(57)【要約】【課題】新規のβ-ヘキソサミニダーゼ放出抑制作用やＩｇＥ産生抑制用を有する組成物を提供する。【解決手段】  アスパラガス由来の糖脂質またはリン脂質の少なくとも一方を有効成分として含有する、β-ヘキソサミニダーゼ放出抑制用及び／又はＩｇＥ産生抑制用の組成物。当該組成物は、優れたβ-ヘキソサミニダーゼ放出抑制作用、ＩｇＥ産生抑制作用を有し、各種医薬用組成物、化粧料組成物、サプリメント、機能性食品等に配合して用いることができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスパラガス由来の糖脂質またはリン脂質の少なくとも一方を有効成分として含有する、β―ヘキソサミニダーゼ放出抑制用及び／又はＩｇＥ産生抑制用の組成物。
【請求項２】
アスパラガス加工物を含有するβ-ヘキソサミニダーゼ放出抑制用及び／又はＩｇＥ産生抑制用の組成物。
【請求項３】
アスパラガス加工物が、アスパラガス抽出物である請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
医薬用組成物である請求項１から３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
アレルギーの予防治療用及び／又は抗炎症用である請求項１から４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
請求項１から３のいずれかに記載の組成物を含有することを特徴とする化粧料組成物。
【請求項７】
請求項１から３のいずれかに記載の組成物を含有することを特徴とするサプリメント。
【請求項８】
請求項１から３のいずれかに記載の組成物を含有することを特徴とする機能性食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、β‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制作用及び／又はＩｇＥ産生抑制作用を有する組成物及びその応用用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満細胞は、顆粒細胞（mast cell / マスト細胞）とも呼ばれ、哺乳類の血液中の好塩基球や血管周辺や結合組織に存在する造血幹細胞由来の細胞である。肥満細胞は、ヒスタミン等を含む顆粒を持ち、細胞が脱顆粒することによってヒスタミンと共にβ‐ヘキソサミニダーゼ等の酵素が放出され、花粉症などのアレルギーを誘起し、炎症を引き起こすことが知られている。そのため、肥満細胞からのβ‐ヘキソサミニダーゼの放出を阻害することはアレルギーの予防や治療や抗炎症として有効である。そのため、これまでに様々なβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制剤や抗アレルギー剤が報告されている（例えば、特許文献１，２）。
【０００３】
また、代表的アレルギー症状の発症プロセスであるＩ型アレルギーの疾患誘発機序において、ＩｇＥ（免疫グロブリンＥ）は中心的な役割を果たしている物質のひとつであり、Ｉ型アレルギーに係る疾病の予防や治療にはＩｇＥの産生を抑制することが有効であり、これまでに様々なＩｇＥ産生阻害剤が報告されている（例えば、特許文献３，４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０００−２３６８４８号公報
【特許文献２】特開２０１０−２４８１０７号公報
【特許文献３】特開２００３−２８６１８２号公報
【特許文献４】特開２００６−２８２６３５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特許文献１〜４で開示されているように、これまでにβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制剤やＩｇＥ産生阻害剤、及びこれらの作用を抑制することによる抗アレルギー剤は報告されているが、これまでにアスパラガス由来の成分にβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制作用やＩｇＥ産生抑制作用があることについては一切報告されていない。
【０００６】
かかる状況下、本発明の目的は、アスパラガス由来の新規のβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制作用やＩｇＥ産生阻害作用を有する組成物、及びその応用品を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、アスパラガス加工物に含まれるアスパラガス由来の糖脂質またはリン脂質がβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制作用やＩｇＥ産生抑制作用を有することを見出し、本発明に至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、以下の発明に係るものである。
