(57)【要約】【課題】新たな表皮細胞増殖促進剤、Ｉ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進剤の提供。【解決手段】コゴミ抽出物を有効成分とする新たな表皮細胞増殖促進剤、Ｉ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
コゴミ抽出物を有効成分とする表皮細胞増殖促進剤。
【請求項２】
コゴミ抽出物が水、アルコール及びこれらの混合溶媒から選ばれる溶媒による抽出物である請求項１記載の表皮細胞増殖促進剤。
【請求項３】
コゴミ抽出物を有効成分とするＩ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進剤。
【請求項４】
Ｉ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進が、皮膚線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進である請求項３記載の産生促進剤。
【請求項５】
コゴミ抽出物が、水、アルコール及びこれらの混合溶媒から選ばれる溶媒による抽出物である請求項３又は４記載の産生促進剤。
【請求項６】
コゴミ抽出物を有効成分とする表皮細胞増殖促進用化粧料組成物又は食品組成物。
【請求項７】
コゴミ抽出物が、水、アルコール及びこれらの混合溶媒から選ばれる溶媒による抽出物である請求項６記載の表皮細胞増殖促進用化粧料組成物又は食品組成物。
【請求項８】
コゴミ抽出物を有効成分とするＩ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進用化粧料組成物又は食品組成物。
【請求項９】
Ｉ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進が、皮膚線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進である請求項８記載の産生促進用化粧料組成物又は食品組成物。
【請求項１０】
コゴミ抽出物が、水、アルコール及びこれらの混合溶媒から選ばれる溶媒による抽出物である請求項８又は９記載の産生促進用化粧料組成物又は食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、表皮細胞増殖促進剤、Ｉ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
表皮細胞は、皮膚の最外層に存在し、外部からの異物の侵入や体の水分の蒸散を防ぐバリアとなって、内部を保護している。また、真皮線維芽細胞は、表皮細胞の内部にあり、コラーゲン線維、エラスチン、ヒアルロン酸等を産生している。
【０００３】
Ｉ型コラーゲンは、線維性コラーゲンであり、骨及び皮膚に多く含まれており、骨や皮膚の弾力性に関与している。一方、ヒアルロン酸は、関節、硝子体、皮膚などの細胞外マトリックスに広く分布しており、潤滑作用、緩衝作用、保湿作用等を有している。
【０００４】
関節や皮膚におけるこれらの成分の含有量が低下すると、潤滑作用、緩衝作用、保湿作用が十分でなくなるため、皮膚においてはしわかさつきが生じる。皮膚のこれらの症状を予防、改善するため、Ｉ型コラーゲン、ヒアルロン酸やその原料であるグルコサミンを塗布、経口摂取が行われている。
【０００５】
しかしながら、食品や化粧品中に配合されたＩ型コラーゲンやヒアルロン酸が吸収され、作用部位に到達するか否かは不明である。
【０００６】
一方、コゴミはイワデンダ科の多年性シダの一種であり、春先に出た新芽を山菜として食用にしている。別名クサソテツという。コゴミ抽出物の作用としては、抗ウイルス作用（特許文献１）、体臭の抑制（特許文献２）、アロマターゼ活性促進作用（特許文献３）、免疫細胞賦活作用（特許文献４）、抗酸化作用（非特許文献１）などが報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平６−２５００３号公報
【特許文献２】特開２００２−８７９７３号公報
【特許文献３】特開２００８−８１４４０号公報
【特許文献４】特開２０１０−１５５８１１号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】日本食品科学工業会会誌，４９，２５７−２６６（２００２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
