(57)【要約】      （修正有）【課題】哺乳類対象において脳卒中および脳卒中の長期間の影響を治療または予防するための組成物および方法の提供。【解決手段】ホルボールエステルまたはその薬学的に許容される塩、異性体、もしくは鏡像異性体、該ホルボールエステルとの協調的治療において有効である少なくとも１つの二次または補助治療剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類対象における１つ以上の脳卒中の影響を予防または治療する方法であって、式Ｉのホルボールエステルまたはその薬学的に許容される塩、異性体、もしくは鏡像異性体の有効量を前記対象に投与することを含み、
【化１】
2018109014.tif 000033
式Ｉ
式中、Ｒ１およびＲ２が、水素、ヒドロキシル、
【化２】
2018109014.tif 000034
およびこれらの置換された誘導体からなる群から選択され、Ｒ３が、水素、
【化３】
2018109014.tif 000035
およびこの置換された誘導体である、前記方法。
【請求項２】
Ｒ１またはＲ２が、
【化４】
2018109014.tif 000036
であり、残りのＲ１またはＲ２が、
【化５】
2018109014.tif 000037
であり、Ｒ３が水素である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ホルボールエステルが、ホルボール１３−ブチレート、ホルボール１２−デカノエート、ホルボール１３−デカノエート、ホルボール１２，１３−ジアセテート、ホルボール１３，２０−ジアセテート、ホルボール１２，１３−ジベンゾエート、ホルボール１２，１３−ジブチレート、ホルボール１２，１３−ジデカノエート、ホルボール１２，１３−ジヘキサノエート、ホルボール１２，１３−ジプロピオネート、ホルボール１２−ミリステート、ホルボール１３−ミリステート、ホルボール１２，１３，２０−トリアセテート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート−２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−テトラデカノエート、ホルボール１２−チグリエート１３−デカノエート、１２−デオキシホルボール１３−アセテート、ホルボール１２−アセテート、またはホルボール１３−アセテートである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するために、式Ｉの前記ホルボールエステルとの組み合わせ製剤または協調的治療レジメンにおいて有効である少なくとも１つの二次または補助治療剤を投与することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１つの二次または補助治療剤が、協調投与プロトコールにおいて、前記対象への前記ホルボールエステルの投与と同時、投与の前、または投与の後で、前記対象に投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１つの二次または補助治療剤が、組織プラスミノーゲン活性化因子、抗凝固剤、スタチン、フィブレート、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、β遮断薬、抗血小板剤、カルシウムチャネル遮断薬、または利尿剤である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するために、式Ｉのホルボールエステルと組み合わせた外科的介入を更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記外科的介入が、頸動脈内膜剥離術、血管形成術、ステント留置術、開頭術、ペースメーカーの挿入、除細動器の埋め込み、弁置換術、冠動脈バイパス術、心臓移植、血管内コイル塞栓術、または卵円孔開存閉鎖術である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記１つ以上の脳卒中の影響が、麻痺、空間障害、判断障害、左半側無視、記憶喪失、失語症、協調および平衡の問題、嘔気、嘔吐、認知障害、知覚障害、見当識障害、同名半盲、または衝動性である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
哺乳類対象における１つ以上の脳卒中の影響を予防または治療するための組成物であって、式Ｉのホルボールエステルまたはその薬学的に許容される塩、異性体、もしくは鏡像異性体の有効量を含み、
【化６】
2018109014.tif 000038
式Ｉ
式中、Ｒ１およびＲ２が、水素、ヒドロキシル、
【化７】
2018109014.tif 000039
およびこれらの置換された誘導体からなる群から選択され、Ｒ３が、水素、
【化８】
2018109014.tif 000040
およびこの置換された誘導体である、前記組成物。
【請求項１１】
Ｒ１またはＲ２が、
【化９】
2018109014.tif 000041
であり、残りのＲ１またはＲ２が、
【化１０】
2018109014.tif 000042
であり、Ｒ３が水素である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ホルボールエステルが、ホルボール１３−ブチレート、ホルボール１２−デカノエート、ホルボール１３−デカノエート、ホルボール１２，１３−ジアセテート、ホルボール１３，２０−ジアセテート、ホルボール１２，１３−ジベンゾエート、ホルボール１２，１３−ジブチレート、ホルボール１２，１３−ジデカノエート、ホルボール１２，１３−ジヘキサノエート、ホルボール１２，１３−ジプロピオネート、ホルボール１２−ミリステート、ホルボール１３−ミリステート、ホルボール１２，１３，２０−トリアセテート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート−２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−テトラデカノエート、ホルボール１２−チグリエート１３−デカノエート、１２−デオキシホルボール１３−アセテート、ホルボール１２−アセテート、またはホルボール１３−アセテートである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するために、式Ｉの前記ホルボールエステルとの組み合わせ製剤において有効である少なくとも１つの二次または補助治療剤を更に含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの二次または補助治療剤が、組織プラスミノーゲン活性化因子、抗凝固剤、スタチン、フィブレート、抗血小板剤、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、または利尿剤である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記１つ以上の脳卒中の副次的影響が、麻痺、空間障害、判断障害、左半側無視、記憶喪失、失語症、協調および平衡の問題、嘔気、嘔吐、認知障害、知覚障害、見当識障害、同名半盲、または衝動性である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１６】
脳卒中の危険性のある哺乳類対象において脳卒中を予防する方法であって、式Ｉのホルボールエステルまたはその薬学的に許容される塩、異性体、もしくは鏡像異性体の有効量を前記対象に投与することを含み、
【化１１】
2018109014.tif 000043
式Ｉ
式中、Ｒ１およびＲ２が、水素、ヒドロキシル、
【化１２】
2018109014.tif 000044
およびこれらの置換された誘導体からなる群から選択され、Ｒ３が、水素、
【化１３】
2018109014.tif 000045
およびこの置換された誘導体である、前記方法。
【請求項１７】
Ｒ１またはＲ２が、
【化１４】
2018109014.tif 000046
であり、残りのＲ１またはＲ２が、
【化１５】
2018109014.tif 000047
であり、Ｒ３が水素である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ホルボールエステルが、ホルボール１３−ブチレート、ホルボール１２−デカノエート、ホルボール１３−デカノエート、ホルボール１２，１３−ジアセテート、ホルボール１３，２０−ジアセテート、ホルボール１２，１３−ジベンゾエート、ホルボール１２，１３−ジブチレート、ホルボール１２，１３−ジデカノエート、ホルボール１２，１３−ジヘキサノエート、ホルボール１２，１３−ジプロピオネート、ホルボール１２−ミリステート、ホルボール１３−ミリステート、ホルボール１２，１３，２０−トリアセテート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート−２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−テトラデカノエート、ホルボール１２−チグリエート１３−デカノエート、１２−デオキシホルボール１３−アセテート、ホルボール１２−アセテート、またはホルボール１３−アセテートである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するために、式Ｉの前記ホルボールエステルとの組み合わせ製剤または協調的治療レジメンにおいて有効である少なくとも１つの二次または補助治療剤を投与することを更に含み、前記二次または補助治療剤が、式Ｉの前記ホルボールエステルの投与と同時、投与の前、または投与の後に投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの二次または補助治療剤が、抗凝固剤、スタチン、フィブレート、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、抗血小板剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、または利尿剤である、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国特許仮出願第６１／５８８，１６７号、２０１２年１月１８日出願の優先権の利益を主張する米国の一般特許であり、その全体が参照として本明細書に組み込まれる。
【０００２】
追加の開示
本出願に関連する追加の開示は、「ホルボールエステルの組成物およびその使用方法」の米国特許出願第１２／０２３，７５３号、２００８年１月３１日出願、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｌ．Ｃｈａｎｇらにおいて見出すことができ、これは米国特許仮出願第６０／８９８，８１０号、２００７年１月３１日出願の優先権の利益を主張するものであり、これらのそれぞれは、その全体が全ての目的において参照として本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本発明は、一般に、脳卒中および脳卒中の影響の治療および予防におけるホルボールエステルの医薬用途に関する。
【背景技術】
【０００４】
植物は、歴史的に多くの医薬的な目的のために役立ってきた。世界保健機構（ＷＨＯ）は、世界の人口の８０％である４０億人がプライマリヘルスケアのある局面において漢方薬を現在使用していると推定する（ＷＨＯファクトシート番号１３４、２００８年１２月）。しかし、望ましい医薬効果を有する特定の化合物を植物から単離すること、およびそれを商業規模で再生することは、困難であり得る。加えて、活性化合物は植物から単離され得るが、ミネラル、ビタミン、揮発性油、グリコシド、アルカノイド、ビオフラバノイドのような他の植物部分、および他の物質は、植物が知られている活性化合物または医薬効果の機能に関与していることもあり、植物に基づいた医薬品の使用、精製、および商業化を難題にしている。
【０００５】
ホルボールは、ジテルペンのチグリアンファミリーにおける天然の植物由来有機化合物である。これは、東南アジア原産のトウダイグサ科の葉状灌木であるクロトンチグリウム（Ｃｒｏｔｏｎ  ｔｉｇｌｉｕｍ）の種に由来するクロトン油の加水分解生成物として、１９３４年に最初に単離された。ホルボールの多様なエステルは、ジアシルグリセロールおよび活性タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）を模倣すること、ならびにマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）経路を含む下流細胞シグナル伝達経路を調節するという報告された能力を含む、重要な生物学的特性を有する。加えてホルボールエステルは、キメリン、Ｒａｓ活性化因子ＲａｓＧＲＰ、および小胞刺激タンパク質Ｍｕｎｃ−１３に結合すると考えられる（Ｂｒｏｓｅ  Ｎ，Ｒｏｓｅｎｍｕｎｄ  Ｃ．，ＪＣｅｌｌ  Ｓｃｉ；１１５：４３９９−４１１（２００２））。幾つかのホルボールエステルは、核内因子カッパＢ（ＮＦ−κＢ）も誘発する。ホルボールエステルの最も重要な生理学的特性は、腫瘍プロモーターとして作用することが報告されているこれらの能力である。（Ｂｌｕｍｂｅｒｇ，１９８８；Ｇｏｅｌ，Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ２６，２７９−２８８（２００７））。
【０００６】
１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）は、ホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテート（ＰＭＡ）とも呼ばれ、複数の細胞株および初代細胞の分化および／またはアポトーシスのインデューサーとして発癌モデルに使用されるホルボールエステルである。ＴＰＡは、また、化学療法により骨髄機構が抑制されている患者において循環白血球および好中球の増加をもたらすこと（Ｈａｎ  Ｚ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９５，５３６３−５３６５（１９９８））、ならびにＭＴ−４細胞に対するＨＩＶ誘発性細胞変性効果を阻害することが報告されている。（Ｍｅｋｋａｗｙ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５３，４７−４６４（２０００））。しかし、皮膚と接触したときの腐食性反応およびその潜在的な毒性の懸念を含む多様な要因に起因して、ＴＰＡは、疾患を治療、管理、または予防する有効なツールであることが示されていない。事実、ホルボールエステルが、炎症性反応および腫瘍発生をもたらす多様な細胞応答の引き金を引くタンパク質キナーゼＣの活性化において、主要な役割を果たすので（Ｇｏｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ２６，２７９−２８８（２００７））、ホルボールエステルは、脳卒中のような炎症性反応を伴う状態の可能な治療候補から一般に除外されている。
【０００７】
心臓疾患および脳卒中は、年間におよそ１千７百万人を死亡させており、全世界の全ての死亡者のほぼ三分の一を占める。これらは、世界中の死亡および身体障害の両方の主な原因となっていることが予測され、死亡者数は、２０２０年までに２千万人を超え、２０３０年までに２千４百万人まで増加すると推定される。（Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｈｅａｒｔ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｏｋｅ，Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ２００４）。
【０００８】
先進国において冠動脈性心疾患および脳卒中に関連する３００を超える危険因子が存在するが（Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｈｅａｒｔ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｏｋｅ，Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ２００４）、全ての心血管疾患の少なくとも１／３は、喫煙、アルコールの摂取、高血圧、高コレステロール、および肥満に起因する。
【０００９】
脳卒中を管理および予防する現在の治療は、一般に、ＡＣＥ阻害剤、アスピリン、β遮断薬、および脂質低下薬物療法などの薬物療法と、ペースメーカー、埋め込み式除細動器、冠動脈ステント、人工弁、および人工心臓のような装置と、冠動脈バイパス術、バルーン血管形成術、弁修復術および置換術、心臓移植、ならびに人工心臓手術のような手術との組み合わせである。「ますます、先端技術による手法のほうが、費用はかからなくても有効な戦略よりも選択されている」（Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｈｅａｒｔ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｏｋｅ，Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ２００４）ことが、医療費の上昇を増加させ、異なる個体群の間で治療の品質に顕著な差をもたらしている。
【００１０】
しかし、先端技術および施設が利用可能であっても、脳卒中に罹患している６０％が死亡しているか、または要介護になり、毎回の脳卒中は、更なる発症の危険性を有意に増加する。「世界中で、心血管疾患およびこれらの危険因子の治療は、大部分の患者において不適切である。」（Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｈｅａｒｔ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｏｋｅ，Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ２００４）。したがって、脳卒中を治療および予防する、ならびに脳卒中により引き起こされる長期間の影響を治療または予防する新たなより有効な手段の必要性が明らかに存在する。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、ホルボールエステルを含有する組成物、およびホルボールエステルを使用する方法に関する。本明細書に記載されている組成物および方法は、脳卒中を予防および治療すること、ならびに急性虚血性事象を含む脳卒中の後遺症を管理することに有効である。
【００１２】
本明細書に記載されているホルボールエステルおよびホルボールエステルの誘導体を使用して予防または治療され得る脳卒中の影響には、麻痺、空間障害、判断障害、左半側無視、記憶喪失、失語症、協調および平衡の問題、嘔気、嘔吐、認知障害、知覚障害、見当識障害、同名半盲、ならびに衝動性が含まれるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、ホルボールエステルおよびホルボールエステルの誘導体の使用は、初回およびその後の脳卒中が生じることを予防し得る。
【００１３】
治療の成功は、脳卒中の重篤度もしくは後遺症の低減、脳卒中の影響の減少もしくは排除、個体が脳卒中を起こしやすくする危険因子の減少、および／またはその後の脳卒中を含む脳卒中の数もしくは重篤度の減少のような、従来の方法に従って決定される。
【００１４】
