(57)【要約】【課題】境界型糖尿病に罹患しているか否かを、精度よく診断できる境界型糖尿病の診断用バイオマーカー等を提供すること。【解決手段】被験者から採取された血液試料中のＳＢＰ（Sedoheptulose 1,7-bisphosphate）又はメチルシステインの濃度を検出することにより、被験者が境界型糖尿病に罹患しているか否かを、精度よく診断することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者から採取された血液試料中のＳＢＰ（Sedoheptulose 1,7-bisphosphate）又はメチルシステインの濃度を検出する工程（ａ）を備えることを特徴とする境界型糖尿病を診断するためのデータを収集する方法。
【請求項２】
被験者から採取された血液試料中のＳＢＰの濃度をコントロール値と比較する工程（ｂ−１）をさらに備え、被験者から採取された血液試料中のＳＢＰ濃度が、コントロール値よりも低い場合、被験者は境界型糖尿病に罹患している可能性が高いことを示すことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
コントロール値が、健常者から採取された血液試料中のＳＢＰの濃度であり、前記健常者が、尿糖陰性の健常者であることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項４】
工程（ａ）が、糖負荷されていない被験者から採取された血液試料中のメチルシステインの濃度と、糖負荷された前記被験者から採取された血液試料中のメチルシステインの濃度とを検出する工程である、請求項１に記載の方法であって、
前記方法が、前記２つのメチルシステイン濃度を比較する工程（ｂ−２）をさらに備え、両者が変わらない場合、被験者は境界型糖尿病に罹患している可能性が高いことを示すことを特徴とする、前記方法。
【請求項５】
血液試料が血清であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
被験者が、尿糖陽性で、かつ腎性尿糖陰性の被験者であることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
ＳＢＰ（Sedoheptulose 1,7-bisphosphate）又はメチルシステインからなることを特徴とする境界型糖尿病を診断するためのバイオマーカー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、境界型糖尿病を診断するためのデータを収集する方法や、境界型糖尿病の診断用バイオマーカーに関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、インスリン分泌障害や、種々の末梢インスリン抵抗性で高血糖状態を呈する疾患である。糖尿病は、大別すると、自己免疫性の膵β細胞破壊が原因でインスリン産生が欠如して高血糖となる１型糖尿病と、末梢インスリン抵抗性や肝での糖新生増加が原因で高血糖となる２型糖尿病との２つのタイプに分けられる。この他に症例は少なくなるが、遺伝子欠損に起因する若年発症成人型糖尿病、特定の薬物が原因となる薬物誘発性糖尿病、妊婦の一部に発症する妊娠糖尿病等が知られている。
【０００３】
日本糖尿病学会により取りまとめられた糖尿病診療ガイドライン２０１０の診断指針では、糖尿病の診断は慢性高血糖を確認し、さらに症状、臨床所見、家族暦、体重暦などを参考として総合的に判断することとしている。具体的には、空腹時血糖値及び７５ｇ経口糖負荷試験（ＯＧＴＴ）２時間値の組み合わせにより、糖尿病型、正常型、境界型に分類する。一方、診断を容易にするために糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）も判定に取り入れ、ＨｂＡ１ｃ値（国際標準値）≧６．５％の場合も糖尿病型とすることとなった。血糖値及びＨｂＡ１ｃ値の２つのマーカーは、それぞれ血液中のグルコース上昇を直接的及び間接的にモニターする指標である。
