(57)【要約】【課題】本発明は、男性ホルモンの増加を促進できる組成物を提供することを目的とする。【解決手段】コンパウンドＫを含有する、男性ホルモン増加促進用組成物。薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物を有効成分として含有する、男性ホルモン増加促進用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
コンパウンドＫを含有する、男性ホルモン増加促進用組成物。
【請求項２】
薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物を有効成分として含有する、男性ホルモン増加促進用組成物。
【請求項３】
男性ホルモンがテストステロンである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物中、コンパウンドＫの含有量が０．０５重量％以上である、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物中、ジンセノシドＲｂ１の含有量が１０重量％以下である、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記発酵物が、薬用人参の微生物発酵物である、請求項２〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記酵素分解物が、薬用人参のグリコシダーゼ分解物である、請求項２〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
１日摂取量として、コンパウンドＫを０．１２〜１６０ｍｇ／６０ｋｇ体重で含有する、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
１日摂取量として、薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物を１９．２ｍｇ〜２４０００ｍｇ／６０ｋｇ体重で含有する、請求項２〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
食品組成物、医薬組成物または飼料組成物である、請求項１〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
男性ホルモン量の減少に起因する症状の改善を目的として使用される、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は男性ホルモン増加促進用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
性腺の機能低下は加齢やストレス等により起こることが実験的、臨床的に確認されている。例えば男性ホルモンであるテストステロンは、概ね２０歳代から徐々に減少することが知られており、中高齢期（例えば４５歳以上）ではその減少とともに性腺機能の低下、更には骨や筋肉の減弱や体脂肪量の増加等が生じやすくなることが報告されており、また、男性ホルモンの減少が男性更年期障害と強く相関することが報告されている。今日、加齢による男性ホルモンの減少に伴う諸症状を呈する状態を、加齢男性性腺機能低下症候群（ＬＯＨ（late-onset hypogonadism）症候群）等と称されることもあり、各種症状への対策が求められている。
【０００３】
男性ホルモン量の低下に対しては、例えば男性ホルモン（アンドロゲン）補充療法が知られているが、長期間の投与が難しく、また、肝機能障害等の副作用も知られている。
【０００４】
一方、コンパウンドＫは公知の物質であり、２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール２０−Ｏ−β−ｄ−グルコピラノシド（Ｍ１）等とも称される。これまでに、コンパウンドＫは、グルカゴン様ペプチド1（ＧＬＰ−１）の分泌を促進する作用を有することが報告されているが（特許文献１）、男性ホルモン量の低下に対する影響は知られていない。
【０００５】
また、薬用人参は、特有のサポニン類を含有しており、貧血、糖尿病、動脈硬化をはじめとする様々な症状の予防や改善に有用であることが知られている。また、薬用人参の乳酸菌発酵物や酵素分解物は、ＧＬＰ−１の分泌を促進する作用を有することが報告されている（特許文献１）。しかし、このような薬用人参、その発酵物や酵素分解物の男性ホルモン量の低下に対する影響は知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１５−１６８６１４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、男性ホルモン量の増加を促進できる組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らが前記課題に鑑み鋭意検討を行ったところ、コンパウンドＫ、薬用人参の発酵物、薬用人参の酵素分解物によれば、男性ホルモン量の増加を促進できることを見出した。本発明はこれらの知見に基づき更に検討を重ねた結果完成されたものであり、次に掲げるものである。
項１．コンパウンドＫを含有する、男性ホルモン増加促進用組成物。
項２．薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物を有効成分として含有する、男性ホルモン増加促進用組成物。
項３．男性ホルモンがテストステロンである、項１または２に記載の組成物。
項４．前記組成物中、コンパウンドＫの含有量が０．０５重量％以上である、項１〜３のいずれかに記載の組成物。
項５．前記組成物中、ジンセノシドＲｂ１の含有量が１０重量％以下である、項１〜４のいずれかに記載の組成物。
項６．前記発酵物が、薬用人参の微生物発酵物である、項２〜５のいずれかに記載の組成物。
項７．前記酵素分解物が、薬用人参のグリコシダーゼ分解物である、項２〜５のいずれかに記載の組成物。
項８．１日摂取量として、コンパウンドＫを０．１２〜１６０ｍｇ／６０ｋｇ体重で含有する、項１〜７のいずれかに記載の組成物。
項９．１日摂取量として、薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物を１９．２〜２４０００ｍｇ／６０ｋｇ体重で含有する、項２〜８のいずれかに記載の組成物。
項１０．食品組成物、医薬組成物または飼料組成物である、項１〜９のいずれかに記載の組成物。
項１１．男性ホルモン量の減少に起因する症状の改善を目的として使用される、項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、男性ホルモンの分泌を促進することができる。本発明によれば、男性ホルモンの血中濃度を高めることができる。このことから、本発明によれば、男性ホルモン量の増加を促進することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、コンパウンドＫの添加によるテストステロン分泌量の変化を示す。
【図２】図２は、薬用人参の発酵物の添加によるテストステロン分泌量の変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
