(57)【要約】【課題】  抗炎症性、抗糖化性、保湿性といった多面的な効果を有する皮膚老化防止剤及びそれを含有する皮膚外用剤を提供する。【解決手段】  ノリウツギ抽出物を有効成分とした炎症防止剤または糖化防止剤を含有させることにより皮膚老化防止剤を完成させ、さらに当該皮膚老化防止剤を含有させることにより皮膚外用剤を完成させた。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ノリウツギ（Hydrangea paniculata siebold）抽出物を有効成分とする炎症防止剤
【請求項２】
ノリウツギ（Hydrangea paniculata siebold）抽出物を有効成分とする糖化防止剤
【請求項３】
請求項１に記載の炎症防止剤を含有することを特徴とする皮膚老化防止剤
【請求項４】
請求項２に記載の糖化防止剤を含有することを特徴とする皮膚老化防止剤
【請求項５】
請求項３または４に記載の皮膚老化防止剤のいずれか１つ以上を含有することを特徴とする皮膚外用剤
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚老化防止剤、特に、ノリウツギ（Hydrangea paniculata siebold）抽出物を有効成分として含有するものであって、その有効性が、抗炎症機能、抗糖化機能向上に基づくものに関し、さらに当該皮膚老化防止剤を配合した皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は生体の最外層に位置することから、環境からのストレスに絶えず曝される器官である。環境ストレスの中でも乾燥や紫外線などは皮膚の炎症を引き起こすことが知られている。また、皮膚バリア機能が低下した状態では、外来物質の侵入による炎症が引き起こされやすい状態となる。皮膚炎症は皮膚疾患又は皮膚癌の原因となるだけではなく、肌荒れの原因ともなる。
【０００３】
紫外線や微生物などの炎症誘発因子の刺激を受けた表皮角化細胞では、種々のシグナル伝達経路が活性化され、転写因子の一つであるNuclear factor - kappa B (NF-κB) が活性化される。活性化したNF-κBはInterleukinやtumor necrosis factor-alphaなどの炎症性サイトカインの遺伝子発現を誘導することで炎症反応を惹起する。NF-κBの活性化や炎症性サイトカインの発現を抑制することは、炎症反応を抑制する上で有効な手段と考えられている。
【０００４】
還元糖とタンパク質との反応に始まる糖化反応（メイラード反応）は食品中の反応として発見されたが、その後、生体内でも起こる反応であることが明らかになった。糖化反応は大別するとアマドリ転移物が生成するまでの前期反応とその後、酸化・脱水・縮合を経て最終糖化産物であるAdvanced Glycation End products（AGEs）が生成される後期反応に分けられる。AGEsにより修飾されたタンパク質は、構造的あるいはそれに伴う機能的な変化を引き起こし、生体に悪影響を及ぼす。また、AGEsがAGEs受容体であるRAGEに結合することにより炎症シグナルが惹起されることも知られている。皮膚においてもAGEsの存在が認められており、皮膚の弾力低下、黄色化の一因とされている。これらのことから、AGEsの蓄積を阻害することは皮膚老化予防において重要であるといえる。AGEsの蓄積を阻害するアプローチとしては、（１）AGEsの生成を阻害する、（２）生成されたAGEsを分解することが挙げられる。
【０００５】
ノリウツギは、ユキノシタ科アジサイ属の落葉低木であり、昆虫の目を引く装飾花と受粉を行う両性花からなる円錐形の花序をつける。ノリウツギ(糊空木)と言う名の通り、樹皮には多量の粘液を含むため、和紙を漉くときの糊料として戦前から利用され、また、現在でも 繊維を均一に分散するために使われている。ノリウツギの幹の内部は中空であるため、パイプとしての利用もある。他のアジサイ種が山中の半日陰地を好むのに対し、本種は林縁部だけでなく、陽のよく当たる原野及び湿原にも自生しており、日本全域で見ることができる。
【０００６】
特許文献１には、メラニン生成抑制作用に優れ、シミやソバカスの改善効果に優れた美白化粧料として、ノリウツギを含む群の植物エキスまたはそのアルカリ処理物を一種または二種以上配合する技術が記載されている。
【０００７】
特許文献２には、ユキノシタ科の植物の抽出物が美白効果を有すること、そして、該植物としてアジサイが記載されている。
【０００８】
非特許文献１には、ノリウツギから特定条件で抽出された赤色色素の物性が開示されており、炭水化物の保護作用を有することが報告されている。