【０００４】
しかし、複雑な問題としては、境界型（すなわち、空腹時グルコース値＝１１０〜１２６ｍｇ／ｄＬ、ＯＧＴＴ値＝１４０〜２００ｍｇ／ｄＬ）にはグレー領域があり、これは「前糖尿病」状態に起因することが多いと考えられている。また、血糖値及びＨｂＡ１ｃ値は、糖尿病を検出・モニターする上で有用であることは広く認識されているものの、１回の血糖検査では確定診断ができずに、２回の検査を行って総合判断する場合が多いことや、糖尿病の疑いと判断され、確定診断がなされるまでに３〜６ヶ月を要する場合もあり、より簡便な検査方法が求められていた。さらに、ヘモグロビンに異常があると、ＨｂＡ１ｃでは正しい血糖状態が判定できないという問題も存在していた。
【０００５】
近年、糖尿病の診断用マーカーを探索する研究が盛んに行なわれている。例えば、アディポネクチン／レプチン比（特許文献１）、アポリポタンパク質（特許文献２）、新規ペプチド（特許文献３）、遺伝子発現プロファイル（特許文献４）、ＦＸＹＤ２−γ多型（特許文献５）、Ｇｃ−グロブリン等（特許文献６）、インスリンシグナルペプチド（特許文献７）、グレリンシグナルペプチド（特許文献８）、アルギニンバソプレシンプロホルモン（特許文献９）が、糖尿病を診断する新たなバイオマーカー候補として報告されている。
【０００６】
一方、メチルシステインは、糖尿病悪化を遅らせる多くの保護作用を有する可能性があることが報告されている（非特許文献１）。しかしながら、かかる文献には、メチルシステインと糖尿病の診断との関連性や、メチルシステインを境界型糖尿病の診断用バイオマーカーとして使用できることについては開示されていない。また、ＳＢＰ（Sedoheptulose 1,7-bisphosphate）等のペントースリン酸経路上の物質を含む抗がん剤の感受性判定マーカーが報告されている（特許文献１０）。しかしながら、かかる文献には、ＳＢＰと糖尿病の診断との関連性や、ＳＢＰを境界型糖尿病の診断用バイオマーカーとして使用できることについては開示されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表２００７−５２６４４９号公報
【特許文献２】特表２００９−５３１７１２号公報
【特許文献３】特表２００９−５３７８１２号公報
【特許文献４】特表２０１１−５０２５３７号公報
【特許文献５】特表２０１１−５１５０７１号公報
【特許文献６】特表２０１１−５１５６８０号公報
【特許文献７】特表２０１１−５１６０３７号公報
【特許文献８】特表２０１１−５１６０３８号公報
【特許文献９】特表２０１２−５０７０２０号公報
【特許文献１０】国際公開第２０１３／１２５６７５号パンフレット
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Hsu, C.C. et al., J Nutr. 2004 Dec;134(12)3245-3249.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、境界型糖尿病に罹患しているか否かを、精度よく診断できる境界型糖尿病の診断用バイオマーカー等を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するため、比較的若い年齢層から血液試料を採取して検討すれば、効率よくバイオマーカーを同定できると考えた。そこで、学生検診受検者に経口糖負荷試験（ＯＧＴＴ）を行い、血液試料を採取し、質量分析法により血液試料中の代謝産物の濃度を測定し、境界型糖尿病に分類される群と、正常型に分類される群との間で有意差検討を行ったところ、ＳＢＰ及びメチルシステインが、精度よく境界型糖尿病を診断できる診断用バイオマーカーであることを見いだし、本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
［１］被験者から採取された血液試料中のＳＢＰ（Sedoheptulose 1,7-bisphosphate）又はメチルシステインの濃度を検出する工程（ａ）を備えることを特徴とする境界型糖尿病を診断するためのデータを収集する方法。