１．コンパウンドＫを含有する、男性ホルモン増加促進用組成物
本発明は、コンパウンドＫを含有する、男性ホルモン増加促進用組成物に関する。
【００１２】
コンパウンドＫは公知の物質であり、化学式Ｃ３６Ｈ６２Ｏ８で表わされ、その構造も公知である。コンパウンドＫは、２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール２０−Ｏ−β−ｄ−グルコピラノシド（Ｍ１）等とも称される。
【００１３】
コンパウンドＫは、天然物由来であってもよく、化学合成して製造されたものであってもよく、その由来は制限されない。
【００１４】
例えば、コンパウンドＫは商業的に入手することができる。本発明を制限するものではないが、例えば市販品としてGINSENOSIDE CK（EXTRASYNTHASE社製）、Compound K（MATRIX SCIENTIFIC社製）、Ginsenoside compound K (P)（ChromaDex, Inc.社製）等が例示される。
【００１５】
コンパウンドＫを天然物から入手する場合、従来公知の抽出手順等に従い、コンパウンドＫを天然物から適宜入手すればよい。コンパウンドＫを含有する天然物としては植物が例示され、本発明を制限するものではないが、該植物として薬用人参等が例示される。また、より効率良くコンパウンドＫを入手する観点から、好ましくは植物の発酵物、植物の酵素分解物等が例示され、より好ましくは薬用人参の発酵物、薬用人参の酵素分解物等が例示される。
【００１６】
使用するこれら植物の部位は、コンパウンドＫを含有する部位であれば特に制限されず、根、茎、葉、花、果実、花蕾、枝、樹皮、種子等のいずれも使用することができる。植物が薬用人参である場合、後述の通り、使用部位として好ましくは根等、より好ましくは側根、主根等、更に好ましくは側根等が例示される。
【００１７】
これらは１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１８】
本発明のコンパウンドＫを含有する男性ホルモン増加促進用組成物におけるコンパウンドＫの含有量は制限されないが、例えば組成物中、コンパウンドＫの含有量が好ましくは０．０５重量％以上、より好ましくは０．０５〜２０重量％、更に好ましくは０．１〜１０重量％、特に好ましくは０．２〜５重量％が例示される。
【００１９】
また、このように本発明の組成物におけるコンパウンドＫの含有量は制限されず、対象者（対象動物）の体格、年齢、男性ホルモン量、症状、適用形態、使用目的等に応じて適宜設定すればよい。本発明を制限するものではないが、組成物中のコンパウンドＫの含有量は、１日摂取量として、体重６０ｋｇの成人を基準として、好ましくは０．１２〜１６０ｍｇ、より好ましくは０．１２〜１２０ｍｇ、更に好ましくは０．２〜７５ｍｇ、特に好ましくは０．４〜２０ｍｇが例示される。本発明の組成物は、１日あたり単回摂取であってもよく複数回の摂取であってもよい。
【００２０】
また、本発明の組成物は、本発明の効果が得られる限り制限されないが、好ましくは該組成物におけるジンセノシドＲｂ１の含有量が１０重量％以下が例示され、より好ましくは該組成物におけるジンセノシドＲｂ１の含有量が２重量％以下、更に好ましくは０．４重量％以下、特に好ましくは０．１重量％以下が例示される。ジンセノシドＲｂ１は公知の物質である。
【００２１】
本発明の組成物の形態も制限されず、目的に応じて適宜設定すればよい。本発明の組成物の形態として、液剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤、エキス剤、酒精剤、エリキシル剤、ローション剤、リニメント剤、注射剤、点滴剤、坐薬等の液状形態、散剤、顆粒剤、細粒剤、錠剤、丸剤、カプセル剤（ハードカプセル、ソフトカプセルを含む）、貼付剤、トローチ、チュアブル、ゲル状、クリーム状、ペースト状、ムース状、軟膏、液状形態の凍結乾燥物等の半固形または固形形態、この他、エアゾール剤等の各種形態が例示される。また、例えば本発明の組成物が固形形態である場合、これは水等の液体と混合して使用してもよく、また、本発明の組成物は徐放性の剤形であってもよい。
【００２２】
また、本発明の組成物の使用態様も制限されず、目的に応じて適宜設定すればよい。本発明の組成物の使用態様として、食品組成物（飲料を含む、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、サプリメント等を含む）、病者用食品を含む）、医薬組成物、飼料組成物、また、食品組成物、医薬組成物、飼料等への添加剤等として使用することができる。
【００２３】
例えば、これらのうち食品組成物について更に例示すると、菓子類（例えば錠菓、キャンディー、チョコレート、ガム、キャラメル、グミ、ゼリー、ようかん、まんじゅう、スナック菓子、クッキー、せんべい等）、麺類（例えば、ラーメン、そば、うどん、ラーメン等）、乳製品（例えば、アイスクリーム、ヨーグルト、ミルク等）、調味料（例えば、味噌、醤油等）、スープ類、飲料（例えば、コーヒー、茶、炭酸飲料、スポーツ飲料、紅茶、ジュース等）が挙げられる。
【００２４】
本発明の組成物は、前述の各種形態、使用態様等における従来公知の通常の手順に従い製造すればよく、必要に応じて、薬学的に許容される成分、可食性の成分といった任意の成分と混合等して製造すればよい。該任意の成分として、賦形剤、崩壊剤、希釈剤、滑沢剤、香料、着色剤、甘味剤、矯味剤、懸濁剤、湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、分散剤、緩衝剤、結合剤、浸透促進剤、安定剤、増量剤、防腐剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、コーティング剤、吸収促進剤、吸着剤、充填剤、酸化防止剤、溶解補助剤、調味料、酸味料、抗炎症剤、清涼剤、皮膜形成剤、ゲル化剤、アミノ酸、ビタミン、ミネラル、酵素、糖類、各種栄養成分等が例示される。これらは１種単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２５】
本発明の組成物は、経口で投与されてもよく非経口（経皮含む）で投与されてもよい。非経口（経皮含む）としては、皮膚や粘膜への適用（外用）、注射等が例示される。これらにおいて好ましくは、経口で投与される。
【００２６】
対象者（対象動物）も制限されないが、ヒト、ヒト以外の哺乳動物が例示される。ヒト以外の哺乳動物としては、男性ホルモンが生体機能の維持、改善を図っている動物が挙げられ、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、ネコ、サル、ブタ、牛、馬等の動物、好ましくはマウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、サル等の動物が例示される。
【００２７】
本発明の組成物によれば、コンパウンドＫを有効成分として男性ホルモン量を増加させることができる。このことから、本発明の組成物によれば男性ホルモンの減少を抑制できる。このため、本発明によれば、男性ホルモンの減少に起因する各種症状の改善を図ることができる。
