(57)【要約】【課題】膜濾過装置、特に水又は廃水処理工程における透過性及び流れを改善するための方法及び組成物を提供すること。【解決手段】本発明は、膜濾過装置、特に水又は廃水処理工程における透過性及び流れを改善するための方法及び組成物。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つの工程に使用される膜の透過性又は１つの工程に使用される膜を通しての流れを改善するための方法であって、前記膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物に前記膜を供することを含んで成る方法。
【請求項２】
前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の細菌株を包含する、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記１又は２以上の微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成微生物である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記１又は２以上の細菌株が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成細菌株である、請求項２記載の方法。
【請求項５】
前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる、１又は２以上の細菌株、１又は２以上の菌類株又は１又は２以上の細菌及び菌類株の混合物を包含する、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記膜が、バチルスssp. (Bacillus ssp.)、例えばバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）; バチルス・アトロファエウス（Bacillus atrophaeus）; バチルス・アゾトホルマンス（Bacillus azotoformans）; バチルス・ブレビス（Bacillus brevis）; バチルス・セレウス（Bacillus cereus）; バチルス・サークランス（ Bacillus circulans）; バチルス・クラウジ（Bacillus clausii）; バチルス・コーグランス（Bacillus coagulans）; バチルス・ファーマス（Bacillus firmus）; バチルス・フレキウス（Bacillus flexus）; バチルス・フシホルミス（Bacillus fusiformis）; バチルス・グロビスポラス（Bacillus globisporus）; バチルス・グルカノライチカス（Bacillus glucanolyticus）; バチルス・インンフェルマス（Bacillus infermus）; バチルス・ラエボラクチカス（Bacillus laevolacticus）; バチルス・リケニホルミス（Bacillus licheniformis）; バチルス・マリナス（Bacillus marinus）; バチルス・メガテリウム（Bacillus megaterium）; バチルス・モジャベンシス（Bacillus mojavensis）; バチルス・ミコイデス（Bacillus mycoides）; バチルス・パリダス（Bacillus pallidus）; バチルス・パラブレビス（Bacillus parabrevis）; バチルス・パステウリ（Bacillus pasteurii）; バチルス・ポリミキサ（Bacillus polymyxa）; バチルス・ポピリアエ（Bacillus popiliae）; バチルス・プミラス（Bacillus pumilus）; バチルス・スファエリカス（Bacillus sphaericus）; バチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）; バチルス・サーモアミロボランス（Bacillus thermoamylovorans）;又はバチルス・スリンギエンシス（Bacillus thuringiensis）の株に供される、請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記改善された流れがより小さな膜表面積を有する膜の使用を可能にする、請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記膜が膜バイオリアクター装置の一部である、請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記工程が水処理工程である、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記１又は２以上の微生物がクオラムセンシング阻害を通してバイオフィルム形成を妨げるか又は低めることができる、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記１又は２以上のバチルスが、
受託番号ＡＴＣＣ１４５８１を有するバチルス・メガテリウム株；
受託番号ＡＴＣＣ７００３８５を有するバチルス・プミラス株；
受託番号ＡＴＣＣ３５６８１を有するパエニバチルス・アゾトフィキサンス（Paenibacillus azotofixans）株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１４を有するバチルス・リケニホルミス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１５を有するバチルス・リケニホルミス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１６を有するバチルス・プミラス株；
受託番号ＡＴＣＣ  ６０５１Ａを有するバチルス・サブチリス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１７を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１８を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１３６を有するバチルス・サブチリス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０３０４を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０３４９を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−３１４２を有するバチルス・メガテリウム株；
受託番号ＰＴＡ−７５４１を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４２を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４３を有するバチルス・アトロファエウス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４４を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４５を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４６を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４７を有するバチルス・サブチリス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４９を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７７９０を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７７９１を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７７９２を有するバチルス・アトロファエウス株；及び
受託番号ＰＴＡ−７７９３を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；又は前記複数の株の混合物から成る群から選択される、請求項６記載の方法。
【請求項１２】
１つの工程に使用される膜の決定的流れを高める方法であって、前記膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物に前記膜を供することを含んで成る方法。
【請求項１３】
前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の細菌株を包含する、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記１又は２以上の微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成微生物である、請求項１２記載の方法。
【請求項１５】
前記１又は２以上の細菌株が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成細菌株である、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる、１又は２以上の細菌株、１又は２以上の菌類株又は１又は２以上の細菌及び菌類株の混合物を包含する、請求項１２記載の方法。
【請求項１７】
前記膜が膜バイオリアクター装置の一部である、請求項１２記載の方法。
【請求項１８】
前記工程が水処理工程である、請求項１２記載の方法。
【請求項１９】
１つの工程に使用される膜の汚れを低めるか又は妨げる方法であって、前記膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物に前記膜を供することを含んで成る方法。
【請求項２０】
前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の細菌株を包含する、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
前記１又は２以上の微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成微生物である、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
前記１又は２以上の細菌株が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成細菌株である、請求項２０記載の方法。
【請求項２３】
前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる、１又は２以上の細菌株、１又は２以上の菌類株又は１又は２以上の細菌及び菌類株の混合物を包含する、請求項１９記載の方法。
【請求項２４】
前記膜が膜バイオリアクター装置の一部である、請求項１９記載の方法。
【請求項２５】
前記工程が水処理工程である、請求項１９記載の方法。
【請求項２６】
前記１又は２以上の微生物がクオラムセンシング阻害を通してバイオフィルム形成を妨げるか又は低めることができる、請求項１９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、膜濾過装置、特に水又は廃水処理工程における透過性及び流れを改善するための方法及び組成物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
関連出願の相互参照
本願は、2009年11月10日及び2010年8月2日にそれぞれ出願された、米国仮出願番号61/259,936及び61/369,801の35 U.S.C.119の利益を請求する。その内容は、参照によって本明細書に完全に組み込まれている。
【０００３】
配列表への言及
本願は、参照として本明細書に組み込まれているコンピュータ読み取り可能な形態で配列表を含む。
【０００４】
発明の背景
膜バイオリアクター（ＭＢＲ）装置は、水及び廃水処理のためのますます一般的な解決策に成っている。水処理及び精製のための膜装置は何十年もの間、使用されて来たが、水及び廃水処理のための広範囲の解決策としてのＭＢＲ装置の使用は、より従来的な生物処理プラントのために無視されて来た。そのような無視についての１つの有意な理由は、ＭＢＲ装置が従来の処理装置によりも、しばしば比較的より高価であることである。しかしながら、生成物の高純度及び低められたフットプリントが、ＭＢＲ装置の使用を所望のものにする。
【０００５】
ＭＢＲ装置は典型的には、１又は２以上の生物学的反応器、例えば嫌気性、無酸素性及び好気性反応器、続いて１又は２以上の膜タンク（個々のタンクは１又は２以上の膜モジュールを含む）を含む。水又は廃水は、重力供給又はポンプにより創造される吸引により膜ジュール中に誘導される。前記工程の間、膜は汚染物及び他の固形物を濾過し、そして透過物が生成される。
【０００６】
膜濾過工程に関する１つの主要欠点は、膜が汚れる傾向があることである。膜が汚れるにつれて、膜の透過性が低下し、そして全体の工程の有効性が低められる。膜汚れ速度は大まかには、流れの上昇と共に指数関数的に高められることが一般的に理解されている。この現象の研究は、決定的流れの理論を導いて来た。決定的流れは多くの手段により説明されるが、決定的流れの一般的定義は、透過性低下が無視できると思われる以下の流れである。従って、流れの制御、好ましくは決定的流れでの又はそれ以下でのその流れの維持が、透過性低下率を低め、そして膜装置の持続的操作を提供する。
【０００７】
膜装置が決定的流れ速度で又はそれ以下で作動される場合でさえ、膜汚れがまた発生し、そして膜の清浄方法が使用されるべきである。膜装置、例えばＭＢＲにおいては、空気スカーリングがしばしば、膜を連続して清浄し、そして透過の維持を助けるために使用される。空気スカーリングは、汚れ及びケーク層増大の低減を助けるために、膜の表面で乱流及び剪断力を作り出す。しかしながら、空気スカーリングは作動費用を有意に高め、そして適切な決定的流動速度の維持下で完全に効果的であるわけではない。
【０００８】
他の物理−機械及び/又は化学的膜清浄又は処理方法が、汚れ物質を除去し、そして膜透過性を維持するために使用される。最も広く使用される物理−機械方法は、逆流洗浄、振動及び空気−スカーリングを包含する。それらの方法はエネルギー集中型であり、そしてすべての膜タイプには適用できない。
【０００９】
化学清浄又は処理方法は、凝固剤及び/又はポリマーによる前処理、及び脱塩剤、殺生物剤及び/又は清浄用品、例えばNaOCl又はクエン酸による処理を包含する。無機又は有機酸、苛性ソーダ又は次亜塩素酸ナトリウムがまた、化学清浄方法にしばしば使用される。しかしながら、頻繁な化学清浄は、装置操作時間の損失、膜の低められた平均寿命及び清浄薬品の多量の消費のために高価である。
【００１０】
物理清浄方法、例えば空気スカーリングは、膜からの全体の固形物、すなわち「一時的」又は「可逆的」汚れとして時々、言及される汚れを引起す物質の除去で量とも効果的である。化学洗浄方法は、より強い汚れた物質、すなわち「不可逆的」又は「永続的」汚れとして時々、言及される汚れを引起す物質の除去で効果的である。しかしながら、化学清浄はすべての永続的又は不可逆的汚れ物質及び膜残留物の残留耐性を除くことはできない。この残留耐性又は「不可逆的」汚れは、多くの年月にわたって膜上に構築し、そして究極的には、膜の寿命を制限する汚れである。
【００１１】
言及された方法、例えば毎日の清浄手段としての化学的に増強された逆流洗浄の組合せがまた通常使用される。毎週の清浄手段はより高い化学薬品濃度での清浄を包含し、そしてさらに規則的清浄はしばしば、膜寿命に対して有意な負の効果を伴ってより集中的化学清浄を包含することができる。
【００１２】
膜汚れの機構は広範囲に研究されてきた。汚れは時間がたつにつれて生じ、そして流れ速度及びコンシステンシー、並びに膜を通過する物質の組成に依存して、種々の段階で生じる。汚れ形成の段階は、初期汚れ（又はコンディショニング汚れ）、定常汚れ、及び膜間圧（ＴＭＰ）上昇として時々説明される。初期汚れは、コロイド吸着、膜孔を阻止する小粒子、及び膜への生物学的凝集物の一時的結合から残る小さな浮氷又は細胞外ポリマー物質への生物（ＥＰＳ）の結果であると思われる。初期汚れによる全体的な耐性変化はしばしば、いったん活動的濾過が生じると、流れ及びＴＭＰに対して無視できる効果を単に有する。しかしながら、初期汚れは、さらなる又は定常汚れを好ましいマトリックスに提供することに大きな役割を演じるように思われる。定常汚れ段階は、粒状物質によるさらなる孔阻止を包含すると共に、また、膜上での高められたケーク形成及びバイオフィルム成長のために好都合ではない。この汚れ段階は膜を通して必ずしも均等に生じるわけではないが、しかし定常汚れはＴＭＰを高め、そして透過性を低め、流れの低下をもたらす。最終汚れ段階は、透過が比較的短時間で有意に下がるＴＭＰ上昇として言及される。ＴＭＰ上昇を引起す機構を仮定する多くの理論が存在する。しかしながら、その機構にもかかららず、いったんＴＭＰ上昇が生じると、膜は実質的に汚され、工程への使用のためには効果的ではない。
【００１３】
他のプロセスパラメーターが膜流れに影響を及ぼすことができる。１つの例は、工程が実施される温度である。一般的に工程温度の上昇は、高められた流れ速度をもたらす。より高い温度によるこの流れの改善は、浸透粘度の低下によることができ、そして汚れ速度を低めることができる。しかしながら、水又は廃水処理工程の温度の制御は典型的には、実施不可能であり、そして費用的に高価であろう。
【００１４】
膜汚れを低めるか又は妨げるための解決策は、すべてのタイプ及び段階の汚れを標的としてきた。特に、バイオフィルム形成の標的化が最近の興味の対象である。例えば、Yeon et al., 2009, Environ. Sci. Technol. 43: 380-385は、定常汚れに包含される生物のクオラムセンシング（ＱＳ）に基づく膜汚れ機構の標的化を論じている。
【００１５】
アメリカ特許出願公開番号第2008/0233093号は、一定の所望しない微生物と共に同時培養される場合、バイオフィルム形成及び/又は浮遊物増殖を低め、そして/又は妨げることができるバチルス属の少数株を開示している。
【発明の概要】
【００１６】
効果的水及び廃水処理の決定的な必要性のために、ＭＢＲ装置を包含する膜適用において、膜汚れを低め、そして/又は決定的流速を高める解決策が高く所望される。
【００１７】
一観点によれば、本発明は１つの工程に使用される膜の透過性又は流れの改善方法を提供し、前記方法は前記膜上の所望しないバイオフィルムの進行を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物に前記膜を供することを含んで成る。
