(57)【要約】      （修正有）【課題】ヒトＣＤ３８及びカニクイザルＣＤ３８と結合する単離された抗体、該抗体を含む医薬組成物、該抗体を用いる治療及び診断方法の提供。【解決手段】ヒトＣＤ３８及びカニクイザルＣＤ３８に特異的に結合する単離された抗体であって、ａ）以下を含む重鎖可変領域：ｉ）特定の配列を含む第１のＣＤＲ；ｉｉ）特定の配列を含む第２のＣＤＲ；ｉｉｉ）特定の配列を含む第３のＣＤＲと、ｂ）以下を含む軽鎖可変領域：ｉ）特定の配列を含む第１のＣＤＲ；ｉｉ）特定の配列を含む第２のＣＤＲ；ｉｉｉ）特定の配列を含む第３のＣＤＲと、ｃ）共有結合された薬物部分と、を含む、抗体。【選択図】図２
2018019689.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＤ３８（配列番号１）及びカニクイザルＣＤ３８（配列番号２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
ａ）以下を含む重鎖可変領域：
ｉ）配列番号３を含む第１のＣＤＲ；
ｉｉ）配列番号４を含む第２のＣＤＲ；
ｉｉｉ）配列番号５を含む第３のＣＤＲ；及び
ｂ）以下を含む軽鎖可変領域：
ｉ）配列番号６を含む第１のＣＤＲ；
ｉｉ）配列番号７を含む第２のＣＤＲ；
ｉｉｉ）配列番号８を含む第３のＣＤＲ；及び
ｃ）共有結合された薬物部分、
を含む、抗体。
【請求項２】
前記重鎖可変領域が配列番号９を含む、請求項１記載の単離された抗体。
【請求項３】
前記軽鎖可変領域が配列番号１０を含む、請求項１記載の単離された抗体。
【請求項４】
前記重鎖可変領域が配列番号９を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号１０を含む、請求項１記載の単離された抗体。
【請求項５】
重鎖が配列番号２１を含み、軽鎖が配列番号２２を含む、請求項１記載の単離された抗体。
【請求項６】
ヒトＣＤ３８（配列番号１）及びカニクイザルＣＤ３８（配列番号２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
ａ）以下を含む重鎖可変領域：
ｉ）配列番号１３を含む第１のＣＤＲ；
ｉｉ）配列番号１４を含む第２のＣＤＲ；
ｉｉｉ）配列番号１５を含む第３のＣＤＲ；及び
ｂ）以下を含む軽鎖可変領域：
ｉ）配列番号１６を含む第１のＣＤＲ；
ｉｉ）配列番号１７を含む第２のＣＤＲ；
ｉｉｉ）配列番号１８を含む第３のＣＤＲ；及び
ｃ）共有結合された薬物部分、
を含む、抗体。
【請求項７】
前記重鎖可変領域が配列番号１９を含む、請求項１記載の単離された抗体。
【請求項８】
前記軽鎖可変領域が配列番号２０を含む、請求項１記載の単離された抗体。
【請求項９】
前記重鎖可変領域が配列番号１９を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号２０を含む、請求項１記載の単離された抗体。
【請求項１０】
重鎖が配列番号３４を含み、軽鎖が配列番号３５を含む、請求項１記載の単離された抗体。
【請求項１１】
さらにＦｃドメインを含む、請求項１又は６記載の単離された抗体。
【請求項１２】
前記Ｆｃドメインがヒトである、請求項１１記載の単離された抗体。
【請求項１３】
前記Ｆｃドメインが変異Ｆｃドメインである、請求項１１記載の単離された抗体。
【請求項１４】
前記薬物部分が、リンカーを用いて前記抗体に結合される、請求項１〜１３のいずれか一項記載の単離された抗体。
【請求項１５】
前記薬物部分が、アウリスタチン、メイタンシノイド、及びカリケアマイシン、ドルスタチン（ｄｏｌｓｔａｔｉｎ）、及びトリコテセンからなる群から選択される、請求項１４記載の単離された抗体。
【請求項１６】
請求項２又は７記載の重鎖をコードする、単離された核酸。
【請求項１７】
請求項３又は８記載の軽鎖をコードする、単離された核酸。
【請求項１８】
請求項１４又は１５記載の単離された核酸を含む、宿主細胞。
【請求項１９】
請求項１又は６記載の抗体の製造方法であって、前記抗体が製造される条件下で請求項１１記載の宿主細胞を培養する工程を含む、方法。
【請求項２０】
ヒトＣＤ３８タンパク質（配列番号１）及びカニクイザルＣＤ３８（配列番号２）の生物活性を阻害する方法であって、配列番号１及び配列番号２の少なくともＫ１２１、Ｆ１３５、Ｑ１３９、Ｄ１４１、Ｅ２３９、Ｗ２４１、Ｃ２７５、Ｋ２７６、Ｆ２８４、Ｐ２９１及びＥ２９２と相互作用する抗体と前記タンパク質を接触させることによる、方法。
【請求項２１】
ヒトＣＤ３８（配列番号１）及びカニクイザルＣＤ３８（配列番号２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
ａ）以下を含む重鎖可変領域：
ｉ）配列番号３を含む第１のＣＤＲ；
ｉｉ）配列番号４を含む第２のＣＤＲ；
ｉｉｉ）配列番号５を含む第３のＣＤＲ；及び
ｂ）以下を含む軽鎖可変領域：
ｉ）配列番号６を含む第１のＣＤＲ；
ｉｉ）配列番号７を含む第２のＣＤＲ；
ｉｉｉ）配列番号８を含む第３のＣＤＲ；及び
ｃ）共有結合された薬物部分、
を含む抗体を、それを必要とする患者に投与することを含む、ガンの治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（背景）
本願は、２０１０年１２月３０に出願されたＵＳＳＮ６１／４２８，６９９；２０１１年３月３１日に出願されたＵＳＳＮ６１／４７０，３８２；２０１１年３月３１日に出願されたＵＳＳＮ６１／４７０，４０６；及び２０１１年５月１１日に出願されたＵＳＳＮ６１／４８５，１０４の３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）下での利益を主張し、これらの出願は全て、その全体が参照によって本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ３８は、サイクリックＡＤＰリボースヒドロラーゼとしても知られ、長いＣ末端細胞外ドメインと、短いＮ末端細胞質ドメインとを有するＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８は、ＣＤ１５７及びＡｐｌｙｓｉａ  ＡＤＰＲを含む、関連する膜結合酵素又は可溶性酵素のグループのメンバーである。この酵素ファミリーは、ＮＡＤをサイクリックＡＤＰリボース又はニコチン酸（ｎｉｃｔｏｔｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）−アデニンジヌクレオチドホスフェートに変換する独特の能力を有する。
【０００３】
さらに、ＣＤ３８は、Ｃａ２＋動員に関与すること、及び多数のシグナル伝達分子（ホスホリパーゼＣγ、ＺＡＰ−７０、ｓｙｋ及びｃ−ｃｂｌを含む）のチロシンリン酸化を介したシグナル伝達に関与することが報告されている。これらの観察結果に基づいて、ＣＤ３８は、リンパ系細胞の正常な発達の間、その成熟及び活性化において重要なシグナル伝達分子であることが提案された。
【０００４】
造血細胞の間での様々な機能的効果は、ＣＤ３８媒介性のシグナル伝達に起因しており、これには、リンパ球増殖、サイトカイン放出、Ｂ細胞及び骨髄性細胞の発達及び生存の制御、並びに樹状細胞の成熟誘導が含まれる。
【０００５】
それにも関わらず、シグナル伝達及び造血におけるＣＤ３８の正確な役割は不明確なままである。なぜなら、シグナル伝達研究の大半は、ＣＤ３８を異所的に過剰発現する細胞株及び抗ＣＤ３８モノクローナル抗体（非生理的リガンドである）を使用しているからである。
【０００６】
ＣＤ３８の予測される天然リガンドは、ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ−１；血小板内皮細胞接着分子−１）である。ＣＤ３１は、１３０ｋＤの免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーであり、循環血小板、好中球、単球及びナイーブＢリンパ球の表面に発現している。機能的には、ＣＤ３１は接着分子として作用とすると考えられる。ＣＤ３８とＣＤ３１の相互作用が、白血病細胞の生存の促進に作用し得ることが示唆されている。
【０００７】
単一分子を欠損した動物モデルは、多くの例において、その動物における分子の生物学的役割を理解する基本的ツールである。その根底にある前提は、タンパク質が必須の機能を発揮しているなら、その完全な喪失により、当該機能の完全な喪失がもたらされるというものである。
【０００８】
ＣＤ３８ノックアウトマウスが作出されている。これらの動物は、組織関連ＮＡＤａｓｅ活性のほぼ完全な喪失を示す。それにも関わらず、これらの動物は生存可能であり、これにより、ＣＤ３８及びその活性は生存に必要ではないとの結論が導かれる。しかしながら、これらのマウスは、先天性免疫の欠損及びＴ細胞依存性液性免疫応答の低下を示す。
【０００９】
マウスでの結果とは対照的に、ヒトにおいては、ＣＤ３８の欠如と生存とは相容れないとの強力な状況証拠が存在する。新生児由来の５，０００超の血液サンプルを分析しても、ＣＤ３８−個体を一つも同定できなかった；これは、マウスとは異なって、ＣＤ３８が生存に必要であることを示唆する。従って、ＣＤ３８機能についてマウスで観察された結果をヒトに外挿できるかは不明である。
【００１０】
ＣＤ３８は、多くの造血器悪性腫瘍、及び様々な造血器悪性腫瘍に由来する細胞株で上方制御されており、当該悪性腫瘍としては、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）、Ｂ細胞及びＴ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が挙げられる。一方、造血系の最も未発達な多能性幹細胞はＣＤ３８−である（図１）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
抗ガン剤の発見及び開発における最近の進歩にも関わらず、ＣＤ３８発現腫瘍を伴う多くの種類のガンは、依然として予後が不良である。従って、このような種類のガンを治療するための方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（本発明の要旨）
本明細書では、ＣＤ３８に結合するための試薬及び方法、並びにＣＤ３８特異的抗体を含むＣＤ３８特異的結合剤を用いた、ＣＤ３８関連疾患の治療方法及びＣＤ３８の検出方法を提供する。治療目的のために、本発明の抗体は、以下に記載のように、結合された薬物部分（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｄｒｕｇ  ｍｏｉｅｔｙ）を含む。診断目的のために、本発明の抗体は、検出可能な標識を任意選択で含んでよい。
【００１３】
従って、いくつかの実施態様において、ヒトＣＤ３８（配列番号１）及びカニクイザルＣＤ３８（配列番号２）に特異的な単離された抗体を記載する。この抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域から構成されており、ここで重鎖可変領域は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）であるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３から構成され、軽鎖可変領域も３つのＣＤＲであるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３から構成される。ＣＤＲの配列は、ＨＣＤＲ１（配列番号３）、ＨＣＤＲ２（配列番号４）、ＨＣＤＲ３（配列番号５）、ＬＣＤＲ１（配列番号６）、ＬＣＤＲ２（配列番号７）及びＬＣＤＲ３（配列番号８）により表される。いくつかの実施態様において、抗体はさらに、結合された薬物部分を含む。
【００１４】
他の実施態様において、単離された抗体は重鎖可変領域から構成されており、ここで重鎖可変領域の配列は配列番号９により包含される。他の実施態様において、単離された抗体は軽鎖可変領域から構成されており、ここで軽鎖可変領域の配列は配列番号１０により包含される。いくつかの実施態様において、抗体はさらに、結合された薬物部分を含む。
【００１５】
いくつかの実施態様において、単離された抗体は重鎖可変領域から構成されており、ここで重鎖可変領域の配列は配列番号９により包含される。他の実施態様において、単離された抗体は軽鎖可変領域から構成されており、ここで軽鎖可変領域の配列は配列番号１０により包含される。重鎖可変領域と軽鎖可変領域のこの組合せは、Ａｂ７９と称される。いくつかの実施態様において、抗体はさらに、結合された薬物部分を含む。
【００１６】
いくつかの実施態様において、単離された抗体は、重鎖及び軽鎖から構成されており、
ここで重鎖の配列は配列番号１１により包含され、軽鎖は配列番号１２により包含される。いくつかの実施態様において、抗体はさらに、結合された薬物部分を含む。
【００１７】
いくつかの実施態様において、単離された抗体はＦｃドメインを含む。他の実施態様において、ＦｃドメインはヒトＦｃドメインである。さらに他の実施態様において、Ｆｃドメインは変異型Ｆｃドメインである。
【００１８】
いくつかの実施態様において、配列番号１１の重鎖をコードする単離された核酸を提供する。他の実施態様において、配列番号１２の軽鎖をコードする単離された核酸を提供する。
【００１９】
いくつかの実施態様において、配列番号１１の重鎖をコードする単離された核酸と、配列番号１２の軽鎖をコードする単離された核酸とを含む、宿主細胞を提供する。
【００２０】
いくつかの実施態様において、本発明の抗体の製造方法を提供する。当該方法は、配列番号１１の重鎖をコードする単離された核酸と、配列番号１２の軽鎖をコードする単離された核酸とを含む宿主細胞を、前記単離された核酸が発現し、抗体が製造される条件下で培養する工程を包含する。次いで、当該分野で標準的な化学を用いて、薬物部分を抗体に結合する。
【００２１】
いくつかの実施態様において、ヒトＣＤ３８（配列番号１）及びカニクイザルＣＤ３８（配列番号２）に特異的な単離された抗体を記載する。この抗体は、６つのＣＤＲから構成されており、ここで、この抗体の各ＣＤＲは、０個、１個又は２個のアミノ酸置換により、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号８とは異なり得る。いくつかの実施態様において、抗体はさらに、結合された薬物部分を含む。
【００２２】
他の実施態様において、ヒトＣＤ３８（配列番号１）及びカニクイザルＣＤ３８（配列番号２）に特異的な単離された抗体を記載する。この抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域から構成されており、ここで重鎖可変領域は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）であるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３から構成されており、軽鎖可変領域も３つのＣＤＲであるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３から構成されている。ＣＤＲの配列は、ＨＣＤＲ１（配列番号１３）、ＨＣＤＲ２（配列番号１４）、ＨＣＤＲ３（配列番号１５）、ＬＣＤＲ１（配列番号１６）、ＬＣＤＲ２（配列番号１７）及びＬＣＤＲ３（配列番号１８）により表される。いくつかの実施態様において、抗体はさらに、結合された薬物部分を含む。
【００２３】
他の実施態様において、単離された抗体は重鎖可変領域から構成されており、ここで重鎖可変領域の配列は配列番号１９により包含される。他の実施態様において、単離された抗体は軽鎖可変領域から構成されており、ここで軽鎖可変領域の配列は配列番号２０により包含される。いくつかの実施態様において、抗体はさらに、結合された薬物部分を含む。
【００２４】
いくつかの実施態様において、単離された抗体は重鎖可変領域から構成されており、ここで重鎖可変領域の配列は配列番号１９により包含される。他の実施態様において、単離された抗体は軽鎖可変領域から構成されており、ここで軽鎖可変領域の配列は配列番号２０により包含される。重鎖可変領域と軽鎖可変領域のこの組合せはＡｂ１９と称される。いくつかの実施態様において、抗体はさらに、結合された薬物部分を含む。いくつかの実施態様において、抗体はさらに、別法として、診断を容易にするために検出可能な標識を含む。
【００２５】
いくつかの実施態様において、単離された抗体は、重鎖及び軽鎖から構成されており、ここで重鎖の配列は配列番号２１により包含され、軽鎖は配列番号２２により包含される。いくつかの実施態様において、抗体はさらに、結合された薬物部分を含む。
【００２６】
いくつかの実施態様において、配列番号２１の重鎖をコードする単離された核酸を提供する。他の実施態様において、配列番号２２の軽鎖をコードする単離された核酸を提供する。
【００２７】
いくつかの実施態様において、配列番号２１の重鎖をコードする単離された核酸と、配列番号２２の軽鎖をコードする単離された核酸とを含む、宿主細胞を提供する。
【００２８】
いくつかの実施態様において、本発明の抗体の製造方法を提供する。当該方法は、配列番号２１の重鎖をコードする単離された核酸と、配列番号２２の軽鎖をコードする単離された核酸とを含む宿主細胞を、前記単離された核酸が発現し、抗体が製造される条件下で培養する工程を包含する。次いで、当該分野で標準的な化学を用いて、薬物部分を抗体に結合する。
【００２９】
他の実施態様において、ヒトＣＤ３８（配列番号１）及びカニクイザルＣＤ３８（配列番号２）に特異的な単離された抗体を記載する。この抗体は、６つのＣＤＲから構成されており、ここで、この抗体の各ＣＤＲは、０個、１個又は２個のアミノ酸置換により、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１８とは異なり得る。
【００３０】
いくつかの実施態様において、ヒトＣＤ３８（配列番号１）及びカニクイザルＣＤ３８（配列番号２）に特異的に結合する単離された抗ＣＤ３８抗体を提供し、ここで該抗体は、約１０−６、１０−７、１０−８、１０−９以上のＫＤでヒトＣＤ３８に結合し、約１０−６、１０−７、１０−８、１０−９以上のＫＤでカニクイザルＣＤ３８と結合する。
【００３１】
いくつかの実施態様において、ヒトＣＤ３８及び／又はカニクイザルＣＤ３８との結合についてＡｂ７９及び／又はＡｂ１９と競合する抗体を提供する。
【００３２】
これらの及び他の実施態様、特徴及び潜在的利点は、以下の記載及び図面を参照することにより明らかとなるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１は、リンパ系細胞のＣＤ３８発現プロファイルを示す。ＣＤ３８発現は、プロＢ細胞（ＣＤ３４＋ＣＤ１９＋ＣＤ２０−）、活性化Ｂ細胞（ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋）、形質細胞（ＣＤ１３８＋ＣＤ１９−ＣＤ２０−）、活性化ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ５６＋）及びＮＫ細胞（ＣＤ５６＋ＣＤ１６＋）において同定された。さらに、ＣＤ３８発現は、リンパ球前駆細胞（ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ１０＋ＣＤ１９−）でも見られるが、リンパ系幹細胞では見られない。
【図２】図２はＡｂ７９及びＡｂ１９の重鎖及び軽鎖の配列を示す。
【図３】図３は、ヒト及びカニクイザルＣＤ３８の配列を表す。
【図４】図４は、免疫蛍光法による、正常組織結合Ａｂ７９の検出を示す。（Ａ）Ａｂ７９で染色された正常ヒト結腸。（Ｂ）無関係なコントロール抗体であるパリビズマブで染色された正常ヒト結腸。（Ｃ）ヘマトキシリンで対比染色された正常ヒト結腸の光学顕微鏡像。（Ｄ）Ａｂ７９で染色された正常ヒト前立腺。（Ｅ）無関係なコントロール抗体であるパリビズマブで染色された正常ヒト前立腺。（Ｆ）ヘマトキシリンで対比染色された正常ヒト前立腺の光学顕微鏡像。（Ｇ）Ａｂ７９で染色された正常ヒトリンパ節。（Ｉ）ヘマトキシリンで対比染色された正常ヒトリンパ節の光学顕微鏡像。
【図５】図５は、多発性骨髄腫（ＭＭ）患者由来の骨髄サンプルへのＡｂ７９結合の検出を示す。（Ａ）正常骨髄の免疫蛍光Ａｂ７９染色。（Ｂ）ＭＭ患者由来の骨髄の代表的な免疫蛍光Ａｂ７９染色。Ａｂ７９により認識されるエピトープは、検査した全ての多発性骨髄腫サンプルにおいて、およそ５０％以上の細胞で強く発現したが、正常骨髄においてはおよそ１０％以下の細胞でしか発現しなかった。
【図６】図６は、免疫蛍光法により検出される、様々な細胞株へのＡｂ７９の結合を示す。（Ａ）ＭＯＬＰ−８、（Ｂ）Ｄａｕｄｉ、（Ｃ）ＲＰＭＩ、（Ｄ）ＭＣＦ７。
【図７】図７は、（Ａ）多発性骨髄腫患者由来の骨髄に由来する細胞、及び（Ｂ）慢性リンパ性白血病患者由来のＰＢＭＣ（ＣＤ５＋細胞でゲーティング）に対する、Ａｂ７９発現のＦＡＣＳ解析を示す。
【図８】図８は、Ａｂ１９、Ａｂ７９並びにベンチマーク抗体ＢＭ１及びＢＭ２を比較する、ｉｎ  ｖｉｖｏ用量反応研究を示す。
【図９】図９は、Ａｂ１９、Ａｂ７９並びにベンチマーク抗体ＢＭ１及びＢＭ２で処置したマウスにおける、可視化したリンパ腫の拡散を示す。
【図１０】図１０は、Ｘ線結晶学データに基づく、ＣＤ３８へのＡｂ７９結合を示す。
【図１１】図１１は、多数の異なるＡＤＣ態様を示す。本明細書で示すように、リンカー部分は変化してよく、アミノ酸組成、自壊的リンカー（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ  ｌｉｎｋｅｒ）などを含む。
【図１１Ａ】図１１は、多数の異なるＡＤＣ態様を示す。本明細書で示すように、リンカー部分は変化してよく、アミノ酸組成、自壊的リンカー（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ  ｌｉｎｋｅｒ）などを含む。
【図１１Ｂ】図１１は、多数の異なるＡＤＣ態様を示す。本明細書で示すように、リンカー部分は変化してよく、アミノ酸組成、自壊的リンカー（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ  ｌｉｎｋｅｒ）などを含む。
【図１１Ｃ】図１１は、多数の異なるＡＤＣ態様を示す。本明細書で示すように、リンカー部分は変化してよく、アミノ酸組成、自壊的リンカー（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ  ｌｉｎｋｅｒ）などを含む。
【図１１Ｄ】図１１は、多数の異なるＡＤＣ態様を示す。本明細書で示すように、リンカー部分は変化してよく、アミノ酸組成、自壊的リンカー（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ  ｌｉｎｋｅｒ）などを含む。
【図１１Ｅ】図１１は、多数の異なるＡＤＣ態様を示す。本明細書で示すように、リンカー部分は変化してよく、アミノ酸組成、自壊的リンカー（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ  ｌｉｎｋｅｒ）などを含む。
【図１２】図１２は、ベンチマーク１及び２、Ａｂ１９並びにＡｂ７９の各抗体に結合するヒトＣＤ３８エピトープを示す。
【図１３】図１３は、好ましいリンカー／薬物組合せの構造を示す。当業者に理解されるように、ここで示すＴＳＦ７９（例えば、Ａｂ７９）抗体は、Ａｂ１９抗体に変更できる。同様に、本明細書で論じるように、本明細書に示すアウリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）Ｅに加えて、任意の数の追加の薬物／リンカー組合せを用いることができる。
【図１４】図１５は、投与２４時間後のカニクイザルにおける細胞数の変化の割合を示す。
【図１５】図１５は、Ａｂ７９の単回投与後の枯渇の回復を示す。
【００３４】
（本発明の詳細な説明）
概説
ＣＤ３８の細胞外ドメインは、ＡＤＰリボシルシクラーゼ活性とＡＤＰリボシルヒドロラーゼ活性の両方を有する、二機能（ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）酵素活性を有することが示されている。従って、ＣＤ３８は、ＮＡＤ＋のｃＡＤＰＲへの変換を触媒でき（シクラーゼ）、さらにそれをＡＤＰリボースに加水分解できる（ヒドロラーゼ）。ｃＡＤＰＲ
は、細胞増殖、分化及びアポトーシスに重要なセカンドメッセンジャーアクティビティーであるカルシウムの細胞内ストアからの動員に機能する。
【００３５】
ＣＤ３８の発現の増加は、造血起源の様々な疾患で報告されており、慢性リンパ芽球性白血病におけるネガティブな予後マーカーとして記載されている。このような疾患としては、多発性骨髄腫（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８））、慢性リンパ芽球性白血病（Ｍｏｒｉｂｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）、Ｊｅｌｉｎｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）、Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）、Ｄｕｒｉｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２））、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病を含む急性リンパ芽球性白血病（Ｋｅｙｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ（２０００））、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、原発性全身性アミロイドーシス、マントル細胞リンパ腫、前リンパ球性／骨髄性白血病、急性骨髄性白血病（Ｋｅｙｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３））、慢性骨髄性白血病（Ｍａｒｉｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３））、濾胞性リンパ腫、ＮＫ細胞白血病及び形質細胞白血病が挙げられるが、これらに限定されない。このように、ＣＤ３８は、造血系疾患の治療において有用な標的を提供する。
【００３６】
複数の抗ＣＤ３８抗体が、ＣＤ３８関連ガンの治療について臨床試験されている（本明細書において、「ベンチマーク１及びベンチマーク２」と称する）。従って、治療効果及び／又は診断的適用を有するＣＤ３８に対する抗体が有用である。本発明は、異なるＣＤ３８エピトープに結合する、２つの異なる抗ＣＤ３８のＣＤＲセットであって、ＣＤ３８のヒト及びカクニイザイル形態の両方に結合するもの、並びにこれらのＣＤＲを含む抗体を提供する。抗体はさらに、本明細書に記載するように、薬物／リンカー結合体を含む。
【００３７】
臨床試験におけるいくつかの抗ＣＤ３８抗体では見られない利点の一つは、カニクイザルＣＤ３８に結合できることである。なぜなら、これらの霊長類は前臨床試験での利用が見出されており、従って、投与、毒性、有効性などの初期の評価につながり得るからである。
【００３８】
ＣＤ３８タンパク質
従って、本発明は、ヒトＣＤ３８タンパク質に特異的に結合する（及び、以下に記載のとおり、追加として、好ましくは、霊長類ＣＤ３８タンパク質に特異的に結合する）単離された抗ＣＤ３８抗体を提供する。当分野で既知のとおり、ＣＤ３８タンパク質は多数の種で見られる。本発明で特に有用なものは、ヒトＣＤ３８タンパク質と霊長類ＣＤ３８タンパク質、特に、臨床試験で使用される霊長類、例えば、カニクイザル（マカカ・ファシキュラリス（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）、カニクイザル（Ｃｒａｂ  ｅａｔｉｎｇ  ｍａｃａｑｕｅ）、本明細書では「サイノ」（ｃｙｎｏ）と称する場合もある）などのＣＤ３８タンパク質の両方に結合する抗体である。「ヒトＣＤ３８」又は「ヒトＣＤ３８抗原」とは、配列番号１、又はエピトープなどの機能性断片（本明細書で定義するとおり）のタンパク質を意味する。一般に、ＣＤ３８は、短い細胞質内テイル、膜貫通ドメイン及び細胞外ドメインを有し、特定の実施態様において、本発明の抗体は、ＣＤ３８タンパク質の細胞外部分と結合する。本明細書において「カニクイザルＣＤ３８」とは、ヒトＣＤ３８と９２％同一である配列番号２を意味する。
【００３９】
ＣＤ３８の同義語には、ＡＤＰリボシルシクラーゼ１、ｃＡＤＰｒヒドロラーゼ１、Ｃｄ３８−ｒｓ１、サイクリックＡＤＰ−リボースヒドロラーゼ１、Ｉ−１９及びＮＩＭ−Ｒ５抗原が含まれる。
【００４０】
いくつかの実施態様において、本発明の抗ＣＤ３８  Ａｂ７９抗体は、多数のアミノ酸残基においてＣＤ３８と相互作用し、該アミノ酸残基としては、Ｋ１２１、Ｆ１３５、Ｑ１３９、Ｄ１４１、Ｍ１４２、Ｄ２０２、Ｖ２０３、Ｈ２０５、Ｑ２３６、Ｅ２３９、Ｗ
２４１、Ｓ２７４、Ｃ２７５、Ｋ２７６、Ｆ２８４、Ｃ２８７、Ｖ２８８、Ｋ２８９、Ｎ２９０、Ｐ２９１、Ｅ２９２、Ｄ２９３が挙げられる。本明細書で概説するように、これらの残基と相互作用する他の抗体も、治療及び診断的適用における使用が見出される。
【００４１】
いくつかの実施態様において、本発明の抗ＣＤ３８抗体は、任意選択で（いくつかの場合においては好ましくは）、ＣＤ１５７などのＣＤ３８ファミリーの他のメンバーと結合しない。例えば、本明細書における好ましい実施態様は、配列番号２３（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００４３２５）のヒトＣＤ１５７と結合しない。
【００４２】
抗体
本発明は、抗ＣＤ３８抗体、通常は本明細書に記載のとおり、治療及び／又は診断抗体を提供する。本発明での使用が発見される抗体は、本明細書に記載のとおり、多数のフォーマットをとることができ、これには、従来の抗体、並びに抗体誘導体、断片及び模倣物（ｍｉｍｅｔｉｃｓ）（以下に記載）が挙げられる。原則として、本発明は、本明細書で定義するとおり６個のＣＤＲのセット（以下に記載のとおり、少数のアミノ酸の変化を含む）を含む抗体構造を提供する。
【００４３】
従来の抗体構造ユニットは、典型的には４量体を含む。各４量体は、典型的には、２つの同一のポリペプチチド鎖対からなり、各対は、１つの「軽」鎖（典型的には約２５ｋＤａの分子量を有する）と１つの「重」鎖（典型的には、約５０〜７０ｋＤａの分子量を有する）を有する。ヒト軽鎖は、κ軽鎖とλ軽鎖に分類される。重鎖は、μ、δ、γ、α又はεに分類され、それぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥとして抗体アイソタイプを定義する。ＩｇＧは複数のサブクラスを有し、サブクラスとしては、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４が挙げられるがこれらに限定されない。ＩｇＭは、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含むサブクラスを有するが、これらに限定されない。従って、本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」は、その定常領域の化学的及び抗原的特徴により定義される免疫グロブリンの任意のサブクラスを意味する。既知のヒト免疫グロブリンアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ１、ＩｇＭ２、ＩｇＤ及びＩｇＥである。治療用抗体には、アイソタイプ及び／又はサブクラスのハイブリッドも含まれ得ることが理解されるべきである。