前記の如くＩ型コラーゲン及びヒアルロン酸は、吸収され、作用部位に到達するか否か不明であることから、天然成分で吸収されやすい成分を用いてＩ型コラーゲンやヒアルロン酸を産生させるためのＩ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進剤が望まれている。また、皮膚のバリア機能を向上させるための成分も望まれている。
【００１０】
従って、本発明の課題は、新たな表皮細胞増殖促進剤、Ｉ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
そこで、本発明者は、新たな表皮細胞増殖促進剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤及びヒアルロン酸産生促進剤を探索すべく、種々の天然由来成分の機能を検討してきたところ、コゴミ抽出物が極めて低濃度で表皮細胞増殖促進作用、Ｉ型コラーゲン及びヒアルロン酸の産生促進作用を示し、かつ細胞毒性が低いことを見出し、本発明を完成した。
【００１２】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔３〕を提供するものである。
【００１３】
〔１〕コゴミ抽出物を有効成分とする表皮細胞増殖促進剤。
〔２〕コゴミ抽出物が水、アルコール及びこれらの混合溶媒から選ばれる溶媒による抽出物である〔１〕記載の表皮細胞増殖促進剤。
〔３〕コゴミ抽出物を有効成分とするＩ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進剤。
〔４〕Ｉ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進が、皮膚線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進である〔３〕記載の産生促進剤。
〔５〕コゴミ抽出物が、水、アルコール及びこれらの混合溶媒から選ばれる溶媒による抽出物である〔３〕又は〔４〕記載の産生促進剤。
〔６〕コゴミ抽出物を有効成分とする表皮細胞増殖促進用化粧料組成物又は食品組成物。
〔７〕コゴミ抽出物が、水、アルコール及びこれらの混合溶媒から選ばれる溶媒による抽出物である〔６〕記載の表皮細胞増殖促進用化粧料組成物又は食品組成物。
〔８〕コゴミ抽出物を有効成分とするＩ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進用化粧料組成物又は食品組成物。
〔９〕Ｉ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進が、皮膚線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進である〔８〕記載の産生促進用化粧料組成物又は食品組成物。
〔10〕コゴミ抽出物が、水、アルコール及びこれらの混合溶媒から選ばれる溶媒による抽出物である〔８〕又は〔９〕記載の産生促進用化粧料組成物又は食品組成物。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の表皮細胞増殖促進剤、Ｉ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進剤は、細胞毒性が低く、かつ極めて低濃度で表皮細胞の増殖を促進し、Ｉ型コラーゲン及びヒアルロン酸産生を促進する。従って、コゴミ抽出物の低用量の塗布や摂取で表皮細胞の増殖を促進し、また皮膚線維芽細胞のＩ型コラーゲンとヒアルロン酸の両方の産生を促進させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】１，３−ブタンジオールの皮膚線維芽細胞の細胞毒性を示す。
【図２】コゴミエキスの皮膚線維芽細胞の細胞毒性を示す。
【図３】コゴミエキスの表皮細胞増殖促進作用。
【図４】コゴミエキスのＩ型コラーゲン産生促進作用を示す。
【図５】コゴミエキスのヒアルロン酸産生促進作用を示す。
【図６】コゴミエキスの表皮細胞におけるヒアルロン酸産生促進作用を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の表皮細胞増殖促進剤、Ｉ型コラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進剤の有効成分は、コゴミ抽出物である。
