(57)【要約】      （修正有）【課題】副作用の低減された医薬組成物の提供。【解決手段】約０．０５〜約３０重量パーセントの実質的に疎水性の酸と；約０．２〜約２５重量パーセントの１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩と；約５０〜約９９．７５重量パーセントのポリマーであって、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよび組合せから選択される該ポリマーとを含む治療用ナノ粒子。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
約０．０５〜約３０重量パーセントの実質的に疎水性の酸と；
約０．２〜約２５重量パーセントの治療剤であって、プロトン化された治療剤のｐＫａは疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい、該治療剤と；
約５０〜約９９．７５重量パーセントのポリマーであって、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよび組合せから選択される該ポリマーとを含む治療用ナノ粒子であって、ここで、
該治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含み、
該治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩である、前記治療用ナノ粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる２０１４年３月１４日に出願した米国仮出願第６１／９５３，６２８号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
患者に特定の薬物を送達する（例えば、特定の組織または細胞型を標的化するか、または特定の罹病組織を標的化するが正常組織を標的化しない）システム、または薬物の放出を制御するシステムは、前々から有益と認識されている。
【０００３】
例えば、活性薬物を含み、例えば、特定の組織または細胞型を標的化するか、または特定の罹病組織を標的化するが正常組織を標的化しない治療薬は、標的化されない体組織内の薬物の量を低減させることができる。これは、薬物の細胞毒性用量が周囲の非癌組織を死滅させることなく癌細胞に送達されることが望ましい癌などの状態を処置する場合、特に重要である。有効な薬物標的化は、抗癌治療でよく見られる望ましくない、生命を脅かすこともある副作用を低減させることができる。加えて、このような治療は、別の方法では薬物が到達できない特定の組織に薬物を到達させることができる。
【０００４】
放出制御および／または標的治療をもたらす治療薬は、他のナノ粒子送達システムでは能力に欠けることが知られている有効量の薬物送達もできなければなない。例えば、適切な量の薬物が各ナノ粒子と会合しており、さらに有利な送達特性を有するために十分な小ささのナノ粒子径を保持しているナノ粒子システムを製造することは難題でありうる。
【０００５】
少なくとも１個の塩基性窒素原子を含有する治療剤（すなわち、プロトン化可能窒素含有治療剤）は、重要な治療剤群の代表である。しかし、このクラスの薬物のナノ粒子製剤は、望ましくない特性、例えば、好ましくないバースト放出プロファイルおよび乏しい薬物負荷量によって妨げられることが多い。
【０００６】
したがって、癌などの疾患を処置するために治療レベルのプロトン化可能窒素含有治療剤を送達することが可能であり、その上、患者の副作用を低減させることも可能であるナノ粒子治療剤およびこのようなナノ粒子の製造方法が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、治療薬、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩、の治療用ナノ粒子に関する。より詳細には、本発明は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩を含み、実質的に疎水性の酸をさらに含む、治療用ナノ粒子に関する。加えて、本発明は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩と、実質的に疎水性の酸と、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよびこれらの組合せから選択されるポリマーとを含む治療用ナノ粒子であって、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む治療用ナノ粒子に関する。本発明は、このようなナノ粒子（複数のこのようなナノ粒子を含む）と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物にも関する。加えて、本発明は、約０．０５〜約３０重量パーセントの実質的に疎水性の酸と、約０．２〜約２５重量パーセントの１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩と、約５０〜９９．７５重量パーセントのコポリマーであって、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよびこれらの組合せから選択されるコポリマーとを含む治療用ナノ粒子であって、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む治療用ナノ粒子、ならびに治療用ナノ粒子と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物に関する。本発明は、約０．０５〜約３０重量パーセントの実質的に疎水性の酸と、約０．２〜約２０重量パーセントの１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩と、約５０〜９９．７５重量パーセントのコポリマーであって、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよびこれらの組合せから選択されるコポリマーとを含む治療用ナノ粒子であって、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む治療用ナノ粒子、ならびに治療用ナノ粒子と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物にも関する。
【０００８】
治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩、を含む高分子ナノ粒子を、本明細書に記載する。この化合物は塩基性であり、本明細書において下で定義するようなプロトン化可能窒素含有治療剤である。このような治療用ナノ粒子の製造および使用方法も本明細書に記載する。
【０００９】
一態様では、治療用ナノ粒子を提供する。この態様において、治療用ナノ粒子は、約０．０５〜約３０重量パーセントの実質的に疎水性の酸と、約０．２〜約２５重量パーセントの１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩（この場合、プロトン化形態の治療剤のｐＫａは、疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい）と、約５０〜９９．７５重量パーセントのコポリマーであって、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよびこれらの組合せから選択されるコポリマーとを含み、治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む。一実施形態において、治療用ナノ粒子は、約０．０５〜約３０重量パーセントの実質的に疎水性の酸と、約０．２〜約２０重量パーセントの１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩（この場合、プロトン化形態の治療剤のｐＫａは、疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい）と、約５０〜９９．７５重量パーセントのコポリマーであって、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよびこれらの組合せから選択されるコポリマーとを含み、治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む。
【００１０】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を約１：７の重量比（治療剤：ＰＬＡ−ＰＥＧ）で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を約１：５の重量比（治療剤：ＰＬＡ−ＰＥＧ）で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を約１：４の重量比（治療剤：ＰＬＡ−ＰＥＧ）で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を約１：１４の重量比（治療剤：ＰＬＡ−ＰＥＧ）で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を約１：３の重量比（治療剤：ＰＬＡ−ＰＥＧ）で含む。
【００１１】
別の態様において、治療用ナノ粒子は、実質的に疎水性の酸であって、実質的に疎水性の酸の上述の治療剤に対するモル比は約０．２５：１〜約２：１の範囲である、実質的に疎水性の酸と、約０．２〜約２５重量パーセントの上述の治療剤であって、プロトン化された治療剤のｐＫａは疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい、治療剤と、約５０〜９９．７５重量パーセントのポリマーであって、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよびこれらの組合せから選択されるポリマーとを含み、治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む。一実施形態において、治療用ナノ粒子は、実質的に疎水性の酸であって、実質的に疎水性の酸の上述の治療剤に対するモル比は約０．２５：１〜約２：１の範囲である、実質的に疎水性の酸と、約０．２〜約２０重量パーセントの上述の治療剤であって、プロトン化された治療剤のｐＫａは疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい、治療剤と、約５０〜９９．７５重量パーセントのポリマーであって、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよびこれらの組合せから選択されるポリマーとを含み、治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む。
【００１２】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、実質的に疎水性の酸と、上述の治療剤であって、プロトン化された治療剤のｐＫａは疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい、上述の治療剤と、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよびこれらの組合せから選択されるポリマーとを含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、上述の治療剤と、実質的に疎水性の酸であって、実質的に疎水性の酸と治療剤のモル比は約０．２５：１〜約２：１の範囲であり、プロトン化された治療剤のｐＫａは疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい、実質的に疎水性の酸と、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよびこれらの組合せから選択されるポリマーとを含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、実質的に疎水性の酸の上述の治療剤に対するモル比は、約０．５：１〜約１．５：１である。特定の実施形態において、実質的に疎水性の酸の上述の治療剤に対するモル比は、約０．７５：１〜約１．２５：１である。特定の実施形態において、実質的に疎水性の酸の上述の治療剤に対するモル比は、約０．２５：１〜約１：１である。特定の実施形態において、プロトン化形態の上述の治療剤のｐＫａは、疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約２．０ｐＫａ単位大きい。他の実施形態において、プロトン化形態の上述の治療剤のｐＫａは、疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約４．０ｐＫａ単位大きい。
【００１５】
別の態様において、治療用ナノ粒子は、疎水性の酸および上述の治療剤を含む疎水性イオン対であって、プロトン化形態の上述の治療剤のｐＫａと疎水性の酸のｐＫａとの差は少なくとも約１．０ｐＫａ単位である、疎水性イオン対と、約５０〜約９９．７５重量パーセントのジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーであって、数平均分子量約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａのポリ（乳酸）および数平均分子量約４ｋＤａ〜約６ｋＤａのポリ（エチレン）グリコールを有する、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーとを含む。本発明のこの態様の特定の実施形態において、プロトン化形態の上述の治療剤のｐＫａと疎水性の酸のｐＫａとの差は、少なくとも約２．０ｐＫａ単位である。他の実施形態において、プロトン化形態の上述の治療剤のｐＫａと疎水性の酸のｐＫａとの差は、少なくとも約４．０ｐＫａ単位である。
【００１６】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約０．０５〜約２０重量パーセントの疎水性の酸を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、実質的に疎水性の酸は、約２〜約８のｌｏｇＰを有し、ここでＰは、疎水性の酸のオクタノール／水分配係数である。いくつかの実施形態において、実質的に疎水性の酸は、約４〜約８のｌｏｇＰを有する。いくつかの実施形態において、実質的に疎水性の酸は、約２〜約７のｌｏｇＰを有する。
【００１８】
いくつかの実施形態において、実質的に疎水性の酸は、約−１．０〜約５．０の水中のｐＫａを有する。他の実施形態において、実質的に疎水性の酸は、約２．０〜約５．０の水中のｐＫａを有する。
【００１９】
特定の実施形態において、実質的に疎水性の酸および上述の治療剤は、治療用ナノ粒子内で疎水性イオン対を形成する。
【００２０】
いくつかの実施形態において、疎水性の酸は脂肪酸である。例えば、特定の実施形態において、脂肪酸は、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデシル酸、アラキドン酸、ヘンイコシル酸、ベヘン酸、トリコシル酸、リグノセリン酸、ペンタコシル酸、セロチン酸、ヘプタコシル酸、モンタン酸、ノナコシル酸、メリシン酸、ヘナトリアコンチル酸（ｈｅｎａｔｒｉａｃｏｎｔｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ラッセル酸、フィリン酸、ゲディン酸、セロプラスチン酸、ヘキサトリアコンチル酸（ｈｅｘａｔｒｉａｃｏｎｔｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）またはこれらの組合せを含むがそれらに限定されない、飽和脂肪酸である。他の実施形態において、脂肪酸は、ヘキサデカトリエン酸、α−リノレイン酸、ステアリドン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸、ヘンエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、テトラコサペンタエン酸、テトラコサヘキサエン酸またはこれらの組合せを含むがそれらに限定されない、ω−３脂肪酸である。さらに他の実施形態において、脂肪酸は、リノール酸、γ−リノレイン酸、エイコサジエン酸、ジホモ−γ−リノレイン酸、アラキドン酸、ドコサジエン酸、アドレン酸、ドコサペンタエン酸、テトラコサテトラエン酸、テトラコサペンタエン酸またはこれらの組合せを含むがそれらに限定されない、ω−６脂肪酸である。特定の他の実施形態において、脂肪酸は、オレイン酸、エイコセン酸、ミード酸、エルカ酸、ネルボン酸またはこれらの組合せを含むがそれらに限定されない、ω−９脂肪酸である。他の実施形態において、脂肪酸は、ルーメン酸、α−カレンド酸、β−カレンド酸、ジャカル酸、α−エレオステアリン酸、β−エレオステアリン酸、カタルプ酸、プニカ酸、ルメレン酸、α−パリナリン酸、β−パリナリン酸、ボセオペンタエン酸、ピノレン酸、ポドカルピン酸またはこれらの組合せを含むがそれらに限定されない、多価不飽和脂肪酸である。
【００２１】
特定の実施形態において、疎水性の酸は胆汁酸である。例えば、いくつかの実施形態において、胆汁酸は、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸、ハイコール酸（ｈｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、β−ムリコール酸、コール酸、リトコール酸、アミノ酸抱合胆汁酸またはこれらの組合せを含むが、それらに限定されない。いくつかの実施形態において、胆汁酸はコール酸である。他の実施形態において、アミノ酸抱合胆汁酸は、グリシン抱合胆汁酸またはタウリン抱合胆汁酸である。
【００２２】
特定の実施形態において、疎水性の酸は、ジオクチルスルホコハク酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ドデシル硫酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、パモ酸、ウンデカン酸またはこれらの組合せを含むが、それらに限定されない。
【００２３】
他の実施形態において、疎水性の酸は、約２００Ｄａ〜約８００Ｄａの間の分子量を有する。
【００２４】
特定の実施形態において、疎水性の酸はパモ酸である。他の実施形態において、疎水性の酸はオレイン酸である。いくつかの実施形態において、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素のオレイン酸に対する重量比は、約６：１である。いくつかの実施形態において、パモ酸に対する１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素の重量比は、約１．８：１である。
【００２５】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、約１〜約２０重量パーセントの上述の治療剤を含む。他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約１〜約１５重量パーセントの上述の治療剤を含む。他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約２〜約２０重量パーセントの上述の治療剤を含む。他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約２〜約１５重量パーセントの上述の治療剤を含む。さらに他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約４〜約２０重量パーセントの上述の治療剤を含む。さらに他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約４〜約１５重量パーセントの上述の治療剤を含む。特定の他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約５〜約２０重量パーセントの上述の治療剤を含む。特定の他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約５〜約１０重量パーセントの上述の治療剤を含む。
【００２６】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、少なくとも１分間、治療剤を実質的に保持する。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約３０％未満を実質的に即時に放出する。特定の他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約１０〜約４５％を約１時間にわたって放出する。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約０．０１〜約１５％を約４時間にわたって放出する。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約０．０１〜約１５％を約１０時間にわたって放出する。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約０．０１〜約２５％を約２０時間にわたって放出する。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約１〜約４０％を約４０時間にわたって放出する。さらに他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、脂肪酸または胆汁酸を含有しないことを除いて治療用ナノ粒子と実質的に同じである対照ナノ粒子についての放出プロファイルと実質的に同じである放出プロファイルを有する。
【００２７】
特定の実施形態において、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．６〜約０．９５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する。特定の他の実施形態において、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．６〜約０．８のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する。さらに他の実施形態において、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．７５〜約０．８５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する。他の実施形態において、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．７〜約０．９のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する。
【００２８】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約１０〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む。特定の他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約１０〜約２０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む。さらに他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約１５〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む。他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約２０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む。
【００２９】
特定の実施形態において、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、数平均分子量約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａのポリ（乳酸）および数平均分子量約４ｋＤａ〜約６ｋＤａのポリ（エチレン）グリコールを有する。
【００３０】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、標的化リガンドで官能化されたポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー約０．２〜約３０重量パーセントをさらに含む。他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、標的化リガンドで官能化されたポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー約０．２〜約３０重量パーセントをさらに含む。特定の実施形態において、標的化リガンドは、ポリ（エチレン）グリコールに共有結合している。
【００３１】
特定の実施形態において、疎水性の酸は高分子電解質である。例えば、いくつかの実施形態において、高分子電解質は、ポリ（スチレンスルホン酸）、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸またはこれらの組合せを含むが、それらに限定されない。
【００３２】
特定の実施形態において、企図される治療用ナノ粒子は、２つまたはそれ以上の実質的に疎水性の酸の混合物をさらに含む。例えば、いくつかの実施形態において、企図される治療用ナノ粒子は、２つの実質的に疎水性の酸の混合物、３つの実質的に疎水性の酸の混合物、４つの実質的に疎水性の酸の混合物、または５つの実質的に疎水性の酸の混合物を含む。いくつかの実施形態において、実質的に疎水性の酸の混合物は、オレイン酸およびコール酸を含む。他の実施形態において、２つの実質的に疎水性の酸の混合物は、オレイン酸およびコール酸を含む。
【００３３】
別の態様において、治療用ナノ粒子は、第１のポリマーと上述の治療剤と実質的に疎水性の酸とを含む第１の有機相を乳化させ、それによってエマルジョン相を形成する工程；エマルジョン相をクエンチし、それによってクエンチ相を形成する工程、および最後に、クエンチ相を濾過して治療用ナノ粒子を回収する工程によって製造される。
【００３４】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される疎水性の酸は、脂肪酸である。例えば、特定の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される脂肪酸は、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデシル酸、アラキドン酸、ヘンイコシル酸、ベヘン酸、トリコシル酸、リグノセリン酸、ペンタコシル酸、セロチン酸、ヘプタコシル酸、モンタン酸、ノナコシル酸、メリシン酸、ヘナトリアコンチル酸、ラッセル酸、フィリン酸、ゲディン酸、セロプラスチン酸、ヘキサトリアコンチル酸またはこれらの組合せを含むがそれらに限定されない、飽和脂肪酸である。他の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される脂肪酸は、ヘキサデカトリエン酸、α−リノレイン酸、ステアリドン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸、ヘンエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、テトラコサペンタエン酸、テトラコサヘキサエン酸またはこれらの組合せを含むがそれらに限定されない、ω−３脂肪酸である。さらに他の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される脂肪酸は、リノール酸、γ−リノレイン酸、エイコサジエン酸、ジホモ−γ−リノレイン酸、アラキドン酸、ドコサジエン酸、アドレン酸、ドコサペンタエン酸、テトラコサテトラエン酸、テトラコサペンタエン酸またはこれらの組合せを含むがそれらに限定されない、ω−６脂肪酸である。特定の他の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される脂肪酸は、オレイン酸、エイコセン酸、ミード酸、エルカ酸、ネルボン酸またはこれらの組合せを含むがそれらに限定されない、ω−９脂肪酸である。他の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される脂肪酸は、ルーメン酸、α−カレンド酸、β−カレンド酸、ジャカル酸、α−エレオステアリン酸、β−エレオステアリン酸、カタルプ酸、プニカ酸、ルメレン酸、α−パリナリン酸、β−パリナリン酸、ボセオペンタエン酸、ピノレン酸、ポドカルピン酸またはこれらの組合せを含むがそれらに限定されない、多価不飽和脂肪酸である。
【００３５】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される疎水性の酸は、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸、ハイコール酸、β−ムリコール酸、コール酸、リトコール酸、アミノ酸抱合胆汁酸またはこれらの組合せを含むがそれらに限定されない、胆汁酸である。いくつかの実施形態において、胆汁酸はコール酸である。他の実施形態において、アミノ酸抱合胆汁酸は、グリシン抱合胆汁酸またはタウリン抱合胆汁酸である。
【００３６】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される疎水性の酸は、ジオクチルスルホコハク酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ドデシル硫酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、パモ酸、ウンデカン酸またはこれらの組合せを含むが、それらに限定されない。
【００３７】
他の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される疎水性の酸は、約２００Ｄａ〜約８００Ｄａの間の分子量を有する。
【００３８】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される疎水性の酸は、パモ酸である。他の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される疎水性の酸は、オレイン酸である。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素のオレイン酸に対する重量比は、約６：１である。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される、パモ酸に対する１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素のオレイン酸の重量比は、約１．８：１である。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素のオレイン酸に対する重量比は、６：１である。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される、パモ酸に対する１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素のオレイン酸の重量比は、１．８：１である。
【００３９】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される第１のポリマーは、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーである。他の実施形態において、第１のポリマーは、ポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーである。特定の他の実施形態において、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．６〜約０．９５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する。特定の他の実施形態において、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．６〜約０．８のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する。さらに他の実施形態において、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．７５〜約０．８５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する。他の実施形態において、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．７〜約０．９のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する。
【００４０】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、約１０〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを使用して製造される。特定の他の実施形態では、約１０〜約２０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを使用する。さらに他の実施形態では、約１５〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを使用する。他の実施形態では、約２０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを使用する。
【００４１】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用されるポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、数平均分子量約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａのポリ（乳酸）および数平均分子量約４ｋＤａ〜約６ｋＤａのポリ（エチレン）グリコールを有する。
【００４２】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー約０．２〜約３０重量パーセントを標的化リガンドでさらに官能化することによって製造される。他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、ポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー約０．２〜約３０重量パーセントを標的化リガンドでさらに官能化することによって製造される。特定の実施形態では、標的化リガンドをポリ（エチレン）グリコールに共有結合させる。
【００４３】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子の製造に使用される疎水性の酸は、高分子電解質である。例えば、いくつかの実施形態において、高分子電解質は、ポリ（スチレンスルホン酸）、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸またはこれらの組合せを含むが、それらに限定されない。
【００４４】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、２つまたはそれ以上の実質的に疎水性の酸の混合物を使用して製造される。例えば、いくつかの実施形態では、２つの実質的に疎水性の酸の混合物、３つの実質的に疎水性の酸の混合物、４つの実質的に疎水性の酸の混合物、または５つの実質的に疎水性の酸の混合物を使用して治療用ナノ粒子を製造することがある。いくつかの実施形態において、実質的に疎水性の酸の混合物は、オレイン酸およびコール酸を含む。他の実施形態において、２つの実質的に疎水性の酸の混合物は、オレイン酸およびコール酸である。
【００４５】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子はポリマーＰＬＡ−ＰＥＧを含み、ＰＬＡ−ＰＥＧのモル比は約５：１である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、第１の有機相と第１の水溶液を合わせて第２の相を形成する工程；第２の相を乳化させて、第１のポリマーと治療剤と実質的に疎水性の酸とを含むエマルジョン相を形成する工程；エマルジョン相をクエンチし、それによってクエンチ相を形成する工程；およびクエンチ相を濾過して治療用ナノ粒子を回収する工程を含む方法によって製造され、治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素であり、第１の有機相は、ベンジルアルコールおよび酢酸エチルを約１．２５のベンジルアルコール対酢酸エチル重量比で含む有機溶媒中に、治療剤と、治療剤対パモ酸の重量比が約１１：１のパモ酸と、治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧの重量比が約１：３のＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）とを含み、ならびに第１の水溶液は、ベンジルアルコールに０．００５：１の重量比で溶解されたポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテルを含み、第１の有機相と第１の水性相を約１：５の重量比で合わせて第２の相を形成し、そこから形成された第２の相を乳化させ、エマルジョン相を、ｐＨ４．５の水溶液での０．１Ｍクエン酸でクエンチし、得られた生成物を濃縮する。
【００４７】
他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、上述の治療剤またはその薬学的に許容される塩と、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよびそれらの組合せから選択されるポリマーとを含む。
【００４８】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、さらに存在する標的化リガンドを有し、リガンドは、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬであり、ここでＧＬは、以下の構造を有する：
【化１】
2018154643.tif 000002
【００４９】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、可溶化剤をさらに含む。特定の実施形態において、可溶化剤は、ポリソルベート８０である。他の実施形態において、可溶化剤は、ポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテルである。
【００５０】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、治療剤１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素と、約１．８：１の治療剤対パモ酸重量比でパモ酸と、治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧの重量比が約１：３のＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）と、約４４：１のＰＬＡ−ＰＥＧ対ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ重量比でＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬとを含む。他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、可溶化剤をさらに含む。特定のこのような実施形態において、可溶化剤は、ポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテルである。
【００５１】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、治療剤１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素と、約６：１の治療剤対オレイン酸重量比でオレイン酸と、約１：７の治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧ重量比でＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）と、約４６：１のＰＬＡ−ＰＥＧ対ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ重量比でＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬとを含む。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、コール酸をさらに含む。他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、可溶化剤をさらに含む。特定のこのような実施形態において、可溶化剤は、ポリソルベート８０である。
【００５２】
さらに別の態様では、本明細書に記載する治療用ナノ粒子と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、複数の企図される治療用ナノ粒子を含むことがある。
【００５３】
特定の実施形態において、医薬組成物は、糖類をさらに含む。例えば、いくつかの実施形態において、糖類は、スクロースもしくはトレハロースまたはそれらの混合物からなる群から選択される二糖類である。
【００５４】
特定の実施形態において、医薬組成物は、シクロデキストリンをさらに含む。例えば、いくつかの実施形態において、シクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ヘプタキス−（２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル）−β−シクロデキストリン、ヘプタキス−（２，３，６−トリ−Ｏ−ベンゾイル）−β−シクロデキストリンまたはこれらの混合物を含むが、それらに限定されない。
【００５５】