別の実施形態において、本明細書に記載されているホルボールエステルおよびホルボールエステルの誘導体を使用して、細胞シグナル伝達経路を調節することができる。そのような調節は、多様な結果を有することができ、例えば、幾つかの実施形態において、ホルボールエステルおよびホルボールエステルの誘導体を含有する組成物は、哺乳類対象においてＴｈ１サイトカインの放出を変えることができる。更なる実施形態において、ホルボールエステルおよび／またはホルボールエステルの誘導体を含有する組成物は、哺乳類対象において、インターロイキン２（ＩＬ−２）の放出を変えることができる。追加の実施形態において、ホルボールエステルおよび／またはホルボールエステルの誘導体を含有する組成物は、哺乳類対象において、インターフェロンの放出を変えることができる。なお別の実施形態において、ホルボールエステルおよび／またはホルボールエステルの誘導体を含有する組成物は、ＥＲＫリン酸化の速度を変えることができる。
【００１５】
本発明は、下記の式Ｉのホルボールエステルを含有する組成物を使用して、脳卒中を治療および予防するための、細胞シグナル伝達経路を調節するための、ならびに／または脳卒中の後遺症を管理、治療、および予防するための新規で驚くほど有効な方法および組成物を提供することにより、前述の目的を達成し、追加の目的および利点を満たし、
【化１】
2018109014.tif 000002
式Ｉ
式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素、ヒドロキシル、
【化２】
2018109014.tif 000003
（ここでアルキル基は、１〜１５個の炭素原子を含有する）、
【化３】
2018109014.tif 000004
（ここで低級アルケニル基は、１〜７個の炭素原子を含有する）、
【化４】
2018109014.tif 000005
およびこれらの置換された誘導体であり得る。Ｒ３は、独立して、水素または
【化５】
2018109014.tif 000006
およびこの置換された誘導体であり得る。本発明の方法および組成物は、式Ｉの組成物の任意の薬学的に許容される塩、鏡像異性体、異性体、多形体、プロドラッグ、水和物、および溶媒和物を更に含む。
【００１６】
幾つかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、水素以外であり、Ｒ３は、水素または
【化６】
2018109014.tif 000007
およびこの置換された誘導体である。別の実施形態において、Ｒ１またはＲ２のいずれかは、
【化７】
2018109014.tif 000008
であり、残りのＲ１またはＲ２は
【化８】
2018109014.tif 000009
（ここで低級アルキルは、１〜７個の炭素のものである）であり、Ｒ３は、水素である。
【００１７】
本明細書の式Ｉの式のアルキル、アルケニル、フェニル、およびベンジル基は、非置換であり得、またはハロゲン、好ましくは、塩素、フッ素もしくは臭素、ニトロ、アミノ、および／または同種のラジカルにより置換され得る。
【００１８】
本明細書に記載されている方法および組成物に使用される例示的なホルボールエステル組成物は、下記の式ＩＩの１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）である。
【化９】
2018109014.tif 000010
式ＩＩ
【００１９】
式Ｉの有用なホルボールエステル、ならびに本発明の製剤および方法の範囲内の関連化合物および誘導体には、前記化合物の他の薬学的に許容される活性塩、ならびに前記化合物の活性異性体、鏡像異性体、多形体、グリコシル化誘導体、溶媒和物、水和物、および／またはプロドラッグが含まれるが、これらに限定されない。本発明の組成物および方法の範囲内で使用されるホルボールエステルの例示的な形態には、ホルボール１３−ブチレート、ホルボール１２−デカノエート、ホルボール１３−デカノエート、ホルボール１２，１３−ジアセテート、ホルボール１３，２０−ジアセテート、ホルボール１２，１３−ジベンゾエート、ホルボール１２，１３−ジブチレート、ホルボール１２，１３−ジデカノエート、ホルボール１２，１３−ジヘキサノエート、ホルボール１２，１３−ジプロピオネート、ホルボール１２−ミリステート、ホルボール１３−ミリステート、ホルボール１２−ミリステート−１３−アセテート（ＴＰＡまたはＰＭＡとしても知られている）、ホルボール１２，１３，２０−トリアセテート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート−２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−テトラデカノエート、ホルボール１２−チグリエート１３−デカノエート、１２−デオキシホルボール１３−アセテート、ホルボール１２−アセテート、およびホルボール１３−アセテートが含まれるが、これらに限定されない。
【００２０】
本発明の方法に従った式Ｉのホルボールエステルまたは式Ｉのホルボールエステルの誘導体、特にＴＰＡによる治療に適している哺乳類対象には、脳卒中を罹患している、または脳卒中の危険性のある個体が含まれるが、これらに限定されない。式Ｉのホルボールエステル、特にＴＰＡによる治療に適している対象には、麻痺、空間障害、判断障害、左半側無視、記憶喪失、失語症、協調および平衡の問題、嘔気、嘔吐、認知障害、知覚障害、見当識障害、同名半盲、および衝動性が含まれるが、これらに限定されない脳卒中の影響に苦しんでいるものが追加的に含まれる。
【００２１】
これらおよび他の対象は、ＮＦ−κＢ活性を調節するために、Ｔｈ１サイトカイン活性を増加するために、麻痺を予防または治療するために、空間認識を増加させるために、記憶喪失を減少させるために、失語症を減少させるために、協調および平衡を増加させるために、脳卒中の発生および重篤度を予防するため、または減少させるために、ならびに認知を改善するために十分な式Ｉのホルボールエステルまたは式Ｉのホルボールエステルの誘導体の有効量を対象に投与することによって、予防的および／または治療的に、有効治療される。
【００２２】
本発明の治療上有用な方法および製剤は、前記化合物の任意の活性な薬学的に許容される塩、ならびに活性な異性体、鏡像異性体、多形体、溶媒和物、水和物、プロドラッグ、および／またはこれらの組み合わせを含む、上記に示された多様な形態で式Ｉのホルボールエステルまたは式Ｉのホルボールエステルの誘導体を有効に使用する。式ＩＩのＴＰＡは、後述の本明細書の実施例の範囲内において本発明の例示的実施形態として用いられる。
【００２３】
本発明の追加の態様の範囲内において、対象に有効な応答を生じるために式Ｉのホルボールエステル化合物と組み合わせ的に処方される、または協調的に投与される１つ以上の二次または補助活性剤と組み合わせた式Ｉのホルボールエステルまたは式Ｉのホルボールエステルの誘導体の有効量を用いる、組み合わせ製剤および方法が提供される。
【００２４】
脳卒中を治療する組み合わせ製剤および協調的治療方法は、脳卒中を予防するか、治療するか、または他の適応症の、１つ以上の追加の二次または補助治療剤と組み合わせた式Ｉのホルボールエステルまたは式Ｉのホルボールエステルの誘導体を用いる。これらの実施形態におけるホルボールエステル、例えばＴＰＡと組み合わせて使用される二次または補助治療剤は、単独で、またはホルボールエステル、例えばＴＰＡと組み合わせて脳卒中の予防または回復に対して直接的または間接的な効果を有することができ、例えばＴＰＡと組み合わせて他の有用な補助治療活性（例えば、抗凝固、抗コレステロール血症、血管拡張、抗高血圧、細動脈抵抗の低下、静脈容量の増加、心臓酸素要求量の低減、心拍数の減少、心拍数の安定化、または神経保護）を示すことができ、あるいは単独で、または例えばＴＰＡと組み合わせて、脳卒中または関連する症状を治療または予防するのに有用な補助治療活性を示すことができる。そのような二次または補助治療剤を、式Ｉのホルボールエステルまたは式Ｉのホルボールエステルの誘導体の投与の前、投与と同時、または投与の後に投与することができる。
【００２５】
哺乳類対象において脳卒中を予防または治療するこれらの組み合わせ製剤および協調的治療方法に有用な補助または二次治療剤には、組織プラスミノーゲン活性化因子、抗凝固剤、スタチン、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、抗血小板剤、β遮断薬、アスピリン、フィブレート、カルシウムチャネル遮断薬、または利尿剤が含まれるが、これらに限定されない。さらに、補助または二次療法には、頸動脈内膜剥離術、血管形成術、バルーン血管形成術、弁修復術および置換術、冠動脈バイパス術、ステント留置術、開頭術、血管内コイル塞栓術、または卵円孔開存閉鎖術を含む外科的介入などがあるが、これらに限定されない療法を使用することができる。
【００２６】
本発明の前述、ならびに追加の目的、特徴、態様、および利点は、以下の発明を実施するための形態により明らかとなる。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
新規方法および組成物は、ヒトを含む哺乳類対象において脳卒中および脳卒中の後遺症を予防および／または治療するのに使用されることが特定されている。
【００２８】
多様な実施形態において、本明細書に記載されている組成物および方法は、Ｔｈ１サイトカインの放出を増加すること、ＥＲＫリン酸化を増加すること、ＮＦ−κＢ活性を調節すること、麻痺を予防または治療すること、空間認識を増加させること、記憶喪失を減少させること、失語症を減少させること、協調および平衡を増加させること、認知を改善すること、見当識を改善すること、その後の脳卒中の有病率を減少すること、および衝動性を減少させることができる。
【００２９】
本明細書に提供される製剤および方法は、式Ｉのホルボールエステルまたは式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物を用い、米国特許出願第１２／０２３，７５３号、２００８年１月３１日出願により完全に記載されており、これは米国特許仮出願第６０／８９８，８１０号、２００７年１月３１日出願および米国特許仮出願第＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿出願の優先権利益を主張し、それぞれその全体が参照として本明細書に組み込まれ、
【化１０】
2018109014.tif 000011
式Ｉ
式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素、ヒドロキシル、
【化１１】
2018109014.tif 000012
（ここでアルキル基は、１〜１５個の炭素原子を含有する）、
【化１２】
2018109014.tif 000013
（ここで低級アルケニル基は、１〜７個の炭素原子を含有する）、
【化１３】
2018109014.tif 000014
およびこれらの置換された誘導体であり得る。Ｒ３は、独立して、水素または
【化１４】
2018109014.tif 000015
であり得る。
【００３０】
幾つかの実施形態において、慢性または再発性の状態の治療に使用される新規組成物では、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、水素以外であり、Ｒ３は、水素または
【化１５】
2018109014.tif 000016
および置換された誘導体である。別の実施形態において、Ｒ１またはＲ２のいずれかは、
【化１６】
2018109014.tif 000017
であり、残りのＲ１またはＲ２は
【化１７】
2018109014.tif 000018
（ここで低級アルキルは、炭素が１〜７個のものである）であり、Ｒ３は、水素である。
【００３１】
本明細書の式のアルキル、アルケニル、フェニル、およびベンジル基は、非置換であり得、またはハロゲン、好ましくは、塩素、フッ素もしくは臭素、ニトロ、アミノ、および／または同種のラジカルにより置換され得る。
【００３２】
本明細書に提供される脳卒中治療製剤および方法は、抗脳卒中剤として、本記載の全ての活性な薬学的に許容される化合物、ならびにこれらの化合物の多様な予見され容易に提供される複合体、塩、溶媒和物、異性体、鏡像異性体、多形体、およびプロドラッグ、およびこれらの組み合わせを含む、上記の式Ｉのホルボールエステルまたは式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物を用いる。
【００３３】
本明細書に提供されるＴｈ１サイトカイン増加製剤および方法は、新規のＴｈ１サイトカイン増加剤として、本記載の全ての活性な薬学的に許容される化合物、ならびにこれらの化合物の多様な予見され容易に提供される複合体、塩、溶媒和物、異性体、鏡像異性体、多形体、およびプロドラッグ、およびこれらの組み合わせを含む、上記の式Ｉのホルボールエステルまたは誘導体化合物を用いる。ヒト対象を含む広範囲の哺乳類対象が、本発明の製剤および方法を使用する治療に適している。これらの対象には、脳卒中を罹患している、または脳卒中の危険性のある個体が含まれるが、これらに限定されない。
【００３４】
本明細書に提供されるＥＲＫリン酸化増加製剤および方法は、新規のＥＲＫリン酸化増加剤として、本記載の全ての活性な薬学的に許容される化合物、ならびにこれらの化合物の多様な予見され容易に提供される複合体、塩、溶媒和物、異性体、鏡像異性体、多形体、およびプロドラッグ、およびこれらの組み合わせを含む、上記の式Ｉのホルボールエステルまたは誘導体化合物を用いる。ヒト対象を含む広範囲の哺乳類対象が、本発明の製剤および方法を使用する治療に適している。これらの対象には、脳卒中を罹患している、または脳卒中の危険性のある個体が含まれるが、これらに限定されない。
【００３５】
本発明の方法および組成物の範囲内では、本明細書に開示されている式Ｉのホルボールエステルまたは式Ｉのホルボールエステルの誘導体の１つ以上が、脳卒中または脳卒中の後遺症を治療および予防するのに有効な薬剤として効果的に処方または投与される。例示的な実施形態において、ＴＰＡは、単独または１つ以上の補助治療剤との組み合わせにより薬学的製剤および治療方法において有効な薬剤であることが実例の目的で示されている。本開示は、追加的に、本明細書に開示されている化合物の複合体、誘導体、塩、溶媒和物、異性体、鏡像異性体、多形体、およびプロドラッグ、ならびにこれらの組み合わせを含む天然または合成化合物の形態で薬学的に許容されるホルボールエステル化合物を更に提供し、これらは、脳卒中および脳卒中の後遺症の治療および予防における本発明の方法および組成物の範囲内で治療剤として有効である。
【００３６】
脳卒中は、脳への血液供給の中断により引き起こされる。このことは、遮断（虚血性脳卒中）または血管の破裂（出血性脳卒中）のいずかにより生じ得る。脳卒中の症状には、特に身体の片側の突発性のしびれまたは脱力感、発話または会話理解の突発性の混乱または問題、片目または両目による突発性の視覚の問題、突発性の歩行、眩暈、または平衡もしくは協調の問題、あるいは原因不明の突発性の重篤な頭痛が含まれるが、これらに限定されない。脳卒中の危険因子には、高血圧、血中脂質異常、タバコの使用、身体的不活発、肥満、ストレス、糖尿病、アルコールの使用、過剰な血中ホモシステイン、炎症、および凝固異常が含まれる。年齢、遺伝、性別、および民族性のような変更不能な危険因子も存在する。
【００３７】
脳卒中の治療は、３つの別個の段階があり、予防、脳卒中直後の治療、および脳卒中後のリハビリテーションである。本明細書に記載されている組成物および方法を、独立して、または他の医薬品、装置、もしくは外科的介入を含む１つ以上の追加的な療法と共に、脳卒中治療の任意の段階に使用することができる。
【００３８】
ホルボールは、ジテルペンのチグリアンファミリーにおける天然の植物由来多環式アルコールである。これは、クロトンチグリウムの種に由来するクロトン油の加水分解生成物として、１９３４年に最初に単離された。大部分の極性有機溶媒および水において良好な可溶性がある。ホルボールのエステルは、下記の式Ｉの一般構造を有し、
【化１８】
2018109014.tif 000019
式Ｉ
式中、Ｒ１およびＲ２は、水素、ヒドロキシル、
【化１９】
2018109014.tif 000020
（ここでアルキル基は、１〜１５個の炭素原子を含有する）、
【化２０】
2018109014.tif 000021
（ここで低級アルケニル基は、１〜７個の炭素原子を含有する）、
【化２１】
2018109014.tif 000022
およびこれらの置換された誘導体からなる群から選択され、Ｒ３は、水素、
【化２２】
2018109014.tif 000023
またはその置換された誘導体であり得、ならびに、式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩、鏡像異性体、多形体、プロドラッグ溶媒和物および水和物、ならびにそれらの置換された誘導体の構造を有する。
【００３９】
用語「低級アルキル」または「低級アルケニル」は、本明細書で使用されるとき、１〜７個の炭素原子を含有する部分を意味する。式Ｉの化合物において、アルキルまたはアルケニル基は、直鎖または分岐鎖であり得る。幾つかの実施形態において、Ｒ１またはＲ２のいずれかまたは両方は、長鎖炭素部分である（すなわち、式Ｉはデカノエートまたはミリステートである）。
【００４０】
本明細書の式のアルキル、アルケニル、フェニル、およびベンジル基は、非置換であり得、またはハロゲン、好ましくは、塩素、フッ素もしくは臭素、ニトロ、アミノ、および同種のラジカルにより置換され得る。
【００４１】
クロトンチグリウムのような薬草供給源からの任意の調製物または抽出物を含む、ホルボールエステルの有機および合成形態は、本明細書の実施形態の範囲内で使用されるホルボールエステル（またはホルボールエステル類縁体、関連化合物、および／もしくは誘導体）を含む有用な組成物と考慮される。本明細書の実施形態の範囲内で使用される有用なホルボールエステルおよび／または関連化合物は、典型的には、式Ｉにより説明された構造を有するが、そのような化合物の機能的に同等な類縁体、複合体、抱合体、および誘導体も本発明の範囲内であると当業者により理解される。
【００４２】
より詳細な実施形態では、上記の式Ｉによる実例的な構造の変更が、ヒトを含む哺乳類対象において脳卒中、脳卒中に起因する損傷を治療および／もしくは予防する、ならびに／または脳卒中の影響もしくは後遺症を管理するのに有用な候補化合物を提供するために選択され、式中、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、水素以外であり、Ｒ３は、水素、
【化２３】
2018109014.tif 000024
およびこれらの置換された誘導体からなる群から選択される。別の実施形態において、Ｒ１またはＲ２のいずれかは、
【化２４】
2018109014.tif 000025
であり、残りのＲ１またはＲ２は、
【化２５】
2018109014.tif 000026
であり、Ｒ３は水素である。
【００４３】
ヒトを含む哺乳類対象において脳卒中、脳卒中に起因する損傷を治療および／もしくは予防する、ならびに／または脳卒中の影響もしくは後遺症を管理する治療において有用な式Ｉのホルボールエステル化合物の例示的な実施形態は、下記の式ＩＩに示されている、ホルボール１２−ミリステート−１３−アセテート（ＰＭＡまたは１２−Ｏ−テトラデカノイル−ホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）としても知られている）において見出される。
【化２６】
2018109014.tif 000027
式ＩＩ
【００４４】
