(57)【要約】      （修正有）【課題】卵巣の早期成長を抑え、卵胞刺激ホルモン（Ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）の生成を抑えることを特徴とする性早熟症の予防、改善又は治療効果とともに、身長の成長にも役立つ薬学組成物及び食品組成物の提供。【解決手段】ヨクイニン及び茵ちんの熱水抽出エキスを有効成分として含有する薬学組成物または、食品組成物。熱水抽出エキスは、２：３〜３：２の重量比のヨクイニン及び茵ちんに１０〜２０倍の重量の水を添加し、８０〜１１０℃で２〜４時間かけて抽出し且つ濃縮して製造する。【選択図】図２１
2018154621.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヨクイニン及び茵ちんの熱水抽出エキスを有効成分として含有する性早熟症の予防又は治療用の薬学組成物。
【請求項２】
前記熱水抽出エキスは、２：３〜３：２の重量比のヨクイニン及び茵ちんに１０〜２０倍の重量の水を添加し、８０〜１１０℃で２〜４時間かけて抽出し且つ濃縮して製造することを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項３】
前記組成物は、卵巣の早期成長を抑え、卵胞刺激ホルモンの生成を抑えるとともに、体長を増大させることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項４】
ヨクイニン及び茵ちんの熱水抽出エキスを有効成分として含有する性早熟症の予防又は改善用の食品組成物。
【請求項５】
前記熱水抽出エキスは、２：３〜３：２の重量比のヨクイニン及び茵ちんに１０〜２０倍の重量の水を添加し、８０〜１１０℃で２〜４時間かけて抽出し且つ濃縮して製造することを特徴とする請求項４に記載の食品組成物。
【請求項６】
前記組成物は、卵巣の早期成長を抑え、卵胞刺激ホルモンの生成を抑えるとともに、体長を増大させることを特徴とする請求項４に記載の食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヨクイニン及び茵ちんの抽出エキスを有効成分として含有する性早熟症の予防、改善又は治療用の組成物に係り、更に詳しくは、ヨクイニン及び茵ちんの熱水抽出エキスを有効成分として含有することにより、卵巣の早期成長を抑え、卵胞刺激ホルモン（Ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）の生成を抑えることを特徴とする性早熟症の予防、改善又は治療用の薬学組成物及び食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
性早熟症（ｐｒｅｃｏｃｉｏｕｓ ｐｕｂｅｒｔｙ）は、乳房発育、睾丸の肥大などの第二次性徴が通常よりも早く出現する病態であり、このような奇形（ａｎｏｍａｌｉｅｓ）は、子供の身長の成長を妨げるだけではなく、ストレスを引き起こす要因として働くことが指摘されている。性成熟は、脳下垂体（ｈｙｐｏｐｈｙｓｉｓ）から分泌される生殖腺刺激ホルモン（ＧＴＨ）により行われる性ホルモンの分泌により開始され、初潮年齢は下がりつつある傾向が見られ、韓国の統計庁によれば、韓国の女性の平均的な初潮年齢は１９７０年には１４．４歳であったが、２００９年には１１．９８歳であることが報告されている。最近の研究結果によれば、１２歳前に早い初潮を経験した女性は、そうでない女性よりも乳がんが発症する危険性が１．５７倍高く、エストロゲンなどの女性ホルモンの露出期間が長くなればなるほど、乳房や子宮内膜にホルモンが更に多く蓄えられることにより、癌の発症の危険性が高くなることが報告されている。韓国の健康保険審査評価院の統計によれば、性早熟症で来院する患者が大幅に増えつつあり、薬物治療を施した患者の数は、２００６年の５８７名から２０１０年の２７７０名へと４．７倍増え、特に、女児における性早熟症の発症比率が、男児に比べて１０倍以上はるかに高くなっている。
【０００３】
性早熟症は、中枢神経系の腫瘍や脳損傷などの気質的な原因から起こるが、過度な性ホルモンの分泌による要因には栄養過多による肥満、ストレス、環境変化などが複合的に影響することが知られている。性早熟症の所見があると診断されなかったとはいえ、早期の性成熟が心配になって洋漢方の医療機関を訪ねる患者が増えつつあり、たとえ低身長で治療を受ける場合であっても、性成熟を早めないながらも成長を改善することを希望している。親達にとって、思春期が早く始まることに対する最大の恐怖は、子供の成長板が早く閉じて身長の成長が早期に終わり、最終的な身長に不利に働くのではないかということであり、たとえ身長の成長を目指して治療を受ける場合であっても、もしかして性成熟を早めるのではないかと心配することになる。
【０００４】