【００２８】
男性ホルモンの減少に起因する症状としては、本発明を制限するものではないが、例えば身体的疲労感、精神的疲労感、憂鬱、不安感、食欲低下、集中力低下、不眠、活力（活気、気力等）低下、緊張感上昇、男性機能障害（性欲低下、勃起障害等）、認知力低下、男性機能障害及び／または認知力低下による意欲や記憶力の低下、精神疾患（うつ病等）、のぼせ、ほてり、発汗、手足の冷え、動悸、頻脈、頭痛、めまい、耳鳴り、手足のしびれ、脂肪量増加、肥満症、筋肉量低下、脂肪代謝低下、メタボリックシンドローム、骨量低下、骨粗鬆症、骨折、運動能力の低下等、加齢男性性腺機能低下症候群に関する各種症状等が例示される。
【００２９】
このことから、本発明の組成物はまた、これらの症状が気になる対象者に好ましく適用することができる。
【００３０】
また、本発明の組成物は、この限りにおいて制限されないが、男性ホルモンの減少を抑制する観点から、好ましくは男性ホルモンの減少がより進んだ状態にある男性、より好ましくは中高年期の男性やストレスを多く感じている男性に対して使用される。このことから、本発明の組成物は、加齢やストレスにより減少した男性ホルモン量の増加を目的として好ましく使用できる。男性ホルモン（アンドロゲン）はステロイドホルモンの一種であり、生体においてその大部分はテストステロンが占める。
【００３１】
本発明の組成物は、これらの用途を目的として使用される組成物も含むものである。
【００３２】
また、このことから、本発明は、コンパウンドＫを含有する男性ホルモン増加促進用組成物の製造方法を提供するといえる。また、本発明は、コンパウンドＫを用いることを特徴とする、男性ホルモン増加促進方法を提供するといえる。
【００３３】
これらの方法において、コンパウンドＫ、男性ホルモン増加促進用組成物、製造方法、該組成物による男性ホルモン増加促進効果等は前述と同様に説明される。
【００３４】
２．薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物を有効成分として含有する、男性ホルモン増加促進用組成物
本発明は、薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物を有効成分として含有する、男性ホルモン増加促進用組成物に関する。
【００３５】
本発明において薬用人参は、特に限定されないが、好ましくはウコギ科薬用人参が例示される。ウコギ科薬用人参としては、オタネニンジン（高麗人参、 Korean ginseng: Panax ginseng C. A. Meyer）、三七ニンジン（Panax notoginseng Burk.） 、アメリカニンジン（Panax quinquefolium L.）、竹節ニンジン（Panax japonicus C.A.Meyer）、ヒマラヤニンジン（Panax pseudo-ginseng Wall. subsp. himalaicus Hara）、ベトナムニンジン（Panax vietnamensis Ha et Grushv）等が例示される。これらにおいて、薬用人参としてより好ましくはオタネニンジンが例示される。
【００３６】
薬用人参の使用部位は、特に制限されず、例えば根、茎、葉、花、果実、花蕾、全草、種子等のいずれも使用することができ、好ましくは根等、より好ましくは側根、主根等、更に好ましくは側根等が例示される。
【００３７】
これらは１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００３８】
本発明において薬用人参の発酵物は、薬用人参を発酵して得られた生成物を意味する。
【００３９】
薬用人参の発酵物を得るにあたり、薬用人参は、そのまま（生のまま）であってもよく、その乾燥物、粉砕物、裁断物、抽出物、ペースト、懸濁物等であってもよい。乾燥、粉砕、裁断、抽出、ペースト化、懸濁等は従来公知の方法に従い行えばよい。また、これらは市販品であってもよく、市販品に対して更に乾燥等の処理を適宜施したものでもよい。
【００４０】
これらは１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００４１】
本発明を制限するものではないが、一例として前記抽出物について説明すると、本発明において抽出物の製造方法（抽出方法）及び抽出条件等は特に限定されず、従来公知の方法に従えばよい。
【００４２】
例えば、前記使用部位をそのまま、必要に応じて裁断、粉砕または乾燥等したのち、溶媒抽出等によって抽出物を得ることができる。溶媒抽出の方法としては、従来公知の方法を採用すればよく、例えば水（温水、熱水を含む）抽出、アルコール抽出、超臨界抽出等の従来公知の抽出方法を利用することができる。
【００４３】
溶媒抽出を行う場合、任意の溶媒を用いればよいが、溶媒としては好ましくは極性溶媒が例示され、より好ましくは水、生理食塩水等の水溶液、炭素数１〜４のアルコール、これらの任意の混合液等が例示され、更に好ましくは水、炭素数１〜４のアルコール、これらの混合液等が例示される。炭素数１〜４のアルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、ｎ−ブタノール等が例示される。これらの溶媒は１種単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００４４】
また、薬用人参と抽出溶媒との混合割合も本発明を制限するものではないが、前記薬用人参（乾燥重量）１００重量部に対して、抽出溶媒は好ましくは３００〜５０００重量部が例示され、より好ましくは４００〜３０００重量部が例示される。
【００４５】
また、抽出において加熱を行う場合、本発明の効果が得られる限り制限されないが、加熱温度として好ましくは１５〜１５０℃程度が例示され、より好ましくは２０〜１２１℃程度が例示される。また、加熱時間も制限されないが、好ましくは０．１〜７２時間程度が例示され、より好ましくは０．３〜２４時間程度が例示される。
【００４６】
得られた抽出物は、そのままの状態で使用してもよく、ろ過して使用してもよく、更に乾燥させて粉末状や顆粒状等の固形の状態で使用してもよい。また、必要に応じて、得られた抽出物に精製、濃縮処理、高活性画分の分離処理等を施してもよい。本発明を制限するものではないが、精製処理としては、濾過、イオン交換樹脂や活性炭カラム等を用いた吸着といった処理が挙げられる。また、濃縮処理としては、エバポレーター等の常法を利用できる。また、高活性画分の分離処理としては、ゲル濾過、吸着処理、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ（High performance liquid chromatography）等の公知の分離処理を利用できる。
【００４７】
また、例えば、このようにして得られた抽出物（または乾燥物、精製処理物、濃縮処理物、高活性画分）を、凍結乾燥処理に供して粉末化する方法をはじめ、従来公知の方法に従って粉末化し、本発明で用いる抽出物としてもよい。また、該抽出物を、必要に応じて炭素数１〜４のアルコール等の溶媒に溶解して用いてもよい。
【００４８】