【００１７】
コゴミ（別名クサソテツ）は、イワデンダ科クサソテツ属（Matteuccia struthiopteris）の多年性シダの一種である。日本の各地に自生している。葉、茎、花、根等、全草も用いることができるが、若芽を用いるのが好ましい。
【００１８】
コゴミの抽出溶媒としては、水、アルコール及びこれらの混合溶媒が好ましい。ここでアルコールとしては、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール−グリセリン等の多価アルコールが挙げられる。このうち、水、エタノール又はこれらの混合溶媒が特に好ましい。
【００１９】
抽出方法としては、コゴミを前記抽出溶媒に浸漬して行うことができる。抽出溶媒の温度は５℃〜沸点までの温度とすることができる。またコゴミは、生の状態で用いてもよいし、凍結保存したものを用いてもよいし、乾燥したものを用いてもよい。
【００２０】
コゴミ抽出物は、そのまま使用してもよいが、必要に応じて濃縮、乾固したものを用いてもよいし、濃縮、乾固物を水や極性溶媒に再溶解して用いてもよい。また、必要に応じて、脱色、脱臭、脱塩等の精製処理をして用いてもよい。
【００２１】
後記実施例に示すように、コゴミ抽出物は、極めて低濃度で表皮細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞におけるＩ型コラーゲン産生促進作用及びヒアルロン酸産生促進作用を示す。また、表皮細胞におけるヒアルロン酸産生も促進する。このような強力な表皮細胞増殖促進作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用及びヒアルロン酸産生促進作用は、特開２００８−８１４４０号公報（特許文献３）のアロマターゼ活性促進作用（０．１３ｍｇ／ｍＬで作用発揮）、特開２０１０−１５５８１１号公報（特許文献４）の免疫細胞賦活作用（０．２５ｍｇ／ｍＬ添加で作用発揮）等の従来のコゴミ抽出物の作用からは全く予測できないものである。
【００２２】
本発明の表皮細胞増殖促進剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤及びヒアルロン酸産生促進剤は、皮膚への塗布、経口摂取等により、表皮細胞増殖促進作用、Ｉ型コラーゲン及びヒアルロン酸の産生促進作用を奏する。従って、本発明の表皮細胞増殖促進剤、Ｉ型コラーゲン産生促進剤及びヒアルロン酸産生促進剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品、特定保健用食品組成物、機能性食品組成物、美容食品組成物として有用である。
【００２３】
本発明の表皮細胞増殖促進剤、Ｉ型コラーゲン又はヒアルロン酸産生促進剤の投与形態としては、経口投与、注射による投与、経皮投与等が挙げられる。医薬品、医薬部外品、機能性表示食品等として用いる場合には、錠剤、顆剤、細粒剤、カプセル剤、トローチ剤等の経口投与製剤；クリーム剤、軟膏剤、乳液、化粧水等の皮膚外用剤又は化粧料組成物が好ましい。また、特定保健用食品、機能性表示食品の場合には、飲料、ヨーグルト等の通常の食品と同様の形態であってもよい。
【００２４】
上記の形態（組成物）へのコゴミ抽出物の配合量は、特に限定されないが、コゴミ抽出物の乾燥固形分量として０．００００１質量％〜０．５質量％が好ましく、０．００００１質量％〜０．１質量％がより好ましい。
【００２５】
上記食品組成物等の経口投与用組成物中には、前記有効成分以外に、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を配合できる。また化粧料組成物、皮膚外用組成物の場合には、前記有効成分以外に、各種油剤、色素、防腐剤、界面活性剤、増粘剤等を配合できる。さらに、他のＩ型コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤を配合することもできる。
【実施例】
【００２６】
次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。
【００２７】
実施例１（コゴミエキスの作製）
冷凍保存していた７５ｇのコゴミにエタノール６７５ｍＬを加え、ミキサーにて６０秒ホモゲナイズした。５０ｍＬ遠沈管に入れ、４℃、３０００ｒｐｍにて１０分間遠心後、上清を回収した。回収した上清をエバポレータにて濃縮後、１２０ｍＬの５０％（ｗ／ｖ）１，３−ブタンジオールで懸濁、Ｎｏ．５Ｃろ紙にてろ過し、コゴミエキスを得た。コゴミエキスは−３０℃で保存した。