【００１８】
別の観点によれば、本発明は１つの工程に使用される膜の決定的流れを高める方法を提供し、前記方法は前記膜上の所望しないバイオフィルムの進行を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物に前記膜を供することを含んで成る。
【００１９】
別の観点によれば、本発明は１つの工程に使用される膜の汚れを低めるか又は妨げる方法を提供し、前記方法は前記膜上の所望しないバイオフィルムの進行を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物に前記膜を供することを含んで成る。
【００２０】
別の観点によれば、本発明は、膜上の所望しないバイオフィルムの進行を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物培養物を含む組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、ＭＢＲパイロットプラントのレイアウトの略図である。
【図２】図２は、時間に対する膜透過性に対するＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１の効果を示す。
【図３】図３は、時間に対する膜透過性に対するＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１の効果を示す。
【図４】図４は、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１による処理を伴ってか又は伴わないでの膜に対する弛緩現象の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
発明の詳細な説明
本発明は、膜濾過装置における透過性を及び流れを改善するための方法及び組成物、並びに水及び廃水処理工程における膜の汚れを低め、そして/又は妨げるための方法及び組成物に関する。
【００２３】
膜の汚れは、濾過装置における多くのプロセス変数、及び処理される水又は廃水の含有率のために、多くの機構における及び異なった速度で発生する。しかしながら膜汚れの１つの共通性は、水又は廃水からの微生物が汚染工程の間、膜上にバイオフィルムを創造し、そして結果として、ＴＭＰが上昇し、そして透過性又は流れが低下することである。膜の汚れ速度と膜を通しての流動速度との間の関係は反比例的に関連する、従って、「決定的流れ」又は最大流速（汚れ形成が低められるか又は遅められ得る）の理論が開発されて来た。しかしながら、決定的流れでの又はそれ以下での流れは発生する汚れを妨げない。結果的にそのような汚れはＴＭＰを低め、そして流れを低め、その結果、膜は濾過工程の有効性を維持するために清浄されるべきである。決定的流れを高める能力が膜装置において好都合である。高められた流れは、存在する装置の能力を改善し、より小さな寸法決定のために新規装置への低い投資用件要件を可能し、そして/又は多数の水又は廃水が、膜が清浄される前、処理され得、そして膜の全体的寿命が高められ得るので、操作効率及び柔軟性を高める。設備投資コスト、及び膜の清浄及び交換費用が高く、そして清浄工程の間の生産性の損失が、失われた操作時間及び収益をもたらす。従って、膜面積当たりより多くの水又は廃水の処理を可能にする方法、及び/又は膜清浄間でのより多くの水又は廃水の処理を可能にし、そして/又は膜の寿命を高める方法は、財政的に有益である。
【００２４】
驚くべきことには、膜濾過装置への一定の微生物の付加は、装置による流速の維持、もしくは上昇され可能にする。本発明に使用される微生物は、所望しないバイオフィルム形成を創造する微生物と同じか又は類似する態様で膜に付着する。しかしながら、本発明の方法に従っての微生物の使用は驚くべきことには、透過性に対して負の効果を有さず、そして同じ期間、同じ工程における未処理の膜を通しての透過性又は流れに比較して、さらに流れを改善することができる（例えば、決定的流れを高める）。
【００２５】
膜の透過性又は膜を通しての流れは一般的に、膜を使用する工程の間、一定期間にわたって低下する。一般的に、この低下は膜汚れのためであることが許容されている。本発明によれば、「透過性の改善」又は「流れの改善」とは、膜透過性又は流れが、同じ条件、例えば流速、温度及び圧力で、一定の同じ期間、細菌株を適用しないで、同じ工程の間、同じか又は類似する膜に比較して、１つの工程の間、一定の期間にわたって同じか又はそれほど低下しないことを意味する。
【００２６】
一態様によれば、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の細菌株（バチルス属の株である）に対して前記膜を供することを含んで成る、水処理工程における膜の汚れを低め、そして/又は妨げる方法が提供される。
【００２７】
一態様によれば、細菌ブレンドが、本発明の方法に従って使用され得る。ブレンドの例は、下記「細菌株及び細菌株のブレンド」セクションに見出され得る。
【００２８】
用語「バイオフィルム」又は「バイオフィルム形成」とは、本明細書において使用される場合、粘液層又はフィルム、又は膜上の所望しない微生物による粘液層又はフィルムの形成を意味する。バイオフィルム形成は、膜に対して単独で又はコロニーで結合する所望しない微生物の増殖の結果である。
【００２９】
本発明はまた、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物に前記膜を供することを含んで成る、１つの工程に使用される膜の透過性又は流れを改善するための方法にも関する。それらの新規微生物は、それらの所望しない株の健康又は生存性に対して直接的な影響を引起さないが、しかし膜表面上のバイオフィルム進行においてそれらと単に競争することができる。本明細書において使用される場合、「供すること」とは、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げる本発明への使用のために、本明細書に引用される１又は２以上の微生物又は細菌株を、処理される水及び/又は直接的に、処理される膜に導入し、接種し、分散し、適用し、そして処理することにより、水及び/又は膜に対して１又は２以上の細菌株を適用することを意味する。供することは、有効量の所望する微生物を含むよう水及び/又は膜の微生物含有率を意図的に傾かせることを包含する。そのような傾向は、本明細書に引用される１又は２以上の微生物又は細菌株を、処理される水及び/又は直接的に、処理される膜に導入し、接種し、分散し、適用し、処理することにより、又は処理される水及び膜において所望する微生物集団を得るのに効果的ないずれか他の方法により達成され得る。
【００３０】
一態様によれば、本発明は、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物に前記膜を供することを含んで成る、１つの工程に使用される膜の決定的流れを高めるための方法を提供する。
【００３１】
別の態様によれば、本発明は、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物に前記膜を供することを含んで成る、１つの工程に使用される膜の汚れを低めるか又は妨げるための方法を提供する。
【００３２】
微生物、細菌株、及び微生物及び細菌株のブレンド
本発明の方法に従って使用される微生物又は細菌株が膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることは理解されるべきである。微生物又は細菌株が膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げるかどうかを決定するために、シュードモナス・アエルギノサ（Pseudomonas aeruginosa）ＰＡＯ１（ＡＴＣＣ４７０８５）との比較を行う。特に、微生物又は細菌株は、実施例１に記載されるように、流れ低下により測定される場合、前記株がシュードモナス・アエルギノサＰＡＯ１（ＡＴＣＣ４７０８５）により引起されるバイオフィルム形成に比較して、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げる場合、本発明組成物及び方法において有用である。前記微生物又は細菌株は、菌株の培養物であり得る。微生物又は細菌株についての好ましい性質は例えば、１又は２以上の次の性質を含み：細胞外ポリマー物質（ＥＰＳ）の最少出力、低バイオケーク形成傾向、及び低粘液性物質放出、そして好ましくは、微生物又は細菌株はそれらの性質のすべてを含む。
【００３３】
一態様によれば、微生物は胞子形成微生物である。別の態様によれば、微生物は胞子形成細菌である。さらに別の態様によれば、微生物は安定胞子の形で存在する。さらに別の態様によれば、微生物は安定細胞胞子の形で存在する。本明細書において使用される場合、「安定」とは、当業界において知られている用語であり、そして好ましい観点によれば、安定は、微生物が膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げるために本発明において適用されるまで、胞子形で存続する微生物の能力を意味するよう本発明において使用される。
【００３４】
一態様によれば、細菌株はグラム陽性細菌株である。
一態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、アグロバクテリウムspp. アグロバクテリウム(Agrobacterium spp.)、例えばアグロバクテリウム・アトランチカム（Agrobacterium atlanticum）; アグロバクテリウム・ルビ（Agrobacterium rubi）; アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Agrobacterium tumefaciens）;又はアグロバクテリウム・ヴィチス（Agrobacterium vitis）の株、及びそれらの組合せである。
【００３５】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、アルスロバクターspp. (Arthrobacter spp.)、例えばアルスロバクター・オキシダンス（Arthrobacter oxydans）; アルスロバクター・アウレセンス（Arthrobacter aurescens）; アルスロバクター・グロビホルミス（Arthrobacter globiformis）; アルスロバクター・ラモサス（Arthrobacter ramosus）; 又はアルスロバクター・ビスコサス（Arthrobacter viscosus）の株、及びそれらの組合せである。
【００３６】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、バチルスssp. (Bacillus ssp.)、 例えばバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）; バチルス・アトロファエウス（Bacillus atrophaeus）; バチルス・アゾトホルマンス（Bacillus azotoformans）; バチルス・ブレビス（Bacillus brevis）; バチルス・セレウス（Bacillus cereus）; バチルス・サークランス（Bacillus circulans）; バチルス・クラウジ（Bacillus clausii）; バチルス・コーグランス（Bacillus coagulans）; バチルス・ファーマス（Bacillus firmus）; バチルス・フレキウス（Bacillus flexus）; バチルス・フシホルミス（Bacillus fusiformis）; バチルス・グロビスポラス（Bacillus globisporus）; バチルス・グルカノライチカス（Bacillus glucanolyticus）; バチルス・インンフェルマス（Bacillus infermus）; バチルス・ラエボラクチカス（Bacillus laevolacticus）; バチルス・リケニホルミス（Bacillus licheniformis）; バチルス・マリナス（Bacillus marinus）; バチルス・メガテリウム（Bacillus megaterium）; バチルス・モジャベンシス（Bacillus mojavensis）; バチルス・ミコイデス（Bacillus mycoides）; バチルス・パリダス（Bacillus pallidus）; バチルス・パラブレビス（Bacillus parabrevis）; バチルス・パステウリ（Bacillus pasteurii）; バチルス・ポリミキサ（Bacillus polymyxa）; バチルス・ポピリアエ（Bacillus popiliae）; バチルス・プミラス（Bacillus pumilus）; バチルス・スファエリカス（Bacillus sphaericus）; バチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）; バチルス・サーモアミロボランス（Bacillus thermoamylovorans）;又はバチルス・スリンギエンシス（Bacillus thuringiensis）の株、及びそれらの組合せである。
【００３７】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、バクテリオデスspp（Bacteriodes spp.）、例えばバクテリオデス・セルロソルベンス（Bacteriodes cellulosolvens）; バクテリオデス・ガラクツロニカス（Bacteriodes galacturonicus）; バクテリオデス・ペクチノフィラス（Bacteriodes pectinophilus）；又はバクテリオデス・バルガテス（Bacteriodes vulgates）の株、及びそれらの組合せである。
【００３８】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ベギアトアspp．（Beggiatoa spp.）、例えば、ベギアトア・アルバ（Beggiatoa alba）、及びそれらの組合せである。
【００３９】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ベイジエリンキアspp.（Beijerinckia spp.）、例えば、ベイジエリンキア・デリキシア（Beijerinckia derxia）; ベイジエリンキア・フルミネンシス（Beijerinckia fluminensis）; ベイジエリンキア・インンジカ（Beijerinckia indica）; 又は ベイジエリンキア・モビリス（Beijerinckia mobilis）の株、及びそれらの組合せである。
【００４０】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ビフィドバクテリウムspp.（Bifidobacterium spp.）、例えば、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Bifidobacterium animalis）; ビフィドバクテリウム・インジュカム（Bifidobacterium inducum）; ビフィドバクテリウム・マグナム（Bifidobacterium magnum）; ビフィドバクテリウム・ミニマム（Bifidobacterium minimum）; 又はビフィドバクテリウム・サブチル（Bifidobacterium subtile）の株、及びそれらの組合せである。
【００４１】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ブラキバクテリウムspp.(Brachybacterium spp.）、例えば、ブラキバクテリウム・アリメンタリウム（Brachybacterium alimentarium）; ブラキバクテリウム・ネステレンタリウム（Brachybacterium nesterenkovii）;又は ブラキバクテリウム・ラモノサム（Brachybacterium rhamnosum）の株、及びそれらの組合せである。
【００４２】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ブラジリゾビウムspp.（Bradyrhizobium spp.）、例えば、ブラジリゾビウ・エルカニ（Bradyrhizobium elkanii）ブラジリゾビウ・ジャポニカム（Bradyrhizobium japonicum）; 又は ブラジリゾビウ・リアオニンゲンス（Bradyrhizobium liaoningense）の株、 及びそれらの組合せである。
【００４３】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ブレビバシラスspp.（Brevibacillus spp.）、例えば、ブレビバシラス・ブレビス（Brevibacillus brevis）; ブレビバシラス・ホルモサス（Brevibacillus formosus）; ブレビバシラス・ラテロスポラス（Brevibacillus laterosporus）; 又はブレビバシラス・パラブレビス（Brevibacillus parabrevis）の株、 及びそれらの組合せである。
【００４４】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、バークホルデリアspp.(Burkholderia spp.）、例えば、バークホルデリア・アンドロポゴニス（Burkholderia andropogonis）; バークホルデリア・サッカリ（Burkholderia sacchari）; 又は バークホルデリア・バンジ（Burkholderia vandii）の株、 及びそれらの組合せである。
【００４５】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、カルノバクテリウムspp. （Carnobacterium spp.）、例えば、カルノバクテリウム・ジベルゲンス（Carnobacterium divergens）; カルノバクテリウム・フンジタム（Carnobacterium funditum）; カルノバクテリウム・モビル（Carnobacterium mobile）; 又は カルノバクテリウム・プレイストセニウム（Carnobacterium pleistocenium）の株、 及びそれらの組合せである。
【００４６】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、カウロバクター spp.（Caulobacter spp.）、例えば、カウロバクター・バクテリオデス（Caulobacter bacteriodes）; カウロバクター・フシホルミス（Caulobacter fusiformis）; カウロバクター・バリアビリス（Caulobacter variabilis）; 又は カウロバクター・ビリオドエス（Caulobacter viriodoes）の株、及びそれらの組合せである。
