(57)【要約】      （修正有）【課題】抽出ステップが複雑でなく、収率が高く、商業生産に適してるトンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法。【解決手段】トンカットアリの根を粉砕し、エタノールで撹拌抽出、ろ過、濃縮後、不純物を除去し、分子量分画し、ｐＨ調整後沈殿化、溶解、洗浄、不純物除去、結晶化などのステップを経る、トンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
原料であるトンカットアリの根を粉砕し、エタノールで撹拌抽出し、ろ過し、アルコールがなくなるまで濃縮し、後の使用のために静置する抽出ステップ（１）と、
ステップ（１）で得られた濃縮液に凝集剤又は清澄剤を加えて不純物を除去し、静置し、ろ過する不純物除去ステップ（２）であって、前記凝集剤が、陽イオン凝集剤、陰イオン凝集剤又は複合イオン凝集剤であり、前記清澄剤が、清澄剤Ａ又は清澄剤Ｂである、不純物除去ステップ（２）と、
分画分子量が１００〜３００の膜でろ過し、透析液を捨て、分画分子量が５００〜７００の膜で濃縮液を更にろ過し、透析液を収集する膜ろ過ステップ（３）と、
ステップ（３）で得られた透析液のｐＨを８〜１０に調整し、沈殿物を収集し、後の使用のために沈殿物を乾燥させるｐＨ調整ステップ（４）と、
ステップ（４）で得られた沈殿物を粉砕し、酢酸エチル、アセトン、エタノールのうちの１つ又は複数の混合溶媒で撹拌溶解し、ろ過し、溶解残渣と溶解液とを得る洗浄、不純物除去ステップ（５）と、
ステップ（５）で得られた溶解残渣をアセトンで溶解し、溶解が終わってから、撹拌条件下でアセトニトリルを加え、静置し、ろ過し、結晶、すなわち、ユーリコマノンを得る結晶化ステップ（６）と、
を含むことを特徴とする、トンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法。
【請求項２】
前記ステップ（１）では、具体的に、原料であるトンカットアリの根を６０〜８０メッシュに粉砕し、原料の質量の４〜５倍であって質量濃度が８０％〜９０％のエタノール溶液を用いて１５℃〜２０℃の温度で２〜３回撹拌抽出し、ろ過し、アルコールがなくなるまで濃縮し、後の使用のために静置することを特徴とする、請求項１に記載のトンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法。
【請求項３】
前記ステップ（１）では、抽出が２回であり、抽出時間が毎回１時間〜２．５時間であることを特徴とする、請求項２に記載のトンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法。
【請求項４】
前記ステップ（１）では、エタノールの質量濃度が８５％であり、１回目の抽出時間が２時間であり、２回目の抽出時間が１．５時間であることを特徴とする、請求項２又は３に記載のトンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法。
【請求項５】
前記ステップ（２）では、具体的に、ステップ（１）で得られた濃縮液に、５℃〜８０℃の温度で、質量濃度が０．１％〜３％の凝集剤又は清澄剤を加え、撹拌して不純物を除去し、０．５時間〜２時間静置し、ろ過し、
前記凝集剤又は清澄剤の質量が、濃縮液の質量の０．５％〜５％であることを特徴とする、請求項１に記載のトンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法。
【請求項６】
前記ステップ（２）では、ステップ（１）で得られた濃縮液に、３０℃の温度で、凝集剤又は清澄剤を加え、撹拌して不純物を除去し、０．５時間〜２時間静置し、ろ過し、