性早熟症にはいくつかの要因が関わっているが、中でも、最も性早熟症に影響を与える要因は遺伝的な要因であり、もし母親が早い時期に乳房が発育したならば、今後、娘もまた早期に乳房が発育する可能性があり、これに加えて、西欧式食習慣、肥満、ストレスなどが関わっていると知られている。なお、多くの環境化学物質の役割についても争いがあった。例えば、廃棄物を焼却するときに発生するダイオキシンと、プラスチック製品に含有されているフタル酸エステル及びビスフェノールＡ（ＢＰＡ）がホルモンと略同じ作用を引き起こしている。これらの化合物は、体内に溜まったときに性ホルモンなどの作用を引き起こして性成熟を促し、特に、６ヶ月以内に４ｃｍ以上の急速な成長をすることは非正常的なケースであって、関心を引き寄せなければならない。
【０００５】
性早熟症が疑われる患者に対しては問診及び診察を行って、第二次性徴の開始時期が女児は８歳未満であるかどうか、男児は９歳未満であるかどうかを確認しなければならず、性腺刺激ホルモン放出ホルモン刺激検査（ＧｎＲＨ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ）を行って真性性早熟症及び仮性性早熟症を鑑別することができる。真性性早熟症は、性腺刺激ホルモン及び性腺ステロイドが両方とも高い濃度を示すが、仮性性早熟症においては性腺ステロイドの濃度のみが高く現れ、ＧｎＲＨ刺激後のＬＨの最大値が５ｍＩＵ／ｍｌ以上であれば、真性性早熟症の所見があると診断することができる。
【０００６】
性早熟症の治療薬物として用いられている性腺刺激ホルモン放出ホルモン作動薬（ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｇｏｎｉｓｔ；ＧｎＲＨａ）は、人体に存在するＧｎＲＨよりも２０〜１５０倍増加された力価を有するように合成された薬材であって、脳下垂体のＧｎＲＨ受容体の発現を脱感作して性腺刺激ホルモンの分泌を抑える機序として働く。ＧｎＲＨａに対する治療効果は、個人差が大きく、最終的な身長に影響を与える因子は、治療期間、発症から治療までの遅延期間、治療の開始時における暦年齢、暦
年齢に対する骨年齢の進行度などであることが判明されている。少なくとも２年以上治療しなければならず、骨年齢が約１２歳になれば治療を中断し、このような真性性早熟症患者の場合には早期に診断して丸６〜７歳に治療を始めたときに最終的な身長が約５〜１０ｃｍほど増大されるが、丸９歳後には効果がないことが知られている。副作用としては、約５％において無菌膿瘍が発生する虞があり、過敏反応、注射部位の肉芽腫、大腿骨頭の分離、骨密度の減少などが稀に発生することが報告されている。
【０００７】
ＧｎＲＨ作動薬（ａｇｏｎｉｓｔ）に対する副作用が懸念されて、韓薬（漢方薬）を用いて性早熟症を治療しようとする親達が増えつつある。しかしながら、その効果に対して客観的に検証を受けたケースが少ないため、むしろ親達に混乱を与えている。そこで、本発明者らは、性早熟症の治療効果に対する客観的な検証を基に、韓医学的に使用可能な材料を対象として新規で且つ効果的な薬剤を開発するために多年間に亘って鋭意努力してきた。このような研究結果の一環として、大韓民国登録特許第１０−１６２６９３８号公報に記載の性早熟症の予防又は改善用の組成物の特許を受けたことがあるが、ここに留まることなく、より優れた効果を有する薬剤の開発を目指して鋭意努力したところ、ヨクイニン及び茵ちんの熱水抽出エキスが性早熟症の予防、改善又は治療に更に優れた効果があるだけではなく、身長の成長にも役立つということを見出し、本発明を完成するに至った。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】大韓民国登録特許第１０−１６２６９３８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、本発明の主な目的は、既存より韓薬材として多用されて人体に対する安全性が検証された植物抽出エキスを用いることにより、副作用を心配する必要がなく、性早熟症に対する優れた予防、改善又は治療効果を有する組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の一態様によれば、本発明は、ヨクイニン及び茵ちんの熱水抽出エキスを有効成分として含有する性早熟症の予防又は治療用の薬学組成物を提供する。
本発明の薬学組成物において、前記熱水抽出エキスは、２：３〜３：２の重量比のヨクイニン及び茵ちんに１０〜２０倍の重量の水を添加し、８０〜１１０℃で２〜４時間かけて抽出し且つ濃縮して製造することが好ましい。
【００１１】
本発明の薬学組成物において、前記組成物は、卵巣の早期成長を抑え、卵胞刺激ホルモン（Ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）の生成を抑えるとともに、体長を増大させることを特徴とする。
