(57)【要約】      （修正有）【課題】睡眠状態を質的に改善する方法、より詳細には、入眠状況、眠りの継続性、起床時起床後の気分（疲労感や不安感・当惑感などのネガティブな精神状態の軽減）を改善する方法の提供。【解決手段】ラクトフェリンを含有する睡眠改善用組成物。前記ラクトフェリンは少なくとも一部がリポソームに内包されていることが好ましい。前記組成物は医薬品組成物又は食品組成物として提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトフェリンを含有する睡眠改善用組成物。
【請求項２】
ラクトフェリンの一部が少なくともリポソームに内包されている請求項１に記載の睡眠改善用組成物。
【請求項３】
ラクトフェリンの一部がリポソームに内包されている請求項２に記載の睡眠改善用組成物。
【請求項４】
医薬品組成物又は食品組成物である、項１〜３のいずれかに記載の睡眠改善用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、睡眠状態を質的に改善する睡眠改善用組成物に関する。詳しくは、入眠状況、眠りの継続性、起床時の気分（疲労感や不安感・当惑感などのネガティブな精神状態の軽減）を改善する睡眠改善用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
睡眠は心身の健康状態と深く関係しており、心身の健康状態が悪化すると睡眠の質的状態が悪化することが多く、睡眠の質的状態が悪化しても心身の健康状態を悪化させることが多い。特に近年の社会生活においては種々の強いストレスを受ける機会が多いことから、睡眠障害などの睡眠の質的悪化によるＱＯＬの低下に苦しむ人が増えている。一方、睡眠改善の手段として、病的な水準であれば医療機関に相談し、睡眠導入剤などの医薬品の使用やカウンセリングなどを受けることが出来る。しかし、治療を受ける状態ではないが体調不良を感じたり、気分がすぐれないことが多いなどの不調を感じている人において、簡便で有効的な手段が確保できない悩みを持っている人が多い。
【０００３】
このため、睡眠を改善する色々な方法が提案されている。例えば、センサーなどを活用して睡眠情報、生活習慣情報や生活状況情報を収集し、データ解析することで睡眠を質的に改善する方法を助言するシステムを活用する方法（特許文献１）、寝具に温度調節の機能を付加することで改善する方法（特許文献２）、香気成分を用い嗅覚を刺激することで改善する方法（特許文献３、４）、動植物に含まれる成分を経口摂取することで改善する方法（特許文献５〜７）などが挙げられる。しかし、これらの方法では、十分な効果が得られにくかったり、継続的な実施を行いにくいだけでなく、人体由来でない物質を通常摂取されるよりも高い濃度で継続的に経口摂取するで健康障害を起こす可能性があるなどの問題点があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１６−１２２３４７号公報
【特許文献２】特開２０１５−１６７６３９号公報
【特許文献３】特開２０１４−１９６２５０号公報
【特許文献４】特開２０１５−０８１２２７号公報
【特許文献５】特開２０１６−１５３３８７号公報
【特許文献６】特開２０１５−１９９６８６号公報
【特許文献７】特開２０１６−０７９０９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、睡眠状態を質的に改善する方法、詳しくは、入眠状況、眠りの継続性、起床時起床後の気分（疲労感や不安感・当惑感などのネガティブな精神状態の軽減）を改善する方法の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、ラクトフェリンを継続的に経口摂取することで、入眠状況、眠りの継続性、起床時の気分（疲労感や不安感・当惑感などのネガティブな精神状態の軽減）を改善することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００７】
本発明は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
ラクトフェリンを含有する睡眠改善用組成物。
項２．
ラクトフェリンの一部が少なくともリポソームに内包されている項１に記載の睡眠改善用組成物。
項３．
ラクトフェリンの一部がリポソームに内包されている項２に記載の睡眠改善用組成物。
項４．
医薬品組成物又は食品組成物である、項１〜３のいずれかに記載の睡眠改善用組成物。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、入眠状況、眠りの継続性、起床時の気分（疲労感や不安感・当惑感などのネガティブな精神状態の軽減）を改善することにより、睡眠状態を質的に改腸し、ＱＯＬを向上することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
