(57)【要約】【課題】本発明は、体液の漏出を止めることができる体液漏出防止剤を提供することを目的とする。【解決手段】  ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有する人工タンパク質（Ａ）並びに水を含む体液漏出防止剤（Ｂ）であって、前記ポリペプチド鎖（Ｙ）は、ＧＶＧＶＰ配列（１）、ＰＧＶＧＶ配列（２）、ＶＰＧＶＧ配列（３）、ＧＶＰＧＶ配列（４）、ＶＧＶＰＧ配列（５）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（６）からなる群から選ばれる１種以上のアミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個結合したポリペプチド鎖であり、前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、前記アミノ酸配列（Ｘ）と、前記アミノ酸配列（Ｘ）の全アミノ酸の個数のうち２０〜４０％がそれぞれリシン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列（Ｘ’）とが合計個数で２〜２００個結合したポリペプチド鎖である体液漏出防止剤を用いる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有する人工タンパク質（Ａ）並びに水を含む体液漏出防止剤（Ｂ）であって、
前記ポリペプチド鎖（Ｙ）は、ＧＶＧＶＰ配列（１）、ＰＧＶＧＶ配列（２）、ＶＰＧＶＧ配列（３）、ＧＶＰＧＶ配列（４）、ＶＧＶＰＧ配列（５）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（６）からなる群から選ばれる１種以上のアミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個結合したポリペプチド鎖であり、
前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、前記アミノ酸配列（Ｘ）と、前記アミノ酸配列（Ｘ）の全アミノ酸の個数のうち２０〜４０％がそれぞれリシン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列（Ｘ’）とが合計個数で２〜２００個結合したポリペプチド鎖である体液漏出防止剤。
【請求項２】
人工タンパク質（Ａ）１分子中に含まれる前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数が１〜２０個である請求項１に記載の体液漏出防止剤。
【請求項３】
人工タンパク質（Ａ）が、更にＧＡＧＡＧＳ配列（７）が２〜５０個連続して結合したポリペプチド鎖（Ｓ）を有する請求項１または２に記載の体液漏出防止剤。
【請求項４】
下記関係式（１）を満足する請求項１〜３いずれかに記載の体液漏出防止剤。
１≦（ｎ１＋ｎ２＋ｎ３）／ｎ４≦２０    （１）
但し、ｎ１はポリペプチド鎖（Ｙ）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）の個数；ｎ２はポリペプチド鎖（Ｙ’）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）の個数；ｎ３はポリペプチド鎖（Ｙ’）を構成するアミノ酸配列（Ｘ’）の個数；ｎ４は人工タンパク質（Ａ）１分子中のＧＡＧＡＧＳ配列（７）の個数を表す。
【請求項５】
人工タンパク質（Ａ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法による分子量が１５〜２００ｋＤａである請求項１〜４のいずれか１項に記載の体液漏出防止剤。
【請求項６】
人工タンパク質（Ａ）が、ＧＶＧＶＰ配列（１）であるアミノ酸配列（Ｘ）と、ＧＶＧＶＰ配列（１）中のアミノ酸がリシンで置換されたアミノ酸配列（Ｘ’１）とを有するポリペプチド鎖（Ｙ’）を有する人工タンパク質（Ａ１）である請求項１〜５のいずれか１項に記載の体液漏出防止剤。
【請求項７】
人工タンパク質（Ａ）が、（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（１４）であるポリペプチド鎖（Ｓ１−１）と、一部がリシン（Ｋ）で置換された（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（１６）であるポリペプチド鎖（Ｙ’１−１）とを有する人工タンパク質（Ａ１１）である請求項３〜６のいずれか１項に記載の体液漏出防止剤。
【請求項８】
体液が消化液である請求項１〜７のいずれか１項に記載の体液漏出防止剤。
【請求項９】
消化液が膵液である請求項８に記載の体液漏出防止剤。
【請求項１０】
さらに粘度調整剤（Ｃ）を含有する請求項１〜９のいずれか１項に記載の体液漏出防止剤。
【請求項１１】
粘度調整剤が（Ｃ）、多糖類、多糖類のアルカリ金属塩、又は多糖類アルカリ土類金属塩である請求項１０に記載の体液漏出防止剤。
【請求項１２】
体液漏出防止剤の重量に基づいて、人工タンパク質（Ａ）が９．５〜４９．５重量％、粘度調整剤（Ｃ）が０．５〜５重量％、水が５０〜９０重量％である請求項１０または１１に記載の体液漏出防止剤。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか記載の体液漏出防止剤（Ｂ）を乾燥してなるシート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体液漏出防止剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
臓器、皮膚、血管といった組織の損傷部、切断面、穴及び吻合部などから漏出出した体液を止めるものとして、損傷部を塞ぐ治療基材が必要となる。この治療基材は損傷部、切断面、穴、吻合部もしくはその周囲の組織に対する強い接着性が用いられている。
【０００３】
これら損傷部等からの体液の漏出を防止する治療基材としては、非生分解性のもの、生分解性のもの、または両者を組み合わせたものがある。一般的に、こうした治療基材は必要な機能を果たした後、分解されることが望ましい。
【０００４】
しかし、特に消化器系領域に生じた損傷部等には様々な細菌が存在するために、非生分解性の治療基材では、それ自体が細菌の温床となりやすく、通常は消化器系領域に生じた損傷部等の治療には生分解性を有した治療基材が用いられている。