［２］被験者から採取された血液試料中のＳＢＰの濃度をコントロール値と比較する工程（ｂ−１）をさらに備え、被験者から採取された血液試料中のＳＢＰ濃度が、コントロール値よりも低い場合、被験者は境界型糖尿病に罹患している可能性が高いことを示すことを特徴とする上記［１］に記載の方法。
［３］コントロール値が、健常者から採取された血液試料中のＳＢＰの濃度であり、前記健常者が、尿糖陰性の健常者であることを特徴とする上記［２］に記載の方法。
［４］工程（ａ）が、糖負荷されていない被験者から採取された血液試料中のメチルシステインの濃度と、糖負荷された前記被験者から採取された血液試料中のメチルシステインの濃度とを検出する工程である、上記［１］に記載の方法であって、
前記方法が、前記２つのメチルシステイン濃度を比較する工程（ｂ−２）をさらに備え、両者が変わらない場合、被験者は境界型糖尿病に罹患している可能性が高いことを示すことを特徴とする、前記方法。
［５］血液試料が血清であることを特徴とする上記［１］〜［４］のいずれかに記載の方法。
［６］被験者が、尿糖陽性で、かつ腎性尿糖陰性の被験者であることを特徴とする上記［１］〜［５］のいずれかに記載の方法。
［７］ＳＢＰ（Sedoheptulose 1,7-bisphosphate）又はメチルシステインからなることを特徴とする境界型糖尿病を診断するためのバイオマーカー。
【００１２】
また本発明の実施の他の形態として、被験者から採取された血液試料中のＳＢＰ又はメチルシステインの濃度を検出する工程（ａ）を備えることを特徴とする境界型糖尿病の診断方法を挙げることができる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によると、境界型糖尿病に罹患しているか否かを診断する上で有用な、精度の高い診断用データを取得できるため、糖尿病予備群である「境界型」を精度よく診断し、境界型糖尿病の適切な治療に有用であり、「糖尿病型」への移行の予防にもつながる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ＯＧＴＴ前に、境界型糖尿病群（以下、単に「境界群」ということがある）及び健常群それぞれについて、血清中のＳＢＰ濃度を測定した結果を示す図である。縦軸の「ＳＢＰ濃度レベル」は、健常群、すなわち、「真の健常者」を多く含むと考えられる「検診時尿糖陰性、かつＯＧＴＴで正常型」であった者１１名のＯＧＴＴ前の検査結果の平均を１とした場合のＳＢＰ濃度の相対値を示す。統計処理は、Student unpaired T-Testにより行った。
【図２】ブドウ糖（Ｇｌｃ）又はデンプン部分加水分解産物（partial hydrolysate of starch；ＰＨＳ）を用いたＯＧＴＴ前、及びＯＧＴＴ後２時間において、血清中のメチルシステイン濃度を測定した結果を示す図である。縦軸の「メチルシステイン濃度レベル」は、Ｇｌｃを用いたＯＧＴＴ前の健常群１１名（図中の「Ｇｌｕ／健常群」）の検査結果の平均を１とした場合のＳＢＰ濃度の相対値を示す。統計処理は、Student unpaired T-Testにより行った。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明のデータを収集する方法としては、被験者（被検者、提供者）から採取された血液試料（被験者由来血液試料）中のＳＢＰ（Sedoheptulose 1,7-bisphosphate）及び／又はメチルシステインの濃度を検出（必要に応じてさらに絶対定量）する工程（ａ）を備える、境界型糖尿病の診断用データを収集する方法（以下、「本件収集方法」ということがある）であれば特に制限されず、上記血液試料としては、血液や、血液から調製された血清又は血漿を挙げることができ、血清が好ましい。本件収集方法は、医師による境界型糖尿病の診断を補助する方法であって、医師による診断行為を含まない。
【００１６】