ラクトフェリンは、分子量が約８万の鉄結合性の糖蛋白質であり、哺乳動物の乳汁、唾液、涙、精液、種々の粘液等に存在する。ヒトにおいても母乳、特に出産後数日の間に多く分泌される初乳に多く存在し、新生児の免疫獲得など健康維持に関して重要な役割を果たしていると考えられている。また、ラクトフェリンは、新生児以降でも体内にも広く分布している。例えば、唾液、涙、十二指腸などの分泌液中に含まれており、新生児以外にとっても重要な役割を担っていると考えられている。本発明に用いるラクトフェリンは、コスト面から牛乳から抽出されたものが好適に用いられるが、由来は特に限定されない。また、アポラクトフェリン、天然型ラクトフェリンまたはホロラクトフェリンであってもよい。具体的には、哺乳類（例えば、ヒト、ウシ、水牛、ウマ、ヤギ、ヒツジ等）の初乳、移行乳、常乳、末期乳等、これらの処理物である脱脂乳、ホエー等からイオン交換クロマトグラフィー等の常法により分離したラクトフェリン、ラクトフェリンから常法により鉄を除去したアポラクトフェリン、アポラクトフェリンに鉄、銅、亜鉛、マンガン等の金属を一部キレートさせた金属結合ラクトフェリン、または前記金属を完全にキレートさせた金属飽和ラクトフェリン、等を使用することができる。 特にウシ由来又はヒト由来のラクトフェリンが好ましい。市販品としては、例えば、森永ラクトフェリンＭＬＦ−ＥＸ（森永乳業株式会社製）、「Ｂｉｏｆｅｒｒｉｎ」（Ｇｌａｎｂｉａ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｓ社製）、「Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ」（Ｆｏｎｔｅｒｒａ社製）を好ましく用いることができる。
【００１０】
本発明に用いるラクトフェリンはリポソームに内包された態様（以下、「ラクトフェリンを含んだリポソーム」、「ラクトフェリンを内包したリポソーム」という場合がある。）であってもよい。つまり、ラクトフェリンを含んだリポソームも好ましく用いることができ、ラクトフェリンの一部がリポソームに内包されている態様が最も好ましい。本発明はラクトフェリンを含んだリポソームも有効成分として含む、睡眠改善用組成物も包含する。
【００１１】
リポソームは脂質小胞体であり、リン脂質を主体とした脂質を十分量の水で水和することにより形成される。一般的に、脂質二重層の数に基づいて分類され、多重膜リポソーム（ＭＬＶ）と一枚膜リポソームに分類される。一枚膜リポソームは、そのサイズに応じて、更にＳＵＶ（ｓｍａｌｌ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａ  ｖｅｓｉｃｌｅ）、ＬＵＶ（ｌａｒｇｅ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａ  ｖｅｓｉｃｌｅ）、ＧＵＶ（ｇｉａｎｔ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａ  ｖｅｓｉｃｌｅ）などに分類される。本発明のリポソームは、これらのいずれであってもよい。好ましいのはＭＬＶである。本発明では、リポソームの大きさは、通常３０〜１０００ｎｍ、好ましくは３０〜６００ｎｍ、より好ましくは５０〜２００ｎｍである。
【００１２】
リン脂質としては、通常レシチンが使用できる。レシチンとしては、例えば、卵黄レシチン、大豆レシチン、ナタネレシチン、コーンレシチン、ひまわりレシチン、ピーナッツレシチンなどを１種単独で又は２種以上組み合わせて使用することができるがこれらに限定されない。本発明では、これらの水素添加物を用いることもできる。レシチンはホスファチジルコリン又は１，２−ジアシルグリセロール  ３−ホスホコリンとも称され、一般的に、グリセロールの１位及び２位に脂肪酸が結合している。本発明では、上記例示のレシチンに加えて、１位及び２位の両方又は片方に炭素数１２〜２４の不飽和脂肪酸が結合しているレシチンを使用することが好ましく、１位に炭素数１２〜２４の飽和脂肪酸、２位に炭素数１２〜２４の不飽和脂肪酸が結合しているレシチンを使用することが特に好ましい。ここで、飽和脂肪酸及び不飽和脂肪酸は直鎖状及び分枝状のいずれでもよい。好ましい不飽和脂肪酸としては、炭素数１６〜１８の不飽和脂肪酸を使用できる。特に２位にオレイン酸、リノール酸が多く結合したレシチンが好ましい。具体的には、卵黄レシチン、大豆レシチンが好ましい。
【００１３】