【０００５】
また、消化器系領域で生じた損傷部等から漏出する体液は、その他の部位の体液に比べて消化酵素の量が多いため、治療基材がそれらの消化酵素への耐分解性を有していることが求められる。
【０００６】
体液が漏出する消化器系領域に生じた損傷部等として膵液瘻が挙げられる。膵液瘻とは膵臓に瘻孔が生じ、膵液が持続的ないし断続的に漏出する状態である。膵液瘻は、最も頻度の高い膵臓手術後合併症の一つであり、膵炎（急性又は慢性）、外傷によって膵液瘻が発生することもある。膵液瘻は重篤な場合には死に至る難治性の疾患であるものの、従来の治療基材（例えば特許文献１）膵液に含まれる消化酵素に対する耐分解性が十分では無いため、膵液の漏出を止めることは困難であり、膵液の漏出を止めることができる新たな治療基材が切望されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１４−２２１８３０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、膵液などの体液の漏出を止めることができる体液漏出防止剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、鋭意研究を重ねた結果、本発明に到達した。
すなわち、本発明は、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有する人工タンパク質（Ａ）並びに水を含む体液漏出防止剤（Ｂ）であって、前記ポリペプチド鎖（Ｙ）は、ＧＶＧＶＰ配列（１）、ＰＧＶＧＶ配列（２）、ＶＰＧＶＧ配列（３）、ＧＶＰＧＶ配列（４）、ＶＧＶＰＧ配列（５）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（６）からなる群から選ばれる１種以上のアミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個結合したポリペプチド鎖であり、前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、前記アミノ酸配列（Ｘ）と、前記アミノ酸配列（Ｘ）の全アミノ酸の個数のうち２０〜４０％がそれぞれリシン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列（Ｘ’）とが合計個数で２〜２００個結合したポリペプチド鎖である体液漏出防止剤；並びにこの体液漏出防止剤（Ｂ）を乾燥してなるシートである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の体液漏出防止剤は、優れた組織接着性を持ち、また膵液などの消化液に対しては容易に分解されない耐分解性を持つため、膵液の漏出を止めることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の体液漏出防止剤は、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有する人工タンパク質（Ａ）並びに水を含む。
前記のポリペプチド鎖（Ｙ）は、ＧＶＧＶＰ配列（１）、ＰＧＶＧＶ配列（２）、ＶＰＧＶＧ配列（３）、ＧＶＰＧＶ配列（４）、ＶＧＶＰＧ配列（５）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（６）からなる群から選ばれる１種以上のアミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個結合したポリペプチド鎖である。
一方、前記のポリペプチド鎖（Ｙ’）は、前記のアミノ酸配列（Ｘ）と、別のアミノ酸配列（Ｘ’）とが合計個数で２〜２００個結合したポリペプチド鎖であり、このアミノ酸配列（Ｘ’）はアミノ酸配列（Ｘ）の全アミノ酸の個数のうち２０〜４０％がそれぞれリシン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列でである。
【００１２】
本願において、「体液漏出防止剤」とは、臓器、皮膚、血管といった組織の損傷部、切断面、穴、吻合部などから漏出した体液等を止めるものとして、塗布又は貼り付けされる医療機器を意味する。
また、本発明における体液とは胃液、膵液、胆汁、腸液等と言った消化液、血液、リンパ液、羊水、体腔内を満たす胸水、腹水を含む体内に存在する細胞内液、細胞外液、体腔液のことである。
【００１３】
本発明において、人工タンパク質（Ａ）は、動物由来成分を排除するために、人工的に製造されるものである。製造方法としては、有機合成法（酵素法、固相合成法及び液相合成法等）及び遺伝子組み換え法等が挙げられる。有機合成法に関しては、「生化学実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ（１９８１年７月１日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」又は「続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）（昭和６２年５月２０日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」に記載されている方法等が適用できる。遺伝子組み換え法に関しては、特許第３３３８４４１号公報に記載されている方法等が適用できる。
有機合成法及び遺伝子組み換え法はともに、人工タンパク質（Ａ）を製造できるが、アミノ酸配列を簡便に変更でき、安価に大量生産できるという観点及び分子量の大きいタンパク質を生産する場合における生産性の観点等から、遺伝子組み換え法が好ましい。
【００１４】
本発明において、ポリペプチド鎖（Ｙ）は、ＧＶＧＶＰ配列（１）、ＰＧＶＧＶ配列（２）、ＶＰＧＶＧ配列（３）、ＧＶＰＧＶ配列（４）、ＶＧＶＰＧ配列（５）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（６）からなる群から選ばれる１種以上のアミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個結合したポリペプチド鎖である。