＜１＞  アスパラガス由来の糖脂質またはリン脂質の少なくとも一方を有効成分として含有する、β‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制用及び／又はＩｇＥ産生抑制用の組成物。
＜２＞  アスパラガス加工物を含有するβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制用及び／又はＩｇＥ産生抑制用の組成物。
＜３＞  アスパラガス加工物が、アスパラガス抽出物である前記＜２＞に記載の組成物。
＜４＞  医薬用組成物である前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の組成物。
＜５＞  アレルギーの予防治療用及び／又は抗炎症用である前記＜１＞から＜４＞のいずれかに記載の組成物。
＜６＞  前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の組成物を含有する化粧料組成物。
＜７＞  前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の組成物を含有するサプリメント。
＜８＞  前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の組成物を含有する機能性食品。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、アスパラガス由来のβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制用及び／又はＩｇＥ産生抑制用の組成物及びその応用品が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】アスパラガス茎部の５０％エタノール抽出物のβ‐ヘキソサミニダーゼ放出粒阻害活性を示す図である。
【図２】アスパラガス茎部の各種溶媒抽出物によるβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制活性を示す図である。
【図３】アスパラガス切下部の５０％エタノール抽出物のβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制活性を示す図である。
【図４】アスパラガス抽出物（茎部の５０％エタノール抽出物）の経口投与によるマウス背部の皮膚炎症症状への影響を示す図である。
【図５】アスパラガス抽出物（茎部の５０％エタノール抽出物）の経口投与によるマウス耳介の皮膚炎症症状への影響を示す図である。
【図６】アスパラガス抽出物（茎部の５０％エタノール抽出物）の経口投与による血中ＩｇＥ濃度への影響を示す図である。
【図７】アスパラガス由来の糖脂質またはリン脂質のβ‐ヘキソサミニダーゼ放出への影響を示す図である。
【図８】アスパラガス由来の糖脂質またはリン脂質の経口投与によるマウス背部の皮膚炎症スコアを示す図である。
【図９】アスパラガス由来の糖脂質またはリン脂質の経口投与によるマウス耳介の皮膚炎症スコアを示す図である。
【図１０】アスパラガス由来の糖脂質とリン脂質の経口投与による血中ＩｇＥ濃度への影響を示す図である。
【図１１】アスパラガス由来の糖脂質とリン脂質の経口投与による血中抗原特異的ＩｇＥ及び総ＩｇＥ濃度への影響を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明について例示物等を示して詳細に説明するが、本発明は以下の例示物等に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において任意に変更して実施できる。
【００１２】
本発明は、アスパラガス由来のβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制用及び／又はＩｇＥ産生抑制用の組成物（以下、「本発明のβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制用及び／又はＩｇＥ産生抑制用の組成物」、又は単に「本発明の組成物」と記載する。）に関する。
【００１３】
本発明の組成物の第１の態様は、アスパラガス由来の糖脂質またはリン脂質の少なくとも一方を有効成分として含有する、ヘキソサミニダーゼ放出抑制用及び／又はＩｇＥ産生抑制用の組成物である。
本発明の組成物の第２の態様は、アスパラガス加工物を含有するヘキソサミニダーゼ放出抑制用及び／又はＩｇＥ産生抑制用の組成物である。
【００１４】