【００４４】
各鎖のアミノ末端部分には、抗原認識に主に関与する約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変領域が含まれる。可変領域では３つのループが重鎖及び軽鎖の各Ｖドメインについて集合しており、抗原結合部位を形成する。各ループは、相補性決定領域とも称され（以下、「ＣＤＲ」とも称する）、この部分におけるアミノ酸配列の変異（ｖａｒｉａｔｉｏｎ）が最も顕著である。「可変」とは、可変領域の特定のセグメントが、抗体の配列において広範囲に異なるという事実を意味する。可変領域内の可変性は、均一に分布していない。代わりに、Ｖ領域は、それぞれ９〜１５アミノ酸長以上の「超可変領域」と称される極度に可変性の短い領域により分離される１５〜３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と称される比較的不変のストレッチからなる。
【００４５】
各ＶＨ及びＶＬは、３つの超可変領域（「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」）と４つのＦＲからなり、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へ配置される：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。
【００４６】
超可変領域は、一般に、軽鎖可変領域における、アミノ酸残基約２４〜３４（ＬＣＤＲ１；「Ｌ」は軽鎖を意味する）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）及び８９〜９７（ＬＣＤＲ３）と重鎖可変領域における、約３１〜３５Ｂ（ＨＣＤＲ１；「Ｈ」は重鎖を意味する）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）及び９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸残基；Ｋａｂａｔ
ｅｔ  ａｌ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ  ＯＦ  ＩＭＭＵＮＯＬ
ＯＧＩＣＡＬ  ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）、及び／又は超可変性ループを形成するそれらの残基（例えば、軽鎖可変領域における残基２６〜３２（ＬＣＤＲ１）、５０〜５２（ＬＣＤＲ２）及び９１〜９６（ＬＣＤＲ３）と、重鎖可変領域における２６〜３２（ＨＣＤＲ１）、５３〜５５（ＨＣＤＲ２）及び９６〜１０１（ＨＣＤＲ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を包含する。本発明の具体的なＣＤＲは以下に記載する。
【００４７】
本明細書にわたり、可変ドメインの残基（およそ、軽鎖可変領域の残基１〜１０７及び重鎖可変領域の残基１〜１１３）について言及する場合には、Ｆｃ領域で使用されるＥＵナンバーシステムとともに、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを通常用いる（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，上記（１９９１））。
【００４８】
ＣＤＲは、抗原結合の形成に寄与し、より詳細には、抗体のエピトープ結合部位の形成に寄与する。「エピトープ」とは、パラトープとして知られる、抗体分子の可変領域における特異的な抗原結合部位と相互作用する決定基を意味する。エピトープは、アミノ酸や糖側鎖などの分子にグループ分けされ、通常、特異的な構造特性及び特異的な電荷特性を有する。単一の抗原が、２以上のエピトープを有してもよい。例えば、本明細書で示すとおり、「Ａｂ１９」及び「Ａｂ７９」と本明細書で称する２つの異なる抗体は、ＣＤ３８分子上の異なるエピトープに結合する。
【００４９】
エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基（エピトープの免疫優性コンポーネント（ｉｍｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｔ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）とも称される）、及び結合に直接関与しない他のアミノ酸残基（特異的な抗原結合ペプチドにより有効に阻害されるアミノ酸残基など）（換言すれば、当該アミノ酸残基は、特異的な抗原結合ペプチドのフットプリント（ｆｏｏｔｐｒｉｎｔ）内である）を含んでよい。
【００５０】
エピトープは、立体構造であるか、直線状であるかのいずれかであってよい。立体構造エピトープは、直線状のポリペプチド鎖の異なるセグメントから空間的に並置されたアミノ酸により製造される。直線状エピトープは、ポリペプチド鎖の隣接アミノ酸残基により作製されたものである。立体構造及び非立体構造エピトープは、変性溶媒の存在下、後者ではなく前者との結合が失われることで区別され得る。
【００５１】
エピトープは、典型的には、特有の空間配置において、少なくとも３つ、通常は、少なくとも５又は８〜１０アミノ酸を含む。同一のエピトープを認識する抗体は、１つの抗体が、標的抗原ともう一つの抗体との結合をブロックする能力を示す単純な免疫アッセイで検証することができ、これは、例えば、実施例で概説するような、「ビニング（ｂｉｎｎｉｎｇ）」などである。実施例に示すようなＸ線結晶学研究により、図１２に示すとおり、本発明の抗体（Ａｂ１９及びＡｂ７９を含む）と従来技術の抗体（ベンチマーク１及びベンチマーク２）の両方に結合するアミノ酸残基が同定される。
【００５２】
本発明において、実施例で概説するとおりＡｂ７９は、ＣＤ３８の多数のアミノ酸残基と相互作用し、該アミノ酸残基としては、Ｋ１２１、Ｆ１３５、Ｑ１３９、Ｄ１４１、Ｍ１４２、Ｅ２３９、Ｗ２４１、Ｓ２７４、Ｃ２７５、Ｋ２７６、Ｆ２８４、Ｖ２８８、Ｋ２８９、Ｎ２９０、Ｐ２９１、Ｅ２９２及びＤ２９３が挙げられる。これらの残基は、Ｓ２７４がシアン（ｃｙａｎ）で実際にはＦ２７４である以外は、ヒト及びカニクイザル（ｃｙａｎ  ｍｏｎｋｅｙｓ）の両方で同一であることに留意すべきである。これらの残基は、免疫優性エピトープ及び／又は特異的抗原結合ペプチドのフットプリント内の残基を表してよい。
【００５３】
本発明において、Ａｂ１９は、異なるエピトープと結合し、これには、Ｇ９１、Ｅ１０３、Ｅ１０３４、Ｄ１０５、Ｑ１０７、Ｍ１１０、Ｋ１１１、Ｔ１１４、Ｑ１１５、Ｔ１４８、Ｖ１９２、Ｒ１９４、Ｒ１９５、Ｆ１９６、Ａ１９９、Ｈ２２８、Ｎ２２９、Ｑ２３１、Ｅ２３３及びＫ２３４が挙げられる。これらの残基は、Ｍ１１０がシアン（ｃｙａｎ）ではＶ１１０であり、Ａ１９９がシアン（ｃｙａｎ）ではＴ１９９であることを除いて、ヒトとカニクイザル（ｃｙａｎ  ｍｏｎｋｅｙｓ）の両方で同一であることに留意すべきである。
【００５４】
従って、いくつかの実施態様において、これらのエピトープのいずれかでの結合によりＡＢ７９及びＡｂ１９と競合する抗体も自己免疫疾患を治療するために使用され得る。Ａｂ７９とＢＭ１は、いくらか重複しており、従って、Ａｂ７９と競合するがＢＭ１とは競合しない抗体の本発明での使用も見出される点に留意すべきである。
【００５５】
従って、本発明は、ヒト及びシアン（ｃｙａｎ）ＣＤ３８の両方に結合し、これらの残基の少なくとも８０％、９０％、９５％又は９８％と相互作用する抗体を提供する。言い換えれば、相互作用ゾーンの表面領域は、これらの残基の領域に過ぎない。
【００５６】
各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を定義する。Ｋａｂａｔらは、重鎖及び軽鎖可変領域の多数の一次配列を集めた。配列の保存の程度に基づいて、彼らは、個々の一次配列をＣＤＲとフレームワークとに分類し、そのリストを作成した（ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ  ＯＦ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．９１−３２４２，Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。参照によりその全体が本明細書に援用される）。
【００５７】
免疫グロブリンのＩｇＧサブクラスでは、重鎖に複数の免疫グロブリンドメインが存在する。本明細書において「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」とは、異なる三次構造を有する免疫グロブリンの領域を意味する。本発明で関心のあるものは、重鎖定常（ＣＨ）ドメインとヒンジドメインを含む、重鎖ドメインである。ＩｇＧ抗体との関連において、ＩｇＧアイソタイプはそれぞれ３つのＣＨ領域を有する。従って、ＩｇＧとの関連において「ＣＨ」ドメインは以下のとおりである：「ＣＨ１」とは、Ｋａｂａｔに示すＥＵインデックスに従って、１１８〜２２０位を意味する。「ＣＨ２」とは、Ｋａｂａｔに示すＥＵインデックスに従って、２３７〜３４０位を意味し、「ＣＨ３」とは、Ｋａｂａｔに示すＥＵインデックスに従って、３４１〜４４７位を意味する。
【００５８】
重鎖の別のタイプのＩｇドメインはヒンジ領域である。本明細書において「ヒンジ」又は「ヒンジ領域」又は「抗体ヒンジ領域」又は「免疫グロブリンヒンジ領域」とは、抗体の第一と第二の定常領域の間のアミノ酸を含むフレキシブルなポリペプチドを意味する。構造的には、ＩｇＧ  ＣＨ１ドメインは、ＥＵ２２０位で終了し、ＩｇＧ  ＣＨ２ドメインは、ＥＵ２３７位の残基で開始する。従って、ＩｇＧについての抗体ヒンジは、本明細書では、２２１位（ＩｇＧ１のＤ２２１）から２３６位（ＩｇＧ１ではＧ２３６）を含むと定義され、ここで、番号付けはＫａｂａｔに示すＥＵインデックスに従うものである。いくつかの実施態様において、例えばＦｃ領域との関連で、下方（ｌｏｗｅｒ）のヒンジが含まれ、「下方のヒンジ」とは一般に２２６位又は２３０位を意味する。
【００５９】
本発明で特に関心があるのはＦｃ領域である。本明細書で使用する場合、「Ｆｃ」又は「Ｆｃ領域」又は「Ｆｃドメイン」とは、第一の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体定常領域を含むポリペプチドを意味し、いくつかの場合においては、ヒンジの一部も含まれる。従って、Ｆｃとは、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グ
ロブリンドメイン、ＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、並びにこれらのドメインのＮ末端のフレキシブルなヒンジを意味する。ＩｇＡとＩｇＭについては、ＦｃにＪ鎖が含まれてもよい。ＩｇＧについては、Ｆｃドメインは、免疫グロブリンドメインＣγ２及びＣγ３（Ｃγ２及びＣγ３）、並びにＣγ１（Ｃγ１）とＣγ２（Ｃγ２）の間の下方のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変化し得るとはいえ、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、そのカルボキシ末端にＣ２２６又はＰ２３０残基を含ものと定義され、ここで番号付けはＫａｂａｔに示すＥＵインデックスに従う。いくつかの実施態様において、以下に詳述するとおり、アミノ酸修飾がＦｃ領域でなされて、例えば、１つ以上のＦｃγＲレセプター、又はＦｃＲｎレセプターとの結合が変更される。
【００６０】
いくつかの実施態様において、抗体は完全長である。本明細書において「完全長抗体」とは、抗体の天然の生物学的形態を構成する構造を意味し、これは、可変及び定常領域を含み、本明細書で概説するとおり１つ以上の修飾を含む。
【００６１】
あるいは、抗体は、様々な構造、例えば、抗体断片、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体模倣物」と称する場合もある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体融合物（「抗体結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）」とも称される場合がある）、及びそれぞれの断片などであってよいが、これらに限定されない。構造は依然として依存する。
【００６２】
一実施態様において、抗体は抗体断片である。具体的な抗体断片としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなるＦａｂ断片；（ｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｉｖ）単一の可変領域からなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６、参照により全体を援用する）；（ｖ）単離されたＣＤＲ領域；（ｖｉ）２つの結合したＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｖｉｉ）単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）であって、ＶＨドメイン及びＶＬドメインが、２つのドメインが会合して抗原結合部位を形成することができるペプチドリンカーにより結合されているもの（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：５８７９−５８８３、参照によりその全体が援用される）；（ｖｉｉｉ）二重特異性単鎖Ｆｖ（ＷＯ０３／１１１６１、参照により本明細書に援用される）；及び（ｉｘ）遺伝子融合により構築された多価又は多重特異性（ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）断片である「ダイアボディ」又は「トリアボディ」（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ．  ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｅｎｚｙｍｏｌ．３２６：４６１−４７９；ＷＯ９４／１３８０４；Ｈｏｌｌｉｇｅｒ
ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−６４４８、参照により全て、その全体が援用される）。
【００６３】
キメラ及びヒト化抗体
いくつかの実施態様において、抗体は異なる種由来の混合物であってよく、例えば、キメラ抗体及び／又はヒト化抗体などであってよい。すなわち、本発明において、ＣＤＲセットは、本明細書において配列により具体的に記載されるもの以外のフレームワーク及び定常領域とともに使用されてよい。
【００６４】
一般に、「キメラ抗体」及び「ヒト化抗体」はともに、２以上の種由来の領域を組み合わせた抗体を意味する。例えば、「キメラ抗体」は、従来、マウス（又はいくつかの場合ではラット）由来の可変領域（１つ以上）とヒト由来の定常領域（１つ以上）とを含む。「ヒト化抗体」は、通常、ヒト抗体で見られる配列と交換された可変ドメインフレームワーク領域を有している非ヒト抗体を意味する。一般に、ヒト化抗体においては、ＣＤＲを
除く抗体全体は、ヒト起源のポリヌクレオチドによりコードされるか、又はそのＣＤＲ内を除いてそのような抗体と同一である。ＣＤＲは、そのいくつか又は全てが非ヒト生物由来の核酸によりコードされ、ヒト抗体可変領域のβシートフレームワークへとグラフトされて抗体を作っており、その特異性はグラフトされたＣＤＲにより決定される。このような抗体の作製は、例えば、ＷＯ９２／１１０１８、Ｊｏｎｅｓ，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ
３２１：５２２−５２５、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６などに記載されており、これらは全て、参照によりその全体が本明細書に援用される。選択されたアクセプターフレームワーク残基の対応するドナー残基への「復帰突然変異（Ｂａｃｋｍｕｔａｔｉｏｎ）」は、多くの場合、最初のグラフト構築物で失われた親和性を取り戻すために必要である（ＵＳ５５３０１０１；ＵＳ５５８５０８９；ＵＳ５６９３７６１；ＵＳ５６９３７６２；ＵＳ６１８０３７０；ＵＳ５８５９２０５；ＵＳ５８２１３３７；ＵＳ６０５４２９７；ＵＳ６４０７２１３、これらは全て、参照によりその全体が援用される）。ヒト化抗体は、最も有利には、少なくとも免疫グロブリン定常領域の一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含み、従って、典型的にはヒトＦｃ領域を含む。ヒト化抗体は、遺伝子組換えされた免疫系を有するマウスを用いて作製されてもよい。Ｒｏｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９−６５４、参照によりその全体が援用される。非ヒト抗体をヒト化及び再形成のための様々な技術及び方法が当分野で公知である（Ｔｓｕｒｕｓｈｉｔａ＆Ｖａｓｑｕｅｚ，２００４，Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂ  Ｃｅｌｌｓ，５３３−５４５，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＳＡ）及びそこで引用される参考文献を参照されたい。これらは全て、参照によりその全体が援用される）。ヒト化方法としては、以下に記載の方法が挙げられるが、これらに限定されない：Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８；Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６；Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，ＵＳＡ８６：１００２９−３３；Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９−１０３５；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：４２８５−９，Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７（２０）：４５９３−９；Ｇｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：４１８１−４１８５；Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  １１：３２１−８、これら全て、参照によりその全体が援用される。ヒト化、又は非ヒト抗体可変領域の免疫原性を低下させる他の方法には、例えば、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：９６９−９７３（参照によりその全体が援用される）などに記載されるような表面再形成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）方法が含まれてよい。一実施態様において、親抗体は、当分野で既知であるとおり、親和性成熟されている。構造に基づく方法は、ヒト化及び親和性成熟について実施されてよく、例えばＵＳＳＮ１１／００４，５９０に記��される方法などである。選択に基づく方法は、抗体可変領域をヒト化及び／又は親和性成熟するために実施されてよく、この方法としては、以下に記載の方法が挙げられるが、これらに限定されない：Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１−１６２；Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８−１０６８４；Ｒｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（３７）：２２６１１−２２６１８；Ｒａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：８９１０−８９１５；Ｋｒａｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １６（１０）：７５３−７５９（これらは全て、参照によりその全体が援用される）。他のヒト化方法は、ＣＤＲの一部のみのグラフトを伴ってよく、これには、以下に記載の方法が挙げられるが、これらに限定されない
：ＵＳＳＮ０９／８１０，５１０；Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−１１２５；Ｄｅ  Ｐａｓｃａｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６−３０８４（これらは全て、参照によりその全体が援用される）。
【００６５】
一実施態様において、本発明の抗体は、多重特異性抗体、とりわけ二重特異性抗体であってよく、二重特異性抗体は、「ダイアボディ」と称される場合もある。これらは、２つ（以上）の異なる抗原、又は同一抗原上の異なるエピトープに結合する抗体である。ダイアボディは、当分野で既知の様々な方法で作製され得（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４：４４６−４４９、参照によりその全体が援用される）、例えば、化学的に又はハイブリッドハイブリドーマ（ｈｙｂｒｉｄ  ｈｙｂｒｉｄｏｍａ）から調製され得る。
【００６６】
一実施態様において、抗体はミニボディである。ミニボディは、ＣＨ３ドメインと連結されたｓｃＦｖを含む最小化抗体様タンパク質である。Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５−３０６１、参照によりその全体が援用される。いくつかの場合において、ｓｃＦｖはＦｃ領域と連結され得、ヒンジ領域のいくつか又は全体を含んでよい。
【００６７】
本発明の抗体は、通常、単離されるか、又は組換えられる。「単離される」とは、本明細書で開示する様々なポリペプチドを記載するために使用する場合、ポリペプチドが発現される細胞又は細胞培養物から同定され且つ分離され、且つ／又は回収されたポリペプチドを意味する。通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製工程により調製される。「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を意味する。例えば、ＣＤ３８と特異的に結合する単離された抗体は、ＣＤ３８以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない。
【００６８】
しかしながら、ヒトＣＤ３８又はカニクイザルＣＤ３８のエピトープ、アイソフォーム又は変異体と特異的に結合する単離された抗体は、例えば、ＣＤ３８種ホモログ（ｓｐｅｃｉｅｓ  ｈｏｍｏｌｏｇ）などの他の種由来の他の関連抗原と交差反応性を有してよい。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まないものであってよい。
【００６９】
異なる特異性を有する単離されたモノクローナル抗体は、良く定義された組成物中で組み合わされ得る。従って、例えば、Ａｂ７９及びＡｂ１９は、所望する場合、単一の製剤で組み合わされ得る。
【００７０】
本発明の抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８リガンド（例えば、配列番号１及び２のヒト及びカニクイザルＣＤ３８タンパク質など）と特異的に結合する。「特異的結合」又は「特異的に結合する」、又は特定の抗原若しくはエピトープに「特異的」であるとは、非特異的相互作用と測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、コントロール分子の結合と比較して、分子の結合を決定することにより測定でき、コントロール分子は、通常、結合活性を有さない類似構造の分子である。例えば、特異的結合は、標的と類似するコントロール分子との競合により決定され得る。
【００７１】
特定の抗原又はエピトープに対する特異的結合は、例えば、少なくとも約１０−４Ｍ、少なくとも約１０−５Ｍ、少なくとも約１０−６Ｍ、少なくとも約１０−７Ｍ、少なくとも約１０−８Ｍ、少なくとも約１０−９Ｍ、或いは少なくとも約１０−１０Ｍ、少なくとも約１０−１１Ｍ、少なくとも約１０−１２Ｍ以上の抗原又はエピトープに対するＫＤを有する抗体により示され得、ここで、ＫＤとは、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を
意味する。典型的には、抗原に特異的に結合する抗体は、抗原又はエピトープに対するコントロール分子について２０〜、５０〜、１００〜、５００〜、１０００〜、５，０００〜、１０，０００〜倍以上のＫＤを有する。
【００７２】
さらに、特定の抗原又はエピトープに対する特異的結合は、例えば、コントロールに対するエピトープについて少なくとも２０〜、５０〜、１００〜、５００〜、１０００〜、５，０００〜、１０，０００〜倍以上の抗原又はエピトープに対するＫＡ又はＫａを有する抗体により示され得、ここで、ＫＡ又はＫａは、特定の抗体−抗原相互作用の結合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）速度を意味する。
【００７３】
抗体修飾
本発明は、さらに変異抗体も提供する。すなわち、本発明の抗体は多数の修飾がなされてよく、これには、ＣＤＲにおけるアミノ酸修飾（親和性成熟）、Ｆｃ領域におけるアミノ酸修飾、グリコシル化変異体、他のタイプの共有結合修飾などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７４】
本明細書において「変異体（ｖａｒｉａｎｔ）」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって親ポリペプチドのものと異なるポリペプチド配列を意味する。アミノ酸修飾には、置換、挿入、及び欠失が含まれてよく、多くの場合、前者が好ましい。
【００７５】
一般に、本明細書に記載するとおり、タンパク質の機能が依然として存在する限り、変異体には任意数の修飾が含まれてよい。すなわち、Ａｂ７９又はＡｂ１９のいずれかのＣＤＲで作製されたアミノ酸変異体の場合、例えば、抗体は、ヒト及びカニクイザルＣＤ３８の両方に依然として、特異的に結合すべきである。同様に、アミノ酸変異体が、Ｆｃ領域で作製された場合、例えば、変異抗体は、抗体の特定の適用又は適応のため、必要なレセプター結合機能を保持すべきである。
【００７６】
しかしながら、一般に、多くの場合、そのゴールは最小数の修飾で機能を変更することであるので、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のアミノ酸置換が通常利用される。いくつかの場合において、１〜５個修飾が存在し、多くの実施態様においては、１〜２、１〜３、及び１〜４個の修飾の使用も認められる。
【００７７】
アミノ酸修飾の数は、機能的ドメインの範囲内であってよいことに留意すべきである：例えば、野生型又は改変タンパク質のＦｃ領域では１〜５個の修飾、例えばＦｖ領域ではる１〜５個の修飾を有することが望ましい場合がある。変異ポリペプチド配列は、親配列（例えば、Ａｂ７９及び／又はＡｂ１９の可変領域、定常領域、並びに／又は重鎖及び軽鎖配列など）と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％又は最大で９８若しくは９９％の同一性を有することが好ましい。配列サイズにもよるが、同一性の割合は、アミノ酸の数によって決まることに留意すべきである。
【００７８】
本明細書において「アミノ酸置換」又は「置換」とは、親ポリペプチド配列の特定の位置のアミノ酸を別のアミノ酸と交換することを意味する。例えば、置換Ｓ１００Ａとは、１００位のセリンをアラニンと交換した変異ポリペプチドをいう。本明細書で使用する場合、「アミノ酸挿入」又は「挿入」とは、親ポリペプチド配列の特定の位置のアミノ酸の追加を意味する。本明細書で使用する場合に、「アミノ酸欠失」又は「欠失」とは、親ポリペプチド配列における特定の位置のアミノ酸の除去を意味する。
【００７９】
本明細書で使用する場合、「親ポリペプチド」、「親タンパク質」、「前駆体ポリペプチド」又は「前駆体タンパク質」とは、変異体を作製するためにその後修飾される、非修飾のポリペプチドを意味する。通常、本明細書における親ポリペプチドはＡｂ７９及びＡ
ｂ１９である。親ポリペプチドは、ポリペプチド自体、親ポリペプチドを含む組成物、又はそれをコードするアミノ酸配列をいうこともある。従って、本明細書で使用する場合、「親Ｆｃポリペプチド」とは、変異体を作製するために修飾されるＦｃポリペプチドを意味し、本明細書で使用する場合、「親抗体」とは、変異抗体を作製するために修飾される抗体を意味する。
【００８０】
本明細書において「野生型」又は「ＷＴ」又は「天然」とは、アレル変異を含む、天然で発見されるアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を意味する。ＷＴタンパク質、ポリペプチド、抗体、免疫グロブリン、ＩｇＧなどは、意図的に修飾されていないアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を有する。
【００８１】
本明細書において「変異Ｆｃ領域」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって、野生型Ｆｃ配列のものとは異なるＦｃ配列を意味する。Ｆｃ変異体は、Ｆｃポリペプチド自体、Ｆｃ変異体ポリペプチドを含む組成物、又はアミノ酸配列をいうこともある。
【００８２】
いくつかの実施態様において、１つ以上のアミノ酸修飾が、抗体（Ａｂ７９又はＡｂ１９のいずれか）の１つ以上のＣＤＲにおいてなされる。一般に、１又は２又は３個のアミノ酸のみが、いずれかの単一のＣＤＲにおいて置換され、通常は４から、５、６、７、８、９又は１０個以上の変化はＣＤＲのセット内ではなされない。しかしながら、任意のＣＤＲにおいて、置換されないか、１個、２個又は３個の置換のいずれかの組合せが、任意の他の置換と、独立して任意選択で組み合わされ得る。
【００８３】
いくつかの場合において、ＣＤＲにおけるアミノ酸修飾は、「親和性成熟」と称される。「親和性成熟された」抗体は、１つ以上のＣＤＲにおいて１つ以上の変更を有するものであり、その結果、これらの変更を有さない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性が改善される。いくつかの場合において、稀ではあるが、その抗原に対する抗体の親和性を低下させることが望ましい場合があるが、通常、これは好ましくない。
【００８４】
親和性成熟は、「親」抗体と比較して、少なくとも約１０％〜５０〜１００〜１５０％以上、又は１〜５倍、抗原に対する抗体の結合親和性を増加させるためになされ得る。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル、又はさらにはピコモル親和性を有する。親和性成熟抗体は、既知の手順により製造される。例えば、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインシャッフリングによる親和性成熟を記載したＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３を参照されたい。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム変異導入法は、以下に記載される：例えば、Ｂａｒｂａｓ，ｅｔ  ａｌ．１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３；Ｓｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９；及びＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６など。
