(57)【要約】      （修正有）【課題】ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド製剤の提供。【解決手段】Ｎ−アセチルアルギニンを含み、Ｎ−アセチルアルギニンを含まない製剤と比較した場合に粘度が低い、エボロクマブを含むＰＣＳＫ９結合ポリペプチドなどのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの製剤が提供される。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含むかかる製剤は、ＰＣＳＫ９関連の疾患、疾病、及び障害を治療及び／または予防するために患者に投与することができる。【選択図】図１
2018154616.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．前記モノクローナル抗体の前記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する前記モノクローナル抗体
からなる群より選択されるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．Ｎ−アセチルアルギニンと
を含み、
少なくとも約８０ｃＰ未満の粘度を有する医薬組成物。
【請求項２】
前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド濃度が、約２１０ｍｇ／ｍＬである、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記Ｎ−アセチルアルギニンが、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在する、請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
バッファーを更に含む、請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
界面活性剤を更に含む、請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
プロリンを更に含む、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
アルギニン塩を更に含む、請求項１〜８のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーを含む、請求項１〜９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１１】
液体である、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む、治療を必要とする対象の治療方法。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物、並びに注射器、ペン型注射器、ボディーインジェクター、及びオートインジェクターからなる群より選択される送達デバイスを備えるキット。
【請求項１４】
少なくとも１４０ｍｇ／ｍＬのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬組成物中のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの調製方法であって、前記医薬組成物の粘度が前記Ｎ−アセチルアルギニンを含まない医薬組成物と比較した場合に低減されるような有効量のＮ−アセチルアルギニンを、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬組成物に添加することを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメントと、
ｂ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体と、
ｃ．
ｉ．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
ｉｉ．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体と、
ｄ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体と、
ｅ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
ｉｉ．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
ｉｉｉ．前記モノクローナル抗体の前記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する前記モノクローナル抗体と
からなる群より選択される前記方法。
【請求項１５】
治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の前記ポリペプチドが濃縮される第１の濃縮ステップと、
ｂ．前記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップと、
ｃ．第２の溶液中の前記ポリペプチドが濃縮される第２の濃縮ステップと、
ｄ．前記濃縮された第２の溶液中の前記ポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップと、
ｅ．第３の溶液中の前記ポリペプチドが濃縮される第３の濃縮ステップと
を含み、
前記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．前記モノクローナル抗体の前記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦａドメインが結合する部位と更に重複する前記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、前記方法。
【請求項１６】
ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断する前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
第３の濃縮ステップの前に、前記ポリペプチドを含む前記溶液の温度が、約２５℃〜約３７℃に高められる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
第１の濃縮ステップにおいて、前記治療用ポリペプチドの濃度が、約３倍〜約７倍高められる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
第２の濃縮ステップにおいて、前記治療用ポリペプチドの濃度が、第１の濃縮ステップから約２倍〜約４倍高められる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
第３の濃縮ステップにおいて、前記治療用ポリペプチドの濃度が、第２の濃縮ステップから約１．５倍〜約２倍高められる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
前記治療用ポリペプチドが、前記治療用ポリペプチドの初期濃度よりも少なくとも約１９〜２０倍濃縮された最終濃度を有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
前記濃縮ステップが、流加限外ろ過を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
第２または第３の溶液のｐＨが、約４．８〜６．９である、請求項１５〜２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ａ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｂ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｃ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満であるが、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｄ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｅ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｆ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｇ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｈ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
濃縮された後に、第３の溶液に界面活性剤が添加される、請求項１５〜２４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年２月２２日出願の米国仮特許出願第６２／４６２，２６６号の優先権を主張し、該出願はその全体が参照により本明細書に援用される。
【０００２】
配列表
本出願は電子的形式での配列表と共に出願されている。「Ａ−２１１２−ＷＯ−ＰＣＴ＿ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」との表題のファイルとして提出された上記配列表は２０１８年１月３１日に作成され、２１ＫＢのサイズである。上記電子的形式の配列表中の情報は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０００３】
提示される主題は、エボロクマブ及び他のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの医薬組成物ならびにかかる組成物の粘度の低減方法の分野に関する。詳細には、提示する主題は、Ｎ−アシルアルギニンを含むエボロクマブ及び他のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの医薬組成物、ならびに高濃度のエボロクマブ及び他のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの製剤の粘度を低減するためのＮ−アシルアルギニンの使用に関する。更に、開示される主題は、かかる医薬組成物の製造に関する方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
治療用抗体は、非経口注入などの投与用に溶液として製剤される。自己投与で皮下投与される製品に関しては、１〜２ミリリットルを超える送達容量を必要とする製剤は忍容性に乏しい。この問題を解決するために、抗体を高濃度（例えば、７０ｍｇ／ｍＬ〜２１０ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上）で製剤し、その結果として投与する容積を低減する場合がある。
【０００５】
しかしながら、一部の高濃度の抗体製剤は製造及び投与することが困難である。例えば、ＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であるエボロクマブ（レパーサ（登録商標））の製剤において、約７０ｍｇ／ｍＬを超える濃度のエボロクマブは高粘度である。しかし、エボロクマブの有効な用量は２週間毎に（Ｑ２Ｗ）２１０ｍｇまたは４週間毎に（Ｑ４Ｗ）４２０ｍｇである。高粘度の製剤は、バルク及び充填の段階を含む製造中に取り扱いが困難であるだけでなく、注射器に吸い上げ注射することが困難であり、患者への投与が困難且つ不快となる。
【０００６】
抗体製剤の粘度を低減するために、未修飾のアルギニン、グリシン、セリン、またはプロリンアミノ酸が抗体組成物に添加されている。例えば、８０ｍｇ／ｍＬの抗体及び７５ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬのアルギニンを含有する抗体製剤が凍結乾燥され、１２０〜２００ｍｇ／ｍＬに再構成される場合があり、最終的なアルギニン濃度は４３１ｍＭ〜７１８ｍＭとなる場合がある（Ｍｏｒｉｃｈｉｋａ  ＆  Ｋａｍｅｏｋａ，  ２００７）。アルギニンは、対照と比較した場合に当該製剤の粘度を低下させるが（Ｍｏｒｉｃｈｉｋａ  ＆  Ｋａｍｅｏｋａ，  ２００７）。更に、アルギニンの効果は、エボロクマブの粘度を所望のレベルまで低下させるには不十分である。
【０００７】
当技術分野において、アルギニンよりも効率的な化合物を含むエボロクマブ含有製剤及び他のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含有する製剤が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｍｏｒｉｃｈｉｋａ  ＆  Ｋａｍｅｏｋａ，  ２００７
【発明の概要】
【０００９】
第１の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択されるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．Ｎ−アセチルアルギニンと
を含み、
少なくとも約８０ｃＰ未満の粘度を有する医薬組成物が提供される。かかる第１の態様において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体であってよい。更に、この第１の態様において、上記医薬組成物の粘度は少なくとも約５０ｃＰ未満であってよい。上記医薬組成物は、約２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有していてもよく、またはヒト血液細胞と等張である。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬ、例えば２１０ｍｇ／ｍＬであってよい。上記Ｎ−アセチルアルギニンは、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭ、例えば、１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、または１４０ｍＭの濃度で存在していてもよい。この態様の医薬組成物は、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、またはそれらの組み合わせからなる群より選択されるバッファーなどのバッファーを更に含んでいてもよい。上記バッファーは約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在していてもよい。いくつかの場合において、上記バッファーは酢酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する。かかる医薬組成物のｐＨは約４．８〜約６．９、例えば、約５．４のｐＨであってよい。この態様の医薬組成物は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（Ｓｐａｎ）（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー（Ｂｒｉｊ））、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される界面活性剤などの界面活性剤を更に含んでいてもよい。上記界面活性剤は約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してもよい。この態様のいくつかの医薬組成物において、上記界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。更に、この態様の医薬組成物はプロリンを更に含んでいてもよく、上記プロリンは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば９０〜１２０ｍＭ、または約１２０ｍＭの濃度で存在してもよい。いくつかの場合において、この第１の態様の医薬組成物は、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば約５０〜約１００ｍＭの濃度で存在してもよいアルギニン塩を更に含んでいてもよい。上記アルギニン塩は、例えば、アルギニン−ＨＣｌ、アルギニン酢酸塩、またはアルギニングルタミン酸塩であってよい。いくつかの場合において、上記アルギニン塩はアルギニンＨＣｌであり、約５０ｍＭの濃度で存在する。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、この第１の態様の医薬組成物中では、約−３０℃以下で貯蔵された場合、少なくとも２年間または５年間以上でさえも安定であることができる。５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、かかる医薬組成物中��は、少なくとも約６ヶ月〜約２４ヶ月間またはそれ以上安定であることができる。２５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１ヶ月間以上、３ヶ月間以上、または６ヶ月間以上でさえも安定であることができる。４０℃では、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１ヶ月間以上安定であることができる。この第１の態様の医薬組成物に含まれるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーは、全ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満、例えば２．５％以下とすることができる。
【００１０】
第２の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択されるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．Ｎ−アセチルアルギニンと、
ｃ．アルギニン塩と、
ｄ．バッファーと、
ｅ．界面活性剤と
を含み、
少なくとも約８０ｃＰ未満の粘度を有する医薬組成物が開示される。
【００１１】
この第２の態様において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体である。
【００１２】
この第２の態様の医薬組成物は少なくとも約５０ｃＰ未満の粘度を有していてもよい。上記医薬組成物は、約２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有していてもよく、またはヒト血液細胞と等張である。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬ、例えば２１０ｍｇ／ｍＬであってよい。上記Ｎ−アセチルアルギニンは、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭ、例えば、１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、または１４０ｍＭの濃度で存在していてもよい。この態様の医薬組成物は、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、またはそれらの組み合わせからなる群より選択されるバッファーなどのバッファーを更に含んでいてもよい。上記バッファーは約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在していてもよい。いくつかの場合において、上記バッファーは酢酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する。かかる医薬組成物のｐＨは約４．８〜約６．９、例えば、約５．４のｐＨであってよい。この態様の医薬組成物は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される界面活性剤などの界面活性剤を更に含んでいてもよい。上記界面活性剤は約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してもよい。この態様のいくつかの医薬組成物において、上記界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。更に、この態様の医薬組成物はプロリンを更に含んでいてもよく、上記プロリンは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば９０〜１２０ｍＭ、または約１２０ｍＭの濃度で存在してもよい。いくつかの場合において、この第２の態様の医薬組成物は、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば５０〜１００ｍＭの濃度で存在してもよいアルギニン塩を更に含んでいてもよい。上記アルギニン塩は、例えば、アルギニン−ＨＣｌ、アルギニン酢酸塩、またはアルギニングルタミン酸塩であってよい。いくつかの場合において、上記アルギニン塩はアルギニンＨＣｌであり、約５０ｍＭの濃度で存在する。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、この第２の態様の医薬組成物中では、約−３０℃以下で貯蔵された場合、少なくとも２年間または５年間以上でさえも安定であることができる。５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、かかる医薬組成物中では、少なくとも約６ヶ月〜約２４ヶ月間またはそれ以上安定であることができる。２５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくと��１ヶ月間以上、３ヶ月間以上、または６ヶ月間以上でさえも安定であることができる。４０℃では、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１ヶ月間以上安定であることができる。この第２の態様の医薬組成物が含むＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーは、全ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満、例えば２．５％以下とすることができる。
【００１３】
第３の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１４０ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約５０ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物が開示される。
【００１４】
この第３の態様において、上記医薬組成物のｐＨは約５．１〜約５．７、例えば、約５．４のｐＨであってよい。上記医薬組成物の粘度は少なくとも約５０ｃＰ未満であってよい。
【００１５】
第４の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
ｂ．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｃ．約１４０ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｄ．約６３ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｅ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｆ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物が開示される。
【００１６】
第５の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１５５ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約７０ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物が開示される。
【００１７】
この第５の態様において、上記医薬組成物のｐＨは約５．１〜約５．７、例えば、約５．４のｐＨであってよい。上記医薬組成物の粘度は少なくとも約４５ｃＰ未満であってよい。
【００１８】
第６の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１７０ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約６３ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物が開示される。
【００１９】
この第６の態様において、上記医薬組成物のｐＨは約５．１〜約５．７、例えば、約５．４のｐＨであってよい。上記医薬組成物の粘度は少なくとも約６０ｃＰ未満であってよい。
【００２０】
第７の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１５５ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約１２０ｍＭの濃度で存在するプロリンと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物が開示される。
【００２１】
この第７の態様において、上記医薬組成物のｐＨは約５．１〜約５．７、例えば、約５．４のｐＨであってよい。上記医薬組成物の粘度は少なくとも約６０ｃＰ未満であってよい。
【００２２】
これらの第３〜第７の態様において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、これらの態様の医薬組成物中では、約−３０℃以下で貯蔵された場合、少なくとも２年間または５年間以上でさえも安定であることができる。５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、かかる医薬組成物中では、少なくとも約６ヶ月〜２４ヶ月間またはそれ以上安定であることができる。２５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１ヶ月間以上、３ヶ月間以上、または６ヶ月間以上でさえも安定であることができる。４０℃では、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１ヶ月間以上安定であることができる。これらの態様の医薬組成物に含まれるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーは、全ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満、例えば２．５％以下とすることができる。
【００２３】
上述の態様のいずれにおいても、上記医薬組成物は液体であってよい。
【００２４】
第８の態様において、上述の７の態様のいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む、それを必要とする対象の治療方法が開示される。
【００２５】
第９の態様において、第１〜第７の態様のいずれかに記載の医薬組成物及び送達デバイスを備えるキットが開示される。上記送達デバイスは、注射器、ペン型注射器、ボディーインジェクター、及びオートインジェクターからなる群より選択されてもよい。上記キットは、上記送達デバイスを用いて上記医薬組成物を投与するための使用説明書を更に備えていてもよい。
【００２６】
第１０の態様において、本明細書では、少なくとも１４０ｍｇ／ｍＬのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含むＰＣＳＫ９結合ポリペプチド医薬組成物の調製方法であって、上記医薬組成物の粘度が上記Ｎ−アセチルアルギニンを含まない上記医薬組成物と比較した場合に低減されるような有効量のＮ−アセチルアルギニンを、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬組成物に添加することを含み、且つ上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメントと、
ｂ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体と、
ｃ．
ｉ．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
ｉｉ．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体と、
ｄ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体と、
ｅ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
ｉｉ．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
ｉｉｉ．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体と
からなる群より選択される上記方法が開示される。
【００２７】
この第１０の態様において、上記医薬組成物の粘度は約８０ｃＰ未満、または約５０ｃＰ未満である。この態様の方法の上記医薬組成物は、約２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有していてもよく、またはヒト血液細胞と等張である。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬ、例えば２１０ｍｇ／ｍＬであってよい。上記Ｎ−アセチルアルギニンは、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭ、例えば、１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、または１４０ｍＭの濃度で存在していてもよい。この態様の医薬組成物は、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、またはそれらの組み合わせからなる群より選択されるバッファーなどのバッファーを更に含んでいてもよい。上記バッファーは約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在していてもよい。いくつかの場合において、上記バッファーは酢酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する。かかる医薬組成物のｐＨは約４．８〜約６．９、例えば、約５．４のｐＨであってよい。この態様の医薬組成物は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される界面活性剤などの界面活性剤を更に含んでいてもよい。上記界面活性剤は約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してもよい。この態様のいくつかの医薬組成物において、上記界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。更に、この態様の医薬組成物はプロリンを更に含んでいてもよく、上記プロリンは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば９０〜１２０ｍＭ、または約１２０ｍＭの濃度で存在してもよい。いくつかの場合において、この第１０の態様の医薬組成物は、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば約５０〜約１００ｍＭの濃度で存在してもよいアルギニン塩を更に含んでいてもよい。上記アルギニン塩は、例えば、アルギニン−ＨＣｌ、アルギニン酢酸塩、またはアルギニングルタミン酸塩であってよい。いくつかの場合において、上記アルギニン塩はアルギニンＨＣｌであり、約５０ｍＭの濃度で存在する。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、この第１０の態様の医薬組成物中では、約−３０℃以下で貯蔵された場合、少なくとも約２年間または５年間以上でさえも安定であることができる。５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、かかる医薬組成物中では、少なくとも約６ヶ月〜２４ヶ月間またはそれ以上安定であることができる。２５℃においては、上記��ＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも約１ヶ月間以上、３ヶ月間以上、または６ヶ月間以上でさえも安定であることができる。４０℃では、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１ヶ月間以上安定であることができる。この第１０の態様の医薬組成物に含まれるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーは、全ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満、例えば２．５％以下とすることができる。
【００２８】
第１１の態様において、本明細書では、治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第１の濃縮ステップと、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップと、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第２の濃縮ステップと、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップと、
ｅ．第３の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第３の濃縮ステップと
を含み、
上記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、上記方法が開示される。
【００２９】
この第１１の態様の方法において、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断する上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体であってよい。
【００３０】
更に、この第１１の態様において、第３の濃縮ステップの前に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が約２５℃〜約３７℃に高められてもよい。また、第１の溶液交換ステップが、第２の溶液の少なくとも３の透析ろ過容量（ｄｉａｖｏｌｕｍｅ）を用いて実施されてもよい。この第１１の態様のいくつかの下位の態様において、第２の溶液交換ステップは第３の溶液の少なくとも４の透析ろ過容量を用いて実施される。他の下位の態様において、上記治療用タンパク質の初期濃度は約１１ｍｇ／ｍＬ以下である。加えて、上記治療用ポリペプチドの濃度は約３倍〜約７倍高められ、例えば上記ポリペプチドの高められた濃度は約３５ｍｇ／ｍＬ〜約７０ｍｇ／ｍＬであってよい。いくつかの下位の態様において、第２の濃縮ステップで、上記治療用ポリペプチドの濃度は、第１の濃縮ステップから約２倍〜４倍、例えば約１４０ｍｇ／ｍＬに高められる。第３の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度は、第２の濃縮ステップから約１．５倍〜約２倍、例えば約２６０ｍｇ／ｍＬに高められてもよい。したがって、上記治療用ポリペプチドは、該治療用ポリペプチドの初期濃度よりも少なくとも約１９〜２０倍濃縮された最終濃度、例えば約２１０ｍｇ／ｍＬを有していてもよい。上記濃縮ステップは流加限外ろ過を含んでいてもよく、更に、第２の溶液と第３の溶液とは同一であってもよい。例えば、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２または第３の溶液はアルギニン塩及びバッファーを含んでいてもよく、例えば、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在し、上記アルギニン塩はＡｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩であり、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在し、上記バッファーは、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムバッファーである。他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭ〜約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１４０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更なる下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１５５ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に、上記組成物はプロリンを更に含んでいてもよく、該プロリンは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する。第２または第３の溶液のｐＨは約４．８〜約６．９、例えば５．４であってよい。第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ａ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｂ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｃ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｄ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｅ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｆ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｇ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｈ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられてもよい。更に、濃縮された後に、第３の溶液に、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グルコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される界面活性剤などの界面活性剤が添加されてもよい。上記界面活性剤は約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してもよい。この態様のいくつかの医薬組成物において、上記界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。
【００３１】
第１２の態様において、本明細書では、治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第１の濃縮ステップと、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニン、アルギニン塩、及びバッファーを含む第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップと、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第２の濃縮ステップと、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニン、アルギニン塩、及びバッファーを含む第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップと、
ｅ．第２の溶液交換ステップの後に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が約２５℃〜約３７℃に高められることと、
ｆ．上記ポリペプチドが流加限外ろ過濃縮を用いて更に濃縮される第３の濃縮ステップと
を含み、
第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ａ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｂ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｃ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｄ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｅ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｆ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｇ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｈ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられ、
上記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、上記方法が提供される。
【００３２】
更に、この第１２の態様において、第１の溶液交換ステップは、第２の溶液の少なくとも３の透析ろ過容量を用いて実施されてもよい。この第１２の態様のいくつかの下位の態様において、第２の溶液交換ステップは第３の溶液の少なくとも４の透析ろ過容量を用いて実施される。他の下位の態様において、上記治療用タンパク質の初期濃度は約１１ｍｇ／ｍＬ以下である。加えて、上記治療用ポリペプチドの濃度は約３倍〜約７倍高められ、例えば上記ポリペプチドの高められた濃度は約３５ｍｇ／ｍＬ〜約７０ｍｇ／ｍＬであってもよい。いくつかの下位の態様において、第２の濃縮ステップで、上記治療用ポリペプチドの濃度は、第１の濃縮ステップから約２倍〜４倍、例えば約１４０ｍｇ／ｍＬに高められる。第３の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度は、第２の濃縮ステップから約１．５倍〜約２倍、例えば約２６０ｍｇ／ｍＬに高められてもよい。したがって、上記治療用ポリペプチドは、該治療用ポリペプチドの初期濃度よりも少なくとも約１９〜２０倍濃縮された最終濃度、例えば約２１０ｍｇ／ｍＬを有していてもよい。上記濃縮ステップは流加限外ろ過を含んでいてもよく、更に、第２の溶液と第３の溶液とは同一であってもよい。上記Ｎ−アセチルアルギニンは約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在し、上記アルギニン塩はＡｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩であってよく、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在し、上記バッファーは、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムバッファーである。他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭ〜約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１４０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更なる下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１５５ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に、上記組成物はプロリンを更に含んでいてもよく、該プロリンは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する。第２または第３の溶液のｐＨは約４．８〜約６．９、例えば５．４であってよい。更に、濃縮された後に、第３の溶液に、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される界面活性剤などの界面活性剤が添加されてもよい。上記界面活性剤は約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してもよい。この態様のいくつかの医薬組成物において、上記界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。
【００３３】
第１３の態様において、本明細書では、治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第１の濃縮ステップ、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過及び第２の溶液の３の透析ろ過容量を用いて第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップ、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第２の濃縮ステップ、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過及び第３の溶液の４の透析ろ過容量を用いて、第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップ、
ｅ．第２の溶液交換ステップの後に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が約２５℃〜約３７℃に高められること、ならびに
ｆ．上記ポリペプチドが流加限外ろ過濃縮を用いて更に濃縮される第３の濃縮ステップ、
ｇ．あるいは、第３の濃縮ステップで得られる溶液に、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）を約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で添加するステップ
を含み、
第２及び第３の溶液が、約１４０ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、約５０ｍＭのＡｒｇ
ＨＣｌ、及び約１０ｍＭの酢酸ナトリウムを含み、ｐＨが約５．２である溶液、約１５
５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、約７０ｍＭのＡｒｇ  ＨＣｌ、及び約１０ｍＭの
酢酸ナトリウムを含み、ｐＨが約５．４である溶液、ならびに約１７０ｍＭのＮ−ア
セチルアルギニン、約１０ｍＭの酢酸ナトリウムを含み、ｐＨが約５．６である溶液、
からなる群より選択される溶液を含み、
第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ａ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｂ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｃ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｄ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｅ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｆ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｇ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｈ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられ、
上記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、上記方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】４０℃で１ヶ月のインキュベーション後の、Ｎ−アセチルアルギニンを含有する種々の製剤中の高濃度でのエボロクマブ試料のサイズ排除クロマトグラフィー−高圧液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）のデータのグラフである。ｘ軸上に示した製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［プロリン（ｍＭ）］。Ｙ軸は高分子量（ＨＭＷ）種（エボロクマブの凝集体及びオリゴマー）である試料のパーセンテージを示す。
【図２】２５℃、せん断速度１０００ｓｅｃ−１における、２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブの製剤粘度の比較のグラフである。
【図３】図３Ａは、ＪＭＰ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒソフトウェアによって作成した、４０℃で１ヶ月間保持したエボロクマブ製剤のＳＥ−ＨＰＬＣデータのグラフである。図３Ｂは、試料を２５℃で３ヶ月間保持した以外は同様のデータである。
【図４】ＳＥ−ＨＰＬＣによる、４０℃で１ヶ月間保持した２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤のＨＭＷ種のパーセントの棒グラフである。製剤は、異なるｐＨにおいて、Ｎ−アセチルアルギニンの濃度及びアルギニンＨＣｌ濃度が異なる。
【図５−１】図５Ａ及び５Ｂは、表示した温度で表示した時間の間（５℃で６ヶ月間（図５Ａ）、２５℃で３ヶ月間（図５Ｂ））保持した、ｐＨ４．８及びｐＨ５．４の選択したエボロクマブ試料の、エボロクマブ・プロリン製剤対照と比較した、ＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラフである。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図５−２】図５Ｃは、表示した温度で表示した時間の間（４０℃で１ヶ月）保持した、ｐＨ４．８及びｐＨ５．４の選択したエボロクマブ試料の、エボロクマブ・プロリン製剤対照と比較した、ＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラフである。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図６】図６Ａ及び６Ｂは、表示した温度（５℃（図６Ａ）、２５℃（図６Ｂ））で保持した、示したエボロクマブ製剤に関して、経時的に発生するＨＭＷ種のパーセントのグラフである。２１０ｍｇ／ｍＬの被験エボロクマブ・Ｎ−アセチルアルギニン製剤を、１４０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ・プロリン製剤対照と比較する。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図７】図７Ａは、ＪＭＰ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒソフトウェアによって作成した、４０℃で１ヶ月間保持したエボロクマブ製剤のカチオン交換クロマトグラフィー−高圧液体クロマトグラフィー（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）データのグラフである。図７Ｂは、試料を２５℃で３ヶ月間保持した以外は同様のデータを示す。更なる詳細については当該の実施例を参照されたい。
【図８】ＣＥＸ−ＨＰＬＣによる、４０℃で１ヶ月間保持した２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤の酸性ピークのパーセントのグラフである。
【図９】図９Ａ及び９Ｂは、光遮蔽による液体中の粒子計測法（ｌｉｇｈｔ  ｏｂｓｃｕｒａｔｉｏｎ  ｌｉｑｕｉｄ  ｂｏｒｎｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ）によって測定した、５℃、２５℃、及び４０℃で３ヶ月間保持した種々のエボロクマブ製剤の、ミリリットル当たりの目視可能以下の粒子（ｓｕｂ−ｖｉｓｉｂｌｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）（１０μＭ以上（図９Ａ）、または２５μＭ以上（図９Ｂ））のグラフである。図９Ｃは、光遮蔽による液体中の粒子計測法によって測定した、５℃または２５℃で６ヶ月間保持した製剤の、目視可能以下の粒子（１０μＭまたは２５μＭ以上）のグラフである。
【図１０】０．７０未満のアスペクト比（ＡＲ）によってフィルタをかけたマイクロフローイメージング（Ｍｉｃｒｏ  Ｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｉｎｇ）（ＭＦＩ）分析によって測定した、種々のエボロクマブ製剤の目視可能以下の粒子のグラフである。
【図１１】示した温度で表示した時間の間保持した種々のエボロクマブ製剤の粘度をまとめたグラフであり、Ｔ０は初期の粘度値を表わす。
【図１２】互いにｐＨ及びバッファーが異なるエボロクマブ製剤の、３ヶ月までの経時的なｐＨ値を示すグラフ及び表である。試料は４０℃で保持した。
【図１３】図１３Ａ〜１３Ｃは、４℃（図１３Ａ）、２５℃（図１３Ｂ）、及び４０℃（図１３Ｃ）で３ヶ月までの間の、ｐＨ及びバッファーが異なる２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤の、ＨＭＷ種のパーセントに対するｐＨの影響を示すＳＥ−ＨＰＬＣデータのグラフである。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図１４】異なるｐＨのエボロクマブ製剤の、製剤直後のオリゴマーレベルのグラフである。
【図１５】４０℃で３ヶ月間保持した後の、ｐＨ及びバッファーが異なるエボロクマブ製剤の種々のサイズのタンパク質分子を示すクロマトグラムである。（ＬＭＷ＝低分子量種）。
【図１６】図１６Ａ〜１６Ｃは、ｐＨ及びバッファーが異なる２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤の、経時的なＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析のデータ（主ピークの％）のグラフである。図１６Ａは５℃で保持した試料の経時的な主ピークのパーセントを示し、図１６Ｂは２５℃で保持した試料の同種のデータを示し、図１６Ｃは４０℃で保持した試料の同種のデータを示す。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図１７】４０℃で保持した、ｐＨ及びバッファーが異なる２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤の、該製剤中の酸性種のパーセントを測定する、経時的なＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析のデータのグラフである。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図１８】２５℃で３ヶ月間保持した、ｐＨ及びバッファーが異なる２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤の、酸性ピーク種、及び塩基性ピーク種、及び主ピーク種を示す、ＣＥＸ−ＨＰＬＣデータのクロマトグラムである。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図１９】ｐＨ及びバッファーが異なる種々のエボロクマブ製剤のペプチドマッピングデータのクロマトグラムであり、試料は４０℃で１ヶ月間保持した。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図２０】４０℃で１ヶ月後の、ｐＨ及びバッファーが異なる製剤中のエボロクマブを分析したいくつかの実験の結果をまとめたグラフである。全ての試料は、１０ｍＭのバッファー１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。更なる詳細については当該の図及び実施例を参照されたい。
【図２１】図２１Ａ及び２１Ｂは、光遮蔽による液体中の粒子計測法によって測定した、５℃、２５℃、及び４０℃で２ヶ月間保持した、ｐＨ及びバッファーが異なる種々のエボロクマブ製剤の、ミリリットル当たりの目視可能以下の粒子（１０μＭ以上（図２１Ａ）、または２５μＭ以上（図２１Ｂ））のグラフである。図２１Ｃ及び２１Ｄは、５℃または２５℃で６ヶ月間保持したｐＨ及びバッファーが異なるエボロクマブ製剤の、目視可能以下の粒子（１０μＭ以上（図２１Ｃ）、２５μＭ以上（図２１Ｄ）のグラフである。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図２２】マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）によって確認した、ｐＨ及びバッファーが異なるエボロクマブ製剤の目視可能以下の粒子のグラフである。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図２３】２５℃で６ヶ月間保持した、ｐＨ及びバッファーが異なる２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤に対する還元キャピラリ電気泳動−ドデシル硫酸ナトリウム（ｒｅｄｕｃｅｄ  ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ−ｓｏｄｉｕｍ  ｄｏｄｅｃｙｌ  ｓｕｌｆａｔｅ）（ｒＣＥ−ＳＤＳ）分析の結果のグラフである。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図２４】ｐＨ及びバッファーが異なるエボロクマブ製剤の、粘度とｐＨとの間の相関性のグラフである。全ての試料は、１０ｍＭのバッファー１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図２５】図２５Ａ〜２５Ｃは、５℃（図２５Ａ）、２５℃（図２５Ａ）、及び４０℃（図２５Ｃ）で表示した期間保持した種々のエボロクマブ製剤の、ＳＥ−ＨＰＬＣによって測定したＨＭＷ種のパーセントのグラフである。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図２６】図２６Ａ〜２６Ｃは、５℃（図２６Ａ）、２５℃（図２６Ａ）、及び４０℃（図２６Ｃ）で表示した期間保持した種々のエボロクマブ製剤の、ＣＥＸ−ＨＰＬＣによって測定した酸性ピークのパーセントのグラフである。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図２７】還元キャピラリ電気泳動−ドデシル硫酸ナトリウム（ｒＣＥ−ＳＤＳ）による、５℃、２５℃、及び４０℃で３ヶ月間保持した種々のエボロクマブ製剤の、初期レベル（Ｔ０）と比較した、Ｐｒｅ−ＬＣ＋ＬＣ＋ＨＣ（ＬＣ＝軽鎖、ＨＣ＝重鎖）のパーセントのグラフである。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図２８】３種の異なる濃度のエボロクマブの種々のエボロクマブ製剤の粘度のグラフであり、粘度データは、表示した温度において、９０，０００ｓｅｃ−１までのせん断速度を用いて測定した。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図２９】３種のＮＡＲ製剤バッファー中におけるエボロクマブ製剤のＵＦ／ＤＦ流量データのグラフである。
【図３０】ＵＦ１／ＤＦ１における３５ｍｇ／ｍＬ及び７０ｍｇ／ｍＬ（ＵＦ／ＤＦ−７０及びＵＦ／ＤＦ−３５）でのエボロクマブのＵＦ／ＤＦプロセスにおけるＨＭＷ種生成のパーセンテージのグラフである。この図はまた、２種のエボロクマブの初期濃度に対する上記プロセスの各ステップにおけるエボロクマブのｍｇ／ｍＬで表した濃度も示す。
【図３１】ｐＨ５．２（図３１Ａ及び３１Ｂ）、ｐＨ５．４（図３１Ｃ及び３１Ｄ）、及びｐＨ５．６（図３１Ｅ及び３１Ｆ）のＮＡＲ含有製剤中のエボロクマブのＳＥ−ＨＰＬＣ（図３１Ａ、図３１Ｃ、及び図３１Ｅ）ならびにＣＥＸ−ＨＰＬＣ（図３１Ｂ、図３１Ｄ、及び図３１Ｆ）のグラフである。この図はまた、ＵＦ／ＤＦプロセスの間の種々のステップにおけるＨＭＷ種のパーセント、ＬＭＷ種のパーセント、及びエボロクマブパーセントも示す。
【図３２】２〜８℃及び室温での貯留液保持検討由来のエボロクマブ・ＮＡＲ  ＤＳ試料のＨＭＷ種生成のパーセントを示す図である。
【図３３】高温での貯留液保持検討由来のエボロクマブ・ＮＡＲ  ＯＣ試料のＨＭＷ種生成のパーセントを示す図である。
【図３４】種々の温度におけるエボロクマブ・ＮＡＲ製剤の粘度測定のグラフである。
【図３５−１】図３５Ａ及び３５Ｂは、実施例９において用いた、４℃（図３５Ａ）、及び２５℃（図３５Ｂ）での６ヶ月までのインキュベーション後の全ての被験製剤のＳＥ−ＨＰＬＣデータのグラフである。
【図３５−２】図３５Ｃは、実施例９において用いた、４０℃での６ヶ月までのインキュベーション後の全ての被験製剤のＳＥ−ＨＰＬＣデータのグラフである。図３５Ｄは、（図３５Ｃにおいて折れ線グラフとして示した）上記４０℃でのＳＥ−ＨＰＬＣデータを棒グラフとして示し、製剤間の凝集の比較をより識別可能にした図である。
【図３６−１】図３６Ａ及び３６Ｂは、実施例９において用いた被験製剤のＣＥＸ−ＨＰＬＣデータのグラフであり、４℃での３ヶ月までのインキュベーション後の酸性ピークの％及び塩基性ピークの％の経時的な変化を示す（図３６Ａ（酸性ピークの％）、図３６Ｂ（塩基性ピークの％））。
【図３６−２】図３６Ｃ及び３６Ｄは、実施例９において用いた被験製剤のＣＥＸ−ＨＰＬＣデータのグラフであり、２５℃での３ヶ月までのインキュベーション後の酸性ピークの％及び塩基性ピークの％の経時的な変化を示す（図３６Ｃ（酸性ピークの％）、図３６Ｄ（塩基性ピークの％））。
【図３６−３】図３６Ｅ及び３６Ｆは、実施例９において用いた被験製剤のＣＥＸ−ＨＰＬＣデータのグラフであり、４０℃での３ヶ月までのインキュベーション後の酸性ピークの％及び塩基性ピークの％の経時的な変化を示す（図３６Ｅ（酸性ピークの％）、図３６Ｆ（塩基性ピークの％））。
【図３７−１】図３７Ａ及び３７Ｂは、３０℃での３ヶ月までのインキュベーション後の、実施例９において用いた被験製剤の主ピークの％及びＬＭＷ種の％に関する経時的なｒＣＥ−ＳＤＳデータのグラフである（図３７Ａ（主ピークの％）、図３７Ｂ（ＬＭＷ種の％））。
【図３７−２】図３７Ｃ及び３７Ｄは、４０℃での３ヶ月までのインキュベーション後の、実施例９において用いた被験製剤の主ピークの％及びＬＭＷ種の％に関する経時的なｒＣＥ−ＳＤＳデータのグラフである（図３７Ｃ（主ピークの％）、図３７Ｂ（ＬＭＷ種の％））。
【図３８−１】図３８Ａ及び３８Ｂは、ＨＩＡＣを用いた光遮蔽粒子計測法による、４℃での３ヶ月までの間のインキュベーション後の実施例９において用いた被験製剤の、目視可能以下の粒子のデータのグラフである。図３８Ａ：ＨＩＡＣ≧１０μｍ、図３８Ｂ：ＨＩＡＣ≧２５μｍ。
【図３８−２】図３８Ｃ及び３８Ｄは、ＨＩＡＣを用いた光遮蔽粒子計測法による、４０℃での３ヶ月までの間のインキュベーション後の実施例９において用いた被験製剤の、目視可能以下の粒子のデータのグラフである。図３８Ｃ：ＨＩＡＣ≧１０μｍ、図３８Ｄ：ＨＩＡＣ≧２５μｍ。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本発明者らは、驚くべきことに、アルギニンの誘導体であるＮ−アセチルアルギニン（ＮＡＲ）が、未アセチル化アルギニンよりも、高濃度（１００ｍｇ／ｍＬを超える、例えば１４０ｍｇ／ｍＬ以上）のエボロクマブを含む医薬組成物の粘度を効率的に低減することを見出した。著しい面倒を伴わない製造及び患者による投与には５０ｃＰ以下の粘度の医薬組成物が適するが、それよりも高い粘度の製剤は（注射器に充填する際などの）取り扱い及び投与が困難である。未修飾のアルギニンが高タンパク質濃度の製剤の粘度を低減することは公知であるが、アルギニングルタミン酸塩は類似のプロリン含有エボロクマブ（２１０ｍｇ／ｍＬ）製剤の粘度を（１５９ｃＰから１０９ｃＰへと）５０ｃＰ低減するのみであり、目標の５０ｃＰ以下よりも大幅に高かった。更に、アルギニン一塩酸塩（Ａｒｇ  ＨＣｌ）の添加単独では、上記プロリン含有製剤の粘度が１５９ｃＰから７０ｃＰへと低下し、この目標を達成しなかった。それに反して、ＮＡＲは、上記粘度を５８ｃＰへと更に低減する驚くべき効果（プロリン製剤と比較して１０１ｃＰを超える低減）を達成し、（ＮＡＲの溶解性を向上させ、等張性製剤を実現するために）Ａｒｇ  ＨＣｌと組み合わせた場合は、５０ｃＰを下回る粘度、実際には、上記目標を７ｃＰ超える４３ｃＰの粘度を有する製剤が達成された。図２を参照されたい。ＮＡＲの溶解度は２３０ｍＭ未満に制限されることから、皮下投与用の等張性製剤を実現するためには別の添加剤が必要となる。アルギニンの塩化物塩が、グルタミン酸塩などの他のアルギニン塩よりもエボロクマブの粘度の低減により効果的であるとの予想外の発見が、製剤粘度の最小化に対して重要であった。
【００３６】
別の予想外の発見としては、ｐＨ依存性のエボロクマブの安定性ならびにＮＡＲ及びアルギニンＨＣｌの存在下での粘度効果があった。高温において５．０より低いｐＨでは、有意なエボロクマブの凝集の速度の増加が見られた。また、ｐＨが５．１から６．９に上昇すると、ｐＨ依存性の粘度の低下が認められた。
【００３７】
本発明者らは更に、２ステップ限外ろ過／透析ろ過（ＵＦ／ＤＦ）プロセスが、従来の１ステッププロセスと比較して、ＮＡＲ物質を顕著に削減しながら、かかるＮＡＲ含有高エボロクマブ濃度医薬製剤を調製することができることを見出した。ＮＡＲはＡｒｇ  ＨＣｌよりも約１０倍高価であることから、かかる方法は顕著なコスト削減を可能にする。
【００３８】
定義
上述の概括的な説明及び以下の詳細な説明は両方共に、単に例示的及び説明的なものであって、限定的なものではない。別段の明示がない限り、単数形の使用は複数形を包含する。別段の指定がない限り、「または」の使用は「及び／または」を意味する。用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態は限定するものではない。「要素（ｅｌｅｍｅｎｔ）」または「構成要素（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」などの用語は、別段の明示がない限り、１のユニットを含む要素（ｅｌｅｍｅｎｔｓ）及び構成要素（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）ならびに２以上の下位ユニットを含む要素及び構成要素を包含する。用語「部分（ｐｏｒｔｉｏｎ）」の使用は、部分（ｍｏｉｅｔｙ）の一部または当該の部分（ｍｏｉｅｔｙ）全体を含む場合がある。数値範囲、例えば１〜５に言及する場合、１、２、３、４、及び５などの全ての間にある値のみならず、１．５、２．２、３．４、及び４．１などのそれらの少数も明示的に包含される。
【００３９】
量を修飾する場合、「約」（例えば、「約」３ｍＭ）とは、当該の修飾される量の近傍での変動が生じてもよいことを意味する。これらの変動は、一般的な測定及び取り扱い操作、偶然の誤差、原料成分の純度などの様々な手段によって生じ得る。
【００４０】
「Ｎ−アセチルアルギニン」（ＮＡＲ）とは式１
【化１】
2018154616.tif 000003
の分子を意味する。
【００４１】
医薬組成物の文脈において、「添加剤」とは、本来的に原体（例えば物質）の一部ではなく、何らかの特定の目的（例えば、保存、粘度低減、安定化）を満たすために意図して添加される物質を意味する。
【００４２】
「類似体」とは、生物学的アッセイを用いて測定した、親配列の生物学的活性を依然として実質的に維持しながら、親配列と比較して挿入、欠失または置換を有するアミノ酸配列をいう。類似体としては、改変されたグリコシル化を伴うポリペプチド、グリコシル化を伴わないポリペプチドが挙げられる。製剤は、例えば水溶性ポリマー（例えばペグ化された）、放射性核種、または他の診断用の部分もしくは標的化のための部分もしくは治療用の部分を結合するために化学的に改変された、天然起源のまたは類似体のポリペプチドの誘導体を含んでいてもよい。
【００４３】
「抗体」とは、任意のイソ型の完全な免疫グロブリンをいい、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及び二重特異性抗体が挙げられる。完全な抗体は、概括的には少なくとも２の全長重鎖及び２の全長軽鎖を含むこととなる。抗体配列は単一の種のみに由来してもよく、または「キメラ」であってもよい。すなわち、当該抗体の異なる部分が２の異なる種に由来してもよい。「抗体」としてはまた、２の実質的に全長の重鎖及び２の実質的に全長の軽鎖を含む抗体であって、２の全長の軽鎖及び２の全長の重鎖からなる抗体と同一または類似の結合及び／または機能を保持するとの条件の上記抗体が挙げられる。例えば、重鎖及び／または軽鎖のＮ末端及び／またはＣ末端に１、２、３、４、または５のアミノ酸残基の置換、挿入または欠失を有する抗体が、当該抗体が、２の全長重鎖及び２の全長軽鎖を含む抗体と同一または類似の結合及び／または機能を保持するとの条件で、上記定義に含まれる。抗体としては、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、及び合成抗体が挙げられる。
【００４４】
一般的な抗体の構造ユニットは四量体を含む。かかる四量体のそれぞれは一般的には、同一である二対のポリペプチド鎖から構成され、それぞれの対が１つの全長「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの全長「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は一般的に、一般的には抗原認識を担う約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は一般的には、エフェクター機能を担うことができる定常領域を画定する。軽鎖は一般的には、カッパ及びラムダ軽鎖として分類される。重鎖は一般的にはミュウ、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、当該抗体のイソ型をそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥとして定義する。ＩｇＧ抗体にはいくつかのサブクラスがあり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４が挙げられる。ＩｇＭには、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含むサブクラスがある。ＩｇＡも同様に、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含むサブクラスに細分化される。全長の軽鎖及び重鎖内では、一般的には、上記可変領域と定常領域とが、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合され、重鎖も更に約１０のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、一般的に抗原結合部位を形成する。