本発明のバイオマーカーは、「境界型糖尿病を診断するため」という用途に限定された、ＳＢＰ及び／又はメチルシステインからなるバイオマーカー（以下、「本件バイオマーカー」ということがある）であり、通常、被験者から採取された血液試料中に存在するＳＢＰやメチルシステインを検出対象とする。本件バイオマーカーは、被験者が境界型糖尿病に罹患しているか否かを診断するための指標となる。
【００１７】
本発明において、「境界型糖尿病」とは、血糖値に基づいて診断した場合に、「正常型」と「糖尿病型」との境界に位置し、糖尿病型に移行する可能性のある状態を意味し、具体的には、空腹時の血糖値が１１０ｍｇ／ｄＬ以上１２６ｍｇ／ｄＬ未満で、かつ、７５ｇのブドウ糖（Glucose；Ｇｌｃ）又はデンプン部分加水分解産物（partial hydrolysate of starch；ＰＨＳ）を用いた経口糖負荷試験（ＯＧＴＴ）を実施した場合、実施後２時間において、血糖値が２００ｍｇ／ｄＬ未満を呈する状態（軽度の耐糖能障害［糖尿病予備群］）、及び／又は、空腹時の血糖値が１１０ｍｇ／ｄＬ未満で、かつ、上記ＯＧＴＴを実施した場合、実施後２時間において、血糖値が１４０ｍｇ／ｄＬ以上２００ｍｇ／ｄＬ未満を呈する状態（軽度の耐糖能障害）を意味する。
【００１８】
上記被験者としては、特に制限されず、境界型糖尿病に罹患しているか否か不明な被験者を挙げることができ、糖尿病は未発症であるが軽度の耐糖能障害を有する者を比較的多く含むと考えられるため、検診時尿糖陽性の被験者が好ましい。本明細書において、「尿糖陽性」とは、血液中のブドウ糖（グルコース）が尿中に漏れ出てきた状態を意味し、具体的には、尿中糖濃度が５０ｍｇ／ｄＬ以上を呈する状態を意味する。また、上記被験者としては、腎性糖尿でない者が好ましい。本明細書において、「腎性尿糖」とは、血糖値が正常にもかかわらず、遺伝的要因等により腎臓での糖再吸収能が低下し、尿糖陽性になる状態を意味し、具体的には、上記ＯＧＴＴを実施した場合、実施前及び／又は実施後０．５〜２時間の範囲内に複数回（例えば１〜１０回、好ましくは２〜８回、より好ましくは３〜５回）測定した血糖値の全てが、１７０ｍｇ／ｄＬ以下であるにもかかわらず、５０ｍｇ／ｄＬ以上の尿糖を呈する状態を意味する。
【００１９】
本件収集方法としては、ＳＢＰを検出する場合、被験者由来血液試料中のＳＢＰの濃度をコントロール値と比較する工程（ｂ−１）をさらに備えるものが好ましい。かかる比較する工程（ｂ−１）を備えることにより、被験者由来血液試料中のＳＢＰ濃度（以下、「被験者ＳＢＰ濃度」ということがある）が、コントロール値よりも低い場合、被験者は境界型糖尿病に罹患している可能性が高いことを示し、被験者ＳＢＰ濃度が、コントロール値よりも低くない場合、被験者は境界型糖尿病に罹患している可能性が低いことを示す。
【００２０】
上記コントロール値としては、被験者ＳＢＰ濃度が、健常者から採取された血液試料（健常者由来血液試料）中のＳＢＰ濃度（以下、「健常者ＳＢＰ濃度」ということがある）よりも低いか否かを判定（判断）するための指標（対照）値であれば特に制限されず、例えば、健常者ＳＢＰ濃度や、健常者ＳＢＰ濃度及び／又は境界型糖尿病患者由来血液試料中のＳＢＰ濃度（以下、「境界型患者ＳＢＰ濃度」ということがある）に基づき算出された閾値（カットオフ値）を挙げることができる。コントロール値として用いる健常者ＳＢＰ濃度としては、本件収集方法を実施する際、その都度測定したものを用いてもよいし、予め測定したものを用いてもよい。健常者由来血液試料や境界型糖尿病患者由来血液試料は、通常、被験者由来血液試料と同じ種類の血液試料が用いられる。上記閾値は、定法、例えば、境界型患者ＳＢＰ濃度のデータや、健常者ＳＢＰ濃度のデータを基に、統計解析ソフトウェアを用いたＲＯＣ（Receiver Operating Characteristic）曲線を用いて算出することができる。
【００２１】
本件バイオマーカーは、被験者ＳＢＰ濃度をコントロール値と比較した場合、被験者ＳＢＰ濃度が、コントロール値よりも低いとき、被験者は境界型糖尿病に罹患している可能性が高いことを示す指標となる。
