(57)【要約】【課題】  皮膚老化、特に皮膚の弾力性低下や黄色化の予防および／または改善のための皮膚外用剤の有効成分として有用な、タンパク質のカルボニル化抑制剤を提供する。【解決手段】  ソルビン酸および／またはその塩を有効成分として含有するタンパク質のカルボニル化抑制剤並びにタンパク質のカルボニル化抑制剤を含有する、皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ソルビン酸および／またはその塩を有効成分として含有するタンパク質のカルボニル化抑制剤。
【請求項２】
ソルビン酸および／またはその塩を有効成分として含有する、皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤。
【請求項３】
化粧料である、請求項２に記載の皮膚外用剤。
【請求項４】
乳液、美容液、ローション、パック、クリーム、ハンドクリーム、ファンデーション、化粧下地、リップクリームおよび口紅からなる群より選ばれる形態のものである、請求項３に記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質のカルボニル化抑制剤に関する。また、本発明は、皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、皮膚老化の要因として活性酸素の存在が知られている。活性酸素とは、酸素分子がより反応性の高い化合物に変化したものの総称であり、生体内では日常的に生成されているが、健康なヒトの場合、活性酸素を除去するシステムが働くため酸化障害が顕在化することはない。しかし、紫外線や大気中の有害物質などにより強い酸化ストレスを受けることで、また、老化などにより細胞の活動が低下することで、活性酸素の除去能を上回った活性酸素が生成してしまい、生体内で酸化、特にタンパク質の酸化が進行することが知られている（非特許文献１、２）。生物の構成成分の１つであるタンパク質には、コラーゲン、ケラチンなどの生物の構造に関わる構造タンパク質や、代謝反応を触媒する酵素や生体の活動を調節するホルモンなどの機能タンパク質が存在し、生物にとって特に重要な分子であることから、近年、生体内のタンパク質の酸化についての研究が盛んに行われている。
【０００３】
生体内のタンパク質の酸化は、タンパク質のリジン残基、アルギニン残基、メチオニン残基などが直接酸化される場合と、脂質が酸化して過酸化脂質となり、さらには分解してアクロレイン、４−ヒドロキシ−２−ノネナール、マロンジアルデヒドなどの反応性が高いアルデヒド化合物となり、これらがタンパク質と結合する場合があり、これら脂質過酸化反応の終期産物（アルデヒド化合物）がタンパク質と結合する反応は、「カルボニル化反応」とも言われている。
【０００４】
タンパク質のカルボニル化は、アルツハイマー病、パーキンソン病、レビー小体病、トリプレットリピート病、筋委縮性側索硬化症、白内障、動脈硬化、糖尿病性腎症など多くの疾患に関与するだけでなく、肌の透明性や保水性の低下（特許文献１）、皮膚の弾力性の低下（特許文献２）および黄色化（特許文献３）といった皮膚老化にも深く関与することが報告されている。
【０００５】
したがって、生体内のタンパク質のカルボニル化反応を抑制することは、皮膚の老化の予防や改善にも効果があるものと期待されることから、さまざまなカルボニル化抑制剤が検討されている。
【０００６】
例えば、特許文献４には、オリーブ葉エキス、加水分解エンドウタンパク質、レモンエキスから選ばれる１種又は２種以上の有効成分を含んで成る、たんぱく質カルボニル化抑制剤が、特許文献５には、黄杞葉からの抽出物及び／又はハス胚芽からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするタンパク質のカルボニル化抑制剤が提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００５−２４９６７２号公報
【特許文献２】特開２００６−３４９３７２号公報
【特許文献３】特開２０１２−２４６２２６号公報
【特許文献４】特開２０１２−０３１１０６号公報
【特許文献５】特開２０１２−０４１２７６号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｌｉｐｉｄｓ，１９９３，ｖｏｌ．２８，ｎｏ．９，ｐｐ７８９−７９３
【非特許文献２】Ｗｏｒｌｄ Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ Ｄｉｅｔｅｔｉｃｓ, １９８７, ｖｏｌ.５０,  ｐｐ１８６−２１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、タンパク質のカルボニル化抑制剤を提供することを目的とする。本発明はまた、皮膚老化、特に皮膚の弾力性低下や黄色化の予防および／または改善に有用な皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために、タンパク質のカルボニル化抑制作用を有する物質について、スクリーニングを試みた。その結果、ソルビン酸およびその塩に強いカルボニル化抑制効果を見出し、本発明を完成させた。
【００１１】
すなわち、本発明は、ソルビン酸および／またはその塩を有効成分とするタンパク質のカルボニル化抑制剤を提供する（以下、「本発明のカルボニル化抑制剤」とも称する）。
【００１２】
本発明はまた、ソルビン酸および／またはその塩を有効成分として含有する、皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤（以下、「本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤」とも称する）を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
タンパク質のカルボニル化反応は、種々の生活習慣病や皮膚老化との関連が示唆されている反応であり、特に、皮膚の弾力性低下および皮膚の黄色化の発生および／または進行に深く関与するものである。したがって、本発明者らによりタンパク質のカルボニル化を抑制する作用が見出されたソルビン酸およびその塩は、皮膚の弾力性低下やそれに伴うたるみ、しわ、および黄色化等の皮膚老化の予防、進行の遅延および／または改善のための皮膚外用剤における有効成分として有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
