(57)【要約】【課題】本発明の課題は、優れた美白効果を有する美白剤を提供することであり、有意なメラニン産生抑制効果を有するメラニン産生抑制剤を提供することである。【解決手段】スルホキノボシルグリセロール(SQG)又はその塩を含むメラニン産生抑制剤、SQG又はその塩を含む美白剤、等を提供することで上記課題を解決する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スルホキノボシルグリセロール又はその塩を含む、メラニン産生抑制剤。
【請求項２】
微細藻類膜抽出物を含む、メラニン産生抑制剤。
【請求項３】
該微細藻類膜抽出物が、スルホキノボシルグリセロール又はその塩を含む、請求項２に記載の剤。
【請求項４】
該微細藻類膜抽出物が、微細藻類を中温処理し、続いて水溶性画分と水不溶性画分との分離操作を行うことにより得られる、中温処理後の上清抽出物である、請求項３に記載の剤。
【請求項５】
微細藻類が、緑藻綱に属する微細藻類である、請求項２〜４のいずれか一項に記載の剤。
【請求項６】
微細藻類が、デスモデスムス属に属する、請求項５に記載の剤。
【請求項７】
皮膚美白用である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の剤。
【請求項８】
スルホキノボシルグリセロール又はその塩を含む、美白用化粧料。
【請求項９】
微細藻類膜抽出物を含む、美白用化粧料。
【請求項１０】
該微細藻類膜抽出物が、スルホキノボシルグリセロール又はその塩を含む、請求項９に記載の化粧料。
【請求項１１】
該微細藻類膜抽出物が、微細藻類を中温処理し、続いて水溶性画分と水不溶性画分との分離操作を行うことにより得られる、中温処理後の上清抽出物である、請求項９に記載の化粧料。
【請求項１２】
微細藻類が、緑藻綱に属する微細藻類である、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の化粧料。
【請求項１３】
微細藻類が、デスモデスムス属に属する、請求項１２に記載の化粧料。
【請求項１４】
皮膚外用剤である、請求項８〜１３のいずれか一項に記載の化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メラニン産生抑制剤及び美白用化粧料に関する。より詳細には、本発明はスルホキノボシルグリセロール又はその塩（本明細書中、SQG又はその塩とも称する）を活性成分として含むメラニン産生抑制剤又は美白用化粧料、及びSQG又はその塩を用いた皮膚の美白化方法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
日焼け等による色素沈着、しみ、そばかす、肝斑、老人性色素斑等は、メラノサイトによる黒色メラニンの産生が亢進し、過剰な黒色メラニンが産生されることによって生じる。この黒色メラニン産生を抑制する美白剤として、コウジ酸、Ｌ−アスコルビン酸、α−グルコシルグリセロール（α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロール）等の美白成分を含んだ美白剤が提案されており、例えば、特許文献１には、糖グリセロールであるα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを有効成分として含む美白剤について記載されている。しかしながら、既存の美白剤には、安全性等において問題を有する場合もあり、安全性及び美白効果の高い美白剤の開発が求められている。
【０００３】
葉緑体のチラコイド膜や微細藻類の膜成分は、ガラクトシルジアシルグリセロール、スルホキノボシルジアシルグリセロール、ジガラクトシルジアシルグリセロール等の糖脂質を多量に含むことが知られており、特許文献２及び３には、微細藻類を中温処理及び／又は有機溶媒処理に供することを含む、糖グリセロールの製造方法が記載されている。
しかしながら、これらの方法によって得られる微細藻類膜抽出物や、スルホキノボシルジアシルグリセロールが、メラニン産生抑制作用を有する事はこれまで知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第2004／331581号
【特許文献２】国際公開第2014／192940号
【特許文献３】国際公開第2015／064648号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、有意なメラニン産生抑制効果を有するメラニン産生抑制剤を提供することであり、優れた美白効果を有する美白用化粧料等を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、微細藻類を中温処理をして得られた抽出物が、細胞毒性を示すことなく、かつ優れたメラニン産生抑制効果を有することを見出した。このメラニン産生抑制効果を示す画分を分析したところ、スルホキノボシルグリセロール（SQG）に優れたメラニン産生抑制効果を見出して、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は以下の通りのものである。
［１］スルホキノボシルグリセロール又はその塩を含む、メラニン産生抑制剤。
［２］微細藻類膜抽出物を含む、メラニン産生抑制剤。
［３］該微細藻類膜抽出物が、スルホキノボシルグリセロール又はその塩を含む、［２］に記載の剤。
［４］該微細藻類膜抽出物が、微細藻類を中温処理し、続いて水溶性画分と水不溶性画分との分離操作を行うことにより得られる、中温処理後の上清抽出物である、［３］に記載の剤。
［５］微細藻類が、緑藻綱に属する微細藻類である、［２］〜［４］のいずれかに記載の剤。
［６］微細藻類が、デスモデスムス属に属する、［５］に記載の剤。
［７］皮膚美白用である、［１］〜［６］のいずれかに記載の剤。
［８］スルホキノボシルグリセロール又はその塩を含む、美白用化粧料。
［９］微細藻類膜抽出物を含む、美白用化粧料。
［１０］該微細藻類膜抽出物が、スルホキノボシルグリセロール又はその塩を含む、［９に記載の化粧料。
［１１］該微細藻類膜抽出物が、微細藻類を中温処理し、続いて水溶性画分と水不溶性画分との分離操作を行うことにより得られる、中温処理後の上清抽出物である、［９］に記載の化粧料。
［１２］微細藻類が、緑藻綱に属する微細藻類である、［９］〜［１１］のいずれかに記載の化粧料。
［１３］微細藻類が、デスモデスムス属に属する、［１２］に記載の化粧料。
［１４］皮膚外用剤である、［８］〜［１３］のいずれかに記載の化粧料。
【発明の効果】
【０００８】
SQG又はその塩は、メラニン産生を有意に抑制することができ、低濃度であってもメラニン産生抑制作用を示す等の高いメラニン産生抑制活性を示し、かつ細胞毒性をほとんど示さないため、本発明により、安全性が高く優れたメラニン産生抑制剤を提供することが可能となる。SQG又はその塩を活性成分として含むメラニン産生抑制剤は、皮膚における過剰なメラニン産生を有意に抑制することができるため、日焼け等による色素沈着、しみ、そばかす、肌のくすみ、肝斑等の予防及び／又は改善に有効な皮膚美白剤として用いることができ、皮膚美白用化粧料の製造に有用である。さらに、本発明の剤は、安全性が高いため、飲食品組成物又は医薬品組成物へ配合し、美白効果／メラニン産生抑制効果が意義をもつ様々な組成物へ配合することもできる。本発明において、SQG又はその塩は、微細藻類膜抽出物により提供され得る。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、中温処理上清（２）の高速液体クロマトグラフィー（HPLC）分析の結果を示す図である。
【図２】図２は、コウジ酸、中温処理上清（１）又は中温処理上清（２）がメラノサイトのメラニン産生率及び生存率に及ぼす効果を示す図である。
【図３】図３は、コウジ酸、スルホキノボシルグリセロール（SQG）又はグルコシルグリセロール（GG）が、メラノサイトのメラニン産生率及び生存率に及ぼす効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明を説明する。本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常に用いられる意味を有する。
【００１１】
１．スルホキノボシルグリセロール(SQG)又はその塩を含む、メラニン産生抑制剤
本発明は、SQG又はその塩を活性成分として含む、メラニン産生抑制剤（本明細書中、本発明の剤とも称する。）を提供する。
SQG又はその塩は、皮膚のメラノサイトによる過剰なメラニンの産生を抑制する作用を有するため、本発明の剤は、日焼け等による色素沈着、しみ、そばかす、肌のくすみ、肝斑等の予防及び／又は改善に有効な皮膚美白剤として用いることができる。従って、本発明の一態様において、本発明の剤は、皮膚の美白用の美白剤であり、本発明の剤と化粧料用の各種成分とを混合して美白用化粧料として用いることができる。
本発明により達成される皮膚の美白効果には、肌の色を白くする積極的な美白効果のみならず、肌の色の黒化を抑制する消極的な美白効果も含まれ、例えば、シミ、ソバカス等の色素沈着を改善する美白効果のみならず、色素沈着を抑制する美白効果も含まれる。
【００１２】
本発明の剤は、シミ、ソバカス、日焼けによる色黒等の局所性色素沈着を予防及び改善することができるが、これらの用途以外にも、例えば、アジソン病などの全身性色素沈着症及び薬剤誘発性色素増加等の予防、改善及び治療など、メラニン産生抑制作用又は美白効果を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
また、本発明の剤は、メラニン、メラノサイト、及びメラニンの関連する疾患（例えばメラノーマ）等の研究のための試薬としても用いることができる。
【００１３】
本明細書中、メラニンとは、黒色メラニン（真性メラニン、eumelaninとも呼ばれる）を指す。
【００１４】