ここで、凝集剤又は清澄剤を加える順序は、濃縮液の質量の１％であって質量濃度が０．３％の陰イオン凝集剤を加えた後、濃縮液の質量の１．５％であって質量濃度が０．５％の清澄剤Ｂを加え、最後に、濃縮液の質量の０．８％であって質量濃度が０．５％の複合イオン凝集剤を加えるようにしたことを特徴とする、請求項１、３又は５に記載のトンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法。
【請求項７】
前記ステップ（５）では、具体的に、ステップ（４）で得られた沈殿物を８０〜１００メッシュに粉砕し、酢酸エチル、アセトン、エタノールのうちの１つ又は複数の混合溶媒を用いて、１〜２回、０．５時間〜２時間撹拌溶解し、ろ過し、溶解残渣と溶解液とを得、
前記溶媒の質量が、沈殿物の質量の１〜３倍であることを特徴とする、請求項１に記載のトンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法。
【請求項８】
前記ステップ（５）では、溶媒には、体積比が９８：２の酢酸エチルとエタノールとの混合溶媒を用い、
前記溶媒と沈殿物との質量比が、１．５：１であることを特徴とする、請求項１又は７に記載のトンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法。
【請求項９】
前記ステップ（６）では、具体的に、ステップ（５）で得られた溶解残渣を質量の０．５〜２．５倍のアセトンで溶解し、溶解してから、滴加時間を１時間〜２時間として、撹拌条件下でアセトンの質量の０．１〜０．５倍のアセトニトリルを滴加し、０℃〜５℃の条件下で１２時間静置し、ろ過し、結晶、すなわち、ユーリコマノンを得ることを特徴とする、請求項１又は７に記載のトンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ケトステロイド化合物の抽出分離の分野に属しており、ユーリコマノンの抽出分離方法に関し、具体的には、トンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
トンカットアリは、ニガキ科ユーリコマ属の植物であり、マレーシア、インドネシア、ベトナム等の東南アジアの国で広く用いられている。原産地ではマレーシア人参、天然のバイアグラ等と呼ばれており、ツバメの巣、錫製の器具と共にマレーシアの三大国宝と称されている。トンカットアリには、抗癌、抗マラリア、男性性機能障害改善等の効果があるほか、人体機能の向上、抗不安、抗骨粗鬆症、鎮痛、抗炎症、抗菌、抗寄生虫、免疫調節、血管新生阻害、及び糖尿病治療の効果もある。ユーリコマノンは、トンカットアリの最も代表的な物質である。
【０００３】
出願番号２０１３１０３５９０２２．２のトンカットアリ植物中のユーリコマノンの抽出精製工程には、抽出・濃縮、脱脂、抽出、カラムクロマトグラフィー分離、脱色、結晶化、精製が含まれており、含有率９８．６％のユーリコマノンが得られている。出願番号２０１５１０９０６４２０．０のトンカットアリ抽出物及びその調製方法は、生薬としてトンカットアリの根を選択し、水で抽出し、マクロ孔質樹脂カラム、濃度が異なるエタノールで溶離し、溶離液を濃縮、乾燥して得るものである。
【０００４】
上述した従来技術では、トンカットアリ原料からのユーリコマノンの抽出方法は、抽出ステップが複雑であり、収率が低く、商業生産に適していない。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、トンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法を提供することを目的としており、これにより、主に、抽出ステップが複雑であり、収率が低く、商業生産に適していないという従来技術における課題が解決される。