【００２２】
上述のコントロール値に対する被験者ＳＢＰ濃度の減少レベルの割合は、検出対象の血液試料の種類、コントロール値の種類、検出方法等により異なるため、一概に特定することはできないが、コントロール値が健常者ＳＢＰ濃度である場合、通常少なくとも２０％であり、好ましくは少なくとも２３％、より好ましくは少なくとも２６％、さらに好ましくは少なくとも３０％、さらにより好ましくは少なくとも３３％、またより好ましくは少なくとも３６％、特に好ましくは少なくとも４０％、特により好ましくは少なくとも４３％、特にさらに好ましくは少なくとも４６％、特にさらにより好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも５３％である。なお、ＳＢＰの濃度を検出する場合の、被験者から採取された血液試料としては、糖負荷された被験者から採取された血液試料であってもよいが、糖負荷されていない被験者から採取された血液試料を用いても効率よく診断できるため、簡便に調製できる観点から、糖負荷されていない被験者から採取された血液試料が好ましい。
【００２３】
上記健常者としては、血糖値に基づいて診断した場合に、「正常型」に分類される者であれば特に制限されず、具体的には、空腹時の血糖値が１１０ｍｇ／ｄＬ未満で、かつ、上記ＯＧＴＴを実施した場合、実施後２時間において、血糖値が１４０ｍｇ／ｄＬ未満を呈する者を挙げることができ、尿糖陰性の者が好ましい。ここで「尿糖陰性」とは、血液中のブドウ糖が尿中にほとんど漏れ出ていない状態を意味し、具体的には、採集した尿中のブドウ糖濃度が５０ｍｇ／ｄＬ未満を呈する状態を意味する。
【００２４】
本件収集方法としては、メチルシステインを検出する場合、工程（ａ）が、糖負荷されていない被験者から採取された血液試料（糖負荷前血液試料）中のメチルシステインの濃度と、糖負荷された前記被験者から採取された血液試料（糖負荷後血液試料）中のメチルシステインの濃度とを検出する工程であり、前記２つのメチルシステイン濃度（糖負荷前血液試料中のメチルシステイン濃度と、糖負荷後血液試料中のメチルシステイン濃度）とを比較する工程（ｂ−２）をさらに備えるものが好ましい。かかる比較する工程（ｂ−２）を備えることにより、糖負荷前血液試料中のメチルシステイン濃度（以下、「糖負荷前メチルシステイン濃度」ということがある）と比較し、糖負荷後血液試料中のメチルシステインの濃度（以下、「糖負荷後メチルシステイン濃度」ということがある）が変わらない（同じ）場合、被験者は境界型糖尿病に罹患している可能性が高いことを示し、糖負荷後メチルシステイン濃度が低下する場合、被験者は境界型糖尿病に罹患している可能性が低いことを示す。上記糖負荷前血液試料と、上記糖負荷後血液試料とは、通常、同じ被験者から採取された同じ種類の血液試料が用いられる。糖負荷後血液試料は、被験者に対して上記ＯＧＴＴを実施し、調製することができる。
【００２５】
本件バイオマーカーは、糖負荷前メチルシステイン濃度と、糖負荷後メチルシステイン濃度とを比較した場合、両者が変わらない（実質同じ）とき、被験者は境界型糖尿病に罹患している可能性が高いことを示す指標となる。
【００２６】
上述の糖負荷前メチルシステイン濃度と、糖負荷後メチルシステイン濃度とが変わらないとは、両者の間の増加又は減少レベル、すなわち、糖負荷前メチルシステイン濃度に対する糖負荷後メチルシステイン濃度の増加又は減少レベル、或いは、糖負荷後メチルシステイン濃度に対する糖負荷前メチルシステイン濃度の増加又は減少レベルが、検出対象の血液試料の種類、検出方法等により異なるため、一概に特定することはできないが、通常最大でも３０％、好ましくは最大でも２６％、より好ましくは最大でも２３％、さらに好ましくは最大でも２０％、さらにより好ましくは最大でも１６％、またより好ましくは最大でも１３％、特に好ましくは最大でも１１％、特により好ましくは最大でも９％、特にさらに好ましくは最大でも６％、特にさらにより好ましくは最大でも３％、最も好ましくは最大でも１％を意味する。
