(57)【要約】【課題】ＭＭＰ９の産生を抑制できるＭＭＰ９の提供。【解決手段】メリッサ（Ｍｅｌｉｓｓａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の溶媒可溶成分を含むマトリックスメタロプロテアーゼ９阻害剤であり、前記溶媒が、多価アルコール、メタノール、エタノールおよびそれらと水の混合液から選ばれるものである、マトリックスメタロプロテアーゼ９阻害剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
メリッサ（Ｍｅｌｉｓｓａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の溶媒可溶成分を含むマトリックスメタロプロテアーゼ９阻害剤であり、
前記溶媒が、多価アルコール、メタノール、エタノールおよびそれらと水の混合液から選ばれるものである、マトリックスメタロプロテアーゼ９阻害剤。
【請求項２】
前記溶媒中の多価アルコールが、１,３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ヘキシレングリコールから選ばれるものである、請求項１記載のマトリックスメタロプロテアーゼ９阻害剤。
【請求項３】
前記溶媒が、１,３−ブチレングリコールまたは１,３−ブチレングリコール濃度が４０〜６０質量％の水溶液である、請求項１記載のマトリックスメタロプロテアーゼ９阻害剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ９阻害剤を含む皮膚外用剤。
【請求項５】
基礎化粧料、頭髪化粧料、メークアップ化粧料から選ばれるものである、請求項４記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ９阻害剤とそれを含む皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の老化には、しわやくすみ、肌理の消失などがあり、これらは加齢だけでなく、紫外線も大きく関与していることが知られている。これらの変化は、組織学的に見た場合、コラーゲン、エラスチンなどの真皮マトリックス成分の減少や変性が生じており、さらには基底膜の損傷が生じている。この変化を引き起こす因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ（以下ＭＭＰと略す）の関与が指摘されている。
【０００３】
ＭＭＰには多くの種類が知られており（非特許文献１参照）、例えばＭＭＰ１は真皮のマトリックスの主要成分であるＩ型およびＩＩＩ型コラーゲンを分解し、ＭＭＰ９は基底膜の構成成分であるＩＶ型コラーゲンやラミニンを分解することが知られている。
ＭＭＰ９による前記分解能の発現は、紫外線の照射によって増加することが知られており、過剰なＭＭＰ９によって皮膚の基底膜が損傷され、結果としてしわなどの皮膚老化を引き起こすといわれている（非特許文献２〜４参照）。
また、紫外線はインターロイキンー６（以下ＩＬ−６と略す）などの炎症サイトカインの産生を高めることが知られており、それらによってもＭＭＰ９が増加するといわれている（特許文献１参照）。
【０００４】
そのため、ＭＭＰ９の産生を抑制することは、皮膚老化の防止および改善にとって重要であると考えられている。
これまでにＭＭＰ９の阻害効果を示す素材はいくつか知られており、例えばクロバナツルアズキ抽出物（特許文献２参照）やＳｙｍｐｌｏｃｏｓ  ｒａｃｅｍｏｓａ、Ｃｙｐｅｒｕｓ  ｒｏｔｕｎｄｕｓ（ハマスゲ）、Ｃｙｐｅｒｕｓ  ｓｃａｒｉｏｓｕｓ、Ｇａｕｌｔｈｅｒｉａ  ｆｒａｇｒａｎｔｉｓｓｉｍａ、Ａｃａｃｉａ  ｆｏｒｎｅｎｓｉａ、Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ  ｃｈｅｂｕｌａ（ミロバランノキ）、Ｆｉｃｕｓ  ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ（ベンガルボダイジュ（バンヤジュ））、Ｃａｓｓｉａ  ｆｉｓｔｕｌａ  Ｌｉｎｎ（ナンバンサイカチ）、Ｌｙｏｎｉａ  ｏｖａｌｉｆｏｌｉａ（ネジキ）、Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｉｎｏｐｈｙｌｌｕｍ（テリハボク（ヤラボ、タマナ））、Ｆｉｃｕｓ  ｒｅｌｉｇｉｏｓａ（テンジクボダイジュ）（特許文献３参照）が知られている。
【０００５】
一方で、メリッサの抽出物はチロシナーゼ活性阻害作用（特許文献４参照）や幹細胞増殖因子（ＳＣＦ）発現上昇抑制作用（特許文献５参照）などが知られているが、ＭＭＰ９に対する作用は知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００５−０８９３０４号公報
【特許文献２】特開２００７−２１７３５２号公報
【特許文献３】特開２００１−１９２３１７号公報
【特許文献４】特開平６−１９９６４７号公報
【特許文献５】特開２００８−２７３８７５号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】宮崎香，生化学，６８（１２)，１７９１―１８０７（１９９６）
【非特許文献２】Ｇａｒｙ  Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ、３７９（２５）、３３５−３３９（１９９６）
