(57)【要約】【課題】安全でかつ効果の高い疲労回復用組成物、及び疲労回復用加圧酵素分解物の製造方法を提供する。【解決手段】牡蠣を６０℃以上で加熱処理した後、加圧下で酵素を反応させた加圧酵素分解物を含有する疲労回復用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
牡蠣を６０℃以上で加熱処理した後、加圧下で酵素反応させた加圧酵素分解物を含有する疲労回復用組成物。
【請求項２】
酵素反応が、圧力４０〜２００ＭＰａ、温度３０〜８０℃で、１〜４８時間の加圧酵素反応である請求項１記載の疲労回復用組成物。
【請求項３】
酵素反応が、圧力５０〜１５０ＭＰａ、温度４０〜７０℃で、３〜２４時間の加圧酵素反応である請求項２記載の疲労回復用組成物。
【請求項４】
酵素がプロテアーゼである請求項１〜３のいずれか１項記載の疲労回復用組成物。
【請求項５】
疲労回復用医薬組成物又は疲労回復用食品組成物である請求項１〜４のいずれか１項記載の疲労回復用組成物。
【請求項６】
牡蠣を６０℃以上で加熱処理する工程と、得られた加熱処理物に、加圧下で酵素を反応させる工程を含む、疲労回復用加圧酵素分解物を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れた疲労回復作用を有する疲労回復用組成物、疲労回復用加圧酵素分解物の製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
現代人は様々なストレスを抱えている。疲労回復作用を有するものとしては、カフェインやビタミンＢ1、クエン酸等が知られており、様々な物質が提案されている。しかしながら、安全でかつより効果の高いものが望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００６−２８２６４４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、安全でかつ効果の高い疲労回復用組成物、及び疲労回復用加圧酵素分解物の製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、牡蠣を６０℃以上で加熱処理した後、加圧下で酵素を反応させた、牡蠣の加圧酵素分解物が、優れたＡＴＰ産生促進作用及びｃＧＭＰ−ＰＤＥ活性阻害作用を有し、疲労回復用として有効であることを知見し、本発明をなすに至ったものである。
【０００６】
従って、本発明は下記疲労回復用組成物及び疲労回復用加圧酵素分解物を製造する方法を提供する。
[１]．牡蠣を６０℃以上で加熱処理した後、加圧下で酵素反応させた加圧酵素分解物を含有する疲労回復用組成物。
[２]．酵素反応が、圧力４０〜２００ＭＰａ、温度３０〜８０℃で、１〜４８時間の加圧酵素反応である[１]記載の疲労回復用組成物。
[３]．酵素反応が、圧力５０〜１５０ＭＰａ、温度４０〜７０℃で、３〜２４時間の加圧酵素反応である[２]記載の疲労回復用組成物。
[４]．酵素がプロテアーゼである[１]〜[３]のいずれかに記載の疲労回復用組成物。
[５]．疲労回復用医薬組成物又は疲労回復用食品組成物である[１]〜[４]のいずれかに記載の疲労回復用組成物。
[６]．牡蠣を６０℃以上で加熱処理する工程と、得られた加熱処理物に、加圧下で酵素を反応させる工程を含む、疲労回復用加圧酵素分解物を製造する方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、安全でかつ効果の高い疲労回復用組成物、及び疲労回復用加圧酵素分解物の製造方法を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明は、牡蠣を６０℃以上で加熱処理した後、加圧下で酵素反応させた加圧酵素分解物を含有する疲労回復用組成物である。
【０００９】
牡蠣は産地、種類等は特に限定されず、１種を用いてもよいが、２種以上の牡蠣を混合して用いてもよい。また、生のものでもよく、冷凍品を用いてもよい。原料は処理しやすいように細かくしてもよい。
【００１０】
加圧下での酵素反応の前に、牡蠣を６０℃以上、好ましくは８０℃以上で加熱処理をする。この加熱処理により、牡蠣の自己消化酵素を失活させることができる。加熱温度の上限は特に限定されないが、１００℃以下とすることができる。加熱処理の時間は１〜１２０分程度であり、２０〜６０分が好ましい。