【００４７】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、セルロモナス spp.（Cellulomonas spp.）、例えば、セルロモナス・ヒューミラタ（Cellulomonas humilata）又はセルロモナス・キシラニリチカ（Cellulomonas xylanilitica）の株、及びそれらの組合せである。
【００４８】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、シトロバクター spp.（Citrobacter spp.）、例えば、シトロバクター・アマロナチカス（Citrobacter amalonaticus）; シトロバクター・コセリ（Citrobacter koseri）; 又はシトロバクター・フレウンジ（Citrobacter freundii）の株、 及びそれらの組合せである。
【００４９】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、コリネバクテリウムspp.（Corynebacerium spp.）、例えば、コリネバクテリウム・フラベスセンス（Corynebacterium flavescens）又は コリネバクテリウム・グルタミカム（Corynebacterium glutamicum）の株、及びそれらの組合せである。
【００５０】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、エンテロバクターspp.(Enterobacter spp.)、例えば、エンテロバクター・クロアカエ（Enterobacter cloacae）; エンテロバクター・ジソルベンス（Enterobacter dissolvens）; エンテロバクター・ゲルゴビアエ（Enterobacter gergoviae）; エンテロバクター・ニミプレスラリス（Enterobacter nimipressuralis）; 又はエンテロバクター・ピリナス（Enterobacter pyrinus）の株、及びそれらの組合せである。
【００５１】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、エシェリヒア spp.（Escherichia spp.）、例えば、エシェリヒア・アルベルチ（Escherichia albertii）; エシェリヒア・ブラタエ（Escherichia blattae）; エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）; エシェリヒア・フェルグソニ（Escherichia fergusonii）; エシェリヒア・ヘルマンニ（Escherichia hermannii）; 又は エシェリヒア・ブルネリス（Escherichia vluneris）の株、及びそれらの組合せである。
【００５２】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、エルウイニアspp.（Erwinia spp.）、例えば、エルウイニア・アミロボサ（Erwinia amylovora）又は エルウイニア・カラトボラ（Erwinia caratovora）の株、 及びそれらの組合せである。
【００５３】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、フラボバクテリウムspp.（Flavobacterium spp.）、例えば、フラボバクテリウム・アシドゥランス（Flavobacterium acidurans） 又は フラボバクテリウム・レシノボラム（Flavobacterium resinovorum）の株、 及びそれらの組合せである。
【００５４】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、グルコノアバクターspp.(Gluconoabacter spp.）、例えば、グルコノアバクター・オキシダンス（Gluconobacter oxidans）の株、及びそれらの組合せである。
【００５５】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ハロモナス spp.（Halomonas spp.）、例えば、ハロモナス・エロンガテ（Halomonas elongate）又はハロモナス・サリナス（Halomonas salinas）の株、及びそれらの組合せである。
【００５６】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ヒホミクロビウムspp.(Hyphomicrobium spp.）、例えば、ヒホミクロビウム・ファシルス（Hyphomicrobium facilis）又はヒホミクロビウム・インンジカム（Hyphomicrobium indicum）の株、及びそれらの組合せである。
【００５７】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ラクトバチルスspp.(Lactobacillus spp.）、例えば、ラクトバチルス・カセイ（Lactobacillus casei）; ラクトバチルス・ヘルベチカス（Lactobacillus helveticus）; ラクトバチルス・ジョンソニ（Lactobacillus johnsonii）; 又は ラクトバチルス・パラカセイ（Lactobacillus paracasei）の株、及びそれらの組合せである。
【００５８】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ラクトコッカス spp.（Lactococcus spp.）、例えば、ラクトコッカス・ラクチ（Lactococcus lacti）の株、及びそれらの組合せである。
【００５９】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、レウコノストック spp.（Leuconostoc spp.）、例えば、レウコノストック・シトレウム（Leuconostoc citreum） 又は レウコノストック・メセンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）の株、及びそれらの組合せである。
【００６０】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、リソバクター spp.（ Lysobacter spp.）、例えば、リソバクター・アンチビオチカス（Lysobacter antibioticus）; リソバクター・ブルネスセンス（Lysobacter brunescens）; 又はリソバクター・エンンザイモゲネス（Lysobacter enzymogenes）の株、 及びそれらの組合せである。
【００６１】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、メチロバクテリウムspp.（Methylobacterium spp.）、例えば、メチロバクテリウム・オルガノフィラム（Methylobacterium organophilum）又はメチロバクテリウム・ローデシアナム（Methylobacterium rhodesianum）の株、及びそれらの組合せである。
【００６２】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、 ミクロバクテリウムspp.（Microbacterium spp.）、例えば、ミクロバクテリウム・ラエバニホルマンス（Microbacterium laevaniformans）の株、及びそれらの組合せである。
【００６３】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ミクソコッカスspp.（Myxococcus spp.）、例えば、ミクソコッカス・フルバス（Myxococcus fulvus） 又は ミクソコッカス・キサンタス（Myxococcus xanthus）の株、及びそれらの組合せである。
【００６４】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ノカルジオデス spp.（Nocardiodes spp.）、例えば、ノカルジオデス・オレイボランス（Nocardiodes oleivorans）の株、及びそれらの組合せである。
【００６５】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、オセアノスピリラムspp.（Oceanospirillum spp.）、例えば、オセアノスピリラム・リナム（Oceanospirillum linum）の株、及びそれらの組合せである。
【００６６】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ペディオコッカスspp.（Pediococcus spp.）、例えば、ペディオコッカス・アシディラクチシ（Pediococcus acidilactici）又はペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）の株、及びそれらの組合せである。
【００６７】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、フォートバクテリウムspp.（ Photobacterium spp.）、例えば、フォートバクテリウム・ダムセラ（Photobacterium damsela） 又は フォートバクテリウム・ホスホレウム（Photobacterium phosphoreum）の株、 及びそれらの組合せである。
【００６８】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、プランクトマイセスspp.（Planctomyces spp.）、例えば、プランクトマイセス・ブラシリエンシス（Planctomyces brasiliensis）又はプランクトマイセス・マリス（Planctomyces maris）の株、及びそれらの組合せである。
【００６９】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ポリアンギウム spp.（Polyangium spp.）、例えば、ポリアンギウム・セルロサム（Polyangium cellulosum）の株、及びそれらの組合せである。
【００７０】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、シュードアルテロモナスspp.（Pseudoalteromonas spp.）、例えば、シュードアルテロモナス・アトランチカ（Pseudoalteromonas atlantica）又はシュードアルテロモナス・ニグリファシエンス（Pseudoalteromonas nigrifaciens）の株、及びそれらの組合せである。
【００７１】
別の態様によれば、 本発明に使用するための細菌株は、シュードノルカルジアspp.（Pseudonorcardia spp.）、例えば、シュードノルカルジア・オートロフィック（Pseudonorcardia autotrophic）の株、及びそれらの組合せである。
【００７２】
別の態様によれば、 本発明に使用するための細菌株は、パエニバチルスspp.（Paenibacillus spp.）、例えば、パエニバチルス・アルベイ（Paenibacillus alvei）; パエニバチルス・アミロリチカス（Paenibacillus amylolyticus）; パエニバチルス・アゾトフィクサンス（Paenibacillus azotofixans）; パエニバチルス・コーキイ（Paenibacillus cookii）; パエニバチルス・マセランス（Paenibacillus macerans）; パエニバチルス・ポリミクサ（Paenibacillus polymyxa）; 又は パエニバチルス・バリダス（Paenibacillus validus）の株、 及びそれらの組合せである。
【００７３】
別の態様によれば、 本発明に使用するための細菌株は、 パラコッカス spp.（Paracoccus spp.）、例えば、パラコッカス・アルカリフィラス（Paracoccus alcaliphilus）; パラコッカス・デニトリフィカンス （Paracoccus denitrificans）; パラコッカス・コクリ（Paracoccus kocurii）; 又は パラコッカス・パントトロフォス（Paracoccus pantotrophus）の株、及びそれらの組合せである。
【００７４】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、シュードモナス spp.（Pseudomonas spp.）、例えば、シュードモナス・アニトミイクロビカ（Pseudomonas anitmiicrobica）; シュードモナス・アウレオファシエンス（Pseudomonas aureofaciens）; シュードモナス・クロロラフィス（Pseudomonas chlororaphis）; シュードモナス・コルガタ（Pseudomonas corrugata）; シュードモナス・フルオレセンス（Pseudomonas fluorescens）; シュードモナス・マルギナリス（Pseudomonas marginalis）; シュードモナス・ニトロレジュセンス（Pseudomonas nitroreducens）; 又はシュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）の株、及びそれらの組合せである。
【００７５】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ロードコッカス spp.（Rhodococcus spp.）、例えば、ロードコッカス・コプロコッカス（Rhodococcus coprophilus）; ロードコッカス・エリトロポリス（Rhodococcus erythropolis）; ロードコッカス・マリノナセンス（Rhodococcus marinonascens）; ロードコッカス・ロードクロウス（Rhodococcus rhodochrous）; ロードコッカス・ルベル（Rhodococcus ruber）、又は ロードコッカス・ゾフィイ（Rhodococcus zopfii）の株、及びそれらの組合せである。
【００７６】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ロードスピリラムspp.（Rhodospirillum spp.）、例えば、ロードスピリラム・ルブラム（Rhodospirillum rubrum）の株、 及びそれらの組合せである。
【００７７】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、 サルモネラ spp.（Salmonella spp.）、例えば、サルモネラ・ボンゴリ（Salmonella bongori）; 又はサルモネラ・エンテリカ（Salmonella enterica）の株、及びそれらの組合せである。
【００７８】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、スフィンゴモナスspp.（Sphingomonas spp.）、例えば、スフィンゴモナス・アドハエシバ（Sphingomonas adhaesiva）の株、 及びそれらの組合せである。
【００７９】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、スタケブランジチアspp.（Stackebrandtia spp.）、例えば、スタケブランジチア・ンアサウエンシス（Stackebrandtia nassauensis）の株、及びそれらの組合せである。
【００８０】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ストレプトミセスspp.（Streptomyces spp.）、例えば、ストレプトミセス・アウロファシエンス（Streptomyces aureofaciens）又はストレプトミセス・グリセウス（Streptomyces griseus）の株、 及びそれらの組合せである。
【００８１】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、チオバチルス spp.（Thiobacillus spp.）、例えば、チオバチルス・ハロフィラス（Thiobacillus halophilus）又はチオバチルス・チオパラス（Thiobacillus thioparus）の株、及びそれらの組合せである。
【００８２】
別の態様によれば、本発明に使用するための細菌株は、ビブリオ spp.（Vibrio spp.）、例えば、ビブリオ・フィシェリ（Vibrio fischeri）又は ビブリオ・ロゲイ（Vibrio logei）の株、 及びそれらの組合せである。
【００８３】
別の態様によれば、本発明に使用するための菌株は、ペニシリウム spp.（Penicillium spp.）、例えば、ペニシリウム・アウランチオグリセウム（Penicillium aurantiogriseum）; ペニシリウム・ビライアエ（Penicillium bilaiae）; ペニシリウム・カメムベリチ（ Penicillium camemberti）; ペニシリウム・カンジダム（Penicillium candidum）; ペニシリウム・カリソゲナム（Penicillium chrysogenum）; ペニシリウム・クラビホルメ（Penicillium claviforme）; ペニシリウム・コムネ（Penicillium commune）; ペニシリウム・クルストサム（Penicillium crustosum）; ペニシリウム・ジジタタム（Penicillium digitatum）; ペニシリウム・イクスパンサム（Penicillium expansum）; ペニシリウム・フニクロサム（Penicillium funiculosum）; ペニシリウム・グラブラム（Penicillium glabrum）; ペニシリウム・グラカム（Penicillium glacum）; ペニシリウム・イタリカム（Penicillium italicum）; ペニシリウム・ラクサルミエンテル（Penicillium lacussarmienter）；ペニシリウム・マルネフェイ（Penicillium marneffei）; ペニシリウム・プロプロゲナム（Penicillium purpurogenum）; ペニシリウム・ロクエフォルチ（Penicillium roqueforti）; ペニシリウム・ストロニフェラム（Penicillium stoloniferum）; ペニシリウム・ウライエンス（Penicillium ulaiense）; ペニシリウム・ベルコサム（Penicillium verrucosum）;又はペニシリウム・ビリジカタム（Penicillium viridicatum）の株、及びそれらの組合せである。