【非特許文献３】Ｇａｒｙ  Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  ＥｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３３７（２０）、１４１９−１４２９（１９９７）
【非特許文献４】Ｏｎｏｕｅ  Ｓ．Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｃｉ、３３（２）、１０５−１１１（２００３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、ＭＭＰ９の産生を抑制できるＭＭＰ９阻害剤と、それを含む皮膚外用剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、メリッサ（Ｍｅｌｉｓｓａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の溶媒可溶成分を含むＭＭＰ９阻害剤であり、
前記溶媒が、多価アルコール、メタノール、エタノールおよびそれらと水の混合液から選ばれるものである、ＭＭＰ９阻害剤と、それを含む皮膚外用剤を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のＭＭＰ９阻害剤は、紫外線を照射した表皮ケラチノサイトの過剰なＭＭＰ９の産生を抑制すると共に、ＩＬ−６による表皮ケラチノサイトの過剰なＭＭＰ９の産生を抑制する。
このため、ＭＭＰ９阻害剤を含む皮膚外用剤は、基底膜の損傷を抑え、皮膚老化の抑制および改善が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】試験例１の紫外線Ｂ波（ＵＶＢ）曝露表皮ケラチノサイトのＭＭＰ９産生に対するメリッサ抽出物の効果の結果を示す図。
【図２】試験例２のＵＶＢ曝露真皮線維芽細胞の培養液による表皮ケラチノサイトのＭＭＰ９産生に対するメリッサ抽出物の効果の結果を示す図。
【図３】試験例３のＩＬ−６による表皮ケラチノサイトのＭＭＰ９産生に対するメリッサ抽出物の効果の結果を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
＜ＭＭＰ９阻害剤＞
本発明で使用するメリッサ（学名：Ｍｅｌｉｓｓａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）は、シソ科コウスイハッカ属に属する多年生草本であり、別名としてコウスイハッカ、レモンバームなどと呼ばれているものである。本発明で使用する部位としては特に葉が好ましいが、葉と共に茎、根などが少量混在されたものを使用してもよい。
【００１３】
メリッサの溶媒可溶成分は、多価アルコール、メタノール、エタノールおよびそれらと水の混合液から選ばれる溶媒の可溶成分である。水との混合物（水溶液）中のアルコール濃度は３０〜７０質量％が好ましい。
多価アルコールとしては、１,３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ヘキシレングリコールから選ばれるものが好ましく、１,３−ブチレングリコールまたは１,３−ブチレングリコール水溶液が好ましい。
１,３−ブチレングリコール水溶液を使用するときは、１,３−ブチレングリコールの濃度は４０〜６０質量％が好ましい。
【００１４】
メリッサの溶媒可溶成分は、上記した溶媒に溶解された液体のもの（上記溶媒の溶液）、前記溶媒の溶液の濃縮液、前記溶媒の溶液を乾燥して粉末にしたものなどを使用することができる。
またメリッサの溶媒可溶成分は市販品を使用することもでき、例えば、商品名メリッサ抽出液ＢＧ−Ｊ（丸善製薬（株））（４９．５０質量％１,３−ブチレングリコール水溶液の可溶成分からなる抽出液，固形分濃度１．００質量％）などを使用することができる。
【００１５】
本発明のＭＭＰ９阻害剤は、メリッサの溶媒可溶成分のみからなるものでもよいし、ＭＭＰ９産生の阻害効果を損なわない範囲で他の成分と併用することもできる。
本発明のＭＭＰ９阻害剤は、紫外線を照射した表皮ケラチノサイトの過剰なＭＭＰ９の産生を抑制する。
また本発明のＭＭＰ９阻害剤は、紫外線を照射した真皮線維芽細胞の培養液で表皮ケラチノサイトを培養したときの過剰なＭＭＰ９の産生を抑制する。
さらに本発明のＭＭＰ９阻害剤は、ＩＬ−６による表皮ケラチノサイトの過剰なＭＭＰ９の産生を抑制する。
このように本発明のＭＭＰ９阻害剤は、過剰なＭＭＰ９の産生を抑制することができるため、皮膚の基底膜の損傷を抑え、皮膚老化を抑制および改善する効果が期待できる。
【００１６】
次に、ＭＭＰ９阻害剤の製造方法を説明する。
メリッサの葉（他の部位を含んでもよい）を乾燥させて刻み、または粉末状にしたあと、２〜２０倍量（質量基準）の抽出溶媒を加え、冷浸（例えば０〜３０°Ｃの溶媒に浸漬する）または加熱（３０°Ｃより高い温度から使用する溶媒の沸点の範囲で加熱）することによって、溶媒可溶成分を抽出する。
使用する抽出溶媒は、上記した溶媒可溶成分の溶媒として例示したものを使用することができる。
抽出溶媒で抽出した溶媒可溶成分はそのまま使用できるほか、必要に応じて、粗精製および精製することができ、さらに濃縮または粉末化することもできる。