別の態様では、それを必要とする対象における癌を処置する方法を提供する。方法は、本明細書に記載の医薬組成物の治療有効量を対象に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、癌は慢性骨髄性白血病である。特定の実施形態において、癌は、慢性骨髄単球性白血病、好酸球増加症候群、腎細胞癌、肝細胞癌、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病、非小細胞肺癌、膵癌、乳癌、固形腫瘍、マントル細胞リンパ腫、消化管間質腫瘍、または頭頸部癌を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、癌は乳癌である。
【００５６】
さらに別の態様では、消化管間質腫瘍の処置を必要とする対象の消化管間質腫瘍を、本明細書に記載する医薬組成物の治療有効量を対象に投与することによって処置する方法を提供する。
【００５７】
さらに別の態様では、治療用ナノ粒子を製造する方法を提供する。方法は、第１の有機相と第１の水溶液を合わせて第２の相を形成する工程；第２の相を乳化させて、第１のポリマーと上述の治療剤と実質的に疎水性の酸とを含むエマルジョン相を形成する工程；続いて、エマルジョン相をクエンチし、それによってクエンチ相を形成する工程；および最後に、クエンチ相を濾過して治療用ナノ粒子を回収する工程を含む。
【００５８】
いくつかの実施形態において、方法は、第２の相を乳化させる工程の前に、上述の治療剤および実質的に疎水性の酸を第２の相に合わせる工程をさらに含む。特定の実施形態において、第２の相を乳化させる工程の前に、上述の治療剤および実質的に疎水性の酸は、疎水性イオン対を形成する。特定の他の実施形態において、第２の相の乳化中に、上述の治療剤および実質的に疎水性の酸は、疎水性イオン対を形成する。特定の実施形態において、方法は、第２の相を乳化させるのと実施的に同時に上述の治療剤および実質的に疎水性の酸を第２の相に合わせる工程をさらに含む。例えば、いくつかの実施形態において、第１の有機相は上述の治療剤を含み、第１の水溶液は実質的に疎水性の酸を含む。
【００５９】
いくつかの実施形態において、上述の治療剤は、プロトン化されたとき、第１のｐＫａを有し、実質的に疎水性の酸は、第２のｐＫａを有し、エマルジョン相は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する水溶液でクエンチされる。例えば、特定の実施形態において、クエンチ相は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する。他の実施形態において、上述の治療剤は、プロトン化されたとき、第１のｐＫａを有し、実質的に疎水性の酸は、第２のｐＫａを有し、第１の水溶液は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する。特定の他の実施形態において、ｐＨは、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のほぼ等距離にあるｐＫａ単位に等しい。
【００６０】
いくつかの実施形態において、上述の治療剤は、プロトン化されたとき、第１のｐＫａを有し、実質的に疎水性の酸は、第２のｐＫａを有し、エマルジョン相は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する水溶液でクエンチされる。例えば、特定の実施形態において、クエンチ相は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する。他の実施形態において、上述の治療剤は、プロトン化されたとき、第１のｐＫａを有し、実質的に疎水性の酸は、第２のｐＫａを有し、第１の水溶液は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する。特定の他の実施形態において、ｐＨは、第１のｐＫａと第２のｐＫａ間の等距離にあるｐＫａ単位に等しい。
【００６１】
別の態様では、対象において薬剤として使用するための、本明細書に記載の治療用ナノ粒子を提供する。
【００６２】
さらに別の態様では、対象において抗増殖効果を生じさせるのに使用するための、本明細書に記載の治療用ナノ粒子を提供する。
【００６３】
さらに別の態様では、対象において抗浸潤薬として固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置に使用するための、本明細書に記載の治療用ナノ粒子を提供する。
【００６４】
さらに別の態様では、対象の癌の予防または処置における、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の使用を提供する。
【００６５】
さらに別の態様では、対象の癌の予防または処置に使用するための、本明細書に記載の治療用ナノ粒子を提供する。
【００６６】
さらに別の態様では、対象の癌の予防または処置のための薬剤の製造における、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の使用を提供する。
【００６７】
さらに別の態様では、対象において抗増殖効果を生じさせるための、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の使用を提供する。
【００６８】
さらに別の態様では、対象において抗増殖効果を生じさせるのに使用するための薬剤の製造における、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の使用を提供する。
【００６９】
さらに別の態様では、対象において抗浸潤薬として固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置に使用するための薬剤の製造における、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の使用を提供する。
【００７０】
さらに別の態様では、抗増殖効果を生じさせる処置を必要とする対象において抗増殖効果を生じさせる方法であって、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の有効量を前記対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００７１】
さらに別の態様では、固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置によって、このような処置を必要とする対象において、抗浸潤効果を生じさせる方法であって、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の有効量を前記対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００７２】
さらに別の態様では、対象の固形腫瘍の予防または処置に使用するための、本明細書に記載の治療用ナノ粒子を提供する。
【００７３】
さらに別の態様では、対象の固形腫瘍の予防または処置に使用するための薬剤の製造における、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の使用を提供する。
【００７４】
さらに別の態様では、固形腫瘍疾患の処置を必要とする対象の固形腫瘍を予防または処置するための方法であって、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の有効量を前記対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】開示するナノ粒子を形成するための乳化プロセスのフローチャートを示す図である。
【図２Ａ】開示する乳化プロセスの流れ図を示す図である。
【図２Ｂ】開示する乳化プロセスの流れ図を示す図である。
【図３】製剤Ａ、ＢおよびＣとして識別して本明細書において下で説明する３製剤であって、各々が１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素を含む３製剤のナノ粒子についてのインビトロ放出プロファイルを示す図である。エラーバーは、標準偏差を示す。水浴温度＝３７℃。
【図４】本明細書において説明し、製剤Ａ、ＢおよびＣとして識別する３製剤であって、各々が１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素を含む３製剤のナノ粒子についてのＷｉｓｔａｒ  Ｈａｎラットにおける薬物動態を示す図である；（ａ）は、遊離治療剤に対するナノ粒子の薬物動態を示し、その一方で（ｂ）は、遊離治療剤を含めずに同じデータを示す。
【図５】薬物１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素の製剤Ａのインビトロ放出プロファイルを示す図である。エラーバーは、標準偏差を示す。水浴温度＝３７℃。
【図６】ｐＨ４．５のクエン酸緩衝クエンチを用いる薬物１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素の製剤Ｃのインビトロ放出プロファイルを示す図である。
【図７】４日に１回に対して８日に１回、製剤Ｂナノ粒子または１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（裸のＡＰＩ）を投与した、雌ＳＣＩＤ／ｂｇマウスにおけるＭＤＡＭＢ３６１異種移植スケジューリングを示す図である。
【図８Ａ】４日に１回に対して８日に１回、製剤Ａ、ＢもしくはＣナノ粒子または裸のＡＰＩを投与した、雌ＳＣＩＤ／ｂｇマウスにおけるＭＤＡＭＢ３６１異種移植スケジューリング研究、および製剤Ａ、ＢもしくはＣナノ粒子または１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（裸のＡＰＩ）でのインビボｐＳ６調節研究を示す図である。ＴＡ＝治療剤。
【図８Ｂ】４日に１回に対して８日に１回、製剤Ａ、ＢもしくはＣナノ粒子または裸のＡＰＩを投与した、雌ＳＣＩＤ／ｂｇマウスにおけるＭＤＡＭＢ３６１異種移植スケジューリング研究、および製剤Ａ、ＢもしくはＣナノ粒子または１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（裸のＡＰＩ）でのインビボｐＳ６調節研究を示す図である。ＴＡ＝治療剤。
【図８Ｃ】４日に１回に対して８日に１回、製剤Ａ、ＢもしくはＣナノ粒子または裸のＡＰＩを投与した、雌ＳＣＩＤ／ｂｇマウスにおけるＭＤＡＭＢ３６１異種移植スケジューリング研究、および製剤Ａ、ＢもしくはＣナノ粒子または１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（裸のＡＰＩ）でのインビボｐＳ６調節研究を示す図である。ＴＡ＝治療剤。
【図９】製剤ＢもしくはＣナノ粒子または１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（裸のＡＰＩ）で処置した雌ｎｕ／ｎｕマウスに関するＷＭ２６６−４モデル腫瘍増殖阻害を示す図である。ＴＡ＝治療剤。
【図１０】製剤ＢもしくはＣナノ粒子または１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（裸のＡＰＩ）での処置後のマウスまたはラットにおけるグルコースおよびインスリンレベルの分析を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００７６】
定義
本出願に示す定義は、本出願全体を通して用いる用語を明確にするためのものである。
【００７７】
用語「本明細書において」は、本出願全体を意味する。
【００７８】
別段の定義がない限り、本明細書において用いる全ての専門および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書に記載するものと同様または同等の方法および材料を本発明の実施または試験の際に使用することができるが、好適な方法および材料を下で説明する。材料、方法および例は、説明に役立つものに過ぎず、限定することを意図したものではない。本明細書において言及するすべての公報、特許および他の文献は、それら全体が参照によって本明細書に組み入れられている。
【００７９】
本明細書に記載する本発明の各実施形態を単独で利用してもよく、または本発明の１つもしくはそれ以上の他の実施形態と併用してもよい。
【００８０】
本出願全体を通して、「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」という語は、冠詞「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」によって修飾されている要素が１つまたはそれ以上であることの包含を含意すると解するものとする。
【００８１】
本出願全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または語尾変化形、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、述べられている要素または要素の群の包含を含意するが、他のいかなる要素または要素の群の除外も含意しないと解するものとする。
【００８２】
本出願全体を通して、組成物が特定の成分を有する、包含するまたは含むと記載されている場合、組成物は列挙されている成分から本質的になることまたは列挙されている成分からなることもあることが考えられる。同様に、方法またはプロセスが、特定のプロセス工程を有する、包含するまたは含むと記載されている場合、プロセスは、列挙されている加工工程から本質的になることまたは列挙されている加工工程からなることもある。さらに、工程の順序または特定の動作を行う順序は、本明細書に記載する組成物および方法が操作可能であるならば重要ではないことを理解されたい。さらに、２つまたはそれ以上の工程または動作が同時に行われることもある。
【００８３】
用語「または」は、本明細書において用いる場合、文脈による明確な別段の指示がない限り、「および／または」を意味すると解するべきである。
【００８４】
用語「アルコキシ」は、酸素が結合されているアルキル基、好ましくは低級アルキル基を指す。代表的なアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどが挙げられる。
【００８５】
さらに、用語「アルキル」（または「低級アルキル」）は、本明細書において用いる場合、「非置換アルキル」と「置換アルキル」の両方を含むことを意図したものであり、これらのうちの後者（置換アルキル）は、炭化水素主鎖の１個またはそれ以上の炭素上の水素が置換基に置き換わっているアルキル部分を指す。このような置換基としては、別段の指定がない限り、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えばカルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミルもしくはアシル）、チオカルボニル（例えばチオエステル、チオアセテートもしくはチオホルメート）、アルコキシル、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキルまたは芳香族部分を挙げることができる。炭化水素鎖上の置換部分それら自体が、適宜、置換されていてもよいことは、当業者には理解されるであろう。例えば、置換アルキルの置換基は、置換および非置換形態のアミノ、アジド、イミノ、アミド、ホスホリル（ホスホネートおよびホスフィネートを含む）、スルホニル（スルフェート、スルホンアミド、スルファモイルおよびスルホネートを含む）およびシリル基、ならびにエーテル、アルキルチオール、カルボニル（ケトン、アルデヒド、カルボキシレートおよびエステルを含む）、−ＣＦ３、−ＣＮなどを含むことができる。
【００８６】
用語「Ｃｘ〜ｙ」は、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアルコキシなどの化学部分と併用されている場合、鎖内にｘ〜ｙ個の炭素原子を含有する基を含むことを意図したものである。例えば、用語「Ｃｘ〜ｙアルキル」は、鎖内にｘ〜ｙ個の炭素原子を含有する直鎖アルキルおよび分岐鎖アルキル基（トリフルオロメチルおよび２，２，２−トリフルオロエチルなどのようなハロアルキル基を含む）を含む、置換または非置換飽和炭化水素基を指す。Ｃ０アルキルは、その基が末端位置にある場合は水素、内部の場合は結合を示す。
【００８７】
用語「アミド」は、本明細書において用いる場合、基
【化２】
2018154643.tif 000003
（式中、各Ｒ３０は、水素もしくはヒドロカルビル基を表し、または２つのＲ３０が、それらが結合しているＮ原子と一緒になって、環構造内に４〜１２個の原子を有する複素環を完成している）を指す。
【００８８】
用語「アリール」は、本明細書において用いる場合、環の各原子が炭素である、置換または非置換単環芳香族基を含む。好ましくは、環は、５〜７員環、より好ましくは６員環である。用語「アリール」は、２個またはそれ以上の炭素またはヘテロ原子が２つの隣接している環に共通である２つまたはそれ以上の環式環を有する多環式環系であって、環の少なくとも１つが芳香族であり、例えば他の環が、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリールおよび／またはヘテロシクリルであることができる、多環式環系も含む。
【００８９】
用語「アリールアルキル」または「アラルキル」は、本明細書において用いる場合、アリール基で置換されているアルキル基を指す。
【００９０】
用語「アジド」は、当技術分野において認知されており、基−Ｎ＝Ｎ＋＝Ｎ−を指す。
【００９１】
用語「カルボキシ」は、本明細書において用いる場合、式−ＣＯ２Ｈによって表される基を指す。
【００９２】
用語「ハロ」および「ハロゲン」は、本明細書において用いる場合、ハロゲンを意味し、クロロ、フルオロ、ブロモおよびヨードを含む。
【００９３】
用語「ヒドロカルビル」は、本明細書において用いる場合、＝Ｏ置換基も＝Ｓ置換基も有さない炭素原子によって結合されている基であって、通常、少なくとも１つの炭素−水素結合および主として炭素主鎖を有するが、場合によりヘテロ原子を含むこともある基を指す。したがって、メチル、エトキシエチル、２−ピリジルおよびトリフルオロメチルのような基は、本出願ではヒドロカルビルであると見なされるが、（連結炭素上に＝Ｏ置換基を有する）アセチルおよび（炭素ではなく酸素によって連結されている）エトキシは、本出願ではヒドロカルビルであると見なされない。ヒドロカルビル基としては、アリール、炭素環、ヘテロシクリル、アルキル、アルケニル、アルキニルおよびこれらの組合せが挙げられるが、それらに限定されない。
【００９４】
用語「ヒドロキシ」は、本明細書において用いる場合、−ＯＨ基を指す。
【００９５】
用語「置換されている」は、主鎖の１個またはそれ以上の炭素上の水素が置換基に置き換わっている部分を指す。「置換」または「で置換されている」は、このような置換が置換原子および置換基の許される価に従うという、および置換が、結果として、安定した化合物、例えば、再配列、環化、除去などによるものなどの変換を自発的に受けない安定した化合物をもたらすという暗黙の条件を含むことは、理解されるであろう。本明細書において用いる場合、用語「置換されている」は、有機化合物のすべての許容される置換基を含むことを企図したものである。広い態様において、許容される置換基は、有機化合物の非環式および環式、分岐および非分岐、炭素環式および複素環式、芳香族および非芳香族置換基を含む。適切な有機化合物について許容される置換基は、１つまたはそれ以上であることもあり、同じまたは異なることもある。本出願では、窒素などのヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たす、水素置換基および／または本明細書に記載する有機化合物の任意の許容される置換基を有することがある。
【００９６】
置換基としては、本明細書に記載する任意の置換基、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えばカルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミルもしくはアシル）、チオカルボニル（例えばチオエステル、チオアセテートもしくはチオホルメート）、アルコキシル、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキルまたは芳香族部分を挙げることができるが、これらに限定されない。置換基それら自体が、適宜、置換されていることがあることは、当業者には理解されるであろう。「非置換」と特に述べられていない限り、本明細書における化学部分への言及は、置換されている異形を含むと解される。例えば、「アリール」基または部分への言及は、置換されている異形と非置換の異形の両方を暗に含む。
【００９７】
「任意選択の」または「場合により」は、続いて記載されている状況が起こることもあり、または起こらないこともあることを意味し、したがって、その適用は、その状況が起こる事例と、起こらない事例を含む。例えば、「場合により置換されている」という句は、非水素置換基が所与の原子上に存在することもあり、または存在しないこともあることを意味し、それ故、その適用は、非水素置換基が存在する構造と、非水素置換基が存在しない構造を含む。
【００９８】
用語「健常な」および「正常な」は、本明細書では同義で用いており、病状が（少なくとも検出限界まで）ない対象または特定の細胞もしくは組織を指す。
【００９９】
相反する指示がない限り、用語「塩基性治療剤」または「治療剤」は、治療剤１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩を指す。治療剤は、下に示す構造を有する：
【化３】
2018154643.tif 000004
【０１００】
治療剤は、その内容が参照によって組み入れられる米国特許第８，０３９，４６９号に記載されている。オクタノール：食塩水の算出ｌｏｇ分配係数（ｃｌｏｇＰ）＝１．２４（算出分配係数）。ｐＨ６．５でのｌｏｇＤ、分布定数＝０．２１２、さらに、ｐＨ７．４でのｌｏｇＤ＝１．０８。上に示したように、治療剤は塩基である。治療剤は、プロトン化可能窒素含有治療剤である。本明細書において用いる場合、「プロトン化可能窒素含有治療剤」は、プロトン化される能力がある少なくとも１つの窒素含有官能基を含有する任意の医薬活性剤を含む。言い換えると、治療剤は、潜在的にプロトンを受け入れることができる孤立電子対を有する窒素原子を有する。ｐＫａは、対応するプロトン化形態の治療剤についての対数尺度での酸解離定数を指す。言い換えると、矢印が指している窒素原子にプロトン（Ｈ＋）が存在する場合、その治療剤は、下に示すｐＫａを有することになる：
【化４】
2018154643.tif 000005
【０１０１】
最も塩基性の高い窒素（下部）およびそれ程塩基性は高くないが依然としてプロトン化可能な窒素（上部）についてのｐＫａ情報を上に示す。ＡＣＤは、Ｌｉａｏ  ＣＺ、Ｎｉｃｋｌａｕｓ  ＭＣ、Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｎｉｎｅ  ｐｒｏｇｒａｍｓ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  ｐＫ（ａ）  ｖａｌｕｅｓ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ、Ｊ．  Ｃｈｅｍ．Ｉｎｆｏｒｍ．Ｍｏｄｅｌ．４９（１２）：２８０１〜２８１２頁、２００９年に記載されているものなどの、当技術分野において公知の標準的技術を用いて算出された数である。治療剤のｐＫａがそのプロトン化形態を指すことを理解しなければならない。
【０１０２】
本発明の治療剤は、１つまたはそれ以上のキラル中心を有し、本発明は、このような化合物の各々の独立したエナンチオマーはもちろん、エナンチオマーの混合物も含む。複数のキラル中心が存在する場合、本発明は、各々の組合せはもちろん、それらの混合物も含む。具体的な立体化学または異性体形が特に示されていない限り、構造のすべてのキラル、ジアステレオマーおよびラセミ形が意図されている。光学活性形の製造方法、例えば、ラセミ形の分割による方法、または光学活性出発原料からの合成による方法は、当技術分野において周知である。
【０１０３】
用語「実質的に」は、「疎水性の酸」などの化合物に関して用いる場合、少なくとも１重量％で存在する化合物を指すか、または２より上のｌｏｇＰを有する疎水性の酸を指す。２より上のｌｏｇＰを有する疎水性の酸には有機相へのより高い分配傾向がある。
【０１０４】
用語「疎水性の酸」は、−７以上、すなわち−６、−５、−４、−３、−２、−１、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６のｌｏｇを有する親油性の酸を指す。
【０１０５】
本明細書に記載するナノ粒子は、治療剤の薬学的に許容される塩を含有することもある。代表的な「薬学的に許容される塩」としては、例えば、水溶性および水不溶性塩、例えば、酢酸塩、アルミニウム、アムソン酸塩（４，４−ジアミノスチルベン−２，２−ジスルホン酸塩）、ベンザチン（Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン）、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、ビスマス、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、ブロミド、酪酸塩、カルシウム、エデト酸カルシウム、カンシル酸塩（カンファースルホン酸塩）、炭酸塩、クロリド、クロリン、クエン酸塩、クラブラン酸塩、ジエタノールアミン、二塩酸塩、二リン酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩（カンファースルホン酸塩）、エシル酸塩（エタンスルホン酸塩）、エチレンジアミン、フマル酸塩、グルセプト酸塩（グルコヘプトン酸塩）、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン（Ｎ，Ｎ’−ビス（デヒドロアビエチル）エチレンジアミン）、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸塩、３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸塩、ヨージド、イソチオン酸塩（２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩）、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リチウム、マグネシウム、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メグルミン（１−デオキシ−１−（メチルアミノ）−Ｄ−グルチトール）、メシル酸塩、メチルブロミド、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩（４，４’−メチレンビス−３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸塩またはエンボン酸塩）、パントテン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、カリウム、プロピオン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、サリチル酸塩、ナトリウム、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、スルホサリチル酸塩、スラメート（ｓｕｒａｍａｔｅ）、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩（８−クロロ−３，７−ジヒドロ−１，３−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン）、トリエチオジド、トロメタミン（２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）、吉草酸塩、および亜鉛塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０６】
相反する指示がない限り、本明細書において下文にて用いる場合の％は重量％である。
【０１０７】
塩基性治療剤を含む高分子ナノ粒子、ならびにこのような治療用ナノ粒子の製造および使用方法を、本明細書に記載する。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、開示するナノ粒子への、および／またはナノ粒子製造プロセスに組み入れられる、実質的に疎水性の酸（例えば脂肪酸および／または胆汁酸）の組み入れ（すなわちドーピング）は、改善された薬物負荷量を含むナノ粒子をもたらすことができる。さらに、特定の実施形態において、疎水性の酸を含む、および／または疎水性の酸の存在下で製造された、ナノ粒子は、向上した放出制御特性を示すことができる。例えば、開示するナノ粒子は、疎水性の酸の非存在下で製造されたナノ粒子と比較して緩徐に治療剤を放出することができる。
【０１０９】
いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、疎水性の酸（例えば脂肪酸および／または胆汁酸）を含む、開示するナノ粒子製剤は、上に示した治療剤上の１個またはそれ以上の窒素原子の、例えばアミン部分の、孤立電子対を用いて治療剤と酸の間に疎水性イオン対（ＨＩＰ）を形成することによって、有意に向上した製剤特性（例えば、薬物負荷量および／または放出プロファイル）を有すると考えられる。本明細書において用いる場合、ＨＩＰは、クーロン引力によって一緒に保持されている、反対の電荷を有するイオンの対である。同様に、いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、いくつかの実施形態では、ＨＩＰを使用して、イオン化可能な基（例えばアミン）を含有する治療剤の疎水性を増加させることができる。治療剤の疎水性が増加すると、有機溶媒への治療剤のより高い溶解度をもたらすことができるＨＩＰが形成される結果となるため、ナノ粒子製剤に有益である。本明細書において企図されるようなＨＩＰ形成は、例えば、薬物負荷量が増加されたナノ粒子をもたらすことができる。ナノ粒子からの治療剤のより緩徐な放出が、例えばいくつかの実施形態では、水溶液への治療剤の溶解度の低下に起因して起こることもある。さらに、治療剤と大きい疎水性対イオンの複合体形成がポリマーマトリックス内への治療剤の拡散を遅速させることもある。有利なことに、ＨＩＰ形成は、疎水性基の治療剤への共有結合による抱合を必要とせずに起こる。
【０１１０】
いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、ＨＩＰの強度は、企図されるナノ粒子の薬物負荷量および放出速度に影響を及ぼすと考えられる。例えば、プロトン化形態の治療剤のｐＫａと、下でより詳細に論じるような疎水性の酸のｐＫａとの差の大きさを増大させることによって、ＨＩＰの強度を増大させることができる。同様に、いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、イオン対形成の条件は、企図されるナノ粒子の薬物負荷量および放出速度に影響を及ぼすと考えられる。
【０１１１】
本明細書に開示するナノ粒子は、１つ、２つ、３つまたはそれ以上の生体適合性および／または生分解性ポリマーを含む。例えば、企図されるナノ粒子は、いくつかの実施形態では約３５〜約９９．７５重量パーセント；いくつかの他の実施形態では、約５０〜約９９．７５重量パーセント；いくつかの実施形態では、約５０〜約９９．５重量パーセント；さらに他の実施形態では約５０〜約９９重量パーセント；さらなる実施形態では約５０〜約９８重量パーセント；さらにさらなる実施形態では約５０〜約９７重量パーセント；追加の実施形態では約５０〜約９６重量パーセント；他の実施形態では約５０〜約９５重量パーセント、さらに他の実施形態では約５０〜約９４重量パーセント；他の実施形態では約５０〜約９３重量パーセント；さらに他の実施形態では約５０〜約９２重量パーセント；約５０〜約９１重量パーセント、いくつかの実施形態では約５０〜約９０重量パーセント；いくつかの実施形態では約、５０〜約８５重量パーセント；いくつかの実施形態では約６０〜約８５重量パーセント；いくつかの実施形態では、約６５〜約８５重量パーセント；およびいくつかの実施形態では、約５０〜約８０重量パーセントの１つまたはそれ以上のブロックコポリマーであって、生分解性ポリマーおよびポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含むブロックコポリマーと、約０〜約５０重量パーセントの生分解性ホモポリマーとを含むことがある。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、企図されるナノ粒子は、いくつかの実施形態では３５〜９９．７５重量パーセント；いくつかの他の実施形態では、５０〜９９．７５重量パーセント；いくつかの実施形態では、５０〜９９．５重量パーセント；さらに他の実施形態では５０〜９９重量パーセント；さらなる実施形態では５０〜９８重量パーセント；さらにさらなる実施形態では５０〜９７重量パーセント；追加の実施形態では５０〜９６重量パーセント；他の実施形態では５０〜９５重量パーセント、さらに他の実施形態では５０〜９４重量パーセント；他の実施形態では５０〜９３重量パーセント；さらに他の実施形態では５０〜９２重量パーセント；５０〜９１重量パーセント、いくつかの実施形態では５０〜９０重量パーセント；いくつかの実施形態では、５０〜８５重量パーセント；いくつかの実施形態では６０〜８５重量パーセント；いくつかの実施形態では、６５〜８５重量パーセント；およびいくつかの実施形態では、５０〜８０重量パーセントの１つまたはそれ以上のブロックコポリマーであって、生分解性ポリマーおよびポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含むブロックコポリマーと、０〜５０重量パーセントの生分解性ホモポリマーとを含むことがある。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、開示するナノ粒子は、約０．２〜約３５重量パーセント、約０．２〜約２５重量パーセント、約０．２〜約２０重量パーセント、約０．２〜約１０重量パーセント、約０．２〜約５重量パーセント、約０．５〜約５重量パーセント、約０．７５〜約５重量パーセント、約１〜約５重量パーセント、約２〜約５重量パーセント、約３〜約５重量パーセント、約１〜約２０重量パーセント、約２〜約２０重量パーセント、約３〜約２０重量パーセント、約４〜約２０重量パーセント、約５〜約２０重量パーセント、約１〜約１５重量パーセント、約２〜約１５重量パーセント、約３〜約１５重量パーセント、約４〜約１５重量パーセント、約５〜約１５重量パーセント、約１〜約１０重量パーセント、約２〜約１０重量パーセント、約３〜約１０重量パーセント、約４〜約１０重量パーセント、約５〜約１０重量パーセント、約１０〜約３０重量パーセント、または約１５〜約２５重量パーセントの治療剤を含むことがある。いくつかの実施形態において、開示するナノ粒子は、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、約２５、約２６、約２７、約２８、約２９、または約３０重量パーセントの治療剤を含む。
【０１１４】
特定の実施形態において、開示するナノ粒子は、０．２〜３５重量パーセント、０．２〜２５重量パーセント、０．２〜２０重量パーセント、０．２〜１０重量パーセント、０．２〜５重量パーセント、０．５〜５重量パーセント、０．７５〜５重量パーセント、１〜５重量パーセント、２〜５重量パーセント、３〜５重量パーセント、１〜２０重量パーセント、２〜２０重量パーセント、３〜２０重量パーセント、４〜２０重量パーセント、５〜２０重量パーセント、１〜１５重量パーセント、２〜１５重量パーセント、３〜１５重量パーセント、４〜１５重量パーセント、５〜１５重量パーセント、１〜１０重量パーセント、２〜１０重量パーセント、３〜１０重量パーセント、４〜１０重量パーセント、５〜１０重量パーセント、１０〜３０重量パーセント、または１５〜２５重量パーセントの治療剤を含むことがある。いくつかの実施形態において、開示するナノ粒子は、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０重量パーセントの治療剤を含む。
【０１１５】
特定の実施形態において、開示するナノ粒子は、疎水性の酸（例えば脂肪酸および／または胆汁酸）を含み、および／または疎水性の酸を含む方法によって製造される。このようなナノ粒子は、疎水性の酸を用いない方法によって製造されたナノ粒子より高い薬物負荷量を有することができる。例えば、疎水性の酸を含む方法によって製造された開示ナノ粒子の（例えば重量での）薬物負荷量は、疎水性の酸を用いない方法によって製造された開示ナノ粒子より、約２倍〜約１０倍の間またはさらにはそれ以上高いことがある。いくつかの実施形態において、疎水性の酸を含む第１の方法によって製造された開示ナノ粒子の（重量での）薬物負荷量は、疎水性の酸を含まないことを除いて第１の方法と同一である第２の方法によって製造された開示ナノ粒子より少なくとも約２倍高い、少なくとも約３倍高い、少なくとも約４倍高い、少なくとも約５倍高い、または少なくとも約１０倍高いことがある。
【０１１６】
特定の態様において、疎水性の酸を含む方法によって製造された開示ナノ粒子の（例えば重量での）薬物負荷量は、疎水性の酸を用いない方法によって製造された開示ナノ粒子より、２倍〜１０倍の間またはさらにはそれ以上高いことがある。いくつかの実施形態において、疎水性の酸を含む第１の方法によって製造された開示ナノ粒子の（重量での）薬物負荷量は、疎水性の酸を含まないことを除いて第１の方法と同一である第２の方法によって製造された開示ナノ粒子より少なくとも２倍高い、少なくとも３倍高い、少なくとも４倍高い、少なくとも５倍高い、または少なくとも１０倍高いことがある。
【０１１７】
任意の好適な疎水性の酸が企図される。いくつかの実施形態において、疎水性の酸は、カルボン酸（例えば、モノカルボン酸、ジカルボン酸、トリカルボン酸など）、硫酸、スルフェン酸またはスルホン酸であることがある。場合によっては、企図される疎水性の酸は、２つまたはそれ以上の酸の混合物を含むこともある。例えば、特定の実施形態において、疎水性の酸は、２つの実質的に疎水性の酸の混合物、いくつかの実施形態では３つの実質的に疎水性の酸の混合物、いくつかの実施形態では４つの実質的に疎水性の酸の混合物、またはいくつかの実施形態では５つの実質的に疎水性の酸の混合物を含むことがある。いくつかの実施形態において、実質的に疎水性の酸の混合物は、オレイン酸およびコール酸を含む。他の実施形態において、２つの疎水性の酸の混合物は、オレイン酸およびコール酸を含む。
【０１１８】
場合によっては、疎水性の酸の塩を製剤に使用してもよい。
【０１１９】
例えば、開示するカルボン酸は、脂肪族カルボン酸（例えば、環式または非環式、分岐または非分岐、炭化水素鎖を有するカルボン酸）であることがある。開示するカルボン酸は、いくつかの実施形態では、ハロゲン（すなわちＦ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩ）、スルホニル、ニトロおよびオキソを含むがこれらに限定されない、１つまたはそれ以上の官能基で置換されていてもよい。特定の実施形態において、開示するカルボン酸は、非置換であることもある。
【０１２０】
例示的カルボン酸としては、置換または非置換脂肪酸（例えば、Ｃ６〜Ｃ５０脂肪酸）を挙げることができる。いくつかの事例において、脂肪酸は、Ｃ１０〜Ｃ２０脂肪酸であることがある。他の事例において、脂肪酸は、Ｃ１５〜Ｃ２０脂肪酸であることがある。脂肪酸は、場合によっては飽和されていることもある。他の実施形態において、脂肪酸は、不飽和であることもある。例えば、脂肪酸は、一価不飽和脂肪酸であることもあり、または多価不飽和脂肪酸であることもある。いくつかの実施形態において、不飽和脂肪酸基の二重結合は、ｃｉｓ配座であることができる。いくつかの実施形態において、不飽和脂肪酸の二重結合は、ｔｒａｎｓ配座であることができる。不飽和脂肪酸としては、ω−３、ω−６またはω−９脂肪酸が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２１】
飽和脂肪酸の非限定的な例としては、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、トリデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデカン酸、アラキドン酸、ヘンエイコサン酸、ベヘン酸、トリコサノン酸、リグノセリン酸、ペンタコサン酸、セロチン酸、ヘプタコサン酸、モンタン酸、ノナコサン酸、メリシン酸、ヘントリアコンタン酸、ラッセル酸、フィリン酸、ゲディン酸、セロプラスチン酸、ヘキサトリアコンタン酸またはこれらの組合せが挙げられる。
【０１２２】
不飽和脂肪酸の非限定的な例としては、ヘキサデカトリエン酸、α−リノレイン酸、ステアリドン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸、ヘンエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、テトラコサペンタエン酸、テトラコサヘキサエン酸、リノール酸、γ−リノレイン酸、エイコサジエン酸、ジホモ−γ−リノレイン酸、アラキドン酸、ドコサジエン酸、アドレン酸、ドコサペンタエン酸、テトラコサテトラエン酸、テトラコサペンタエン酸、オレイン酸（ｐＫａ＝約４〜５；ｌｏｇＰ＝６．７８）、エイコセン酸、ミード酸、エルカ酸、ネルボン酸、ルーメン酸、α−カレンド酸、β−カレンド酸、ジャカル酸、α−エレオステアリン酸、β−エレオステアリン酸、カタルプ酸、プニカ酸、ルメレン酸、α−パリナリン酸、β−パリナリン酸、ボセオペンタエン酸、ピノレン酸、ポドカルピン酸、パルミトレイン酸、バクセン酸、ガドレイン酸、エルカ酸またはこれらの組合せが挙げられる。
【０１２３】
疎水性の酸の他の非限定的な例としては、芳香族酸、例えば、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（すなわちキシナホ酸）（ｐＫａ＝約２〜３；ｌｏｇＰ＝２．９７）、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸（ｐＫａ＝−２；ｌｏｇＰ＝１．３）、ナフタレン−２−スルホン酸（ｐＫａ＝−１．８；ｌｏｇＰ＝２．１）、パモ酸（ｐＫａ＝２．４；ｌｏｇＰ＝６．１７）、桂皮酸、フェニル酢酸、（±）−カンファー−１０−スルホン酸、ドデシルベンゼンスルホン酸（ｐＫａ＝−１．８；ｌｏｇＰ＝６．６）またはこれらの組合せが挙げられる。疎水性の酸の他の非限定的な例としては、ドデシル硫酸（ｐＫａ＝−０．０９；ｌｏｇＰ＝４．５）、ジオクチルスルホコハク酸（すなわちドキュセート酸（ｄｏｃｕｓａｔｅ  ａｃｉｄ））（ｐＫａ＝−０．８；ｌｏｇＰ＝５．２）、ジオレイルホスファチジン酸（ｐＫａ＝約２）、またはビタミンＤ３硫酸エステル（ｐＫａ＝−１．５）が挙げられる。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、疎水性の酸は胆汁酸であることがある。胆汁酸の非限定的な例としては、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸（ｐＫａ＝４．６５；ｌｏｇＰ＝３．７９）、ハイコール酸、β−ムリコール酸、コール酸（ｐＫａ＝約４．５；ｌｏｇＰ＝２．４８）、タウロコール酸、コレステリル硫酸塩（ｐＫａ＝−１．４）、リトコール酸、アミノ酸抱合胆汁酸、またはそれらの組合せが挙げられる。アミノ酸抱合胆汁酸は、好適ないずれのアミノ酸に抱合されていてもよい。いくつかの実施形態において、アミノ酸抱合胆汁酸は、グリシン抱合胆汁酸またはタウリン抱合胆汁酸である。