【００４５】
上記可変領域は一般的には、３つの相補性決定領域すなわちＣＤＲとも呼ばれる超可変領域によって連結される、比較的保存されたフレームワーム領域（ＦＲ）の同一の一般構造を示す。各対の上記２つの鎖の上記ＣＤＲは、上記フレームワーク領域によって一列に並んでおり、特定のエピトープに結合することができる。軽鎖及び重鎖の可変領域は共に、一般的に、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の帰属は、一般的にＫａｂａｔ（Ｋａｂａｔ，  Ｗｕ，  Ｐｅｒｒｙ，  Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，  ＆  Ｆｏｅｌｌｅｒ，  １９９１；Ｋａｂａｔ，  Ｗｕ，  Ｒｅｉｄ−Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｐｅｒｒｙ，  ＆  Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，  １９８７）またはＣｈｏｔｈｉａ  （Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ，  １９８７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９）の定義に従う。
【００４６】
全長抗体に代えて、抗体の「フラグメント」または「抗原結合フラグメント」を用いることができる。「抗体フラグメント」とは、ＰＣＳＫ９などの標的タンパク質に対する特異的抗原結合を可能にするために十分である、免疫グロブリンの少なくとも１つのＣＤＲを含有する、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメントをいう。
【００４７】
抗体重鎖は抗体軽鎖の不存在下で抗原に結合することができる。抗体軽鎖は抗体重鎖の不存在下で抗原に結合することができる。抗体結合領域は抗体軽鎖の不存在下で抗原に結合することができる。抗体結合領域は抗体重鎖の不存在下で抗原に結合することができる。個々の可変領域は他の可変領域の不存在下で抗原に特異的に結合することができる。
【００４８】
上記重鎖の上記ＣＤＲ領域は、一般的にはＨ１、Ｈ２、及びＨ３と呼ばれ、アミノ末端からカルボキシ末端の方向に順次番号付けされる。上記軽鎖中の上記ＣＤＲ領域はＬ１、Ｌ２、及びＬ３と呼ばれ、アミノ末端からカルボキシ末端の方向に順次番号付けされる。
【００４９】
用語「軽鎖」は、全長軽鎖及び結合特異性を与えるのに十分な可変領域配列を有する軽鎖のフラグメントを包含する。全長軽鎖は、可変領域ドメイン、ＶＬ、及び定常領域ドメイン、ＣＬを含む。上記軽鎖の上記可変領域ドメインは当該ポリペプチドのアミノ末端にある。軽鎖としては、カッパ鎖及びラムダ鎖が挙げられる。
【００５０】
用語「重鎖」は、全長重鎖及び結合特異性を与えるのに十分な可変領域配列を有するそのフラグメントを包含する。全長重鎖は、可変領域ドメイン、ＶＨ、ならびに３種の定常領域ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。上記ＶＨドメインは当該ポリペプチドのアミノ末端にあり、上記ＣＨドメインはカルボキシ末端にあり、ＣＨ３は当該ポリペプチドのカルボキシ末端に最も近い。重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４サブタイプを含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２サブタイプを含む）、ＩｇＭならびにＩｇＥを含む任意のイソ型の重鎖であってよい。
【００５１】
それぞれの個々の免疫グロブリン鎖は、一般的にはいくつかの「免疫グロブリンドメイン」から構成され、それぞれの免疫グロブリンドメインは大まかに９０〜１１０のアミノ酸からなり、特徴的な折り畳みパターンを有する。これらのドメインは抗体ポリペプチドの基本的なユニットである。ヒトにおいて、上記ＩｇＡ及びＩｇＤイソ型は４の重鎖及び４の軽鎖を含有し、上記ＩｇＧ及びＩｇＥイソ型は２の重鎖及び２の軽鎖を含有し、上記ＩｇＭイソ型は５の重鎖及び５の軽鎖を含有する。重鎖Ｃ領域は一般的に、エフェクター機能を担うことができる１または複数のドメインを含む。重鎖定常領域ドメインの数は当該イソ型に依存する。例えば、ＩｇＧ重鎖は、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３として知られる３のＣ領域ドメインを含有する。特定の場合において、抗ＰＣＳＫ９抗体はＩｇＧ１またはＩｇＧ２またはＩｇＧ４イソ型である。
【００５２】
用語「可変領域」または「可変ドメイン」とは、一般的には上記重鎖中のアミノ酸末端のおよそ１２０〜１３０アミノ酸及び上記軽鎖中のアミノ末端の約１００〜１１０アミノ酸を含む、抗体の上記軽鎖及び／または重鎖の部分をいう。抗体の上記可変領域は、一般的には特定の抗体のその標的に対する特異性を決定する。
【００５３】
「抗原」とは、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド（例えば、抗体またはその結合フラグメントを含む）などの、選択的結合剤が結合することができる分子または分子の一部分を意味する。いくつかの場合において、上記抗原は、動物において、当該抗原に結合することができる抗体を産生させるために用いることができる。抗原は、種々のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと相互作用することができる１または複数のエピトープを保有することができる。
【００５４】
「アルギニン塩」とはアルギニンの塩を意味する。例としては、アルギニン一塩酸塩（Ａｒｇ  ＨＣｌ）、アルギニン酢酸塩（Ａｒｇ酢酸塩）及びアルギニングルタミン酸塩（Ａｒｇグルタミン酸塩）が挙げられる。
【００５５】
「バッファー」とは、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、ならびにそれらの塩を含む、薬学的に許容されるバファーを意味する。
【００５６】
同一のエピトープに対して競合する抗体の文脈において用いられる場合、「競合する」とは、被験抗体が、リファレンス抗体（例えば、リガンド、またはリファレンス抗体）の共通の抗原（例えば、ＰＣＳＫ９またはそのフラグメント）に対する特異的な結合を妨げるかまたは阻害する（例えば低減する）アッセイによって測定される、抗体間の競合を意味する。１つの抗体が別の抗体と競合するかを判定するために、多数の種類の競合結合アッセイ、例えば、種々の当技術分野で認知された試薬及び標識を用いた固相の直接的または間接的免疫アッセイを用いることができる。被験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を測定することによって競合的阻害が測定される。通常、被験抗体を過剰に存在させる。競合アッセイによって識別される抗体には、リファレンス抗体と同一のエピトープに結合する抗体及び、リファレンス抗体が結合するエピトープに、立体障害が生じるのに十分に近位の隣接するエピトープに結合する抗体が含まれる。通常、競合する抗体が過剰に存在する場合、該抗体はリファレンス抗体の共通の抗原に対する特異的な結合を、少なくとも４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％または７５％以上阻害する（例えば低減する）。いくつかの場合、結合は、少なくとも８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、または９７％以上阻害される。
【００５７】
「透析ろ過」、「ＤＦ」及び類似の用語は、限外ろ過膜（すなわち、異なる形状またはサイズを有する分子の間を区別することができる半透過性膜）を用いて、例えば、ポリペプチドもしくは他の生体分子を含有する溶液または混合物から、塩または溶媒を除去、置換する、またはそれらの濃度を低減することを意味する。
【００５８】
ろ過の文脈において、「透析ろ過容量（ｄｉａｖｏｌｕｍｅ）（ＤＶ）」とは、残留分の容量に対する単位操作に導入される透析ろ過バッファーの容量を意味する。
【００５９】
「エピトープ」は、抗体などのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが結合することができる任意の決定基を包含する。エピトープは抗原の一領域であって、当該抗原を標的とするＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが結合する上記抗原の領域であり、該抗原がタンパク質である場合には、上記領域は上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドに直接接触する特定のアミノ酸を含む。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基及びスルホニル基などの、化学的に活性な分子の表面基を含んでいてもよく、特定の三次元的な構造上の特徴及び特定の電荷の特徴を有していてもよい。特定の抗原に対して特異的な抗体は、タンパク質または他の高分子の複雑な混合物中において、標的抗原上のエピトープを優先的に認識する。
【００６０】
「賦形剤」とは、処方薬において希釈剤もしくはビヒクルとして、または薬が丸剤の形態で提供される場合に形状もしくは硬さを付与するために添加される、概ね不活性な物質、例えば、単シロップ、植物性ガム、芳香散、ハチミツ、及び種々のエリキシルを意味する。
【００６１】
「供給クロスフロー（Ｆｅｅｄ  Ｃｒｏｓｓ−ｆｌｏｗ）」とは、供給流速（Ｌ／時間）を膜面積（ｍ２）で除した値を意味する。
【００６２】
ろ過の文脈において、「流量（ｆｌｕｘ）（ＬＭＨ）」とは、時間当たり膜面積の平米当たりのリットル（Ｌ／ｈ／ｍ２）を意味する。
【００６３】
治療用ポリペプチドを含有する医薬製剤の文脈において、「高分子量種」または「ＨＭＷ種」とは、当技術分野で認知されたアッセイによって測定した、本来の治療用ポリペプチドよりも大きな治療用タンパク質を意味する。ＨＭＷ種には、治療用ポリペプチドのオリゴマー及び治療用ポリペプチドの凝集体が含まれる。
【００６４】
ろ過の文脈において、「ホールドアップ容積（ＨＵＶ）」とは、カートリッジの容積を含むＴＦＦシステムのライン容積を意味する。
【００６５】
「同一性」とは、当該配列をアラインし且つ比較することによって判定される、２以上のポリペプチド分子または２以上の核酸分子の間の関係をいう。「同一性パーセント」とは、比較される分子中のアミノ酸またはヌクレオチド間の同一な残基のパーセントを意味し、比較される分子の最小のもののサイズに基づいて算出される。これらの計算に関しては、アラインメント中のギャップ（存在する場合には）は、好ましくは、特定の数学的モデルまたはアルゴリズムによって対処される。これらの技法は当技術分野において周知である。
【００６６】
同一性パーセントの計算において、比較される配列は一般的に、当該配列間で最大の一致を最大化するようにアラインされる。
【００６７】
２のアミノ酸配列をアラインするための特定のアラインメントスキームによって、上記２の全長の配列間には顕著な相関性がないにもかかわらず、該２の配列の短い領域のみが一致する結果となる場合があり、このアラインされた小さな領域が非常に高い配列同一性を有することがある。したがって、選択されたアラインメント方法は、それが所望であるならば、目的とするポリペプチドの所望の数の連続したアミノ酸（例えば５０のアミノ酸）に及ぶアラインメントを生じさせるように適合させてもよい。
【００６８】
２０種の従来のアミノ酸の立体異性体（例えばＤ−アミノ酸）、α−，α−ジ置換アミノ酸などの非天然アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、及び他の非従来型アミノ酸もまたＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの好適な構成成分となり得る。非従来型アミノ酸の例としては、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、ε−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、σ−Ｎ−メチルアルギニン、ならびに他の類似のアミノ酸及びイミノ酸（例えば４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。
【００６９】
保存的アミノ酸置換は、一般的には生物学的系における合成によるのではなく化学的なペプチド合成によって組み込まれた、非天然起源のアミノ酸残基を包含することができる。これらはペプチド模倣体及び他の逆向きのまたは逆位の形態のアミノ酸残基を含む。
【００７０】
上記抗原結合タンパク質またはＰＣＳＫ９タンパク質を変化させるにあたって、アミノ酸の疎水性親水性指標（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｙ  ｉｎｄｅｘ）を考慮してもよい。各アミノ酸に、当該アミノ酸の疎水性及び電荷の特徴に基づいて疎水性親水性指標が指定されている。タンパク質に対する相互作用的な生物学的機能の付与において、上記アミノ酸の疎水性親水性指標が重要であることは当技術分野において理解されている。特定のアミノ酸を類似した疎水性親水性指標またはスコアを有する他のアミノ酸で置換することができ、類似の生物学的活性を依然として保持することができる。
【００７１】
類似のアミノ酸の置換は親水性に基づいて効果的に行うことができる。エピトープを、一次アミノ酸配列から親水性に基づいて識別することもできる。これらの領域は「エピトープのコア領域（ｅｐｉｔｏｐｉｃ  ｃｏｒｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ）」とも呼ばれる。
【００７２】
治療用ポリペプチドを含有する医薬製剤の文脈において、「低分子量種」または「ＬＭＷ種」とは、当技術分野で認知されたアッセイによって測定した、本来の治療用ポリペプチドよりも小さなポリペプチドを意味する。ＬＭＷ種は上記治療用ポリペプチドのフラグメントを包含する。
【００７３】
「抗ＰＣＳＫ９中和抗体」で用いられる「中和抗体」または「標的を中和する抗体」とは、標的に結合し、該標的の生物学的活性を妨げるまたは低減する抗体をいう。上記活性を妨げるまたは低減することは、当該標的上の結合部位を直接遮断することによって、または当該標的に結合して、間接的な手段を通じて結合する該標的の能力を変えること、例えば、該標的における構造上もしくはエネルギー上の変化などによってなし得る。抗体または免疫学的に機能するそのフラグメントの結合及び／または特異性の評価において、過剰な抗体が、当該リガンドに結合した結合相手の量を、（イン・ビトロ競合結合アッセイで測定して）少なくとも約１〜２０％、２０〜３０％、３０〜４０％、４０〜５０％、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、９７〜９８％、９８〜９９％またはそれ以上低減する場合に、抗体またはフラグメントは、標的のその結合相手に対する結合を実質的に阻害し得る。ＰＣＳＫ９抗体の場合には、かかる中和分子はＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに結合する能力を減じることができる。いくつかの場合において、上記中和能は競合アッセイを通じてキャラクタライズまたは記述される。いくつかの場合において、上記中和能はＩＣ５０またはＥＣ５０値の見地から記述される。いくつかの場合において、上記抗体は、ＰＣＳＫ９に結合し、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲに結合することを妨げることによって、またはＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに結合する能力を低減することによってＰＣＳＫ９を中和する。いくつかの場合において、上記抗体は、ＰＣＳＫ９に結合し、ＰＣＳＫ９は依然としてＬＤＬＲに結合することが可能ではあるが、ＰＣＳＫ９媒介性のＬＤＬＲの分解を妨げるまたは低減することによってＰＣＳＫ９を中和する。したがって、いくつかの例において、中和抗体は依然としてＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ結合の機会を与え得るが、それに続くＰＣＳＫ９が関与するＬＤＬＲの分解を妨げるまたは低減することができる。中和によってＬＤＬ−Ｃ（及び／またはアポＢ、Ｌｐ（ａ）などの他の脂質）が低下する。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、かかるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの変異体を含めて、抗体の種類を越えて、これらの同様の活性を有することができる。
【００７４】
「ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド」とは、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）タンパク質に結合するポリペプチドを意味する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９の低密度脂質受容体（ＬＤＬＲ）への結合を遮断する。かかる遮断ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であってよく、以下、すなわち、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むｍＡｂ（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｂ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するｍＡｂ、
ｃ．
ｉ．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
ｉｉ．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むｍＡｂ、
ｄ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するｍＡｂ、
ｅ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
ｉｉ．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するｍＡｂであって、
ｉｉｉ．上記ｍＡｂの上記エピトープが、ＬＤＬＲの上皮増殖因子様リピートＡ（ＥＧＦ−Ａ）ドメインが結合する部位と更に重複する上記ｍＡｂ、または
ｆ．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ｉ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｉｉ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むｍＡｂ
の１種であってよい。
【００７５】
上記のアミノ酸配列を表１に示し、表１はエボロクマブの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域も示す。エボロクマブ重鎖及び軽鎖の全長ヌクレオチド配列を表２に示し、表２にはエボロクマブＨＣＶＲ及びＬＣＶＲに対するヌクレオチド配列も示す。
【表１】
2018154616.tif 000004
2018154616.tif 000005
2018154616.tif 000006
【表２】
2018154616.tif 000007
2018154616.tif 000008
2018154616.tif 000009
【００７６】
エボロクマブはＣＡＳ登録番号１２５６９３７−２７−５である。
【００７７】
エボロクマブの変異体であって、そのＰＣＳＫ９結合及び阻害特性に影響がない上記変異体を表３に示す。
【表３】
2018154616.tif 000010
【００７８】
「医薬組成物」または「医薬製剤」等とは、生物学的に活性なタンパク質（例えばＰＣＳＫ９結合ポリペプチド）などの薬学的に活性な薬物の、通常は無菌の、それを必要とする対象に対する非経口投与（静脈内投与、筋内投与、皮下投与、噴霧投与、肺内投与、鼻腔内投与または髄腔内投与を含む）などの投与に適し、且つ薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、及びアメリカ食品医薬品局または他の外国の国家機関によって安全性が認証された他の添加剤のみを含む組成物をいう。医薬製剤には、液剤、例えば、直接投与することができる水溶液剤、及び投与の前に希釈剤を添加することによって溶液へと再構成することができる凍結乾燥粉末剤が含まれる。
【００７９】
「ポリペプチド」または「タンパク質」とは、天然起源の且つ非組換えの細胞によって産生されたタンパク質である、または遺伝子改変されたもしくは組換えの細胞によって産生された天然タンパク質のアミノ酸配列を有する高分子を意味し、天然タンパク質のアミノ酸配列を有する分子、または天然の配列の１もしくは複数のアミノ酸からの欠失、上記アミノ酸に対する付加、及び／または上記アミノ酸の置換を有する分子を含む。この用語はまた、１または複数のアミノ酸が相当する天然起源のアミノ酸及びポリマーの化学的な類似体であるアミノ酸ポリマーも包含する。「ポリペプチドフラグメント」とは、全長天然タンパク質と比較して、アミノ末端欠失、カルボキシル末端欠失、及び／または内部欠失を有するポリペプチドをいう。かかるフラグメントはまた、天然タンパク質と比較して、改変アミノ酸を含有していてもよい。フラグメントは約５〜５００のアミノ酸の長さであってよい。例えば、フラグメントは、少なくとも５、６、８、１０、１４、２０、５０、７０、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、または４５０のアミノ酸の長さであってよい。有用なポリペプチドフラグメントとしては、結合ドメインを含む、抗体の免疫学的機能を有するフラグメントが挙げられる。ＰＣＳＫ９結合抗体の場合、有用なフラグメントとしては、ＣＤＲ領域、重鎖及び／または軽鎖の可変ドメイン、抗体鎖の部分または２のＣＤＲを含むその可変領域が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００８０】
（症状、疾患、または障害の発症などを）「予防する」ことはある事象の可能性を排除することを必要とはしない。むしろ、化合物または方法の存在下で当該事象の発生の可能性が低減されていることを意味する。治療上の意味における予防は、対象が障害を発症することとなるリスクまたは他のリスク要因を低減する予防的処置及び適用を含む。
【００８１】
「安定な医薬製剤」、「安定な製剤」または「医薬製剤が安定である」とは、約−３０℃（もしくはそれよりも低温）〜約５℃または〜約４０℃で少なくとも１ヶ月間、または２ヶ月間、または３ヶ月間、または６ヶ月間、または１年間、または２年間、または５年間、またはそれ以上の間保管した場合に、対照製剤試料と比較して、示される凝集の増加が５％以下に制限され、及び／または生物学的活性の減損が５％以下に低減されたＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの医薬製剤をいう。製剤の安定性は、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）、カチオン交換ＨＰＬＣ（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）、光遮蔽による目視可能以下の粒子の検出法（ＨＩＡＣ）及び／または目視検査を含む多くの標準的なアッセイのいずれかを用いて、当業者が判定することができる。一般的に、貯蔵温度が高い程上記製剤の有効期間は短くなる。
【００８２】
劣化（ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）のアッセイ技法は、当該医薬製剤中のタンパク質の内容に応じて変わる。例示的な技法としては、例えば凝集を検出するためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）−ＨＰＬＣ、例えばタンパク質分解を検出するための逆相（ＲＰ−）ＨＰＬＣ、例えば当該タンパク質の電荷の変化を検出するためのイオン交換ＨＰＬＣ、タンパク質の立体構造上の変化を検出するための質量分析法、蛍光分光分析法、円二色性分光分析法、フーリエ変換赤外分光分析法（ＦＴ−ＩＲ）、及びラマン分光分析法が挙げられる。これらの技法の全てを、単独でまたは組み合わせて用いて、当該医薬製剤中のタンパク質の劣化をアッセイすることができ、且つその製剤の有効期間を判定することができる。本明細書に開示される医薬製剤においては、一般的に、２年間にわたって２〜８℃で貯蔵された場合に、劣化（例えば、分解、凝集またはアンフォールディング）の増加は約２％〜３％以下しか示さない。
【００８３】
「対象」または「患者」は同義で用いられ、ヒト及び非ヒト動物の対象、ならびに障害が正式に診断された対象、障害が正式には認知されていない対象、治療を受けている対象、及び障害を発症するリスクのある対象を包含する。
【００８４】
「界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）」とは、一般的に、湿潤剤、表面張力低下剤、洗剤、分散剤、乳化剤、及び四級アンモニウム防腐剤と呼ばれる物質を含む界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｅ−ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ）を意味する。
【００８５】
「タンジェント流ろ過」すなわち「ＴＦＦ」とは、溶液が、より低分子量の塩及び／または溶質が加圧下で通過する限外ろ過膜（すなわち、異なる形状またはサイズの分子の間を区別することができる半透過性膜）を接線方向に横切るプロセスを意味する。
【００８６】
「治療有効量」とは、対象において治療上の応答を生起することが判定されたＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの量をいう。かかる治療有効量は当業者によって容易に確認される。
【００８７】
ろ過の文脈において、「膜間圧（ＴＭＰ）」とは、当該膜の供給側からろ液側への平均の差圧を意味し、式（１）
【数１】
2018154616.tif 000011
によって表すことができる。
【００８８】
「治療する」こと及び「治療」を提供することは治療上の処置を提供することを含む。治療は障害の完全な治癒を必要とせず、症状または潜在的なリスク因子を低減する場合を包含する。
【００８９】
「限外ろ過（ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）」、「限外ろ過（ｕｌｔｒａｆｉｌｔｅｒｉｎｇ）、「ＵＦ」、及び類似の用語とは、異なる形状及びサイズの分子間を区別する半透過性膜を用いて、分子を異なる分子から分離する、または類似した、もしくは実質的に同一の分子を濃縮することを意味する。
【００９０】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの「変異体」とは、アミノ酸配列であって、１または複数のアミノ酸残基が、別のポリペプチド配列と比較して、上記アミノ酸配列中に挿入され、該配列から欠失し及び／または該配列中に置換された上記アミノ酸配列を意味する。変異体は融合タンパク質を包含する。
【００９１】
「粘度」とは、流体が流動することに対する抵抗を意味し、センチポイズ（ｃＰ）またはミリパスカル・秒（ｍＰａ・ｓ）の単位で測定することができ、ここで、一定のせん断速度において、１ｃＰ＝１ｍＰａ・ｓである。粘度は、粘度計、例えば、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（マサチューセッツ州ミドルボロウ）のダイアル読取式粘度計、またはｍ−ＶＲＯＣ（商標）レオメータもしくはＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューカッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータを用いることによって測定することができる。粘度は任意の他の方法を用いて及び当技術分野で公知の任意の他の単位で測定することができる（例えば、絶対粘度、動粘度または動力学粘度）。粘度を測定するために用いる方法の如何にかかわらず、一定のせん断速度での、対照製剤に対する添加剤を加えた製剤における粘度のパーセントの低下は略同一となる。
【００９２】
本組成物及び方法の構成要素
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド
エボロクマブを含むＰＣＳＫ９結合ポリペプチドに関しては詳細に報告されている（Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２）。
【００９３】
プロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン９型（ＰＣＳＫ９）は、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）タンパク質のレベルの調節に関与するセリンプロテアーゼである（Ｈｏｒｔｏｎ，  Ｃｏｈｅｎ，  ＆  Ｈｏｂｂｓ，  ２００７；Ｓｅｉｄａｈ  ＆  Ｐｒａｔ，  ２００７）。ＰＣＳＫ９は、セリンプロテアーゼのサブチリシン（Ｓ８）ファミリーのプロホルモン−プロタンパク質転換酵素である（Ｓｅｉｄａｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３）。表１に、配列番号３として例示的なヒトＰＣＳＫ９アミノ酸配列を示し、配列番号３はＰＣＳＫ９の（非プロセス型の）タンパク質前駆体の形態である。ＰＣＳＫ９タンパク質はまた、全長ＰＣＳＫ９タンパク質のフラグメントを包含してもよい。ＰＣＳＫ９タンパク質の構造は解明されている（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７；Ｐｉｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７）。ＰＣＳＫ９は、シグナル配列、Ｎ末端プロドメイン、サブチリシン様触媒ドメイン、及びＣ末端ドメインを含む。
【００９４】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、１または複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むポリペプチドである。いくつかのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドにおいて、ＣＤＲはフレームワーク領域中に埋め込まれており、該フレームワーク領域は、ＣＤＲ(複数可)の適正なＰＣＳＫ９結合特性が得られるようにＣＤＲ(複数可)を方向付けする。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９とＬＤＬＲの間の相互作用を妨害、遮断、低減または調節することができる。かかるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは「中和作用を有する」と表される。当該ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが中和作用を有し、ＰＣＳＫ９に結合したとしても、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲの間の結合はなおも起こり得る。例えば、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９上のＬＤＬＲ結合部位を遮断することなく、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する悪影響を妨げるまたは低減する。したがって、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲの間の結合を妨げることなく、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲを分解する能力を調節するまたは変化させることができる。かかるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは「非競合的中和作用を有する」と記述される場合がある。上記中和作用を有するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲに結合することを妨げる位置または様式でＰＣＳＫ９に結合する場合がある。かかるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは「競合的中和作用を有する」と記述される場合がある。ＰＣＳＫ９中和剤によって、対象においてより大きな量の遊離のＬＤＬＲが存在することになり、その結果より多いＬＤＬＲがＬＤＬに結合し、それによって当該対象におけるＬＤＬの量を低減する。その次には、これによって対象に存在する血清コレステロールの量が低下する。
【００９５】
いくつかのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９媒介性の活性（結合を含む）を阻害することができる。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはまた、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲの間の相互作用及びＰＣＳＫ９によって媒介される他の生理学的影響を阻害することもできる。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９に対する完全ヒト抗体などのヒト型であってよい。
【００９６】
いくつかのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９の触媒ドメインに結合することができる。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはまた、成熟形態のＰＣＳＫ９にも結合することができる。他の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９のプロドメインに結合することができる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは成熟形態のＰＣＳＫ９に選択的に結合することができる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲに結合できないまたは効率的に結合できないように、触媒ドメインに結合する。いくつかのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは触媒ドメインのＣ末端には結合しない。他の場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは触媒ドメインのＮ末端には結合しない。他の場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９タンパク質のＮ末端またはＣ末端には結合しない。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、抗ＰＣＳＫ９抗体が結合するエピトープのいずれか１に結合する。いくつかの場合において、このことは、候補抗体とエボロクマブなどの基準となる抗体の間の競合アッセイによって判定することができる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲと相互作用することを妨げるように、特定の立体構造の状態のＰＣＳＫ９に結合する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９のＶドメインに結合する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９のＶドメインに結合し、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲと結合することを妨げる（または低減する）。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９のＶドメインに結合し、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲへの結合を妨げない（または低減しない）が、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＬＤＬＲ上のＰＣＳＫ９によって媒介される害のある活性を妨げるまたは低減する。
【００９７】
いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、１または複数のＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６のＣＤＲ）を含む。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、（ａ）ポリペプチド構造ならびに（ｂ）上記ポリペプチド構造中に挿入された及び／または該構造に連結された１または複数のＣＤＲを含む。上記ポリペプチド構造は様々な異なる形態をとることができる。例えば、上記ポリペプチド構造は、天然起源の抗体のフレームワーク、そのフラグメントもしくは変異体であるか、またはそれらを含んでいてもよく、あるいは合成品であってもよい。
【００９８】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドのポリペプチド構造は、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（抗体模倣体）、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体融合物（場合により「抗体接合体」と呼ばれる）、及びそれぞれ各抗体の部分またはフラグメントを含む抗体であってよく、または上記抗体に由来する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは抗体のフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖ）である。
【００９９】
特定のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは特異的にまたは選択的にヒトＰＣＳＫ９に結合する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、特異的にまたは選択的に、配列番号３の残基１５３〜６９２を有するまたは該残基からなるヒトＰＣＳＫ９タンパク質に結合する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、シグナル配列の有無にかかわらず、ＰＣＳＫ９タンパク質の少なくともフラグメント及び／または全長ＰＣＳＫ９タンパク質に特異的に結合する。
【０１００】
いくつかの場合において、上記抗体は少なくとも１の可変重鎖及び１の可変軽鎖を含む。他の場合において、上記抗体は２の同一の軽鎖及び２の同一の重鎖を含有する。一例として、抗体またはＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、重鎖及び軽鎖、２の重鎖、または２の軽鎖を含んでいてもよい。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１の表１に記載する配列（配列番号４〜９）由来の１、２、及び／または３の重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲを含む（またはそれらからなる）。いくつかの場合において、６のＣＤＲの全て（軽鎖（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）由来のＣＤＲ１〜３及び重鎖（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）由来のＣＤＲ１〜３）が上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの一部である。いくつかの場合において、１、２、３、４、５またはそれ以上のＣＤＲが上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドに含まれる。いくつかの場合において、表１の配列中のＣＤＲ由来の１の重鎖ＣＤＲ及び１の軽鎖ＣＤＲが上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドに含まれる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドには更なるセクションが含まれる。
【０１０１】
上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、表２にエボロクマブに関して示すような核酸配列によってコードされていてもよい。
【０１０２】
いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、配列番号３のＰＣＳＫ９に少なくとも５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜９５、９５〜９９パーセント同一である、またはそれよりも大きいパーセントで同一であるＰＣＳＫ９の変異体に結合する（但し遮断はしない）。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはかかる変異体に結合する（但し遮断はしない）。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはかかるＰＣＳＫ９の変異体に結合し、該変異体がＬＤＬＲと相互作用することを妨げる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９の変異体に結合し、該変異体がＬＤＬＲと相互作用することを妨げる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９の変異体は、位置４７４、Ｅ６２０Ｇ、及び／またはＥ６７０Ｇにおける変異体などのヒト変異体である。いくつかの場合において、上記位置４７４のアミノ酸はバリンである。
【０１０３】
ヒト化ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド（例えば抗体）
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒト化抗体及び／またはその一部を含んでいてもよい。
【０１０４】
ヒト化抗体はヒトにおいて実質的に非免疫原性であり、実質的に、当該ヒト化抗体が由来する種とは別の種に由来する抗体と同様の、標的に対する親和性を有する。
【０１０５】
標的に対する結合親和性の向上を達成するように及び／または受容者における当該抗体の免疫原性を低減するように、抗体の改変を設計することができる。特定の場合において、ヒト化抗体が、該抗体のその同系の抗原に対する親和性を向上させるために、グリコシル化部位を除去するように改変される。「再構成（ｒｅｓｈａｐｉｎｇ）」、「超キメラ化（ｈｙｐｅｒｃｈｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）」、または「ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）／リサーフィシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」などの技法を用いてヒト化抗体を作製することができる。かかる技法は一般に、外来の残基の数を低減することによって抗体の免疫原性を低減するが、当該抗体を繰返し投与した後での抗イディオタイプ及び抗アロタイプの反応を防止することはない。他の免疫原性の低減方法は当技術分野において公知である。
【０１０６】
ＰＣＳＫ９に対する抗体の軽鎖及び重鎖可変領域のＣＤＲは、同一種または別の種由来のフレームワーク領域（ＦＲ）にグラフトすることができる。上記軽鎖及び重鎖可変領域のＣＤＲはコンセンサスヒトＦＲにグラフトすることができる。いくつかの場合において、ＰＣＳＫ９の重鎖または軽鎖に対する抗体のＦＲは、異なる重鎖または軽鎖由来のＦＲと置き換えることができる。抗体由来の上記グラフトされた可変領域は、ＰＣＳＫ９に対する抗体の定常領域とは異なる定常領域と共に用いることができる。上記グラフトされた可変領域は単鎖Ｆｖ抗体の一部であってよい。
【０１０７】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド変異体
有用な他の抗体としては、組み合わせまたは表１に示す可変重鎖及び可変軽鎖の下位部分によって形成された、上記に列挙したＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの変異体があり、これらの抗体は、それぞれが、表１の配列のアミノ酸配列（上記の全体の配列または該配列のサプパートのいずれか、例えば１または複数のＣＤＲ）に対する、少なくとも５０％、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、９７〜９９％、または９９％を超える同一性を有する可変軽鎖及び／または可変重鎖を含む。いくつかの場合において、かかる抗体は少なくとも１の重鎖及び１の軽鎖を含む一方、他の場合においては、上記変異体形態は２の同一の軽鎖及び２の同一の重鎖（またはそれらの下位部分）を含有する。
【０１０８】
特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド変異体は、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む可変領域を含む重鎖を含む。
【０１０９】
いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、配列番号４〜９の配列の少なくとも１におけるＣＤＲ由来の１または複数のＣＤＲに対して少なくとも９０％、９０〜９５％、及び／または９５〜９９％同一である配列を有する。いくつかの場合において、１、２、３、４、５、または６のＣＤＲ（それぞれが、上記配列に対して少なくとも９０％、９０〜９５％、及び／または９５〜９９％同一である）が存在する。
【０１１０】
特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、配列番号１１または１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む可変領域を含む軽鎖を含む。
【０１１１】
他の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、配列番号１０または１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む可変領域を含む重鎖を含む。
【０１１２】
当業者であれば、周知の技法を用いて、好適なＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの変異体を判定することができる。特定の場合において、当業者であれば、活性に対して重要ではないと考えられる領域を標的とすることによって活性を破壊することなく変化させることができる、分子の好適な領域を特定することができる。特定の場合において、類似するポリペプチドの中で保存される分子の残基及び部分を特定することができる。特定の場合において、生物学的活性または構造にとって重要である可能性のある領域でさえも、当該生物学的活性を破壊することなく、または当該ポリペプチド構造に悪影響を与えることなく、保存的アミノ酸置換に供することができる場合がある。
【０１１３】
また、当業者であれば、活性または構造にとって重要な、類似するポリペプチド中の残基を特定する構造−機能に関する研究を見直すことができる。かかる比較に鑑みて、類似するタンパク質中で活性または構造にとって重要であるアミノ酸残基に相当する、あるタンパク質中のアミノ酸残基の重要性を予測することができる。当業者であれば、かかる予測された重要なアミノ酸残基の、化学的に類似するアミノ酸による置換を選択することができる。
【０１１４】
当業者であれば、類似するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドにおける三次元構造及び該構造に関係するアミノ酸配列を分析することもできる。当業者であれば、かかる情報に鑑みて、抗体の、その三次元構造に関するアミノ酸残基のアラインメントを予測することができる。特定の場合において、当業者であれば、当該タンパク質の表面上に存在することが予測されるアミノ酸残基に対して、かかる残基は他の分子との重要な相互作用に関与する場合があるので、極端な変化を起こさないことを選択することができる。更に、当業者であれば、それぞれの所望のアミノ酸残基における単一のアミノ酸置換を含む試験的な変異体を生成させることができる。次いで、当技術分野で公知の活性アッセイを用いて上記変異体をスクリーニングすることができる。かかる変異体を用いて好適な変異体に関する情報を収集することができる。例えば、特定のアミノ酸残基に対する変化によって、活性の破壊、活性の望ましくない低下、または不適当な活性が生じるような場合には、かかる変化を有する変異体を避けることができる。換言すれば、当業者であれば、かかる慣用的な実験から収集される情報に基づいて、単独または他の変異との組み合わせのいずれかでの更なる置換を避けるべきアミノ酸を容易に判定することができる。
【０１１５】
特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド変異体は、グリコシル化部位の数及び／または種類が、親ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して変化しているグリコシル化変異体を包含する。特定の場合において、タンパク質変異体は当該の天然タンパク質よりも大きなまたは小さな数のＮ結合型グリコシル化部位を含む。更なる好ましい抗体変異体としては、親アミノ酸配列と比較して、１または複数のシステイン残基が欠失した、または別のアミノ酸（例えばセリン）で置換されたシステイン変異体が挙げられる。システイン変異体は、抗体が、不溶な封入体の単離後などに、生物学的に活性な立体構造へとリフォールディングされる必要がある場合に有用となることがあり得る。システイン変異体は概して天然タンパク質よりも少ないシステイン残基を有し、一般的に、対を形成していないシステインに起因する相互作用を最小化するために偶数個を有する。
【０１１６】
競合性ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド
エボロクマブと競合するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドまたはエボロクマブが結合するエピトープに結合してＰＣＳＫ９との特異的結合を形成する機能を有するフラグメントを用いることができる。かかるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドもまた、同一のエピトープＰＣＳＫ９結合ポリペプチドまたは重複するエピトープに結合することができる。エボロクマブと競合するすなわちエボロクマブと同一のエピトープに結合するＰＣＳＫ９結合ポリペプチド及びフラグメントは、類似する機能特性を示す。したがって、具体的な例として、提供される上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドとしては、エボロクマブの６のＣＤＲの全て（配列番号４〜９）、もしくはそれぞれ配列番号２及び１の２の軽鎖及び２の重鎖を有する抗体またはＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと競合するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが挙げられる。
【０１１７】
例示的エピトープ
抗ＰＣＳＫ９抗体が結合する配列番号３（ヒトＰＣＳＫ９ポリペプチド）のエピトープを示す。エボロクマブ（及び配列番号１４のＨＣＶＲ及び配列番号１５のＬＣＶＲを有するエボロクマブ変異体）の場合、上記エピトープは、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８である。
【０１１８】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド（例えば抗体）の調製
抗体の固有の特性、例えば抗体のその標的に対する親和性を操作するためには特定の方策が用いられる。かかる方策としては、抗体をコードするポリヌクレオチド分子の部位特異的なまたはランダムな突然変異誘発を用いて抗体変異体を生成させることが挙げられる。特定の場合において、かかる生成の後には、所望の変化、例えば親和性の増加または減少を示す抗体変異体に対するスクリーニングが行われる。
【０１１９】
突然変異誘発の方策において標的となるアミノ酸残基は当該ＣＤＲまたはＦＲ中の残基であってよい。
【０１２０】
特定の場合において、ランダムなまたは部位特異的な突然変異誘発を、体細胞親和性成熟過程の間に突然変異しやすい領域に相当する部位である、当該ＣＤＲ中の超突然変異部位に制限することによって、より小さな且つより効果的にスクリーニングされた抗体変異体のライブラリが作製される。
【０１２１】
抗体は細胞株中で発現させることができる。特定の抗体をコードする配列（配列番号１２及び１３のポリヌクレオチドなどの、配列番号１及び２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドなど）を用いて、好適な哺乳動物宿主細胞を形質転換することができる。形質転換は、任意の公知の宿主細胞中へのポリヌクレオチドの導入方法によって行うことができる。用いる形質転換手順は形質転換される宿主に依存する。哺乳動物細胞中への異種ポリヌクレオチドの導入方法は当技術分野において周知であり、該方法としては、デキストラン媒介トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介トランスフェクション、プロトプラスト融合、電気穿孔、リポソーム中へのポリヌクレオチド（複数可）の封入、及び核中へのＤＮＡの直接微量注入が挙げられる。
【０１２２】
発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は当技術分野において周知であり、多くの不死化細胞株がＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＴＣ）から入手可能である。該細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベービーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えばＨｅｐ  Ｇ２）、ヒト腎上皮２９３細胞、及び多数の他の細胞株が挙げられる。
【０１２３】
特定の場合において、抗体は２１Ｂ１２ハイブリドーマ細胞株（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）によって産生される。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、約１ｎＭ未満、例えば、１０００ｐＭ〜１００ｐＭ、１００ｐＭ〜１０ｐＭ、１０ｐＭ〜１ｐＭ、及び／または１ｐＭ〜０．１ｐＭまたはそれ未満の解離定数（ＫＤ）でＰＣＳＫ９に結合する。
【０１２４】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＭイソ型の少なくとも１種の免疫グロブリン分子を含んでいてもよい。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトカッパ軽鎖及び／またはヒト重鎖を含む。特定の場合において、上記重鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＭイソ型の重鎖である。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは哺乳動物細胞中での発現のためにクローン化されている。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＭイソ型の定常領域のいずれか以外の定常領域を含む。
【０１２５】
特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトラムダ軽鎖及びヒトＩｇＧ２重鎖を含む。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトラムダ軽鎖及びヒトＩｇＧ４重鎖を含む。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトラムダ軽鎖及びヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＭ重鎖を含む。他の実施形態において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトカッパ軽鎖及びヒトＩｇＧ２重鎖を含む。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトカッパ軽鎖及びヒトＩｇＧ４重鎖を含む。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトカッパ軽鎖及びヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＭ重鎖を含む。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＩｇＧ２イソ型に対する定常領域でもなく、ＩｇＧ４イソ型に対する定常領域でもない定常領域に結合した抗体の可変領域を含む。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは哺乳動物細胞中での発現のためにクローン化されている。
【０１２６】
エボロクマブの場合、上記抗体はＩｇＧ２−ラムダヒトモノクローナル抗体；ラムダ軽鎖テトラキスジスルフィドを有するガンマ２重鎖−ジスルフィドである。エボロクマブはＡｓｎ−２９１及びＡｓｎ−２９１’’においてグリコシル化されており、且つ２２’−９０’、２２’’−９０’’、２２’−９６’、２２’’−９６’’、１２９−２１４’、１２９’’−２１４’’、１３７’−１９６’、１３７’’−１９６’’、１４２−１９８、１４２’’−１９８’’、２１７−２１７’、２１８−２１８’、２２１−２２１’’、２２４−２２４’’、２５５−３１５、２５５’’−３１５’’、３６１−４１９、及び３６１’’−４１９’’残基間にジスルフィド架橋を有する。
【０１２７】
特定の場合において、エボロクマブの上記重鎖及び軽鎖に対する、または配列番号１４及び１５のＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを有する抗体の重鎖及び軽鎖に対する保存的改変によって、ハイブリドーマ株２１Ｂ１２由来の抗体の機能的及び化学的特性と類似の上記特性を有する、ＰＣＳＫ９に対する抗体を生成させることができる。対照的に、上記重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列における置換であって、（ａ）置換の領域における分子骨格の構造、例えば、シートもしくはヘリックスの立体構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩の維持に対する該置換の影響が顕著に異なる上記置換を選択することによって、ＰＣＳＫ９に対する抗体の機能的及び化学的特性のかなりの改変を実現することができる。
【０１２８】
例えば、保存的アミノ酸置換は、当該位置におけるアミノ酸残基の極性または電荷に対して殆どまたは全く影響がないような、天然アミノ酸残基の非天然残基による置換を含んでいてもよい。
【０１２９】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは多くの場合、１または複数のポリペプチドを含む。種々の発現ベクター／宿主系のいずれかを用いて、１もしくは複数のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの構成要素を含むポリペプチドまたはＰＣＳＫ９結合ポリペプチドそれ自体をコードするポリヌクレオチド分子を発現させることができる。かかる系としては、組換えバクテリオファージ、プラスミド、またはコスミドＤＮＡ発現ベクターによって形質転換した細菌などの微生物；酵母発現ベクターによって形質転換した酵母；ウイルス発現ベクター（例えばバキュロウイルス）に感染させた昆虫細胞；ウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ、タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）によってトランスフェクトした、または細菌発現ベクター（例えば、ＴｉまたはｐＢＲ３２２プラスミド）によって形質転換した植物細胞系；または動物細胞系が挙げられる。
【０１３０】
１もしくは複数のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの構成要素を含むポリペプチドまたはＰＣＳＫ９結合ポリペプチドそれ自体を種々の発現系から精製することができ、かかる技法は当業者には周知である。
【０１３１】
医薬製剤構成成分
いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬製剤は、２種以上の異なるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む。特定の実施形態において、医薬製剤は２種以上のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は２種以上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、上記種々の抗原結合タンパク質は、ＰＣＳＫ９に対する結合に関して互いに競合することはない。いくつかの実施形態において、本医薬製剤はエボロクマブを含む。
【０１３２】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを、半減期を延長するビヒクルと組み合わせてもよい。かかるビヒクルはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、グリコーゲン（例えば上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドのグリコシル化）、及びデキストランを含む。
【０１３３】
許容される製剤構成成分は、好ましくは、用いる投薬量及び濃度において受容者に対して非毒性である。医薬製剤は、例えば、当該組成物のｐＨ、モル浸透圧濃度、粘度、透明性、色相、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解もしくは放出、吸収または浸透速度を改変、維持あるいは保つための薬剤を含んでいてもよい。
【０１３４】
例えば、好適な製剤物質としては、アミノ酸（プロリン、アルギニン、リシン、メチオニン、タウリン、グリシン、グルタミン、またはアスパラギンなど）；抗菌剤；抗酸化剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウムなど）；バッファー（ホウ酸塩、炭酸水素塩、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム（「ＮａＯＡＣ」）、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、Ｔｒｉｓバッファー、クエン酸塩、リン酸塩バッファー、リン酸緩衝生理的食塩水（すなわちＰＢＳバッファー）または他の有機酸）；増量剤（マンニトールまたはグリシンなど）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリンまたはヒドロキシ−β−シクロデキストリンなど）；充填剤；単糖類；二糖類；及び他の炭水化物（グルコース、スクロース、フルクトース、ラクトース、マンノース、トレハロース、またはデキストリンなど）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなど）;着色料、香味料及び希釈剤;乳化剤;親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）;低分子量ポリペプチド;塩形成対イオン（ナトリウムなど）;防腐剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸または過酸化水素など）;溶媒（グリセリン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなど）;糖アルコール（マンニトールまたはソルビトールなど）;懸濁剤;界面活性剤または湿潤剤（プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなど）;安定性向上剤（スクロースまたはソルビトールなど）;浸透圧増強剤（アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトールソルビトール）;送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤及び／または医薬アジュバントが挙げられる。
【０１３５】
一態様において、本医薬製剤は高濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む。特定の実施形態において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は、約７０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬの範囲、例えば、約７０ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２１０ｍｇ／ｍＬ、約２２０ｍｇ／ｍＬ、約２３０ｍｇ／ｍＬ、約２４０ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、または約２６０ｍｇ／ｍＬである。いくつかのの実施形態において、エボロクマブの濃度は、約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２１０ｍｇ／ｍＬの範囲、例えば、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２１０ｍｇ／ｍＬ、約２２０ｍｇ／ｍＬ、約２３０ｍｇ／ｍＬ、約２４０ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、または約２６０ｍｇ／ｍＬである。
【０１３６】
別の態様において、本医薬製剤は、例えば酢酸ナトリウム、リン酸塩、リン酸緩衝生理的食塩水（「ＰＢＳ」）、ヒスチジン、及び／または約ｐＨ７．０〜８．５のＴｒｉｓバッファーなどの少なくとも１種のバッファー剤を含む。上記バッファーは生理学的に適したｐＨを維持する働きをする。また、上記バッファーは当該医薬製剤の等張性及び化学的安定性を向上させることができる。特定の実施形態において、上記緩衝剤は約５ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲、例えば約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、または約１００ｎＭの緩衝剤である。特定の実施形態において、上記緩衝剤はＮａＯＡＣである。特定の実施形態において、上記緩衝剤はＮａＯＡＣであり、約１０ｍＭの濃度で存在する。他の実施形態において、上記バッファーはグルタミン酸ナトリウムである。特定の実施形態において、上記緩衝剤はグルタミン酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する。更に他の実施形態において、上記緩衝剤はリン酸塩バッファーである。特定の実施形態において、上記リン酸塩バッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。なおも更なる実施形態において、上記緩衝剤はヒスチジンである。いくつかのこれらの実施形態において、上記ヒスチジンバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。本医薬製剤の有用なｐＨ値としては、約４〜約７、または約４．８〜約６．９、または約５．０〜約５．５、または約５、または約５．４が挙げられる。
【０１３７】
特定の実施形態において、本医薬製剤は、２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲の、例えば、約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、または約４００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有し、等張性である。重量モル浸透圧濃度は流体量に対する溶質の比の尺度である。換言すると、重量モル浸透圧濃度は溶液のキログラム当たりの分子及びイオン（または分子）の数である。特定の実施形態において、上記重量モル浸透圧濃度は３００ｍＯｓｍ／ｋｇである。重量モル浸透圧濃度は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ２０２０  Ｍｕｌｔｉ−ｓａｍｐｌｅ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ（マサチューセッツ州ノーウッド）などの浸透圧計によって測定することができる。上記Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ２０２０  Ｍｕｌｔｉ−ｓａｍｐｌｅ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒは凝固点降下法を用いることによって重量モル浸透圧濃度を測定する。溶液中の浸透圧調節物質の濃度が高い程、該溶液が凝固する温度が低下する。重量モル浸透圧濃度はまた、直線外挿法などの当技術分野で公知の任意の他の方法を用いて任意の他の単位で測定してもよい。他の実施形態において、本医薬製剤は、赤血球などのヒト血液細胞と等張である。
【０１３８】
更に別の態様において、本医薬製剤は少なくとも１種の界面活性剤ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）を含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は、当該製剤の容積当たりの重量（ｗ／ｖ）で約０．０００１％〜約１０％の範囲、例えば、約０．０００１％、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０５％、約０．１％、約０．５％、約１％、約５％、または約１０％の濃度の界面活性剤を含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０００１％〜約１％  ｗ／ｖの範囲の濃度のポリソルベート８０を含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０１％  ｗ／ｖの濃度のポリソルベート８０を含む。他の実施形態において、本製剤は当該製剤の約０．０００１％〜約１％  ｗ／ｖの範囲の濃度のプルロニック（登録商標）Ｆ−６８を含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０１％  ｗ／ｖの濃度のプルロニック（登録商標）Ｆ−６８を含む。更に他の実施形態において、本製剤は当該製剤の約０．０００１％〜約１％  ｗ／ｖの範囲の濃度のビタミンＥ  ＴＰＧＳを含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０１％  ｗ／ｖの濃度のビタミンＥ  ＴＰＧＳを含む。