更に、前述の懸濁物についても一例を説明すると、懸濁物の調製においても、溶媒として前述の抽出溶媒を用いてもよい。また、薬用人参と溶媒との混合割合も前述の溶媒抽出時の条件を参考にして適宜混合すればよく、また、懸濁液の調製において加熱を行う場合は、前述する抽出時の加熱温度及び加熱時間を考慮して適宜加熱すればよい。
【００４９】
本発明において薬用人参の発酵物は、前記薬用人参を発酵させることにより得ることができる。発酵は、薬用人参を発酵できる限り制限されず任意の方法を用いればよいが、好ましくは微生物を用いて発酵される。この観点から、本発明において薬用人参の発酵物として好ましくは薬用人参の微生物による発酵物（薬用人参の微生物発酵物）である。微生物を用いて発酵を行う方法は確立されており、例えば前述の特許文献１や特許第５２０７７１号公報を参考にして発酵物を得ることができる。また、このような発酵物として市販品を用いてもよい。
【００５０】
このことから、薬用人参の発酵物を得る方法として、好ましくは、微生物の存在下で薬用人参を発酵させて、薬用人参の発酵物を得る方法が例示され、より好ましくは、薬用人参を含有する培地を滅菌処理し、得られた培地と微生物とを混合して薬用人参を発酵させ、薬用人参の発酵物を得る方法が例示される。滅菌は、本発明の効果が妨げられない限り、加熱滅菌、高圧蒸気滅菌、ろ過滅菌等の従来公知の方法に従い適宜行えばよい。
【００５１】
本発明を制限するものではないが、以下に、薬用人参を含有する培地を滅菌処理し、得られた培地と微生物とを混合して薬用人参を発酵させて、薬用人参の微生物発酵物を得る手順の一例を説明する。
【００５２】
本発明において培地としては、微生物を培養できる限り制限されず、窒素源、ミネラル源、ｐＨ緩衝剤、炭素源、無機物、水などといった微生物の培養に通常使用される各種成分を必要に応じて含む培地が例示される。このような培地は液体培地、固体培地等のいずれであってもよいが、より効率よく薬用人参の発酵物を得る観点から、好ましくは液体培地である。
【００５３】
この限りにおいて制限されないが、一部の成分について説明すると、窒素源として、ペプトン、ポリペプトン、尿素、アミノ酸、タンパク質、大豆ペプチド等のペプチド類をはじめとする有機態窒素源、アンモニア、アンモニウム塩をはじめとする無機態窒素源が例示される。窒素源として好ましくはペプトン、ポリペプトン、ペプチド類等が例示される。これらは１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。培地中の窒素源の濃度は、微生物が生育できる通常の濃度であればよく、特に限定されないが、培養開始時の窒素源の濃度として、通常、０．０５〜１０重量％程度が好ましく、０．１〜５重量％程度がより好ましく例示される。
【００５４】
ミネラル源としては、酵母エキス、肉エキス、カリウム、リン、マグネシウム、イオウ等（例えば、リン酸一水素カリウム、硫酸マグネシウム等）が例示される。これらは１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００５５】
ｐＨ緩衝剤としては、炭酸カルシウム等が例示される。
【００５６】
無機物としては、硫酸アンモニウム、リン酸カリウム、塩化マグネシウム、食塩、鉄、マンガン、モリブデン、各種ビタミン類等が例示される。これらは１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００５７】
培地のｐＨは、微生物を培養できる限り制限されないが、室温（２５℃）において、好ましくはｐＨ３〜７程度が例示され、より好ましくはｐＨ５〜６．５程度が例示される。ｐＨは必要に応じて酸やアルカリを用いて調整すればよい。
【００５８】
本発明を制限するものではないが、このような培地の一例として、大豆ペプチド、酵母エキス、炭酸カルシウムを含有する培地が例示され、更には後述する実施例で使用する培地が例示される。
【００５９】
薬用人参を含有する培地を滅菌処理は、前記培地と薬用人参とを混合し、滅菌処理することにより行うことができる。滅菌処理としては前述の方法が例示でき、効率良く所望の発酵物を得る観点から、好ましくは高圧蒸気滅菌が例示される。
【００６０】
培地と混合する薬用人参の使用量も特に限定されず、薬用人参の種類、使用部位、培養条件等に応じて適宜決定すればよい。一例として、薬用人参／培地全量の重量比として、好ましくは１／１００〜５０／１００程度が例示され、より好ましくは５／１００〜２０／１００程度が例示され、更に好ましくは１０／１００〜１５／１００程度が例示される。ここで、該重量比は、薬用人参を内温約１００〜１８０℃ で１〜６時間乾燥させた薬用人参の乾燥物に換算した値における一例である。該値を参考にして、薬用人参の使用量を適宜決定すればよい。また、培地は、本発明の効果を妨げない限り、必要に応じて薬用人参や前述する成分以外の添加剤等を含んでいてもよい。
【００６１】
本発明において使用する微生物も、本発明の効果が得られる限り制限されない。このような微生物として、好ましくはグラム陽性菌、より好ましくは乳酸菌が例示される。この観点から、本発明の薬用人参の微生物発酵物として、好ましくは薬用人参のグラム陽性菌による発酵物（薬用人参のグラム陽性菌発酵物）が例示され、より好ましくは薬用人参の乳酸菌よる発酵物（薬用人参の乳酸菌発酵物）が例示される。これらは１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００６２】
これらの微生物において、より好ましくはβ−グルコシダーゼ、α−アラビノシダーゼ、α−ラムノシダーゼからなる群より選択される少なくとも１種の酵素を生産できる微生物であって、食品に添加することができる微生物が例示される。
【００６３】
本発明はこの限りにおいて制限されないが、例えばこのような酵素を生産できる微生物として、ラクトバチルス  アシドフィルス（Lactobacillus acidphilus）、ラクトバチルス  ガセリ（L. gasseri）、ラクトバチルス  マリ（L. mali）、ラクトバチルス  プランタラム（L. plantarum）、ラクトバチルス  ブヒネリ（L.buchneri）、ラクトバチルス  カゼイ（L. casei）、ラクトバチルス  ジョンソニー（L. johnsonii）、ラクトバチルス  ガリナラム（L. gallinarum）、ラクトバチルス  アミロボラス（L. amylovorus）、ラクトバチルス  ブレビス（L. brevis）、ラクトバチルス  ラムノーザス（L. rhamnosus）、ラクトバチルス  ケフィア（L. kefir）、ラクトバチルス  パラカゼイ（L. paracasei）、ラクトバチルス  クリスパタス（L. crispatus）等のラクトバチルス属の乳酸菌；ストレプトコッカス サーモフィルス（Streptcoccus thermophilus）等のストレプトコッカス属の乳酸菌；ラクトコッカス ラクチス（Lactococcus lactis）等のラクトコッカス属の乳酸菌；ビフィドバクテリウム ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、ビフィドバクテリウム ロンガム（B. longum）、ビフィドバクテリウム アドレスセンティス（B. adolescentis）、ビフィドバクテリウム インファンティス（B. infantis）、ビフィドバクテリウム  ブレーベ（B. breve）、ビフィドバクテリウム  カテヌラータム（B. catenulatum）等のビフィドバクテリウム属の乳酸菌；バチルス ズブチリス（Bacillus subtilis）等のバチルス属細菌；サッカロマイセス セレビシエ（Saccharomyses cerevisiae）等のサッカロマイセス属酵母；トルラスポラ デルブルエッキー（Torulaspora delbrueckii）等のトルラスポラ属酵母；キャンジダ ケフィア等のキャンジダ属酵母等が例示される。