本発明は、アスパラガス由来の糖脂質及びリン脂質に、ヘキソサミニダーゼ放出抑制作用及びＩｇＥ産生抑制作用を有することに基づく。なお、同じアスパラガス由来の脂質でも、他の脂質はヘキソサミニダーゼ放出抑制作用やＩｇＥ産生抑制作用を有さない。
本発明の第１の態様では、本発明の組成物はアスパラガス由来の糖脂質やリン脂質を有効成分として含有する。すなわち、本発明の第１の態様は、原料アスパラガスやその加工物であるアスパラガス加工物から含有される成分の分離処理を行って得られる糖脂質やリン脂質を含有する組成物である。
【００１５】
一方、本発明の第２の態様は、原料アスパラガスを加工したアスパラガス加工物を含有する組成物である。アスパラガス加工物の詳細は後述するが、アスパラガス加工物にはアスパラガス由来の糖脂質やリン脂質が含まれ、これらの脂質がヘキソサミニダーゼ放出抑制作用及びＩｇＥ産生抑制作用を有するが、これらの脂質以外にもヘキソサミニダーゼ放出抑制作用及びＩｇＥ産生抑制作用を有する成分が含まれることを否定するものではない。
【００１６】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
【００１７】
（原料アスパラガス）
本発明の組成物の原料として使用される「原料アスパラガス」は、一般に食用で用いられているアスパラガス・オフィシナリス（Asparagus officinalis）の茎部、切下部及び擬葉を含む概念である。
「茎部」は、アスパラガスの若茎の部分であり、可食部である。
また、「切下部」は、アスパラガスの規格外の根元部分とされる部分であり、通常、下から２ｃｍ程度である。これらは、通常廃棄されている。
また、「擬葉」は、茎部がさらに伸びた後、枝分かれしてできる茎であり、葉に代わり光合成で養分を作る部分である。
【００１８】
原料アスパラガスは、その使用部位に応じて、未加工、又は適当な形状に加工されて工程（１）に供される。すなわち、アスパラガスの茎部、切下部及び擬葉をそのまま、スライス、粉砕、圧搾またはすりおろす等により、細粒物として使用することもできる。
【００１９】
廃棄物の有効利用の観点からは、原料アスパラガスとして切下部（すべて切下部である場合も含む）を含むことが好ましい。
【００２０】
（アスパラガス加工物）
本発明の第２の態様の組成物において使用され本発明に係る「アスパラガス加工物」は、原料アスパラガスをそのまま又は加熱処理した、粉砕物、細断物、しぼり汁、抽出物、これらの乾燥物などが挙げられる。これらは糖脂質及びリン脂質の分離除去を行わっていないため、アスパラガス由来の糖脂質及びリン脂質を含有する。なお、本明細書において「抽出物」としては、例えば、原料アスパラガスをそのままや加工物を溶媒で抽出して得られる抽出液、その希釈液や濃縮液、又はそれらの乾燥物やその粉末が挙げられ、アスパラガスにおける、ヘキソサミニダーゼ放出抑制作用及びＩｇＥ産生抑制作用を有する成分（特には糖脂質やリン脂質）が含有されていれば特に限定されない。
【００２１】
また、アスパラガス加工物は粉状や粒状、顆粒状などの粉末に成形したものを用いてもよい。成形方法としては、特に限定されず、特に造粒が必要な場合は、適切な結合剤や賦形剤などを添加の上、公知の湿式、乾式などの顆粒造粒法を使用することができる。
【００２２】
アスパラガス加工物の粉状又は顆粒状の粒子における粒子径としては、特に制限されるものではなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００２３】
アスパラガスの粉砕物は、アスパラガスをそのまま又は加熱処理した後、粉砕装置を用いて粉砕装置を用いて粉砕することで得ることができる。また、天日や乾燥機を用いて乾燥した後に粉砕してもよい。乾燥と粉砕の順番や回数は任意である。粉砕装置としては公知の装置を使用することができる。
【００２４】
アスパラガスの抽出物又はしぼり汁の乾燥物としては、例えば、アスパラガスの抽出物又は搾汁をそのままあるいは濃縮し、さらにこれらを乾燥したものなどが挙げられる。乾燥は、噴霧乾燥、凍結乾燥、減圧乾燥、流動乾燥などの公知の方法により行うことができる。
【００２５】
アスパラガス抽出物は、アスパラガスをそのまま又はその破砕物、粉砕物、しぼり汁などを適切な溶媒で抽出したものである。
アスパラガス加工物の中でも、原料アスパラガスを加熱処理して抽出溶媒と接触させて製造されるアスパラガス抽出物は好適な態様の一つである
特にヘキソサミニダーゼ放出抑制作用及びＩｇＥ産生抑制作用に優れる点で、以下の製法で得られるアスパラガス抽出物が好適である。
工程（１）：原料アスパラガスを、温度８０℃以上の条件で加熱処理する工程
工程（２）：工程（１）で得られた加熱処理後のアスパラガスに抽出溶媒を接触させ、アスパラガス抽出物を得る工程
【００２６】