【００１２】
本発明の他の態様によれば、本発明は、ヨクイニン及び茵ちんの熱水抽出エキスを有効成分として含有する性早熟症の予防又は改善用の食品組成物を提供する。
本発明の食品組成物において、前記熱水抽出エキスは、２：３〜３：２の重量比のヨクイニン及び茵ちんに１０〜２０倍の重量の水を添加し、８０〜１１０℃で２〜４時間かけて抽出し且つ濃縮して製造することが好ましい。
【００１３】
本発明の食品組成物において、前記組成物は、卵巣の早期成長を抑え、卵胞刺激ホルモン（Ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）の生成を抑えるとともに、体長を増大させることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の組成物は、ヨクイニン及び茵ちんの熱水抽出エキスを有効成分として含有することにより、卵巣の早期成長を抑え、卵胞刺激ホルモン（Ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）の生成を抑えて性早熟症を有効に予防、改善又は治療することができる。特に、本発明の組成物は、上述したような性早熟症の予防、改善又は治療効果を有するとともに、身長の成長にも役立つというメリットがあり、通常の韓医学処方に比べて材料の種類が少ないため非常に製造しやすいというメリットもある。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の抽出エキスが体重に及ぼす影響を調べた結果である。
【図２】本発明の抽出エキスが食餌摂取量に及ぼす影響を調べた結果である。
【図３】本発明の抽出エキスが体長に及ぼす影響を調べた結果であって、動物モデルとして用いたラットの尻尾を除く体長を調べたものである。
【図４】本発明の抽出エキスが体長に及ぼす影響を調べた結果であって、動物モデルとして用いたラットの尻尾を含む体長を調べたものである。
【図５】本発明の抽出エキスが大腿骨の長さに及ぼす影響を調べた結果である。
【図６】本発明の抽出エキスが大腿骨の重さに及ぼす影響を調べた結果である。
【図７】本発明の抽出エキスが肝臓の重さに及ぼす影響を調べた結果である。
【図８】本発明の抽出エキスが脾臓の重さに及ぼす影響を調べた結果である。
【図９】本発明の抽出エキスが腎臓の重さに及ぼす影響を調べた結果である。
【図１０】本発明の抽出エキスが卵巣の重さに及ぼす影響を調べた結果である。
【図１１】本発明の抽出エキスが血中グルコースの濃度に及ぼす影響を調べた結果である。
【図１２】本発明の抽出エキスが血中総コレステロールの濃度に及ぼす影響を調べた結果である。
【図１３】本発明の抽出エキスが血中カルシウムの濃度に及ぼす影響を調べた結果である。
【図１４】本発明の抽出エキスが血中ＩＧＦ−１の濃度に及ぼす影響を調べた結果である。
【図１５】本発明の抽出エキスが血中ＩＧＦＢＰ−３の濃度に及ぼす影響を調べた結果である。
【図１６】本発明の抽出エキスが血中ＡＬＰの濃度に及ぼす影響を調べた結果である。
【図１７】本発明の抽出エキスが血中オステオカルシンの濃度に及ぼす影響を調べた結果である。
【図１８】本発明の抽出エキスが骨密度に及ぼす影響を調べた結果である。
【図１９】本発明の抽出エキスが血中エストラジオールの濃度に及ぼす影響を調べた結果である。
【図２０】本発明の抽出エキスが血中黄体形成ホルモンの濃度に及ぼす影響を調べた結果である。
【図２１】本発明の抽出エキスが血中卵胞刺激ホルモンの濃度に及ぼす影響を調べた結果である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の組成物は、ヨクイニン及び茵ちんの熱水抽出エキスを有効成分として含有することを特徴とする。
【００１７】
ヨクイニンは、ハトムギ（Ｃｏｉｘ  ｌａｃｒｙｍａ−ｊｏｂｉ  Ｌｉｎｎｅ  ｖａｒ．  ｍａ−ｙｕｅｎ  Ｓｔａｐｆ）（イネ科：Ｇｒａｍｉｎｅａｅ）の硬い包鞘に包まれた種子の生薬名であり、種子の皮をむいたものである。お茶などにして飲んだり、利尿、鎮痛、強壮の作用があることから、浮腫、神経痛、リウマチ、膀胱結石などに薬材として用いる。
【００１８】
茵ちんは、カワラヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｃａｐｉｌｌａｒｉｓ  Ｔｈｕｎｂｅｒｇ）(キク科：Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ)の地上部であり、膽汁分泌促進作用、肝臓機能保護及び肝臓細胞再生作用、脂質分解作用、冠状動脈拡張作用、血圧降下作用、解熱、利尿作用、抗微生物作用、腹水癌細胞抑制効果などの効能があることが報告されている。
【００１９】
