上の成分
（２）赤ワイン及び／又はその抽出物、黒ショウガ及び／又はその抽出物、並びにオルニチン及び／又はその塩
（３）赤ワイン及びその抽出物、並びに黒ショウガ及びその抽出物のいずれか１種以上の成分
【００１８】
赤ワインは、通常知られているとおりのブドウの果汁を発酵処理に供し、必要に応じて貯蔵して得られるものであれば特に限定されない。赤ワインは、赤ワインに種々の成分が添加されたものであってもよく、そのようなものとしては、例えば、濃縮果汁、ブランデーを添加したシェリー、ポート、マディラ、マラガ、マルサラなどのいわゆる補強ワイン、赤ワインに薬草、香料、色素などを添加して得られる、ベルモットを代表とする混成ワインなどが挙げられる。
【００１９】
黒ショウガ（Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）は、東南アジアなどに自生することで知られているショウガ科バンウコン属の植物として知られているものであれば特に限定されず、例えば、その根、茎、葉、花、枝などの部位を用いることができるが、好ましくは根及び茎である。
【００２０】
黒ショウガは、採取した状態の未加工のものに加えて、採取した後に所定の処理に供して得られる加工物であってもよい。加工物としては、例えば、乾燥粉末、細片化物及びその乾燥粉末、搾汁及びその乾燥粉末、抽出物及びその乾燥粉末などが挙げられるが、これらに限定されない。具体的には、加工、貯蔵、運搬などの容易性や使用形態の汎用性といった観点から、乾燥粉末であることが好ましい。
【００２１】
赤ワインの抽出物及び黒ショウガの抽出物は、赤ワインや黒ショウガにおける成分が抽出された物であれば特に限定されないが、例えば、赤ワインや黒ショウガが含有する成分を、常法に従って溶媒で抽出して得られる抽出液、その希釈液や濃縮液、又はそれらの乾燥物やその粉末などが挙げられる。例えば、赤ワインが含有する成分としてはポリフェノールなどが挙げられ、黒ショウガが含有する成分としては５，７−ジメトキシフラボンといったポリメトキシフラボノイドなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２２】
抽出に使用される溶媒としては、例えば、常温水、温水、熱水などの水；エタノール、メタノール、イソプロパノール、ブタノールなどの低級アルコール；酢酸エチル、酢酸メチルなどの低級エステル；アセトン；これらと水との混合溶媒などが挙げられる。混合溶媒としては、例えば、アセトン／水（２／８〜８／２、体積比）混合物、エタノール／水（２／８〜８／２、体積比）混合物などが挙げられる。
【００２３】
抽出方法は特に限定されないが、例えば、赤ワインや黒ショウガに対して２〜２０倍質量の溶媒を加え、０℃〜溶媒の還流温度の範囲で数分〜数十時間、静置、振盪、攪拌、還流などの任意の条件下にて抽出を行う方法などが挙げられる。抽出作業後、ろ過、遠心分離などの固液分離操作を行い、不溶な固形物を除去することが好ましい。これに、必要に応じて希釈、濃縮などの操作を行うことにより、抽出物を得ることができる。さらに、不溶物についても同じ操作を繰り返して抽出し、その抽出物を先の抽出物と合わせて用いてもよい。これらの抽出物は、当業者が通常用いる精製方法により、さらに精製して使用してもよい。
【００２４】
抽出物から乾燥物を得る方法は特に限定されず、例えば、抽出物やその濃縮物を、噴霧乾燥、凍結乾燥、減圧乾燥、流動乾燥などの当業者が通常用いる乾燥処理に供する方法などが挙げられる。さらに、このようにして得られた乾燥物を、当業者に知られる方法を用いて粉末化して使用することが可能である。
【００２５】
オルニチンは、通常知られているとおりの、２，５−ジアミノペンタン酸ともよばれるアミノ酸の１種である。オルニチンの塩は、通常知られているとおりのオルニチンの無機塩及び有機塩であれば特に限定されないが、例えば、オルニチンのカルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩といった金属塩などが挙げられる。