本発明の製剤および方法の範囲内の追加的に有用なホルボールエステル、ならびに関連化合物および誘導体には、前記化合物の他の薬学的に許容される活性塩、ならびに前記化合物の活性異性体、鏡像異性体、多形体、グリコシル化誘導体、溶媒和物、水和物、および／またはプロドラッグが含まれるが、これらに限定されない。式Ｉのホルボールエステルの誘導体は、それ自体ホルボールエステルであっても、なくてもよい。本発明の組成物および方法の範囲内で使用されるホルボールエステルの更なる例示的な形態には、表１に示されている、ホルボール１３−ブチレート、ホルボール１２−デカノエート、ホルボール１３−デカノエート、ホルボール１２，１３−ジアセテート、ホルボール１３，２０−ジアセテート、ホルボール１２，１３−ジベンゾエート、ホルボール１２，１３−ジブチレート、ホルボール１２，１３−ジデカノエート、ホルボール１２，１３−ジヘキサノエート、ホルボール１２，１３−ジプロピオネート、ホルボール１２−ミリステート、ホルボール１３−ミリステート、ホルボール１２，１３，２０−トリアセテート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート−２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−テトラデカノエート、ホルボール１２−チグリエート１３−デカノエート、１２−デオキシホルボール１３−アセテート、ホルボール１２−アセテート、およびホルボール１３−アセテートが含まれるが、これらに限定されない。
表１
例示的なホルボールエステル
【表１】
2018109014.tif 000028
2018109014.tif 000029
2018109014.tif 000030
2018109014.tif 000031
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【００４５】
本明細書に記載されている組成物は、哺乳類対象における脳卒中、または脳卒中関連症状もしくは後遺症の予防および／または治療に有効である、式Ｉのホルボールエステル化合物または式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物の脳卒中損傷緩和または予防有効量を含む脳卒中治療組成物を含む。活性化合物の「脳卒中治療」、「抗凝固」、「抗コレステロール血症」、「血管拡張」、「抗高血圧」、「細動脈抵抗の低下」、「静脈容量の増加」、「心臓酸素要求量の低減」、「心拍数の減少」、「心拍数の安定化」、または「神経保護」に有効な量は、対象において脳卒中の１つ以上の症状または後遺症を特定の治療介入期間にわたって測定可能に緩和する単回または多回単位剤形によって治療上有効である。例示的な実施形態の範囲内において、本発明の組成物は、脳卒中にかかりやすい、または脳卒中を罹患しているヒトおよび他の哺乳類対象において脳卒中または脳卒中の後遺症を予防または緩和する治療方法に有効である。
【００４６】
本発明のホルボールエステル治療組成物は、典型的には、安定性、送達、吸収、半減期、効能、薬物動態、および／もしくは薬力学を向上させる、副作用を低減する、または薬学的使用の他の利点を提供することができる１つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤、ビヒクル、乳化剤、安定剤、防腐剤、緩衝剤、および／または他の添加剤と共に処方され得る、式Ｉのホルボールエステル化合物または式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物の有効量または単位投与量を含む。有効量の式Ｉのホルボールエステルまたは関連もしくは誘導体化合物（例えば、有効濃度／量のＴＰＡ、またはＴＰＡの選択された薬学的に許容される塩、異性体、鏡像異性体、溶媒和物、多形体、および／もしくはプロドラッグを含む単位用量）は、臨床および患者に特異的な因子に応じて、当業者によって容易に決定される。ヒトを含む哺乳類対象への投与用の活性化合物の適切な有効単位投与量は、約１０〜約１５００μｇ、約２０〜約１０００μｇ、約２５〜約７５０μｇ、約５０〜約５００μｇ、約１５０〜約５００μｇ、約１２５μｇ〜約５００μｇ、約１８０〜約５００μｇ、約１９０〜約５００μｇ、約２２０〜約５００μｇ、約２４０〜約５００μｇ、約２６０〜約５００μｇ、約２９０〜約５００μｇの範囲であり得る。特定の実施形態において、式Ｉのホルボールエステル化合物または関連もしくは誘導体化合物の疾患治療有効投与量は、より狭い範囲内から、例えば１０〜２５μｇ、３０〜５０μｇ、７５〜１００μｇ、１００〜３００μｇ、または１５０〜５００μｇから選択され得る。これらおよび他の有効単位投与量は、例えば、１日、１週間、または１か月に１〜５または２〜３用量を投与することを含む投与レジメンにおいて、単回用量により、または多回１日、週、もしくは月用量の形態により投与され得る。１つの例示的な実施形態では、１０〜３０μｇ、３０〜５０μｇ、５０〜１００μｇ、１００〜３００μｇ、または３００〜５００μｇの投与量が、１日あたり、１、２、３、４、または５回投与される。より詳細な実施形態では、５０〜１００μｇ、１００〜３００μｇ、３００〜４００μｇ、または４００〜６００μｇの投与量が１日に１回または２回投与される。更なる実施形態では、５０〜１００μｇ、１００〜３００μｇ、３００〜４００μｇ、または４００〜６００μｇの投与量が１日おきに投与される。代替的な実施形態において、投与量は、体重に基づいて計算され、例えば、１日あたり約０．５μｇ／ｍ２〜約３００μｇ／ｍ２、約１μｇ／ｍ２〜約２００μｇ／ｍ２、１日あたり約１μｇ／ｍ２〜約１８７．５μｇ／ｍ２、１日あたり約１μｇ／ｍ２〜１日あたり約１７５μｇ／ｍ２、１日あたり約１μｇ／ｍ２〜１日あたり約１５７μｇ／ｍ２  １日あたり約１μｇ／ｍ２〜約１２５μｇ／ｍ２、１日あたり約１μｇ／ｍ２〜約７５μｇ／ｍ２、１日あたり１μｇ／ｍ２〜約５０／μｇ／ｍ２、１日あたり２μｇ／ｍ２〜約５０μｇ／ｍ２、１日あたり２μｇ／ｍ２〜約３０μｇ／ｍ２、または１日あたり３μｇ／ｍ２〜約３０μｇ／ｍ２の量で投与され得る。
【００４７】
他の実施形態において、投与量は、より少ない頻度、例えば、１日おきに０．５μｇ／ｍ２〜約３００μｇ／ｍ２、約１μｇ／ｍ２〜約２００μｇ／ｍ２、１日おきに約１μｇ／ｍ２〜約１８７．５μｇ／ｍ２、１日おきに約１μｇ／ｍ２〜約１７５μｇ／ｍ２、１日あたり約１μｇ／ｍ２〜１日おきに約１５７μｇ／ｍ２  １日おきに約１μｇ／ｍ２〜約１２５μｇ／ｍ２、１日おきに約１μｇ／ｍ２〜約７５μｇ／ｍ２、１日おきに１μｇ／ｍ２〜約５０μｇ／ｍ２、１日おきに２μｇ／ｍ２〜約５０μｇ／ｍ２、１日あたり２μｇ／ｍ２〜約３０μｇ／ｍ２、または１日あたり３μｇ／ｍ２〜約３０μｇ／ｍ２で投与され得る。追加的な実施形態において、投与量は、週に３回、週に４回、週に５回、週日のみ、他の治療レジメンと協調する場合にのみ、連日、または臨床および患者に特異的な因子に応じて任意の適切な投与レジメンで投与され得る。
【００４８】
（代替的には「脳卒中治療」、「抗凝固」、「抗コレステロール血症」、「血管拡張」、「抗高血圧」、「細動脈抵抗の低下」、「静脈容量の増加」、「心臓酸素要求量の低減」、「心拍数の減少」、「心拍数の安定化」、「ＥＲＫリン酸化の誘発」、「ＩＬ−２の調節」、および／または「神経保護」に）有効な量の式Ｉのホルボールエステル化合物または式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物を含む本発明の組成物の量、時間、および送達様式は、投与が予防的もしくは治療的にかかわらず、個体の体重、年齢、性別、および状態、疾患の激しさ、および／または関連する症状などの因子に基づいて、ならびに薬剤の送達、吸収、半減期を含む薬物動態、および効能に影響を及ぼすことが知られている他の因子に基づいて、個体別に日常的に調整される。
【００４９】
本発明の本疾患治療（代替的には、「脳卒中治療」、「抗凝固」、「抗コレステロール血症」、「血管拡張」、「抗高血圧」、「ＥＲＫリン酸化の誘発」、「細動脈抵抗の低下」、「静脈容量の増加」、「心臓酸素要求量の低減」、「心拍数の減少」、「心拍数の安定化」、「血餅の減少」、「神経保護」、「ＩＬ−２の調節」、または「ＮＦκＢの調節」）製剤の有効用量または多回投与治療レジメンは、通常、対象において脳卒中の症状を実質的に予防または緩和するのに必要および十分な最小投与レジメンを推定するために選択される。投与量および投与プロトコールは、多くの場合、数日間にわたる、さらには１週間以上または１年以上にわたる反復投与療法を含む。有効な治療レジメンは、数日間、数週間、数か月、さらには数年間にわたって続く、１日に投与される、または１日に多回用量が投与される予防的投与量を含むこともある。
【００５０】
脳卒中の治療における本発明の組成物および方法の有効性は、実施例９に示されている一時的な中大脳動脈閉塞、実施例８に示されている永続的な中大脳動脈閉塞、血管内線維中大脳動脈閉塞、実施例７に示されている塞栓性中大脳動脈閉塞、静脈および動脈のエンドセリン−１−誘発性狭窄、または大脳皮質光増感反応血栓症（ｃｅｒｅｂｒｏｃｏｒｔｉｃａｌ  ｐｈｏｔｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）を含む多様なモデル系の使用により実証され得る。本発明のホルボールエステル組成物の使用は、モデル系により示された症状または長期間の影響を対照動物と比べて０％、２０％、３０％、５０％、またはそれ以上、最大７５〜９０％、９６％、またはそれ以上の減少まで減少する。
【００５１】
脳卒中の治療における本発明の組成物および方法の有効性は、脳卒中を罹患した個体において示される症状の減少により更に実証され得る。そのような症状には、麻痺、空間障害、判断障害、左半側無視、記憶喪失、失語症、協調および平衡の問題、嘔気、嘔吐、認知障害、知覚障害、見当識障害、同名半盲、および衝動性が含まれるが、これらに限定されない。本発明のホルボールエステル組成物の使用は、個体により示された症状を初期状態と比べて０％、２０％、３０％、５０％、またはそれ以上、最大７５〜９０％、９６％、またはそれ以上の減少まで減少する。
【００５２】
本発明の追加的な態様の範囲内において、有効量の式Ｉのホルボールエステル化合物または式Ｉの誘導体化合物、および式Ｉのホルボールエステル化合物と共に組み合わせ的に処方される、または協調的に投与される１つ以上の二次または補助剤を、多重活性疾患治療組成物または協調的治療方法を生じるために用いる、組み合わせ疾患治療（「脳卒中治療」、「抗凝固」、「抗コレステロール血症」、「血管拡張」、「抗高血圧」、「ＥＲＫリン酸化の誘発」、「細動脈抵抗の低下」、「静脈容量の増加」、「心臓酸素要求量の低減」、「心拍数の減少」、「心拍数の安定化」、または「ＮＦκＢの調節」）製剤および協調的投与方法が提供される。
【００５３】
脳卒中の予防または治療における例示的な組み合わせ製剤および協調的治療方法は、標的疾患、状態、および／または症状の治療または予防に有用な１つ以上の追加の神経保護または他の適応症の二次または補助治療剤と組み合わせて、式Ｉのホルボールエステルまたは式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物を用いる。本発明の大部分の組み合わせ製剤および協調的治療方法において、式Ｉのホルボールエステル化合物、または関連もしくは誘導体化合物は、１つ以上の二次または補助治療剤と組み合わせて処方または協調的に投与されて、脳卒中または脳卒中の影響の予防または治療に組み合わせ的に有効な、または協調的に有用な組み合わせ製剤または協調的治療方法を生じる。これに関連して、例示的な組み合わせ製剤および協調的治療方法は、組織プラスミノーゲン活性化因子、抗凝固剤、スタチン、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、抗血小板剤、フィブレート、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、または利尿剤から選択される１つ以上の二次または補助治療剤と組み合わせた、式Ｉのホルボールエステル化合物または式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物を用いる。例示的な抗凝固剤には、ヘパリン、ワルファリン、ヘパリノイド、フェニンジオン、アトメンチン（ａｔｏｍｅｎｔｉｎ）、アセノクマロール、フェンプロクモン、イドラパリヌクス、フォンダパリヌクス、およびトロンビン阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。例示的なスタチンには、ロバスタチン、アムロジピン、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、ピタバスタチン、およびプラバスタチンが含まれるが、これらに限定されない。例示的なアンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬には、カンデサルタン、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、テルミサルタン、およびバルサルタンが含まれるが、これらに限定されない。アンギオテンシン変換酵素阻害剤には、エナゼプリル（ｅｎａｚｅｐｒｉｌ）、カプトプリル、エナラプリル、ホシノプリル、イシノプリル（ｉｓｉｎｏｐｒｉｌ）、モエキシプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、およびトランドラプリルが含まれるが、これらに限定されない。例示的なβ遮断薬には、アルプレノロール、ブシンドロール、カルテオロール、カルベジロール、ラベタロール、ナドロール、オクスプレノロール、 ペンブトロール、ピンドロールプロプラノロール、ソタロール、チモロール、トチュウ、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、セリプロロール、エスモロール、メトプロロール、およびネビボロールが含まれるが、これらに限定されない。例示的なカルシウムチャネル遮断薬には、アムロジピン、クレビジピン、ジルチアゼム、フェロジピン、イスラジピン、ニフェジピン、ニカルジピン、ニモジピン、ニソルジピン、およびベラパミルが含まれるが、これらに限定されない。例示的な利尿剤には、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、ブメタニド、エタクリン酸、フロセミド、アミロライド、エプレレノン、スピロノラクトン、およびトリアムテレンが含まれるが、これらに限定されない。例示的なフィブレートには、ベンザフィブ���ート（ｂｅｎｚａｆｉｂｒａｔｅ）、シプロフィブレート、クロフィブレート、ゲムフィブロジル、またはフェノフィブレートが含まれるが、これらに限定されない。例示的な抗血小板剤には、クロピドグレルおよびチクロピジンが含まれるが、これらに限定されない。
【００５４】
協調的治療方法は、ペースメーカー、埋め込み式除細動器、冠動脈ステント、人工弁、冠動脈バイパス術、バルーン血管形成術、弁修復術および置換術、頸動脈内膜剥離術、血管形成術、ステント留置術、開頭術、血管内コイル塞栓術、卵円孔開存閉鎖術、および心臓移植の使用が含まれるが、これらに限定されない外科的介入を更に用いることができる。
【００５５】
特定の実施形態において、本発明は、ホルボールエステルと、疾患治療活性を有する１つ以上の補助剤を含む組み合わせ疾患治療（「脳卒中治療」、「抗凝固」、「抗コレステロール血症」、「血管拡張」、「抗高血圧」、「ＥＲＫリン酸化の誘発」、「細動脈抵抗の低下」、「静脈容量の増加」、「心臓酸素要求量の低減」、「心拍数の減少」、「心拍数の安定化」、または「ＮＦκＢの調節」）製剤を提供する。そのような組み合わせ製剤の範囲内において、式Ｉのホルボールエステルと、疾患治療活性を有する１つ以上の補助剤は、単独または組み合わせにより、疾患治療（「脳卒中治療」、「抗凝固」、「抗コレステロール血症」、「血管拡張」、「抗高血圧」、「ＥＲＫリン酸化の誘発」、「細動脈抵抗の低下」、「静脈容量の増加」、「心臓酸素要求量の低減」、「心拍数の減少」、「心拍数の安定化」、または「ＮＦκＢの調節」）有効量で組み合わせ製剤に存在する。例示的な実施形態において、式Ｉのホルボールエステル化合物および非ホルボールエステル剤は、それぞれ、疾患治療／予防量（すなわち、対象において症状の検出可能な緩和を単独で誘発する単回投与量）により存在する。あるいは、組み合わせ製剤は、式Ｉのホルボールエステル化合物および非ホルボールエステル剤の一方または両方を治療量以下の単回投与量で含むことができ、ここで両方の薬剤を含む組み合わせ製剤は、疾患、状態、または症状緩和応答を誘発するのに総体的に有効な両方の薬剤の組み合わせ投与量を特徴とする。したがって、式Ｉのホルボールエステル化合物または式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物、および非ホルボールエステル剤の一方または両方は、治療量以下の用量で製剤に存在し得る、または協調的投与プロトコールにより投与され得るが、これらは、製剤または方法において総体的に、被験者の疾患、脳卒中の発生もしくは再発、または脳卒中の後遺症の症状に検出可能な減少を誘発する。なおべつの実施形態において、組み合わせ製剤は、１つ以上の神経保護剤を含むことができる。更なる実施形態において、組み合わせ製剤は、本明細書に記載されている、１つ以上の抗炎症剤、または他の二次もしくは追加の治療剤を含むことができる。
【００５６】
本発明の協調的投与プロトコールを実施するため、式Ｉのホルボールエステル化合物または式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物を、本明細書において考慮される１つ以上の二次または補助治療剤と同時または連続して投与することができる。したがって、特定の実施形態において、化合物は、別個の製剤または上記に記載された組み合わせ製剤（すなわち、式Ｉのホルボールエステル化合物、または関連もしくは誘導体化合物と、非ホルボールエステル治療剤の両方）を使用して、非ホルボールエステル剤、または本明細書において考慮される任意の他の二次もしくは補助治療剤と協調的に投与される。この協調的投与は、同時、またはいずれかの順序により連続的に実施することができ、１つのみ、または両方（またはすべて）の活性治療剤が個別および／または総体的にこれらの生物学的活性を発揮する間に期間があり得る。
【００５７】
別の実施形態において、そのような協調的治療方法は、例えば、脳卒中の治療の多様なプロトコールに従うことができる、または多様なプロトコールにより導かれ得る。協調的治療方法は、例えば、脳卒中により引き起こされる損傷の予防または治療のためのホルボールエステルおよび／または治療を含むことができる。すべてのそのような協調的治療方法の特徴的な態様は、式Ｉのホルボールエステル化合物または式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物が、相補的な脳卒中予防もしくは治療剤と共に好ましい臨床応答を生じる、または二次もしくは補助治療剤によりもたらされる特徴的な臨床応答を生じる、少なくとも幾つかの活性を発揮することである。多くの場合、式Ｉのホルボールエステル化合物または式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物と、二次または補助治療剤との協調的投与は、式Ｉのホルボールエステル化合物もしくは式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物、または二次もしくは補助治療剤が単独で投与されたときに誘発される治療効果を超えた、改善された治療または予防結果を対象において生じる。この資質は、直接的な効果と間接的な効果の両方を考慮する。
【００５８】