【００６４】
これらのなかでも好ましくは乳酸菌であり、より好ましくはラクトバチルス属の乳酸菌、ストレプトコッカス属の乳酸菌、ラクトコッカス属の乳酸菌、ビフィドバクテリウム属の乳酸菌、サッカロマイセス属酵母等が例示される。
【００６５】
これらは１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００６６】
本発明を制限するものではないが、ラクトバチルス属の乳酸菌としては、例えば、ラクトバチルス カゼイハセガワ菌株（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３、受託日：平成１５年８月１１日）、ラクトバチルス  ガセリ  ＤＳＭ２０２４３株、ラクトバチルス  プランタラム  ＡＴＣＣ１４９４７株、同ＡＴＣＣ１０２４１株、ラクトバチルス  ブヒネリ  ＡＴＣＣ４００５株、ラクトバチルス  カゼイ  ＡＴＣＣ３９３株、ラクトバチルス  マリ  ＡＴＣＣ２７３０４株、ラクトバチルス  ガリナラム  ＪＣＭ２０１１株、ラクトバチルス  アミロボラス  ＪＣＭ１１２６株、ラクトバチルス  ブレビス  ＡＴＣＣ１４８６９株、ラクトバチルス  ラムノーザス  ＡＴＣＣ７４６９株、同ＡＴＣＣ５３１０３株、ラクトバチルス  ケフィア  ＮＲＩＣ１６９３株、ラクトバチルス  パラカゼイ  ＮＣＤＯ−１５１株等が挙げられる。
【００６７】
ラクトコッカス属の乳酸菌としては、例えば、ラクトコッカス  ラクチス  ＡＴＣＣ１５５７７株等が挙げられる。
【００６８】
ビフィドバクテリウム属の乳酸菌としては、例えば、ビフィドバクテリウム  ビフィダム  ＪＣＭ７００２株、ビフィドバクテリウム  アドレスセンティス  ＡＴＣＣ１５７０３株等が挙げられる。
【００６９】
サッカロマイセス属酵母としては、例えば、サッカロマイセス  セレビシエ  ＩＦＯ−０３０９株、同ＩＦＯ−２０１８株等が挙げられる。
【００７０】
これらは１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００７１】
これらの微生物のなかでも、ラクトバチルス カゼイハセガワ菌株が特に好ましく例示される。該菌株は、漬物などの一般食品から分離された微生物であり、経口摂取しても安全である。該該菌株によれば、例えば、高麗人参からコンパウンドＫを効率よく高麗人参の発酵物中に生成できることが知られている。
【００７２】
本発明において、前記培地と微生物とを混合する条件は、薬用人参を発酵できる限り制限されない。例えば、前述の薬用人参を含有する培地と、液体培地で微生物を予め培養した培養液とを混合する場合、前述の薬用人参を含有する培地の重さ１００重量部に対して、該培養液を０．０１〜１０程度重量部で混合することが好ましく例示され、０．１〜５重量部程度で混合することがより好ましく例示される。
【００７３】
微生物を予め培養する液体培地は、微生物が生育できる限り制限されず、使用する微生物の種類等に応じて適宜決定すればよい。一例として、後述する実施例に記載する培地が挙げられる。
【００７４】
本発明において、該混合後における培地のｐＨは、微生物が生育でき、薬用人参の発酵可能である限り制限されず、使用する微生物の種類等に応じて適宜決定すればよいが、一例として、ｐＨを４〜７程度に調整することが好ましい。
【００７５】
本発明において、該混合後における薬用人参の発酵温度は、発酵可能である限り制限されず、前記培地の組成、微生物の種類や混合量等に応じて適宜決定すればよいが、より効率良く発酵を行う観点から、好ましくは２５〜３７℃程度が例示され、より好ましくは２８〜３３℃程度が例示される。発酵時間も発酵可能である限り制限されず、前記培地の組成、微生物の種類や混合量、発酵温度等に応じて適宜決定すればよいが、好ましくは２〜２１日程度が例示され、より好ましくは７〜１４日程度が例示される。発酵は、好気条件下で行ってもよく嫌気条件下で行ってもよい。発酵後、更に常法により加熱減菌することが好ましい。
【００７６】
発酵後、得られた発酵液はそのまま本発明の組成物の一成分として使用してもよく、濃縮、乾燥、精製、抽出、希釈等の任意の処理を行った後に、本発明の組成物の一成分として使用してもよい。例えば濃縮方法としては得られた発酵液そのものを濃縮する方法、得られた発酵液を静置して上澄み液を回収し、回収した上澄み液を濃縮する方法、上澄み液を抽出、濃縮する方法等が例示される。乾燥方法としては、発酵液そのもの、前記上澄み液、あるいはその抽出物や濃縮物を乾燥させる方法等が例示される。精製法としては、ろ過、遠心分離等が例示される。これらは従来公知の方法を参考にして適宜行えばよい。
【００７７】
本発明では、このようにして得られたものを、薬用人参の微生物発酵物と称することができる。
【００７８】
本発明において薬用人参の酵素分解物は、薬用人参を酵素処理して得られた生成物を意味する。
【００７９】
薬用人参の酵素分解物を得るにあたり、酵素分解は従来公知の方法に従い行えばよく、酵素分解方法は従来十分に確立されている（例えば、J. Agric. Food. Chem. 2012, 60(14):3776-81に記載の方法）。この限りにおいて制限されないが、以下に、薬用人参の酵素分解物の製造方法の一例を説明する。
【００８０】
薬用人参の酵素分解は、薬用人参と酵素を接触させることにより実施できる。
【００８１】
薬用人参は前述の通りである。
【００８２】
薬用人参の酵素分解に使用する酵素としては、好ましくはグリコシダーゼが例示され、より好ましくはβ−グルコシダーゼ、α−アラビノシダーゼ、α−ラムノシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、キシラナーゼ、ラクターゼ、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ等が例示される。酵素分解に使用する酵素として更に好ましくはβ−グルコシダーゼ、α−アラビノシダーゼ、α−ラムノシダーゼ等が例示され、特に好ましくはβ−グルコシダーゼ等が例示される。これらは１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。酵素としてグリコシダーゼを用いた場合、本発明において薬用人参の酵素分解物は薬用人参のグリコシダーゼ分解物と称することができる。
【００８３】
