(57)【要約】【課題】安全性に優れた天然物由来成分の中から、XVII型コラーゲンの産生を促進する作用を有するものを見出し、それを有効成分とするXVII型コラーゲン産生促進剤を提供する。【解決手段】本発明に係るXVII型コラーゲン産生促進剤の有効成分として、マジョラムからの抽出物を含有させる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
マジョラムからの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするXVII型コラーゲン産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、XVII型コラーゲン産生促進剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は角層、表皮、基底膜及び真皮から構成されている。基底膜は、表皮と真皮との境界部に存在し、表皮と真皮とを繋ぎ止めるだけでなく、皮膚機能の維持に重要な役割を果たしている（非特許文献１参照）。基底膜の主要骨格は、ＩＶ型コラーゲンからなる網目構造をしている。基底膜と表皮細胞との接着にはヘミデスモソームと呼ばれる構造が寄与しており、XVII型コラーゲン、インテグリンα６β４、ラミニン５等の細胞接着分子により、基底膜と表皮細胞とが接着されている。若い皮膚においては、基底膜の働きにより表皮、真皮の相互作用が恒常性を保つことで水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【０００３】
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、上記細胞接着分子は分解・変質を起こし、基底膜構造が破壊される（非特許文献２，３参照）。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるから、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワの形成、きめの消失、弾力性の低下等には、基底膜成分の減少、基底膜の構造変化が関与しており、XVII型コラーゲンの産生を促進することにより、皮膚の老化症状を予防・改善することができると考えられる。
【０００４】
また、近年、毛包幹細胞に発現するXVII型コラーゲンが毛包幹細胞の維持に必須であり、さらに毛包幹細胞が色素幹細胞を維持しており、XVII型コラーゲンが幹細胞の維持を介して白髪と脱毛を抑制すること、さらに加齢に伴いXVII型コラーゲンが分解されると、毛包幹細胞が幹細胞性を失って表皮角化細胞へと分化してしまい、毛包が矮小化して薄毛脱毛の原因になることなどが明らかにされ（非特許文献４，５参照）、XVII型コラーゲンと白髪、薄毛等との関係が注目されている。このような中、XVII型コラーゲンまたはその変異体を含む、脱毛抑制剤、毛髪の脱色素化抑制剤等が提案されている（特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００９−１６１５０９号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Marinkovich MP et al.，J. Cell Biol.，1992年，vol.199，pp.695-703
【非特許文献２】Lavker et al.，J. Invest. Dermatol.，1979年，vol.73，pp.59‐66
【非特許文献３】Langton AK et al.，Mech. Ageing Dev.，2016年，vol.156，pp.14-6
【非特許文献４】Tanimura S et al.，Cell Stem Cell，2011年，vol.8，pp.177-87
【非特許文献５】Matsumura H et al.，Science，2016年，vol.351，aad4395
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、安全性に優れた天然物由来成分の中から、XVII型コラーゲンの産生を促進する作用を有するものを見出し、それを有効成分とするXVII型コラーゲン産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために、本発明に係るXVII型コラーゲン産生促進剤は、マジョラムからの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、マジョラムからの抽出物を有効成分として含有させることにより、作用効果に優れ、かつ安全性の高いXVII型コラーゲン産生促進剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
本実施形態のXVII型コラーゲン発現促進剤は、マジョラムからの抽出物を有効成分として含有するものである。
【００１１】
ここで、本実施形態において「抽出物」には、上記植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１２】
本実施形態において使用する抽出原料は、マジョラム（学名：Origanum majorana）である。
【００１３】
マジョラム（Origanum majorana，別名：マヨラナ、オレガノ）は、シソ科ハナハッカ属に属する多年生草本であって、地中海沿岸、北アフリカ、西アジア等に分布しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得るマジョラムの構成部位としては、例えば、葉部、茎部、花部、蕾部、根茎部、地上部又はこれらの混合物が挙げられるが、好ましくは葉部である。
【００１４】
上記マジョラムからの抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、上記抽出原料の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１５】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用することが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００１６】