【０１２５】
特定の事例において、疎水性の酸は、高分子電解質であることがある。例えば、高分子電解質は、ポリスルホン酸（例えば、ポリ（スチレンスルホン酸）もしくはデキストラン硫酸塩）またはポリカルボン酸（例えば、ポリアクリル酸またはポリメタクリル酸）であることがある。
【０１２６】
いくつかの事例において、企図される疎水性の酸は、約１０００Ｄａ未満、いくつかの実施形態では約５００Ｄａ未満、いくつかの実施形態では約４００Ｄａ未満、いくつかの実施形態では約３００Ｄａ未満、いくつかの実施形態では約２５０Ｄａ未満、いくつかの実施形態では約２００Ｄａ未満、およびいくつかの実施形態では約１５０Ｄａ未満の分子量を有することがある。場合によっては、疎水性の酸は、約１００Ｄａ〜約１０００Ｄａの間、いくつかの実施形態では約２００Ｄａ〜約８００Ｄａの間、いくつかの実施形態では約２００Ｄａ〜約６００Ｄａの間、いくつかの実施形態では約１００Ｄａ〜約３００Ｄａの間、いくつかの実施形態では約２００Ｄａ〜約４００Ｄａの間、いくつかの実施形態では約３００Ｄａ〜約５００Ｄａの間、およびいくつかの実施形態では約３００Ｄａ〜約１０００Ｄａの間の分子量を有することもある。特定の実施形態において、企図される酸は、約２００ｋＤａより大きい、いくつかの実施形態では約３００Ｄａより大きい、いくつかの実施形態では約４００Ｄａより大きい、およびいくつかの実施形態では約５００Ｄａより大きい分子量を有することがある。特定の実施形態では、ナノ粒子製剤に使用される疎水性の酸の分子量を増加させることによって、ナノ粒子からの治療剤の放出速度を遅速させることができる。
【０１２７】
いくつかの事例において、企図される疎水性の酸は、１０００Ｄａ未満、いくつかの実施形態では５００Ｄａ未満、いくつかの実施形態では４００Ｄａ未満、いくつかの実施形態では３００Ｄａ未満、いくつかの実施形態では２５０Ｄａ未満、いくつかの実施形態では２００Ｄａ未満、およびいくつかの実施形態では１５０Ｄａ未満の分子量を有することがある。場合によっては、疎水性の酸は、１００Ｄａ〜１０００Ｄａの間、いくつかの実施形態では２００Ｄａ〜８００Ｄａの間、いくつかの実施形態では２００Ｄａ〜６００Ｄａの間、いくつかの実施形態では１００Ｄａ〜３００Ｄａの間、いくつかの実施形態では２００Ｄａ〜４００Ｄａの間、いくつかの実施形態では３００Ｄａ〜５００Ｄａの間、およびいくつかの実施形態では３００Ｄａ〜１０００Ｄａの間の分子量を有することもある。特定の実施形態において、企図される酸は、２００ｋＤａより大きい、いくつかの実施形態では３００Ｄａより大きい、いくつかの実施形態では４００Ｄａより大きい、およびいくつかの実施形態では５００Ｄａより大きい分子量を有することがある。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、疎水性の酸は、少なくとも一部は、酸の強度に基づいて選択される。例えば、疎水性の酸は、２５℃で判定して、約−５〜約７、いくつかの実施形態では約−３〜約５、いくつかの実施形態では約−３〜約４、いくつかの実施形態では約−３〜約３．５、いくつかの実施形態では約−３〜約３、いくつかの実施形態では約−３〜約２、いくつかの実施形態では約−３〜約１、いくつかの実施形態では約−３〜約０．５、いくつかの実施形態では約−１．０〜約５．０、いくつかの実施形態では約−０．５〜約０．５、いくつかの実施形態では約１〜約７、いくつかの実施形態では約２〜約７、いくつかの実施形態では約２．０〜約５．０、いくつかの実施形態では約３〜約７、いくつかの実施形態では約４〜約６、いくつかの実施形態では約４〜約５．５、いくつかの実施形態では約４〜約５、およびいくつかの実施形態では約４．５〜約５の水中での酸解離定数（ｐＫａ）を有することがある。いくつかの実施形態において、酸は、約２５℃で判定して、約７未満、約５未満、約３．５未満、約３未満、約２未満、約１未満、または約０未満のｐＫａを有することがある。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、疎水性の酸は、２５℃で判定して、−５〜７、いくつかの実施形態では−３〜５、いくつかの実施形態では−３〜４、いくつかの実施形態では−３〜３．５、いくつかの実施形態では−３〜３、いくつかの実施形態では−３〜２、いくつかの実施形態では−３〜１、いくつかの実施形態では−３〜０．５、いくつかの実施形態では−１．０〜５．０、いくつかの実施形態では−０．５〜０．５、いくつかの実施形態では１〜７、いくつかの実施形態では２〜７、いくつかの実施形態では２．０〜５．０、いくつかの実施形態では３〜７、いくつかの実施形態では４〜６、いくつかの実施形態では４〜５．５、いくつかの実施形態では４〜５、およびいくつかの実施形態では４．５〜５の水中での酸解離定数（ｐＫａ）を有することがある。いくつかの実施形態において、酸は、２５℃で判定して、７未満、５未満、３．５未満、３未満、２未満、１未満、または０未満のｐＫａを有することがある。
【０１３０】
特定の実施形態において、疎水性の酸は、少なくとも一部は、疎水性の酸のｐＫａとプロトン化された治療剤のｐＫａとの差に基づいて選択される。例えば、いくつかの事例において、疎水性の酸のｐＫａとプロトン化された治療剤のｐＫａとの差は、２５℃で判定して、約１ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約１ｐＫａ単位〜約１０ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約１ｐＫａ単位〜約５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約１ｐＫａ単位〜約３ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約１ｐＫａ単位〜約２ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約２ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約２ｐＫａ単位〜約１０ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約２ｐＫａ単位〜約５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約２ｐＫａ単位〜約３ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約３ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約３ｐＫａ単位〜約１０ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約３ｐＫａ単位〜約５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約４ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約４ｐＫａ単位〜約１０ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約４ｐＫａ単位〜約６ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約５ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約５ｐＫａ単位〜約１０ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約５ｐＫａ単位〜約７ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約７ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約７ｐＫａ単位〜約９ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約９ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約９ｐＫａ単位〜約１１ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では約１１ｐＫａ単位〜約１３ｐＫａ単位の間、およびいくつかの実施形態では約１３ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間であることがある。
【０１３１】
特定の実施形態において、疎水性の酸のｐＫａとプロトン化された治療剤のｐＫａとの差は、２５℃で判定して、１ｐＫａ単位〜１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では１ｐＫａ単位〜１０ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では１ｐＫａ単位〜５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では１ｐＫａ単位〜３ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では１ｐＫａ単位〜２ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では２ｐＫａ単位〜１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では２ｐＫａ単位〜１０ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では２ｐＫａ単位〜５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では２ｐＫａ単位〜３ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では３ｐＫａ単位〜１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では３ｐＫａ単位〜１０ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では３ｐＫａ単位〜５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では４ｐＫａ単位〜１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では４ｐＫａ単位〜１０ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では４ｐＫａ単位〜６ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では５ｐＫａ単位〜１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では５ｐＫａ単位〜１０ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では５ｐＫａ単位〜７ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では７ｐＫａ単位〜１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では７ｐＫａ単位〜９ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では９ｐＫａ単位〜１５ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では９ｐＫａ単位〜１１ｐＫａ単位の間、いくつかの実施形態では１１ｐＫａ単位〜１３ｐＫａ単位の間、およびいくつかの実施形態では１３ｐＫａ単位〜１５ｐＫａ単位の間であることがある。
【０１３２】
いくつかの事例において、疎水性の酸のｐＫａとプロトン化された治療剤のｐＫａとの差は、２５℃で判定して、少なくとも約１ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも約２ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも約３ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも約４ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも約５ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも約６ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも約７ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも約８ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも約９ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも約１０ｐＫａ単位、およびいくつかの実施形態では少なくとも約１５ｐＫａ単位であることがある。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、疎水性の酸のｐＫａとプロトン化された治療剤のｐＫａとの差は、２５℃で判定して、少なくとも１ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも２ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも３ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも４ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも５ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも６ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも７ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも８ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも９ｐＫａ単位、いくつかの実施形態では少なくとも１０ｐＫａ単位、およびいくつかの実施形態では少なくとも１５ｐＫａ単位であることがある。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、疎水性の酸は、約２〜約１５の間、いくつかの実施形態では約５〜約１５の間、いくつかの実施形態では約５〜約１０の間、いくつかの実施形態では約２〜約８の間、いくつかの実施形態では約４〜約８の間、いくつかの実施形態では約２〜約７の間、またはいくつかの実施形態では約４〜約７の間のｌｏｇＰを有することがある。いくつかの事例において、疎水性の酸は、約２より大きい、約４より大きい、約５より大きい、または約６より大きいｌｏｇＰを有することがある。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、疎水性の酸は、２〜１５の間、いくつかの実施形態では５〜１５の間、いくつかの実施形態では５〜１０の間、いくつかの実施形態では２〜８の間、いくつかの実施形態では４〜８の間、いくつかの実施形態では２〜７の間、またはいくつかの実施形態では４〜７の間のｌｏｇＰを有することがある。いくつかの事例において、疎水性の酸は、２より大きい、４より大きい、５より大きい、または６より大きいｌｏｇＰを有することがある。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、企図される疎水性の酸は、例えば治療用ナノ粒子の特性の向上に、有利である相転移温度を有することがある。例えば、疎水性の酸は、約３５０℃未満、場合によっては約３００℃未満、場合によっては約１００℃未満、および場合によっては約５０℃未満の融点を有することがある。特定の実施形態において、疎水性の酸は、約５℃〜約２５℃の間、場合によっては約１５℃〜約５０℃の間、場合によっては約３０℃〜約１００℃の間、場合によっては約７５℃〜約１５０℃の間、場合によっては約１２５℃〜約２００℃の間、場合によっては約１５０℃〜約２５０℃の間、場合によっては約２００℃〜約３００℃の間、および場合によっては約２５０℃〜約３００℃の間の融点を有することがある。場合によっては、疎水性の酸は、約１５℃未満、場合によっては約１０℃未満、または場合によっては約０℃未満の融点を有することがある。特定の実施形態において、疎水性の酸は、約−３０℃〜約０℃の間、または場合によっては約−２０℃〜約−１０℃の間の融点を有することがある。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、疎水性の酸は、３５０℃未満、場合によっては３００℃未満、場合によっては１００℃未満、および場合によっては５０℃未満の融点を有することがある。特定の実施形態において、疎水性の酸は、約５℃〜約２５℃の間、場合によっては１５℃〜５０℃の間、場合によっては３０℃〜１００℃の間、場合によっては７５℃〜１５０℃の間、場合によっては１２５℃〜２００℃の間、場合によっては１５０℃〜２５０℃の間、場合によっては２００℃〜３００℃の間、および場合によっては２５０℃〜３５０℃の間の融点を有することがある。場合によっては、疎水性の酸は、１５℃未満、場合によっては１０℃未満、または場合によっては０℃未満の融点を有することがある。特定の実施形態において、疎水性の酸は、−３０℃〜０℃の間、または場合によっては−２０℃〜−１０℃の間の融点を有することがある。
【０１３８】
例えば、本明細書に開示する方法およびナノ粒子に使用するための疎水性の酸は、少なくとも一部は、酸を含む溶媒への治療剤の溶解度に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施形態では、溶媒に依存して、酸を含む溶媒に溶解された治療剤は、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約１２５ｍｇ／ｍＬ〜約１７５ｍｇ／ｍＬの間、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの間、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの間の溶解度を有することがある。いくつかの実施形態において、疎水性の酸を含有する溶媒に溶解された治療剤は、約１０ｍｇ／ｍＬより高い、約５０ｍｇ／ｍＬより高い、または約１００ｍｇ／ｍＬより高い溶解度を有することがある。いくつかの実施形態において、疎水性の酸を含有する溶媒に溶解された治療剤（例えば、治療剤と溶媒と疎水性の酸とからなる第１の溶液）は、疎水性の酸を含有しない溶媒に治療剤を溶解したとき（例えば、治療剤と溶媒とからなる第２の溶液）より少なくとも約２倍高い、いくつかの実施形態では少なくとも約５倍高い、いくつかの実施形態では少なくとも約１０倍高い、いくつかの実施形態では少なくとも約２０倍高い、いくつかの実施形態では少なくとも約２倍〜約２０倍高い、またはいくつかの実施形態では少なくとも約１０倍〜約２０倍高い溶解度を有することがある。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、溶媒に依存して、酸を含む溶媒に溶解された治療剤は、１５ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの間、２０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの間、２５ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの間、５０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの間、７５ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの間、１００ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの間、１２５ｍｇ／ｍＬ〜１７５ｍｇ／ｍＬの間、１５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの間、２５ｍｇ／ｍＬ〜７５ｍｇ／ｍＬの間の溶解度を有することがある。いくつかの実施形態において、疎水性の酸を含有する溶媒に溶解された治療剤は、１０ｍｇ／ｍＬより高い、５０ｍｇ／ｍＬより高い、または１００ｍｇ／ｍＬより高い溶解度を有することがある。いくつかの実施形態において、疎水性の酸を含有する溶媒に溶解された治療剤（例えば、治療剤と溶媒と疎水性の酸とからなる第１の溶液）は、疎水性の酸を含有しない溶媒に治療剤を溶解したとき（例えば、治療剤と溶媒とからなる第２の溶液）より少なくとも２倍高い、いくつかの実施形態では少なくとも５倍高い、いくつかの実施形態では少なくとも１０倍高い、いくつかの実施形態では少なくとも２０倍高い、いくつかの実施形態では少なくとも２倍〜２０倍高い、またはいくつかの実施形態では少なくとも１０倍〜２０倍高い溶解度を有することがある。
【０１４０】
いくつかの事例において、薬物溶液（すなわち治療剤溶液）中の疎水性の酸の濃度は、約１重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約２重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約３重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約４重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約５重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約６重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約８重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１０重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１２重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１４重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１６重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１重量パーセント〜約５重量パーセント、いくつかの実施形態では約３重量パーセント〜約９重量パーセント、いくつかの実施形態では約６重量パーセント〜約１２重量パーセント、いくつかの実施形態では約９重量パーセント〜約１５重量パーセント、いくつかの実施形態では約１２重量パーセント〜約１８重量パーセント、およびいくつかの実施形態では約１５重量パーセント〜約２１重量パーセントの範囲であることがある。特定の実施形態において、薬物溶液中の疎水性の酸の濃度は、約１重量パーセントまたはそれ以上、いくつかの実施形態では約２重量パーセントまたはそれ以上、いくつかの実施形態では約３重量パーセントまたはそれ以上、いくつかの実施形態では約５重量パーセントまたはそれ以上、いくつかの実施形態では約１０重量パーセントまたはそれ以上、いくつかの実施形態では約１５重量パーセントまたはそれ以上、およびいくつかの実施形態では約２０重量パーセントまたはそれ以上であることがある。
【０１４１】
いくつかの事例において、薬物溶液（すなわち治療剤溶液）中の疎水性の酸の濃度は、１重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では２重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では３重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では４重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では５重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では６重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では８重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では１０重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では１２重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では１４重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では１６重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では１重量パーセント〜５重量パーセント、いくつかの実施形態では３重量パーセント〜９重量パーセント、いくつかの実施形態では６重量パーセント〜１２重量パーセント、いくつかの実施形態では９重量パーセント〜１５重量パーセント、いくつかの実施形態では１２重量パーセント〜１８重量パーセント、およびいくつかの実施形態では１５重量パーセント〜２１重量パーセントの範囲であることがある。特定の実施形態において、薬物溶液中の疎水性の酸の濃度は、１重量パーセントまたはそれ以上、いくつかの実施形態では２重量パーセントまたはそれ以上、いくつかの実施形態では３重量パーセントまたはそれ以上、いくつかの実施形態では５重量パーセントまたはそれ以上、いくつかの実施形態では１０重量パーセントまたはそれ以上、いくつかの実施形態では１５重量パーセントまたはそれ以上、およびいくつかの実施形態では２０重量パーセントまたはそれ以上であることがある。
【０１４２】
特定の実施形態において、（例えば、最初にナノ粒子の製剤化中の、および／またはナノ粒子内の）疎水性の酸の治療剤に対するモル比は、約０．２５：１〜約６：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約５：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約４：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約３：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約２：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約１．５：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約１：１、いくつかの実施形態では約０．２５：１〜約０．５：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約６：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約５：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約４：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約３：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約２：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約１．５：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約１：１、いくつかの実施形態では約０．５：１〜約０．７５：１、いくつかの実施形態では約０．７５：１〜約２：１、いくつかの実施形態では約０．７５：１〜約１．５：１、いくつかの実施形態では約０．７５：１〜約１．２５：１、いくつかの実施形態では約０．９：１〜約１．１：１、いくつかの実施形態では約０．９５：１〜約１．０５：１、いくつかの実施形態では約１：１、いくつかの実施形態では約０．７５：１〜約１：１、いくつかの実施形態では約１：１〜約６：１、いくつかの実施形態では約１：１〜約５：１、いくつかの実施形態では約１：１〜約４：１、いくつかの実施形態では約１：１〜約３：１、いくつかの実施形態では約１：１〜約２：１、いくつかの実施形態では約１：１〜約１．５：１、いくつかの実施形態では約１．５：１〜約６：１、いくつかの実施形態では約１．５：１〜約５：１、いくつかの実施形態では約１．５：１〜約４：１、いくつかの実施形態では約１．５：１〜約３：１、いくつかの実施形態では約２：１〜約６：１、いくつかの実施形態では約２：１〜約４：１、いくつかの実施形態では約３：１〜約６：１、いくつかの実施形態では約３：１〜約５：１、およびいくつかの実施形態では約４：１〜約６：１の範囲であることがある。
【０１４３】
特定の実施形態において、（例えば、最初にナノ粒子の製剤化中の、および／またはナノ粒子内の）疎水性の酸の治療剤に対するモル比は、０．２５：１〜６：１、いくつかの実施形態では０．２５：１〜５：１、いくつかの実施形態では０．２５：１〜４：１、いくつかの実施形態では０．２５：１〜３：１、いくつかの実施形態では０．２５：１〜２：１、いくつかの実施形態では０．２５：１〜１．５：１、いくつかの実施形態では０．２５：１〜１：１、いくつかの実施形態では０．２５：１〜０．５：１、いくつかの実施形態では０．５：１〜６：１、いくつかの実施形態では０．５：１〜５：１、いくつかの実施形態では０．５：１〜４：１、いくつかの実施形態では０．５：１〜３：１、いくつかの実施形態では０．５：１〜２：１、いくつかの実施形態では０．５：１〜１．５：１、いくつかの実施形態では０．５：１〜１：１、いくつかの実施形態では０．５：１〜０．７５：１、いくつかの実施形態では０．７５：１〜２：１、いくつかの実施形態では０．７５：１〜１．５：１、いくつかの実施形態では０．７５：１〜１．２５：１、いくつかの実施形態では０．９：１〜１．１：１、いくつかの実施形態では０．９５：１〜１．０５：１、いくつかの実施形態では１：１、いくつかの実施形態では０．７５：１〜１：１、いくつかの実施形態では１：１〜６：１、いくつかの実施形態では１：１〜５：１、いくつかの実施形態では１：１〜４：１、いくつかの実施形態では１：１〜３：１、いくつかの実施形態では１：１〜２：１、いくつかの実施形態では１：１〜１．５：１、いくつかの実施形態では１．５：１〜６：１、いくつかの実施形態では１．５：１〜５：１、いくつかの実施形態では１．５：１〜４：１、いくつかの実施形態では１．５：１〜３：１、いくつかの実施形態では２：１〜６：１、いくつかの実施形態では２：１〜４：１、いくつかの実施形態では３：１〜６：１、いくつかの実施形態では３：１〜５：１、およびいくつかの実施形態では４：１〜６：１の範囲であることがある。
【０１４４】
いくつかの事例において、疎水性の酸の治療剤に対する（すなわち、ナノ粒子の製剤化中の）モル比は、ナノ粒子中の疎水性の酸のナノ粒子に対する（すなわち、未封入の疎水性の酸および治療剤の除去後の）モル比とは異なることがある。他の事例において、疎水性の酸の治療剤に対する（すなわち、ナノ粒子の製剤化中の）モル比は、ナノ粒子中の疎水性の酸のナノ粒子に対する（すなわち、未封入の疎水性の酸および治療剤の除去後の）モル比と本質的に同じであることもある。
【０１４５】
ある実施形態において、ナノ粒子が疎水性の酸を含有するとき、治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素、を含むナノ粒子は、疎水性の酸と塩を形成することがある。言い換えると、治療剤と会合している疎水性の酸は、薬学的に許容される塩である。したがって、ある実施形態において、本発明は、治療剤またはその薬学的に許容される塩と、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよびこれらの組合せから選択されるポリマーとを含む治療剤ナノ粒子であって、治療剤は１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素である、治療用ナノ粒子に関する。
【０１４６】
場合によっては、治療剤を含有する溶液を、ポリマーを含有する溶液とは別に製造してもよく、次いでそれら２溶液を合わせ、その後、ナノ粒子製剤化を行ってもよい。例えば、一実施形態において、第１の溶液は、治療剤および疎水性の酸を含有し、第２の溶液は、ポリマーおよび場合により疎水性の酸を含有する。第２の溶液が疎水性の酸を含有しない製剤は、例えば、プロセスに使用される疎水性の酸の量の最小化に有利であることがあり、または場合によっては、疎水性の酸と、例えば疎水性の酸の存在下で分解することができるポリマーの間の接触時間の最小化に有利であることもある。他の場合、治療剤とポリマーと疎水性の酸とを含有する単一の溶液を製造することもある。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、疎水性イオン対をナノ粒子の製剤前に形成することがある。例えば、疎水性イオン対を含有する溶液を、企図されるナノ粒子の製剤化前に（例えば、好適な量の治療剤および疎水性の酸を含有する溶液を製造することによって）製造してもよい。他の実施形態では、疎水性イオン対をナノ粒子の製剤中に形成することがある。例えば、治療剤を含有する第１の溶液と、疎水性の酸を含有する第２の溶液とを、ナノ粒子を製造するプロセス工程中（例えば、エマルジョン形成前および／またはエマルジョン形成中）に合わせてもよい。特定の実施形態において、疎水性イオン対は、企図されるナノ粒子への治療剤および疎水性の酸の封入前に形成することがある。他の実施形態において、疎水性イオン対は、ナノ粒子内で、例えば治療剤および疎水性の酸の封入後に、形成することがある。
【０１４８】
特定の実施形態において、疎水性の酸は、２５℃で判定して、水１００ｍＬ当たり約２ｇまたはそれ以下、いくつかの実施形態では、水１００ｍＬ当たり約１ｇまたはそれ以下；いくつかの実施形態では、水１００ｍＬ当たり約１００ｍｇまたはそれ以下、いくつかの実施形態では、水１００ｍＬ当たり約１０ｍｇまたはそれ以下、およびいくつかの実施形態では水１００ｍＬ当たり約１ｍｇまたはそれ以下の溶解度を有することがある。他の実施形態において、疎水性の酸は、２５℃で判定して、水１００ｍＬ当たり約１ｍｇ〜水１００ｍＬ当たり約２ｇ；いくつかの実施形態では水１００ｍＬ当たり約１ｍｇ〜水１００ｍＬ当たり約１ｇ、いくつかの実施形態では、水１００ｍＬ当たり約１ｍｇ〜水１００ｍＬ当たり約５００ｍｇ、およびいくつかの実施形態では水１００ｍＬ当たり約１ｍｇ〜水１００ｍＬ当たり約１００ｍｇの範囲の溶解度を有することがある。いくつかの実施形態において、疎水性の酸は、２５℃で本質的に水に不溶性であることもある。
【０１４９】
特定の実施形態において、疎水性の酸は、２５℃で判定して、水１００ｍＬ当たり２ｇまたはそれ以下、いくつかの実施形態では水１００ｍＬ当たり１ｇまたはそれ以下；いくつかの実施形態では、水１００ｍＬ当たり１００ｍｇまたはそれ以下、いくつかの実施形態では、水１００ｍＬ当たり１０ｍｇまたはそれ以下、およびいくつかの実施形態では水１００ｍＬ当たり１ｍｇまたはそれ以下の溶解度を有することがある。他の実施形態において、疎水性の酸は、２５℃で判定して、水１００ｍＬ当たり１ｍｇ〜水１００ｍＬ当たり２ｇ；いくつかの実施形態では水１００ｍＬ当たり１ｍｇ〜水１００ｍＬ当たり１ｇ、いくつかの実施形態では、水１００ｍＬ当たり１ｍｇ〜水１００ｍＬ当たり５００ｍｇ、およびいくつかの実施形態では水１００ｍＬ当たり１ｍｇ〜水１００ｍＬ当たり１００ｍｇの範囲の溶解度を有することがある。いくつかの実施形態において、疎水性の酸は、２５℃で本質的に水に不溶性であることもある。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、開示するナノ粒子は、ナノ粒子の製造中に使用される疎水性の酸が本質的にないことがある。他の実施形態において、開示するナノ粒子は、疎水性の酸を含むことがある。例えば、いくつかの実施形態において、開示するナノ粒子中の酸含有量は、約０．０５重量パーセント〜約３５重量パーセント、いくつかの実施形態では約０．０５重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約０．０５重量パーセント〜約２０重量パーセント、いくつかの実施形態では、約０．５重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約１重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約２重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では約３重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では、約５重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では、約７重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では、約１０重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では、約１５重量パーセント〜約２５重量パーセント、いくつかの実施形態では、約１５重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では、約２０重量パーセント〜約３０重量パーセント、いくつかの実施形態では、約０．０５重量パーセント〜約０．５重量パーセント、いくつかの実施形態では、約０．０５重量パーセント〜約５重量パーセント、いくつかの実施形態では、約１重量パーセント〜約５重量パーセント、いくつかの実施形態では約３重量パーセント〜約１０重量パーセント、いくつかの実施形態では、約１重量パーセント〜約１０重量パーセント、いくつかの実施形態では、約５重量パーセント〜約１０重量パーセント、いくつかの実施形態では、約５重量パーセント〜約１５重量パーセント、およびいくつかの実施形態では、約１０重量パーセント〜約２０重量パーセントの範囲であることがある。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、開示するナノ粒子中の酸含有量は、０．０５重量パーセント〜３５重量パーセント、いくつかの実施形態では０．０５重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では０．０５重量パーセント〜２０重量パーセント、いくつかの実施形態では、０．５重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では１重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では２重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では３重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では、５重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では、７重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では、１０重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では、１５重量パーセント〜２５重量パーセント、いくつかの実施形態では、１５重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では、２０重量パーセント〜３０重量パーセント、いくつかの実施形態では、０．０５重量パーセント〜０．５重量パーセント、いくつかの実施形態では、０．０５重量パーセント〜５重量パーセント、いくつかの実施形態では、１重量パーセント〜５重量パーセント、いくつかの実施形態では３重量パーセント〜１０重量パーセント、いくつかの実施形態では、１重量パーセント〜１０重量パーセント、いくつかの実施形態では、５重量パーセント〜１０重量パーセント、いくつかの実施形態では、５重量パーセント〜１５重量パーセント、およびいくつかの実施形態では、１０重量パーセント〜２０重量パーセントの範囲であることがある。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、開示するナノ粒子は、実質的に即時に放出する（例えば、約１分〜約３０分、約１分〜約２５分、約５分〜約３０分、約５分〜約１時間、約１時間、または約２４時間）。他の場合、放出プロファイルは、より緩徐である：治療剤の約２重量％またはそれ以下；約５重量％またはそれ以下；約１０重量％またはそれ以下；約１５重量％またはそれ以下；約２０重量％またはそれ以下；約２５重量％またはそれ以下、または約３０重量％またはそれ以下、約４０重量％またはそれ以下は、例えば、リン酸緩衝溶液、例えば一塩基性および二塩基性リン酸緩衝液（例えば、水、例えばＲＯＤＩ水、１リットルに溶解された、０．１３８Ｍ塩化ナトリウム、０．００２７Ｍ塩化カリウム、約０．０２Ｍ一塩基性リン酸ナトリウムまたはカリウム、および約０．０１Ｍ二塩基性リン酸ナトリウムまたはカリウム緩衝液）の中に置かれたとき、室温（例えば２５℃）および／または３７℃で放出される。特定の実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液、例えば本明細書において上で説明したもの）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、約１時間にわたって放出される治療剤約０．０１〜約５０重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約２５重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約１５重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約１０重量％、いくつかの実施形態では約１〜約４０重量％、いくつかの実施形態では約５〜約４０重量％、およびいくつかの実施形態では約１０〜約４０重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することがある。いくつかの実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、約４時間にわたって放出される治療剤約１０〜約７０重量％、いくつかの実施形態では約１０〜約４５重量％、いくつかの実施形態では約１０〜約３５重量％、またはいくつかの実施形態では約１０〜約２５重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することがある。