【００８４】
別の態様によれば、本発明に使用するための微生物は、アグロバクテリウムspp. アグロバクテリウム、例えばアグロバクテリウム・アトランチカム; アグロバクテリウム・ルビ; アグロバクテリウム・ツメファシエンス;又はアグロバクテリウム・ヴィチス、アルスロバクターspp.、例えばアルスロバクター・オキシダンス; アルスロバクター・アウレセンス; アルスロバクター・グロビホルミス; アルスロバクター・ラモサス; 又はアルスロバクター・ビスコサス、バチルスssp.、例えばバチルス・アミロリケファシエンス; バチルス・アトロファエウス; バチルス・アゾトホルマンス; バチルス・ブレビス; バチルス・セレウスバチルス・サークランス; バチルス・クラウジ; バチルス・コーグランス; バチルス・ファーマス; バチルス・フレキウス; バチルス・フシホルミスバチルス・グロビスポラス; バチルス・グルカノライチカス; バチルス・インンフェルマス; バチルス・ラエボラクチカス; バチルス・リケニホルミス; バチルス・マリナス; バチルス・メガテリウム; バチルス・モジャベンシス; バチルス・ミコイデス; バチルス・パリダス; バチルス・パラブレビス; バチルス・パステウリ; バチルス・ポリミキサ; バチルス・ポピリアエ; バチルス・プミラス; バチルス・スファエリカス; バチルス・サブチリス; バチルス・サーモアミロボランス;又はバチルス・スリンギエンシス、バクテリオデスspp、例えば、バクテリオデス・セルロソルベンス; バクテリオデス・ガラクツロニカス; バクテリオデス・ペクチノフィラス；又はバクテリオデス・バルガテス、ベギアトアspp．、例えば、ベギアトア・アルバ、ベイジエリンキアspp.、例えば、 ベイジエリンキア・デリキシア; ベイジエリンキア・フルミネンシス; ベイジエリンキア・インンジカ; 又はベイジエリンキア・モビリス、ビフィドバクテリウムspp.、例えば、ビフィドバクテリウム・アニマリス; ビフィドバクテリウム・インジュカム; ビフィドバクテリウム・マグナム; ビフィドバクテリウム・ミニマム; 又はビフィドバクテリウム・サブチル、ブラキバクテリウムspp.、例えば、ブラキバクテリウム・アリメンタリウム; ブラキバクテリウム・ネステレンタリウム;又は ブラキバクテリウム・ラモノサム、ブラジリゾビウムspp.、例えば、ブラジリゾビウ・エルカニ；ブラジリゾビウ・ジャポニカム; 又は ブラジリゾビウ・リアオニンゲンス、ブレビバシラスspp.、例えば、ブレビバシラス・ブレビス; ブレビバシラス・ホルモサス; ブレビバシラス・ラテロスポラス; 又は ブレビバシラス・パラブレビス、バークホルデリアspp.、例えば、 バークホルデリア・アンドロポゴニス; バークホルデリア・サッカリ; 又は バークホルデリア・バンジ、カルノバクテリウムspp.、例えば、カルノバクテリウム・ジベルゲンス; カルノバクテリウム・フンジタム; カルノバクテリウム・モビル; 又は カルノバクテリウム・プレイストセニウム、カウロバクター spp.、例えば、 カウロバクター・バクテリオデス; カウロバクター・フシホルミス; カウロバクター・バリアビリス; 又は カウロバクター・ビリオドエス、セルロモナス spp.、例えば、セルロモナス・ヒューミラタ又は セルロモナス・キシラニリチカ、シトロバクター spp.、例えば、 シトロバクター・アマロナチカス; シトロバクター・コセリ; 又は シトロバクター・フレウンジ、コリネバクテリウムspp.、例えば、 コリネバクテリウム・フラベスセンス又は コリネバクテリウム・グルタミカム、エンテロバクターspp.、例えば、エンテロバクター・クロアカエ; エンテロバクター・ジソルベンス; エンテロバクター・ゲルゴビアエ; エンテロバクター・ニミプレスラリス; 又は エンテロバクター・ピリナス、エシェリヒア spp.、例えば、エシェリヒア・アルベルチ; エシェリヒア・ブラタエエシェリヒア・コリ; エシェリヒア・フェルグソニ; エシェリヒア・ヘルマンニ; 又は エシェリヒア・ブルネリス、エルウイニアspp.、例えば、エルウイニア・アミロボサ又は エルウイニア・カラトボラ、フラボバクテリウムspp.、例えば、フラボバクテリウム・アシドゥランス又は フラボバクテリウム・レシノボラム、グルコノアバクターspp.、例えば、 グルコノアバクター・オキシダンス、ハロモナス spp.、例えば、ハロモナス・エロンガテ又は ハロモナス・サリナス、ヒホミクロビウムspp.、例えば、ヒホミクロビウム・ファシルス又はヒホミクロビウム・インンジカム、ラクトバチルスspp.、例えば、ラクトバチルス・カセイ; ラクトバチルス・ヘルベチカス; ラクトバチルス・ジョンソニ; 又は ラクトバチルス・パラカセイ、ラクトコッカス spp.、例えば、ラクトコッカス・ラクチ、レウコノストック spp.、例えば、レウコノストック・シトレウム又は レウコノストック・メセンテロイデス、リソバクター spp.、例えば、リソバクター・アンチビオチカス; リソバクター・ブルネスセンス; 又は リソバクター・エンンザイモゲネス、メチロバクテリウムspp.、例えば、メチロバクテリウム・オルガノフィラム又は メチロバクテリウム・ローデシアナム、ミクロバクテリウムspp.、例えば、ミクロバクテリウム・ラエバニホルマンス、ミクソコッカスspp.、例えば、ミクソコッカス・フルバス又は ミクソコッカス・キサンタス、ノカルジオデス spp.、例えば、ノカルジオデス・オレイボランス、オセアノスピリラムspp.、例えば、 オセアノスピリラム・リナム、ペディオコッカスspp.、例えば、 ペディオコッカス・アシディラクチシ又は ペディオコッカス・ペントサセウス、フォートバクテリウムspp.、例えば、フォートバクテリウム・ダムセラ又は フォートバクテリウム・ホスホレウム、プランクトマイセスspp.、例えば、プランクトマイセス・ブラシリエンシス又は プランクトマイセス・マリス、ポリアンギウム spp.、例えば、ポリアンギウム・セルロサム、シュードアルテロモナスspp.、例えば、シュードアルテロモナス・アトランチカ又は シュードアルテロモナス・ニグリファシエンス、シュードノルカルジアspp.、例えば、シュードノルカルジア・オートロフィック、パエニバチルスspp.、例えば、パエニバチルス・アルベイ; パエニバチルス・アミロリチカス; パエニバチルス・アゾトフィクサンス; パエニバチルス・コーキイ; パエニバチルス・マセランス; パエニバチルス・ポリミクサ; 又は パエニバチルス・バリダス、パラコッカス spp.、例えば、パラコッカス・アルカリフィラス; パラコッカス・デニトリフィカンス; パラコッカス・コクリ; 又は パラコッカス・パントトロフォス、シュードモナス spp.、例えば、シュードモナス・アニトミイクロビカ; シュードモナス・アウレオファシエンス; シュードモナス・クロロラフィス; シュードモナス・コルガタ; シュードモナス・フルオレセンス; シュードモナス・マルギナリス; シュードモナス・ニトロレジュセンス; 又はシュードモナス・プチダ、ロードコッカス spp.、例えば、ロードコッカス・コプロコッカス; ロードコッカス・エリトロポリス; ロードコッカス・マリノナセンス; ロードコッカス・ロードクロウス; ロードコッカス・ルベル、又は ロードコッカス・ゾフィイ、ロードスピリラムspp.、例えば、ロードスピリラム・ルブラム、サルモネラ spp.、例えば、サルモネラ・ボンゴリ; 又はサルモネラ・エンテリカ、スフィンゴモナスspp.、例えば、スフィンゴモナス・アドハエシバ、スタケブランジチアspp.、例えば、スタケブランジチア・ンアサウエンシス、ストレプトミセスspp.、例えば、ストレプトミセス・アウロファシエンス又は ストレプトミセス・グリセウス、チオバチルス spp.、例えば、チオバチルス・ハロフィラス又はチオバチルス・チオパラス、ビブリオ spp.、例えば、ビブリオ・フィシェリ又は ビブリオ・ロゲイ、及びペニシリウム spp.、例えば、ペニシリウム・アウランチオグリセウム; ペニシリウム・ビライアエ; ペニシリウム・カメムベリチ; ペニシリウム・カンジダム; ペニシリウム・カリソゲナム; ペニシリウム・クラビホルメ; ペニシリウム・コムネ; ペニシリウム・クルストサム; ペニシリウム・ジジタタム; ペニシリウム・イクスパンサム; ペニシリウム・フニクロサム; ペニシリウム・グラブラム; ペニシリウム・グラカム; ペニシリウム・イタリカム; ペニシリウム・ラクサルミエンテルペニシリウム・マルネフェイ; ペニシリウム・プロプロゲナム; ペニシリウム・ロクエフォルチ; ペニシリウム・ストロニフェラム; ペニシリウム・ウライエンス; ペニシリウム・ベルコサム;又はペニシリウム・ビリジカタムの株、及びそれらの組合せである。
【００８５】
一態様によれば、１又は２以上の細菌株は、下記群から選択される：
受託番号ＡＴＣＣ１４５８１を有するバチルス・メガテリウム株；
受託番号ＡＴＣＣ７００３８５を有するバチルス・プミラス株；
受託番号ＡＴＣＣ３５６８１を有するパエニバチルス・アゾトフィキサンス（Paenibacillus azotofixans）株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１４を有するバチルス・リケニホルミス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１５を有するバチルス・リケニホルミス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１６を有するバチルス・プミラス株；
受託番号ＡＴＣＣ  ６０５１Ａを有するバチルス・サブチリス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１７を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１８を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１３６を有するバチルス・サブチリス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０３０４を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０３４９を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−３１４２を有するバチルス・メガテリウム株；
受託番号ＰＴＡ−７５４１を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４２を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４３を有するバチルス・アトロファエウス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４４を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４５を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４６を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４７を有するバチルス・サブチリス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４９を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７７９０を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７７９１を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７７９２を有するバチルス・アトロファエウス株；及び
受託番号ＰＴＡ−７７９３を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；又は少なくとも２種の上記寄託された株、例えば２以上、少なくとも３種の上記株、少なくとも４種の上記株、少なくとも５種の上記株、少なくとも６種の上記株、少なくとも７種の上記株、すべての種までの上記株。
【００８６】
用語、「有効量」、「有効濃度」又は「有効用量」とは、膜上に所望しない微生物により引起されるバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の細菌株の量、濃度又は用量として本明細書において定義される。絶対数での実質の有効用量は、次の要因に依存する：問題の所望しない微生物；目的が妨げるか又は低めるか；株又は前記株を含んで成る組成物間の接触時間；存在する他の成分、及びまた、問題の膜。一態様によれば、細菌、例えば株ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１７の有効用量が、１×１０４〜１×１０１１ＣＦＵ／ｃｍ２の最終濃度、好ましくは１×１０６〜１×１０７ＣＦＵ／ｃｍ２の最終濃度で膜表面に導入される。典型的には、これは１×１０３〜１×１０１０ＣＦＵ／ｍｌ、好ましくは１×１０５〜１×１０６ＣＦＵ／ｍｌの膜−含有容器におけるそれらの細菌株の導入をもたらす。
【００８７】
「有効量（effective amount）」、「有効の濃度（effective concentration）」又は「有効用量（effective dosage）」は究極的には、本明細書に記載されるように、バイオフィルム形成を低め、そして/又は妨げることへの使用のために本明細書に記載される１又は２以上の微生物に水及び/又は膜を供することにより達成される。
【００８８】
一般的に、所望しない微生物及び栄養物の高い負荷を受ける環境は高い用量の軽減細菌株を必要とし、ところが所望しない生物の低い負荷を受ける環境は低い用量の軽減細菌株を必要とする。さらに、例えば膜上のバイオフィルム形成の阻止は一般的に、その対応する膜上のバイオフィルム形成を低めることにより低い用量の関連細菌株を必要とする。
【００８９】
結果的に、本発明の方法は、１又は２以上の所望しない微生物、好ましくは膜又は表面上にすでに存在する細菌の増殖を阻害するために（すなわち、低められたバイオフィルム形成を導く）使用され得る。別の態様によれば、本発明は、実質的に汚れのない膜（すなわち、所望しない微生物を実質的に有さない膜）上でのバイオフィルム形成を妨げ、そして/又は実質的に遅延することに関する。言い換えれば、その関連する菌株は、１又は２以上の所望しない微生物の未来の増殖に対して膜を保護する。本発明の方法は、所望しない微生物の低減をもたらすことができる。好ましい態様によれば、その関連する細菌株は、問題の膜に適用され得る。定期的とは、本発明の方法が一定期間、例えば分、時間、日、週、月、等ごとに繰り返されるか又は反復され得ることを意味する。上記のように、効果は長期間、持続することができない。細菌株の再投入が必要である。
【００９０】
本発明によれば、細菌株は、膜がその工程に使用される前、膜が工程に使用された後、膜の清浄に続いてすぐに、工程の間いずれの時間でも、又はそれらのいずれかの組合せで、膜に導入され得る。
【００９１】
所望しない微生物
本発明においては、用語「所望しない微生物（undesired microorganisms）」とは、問題の膜に対して否定的であると思われる効果をもたらす微生物を意味する。例えば、その否定的効果は、そのような所望しない微生物による膜の汚れであり得る。所望しない微生物はまた、病原性微生物、特に病原性細菌を包含することができる。細菌株が所望のものでないかどうかを決定するために、シュードモナス：アエルギノサＰＡＯ１（ＡＴＣＣ４７０８５）と比較が行われる。特に、細菌株は、その株が膜の汚れを引起す場合（実施例１によれば、流れの低下により測定されるように）、所望のものでなく、そして本発明の組成物及び方法に使用され得ない。別の態様によれば、細菌株は、その株が、シュードモナス・アエルギノサＰＡＯ１（ＡＴＣＣ４７０８５）と少なくとも同じくらに、膜の汚れを引起す場合（実施例１によれば、流れの低下により測定されるように）、所望のものではなく、そして本発明の組成物及び方法に使用され得ない。細菌株はまた、その細菌株がシュードモナス・アエルギノサＰＡＯ１（ＡＴＣＣ４７０８５）により引起される汚れを低めない場合、所望のものではない。従って、同じ種の異なった菌株は、流れに対して反対の効果を有することができる。
【００９２】
１又は２以上の本発明に関連する単離細菌株を有効量で用いることにより、膜上でのバイオフィルム形成は低められ、そして/又は妨げられ得る。
【００９３】
好ましい態様によれば、バイオフィルム形成の傾向がある問題の膜は、いずれかのバイオフィルム形成の前、再発防止として１又は２以上の細菌株にさらされ得る。これは、有意に低いバイオフィルムの形成、又はほとんど膜汚れの助けにならないバイオフィルムの形成をもたらす。
【００９４】
所望しない微生物の例は、下記に開示されるそれらの微生物を包含する。
所望しない微生物は、好気性細菌又は嫌気性細菌、グラム陽性及びグラム陰性細菌、菌類（酵母又は糸状菌）、藻類及び/又は原虫を包含するが、但しそれらだけには限定されない。所望しない細菌は、アセトバクター（Acetobacter）、アエロモナス（Aeromonas）、アゾトバクター・ビネランジ（Azotobacter vinelandii）、ベータバクテリウム（Betabacterium）、ブルコルデリア（Burkholderia）、クロストリジウム・ボツリナム（Clostridium botulinum）、コリネバクテリウム・ジフテリア（Corynebacterium diphteriae）、大腸菌（Escherichia coli）、フラボバクテリウム（Flavobacterium）、リューコノストック（Leuconostoc）、レジオネラspp.（Legionella spp.）, リステリアspp.（Listeria spp.）, マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Mycobacterium tuberculosis）、肺炎球菌(Pneumococcus)、シュードモナスspp.（Pseudomonas spp.）、例えばシュードモナス・アエルギノサ（Pseudomonas aeruginosa）、サルモネラ（Salmonella）、スタフィロコッカス（Staphylococcus）、ストレプトコッカスspp.（Streptococcus spp.）及びビブリオspp.（Vibrio spp.）から成る群から選択された細胞を包含する。
【００９５】