【００２７】
本件収集方法において、ＳＢＰやメチルシステインの濃度を検出・定量する方法としては、ＳＢＰやメチルシステインを特異的に検出できる方法であればどのような方法であってもよく、具体的には、質量分析法を挙げることができる。かかる質量分析法とは、血液試料を、イオン源を用いて気体状のイオンとし（イオン化）、分析部において、真空中で運動させ電磁気力を用いて、あるいは飛行時間差によりイオン化した血液試料を質量電荷比に応じて分離し、検出できる質量分析計を用いた測定方法のことをいい、イオン源を用いてイオン化する方法としては、電子イオン化（ＥＩ）法、化学イオン化（ＣＩ）法、電界脱離イオン化（ＦＤ）法、高速原子衝撃（ＦＡＢ）法、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）法、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）法等の方法を適宜選択することができ、また、分析部において、イオン化した血液試料を分離する方法としては、磁場偏向型、四重極型、イオントラップ型、飛行時間（ＴＯＦ）型、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴型等の分離方法を適宜選択することができる。また、２以上の質量分析法を組み合わせたタンデム型質量分析（ＭＳ／ＭＳ）を利用することができる。また、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）や液体クロマトグラフィー（ＬＣ）や高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、ＳＢＰやメチルシステインを夾雑物から分離・精製して分析することができる。
【００２８】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例】
【００２９】
１．方法
［症例］
２０１３〜２０１４年度に、千葉大学で実施した学生検診において、尿糖陽性（試験紙による定性検査で尿糖＋１［５０ｍｇ／ｄＬ］以上）の者のうち、２０１３年４月から２０１５年３月までに千葉大学医学部附属病院糖尿病・代謝・内分泌内科外来を受診した者に対し、承諾が得られた４８名（表１）に対し、Ｇｌｃ又はＰＨＳを用いたＯＧＴＴを実施した。
さらに、過去の千葉大学で実施した学生検診において、尿糖陰性（複数回受診した場合は全てが陰性）で、かつ２親等以内の親族に糖尿病者と診断された者がいない者を、尿糖陰性者として募集し、承諾が得られた５１名（表１）に対し、２０１３年８月から２０１４年３月の期間に、上記ＯＧＴＴを実施した。
【００３０】
【表１】
2018040743.tif 000002
【００３１】
［ＯＧＴＴ］
ＯＧＴＴ実施の前日２１時以降は、栄養素を含む飲料水や食物の摂取を禁止し、翌朝、７５ｇのＧｌｃ又はＰＨＳを、尿糖陽性者及び尿糖陰性者に経口投与し、定法にしたがってＯＧＴＴを実施した。ＯＧＴＴ前後の尿糖陽性者及び尿糖陰性者から血液及び尿を採取し、血清を調製した後、定法にしたがって血糖値及び尿糖値（尿中糖濃度）を測定した。なお、ＯＧＴＴは２回行い、１回目のＯＧＴＴと２回目のＯＧＴＴとは、４日〜６カ月の間隔をあけた。
【００３２】
［境界群と健常群の分類］
境界群の分類は、現行の糖尿病の診断基準に準じた。すなわち、尿糖陽性者（４８名）及び尿糖陰性者（５１名）のうち、予め腎性糖尿の者（ＯＧＴＴ［１及び２時間］後の血糖値≦１７０ｍｇ／ｄＬ、かつＯＧＴＴ［０、１、又は２時間］後の尿糖値≧５０ｍｇ／ｄＬ）（９名）を除いた。腎性糖尿９名は、全て尿糖陽性者であったため、残りの尿糖陽性者（３９名）及び尿糖陰性者（５１名）のうち、糖尿病型（空腹時血糖値≧１２６ｍｇ／ｄＬ、又はＯＧＴＴ２時間後の血糖値≧２００ｍｇ／ｄＬ）、及び正常型（空腹時血糖値＜１１０ｍｇ／ｄＬ、かつＯＧＴＴ２時間後の血糖値＜１４０ｍｇ／ｄＬ）のいずれでもない者１３名（１１名が尿糖陽性者であり、２名が尿糖陽性者）を、境界群に分類した。