特定の実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液、例えば上文にて説明したもの）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、約４時間にわたって放出される治療剤約０．０１〜約５０重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約２５重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約１５重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約１０重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約５重量％、およびいくつかの実施形態では約０．０１〜約３重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することがある。特定の実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液、例えば上文にて説明したもの）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、約１０時間にわたって放出される治療剤約０．０１〜約６０重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約２５重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約１５重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約１０重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約５重量％、およびいくつかの実施形態では約０．０１〜約３重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することがある。特定の実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液、例えば上文にて説明したもの）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、約２０時間にわたって放出される治療剤約０．０１〜約７０重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約５０重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約２５重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約１５重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約１０重量％、いくつかの実施形態では約０．０１〜約５重量％、およびいくつかの実施形態では約０．０１〜約３重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することがある。特定の実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液、例えば上文にて説明したもの）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、約４０時間にわたって放出される治療剤約１〜約８０重量％、いくつかの実施形態では約１〜約５０重量％、いくつかの実施形態では約１〜約３０重量％、いくつかの実施形態では約１〜約２５重量％、いくつかの実施形態では約１〜約１５重量％、いくつかの実施形態では約１〜約１０重量％、およびいくつかの実施形態では約１〜約５重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することがある。特定の実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液、例えば上文にて説明したもの）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、約１００時間にわたって放出される治療剤約１０〜約１００重量％、いくつかの実施形態では約１０〜約８０重量％、いくつかの実施形態では約１０〜約７０重量％、いくつかの実施形態では約１０〜約６０重量％、いくつかの実施形態では約１０〜約５０重量％、いくつかの実施形態では約１０〜約４０重量％、いくつかの実施形態では約１０〜約３０重量％、いくつかの実施形態では約１０〜約２０重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することができる。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、開示するナノ粒子は、実質的に即時に放出する（例えば、１分〜３０分、１分〜２５分、５分〜３０分、５分〜１時間、１時間、または２４時間）。他の場合、放出プロファイルは、より緩徐である：治療剤２重量％またはそれ以下；５重量％またはそれ以下；１０重量％またはそれ以下；１５重量％またはそれ以下；２０重量％またはそれ以下；２５重量％またはそれ以下、３０重量％またはそれ以下、４０重量％またはそれ以下は、例えば、リン酸緩衝溶液、例えば一塩基性および二塩基性リン酸緩衝液（例えば、水、例えばＲＯＤＩ水、１リットルに溶解された、０．１３８Ｍ塩化ナトリウム、０．００２７Ｍ塩化カリウム、約０．０２Ｍ一塩基性リン酸ナトリウムまたはカリウム、および約０．０１Ｍ二塩基性リン酸ナトリウムまたはカリウム緩衝液）の中に置かれたとき、室温（例えば２５℃）および／または３７℃で放出される。特定の実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液、例えば上文にて説明したもの）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、１時間にわたって放出される治療剤０．０１〜５０重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜２５重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜１５重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜１０重量％、いくつかの実施形態では１〜４０重量％、いくつかの実施形態では５〜４０重量％、およびいくつかの実施形態では１０〜４０重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することがある。いくつかの実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、４時間にわたって放出される治療剤１０〜７０重量％、いくつかの実施形態では１０〜４５重量％、いくつかの実施形態では１０〜３５重量％、またはいくつかの実施形態では１０〜２５重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することがある。特定の実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液、例えば上文にて説明したもの）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、４時間にわたって放出される治療剤０．０１〜５０重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜２５重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜１５重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜１０重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜５重量％、およびいくつかの実施形態では０．０１〜３重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することがある。特定の実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液、例えば上文にて説明したもの）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、１０時間にわたって放出される治療剤０．０１〜６０重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜２５重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜１５重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜１０重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜５重量％、およびいくつかの実施形態では０．０１〜３重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することがある。特定の実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液、例えば上文にて説明したもの）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、２０時間にわたって放出される治療剤０．０１〜７０重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜５０重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜２５重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜１５重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜１０重量％、いくつかの実施形態では０．０１〜５重量％、およびいくつかの実施形態では０．０１〜３重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することがある。特定の実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液、例えば上文にて説明したもの）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、４０時間にわたって放出される治療剤１〜８０重量％、いくつかの実施形態では１〜５０重量％、いくつかの実施形態では１〜３０重量％、いくつかの実施形態では１〜２５重量％、いくつかの実施形態では１〜１５重量％、いくつかの実施形態では１〜１０重量％、およびいくつかの実施形態では１〜５重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することがある。特定の実施形態において、治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液、例えば上文にて説明したもの）中に置かれたとき、例えば２５℃でおよび／または３７℃で、１００時間にわたって放出される治療剤１０〜１００重量％、いくつかの実施形態では１０〜８０重量％、いくつかの実施形態では１０〜７０重量％、いくつかの実施形態では１０〜６０重量％、いくつかの実施形態では１０〜５０重量％、いくつかの実施形態では１０〜４０重量％、いくつかの実施形態では１０〜３０重量％、いくつかの実施形態では１０〜２０重量％に実質的に相当する速度で、治療剤を放出することができる。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、開示するナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、例えば少なくとも約１分間、少なくとも約１時間、またはそれ以上、治療剤を実質的に保持することがある。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、開示するナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、例えば少なくとも１分間、少なくとも１時間、またはそれ以上、治療剤を実質的に保持することがある。
【０１５６】
一実施形態において、開示する治療用ナノ粒子は、標的化リガンド、例えば、低分子量リガンドを含むことがある。特定の実施形態において、低分子量リガンドはポリマーに結合されており、ナノ粒子は、リガンド結合ポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ−リガンド）の非官能化ポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧ）に対する特定の比を含む。ナノ粒子は、これら２つのポリマーの有効な比を有することができ、したがって、癌などの疾患または障害の処置に有効な量のリガンドがナノ粒子と会合している。例えば、リガンド密度増加は、標的結合（細胞結合／標的取り込み）を増加させて、ナノ粒子を「標的特異的」にしうる。あるいは、ナノ粒子中の特定の濃度の非官能化ポリマー（例えば、非官能化ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマー）は、炎症および／または免疫原性を制御することができ（すなわち、免疫応答を誘発する能力）、疾患もしくは障害の処置に適切である循環半減期をナノ粒子に持たせることができる。例えば、ある実施形態において、非官能化ポリマーのリガンド結合ポリマーに対するモル比は、約０．０１〜約０．１の範囲であり、別の実施形態では、例えば０．０２５などの、約０．０１〜約０．０５の範囲である。さらに、非官能化ポリマーは、いくつかの実施形態では、網内系（ＲＥＳ）による循環系からのクリアランス速度を低下させることもある。したがって、非官能化ポリマーは、投与されたときに体中を巡ることができるようにしうる特性を粒子に備えさせることができる。いくつかの実施形態において、非官能化ポリマーは、本来であれば高いリガンド濃度のバランスを取ることもでき、そうでなければその高いリガンド濃度によって対象によるクリアランスは加速され、その結果、標的細胞への送達がより少なくなりうる。
【０１５７】
別の実施形態において、非官能化ポリマーのリガンド結合ポリマーに対するモル比は、約０．０１〜約０．１の範囲であり、別の実施形態では、例えば０．０２５などの、約０．０１〜約０．０５の範囲である。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するナノ粒子は、ナノ粒子の全ポリマー組成（すなわち、官能化＋非官能化ポリマー）のおおよそ０．１〜約５０、例えば約０．１〜約３０、例えば約０．１〜約２０、例えば約０．１〜約１０モルパーセントの範囲を構成するリガンドに結合している官能化ポリマーを含むことがある。別の実施形態では、１つまたはそれ以上の低分子量リガンドと（例えば、共有結合で（すなわち、リンカー（例えばアルキレンリンカー）によって）または結合で）結合しているポリマーを含むナノ粒子であって、低分子量リガンドの全ポリマーに対する重量パーセントが約０．００１〜約５、例えば約０．００１〜約２、例えば約０．００１〜約１の範囲であるナノ粒子も、本明細書において開示する。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するナノ粒子は、ナノ粒子の全ポリマー組成（すなわち、官能化＋非官能化ポリマー）の０．１〜５０、例えば０．１〜３０、例えば０．１〜２０、例えば０．１〜１０モルパーセントの範囲を構成するリガンドに結合している官能化ポリマーを含むことがある。１つまたはそれ以上の低分子量リガンドと結合しているポリマーを含むナノ粒子であって、低分子量リガンドの全ポリマーに対する重量パーセントが０．００１〜５、例えば０．００１〜２、例えば０．００１〜１の範囲であるナノ粒子も、本明細書において開示する。
【０１６０】
一般に、「ナノ粒子」は、１０００ｎｍ未満、例えば、約１０ｎｍ〜約２００ｎｍの直径を有する任意の粒子を指す。開示する治療用ナノ粒子は、約６０〜約１２０ｎｍ、または約７０〜約１２０ｎｍ、または約８０〜約１２０ｎｍ、または約９０〜約１２０ｎｍ、または約１００〜約１２０ｎｍ、または約６０〜約１３０ｎｍ、または約７０〜約１３０ｎｍ、または約８０〜約１３０ｎｍ、または約９０〜約１３０ｎｍ、または約１００〜約１３０ｎｍ、または約１１０〜約１３０ｎｍ、または約６０〜約１４０ｎｍ、または約７０〜約１４０ｎｍ、または約８０〜約１４０ｎｍ、または約９０〜約１４０ｎｍ、または約１００〜約１４０ｎｍ、または約１１０〜約１４０ｎｍ、または約６０〜約１５０ｎｍ、または約７０〜約１５０ｎｍ、または約８０〜約１５０ｎｍ、または約９０〜約１５０ｎｍ、または約１００〜約１５０ｎｍ、または約１１０〜約１５０ｎｍ、または約１２０〜約１５０ｎｍの範囲の直径を有するナノ粒子を含むことがある。
【０１６１】
開示する治療用ナノ粒子は、６０〜１２０ｎｍ、または７０〜１２０ｎｍ、または８０〜１２０ｎｍ、または９０〜１２０ｎｍ、または１００〜１２０ｎｍ、または６０〜１３０ｎｍ、または７０〜１３０ｎｍ、または８０〜１３０ｎｍ、または９０〜１３０ｎｍ、または１００〜１３０ｎｍ、または１１０〜１３０ｎｍ、または６０〜１４０ｎｍ、または７０〜１４０ｎｍ、または８０〜１４０ｎｍ、または９０〜１４０ｎｍ、または１００〜１４０ｎｍ、または１１０〜１４０ｎｍ、または６０〜１５０ｎｍ、または７０〜１５０ｎｍ、または８０〜１５０ｎｍ、または９０〜１５０ｎｍ、または１００〜１５０ｎｍ、または１１０〜１５０ｎｍ、または１２０〜１５０ｎｍの範囲の直径を有するナノ粒子を含むことがある。
【０１６２】
ポリマー
いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、ポリマーマトリックスおよび治療剤を含むことがある。いくつかの実施形態では、治療剤および／または標的部分（すなわち、低分子量リガンド）をポリマーマトリックスの少なくとも一部と会合させることができる。例えば、いくつかの実施形態では、標的化部分（例えばリガンド）をポリマーマトリックスの表面と共有結合で会合させることができる。いくつかの実施形態において、共有結合性会合は、リンカーによって媒介される。治療剤をポリマーマトリックスの表面と会合させることができ、ポリマーマトリックス内に封入することができ、ポリマーマトリックスによって包囲することができ、および／またはポリマーマトリックス全体にわたって分散させることができる。
【０１６３】
広範なポリマー、およびそれらから粒子を形成する方法は、薬物送達技術分野において公知である。いくつかの実施形態において、本開示は、少なくとも２つの高分子を有するナノ粒子であって、第１の高分子が、低分子量リガンド（例えば標的化部分）と結合している第１のポリマーを含み；第２の高分子が、標的化部分と結合していない第２のポリマーを含む、ナノ粒子に関する。ナノ粒子は、１つまたはそれ以上のさらなる、非官能化ポリマーを場合により含むことができる。
【０１６４】
任意の好適なポリマーを本開示ナノ粒子に使用することができる。ポリマーは、天然ポリマーであってもよく、または非天然（合成）ポリマーであってもよい。ポリマーは、ホモポリマーであってもよく、または２つもしくはそれ以上のモノマーを含むコポリマーであってもよい。配列の点からは、コポリマーは、ランダムであることもあり、ブロックであることもあり、またはランダム配列とブロック配列の組合せを含むこともある。概して、ポリマーは、有機ポリマーである。
【０１６５】
用語「ポリマー」には、本明細書において用いる場合、当技術分野において用いられているようなその通常の意味、すなわち、共有結合によって連結されている１つまたはそれ以上の繰り返し単位（モノマー）を含む分子構造、が与えられる。繰り返し単位は、すべて同一であることもあり、または場合によっては、１タイプより多くのタイプの繰り返し単位がポリマー内に存在することもある。場合によっては、ポリマーは、生物学的に誘導される、すなわち、バイオポリマーであることがある。非限定的な例としては、ペプチドまたはタンパク質が挙げられる。場合によっては、さらなる部分、例えば、下で説明するものなどの生物学的部分も、ポリマー内に存在することがある。１タイプより多くのタイプの繰り返し単位がポリマー内に存在する場合には、ポリマーは「コポリマー」と言われる。ポリマーを用いるいずれの実施形態においても、用いるポリマーが場合によってはコポリマーであることもあることは理解されるはずである。コポリマーを形成する繰り返し単位は、いかように配列されていてもよい。例えば、繰り返し単位は、ランダムな順序で配列されてこともあり、交互順序で配列されていることもあり、またはブロックコポリマーとして、すなわち、第１の繰り返し単位（例えば第１のブロック）を各々が含む１つまたはそれ以上の領域、および第２の繰り返し単位（例えば第２のブロック）を各々が含む１つまたはそれ以上の第２の領域などを含む、ブロックコポリマーとして、配列されていることもある。ブロックコポリマーは、２つの別個のブロックを有することもあり（ジブロックコポリマー）、３つの別個のブロックを有することもあり（トリブロックコポリマー）、またはそれ以上の数の別個のブロックを有することもある。
【０１６６】
開示する粒子は、コポリマーを含むことができ、コポリマーは、いくつかの実施形態では、通常は２つまたはそれ以上のポリマーの互いの共有結合によって、互いに会合している２つまたはそれ以上のポリマー（例えば本明細書に記載するもの）を表す。したがって、コポリマーは、互いに結合してブロックコポリマーを形成している第１のポリマーと第２のポリマーを含み、第１のポリマーは、ブロックコポリマーの第１のブロックであることができ、第２のポリマーはブロックコポリマーの第２のブロックであることができる。もちろん、ブロックコポリマーが、場合によってはポリマーの複数のブロックを含有することもあること、ならびに本明細書において用いる場合の「ブロックコポリマー」が、単一の第１のブロックおよび単一の第２のブロックのみを有するブロックコポリマーのみに限定されないことは、当業者には理解されるであろう。例えば、ブロックコポリマーは、第１のポリマーを含む第１のブロック、第２のポリマーを含む第２のブロック、および第３のポリマーまたは第１のポリマーを含む第３のブロックなどを含むことがある。場合によっては、ブロックコポリマーは、第１のポリマーの第１のブロック、および第２のポリマーの第２のブロック（および特定の場合、第３のブロック、第４のブロックなど）を任意の数含有することができる。加えて、ブロックコポリマーを場合によっては他のブロックコポリマーから形成することもできることに留意すべきである。例えば、第１のブロックコポリマーを別のポリマー（ホモポリマー、バイオポリマー、別のブロックコポリマーなどであってもよい）に結合させて複数のタイプのブロックを含有する新たなブロックコポリマーを形成してもよく、および／または他の部分に（例えば非高分子部分に）結合させてもよい。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、ポリマー（例えば、コポリマー、例えばブロックコポリマー）は、両親媒性であることができ、すなわち、親水性部分と疎水性部分、または相対的に親水性の部分と相対的に疎水性の部分を有することができる。親水性ポリマーは、一般に水を引き寄せるものであることができ、疎水性ポリマーは、一般に水を撥くものであることができる。親水性または疎水性ポリマーは、例えば、ポリマーの試料を製造すること、そして水とのその接触角を測定することによって同定することができる（概して、ポリマーは６０°未満の接触角を有することになり、その一方で疎水性ポリマーは約６０°より大きい接触角を有することになる）。場合によっては、２つまたはそれ以上のポリマーの親水性を互いに相対して測定してもよく、すなわち、第１のポリマーは、第２のポリマーより親水性が高いことがある。例えば、第１のポリマーは、第２のポリマーより小さい接触角を有することもある。
【０１６８】
１セットの実施形態において、本明細書において企図されるポリマー（例えば、コポリマー、例えばブロックコポリマー）は、生体適合性ポリマー、すなわち、生きている対象に挿入または注射されたとき有害な応答を通常は誘導しないポリマー、例えば、免疫系による、例えばＴ細胞応答による、有意な炎症および／またはポリマーに対する急性拒絶反応がないポリマーを含む。したがって、本明細書において企図される治療用粒子は、非免疫原性であることができる。本明細書において用いる場合の非免疫原性という用語は、循環抗体、Ｔ細胞または反応性免疫細胞を通常は全くまたは最小レベルしか惹起しない、および個体において個体自体に対する免疫応答を通常は惹起しない、天然状態の内因性増殖因子を指す。
【０１６９】
生体適合性は、免疫系の少なくとも一部分による物質に対する急性拒絶反応を概して指す。すなわち、対象に埋め込まれた非生体適合性物質は、対象において免疫応答を誘発し、この免疫応答は、免疫系が物質に対する拒絶反応を十分に制御することができないほど重篤であることがあり、また多くの場合、物質を対象から除去しなければならないほどのものである。生体適合性を判定するための１つの簡単な試験は、インビトロでの細胞へのポリマーの曝露である；生体適合性ポリマーは、中等度の濃度で、例えば５０マイクログラム／１０６細胞の濃度で、有意な細胞死をもたらすことに通常はならないポリマーである。例えば、生体適合性ポリマーは、線維芽細胞または上皮細胞などの細胞に曝露されたとき、このような細胞によって貪食されたまたは別様に取り込まれた場合でさえ、約２０％未満の細胞死しか引き起こさないだろう。様々な実施形態において有用でありうる生体適合性ポリマーの非限定的な例としては、ポリジオキサノン（ＰＤＯ）、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリヒドロキシブチレート、ポリ（グリセロールセバケート）、ポリグリコリド（すなわち、ポリ（グリコール）酸）（ＰＧＡ）、ポリラクチド（すなわち、ポリ（乳）酸）（ＰＬＡ）、ポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸（ＰＬＧＡ）、ポリカプロラクトン、またはこれらのおよび／もしくは他のポリマーを含むコポリマーもしくは誘導体が挙げられる。
【０１７０】
特定の実施形態において、企図される生体適合性ポリマーは、生分解性であることがあり、すなわち、ポリマーは、体内などの生理的環境の中で化学的におよび／または生物学的に分解することができる。本明細書において用いる場合、「生分解性」ポリマーは、細胞に導入されたとき、細胞対する有意な毒性作用のない細胞が再使用または廃棄することができる成分へと、細胞機構によって破壊される（生物学的分解性）、および／または加水分解などの化学プロセスによって破壊される（化学的分解性）ポリマーである。一実施形態において、生分解性ポリマーおよびそれらの分解副生成物は、生体適合性であることができる。
【０１７１】
本明細書に開示する粒子は、ＰＥＧを含有することもあり、または含有しないこともある。加えて、特定の態様は、ポリ（エステル−エーテル）、例えば、エステル結合（例えば、Ｒ１００−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ１結合）およびエーテル結合（例えば、Ｒ１−Ｏ−Ｒ１結合）（ここで、Ｒ１００およびＲ１は、独立してヒドロカルビル部分であり、これらのヒドロカルビル部分は、場合により置換されていてもよく、および同じであってもまたは異なってもよい）によって連結されている繰り返し単位を有するポリマー、を含有するコポリマーに関することがある。いくつかの実施形態では、カルボン酸基を含有する生分解性ポリマー、例えば加水分解性ポリマーをポリ（エチレングリコール）繰り返し単位と結合させてポリ（エステル−エーテル）を形成することがある。ポリ（エチレングリコール）繰り返し単位を含有するポリマー（例えば、コポリマー、例えばブロックコポリマー）を「ＰＥＧ化」ポリマーと呼ぶこともできる。
【０１７２】
例えば、企図されるポリマーは、（例えば対象体内で）水に曝露されると自発的に加水分解するものであることがあり、またはポリマーは、熱に曝露されると（例えば約３７℃の温度で）分解することがある。ポリマーの分解は、使用されるポリマーまたはコポリマーに依存して、様々な速度で起こることがある。例えば、ポリマーの半減期（ポリマーの５０％をモノマーにおよび／または他の非高分子部分に分解することができる時間）は、そのポリマーに依存して、およそ数日、数週間、数カ月または数年であることがある。ポリマーは、例えば、酵素活性または細胞機構によって、場合によっては例えば（例えば比較的低いｐＨを有する）リゾチームへの曝露によって、生物学的に分解されることもある。場合によっては、ポリマーは、細胞に対する有意な毒性作用のない細胞が再使用または廃棄することができる、モノマーおよび／または他の非高分子材料に破壊されることがある（例えば、ポリラクチドは加水分解されて乳酸を形成することがあり、ポリグリコリドは加水分解されてグリコール酸を形成することがあるなど）。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、ポリマーはポリエステルであることがあり、ポリエステルには、本明細書では総称して「ＰＬＧＡ」と呼ぶ、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）などの、乳酸単位とグリコール酸単位を含むコポリマー；ならびに本明細書では「ＰＧＡ」と呼ぶ、グリコール単位を含むホモポリマー、ならびに本明細書では総称して「ＰＬＡ」と呼ぶ、ポリ−Ｌ−乳酸、ポリ−Ｄ−乳酸、ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸、ポリ−Ｌ−ラクチド、ポリ−Ｄ−ラクチドおよびポリ−Ｄ，Ｌ−ラクチドなどの、乳酸単位を含むホモポリマーが含まれる。いくつかの実施形態において、例示的ポリエステルとしては、例えば、ポリヒドロキシ酸；ラクチドおよびグリコリドのＰＥＧ化ポリマーおよびコポリマー（例えば、ＰＥＧ化ＰＬＡ、ＰＥＧ化ＰＧＡ、ＰＥＧ化ＰＬＧＡ、およびこれらの誘導体）が挙げられる。いくつかの実施形態において、ポリエステルとしては、例えば、ポリ無水物、ポリ（オルトエステル）、ＰＥＧ化ポリ（オルトエステル）、ポリ（カプロラクトン）、ＰＥＧ化ポリ（カプロラクトン）、ポリリシン、ＰＥＧ化ポリリシン、ポリ（エチレンイミン）、ＰＥＧ化ポリ（エチレンイミン）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リシン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グリコール酸］、およびこれらの誘導体が挙げられる。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、ポリマーは、ＰＬＧＡであることがある。ＰＬＧＡは、乳酸とグリコール酸の生体適合性かつ生体分解性コポリマーであり、様々な形態のＰＬＧＡが乳酸：グリコール酸比によって特徴づけられる。乳酸は、Ｌ−乳酸、Ｄ−乳酸、またはＤ，Ｌ−乳酸であることがある。乳酸−グリコール酸比を変えることによってＰＬＧＡの分解速度を調整することができる。いくつかの実施形態において、ＰＬＧＡは、おおよそ８５：１５、おおよそ７５：２５、おおよそ６０：４０、おおよそ５０：５０、おおよそ４０：６０、おおよそ２５：７５、またはおおよそ１５：８５の乳酸：グリコール酸モル比を特徴とすることができる。いくつかの実施形態では、粒子のポリマー（例えば、ＰＬＧＡブロックコポリマーまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマー）内の乳酸モノマーのグリコール酸モノマーに対するモル比を選択して水取り込みなどの様々なパラメーターについて最適化してもよく、治療剤放出および／またはポリマー分解速度を最適化することできる。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、ポリマーは、１つまたはそれ以上のアクリルポリマーであることがある。特定の実施形態において、アクリルポリマーとしては、例えば、アクリル酸およびメタクリル酸コポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（メタクリル酸ポリアクリルアミド）、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、グリシジルメタクリレートコポリマー、ポリシアノアクリレート、および前述のポリマーの１つまたはそれ以上を含む組合せが挙げられる。アクリルポリマーは、第四級アンモニウム基の含有量が少ない、アクリル酸エステルおよびメタクリル酸エステルの完全重合コポリマーを含むこともある。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、ポリマーは、カチオン性ポリマーであることができる。一般に、カチオン性ポリマーは、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはそれらの誘導体）の負電荷を有する鎖を縮合および／または保護することができる。アミン含有ポリマー、例えば、ポリ（リシン）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）およびポリ（アミドアミン）デンドリマーは、開示する粒子におけるいくつかの実施形態での使用が企図される。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、ポリマーは、カチオン側鎖を有する分解性ポリエステルであることができる。これらのポリエステルの例としては、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リシン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）が挙げられる。
【０１７８】
ＰＥＧは、例えばリガンドに結合していない場合、末端にあることもあり、末端基を含むこともあることが企図される。例えば、ＰＥＧは、ヒドロキシル、メトキシもしくは他のアルコキシル基、メチルもしくは他のアルキル基、アリール基、カルボン酸、アミン、アミド、アセチル基、グアニジノ基、またはイミダゾールで終わることがある。他の企図される末端基としては、アジド、アルキン、マレイミド、アルデヒド、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、アルコキシアミンまたはチオール部分が挙げられる。
【０１７９】
当業者は、例えば、ポリマーをアミンで終わるＰＥＧ基と反応させるためのＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）およびＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）の使用、開環重合技術（ＲＯＭＰ）などよる、ポリマーをＰＥＧ化する方法および技術について知っているであろう。
【０１８０】
一実施形態において、ポリマーの分子量（または例えば分子量比、例えばコポリマーの異なるブロックの分子量比）を、本明細書に開示の有効な処置のために最適化することができる。例えば、ポリマーの分子量は、粒子分解速度（例えば、生分解性ポリマーの分子量を調整することができる場合）、溶解度、水取り込み、および薬物放出速度に影響を及ぼすことがある。例えば、ポリマーの分子量（または例えば分子量比、例えばコポリマーの異なるブロックの分子量比）は、処置される対象体内で（数時間から１〜２週間、３〜４週間、５〜６週間、７〜８週間などにわたる）妥当な期間内に粒子が生分解性するように調整することができる。
【０１８１】
開示する粒子は、例えば、ＰＥＧとＰＬ（Ｇ）Ａのジブロックコポリマーであって、例えば、ＰＥＧ部分が約１，０００〜２０，０００、例えば約２，０００〜２０，０００、例えば約２〜約１０，０００の数平均分子量を有することがあり、ＰＬ（Ｇ）Ａ部分が約５，０００〜約２０，０００、または約５，０００〜１００，０００、例えば約２０，０００〜７０，０００、例えば約１５，０００〜５０，０００の数平均分子量を有することがある、ジブロックコポリマーを含むことができる。
【０１８２】
例えば、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーもしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを約１０〜約９９重量パーセント、またはポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーもしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを約５０〜約９９．７５重量パーセント、約２０〜約８０重量パーセント、約４０〜約８０重量パーセント、もしくは約３０〜約５０重量パーセント、もしくは約７０〜約９０重量パーセント、約７０〜約９９．７５重量パーセント、約８０〜約９９．７５重量パーセント、約７０〜約８０重量パーセント、もしくは約８５〜約９５重量パーセント含む、例示的治療用ナノ粒子をここで開示する。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーもしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを約５０重量パーセント、約５５重量パーセント、約６０重量パーセント、約６５重量パーセント、約７０重量パーセント、約７５重量パーセント、約８０重量パーセント、約８５重量パーセント、約９０重量パーセントまたは約９５重量パーセント含む。例示的ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約１５〜約２０ｋＤａ、または約１０〜約２５ｋＤａの範囲の数平均分子量のポリ（乳）酸と、約４ｋＤａ〜約６ｋＤａ、約４ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、約６ｋＤａ〜約１０ｋＤａまたは約２ｋＤａ〜約１０ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールとを含むことができる。
【０１８３】
別の実施形態では、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーもしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを１０〜９９重量パーセント、またはポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーもしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを５０〜９９．７５重量パーセント、２０〜８０重量パーセント、４０〜８０重量パーセント、もしくは３０〜５０重量パーセント、もしくは７０〜９０重量パーセント、７０〜９９．７５重量パーセント、８０〜９９．７５重量パーセント、７０〜８０重量パーセント、もしくは８５〜９５重量パーセント含む、例示的治療用ナノ粒子をここで開示する。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーもしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを５０重量パーセント、５５重量パーセント、６０重量パーセント、６５重量パーセント、７０重量パーセント、７５重量パーセント、８０重量パーセント、８５重量パーセント、９０重量パーセントまたは９５重量パーセント含む。例示的ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、１５〜２０ｋＤａ、または１０〜２５ｋＤａの範囲の数平均分子量のポリ（乳）酸と、４ｋＤａ〜６ｋＤａ、４ｋＤａ〜１０ｋＤａ、６ｋＤａ〜１０ｋＤａまたは２ｋＤａ〜１０ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールとを含むことができる。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．６〜約０．９５、いくつかの実施形態では、約０．７〜約０．９、いくつかの実施形態では、約０．６〜約０．８、いくつかの実施形態では、約０．７〜約０．８、いくつかの実施形態では、約０．７５〜約０．８５、いくつかの実施形態では約０．８〜約０．９、およびいくつかの実施形態では、約０．８５〜約０．９５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有することがある。コポリマーのポリ（乳）酸成分の数平均分子量をポリ（乳）酸成分の数平均分子量とポリ（エチレン）グリコール成分の数平均分子量の合計で割ることによってポリ（乳）酸数平均分子量分率を算出することができることは理解されるはずである。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、０．６〜０．９５、いくつかの実施形態では、０．７〜０．９、いくつかの実施形態では、０．６〜０．８、いくつかの実施形態では、０．７〜０．８、いくつかの実施形態では、０．７５〜０．８５、いくつかの実施形態では０．８〜０．９、およびいくつかの実施形態では、０．８５〜０．９５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有することがある。
【０１８６】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を約１：７の重量比で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を約１：４の重量比で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を約１：１４の重量比で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を約１：３の重量比で含む。
【０１８７】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を１：７の重量比で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を１：４の重量比で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を１：１４の重量比で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（３，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を１：３の重量比で含む。
【０１８８】
開示するナノ粒子は、場合により、ポリ（乳）酸もしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸（ＰＥＧを含まないもの）を約１〜約５０重量パーセント含むことがあり、または場合により、ポリ（乳）酸もしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸を約１〜約５０重量パーセント、もしくは約１０〜約５０重量パーセント、もしくは約３０〜約５０重量パーセント含むことがある。例えば、ポリ（乳）酸またはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸は、約５〜約１５ｋＤａ、または約５〜約１２ｋＤａの範囲の数平均分子量を有することがある。例示的ＰＬＡは、約５〜約１０ｋＤａの範囲の数平均分子量を有することがある。例示的ＰＬＧＡは、約８〜約１２ｋＤａの範囲の数平均分子量を有することがある。