一態様によれば、所望しない微生物は好気性細菌である。別の態様によれば、好気性細菌はアエロモナス株である。別の態様によれば、好気性細菌は、ブルコルデリア株である。別の態様によれば、好気性細菌はフラボバクテリウム株である。別の態様によれば、好気性細菌は、ミクロバクテリウム株である。別の態様によれば、好気性細菌はシュードモナス株である。別の態様によれば、好気性細菌は、サルモネラ株である。別々の態様によれば、好気性細菌はスタフィロコッカス株である。別の態様によれば、好気性細菌は、エンテロバクター科（例えば、Ｅ．コリを包含する）からである。
【００９６】
別の態様によれば、好気性細菌はブルコルデリア・セパシア(Burkholderia cepacia)である。別の態様によれば、好気性細菌はミクロバクテリウム・インペリアレ（Microbacterium imperiale)又はマイコバクテリウム・ツベルキュロシス（Mycobacterium tuberculosis）である。別の態様によれば、好気性細菌はシュードモナス・アエルギノサ（Pseudomonas aeruginosa）である。別の態様によれば、好気性細菌はシュードモナス・フルオレセンス（Pseudomonas fluorescens）である。別の態様によれば、好気性細菌はシュードモナス・オレオボランス（Pseudomonas oleovorans）である。別の態様によれば、好気性細菌はシュードモナス・シュードアルカリゲネス（Pseudomonas pseudoalcaligenes）である。別の態様によれば、好気性細菌はサルモレラ・エンテリチジス（Salmonella enteritidis）である。別の態様によれば、好気性細菌はスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）である。別の態様によれば、好気性細菌はスタフィロコッカス・エピダーミジス（Staphylococcus epidermidis）である。
【００９７】
別の態様によれば、細菌は、リステリア・モノサイトゲネル（Listeria monocytogenes）である。
【００９８】
別の態様によれば、細菌は、レジオネラ・アデライデネシス（Legionella adelaidensis）である。別の態様によれば、細菌は、レジオネラ・プネウモフィラ（Legionella pneumophila）である。別の態様によれば、細菌は、レジオネラ・フィーレイ（Legionella feeleii）である。別の態様によれば、細菌は、レジオネラ・モラビカ（Legionella moravica）である。
【００９９】
別の態様によれば、細菌は、ビブリオ・ハルベイ（Vibrio harveyi）、ビブリオ・フィシェリ（Vibrio fischerii）及び/又はビブリオ・アルギノリチカス（Vibrio alginolyticus）である。
【０１００】
別の態様によれば、微生物は、嫌気性細菌である。別の態様によれば、嫌気性細菌は、デスルホビブリオ（Desulfovibrio）株である。別の態様によれば、嫌気性細菌は、デスルホビブリオ・デスルフリカンス（Desulfovibrio desulfuricans）である。
【０１０１】
クオラムセンシング及び他の微生物シグナリング機構
クオラムセンシングは、細菌の「伝達（communicate）」を可能にし、そして細菌集団の表現型局面、例えば色素形成、運動性、病原性及びバイオフィルム形成に対する細菌の影響を可能にする機構である。クオラムセンシングは、自己誘発物質（autoinducer）と呼ばれる小さなシグナル分子の分泌を通して達成されると思われる。それらの自己誘発物質の急冷又は不活性化は、所望しない微生物のバイオフィルム形成を阻止することができる。従って、クオラムセンシング阻害は、バイオフィルム制御のための作用様式である。一態様によれば、本発明の細菌株は、クオラムセンシング阻害によるバイオフィルム形成を妨げることにより膜汚れを妨げる。別の態様によれば、クオラムセンシング阻害は、アシルホモセリンラクトン（ＡＨＬ）阻害の阻害を通してである。別の態様によれば、クオラムセンシング阻害は、微生物のアシラーゼ活性のためである。別の態様によれば、クオラムセンシング阻害は、微生物のラクトナーゼ活性のためである。別の態様によれば、クオラムセンシング阻害は、微生物のラセマーゼ活性のためである。
【０１０２】
本発明の別の態様は、クオラムセンシング阻害によるバイオフィルム形成を阻害する細菌能力に基づかれる本発明の方法及び組成物への使用のための微生物のスクリーニング方法を包含する。本発明の別の態様によれば、クオラムセンシング阻害は、アシルホモセリンラクトン（ＡＨＬ）阻害を通してである。本発明のさらなる別の態様によれば、クオラムセンシング阻害は、微生物のアシラーゼ活性のためである。クオラムセンシングは、１つの微生物又は微生物の組合せの作用により効果的に達成され得る。
【０１０３】
膜
種々の膜タイプ及び形状が水又は廃水処理工程に使用され得る。膜形状のタイプは、毛管、チューブ型、中空ファイバー、多管、プラット−フレーム/フラットシート、プリーツカートリッジフィルター、スパイラル巻線状体、及びセラミック、例えばセラミックディスクを包含する。膜は、１又は２以上の材料、例えば塩素化ポリエチレン、ポリアクリロニトリル、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリビニルアルコール、セルロースアセテート、再生セルロース、ポリビニリデンジフルオリド、ポリエチルスルホン、ポリエチレン、ポリプロピレン及びセラミック材料から製造され得る。適用に基づいて変化することができる膜の他の特徴は例えば、膜孔サイズを包含する。膜孔のサイズは、水又は廃水から除去される粒状物又は不純物のサイズに依存して大きいか又は小さい。本発明の膜タイプは、限外濾過、精密濾過及びナノ濾過のために使用されるそれらのタイプを包含する。
【０１０４】
膜バイオリアクター装置
膜バイオリアクター（ＭＢＲ）装置は典型的には、次の２種の基本的工程、すなわち生物学的分解及び膜分解を、浮遊物及び分解を担当する微生物が膜濾過ユニットにより処理水から分離される単一工程に結びつける。例えば、Water Treatment Membrane Processes, McGraw-Hill, 1996, p. 17.2を参照のこと。全バイオマスは装置内に閉じ込められ、反応器中の微生物についての残留時間（スラッジ齢）及び流出液の殺菌の両制御を提供する。
【０１０５】
典型的ＭＢＲユニットにおいては、注入廃水がエアレーションタンク中にポンプにより供給されるか、又は重力供給され、ここで廃水が廃水における有機物質を分解するバイオマスと接触される。エアレーション手段、例えば、例えばブローワがバイオマスに酸素を供給する。その得られる混合流体が膜モジュール中にエアレーションタンクからポンプにより供給されるか又は重力供給され、ここで前記流体が圧力下で膜を通して機械的に又は重力的に濾過されるか、又は低真空下で膜を通して引き出される。ある装置においては、エアレーションタンク及び膜タンクは、同じタンクである。流出物は装置から廃棄され、そして濃縮混合液体がバイオリアクターに戻される。過剰のスラッジが、一定のスラッジ齢を維持するためにポンプにより出され、そして膜は逆流洗浄、化学的洗浄、空気スカーリング、又はそれらの機構のいずれかの組合せにより規則的に清浄される。
【０１０６】
ＭＢＲ装置は、複数の形状を有する。２種の主要ＭＢＲ工程形状は、浸水された/浸された及び副流形状を包含する。油圧操作の２種の主要機構、例えばポンピング及びエアーリフトがまた存在する。それらの形状及び多量液体移行機構式は典型的には、従来のバイオマス廃棄ＭＢＲとして言及される。他の形状は、処理水からのバイオマスの分離以外の目的のために膜を用いる抽出及び拡散工程を包含する。それらの工程形状のすべては、膜、例えば上記「膜」セクションに記載されるそれらの膜を含んで成る１又は２以上の膜ユニットを包含する。
【０１０７】
一態様によれば、膜は膜バイオリアクターに存在する。別の態様によれば、廃水処理工程は、膜フラット−シートカセットユニット又は中空−ファイバーユニット自体が典型的には浸されている膜バイオリアクターにおいて生じる。
【０１０８】
一態様によれば、廃水は、膜バイオリアクターに入る前、前処理される。前処理は、廃水の源で、前処理プラントで、又は全体のＭＢＲ装置の一部として生じることができる。そのような前処理は、粗固形物除去を達成するために、棒スクーリン、グリッドチャンバー又は回転ドラムスクリーンを含むことができる。他の前処理は、物質、例えば有害汚染物、オイル又は燃料、又は他の毒性物質を含むことができる。
【０１０９】
水処理工程
１又は２以上の水処理工程が、本発明により企画される。そのような水処理工程は、逆浸透、塩水脱塩及び飲料水精製、並びに廃水処理を包含するが、但しそれらだけには制限されない。本発明の水又は廃水は、ヒト廃棄物、汚物溜めの漏出物、浄化槽排出物、下水処理場排出物、洗浄水、例えば家庭雑排水又は沈泥、集められた雨水、地下水、余剰製造液体、海水、河川水、人工液体廃棄物、高速道路排出物、大雨排出物、黒水、産業廃棄物、産業用地排水又は排出物、例えば冷却水又は工程用水、及び農業排出又は排出物を包含するいずれかの源からであり得る。
【０１１０】
本発明の組成物
本発明はまた、本明細書に記載されるような寄託された菌株を包含する、１又は２以上の微生物を含んで成る組成物にも関する。本発明の組成物は、本明細書に関連する１又は２以上の細菌株を、単一の株又は複数株のブレンドとして含むことができ、そしてさらに、下記に言及される１又は２以上の追加の成分を含む。
【０１１１】
本発明はまた、水処理工程及び/又は膜への適用のために適切な形で、例えば膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げるための形及び有効量で、本明細書に記載されるように、１又は２以上の微生物又は寄託された菌株を包含する１又は２以上の細菌株を含んで成る組成物にも関する。微生物は好ましくは、安定した胞子の形で存在する。
【０１１２】
追加の成分
組成物は、１又は２以上の追加の成分及び/又は酵素を含むことができる。企画される酵素の例は、下記「酵素」セクションに言及される。
【０１１３】
他の成分は、バイオフィルム形成又は不活性成分を低めるか又は妨げる活性成分であり、そしてシス−２−デカン酸、分散剤、安定剤、香料、色素及び殺生物剤を包含するが、但しそれらだけには制限されない。他の成分は、従来の化学により、又は場合によっては、生物学的に製造され得る。
【０１１４】
酵素
１又は２以上の酵素が本発明の組成物に存在することができる。例えば、組成物はアシラーゼ及び／又はラクトナーゼを含むことができる。一態様によれば、酵素は、菌類又は細菌源からである。別の態様によれば、酵素はまた、そのような酵素を発現するよう遺伝子的に修飾された、１又は２以上の本発明の細菌株により「インサイチュで」生成され得る。別の態様によれば、酵素は、本発明の細菌株に対して生来のものであり、そして天然において発現され得るか、又は細菌株は天然に存在する酵素の発現レベルを変更するために遺伝子的に修飾され得る。
【実施例】
【０１１５】
実施例１
ＭＢＲ装置における汚れを低めるか又は妨げることができる候補体株のスクリーニング方法
候補体株を、１×Lysogenyブイヨン（１０gのトリプトン；５gの酵母抽出物：１ｇのＮａＣｌ及び１Lまでの脱イオン水）中において２５℃で振盪しながら、約１６時間にわたって増殖し、そして培養した。次に、候補体株を、血球計を用いて計数し、そして次に、１×ける１０３個の細胞／ｍｌの濃度まで連続して希釈した。ＰＶＤＦ（ポリ（弗化ビニリデン）−底の９６−ウェルプレート（Millipore（登録商標）番号: MSGVS2210）の個々のウェルを、１００μlの無菌0.1×Lysogenyブイヨンにより充填した。１００μlの希釈された候補体株をウェルに添加した。候補体株を添加しないそれらのウェルを、１００μlの無菌１×Lysogenyブイヨンにより充填した。９６−ウェルプレートをBreathe Easy（登録商標）プレート密封フィルムにより密封し、そして２５℃で約１６時間、プレートシェーカー上に配置した。
【０１１６】
シュードモナス・アエルギノサＰＡＯ1を、バイオフィルム形成株として選択し、そして25℃で１×Lysogenyブイヨン（１０gのトリプトン；５gの酵母抽出物：１ｇのＮａＣｌ及び１Lまでの脱イオン水）において、２００rpmで振盪しながら約１６時間にわたって増殖し、そして培養した。P.アエルギノサ培養物を、血球計を用いて計数し、そして次に、１×１０３個の細胞/ｍｌの濃度に連続希釈した。
【０１１７】
バイオフィルム形成株の培養に続いて、Breathe Easy（登録商標）プレート密封フィルムを９６−ウェルプレートから除去し、そして１００μlの希釈されたバイオフィルム形成株P.アエルギノサを、候補体株を含むウェルに添加した。バイオフィルム形成株を含まないそれらのウェルを、１００μlの無菌１×Lysogenyブイヨンにより充填した。９６−ウェルプレートを、新しいBreathe Easy（登録商標）プレート密封フィルムにより再密封し、そして２５℃で２４時間、２００ｒｐｍでプレートシェーカー上に配置した。
【０１１８】
２４時間後、Breathe Easy（登録商標）プレート密封フィルムを、９６−ウェルプレートから除去した。１０μlを個々のウェルから除き、そしてプレートするために、又は５９０ｎｍでの光学密度測定のために新規の無菌９６−ウェルプレートのその対応するウェル中に配置した。追加の９９０μlのリン酸緩衝生理食塩水（PBS）を個々のウェルに添加し、個々のウェルの体積を約１ｍｌにした。次に、９６−ウェルプレートを、Wypalf (Kimberly-Clark)上で逆さにし、いずの浮遊細胞をも除去し、そして次に、過剰の培地をピペットを用いて除去した。個々のウェルを２５０μlのＰＢＳにより連続的にすすぎ、そして次に、Wypalf (Kimberly-Clark)上で２度、逆さにした。残留するＰＢＳをピペットを用いて除去し、次にＰＢＳ中、２５０μlの０．２５％ブリリアントグリーン染料を個々のウェルに添加した。次に、９６−ウェルプレートを、９６−ウェル透明底収集プレート上のMillipore真空マニホールド（Millipore 番号: MSVMHTS00）の上部に配置した。−０．５バールで２分間、９６−ウェルプレートを真空にした。真空を解除し、そして９６−ウェル収集プレートをフロースルー評価のために回収した。
【０１１９】
特に、９６−ウェル収集プレートを、プレートリーダー（BioTek Synergy HT）上に配置し、そして個々のウェルの吸光度をλ＝６１０ｎｍ (Ａｂｓ６１０)で測定した。個々のウェルに集められたフロースルーの体積を、等式Ｖ＝Ａｂｓ６１０×８８．９９７＋１５．３３４（式中、Ｖ＝ウェルにおける０．２５％ブリリアントグリーンの体積）を適用することにより決定した。この等式は、９６ウェルプレートにおける０．２５％ブリリアントグリーンのＡ６１０を測定し、そして個々のウェルにおける既知体積に対してそれをプロットすることにより誘導された。高い吸光度を有するウェルは、低い吸光度を有するそれらのウェルよりも高い体積を有した。従って、吸光度を有するそれらのウェルを、バイオフィルム形成を低めるか、又は妨げることができる候補体株をたぶん含むものとして、選択した。
【０１２０】
９６−ウェルスクリーニング方法の結果は、表１に見出される。１１種の科内の１６種の属に属する３８菌株を、９６−ウェルに基づく方法を用いて、バイオフィルム形成性シュードモナス・アエルギノサ株ＰＡＯ１の存在下で、ＰＶＤＦ膜を通しての流れを保護するそれらの能力について試験した。株は、それが同じ条件下で同じサイズの無菌で非接種のＰＶＤＦ膜により可能にされる流れの２５％以上を維持できる場合、候補体株として見なされる。その結果は、統計発生的に広範囲の細菌及び菌類（ペニシリウムsp）が生物学的汚れ付与剤の存在下でトランスメンブラン流れを維持できることを示す。
【０１２１】
【表１】
2018089627.tif 000003
【０１２２】
【表２】
2018089627.tif 000004
【０１２３】
実施例２
実験室規模のＭＢＲモデル（ＰＶＤＦ）
実験室規模のＭＢＲ装置を、使用の前、９５％イソプロパノールにより処理され、続いて１０％過塩素酸塩により殺菌された、６３．５ｍｍ直径（２８．７ｃｍ２の有効面積）のＰＶＤＦ膜を固定されたAmicon  8200撹拌細胞限外濾過ユニット（Millipore, Billerica, MA, USA）中に重力供給を通して流れる０．５×Lysogenyブイヨン（5gのトリプトン；２．５ｇの酵母抽出物：０．５ｇのNacl及び１Lまでの脱イオン水）を用いて調製した。濾過装置を、２×１０６ｃｆｕ／ｃｍ２の割合で興味ある株の胞子により接種し、そして約１２５ｒｐｍでの一定撹拌及び８．５ｍｌ／時間／ｃｍ２の流速で、２５℃で２４時間インキュベートした。対照ユニットを同様にして調製した（但し、興味ある株の接種は行われなかった）。２４時間のインキュベーションの後、前記ユニットを、２×１０４ｃｆｕ／ｃｍ２のシュードモナス・アエルギノサ株ＰＡＯ１（既知のバイオフィルム形成生物）により接種し、そしてすべての同時に作動するフィルターのフロースルー速度を、約８ｍｌ／時間／ｃｍ２に調節した。フィルターユニットは、さらに５０時間、上記条件下で作動し続けた。膜を通しての流速を、５分間にわたって、個々のフィルターユニットからの流出水量の体積を測定することにより、規則的間隔で決定した。実験の結論で、フィルターユニットを無菌分解し、そして実施可能な計算を、膜の培地部分及び０．１８ｃｍ２部分の両者に対して実施し、興味ある株及びシュードモナス・アエルギノサ株の両者の細胞密度を決定した。
【０１２４】
４８時間の時点（Ｆ４８）での測定値を、流れ比較のための最良な指示点として取った。
（Ｆ０−Ｆ４８）＊１００/Ｆ０＝流れの低下率％
興味ある菌株及び得られる流速を表２に提供する。
【０１２５】
【表３】
2018089627.tif 000005
【０１２６】
結果は、多くの菌株が膜を通しての流速を有意に改善したことを示す。
【０１２７】
実施例３
実験室規模のＭＢＲモデル（ＰＥＳ）
実験室規模のＭＢＲ実験を、ＰＶＤＦ膜とは対照的にポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）膜を用いて、実施例２に記載られる実験に類似して構成した。ＭＢＲユニットを、ＮＲＲＬ Ｂ−５０１４１ 又はＮＲＲＬ  B-５０１３６のいずれかにより、実験例２におけるようにして接種した。対照ユニットを、同様にして調製した（但し、興味ある菌株による接種されなかった）。フィルターユニットを、実施例２に特定される条件下で５０時間、作動し、そして膜を通しての流速を、５分間にわたって個々のフィルターユニットからの流出水量の体積を測定することにより、規則的間隔で決定した。４８時間の時点（Ｆ４８）での測定値を、流れ比較のための最良な指示点として取った。
（Ｆ０−Ｆ４８）＊１００/Ｆ０＝流れの低下率％
【０１２８】
ＰＥＳ膜を通しての流速の維持での菌株ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１及びＮＲＲＬ  Ｂ−５０１３６の効率が表３に与えられている。