本明細書中、「美白」とは、メラノサイトの増加を抑制する、メラノサイトがメラニンを産生するのを抑制する、皮膚にメラニン色素が過剰に沈着するのを防止する、既に沈着したメラニン色素を薄くする等の１以上の機能を言う。
【００１５】
本発明の剤は、所望の効果が奏される限り、いかなる動物に対しても適用することもできるが、通常、ヒト用である。
【００１６】
本発明の剤は、SQG又はその塩を活性成分として含有する。SQG又はその塩は、本発明の剤中に、メラニン産生抑制効果や美白効果等の所望の効果を達成するための有効量で存在する。
【００１７】
（１）スルホキノボシルグリセロール
スルホキノボシルグリセロール（SQG）とは、グリセロールの水酸基にスルホキノボースが結合したものを指す。本発明において用いられるSQGは、グリセロールの1位の炭素の水酸基にスルホキノボースが結合したものであってもよく、2位の炭素の水酸基にスルホキノボースが結合したものであってもよく、またはそれらの混合物であってもよい。好ましくは本発明において用いられるSQGは、グリセロールの1位の炭素の水酸基にスルホキノボースが結合したものである。グリセロールの1位の炭素の水酸基にスルホキノボースが結合したSQGの構造を、下記式（Ｉ）に例示する。
【化１】
2018043946.tif 000002
【００１８】
グリセロールの2位の炭素の水酸基にスルホキノボースが結合したSQGの構造を、下記式（ＩＩ）に例示する。
【化２】
2018043946.tif 000003
【００１９】
本発明において使用するSQGは、上記に例示されるSQGの異性体であってもよく、また水和物又は溶媒和物であってもよい。
【００２０】
SQGの塩としては、無機酸との塩（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩など）；有機酸との塩（例えば、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩など）；酸性又は塩基性アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、リジン、オルニチンなど）との塩；無機塩基との塩［例えば、金属（カリウム、ナトリウムなどのアルカリ金属；カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属；アルミニウム）との塩、アンモニウム塩など］；有機塩基（例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、メチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、グアニジン、コリン、シンコニン、メグルミンなど）との塩等が挙げられるが、所望の効果が得られる限り特に限定されない。SQGの塩は、所望の用途に適したものであることが好ましく、例えば、化粧料に用いることを目的とする場合、SQGの塩は化粧品的に許容可能な塩であることが好ましく、皮膚への適用を目的とする場合、SQGの塩は皮膚化学的に許容可能な塩であることが好ましく、医薬品として用いる場合は、薬学的に許容可能な塩であることが好ましい。
SQGの塩は、自体公知の方法に従って、SQGと、無機塩基又は有機塩基とを反応させることにより、各々の塩を得ることができる。
【００２１】
SQG又はその塩は自体公知の方法により製造することができる。例えば、SQGは、グリセロールの水酸基に、酵素的にあるいは化学的にスルホキノボースをグリコシド結合させることにより、製造することができる。あるいは、アシル化スルホキノボシルグリセロールから、酵素的にあるいは化学的にアシル基を切断することにより製造することができるが、これらに限定されない。例えばSQGは、国際公開第2014/192940号参考例１に記載の方法に準じた方法を用いて製造することもでき、あるいは、国際公開第2014/192940号に記載の糖グリセロールの製造方法を用いて製造することもできるが、製造方法はこれらに限定されない。SQG又はその塩は、通常有機合成で用いられる、抽出、蒸留、結晶化、カラムクロマトグラフィー等の手法を用いて精製することができる。
本発明の剤に含まれるSQG又はその塩は、後述する微細藻類膜抽出物により提供され得る。従って、一態様として、本発明は、微細藻類膜抽出物を含むメラニン産生抑制剤を提供する。
【００２２】
（２）SQG又はその塩を活性成分として含むメラニン産生抑制剤の製剤化
本発明の剤は、所望の用途に適した担体（例えば薬学的に許容可能な担体、化粧品的に許容可能な担体、皮膚化学的に許容可能な担体等）等を用いて、常法に従い、任意の剤形に製剤化して提供することができ、他の組成物（例えば、化粧料、飲食品組成物又は医薬品組成物等）に配合して使用し得る。本発明の剤は、所望の効果を損なわない限り、活性成分であるSQG又はその塩に加えて、各種組成物に通常配合され得る各種成分をその用途に応じて含有させることができるが、SQG又はその塩自体を単独で（或いは本発明の微細藻類膜抽出物を単独で）、本発明の剤として用いてもよい。
【００２３】
本発明の剤におけるSQG又はその塩の含有量は、例えば、0.00001〜100重量％、好ましくは0.0001〜100重量％、より好ましくは0.001〜100重量％、さらに好ましくは0.01〜100重量％、さらにより好ましくは0.1〜100重量％、なおより好ましくは1.0〜100重量％である。
【００２４】
本発明の剤は、所望の用途に適する限り、いかなる剤形であってもよく、例えば、液状、ペースト状、ゲル状、固体状、粉末状、泡状、ジェリー状等の任意の形態をとることができる。本発明の剤の剤形が固形または粉末状である場合、適切な溶媒等を使用して所望の濃度になるように溶解し、使用してもよい。本発明の剤の剤形が溶液である場合、所望の濃度になるように適切な溶媒に希釈するなどして、使用してもよい。本発明の剤の剤形が溶液である場合、該溶液のｐＨは、好ましくは約4〜約10であり、より好ましくは約5〜約9であるが、これらに限定されない。
【００２５】
本発明の剤は、通常の美白用化粧料に使用され得る各種成分と混合して、本発明の美白用化粧料とすることもできる。
また、本発明の剤は、通常の飲食品や医薬品に使用される賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料等の、所望の用途に適した各種成分を適宜配合して、飲食品又は医薬品として提供することができる。
【００２６】
２．スルホキノボシルグリセロール（SQG）又はその塩を含む、美白用化粧料
本発明はさらにSQG又はその塩を活性成分として含む、美白用化粧料（本明細書中、本発明の美白用化粧料とも称する）を提供する。一態様において、本発明の剤は、通常化粧料（医薬部外品を含む）に使用し得る各種成分等と混合して、本発明の美白用化粧料とすることができる。
本発明の美白用化粧料に含まれるSQG又はその塩は、後述する微細藻類膜抽出物により提供され得る。従って、一態様として、本発明は、微細藻類膜抽出物を含む美白用化粧料を提供する。
【００２７】
所望の効果が得られる限り制限されるものではないが、本発明の美白用化粧料中のSQG又はその塩の量は、通常0.000001重量％以上、好ましくは0.00001重量％以上、より好ましくは0.0001重量％以上、さらに好ましくは0.001重量％以上、有効な効果を発揮し得るという観点で好ましくは0.01重量％以上、更に好ましくは0.1重量％以上、更に一層好ましくは1.0重量％以上、殊更好ましくは2.0重量％以上であり、多すぎても効果が頭打ちになり、また他の成分を配合させる余地がなくなる等の観点から、本発明の美白用化粧料中のSQG又はその塩の量は、通常は99重量％以下、好ましくは50.0重量％以下、更に好ましくは10.0重量％以下である。本発明の美白用化粧料中、SQG又はその塩は、通常0.000001〜30.0重量％、好ましくは0.00001〜30.0重量％、より好ましくは0.0001〜30.0重量％、さらに好ましくは0.001〜30.0重量％、さらにより好ましくは0.01〜20.0重量％、なおより好ましくは0.1〜10.0重量％配合する。
【００２８】
本発明において、化粧料は医薬部外品も含む概念である。その形態には特に制限はなく、液状、ペースト状、ゲル状、固体状、粉末状、泡状、ジェリー状等の任意の形態をとることができる。具体的には、例えば、溶液、懸濁液、ローション、クリーム、ゲル、スティック、ペンシル、スプレー、軟膏、ムース、パッチ、化粧水、乳液、美容液、シャンプー、ヘアリンス、ヘアコンディショナー、ヘアムース、ヘアジェル、ヘアワックス、ファンデーション、アイライナー、アイブロウペンシル、マスカラ、アイシャドウ、チーク、リップスティック、口紅、おしろい、パウダー、パック、パックマスク、香水、オーデコロン、洗顔フォーム、洗顔料、クレンジングフォーム、クレンジングオイル、クレンジングジェル、クレンジングミルク、ゲル、石鹸、エアゾル、浴用剤、養毛剤、日焼け防止剤（日焼け止め）、創傷被覆材、粘着性包帯等が挙げられる。
【００２９】
本発明の美白用化粧料には、上記SQG又はその塩に加え、通常、化粧料（医薬部外品を含む）に使用し得る、化粧品的に又は皮膚化学的に許容可能な各種成分を、所望の用途に応じて、本発明の効果を阻害しない範囲で配合させることができる。例えば、油性成分、界面活性剤、アミノ酸類、アミノ酸誘導体類、低級アルコール、高級アルコール、多価アルコール、糖アルコールおよびそのアルキレンオキシド付加物、水溶性高分子、ゲル化剤、保湿剤、殺菌剤および抗菌剤、抗炎症剤、鎮痛剤、抗真菌剤、角質軟化剥離剤、皮膚着色剤、ホルモン剤、紫外線吸収剤、発汗防止剤および収斂活性成分、汗防臭剤、ビタミン剤、血流促進剤（血管拡張剤、血行促進剤）、生薬、pH調整剤、金属イオン封鎖剤、粘度調整剤、パール化剤、天然香料、合成香料、色素、顔料、酸化防止剤、防腐剤、乳化剤、脂肪及びワックス、シリコーン化合物、香油等が挙げられるがこれらに限定されない。
【００３０】