粗精製および精製としては、ＭＣＩゲル（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）などの吸着剤による吸着および溶出、クロマトグラフィーなどを適当に組み合わせることができる。
【００１７】
＜皮膚外用剤＞
本発明の皮膚外用剤は、上記したＭＭＰ９を含むものである。
本発明の皮膚外用剤中のＭＭＰ９の含有量は、有効濃度や安定性の点から、０．０１〜１０質量％が好ましく、０．０５〜５質量％がより好ましい。
【００１８】
本発明の皮膚外用剤は、医薬部外品や化粧品として使用することができる。
本発明の皮膚外用剤は、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パックなどの基礎化粧料、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント、ヘアクリーム、ポマード、ヘアスプレー、整髪料、染毛料、育毛料（養毛料）などの頭髪化粧料、ファンデーション、白粉、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ、眉墨などのメークアップ化粧料などとして使用することができる。
【００１９】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。なお「％」は特に断らない限り質量％を意味する。
【実施例】
【００２０】
実施例１
０．５質量％メリッサ抽出液ＢＧ−Ｊ（丸善製薬（株））をそのままＭＭＰ９阻害剤として使用した。
【００２１】
試験例１＜ＵＶＢ曝露表皮ケラチノサイトのＭＭＰ９産生抑制試験＞
(1)ＨａＣａＴ細胞（不死化角化細胞）を４８ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅに播種し、３７℃、５．０％ＣＯ2の条件下で一晩培養した。
(2)０．５％ＭＭＰ９阻害剤（メリッサ抽出液ＢＧ−Ｊ；丸善製薬（株））を添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ'ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ‘ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）培地（５．０％Ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ）含有）で２４時間培養した。
(3)ＵＶＢを２０  ｍＪ／ｃｍ2のエネルギー量で照射し、ＤＭＥＭ培地（ＦＢＳ未含有）で７２時間培養した。
(4)ＭＭＰ  Ｈｕｍａｎ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ａｂｃａｍ  ｐｌｃ．）を用いて培養液内のＭＭＰ９量を測定し、得られた値をタンパク量で除して、タンパク１μｇあたりのＭＭＰ９量を算出した。
【００２２】
結果を図１に示した。図１から明らかなとおり、ＵＶＢ照射によってＨａＣａＴ細胞のＭＭＰ９の産生量は有意に増加したが、その増加をＭＭＰ９阻害剤は有意に抑制した。
【００２３】
試験例２＜ＵＶＢ曝露真皮線維芽細胞の培養液（Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ  ｍｅｄｉｕｍ（ＣＭ））による表皮ケラチノサイトのＭＭＰ９産生抑制試験＞
（Ｉ）ＵＶＢ曝露真皮線維芽細胞の培養液の作製
(1)正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）を４８ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅに播種し、３７℃、５．０％ＣＯ2の条件下で一晩培養した。
(2)ＵＶＢを６０  ｍＪ／ｃｍ2のエネルギー量で照射し、ＤＭＥＭ培地（ＦＢＳ未含有）で７２時間培養した。
(3)培養上清を回収し、＜４℃、１,０００ｇ＞の条件で５分間遠心し、その上清をＣＭとした。
【００２４】
（II）ＭＭＰ９産生量の測定
(1)ＨａＣａＴ細胞（不死化角化細胞）を４８ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅに播種し、３７℃、５．０％ＣＯ2の条件下で一晩培養した。
(2)０．５％ＭＭＰ９阻害剤（メリッサ抽出液ＢＧ−Ｊ；丸善製薬（株））を添加したＤＭＥＭ培地（５．０％ＦＢＳ含有）で２４時間培養した。
(3)（Ｉ）で作製したＣＭに交換し、７２時間培養した。
(4)ＭＭＰ  Ｈｕｍａｎ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ａｂｃａｍ  ｐｌｃ．）を用いて培養液内のＭＭＰ９量を測定し、得られた値をタンパク量で除して、タンパク１μｇあたりのＭＭＰ９量を算出した。
【００２５】
結果を図２に示した。図２から明らかなとおり、ＵＶＢ曝露真皮線維芽細胞の培養液によってＨａＣａＴ細胞のＭＭＰ９の産生量は有意に増加したが、その増加をＭＭＰ９阻害剤は有意に抑制した。
【００２６】
試験例３＜ＩＬ−６による表皮ケラチノサイトのＭＭＰ９産生抑制試験＞
(1)ＨａＣａＴ細胞（不死化角化細胞）を４８ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅに播種し、３７℃、５．０％ＣＯ2の条件下で一晩培養した。