【０１８９】
開示するナノ粒子は、場合により、ポリ（乳）酸もしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸（ＰＥＧを含まないもの）を１〜５０重量パーセント含むことがあり、または場合により、ポリ（乳）酸もしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸を１〜５０重量パーセント、もしくは１０〜５０重量パーセント、もしくは３０〜５０重量パーセント含むことがある。例えば、ポリ（乳）酸またはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸は、５〜１５ｋＤａ、または５〜１２ｋＤａの範囲の数平均分子量を有することがある。例示的ＰＬＡは、５〜１０ｋＤａの範囲の数平均分子量を有することがある。例示的ＰＬＧＡは、８〜１２ｋＤａの範囲の数平均分子量を有することがある。
【０１９０】
治療用ナノ粒子は、いくつかの実施形態において、約１０〜約３０重量パーセント、約１０〜約２５重量パーセント、約１０〜約２０重量パーセント、約１０〜約１５重量パーセント、約１５〜約２０重量パーセント、約１５〜約２５重量パーセント、約２０〜約２５重量パーセント、約２０〜約３０重量パーセント、または約２５〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含有することがあり、ポリ（エチレン）グリコールは、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、またはポリ（エチレン）グリコールホモポリマーとして存在することがある。特定の実施形態では、ナノ粒子のポリマーを脂質と結合させることができる。ポリマーは、例えば、脂質を末端に有するＰＥＧであることができる。
【０１９１】
治療用ナノ粒子は、いくつかの実施形態において、１０〜３０重量パーセント、１０〜２５重量パーセント、１０〜２０重量パーセント、１０〜２５重量パーセント、１０〜１５重量パーセント、１５〜２０重量パーセント、１５〜２５重量パーセント、２０〜２５重量パーセント、２０〜３０重量パーセント、または２５〜３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含有することがあり、ポリ（エチレン）グリコールは、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、またはポリ（エチレン）グリコールホモポリマーとして存在することがある。
【０１９２】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子はポリマーＰＬＡ−ＰＥＧを含み、ＰＬＡ−ＰＥＧのモル比は約５：１である。他の実施形態において、治療用ナノ粒子はポリマーＰＬＡ−ＰＥＧを含み、ＰＬＡ−ＰＥＧのモル比は５：１である。
【０１９３】
標的化部分
いくつかの実施形態では、任意選択の標的化部分、すなわち、生物学的実体、例えば膜成分、細胞表面受容体、抗原などと結合または別様に会合することができる部分、を含むことがあるナノ粒子を本明細書において提供する。粒子の表面に存在する標的化部分は、粒子を特定の標的部位、例えば腫瘍、疾患部位、組織、器官、細胞型など、に局在化させることができる。したがって、それ故、ナノ粒子は、「標的特異的」であることができる。したがって、場合によっては、薬物または他のペイロードを粒子から放出し、特定の標的部位と局所的に相互作用させることもできる。
【０１９４】
一実施形態において、開示するナノ粒子は、低分子量リガンドである標的化部分を含む。用語「結合する」または「結合（すること）」は、本明細書において用いる場合、生化学的、生理的および／または化学的相互作用を含む（しかしこれらに限定されない）特異的または非特異的結合または相互作用に概して起因して相互親和性または結合能力を示す分子または部分の対応するペア間の相互作用を指す。「生物学的結合」は、タンパク質、核酸、糖タンパク質、炭水化物、ホルモンなどをはじめとする分子のペア間で起こる相互作用のタイプを定義する。用語「結合パートナー」は、特定の分子との結合を受けることができる分子を指す。「特異的結合」は、他の類似した生物学的実体より実質的に高度に結合パートナー（もしくは限定数の結合パートナー）と結合することができるまたは結合パートナー（もしくは限定数の結合パートナー）を認識することができる分子、例えばポリヌクレオチドを指す。１セットの実施形態において、標的化部分は、（解離定数によって測定して）約１マイクロモル未満、少なくとも約１０マイクロモル、または少なくとも約１００マイクロモルの親和性を有する。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、標的化部分は、（解離定数によって測定して）１マイクロモル未満、少なくとも１０マイクロモル、または少なくとも１００マイクロモルの親和性を有する。
【０１９６】
例えば、標的化部分は、使用される標的化部分に依存して、対象の体内の腫瘍（例えば固形腫瘍）、疾患部位、組織、器官、細胞型などに粒子を局在化させることができる。例えば、低分子量リガンドは、固形腫瘍、例えば乳腺腫瘍もしくは前立腺腫瘍または乳癌もしくは前立腺癌細胞に局在化することができる。対象は、ヒトであってもよく、または非ヒト動物であってもよい。対象の例としては、哺乳類、例えばイヌ、ネコ、ウマ、ロバ、ウサギ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラット、マウス、モルモット、ハムスター、霊長目、ヒトなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９７】
企図される標的化部分は、小分子を含むことがある。特定の実施形態において、用語「小分子」は、比較的低分子量を有し、タンパク質、ペプチドまたは核酸ではない有機化合物を、天然に存在するものであろうと、または（例えば化学合成によって）人工的に生成されたものであろうと指す。小分子は、概して、複数の炭素−炭素結合を有する。特定の実施形態において、小分子は、約２０００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以下のサイズである。いくつかの実施形態において、小分子は、約１５００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以下、または約１０００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以下である。いくつかの実施形態において、小分子は、約８００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以下、５００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以下、例えば、約１００ｇ／ｍｏｌ〜約６００ｇ／ｍｏｌ、または約２００ｇ／ｍｏｌ〜約５００ｇ／ｍｏｌである。
【０１９８】
特定の実施形態において、小分子は、２０００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以下のサイズである。いくつかの実施形態において、小分子は、１５００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以下、または１０００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以下である。いくつかの実施形態において、小分子は、８００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以下、５００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以下、例えば、１００ｇ／ｍｏｌ〜６００ｇ／ｍｏｌ、または２００ｇ／ｍｏｌ〜５００ｇ／ｍｏｌである。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、低分子量リガンドは、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶのもの：
【化５】
2018154643.tif 000006
およびそのエナンチオマー、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ジアステレオマーまたはラセミ体であり；
式中、ｍおよびｎは、各々独立して、０、１、２または３であり；ｐは、０または１であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、置換または非置換アルキル（例えばＣ１〜１０−アルキル、Ｃ１〜６−アルキル、またはＣ１〜４−アルキル）、置換または非置換アリール（例えばフェニルまたはピリジニル）、およびこれらの任意の組合せから選択され；ならびにＲ３は、ＨまたはＣ１〜６−アルキル（例えばＣＨ３）である。
【０２００】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶの化合物について、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４またはＲ５は、ナノ粒子への結合点、例えば、開示するナノ粒子の一部を形成するポリマー、例えばＰＥＧ、への結合点を含む。結合点は、共有結合、イオン結合、水素結合、化学的吸着および物理的吸着を含む吸着により形成される結合、ファンデルワールス結合から形成される結合、または分散力によって形成されることがある。例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４またはＲ５がアニリンまたはＣ１〜６−アルキル−ＮＨ２基と定義される場合、これらの官能基のいずれかの水素（例えばアミノ水素）を除去してもよく、その結果、低分子量リガンドをナノ粒子のポリマーマトリックス（例えば、ポリマーマトリックスのＰＥＧブロック）に共有結合させる。本明細書において用いる場合、用語「共有結合」は、少なくとも１つの電子対を共有することによって形成された２原子間の結合を指す。式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの特定の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、Ｃ１〜６−アルキルもしくはフェニル、またはＣ１〜６−アルキルもしくはフェニルの任意の組合せであり、これらは、独立して、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２またはＣＯ２Ｈで１回またはそれ以上置換されており、アルキル基にＮ（Ｈ）、ＳまたはＯが割り込んでいることもある。別の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、ＣＨ２−Ｐｈ、（ＣＨ２）２−ＳＨ、ＣＨ２−ＳＨ、（ＣＨ２）２Ｃ（Ｈ）（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈ、ＣＨ２Ｃ（Ｈ）（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈ、ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ２）２Ｃ（Ｈ）（ＳＨ）ＣＯ２Ｈ、ＣＨ２−Ｎ（Ｈ）−Ｐｈ、Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ、またはＯ−（ＣＨ２）２−Ｐｈであり、式中、ｐｈはフェニルであり、各ｐｈは、独立して、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＯ２ＨまたはＳＨで１回またはそれ以上置換されていることがある。これらの式について、ＮＨ２、ＯＨまたはＳＨ基は、ナノ粒子への共有結合点（例えば、−Ｎ（Ｈ）−ＰＥＧ、−Ｏ−ＰＥＧ、または−Ｓ−ＰＥＧ）として役立つ。
【０２０１】
例示的リガンドとしては、次のもの：
【化６】
2018154643.tif 000007
およびこれらのエナンチオマー、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ジアステレオマーまたはラセミ体が挙げられ、ここで、ＮＨ２、ＯＨもしくはＳＨ基は、ナノ粒子への共有結合点（例えば、−Ｎ（Ｈ）−ＰＥＧ、−Ｏ−ＰＥＧ、もしくは−Ｓ−ＰＥＧ）としての役立ち、または
【化７】
2018154643.tif 000008
はナノ粒子への結合点を示し、ここで、ｎは、１、２、３、４，５または６であり、Ｒは、ＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、（ＮＨ２、ＳＨ、ＯＨまたはＣＯ２Ｈで置換されている）Ｃ１〜６−アルキル、および（ＮＨ２、ＳＨ、ＯＨまたはＣＯ２Ｈで置換されている）フェニルからなる群から独立して選択され、Ｒは、ナノ粒子への共有結合点（例えば、−Ｎ（Ｈ）−ＰＥＧ、−Ｓ−ＰＥＧ、−Ｏ−ＰＥＧ、またはＣＯ２−ＰＥＧ）として役立つ。これらの化合物は、ＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、（ＮＨ２、ＳＨ、ＯＨもしくはＣＯ２Ｈで置換されている）Ｃ１〜６−アルキルまたは（ＮＨ２、ＳＨ、ＯＨもしくはＣＯ２Ｈで置換されている）フェニルでさらに置換されていることがあり、これらの官能基もまたナノ粒子への共有結合点として役立つことができる。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、前立腺または乳癌腫瘍などの固形腫瘍に関連する細胞を標的化するために使用することができる小分子標的化部分としては、ＰＳＭＡペプチダーゼ阻害剤、例えば２−ＰＭＰＡ、ＧＰＩ５２３２、ＶＡ−０３３、フェニルアルキルホスホンアミデートならびに／またはこれらの類似体および誘導体が挙げられる。いくつかの実施形態において、前立腺癌腫瘍に関連する細胞を標的化するために使用することができる小分子標的化部分としては、チオールおよびインドールチオール誘導体、例えば、２−ＭＰＰＡおよび３−（２−メルカプトエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸誘導体が挙げられる。いくつかの実施形態において、前立腺癌腫瘍に関連する細胞を標的化するために使用することができる小分子標的化部分としては、ヒドロキサメート誘導体が挙げられる。いくつかの実施形態において、前立腺癌腫瘍に関連する細胞を標的化するために使用することができる小分子標的化部分としては、ＰＢＤＡ系および尿素系阻害剤、例えば、ＺＪ４３、ＺＪ１１、ＺＪ１７、ＺＪ３８および／または、ならびにこれらの類似体および誘導体、アンドロゲン受容体標的化物質（ＡＲＴＡ）、ポリアミド、例えばプトレシン、スペルミンおよびスペルミジン、ＮＡＡＧペプチダーゼまたはＮＡＡＬＡＤアーゼとしても公知の酵素グルタミン酸カルボキシラーゼＩＩ（ＧＣＰＩＩ）の阻害剤が挙げられる。
【０２０３】
別の実施形態において、標的化部分は、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、葉酸受容体またはｔｏｌｌ受容体を標的化するリガンドであることができる。別の実施形態において、標的化部分は、葉酸塩、葉酸、またはＥＧＦＲ結合分子である。
【０２０４】
例えば、企図される標的化部分としては、核酸、ポリペプチド、糖タンパク質、炭水化物または脂質を挙げることができる。例えば、標的化部分は、細胞型特異的マーカーと結合する核酸標的化部分（例えば、アプタマー、例えばＡ１０アプタマー）であることができる。一般に、アプタマーは、ポリペプチドなどの特定の標的と結合するオリゴヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはその類似体もしくは誘導体）である。いくつかの実施形態において、標的化部分は、細胞表面受容体の天然に存在するリガンドまたは合成リガンド、例えば、増殖因子、ホルモン、ＬＤＬ、トランスフェリンなどであることがある。標的化部分は抗体であることができ、この抗体という用語は、抗体断片を含むことを意図したものである。抗体の特徴的部分、一本鎖標的化部分は、例えば、ファージディスプレーなどの手法を用いて同定することができる。
【０２０５】
本明細書に開示する標的化部分を、いくつかの実施形態では、開示するポリマーまたはコポリマー（例えばＰＬＡ−ＰＥＧ）に結合させることができ、このようなポリマー結合体は、開示するナノ粒子の一部を形成することがある。
【０２０６】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、さらに存在する標的化リガンドを有し、リガンドは、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬであり、式中、ＧＬは、以下の構造を有する：
【化８】
2018154643.tif 000009
【０２０７】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、ポリマー−薬物結合体を含むことがある。例えば、開示するポリマーまたはコポリマー（例えばＰＬＡ−ＰＥＧ）に薬物が結合されていることもあり、このようなポリマー−薬物結合体が、開示するナノ粒子の一部を形成することもある。例えば、開示する治療用ナノ粒子は、場合により、約０．２〜約３０重量パーセントのＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧを含むことがあり、ここで、ＰＥＧは薬物で官能化されている（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ−薬物）。
【０２０８】
別の例では、開示する治療用ナノ粒子は、場合により、０．２〜３０重量パーセントのＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧを含むことがあり、ここで、ＰＥＧは薬物で官能化されている（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ−薬物）。
【０２０９】
開示するポリマー結合体（例えば、ポリマー−リガンド結合体）をいずれの好適な結合技術を用いて形成してもよい。例えば、２つの化合物、例えば、標的化部分または薬物と生体適合性ポリマー（例えば生体適合性ポリマーおよびポリ（エチレングリコール））を、ＥＤＣ−ＮＨＳ化学（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド）、またはチオール官能化ポリエーテル、アミン官能化ポリエーテルもしくは同様に官能化されているポリエーテルの一方の末端に結合させることができるマレイミドまたはカルボン酸を含む反応などの技術を用いて、結合させてもよい。ポリマー−標的化部分結合体またはポリマー−薬物結合体を形成するための標的化部分または薬物とポリマーとの結合は、これらに限定されるものではないがジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、アセトンなどのような有機溶媒中で行うことができる。当業者は、常例的な実験以上のものを用いずに具体的な反応条件を決めることができる。
【０２１０】
別のセットの実施形態では、カルボン酸官能基を含むポリマー（例えば、ポリ（エステル−エーテル）化合物）とアミン官能基を有するポリマーまたは他の部分（例えば、標的化部分もしくは治療剤）とを反応させることによって結合反応を行うこともある。例えば、標的化部分、例えば、低分子量リガンド、または治療剤をアミンと反応させて、アミノ含有部分を形成してもよく、その後、そのアミン含有部分をポリマーのカルボン酸と結合させることができる。このような反応を一工程反応として行ってもよい。すなわち、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドまたはマレイミドなどの中間体を使用せずに結合を行う。いくつかの実施形態では、治療剤をアミン含有リンカーと反応させてアミン含有薬物を形成することがあり、その後、そのアミン含有薬物を上で説明したようにポリマーのカルボン酸に結合させることができる。アミン含有部分とカルボン酸を末端に有するポリマー（例えばポリ（エステル−エーテル）化合物）との結合反応は、１セットの実施形態では、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトン、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ピリジン、ジオキサンまたはジメチルスルホキシドなどの（しかしこれらに限定されない）有機溶媒に可溶化されたアミン含有部分を、カルボン酸を末端に有するポリマーを含有する溶液に添加することによって果たされることもある。カルボン酸を末端に有するポリマーは、これらに限定されるものではないがジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフランまたはアセトンなどの有機溶媒に含有されていることもある。アミン含有部分とカルボン酸を末端に有するポリマーの間の反応は、場合によっては自発的に起こることがある。このような反応後に未結合の反応体を洗い流してもよく、ポリマーを例えばエチルエーテル、ヘキサン、メタノールまたはエタノールなどの溶媒で沈殿させてもよい。特定の実施形態では、アルコール含有部分とポリマーのカルボン酸官能基の間に結合体を形成することもあり、この形成は、アミンとカルボン酸の結合体について上で説明したのと同様に果たすことができる。
【０２１１】
ナノ粒子の製造
本開示のもう１つの態様は、開示するナノ粒子を製造するシステムおよび方法に関する。いくつかの実施形態では、２つまたはそれ以上の異なるポリマー（例えば、コポリマー、例えばブロックコポリマー）を異なる比で使用し、ポリマー（例えば、コポリマー、例えばブロックコポリマー）から粒子を生成することによって、粒子の特性を制御する。例えば、１つのポリマー（例えば、コポリマー、例えばブロックコポリマー）は、低分子量リガンドを含むことがあり、その一方で別のポリマー（例えば、コポリマー、例えばブロックコポリマー）は、その生体適合性、および／または結果として得られる粒子の免疫原性を制御するその能力のために選択されることがある。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子製造プロセス（例えば、下で論じるようなナノ沈殿プロセスまたはナノエマルジョンプロセス）で使用される溶媒は、このプロセスを用いて製造されるナノ粒子に有利な特性を付与することができる疎水性の酸を含むことがある。上で論じたように、場合によっては、疎水性の酸は、開示するナノ粒子の薬物負荷量を向上させることができる。さらに、いくつかの事例では、開示するナノ粒子の放出制御特性を疎水性の酸の使用によって向上させることができる。場合によっては、疎水性の酸を、例えばプロセスに使用される有機溶液または水溶液に含めることもある。一実施形態では、治療剤を有機溶液および疎水性の酸および場合により１つまたはそれ以上のポリマーと合わせる。治療剤を溶解するために使用される溶液中の疎水性の酸濃度は上で論じており、例えば、約１重量パーセント〜約３０重量パーセント、または１重量パーセント〜３０重量パーセントなどの範囲であることがある。
【０２１３】
１セットの実施形態において、粒子は、１つまたはそれ以上のポリマーを含む溶液を用意する工程、および溶液をポリマー非溶媒と接触させて粒子を生成する工程によって形成される。溶液は、ポリマー非溶媒と混和性であってもよく、または不混和性であってもよい。例えば、アセトニトリルなどの水混和性液体がポリマーを含有することもあり、そのアセトニトリルと水（ポリマー非溶媒）とを、例えばこのアセトニトリルを制御された速度で水に注入することによって、接触させると粒子が形成される。溶液に含有されるポリマーは、ポリマー非溶媒と接触すると沈殿して、ナノ粒子などの粒子を形成することができる。２つの液体は、一方が、周囲温度および周囲圧力で少なくとも１０重量％のレベルまで他方に可溶でない場合、互いに「不混和性」であるまたは混和性でないと言われる。概して、有機溶液（例えば、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトン、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ピリジン、ジオキサン、ジメチルスルホキシドなど）および水性液体（例えば、水、または溶解した塩もしくは他の化学種を含有する水、細胞培地、生物学的媒体、エタノールなど）は、互いに対して不混和性である。例えば、第１の溶液を第２の溶液に（好適な速度またはスピードで）注入してもよい。場合によっては、ナノ粒子などの粒子は、第１の溶液が不混和性の第２の液体と接触すると形成されることがあり、例えば、第１の溶液を第２の液体に注入している間に接触によるポリマーの沈殿に起因してポリマーがナノ粒子を形成し、場合によっては、例えば、導入速度を注意深く制御し、比較的緩徐な速度に保ったとき、ナノ粒子が形成することもある。このような粒子形成の制御を、当業者は、常例的実験のみを用いて容易に最適化することができる。
【０２１４】
表面官能性、表面電荷、粒子径、ゼータ（ζ）電位、疎水性、免疫原性制御能力などのような特性は、開示する方法を用いて高度に制御することができる。例えば、粒子のライブラリーを合成し、スクリーニングして、粒子が粒子の表面に存在する部分（例えば、低分子量リガンド）について特異的密度を有することを可能ならしめる特定のポリマー比を有する粒子を同定する。これにより、過度の努力なしで、１つまたはそれ以上の特異的特性、例えば、特異的粒子径および特異的表面密度を有する粒子を製造することが可能になる。したがって、特定の実施形態は、このようなライブラリーを使用するスクリーニング技術はもちろん、このようなライブラリーを使用して同定される任意の粒子にも関する。加えて、同定をいずれの好適な方法によって行ってもよい。例えば、同定は、直接的もしくは間接的であってもよく、または定量的にもしくは定性的に進行してもよい。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、リガンド官能化ポリマー結合体の生成について説明したものに類似した手順を用いて、既製ナノ粒子を標的化部分で官能化する。例えば、第１のコポリマー（ＰＬＧＡ−ＰＥＧ、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）およびポリ（エチレングリコール））をプロトン化可能窒素含有治療剤と混合して粒子を形成する。その後、粒子を低分子量リガンドと会合させて、癌の処置に使用することができるナノ粒子を形成する。粒子を様々な量の低分子量リガンドと会合させてナノ粒子のリガンド表面密度を制御することができ、それによってナノ粒子の治療特性を変えることができる。さらに、例えば、分子量、ＰＥＧの分子量およびナノ粒子の表面電荷などのパラメーターを制御することにより、非常に精密に制御された粒子を得ることができる。
【０２１６】
別の実施形態では、ナノエマルジョンプロセス、例えば、図１、２Ａおよび２Ｂで表されるプロセスを提供する。例えば、治療剤、疎水性の酸、第１のポリマー（例えば、ジブロックコポリマー、例えばＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧ（これらはいずれも場合によりリガンドと結合していることがある））および任意選択の第２のポリマー（例えば、ＰＬ（Ｇ）Ａ−ＰＥＧまたはＰＬＡ）を有機溶液と合わせて第１の有機相を形成してもよい。このような第１の相は、約１〜約５０重量％の固形分、約５〜約５０重量％の固形分、約５〜約４０重量％の固形分、約１〜約１５重量％の固形分、または約１０〜約３０重量％の固形分を含むことがある。第１の有機相を第１の水溶液を合わせて第２の相を形成してもよい。有機溶液としては、例えば、トルエン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、イソプロピルアルコール、酢酸イソプロピル、ジメチルホルムアミド、塩化メチレン、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、ベンジルアルコール、Ｔｗｅｅｎ（商標）８０またはＳｐａｎ８０など、およびこれらの組合せを挙げることができる。ある実施形態において、有機相は、ベンジルアルコール、酢酸エチルおよびこれらの組合せを含むことがある。第２の相は、固形分約０．１から５０重量％まで、または約１から５０重量％まで、または約５から４０重量％まで、または約１から１５重量％までの範囲であることができる。水溶液は、コール酸ナトリウム、酢酸エチル、ポリ酢酸ビニルおよびベンジルアルコールのうちの１つまたはそれ以上の場合により併用での、水であることができる。いくつかの実施形態において、水性相のｐＨは、プロトン化された塩基性治療剤のｐＫａおよび／または疎水性の酸のｐＫａに基づいて選択されることがある。例えば、特定の実施形態において、治療剤は、プロトン化されたとき、第１のｐＫａを有することがあり、疎水性の酸は、第２のｐＫａを有することがあり、水性相は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有することがある。特定の他の実施形態において、水性相のｐＨは、第１のｐＫａと第２のｐＫａ間のほぼ等距離にあるｐＫａ単位に等しいことがある。
【０２１７】
別の実施形態において、第１の相は、１〜５０重量％の固形分、５〜５０重量％の固形分、５〜４０重量％の固形分、１〜１５重量％の固形分、または１０〜３０重量％の固形分を含むことがある。ある実施形態において、第２の相は、固形分０．１から５０重量％まで、または１から５０重量％まで、または５から４０重量％まで、または１から１５重量％までの範囲であることができる。特定の他の実施形態において、水性相のｐＨは、第１のｐＫａと第２のｐＫａ間の等距離にあるｐＫａ単位に等しいことがある。
【０２１８】
例えば、油相または有機相は、非溶媒（水）と部分的にしか混和できない溶媒を使用することがある。したがって、十分に低い比率で混合された場合、および／または有機溶媒で予め飽和された水を使用した場合、油相は液体のままである。油相を水溶液に乳化させて、液滴として、例えばホモジナイザーまたは超音波処理装置などの高エネルギー分散システムを使用してナノ粒子を剪断してもよい。別名「水相」として知られている、エマルジョンの水性部分は、コール酸ナトリウムからなり、酢酸エチルおよびベンジルアルコールで過飽和されている、界面活性剤溶液であることもある。いくつかの事例において、有機相（例えば、第１の有機相）は、塩基性治療剤を含むことがある。加えて、特定の実施形態において、水溶液（例えば、第１の水溶液）は、実質的に疎水性の酸を含むことがある。他の実施形態では、塩基性治療剤および実質的に疎水性の酸は両方とも有機相に溶解されていることがある。
【０２１９】
エマルジョン相を形成するための第２の相の乳化は、例えば、１工程または２工程の乳化工程で行われることがある。例えば、一次エマルジョンを製造し、その後、乳化させて微細エマルジョンを形成してもよい。一次エマルジョンは、例えば、単純混合、高圧ホモジナイザー、プローブ式超音波処理装置、撹拌棒、またはロータースターター式ホモジナイザーを使用して形成することができる。例えば、プローブ式超音波処理装置または高圧ホモジナイザーの使用により、例えば、ホモジナイザーに１、２、３回またはそれ以上通すことによって、一次エマルジョンを微細エマルジョンにしてもよい。例えば、高圧ホモジナイザーを使用する場合、用いる圧力は、約３０〜約６０ｐｓｉ、約４０〜約５０ｐｓｉ、約１０００〜約８０００ｐｓｉ、約２０００〜約４０００ｐｓｉ、約４０００〜約８０００ｐｓｉ、または約４０００〜約５０００ｐｓｉ、例えば、約２０００、２５００、４０００または５０００ｐｓｉであることがある。
【０２２０】
別の例では、高圧ホモジナイザーを使用する場合、用いる圧力は、３０〜６０ｐｓｉ、４０〜５０ｐｓｉ、１０００〜８０００ｐｓｉ、２０００〜４０００ｐｓｉ、４０００〜８０００ｐｓｉ、または４０００〜５０００ｐｓｉ、例えば、２０００、２５００、４０００または５０００ｐｓｉであることがある。
【０２２１】
場合によっては、エマルジョン中の小滴の非常に高い表面積対体積比を特徴としうる微細エマルジョン条件を、治療剤および疎水性の酸の溶解度を最大にするように選択し、所望のＨＩＰを形成することができる。特定の実施形態において、微細エマルジョン条件下では、溶解成分の平衡が非常に迅速に、すなわち、ナノ粒子の凝固より速く起こることができる。したがって、ＨＩＰの選択、例えば、プロトン化形態の治療剤と疎水性の酸とのｐＫａ差に基づくＨＩＰの選択、または微細エマルジョンのｐＨおよび／もしくはクエンチ溶液のｐＨなどの他のパラメーターの調整は、例えば、ナノ粒子から外への治療剤および／または疎水性の酸の拡散とは対照的にナノ粒子内でのＨＩＰの形成を規定することによって、ナノ粒子の薬物負荷量および放出特性に有意な影響を及ぼすことができる。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、第２の相を乳化させる前に、治療剤および実質的に疎水性の酸を第２の相に合わせることがある。いくつかの事例において、治療剤および実質的に疎水性の酸は、第２の相を乳化させる前に疎水性イオン対を形成することがある。他の実施形態において、第２の相の乳化中に、治療剤および実質的に疎水性の酸は、疎水性イオン対を形成することもある。例えば、第２の相を乳化するのと実質的に同時に治療剤および実質的に疎水性の酸を第２の相に合わせることがあり、例えば、治療剤および実質的に疎水性の酸を別々の溶液（例えば、２つの実質的に不混和性の溶液）に溶解することがあり、その後、乳化中にそれらの溶液を合わせる。別の例では、治療剤および実質的に疎水性の酸を別々の混和性溶液に溶解することがあり、その後、それらの溶液を乳化中の第２の相に供給する。
【０２２３】
溶媒の抽出を完了し、粒子を凝固させるために、溶媒蒸発または希釈のいずれかが必要とされることがある。抽出の動態のより良い制御、およびより自在に拡大縮小できるプロセスのために、水性クエンチによる溶媒希釈を用いてもよい。例えば、エマルジョンを冷水に入れて希釈して、有機溶媒のすべてを溶解してクエンチ相を形成するために十分な濃度にすることができる。いくつかの実施形態では、クエンチングを、少なくとも一部は、約５℃またはそれ以下の温度で行うことがある。例えば、クエンチングに使用される水は、室温未満の温度（例えば、約０〜約１０℃、または約０〜約５℃）であることがある。特定の実施形態では、例えば、放出プロファイルなどのナノ粒子の特性を向上させることまたは薬物負荷量などのナノ粒子パラメーターを向上させることによりエマルジョン相のクエンチングに有利であるｐＨを有するクエンチが選択されることがある。クエンチのｐＨは、例えば酸もしくは塩基滴定によって、または緩衝液の適切な選択によって調整することができる。いくつかの実施形態において、クエンチのｐＨは、プロトン化された塩基性治療剤のｐＫａおよび／または疎水性の酸のｐＫａに基づいて選択されることがある。例えば、特定の実施形態において、塩基性治療剤は、プロトン化されたとき、第１のｐＫａを有することがあり、疎水性の酸は、第２のｐＫａを有することがあり、エマルジョン相は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する水溶液でクエンチされることがある。いくつかの実施形態において、結果として得られるクエンチ相も、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有することがある。特定の実施形態において、ｐＨは、第１のｐＫａと第２のｐＫａ間のほぼ等距離にあるｐＫａ単位に等しいことがある。
【０２２４】
特定の実施形態において、ＨＩＰ形成は、乳化中または後に、例えば微細エマルジョン内の平衡条件の結果として、起こることがある。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、有機溶媒可溶性対イオン（すなわち、疎水性の酸）はＨＩＰ形成の結果としてエマルジョンのナノ粒子内への治療剤の分散を助長することができると考えられる。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、ナノ粒子へのＨＩＰの溶解度はエマルジョンの水性相へのおよび／またはクエンチへのＨＩＰの溶解度より高いので、ＨＩＰは、ナノ粒子の凝固前はナノ粒子内に残存することができる。例えば、塩基性治療剤のｐＫａと疎水性の酸のｐＫａの間であるクエンチのｐＨを選択することにより、イオン化治療剤および疎水性の酸の形成を最適化することができる。しかし、高過ぎるｐＨの選択は、疎水性の酸をナノ粒子から外に拡散させる傾向があることがあり、その一方で低すぎるｐＨの選択は、治療剤をナノ粒子から外に拡散させる傾向があることがある。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子形成プロセスに使用される水溶液（例えば、水性相、エマルジョン相、クエンチ、およびクエンチ相を含むが、これらに限定されない）のｐＨは、独立して選択してもよく、約１〜約３、いくつかの実施形態では約２から約４、いくつかの実施形態では、約３〜約５、いくつかの実施形態では、約４〜約６、いくつかの実施形態では、約５〜約７、いくつかの実施形態では、約６〜約８、いくつかの実施形態では、約７〜約９、およびいくつかの実施形態では、約８〜約１０の範囲であることがある。特定の実施形態において、ナノ粒子形成プロセスに使用される水溶液のｐＨは、約３〜約４、いくつかの実施形態では約４〜約５、いくつかの実施形態では、約５〜約６、いくつかの実施形態では約６〜約７、いくつかの実施形態では約７〜約８、およびいくつかの実施形態では約８〜約９の範囲であることがある。
【０２２６】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子形成プロセスに使用される水溶液（例えば、水性相、エマルジョン相、クエンチ、およびクエンチ相を含むが、これらに限定されない）のｐＨは、独立して選択してもよく、１〜３、いくつかの実施形態では２から４、いくつかの実施形態では、３〜５、いくつかの実施形態では、４〜６、いくつかの実施形態では、５〜７、いくつかの実施形態では、６〜８、いくつかの実施形態では、７〜９、およびいくつかの実施形態では、８〜１０の範囲であることがある。特定の実施形態において、ナノ粒子形成プロセスに使用される水溶液のｐＨは、３〜４、いくつかの実施形態では４〜５、いくつかの実施形態では、５〜６、いくつかの実施形態では６〜７、いくつかの実施形態では７〜８、およびいくつかの実施形態では８〜９の範囲であることがある。
【０２２７】
いくつかの実施形態において、治療剤のすべてがこの段階で粒子に封入されるとは限らず、薬物可溶化剤をクエンチ相に添加して可溶化相を形成する。薬物可溶化剤は、例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（商標）８０、Ｔｗｅｅｎ（商標）２０、ポリビニルピロリドン、シクロデキストラン、ドデシル硫酸ナトリウム、コール酸ナトリウム、ジエチルニトロソアミン、酢酸ナトリウム、尿素、グリセリン、プロピレングリコール、グリコフロール、ポリ（エチレン）グリコール、ｂｒｉｓ（ポリオキシエチレングリコール）ドデシルエーテル、安息香酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、ポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテルまたはこれらの組合せであることがある。例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）８０をクエンチされたナノ粒子懸濁液に添加して遊離薬物を可溶化し、薬物結晶の形成を防止することができる。いくつかの実施形態において、薬物可溶化剤のプロトン化可能窒素含有治療剤に対する比は、約２００：１〜約１０：１、またはいくつかの実施形態では約１００：１〜約１０：１である。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、薬物可溶化剤のプロトン化可能窒素含有治療剤に対する比は、２００：１〜１０：１、またはいくつかの実施形態では１００：１〜１０：１である。
【０２２９】
可溶化された相を濾過してナノ粒子を回収してもよい。例えば、限外濾過膜を使用してナノ粒子懸濁液を濃縮し、有機溶媒、遊離薬物（すなわち、未封入治療剤）、薬物可溶化剤および他の加工助剤（界面活性剤）を実質的になくすことがある。例示的濾過は、接線流濾過システムを使用して行われることがある。例えば、溶質、ミセルおよび有機溶媒は通過させるがナノ粒子を保持するのに適している孔径を有する膜を使用することにより、ナノ粒子を選択的に分離することができる。約３００〜約５００ｋＤａの範囲の分子量カットオフ（≒約５〜約２５ｎｍ）を有する例示的膜が使用されることがある。３００〜５００ｋＤａの範囲の分子量カットオフ（≒５〜２５ｎｍ）を有する例示的膜が使用されることがある。
【０２３０】
定容アプローチを用いて透析濾過が行われることもあり、定容アプローチは、透析濾過液（冷脱イオン水、例えば約０〜約５℃、または０〜約１０℃）が供給懸濁液に、そのフィルトレートがその懸濁液から除去されるのと同じ速度で添加されることを意味する。いくつかの実施形態において、濾過は、約０〜約５℃、または０〜約１０℃の第１の温度、および約２０〜約３０℃、または１５〜約３０℃の第２の温度を使用する第１の濾過を含むことがある。いくつかの実施形態において、濾過は、約１〜約３０、場合によっては約１〜約１５、または場合によっては１〜約６ダイアボリューム（ｄｉａｖｏｌｕｍｅ）を処理することを含むことがある。例えば、濾過は、約０〜約５℃で約１〜約３０、または場合によっては約１〜約６ダイアボリュームを処理すること、および約２０〜約３０℃で少なくとも１ダイアボリューム（例えば、約１〜約１５、約１〜約３、または約１〜約２ダイアボリューム）を処理することを含むことがある。いくつかの実施形態において、濾過は、異なる、明確に区別できる温度で、異なるダイアボリュームを処理することを含む。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、濾過は、０〜５℃、または０〜１０℃の第１の温度、および２０〜３０℃、または１５〜３０℃の第２の温度を使用する第１の濾過を含むことがある。いくつかの実施形態において、濾過は、１〜３０、場合によっては１〜１５、または場合によっては１〜６ダイアボリュームを処理することを含むことがある。例えば、濾過は、０〜５℃で１〜３０、または場合によっては１〜６ダイアボリュームを処理すること、および２０〜３０℃で少なくとも１ダイアボリューム（例えば、１〜１５、１〜３、または１〜２ダイアボリューム）を処理することを含むことがある。
【０２３２】