【０１３９】
本医薬製剤は、（ソルビトール、マンニトール、グリセリン及びズルシトールを含む）ポリヒドロキシ炭化水素及び／または（スクロース、ラクトース、マルトース及びトレハロースを含む）二糖及び／または（製剤の種類を越えて、アルギニン一塩酸塩などのアルギニン塩、及びＮ−アセチルアルギニンなどのアルギニンのアセチル誘導体を含む、ならびに、例えば、プロリン、リシン、メチオニン、及びタウリンを含んでいてもよい）アミノ酸及び／またはベンジルアルコールなどの少なくとも１種の安定剤を含んでいてもよく、上記ポリヒドロキシ炭化水素及び／または二糖及び／またはアミノ酸及び／またはベンジルアルコールの合計が当該製剤の約０．５％〜約１０％  ｗ／ｖである。本医薬製剤は、例えば、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ、例えば約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば約９０ｍＭ〜約１２０ｍＭ、例えば１２０ｍＭのプロリンを含んでいてもよい。
【０１４０】
一態様において、本医薬製剤は、室温（すなわち２５℃）で測定して約８０センチポイズ（ｃＰ）未満のレベルの粘度を有する。特定の実施形態において、本医薬製剤は、約７０センチポイズ（ｃＰ）、約６０センチポイズ（ｃＰ）、約５０センチポイズ（ｃＰ）、約４０センチポイズ（ｃＰ）、約３０センチポイズ（ｃＰ）、約２５センチポイズ（ｃＰ）、約２０センチポイズ（ｃＰ）、約１８センチポイズ（ｃＰ）、約１５センチポイズ（ｃＰ）、約１２センチポイズ（ｃＰ）、約１０センチポイズ（ｃＰ）、約８センチポイズ（ｃＰ）、約６センチポイズ（ｃＰ）、約４センチポイズ（ｃＰ）、約２センチポイズ（ｃＰ）、または約１センチポイズ（ｃＰ）未満のレベルの粘度を有する。
【０１４１】
一態様において、本医薬製剤は、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの経時的な生物物理学的または生化学的特性を調べるアッセイなどの、少なくとも１種の安定性アッセイによって測定して安定である。医薬組成物の安定性はＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いて測定することができる。ＳＥＣ−ＨＰＬＣはタンパク質をそれらの流体力学的容積の違いに基づいて分離する。より大きな流体力学的なタンパク質の容積をもつ分子は、より小さな容積をもつ分子よりもより速く溶離する。ＳＥＣ−ＨＰＬＣの場合、安定な医薬製剤が示すＨＭＷ種の増加は対照試料に比較して約５％以下であり、例えば、ＨＭＷ種の増加は対照試料に比較して、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、約０．５％以下である。
【０１４２】
あるいはまたは上記に加えて、安定性はカチオン交換ＨＰＬＣ（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）を用いて測定することができる。ＣＥＸ−ＨＰＬＣはタンパク質をそれらの表面電荷の違いに基づいて分離する。設定したｐＨにおいて、荷電したイソ型の抗ＰＣＳＫ９  ＡＢＰをカチオン交換カラム上で分離し、塩勾配を用いて溶離する。溶離物を紫外光（ＵＶ）の吸光度によって監視する。各イソ型のピークを全ピーク面積に対するパーセントとして測定することによって、荷電したイソ型の分布を評価する。ＣＥＸ−ＨＰＬＣの場合、安定な医薬製剤が示す主たるイソ型ピークの減少は対照試料に比較して約５％以下であり、例えば、主たるイソ型ピークの減少は対照試料に比較して約３％〜約５％、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、約０．５％以下である。
【０１４３】
更に、あるいはまたは上記に加えて、製剤の安定性は光遮蔽による目視可能以下の粒子の検出法（ＨＩＡＣ）を用いて測定することができる。光遮蔽センサー（ＨＩＡＣ／Ｒｏｙｃｏ  ＨＲＬＤ−１５０または相当品）を備え、液体試料供給装置を有する電子的な液体中の粒子計測システム（ＨＩＡＣ／Ｒｏｙｃｏ  ９７０３（Ｈａｃｈ  Ｃｏｍｐａｎｙ、コロラド州ラブランド）または相当品）は、所与の被験試料中の粒子の数及び粒子のサイズの範囲を定量する。液体中の粒子が光源と検出器との間を通過すると、該粒子は検出器に当たる光線を弱める、すなわち「遮蔽する」。粒子の濃度が上記センサーの正常範囲内である場合には、これらの粒子は一つ一つ検出される。それぞれの粒子が検出区域を通過すると受光器上の入射光が減少し、受光器の電圧出力が瞬間的に低下する。上記電圧の変化が電気パルスとして記録され、該パルスは該装置によって存在する粒子の数へと変換される。上記方法は非特異的であり、粒子をそれらの由来とは無関係に測定する。監視される粒子径は一般的に１０μｍ及び２５μｍである。ＨＩＡＣの場合、安定した医薬製剤が示す１０μｍの粒子は、対照試料と比較して容器（または単位）当たり６０００以下、例えば、１０μｍの粒子は、対照試料と比較して容器（または単位）当たり５０００以下、４０００以下、３０００以下、２０００以下、１０００以下である。他の場合において、安定した医薬製剤が示す２５μｍの粒子は、対照試料と比較して容器（または単位）当たり６００以下、例えば、２５μｍの粒子は、対照試料と比較して容器（または単位）当たり５００以下、４００以下、３００以下、２００以下、１００以下、５０以下である。
【０１４４】
医薬製剤の安定性はまた、目視評価を用いて評価してもよい。目視評価は試料の目視可能な物理的特性を記述するために用いられる定性的方法である。試料を、評価する特性（例えば、色相、透明性、粒子または異物の存在）に応じた、検査ブースの黒及び／または白の背景に対して目視する。試料を、オパール光を発する標準試料及び色相標準試料と対比させて目視することもある。目視評価の場合、安定した医薬製剤は、対照試料と比較して、色相、透明性、粒子または異物の存在の有意な変化を示さない。
【０１４５】
例示的医薬製剤
例示的なＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの医薬製剤を表４に示す。いくつかの該製剤においては範囲で示し、下位の例（例えば１．１）においては具体的な例を示す。
【表４】
2018154616.tif 000012
2018154616.tif 000013
【０１４６】
治療への適用
エボロクマブなどのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは種々の治療への適用に用いることができる。例えば、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、高コレステロール血症などのコレステロール関連障害（血清コレステロール関連障害）などの、ＰＣＳＫ９に関連する疾病の治療に有用である。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９活性に関連する影響、症状、及び／または病理学の治療に有用な場合がある。
【０１４７】
コレステロール（血清コレステロールを含む）、ＬＤＬ、ＬＤＬＲ、ＰＣＳＫ９、ＶＬＤＬ−Ｃ、アポタンパク質Ｂ（「アポＢ」）、リポタンパク質Ａ（「Ｌｐ（ａ）」）、トリグリセリド、ＨＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃ、及び総コレステロールレベルを含む分子または分子の群のレベルの上昇に関連する、または該上昇の影響を受ける可能性のある障害に、本明細書に開示するエボロクマブ医薬組成物を用いる方法によって対処して、対象におけるかかる障害を治療する及び／または予防する及び／またはかかる障害のリスクを低減することができる。上記開示するエボロクマブ組成物を用いて、これらの分子または分子の群の量を低減するなど、これらの分子または分子の群のレベルを調節することができる。例えば、開示するエボロクマブ組成物を、これらの分子または分子の群の量を異常に高いレベルからまたは正常なレベルからでも減少させる方法に用いることができる、すなわち、コレステロール（血清コレステロールを含む）、ＬＤＬ、ＬＤＬＲ、ＰＣＳＫ９、ＶＬＤＬ−Ｃ、アポＢ、Ｌｐ（ａ）、トリグリセリド、ＨＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃ、及び総コレステロールレベルを低減することができる。
【０１４８】
「コレステロール関連障害」（「血清コレステロール関連障害」を含む）としては、以下、すなわち、家族性高コレステロール血症、非家族性高コレステロール血症、高脂血症、心臓疾患、代謝症候群、糖尿病、冠状動脈性心臓疾患、脳卒中、心血管疾患、アルツハイマー病、ならびに、例えば、総血清コレステロールの上昇、ＬＤＬの上昇、トリグリセリドの上昇、ＶＬＤＬの上昇、及び／または低いＨＤＬによって示すことができる全般的な脂質異常症のいずれかの１または複数が挙げられる。原発性及び続発性脂質異常症のいくつかの非限定的な例としては、代謝症候群、真性糖尿病、家族性複合型高脂血症、家族性高トリグリセリド血症、ヘテロ接合性高コレステロール血症、ホモ接合性高コレステロール血症、家族性欠陥アポリポタンパクＢ−１００血症を含む家族性高コレステロール血症；多遺伝子性高コレステロール血症；レムナント除去不全疾患（ｒｅｍｎａｎｔ  ｒｅｍｏｖａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）、肝性リパーゼ欠乏症；以下、すなわち、食傷、甲状腺機能低下、エストロゲン及びプロゲスチン治療薬、β遮断薬、及びサイアザイド系利尿剤を含む薬物のいずれかに続発する脂質異常症；ネフローゼ症候群、慢性腎不全、クッシング症候群、原発性胆汁性肝硬変、糖原病、肝癌、胆汁うっ滞、先端巨大症、インスリノーマ、成長ホルモン単独欠損症、及びアルコール誘発性高トリグリセリド血症が挙げられる。上記開示するエボロクマブ組成物を用いて、心血管起因の死、非心血管起因または全ての原因による死、冠状動脈性心臓疾患、冠状動脈疾患、末梢性動脈疾患、脳卒中（虚血性及び出血性）、狭心症、または脳血管性疾患及び急性冠動脈症候群、心筋梗塞ならびに不安定性狭心症などのアテローム硬化性疾患を治療する及び／または予防する及び／または該疾患のリスクを低減することもできる。上記開示するエボロクマブ組成物は、致死性及び非致死性の心臓発作、致死性及び非致死性の脳卒中、特定の種類の心臓手術、心不全による入院、心臓疾患を有する対象の胸痛、及び／または、過去の心臓発作、過去の心臓手術、及び／または動脈の閉塞の証拠がある胸痛などの既往の心臓疾患に起因する心血管事象及び／または移植関連の血管性疾患のリスクの低減においても有用である場合がある。いくつかの場合において、上記開示するエボロクマブ組成物は、高いＣＲＰまたはｈｓＣＲＰに起因する心血管のリスクの防止または低減方法に用いてもよい。いくつかの実施形態において、上記ＡＢＰ及び方法を用いて、心血管事象の再発のリスクを低減することができる。
【０１４９】
概括的に、スタチンを用いることによって対処可能（治療可能または予防可能のいずれか）な疾患または障害もまた、上記開示するエボロクマブ組成物の適用によって恩恵を受けることができる。更に、コレステロール合成またはＬＤＬＲ発現の増加を妨げることによって恩恵を受けることができる障害または疾患も、上記開示するエボロクマブ組成物を用いて治療することができる。また、上記開示するエボロクマブ組成物の使用は糖尿病の治療に特に有用である場合がある。冠状動脈性心臓疾患に対するリスク因子は糖尿病だけではなく、インスリンはＰＣＳＫ９の発現を増加させる。すなわち、糖尿病の人々は高い血漿脂質レベル（高いＰＣＳＫ９レベルと関連する場合がある）を有しており、これらのレベルを低下させることによって恩恵を受ける場合がある。
【０１５０】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが治療への適用に用いられる場合、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９の１または複数の生物学的活性を阻害、妨害、または調節することができる。例えば、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合することができ、及び／またはヒトＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を、少なくとも約２０％〜４０％、４０〜６０％、６０〜８０％、８０〜８５％、またはそれ以上（例えば、イン・ビトロ競合結合アッセイにおいて測定することによって）、実質的に阻害することができる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、１０−１３Ｍ未満のＫｄ（より強固に結合している）を有する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＬＤＬＲのＰＣＳＫ９に対する結合に関して、１μＭ未満、１０００ｎＭ〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜１０ｎＭ、１０ｎＭ〜１ｎＭ、１０００ｐＭ〜５００ｐＭ、５００ｐＭ〜２００ｐＭ、２００ｐＭ未満、２００ｐＭ〜１５０ｐＭ、２００ｐＭ〜１００ｐＭ、１００ｐＭ〜１０ｐＭ、１０ｐＭ〜１ｐＭのＩＣ５０を有する。
【０１５１】
医薬組成物は併用療法剤で、すなわち他の薬剤と組み合わせて投与されてもよい。この併用療法剤はＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを少なくとも１種の抗コレステロール剤との組み合わせで含んでいてもよい。薬剤は、イン・ビトロで合成的に調製した化学的製剤、抗体、抗原結合領域、ならびにそれらの組み合わせ及び接合体を含む。特定の実施形態において、薬剤は、アゴニスト、アンタゴニスト、アロステリック調節剤、または毒素として作用し得る。特定の実施形態において、薬剤はその標的を阻害または刺激（例えば、受容体もしく酵素の活性化または阻害）するように作用し、それによってＬＤＬＲの発現の増加を促進するかまたは血清コレステロールレベルを低下させることができる。
【０１５２】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、コレステロール低下（血清及び／または総コレステロール）剤による治療の前に、該治療と同時に、及び該治療の後に投与してもよい。例えば、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、高コレステロール血症、心臓疾患、糖尿病、及び／または任意のコレステロール関連障害の発症を予防または軽減するために予防的に投与してもよい。更に、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、既に存在する高コレステロール血症の治療のために投与してもよい。いくつかの場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの投与は、当該障害及び／または当該障害に関連する症状の発症を遅延させることができる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、上記コレステロール関連障害またはそれらのサブセットのいずれか１種のいずれの症状もない対象に提供される。
【０１５３】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、高コレステロール血症などの種々のコレステロール関連障害を治療するための特定の治療薬と共に用いてもよい。当該の病態及び所望の治療のレベルを考慮して、２種、３種、またはそれ以上の種類の薬剤を投与してもよい。かかる薬剤は同一の製剤中に含ませることによって一緒に提供してもよい。あるいは、かかる薬剤は、別個に製剤し、且つ、所望であれば、治療キット中に包含させることによって一緒に提供してもよい。別の例において、かかる薬剤は別個に提供してもよい。
【０１５４】
投薬量及び投与レジメン
エボロクマブなどのｍＡｂなどのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの患者に投与される量は治療有効量である。ＰＣＳＫ９結合タンパク質の一般的な投薬量は約０．１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまでまたはそれ以上の範囲であってよい。特定の場合において、上記投薬量は０．１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで、または１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで、または５μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで、または１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、または２ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、または２ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドであってよい。
【０１５５】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの量（すなわち用量）は、少なくとも約１０ｍｇ〜約１４００ｍｇ；または約１４ｍｇ〜約１２００ｍｇ；または約１４ｍｇ〜約１０００ｍｇ；または約１４ｍｇ〜約８００ｍｇ；または約１４ｍｇ〜約７００ｍｇ；または約１４ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２０ｍｇ〜約４８０ｍｇまで；または約７０ｍｇから約４８０ｍｇまで；または約８０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約９０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１００ｍｇ〜約４８０ｍｇ、または約１０５ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１１０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１１５ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１２０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１２５ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１３０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１３５ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１４０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１４５ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１５０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１６０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１７０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１８０ｍｇ〜約４８０ｍｇまたは約１９０ｍｇ〜約４８０ｍｇまたは約２００ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２１０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２２０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２３０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２４０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２５０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２６０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２７０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２８０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２９０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３００ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３１０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３２０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３３０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３４０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３５０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３６０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３７０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３８０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３９０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４００ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４１０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４２０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４３０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４４０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４５０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４６０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４７０ｍｇ〜約４８０ｍｇの範囲のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドであってよい。
【０１５６】
投与の頻度は、当該製剤中のＰＣＳＫ９結合ポリペプチド及び／または更なる治療薬のいずれかの薬物動態学的パラメータを考慮に入れることとなる。臨床医は、所望の効果が得られる投薬量に達するまで本製剤を投与してもよい。本製剤は、単回投与として、または経時的に２回、３回、４回もしくはそれ以上の投与（同一量のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含有していてもまたはそうでなくてもよい）として、あるいは移植デバイスまたはカテーテルを介した注入として投与してもよい。本製剤はまた、針及び注射器によって皮下または静脈内送達してもよい。皮下送達に関しては、ペン型送達システム、ならびにボディーインジェクター及びオートインジェクター送達デバイスが、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬製剤を送達してもよい。
【０１５７】
特定の場合において、少なくとも約１０ｍｇ、または約１４ｍｇまで、または約２０ｍｇまで、または約３５ｍｇまで、または約４０ｍｇまで、または約４５ｍｇまで、または約５０ｍｇまで、または約７０ｍｇまでの用量のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、それを必要とする患者に週に１回（ＱＷ）投与される。
【０１５８】
他の場合において、少なくとも約７０ｍｇ、または約１００ｍｇまで、または約１０５ｍｇまで、または約１１０ｍｇまで、または約１１５ｍｇまで、または約１２０ｍｇまで、または約１４０ｍｇまで、または約１６０ｍｇまで、または約２００ｍｇまで、または約２５０ｍｇまで、または約２８０ｍｇまで、または約３００ｍｇまで、または約３５０ｍｇまで、または約４００ｍｇまで、または約４２０ｍｇまでの用量のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、それを必要とする患者に隔週に１回（すなわち２週に１回、「Ｑ２Ｗ」）投与される。
【０１５９】
特定の他の場合において、少なくとも約２５０ｍｇ、または約２８０ｍｇまで、または約３００ｍｇまで、または約３５０ｍｇまで、または約４００ｍｇまで、または約４２０ｍｇまで、または約４５０ｍｇまで、または約４８０ｍｇまでの用量のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、それを必要とする患者に４週に１回（「Ｑ４Ｗ」）（すなわちカレンダーの１月に１回）投与される。
【０１６０】
例えば、エボロクマブを２１０ｍｇの用量としてＱ２Ｗで投与してもよい。あるいは、エボロクマブを４２０ｍｇの用量としてＱ４Ｗで投与してもよい。治療する疾病の状況によっては、これらの２種の薬物用量を毎週投与してもよい。
【０１６１】
いくつかの場合において、血清ＬＤＬコレステロールレベルが、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比較して少なくとも約１５％低下する。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルが、少なくとも約２０％、または約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、更にそれ以上低下する。
【０１６２】
貯蔵及びキット
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む製剤は、少なくとも１種の更なる治療薬の有無にかかわらず、貯蔵の目的で、所望の純度を有する選択した製剤を任意選択の製剤用薬剤と混合することによって、凍結乾燥したケーキまたは水溶液の形態で調製してもよい。更に、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む製剤は、少なくとも１種の更なる治療薬の有無にかかわらず、適宜の賦形剤を用いて凍結乾燥体として製剤してもよい。
【０１６３】
本医薬製剤は、製剤後に、溶液剤、懸濁液剤、ゲル剤、乳化液剤、固形剤、または脱水したもしくは凍結乾燥した粉体として無菌バイアル中で貯蔵してもよい。かかる製剤は、そのまま使用できる形態または投与の前に再構成する（例えば凍結乾燥された）形態のいずれかで貯蔵してもよい。いくつかの例では、本ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド製剤は、適宜の貯蔵用バッグ（例えば、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ（ドイツ国ゲッティンゲン）製）などの容器またはポリカーボネート製カーボイ中で貯蔵してもよい。本医薬製剤はまた、製剤後に、そのまま使用できる形態の溶液剤または懸濁液剤として、予め充填した注射器（２．２５ｍＬのＰＦＳなどのＰＦＳ）、ならびにガラスバイアル（５ｃｃのガラスバイアルなど）中で貯蔵してもよい。
【０１６４】
特定の実施形態において、単回投与ユニットを作製するためのキットが提供される。特定の実施形態において、上記キットは、乾燥したタンパク質を有する第１の容器及び水性製剤を有する第２の容器が収納されていてもよい。特定の実施形態において、単一のチャンバ及び複数のチャンバをもつ、予め充填された注射器（例えば、液体注射器及び凍結乾燥粉体注射器）が収納されたキットが挙げられる。
【０１６５】
Ｎ−アセチルアルギニンを含むＰＣＳＫ９結合ポリペプチド製剤の限外ろ過／透析ろ過
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、開示するＵＦ／ＤＦプロセスにおいて約２１０ｇ／Ｌに製剤してもよい。例えば、開示する方法において、７０ｇ／Ｌ（または３５ｇ／Ｌ）の第１の透析ろ過（ＤＦ１）濃縮液を３回透析ろ過し、１４０ｇ／Ｌに濃縮する。次いで、１４０ｇ／Ｌの第２の透析ろ過（ＤＦ２）濃縮液を透析ろ過し、２６０ｇ／Ｌに濃縮する。次いで製剤を２１０ｇ／Ｌの最終濃度にフラッシングして、濃縮貯留液をシステムから回収する。
【０１６６】
開示する方法では、実施例において、約７０ｍｇ／ｍＬ及び約３５ｍｇ／ｍＬの第１の限外ろ過（ＵＦ１）濃縮液が、最終的な原体（ＤＳ）において、ＨＭＷ（％）への有意な影響を与えないことが示される。更に、開示する方法において、透析ろ過を確実に完了させるために必要な、ＤＦ段階でのＤＦの透析ろ過容量は僅かに７である。
【０１６７】
開示するＵＦ／ＤＦプロセスを表５及び６にまとめる。
【表５】
2018154616.tif 000014
【表６】
2018154616.tif 000015
2018154616.tif 000016
2018154616.tif 000017
2018154616.tif 000018
【０１６８】
したがって、本明細書では、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドなどの、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第１の濃縮ステップと、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップと、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第２の濃縮ステップと、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップと、
ｅ．第３の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第３の濃縮ステップと
を含む上記方法が開示される。
【０１６９】
第３の濃縮ステップの前に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が、約２５℃〜約３７℃に、例えば、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６℃、及び約３７℃に高められてもよい。また、第１の溶液交換ステップが、少なくとも３回の第２の溶液の透析ろ過を用いて実現されてもよく、いくつかの場合においては、更なる透析ろ過、例えば、４回、５回、または６回の透析ろ過が用いられてもよい。第２の溶液交換ステップが、少なくとも４回の第３の溶液の透析ろ過を用いて実現されてもよいが、５回、６回、または７回の透析ろ過を含む更なる透析ろ過が用いられてもよい。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの最終濃度は、約１１ｍｇ／ｍＬ未満、例えば、１ｍｇ未満、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは約１１ｍｇ／ｍＬであってよい。また、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は、約３倍〜約７倍、例えば、約３、４、５、６倍、または約７倍高められてもよい。例えば、上記ポリペプチドの上記高められた濃度は、約３５ｍｇ／ｍＬ〜約７０ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上、例えば、約３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９ｍｇ／ｍＬ、もしくは約７０ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上である。第２の濃縮ステップにおいて、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は、第１の濃縮ステップから約２〜４倍（例えば、約２倍、３倍、または約４倍）、例えば、約７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２５０ｍｇ／ｍＬ、または約３００ｍｇ／ｍＬに高められる。第３の濃縮ステップにおいて、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は、第２の濃縮ステップから約１．５〜約２倍、例えば、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、２００、２５０ｍｇ／ｍＬ、または約３００ｍｇ／ｍＬ、例えば約２６０ｍｇ／ｍＬに高められてもよい。したがって、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、上記治療用ポリペプチドの初期の濃度よりも少なくとも約１９〜２０倍濃縮された、例えば約２１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を有していてもよい。上記濃縮ステップは流加限外ろ過を含んでいてもよく、更に、第２の溶液と第３の溶液とは同一であってもよい。
【０１７０】
Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２または第３の溶液（例えば「ＮＡＲ溶液」）は、アルギニン塩及びバッファーを含んでいてもよく、例えば、上記Ｎ−アセチルアルギニンは、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭ、例えば約２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５ｍＭ、または約２３０ｍＭの濃度で存在し、上記アルギニン塩はＡｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩であり、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば、約２５、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５ｍＭ、または約１５０ｍＭの濃度で存在し、上記バッファーは、約５ｍＭ〜約３０ｍＭ、例えば、約５、１０、１５、２０、２５ｍＭ、または約３０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムバッファーである。他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭ〜約７０ｍＭ（例えば、約６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９ｍＭ、または約７０ｍＭ）の濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。例えば、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１４０ｍＭの濃度で存在していてもよく、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更なる下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１５５ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に別の例において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。
【０１７１】
更に、上記組成物（上記ＮＡＲ溶液を含む）はプロリンを更に含んでいてもよく、該プロリンは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば、約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５ｍＭ、または約１５０ｍＭの濃度で存在する。第２または第３の溶液のｐＨは、約４．８〜約６．９、例えば、約４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、または約６．９、例えば５．３、５．４、または５．５であってよい。第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ａ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下、例えば、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０μｍ、または約５００μｍであるメッシュ開口と、
ｂ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下（例えば、約３２、３３、３４、３５％、または約３６％）である開口面積と、
ｃ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上、例えば、約１６．２、１６、１５．８、１５．６、１５．４、１５．２、１５、１４．８、１４．６、１４．４、１４．２、１４、１３．８、１３．６、１３．４、１３．２、１３、１２．８、１２．６、１２．４ｎ／ｃｍまたは約１２．２ｎ／ｃｍのメッシュ数と、
ｄ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下、例えば、約２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０μｍ、または約３４０μｍである線径と、
ｅ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下、例えば、約１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、または１８０ｇ／ｍ２である坪量と、
ｆ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｇ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｈ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられてもよい。
【０１７２】
更に、濃縮された後に、第３の溶液に、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）などの界面活性剤が添加されてもよい。いくつかの場合において、上記界面活性剤は、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８）またはＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）である。上記界面活性剤は、当該製剤の容積当たりの重量（ｗ／ｖ）で約０．０００１％〜約１０％の範囲、例えば、当該製剤の約０．０００１％、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０５％、約０．１％、約０．５％、約１％、約５％、または約１０％の界面活性剤（ｗ／ｖ）の濃度であってよい。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０００１％〜約１％  ｗ／ｖの範囲の濃度のポリソルベート８０を含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０１％  ｗ／ｖの濃度のポリソルベート８０を含む。他の実施形態において、本製剤は当該製剤の約０．０００１％〜約１％  ｗ／ｖの範囲の濃度のプルロニック（登録商標）Ｆ−６８を含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０１％  ｗ／ｖの濃度のプルロニック（登録商標）Ｆ−６８を含む。更に他の実施形態において、本製剤は当該製剤の約０．０００１％〜約１％  ｗ／ｖの範囲の濃度のビタミンＥ  ＴＰＧＳを含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０１％  ｗ／ｖの濃度のビタミンＥ  ＴＰＧＳを含む。
【０１７３】
以下の実施例の節は単に例として記載されるものであり、本開示または特許請求の範囲を何ら限定するために示されるものではない。
【実施例】
【０１７４】
粘度測定は、別段の特記がない限り、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータを用いて行った。
【０１７５】
実施例１  −  実験の設計（ＤＯＥ）の検討；Ｎ−アセチルアルギニンを含有するエボロクマブ製剤の最適化
Ｎ−アセチルアルギニンを含有するエボロクマブ製剤を最適化するために実験の設計（ＤＯＥ）の検討を開始した。１１種の製剤を、粘度、予め充填した注射器の押出力、安定性、ｐＨ、及び重量モル浸透圧濃度について試験した。初期の製剤パラメータに対するデータを表７に示す。
【表７】
2018154616.tif 000019
【０１７６】
図１に示す１ヶ月間４０℃のデータに基づいて、酢酸塩濃度を最小化した。当該製剤を等張性とするためにプロリン濃度を１２０ｍＭに増加させた。粘度の低減と１７０ｍＭ、４℃で見られるＮ−アセチルアルギニンの結晶化との間でバランスをとるために、Ｎ−アセチルアルギニン（１５５ｍＭ）を選択した。データはまた、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０；ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、プルロニック（登録商標）Ｆ−６８（ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体）、及びビタミンＥ  ＴＰＧＳ（Ｄ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート）の間での界面活性剤の違いよって、粘度または安定性における有意な差異がないことも示した。
【０１７７】
これらのデータに基づいて、１０ｍＭの酢酸塩、１５５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、１２０ｍＭのプロリン、０．０１％のポリソルベート８０、ｐＨ５．４が、高濃度（例えば１９０〜２１０ｍｇ／ｍＬ）のエボロクマブの低粘度製剤にとって好適であることを見出した。表８に提示するデータが、この製剤が等張性であり且つ低粘度であることを示した。
【表８】
2018154616.tif 000020
【０１７８】
実施例２  −  添加剤濃度、ｐＨ、及びバッファーの影響を評価するためのＤＯＥ検討
実施例２〜４は、凝集、脱アミド化、及び他の安定性を示す因子のいずれをも最小化しつつ、可能な限り粘度を低減するために最適化した製剤を対象としている。
【０１７９】
Ｎ−アセチルアルギニン（ＮＡＲ）を、添加剤スクリーニング検討での粘度低減におけるその優れた効果に基づいて選択した（例えば実施例１を参照のこと）。ＮＡＲの濃度は２〜８℃におけるその溶解度によって制限された。１７５ｍＭの高濃度においてＮＡＲの結晶化が見られなかった安定性の検討に基づいて、透析ろ過（ＤＦ）バッファー中での１５５ｍＭのＮＡＲ濃度を選択した。最も低粘度の等張性薬物製品製剤を実現するため且つＮＡＲの溶解性を向上させるために、アルギニンＨＣｌ（７０ｍＭ）をＤＦバッファーに添加した。エボロクマブの凝集及び脱アミド化を最小化するために、５．４の製剤のｐＨを選択した。バッファー及び界面活性剤（酢酸塩／ポリソルベート８０）がエボロクマブ製剤の粘度及び安定性に最小の影響を示した。
【０１８０】
ＮＡＲ／アルギニンＨＣｌ製剤中でのエボロクマブの安定性を検討するために、３種の主たる検討を実施した。該検討は以下のとおりであった
１．添加剤濃度、ｐＨ、及びバッファー（酢酸塩対クルタミン酸塩）の影響を評価するためのＤＯＥ検討(実施例２)。
２．粘度／安定性に対するｐＨ（５．１〜６．９）の影響を評価するために設計した広範なｐＨの検討(実施例３)。
３．薬物製品製造の単位操作の影響を含む、上位の候補製剤の安定性を評価するためのスケールダウンした検討(実施例４)。
【０１８１】
結果
≦５０ｃＰの粘度を目標として設定した。製剤粘度のスクリーニングによって、ＮＡＲが粘度を低減するための最も有効な添加剤であることが示された。但し、ＮＡＲの溶解性が限定されることから、等張性製剤を実現するため、且つ５０ｃＰ以下の粘度を有する２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤の目標を満たすために、ＮＡＲとアルギニンＨＣｌとの組み合わせを用いた。スクリーニングの間に評価した、選択した製剤の概要を図２に示す。
【０１８２】
ＤＯＥ検討は、２１０ｍｇ／ｍＬにおけるエボロクマブの安定性及び粘度に対するＮＡＲ／アルギニンＨＣｌ濃度、ｐＨ、及びバッファー種の影響を評価するために設計した。各試料の製剤変数を表９に示す。検討の設計には、１５５〜１７５ｍＭのＮＡＲ濃度、５０〜１００ｍＭのアルギニンＨＣｌ濃度、及び４．８〜５．４のｐＨが含まれていた。上記検討には、１０ｍＭでの酢酸塩バッファーとクルタミン酸塩バッファーとの間の比較も含まれていた。上記検討には、ＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料と同一のロットの出発物質から調製してＰＦＳ中に充填した、１４０ｍｇ／ｍＬのプロリン製剤対照が含まれていた。試料を０．２μｍのＰＶＤＦ製フィルタを用いて滅菌ろ過し、約２．０ｍＬの充填容積でガラス製ＰＦＳ中に手作業で充填した。
【表９】
2018154616.tif 000021
【０１８３】
表１０では、ｐＨ、濃度、重量モル浸透圧濃度、及び粘度に関するデータを一覧表にしている。ｐＨ値は全ての試料について目標に近いことを観測した。重量モル浸透圧濃度は２５６〜３９２ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲に及んでいた。粘度は、より高いｐＨにおいてより低い粘度の矛盾した傾向を示しているように思われた。
【表１０】
2018154616.tif 000022
【０１８４】
ＪＭＰ統計的解析ソフトウェア（ＳＡＳ；ノースカロライナ州ケーリー；図３Ａ及び３Ｂ）を用いたサイズ排除高圧液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）データの解析によって、ｐＨ及びアルギニンＨＣｌ濃度の、４０℃で１ヶ月間における、主ピークのパーセントの低下に対する有意な影響が明らかになった（図３Ａ）。より低いｐＨ及びより高いアルギニンＨＣｌ濃度によって、主として凝集ピークの増加及び、それよりも程度は低いが、オリゴマーピークの増加に起因して、より大きな主ピークの低下が生じた。両ピークを併せて高分子量（ＨＭＷ）種と分類した。図４は、４０℃で１ヶ月の時点に対する、ｐＨ及びアルギニンＨＣｌのＨＭＷ種のパーセントに対する影響を示す。ｐＨ５．４の試料に比較してｐＨ４．８の試料において、有意により高いレベルのＨＭＷ種のパーセントが見られた。また、ｐＨ５．４に比較してｐＨ４．８において、より高いアルギニンＨＣｌ濃度がより高いＨＭＷ種のパーセントにつながるという影響が有意により顕著であった。
【０１８５】
図５Ａ〜５Ｃは、それぞれ、５℃で６ヶ月間、２５℃で３ヶ月間、及び４０℃で１ヶ月での、１４０ｍｇ／ｍＬのプロリン対照と比較した、ｐＨ４．８及びｐＨ５．４の選択した試料のＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。上記クロマトグラムは、ｐＨ５．４と比較して、ｐＨ４．８において凝集のレベルの増加の傾向を示している。上記クロマトグラムはまた、１４０ｍｇ／ｍＬのプロリン対照と比較して、２１０ｍｇ／ｍＬのＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料に関してより速い凝集の速度が観測されたにもかかわらず、２１０ｍｇ／ｍＬのＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料に関する分解プロファイルが同等であったことを示している。
【０１８６】
この実験で検討した全ての製剤は、４０℃において見られたｐＨ及びＡｒｇ  ＨＣｌ濃度に依存する違いにもかかわらず、５℃で６ヶ月まで及び２５℃で１ヶ月までに関しては同等のＨＭＷ種のパーセントを示した（図６Ａ、６Ｂ）。
【０１８７】
液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）分析による一般的なペプチドマッピングを、選択した試料に対して実施した。ペプチドマップＨＰＬＣ−紫外（ＵＶ）クロマトグラムを、プロリン  エボロクマブ製剤対照及びエボロクマブ標準試料と目視で比較した。ＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料において、対照と比較して新たなピークは認められなかった（図８）。また、質量分析によって検出される化学的変性の分析によって、ＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料と対照との間に有意な変化は示されなかった。相対的な定量を実施し、Ｎ５５及びＮ３３の脱アミド化ならびにＭ２４６及びＭ４２２の酸化を表１１に示す。ｐＨ５．４のＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料において、ｐＨ５．１のＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料及びｐＨ５．０のプロリン試料と比較して、僅かに高いレベルのＮ５５の脱アミド化が見られ、これはＣＥＸによって見られる酸性ピークの増加と整合する。Ｎ３３（相補性決定領域（ＣＤＲ）中の潜在的な脱アミド化部位）は、評価したｐＨ範囲及び条件においては有意な脱アミド化の増加を示してはいないように思われた。ＡＳＣでのインキュベーション後において、１４０ｍｇ／ｍＬのプロリン対照試料のＭ２４６及びＭ４２２の両方の酸化速度は、２１０ｍｇ／ｍＬのＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料と比較して高かった。
【表１１】
2018154616.tif 000023
【０１８８】
光遮蔽による液体中の粒子計測法及びマイクロフローイメージング（ＭＦＩ）による目視可能以下の粒子は、検討した製剤変数と相関した有意な傾向を示さなかった（図９Ａ〜９Ｃ及び図１０）。目視可能以下の粒子の数は、２１０ｍｇ／ｍＬのＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料と１４０ｍｇ／ｍＬのプロリン対照試料との間で同等であった。
【０１８９】
図１１は、時間ゼロ、３ヶ月、及び６ヶ月の時点における本検討の粘度データをまとめたものである。上記データは、全ての製剤に関して、５℃及び２５℃で６ヶ月までの間は粘度が安定なままであったことを示している。４０℃の試料はｐＨに依存する粘度の増加を示し、これはＳＥ−ＨＰＬＣによって見られた４０℃におけるＨＭＷ種のパーセントの増加（図４）と相関していた。
【０１９０】
所見
略等張性の製剤（約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ）が本検討の範囲の中央に位置する製剤（１０ｍＭのバッファー、１６５ｍＭのＮＡＲ、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ）において実現された。
【０１９１】
ｐＨが上昇すると、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いて観測される加速貯蔵後の凝集のパーセントが減少するのと同時に、カチオン交換によって検出されるより高いパーセントの酸性種を伴う脱アミド化が増加した。
【０１９２】
アルギニンＨＣｌ濃度は、ｐＨ４．８において安定性により大きな影響を与え（２５℃及び４０℃において凝集を増加させ）、その影響はｐＨ５．４で最小化した。
【０１９３】
酢酸塩及びグルタミン酸塩の安定性及び粘度に対する影響は同等である。
【０１９４】
ＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ対プロリン対照に関して、５℃及び２５℃で３ヶ月までならびに４０℃で１ヶ月までの間、選択した試料のペプチドマッピングによって、新たなピークは認められなかった。
【０１９５】
５℃及び２５℃で６ヶ月まで、粘度は安定したままである。
【０１９６】
ＮＡＲは、５０〜１００ｍＭの間のＡｒｇ  ＨＣｌ濃度で、１７５ｍＭまでのＤＦバッファー中の濃度において、５℃の製剤中で可溶のままである。
【０１９７】
実施例３  −  ｐＨの検討
より広範な範囲にわたるｐＨの影響を更に調べるためにｐＨの検討を設計した。上記検討は５．１〜６．９の目標ｐＨ範囲の製剤を含んでいた。各試料に用いたｐＨ及びバッファーを表１２に記載する。全ての試料を、１０ｍＭのバッファー、１６５ｍＭのＮＡＲ、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、０．０１％のポリソルベート８０と共に２１０ｍｇ／ｍＬで製剤した。試料を０．２μｍのＰＶＤＦ製フィルタを用いて滅菌ろ過し、２．０ｍＬの充填容積でガラス製ＰＦＳ中に手作業で充填した。
【表１２】
2018154616.tif 000024
【０１９８】
結果
各試料の時間ゼロにおける及び４０℃で３ヶ月にわたるｐＨ値を図１２に示す。
【０１９９】
図１３Ａ〜１３Ｃは、それぞれ、４℃、２５℃、及び４０℃で３ヶ月までの間の、ＳＥ−ＨＰＬＣによるＨＭＷ種のパーセント（オリゴマーのパーセント＋凝集体のパーセント）に対するｐＨの影響を示す。５℃及び２５℃のデータには、異なるｐＨの製剤間で僅かな差異しか見られない。ｐＨに相関する最も顕著な差は、ｐＨ６．６及びｐＨ６．９の製剤に関する、時間ゼロからのより高いレベルのＨＭＷ種のパーセントであった。図１４はｐＨに対する時間ゼロでのオリゴマーレベルのプロットを示す。ｐＨの上昇に伴うオリゴマーの僅かな上昇傾向が認められ、ｐＨ６．３を超えるとより急な上昇が認められた。オリゴマーレベルはより低いｐＨで最小化した。
【０２００】
上述のＤＯＥ検討（実施例２）において見られたように、ＨＭＷ種のパーセントは、検討した各ｐＨに対して４０℃では経時的に増加し、より低いｐＨが初期の増加速度がより高いことと相関があった。
【０２０１】
４０℃におけるＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラムの比較から、３ヶ月の時点で、ｐＨの低下に伴って凝集体のピークのレベルの増加が生じた（図１５）。
【０２０２】
図１６Ａ〜１６Ｃは、５℃（図１６Ａ）、２５℃（図１６Ｂ）、及び４０℃（図１６Ａ）で６ヶ月までの間のＣＥＸ−ＨＰＬＣによる主ピークのパーセントに対するｐＨの影響を示す。５℃においては６ヶ月の時点で、ｐＨ≦６．０の試料の主ピークのパーセントには有意な変化はなかった一方、ｐＨ≧６．３の試料の主ピークのパーセントには減少が認められた（図１６Ａ）。図１６Ｂ及び図１６ＣにおけるＡＳＣでのＣＥＸ−ＨＰＬＣデータは、ｐＨの上昇に伴って主ピークのパーセントが減少したこと、及び減少の速度がｐＨ＞６．０において顕著に加速されたことを示した。
【０２０３】
図１７は、４０℃におけるＣＥＸ主ピークのパーセントのｐＨに依存する減少が酸性種のパーセントの増加に起因していたことを示す。
【０２０４】
図１８において、２５℃で３ヶ月の時点におけるＣＥＸ−ＨＰＬＣクロマトグラムの比較を見ることができる。酸性ピークのパーセントがｐＨの上昇に伴って成長し、６．３を超えるｐＨを有する試料のクロマトグラフィープロファイルの顕著な変化が存在する。
【０２０５】
液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）を用いたトリプシンによるペプチドマッピングを、４０℃で１ヶ月間貯蔵後の試料に対して実施した。ペプチドマップＨＰＬＣ−ＵＶクロマトグラム（図１９）を、標準試料と当該のｐＨ範囲全体にわたって目視により比較した。また、質量分析による化学的変性の分析により、Ｎ５５及びＮ３３の脱アミド化を除いて、ｐＨに相関する有意な変化は見られなかった。Ｎ５５及びＮ３３の脱アミド化ならびにＭ２４６及びＭ４２２の酸化の相対的な定量レベルを表１３に示す。Ｎ５５の脱アミド化のパーセント及びＮ３３の脱アミド化のパーセントは、ｐＨの上昇に伴うＣＥＸ−ＨＰＬＣデータに見られる酸性ピークのパーセントのレベルの増加と相関があった。Ｍ２４６またはＭ４２２に関する酸化レベルに対する有意なｐＨの影響は存在しないように思われた。
【表１３】
2018154616.tif 000025
【０２０６】
図２０に、４０℃で１ヶ月の試料のバイオアッセイの結果を、初期主ピークのパーセント（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）ならびに（脱アミド化していない）Ｎ５５のパーセント及びＮ３３のパーセントと共にプロットする。
【０２０７】
光遮蔽による液体中の粒子計測法（図２１Ａ〜２１Ｃ）及びＭＦＩ（図２２）による目視可能以下の粒子には、ｐＨと相関する有意な傾向は見られなかった。
【０２０８】
図２３のデータは、還元キャピラリ電気泳動−ドデシル硫酸ナトリウム（ｒＣＥ−ＳＤＳ）分析によって２５℃で６ヶ月まで測定した場合、断片化または他の分解に対して、ｐＨが及ぼす影響は、最小限であったことを示している。図２３のＰｒｅ軽鎖＋軽鎖＋重鎖（Ｐｒｅ  ＬＣ＋ＬＣ＋ＨＣ）のパーセントは、当該ｐＨ範囲の両端で僅かな減少を示している。より低いｐＨの試料は僅かにより高い中間的な分子量（ＭＭＷ）種のパーセントを含有しており、より高いｐＨの試料は僅かにより高いＨＭＷ種のパーセントを含有していた。低分子量（ＬＭＷ）種のパーセントは当該ｐＨ範囲にわたって同等である。
【０２０９】
最後に、図２４に示すように、粘度とｐＨとの間には、単位ｐＨ当たり６．６ｃＰの減少の良好な直線的相関がある。
【０２１０】
所見
ｐＨが上昇すると、（１）４０℃において凝集速度が低下し、（２）オリゴマーの初期レベルがより高くなり、（３）２５℃及び４０℃において脱アミド化速度が増加し、（４）粘度が低下した。ｐＨは、目視可能な粒子または目視可能以下の粒子に対して有意な影響を与えてはいないように思われ、またｐＨは、ｒＣＥ−ＳＤＳによって測定した断片化または他の分解に対して有意な影響を与えてはいないように思われた。
【０２１１】
実施例４  −  スケールダウンした検討
３種の製剤を商業的製造適性及び安定性の評価に供した。候補製剤を、商業的製造を模擬した種々の単位操作に供し、その後安定性評価に供した。
【０２１２】
結果
各製剤原体の物理的特性を測定した。
【０２１３】
各製剤のｐＨがＤＦバッファーのｐＨよりも約０．１７高く測定された。製剤３のＤＦバッファーは目標を０．１４超えており、その結果ＤＳのｐＨが目標を０．３１超えていた。
【０２１４】
５℃、２５℃、及び４０℃における薬物製品の安定性に関するＳＥ−ＨＰＬＣ（ＨＭＷ種のパーセント）の結果を図２５Ａ〜２５Ｃに示す。５℃及び２５℃においてはＨＭＷ種のパーセントの増加速度が３種の全ての試料について同等であった一方、４０℃においては試料１（ｐＨがより低い）の凝集速度が僅かに高かった。
【０２１５】
ＣＥＸ−ＨＰＬＣデータを図２６Ａ〜２６Ｃに示し、該データは予想されたｐＨ及び、前述の検討において認められた、温度に依存する酸性ピークのパーセントの増加（前述の実施例を参照のこと）を示す。
【０２１６】
図２７に示すｒＣＥ−ＳＤＳデータは、試験した全ての温度及び時点における、各スケールダウンした製剤のＰｒｅＬＣ＋ＨＣ＋ＬＣのパーセントが同等のレベルであることを示している。
【０２１７】
濁度レベルは５℃及び２５℃で４ヶ月までの間には有意に変化しなかったが、４０℃で４ヶ月後には増加した。
【０２１８】
スケールダウンした試料の濃度は、各製剤について２００、２１０、及び２２０ｍｇ／ｍＬに調整した。試料を、ｍ−ＶＲＯＣ（商標）レオメータ（ＲｈｅｏＳｅｎｓｅ、カリフォルニア州サンラモン）によって、９０，０００ｓｅｃ−１に及ぶせん断速度及び１８℃〜２８℃の温度で試験した。図２８のデータは２２〜５２ｃＰの粘度範囲にわたっており、タンパク質濃度、温度、及び製剤変数の粘度に対する影響を説明している。
【０２１９】
所見
ＳＥ−ＨＰＬＣによるＨＭＷ種のパーセントのレベル及び凝集速度は、上述の検討において認められたものと整合していた（例えば上述の実施例を参照のこと）。
【０２２０】
ＣＥＸ−ＨＰＬＣによる主ピークのパーセント、酸性ピーク、及び塩基性ピークのレベルならびに変化の速度は、上述の検討において認められたものと整合していた。
【０２２１】
ｒＣＥ−ＳＤＳデータは、ＲＳＣ及びＡＳＣでの３ヶ月まで、有意な断片化または他の分解を示さなかった。
【０２２２】
実施例５  −  Ｎ−アセチルアルギニンを含む製剤中のエボロクマブの限外ろ過／透析ろ過
材料及び方法
小規模な限外ろ過／透析ろ過（ＵＦ／ＤＦ）の開発実験では、３０ｋＤの分子量でカットオフのＵｌｔｒａｃｅｌ  ＰＬＣＴＫ  Ｍｅｍｂｒａｎｅを備えるＰｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）３カセット（Ｄ  Ｓｃｒｅｅｎ、０．１１ｍ２、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；マサチューセッツ州ビレリカ）を用いた。上記実験はタンジェント流ろ過（ＴＦＦ）プロセスシステム（Ｐｅｎｄｏ  ＴＥＣＨ、ニュージャージー州プリンストン）上で実施した。この実験は室温（２２．２±２℃）で実施した。
【０２２３】
上記ＵＦ／ＤＦ開発実験を、異なるｐＨ値の３種のＮＡＲ製剤バッファーを評価するために小規模で実施し、それらの透過流量データを濃度に対して比較した。ＮＡＲの消費量を減少させることによってコストを削減するために２回のＤＦステップを用いた。上記ＵＦ／ＤＦプロセスの間の高分子量種生成に対する２種の目標濃度（３５ｍｇ／ｍＬ及び７０ｍｇ／ｍＬ）を評価するために、ＵＦ１／ＤＦ１ステップにおいて更なる実験を実施した。他のＵＦ／ＤＦ運転パラメータは評価しなかった。ＵＦ／ＤＦ実験の概括的な手順を表１４に記載する。
【表１４】
2018154616.tif 000026
【０２２４】
可変光路長分光光度計（ＳｏｌｏＶＰＥシステム、ＳｏｌｏＶＰＥ、ニュージャージー州ブリッジウォーター）を用い、１．５（ｃｍ）−１（ｇ／Ｌ）−１の吸光係数でＡ２８０の測定を実施した。
【０２２５】
生成物貯留液の品質を評価するために用いた分析方法には、ＳＥ−ＨＰＬＣ、ｒＣＥ−ＳＤＳ、及びＣＥＸ−ＨＰＬＣが含まれていた。
【０２２６】
ＮＡＲ：Ａｃ−Ａｒｇ−ＯＨ、Ｂｉｏｃｈｅｍカタログ番号  Ｅ−１０２５
【０２２７】
ＮＡＲ製剤バッファーの検討結果
この実験では上記ＵＦ／ＤＦプロセスにおいて３種のＮＡＲ製剤バッファーを評価した。上記ＵＦ／ＤＦプロセスは概括的な指針に従った。すなわち、（１）エボロクマブを流加濃縮によって７０ｍｇ／ｍＬに濃縮し（ＵＦ１）、３の透析ろ過容量でＮＡＲ製剤バッファーへと透析ろ過し（ＤＦ１）、（２）上記タンパク質を１４０ｍｇ／ｍＬに更に濃縮し（ＵＦ２）、４の透析ろ過容量でＮＡＲ製剤バッファーへと透析ろ過し（ＤＦ２）、（３）上記タンパク質を目標の約２６０ｍｇ／ｍＬに過剰に濃縮し、３７℃においてシステムから回収した。タンパク質負荷／膜面積は、ＮＡＲ  ｐＨ５．４に関しては１４６８ｇ／ｍ２であり、ＮＡＲ  ｐＨ５．２及び５．６に関しては８００ｍ２であった。
【０２２８】
流量のデータを濃度に対してプロットし、全てのＮＡＲ製剤バッファーにわたって比較した。また、各透析ろ過ステップから試料採取することによって添加剤レベルを分析し、透析ろ過性能を検討し、且つ最小透析ろ過容量を判定した。
【０２２９】
結果及び所見
上記ＵＦ／ＤＦ検討の流量データを用いて、図２９に示すろ液流量対濃度のプロットを作成した。上記流量プロファイルは上記３種のＮＡＲ製剤バッファーを通して同等であった。上記流量は、タンパク質がＮＡＲ製剤バッファーにバッファー交換されるのに伴って増加したが（ＤＦ１及びＤＦ２）、タンパク質濃度の増加に伴って顕著に低下した（ＵＦ１、ＵＦ２、及びＯＣ）。ＵＦ／ＤＦに対する合計のプロセス時間は、異なる膜面積に起因して、ＮＡＲ  ｐＨ５．４においては２０時間であり、ＮＡＲ  ｐＨ５．２及び５．６に関しては１０時間であった。流量プロファイルが類似した結果であったことは、上記ＮＡＲ製剤バッファーが上記プロセス流量に対して有意な影響を与えないことを示していた。エボロクマブ原体（ＤＳ）の小規模ＵＦ／ＤＦの検討の概要を表１５に示す。
【０２３０】
上記透析ろ過ステップ（ＤＦ１及びＤＦ２）において、各透析ろ過容量（１〜７のＤＶ）で試料を採取して、透析ろ過性能を調べ、且つ最小透析ろ過容量を判定した。表１６の代表的な試料の分析はエボロクマブ・ＮＡＲ  ｐＨ５．４のＵＦ／ＤＦ検討によるものであった。これらの結果は、ＮＡＲ  ｐＨ５．４に対する透析ろ過は、５の透析ろ過容量の後の時点で本質的に完了していたことを示していた。
【表１５】
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【表１６】
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【０２３１】
実施例６  −  エボロクマブ製剤のＵＦ／ＤＦ中のＤＳ濃度及びＨＭＷ生成の監視
この実験の目的は、流加濃縮／透析ろ過（ＵＦ１／ＤＦ１）に対する目標濃度を評価すること、及びＵＦ／ＤＦ運転中のＨＭＷ生成を最小化するための目標濃度を判定することであった。上記ＵＦ／ＤＦプロセスは表１７に記載する概括的な指針に従った。エボロクマブ（１１ｍｇ／ｍＬ）を流加濃縮（ＵＦ１）によって３５ｍｇ／ｍＬまたは７０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。タンパク質負荷／膜面積は８００ｍ２であり、ＮＡＲ製剤バッファーは、１０ｍＭの酢酸塩、１５５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７０ｍＭのアルギニンＨＣｌを含み、ｐＨ５．３であった。
【０２３２】
また、ＵＦ／ＤＦ運転を評価するために、生成物貯留液の品質分析用に各ＵＦ／ＤＦステップからタンパク質試料を採取した。上記生成物貯留液の品質データを用いて、ＨＭＷ生成に対する異なるＵＦ１／ＤＦ１生成物濃度の影響を検討した。
【０２３３】
材料及び方法
実施例５を参照されたい。
【０２３４】
結果及び所見
図３０は、ＵＦ１／ＤＦ１における３５ｍｇ／ｍＬ及び７０ｍｇ／ｍＬ（ＵＦ／ＤＦ−７０及びＵＦ／ＤＦ−３５）でのエボロクマブＵＦ／ＤＦプロセスにおけるＨＭＷ（％）生成を比較したプロットを示す。初期には、ＵＦ／ＤＦ−７０−ＵＦ１におけるＨＭＷ種（％）はＵＦ／ＤＦ−３５−ＵＦ１よりも０．２％高かったが、ＵＦ１以後ではＨＭＷ（％）は同等であり、最終的なＤＳにおいては同一であった。この結果は、ＨＭＷ種は可逆的であり、ＵＦ１に対する目標濃度は最終的なＤＳにおけるＨＭＷ種の生成に対して有意な影響を与えないことを示していた。貯留液の量を減らすため、目標濃度を７０ｍｇ／ｍＬにすることが推奨される。
【０２３５】
実施例７  −  小規模ＵＦ／ＤＦ由来の３種のＮＡＲ  ＤＳに対する貯留液保持の検討
この実施例では、３種のＮＡＲ製剤バッファーに対して製剤したエボロクマブの３種のバッチの安定性を監視した。１０ｍＬの各ＤＳ試料を２〜８℃で保持した。図３１Ａ〜３１Ｆに示す各時点で約１ｍＬの試料を抜き出し、２〜８℃で分析試験に送付した。
【０２３６】
結果及び所見
２〜８℃で保持したエボロクマブ・ＮＡＲのＳＥ−ＨＰＬＣ及びＣＥＸ−ＨＰＬＣを図３６及び３７に示す。ＣＥＸ及びｒＣＥ−ＳＤＳの結果は同等の結果となった。ＮＡＲ  ｐＨ５．２、５．４、及びｐＨ５．６のプロセスから得られたＤＳバッチは、原料物質中の１．１％に対して、ＵＦ／ＤＦ運転の間、それぞれ１．４％、１．５％、及び１．７％のＨＭＷ種を有していた。図３２において、上記ＨＭＷ種の％をプロットし、エボロクマブ原料物質と１１週間保持したＮＡＲ  ＤＳとを比較した。上記３種の製剤バッチの全てにおいてＨＭＷ（％）が０．４％〜０．５％増加していた。これらのＤＳバッチは２〜８℃において少なくとも７日間は安定であった。
【０２３７】
実施例８  −  エボロクマブ  ＨＭＰ  ＣＰＤ１  ＮＡＲ過剰濃縮（２６０ｇ／Ｌ）に対する３７℃、３９℃、４２℃、及び４５℃でのイン・プロセス貯留液の保持検討
イン・プロセスエボロクマブ過剰濃縮液（２６０ｇ／Ｌ）の３７℃、３９℃、４２℃、及び４５℃における安定性を評価した。３０ｍＬのＯＣ試料を、所定の温度に制御した部屋において水浴中でインキュベートした。図３３及び３４に示す各時点で、約１ｍＬの試料を採取し、凍結し、ドライアイスと共に分析に送付した。より高い温度で保持したＯＣ試料に対して粘度値を測定し、２３℃及び２５℃で保持した試料と比較した。
【０２３８】
結果及び所見
図３３に示すように、ＳＥ−ＨＰＬＣの結果は、エボロクマブ・ＮＡＲ  ＯＣは３７℃、３９℃、及び４２℃では３時間の間安定であるが、４５℃では安定でないことを示していた。ＣＥＸ及びｒＣＥ−ＳＤＳの結果は同等であった。図３４は、温度が上昇するとＯＣの粘度が低下し、温度が３７℃から４２℃へと上昇すると、粘度が１９％（１４．７ｃＰ）低下したことを示している。
【０２３９】
本明細書において用いる節の見出しは構成上の目的のためだけのものであり、記載する主題を限定すると解釈されるべきものではない。特許、特許出願、記事、書籍、及び論文を含む、本明細書に引用される全ての文献または文献の一部は、この記載によって、如何なる目的に対してもそれらの全体が参照により援用される。
【０２４０】
実施例９  −  製剤のロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）のＤＯＥ検討
エボロクマブの安定性に対する、示した設計空間内の製剤変数の影響を検討するために、製剤のロバスト性の実験設計（ＤＯＥ）の検討を設計した。上記検討の変数には、エボロクマブ濃度、ＮＡＲ濃度、Ａｒｇ  ＨＣｌ濃度、及びｐＨが含まれていた。表１７に記載した１８種の製剤を、０．２μｍのＰＶＤＦ製フィルタを用いて滅菌ろ過し、２．０ｍＬのガラス製の予め充填した注射器中に充填した。試料を、種々の温度でのインキュベーションに続いて、安定性の指標となる一連の分析方法によって試験した。全ての製剤が、表１７に記載した成分に加えて、１０ｍＭの酢酸ナトリウム及び０．０１％(w/v)のポリソルベート８０を含んでいた。
【表１７】
2018154616.tif 000029
【０２４１】
表１８は、被験製剤のそれぞれについて、エボロクマブ濃度、ｐＨ値、及び添加剤濃度の測定値を示す。全てが表１７に記載した目標レベルに近接している。
【表１８】
2018154616.tif 000030
【０２４２】
結果及び所見