また、尿糖陰性者（５１名）のうち、正常型（空腹時血糖値＜１１０ｍｇ／ｄＬ、かつＯＧＴＴ２時間後の血糖値＜１４０ｍｇ／ｄＬ）である者（４９名）を、健常群に分類した。
【００３３】
［血清中の代謝産物の測定］
境界群（１３名）及び健常群（４９名）のうち、性別や年齢を考慮した、それぞれ１１名について、液体クロマトグラフ-タンデム型質量分析計（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）（ＬＣ：Prominence, Shimadzu社製、ＭＳ／ＭＳ：Qtrap 4500, AB Sciex社製）を用いた質量分析法により、血清中に含まれる評価可能な４２種類の代謝産物を検出・定量し、直交部分最小二乗法-判別分析（ＯＰＬＳ−ＤＡ；Orthogonal partial least squares discriminant analysis）を用いて、両群の判別に寄与する代謝産物を同定した。なお、上述の血清中に含まれる評価可能な４２種類の代謝産物は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより測定可能な２６３種類の物質のうち、血清試料中に検出された約１５０種類の物質であり、かつ、−８０℃及び−２０℃で１カ月間保存したときに、両群間の検出感度に差が認められなかったものである。
【００３４】
２．結果
［境界型糖尿病の診断用バイオマーカーの同定］
直交部分最小二乗法-判別分析の結果、境界群及び健常群間の判別に寄与する代謝産物として、ＳＢＰ及びメチルシステインが同定された。
【００３５】
［ＳＢＰ］
ＯＧＴＴ前において、境界群のＳＢＰ濃度（３．２９±０．３６［平均値±標準偏差］）は、健常群のＳＢＰ濃度（１．９９±０．３２）と比べ、約４０％減少し、有意差（Ｐ＝０．０１３）が認められた（図１）。この結果は、境界型糖尿病に罹患すると、血清中のＳＢＰ濃度が、健常者よりも減少することから、かかるＳＢＰ濃度の減少を指標として、ＯＧＴＴを行うことなく、境界型糖尿病を診断できることを示している。なお、ＯＧＴＴ前後における、血清中のＳＢＰ濃度は、境界群及び健常群間で違いは認められなかった。
【００３６】
［メチルシステイン］
健常群において、Ｇｌｃを用いたＯＧＴＴ後のメチルシステイン濃度（０．０６０１±０．００６４１）は、当該ＯＧＴＴ前のメチルシステイン濃度（０．０８７３±０．００７６９）と比べ、３１％低下し、有意差（Ｐ＝０．００２５）が認められたのに対して（図２の「Ｇｌｃ／健常群」）、境界群において、当該ＯＧＴＴ後のメチルシステイン濃度（０．０６３２±０．００４６５）は、当該ＯＧＴＴ前のメチルシステイン濃度（０．０７２３±０．０１０２）と比べ、１２．６％の減少に留まり、有意差は認められなかった（図２の「Ｇｌｃ／境界群」）。
また、健常群において、ＰＨＳを用いたＯＧＴＴ後のメチルシステイン濃度（０．０６１４±０．００７５２）は、当該ＯＧＴＴ前のメチルシステイン濃度（０．０９４２±０．０１１７）と比べ、３５％減少し、有意差（Ｐ＝０．０３７）が認められたのに対して（図２の「ＰＨＳ／健常群」）、境界群において、当該ＯＧＴＴ後のメチルシステイン濃度（０．０５１１±０．００７３３）は、当該ＯＧＴＴ前のメチルシステイン濃度（０．０５１３±０．０１０８）とほとんど変わらなかった（図２の「ＰＨＳ／境界群」）。これらの結果は、境界型糖尿病に罹患すると、ＯＧＴＴ前後における、血清中のＳＢＰ濃度減少が抑制されることから、ＯＧＴＴ前後の血清中のＳＢＰ濃度がほとんど変わらなくなることを指標として、境界型糖尿病を診断できることを示している。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明は、糖尿病予備群である「境界型」を精度よく診断することにより、「境界型」の適切な治療や、「糖尿病型」への移行の予防に資するものである。
【図１】
2018040743.tif 000003
【図２】
2018040743.tif 000004