この製造方法では、原料となるアスパラガスを上記特定の温度条件で加熱処理することにより、加熱処理を行わない場合と比較して、アスパラガスに含まれる有効成分の抽出効率が格段に向上し、生産性良く、β‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制活性、脱顆粒抑制活性、ＩｇＥ（免疫グロブリンＥ；Immunoglobulin E）の抑制活性の少なくとも１以上を有するアスパラガス抽出物を製造することができる。
【００２７】
上記好適なアスパラガス抽出物の具体的な製造方法については、後述する［実施例］で詳述する。
【００２８】
（アスパラガス由来の糖脂質及びリン脂質）
本発明の第１の態様の有効成分であるアスパラガス由来の糖脂質やリン脂質は、原料アスパラガス又はその加工物（アスパラガス加工物）から分離抽出して得ることができる。
アスパラガス由来の糖脂質やリン脂質を得るための分離抽出方法も特に限定されないが、できるだけ緩やかな条件で行うことが好ましい。
【００２９】
アスパラガス由来の糖脂質やリン脂質は、当業者が通常用いる方法により精製してもよい。
【００３０】
アスパラガス由来の糖脂質やリン脂質の具体的な分離方法については、後述する［実施例］で詳述する。
【００３１】
＜本発明の組成物の応用＞
本発明の組成物は、後述する実施例で示すようにβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制活性、脱顆粒抑制活性、ＩｇＥ（免疫グロブリンＥ；Immunoglobulin E）の抑制活性を有し、これらの活性に関連する抗アレルギー作用、抗炎症作用を有する。そのため、医薬用組成物、化粧料組成物、サプリメント、機能性食品等への使用が可能である。
【００３２】
（医薬組成物）
本発明の組成物は、その有効量を薬学的に許容される基材とともに配合して医薬組成物（以下、「本発明の医薬組成物」と記載する場合がある。）としてもよい。
【００３３】
本明細書において、「医薬組成物」とは、対象となる疾患の予防、治療、症状の改善の少なくともひとつに対して有用な薬剤を意味する。また、本明細書において、「医薬組成物」には、医薬品のみならず、医薬部外品も含む。
【００３４】
本発明の医薬組成物は、本発明の組成物以外にもその効能を損なわない範囲で他の薬剤や薬理学的に許容される任意の成分を含んでもよい。また、本発明の組成物そのもの（すなわち、アスパラガス由来の糖脂質やリン脂質、またはこれを含むアスパラガス加工物）を、本発明の医薬組成物として使用してもよい。
【００３５】
本発明の医薬組成物は、β‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制活性、脱顆粒抑制活性、ＩｇＥ抑制活性が関与する疾患の予防、治療、症状の改善の少なくともひとつに対して有用である。すなわち、「予防」には、当該疾患または症状の発症の抑制および遅延が含まれる。また、「治療」には、当該疾患または症状の病態の改善および寛解、並びに当該疾患または症状の進展の抑制が含まれる。
【００３６】
本発明の医薬組成物の対象となる、疾患又は症状の具体例として、例えば、アトピー性皮膚炎、炎症（急性炎症、慢性炎症等）、花粉症、アレルギー性鼻炎、気管支喘息、蕁麻疹、食物アレルギー、好酸球性肺炎等が挙げられる。
【００３７】
本発明の医薬組成物は、アスパラガス由来の糖脂質やリン脂質、またはこれを含むアスパラガス加工物を含有していればよく、どのような形態の薬剤であっても構わない。本発明の医薬組成物の形態としては、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、又はカプセル剤等の剤型がある。本発明の医薬組成物の形態は、固体又は液体同士でもよいし、固体と液体でも良いし、特に限定されない。投与方法としては、経口又は非経口であってもよい。本発明の医薬組成物の好適な態様としては、経口剤や皮膚外用剤が挙げられる。
【００３８】
また、アスパラガス由来の糖脂質やリン脂質、またはこれを含むアスパラガス加工物は、医薬品、医薬部外品以外の製品に配合してもよい。そのような用途のうち、好適な具体例としては、サプリメント、機能性食品、化粧料組成物が挙げられる。
【００３９】
（サプリメント）
本発明のサプリメントは、本発明の組成物、すなわち、アスパラガス由来の糖脂質やリン脂質、またはこれを含むアスパラガス加工物を含有する。本発明のサプリメントの形態は、特に制限されず、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、糖衣錠、フィルム剤、トローチ剤、チュアブル剤、溶液、乳濁液、懸濁液等の任意の形態でよい。