凝集を評価するために、４℃（図３５Ａ）、２５℃（図３５Ｂ）、ならびに４０℃（図３５Ｃ及び３５Ｄ）における０〜６ヶ月のインキュベーション後に、表１８に示す製剤に対して、ＳＥ−ＨＰＬＣ分析を実施した。データは、４℃及び２５℃の条件に関しては全ての製剤について、ＨＭＷ種の％の増加速度が類似していたが、加速した４０℃のストレス条件では凝集に対するｐＨに依存する影響が認められた。ｐＨ５．１のより低いｐＨの試料は、４０℃において凝集速度が最も速いことが認められた一方、ｐＨ５．７の試料は、凝集速度が最も遅いことが認められた（図３５Ｃ及び３５Ｄ）。ｐＨ５．４の試料は４０℃において、凝集速度がｐＨ５．１と５．７の凝集速度の中間であることが認められたが、これらの速度はｐＨ５．７の試料について認められたより低い凝集速度により類似していた（図３５Ｃ及び３５Ｄ）。
【０２４３】
酸性ピークの％及び塩基性ピークの％の経時的な増加に対するｐＨの影響（３ヶ月まで）をＣＥＸ−ＨＰＬＣを用いて調べ、そのデータを、４℃については図３６Ａ（酸性ピーク）及び３６Ｂ（塩基性ピーク）、２５℃については図３６Ｃ（酸性ピーク）及び３６Ｄ（塩基性ピーク）、４０℃については図３６Ｅ（酸性ピーク）及び３６Ｆ（塩基性ピーク）に示す。２５℃及び４０℃の試料に関するデータに示すように（図３６Ｃ〜３６Ｆ）、ｐＨが当該製剤中の酸性及び塩基性ピークの％に影響を与えることが認められた。ｐＨ５．７の試料に関するデータが酸性ピークの％の増加のより高い速度と密接に関係していた一方、ｐＨ５．１の試料に関するデータは最も低い増加速度を示した。ｐＨ５．４の２種の試料の分解速度は、ｐＨ５．１及びｐＨ５．７のこれらの試料の観測された速度のちょうど間であることが認められた。塩基性ピークの％の変化の傾向は違いがより少ないように思われたが、４０℃でインキュベートした試料からは、より低いｐＨにおいて塩基性ピークの％レベルがより高い傾向が認められた。
【０２４４】
３０℃または４０℃のいずれかでの３ヶ月までの間の上記製剤中のエボロクマブの断片化または他の分解を、ｒＣＥ−ＳＤＳ及びＳＥ−ＨＰＬＣ分析を用いて評価した。図３７Ａ及び３７Ｂは３０℃でインキュベートした試料のデータを示し、図３７Ｃ及び３７Ｄは４０℃でインキュベートした試料のデータを示す。この検討の設計空間内での製剤組成物に関係するｒＣＥ−ＳＤＳデータの有意な傾向は認められなかった。
【０２４５】
４℃及び４０℃での３ヶ月までの間のインキュベーション後の上記製剤について、目視可能以下の粒子の存在及び量を、ＨＩＡＣを用いた光遮蔽粒子計測法によって経時的に測定した。これらのデータを図３８Ａ〜３８Ｄに示す。（図３８Ａ（１０μｍ以上の粒子）及び３８Ｂ（２５μｍ以上の粒子）は４℃で保持した試料に関する結果を示し、図３８Ｃ（１０μｍ以上の粒子）及び３８Ｄ（２５μｍ以上の粒子）は４０℃で保持した試料に関する結果を示す。）これらのデータから、検討した製剤変数と関係する目視可能以下の粒子の数における有意な傾向は認められなかった。
【０２４６】
この実施例から、上記データは、検討した狭い製剤設計空間内において、４℃または２５℃における貯蔵の間の安定性に対する有意な影響は認められないことを実証した。４０℃におけるｐＨに関係するデータは、ｐＨが、ＳＥ−ＨＰＬＣによって検出される凝集速度、ならびにＣＥＸ−ＨＰＬＣによって検出される酸性種のパーセント及び、それよりも程度は低いが、塩基性種のパーセントに影響を与えることを示唆していた。
【０２４７】
例示的な実施形態
ここでは、エボロクマブを含む医薬組成物の例示的な実施形態が開示され、かかる組成物はＮ−アセチルアルギニンを含み、上記医薬組成物の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）は少なくとも約８０ｃP未満である。更にここでは、エボロクマブなどの治療用ポリペプチドの製剤方法が開示され、かかる組成物はＮＡＲを含む。
【０２４８】
実施形態１：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択されるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．Ｎ−アセチルアルギニンと
を含み、
少なくとも約８０ｃＰ未満の粘度を有する医薬組成物。
【０２４９】
実施形態２：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体である、実施形態１に記載の医薬組成物。
【０２５０】
実施形態３：少なくとも約５０ｃＰ未満の粘度を有する、実施形態２または３に記載の医薬組成物。
【０２５１】
実施形態４：約２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有する、実施形態２または３に記載の医薬組成物。
【０２５２】
実施形態５：約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有する、実施形態４に記載の医薬組成物。
【０２５３】
実施形態６：ヒト血液細胞と等張である、実施形態５に記載の医薬組成物。
【０２５４】
実施形態７：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、実施形態１に記載の医薬組成物。
【０２５５】
実施形態８：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度が、約２１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態２に記載の医薬組成物。
【０２５６】
実施形態９：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１〜８のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２５７】
実施形態１０：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在する、実施形態９に記載の医薬組成物。
【０２５８】
実施形態１１：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１０に記載の医薬組成物。
【０２５９】
実施形態１２：バッファーを更に含む、実施形態１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２６０】
実施形態１３：上記バッファーが、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、実施形態１３に記載の医薬組成物。
【０２６１】
実施形態１４：上記バッファーが、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１３に記載の医薬組成物。
【０２６２】
実施形態１５：上記バッファーが、酢酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１４に記載の医薬組成物。
【０２６３】
実施形態１６：ｐＨが、約４．８〜約６．９である、実施形態１〜１５のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２６４】
実施形態１７：ｐＨが、約５．４である、実施形態１１に記載の医薬組成物。
【０２６５】
実施形態１８：界面活性剤を更に含む、実施形態１〜１７のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２６６】
実施形態１９：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される、実施形態１８に記載の医薬組成物。
【０２６７】
実施形態２０：上記界面活性剤が、約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１９に記載の医薬組成物。
【０２６８】
実施形態２１：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態２０に記載の医薬組成物。
【０２６９】
実施形態２２：プロリンを更に含む、実施形態１〜２１のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２７０】
実施形態２３：上記プロリンが、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態２２に記載の医薬組成物。
【０２７１】
実施形態２４：上記プロリンが、約９０ｍＭ〜約１２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態２３に記載の医薬組成物。
【０２７２】
実施形態２５：上記プロリンが、約１２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態２２または２３に記載の医薬組成物。
【０２７３】
実施形態２６：アルギニン塩を更に含む、実施形態１〜２５のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２７４】
実施形態２７：上記アルギニン塩が、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態２６に記載の医薬組成物。
【０２７５】
実施形態２８：上記アルギニン塩が、約５０ｍＭ〜約１００ｍＭの濃度で存在する、実施形態２７に記載の医薬組成物。
【０２７６】
実施形態２９：上記アルギニン塩が、アルギニン−ＨＣｌ、アルギニン酢酸塩、またはアルギニングルタミン酸塩である、実施形態２６に記載の医薬組成物。
【０２７７】
実施形態３０：上記アルギニンＨＣｌが、約５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態２９に記載の医薬組成物。
【０２７８】
実施形態３１：約−３０℃以下で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２年間安定である、実施形態１〜３０のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２７９】
実施形態３２：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約５年間安定である、実施形態３１に記載の医薬組成物。
【０２８０】
実施形態３３：約５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態１〜３０のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２８１】
実施形態３４：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２４ヶ月間安定である、実施形態３３に記載の医薬組成物。
【０２８２】
実施形態３５：約２５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態１〜３０のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２８３】
実施形態３６：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約３ヶ月間安定である、実施形態３５に記載の医薬組成物。
【０２８４】
実施形態３７：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態３５に記載の医薬組成物。
【０２８５】
実施形態３８：約４０℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態１〜３０のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２８６】
実施形態３９：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーを含む、実施形態１〜３８のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２８７】
実施形態４０：存在する上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約２．５％未満である、実施形態３９に記載の医薬組成物。
【０２８８】
実施形態４１：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択されるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．Ｎ−アセチルアルギニンと、
ｃ．アルギニン塩と、
ｄ．バッファーと、
ｅ．界面活性剤と
を含み、
少なくとも約８０ｃＰ未満の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）を有する医薬組成物。
【０２８９】
実施形態４２：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体である、実施形態４１に記載の医薬組成物。
【０２９０】
実施形態４３：少なくとも約５０ｃＰ未満の粘度を有する、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０２９１】
実施形態４４：約２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有する、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０２９２】
実施形態４５：約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有する、実施形態４４に記載の医薬組成物。
【０２９３】
実施形態４６：ヒト血液細胞と等張である、実施形態４５に記載の医薬組成物。
【０２９４】
実施形態４７：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０２９５】
実施形態４８：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度が、約２１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態４７に記載の医薬組成物。
【０２９６】
実施形態４９：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在する、実施形態４１〜４８のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２９７】
実施形態５０：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在する、実施形態４９に記載の医薬組成物。
【０２９８】
実施形態５１：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭの濃度で存在する、実施形態５０に記載の医薬組成物。
【０２９９】
実施形態５２：上記バッファーが、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０３００】
実施形態５３：上記バッファーが、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在する、実施形態５２に記載の医薬組成物。
【０３０１】
実施形態５４：上記バッファーが、酢酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態５３に記載の医薬組成物。
【０３０２】
実施形態５５：上記ｐＨが、約４．８〜約６．９である、実施形態４１または４２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３０３】
実施形態５６：上記ｐＨが、約５．４である、実施形態５５に記載の医薬組成物。
【０３０４】
実施形態５７：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０３０５】
実施形態５８：上記界面活性剤が、約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態５７に記載の医薬組成物。
【０３０６】
実施形態５９：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態５７に記載の医薬組成物。
【０３０７】
実施形態６０：プロリンを更に含む、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０３０８】
実施形態６１：上記プロリンが、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態６０に記載の医薬組成物。
【０３０９】
実施形態６２：上記プロリンが、約９０ｍＭ〜約１２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態６１に記載の医薬組成物。
【０３１０】
実施形態６３：上記プロリンが、約１２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態６２に記載の医薬組成物。
【０３１１】
実施形態６４：上記アルギニン塩が、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０３１２】
実施形態６５：上記アルギニン塩が、約５０ｍＭ〜約１００ｍＭの濃度で存在する、実施形態６４に記載の医薬組成物。
【０３１３】
実施形態６６：上記アルギニン塩が、アルギニン−ＨＣｌ、アルギニン酢酸塩、またはアルギニングルタミン酸塩である、実施形態６４に記載の医薬組成物。
【０３１４】
実施形態６７：上記アルギニンＨＣｌが、約５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態６６に記載の医薬組成物。
【０３１５】
実施形態６８：約−３０℃以下で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２年間安定である、実施形態４１〜６７のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３１６】
実施形態６９：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約５年間安定である、実施形態６８に記載の医薬組成物。
【０３１７】
実施形態７０：約５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態４１〜６７のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３１８】
実施形態７１：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２４ヶ月間安定である、実施形態７０に記載の医薬組成物。
【０３１９】
実施形態７２：約２５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態４１〜６７のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３２０】
実施形態７３：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約３ヶ月間安定である、実施形態７２に記載の医薬組成物。
【０３２１】
実施形態７４：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態７３に記載の医薬組成物。
【０３２２】
実施形態７５：約４０℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態４１〜６７のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３２３】
実施形態７６：含まれる上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満である、実施形態４１〜７５のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３２４】
実施形態７７：存在する上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約２．５％未満である、実施形態７６に記載の医薬組成物。
【０３２５】
実施形態７８：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１４０ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約５０ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物。
【０３２６】
実施形態７９：約５．１〜約５．７のｐＨを有する、実施形態７８に記載の医薬組成物。
【０３２７】
実施形態８０：少なくとも約５０ｃＰ未満の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）を有する、実施形態７８または７９に記載の医薬組成物。
【０３２８】
実施形態８１：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
ｂ．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｃ．約１４０ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｄ．約６３ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｅ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｆ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物。
【０３２９】
実施形態８２：約５．１〜約５．７のｐＨを有する、実施形態８１に記載の医薬組成物。
【０３３０】
実施形態８３：少なくとも約８０ｃＰ未満の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）を有する、実施形態８１または８２に記載の医薬組成物。
【０３３１】
実施形態８４：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１５５ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約７０ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物。
【０３３２】
実施形態８５：約５．１〜約５．７のｐＨを有する、実施形態８４に記載の医薬組成物。
【０３３３】
実施形態８６：少なくとも約４５ｃＰ未満の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）を有する、実施形態８４または８５に記載の医薬組成物。
【０３３４】
実施形態８７：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１７０ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約６３ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物。
【０３３５】
実施形態８８：約５．１〜約５．７のｐＨを有する、実施形態８７に記載の医薬組成物。
【０３３６】
実施形態８９：少なくとも約６０ｃＰ未満の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）を有する、実施形態８７または８８に記載の医薬組成物。
【０３３７】
実施形態９０：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１５５ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約１２０ｍＭの濃度で存在するプロリンと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物。
【０３３８】
実施形態９１：約５．１〜約５．７のｐＨを有する、実施形態９０に記載の医薬組成物。
【０３３９】
実施形態９２：少なくとも約６０ｃＰ未満の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）を有する、実施形態９０または９１に記載の医薬組成物。
【０３４０】
実施形態９３：約−３０℃以下で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２年間安定である、実施形態７８〜９２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３４１】
実施形態９４：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約５年間安定である、実施形態９３に記載の医薬組成物。
【０３４２】
実施形態９５：約５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態７８〜９２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３４３】
実施形態９６：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２４ヶ月間安定である、実施形態９５に記載の医薬組成物。
【０３４４】
実施形態９７：約２５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態７８〜９２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３４５】
実施形態９８：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約３ヶ月間安定である、実施形態９７に記載の医薬組成物。
【０３４６】
実施形態９９：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態９８に記載の医薬組成物。
【０３４７】
実施形態１００：約４０℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態７８〜９２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３４８】
実施形態１０１：含まれる上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満である、実施形態７８〜９２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３４９】
実施形態１０２：存在する上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約２．５％未満である、実施形態１０１に記載の医薬組成物。
【０３５０】
実施形態１０３：液体である、実施形態１〜１０２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３５１】
実施形態１０４：実施形態１〜１０３のいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む、投与を必要とする対象の治療方法。
【０３５２】
実施形態１０５：実施形態１〜１０３のいずれかに記載の医薬組成物及び注射器、ペン型注射器、ボディーインジェクター、及びオートインジェクターからなる群より選択される送達デバイスを備えるキット。
【０３５３】
実施形態１０６：上記送達デバイスを用いて上記医薬組成物を投与するための使用説明書を更に備える、実施形態１０５に記載のキット。
【０３５４】
実施形態１０７：少なくとも１４０ｍｇ／ｍＬのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬組成物中のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの調製方法であって、上記医薬組成物の粘度が上記Ｎ−アセチルアルギニンを含まない上記医薬組成物と比較した場合に低減されるような有効量のＮ−アセチルアルギニンを、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬組成物に添加することを含み、且つ上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメントと、
ｂ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体と、
ｃ．
ｉ．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
ｉｉ．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体と、
ｄ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体と、
ｅ．
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
ｉｖ．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
ｖ．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体と
からなる群より選択される上記方法。
【０３５５】
実施形態１０８：上記医薬組成物の粘度が、約８０ｃＰ未満である（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定して）、実施形態１０７に記載の方法。
【０３５６】
実施形態１０９：上記医薬組成物の粘度が、約５０ｃＰ未満である、実施形態１０８に記載の方法。
【０３５７】
実施形態１１０：上記医薬組成物が、約２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有する、実施形態１０７〜１０９のいずれかに記載の方法。
【０３５８】
実施形態１１１：上記医薬組成物が、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有する、実施形態１１０に記載の方法。
【０３５９】
実施形態１１２：上記医薬組成物が、ヒト血液細胞と等張である、実施形態１１１に記載の方法。
【０３６０】
実施形態１１３：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、約１８０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、実施形態１０７に記載の方法。
【０３６１】
実施形態１１４：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度が、約２１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１１３に記載の方法。
【０３６２】
実施形態１１５：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１０７〜１１４のいずれかに記載の方法。
【０３６３】
実施形態１１６：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１１５に記載の方法。
【０３６４】
実施形態１１７：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１１５に記載の方法。
【０３６５】
実施形態１１８：バッファーを更に含む、実施形態１０７〜１１７のいずれかに記載の方法。
【０３６６】
実施形態１１９：上記バッファーが、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、実施形態１１８に記載の方法。
【０３６７】
実施形態１２０：上記バッファーが、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１１９に記載の方法。
【０３６８】
実施形態１２１：上記バッファーが、酢酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１２０に記載の方法。
【０３６９】
実施形態１２２：上記ｐＨが、約４．８〜約６．９である、実施形態１０７〜１２１のいずれかに記載の方法。
【０３７０】
実施形態１２３：ｐＨが、約５．４である、実施形態１２２に記載の方法。
【０３７１】
実施形態１２４：界面活性剤を更に含む、実施形態１０７〜１２３のいずれかに記載の方法。
【０３７２】
実施形態１２５：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される、実施形態１２４に記載の方法。
【０３７３】
実施形態１２６：上記界面活性剤が、約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１．０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１２５に記載の方法。
【０３７４】
実施形態１２７：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１２６に記載の方法。
【０３７５】
実施形態１２８：プロリンを更に含む、実施形態１０７〜１２７のいずれかに記載の方法。
【０３７６】
実施形態１２９：上記プロリンが、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１２８に記載の方法。
【０３７７】
実施形態１３０：上記プロリンが、約９０ｍＭ〜約１２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１２９に記載の方法。
【０３７８】
実施形態１３１：上記プロリンが、約１２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１３０に記載の方法。
【０３７９】
実施形態１３２：アルギニン塩を更に含む、実施形態１０７〜１３１のいずれかに記載の方法。
【０３８０】
実施形態１３３：上記アルギニン塩が、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１３２に記載の方法。
【０３８１】
実施形態１３４：上記アルギニン塩が、約５０ｍＭ〜約１００ｍＭの濃度で存在する、実施形態１３３に記載の方法。
【０３８２】
実施形態１３５：上記アルギニン塩が、アルギニン−ＨＣｌ、アルギニン酢酸塩、またはアルギニングルタミン酸塩である、実施形態１３３に記載の方法。
【０３８３】
実施形態１３６：上記アルギニンＨＣｌが、約５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１３５に記載の方法。
【０３８４】
実施形態１３７：約−３０℃以下で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２年間安定である、実施形態１０７〜１３６のいずれかに記載の方法。
【０３８５】
実施形態１３８：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約５年間安定である、実施形態１３７に記載の方法。
【０３８６】
実施形態１３９：約５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態１０７〜１３６のいずれかに記載の方法。
【０３８７】
実施形態１４０：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２４ヶ月間安定である、実施形態１３９に記載の方法。
【０３８８】
実施形態１４１：約２５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態１０７〜１３６のいずれかに記載の方法。
【０３８９】
実施形態１４２：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約３ヶ月間安定である、実施形態１４１に記載の方法。
【０３９０】
実施形態１４３：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態１４２に記載の方法。
【０３９１】
実施形態１４４：約４０℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態１０７〜１３６のいずれかに記載の方法。
【０３９２】
実施形態１４５：含まれる上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満である、実施形態１０７〜１３６のいずれかに記載の方法。
【０３９３】
実施形態１４６：存在する上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約２．５％未満である、実施形態１４５に記載の方法。
【０３９４】
実施形態１４７：治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第１の濃縮ステップと、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップと、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第２の濃縮ステップと、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップと、
ｅ．第３の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第３の濃縮ステップと
を含み、
上記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｉｉ．
３．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
４．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
５．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、上記方法。
【０３９５】
実施形態１４８：ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断する上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体である実施形態１４７に記載の方法。
【０３９６】
実施形態１４９：第３の濃縮ステップの前に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が、約２５℃〜約３７℃に高められる、実施形態１４７に記載の方法。
【０３９７】
実施形態１５０：第１の溶液交換ステップが、少なくとも３回の第２の溶液の透析ろ過を用いて実現される、実施形態１４７に記載の方法。
【０３９８】
実施形態１５１：第２の溶液交換ステップが、少なくとも４回の第３の溶液の透析ろ過を用いて実現される、実施形態１４７に記載の方法。
【０３９９】
実施形態１５２：上記治療用タンパク質の初期濃度が、約１１ｍｇ／ｍＬ以下である、実施形態１４７に記載の方法。
【０４００】
実施形態１５３：第１の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度が、約３倍〜約７倍高められる、実施形態１４７に記載の方法。
【０４０１】
実施形態１５４：上記ポリペプチドの上記高められた濃度が、約３５ｍｇ／ｍＬ〜約７０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１５３に記載の方法。
【０４０２】
実施形態１５５：第２の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度が、第１の濃縮ステップから約２倍〜４倍高められる、実施形態１４７に記載の方法。
【０４０３】
実施形態１５６：上記高められたポリペプチドの濃度が、約１４０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１５５に記載の方法。
【０４０４】
実施形態１５７：第３の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度が、第２の濃縮ステップから約１．５倍〜約２倍高められる、実施形態１４７に記載の方法。
【０４０５】
実施形態１５８：上記高められたポリペプチドの濃度が、約２６０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１５７に記載の方法。
【０４０６】
実施形態１５９：上記治療用ポリペプチドが、該治療用ポリペプチドの初期濃度よりも少なくとも約１９〜２０倍濃縮された最終濃度を有する、実施形態１４７に記載の方法。
【０４０７】
実施形態１６０：上記治療用ポリペプチドの上記最終濃度が、約２１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１５９に記載の方法。
【０４０８】
実施形態１６１：上記濃縮ステップが、流加限外ろ過を含む、実施形態１４７に記載の方法。
【０４０９】
実施形態１６２：第２の溶液と第３の溶液とが同一である、実施形態１４７に記載の方法。
【０４１０】
実施形態１６３：Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２または第３の溶液が、アルギニン塩及びバッファーを含む、実施形態１４７に記載の方法。
【０４１１】
実施形態１６４：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在し、上記アルギニン塩が、Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩であり且つ約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在し、上記バッファーが、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムバッファーである、実施形態１６３に記載の方法。
【０４１２】
実施形態１６５：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約６３〜約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１６４に記載の方法。
【０４１３】
実施形態１６６：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約６３の濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１６４に記載の方法。
【０４１４】
実施形態１６７：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１５５ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約７０の濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１６４に記載の方法。
【０４１５】
実施形態１６８：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約６３の濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１６４に記載の方法。
【０４１６】
実施形態１６９：プロリンを更に含み、上記プロリンが、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１６５または１６６に記載の方法。
【０４１７】
実施形態１７０：第２または第３の溶液が、約４．８〜約６．９のｐＨを有する、実施形態１６３〜１６９のいずれかに記載の方法。
【０４１８】
実施形態１７１：上記ｐＨが、約５．４である、実施形態１７０に記載の方法。
【０４１９】
実施形態１７２：第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ａ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｂ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｃ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｄ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｅ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｆ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｇ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｈ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられる、実施形態１４７に記載の方法。
【０４２０】
実施形態１７３：濃縮された後に、第３の溶液に界面活性剤が添加される、実施形態１４７〜１７２のいずれかに記載の方法。
【０４２１】
実施形態１７４：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択され、約０．０００１％〜約１％の濃度で存在する、実施形態１７３に記載の方法。
【０４２２】
実施形態１７５：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１７５に記載の方法。
【０４２３】
実施形態１７６：治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第１の濃縮ステップと、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過及び第２の溶液の３の透析ろ過容量を用いてＮ−アセチルアルギニン、アルギニン塩、及びバッファーを含む第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップと、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第２の濃縮ステップと、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過及び第３の溶液の４の透析ろ過容量を用いて、Ｎ−アセチルアルギニン、アルギニン塩、及びバッファーを含む第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップと、
ｅ．第２の溶液交換ステップの後に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が約２５℃〜約３７℃に高められることと
ｆ．上記ポリペプチドが流加限外ろ過濃縮を用いて更に濃縮される第３の濃縮ステップと
を含み、
第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ｇ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｈ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｉ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｊ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｋ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｌ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｍ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｎ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられ、
上記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、上記方法
【０４２４】
実施形態１７７：第３の濃縮ステップの前に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が、約２５℃〜約３７℃に高められる、実施形態１７６に記載の方法。
【０４２５】
実施形態１７８：上記治療用タンパク質の初期濃度が、１１ｍｇ／ｍＬ以下である、実施形態１７６に記載の方法。
【０４２６】
実施形態１７９：第１の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度が、約３倍〜約７倍高められる、実施形態１７６に記載の方法。
【０４２７】
実施形態１８０：第１の濃縮ステップにおいて、上記ポリペプチドの上記高められた濃度が、約３５ｍｇ／ｍＬ〜約７０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１７９に記載の方法。
【０４２８】
実施形態１８１：第２の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度が、第１の濃縮ステップから約２倍〜約４倍高められる、実施形態１７６に記載の方法。
【０４２９】
実施形態１８２：上記高められたポリペプチド濃度が、約１４０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１８１に記載の方法。
【０４３０】
実施形態１８３：第３の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度が、第２の濃縮ステップから約１．５倍〜約２倍高められる、実施形態１７６に記載の方法。
【０４３１】
実施形態１８４：上記高められたポリペプチド濃度が、約２６０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１８３に記載の方法。
【０４３２】
実施形態１８５：上記治療用ポリペプチドが、該治療用ポリペプチドの初期濃度よりも少なくとも約１９〜２０倍濃縮された最終濃度を有する、実施形態１７６に記載の方法。
【０４３３】
実施形態１８６：上記治療用ポリペプチドの上記最終濃度が、約２１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１８５に記載の方法。
【０４３４】
実施形態１８７：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩であり、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在し、上記バッファーが、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムバッファーである、実施形態１７６に記載の方法。
【０４３５】
実施形態１８８：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約６３ｍＭ〜約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１８８に記載の方法。
【０４３６】
実施形態１８９：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１８８に記載の方法。
【０４３７】
実施形態１９０：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１５５ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１８８に記載の方法。
【０４３８】
実施形態１９１：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１８８に記載の方法。
【０４３９】
実施形態１９２：プロリンを更に含み、上記プロリンが、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１７６に記載の方法。
【０４４０】
実施形態１９３：第２または第３の溶液が、約４．８〜約６．９のｐＨを有する、実施形態１７６〜１９２のいずれかに記載の方法。
【０４４１】
実施形態１９４：上記ｐＨが、約５．４である、実施形態１９３に記載の方法。
【０４４２】
実施形態１９５：濃縮された後に、第３の溶液に界面活性剤が添加される、実施形態１７６〜１９４のいずれかに記載の方法。
【０４４３】
実施形態１９６：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択され、約０．０００１％〜約１％の濃度で存在する、実施形態１９５に記載の方法。
【０４４４】
実施形態１９７：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％の濃度で存在する、実施形態１９６に記載の方法。
【０４４５】
実施形態１９８：治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第１の濃縮ステップ、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過及び第２の溶液の３の透析ろ過容量を用いて第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップ、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第２の濃縮ステップ、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過及び第３の溶液の４の透析ろ過容量を用いて、第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップ、
ｅ．第２の溶液交換ステップの後に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が約２５℃〜約３７℃に高められること、ならびに
ｆ．上記ポリペプチドが、流加限外ろ過濃縮を用いて更に濃縮される第３の濃縮ステップ、
ｇ．あるいは、第３の濃縮ステップで得られる溶液に、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で添加するステップ
を含み、
第２及び第３の溶液が、約１４０ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、約５０ｍＭのＡｒｇＨＣＩ、及び約１０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む溶液、ｐＨが約５．２である溶液、約１５５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、約７０ｍＭのＡｒｇＨＣＩ、及び約１０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む溶液、ｐＨが約５．４である溶液、及び約１７０ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、及び約１０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む溶液、ｐＨが約５．６である溶液、からなる群より選択される溶液を含み、
第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ｈ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｉ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｊ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｋ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｌ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｍ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｎ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｏ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられ、
上記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８９７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、上記方法。
【０４４６】
実施形態１９９：上記対象が、
家族性高コレステロール血症（ヘテロ接合性高コレステロール血症、ホモ接合性高コレステロール血症、家族性欠陥アポリポタンパクＢ−１００血症；多遺伝子性高コレステロール血症を含む）、非家族性高コレステロール血症、高脂血症、心臓疾患、代謝症候群、糖尿病、冠状動脈性心臓疾患、脳卒中、心血管疾患、アルツハイマー病、ならびに脂質異常症（代謝症候群、真性糖尿病、家族性複合型高脂血症、家族性高トリグリセリド血症；レムナント除去不全疾患、肝性リパーゼ欠乏症；食傷、甲状腺機能低下、エストロゲン及びプロゲスチン治療薬、β遮断薬、及びサイアザイド系利尿剤を含む薬物のいずれかに続発する脂質異常症；ネフローゼ症候群、慢性腎不全、クッシング症候群、原発性胆汁性肝硬変、糖原病、肝癌、胆汁うっ滞、先端巨大症、インスリノーマ、成長ホルモン単独欠損症、またはアルコール誘発性高トリグリセリド血症などの原発性及び続発性脂質異常症を含む）からなる群より選択されるコレステロール関連疾患または障害と、
心血管起因の死、非心血管起因または全ての原因による死、冠状動脈性心臓疾患、冠状動脈疾患、末梢性動脈疾患、脳卒中（虚血性及び出血性）、狭心症、脳血管性疾患及び急性冠動脈症候群、心筋梗塞及び不安定性狭心症からなる群より選択されるアテローム硬化性疾患と、
スタチンを用いることによって対処可能な疾患または障害と
からなる群より選択される疾患または障害を有する、実施形態１０４に記載の方法。
【０４４７】
実施形態２００：上記対象の上記治療が、致死性及び非致死性の心臓発作、致死性及び非致死性の脳卒中、心臓手術、心不全による入院、心臓疾患を有する対象の胸痛、及び／または既往の心臓疾患に起因する心血管事象、高いＣＲＰまたはｈｓＣＲＰに起因する心血管の疾病、ならびに心血管事象の再発からなる群より選択される疾病のリスクを低減することを含む、実施形態１０４に記載に方法。
【０４４８】
実施形態２０１：薬剤として用いるための実施形態１〜１０３のいずれかに記載の医薬組成物。
【０４４９】
実施形態２０２：上記薬剤が、
家族性高コレステロール血症（ヘテロ接合性高コレステロール血症、ホモ接合性高コレステロール血症、家族性欠陥アポリポタンパクＢ−１００血症；多遺伝子性高コレステロール血症を含む）、非家族性高コレステロール血症、高脂血症、心臓疾患、代謝症候群、糖尿病、冠状動脈性心臓疾患、脳卒中、心血管疾患、アルツハイマー病、ならびに脂質異常症（代謝症候群、真性糖尿病、家族性複合型高脂血症、家族性高トリグリセリド血症；レムナント除去不全疾患、肝性リパーゼ欠乏症；食傷、甲状腺機能低下、エストロゲン及びプロゲスチン治療薬、β遮断薬、及びサイアザイド系利尿剤を含む薬物のいずれかに続発する脂質異常症；ネフローゼ症候群、慢性腎不全、クッシング症候群、原発性胆汁性肝硬変、糖原病、肝癌、胆汁うっ滞、先端巨大症、インスリノーマ、成長ホルモン単独欠損症、またはアルコール誘発性高トリグリセリド血症などの原発性及び続発性脂質異常症を含む）からなる群より選択されるコレステロール関連疾患または障害と、
心血管起因の死、非心血管起因または全ての原因による死、冠状動脈性心臓疾患、冠状動脈疾患、末梢性動脈疾患、脳卒中（虚血性及び出血性）、狭心症、脳血管性疾患及び急性冠動脈症候群、心筋梗塞及び不安定性狭心症からなる群より選択されるアテローム硬化性疾患と、
スタチンを用いることによって対処可能な疾患または障害と
からなる群より選択される疾患または障害の治療に用いるためのものである、実施形態２０１に記載の医薬組成物。
【０４５０】
実施形態２０３：上記薬剤が、致死性及び非致死性の心臓発作、致死性及び非致死性の脳卒中、心臓手術、心不全による入院、心臓疾患を有する対象の胸痛、及び／または既往の心臓疾患に起因する心血管事象、高いＣＲＰまたはｈｓＣＲＰに起因する心血管の疾病、ならびに心血管事象の再発からなる群より選択される疾病のリスクの低減に用いるためのものである、実施形態２０２に記載の方法。
【０４５１】
【表１９】
2018154616.tif 000031
2018154616.tif 000032
【０４５２】
参照文献
Ｃｈａｎ，  Ｊ．，  Ｇｉｂｂｓ，  Ｊ．，  Ｄｉａｓ，  Ｃ．，  Ｗａｓｓｅｒｍａｎ，  Ｓ．，  Ｓｃｏｔｔ，  Ｒ．，  Ｃｌｏｇｓｔｏｎ，  Ｃ．，  ．  ．  ．  Ｓｔｅｉｎ，  Ｅ．  （２０１２）．  ＷＯ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ＷＯ２０１２１５４９９９．
Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．，  ＆  Ｌｅｓｋ，  Ａ．  Ｍ．  （１９８７）．  Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，  １９６（４），  ９０１−９１７．
Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．，  Ｌｅｓｋ，  Ａ．  Ｍ．，  Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ，  Ａ．，  Ｌｅｖｉｔｔ，  Ｍ．，  Ｓｍｉｔｈ−Ｇｉｌｌ，  Ｓ．  Ｊ．，  Ａｉｒ，  Ｇ．，  ．  ．  ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）．  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ．  Ｎａｔｕｒｅ，  ３４２（６２５２），  ８７７−８８３．  ｄｏｉ：  １０．１０３８／３４２８７７ａ０
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，  Ｄ．，  Ｄａｎｌｅｙ，  Ｄ．  Ｅ．，  Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ，  Ｋ．  Ｆ．，  Ｇｒｉｆｆｏｒ，  Ｍ．  Ｃ．，  Ｈａｗｋｉｎｓ，  Ｊ．  Ｌ．，  Ｓｕｂａｓｈｉ，  Ｔ．  Ａ．，  ．  ．  ．  Ｑｉｕ，  Ｘ．  （２００７）．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ＰＣＳＫ９  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｍｕｔａｎｔｓ  ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ．  Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，  １４（５），  ４１３−４１９．  ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｎｓｍｂ１２３５
Ｈｏｒｔｏｎ，  Ｊ．  Ｄ．，  Ｃｏｈｅｎ，  Ｊ．  Ｃ．，  ＆  Ｈｏｂｂｓ，  Ｈ．  Ｈ．  （２００７）．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ＰＣＳＫ９：  ｉｔｓ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ＬＤＬ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ，  ３２（２），  ７１−７７．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｔｉｂｓ．２００６．１２．００８
Ｊａｃｋｓｏｎ，  Ｓ．  Ｍ．，  Ｗａｌｋｅｒ，  Ｎ．  Ｐ．，  Ｐｉｐｅｒ，  Ｄ．  Ｅ．，  Ｓｈａｎ，  Ｂ．，  Ｓｈｅｎ，  Ｗ．，  Ｃｈａｎ，  Ｊ．，  ．  ．  ．  Ｃａｒａｂｅｏ，  Ｔ．  （２００９）．  ＷＯ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ＷＯ  ２００９／０２６５５８．
Ｋａｂａｔ，  Ｅ．，  Ｗｕ，  Ｔ．，  Ｐｅｒｒｙ，  Ｈ．，  Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，  Ｋ．，  ＆  Ｆｏｅｌｌｅｒ，  Ｃ．  （１９９１）．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （Ｖｏｌ．  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２）．  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ：  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ．
Ｋａｂａｔ，  Ｅ．，  Ｗｕ，  Ｔ．，  Ｒｅｉｄ−Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｍ．，  Ｐｅｒｒｙ，  Ｈ．，  ＆  Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，  Ｋ．  （１９８７）．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （４ｔｈ  ｅｄ．  Ｖｏｌ．  Ｎｏ．  １６５−４９２）．  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ：  ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ．
Ｍｏｒｉｃｈｉｋａ，  Ｔ．，  ＆  Ｋａｍｅｏｋａ，  Ｄ．  （２００７）．  ＷＯ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ＷＯ２００７０７４８８０．
Ｐｉｐｅｒ，  Ｄ．  Ｅ．，  Ｊａｃｋｓｏｎ，  Ｓ．，  Ｌｉｕ，  Ｑ．，  Ｒｏｍａｎｏｗ，  Ｗ．  Ｇ．，  Ｓｈｅｔｔｅｒｌｙ，  Ｓ．，  Ｔｈｉｂａｕｌｔ，  Ｓ．  Ｔ．，  ．  ．  ．  Ｗａｌｋｅｒ，  Ｎ．  Ｐ．  （２００７）．  Ｔｈｅ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ＰＣＳＫ９：  ａ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ＬＤＬ−ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  １５（５），  ５４５−５５２．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｓｔｒ．２００７．０４．００４
Ｓｅｉｄａｈ，  Ｎ．  Ｇ．，  Ｂｅｎｊａｎｎｅｔ，  Ｓ．，  Ｗｉｃｋｈａｍ，  Ｌ．，  Ｍａｒｃｉｎｋｉｅｗｉｃｚ，  Ｊ．，  Ｊａｓｍｉｎ，  Ｓ．  Ｂ．，  Ｓｔｉｆａｎｉ，  Ｓ．，  ．  ．  ．  Ｃｈｒｅｔｉｅｎ，  Ｍ．  （２００３）．  Ｔｈｅ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  ｎｅｕｒａｌ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  １  （ＮＡＲＣ−１）：  ｌｉｖｅｒ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，  １００（３），  ９２８−９３３．  ｄｏｉ：  １０．１０７３／ｐｎａｓ．０３３５５０７１００
Ｓｅｉｄａｈ，  Ｎ．  Ｇ．，  ＆  Ｐｒａｔ，  Ａ．  （２００７）．  Ｔｈｅ  ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ．  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  （Ｂｅｒｌ），  ８５（７），  ６８５−６９６．  ｄｏｉ：  １０．１００７／ｓ００１０９−００７−０１７２−７
【図１】
2018154616.tif 000033
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５−１】
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【図３５−２】
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【図３６−１】
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【図３６−２】
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【図３６−３】
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【図３７−１】
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【図３７−２】
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【図３８−１】
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【図３８−２】
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【配列表】
2018154616000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年8月6日(2018.8.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年２月２２日出願の米国仮特許出願第６２／４６２，２６６号の優先権を主張し、該出願はその全体が参照により本明細書に援用される。
【０００２】
配列表
本出願は電子的形式での配列表と共に出願されている。「Ａ−２１１２−ＷＯ−ＰＣＴ＿ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」との表題のファイルとして提出された上記配列表は２０１８年１月３１日に作成され、２１ＫＢのサイズである。上記電子的形式の配列表中の情報は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０００３】
提示される主題は、エボロクマブ及び他のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの医薬組成物ならびにかかる組成物の粘度の低減方法の分野に関する。詳細には、提示する主題は、Ｎ−アシルアルギニンを含むエボロクマブ及び他のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの医薬組成物、ならびに高濃度のエボロクマブ及び他のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの製剤の粘度を低減するためのＮ−アシルアルギニンの使用に関する。更に、開示される主題は、かかる医薬組成物の製造に関する方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