油性成分としては、例えば、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、ベヘン酸等の飽和または不飽和脂肪酸；当該飽和または不飽和脂肪酸から得られる高級アルコール類；乳酸オクチルドデシル、リシノール酸オクチルドデシル、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸ミリスチル、ステアリン酸ミリスチル、イソステアリン酸ミリスチル、オレイン酸ミリスチル、ベヘン酸ミリスチル、エルカ酸ミリスチル、エチルヘキサン酸セチル、カプリン酸セチル、ミリスチン酸セチル、パルミチン酸セチル、ステアリン酸セチル、イソステアリン酸セチル、オレイン酸セチル、ベヘン酸セチル、エルカ酸セチル、ミリスチン酸ステアリル、パルミチン酸ステアリル、ステアリン酸ステアリル、ヒドロキシステアリン酸ステアリル、イソステアリン酸ステアリル、オレイン酸ステアリル、ベヘン酸ステアリル、エルカ酸ステアリル、ミリスチン酸イソステアリル、パルミチン酸イソステアリル、ステアリン酸イソステアリル、ヒドロキシステアリン酸イソステアリル、イソステアリン酸イソステアリル、オレイン酸イソステアリル、ベヘン酸イソステアリル、エルカ酸イソステアリル、ミリスチン酸ベヘニル、パルミチン酸ベヘニル、ステアリン酸ベヘニル、イソステアリン酸ベヘニル、オレイン酸ベヘニル、ベヘン酸ベヘニル、エルカ酸ベヘニル、ミリスチン酸エルシル、パルミチン酸エルシル、ステアリン酸エルシル、イソステアリン酸エルシル、オレイン酸エルシル、ベヘン酸エルシル、エルカ酸エルシル、ノナン酸コレステリル、ノナン酸セテアリル等の直鎖または分岐鎖の脂肪アルコールのエステル；ラウロイルグルタミン酸ジ（コレステリル／ベヘニル／オクチルドデシル）、ラウロイルグルタミン酸ジ（コレステリル／オクチルドデシル）、ラウロイルグルタミン酸ジ（フィトステリル／オクチルドデシル）、ラウロイルグルタミン酸ジ（オクチルドデシル／フィトステリル／ベヘニル）、ラウロイルサルコシンイソプロピル、ミリストイルメチルβアラニン（フィトステリル／デシルテトラデシル）等のアミノ酸類のエステル（例えば、味の素社製、「エルデュウ」ＰＳ−２０３，ＰＳ−３０４，ＰＳ−３０６、ＡＰＳ−３０７、ＳＬ−２０５）；ダイマージリノール酸（フィトステリル／イソステアリル／セチル／ステアリル／ベヘニル）、ダイマージリノール酸ダイマージリノレイルビス（ベヘニル／イソステアリル／フィトステリル）、ダイマージリノレイル水添ロジン縮合物、ジイソステアリン酸ダイマージリノレイル、ビス（ラウロイルグルタミン酸／ラウロイルサルコシン）ダイマージリノレイル等のダイマー酸のエステル；スクワラン、スクワレン、ヒマシ油および／または水添ヒマシ油とその誘導体；ヒドロキシステアリン酸モノグリセリド、ヒドロキシステアリン酸ジグリセリド、イソステアリン酸モノグリセリド、イソステアリン酸ジグリセリド、オレイン酸モノグリセリド、オレイン酸ジグリセリド、リシノール酸モノグリセリド、リシノール酸ジグリセリド、リノール酸モノグリセリド、リノール酸ジグリセリド、リノレン酸モノグリセリド、リノレン酸ジグリセ���ド、酒石酸モノグリセリド、酒石酸ジグリセリド、クエン酸モノグリセリド、クエン酸ジグリセリド、リンゴ酸モノグリセリド、リンゴ酸ジグリセリドおよびこれらのグリセリドのエチレンオキシド１〜３０モル付加物等のグリセリド類；ミツロウ、液状および精製ラノリンを含むラノリン類およびその誘導体；シア脂、アマニ油、ツバキ油、アーモンド油、アボカド油、オリーブ油、菜種油、サフラワー油、大豆油、落花生油、ココナッツ油、マカデミアナッツ油、ホホバ油、シナモン油、ブドウ油、トウモロコシ油、ヒマワリ油、サザンカ油、米ヌカ油、米胚芽油、小麦胚芽油、キョウニン油、茶実油、カルナバロウ、ゴマ油、綿実油、カカオ油、ナタネ油、月見草油、ヤシ油、パーム油、パーム核油、硬化パーム油、ミンク油、牛脂、豚脂、木ロウ、キャンデリラロウ、鯨ロウなどの動植物由来の油性原料；パラフィン、イソパラフィン、オクタン、デカン、ドデカン、イソドデカン、ヘキサデカン、イソヘキサデカン、マイクロクリスタリンワックス、流動パラフィン、ワセリン、セレシンなどの石油および鉱物由来の油性原料；メチルポリシロキサン、ジメチルポリシロキサン、シクロメチコン、ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン、ポリオキシプロピレン・メチルポリオキシシロキサン、ポリ（オキシエチレン、オキシプロピレン）・メチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、脂肪酸変性ポリシロキサン、脂肪族アルコール変性ポリシロキサン、アミノ酸変性ポリシロキサンなどのシリコーンポリマー等のシリコーン類；樹脂酸、脂肪酸エステル、ケトン類等を挙げることができる。
【００３１】
界面活性剤としては、例えば、アニオン界面活性剤、非イオン性界面活性剤、カチオン界面活性剤および両性界面活性剤等が挙げられる。アニオン界面活性剤としては、例えば、Ｎ−長鎖アシル酸性アミノ酸塩（例、Ｎ−長鎖アシルグルタミン酸塩、Ｎ−長鎖アシルアスパラギン酸塩など）、Ｎ−長鎖アシル中性アミノ酸塩（例、Ｎ−長鎖アシルグリシン塩、Ｎ−長鎖アシルアラニン塩、Ｎ−長鎖アシルスレオニン塩および、Ｎ−長鎖アシルサルコシン塩など）等のＮ−長鎖アシルアミノ酸塩（例えば、味の素社製「アミソフト」ＣＴ−１２、ＬＴ−１２、ＣＫ−２２、ＣＳ−２２、ＣＳ−１１、ＣＫ−１１、ＬＳ−１１、ＬＫ−１１、ＭＳ−１１、ＭＫ−１１、ＧＳ−１１、ＨＳ−１１、ＣＡ、ＬＡ−Ｄ、「アミノソープ」ＡＲ−１２、「アミライト」ＧＣＫ−１２、ＧＣＫ−１１、ＧＣＳ−１１、ＡＣＴ−１２）、Ｎ−長鎖脂肪酸アシル−Ｎ−メチルタウリン塩、アルキルサルフェートおよびそのアルキレンオキシド付加物、脂肪酸アミドエーテルサルフェート、脂肪酸の金属塩、弱塩基およびアミノ酸塩、スルホコハク酸系界面活性剤、アルキルフォスフェートおよびそのアルキレンオキシド付加物、高級アルキル硫酸エステル塩、アルキルエーテル硫酸エステル塩、アルキルヒドロキシエーテルカルボン酸塩、アルキルエーテルカルボン酸などが挙げられ；非イオン性界面活性剤としては、例えば、エーテル型界面活性剤（例、グリセリンエーテルおよびそのアルキレンオキシド付加物など）、エステル型界面活性剤（例、グリセリンエステルおよびそのアルキレンオキシド付加物など）、エーテルエステル型界面活性剤（例、ソルビタンエステルおよびそのアルキレンオキシド付加物など）、脂肪酸アルキロールアミド（例、脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸ジエタノールアミドなど）、エステル型界面活性剤（例、ポリオキシアルキレン脂肪酸エステル、ポリオキシアルキレン多価アルコール脂肪酸エステル、ポリオキシアルキレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシアルキレン水添ヒマシ油、モノステアリン酸グリセリン、グリセリンエステル、脂肪酸ポリグリセリンエステル、アシルアミノ酸ポリグリセリンエステル、ソルビタンエステル、ショ糖脂肪酸エステルなど）、含窒素型の非イオン性界面活性剤（例、アルキルグルコシド類、硬化ヒマシ油ピログルタミン酸ジエステルおよびそのエチレンオキシド付加物、ならびに脂肪酸アルカノールアミドなど）などが挙げられ；カチオン界面活性剤としては、例えば、脂肪族アミン塩（例、アルキルアンモニウムクロライド、ジアルキルアンモニウムクロライド、塩化アルキルトリメチルアンモニウム（C16-C22）、ジアルキルジメチルアンモニウムメトサルフェート塩など）、芳香族４級アンモニウム塩（例、前記脂肪族アミン塩の４級アンモニウム塩、ベンザルコニウム塩など）、脂肪酸アシルアルギニンエステル、Ｎ−長鎖アシルアルギニンエチルピロリドンカルボン酸塩、アミドアミン類、ステアラミドプロピルジメチルアミングルタミン酸塩、ステアラミドプロピルジメチルアミン乳酸塩、ステアラミドプロピルジメチルアミンピロリドンカルボン酸塩、ベヘナミドプロピルジメチルアミングルタミン酸塩ベヘナミドプロピルジメチルアミン乳酸塩、��ヘナミドプロピルジメチルアミンピロリドンカルボン酸塩等が挙げられ；両性界面活性剤としては、例えば、ベタイン型界面活性剤（例、アルキルベタイン、アルキルアミドベタイン、スルホベタイン、イミダゾリニウムベタイン、アミノプロピオネート、カルボキシベタインなど）、Ｎ−長鎖アシルアルギニン、Ｎ−（３−アルキル（１２，１４）オキシ−２−ヒドロキシプロピル）アルギニン塩酸塩、アミノカルボン酸型界面活性剤、イミダゾリン型界面活性剤等が挙げられる。
【００３２】
アミノ酸類としては、例えば、アルギニン、リジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、グリシン、アラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、スレオニン、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、グルタミン、アスパラギン、システイン、シスチン、メチオニンおよびこれらの塩が挙げられる。
【００３３】
アミノ酸誘導体類としては、例えば、ピロリドンカルボン酸およびその塩、トリメチルグリシン、ラウロイルリジンなどが挙げられる。
【００３４】
低級アルコールとしては、例えば、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどが挙げられる。
高級アルコールとしては、例えば、セチルアルコール、ラウリルアルコール、イソステアリルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ミリスチルアルコール、オクチルドデカノール、ベヘニルアルコール、ラノリンアルコール、セトステアリルアルコール、デシルテトラデカノール、ヘキシルデカノール、コレステロール、フィトステロールなどが挙げられる。
【００３５】
多価アルコールとしては、例えば、グリセリン、ジグリセリン、エチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、イソプレングリコールなどが挙げられる。