具体的には（ＧＶＧＶＰ）ａ配列（Ｙ１）、（ＰＧＶＧＶ）ｂ配列（Ｙ２）、（ＶＰＧＶＧ）ｃ配列（Ｙ３）、（ＧＶＰＧＶ）ｄ配列（Ｙ４）、（ＶＧＶＰＧ）ｅ配列（Ｙ５）、（ＧＰＰ）ｆ配列（Ｙ６）、（ＧＡＰ）ｇ配列（Ｙ７）及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）ｈ配列（Ｙ８）で表されるポリペプチド鎖等が挙げられる。
なお、添え字の記号のａ〜ｈはそれぞれアミノ酸配列（Ｘ）の個数であり、２〜２００の整数である。
人工タンパク質（Ａ）１分子中にポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、上記ポリペプチド鎖を１種有してもよく、２種以上有してもよい。
また、人工タンパク質（Ａ）中にアミノ酸配列（Ｘ）が同種類のポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、上記（Ｘ）の個数は、（Ｙ）ごとに同一でも異なっていてもよい。すなわち、上記ａ〜ｈが同じポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよく、ａ〜ｈが異なるポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもいい。
【００１５】
ポリペプチド鎖（Ｙ）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）としては、細胞との親和性及び細胞非接着性の観点から、ＧＶＧＶＰ配列（１）、ＰＧＶＧＶ配列（２）、ＶＰＧＶＧ配列（３）、ＧＶＰＧＶ配列（４）及びＶＧＶＰＧ配列（５）が好ましく、更に好ましくはＧＶＧＶＰ配列（１）及びＶＰＧＶＧ配列（３）である。
ポリペプチド鎖（Ｙ）としては、溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間の観点の観点から、（ＧＶＧＶＰ）ａ配列（Ｙ１）、（ＰＧＶＧＶ）ｂ配列（Ｙ２）、（ＶＰＧＶＧ）ｃ配列（Ｙ３）、（ＧＶＰＧＶ）ｄ配列（Ｙ４）及び（ＶＧＶＰＧ）ｅ配列（Ｙ５）が好ましく、更に好ましくは（ＧＶＧＶＰ）ａ配列（Ｙ１）及び（ＶＰＧＶＧ）ｃ配列（Ｙ３）である。
【００１６】
本発明において、ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、アミノ酸（Ｘ）と、アミノ酸配列（Ｘ）の全アミノ酸の個数のうち２０〜４０％がそれぞれリシン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列（Ｘ’）とが合計個数で２〜２００個結合したポリペプチド鎖である。
好ましくは２〜５０個、さらに好ましくは５〜３０個である。
【００１７】
アミノ酸配列（Ｘ’）としては、ＧＶＧＶＰ配列（１）中のアミノ酸がリシン（Ｋ）で置換されたアミノ酸配列（Ｘ’１）｛ＧＫＧＶＰ配列（８）、ＧＶＧＫＰ配列（９）及びＧＫＧＫＰ配列（１０）等｝、ＶＰＧＶＧ配列（３）中のアミノ酸がリシン（Ｋ）で置換されたアミノ酸配列（Ｘ’２）｛ＫＰＧＶＧ配列（１１）、ＶＰＧＫＧ配列（１２）及びＫＰＧＫＧ配列（１３）等｝等が挙げられる。
【００１８】
また、アミノ酸配列（Ｘ’）としては、溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間の観点から、ＧＫＧＶＰ配列（８）、ＧＶＧＫＰ配列（９）、ＧＫＧＫＰ配列（１０）、ＫＰＧＶＧ配列（１１）、ＶＰＧＫＧ配列（１２）及びＫＰＧＫＧ配列（１３）からなる群から選ばれる少なくとも１種の配列が好ましく、更に好ましくはＧＫＧＶＰ配列（８）及びＫＰＧＶＧ配列（１１）からなる群から選ばれる少なくとも１種である。
【００１９】
人工タンパク質（Ａ）は、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有することにより、体温付近でゲル化することが可能となる。したがって、本発明の人工タンパク質（Ａ）及び水を含む体液漏出防止剤を、組織の損傷部、吻合部等に塗布することにより、体液の漏出を防止することができる。
【００２０】
人工タンパク質（Ａ）１分子中に含まれる上記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数は、２０個以下であり、好ましくは１〜２０個であり、（Ａ）の溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間の観点から、さらに好ましくは３〜１８個である。
【００２１】
人工タンパク質（Ａ）において、（Ａ）１分子中のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数は、溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間の観点から、５０〜２００個が好ましく、特に好ましくは９０〜１５０個である。
【００２２】
本発明において、人工タンパク質（Ａ）は、ゲル化時間の観点から、更にＧＡＧＡＧＳ配列（７）を有することが好ましい。
（Ａ）がＧＡＧＡＧＳ配列（７）を有している場合、（Ａ）の溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間観点から、ＧＡＧＡＧＳ配列（７）が２〜５０個連続して結合したポリペプチド鎖（Ｓ）を有していることが好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｓ）において、ＧＡＧＡＧＳ配列（７）が連続する個数は、（Ａ）の溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間観点から、２〜１０個が好ましく、更に好ましくは２〜８個であり、特に好ましくは２〜６個であり、最も好ましくは２〜４個である。
（Ａ）において、ポリペプチド鎖（Ｓ）を有する際、（Ａ）１分子中に（Ｓ）を１個以上有すればよいが、ゲル化時間の観点から、２〜２０個が好ましく、更に好ましくは５〜１８個である。
【００２３】
人工タンパク質（Ａ）において、ポリペプチド鎖（Ｙ）、ポリペプチド鎖（Ｙ’）及びポリペプチド鎖（Ｓ）を合計２個以上有する場合は、ポリペプチド鎖とポリペプチド鎖との間に、介在アミノ酸配列（Ｚ）を有していてもいい。