【０１２９】
【表４】
2018089627.tif 000006
結果は、菌株ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１及びＮＲＲＬ  Ｂ−５０１３６がＰＥＳ膜を通しての流速を有意に改善したことを示す。
【０１３０】
実施例４
バチルス・アミロリケファシエンスＮＲＲＬ Ｂ−５０１４１のパイロットスケール試験。操作の前、微生物接種及び接種物水の再循環を伴ってのＭＢＲ膜コロニー形成及び流れ効果
この実施例に使用されるＭＢＲ装置の構成は、図１に記載される。
ＭＢＲ装置は、２０ｍ２の合計ＰＶＤＦ膜表面積を有し、そして合計２４１日間、実施された。１１０日から１５０日までの間隔は、参照期間として見なされる。次亜塩素酸ナトリウム（５００ppmのＣｌ２）を用いての数回の清浄行為を、化学的に汚れを低め、そして透過性を高めるために実施した。８９日での清浄は、３００Ｌ/ｍ２/時間/バールの透過率をもたらし、これは１５０日まで参照期間の間、持続した。この透過率は、それらの条件下でこの処理ブラントで典型的には観察される透過率である。次に、膜を、上記方法によりもう１度、清浄し、そして続いて、バチルス・アミロリケファシエンスＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１の胞子懸濁液により接種した。胞子接種物（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１）は、樹枝状塩（ＮａＣｌ）とＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１噴霧乾燥胞子濃縮物との約１０％（ｗ/ｗ）ブレンドで調製された。ＮＲＲＬ−Ｂ−５０１４１の最終濃度は、４．１１×１０１０ＣＦＵ／ｇであった。接種物は、輸送及び適用のために、青色キャップの円錐管（５０ｍｌのサイズ）中に２０ｇアリコートで分配された。
【０１３１】
接種剤を、約４００ｍｌの水中に２０ｇの接種物を添加することにより調製した。その混合物を約１分間、手動振盪し、水中に胞子を分散した。振盪混合物を、約１０〜１５Ｌの水を含む大きなバケツ中に注ぎ、そして撹拌ブレンドした。バケツ中の全内容物を、膜ホルダーの上部上の４６００Ｌのアエレーションタンク中に徐々に注ぎ、比較的均等に表面積を被覆した。接種物の添加の前、ＭＢＲ装置の条件は次の通りであった：水温２５℃、ｐＨ７．６、酸素圧５．８ｍ／ｌ及び水流９００Ｌ／時。接種物の添加に続いて、ＭＢＲ装置の条件は次の通りであった：水温２５℃、ｐＨ７．３５、酸素圧０．７ｍｇ／ｌ及び水流７５０Ｌ／時。最終ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１胞子濃度は、アエレーションタンクにおいて約１．８×１０５ＣＦＵ／ｍｌであった。接種剤を２０〜３０分間、分散し、続いて約２０時間、アエレーションタンクにおいて再循環するか、又は膜を通して水を約２．５回通し、膜とＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１接種剤との相互反応の機会を増強した。従って、膜表面積に対する添加される微生物の比率は約３．５×１０６ＣＦＵ／ｃｍ２である。
【０１３２】
ＭＢＲ装置の透過タンクにおける水レベルを、膜タンクにおける水レベル以下になるよう調節し、膜（ＴＭＰ）に対する圧力差異をもたらし、膜を通して水を動かした。ＴＭＰは、流入を制御するために、圧力トランスミッターを用いることにより２５０〜３００ｍｍの水カラムの区間において比較的一定したレベルで制御された。空気スカーリングを連続的に使用し、膜上でのスラッジケークの構築を妨げた。さらに、膜を通しての流れを、定期的に停止し、すなわち約１０分間の流れ、続いて２分間の流れの停止を伴い、スラッジ及びケーク構築の防止を助けた。
【０１３３】
削られたサンプルを、１９０日で又は約１９０日で採取した。サンプリングの間、空気スカーリングを停止し、そしてＭＢＲ流体の表面レベルを低め、膜の上部への物理的接近を可能した。これは、貯蔵タンク中への前記流体の一部の流入を可能にすることにより達成された。続いて、削りくずを、膜の短い水フラッシュの前及び後、サンプリングされた膜の側面又は中央部分上の流体表面上の露出膜表面から採取した。ＭＢＲ膜の約１０ｃｍ２に対応する６種の削りくず（サンプル１〜６）を、無菌のスクリューキャップ管中に入れ、そして微生物分析の前、冷却して（４〜１０℃）保存した。
【０１３４】
６種のサンプルの個々について削られた材料を、０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に再懸濁し、そして２３℃で３０分間、標準のリスト作動シェーカーにより振盪した。希釈溶液を、Standard Method Agar (SMA plates, Smith River Biologicals, Ferrum, VA, USA)上に標準技法によりプレートし、そして３５℃で２日間インキュベートした。
【０１３５】
膜削りくずから回収された細胞の％の評価を、明白なＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１形態学を有するコロニーの数を、異なった形態学を有するコロニーに数に比較して、定量化することにより入手した。サンプル１〜６の分析からの結果を包含するＭＢＲバイオフィルムサンプル情報が表４に示される。
【０１３６】
【表５】
2018089627.tif 000007
【０１３７】
ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１株の形態学に適合する形態学をサンプルの個々からのコロリーを単離し、そして個々の単離物からＤＮＡを精製し、そしてDiversaLab RAPD PCR−増幅方法（bioMerieux, Inc., Durham, NC, USAからのBacillus Kit repPCR材料を用いる、DiveraLab Strainタイピングソフトウェアを有するAgilent 2100 Bioanalyzer）を用いることにより、既知ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１親株に対する同一性について評価した。
【０１３８】
表５に詳しく述べられるように、選択されたすべての２４種の単離物（採取された６種の削りくずの個々から４種）は、既知の親ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１株に対して強い適合性を有した。異なったコロニータイプ（対照；単離物２６）を有する株は、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１と適合しなかった（すなわち、それは９０％以下の類似性を有した）。
【０１３９】
【表６】
2018089627.tif 000008
【０１４０】
実地試験評価におけるＭＢＲ流れに対するＮＲＲＬ  Ｂ−５１０４１の効果
増強された透過速度は、平均４００Ｌ／ｍ２／時間／バールの一定した透過性レベルを伴って、微生物接種の後の期間において（１５４〜２００日目）、著しく増強された。これは、温度及び圧力の実質的に同一の条件下で、参照期間、すなわち１０５〜１５２日（微生物接種を有さない）に比較して、微生物接種に続いて、全体の流速において約３３％の上昇率を表す（図２を参照のこと）。
【０１４１】
図２に示される透過性は、次の等式を用いて１５℃の標準温度に修正された毎月の平均正味透過流に基づかれている：
Ｆ１５℃＝Ｆtemp＊ｅ(−０．０２６７＊（Ｔ−１５）)
（式中、Ｆは流れ（Ｌ／ｍ２＊時）であり、Ｔは実際の温度であり、そして透過性＝Ｆ／圧力（バール）である。）
【０１４２】
トランスメンブラン圧力（ＴＭＰ）は一定に維持され、そして化学及び生化学パラメーターは参照及び試験期間を通して毎日、評価された。
【０１４３】
ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１の第２接種。再循環を伴わないでの微生物接種によるＭＢＲ膜コロニー形成及び維持される透過性増強
１９５日目又はほぼ１９５日目、ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１をＭＢＲタンク中に再び接種し、但し、第２接種の後の水再循環は行われなかった。約３７５ｌ／ｍ２／時間／バールの高い透過速度が２１２日まで維持された。
【０１４４】
接種の約２６日後、すなわち２１１日又はほぼ２１１日目、追加の削りかすを集め、そして上記と同じ方法を用いて分析した。コロニーの％及び株同一性についての結果が表６及び７に示される。膜削りかすにおける接種された株（ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１）の存在は、合計の回収された微生物株の７〜５２％であった。ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１株の同一性を、標準固形培地上の類似するコロニー形態学を有する単離された菌株の１６Ｓ ｒＤＮＡの１５００ｂｐのセグメントの高い相同配列分析により再び確かめた。これは、膜を通しての増強された透過性の時間の間、接触された菌株の存在を確かめた。
【０１４５】
【表７】
2018089627.tif 000009
【０１４６】
【表８】
2018089627.tif 000010
【０１４７】
実施例５
ＭＢＲ汚れ防止実験のためのバチルス・サブチリス株Ａ１６４（ＡＴＣＣ６０５１Ａ）中の興味ある遺伝子の破壊
バチルス・サブチリスＡ１６４（ＡＴＣＣ６０５１Ａ）のｒａｃＸ遺伝子を、ネオマイシン抗生物質に対する耐性を付与する遺伝子によるｒａｃＸコード配列のほとんどの置換により破壊した。この遺伝子破壊は三方向ＳＯＥ（オーバーラップ延長によるスプライシング）ＰＣＲを用いて、インビトロで構成された。
【０１４８】
３種のＤＮＡフラグメントをＰＣＲにより増幅した。バチルス・サブチリスｒａｃＸ遺伝子の下流のＤＮＡの領域を含むフラグメントを、プライマー０６１０９６４及び０６１０９６５を用いて、バチルス・サブチリスＡ１６４ゲノムＤＮＡから増幅した。ネオマシン耐性遺伝子（ｎｅｏ）を、プライマー０６１０９６６及び０６１０９６７を用いて、ｐＢＥＳＴ５０１プラスミドのＤＮＡ（Itaya et al., 1989, Nucl. Acids Res. 17:4410）から増幅した。バチルス・サブチリスｒａｃＸ遺伝子の上流のＤＮＡの領域を含むフラグメントを、プライマー０６１０９６８及び０６１０９６９を用いて、バチルス・サブチリスＡ１６４ゲノムＤＮＡから増幅した。
【０１４９】
プライマー０６１０９６４: ５'-GGATTAACGAGGGCCAAC-３' (配列番号:１)
プライマー ０６１０９６５: ５'-AGAATTGATCTGCGGCACATATCTTGCTTATCAAAGCTAG-３' (配列番号:２)
プライマー  ０６１０９６６: ５' -ATAAGCAAGATATGTGCCGCAGATCAATTCTGATAATTAC-３' (配列番号:３)
プライマー  ０６１０９６７: ５'-ATCGACCTCGCCGTTTATAGGTCGAGATCAGGGAATG-３' (配列番号:４)
プライマー ０６１０９６８: ５' -CATTCCCTGATCTCGACCTATAAACGGCGAGGTCGAT-３' (配列番号:５)
プライマー ０６１０９６９: ５'-TGCAGCATATCATGGCGT-３' (配列番号:６)
【０１５０】
ＰＣＲを、Phusion（登録商標）Hot Start DNA Polymerase (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA, USA)を用いて、その製造業者の説明に従って、PTC-200 Peltier 熱サイクラー(MJ Research, Inc., Waltham, MA, USA)により、次の温度プロフィールを用いて実施した：
９６℃で２分の１サイクル；
９４℃で３０秒；６０℃で４５秒、サイクル当たり１℃の低下；及び７２℃で１分の１１サイクル：
９４℃で３０秒；５０℃で４５秒；及び７２℃で１分、サイクル当たり５秒の上昇の２０サイクル：
７２℃で５分の１サイクル。
【０１５１】
プライマー０６１０９６及び０６１０９６６は、前記下流のｒａｃＸフラグメントがｎｅｏフラグメントに対して融合されるよう、お互い塩基対に対して企画された。同様に、プライマー０６１０９６７及び０６１０９６８は、ｎｅｏフラグメントが前記上流のｒａｃＸフラグメントに対して融合されるよう、お互い塩基対に対して企画された。３種のＰＣＲ生成物は、次の通りに、それらを単一のＰＣＲ生成物中に融合するために単一のＳＯＥ  ＰＣＲにおいて組合した。
【０１５２】
ＰＣＲ生成物を、QIAQUICK（登録商標）Gel Extraction Kit (QIAGEN Inc., Valencia, CA, USA)を用いて、その製造業者の説明書に従って精製し、そしてプライマー０６１０９６４及び０６１０９６９を用いて、ＳＯＥ  ＰＣＲにおいて鋳型ＤＮＡとして使用した。ＰＣＲを、Phusion（登録商標）Hot Start DNA Polymeraseを用いて、その製造業者の説明書に従って、ＰＣＲ−２００  Ｐｅｌｔｉｅｒ熱サイクラーにおいて、次の温度プロフィールを用いて実施した：
９６℃で２分の１サイクル；
９４℃で３０秒；６０℃で４５秒  サイクル当たり１℃の低下；及び７２℃で３分の１１サイクル；
９４℃で３０秒；５０℃で４５秒；及び７２℃で３分、サイクル当たり２０秒の上昇；サイクル当たり２０秒の上昇の２０サイクル；
７２℃で５分の１サイクル。
【０１５３】
得られるｒａｃＸ：：ｎｅｏ  ＰＣＲ生成物を、QIAQUICK（登録商標）Gel Extraction Kitを用いて、その製造業者の説明書に従って精製した。多量のＰＣＲ生成物を生成するために、精製されたｒａｃＸ：：ｎｅｏ  ＰＣＲを、プライマー０６１０９６４及び０６１０９６９を用いてＰＣＲにおいて鋳型ＤＮＡとして使用した。ＰＣＲを、ＳＯＥ  ＰＣＲについて記載されるようにして実施した。
【０１５４】
バチルス・サブチリスＡ１６４を、得られるＰＣＲフラグメントにより、Anagnostopoulos及びSpizizen (J. Bacteriol. 81 :741-746 (1961 ))の方法に従って形質転換した。形質転換体を、３７℃でＴＢＡＢネオマイシンプレート上で選択した。ＴＢＡＢ培地は、Difco Tryptose Blood Agar Base (BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ, USA)から構成された。ＴＢＡＢネオマイシンプレートは、ＴＢＡＢ培地及び１ｍｌ当たり６μｇのネオマイシンから構成された。１つのそのような形質転換体を、バチルス・サブチリスＭＤＴ３６１と命名した。ｎｅｏ遺伝子の挿入のよるｒａｃＸ遺伝子の破壊を、ＰＣＲ及びＤＮＡ配列決定により確かめた。
【０１５５】
バチルス・サブチリスＡ１６４のｙｌｍＥ遺伝子を、スペクチノマイシン抗生物質に対する耐性を付与する遺伝子によるｙｌｍＥコード配列のほとんどの置換により破壊した。遺伝子破壊は、三方向ＳＯＥ（オーバーラップ延長によるスプライシング）を用いて、インビトロで構成された。
【０１５６】
３種のＤＮＡフラグメントをＰＣＲにより増幅した。バチルス・サブチリスｙｌｍＥ遺伝子の上流のＤＮＡの領域を含むフラグメントを、プライマー０６１０９７０及び０６１０９７１を用いて、バチルス・サブチリスＡ１６４ゲノムＤＮＡから増幅した。スペクチノマイシン耐性遺伝子（ｓｐｃ）を、プライマー０６１０９７２及び０６１０９７３を用いて、ｐＳＪ５２１８プラスミドＤＮＡ（国際出願ＷＯ  ２００２／０００９０７号）から増幅した。バチルス・サブチリスｙｌｍＥ遺伝子の下流のＤＮＡの領域を含むフラグメントを、プライマー０６１０９７４及び０６１０９７５を用いて、バチルス・サブチリスＡ１６４ゲノムＤＮＡから増幅した。
【０１５７】
プライマー ０６１０９７０: ５'-TATTGGGGAGGAAGTTGG-３' (配列番号:７)
プライマー ０６１０９７１ : ５'-TTTCACAATTTGTCTACAGCGTAAATTATCAACAACACG C-３' (配列番号:８)
プライマー ０６１０９７２: ５'-TTGTTGATAATTTACGCTGTAGACAAATTGTGAAAGGATG-３' (配列番号:９)
プライマー ０６１０９７３: ５'-ACTAACGATGCCACTAATATTAATAAACTATCGAAGGAAC-３' (配列番号:１０)
プライマー ０６１０９７４: ５'-TAGTTTATTAATATTAGTGGCATCGTTAGTCGGAAATGAA-３' (配列番号:１１)
プライマー ０６１０９７５: ５'-CTTCAATCAGCATTTGGAAAC-３' (配列番号:１２)
【０１５８】
ＰＣＲを、ＰＴＣ−２００  Ｐｅｌｔｉｅｒ熱サイクラーにおいて、Phusion（登録商標） Hot Start DNA Polymeraseを用いて、その製造者の説明書に従って、次の温度プロフィールを用いて実施した：
９６℃で２分の１サイクル；
９４℃で３０秒；６０℃で４５秒、サイクル当たり１℃の低下；及び７２℃で１分の１１リサイクル；
９４℃で３０秒；５０℃で４５秒；及び７２℃で１分の２０サイクル、サイクル当たり５秒の上昇；
７２℃で５分の１サイクル。
【０１５９】
プライマー０６１０９７１及び０６１０９７２を、上流のｙｌｍＥフラグメントがｓｐｃフラグメントに対して融合されるよう、お互い塩基対に企画した。同様に、プライマー０６１０９７３及び０６１０９７４を、ｓｐｃフラグメントが下流のｙｌｍＥフラグメントに対して融合されるよう、お互い塩基対に企画される。３種のＰＣＲ生成物を、次の通りに単一のＳＯＥ  ＰＣＲにおいて組合し、それらを単一のＰＣＲ生成物中に融合した。
【０１６０】
ＰＣＲ生成物を、QIAQUICK（登録商標）Gel Extraction Kit (QIAGEN Inc., Valencia, CA, USA)を用いて、その製造業者の説明書に従って精製し、そしてプライマー０６１０９７０及び０６１０９７０５を用いて、ＳＯＥ  ＰＣＲにおいて鋳型ＤＮＡとして使用した。ＰＣＲを、Phusion（登録商標）Hot Start DNA Polymeraseを用いて、その製造業者の説明書に従って、ＰＣＲ−２００  Ｐｅｌｔｉｅｒ熱サイクラーにおいて、次の温度プロフィールを用いて実施した：
９６℃で２分の１サイクル；
９４℃で３０秒；６０℃で４５秒  サイクル当たり１℃の低下；及び７２℃で３分の１１サイクル；
９４℃で３０秒；５０℃で４５秒；及び７２℃で３分、サイクル当たり５秒の上昇；サイクル当たり２０秒の上昇の２０サイクル；
７２℃で５分の１サイクル。
【０１６１】