(2)０．５％ＭＭＰ９阻害剤（メリッサ抽出液ＢＧ−Ｊ；丸善製薬（株））を添加したＤＭＥＭ培地（ＦＢＳ未含有）で２４時間培養した。
(3)１００ｎｇ／ｍＬのＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−６  Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）を添加したＤＭＥＭ培地（ＦＢＳ未含有）で７２時間培養した。
(4)ＭＭＰ  Ｈｕｍａｎ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ａｂｃａｍ  ｐｌｃ．）を用いて培養液内のＭＭＰ９量を測定し、得られた値をタンパク量で除して、タンパク１μｇあたりのＭＭＰ９量を算出した。
【００２７】
結果を図３に示した。図３から明らかなとおり、ＩＬ−６によってＨａＣａＴ細胞のＭＭＰ９の産生量は有意に増加したが、その増加をＭＭＰ９阻害剤は有意に抑制した。
【００２８】
実施例２（皮膚用クリームの製造）
下記の成分（１）〜（５）を混合後に加熱溶解して７５℃とし、これに混合・加熱融解し７５℃とした（６）〜（９）および（１２）を添加して乳化させた。撹拌冷却後、（１０）および（１１）を添加して、皮膚用クリームを得た。
（組成）                                            （質量％）
（１）ステアリン酸                                          １．００
（２）バチルアルコール                                      １．００
（３）モノステアリン酸グリセリン                            ０．５０
（４）スクアラン                                          １５．００
（５）ソルビタンモノステアレート                            ２．００
（６）ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート  ２．００
（７）水酸化カリウム                                        ０．０５
（８）カルボキシビニルポリマー                              ０．１０
（９）パラヒドロキシ安息香酸メチル                          ０．１０
（１０）ＭＭＰ９阻害剤                                      ０．１０
（１１）香料                                                ０．１０
（１２）精製水                                              残部割合
合計                                                １００．００
【００２９】
実施例３（皮膚用クリームの製造）
下記の成分（１）〜（５）を混合後に加熱溶解して７５℃とし、これに混合・加熱融解し７５℃とした（６）〜（９）および（１２）を添加して乳化させた。撹拌冷却後、（１０）および（１１）を添加して、皮膚用クリームを得た。
（組成）                                            （質量％）
（１）ステアリン酸                                          １．００
（２）バチルアルコール                                      １．００
（３）モノステアリン酸グリセリン                            ０．５０
（４）スクアラン                                          １５．００
（５）ソルビタンモノステアレート                            ２．００
（６）ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート  ２．００
（７）水酸化カリウム                                        ０．０５
（８）カルボキシビニルポリマー                              ０．１０
（９）パラヒドロキシ安息香酸メチル                          ０．１０
（１０）ＭＭＰ９阻害剤                                      ０．１０
（１１）香料                                                ０．１０
（１２）精製水                                              残部割合
合計                                                １００．００
【図１】
2018177716.tif 000002
【図２】
2018177716.tif 000003
【図３】
2018177716.tif 000004