ラクトフェリンを含んだリポソームは、従来の方法により製造することができる。例えば、所望量のレシチン及び必要に応じて所望量のステロールを、例えばエタノールなどの適当な有機溶媒で可溶化し、減圧下に溶媒を除去し、膜脂質を作成後、これにラクトフェリンや任意の生理活性物質を含む水溶液を添加して、例えば、１０００〜３０００ｒｐｍ程度で２〜５分間程度撹拌して、リポソーム懸濁液を調製することにより、ラクトフェリンを封入したリポソームを得ることができる。
【００１４】
また、この方法とは別に、所望量のレシチン及び必要に応じて所望量ステロールを少量のエタノールに溶解後、水溶液又は緩衝液に分散して予備乳化を行った後、高圧で分散させて脂質二重層を形成させてリポソーム懸濁液を調製することによってもラクトフェリンを封入したリポソームを得ることができる。
【００１５】
ステロールとしては、コレステロール、ラノステロール、ジヒドロラノステロール、デスモステロール、ジヒドロコレステロールなどの動物由来のステロール；β−シトステロール、カンペステロール、スティグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、エルゴスタディエノール、シトステロール、ブラシカステロールなどの植物由来のステロール（フィトステロール）；チモステロール、エルゴステロールなどの微生物由来のステロール等が挙げられ、１種単独で又は２種以上組み合わせて使用できる。これらの中でも、コレステロール又はフィトステロールが好ましく用いられる。
【００１６】
リポソームにおけるレシチンとステロールのモル比は、５５：４５〜９５：５程度が好ましく、６０：４０〜９０：１０程度がより好ましく、７５：２５〜８５：１５程度が最も好ましい。モル比がこれらの範囲にあるとリポソーム膜の安定性が向上する。なお、レシチン又はステロールの含有量は既知の方法で測定できる。例えば、レシチンの含有量はＦｉｓｋｅ−Ｓｕｂｂａｒｏｗ法など、ステロールの含有量はＨＰＬＣ、比色法などによって定量できる。
【００１７】
本発明において使用される、ラクトフェリンを内包したリポソームにおいて、ラクトフェリンはリポソーム膜に囲まれる空間に封入されていることが好ましいが、ラクトフェリンがリポソーム膜構成成分として含まれていてもよいし、多重膜リポソームを構成する多重膜の間に含まれていてもよいし、リポソーム膜のうちの最も外側の膜にラクトフェリンが付着又は結合する形態で含まれていてもよい。
【００１８】
得られたラクトフェリンを内包したリポソームの懸濁液は、必要に応じて、リポソーム外液中のラクトフェリンを除去する操作、例えば懸濁液を濾過後，得られた濾液を透析する操作を行ってもよい。また、リポソームの懸濁液は、液状のままでも使用できるが、凍結乾燥した乾燥物として使用することもできる。リポソームは、その乾燥物を錠剤やカプセル化したものをはじめ、様々な経口摂取に適した形態とすることが可能である。
【００１９】
ラクトフェリンを内包したリポソームの懸濁液中におけるラクトフェリン、レシチンおよびステロールの含有量は、以下のとおりである。ラクトフェリンの含有量は好ましくは１０〜９９質量％程度、より好ましくは２０〜９５質量％程度、さらに好ましくは３０〜９０質量％程度。レシチンの含有量は、好ましくは１〜８０質量％程度、より好ましくは３〜６５質量％程度、さらに好ましくは５〜５０質量％程度。ステロールの含有量は、好ましくは０〜４０質量％程度、より好ましくは０．１〜３０質量％程度、さらに好ましくは１〜２０質量％程度である。また、ラクトフェリンの含有量がレシチンの含有量に比べて３倍程度までであれば、ラクトフェリンの全てがリポソームに内包される場合があり得るが、４倍を超えると少なくとも一部のラクトフェリンはリポソームに包含されない形で懸濁液中に存在している。
【００２０】
さらに、ラクトフェリンを内含したリポソームの表面をコーティングすることができ、このコーティング物も有効成分として利用できる。好ましいコーティングとしては、硫酸基を含有する多糖類によるコーティングがあげられる。硫酸基含有多糖類としては、フコイダン、カラギーナン、寒天、ヘパリンなどが挙げられる。また、該硫酸基含有多糖類としては、硫酸基を含まない多糖を硫酸化したものも包含され、例えば、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸などであってもよい。
【００２１】
硫酸基含有多糖類としては、分子量が５０００〜３０００００程度のものが好ましく用いられる。これらの硫酸基含有多糖類の中でもフコイダン及びカラギーナンを好ましく用いることができ、特にフコイダンが好ましい。硫酸基含有多糖類の使用量は、例えば、リポソームに含有されるレシチン１００質量部に対して、１０〜５００質量部程度が好ましく、２０〜２００質量部程度がより好ましい。
【００２２】