治療用抗体は、非経口注入などの投与用に溶液として製剤される。自己投与で皮下投与される製品に関しては、１〜２ミリリットルを超える送達容量を必要とする製剤は忍容性に乏しい。この問題を解決するために、抗体を高濃度（例えば、７０ｍｇ／ｍＬ〜２１０ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上）で製剤し、その結果として投与する容積を低減する場合がある。
【０００５】
しかしながら、一部の高濃度の抗体製剤は製造及び投与することが困難である。例えば、ＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であるエボロクマブ（レパーサ（登録商標））の製剤において、約７０ｍｇ／ｍＬを超える濃度のエボロクマブは高粘度である。しかし、エボロクマブの有効な用量は２週間毎に（Ｑ２Ｗ）２１０ｍｇまたは４週間毎に（Ｑ４Ｗ）４２０ｍｇである。高粘度の製剤は、バルク及び充填の段階を含む製造中に取り扱いが困難であるだけでなく、注射器に吸い上げ注射することが困難であり、患者への投与が困難且つ不快となる。
【０００６】
抗体製剤の粘度を低減するために、未修飾のアルギニン、グリシン、セリン、またはプロリンアミノ酸が抗体組成物に添加されている。例えば、８０ｍｇ／ｍＬの抗体及び７５ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬのアルギニンを含有する抗体製剤が凍結乾燥され、１２０〜２００ｍｇ／ｍＬに再構成される場合があり、最終的なアルギニン濃度は４３１ｍＭ〜７１８ｍＭとなる場合がある（Ｍｏｒｉｃｈｉｋａ  ＆  Ｋａｍｅｏｋａ，  ２００７）。アルギニンは、対照と比較した場合に当該製剤の粘度を低下させるが（Ｍｏｒｉｃｈｉｋａ  ＆  Ｋａｍｅｏｋａ，  ２００７）。更に、アルギニンの効果は、エボロクマブの粘度を所望のレベルまで低下させるには不十分である。
【０００７】
当技術分野において、アルギニンよりも効率的な化合物を含むエボロクマブ含有製剤及び他のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含有する製剤が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｍｏｒｉｃｈｉｋａ  ＆  Ｋａｍｅｏｋａ，  ２００７
【発明の概要】
【０００９】
第１の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択されるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．Ｎ−アセチルアルギニンと
を含み、
少なくとも約８０ｃＰ未満の粘度を有する医薬組成物が提供される。かかる第１の態様において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体であってよい。更に、この第１の態様において、上記医薬組成物の粘度は少なくとも約５０ｃＰ未満であってよい。上記医薬組成物は、約２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有していてもよく、またはヒト血液細胞と等張である。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬ、例えば２１０ｍｇ／ｍＬであってよい。上記Ｎ−アセチルアルギニンは、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭ、例えば、１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、または１４０ｍＭの濃度で存在していてもよい。この態様の医薬組成物は、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、またはそれらの組み合わせからなる群より選択されるバッファーなどのバッファーを更に含んでいてもよい。上記バッファーは約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在していてもよい。いくつかの場合において、上記バッファーは酢酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する。かかる医薬組成物のｐＨは約４．８〜約６．９、例えば、約５．４のｐＨであってよい。この態様の医薬組成物は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（Ｓｐａｎ）（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー（Ｂｒｉｊ））、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される界面活性剤などの界面活性剤を更に含んでいてもよい。上記界面活性剤は約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してもよい。この態様のいくつかの医薬組成物において、上記界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。更に、この態様の医薬組成物はプロリンを更に含んでいてもよく、上記プロリンは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば９０〜１２０ｍＭ、または約１２０ｍＭの濃度で存在してもよい。いくつかの場合において、この第１の態様の医薬組成物は、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば約５０〜約１００ｍＭの濃度で存在してもよいアルギニン塩を更に含んでいてもよい。上記アルギニン塩は、例えば、アルギニン−ＨＣｌ、アルギニン酢酸塩、またはアルギニングルタミン酸塩であってよい。いくつかの場合において、上記アルギニン塩はアルギニンＨＣｌであり、約５０ｍＭの濃度で存在する。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、この第１の態様の医薬組成物中では、約−３０℃以下で貯蔵された場合、少なくとも２年間または５年間以上でさえも安定であることができる。５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、かかる医薬組成物中��は、少なくとも約６ヶ月〜約２４ヶ月間またはそれ以上安定であることができる。２５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１ヶ月間以上、３ヶ月間以上、または６ヶ月間以上でさえも安定であることができる。４０℃では、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１ヶ月間以上安定であることができる。この第１の態様の医薬組成物に含まれるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーは、全ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満、例えば２．５％以下とすることができる。
【００１０】
第２の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択されるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．Ｎ−アセチルアルギニンと、
ｃ．アルギニン塩と、
ｄ．バッファーと、
ｅ．界面活性剤と
を含み、
少なくとも約８０ｃＰ未満の粘度を有する医薬組成物が開示される。
【００１１】
この第２の態様において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体である。
【００１２】
この第２の態様の医薬組成物は少なくとも約５０ｃＰ未満の粘度を有していてもよい。上記医薬組成物は、約２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有していてもよく、またはヒト血液細胞と等張である。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬ、例えば２１０ｍｇ／ｍＬであってよい。上記Ｎ−アセチルアルギニンは、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭ、例えば、１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、または１４０ｍＭの濃度で存在していてもよい。この態様の医薬組成物は、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、またはそれらの組み合わせからなる群より選択されるバッファーなどのバッファーを更に含んでいてもよい。上記バッファーは約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在していてもよい。いくつかの場合において、上記バッファーは酢酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する。かかる医薬組成物のｐＨは約４．８〜約６．９、例えば、約５．４のｐＨであってよい。この態様の医薬組成物は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される界面活性剤などの界面活性剤を更に含んでいてもよい。上記界面活性剤は約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してもよい。この態様のいくつかの医薬組成物において、上記界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。更に、この態様の医薬組成物はプロリンを更に含んでいてもよく、上記プロリンは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば９０〜１２０ｍＭ、または約１２０ｍＭの濃度で存在してもよい。いくつかの場合において、この第２の態様の医薬組成物は、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば５０〜１００ｍＭの濃度で存在してもよいアルギニン塩を更に含んでいてもよい。上記アルギニン塩は、例えば、アルギニン−ＨＣｌ、アルギニン酢酸塩、またはアルギニングルタミン酸塩であってよい。いくつかの場合において、上記アルギニン塩はアルギニンＨＣｌであり、約５０ｍＭの濃度で存在する。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、この第２の態様の医薬組成物中では、約−３０℃以下で貯蔵された場合、少なくとも２年間または５年間以上でさえも安定であることができる。５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、かかる医薬組成物中では、少なくとも約６ヶ月〜約２４ヶ月間またはそれ以上安定であることができる。２５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくと��１ヶ月間以上、３ヶ月間以上、または６ヶ月間以上でさえも安定であることができる。４０℃では、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１ヶ月間以上安定であることができる。この第２の態様の医薬組成物が含むＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーは、全ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満、例えば２．５％以下とすることができる。
【００１３】
第３の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１４０ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約５０ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物が開示される。
【００１４】
この第３の態様において、上記医薬組成物のｐＨは約５．１〜約５．７、例えば、約５．４のｐＨであってよい。上記医薬組成物の粘度は少なくとも約５０ｃＰ未満であってよい。
【００１５】
第４の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
ｂ．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｃ．約１４０ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｄ．約６３ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｅ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｆ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物が開示される。
【００１６】
第５の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１５５ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約７０ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物が開示される。
【００１７】
この第５の態様において、上記医薬組成物のｐＨは約５．１〜約５．７、例えば、約５．４のｐＨであってよい。上記医薬組成物の粘度は少なくとも約４５ｃＰ未満であってよい。
【００１８】
第６の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１７０ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約６３ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物が開示される。
【００１９】
この第６の態様において、上記医薬組成物のｐＨは約５．１〜約５．７、例えば、約５．４のｐＨであってよい。上記医薬組成物の粘度は少なくとも約６０ｃＰ未満であってよい。
【００２０】
第７の態様において、本明細書では、
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１５５ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約１２０ｍＭの濃度で存在するプロリンと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物が開示される。
【００２１】
この第７の態様において、上記医薬組成物のｐＨは約５．１〜約５．７、例えば、約５．４のｐＨであってよい。上記医薬組成物の粘度は少なくとも約６０ｃＰ未満であってよい。
【００２２】
これらの第３〜第７の態様において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、これらの態様の医薬組成物中では、約−３０℃以下で貯蔵された場合、少なくとも２年間または５年間以上でさえも安定であることができる。５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、かかる医薬組成物中では、少なくとも約６ヶ月〜２４ヶ月間またはそれ以上安定であることができる。２５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１ヶ月間以上、３ヶ月間以上、または６ヶ月間以上でさえも安定であることができる。４０℃では、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１ヶ月間以上安定であることができる。これらの態様の医薬組成物に含まれるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーは、全ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満、例えば２．５％以下とすることができる。
【００２３】
上述の態様のいずれにおいても、上記医薬組成物は液体であってよい。
【００２４】
第８の態様において、上述の７の態様のいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む、それを必要とする対象の治療方法が開示される。
【００２５】
第９の態様において、第１〜第７の態様のいずれかに記載の医薬組成物及び送達デバイスを備えるキットが開示される。上記送達デバイスは、注射器、ペン型注射器、ボディーインジェクター、及びオートインジェクターからなる群より選択されてもよい。上記キットは、上記送達デバイスを用いて上記医薬組成物を投与するための使用説明書を更に備えていてもよい。
【００２６】
第１０の態様において、本明細書では、少なくとも１４０ｍｇ／ｍＬのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含むＰＣＳＫ９結合ポリペプチド医薬組成物の調製方法であって、上記医薬組成物の粘度が上記Ｎ−アセチルアルギニンを含まない上記医薬組成物と比較した場合に低減されるような有効量のＮ−アセチルアルギニンを、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬組成物に添加することを含み、且つ上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメントと、
ｂ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体と、
ｃ．
ｉ．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
ｉｉ．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体と、
ｄ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体と、
ｅ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
ｉｉ．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
ｉｉｉ．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体と
からなる群より選択される上記方法が開示される。
【００２７】
この第１０の態様において、上記医薬組成物の粘度は約８０ｃＰ未満、または約５０ｃＰ未満である。この態様の方法の上記医薬組成物は、約２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有していてもよく、またはヒト血液細胞と等張である。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬ、例えば２１０ｍｇ／ｍＬであってよい。上記Ｎ−アセチルアルギニンは、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭ、例えば、１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、または１４０ｍＭの濃度で存在していてもよい。この態様の医薬組成物は、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、またはそれらの組み合わせからなる群より選択されるバッファーなどのバッファーを更に含んでいてもよい。上記バッファーは約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在していてもよい。いくつかの場合において、上記バッファーは酢酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する。かかる医薬組成物のｐＨは約４．８〜約６．９、例えば、約５．４のｐＨであってよい。この態様の医薬組成物は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される界面活性剤などの界面活性剤を更に含んでいてもよい。上記界面活性剤は約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してもよい。この態様のいくつかの医薬組成物において、上記界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。更に、この態様の医薬組成物はプロリンを更に含んでいてもよく、上記プロリンは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば９０〜１２０ｍＭ、または約１２０ｍＭの濃度で存在してもよい。いくつかの場合において、この第１０の態様の医薬組成物は、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば約５０〜約１００ｍＭの濃度で存在してもよいアルギニン塩を更に含んでいてもよい。上記アルギニン塩は、例えば、アルギニン−ＨＣｌ、アルギニン酢酸塩、またはアルギニングルタミン酸塩であってよい。いくつかの場合において、上記アルギニン塩はアルギニンＨＣｌであり、約５０ｍＭの濃度で存在する。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、この第１０の態様の医薬組成物中では、約−３０℃以下で貯蔵された場合、少なくとも約２年間または５年間以上でさえも安定であることができる。５℃においては、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、かかる医薬組成物中では、少なくとも約６ヶ月〜２４ヶ月間またはそれ以上安定であることができる。２５℃においては、上記��ＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも約１ヶ月間以上、３ヶ月間以上、または６ヶ月間以上でさえも安定であることができる。４０℃では、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１ヶ月間以上安定であることができる。この第１０の態様の医薬組成物に含まれるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーは、全ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満、例えば２．５％以下とすることができる。
【００２８】
第１１の態様において、本明細書では、治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第１の濃縮ステップと、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップと、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第２の濃縮ステップと、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップと、
ｅ．第３の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第３の濃縮ステップと
を含み、
上記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、上記方法が開示される。
【００２９】
この第１１の態様の方法において、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断する上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体であってよい。
【００３０】
更に、この第１１の態様において、第３の濃縮ステップの前に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が約２５℃〜約３７℃に高められてもよい。また、第１の溶液交換ステップが、第２の溶液の少なくとも３の透析ろ過容量（ｄｉａｖｏｌｕｍｅ）を用いて実施されてもよい。この第１１の態様のいくつかの下位の態様において、第２の溶液交換ステップは第３の溶液の少なくとも４の透析ろ過容量を用いて実施される。他の下位の態様において、上記治療用タンパク質の初期濃度は約１１ｍｇ／ｍＬ以下である。加えて、上記治療用ポリペプチドの濃度は約３倍〜約７倍高められ、例えば上記ポリペプチドの高められた濃度は約３５ｍｇ／ｍＬ〜約７０ｍｇ／ｍＬであってよい。いくつかの下位の態様において、第２の濃縮ステップで、上記治療用ポリペプチドの濃度は、第１の濃縮ステップから約２倍〜４倍、例えば約１４０ｍｇ／ｍＬに高められる。第３の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度は、第２の濃縮ステップから約１．５倍〜約２倍、例えば約２６０ｍｇ／ｍＬに高められてもよい。したがって、上記治療用ポリペプチドは、該治療用ポリペプチドの初期濃度よりも少なくとも約１９〜２０倍濃縮された最終濃度、例えば約２１０ｍｇ／ｍＬを有していてもよい。上記濃縮ステップは流加限外ろ過を含んでいてもよく、更に、第２の溶液と第３の溶液とは同一であってもよい。例えば、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２または第３の溶液はアルギニン塩及びバッファーを含んでいてもよく、例えば、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在し、上記アルギニン塩はＡｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩であり、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在し、上記バッファーは、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムバッファーである。他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭ〜約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１４０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更なる下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１５５ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に、上記組成物はプロリンを更に含んでいてもよく、該プロリンは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する。第２または第３の溶液のｐＨは約４．８〜約６．９、例えば５．４であってよい。第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ａ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｂ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｃ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｄ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｅ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｆ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｇ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｈ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられてもよい。更に、濃縮された後に、第３の溶液に、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グルコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される界面活性剤などの界面活性剤が添加されてもよい。上記界面活性剤は約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してもよい。この態様のいくつかの医薬組成物において、上記界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。
【００３１】
第１２の態様において、本明細書では、治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第１の濃縮ステップと、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニン、アルギニン塩、及びバッファーを含む第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップと、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第２の濃縮ステップと、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニン、アルギニン塩、及びバッファーを含む第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップと、
ｅ．第２の溶液交換ステップの後に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が約２５℃〜約３７℃に高められることと、
ｆ．上記ポリペプチドが流加限外ろ過濃縮を用いて更に濃縮される第３の濃縮ステップと
を含み、
第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ａ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｂ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｃ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｄ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｅ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｆ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｇ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｈ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられ、
上記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、上記方法が提供される。
【００３２】
更に、この第１２の態様において、第１の溶液交換ステップは、第２の溶液の少なくとも３の透析ろ過容量を用いて実施されてもよい。この第１２の態様のいくつかの下位の態様において、第２の溶液交換ステップは第３の溶液の少なくとも４の透析ろ過容量を用いて実施される。他の下位の態様において、上記治療用タンパク質の初期濃度は約１１ｍｇ／ｍＬ以下である。加えて、上記治療用ポリペプチドの濃度は約３倍〜約７倍高められ、例えば上記ポリペプチドの高められた濃度は約３５ｍｇ／ｍＬ〜約７０ｍｇ／ｍＬであってもよい。いくつかの下位の態様において、第２の濃縮ステップで、上記治療用ポリペプチドの濃度は、第１の濃縮ステップから約２倍〜４倍、例えば約１４０ｍｇ／ｍＬに高められる。第３の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度は、第２の濃縮ステップから約１．５倍〜約２倍、例えば約２６０ｍｇ／ｍＬに高められてもよい。したがって、上記治療用ポリペプチドは、該治療用ポリペプチドの初期濃度よりも少なくとも約１９〜２０倍濃縮された最終濃度、例えば約２１０ｍｇ／ｍＬを有していてもよい。上記濃縮ステップは流加限外ろ過を含んでいてもよく、更に、第２の溶液と第３の溶液とは同一であってもよい。上記Ｎ−アセチルアルギニンは約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在し、上記アルギニン塩はＡｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩であってよく、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在し、上記バッファーは、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムバッファーである。他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭ〜約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１４０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更なる下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１５５ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に、上記組成物はプロリンを更に含んでいてもよく、該プロリンは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する。第２または第３の溶液のｐＨは約４．８〜約６．９、例えば５．４であってよい。更に、濃縮された後に、第３の溶液に、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される界面活性剤などの界面活性剤が添加されてもよい。上記界面活性剤は約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してもよい。この態様のいくつかの医薬組成物において、上記界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。
【００３３】
第１３の態様において、本明細書では、治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第１の濃縮ステップ、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過及び第２の溶液の３の透析ろ過容量を用いて第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップ、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第２の濃縮ステップ、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過及び第３の溶液の４の透析ろ過容量を用いて、第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップ、
ｅ．第２の溶液交換ステップの後に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が約２５℃〜約３７℃に高められること、ならびに
ｆ．上記ポリペプチドが流加限外ろ過濃縮を用いて更に濃縮される第３の濃縮ステップ、
ｇ．あるいは、第３の濃縮ステップで得られる溶液に、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）を約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で添加するステップ
を含み、
第２及び第３の溶液が、約１４０ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、約５０ｍＭのＡｒｇ
ＨＣｌ、及び約１０ｍＭの酢酸ナトリウムを含み、ｐＨが約５．２である溶液、約１５
５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、約７０ｍＭのＡｒｇ  ＨＣｌ、及び約１０ｍＭの
酢酸ナトリウムを含み、ｐＨが約５．４である溶液、ならびに約１７０ｍＭのＮ−ア
セチルアルギニン、約１０ｍＭの酢酸ナトリウムを含み、ｐＨが約５．６である溶液、
からなる群より選択される溶液を含み、
第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ａ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｂ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｃ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｄ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｅ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｆ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｇ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｈ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられ、
上記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、上記方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】４０℃で１ヶ月のインキュベーション後の、Ｎ−アセチルアルギニンを含有する種々の製剤中の高濃度でのエボロクマブ試料のサイズ排除クロマトグラフィー−高圧液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）のデータのグラフである。ｘ軸上に示した製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［プロリン（ｍＭ）］。Ｙ軸は高分子量（ＨＭＷ）種（エボロクマブの凝集体及びオリゴマー）である試料のパーセンテージを示す。
【図２】２５℃、せん断速度１０００ｓｅｃ−１における、２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブの製剤粘度の比較のグラフである。
【図３】図３Ａは、ＪＭＰ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒソフトウェアによって作成した、４０℃で１ヶ月間保持したエボロクマブ製剤のＳＥ−ＨＰＬＣデータのグラフである。図３Ｂは、試料を２５℃で３ヶ月間保持した以外は同様のデータである。
【図４】ＳＥ−ＨＰＬＣによる、４０℃で１ヶ月間保持した２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤のＨＭＷ種のパーセントの棒グラフである。製剤は、異なるｐＨにおいて、Ｎ−アセチルアルギニンの濃度及びアルギニンＨＣｌ濃度が異なる。
【図５−１】図５Ａ及び５Ｂは、表示した温度で表示した時間の間（５℃で６ヶ月間（図５Ａ）、２５℃で３ヶ月間（図５Ｂ））保持した、ｐＨ４．８及びｐＨ５．４の選択したエボロクマブ試料の、エボロクマブ・プロリン製剤対照と比較した、ＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラフである。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図５−２】図５Ｃは、表示した温度で表示した時間の間（４０℃で１ヶ月）保持した、ｐＨ４．８及びｐＨ５．４の選択したエボロクマブ試料の、エボロクマブ・プロリン製剤対照と比較した、ＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラフである。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図６】図６Ａ及び６Ｂは、表示した温度（５℃（図６Ａ）、２５℃（図６Ｂ））で保持した、示したエボロクマブ製剤に関して、経時的に発生するＨＭＷ種のパーセントのグラフである。２１０ｍｇ／ｍＬの被験エボロクマブ・Ｎ−アセチルアルギニン製剤を、１４０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ・プロリン製剤対照と比較する。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図７】図７Ａは、ＪＭＰ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒソフトウェアによって作成した、４０℃で１ヶ月間保持したエボロクマブ製剤のカチオン交換クロマトグラフィー−高圧液体クロマトグラフィー（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）データのグラフである。図７Ｂは、試料を２５℃で３ヶ月間保持した以外は同様のデータを示す。更なる詳細については当該の実施例を参照されたい。
【図８】ＣＥＸ−ＨＰＬＣによる、４０℃で１ヶ月間保持した２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤の酸性ピークのパーセントのグラフである。
【図９】図９Ａ及び９Ｂは、光遮蔽による液体中の粒子計測法（ｌｉｇｈｔ  ｏｂｓｃｕｒａｔｉｏｎ  ｌｉｑｕｉｄ  ｂｏｒｎｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ）によって測定した、５℃、２５℃、及び４０℃で３ヶ月間保持した種々のエボロクマブ製剤の、ミリリットル当たりの目視可能以下の粒子（ｓｕｂ−ｖｉｓｉｂｌｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）（１０μＭ以上（図９Ａ）、または２５μＭ以上（図９Ｂ））のグラフである。図９Ｃは、光遮蔽による液体中の粒子計測法によって測定した、５℃または２５℃で６ヶ月間保持した製剤の、目視可能以下の粒子（１０μＭまたは２５μＭ以上）のグラフである。
【図１０】０．７０未満のアスペクト比（ＡＲ）によってフィルタをかけたマイクロフローイメージング（Ｍｉｃｒｏ  Ｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｉｎｇ）（ＭＦＩ）分析によって測定した、種々のエボロクマブ製剤の目視可能以下の粒子のグラフである。
【図１１】示した温度で表示した時間の間保持した種々のエボロクマブ製剤の粘度をまとめたグラフであり、Ｔ０は初期の粘度値を表わす。
【図１２】互いにｐＨ及びバッファーが異なるエボロクマブ製剤の、３ヶ月までの経時的なｐＨ値を示すグラフ及び表である。試料は４０℃で保持した。
【図１３】図１３Ａ〜１３Ｃは、４℃（図１３Ａ）、２５℃（図１３Ｂ）、及び４０℃（図１３Ｃ）で３ヶ月までの間の、ｐＨ及びバッファーが異なる２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤の、ＨＭＷ種のパーセントに対するｐＨの影響を示すＳＥ−ＨＰＬＣデータのグラフである。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図１４】異なるｐＨのエボロクマブ製剤の、製剤直後のオリゴマーレベルのグラフである。
【図１５】４０℃で３ヶ月間保持した後の、ｐＨ及びバッファーが異なるエボロクマブ製剤の種々のサイズのタンパク質分子を示すクロマトグラムである。（ＬＭＷ＝低分子量種）。
【図１６】図１６Ａ〜１６Ｃは、ｐＨ及びバッファーが異なる２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤の、経時的なＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析のデータ（主ピークの％）のグラフである。図１６Ａは５℃で保持した試料の経時的な主ピークのパーセントを示し、図１６Ｂは２５℃で保持した試料の同種のデータを示し、図１６Ｃは４０℃で保持した試料の同種のデータを示す。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図１７】４０℃で保持した、ｐＨ及びバッファーが異なる２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤の、該製剤中の酸性種のパーセントを測定する、経時的なＣＥＸ−ＨＰＬＣ分析のデータのグラフである。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図１８】２５℃で３ヶ月間保持した、ｐＨ及びバッファーが異なる２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤の、酸性ピーク種、及び塩基性ピーク種、及び主ピーク種を示す、ＣＥＸ−ＨＰＬＣデータのクロマトグラムである。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図１９】ｐＨ及びバッファーが異なる種々のエボロクマブ製剤のペプチドマッピングデータのクロマトグラムであり、試料は４０℃で１ヶ月間保持した。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図２０】４０℃で１ヶ月後の、ｐＨ及びバッファーが異なる製剤中のエボロクマブを分析したいくつかの実験の結果をまとめたグラフである。全ての試料は、１０ｍＭのバッファー１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。更なる詳細については当該の図及び実施例を参照されたい。
【図２１】図２１Ａ及び２１Ｂは、光遮蔽による液体中の粒子計測法によって測定した、５℃、２５℃、及び４０℃で２ヶ月間保持した、ｐＨ及びバッファーが異なる種々のエボロクマブ製剤の、ミリリットル当たりの目視可能以下の粒子（１０μＭ以上（図２１Ａ）、または２５μＭ以上（図２１Ｂ））のグラフである。図２１Ｃ及び２１Ｄは、５℃または２５℃で６ヶ月間保持したｐＨ及びバッファーが異なるエボロクマブ製剤の、目視可能以下の粒子（１０μＭ以上（図２１Ｃ）、２５μＭ以上（図２１Ｄ）のグラフである。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図２２】マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）によって確認した、ｐＨ及びバッファーが異なるエボロクマブ製剤の目視可能以下の粒子のグラフである。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図２３】２５℃で６ヶ月間保持した、ｐＨ及びバッファーが異なる２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤に対する還元キャピラリ電気泳動−ドデシル硫酸ナトリウム（ｒｅｄｕｃｅｄ  ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ−ｓｏｄｉｕｍ  ｄｏｄｅｃｙｌ  ｓｕｌｆａｔｅ）（ｒＣＥ−ＳＤＳ）分析の結果のグラフである。試料は全て、１０ｍＭのそれぞれ記載したバッファーに加えて、１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図２４】ｐＨ及びバッファーが異なるエボロクマブ製剤の、粘度とｐＨとの間の相関性のグラフである。全ての試料は、１０ｍＭのバッファー１６５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、及び０．０１％のポリソルベート８０を含有する。
【図２５】図２５Ａ〜２５Ｃは、５℃（図２５Ａ）、２５℃（図２５Ａ）、及び４０℃（図２５Ｃ）で表示した期間保持した種々のエボロクマブ製剤の、ＳＥ−ＨＰＬＣによって測定したＨＭＷ種のパーセントのグラフである。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図２６】図２６Ａ〜２６Ｃは、５℃（図２６Ａ）、２５℃（図２６Ａ）、及び４０℃（図２６Ｃ）で表示した期間保持した種々のエボロクマブ製剤の、ＣＥＸ−ＨＰＬＣによって測定した酸性ピークのパーセントのグラフである。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図２７】還元キャピラリ電気泳動−ドデシル硫酸ナトリウム（ｒＣＥ−ＳＤＳ）による、５℃、２５℃、及び４０℃で３ヶ月間保持した種々のエボロクマブ製剤の、初期レベル（Ｔ０）と比較した、Ｐｒｅ−ＬＣ＋ＬＣ＋ＨＣ（ＬＣ＝軽鎖、ＨＣ＝重鎖）のパーセントのグラフである。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図２８】３種の異なる濃度のエボロクマブの種々のエボロクマブ製剤の粘度のグラフであり、粘度データは、表示した温度において、９０，０００ｓｅｃ−１までのせん断速度を用いて測定した。製剤の表記法の説明：［酢酸塩（ｍＭ）］／［Ｎ−アセチルアルギニン（ｍＭ）］／［アルギニンＨＣｌ（ｍＭ）］。
【図２９】３種のＮＡＲ製剤バッファー中におけるエボロクマブ製剤のＵＦ／ＤＦ流量データのグラフである。
【図３０】ＵＦ１／ＤＦ１における３５ｍｇ／ｍＬ及び７０ｍｇ／ｍＬ（ＵＦ／ＤＦ−７０及びＵＦ／ＤＦ−３５）でのエボロクマブのＵＦ／ＤＦプロセスにおけるＨＭＷ種生成のパーセンテージのグラフである。この図はまた、２種のエボロクマブの初期濃度に対する上記プロセスの各ステップにおけるエボロクマブのｍｇ／ｍＬで表した濃度も示す。
【図３１】ｐＨ５．２（図３１Ａ及び３１Ｂ）、ｐＨ５．４（図３１Ｃ及び３１Ｄ）、及びｐＨ５．６（図３１Ｅ及び３１Ｆ）のＮＡＲ含有製剤中のエボロクマブのＳＥ−ＨＰＬＣ（図３１Ａ、図３１Ｃ、及び図３１Ｅ）ならびにＣＥＸ−ＨＰＬＣ（図３１Ｂ、図３１Ｄ、及び図３１Ｆ）のグラフである。この図はまた、ＵＦ／ＤＦプロセスの間の種々のステップにおけるＨＭＷ種のパーセント、ＬＭＷ種のパーセント、及びエボロクマブパーセントも示す。
【図３２】２〜８℃及び室温での貯留液保持検討由来のエボロクマブ・ＮＡＲ  ＤＳ試料のＨＭＷ種生成のパーセントを示す図である。
【図３３】高温での貯留液保持検討由来のエボロクマブ・ＮＡＲ  ＯＣ試料のＨＭＷ種生成のパーセントを示す図である。
【図３４】種々の温度におけるエボロクマブ・ＮＡＲ製剤の粘度測定のグラフである。
【図３５−１】図３５Ａ及び３５Ｂは、実施例９において用いた、４℃（図３５Ａ）、及び２５℃（図３５Ｂ）での６ヶ月までのインキュベーション後の全ての被験製剤のＳＥ−ＨＰＬＣデータのグラフである。
【図３５−２】図３５Ｃは、実施例９において用いた、４０℃での６ヶ月までのインキュベーション後の全ての被験製剤のＳＥ−ＨＰＬＣデータのグラフである。図３５Ｄは、（図３５Ｃにおいて折れ線グラフとして示した）上記４０℃でのＳＥ−ＨＰＬＣデータを棒グラフとして示し、製剤間の凝集の比較をより識別可能にした図である。
【図３６−１】図３６Ａ及び３６Ｂは、実施例９において用いた被験製剤のＣＥＸ−ＨＰＬＣデータのグラフであり、４℃での３ヶ月までのインキュベーション後の酸性ピークの％及び塩基性ピークの％の経時的な変化を示す（図３６Ａ（酸性ピークの％）、図３６Ｂ（塩基性ピークの％））。
【図３６−２】図３６Ｃ及び３６Ｄは、実施例９において用いた被験製剤のＣＥＸ−ＨＰＬＣデータのグラフであり、２５℃での３ヶ月までのインキュベーション後の酸性ピークの％及び塩基性ピークの％の経時的な変化を示す（図３６Ｃ（酸性ピークの％）、図３６Ｄ（塩基性ピークの％））。
【図３６−３】図３６Ｅ及び３６Ｆは、実施例９において用いた被験製剤のＣＥＸ−ＨＰＬＣデータのグラフであり、４０℃での３ヶ月までのインキュベーション後の酸性ピークの％及び塩基性ピークの％の経時的な変化を示す（図３６Ｅ（酸性ピークの％）、図３６Ｆ（塩基性ピークの％））。
【図３７−１】図３７Ａ及び３７Ｂは、３０℃での３ヶ月までのインキュベーション後の、実施例９において用いた被験製剤の主ピークの％及びＬＭＷ種の％に関する経時的なｒＣＥ−ＳＤＳデータのグラフである（図３７Ａ（主ピークの％）、図３７Ｂ（ＬＭＷ種の％））。
【図３７−２】図３７Ｃ及び３７Ｄは、４０℃での３ヶ月までのインキュベーション後の、実施例９において用いた被験製剤の主ピークの％及びＬＭＷ種の％に関する経時的なｒＣＥ−ＳＤＳデータのグラフである（図３７Ｃ（主ピークの％）、図３７Ｂ（ＬＭＷ種の％））。
【図３８−１】図３８Ａ及び３８Ｂは、ＨＩＡＣを用いた光遮蔽粒子計測法による、４℃での３ヶ月までの間のインキュベーション後の実施例９において用いた被験製剤の、目視可能以下の粒子のデータのグラフである。図３８Ａ：ＨＩＡＣ≧１０μｍ、図３８Ｂ：ＨＩＡＣ≧２５μｍ。
【図３８−２】図３８Ｃ及び３８Ｄは、ＨＩＡＣを用いた光遮蔽粒子計測法による、４０℃での３ヶ月までの間のインキュベーション後の実施例９において用いた被験製剤の、目視可能以下の粒子のデータのグラフである。図３８Ｃ：ＨＩＡＣ≧１０μｍ、図３８Ｄ：ＨＩＡＣ≧２５μｍ。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本発明者らは、驚くべきことに、アルギニンの誘導体であるＮ−アセチルアルギニン（ＮＡＲ）が、未アセチル化アルギニンよりも、高濃度（１００ｍｇ／ｍＬを超える、例えば１４０ｍｇ／ｍＬ以上）のエボロクマブを含む医薬組成物の粘度を効率的に低減することを見出した。著しい面倒を伴わない製造及び患者による投与には５０ｃＰ以下の粘度の医薬組成物が適するが、それよりも高い粘度の製剤は（注射器に充填する際などの）取り扱い及び投与が困難である。未修飾のアルギニンが高タンパク質濃度の製剤の粘度を低減することは公知であるが、アルギニングルタミン酸塩は類似のプロリン含有エボロクマブ（２１０ｍｇ／ｍＬ）製剤の粘度を（１５９ｃＰから１０９ｃＰへと）５０ｃＰ低減するのみであり、目標の５０ｃＰ以下よりも大幅に高かった。更に、アルギニン一塩酸塩（Ａｒｇ  ＨＣｌ）の添加単独では、上記プロリン含有製剤の粘度が１５９ｃＰから７０ｃＰへと低下し、この目標を達成しなかった。それに反して、ＮＡＲは、上記粘度を５８ｃＰへと更に低減する驚くべき効果（プロリン製剤と比較して１０１ｃＰを超える低減）を達成し、（ＮＡＲの溶解性を向上させ、等張性製剤を実現するために）Ａｒｇ  ＨＣｌと組み合わせた場合は、５０ｃＰを下回る粘度、実際には、上記目標を７ｃＰ超える４３ｃＰの粘度を有する製剤が達成された。図２を参照されたい。ＮＡＲの溶解度は２３０ｍＭ未満に制限されることから、皮下投与用の等張性製剤を実現するためには別の添加剤が必要となる。アルギニンの塩化物塩が、グルタミン酸塩などの他のアルギニン塩よりもエボロクマブの粘度の低減により効果的であるとの予想外の発見が、製剤粘度の最小化に対して重要であった。
【００３６】
別の予想外の発見としては、ｐＨ依存性のエボロクマブの安定性ならびにＮＡＲ及びアルギニンＨＣｌの存在下での粘度効果があった。高温において５．０より低いｐＨでは、有意なエボロクマブの凝集の速度の増加が見られた。また、ｐＨが５．１から６．９に上昇すると、ｐＨ依存性の粘度の低下が認められた。
【００３７】
本発明者らは更に、２ステップ限外ろ過／透析ろ過（ＵＦ／ＤＦ）プロセスが、従来の１ステッププロセスと比較して、ＮＡＲ物質を顕著に削減しながら、かかるＮＡＲ含有高エボロクマブ濃度医薬製剤を調製することができることを見出した。ＮＡＲはＡｒｇ  ＨＣｌよりも約１０倍高価であることから、かかる方法は顕著なコスト削減を可能にする。
【００３８】
定義
上述の概括的な説明及び以下の詳細な説明は両方共に、単に例示的及び説明的なものであって、限定的なものではない。別段の明示がない限り、単数形の使用は複数形を包含する。別段の指定がない限り、「または」の使用は「及び／または」を意味する。用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態は限定するものではない。「要素（ｅｌｅｍｅｎｔ）」または「構成要素（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」などの用語は、別段の明示がない限り、１のユニットを含む要素（ｅｌｅｍｅｎｔｓ）及び構成要素（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）ならびに２以上の下位ユニットを含む要素及び構成要素を包含する。用語「部分（ｐｏｒｔｉｏｎ）」の使用は、部分（ｍｏｉｅｔｙ）の一部または当該の部分（ｍｏｉｅｔｙ）全体を含む場合がある。数値範囲、例えば１〜５に言及する場合、１、２、３、４、及び５などの全ての間にある値のみならず、１．５、２．２、３．４、及び４．１などのそれらの少数も明示的に包含される。
【００３９】
量を修飾する場合、「約」（例えば、「約」３ｍＭ）とは、当該の修飾される量の近傍での変動が生じてもよいことを意味する。これらの変動は、一般的な測定及び取り扱い操作、偶然の誤差、原料成分の純度などの様々な手段によって生じ得る。
【００４０】
「Ｎ−アセチルアルギニン」（ＮＡＲ）とは式１
【化１】
2018154616.tif 000077
の分子を意味する。
【００４１】
医薬組成物の文脈において、「添加剤」とは、本来的に原体（例えば物質）の一部ではなく、何らかの特定の目的（例えば、保存、粘度低減、安定化）を満たすために意図して添加される物質を意味する。
【００４２】
「類似体」とは、生物学的アッセイを用いて測定した、親配列の生物学的活性を依然として実質的に維持しながら、親配列と比較して挿入、欠失または置換を有するアミノ酸配列をいう。類似体としては、改変されたグリコシル化を伴うポリペプチド、グリコシル化を伴わないポリペプチドが挙げられる。製剤は、例えば水溶性ポリマー（例えばペグ化された）、放射性核種、または他の診断用の部分もしくは標的化のための部分もしくは治療用の部分を結合するために化学的に改変された、天然起源のまたは類似体のポリペプチドの誘導体を含んでいてもよい。
【００４３】
「抗体」とは、任意のイソ型の完全な免疫グロブリンをいい、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及び二重特異性抗体が挙げられる。完全な抗体は、概括的には少なくとも２の全長重鎖及び２の全長軽鎖を含むこととなる。抗体配列は単一の種のみに由来してもよく、または「キメラ」であってもよい。すなわち、当該抗体の異なる部分が２の異なる種に由来してもよい。「抗体」としてはまた、２の実質的に全長の重鎖及び２の実質的に全長の軽鎖を含む抗体であって、２の全長の軽鎖及び２の全長の重鎖からなる抗体と同一または類似の結合及び／または機能を保持するとの条件の上記抗体が挙げられる。例えば、重鎖及び／または軽鎖のＮ末端及び／またはＣ末端に１、２、３、４、または５のアミノ酸残基の置換、挿入または欠失を有する抗体が、当該抗体が、２の全長重鎖及び２の全長軽鎖を含む抗体と同一または類似の結合及び／または機能を保持するとの条件で、上記定義に含まれる。抗体としては、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、及び合成抗体が挙げられる。
【００４４】
一般的な抗体の構造ユニットは四量体を含む。かかる四量体のそれぞれは一般的には、同一である二対のポリペプチド鎖から構成され、それぞれの対が１つの全長「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの全長「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は一般的に、一般的には抗原認識を担う約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は一般的には、エフェクター機能を担うことができる定常領域を画定する。軽鎖は一般的には、カッパ及びラムダ軽鎖として分類される。重鎖は一般的にはミュウ、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、当該抗体のイソ型をそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥとして定義する。ＩｇＧ抗体にはいくつかのサブクラスがあり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４が挙げられる。ＩｇＭには、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含むサブクラスがある。ＩｇＡも同様に、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含むサブクラスに細分化される。全長の軽鎖及び重鎖内では、一般的には、上記可変領域と定常領域とが、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合され、重鎖も更に約１０のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、一般的に抗原結合部位を形成する。
【００４５】
上記可変領域は一般的には、３つの相補性決定領域すなわちＣＤＲとも呼ばれる超可変領域によって連結される、比較的保存されたフレームワーム領域（ＦＲ）の同一の一般構造を示す。各対の上記２つの鎖の上記ＣＤＲは、上記フレームワーク領域によって一列に並んでおり、特定のエピトープに結合することができる。軽鎖及び重鎖の可変領域は共に、一般的に、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の帰属は、一般的にＫａｂａｔ（Ｋａｂａｔ，  Ｗｕ，  Ｐｅｒｒｙ，  Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，  ＆  Ｆｏｅｌｌｅｒ，  １９９１；Ｋａｂａｔ，  Ｗｕ，  Ｒｅｉｄ−Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｐｅｒｒｙ，  ＆  Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，  １９８７）またはＣｈｏｔｈｉａ  （Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ，  １９８７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９）の定義に従う。
【００４６】
全長抗体に代えて、抗体の「フラグメント」または「抗原結合フラグメント」を用いることができる。「抗体フラグメント」とは、ＰＣＳＫ９などの標的タンパク質に対する特異的抗原結合を可能にするために十分である、免疫グロブリンの少なくとも１つのＣＤＲを含有する、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメントをいう。
【００４７】
抗体重鎖は抗体軽鎖の不存在下で抗原に結合することができる。抗体軽鎖は抗体重鎖の不存在下で抗原に結合することができる。抗体結合領域は抗体軽鎖の不存在下で抗原に結合することができる。抗体結合領域は抗体重鎖の不存在下で抗原に結合することができる。個々の可変領域は他の可変領域の不存在下で抗原に特異的に結合することができる。
【００４８】
上記重鎖の上記ＣＤＲ領域は、一般的にはＨ１、Ｈ２、及びＨ３と呼ばれ、アミノ末端からカルボキシ末端の方向に順次番号付けされる。上記軽鎖中の上記ＣＤＲ領域はＬ１、Ｌ２、及びＬ３と呼ばれ、アミノ末端からカルボキシ末端の方向に順次番号付けされる。
【００４９】
用語「軽鎖」は、全長軽鎖及び結合特異性を与えるのに十分な可変領域配列を有する軽鎖のフラグメントを包含する。全長軽鎖は、可変領域ドメイン、ＶＬ、及び定常領域ドメイン、ＣＬを含む。上記軽鎖の上記可変領域ドメインは当該ポリペプチドのアミノ末端にある。軽鎖としては、カッパ鎖及びラムダ鎖が挙げられる。
【００５０】
用語「重鎖」は、全長重鎖及び結合特異性を与えるのに十分な可変領域配列を有するそのフラグメントを包含する。全長重鎖は、可変領域ドメイン、ＶＨ、ならびに３種の定常領域ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。上記ＶＨドメインは当該ポリペプチドのアミノ末端にあり、上記ＣＨドメインはカルボキシ末端にあり、ＣＨ３は当該ポリペプチドのカルボキシ末端に最も近い。重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４サブタイプを含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２サブタイプを含む）、ＩｇＭならびにＩｇＥを含む任意のイソ型の重鎖であってよい。
【００５１】
それぞれの個々の免疫グロブリン鎖は、一般的にはいくつかの「免疫グロブリンドメイン」から構成され、それぞれの免疫グロブリンドメインは大まかに９０〜１１０のアミノ酸からなり、特徴的な折り畳みパターンを有する。これらのドメインは抗体ポリペプチドの基本的なユニットである。ヒトにおいて、上記ＩｇＡ及びＩｇＤイソ型は４の重鎖及び４の軽鎖を含有し、上記ＩｇＧ及びＩｇＥイソ型は２の重鎖及び２の軽鎖を含有し、上記ＩｇＭイソ型は５の重鎖及び５の軽鎖を含有する。重鎖Ｃ領域は一般的に、エフェクター機能を担うことができる１または複数のドメインを含む。重鎖定常領域ドメインの数は当該イソ型に依存する。例えば、ＩｇＧ重鎖は、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３として知られる３のＣ領域ドメインを含有する。特定の場合において、抗ＰＣＳＫ９抗体はＩｇＧ１またはＩｇＧ２またはＩｇＧ４イソ型である。
【００５２】
用語「可変領域」または「可変ドメイン」とは、一般的には上記重鎖中のアミノ酸末端のおよそ１２０〜１３０アミノ酸及び上記軽鎖中のアミノ末端の約１００〜１１０アミノ酸を含む、抗体の上記軽鎖及び／または重鎖の部分をいう。抗体の上記可変領域は、一般的には特定の抗体のその標的に対する特異性を決定する。
【００５３】
「抗原」とは、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド（例えば、抗体またはその結合フラグメントを含む）などの、選択的結合剤が結合することができる分子または分子の一部分を意味する。いくつかの場合において、上記抗原は、動物において、当該抗原に結合することができる抗体を産生させるために用いることができる。抗原は、種々のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと相互作用することができる１または複数のエピトープを保有することができる。
【００５４】
「アルギニン塩」とはアルギニンの塩を意味する。例としては、アルギニン一塩酸塩（Ａｒｇ  ＨＣｌ）、アルギニン酢酸塩（Ａｒｇ酢酸塩）及びアルギニングルタミン酸塩（Ａｒｇグルタミン酸塩）が挙げられる。
【００５５】
「バッファー」とは、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、ならびにそれらの塩を含む、薬学的に許容されるバファーを意味する。
【００５６】
同一のエピトープに対して競合する抗体の文脈において用いられる場合、「競合する」とは、被験抗体が、リファレンス抗体（例えば、リガンド、またはリファレンス抗体）の共通の抗原（例えば、ＰＣＳＫ９またはそのフラグメント）に対する特異的な結合を妨げるかまたは阻害する（例えば低減する）アッセイによって測定される、抗体間の競合を意味する。１つの抗体が別の抗体と競合するかを判定するために、多数の種類の競合結合アッセイ、例えば、種々の当技術分野で認知された試薬及び標識を用いた固相の直接的または間接的免疫アッセイを用いることができる。被験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を測定することによって競合的阻害が測定される。通常、被験抗体を過剰に存在させる。競合アッセイによって識別される抗体には、リファレンス抗体と同一のエピトープに結合する抗体及び、リファレンス抗体が結合するエピトープに、立体障害が生じるのに十分に近位の隣接するエピトープに結合する抗体が含まれる。通常、競合する抗体が過剰に存在する場合、該抗体はリファレンス抗体の共通の抗原に対する特異的な結合を、少なくとも４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％または７５％以上阻害する（例えば低減する）。いくつかの場合、結合は、少なくとも８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、または９７％以上阻害される。
【００５７】
「透析ろ過」、「ＤＦ」及び類似の用語は、限外ろ過膜（すなわち、異なる形状またはサイズを有する分子の間を区別することができる半透過性膜）を用いて、例えば、ポリペプチドもしくは他の生体分子を含有する溶液または混合物から、塩または溶媒を除去、置換する、またはそれらの濃度を低減することを意味する。
【００５８】
ろ過の文脈において、「透析ろ過容量（ｄｉａｖｏｌｕｍｅ）（ＤＶ）」とは、残留分の容量に対する単位操作に導入される透析ろ過バッファーの容量を意味する。
【００５９】
「エピトープ」は、抗体などのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが結合することができる任意の決定基を包含する。エピトープは抗原の一領域であって、当該抗原を標的とするＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが結合する上記抗原の領域であり、該抗原がタンパク質である場合には、上記領域は上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドに直接接触する特定のアミノ酸を含む。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基及びスルホニル基などの、化学的に活性な分子の表面基を含んでいてもよく、特定の三次元的な構造上の特徴及び特定の電荷の特徴を有していてもよい。特定の抗原に対して特異的な抗体は、タンパク質または他の高分子の複雑な混合物中において、標的抗原上のエピトープを優先的に認識する。
【００６０】
「賦形剤」とは、処方薬において希釈剤もしくはビヒクルとして、または薬が丸剤の形態で提供される場合に形状もしくは硬さを付与するために添加される、概ね不活性な物質、例えば、単シロップ、植物性ガム、芳香散、ハチミツ、及び種々のエリキシルを意味する。
【００６１】
「供給クロスフロー（Ｆｅｅｄ  Ｃｒｏｓｓ−ｆｌｏｗ）」とは、供給流速（Ｌ／時間）を膜面積（ｍ２）で除した値を意味する。
【００６２】
ろ過の文脈において、「流量（ｆｌｕｘ）（ＬＭＨ）」とは、時間当たり膜面積の平米当たりのリットル（Ｌ／ｈ／ｍ２）を意味する。
【００６３】
治療用ポリペプチドを含有する医薬製剤の文脈において、「高分子量種」または「ＨＭＷ種」とは、当技術分野で認知されたアッセイによって測定した、本来の治療用ポリペプチドよりも大きな治療用タンパク質を意味する。ＨＭＷ種には、治療用ポリペプチドのオリゴマー及び治療用ポリペプチドの凝集体が含まれる。
【００６４】
ろ過の文脈において、「ホールドアップ容積（ＨＵＶ）」とは、カートリッジの容積を含むＴＦＦシステムのライン容積を意味する。
【００６５】