飲食物の製造分野においては、細菌、カビ、酵母に対して広い抗菌作用を示す物質としてソルビン酸類が知られており、魚肉練り製品や食肉製品、飲料等に対する食品添加物として使用されている。また、飲食品以外への用途においても、ソルビン酸類の使用の検討が進められている。本発明のカルボニル化抑制剤の有効成分であるソルビン酸およびその塩は、合成品であってもよく、植物から抽出、単離されたものであってもよく、市販されているものであってもよい。合成や植物からの抽出、単離によって得る場合、その方法は特に限定されず、従来知られる方法を採用することができる。ソルビン酸塩を用いる場合、塩の種類は特に限定されず、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、ストロンチウム塩等のアルカリ土類金属塩、ベリリウム塩、マグネシウム塩等の金属塩等を用いることができる。一つの好ましい態様として、本発明のカルボニル化抑制剤は、ソルビン酸を有効成分とする。
【００１５】
本発明のカルボニル化抑制剤は、ソルビン酸および／またはその塩を含むものであればよく、その効果を妨げない限り、化粧品、医薬品、医薬部外品等に一般に用いられる賦型剤等を適宜用いて顆粒状、粉末状とする他、適当な溶剤等を用いて液状、エマルション、クリーム、ペースト等としてもよい。これらの賦型剤の種類や配合量は、当業者に周知のものから適宜選択することができる。
【００１６】
本発明のカルボニル化抑制剤は、皮膚外用剤、例えば、乳液、美容液、ローション、パック、クリーム、ハンドクリーム、ファンデーション、化粧下地、リップクリームおよび口紅等の化粧料に配合することができる。本発明のカルボニル化抑制剤の、皮膚外用剤への配合量は使用する系により異なり、所望する効果によって適宜調整すればよいが、皮膚外用剤全量に対するソルビン酸および／またはその塩の量が、好ましくは０．０１〜２０重量％、より好ましくは０．０５〜５重量％、さらに好ましくは０．１〜１重量％となるように配合されるのがよい。配合量が０．０１重量％未満の場合、十分なカルボニル化抑制効果が発揮されない傾向があり、配合量が２０重量％を超える場合、溶解性が低下し安定性が悪くなる傾向がある。
【００１７】
本発明の実施形態に係る化粧料には、必要に応じて通常化粧料や医薬部外品に添加される他の成分、例えば油分、界面活性剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、水溶性高分子、無機顔料、有機顔料、美白剤、抗炎症剤、動植物エキス、香料、ｐＨ調節剤、金属封鎖剤、防腐剤等の化粧料に一般的に配合される添加剤を含有していてもよい。
【００１８】
以下、実施例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００１９】
以下のソルビン酸の、タンパク質のカルボニル化抑制作用を評価した。
＜使用した試薬＞
・ソルビン酸  （和光純薬工業株式会社）
【００２０】
実施例１
ｉｎ ｖｉｔｒｏカルボニル化抑制試験
特開２０１２−２４６２２６号公報に記載の方法を参照し、ヒドロキシ安息香酸およびその誘導体のアクロレインにより誘導されるコラーゲンのカルボニル化に対する抑制効果を確認した。
使用試薬
基質：９６ウェルコラーゲンプレート(コーニング株式会社）のコラーゲン
カルボニル化誘導試薬：アクロレイン(東京化成工業株式会社）
カルボニル基検出試薬：ビオチンヒドラジド(株式会社同仁化学研究所）
【００２１】
具体的には、１００μＭアクロレインおよびソルビン酸を溶解して試料溶液を調製した。ソルビン酸の濃度は、０．２〜０．６重量％に設定した。ソルビン酸を含まない試料溶液には、１００μＭアクロレインおよびサンプルと同量の溶媒を溶解させた（ポジティブコントロール）。これらの試料溶液を、コラーゲンプレートの各ウェルに１００μＬずつ分注して３７℃で５日間反応させた。なお、アクロレインを含まず、ソルビン酸と同量の溶媒を含む溶液についても、同様に試験を行った（ネガティブコントロール）。
５日間反応させたプレートは、界面活性剤（０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）を含むリン酸緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）を用いて洗浄した。その後１．０％ＥＣＬ  ＰｒｉｍｅＢｌｏｃｋｉｎｇ  Ａｇｅｎｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を含むＰＢＳ−Ｔ緩衝液を加えて室温で１時間ブロッキングした。再び界面活性剤（０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）を含むリン酸緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）を用いて洗浄した後、１００ｍＭの２−モルホリノエタンスルホン酸・一水和物（ＭＥＳ）緩衝液で調製した０．１μＭビオチン−ヒドラジド溶液を各ウェルに１００μＬずつ分注して室温で２時間反応させた。反応後、ＰＢＳ−Ｔ緩衝液を用いて洗浄した。その後０．１μｇ／ｍＬのペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識アビジン（ベクター）を各ウェルに１００μＬずつ分注して３７℃で１時間反応させた。さらにＰＢＳ−Ｔ緩衝液を用いて洗浄した後、ＨＲＰの基質である３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン二塩酸塩（ＴＭＢ）を含有する基質溶液（ＳｕｒＭｏｄｉｃｓ）で発色させた。発色反応を止めるため、１Ｎ硫酸溶液を１００μＬずつ加えた。各ウェルについて波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定し、下記計算式により抑制率を算出した。各濃度についてＮ＝３で抑制率を求め、その平均値によりカルボニル化抑制効果を評価した。
カルボニル化抑制率（％）＝（各試料の吸光度−ネガティブコントロールの吸光度）／（ポジティブコントロールの吸光度−ネガティブコントロールの吸光度）×１００
【００２２】
ソルビン酸を添加した試験区では、コラーゲンのカルボニル化が抑制されていた。結果を表１に示す。
【００２３】
【表１】
2018090507.tif 000002
【００２４】
実施例２
化粧水の製造
表２に示す割合で各成分を配合し、化粧水を製造した。該化粧水は、本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の一形態である。
【００２５】
【表２】
2018090507.tif 000003
【００２６】
実施例３
乳液の製造
表３に示す割合で各成分を配合し、乳液を製造した。該乳液は、本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の一形態である。
【００２７】
【表３】
2018090507.tif 000004