本発明の熱水抽出エキスは、前記ヨクイニン及び茵ちんに水を添加し且つ加熱する方法で製造することができる。このとき、抽出に適用される材料の割合、溶媒、溶媒の使用量、抽出温度、抽出時間などの条件に応じて抽出される成分の差が生じるため、本発明において目指す効果の面からみて差があり得るが、本発明によれば、２：３〜３：２の重量比のヨクイニン及び茵ちんにこれらを合計した重量を基準として１０〜２０倍の重量の水を添加し、８０〜１１０℃で２〜４時間かけて抽出する条件を採用すれば、性早熟症の予防、改善又は治療効果を有する抽出エキスを得ることができる。より好ましくは、４：５〜５：４の重量比のヨクイニン及び茵ちんにこれらを合計した重量を基準として１３〜１７倍の重量の水を添加し、９０〜１１０℃で抽出する。このような抽出条件によって得た熱水抽出エキスそれ自体を用いてもよいが、投与のしやすさや摂取のしやすさ又は剤形化のしやすさを図るために、ろ過及び濃縮過程を経ることがましい。このとき、ろ過は、抽出材料として用いたヨクイニン及び茵ちんの抽出粕又はその他の固形不純物を取り除く目的でフィルターなどを用いた通常のろ過方法を用いて行ってもよく、濃縮は、溶媒として用いた水を取り除くための通常の濃縮方法を用いて行ってもよい。濃縮は、抽出エキスに含有されている有効成分の破壊又は変性を防ぐために、６０℃以下の温度条件下で行うことが好ましい。
本発明においては、動物モデルを用いた実験を通じて、上述したようなヨクイニン及び茵ちんの熱水抽出エキスが卵巣の早期成長を抑え、卵胞刺激ホルモン（Ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ；ＦＳＨ）の生成を抑えることを証明した。
【００２０】
本発明の抽出エキス処理群及び対照群を比較したところ、脾臓など他の臓器の重さの変化において有意差を示さなかったのに対し、卵巣の重さは処理群において有意的に減少した。これは、本発明の抽出エキスが卵巣の早期成長を抑えることにより、性早熟症を予防、改善及び治療することができるということを意味する。
【００２１】
また、性腺刺激ホルモンの一種であるＦＳＨの濃度が処理群において濃度依存的に有意的に減少した。ＦＳＨは、性成熟において非常に重要な役割を果たすホルモンであって、卵巣の成長及びエストロゲンの産生を刺激し、男性においては精子の形成を刺激する。性早熟症においては、このようなホルモン数値が早い年齢に思春期レベルに達するため早期性成熟が行われるが、本発明の抽出エキスは、このようなＦＳＨの生成を抑えることにより、性早熟症を予防、改善及び治療することができる。ＦＳＨの生成抑制効果及び上述したような卵巣の早期成長の抑制効果が関わっていると考えられ、且つ、エストラジオールの場合、有意差ではないが、処理濃度に応じて減少する傾向を示したが、これもまた、前記ＦＳＨの生成の抑制効果と関わっていると考えられる。
【００２２】
本発明の抽出エキスは、体重の変化において有意差は見られなかったが、体長の変化において有意的な増加効果が現れた。このような結果は、上述したような性早熟症の予防、改善又は治療効果があるとともに、身長の成長を促すことができるということを意味するものであって、非常に大きなメリットになり得る。
骨の形成と密接な関係にあるタンパク質であるオステオカルシンの濃度もまた、処理群において有意的に増加したが、このような結果は、本発明の抽出エキスが骨の形成に役立つということを意味する。血漿内のオステオカルシンの濃度は、骨芽細胞の活性を示唆し、血中の高濃度のオステオカルシンは、骨密度（ＢＭＤ）の増加との相関関係が非常に高い。前記オステオカルシンに対する効果は、前記体長増大効果とも関わっていると考えられる。
【００２３】
本発明の薬学組成物は、全体の組成物の重量を基準として本発明の抽出エキスを０．１〜１００重量％で含有することができるものと認められる。
本発明の薬学組成物は、臨床投与に際して経口又は非経口で投与可能であると認められるが、好ましくは、経口投与することが好ましいと認められる。非経口投与に際しては、腹腔内注射、直腸内注射、皮下注射、静脈注射、筋肉内注射、子宮内硬膜注射、脳血管内注射又は胸部内注射により投与可能であり、通常の医薬品製剤の形で使用可能であると認められる。
【００２４】
本発明の薬学組成物は、単独で用いてもよく、手術、放射線治療、ホルモン治療、化学治療及び生物学的な反応調節剤を用いる方法と併用してもよいと認められる。
【００２５】
本発明の薬学組成物の一日当たりの投与量は、組成物に含有されている本発明の抽出エキスの乾燥重量を基準として一日当たりに約０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、０．０１〜１ｍｇ／ｋｇであってもよく、一日当たりに１回又は一日当たりに数回に分けて投与可能であるが、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率及び疾患の重症度などに応じてその範囲が様々に変化可能であるといえる。