得られるｙｌｍＥ：：ｓｐｃ  ＰＣＲ生成物を、QIAQUICK（登録商標）Gel Extraction Kitを用いて、その製造業者の説明書に従って精製した。多量のＰＣＲ生成物を生成するために、精製されたｙｌｍＥ：：ｓｐｃ  ＰＣＲを、プライマー０６１０９７０  及び０６１０９７０５を用いてＰＣＲにおいて鋳型ＤＮＡとして使用した。ＰＣＲを、ＳＯＥ  ＰＣＲについて記載されるようにして実施した。
【０１６２】
バチルス・サブチリスＡ１６４を、得られるＰＣＲフラグメントにより、Anagnostopoulos及びSpizizen (J. Bacteriol. 81 :741-746 (1961))の方法に従って形質転換した。形質転換体を、３７℃でＴＢＡＢスペクチノマイシンプレート上で選択した。ＴＢＡＢ培地は、Difco Tryptose Blood Agar Base (BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ, USA)から構成された。ＴＢＡＢスペクチノマイシンプレートは、ＴＢＡＢ培地及び１ｍｌ当たり１２０μｇのスペクチノマイシンから構成された。１つのそのような形質転換体を、バチルス・サブチリスＭＤＴ３６２と命名した。ｓｐｃ遺伝子の挿入のよるｙｌｍＥ遺伝子の破壊を、ＰＣＲ及びＤＮＡ配列決定により確かめた。
【０１６３】
形質転換体バチルス・サブチリスＭＤＴ３６２を、Anagnostopoulos and Spizizen (J. Bacteriol. 81 :741 -746 (1961))の方法に従って、バチルス・サブチリスＭＤＴ３６１からのゲノムにより形質転換した。形質転換体を、３７℃でＴＢＡＢネオマイシンプレート上で選択した。１つのそのような形質転換体を、バチルス・サブチリスＭＤＴ３６３として命名した。ｎｅｏ遺伝子の挿入によるｒａｃＸ遺伝子の破壊、及びｓｐｃ遺伝子の挿入によるｙｌｍＥ遺伝子の破壊を、ＰＣＲ及びＤＮＡ配列決定により確かめた。
【０１６４】
野生型Ａ１６４及びＢ．サブチリスＡ１６４の遺伝子ノックアウトを、２００ｒｐｍで振盪しながら、０．５×Lysogenyブイヨン（ＬＢ）において約１６時間、増殖した。増殖の後、培養物密度、血球計上での直接的な計数により決定した。膜ディスクを、フィルターホルダーに配置し、そしてまず１００％イソプロパノール、次に１０％過塩素酸ナトリウムにより処理した。膜及びホルダーを、無菌水によりすすぎ、次に１ｍｌの合計体積で注射器を通して１００個の細胞／ｍｌ−１で試験される株を含む０．１×ＬＢにより接種し、そして２５０ｒｐｍで約１６時間、２５℃でインキュベートした。続いて、膜を、１ｍｌの０．１×ＬＢ中、１００個の細胞／ｍｌ−１の割合でＰ．アエルギノサ株ＰＡＯ１により接種し、そして２５０ｒｐｍで振盪しながら２５℃で一晩インキュベートした。培地及び浮遊細胞を、注射器によりフィルターホルダーの内容物を吸引することにより、そのホルダーから除外した。続いて、流速を、３ｍｌのリン酸緩衝液（PBS）を含む注射器を備えた真空マニホールドの個々の口上に処理された及び未処理のフィルターを配置し、そして−２．０バールの真空を５分間、適用することにより決定した。濾液を別々に、個々のフィルターについて回収し、そしてフロースルー体積を重力分析的に決定した。表されるデータは、フロースルーの平均体積±１標準偏差である。表８を参照のこと。フロースルー体積の有意差を、ｙＦＩｎＤ破壊変異体及びニ重ラセマーゼノックアウトｒａｃX＋ｙｌｍＥのために観察された。攻撃されていない菌株及びバイオフィルム形成形としてのＰＡＯ１により攻撃された菌株を、三重反復して試験した。
【０１６５】
【表９】
2018089627.tif 000011
【０１６６】
実施例６
バチルス・サブチリスＮＲＲＬ  Ｂ−５０１３６の二重−トラック大規模実験室試験
類似する接種されていないＭＢＲ膜と比較される、微生物接種されたＭＢＲ膜の流れ効果及びコロニー形成。
【０１６７】
この実験に使用されるＭＢＲ装置の構成は、図３に記載される。明確にするために、２つの同一のＭＢＲユニットの１つのみが描かれている。実施例６のＭＢＲについての工程パラメータが表９に開示されている。
【０１６８】
適用されるフラットシート膜は、Alfa Laval A Sにより製造される、０．２μｍの平均孔サイズのＰＶＤＦミクロ濾過膜である。膜は１０枚の膜のカセットで積層され、現試験における有効膜面積は０．８ｍ２であった。反応器は、１０Ｌ/分・ｍ２の膜スカーリングのために一定のアエレーションにより両者とも好気性にされる。反応器の側面に沿って、エアレーション（合計２０Ｌ／分）が同様に確立され、沈殿が回避され、そして反応器の完全な混合が確保される。
【０１６９】
トランスメンブラン圧力（ＴＭＰ）を、膜反応器及び透過緩衝液装置の水レベルの差異として確立する。適用される有効ＴＭＰは３０ｍバールであった（流量計及び透過装置の圧力低下は存在しなかった）。２分の弛緩が、ポンプ活動を停止することにより、それぞれ１０分の濾過の後、適用された。反応器は最初に、Aalborg East WWTP (廃水処理プラント)からの活性化スラッジにより接種され、そしてＭＢＲがＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１について実施例４に記載される同じ割合及び濃度で、バチルス・サブチリスＮＲＲＬ  Ｂ−５０１３６により接種される前、約１ヶ月間、順応された。スラッジを、１０ｇ／Ｌの一定のＭＬＳＳを維持するために毎日、採取した。このスラッジ除去は、２５〜３０日のスラッジ齢（ＳＲＴ）をもたらした。
【０１７０】
【表１０】
2018089627.tif 000012
【０１７１】
廃水は、水道水及び濃縮された基質の混合物から構成された。水道水注入口は、入口緩衝液タンクにおけるフロートバルブにより制御された。濃縮された基質は、別々の入力ラインから添加され、そしてその添加は、０．１ｋｇのＢＯＤ／ｋｇ  ＭＬＳ／日のＦ／Ｍ
比率設定の後、制御された。濃縮された基質は、脱イオン水と共に混合され、ブレンドされ、そして添加の前、大きな粒子及びファイバーを除去するために沈殿される標準の市販イヌ用飼料であった。さらに、きめの細かい市販のフィシュミールを基質混合物に添加し、合計タンパク質含有率を高めた。濃縮された基質組成は表１０に開示される。
【０１７２】
【表１１】
2018089627.tif 000013
【０１７３】
１８−日の試験期間からの十分な結果が図３に提供される。その結果は、約５日の初期期間の操作の後、未処理反応器の流速は急速に低下し、そしてＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１により処理された反応器は、約１８日の操作まで、この点から高い流速を維持したことを示す。約１０．５日の後−接種で、バチルス・サブチリスＮＲＲＬ  Ｂ−５０１３６により処理されたＭＢＲ反応器は、未処理の反応器よりも３４％早い流れを示した。３−時間周期の約９日の後−接種からの代表的データのより接近した視点が図４に提供される。規則的ポンプ弛緩現象、すなわちＭＢＲ操作のための標準的実施はそれぞれ２分間、続き、そして１０分間隔で生じた。結果は、未処理のＭＢＲ反応器弛緩現象がすぐに一時的な流速の上昇、続いて低下をもたらし、ところが処理された反応器においては、より早い流速が、弛緩現象にもかかわらず、維持されることを示す。それらの結果は、処理された反応器膜が、未処理の反応器における膜ほど影響されないことを示唆する。
【０１７４】
本発明は、次の番号付けされた項目により記載される：
１．１つの工程に使用される膜の透過性又は１つの工程に使用される膜を通しての流れを改善するための方法であって、前記膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物に前記膜を供することを含んで成る方法。
【０１７５】
２．前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の細菌株を包含する、パラグラフ１の方法。
【０１７６】
３．前記１又は２以上の微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成微生物である、パラグラフ１記載の方法。
【０１７７】
４．前記１又は２以上の細菌株が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成細菌株である、パラグラフ２の方法。
【０１７８】
５．前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる、１又は２以上の細菌株、１又は２以上の菌類株又は１又は２以上の細菌及び菌類株の混合物を包含する、パラグラフ１の方法。
【０１７９】
６．前記膜が、バチルスssp.、例えばバチルス・アミロリケファシエンス; バチルス・アトロファエウス; バチルス・アゾトホルマンス; バチルス・ブレビス; バチルス・セレウス; バチルス・サークランス; バチルス・クラウジ; バチルス・コーグランス; バチルス・ファーマス; バチルス・フレキウス; バチルス・フシホルミス; バチルス・グロビスポラス; バチルス・グルカノライチカス; バチルス・インンフェルマス; バチルス・ラエボラクチカス; バチルス・リケニホルミス; バチルス・マリナス; バチルス・メガテリウム; バチルス・モジャベンシス; バチルス・ミコイデス; バチルス・パリダス; バチルス・パラブレビス; バチルス・パステウリ; バチルス・ポリミキサ; バチルス・ポピリアエ; バチルス・プミラス; バチルス・スファエリカス; バチルス・サブチリス; バチルス・サーモアミロボランス;又はバチルス・スリンギエンシスの株にさらされる、パラグラフ１〜５のいずれか１の方法。
【０１８０】
７．前記膜が、バチルス・アミロリケファシエンス又はバチルス・サブチリスの株にさらされる、パラグラフ１〜６のいずれか１の方法。
【０１８１】
８．前記膜が、ブレビバシラス  spp.、例えば、ブレビバシラス・ブレビス; ブレビバシラス・ホルモサス; ブレビバシラス・ラテロスポラス; 又は ブレビバシラス・パラブレビスの株にさらされる、パラグラフ１〜７のいずれか１の方法。
【０１８２】
９．前記膜が、パエニバチルスspp.、例えば、パエニバチルス・アルベイ; パエニバチルス・アミロリチカス; パエニバチルス・アゾトフィクサンス; パエニバチルス・コーキイ; パエニバチルス・マセランス; パエニバチルス・ポリミクサ; 又は パエニバチルス・バリダスの株にさらされる、パラグラフ１〜８のいずれか１の方法。
【０１８３】
１０．前記膜が、ロードコッカス spp.）、例えば、ロードコッカス・コプロコッカス; ロードコッカス・エリトロポリス; ロードコッカス・マリノナセンス; ロードコッカス・ロードクロウス; ロードコッカス・ルベル、 又は ロードコッカス・ゾフィイの株にさらされる、パラグラフ１〜９のいずれか１の方法。
【０１８４】
１１．前記膜が、エシェリヒア spp.、例えば、エシェリヒア・アルベルチ; エシェリヒア・ブラタエ; エシェリヒア・コリ; エシェリヒア・フェルグソニ; エシェリヒア・ヘルマンニ; 又は エシェリヒア・ブルネリスの株にさらされる、パラグラフ１〜１０のいずれか１項記載の方法。
【０１８５】
１２．前記膜が、エンテロバクターspp.、例えば、エンテロバクター・クロアカエ; エンテロバクター・ジソルベンス; エンテロバクター・ゲルゴビアエ; エンテロバクター・ニミプレスラリス; 又は エンテロバクター・ピリナスの株にさらされる、パラグラフ１〜１１のいずれか１の方法。
【０１８６】
１３．前記膜が、シトロバクター spp.、例えば、シトロバクター・アマロナチカス; シトロバクター・コセリ; 又は シトロバクター・フレウンジの株にさらされる、パラグラフ１〜１２のいずれか１の方法。
【０１８７】
１４．前記膜が、サルモネラ spp.、例えば、 サルモネラ・ボンゴリ; 又はサルモネラ・エンテリカの株にさらされる、パラグラフ１〜１３のいずれか１の方法。
【０１８８】
１５．前記膜が、ペニシリウム spp.、例えば、ペニシリウム・アウランチオグリセウム; ペニシリウム・ビライアエ; ペニシリウム・カメムベリチ; ペニシリウム・カンジダム; ペニシリウム・カリソゲナム; ペニシリウム・クラビホルメ; ペニシリウム・コムネ; ペニシリウム・クルストサム; ペニシリウム・ジジタタム; ペニシリウム・イクスパンサム; ペニシリウム・フニクロサム; ペニシリウム・グラブラム; ペニシリウム・グラカム; ペニシリウム・イタリカム; ペニシリウム・ラクサルミエンテル；ペニシリウム・マルネフェイ; ペニシリウム・プロプロゲナム; ペニシリウム・ロクエフォルチ; ペニシリウム・ストロニフェラム; ペニシリウム・ウライエンス; ペニシリウム・ベルコサム;又はペニシリウム・ビリジカタムの株にさらされる、パラグラフ１〜１４のいずれか１の方法。
【０１８９】
１６．前記改善された流れが、これまでのより大きな装置により提供される場合、必要とされる最適な廃水流及び体積を維持すると共に、より小さな断面積を有する膜装置の使用を可能にする、パラグラフ１〜１５のいずれかの方法。
【０１９０】
１７．前記改善された流れがより小さな膜表面積を有する膜の使用を可能にする、パラグラフ１〜１６のいずれか１の方法。
【０１９１】
１８．前記膜が膜バイオリアクター装置の一部である、パラグラフ１〜１７のいずれか１の方法。
【０１９２】
１９．前記工程が水処理工程である、パラグラフ１〜１８のいずれか１の方法。
【０１９３】
２０．前記水処理工程が廃水処理工程である、パラグラフ１〜１９のいずれか１の方法。
【０１９４】
２１．前記１又は２以上の微生物が、クオラムセンシング阻害を通してバイオフィルム形成を妨げるか又は低めることができる、パラグラフ１〜２０のいずれか１の方法。
【０１９５】
２２．前記１又は２以上の細菌が、クオラムセンシング阻害を通してバイオフィルム形成を妨げるか又は低めることができる、パラグラフ１〜２１のいずれか１の方法。
【０１９６】
２３．前記１又は２以上の細菌株が、バチルス菌の菌株から選択される、パラグラフ１〜２２のいずれか１の方法。
【０１９７】
２４．前記１又は２以上のバチルス株が、
受託番号ＡＴＣＣ１４５８１を有するバチルス・メガテリウム株；
受託番号ＡＴＣＣ７００３８５を有するバチルス・プミラス株；
受託番号ＡＴＣＣ３５６８１を有するパエニバチルス・アゾトフィキサンス（Paenibacillus azotofixans）株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１４を有するバチルス・リケニホルミス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１５を有するバチルス・リケニホルミス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１６を有するバチルス・プミラス株；
受託番号ＡＴＣＣ  ６０５１Ａを有するバチルス・サブチリス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１７を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１８を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１３６を有するバチルス・サブチリス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０３０４を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０３４９を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−３１４２を有するバチルス・メガテリウム株；
受託番号ＰＴＡ−７５４１を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４２を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４３を有するバチルス・アトロファエウス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４４を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４５を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４６を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４７を有するバチルス・サブチリス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４９を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７７９０を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７７９１を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７７９２を有するバチルス・アトロファエウス株；及び
受託番号ＰＴＡ−７７９３を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；又は前記複数の株の混合物から成る群から選択される、パラグラフ６の方法。
【０１９８】
２５．前記１又は２以上の細菌株が、１×１０３〜１×１０１０ ＣＦＵ／ｍｌの最終濃度で膜に対して導入される、パラグラフ１〜２４のいずれか１の方法。
【０１９９】
２６．前記１又は２以上の細菌株が、１×１０４〜１×１０１１ ＣＦＵ／ｍｌの最終濃度で膜に対して導入される、パラグラフ１〜２５のいずれか１の方法。
【０２００】
２７．前記膜が、その膜が使用される工程にゆだねられる前、約１分〜約２日間、１又は２以上の細菌株にさらされる、パラグラフ１〜２６のいずれか１の方法。
【０２０１】
２８．前記膜バイオリアクターが、浸水された又は浸された工程形状である、パラグラフ１８〜２７のいずれか１の方法。
【０２０２】
２９．前記廃水が産業又は農業工程からである、パラグラフ１８〜２８のいずれか１の方法。
【０２０３】
３０．１つの工程に使用される膜の決定的流れを高める方法であって、前記膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物に前記膜を供することを含んで成る方法。
【０２０４】
３１．前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の細菌株を包含する、パラグラフ３０の方法。
【０２０５】
３２．前記１又は２以上の微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成微生物である、パラグラフ３０の方法。
【０２０６】
３３．前記１又は２以上の細菌株が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成細菌株である、パラグラフ３１の方法。
【０２０７】