ナノ粒子懸濁液を精製し、濃縮した後、粒子を１つ、２つまたはそれ以上の滅菌フィルターおよび／またはデプスフィルター（例えば、約０．２μｍでデプスプレフィルターを使用する）に通してもよい。例えば、除菌工程は、濾過トレーンを使用して制御された速度で治療用ナノ粒子を濾過することを含むことがある。いくつかの実施形態において、濾過トレーンは、デプスフィルターおよび除菌フィルターを含むことがある。
【０２３３】
ナノ粒子製造の別の実施形態において、有機相は、治療剤とポリマー（ホモポリマー、コポリマー、およびリガンドを伴うコポリマー）の混合物で形成され、構成されている。水性相が界面活性剤と多少の溶解している溶媒とで構成されている場合、有機相と水性相とを比率おおよそ１：５（油相：水性相）で混合する。単純混合下でまたはロータースターター式ホモジナイザーの使用により２相を合わせることにより、一次エマルジョンを形成する。その後、その一次エマルジョンを高圧ホモジナイザーの使用により微細エマルジョンにする。その後、微細エマルジョンを脱イオン水にかき混ぜながら添加することによってクエンチする。いくつかの実施形態において、クエンチ：エマルジョン比は、約２：１〜約４０：１、またはいくつかの実施形態では約５：１〜約１５：１であることがある。いくつかの実施形態において、クエンチ：エマルジョン比は、おおよそ８．５：１である。いくつかの実施形態において、クエンチ：エマルジョン比は、２：１〜４０：１、またはいくつかの実施形態では５：１〜１５：１であることがある。いくつかの実施形態において、クエンチ：エマルジョン比は、８．５：１である。その後、Ｔｗｅｅｎ（商標）（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）８０）の溶液をクエンチに添加して、全体としておおよそ２％Ｔｗｅｅｎ（商標）を得る。これは、遊離、未封入治療剤を溶解するのに役立つ。その後、ナノ粒子を遠心分離または限外濾過／透析濾過のいずれかによって単離する。
【０２３４】
製剤の製造に使用されるポリマー、治療剤および疎水性の酸の量が最終製剤と異なることがあることは理解されるであろう。例えば、治療剤の一部はナノ粒子に完全に組み込まれないことがあり、このような遊離治療剤を例えば濾過して除去してもよい。例えば、ある実施形態では、約９％の第１の疎水性の酸（例えば脂肪酸）を含有する第１の有機溶液中に約１１重量パーセント理論負荷量の治療剤を含有する第１の有機溶液と、ポリマーを約８９重量パーセント含有する第２の有機溶液（例えば、ポリマーは、ポリマーに結合している標的化部分を約２．５ｍｏｌパーセント、およびＰＬＡ−ＰＥＧを約９７．５ｍｏｌパーセント含むことがある）と、約０．１２％の第２の疎水性の酸（例えば、胆汁酸）を含有する水溶液とを製剤の製造に使用することがあり、その結果、例えば、治療剤を約２重量パーセント、ポリマーを約９７．５重量パーセント（ポリマーは、ポリマーに結合している標的化部分を約１．２５ｍｏｌパーセントおよびＰＬＡ−ＰＥＧを約９８．７５ｍｏｌパーセント含むことがある）、および全疎水性の酸を約０．５％含む最終ナノ粒子が得られる。このような方法によって、治療剤を約１〜約２０重量パーセント、例えば、治療剤を約１、約２、約３、約４、約５、約８、約１０または約１５重量パーセント含む、対象への投与に好適な最終ナノ粒子を得ることができる。
【０２３５】
別の実施形態では、９％の第１の疎水性の酸（例えば脂肪酸）を含有する第１の有機溶液中の１１重量パーセント理論負荷量の治療剤を含有する第１の有機溶液と、ポリマーを８９重量パーセント含有する第２の有機溶液（例えば、ポリマーは、ポリマーに結合している標的化部分を２．５ｍｏｌパーセントおよびＰＬＡ−ＰＥＧを９７．５ｍｏｌパーセント含むことがある）と、０．１２％の第２の疎水性の酸（例えば、胆汁酸）を含有する水溶液とを製剤の製造に使用することがあり、その結果、例えば、治療剤を２重量パーセント、ポリマーを９７．５重量パーセント（ポリマーは、ポリマーに結合している標的化部分を１．２５ｍｏｌパーセントおよびＰＬＡ−ＰＥＧを９８．７５ｍｏｌパーセント含むことがある）、および全疎水性の酸を０．５％含む最終ナノ粒子が得られる。このような方法によって、治療剤を１〜２０重量パーセント、例えば、治療剤を１、２、３、４、５、８、１０または１５重量パーセント含む、対象への投与に好適な最終ナノ粒子を得ることができる。
【０２３６】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、治療剤１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびパモ酸を約０．１：１、約０．５：１、約１：１、約１．１：１、約１．２：１、約１．３：１、約１．４：１、約１．５：１、約１．６：１、約１．７：１、約１．８：１、約１．９：１、約２：１、約２．５：１、約３：１、約３．５：１、約４：１、約４．５：１、約５：１、約５．５：１、約６：１、約６．５：１、約７：１、約７．５：１、約８：１、約８．５：１、約９：１、約９．５：１、または約１０：１の治療剤対パモ酸重量比で含む。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、ＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を約０．５：１、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、約１：１０、約１：１５、または約１：２０の治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧ重量比で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、治療剤１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素と、約１．８：１の治療剤対パモ酸重量比でパモ酸と、治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧの重量比が約１：３のＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）と、約４４：１のＰＬＡ−ＰＥＧ対ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ重量比でのＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬとを含む。他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、可溶化剤をさらに含む。特定のこのような実施形態において、可溶化剤は、ポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテルである。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、治療剤１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびパモ酸を０．１：１、０．５：１、１：１、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１、２：１、２．５：１、３：１、３．５：１、４：１、４．５：１、５：１、５．５：１、６：１、６．５：１、７：１、７．５：１、８：１、８．５：１、９：１、９．５：１、または１０：１の治療剤対パモ酸重量比で含む。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、ＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を０．５：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、または１：２０の治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧ重量比で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、治療剤１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素と、１．８：１の治療剤対パモ酸重量比でパモ酸と、１：３の治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧ重量比でＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）と、４４：１のＰＬＡ−ＰＥＧ対ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ重量比でＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬとを含む。他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、可溶化剤をさらに含む。特定の実施形態において、可溶化剤は、ポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテルである。
【０２３７】
特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、治療剤１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびオレイン酸を約０．１：１、約０．５：１、約１：１、約１．１：１、約１．２：１、約１．３：１、約１．４：１、約１．５：１、約１．６：１、約１．７：１、約１．８：１、約１．９：１、約２：１、約２．５：１、約３：１、約３．５：１、約４：１、約４．５：１、約５：１、約５．５：１、約６：１、約６．５：１、約７：１、約７．５：１、約８：１、約８．５：１、約９：１、約９．５：１、または約１０：１の治療剤対オレイン酸重量比で含む。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、ＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を約０．５：１、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、約１：１０、約１：１１、約１：１２、約１：１３、約１：１４、約１：１５、約１：２０、約１：２５、または約１：３０の治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧ重量比で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、治療剤１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素と、約６：１の治療剤対オレイン酸重量比でオレイン酸と、約１：７の治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧ重量比でＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）と、約４６：１のＰＬＡ−ＰＥＧ対ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ重量比でＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬとを含む。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、コール酸をさらに含む。他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、可溶化剤をさらに含む。特定のこのような実施形態において、可溶化剤は、ポリソルベート８０である。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、治療剤１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびオレイン酸を０．１：１、０．５：１、１：１、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１、２：１、２．５：１、３：１、３．５：１、４：１、４．５：１、５：１、５．５：１、６：１、６．５：１、７：１、７．５：１、８：１、８．５：１、９：１、９．５：１、または１０：１の治療剤対オレイン酸重量比で含む。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、ＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を０．５：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：２０、１：２５、または１：３０の治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧ重量比で含む。特定の実施形態において、治療用ナノ粒子は、治療剤１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素と、６：１の治療剤対オレイン酸重量比でオレイン酸と、１：７の治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧ重量比でＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）と、４６：１のＰＬＡ−ＰＥＧ対ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ重量比でＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬとを含む。いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、コール酸をさらに含む。他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、可溶化剤をさらに含む。特定のこのような実施形態において、可溶化剤は、ポリソルベート８０である。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、第１のポリマーと治療剤と実質的に疎水性の酸とを含む第１の有機相を乳化させ、それによってエマルジョン相を形成する工程；エマルジョン相をクエンチし、それによってクエンチ相を形成する工程；およびクエンチ相を濾過して治療用ナノ粒子を回収する工程によって製造されるナノ粒子であり、治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩である。
【０２３９】
他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、第１の有機相と第１の水溶液を合わせて第２の相を形成する工程；第２の相を乳化させて、第１のポリマーと治療剤と実質的に疎水性の酸とを含むエマルジョン相を形成する工程；エマルジョン相をクエンチし、それによってクエンチ相を形成する工程；およびクエンチ相を濾過して治療用ナノ粒子を回収する工程を含む方法によって製造されるナノ粒子であり、ここで、治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素であり、第１の有機相は、ベンジルアルコールと酢酸エチルを約１．２５のベンジルアルコール対酢酸エチル重量比で含む有機溶媒中に、治療剤と、治療剤対パモ酸の重量比が約１１：１のパモ酸と、治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧの重量比が約１：３のＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）とを含み、第１の水溶液は、ベンジルアルコールに０．００５：１の重量比で溶解されたポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテルを含み、第１の有機相と第１の水性相を約１：５の重量比で合わせて第２の相を形成し、そこから形成された第２の相を乳化させ、そのエマルジョン相をｐＨ４．５の水溶液での０．１Ｍクエン酸でクエンチし、得られた生成物を濃縮する。
【０２４０】
治療剤は、その薬学的に許容される塩形態、遊離塩基形態、水和物、異性体およびプロドラッグなどの、代替形態を含むことがある。
【０２４１】
本発明の化合物に関連して用いるときの「有効量」は、対象におけるｍＴＯＲまたはＰＩ３Ｋを阻害するのに有効な量である。
【０２４２】
本発明の治療剤は、ｍＴＯＲ阻害活性を示し、したがって、治療剤から製造される治療用ナノ粒子は、ｍＴＯＲが関与する異常細胞増殖を阻害するために利用することができる。したがって、本発明の治療用ナノ粒子は、ｍＴＯＲの異常細胞増殖作用に関連する障害、例えば、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、骨障害、関節炎、糖尿病性網膜症、乾癬、良性前立腺肥大、アテローム性動脈硬化症、炎症、血管新生、免疫障害、膵炎、腎疾患、癌などの処置に有効である。詳細には、本発明の化合物は、優れた癌細胞増殖阻害効果を有し、癌、好ましくは全てのタイプの固形癌および悪性リンパ腫、特に、白血病、皮膚癌、膀胱癌、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、結腸癌、膵癌、腎癌、胃癌、脳腫瘍、進行性腎細胞癌、急性リンパ芽球性白血病、悪性黒色腫、軟部組織または骨肉腫などの処置に有効である。
【０２４３】
本発明の治療剤は、ＰＩ３キナーゼ阻害活性を示し、したがって、治療剤から製造される治療用ナノ粒子は、ＰＩ３キナーゼが関与する異常細胞増殖を阻害するために利用することができる。したがって、本発明の治療剤は、ＰＩ３キナーゼの異常細胞増殖作用に関連する障害、例えば、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、骨障害、関節炎、糖尿病性網膜症、乾癬、良性前立腺肥大、アテローム性動脈硬化症、炎症、血管新生、免疫障害、膵炎、腎疾患、癌などの処置に有効である。詳細には、本発明の治療用ナノ粒子は、優れた癌細胞増殖阻害効果を有し、癌、好ましくは全てのタイプの固形癌および悪性リンパ腫、特に、白血病、皮膚癌、膀胱癌、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、結腸癌、膵癌、腎癌、胃癌、脳腫瘍、頭頸部癌（例えば、次の領域の癌：口腔、咽頭、喉頭、副鼻腔および鼻腔もしくは唾液腺）、進行性腎細胞癌、急性リンパ芽球性白血病、悪性黒色腫、軟部組織または骨肉腫などの処置に有効である。
【０２４４】
治療剤は、ＰＴＥＮ欠損に関連する癌の処置にも有効である。第１０染色体のホスファターゼ・テンシン・ホモログ欠失（ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ａｎｄ  ｔｅｎｓｉｎ  ｈｏｍｏｌｏｇ  ｄｅｌｅｔｅｄ  ｏｎ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  １０）（ＰＴＥＮ）は、脂質とタンパク質のホスファターゼであり、セリン、トレオニンおよびチロシン残基上のタンパク質基質を脱リン酸化することによってタンパク質ホスファターゼとして機能する。ＰＴＥＮは、ホスホイノシトール−３キナーゼ（ＰＩ３キナーゼ）の肝要なシグナル伝達成分であるホスホイノシタール３，４，５−三リン酸（ＰＩＰ３）を脱リン酸化することによって脂質ホスファターゼとしても機能する。ＰＴＥＮは、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路の媒介を含む細胞プロセス、セントロメアの維持に関与している公知の腫瘍抑制因子であり、Ｒａｄ５１遺伝子発現の媒介によってＤＮＡ修復経路に関与する。腫瘍抑制因子はゲノム安定性の維持に関与し、これらの腫瘍抑制因子の機能喪失がゲノム不安定性をもたらすことは公知である。遺伝子不安定性は、腫瘍抑制因子の喪失の必然的な結果を意味する。実際、ＰＴＥＮ突然変異および遺伝子不安定性の頻発が広範なＰＴＥＮ欠損癌に見られる。同様に、いくつかの腫瘍細胞株にＰＴＥＮが欠損していることは公知である。同様に、いくつかの腫瘍細胞株にＰＴＥＮが欠損していることは公知である。ＰＴＥＮヌル胚性幹細胞は、電離放射線に反応してＤＮＡ修復チェックポイント欠損を示すことが証明されており、その結果、ＤＮＡ二本鎖の間隙および切断を伴う未修復染色体が蓄積する。さらなるメカニズムの研究により、観察されたＧ２チェックポイント欠損は、ＰＴＥＮの欠如に起因するチェックポイントタンパク質、ＣＨＫ１、の機能障害の結果として生じうることが明らかになった。ＰＴＥＮ欠損はＡＫＴキナーゼ活性を直接上昇させ、それによってＣＨＫ１リン酸化が誘発される。リン酸化されたＣＨＫ１はユビキチン化され、それによって核へのそのＣＨＫ１の侵入が妨げられる。細胞質内にＣＨＫ１が離隔されることで、ＤＮＡ修復チェックポイントの開始に関するその正常な機能が損なわれる。加えて、ＰＴＥＮ欠損細胞におけるＣＨＫ１不活性化は、ＤＮＡ二本鎖切断の蓄積につながる。原発性ヒト乳癌の大きなパネルにおけるＣＨＫ１局在化についての調査は、ＰＴＥＮ発現がより少なく、ＡＫＴリン酸化が増加した腫瘍細胞において、細胞質内ＣＨＫ１レベルの増加を示す。さらに、ＰＴＥＮ発現が少ないヒト乳癌においても、Ｐｔｅｎ＋／−マウスからの前立腺上皮内新生物においても、異数性が観察されることが多かった。このようなインビトロおよびインビボ観察は、ＰＴＥＮ欠損が、重要なチェックポイントタンパク質の機能不全を引き起こすことによって発癌シグナル伝達プロセスの開始に関与することを示す。細胞質は、ＰＴＥＮがその腫瘍抑制機能を引き出す主要部位と考えられており、ＰＴＥＮがそのホスファターゼ活性によってＰＩ３キナーゼ経路を遮断できることは、ＰＴＥＮが発癌を抑制する肝要なメカニズムとみなされている。ＰＴＥＮの細胞内分布は組織によって異なるが、ニューロン、神経膠腫、甲状腺細胞、膵臓細胞および皮膚細胞における内因性ＰＴＥ���は、主として核区画内で見いだされる。悪性病変が核から細胞質へのＰＴＥＮの移行を伴うことがあることを示す証拠が増加している。突然変異、欠失またはプロモーター過剰メチル化のいずれかによるＰＴＥＮの不活性化が、広範な腫瘍において確認されている。本発明の治療剤、子宮内膜癌、神経膠芽腫（多形神経膠芽腫／未分化星状細胞腫）、前立腺癌、腎癌、小細胞肺癌、髄膜腫、頭頸部癌、甲状腺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、乳癌、黒色腫などの、ＰＴＥＮ欠損に関連する癌を処置する方法。
【０２４５】
医薬製剤
別の態様によると、本明細書に開示するナノ粒子を薬学的に許容される担体と併用して医薬組成物を形成することができる。当業者には理解されるであろうが、担体は、下で説明するような投与経路、標的組織の位置、送達される薬物、薬物送達の時間経過などに基づいて選択することができる。
【０２４６】
医薬組成物は、経口および非経口経路を含む当技術分野において公知の任意の手段によって患者または対象に投与することができる。本明細書において用いる場合の用語「患者」または「対象」は、同義であり、ヒトはもちろん、例えば哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類および魚類を含む非ヒトも指す。例えば、非ヒトは、哺乳類（例えば、齧歯目、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、霊長目、またはブタ）であることがある。特定の実施形態において、非経口経路は、消化管に見られる消化酵素との接触を回避するので、望ましい。このような実施形態によると、本発明の組成物は、注射（例えば、静脈内、皮下もしくは筋肉内、腹腔内注射）によって投与、直腸内投与、膣内投与、（粉末剤、クリーム、軟膏もしくは滴剤によるような）局所投与、または（スプレーによるような）吸入によって投与することができる。
【０２４７】
特定の実施形態において、ナノ粒子は、それを必要とする対象に全身投与、例えばＩＶ注入または注射によって投与される。
【０２４８】
注射用製剤、例えば、無菌注射用水性または油性懸濁液は、好適な分散または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知の技術に従って製剤化することができる。無菌注射用製剤は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液のような、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌注射用溶液、懸濁液またはエマルジョンであることもある。利用することができる許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、リンガー溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および等張塩化ナトリウム溶液などがある。加えて、無菌固定油が溶媒または懸濁媒体として従来利用されている。このために、合成モノまたはジグリセリドをはじめとする任意の無菌固定油を利用することができる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸が注射剤の製造に使用される。一実施形態では、カルボキシメチルセルロースナトリウムを１％（ｗ／ｖ）およびＴｗｅｅｎ（商標）８０を０．１％（ｖ／ｖ）含む担体液に本発明の結合体を懸濁させる。注射製剤は、例えば、細菌保持フィルターによる濾過によって、または使用前に滅菌水もしくは他の無菌注射用媒体に溶解または分散させることができる無菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって、滅菌することができる。
【０２４９】
経口投与用の固体剤形としては、カプセル、錠剤、ピル、散在および顆粒が挙げられる。このような固体剤形において、封入または未封入結合体は、少なくとも１つの薬学的に許容される不活性賦形剤もしくは担体、例えばクエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム、ならびに／または（ａ）充填剤もしくは増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸、（ｂ）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアラビアゴムなど、（ｃ）保湿剤、例えばグリセリン、（ｄ）崩壊剤、例えば寒天、炭
酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム、（ｅ）溶解遅延剤、例えばパラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えばセチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなど、（ｈ）吸収剤、例えばカオリンおよびベントナイト粘土、および（ｉ）潤滑剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびこれらの混合物と混合される。カプセル、錠剤およびピルの場合、剤形は、緩衝剤も含むことがある。
【０２５０】
治療剤を含有するナノ粒子の正確な投薬量が個々の医師によって処置すべき患者にかんがみて選択され、一般に、処置を受ける患者に有効量の治療剤ナノ粒子を与えるために投薬量および投与が調整されることは理解されるであろう。本明細書において用いる場合、プロトン化可能窒素含有治療剤を含有するナノ粒子の「有効量」は、所望の生物学的応答を惹起するために必要な量を指す。当業者には理解されるであろうが、治療剤を含有するナノ粒子の有効量は、所望の生物学的エンドポイント、送達すべき薬物、標的組織、投与経路などのような因子に依存して変わることがある。例えば、治療剤を含有するナノ粒子の有効量は、所望の期間にわたって腫瘍サイズの所望の量の低減をもたらす量であることもある。考慮されることがあるさらなる因子としては、病状の重症度；処置を受ける患者の年齢、体重および性別；食事、投与回数および頻度；薬の組合せ；反応感度；ならびに治療に対する認容性／反応が挙げられる。
【０２５１】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のため、ナノ粒子を投薬単位形で製剤化してもよい。本明細書において用いる場合の「投薬単位形」という表現は、処置すべき患者に適しているナノ粒子の物理的に別個の単位を指す。しかし、組成物の全１日使用量が担当医によって正当な医学的判断の範囲内で決定されることは理解されるであろう。いずれのナノ粒子についても、治療有効量を最初に細胞培養アッセイまたは動物モデル（通常はマウス、ウサギ、イヌもしくはブタ）のいずれかで推定することができる。動物モデルは、望ましい濃度範囲および投与経路を得るためにも使用される。その後、このような情報を用いて、ヒトにおける有用な用量および投与経路を決定することができる。ナノ粒子の治療効能および毒性は、細胞培養または実験動物において標準的な製薬手順、例えばＥＤ５０（この用量が集団の５０％において治療的に有効である）およびＬＤ５０（この用量が集団の５０％にとって致死性である）によって判定することができる。毒性効果の治療効果に対する用量比が治療指数であり、それを比率、ＬＤ５０／ＥＤ５０、として表すことができる。大きい治療指数を示す医薬組成物は、いくつかの実施形態において有用でありうる。細胞培養アッセイおよび動物研究から得たデータを、ヒトに使用するための投薬量範囲の公式化に使用することができる。
【０２５２】
ある実施形態において、本明細書に開示する組成物は、約１０ｐｐｍまたはそれ以下のパラジウム、約８ｐｐｍまたはそれ以下のパラジウム、または約６ｐｐｍまたはそれ以下のパラジウムを含むことがある。例えば、ポリマー結合体を有するナノ粒子を含む組成物であって、約１０ｐｐｍ未満またはそれ以下のパラジウムを有する組成物をここで提供する。
【０２５３】
ある実施形態において、本明細書に開示する組成物は、１０ｐｐｍまたはそれ以下のパラジウム、８ｐｐｍまたはそれ以下のパラジウム、または６ｐｐｍまたはそれ以下のパラジウムを含むことがある。例えば、ポリマー結合体を有するナノ粒子を含む組成物であって、１０ｐｐｍ未満またはそれ以下のパラジウムを含む組成物をここで提供する。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示するナノ粒子を含む、凍結に好適な組成物が企図され、ならびに凍結に好適な溶液、例えば、糖、例えば単糖類、二糖類もしくは多糖類、例えばスクロースおよび／もしくはトレハロース、ならびに／または塩ならびに／またはシクロデキストリン溶液がナノ粒子懸濁液に添加される。糖（例えば、スクロースまたはトレハロース）は、例えば凍結保護物質として作用して、凍結時に粒子の凝集を防止することができる。例えば、複数の開示するナノ粒子とスクロースとイオン性ハロゲン化物と水とを含むナノ粒子製剤であって；ナノ粒子／スクロース／水／イオン性ハロゲン化物が、約３〜４０％／１０〜４０％／２０〜９５％／０．１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）または約５〜１０％／１０〜１５％／８０〜９０％／１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）である、ナノ粒子製剤を本明細書において提供する。例えば、このような溶液は、本明細書に開示のナノ粒子と、約５重量％〜約２０重量％のスクロースと、約１０〜１００ｍＭの濃度のイオン性ハロゲン化物、例えば塩化ナトリウムとを含むことがある。別の例では、複数の開示するナノ粒子とトレハロースとシクロデキストリンと水とを含むナノ粒子製剤であって；ナノ粒子／トレハロース／水／シクロデキストリンが、約３〜４０％／１〜２５％／２０〜９５％／１〜２５％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）または約５〜１０％／１〜２５％／８０〜９０％／１０〜１５％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）である、ナノ粒子製剤を本明細書において提供する。
【０２５５】
別の例では、複数の開示するナノ粒子とスクロースとイオン性ハロゲン化物と水とを含むナノ粒子製剤であって；ナノ粒子／スクロース／水／イオン性ハロゲン化物が、３〜４０％／１０〜４０％／２０〜９５％／０．１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）または５〜１０％／１０〜１５％／８０〜９０％／１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）である、ナノ粒子製剤を本明細書において提供する。例えば、このような溶液は、本明細書に開示のナノ粒子と、５重量％〜２０重量％のスクロースと、１０〜１００ｍＭの濃度のイオン性ハロゲン化物、例えば塩化ナトリウムとを含むことがある。別の例では、複数の開示するナノ粒子とトレハロースとシクロデキストリンと水とを含むナノ粒子製剤であって；ナノ粒子／トレハロース／水／シクロデキストリンが、３〜４０％／１〜２５％／２０〜９５％／１〜２５％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）または５〜１０％／１〜２５％／８０〜９０％／１０〜１５％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）である、ナノ粒子製剤を本明細書において提供する。
【０２５６】
例えば、企図される溶液は、本明細書に開示のナノ粒子と、約１重量％〜約２５重量％の二糖類、例えばトレハロースまたはスクロース（例えば、約５重量％〜約２５重量％のトレハロースまたはスクロース、例えば約１０重量％のトレハロースもしくはスクロース、または約１５重量％のトレハロースもしくはスクロース、例えば５重量％のスクロース）と、約１重量％〜約２５重量％の濃度のシクロデキストリン、例えばβ−シクロデキストリン（例えば、約５重量％〜約２０重量％、例えば約１０重量％もしくは約２０重量％、または約１５重量％〜約２０重量％のシクロデキストリン）とを含むことがある。企図される製剤は、複数の開示するナノ粒子（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧと活性薬剤とを含むナノ粒子）と、約２重量％〜約１５重量％（または約４重量％〜約６重量％、例えば約５重量％）のスクロースと、約５重量％〜約２０重量％（例えば、約７％（重量パーセント）〜約１２重量％、例えば約１０重量％）のシクロデキストリン、例えばＨｐｂＣＤとを含むことがある。
【０２５７】
別の例では、企図される溶液は、本明細書に開示のナノ粒子と、１重量％〜２５重量％の二糖類、例えばトレハロースまたはスクロース（例えば、５重量％〜２５重量％のトレハロースまたはスクロース、例えば１０重量％のトレハロースもしくはスクロース、または１５重量％のトレハロースもしくはスクロース、例えば５重量％のスクロース）と、１重量％〜２５重量％の濃度のシクロデキストリン、例えばβ−シクロデキストリン（例えば、５重量％〜２０重量％、例えば１０重量％もしくは２０重量％、または１５重量％〜２０重量％のシクロデキストリン）とを含むことがある。企図される製剤は、複数の開示するナノ粒子（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧと活性薬剤とを含むナノ粒子）と、２重量％〜１５重量％（または４重量％〜６重量％、例えば５重量％）のスクロースと、５重量％〜２０重量％（例えば、７％（重量パーセント）〜１２重量％、例えば１０重量％）のシクロデキストリン、例えばＨｐｂＣＤとを含むことがある。
【０２５８】
本開示は、一つには、再構成されたときに大きい凝集物の量が最小限である凍結乾燥医薬組成物に関する。このような大きい凝集物は、約０．５μｍまたはそれ以上、約１μｍまたはそれ以上、約１０μｍまたはそれ以上のサイズを有することがあり、再構成溶液において望ましいはずがない。凝集物のサイズは、参照によって本明細書に組み入れられている米国薬局方（「ＵＳＰ」）の＜７８８＞に示されているものを含む、様々な技法によって測定することができる。ＵＳＰ＜７８８＞において概説されている試験としては、光遮蔽粒子計数試験、顕微鏡粒子計数試験、レーザー回折、および単一粒子光検知法が挙げられる。一実施形態において、所与の試料における粒子径は、レーザー回折および／または単一粒子光検知法を用いて測定される。
【０２５９】
光遮蔽粒子計数試験によるＵＳＰ＜７８８＞は、懸濁液中の粒子径をサンプリングするためのガイドラインを規定している。１００ｍＬ以下の溶液について、製剤は、１０μｍ以上である存在する粒子の平均数が容器当たり６０００を超えない場合、および２５μｍ以上である存在する粒子の平均数が容器当たり６００を超えない場合、試験を満たす。
【０２６０】
ＵＳＰ＜７８８＞において概説されているように、顕微鏡粒子計数試験は、接眼ミクロメーターを備えている、倍率１００±１０倍に調整された双眼顕微鏡を使用して、粒子量を判定するガイドラインを規定している。接眼ミクロメーターは、倍率１００倍で見たとき、１０μｍおよび２５μｍを示す黒い基準円を伴う、四分円に分割された円からなる円形直径目盛りである。線形目盛りをその円形直径目盛りの下に備えている。１０μｍおよび２５μｍを参照して粒子の数を目で勘定する。１００ｍＬ以下の溶液について、製剤は、１０μｍ以上である存在する粒子の平均数が容器当たり３０００を超えない場合、および２５μｍ以上である存在する粒子の平均数が容器当たり３００を超えない場合、試験をみたす。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、再構成時の開示する組成物の１０ｍＬ水性試料は、１０マイクロメートル以上の粒子径を有する粒子をｍＬ当たり６００未満；および／または２５マイクロメートル以上の粒子径を有する粒子をｍＬ当たり６０未満含む。
【０２６２】
動的光散乱（ＤＬＳ）を用いて粒子径を測定してもよいが、ＤＬＳはブラウン運動に依存するため、この技術は、一部のより大きい粒子を検出できない。レーザー回折は、粒子と懸濁媒体間の屈折率の差に依存する。この技法は、サブミクロン〜ミリメートル範囲の粒子の検出が可能である。ナノ粒子懸濁液中の比較的少ない（例えば、約１〜５重量％）量のより大きい粒子を判定することができる。単一粒子光検知法（ＳＰＯＳ）は、希薄懸濁液の光遮蔽を用いて、約０．５μｍの個々の粒子を計数する。測定試料の粒子濃度を知ることにより、凝集物の重量百分率または凝集物濃度（粒子／ｍＬ）を算出することができる。
【０２６３】
凝集物の形成は、凍結乾燥中に粒子表面の脱水に起因して起こることもある。この脱水は、凍結乾燥前の懸濁液に二糖類などの凍結乾燥保護剤を使用することによって回避することができる。好適な二糖類としては、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロースもしくはセロビオース、および／またはこれらの混合物が挙げられる。他の企図される二糖類としては、コージビオース、ニゲロース、イソマルトース、β，β−トレハロース、α，β−トレハロース、ソホロース、ラミナリビオース、ゲンチオビオース、ツラノース、マルツロース、パラチノース、ゲンチオビウロース、マンノビオース、メリビオース、メリビウロース、ルチノース、ルチヌロース、およびキシロビオースが挙げられる。再構成は、出発懸濁液と比較したとき、同等のＤＬＳ粒子径分布を示す。しかし、レーザー回折は、いくつかの再構成溶液において１０μｍより大きい粒子径の粒子を検出することができる。さらに、ＳＰＯＳもまた、ＦＤＡガイドラインの濃度（１０μｍより大きい粒子について、１０４〜１０５粒子／ｍＬ）より高い濃度で１０μｍより大きい粒子径の粒子を検出することができる。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、１つまたはそれ以上のイオン性ハロゲン化物塩が、糖、例えば、スクロース、トレハロースまたはこれらの混合物への追加の凍結乾燥保護剤として使用されることがある。糖としては、二糖類、単糖類、三糖類および／または多糖類を挙げることができ、糖は、他の賦形剤、例えばグリセリンおよび／または界面活性剤を含むこともある。場合により、シクロデキストリンを追加の凍結乾燥保護剤として含めることがある。シクロデキストリンをイオン性ハロゲン化物塩の代わりに添加することもある。あるいは、シクロデキストリンをイオン性ハロゲン化物塩に加えて添加することもある。
【０２６５】
好適なイオン性ハロゲン化物塩としては、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化亜鉛、またはこれらの混合物を挙げることができる。好適なさらなるイオン性ハロゲン化物塩としては、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カルシウム、臭化亜鉛、臭化カリウム、臭化マグネシウム、臭化アンモニウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カルシウム、ヨウ化亜鉛、ヨウ化カリウム、ヨウ化マグネシウムもしくはヨウ化アンモニウム、および／またはこれらの混合物が挙げられる。一実施形態では、イオン性ハロゲン化物塩とともにスクロースが約１〜約１５重量パーセント使用されることもある。一実施形態では、イオン性ハロゲン化物塩とともにスクロースが１〜１５重量パーセント使用されることもある。一実施形態において、凍結乾燥医薬組成物は、塩化ナトリウムを約１０〜約１００ｍＭ含むことがある。一実施形態において、凍結乾燥医薬組成物は、塩化ナトリウムを１０〜１００ｍＭ含むことがある。別の実施形態において、凍結乾燥医薬組成物は、約１００〜約５００ｍＭの二価イオン性塩化物塩、例えば、塩化カルシウムまたは塩化亜鉛を含むことがある。別の実施形態において、凍結乾燥医薬組成物は、１００〜５００ｍＭの二価イオン性塩化物塩、例えば、塩化カルシウムまたは塩化亜鉛を含むことがある。さらに別の実施形態において、凍結乾燥すべき懸濁液は、シクロデキストリンをさらに含むことがあり、例えば、約１〜約２５重量パーセントのシクロデキストリンが使用されることがある。さらに別の実施形態において、凍結乾燥すべき懸濁液は、シクロデキストリンをさらに含むことがあり、例えば、１〜２５重量パーセントのシクロデキストリンが使用されることがある。
【０２６６】
好適なシクロデキストリンとしては、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、またはこれらの混合物を挙げることができる。本明細書に開示する組成物での使用が企図される例示的シクロデキストリンとしては、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰｂＣＤ）、ヒドロキシエチル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、ジメチル−β−シクロデキストリン、カルボキシメチル−β−シクロデキストリン、カルボキシメチルエチル−β−シクロデキストリン、ジエチル−β−シクロデキストリン、トリ−Ｏ−アルキル−β−シクロデキストリン、グルコシル−β−シクロデキストリン、およびマルトシル−β−シクロデキストリンが挙げられる。一実施形態では、シクロデキストリンとともにトレハロースが約１〜約２５重量パーセント（例えば、約１０重量％〜約１５重量％、例えば５〜約２０重量％）使用されることもある。一実施形態において、凍結乾燥医薬組成物は、β−シクロデキストリンを約１〜約２５重量パーセント含むことがある。例示的組成物は、ＰＬＡ−ＰＥＧと、活性薬剤／治療剤と、スクロース約４％〜約６％（例えば、約５％（重量パーセント））と、ＨＰｂＣＤ約８〜約１２重量パーセント（例えば、約１０重量パーセント）とを含むナノ粒子を含むことがある。一実施形態では、シクロデキストリンとともにトレハロースが１〜２５重量パーセント（例えば、１０重量％〜１５重量％、例えば５〜２０重量％）使用されることもある。一実施形態において、凍結乾燥医薬組成物は、β−シクロデキストリンを１〜２５重量パーセント含むことがある。例示的組成物は、ＰＬＡ−ＰＥＧと、活性薬剤／治療剤と、スクロース４％〜６％（例えば、５％（重量パーセント））と、ＨＰｂＣＤ８〜１２重量パーセント（例えば、１０重量パーセント）とを含むナノ粒子を含むことがある。