上記植物からの抽出物は、抽出原料としての上記植物を乾燥した後、そのまままたは粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することによって得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。
【００１７】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用することが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独でまたは２種以上を組み合わせて、室温または溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００１８】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本実施形態において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１９】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００２０】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を抽出溶媒として使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比が９：１〜１：９（容量比）であることが好ましく、７：３〜２：８（容量比）であることがさらに好ましい。また、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水と低級脂肪族ケトンとの混合比が９：１〜２：８（容量比）であることが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水と多価アルコールとの混合比が５：５〜１：９（容量比）であることが好ましい。
【００２１】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温または還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。
【００２２】
以上のようにして得られるマジョラムからの抽出物（以下、単に「マジョラム抽出物」ということがある。）は、優れたXVII型コラーゲン産生促進作用を有しているため、XVII型コラーゲン産生促進剤の有効成分として用いることができる。本実施形態に係るXVII型コラーゲン産生促進剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品等の幅広い用途に使用することができる。
【００２３】
本実施形態に係るXVII型コラーゲン産生促進剤は、マジョラム抽出物のみからなるものでもよいし、マジョラム抽出物を製剤化したものでもよい。
【００２４】
本実施形態に係るXVII型コラーゲン産生促進剤は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。XVII型コラーゲン産生促進剤は、他の組成物（例えば、皮膚化粧料等）に配合して使用することができるほか、錠剤、カプセル剤等として使用することができる。
【００２５】
本実施形態に係るXVII型コラーゲン産生促進剤を製剤化した場合、マジョラム抽出物の含有量は、特に限定されるものではなく、目的に応じて適宜設定することができる。
【００２６】
なお、本実施形態に係るXVII型コラーゲン産生促進剤は、必要に応じて、XVII型コラーゲン産生促進作用を有する他の天然抽出物等を、マジョラム抽出物とともに配合して有効成分として用いることができる。
【００２７】
本実施形態に係るXVII型コラーゲン産生促進剤の患者に対する投与方法としては、経口投与、静脈内投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防または治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本実施形態に係るXVII型コラーゲン産生促進剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００２８】
本実施形態に係るXVII型コラーゲン産生促進剤は、有効成分であるマジョラム抽出物が有するXVII型コラーゲン産生促進作用を通じて、XVII型コラーゲンの産生を促進することができる。これにより、基底膜構造の再構築を誘導し、しわの形成、きめの消失、弾力性の低下等の皮膚の老化症状を予防または改善することができるとともに、皮膚の損傷を治療または改善することができる。また、本実施形態に係るXVII型コラーゲン産生促進剤は、マジョラム抽出物のXVII型コラーゲン産生促進作用を通じて、毛包幹細胞や色素幹細胞を維持することができ、これにより毛髪の脱色素化（白髪）や脱毛を予防または改善することができる。ただし、本実施形態に係るXVII型コラーゲン産生促進剤は、これらの用途以外にも、XVII型コラーゲン産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００２９】
本実施形態のXVII型コラーゲン産生促進剤は、優れたXVII型コラーゲン産生促進作用を有するため、例えば、皮膚外用剤や飲食品に配合するのに好適である。この場合に、マジョラム抽出物をそのまま配合してもよいし、マジョラム抽出物から製剤化したXVII型コラーゲン産生促進剤を配合してもよい。
【００３０】
ここで、皮膚外用剤としては、その区分に制限はなく、経皮的に使用される皮膚化粧料、医薬部外品、医薬品等を幅広く含むものであり、具体的には、例えば、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、美容液、ローション、ジェル、美容オイル、パック、ファンデーション、リップクリーム、入浴剤、ヘアートニック、ヘアーローション、石鹸、ボディシャンプー等が挙げられる。
【００３１】
飲食品としては、その区分に制限はなく、経口的に摂取される一般食品、健康食品（機能性飲食品）、保健機能食品（特定保健用食品，栄養機能食品）等を幅広く含むものである。