例示的な実施形態の範囲内において、式Ｉのホルボールエステル化合物または式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物は、１つ以上の二次脳卒中治療化合物、または他の適応症もしくは補助治療剤、例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子、抗凝固剤、スタチン、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、フィブレート、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、脂質低下投薬、抗血小板剤、または利尿剤と協調的に（組み合わせた、または別個の製剤により同時にまたは連続的に）投与される。さらに、ペースメーカー、埋め込み式除細動器、冠動脈ステント、人工弁、人工心臓、冠動脈バイパス術、バルーン血管形成術、弁修復術および置換術、心臓移植、頸動脈内膜剥離術、血管形成術、ステント留置術、開頭術、血管内コイル塞栓術、または卵円孔開存閉鎖術などであるが、これらに限定されない補助または二次療法を、脳卒中または脳卒中の影響に治療に使用することができる。
【００５９】
上記に示されたように、本明細書において考慮される本発明の全ての多様な実施形態において、疾患治療方法および製剤は、主題の化合物の薬学的に許容される塩、溶媒和物、異性体、鏡像異性体、多形体、溶媒和物、水和物、および／またはプロドラッグのいずれかまたは組み合わせを含む、多様な形態のいずれかによる式Ｉのホルボールエステル化合物を用いることができる。本発明の例示的な実施形態では、ＴＰＡが実例的な目的において治療製剤および方法の範囲内で用いられる。
【００６０】
本発明の薬学的組成物を、これらが意図される治療または予防目的を達成する任意の手段により投与することができる。本発明の組成物の適切な投与経路には、静脈内、筋肉内、腹腔内、脊髄内、鞘内、脳室内、動脈内、皮下、および鼻腔内経路などであるが、これらに限定されない注射方法を含む、従来の経路、装置、および方法が含まれるが、これらに限定されない。
【００６１】
本発明の組成物は、用いられる特定の投与様式に適した薬学的に許容される担体を更に含むことができる。本発明の組成物の剤形は、上記に考察された投与単位の調製に適していると製薬技術において認識されている賦形剤を含む。そのような賦形剤には、限定することを意図しないで、結合剤、充填剤、潤滑剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、風味剤、防腐剤、緩衝剤、湿潤剤、崩壊剤、発泡剤、ならびに他の従来の賦形剤および添加剤が含まれる。
【００６２】
望ましい場合、本発明の組成物を、親水性徐放ポリマーのような徐放担体の使用により、制御放出形態で投与することができる。これに関連して、例示的な制御放出剤には、約１００ｃｐｓ〜約１００，０００ｃｐｓの範囲の粘度を有するヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはコレステロールのような他の生体適合性マトリックスが含まれるが、これらに限定されない。
【００６３】
本発明の式Ｉの幾つかのホルボールエステル組成物は、本発明の多くの他の考慮される組成物と同様に、任意に抗酸化剤、緩衝剤、制菌剤、および／または製剤を哺乳類対象の血液と等張にする溶質を含み得る水性または非水性滅菌注射用液剤、ならびに懸濁剤および／または増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁剤を含む、例えば静脈内、筋肉内、皮下、または腹腔内投与される非経口投与用に設計される。製剤は、単位用量または多回用量容器により提示され得る。本発明の追加の組成物および製剤は、非経口投与後の延長放出のためにポリマーを含むことができる。非経口調合剤は、そのような投与に適した液剤、分散剤、または乳剤であり得る。主題の薬剤を、非経口投与後の延長放出のために、ポリマーに処方することもできる。薬学的に許容される製剤および成分は、典型的には滅菌であるか、または容易に滅菌され、生物学的に不活性であり、容易に投与される。そのようなポリマー材料は、製薬技術の当業者には良く知られている。非経口調合剤は、典型的には、緩衝剤および防腐剤、ならびに水、生理食塩水、平衡塩類溶液、水性デキストロース、グリセロールなどのような薬学的および生理学的に許容される注射用流体を含む。本注射用液剤、乳剤、および懸濁剤は、前記の種類の滅菌粉末、顆粒、および錠剤から調製され得る。好ましい単位投与製剤は、活性成分の、本明細書に上述したような１日用量もしくは単位、１日副用量（ｓｕｂｄｏｓｅ）、またはその適切な分画を含有するものである。
【００６４】
より詳細な実施形態において、本発明の組成物は、例えばコアセルベーション技術もしくは界面重合 （それぞれ、例えばヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセル、およびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）により調製されたマイクロカプセル、微粒子、または微小球における、コロイド薬剤送達系（例えば、リポソーム、アルブミン微小球、マイクロエマルション、ナノ粒子、およびナノカプセル）における、またはマクロエマルション内における送達のために封入された、式Ｉのホルボールエステル化合物または式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物を含むことができる。
【００６５】
上記に示されているように、特定の実施形態において、本発明の方法および組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、式Ｉの上記に記載されたホルボールエステル化合物および／または関連若しくは誘導体化合物の酸付加塩または塩基塩を用いることができる。薬学的に許容される付加塩の例には、無機および有機酸付加塩が含まれる。適切な酸付加塩は、非毒性塩を形成する酸、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、硝酸塩、リン酸塩、およびリン酸水素塩から形成される。追加の薬学的に許容される塩には、ナトリウム塩、カリウム塩、セシウム塩などの金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ′−ジベンジルエチレンジアミン塩などの有機アミン塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、酢酸塩、ジクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、シュウ酸塩、およびギ酸塩のような有機酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、およびｐ−トルエンスルホン酸塩のようなスルホン酸塩、ならびにアルギン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩のようなアミノ酸塩、酒石酸塩、およびグルコン酸塩が含まれるが、これらに限定されない。適切な塩基塩は、非毒性塩を形成する塩基、例えば、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛、およびジエタノールアミンの塩から形成される。
【００６６】
本発明の他の詳細な実施形態、方法、および組成物は、式Ｉのホルボールエステルのプロドラッグを用いる。プロドラッグは、活性親薬剤をインビボで放出する任意の共有結合担体であると考慮される。本発明の範囲内において有用なプロドラッグの例には、置換基のヒドロキシルアルキルまたはアミノアルキルとのエステルまたはアミドが含まれ、これらは、上記に記載された化合物を無水コハク酸のような無水物と反応させることによって調製され得る。
【００６７】
本明細書に開示されている発明は、式Ｉのホルボールエステルの代謝産物をインビボで使用する（主題前駆体化合物の投与後にインビボで生成される、または代謝産物それ自体の形態で直接投与される）、前記化合物を含む方法および組成物を包含することも理解される。そのような産物は、例えば、主に酵素プロセスに起因して、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、エステル化などによりもたらされ得る。したがって、本発明は、式Ｉのホルボールエステル化合物を、その代謝産物を生じるのに十分な時間にわたって哺乳類対象と接触させることを含む方法によって生成される化合物を用いる、本発明の方法および組成物を含む。そのような産物は、典型的には、本発明の放射標識化合物を調製し、ラット、マウス、モルモット、サル、またはヒトなどの動物に検出可能な用量で非経口投与し、代謝が生じるのに十分な時間を与え、尿、血液、または他の生物学的試料から変換産物を単離することによって特定される。
【００６８】
本明細書に開示されている発明は、標識した（例えば、同位体標識した、蛍光標識した、そうでなければ従来の方法を使用して標識化合物の検出を可能にするように標識した）式Ｉのホルボールエステル化合物を、脳卒中の１つ以上の症状の危険性のある、または症状を提示している哺乳類対象（例えば、細胞、組織、臓器、または個体）と接触させ、その後、広範囲の既知のアッセイおよび標識／検出方法のいずれかを使用して標識化合物の存在、場所、代謝、および／または結合状態を検出することを含む、哺乳類対象において、脳卒中が含まれるが、これに限定されない疾患の危険レベル、存在、重篤度、または治療指標を診断する、そうでなければ管理するための診断組成物を包含することも理解される。例示的な実施形態において、式Ｉのホルボールエステル化合物は、１個以上の原子が、異なる原子質量または質量数を有する原子に置き換えられることにより同位体標識される。開示されている化合物に組み込まれ得る同位体の例には、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、および３６Ｃｌのような水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、および塩素の同位体が含まれる。次に同位体標識化合物を、個体または他の対象に投与し、その後、上記に記載されたように検出して、従来の技術によって有用な診断および／または治療管理データが得られる。
【実施例】
【００６９】
下記に記載されている実験は、脳卒中治療および予防薬剤としてのホルボールエステルおよび誘導体化合物の新規で強力な用途を実証する。これらおよび追加の知見は、以下の実施例の範囲内で更に展開および解明される。
【００７０】
実施例Ｉ
Ｓ１８０細胞が注射されたマウスにおける末梢白血球（ＷＢＣ）およびヘモグロビン（Ｈｂ）に対するＴＰＡの効果
肉腫１８０（Ｓ１８０）細胞をＫｗｅｎ−Ｍｉｎｇマウスに注射した。３日目には、マウスにＴＰＡを５０、１００、または２００μｇ／ｋｇ／日により７日間にわたって腹腔内に与えた。処理が完了した２日後、血液試料をＷＢＣおよびＨｂ分析のために治療マウスの尾から採取した。治療群（５０、１００、または２００μｇ／ｋｇ／日を７日間）のＷＢＣカウントは、それぞれ、１６．１±７．４、１８．７±３．０、および２０．７±３．４×１０９／Ｌであり、対照群のＷＢＣカウントは、１３．６±１．８×１０９／Ｌであった。治療群のＨｂは、１３６±１１、１４９±１２、および１４９±１０ｇ／Ｌであり、対照群のＨｂは、１３４±１５ｇ／Ｌであった。結果は、ＴＰＡの腹腔内注射がマウスにおける抹消ＷＢＣカウントを用量依存的に増加し得るが、Ｈｂレベルは、対照マウスと比較したとき、ＴＰＡ治療マウスにおいて大きく影響を受けなかったことを示す。
【００７１】
実施例ＩＩ
用量範囲研究 
ＴＰＡ適用により引き起こされる強い局所刺激に起因して、ＴＰＡを静脈内注入により患者に与えた。滅菌シリンジ中のＴＰＡ液剤を、２００ｍｌの滅菌食塩水の中に注入し、静脈内注入のために十分に混合した。
【００７２】
臨床的に投与された異なるＴＰＡ用量の毒性および副作用：
【００７３】
（１）１ｍｇ／患者／週で与えられたＴＰＡ： 
【００７４】
溶液中１ｍｇのＴＰＡを静脈内注入のために２００ｍｌの滅菌食塩水と十分に混合し、これは、１６μｇ／分の速度により１時間で完了した。ＴＰＡ投与の１時間後、患者は悪寒を感じ初め、これは３０分間続き、続いて軽度から重度の発汗を伴って発熱した（患者の体温は、３７．５〜３９．５℃に達し、これは３〜５時間続いてから、正常に戻った）。上記の症状は、患者にグルココルチコイドを与えると緩和させることができた。この用量のＴＰＡは、少数の患者の出血を引き起こし、数人の患者は、短期間にわたって呼吸困難に苦しみ、Ｈｂが尿の中に検出された。しかし、これらの副作用は短期間であり、可逆的であった。心臓、肝臓、腎臓、および肺機能は、全て正常であることが見出された。
【００７５】
（２）０．５ｍｇ／患者×２／週で与えられたＴＰＡ：（１週間に２用量）
【００７６】
溶液中０．５ｍｇのＴＰＡを静脈内注入のために２００ｍｌの食塩水と十分に混合し、これは、８μｇ／分の速度により１時間で完了した。投与後の反応は、１ｍｇのＴＰＡ投与量と類似していたが、１ｍｇ用量よりも程度が少なかった。患者は、低用量をより容易に耐容した。時々、Ｈｂが患者の尿の中に検出された。呼吸困難は観察されなかった。心臓、肝臓、腎臓、および肺機能は、全て正常であった。
【００７７】
（３）０．２５ｍｇ／患者／×４／週で与えられたＴＰＡ：
【００７８】
溶液中０．２５ｍｇのＴＰＡを静脈内注入のために２００ｍｌの食塩水と十分に混合し、これは、４μｇ／分の速度により１時間で完了した。投与の後、悪寒および発熱のような症状も観察されたが、より高い投与量のときよりも程度ははるかに少なかった。Ｈｂは尿中に検出されず、呼吸困難に苦しんだ患者はいなかった。心臓、肝臓、腎臓、および肺機能は、全て正常であった。
【００７９】
実施例ＩＩＩ
ＴＰＡによる再発性／難治性悪性腫瘍の治療
組織学的に確認されている再発性／難治性血液悪性腫瘍／骨髄障害を有する患者を、ＴＰＡ（Ｘｉｃｈｕａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｎａｎ  Ｙａｎｇ，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）、デキサメタゾン、およびトリサルチル酸コリンマグネシウム（ｃｈｏｌｉｎｅ  ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｔｒｉｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）の組み合わせにより治療する。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療におけるＴＰＡの治療用途を実証するために下記に記載された同等の方法を適用して、他の新生物状態および悪性腫瘍を治療するＴＰＡの用途を実証する。本明細書の特定のプロトコールに加えて、治療および／または寛解の成功は、多種多様な周知の癌検出および評価方法を使用して、例えば、固形腫瘍のサイズ低減を決定すること、腫瘍の増殖、段階、転移能、組織学的癌マーカーの存在／発現レベルを評価する組織学的研究などにより異なる標的新生物および悪性状態において決定される。
【００８０】
ＡＭＬは、緊急および集中療法が一般に認められる侵襲性の疾患である。ＡＭＬが診断される平均的な患者の年齢は、６４〜６８歳であり、標準的な化学療法により治療された６０歳を超える患者は、その年代の＜２０％が疾患を完治している。先行する血液障害または以前からの白血病誘発性化学療法／放射線療法の後にＡＭＬを発生した患者は、その疾患が特定の有害な細胞遺伝学的および臨床的特徴に関連する患者と類似して不十分な結果を有する。したがって、ＡＭＬを診断された大部分の患者は、極めて不十分な予後に関連する患者である、および／または疾患関連特徴を有する。再発性の疾患を有する患者では、治癒する能力を実証した標準的な非移植療法はない。これらの患者では、ＡＭＬは多くの場合に致死的疾患である。ＡＭＬの療法に対する新たな手法が必要である。
【００８１】
本発明の方法および組成物を用いることにより、ＴＰＡは、ＴＰＡの細胞内シグナル経路の調節における新規な役割、細胞株に分化および／またはアポトーシスを誘発するその能力、ならびに新生物および骨髄性悪性腫瘍を含む悪性障害を治療するＴＰＡの有効性を示す臨床データに基づいて、ＡＭＬの患者を治療する治療剤として開発されている。
【００８２】
今まで、ＴＰＡの臨床評価は、ＴＰＡが、細胞生存率およびアポトーシスアッセイにより測定して少なくともＡＭＬ症例の部分集団に直接的な治療細胞毒性作用を及ぼすことを示している。ウエスタン分析により分析された全ての初代培養物において、ＴＰＡは１時間で培養物にＥＲＫリン酸化を強く発揮した。初代ＡＭＬ細胞に対するＴＰＡの細胞毒性作用は、２４時間のエキソビボ曝露後に続くホスホＥＲＫ生存促進シグナルの損失と関連する。この観察は、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２６、およびＰＤ１８４３５２のようなＭＥＫ阻害剤によるＥＲＫシグナル伝達の薬理学的遮断の後の初代ＡＭＬ生存の減少を報告した他の研究と良好に一致する。本発明者たちの研究では、ＥＲＫシグナル伝達の損失は、ＥＲＫホスファターゼの誘発に関連する。
【００８３】
タンパク質キナーゼＣおよびＥＲＫ活性化に加えて、ＴＰＡは、多くの場合にＡＭＬ芽球および白血病幹細胞において構成的に活性である生存促進転写因子であるＮＦ−κＢの既知の誘発因子である。本発明者たちの研究室における最近の研究は、ＡＭＬ細胞のＮＦ−κＢが、デキサメタゾン＋トリサルチル酸コリンマグネシウム（ＣＭＴ）による４８時間の治療によりインビボで阻害され得ることを実証している。さらに、本発明者たちは、デキサメタゾンが、ＭＫＰ−１ＥＲＫホスファターゼの発現を誘発し得ること、および初代ＡＭＬ試料に対するＴＰＡ細胞毒性を増強し得ることを示している。これに関連して、本発明者たちは、下記の例示的な実施形態において、ＴＰＡによる治療の２４時間前および２４時間後に使用される補助薬物療法としてデキサメタゾンおよびＣＭＴを使用することを選択した。これらの薬物療法は、十分に耐容され、治療の炎症性有害作用を低減すること、およびＥＲＫホスファターゼ発現を増加し、ＮＦ−κＢを阻害してＴＰＡ細胞毒性を増強することが予測される。加えて、デキサメタゾンおよびＣＭＴは、これらが、構成的ＮＦ−κＢ発現の抗アポトーシス作用の阻害により、およびシグナル伝達経路活性を減少するホスファターゼの誘発により、抗炎症性であり、有害な作用を改善し得、且つ抗白血病活性を増強し得るので、補助薬物療法として使用される。
【００８４】
初期ＴＰＡ第１相研究に３５人の患者が登録した［２３人は、再発性／難治性ＡＭＬを有し、２人は他の骨髄性悪性腫瘍（ＣＭＬ急性転化、過剰な芽球を有する骨髄形成異常症）、３人は、ホジキン病を有し、３人は、非ホジキンリンパ腫を有し、４人は、固形腫瘍を有した］。大多数の患者は、再発性／難治性ＡＭＬを有した。本発明者たちの臨床結果は、安定した疾患を５か月間を超えて有し、８回のＴＰＡ注入を受けた１人のＡＭＬ患者を含む。第２のＡＭＬ患者では、循環芽球の数に顕著（５倍）な低下がＴＰＡ投与の後に見られた。白血病芽球におけるこの低下は４週間続き、患者は、最終的に真菌感染により死亡した。最後に、再発性および難治性ホジキン病を有する患者は、自家幹細胞救出による高用量化学療法にもかかわらず、ＴＰＡ投与の後に胸壁質量に部分的な寛解を有した。ＴＰＡ用量増加は、０．１８８ｍｇ／ｍ２の用量で１〜５日、８〜１２日まで治療された３人の患者のうち２人が第ＩＩＩ級非血液学的用量制限毒性（ＤＬＴ）を経験した最後のコホートにおいて完了し、最大耐容ＴＰＡ用量を単一薬剤として１〜５日および８〜１２日で０．１２５ｍｇ／ｍ２／日と確立した。
【００８５】
ＡＭＬおよび他の血液悪性腫瘍の場合では、患者には、６時間にわたる連続的／間欠的なパルス酸素計測法により投与される１ｍｇ／週×３週間（１、８、１５日目）のＴＰＡの初回用量を与える。ＴＰＡ療法を開始する２４時間前に、患者には、１０ｍｇのデキサメタゾンを６時間毎に与え、１５００ｍｇのトリサルチル酸コリンマグネシウム（ＣＭＴ）を、ＴＰＡ投与の２４時間後まで８時間毎に連続して与える。初回用量のＴＰＡを投与した後、患者は２週間の安静期間を有し、その後に再評価され得る。初回用量のＴＰＡによる疾患応答または安定化を有する患者は、下記のプロトコールに従って、２８日間の６サイクルまで治療される。