介在アミノ酸配列（Ｚ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、（Ｙ）、（Ｙ’）又は（Ｓ）では無いペプチド配列である。（Ｚ）を構成するアミノ酸の数は、（Ａ）の溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間観点のから、１〜１０個が好ましく、更に好ましくは１〜５個であり、特に好ましくは１〜３個である。（Ｚ）として、具体的には、ＶＡＡＧＹ配列（１４）、ＧＡＡＧＹ配列（１５）及びＬＧＰ配列等が挙げられる。
【００２４】
人工タンパク質（Ａ）中の両末端の各ポリペプチド鎖（Ｙ）、ポリペプチド鎖（Ｙ’）及びポリペプチド鎖（Ｓ）のＮ及び／又はＣ末端には、末端アミノ酸配列（Ｔ）を有していてもいい。
（Ｔ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、（Ｙ）、（Ｙ’）又は（Ｓ）では無いペプチド配列である。（Ｔ）を構成するアミノ酸の数は、（Ａ）の溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間観点から、１〜１００個が好ましく、更に好ましくは５〜４０個であり、特に好ましくは１０〜３５個である。
（Ｔ）として、具体的には、ＭＤＰＶＶＬＱＲＲＤＷＥＮＰＧＶＴＱＬＮＲＬＡＡＨＰＰＦＡＳＤＰＭ配列（１６）等が挙げられる。
【００２５】
人工タンパク質（Ａ）は、上記（Ｔ）以外に、発現させた（Ａ）の精製または検出を容易にするために、（Ａ）のＮ及び／又はＣ末端に特殊なアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチド（以下これらを「精製タグ」と称する）を有してもいい。精製タグとしては、アフィニティー精製用のタグが利用される。そのような精製タグとしては、ポリヒスチジンからなる６×Ｈｉｓタグ、Ｖ５タグ、Ｘｐｒｅｓｓタグ、ＡＵ１タグ、Ｔ７タグ、ＶＳＶ−Ｇタグ、ＤＤＤＤＫタグ、Ｓタグ、ＣｒｕｚＴａｇ０９ＴＭ、ＣｒｕｚＴａｇ２２ＴＭ、ＣｒｕｚＴａｇ４１ＴＭ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕタグ、Ｈａ．１１タグ、ＫＴ３タグ、マルトース結合タンパク質、ＨＱタグ、Ｍｙｃタグ、ＨＡタグ及びＦＬＡＧタグ等がある。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ−１）グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＴＳ）  （ｉｉ−１）グルタチオン
（ｉ−２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）  （ｉｉ−２）アミロース
（ｉ−３）ＨＱタグ  （ｉｉ−３）ニッケル
（ｉ−４）Ｍｙｃタグ  （ｉｉ−４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ−５）ＨＡタグ  （ｉｉ−５）抗ＨＡ抗体
（ｉ−６）ＦＬＡＧタグ  （ｉｉ−６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ−７）６×Ｈｉｓタグ  （ｉｉ−７）ニッケル又はコバルト
前記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおける人工タンパク質（Ａ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。
【００２６】
人工タンパク質（Ａ）１分子中のポリペプチド鎖（Ｙ）及びポリペプチド鎖（Ｙ’）の合計含有量（重量％）は、溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間観点から、（Ａ）の分子量を基準として、４０〜８０重量％が好ましく、更に好ましくは５０〜７０重量％である。
【００２７】
人工タンパク質（Ａ）中のポリペプチド鎖（Ｙ）及び（Ｙ’）の合計含有量は、アミノ酸配列決定によって求めることができる。具体的には、下記の測定法によって求めることができる。
【００２８】
＜ポリペプチド鎖（Ｙ）及び（Ｙ’）の合計含有量の測定法＞
津製作所社製ペプチドシーケンサー（プロテインシーケンサ）ＰＰＳＱ−３３Ａを用いて、アミノ酸配列を決定する。決定したアミノ酸配列から、下記数式（１）によりポリペプチド鎖（Ｙ）及び（Ｙ’）の合計含量を求める。
ポリペプチド鎖（Ｙ）と（Ｙ’）の合計含有量＝Σ（γ×β）／Σ（α×β）×１００  （１）
α：人工タンパク質（Ａ）中の各アミノ酸の数
β：各アミノ酸の分子量
γ：ポリペプチド鎖（Ｙ）及び（Ｙ’）中の各アミノ酸の個数
【００２９】
人工タンパク質（Ａ）１分子中のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計含有量（重量％）は、溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間観点から、（Ａ）の分子量を基準として４０〜８０重量％が好ましく、更に好ましくは５０〜７０重量％である。
【００３０】
（Ａ）の溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間観点から、人工タンパク質（Ａ）中の各種アミノ酸配列の個数は、下記関係式（１）を満足することが好ましい。
１≦（ｎ１＋ｎ２＋ｎ３）／ｎ４≦２０    （１）
ここで、ｎ１はポリペプチド鎖（Ｙ）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）の個数；ｎ２はポリペプチド鎖（Ｙ’）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）の個数；ｎ３はポリペプチド鎖（Ｙ’）を構成するアミノ酸配列（Ｘ’）の個数；ｎ４は人工タンパク質（Ａ）１分子中のＧＡＧＡＧＳ配列（７）の個数を表す。
さらに好ましくは、１≦（ｎ１＋ｎ２＋ｎ３）／ｎ４≦１０である。
【００３１】
本発明において、（Ａ）がＧＡＧＡＧＳ配列（７）を有していると、ゲル化時間が更に良好になる。特に、ＧＡＧＡＧＳ配列（７）とアミノ酸配列（Ｘ）及び（Ｘ’）との比が上記範囲であることで、溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間のバランスがとれる。
【００３２】
人工タンパク質（Ａ）の分子質量は、溶解性（特に水への溶解性）及びゲル化時間観点から、１５〜２００ｋＤａが好ましく、更に好ましくは６０〜８０ｋＤａである。この範囲であると、（Ａ）が分解されるまでの時間が適度である。