【００２６】
実際の臨床投与に際して色々な剤形で投与可能であるが、製剤化する場合には、通常的に使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤又は賦形剤を用いて調製することができる。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれ得る。非水性溶剤、懸濁溶剤としては、プロピレングリコール（Ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物性油、エチロレートなどの注射可能なエステルなどが使用可能である。坐剤の基剤としては、ウイテプゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイーン６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセリンゼラチンなどが使用可能である。
【００２７】
本発明の薬学組成物は、本発明の抽出エキスに更に同一又は類似の機能を有する有効成分を１種以上含有することができる。
【００２８】
本発明の食品組成物は、前記有効量を基準として本発明の抽出エキスそれ自体又は食品学的に許容された担体と混合した組成物であってもよい。本発明の食品組成物は、食肉加工品、魚肉製品、豆腐、寄せ物、おかゆ、ラーメン、蕎麦やうどんなどの麺類、醤油、味噌、唐辛子味噌、混合味噌などの調味食品、ソース、お菓子、発酵乳やチーズなどの乳加工品、キムチなどの漬け物、果物、野菜、豆乳、発酵飲料などの飲み物の食品形態が採用可能であると認められる。なお、食品学的に許容された担体としては、前記薬学的に許容された担体も使用可能である。
【００２９】
以下、実施例を挙げて本発明を詳述する。これらの実施例は単に本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれらの実施例により制限されると解釈されてはならない。
【００３０】
実施例１．抽出エキスの製造
精選したヨクイニン６００ｇ及び茵ちん６００ｇを抽出器に入れ、これらを合計した重量の約１５倍の重量の浄水又は精製水を入れて約１００℃で約３時間かけて抽出して抽出エキス液を得た。抽出エキス液を１μｍのフィルターでろ過し、ろ液を６０℃以下で減圧濃縮し且つ乾燥させて、乾燥粉末状態の乾燥エキス１０３．８ｇを得た（歩留まり率：８．６５％）。
【００３１】
実験例１．動物実験
１．実験方法
１−１．実験動物及び実験設計
平均体重１１０ｇの雌性ＳＰＦスプラーグドーリーラット（ｓｐｅｃｉｆｉｅｄ−ｐａｔｈｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ  ｒａｔｓ）（４〜５週齢）を対象として前記実施例１の抽出エキスが性早熟症に及ぼす影響に対する実験を３週間に亘って行った。
抽出エキスを実験群のラットにそれぞれ５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇになるように水１ｍｌに添加して口腔投与した。実験群及び対照群をそれぞれ一群当たりに５匹ずつになるように合計で４群に分け、実験群には抽出エキスを摂取容量基準に従って口腔投与し、対照群には水を投与した。
【００３２】
１−２．体重、食餌摂取量及び成長指標の測定
実験期間の間の飼料の摂取量（ｄｉｅｔ ｉｎｔａｋｅ）は、毎日飼料を給与した後、その翌日に同じ時間に残った飼料量を測定して計算し、実験ラットの増体量（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎ）は、１週間おきに体重を測定して計算した。体長（ｂｏｄｙ ｌｅｎｇｔｈ）は、予め実験テーブルの上に巻き尺を固定した後、ラットをエチルエーテルで麻酔した後、鼻先から尻尾を除く部分までを測定した。大腿骨の長さ（ｆｅｍｕｒ ｌｅｎｇｔｈ）は、実験が終わったときに右側の大腿部を抜骨して筋肉を除去し、カリパスを用いて測定した。
【００３３】
１−３．臓器の重さの測定
臓器の重さを調べるために、実験が終わったとき、血液の採取を終えた後、解剖して肝臓（ｌｉｖｅｒ）、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）、脾臓（ｓｐｌｅｅｎ）、卵巣（ｏｖａｒｙ）を分離摘出し、生理食塩水で洗浄した後、ガーゼで血液、体液及び水分を取り除いた後、実物の重量を測定した。
【００３４】
１−４．血液成分の分析