【００８６】
２週間の安静期間の後、患者は、ＴＰＡ投与の３０分前に６５０ｍｇのタイレノールおよび２５〜５０ｍｇ（患者のサイズおよび年齢に応じて決まる）のベナドリルにより予備薬物治療される。次に、彼らには中心静脈カテーテルによるＴＰＡの静脈内注入を、１週間あたり５日間で２週間続けて毎日与え、その後２週間の安静期間を与える。ＴＰＡは、２００ｍｌの通常の食塩水中の１ｍｇの用量を１時間かけて投与する。ＴＰＡ療法を開始する２４時間前に、患者には、１０ｍｇのデキサメタゾンを６時間毎に与え、１５００ｍｇのトリサルチル酸コリンマグネシウムを、ＴＰＡ投与の２４時間後まで８時間毎に連続して与える。
【００８７】
ＴＰＡの血中レベルを、有機溶媒抽出分化活性を測定するバイオアッセイの使用により、注入の前および後で測定する。１ｍｌの血液を５ｍｌの酢酸エチルにより２回抽出し、抽出残渣を５０μＬのエタノールに再溶解し、アリコートのＨＬ６０細胞を加える。４８時間後、接着細胞を測定する。
【００８８】
試験は、ＴＰＡの注入の前および後に採取した血液試料においても実施して、白血球、血小板、および好中球のレベルを決定する。試料を、骨髄芽球およびアウエル小体の存在について追加的に分析する。これらおよび継続実験は、ＡＭＬ、ならびに他の新生物および悪性状態における新生物細胞に対してＴＰＡが誘発する治療細胞毒性および他の作用を更に解明する。
【００８９】
実施例ＩＶ
ＥＲＫ活性化に対する調節の測定
ホスホＥＲＫレベルを、白血病の患者における循環悪性細胞およびリンパ腫／固形腫瘍の患者における末梢血単核球において測定する。血液試料を、実施例ＩＩＩのプロトコールに従って治療された患者から、ＴＰＡ投与の前および後の両方で採取する。
【００９０】
ＷＢＣが１μＬあたり１０００個以上である白血病患者において、フローサイトメトリーを、蛍光体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）に直接結合した細胞表面抗原特異的およびホスホＥＲＫ特異的抗体の使用により、血液試料において実施する。試料を、実施例ＩＩＩのプロトコールによる初回治療の１、２、および１１日目、ならびに続くサイクルの１および１１日目にＴＰＡの投与前およびＴＰＡ注入の１時間後に採取する。絶対白血病芽球数の１μＬあたり２５００個以上を有する白血病の患者および他の非白血病の患者において、末梢血試料を、注入の前、ならびに１および４時間後に、実施例ＩＩＩのプロトコールによる初回サイクルの１、８、および１５日目に採取する。また試料を、リン光体ＥＲＫによるウエスタンブロット分析を使用し、フローサイトメトリーにより得られ、臨床応答と相関する結果を確認した総ＥＲＫ１／２レベルを使用して、分析した。
【００９１】
前述の分析は、初代ＡＭＬ細胞により例示されている悪性細胞に対するＴＰＡの細胞毒性作用、およびリン光ＥＲＫ生存促進シグナルのＴＰＡによる関連する低減を含む、新生物および悪性状態の治療におけるＴＰＡの役割を更に解明する。
【００９２】
実施例Ｖ
ＮＦ−κＢ調節の測定
前の研究において、本発明者たちは、ＮＦ−κＢ活性が、ＴＰＡとデキサメタゾンの投与後に患者において調節され得ることを示した。さらに、デキサメタゾンは、ＭＫＰ−１ＥＲＫホスファターゼ発現を誘発し、ＴＰＡ細胞毒性を増強することが示されている。以下の研究は、ＮＦ−κＢ活性が、ＴＰＡとデキサメタゾンにより治療された患者においてどのように治療的に調節されるかを更に解明するように設計されている。
【００９３】
ＮＦ−κＢ結合は、ＥＬＩＳＡに基づいたアッセイ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＵＳＡ）を使用して、患者末梢血試料のベースライン、ならびに実施例ＩＩＩに従ってＴＰＡにより治療された患者の注入前および後で測定する。ＮＦ−κＢレベルは、９６ウエルフォーマットの使用による細胞抽出物の限定量の結合を検出する化学発光強度を使用して定量化する。さらに、電気泳動移動度シフトアッセイを実施して、１μＬあたり２５００個以上の絶対白血病芽球数を有する白血病患者および正常な白血球細胞カウントを有する非白血病患者からの末梢血試料における、ＮＦ−κＢ結合を測定する。
【００９４】
前述の研究は、ＴＰＡがＮＦ−κＢの誘発因子であることを更に示しているが、これらの実験は、ＡＭＬ細胞のＮＦ−κＢがデキサメタゾンおよびトリサルチル酸コリンマグネシウムによる治療で阻害され得ることを実証する。
【００９５】
実施例ＶＩ
脳卒中に罹患した個体の治療
患者Ｎ．Ｃ．、男性、６８歳は、ＴＰＡによる治療の１８か月前に脳卒中を罹患した。ＴＰＡ治療が開始された時点では、彼は杖なしでは歩行することができず、左手および左足の両方に困難を有し、疲労し、弱っていた。彼は、０．１９ｍｇのＴＰＡ（０．１２５ｍｇ／ｍ２）を含有する１つのアンプル剤の注射を１日おきに４週間、次に、０．２４ｍｇのＴＰＡ（１．２５×０．１２５ｍｇ／ｍ２）を１日おきに２週間、次に０．２６ｍｇのＴＰＡ（１．５×０．１２５ｍｇ／ｍ２）を１日おきに更に３週間、受けた。患者は完全に回復した。
【００９６】
患者Ｍ．Ｃ．、男性、６５歳は、ＴＰＡによる治療が開始される７年前に脳卒中を罹患した。彼は、０．１９ｍｇのＴＰＡ（０．１２５ｍｇ／ｍ２）の１週間あたり３〜４回の注入を１０週間にわたって受け、合計で３５回の注入を受けた。彼は、顔面の可動性を回復し、右側の可動性に８０％の改善を有した。
【００９７】
実施例ＶＩＩ
ＴＰＡによる塞栓性脳卒中モデルの治療
それぞれ２８０〜３５０ｇの体重を有する雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，Ｊａｐａｎ）を使用する。塞栓性脳卒中を、Ｋｕｄｏら（１９８２）による方法の変更に従って誘発する。血液の収集に使用されるラットに、自発呼吸させながら、１．０％のハロタン（Ｆｌｕｏｒｏｔｈａｎｅ（商標）；Ｔａｋｅｄａ，Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）で麻酔をかける。２４ゲージＳｕｒｆｌｏ（商標）（Ｔｅｒｕｍｏ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｌｋｔｏｎ，ＭＤ）を大腿動脈に固定し、０．１ｍＬの動脈血を１ｍＬの注射用シリンジ（Ｔｅｒｕｍｏ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｌｋｔｏｎ，ＭＤ）により採取する。シリンジ中の動脈血を、３０℃で２日間インキュベートして、血餅を形成する。その後、０．１ｍＬの生理食塩水を注射用シリンジに加え、２６ゲージ注射針（Ｔｅｒｕｍｏ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｌｋｔｏｎ，ＭＤ）に２回通過させて、血餅を粉砕する。
【００９８】
大脳塞栓性脳卒中が誘発されるラットに、自発呼吸させながら、１．０％のハロタンで麻酔をかける。ラットの頸部を正中切開し、外頸動脈、上甲状腺動脈、後頭動脈、および翼口蓋動脈を双極凝固器（Ｔ−４５；Ｋｅｉｓｅｉ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）により焼灼する。大脳塞栓症を、０．１ｍＬの破砕された血餅を内頸動脈に注入することにより誘発する。
【００９９】
大脳塞栓症の形成の評価は、レーザードップラー流速測定法（ＦｌｏＣ１；Ｏｍｅｇａｗａｖｅ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を使用して実施する。３０％未満のレベルまでの脳血流の減少を、塞栓形成の肯定的な証拠とする。脳血流は、血餅の注入の３０分後にモニターし、血流は、血餅の注入前の５０％以下の流量が残っているようにモニターする。その後、医薬の投与用のカニューレ（ＰＥ５０）を、頸静脈に固定し、動物を目覚めさせる。
【０１００】
大脳塞栓症の形成の成功したラットを４つの群に分ける。ラットの第１群には食塩水注射を１日おきに与える。第２〜４群には、０．１２５ｍｇ／ｍ２のＴＰＡの注射を１日おきに４週間にわたって与える。次に第２群を殺処分する。第３〜４群には、更に０．１５６ｍｇ／ｍ２のＴＰＡの注射を１日おきに２週間にわたって与え、次に第３群を殺処分する。第４群には、０．１８７７５ｍｇ／ｍ２のＴＰＡの注射を１日おきに３週間にわたって与え、次に殺処分する。
【０１０１】
動物を殺処分した後に脳を切除し、ＭｃＩｗａｉｎ組織細断機（Ｍｉｃｋｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｕ．Ｋ．）を使用して１ｍｍ間隔で１０枚の切片に薄切りし、２％のＴＴＣ（２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド；Ｔｏｋｙｏ  Ｋａｓｅｉ）に３７℃で２０分間浸けることにより染色する。ＴＴＣ染色切片の画像をデジタルカメラ（ＨＣ−２５００；Ｆｕｊｉ  ＰｈｏｔｏＦｉｌｍ）およびＰｈａｔｏｇｒａｂ−２５００（Ｆｕｊｉ  Ｐｈｏｔｏ  Ｆｉｌｍ）の使用によりコンピューターにアップロードし、梗塞体積を、Ｍａｃ  Ｓｃｏｐｅ（Ｍｉｔａｎｉ，Ｊａｐａｎ）の使用により計算する。梗塞体積は、平均値±標準偏差により与えられる。梗塞体積の結果の統計的検定に関して、評価は、対照群および対照群と比較したＴＰＡ投与群のそれぞれにダネット検定を実施し、次にＴＰＡ投与群にｔ検定を実施することによって行う。
【０１０２】
神経症状は、殺処分されるまで毎日観察し、ラットは、３つの検定に従って評価する。（１）ラットを尾により穏やかに保持し、床の上方１メートルに吊し、前肢の屈曲を観察する。（２）ラットを、鉤爪により堅く掴むことができる大型の軟らかいプラスチック被覆紙に上に置く。手により尾を保持することにより、前肢が数インチ移動するまで、穏やかな側圧がラットの肩部に適用される。（３）ラットを、自由に動き回らせて、旋回行動を観察する。神経症状のスコア付けは、Ｂｅｄｅｒｓｏｎら（１９８６）により開発されたスコアに従って実施され、以下の通りである。０  観察される欠陥なし、１  前肢の屈曲、２  旋回することなく、側面押しに対して抵抗が減少する、３  等級２と同じ行動であるが、旋回する。
【０１０３】
神経症状は、対照群および対照群と比較したＴＰＡ投与群のそれぞれにスチール検定を使用して評価し、次にＴＰＡ投与群にウィルコクソン検定を実施して評価する。いずれの評価においても、ｐ＜０．０５の値が統計的に有意であると定義される。
【０１０４】
実施例ＶＩＩＩ
永続的な中大脳動脈閉塞モデルを使用する脳卒中の治療におけるＴＰＡの有効性
雄Ｗｉｓｔａｒ（２５０〜３２０ｇ）をこの研究に使用する。動物にイソフルラン（３％で導入、１〜２％で維持）により麻酔をかける。麻酔は、足指のピンチによりモニターする。無菌技術をこの研究の全ての手順において使用する。手術部位をクリップで挟み、アルコールおよび手術用スクラブで洗浄する。動物を温水加熱パッドに置いて、体温を維持させる。正中傍切開を、頸動脈にわたって頸部に行う。組織を鈍的切開して、頸動脈および分岐点を露出させる。縫合糸を、近位部または総頸動脈および外頸動脈の周りに設置する。これらの縫合糸を結ぶ。切開を結紮の遠位にある総頸動脈に行う。予め調製したフィラメント（４−０モノフィラメント縫合糸または同様の材料）を動脈に設置し、内頸動脈に進める。フィラメントを、頸動脈分岐点を約２０ｍｍ超えて、中大脳動脈の中に押し込むように僅かな抵抗を感じるまで進める。フィラメントの挿入の際に動脈を破裂させないように注意しなければならない。フィラメントをその場に結び、皮膚切開を閉じる。動物を、目覚めたときに、閉塞の成功についてＢｅｄｅｒｓｏｎスケールの使用により評価する。（Ｂｅｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｓｔｒｏｋｅ，１７：１３０４−１３０８を参照すること。）体温は、１５分毎に取って、正常体温を維持する。中大脳動脈閉塞術を受けた動物は、手術の数時間後に体温調節に困難を有し得る。動物を体温によって冷却または加熱ボックスの中に置く。体温は、３７．５℃に維持する。動物を中大脳動脈後の６時間にわたってモニターし、次にケージに一晩置く。
【０１０５】
ラットを４群に分ける。ラットの第１群には食塩水注射を１日おきに与える。第２〜４群には、０．１２５ｍｇ／ｍ２のＴＰＡの注射を１日おきに４週間にわたって与える。次に第２群を殺処分する。第３〜４群には、更に０．１５６ｍｇ／ｍ２のＴＰＡの注射を１日おきに２週間にわたって与え、次に第３群を殺処分する。第４群には、０．１８７７５ｍｇ／ｍ２のＴＰＡの注射を１日おきに３週間にわたって与え、次に殺処分する。
【０１０６】
動物を殺処分した後に脳を切除し、ＭｃＩｗａｉｎ組織細断機（Ｍｉｃｋｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｕ．Ｋ．）を使用して１ｍｍ間隔で１０枚の切片に薄切りし、２％のＴＴＣ（２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド；Ｔｏｋｙｏ  Ｋａｓｅｉ）に３７℃で２０分間浸けることにより染色する。ＴＴＣ染色切片の画像をデジタルカメラ（ＨＣ−２５００；Ｆｕｊｉ  ＰｈｏｔｏＦｉｌｍ）およびＰｈａｔｏｇｒａｂ−２５００（Ｆｕｊｉ  Ｐｈｏｔｏ  Ｆｉｌｍ）の使用によりコンピューターにアップロードする。脳切片を撮影し、梗塞の大きさ、梗塞の体積、境界域、および浮腫について分析する。
【０１０７】
神経症状を、殺処分するまで毎日観察する。神経症状は、殺処分されるまで毎日観察し、ラットは、３つの検定に従って評価する。（１）ラットを尾により穏やかに保持し、床の上方１メートルに吊し、前肢の屈曲を観察する。（２）ラットを、鉤爪により堅く掴むことができる大型の軟らかいプラスチック被覆紙に上に置く。手により尾を保持することにより、前肢が数インチ移動するまで、穏やかな側圧がラットの肩部に適用される。（３）ラットを、自由に動き回らせて、旋回行動を観察する。神経症状のスコア付けは、Ｂｅｄｅｒｓｏｎら（１９８６）により開発されたスコアに従って実施され、以下の通りである。０  観察される欠陥なし、１  前肢の屈曲、２  旋回することなく、側面押しに対して抵抗が減少する、３  等級２と同じ行動であるが、旋回する。
【０１０８】
神経症状は、対照群および対照群と比較したＴＰＡ投与群のそれぞれにスチール検定を使用して評価し、次にＴＰＡ投与群にウィルコクソン検定を実施して評価する。いずれの評価においても、ｐ＜０．０５の値が統計的に有意であると定義される。
【０１０９】
実施例ＩＸ
一時的な中大脳動脈閉塞モデルを使用する脳卒中の治療におけるＴＰＡの有効性
雄Ｃ５７Ｂ１６マウス（２５〜３０ｇ）をこの研究に使用する。マウスにイソフルラン（３％で導入、１〜２％で維持）により麻酔をかける。手術部位をクリップで挟み、アルコールおよび手術用スクラブで洗浄する。正中頸部切開を、頸動脈にわたって行い、動脈をその分岐点まで切開する。モノフィラメント縫合糸を内頸動脈に導入し、中大脳動脈に留まるまで進める。縫合糸をその場に結び、切開を閉じる。閉塞の２時間後、マウスに再び麻酔をかけ、縫合糸を中大脳動脈（ＭＣＡ）から取り外す。体温は、手術の間および後の両方において、加熱バッドの使用により維持する。動物を中大脳動脈閉塞後の４時間にわたってモニターする。
【０１１０】
ラットを４群に分ける。ラットの第１群には食塩水注射を１日おきに与える。第２〜４群には、０．１２５ｍｇ／ｍ２のＴＰＡの注射を１日おきに４週間にわたって与える。次に第２群を殺処分する。第３〜４群には、更に０．１５６ｍｇ／ｍ２のＴＰＡの注射を１日おきに２週間にわたって与え、次に第３群を殺処分する。第４群には、０．１８７７５ｍｇ／ｍ２のＴＰＡの注射を１日おきに３週間にわたって与え、次に殺処分する。
【０１１１】
動物を殺処分した後に脳を切除し、ＭｃＩｗａｉｎ組織細断機（Ｍｉｃｋｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｕ．Ｋ．）を使用して１ｍｍ間隔で１０枚の切片に薄切りし、２％のＴＴＣ（２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド；Ｔｏｋｙｏ  Ｋａｓｅｉ）に３７℃で２０分間浸けることにより染色する。ＴＴＣ染色切片の画像をデジタルカメラ（ＨＣ−２５００；Ｆｕｊｉ  ＰｈｏｔｏＦｉｌｍ）およびＰｈａｔｏｇｒａｂ−２５００（Ｆｕｊｉ  Ｐｈｏｔｏ  Ｆｉｌｍ）の使用によりコンピューターにアップロードする。脳切片を撮影し、梗塞の大きさ、梗塞の体積、境界域、および浮腫について分析する。
【０１１２】
神経症状は、殺処分されるまで毎日観察し、ラットは、３つの検定に従って評価する。（１）ラットを尾により穏やかに保持し、床の上方１メートルに吊し、前肢の屈曲を観察する。（２）ラットを、鉤爪により堅く掴むことができる大型の軟らかいプラスチック被覆紙に上に置く。手により尾を保持することにより、前肢が数インチ移動するまで、穏やかな側圧がラットの肩部に適用される。（３）ラットを、自由に動き回らせて、旋回行動を観察する。神経症状のスコア付けは、Ｂｅｄｅｒｓｏｎら（１９８６）により開発されたスコアに従って実施され、以下の通りである。０  観察される欠陥なし、１  前肢の屈曲、２  旋回することなく、側面押しに対して抵抗が減少する、３  等級２と同じ行動であるが、旋回する。
【０１１３】
神経症状は、対照群および対照群と比較したＴＰＡ投与群のそれぞれにスチール検定を使用して評価し、次にＴＰＡ投与群にウィルコクソン検定を実施して評価する。いずれの評価においても、ｐ＜０．０５の値が統計的に有意であると定義される。
【０１１４】
実施例Ｘ
脳卒中を治療するＴＰＡの使用における臨床有効性
１か月未満の前に脳卒中を罹患した年齢が３０〜７２歳の男性および女性が、ＴＰＡの１０週間試験に参加するように動員される。
【０１１５】
動員された個人は、インフォームドコンセントのフォームに署名し、コンピューター断層撮影法（ＣＴ）、身体的および神経学的試験、神経学的検査、鎮静レベル、国立衛生研究所の脳卒中アンケート（ＮＩＨＳＳ）、１２誘導心電図、心電図の遠隔測定、パルス酸素測定、生命徴候、体重、患者の背景、妊娠検査、尿中の医薬の測定、血液学的検査、凝固パネル、一般的臨床検査、尿検査を使用して評価される。臨床検査には、完全代謝パネル（Ｎａ、Ｋ、Ｃｌ、ＣＯ２、Ｇｌｕ、ＢＵＮ、Ｃｒ、Ｃａ、ＴＰ、Ａｌｂ、ＴＢｉｌｉ、ＡＰ、ＡＳＴ、ＡＬＴ）、血液学ＣＢＣ（Ｈｇｂ、Ｈｃｔ、ＲＢＣ、ＷＢＣ、Ｐｌｔ、Ｄｉｆｆ）、および全ての女性のための血清ｈＣＧが含まれる。
【０１１６】
個人には、０．１２５ｍｇ／ｍ２のＴＰＡまたはプラセボを１日おきに４週間にわたって、次に１．２５×０．１２５ｍｇ／ｍ２またはプラセボを１日おきに５週目と６週目に、１．５×０．１２５ｍｇ／ｍ２またはプラセボを１日おきに７週目から９週目に投与する。個人を、ＴＰＡまたはプラセボの投与中および投与後の２時間にわたってモニターする。
【０１１７】
第５および１０週目に、対象を、ＮＩＨＳＳ（ＮＩＨ脳卒中スケール）、Ｂａｒｔｈｅｌ  ＡＤＬ指数（Ｇｒａｎｇｅｒ，１９７９）、および改変Ｒａｎｋｉｎスケール（Ｆａｒｒｅｌｌ，１９９１）の使用により評価する。
【０１１８】
有効性は、プラセボと比較した、ＴＰＡにより治療された個人におけるＮＩＨＳＳのベースラインからの変化を測定することによって決定される。二次効能変数は、Ｂａｒｔｈｅｌ  ＡＤＬ指数および改変Ｒａｎｋｉｎスケールである。安全性の測定がまとめられ、試験の全体にわたって評価され、特に訪問時のベースラインから５週目までの変化の測定が評価される。これらの測定には、有害事象の報告、身体検査、生命徴候、体重測定値、ＥＣＧ、臨床検査の結果、および生命徴候、ならびに自殺行動および／または観念化が含まれる。有害事象は、研究薬剤と因果関係があるかにかかわらず、研究薬剤が投与された対象に生じる任意の都合の悪い医療事象である。したがって、有害事象は、研究薬剤と関連すると考慮されるかにかかわらず、研究薬剤と一時的に関連する任意の好ましくない、または意図されない徴候（例えば、異常な検査所見）、症状、または障害であり得る。