なお、人工タンパク質（Ａ）の分子質量は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法により、測定サンプルを分離し、泳動距離を標準物質と比較する方法によって求められる。
【００３３】
好ましい人工タンパク質（Ａ）の一部を以下に例示する。
（１）アミノ酸配列（Ｘ）がＧＶＧＶＰ配列（１）の人工タンパク質（Ａ１−１）
アミノ酸配列（Ｘ）として、ＧＶＧＶＰ配列（１）を有し、アミノ酸配列（Ｘ’）としてＧＫＧＶＰ配列（８）を有する人工タンパク質（Ａ１）であり、更に好ましくは、（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（１６）であるポリペプチド鎖（Ｙ’１−１）及び（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（１４）であるポリペプチド鎖（Ｓ１−１）を有する人工タンパク質（Ａ１−１）、ポリペプチド鎖（Ｙ’１−１）及び（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）であるポリペプチド鎖（Ｓ１−２）を有する人工タンパク質（Ａ１−２）、並びにポリペプチド鎖（Ｙ’１−１）、ポリペプチド鎖（Ｓ１−１）及びポリペプチド鎖（Ｓ１−２）を有する人工タンパク質（Ａ１−３）である。
具体的には、下記人工タンパク質が挙げられる。
（ｉ）ＧＡＧＡＧＳ配列（７）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（１４）のポリペプチド鎖（Ｓ１−１）を１２個及びＧＶＧＶＰ配列（１）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１−１）中のＶ（バリン）のうち１個がＫ（リシン）に置換された（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（１６）（Ｙ’１−１）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなるものに、ＧＡＧＡＧＳ配列（７）が２個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）のポリペプチド鎖（Ｓ１−２）１個が化学結合した構造を有する分子質量が約８０ｋＤａの配列（１８）の人工タンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ）
（ｉｉ）ＧＡＧＡＧＳ配列（７）が２個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）のポリペプチド鎖（Ｓ１−２）及び（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（１６）のポリペプチド鎖（Ｙ’１−１）をそれぞれ１７個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約７７ｋＤａの配列（１９）の人工タンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋ）
（ｉｉｉ）ＧＡＧＡＧＳ配列（７）が２個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）のポリペプチド鎖（Ｓ１−２）を１６個、及びＧＶＧＶＰ配列（１）が１６個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１−１）中のＶ（バリン）のうち１個がＫ（リシン）に置換された（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）１１配列（１７）（Ｙ’１−２）を８個有し、これらが｛（Ｓ１−２）（Ｙ’１−２）（Ｓ１−２）｝８の順で化学結合してなる分子質量が約７１ｋＤａの配列（２０）の人工タンパク質（ＳＥＬＰ４１５Ｋ）
（ｉｖ）ＧＡＧＡＧＳ配列（７）が２個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）のポリペプチド鎖（Ｓ１−２）を６個、ＧＶＧＶＰ配列（１）が１６個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１−１）中のＶ（バリン）のうち１個がＫ（リシン）に置換された（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）１１配列（１７）（Ｙ’１−２）を６個、及びＧＡＧＡＧＳ配列（７）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（１４）のポリペプチド鎖（Ｓ１−１）を６個有し、これらが｛（Ｓ１−２）（Ｙ’１−２）（Ｓ１−１）｝６の順で化学結合してなる分子質量が約６５ｋＤａの配列（２１）の人工タンパク質（ＳＥＬＰ８１５Ｋ）
【００３４】
本発明の体液漏出防止剤は、人工タンパク質（Ａ）及び水を含む体液漏出防止剤である。
水としては、滅菌されたものであれば特に限定するものではなく、滅菌方法としては、０．２μｍ以下の孔径を持つ精密ろ過膜を通した水、限外ろ過膜を通した水、逆浸透膜を通した水及びオートクレーブで１２１℃２０分加熱して過熱滅菌したイオン交換水等が挙げられる。
【００３５】
本発明の体液漏出防止剤は、さらに粘度調整剤（Ｃ）を含むことが好ましい。粘度調整剤を含むと損傷部への接着性が良好となり好ましい。
粘度調整剤（Ｃ）としては、ポリエチレングリコール、キサンタンガム、多糖類（デンプン、アルギン酸、ヒアルロン酸、カラギーナン、ペクチン及びカルボキシメチルセルロース）並びにこれらのアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩等が挙げられる。
粘度調整剤は、１種を単独で用いても、２種以上を併用してもよい。
これらの内、ゲル化時間の調整及び安全性の観点から、多糖類（好ましくはアルギン酸、ヒアルロン酸及びカルボキシメチルセルロース）、前記の多糖類のアルカリ金属塩及び前記の多糖類のアルカリ土類金属塩が好ましい。
【００３６】