本発明のサプリメントは、本発明の組成物以外に、サプリメントとして通常使用される任意の成分を含んでいてもよい。そのような成分としては、例えば、アミノ酸，ペプチド；ビタミンＥ、ビタミンＣ、ビタミンＡ、ビタミンＢ、葉酸等のビタミン類；ミネラル類；糖類；無機塩類；クエン酸またはその塩；茶エキス；油脂；プロポリス、ローヤルゼリー、タウリン等の滋養強壮成分；ショウガエキス、高麗人参エキス等の生薬エキス；ハーブ類：コラーゲン等が挙げられる。
【００４０】
（機能性食品）
本発明の組成物、すなわち、アスパラガス由来の糖脂質やリン脂質、またはこれを含むアスパラガス加工物は、日常的に経口摂取しやすいように、各種の食品、飲料と混ぜて機能性食品とすることで、長期的に摂取することも容易である。
ここでいう「機能性食品」とは、一般食品に加えて、健康の維持の目的で摂取する食品および／又は飲料を意味し、保健機能食品である特定保健用食品や栄養機能食品や、健康食品、栄養補助食品、栄養保険食品等を含む概念である。この中でも保健機能食品である特定保健用食品や栄養機能食品が好ましい機能性食品の態様である。なお、機能性食品として製品化する場合には、食品に用いられる様々な添加剤、具体的には、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤漂白剤、防菌防黴剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料等を添加していてもよい。
【００４１】
本発明の機能性食品の対象となる、食品、飲料は特に限定されるものではない。例えば、食品として、ソーセージ、ハム、魚介加工品、ゼリー、キャンディー、チューインガムなどの食品類が挙げられる。また、飲料としては、各種の茶類、清涼飲料水、酒類、栄養ドリンクなどが挙げられる。
【００４２】
アスパラガス由来の糖脂質やリン脂質、またはこれを含むアスパラガス加工物を、機能性食品に配合する割合は任意であるが、β‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制活性、脱顆粒抑制活性、ＩｇＥ抑制活性の少なくとも１以上に有意性がある範囲で配合割合が選択される。
【００４３】
（食品添加剤）
また、本発明の組成物、すなわち、アスパラガス由来の糖脂質やリン脂質、またはこれを含むアスパラガス加工物は、それ自体またはこれに他の成分を添加して食品添加剤として使用することも可能である。他の成分は、飲食品添加剤として使用可能であるならば特に制限はない。食品添加剤の添加対象となる飲料、食品についても任意であり、特に制限はない。
【００４４】
本発明の組成物を、食品添加剤に配合する割合は任意であるが、β‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制活性、脱顆粒抑制活性、ＩｇＥ抑制活性の少なくとも１以上に有意性がある範囲で配合割合が選択される。
【００４５】
本発明の組成物は、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。そのため、ペットフード等の動物用のサプリメントや機能性食品へ添加することもできる。
【００４６】
（化粧料組成物）
本発明の化粧料組成物は、上記組成物、すなわち、アスパラガス由来の糖脂質やリン脂質、またはこれを含むアスパラガス加工物を含有することを特徴とする。本発明の組成物は、各種化粧料基材及び化粧料添加物に対して任意に配合できる。
【００４７】
本発明の化粧料組成物は、慣用の化粧料基材を適宜配合し、所望の剤型とすることができる。その形態は特に制限はないが、化粧水、乳液、ジェル、クリーム、パック、ヘアトニック、ヘアクリームファンデーション、水性軟膏、スプレー等の形態が挙げられる。また、本発明において、化粧料組成物は、入浴剤、ボディーソープ、シャンプー等の入浴用組成物も含む概念である。
【００４８】
また、本発明の化粧料組成物には、本発明の効果を損なわない範囲で通常化粧料や皮膚外用医薬、入浴用製品で使用される任意の成分を添加することができる。かかる任意成分の具体例としては、増粘・ゲル化剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、色素剤、金属封鎖剤、防腐剤、ｐＨ調整剤、香料、ミツロウ等が挙げられる。これら任意成分の配合割合は、その目的に応じて適宜選択して決定することができる。
【００４９】
本発明の組成物を、化粧料組成物に配合する割合は任意であるが、β‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制活性、脱顆粒抑制活性、ＩｇＥ抑制活性の少なくとも１以上に有意性がある範囲で配合割合が選択される。
【実施例】
【００５０】
以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。また、実施例の混合溶媒において示す「％」は、特に明示しない限り「体積％」を示す。また、抽出溶媒が混合溶媒の場合、バランスである水は省略して記載する。例えば、「５０％エタノール」と記載した場合、５０体積％エタノールと５０体積％水との混合溶媒を意味する。