【０００９】
非特許文献２には、ノリウツギの樹皮から抽出した粘液性組成物からポリサッカライドを単離したこと、そしてその物性について報告されている。
【００１０】
非特許文献３には、ノリウツギ由来のクマリン配糖体とイリドイド配糖体が神経保護作用を有する旨が報告されている。
【００１１】
しかし、これらのいずれにも、ノリウツギ抽出物の抗炎症機能、抗糖化機能、保湿機能の向上や、これらの有効性に基づいた皮膚老化防止剤への応用についての記載や示唆は存在しない。
【００１２】
一方、当業者によって、植物抽出物に限らず、様々な原料の配合に基づいた様々な剤型の皮膚外用剤の一種であるスキンケア・メイク化粧料組成物が提案されている。（非特許文献４）
【００１３】
しかしながら、同様に、ノリウツギ抽出物の抗炎症機能、抗糖化機能、保湿機能の存在について記載または示唆されたものはない。
【００１４】
また、これらの機能を有するノリウツギ抽出物を有効成分とした抗炎症剤、抗糖化剤、保湿剤並びにこれらを配合した皮膚老化防止剤及び皮膚外用剤についての応用可能性について記載または示唆されたものも存在しない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】特開平０４−３４６９１１
【特許文献２】特開２００１−２０６８１９
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Dongbei Linye Daxue Xuebao 39：5：62-63,71(2011)
【非特許文献２】Chem Pharm Bull 24：2：230-234(1976)
【非特許文献３】Planta Med 78：17：1844-1850(2012)
【非特許文献４】「化粧品分野における公知技術集２０１２年版（平成２４年３月１６日発行）」（日本化粧品工業連合会  特許委員会編）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
抗炎症性、抗糖化性、保湿性といった多面的な効果を有する皮膚老化防止剤及びそれを含有する皮膚外用剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
発明者らは、ノリウツギの未知の有用性に着目し、その効果について探索と研究を進めていたところ、驚くべきことに、優れた抗炎症性、抗糖化性、保湿性、皮膚バリア効果を有することを見出し、発明を完成した。また、非特許文献４に例示されている皮膚外用剤として、さらには各種剤形に賦形するにあたっての、より最適な条件を見出すことに成功し、さらなる発明を完成した。
【発明の効果】
【００１９】
本発明は、抗炎症性、抗糖化性、保湿性、といった多面的に優れた効果を有するノリウツギの抽出物からなる皮膚老化防止剤を提供することができるので、単独要因に対する効果が確認されているに過ぎない既存の抗老化剤よりも、皮膚老化の諸要因に対して幅広く対応することができ、あるいは、複数の皮膚老化防止剤を必ずしも必要としない皮膚外用剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ノリウツギ（花）写真
【図２】ノリウツギ（全草）写真
【発明を実施するための形態】
【００２１】
ノリウツギ抽出物単体でも使用できるが、各種の様態の外用剤（医薬品・医薬部外品・化粧品など薬事上の分類を問わない）として調製し使用者の利便性を向上することができる。特に皮膚外用剤の調製にあたっては、例えば非特許文献４に紹介されている調剤例を用いることができる。
【００２２】
［ノリウツギ抽出物の調製］
植物原料から抽出物を調製する一般的方法を適宜採用することができるが、溶媒抽出法が望ましい。溶媒抽出については、水、エタノール等の極性溶媒を用いることが望ましく、水とその他の極性溶媒を同時に用いることがさらに望ましい。さらに、抽出物を活性炭処理、液液分配、カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、ゲル濾過、等によって、分離精製し、さらに活性の高い画分（成分）を抽出することもできる。
また、抽出部位は、全草を使用することもできるが、配合効率の観点から、特に、花・実を使用することが望ましい。
【００２３】
［外用剤の調製］
外用剤、例えば化粧料として調製する場合、パウダー、パウダーファンデーション等の粉体、石けん、リップスティック等の固体、クリーム、乳液、クリームファンデーション等の乳化物、化粧水、美容液等の液体など、種々の形態に調製することが出来る。また、シャンプー、トリートメント、頭皮用皮膚外用剤であってもよい。
【００２４】