【００２６】
ＨＭＢ及びその塩、赤ワイン及びその抽出物、黒ショウガ及びその抽出物、並びにオルニチン及びその塩のそれぞれは、当業者により通常知られている方法によって製造したものでもよいし、市場に流通しているものであってもよい。
【００２７】
筋肉増強用組成物は、ＨＭＢ及び／又はその塩と上記態様（１）〜（３）の副成分とを組み合わせて含有することによって、筋肉増強作用を示す。本明細書における「筋肉増強作用」とは、例えば、筋芽細胞の分化誘導、筋肉の再生や修復、筋肉量の増加、筋肉の分解抑制、筋肉疲労の回復促進及び運動能力向上のうち少なくともいずれか１つの作用をいう。筋肉増強用組成物は、後述する実施例に記載があるとおり、筋芽細胞によるミオゲニンの発現量が増大することによって、筋肉細胞の分化を経て筋肉の再生や修復をなし得る。
【００２８】
筋肉増強用組成物が有する筋肉増強作用の程度は、例えば、後述する実施例に記載があるとおりの細胞株を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏにてミオゲニンの発現量を調べた場合に、ミオゲニンの発現量がＨＭＢを単独で用いた場合よりも大きくなる程度であることが挙げられ、好ましくはＨＭＢを単独で用いた場合に対して１．１倍以上であり、より好ましくはＨＭＢを単独で用いた場合に対して１．５倍以上であり、さらに好ましくはＨＭＢを単独で用いた場合に対して２．０倍以上であり、なおさらに好ましくはＨＭＢを単独で用いた場合に対して２．５倍以上である。
【００２９】
筋肉増強用組成物の製造方法は特に限定されず、例えば、室温や加温下で、各成分を含有せしめることにより、固形状組成物とすることができる。または、この固形状組成物を、水などの溶媒に溶解させて液状組成物とすることができる。さらに、各成分の液状物に、他の固形状成分を加えて混合することにより液状組成物とすることができる。なお、得られた液状組成物は、乾燥処理を経て、粉末化しても良い。この場合の乾燥処理の方法としては、噴霧乾燥、凍結乾燥などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
筋肉増強用組成物に含有されるＨＭＢ及び／又はその塩並びに上記態様（１）〜（３）の副成分の含有量は、筋肉増強作用が認められる程度の量であれば特に限定されないが、経口用組成物としての下限値は、例えば、組成物全体に対して、０．０００１ｗｔ％以上、好ましくは０．００１ｗｔ％以上、より好ましくは０．０１ｗｔ％以上であり、上限値は９９ｗｔ％以下、好ましくは９５ｗｔ％以下、より好ましくは９０ｗｔ％以下である。化粧品などの非経口用組成物として下限値は、例えば、０．００００１ｗｔ％以上、好ましくは０．０００１ｗｔ％以上、より好ましくは０．００１ｗｔ％以上であり、上限値は９０ｗｔ％以下、好ましくは８０ｗｔ％以下、より好ましくは７０ｗｔ％以下である。
【００３１】
筋肉増強用組成物は、筋肉増強作用を得ることを目的とした種々の形態で利用され得る。例えば、特別な処理を加えることなく種々の目的に利用してもよい。筋肉増強用組成物を経口用として用いる場合、剤形は特に限定されないが、例えば、筋肉増強用の医薬品組成物、医薬部外品組成物及び飲食品組成物などの形態をとり得る。
【００３２】
飲食品組成物の具体的な一態様は、例えば、生体に対して一定の機能性を有する飲食品である機能性飲食品である。機能性飲食品は、例えば、特定保健用飲食品、機能性表示飲食品、栄養機能飲食品、保健機能飲食品、特別用途飲食品、栄養補助飲食品、健康補助飲食品、サプリメント、美容飲食品などのいわゆる健康飲食品に加えて、乳児用飲食品、妊産婦用飲食品、高齢者用飲食品などの特定者用飲食品を包含する。さらに機能性飲食品は、コーデックス（ＦＡＯ／ＷＨＯ合同食品規格委員会）の食品規格に基づく健康強調表示（Ｈｅａｌｔｈ  ｃｌａｉｍ）が適用される健康飲食品を包含する。
