(57)【要約】【課題】新規なＴｏｌｌ様受容体２活性化用組成物の提供。【解決手段】本発明によれば、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌またはその処理物を有効成分として含んでなる、Ｔｏｌｌ様受容体２（ＴＬＲ２）活性化用組成物が提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌またはその処理物を有効成分として含んでなる、Ｔｏｌｌ様受容体２（ＴＬＲ２）活性化用組成物。
【請求項２】
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌が、ビフィドバクテリウム・ブレーベＪＣＭ１１９２Ｔ株に対して２倍以上のＴＬＲ２活性化能を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌が、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＯＬＢ６３７８菌株（Bifidobacterium bifidum OLB6378、受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−３１）である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
腸管バリア機能改善に用いるための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
腸管バリア機能改善により治療、予防または改善することができる疾患または症状の治療、予防および／または改善に用いるための、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
疾患が、壊死性腸炎、潰瘍性大腸炎、持続性下痢、アレルギー疾患または食物過敏症である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
新生児向け、乳幼児向け、小児向けおよび／または高齢者向けである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌が、加熱処理された菌体である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｔｏｌｌ様受容体２活性化用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体の免疫システムには先天的な自然免疫と後天的に生じる獲得免疫の２種類がある。ヒト等の高等生物にしか存在しない獲得免疫に対して、自然免疫は昆虫からヒトまで広く保存された免疫機構である。自然免疫を担当する細胞（マクロファージや樹状細胞等）は外界からの病原細菌等が侵入すると、すばやくこれを探知し、食作用等の直接的な攻撃に加え、サイトカイン等の警戒シグナルを発して獲得免疫系を活性化するといった感染防御の第一段階として機能している。この様な一連の免疫反応システムにおいて最初のきっかけとなる細菌を発見する役目を果たしている受容体タンパクがＴｏｌｌ様レセプター（Toll-like receptor）（本明細書中、「ＴＬＲ」という）である。
【０００３】
ＴＬＲは現在までにヒトにおいて１０種類が同定されており、それぞれのＴＬＲは認識する分子構造が異なるものと考えられている。その中でＴＬＲ２は、ペプチドグリカン（ＰＧＮ）、リポテイコ酸、微生物のリポタンパク質およびザイモサンのような微生物の細胞壁成分に反応した細胞シグナル伝達を媒介することが知られている（非特許文献１）。例えば、ＴＬＲ２の活性化により、腸管にタイトジャンクションの保護強化を通じて、腸管バリア機能を改善できることが確認されている（非特許文献２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Wetzler, L.M. Vaccine 21, S55-S60 (2003)
【非特許文献２】Elke Cario et al., GASTROENTEROLOGY 127(1), pp224-238(2004)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
このようにＴＬＲ２を経由した細胞シグナル伝達は生体免疫系をはじめとする様々な生体内反応を司っている。本発明者らは、ＴＬＲ２を経由した細胞シグナル伝達系の有用性に着目し、ＴＬＲ２を活性化することができる食品素材について鋭意検討を行った。その結果、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌（特に、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＯＬＢ６３７８菌株）に強力なＴＬＲ２活性化能があることを見いだした。
【０００６】
すなわち、本発明は、新規なＴｏｌｌ様受容体２活性化用組成物およびＴｏｌｌ様受容体２活性化剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明によれば以下の発明が提供される。