血液成分を調べるために、実験が終わったとき、実験ラットをエチルエーテルで麻酔した後、心臓から採血した。血清から血糖、コレステロール、カルシウムなどを自動化学分析器で測定し、血中ＡＬＰの活性、エストラジオール、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、オステオカルシン、ＩＧＦ−１、ＩＧＦＢＰ−３の濃度はキットを用いて酵素比色法（ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ）で分析した。骨密度は、抜骨された大腿骨を対象として骨密度測定器を用いて分析した。
【００３５】
１−５．血中ホルモン及び骨形成指標の分析の意義
１）エストラジオール：雌性において発情行動を誘発し、発情に伴う副生殖器官の発育及び機能を促す物質を総称し、主として卵胞から分泌されるため卵胞ホルモン（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ｈｏｒｍｏｎｅ）とも呼ばれる。
【００３６】
２）卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）：脳下垂体前葉の性腺刺激細胞から分泌される性腺刺激ホルモンの一種であって、糖タンパク質ホルモンであり、視床下部から分泌される性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）により調節される。雌性において卵巣内にある卵胞の成長及び成熟を刺激し、雄性においては精巣の曲精細管内にある胚芽細胞（ｇｅｒｍｉｎａｌ ｃｅｌｌ）の分化を促し、精子の形成過程中に第二次精母細胞までの発生過程を促す。
【００３７】
３）黄体形成ホルモン（ＬＨ）：ＦＳＨのように脳下垂体前葉の性腺刺激細胞から分泌される性腺刺激ホルモンの一種であって、糖タンパク質ホルモンであり、雌性においてはＦＳＨとの共同作用で卵胞を完全に発育させて多量のエストロゲンを分泌し、雄性においては精巣内間質細胞を刺激してアンドロゲンを分泌する生理作用を有している。
【００３８】
４）オステオカルシン：骨形成バイオマーカーであって、プロトロンビン内において発見したγ−カルボキシグルタミン酸（Ｇｌａ）を含む骨格の酸性タンパク質である。骨芽細胞（ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ）及び象牙芽細胞（ｏｄｏｎｔｏｂｌａｓｔ）においてのみ産生される。骨芽細胞により合成されたオステオカルシンは、リン灰石結晶とともに骨細胞に沈着されるが、血漿内においても観察することができる（正常値：６〜７ｎｇ／ｍｌ）。骨格におけるオステオカルシンの役割は不明であるが、血漿内のオステオカルシンの濃度は骨芽細胞の活性を示唆し、血中の高濃度のオステオカルシンは骨密度（ＢＭＤ）の増加との相関関係が非常に高い。
【００３９】
５）ＡＬＰ（アルカリホスファターゼ、アルカリ性リン酸加水分解酵素）：骨芽細胞から分泌される骨形成バイオマーカーであって、骨形成指標として最も普遍的に用いられるが、骨に加えて、肝臓、腎臓、胎盤などにおいても５０％以上生成されているため、敏感度及び特異性がやや低い。有機リン酸エステルから無機リン酸を放出するホスファターゼ酵素であって、最適なｐＨが９であり、アルカリ性である。血中ＡＬＰの活性は肝臓や骨などの疾患により変化するため、臨床検査の対象となる。アルカリホスファターゼは骨に最も多く、血漿においても発見される。血漿ＡＬＰは、正常のときに肝臓から排出されるが、閉塞性黄疸であるときにはこの酵素の活性が血漿中において増加する。これに加えて、佝僂病、副甲状腺機能亢進症、ページェット病、骨芽細胞肉腫、転移癌などであるときに増加する。６種のアイソザイムが存在する。
【００４０】
６）ＩＧＦ−１、ＩＧＦＢＰ−３：ＧＨ（ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ）は、肝臓及び骨格系組織においてインスリン様成長因子−Ｉ（（Ｉｎｓｕｌｉｎ  ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−Ｉ；ＩＧＦ−Ｉ）を生成してＩＧＦ−Ｉが軟骨組織に働くことにより成長を刺激し、蛋白同化作用を増加させる。インスリン様成長因子結合蛋白−３（ＩＧＦ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ−３；ＩＧＦＢＰ−３）はＧＨにより直接的に影響を受ける。ＩＧＦＢＰ−３は、ＩＧＦ−Ｉ及び酸不安定サブユニット（ａｃｉｄ ｌａｂｉｌｅ ｓｕｂｕｎｉｔ；ＡＬＳ）と結合されて１５０ｋＤａ複合体をなして血液内に存在する。
【００４１】
ＩＧＦ−Ｉは、末端肥大症や巨人症、甲状腺機能亢進症のときに増加し、脳下垂体性小人症、栄養障害、ＧＨ分泌不全性低身長症、思春期遅延症のときに低下する。ＩＧＦＢＰ−３は、ＧＨ欠損症の診断及び治療への適応判定及びモニターリングに用いて好適な指標であって、末端肥大症のときに増加し、ＧＨ欠損症のときに低下する。
【００４２】
１−６．統計的な処理