【００３３】
筋肉増強用組成物の摂取量は特に限定されず、摂取者に求められる筋肉量の程度や摂取態様などに応じて適宜設定され得るが、例えば、摂取１回量として、摂取者の体重を基準として、ＨＭＢ及び／又はその塩並びに上記態様（１）〜（３）の副成分の総量について１０〜１０，０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１０〜１，０００ｍｇ／ｋｇである。
【００３４】
筋肉増強用組成物の１日の摂取量は特に限定されず、例えば、ＨＭＢ及び／又はその塩並びに上記態様（１）〜（３）の副成分の総量について１〜１０ｇ、好ましくは１．５〜４ｇである。
【００３５】
上述したとおり、筋肉増強用組成物の利用形態は特に限定されないが、例えば、経口用筋肉増強用組成物とすることができる。経口用筋肉増強用組成物の形態は特に限定されず、任意の形態とすることができる。経口用筋肉増強用組成物の形態としては、例えば、経口摂取に適した形態、具体的には液状、粉末状、粒状、顆粒状、錠状、棒状、板状、ブロック状、固形状、丸状、ペースト状、ハードカプセルやソフトカプセルのようなカプセル状、カプレット状、タブレット状、ゲル状などの各形態が挙げられる。
【００３６】
筋肉増強用組成物は、容器に詰めて密封した容器詰組成物とすることができる。容器は特に限定されないが、例えば、アルミなどの金属、紙、ＰＥＴやＰＴＰなどのプラスチック、１層又は積層（ラミネート）のフィルム袋、レトルトパウチ、真空パック、アルミ容器、プラスチック容器、瓶、缶などの包装容器が挙げられる。筋肉増強用組成物は、経時的な変質を避けるために、容器に詰めて密封した後に、加圧及び／又は加熱などにより殺菌処理したものであることが好ましい。
【００３７】
筋肉増強用組成物の使用方法は特に限定されないが、例えば、筋肉増強用組成物をそのまま、水などとともに、又は水などで希釈するなどして、飲むことにより経口摂取することができる。摂取者の好みなどに応じて、筋肉増強用組成物と他の固体物や液状物とを混ぜて経口摂取してもよい。筋肉増強用組成物を口腔崩壊剤形とした場合は、水なしで経口摂取することができる。
【００３８】
筋肉増強用組成物は、ＨＭＢ及び／又はその塩と上記態様（１）〜（３）の副成分とを少なくとも含有すればよいが、これらとその他の成分とを組み合わせたものとすることができる。その他の成分としては特に限定されないが、例えば、増粘剤、光沢剤、製造用剤などをその他の成分として用いることができる。これら以外にも、種々の賦形剤、結合剤、滑沢剤、安定剤、希釈剤、増量剤、乳化剤、着色料、香料、香油などをその他の成分として用いることができる。その他の成分の含有量は、筋肉増強用組成物の形態などに応じて適宜選択することができる。
【００３９】
筋肉増強用組成物を非経口用組成物とする場合、例えば、化粧品に適した形態として使用することができる。すなわち、筋肉増強用組成物の一態様は、化粧用組成物である。例えば、筋肉増強用組成物は、そのままで、又は通常化粧品の加工に使用される添加物と混合して、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤などの種々の形態に加工され得る。具体的には、化粧水、化粧クリーム、乳液、クリーム、パック、ヘアトニック、ヘアクリーム、シャンプー、ヘアリンス、トリートメント、洗顔剤、ファンデーション、育毛剤、水性軟膏、スプレーなどとして利用できる。
【００４０】
筋肉増強用組成物は、その筋肉増強作用により、これを使用することは、歩行困難者、運動障害者などの筋機能の低下によってもたらされる症状や疾患に罹患する者及びそのリスクがある者、直接的及び間接的に筋機能の低下に起因するその他の疾患に罹患する者及びそのリスクがある者に対しての健康維持に有用である。また、筋肉増強用組成物は、筋肉の衰えを感じる中高年者や運動不足者だけでなく、筋肉量増大、筋力上昇、シェイプアップ、身体の引き締め、痩身、トレーニング時の効率的な栄養の摂取などの要望をもつ若年者にとっても有用である。