本発明の体液漏出防止剤が粘度調整剤を含有する場合、人工タンパク質（Ａ）、粘度調整剤及び水の重量割合は、ゲル化時間等の観点から、体液漏出防止剤の重量に基づいて、それぞれ、９．５〜４９．５重量％、０．５〜５重量％、５０〜９０重量％であることが好ましく、更に好ましくは１０〜３０重量％、２〜４重量％、６８〜８８重量％である。
【００３７】
本発明の体液漏出防止剤が含む水は、緩衝成分を含んだ緩衝液として用いてもいい。
緩衝成分としては、リン酸等有機酸やグッドバッファー等が挙げられる。
緩衝成分は、１種を単独で用いても２種以上を併用してもよい。
ゲル状の体液漏出防止剤中の緩衝成分の含有量は、ゲル化時間の観点から、０〜５０ｍＭが好ましく、更に好ましくは０〜１０ｍＭである。
【００３８】
本発明の体液漏出防止剤は、更に塩（例えばナトリウム塩等）を含んでいても良い。
塩の重量割合は、ゲル化の観点から、体液漏出防止剤の重量を基準として、０〜０．８重量％が好ましく、更に好ましくは０．７〜０．６重量％である。
塩は、１種を単独で用いても２種以上を併用してもよい。
【００３９】
本発明の体液漏出防止剤には、更に架橋剤（グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル及びカルボジイミド等）を併用することもできる。架橋剤を用いる場合、ゲル化時間及び安全性の観点から、グルタルアルデヒドが好ましい。
架橋剤は、１種を単独で用いても２種以上を併用してもよい。
【００４０】
本発明の体液漏出防止剤は、人工タンパク質（Ａ）及び水、並びに必要により用いる粘度調整剤（Ｃ）等を公知の方法で混合することで得ることができる。
【００４１】
本発明の体液漏出防止剤は、本発明の体液漏出防止剤を加温し、水分量を減らすことでシート状にし、用いることができる。
シート状の体液漏出防止剤とすることで、より強固に、体液の漏出を防止することができる。
シート状に成形して用いる場合、成形性等の観点から、人工タンパク質（Ａ）及び粘度調整剤の重量割合は、人工タンパク質（Ａ）及び粘度調整剤の合計重量を基準として、それぞれ７０〜９９重量％、１〜３０重量％含有することが好ましく、更に好ましくはそれぞれ９０〜９８、２〜１０重量％である。
【００４２】
シート状の体液漏出防止剤は、体液漏出防止剤を平底の容器（プラスチック容器等）に流し込み、循風乾燥機を用いる等公知の乾燥手段で、前記の容器中の体液漏出防止剤を乾燥することにより得ることができる。
乾燥時の温度としては、タンパク質の安定性の観点から、３０〜４５℃であることが好ましい。また、乾燥時間は、タンパク質の安定性の観点から、１２〜２４時間であることが好ましい。
【００４３】
シート状の体液漏出防止剤は、上記の乾燥工程後に、メタノールに浸漬させる処理を行うことが好ましい。シート状の体液漏出防止剤は、メタノールに浸漬させることで、耐分解性をより高めることができる。
シート状の体液漏出防止剤をメタノールに浸漬させる時間としては、１２〜３０時間であることが好ましい。
【００４４】
シート状の体液漏出防止剤は、上記のメタノール処理工程後に、金属塩を添加することが好ましい。
シート状の体液漏出防止剤は、金属塩を添加することで、金属塩のカチオンとキレートを形成し、更に耐分解性を高めることができる。
金属塩のカチオンとしては、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン及び鉄イオン等が挙げられ、また、アニオンとしては、塩化物イオン、硫化物イオン及びリン酸イオン等が挙げられる。
金属塩として好ましいものとしては、塩化カルシウム等が挙げられる。
金属塩は、１種を単独で用いても２種以上を併用してもよい。
また、シート状の体液漏出防止剤に金属塩を添加する方法としては、金属塩の水溶液にシート状の体液漏出防止剤を浸漬させる方法等が挙げられる。
金属塩水溶液中の金属塩の濃度は、０．５〜１０％であることが好ましい。また、シート状の体液漏出防止剤を金属塩水溶液に浸漬させる時間としては、１０〜２４時間であることが好ましい。
【００４５】
本発明の体液漏出防止剤は、体液が漏出する消化器系領域に生じた損傷部等に直接塗布または貼り付けて用いられる。
本発明の体液漏出防止剤は、消化酵素への耐分解性を有しているため、体液が消化液である場合の体液漏出防止剤として好ましく用いることができ、特に膵液に含まれる消光酵素に対しても耐分解性を有しているため、体液が膵液である場合の体液漏出防止剤として好ましく用いることができる。
【実施例】
【００４６】
以下、実施例及び比較例により本発明を更に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。以下、特に定めない限り、％は重量％、部は重量部を示す。
【００４７】
＜製造例１＞
［タンパク質（Ａ１−１）の作製］
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の生産
特許第４０８８３４１号公報の実施例記載の方法に準じて、ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５を作製した。
作製したプラスミドを大腸菌にトランスフォーメーションし、ＳＥＬＰ８Ｋ生産株を得た。以下、このＳＥＬＰ８Ｋ生産株を用いて、配列（１８）のタンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）を生産する方法を示す。
【００４８】
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の培養
３０℃で生育させたＳＥＬＰ８Ｋ生産株の一夜培養液を使用して、２５０ｍｌフラスコ中のＬＢ培地５０ｍｌに接種した。カナマイシンを最終濃度５０μｇ／ｍｌとなるように加え、該培養液を３０℃で攪拌しながら（２００ｒｐｍ）インキュベートした。培養液が濁度ＯＤ６００＝０．８（吸光度計ＵＶ１７００：島津製作所製を使用）となった時に、４０ｍｌを４２℃に前もって温めたフラスコに移し、同じ温度で約２時間培養した。培養した培養液を氷上で冷却し、培養液の濁度ＯＤ６００を測定し、遠心分離にて大腸菌を集菌した。
【００４９】
タンパク質（Ａ１−１）の精製
集菌した大腸菌を、（１）菌体溶解、（２）遠心分離による不溶性細片の除去、（３）硫安沈殿、（４）限外濾過、（５）陰イオン交換クロマトグラフィー、（６）限外濾過、（７）凍結乾燥を行うことにより大腸菌バイオマスから精製した。