【０２６７】
一態様では、開示するナノ粒子を含む凍結乾燥医薬組成物であって、約１００ｍＬ以下の水性媒体で、約５０ｍｇ／ｍＬのナノ粒子濃度で凍結乾燥医薬組成物が再構成されると、非経口投与に好適な再構成された組成物は、１０マイクロメートル以上のマイクロ粒子を６０００未満、例えば３０００未満、および／または２５マイクロメートル以上のマイクロ粒子を６００未満、例えば３００未満含む、凍結乾燥医薬組成物を提供する。
【０２６８】
マイクロ粒子の数は、ＵＳＰ＜７８８＞に記載されているものなどの当業者に公知の手段によって；ＵＳＰ＜７８８＞に記載されているものなどの光遮蔽粒子計数試験によって；顕微鏡粒子計数試験、レーザー回折、および単一粒子光検知法によって、決定することができる。
【０２６９】
ある態様では、再構成されたとき非経口使用に好適な医薬組成物であって、疎水性ポリマーセグメントと親水性ポリマーセグメントとを有するコポリマーを各々が含む複数の治療用粒子；活性薬剤；糖；およびシクロデキストリンを含む、医薬組成物を提供する。
【０２７０】
例えば、コポリマーは、ポリ（乳）酸−ブロック−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーであってもよい。再構成されたとき、１００ｍＬ水性試料は、１０マイクロメートル以上の粒子径を有する粒子を６０００未満；および２５マイクロメートル以上の粒子径を有する粒子を６００未満含むことがある。
【０２７１】
二糖類およびイオン性ハロゲン化物塩を添加する工程は、スクロースを約５〜約１５重量パーセントまたはトレハロースを約５〜約２０重量パーセント（例えば、トレハロースを約１０〜約２０重量パーセント）、およびイオン性ハロゲン化物塩を約１０〜約５００ｍＭ添加することを含むことがある。イオン性ハロゲン化物塩は、塩化ナトリウム、塩化カルシウムおよび塩化亜鉛、またはこれらの混合物から選択することができる。ある実施形態では、シクロデキストリンも約１〜約２５重量パーセント添加する。
【０２７２】
別の実施形態において、二糖類およびイオン性ハロゲン化物塩を添加する工程は、スクロースを５〜１５重量パーセントまたはトレハロースを５〜２０重量パーセント（例えば、トレハロースを１０〜２０重量パーセント）、およびイオン性ハロゲン化物塩を１０〜５００ｍＭ添加することを含むことがある。ある実施形態では、シクロデキストリンも１〜２５重量パーセント添加する。
【０２７３】
別の実施形態において、二糖類およびシクロデキストリンを添加する工程は、スクロースを約５〜約１５重量パーセントまたはトレハロースを約５〜約２０重量パーセント（例えば、トレハロースを約１０〜約２０重量パーセント）、およびシクロデキストリンを約１〜約２５重量パーセント添加することを含むことがある。ある実施形態では、シクロデキストリンを約１０〜約１５重量パーセント添加する。シクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、またはこれらの混合物から選択することができる。
【０２７４】
別の実施形態において、二糖類およびシクロデキストリンを添加する工程は、スクロースを５〜１５重量パーセントまたはトレハロースを５〜２０重量パーセント（例えば、トレハロースを１０〜２０重量パーセント）、およびシクロデキストリンを１〜２５重量パーセント添加することを含むことがある。ある実施形態では、シクロデキストリンを１０〜１５重量パーセント添加する。
【０２７５】
別の態様では、医薬ナノ粒子組成物中の粒子の実質的凝集を防止する方法であって、再構成時のナノ粒子の凝集を防止するために糖および塩を凍結乾燥製剤に添加する工程を含む方法を提供する。ある実施形態では、シクロデキストリンも凍結乾燥剤製剤に添加される。さらに別の態様では、医薬ナノ粒子組成物中の粒子の実質的凝集を防止する方法であって、再構成時のナノ粒子の凝集を防止するために糖およびシクロデキストリンを凍結乾燥製剤に添加する工程を含む方法を提供する。
【０２７６】
企図される凍結乾燥組成物は、約４０ｍｇ／ｍＬより高い治療用粒子濃度を有することがある。非経口投与に好適な製剤は、１０ｍＬ用量中に１０マイクロメートルより大きい粒子径を有する粒子を約６００未満有することがある。凍結乾燥は、約−４０℃より高い、または例えば、約−３０℃未満の温度で組成物を凍結させて、凍結組成物を形成する工程；および凍結組成物を乾燥させて、凍結乾燥組成物を形成する工程を含むことがある。乾燥工程は、約−２５〜約−３４℃、または約−３０〜約−３４℃で、約５０ミリトルで行われることがある。
【０２７７】
企図される凍結乾燥組成物は、４０ｍｇ／ｍＬより高い治療用粒子濃度を有することがある。非経口投与に好適な製剤は、１０ｍＬ用量中に１０マイクロメートルより大きい粒子径を有する粒子を６００未満有することがある。凍結乾燥は、−４０℃より高い、または例えば、−３０℃未満の温度で組成物を凍結させて、凍結組成物を形成する工程；および凍結組成物を乾燥させて、凍結乾燥組成物を形成する工程を含むことがある。乾燥工程は、−２５〜−３４℃、または−３０〜−３４℃で、５０ミリトルで行われることがある。
【０２７８】
処置方法
いくつかの実施形態では、標的化ナノ粒子を処置のために使用することができる。本明細書において用いる場合、用語「処置する」、「処置」または「処置すること」は、疾患、障害および／もしくは状態の１つもしくはそれ以上の症状もしくは特徴を軽減すること、改善すること、緩和すること、症状もしくは特徴の発生を遅延させること、症状もしくは特徴の進行を阻害すること、症状もしくは特徴の重症度を低減させること、および／または症状もしくは特徴の発生率を低減させることを意味する。いくつかの実施形態において、標的化ナノ粒子は、固形腫瘍、例えば癌および／または癌細胞を処置するために使用されることがある。特定の実施形態において、標的化ナノ粒子、またはナノ粒子を含む医薬組成物は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）が、処置を必要とする対象の癌細胞表面または腫瘍新生血管（前立腺もしくは非前立腺固形腫瘍の新生血管を含む）内で発現される、任意の癌を処置するために使用することができる。ＰＳＭＡ関連適応症の例としては、前立腺癌、乳癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、および神経膠芽腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７９】
いくつかの実施形態において、標的化ナノ粒子、またはナノ粒子を含む医薬組成物は、疾患、障害および／もしくは状態の１つもしくはそれ以上の症状もしくは特徴を軽減する、改善する、緩和する、症状もしくは特徴の発生を遅延させる、症状もしくは特徴の進行を阻害する、症状もしくは特徴の重症度を低減させる、および／または症状もしくは特徴の発生率を低減させるための薬剤の製造に使用することができる。いくつかの実施形態において、標的化ナノ粒子、またはナノ粒子を含む医薬組成物は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）が、処置を必要とする対象の癌細胞表面または腫瘍新生血管（前立腺もしくは非前立腺固形腫瘍の新生血管を含む）内で発現される、任意の癌を処置するための薬剤の製造に使用することができる。
【０２８０】
用語「癌」は、悪性癌ばかりでなく前悪性癌も含む。癌としては、血液（例えば、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病、マントル細胞リンパ腫）、前立腺、胃癌、結腸直腸癌、皮膚癌、例えば黒色腫または基底細胞癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）乳癌、頭頸部癌、気管支癌、膵癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、口腔または咽頭癌、肝癌（例えば、肝細胞癌）、腎癌（例えば、腎細胞癌）、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、消化管間質腫瘍、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、造血組織の癌、頭部または頸部癌などが挙げられるが、これらに限定されない。「癌細胞」は、腫瘍（例えば、固形腫瘍）の形態であることがあり、対象体内に単独で存在することもあり（例えば白血病細胞）、または癌に由来する細胞株であることもある。
【０２８１】
癌は、様々な身体症状に関連することがある。癌の症状は、一般に、腫瘍のタイプおよび位置に依存する。例えば、肺癌は、咳嗽、息切れおよび胸痛の原因になることがあり、その一方で結腸癌は、下痢、便秘および血便の原因になることが多い。しかし、少数だが例を挙げると、以下の症状は、多くの癌と関連することが一般に多い：発熱、悪寒、寝汗、咳、呼吸困難、体重減少、食欲減退、食欲不振、悪心、嘔吐、下痢、貧血、黄疸、肝肥大、喀血、疲労、倦怠感、認知機能障害、うつ状態、ホルモン障害、好中球減少症、疼痛、非治癒性の痛み、リンパ節肥大、末梢神経障害、および性機能不全。
【０２８２】
一態様では、癌（例えば白血病）の処置方法を提供する。いくつかの実施形態において、癌の処置は、その処置を必要とする対象に、治療有効量の本発明の標的化粒子を、所望の結果を達成するために必要であるような量でおよび必要であるような時間にわたって投与することを含む。特定の実施形態において、本発明の標的化粒子の「治療有効量」は、癌の１つもしくはそれ以上の症状もしくは特徴の処置、軽減、改善、緩和、症状もしくは特徴の発生の遅延、症状もしくは特徴の進行の阻害、症状もしくは特徴の重症度の低減、および／または症状もしくは特徴の発生の発生率の低減に有効な量である。
【０２８３】
一態様では、癌（例えば、白血病）に罹患している対象に本発明の組成物を投与する方法を提供する。いくつかの実施形態では、所望の結果（すなわち、癌の処置）を果たすために必要であるような量でおよび必要であるような時間にわたって、粒子を対象に投与することができる。特定の実施形態において、本発明の標的化粒子の「治療有効量」は、癌の１つもしくはそれ以上の症状もしくは特徴の処置、軽減、改善、緩和、症状もしくは特徴の発生の遅延、症状もしくは特徴の進行の阻害、症状もしくは特徴の重症度の低減、および／または症状もしくは特徴の発生の発生率の低減に有効な量である。
【０２８４】
本発明の治療プロトコールは、治療有効量の本発明の標的化粒子を健常個体（すなわち、癌のいずれの症状も呈さないおよび／または癌と診断されていない対象）に投与することを含む。例えば、健常個体を癌の発生および／または癌の症状の発症前に本発明の標的化粒子で「免疫」することができ；リスク個体（例えば、癌の家族歴がある患者；癌の発生に関連する１つまたはそれ以上の遺伝子突然変異を有する患者；癌の発生に関連する遺伝子多型を有する患者；癌の発生に関連するウイルスに感染している患者；癌の発生に関連する習慣および／または生活様式を有する患者など）を癌の症状の発症と実質的に同時に（例えば、発症から４８時間以内、２４時間以内、または１２時間以内に）処置することができる。もちろん、癌を有することが分かっている個体は、本発明の処置をいつ受けてもよい。
【０２８５】
他の実施形態において、開示するナノ粒子は、癌細胞、例えば骨髄性白血病癌細胞、の増殖を阻害するために使用することができる。本明細書において用いる場合、用語「癌細胞の増殖を阻害する」または「癌細胞の増殖を阻害すること」は、癌細胞増殖速度を未処置対照癌細胞の実測もしくは予測増殖速度と比較して低下させるような、癌細胞増殖および／もしくは遊走速度のあらゆる減速、癌細胞増殖および／もしくは遊走の停止、または癌細胞の殺滅を指す。用語「増殖を阻害する」は、癌細胞または腫瘍のサイズの低減または消失はもちろん、その転移の可能性の低下も指すことができる。好ましくは、細胞レベルでのこのような阻害は、患者の癌の、サイズを低減させる、増殖を阻止する、悪性度を低下させる、または転移を予防もしくは阻害することができる。当業者は、癌細胞増殖が阻害されるかどうかを様々な適切な兆候のいずれかによって容易に判定することができる。
【０２８６】
癌細胞増殖の阻害は、例えば、細胞周期の特定の期における癌細胞の停止、例えば、細胞周期のＧ２／Ｍ期での停止によって証明することができる。癌細胞増殖の阻害は、癌細胞または腫瘍サイズの直接または間接的測定によって証明することもできる。ヒト癌患者において、このような測定は、一般に、周知の画像診断法、例えば、磁気共鳴画像法、コンピューター断層撮影およびＸ線を用いて行われる。癌細胞増殖は、例えば、循環癌胎児抗原レベル、前立腺特異的抗原レベル、または癌細胞増殖と相関関係がある他の癌特異的抗原のレベルを判定することによって、直接判定することもできる。癌性増殖の阻害は、対象の生存期間延長ならびに／または健康および福祉の増加とも一般に相関関係がある。
【０２８７】
活性薬剤を含む本明細書に開示するナノ粒子を患者に投与する方法であって、患者に投与すると、このようなナノ粒子が、薬剤単独の（すなわち、開示するナノ粒子としてではない）投与と比較して、分布容積を実質的に低減させる、および／または遊離Ｃｍａｘを実質的に低減させる方法も、本明細書において提供する。
【０２８８】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ＭＥＫ１／２阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、プロカルバジン、ダカルバジン、ゲムシタビン、カペシタビン、メトトレキサート、タキソール、タキソテール、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシ尿素、シタラビン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソ尿素、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルバジン、エトポシド、テニポシド、カンパセシン（ｃａｍｐａｔｈｅｃｉｎ）、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ミトキサントロン、Ｌ−アスパラギナーゼ、ドキソルビシン、エピルビシン、５−フルオロウラシル、ドセタキセル、パクリタキセル、ロイコボリン、レバミソール、イリノテカン、エストラムスチン、エトポシド、ナイトロジェンマスタード、ＢＣＮＵ、カルムスチン、ロムスチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、オキサリプラチン、メシル酸イマチニブ、ベバシズマブ、ヘキサメチルメラミン、トポテカン、チロシンキナーゼ阻害剤、チロホスチン、ハービマイシンＡ、ゲニステイン、エルブスタチン、ヒドロキシジン、酢酸グラチラマー、インターフェロンβ−１ａ、インターフェロンβ−１ｂ、ナタリズマブおよびラベンダスチンＡからなる群から選択される化合物；ならびに薬学的に許容される担体とともに投与される。
【０２８９】
別の態様では、対象において薬剤として使用するための、本明細書に記載の治療用ナノ粒子を提供する。
【０２９０】
さらに別の態様では、対象において抗増殖効果を生じさせるのに使用するための、本明細書に記載の治療用ナノ粒子を提供する。
【０２９１】
さらに別の態様では、対象において抗浸潤薬として固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置に使用するための、本明細書に記載の治療用ナノ粒子を提供する。
【０２９２】
さらに別の態様では、対象の癌の予防または処置における、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の使用を提供する。
【０２９３】
さらに別の態様では、対象の癌の予防または処置に使用するための、本明細書に記載の治療用ナノ粒子を提供する。
【０２９４】
さらに別の態様では、対象の癌の予防または処置のための薬剤の製造における、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の使用を提供する。
【０２９５】
さらに別の態様では、対象において抗増殖効果を生じさせるための、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の使用を提供する。
【０２９６】
さらに別の態様では、対象において抗増殖効果を生じさせるのに使用するための薬剤の製造における、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の使用を提供する。
【０２９７】
さらに別の態様では、対象において抗浸潤薬として固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置に使用するための薬剤の製造における、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の使用を提供する。
【０２９８】
さらに別の態様では、抗増殖効果を生じさせる処置を必要とする対象において抗増殖効果を生じさせる方法であって、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の有効量を前記対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【０２９９】
さらに別の態様では、固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置によって、このような処置を必要とする対象において、抗浸潤効果を生じさせる方法であって、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の有効量を前記対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【０３００】
さらに別の態様では、対象の固形腫瘍疾患の予防または処置に使用するための、本明細書に記載の治療用ナノ粒子を提供する。
【０３０１】
さらに別の態様では、対象の固形腫瘍疾患の予防または処置に使用するための薬剤の製造における、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の使用を提供する。
【０３０２】
さらに別の態様では、固形腫瘍疾患の処置を必要とする対象の固形腫瘍を予防または処置する方法であって、本明細書に記載の治療用ナノ粒子の有効量を前記対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【０３０３】
２０１２年６月２６日に発行された、「Ｄｒｕｇ  Ｌｏａｄｅｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｍａｋｉｎｇ  ａｎｄ  Ｕｓｉｎｇ  Ｓａｍｅ」と題する、米国特許第８，２０６，７４７号は、その全体が参照によって本明細書に組み入れられている。
【０３０４】
実施形態
本発明のいくつかの実施形態は、次の通りである：
１．約０．０５〜約３０重量パーセントの実質的に疎水性の酸と；
約０．２〜約２５重量パーセントの治療剤であって、プロトン化された治療剤のｐＫａが疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい治療剤と；
約５０〜約９９．７５重量パーセントのポリマーであって、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよび組合せから選択されるポリマーとを含む治療用ナノ粒子であって、ここで、
治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含み、
治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩である、治療用ナノ粒子。
【０３０５】
２．治療剤の量は、約０．２〜約２０重量パーセントである、実施形態１の治療用ナノ粒子。
【０３０６】
３．１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素；および
ＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素：ＰＬＡ−ＰＥＧの重量比約１：７で含む、実施形態１または２による治療用ナノ粒子。
【０３０７】
４．１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素；および
ＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素：ＰＬＡ−ＰＥＧの重量比約１：１４で含む、実施形態１または２による治療用ナノ粒子。
【０３０８】
５．１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素；および
ＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）を、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，7−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素：ＰＬＡ−ＰＥＧの重量比約１：５で含む、実施形態１または２による治療用ナノ粒子。
【０３０９】
６．約０．２〜約２５重量パーセントの治療剤と；
実質的に疎水性の酸であって、実質的に疎水性の酸の治療剤に対するモル比は約０．２５：１〜約２：１であり、プロトン化された治療剤のｐＫａは疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい、実質的に疎水性の酸と；
約５０〜約９９．７５重量パーセントのポリマーであって、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよび組合せから選択されるポリマーとを含み、ここで、治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む治療用ナノ粒子であって、
治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩である、治療用ナノ粒子。
【０３１０】
７．治療剤の量は、約０．２〜約２０重量パーセントである、実施形態６に記載の治療用ナノ粒子。
【０３１１】
８．実質的に疎水性の酸と；
治療剤であって、プロトン化された治療剤のｐＫａは疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい、治療剤と；
ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよび組合せから選択されるポリマーと
を含む治療用ナノ粒子であって、ここで、
治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩である、治療用ナノ粒子。
【０３１２】
９．治療剤と；
実質的に疎水性の酸であって、実質的に疎水性の酸の治療剤に対するモル比は約０．２５：１〜約２：１の範囲であり、プロトン化された治療剤のｐＫａは疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい、実質的に疎水性の酸と；
ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよび組合せから選択されるポリマーと
を含む治療用ナノ粒子であって、ここで、
治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩である、治療用ナノ粒子。
【０３１３】
１０．実質的に疎水性の酸の治療剤に対するモル比は、約０．５：１〜約１．５：１である、実施形態６または９の治療用ナノ粒子。
【０３１４】
１１．実質的に疎水性の酸の治療剤に対するモル比は、約０．２５：１〜約１：１である、実施形態６または９の治療用ナノ粒子。
【０３１５】
１２．実質的に疎水性の酸の治療剤に対するモル比は、約０．７５：１〜約１．２５：１である、実施形態６または９の治療用ナノ粒子。
【０３１６】
１３．プロトン化された治療剤のｐＫａは、疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約２．０ｐＫａ単位大きい、実施形態１〜１２のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３１７】
１４．プロトン化された治療剤のｐＫａは、疎水性の酸のｐＫａより少なくとも約４．０ｐＫａ単位大きい、実施形態１〜１２のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３１８】
１５．疎水性の酸および治療剤を含む疎水性イオン対であって、プロトン化された治療剤のｐＫａと疎水性の酸のｐＫａとの差が少なくとも約１．０ｐＫａ単位またはそれ以上である、疎水性対イオンと；
約５０〜約９９．７５重量パーセントのジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーであって、数平均分子量約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａのポリ（乳酸）および数平均分子量約４ｋＤａ〜約６ｋＤａのポリ（エチレングリコール）を有する、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーとを含む治療用ナノ粒子であって、ここで、
治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩である、治療用ナノ粒子。
【０３１９】
１６．プロトン化された治療剤のｐＫａと疎水性の酸のｐＫａとの差は、少なくとも約２．０ｐＫａ単位である、実施形態１５の治療用ナノ粒子。
【０３２０】
１７．プロトン化された治療剤のｐＫａと疎水性の酸のｐＫａとの差は、少なくとも約４．０ｐＫａ単位である、実施形態１５の治療用ナノ粒子。
【０３２１】
１８．約０．０５〜約２０重量パーセントの疎水性の酸を含む、実施形態１〜５、８または１３〜１７のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３２２】
１９．実質的に疎水性の酸は、約２〜約７の範囲のｌｏｇＰを有する、実施形態１〜１８のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３２３】
２０．実質的に疎水性の酸は、約４〜約８の範囲のｌｏｇＰを有する、実施形態１〜１８のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３２４】
２１．実質的に疎水性の酸は、約−１．０〜約５．０の水中のｐＫａを有する、実施形態１〜２０のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３２５】
２２．実質的に疎水性の酸は、約２．０〜約５．０の水中のｐＫａを有する、実施形態１〜２０のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３２６】
２３．実質的に疎水性の酸および治療剤は、治療用ナノ粒子内で疎水性イオン対を形成する、実施形態１〜２２のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３２７】
２４．疎水性の酸は脂肪酸である、実施形態１〜２３のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３２８】
２５．脂肪酸は：カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデシル酸、アラキドン酸、ヘンイコシル酸、ベヘン酸、トリコシル酸、リグノセリン酸、ペンタコシル酸、セロチン酸、ヘプタコシル酸、モンタン酸、ノナコシル酸、メリシン酸、ヘナトリアコンチル酸、ラッセル酸、フィリン酸、ゲディン酸、セロプラスチン酸、ヘキサトリアコンチル酸およびこれらの組合せからなる群から選択される飽和脂肪酸である、実施形態２４の治療用ナノ粒子。
【０３２９】
２６．脂肪酸は：ヘキサデカトリエン酸、α−リノレイン酸、ステアリドン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸、ヘンエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、テトラコサペンタエン酸、テトラコサヘキサエン酸およびこれらの組合せからなる群から選択されるω−３脂肪酸である、実施形態２４の治療用ナノ粒子。
【０３３０】
２７．脂肪酸は：リノール酸、γ−リノレイン酸、エイコサジエン酸、ジホモ−γ−リノレイン酸、アラキドン酸、ドコサジエン酸、アドレン酸、ドコサペンタエン酸、テトラコサテトラエン酸、テトラコサペンタエン酸およびこれらの組合せからなる群から選択されるω−６脂肪酸である、実施形態２４の治療用ナノ粒子。
【０３３１】
２８．脂肪酸は：オレイン酸、エイコセン酸、ミード酸、エルカ酸、ネルボン酸およびこれらの組合せからなる群から選択されるω−９脂肪酸である、実施形態２４の治療用ナノ粒子。
【０３３２】
２９．脂肪酸はオレイン酸である、実施形態２８の治療用ナノ粒子。
【０３３３】
３０．１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素のオレイン酸に対する重量比は、約６：１である、実施形態２９の治療用ナノ粒子。
【０３３４】
３１．脂肪酸は：ルーメン酸、α−カレンド酸、β−カレンド酸、ジャカル酸、α−エレオステアリン酸、β−エレオステアリン酸、カタルプ酸、プニカ酸、ルメレン酸、α−パリナリン酸、β−パリナリン酸、ボセオペンタエン酸、ピノレン酸、ポドカルピン酸およびこれらの組合せからなる群から選択される多価不飽和脂肪酸である、実施形態２４の治療用ナノ粒子。
【０３３５】
３２．疎水性の酸は胆汁酸である、実施形態１〜２４のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３３６】
３３．胆汁酸は、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸、ハイコール酸、β−ムリコール酸、コール酸、リトコール酸、アミノ酸抱合胆汁酸およびこれらの組合せからなる群から選択される、実施形態３２の治療用ナノ粒子。
【０３３７】
３４．胆汁酸はコール酸である、実施形態３３の治療用ナノ粒子。
【０３３８】
３５．アミノ酸抱合胆汁酸は、グリシン抱合胆汁酸またはタウリン抱合胆汁酸である、実施形態３３の治療用ナノ粒子。
【０３３９】
３６．疎水性の酸は、ジオクチルスルホコハク酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ドデシル硫酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、パモ酸、ウンデカン酸およびこれらの組合せからなる群から選択される、実施形態１〜２３のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３４０】
３７．疎水性の酸はパモ酸である、実施形態３６の治療用ナノ粒子。
【０３４１】
３８．１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素のパモ酸に対する重量比は、約１．８：１である、実施形態３７の治療用ナノ粒子。
【０３４２】
３９．約１〜約２０重量パーセントの治療剤を含む、実施形態１〜３８のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３４３】
４０．約２〜約２０重量パーセントの治療剤を含む、実施形態１〜３８のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３４４】
４１．約４〜約２０重量パーセントの治療剤を含む、実施形態１〜３８のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３４５】
４２．約５〜約２０重量パーセントの治療剤を含む、実施形態１〜３８のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３４６】
４３．疎水性の酸は、約２００Ｄａ〜約８００Ｄａの間の分子量を有する、実施形態１〜３８のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３４７】
４４．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、少なくとも１分間、治療剤を実質的に保持する、実施形態１〜４３のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３４８】
４５．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約３０％未満を実質的に即時に放出する、実施形態１〜４３のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３４９】
４６．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約１０〜約４５％を約１時間にわたって放出する、実施形態１〜４３のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３５０】
４７．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約０．０１〜約１５％を約４時間にわたって放出する、実施形態１〜４３のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３５１】
４８．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約０．０１〜約１５％を約１０時間にわたって放出する、実施形態１〜４３のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３５２】
４９．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約０．０１〜約２５％を約２０時間にわたって放出する、実施形態１〜４３のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３５３】
５０．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約１〜約４０％を約４０時間にわたって放出する、実施形態１〜４３のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３５４】
５１．脂肪酸または胆汁酸を含有しないことを除いて治療用ナノ粒子と実質的に同じである対照ナノ粒子についての放出プロファイルと実質的に同じである放出プロファイルを有する、実施形態１〜４３のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３５５】
５２．ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．６〜約０．９５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する、実施形態１〜５１のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３５６】
５３．ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．６〜約０．８のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する、実施形態１〜５１のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３５７】
５４．ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．７５〜約０．８５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する、実施形態１〜５１のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３５８】
５５．ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．７〜約０．９のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する、実施形態１〜５１のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３５９】
５６．約１０〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、実施形態１〜５５のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３６０】
５７．約１０〜約２０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、実施形態１〜５５のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３６１】
５８．約１５〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、実施形態１〜５５のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３６２】
５９．約２０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、実施形態１〜５５のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３６３】
６０．ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、数平均分子量約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａのポリ（乳酸）および数平均分子量約４ｋＤａ〜約６ｋＤａのポリ（エチレン）グリコールを有する、実施形態１〜５９のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３６４】
６１．標的化リガンドで官能化されたポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを約０．２〜約３０重量パーセントさらに含む、実施形態１〜６０のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３６５】
６２．標的化リガンドで官能化されたポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを約０．２〜約３０重量パーセントさらに含む、実施形態１〜６０のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３６６】
６３．標的化リガンドは、ポリ（エチレン）グリコールに共有結合している、実施形態６１または６２の治療用ナノ粒子。
【０３６７】
６４．疎水性の酸は高分子電解質である、実施形態１〜６３のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３６８】
６５．高分子電解質は、ポリ（スチレンスルホン酸）、ポリアクリル酸、およびポリメタクリル酸からなる群から選択される、実施形態６４の治療用ナノ粒子。
【０３６９】
６６．実質的に疎水性の酸は、２つまたはそれ以上の実質的に疎水性の酸の混合物である、実施形態１〜６５のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３７０】
６７．２つの実質的に疎水性の酸の混合物を含む、実施形態６６の治療用ナノ粒子。
【０３７１】
６８．２つの実質的に疎水性の酸は、オレイン酸およびコール酸である、実施形態６７の治療用ナノ粒子。
【０３７２】
６９．３つの実質的に疎水性の酸の混合物を含む、実施形態６６の治療用ナノ粒子。
【０３７３】
７０．４つの実質的に疎水性の酸の混合物を含む、実施形態６６の治療用ナノ粒子。
【０３７４】
７１．５つの実質的に疎水性の酸の混合物を含む、実施形態６６の治療用ナノ粒子。
【０３７５】
７２．第１のポリマーと治療剤と実質的に疎水性の酸とを含む第１の有機相を乳化させ、それによってエマルジョン相を形成する工程；
エマルジョン相をクエンチし、それによってクエンチ相を形成する工程；および
クエンチ相を濾過して治療用ナノ粒子を回収する工程
を含む方法によって製造される治療用ナノ粒子であって、
治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩である、治療用ナノ粒子。
【０３７６】
７３．疎水性の酸は脂肪酸である、実施形態７２の治療用ナノ粒子。
【０３７７】
７４．脂肪酸は：カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデシル酸、アラキドン酸、ヘンイコシル酸、ベヘン酸、トリコシル酸、リグノセリン酸、ペンタコシル酸、セロチン酸、ヘプタコシル酸、モンタン酸、ノナコシル酸、メリシン酸、ヘナトリアコンチル酸、ラッセル酸、フィリン酸、ゲディン酸、セロプラスチン酸、ヘキサトリアコンチル酸およびこれらの組合せからなる群から選択される飽和脂肪酸である、実施形態７３の治療用ナノ粒子。
【０３７８】
７５．脂肪酸は：ヘキサデカトリエン酸、α−リノレイン酸、ステアリドン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸、ヘンエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、テトラコサペンタエン酸、テトラコサヘキサエン酸およびこれらの組合せからなる群から選択されるω−３脂肪酸である、実施形態７３の治療用ナノ粒子。
【０３７９】
７６．脂肪酸は：リノール酸、γ−リノレイン酸、エイコサジエン酸、ジホモ−γ−リノレイン酸、アラキドン酸、ドコサジエン酸、アドレン酸、ドコサペンタエン酸、テトラコサテトラエン酸、テトラコサペンタエン酸およびこれらの組合せからなる群から選択されるω−６脂肪酸である、実施形態７３の治療用ナノ粒子。
【０３８０】
７７．脂肪酸は：オレイン酸、エイコセン酸、ミード酸、エルカ酸、ネルボン酸およびこれらの組合せからなる群から選択されるω−９脂肪酸である、実施形態７３の治療用ナノ粒子。
【０３８１】
７８．脂肪酸はオレイン酸である、実施形態７７の治療用ナノ粒子。
【０３８２】