【０００６】
本発明により提供される技術的解決手段は、以下の通りである。
【０００７】
トンカットアリの根からのユーリコマノンの抽出分離方法は、以下のステップを含む。
【０００８】
抽出ステップ（１）
【０００９】
原料であるトンカットアリの根を粉砕し、エタノールで撹拌抽出し、ろ過し、アルコールがなくなるまで濃縮し、後の使用のために静置する。
【００１０】
不純物除去ステップ（２）
【００１１】
ステップ（１）で得られた濃縮液に凝集剤又は清澄剤を加えて不純物を除去し、静置し、ろ過する。
【００１２】
前記凝集剤が、陽イオン凝集剤、陰イオン凝集剤又は複合イオン凝集剤であり、前記清澄剤が、清澄剤Ａ（すなわち、清澄剤ＺＴＣ  ＩＩ  Ａ）又は清澄剤Ｂ（清澄剤ＺＴＣ  ＩＩ  Ｂ）である。
【００１３】
膜ろ過ステップ（３）
【００１４】
分画分子量が１００〜３００の膜でろ過し、透析液を捨て、分画分子量が５００〜７００の膜で濃縮液を更にろ過し、透析液を収集する。
【００１５】
ｐＨ調整ステップ（４）
【００１６】
ステップ（３）で得られた透析液のｐＨを８〜１０に調整し、沈殿物を収集し、後の使用のために沈殿物を乾燥させる。
【００１７】
洗浄、不純物除去ステップ（５）
【００１８】
ステップ（４）で得られた沈殿物を粉砕し、酢酸エチル、アセトン、エタノールのうちの１つ又は複数の混合溶媒で撹拌溶解し、ろ過し、溶解残渣と溶解液とを得る。
【００１９】
結晶化ステップ（６）
【００２０】
ステップ５）で得られた溶解残渣をアセトンで溶解し、溶解が終わってから、撹拌条件下でアセトニトリルを加え、静置し、ろ過し、結晶、すなわち、ユーリコマノンを得る。
【００２１】
上記ステップ（１）において、好ましくは、原料であるトンカットアリの根を６０〜８０メッシュに粉砕し、原料の質量の４〜５倍であって質量濃度が８０％〜９０％のエタノール溶液を用いて１５℃〜２０℃の温度で２〜３回撹拌抽出し、ろ過し、アルコールがなくなるまで濃縮し、後の使用のために静置する。
【００２２】
上記ステップ（１）において、最も好ましくは、抽出が２回であり、抽出時間が毎回１時間〜２．５時間である。
【００２３】
上記ステップ（１）において、好ましくは、エタノールの質量濃度が８５％であり、１回目の抽出時間が２時間であり、２回目の抽出時間が１．５時間である。
【００２４】
上記ステップ（２）において、好ましくは、ステップ（１）で得られた濃縮液に、５℃〜８０℃の温度で、質量濃度が０．１％〜３％の凝集剤又は清澄剤を加え、撹拌して不純物を除去し、０．５時間〜２時間静置し、ろ過するようにし、前記凝集剤又は清澄剤の質量が、濃縮液の質量の０．５％〜５％である。
【００２５】
上記ステップ（２）において、より好ましくは、ステップ（１）で得られた濃縮液に凝集剤又は清澄剤を３０℃の温度で加え、撹拌して不純物を除去し、０．５時間〜２時間静置し、ろ過するようにし、なお、凝集剤又は清澄剤を加える順序は、濃縮液の質量の１％であって質量濃度が０．３％の陰イオン凝集剤を加えた後、濃縮液の質量の１．５％であって質量濃度が０．５％の清澄剤Ｂを加え、最後に、濃縮液の質量の０．８％であって質量濃度が０．５％の複合イオン凝集剤を加えるようにする。
【００２６】
上記ステップ（５）において、好ましくは、ステップ（４）で得られた沈殿物を８０〜１００メッシュに粉砕し、酢酸エチル、アセトン、エタノールのうちの１つ又は複数の混合溶媒を用いて、１〜２回、０．５時間〜２時間撹拌溶解し、ろ過し、溶解残渣と溶解液とを得るようにし、前記溶媒の質量が、沈殿物の質量の１〜３倍である。
【００２７】
上記ステップ（５）において、より好ましくは、溶媒には、体積比が９８：２の酢酸エチルとエタノールとの混合溶媒を用いるようにし、前記溶媒と沈殿物との質量比が、１．５：１である。