この場合に配合し得る他の成分としては、通常、化粧品、医薬品等の外用剤の基剤成分あるいは添加剤成分または機能性を賦与する目的で用いられる成分、例えば、液状油分、固形油分、各種界面活性剤、金属セッケン、保湿剤、ゲル化剤、水溶性高分子、低級アルコール、多価アルコール、糖類、紫外線吸収剤、皮膜形成剤、樹脂、包接化合物、消臭剤、アミノ酸類、ビタミン類、薬剤、植物・動物・微生物由来の抽出物、有機酸、有機アミン、金属イオン封鎖剤、酸化防止剤、抗菌剤、防腐剤、ｐＨ調整剤、清涼剤、香料、エモリエント剤、色素、美白剤、抗しわ剤、抗老化剤、抗炎症剤、発毛剤、育毛促進剤、活性酸素除去剤、血行促進剤、収斂剤、角質溶解剤、タンパク質分解酵素などの成分、および外用薬の薬効成分としてのステロイド剤、非ステロイド剤を含む抗炎症剤、免疫抑制剤、鎮痛消炎剤、抗菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤、抗潰瘍・褥瘡剤、創傷被覆剤、循環改善剤、止痒剤、局所麻酔剤、酔い止め剤、ニコチン剤、女性ホルモン剤等が挙げられる。調製にあたっては、本発明のノリウツギ抽出物の配合量及び目的とする外用剤の種類に応じた常法（例えば非特許文献４の調剤例）を用いることが出来る。
【実施例１】
【００２５】
以下の手順でノリウツギ抽出物を３０％エタノール溶液として調製し、抗炎症作用、抗糖化作用について、精製水を比較例として、それぞれ後述の通り効果を検証した。
使用するノリウツギの抽出部位については、採取した全草から花及び実以外の部位を取り除いたものを使用した。
なお、特に記載のない場合、百分率は重量百分率を意味しており、以降も同様である。
【００２６】
＜ノリウツギ抽出物（３０％エタノール溶液）調製法＞
１．乾燥したノリウツギ１００ｇを粉砕し、９５％エタノール５００ｇを加えた。
２．４０℃で１２０分撹拌抽出した。
３．さらに５００ｇ加水した後、５％水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨ１３〜１４に調整した。
４．７０℃まで加熱した後、１０％乳酸を添加してｐＨ６．５に調整した。
５．室温まで徐放した後、３０％エタノール溶液になるよう加水し、ノリウツギ抽出物（３０％エタノール溶液）を得た。
【００２７】
[抗炎症作用の検証]
ノリウツギ抽出物の炎症性サイトカイン産生抑制作用をinterleukin-8（IL-8）およびtumor necrosis factor- alpha（TNF-α）の遺伝子発現を指標に調べた。
試験は以下のように行った。
培養した正常ヒト表皮角化細胞（NHEK）を０．２％ノリウツギ抽出物（「ノリウツギ抽出物（３０％エタノール溶液）」を加水希釈してノリウツギ抽出物として０．２％含有したもの。以下同じ。）で２４時間処理した。
その後、さらに、２μg/mlリポ多糖（LPS; グラム陰性菌の細胞壁成分であり炎症を惹起する）および０．２％ノリウツギ抽出物で６時間処理した。
処理後の細胞からRNAを抽出し、EcoTM Real time PCR system（illumina）を用いてRT-PCR法でIL-8およびTNF-αの遺伝子発現を調べた。
【００２８】
【表１】
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上記の通り、ノリウツギ抽出物は、LPSによるIL-8およびTNF-αの遺伝子発現上昇を抑制することを確認した。
【００２９】
ノリウツギ抽出物のNF-κBの活性化抑制作用をNF-κBのサブユニットの一つであるp６５の核内レベルを指標に調べた。
試験は以下のように行った。培養したNHEKを０．２％ノリウツギ抽出物で２４時間処理した。その後、さらに、２μg/ml LPSおよび０．２％ノリウツギ抽出物で１時間処理した。
処理後の細胞から核タンパク質を抽出し、ウエスタンブロッティングでp６５の発現レベルを調べた。
【００３０】
【表２】
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上記の通り、ノリウツギ抽出物が、LPSによる核内p６５レベルの上昇を抑制する機能を有することを確認した。
【００３１】
以上のことから、ノリウツギ抽出物は、炎症性サイトカインの発現遺伝子の生成抑制効果を有する優れた抗炎症剤であることがわかる。
【００３２】
［抗糖化作用の検証］
ノリウツギ抽出物の抗糖化作用を糖化誘導物質グリオキサール（glyoxal）により形成されるAGEsを指標に調べた。
試験は以下のように行った。
培養した正常ヒト真皮線維芽細胞（NB1RGB）をglyoxalおよび０．２％ノリウツギ抽出物で２４時間処理した。