「同一性」とは、当該配列をアラインし且つ比較することによって判定される、２以上のポリペプチド分子または２以上の核酸分子の間の関係をいう。「同一性パーセント」とは、比較される分子中のアミノ酸またはヌクレオチド間の同一な残基のパーセントを意味し、比較される分子の最小のもののサイズに基づいて算出される。これらの計算に関しては、アラインメント中のギャップ（存在する場合には）は、好ましくは、特定の数学的モデルまたはアルゴリズムによって対処される。これらの技法は当技術分野において周知である。
【００６６】
同一性パーセントの計算において、比較される配列は一般的に、当該配列間で最大の一致を最大化するようにアラインされる。
【００６７】
２のアミノ酸配列をアラインするための特定のアラインメントスキームによって、上記２の全長の配列間には顕著な相関性がないにもかかわらず、該２の配列の短い領域のみが一致する結果となる場合があり、このアラインされた小さな領域が非常に高い配列同一性を有することがある。したがって、選択されたアラインメント方法は、それが所望であるならば、目的とするポリペプチドの所望の数の連続したアミノ酸（例えば５０のアミノ酸）に及ぶアラインメントを生じさせるように適合させてもよい。
【００６８】
２０種の従来のアミノ酸の立体異性体（例えばＤ−アミノ酸）、α−，α−ジ置換アミノ酸などの非天然アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、及び他の非従来型アミノ酸もまたＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの好適な構成成分となり得る。非従来型アミノ酸の例としては、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、ε−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、σ−Ｎ−メチルアルギニン、ならびに他の類似のアミノ酸及びイミノ酸（例えば４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。
【００６９】
保存的アミノ酸置換は、一般的には生物学的系における合成によるのではなく化学的なペプチド合成によって組み込まれた、非天然起源のアミノ酸残基を包含することができる。これらはペプチド模倣体及び他の逆向きのまたは逆位の形態のアミノ酸残基を含む。
【００７０】
上記抗原結合タンパク質またはＰＣＳＫ９タンパク質を変化させるにあたって、アミノ酸の疎水性親水性指標（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｙ  ｉｎｄｅｘ）を考慮してもよい。各アミノ酸に、当該アミノ酸の疎水性及び電荷の特徴に基づいて疎水性親水性指標が指定されている。タンパク質に対する相互作用的な生物学的機能の付与において、上記アミノ酸の疎水性親水性指標が重要であることは当技術分野において理解されている。特定のアミノ酸を類似した疎水性親水性指標またはスコアを有する他のアミノ酸で置換することができ、類似の生物学的活性を依然として保持することができる。
【００７１】
類似のアミノ酸の置換は親水性に基づいて効果的に行うことができる。エピトープを、一次アミノ酸配列から親水性に基づいて識別することもできる。これらの領域は「エピトープのコア領域（ｅｐｉｔｏｐｉｃ  ｃｏｒｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ）」とも呼ばれる。
【００７２】
治療用ポリペプチドを含有する医薬製剤の文脈において、「低分子量種」または「ＬＭＷ種」とは、当技術分野で認知されたアッセイによって測定した、本来の治療用ポリペプチドよりも小さなポリペプチドを意味する。ＬＭＷ種は上記治療用ポリペプチドのフラグメントを包含する。
【００７３】
「抗ＰＣＳＫ９中和抗体」で用いられる「中和抗体」または「標的を中和する抗体」とは、標的に結合し、該標的の生物学的活性を妨げるまたは低減する抗体をいう。上記活性を妨げるまたは低減することは、当該標的上の結合部位を直接遮断することによって、または当該標的に結合して、間接的な手段を通じて結合する該標的の能力を変えること、例えば、該標的における構造上もしくはエネルギー上の変化などによってなし得る。抗体または免疫学的に機能するそのフラグメントの結合及び／または特異性の評価において、過剰な抗体が、当該リガンドに結合した結合相手の量を、（イン・ビトロ競合結合アッセイで測定して）少なくとも約１〜２０％、２０〜３０％、３０〜４０％、４０〜５０％、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、９７〜９８％、９８〜９９％またはそれ以上低減する場合に、抗体またはフラグメントは、標的のその結合相手に対する結合を実質的に阻害し得る。ＰＣＳＫ９抗体の場合には、かかる中和分子はＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに結合する能力を減じることができる。いくつかの場合において、上記中和能は競合アッセイを通じてキャラクタライズまたは記述される。いくつかの場合において、上記中和能はＩＣ５０またはＥＣ５０値の見地から記述される。いくつかの場合において、上記抗体は、ＰＣＳＫ９に結合し、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲに結合することを妨げることによって、またはＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに結合する能力を低減することによってＰＣＳＫ９を中和する。いくつかの場合において、上記抗体は、ＰＣＳＫ９に結合し、ＰＣＳＫ９は依然としてＬＤＬＲに結合することが可能ではあるが、ＰＣＳＫ９媒介性のＬＤＬＲの分解を妨げるまたは低減することによってＰＣＳＫ９を中和する。したがって、いくつかの例において、中和抗体は依然としてＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ結合の機会を与え得るが、それに続くＰＣＳＫ９が関与するＬＤＬＲの分解を妨げるまたは低減することができる。中和によってＬＤＬ−Ｃ（及び／またはアポＢ、Ｌｐ（ａ）などの他の脂質）が低下する。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、かかるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの変異体を含めて、抗体の種類を越えて、これらの同様の活性を有することができる。
【００７４】
「ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド」とは、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）タンパク質に結合するポリペプチドを意味する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９の低密度脂質受容体（ＬＤＬＲ）への結合を遮断する。かかる遮断ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であってよく、以下、すなわち、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むｍＡｂ（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｂ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するｍＡｂ、
ｃ．
ｉ．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
ｉｉ．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むｍＡｂ、
ｄ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するｍＡｂ、
ｅ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
ｉｉ．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するｍＡｂであって、
ｉｉｉ．上記ｍＡｂの上記エピトープが、ＬＤＬＲの上皮増殖因子様リピートＡ（ＥＧＦ−Ａ）ドメインが結合する部位と更に重複する上記ｍＡｂ、または
ｆ．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ｉ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｉｉ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むｍＡｂ
の１種であってよい。
【００７５】
上記のアミノ酸配列を表１に示し、表１はエボロクマブの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域も示す。エボロクマブ重鎖及び軽鎖の全長ヌクレオチド配列を表２に示し、表２にはエボロクマブＨＣＶＲ及びＬＣＶＲに対するヌクレオチド配列も示す。
【表１】
2018154616.tif 000078
2018154616.tif 000079
2018154616.tif 000080
【表２】
2018154616.tif 000081
2018154616.tif 000082
2018154616.tif 000083
【００７６】
エボロクマブはＣＡＳ登録番号１２５６９３７−２７−５である。
【００７７】
エボロクマブの変異体であって、そのＰＣＳＫ９結合及び阻害特性に影響がない上記変異体を表３に示す。
【表３】
2018154616.tif 000084
【００７８】
「医薬組成物」または「医薬製剤」等とは、生物学的に活性なタンパク質（例えばＰＣＳＫ９結合ポリペプチド）などの薬学的に活性な薬物の、通常は無菌の、それを必要とする対象に対する非経口投与（静脈内投与、筋内投与、皮下投与、噴霧投与、肺内投与、鼻腔内投与または髄腔内投与を含む）などの投与に適し、且つ薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、及びアメリカ食品医薬品局または他の外国の国家機関によって安全性が認証された他の添加剤のみを含む組成物をいう。医薬製剤には、液剤、例えば、直接投与することができる水溶液剤、及び投与の前に希釈剤を添加することによって溶液へと再構成することができる凍結乾燥粉末剤が含まれる。
【００７９】
「ポリペプチド」または「タンパク質」とは、天然起源の且つ非組換えの細胞によって産生されたタンパク質である、または遺伝子改変されたもしくは組換えの細胞によって産生された天然タンパク質のアミノ酸配列を有する高分子を意味し、天然タンパク質のアミノ酸配列を有する分子、または天然の配列の１もしくは複数のアミノ酸からの欠失、上記アミノ酸に対する付加、及び／または上記アミノ酸の置換を有する分子を含む。この用語はまた、１または複数のアミノ酸が相当する天然起源のアミノ酸及びポリマーの化学的な類似体であるアミノ酸ポリマーも包含する。「ポリペプチドフラグメント」とは、全長天然タンパク質と比較して、アミノ末端欠失、カルボキシル末端欠失、及び／または内部欠失を有するポリペプチドをいう。かかるフラグメントはまた、天然タンパク質と比較して、改変アミノ酸を含有していてもよい。フラグメントは約５〜５００のアミノ酸の長さであってよい。例えば、フラグメントは、少なくとも５、６、８、１０、１４、２０、５０、７０、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、または４５０のアミノ酸の長さであってよい。有用なポリペプチドフラグメントとしては、結合ドメインを含む、抗体の免疫学的機能を有するフラグメントが挙げられる。ＰＣＳＫ９結合抗体の場合、有用なフラグメントとしては、ＣＤＲ領域、重鎖及び／または軽鎖の可変ドメイン、抗体鎖の部分または２のＣＤＲを含むその可変領域が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００８０】
（症状、疾患、または障害の発症などを）「予防する」ことはある事象の可能性を排除することを必要とはしない。むしろ、化合物または方法の存在下で当該事象の発生の可能性が低減されていることを意味する。治療上の意味における予防は、対象が障害を発症することとなるリスクまたは他のリスク要因を低減する予防的処置及び適用を含む。
【００８１】
「安定な医薬製剤」、「安定な製剤」または「医薬製剤が安定である」とは、約−３０℃（もしくはそれよりも低温）〜約５℃または〜約４０℃で少なくとも１ヶ月間、または２ヶ月間、または３ヶ月間、または６ヶ月間、または１年間、または２年間、または５年間、またはそれ以上の間保管した場合に、対照製剤試料と比較して、示される凝集の増加が５％以下に制限され、及び／または生物学的活性の減損が５％以下に低減されたＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの医薬製剤をいう。製剤の安定性は、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）、カチオン交換ＨＰＬＣ（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）、光遮蔽による目視可能以下の粒子の検出法（ＨＩＡＣ）及び／または目視検査を含む多くの標準的なアッセイのいずれかを用いて、当業者が判定することができる。一般的に、貯蔵温度が高い程上記製剤の有効期間は短くなる。
【００８２】
劣化（ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）のアッセイ技法は、当該医薬製剤中のタンパク質の内容に応じて変わる。例示的な技法としては、例えば凝集を検出するためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）−ＨＰＬＣ、例えばタンパク質分解を検出するための逆相（ＲＰ−）ＨＰＬＣ、例えば当該タンパク質の電荷の変化を検出するためのイオン交換ＨＰＬＣ、タンパク質の立体構造上の変化を検出するための質量分析法、蛍光分光分析法、円二色性分光分析法、フーリエ変換赤外分光分析法（ＦＴ−ＩＲ）、及びラマン分光分析法が挙げられる。これらの技法の全てを、単独でまたは組み合わせて用いて、当該医薬製剤中のタンパク質の劣化をアッセイすることができ、且つその製剤の有効期間を判定することができる。本明細書に開示される医薬製剤においては、一般的に、２年間にわたって２〜８℃で貯蔵された場合に、劣化（例えば、分解、凝集またはアンフォールディング）の増加は約２％〜３％以下しか示さない。
【００８３】
「対象」または「患者」は同義で用いられ、ヒト及び非ヒト動物の対象、ならびに障害が正式に診断された対象、障害が正式には認知されていない対象、治療を受けている対象、及び障害を発症するリスクのある対象を包含する。
【００８４】
「界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）」とは、一般的に、湿潤剤、表面張力低下剤、洗剤、分散剤、乳化剤、及び四級アンモニウム防腐剤と呼ばれる物質を含む界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｅ−ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ）を意味する。
【００８５】
「タンジェント流ろ過」すなわち「ＴＦＦ」とは、溶液が、より低分子量の塩及び／または溶質が加圧下で通過する限外ろ過膜（すなわち、異なる形状またはサイズの分子の間を区別することができる半透過性膜）を接線方向に横切るプロセスを意味する。
【００８６】
「治療有効量」とは、対象において治療上の応答を生起することが判定されたＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの量をいう。かかる治療有効量は当業者によって容易に確認される。
【００８７】
ろ過の文脈において、「膜間圧（ＴＭＰ）」とは、当該膜の供給側からろ液側への平均の差圧を意味し、式（１）
【数１】
2018154616.tif 000085
によって表すことができる。
【００８８】
「治療する」こと及び「治療」を提供することは治療上の処置を提供することを含む。治療は障害の完全な治癒を必要とせず、症状または潜在的なリスク因子を低減する場合を包含する。
【００８９】
「限外ろ過（ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）」、「限外ろ過（ｕｌｔｒａｆｉｌｔｅｒｉｎｇ）、「ＵＦ」、及び類似の用語とは、異なる形状及びサイズの分子間を区別する半透過性膜を用いて、分子を異なる分子から分離する、または類似した、もしくは実質的に同一の分子を濃縮することを意味する。
【００９０】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの「変異体」とは、アミノ酸配列であって、１または複数のアミノ酸残基が、別のポリペプチド配列と比較して、上記アミノ酸配列中に挿入され、該配列から欠失し及び／または該配列中に置換された上記アミノ酸配列を意味する。変異体は融合タンパク質を包含する。
【００９１】
「粘度」とは、流体が流動することに対する抵抗を意味し、センチポイズ（ｃＰ）またはミリパスカル・秒（ｍＰａ・ｓ）の単位で測定することができ、ここで、一定のせん断速度において、１ｃＰ＝１ｍＰａ・ｓである。粘度は、粘度計、例えば、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（マサチューセッツ州ミドルボロウ）のダイアル読取式粘度計、またはｍ−ＶＲＯＣ（商標）レオメータもしくはＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューカッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータを用いることによって測定することができる。粘度は任意の他の方法を用いて及び当技術分野で公知の任意の他の単位で測定することができる（例えば、絶対粘度、動粘度または動力学粘度）。粘度を測定するために用いる方法の如何にかかわらず、一定のせん断速度での、対照製剤に対する添加剤を加えた製剤における粘度のパーセントの低下は略同一となる。
【００９２】
本組成物及び方法の構成要素
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド
エボロクマブを含むＰＣＳＫ９結合ポリペプチドに関しては詳細に報告されている（Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２）。
【００９３】
プロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン９型（ＰＣＳＫ９）は、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）タンパク質のレベルの調節に関与するセリンプロテアーゼである（Ｈｏｒｔｏｎ，  Ｃｏｈｅｎ，  ＆  Ｈｏｂｂｓ，  ２００７；Ｓｅｉｄａｈ  ＆  Ｐｒａｔ，  ２００７）。ＰＣＳＫ９は、セリンプロテアーゼのサブチリシン（Ｓ８）ファミリーのプロホルモン−プロタンパク質転換酵素である（Ｓｅｉｄａｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３）。表１に、配列番号３として例示的なヒトＰＣＳＫ９アミノ酸配列を示し、配列番号３はＰＣＳＫ９の（非プロセス型の）タンパク質前駆体の形態である。ＰＣＳＫ９タンパク質はまた、全長ＰＣＳＫ９タンパク質のフラグメントを包含してもよい。ＰＣＳＫ９タンパク質の構造は解明されている（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７；Ｐｉｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７）。ＰＣＳＫ９は、シグナル配列、Ｎ末端プロドメイン、サブチリシン様触媒ドメイン、及びＣ末端ドメインを含む。
【００９４】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、１または複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むポリペプチドである。いくつかのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドにおいて、ＣＤＲはフレームワーク領域中に埋め込まれており、該フレームワーク領域は、ＣＤＲ(複数可)の適正なＰＣＳＫ９結合特性が得られるようにＣＤＲ(複数可)を方向付けする。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９とＬＤＬＲの間の相互作用を妨害、遮断、低減または調節することができる。かかるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは「中和作用を有する」と表される。当該ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが中和作用を有し、ＰＣＳＫ９に結合したとしても、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲの間の結合はなおも起こり得る。例えば、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９上のＬＤＬＲ結合部位を遮断することなく、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する悪影響を妨げるまたは低減する。したがって、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲの間の結合を妨げることなく、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲを分解する能力を調節するまたは変化させることができる。かかるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは「非競合的中和作用を有する」と記述される場合がある。上記中和作用を有するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲに結合することを妨げる位置または様式でＰＣＳＫ９に結合する場合がある。かかるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは「競合的中和作用を有する」と記述される場合がある。ＰＣＳＫ９中和剤によって、対象においてより大きな量の遊離のＬＤＬＲが存在することになり、その結果より多いＬＤＬＲがＬＤＬに結合し、それによって当該対象におけるＬＤＬの量を低減する。その次には、これによって対象に存在する血清コレステロールの量が低下する。
【００９５】
いくつかのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９媒介性の活性（結合を含む）を阻害することができる。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはまた、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲの間の相互作用及びＰＣＳＫ９によって媒介される他の生理学的影響を阻害することもできる。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９に対する完全ヒト抗体などのヒト型であってよい。
【００９６】
いくつかのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９の触媒ドメインに結合することができる。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはまた、成熟形態のＰＣＳＫ９にも結合することができる。他の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９のプロドメインに結合することができる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは成熟形態のＰＣＳＫ９に選択的に結合することができる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲに結合できないまたは効率的に結合できないように、触媒ドメインに結合する。いくつかのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは触媒ドメインのＣ末端には結合しない。他の場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは触媒ドメインのＮ末端には結合しない。他の場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９タンパク質のＮ末端またはＣ末端には結合しない。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、抗ＰＣＳＫ９抗体が結合するエピトープのいずれか１に結合する。いくつかの場合において、このことは、候補抗体とエボロクマブなどの基準となる抗体の間の競合アッセイによって判定することができる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲと相互作用することを妨げるように、特定の立体構造の状態のＰＣＳＫ９に結合する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９のＶドメインに結合する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９のＶドメインに結合し、ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲと結合することを妨げる（または低減する）。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９のＶドメインに結合し、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲへの結合を妨げない（または低減しない）が、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＬＤＬＲ上のＰＣＳＫ９によって媒介される害のある活性を妨げるまたは低減する。
【００９７】
いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、１または複数のＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６のＣＤＲ）を含む。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、（ａ）ポリペプチド構造ならびに（ｂ）上記ポリペプチド構造中に挿入された及び／または該構造に連結された１または複数のＣＤＲを含む。上記ポリペプチド構造は様々な異なる形態をとることができる。例えば、上記ポリペプチド構造は、天然起源の抗体のフレームワーク、そのフラグメントもしくは変異体であるか、またはそれらを含んでいてもよく、あるいは合成品であってもよい。
【００９８】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドのポリペプチド構造は、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（抗体模倣体）、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体融合物（場合により「抗体接合体」と呼ばれる）、及びそれぞれ各抗体の部分またはフラグメントを含む抗体であってよく、または上記抗体に由来する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは抗体のフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖ）である。
【００９９】
特定のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは特異的にまたは選択的にヒトＰＣＳＫ９に結合する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、特異的にまたは選択的に、配列番号３の残基１５３〜６９２を有するまたは該残基からなるヒトＰＣＳＫ９タンパク質に結合する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、シグナル配列の有無にかかわらず、ＰＣＳＫ９タンパク質の少なくともフラグメント及び／または全長ＰＣＳＫ９タンパク質に特異的に結合する。
【０１００】
いくつかの場合において、上記抗体は少なくとも１の可変重鎖及び１の可変軽鎖を含む。他の場合において、上記抗体は２の同一の軽鎖及び２の同一の重鎖を含有する。一例として、抗体またはＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、重鎖及び軽鎖、２の重鎖、または２の軽鎖を含んでいてもよい。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、少なくとも１の表１に記載する配列（配列番号４〜９）由来の１、２、及び／または３の重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲを含む（またはそれらからなる）。いくつかの場合において、６のＣＤＲの全て（軽鎖（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）由来のＣＤＲ１〜３及び重鎖（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）由来のＣＤＲ１〜３）が上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの一部である。いくつかの場合において、１、２、３、４、５またはそれ以上のＣＤＲが上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドに含まれる。いくつかの場合において、表１の配列中のＣＤＲ由来の１の重鎖ＣＤＲ及び１の軽鎖ＣＤＲが上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドに含まれる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドには更なるセクションが含まれる。
【０１０１】
上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、表２にエボロクマブに関して示すような核酸配列によってコードされていてもよい。
【０１０２】
いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、配列番号３のＰＣＳＫ９に少なくとも５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜９５、９５〜９９パーセント同一である、またはそれよりも大きいパーセントで同一であるＰＣＳＫ９の変異体に結合する（但し遮断はしない）。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはかかる変異体に結合する（但し遮断はしない）。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはかかるＰＣＳＫ９の変異体に結合し、該変異体がＬＤＬＲと相互作用することを妨げる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９の変異体に結合し、該変異体がＬＤＬＲと相互作用することを妨げる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９の変異体は、位置４７４、Ｅ６２０Ｇ、及び／またはＥ６７０Ｇにおける変異体などのヒト変異体である。いくつかの場合において、上記位置４７４のアミノ酸はバリンである。
【０１０３】
ヒト化ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド（例えば抗体）
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒト化抗体及び／またはその一部を含んでいてもよい。
【０１０４】
ヒト化抗体はヒトにおいて実質的に非免疫原性であり、実質的に、当該ヒト化抗体が由来する種とは別の種に由来する抗体と同様の、標的に対する親和性を有する。
【０１０５】
標的に対する結合親和性の向上を達成するように及び／または受容者における当該抗体の免疫原性を低減するように、抗体の改変を設計することができる。特定の場合において、ヒト化抗体が、該抗体のその同系の抗原に対する親和性を向上させるために、グリコシル化部位を除去するように改変される。「再構成（ｒｅｓｈａｐｉｎｇ）」、「超キメラ化（ｈｙｐｅｒｃｈｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）」、または「ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）／リサーフィシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」などの技法を用いてヒト化抗体を作製することができる。かかる技法は一般に、外来の残基の数を低減することによって抗体の免疫原性を低減するが、当該抗体を繰返し投与した後での抗イディオタイプ及び抗アロタイプの反応を防止することはない。他の免疫原性の低減方法は当技術分野において公知である。
【０１０６】
ＰＣＳＫ９に対する抗体の軽鎖及び重鎖可変領域のＣＤＲは、同一種または別の種由来のフレームワーク領域（ＦＲ）にグラフトすることができる。上記軽鎖及び重鎖可変領域のＣＤＲはコンセンサスヒトＦＲにグラフトすることができる。いくつかの場合において、ＰＣＳＫ９の重鎖または軽鎖に対する抗体のＦＲは、異なる重鎖または軽鎖由来のＦＲと置き換えることができる。抗体由来の上記グラフトされた可変領域は、ＰＣＳＫ９に対する抗体の定常領域とは異なる定常領域と共に用いることができる。上記グラフトされた可変領域は単鎖Ｆｖ抗体の一部であってよい。
【０１０７】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド変異体
有用な他の抗体としては、組み合わせまたは表１に示す可変重鎖及び可変軽鎖の下位部分によって形成された、上記に列挙したＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの変異体があり、これらの抗体は、それぞれが、表１の配列のアミノ酸配列（上記の全体の配列または該配列のサプパートのいずれか、例えば１または複数のＣＤＲ）に対する、少なくとも５０％、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、９７〜９９％、または９９％を超える同一性を有する可変軽鎖及び／または可変重鎖を含む。いくつかの場合において、かかる抗体は少なくとも１の重鎖及び１の軽鎖を含む一方、他の場合においては、上記変異体形態は２の同一の軽鎖及び２の同一の重鎖（またはそれらの下位部分）を含有する。
【０１０８】
特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド変異体は、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む可変領域を含む重鎖を含む。
【０１０９】
いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、配列番号４〜９の配列の少なくとも１におけるＣＤＲ由来の１または複数のＣＤＲに対して少なくとも９０％、９０〜９５％、及び／または９５〜９９％同一である配列を有する。いくつかの場合において、１、２、３、４、５、または６のＣＤＲ（それぞれが、上記配列に対して少なくとも９０％、９０〜９５％、及び／または９５〜９９％同一である）が存在する。
【０１１０】
特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、配列番号１１または１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む可変領域を含む軽鎖を含む。
【０１１１】
他の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、配列番号１０または１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む可変領域を含む重鎖を含む。
【０１１２】
当業者であれば、周知の技法を用いて、好適なＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの変異体を判定することができる。特定の場合において、当業者であれば、活性に対して重要ではないと考えられる領域を標的とすることによって活性を破壊することなく変化させることができる、分子の好適な領域を特定することができる。特定の場合において、類似するポリペプチドの中で保存される分子の残基及び部分を特定することができる。特定の場合において、生物学的活性または構造にとって重要である可能性のある領域でさえも、当該生物学的活性を破壊することなく、または当該ポリペプチド構造に悪影響を与えることなく、保存的アミノ酸置換に供することができる場合がある。
【０１１３】
また、当業者であれば、活性または構造にとって重要な、類似するポリペプチド中の残基を特定する構造−機能に関する研究を見直すことができる。かかる比較に鑑みて、類似するタンパク質中で活性または構造にとって重要であるアミノ酸残基に相当する、あるタンパク質中のアミノ酸残基の重要性を予測することができる。当業者であれば、かかる予測された重要なアミノ酸残基の、化学的に類似するアミノ酸による置換を選択することができる。
【０１１４】
当業者であれば、類似するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドにおける三次元構造及び該構造に関係するアミノ酸配列を分析することもできる。当業者であれば、かかる情報に鑑みて、抗体の、その三次元構造に関するアミノ酸残基のアラインメントを予測することができる。特定の場合において、当業者であれば、当該タンパク質の表面上に存在することが予測されるアミノ酸残基に対して、かかる残基は他の分子との重要な相互作用に関与する場合があるので、極端な変化を起こさないことを選択することができる。更に、当業者であれば、それぞれの所望のアミノ酸残基における単一のアミノ酸置換を含む試験的な変異体を生成させることができる。次いで、当技術分野で公知の活性アッセイを用いて上記変異体をスクリーニングすることができる。かかる変異体を用いて好適な変異体に関する情報を収集することができる。例えば、特定のアミノ酸残基に対する変化によって、活性の破壊、活性の望ましくない低下、または不適当な活性が生じるような場合には、かかる変化を有する変異体を避けることができる。換言すれば、当業者であれば、かかる慣用的な実験から収集される情報に基づいて、単独または他の変異との組み合わせのいずれかでの更なる置換を避けるべきアミノ酸を容易に判定することができる。
【０１１５】
特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド変異体は、グリコシル化部位の数及び／または種類が、親ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して変化しているグリコシル化変異体を包含する。特定の場合において、タンパク質変異体は当該の天然タンパク質よりも大きなまたは小さな数のＮ結合型グリコシル化部位を含む。更なる好ましい抗体変異体としては、親アミノ酸配列と比較して、１または複数のシステイン残基が欠失した、または別のアミノ酸（例えばセリン）で置換されたシステイン変異体が挙げられる。システイン変異体は、抗体が、不溶な封入体の単離後などに、生物学的に活性な立体構造へとリフォールディングされる必要がある場合に有用となることがあり得る。システイン変異体は概して天然タンパク質よりも少ないシステイン残基を有し、一般的に、対を形成していないシステインに起因する相互作用を最小化するために偶数個を有する。
【０１１６】
競合性ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド
エボロクマブと競合するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドまたはエボロクマブが結合するエピトープに結合してＰＣＳＫ９との特異的結合を形成する機能を有するフラグメントを用いることができる。かかるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドもまた、同一のエピトープＰＣＳＫ９結合ポリペプチドまたは重複するエピトープに結合することができる。エボロクマブと競合するすなわちエボロクマブと同一のエピトープに結合するＰＣＳＫ９結合ポリペプチド及びフラグメントは、類似する機能特性を示す。したがって、具体的な例として、提供される上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドとしては、エボロクマブの６のＣＤＲの全て（配列番号４〜９）、もしくはそれぞれ配列番号２及び１の２の軽鎖及び２の重鎖を有する抗体またはＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと競合するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが挙げられる。
【０１１７】
例示的エピトープ
抗ＰＣＳＫ９抗体が結合する配列番号３（ヒトＰＣＳＫ９ポリペプチド）のエピトープを示す。エボロクマブ（及び配列番号１４のＨＣＶＲ及び配列番号１５のＬＣＶＲを有するエボロクマブ変異体）の場合、上記エピトープは、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８である。
【０１１８】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド（例えば抗体）の調製
抗体の固有の特性、例えば抗体のその標的に対する親和性を操作するためには特定の方策が用いられる。かかる方策としては、抗体をコードするポリヌクレオチド分子の部位特異的なまたはランダムな突然変異誘発を用いて抗体変異体を生成させることが挙げられる。特定の場合において、かかる生成の後には、所望の変化、例えば親和性の増加または減少を示す抗体変異体に対するスクリーニングが行われる。
【０１１９】
突然変異誘発の方策において標的となるアミノ酸残基は当該ＣＤＲまたはＦＲ中の残基であってよい。
【０１２０】
特定の場合において、ランダムなまたは部位特異的な突然変異誘発を、体細胞親和性成熟過程の間に突然変異しやすい領域に相当する部位である、当該ＣＤＲ中の超突然変異部位に制限することによって、より小さな且つより効果的にスクリーニングされた抗体変異体のライブラリが作製される。
【０１２１】
抗体は細胞株中で発現させることができる。特定の抗体をコードする配列（配列番号１２及び１３のポリヌクレオチドなどの、配列番号１及び２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドなど）を用いて、好適な哺乳動物宿主細胞を形質転換することができる。形質転換は、任意の公知の宿主細胞中へのポリヌクレオチドの導入方法によって行うことができる。用いる形質転換手順は形質転換される宿主に依存する。哺乳動物細胞中への異種ポリヌクレオチドの導入方法は当技術分野において周知であり、該方法としては、デキストラン媒介トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介トランスフェクション、プロトプラスト融合、電気穿孔、リポソーム中へのポリヌクレオチド（複数可）の封入、及び核中へのＤＮＡの直接微量注入が挙げられる。
【０１２２】
発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は当技術分野において周知であり、多くの不死化細胞株がＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＴＣ）から入手可能である。該細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベービーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えばＨｅｐ  Ｇ２）、ヒト腎上皮２９３細胞、及び多数の他の細胞株が挙げられる。
【０１２３】
特定の場合において、抗体は２１Ｂ１２ハイブリドーマ細胞株（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）によって産生される。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、約１ｎＭ未満、例えば、１０００ｐＭ〜１００ｐＭ、１００ｐＭ〜１０ｐＭ、１０ｐＭ〜１ｐＭ、及び／または１ｐＭ〜０．１ｐＭまたはそれ未満の解離定数（ＫＤ）でＰＣＳＫ９に結合する。
【０１２４】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＭイソ型の少なくとも１種の免疫グロブリン分子を含んでいてもよい。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトカッパ軽鎖及び／またはヒト重鎖を含む。特定の場合において、上記重鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＭイソ型の重鎖である。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは哺乳動物細胞中での発現のためにクローン化されている。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＭイソ型の定常領域のいずれか以外の定常領域を含む。
【０１２５】
特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトラムダ軽鎖及びヒトＩｇＧ２重鎖を含む。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトラムダ軽鎖及びヒトＩｇＧ４重鎖を含む。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトラムダ軽鎖及びヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＭ重鎖を含む。他の実施形態において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトカッパ軽鎖及びヒトＩｇＧ２重鎖を含む。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトカッパ軽鎖及びヒトＩｇＧ４重鎖を含む。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトカッパ軽鎖及びヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＭ重鎖を含む。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＩｇＧ２イソ型に対する定常領域でもなく、ＩｇＧ４イソ型に対する定常領域でもない定常領域に結合した抗体の可変領域を含む。特定の場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは哺乳動物細胞中での発現のためにクローン化されている。
【０１２６】
エボロクマブの場合、上記抗体はＩｇＧ２−ラムダヒトモノクローナル抗体；ラムダ軽鎖テトラキスジスルフィドを有するガンマ２重鎖−ジスルフィドである。エボロクマブはＡｓｎ−２９１及びＡｓｎ−２９１’’においてグリコシル化されており、且つ２２’−９０’、２２’’−９０’’、２２’−９６’、２２’’−９６’’、１２９−２１４’、１２９’’−２１４’’、１３７’−１９６’、１３７’’−１９６’’、１４２−１９８、１４２’’−１９８’’、２１７−２１７’、２１８−２１８’、２２１−２２１’’、２２４−２２４’’、２５５−３１５、２５５’’−３１５’’、３６１−４１９、及び３６１’’−４１９’’残基間にジスルフィド架橋を有する。
【０１２７】
特定の場合において、エボロクマブの上記重鎖及び軽鎖に対する、または配列番号１４及び１５のＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを有する抗体の重鎖及び軽鎖に対する保存的改変によって、ハイブリドーマ株２１Ｂ１２由来の抗体の機能的及び化学的特性と類似の上記特性を有する、ＰＣＳＫ９に対する抗体を生成させることができる。対照的に、上記重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列における置換であって、（ａ）置換の領域における分子骨格の構造、例えば、シートもしくはヘリックスの立体構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩の維持に対する該置換の影響が顕著に異なる上記置換を選択することによって、ＰＣＳＫ９に対する抗体の機能的及び化学的特性のかなりの改変を実現することができる。
【０１２８】
例えば、保存的アミノ酸置換は、当該位置におけるアミノ酸残基の極性または電荷に対して殆どまたは全く影響がないような、天然アミノ酸残基の非天然残基による置換を含んでいてもよい。
【０１２９】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは多くの場合、１または複数のポリペプチドを含む。種々の発現ベクター／宿主系のいずれかを用いて、１もしくは複数のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの構成要素を含むポリペプチドまたはＰＣＳＫ９結合ポリペプチドそれ自体をコードするポリヌクレオチド分子を発現させることができる。かかる系としては、組換えバクテリオファージ、プラスミド、またはコスミドＤＮＡ発現ベクターによって形質転換した細菌などの微生物；酵母発現ベクターによって形質転換した酵母；ウイルス発現ベクター（例えばバキュロウイルス）に感染させた昆虫細胞；ウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ、タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）によってトランスフェクトした、または細菌発現ベクター（例えば、ＴｉまたはｐＢＲ３２２プラスミド）によって形質転換した植物細胞系；または動物細胞系が挙げられる。
【０１３０】
１もしくは複数のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの構成要素を含むポリペプチドまたはＰＣＳＫ９結合ポリペプチドそれ自体を種々の発現系から精製することができ、かかる技法は当業者には周知である。
【０１３１】
医薬製剤構成成分
いくつかの実施形態において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬製剤は、２種以上の異なるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む。特定の実施形態において、医薬製剤は２種以上のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、ＰＣＳＫ９に対する抗原結合タンパク質は２種以上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、上記種々の抗原結合タンパク質は、ＰＣＳＫ９に対する結合に関して互いに競合することはない。いくつかの実施形態において、本医薬製剤はエボロクマブを含む。
【０１３２】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを、半減期を延長するビヒクルと組み合わせてもよい。かかるビヒクルはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、グリコーゲン（例えば上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドのグリコシル化）、及びデキストランを含む。
【０１３３】
許容される製剤構成成分は、好ましくは、用いる投薬量及び濃度において受容者に対して非毒性である。医薬製剤は、例えば、当該組成物のｐＨ、モル浸透圧濃度、粘度、透明性、色相、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解もしくは放出、吸収または浸透速度を改変、維持あるいは保つための薬剤を含んでいてもよい。
【０１３４】
例えば、好適な製剤物質としては、アミノ酸（プロリン、アルギニン、リシン、メチオニン、タウリン、グリシン、グルタミン、またはアスパラギンなど）；抗菌剤；抗酸化剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウムなど）；バッファー（ホウ酸塩、炭酸水素塩、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム（「ＮａＯＡＣ」）、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、Ｔｒｉｓバッファー、クエン酸塩、リン酸塩バッファー、リン酸緩衝生理的食塩水（すなわちＰＢＳバッファー）または他の有機酸）；増量剤（マンニトールまたはグリシンなど）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリンまたはヒドロキシ−β−シクロデキストリンなど）；充填剤；単糖類；二糖類；及び他の炭水化物（グルコース、スクロース、フルクトース、ラクトース、マンノース、トレハロース、またはデキストリンなど）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなど）;着色料、香味料及び希釈剤;乳化剤;親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）;低分子量ポリペプチド;塩形成対イオン（ナトリウムなど）;防腐剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸または過酸化水素など）;溶媒（グリセリン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなど）;糖アルコール（マンニトールまたはソルビトールなど）;懸濁剤;界面活性剤または湿潤剤（プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなど）;安定性向上剤（スクロースまたはソルビトールなど）;浸透圧増強剤（アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトールソルビトール）;送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤及び／または医薬アジュバントが挙げられる。
【０１３５】
一態様において、本医薬製剤は高濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む。特定の実施形態において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は、約７０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬの範囲、例えば、約７０ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２１０ｍｇ／ｍＬ、約２２０ｍｇ／ｍＬ、約２３０ｍｇ／ｍＬ、約２４０ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、または約２６０ｍｇ／ｍＬである。いくつかのの実施形態において、エボロクマブの濃度は、約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２１０ｍｇ／ｍＬの範囲、例えば、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２１０ｍｇ／ｍＬ、約２２０ｍｇ／ｍＬ、約２３０ｍｇ／ｍＬ、約２４０ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、または約２６０ｍｇ／ｍＬである。
【０１３６】
別の態様において、本医薬製剤は、例えば酢酸ナトリウム、リン酸塩、リン酸緩衝生理的食塩水（「ＰＢＳ」）、ヒスチジン、及び／または約ｐＨ７．０〜８．５のＴｒｉｓバッファーなどの少なくとも１種のバッファー剤を含む。上記バッファーは生理学的に適したｐＨを維持する働きをする。また、上記バッファーは当該医薬製剤の等張性及び化学的安定性を向上させることができる。特定の実施形態において、上記緩衝剤は約５ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲、例えば約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、または約１００ｎＭの緩衝剤である。特定の実施形態において、上記緩衝剤はＮａＯＡＣである。特定の実施形態において、上記緩衝剤はＮａＯＡＣであり、約１０ｍＭの濃度で存在する。他の実施形態において、上記バッファーはグルタミン酸ナトリウムである。特定の実施形態において、上記緩衝剤はグルタミン酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する。更に他の実施形態において、上記緩衝剤はリン酸塩バッファーである。特定の実施形態において、上記リン酸塩バッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。なおも更なる実施形態において、上記緩衝剤はヒスチジンである。いくつかのこれらの実施形態において、上記ヒスチジンバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。本医薬製剤の有用なｐＨ値としては、約４〜約７、または約４．８〜約６．９、または約５．０〜約５．５、または約５、または約５．４が挙げられる。
【０１３７】
特定の実施形態において、本医薬製剤は、２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲の、例えば、約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、または約４００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有し、等張性である。重量モル浸透圧濃度は流体量に対する溶質の比の尺度である。換言すると、重量モル浸透圧濃度は溶液のキログラム当たりの分子及びイオン（または分子）の数である。特定の実施形態において、上記重量モル浸透圧濃度は３００ｍＯｓｍ／ｋｇである。重量モル浸透圧濃度は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ２０２０  Ｍｕｌｔｉ−ｓａｍｐｌｅ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ（マサチューセッツ州ノーウッド）などの浸透圧計によって測定することができる。上記Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ２０２０  Ｍｕｌｔｉ−ｓａｍｐｌｅ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒは凝固点降下法を用いることによって重量モル浸透圧濃度を測定する。溶液中の浸透圧調節物質の濃度が高い程、該溶液が凝固する温度が低下する。重量モル浸透圧濃度はまた、直線外挿法などの当技術分野で公知の任意の他の方法を用いて任意の他の単位で測定してもよい。他の実施形態において、本医薬製剤は、赤血球などのヒト血液細胞と等張である。
【０１３８】
更に別の態様において、本医薬製剤は少なくとも１種の界面活性剤ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）を含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は、当該製剤の容積当たりの重量（ｗ／ｖ）で約０．０００１％〜約１０％の範囲、例えば、約０．０００１％、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０５％、約０．１％、約０．５％、約１％、約５％、または約１０％の濃度の界面活性剤を含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０００１％〜約１％  ｗ／ｖの範囲の濃度のポリソルベート８０を含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０１％  ｗ／ｖの濃度のポリソルベート８０を含む。他の実施形態において、本製剤は当該製剤の約０．０００１％〜約１％  ｗ／ｖの範囲の濃度のプルロニック（登録商標）Ｆ−６８を含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０１％  ｗ／ｖの濃度のプルロニック（登録商標）Ｆ−６８を含む。更に他の実施形態において、本製剤は当該製剤の約０．０００１％〜約１％  ｗ／ｖの範囲の濃度のビタミンＥ  ＴＰＧＳを含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０１％  ｗ／ｖの濃度のビタミンＥ  ＴＰＧＳを含む。
【０１３９】
本医薬製剤は、（ソルビトール、マンニトール、グリセリン及びズルシトールを含む）ポリヒドロキシ炭化水素及び／または（スクロース、ラクトース、マルトース及びトレハロースを含む）二糖及び／または（製剤の種類を越えて、アルギニン一塩酸塩などのアルギニン塩、及びＮ−アセチルアルギニンなどのアルギニンのアセチル誘導体を含む、ならびに、例えば、プロリン、リシン、メチオニン、及びタウリンを含んでいてもよい）アミノ酸及び／またはベンジルアルコールなどの少なくとも１種の安定剤を含んでいてもよく、上記ポリヒドロキシ炭化水素及び／または二糖及び／またはアミノ酸及び／またはベンジルアルコールの合計が当該製剤の約０．５％〜約１０％  ｗ／ｖである。本医薬製剤は、例えば、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ、例えば約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば約９０ｍＭ〜約１２０ｍＭ、例えば１２０ｍＭのプロリンを含んでいてもよい。
【０１４０】
一態様において、本医薬製剤は、室温（すなわち２５℃）で測定して約８０センチポイズ（ｃＰ）未満のレベルの粘度を有する。特定の実施形態において、本医薬製剤は、約７０センチポイズ（ｃＰ）、約６０センチポイズ（ｃＰ）、約５０センチポイズ（ｃＰ）、約４０センチポイズ（ｃＰ）、約３０センチポイズ（ｃＰ）、約２５センチポイズ（ｃＰ）、約２０センチポイズ（ｃＰ）、約１８センチポイズ（ｃＰ）、約１５センチポイズ（ｃＰ）、約１２センチポイズ（ｃＰ）、約１０センチポイズ（ｃＰ）、約８センチポイズ（ｃＰ）、約６センチポイズ（ｃＰ）、約４センチポイズ（ｃＰ）、約２センチポイズ（ｃＰ）、または約１センチポイズ（ｃＰ）未満のレベルの粘度を有する。
【０１４１】
一態様において、本医薬製剤は、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの経時的な生物物理学的または生化学的特性を調べるアッセイなどの、少なくとも１種の安定性アッセイによって測定して安定である。医薬組成物の安定性はＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いて測定することができる。ＳＥＣ−ＨＰＬＣはタンパク質をそれらの流体力学的容積の違いに基づいて分離する。より大きな流体力学的なタンパク質の容積をもつ分子は、より小さな容積をもつ分子よりもより速く溶離する。ＳＥＣ−ＨＰＬＣの場合、安定な医薬製剤が示すＨＭＷ種の増加は対照試料に比較して約５％以下であり、例えば、ＨＭＷ種の増加は対照試料に比較して、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、約０．５％以下である。
【０１４２】
あるいはまたは上記に加えて、安定性はカチオン交換ＨＰＬＣ（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）を用いて測定することができる。ＣＥＸ−ＨＰＬＣはタンパク質をそれらの表面電荷の違いに基づいて分離する。設定したｐＨにおいて、荷電したイソ型の抗ＰＣＳＫ９  ＡＢＰをカチオン交換カラム上で分離し、塩勾配を用いて溶離する。溶離物を紫外光（ＵＶ）の吸光度によって監視する。各イソ型のピークを全ピーク面積に対するパーセントとして測定することによって、荷電したイソ型の分布を評価する。ＣＥＸ−ＨＰＬＣの場合、安定な医薬製剤が示す主たるイソ型ピークの減少は対照試料に比較して約５％以下であり、例えば、主たるイソ型ピークの減少は対照試料に比較して約３％〜約５％、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、約０．５％以下である。
【０１４３】
更に、あるいはまたは上記に加えて、製剤の安定性は光遮蔽による目視可能以下の粒子の検出法（ＨＩＡＣ）を用いて測定することができる。光遮蔽センサー（ＨＩＡＣ／Ｒｏｙｃｏ  ＨＲＬＤ−１５０または相当品）を備え、液体試料供給装置を有する電子的な液体中の粒子計測システム（ＨＩＡＣ／Ｒｏｙｃｏ  ９７０３（Ｈａｃｈ  Ｃｏｍｐａｎｙ、コロラド州ラブランド）または相当品）は、所与の被験試料中の粒子の数及び粒子のサイズの範囲を定量する。液体中の粒子が光源と検出器との間を通過すると、該粒子は検出器に当たる光線を弱める、すなわち「遮蔽する」。粒子の濃度が上記センサーの正常範囲内である場合には、これらの粒子は一つ一つ検出される。それぞれの粒子が検出区域を通過すると受光器上の入射光が減少し、受光器の電圧出力が瞬間的に低下する。上記電圧の変化が電気パルスとして記録され、該パルスは該装置によって存在する粒子の数へと変換される。上記方法は非特異的であり、粒子をそれらの由来とは無関係に測定する。監視される粒子径は一般的に１０μｍ及び２５μｍである。ＨＩＡＣの場合、安定した医薬製剤が示す１０μｍの粒子は、対照試料と比較して容器（または単位）当たり６０００以下、例えば、１０μｍの粒子は、対照試料と比較して容器（または単位）当たり５０００以下、４０００以下、３０００以下、２０００以下、１０００以下である。他の場合において、安定した医薬製剤が示す２５μｍの粒子は、対照試料と比較して容器（または単位）当たり６００以下、例えば、２５μｍの粒子は、対照試料と比較して容器（または単位）当たり５００以下、４００以下、３００以下、２００以下、１００以下、５０以下である。
【０１４４】
医薬製剤の安定性はまた、目視評価を用いて評価してもよい。目視評価は試料の目視可能な物理的特性を記述するために用いられる定性的方法である。試料を、評価する特性（例えば、色相、透明性、粒子または異物の存在）に応じた、検査ブースの黒及び／または白の背景に対して目視する。試料を、オパール光を発する標準試料及び色相標準試料と対比させて目視することもある。目視評価の場合、安定した医薬製剤は、対照試料と比較して、色相、透明性、粒子または異物の存在の有意な変化を示さない。
【０１４５】
例示的医薬製剤
例示的なＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの医薬製剤を表４に示す。いくつかの該製剤においては範囲で示し、下位の例（例えば１．１）においては具体的な例を示す。
【表４】
2018154616.tif 000086
2018154616.tif 000087
【０１４６】
治療への適用
エボロクマブなどのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは種々の治療への適用に用いることができる。例えば、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、高コレステロール血症などのコレステロール関連障害（血清コレステロール関連障害）などの、ＰＣＳＫ９に関連する疾病の治療に有用である。ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＰＣＳＫ９活性に関連する影響、症状、及び／または病理学の治療に有用な場合がある。
【０１４７】
コレステロール（血清コレステロールを含む）、ＬＤＬ、ＬＤＬＲ、ＰＣＳＫ９、ＶＬＤＬ−Ｃ、アポタンパク質Ｂ（「アポＢ」）、リポタンパク質Ａ（「Ｌｐ（ａ）」）、トリグリセリド、ＨＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃ、及び総コレステロールレベルを含む分子または分子の群のレベルの上昇に関連する、または該上昇の影響を受ける可能性のある障害に、本明細書に開示するエボロクマブ医薬組成物を用いる方法によって対処して、対象におけるかかる障害を治療する及び／または予防する及び／またはかかる障害のリスクを低減することができる。上記開示するエボロクマブ組成物を用いて、これらの分子または分子の群の量を低減するなど、これらの分子または分子の群のレベルを調節することができる。例えば、開示するエボロクマブ組成物を、これらの分子または分子の群の量を異常に高いレベルからまたは正常なレベルからでも減少させる方法に用いることができる、すなわち、コレステロール（血清コレステロールを含む）、ＬＤＬ、ＬＤＬＲ、ＰＣＳＫ９、ＶＬＤＬ−Ｃ、アポＢ、Ｌｐ（ａ）、トリグリセリド、ＨＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃ、及び総コレステロールレベルを低減することができる。
【０１４８】
「コレステロール関連障害」（「血清コレステロール関連障害」を含む）としては、以下、すなわち、家族性高コレステロール血症、非家族性高コレステロール血症、高脂血症、心臓疾患、代謝症候群、糖尿病、冠状動脈性心臓疾患、脳卒中、心血管疾患、アルツハイマー病、ならびに、例えば、総血清コレステロールの上昇、ＬＤＬの上昇、トリグリセリドの上昇、ＶＬＤＬの上昇、及び／または低いＨＤＬによって示すことができる全般的な脂質異常症のいずれかの１または複数が挙げられる。原発性及び続発性脂質異常症のいくつかの非限定的な例としては、代謝症候群、真性糖尿病、家族性複合型高脂血症、家族性高トリグリセリド血症、ヘテロ接合性高コレステロール血症、ホモ接合性高コレステロール血症、家族性欠陥アポリポタンパクＢ−１００血症を含む家族性高コレステロール血症；多遺伝子性高コレステロール血症；レムナント除去不全疾患（ｒｅｍｎａｎｔ  ｒｅｍｏｖａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）、肝性リパーゼ欠乏症；以下、すなわち、食傷、甲状腺機能低下、エストロゲン及びプロゲスチン治療薬、β遮断薬、及びサイアザイド系利尿剤を含む薬物のいずれかに続発する脂質異常症；ネフローゼ症候群、慢性腎不全、クッシング症候群、原発性胆汁性肝硬変、糖原病、肝癌、胆汁うっ滞、先端巨大症、インスリノーマ、成長ホルモン単独欠損症、及びアルコール誘発性高トリグリセリド血症が挙げられる。上記開示するエボロクマブ組成物を用いて、心血管起因の死、非心血管起因または全ての原因による死、冠状動脈性心臓疾患、冠状動脈疾患、末梢性動脈疾患、脳卒中（虚血性及び出血性）、狭心症、または脳血管性疾患及び急性冠動脈症候群、心筋梗塞ならびに不安定性狭心症などのアテローム硬化性疾患を治療する及び／または予防する及び／または該疾患のリスクを低減することもできる。上記開示するエボロクマブ組成物は、致死性及び非致死性の心臓発作、致死性及び非致死性の脳卒中、特定の種類の心臓手術、心不全による入院、心臓疾患を有する対象の胸痛、及び／または、過去の心臓発作、過去の心臓手術、及び／または動脈の閉塞の証拠がある胸痛などの既往の心臓疾患に起因する心血管事象及び／または移植関連の血管性疾患のリスクの低減においても有用である場合がある。いくつかの場合において、上記開示するエボロクマブ組成物は、高いＣＲＰまたはｈｓＣＲＰに起因する心血管のリスクの防止または低減方法に用いてもよい。いくつかの実施形態において、上記ＡＢＰ及び方法を用いて、心血管事象の再発のリスクを低減することができる。