【００４１】
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではなく、本発明の課題を解決し得る限り、本発明は種々の態様をとることができる。
【実施例】
【００４２】
以下のとおりに、β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸（ＨＭＢ）と副成分との組み合わせによる、筋芽細胞の分化マーカーであるミオゲニン（Ｍｙｏｇｅｎｉｎ；Ｍｙｏｇ）の発現促進量を評価した。
【００４３】
（１）被験物質
被験物質として以下のものを用いた。
・ＨＭＢ：市販のＨＭＢカルシウム
・赤ワイン：市販の赤ワイン抽出物（赤ワインの搾りかすのエタノール抽出物を噴霧乾燥したもの）
・黒ショウガ：市販の黒ショウガ抽出物（黒ショウガのエタノール抽出物を噴霧乾燥したもの）
・オルニチン：市販のＬ−オルニチン塩酸塩
【００４４】
０．５ｖｏｌ％ＤＭＳＯを含有する２ｖｏｌ％Ｈｏｒｓｅ  Ｓｅｒｕｍ−ＤＭＥＭ（２％ＨＳ−ＤＭＥＭ）分化誘導培地（０．５％ＤＭＳＯ−２％ＨＳ−ＤＭＥＭ）を溶媒として、被験物質を下記に示す所定濃度になるように溶解することにより被験物質溶液を調製した。
ＨＭＢ  １０００μｇ／ｍＬ
赤ワイン  ６．２５μｇ／ｍＬ
黒ショウガ  ６．２５μｇ／ｍＬ
オルニチン  ５０μｇ／ｍＬ
【００４５】
（２）被験試料
被験物質の最終濃度が５０μｇ／ｍＬになるように、被験物質溶液を０．５％ＤＭＳＯ−２％ＨＳ−ＤＭＥＭに加えて、表１（単位はμｇ／ｍＬ）に示す被験試料を調製した。
【表１】
2018090504.tif 000003
【００４６】
（３）細胞培養
３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で、１０ｖｏｌ％ＦＢＳ−ＤＭＥＭ培地を入れた７５ｃｍ２フラスコを用いて、マウス骨格筋由来細胞株Ｃ２Ｃ１２を培養した。
【００４７】
培養後、トリプシン処理により浮遊させた細胞を７５ｃｍ２フラスコから回収し、細胞数を計測した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートの各ウェルに２，０００ｃｅｌｌｓ／ウェルの細胞密度にて播種した。細胞を播種した９６ウェルプレートを、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で７２時間培養した。
【００４８】
培養後、ウェル内の培地を取り除き、各ウェルに２％ＨＳ−ＤＭＥＭ  ２００μＬを加えて洗浄した。洗浄後の各ウェルに、被験試料１〜８を加えて、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間培養した。コントロールとして、被験試料を含まない０．５％ＤＭＳＯ−２％ＨＳ−ＤＭＥＭ、分化誘導をかけないネガティブコントロールとして、１０％ＦＢＳ−ＤＭＥＭを添加して培養した。
【００４９】
（４）遺伝子発現解析
培養後、培地を除去し、各ウェルをＰＢＳ  ２００μＬ／ウェルで１回洗浄した。次いで、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（キアゲン社）を用いてｍＲＮＡを回収し、ＲｅｖｅｒＴｒａ  Ａｃｅ（登録商標）  ｑＰＣＲ  ＲＴ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ  ｗｉｔｈ  ｇＤＮＡ  Ｒｅｍｏｖｅｒ（東洋紡社）を用いてｃＤＮＡを作製した。
【００５０】
得られたｃＤＮＡを鋳型として、下記のプライマー（キアゲン社）を用いて、ＱｕａｎｔｉＮｏｖａ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（キアゲン社）により定量リアルタイムＰＣＲを行い、Ｇａｐｄｈ及びミオゲニンのｍＲＮＡ発現量を測定した。