このようにして、配列（１８）のタンパク質（Ａ）である精製したタンパク質（Ａ１−１）を得た。また、精製したタンパク質（Ａ１−１）の分子量は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法により求めた結果、８０ＫＤａであった。
【００５０】
（１）菌体溶解
集菌した大腸菌１００ｇに対して、脱イオン水２００ｇを加えて、高圧ホモジナイザー（５５ＭＰａ）にて菌体溶解し、溶解した菌体を含む菌体溶解液を得た。その後、菌体溶解液を氷酢酸にてｐＨ４．０に調整した。
【００５１】
（２）遠心分離による不溶性細片の除去
さらに菌体溶解液を遠心分離（６３００ｒｐｍ、４℃、３０分間）して、上清を回収した。
【００５２】
（３）硫安沈殿
回収した上清に硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８〜１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解した。溶解した液に対して、同様に硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８〜１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解し、溶液を得た。
【００５３】
（４）限外濾過
（３）で得た溶液を分子質量３０,０００カットの限外濾過装置（ホロファーバー：ＧＥヘルスケア製）に供した。３で得た溶液に対して、１０倍量の脱イオン水を用いて、限外濾過を実施し、限外濾過後のタンパク質を得た。
【００５４】
（５）陰イオン交換クロマトグラフィー
限外濾過後のタンパク質を１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に溶解して２０ｇ／Ｌとし、陰イオン交換カラムＨｉＰｒｅｐＳＰ  ＸＬ１６／１０（ＧＥヘルスケア社製）をセットしたＡＫＴＡＰｒｉｍｅ（アマシャム社製）に供した。溶出液として５００ｍＭ １０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液を用いて、溶出画分を回収した。
【００５５】
（６）限外濾過
（５）で得た溶液を上記「４：限外濾過」と同様にして処理し、限外濾過後のタンパク質を得た。
【００５６】
（７）凍結乾燥
タンパク質を脱イオン水に溶解して１０ｇ／Ｌとし、水位が１５ｍｍ以下となるようにステンレス製のバットに入れる。その後、凍結乾燥機（日本テクノサービス社製）に入れて、−４０℃、８時間かけて凍結させる。凍結後、真空度が８Ｐａ以下、−２０℃で、７０時間かけて１次乾燥、真空度が８Ｐａ以下、１０℃で、２４時間かけて２次乾燥させ、精製したタンパク質（Ａ１−１）を得た。
【００５７】
タンパク質（Ａ１−１）の同定
得られたタンパク質（Ａ１−１）を下記の手順で同定した。
抗ラビットＳＥＬＰ８Ｋ抗体及びＣ末端配列の６×Ｈｉｓタグに対する抗ラビット６×Ｈｉｓ抗体（Ｒｏｌａｎｄ社製）を用いたウエスタンブロットにより分析した。見かけ分子質量８０ｋＤａのタンパク質バンドが、各抗体に抗体反応性を示した。また得られたタンパク質をアミノ分析供した結果、該生成物が、グリシン（４３．７重量％），アラニン（１２．３重量％），セリン（５．３重量％），プロリン（１１．７重量％）及びバリン（２１．２重量％）に富むものであった。また、該生成物はリシンを１．５重量％含んでいた。下記の表１は、精製された生成物の組成と、合成遺伝子配列から推測された予測理論組成との相関関係を示す。
【００５８】
【表１】
2018000957.tif 000002
【００５９】
したがって、タンパク質（Ａ１−１）はＧＡＧＡＧＳ配列（７）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（１４）のポリペプチド鎖（Ｓ１−１）を１２個、及びＧＶＧＶＰ配列（１）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１−１）中のＶ（バリン）のうち１個がＫ（リシン）に置換された（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（１６）（Ｙ’１−１）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなる配列（１８）のタンパク質〔含有するアミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数が１３個［ポリペプチド鎖（Ｙ’）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）（ｎ２）は含まない］であることを確認した。
すなわち、ｎ１＝０、ｎ2＝９１、ｎ3＝１３、ｎ４＝４８であり、（ｎ１＋ｎ２＋ｎ３）／ｎ４は２．２であった。    
【００６０】
＜ウエスタンブロット法＞
ウエスタンブロット用サンプル２０μＬに３×ＳＤＳ処理バッファ（１５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、３００ｍＭ  ジチオスレイトール、６重量％  ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、０．３重量％  ブロモフェノールブルー、及び３０重量％  グリセロールを含む）１０μＬを添加して９５℃５分間加温し、泳動用試料を調製した。この泳動用試料１５μＬを用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。泳動後のゲルをＰＶＤＦメンブレンにトランスファーし、これをブロッキングバッファ（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１重量％  Ｔｗｅｅｎ２０、及び５重量％  スキムミルクを含む）に浸漬して１時間室温で振蕩することによりメンブレンのブロッキング処理を行った。ブロッキング処理後、メンブレンをＴＢＳ−Ｔ（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、及び０．１重量％  Ｔｗｅｅｎ２０を含む）で２分間洗浄した。次に、メンブレンを一次抗体溶液（一次抗体：抗Ｈｉｓ−ｔａｇ抗体（Ｒｏｃｋｌａｎｄ社製）をＴＢＳ−Ｔで５００分の１に希釈した溶液）に浸漬し、４℃で一晩静置して抗体反応を行った。