【００５１】
＜評価方法＞
後述する実験例における評価方法は以下の通りである。
（１）RBL-2H3細胞株を用いた脱顆粒試験（β‐ヘキソサミニダーゼ放出活性の評価）
５×１０5 cellsのラット好塩基球様細胞株RBL-2H3（JCRB）をTyrode Buffer（Sigma）で洗浄した後、サンプル溶液及び１０μＭのcalcium ionophore A23187（Sigma）を含むTyrode Bufferで懸濁し、３７℃で３０分間反応させた。その後、５分間氷冷し、反応を停止させ、遠心分離により上清を回収した。
回収した上清に２ｍＭのp-nitrophenyl N-2-actyl-β-D-glucosamine /citrate buffer (ｐＨ４．５) (Sigma)を加え、３７℃でインキュベートした。３０分間静置後、carbonate buffer (ｐＨ１０)を添加して反応を停止させ、吸光波長４０５ｎｍでβ‐ヘキソサミニダーゼを検出、定量した。
また、β‐ヘキソサミニダーゼ放出活性を脱顆粒反応の指標として、アレルギー反応及び炎症反応への影響を評価した。
【００５２】
（２）アトピー性皮膚炎モデルマウスへの影響の評価
６週齢、オスのNC/Nga マウスを日本SLCから購入した。 これらのマウスは１２時間の明暗転サイクルが保たれた SPF (Specific pathogen free) 環境下で飼育した。 給餌及び給水は自由摂取とした。
アスパラガス抽出物、または糖脂質、リン脂質の効果を検討するため、それぞれのサンプルを１日１回経口投与した。比較対照であるコントロール群にはサンプル溶媒のみを投与した。 マウスのアトピー性皮膚炎を誘導するため、まず剃毛した胸部及び腹部、フットパットにエタノール/アセトン (３：１，v/v) に溶解した５重量％ピクリルクロライド（東京化成工業）を塗布した。続いて４日目から実験終了時までオリーブオイル（Filippo Berio）に溶解した１重量％ピクリルクロライドを１週間に一度背部及び耳介に塗布し、アトピー性皮膚炎を誘発させた。１週間に１度皮膚炎症症状を、(i)発赤・出血、(ii)浮腫、(iii)脱毛・組織欠損、(iv)乾燥、(v)発疹を０(無し)、１(軽度)、２(中程度)、３(重度)で点数化し、評価した。
また、尾より採血しＩｇＥ抗体量をELISA  kit (eBioscience)により測定した。
【００５３】
（３）卵白アルブミン誘導アレルギーマウスへの影響の評価
６週齢、メスの BALB/c マウスは九動から購入した。これらのマウスは１２時間の明暗転サイクルが保たれたSPF環境下で飼育した。 給餌及び給水は自由摂取とした。
マウスは５匹、７群に分け、純水もしくは１００，５００ｍｇ/ｋｇ/ｄａｙのアスパラガス抽出物を含む純水、１０，５０ｍｇ/ｋｇ/ｄａｙの糖脂質、リン脂質を含む純水を２８日間経口投与した。
また、実験開始日に卵白アルブミン（OVA、Sigma）を含む水酸化アルミニウム溶液(５０μｇＯＶＡ/１ｍｇ Ａ１（ＯＨ）3/ｍＬ) をマウスに腹腔内投与し、抗原暴露した。 この免疫投与は１週間ごとに計４回繰り返し行なった。２９日間飼育後、マウス血清中の総IgE量と抗原特異的IgE量をELISA  kit (eBioscience) 及びgoat anti-mouse IgE HRP (Bethyl laboratories) により測定し、アスパラガス抽出物及び糖脂質、リン脂質の影響を評価した。
【００５４】
＜原料アスパラガスの切り分け＞
原料アスパラガスとして、佐賀県産アスパラガス（Asparagus officinalis）を使用した。当該原料アスパラガスを可食部の茎部（穂先から２５ｃｍ）と、非可食部の切下部（根元部分、下から２ｃｍ）に切り分け、茎部をさらに上部（７ｃｍ）、中部（９ｃｍ）、下部（９ｃｍ）に切り分けた（図１の左図参照）。
【００５５】
１．アスパラガス抽出物の評価
評価１−１：アスパラガス茎部（可食部）からのアスパラガス抽出物（茎部、加熱水蒸気処理、５０％エタノール抽出物）によるRBL-2H3の脱顆粒阻害の評価
上述したアスパラガス茎部の上部、中部及び下部をそれぞれ１ｃｍ程度に切り分け、５分間加熱水蒸気処理（１００℃の水蒸気）した後、凍結乾燥（−１０℃以下で凍結し、その後室温（約２５℃）で減圧乾燥、以下においても同様）を行い、得られた乾燥物を粉砕してアスパラガスパウダーとした。
得られたアスパラガスパウダー２ｇを５０％エタノールに加え、室温（約２５℃）で４時間撹拌した。その後、１０，０００ｇ、４℃の条件で１時間遠心分離した後、上澄み液を２号の濾紙で濾過し、抽出液を回収した。得られた抽出液はエバポレーターにより有機溶媒を除去した後に、凍結乾燥を行い、実験例１のアスパラガス抽出物（茎部、５０％エタノール抽出物）を得た。