【００３６】
糖アルコールおよびそのアルキレンオキシド付加物としては、例えば、マンニトール、エリスリトールなどが挙げられる。
【００３７】
水溶性高分子としては、例えば、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸を含むポリアミノ酸およびその塩、ポリエチレングリコール、高重合度ポリエチレングリコール、アラビアゴム類、アルギン酸塩、キサンタンガム、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、キチン、キトサン、水溶性キチン、ペクチン、マンナン、カラギーナン、ジェランガム、クインスシード、グアガム、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルデンプンリン酸、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルトリメチルアンモニウムクロライド、ポリ塩化ジメチルメチレンピペリジウム、ポリビニルピロリドン誘導体四級アンモニウム、アクリル酸コポリマー、カチオン化プロテイン、コラーゲン分解物およびその誘導体、アシル化タンパク、デキストリンパルミチン酸エステル、ステアリン酸アルミニウム、ポリグリセリン、ジベンジリデンソルビトール、１２−ヒドロキシステアリン酸などが挙げられる。
【００３８】
ゲル化剤としては、例えば、Ｎ−２−エチルヘキサノイル−Ｌ−グルタミン酸ジブチルアミド、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸ジブチルアミド（例えば味の素社製ＧＰ−１、ＥＢ−２１）などが挙げられる。
【００３９】
保湿剤としては、例えば、グリセリン、ジグリセリン、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン硫酸塩、ハチミツ、コラーゲン、尿素、ＤＬ−ピロリドンカルボン酸ナトリウム・Ｌ−ピロリドンカルボン酸混合溶液（ＡＪＩＤＥＷ  ＮＬ−５０）、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸ジ（フィトステリル・２−オクチルドデシル）、１，３−ペンタンジオール、１，３−プロパンジオールなどが挙げられる。
【００４０】
殺菌剤及び抗菌剤としては、例えば、４−ヒドロキシ安息香酸並びにその塩及びエステル、トリクロサン、クロルヘキシジン、フェノキシエタノール、メントール、ミント油、カプリン酸グリセリル、カプリル酸グリセリル、サリチル酸−Ｎ−アルキルアミド、Ｎ−ヤシ油脂肪酸アシル−Ｌ−アルギニンエチル・ＤＬ−ピロリドンカルボン酸塩、塩化ベンザルコニウム、イソプロピルメチルフェノール等が挙げられる。
【００４１】
抗炎症剤、鎮痛剤、抗真菌剤、角質軟化剥離剤、皮膚着色剤、ホルモン剤としては、例えば、アロエ抽出物、ユリ抽出物、ヒノキチオール、ヒドロコルチゾン（Ｖ）、ε−アミノカルボン酸、アズレン、アラントイン、グリチルリチン酸類、グリチルリチン酸誘導体、β−グリチルレチン酸等が挙げられる。
【００４２】
紫外線吸収剤は、例えば、室温で液状または結晶であり、紫外線を吸収して、その吸収したエネルギーをより長波長の放射線（例えば熱）として放出することのできる有機物質（光保護フィルター）である、ＵＶ−ＢフィルターとＵＶ−Ａフィルターが挙げられる。ＵＶ−Ｂフィルターは、油溶性または水溶性であり得る。該油溶性物質としては、例えば、３−ベンジリデンカンファーまたは３−ベンジリデンノルカンファーおよびそれらの誘導体（例えば、３−（４−メチルベンジリデン）−カンファー）；４−アミノ安息香酸誘導体（好ましくは４−（ジメチルアミノ）−安息香酸−２−エチルヘキシルエステル、４−（ジメチルアミノ）−安息香酸−２−オクチルエステル、４−（ジメチルアミノ）−安息香酸ペンチルエステル）；桂皮酸エステル（好ましくは４−メトキシ桂皮酸−２−エチルヘキシルエステル、４−メトキシ桂皮酸プロピルエステル、４−メトキシ桂皮酸イソプロピルエステル、４−メトキシ桂皮酸イソペンチルエステル、２−シアノ−３，３−フェニル桂皮酸−２−エチルヘキシルエステル［オクトクリレン（Ｏｃｔｏｃｒｙｌｅｎｅ）］）；サリチル酸エステル（好ましくは、サリチル酸−２−エチルヘキシルエステル、サリチル酸−４−イソプロピルベンジルエステル、サリチル酸ホモメンチルエステル）；ベンゾフェノン誘導体（好ましくは、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４’−メチルベンゾフェノン、２，２’−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン）；ベンザルマロン酸エステル（好ましくは、４−メトキシベンザルマロン酸ジ−２−エチルヘキシルエステル）；トリアジン誘導体（例えば、２，４，６−トリアニリノ−（ｐ−カルボ−２’−エチル−１’−ヘキシルオキシ）−１，３，５−トリアジン、オクチル・トリアゾン、ジオクチル・ブタミド・トリアゾン［Ｕｖａｓｏｒｂ（登録商標）ＨＥＢ］）；プロパン−１，３−ジオン（例えば、１−（４−ｔ−ブチルフェニル）−３−（４’−メトキシフェニル）−プロパン−１，３−ジオン）；ケトトリシクロ（５．２．１．０）デカン誘導体などが挙げられる。該水溶性物質としては、例えば、２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸およびそのアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、アルキルアンモニウム塩、アルカノールアンモニウム塩およびグルカンモニウム塩；ベンゾフェノンのスルホン酸誘導体（好ましくは、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸およびその塩）；３−ベンジリデンカンファーのスルホン酸誘導体（例えば、４−（２−オキソ−３−ボルニリデンメチル）−ベンゼンスルホン酸および２−メチル−５−（２−オキソ−３−ボルニリデン）−スルホン酸並びにそれらの塩などが挙げられる。ＵＶ−Ａフィルターとしては、とりわけ、ベンゾイルメタン誘導体が用いられ、例えば、１−（４’−ｔ−ブチルフェニル）−３−（４’−メトキシフェニル）−プロパン−１，３−ジオン、４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン（Parsol（登録商標）１７８９）、１−フェニル−３−（４’−イソプロピルフェニル）−プロパン−１，３−ジオン、およびエナミン化合物、４−メトキシジベンゾイルメタン、４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタンが挙げられる。その他、酸化チタン、酸化亜鉛、オクチルメトキシシンナメート、ジメトキシベンジリデンジオキソイミダゾリジンプロピオン酸２−エチルヘキシル等が挙げられる。
【００４３】
発汗防止剤及び収斂活性成分、汗防臭剤としては、例えば、アルミニウム、ジルコニウムまたは亜鉛の塩である、アルミニウムクロリド、アルミニウムクロロヒドレート、アルミニウムジルコニウムトリクロロヒドレート、アルミニウムジルコニウムテトラクロロヒドレート、ピロリドンカルボン酸亜鉛等が挙げられる。
【００４４】
ビタミン剤としては、例えば、ビタミンA、B1、B2、B6、Eおよびその誘導体等が挙げられる。
【００４５】
血流促進剤としては、例えば、イクタモール、塩化カルプロニウム、ビタミンE又はその誘導体、カフェイン、カプサイシノイド（例、カプサイシン等）、カプシノイド（例、ジヒドロカプシエイト等）、カンタリスチンキ、ジンゲロン、タンニン酸、ミノキシジル、γ−オリザノール、Ｌ−ピロリドンカルボン酸亜鉛、ＤＬ−ピロリドンカルボン酸、ＤＬ−ピロリドンカルボン酸ナトリウム液、ＤＬ−ピロリドンカルボン酸ナトリウム・Ｌ−ピロリドンカルボン酸混合溶液（AJIDEW NL-50）等が挙げられる。
【００４６】
生薬としては、センブリエキス、セファランチン、ニンニク抽出物、人参抽出物、アロエ抽出物、ゲンチアナ抽出物、ユズ抽出物、アルテア抽出物等が挙げられる。
【００４７】
pH調整剤としては、例えば、クエン酸、アジピン酸、リン酸、グルタミン酸、乳酸、硫酸、塩酸、アンモニウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アルギニン、γ−オリザノール等が挙げられる。
【００４８】
金属イオン封鎖剤としては、例えば、エデト酸及びその塩、ジエチレントリアミン５酢酸およびその塩、エチレンジアミンヒドロキシエチル３酢酸およびその塩、ヒドロキシエタンジホスホン酸およびその塩、リン酸、クエン酸、コハク酸、グルコン酸、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、ヘキサメタリン酸Ｎａ、フィチン酸、ペンテト酸ナトリウム等が挙げられる。
【００４９】
粘度調整剤としては、例えば、寒天、有機変性粘土鉱物等が挙げられる。
【００５０】
パール化剤としては、例えば、アルキレングリコールエステル、脂肪酸アルカノールアミド、脂肪酸モノグリセリド、脂肪エーテル等が挙げられる。
【００５１】
合成香料としては、例えば、エステル、エーテル、アルデヒド、ケトン、アルコール及び炭化水素型の香料などが挙げられる。
【００５２】