【０１４９】
概括的に、スタチンを用いることによって対処可能（治療可能または予防可能のいずれか）な疾患または障害もまた、上記開示するエボロクマブ組成物の適用によって恩恵を受けることができる。更に、コレステロール合成またはＬＤＬＲ発現の増加を妨げることによって恩恵を受けることができる障害または疾患も、上記開示するエボロクマブ組成物を用いて治療することができる。また、上記開示するエボロクマブ組成物の使用は糖尿病の治療に特に有用である場合がある。冠状動脈性心臓疾患に対するリスク因子は糖尿病だけではなく、インスリンはＰＣＳＫ９の発現を増加させる。すなわち、糖尿病の人々は高い血漿脂質レベル（高いＰＣＳＫ９レベルと関連する場合がある）を有しており、これらのレベルを低下させることによって恩恵を受ける場合がある。
【０１５０】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが治療への適用に用いられる場合、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはＰＣＳＫ９の１または複数の生物学的活性を阻害、妨害、または調節することができる。例えば、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドはヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合することができ、及び／またはヒトＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を、少なくとも約２０％〜４０％、４０〜６０％、６０〜８０％、８０〜８５％、またはそれ以上（例えば、イン・ビトロ競合結合アッセイにおいて測定することによって）、実質的に阻害することができる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、１０−１３Ｍ未満のＫｄ（より強固に結合している）を有する。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、ＬＤＬＲのＰＣＳＫ９に対する結合に関して、１μＭ未満、１０００ｎＭ〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜１０ｎＭ、１０ｎＭ〜１ｎＭ、１０００ｐＭ〜５００ｐＭ、５００ｐＭ〜２００ｐＭ、２００ｐＭ未満、２００ｐＭ〜１５０ｐＭ、２００ｐＭ〜１００ｐＭ、１００ｐＭ〜１０ｐＭ、１０ｐＭ〜１ｐＭのＩＣ５０を有する。
【０１５１】
医薬組成物は併用療法剤で、すなわち他の薬剤と組み合わせて投与されてもよい。この併用療法剤はＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを少なくとも１種の抗コレステロール剤との組み合わせで含んでいてもよい。薬剤は、イン・ビトロで合成的に調製した化学的製剤、抗体、抗原結合領域、ならびにそれらの組み合わせ及び接合体を含む。特定の実施形態において、薬剤は、アゴニスト、アンタゴニスト、アロステリック調節剤、または毒素として作用し得る。特定の実施形態において、薬剤はその標的を阻害または刺激（例えば、受容体もしく酵素の活性化または阻害）するように作用し、それによってＬＤＬＲの発現の増加を促進するかまたは血清コレステロールレベルを低下させることができる。
【０１５２】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、コレステロール低下（血清及び／または総コレステロール）剤による治療の前に、該治療と同時に、及び該治療の後に投与してもよい。例えば、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、高コレステロール血症、心臓疾患、糖尿病、及び／または任意のコレステロール関連障害の発症を予防または軽減するために予防的に投与してもよい。更に、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、既に存在する高コレステロール血症の治療のために投与してもよい。いくつかの場合において、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの投与は、当該障害及び／または当該障害に関連する症状の発症を遅延させることができる。いくつかの場合において、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、上記コレステロール関連障害またはそれらのサブセットのいずれか１種のいずれの症状もない対象に提供される。
【０１５３】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、高コレステロール血症などの種々のコレステロール関連障害を治療するための特定の治療薬と共に用いてもよい。当該の病態及び所望の治療のレベルを考慮して、２種、３種、またはそれ以上の種類の薬剤を投与してもよい。かかる薬剤は同一の製剤中に含ませることによって一緒に提供してもよい。あるいは、かかる薬剤は、別個に製剤し、且つ、所望であれば、治療キット中に包含させることによって一緒に提供してもよい。別の例において、かかる薬剤は別個に提供してもよい。
【０１５４】
投薬量及び投与レジメン
エボロクマブなどのｍＡｂなどのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの患者に投与される量は治療有効量である。ＰＣＳＫ９結合タンパク質の一般的な投薬量は約０．１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまでまたはそれ以上の範囲であってよい。特定の場合において、上記投薬量は０．１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで、または１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで、または５μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで、または１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、または２ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、または２ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドであってよい。
【０１５５】
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの量（すなわち用量）は、少なくとも約１０ｍｇ〜約１４００ｍｇ；または約１４ｍｇ〜約１２００ｍｇ；または約１４ｍｇ〜約１０００ｍｇ；または約１４ｍｇ〜約８００ｍｇ；または約１４ｍｇ〜約７００ｍｇ；または約１４ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２０ｍｇ〜約４８０ｍｇまで；または約７０ｍｇから約４８０ｍｇまで；または約８０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約９０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１００ｍｇ〜約４８０ｍｇ、または約１０５ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１１０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１１５ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１２０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１２５ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１３０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１３５ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１４０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１４５ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１５０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１６０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１７０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１８０ｍｇ〜約４８０ｍｇまたは約１９０ｍｇ〜約４８０ｍｇまたは約２００ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２１０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２２０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２３０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２４０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２５０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２６０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２７０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２８０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２９０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３００ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３１０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３２０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３３０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３４０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３５０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３６０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３７０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３８０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３９０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４００ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４１０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４２０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４３０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４４０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４５０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４６０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４７０ｍｇ〜約４８０ｍｇの範囲のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドであってよい。
【０１５６】
投与の頻度は、当該製剤中のＰＣＳＫ９結合ポリペプチド及び／または更なる治療薬のいずれかの薬物動態学的パラメータを考慮に入れることとなる。臨床医は、所望の効果が得られる投薬量に達するまで本製剤を投与してもよい。本製剤は、単回投与として、または経時的に２回、３回、４回もしくはそれ以上の投与（同一量のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含有していてもまたはそうでなくてもよい）として、あるいは移植デバイスまたはカテーテルを介した注入として投与してもよい。本製剤はまた、針及び注射器によって皮下または静脈内送達してもよい。皮下送達に関しては、ペン型送達システム、ならびにボディーインジェクター及びオートインジェクター送達デバイスが、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬製剤を送達してもよい。
【０１５７】
特定の場合において、少なくとも約１０ｍｇ、または約１４ｍｇまで、または約２０ｍｇまで、または約３５ｍｇまで、または約４０ｍｇまで、または約４５ｍｇまで、または約５０ｍｇまで、または約７０ｍｇまでの用量のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、それを必要とする患者に週に１回（ＱＷ）投与される。
【０１５８】
他の場合において、少なくとも約７０ｍｇ、または約１００ｍｇまで、または約１０５ｍｇまで、または約１１０ｍｇまで、または約１１５ｍｇまで、または約１２０ｍｇまで、または約１４０ｍｇまで、または約１６０ｍｇまで、または約２００ｍｇまで、または約２５０ｍｇまで、または約２８０ｍｇまで、または約３００ｍｇまで、または約３５０ｍｇまで、または約４００ｍｇまで、または約４２０ｍｇまでの用量のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、それを必要とする患者に隔週に１回（すなわち２週に１回、「Ｑ２Ｗ」）投与される。
【０１５９】
特定の他の場合において、少なくとも約２５０ｍｇ、または約２８０ｍｇまで、または約３００ｍｇまで、または約３５０ｍｇまで、または約４００ｍｇまで、または約４２０ｍｇまで、または約４５０ｍｇまで、または約４８０ｍｇまでの用量のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、それを必要とする患者に４週に１回（「Ｑ４Ｗ」）（すなわちカレンダーの１月に１回）投与される。
【０１６０】
例えば、エボロクマブを２１０ｍｇの用量としてＱ２Ｗで投与してもよい。あるいは、エボロクマブを４２０ｍｇの用量としてＱ４Ｗで投与してもよい。治療する疾病の状況によっては、これらの２種の薬物用量を毎週投与してもよい。
【０１６１】
いくつかの場合において、血清ＬＤＬコレステロールレベルが、投与前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比較して少なくとも約１５％低下する。いくつかの実施形態において、血清ＬＤＬコレステロールレベルが、少なくとも約２０％、または約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、更にそれ以上低下する。
【０１６２】
貯蔵及びキット
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む製剤は、少なくとも１種の更なる治療薬の有無にかかわらず、貯蔵の目的で、所望の純度を有する選択した製剤を任意選択の製剤用薬剤と混合することによって、凍結乾燥したケーキまたは水溶液の形態で調製してもよい。更に、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む製剤は、少なくとも１種の更なる治療薬の有無にかかわらず、適宜の賦形剤を用いて凍結乾燥体として製剤してもよい。
【０１６３】
本医薬製剤は、製剤後に、溶液剤、懸濁液剤、ゲル剤、乳化液剤、固形剤、または脱水したもしくは凍結乾燥した粉体として無菌バイアル中で貯蔵してもよい。かかる製剤は、そのまま使用できる形態または投与の前に再構成する（例えば凍結乾燥された）形態のいずれかで貯蔵してもよい。いくつかの例では、本ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド製剤は、適宜の貯蔵用バッグ（例えば、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ（ドイツ国ゲッティンゲン）製）などの容器またはポリカーボネート製カーボイ中で貯蔵してもよい。本医薬製剤はまた、製剤後に、そのまま使用できる形態の溶液剤または懸濁液剤として、予め充填した注射器（２．２５ｍＬのＰＦＳなどのＰＦＳ）、ならびにガラスバイアル（５ｃｃのガラスバイアルなど）中で貯蔵してもよい。
【０１６４】
特定の実施形態において、単回投与ユニットを作製するためのキットが提供される。特定の実施形態において、上記キットは、乾燥したタンパク質を有する第１の容器及び水性製剤を有する第２の容器が収納されていてもよい。特定の実施形態において、単一のチャンバ及び複数のチャンバをもつ、予め充填された注射器（例えば、液体注射器及び凍結乾燥粉体注射器）が収納されたキットが挙げられる。
【０１６５】
Ｎ−アセチルアルギニンを含むＰＣＳＫ９結合ポリペプチド製剤の限外ろ過／透析ろ過
ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、開示するＵＦ／ＤＦプロセスにおいて約２１０ｇ／Ｌに製剤してもよい。例えば、開示する方法において、７０ｇ／Ｌ（または３５ｇ／Ｌ）の第１の透析ろ過（ＤＦ１）濃縮液を３回透析ろ過し、１４０ｇ／Ｌに濃縮する。次いで、１４０ｇ／Ｌの第２の透析ろ過（ＤＦ２）濃縮液を透析ろ過し、２６０ｇ／Ｌに濃縮する。次いで製剤を２１０ｇ／Ｌの最終濃度にフラッシングして、濃縮貯留液をシステムから回収する。
【０１６６】
開示する方法では、実施例において、約７０ｍｇ／ｍＬ及び約３５ｍｇ／ｍＬの第１の限外ろ過（ＵＦ１）濃縮液が、最終的な原体（ＤＳ）において、ＨＭＷ（％）への有意な影響を与えないことが示される。更に、開示する方法において、透析ろ過を確実に完了させるために必要な、ＤＦ段階でのＤＦの透析ろ過容量は僅かに７である。
【０１６７】
開示するＵＦ／ＤＦプロセスを表５及び６にまとめる。
【表５】
2018154616.tif 000088
【表６】
2018154616.tif 000089
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【０１６８】
したがって、本明細書では、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドなどの、ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第１の濃縮ステップと、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップと、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第２の濃縮ステップと、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップと、
ｅ．第３の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第３の濃縮ステップと
を含む上記方法が開示される。
【０１６９】
第３の濃縮ステップの前に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が、約２５℃〜約３７℃に、例えば、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６℃、及び約３７℃に高められてもよい。また、第１の溶液交換ステップが、少なくとも３回の第２の溶液の透析ろ過を用いて実現されてもよく、いくつかの場合においては、更なる透析ろ過、例えば、４回、５回、または６回の透析ろ過が用いられてもよい。第２の溶液交換ステップが、少なくとも４回の第３の溶液の透析ろ過を用いて実現されてもよいが、５回、６回、または７回の透析ろ過を含む更なる透析ろ過が用いられてもよい。上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの最終濃度は、約１１ｍｇ／ｍＬ未満、例えば、１ｍｇ未満、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは約１１ｍｇ／ｍＬであってよい。また、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は、約３倍〜約７倍、例えば、約３、４、５、６倍、または約７倍高められてもよい。例えば、上記ポリペプチドの上記高められた濃度は、約３５ｍｇ／ｍＬ〜約７０ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上、例えば、約３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９ｍｇ／ｍＬ、もしくは約７０ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上である。第２の濃縮ステップにおいて、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は、第１の濃縮ステップから約２〜４倍（例えば、約２倍、３倍、または約４倍）、例えば、約７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２５０ｍｇ／ｍＬ、または約３００ｍｇ／ｍＬに高められる。第３の濃縮ステップにおいて、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度は、第２の濃縮ステップから約１．５〜約２倍、例えば、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、２００、２５０ｍｇ／ｍＬ、または約３００ｍｇ／ｍＬ、例えば約２６０ｍｇ／ｍＬに高められてもよい。したがって、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、上記治療用ポリペプチドの初期の濃度よりも少なくとも約１９〜２０倍濃縮された、例えば約２１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を有していてもよい。上記濃縮ステップは流加限外ろ過を含んでいてもよく、更に、第２の溶液と第３の溶液とは同一であってもよい。
【０１７０】
Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２または第３の溶液（例えば「ＮＡＲ溶液」）は、アルギニン塩及びバッファーを含んでいてもよく、例えば、上記Ｎ−アセチルアルギニンは、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭ、例えば約２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５ｍＭ、または約２３０ｍＭの濃度で存在し、上記アルギニン塩はＡｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩であり、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば、約２５、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５ｍＭ、または約１５０ｍＭの濃度で存在し、上記バッファーは、約５ｍＭ〜約３０ｍＭ、例えば、約５、１０、１５、２０、２５ｍＭ、または約３０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムバッファーである。他の下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭ〜約７０ｍＭ（例えば、約６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９ｍＭ、または約７０ｍＭ）の濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。例えば、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１４０ｍＭの濃度で存在していてもよく、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更なる下位の態様において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１５５ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。更に別の例において、上記Ｎ−アセチルアルギニンは約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩は約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーは約１０ｍＭの濃度で存在する。
【０１７１】
更に、上記組成物（上記ＮＡＲ溶液を含む）はプロリンを更に含んでいてもよく、該プロリンは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、例えば、約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５ｍＭ、または約１５０ｍＭの濃度で存在する。第２または第３の溶液のｐＨは、約４．８〜約６．９、例えば、約４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、または約６．９、例えば５．３、５．４、または５．５であってよい。第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ａ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下、例えば、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０μｍ、または約５００μｍであるメッシュ開口と、
ｂ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下（例えば、約３２、３３、３４、３５％、または約３６％）である開口面積と、
ｃ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上、例えば、約１６．２、１６、１５．８、１５．６、１５．４、１５．２、１５、１４．８、１４．６、１４．４、１４．２、１４、１３．８、１３．６、１３．４、１３．２、１３、１２．８、１２．６、１２．４ｎ／ｃｍまたは約１２．２ｎ／ｃｍのメッシュ数と、
ｄ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下、例えば、約２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０μｍ、または約３４０μｍである線径と、
ｅ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下、例えば、約１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、または１８０ｇ／ｍ２である坪量と、
ｆ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｇ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｈ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられてもよい。
【０１７２】
更に、濃縮された後に、第３の溶液に、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）などの界面活性剤が添加されてもよい。いくつかの場合において、上記界面活性剤は、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８）またはＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）である。上記界面活性剤は、当該製剤の容積当たりの重量（ｗ／ｖ）で約０．０００１％〜約１０％の範囲、例えば、当該製剤の約０．０００１％、約０．００５％、約０．００６％、約０．００７％、約０．００８％、約０．００９％、約０．０１％、約０．０５％、約０．１％、約０．５％、約１％、約５％、または約１０％の界面活性剤（ｗ／ｖ）の濃度であってよい。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０００１％〜約１％  ｗ／ｖの範囲の濃度のポリソルベート８０を含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０１％  ｗ／ｖの濃度のポリソルベート８０を含む。他の実施形態において、本製剤は当該製剤の約０．０００１％〜約１％  ｗ／ｖの範囲の濃度のプルロニック（登録商標）Ｆ−６８を含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０１％  ｗ／ｖの濃度のプルロニック（登録商標）Ｆ−６８を含む。更に他の実施形態において、本製剤は当該製剤の約０．０００１％〜約１％  ｗ／ｖの範囲の濃度のビタミンＥ  ＴＰＧＳを含む。特定の実施形態において、本医薬製剤は当該製剤の約０．０１％  ｗ／ｖの濃度のビタミンＥ  ＴＰＧＳを含む。
【０１７３】
以下の実施例の節は単に例として記載されるものであり、本開示または特許請求の範囲を何ら限定するために示されるものではない。
【実施例】
【０１７４】
粘度測定は、別段の特記がない限り、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータを用いて行った。
【０１７５】
実施例１  −  実験の設計（ＤＯＥ）の検討；Ｎ−アセチルアルギニンを含有するエボロクマブ製剤の最適化
Ｎ−アセチルアルギニンを含有するエボロクマブ製剤を最適化するために実験の設計（ＤＯＥ）の検討を開始した。１１種の製剤を、粘度、予め充填した注射器の押出力、安定性、ｐＨ、及び重量モル浸透圧濃度について試験した。初期の製剤パラメータに対するデータを表７に示す。
【表７】
2018154616.tif 000093
【０１７６】
図１に示す１ヶ月間４０℃のデータに基づいて、酢酸塩濃度を最小化した。当該製剤を等張性とするためにプロリン濃度を１２０ｍＭに増加させた。粘度の低減と１７０ｍＭ、４℃で見られるＮ−アセチルアルギニンの結晶化との間でバランスをとるために、Ｎ−アセチルアルギニン（１５５ｍＭ）を選択した。データはまた、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０；ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、プルロニック（登録商標）Ｆ−６８（ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体）、及びビタミンＥ  ＴＰＧＳ（Ｄ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート）の間での界面活性剤の違いよって、粘度または安定性における有意な差異がないことも示した。
【０１７７】
これらのデータに基づいて、１０ｍＭの酢酸塩、１５５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、１２０ｍＭのプロリン、０．０１％のポリソルベート８０、ｐＨ５．４が、高濃度（例えば１９０〜２１０ｍｇ／ｍＬ）のエボロクマブの低粘度製剤にとって好適であることを見出した。表８に提示するデータが、この製剤が等張性であり且つ低粘度であることを示した。
【表８】
2018154616.tif 000094
【０１７８】
実施例２  −  添加剤濃度、ｐＨ、及びバッファーの影響を評価するためのＤＯＥ検討
実施例２〜４は、凝集、脱アミド化、及び他の安定性を示す因子のいずれをも最小化しつつ、可能な限り粘度を低減するために最適化した製剤を対象としている。
【０１７９】
Ｎ−アセチルアルギニン（ＮＡＲ）を、添加剤スクリーニング検討での粘度低減におけるその優れた効果に基づいて選択した（例えば実施例１を参照のこと）。ＮＡＲの濃度は２〜８℃におけるその溶解度によって制限された。１７５ｍＭの高濃度においてＮＡＲの結晶化が見られなかった安定性の検討に基づいて、透析ろ過（ＤＦ）バッファー中での１５５ｍＭのＮＡＲ濃度を選択した。最も低粘度の等張性薬物製品製剤を実現するため且つＮＡＲの溶解性を向上させるために、アルギニンＨＣｌ（７０ｍＭ）をＤＦバッファーに添加した。エボロクマブの凝集及び脱アミド化を最小化するために、５．４の製剤のｐＨを選択した。バッファー及び界面活性剤（酢酸塩／ポリソルベート８０）がエボロクマブ製剤の粘度及び安定性に最小の影響を示した。
【０１８０】
ＮＡＲ／アルギニンＨＣｌ製剤中でのエボロクマブの安定性を検討するために、３種の主たる検討を実施した。該検討は以下のとおりであった
１．添加剤濃度、ｐＨ、及びバッファー（酢酸塩対クルタミン酸塩）の影響を評価するためのＤＯＥ検討(実施例２)。
２．粘度／安定性に対するｐＨ（５．１〜６．９）の影響を評価するために設計した広範なｐＨの検討(実施例３)。
３．薬物製品製造の単位操作の影響を含む、上位の候補製剤の安定性を評価するためのスケールダウンした検討(実施例４)。
【０１８１】
結果
≦５０ｃＰの粘度を目標として設定した。製剤粘度のスクリーニングによって、ＮＡＲが粘度を低減するための最も有効な添加剤であることが示された。但し、ＮＡＲの溶解性が限定されることから、等張性製剤を実現するため、且つ５０ｃＰ以下の粘度を有する２１０ｍｇ／ｍＬのエボロクマブ製剤の目標を満たすために、ＮＡＲとアルギニンＨＣｌとの組み合わせを用いた。スクリーニングの間に評価した、選択した製剤の概要を図２に示す。
【０１８２】
ＤＯＥ検討は、２１０ｍｇ／ｍＬにおけるエボロクマブの安定性及び粘度に対するＮＡＲ／アルギニンＨＣｌ濃度、ｐＨ、及びバッファー種の影響を評価するために設計した。各試料の製剤変数を表９に示す。検討の設計には、１５５〜１７５ｍＭのＮＡＲ濃度、５０〜１００ｍＭのアルギニンＨＣｌ濃度、及び４．８〜５．４のｐＨが含まれていた。上記検討には、１０ｍＭでの酢酸塩バッファーとクルタミン酸塩バッファーとの間の比較も含まれていた。上記検討には、ＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料と同一のロットの出発物質から調製してＰＦＳ中に充填した、１４０ｍｇ／ｍＬのプロリン製剤対照が含まれていた。試料を０．２μｍのＰＶＤＦ製フィルタを用いて滅菌ろ過し、約２．０ｍＬの充填容積でガラス製ＰＦＳ中に手作業で充填した。
【表９】
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【０１８３】
表１０では、ｐＨ、濃度、重量モル浸透圧濃度、及び粘度に関するデータを一覧表にしている。ｐＨ値は全ての試料について目標に近いことを観測した。重量モル浸透圧濃度は２５６〜３９２ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲に及んでいた。粘度は、より高いｐＨにおいてより低い粘度の矛盾した傾向を示しているように思われた。
【表１０】
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【０１８４】
ＪＭＰ統計的解析ソフトウェア（ＳＡＳ；ノースカロライナ州ケーリー；図３Ａ及び３Ｂ）を用いたサイズ排除高圧液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）データの解析によって、ｐＨ及びアルギニンＨＣｌ濃度の、４０℃で１ヶ月間における、主ピークのパーセントの低下に対する有意な影響が明らかになった（図３Ａ）。より低いｐＨ及びより高いアルギニンＨＣｌ濃度によって、主として凝集ピークの増加及び、それよりも程度は低いが、オリゴマーピークの増加に起因して、より大きな主ピークの低下が生じた。両ピークを併せて高分子量（ＨＭＷ）種と分類した。図４は、４０℃で１ヶ月の時点に対する、ｐＨ及びアルギニンＨＣｌのＨＭＷ種のパーセントに対する影響を示す。ｐＨ５．４の試料に比較してｐＨ４．８の試料において、有意により高いレベルのＨＭＷ種のパーセントが見られた。また、ｐＨ５．４に比較してｐＨ４．８において、より高いアルギニンＨＣｌ濃度がより高いＨＭＷ種のパーセントにつながるという影響が有意により顕著であった。
【０１８５】
図５Ａ〜５Ｃは、それぞれ、５℃で６ヶ月間、２５℃で３ヶ月間、及び４０℃で１ヶ月での、１４０ｍｇ／ｍＬのプロリン対照と比較した、ｐＨ４．８及びｐＨ５．４の選択した試料のＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。上記クロマトグラムは、ｐＨ５．４と比較して、ｐＨ４．８において凝集のレベルの増加の傾向を示している。上記クロマトグラムはまた、１４０ｍｇ／ｍＬのプロリン対照と比較して、２１０ｍｇ／ｍＬのＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料に関してより速い凝集の速度が観測されたにもかかわらず、２１０ｍｇ／ｍＬのＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料に関する分解プロファイルが同等であったことを示している。
【０１８６】
この実験で検討した全ての製剤は、４０℃において見られたｐＨ及びＡｒｇ  ＨＣｌ濃度に依存する違いにもかかわらず、５℃で６ヶ月まで及び２５℃で１ヶ月までに関しては同等のＨＭＷ種のパーセントを示した（図６Ａ、６Ｂ）。
【０１８７】
液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）分析による一般的なペプチドマッピングを、選択した試料に対して実施した。ペプチドマップＨＰＬＣ−紫外（ＵＶ）クロマトグラムを、プロリン  エボロクマブ製剤対照及びエボロクマブ標準試料と目視で比較した。ＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料において、対照と比較して新たなピークは認められなかった（図８）。また、質量分析によって検出される化学的変性の分析によって、ＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料と対照との間に有意な変化は示されなかった。相対的な定量を実施し、Ｎ５５及びＮ３３の脱アミド化ならびにＭ２４６及びＭ４２２の酸化を表１１に示す。ｐＨ５．４のＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料において、ｐＨ５．１のＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料及びｐＨ５．０のプロリン試料と比較して、僅かに高いレベルのＮ５５の脱アミド化が見られ、これはＣＥＸによって見られる酸性ピークの増加と整合する。Ｎ３３（相補性決定領域（ＣＤＲ）中の潜在的な脱アミド化部位）は、評価したｐＨ範囲及び条件においては有意な脱アミド化の増加を示してはいないように思われた。ＡＳＣでのインキュベーション後において、１４０ｍｇ／ｍＬのプロリン対照試料のＭ２４６及びＭ４２２の両方の酸化速度は、２１０ｍｇ／ｍＬのＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料と比較して高かった。
【表１１】
2018154616.tif 000097
【０１８８】
光遮蔽による液体中の粒子計測法及びマイクロフローイメージング（ＭＦＩ）による目視可能以下の粒子は、検討した製剤変数と相関した有意な傾向を示さなかった（図９Ａ〜９Ｃ及び図１０）。目視可能以下の粒子の数は、２１０ｍｇ／ｍＬのＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ試料と１４０ｍｇ／ｍＬのプロリン対照試料との間で同等であった。
【０１８９】
図１１は、時間ゼロ、３ヶ月、及び６ヶ月の時点における本検討の粘度データをまとめたものである。上記データは、全ての製剤に関して、５℃及び２５℃で６ヶ月までの間は粘度が安定なままであったことを示している。４０℃の試料はｐＨに依存する粘度の増加を示し、これはＳＥ−ＨＰＬＣによって見られた４０℃におけるＨＭＷ種のパーセントの増加（図４）と相関していた。
【０１９０】
所見
略等張性の製剤（約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ）が本検討の範囲の中央に位置する製剤（１０ｍＭのバッファー、１６５ｍＭのＮＡＲ、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ）において実現された。
【０１９１】
ｐＨが上昇すると、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いて観測される加速貯蔵後の凝集のパーセントが減少するのと同時に、カチオン交換によって検出されるより高いパーセントの酸性種を伴う脱アミド化が増加した。
【０１９２】
アルギニンＨＣｌ濃度は、ｐＨ４．８において安定性により大きな影響を与え（２５℃及び４０℃において凝集を増加させ）、その影響はｐＨ５．４で最小化した。
【０１９３】
酢酸塩及びグルタミン酸塩の安定性及び粘度に対する影響は同等である。
【０１９４】
ＮＡＲ／Ａｒｇ  ＨＣｌ対プロリン対照に関して、５℃及び２５℃で３ヶ月までならびに４０℃で１ヶ月までの間、選択した試料のペプチドマッピングによって、新たなピークは認められなかった。
【０１９５】
５℃及び２５℃で６ヶ月まで、粘度は安定したままである。
【０１９６】
ＮＡＲは、５０〜１００ｍＭの間のＡｒｇ  ＨＣｌ濃度で、１７５ｍＭまでのＤＦバッファー中の濃度において、５℃の製剤中で可溶のままである。
【０１９７】
実施例３  −  ｐＨの検討
より広範な範囲にわたるｐＨの影響を更に調べるためにｐＨの検討を設計した。上記検討は５．１〜６．９の目標ｐＨ範囲の製剤を含んでいた。各試料に用いたｐＨ及びバッファーを表１２に記載する。全ての試料を、１０ｍＭのバッファー、１６５ｍＭのＮＡＲ、７５ｍＭのアルギニンＨＣｌ、０．０１％のポリソルベート８０と共に２１０ｍｇ／ｍＬで製剤した。試料を０．２μｍのＰＶＤＦ製フィルタを用いて滅菌ろ過し、２．０ｍＬの充填容積でガラス製ＰＦＳ中に手作業で充填した。
【表１２】
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【０１９８】
結果
各試料の時間ゼロにおける及び４０℃で３ヶ月にわたるｐＨ値を図１２に示す。
【０１９９】
図１３Ａ〜１３Ｃは、それぞれ、４℃、２５℃、及び４０℃で３ヶ月までの間の、ＳＥ−ＨＰＬＣによるＨＭＷ種のパーセント（オリゴマーのパーセント＋凝集体のパーセント）に対するｐＨの影響を示す。５℃及び２５℃のデータには、異なるｐＨの製剤間で僅かな差異しか見られない。ｐＨに相関する最も顕著な差は、ｐＨ６．６及びｐＨ６．９の製剤に関する、時間ゼロからのより高いレベルのＨＭＷ種のパーセントであった。図１４はｐＨに対する時間ゼロでのオリゴマーレベルのプロットを示す。ｐＨの上昇に伴うオリゴマーの僅かな上昇傾向が認められ、ｐＨ６．３を超えるとより急な上昇が認められた。オリゴマーレベルはより低いｐＨで最小化した。
【０２００】
上述のＤＯＥ検討（実施例２）において見られたように、ＨＭＷ種のパーセントは、検討した各ｐＨに対して４０℃では経時的に増加し、より低いｐＨが初期の増加速度がより高いことと相関があった。
【０２０１】
４０℃におけるＳＥ−ＨＰＬＣクロマトグラムの比較から、３ヶ月の時点で、ｐＨの低下に伴って凝集体のピークのレベルの増加が生じた（図１５）。
【０２０２】
図１６Ａ〜１６Ｃは、５℃（図１６Ａ）、２５℃（図１６Ｂ）、及び４０℃（図１６Ａ）で６ヶ月までの間のＣＥＸ−ＨＰＬＣによる主ピークのパーセントに対するｐＨの影響を示す。５℃においては６ヶ月の時点で、ｐＨ≦６．０の試料の主ピークのパーセントには有意な変化はなかった一方、ｐＨ≧６．３の試料の主ピークのパーセントには減少が認められた（図１６Ａ）。図１６Ｂ及び図１６ＣにおけるＡＳＣでのＣＥＸ−ＨＰＬＣデータは、ｐＨの上昇に伴って主ピークのパーセントが減少したこと、及び減少の速度がｐＨ＞６．０において顕著に加速されたことを示した。
【０２０３】
図１７は、４０℃におけるＣＥＸ主ピークのパーセントのｐＨに依存する減少が酸性種のパーセントの増加に起因していたことを示す。
【０２０４】
図１８において、２５℃で３ヶ月の時点におけるＣＥＸ−ＨＰＬＣクロマトグラムの比較を見ることができる。酸性ピークのパーセントがｐＨの上昇に伴って成長し、６．３を超えるｐＨを有する試料のクロマトグラフィープロファイルの顕著な変化が存在する。
【０２０５】
液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）を用いたトリプシンによるペプチドマッピングを、４０℃で１ヶ月間貯蔵後の試料に対して実施した。ペプチドマップＨＰＬＣ−ＵＶクロマトグラム（図１９）を、標準試料と当該のｐＨ範囲全体にわたって目視により比較した。また、質量分析による化学的変性の分析により、Ｎ５５及びＮ３３の脱アミド化を除いて、ｐＨに相関する有意な変化は見られなかった。Ｎ５５及びＮ３３の脱アミド化ならびにＭ２４６及びＭ４２２の酸化の相対的な定量レベルを表１３に示す。Ｎ５５の脱アミド化のパーセント及びＮ３３の脱アミド化のパーセントは、ｐＨの上昇に伴うＣＥＸ−ＨＰＬＣデータに見られる酸性ピークのパーセントのレベルの増加と相関があった。Ｍ２４６またはＭ４２２に関する酸化レベルに対する有意なｐＨの影響は存在しないように思われた。
【表１３】
2018154616.tif 000099
【０２０６】
図２０に、４０℃で１ヶ月の試料のバイオアッセイの結果を、初期主ピークのパーセント（ＣＥＸ−ＨＰＬＣ）ならびに（脱アミド化していない）Ｎ５５のパーセント及びＮ３３のパーセントと共にプロットする。
【０２０７】
光遮蔽による液体中の粒子計測法（図２１Ａ〜２１Ｃ）及びＭＦＩ（図２２）による目視可能以下の粒子には、ｐＨと相関する有意な傾向は見られなかった。
【０２０８】
図２３のデータは、還元キャピラリ電気泳動−ドデシル硫酸ナトリウム（ｒＣＥ−ＳＤＳ）分析によって２５℃で６ヶ月まで測定した場合、断片化または他の分解に対して、ｐＨが及ぼす影響は、最小限であったことを示している。図２３のＰｒｅ軽鎖＋軽鎖＋重鎖（Ｐｒｅ  ＬＣ＋ＬＣ＋ＨＣ）のパーセントは、当該ｐＨ範囲の両端で僅かな減少を示している。より低いｐＨの試料は僅かにより高い中間的な分子量（ＭＭＷ）種のパーセントを含有しており、より高いｐＨの試料は僅かにより高いＨＭＷ種のパーセントを含有していた。低分子量（ＬＭＷ）種のパーセントは当該ｐＨ範囲にわたって同等である。
【０２０９】
最後に、図２４に示すように、粘度とｐＨとの間には、単位ｐＨ当たり６．６ｃＰの減少の良好な直線的相関がある。
【０２１０】
所見
ｐＨが上昇すると、（１）４０℃において凝集速度が低下し、（２）オリゴマーの初期レベルがより高くなり、（３）２５℃及び４０℃において脱アミド化速度が増加し、（４）粘度が低下した。ｐＨは、目視可能な粒子または目視可能以下の粒子に対して有意な影響を与えてはいないように思われ、またｐＨは、ｒＣＥ−ＳＤＳによって測定した断片化または他の分解に対して有意な影響を与えてはいないように思われた。
【０２１１】
実施例４  −  スケールダウンした検討
３種の製剤を商業的製造適性及び安定性の評価に供した。候補製剤を、商業的製造を模擬した種々の単位操作に供し、その後安定性評価に供した。
【０２１２】
結果
各製剤原体の物理的特性を測定した。
【０２１３】
各製剤のｐＨがＤＦバッファーのｐＨよりも約０．１７高く測定された。製剤３のＤＦバッファーは目標を０．１４超えており、その結果ＤＳのｐＨが目標を０．３１超えていた。
【０２１４】
５℃、２５℃、及び４０℃における薬物製品の安定性に関するＳＥ−ＨＰＬＣ（ＨＭＷ種のパーセント）の結果を図２５Ａ〜２５Ｃに示す。５℃及び２５℃においてはＨＭＷ種のパーセントの増加速度が３種の全ての試料について同等であった一方、４０℃においては試料１（ｐＨがより低い）の凝集速度が僅かに高かった。
【０２１５】
ＣＥＸ−ＨＰＬＣデータを図２６Ａ〜２６Ｃに示し、該データは予想されたｐＨ及び、前述の検討において認められた、温度に依存する酸性ピークのパーセントの増加（前述の実施例を参照のこと）を示す。
【０２１６】
図２７に示すｒＣＥ−ＳＤＳデータは、試験した全ての温度及び時点における、各スケールダウンした製剤のＰｒｅＬＣ＋ＨＣ＋ＬＣのパーセントが同等のレベルであることを示している。
【０２１７】
濁度レベルは５℃及び２５℃で４ヶ月までの間には有意に変化しなかったが、４０℃で４ヶ月後には増加した。
【０２１８】
スケールダウンした試料の濃度は、各製剤について２００、２１０、及び２２０ｍｇ／ｍＬに調整した。試料を、ｍ−ＶＲＯＣ（商標）レオメータ（ＲｈｅｏＳｅｎｓｅ、カリフォルニア州サンラモン）によって、９０，０００ｓｅｃ−１に及ぶせん断速度及び１８℃〜２８℃の温度で試験した。図２８のデータは２２〜５２ｃＰの粘度範囲にわたっており、タンパク質濃度、温度、及び製剤変数の粘度に対する影響を説明している。
【０２１９】
所見
ＳＥ−ＨＰＬＣによるＨＭＷ種のパーセントのレベル及び凝集速度は、上述の検討において認められたものと整合していた（例えば上述の実施例を参照のこと）。
【０２２０】
ＣＥＸ−ＨＰＬＣによる主ピークのパーセント、酸性ピーク、及び塩基性ピークのレベルならびに変化の速度は、上述の検討において認められたものと整合していた。
【０２２１】
ｒＣＥ−ＳＤＳデータは、ＲＳＣ及びＡＳＣでの３ヶ月まで、有意な断片化または他の分解を示さなかった。
【０２２２】
実施例５  −  Ｎ−アセチルアルギニンを含む製剤中のエボロクマブの限外ろ過／透析ろ過
材料及び方法
小規模な限外ろ過／透析ろ過（ＵＦ／ＤＦ）の開発実験では、３０ｋＤの分子量でカットオフのＵｌｔｒａｃｅｌ  ＰＬＣＴＫ  Ｍｅｍｂｒａｎｅを備えるＰｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）３カセット（Ｄ  Ｓｃｒｅｅｎ、０．１１ｍ２、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；マサチューセッツ州ビレリカ）を用いた。上記実験はタンジェント流ろ過（ＴＦＦ）プロセスシステム（Ｐｅｎｄｏ  ＴＥＣＨ、ニュージャージー州プリンストン）上で実施した。この実験は室温（２２．２±２℃）で実施した。
【０２２３】
上記ＵＦ／ＤＦ開発実験を、異なるｐＨ値の３種のＮＡＲ製剤バッファーを評価するために小規模で実施し、それらの透過流量データを濃度に対して比較した。ＮＡＲの消費量を減少させることによってコストを削減するために２回のＤＦステップを用いた。上記ＵＦ／ＤＦプロセスの間の高分子量種生成に対する２種の目標濃度（３５ｍｇ／ｍＬ及び７０ｍｇ／ｍＬ）を評価するために、ＵＦ１／ＤＦ１ステップにおいて更なる実験を実施した。他のＵＦ／ＤＦ運転パラメータは評価しなかった。ＵＦ／ＤＦ実験の概括的な手順を表１４に記載する。
【表１４】
2018154616.tif 000100
【０２２４】
可変光路長分光光度計（ＳｏｌｏＶＰＥシステム、ＳｏｌｏＶＰＥ、ニュージャージー州ブリッジウォーター）を用い、１．５（ｃｍ）−１（ｇ／Ｌ）−１の吸光係数でＡ２８０の測定を実施した。
【０２２５】
生成物貯留液の品質を評価するために用いた分析方法には、ＳＥ−ＨＰＬＣ、ｒＣＥ−ＳＤＳ、及びＣＥＸ−ＨＰＬＣが含まれていた。
【０２２６】
ＮＡＲ：Ａｃ−Ａｒｇ−ＯＨ、Ｂｉｏｃｈｅｍカタログ番号  Ｅ−１０２５
【０２２７】
ＮＡＲ製剤バッファーの検討結果
この実験では上記ＵＦ／ＤＦプロセスにおいて３種のＮＡＲ製剤バッファーを評価した。上記ＵＦ／ＤＦプロセスは概括的な指針に従った。すなわち、（１）エボロクマブを流加濃縮によって７０ｍｇ／ｍＬに濃縮し（ＵＦ１）、３の透析ろ過容量でＮＡＲ製剤バッファーへと透析ろ過し（ＤＦ１）、（２）上記タンパク質を１４０ｍｇ／ｍＬに更に濃縮し（ＵＦ２）、４の透析ろ過容量でＮＡＲ製剤バッファーへと透析ろ過し（ＤＦ２）、（３）上記タンパク質を目標の約２６０ｍｇ／ｍＬに過剰に濃縮し、３７℃においてシステムから回収した。タンパク質負荷／膜面積は、ＮＡＲ  ｐＨ５．４に関しては１４６８ｇ／ｍ２であり、ＮＡＲ  ｐＨ５．２及び５．６に関しては８００ｍ２であった。
【０２２８】
流量のデータを濃度に対してプロットし、全てのＮＡＲ製剤バッファーにわたって比較した。また、各透析ろ過ステップから試料採取することによって添加剤レベルを分析し、透析ろ過性能を検討し、且つ最小透析ろ過容量を判定した。
【０２２９】
結果及び所見
上記ＵＦ／ＤＦ検討の流量データを用いて、図２９に示すろ液流量対濃度のプロットを作成した。上記流量プロファイルは上記３種のＮＡＲ製剤バッファーを通して同等であった。上記流量は、タンパク質がＮＡＲ製剤バッファーにバッファー交換されるのに伴って増加したが（ＤＦ１及びＤＦ２）、タンパク質濃度の増加に伴って顕著に低下した（ＵＦ１、ＵＦ２、及びＯＣ）。ＵＦ／ＤＦに対する合計のプロセス時間は、異なる膜面積に起因して、ＮＡＲ  ｐＨ５．４においては２０時間であり、ＮＡＲ  ｐＨ５．２及び５．６に関しては１０時間であった。流量プロファイルが類似した結果であったことは、上記ＮＡＲ製剤バッファーが上記プロセス流量に対して有意な影響を与えないことを示していた。エボロクマブ原体（ＤＳ）の小規模ＵＦ／ＤＦの検討の概要を表１５に示す。
【０２３０】
上記透析ろ過ステップ（ＤＦ１及びＤＦ２）において、各透析ろ過容量（１〜７のＤＶ）で試料を採取して、透析ろ過性能を調べ、且つ最小透析ろ過容量を判定した。表１６の代表的な試料の分析はエボロクマブ・ＮＡＲ  ｐＨ５．４のＵＦ／ＤＦ検討によるものであった。これらの結果は、ＮＡＲ  ｐＨ５．４に対する透析ろ過は、５の透析ろ過容量の後の時点で本質的に完了していたことを示していた。
【表１５】
2018154616.tif 000101
【表１６】
2018154616.tif 000102
【０２３１】
実施例６  −  エボロクマブ製剤のＵＦ／ＤＦ中のＤＳ濃度及びＨＭＷ生成の監視
この実験の目的は、流加濃縮／透析ろ過（ＵＦ１／ＤＦ１）に対する目標濃度を評価すること、及びＵＦ／ＤＦ運転中のＨＭＷ生成を最小化するための目標濃度を判定することであった。上記ＵＦ／ＤＦプロセスは表１７に記載する概括的な指針に従った。エボロクマブ（１１ｍｇ／ｍＬ）を流加濃縮（ＵＦ１）によって３５ｍｇ／ｍＬまたは７０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。タンパク質負荷／膜面積は８００ｍ２であり、ＮＡＲ製剤バッファーは、１０ｍＭの酢酸塩、１５５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、７０ｍＭのアルギニンＨＣｌを含み、ｐＨ５．３であった。
【０２３２】
また、ＵＦ／ＤＦ運転を評価するために、生成物貯留液の品質分析用に各ＵＦ／ＤＦステップからタンパク質試料を採取した。上記生成物貯留液の品質データを用いて、ＨＭＷ生成に対する異なるＵＦ１／ＤＦ１生成物濃度の影響を検討した。
【０２３３】
材料及び方法
実施例５を参照されたい。
【０２３４】
結果及び所見
図３０は、ＵＦ１／ＤＦ１における３５ｍｇ／ｍＬ及び７０ｍｇ／ｍＬ（ＵＦ／ＤＦ−７０及びＵＦ／ＤＦ−３５）でのエボロクマブＵＦ／ＤＦプロセスにおけるＨＭＷ（％）生成を比較したプロットを示す。初期には、ＵＦ／ＤＦ−７０−ＵＦ１におけるＨＭＷ種（％）はＵＦ／ＤＦ−３５−ＵＦ１よりも０．２％高かったが、ＵＦ１以後ではＨＭＷ（％）は同等であり、最終的なＤＳにおいては同一であった。この結果は、ＨＭＷ種は可逆的であり、ＵＦ１に対する目標濃度は最終的なＤＳにおけるＨＭＷ種の生成に対して有意な影響を与えないことを示していた。貯留液の量を減らすため、目標濃度を７０ｍｇ／ｍＬにすることが推奨される。
【０２３５】
実施例７  −  小規模ＵＦ／ＤＦ由来の３種のＮＡＲ  ＤＳに対する貯留液保持の検討
この実施例では、３種のＮＡＲ製剤バッファーに対して製剤したエボロクマブの３種のバッチの安定性を監視した。１０ｍＬの各ＤＳ試料を２〜８℃で保持した。図３１Ａ〜３１Ｆに示す各時点で約１ｍＬの試料を抜き出し、２〜８℃で分析試験に送付した。
【０２３６】
結果及び所見
２〜８℃で保持したエボロクマブ・ＮＡＲのＳＥ−ＨＰＬＣ及びＣＥＸ−ＨＰＬＣを図３６及び３７に示す。ＣＥＸ及びｒＣＥ−ＳＤＳの結果は同等の結果となった。ＮＡＲ  ｐＨ５．２、５．４、及びｐＨ５．６のプロセスから得られたＤＳバッチは、原料物質中の１．１％に対して、ＵＦ／ＤＦ運転の間、それぞれ１．４％、１．５％、及び１．７％のＨＭＷ種を有していた。図３２において、上記ＨＭＷ種の％をプロットし、エボロクマブ原料物質と１１週間保持したＮＡＲ  ＤＳとを比較した。上記３種の製剤バッチの全てにおいてＨＭＷ（％）が０．４％〜０．５％増加していた。これらのＤＳバッチは２〜８℃において少なくとも７日間は安定であった。
【０２３７】
実施例８  −  エボロクマブ  ＨＭＰ  ＣＰＤ１  ＮＡＲ過剰濃縮（２６０ｇ／Ｌ）に対する３７℃、３９℃、４２℃、及び４５℃でのイン・プロセス貯留液の保持検討
イン・プロセスエボロクマブ過剰濃縮液（２６０ｇ／Ｌ）の３７℃、３９℃、４２℃、及び４５℃における安定性を評価した。３０ｍＬのＯＣ試料を、所定の温度に制御した部屋において水浴中でインキュベートした。図３３及び３４に示す各時点で、約１ｍＬの試料を採取し、凍結し、ドライアイスと共に分析に送付した。より高い温度で保持したＯＣ試料に対して粘度値を測定し、２３℃及び２５℃で保持した試料と比較した。
【０２３８】
結果及び所見
図３３に示すように、ＳＥ−ＨＰＬＣの結果は、エボロクマブ・ＮＡＲ  ＯＣは３７℃、３９℃、及び４２℃では３時間の間安定であるが、４５℃では安定でないことを示していた。ＣＥＸ及びｒＣＥ−ＳＤＳの結果は同等であった。図３４は、温度が上昇するとＯＣの粘度が低下し、温度が３７℃から４２℃へと上昇すると、粘度が１９％（１４．７ｃＰ）低下したことを示している。
【０２３９】
本明細書において用いる節の見出しは構成上の目的のためだけのものであり、記載する主題を限定すると解釈されるべきものではない。特許、特許出願、記事、書籍、及び論文を含む、本明細書に引用される全ての文献または文献の一部は、この記載によって、如何なる目的に対してもそれらの全体が参照により援用される。
【０２４０】
実施例９  −  製剤のロバスト性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）のＤＯＥ検討
エボロクマブの安定性に対する、示した設計空間内の製剤変数の影響を検討するために、製剤のロバスト性の実験設計（ＤＯＥ）の検討を設計した。上記検討の変数には、エボロクマブ濃度、ＮＡＲ濃度、Ａｒｇ  ＨＣｌ濃度、及びｐＨが含まれていた。表１７に記載した１８種の製剤を、０．２μｍのＰＶＤＦ製フィルタを用いて滅菌ろ過し、２．０ｍＬのガラス製の予め充填した注射器中に充填した。試料を、種々の温度でのインキュベーションに続いて、安定性の指標となる一連の分析方法によって試験した。全ての製剤が、表１７に記載した成分に加えて、１０ｍＭの酢酸ナトリウム及び０．０１％(w/v)のポリソルベート８０を含んでいた。
【表１７】
2018154616.tif 000103
【０２４１】
表１８は、被験製剤のそれぞれについて、エボロクマブ濃度、ｐＨ値、及び添加剤濃度の測定値を示す。全てが表１７に記載した目標レベルに近接している。
【表１８】
2018154616.tif 000104
【０２４２】
結果及び所見
凝集を評価するために、４℃（図３５Ａ）、２５℃（図３５Ｂ）、ならびに４０℃（図３５Ｃ及び３５Ｄ）における０〜６ヶ月のインキュベーション後に、表１８に示す製剤に対して、ＳＥ−ＨＰＬＣ分析を実施した。データは、４℃及び２５℃の条件に関しては全ての製剤について、ＨＭＷ種の％の増加速度が類似していたが、加速した４０℃のストレス条件では凝集に対するｐＨに依存する影響が認められた。ｐＨ５．１のより低いｐＨの試料は、４０℃において凝集速度が最も速いことが認められた一方、ｐＨ５．７の試料は、凝集速度が最も遅いことが認められた（図３５Ｃ及び３５Ｄ）。ｐＨ５．４の試料は４０℃において、凝集速度がｐＨ５．１と５．７の凝集速度の中間であることが認められたが、これらの速度はｐＨ５．７の試料について認められたより低い凝集速度により類似していた（図３５Ｃ及び３５Ｄ）。
【０２４３】
酸性ピークの％及び塩基性ピークの％の経時的な増加に対するｐＨの影響（３ヶ月まで）をＣＥＸ−ＨＰＬＣを用いて調べ、そのデータを、４℃については図３６Ａ（酸性ピーク）及び３６Ｂ（塩基性ピーク）、２５℃については図３６Ｃ（酸性ピーク）及び３６Ｄ（塩基性ピーク）、４０℃については図３６Ｅ（酸性ピーク）及び３６Ｆ（塩基性ピーク）に示す。２５℃及び４０℃の試料に関するデータに示すように（図３６Ｃ〜３６Ｆ）、ｐＨが当該製剤中の酸性及び塩基性ピークの％に影響を与えることが認められた。ｐＨ５．７の試料に関するデータが酸性ピークの％の増加のより高い速度と密接に関係していた一方、ｐＨ５．１の試料に関するデータは最も低い増加速度を示した。ｐＨ５．４の２種の試料の分解速度は、ｐＨ５．１及びｐＨ５．７のこれらの試料の観測された速度のちょうど間であることが認められた。塩基性ピークの％の変化の傾向は違いがより少ないように思われたが、４０℃でインキュベートした試料からは、より低いｐＨにおいて塩基性ピークの％レベルがより高い傾向が認められた。
【０２４４】
３０℃または４０℃のいずれかでの３ヶ月までの間の上記製剤中のエボロクマブの断片化または他の分解を、ｒＣＥ−ＳＤＳ及びＳＥ−ＨＰＬＣ分析を用いて評価した。図３７Ａ及び３７Ｂは３０℃でインキュベートした試料のデータを示し、図３７Ｃ及び３７Ｄは４０℃でインキュベートした試料のデータを示す。この検討の設計空間内での製剤組成物に関係するｒＣＥ−ＳＤＳデータの有意な傾向は認められなかった。
【０２４５】
４℃及び４０℃での３ヶ月までの間のインキュベーション後の上記製剤について、目視可能以下の粒子の存在及び量を、ＨＩＡＣを用いた光遮蔽粒子計測法によって経時的に測定した。これらのデータを図３８Ａ〜３８Ｄに示す。（図３８Ａ（１０μｍ以上の粒子）及び３８Ｂ（２５μｍ以上の粒子）は４℃で保持した試料に関する結果を示し、図３８Ｃ（１０μｍ以上の粒子）及び３８Ｄ（２５μｍ以上の粒子）は４０℃で保持した試料に関する結果を示す。）これらのデータから、検討した製剤変数と関係する目視可能以下の粒子の数における有意な傾向は認められなかった。
【０２４６】
この実施例から、上記データは、検討した狭い製剤設計空間内において、４℃または２５℃における貯蔵の間の安定性に対する有意な影響は認められないことを実証した。４０℃におけるｐＨに関係するデータは、ｐＨが、ＳＥ−ＨＰＬＣによって検出される凝集速度、ならびにＣＥＸ−ＨＰＬＣによって検出される酸性種のパーセント及び、それよりも程度は低いが、塩基性種のパーセントに影響を与えることを示唆していた。
【０２４７】
例示的な実施形態
ここでは、エボロクマブを含む医薬組成物の例示的な実施形態が開示され、かかる組成物はＮ−アセチルアルギニンを含み、上記医薬組成物の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）は少なくとも約８０ｃP未満である。更にここでは、エボロクマブなどの治療用ポリペプチドの製剤方法が開示され、かかる組成物はＮＡＲを含む。
【０２４８】
実施形態１：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択されるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．Ｎ−アセチルアルギニンと
を含み、
少なくとも約８０ｃＰ未満の粘度を有する医薬組成物。
【０２４９】
実施形態２：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体である、実施形態１に記載の医薬組成物。
【０２５０】
実施形態３：少なくとも約５０ｃＰ未満の粘度を有する、実施形態２または３に記載の医薬組成物。
【０２５１】
実施形態４：約２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有する、実施形態２または３に記載の医薬組成物。
【０２５２】
実施形態５：約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有する、実施形態４に記載の医薬組成物。
【０２５３】
実施形態６：ヒト血液細胞と等張である、実施形態５に記載の医薬組成物。
【０２５４】
実施形態７：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、実施形態１に記載の医薬組成物。
【０２５５】
実施形態８：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度が、約２１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態２に記載の医薬組成物。
【０２５６】
実施形態９：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１〜８のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２５７】
実施形態１０：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在する、実施形態９に記載の医薬組成物。
【０２５８】
実施形態１１：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１０に記載の医薬組成物。
【０２５９】
実施形態１２：バッファーを更に含む、実施形態１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２６０】
実施形態１３：上記バッファーが、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、実施形態１３に記載の医薬組成物。
【０２６１】
実施形態１４：上記バッファーが、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１３に記載の医薬組成物。
【０２６２】
実施形態１５：上記バッファーが、酢酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１４に記載の医薬組成物。
【０２６３】
実施形態１６：ｐＨが、約４．８〜約６．９である、実施形態１〜１５のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２６４】
実施形態１７：ｐＨが、約５．４である、実施形態１１に記載の医薬組成物。
【０２６５】
実施形態１８：界面活性剤を更に含む、実施形態１〜１７のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２６６】
実施形態１９：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される、実施形態１８に記載の医薬組成物。
【０２６７】
実施形態２０：上記界面活性剤が、約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１９に記載の医薬組成物。
【０２６８】
実施形態２１：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態２０に記載の医薬組成物。
【０２６９】
実施形態２２：プロリンを更に含む、実施形態１〜２１のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２７０】
実施形態２３：上記プロリンが、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態２２に記載の医薬組成物。
【０２７１】
実施形態２４：上記プロリンが、約９０ｍＭ〜約１２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態２３に記載の医薬組成物。
【０２７２】
実施形態２５：上記プロリンが、約１２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態２２または２３に記載の医薬組成物。
【０２７３】
実施形態２６：アルギニン塩を更に含む、実施形態１〜２５のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２７４】
実施形態２７：上記アルギニン塩が、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態２６に記載の医薬組成物。
【０２７５】
実施形態２８：上記アルギニン塩が、約５０ｍＭ〜約１００ｍＭの濃度で存在する、実施形態２７に記載の医薬組成物。
【０２７６】
実施形態２９：上記アルギニン塩が、アルギニン−ＨＣｌ、アルギニン酢酸塩、またはアルギニングルタミン酸塩である、実施形態２６に記載の医薬組成物。
【０２７７】
実施形態３０：上記アルギニンＨＣｌが、約５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態２９に記載の医薬組成物。
【０２７８】
実施形態３１：約−３０℃以下で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２年間安定である、実施形態１〜３０のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２７９】
実施形態３２：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約５年間安定である、実施形態３１に記載の医薬組成物。
【０２８０】
実施形態３３：約５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態１〜３０のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２８１】