コーティングは、例えば、ラクトフェリンを含んだリポソームを含む懸濁液に、硫酸基含有多糖類を加え、１０００〜３０００ｒｐｍ程度で２〜５分間程度撹拌することにより行うことができる。また、１つのコーティング膜の中に複数のリポソームが含まれていてもよい。なお、リポソームが硫酸基含有多糖類でコーティングされていることは、例えば、リポソーム溶液のゼータ電位が、硫酸基含有多糖類を添加して撹拌した際に変化することにより確認できる。
【００２３】
本発明に係るラクトフェリンを含有する睡眠改善用組成物は、寝つきや睡眠が十分に得られるという「質の高い睡眠」を実現させることで、起きたときに眠気を感じにくく、疲労回復の実感やネガティブな思考性向になりにくい効果を得ることが出来る。
【００２４】
当該ラクトフェリンを含有する睡眠改善用組成物におけるラクトフェリンの含有量は本発明の効果が奏される範囲であれば特に制限されない。例えば、１〜１００００ｍｇ、５〜５０００ｍｇ、１０〜２０００ｍｇ、又は２０〜１０００ｍｇ程度が例示できる。また、含有割合も特に制限はされず、例えば０．１〜１００質量％、１〜９９質量％、又は１０〜８０質量％程度、が例示できる。またさらに、当該睡眠改善用組成物を摂取する場合のラクトフェリンの摂取量も特に制限はされず、例えば成人一日あたり１０〜１００００ｍｇ、２０〜５０００ｍｇ、３０〜２０００ｍｇ、又は５０〜１０００ｍｇ程度が例示できる。
【００２５】
また、当該ラクトフェリンを含有する睡眠改善用組成物は、成人１日当たり１回又は複数回（好ましくは２〜３回）に分けて摂取することが好ましい。子供の場合は、年齢に応じて摂取回数を制限したり、１回当たりの摂取量を制限する事が好ましい。制限の方法としては例えば、成人であれば複数個摂取するところを摂取する個数を減らしたり、タブレットや打錠剤に割線を設け、摂取量に応じて分割してから摂取する方法などが挙げられる。摂取量を適用対象はヒトが好ましいが、ヒト以外の非ヒト哺乳動物であってもよい。適用対象が非ヒト哺乳動物（例えばペット又は家畜、より具体的には、イヌ、ネコ、サル、ウシ、ブタ、ヒツジ等）の場合も、当該ヒトの投与又は摂取量を参考として適宜設定することができる。
【００２６】
当該ラクトフェリンを含有する睡眠改善用組成物は、医薬組成物、医薬部外品組成物又は食品組成物（飲料組成物及び食品添加物組成物を包含する）として好ましく用いることができる。
【００２７】
医薬組成物や医薬部外品として用いる場合、他の成分としては、薬学的に許容される基剤、担体、及び／又は添加剤（例えば溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等）等が例示できる。また、当該医薬組成物の形態も特に制限されず、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤等が例示できる。これらの形態の医薬製剤は、必要に応じて当該他の成分と、ラクトフェリンを組み合わせて常法により調製することができる。
【００２８】
食品組成物として用いる場合、他の成分としては、食品衛生学上許容される基剤、担体、添加剤や、その他食品として利用され得る成分・材料が例示できる。また、当該食品組成物の形態も特に制限されず、例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品などの保健機能食品；病者用食品、妊産婦授乳婦用粉乳、乳児用調製粉乳などの特別用途食品；栄養補助食品、健康補助食品、栄養調整食品、サプリメントなどの、いわゆる健康食品；病者向け調理済み食品（病院食、病人食又は介護食等）等が例示できる。これらは常法により調製することができる。特に、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品などの保健機能食品；病者用食品、妊産婦授乳婦用粉乳、乳児用調製粉乳などの特別用途食品；栄養補助食品、健康補助食品、栄養調整食品、サプリメントなどの、いわゆる健康食品として、食品組成物を調製する場合は、継続的な摂取が行いやすいように、例えば顆粒、カプセル、錠剤（チュアブル剤等を含む）、飲料（飲料パウダー、ドリンク剤等）等の形態で調製することが好ましく、なかでもカプセル、タブレット、錠剤、飲料パウダー、ドリンク剤の形態が摂取の簡便さの点からは好ましいが、特にこれらに限定されるものではない。なお、食品組成物の中でも食品添加物組成物として用いる場合には、その形態として、例えば液状、粉末状、フレーク状、顆粒状、ペースト状のものが挙げられる。
【００２９】
特に制限はされないが、当該ラクトフェリンを含有する睡眠改善用組成物の上記その他の成分としては、デキストリン、セルロース、レシチン(特に大豆由来)、微粒二酸化ケイ素、ステアリン酸カルシウム等が特に好ましく例示される。
【００３０】
なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。