【００２８】
実施例２（薬理試験）
Ａ．方法
（１）細胞培養
１）線維芽細胞
正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＷＳ−１、ＡＴＣＣより入手）を１０％ＦＢＳ、ピルビン酸、非必須アミノ酸を含むＥａｇｌｅ’ｓ  ＭＥＭにて増殖させた。
１）−１  細胞毒性試験においては、９６ｗｅｌｌプレートに２×１０3／ｗｅｌｌで播種後、翌日にピルビン酸、非必須アミノ酸を含むＥａｇｌｅ’ｓ  ＭＥＭにて培地交換し、さらに２４時間後に各濃度のコゴミエキス、あるいは各濃度の１，３−ブタンジオールを添加した。２４時間後にＷＳＴ−１（細胞増殖活性キット）を１０μＬずつ添加し６０分後に４５０ｎｍにて吸光度を測定した。
１）−２  Ｉ型コラーゲン量及びヒアルロン酸量測定においては、２４ｗｅｌｌプレートに１×１０4／ｗｅｌｌで播種後、翌日にピルビン酸、非必須アミノ酸を含むＥａｇｌｅ’ｓ  ＭＥＭにて培地交換し、さらに２４時間後に各濃度のコゴミエキス、各濃度の１，３−ブタンジオールを添加した。７２時間後に培養上清を回収し、サンプルとした。
２）表皮細胞
表皮細胞としてクラボウ社製を用いた。培地として５０ｍＬのＨｕＭｅｄｉａ・ＫＢ２に５０μＬのｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ、５０μＬのＩｎｓｕｌｉｎ、５０μＬのＥＧＦ、５０μＬのｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ及び２００μＬのウシ脳下垂体抽出物を含むもので培養した。
２）−１  細胞増殖に対する試験においては、９６ｗｅｌｌプレートに２×１０3／ｗｅｌｌで播種後、翌日に３０μＬのｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ、５０μＬのＩｎｓｕｌｉｎ、５０μＬのｇｅｎｔａｍｉｃｉｎを含む３０ｍＬのＭＥＭ及び１５ｍＬのＨＡＭ  Ｆ−１２培地の混合培地にて培地交換し、さらに２４時間後に各濃度のコゴミエキス、２％、０．２％の１，３−ブタンジオールを添加した。２４時間後にＷＳＴ−１（細胞増殖活性キット）を１０μＬずつ添加し６０分後に４５０ｎｍにて吸光度を測定した。
【００２９】
（２）コラーゲン量の測定
コゴミエキス添加７２時間後の培養上清２０μＬを６％ポリアクリルアミド電気泳動に供し、その後ウエスタンブロッティングを行った。Ｉ型コラーゲン量は抗ヒトＩ型コラーゲン抗体（Ｌｏｃｋｌａｎｄ社製）を用い、二次抗体として、ＨＲＰ−抗ｒａｂｂｉｔ抗体（ＧＥ社製）を用いた。定量は、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｉｍａｇｅｒ  ６００（ＧＥ社製）を用いて行った。
【００３０】
（３）ヒアルロン酸量の測定
７２時間培養した培養上清をＥＬＩＳＡキットにて測定した。
【００３１】
Ｂ．結果
（１）細胞毒性試験
コゴミエキスを溶解している１，３−ブタンジオール（ＢＤ）の線維芽細胞での細胞毒性試験を行ったところ、０．１％以下では細胞数に影響を与えなかった（図１）。
次に線維芽細胞でのコゴミエキスの細胞毒性試験を行ったところ、２％（ＢＤ濃度１％）では、顕著に細胞数が減少したが、０．２％以下ではコントロールと変化がなかった（図２）。
【００３２】
（２）表皮細胞に対する作用
表皮細胞に対しては、０．０００００２％及び０．００００２％でコントロールと比較して有意に増殖を促進した（図３）。
【００３３】
（３）コラーゲン量
線維芽細胞にコゴミエキス添加７２時間培養後の培養上清を用いてＩ型コラーゲン量を測定した。その結果、Ｉ型コラーゲン量は誤差が大きかったものの、０．０２〜０．０００００２％において増加傾向が認められた（図４）。
【００３４】
（４）ヒアルロン酸量
線維芽細胞が産生するヒアルロン酸量は、０．００００２％及び０．０００００２％で、コントロールと比較して増加傾向を示した（図５）。
また、コゴミエキスは、表皮細胞におけるヒアルロン酸産生量も増加させることも判明した（図６）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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