【００１１】
上記で得られた加熱処理物に、加圧下で酵素を反応させる条件としては、圧力４０〜２００ＭＰａが好ましく、５０〜１５０ＭＰａがより好ましく、６０〜１００ＭＰａがさらに好ましい。さらに加圧加温することが好ましく、温度は２０〜９０℃が好ましく、３０〜８０℃がより好ましく、４０〜７０℃がさらに好ましく、４０〜６０℃が特に好ましい。酵素反応時間は、１〜７２時間が好ましく、１〜４８時間がより好ましく、３〜４８時間がさらに好ましく、３〜３６時間、３〜２４時間、６〜２４時間の順で特に好ましい。加圧する装置は特に限定されず、例えば、加圧・加温処理機等が好適である。
【００１２】
酵素は特に限定されないが、プロテアーゼ、糖質分解酵素等が挙げられ、プロテアーゼが好ましい。プロテアーゼとしては、パパイン、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン等の公知のプロテアーゼ、各種微生物が産生するプロテアーゼ等が挙げられる。中でも、サーモライシン、パパイン、パンクレアチンが好ましく、サーモライシンが特に好ましい。
【００１３】
酵素量は特に限定されず、各酵素の特性によって選定されるが、酵素処理対象に対して０．０１〜５．０質量％が好ましく、０．１〜０．５質量％がさらに好ましい。
【００１４】
上記酵素を失活させるためには、使用した酵素の失活方法に従えばよいが、例えば、８０℃以上で１０〜３０分処理すればよい。
【００１５】
得られた牡蠣の加圧酵素分解物は、その後ろ過工程等の公知の処理方法を選択することができる。また、加圧酵素分解物は液状でもよく、適宜、濃縮、分離精製、噴霧乾燥等を行い、固形にしてもよい。
【００１６】
[牡蠣の加圧酵素分解物の製造方法]
加圧酵素分解物を製造する方法としては、牡蠣を６０℃以上で加熱処理する工程と、得られた加熱処理物に、加圧下で酵素を反応させる工程を含むものであり、上記で説明した通りである。
【００１７】
[疲労回復用組成物]
本発明の疲労回復用組成物は、上記牡蠣の加圧酵素分解物を有効成分として含むものであり、経口等の内服、外用等が挙げられるが、経口摂取が好ましい。その摂取量は成人一人当たり一日１０〜１０，０００ｍｇ（固形分、以下同様）が好ましく、１００〜５００ｍｇがより好ましい。組成物中の牡蠣の加圧酵素分解物の配合量は、上記摂取量となるように０．０１〜９９質量％の範囲から適宜選定される。摂取方法も特に限定されず、１日複数回に分けて摂取してもよい。
【００１８】
疲労回復用組成物としては、疲労回復用医薬組成物、疲労回復用食品組成物等が挙げられ、特に限定されない。疲労回復用医薬組成物としては、医薬品、医薬部外品等を含み、疲労回復用食品組成物としては、食品、機能性食品、特定保健用食品等が挙げられる。剤型は特に限定されず、顆粒剤、細粒剤、粉末、錠剤、カプセル、液剤、乳剤、懸濁液等の内服剤、飲料、固形、半固形、ゼリー状等のあらゆる食品の形態、ローション剤、軟膏剤、パップ剤等の外用剤が挙げられる。
【００１９】
本発明の疲労回復用組成物としては、本発明の効果を損なわない範囲で、上記剤型に通常用いられる任意成分を通常量配合することができる。
【００２０】
[ＡＴＰ産生促進剤、ｃＧＭＰ−ＰＤＥ活性阻害剤]
本発明の牡蠣の加圧酵素分解物は、後述する実施例で示された通り、ＡＴＰ産生促進作用及びｃＧＭＰ−ＰＤＥ活性阻害作用を有するため、牡蠣の加圧酵素分解物を有効成分として含有するＡＴＰ産生促進剤、ｃＧＭＰ−ＰＤＥ活性阻害剤としても好適である。これらの剤として用いる場合も、摂取量等は上記と同じである。なお、「ＡＴＰ産生促進」とは「生体のエネルギー物質であるＡＴＰの生産量を上げること」であり、「ｃＧＭＰ−ＰＤＥ活性阻害」とは、細胞内のｃＧＭＰ濃度を阻害することで、血管を弛緩させること」であり、いずれも疲労回復の指標となる。
【実施例】
【００２１】
以下、下記例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。
【００２２】
下記サンプルについて、下記に示す方法で「ＡＴＰ産生促進作用」及び「ｃＧＭＰ−ＰＤＥ活性阻害作用」を評価した。
実施品：牡蠣の加圧・酵素分解物