酵素分解における薬用人参と酵素との接触時の温度（反応温度）は、本発明の効果が得られる限り制限されず、使用する酵素の種類や薬用人参の種類、これらの使用量等に応じて適宜決定すればよい。該反応温度として、好ましくは１０〜９０℃程度が例示され、より好ましくは３０〜５０℃程度が例示される。
【００８４】
接触時の時間（反応時間）も、本発明の効果が得られる限り制限されず、使用する酵素の種類や薬用人参の種類、これらの使用量、処理温度等に応じて適宜決定すればよい。該反応時間として、好ましくは１時間〜２週間程度が例示され、より好ましくは４時間〜１週間程度が例示される。
【００８５】
このような反応後、得られた反応物はそのまま本発明の組成物の一成分として使用してもよく、濃縮、乾燥、精製、抽出、希釈等の任意の処理を行った後に、本発明の組成物の一成分として使用してもよく、前述の薬用人参の微生物発酵物と同様に説明される。
【００８６】
薬用人参と酵素の接触をより効果的に行い、より効率良く酵素反応物を得る観点から、得られた反応物は好ましくは反応液の状態にある。このような反応液の濃縮方法としては得られた反応液そのものを濃縮する方法、得られた反応液を静置して上澄み液を回収し、回収した上澄み液を濃縮する方法、上澄み液を抽出、濃縮する方法等が例示される。乾燥方法としては、反応液そのもの、前記上澄み液、あるいはその抽出物や濃縮物を乾燥させる方法等が例示される。精製法としては、ろ過、遠心分離等が例示される。これらは従来公知の方法を参考にして適宜行えばよい。
【００８７】
本発明では、このようにして得られたものを、薬用人参の酵素分解物と称することができる。該酵素分解物においても、高麗人参からコンパウンドＫを効率よく高麗人参の酵素分解物中に生成できる。
【００８８】
コンパウンドＫは、高麗人参に含まれるジンセノシドＲｂ１からの糖の切断等により生成される化合物であり、本発明においては、前記発酵と同様に、前記酵素分解によってもジンセノシドＲｂ１からのコンパウンドＫの生成が促進される。このため、本発明において、薬用人参の発酵物や酵素分解物として好ましくは、未処理の薬用人参と比較して、コンパウンドＫの含有割合が高いものであり、より好ましくは、未処理の薬用人参と比較して、ジンセノシドＲｂ１に対するコンパウンドＫの含有割合が高いものである。このことから、薬用人参の発酵物や酵素分解物によれば男性ホルモン量の増加を促進できる。
【００８９】
本発明の組成物における薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物の含有量は制限されず、対象者（対象動物）の体格、年齢、男性ホルモン量、症状、適用形態、使用目的等に応じて適宜設定すればよい。このように本発明を制限するものではないが、組成物中の薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物の含有量（これらの総量）として、１日摂取量として、体重６０ｋｇの成人を基準として、好ましくは１９．２〜２４０００ｍｇ、より好ましくは３０〜８０００ｍｇ、更に好ましくは４０〜２０００ｍｇが例示される。本発明の組成物は、１日あたり単回投与であってもよく複数回投与であってもよい。
【００９０】
また、本発明を制限するものではないが、本発明の薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物を有効成分として含有する男性ホルモン増加促進用組成物において、例えば該組成物中、コンパウンドＫが好ましくは０．０５重量％以上、より好ましくは０．０５〜２０重量％、更に好ましくは０．１〜１０重量％、特に好ましくは０．２〜５重量％が例示される。
【００９１】
また、本発明の組成物は、本発明の効果が得られる限り制限されないが、好ましくは該組成物におけるジンセノシドＲｂ１の含有量が１０重量％以下が例示され、より好ましくは該組成物におけるジンセノシドＲｂ１の含有量が２重量％以下、更に好ましくは０．４重量％以下、特に好ましくは０．１重量％以下が例示される。ジンセノシドＲｂ１は公知の物質である。
【００９２】
本発明の組成物の形態も制限されず、目的に応じて適宜設定すればよい。本発明の組成物の形態としては、前記「１．コンパウンドＫを含有する、男性ホルモン増加促進用組成物」と同様に説明され、液剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤、エキス剤、酒精剤、エリキシル剤、ローション剤、リニメント剤、注射剤、点滴剤、坐薬等の液状形態、散剤、顆粒剤、細粒剤、錠剤、丸剤、カプセル剤（ハードカプセル、ソフトカプセルを含む）、貼付剤、トローチ、チュアブル、ゲル状、クリーム状、ペースト状、ムース状、軟膏、液状形態の凍結乾燥物等の半固形または固形形態、この他、エアゾール剤等の各種形態が例示される。また、例えば本発明の組成物が固形形態である場合、これは水等の液体と混合して使用してもよく、また、本発明の組成物は徐放性の剤形であってもよい。
【００９３】
また、本発明の組成物の使用態様も制限されず、目的に応じて適宜設定すればよく、前記「１．コンパウンドＫを含有する、男性ホルモン増加促進用組成物」と同様に説明される。すなわち、本発明の組成物の使用態様として、食品組成物（飲料を含む、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、サプリメント等を含む）、病者用食品を含む）、医薬組成物、飼料組成物、また、食品組成物、医薬組成物、飼料等への添加剤等として使用することができる。
【００９４】
また、本発明の組成物は、前述の各種形態、使用態様等における従来公知の通常の手順に従い製造すればよく、必要に応じて、薬学的に許容される成分、可食性の成分といった任意の成分と混合等して製造すればよい。該任意の成分として、前記「１．コンパウンドＫを含有する、男性ホルモン増加促進用組成物」において挙げた成分が例示される。
【００９５】
本発明の組成物は、経口で投与されてもよく非経口（経皮含む）で投与されてもよい。非経口（経皮含む）としては、皮膚や粘膜への適用（外用）、注射等が例示される。これらにおいて好ましくは、経口で投与される。
【００９６】
対象者（対象動物）も制限されず、対象者（対象動物）は同様に説明される。
【００９７】
本発明の組成物によれば、薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物を有効成分として男性ホルモン量を増加させることができる。このことから、本発明の組成物によれば男性ホルモンの減少を抑制できる。このことから、本発明によれば、男性ホルモンの減少に起因する各種症状の改善を図ることができる。男性ホルモンの減少に起因する症状は、前述と同様に説明される。従って、本発明の組成物はまた、これらの症状が気になる対象者に好ましく適用することができる。
【００９８】
また、本発明の組成物は、この限りにおいて制限されないが、男性ホルモンの減少を抑制する観点から、好ましくは男性ホルモンの減少がより進んだ状態にある男性、より好ましくは中高年期の男性の男性やストレスを多く感じている男性に対してに対して使用される。このことから、本発明の組成物は、加齢やストレスにより減少した男性ホルモン量の増加を目的として好ましく使用できる。男性ホルモン（アンドロゲン）は前述の通りステロイドホルモンの一種であり、生体においてその大部分はテストステロンが占める。