反応後、このメンブレンをＴＢＳ−Ｔで５分間、４回洗浄した後、一次抗体に結合可能であり且つ標識酵素として西洋ワサビペルオキシダーゼを結合させた二次抗体の溶液（二次抗体：ＥＣＬ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ  ＨＲＰ  ｌｉｎｋｅｄ  Ｆ（ａｂ’）２  ｆｒａｇｍｅｎｔ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）をＴＢＳ−Ｔで２０００分の１に希釈した溶液）にメンブレンを浸漬し、３０分間室温で静置して抗体反応を行った。反応後、メンブレンをＴＢＳ−Ｔで５分間、４回洗浄した後、ＥＣＬ−Ａｄｖａｎｃｅ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）により酵素反応を行った。ルミノメーターＦｏｒＥＣＬ（アマシャム社製）を用いて、高感度インスタント黒白フィルム（富士フイルム株式会社製）に感光させ、バンドを可視化した。肉眼でバンドが確認できない場合、分解吸収され、無くなったと判断した。
【００６１】
＜実施例１＞
人工タンパク質（Ａ−１）を含有したゲル状の体液漏出防止剤（Ｂ−１）の作製
製造例１で得たタンパク質（Ａ１−１）を１２．５重量％となるように純水に溶解した。
この溶液がゲル化するまで３７℃にて加温、静置した後、凍結乾燥を行った。
この凍結乾燥物を再び１２．５重量％になるように純水に溶解させ、加温してゲル化した後、再び凍結乾燥する一連の工程を計４回繰り返して行い、人工タンパク質（Ａ−１）を得た。
得られた人工タンパク質（Ａ−１）を２０重量％、アルギン酸ナトリウム（粘度が３００〜４００ｃＰ）［和光純薬工業（株）製］を４重量％の濃度で脱イオン水に溶解し、ゲル状の体液漏出防止剤（Ｂ−１）を作製した。
【００６２】
＜実施例２＞
人工タンパク質（Ａ−１）含有したゲル状の体液漏出防止剤（Ｂ−２）の作製
実施例１と同様にして得られた体液漏出防止剤（２）に対し、1重量％のデンプン（溶性）［和光純薬工業（株）製］を添加した体液漏出防止剤（Ｂ−２）を作成した。
【００６３】
＜実施例３＞
人工タンパク質（Ａ−１）含有したゲル状の体液漏出防止剤（Ｂ−３）の作製
実施例１と同様にして得られた人工タンパク質（Ａ−１）を３０重量％、アルギン酸ナトリウムを３．５重量％の濃度で脱イオン水に溶解し体液漏出防止剤（Ｂ−３）を作製した。
【００６４】
＜実施例４＞
人工タンパク質（Ａ−１）含有したゲル状の体液漏出防止剤（Ｂ−４）の作製
実施例１と同様にして得られた人工タンパク質（Ａ−１）を３０重量％、アルギン酸ナトリウムを３．５重量％、デンプンを1重量％の濃度で脱イオン水に溶解し、３７℃にて加温、静置してゲル化させ、体液漏出防止剤（Ｂ−４）を作製した。
【００６５】
＜実施例５＞
人工タンパク質（Ａ−１）含有したシート（Ｄ−１）の作製
実施例１と同様にして得られた人工タンパク質（Ａ１）とアルギン酸ナトリウムと水を１９：１：３８０の重量割合で混合し、４ｃｍ×６ｃｍの大きさの底面を有する平底のプラスチック容器に流し込み、４０℃に設定した循風乾燥機［ＥＹＥＬＡ製］を用いて１２時間乾燥させて、シート状に形成した。その後、プラスチック容器から取り出したシート状形成物をメタノールに２４時間浸漬させ、シート状の体液漏出防止剤（Ｄ−１）を作製した。
【００６６】
＜実施例６＞
人工タンパク質（Ａ−１）含有したシート（Ｄ−２）の作製
アルギン酸ナトリウムに代えてデンプンを使用した以外は実施例６と同様に操作し、シート状の体液漏出防止剤組成物（Ｄ−２）を作製した。
【００６７】
＜実施例７＞
人工タンパク質（Ａ−１）含有したシート状（Ｄ−３）の作製
実施例６と同様にして得られた人工タンパク質（Ａ−１）含有したシート状の体液漏出防止剤組成物（６）に対し、１％の塩化カルシウム水溶液に１２時間浸漬させ、人工タンパク質（Ａ１）含有したシート状の体液漏出防止剤組成物（Ｄ−３）を作製した。
【００６８】
＜比較例１＞
ベリプラスト［ＣＬＳベーリング（株）製］を用いて、ベリプラスト付属説明書に従って調整したＡ液及びＢ液を比較用の体液漏出防止剤（Ｂ’−１）として用いた。
【００６９】
＜ゲルの組織接着性の評価＞
組織表面のモデル系としてコラーゲンに対する接着性を評価した。
具体的には、大きさ２ｃｍ×５ｃｍのコラーゲンシートを用意し、接着面が２ｃｍ２となるようにゲル状の体液漏出防止剤（Ｂ−１）〜（Ｂ−４）を１００ｍｇ塗布し、２枚のコラーゲンシートを接着させた。
ベリプラストを用いた（Ｂ’−１）についてはＡ液、Ｂ液５０ｍｇずつ順番に塗布し、２枚のコラーゲンシートを接着させた。
オードグラフ［ＡＧ−ＩＳ、（株）島津製作所製］にて２枚のコラーゲンシートを５ｃｍ／秒の速度で引っ張り、接着面がはがれる際の破断応力（Ｎ）を測定した。結果を表２に示す。
【００７０】
【表２】
2018000957.tif 000003
【００７１】
＜消化酵素に対する耐分解性評価＞
ガーゼにしみ込ませた１％パンクレアチン溶液に対し、ゲル状の体液漏出防止（Ｂ−１）〜（Ｂ−４）２５０ｍｇ、シート状の及び体液漏出防止剤（Ｄ−１）〜（Ｄ−３）５０ｍｇを静置した。ベリプラスとの場合は５５ｍｇを使用した。
３７℃にて、７日間分解させ、分解度合いを評価した。消化液に対するに分解性の評価は以下の基準で評価した。結果は表２に示す。
【００７２】
なお、パンクレチアンは膵液に含まれる消化酵素であり、グレードの値が大きいほど、体液漏出防止剤に変化が無く、消化酵素への耐分解性が高いことを意味する。
グレード４：変化が無いか、形状を保たれている
グレード３：一部形状が変化し、部分的に分解されている。
グレード２：大部分の形状が変化し、ほとんどが分解されている。
グレード１：完全に分解され、目視で確認することができない。
【００７３】
表２の結果から、本発明のゲル状の体液漏出防止剤はベリプラストと比較して、ゲルの破断強度が大きいことがわかる。また、いずれの実施例のゲルとシートも、比較用の体液漏出防止剤と比較して、消化液に対する耐分解性が高いことが分かる。
【産業上の利用可能性】
【００７４】
本発明の体液漏出防止剤は、従来の製品に比べ組織接着性が高いため、臓器、皮膚、血管といった組織の損傷部、切断面、穴、吻合部などから漏出出した体液を効果的に止めることができる。加えて、消化液に対する耐分解性を持っていることから、従来では治療の難しい症例に対して画期的な治療効果を提供することが可能となる。
【配列表】
2018000957000001.app