［１］ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌（以下、「本発明のビフィズス菌」ということがある）またはその処理物を有効成分として含んでなる、ＴＬＲ２活性化用組成物およびＴＬＲ２活性化剤（以下、「本発明の組成物および用剤」ということがある）。
［２］ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌が、ビフィドバクテリウム・ブレーベＪＣＭ１１９２Ｔ株に対して２倍以上のＴＬＲ２活性化能を有する、上記［１］に記載の組成物。
［３］ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌が、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＯＬＢ６３７８菌株（Bifidobacterium bifidum OLB6378、受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−３１）である、上記［１］または［２］に記載の組成物。
［４］腸管バリア機能改善に用いるための、上記［１］〜［３］のいずれかに記載の組成物。
［５］腸管バリア機能改善により治療、予防または改善することができる疾患または症状の治療、予防および／または改善に用いるための、上記［４］に記載の組成物。
［６］疾患が、壊死性腸炎、潰瘍性大腸炎、持続性下痢、アレルギー疾患または食物過敏症である、上記［５］に記載の組成物。
［７］新生児向け、乳幼児向け、小児向けおよび／または高齢者向けである、上記［１］〜［６］のいずれかに記載の組成物。
［８］ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌が、加熱処理された菌体である、上記［１］〜［７］のいずれかに記載の組成物。
【０００８】
本発明の組成物および用剤によれば、摂取対象者および投与対象者において、ＴＬＲ２の活性化とそれに関連する作用効果が期待できる。本発明の有効成分であるビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌は、人類が長年摂取してきた食品素材に含まれる菌であることから、本発明の組成物および用剤は、副作用がない状態でＴＬＲ２の活性化を図ることができる点で有利である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ビフィドバクテリウム・ビフィダムＯＬＢ６３７８菌株および他の供試菌株のＴＬＲ２活性化能（ＳＥＡＰ濃度）の測定結果（平均値±標準偏差、検出限界１５．６ｎｇ／ｍＬ）を示した図である。
【発明の具体的説明】
【００１０】
本発明の有効成分は、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）に属する菌である。本発明においては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌が、強力なＴＬＲ２活性化能を有することを特徴とする。すなわち、本発明においては、汎用菌株であるビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）ＪＣＭ１１９２Ｔ菌株のＴｏｌｌ様受容体２活性化能よりも高いＴｏｌｌ様受容体２活性化能を有する、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌を有効成分として使用することができ、好ましくはビフィドバクテリウム・ブレーベＪＣＭ１１９２Ｔ菌株に対して２倍以上（好ましくは２．２倍以上、より好ましくは２．４倍以上）のＴｏｌｌ様受容体２活性化能を有する、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌を有効成分として使用することができる。なお、ビフィドバクテリウム・ブレーベＪＣＭ１１９２Ｔ菌株は理化学研究所・バイオリソースセンター・微生物材料開発室から入手することができる。また、ＴＬＲ２活性化能の程度は、ＴＬＲ２活性化により分泌されるアルカリフォスファターゼ（ＳＥＡＰ）の濃度を指標にして評価することができる。
【００１１】
本発明の好ましい態様においては、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌として、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＯＬＢ６３７８菌株（Bifidobacterium bifidum OLB6378、受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−３１）を用いることができる。この菌株は独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託されている。以下に寄託を特定する内容を記載する。
【００１２】
（１）寄託機関名：独立行政法人製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター
（２）連絡先：〒２９２−０８１８    千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８（電話番号０４３８−２０−５５８０）
（３）受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−３１
（４）識別のための表示：Bifidobacterium bifidum OLB6378
（５）原寄託日：２００４年１０月２６日
（６）ブダペスト条約に基づく寄託への移管日：２００６年１月１８日
【００１３】
ビフィドバクテリウム・ビフィダムＯＬＢ６３７８株は、ヒト乳幼児糞便由来のグラム陽性偏性嫌気性桿菌である。ＢＬ寒天培地（栄研化学社製）平板上に本菌を塗布し、ＡｎａｅｒｏＰａｃｋ・ケンキ（三菱ガス化学社製）使用による嫌気状態にて３７℃４８時間培養すると、不透明な円形半球状の光沢を有するコロニーを形成する。また、Bifidobacterium bifidumの特異的プライマー（腸内フローラシンポジウム８、腸内フローラの分子生物学的検出・同定、光岡知足、松本隆広）を用いたＰＣＲで増幅産物が認められる。また、ガラクトース、グルコース、フルクトース、ラクトース、ゲンチオビオースに対する発酵性を有する。
【００１４】
本発明のビフィズス菌を培養するための培地としてはビフィズス菌の培地に通常用いられる培地を用いることができる。すなわち本発明に利用できる培地は特に限定されず、主炭素源のほか窒素源、無機物その他の栄養素を所定範囲の量で含有する培地であれば、いずれの培地も使用可能である。炭素源としてはラクトース、グルコース、スクロース、フラクトース、澱粉加水分解物、廃糖蜜等が使用菌の資化性に応じて使用できる。窒素源としてはカゼインの加水分解物、ホエイタンパク質加水分解物、大豆タンパク質加水分解物等の有機窒素含有物が使用できる。この他に増殖促進剤として肉エキス、魚肉エキス、酵母エキス等を用いることができる。
【００１５】
本発明のビフィズス菌の培養は嫌気条件下で行うことが好ましく、炭素ガスを通気しながら培養する方法等の公知の手法を適用することができるが、通常用いられる液体静置培養等による微好気条件や、あるいはバッチ培養条件下等他の手法を用いて培養することもできる。培養温度は２５〜５０℃、特に３５〜４２℃が好ましいが、本発明はこれに限定されず、菌が生育できる温度であれば他の温度条件でもよい。培養中の培地のｐＨは、６．０〜７．０に維持することが好ましいが、菌が生育することができる時間であれは他のｐＨ条件であってもよい。培養時間は好ましくは３〜４８時間、さらに好ましくは８〜２４時間、特に好ましくは１０〜２０時間であるが、菌が生育することができる時間であれは他の培養時間であってもよい。
【００１６】
得られた菌体は以下のような処理を行った処理物として本発明の組成物および用剤に含有させることができる。本発明のビフィズス菌の処理物としては、培養終了後のままの培養物、培養終了後に遠心分離または濾別等をおこなった培養物、それらの濃縮物、さらにペースト状に加工したもの、各種方法による乾燥物（噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物等）、媒体に分散させた液状物、希釈剤による希釈物、加熱処理した加熱処理物（加熱処理菌体）、紫外線および／または放射線により処理した光照射処理物（光照射処理菌体）、薬剤（殺菌剤、抗菌剤、静菌剤）により処理した薬剤処理物（薬剤処理菌体）、乾燥物をミル等で破砕した破砕物、等が含まれる。遠心分離、濾別、濃縮は通常用いられている手法で行う。また乾燥は、例えば真空乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥、ドラム乾燥等により行うことができる。本明細書ではこれらを、単に「処理物」と略記することがある。
【００１７】
上記の方法で得られたビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌およびその処理物は、そのまま生菌で、あるいは加熱処理菌とした後、破砕あるいは未粉砕した処理物として、単独または複数種の混合物として、本発明の組成物および用剤に含有させることができる。生菌であれば、摂取または投与後に腸内で増殖し、定着する等の効果が期待でき、さらには本発明の効果が持続的に奏されることも期待できる。また、加熱処理した菌体（例えば、加熱処理済みの菌体の懸濁（分散）液より０．１ｍＬサンプリングし、これをビフィズス菌の生育できる培地を含むシャーレに塗沫し、嫌気条件下で培養しても菌の集落（コロニー）が形成されない形態のもの）であれば、酸素の存在下で生存しづらいというビフィズス菌の特性を考慮する必要がなく、本発明の組成物および用剤として応用範囲が拡がるため、好ましい。
【００１８】