３４．前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる、１又は２以上の細菌株、１又は２以上の菌類株又は１又は２以上の細菌及び菌類株の混合物を包含する、パラグラフ３０の方法。
【０２０８】
３５．前記膜が膜バイオリアクター装置の一部である、パラグラフ３０の方法。
【０２０９】
３６．前記工程が水処理工程である、パラグラフ３０の方法。
【０２１０】
３７．前記水処理工程が廃水処理工程である、パラグラフ３６の方法。
【０２１１】
３８．前記１又は２以上の微生物が、クオラムセンシング阻害を通してバイオフィルム形成を妨げるか又は低めることができる、パラグラフ３０〜３７のいずれか１の方法。
【０２１２】
３９．前記１又は２以上の細菌株が、バチルス菌の菌株から選択される、パラグラフ３０〜３８のいずれか１の方法。
【０２１３】
４０．前記１又は２以上の細菌株が、１×１０３〜１×１０１０ ＣＦＵ／ｍｌの最終濃度で膜に対して導入される、パラグラフ３０〜３９のいずれか１の方法。
【０２１４】
４１．前記１又は２以上の細菌株が、１×１０４〜１×１０１１ ＣＦＵ／ｍｌの最終濃度で膜に対して導入される、パラグラフ３０〜４０のいずれか１の方法。
【０２１５】
４２．前記膜が、その膜が使用される工程にゆだねられる前、約１分〜約２日間、１又は２以上の細菌株にさらされる、パラグラフ３０〜４１のいずれか１の方法。
【０２１６】
４３．前記膜バイオリアクターが、浸水された又は浸された工程形状である、パラグラフ３０〜４２のいずれか１の方法。
【０２１７】
４４．前記廃水が産業又は農業工程からである、パラグラフ３０〜４３のいずれか１の方法。
【０２１８】
４５．１つの工程に使用される膜の汚れを低めるか又は妨げる方法であって、前記膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物に前記膜を供することを含んで成る方法。
【０２１９】
４６．前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の細菌株を包含する、パラグラフ４５の方法。
【０２２０】
４７．前記１又は２以上の微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成微生物である、パラグラフ４５の方法。
【０２２１】
４８．前記１又は２以上の細菌株が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成細菌株である、パラグラフ４６の方法。
【０２２２】
４９．前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる、１又は２以上の細菌株、１又は２以上の菌類株又は１又は２以上の細菌及び菌類株の混合物を包含する、パラグラフ４５の方法。
【０２２３】
５０．前記膜が膜バイオリアクター装置の一部である、パラグラフ４５の方法。
【０２２４】
５１．前記工程が水処理工程である、パラグラフ４５又は５０の方法。
【０２２５】
５２．前記水処理工程が排水処理工程である、パラグラフ５１の方法。
【０２２６】
５３．前記１又は２以上の微生物がクオラムセンシング阻害を通してバイオフィルム形成を妨げるか又は低めることができる、パラグラフ４５〜５２のいずれか１の方法。
【０２２７】
５４．前記１又は２以上の細菌が、クオラムセンシング阻害を通してバイオフィルム形成を妨げるか又は低めることができる、パラグラフ４５〜５３のいずれか１の方法。
【０２２８】
５５．前記１又は２以上の細菌株が、バチルス菌の菌株から選択される、パラグラフ４５〜５４のいずれか１の方法。
【０２２９】
５６．前記１又は２以上の細菌株が、１×１０３〜１×１０１０ ＣＦＵ／ｍｌの最終濃度で膜に対して導入される、パラグラフ４５〜５５のいずれか１の方法。
【０２３０】
５７．前記１又は２以上の細菌株が、１×１０４〜１×１０１１ ＣＦＵ／ｍｌの最終濃度で膜に対して導入される、パラグラフ４５〜５６のいずれか１の方法。
【０２３１】
５８．１つの工程に使用される膜の透過性又は１つの工程に使用される膜を通しての流れを改善するための方法であって、前記膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物を前記膜に添加することを含んで成る方法。
【０２３２】
５９．１つの工程に使用される膜の決定的流れを高める方法であって、前記膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物を前記膜に添加することを含んで成る方法。
【０２３３】
６０．１つの工程に使用される膜の汚れを低めるか又は妨げる方法であって、前記膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物を前記膜に添加することを含んで成る方法。
【０２３４】
６１．前記膜が、その膜が使用される工程にゆだねられる前、約１分〜約２日間、１又は２以上の細菌株にさらされる、パラグラフ４５〜６０のいずれか１の方法。
【０２３５】
６２．前記膜バイオリアクターが、浸水された又は浸された工程形状である、パラグラフ４５〜６１のいずれか１の方法。
【０２３６】
６３．前記廃水が産業又は農業工程からである、パラグラフ４５〜６２のいずれか１の方法。
【０２３７】
６４．パラグラフ１〜６３のいずれか１の方法を含んで成る、ＭＢＲ装置能力の改善方法。
【０２３８】
６５．パラグラフ１〜６４のいずれか１の方法を含んで成る、ＭＢＲ装置の膜表面積を低めるための方法。
【０２３９】
６６．パラグラフ１〜６５のいずれか１の方法を含んで成る、ＭＢＲ装置の製造費用を低めるための方法。
【０２４０】
６７．パラグラフ１〜６６のいずれか１の方法を含んで成る、ＭＢＲ装置内の膜の数を低めるための方法。
【０２４１】
６８．所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物、及び１又は２以上の追加の成分を含んで成る、膜濾過装置への使用のための組成物。
【０２４２】
６９．前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の細菌株を包含する、パラグラフ６８の組成物。
【０２４３】
７０．前記１又は２以上の微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成微生物である、パラグラフ６８の組成物。
【０２４４】
７１．前記１又は２以上の細菌株が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成細菌株である、パラグラフ６８記載の組成物。
【０２４５】
７２．前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる、１又は２以上の細菌株、１又は２以上の菌類株又は１又は２以上の細菌及び菌類株の混合物を包含する、パラグラフ６８記載の組成物。
【０２４６】
７３．前記微生物が、クオラムセンシング阻害を通してバイオフィルム形成を妨げるか又は低めることができる、パラグラフ１〜７２のいずれか１の組成物。
【０２４７】
７４．前記微生物が、１又は２以上のラセマーゼの発現を通してＬ−チロシンをＤ−チロシンに転換することによりバイオフィルム形成を妨げるか又は低めることができる、パラグラフ１〜７３のいずれか１の組成物。
【０２４８】
７５．前記微生物が、ｙｌｍＥラセマーゼの発現を通してＬ−チロシンをＤ−チロシンに転換することによりバイオフィルム形成を妨げるか又は低めることができる、パラグラフ１〜７４のいずれか１の組成物。
【０２４９】
７６．前記微生物が、ｒａｃＸラセマーゼの発現を通してＬ−チロシンをＤ−チロシンに転換することによりバイオフィルム形成を妨げるか又は低めることができる、パラグラフ１〜７５のいずれか１の組成物。
【０２５０】
７７．前記１又は２以上の追加の成分が、界面活性剤、酵素又はそれらの組合せを含む、パラグラフ１〜７６のいずれか１の組成物。
【０２５１】
７８．流入口との間に配置される少なくとも１つの膜を有する流出口に連結される流入口；及び
前記膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることできる、濾過装置への添加のために選択される１又は２以上の微生物、を含んで成る濾過装置。
【０２５２】
７９．前記膜がフラットシートミクロ濾過膜である、パラグラフ７８の装置。
【０２５３】
８０．前記膜がポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜又はポリエチルスルホン（ＰＥＳ）膜である、パラグラフ７８〜７９のいずれか１の装置。
【０２５４】
８１．前記膜が膜バイオリアクター装置の一部である、パラグラフ７８〜８０のいずれか１の装置。
【０２５５】
８２．前記膜バイオリアクターが、浸水された又は浸された装置形状である、パラグラフ７９〜８１のいずれか１の装置。
【０２５６】
８３．前記装置が水処理装置である、パラグラフ７９〜８２のいずれか１の装置。
【０２５７】
８４．前記水処理装置が廃水処理装置である、パラグラフ７９〜８３のいずれか１の装置。
【０２５８】
８５．前記廃水が産業又は農業工程からである、パラグラフ７９〜８４のいずれか１の装置。
【０２５９】
８６．膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物が、装置の操作のために必要な膜の合計表面積を低める、パラグラフ７９〜８５のいずれか１の装置。
【０２６０】
８７．膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の微生物が、装置の操作のために必要な膜の合計数を低める、パラグラフ７９〜８６のいずれか１項記載の装置。
【０２６１】
８８．前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる１又は２以上の細菌株を包含する、パラグラフ７９〜８７のいずれか１の装置。
【０２６２】
８９．前記１又は２以上の微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成微生物である、パラグラフ７９〜８８のいずれか１の装置。
【０２６３】
９０．前記１又は２以上の細菌株が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる胞子形成細菌株である、パラグラフ７９〜８９のいずれか１の装置。
【０２６４】
９１．前記微生物が、膜上での所望しないバイオフィルム形成を低めるか又は妨げることができる、１又は２以上の細菌株、１又は２以上の菌類株又は１又は２以上の細菌及び菌類株の混合物を包含する、パラグラフ７９〜９０のいずれか１の装置。
【０２６５】
９２．前記装置が、バチルスssp.、例えばバチルス・アミロリケファシエンス; バチルス・アトロファエウス; バチルス・アゾトホルマンス; バチルス・ブレビス; バチルス・セレウス; バチルス・サークランス; バチルス・クラウジ; バチルス・コーグランス; バチルス・ファーマス; バチルス・フレキウス; バチルス・フシホルミス; バチルス・グロビスポラス; バチルス・グルカノライチカス; バチルス・インンフェルマス; バチルス・ラエボラクチカス; バチルス・リケニホルミス; バチルス・マリナス; バチルス・メガテリウム; バチルス・モジャベンシス; バチルス・ミコイデス; バチルス・パリダス; バチルス・パラブレビス; バチルス・パステウリ; バチルス・ポリミキサ; バチルス・ポピリアエ; バチルス・プミラス; バチルス・スファエリカス; バチルス・サブチリス; バチルス・サーモアミロボランス;又はバチルス・スリンギエンシスの株を含む、パラグラフ７９〜９１のいずれか１の装置。
【０２６６】
９３．前記装置が、バチルス・アミロリケファシエンス又はバチルス・サブチリスの株を含む、パラグラフ７９〜９２のいずれか１の装置。
【０２６７】
９４．前記装置が、ブレビバシラス  spp.、例えば、ブレビバシラス・ブレビス; ブレビバシラス・ホルモサス; ブレビバシラス・ラテロスポラス; 又は ブレビバシラス・パラブレビスの株を含む、パラグラフ７９〜９３のいずれか１の装置。
【０２６８】
９５．前記装置が、パエニバチルスspp.、例えば、パエニバチルス・アルベイ; パエニバチルス・アミロリチカス; パエニバチルス・アゾトフィクサンス; パエニバチルス・コーキイ; パエニバチルス・マセランス; パエニバチルス・ポリミクサ; 又は パエニバチルス・バリダスの株にさらされる、パラグラフ１〜８のいずれか１の装置。
【０２６９】
９６．前記膜が、ロードコッカス spp.）、例えば、ロードコッカス・コプロコッカス; ロードコッカス・エリトロポリス; ロードコッカス・マリノナセンス; ロードコッカス・ロードクロウス; ロードコッカス・ルベル、 又は ロードコッカス・ゾフィイの株を含む、パラグラフ７９〜９４のいずれか１の装置。
【０２７０】
９７．前記装置が、エシェリヒア spp.、例えば、エシェリヒア・アルベルチ; エシェリヒア・ブラタエ; エシェリヒア・コリ; エシェリヒア・フェルグソニ; エシェリヒア・ヘルマンニ; 又は エシェリヒア・ブルネリスの株を含む、パラグラフ７９〜９６のいずれか１の装置。
【０２７１】
９８．前記装置が、エンテロバクターspp.、例えば、エンテロバクター・クロアカエ; エンテロバクター・ジソルベンス; エンテロバクター・ゲルゴビアエ; エンテロバクター・ニミプレスラリス; 又は エンテロバクター・ピリナスの株を含む、パラグラフ７９〜９７のいずれか１の装置。
【０２７２】
９９．前記装置が、シトロバクター spp.、例えば、シトロバクター・アマロナチカス; シトロバクター・コセリ; 又はシトロバクター・フレウンジの株を含む、パラグラフ７９〜９８のいずれか１の装置。
【０２７３】
１００．前記装置が、サルモネラ spp.、例えば、サルモネラ・ボンゴリ; 又はサルモネラ・エンテリカの株を含む、パラグラフ７９〜９９のいずれか１の装置。
【０２７４】
１０１．前記装置が、ペニシリウム spp.、例えば、ペニシリウム・アウランチオグリセウム; ペニシリウム・ビライアエ; ペニシリウム・カメムベリチ; ペニシリウム・カンジダム; ペニシリウム・カリソゲナム; ペニシリウム・クラビホルメ; ペニシリウム・コムネ; ペニシリウム・クルストサム; ペニシリウム・ジジタタム; ペニシリウム・イクスパンサム; ペニシリウム・フニクロサム; ペニシリウム・グラブラム; ペニシリウム・グラカム; ペニシリウム・イタリカム; ペニシリウム・ラクサルミエンテル；ペニシリウム・マルネフェイ; ペニシリウム・プロプロゲナム; ペニシリウム・ロクエフォルチ; ペニシリウム・ストロニフェラム; ペニシリウム・ウライエンス; ペニシリウム・ベルコサム;又はペニシリウム・ビリジカタムの株を含む、パラグラフ７９〜１００のいずれか１の装置。
【０２７５】
１０２．前記１又は２以上のバチルス株が、
受託番号ＡＴＣＣ１４５８１を有するバチルス・メガテリウム株；
受託番号ＡＴＣＣ７００３８５を有するバチルス・プミラス株；
受託番号ＡＴＣＣ３５６８１を有するパエニバチルス・アゾトフィキサンス（Paenibacillus azotofixans）株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１４を有するバチルス・リケニホルミス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１５を有するバチルス・リケニホルミス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１６を有するバチルス・プミラス株；
受託番号ＡＴＣＣ  ６０５１Ａを有するバチルス・サブチリス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１７を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５００１８を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１３６を有するバチルス・サブチリス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０１４１を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０３０４を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＮＲＲＬ  Ｂ−５０３４９を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−３１４２を有するバチルス・メガテリウム株；
受託番号ＰＴＡ−７５４１を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４２を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４３を有するバチルス・アトロファエウス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４４を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４５を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４６を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４７を有するバチルス・サブチリス株；
受託番号ＰＴＡ−７５４９を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７７９０を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７７９１を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；
受託番号ＰＴＡ−７７９２を有するバチルス・アトロファエウス株；及び
受託番号ＰＴＡ−７７９３を有するバチルス・アミロリケファシエンス株；又は前記複数の株の混合物から成る群から選択される、パラグラフ９２記載の装置。
【０２７６】
本明細書に記載される発明は、本明細書に開示される特許の態様により範囲を限定されるものではない。何故ならば、それらの態様は本発明のいくつかの観点を例示するものである。いずれかの同等の態様が本発明の範囲内で意図される。実際、本明細書に示され、そして記載されるそれらの修飾の他に、本発明の種々の修飾は、前述の記載から当業者に明らかになるであろう。そのような修飾はまた本発明の範囲内にある。
【図１】
2018089627.tif 000014
【図２】
2018089627.tif 000015
【図３】
2018089627.tif 000016
【図４】
2018089627.tif 000017
【配列表】
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