実験結果は、平均±標準誤差で表示した。統計的な処理は、スチューデントのｔ検定又は一元配置分散分析（ｏｎｅ  ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）を用いて行い、Ｐ値が０．０５未満である場合に統計的に意味があるものとした。
【００４３】
２．実験結果
２−１．体重及び一日当たりの増体量
実験が終わったときの体重は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ１９０．１４±４．２３、１８９．４６±５．４０、１８７．９４±４．５６であった（図１参照）。なお、対照群は１７２．８３±５．９８であり、対照群と比較して全ての群の体重が上昇する傾向を示したが、有意差は見られなかった。
【００４４】
２−２．食餌摂取量
実験期間の間の平均的な食餌摂取量は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ１６．７３ｇ／ｄａｙ、１５．８９ｇ／ｄａｙ、１５．７５ｇ／ｄａｙであった（図２参照）。なお、対照群は１８．８５ｇ／ｄａｙであり、対照群と比較して残りの群の摂取量がやや減少した。
【００４５】
２−３．体長
実験が終わったときの尻尾を除く体長は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ１７．８８±０．２９ｃｍ、１８．０８±０．２４ｃｍ、１８．３４±０．１４ｃｍであった（図３参照）。尻尾を含む全体の体長は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ３７．０２±０．４４ｃｍ、３７．０２±０．４２ｃｍ、３７．０８±０．３２ｃｍであった（図４参照）。なお、対照群は、それぞれ１７．８７±０．１３ｃｍ、３６．５３±０．５０ｃｍであり、尻尾を除く体長は２００ｍｇ／ｋｇ群において対照群に比べて有意的な増大を示し、尻尾を含む全体の体長もまた、全ての群において照群に比べてやや増大された。
【００４６】
２−４．大腿骨の長さ
実験が終わったときの大腿骨の長さは、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ２．９０７±０．０７ｍｍ、２．８８２±０．０２ｍｍ、２．９２３±０．０５ｍｍであった（図５参照）。なお、対照群は２．９０９±０．０５ｍｍであり、ほとんど差がなかった。
【００４７】
２−５．大腿骨の重さ
実験が終わったときの大腿骨の重さはグループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ５４０．８±２５．５２ｍｇ、５３１．７±２９．４６ｍｇ、５４４．８±２８．３７ｍｇであった（図６参照）。なお、対照群は５４５．７±２３．１６ｍｇであり、有意差は見られなかった。
【００４８】
２−６．肝臓の重さ
実験が終わったときの肝臓の重さは、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ７４１９．８±２５．５２ｍｇ、７３７４．２±８８４．９６ｍｇ、６９３４±３０６．７５ｍｇであった（図７参照）。なお、対照群は７２９８．４±８２８．４３ｍｇであり、大差を示さなかった。
【００４９】
２−７．脾臓の重さ
実験が終わったときの脾臓の重さは、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ４２２．８±３５．００ｍｇ、４１９．２±４０．０７ｍｇ、３８５．８±３６．１６ｍｇであった（図８参照）。なお、対照群は３６３．２±４９．１１ｍｇであり、対照群に比べて実験群においてやや増加する様相を示したが、有意差は見られなかった
【００５０】
２−８．腎臓の重さ
実験が終わったとき、腎臓の重さは、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ１３９４．８±５７．２９ｍｇ、１３４７．４±９０．８５ｍｇ、１３２０±８４．１０ｍｇであった（図９参照）。対照群は１４０６±８７．０８ｍｇであって、対照群に比べて実験群においてやや減少する様相を示したが、有意差はなかった
【００５１】
２−９．卵巣の重さ
実験が終わったときの卵巣の重さは、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ６９．８±１４．７１ｍｇ、５５．６±５．９５ｍｇ、４５±８．０４ｍｇであった（図１０参照）。なお、対照群は６０±８．１５ｍｇであり、対照群に比べて実験群において全体的に減少する様相を示し、特に、２００ｍｇ／ｋｇ群において有意的に減少した。
【００５２】
２−１０．グルコース
グルコースの濃度は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ１６７．８０±１９．６９ｍｇ／ｄｌ、１５８．８０±１９．４０ｍｇ／ｄｌ、１７５．８０±１６．７４ｍｇ／ｄｌであった（図１１参照）。なお、対照群は１４７．００±２４．２４ｍｇ／ｄｌであり、対照群に比べて実験群においてやや増加した。