天然香料としては、例えば、花（例、ユリ、ラベンダー、バラ、ジャスミン、ネロリ、イラン−イラン等）、茎および葉（例、ゼラニウム、パチョリ、プチグレン等）、果実（例、アニス、コリアンダー、キャラウェー、ビャクシン等）、果皮（例、ベルガモット、レモン、オレンジ等）、根（例、ナツメグ、アンゼリカ、セロリ、カルダモン、コスタス、アヤメ、ショウブ等）、木（例、マツ、ビャクダン、グアヤク、シーダー、シタン等）、ハーブおよび草（例、タラゴン、レモングラス、セージ、タイム等）、針葉および枝（例、トウヒ、モミ、マツ、低木マツ等）、樹脂およびバルサム（例、ガルバヌム、エレミ、ベンゾイン、ミルラ、乳香、オポパナクス等）などの植物性原料、並びに、シベット、ビーバーなどの動物性原料が挙げられる。さらに、芳香成分として用いられることの多い比較的揮発性の低い精油として、例えば、セージ油、カモミール油、丁子油、メリッサ油、ミント油、シナモン葉油、ライム花油、ジュニパーベリー油、ベチベル油、乳香油、ガルバヌム油、ラブダヌム油およびラバンジン油、ベルガモット油、ジヒドロミルセノール、リリアール、ライラール、シトロネロール、フェニルエチルアルコール、α−ヘキシルシンナムアルデヒド、ゲラニオール、ベンジルアセトン、シクラメンアルデヒド、リナロール、Ｂｏｉｓａｍｂｒｅｎｅ  Ｆｏｒｔｅ、Ａｍｂｒｏｘａｎ、インドール、ヘジオン（Ｈｅｄｉｏｎｅ）、サンデリス（Ｓａｎｄｅｌｉｃｅ）、シトラス油、マンダリン油、オレンジ油、アリルペンチルグリコレート、シクロバータル（Ｃｙｃｌｏｖｅｒｔａｌ）、ラバンジン油、クラリー油、β−ダマスコン、ゼラニウム油バーボン、シクロヘキシルサリチレート、Ｖｅｒｔｏｆｉｘ  Ｃｏｅｕｒ、Ｉｓｏ−Ｅ−Ｓｕｐｅｒ、Ｆｉｘｏｌｉｄｅ  ＮＰ、エバニル、イラルデイン（Ｉｒａｌｄｅｉｎ）ガンマ、フェニル酢酸、ゲラニルアセテート、ベンジルアセテート、ローズオキシド、ロミラート（Ｒｏｍｉｌａｔ）、イロチル（Ｉｒｏｔｙｌ）およびフロラマート（Ｆｌｏｒａｍａｔ）、ペパーミント油、スペアミント油、アニス油、ダイウイキョウ油、キャラウェー油、ユーカリ油、ウイキョウ油、シトラス油、ウィンターグリーン油、メントールなどが挙げられる。
【００５３】
色素としては、例えば、コチニールレッドＡ（Ｃ．Ｉ．１６２５５）、パテントブルー（Ｃ．Ｉ．４２０５１）、クロロフィリン（Ｃ．Ｉ．７５８１０）等が挙げられる。
【００５４】
顔料としては、例えば、酸化チタン、マイカ、セリサイト、Ｎε−ラウロイル−Ｌ−リジンなどが挙げられる。
【００５５】
酸化防止剤としては、例えば、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体ならびにその塩、亜硫酸ナトリウムなどが挙げられる。
【００５６】
防腐剤としては、例えば、フェノキシエタノール、パラベン、ソルビン酸、イソプロピルメチルフェノール、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、デヒドロ酢酸、ヘキサンジオール、ペンタンジオール、硫酸クロルヘキシジン、Ｎ−ヤシ油脂肪酸アシル−Ｌ−アルギニンエチル・ＤＬ−ピロリドンカルボン酸塩等が挙げられる。
【００５７】
乳化剤は、例えば、ノニオン性界面活性剤であり、８〜２２個の炭素原子を有する直鎖脂肪アルコール、１２〜２２個の炭素原子を有する脂肪酸、アルキル基に８〜１５個の炭素原子を含むアルキルフェノール、およびアルキル基に８〜２２個の炭素原子を含むアルキルアミンへの、２〜３０モルのエチレンオキシドおよび／または０〜５モルのプロピレンオキシドの付加生成物；アルキル（アルケニル）基に８〜２２個の炭素原子を含むアルキルおよび／またはアルケニルオリゴグリコシド、およびそれらのエトキシル化物；ヒマシ油および／または水素化ヒマシ油のエチレンオキシド１〜１５モル付加物；ヒマシ油および／または水素化ヒマシ油のエチレンオキシド１５〜６０モル付加物；１２〜２２個の炭素原子を含む不飽和直鎖または飽和分枝状の脂肪酸および／または３〜１８個の炭素原子を含むヒドロキシカルボン酸と、グリセリンおよび／またはソルビタンとの部分エステル、並びにそれらと１〜３０モルのエチレンオキシドの付加物；ポリグリセリン（２〜８の平均自己縮合度）、ポリエチレングリコール（分子量４００〜５０００）、トリメチロールプロパン、ペンタエリトリトール、糖アルコール（例えばソルビトール）、アルキルグルコシド（例えばメチルグルコシド、ブチルグルコシド、ラウリルグルコシド及びＣ１６−Ｃ１８アルキルグルコシド）およびポリグルコシド（例えばセルロース）と、１２〜２２個の炭素原子を含む飽和および／または不飽和の直鎖または分枝状の脂肪酸および／または３〜１８個の炭素原子を含むヒドロキシカルボン酸との部分エステル、並びにそれらとエチレンオキシド１〜３０モルの付加物；ペンタエリトリトール、脂肪酸、クエン酸と脂肪アルコールとの混合エステル、および／または６〜２２個の炭素原子を含む脂肪酸と、メチルグルコースおよびポリオール（好ましくは、グリセロールまたはポリグリセロール）との混合エステル；モノ−、ジ−、トリアルキルホスフェート、およびモノ−、ジ−および／またはトリＰＥＧ−アルキルホスフェート並びにそれらの塩；羊毛ろうアルコール；ポリシロキサン／ポリアルキル／ポリエーテルコポリマーおよび相当する誘導体；ブロックコポリマー（例えば、ポリエチレングリコール−３０ジポリヒドロキシステアレート）；ポリマー乳化剤（例えば、ＧｏｏｄｒｉｃｈのＰｅｍｕｌｅｎ型（ＴＲ−１、ＴＲ−２））；ポリアルキレングリコール、およびグリセロールカーボネートなどが挙げられる。エチレンオキシド付加物としては、例えば、脂肪アルコール、脂肪酸、アルキルフェノール、またはヒマシ油の、エチレンオキシドが挙げられ、プロピレンオキシド付加物としては、既知の市販生成物が挙げられる。部分グリセリドとしては、例えば、ヒドロキシステアリン酸モノグリセリド、ヒドロキシステアリン酸ジグリセリド、イソステアリン酸モノグリセリド、イソステアリン酸ジグリセリド、オレイン酸モノグリセリド、オレイン酸ジグリセリド、リシノール酸モノグリセリド、リシノール酸ジグリセリド、リノール酸モノグリセリド、リノール酸ジグリセリド、リノレン酸モノグリセリド、リノレン酸ジグリセリド、エルカ酸モノグリセリド、エルカ酸ジグリセリド、酒石酸モノグリセリド、酒石酸ジグリセリド、クエン酸モノグリセリド、クエン酸ジグリセリド、リンゴ酸モノグリセリド、リンゴ酸ジグリセリドなどが挙げられる。さらに、上記部分グリセリドのエチレンオキシド１〜３０モル（好ましくは、５〜１０モル）付加物も適当である。ソルビタンエステルとしては、例えば、ソルビタン  モノイソステアレート、ソルビタン  セスキイソステアレート、ソルビタン  ジイソステアレート、ソルビタン  トリイソステアレート、ソルビタン  モノオレエート、ソルビタン  セスキオレエート、ソルビタン  ジオレエート、ソルビタン  トリオレエート、ソルビタン  モノエルケート、ソルビタン  セスキエルケート、ソルビタン  ジエルケート、ソルビタン  トリエルケート、ソルビタン  モノリシノレート、ソルビタン  セスキリシノレート、ソルビタン  ジリシノレート、ソルビタン  トリリシノレート、ソルビタン  モノヒドロキシステアレート、ソルビタン  セスキヒドロキシステアレート、ソルビタン  ジヒドロキシステアレート、ソルビタン  トリヒドロキシステアレート、ソルビタン  モノタートレート、ソルビタン  セスキタートレート、ソルビタン  ジタートレート、ソルビタン  トリタートレート、ソルビタン  モノシトレート、ソルビタン  セスキシトレート、ソルビタン  ジシトレート、ソルビタン  トリシトレート、ソルビタン  モノマレエート、ソルビタン  セスキマレエート、ソルビタン  ジマレエート、ソルビタン  トリマレエート、およびそれらの工業用混合物が挙げられる。さらに、上記ソルビタンエステルのエチレンオキシド１〜３０モル（好ましくは、５〜１０モル）付加物も適当である。ポリグリセロールエステルとしては、例えば、ポリグリセリル−２  ジポリヒドロキシステアレート（Ｄｅｈｙｍｕｌｓ（登録商標）  ＰＧＰＨ）、ポリグリセリン−３−ジイソステアレート（Ｌａｍｅｆｏｒｍ（登録商標）  ＴＧＩ）、ポリグリセリル−４  イソステアレート（Ｉｓｏｌａｎ（登録商標）  ＧＩ３４）、ポリグリセリル−３  オレエート、ジイソステアロイル  ポリグリセリル−３ジイソステアレート（Ｉｓｏｌａｎ（登録商標）  ＰＤＩ）、ポリグリセリル−３  メチルグルコース  ジステアレート（Ｔｅｇｏ  Ｃａｒｅ（登録商標）  ４５０）、ポリグリセリル−３  蜜蝋（Ｃｅｒａ  Ｂｅｌｌｉｎａ（登録商標））、ポリグリセリル−４  カプレート（Ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌ  Ｃａｐｒａｔｅ  Ｔ２０１０／９０）、ポリグリセリル−３  セチルエーテル（Ｃｈｉｍｅｘａｎｅ（登録商標）  ＮＬ）、ポリグリセリル−３  ジステアレート（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）  ＧＳ  ３２）およびポリグリセリル  ポリリシノレート（Ａｄｍｕｌ（登録商標）  ＷＯＬ  １４０３）、ポリグリセリル  ダイメレート  イソステアレート、並びにそれらの混合物などが挙げられる。ポリオールエステルとしては、例えば、トリメチロールプロパンまたはペンタエリスリトールと、ラウリン酸、ヤシ油脂肪酸、獣脂脂肪酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、ベヘン酸などとのモノ、ジおよびトリエステルであって、場合によりエチレンオキシド１〜３０モルと反応したもの、ステアリン酸塩、ＰＯＥ脂肪酸グリセリンエステル、ＰＯＥ水添ヒマシ油エステル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル、Ｎ��ステアロイル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム、ピログルタミン酸イソステアリン酸ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油、ピログルタミン酸イソステアリン酸ＰＥＧ−３０水添ヒマシ油、ピログルタミン酸イソステアリン酸ＰＥＧ−６０水添ヒマシ油、ピログルタミン酸イソステアリン酸グリセレス−２５等を挙げることができる。
【００５８】
脂肪及びワックスとしては、例えば、１２−ヒドロキシステアリン酸、ラノリン、蜜蝋、キャンデリラロウ、カルナウバロウ、ワセリン、固形パラフィン、ラノリン誘導体、マイクロクリスタリンワックス、セレシン、合成トリグリセライド、ビーズワックス、木ロウなどが挙げられる。