冷凍品の生牡蠣１００ｋｇをミンチ化し、加圧加温装置に投入し、９０℃以上で２０分処理し、自己消化酵素を失活させた。これにサモアーゼＰＣ１０Ｓ（天野エンザイム（株）製）０．３ｋｇを添加し、６０ＭＰａ・５０℃で２４時間加圧加温酵素分解処理を行った。その後、９０℃以上・３０分で酵素を失活させ、セライトろ過を行って、加熱処理した後噴霧乾燥して牡蠣の加圧酵素分解物を得た。
比較品：
（１）牡蠣粉末（凍結乾燥品）
冷凍品の生牡蠣１００ｋｇをミンチ化、凍結乾燥して牡蠣粉末を得た。
（２）牡蠣の加圧処理物（自己消化酵素処理）
冷凍品の生牡蠣１００ｋｇをミンチ化し、加圧加温装置に投入し、６０ＭＰａ・５０℃で２４時間加圧加温酵素分解処理を行った。その後、９０℃以上・３０分で自己消化酵素を失活させ、セライトろ過を行って、加熱処理した後噴霧乾燥して牡蠣の加圧処理物を得た。
（３）カキエキスパウダー（熱水抽出）
冷凍品の生牡蠣１００ｋｇを熱水抽出し、固液分離を行って、加熱処理した後噴霧乾燥してかきエキスパウダー（熱水抽出）を得た。
【００２３】
[ＡＴＰ産生促進作用試験方法]
＜試験方法＞
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にＫＧＭで希釈した後、コラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、ＫＧＭで溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加し、２時間培養した。ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定した。すなわち、培養終了後、『「細胞の」ＡＴＰ測定試薬』（東洋ビーネット社）を各ｗｅｌｌに１００μＬずつ添加した。反応後、化学発光量を測定した。
ＡＴＰ産生促進率（％）の計算方法は以下の通りである。
ＡＴＰ産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
Ａ：被験試料を添加した細胞での化学発光量
Ｂ：被験試料を添加しない細胞での化学発光量
【００２４】
【表１】
2018177741.tif 000002
【００２５】
[ｃＧＭＰ−ＰＤＥ活性阻害作用試験方法]
ＰＤＥ−ＧｌｏＰｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用い、試験を実施した。
すなわち１０容量％ＤＭＳＯに溶解した被験試料５μＬ、酵素源として１０Ｕ／ｗｅｌｌとなるように調整したＰｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ（Ｔｙｐｅ  Ｖ，ｃＧＭＰ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ，Ｂｏｖｉｎｅ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ，Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ、Ｌｏｔ．Ｄ００１１１１００）７．５μＬ及び基質として２０μｍｏｌ／Ｌ、ｃＧＭＰ１２．５μＬを９６ｗｅｌｌプレートに加え、３７℃で２時間間反応した。反応後、ＰＤＥ−Ｇｌｏ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ  １２．５μＬを加え、反応を停止させた後、ＰＤＥ−Ｇｌｏ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ  １２．５μＬを加え、室温で２０分間静置した。Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ  ｒｅａｇｅｎｔ  ５０μＬを加え、室温で１０分間反応した後、発光を測定した。
ｃＧＭＰ−ＰＤＥ活性阻害率（％）の計算方法は以下の通りである。
ｃＧＭＰ−ＰＤＥ活性阻害率（％）＝（Ｃ−Ｓ）／Ｃ×１００
Ｓ：被験試料溶液の発光度
Ｃ：コントロール溶液（イオン交換水）の発光度
【００２６】
【表２】
2018177741.tif 000003
【００２７】
【表３】
2018177741.tif 000004
【００２８】
上記結果から明らかであるように、本発明の牡蠣の加圧酵素分解物は、牡蠣粉末、牡蠣の加圧処理物（自己消化酵素処理）、カキエキスパウダーでは得られない、優れたＡＴＰ産生促進作用及びｃＧＭＰ−ＰＤＥ活性阻害作用を有する。