【０１１９】
対象は、全ての訪問を完了すると、研究を完了したと考慮される。組み入れ／除外規準を満たすことに失敗する、有害事象に苦しむ、不十分な治療応答を有する、同意書を取り消す、プロトコールに違反する、来院を止める、または死亡する場合に、研究が終了になり得る。
【０１２０】
参考文献
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Ｃｕｉ  Ｘ  Ｘ，  Ｃｈａｎｇ  Ｒ  Ｌ，  Ｚｈｅｎｇ  Ｘ，  Ｗｏｏｄｗａｒｄ  Ｄ，  Ｓｔｒａｉｒ  Ｒ，  ａｎｄ  Ｃｏｎｎｅｙ  Ａ  Ｈ．  Ａ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｂｉｏａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ｂｌｏｏｄ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  １２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ−１３−ａｃｅｔａｔｅ  （ＴＰＡ）  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ：  ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ．  Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｓ  ２００２；  １３：  １６９−７４．
Ｄｅｅｇａｎ  Ｍ．  Ｊ．，  Ｍａｅｄａ  ｋ．  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ  ａｆｔｅｒ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｏｒ  ｐｈｏｒｂｏｌ  ｅｓｔｅｒ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ａｎｄ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ．  Ａｍ  Ｊ  Ｈｅｒｍａｔｏｌ．  １７（４），  ３３５−４７  （１９８４）．
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Ｆａｒｒｅｌｌ  Ｂ，  Ｇｏｄｗｉｎ  Ｊ，  Ｒｉｃｈａｒｄｓ  Ｓ，  Ｗａｒｌｏｗ  Ｃ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）．  “Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｉｓｃｈａｅｍｉｃ  ａｔｔａｃｋ  （ＵＫ−ＴＩＡ）  ａｓｐｉｒｉｎ  ｔｒｉａｌ：  ｆｉｎａｌ  ｒｅｓｕｌｔｓ．”  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ５４  （１２）：  １０４４−１０５４．
Ｆｏｒｂｅｓ  Ｉ．  Ｊ．，  Ｚａｌｅｗｓｋｉ  Ｐ．  Ｄ．，  Ｌｅｔａｒｔｅ  Ｍ．  Ｈｕｍａｎ  Ｂ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｒｅｖｅａｌｅｄ  ｂｙ  ＴＰＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｅｕｋａｅｍｉ  ｃｅｌｌｓ．  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  １６３（１），  １−６  （１９８２）．
Ｇｕｎｊａｎ  Ｇｏｅｌ，  Ｈａｒｉｎｄｅｒ  Ｐ．  Ｓ．  Ｍａｋｋａｒ，  Ｇｅｏｒｇｅ  Ｆｒａｎｃｉｓ，  ａｎｄ  Ｋｌａｕｓ  Ｂｅｃｋｅｒ．  Ｐｈｏｒｂｏｌ  Ｅｓｔｅｒｓ：  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ，  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎ  Ａｎｉｍａｌｓ．  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，  ２６：２７９−２８８，  ２００７．Ｇｏｇｕｓｅｖ  Ｊ．，  Ｂａｒｂｅｙ  Ｓ．，  Ｎｅｚｅｌｏｆ  Ｃ．  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴＮＦ−ａｌｐｈａ  ａｎｄ  ＩＬ−１  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ＴＰＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ   “Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｈｉｓｔｉｏｃｙｏｓｉｓ”  ＤＥＬ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ｔ（５：６）  （ｑ３５：Ｐ２１）．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １６（１），  ４５５−６０  （１９９６）．
Ｇｒａｎｇｅｒ  ＣＶ，  Ｄｅｖｉｓ  ＬＳ，  Ｐｅｔｅｒｓ  ＭＣ，  Ｓｈｅｒｗｏｏｄ  ＣＣ，  Ｂａｒｒｅｔｔ  ＪＥ．  Ｓｔｒｏｋｅ  ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ：  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｒｅｐｅａｔｅｄ  Ｂａｒｔｈｅｌ  Ｉｎｄｅｘ  ｍｅａｓｕｒｅｓ．  Ａｒｃｈ  Ｐｈｙｓ  Ｍｅｄ  Ｒｅｈａｂｉｌ．  １９７９；６０：１４−１７．
Ｈａｎ  Ｚ  Ｔ，  Ｚｈｕ  Ｘ  Ｘ，  Ｙａｎｇ  Ｒ  Ｙ，  Ｓｕｎ  Ｊ  Ｚ，  Ｔｉａｎ  Ｇ  Ｆ，  Ｌｉｕ  Ｘ  Ｊ，  Ｃａｏ  Ｇ  Ｓ，  Ｎｅｗｍａｒｋ  Ｈ  Ｌ，  Ｃｏｎｎｅｙ  Ａ  Ｈ，  ａｎｄ  Ｃｈａｎｇ  Ｒ  Ｌ．  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｎｆｕｓｉｏｎｓ  ｏｆ  １２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ−１３−ａｃｅｔａｔｅ  （ＴＰＡ）  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：  ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １９９８；  ９５：  ５３５７−６１．
Ｈａｎ  Ｚ．  Ｔ．，  Ｔｏｎｇ  Ｙ．  Ｋ．，  Ｈｅ  Ｌ．  Ｍ．，  Ｚｈａｎｇ  Ｙ．，  Ｓｕｎ  Ｊ．  Ｚ．，  Ｗａｎｇ  Ｔ．  Ｙ．，  Ｚｈａｎｇ  Ｈ．，  Ｃｕｉ  Ｙ．  Ｌ．，  Ｎｅｗｍａｒｋ  Ｈ．  Ｌ．，  Ｃｏｎｎｅｙ  Ａ．  Ｈ．，  Ｃｈａｎｇ  Ｒ．  Ｌ．  １２−Ｏ−Ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌ−ｐｈｏｒｂｏｌ−１３−ａｃｅｔａｔｅ  （ＴＰＡ）  −ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｄｅｐｒｅｓｓｅｄ  ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ９５，  ５３６３−５３６５  （１９９８）．
Ｈａｎ  Ｚ．Ｔ．，  Ｚｈｕ  Ｘ．  Ｘ．，  Ｙａｎｇ  Ｒ．  Ｙ．，  Ｓｕｎ  Ｊ．  Ｚ．，  Ｔｉａｎ  Ｇ．  Ｆ．，  Ｌｉｕ  Ｘ．  Ｊ．，  Ｃａｏ  Ｇ．  Ｓ．，  ＮｅｗＭａｒｋ  Ｈ．  Ｌ．，  Ｃｏｎｎｅｙ  Ａ．  Ｈ．，  ａｎｄ  Ｃｈａｎｇ  Ｒ．  Ｌ．  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  １２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌ−ｐｈｏｒｂｏｌ−１３−ａｃｅｔａｔｅ  （ＴＰＡ）  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：  ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ．  Ｐｒｏ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ９５，  ５３５７−５３６１  （１９９８）．  
Ｈａｒａｄａ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．：  Ｔｕｍｏｒ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ，  ＴＰＡ，  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ．  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １５４，  ２４９−２５８  （１９８６）．
Ｈｅｃｋｅｒ  Ｅ．  Ｉｎ  ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ａｌｌｇｅｍｅｉｎｅｎ  ｐａｔｈｏｌｇｉｅ，  ｅｄ．  Ｇｒｕｎｄｍａｎｎ，  Ｅ．  （Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｂｅｒｌｉｎ−Ｈｅｉｄｅｉｂｅｒｇ，  Ｖｏｌ．  ＩＶ  １６，  ６５１−６７６  （１９７５）．
Ｈｅｃｋｅｒ  Ｅ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  −ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ  ｉｎ  ｄｅｔｅｒｐｅｎｅ  ｅｓｔｅｒｓ  ｉｒｒｉｔａｎｔ  ａｎｄ  ｃｏ−ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃ  ｔｏ  ｍｏｕｓｅ  ｓｋｉｎ，  ｉｎ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏ−ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．  Ｅｄｓ．  Ｓｌａｇａ，  Ｔ．  Ｊ．，  Ｓｅｖａｋ，  Ａ．  ｊ．  ａｎｄ  Ｂｏｕｔｗｅｌｌ，  Ｒ．Ｋ．  Ｒａｖｅｎ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １１−４９  （１９７８）．
Ｈｏｆｍａｎｎ  Ｊ．  Ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ．  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  １１，  ６４９−６６９  （１９９７）．
Ｈｕｂｅｒｍａｎ  Ｅ．，  Ｃａｌｌａｈａｍ  Ｍ．  Ｆ．  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｔｕｍｏｒ−ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ．    Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．７６，  １２９３−１２９７  （１９７９）．  
Ｈｕｎｔｅｒ  Ｔ．  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ２０００  ａｎｄ  ｂｅｙｏｎｄ．  Ｃｅｌｌ  １００，  １１３−１１７  （２０００）．
Ｋａｓｓｅｌ  Ｏ，  Ｓａｎｃｏｎｏ  Ａ，  Ｋｒａｔｚｓｃｈｍａｒ  Ｊ，  Ｋｒｅｆｔ  Ｂ，  Ｓｔａｓｓｅｎ  Ｍ，  ａｎｄ  Ｃａｔｏ  Ａ  Ｃ．  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ＭＡＰ  ｋｉｎａｓｅ  ｖｉａ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｃｒｅａｓｅｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＫＰ−１．  Ｅｍｂｏ  Ｊ  ２００１；  ２０：  ７１０８−１６．
Ｋａｚａｎｉｅｔｚ  Ｍ．Ｇ．  Ｅｙｅｓ  Ｗｉｄｅ  Ｓｈｕｔ：  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ｉｓｏｅｎｚｙｍｅｓ  ａｒｅ  ｎｏｔ  ｔｈｅ  ｏｎｌｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｈｏｒｂｏｌ  ｅｓｔｅｒ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ．  Ｍｏｌ．  Ｃａｒｃｉｎｏｇ．  ２８，  ５−１２  （２０００）．
Ｋｅｏｆｆｌｅｒ  Ｈ．  Ｐ．，  Ｂａｒ−Ｅｌｉ  Ｍ．，  Ｔｅｒｒｉｔｏ  Ｍ．  Ｃ．  Ｐｈｏｒｂｏｌ  ｅｓｔｅｒ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ  ｌｉｎｅｓ  ｂｌｏｃｋｅｄ  ａｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｓｔａｇｅｓ  ｏｆ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４１，  ９１９−９２６  （１９８１）．  
Ｋｉｍ  Ｓ  Ｃ，  Ｈａｈｎ  Ｊ  Ｓ，  Ｍｉｎ  Ｙ  Ｈ，  Ｙｏｏ  Ｎ  Ｃ，  Ｋｏ  Ｙ  Ｗ，  ａｎｄ  Ｌｅｅ  Ｗ  Ｊ．  Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ａｃｕｔｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａｓ：  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＥＫ，  ｈｙｐｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｋｉｎａｓｅ，  ａｎｄ  ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，  ＰＡＣ１．  Ｂｌｏｏｄ  １９９９；  ９３：  ３８９３−９．
Ｋｉｙｏｉ  Ｈ，  Ｎａｏｅ  Ｔ，  Ｎａｋａｎｏ  Ｙ，  Ｙｏｋｏｔａ  Ｓ，  Ｍｉｎａｍｉ  Ｓ，  Ｍｉｙａｗａｋｉ  Ｓ，  Ａｓｏｕ  Ｎ，  Ｋｕｒｉｙａｍａ  Ｋ，  Ｊｉｎｎａｉ  Ｉ，  Ｓｈｉｍａｚａｋｉ  Ｃ，  Ａｋｉｙａｍａ  Ｈ，  Ｓａｉｔｏ  Ｋ，  Ｏｈ  Ｈ，  Ｍｏｔｏｊｉ  Ｔ，  Ｏｍｏｔｏ  Ｅ，  Ｓａｉｔｏ  Ｈ，  Ｏｈｎｏ  Ｒ，  ａｎｄ  Ｕｅｄａ  Ｒ．  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＬＴ３  ａｎｄ  Ｎ−ＲＡＳ  ｇｅｎｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｂｌｏｏｄ  １９９９；  ９３：  ３０７４−８０．
Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｍ．，  Ｏｋａｄａ  Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  ａｌｐｈａ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｇｉｎｇｉｖａｌ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ  ｉｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．  Ｊ  Ｄｅｎｔ  Ｒｅｓ．  ７８（４），  ８４０−９  （１９９９）．
Ｋｕｄｏ  Ｍ．，  Ａｏｙａｍａ  Ａ．，  Ｉｃｈｉｍｏｒｉ  Ｓ．  ａｎｄ  Ｆｕｋｕｎａｇａ  Ｎ．  Ａｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ：  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｂｌｏｏｄ  ｃｌｏｔ  ｅｍｂｏｌｉ  ｉｎ  ｒａｔｓ．  Ｓｔｒｏｋｅ  １３：  ５０５−５０８  （１９８２）
Ｌｅｂｉｅｎ  Ｔ．  Ｗ．，  Ｂｏｌｌｕｍ  Ｆ．  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｈｏｒｂｏｌ  ｅｓｔｅｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｎ−Ｔ，  ｎｏｎ−Ｂ  ｌｅｕｄｅｍｉｃ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ：  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２８（３），  １３１６−２０  （１９８２）．
ＭＤ  Ｉｑｂａｌ  Ｈｏｓｓａｉｎ  Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｐｈｏｒｂｏｌ  Ｅｓｔｅｒ  ＴＰＡ  Ｓｔｒｏｎｇｌｙ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ＨＩＶ−１  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｓｙｎｃｙｔｉａ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｕｔ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｖｉｒｕｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ：  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ｐａｔｈｗａｙ．  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６，  １２６−１３２，  （１９９０）．
Ｍｅｉｎｈａｒｄｔ  Ｇ．，  Ｒｏｔｈ  Ｊ．，  Ｈａｓｓ  Ｒ．  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ｒｅｌａｙｓ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓａｍｅ  ｃｅｌｌ  ｔｙｐｅ：  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｓｐａｓｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ．  ７，  ７９５−８０３  （２０００）．