【実施例】
【００３１】
以下、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の例に限定されるものではない。
睡眠状態にラクトフェリンが与える影響の検討
試験組成物として、森永ラクトフェリンＭＬＦ−ＥＸ（森永乳業株式会社製）を用いた。  ＭＬＦ−ＥＸは、既存の天然食品添加物であるウシ由来ＬＦを９０％以上含む食品用原料である。ＭＬＦ−ＥＸ以外に、デキストリン、セルロース、レシチン（大豆由来）、微粒二酸化ケイ素、ステアリン酸カルシウムを配合し、打錠して錠剤（３００ｍｇ）を製造した。製造時、当該錠剤６錠あたり、ＬＦとして２７０ｍｇを含むように原材料量を調整した（すなわち、１錠３００ｍｇあたりラクトフェリン４５ｍｇを含有する）。また、プラセボとして、ＭＬＦ−ＥＸをデキストリンで置き換えた錠剤も同様に製造した。これらの錠剤を一日６錠ずつ、４週間被験者に摂取させた。試験開始2週間前から試験開始時直前の３日間、試験開始後から２週目直前の３日間と試験開始後２週間目から４週目直前の３日間の全ての日において、朝の起床時にＯＳＡ睡眠調査票ＭＡ版（ＯＳＡ ｓｌｅｅｐ ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ ＭＡ ｖｅｒｓｉｏｎ）（一般社団法人日本睡眠改善協議会公開版）を用いたアンケート調査を行った。ＯＳＡ睡眠調査票ＭＡ版は、第1因子：起床時眠気（sleepiness on rising）、第２因子：入眠と睡眠維持（initiation and maintenance of sleep）、第３因子：夢み（frequent dreaming）、第４因子：疲労回復（refreshing）、第５因子：睡眠時間（sleep length）の５因子形１６項目の質問（４段階評価。ネガティブ評価は「１」〜ポジティブ評価は「４」。例えば、第１問では、「１」非常に疲れが残っている。「２」やや疲れが残っている。「３」やや疲れが残っている。「４」非常に疲れが残っている。）で構成されるアンケートで、１６問の回答結果から各因子における心理や身体状態の調査する目的で実施した。加えて、試験開始日、試験開始後２週間目の日及び４週間目の日の３回において、日本語版ＰＯＭＳ短縮版―成人用(Profile of Mood States-Brief Form Japanese Version)（（株）金子書房発行）を用いたアンケート調査を実施し、気分や疲労度などの状態チェックの評価を行なった。日本語版ＰＯＭＳ短縮版は３５項目の質問（５段階評価。例えば、第１問「人づき合いが楽しい」では、「０」全くなかった。「１」少しあった「２」まあまああった「３」かなりあった「４」非常に多くあった）で構成され、専用のツールを用いて、（混乱−当惑）（緊張−不安）などの７尺度と、ネガティブな気分状態を総合的に表す（ＴＭＤ得点）を求めるものであり、これら尺度や得点は数値が高いほどネガティブな状態であることが知られている。得られた結果を表１に示す。なお、変動値とは試験開始後の各評価点から試験開始時点の評価点を差し引いた数値を意味する。また、ＴＭＤ得点（Total  Mood  Disturbance）は、ネガティブな気分状態を総合的に表す得点である。
【００３２】
【表１】
2018043964.tif 000002
【００３３】
表１に示したとおり、ラクトフェリン飲用群（ＬＬＦ）は、起床時の眠気感、入眠のしやすさや睡眠状態の維持、起床時の疲労回復感において改善し、心理状態においても、ネガティブな心理状態になることを防いでいる結果を示した。一方、プラセボ群においては、起床時の眠気感や疲労回復感で悪化しており、ネガティブな精神状態に陥る傾向があるという結果を示した。本試験の実施時期は３月末から６月初旬であったが、この期間は、交感神経が相対的に強く働きやすい冬季と副交感神経が相対的に強く働きやすい夏季の季節の変わり目であり、１年を通して最も体調や精神状態が不調となりやすいことが知られている。特に精神状態においては、春にネガティブな精神状態に陥り、健常人においても季節性感情障害や抑うつ症状が発生し、精神的な既往歴のある人においては鬱病を発症・再発する人が多いことも知られている。今回、試験した時期の温湿度は、気象庁の測定データ（大阪府）では、６．５℃、５８ＲＨ％〜１９．８℃、７２ＲＨ％の範囲で変動していた。今回の試験におけるプラセボ群の試験結果が、睡眠状態の悪化やネガティブな精神状態に陥る傾向を示したことについては、季節要因が作用したものと考えられる。従って、ラクトフェリン飲用群の試験結果は、同様に季節要因を考慮すると、睡眠状態を改善し、またネガティブな精神状態からポジティブな精神状態に改善する効果があることを示していると推察できる。