【００８５】
あるいは、アミノ酸修飾は、「サイレント」である、例えば、抗原に対する抗体の親和性を有意に変更しない、本発明の抗体の１つ以上のＣＤＲでなされ得る。これらは、発現を最適化する（本発明の抗体をコードする核酸についてなし得る）ことを含む様々な理由でなされ得る。
【００８６】
従って、変異ＣＤＲ及び抗体は、本発明のＣＤＲ及び抗体の定義内に含まれる；すなわち、本発明の抗体は、Ａｂ７９及びＡｂ１９の１つ以上のＣＤＲにおいて、アミノ酸修飾を含み得る。さらに、以下で概説するとおり、アミノ酸修飾は、ＣＤＲ外の任意の領域（
フレームワーク及び定常領域を含む）において、独立して任意選択でなされ得る。
【００８７】
いくつかの実施態様において、ヒトＣＤ３８（配列番号１）及びカニクイザルＣＤ３８（配列番号２）に対して特異的な、Ａｂ７９及びＡｂ１９変異抗体を記載する。この抗体は６つのＣＤＲからなり、ここで、この抗体の各ＣＤＲは、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号８と０、１又は２個のアミノ酸置換により異なり得る。他の実施態様において、変異抗ＣＤ３８抗体は、６つのＣＤＲからなり、ここで、この抗体の各ＣＤＲは、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１８と０、１又は２個のアミノ酸置換により異なり得る。
【００８８】
いくつかの実施態様において、本発明の抗ＣＤ３８抗体は、変異Ｆｃドメインからなる。当分野で既知のとおり、抗体のＦｃ領域は、多数のＦｃレセプター及びリガンドと相互作用し、エフェクター機能と称される重要な機能的能力の数々を与える。これらのＦｃレセプターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ヒトにおける）アイソフォームＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ及びＦｃγＲＩｃを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームＦｃγＲＩＩａ（アロタイプＨ１３１及びＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ−１及びＦｃγＲＩＩｂ−２を含む）及びＦｃγＲＩＩｃを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；並びにアイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプＶ１５８及びＦ１５８を含み、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）と関連する））及びＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプＦｃγＲＩＩＩｂ−ＮＡ１及びＦｃγＲＩＩＩｂ−ＮＡ２を含む）を含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）；ＦｃＲｎ（新生児型レセプター）、Ｃ１ｑ（補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与する補体タンパク質）並びにＦｃＲｎ（血清半減期に関与する新生児型レセプター）。適した修飾は、以下で一般に概説されるように、１つ以上の位置でなされ得る：例えば、ＵＳ特許出願１１／８４１，６５４及びそこで引用される参考文献、ＵＳ２００４／０１３２１０、ＵＳ２００５／００５４８３２、ＵＳ２００６／００２４２９８、ＵＳ２００６／０１２１０３２、ＵＳ２００６／０２３５２０８、ＵＳ２００７／０１４８１７０、ＵＳＳＮ１２／３４１，７６９、ＵＳ特許Ｎｏ．６，７３７，０５６、ＵＳ特許Ｎｏ．７，６７０，６００、ＵＳ特許Ｎｏ．６，０８６，８７５（これらは全て、参照によりその全体が明確に援用される）（特に、Ｆｃレセプターとの結合を増加させる特定のアミノ酸置換について）。
【００８９】
上記で概説する修飾に加えて、他の修飾がなされ得る。例えば、分子は、ＶＨドメインとＶＬドメインを連結するジスルフィド架橋の組込みにより安定化され得る（Ｒｅｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：１２３９−１２４５、参照によりその全体が援用される）。さらに、以下で概説するようになされ得る抗体の様々な共有結合修飾が存在する。
【００９０】
抗体の共有結合修飾は、本発明の範囲内に含まれ、常にではないが通常は、翻訳後に行われる。例えば、選択された側鎖又はＮ末端若しくはＣ末端残基と反応可能な有機誘導体化剤を抗体の特定のアミノ酸残基と反応させることにより、複数のタイプの抗体共有結合修飾が分子に導入される。
【００９１】
最も一般的には、システイニル残基が、クロロ酢酸又はクロロアセトアミドなどのα−ハロアセテート（及び対応するアミン）と反応して、カルボキシメチル又はカルボキシアミドメチル誘導体を生成する。システイニル残基はまた、ブロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５−イミドゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルホスフェート、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド、メチル  ２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロメルクリベンゾアート、２−クロロメルクリ−４−ニトロフェノール、又はクロロ−７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾールなどとの反応
により、誘導体化されてよい。
【００９２】
さらに、抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）適用においては、システインでの修飾が特に有用である（さらに以下に記載する）。いくつかの実施態様において、抗体の定常領域は、薬物部分のより特異的かつ制御された配置を可能にするために、特に「チオール反応性」である１つ以上のシステインを含むよう改変され得る。例えば、ＵＳ特許Ｎｏ．７，５２１，５４１（参照によりその全体が本明細書に援用される）を参照されたい。
【００９３】
ヒスチジル残基は、ジエチルピロカーボネートとｐＨ５．５〜７．０で反応させることにより誘導体化される。なぜなら、この薬剤は、ヒスチジル側鎖に対して比較的特異的だからである。パラ−ブロモフェナシルブロミドも有用である；反応は、ｐＨ６．０で０．１Ｍカコジル酸ナトリウム中で実施されることが好ましい。
【００９４】
リジニル（ｌｙｓｉｎｙｌ）及びアミノ末端残基は、コハク酸又は他のカルボン酸無水物と反応する。この薬剤を用いた誘導体化は、リジニル残基の電荷を逆転させる効果を有する。α−アミノ含有残基を誘導体化するために適した他の薬剤は、メチルピコリンイミデートなどのイミドエステル；ピリドキサールホスフェート；ピリドキサール；クロロボロヒドリド；トリニトロベンゼンスルホン酸；Ｏ−メチルイソウレア；２，４−ペンタンジオン；及びグリオキシル酸とのアミノ基転移酵素触媒反応が挙げられる。
【００９５】
アルギニル残基は、１つ又は複数の従来の試薬との反応により修飾され、これらのなかには、フェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、１，２−シクロヘキサンジオン、及びニンヒドリンがある。アルギニン残基の誘導体化は、グアニジン官能基の高いｐＫａにより、反応がアルカリ条件で実施されることを必要とする。さらに、これらの試薬は、リジンの基、及びアルギニンイプシロンアミノ基と反応してよい。
【００９６】
チロシル残基の特定の修飾は、チロシル残基にスペクトル標識を導入することに特に関心がある場合には、芳香族ジオゾニウム化合物又はテトラニトロメタンと反応させることによりなされてよい。最も一般的には、Ｎ−アセチルイミドゾール及びテトラニトロメタンを用いて、それぞれ、Ｏ−アセチルチロシル種及び３−ニトロ誘導体を形成する。チロシル残基は、１２５Ｉ又は１３１Ｉを用いてヨウ素化して、ラジオイムノアッセイ、クロラミンＴ法（適しているとして上記に記載したもの）で使用するための標識されたタンパク質を調製する。
【００９７】
カルボキシル側鎖基（アスパルチル又はグルタミル）は、カルボジイミド（Ｒ’−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）［式中、Ｒ及びＲ’は、任意選択で異なるアルキル基である］との反応により選択的に修飾され、例えば、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル−４−エチル）カルボジイミド、１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミドなどである。さらに、アスパルチル及びグルタミル残基は、アンモニウムイオンとの反応によりアスパラギニル及びグルタミニル残基に変換される。
【００９８】
二官能性剤を用いた誘導体化は、以下に記載の方法に加えて様々な方法で使用するため、水不溶性のサポートマトリックス又は表面への抗体の架橋に有用である。一般的に使用される架橋剤としては、例えば、１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば、４−アジドサリチル酸とのエステル、ホモ二官能性イミドエステル（３，３’−ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）などのジスクシンイミジルエステルを含む）及び二官能性マレイミド（ビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタンなど）が挙げられる。メチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデートなどの誘導体化剤は、光の存在下で架橋を形成できる光活性化可能（ｐｈｏｔｏａｃｔｉｖａｔａｂｌｅ）な中間体を生成す
る。あるいは、サイノモルガソジェン（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓｏｇｅｎ）ブロミド活性化炭水化物などの反応性水不溶性マトリックス及び反応性基質（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．３，９６９，２８７；３，６９１，０１６；４，１９５，１２８；４，２４７，６４２；４，２２９，５３７；及び４，３３０，４４０（全て参照により援用される）に記載のもの）がタンパク質固定化に用いられる。
【００９９】
グルタミニル及びアスパラギニル残基は、それぞれ、対応するグルタミル及びアスパルチル残基に頻繁に脱アミノ化される。あるいは、これらの残基は、中程度の酸性条件下で脱アミド化される。これらの残基のいずれの形態も、本発明の範囲内に含まれる。
【０１００】
他の修飾として、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル又はスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン及びヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９−８６［１９８３］、参照によりその全体が援用される）、Ｎ−末端アミンのアセチル化、及びＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
【０１０１】
さらに、当業者に理解されるように、標識（蛍光、酵素、磁気、放射性などを含む）は全て抗体（及び本発明の他の組成物）に追加され得る。
【０１０２】
グリコシル化
別のタイプの共有結合修飾は、グリコシル化での変更である。別の実施態様において、本明細書で開示する抗体は、１つ以上の改変糖型（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｇｌｙｃｏｆｏｒｍ）を含むよう修飾され得る。本明細書で使用される場合、「改変糖型」とは抗体と共有結合した炭水化物組成物を意味し、ここで、前記炭水化物組成物は、化学的に親抗体のものとは異なる。改変糖型は、エフェクター機能の増強又は低下を含む（これらに限定されない）種々の目的のために有用であり得る。改変糖型の好ましい形態は、アフコシル化（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）であり、これは、おそらくＦｃγＲＩＩＩａレセプターへの強固（ｔｉｇｈｔｅｒ）な結合を介して、ＡＤＣＣ機能の増加と関連することを示している。これに関連して、「アフコシル化」とは、宿主細胞で製造される抗体の大多数が、実質的にフコースを欠いていることを意味し、例えば、作製された抗体の９０〜９５〜９８％が、抗体の炭水化物部分（通常、Ｆｃ領域のＮ２９７で結合される）の成分として相当量（ａｐｐｒｅｃｉａｂｌｅ）のフコースを有さないことを意味する。機能的に定義すると、アフコシル化抗体は、通常、ＦｃγＲＩＩＩａレセプターに対して、少なくとも５０％以上の親和性を示す。
【０１０３】
改変糖型は、当分野で既知の様々な方法で作製されてよい（Ｕｍａnａ  ｅｔ  ａｌ．
，１９９９，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７：１７６−１８０；Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ７４：２８８−２９４；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３−２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ
２７８：３４６６−３４７３；ＵＳ６，６０２，６８４；ＵＳＳＮ１０／２７７，３７０；ＵＳＳＮ１０／１１３，９２９；ＰＣＴ  ＷＯ００／６１７３９Ａ１；ＰＣＴ  ＷＯ０１／２９２４６Ａ１；ＰＣＴ  ＷＯ０２／３１１４０Ａ１；ＰＣＴ  ＷＯ０２／３０９５４Ａ１（全て参照によりその全体が援用される）；（Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）技術［Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ］；ＧｌｙｃｏＭＡｂ（登録商標）グリコシル化改変技術［Ｇｌｙｃａｒｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡＧ，Ｚuｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ］）。これらの技術の多くが、Ｆｃ領域に共有結
合するフコシル化及び／又は二分化（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ）オリゴ糖のレベルを制御する
ことに基づき、例えば、種々の生物又は細胞株（改変されたか、そうではないもの）、例えば、Ｌｅｃ−１３  ＣＨＯ細胞又はラットハイブリドーマＹＢ２／０細胞などでＩｇＧを発現させること、グリコシル化経路に関与する酵素（例えば、ＦＵＴ８［α１，６−フコシルトランスフェラーゼ（α１，６−ｆｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｅｒａｓｅ）］及び／又はβ１−４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ［ＧｎＴＩＩＩ］）を制御すること、又はＩｇＧを発現させた後に１つ以上の炭水化物を修飾することなどによる。例えば、「糖改変抗体（ｓｕｇａｒ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」又はＳｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓの「ＳＥＡ技術」は、製造の間にフコシル化を阻害する修飾されたサッカリドを添加することにより機能する；例えば、２００９０３１７８６９を参照されたい（参照によりその全体が援用される）。改変糖型は、典型的には、異なる炭水化物又はオリゴ糖を意味し、従って、抗体は、改変糖型を含み得る。
【０１０４】
あるいは、改変糖型は、異なる炭水化物又はオリゴ糖を含むＩｇＧ変異体を意味してもよい。当分野で既知のとおり、グリコシル化パターンは、タンパク質の配列（例えば、以下に記載する特定のグリコシル化アミノ酸残基の有無）、又はタンパク質が製造される宿主細胞若しくは生物の両方によって決まり得る。特定の発現系を以下に記載する。
【０１０５】
ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合型又はＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型とは、炭水化物部分がアスパラギン残基の側鎖に結合することを意味する。アスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニンのトリペプチド配列（ここで、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素結合に対する認識配列である。従って、ポリペプチドにこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在することにより、潜在的グリコシル化部位が形成される。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース又はキシロースの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はトレオニンへの結合を意味するが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンを使用してもよい。
【０１０６】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、上記トリペプチド配列の１つ以上を含むようにアミノ酸配列を変更（ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ）することにより都合よく達成される（Ｎ結合型グリコシル化部位について）。変更は、１つ以上のセリン又はスレオニン残基の出発配列への付加、又はそれによる置換によりなされてもよい（Ｏ結合型グリコシル化部位について）。容易にするために、抗体アミノ酸配列は、ＤＮＡレベルでの変化を介して好ましくは変更され、特に、所望のアミノ酸に翻訳されるコドンが作製されるように、予め選択した塩基で標的ポリペプチドをコードするＤＮＡを変異させることによる。
【０１０７】
抗体上の炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、化学的又は酵素的にグリコシドをタンパク質に結合させることによる。これらの手順は、Ｎ結合型及びＯ結合型グリコシル化に関するグリコシル化能力を有する宿主細胞でのタンパク質製造を必要としないという点において有利である。使用される結合様式によって、１つ以上の糖が以下に結合されてよい：（ａ）アルギニン及びヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）遊離スルフヒドリル基（システインのものなど）、（ｄ）遊離ヒドロキシル基（セリン、スレオニン、ヒドロキシプロリンのものなど）、（ｅ）芳香族残基（フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンのものなど）、又は（ｆ）グルタミンのアミド基。これらの方法は、ＷＯ８７／０５３３０及びＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ，１９８１，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９−３０６に記載されており、これらはともに参照によりその全体が援用される。
【０１０８】
出発抗体に存在する炭水化物部分の除去（例えば、翻訳後）は、化学的又は酵素的に達成されてよい。化学的な脱グリコシル化は、化合物トリフルオロメタンスルホン酸又は同等の化合物へのタンパク質の暴露を必要とする。この処理により、結合する糖（Ｎ−アセ
チルグルコサミン又はＮ−アセチルガラクトサミン）を除く、大部分又は全ての糖が切断される一方で、ポリペプチドは無傷のままである。化学的脱グリコシル化は、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５９：５２及びＥｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１８：１３１に記載されており、これらはともに参照によりその全体が援用される。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１３８：３５０（参照によりその全体が援用される）に記載されるとおり、様々なエンド及びエキソ−グリコシダーゼを使用することにより達成できる。潜在的グリコシル化部位でのグリコシル化は、Ｄｕｓｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：３１０５（参照によりその全体が援用される）に記載されるとおり、化合物ツニカマイシンの使用により妨げられ得る。ツニカマイシンは、タンパク質−Ｎ−グリコシド結合の形成を阻害する。
【０１０９】
抗体の共有結合修飾の別のタイプは、様々な非タンパク性ポリマーと抗体との結合を含み、当該ポリマーとしては、例えば、Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓの２００５−２００６ＰＥＧカタログ（Ｎｅｋｔａｒウェブサイトから入手可能）、ＵＳ特許Ｎｏ．４，６４０，８３５；４，４９６，６８９；４，３０１，１４４；４，６７０，４１７；４，７９１，１９２又は４，１７９，３３７（これらは全て参照によりその全体が援用される）に記載されるように、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレンなどの各種ポリオールが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、当分野で既知のとおり、アミノ酸置換は、ＰＥＧなどのポリマーの付加を容易にするために、抗体内の様々な位置で行われてよい。例えば、Ｕ．Ｓ．公報Ｎｏ．２００５／０１１４０３７Ａ１（参照によりその全体が援用される）を参照されたい。
【０１１０】
特定のＣＤＲ及び可変領域の実施態様
本発明は、それぞれ特定のＣＤＲセット（上記で概説するように、いくつかのアミノ酸置換を含む）を有する多数の抗体を提供する。上記で概説するように、抗体は、６つのＣＤＲのセット、可変領域、又は全長の重鎖及び軽鎖（定常領域を含む）により定義され得る。さらに、上記で概説するように、アミノ酸置換がなされてもよい。一般に、ＣＤＲ内の変化との関連で、アミノ酸修飾は、ＣＤＲの長さが比較的短いことに起因して、なされ得るアミノ酸修飾の数に関して通常記載される。これは、可変、定常又は全長配列に導入され得るアミノ酸修飾の数の議論にも適用できる一方、変化の数に加えて、「％同一性」に関してこれらの変化を定義することも適切である。従って、本明細書に記載されるように、本発明内に含まれる抗体は、本明細書に列挙した配列番号と８０、８５、９０、９５、９８又は９９％同一である。
【０１１１】
Ａｂ７９抗体の関連で、ＣＤＲのセットは以下のとおりである：重鎖の３つのＣＤＲは、ＨＣＤＲ１配列番号３（ＨＣＤＲ１）、配列番号４（ＨＣＤＲ２）及び配列番号５（ＨＣＤＲ３）を含み、かつ軽鎖の３つのＣＤＲは、配列番号６（ＬＣＤＲ１）、配列番号７（ＬＣＤＲ２）及び配列番号８（ＬＣＤＲ３）を含む。
【０１１２】
Ａｂ１９の関連で、ＣＤＲのセットは以下のとおりである：ＨＣＤＲ１（配列番号１３）、ＨＣＤＲ２（配列番号１４）及びＨＣＤＲ３（配列番号１５）、並びにＬＣＤＲ１（配列番号１６）、ＬＣＤＲ２（配列番号１７）及びＬＣＤＲ３（配列番号１８）。
【０１１３】
本発明から特に排除される抗体は、配列番号２４及び２５（ベンチマーク１の重鎖及び軽鎖）並びに配列番号２６及び２７（ベンチマーク２の重鎖及び軽鎖）のものである。これらの抗体は、下記のカニクイザルＣＤ３８と交差反応しないことに留意すべきである。
【０１１４】
本発明の抗体は、ヒト及びカニクイザルＣＤ３８と交差反応し、従って種交差反応性抗
体（ｓｐｅｃｉｅｓ  ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）である。「種交差反応性抗体」とは、第一の哺乳動物種由来の抗原に対する結合親和性とほぼ同一の、第二の哺乳動物種由来のその抗原のホモログに対する結合親和性を有する抗体である。種交差反応性は、例えば、第一の哺乳動物種の抗原に対する抗体のＫＤを、第二の哺乳動物種のその抗原ホモログに対する同一抗体のＫＤで割った比率として表すことができ、当該比率は、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、２、５、１０、１５、最大で２０である。あるいは又はさらに、抗体は、第二の種に投与されて治療又は診断効果を示す場合に、「種交差反応性」である。従って、本ケースでは、本発明の抗体は、カクニイザルＣＤ３８と交差反応性であり、カニクイザル霊長類に投与されて前臨床効果を示し、従って、交差反応性と考えられる。
【０１１５】
いくつかの実施態様において、ヒトＣＤ３８及び／又はカニクイザルＣＤ３８との結合に対して、本発明の抗体（例えば、Ａｂ７９及び／又はＡｂ１９）と競合する抗体を提供するが、これには、ＢＭ１又はＢＭ２のいずれも含まれない。２つ以上の抗ＣＤ３８抗体によるＣＤ３８又はＣＤ３８の一部との結合の競合は、当分野で既知の任意の適した技術により決定されてよい。
【０１１６】
本発明の関連で競合とは、試験化合物の存在下、本発明の抗体（例えば、Ａｂ７９又はＡｂ１９）が、例えばＣＤ３８などの特定の結合パートナーと結合する性向を、検出可能に有意に減少させることをいう。典型的には、競合とは、ＥＬＩＳＡやＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）アッセイなどの標準的な技術により測定されるように、競合物質の存在下、本発明の抗体がＣＤ３８と結合するのを少なくとも約１０〜１００％減少させることを意味する。従って、例えば、競合についての基準を、少なくとも約１０％の相対的阻害が検出される；少なくとも約１５％の相対的阻害が検出される；又は、少なくとも約２０％の相対的阻害が検出された後、抗体は十分に競合すると考えられる、と設定することが可能である。競合抗体の属するエピトープが抗原中に近接して位置する場合、競合は、ＣＤ３８結合の約４０％超の相対的阻害により特徴付けられてよい（例えば、少なくとも約４５％阻害、例えば少なくとも約５０％阻害、例えば少なくとも約５５％阻害、例えば少なくとも約６０％阻害、例えば少なくとも約６５％阻害、例えば少なくとも約７０％阻害、例えば少なくとも約７５％阻害、例えば少なくとも約８０％阻害、例えば少なくとも約８５％阻害、例えば少なくとも約９０％阻害、例えば少なくとも約９５％阻害、又はそれより高いレベルの相対的阻害）。
【０１１７】
いくつかの場合において、競合的結合アッセイの１つ以上の成分が、診断的適用の関連で、以下に記載するように標識される。
【０１１８】
競合は、２以上のＣＤ３８エピトープについて、及び／又はＣＤ３８の一部について、抗ＣＤ３８抗体間で存在してもよい場合もあり、例えば、ＣＤ３８の特定の領域の抗体結合特性がその断片中に保持される場合、例えば、様々な試験断片に位置するうまく提示された（ｗｅｌｌ−ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ）直線状エピトープ、又は十分に大きなＣＤ３８断片及びＣＤ３８で提示される立体構造エピトープの場合などである。
【０１１９】
競合の評価は、典型的には、本発明の抗体、ＣＤ３８（ヒト若しくはカニクイザルのいずれか、又は両方）、及び試験分子を用いて、相対的阻害結合を評価することを伴う。試験分子としては任意の分子が挙げられ、他の抗体、低分子、ペプチドなどが挙げられる。化合物は、他に存在する分子に対する、問題となる分子の選択性及び／又は特異性に関する情報が比較により与えられるのに十分な量で混合される。
【０１２０】
試験化合物、ＣＤ３８及び本発明の抗体の量は変更されてよい。例えば、ＥＬＩＳＡ評価のためには、約５〜５０μｇ（例えば、約１０〜５０μｇ、約２０〜５０μｇ、約５〜
２０μｇ、約１０〜２０μｇなど）の抗ＣＤ３８抗体及び／又はＣＤ３８標的が、競合が存在するかを評価するために必要である。条件は、結合に適するべきでもある。典型的には、生理学的又はほぼ生理学的条件（例えば、約２０〜４０℃の温度、ｐＨ＝約７〜８など）が、抗ＣＤ３８：ＣＤ３８結合に適する。
【０１２１】
多くの場合、競合は、ＥＬＩＳＡ及び／又はＦＡＣＳ分析により決定されるように、約５％よりもかなり高い相対的阻害により特徴づけられる。特定の状況（例えば、ＣＤ３８に結合する別のペプチド又は分子（例えば、ＣＤ３８の天然の結合パートナー、例えば、ＣＤ３１抗原とも称されるＣＤ３１、ＥｎｄｏＣＡＭ、ＧＰＩＩＡ、ＰＥＣＡＭ−１、血小板／内皮細胞接着分子、天然に存在する抗ＣＤ３８抗体など）の結合を阻害するという目的の機能を有するよう設計された新規抗体について、競合アッセイを用いて選択又はスクリーニングする場合）では、競合に適したレベルの基準／決定因子として、より高い相対的阻害の閾値を設定することが望ましい場合がある。
【０１２２】
いくつかの実施態様において、本発明の抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８の１つ以上の残基又は領域と特異的に結合するが、ＣＤ３８と相同性を有する他のタンパク質、例えば、ＢＳＴ−１（骨髄間質細胞抗原−１）、Ｍｏ５（ＣＤ１５７とも称される）などと交差反応しないものでもある。
【０１２３】
典型的には、交差反応性の欠如は、適切なアッセイ条件下、十分量の分子を用いたＥＬＩＳＡ及び／又はＦＡＣＳ分析により評価される場合、分子間の相対的競合阻害が約５％未満であることを意味する。
【０１２４】
開示する抗体は、リガンド−レセプター相互作用のブロック、又はレセプターコンポーネント相互作用の阻害での使用が見出され得る。本発明の抗ＣＤ３８は、「遮断（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）」又は「中和」するものであってよい。「中和抗体」は、ＣＤ３８への結合により、ＣＤ３８の生物活性、例えば、リガンドと相互作用する能力、酵素活性、及び／又はシグナリング能力を阻害する抗体を意味することが意図される。ＣＤ３８の生物活性の阻害は、当分野で既知の複数の標準的ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏアッセイの１つ以上により評価され得る（以下の実施例を参照されたい）。