【００２８】
上記ステップ（６）において、好ましくは、ステップ（５）で得られた溶解残渣を質量の０．５〜２．５倍のアセトンで溶解し、溶解してから、滴加時間を１時間〜２時間として、撹拌条件下でアセトンの質量の０．１〜０．５倍のアセトニトリルを滴加し、０℃〜５℃の条件下で１２時間静置し、ろ過し、結晶、すなわち、ユーリコマノンを得る。
【００２９】
本発明の利点は、以下の通りである。
【００３０】
本発明で用いられる方法は、操作がシンプルであり、製品の含有率が高く、回収率が高く、得られる製品の収率が０．１０〜０．２５％であり、含有率が９８．８％以上であり、商業生産に適している。
具体的な実施形態
【実施例】
【００３１】
実施例１
【００３２】
原料であるトンカットアリの根１０００ｋｇを粉砕メッシュ数６０メッシュで粉砕し、原料の質量の４倍であって質量濃度が８０％のエタノールで撹拌抽出した。２回抽出し、抽出時間は毎回１時間とした。抽出が終わってから、ろ過し、アルコールがなくなるまで濃縮し、静置した。
【００３３】
上述のように抽出した濃縮液に、５℃の条件下で、液体の質量の０．５％であって質量濃度が０．１％の陽イオン凝集剤を加え、３０分撹拌して作用させ、静置時間を０．５時間として、ろ過した。
【００３４】
分画分子量が１００の膜でろ過し、透析液を捨て、濃縮液（還流液）を引き続き分画分子量が５００の膜でろ過し、透析液を収集した。
【００３５】
上記透析液のｐＨを８に調整し、沈殿物を収集し、後の使用のために沈殿物を乾燥させた。
【００３６】
上記沈殿物を８０メッシュに粉砕し、沈殿物の質量の１倍の酢酸エチルで撹拌溶解した。溶解時間を０．５時間とし、合計１回溶解した。ろ過し、溶解残渣と溶解液とを得て、溶解液は捨てた。
【００３７】
上記溶解残渣を沈殿物の質量の０．５倍のアセトンで溶解し、溶解が終わってから、撹拌しながらアセトニトリルをゆっくり滴加した。滴加するアセトニトリルの量はアセトンの０．１倍とし、滴加時間は１時間とした。滴加中にゆっくりと結晶が析出された。アセトニトリルの滴加が終わった液体を０〜５℃の条件下で１２時間静置し、ろ過し、結晶製品を得た。得られた製品は、含有率が９８．８％のユーリコマノン１ｋｇであった。
【００３８】
実施例２
【００３９】
原料であるトンカットアリの根１０００ｋｇを粉砕メッシュ数８０メッシュで粉砕し、原料の質量の５倍であって質量濃度が９０％のエタノールで撹拌抽出した。３回抽出し、抽出時間は毎回２．５時間とした。抽出が終わってから、ろ過し、アルコールがなくなるまで濃縮し、静置した。
【００４０】
上述のように抽出した濃縮液に、８０℃条件下で、液体の質量の５％であって質量濃度が３％の陰イオン凝集剤を加え、２０分撹拌して作用させ、静置時間を２時間として、ろ過した。
【００４１】
分画分子量が３００の膜でろ過し、透析液を捨て、濃縮液（還流液）を引き続き分画分子量が７００の膜でろ過し、透析液を収集した。
【００４２】
上記透析液のｐＨを１０に調整し、沈殿物を収集し、後の使用のために沈殿物を乾燥させた。
【００４３】
上記沈殿物を１００メッシュに粉砕し、沈殿物の質量の３倍の酢酸エチルとアセトンとの混合溶媒で撹拌溶解した。酢酸エチルとアセトンとの体積比は９９：１とし、溶解時間は２時間とし、合計２回溶解した。ろ過し、溶解残渣と溶解液とを得て、溶解液は捨てた。
【００４４】
上記溶解残渣を沈殿物の質量の２．５倍のアセトンで溶解し、溶解が終わってから、撹拌しながらアセトニトリルをゆっくり滴加した。滴加するアセトニトリルの量はアセトンの０．５倍とし、滴加時間は２時間とした。滴加中にゆっくりと結晶が析出された。アセトニトリルの滴加が終わった液体を０〜５℃の条件下で１２時間静置し、ろ過し、結晶製品を得た。得られた製品は、含有率が９９．０％のユーリコマノン１．１ｋｇであった。