本発明で、加熱処理した本発明のビフィズス菌を用いる場合には、加熱処理の条件としては、例えば、加熱温度は通常６０〜３００℃、好ましくは６０℃〜２００℃、より好ましくは６０〜１５０℃、さらに好ましくは６０〜１４０℃、さらに好ましくは６０〜１３０℃、さらに好ましくは６０〜１２０℃、さらに好ましくは６０〜１１０℃、さらに好ましくは６０〜１００℃、さらに好ましくは７０〜１００℃、さらに好ましくは８０〜１００℃、特に好ましくは８５〜９５℃である。加熱処理の条件として６０℃以上とすることで、菌の栄養細胞が殺菌されるため、好ましい。また、加熱処理の条件として３００℃以下とすることで、菌が炭化せずに残存するため、好ましい。
【００１９】
また、加熱処理の時間は、例えば、０．０１〜１２０分間、好ましくは０．０１５〜６０分間、より好ましくは０．０２〜４０分間、さらに好ましくは０．０２５〜３０分間、さらに好ましくは０．０３〜２５分間、特に好ましくは０．０３〜２０分間である。加熱処理の時間を０．１分間以上とすることで、ビフィズス菌の栄養細胞が殺菌されるため、好ましい。また、加熱処理の時間を１２０分間以下とすることで、熱変性を抑えて栄養細胞の殺菌が効率よく行える点から好ましい。
【００２０】
最適な加熱処理の時間を、低温域（６０〜１００℃）での加熱処理においては、例えば、０．２〜１２０分間、好ましくは０．２〜６０分間、より好ましくは０．２〜４０分間、さらに好ましくは０．２〜３０分間、さらに好ましくは０．２〜２５分間、特に好ましくは０．２〜２０分間とすることができる。また、最適な加熱処理の時間を、高温域（１００〜３００℃）での加熱処理においては、例えば、０．０１〜０．５分間、好ましくは０．０１５〜０．５分間、より好ましくは０．０２〜０．５分間、さらに好ましくは０．０２５〜０．５分間、さらに好ましくは０．０３〜０．５分間、特に好ましくは０．０３〜０．５分間である。例えば、加熱処理は９０℃で１５分間の条件で行う。
【００２１】
加熱処理方法は、特に限定されない。例えば得られた菌体をプレート式殺菌機、チューブラー式殺菌機、直接加熱式殺菌機、ジャケット付きタンク等の加熱殺菌装置を用いて、所定の条件で加熱することができる。
【００２２】
本発明の組成物および用剤は、本発明のビフィズス菌またはその処理物単独で提供することができ、あるいは、本発明のビフィズス菌またはその処理物と他の成分とを混合して提供することもできる。本発明の組成物および用剤における本発明のビフィズス菌の配合量は、その目的、用途、形態、剤型、症状、体重等に応じて任意に定めることができ、本発明はこれに限定されないが、その含量としては、全体量に対して、０．１〜９０％（ｗ／ｗ）の含量で配合することができ、さらに好ましくは０．１〜５０％（ｗ／ｗ）の含量で配合することができる。本発明においては、本発明の用剤を本発明のビフィズス菌またはその処理物からなるものとし、本発明の組成物を本発明のビフィズス菌またはその処理物と他の成分とを含んでなるものとすることができる。
【００２３】
本発明のビフィズス菌およびその処理物はＴＬＲ２を活性化することができるが、ＴＬＲ２活性化により、腸管タイトジャンクションの保護を通じて、腸管バリア機能を改善することができる（非特許文献２参照）。従って、本発明の組成物および用剤は、ＴＬＲ２活性化を通じて腸管バリア機能の改善を図ることができる。すなわち、本発明によれば、本発明のビフィズス菌またはその処理物を有効成分として含んでなる、腸管バリア機能改善用組成物および腸管バリア機能改善剤が提供される。
【００２４】
ここで、「腸管バリア機能」とは、食物抗原、食物とともに腸に入ってくる細菌およびウイルス、腸内細菌並びにこれらが産生する有害物質等から腸を守る機能のことをいう。また、「腸管バリア機能改善」は、「腸管バリア機能の回復」および「腸管バリア透過性の亢進阻害」を含む意味で用いられるものとする。「腸管バリア機能改善」はさらに、低下した腸管バリア機能を高めること、バリア機能の低下を抑制すること、正常な腸管が持つバリア機能をさらに高めることを含む意味で用いられるものとする。
【００２５】
本発明において、「腸管のバリア機能の回復」とは、腸管における透過性が、何らかの原因により正常の範囲を超えて病的若しくは望ましくない程度に亢進した状態からの回復を意味し、正常な状態に戻すことのみならず、質的に正常な状態に近づける意味で用いられる。また、回復には、腸管における透過性が、何らかの原因により正常の範囲を超えて病的若しくは望ましくない程度に亢進した状態から回復するまでの回復期間を短くする回復の促進、言い換えるならば、通常の食品を摂取している場合に比べて、つまり自然治癒よりも早期に正常な状態に回復させることをも含む意味で用いられる。
【００２６】
また、本発明において、「腸管バリアの透過性の亢進阻害」とは、外因性あるいは内因性の原因により腸管におけるバリア機能が破壊され、腸管バリアの透過性が正常な状態から病的な状態になるのを予防若しくは抑制することを意味し、その透過性を正常な状態に維持することをも含む意味で用いられる。本発明でいう腸管バリアの透過性の亢進には、上皮細胞のみならず、腸管粘膜等の他の腸管バリアを構成する生体機構にも関連した腸管バリアの破壊・破綻・衰弱・低下が含まれる。
【００２７】
本発明のビフィズス菌およびその処理物は、下痢症の改善、便秘症の改善、腸内の有害細菌の増殖抑制、ビタミンＢ群の産生、乳糖の分解による消化吸収の促進等の作用を有することが知られている。従って、本発明の組成物および用剤は、ＴＬＲ２の活性化とそれに関連する作用効果に加えて、これらの作用効果も期待できる。