処理後の細胞からタンパク質を抽出し、Bio-Dot Microfiltration Apparatus（Bio-RAD）を用いてドットブロッティングでAGEsの形成レベルを調べた。
【００３３】
【表３】
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得られたdot-blottingを解析した結果、上記の通り、AGEs形成が抑制されることを確認した。
【００３４】
ノリウツギ抽出物の抗糖化作用をglyoxalにより形成されたAGEsの分解を指標に確認した。試験は以下のように行った。
培養したNHEKをglyoxalで２４時間処理した。
処理後、glyoxalを除去し、０．２％ノリウツギ抽出物で２４時間処理した。
処理後の細胞からタンパク質を抽出し、Bio-Dot Microfiltration Apparatus（Bio-RAD）を用いてドットブロッティングでAGEsの分解を調べた。
【００３５】
【表４】
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得られたdot-blottingを解析した結果、上記の通り、AGEsを分解することを確認した。
【００３６】
以上のことから、ノリウツギ抽出物は、AGEsの抑制効果と分解効果の両方を併せ持つ、優れた抗糖化剤であることがわかる。
【００３７】
ノリウツギ抽出物を配合した皮膚外用剤の調剤例として以下の化粧料を調製した。
【実施例２】
【００３８】
［化粧水］
実施例１のノリウツギ抽出物（３０％エタノール溶液）を使用して以下の構成成分を常法で調製した。（表中のノリウツギ抽出物は、このノリウツギ抽出物（３０％エタノール溶液）をいう。以下同じ。）
また、比較例として、ノリウツギ抽出物（３０％エタノール溶液）を精製水で置換したものを調製した。
【表５】
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【実施例３】
【００３９】
［ローション］
実施例１のノリウツギ抽出物（３０％エタノール溶液）を使用して以下の構成成分を常法で調製した。
また、比較例として、ノリウツギ抽出物（３０％エタノール溶液）分を精製水で置換したものを調製した。
【表６】
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【実施例４】
【００４０】
［クリーム剤］
実施例１のノリウツギ抽出物（３０％エタノール溶液）を使用して以下の構成成分を常法で調製した。
また、比較例として、ノリウツギ抽出物（３０％エタノール溶液）分を精製水で置換したものを調製した。
【表７】
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【実施例５】
【００４１】
［パック剤］
実施例１のノリウツギ抽出物（３０％エタノール溶液）を使用して以下の構成成分を常法で調製した。
また、比較例として、ノリウツギ抽出物（３０％エタノール溶液）分を精製水で置換したものを調製した。
【表８】
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【００４２】
以下に、実施例２から５及び対応する比較例を対象にモニター官能評価での効果検証結果を示す。
なお、検証にあたっては、女性従業員から選抜した健常な皮膚を有するモニター３名に、実施例２の化粧水を複数回使用させ、化粧料、特にスキンケア化粧料において求められ、また、皮膚老化の指標とされている「うるおい」「なめらかさ」「やわらかさ」「つや」「透明感」「ハリ」「総合評価」について評価した。このとき、「１．感じない、２．あまり感じない、３．どちらともいえない、４．やや感じる、５．感じる」の５段階で判定したものの平均値を採用し検証した。
【００４３】
【表９】
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上記の通り、ノリウツギ抽出物の皮膚老化防止剤及びこれを含む化粧料の抗皮膚老化効果が認められた。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明の化粧品組成物は、外用化粧品としてメーキャップ化粧品やスキンケア化粧品（機能性化粧品）のベース基剤としてだけでなく、水分蒸発抑制機能による保湿効果をもつ機能性化粧品としても利用できる。また、薬事上の各種基準・要件を備えることによって、医薬部外品及び医薬品にも利用することができる。
【図１】
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【図２】
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