【００４５】
実施例３
【００４６】
原料であるトンカットアリの根１０００ｋｇを粉砕メッシュ数７０メッシュで粉砕し、原料の質量の４．５倍であって８５％のエタノールで撹拌抽出した。３回抽出し、抽出時間は毎回１時間とした。抽出が終わってから、ろ過し、アルコールがなくなるまで濃縮し、静置した。
【００４７】
上述のように抽出した濃縮液に、２５℃の条件下で、まず、液体の質量の１％であって濃度が２．０％の陰イオン凝集剤を加え、４０分撹拌して作用させ、その後、液体の質量が１．５％であって濃度が０．５％の陽イオン凝集剤を加え、３０分撹拌して作用させ、静置時間を１時間として、ろ過した。
【００４８】
分画分子量が２００の膜でろ過し、透析液を捨て、濃縮液（還流液）を引き続き分画分子量が６００の膜でろ過し、透析液を収集した。
【００４９】
上記透析液のｐＨを９に調整し、沈殿物を収集し、後の使用のために沈殿物を乾燥させた。
【００５０】
上記沈殿物を８０メッシュに粉砕し、沈殿物の質量の２倍の酢酸エチルとエタノールとの混合溶媒で撹拌溶解した。酢酸エチルとエタノールとの体積比は９８：２とし、溶解時間は１．５時間とし、合計１回溶解した。ろ過し、溶解残渣と溶解液とを得て、溶解液は捨てた。
【００５１】
上記溶解残渣を沈殿物の質量の１倍のアセトンで溶解し、溶解が終わってから、撹拌しながらアセトニトリルをゆっくり滴加した。滴加するアセトニトリルの量はアセトンの０．３倍とし、滴加時間は１．５時間とした。滴加中にゆっくりと結晶が析出された。アセトニトリルの滴加が終わった液体を０〜５℃の条件下で１２時間静置し、ろ過し、結晶製品を得た。得られた製品は、含有率が９８．９％以上のユーリコマノン２．１０ｋｇであった。
【００５２】
実施例４
【００５３】
原料であるトンカットアリの根１０００ｋｇを粉砕メッシュ数８０メッシュで粉砕し、原料の質量の５倍であって質量濃度が８３％のエタノールで撹拌抽出した。３回抽出し、抽出時間は毎回１．５時間とした。抽出が終わってから、ろ過し、アルコールがなくなるまで濃縮し、静置した。
【００５４】
上述のように抽出した濃縮液に、６０℃の条件下で、まず、液体の質量の３％であって濃度が３％の清澄剤ＺＴＣ  ＩＩ  Ｂを加え、３０分撹拌して作用させ、その後、液体の質量が２％であって濃度が１％の複合イオン凝集剤を加え、２０分撹拌して作用させ、最後に、液体の質量が１％であって濃度が１％の清澄剤ＺＴＣ  ＩＩ  Ｂを加え、４０分撹拌して作用させ、静置時間を１時間として、ろ過した。
【００５５】
分画分子量が３００の膜でろ過し、透析液を捨て、濃縮液（還流液）を引き続き分画分子量が５００の膜でろ過し、透析液を収集した。
【００５６】
上記透析液のｐＨを８．５に調整し、沈殿物を収集し、後の使用のために沈殿物を乾燥させた。
【００５７】
上記沈殿物を８０メッシュに粉砕し、沈殿物の質量の１．５倍の酢酸エチルとエタノールとの混合溶媒で撹拌溶解した。酢酸エチルとエタノールとの体積比は９８：２とし、溶解時間は０．８時間とし、合計１回溶解した。ろ過し、溶解残渣と溶解液とを得て、溶解液は捨てた。
【００５８】
上記溶解残渣を沈殿物の質量の１．５倍のアセトンで溶解し、溶解が終わってから、撹拌しながらアセトニトリルをゆっくり滴加した。滴加するアセトニトリルの量はアセトンの０．４倍とし、滴加時間は１．５時間とした。滴加中にゆっくりと結晶が析出された。アセトニトリルの滴加が終わった液体を０〜５℃の条件下で１２時間静置し、ろ過し、結晶製品を得た。得られた製品は、含有率が９８．９％のユーリコマノン２．３ｋｇであった。
【００５９】
実施例５
【００６０】