【０１２５】
「結合を阻害する」又は「結合を遮断する」（例えば、ＣＤ３８結合パートナーとＣＤ３８との結合の阻害／遮断について言及する場合）には、部分的及び完全な阻害／遮断の両方が包含される。ＣＤ３８結合パートナーとＣＤ３８との結合の阻害／遮断は、阻害又は遮断されることなくＣＤ３８結合パートナーがＣＤ３８と結合した場合に生じる細胞シグナリングの正常なレベル又はタイプを低下又は変更してもよい。阻害及び遮断はまた、抗ＣＤ３８抗体と接触しないリガンドと比較して、抗ＣＤ３８抗体と接触させた場合のＣＤ３８結合パートナーとＣＤ３８との結合親和性が、測定可能に減少することを含むことが意図され、例えば、ＣＤ３８結合パートナーとＣＤ３８との結合が、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％又は１００％遮断されることなどである。
【０１２６】
開示する抗ＣＤ３８抗体はまた、細胞増殖を阻害してもよい。「増殖を阻害する」とは、抗ＣＤ３８抗体と接触しない細胞の増殖と比較して、抗ＣＤ３８抗体と接触した場合の同一の細胞の増殖が、測定可能に減少することを含み、例えば、細胞培養物の増殖が少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％又は１００％阻害されることなどである。
【０１２７】
本発明の抗体の製造方法
本発明は、開示する抗ＣＤ３８抗体の製造方法をさらに提供する。これらの方法は、本
発明の抗体をコードする、１つ以上の単離された核酸を含む宿主細胞を培養する工程を含む。当業者に理解されるように、これは、抗体の特性に応じて、様々な方法で実施され得る。いくつかの実施態様において、本発明の抗体が全長の従来の抗体である場合、例えば、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域である場合には、例えば、抗体が製造され、単離可能な条件下で実施される。
【０１２８】
一般に、本発明の抗体をコードする核酸を提供する。このようなポリヌクレオチドは、重鎖及び軽鎖それぞれの可変領域及び定常領域の両方をコードするものであるが、本明細書に記載の組成物に従って、他の組合せも本発明により企図される。本発明は、開示するポリヌクレオチド由来のオリゴヌクレオチド断片、及びこれらのポリヌクレオチドと相補的な核酸配列も企図する。
【０１２９】
ポリヌクレオチドはＲＮＡの形態であってもＤＮＡの形態であってもよい。ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、核酸アナログ及び合成ＤＮＡの形態であるポリヌクレオチドは、本発明の範囲内である。ＤＮＡは二本鎖であっても一本鎖であってもよく、一本鎖の場合には、コーディング（センス）鎖又は非コーディング（アンチセンス）鎖であってよい。ポリペプチドをコードするコーディング配列は、本明細書で提供するコーディング配列と同一であってもよく、又は異なるコーディング配列であって、遺伝コードの冗長性又は縮重の結果として、本明細書で提供するＤＮＡと同一のポリペプチドをコードする配列であってもよい。
【０１３０】
いくつかの実施態様において、本発明の抗体をコードする１つ以上の核酸は、発現ベクターに組み込まれ、当該発現ベクターは、導入される宿主細胞の染色体外であるか、又はそのゲノム中にインテグレートされるよう設計され得る。発現ベクターは、任意数の適切な制御配列（転写及び翻訳調節配列、プロモーター、リボソーム結合部位、エンハンサー、複製起点などが挙げられるが、これらに限定されない）又は他の要素（選択遺伝子など）を含むことができ、これらは全て、当分野でよく知られるように操作可能に連結される。いくつかの場合、２つの核酸を用いて、それぞれを異なる発現ベクターに入れるか（例えば、第一の発現ベクターに重鎖、第二の発現ベクターに軽鎖）、あるいはそれらを同一の発現ベクターにいれることができる。制御配列の選択を含む、１つ以上の発現ベクターの設計は、宿主細胞の選択、所望するタンパク質の発現レベルなどの因子によって決まり得ることが当業者に理解されるだろう。
【０１３１】
一般に、選択される宿主細胞に適した任意の方法（例えば、トランスフォーメーション、トランスフェクション、エレクトロポレーション、インフェクションなど）を用いて、１つ以上の核酸が１つ以上の発現調節要素に操作可能に連結されるように（例えば、ベクターにおいて、細胞でのプロセスにより作出される構築物において、宿主細胞のゲノムにインテグレートされて）、核酸及び／又は発現が適した宿主細胞に導入され、組換え宿主細胞が作出される。得られた組換え宿主細胞は、発現に適した条件下（例えば、インデューサーの存在下、適した非ヒト動物中、適した塩、増殖因子、抗生物質、栄養補助剤などを添加した適した培地など）で維持でき、それによりコードされた１つ以上のポリペプチドが製造される。いくつかの場合において、重鎖が１つの細胞で製造され、軽鎖が別の細胞で製造される。
【０１３２】
発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は当分野で既知であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡから入手可能な多くの不死化細胞株が含まれ、これには、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨＥＫ  ２９３細胞、ＮＳＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞ガン細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、及び多数の他の細胞株が挙げられるが、これらに限定されない。細菌、酵
母、昆虫及び植物を含む（これらに限定されない）非哺乳動物細胞を用いて、組換え抗体を発現させることもできる。いくつかの実施態様において、抗体は、ウシやニワトリなどのトランスジェニック動物において製造することができる。
【０１３３】
抗体分子生物学、発現、精製及びスクリーニングの一般的な方法は、例えば、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＆  Ｄｕｂｅｌにより編集されたＡｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，２００１  ａｎｄ  ２０１０  Ｈａｙｈｕｒｓｔ  ＆  Ｇｅｏｒｇｉｏｕ，２００１，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  ５：６８３−６８９；Ｍａｙｎａｒｄ  ＆  Ｇｅｏｒｇｉｏｕ，２０００，Ａｎｎｕ
Ｒｅｖ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｅｎｇ  ２：３３９−７６；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２に記載される。
【０１３４】
本明細書に記載の抗体薬物結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）は、当分野で知られるように作製され、これには、以下により利用される技術が含まれる：Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（例えば、Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．８，０６７，５４６、８，０３９，２７３、７，９８９，４３４、７，８５１，４３７、７，８３７，９８０及び７，８２９，５３１を参照されたい。これらは全て参照により明確にその全体が本明細書に援用され、特に薬物、リンカー及び結合方法を参照する）、Ｓｙｎｔａｒｇａ（例えば、７，７０５，０４５及び７，２２３，８３７を参照されたい。これらは全て参照により明確にその全体が本明細書に援用され、特に薬物、リンカー及び結合方法を参照する）、Ｍｅｄａｒｅｘ（例えば、８，０３４，９５９、８，０３４，７８７、７，９６８，５８６、７，８４７，１０５を参照されたい。これらは全て参照により明確にその全体が本明細書に援用され、特に薬物、リンカー及び結合方法を参照する）、及び当分野で周知の他の方法。
【０１３５】
適用及び適応
本発明の抗体が作製された場合には、ＣＤ３８関連疾患の診断及びその治療を含む様々な適用での使用が見出される。
【０１３６】
ＣＤ３８関連病態
一つの側面において、本発明は、医薬上有効量の開示抗体を患者に投与する工程を含む、ＣＤ３８を発現する細胞の増殖と関連する病態の治療法を提供する。ある実施態様において、病態はガンであり、特定の実施態様において、ガンは血液ガンである。他の特定の実施態様において、病態は、多発性骨髄腫、慢性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、形質細胞白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、Ｂ−細胞リンパ腫又はバーキットリンパ腫である。
【０１３７】
特定の病態は、ＣＤ３８を発現する細胞と関連し、特定の病態は、細胞表面上のＣＤ３８の過剰発現、高密度発現又は上方制御された発現と関連することが当分野で既知である。細胞集団がＣＤ３８を発現するかどうかは、当分野で既知の方法、例えば、所与の集団において、ＣＤ３８と特異的に結合する抗体により標識された細胞の割合をフローサイトメトリーにより決定する方法や、免疫組織化学アッセイなどにより決定でき、これは、診断的適用について以下で一般に記載するとおりである。例えば、ＣＤ３８の発現が細胞の約１０〜３０％で検出される細胞集団は、ＣＤ３８に対して弱陽性（ｗｅａｋ  ｐｏｓｉｔｉｖｉｔｙ）を有するとみなすことができ；ＣＤ３８の発現が細胞の約３０％超で検出される細胞集団は、ＣＤ３８に対して明確に（ｄｅｆｉｎｉｔｅ）陽性であるとみなすことができるが（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８），Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７２：３５１−３５６で示すとおり）、とはいえ他の基準を用いて、細胞集団がＣＤ３８を発現するかを決定できる。細胞表面上の発現密度は、当分野で既知の方法、例えば、ＣＤ３８と特異的に結合する抗体を用いて蛍光標識されている細胞の平均蛍光密度をフローサイトメトリーにより測定することなどにより、決定できる。
【０１３８】
いくつかの実施態様において、本発明の組成物及び方法は、「血液ガン」などのガンに適用され、この用語は、血液形成組織の悪性新生物を意味し、白血病、リンパ腫及び多発性骨髄腫を包含する。ＣＤ３８発現と関連する病態の非限定的な例として、以下を挙げることができるが、これらに限定されない：多発性骨髄腫（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８），Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７２：３５１−３５６）、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）（Ｄuｒｉｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｌｅｕｋｅ
ｍｉａ  １６：３０−５；Ｍｏｒａｂｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００１），Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２５：９２７−３２；Ｍａｒｉｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３），Ｎｅｏｐｌａｓｍａ  ４０（６）：３５５−８；及びＪｅｌｉｎｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００１），Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１１５：８５４−６１）、急性リンパ芽球性白血病（Ｋｅｙｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９），Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２４：１５３−９；及びＭａｒｉｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３），Ｎｅｏｐｌａｓｍａ  ４０（６）：３５５−８）、慢性骨髄性白血病（Ｍａｒｉｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３），Ｎｅｏｐｌａｓｍａ  ４０（６）：３５５−８）、急性骨髄性白血病（Ｋｅｙｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９），Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ
２４：１５３−９）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ又はｍｙｅｌｏｉｄ）白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ又はｍｙｅｌｏｉｄ）白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、又は急性期慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ−ＢＰ）、及びこれらの白血病の全てのサブタイプ（当分野で公知の形態学的、組織化学的及び免疫学的技術により定義されるもの）。
【０１３９】
「新生物」又は「新生物病態（ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）」とは、正常なコントロールを失い、その結果１以上の症状（制御不能の増殖、分化の欠如、局所的な組織浸潤及び転移を含む）を生じることにより特徴づけられる、細胞増殖と関連する病態を意味する。
【０１４０】
本発明のいくつかの実施態様において、血液ガンは、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）からなる群から選択される。
【０１４１】
さらに、ＣＤ３８発現が、例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｄｕｒｉｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １６：３０−５；及びＭｏｒａｂｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００１），Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２５：９２７−３２）及び急性骨髄性白血病（Ｋｅｙｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９），Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２４：１５３−９）などの病態を有する患者に対する予後指標であることが当分野で既知である。
【０１４２】
ＣＬＬは、西側諸国における成人の最も一般的は白血病である。ＣＬＬは、リンパ節や他のリンパ系組織に関与する、成熟した外観を有するリンパ球のクローン性増殖であり、骨髄への進行性浸潤を有し、末梢血での存在がみられる。Ｂ細胞型（Ｂ−ＣＬＬ）が、大部分のケースの代表である。
【０１４３】
Ｂ−ＣＬＬ
Ｂ−ＣＬＬは、長年にわたり、持続的な形で骨髄及び末梢血に蓄積する反応不顕性の単クローン性Ｂ系細胞の進行性の増加により特徴付けられる難病である。ＣＤ３８の発現は、Ｂ−ＣＬＬに対する独立した予後不良因子と考えられる。Ｈａｍｂｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９９：１０２３−９（２００２）。
【０１４４】
Ｂ−ＣＬＬの現在の標準的治療法は、一時的な緩和であり、細胞増殖抑制剤であるクロラムブシル又はフルダラビンを用いて主に実施される。再発した場合には、リツキシマブ（ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体）又はキャンパス（ＣＤ５２に対するモノクローナル抗体）と組み合わせてフルダラビン、シクロホスファミドを用いる併用療法が多くの場合開始される。従って、Ｂ−ＣＬＬの治療に対して、未だ満たされていない重大な医学的ニーズが存在する。いくつかの実施態様において、開示する抗ＣＤ３８抗体を用いたＢ−ＣＬＬの治療方法を提供する（かつ、以下で概説するように、これは、任意選択且つ独立して、上記薬物のいずれかを含む併用療法を用いて実施されてよい）。
【０１４５】
Ｂ−ＣＬＬは、緩慢性と進行性の２つのサブタイプにより特徴付けられる。これらの臨床表現型は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子における体細胞突然変異の有無と相関する。本明細書で使用する場合、緩慢性Ｂ−ＣＬＬとは、変異したＩｇＶＨ遺伝子を有し、且つ／又は緩慢性Ｂ−ＣＬＬと関連する１つ以上の臨床表現型を示す対象における障害を意味する。本明細書で使用する場合、進行性Ｂ−ＣＬＬとは、変異していないＩｇＶＨ遺伝子を有し、且つ／又は進行性Ｂ−ＣＬＬと関連する１つ以上の臨床表現型を示す対象における障害を意味する。
【０１４６】
多発性骨髄腫
多発性骨髄腫は、骨髄における形質細胞の新生増殖により特徴付けられるＢ細胞系の悪性障害である。現在治療レジメンは、中等度の奏効率を示す。しかし、全体の生存率は横ばいでしかなく、平均生存期間はおよそ３年である。従って、多発性骨髄腫の治療に対して、未だ満たされていない重大な医学的ニーズが存在する。いくつかの実施態様において、開示する抗ＣＤ３８抗体を用いた多発性骨髄腫の治療方法を提供する。
【０１４７】
ＣＤ３８は、最終的にＢ細胞に分化する形質細胞に高度に発現する。
【０１４８】
骨髄腫細胞の増殖は、様々な作用を引き起こし、これには、骨における溶解性病変（穴）、赤血球数の減少、異常タンパク質の産生（腎臓、神経及び他の臓器へのダメージを伴う）、免疫系機能の低下及び血中カルシムレベルの上昇（高カルシウム血症）が挙げられる。
【０１４９】
現在の治療オプションには、化学療法、好ましくは、可能であれば自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）と関連する化学療法が含まれる。
【０１５０】
意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症及びくすぶり型多発性骨髄腫
いくつかの実施態様において、開示抗体を用いた単クローン性免疫グロブリン血症の治療方法を提供する。他の実施態様において、開示抗体を用いたくすぶり型多発性骨髄腫の治療方法を提供する。
【０１５１】
意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）及びくすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）は、骨髄における単クローン性形質細胞増殖と、末端器官障害の欠如により特徴付けられる無症候性の前腫瘍性障害である。
【０１５２】
くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）は、症候性又は活動型多発性骨髄腫への高い進行リスクを有する、形質細胞の無症候性増殖障害である（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５６（２５）：２５８２−２５９０（２００７））。
【０１５３】
ＳＭＭを定義する国際コンセンサス基準が２００３年に採択され、当該基準は、患者が、＞３０ｇ／ＬのＭタンパク質レベル、及び／又は＞１０％の骨髄クローン性形質細胞を有することを必要とする（Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１２１：７４９−５７（２００
３））。患者は、骨病変又は症状を含む臓器又は関連組織の損傷を有してはならない（Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１２１：７４９−５７（２００３））。
【０１５４】
最近の研究により、２つのＳＭＭサブセットが同定されている：ｉ）進行性疾患を有する患者及びｉｉ）非進行性疾患を有する患者（Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１２１：６３１−６３６（２００３））。ＭＧＵＳを定義する国際コンセンサス基準は、患者が、＜３０ｇ／ＬのＭタンパク質レベル、＜１０％の骨髄形質細胞、及び骨病変又は症状を含む臓器又は関連組織の損傷を有さないことを必要とする（Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１２１：７４９−５７（２００３））。
【０１５５】
ＳＭＭは、末端器官障害が存在しないことから、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）と類似する（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５６（２５）：２５８２−２５９０（２００７））。しかしながら、臨床的には、ＳＭＭは、２０年で活動型多発性骨髄腫又はアミロイドーシスに進行する可能性が遥かに高い（ＳＭＭでは７８％の確率であるのに対し、ＭＧＵＳでは２１％）（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５６（２５）：２５８２−２５９０（２００７））。
【０１５６】
図１１は多数の異なるＡＤＣの態様を示す。本明細書に記載するように、リンカー部分は変化してよく、これには、アミノ酸組成、自壊的（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）リンカーなどが含まれる。
【０１５７】
抗体薬物結合体
いくつかの実施態様において、本発明の抗ＣＤ３８抗体は、薬物と結合して抗体−薬物結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）（ＡＤＣ）を形成する。一般に、ＡＤＣはガン適用（ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）に使用され、その場合には、細胞傷害性剤（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｇｅｎｔ）又は細胞増殖抑制剤の局所デリバリーのための抗体−薬物結合体の使用は、薬物部分の腫瘍への標的デリバリーを可能にし、これにより、より高い有効性、より低い毒性などを可能となり得る。この技術の概説は、Ｄｕｃｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，２１：５−１３（２０１０）、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．１４（３）：１５４（２００８）及びＳｅｎｔｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３：２３５−２４４（２００９）（これらは全て、参照によりその全体が援用される）により提供される。
【０１５８】
従って、本発明は、薬物と結合した抗ＣＤ３８抗体を提供する。一般に、結合は、以下でさらに記載するように、抗体への共有結合により実施され、通常は、リンカー、多くの場合はペプチド結合（以下に記載するように、標的部位であるかを問わず、プロテアーゼによる切断に反応しやすいよう設計されてよい）に依拠する。さらに、上述のとおり、リンカー−薬物ユニット（ＬＵ−Ｄ）の結合は、抗体内のシステインへの結合によりなされ得る。当業者に理解されるように、抗体当たりの薬物部分の数は、反応条件によって変更でき、薬物：抗体は１：１〜１０：１に変更できる。当業者に理解されるように、実際の数は平均である。
【０１５９】
従って、本発明は、薬物と結合した抗ＣＤ３８抗体を提供する。上述のとおり、ＡＤＣの薬物は任意数の薬剤（ａｇｅｎｔ）であってよく、細胞傷害性剤、例えば、化学療法剤、増殖阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物又は動物起源の酵素的に活性な毒素、又はそのフラグメント）、又は放射性同位体（すなわち、ラジオコンジュゲート（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ））が提供されるが、これらに限定されない。他の実施態様において、本発明はさらに、ＡＤＣを用いる方法を提供する。
【０１６０】
本発明での使用のための薬物には、細胞傷害性薬、特に癌治療のために使用されるもの
が挙げられる。このような薬物としては、一般に、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗薬、天然生成物及びそれらのアナログが挙げられる。例示的なクラスの細胞傷害性剤としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼインヒビター及びチミジル酸シンターゼインヒビターなどの酵素阻害剤、ＤＮＡインターカレート剤、ＤＮＡ切断剤、トポイソメラーゼインヒビター、アントラサイクリンファミリーの薬物、ビンカ薬物、マイトマイシン、ブレオマイシン、細胞傷害性ヌクレオシド、プテリジンファミリーの薬物、ジイネン、ポドフィロトキシン、ドラスタチン、メイタンシノイド、分化誘導剤及びタキソールが挙げられる。
【０１６１】
これらのクラスのメンバーとしては、例えば、メトトレキサート、メトプテリン、ジクロロメトトレキサート、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、シトシンアラビノシド、メルファラン、ロイロシン、ロイロシデイン、アクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、マイトマイシンＣ、マイトマイシンＡ、カルミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アミノプテリン、タリソマイシン、ポドフィロトキシン及びポドフィロトキシン誘導体（エトポシド又はリン酸エトポシドなど）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、タキサン類、例えばタキソール、タキソテール、レチノイン酸、酪酸、Ｎ８−アセチルスペルミジン、カンプトテシン、カリケアマイシン、エスペラマイシン、エン−ジイン、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＳＡ、カリケアマイシン、カンプトテシン、メイタンシノイド（ＤＭ１を含む）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、及びメイタンシノイド（ＤＭ４）、並びにそれらのアナログが挙げられる。
【０１６２】
毒素は、抗体−毒素結合体として使用されてよく、細菌毒素、例えばジフテリア毒素、植物毒素、例えばリシン（ｒｉｃｉｎ）、低分子毒素、例えば、ゲルダナマイシン（Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２（１９）：１５７３−１５８１；Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １０：１０２５−１０２８；Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１３：７８６−７９１）、メイタンシノイド（ＥＰ１３９１２１３；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３）及びカリケアマイシン（Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２９２８；Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２）などが挙げられる。毒素は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合又はトポイソメラーゼ阻害を含むメカニズムにより、細胞傷害性及び細胞増殖抑制効果を発揮してよい。
【０１６３】
抗ＣＤ３８抗体と１つ以上の低分子毒素、例えば、メイタインシノイド、ドラスタチン、アウリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、トリコテセン、カリケアマイシン及びＣＣ１０６５、並びに毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体との結合体が企図される。
【０１６４】
メイタンシノイド
メイタンシノイド薬物部分として使用するのに適したメイタンシン化合物が当分野で公知であり、これは、既知の方法で天然源から単離されるか、遺伝子工学技術を用いて製造されるか（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ（２００２）ＰＮＡＳ  ９９：７９６８−７９７３を参照されたい）、又は既知の方法に従って合成により調製されるメイタンシノール若しくはメイタンシノールアナログであってよい。以下に記載するように、薬物は、抗体との結合のために、チオールやアミン基などの官能性活性基（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐ）の組込みにより修飾されてよい。
【０１６５】
例となるメイタンシノイド薬物部分としては、修飾された芳香族環を有するもの、例えば：Ｃ−１９−デクロロ（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４，２５６，７４６）（アンサマイトシンＰ２のリチウムアルミニウムヒドリド還元により調製）；Ｃ−２０−ヒドロキシ（又はＣ
−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４，３６１，６５０及び４，３０７，０１６）（ストレプトマイセス又はアクチノミセスの脱メチル化、又はＬＡＨを用いた脱塩素化により調製）；及びＣ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４，２９４，７５７）（塩化アシルを用いるアシル化により調製）など、並びに他の位置での修飾を有するものが挙げられる。
【０１６６】