【００２８】
上記の通り、本発明のビフィズス菌およびその処理物はＴＬＲ２を活性化することができ、ひいては腸管バリア機能を改善することができる。ここで、腸管バリア機能の破綻あるいは低下により、壊死性腸炎、潰瘍性大腸炎、持続性下痢、アレルギー疾患および食物過敏症等を発症することが知られている（Guamer F et al., Eur J Clin Nutr,56(Suppl 4),S34-38(2002)等参照）。従って、本発明の組成物および用剤は、腸管バリア機能改善により治療、予防または改善することができる疾患または症状の治療、予防および／または改善に用いることができる。すなわち、本発明によれば、本発明のビフィズス菌またはその処理物を有効成分として含んでなる、腸管バリア機能改善により治療、予防または改善することができる疾患または症状の治療、予防および／または改善用組成物並びに同疾患または症状の治療、予防および／または改善剤が提供される。腸管バリア機能改善により治療、予防または改善することができる疾患または症状としては、壊死性腸炎、潰瘍性大腸炎、持続性下痢、アレルギー疾患および食物過敏症等が挙げられる。
【００２９】
本発明の組成物および用剤並びに本発明の治療剤、予防剤および改善剤は医薬品、医薬部外品、食品、飼料等の形態で提供することができ、下記の記載に従って実施することができる。
【００３０】
本発明のビフィズス菌およびその処理物は、ヒトおよび非ヒト動物に経口投与することができる。経口剤としては、顆粒剤、散剤、錠剤（糖衣錠を含む）、丸剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤が挙げられる。これらの製剤は、当分野で通常行われている手法により、薬学上許容される担体を用いて製剤化することができる。薬学上許容される担体としては、賦形剤、結合剤、希釈剤、添加剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられる。本発明では、経口剤は胃では溶けず腸で溶けるように腸溶性製剤として提供してもよく、例えば、カプセル剤として提供するか、あるいは錠剤等の表面を腸溶性フィルムでコーティングすることができる。
【００３１】
本発明のビフィズス菌およびその処理物は、ヒトおよび非ヒト動物に経管投与、経鼻管投与、点滴、座薬等の経口投与以外の体内への投与も本発明の組成物および用剤の形状に応じて可能である。例えば、本発明のビフィズス菌またはその処理物を含む粘性を有する液状の組成物、または、本発明のビフィズス菌またはその処理物を含む半固形状の組成物とすることで、咀嚼や嚥下の機能が低下し、経口摂取ないしは経口投与ができないヒトおよび非ヒト動物に対しても投与することができる。本発明の組成物および用剤を経口摂取以外で摂取させるか、あるいは投与することにより、咀嚼や嚥下の機能が加齢等により低下したとしても、これらのヒトおよび非ヒト動物のＴＬＲ２の活性化が期待できる。
【００３２】
本発明のビフィズス菌およびその処理物は、ヒトおよび非ヒト動物に経口摂取させることができる。本発明のビフィズス菌およびその処理物を経口摂取させる場合には、単離、精製または粗精製された形態のものであっても、本発明のビフィズス菌またはその処理物を含む食品あるいは食品の原料の形態であってもよい。
【００３３】
本発明のビフィズス菌およびその処理物を食品として提供する場合には、本発明のビフィズス菌またはその処理物をそのまま食品に含有させることができ、該食品は本発明のビフィズス菌またはその処理物を有効量含有した食品である。ここで、本発明のビフィズス菌およびその処理物を「有効量含有した」とは、個々の食品において通常喫食される量を摂取した場合に後述するような範囲で本発明のビフィズス菌およびその処理物が摂取されるような含有量をいう。また「食品」とは、健康食品、機能性食品、保健機能食品（例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品）、特別用途食品（例えば、幼児用食品、妊産婦用食品、病者用食品）を含む意味で用いられる。
【００３４】
「食品」の形態は特に限定されるものではなく、例えば、飲料や流動食のような液状の形態であっても、ペースト状、半液体、ゲル状の形態であっても、固形、粉末の形態であってもよい。また、液状、固形、粉末等の形態を問わず、本発明のビフィズス菌およびその処理物は、各種食品（牛乳、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、調製粉乳、流動食、特別用途食品、病者用食品、栄養食品、冷凍食品、加工食品その他の市販食品等）に添加し、これを摂取させてもよい。また、栄養組成物の使用形態が粉末の場合、噴霧乾燥、凍結乾燥等の手段を用いることにより製造することができる。
【００３５】