【００５９】
シリコーン化合物としては、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、メチルハイドロジェンポリシロキサン等の鎖状シリコーン；オクタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロヘキサシロキサン等の環状シリコーン；並びにアミノ−修飾シリコーン化合物、脂肪酸−修飾シリコーン化合物、アルコール−修飾シリコーン化合物、ポリエーテル−修飾シリコーン化合物、エポキシ−修飾シリコーン化合物、フッ素−修飾シリコーン化合物、グリコシド−修飾シリコーン化合物および／またはアルキル−修飾シリコーン化合物（室温で液状または樹脂様であり得るもの）、ジメチルシロキサン単位数２００〜３００の平均鎖長を有するジメチコンと水素化シリケートとの混合物であるシメチコンなどが挙げられる。
【００６０】
香油としては、天然および合成香料の混合物が挙げられる。
【００６１】
好ましい一態様として、本発明の美白用化粧料は、皮膚外用剤である。
本発明の美白用化粧料（あるいはSQG又はその塩を活性成分として含む医薬組成物）を皮膚外用剤として使用する場合、皮膚外用剤に慣用の助剤、例えばエデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸及びその誘導体、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸及びその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンC、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類、レチノイン酸、レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール等のビタミンA類なども適宜配合することができる。
【００６２】
本発明の美白用化粧料は、活性成分であるSQG又はその塩に加え、他の美白成分を配合することができる。他の美白成分としては、所望の効果を損なわない限り限定されず、例えば、ハイドロキノン、アルブチン、ハイドロキノン配糖体等のハイドロキノン及びその誘導体；アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステル及びＬ−アスコルビン酸−２−硫酸エステル等のＬ−アスコルビン酸エステル類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド及びＬ−アスコルビン酸−５−グルコシド等のＬ−アスコルビン酸グルコシド類、３−Ｏ−アスコルビン酸エチルエーテル及び３−Ｏ−アスコルビン酸セチルエーテル等のＬ−アスコルビン酸エーテル類等の、アスコルビン酸及びその誘導体；コウジ酸及びコウジ酸ジパルミテート等の、コウジ酸及びその誘導体；ニコチン酸アミド等のニコチン酸誘導体；クマロイルセロトニン及びフェルロイルセロトニン等の、セロトニン誘導体；３−メトキシサリチル酸、４−メトキシサリチル酸及び５−メトキシサリチル酸等のサリチル酸誘導体；アスタキサンチン；α−リポ酸；パンテテインスルホン酸カルシウム；杏エキス、小麦胚芽エキス、アセロラエキス、リンドウエキス、厚葉岩白菜エキス、油溶性甘草エキス、サイシンエキス、亜麻仁エキス、オランダカラシエキス、芍薬エキス、当帰エキス、ワレモコウエキス、マロニエ樹皮エキス、イブキトラノオエキス、クララエキス、オウゴンエキス、イタドリエキス、ラズベリーエキス（ラズベリーケトングルコシド）、白樺エキス、キキョウ根エキス、カミツレエキス、酵母エキス及びプラセンタエキス等の、美白効果を有するエキス；ベニバナ抽出物、ベニバナ種子抽出物、ニワトコ抽出物、ホウノキ抽出物、デイジー抽出物、褐藻抽出物、エイジツ抽出物、火棘抽出物、柿タンニン抽出物、イチョウ葉抽出物、カシス抽出物、紅茶抽出物、緑茶抽出物、ウーロン茶抽出物、タマリンド抽出物、ルイボス抽出物、ソウハクヒ抽出物、コウボク抽出物、ジオスコリア・コンポジータ抽出物、米糠抽出物、トウニン抽出物及びユキノシタ抽出物等の、美白効果を有する植物抽出物；エラグ酸、没食子酸、ペンタガロイルグルコース、レスベラトロール、グラブリジン、グラブレン、レゾルシン及びその誘導体等の、美白効果を有するポリフェノール；リノレン酸及びリノール酸等の美白効果を有する不飽和脂肪酸；グルタチオン（ＧＳＨ）及びコラーゲンペプチド等の美白効果を有するペプチド；Ｎ−アセチルＬ−チロシン等のチロシン誘導体、Ｎ−アセチルＬ−システイン等のシステイン誘導体、エルゴチオネイン及びトラネキサム酸（ｔ−ＡＭＣＨＡ）等の、美白効果を有するアミノ酸；アデノシン一リン酸等の美白効果を有する核酸誘導体；並びにルシノール（４−ｎ−ブチルレソルシノール）、マグノリグナン、ビフェニル化合物、ロドデノール及びその誘導体等の美白効果を有するアルキルフェノールから選択される１種以上が挙げられる。
【００６３】
３．メラニン産生抑制効果を有する微細藻類膜抽出物
一態様において、本発明の剤又は本発明の美白用化粧料に含まれるSQG又はその塩は、微細藻類の膜成分を脱脂肪酸基化処理することより得られる、メラニン産生抑制効果を有する微細藻類膜抽出物（本明細書中、単に微細藻類膜抽出物とも称する）により提供することもできる。該微細藻類膜抽出物は、SQG又はその塩を含む。本発明において用いられる微細藻類の膜成分は、アシル化されたSQGを含む膜成分であり、例えばチラコイド膜である。
微細藻類膜抽出物の製造方法を以下に詳述する。
【００６４】
（１）微細藻類
本明細書中、「微細藻類」は、一般的には水中に存在する顕微鏡サイズの藻で、その多くは植物と同様に、葉緑素を持ち、光合成によって大気中の二酸化炭素（CO2）を固定化し酸素（O2）を産生する。微細藻類には、原核生物であるシアノバクテリア（藍藻）（cyanobacteria）、並びに真核生物である灰色植物門（Glaucophyta）、紅色植物門（紅藻）（Rhodophyta）、緑色植物門 （Chlorophyta）、クリプト植物門（クリプト藻）（Cryptophyta）、ハプト植物門（ハプト藻）（Haptophyta）、不等毛植物門（Heterokontophyta）、渦鞭毛植物門（渦鞭毛藻）（Dinophyta）、ユーグレナ植物門（Euglenophyta）及びクロララクニオン植物門（Chlorarachniophyta）に分類される様々な単細胞生物が含まれる。
【００６５】
緑色植物門に属する藻類としては、例えば、緑藻綱（Chlorophyceae）、トレボキシア藻綱（Trebouxiophyceae）、プラシノ藻綱（Prasinophyceae）、アオサ藻綱（Ulvophyceae）、車軸藻綱（Charophyceae）等の綱に属する藻類が挙げられる。緑藻綱に属する藻類としては、例えば、ネオクロリス・オレオアバンダンス（Neochloris oleoabundans）（Tornabene, T.G. et al. 1983. Enzyme and Microb. Technol. 5: 435-440）等のネオクロリス属藻類、ナノクロリス・エスピー（Nannochloris sp.）（Takagi, M. et al. 2000. Appl. Microbiol. Biotechnol. 54: 112-117）等のナノクロリス属藻類、クラミドモナス・レインハルディ（Chlamydomonas reinhardtii）等のクラミドモナス（Chlamydomonas）属藻類、セネデスムス（Scenedesmus）属藻類、デスモデスムス（Desmodesmus）属藻類を挙げることが出来る。トレボキシア藻綱に属する藻類としては、例えば、クロレラ・ケッサレリ（Chlorella kessleri）等のクロレラ（Chlorella）属藻類を挙げることが出来る。
【００６６】
本発明に用いられる微細藻類は、このような微細藻類に分類されるものであり、所望の効果を有する微細藻類膜抽出物を得られる限り、いずれのものであってもよい。本発明に用いられる微細藻類としては、緑色植物門に属する微細藻類が好ましく、緑藻網又はトレボキシア藻綱に属する微細藻類がより好ましく、クロレラ属、クラミドモナス属、デスモデスムス属又はセネデスムス属に属する微細藻類がさらに好ましく、より好ましくはデスモデスムス属に属する微細藻類、最も好ましくはFERM BP-22277株である。
本発明に用いられる微細藻類は、通常、生きた微細藻類であるが、メラニン産生抑制活性を示す微細藻類膜抽出物が得られる限り、微細藻類の乾燥物などの死んだ微細藻類であっても構わない。
本発明に用いられる微細藻類は、in vitroで培養された微細藻類であってもよい。in vitroで培養された微細藻類を用いる場合、微細藻類の培養方法は、微細藻類が増殖できる限り特に制限されず、自体公知の方法により培養することができ、例えば国際公開第2014/192940号に記載の微細藻類の培養方法に準じた方法により培養することができる。
【００６７】
（２）微細藻類の膜成分の脱脂肪酸基化
微細藻類の膜成分の脱脂肪酸基化は、微細藻類全体、又は膜成分を含む微細藻類の１以上の部分を、脱脂肪酸基化処理することにより行われる。微細藻類の膜成分の脱脂肪酸基化は、微細藻類の膜成分に含まれる脂質から脂肪酸基（好ましくはアシル基）を脱離させることができる限り特に制限されず、(i)微細藻類の中温処理、(ii)ジエチルエーテル、エタノール又はメタノール等の有機溶媒を用いた有機溶媒処理等により行うことができる。好ましくは、微細藻類の膜成分の脱脂肪酸基化は、(iii)微細藻類を中温処理に付し、得られた中温処理産物から水溶性画分を選択すること、(iv)ジエチルエーテル、エタノール又はメタノール等の有機溶媒を用いた有機溶媒処理を行い溶性画分を選択することにより行われる。微細藻類の「中温処理産物」とは、微細藻類を含む水性溶媒を中温処理に付すことにより得られる産物を意味する。毒性を示し得る有機溶媒が残存する可能性を低減させる等の観点から、微細藻類の膜成分の脱脂肪酸基化としては、上記(i)又は(iii)が好ましい。