Ｍｉｌｅｌｌａ  Ｍ，  Ｋｏｒｎｂｌａｕ  Ｓ  Ｍ，  Ｅｓｔｒｏｖ  Ｚ，  Ｃａｒｔｅｒ  Ｂ  Ｚ，  Ｌａｐｉｌｌｏｎｎｅ  Ｈ，  Ｈａｒｒｉｓ  Ｄ，  Ｋｏｎｏｐｌｅｖａ  Ｍ，  Ｚｈａｏ  Ｓ，  Ｅｓｔｅｙ  Ｅ，  ａｎｄ  Ａｎｄｒｅｅｆｆ  Ｍ．  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＭＥＫ／ＭＡＰＫ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｍｏｄｕｌｅ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００１；  １０８：  ８５１−９．Ｍｏｃｈｔｙ−Ｒｏｓｅｎ  Ｄ．，  Ｋａｕｖａｒ  Ｌ．  Ｍ．  Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ．  Ａｄｖ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ４４，  ９１−１４５  （１９９８）．
Ｍｏｒｇａｎ  Ｍ  Ａ，  Ｄｏｌｐ  Ｏ，  ａｎｄ  Ｒｅｕｔｅｒ  Ｃ  Ｗ．  Ｃｅｌｌ−ｃｙｃｌｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｋｉｎａｓｅ  （ＭＥＫ−１／２）  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ＲＡＳ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．  Ｂｌｏｏｄ  ２００１；  ９７：  １８２３−３４．
Ｎａｇａｓａｗａ  Ｋ．，  Ｃｈｅｃｈｇｉｋ  Ｂ．  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｂｙ  １２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂａｌ−１３−ａｃｅｔａｔｅ．  Ｔｈｙｍｕｓ．  ３（４−５），  ３０７−１８，  （１９８１）．
Ｎａｋａｏ  Ｙ．，  Ｍａｔｓｕｄａ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｐａｒａｄｏｘｉｃａｌ  ａｎｔｉ−ｌｅｕｋｅｍｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｌａｎｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ  ｏｎ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｔｈｙｍｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ３０（６），  ６８７−９５  （１９８２）．
Ｎａｋａｏ  Ｙ．，  Ｍａｔｓｕｄａ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｈｏｒｂｏｌ  ｅｓｔｅｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ＨＰＢ−ＡＬＬ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４２（９），  ３３８４３−５０  （１９８２）．
Ｎｅｗｔｏｎ  Ａ．Ｃ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ：  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０，  ２８４９５−２８４９９  （１９９５）．
Ｐａｌｏｍｂｅｌｌａ  Ｖ  Ｊ，  Ｒａｎｄｏ  Ｏ  Ｊ，  Ｇｏｌｄｂｅｒｇ  Ａ  Ｌ，  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔ．  Ｔｈｅ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ＮＦ−ｋａｐｐａ  Ｂ１  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＮＦ−ｋａｐｐａ  Ｂ．  Ｃｅｌｌ  １９９４；  ７８：  ７７３−８５．
Ｐｌａｔａｎｉａｓ  Ｌ  Ｃ．  Ｍａｐ  ｋｉｎａｓｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ａｎｄ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．  Ｂｌｏｏｄ  ２００３；  １０１：  ４６６７−７９．
Ｒｏｖｅｒａ  Ｇ．，  Ｓａｎｔｏｌｉ  Ｄ．，  Ｄａｍｓｋｙ  Ｃ．  Ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ  ｉｎｔｏ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−ｌｉｋｅ  ｃｅｌｌｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａ  ｐｈｏｒｂｏｌ  ｄｉｅｓｔｅｒ．  Ｐｒｏ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ７，  ２７７９−２７８３  （１９７９）．
ＹＩＰ，  Ｙ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｇａｍｍａ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｄｉｔｅｒｐｅｎｅ  ｅｓｔｅｒｓ．  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３４（１）  １３１−１３９  （１９８１）．
【０１２１】
Ｚｈａｏ  Ｊ．，  Ｓｈａｒｍａ  Ｙ．，  Ａｇａｒｗａｌ  Ｒ．  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｆｌａｖｏｎｏｉｄ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ｓｉｌｙｍａｒｉｎ  ａｇａｉｎｓｔ  １２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ  １３−ａｃｅｔａｔｅ−ｃａｕｓｅｄ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｎｄ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ２  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−Ｉ  ａｌｐｈａ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ＳＥＮＣＡＲ  ｍｏｕｓｅ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔａｇｅ  １  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ．  Ｍｏｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｇ．  ２６（４），  ３２１−３３  （１９９９）．
【手続補正書】
【提出日】平成30年3月8日(2018.3.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類対象における脳卒中に起因する損なわれた可動性を予防または治療するための医薬の製造における、式Ｉのホルボールエステルまたはその薬学的に許容される塩、異性体、もしくは鏡像異性体の使用、ここで
【化１】
2018109014.tif 000048
式Ｉ
式中、Ｒ１およびＲ２が、水素、ヒドロキシル、
【化２】
2018109014.tif 000049
ここで該アルキル基は１〜１５の炭素原子を含み、
【化３】
2018109014.tif 000050
ここで該低級アルケニル基は１〜７の炭素原子を含み、
【化４】
2018109014.tif 000051
からなる群から選択され、Ｒ３が、水素、および
【化５】
2018109014.tif 000052
ここで該低級アルキル基は１〜７の炭素原子を含み、
からなる群から選択される、前記使用。
【請求項２】
Ｒ１またはＲ２が、
【化６】
2018109014.tif 000053
であり、残りのＲ１またはＲ２が、
【化７】
2018109014.tif 000054
であり、Ｒ３が水素である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記医薬が前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するための組み合わせ製剤であり、該組み合わせ製剤の製造における、式Ｉの前記ホルボールエステルとの組み合わせ製剤において有効である少なくとも１つの二次または補助治療剤の使用、または
前記医薬が協調的治療レジメン用医薬と用いられるためのものであり、前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するための該協調的治療レジメン用医薬の製造における式Ｉの前記ホルボールエステルとの協調的治療レジメンにおいて有効である少なくとも１つの二次または補助治療剤の使用を更に含む、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記少なくとも１つの二次または補助治療剤が、協調投与プロトコールにおいて、前記対象への前記ホルボールエステルの投与と同時、投与の前、または投与の後で、前記対象に投与されるためのものである、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記少なくとも１つの二次または補助治療剤が、組織プラスミノーゲン活性化因子、抗凝固剤、スタチン、フィブレート、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、β遮断薬、抗血小板剤、カルシウムチャネル遮断薬、または利尿剤である、請求項３に記載の使用。
【請求項６】
前記対象における損なわれた可動性の治療または予防が、式Ｉのホルボールエステルを含む医薬の投与と組み合わせた外科的介入を更に含むものであるための、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記外科的介入が、頸動脈内膜剥離術、血管形成術、ステント留置術、開頭術、ペースメーカーの挿入、除細動器の埋め込み、弁置換術、冠動脈バイパス術、心臓移植、血管内コイル塞栓術、または卵円孔開存閉鎖術である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
哺乳類対象における１つ以上の脳卒中の影響を予防または治療するための組成物であって、式Ｉのホルボールエステルまたはその薬学的に許容される塩、異性体、もしくは鏡像異性体の有効量を含み、
【化８】
2018109014.tif 000055
式Ｉ
式中、Ｒ１およびＲ２が、水素、ヒドロキシル、
【化９】
2018109014.tif 000056
ここで該アルキル基は１〜１５の炭素原子を含み、
【化１０】
2018109014.tif 000057
ここで該低級アルケニル基は１〜７の炭素原子を含み、
【化１１】
2018109014.tif 000058
からなる群から選択され、Ｒ３が、水素、および
【化１２】
2018109014.tif 000059
ここで該低級アルキル基は１〜７の炭素原子を含み、
からなる群から選択され、
前記１つ以上の脳卒中の影響が、麻痺、空間障害、判断障害、左半側無視、記憶喪失、失語症、協調および平衡の問題、嘔気、嘔吐、認知障害、知覚障害、見当識障害、同名半盲、損なわれた可動性または衝動性である、前記組成物。
【請求項９】
Ｒ１またはＲ２が、
【化１３】
2018109014.tif 000060
であり、残りのＲ１またはＲ２が、
【化１４】
2018109014.tif 000061
であり、Ｒ３が水素である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するために、式Ｉの前記ホルボールエステルとの組み合わせ製剤において有効である少なくとも１つの二次または補助治療剤を更に含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの二次または補助治療剤が、組織プラスミノーゲン活性化因子、抗凝固剤、スタチン、フィブレート、抗血小板剤、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、または利尿剤である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
脳卒中の危険性のある哺乳類対象において脳卒中に起因する損なわれた可動性を予防または治療するための医薬の製造における、式Ｉのホルボールエステルまたはその薬学的に許容される塩、異性体、もしくは鏡像異性体の使用、ここで
【化１５】
2018109014.tif 000062
式Ｉ
式中、Ｒ１およびＲ２が、水素、ヒドロキシル、
【化１６】
2018109014.tif 000063
ここで該アルキル基は１〜１５の炭素原子を含み、
【化１７】
2018109014.tif 000064
ここで該低級アルケニル基は１〜７の炭素原子を含み、
【化１８】
2018109014.tif 000065
からなる群から選択され、Ｒ３が、水素、および
【化１９】
2018109014.tif 000066
ここで該低級アルキル基は１〜７の炭素原子を含み、
からなる群から選択される、前記使用。
【請求項１３】
Ｒ１またはＲ２が、
【化２０】
2018109014.tif 000067
であり、残りのＲ１またはＲ２が、
【化２１】
2018109014.tif 000068
であり、Ｒ３が水素である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記医薬が前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するための組み合わせ製剤であり、該組み合わせ製剤の製造における、式Ｉの前記ホルボールエステルとの組み合わせ製剤において有効である少なくとも１つの二次または補助治療剤の使用、または
前記医薬が協調的治療レジメン用医薬と用いられるためのものであり、前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するための該協調的治療レジメン用医薬の製造における式Ｉの前記ホルボールエステルとの協調的治療レジメンにおいて有効である少なくとも１つの二次または補助治療剤の使用を更に含む、請求項１２に記載の使用。
【請求項１５】
前記二次または補助治療剤が、式Ｉの前記ホルボールエステルの投与と同時、投与の前、または投与の後に投与されるためのものである、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記少なくとも１つの二次または補助治療剤が、抗凝固剤、スタチン、フィブレート、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、抗血小板剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、または利尿剤である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１７】
前記対象における損なわれた可動性の治療または予防が、式Ｉのホルボールエステルを含む医薬の投与と組み合わせた外科的介入を更に含むものである、請求項１２に記載の使用。
【請求項１８】
前記外科的介入が、頸動脈内膜剥離術、血管形成術、ステント留置術、開頭術、ペースメーカーの挿入、除細動器の埋め込み、弁置換術、冠動脈バイパス術、心臓移植、血管内コイル塞栓術、または卵円孔開存閉鎖術である、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
式Iのホルボールエステルが１２‐Ｏ‐テトラデカノイルホルボール‐１３‐アセタート（ＴＰＡ）である、請求項１又は１２に記載の使用。
【請求項２０】
前記ホルボールエステルが、ホルボール１３−ブチレート、ホルボール１２−デカノエート、ホルボール１３−デカノエート、ホルボール１２，１３−ジアセテート、ホルボール１３，２０−ジアセテート、ホルボール１２，１３−ジベンゾエート、ホルボール１２，１３−ジブチレート、ホルボール１２，１３−ジデカノエート、ホルボール１２，１３−ジヘキサノエート、ホルボール１２，１３−ジプロピオネート、ホルボール１２−ミリステート、ホルボール１３−ミリステート、ホルボール１２，１３，２０−トリアセテート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート−２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−テトラデカノエート、ホルボール１２−チグリエート１３−デカノエート、１２−デオキシホルボール１３−アセテート、ホルボール１２−アセテート、またはホルボール１３−アセテートである、請求項１または１２に記載の使用。
【請求項２１】
前記医薬が、式Iのホルボールエステルを約10〜約1500μg含む、請求項１または１２に記載の使用。
【請求項２２】
前記医薬の用量が、一日当たりの用量である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
式Iのホルボールエステルが１２‐Ｏ‐テトラデカノイルホルボール‐１３‐アセタート（ＴＰＡ）である、請求項８に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ホルボールエステルが、ホルボール１３−ブチレート、ホルボール１２−デカノエート、ホルボール１３−デカノエート、ホルボール１２，１３−ジアセテート、ホルボール１３，２０−ジアセテート、ホルボール１２，１３−ジベンゾエート、ホルボール１２，１３−ジブチレート、ホルボール１２，１３−ジデカノエート、ホルボール１２，１３−ジヘキサノエート、ホルボール１２，１３−ジプロピオネート、ホルボール１２−ミリステート、ホルボール１３−ミリステート、ホルボール１２，１３，２０−トリアセテート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート−２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−テトラデカノエート、ホルボール１２−チグリエート１３−デカノエート、１２−デオキシホルボール１３−アセテート、ホルボール１２−アセテート、またはホルボール１３−アセテートである、請求項８に記載の組成物。
【請求項２５】
式Iのホルボールエステルの有効量が約10〜約1500μgである、請求項８に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明は、下記の式Ｉのホルボールエステルを含有する組成物を使用して、脳卒中を治療および予防するための、細胞シグナル伝達経路を調節するための、ならびに／または脳卒中の後遺症を管理、治療、および予防するための新規で驚くほど有効な方法および組成物を提供することにより、前述の目的を達成し、追加の目的および利点を満たし、
【化１】
2018109014.tif 000069
式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素、ヒドロキシル、
【化２】
2018109014.tif 000070