本発明のビフィズス菌またはその処理物はまた、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等とを混合した組成物として提供してもよい。タンパク質としては、例えば、全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ粉、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）、ホエイタンパク質分離物（ＷＰＩ）、α−カゼイン、β−カゼイン、κ−カゼイン、β−ラクトグロブリン、α−ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、これら加水分解物；バター、乳性ミネラル、クリーム、ホエイ、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖等の各種乳由来成分が挙げられる。また、糖質としては、例えば、糖類、加工澱粉（デキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等）、食物繊維が挙げられる。脂質としては、例えば、ラード、魚油等、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の動物性油脂；パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂が挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンＡ、カロチン類、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ群、ビタミンＥ、ビタミンＫ群、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸が挙げられる。ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレンが挙げられる。有機酸としては、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸が挙げられる。医薬品や食品として使用実績のある副作用のないものはいずれも適用可能である。またこれらの成分は、２種以上を組み合わせて使用することができる。
【００３６】
本発明の組成物および用剤の医薬品または食品としての１日当たりの摂取量あるいは投与量は、摂取対象者の病態、年齢、症状、体重、用途や、本発明の組成物および用剤が栄養の唯一の物であるか等によって異なるため、特に限定されない。ＴＬＲ２の活性化や、それに関連する作用効果を目的とする摂取および投与の場合、例えば、成人１日当たりの本発明のビフィズス菌およびその処理物の摂取または投与量は、例えば、１日当たり１０８個以上、１０８〜１０１２個、５×１０８〜５×１０１１個、１０９〜１０１１個、５×１０９〜５×１０１０個、６×１０９〜４×１０１０個、７×１０９〜３×１０１０個とすることができ、好ましくは、８×１０９〜２×１０１０個、さらに好ましくは９×１０９〜２×１０１０個とすることができる。摂取量および投与量は、摂取対象者および投与対象者の担当医により決定してもよい。
【００３７】
本発明の組成物および用剤は、副作用の恐れが少ないため、体力が十分に備わっていない年齢層向けの組成物および用剤として提供することができる点で有利である。本発明の組成物および用剤は、例えば、新生児（特に、生後間もない新生児）向け、乳幼児向け、小児向けおよび／または高齢者向けの組成物および用剤として提供することができる。ここで「新生児」とは、生後間もない乳児のことをいい、健常新生児、未熟児、早産児および低出生体重児を含む意味で用いられる。また、「新生児」とは、新生児期にある子供を指し、新生児期とは出生後の間もない時期を意味し、ヒトの場合、通常では出生後から４週間以内が新生児期にあたる。
【００３８】
本発明の組成物および用剤は、ＴＬＲ２の活性化およびそれに関連する作用効果の発揮に有効な１日分の摂取量の組成物および用剤で提供することができる。この場合、本発明の組成物および用剤は、本発明のビフィズス菌およびその処理物の１日分の有効摂取量を摂取できるように包装されていてもよく、１日分の有効摂取量が摂取できる限り、包装形態は一包装であっても、複数包装であってもよい。包装形態で提供する場合、１日分の有効摂取量が摂取できるように摂取量に関する記載が包装になされているか、または該記載がなされた文書を一緒に提供することが望ましい。また、１日分の有効摂取量を複数包装で提供する場合には、摂取の便宜上、１日分の有効摂取量の複数包装をセットで提供することもできる。
【００３９】
本発明の組成物および用剤を提供するための包装形態は、一定量を規定する形態であれば特に限定されず、例えば、包装紙、袋、ソフトバッグ、紙容器、缶、ボトル、カプセル等の収容可能な容器等が挙げられる。
【００４０】
本発明の組成物および用剤はその効果をよりよく発揮させるために、１週間以上継続的に投与または摂取させることが好ましく、投与および摂取期間はより好ましくは２〜８週間、特に好ましくは２〜４週間である。ここで、「継続的に」とは毎日投与または摂取を続けることを意味する。本発明の組成物および用剤を包装形態で提供する場合には、継続的摂取のために一定期間（例えば、１週間）の有効摂取量をセットで提供してもよい。