脱脂肪酸基化処理に付される微細藻類は、培養された微細藻類であってもよい。培養された微細藻類を用いる場合、該微細藻類は、培地に含まれたまま脱脂肪酸基化処理に供してもよく、培地から回収し、水や水性緩衝液等の水性媒体（水性溶媒）に再懸濁してから脱脂肪酸基化処理に供してもよい。
微細藻類を培地から回収する手法は特に制限されず、例えば公知の手法（Grima, E. M. et al. 2003. Biotechnol. Advances 20: 491-515）を利用でき、例えば、自然沈降、遠心分離、濾過等の手法により、微細藻類を培地から回収することができる。また、その際、凝集剤（flocculant）を利用してもよい。回収した微細藻類は、適当な媒体を用いて適宜洗浄及び／又は再懸濁することができる。洗浄や懸濁に利用できる媒体としては、例えば、水や水性緩衝液等の水性媒体（水性溶媒）等が挙げられる。
培地成分の持ち込みを避けるという観点から、培地から回収し水性溶媒に再懸濁した微細藻類を用いることが好ましく、培地から回収後洗浄を行い、水性溶媒に再懸濁した微細藻類を用いることが好ましい。
【００６８】
また、微細藻類は、例えば、希釈、濃縮、凍結、融解、乾燥等の前処理を行ってから脱脂肪酸基化処理に供してもよく、これらの前処理は、適宜組み合わせて行ってもよい。
微細藻類は、懸濁液中の微細藻類の濃度が、乾燥重量に換算して、例えば、25 g/L以上、または250 g/L以上となるように、希釈または濃縮してから脱脂肪酸基化処理に供してもよい。
【００６９】
脱脂肪酸基化処理の前には、反応系のpHを弱酸性あるいは弱アルカリ性に調整してもよい。弱酸性とは、例えば、pH 3.0〜7.0、pH 4.0〜6.0、またはpH 4.5〜6.0であってよい。弱アルカリ性とは、例えば、pH 7.5〜12.0、pH 9.0〜11.0、またはpH 9.0〜10.5であってよい。pHの調整は、例えば、塩酸等の酸性物質や、NaOHやKOH等のアルカリ性物質を用いて行うことができる。当該pH調整により、微細藻類が加水分解されてもよく、されなくてもよい。
【００７０】
脱脂肪酸基化処理として中温処理を行う場合、微細藻類の中温処理は、国際公開第2014/192940号に記載の方法に準じて行うことができる。
微細藻類は、上述したような適当な水性媒体に懸濁した状態で中温処理に供することができる。本明細書中、「中温処理」とは、中温度での処理をいう。中温処理としては、例えば、国際公開第2011/013707号及び国際公開第2014/192940号等に記載の中温度での処理を参照できる。中温度は、処理時間等の諸条件に応じて適宜設定できる。メラニン産生抑制等の所望の効果を得られる限り特に制限されないが、中温度は、通常35℃以上、好ましくは40℃以上、より好ましくは45℃以上、さらに好ましくは50℃以上であり、例えば通常70℃以下、好ましくは65℃以下、より好ましくは60℃以下である。中温処理の時間は、処理温度等の諸条件に応じて適宜設定できる。中温処理の時間は、例えば、1時間以上、または5時間以上であり得る。また、中温処理の時間は、例えば、48時間以下、または24時間以下であってよい。中温処理のpHは、所望の効果を有する抽出物が得られる限り特に制限されず、通常、pH 3.0〜11.0であり、弱酸性であってもよく、中性付近であってもよく、弱アルカリ性であってもよい。弱酸性とは、上記のような弱酸性の範囲、例えば、pH 4.5〜6.0であってよい。中性付近とは、例えば、pH 7.0〜9.0であってよい。弱アルカリ性とは、上記のような弱アルカリ性の範囲、例えば、pH 9.0〜10.5であってよい。
中温処理は、静置で行ってもよく、撹拌や振とうしながら行ってもよい。
【００７１】
中温処理は、連続的に行われてもよく、間欠的に行われてもよい。処理温度等の反応条件は、中温処理を通じて一定であってもよく、そうでなくてもよい。すなわち、微細藻類は、例えば、連続で同じ温度で処理（以下、「連続中温処理」ともいう）してもよく、途中で温度を変動させて処理してもよい。連続中温処理は、例えば、上記例示した中温度の範囲および上記例示した中温処理の時間の範囲で行われてよい。途中で温度を変動させる態様としては、例えば、途中で温度を低下させる態様が挙げられる。途中で温度を低下させる態様としては、例えば、第一段中温処理として、一旦中温度で処理した後に、第二段中温処理として、第一段中温処理の温度を下回る温度で処理する態様が挙げられる。第一段中温処理の温度は、例えば、上記例示した中温度の範囲であってよい。第二段中温処理の温度は、例えば、30℃以上、35℃以上、または40℃以上であってよい。また、第二段中温処理の温度は、例えば、55℃以下、50℃以下、または45℃以下であってよい。第一段中温処理の時間は、例えば、1分以上、5分以上、10分以上、または20分以上であってよい。第一段中温処理の時間は、例えば、120分以下、または60分以下であってよい。第二段中温処理の時間は、例えば、1時間以上、2時間以上、または4時間以上であってよい。第二段中温処理の時間は、例えば、20時間以下、または15時間以下であってよい。
【００７２】
上記の中温処理により得られた中温処理産物は、そのまま本発明に用いてもよいが、さらに、該中温処理産物の水溶性画分と水不溶性画分との分離操作を行い、水溶性画分を回収して、本発明に用いることが好ましい。また、所望の効果を有する限り、該水溶性画分をさらに乾燥、希釈、濃縮及び凍結等に付してもよい。本明細書中、上記水溶性画分そのもの並びに上記水溶性画分の乾燥物、希釈物、濃縮物及び凍結物等を総称して中温処理後の上清抽出物と称する。この中温処理後の上清抽出物を、本発明に用いることができる。
水溶性画分と水不溶性画分の分離操作は、自体公知の方法により行うことができる。分離操作の例としては、所望の効果を有する水溶性画分を得られる限り特に制限されないが、自然沈降、濾過操作、遠心分離による分離操作等及びこれらの組合せが挙げられる。
【００７３】
「有機溶媒処理」とは、有機溶媒による処理をいう。有機溶媒処理の条件は、所望の効果を有する微細藻類膜抽出物を得られる限り特に制限されない。有機溶媒処理は、微細藻類と有機溶媒を接触させることにより行うことができる。例えば、回収した微細藻類を有機溶媒で懸濁してもよいし、微細藻類の懸濁物に有機溶媒を添加してもよい。有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、２−プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール等のアルコール類、アセトン等のケトン類、ジメチルエーテル、ジエチルエーテル等のエーテル類、酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類、ｎ−ヘキサン等のアルカン類、ベンゼン、フェノール、クロロホルムが挙げられる。有機溶媒としては、水溶性のものが好ましい。有機溶媒としては、アルコールが好ましく、メタノールがより好ましい。有機溶媒としては、１種の有機溶媒を用いてもよく、２種またはそれ以上の有機溶媒を組み合わせて用いてもよい。有機溶媒は、純品であってもよく、他の成分との混合物であってもよい。他の成分としては、例えば、水や水性緩衝液等の水性媒体（水性溶媒）が挙げられる。すなわち、例えば、有機溶媒処理には、有機溶媒の水溶液を利用することができる。混合物中の有機溶媒濃度は、例えば、10％（v/v）以上、または20％（v/v）以上であってよく、90％（v/v）以下、70％（v/v）以下、または50％（v/v）以下であってよい。また、有機溶媒処理を行う反応液中の有機溶媒濃度は、例えば、10％（v/v）以上、または20％（v/v）以上であってよく、90％（v/v）以下、70％（v/v）以下、または50％（v/v）以下であってよい。有機溶媒処理の時間は、例えば、10分以上、30分以上、または1時間以上であってよい。また、有機溶媒処理の時間は、例えば、10時間以下、5時間以下、または3時間以下であってよい。有機溶媒処理の温度は、制御されてもよく、制御されなくてもよい。有機溶媒処理の温度は、例えば、10〜70℃であってよく、室温であってもよい。有機溶媒処理は、静置で行ってもよく、撹拌や振とうしながら行ってもよい。
【００７４】
微細藻類を、上記有機溶媒処理に付した後、溶性画分と不溶性画分とを分離させる操作を行い、溶性画分を回収することにより、微細藻類膜抽出物を得ることができる。所望の効果を有する限り、該溶性画分をさらに乾燥、希釈、濃縮及び凍結等に付してもよい。本明細書中、上記溶性画分そのもの並びに該溶性画分の乾燥物、希釈物、濃縮物及び凍結物等を総称して有機溶媒抽出物と称する。この有機溶媒抽出物を、本発明に用いることもできる。
【００７５】
上記のように得た微細藻類膜抽出物（例、中温処理後の上清抽出物）は、その使用の用途に応じて、さらに濾過滅菌等の滅菌処理、陽イオン交換クロマトグラフィー等の分画操作による活性成分の濃縮、フェオフォルバイド等の毒性成分やタンパク質等の除去処理等の所望の操作に付すこともできる。
【００７６】
微細藻類膜抽出物を生体へ適用する場合、安全性が高くアレルゲン性の低いものが好ましいと考えられるため、本発明に用いる微細藻類膜抽出物は、滅菌処理されたものであることが好ましく、フェオフォルバイド等の毒性物質及び／又はタンパク質を含まないことが好ましい。
【００７７】
４．皮膚の美白化方法
本発明は、美白化が所望される皮膚領域に、本発明の美白用化粧料を適用することによる、皮膚の美白化方法を提供する。さらに本発明は、皮膚中の過剰なメラニン産生の抑制が必要な対象に対して、本発明の美白用化粧料を適用することを含んで成る、皮膚中の過剰なメラニン産生を抑制するための美容的又は治療的方法を提供する。これらの方法において、本発明の美白用化粧料は、皮膚外用剤として調製されたものであることが好ましい。
【００７８】