【００５３】
２−１１．ＴＣ（総コレステロール）
ＴＣの濃度は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ６０．８０±７．２６ｍｇ／ｄｌ、５６．６０±８．８８ｍｇ／ｄｌ、６７．８０±１０．８３ｍｇ／ｄｌであった（図１２参照）。なお、対照群は６２．５０±９．１１ｍｇ／ｄｌであり、対照群に比べて実験群においてやや増加又は減少した。
【００５４】
２−１２．カルシウム
カルシウムの濃度は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ２．３０±０．５９ｍｇ／ｄｌ、２．３８±０．６５ｍｇ／ｄｌ、２．１２±０．５０ｍｇ／ｄｌであった（図１３参照）。なお、対照群は２．３３±０．６４ｍｇ／ｄｌであり、大差を示さなかった。
【００５５】
２−１３．ＩＧＦ−１
ＩＧＦ−１の濃度は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ１９７．９１±２５．６９ｎｇ／ｍｌ、１９０．６４±２０．１７ｎｇ／ｍｌ、１８５．８２±９．５７ｎｇ／ｍｌであった（図１４参照）。なお、対照群は２３０．７６±１２．１２ｎｇ／ｍｌであり、投与群と大差ないことが示された。
【００５６】
２−１４．ＩＧＦＢＰ−３
ＩＧＦＢＰ−３の濃度は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ１９．６５±１．４９ｎｇ／ｍｌ、２０．２７±０．４５ｎｇ／ｍｌ、２１．１０±１．０５ｎｇ／ｍｌであった（図１５参照）。なお、対照群は２２．２２±１．０５ｎｇ／ｍｌであり、投与群と比較したときに大差を示さなかった。
【００５７】
２−１５．ＡＬＰ
ＡＬＰの濃度は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ１２６．１９±３．３５ｎｇ／ｍｌ、１２４．７９±４．２８ｎｇ／ｍｌ、１１９．８９±２．１８ｎｇ／ｍｌであった（図１６参照）。なお、対照群は１２３．５４±４．８１ｎｇ／ｍｌであり、大差を示さなかった。
【００５８】
２−１６．オステオカルシン
オステオカルシンの濃度は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ３０６．９０±１８．１９ｐｇ／ｍｌ、３３５．９１±１４．４６ｐｇ／ｍｌ、３２６．８３±１２．５５ｐｇ／ｍｌであった（図１７参照）。なお、対照群は３０３．３０±４．７９ｐｇ／ｍｌであり、対照群に比べて実験群において有意的に上昇した。
【００５９】
２−１７．骨密度
ＢＭＤの濃度は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ０．０８８±０．００３ｇ／ｃｍ２、０．０８８±０．００２ｇ／ｃｍ２、０．０８９±０．００３ｇ／ｃｍ２であった（図１８参照）。なお、対照群は０．０９０±０．００２ｇ／ｃｍ２であり、大差を示さなかった。
【００６０】
２−１８．エストラジオール
エストラジオールの濃度は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ３．５４±０．１９ｐｇ／ｍｌ、３．４５±３．５ｐｇ／ｍｌ、３．１２±０．３９ｐｇ／ｍｌであった（図１９参照）。なお、対照群は３．５３±０．２１ｐｇ／ｍｌであり、略同じ値を示すか、或いは、対照群に比べて実験群においてやや減少した。
【００６１】
２−１９．黄体形成ホルモン
黄体形成ホルモンの濃度は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ２９３．３３±１．６３ｍｌＵ／ｍｌ、２９３．４±２．２６ｍｌＵ／ｍｌ、２９４．３３±２．１３ｍｌＵ／ｍｌであった（図２０参照）。なお、対照群は２９２．３３±１．２３ｍｌＵ／ｍｌであり、略同じ値を示すか、或いは、対照群に比べて実験群においてやや増加したが、有意差は見られなかった。
【００６２】
２−２０．卵胞刺激ホルモン
卵胞刺激ホルモンの濃度は、グループ当たりに（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）それぞれ１９．３１±４．３５ｎｇ／ｍｌ、１１．８７±０．３４ｎｇ／ｍｌ、５．３３±１．１０ｎｇ／ｍｌであった（図２１参照）。なお、対照群は４６．７３±０．８０ｎｇ／ｍｌであり、対照群に比べて実験群において濃度依存的に有意的に減少した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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