【００５６】
＜比較例１（茎部、未加熱処理、５０％エタノール抽出物＞
加熱水蒸気処理したアスパラガス茎部に代えて、加熱処理を行っていない未加熱のアスパラガス茎部を使用した以外は、実施例１と同様にして比較例１（非加熱）のアスパラガス抽出物（茎部、５０％エタノール抽出物）を得た。
【００５７】
図１（右図）に実施例１（加熱処理）、比較例（非加熱）のアスパラ抽出物のRBL-2H3細胞株を用いた脱顆粒試験（β‐ヘキソサミニダーゼ放出活性の評価）の結果を示す。なお、図１において、比較対照であるコントロール群（アスパラガス抽出物  添加なし）を１００％としている。
比較例１である非加熱のアスパラガス抽出物では、コントロール群とほとんど差がなく、β‐ヘキソサミニダーゼの放出にほぼ影響を及ぼしていない。これに対し、加熱処理を行った実施例１（加熱処理）の抽出物では上部、中部、下部のいずれも、β‐ヘキソサミニダーゼの放出を阻害した。
なお、実施例１（加熱５分間）と同様に、３分間から１５分間加熱処理を行ったアスパラガス抽出物についても同様にβ‐ヘキソサミニダーゼの放出を阻害活性が確認された（図示せず）。
【００５８】
評価１−２：様々な抽出溶媒からのアスパラガス抽出物の評価
佐賀県産アスパラガスの茎部を使用し、上記１−１と同様を得たアスパラガスパウダーとした。
得られたアスパラガスパウダー２ｇずつをそれぞれ１００ｍＬの超純水、５０％エタノール、又は８０％エタノールに加え、室温（約２５℃）で４時間撹拌した。
その後、アスパラガスパウダーと溶媒の混合物を撹拌後に、１０，０００ｇ、４℃の条件で１時間遠心分離した後、上澄み液を２号の濾紙で濾過し、それぞれの抽出液を回収した。
超純水を用いて得た抽出液は０．２２μｍフィルター（Nunc）にかけ、凍結乾燥を行い、得られた乾燥物をアスパラガス抽出物（水抽出物）とした。
５０％エタノール、８０％エタノールを用いて得た抽出液はエバポレーターにより有機溶媒を除去した後に、凍結乾燥を行い、アスパラガス抽出物とした。
いずれの抽出物も細胞試験を行う際はジメチルスルホキシド (DMSO、Wako)もしくは５０％エタノールに溶解し、０．２２μｍフィルターにかけ、使用した。
【００５９】
図２にアスパラガス茎部各種溶媒抽出物によるβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制活性を示す。
水抽出物、５０％及び８０％エタノール抽出物は濃度依存的にβ‐ヘキソサミニダーゼの放出を有意に阻害していることがわかる。
【００６０】
評価１−３：アスパラガス切下部（非可食部）からのアスパラガス抽出物の評価
原料として、アスパラガス茎部から、アスパラガス切下部に代えた以外は、実施例１のアスパラガス抽出物の製造方法と同様にして、実施例２のアスパラガス抽出物（切下部、５０％エタノール抽出物）を得た。
図３（右図）に加熱処理したアスパラガス切下部（非可食部）のβ‐ヘキソサミニダーゼの放出を阻害活性の評価結果を示す。また、図３には茎部（可食部）の結果も併せて示した。原料であるアスパラガス茎部及び切下部の加熱処理は５分、７分、１０分とした。
その結果、図３（右図）に示すように、アスパラガス切下部から作製したアスパラガス抽出物は可食部と同様にβ‐ヘキソサミニダーゼの放出を抑制していることが確認された。
【００６１】
以上の結果から、加熱処理は脱顆粒放出抑制活性（β‐ヘキソサミニダーゼの放出抑制活性）に優れたアスパラガス抽出物を作製するための重要な工程であり、この処理を行ったアスパラガス茎部及び切下部の抽出物は、部位によらず脱顆粒反応を阻害することが明らかになった。
また、水―エタノール混合溶媒を抽出溶媒とした場合、得られるアスパラガス抽出物が優れたβ‐ヘキソサミニダーゼの放出作用を示すことが確認された。
【００６２】
評価１−４：アスパラガス抽出物の経口投与のアトピー性皮膚炎及び血中ＩｇＥ濃度への影響
アスパラガス抽出物のアレルギー反応への影響を検討するため、アトピー性皮膚炎モデルマウスを用いて糖脂質、リン脂質の皮膚炎症症状及び血中ＩｇＥ濃度への影響を検討した。なお、アスパラガス抽出物として茎部の５０％エタノール抽出物を使用した。 
実験は、上記実験方法（２）アトピー性皮膚炎モデルマウスへの影響の評価の通り行った。
【００６３】
図４はマウス背部の皮膚炎症スコア及び試験開始１２週目の背部の様子を示したものである。炎症スコアのグラフではＰＢＳのみを投与したコントロール群と比べ、アスパラガス抽出物を投与したマウスでスコアの上昇が抑制され、試験開始7週目から有意な差が認められた。また、試験１２週目の背部の写真からもアスパラガス抽出物投与群では炎症症状の悪化が抑制、もしくは改善した様子が確認された。