【００９９】
このように、本発明の組成物は、これらの用途を目的として使用される組成物をも含むものである。
【０１００】
また、このことから、本発明は、薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物を有効成分として含有する男性ホルモン増加促進用組成物の製造方法を提供するといえる。また、本発明は、薬用人参の発酵物及び／または酵素分解物を用いることを特徴とする、男性ホルモン増加促進方法を提供するといえる。
【０１０１】
これらの方法において、薬用人参の発酵物、酵素分解物、男性ホルモン増加促進用組成物、製造方法、該組成物による男性ホルモン増加促進効果等は前述と同様に説明される。
【実施例】
【０１０２】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明は実施例に限定されるものではない。
【０１０３】
試験例１
次の手順に従い、コンパウンドＫによる男性ホルモン分泌に対する影響を評価した。
【０１０４】
・試料（コンパウンドＫ）
コンパウンドＫ（商品名GINSENOSIDE CK、0150S、エキストラシンシース社製）4mg/バイアルに50%エタノールを2 mL添加してコンパウンドＫを溶解し、得られた溶液を、0.1%ウシ血清アルブミン（BSA）を添加したDME/F-12培地（ナカライテスク社製）（以下、0.1％BSA-DME/F-12）を用いて適宜希釈し、これを試料とした。
【０１０５】
・評価手順
マウス（ddY系、雄、7〜8週令）から精巣を採取し初代培養を行った。具体的には、精巣をコラゲナーゼ処理し（Worthington、Type2、0.05%、37℃、15分)、細胞を分散させ、10％ウシ胎児血清（FBS）を含むDME/F-12培地にて3×105cell/0.5mLに調製し、24ウェルプレートに播種し、一夜、培養した。培養後、PBS(-)（ダルベッコズPBS（塩化カリウム0.2g/L、リン酸一カリウム0.2g/L、塩化ナトリウム8g/L、無水リン酸二ナトリウム1.15g/L、pH 7.4、等張溶液。イオン含有量（mEq）Na+ 148、K+ 4、Cl- 139）で細胞を洗浄し、これに、0.1％BSA-DME/F-12培地と共に、前述のようにして調製した試料を1/10容量となるように添加し、ウェル中のコンパウンドＫの濃度を1μg/mL、10μg/mL、100μg/mLとした。
【０１０６】
前記試料に代えて、コンパウンドＫを用いない以外は同様にして調製した50%エタノールと0.1％BSA-DME/F-12との混合液を、前述と同様に1/10容量となるように添加したものをコントロール（コンパウンドＫの濃度Oμg/mL）とした。
【０１０７】
次いで、2時間培養後、培地を採取し、培地中のテストステロン濃度をEIA（enzyme immunoassay：酵素免疫抗体法）により測定した。
【０１０８】
具体的には、96ウェルマイクロプレート (Nunc、Denmark) にヤギ抗家兎IgG抗体 （2μg/well）を添加し、常温で1時間コーティングした。洗浄後、ブロッキング液 （0.14MNaCl、0.02%チメロザール、1%BSA、0.01Mリン酸緩衝液、pH7.4）を添加し、常温で15分間ブロッキングした。洗浄後、採取した培地、テストステロン(和光純薬工業社製)（標準抗原）、ビオチン化テストステロン（標識抗原）、抗テストステロン血清を順次添加し、2時間反応させた。洗浄後、HRP標識アビジン（1万倍希釈、ジャクソンイムノリサーチ社製）を添加し、攪拌後30分間反応させた。洗浄後、0.002％オルトフェニレンジアミン溶液（0.0012％過酸化水素を含むリン酸クエン酸緩衝液に溶解）を加えて10分間呈色反応させ、2 M硫酸にて反応を停止し、マイクロプレートリーダーで490 nmにおける吸光度を測定し、テストステロン分泌量を求めた。
【０１０９】
・結果
結果を図１に示す（平均値±標準誤差、検体数各４）。図１から明らかなように、コンパウンドＫを添加していない培地（図中「0μg/mL」）におけるテストステロン濃度と比較して、コンパウンドＫを添加した培地においてテストステロン濃度が高まった。具体的には、コンパウンドＫの添加量が10μg/mLあるいは100μg/mLのいずれであっても培地中のテストステロン濃度が明らかに高まった。また、図１には示していないが、コンパウンドＫの添加量が1μg/mLであっても培地中のテストステロン濃度が高まった。このことから、コンパウンドＫによれば、細胞からのテストステロン分泌を有意に促進できることが確認された。
【０１１０】
試験例２
次の手順に従い、薬用人参による男性ホルモン分泌に対する影響を評価した。
【０１１１】
・試料（薬用人参）
ラクトバチルスカゼイハセガワ菌株（受託番号：FERM BP-10123）を用いて薬用人参の発酵物を得た。具体的には、ラクトバチルスカゼイハセガワ菌株1白金耳を培地（グルコース30g/L、酵母エキス10g/L、大豆ペプチド5g/L、K2HPO4  2g/L、MgSO4・7H2O 0.5g/L）20mLに植菌し、28℃で48時間静置培養した。次いで、得られた培養液2mLを、新たな培地（組成は前述と同じ）120mLに添加し、28℃で48時間静置培養した。得られた培養液20mLを、高圧蒸気滅菌処理（121℃、20分間）した発酵用溶液（オタネニンジン（側根）粉末130g/L 、酵母エキス10g/L、大豆ペプチド5g/L、炭酸カルシウム10g/L）1 Lに添加し、28℃ で10日間発酵した。得られた発酵液を水酸化ナトリウムでpH5.0に調整し、噴霧乾燥することにより、オタネニンジン発酵物を得た。
【０１１２】
得られたオタネニンジン発酵物1000mgを50％エタノール10mLまたは水10mLと混合し、1時間、室温にて反転混和撹拌し、次いで溶液を遠心分離（4000rpm、15分）した。得られた上清を抽出液とし、使用時まで−20℃で保存した。使用前に、該抽出液を0.1%BSA-DME/F-12培地で適宜希釈した。ここで、エタノールを用いて抽出した試料を試料Ｅ、水を用いて抽出した試料を試料Ｗとした。
【０１１３】
比較例として、非発酵物の抽出液を用いた。具体的には、オタネニンジン（側根）粉末1000mgを50％エタノール10mLまたは水10mLと混合し、一夜、室温にて反転混和撹拌し、次いで溶液を前述と同様にして遠心分離し、得られた上清を非発酵物の抽出液とした。抽出液は、前述と同様に、使用時まで−20℃で保存し、使用前に0.1%BSA-DME/F-12培地で希釈した。ここで、エタノールを用いて抽出した比較試料を比較試料Ｅ、水を用いて抽出した比較試料を比較試料Ｗとした。
【０１１４】
・評価手順
前記試験例と同様にして、精巣をコラゲナーゼ処理し、細胞を分散させ、10％FBSを含むDME/F-12培地を用いて、得られた細胞をウェルプレートに播種（1.5×105cells/well）し、一夜、培養した。培養後、PBS(-)で細胞を洗浄し、0.1%BSA-DME/F-12培地と共に、前述のようにして調製した試料Ｅ、試料Ｗ、比較試料Ｅまたは比較試料Ｗをオタネニンジン発酵物またはオタネニンジン（側根）粉末1 mg相当量/mL（ウェル最終濃度）となるように添加し、2時間培養後、培地を採取し、各培地中のテストステロン濃度をEIAにより前述と同様に測定した。