Ｇａｐｄｈ：Ｍｍ＿Ｇａｐｄｈ＿３＿ＳＧ  ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｐｒｉｍｅｒ  Ａｓｓａｙ  （ＱＴ０１６５８６９２）
Ｍｙｏｇ：Ｍｍ＿Ｍｙｏｇ＿１＿ＳＧ  ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｐｒｉｍｅｒ  Ａｓｓａｙ  （ＱＴ００１１２３７８）
【００５１】
解析は相対定量により行い、ＧａｐｄｈのｍＲＮＡ発現量を内在性コントロールとしてｍＲＮＡ量を補正した。
【００５２】
（５）評価
ＨＭＢと副成分との組み合わせによる、ミオゲニンのｍＲＮＡ発現量の測定結果（内在性コントロールに対する相対発現量）を比較例１の値を１にした時の相対値として図１に示す。
【００５３】
図１に示されているとおりに、ＨＭＢ単独よりも、ＨＭＢと赤ワイン、及び黒ショウガといった副成分とを組み合わせた方が、ミオゲニン発現量は大きかった。
【００５４】
そして、驚くべきことに、ＨＭＢと赤ワイン、又は黒ショウガとの組み合わせによる発現量からＨＭＢ単独の発現量を差し引いて得られる発現量に基づけば、ＨＭＢと組み合わせるべき副成分を、１種類よりも、２種類にすることにより、相加的よりもむしろ相乗的にミオゲニン発現量は大きくなった。
【００５５】
さらに、ＨＭＢと単独で組み合わせてもミオゲニンの発現量に影響しなかったオルニチンを、黒ショウガ、若しくは赤ワインの何れか、又はそれらの両方と組み合わせることで、ミオゲニンの発現量が飛躍的に増大した。
【００５６】
以上の結果から、ＨＭＢは、赤ワイン、及び／又は黒ショウガと組み合わせることによって、ミオゲニンのｍＲＮＡ発現量を促進すること、オルニチンはこの効果をさらに増強することがわかった。そして、このことより、これらの組み合わせは、筋芽細胞の分化誘導を促し、もって筋肉増強作用を有することがわかる。
【００５７】
＜製造例１〜６＞
下記表２の配合にて、ＨＭＢ及び赤ワイン、黒ショウガ、オルニチンを含有する顆粒剤を製造した。
【表２】
2018090504.tif 000004
【００５８】
＜製造例７〜１２＞
下記表３の配合にて、ＨＭＢ及び赤ワイン、黒ショウガ、オルニチンを含有する顆粒剤を製造した。
【表３】
2018090504.tif 000005
【００５９】
＜製造例１３〜１８＞
下記表４の配合にて、ＨＭＢ及び赤ワイン、黒ショウガ、オルニチンを含有する粉末飲料を製造した。
【表４】
2018090504.tif 000006
【００６０】
＜製造例１９〜２４＞
下記表５の配合にて、ＨＭＢ及び赤ワイン、黒ショウガ、オルニチンを配合し、ゼラチン及びグリセリンを含む被膜で被包し、ソフトカプセル剤を製造した。
【表５】
2018090504.tif 000007
【００６１】
＜製造例２５〜３０＞
下記表６の配合にて、ＨＭＢ及び赤ワイン、黒ショウガ、オルニチンを配合し、ゼラチンを含む被膜で被包し、ハードカプセル剤を製造した。
【表６】
2018090504.tif 000008
【００６２】
＜製造例３１〜３６＞
下記表７の配合にて、ＨＭＢ及び赤ワイン、黒ショウガ、オルニチンを含有する液体飲料を製造した。
【表７】
2018090504.tif 000009
【００６３】
＜製造例３７〜４２＞
下記表８の配合にて、ＨＭＢ及び赤ワイン、黒ショウガ、オルニチンを含有する錠剤を製造した。
【表８】
2018090504.tif 000010
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明の一態様の筋肉増強用組成物は、筋肉増強作用を有することから、筋機能が低下した者、筋肉の衰えを感じる中高年者や運動不足者の健康維持に利用可能であるだけでなく、筋肉量増大、筋力上昇、身体の引き締めなどの要望をもつ若年者にとっても有用である。
【図１】
2018090504.tif 000011