同様に、図５はマウス耳介の皮膚炎症スコア及び試験開始１２週目の耳介の様子を示したものである。この結果からも、アスパラガス抽出物投与群は炎症スコアの上昇を抑え、著しく耳介の炎症症状の悪化を予防したことが確認された。
また、図６に示されるように、アスパラガス抽出物の経口投与による血中ＩｇＥ濃度への影響を評価したところ、アスパラガス抽出物の経口投与は肥満細胞や好塩基球等の脱顆粒反応の引き金となる血中ＩｇＥ濃度を低下させることが確認された。
【００６４】
以上の結果から、アスパラガス抽出物は、ＩｇＥ濃度の上昇やアトピー性皮膚炎症状の悪化といったＩ型及びＩＶ型アレルギーの予防、改善に有用であることが示された。
【００６５】
２．アスパラガス由来の脂質の評価
＜アスパラガスからの脂質抽出＞
上記評価１−１の通りの方法で５０％エタノールを用いて得られたアスパラガスパウダーからアスパラガス抽出液を作製した。この抽出液に等量のクロロホルム（Wako）を加え、よく振り混ぜた後、有機相を分離した。
この有機相を濃縮、乾燥し得られたクロロホルム抽出物から中性脂質、糖脂質、リン脂質の３つの脂質画分を分画した。
まず、クロロホルム抽出物に対し、５０倍量の活性化したシリカゲル（Wako）をガラスカラムに詰め、カラム容量の2倍量のクロロホルムで洗浄した。これにクロロホルムに溶解させたクロロホルム抽出物を静かに加え、続いてカラム容量の１０倍量のクロロホルム、アセトン（Wako）、メタノール（Wako）を連続的に流下させた。溶出液はクロロホルム、アセトン、メタノールのそれぞれで回収し、濃縮して得られた抽出物を中性脂質、糖脂質、リン脂質として使用した。
【００６６】
評価２−１：アスパラガス由来の糖脂質またはリン脂質のβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制作用の評価
アスパラガスから抽出した中性脂質、糖脂質、リン脂質のRBL-2H3 の脱顆粒反応（β‐ヘキソサミニダーゼ放出）への影響を検討した。結果を図７に示す。
図７から明らかなように、中性脂質はほとんどβ‐ヘキソサミニダーゼ放出に影響を与えない一方で、糖脂質、リン脂質は有意にその放出を阻害した。
したがって、アスパラガス由来の糖脂質及びリン脂質は、β‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制作用（脱顆粒阻害作用）を有することが確認された。
【００６７】
評価２−２：アスパラガス由来の糖脂質またはリン脂質の経口投与のアトピー性皮膚炎及び血中ＩｇＥ濃度への影響
アスパラガス由来脂質のアレルギー反応への影響を検討するため、アトピー性皮膚炎モデルマウスを用いて糖脂質、リン脂質の皮膚炎症症状及び血中ＩｇＥ濃度への影響を検討した。実験は、上記実験方法（２）アトピー性皮膚炎モデルマウスへの影響の評価の通り行った。
【００６８】
図８にはマウス背部の皮膚炎症スコアを示した。試験開始８週目から純水のみを投与したコントロールと比べ、アスパラガス抽出物及び糖脂質、リン脂質を投与したマウスではスコアの上昇が抑制され始め、１２週目では有意にスコアが低下した。
また、図９に耳介の炎症スコアを示している。試験開始9週目からはコントロール群と比べ、アスパラガス抽出物及び糖脂質１０ｍｇ/ｋｇ/ｄａｙ、リン脂質１０ｍｇ/ｋｇ/ｄａｙの投与群でスコアの低下が確認された。
さらに、図１０に示すとおり、１２週目の血中抗体量を測定したところ、アスパラガス抽出物、糖脂質、リン脂質投与群ではコントロール群よりもＩｇＥ濃度が低下することが確認された。
【００６９】
以上から、糖脂質及びリン脂質はＩｇＥ濃度の上昇やアトピー性皮膚炎の悪化といったアレルギーの予防、改善に有用であることが示された。
【００７０】
評価２−３：アスパラガス由来脂質の卵白アルブミン誘導アレルギーモデルの血中ＩｇＥ濃度への影響
アスパラガス由来糖脂質及びリン脂質のＩ型アレルギーへの影響を検討するために、卵白アルブミン（OVA）で誘導し作製したアレルギーモデルマウスへの影響を検討した。結果を図１１に示す。
図１１に示す通り、糖脂質及びリン脂質を投与したマウスでは、血中総ＩｇＥ濃度が低下し、さらにＯＶＡ特異ＩｇＥg濃度も有意に低下することが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００７１】
本発明のβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制用及び／又はＩｇＥ産生抑制用の組成物は、優れたβ‐ヘキソサミニダーゼ放出抑制作用、ＩｇＥ産生抑制作用を有し、各種医薬用組成物、化粧料組成物、サプリメント、機能性食品等に配合して用いることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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