【００３２】
また、本実施形態に係るXVII型コラーゲン産生促進剤は、優れたXVII型コラーゲン産生促進作用を有するので、これらの作用機構に関する研究のための試薬としても好適に利用することができる。
【００３３】
なお、本実施形態に係るXVII型コラーゲン産生促進剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば，マウス，ラット，イヌ，ネコ，ウシ，ブタ，サル等）に対して適用することもできる。
【実施例】
【００３４】
以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。なお、本試験例においては、被験試料としてマジョラム抽出液（丸善製薬社製）の凍結乾燥品（試料１）を使用した。
【００３５】
〔試験例１〕XVII型コラーゲン（ＣＯＬ１７Ａ１）ｍＲＮＡ発現促進作用試験
マジョラム抽出物（試料１）について、以下のようにしてＣＯＬ１７Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【００３６】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、７５ｃｍ２フラスコにて正常ヒト表皮角化細胞増殖用培地（Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２，以下「ＫＧＭ」と記載）を用い、３７℃・５％ＣＯ２の条件下にて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１５×１０4 cells／ｍＬの細胞密度となるようにＫＧＭで希釈した後、３５ｍｍシャーレに２ｍＬずつ播種し（３０×１０4 cells／２ｍＬ／シャーレ）、３７℃・５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞増殖用基礎培地（Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＢ２，以下「ＫＢＭ」と記載，上記ＫＧＭに増殖因子（ｈＥＧＦ，ＢＰＥ，インスリン）を添加していないもの）に交換し、さらに２４時間培養した。
【００３７】
２４時間培養の後、被験試料（試料１，試料濃度は下記表１を参照）を溶解したＫＢＭに交換し、３７℃・５％ＣＯ２の条件下にて２４時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ II（ニッポンジーン社製，Cat. No. 311-07361）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００３８】
この総ＲＮＡを鋳型とし、ＣＯＬ１７Ａ１および内部標準であるＧＡＰＤＨについて、ｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社製）を用いて、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製，code No. RR063A）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。ＣＯＬ１７Ａ１ ｍＲＮＡの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりＣＯＬ１７Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。
【００３９】
ＣＯＬ１７Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加での補正値
Ｂ：試料無添加での補正値
結果を表１に示す。
【００４０】
【表１】
2018108973.tif 000002
【００４１】
表１に示すように、マジョラム抽出物（試料１）は、優れたＣＯＬ１７Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【００４２】
〔試験例２〕XVII型コラーゲン産生促進作用試験
マジョラム抽出物（試料１）について、以下のようにしてXVII型コラーゲン産生促進作用を試験した。
【００４３】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、ＫＧＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２×１０5 cells/mLの細胞密度になるように、ＫＢＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【００４４】
培養終了後、培地を除去し、ＫＢＭで溶解した被験試料（試料１，試料濃度は下記表２を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、４８時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。培養終了後、培地を除去し、細胞をプレートに固定させ、細胞表面に発現したXVII型コラーゲンの量を、抗ヒトXVII型コラーゲンα１鎖ポリクローナル抗体（FLAREBIO BIOTECH社製）を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。測定結果から、下記式によりXVII型コラーゲン産生促進率（％）を算出した。
【００４５】
XVII型コラーゲン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加でのXVII型コラーゲン量
Ｂ：試料無添加でのXVII型コラーゲン量
結果を表２に示す。
【００４６】
【表２】
2018108973.tif 000003
【００４７】
表２に示すように、マジョラム抽出物（試料１）は、優れたXVII型コラーゲン産生促進作用を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
本発明に係るXVII型コラーゲン産生促進剤は、基底膜構造の再構築；皮膚の老化症状の予防または改善；皮膚損傷の治療または改善；白髪の予防；脱毛予防；などに大きく貢献できる。