原料であるトンカットアリの根１０００ｋｇを粉砕メッシュ数８０メッシュで粉砕し、原料の質量の４．５倍であって８５％のエタノールで撹拌抽出した。２回抽出し、１回目の抽出時間は２時間とし、２回目の抽出時間は１．５時間とした。抽出が終わってから、ろ過し、アルコールがなくなるまで濃縮し、静置した。
【００６１】
上述のように抽出した濃縮液に、４０℃の条件下で、まず、液体の質量の２．３％であって濃度が０．９％の清澄剤ＺＴＣ  ＩＩ  Ｂを加え、２５分撹拌して作用させ、その後、液体の質量が２％であって濃度が０．８５％の清澄剤ＺＴＣ  ＩＩ  Ａを加え、３５分撹拌して作用させ、最後に、液体の質量が０．８％であって濃度が０．９％の清澄剤Ｂを加え、３０分撹拌して作用させ、静置時間を１時間として、ろ過した。
【００６２】
分画分子量が２００の膜でろ過し、透析液を捨て、濃縮液（還流液）を引き続き分画分子量が６００の膜でろ過し、透析液を収集した。
【００６３】
上記透析液のｐＨを９．５に調整し、沈殿物を収集し、後の使用のために沈殿物を乾燥させた。
【００６４】
上記沈殿物を８０メッシュに粉砕し、沈殿物の質量の１．５倍の酢酸エチルとアセトンとの混合溶媒で撹拌溶解した。酢酸エチルとアセトンとの体積比は９：１とし、溶解時間は１．３時間とし、合計２回溶解した。ろ過し、溶解残渣と溶解液とを得て、溶解液は捨てた。
【００６５】
上記溶解残渣を沈殿物の質量の１．８倍のアセトンで溶解し、溶解が終わってから、撹拌しながらアセトニトリルをゆっくり滴加した。滴加するアセトニトリルの量はアセトンの０．４５倍とし、滴加時間は２時間とした。滴加中にゆっくりと結晶が析出された。アセトニトリルの滴加が終わった液体を０〜５℃の条件下で１２時間静置し、ろ過し、結晶製品を得た。得られた製品は、含有率が９８．７％のユーリコマノン２．１ｋｇであった。
【００６６】
実施例６
【００６７】
原料であるトンカットアリの根１０００ｋｇを粉砕メッシュ数８０メッシュで粉砕し、原料の質量の５倍であって質量濃度が９０％のエタノールで撹拌抽出した。２回抽出し、１回目の抽出時間は２時間とし、２回目の抽出時間は１．５時間とした。抽出が終わってから、ろ過し、アルコールがなくなるまで濃縮し、静置した。
【００６８】
上述のように抽出した濃縮液に、３０℃の条件下で、まず、液体の質量の１％であって濃度が０．３％の陰イオン凝集剤を加え、３０分撹拌して作用させ、その後、液体の質量の１．５％であって濃度が０．５％の清澄剤ＺＴＣ  ＩＩ  Ｂを加え、４０分撹拌して作用させ、最後に、液体の量の０．８％であって濃度が０．５％の複合イオン凝集剤を加え、２５分撹拌して作用させた。
【００６９】
分画分子量が２００の膜でろ過し、透析液を捨て、濃縮液（還流液）を引き続き分画分子量が６００の膜でろ過し、透析液を収集した。
【００７０】
上記透析液のｐＨを９に調整し、沈殿物を収集し、後の使用のために沈殿物を乾燥させた。
【００７１】
上記沈殿物を１００メッシュに粉砕し、沈殿物の質量の１．５倍の酢酸エチルとエタノールとの混合溶媒で撹拌溶解した。酢酸エチルとエタノールとの体積比は９８：２とし、溶解時間は１時間とし、合計２回溶解した。ろ過し、溶解残渣と溶解液とを得て、溶解液は捨てた。
【００７２】
上記溶解残渣を沈殿物の質量の２倍のアセトンで溶解し、溶解が終わってから、撹拌しながらアセトニトリルをゆっくり滴加した。滴加するアセトニトリルの量はアセトンの０．５倍とし、滴加時間は１．５時間とした。滴加中にゆっくりと結晶が析出された。アセトニトリルの滴加が終わった液体を０〜５℃の条件下で１２時間静置し、ろ過し、結晶製品を得た。得られた製品は、含有率が９９．１％のユーリコマノン２．５ｋｇであった。
【外国語明細書】
2018108982000001.pdf
2018108982000002.pdf
2018108982000003.pdf