【０１１５】
・結果
結果を図２に示す（平均値±標準誤差、検体数各４）。なお、試料Ｅ、Ｗ、比較試料Ｅ、Ｗのいずれも用いない以外は同様にして得た培地中のテストステロン濃度を、図中「無添加」にて示す。
【０１１６】
図２から明らかなように、無添加の培地におけるテストステロン濃度と比較して、試料Ｅまたは試料Ｗを添加した培地においてテストステロン濃度が著しく高まった。比較試料Ｗを添加した場合にも培地中のテストステロン濃度が高まったが、試料Ｅや試料Ｗを添加した場合と比較すると、その効果は大きく劣った。また、比較試料Ｅでは有意な増加は認められなかった。このことから、薬用人参の発酵物によれば、細胞からのテストステロン分泌を有意に促進できることが確認された。
【０１１７】
試験例３
次の手順に従い、薬用人参による血中男性ホルモン濃度に対する影響を評価した。
【０１１８】
・試料
前記試験例２と同様にして、オタネニンジン発酵物を得た。このようにして得た発酵物（粉末）を水と混合し、該発酵物を2000mg/10mL、400mg/10mL、80mg/10mL、16mg/10mLで含有する液体試料（順に試料1〜4とする）を得た。なお、コントロールは液体試料に代えて水とした。
【０１１９】
・評価手順
ラット（Wistar系、雄、13週齢）を、ラット用ゲージ（ステンレス金網製蓋、プラスチック製ケージ、1匹／ケージ）内で、市販固型飼料（商品名CE-2、日本クレア社製）及び水の自由給餌にて７日間飼育した。試料投与前体重に基づいて各試験間で差がないように振り分けた（１群あたり４匹）。ラットの体重100g当り1.0mLとして、試料投与時に体重換算して必要量を算出し、調製した試料1〜4をラットに強制経口投与した。強制投与は一日午前と午後の2回行い、投与間隔として6時間以上の間を設けた。なお、コントロールとして水を投与する群では、ラット体重100g当り0.5ｍLにて同様に強制投与を行った。試料または水の投与は21日間連続して行った。
【０１２０】
また、試料の経口投与開始後11日目〜16日目の5日間、各ラットに拘束ストレスを与えた。具体的には、ボールマンケージ（KN-326-2-A型、夏目製作所製）内で5日間、試料または水等を与えながら飼育することにより、ラットに拘束ストレス負荷をかけた。拘束ストレス負荷を5日間かけた後、拘束ストレス負荷を解除し、再度、拘束ストレス負荷前の飼育条件（拘束ストレス負荷なしでの前記試料または水の経口投与条件）に戻した。
【０１２１】
ボールマンケージにラットを入れる直前（試料の経口投与開始後11日目）及び拘束ストレス負荷を解除した5日後（試料の経口投与開始後21日目）に、採血を行い、血中のテストステロン濃度を測定した。具体的には、採血は、尾動脈または頸静脈より採血（約0.7ml）し、サンプル管に入れ、遠心分離後に血清を採取し、遊離テストステロン濃度をELISA法を用いて分析した。
【０１２２】
具体的には、Free Testosterone ELISA（DB52181、IBL INTERNATIONAL）キットを用いて、遊離テストステロン濃度を分析した。手順はキットのマニュアルに従い、抗テストステロンモノクローナル抗体が予め固相化されたウェルプレートに、採取した血清、標準抗原（テストステロン）、コントロール抗原（テストステロン）を添加し、次いでHRP 標識テストステロンを加えて １時間反応させた。洗浄後、基質溶液（テトラメチルベンジ）を加えて呈色反応させ、1M硫酸にて反応を停止し、マイクロプレートリーダーで450nmにおける吸光度を測定し、血清中の遊離テストステロン量を求めた。
【０１２３】
・結果
結果を表１に示す。表１では、ストレス負荷前の各群における血中の遊離テストステロン濃度を１として示す。表１から明らかなように、コントロール群では、ラットにストレスを与えることにより血中の遊離テストステロン濃度が0.36へ大きく低下していることが分かる。これに対して、前記試料1〜4を投与した群ではいずれも、ストレス負荷後の値が、コントロール群におけるストレス負荷後の値を上回っており、ストレス負荷による血中の遊離テストステロン濃度の低下が有意に抑制された。
【０１２４】
このことから、薬用人参の発酵物によれば、血中の遊離テストステロン濃度の低下を抑制できることが分かった。
【０１２５】
【表１】
2018108949.tif 000002
【０１２６】
該結果を、「CRCテキストブック 日本臨床薬理学会認定CRCのための研修ガイドライン」に基づいてヒトへの投与量へ換算した場合、1日摂取量として、薬用人参の発酵物19.2mg〜24000mg/body(60kg)/dayであるといえる。また、薬用人参の発酵物中のコンパウンドＫの含有量に基づいて換算すると、1日摂取量として、コンパウンドＫを0.123〜154mg/body(60kg)/dayであるといえる。
【０１２７】
試験例４
【０１２８】
・手順
次の手順に従い、薬用人参による男性ホルモン濃度に対する影響を評価した。
【０１２９】
マウス（ddY、雄性、7週齢、日本SLC、浜松）12匹を３群（ストレス無し通常食摂取群（以下、ストレス無通常食群）、ストレス有り通常食摂取群（以下、ストレス有通常食群）、ストレス有り薬用人参の発酵物摂取群（以下、ストレス有発酵人参食群）に分けた。
【０１３０】
ストレス無通常食群及びストレス有通常食群については標準粉末飼料 (MF、オリエンタル酵母社製)を、ストレス有発酵人参食群については該粉末飼料に5重量％になるように前記試験例２と同様にして得たオタネニンジン発酵物（粉末）を混ぜた混餌を、2週間自由摂取させた。ケージあたり１匹、飲水は自由摂取、12時間明暗サイクル (明期8:00-20:00、暗期20:00-8:00) で温度 (23±1℃) および湿度 (55±5%) が調節された環境下で、マウスを飼育した。ストレス有りのマウスは、試験開始11日目、12日目、13日目の合計3回、20時〜翌8時にプラスティック製試験管にマウスを入れて拘束し、ストレスを負荷した。14日目の8時にストレスを解除し、その3時間後に解剖し、精巣を採取し、各群毎にマウスの精巣を合わせて、初代培養を行った。
【０１３１】
初代培養方法は、試験例１に示した方法（ウェルあたりの細胞数は3×105cells）により行い、培養2時間後に得られる培養液中のテストステロン分泌量を試験例１と同様にしてEIAにより測定した。
【０１３２】
・結果
ストレス無通常食群と比較して、ストレス有通常食群ではテストステロン分泌量は有意に低下したのに対して、ストレス有発酵人参食群では分泌量の低下が抑制された。このことは、薬用人参の発酵物の摂取が、ストレス環境下におけるテストステロン分泌の増加に役立つことを示す。
【０１３３】
このことから、コンパウンドＫ、薬用人参発酵物によれば、これを投与することにより、男性ホルモン量の低減を抑制できることが理解できる。また、コンパウンドＫの産生が促進される薬用人参の酵素分解物によっても、男性ホルモン量の低減を抑制できることが理解できる。
【図１】
2018108949.tif 000003
【図２】
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