例となるメイタンシノイド薬物部分としては、さらに以下の修飾を有するもの、例えば：Ｃ−９−ＳＨ（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４，４２４，２１９）（メイタンシノールのＨ２Ｓ又はＰ２Ｓ５との反応により調製）；Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４，３３１，５９８）；Ｃ−１４−ヒドロキシメチル又はアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＡｃ）（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４，４５０，２５４）（ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）から調製）；Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４，３６４，８６６）（ストレプトマイセスによるメイタンシノールの転化により調製）；Ｃ−１５−メトキシ（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４，３１３，９４６及び４，３１５，９２９）（トレウィア  ヌドロフローラ（Ｔｒｅｗｉａ  ｎｕｄｌｆｌｏｒａ）より単離）；Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４，３６２，６６３及び４，３２２，３４８）（ストレプトマイセスによるメイタンシノールの脱メチル化により調製）；及び、４，５−デオキシ（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４，３７１，５３３）（メイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元により調製）などが挙げられる。
【０１６７】
特に使用されるのは、ＤＭ１（参照により援用されるＵＳ特許Ｎｏ．５，２０８，０２０に開示）及びＤＭ４（参照により援用されるＵＳ特許Ｎｏ．７，２７６，４９７に開示）である。５，４１６，０６４、ＷＯ／０１／２４７６３、７，３０３，７４９、７，６０１，３５４、ＵＳＳＮ１２／６３１，５０８、ＷＯ０２／０９８８８３、６，４４１，１６３、７，３６８，５６５、ＷＯ０２／１６３６８及びＷＯ０４／１０３３２７２（これらは全て、その全体が参照により明確に援用される）に記載の多数の追加のメイタンシノイド誘導体及び方法も参照されたい。
【０１６８】
メイタンシノイドを含むＡＤＣ、その作製方法及びその治療的使用は、例えば、Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５，２０８，０２０；５，４１６，０６４；６，４４１，１６３及び欧州特許ＥＰ０４２５２３５Ｂ１に開示されており、この開示は参照により明確に援用される。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３（１９９６）では、ヒト結腸直腸ガンに対して指向された、モノクローナル抗体Ｃ２４２に結合されたＤＭ１として示されるメイタンシノイドを含むＡＤＣが記載された。当該結合体は、培養結腸ガン細胞に向けて高い細胞傷害性であることが見られ、ｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍増殖アッセイにおいて抗腫瘍活性を示した。
【０１６９】
Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）では、メイタンシノイドを、ジスルフィドリンカーを介して、ヒト結腸ガン細胞株における抗原に結合するマウス抗体Ａ７と結合させるか、又はＨＥＲ−２／ｎｅｕ癌原遺伝子に結合する別のマウスモノクローナル抗体ＴＡ．１と結合させたＡＤＣが記載される。ＴＡ．１−メイタンシノイド結合体の細胞傷害性は、ヒト乳癌細胞株ＳＫ−ＢＲ−３（細胞当たり、３×１０５ＨＥＲ−２表面抗原を発現する）に対してｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験された。薬物結合体は、遊離メイタンシノイド薬物と同様のある程度の細胞傷害性を達成し、これは、抗体分子当たりのメイタンシノイド分子数を増加させることにより増加した。Ａ７−メイタンシノイド結合体は、マウスにおいて低い全身細胞傷害性（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）を示した。
【０１７０】
アウリスタチン及びドラスタチン
いくつかの実施態様において、ＡＤＣは、ドラスタチン又はドラスタチンペプチドのアナログ及び誘導体、アウリスタチンに結合させた抗ＣＤ３８抗体を含む（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５，６３５，４８３、５，７８０，５８８）。ドラスタチン及びアウリスタチンは、微小管動態、ＧＴＰ加水分解、並びに核及び細胞の分裂に干渉し（Ｗｏｙｋｅ  ｅｔ  ａｌ（２００１）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４５（１２）：３５８０−３５８４）、抗癌活性（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５６６３１４９）及び抗真菌活性（Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４２：２９６１−２９６５）を有することが示されている。ドラスタチン薬物部分又はアウリスタチン薬物部分は、ペプチド薬物部分のＮ（アミノ）末端又はＣ（カルボキシル）末端を介して抗体に結合させてよい（ＷＯ０２／０８８１７２）。
【０１７１】
例示的なアウリスタチンの実施態様は、Ｓｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｕｍｂｅｒ  ６２３，ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ  Ｍａｒ．２８，２００４及び米国特許公報Ｎｏ．２００５／０２３８６４８（これらの開示は、参照によりその全体が明確に援用される）に開示されるように、Ｎ末端結合モノメチルアウリスタチン薬物部分であるＤＥとＤＦを含む。
【０１７２】
例示的なアウリスタチンの実施態様は、ＭＭＡＥである（図１０に示す。図１０では、波線は抗体薬物結合体のリンカー（Ｌ）への共有結合を示す：参照によりその全体が明確に援用されるＵＳ特許Ｎｏ．６，８８４，８６９を参照されたい）。
【０１７３】
別の例示的なアウリスタチンの実施態様は、ＭＭＡＦである（図１０に示す。図１０では、波線は抗体薬物結合体のリンカー（Ｌ）への共有結合を示す：参照によりその全体が明確に援用されるＵＳ２００５／０２３８６４９、５，７６７，２３７及び６，１２４，４３１を参照されたい）。
【０１７４】
ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦと様々なリンカー要素（本明細書にさらに記載）を含むさらなる例示的な実施態様は、以下の構造及び略語を有する（ここで、Ａｂは抗体を意味し、ｐは１〜約８である）：
【０１７５】
典型的には、ペプチドベースの薬物部分は、２つ以上のアミノ酸及び／又はペプチド断片の間にペプチド結合を形成することにより調製することができる。そのようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野で周知である液相合成法に従って調製することができる（Ｅ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ  ａｎｄ  Ｋ．Ｌｕｂｋｅ，“Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，  ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐｐ７６−１３６，１９６５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。アウリスタチン／ドラスタチン薬物部分は、Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５，６３５，４８３；Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５，７８０，５８８；Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：５４６３−５４６５；Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １３：２４３−２７７；Ｐｅｔｔｉｔ，Ｇ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９６，７１９−７２５；Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１  ５：８５９−８６３；及びＤｏｒｏｎｉｎａ（２００３）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２１（７）：７７８−７８４の方法に従って調製してよい。
【０１７６】
カリケアマイシン
別の実施態様において、ＡＤＣは、１つ以上のカリケアマイシン分子と結合させた本発明の抗体を含む。例えば、マイロターグ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）は、最初に市販されたＡＤＣ薬物であり、ペイロード（ｐａｙｌｏａｄ）としてカリケアマイシンγ１を利用する（
参照によりその全体が援用される、ＵＳ特許Ｎｏ．４，９７０，１９８を参照されたい）。さらなるカリケアマイシン誘導体は、ＵＳ特許Ｎｏ．５，２６４，５８６、５，３８４，４１２、５，５５０，２４６、５，７３９，１１６、５，７７３，００１、５，７６７，２８５及び５，８７７，２９６（全て参照により明確に援用される）に記載される。抗生物質のカリケアマイシンファミリーは、ピコモル以下の濃度で二本鎖ＤＮＡ切断物を産生することができる。カリケアマイシンファミリーの結合体の調製に関しては、Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５，７１２，３７４、５，７１４，５８６、５，７３９，１１６、５，７６７，２８５、５，７７０，７０１、５，７７０，７１０、５，７７３，００１、５，８７７，２９６（すべてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）を参照されたい。使用してよいカリケアマイシンの構造的アナログとして、γ１Ｉ、α２Ｉ、α２Ｉ、Ｎ−アセチル−γ１Ｉ、ＰＳＡＧ及びθＩ１が挙げられるが、これらに限定されない（Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：３３３６−３３４２（１９９３）、Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：２９２５−２９２８（１９９８）及びＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄの上記米国特許）。抗体を結合体化させることのできる別の抗腫瘍薬物は、葉酸代拮抗薬であるＱＦＡである。カリケアマイシン及びＱＦＡの両方は、細胞内作用部位を有し、原形質膜を容易に通過しない。従って、抗体媒介インターナリゼーションを介したこれらの薬剤の細胞取り込みは、それらの細胞傷害性効果を大きく増強する。
【０１７７】
デュオカルマイシン
ＣＣ−１０６５（参照により援用される４，１６９，８８８を参照されたい）及びデュオカルマイシンは、ＡＤＣで利用される抗腫瘍抗生物質ファミリーのメンバーである。これらの抗生物質は、副溝において、アデニンのＮ３での配列選択的ＤＮＡアルキル化を介した作用するようであり、これにより、一連の事象が開始され、結果としてアポトーシスとなる。
【０１７８】
デュオカルマイシンの重要なメンバーとして、デュオカルマイシンＡ（参照により援用される、ＵＳ特許Ｎｏ．４，９２３，９９０）及びデュオカルマイシンＳＡ（参照により援用される、Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５，１０１，０３８）、並びに以下に記載される多数のアナログが挙げられる：ＵＳ特許Ｎｏ．７，５１７，９０３、７，６９１，９６２、５，１０１，０３８；５，６４１，７８０；５，１８７，１８６；５，０７０，０９２；５，０７０，０９２；５，６４１，７８０；５，１０１，０３８；５，０８４，４６８、５，４７５，０９２、５，５８５，４９９、５，８４６，５４５、ＷＯ２００７／０８９１４９、ＷＯ２００９／０１７３９４Ａ１、５，７０３，０８０、６，９８９，４５２、７，０８７，６００、７，１２９，２６１、７，４９８，３０２及び７，５０７，４２０（これらは全て、参照により明確に援用される）。
【０１７９】
他の細胞傷害性剤
本発明の抗体に結合できる他の抗腫瘍剤としては、ＢＣＮＵ、ストレプトゾイシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｉｃｉｎ）、ビンクリスチン及び５−フルオロウラシル、Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５，０５３，３９４及び５，７７０，７１０に記載のＬＬ−Ｅ３３２８８複合体としてまとめて知られる薬剤のファミリー、並びにエスペラミシン（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５，８７７，２９６）が挙げられる。
【０１８０】
使用することのできる酵素的に活性な毒素及びそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデッシンＡ鎖、α−サルシン、アレウリテス・フォルディ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ
−Ｓ）、モモルディカ・カランティア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）インヒビター、クルシン、クロチン、サポナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｎａｌｉｓ）インヒビター、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンが挙げられる。例えば、１９９３年１０月２８日公開のＷＯ９３／２１２３２号を参照されたい。
【０１８１】
本発明は、抗体と、核酸分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼ、又はデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）などのＤＮＡエンドヌクレアーゼ）との間に形成されるＡＤＣをさらに意図する。
【０１８２】
腫瘍の選択的破壊のために、抗体は高放射性原子を含んでよい。多様な放射性同位体が、放射性結合（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）抗体の産生に利用することができる。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。
【０１８３】
放射標識又は他の標識は、既知の方法により結合体に組み込まれてよい。例えば、ペプチドを生合成してもよいし、水素の代わりに例えばフッ素−１９を含む適当なアミノ酸前駆体を用いる化学的アミノ酸合成により合成してよい。Ｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８及びＩｎ１１１などの標識は、システイン残基を経てペプチドに結合させることができる。イットリウム−９０は、リジン残基を経て結合させることができる。ＩＯＤＯＧＥＮ法（Ｆｒａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９７８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．８０：  ４９−５７）を用いてヨウ素−１２３を取り込むことができる。“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ”（Ｃｈａｔａｌ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９）は、他の方法を詳細に説明する。
【０１８４】
複数の抗体を含む組成物について、薬物負荷は、抗体当たりの薬物分子の平均数であるｐにより表される。薬物負荷は、抗体当たり１〜２０薬物（Ｄ）の範囲であってよい。結合体化反応の調製における抗体当たりの薬物の平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ及びＨＰＬＣなどの慣用的な手段によって特徴付けることができる。ｐの換算で抗体−薬物−結合体の定量的分布も決定することができる。
【０１８５】
いくつかの例において、ｐが他の薬物負荷を有する抗体−薬物−結合体からの特定の値である、均一な抗体−薬物−結合体の分離、精製及び特徴付けは、逆相ＨＰＬＣ又は電気泳動などの手段によって達成することができる。例示的な実施態様において、ｐは２、３、４、５、６、７若しくは８であるか、又はその分数（ｆｒａｃｔｉｏｎ）である。
【０１８６】
抗体薬物結合体の生成は、当業者に公知の任意の技術によって達成され得る。簡潔には、抗体薬物結合体は、抗体ユニットとしての抗ＣＤ３８抗体、薬物、及び任意選択で薬物と結合剤とを連結するリンカーを含み得る。
【０１８７】
多くの様々な反応が、結合剤への薬物及び／又はリンカーの共有結合に利用可能である。これは、結合剤（例えば、抗体分子）のアミノ酸残基（リジンのアミン基、グルタミン酸及びアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基、及び芳香族アミノ酸の種々の部分を含む）の反応によって達成される。共有結合の最も一般に使用される非特異的方法のうちの１つは、化合物のカルボキシ（又はアミノ）基を、抗体のアミノ（又はカルボキシ）基に連結するためのカルボジイミド反応である。さらに、二官能性剤（例えば、ジアルデヒド又はイミドエステル）は、化合物のアミノ基を、抗体分子のアミノ基に連結するために使用されてきた。
【０１８８】
シッフ塩基反応は、結合剤への薬物の結合にも利用可能である。この方法は、グリコール又はヒドロキシル基を含む薬物の過ヨウ素酸酸化、従って、アルデヒドの形成を含み、アルデヒドは、次いで、結合剤と反応させられる。結合は、結合剤のアミノ基とのシッフ塩基の形成を介して起こる。イソチオシアネートはまた、結合剤に薬物を共有結合させるためのカップリング剤として使用され得る。他の技術は、当業者に公知であり、本発明の範囲内である。
【０１８９】
いくつかの実施態様において、中間体（リンカーの前駆物質である）を、適切な条件下で薬物と反応させる。他の実施態様において、反応性の基は、薬物及び／又は中間体に対して使用される。薬物と中間体との間の反応の生成物、又は誘導体化薬物を、その後、適切な条件下で、本発明の抗ＣＤ３８抗体と反応させる。
【０１９０】
本発明の結合体を調製する目的で、より簡便に化合物の反応を行うため、所望の化合物に修飾を行ってよいことが理解されるだろう。例えば、アミン、ヒドロキシル、又はスルフヒドリルなどの官能基を、薬物の活性又は他の特性に対して最小限又は許容可能な効果を有する位置で、薬物に付加してよい。
【０１９１】
リンカーユニット
典型的には、抗体薬物結合体は、薬物ユニットと抗体ユニットとの間にリンカーユニットを含む。いくつかの実施態様において、リンカーは、リンカーの切断により、適切な環境において抗体から薬物ユニットを放出するように、細胞内又は細胞外条件下で切断可能である。例えば、特定のプロテアーゼを分泌する固形腫瘍は、切断可能なリンカーの標的として機能してよく；他の実施態様では、利用されるのは細胞内プロテアーゼである。さらに他の実施態様において、リンカーユニットは、切断可能でなく、薬物は、例えば、リソソームでの抗体分解によって放出される。
【０１９２】
いくつかの実施態様において、リンカーは、細胞内環境中に（例えば、リソソーム又はエンドソーム又はまたはカベオラ（ｃａｖｅｏｌｅａ）内）に存在する切断剤によって切断可能である。リンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼ又はプロテアーゼ酵素（リソソームプロテアーゼ又はエンドソームプロテアーゼが挙げられるが、これらに限定されない）によって切断されるペプチジルリンカーであり得る。いくつかの実施態様において、ペプチジルリンカーは、少なくとも２アミノ酸長又は少なくとも３アミノ酸長である。
【０１９３】
切断剤としては、限定されないが、カテプシンＢ及びカテプシンＤ並びにプラスミンが挙げられ得、これらは全て、標的細胞内の活性薬物の放出を生じるジペプチド薬物誘導体を加水分解することが知られている（例えば、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３を参照されたい）。ＣＤ３８発現細胞に存在する酵素によって切断可能なペプチジルリンカーがある。例えば、チオール依存性プロテアーゼであり、ガン組織において高度に発現されるカテプシン−Ｂによって切断可能であるペプチジルリンカーが、使用され得る（例えば、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ又はＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙリンカー（配列番号Ｘ）など）。このようなリンカーの他の例は、例えば、Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．６，２１４，３４５（その全体が、全ての目的のために、本明細書に参照により援用される）に記載される。
【０１９４】
いくつかの実施態様において、細胞内プロテアーゼによって切断可能なペプチジルリンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔリンカー又はＰｈｅ−Ｌｙｓリンカー（例えば、Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．６，２１４，３４５（これは、ｖａｌ−ｃｉｔリンカーでのドキソルビシンの合成を記載する）を参照されたい）である。
【０１９５】
他の実施態様において、切断可能なリンカーは、ｐＨ感受性（すなわち、特定のｐＨ値
での加水分解に感受性）である。典型的には、ｐＨ感受性リンカーは、酸性条件下で加水分解可能である。例えば、リソソームにおいて加水分解可能である酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、ｃｉｓ−アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、及びケタールなど）が使用され得る（例えば、Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５，１２２，３６８；５，８２４，８０５；５，６２２，９２９；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３；Ｎｅｖｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４６５３−１４６６１を参照されたい）。このようなリンカーは、中性ｐＨ条件（例えば、血液中の条件）下で比較的安定であるが、ｐＨ５．５又は５．０未満（リソソームのｐＨに近い）では不安定である。特定の実施態様において、加水分解可能なリンカーは、チオエーテルリンカー（例えば、アシルヒドラゾン結合を介して治療剤に結合したチオエーテル）である（例えば、Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５，６２２，９２９を参照されたい）。
【０１９６】
さらに他の実施態様において、リンカーは、還元条件下で切断可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。種々のジスルフィドリンカーが当該分野で既知であり、これらとしては例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジル−５−アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート）及びＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジル−オキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）−、ＳＰＤＢ及びＳＭＰＴを使用して形成され得るものが挙げられる（例えば、Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：５９２４−５９３１；Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ  ａｎｄ
Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（Ｃ．Ｗ．Ｖｏｇｅｌ  ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕ．Ｐｒｅｓｓ，１９８７を参照されたい。Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４，８８０，９３５も参照されたい）。
【０１９７】
さらに他の特定の実施態様において、リンカーは、マロネートリンカー（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５：１３８７−９３）、マレイミドベンゾイルリンカー（Ｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３（１０）：１２９９−１３０４）、又は３’−Ｎ−アミドアナログ（Ｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３（１０）：１３０５−１２）である。
【０１９８】
さらに他の実施態様において、リンカーユニットは、切断可能ではなく、薬物は抗体分解によって放出される（例えば、Ｕ．Ｓ．公開広報Ｎｏ．２００５／０２３８６４９（その全体が、全ての目的のために本明細書に参照により援用される）を参照されたい）。
【０１９９】
多くの実施態様において、リンカーは自壊的（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）である。本明細書で使用する場合、「自壊的スペーサー（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ  Ｓｐａｃｅｒ）」という用語は、２個の間隔の空いた化学部分を安定な３つの部分からなる分子へと一緒に共有結合し得る二官能性化学部分をいう。それは、第１の部分への結合が切断される場合、第２の化学部分から自発的に分離する。例えば、ＷＯ２００７０５９４０４Ａ２、ＷＯ０６１１０４７６Ａ２、ＷＯ０５１１２９１９Ａ２、ＷＯ２０１０／０６２１７１、ＷＯ０９／０１７３９４、ＷＯ０７／０８９１４９、ＷＯ０７／０１８４３１、ＷＯ０４／０４３４９３及びＷＯ０２／０８３１８０（これらは、薬物−切断可能な基質結合体を対象としており、薬物及び切断可能な基質は、任意選択で、自壊的リンカーを介して結合されている。これらは全て参照により明確に援用される）を参照されたい。
【０２００】
多くの場合、リンカーは、細胞外環境に対して実質的に感受性ではない。本明細書で使用する場合、リンカーの文脈において「細胞外環境に対して実質的に感受性ではない」とは、抗体薬物結合体化合物のサンプルにおいて、リンカーのうちの約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約５％以下、約３％以下又は約１％以下が、抗体薬物結合体化合物が細胞外環境に（例えば、血漿中に）存在する場合に切断されることを意味する。
【０２０１】
リンカーが細胞外環境に対して実質的に感受性でないかは、例えば、血漿とともに、抗体薬物結合体化合物を所定の期間（例えば、２時間、４時間、８時間、１６時間又は２４時間）にわたってインキュベートし、次いで、上記血漿中に存在する遊離薬物の量を定量することによって、決定され得る。
【０２０２】
他の相互に排他的ではない実施態様において、リンカーは、細胞インターナリゼーションを促進する。特定の実施態様において、リンカーは、治療剤に結合された場合に（すなわち、本明細書に記載されるように、抗体薬物結合体化合物のリンカー−治療剤部分の環境において）細胞インターナリゼーションを促進する。さらに他の実施態様において、リンカーは、アウリスタチン化合物及び本発明の抗ＣＤ３８抗体の両方に結合体化された場合に、細胞インターナリゼーションを促進する。
【０２０３】
本発明の組成物及び方法とともに使用され得る種々の例示的リンカーは、ＷＯ２００４−０１０９５７、Ｕ．Ｓ．公開公報Ｎｏ．２００６／００７４００８、Ｕ．Ｓ．公開公報Ｎｏ．２００５０２３８６４９及びＵ．Ｓ．公開公報Ｎｏ．２００６／００２４３１７（これらの各々は、その全体が、全ての目的のために本明細書に参照により援用される）に記載される。
【０２０４】
薬物負荷
薬物負荷はｐにより表され、ｐは、分子における抗体当たりの薬物部分の平均数である。薬物負荷（「ｐ」）は、抗体当たり、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以上の部分（Ｄ）であってよいが、とはいえ、多くの場合、平均数は分数又は小数（ａ  ｆｒａｃｔｉｏｎ  ｏｒ  ａ  ｄｅｃｉｍａｌ）である。通常は、１〜４の薬物負荷が多くの場合有用であり、１〜２も有用である。本発明のＡＤＣは、１〜２０の範囲の薬物部分が結合された抗体の集まりが含まれる。結合体化反応からＡＤＣを調製する場合の抗体当たりの薬物部分の平均数は、質量分析やＥＬＩＳＡアッセイなどの従来の手段によって特徴付けられ得る。
【０２０５】
ｐに関してＡＤＣの量的分布も決定され得る。いくつかの場合において、ｐが他の薬物負荷を有するＡＤＣからの特定の値である、均一なＡＤＣの分離、精製及び特徴付けは、電気泳動などの手段によって達成され得る。
【０２０６】
いくつかの抗体−薬物結合体について、ｐは抗体への結合部位の数によって制限され得る。例えば、上記の例示的実施形態にあるとおり、結合がシステインチオールである場合、抗体はシステインチオール基を１個のみ若しくは数個有し得るか、又はそれを介してリンカーが結合し得る十分な反応性を有するチオール基を１個のみ若しくは数個有し得る。特定の実施態様では、より高い薬物負荷、例えばｐ＞５は、特定の抗体−薬物結合体の凝集、不溶解、毒性、又は細胞透過性の喪失を起こし得る。特定の実施態様形態において、本発明のＡＤＣの薬物負荷は、１〜約８；約２〜約６；約３〜約５；約３〜約４；約３．１〜約３．９；約３．２〜約３．８；約３．２〜約３．７；約３．２〜約３．６；約３．３〜約３．８；又は約３．３〜約３．７の範囲である。実際、特定のＡＤＣについて、抗体当たりの薬物部分の最適な比は８未満であってよく、約２〜約５であってよいことが示されている。ＵＳ２００５−０２３８６４９  Ａ１（その全体が参照により援用される）を参照されたい。
【０２０７】
特定の実施態様では、結合体化反応の間、理論上の最大薬物部分より少ない数が抗体に結合する。抗体は、以下で考察するように、例えば、薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬と反応しないリジン残基を含み得る。概して、抗体は、薬物部分と結合し得る反応性の遊離システインチオール基を多くは含まない。実際には、抗体中のほとんどのシステインチオール残基がジスルフィド架橋として存在する。特定の実施態様では、抗体を部分的又は完全な還元条件下でジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）などの還元剤によって還元して、反応性システインチオール基を生成してもよい。特定の実施態様では、抗体を変性条件に供してリジン又はシステインなどの反応性の求核基を露出させる。
【０２０８】
ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比）は様々な方法で、例えば、以下によって調節することができる：（ｉ）抗体との反応性を有するモル過剰の薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬を制限すること、（ｉｉ）結合体化反応時間又は温度を制限すること、（ｉｉｉ）システインチオール改変のための還元条件を部分的又は制限的なものとすること、（ｉｖ）リンカー−薬物結合の数及び／又は位置が調節されるようにシステイン残基の数及び位置を改変するため、組換え技術により抗体のアミノ酸配列を遺伝子操作すること（本明細書及びＷＯ２００６／０３４４８８（その全体が参照により援用される）に開示されるように調製されるチオＭａｂ又はチオＦａｂなど）。
【０２０９】
２個以上の求核基が、薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬と反応し、続いて薬物部分試薬と反応する場合、得られる生成物は、抗体に結合した１つ以上の薬物部分の分布を有するＡＤＣ化合物の混合物であることが理解されるべきである。抗体当たりの平均薬物数は、抗体に特異的で且つ薬物に特異的な二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイ法により混合物から計算されてもよい。個々のＡＤＣ分子は混合物において質量分析で同定し、ＨＰＬＣ、例えば疎水性相互作用クロマトグラフィーなどにより分離し得る。
【０２１０】
いくつかの実施態様では、単一の負荷値を有する同種ＡＤＣが、結合体混合物から電気泳動法又はクロマトグラフィーにより分離され得る。
【０２１１】
ＡＤＣの細胞傷害性効果の判定方法
薬物又は抗体−薬物結合体が細胞に対して細胞増殖抑制効果及び／又は細胞傷害性効果を及ぼすかどうかを判定する方法は公知である。一般に、抗体薬物結合体の細胞傷害性活性又は細胞増殖抑制活性は、以下により計測され得る：細胞培養培地において抗体薬物結合体の標的タンパク質を発現する哺乳動物細胞を曝露し；細胞を約６時間〜約５日間にわたり培養し；且つ細胞生存率を計測する。細胞ベースのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを使用して抗体薬物結合体の生存率（増殖）、細胞傷害性、及びアポトーシス誘導（カスパーゼ活性化）を計測することができる。
【０２１２】
抗体薬物結合体が細胞増殖抑制効果を及ぼすかどうかの判定には、チミジン取込みアッセイ法を用いてもよい。例えば、標的抗原を発現する癌細胞を５，０００細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに播種し、７２時間の期間にわたり培養し、その７２時間の期間のうちの最後の８時間の間に０．５μＣｉの３Ｈ−チミジンに曝露することができる。抗体薬物結合体の存在下及び非存在下における培養物の細胞への３Ｈ−チミジンの取込みが計測される。
【０２１３】
細胞傷害性（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）を判定するには、壊死又はアポトーシス（プログラム細胞死）を計測することができる。壊死は典型的には、細胞膜透過性の増加；細胞の膨潤、及び細胞膜の断裂を伴う。アポトーシスは典型的には、膜の小疱形成、細胞質の凝集、及び内因性エンドヌクレアーゼの活性化により特徴付けられる。ガン細胞に対す
るこれらの作用のいずれかを測定することにより、抗体薬物結合体がガン治療に有用であることが示される。
【０２１４】
細胞生存率は、ニュートラルレッド、トリパンブルー、又はＡＬＡＭＡＲ（商標）ブルーなどの色素の細胞中における取込みを測定することにより計測することができる（例えば、Ｐａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３：４７３−４７６を参照されたい）。かかるアッセイ法では、色素を含む培地中で細胞をインキュベートし、細胞を洗浄し、色素の細胞取込みを反映する残留色素を分光光度法で計測する。細胞傷害性の計測のためには、タンパク質結合色素のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）もまた使用することができる（Ｓｋｅｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８２：１１０７−１２）。
【０２１５】
或いは、死細胞ではなく生細胞を検出することによる、哺乳動物細胞の生存及び増殖についての定量的比色アッセイ法において、ＭＴＴなどのテトラゾリウム塩が用いられる（例えば、Ｍｏｓｍａｎｎ  １９８３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：５５−６３を参照されたい）。
【０２１６】
アポトーシスは、例えばＤＮＡ断片化を計測することによって定量することができる。ＤＮＡ断片化をｉｎ  ｖｉｔｒｏで定量的に測定する市販の測光法が利用可能である。かかるアッセイ法の例としては、ＴＵＮＥＬ（断片化したＤＮＡにおける標識ヌクレオチドの取込みを検出する）及びＥＬＩＳＡベースのアッセイ法が挙げられ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ，１９９９，Ｎｏ．２，ｐｐ．３４−３７（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）に記載されている。
【０２１７】
アポトーシスはまた、細胞における形態学的な変化の計測によっても判定することができる。例えば、壊死と同様に、特定の色素（例えば、蛍光色素、例えばアクリジンオレンジ又は臭化エチジウムなど）の取込みを計測することにより、細胞膜の完全性の喪失を判定することができる。アポトーシス細胞数の計測方法については、Ｄｕｋｅ  ａｎｄ  Ｃｏｈｅｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，１９９２，ｐｐ．３．１７．１−３．１７．１６）により記載されている。細胞はまた、ＤＮＡ色素（例えば、アクリジンオレンジ、臭化エチジウム、又はヨウ化プロピジウム）で標識し、それらの細胞を、核の内膜に沿ったクロマチンの凝縮及び辺縁趨向について観察することができる。アポトーシスを判定するために計測することができる他の形態学的な変化としては、例えば、細胞質凝集、膜の小疱形成の増加、及び細胞収縮が挙げられる。
【０２１８】
アポトーシス細胞の存在は、培養物の付着した区画と「浮遊した」区画の双方で計測することができる。例えば、双方の区画とも上清を除去して回収し、付着した細胞をトリプシン処理し、遠心分離洗浄ステップ（例えば、２０００ｒｐｍで１０分間）の後に調製物を合わせて１つにし、アポトーシスを（例えば、ＤＮＡ断片化の計測により）検出することができる。（例えば、Ｐｉａｚｚａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：３１１０−１６を参照されたい）。
【０２１９】
Ｉｎ  ｖｉｖｏでは、本発明の抗ＣＤ３８抗体の治療組成物の効果を好適な動物モデルで評価することができる。例えば異種ガンモデルを使用することができ、このモデルでは、ガンの外植片又は継代されたゼノグラフト組織がヌードマウス又はＳＣＩＤマウスなどの免疫不全動物に導入される（Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３：４０２−４０８）。腫瘍形成の阻害、腫瘍退縮又は転移などを計測するアッセイ法を用いて有効性を予測することができる。
【０２２０】
前述の方法の実施において使用される治療組成物は、所望のデリバリー方法に好適な担体を含む医薬組成物に製剤化することができる。好適な担体は、治療組成物と組み合わせた場合に治療組成物の抗腫瘍機能を維持し、通常は患者の免疫系との反応性を有しない任意の材料を含む。例としては、滅菌リン酸緩衝生理食塩水溶液、静菌水などの、数多くの標準的な医薬担体のいずれかも挙げられるが、これらに限定されない（概して、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｏｓａｌ．，Ｅｄ．，１９８０を参照されたい）。
【０２２１】
Ｉｎ  Ｖｉｖｏ投与のための抗体組成物
本発明に従って使用される抗体の製剤は、任意選択で医薬上許容される担体、賦形剤又は安定化剤とともに、所望の純度を有する抗体を混合することにより保存のために凍結乾燥製剤又は水溶性の形態で調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．［１９８０］）。許容される担体、賦形剤又は安定化剤は、実施される用量及び濃度において、レシピエントに対して非毒性であり、リン酸、クエン酸及び他の有機酸などのバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存料（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール：アルキルパベン（メチル又はプロピルパラベンなど）；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンなど）；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジンなど）；単糖、二糖及び他の炭水化物（グルコース、マンノース又はデキストリンを含む）；キレート化剤（ＥＤＴＡなど）；糖類（スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなど）；塩形成カウンターイオン（ナトリウムなど）；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又は非イオン性界面活性剤（ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など）が挙げられる。
【０２２２】
本明細書における製剤は、治療されるべき特定の適応のために、必要に応じて２以上の活性化合物を含んでよく、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有するものである。例えば、他の特異性を有する抗体を提供することが望ましいことがある。あるいは、又はさらに、組成物は、細胞傷害性剤、サイトカイン、増殖阻害剤及び／又は低分子アンタゴニストを含んでよい。このような分子は、意図される目的のために有効な量で組み合わせて適切に存在する。
【０２２３】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合により、調製されたマイクロカプセル中に封入されてよく、例えば、コロイド状ドラッグデリバリーシステム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルションにおける、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルなどである。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に記載されている。
【０２２４】
Ｉｎ  ｖｉｖｏ投与のために使用されるべき製剤は、無菌であるか、ほぼ無菌に近いものであるべきである。これは、滅菌ろ過膜を介したろ過により容易に達成される。
【０２２５】
徐放性調製物を調製してよい。徐放性調製物の適した例としては、抗体を含む固形疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、例えば、フィルム
又はマイクロカプセルなどの成形品の形態である。徐放性調製物の例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．３，７７３，９１９）、Ｌ−グルタミン酸とガンマエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−ビニルアセテート、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーとロイプロリドアセテートからなる注入可能なマイクロスフェア）、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン−ビニルアセテート及び乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日間にわたって分子を放出することができるが、ある種のヒドロゲルは、より短い期間、タンパク質を放出する。
【０２２６】
カプセル化された抗体が、長期間体内で保持される場合、３７℃での湿気の暴露の結果、それらは変性又は凝集し得、結果として生物学的活性を喪失し、免疫原性の潜在的変化を引き起こす。合理的戦略として、関与するメカニズムに応じた安定化が考案され得る。例えば、凝集メカニズムが、チオ−ジスルフィド交換を介した分子内Ｓ−Ｓ結合形成であることを発見した場合には、スルフヒドリル残基を修飾し、酸性溶液から凍結乾燥し、含水量を調節し、適切な添加物を使用し、特定のポリマーマトリックス組成物を開発することにより、安定化が達成され得る。
【０２２７】
投与様式
本発明の抗体及び化学療法剤は、既知の方法に従って対象に投与され、例えば、ボーラスとして又は一定期間にわたる持続注入による静脈内投与、筋肉内、腹腔内、脳髄腔内（ｉｎｔｒａｃｅｒｏｂｒｏｓｐｉｎａｌ）、皮下、関節内、滑液内、クモ膜下腔内、経口、局所又は吸入による経路により患者に投与される。抗体の静脈内又は皮下投与が好ましい。
【０２２８】
治療様式
本発明の方法において、治療は、疾患又は病態に対する正の治療応答（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を提供するために使用される。「正の治療応答」とは、疾患若しくは病態の改善、及び／又は疾患若しくは病態と関連する症状の改善を意図する。例えば、正の治療応答は、疾患における以下の改善の１つ以上を意味し得る：（１）新生細胞数の減少；（２）新生細胞死の増加；（３）新生細胞生存の阻害；（５）腫瘍増殖の阻害（すなわち、ある程度遅らせる、好ましくは停止）；（６）患者生存率の増加；及び（７）疾患又は病態と関連する１つ以上の症状のある程度の緩和。
【０２２９】
任意の所与の疾患又は病態に対する正の治療応答は、その疾患又は病態に特異的な標準化された応答基準により決定され得る。腫瘍応答は、スクリーニング技術、例えば、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ−放射線イメージング、コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、骨スキャンイメージング、内視鏡検査及び腫瘍生検サンプリング（骨髄穿刺（ＢＭＡ）を含む）及び循環腫瘍細胞の計測などを用いて、腫瘍形態の変化（すなわち、全腫瘍組織量、腫瘍サイズなど）について評価できる。
【０２３０】
これらの正の治療応答に加えて、治療を受ける対象は、疾患と関連する症状において、改善の有益な効果を受け得る。
【０２３１】
従って、Ｂ細胞腫瘍について、対象は、いわゆるＢ症状、すなわち、盗汗、発熱、体重減少及び／又は蕁麻疹の低下を受け得る。前ガン状態について、抗ＣＤ３８療法での治療は、例えば、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）に罹患した対象における多発性骨髄腫の発症などの、関連する悪性疾患の発症までの期間を遮断及び／又は引き延ばし得る。
【０２３２】
疾患の改善は、完全寛解として特徴付けられてよい。「完全寛解」とは、骨髄腫の場合には、なんらかの以前は異常であった放射線学的検査、骨髄、及び脳脊髄液（ＣＳＦ）又は異常な単クローン性タンパク質の正常化とともに、臨床的に検出可能な疾患がなくなることを意図する。
【０２３３】
このような応答は、本発明の方法による治療後、少なくとも４〜８週間、場合によっては６〜８週間持続してよい。あるいは、疾患における改善は、部分寛解として分類されてよい。「部分寛解」とは、新たな病変の不在下で、全ての測定可能な腫瘍組織量（すなわち、対象に存在する悪性細胞数、又は測定される腫瘍塊の大部分又は異常な単クローン性タンパク質の量）が少なくとも約５０％減少し、それが４〜８週間又は６〜８週間持続し得ることを意図する。
【０２３４】
本発明の治療は、「治療上有効量」の使用される医薬を含む。「治療上有効量」とは、必要な用量及び期間で、所望の治療結果を達成するのに有効な量をいう。
【０２３５】
治療上有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重や、個体において所望の反応を導く医薬の能力などの要因によって変動し得る。治療上有効量はまた、抗体又は抗体部分の毒性又は有害作用のいずれかより治療上有益な効果が上回るものでもある。
【０２３６】
腫瘍療法における「治療上有効量」は、疾患の進行を一定に保つ能力により測定されてよい。ガンを阻害する化合物の能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系で評価されてよい。
【０２３７】
あるいは、組成物のこの特性は、当業者に既知のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにより、化合物が細胞増殖を阻害する能力又はアポトーシスを誘導する能力を調べることにより評価されてよい。治療化合物の治療上有効量は、腫瘍サイズを減少させるか、あるいは対象における症状を改善し得る。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重篤度、及び特定の組成物又は選択される投与経路などの因子に基づいて、このような量を決定できるだろう。
【０２３８】
用量レジメンは、最適な所望の反応（例えば、治療応答）を提供するために調整される。例えば、単回ボーラスを投与してよく、複数の分割量を時間をかけて投与してよく、又は用量を比例的に減少又は増加（危急的治療状況により示されるとおり）させてもよい。非経口組成物は、投与を容易にするために、また投薬量を一様にするために、投薬単位形態に製剤化してもよい。本明細書で使用する場合、投薬単位形態（ｄｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ  ｆｏｒｍ）とは、治療されるべき対象のために単一用量として適切な、物理的に別個の単位を意味し、各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果を生じるよう計算された、予め決められた量の活性化合物を含む。
【０２３９】
本発明の投薬単位形態についての規格は、（ａ）活性化合物に特有の特性及び達成されるべき特定の治療効果、並びに（ｂ）個体における治療感受性（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）のために、そのような活性化合物を配合する当分野に固有の限界、により決定され、それらに直接依存する。
【０２４０】
本発明で使用される抗ＣＤ３８抗体についての有効量及び投薬レジメンは、治療されるべき疾患又は病態によって決まり、当業者により決定され得る。
【０２４１】
本発明で使用される抗ＣＤ３８抗体の治療上有効量についての非限定的な例示範囲は、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇなど、例えば約０．１〜
２０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．５、例えば約０．３、約１、又は約３ｍｇ／ｋｇなどである。別の実施態様において、抗体は、１ｍｇ／ｋｇ以上の用量、例えば１〜２０ｍｇ／ｋｇの用量、例えば５〜２０ｍｇ／ｋｇの用量、例えば８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０２４２】
当分野の通常の技術を有する医師であれば、必要な医薬組成物の有効量を容易に決定し、処方し得る。例えば、医師又は獣医は、所望の治療効果を達成するのに必要な量よりも低いレベルで、医薬組成物に用いられる医薬の用量をスタートし、所望の効果が達成されるまで徐々に用量を増加させることができる。
【０２４３】
一実施態様において、抗ＣＤ３８抗体は、１週間の投与量が１０〜５００ｍｇ／ｋｇ、例えば２００〜４００ｍｇ／ｋｇで注入により投与される。このような投与は、例えば、１〜８回（３〜５回など）、反復してよい。投与は、２〜２４時間、例えば２〜１２時間の期間に亘って持続注入により実施されてよい。
【０２４４】
一実施態様において、毒性を含む副作用を低下させることが必要な場合には、抗ＣＤ３８抗体は、２４時間超などの長期間に亘ったゆっくりした持続注入により投与される。
【０２４５】
一実施態様において、抗ＣＤ３８抗体は、１週間の投与量が２５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、例えば３００ｍｇ、５００ｍｇ、７００ｍｇ、１０００ｍｇ、１５００ｍｇ又は２０００ｍｇなどで、最大８回、例えば４〜６回など投与される。投与は、２〜２４時間、例えば２〜１２時間などに亘る持続注入により実施されてよい。このようなレジメンは、例えば６ヶ月又は１２ヶ月後に、必要に応じて１回以上反復されてよい。用量は、例えば、生物学的サンプルを取り出し、抗ＣＤ３８抗体の抗原結合領域を標的とする抗イディオタイプ抗体を用いることにより、投与時の血中の本発明の化合物量を測定することにより決定されるか、又は調整されてよい。
【０２４６】
さらなる実施態様において、抗ＣＤ３８抗体は、２〜１２週間、例えば３〜１０週間、例えば４〜８週間、週に一回投与される。
【０２４７】
一実施態様において、抗ＣＤ３８抗体は、維持療法により投与され、これは、例えば、６ヶ月以上の期間、週に一回投与される。
【０２４８】
一実施態様において、抗ＣＤ３８抗体は、抗ＣＤ３８抗体の一回の注入とそれに続く放射性同位体結合抗ＣＤ３８抗体の注入を含むレジメンにより投与される。レジメンは、例えば７〜９日後などに反復されてよい。
【０２４９】
本発明に従った治療は、非限定例として、単回又は分割量を２４、１２、８、６、４若しくは２時間ごとに又は任意の組合せで使用して、治療の開始後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０日目に少なくとも１回、あるいはまた１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０週目に少なくとも１回、又はその任意の組合せで、一日当たり、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０又は１００ｍｇ／ｋｇの抗体量を一日当たりの用量として提供してよい。
【０２５０】
いくつかの実施態様において、その抗ＣＤ３８抗体分子は、１つ以上の追加の治療剤、例えば化学療法剤と組み合わせて使用する。ＤＮＡ損傷化学療法剤の非限定例として、トポイソメラーゼＩ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、カムトテシン及びそのアナログ又は代謝物、ドキソルビシンなど）；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、エトポシド、テニポシド、ダウノルビシンなど）；アルキル化剤（例えば、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、チオテパ、イフォスファミド、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、デカルバジン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、シクロホスファミドなど）；ＤＮＡインターカレーター（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンなど）；ＤＮＡインターカレーター及びフリーラジカルジェネレーター（ブレオマイシンなど）；及びヌクレオシド模倣物（例えば、５−フルオロウラシル、カペシチビン、ゲムシタビン、フルダラビン、シタラビン、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン、ヒドロキシウレアなど）が挙げられる。
【０２５１】
細胞複製を妨げる化学療法剤として、以下が挙げられる：パクリタキセル、ドセタキセル及び関連アナログ；ビンクリスチン、ビンブラスチン及び関連アナログ；サリドマイド、レナリドミド及び関連アナログ（例えば、ＣＣ−５０１３、ＣＣ−４０４７など）；タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、イマチニブメシレート及びゲフィチニブ）；プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）；ＮＦ−κＢ阻害剤（ＩκＢキナーゼの阻害剤を含む）；ガンで過剰発現するタンパク質と結合し、それにより細胞複製を下方制御する抗体（例えば、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、ベバシズマブなど）；及びガンで上方制御、過剰発現又は活性化されることが既知のタンパク質又は酵素の他の阻害剤であって、その阻害が細胞複製を下方制御するもの。
【０２５２】
いくつかの実施態様において、本発明の抗体は、ベルケイド（登録商標）（ボルテゾミブ）での治療前、同時、又は後に使用できる。
【０２５３】
診断用途
提供する抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８と関連する腫瘍又は他の疾患状態のｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏイメージングでの使用も見出される。いくつかの実施態様において、本明細書の記載の抗体は、診断及び治療のために使用され、又は診断のみに使用される。抗ＣＤ３８抗体を診断と治療の両方に使用する場合には、いくつかの実施態様は、診断抗体が治療抗体との結合に競合しないように、２つの異なるエピトープに対する２つの異なる抗ＣＤ３８抗体に依拠するが、とはいえ、いくつかの場合では同一の抗体を両方の目的のために使用できる。例えば、いくつかの例において、Ａｂ１９抗体を診断的（通常、以下に記載のように標識される）に使用し、一方でＡｂ７９を治療的に使用するか、逆もまた同様である。従って、本発明に含まれる組成物は、診断抗体と治療抗体を含むものであり、いくつかの実施態様においては、診断抗体は本明細書に記載のように標識される。さらに、治療抗体と診断抗体の組成物は、本明細書で概説するように、他の薬物と同時投与されてもよい。
【０２５４】
多くの実施態様において、診断抗体は標識される。本明細書において「標識される」とは、本明細書に開示する抗体が、スクリーニング又は診断手順で検出できるよう結合される１つ以上の要素、アイソトープ又は化合物を有することを意味する。一般に、標識は複数のクラスに分類される：ａ）免疫標識（抗体により認識される融合パートナーとして組み込まれるエピトープであってよい）、ｂ）同位体標識（放射性同位体又は重同位体であってよい）、ｃ）低分子標識（蛍光及び比色（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ）色素、又は他の標識方法を可能にするビオチンなどの分子を含んでよい）、及びｄ）粒子などの標識（超音波標識のためのバブルを含む）又は体内イメージングを可能にする常磁性標識。当分野で既知であるように、標識は任意の位置で抗体に組み込まれてよく、タンパク質発現の間にｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで組み込まれてよい。
【０２５５】
診断は、下記に記載するように体全体のイメージングを可能にする診断抗体の投与によりｉｎ  ｖｉｖｏで実施されることもでき、又は患者から取り出したサンプル上でｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施することもできる。この関連において、「サンプル」には、体液（血液、尿、血清、リンパ液、唾液、肛門及び膣分泌物、汗及び精液を含むがこれらに限定されない）、及び関連組織の生検から得られるものなどの組織サンプルを含む（これらに限定されない）、任意数の物を含む。
【０２５６】
いくつかの実施態様において、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングは、例えば、超音波、ＣＴスキャン、Ｘ線、ＭＲＩ及びＰＥＴスキャン、並びに光学技術（体の表面に近い腫瘍について光学標識（ｏｐｔｉｃａｌ  ｌａｂｅｌ）を用いるものなど）を含む（これらに限定されない）ものにより実施される。
【０２５７】
ＣＤ３８と関連する疾患のｉｎ  ｖｉｖｏイメージングは、任意の適した技術により実施されてよい。例えば、９９Ｔｃ−標識、又は別のβ線放射同位体での標識を用いて、抗ＣＤ３８抗体を標識してよい。この技術の変形例として、ガンマカメラ技術よりも画像を改善するために磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）の使用が挙げられてよい。同様の免疫シンチグラフィー法及び原理は、例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ（ｅｄ．），Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ  １９８８），Ｃｈａｓｅ，“Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅｓ”，ｉｎ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２４−６５２（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，１９９０）、及びＢｒｏｗｎ，“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”，ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２２７−４９，Ｐｅｚｚｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（Ｃｈａｐｍａｎ  ＆  Ｈａｌｌ  １９９３）などに記載されている。
【０２５８】
一実施態様において、本発明は、抗ＣＤ３８抗体が検出促進剤に結合され、結合抗体を血流に注入することなどにより宿主に投与して、宿主における標識抗体の存在及び位置を分析する、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング方法を提供する。この技術、及び本明細書で提供する任意の他の診断方法を介して、本発明は、ヒト患者、又はヒト患者から得られた生物学的サンプルにおける、疾患関連細胞の存在をスクリーニングする方法を提供する。
【０２５９】
診断イメージングについては、放射性同位体を抗ＣＤ３８抗体に直接結合させるか、又は媒介となる（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｒｙ）官能基を用いることにより間接的に結合させるかのいずれかであってよい。有用な媒介となる官能基としては、エチレンジアミンテトラ酢酸、ジエチレントリアミンペンタ酢酸などのキレーターが挙げられる（例えば、Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５，０５７，３１３を参照されたい）。放射性同位体に結合させた抗ＣＤ３８抗体を伴うこのような診断アッセイにおいて、患者にデリバリーされる結合抗ＣＤ３８抗体の用量は、典型的には、検出及び正確な測定を可能にする、最小限の半減期、最小限の体内保持及び最小限の同位体量の最もよい組み合わせについて同位体を選択することを通じて、可能な限り低いレベルで維持される。