以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【実施例】
【００７９】
実施例１
中温処理上清の調製（１）
藻類株の培養
緑藻AJ7850株（FERM BP-22277株）を、100 mLの0.2×ガンボーグB5培地（日本製薬）を入れた500 mL容三角フラスコにて、培養温度30℃、光強度7,000 lux、3 % CO2濃度の空気・CO2混合ガス雰囲気のインキュベーター（TOMY社製培養装置CLE-303）で7日間振とう培養し、これを前培養液とした。1.5 L の0.2×ガンボーグB5 培地を入れた2 L容ジャーファーメンター（石川製作所製）に、前培養液80 mLを添加し、培養温度30℃、光強度20,000 luxにて、500 mL/minで3%CO2濃度の空気・CO2混合ガスを吹き込みながら、15日間培養を行った。尚、光源には、蛍光灯からの白色光を用いた。
【００８０】
(0.2×ガンボーグB5培地)
KNO3                500 mg/L
MgSO4・7H2O      50 mg/L
NaH2PO4・H2O    30 mg/L
CaCl2・2H2O       30 mg/L
（NH4）2SO4        26.8 mg/L
Na2-EDTA          7.46 mg/L
FeSO4・7H2O       5.56 mg/L
MnSO4・H2O        2 mg/L
H3BO3                0.6 mg/L
ZnSO4・7H2O       0.4 mg/L
KI                      0.15 mg/L
Na2MoO2・2H2O    0.05 mg/L
CuSO4・5H2O      0.005 mg/L
CoCl2・6H2O       0.005 mg/L
120℃ 15分       オートクレーブ殺菌
【００８１】
中温処理
緑藻AJ7850株（FERM BP-22277株）の培養液2.3 Lを6,000 rpmで10分間遠心分離して上清を除き、AJ7850株藻体を得た。得られた藻体を少量の滅菌水で懸濁し、遠心分離して上清を除く操作を4回繰り返し、4回目の遠心分離後の藻体を、滅菌水で100 mLにメスアップして濃縮液を調製した。pHは約6.5であった。53℃で2時間30分撹拌することにより中温処理を実施した。中温処理後の処理物を遠心分離し、残渣除去後の上清を得た。得られた上清を中温処理上清（１）とした。
【００８２】
実施例2
中温処理上清の調製（２）
藻類株の培養
緑藻AJ7850株（FERM BP-22277株）を、100 mLの0.2×ガンボーグB5培地（日本製薬）を入れた500 mL容三角フラスコにて、培養温度30℃、光強度7,000 lux、3 % CO2濃度の空気・CO2混合ガス雰囲気のインキュベーター（TOMY社製培養装置CLE-303）で7日間振とう培養し、これを前培養液とした。1.5 L の0.2×ガンボーグB5 培地を入れた2 L容ジャーファーメンター（石川製作所製）に、前培養液80 mLを添加し、培養温度30℃、光強度20,000 luxにて、500 mL/minで3%CO2濃度の空気・CO2混合ガスを吹き込みながら、12日間培養を行った。尚、光源には、蛍光灯からの白色光を用いた。
中温処理
緑藻AJ7850株（FERM BP-22277株）の培養液3.7 Lを6,000 rpmで10分間遠心分離して上清を除き、藻体を得た。得られた藻体を少量の滅菌水で懸濁し、遠心分離して上清を除く操作を4回繰り返し、4回目の遠心分離後の藻体を、滅菌水で200 mLにメスアップして濃縮液を調製した。0.1N H2SO4を添加してpH 5.51に調整した。53℃で2時間30分撹拌することにより中温処理を実施した。中温処理後の処理物を遠心分離し、残渣除去後の上清を得た。得られた上清を中温処理上清（２）とした。
【００８３】
実施例3
中温処理上清の分析
実施例２で調製した中温処理上清（２）をHPLC分析に供した。HPLCは、オートサンプラー L-7200、ポンプ L-7100、および示差屈折率検出器 L-2490（いずれも日立）に糖分析用カラム SH-1011(昭和電工)2本を直列に備え付けたHPLC分析装置を使用して行った。移動相には水を用い、流速は1.0 mL/min、カラム温度は60℃とした。HPLC分析結果を図1に示す。HPLCで検出されたピークの質量分析により、保持時間10.40分のピークがスルホキノボシルグリセロールであることを確認した。スルホキノボシルグリセロールの標品（WO2014192940参考例１）を同様のHPLC分析に供することにより、中温処理上清（２）中のスルホキノボシルグリセロールの濃度は94 mg/mLと計算された。
実施例１で調製した中温処理上清（１）についても同様のHPLC分析を行い、スルホキノボシルグリセロールと同じ保持時間のピークを検出した。
【００８４】
実施例4
メラニン産生抑制活性試験
実施例１で調製した中温処理上清（１）及び実施例２で調製した中温処理上清（２）の美白効果を比較すべくメラニン産生率測定を行った。B16メラノーマをDMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) （高グルコース、血清10 %含有）にて37 ℃、5 %CO2、飽和蒸気下で培養した。コンフルエント状態になった細胞を、96ウェルプレートに播種した。評価サンプルは、該中温処理上清（１）（又は（２））10 mlを凍結乾燥にて乾燥させ、上記DMEM（フェノールレッド不含）4mlにて再溶解したものを利用し、ポジティブコントロールとしては、コウジ酸（シグマアルドリッチ製）を利用した。播種翌日、各評価サンプル又はポジティブコントロールの希釈系列を上記DMEM（フェノールレッド不含）にて調製し、各ウェルの培地を交換した。3日間培養し、450 nmにおける吸光度をマイクロプレートリーダー（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）にて測定した。コントロール（サンプル添加なし）の測定値を100 %と規定した場合の、各サンプル所定濃度添加3日後の測定値を相対％にすることにより、コントロール中のメラニン量を100 %とした場合の、各サンプルのメラニン産生率を算出した。結果を図2に示す。
【００８５】
細胞毒性試験（ニュートラルレッド法）
メラニン産生抑制試験にて吸光度を測定した後、プレートから評価サンプル溶液を取り除き、各ウェルを200 μlのDMEM（高グルコース、血清10 %含有）を用いてリンスした。NR（ニュートラルレッド）入りDMEMを200 μl / wellで滴下し、2時間、37 ℃、5 %CO2、飽和蒸気下で静置した。DMEM（ニュートラルレッド入り）を捨て、洗浄固定液（2 wt%塩化カルシウム溶液及び2wt/%ホルマリン溶液を等量で混合）を200 μl / well添加し、1分間静置後、洗浄固定液を取り除いた。NR抽出液（酢酸酸性エチルアルコール）200 μl / wellを添加し、プレートシェイカーにて15分間震蕩した。生細胞へのNRの取り込みは、マイクロプレートリーダー（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）でNR抽出液の540nmの吸光度を測定することにより調べた。コントロール（サンプル添加なし）のNR抽出液の測定値（吸光度）を100 %と規定した場合の、所定濃度の各サンプル添加細胞のNR抽出液の吸光度を相対％にすることにより、各サンプルの細胞毒性を算出した。
中温処理上清（１）、及び（２）は、細胞毒性の無い濃度において、メラニン産生抑制効果が同等であることを確認した（図2）。
【００８６】
実施例5
スルホキノボシルグリセロールのメラニン産生抑制活性（グリコシルグリセロールとの比較を含む）
スルホキノボシルグリセロールはWO2014192940参考例１に記載の方法に従って、合成した。スルホキノボシルグリセロール（SQG）及びグリコシルグリセロール（GG）（購入品）の美白効果を比較すべくメラニン産生率測定を行った。B16メラノーマをDMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium)（高グルコース、血清10 %含有）にて37 ℃、5 %CO2、飽和蒸気下で培養した。コンフルエント状態になった細胞を、96ウェルプレートに播種した。翌日、各評価サンプル又はポジティブコントロール（コウジ酸（シグマアルドリッチ製））の希釈系列を上記DMEM（フェノールレッド不含）にて調製し、各ウェルの培地を交換した。3日間培養し450 nmにおける吸光度をマイクロプレートリーダー（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）にて測定した。コントロール（サンプル添加なし）の測定値を100 %と規定した場合の、各サンプル所定濃度添加3日後の測定値を相対％にすることにより、コントロール中のメラニン量を100 %とした場合の、各サンプルのメラニン産生率を算出した。細胞毒性試験は実施例４記載の方法にて実施した。結果を図3に示す。
SQGは細胞毒性の無い濃度において、メラニン産生抑制効果を示した。一方、GGは、SQGの2倍濃度以上においても、メラニン産生抑制効果は確認できなかった。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
本発明により、安全性に優れ、高いメラニン産生抑制作用を有するメラニン産生抑制剤及び美白用化粧料が提供可能となった。本発明の剤は、メラニン産生抑制作用又は美白効果を発揮することに意義のある様々の用途に用いることができ、例えば、日焼け等による色素沈着、しみ、そばかす、肌のくすみ、肝斑等の予防、改善、治療等に有効な美白剤として用いることができ、特に、皮膚美白用化粧料の製造等に有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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