【００４１】
本発明によれば、有効量のビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌若しくはその処理物またはそれを含む組成物を、それを必要としている対象に摂取させるか、あるいは投与することを含んでなる、ＴＬＲ２活性化方法が提供される。摂取または投与対象は、ヒトを含む哺乳動物であり、好ましくはヒトである。本発明の方法は、本発明の組成物および用剤に関する記載に従って実施することができる。
【００４２】
本発明によればまた、ＴＬＲ２活性化用組成物の製造のための、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌若しくはその処理物またはそれを含む組成物の使用が提供される。本発明によればさらに、ＴＬＲ２活性化剤の製造のための、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌若しくはその処理物またはそれを含む組成物の使用が提供される。本発明によればさらにまた、ＴＬＲ２活性化のための、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌若しくはその処理物またはそれを含む組成物の使用が提供される。本発明によればさらにまた、ＴＬＲ２活性化に使用するための、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属する菌若しくはその処理物またはそれを含む組成物が提供される。本発明の使用並びに本発明のビフィズス菌およびその処理物並びにそれらを含む組成物は、本発明の組成物および用剤に関する記載に従って実施することができる。
【実施例】
【００４３】
以下の例に基づき本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【００４４】
例１：ビフィドバクテリウム・ビフィダムＯＬＢ６３７８株のＴＬＲ２活性化能の評価
ビフィドバクテリウム・ビフィダムＯＬＢ６３７８株（受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−３１）のＴＬＲ２活性化能を、ビフィドバクテリウム・ブレーベＪＣＭ１１９２Ｔ株（基準株）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）菌株、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）菌株と比較した。
【００４５】
ＴＬＲ２活性化能を評価するための各供試菌株検体は以下のように作成した。すなわち、各供試菌株をGAM Broth “Nissui”（日水製薬社製、製品コード05422）を用いて嫌気条件下の３７℃で１８時間培養した。菌培養液（５００ｍＬ）を遠心分離（２，０００×Ｇ、１５分、４℃）し、得られた沈澱を生理食塩水で再懸濁した（洗浄工程）。この洗浄工程を、生理食塩水で２回、蒸留水で１回の計３回繰り返し、得られた沈澱に蒸留水を加えて２０ｍＬの菌懸濁液とした。この菌懸濁液を８０℃で３０分間加熱した後、凍結乾燥を実施し、菌体の乾燥菌末を得た。乾燥菌末を２μｇ／ｍＬの濃度で蒸留水に懸濁し、ＴＬＲ２活性化能の評価に用いた。
【００４６】
ＴＬＲ２活性化能の評価には、ＴＬＲ２／ＮＦκＢ／ＳＥＡＰの各遺伝子を導入したＨＥＫ２９３細胞であるＴＬＲ２  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ（Ｎｏｖｕｓｂｉｏ社製、型番ＮＢＰ２−２６２７４）を用いた。すなわち、ＴＬＲ２  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅを１．５×１０５個細胞／ｍＬの濃度で２５０μＬずつ４８穴プレートに播種し、４ｍＭグルタミンを含むｈｉｇｈ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ＤＭＥＭ（１０％ＦＣＳ添加）培地で２４時間培養した。その後、上記の通り調製した各供試菌株の懸濁液（２μｇ／ｍＬ）を２５０μＬずつ添加した（終濃度１μｇ／ｍＬ）。供試菌株添加２４時間後の培養上清を回収し、ＴＬＲ２  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅによって分泌されたアルカリフォスファターゼ（ＳＥＡＰ）の濃度を定量した。定量はSEAPorter Assay Kit (Novusbio社製、型番10055K)を用いて実施した。この時のＳＥＡＰ濃度を各供試菌株のＴＬＲ２活性化能の指標とした。
【００４７】
ＴＬＲ２活性化能の測定結果は図１に示される通りであった。ビフィドバクテリウム・ビフィダムＯＬＢ６３７８株は、ＴＬＲ２活性化能が他の供試菌株と比べて著しく高く、ビフィドバクテリウム・ブレーベＪＣＭ１１９２Ｔ株（基準株）に比べておよそ２．４倍高かった。
【図１】
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