【０２６０】
放射性同位体及び放射線不透過性剤に加えて、診断方法は、色素（例えば、ビオチン−ストレプトアジビン複合体など）、造影剤、蛍光化合物又は分子、及び増強剤（例えば、常磁性イオン）（磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）（例えば、ＭＲＩ技術、及びＭＲＩ増強剤に結合する抗体の調製を記載したＵ．Ｓ．特許Ｎｏ．６，３３１，１７５などを参照されたい）について）に結合させた抗ＣＤ３８抗体を用いて実施してよい。このような診
断／検出剤は、磁気共鳴イメージングで使用するための剤、及び蛍光化合物から選択されてよい。
【０２６１】
抗ＣＤ３８抗体に放射性金属又は常磁性イオンを負荷するために、イオンを結合するための多様なキレート基が結合されたロングテールを有する試薬と、抗体とを反応させる必要があり得る。このようなテールは、ポリリジンや多糖などのポリマー、又はキレート基との結合が可能なペンダント基を有する他の誘導体化若しくは誘導可能な鎖、例えば、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビスチオセミカルバゾン、ポリオキシム、及びこの目的のために有用であることが既知の基などであってよい。
【０２６２】
キレートは、標準化学を用いて抗ＣＤ３８抗体に結合されてよい。キレートは、免疫反応性の最小限の喪失、及び最小限の凝集及び／又は内部交差反応性を有する分子への結合形成を可能にする基により抗ＣＤ３抗体に通常は結合される。
【０２６３】
潜在的に有用な金属キレート組み合わせの例として、２−ベンジル−ＤＴＰＡ及びそのモノメチル及びシクロヘキシルアナログが挙げられ、通常のエネルギー範囲である６０〜４，０００ｋｅＶの診断同位体、例えば、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、１８Ｆ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、９９Ｔｃ、９４Ｔｃ、１１Ｃ、１３Ｎ、５Ｏ、７６Ｂｒなど（ラジオイメージングについて）とともに使用される。
【０２６４】
標識として、放射性核種、放射性物質造影剤、常磁性イオン、金属、蛍光標識、化学発行標識、超音波造影剤、光活性剤が挙げられる。このような診断剤は公知であり、このような公知の診断剤のいずれも使用してよい。診断剤の非限定的な例として、放射性核種、例えば、１１０Ｉｎ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、１８Ｆ、５２Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、９４ｍＴｃ、９４Ｔｃ、９９ｍＴｃ、１２０Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１５４−１５８Ｇｄ、３２Ｐ、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、５１Ｍｎ、５２ｍＭｎ、５５Ｃｏ、７２Ａｓ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、８２ｍＲｂ、８３Ｓｒ、又は他のγ−、β−若しくは陽電子放射体などが挙げられてよい。
【０２６５】
使用される常磁性イオンとして、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）又はエルビウム（ＩＩＩ）を挙げてよい。金属造影剤として、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）又はビスマス（ＩＩＩ）を挙げてよい。
【０２６６】
超音波造影剤は、リポソーム、例えばガス封入（ｆｉｌｌｅｄ）リポソームを含んでよい。放射線不透過性診断剤は、化合物、バリウム化合物、ガリリウム化合物及びタリウム化合物から選択されてよい。
【０２６７】
これらの及び同様のキレートは、マンガン、鉄、カドリニウムなどの非放射線金属と複合化させる場合に、抗ＣＤ３８抗体と関連して、ＭＲＩ診断方法に有用であり得る。ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡなどの大環状キレートは、様々な金属及び放射性金属で有用であり、とりわけ、それぞれ、ガリウム、イッテリウム及び銅の放射性核種で有用である。このような金属キレート複合体は、対象となる金属に対する環のサイズを調節することにより非常に安定化させ得る。２２３Ｒａなどの核種との安定した結合について関心対象である大環状ポリエーテルなどの他の環系キレートも診断方法に適切であり得る。
【０２６８】
従って、本発明は、診断抗ＣＤ３８抗体結合体であって、抗ＣＤ３８抗体結合体が造影
剤（例えば、磁気共鳴イメージング、コンピューター断層撮影法、超音波造影増強剤などのため）又は例えば、γ−、β−、α−、オージェ電子−、又は陽電子放出同位体などであってよい放射性核種に結合されている、結合体を提供する。
【０２６９】
抗ＣＤ３８抗体はまた、例えば、特定の細胞、組織又は血清における対象抗原の発現を検出するのに有用であり得る。診断的適用のために、抗体は典型的には、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで検出可能な部分で標識される。当業者に理解されるように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験での使用に適した標識は広範囲にわたって存在する。本発明のこの側面での使用に適した色素（ｄｙｅ）としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：蛍光ランタニド複合体（ユーロピウム及びテルビウムを含む）、フルオレセイン、ローダミン、テトラムエチルローダミン、エオシン、エリスロシン、クマリン、メチル−クマリン、量子ドット（「ナノクリスタル」とも称される；Ｕ．Ｓ．Ｓｅｒ．Ｎｏ．０９／３１５，５８４を参照されたい（参照により援用される））、ピレン、マラカイトグリーン、スチルベン、ルシファーイエロー、カスケードブルー（商標）、テキサスレッド、Ｃｙ色素（Ｃｙ３、Ｃｙ５など）、アレクサを含むアレクサ色素、フィコエリトリン、ボディピー及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｂｙ  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｐ．  Ｈａｕｇｌａｎｄの第６版に記載の他のもの（参照により本明細書に援用される）。
【０２７０】
次いで、染色された組織は、腫瘍におけるＣＤ３８関連ペプチド量のインディケーターとして放射活性を計測するために評価され得る。例えば、浸潤性ガン細胞の存在に対するバイオマーカーとしてＣＤ３８を使用する場合においては、このような技術の使用により得られた画像を用いて、患者、哺乳動物又は組織における生体分布を評価してよい。
【０２７１】
製品
他の実施態様において、上述の障害の治療に有用な物質を含む製品を提供する。当該製品は、容器とラベルを含む。適した容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ及び試験管などが挙げられる。容器は、ガラスやプラスチックなど様々な物質から成型されてよい。容器は、病態の治療に有効な組成物を保持し、滅菌アクセスポート（例えば、容器は、皮下注射針による穿刺可能なストッパーを有する注入可能な溶液バッグ又はバイアルであってよい）を有してよい。組成物中の活性剤は抗体である。容器上に又は容器に付随するラベルは、組成物が、選択する病態の治療に使用されることを示す。製品はさらに、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液などの医薬上許容されるバッファーを含む第二の容器を含んでよい。製品は、商業上及びユーザーの点から見て好ましい他の物質をさらに含んでよく、これには、他のバッファー、希釈剤、フィルター、ニードル、シリンジ及び使用方法を記載した添付文書が挙げられる。
【実施例】
【０２７２】
以下の実施例は、本発明を例証するために提供するものであり、本発明を何ら限定するものではない。
【０２７３】
実施例１：ヒト、カニクイザル及びマウスＣＤ３８をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター構築物
ヒトＣＤ３８（ｈｕＣＤ３８）を発現するベクターを構築するために、ｈｕＣＤ３８をコードするポリヌクレオチドをＯｒｉｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｔｒｕｅｃｌｏｎｅ（登録商標）ｈｕｍａｎから得たｃＤＮＡから単離した。Ｇ４１８（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）耐性トランスフェクタントの選択を可能にするネオマイシン耐性（ｎｅｏＲ）遺伝子を含む安定な発現ベクター（ＸＯＭＡ，Ｉｎｃ．）に単離したｈｕＣＤ３８をクローニングした。選択されたトランスフェクタントに存在するｈｕＣＤ３８遺伝子をシーケンシングして、任意の配列エラーを同定した。ＧｅｎｂａｎｋアクセッションＮＭ＿００１７７５から外れた配列エラーをＰＣＲ部位特異的変異導入により訂正した。最終的なベ
クターＤＮＡを５’シーケンシングにより確認した。
【０２７４】
カニクイザルＣＤ３８（ｃｙＣＤ３８）を発現するベクターを構築するために、Ｂｉｏｃｈａｉｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ’ｓ  ｃＤＮＡ−ｍｏｎｋｅｙ（カニクイザル）−正常脾臓組織から得たＤＮＡからｃｙＣＤ３８をコードするポリヌクレオチドを単離した。Ｇ４１８（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）耐性トランスフェクタントの選択を可能にするｎｅｏＲ遺伝子を含む安定な発現ベクター（ＸＯＭＡ，Ｉｎｃ．）に単離したｃｙＣＤ３８をクローニングした。選択されたトランスフェクタントに存在するｃｙＣＤ３８遺伝子をシーケンシングして、任意の配列エラーを同定した。ＧｅｎｂａｎｋアクセッションＡＹ５５５１４８から外れた配列エラーをＰＣＲ部位特異的変異導入により訂正した。最終的なベクターＤＮＡをシーケンシングにより確認した。
【０２７５】
マウスＣＤ３８（ｍｏＣＤ３８）を発現するベクターを構築するためにＯｒｉｇｅｎｅ’ｓ  ＴｒｕｅＯＲＦコレクションから得たＤＮＡからｍｏＣＤ３８をコードするポリヌクレオチドを単離した。Ｇ４１８（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）耐性トランスフェクタントの選択を可能にするｎｅｏＲ遺伝子を含む安定な発現ベクター（ＸＯＭＡ，Ｉｎｃ．）に単離したｍｏＣＤ３８をクローニングした。選択されたトランスフェクタントに存在するｍｏＣＤ３８遺伝子をシーケンシングして、任意の配列エラーを同定した。ＧｅｎｂａｎｋアクセッションＮＭ＿００７６４６から外れた配列エラーをＰＣＲ部位特異的変異導入により訂正した。最終的なベクターＤＮＡをシーケンシングにより確認した。
【０２７６】
実施例２：ＣＤ３８を発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞の開発
ｈｕＣＤ３８、ｍｕＣＤ３８及びｃｙＣＤ３８を発現するＣＨＯ細胞を開発するために、ＣＨＯ細胞を直鎖化ＤＮＡでトランスフェクトした。選択下で一週間置いた後、フローサイトメトリーにより細胞をソーティングし、最も高いｈｕＣＤ３８、ｍｕＣＤ３８又はｃｙＣＤ３８発現細胞（最大１５％）を９６ウェルプレートに播種して、単一コロニーを生じさせた。残りの細胞も選択下で播種し、バックアップコロニーを生じさせた。播種してからおよそ１２〜１４日後に単一コロニーを同定し、９６ディープウェルプレートに移した。第二継代後、ＦＡＣＳ分析によりクローンをスクリーニングした。トップの産生クローンを継代し、振とうフラスコに広げた。マイコプラズマＡＶＡ試験及びスケールアップのために、トップの２クローンを凍結及び／又は培養した。
【０２７７】
播種性（ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ）ゼノグラフトモデルのためのルシフェラーゼレポーターを構築するために、ＣＭＶプロモーター／ルシフェラーゼ遺伝子／ネオマイシン選択可能なマーカーを含む市販のベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて、Ｄａｕｄｉバーキットリンパ腫細胞の安定発現株を作製した。
【０２７８】
実施例３：ファージディスプレイライブラリー及びＣＤ３８と結合する薬剤のスクリーニング
標的特異抗体のファージディスプレイライブラリーからの選択は、Ｍａｒｋｓらにより記載される方法（２００４，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８：１６１−７６）に従って実施した。簡単に述べると、ファージディスプレイライブラリーを室温で１時間、１００ｐｍｏｌのビオチン化ＣＤ３８とともにインキュベートし、次いで１００μＬのストレプトアジビンビーズ懸濁液（ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−２８０  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、形成した複合体を捕捉した。洗浄バッファー（ＰＢＳ中５％ミルク）でビーズを洗浄することにより非特異的なファージを除去した。結合したファージを０．５ｍＬの１００ｎＭトリエチルアミン（ＴＥＡ）で溶出し、等量の１Ｍ  ＴＲＩＳ−ＣＩ（ｐＨ７．４）を添加することによりすぐに中和した。溶出したファージプールを用いて、対数増殖期のＴＧ１  Ｅ．ｃｏｌｉに感染させ、Ｍａｒｋｓらの上記文献に記載のように、ファージミドをレスキューした。選択を計３
ラウンド繰り返した。
【０２７９】
あるいは、固定化したＣＤ３８（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）に対してファージディスプレイライブラリーをパンニングして、ＣＤ３８との結合能力を有する抗体断片パネルを同定した。パンニングは、標準的なプロトコルを用いて実施した（例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１７８：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ：Ｐ．Ｍ．Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ａｎｄ  Ｒ．Ａｉｔｋｅｎ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；“Ｐａｎｎｉｎｇ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｈａｇｅ−Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ”，Ｃｏｏｍｂｅｒ，Ｄ．Ｗ．Ｊ．，ｐｐ．１３３−１４５、及び“Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ”，Ｃｈａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｐｐ．１４７−１５７を参照されたい）。簡単に述べると、ＮＵＮＣ（登録商標）ＭＡＸＩＳＯＲＰプレートの３つのウェルに、ＰＢＳ中、１０μｇ／ｍＬの濃度の組換えＣＤ３８（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）５０μＬをコーティングした。４℃で一晩インキュベートした後、ＰＢＳ中５％ミルクを用いて、結合していない結合部位を１時間、室温でブロッキングした。次いで、５％ミルク／ＰＢＳ中、およそ２００μＬのファージライブラリーをブロッキングしたウェルに添加し、室温でおよそ１〜２時間インキュベートした。ウェルを洗浄し、結合したファージを標準的な方法を用いて溶出した（例えば、Ｓａｍ  ｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２００１を参照されたい）。溶出したファージは、対数増殖期にあるＥ．ｃｏｌｉ  ＴＧ１宿主細胞への感染を介して増幅させた。２，５００ＲＰＭで５分間遠心分離することにより感染ＴＧ１細胞を回収し、１５ｃｍの２ＹＴ−アンピシリン−２％グルコース寒天プレート上に播種し、３０℃で一晩インキュベートした。ついで、増幅させたファージを用いてパンニング工程を繰り返した。パンニング、溶出及び増幅のサイクルを３ラウンド繰り返した。
【０２８０】
パンニングが完了した後、播種したＴＧ１細胞由来の単一コロニーを用いて、９６ウェルプレート中、培地に接種した。ミクロ培養をＯＤ６００＝０．６まで増殖させ、その時点で、１ｍＭのＩＰＴＧを添加することにより可溶性ｓｃＦＶの発現を誘導し、シェーカー中、３０℃で一晩インキュベートした。遠心分離により細菌をペレット化し、標準的なＥＬＩＳＡアッセイ及びＦＡＣＳ結合アッセイにより固定化ＣＤ３８に結合するｓｃＦｖを試験するために、ペリプラズム抽出物を用いた。
【０２８１】
ＦＡＣＳ結合スクリーニングのために、ＣＤ３８を安定発現するＣＨＯ細胞を用いて、天然の膜結合ＣＤ３８に結合する能力についてペリプラズム抽出物（ＰＰＥ）中のｓｃＦｖをスクリーニングした。親及びＣＨＯトランスフェクタント（ヒトＣＤ３８又はカニクイザルＣＤ３８又はマウスＣＤ３８発現細胞株）を、ＰＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、０．５％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ-Ａｌｄｒｉｃｈ）及び０．１％ＮａＮ３（
Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）（ＦＡＣＳバッファー）中、別々に、２×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。ＣＤ３８を発現しない親ＣＨＯ細胞をネガティブコントロールとして使用した。２５μＬの細胞アリコートをＶ底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ  Ｃａｔ＃３８９７）に播種し、ｍｙｃタグｓｃＦｖ抗体断片を含むペリプラズム抽出物２５μＬを細胞に添加し、次いで混合物を４℃で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を２回洗浄し、その後、ペレットを２５μＬのマウス抗ｃ−ｍｙｃ（ＦＡＣＳバッファー中、１／１０００）（Ｒｏｃｈｅ）に再懸濁し、再度４℃で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳバッファー（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｌａｂｓ）中、１／２００希釈した抗マウスＩｇＧ−ＰＥ２５μＬ中に再懸濁し、再度、４℃で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を２回洗浄して、過剰な非結合抗体を除去し、７０μＬのＦＡ
ＣＳバッファーに再懸濁し、ＢＤ  ＦＡＣＳｃａｎ（登録商標）で分析した。得られたデータをＦｌｏｗＪｏ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＴｒｅｅＳｔａｒ，Ｉｎｃ．）を用いて評価した。陽性サンプルは、親ＣＨＯ細胞株（ＣＤ３８−）の平均蛍光強度に対する、ＣＤ３８トランスフェクトＣＨＯ細胞の平均蛍光強度を比較することにより同定した。
【０２８２】
ヒトＣＤ３８に結合した抗体クローンをシーケンシングして、独特のクローンを同定した。次いで、独特のｓｃＦｖクローンを、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）分析により決定されたオフレートに基づき、ランク付けした。標準的なアミンカップリングケミストリーにより（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））、２００ＲＵ〜５００ＲＵのヒト組換えＣＤ３８（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ’  ｃａｔ＃２４０４−ＡＣ又は同等物）をＣＭ５又は同等のチップに固定した。リファレンススポットも調製し、これを活性化し、次いでタンパク質を固定化することなくブロッキングした。これは、アセテートバッファー（ｐＨ５．０）中、１〜３μｇ／ｍＬに抗原を希釈し、必要なレベルが固定化されるまで（３〜５）分間、活性化表面に注入することにより実施した。次いで、表面をエタノールアミンでブロッキングした。ペリプラズム抽出物を、２ｍｇ／ｍＬＢＳＡ（ウシ血清アルブミン））を有する、アッセイランニングバッファー１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラ酢酸）及び０．０５％ポリソルベート２０（ｐＨ７．４）で１：１に希釈した。希釈したペリプラズム抽出物を表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）表面に、３０分で、３００秒間と追加の９００秒間（モニタリングされる解離時間）で注入した。１００ｍＭ  ＨＣｌを８秒間、１回注入して再生（ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）させた。リファレンススポットから得られたデータを、活性表面から得られたデータから減算し、次いでＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００ソフトウェアにおいて１：１解離モデルを用いて、解離曲線をフィッティングした。
【０２８３】
トップランクのｓｃＦｖクローンをＩｇＧ１抗体に変換した。保持された結合特性を保証し、種間交差反応性を評価するため、親ＣＨＯ細胞、並びにヒト、マウス及びカニクイザルＣＤ３８を発現するＣＨＯ細胞を用いて、ＩｇＧ１再フォーマット（ｒｅｆｏｒｍａｔｔｅｄ）クローンに対しＦＡＣＳ結合スクリーニングを繰り返した。ＩｇＧ再フォーマットクローンのＦＡＣＳ特徴付けを上述のとおり実施したが、抗ｃ−ｍｙｃ抗体及び抗マウスＩｇＧ−ＰＥの添加からなる工程は、全長ヒトＩｇＧの結合が、フィコエリトリン結合抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ）の添加により検出される１回の工程に置き換えた。
【０２８４】
実施例４：ＩｇＧ再フォーマットクローンのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞系アッセイ
約１５０のクローンをヒトＩｇＧ１抗体として再フォーマットし、以下に記載するとおり、アッセイのパネルを用いて、５つ（Ａｂ１９、Ａｂ４３、Ａｂ７２、Ａｂ７９及びＡｂ１１０）を十分に評価した。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏアッセイの両方におけるＩｇＧ再フォーマットクローンのパフォーマンスを２つの抗体、ＢＭＴＫ４−１（ベンチマーク１、ＢＭ−１又はＢＭＴＫ−１とも称する）（配列番号２４及び２５；重鎖及び軽鎖可変領域）及びＢＭＴＫ４−２（ベンチマーク２、ＢＭ−２又はＢＭＴＫ−２とも称する）（配列番号２６及び２７；重鎖及び軽鎖可変領域）と比較した。これらのアミノ酸配列は、それぞれ、既知の抗ＣＤ３８抗体ダラツムマブ（ＨｕＭａｘ−ＣＤ３８とも称され、国際公開Ｎｏ．０６／０９９８７５に開示される）及びＳＡＲ６５０９８４（国際公開Ｎｏ．０８／０４７２４２に開示される）に由来した。呼吸系発疹ウイルスを認識する臨床的に認可された抗体であるパリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標））（Ｍｅｄｌｍｍｕｎｅ）をＣＤ３８結合に対するネガティブコントロールとした。
【０２８５】
実施例５：免疫蛍光法によるＡｂ７９結合の検出
Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８色素で標識されたＡｂ７９を正常ヒト結腸直腸組織、前立腺及びリンパ凍結切片に適用した。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）
４８８色素で標識されたパリビズマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標））をネガティブ染色コントロールとした。得られた免疫蛍光像を図４に示す。正常ヒト結腸直腸組織、前立腺及びリンパ節において、Ａｂ７９について観察された染色パターンは、市販のポリクローナル抗ＣＤ３８抗体で見られたものと同一であった（データ示さず）。
【０２８６】
Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８色素標識されたＡｂ７９を正常及び多発性骨髄腫の骨髄試料にも適用した（図５）。Ａｂ７９は正常骨髄細胞の〜１０％と結合したのに対し、多発性骨髄腫の骨髄細胞は＞９０％がＡｂ７９結合を示した（４つの試験サンプルのうち４つにおいて）。
【０２８７】
Ａｂ７９が多数の細胞株（ＭＯＬＰ−８、ＤＡＵＤＩ、ＲＰＭＩ及びＭＣＦ７）と結合する能力についても検証した。ＭＯＬＰ−８（ヒト多発性骨髄腫）、ＤＡＵＤＩ（バーキットリンパ腫罹患者由来のリンパ芽球）及びＲＰＭＩ（慢性骨髄性白血病罹患者から樹立された細胞株）細胞はすべて、Ａｂ７９による結合を示した。乳癌株であるＭＣＦ７は、Ａｂ７９結合に対して、概してネガティブであるようだった（図６）。
【０２８８】
Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８結合抗体を８μｍのクリオスタット凍結切片上で染色し、エタノール／アセトン混合物で５分間固定し、その後、湿度制御チャンバー中、室温で１時間、抗体とともにインキュベートした。次いで、切片を洗浄し、ＤＡＰＩ含有包埋剤（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ｃａｔ＃Ｈ１５００）を添加し、カバーガラスをのせた。
【０２８９】
実施例６：多発性骨髄腫（ＭＭ）及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）に対するＡｂ７９発現の評価
多発性骨髄腫患者由来の骨髄サンプルに対するＡｂ７９結合は、ＣＤ１３８＋細胞の濃縮（ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）後か、或いはＣＤ１３８＋ＣＤ４５−／ｌｏ細胞のゲーティングによるかのいずかによりフローサイトメトリーにより分析した（図７Ａ）。Ａｂ７９は、６つの多発性骨髄腫サンプルのうち４つにおいて、＞９５％の細胞で発現が見られた。Ａｂ７９の結合パターンは、臨床検査室で使用された抗ＣＤ３８抗体のものと、概して類似しているようであった。さらに、Ａｂ７９は、慢性リンパ性白血病罹患者由来の細胞と結合した（図７Ｂ）。
【０２９０】
ＭＭ及びＣＬＬと結合するＡｂ７９をＦＡＣＳにより測定するために、患者サンプルを２４時間以内に処理した。製造者の指示書に従って、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（商標）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により末梢血単核細胞を単離した。括弧内のクローンと以下の抗体パネルを用いて、発現分析を実施した。ＭＭパネル：Ａｂ７９−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ（２Ｄ１）、ＣＤ１３８−ＡＰＣ（ＭＩ１５）。ＣＬＬパネル：Ａｂ７９−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８；ＣＤ５−ＰＥ（ＵＣＨＴ２）、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ（２Ｄ１）、ＣＤ１９−ＡＰＣ（ＳＪ２５Ｃ１）。５μＬのＰＥ、ＰｅｒＣＰ若しくはＡＰＣ標識抗体、又は１０μＬのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８標識抗体又はアイソタイプコントロールを、１００μＬの０．２×１０６  ＰＢＭＣ又はＣＤ１３８濃縮細胞（骨髄穿刺液由来）のいずれかを含む各ウェル又はチューブに添加した。サンプルを室温で３０分間インキュベートし、その後、製造者の指示書に従って、赤血球細胞をＢＤ  Ｐｈａｒｍｌｙｓｅを用いて溶解した。全てのサンプルをＦＡＣＳバッファーで３回洗浄した。１％パラホルムアルデヒドでサンプルを固定し、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩ又はＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｅｒ（商標）で分析した。
【０２９１】
実施例７：抗ＣＤ３８誘導ＣＤＣアッセイ
カニクイザル交差反応性クローンを、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導する能力に
ついて試験した。ＭＯＬＰ−８細胞を、５０μＬの完全培地（１０％胎児ウシ血清を添加したＲＰＭＩ）中、黒色の９６ウェル平底組織培養プレートにウェル当たり１０，０００細胞の密度で播種した。５０μＬの２×抗ＣＤ３８抗体、コントロールＩｇＧ抗体又は培地のみのものを各ウェルに添加し、室温で１０分間インキュベートしておいた。細胞株に応じて量を変更した（２〜１５μＬ）精製ウサギ補体（ｃａｔ＃ＣＬ３４４１  Ｃｅｄａｒｌａｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃａｎａｄａ）を、コントロールウェル以外の各ウェルに添加した。３７℃で１時間インキュベートした後、プレートを室温にし、ウェル当たり１００μＬのセルタイターＣｙｔｏＴｏｘ  Ｇｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｇ７５７１／Ｇ７５７３）を添加し、プレートを５〜７分間振とうさせ、発光をＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）発光プレートリーダーで読み取った。試験条件：細胞のみ；細胞＋補体；細胞＋ＩｇＧコントロール＋補体；細胞＋抗体＋補体。ＣＤＣ％は、下記式を用いて計算した：
１００−（ＲＬＵＴ／ＲＬＵＣ）×１００
［式中、ＲＬＵＴは、試験サンプルの相対発光単位（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ｕｎｉｔ）であり、ＲＬＵＣは、補体のみのサンプルの相対発光単位である］。統計分析はＰＲＩＳＭソフトウェアを用いて実施した。抗体濃度に対するＣＤＣ％をプロットすることにより決定されたＥＣ５０値を表１に示す。
【０２９２】
実施例８：抗ＣＤ３８誘導ＡＤＣＣアッセイ
抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は、標的細胞としてＤａｕｄｉ、ＭＯＬＰ−８及びＲＰＭＩ−８２２６細胞株を用いて評価した。Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）から得られた軟膜又はＬＲＳから、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐｌａｑｕｅ（商標）分離によりエフェクター細胞としてＰＢＭＣを単離した。ＰＢＳ中２％ＦＢＳを用いて試料を１：３希釈した。３５ｍＬの希釈試料の下に１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｐｌａｑｕｅ（商標）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を徐々に層状にし、１８００ｒｐｍ（ブレーキオフ）で２５分間遠心分離した。ＰＢＭＣを含む濁った中間層を集め、ＰＢＳ中２％ＦＢＳで３回洗浄し、１０％ＤＭＳＯ／ＦＢＳ中、アリコート当たり５０×１０６細胞／ｍＬのアリコートを凍結した。必要な場合には、凍結したＰＢＭＣアリコートを融解し、２×１０６／ｍＬで、１０％ＦＢＳ／ＲＭＰＩ＋５ｎｇ／ｍＬ  組換えヒトＩＬ２（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃２０２−ＩＬ）中、一晩培養した。
【０２９３】
ＡＤＣＣアッセイのために、すべての工程は完全培地中で実施した。ウェル当たり５０００の標的細胞を、５０μＬの３×抗ＣＤ３８、コントロールＩｇＧ又は培地のみが添加された９６ウェルプレートに播種し、その後、５０μＬのヒトエフェクターＰＢＭＣを、標的：エフェクター（Ｔ：Ｅ）細胞が１：２５〜１：５０となる比率で添加した。〜３０秒間、８００ｒｐｍでプレートを簡単に遠心分離して、全ての細胞を近づけた。３７℃で４時間後、プレートを１１００ｒｐｍで５分間遠心分離し、１００μＬの上清を白色プレートに移した。１００μＬのＣｙｔｏＴｏｘ  Ｇｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  ｃａｔ＃Ｇ９２９２）を上清に添加し、プレートを２０〜３０分間、ＲＴで振とうさせた。発光をＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）発光プレートリーダーで読み取り、特異的溶解の割合を下記式を用いて測定した：
（ＲＬＵＴ／ＲＬＵＥ／Ｔ）／（ＲＬＵＬ／ＲＬＵＥ／Ｔ）×１００
［式中、ＲＬＵＴは、試験サンプルの相対発光単位であり、ＲＬＵＥ／Ｔは、標的細胞及びエフェクター細胞のみを含むサンプルの相対発光単位であり、ＲＬＵＬは、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００で溶解した細胞についての相対発光単位である。］統計分析は、ＰＲＩＳＭソフトウェアを用いて実施した。抗体濃度に対する特異的溶解％をプロットすることにより決定されたＥＣ５０値を表１に示す。
【表１】
2018019689.tif 000003
【０２９４】
実施例９：ＦＡＣＳによる親和性決定
ＣＤ３８を発現するＭＯＬＰ−８細胞は、およそ２００万細胞／ｍＬの生存細胞濃度で、１％ＦＢＳバッファーに懸濁した。試験すべきｍＡｂは、１×ＰＢＳ中、２つの９６ウェルプレート上、ウェルにわたって段階希釈（２倍）した。各滴定（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）の最後のウェルは、バッファーのみを含んだ。最終体積が３００〜Ｌ／ウェルとなり、各ウェルがおよそ１００，０００細胞含むように各ウェルに追加のＰＢＳ及び細胞懸濁液を追加した。ｍＡｂを下記に列挙し、滴定で使用した、対応する最終的なｍＡｂ結合部位濃度（２×分子濃度）範囲も示す：
ベンチマーク１、［ｍＡｂ］結合部位＝５０．８ｎＭ〜４９．７ｐＭ
ベンチマーク２、［ｍＡｂ］結合部位＝４９．５ｎＭ〜４８．３ｐＭ
Ａｂ４３、［ｍＡｂ］結合部位＝４９．３ｎＭ〜４８．２ｐＭ
Ａｂ１１０、［ｍＡｂ］結合部位＝２０４ｎＭ〜４９．９ｐＭ
Ａｂ７９、［ｍＡｂ］結合部位＝１０３ｎＭ〜２５．３ｐＭ
Ａｂ７２、［ｍＡｂ］結合部位＝１０３ｎＭ〜２５．２ｐＭ
Ａｂ１９、［ｍＡｂ］結合部位＝１００ｎＭ〜１２．２ｐＭ
プレートをプレートシェーカーに４℃で５時間置き、その後、プレートを１×ＰＢＳで４℃、３回洗浄した。次いで、２００μＬの９９ｎＭ  Ｃｙ５ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異ポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，＃１０９−１７５−００８）を各ウェルに添加し、プレートを４℃で３０分間振とうさせた。プレートを再度１×ＰＢＳで４℃、２回洗浄し、次いで、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩ  ＨＴＳフローサイトメーターを用いて、独特のｍＡｂ結合部位濃度を含む各ウェルについて、５０００イベントの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を記録した。抗体結合部位濃度の関数としての平均蛍光強度のプロットは、ＫＤを見積もるための下記式を用いて、Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ  ３．０ソフトウェアで非線形フィッティングした：
Ｆ＝ｐ［（ＫＤ＋ＬＴ＋ｎ（Ｍ））−｛（ＫＤ＋ＬＴ＋ｎ（Ｍ））２−４ｎ（Ｍ）（ＬＴ）｝１／２］／２＋Ｂ
［式中、Ｆ（平均蛍光強度）、ＬＴ（トータルのｍＡｂ結合部位濃度）、ｐ（ｍＡｂに結合する任意の蛍光単位に関する比例定数）、Ｍ（細胞内モル濃度；３００μＬ中、１００，０００細胞に基づいて０．５５３ｆＭ）、ｎ（細胞当たりのレセプター数）、Ｂ（バックグラウンドシグナル）、及びＫＤ＝平衡解離定数。］。
【０２９５】
各抗体の滴定曲線について、ＫＤの見積もりはＰとして得、ｎ、Ｂ及びＬＤは、非線形
分析において自由にフロート（ｆｌｏａｔｅｄ  ｆｒｅｅｌｙ）させた。上記方程式の詳細な導出については、Ｄｒａｋｅ  ａｎｄ  Ｋｌａｋａｍｐ（２００７），“Ａ  ｒｉｇｏｒｏｕｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ  ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｃｏｎｓｔａｎｔｓ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３１８：１５７  −６２（参照により本明細書に援用される）を参照されたい。全ての抗体について得られたＫＤのものを、括弧内において各フィットの９５％信頼区間とともに親和性が減少した順に表３に列記する。抗体結合部位濃度（２×分子濃度）を非線形曲線フィッティングのために使用した。
【０２９６】
実施例１０：Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）による親和性決定
可溶性ＣＤ３８エクトドメイン（ＥＣＤ）に対するＩｇＧ抗体の親和性は、２２℃、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）Ａ１００上で、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析により決定した。ヤギ抗ヒトＩｇＧポリクローナル抗体（Ｃａｌｔａｇ  Ｈ１０５００）を、チップの４つ全てのフローセル内のスポット１、２、４及び５への標準的なアミンカップリングを用いて、ＣＭ５バイオセンサーチップに固定化した。各スポット上の固定化レベルは、５８６５ＲＵ〜６８９９ＲＵの範囲であった。ヒトＣＤ３８はＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｃａｔ＃２４０４−ＡＣ，Ｌｏｔ＃ＰＥＨ０２０８１２Ａ）から得た。ＣＤ３８のストック濃度は、Ｐａｃｅら（（１９９５）“Ｈｏｗ  ｔｏ  ｍｅａｓｕｒｅ  ａｎｄ  ｐｒｅｄｉｃｔ  ｍｏｌａｒ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｐｒｏｔｅｉｎ”  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ４（１１）：２４１１−２３  ａｎｄ  Ｐａｃｅ  ａｎｄ  Ｇｒｉｍｓｌｅｙ（２００４）“Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ”，ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３：  Ｕｎｉｔ  ３．１）に詳述される方法を用いて決定した（各参考文献の教示は参照により本明細書に援用される）。
【０２９７】
ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水、０．００５％ポリソルベート２０を脱ガスし、濾過したＢＳＡを最終濃度１００μｇ／ｍＬで添加することによりランニングバッファーを調製した。８つの精製ｍＡｂ全てをランニングバッファーでおよそ２μｇ／ｍＬに希釈した。予備実験により、〜１００ＲＵと同じくらいの表面容量（Ｒｍａｘ）を維持するために捕捉されるべき捕捉されるべき各ｍＡｂの量を見積もった。各ｍＡｂ捕捉／抗原注入サイクルについて、ｍＡｂは、それぞれのリファレンス表面として働くスポット２と４に近接する、各フローセル内のスポット１及び５で捕捉された。各希釈ｍＡｂは、１０μＬ／分の流速で１分間捕捉され、その後、表面を安定化するため、ランニングバッファーを３分間流した。ＨｕＣＤ３８は、全ての４つのフローセルに１２０秒間、３０μＬ／分、１９３．７ｎＭ〜３．０ｎＭ（２×段階希釈）の濃度範囲にわたって注入し、その後、１５分間解離段階とした。サンプルは全てランニングバッファー中で調製し、二重参照（ｄｏｕｂｌｅ
ｒｅｆｅｒｅｎｃｉｎｇ）のために散在（ｉｎｔｅｒｓｐｅｒｓｅｄ）された７つのバッファー注入物を用いてランダムに３連で注入した。１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．７）での２０秒間のパルスを２回行い、表面を再生した。
【０２９８】
全てのセンサーグラムデータをＳｃｒｕｂｂｅｒ  ２．０ｃソフトウェアで処理し、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ  ２．０ｃの１：１相互作用モデルにグローバルにフィッティングさせた。得られた結合定数を表２に示す。
【０２９９】
【表２】
2018019689.tif 000004
【０３００】
実施例１１：免疫蛍光内在化アッセイ
免疫蛍光技術を用いて、抗ＣＤ３８抗体のＭＯＬＰ−８細胞への内在化を評価した。ＭＯＬＰ−８細胞を集め、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８に直接結合させた各抗ＣＤ３８抗体１μｇを用いて、ＲＰＭＩ−１６４０中、５×１０６細胞を４℃、１０分間染色した。１％ＢＳＡ含有ＰＢＳで細胞を洗浄し、１×１０６細胞を４℃又は３７℃で３時間又は６時間インキュベートした。２μｇのウサギ抗Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、４℃、３０分間、表面染色をクエンチした。細胞を洗浄し、１％ＰＦＡを含むＰＢＳで固定し、Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔ  ９６ウェルプレート（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に移し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）フローサイトメーターを用いたフローサイトメトリーにより評価するか、ＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ（登録商標）Ｍｉｃｒｏ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を２０倍の倍率で用いて画像化するかのいずれか行った。
【０３０１】
実施例１２：Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）によるエピトープビニング
Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ａ１００機器を用いて、２つのベンチマーク抗体とＡｂ１９及びＡｂ７９をビニング（ｂｉ〜）した。最初に、ＮＨＳ／ＥＤＣカップリング化学を用いて、ＣＭ５チップ上に高密度及び低密度で抗体を固定化した。エピトープビニング実験の各サイクルについて、ＣＤ３８をこれらの表面上に最初に注入した。次いで、ＥＬＩＳＡフォーマットにおけるサンドイッチアッセイと同様に、独特の抗体（固定化抗体のセットから得られたもの）をＣＤ３８／抗体複合体を含む表面上に注入した。各サイクルの最後にリン酸パルスを用いて表面を再生した。ＢＳＡ添加ＨＢＳ−Ｐ（１０ｍＭ  １０  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣＩ、０．００５％）Ｐ−２０）を用いて、２２℃でデータを集めた。得られたセンサーグラムをＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ａ１００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアパッケージの「Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ」モジュールとＳｃｒｕｂｂｅｒ  ｆｏｒ  Ａ１００データセットのトライアルバージョン（ｔｒｉａｌ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｃｒｕｂｂｅｒ  ｆｏｒ  Ａ１００  ｄａｔａ  ｓｅｔ）を用いて処理した。再現データを使用して、表３に示すとおり、２つの別々の実験から上記４つのｍＡｂに対するバイナリー４×４マトリックスを作製した。
【０３０２】
【表３】
2018019689.tif 000005
【０３０３】
実施例１３：ｉｎ  ｖｉｖｏ分析
ヒトリンパ腫の播種性Ｄａｕｄｉ−ルシフェラーゼモデルについて、Ａｂ１９及びＡｂ７９のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性を試験した。Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得た６〜８週齢のメスＣＢ．１７  ＳＣＩＤマウスに１×１０６個のＤａｕｄｉ−Ｌｕｃ腫瘍細胞を静脈注射した。研究７日目に、パリビズマブ、Ａｂ７９、Ａｂ１９、ベンチマーク１及びベンチマーク２をマウス腹腔内に注射した。ＩＶＩＳ  Ｘｅｎｏｇｅｎ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、２１日目から毎週、生物発光イメージングを実施し、全身腫瘍組織量をモニタリングした。イメージングのために、イメージジングの１０分前にルシフェラーゼ基質（１５０ｍｇ／ｋｇ）を動物にＩＰ注射し、次いでイソフルラン下で動物を麻酔し、イメージングした。結果を図８及び９に示す。
【０３０４】
（配列表）
配列番号１（ＣＤ３８ホモ・サピエンス；ＮＰ＿００１７６６．２）
ＭＡＮＣＥＦＳＰＶＳＧＤＫＰＣＣＲＬＳＲＲＡＱＬＣＬＧＶＳＩＬＶＬＩＬＶＶＶＬＡＶＶＶＰＲＷＲＱＱＷＳＧＰＧＴＴＫＲＦＰＥＴＶＬＡＲＣＶＫＹＴＥＩＨＰＥＭＲＨＶＤＣＱＳＶＷＤＡＦＫＧＡＦＩＳＫＨＰＣＮＩＴＥＥＤＹＱＰＬＭＫＬＧＴＱＴＶＰＣＮＫＩＬＬＷＳＲＩＫＤＬＡＨＱＦＴＱＶＱＲＤＭＦＴＬＥＤＴＬＬＧＹＬＡＤＤＬＴＷＣＧＥＦＮＴＳＫＩＮＹＱＳＣＰＤＷＲＫＤＣＳＮＮＰＶＳＶＦＷＫＴＶＳＲＲＦＡＥＡＡＣＤＶＶＨＶＭＬＮＧＳＲＳＫＩＦＤＫＮＳＴＦＧＳＶＥＶＨＮＬＱＰＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧＲＥＤＳＲＤＬＣＱＤＰＴＩＫＥＬＥＳＩＩＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲＰＤＫＦＬＱＣＶＫＮＰＥＤＳＳＣＴＳＥＩ
【０３０５】
配列番号２（ＣＤ３８マカカ・ファシキュラリス（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）；ＡＡＴ３６３３０．１）
ＭＡＮＣＥＦＳＰＶＳＧＤＫＰＣＣＲＬＳＲＲＡＱＶＣＬＧＶＣＬＬＶＬＬＩＬＶＶＶＶＡＶＶＬＰＲＷＲＱＱＷＳＧＳＧＴＴＳＲＦＰＥＴＶＬＡＲＣＶＫＹＴＥＶＨＰＥＭＲＨＶＤＣＱＳＶＷＤＡＦＫＧＡＦＩＳＫＹＰＣＮＩＴＥＥＤＹＱＰＬＶＫＬＧＴＱＴＶＰＣＮＫＴＬＬＷＳＲＩＫＤＬＡＨＱＦＴＱＶＱＲＤＭＦＴＬＥＤＭＬＬＧＹＬＡＤＤＬＴＷＣＧＥＦＮＴＦＥＩＮＹＱＳＣＰＤＷＲＫＤＣＳＮＮＰＶＳＶＦＷＫＴＶＳＲＲＦＡＥＴＡＣＧＶＶＨＶＭＬＮＧＳＲＳＫＩＦＤＫＮＳＴＦＧＳＶＥＶＨＮＬＱＰＥＫＶＱＡＬＥＡＷＶＩＨＧＧＲＥＤＳＲＤＬＣＱＤＰＴＩＫＥＬＥＳＩＩＳＫＲＮＩＲＦＦＣＫＮＩＹＲＰＤＫＦＬＱＣＶＫＮＰＥＤＳＳＣＬＳＧＩ
【０３０６】
配列番号３（ＨＣＤＲ１  Ａｂ７９）
ＧＦＴＦＤＤＹＧ
【０３０７】
配列番号４（ＨＣＤＲ２  Ａｂ７９）
ＩＳＷＮＧＧＫＴ
【０３０８】
配列番号５（ＨＣＤＲ３  Ａｂ７９）
ＡＲＧＳＬＦＨＤＳＳＧＦＹＦＧＨ
【０３０９】
配列番号６（ＬＣＤＲ１  Ａｂ７９）
ＳＳＮＩＧＤＮＹ
【０３１０】
配列番号７（ＬＣＤＲ２  Ａｂ７９）
ＲＤＳ
【０３１１】
配列番号８（ＬＣＤＲ３  Ａｂ７９）
ＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳ
【０３１２】
配列番号９（重鎖  Ａｂ７９）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＮＧＧＫＴＨＹＶＤＳＶＫＧＱＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＳＬＦＨＤＳＳＧＦＹＦＧＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡ
【０３１３】
配列番号１０（軽鎖  Ａｂ７９）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＤＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＲＤＳＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬ
【０３１４】
配列番号１１（重鎖  Ａｂ１９）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＮＹＤＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤＧＳＤＫＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＹＹＹＧＦＳＧＰＳＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡ
【０３１５】
配列番号１２（軽鎖  Ａｂ１９）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＮＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＤＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＲＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬ
【０３１６】
配列番号１３（ＨＣＤＲ１  Ａｂ１９）
ＧＦＴＦＮＮＹＧ
【０３１７】
配列番号１４（ＨＣＤＲ２  Ａｂ１９）
ＩＳＹＤＧＳＤＫ
【０３１８】
配列番号１５（ＨＣＤＲ３  Ａｂ１９）
ＡＲＶＹＹＹＧＦＳＧＰＳＭＤＶ
【０３１９】
配列番号１６（ＬＣＤＲ１  Ａｂ１９）
ＮＳＮＩＧＳＮＴ
【０３２０】
配列番号１７（ＬＣＤＲ２  Ａｂ１９）
ＳＤＳ
【０３２１】
配列番号１８（ＬＣＤＲ３  Ａｂ７９）
ＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＲ
【０３２２】
配列番号１９（重鎖  Ａｂ１９）ｗ／定常（ｃｏｎｓｔａｎｔ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＮＹＤＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤＧＳＤＫＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＹＹＹＧＦＳＧＰＳＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０３２３】
配列番号２０（軽鎖  Ａｂ１９）ｗ／定常
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＮＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＤＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＲＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
【０３２４】
配列番号２１（重鎖  Ａｂ７９）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＮＧＧＫＴＨＹＶＤＳＶＫＧＱＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＳＬＦＨＤＳＳＧＦＹＦＧＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０３２５】
配列番号２２（軽鎖  Ａｂ７９）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＤＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＲＤＳＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
【０３２６】
配列番号２３（ＣＤ１５７ホモ・サピエンス；ＮＰ＿００４３２５）
ＭＡＡＱＧＣＡＡＳＲＬＬＱＬＬＬＱＬＬＬＬＬＬＬＬＡＡＧＧＡＲＡＲＷＲＧＥＧＴＳＡＨＬＲＤＩＦＬＧＲＣＡＥＹＲＡＬＬＳＰＥＱＲＮＫＮＣＴＡＩＷＥＡＦＫＶＡＬＤＫＤＰＣＳＶＬＰＳＤＹＤＬＦＩＮＬＳＲＨＳＩＰＲＤＫＳＬＦＷＥＮＳＨＬＬＶＮＳＦＡＤＮＴＲＲＦＭＰＬＳＤＶＬＹＧＲＶＡＤＦＬＳＷＣＲＱＫＮＤＳＧＬＤＹＱＳＣＰＴＳ
ＥＤＣＥＮＮＰＶＤＳＦＷＫＲＡＳＩＱＹＳＫＤＳＳＧＶＩＨＶＭＬＮＧＳＥＰＴＧＡＹＰＩＫＧＦＦＡＤＹＥＩＰＮＬＱＫＥＫＩＴＲＩＥＩＷＶＭＨＥＩＧＧＰＮＶＥＳＣＧＥＧＳＭＫＶＬＥＫＲＬＫＤＭＧＦＱＹＳＣＩＮＤＹＲＰＶＫＬＬＱＣＶＤＨＳＴＨＰＤＣＡＬＫＳＡＡＡＡＴＱＲＫＡＰＳＬＹＴＥＱＲＡＧＬＩＩＰＬＦＬＶＬＡＳＲＴＱＬ
【０３２７】
配列番号２４（ベンチマーク１；重鎖可変領域）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＮＳＦＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＤＫＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０３２８】
配列番号２５（ベンチマーク１；軽鎖可変領域）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ
【０３２９】
配列番号２６（ベンチマーク２；重鎖可変領域）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＡＫＰＧＴＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴＩＹＰＧＤＧＤＴＧＹＡＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＫＴＶＹＭＨＬＳＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＤＹＹＧＳＮＳＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
【０３３０】
配列番号２７（ベンチマーク２；軽鎖可変領域）
ＤＩＶＭＴＱＳＨＬＳＭＳＴＳＬＧＤＰＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＶＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＳＡＳＹＲＹＩＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＡＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＰＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ
【０３３１】
配列番号２８（重鎖  Ａｂ４３）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＲＩＮＳＤＧＳＳＴＳＹＡＤＳＭＫＧＱＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＹＹＹＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０３３２】
配列番号２９（軽鎖  Ａｂ４３）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＧＳＳＮＩＧＹＫＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＬＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴ
ＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
【０３３３】
配列番号３０（重鎖  Ａｂ７２）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＳＮＹＤＦＷＳＧＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０３３４】
配列番号３１（軽鎖  Ａｂ７２）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＫＴＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＡＡＲＳＴＮＩＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
【０３３５】
配列番号３２（重鎖  Ａｂ１１０）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＩＩＹＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＡＴＷＧＧＡＴＨＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０３３６】
配列番号３３（軽鎖  Ａｂ１１０）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＲＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＴＷＤＤＳＬＮＧＶＬＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
【０３３７】
配列番号３４（重鎖  Ａｂ１９）ｗ／定常
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＮＹＤＭＴＷＶＲＱＡ
ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤＧＳＤＫＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＹＹＹＧＦＳＧＰＳＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０３３８】
配列番号３５（軽鎖  Ａｂ１９）ｗ／定常
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＮＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＤＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＲＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
【０３３９】
本発明の実施態様を明確にするために、詳細に参照により本発明を説明するが、添付の特許請求の範囲に定義される発明の範囲から逸脱することなく、改作及び改変が可能であることは明らかである。より詳細には、特に有利な例として、本明細書において本発明のいくつかの側面を特定するが、本発明は、これらの特定の本発明の側面により限定される必要はないことが企図される。
【図１】
2018019689.tif 000006
【図２】
2018019689.tif 000007
【図３】
2018019689.tif 000008
【図４】
2018019689.tif 000009
【図５】
2018019689.tif 000010
【図６】
2018019689.tif 000011
【図７】
2018019689.tif 000012
【図８】
2018019689.tif 000013
【図９】
2018019689.tif 000014
【図１０】
2018019689.tif 000015
【図１１】
2018019689.tif 000016
【図１１Ａ】
2018019689.tif 000017
【図１１Ｂ】
2018019689.tif 000018
【図１１Ｃ】
2018019689.tif 000019
【図１１Ｄ】
2018019689.tif 000020
【図１１Ｅ】
2018019689.tif 000021
【図１２】
2018019689.tif 000022
【図１３】
2018019689.tif 000023
【図１４】
2018019689.tif 000024
【図１５】
2018019689.tif 000025
【配列表】
2018019689000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成29年8月22日(2017.8.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書又は図面に記載の発明。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１６】
配列番号１３（ＨＣＤＲ１  Ａｂ１９）
ＧＦＴＦＮＮＹＤ
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2018019689000001.app
【外国語明細書】
2018019689000001.pdf
2018019689000002.pdf
2018019689000003.pdf
2018019689000004.pdf