実施形態３４：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２４ヶ月間安定である、実施形態３３に記載の医薬組成物。
【０２８２】
実施形態３５：約２５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態１〜３０のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２８３】
実施形態３６：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約３ヶ月間安定である、実施形態３５に記載の医薬組成物。
【０２８４】
実施形態３７：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態３５に記載の医薬組成物。
【０２８５】
実施形態３８：約４０℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態１〜３０のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２８６】
実施形態３９：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーを含む、実施形態１〜３８のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２８７】
実施形態４０：存在する上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約２．５％未満である、実施形態３９に記載の医薬組成物。
【０２８８】
実施形態４１：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択されるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．Ｎ−アセチルアルギニンと、
ｃ．アルギニン塩と、
ｄ．バッファーと、
ｅ．界面活性剤と
を含み、
少なくとも約８０ｃＰ未満の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）を有する医薬組成物。
【０２８９】
実施形態４２：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体である、実施形態４１に記載の医薬組成物。
【０２９０】
実施形態４３：少なくとも約５０ｃＰ未満の粘度を有する、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０２９１】
実施形態４４：約２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有する、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０２９２】
実施形態４５：約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有する、実施形態４４に記載の医薬組成物。
【０２９３】
実施形態４６：ヒト血液細胞と等張である、実施形態４５に記載の医薬組成物。
【０２９４】
実施形態４７：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０２９５】
実施形態４８：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度が、約２１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態４７に記載の医薬組成物。
【０２９６】
実施形態４９：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在する、実施形態４１〜４８のいずれかに記載の医薬組成物。
【０２９７】
実施形態５０：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在する、実施形態４９に記載の医薬組成物。
【０２９８】
実施形態５１：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭの濃度で存在する、実施形態５０に記載の医薬組成物。
【０２９９】
実施形態５２：上記バッファーが、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０３００】
実施形態５３：上記バッファーが、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在する、実施形態５２に記載の医薬組成物。
【０３０１】
実施形態５４：上記バッファーが、酢酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態５３に記載の医薬組成物。
【０３０２】
実施形態５５：上記ｐＨが、約４．８〜約６．９である、実施形態４１または４２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３０３】
実施形態５６：上記ｐＨが、約５．４である、実施形態５５に記載の医薬組成物。
【０３０４】
実施形態５７：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０３０５】
実施形態５８：上記界面活性剤が、約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態５７に記載の医薬組成物。
【０３０６】
実施形態５９：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態５７に記載の医薬組成物。
【０３０７】
実施形態６０：プロリンを更に含む、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０３０８】
実施形態６１：上記プロリンが、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態６０に記載の医薬組成物。
【０３０９】
実施形態６２：上記プロリンが、約９０ｍＭ〜約１２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態６１に記載の医薬組成物。
【０３１０】
実施形態６３：上記プロリンが、約１２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態６２に記載の医薬組成物。
【０３１１】
実施形態６４：上記アルギニン塩が、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態４１または４２に記載の医薬組成物。
【０３１２】
実施形態６５：上記アルギニン塩が、約５０ｍＭ〜約１００ｍＭの濃度で存在する、実施形態６４に記載の医薬組成物。
【０３１３】
実施形態６６：上記アルギニン塩が、アルギニン−ＨＣｌ、アルギニン酢酸塩、またはアルギニングルタミン酸塩である、実施形態６４に記載の医薬組成物。
【０３１４】
実施形態６７：上記アルギニンＨＣｌが、約５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態６６に記載の医薬組成物。
【０３１５】
実施形態６８：約−３０℃以下で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２年間安定である、実施形態４１〜６７のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３１６】
実施形態６９：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約５年間安定である、実施形態６８に記載の医薬組成物。
【０３１７】
実施形態７０：約５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態４１〜６７のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３１８】
実施形態７１：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２４ヶ月間安定である、実施形態７０に記載の医薬組成物。
【０３１９】
実施形態７２：約２５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態４１〜６７のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３２０】
実施形態７３：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約３ヶ月間安定である、実施形態７２に記載の医薬組成物。
【０３２１】
実施形態７４：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態７３に記載の医薬組成物。
【０３２２】
実施形態７５：約４０℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態４１〜６７のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３２３】
実施形態７６：含まれる上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満である、実施形態４１〜７５のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３２４】
実施形態７７：存在する上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約２．５％未満である、実施形態７６に記載の医薬組成物。
【０３２５】
実施形態７８：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１４０ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約５０ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物。
【０３２６】
実施形態７９：約５．１〜約５．７のｐＨを有する、実施形態７８に記載の医薬組成物。
【０３２７】
実施形態８０：少なくとも約５０ｃＰ未満の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）を有する、実施形態７８または７９に記載の医薬組成物。
【０３２８】
実施形態８１：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
ｂ．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｃ．約１４０ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｄ．約６３ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｅ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｆ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物。
【０３２９】
実施形態８２：約５．１〜約５．７のｐＨを有する、実施形態８１に記載の医薬組成物。
【０３３０】
実施形態８３：少なくとも約８０ｃＰ未満の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）を有する、実施形態８１または８２に記載の医薬組成物。
【０３３１】
実施形態８４：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１５５ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約７０ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物。
【０３３２】
実施形態８５：約５．１〜約５．７のｐＨを有する、実施形態８４に記載の医薬組成物。
【０３３３】
実施形態８６：少なくとも約４５ｃＰ未満の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）を有する、実施形態８４または８５に記載の医薬組成物。
【０３３４】
実施形態８７：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１７０ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約６３ｍＭの濃度で存在するアルギニンＨＣｌと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物。
【０３３５】
実施形態８８：約５．１〜約５．７のｐＨを有する、実施形態８７に記載の医薬組成物。
【０３３６】
実施形態８９：少なくとも約６０ｃＰ未満の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）を有する、実施形態８７または８８に記載の医薬組成物。
【０３３７】
実施形態９０：
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、約１９５〜２２５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．約１５５ｍＭの濃度で存在するＮ−アセチルアルギニンと、
ｃ．約１２０ｍＭの濃度で存在するプロリンと、
ｄ．約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０１５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）と、
ｅ．約１０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムと
を含む医薬組成物。
【０３３８】
実施形態９１：約５．１〜約５．７のｐＨを有する、実施形態９０に記載の医薬組成物。
【０３３９】
実施形態９２：少なくとも約６０ｃＰ未満の粘度（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定した）を有する、実施形態９０または９１に記載の医薬組成物。
【０３４０】
実施形態９３：約−３０℃以下で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２年間安定である、実施形態７８〜９２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３４１】
実施形態９４：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約５年間安定である、実施形態９３に記載の医薬組成物。
【０３４２】
実施形態９５：約５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態７８〜９２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３４３】
実施形態９６：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２４ヶ月間安定である、実施形態９５に記載の医薬組成物。
【０３４４】
実施形態９７：約２５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態７８〜９２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３４５】
実施形態９８：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約３ヶ月間安定である、実施形態９７に記載の医薬組成物。
【０３４６】
実施形態９９：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態９８に記載の医薬組成物。
【０３４７】
実施形態１００：約４０℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態７８〜９２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３４８】
実施形態１０１：含まれる上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満である、実施形態７８〜９２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３４９】
実施形態１０２：存在する上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約２．５％未満である、実施形態１０１に記載の医薬組成物。
【０３５０】
実施形態１０３：液体である、実施形態１〜１０２のいずれかに記載の医薬組成物。
【０３５１】
実施形態１０４：実施形態１〜１０３のいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む、投与を必要とする対象の治療方法。
【０３５２】
実施形態１０５：実施形態１〜１０３のいずれかに記載の医薬組成物及び注射器、ペン型注射器、ボディーインジェクター、及びオートインジェクターからなる群より選択される送達デバイスを備えるキット。
【０３５３】
実施形態１０６：上記送達デバイスを用いて上記医薬組成物を投与するための使用説明書を更に備える、実施形態１０５に記載のキット。
【０３５４】
実施形態１０７：少なくとも１４０ｍｇ／ｍＬのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬組成物中のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの調製方法であって、上記医薬組成物の粘度が上記Ｎ−アセチルアルギニンを含まない上記医薬組成物と比較した場合に低減されるような有効量のＮ−アセチルアルギニンを、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬組成物に添加することを含み、且つ上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメントと、
ｂ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体と、
ｃ．
ｉ．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
ｉｉ．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体と、
ｄ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体と、
ｅ．
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
ｉｖ．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
ｖ．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体と
からなる群より選択される上記方法。
【０３５５】
実施形態１０８：上記医薬組成物の粘度が、約８０ｃＰ未満である（例えば、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（デラウェア州ニューキャッスル）のＡＥＳＲ−Ｇ２コーン・プレートレオメータなどのレオメータによって測定して）、実施形態１０７に記載の方法。
【０３５６】
実施形態１０９：上記医薬組成物の粘度が、約５０ｃＰ未満である、実施形態１０８に記載の方法。
【０３５７】
実施形態１１０：上記医薬組成物が、約２５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有する、実施形態１０７〜１０９のいずれかに記載の方法。
【０３５８】
実施形態１１１：上記医薬組成物が、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの重量モル浸透圧濃度を有する、実施形態１１０に記載の方法。
【０３５９】
実施形態１１２：上記医薬組成物が、ヒト血液細胞と等張である、実施形態１１１に記載の方法。
【０３６０】
実施形態１１３：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、約１８０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、実施形態１０７に記載の方法。
【０３６１】
実施形態１１４：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度が、約２１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１１３に記載の方法。
【０３６２】
実施形態１１５：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１０７〜１１４のいずれかに記載の方法。
【０３６３】
実施形態１１６：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１１５に記載の方法。
【０３６４】
実施形態１１７：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１１５に記載の方法。
【０３６５】
実施形態１１８：バッファーを更に含む、実施形態１０７〜１１７のいずれかに記載の方法。
【０３６６】
実施形態１１９：上記バッファーが、酢酸塩バッファー、グルタミン酸塩バッファー、ヒスチジンバッファー、及びリン酸塩バッファー、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、実施形態１１８に記載の方法。
【０３６７】
実施形態１２０：上記バッファーが、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１１９に記載の方法。
【０３６８】
実施形態１２１：上記バッファーが、酢酸ナトリウムであり、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１２０に記載の方法。
【０３６９】
実施形態１２２：上記ｐＨが、約４．８〜約６．９である、実施形態１０７〜１２１のいずれかに記載の方法。
【０３７０】
実施形態１２３：ｐＨが、約５．４である、実施形態１２２に記載の方法。
【０３７１】
実施形態１２４：界面活性剤を更に含む、実施形態１０７〜１２３のいずれかに記載の方法。
【０３７２】
実施形態１２５：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）、ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択される、実施形態１２４に記載の方法。
【０３７３】
実施形態１２６：上記界面活性剤が、約０．０００１％（ｗ／ｖ）〜約１．０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１２５に記載の方法。
【０３７４】
実施形態１２７：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１２６に記載の方法。
【０３７５】
実施形態１２８：プロリンを更に含む、実施形態１０７〜１２７のいずれかに記載の方法。
【０３７６】
実施形態１２９：上記プロリンが、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１２８に記載の方法。
【０３７７】
実施形態１３０：上記プロリンが、約９０ｍＭ〜約１２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１２９に記載の方法。
【０３７８】
実施形態１３１：上記プロリンが、約１２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１３０に記載の方法。
【０３７９】
実施形態１３２：アルギニン塩を更に含む、実施形態１０７〜１３１のいずれかに記載の方法。
【０３８０】
実施形態１３３：上記アルギニン塩が、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１３２に記載の方法。
【０３８１】
実施形態１３４：上記アルギニン塩が、約５０ｍＭ〜約１００ｍＭの濃度で存在する、実施形態１３３に記載の方法。
【０３８２】
実施形態１３５：上記アルギニン塩が、アルギニン−ＨＣｌ、アルギニン酢酸塩、またはアルギニングルタミン酸塩である、実施形態１３３に記載の方法。
【０３８３】
実施形態１３６：上記アルギニンＨＣｌが、約５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１３５に記載の方法。
【０３８４】
実施形態１３７：約−３０℃以下で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２年間安定である、実施形態１０７〜１３６のいずれかに記載の方法。
【０３８５】
実施形態１３８：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約５年間安定である、実施形態１３７に記載の方法。
【０３８６】
実施形態１３９：約５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態１０７〜１３６のいずれかに記載の方法。
【０３８７】
実施形態１４０：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約２４ヶ月間安定である、実施形態１３９に記載の方法。
【０３８８】
実施形態１４１：約２５℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態１０７〜１３６のいずれかに記載の方法。
【０３８９】
実施形態１４２：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約３ヶ月間安定である、実施形態１４１に記載の方法。
【０３９０】
実施形態１４３：上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約６ヶ月間安定である、実施形態１４２に記載の方法。
【０３９１】
実施形態１４４：約４０℃で貯蔵された場合に、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、少なくとも約１ヶ月間安定である、実施形態１０７〜１３６のいずれかに記載の方法。
【０３９２】
実施形態１４５：含まれる上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満である、実施形態１０７〜１３６のいずれかに記載の方法。
【０３９３】
実施形態１４６：存在する上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーが、上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約２．５％未満である、実施形態１４５に記載の方法。
【０３９４】
実施形態１４７：治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第１の濃縮ステップと、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップと、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第２の濃縮ステップと、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップと、
ｅ．第３の溶液中の上記ポリペプチドが濃縮される第３の濃縮ステップと
を含み、
上記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｉｉ．
３．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
４．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
５．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、上記方法。
【０３９５】
実施形態１４８：ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断する上記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体である実施形態１４７に記載の方法。
【０３９６】
実施形態１４９：第３の濃縮ステップの前に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が、約２５℃〜約３７℃に高められる、実施形態１４７に記載の方法。
【０３９７】
実施形態１５０：第１の溶液交換ステップが、少なくとも３回の第２の溶液の透析ろ過を用いて実現される、実施形態１４７に記載の方法。
【０３９８】
実施形態１５１：第２の溶液交換ステップが、少なくとも４回の第３の溶液の透析ろ過を用いて実現される、実施形態１４７に記載の方法。
【０３９９】
実施形態１５２：上記治療用タンパク質の初期濃度が、約１１ｍｇ／ｍＬ以下である、実施形態１４７に記載の方法。
【０４００】
実施形態１５３：第１の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度が、約３倍〜約７倍高められる、実施形態１４７に記載の方法。
【０４０１】
実施形態１５４：上記ポリペプチドの上記高められた濃度が、約３５ｍｇ／ｍＬ〜約７０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１５３に記載の方法。
【０４０２】
実施形態１５５：第２の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度が、第１の濃縮ステップから約２倍〜４倍高められる、実施形態１４７に記載の方法。
【０４０３】
実施形態１５６：上記高められたポリペプチドの濃度が、約１４０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１５５に記載の方法。
【０４０４】
実施形態１５７：第３の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度が、第２の濃縮ステップから約１．５倍〜約２倍高められる、実施形態１４７に記載の方法。
【０４０５】
実施形態１５８：上記高められたポリペプチドの濃度が、約２６０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１５７に記載の方法。
【０４０６】
実施形態１５９：上記治療用ポリペプチドが、該治療用ポリペプチドの初期濃度よりも少なくとも約１９〜２０倍濃縮された最終濃度を有する、実施形態１４７に記載の方法。
【０４０７】
実施形態１６０：上記治療用ポリペプチドの上記最終濃度が、約２１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１５９に記載の方法。
【０４０８】
実施形態１６１：上記濃縮ステップが、流加限外ろ過を含む、実施形態１４７に記載の方法。
【０４０９】
実施形態１６２：第２の溶液と第３の溶液とが同一である、実施形態１４７に記載の方法。
【０４１０】
実施形態１６３：Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２または第３の溶液が、アルギニン塩及びバッファーを含む、実施形態１４７に記載の方法。
【０４１１】
実施形態１６４：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在し、上記アルギニン塩が、Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩であり且つ約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在し、上記バッファーが、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムバッファーである、実施形態１６３に記載の方法。
【０４１２】
実施形態１６５：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約６３〜約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１６４に記載の方法。
【０４１３】
実施形態１６６：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約６３の濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１６４に記載の方法。
【０４１４】
実施形態１６７：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１５５ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約７０の濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１６４に記載の方法。
【０４１５】
実施形態１６８：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約６３の濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１６４に記載の方法。
【０４１６】
実施形態１６９：プロリンを更に含み、上記プロリンが、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１６５または１６６に記載の方法。
【０４１７】
実施形態１７０：第２または第３の溶液が、約４．８〜約６．９のｐＨを有する、実施形態１６３〜１６９のいずれかに記載の方法。
【０４１８】
実施形態１７１：上記ｐＨが、約５．４である、実施形態１７０に記載の方法。
【０４１９】
実施形態１７２：第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ａ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｂ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｃ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｄ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｅ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｆ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｇ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｈ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられる、実施形態１４７に記載の方法。
【０４２０】
実施形態１７３：濃縮された後に、第３の溶液に界面活性剤が添加される、実施形態１４７〜１７２のいずれかに記載の方法。
【０４２１】
実施形態１７４：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択され、約０．０００１％〜約１％の濃度で存在する、実施形態１７３に記載の方法。
【０４２２】
実施形態１７５：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１７５に記載の方法。
【０４２３】
実施形態１７６：治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第１の濃縮ステップと、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過及び第２の溶液の３の透析ろ過容量を用いてＮ−アセチルアルギニン、アルギニン塩、及びバッファーを含む第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップと、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第２の濃縮ステップと、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過及び第３の溶液の４の透析ろ過容量を用いて、Ｎ−アセチルアルギニン、アルギニン塩、及びバッファーを含む第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップと、
ｅ．第２の溶液交換ステップの後に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が約２５℃〜約３７℃に高められることと
ｆ．上記ポリペプチドが流加限外ろ過濃縮を用いて更に濃縮される第３の濃縮ステップと
を含み、
第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ｇ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｈ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｉ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｊ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｋ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｌ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｍ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｎ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられ、
上記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
３．上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、上記方法
【０４２４】
実施形態１７７：第３の濃縮ステップの前に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が、約２５℃〜約３７℃に高められる、実施形態１７６に記載の方法。
【０４２５】
実施形態１７８：上記治療用タンパク質の初期濃度が、１１ｍｇ／ｍＬ以下である、実施形態１７６に記載の方法。
【０４２６】
実施形態１７９：第１の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度が、約３倍〜約７倍高められる、実施形態１７６に記載の方法。
【０４２７】
実施形態１８０：第１の濃縮ステップにおいて、上記ポリペプチドの上記高められた濃度が、約３５ｍｇ／ｍＬ〜約７０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１７９に記載の方法。
【０４２８】
実施形態１８１：第２の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度が、第１の濃縮ステップから約２倍〜約４倍高められる、実施形態１７６に記載の方法。
【０４２９】
実施形態１８２：上記高められたポリペプチド濃度が、約１４０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１８１に記載の方法。
【０４３０】
実施形態１８３：第３の濃縮ステップにおいて、上記治療用ポリペプチドの濃度が、第２の濃縮ステップから約１．５倍〜約２倍高められる、実施形態１７６に記載の方法。
【０４３１】
実施形態１８４：上記高められたポリペプチド濃度が、約２６０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１８３に記載の方法。
【０４３２】
実施形態１８５：上記治療用ポリペプチドが、該治療用ポリペプチドの初期濃度よりも少なくとも約１９〜２０倍濃縮された最終濃度を有する、実施形態１７６に記載の方法。
【０４３３】
実施形態１８６：上記治療用ポリペプチドの上記最終濃度が、約２１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１８５に記載の方法。
【０４３４】
実施形態１８７：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩であり、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在し、上記バッファーが、約５ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度の酢酸ナトリウムバッファーである、実施形態１７６に記載の方法。
【０４３５】
実施形態１８８：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約６３ｍＭ〜約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１８８に記載の方法。
【０４３６】
実施形態１８９：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１４０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１８８に記載の方法。
【０４３７】
実施形態１９０：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１５５ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約７０ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１８８に記載の方法。
【０４３８】
実施形態１９１：上記Ｎ−アセチルアルギニンが、約１７０ｍＭの濃度で存在し、上記Ａｒｇ  ＨＣｌ、Ａｒｇ酢酸塩、またはＡｒｇグルタミン酸塩が、約６３ｍＭの濃度で存在し、上記酢酸ナトリウムバッファーが、約１０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１８８に記載の方法。
【０４３９】
実施形態１９２：プロリンを更に含み、上記プロリンが、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１７６に記載の方法。
【０４４０】
実施形態１９３：第２または第３の溶液が、約４．８〜約６．９のｐＨを有する、実施形態１７６〜１９２のいずれかに記載の方法。
【０４４１】
実施形態１９４：上記ｐＨが、約５．４である、実施形態１９３に記載の方法。
【０４４２】
実施形態１９５：濃縮された後に、第３の溶液に界面活性剤が添加される、実施形態１７６〜１９４のいずれかに記載の方法。
【０４４３】
実施形態１９６：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０またはポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（プルロニック（登録商標）Ｆ−６８及び他のプルロニック（登録商標）などのポロキサマー）、ソルビタンアルキスエステル（スパン（登録商標））、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル（ブリー）ポリプロピレングリコールアルキルエーテル、グリコシドアルキルエーテル、及びＤ−α−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ）からなる群より選択され、約０．０００１％〜約１％の濃度で存在する、実施形態１９５に記載の方法。
【０４４４】
実施形態１９７：上記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）であり、約０．０１％の濃度で存在する、実施形態１９６に記載の方法。
【０４４５】
実施形態１９８：治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第１の濃縮ステップ、
ｂ．上記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過及び第２の溶液の３の透析ろ過容量を用いて第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップ、
ｃ．第２の溶液中の上記ポリペプチドが流加限外ろ過を用いて濃縮される第２の濃縮ステップ、
ｄ．上記濃縮された第２の溶液中の上記ポリペプチドが、透析ろ過及び第３の溶液の４の透析ろ過容量を用いて、第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップ、
ｅ．第２の溶液交換ステップの後に、上記ポリペプチドを含む上記溶液の温度が約２５℃〜約３７℃に高められること、ならびに
ｆ．上記ポリペプチドが、流加限外ろ過濃縮を用いて更に濃縮される第３の濃縮ステップ、
ｇ．あるいは、第３の濃縮ステップで得られる溶液に、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で添加するステップ
を含み、
第２及び第３の溶液が、約１４０ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、約５０ｍＭのＡｒｇＨＣＩ、及び約１０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む溶液、ｐＨが約５．２である溶液、約１５５ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、約７０ｍＭのＡｒｇＨＣＩ、及び約１０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む溶液、ｐＨが約５．４である溶液、及び約１７０ｍＭのＮ−アセチルアルギニン、及び約１０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む溶液、ｐＨが約５．６である溶液、からなる群より選択される溶液を含み、
第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ｈ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｉ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｊ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満が、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｋ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｌ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｍ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｎ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｏ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられ、
上記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４または１６のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４または１６のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または１６のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５または１７のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５または１７のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５または１７のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体であって、
上記モノクローナル抗体の上記エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ−Ａドメインが結合する部位と更に重複する上記モノクローナル抗体
からなる群より選択される、上記方法。
【０４４６】
実施形態１９９：上記対象が、
家族性高コレステロール血症（ヘテロ接合性高コレステロール血症、ホモ接合性高コレステロール血症、家族性欠陥アポリポタンパクＢ−１００血症；多遺伝子性高コレステロール血症を含む）、非家族性高コレステロール血症、高脂血症、心臓疾患、代謝症候群、糖尿病、冠状動脈性心臓疾患、脳卒中、心血管疾患、アルツハイマー病、ならびに脂質異常症（代謝症候群、真性糖尿病、家族性複合型高脂血症、家族性高トリグリセリド血症；レムナント除去不全疾患、肝性リパーゼ欠乏症；食傷、甲状腺機能低下、エストロゲン及びプロゲスチン治療薬、β遮断薬、及びサイアザイド系利尿剤を含む薬物のいずれかに続発する脂質異常症；ネフローゼ症候群、慢性腎不全、クッシング症候群、原発性胆汁性肝硬変、糖原病、肝癌、胆汁うっ滞、先端巨大症、インスリノーマ、成長ホルモン単独欠損症、またはアルコール誘発性高トリグリセリド血症などの原発性及び続発性脂質異常症を含む）からなる群より選択されるコレステロール関連疾患または障害と、
心血管起因の死、非心血管起因または全ての原因による死、冠状動脈性心臓疾患、冠状動脈疾患、末梢性動脈疾患、脳卒中（虚血性及び出血性）、狭心症、脳血管性疾患及び急性冠動脈症候群、心筋梗塞及び不安定性狭心症からなる群より選択されるアテローム硬化性疾患と、
スタチンを用いることによって対処可能な疾患または障害と
からなる群より選択される疾患または障害を有する、実施形態１０４に記載の方法。
【０４４７】
実施形態２００：上記対象の上記治療が、致死性及び非致死性の心臓発作、致死性及び非致死性の脳卒中、心臓手術、心不全による入院、心臓疾患を有する対象の胸痛、及び／または既往の心臓疾患に起因する心血管事象、高いＣＲＰまたはｈｓＣＲＰに起因する心血管の疾病、ならびに心血管事象の再発からなる群より選択される疾病のリスクを低減することを含む、実施形態１０４に記載に方法。
【０４４８】
実施形態２０１：薬剤として用いるための実施形態１〜１０３のいずれかに記載の医薬組成物。
【０４４９】
実施形態２０２：上記薬剤が、
家族性高コレステロール血症（ヘテロ接合性高コレステロール血症、ホモ接合性高コレステロール血症、家族性欠陥アポリポタンパクＢ−１００血症；多遺伝子性高コレステロール血症を含む）、非家族性高コレステロール血症、高脂血症、心臓疾患、代謝症候群、糖尿病、冠状動脈性心臓疾患、脳卒中、心血管疾患、アルツハイマー病、ならびに脂質異常症（代謝症候群、真性糖尿病、家族性複合型高脂血症、家族性高トリグリセリド血症；レムナント除去不全疾患、肝性リパーゼ欠乏症；食傷、甲状腺機能低下、エストロゲン及びプロゲスチン治療薬、β遮断薬、及びサイアザイド系利尿剤を含む薬物のいずれかに続発する脂質異常症；ネフローゼ症候群、慢性腎不全、クッシング症候群、原発性胆汁性肝硬変、糖原病、肝癌、胆汁うっ滞、先端巨大症、インスリノーマ、成長ホルモン単独欠損症、またはアルコール誘発性高トリグリセリド血症などの原発性及び続発性脂質異常症を含む）からなる群より選択されるコレステロール関連疾患または障害と、
心血管起因の死、非心血管起因または全ての原因による死、冠状動脈性心臓疾患、冠状動脈疾患、末梢性動脈疾患、脳卒中（虚血性及び出血性）、狭心症、脳血管性疾患及び急性冠動脈症候群、心筋梗塞及び不安定性狭心症からなる群より選択されるアテローム硬化性疾患と、
スタチンを用いることによって対処可能な疾患または障害と
からなる群より選択される疾患または障害の治療に用いるためのものである、実施形態２０１に記載の医薬組成物。
【０４５０】
実施形態２０３：上記薬剤が、致死性及び非致死性の心臓発作、致死性及び非致死性の脳卒中、心臓手術、心不全による入院、心臓疾患を有する対象の胸痛、及び／または既往の心臓疾患に起因する心血管事象、高いＣＲＰまたはｈｓＣＲＰに起因する心血管の疾病、ならびに心血管事象の再発からなる群より選択される疾病のリスクの低減に用いるためのものである、実施形態２０２に記載の方法。
【０４５１】
【表１９】
2018154616.tif 000105
2018154616.tif 000106
【０４５２】
参照文献
Ｃｈａｎ，  Ｊ．，  Ｇｉｂｂｓ，  Ｊ．，  Ｄｉａｓ，  Ｃ．，  Ｗａｓｓｅｒｍａｎ，  Ｓ．，  Ｓｃｏｔｔ，  Ｒ．，  Ｃｌｏｇｓｔｏｎ，  Ｃ．，  ．  ．  ．  Ｓｔｅｉｎ，  Ｅ．  （２０１２）．  ＷＯ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ＷＯ２０１２１５４９９９．
Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．，  ＆  Ｌｅｓｋ，  Ａ．  Ｍ．  （１９８７）．  Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，  １９６（４），  ９０１−９１７．
Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．，  Ｌｅｓｋ，  Ａ．  Ｍ．，  Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ，  Ａ．，  Ｌｅｖｉｔｔ，  Ｍ．，  Ｓｍｉｔｈ−Ｇｉｌｌ，  Ｓ．  Ｊ．，  Ａｉｒ，  Ｇ．，  ．  ．  ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）．  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ．  Ｎａｔｕｒｅ，  ３４２（６２５２），  ８７７−８８３．  ｄｏｉ：  １０．１０３８／３４２８７７ａ０
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，  Ｄ．，  Ｄａｎｌｅｙ，  Ｄ．  Ｅ．，  Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ，  Ｋ．  Ｆ．，  Ｇｒｉｆｆｏｒ，  Ｍ．  Ｃ．，  Ｈａｗｋｉｎｓ，  Ｊ．  Ｌ．，  Ｓｕｂａｓｈｉ，  Ｔ．  Ａ．，  ．  ．  ．  Ｑｉｕ，  Ｘ．  （２００７）．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ＰＣＳＫ９  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｍｕｔａｎｔｓ  ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ．  Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，  １４（５），  ４１３−４１９．  ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｎｓｍｂ１２３５
Ｈｏｒｔｏｎ，  Ｊ．  Ｄ．，  Ｃｏｈｅｎ，  Ｊ．  Ｃ．，  ＆  Ｈｏｂｂｓ，  Ｈ．  Ｈ．  （２００７）．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ＰＣＳＫ９：  ｉｔｓ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ＬＤＬ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ，  ３２（２），  ７１−７７．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｔｉｂｓ．２００６．１２．００８
Ｊａｃｋｓｏｎ，  Ｓ．  Ｍ．，  Ｗａｌｋｅｒ，  Ｎ．  Ｐ．，  Ｐｉｐｅｒ，  Ｄ．  Ｅ．，  Ｓｈａｎ，  Ｂ．，  Ｓｈｅｎ，  Ｗ．，  Ｃｈａｎ，  Ｊ．，  ．  ．  ．  Ｃａｒａｂｅｏ，  Ｔ．  （２００９）．  ＷＯ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ＷＯ  ２００９／０２６５５８．
Ｋａｂａｔ，  Ｅ．，  Ｗｕ，  Ｔ．，  Ｐｅｒｒｙ，  Ｈ．，  Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，  Ｋ．，  ＆  Ｆｏｅｌｌｅｒ，  Ｃ．  （１９９１）．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （Ｖｏｌ．  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２）．  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ：  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ．
Ｋａｂａｔ，  Ｅ．，  Ｗｕ，  Ｔ．，  Ｒｅｉｄ−Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｍ．，  Ｐｅｒｒｙ，  Ｈ．，  ＆  Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，  Ｋ．  （１９８７）．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （４ｔｈ  ｅｄ．  Ｖｏｌ．  Ｎｏ．  １６５−４９２）．  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ：  ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ．
Ｍｏｒｉｃｈｉｋａ，  Ｔ．，  ＆  Ｋａｍｅｏｋａ，  Ｄ．  （２００７）．  ＷＯ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ＷＯ２００７０７４８８０．
Ｐｉｐｅｒ，  Ｄ．  Ｅ．，  Ｊａｃｋｓｏｎ，  Ｓ．，  Ｌｉｕ，  Ｑ．，  Ｒｏｍａｎｏｗ，  Ｗ．  Ｇ．，  Ｓｈｅｔｔｅｒｌｙ，  Ｓ．，  Ｔｈｉｂａｕｌｔ，  Ｓ．  Ｔ．，  ．  ．  ．  Ｗａｌｋｅｒ，  Ｎ．  Ｐ．  （２００７）．  Ｔｈｅ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ＰＣＳＫ９：  ａ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ＬＤＬ−ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  １５（５），  ５４５−５５２．  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｊ．ｓｔｒ．２００７．０４．００４
Ｓｅｉｄａｈ，  Ｎ．  Ｇ．，  Ｂｅｎｊａｎｎｅｔ，  Ｓ．，  Ｗｉｃｋｈａｍ，  Ｌ．，  Ｍａｒｃｉｎｋｉｅｗｉｃｚ，  Ｊ．，  Ｊａｓｍｉｎ，  Ｓ．  Ｂ．，  Ｓｔｉｆａｎｉ，  Ｓ．，  ．  ．  ．  Ｃｈｒｅｔｉｅｎ，  Ｍ．  （２００３）．  Ｔｈｅ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  ｎｅｕｒａｌ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  １  （ＮＡＲＣ−１）：  ｌｉｖｅｒ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，  １００（３），  ９２８−９３３．  ｄｏｉ：  １０．１０７３／ｐｎａｓ．０３３５５０７１００
Ｓｅｉｄａｈ，  Ｎ．  Ｇ．，  ＆  Ｐｒａｔ，  Ａ．  （２００７）．  Ｔｈｅ  ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ．  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  （Ｂｅｒｌ），  ８５（７），  ６８５−６９６．  ｄｏｉ：  １０．１００７／ｓ００１０９−００７−０１７２−７
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、並びに
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体
からなる群より選択されるＰＣＳＫ９結合ポリペプチドと、
ｂ．Ｎ−アセチルアルギニンと
を含み、
少なくとも約８０ｃＰ未満の粘度を有する医薬組成物。
【請求項２】
前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約２６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチド濃度が、約２１０ｍｇ／ｍＬである、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記Ｎ−アセチルアルギニンが、約２５ｍＭ〜約２３０ｍＭの濃度で存在する、請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
バッファーを更に含む、請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
界面活性剤を更に含む、請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
プロリンを更に含む、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
アルギニン塩を更に含む、請求項１〜８のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの濃度の約３％未満のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの高分子量凝集体またはオリゴマーを含む、請求項１〜９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１１】
液体である、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む、治療を必要とする対象の治療方法。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物、並びに注射器、ペン型注射器、ボディーインジェクター、及びオートインジェクターからなる群より選択される送達デバイスを備えるキット。
【請求項１４】
少なくとも１４０ｍｇ／ｍＬのＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬組成物中のＰＣＳＫ９結合ポリペプチドの調製方法であって、前記医薬組成物の粘度が前記Ｎ−アセチルアルギニンを含まない医薬組成物と比較した場合に低減されるような有効量のＮ−アセチルアルギニンを、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含む医薬組成物に添加することを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメントと、
ｂ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体と、
ｃ．
ｉ．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
ｉｉ．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体と、
ｄ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、及びＤ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、及びＤ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体と、
ｅ．
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
ｉｉ．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体と
からなる群より選択される、方法。
【請求項１５】
治療用ポリペプチドの製剤方法であって、
ａ．第１の溶液中の前記ポリペプチドが濃縮される第１の濃縮ステップと、
ｂ．前記第１の溶液中の濃縮されたポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第２の溶液へと交換される第１の溶液交換ステップと、
ｃ．第２の溶液中の前記ポリペプチドが濃縮される第２の濃縮ステップと、
ｄ．前記濃縮された第２の溶液中の前記ポリペプチドが、透析ろ過を用いて、Ｎ−アセチルアルギニンを含む第３の溶液へと交換される第２の溶液交換ステップと、
ｅ．第３の溶液中の前記ポリペプチドが濃縮される第３の濃縮ステップと
を含み、
前記治療用ポリペプチドが、ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断するＰＣＳＫ９結合ポリペプチドを含み、前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドは、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むモノクローナル抗体（エボロクマブ）、またはその抗原結合フラグメント、
ｉｉ．ＰＣＳＫ９との結合に関してエボロクマブと競合するモノクローナル抗体、
ｉｉｉ．
１．以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、配列番号１４のＣＤＲ１である重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４のＣＤＲ２である重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４のＣＤＲ３である重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチド、及び
２．以下のＣＤＲ、すなわち、配列番号１５のＣＤＲ１である軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のＣＤＲ２である軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５のＣＤＲ３である軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチド
を含むモノクローナル抗体、
ｉｖ．配列番号３のアミノ酸配列を含むＰＣＳＫ９の以下の残基、すなわち、Ｓ１５３、Ｄ１８８、Ｉ１８９、Ｑ１９０、Ｓ１９１、Ｄ１９２、Ｒ１９４、Ｅ１９７、Ｇ１９８、Ｒ１９９、Ｖ２００、Ｄ２２４、Ｒ２３７、Ｄ２３８、Ｋ２４３、Ｓ３７３、Ｄ３７４、Ｓ３７６、Ｔ３７７、Ｆ３７９、Ｉ１５４、Ｔ１８７、Ｈ１９３、Ｅ１９５、Ｉ１９６、Ｍ２０１、Ｖ２０２、Ｃ２２３、Ｔ２２８、Ｓ２３５、Ｇ２３６、Ａ２３９、Ｇ２４４、Ｍ２４７、Ｉ３６９、Ｓ３７２、Ｃ３７５、Ｃ３７８、Ｒ２３７、Ｄ２３８の少なくとも１に結合するモノクローナル抗体、並びに
ｖ．
１．配列番号１のアミノ酸配列の重鎖可変領域、及び
２．配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖可変領域
を含む抗体が結合するエピトープと重複するＰＣＳＫ９上のエピトープでＰＣＳＫ９に結合するモノクローナル抗体
からなる群より選択される、方法。
【請求項１６】
ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲに対する結合を遮断する前記ＰＣＳＫ９結合ポリペプチドが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、
ａ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、
ｂ．それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と
を含む重鎖ポリペプチドを含むモノクローナル抗体である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
第３の濃縮ステップの前に、前記ポリペプチドを含む前記溶液の温度が、約２５℃〜約３７℃に高められる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
第１の濃縮ステップにおいて、前記治療用ポリペプチドの濃度が、約３倍〜約７倍高められる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
第２の濃縮ステップにおいて、前記治療用ポリペプチドの濃度が、第１の濃縮ステップから約２倍〜約４倍高められる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
第３の濃縮ステップにおいて、前記治療用ポリペプチドの濃度が、第２の濃縮ステップから約１．５倍〜約２倍高められる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
前記治療用ポリペプチドが、前記治療用ポリペプチドの初期濃度よりも少なくとも約１９〜２０倍濃縮された最終濃度を有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
前記濃縮ステップが、流加限外ろ過を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
第２または第３の溶液のｐＨが、約４．８〜６．９である、請求項１５〜２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
第１及び第２の溶液交換ステップにおいて、
ａ．約３５０μｍを超えるが、約５００μｍ以下であるメッシュ開口と、
ｂ．膜面積の約３２％を超えるが、約３６％以下である開口面積と、
ｃ．約１６．２ｎ／ｃｍ未満であるが、約１２．２ｎ／ｃｍ以上のメッシュ数と、
ｄ．約２７０μｍを超えるが、約３４０μｍ以下である線径と、
ｅ．約１６０ｇ／ｍ２を超えるが、約１８０ｇ／ｍ２以下である坪量と、
ｆ．約５１５μｍを超えるが、約６１０μｍ以下である厚さと、
ｇ．約１１３８．１ｇ／ｍ２を超えるが、約１９１９．３ｇ／ｍ２以下である膜負荷量と、
ｈ．約６０ｐｓｉの最大供給圧と
からなる群より選択される少なくとも１の特性を有する透析ろ過膜が用いられる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
濃縮された後に、第３の溶液に界面活性剤が添加される、請求項１５〜２４のいずれかに記載の方法。
【外国語明細書】
2018154616000001.pdf