（ここでアルキル基は、１〜１５個の炭素原子を含有する）、
【化３】
2018109014.tif 000071
（ここで低級アルケニル基は、１〜７個の炭素原子を含有する）、
【化４】
2018109014.tif 000072
およびこれらの置換された誘導体であり得る。Ｒ３は、独立して、水素または
【化５】
2018109014.tif 000073
およびこの置換された誘導体であり得る。本発明の方法および組成物は、式Ｉの組成物の任意の薬学的に許容される塩、鏡像異性体、異性体、多形体、プロドラッグ、水和物、および溶媒和物を更に含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
幾つかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、水素以外であり、Ｒ３は、水素または
【化６】
2018109014.tif 000074
およびこの置換された誘導体である。別の実施形態において、Ｒ１またはＲ２のいずれかは、
【化７】
2018109014.tif 000075
であり、残りのＲ１またはＲ２は
【化８】
2018109014.tif 000076
（ここで低級アルキルは、１〜７個の炭素のものである）であり、Ｒ３は、水素である。 
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
本明細書に記載されている方法および組成物に使用される例示的なホルボールエステル組成物は、下記の式ＩＩの１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）である。
【化９】
2018109014.tif 000077
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
本明細書に提供される製剤および方法は、式Ｉのホルボールエステルまたは式Ｉのホルボールエステルの誘導体化合物を用い、米国特許出願第１２／０２３，７５３号、２００８年１月３１日出願により完全に記載されており、これは米国特許仮出願第６０／８９８，８１０号、２００７年１月３１日出願の優先権利益を主張し、それぞれその全体が参照として本明細書に組み込まれ、
【化１０】
2018109014.tif 000078
式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素、ヒドロキシル、
【化１１】
2018109014.tif 000079
（ここでアルキル基は、１〜１５個の炭素原子を含有する）、
【化１２】
2018109014.tif 000080
（ここで低級アルケニル基は、１〜７個の炭素原子を含有する）、
【化１３】
2018109014.tif 000081
およびこれらの置換された誘導体であり得る。Ｒ３は、独立して、水素または
【化１４】
2018109014.tif 000082
であり得る。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
幾つかの実施形態において、慢性または再発性の状態の治療に使用される新規組成物では、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、水素以外であり、Ｒ３は、水素または
【化１５】
2018109014.tif 000083
および置換された誘導体である。別の実施形態において、Ｒ１またはＲ２のいずれかは、
【化１６】
2018109014.tif 000084
であり、残りのＲ１またはＲ２は
【化１７】
2018109014.tif 000085
（ここで低級アルキルは、炭素が１〜７個のものである）であり、Ｒ３は、水素である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
ホルボールは、ジテルペンのチグリアンファミリーにおける天然の植物由来多環式アルコールである。これは、クロトンチグリウムの種に由来するクロトン油の加水分解生成物として、１９３４年に最初に単離された。大部分の極性有機溶媒および水において良好な可溶性がある。ホルボールのエステルは、下記の式Ｉの一般構造を有し、
【化１８】
2018109014.tif 000086
式中、Ｒ１およびＲ２は、水素、ヒドロキシル、
【化１９】
2018109014.tif 000087
（ここでアルキル基は、１〜１５個の炭素原子を含有する）、
【化２０】
2018109014.tif 000088
（ここで低級アルケニル基は、１〜７個の炭素原子を含有する）、
【化２１】
2018109014.tif 000089
およびこれらの置換された誘導体からなる群から選択され、Ｒ３は、水素、または
【化２２】
2018109014.tif 000090
およびその置換された誘導体であり得、ならびに、式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩、鏡像異性体、多形体、プロドラッグ溶媒和物および水和物の構造を有する。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
より詳細な実施形態では、上記の式Ｉによる実例的な構造の変更が、ヒトを含む哺乳類対象において脳卒中、脳卒中に起因する損傷を治療および／もしくは予防する、ならびに／または脳卒中の影響もしくは後遺症を管理するのに有用な候補化合物を提供するために選択され、式中、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、水素以外であり、Ｒ３は、水素、
【化２３】
2018109014.tif 000091
およびこれらの置換された誘導体からなる群から選択される。別の実施形態において、Ｒ１またはＲ２のいずれかは、
【化２４】
2018109014.tif 000092
であり、残りのＲ１またはＲ２は、
【化２５】
2018109014.tif 000093
であり、Ｒ３は水素である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
ヒトを含む哺乳類対象において脳卒中、脳卒中に起因する損傷を治療および／もしくは予防する、ならびに／または脳卒中の影響もしくは後遺症を管理する治療において有用な式Ｉのホルボールエステル化合物の例示的な実施形態は、下記の式ＩＩに示されている、ホルボール１２−ミリステート−１３−アセテート（ＰＭＡまたは１２−Ｏ−テトラデカノイル−ホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）としても知られている）において見出される。
【化２６】
2018109014.tif 000094
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
本発明の製剤および方法の範囲内の追加的に有用なホルボールエステル、ならびに関連化合物および誘導体には、前記化合物の他の薬学的に許容される活性塩、ならびに前記化合物の活性異性体、鏡像異性体、多形体、グリコシル化誘導体、溶媒和物、水和物、および／またはプロドラッグが含まれるが、これらに限定されない。式Ｉのホルボールエステルの誘導体は、それ自体ホルボールエステルであっても、なくてもよい。本発明の組成物および方法の範囲内で使用されるホルボールエステルの更なる例示的な形態には、表１に示されている、ホルボール１３−ブチレート、ホルボール１２−デカノエート、ホルボール１３−デカノエート、ホルボール１２，１３−ジアセテート、ホルボール１３，２０−ジアセテート、ホルボール１２，１３−ジベンゾエート、ホルボール１２，１３−ジブチレート、ホルボール１２，１３−ジデカノエート、ホルボール１２，１３−ジヘキサノエート、ホルボール１２，１３−ジプロピオネート、ホルボール１２−ミリステート、ホルボール１３−ミリステート、ホルボール１２，１３，２０−トリアセテート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート−２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−テトラデカノエート、ホルボール１２−チグリエート１３−デカノエート、１２−デオキシホルボール１３−アセテート、ホルボール１２−アセテート、およびホルボール１３−アセテートが含まれるが、これらに限定されない。
表１
例示的なホルボールエステル
【表１】
2018109014.tif 000095
2018109014.tif 000096
2018109014.tif 000097
2018109014.tif 000098
2018109014.tif 000099
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２１】
Ｚｈａｏ  Ｊ．，  Ｓｈａｒｍａ  Ｙ．，  Ａｇａｒｗａｌ  Ｒ．  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｆｌａｖｏｎｏｉｄ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ｓｉｌｙｍａｒｉｎ  ａｇａｉｎｓｔ  １２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ  １３−ａｃｅｔａｔｅ−ｃａｕｓｅｄ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｎｄ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ２  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−Ｉ  ａｌｐｈａ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ＳＥＮＣＡＲ  ｍｏｕｓｅ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔａｇｅ  １  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ．  Ｍｏｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｇ．  ２６（４），  ３２１−３３  （１９９９）．
[１]  哺乳類対象における１つ以上の脳卒中の影響を予防または治療する方法であって、式Ｉのホルボールエステルまたはその薬学的に許容される塩、異性体、もしくは鏡像異性体の有効量を前記対象に投与することを含み、
【化２７】
2018109014.tif 000100
式Ｉ
式中、Ｒ１およびＲ２が、水素、ヒドロキシル、
【化２８】
2018109014.tif 000101
およびこれらの置換された誘導体からなる群から選択され、Ｒ３が、水素、
【化２９】
2018109014.tif 000102
およびこの置換された誘導体である、前記方法。   
[２]  Ｒ１またはＲ２が、
【化３０】
2018109014.tif 000103
であり、残りのＲ１またはＲ２が、
【化３１】
2018109014.tif 000104
であり、Ｒ３が水素である、請求項１に記載の方法。   
[３]  前記ホルボールエステルが、ホルボール１３−ブチレート、ホルボール１２−デカノエート、ホルボール１３−デカノエート、ホルボール１２，１３−ジアセテート、ホルボール１３，２０−ジアセテート、ホルボール１２，１３−ジベンゾエート、ホルボール１２，１３−ジブチレート、ホルボール１２，１３−ジデカノエート、ホルボール１２，１３−ジヘキサノエート、ホルボール１２，１３−ジプロピオネート、ホルボール１２−ミリステート、ホルボール１３−ミリステート、ホルボール１２，１３，２０−トリアセテート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート−２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−テトラデカノエート、ホルボール１２−チグリエート１３−デカノエート、１２−デオキシホルボール１３−アセテート、ホルボール１２−アセテート、またはホルボール１３−アセテートである、請求項１に記載の方法。   
[４]  前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するために、式Ｉの前記ホルボールエステルとの組み合わせ製剤または協調的治療レジメンにおいて有効である少なくとも１つの二次または補助治療剤を投与することを更に含む、請求項１に記載の方法。   
[５]  前記少なくとも１つの二次または補助治療剤が、協調投与プロトコールにおいて、前記対象への前記ホルボールエステルの投与と同時、投与の前、または投与の後で、前記対象に投与される、請求項４に記載の方法。   
[６]  前記少なくとも１つの二次または補助治療剤が、組織プラスミノーゲン活性化因子、抗凝固剤、スタチン、フィブレート、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、β遮断薬、抗血小板剤、カルシウムチャネル遮断薬、または利尿剤である、請求項４に記載の方法。   
[７]  前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するために、式Ｉのホルボールエステルと組み合わせた外科的介入を更に含む、請求項１に記載の方法。   
[８]  前記外科的介入が、頸動脈内膜剥離術、血管形成術、ステント留置術、開頭術、ペースメーカーの挿入、除細動器の埋め込み、弁置換術、冠動脈バイパス術、心臓移植、血管内コイル塞栓術、または卵円孔開存閉鎖術である、請求項７に記載の方法。   
[９]  前記１つ以上の脳卒中の影響が、麻痺、空間障害、判断障害、左半側無視、記憶喪失、失語症、協調および平衡の問題、嘔気、嘔吐、認知障害、知覚障害、見当識障害、同名半盲、または衝動性である、請求項１に記載の方法。   
[１０]  哺乳類対象における１つ以上の脳卒中の影響を予防または治療するための組成物であって、式Ｉのホルボールエステルまたはその薬学的に許容される塩、異性体、もしくは鏡像異性体の有効量を含み、
【化３２】
2018109014.tif 000105
式Ｉ
式中、Ｒ１およびＲ２が、水素、ヒドロキシル、
【化３３】
2018109014.tif 000106
およびこれらの置換された誘導体からなる群から選択され、Ｒ３が、水素、
【化３４】
2018109014.tif 000107
およびこの置換された誘導体である、前記組成物。   
[１１]  Ｒ１またはＲ２が、
【化３５】
2018109014.tif 000108
であり、残りのＲ１またはＲ２が、
【化３６】
2018109014.tif 000109
であり、Ｒ３が水素である、請求項１０に記載の組成物。   
[１２]  前記ホルボールエステルが、ホルボール１３−ブチレート、ホルボール１２−デカノエート、ホルボール１３−デカノエート、ホルボール１２，１３−ジアセテート、ホルボール１３，２０−ジアセテート、ホルボール１２，１３−ジベンゾエート、ホルボール１２，１３−ジブチレート、ホルボール１２，１３−ジデカノエート、ホルボール１２，１３−ジヘキサノエート、ホルボール１２，１３−ジプロピオネート、ホルボール１２−ミリステート、ホルボール１３−ミリステート、ホルボール１２，１３，２０−トリアセテート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート−２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−テトラデカノエート、ホルボール１２−チグリエート１３−デカノエート、１２−デオキシホルボール１３−アセテート、ホルボール１２−アセテート、またはホルボール１３−アセテートである、請求項１０に記載の組成物。   
[１３]  前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するために、式Ｉの前記ホルボールエステルとの組み合わせ製剤において有効である少なくとも１つの二次または補助治療剤を更に含む、請求項１０に記載の組成物。   
[１４]  前記少なくとも１つの二次または補助治療剤が、組織プラスミノーゲン活性化因子、抗凝固剤、スタチン、フィブレート、抗血小板剤、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、または利尿剤である、請求項１３に記載の組成物。   
[１５]  前記１つ以上の脳卒中の副次的影響が、麻痺、空間障害、判断障害、左半側無視、記憶喪失、失語症、協調および平衡の問題、嘔気、嘔吐、認知障害、知覚障害、見当識障害、同名半盲、または衝動性である、請求項１０に記載の組成物。   
[１６]  脳卒中の危険性のある哺乳類対象において脳卒中を予防する方法であって、式Ｉのホルボールエステルまたはその薬学的に許容される塩、異性体、もしくは鏡像異性体の有効量を前記対象に投与することを含み、
【化３７】
2018109014.tif 000110
式Ｉ
式中、Ｒ１およびＲ２が、水素、ヒドロキシル、
【化３８】
2018109014.tif 000111
およびこれらの置換された誘導体からなる群から選択され、Ｒ３が、水素、
【化３９】
2018109014.tif 000112
およびこの置換された誘導体である、前記方法。   
[１７]  Ｒ１またはＲ２が、
【化４０】
2018109014.tif 000113
であり、残りのＲ１またはＲ２が、
【化４１】
2018109014.tif 000114
であり、Ｒ３が水素である、請求項１６に記載の方法。   
[１８]  前記ホルボールエステルが、ホルボール１３−ブチレート、ホルボール１２−デカノエート、ホルボール１３−デカノエート、ホルボール１２，１３−ジアセテート、ホルボール１３，２０−ジアセテート、ホルボール１２，１３−ジベンゾエート、ホルボール１２，１３−ジブチレート、ホルボール１２，１３−ジデカノエート、ホルボール１２，１３−ジヘキサノエート、ホルボール１２，１３−ジプロピオネート、ホルボール１２−ミリステート、ホルボール１３−ミリステート、ホルボール１２，１３，２０−トリアセテート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート、１２−デオキシホルボール１３−アンゲレート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート、１２−デオキシホルボール１３−イソブチレート−２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート、１２−デオキシホルボール１３−フェニルアセテート２０−アセテート、１２−デオキシホルボール１３−テトラデカノエート、ホルボール１２−チグリエート１３−デカノエート、１２−デオキシホルボール１３−アセテート、ホルボール１２−アセテート、またはホルボール１３−アセテートである、請求項１６に記載の方法。   
[１９]  前記対象において脳卒中の影響を治療または予防するために、式Ｉの前記ホルボールエステルとの組み合わせ製剤または協調的治療レジメンにおいて有効である少なくとも１つの二次または補助治療剤を投与することを更に含み、前記二次または補助治療剤が、式Ｉの前記ホルボールエステルの投与と同時、投与の前、または投与の後に投与される、請求項１６に記載の方法。   
[２０]  前記少なくとも１つの二次または補助治療剤が、抗凝固剤、スタチン、フィブレート、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、抗血小板剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、または利尿剤である、請求項１９に記載の方法。
【外国語明細書】
2018109014000001.pdf