７９．脂肪酸は：ルーメン酸、α−カレンド酸、β−カレンド酸、ジャカル酸、α−エレオステアリン酸、β−エレオステアリン酸、カタルプ酸、プニカ酸、ルメレン酸、α−パリナリン酸、β−パリナリン酸、ボセオペンタエン酸、ピノレン酸、ポドカルピン酸およびこれらの組合せからなる群から選択される多価不飽和脂肪酸である、実施形態７３の治療用ナノ粒子。
【０３８３】
８０．疎水性の酸は胆汁酸である、実施形態７２の治療用ナノ粒子。
【０３８４】
８１．胆汁酸は、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸、ハイコール酸、β−ムリコール酸、コール酸、リトコール酸、アミノ酸抱合胆汁酸およびこれらの組合せからなる群から選択される、実施形態８０の治療用ナノ粒子。
【０３８５】
８２．胆汁酸はコール酸である、実施形態８１の治療用ナノ粒子。
【０３８６】
８３．アミノ酸抱合胆汁酸は、グリシン抱合胆汁酸またはタウリン抱合胆汁酸である、実施形態８１の治療用ナノ粒子。
【０３８７】
８４．疎水性の酸は、ジオクチルスルホコハク酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ドデシル硫酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、パモ酸、ウンデカン酸およびこれらの組合せからなる群から選択される、実施形態７２のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３８８】
８５．疎水性の酸はパモ酸である、実施形態８４の治療用ナノ粒子。
【０３８９】
８６．疎水性の酸は、約２００Ｄａ〜約８００Ｄａの間の分子量を有する、実施形態７２〜８５のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３９０】
８７．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、少なくとも１分間、治療剤を実質的に保持する、実施形態７２〜８６のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３９１】
８８．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約３０％未満を実質的に即時に放出する、実施形態７２〜８６のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３９２】
８９．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約１０〜約４５％を約１時間にわたって放出する、実施形態７２〜８６のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３９３】
９０．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約０．０１〜約１５％を約４時間にわたって放出する、実施形態７２〜８６のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３９４】
９１．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約０．０１〜約１５％を約１０時間にわたって放出する、実施形態７２〜８６のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３９５】
９２．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約０．０１〜約２５％を約２０時間にわたって放出する、実施形態７２〜８６のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３９６】
９３．３７℃のリン酸緩衝溶液中に置かれたとき、治療剤の約１〜約４０％を約４０時間にわたって放出する、実施形態７２〜８６のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３９７】
９４．脂肪酸または胆汁酸を含有しないことを除いて治療用ナノ粒子と実質的に同じである対照ナノ粒子についての放出プロファイルと実質的に同じである放出プロファイルを有する、実施形態７２〜８６のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３９８】
９５．第１のポリマーは、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーである、実施形態７２〜９４のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０３９９】
９６．第１のポリマーは、ポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーである、実施形態７２〜９４のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０４００】
９７．実質的に疎水性の酸は、２つまたはそれ以上の実質的に疎水性の酸の混合物である、実施形態７２〜９６のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０４０１】
９８．２つの実質的に疎水性の酸の混合物を含む、実施形態９７の治療用ナノ粒子。
【０４０２】
９９．３つの実質的に疎水性の酸の混合物を含む、実施形態９７の治療用ナノ粒子。
【０４０３】
１００．４つの実質的に疎水性の酸の混合物を含む、実施形態９７の治療用ナノ粒子。
【０４０４】
１０１．５つの実質的に疎水性の酸の混合物を含む、実施形態９７の治療用ナノ粒子。
【０４０５】
１０２．ポリマーはＰＬＡ−ＰＥＧであり、ＰＬＡ−ＰＥＧのモル比は５：１である、実施形態１、５〜９５、または９７〜１０１のいずれかの治療用ナノ粒子。
【０４０６】
１０３．第１の有機相と第１の水溶液を合わせて第２の相を形成する工程；
第２の相を乳化させて、第１のポリマーと治療剤と実質的に疎水性の酸とを含むエマルジョン相を形成する工程；
エマルジョン相をクエンチし、それによってクエンチ相を形成する工程；および
クエンチ相を濾過して治療用ナノ粒子を回収する工程
を含む方法によって製造される治療用ナノ粒子であって、ここで、
治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素であり、第１の有機相は、ベンジルアルコールと酢酸エチルを約１．２５のベンジルアルコール対酢酸エチル重量比で含む有機溶媒中に、治療剤と、治療剤対パモ酸の重量比が約１１：１のパモ酸と、治療剤対ＰＬＡ−ＰＥＧの重量比が約１：３のＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）とを含み、第１の水溶液は、ベンジルアルコールに０．００５：１の重量比で溶解されたポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテルを含み、第１の有機相と第１の水性相を約１：５の重量比で合わせて第２の相を形成し、そこから形成された第２の相を乳化させ、そのエマルジョン相をｐＨ４．５の水溶液での０．１Ｍクエン酸でクエンチし、得られた生成物を濃縮する、治療用ナノ粒子。
【０４０７】
１０４．１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩の治療用ナノ粒子。
【０４０８】
１０５．治療剤またはその薬学的に許容される塩と、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーおよび組合せから選択されるポリマーとを含む治療用ナノ粒子であって、ここで、治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩である、治療用ナノ粒子。
【０４０９】
１０６．標的化リガンドがさらに存在し、標的化リガンドはＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬであり、ここで、ＧＬは次の構造：
【化９】
2018154643.tif 000010
を有する、実施形態１〜７１、１０４、または１０５のいずれかの治療用ナノ粒子。
【０４１０】
１０７．可溶化剤をさらに含む、実施形態１〜７１、または１０４〜１０６のいずれか１つの実施形態による治療用ナノ粒子。
【０４１１】
１０８．可溶化剤はポリソルベート８０である、実施形態１０７による治療用ナノ粒子。
【０４１２】
１０９．可溶化剤はポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテルである、実施形態１０７の治療用ナノ粒子。
【０４１３】
１１０．治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素である、実施形態１〜１０９のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子。
【０４１４】
１１１．実施形態１〜１１０のいずれかの治療用ナノ粒子と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【０４１５】
１１２．複数の治療用ナノ粒子を含む、実施形態１１１の医薬組成物。
【０４１６】
１１３．糖類をさらに含む、実施形態１１１または１１２の医薬組成物。
【０４１７】
１１４．シクロデキストリンをさらに含む、実施形態１１１〜１１３のいずれか１つの実施形態の医薬組成物。
【０４１８】
１１５．糖類は、スクロース、トレハロースおよびそれらの混合物からなる群から選択される二糖類である、実施形態１１３または１１４の医薬組成物。
【０４１９】
１１６．それを必要とする対象における癌を処置する方法であって、対象に実施形態１〜１１０のいずれか１つの実施形態の治療用ナノ粒子または実施形態１１１〜１１５のいずれか１つの実施形態の医薬組成物の治療有効量を投与することを含む方法。
【０４２０】
１１７．癌は慢性骨髄性白血病である、実施形態１１６の方法。
【０４２１】
１１８．癌は消化管間質腫瘍である、実施形態１１６の方法。
【０４２２】
１１９．癌は、慢性骨髄単球性白血病、好酸球増加症候群、腎細胞癌、肝細胞癌、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病、非小細胞肺癌、膵癌、乳癌、固形腫瘍、頭頸部癌およびマントル細胞リンパ腫からなる群から選択される、実施形態１１６の方法。
【０４２３】
１２０．癌は乳癌である、実施形態１１９の方法。
【０４２４】
１２１．治療用ナノ粒子を製造する方法であって：
第１の有機相と第１の水溶液を合わせて第２の相を形成する工程；
第２の相を乳化させて、第１のポリマーと治療剤と実質的に疎水性の酸とを含むエマルジョン相を形成する工程；
エマルジョン相をクエンチし、それによってクエンチ相を形成する工程；および
クエンチ相を濾過して治療用ナノ粒子を回収する工程
を含み、ここで、治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素またはその薬学的に許容される塩である、方法。
【０４２５】
１２２．第２の相を乳化させる工程の前に、治療剤および実質的に疎水性の酸を第２の相に合わせる工程をさらに含む、実施形態１２１の方法。
【０４２６】
１２３．第２の相を乳化させる工程の前に、治療剤および実質的に疎水性の酸は、疎水性イオン対を形成する、実施形態１２２の方法。
【０４２７】
１２４．第２の相の乳化中に、治療剤および実質的に疎水性の酸は、疎水性イオン対を形成する、実施形態１２２の方法。
【０４２８】
１２５．第２の相を乳化させる工程と実質的に同時に治療剤および実質的に疎水性の酸を第２の相に合わせる工程をさらに含む、実施形態１２１の方法。
【０４２９】
１２６．第１の有機相は治療剤を含み、第１の水溶液は実質的に疎水性の酸を含む、実施形態１２５の方法。
【０４３０】
１２７．治療剤は、プロトン化されたとき、第１のｐＫａを有し、実質的に疎水性の酸は、第２のｐＫａを有し、エマルジョン相は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する水溶液でクエンチされる、実施形態１２１〜１２６のいずれか１つの実施形態の方法。
【０４３１】
１２８．クエンチ相は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する、実施形態１２７の方法。
【０４３２】
１２９．治療剤は、プロトン化されたとき、第１のｐＫａを有し、実質的に疎水性の酸は、第２のｐＫａを有し、第１の水溶液は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する、実施形態１２１〜１２８のいずれか１つの実施形態の方法。
【０４３３】
１３０．ｐＨは、第１のｐＫａと第２のｐＫａ間のほぼ等距離にあるｐＫａ単位に等しい、実施形態１２７〜１２９のいずれか１つの実施形態の方法。
【０４３４】
１３１．治療剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素である、実施形態１２１〜１３０のいずれか１つの実施形態の方法。
【実施例】
【０４３５】
本発明を、今、一般的に説明しているが、本発明は、以下の実施形態を参照することによって、より容易に理解されるであろう。以下の実施形態は、単に特定の態様および実施形態の例証のために含めるものであり、いかなる点においても本発明を限定することを意図したものではない。
【実施例１】
【０４３６】
治療剤を含有する製剤Ａの製造
（ａ）有機相ストックの製造：ベンジルアルコール（８９３２．５ｍｇ）をＲＯＤＩ（逆浸透脱イオン）水６７．５ｍｇにかき混ぜながら溶解した。治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素、（１５０ｍｇ）をその溶液に添加し、その後、それを薬物が溶解するまで超音波処理した。ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ（１９．２ｍｇ）、および１６ｍｏｌ／５ｍｏｌの比のＰＬＡ−ＰＥＧ（８３０．８ｍｇ）をそこに添加し、溶解するまでボルテックスした。
（ｂ）水性相ストックの製造：コール酸ナトリウム（２．７５ｇ）を撹拌プレートでＲＯＤＩ水（９５５．５ｇ）に溶解した。ベンジルアルコール（４０ｇ）をコール酸ナトリウム／水溶液に添加し、その混合物を溶解するまで撹拌プレートで撹拌した。
（ｃ）エマルジョンの形成：水性相の有機相に対する重量比は５：１であった。１０ｇを計量した有機相を、氷水浴で冷却した水性相５０ｇに注入し、ハンドホモジナイザーを使用して１５秒間、その混合物を均質化した。その粗エマルジョンを、ワンパス用のゲージで１０４８５ｐｓｉに設定した圧力で送って高圧ホモジナイザーに通して、ナノエマルジョン（微細エマルジョン）を形成した。
（ｄ）ナノ粒子の形成：撹拌プレートで撹拌しながらナノエマルジョンを冷ＲＯＤＩ水（２℃未満）６００ｇに注入して、クエンチ相を形成した。（クエンチのエマルジョンに対する重量比は１０：１であった）。クエンチ相にポリソルベート８０（ＲＯＤＩ水６５０ｇに溶解した３５０グラム）の溶液６４．３グラムをかき混ぜながら添加した。
（ｅ）接線流濾過（ＴＦＦ）によるナノ粒子の濃縮：３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２膜）を用いるＴＦＦを使用することによりクエンチ相を濃縮して、ナノ粒子濃縮物おおよそ２００ｍＬを形成した。そのナノ粒子濃縮物を２℃未満の冷ＲＯＤＩ水おおよそ２０ダイアボリュームで透析濾過した。透析濾過されたナノ粒子濃縮物の体積は、最小体積に縮小された。
【０４３７】
したがって、この製剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素と、ポリマーＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）およびＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬとを、約４３：１のＰＬＡ−ＰＥＧ対ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ重量比、および１５：８５の治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素、対ポリマー重量比で含有した。対イオンも疎水性の酸もこの製剤中に存在しなかった。上文にて説明したように形成したナノ粒子の粒子径は約１１６ｎｍであった。
【実施例２】
【０４３８】
治療剤を含有する製剤Ｂの製造
（ａ）有機相ストックの製造：オレイン酸（９００ｍｇ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（２７３ｍｇ）をベンジルアルコール（８８２７ｍｇ）に溶解した。治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（１２０ｍｇ）をそのオレイン酸／ＴＦＡ／ベンジルアルコール溶液と混合し、１０分間、８０℃に加熱して、治療剤をその溶液に溶解した。１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素を溶解したら、その溶液を放置して室温に冷却した。この溶液を１６モル／５モル比のＰＬＡ−ＰＥＧ（８６０ｍｇ）、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ（１８．９ｍｇ）および酢酸エチル（４５４９ｍｇ）のポリマー溶液と十分に混合して溶液を形成した。
（ｂ）水性相ストックの製造：撹拌プレートでコール酸ナトリウム（４．５ｇ）をＲＯＤＩ水（９５５．５ｇ）に溶解した。ベンジルアルコール（４０ｇ）をコール酸ナトリウム／水溶液に添加し、その混合物を溶解するまで撹拌プレートで撹拌した。
（ｃ）エマルジョンの形成：水性相の有機相に対する重量比は５：１であった。氷水浴で冷却した水性相３３．４ｇに有機相を注入し、ハンドホモジナイザーを使用して１５秒間、その混合物を均質化した。その粗エマルジョンを、ワンパス用のゲージで１０４８５ｐｓｉに設定した圧力で送って高圧ホモジナイザーに通して、ナノエマルジョン（微細エマルジョン）を形成した。
（ｄ）ナノ粒子の形成：撹拌プレートで撹拌しながらナノエマルジョンを冷ＲＯＤＩ水（２℃未満）４０１．２ｇに注入して、クエンチ相を形成した。クエンチ相にポリソルベート８０（ＲＯＤＩ水６５０ｇに溶解した３５０ｇ）の溶液５１．４グラムをかき混ぜながら添加した。
（ｅ）接線流濾過（ＴＦＦ）によるナノ粒子の濃縮：３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２膜）を用いるＴＦＦを使用することによりクエンチ相を濃縮して、ナノ粒子濃縮物おおよそ２００ｍＬを形成した。そのナノ粒子濃縮物を２℃未満の冷ＲＯＤＩ水おおよそ２０ダイアボリュームで透析濾過した。透析濾過されたナノ粒子濃縮物の体積は、最小体積に縮小された。
【０４３９】
したがって、この製剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素と、ポリマーＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）およびＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬとを、約４６：１のＰＬＡ−ＰＥＧ対ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ重量比、および１２：８８の治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素、対ポリマー重量比で含有した。この製剤は、３％トリフルオロ酢酸中、約５．７重量％の１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素および約９重量％のオレイン酸を含有した。上文にて説明したように形成したナノ粒子の粒子径は約７４ｎｍであった。
【実施例３】
【０４４０】
治療剤を含有する製剤Ｃの製造
（ａ）有機相ストックの製造：トリフルオロ酢酸（１６００ｍｇ）、ベンジルアルコール（８８２７ｍｇ）およびＲＯＤＩ水（１５００ｍｇ）を混合し、必要に応じて加熱して、溶液を形成した。この溶液に、治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（１４６８．８ｍｇ）を添加し、得られた混合物を超音波処理して溶液を形成した。治療剤を溶解したら、溶液を放置して室温に冷却した。この溶液をパモ酸（１３６．５ｍｇ）およびＤＭＳＯ（３３１．２ｍｇ）の溶液に添加した。この溶液を１６モル／５モル比のＰＬＡ−ＰＥＧ（６４３．５ｍｇ）、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ（１４．５ｍｇ）および酢酸エチル（７２００ｍｇ）のポリマー溶液と十分に混合した。
（ｂ）水性相ストックの製造：界面活性剤、Ｂｒｉｊ  Ｓ１００（ポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテル）（２００ｍｇ）を撹拌しながらベンジルアルコール（４０．０ｇ）に溶解し、冷ＲＯＤＩ水（９５９．８ｇ）をそこに添加し、溶液が透明になるまで氷上で混合した。その水性相ストックを撹拌しながら２℃未満に冷却した。
（ｃ）エマルジョンの形成：水性相の有機相に対する重量比は５：１であった。氷水浴で冷却した水性相５０．０７ｇに有機相を注入し、ハンドホモジナイザーを使用して１５秒間、その混合物を均質化した。その粗エマルジョンを、ワンパス用のゲージで１０４８５ｐｓｉに設定した圧力で送って高圧ホモジナイザーに通して、ナノエマルジョン（微細エマルジョン）を形成した。
（ｄ）ナノ粒子の形成：２℃未満に冷却した冷ＲＯＤＩ水（１０００ｇ）のクエンチ溶液にナノエマルジョンを注入し、撹拌プレートで撹拌した。ＲＯＤＩ水（６５０ｇ）に溶解したポリソルベート８０（３５０ｇ）の冷却された溶液（２℃未満）をそのクエンチ溶液にかき混ぜながら添加した。
（ｅ）接線流濾過（ＴＦＦ）によるナノ粒子の濃縮：３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２膜）を用いるＴＦＦを使用することによりクエンチ相を濃縮して、ナノ粒子濃縮物おおよそ２００ｍＬを形成した。ナノ粒子濃縮物を２℃未満の冷ＲＯＤＩ水おおよそ２０ダイアボリュームで透析濾過した。透析濾過されたナノ粒子濃縮物の体積は最小体積に縮小された。
【０４４１】
したがって、この製剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素と、ポリマーＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比１６：５）およびＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬとを、約４４：１のＰＬＡ−ＰＥＧ対ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ重量比、および２２：６４の治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素、対ポリマー重量比で含有した。この製剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素に対して約６０重量％のパモ酸を含有した。したがって、この製剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素を約５重量％、およびパモ酸を３．２重量％含有した。上文にて説明したように形成したナノ粒子の粒子径は約９２ｎｍであった。
【実施例４】
【０４４２】
治療剤を含有する製剤Ｄ
（ａ）有機ストック溶液の製造：ベンジルアルコール中の加熱した７重量％キシナホ酸溶液を、モル比１６：５のＰＬＡ−ＰＥＧとともに酢酸エチルと合わせ、溶解するまでボルテックスした。治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素をそこに添加して、１５重量％の最終濃度にした。
（ｂ）水性相ストックの製造：撹拌しながらコール酸ナトリウム（２．７５ｇ）をＲＯＤＩ水（９５５．５ｇ）に溶解した。ベンジルアルコール（４０ｇ）をそのコール酸ナトリウム水溶液に添加し、その混合物を溶解するまで撹拌した。
（ｃ）エマルジョンの形成：水性相の有機相に対する重量比は、５：１であった。氷水浴で冷却した水性相に有機相を注入し、ハンドホモジナイザーを使用して１５秒間、その混合物を均質化した。その粗エマルジョンを、ワンパス用のゲージで１０４８５ｐｓｉに設定した圧力で送って高圧ホモジナイザーに通して、ナノエマルジョン（微細エマルジョン）を形成した。
（ｄ）ナノ粒子の形成：２℃未満に冷却した冷ＲＯＤＩ水（１０００ｇ）中の無水クエン酸（１９．２ｇ）からなるクエンチ緩衝溶液にナノエマルジョンを注入し、１０Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ４．５にし、得られた溶液を撹拌プレートで撹拌した。ＲＯＤＩ水（６５０ｇ）に溶解したポリソルベート８０（３５０ｇ）の冷却された溶液（２℃未満）をそのクエンチ溶液にかき混ぜながら添加した。
（ｅ）実施例１の手順に従ってナノ粒子を接線流濾過によって濃縮した。
【０４４３】
したがって、この製剤は、対イオンキシナホ酸を含有した。この製剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素を含有した。上文にて説明したように形成したナノ粒子の粒子径は約１０９ｎｍであった。
【０４４４】
比較例１  対照溶液
（ａ）有機ストック溶液の製造：ＲＯＤＩ水にベンジルアルコールに溶解することによって製造した７．５重量％ベンジルアルコール溶液を、モル比１６：５を有する混合物でのＰＬＡ−ＰＥＧとともに酢酸エチルと合わせ、溶解するまでボルテックスした。
（ｂ）水性相ストックの製造：撹拌しながらコール酸ナトリウム（２．７５ｇ）をＲＯＤＩ水（９５５．５ｇ）に溶解した。ベンジルアルコール（４０ｇ）をそのコール酸ナトリウム／水溶液に添加し、その混合物を溶解するまで撹拌した。
（ｃ）エマルジョンの形成：水性相の有機相に対する重量比は５：１であった。氷水浴で冷却した水性相に有機相を注入し、ハンドホモジナイザーを使用して１５秒間、その混合物を均質化した。その粗エマルジョンを、ワンパス用のゲージで１０４８５ｐｓｉに設定した圧力で送って高圧ホモジナイザーに通して、ナノエマルジョン（微細エマルジョン）を形成した。
（ｄ）ナノ粒子の形成：撹拌プレートで撹拌しながらナノエマルジョンを冷ＲＯＤＩ水（２℃未満）６００ｇに注入して、クエンチ相を形成した。（クエンチのエマルジョンに対する重量比は１０：１であった）。クエンチ相にポリソルベート８０（ＲＯＤＩ水６５０ｇに溶解した３５０ｇ）の溶液６４．３グラムをかき混ぜながら添加した。
（ｅ）接線流濾過（ＴＦＦ）によるナノ粒子の濃縮：３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２膜）を用いるＴＦＦを使用することによりクエンチ相を濃縮して、ナノ粒子濃縮物おおよそ２００ｍＬを形成した。ナノ粒子濃縮物を２℃未満の冷ＲＯＤＩ水おおよそ２０ダイアボリュームで透析濾過した。透析濾過されたナノ粒子濃縮物の体積は最小体積に縮小された。
【０４４５】
比較例２  製剤Ｂ
（ａ）有機相ストックの製造：オレイン酸（９００ｍｇ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（２７３ｍｇ）をベンジルアルコール（８８２７ｍｇ）に溶解した。治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（１２０ｍｇ）をそのオレイン酸／ＴＦＡ／ベンジルアルコール溶液と混合し、１０分間、８０℃に加熱して、治療剤をその溶液に溶解した。１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素を溶解したら、その溶液を放置して室温に冷却した。この溶液を１６モル／５モル比のＰＬＡ−ＰＥＧ（８６０ｍｇ）、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ（１８．９ｍｇ）および酢酸エチル（４５４９ｍｇ）のポリマー溶液と十分に混合して溶液を形成した。
（ｂ）水性相ストックの製造：撹拌プレートでコール酸ナトリウム（４．５ｇ）をＲＯＤＩ水（９５５．５ｇ）に溶解した。ベンジルアルコール（４０ｇ）をそのコール酸ナトリウム／水溶液に添加し、その混合物を溶解するまで撹拌プレートで撹拌した。
（ｃ）エマルジョンの形成：水性相の有機相に対する重量比は、５：１であった。氷水浴で冷却した水性相３３．４ｇに有機相を注入し、ハンドホモジナイザーを使用して１５秒間、その混合物を均質化した。その粗エマルジョンを、ワンパス用のゲージで１０４８５ｐｓｉに設定した圧力で送って高圧ホモジナイザーに通して、ナノエマルジョン（微細エマルジョン）を形成した。
（ｄ）ナノ粒子の形成：撹拌プレートで撹拌しながらナノエマルジョンを冷ＲＯＤＩ水（２℃未満）４０１．２ｇに注入して、クエンチ相を形成した。クエンチ相にポリソルベート８０（ＲＯＤＩ水６５０ｇに溶解した３５０ｇ）の溶液５１．４グラムをかき混ぜながら添加した。
（ｅ）接線流濾過（ＴＦＦ）によるナノ粒子の濃縮：３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２膜）を用いるＴＦＦを使用することによりクエンチ相を濃縮して、ナノ粒子濃縮物おおよそ２００ｍＬを形成した。ナノ粒子濃縮物を２℃未満の冷ＲＯＤＩ水おおよそ２０ダイアボリュームで透析濾過した。透析濾過されたナノ粒子濃縮物の体積は最小体積に縮小された。
【０４４６】
したがって、この製剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素およびＰＬＡ−ＰＥＧ（モル比約１６：５）を約１：１４．７の治療剤対ポリマー重量比で含有した。この製剤は、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素を６．０重量％、コール酸を約５．４％、およびオレイン酸を約１．１重量％含有した。
【実施例５】
【０４４７】
治療剤を含有する製剤Ｅ
ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬポリマーが存在しなかったことを除いて実施例１の手順を繰り返した。ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬポリマーの代わりに１６ｍｏｌ／５ｍｏｌ比のＰＬＡ−ＰＥＧ  １９．２ｍｇを用い、したがって、存在するＰＬＡ−ＰＥＧの総量は８５０ｍｇであった。
【実施例６】
【０４４８】
治療剤を含有する製剤Ｆ
ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬポリマーが存在しなかったことを除いて実施例２の手順を繰り返した。ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬポリマーの代わりに１６ｍｏｌ／５ｍｏｌ比のＰＬＡ−ＰＥＧ  ２０ｍｇを用い、したがって、存在するＰＬＡ−ＰＥＧの総量は８６０ｍｇであった。
【実施例７】
【０４４９】
治療剤を含有する製剤Ｆ
ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬポリマーが存在しなかったことを除いて実施例３の手順を繰り返した。ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬポリマーの代わりに１６ｍｏｌ／５ｍｏｌ比のＰＬＡ−ＰＥＧ  １４．５ｍｇを用い、したがって、存在するＰＬＡ−ＰＥＧの総量は６５８ｍｇであった。
【実施例８】
【０４５０】
製剤の放出プロファイル
治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素、２００ｍｇを濃度＞２．５ｍｇ／ｍＬで送達するために十分な規模で各製剤を製造した（製剤Ａ＝２５ｇ、製剤Ｂ＝２０ｇ、製剤Ｃ＝１０ｇ）。スクロースを３０重量％含有するナノ粒子懸濁液を製造し、治療剤＞１１ｍｇのアリコートでバイアルに入れた。表１は、この研究のために製造したナノ粒子の特性を要約するものである。
【０４５１】
【表１】
2018154643.tif 000011
【０４５２】
３つのバッチは、粒子径および治療剤放出基準（９０〜１５０ｎｍ、ｔ＞２時間で放出される治療剤＜５０％）を満たした。製剤Ａのナノ粒子を除いて、これらのバッチは、治療剤負荷量＞５％の基準も満たした。歴史的に、製剤Ａの治療剤負荷量は下限であるか、目標負荷量閾値より下であり、そのためこの結果は以外でなかった。
【０４５３】
図３は、各バッチについてのインビトロ放出曲線を示す。用いたインビトロ放出法は、遠心分離システムを使用して３７℃条件でこれらのナノ粒子からの放出プロファイルを判定するものであった。試料を２６４，０００ｘｇで３０分間遠心分離し、上清を治療剤濃度についてアッセイした。上清濃度を遠心分離前の総治療剤濃度と比較することによって累積放出百分率を決定した。
【０４５４】
図３のインビトロ放出プロファイルは、各製剤の治療剤放出速度に定量可能なはっきりとした違いがあることを示す。図４は、Ｗｉｓｔａｒ  Ｈａｎラットにおける治療剤ナノ粒子の薬物動態を示す。
【０４５５】
プロトコールは、次の通りであった：頸静脈カニューレが留置されている雄Ｗｉｓｔａｒ  Ｈａｎラット（おおよそ６週齢；ｎ＝４／群）に製剤Ａ、ＢおよびＣナノ粒子または０．９％食塩水で希釈した製剤Ａ、ＢおよびＣナノ粒子の１ｍｇ／ｋｇボーラスを静脈内投与した。投与後様々な時点で、頸静脈カニューレから逐次採血を行い、治療剤の血漿中濃度をＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって定量した。図４（ａ）は、遊離治療剤に対してナノ粒子の薬物動態を示し、その一方で（ｂ）は、遊離治療剤を含めずに同じデータを示す。
【０４５６】
図４（ａ）は、試験した３つの製剤Ａ、ＢおよびＣすべてが、遊離ＡＰＩと比較して血流中での保持時間の実質的増加を示したことを示す。これは、ＡＵＣおよびｔ１／２値増加に対応し、これを表２（ＴＡ＝治療剤）に要約する。
【０４５７】
【表２】
2018154643.tif 000012
【実施例９】
【０４５８】
製剤Ｃの放出プロファイル
旧来のバッチ法を用いて、２ｇおよび５ｇ規模で、実施例３の場合と同様に、製剤Ｃを再び製造した。可能性のあるイオン対形成を促進するために、水酸化ナトリウムで滴定してｐＨ４．５にした５０ｍＭクエン酸緩衝液を使用して製剤Ｃの追加の２ｇバッチを製造した。このｐＨは、パモ酸のｐＫａ（約２．５）と１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素の第１のｐＫａ（約６．７）の間のｐＨであったので選択した。表３は、これらの小規模バッチについての粒子特性を要約するものである：
【０４５９】
【表３】
2018154643.tif 000013
【０４６０】
２ｇバッチから５ｇバッチへのエマルジョン加工時間増加は、治療剤の負荷量の実質的減少をもたらした。しかし、ｐＨ４．５緩衝クエンチの使用は、治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素、の負荷量のほぼ３倍増加をもたらすことが明らかになった。
【０４６１】
インビトロ放出法を用いて、遠心分離システムを使用して３７℃条件でこれらのナノ粒子からの放出プロファイルを判定した。試料を２６４，０００ｘｇで３０分間遠心分離し、上清を治療剤濃度についてアッセイした。上清濃度を遠心分離前の総治療剤濃度と比較することによって累積放出百分率を決定した。図５は、インビトロ放出プロファイルが緩衝クエンチの使用による影響を受けなかったことを示す。
【実施例１０】
【０４６２】
製剤Ｃについての粒子特性の判定
製剤Ｃの２つの１０ｇバッチを、滴定してｐＨ４．５にした１００ｍＭクエン酸緩衝液クエンチを用い、治療剤、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素、の薬物負荷量に対する加工時間の影響を回避するために各々５つの２ｇバッチをプールすることによって製造した。表４は、これらの小規模バッチについての粒子特性を要約するものである：
【０４６３】
【表４】
2018154643.tif 000014
【０４６４】
インビトロ放出プロファイルは、次のように行った：インビトロ放出法を用いて、遠心分離システムを使用して３７℃条件でこれらのナノ粒子からの放出プロファイルを判定した。試料を２６４，０００ｘｇで３０分間遠心分離し、上清を治療剤濃度についてアッセイした。上清濃度を遠心分離前の総治療剤濃度と比較することによって累積放出百分率を決定した。結果を図６に示す。
【０４６５】
この研究から、製剤Ｃにおける最大治療剤負荷量はｐＨ４．５で達成されることを突き止めた。拘束されることを望むものではないが、これは、溶液のｐＨがプロトン化された治療剤のｐＫａより下、かつ酸性分子（パモ酸）のｐＫａより上であるとき治療剤と対イオン間でのイオン対形成が促進されることに起因すると考えることができると考えられる。この効果は、理論的には、両方の化学種の最大の割合がそれらのイオン化状態にあるときに最大化されると考えられる。
【実施例１１】
【０４６６】
ＭＤＡＭＢ３６１異種移植スケジューリング研究  １−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素ナノ粒子Ｑ４Ｄ対Ｑ８Ｄ  約６週齢の雌ＳＣＩＤ／ｂｇマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から入手した。Ａｌｐｈａ−Ｄｒｉ床敷があり、ＨＥＰＡフィルター付き換気ラック上に収納されている、除菌フィルタートップケージの中で、無菌室条件下で動物を維持した。動物には齧歯動物用滅菌固形飼料および水を自由に与えた。手順のすべては、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  ａｍｉｎａｌ  Ｒｓｅａｒｃｈ実験動物の管理と使用に関する指針およびＰｆｉｚｅｒ動物実験委員会ガイドラインを遵守して行った。
【０４６７】
腫瘍細胞接種の３〜４日前に、動物に０．３６ｍｇ、６０日放出型１７β−エストラジオールペレット（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ）を埋め込んだ。集密度８０〜９０％で回収した、生存率が８０〜９０％より高いＭＤＡ−ＭＢ−３６１細胞（ＮＳ）に５０％マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を補充して腫瘍生着を助長した。細胞（２００μＬ中、５×１０６個）をマウスの後側腹部に皮下（Ｓ．Ｃ．）埋め込みし、指定サイズに増殖させた後、各実験用の化合物を投与した。腫瘍サイズは、電子ノギスでの測定によって決定し、その長さ×幅２×０．５の積として腫瘍体積を算出した。腫瘍体積が平均２５０ｍｍ３に達したら、ビヒクル対照を含む処置群にマウスを無作為に割り当て、１０ｍＬ／ｋｇ量の対応する薬物を４日ごと（Ｑ４Ｄ）または８日ごと（Ｑ８Ｄ）のスケジュールで静脈内（ｉ．ｖ．）注射した。動物を各注射時に１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素  ５もしくは１０ｍｇ／ｋｇ、または製剤Ｂナノ粒子  ２５ｍｇ／ｋｇで処置した。
【０４６８】
図７は、８日ごとに投与した製剤Ｂナノ粒子が、４日に１回と同様の効能を有すること、および製剤Ｂナノ粒子が診療所での２週間投与頻度を利用可能にすることを示す。
【実施例１２】
【０４６９】
ＭＤＡＭＢ３６１腫瘍増殖阻害および腫瘍増殖遅延研究
約６週齢の雌ＳＣＩＤ／ｂｇマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から入手した。Ａｌｐｈａ−Ｄｒｉ床敷があり、ＨＥＰＡフィルター付き換気ラック上に収納されている、除菌フィルタートップケージの中で、無菌室条件下で動物を維持した。動物には齧歯動物用滅菌固形飼料および水を自由に与えた。手順のすべては、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  ａｍｉｎａｌ  Ｒｓｅａｒｃｈ実験動物の管理と使用に関する指針およびＰｆｉｚｅｒ動物実験委員会ガイドラインを遵守して行った。
【０４７０】
腫瘍細胞接種の３〜４日前に、動物に０．３６ｍｇ、６０日放出型１７β−エストラジオールペレット（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ）を埋め込んだ。集密度８０〜９０％で回収した、生存率が８０〜９０％より高いＭＤＡ−ＭＢ−３６１細胞（ＮＳ）に５０％マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を補充して腫瘍生着を助長した。細胞（２００μＬ中、５×１０６個）をマウスの後側腹部に皮下（Ｓ．Ｃ．）埋め込みし、指定サイズに増殖させた後、各実験用の化合物を投与した。腫瘍サイズは、電子ノギスでの測定によって決定し、その長さ×幅２×０．５の積として腫瘍体積を算出した。腫瘍体積が平均２５０ｍｍ３に達したら、ビヒクル対照群を含む処置群にマウスを無作為に割り当て、１０ｍＬ／ｋｇ量の対応する薬物の４用量を４日ごと（Ｑ４Ｄ）のスケジュールで静脈内（ｉ．ｖ．）注射した。４回目の用量の後、動物を腫瘍増殖遅延についてさらにモニターした。動物を各注射時に１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素  １０ｍｇ／ｋｇ；製剤ＡもしくはＢナノ粒子  ２、１０もしくは２５ｍｇ／ｋｇ；または製剤Ｃナノ粒子  １０もしくは２５ｍｇ／ｋｇで処置した。
【０４７１】
図８Ａ、８Ｂおよび８Ｃは、製剤Ｂナノ粒子および製剤Ｃナノ粒子が、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（裸のＡＰＩ）および製剤Ａナノ粒子に対して向上した効能で腫瘍増殖を阻害することを示す。
【実施例１３】
【０４７２】
ＷＭ２６６−４モデル腫瘍増殖阻害研究
約８週齢の雌ｎｕ／ｎｕマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から入手した。Ａｌｐｈａ−Ｄｒｉ床敷があり、ＨＥＰＡフィルター付き換気ラック上に収納されている、除菌フィルタートップケージの中で、無菌室条件下で動物を維持した。動物は、齧歯動物用滅菌固形飼料および水を自由に入手した。手順のすべては、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  ａｍｉｎａｌ  Ｒｓｅａｒｃｈ実験動物の管理と使用に関する指針およびＰｆｉｚｅｒ動物実験委員会ガイドラインを遵守して行った。
【０４７３】
集密度８０〜９０％で回収した、生存率が８０〜９０％より高いＷＭ２６６−４細胞（ＮＳ）に５０％マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を補充して腫瘍生着を助長した。細胞（２００μＬ中、２×１０６個）をマウスの後側腹部に皮下（Ｓ．Ｃ．）埋め込みし、指定サイズに増殖させた後、各実験用の化合物を投与した。腫瘍サイズは、電子ノギスでの測定によって決定し、その長さ×幅２×０．５の積として腫瘍体積を算出した。腫瘍体積が平均４００ｍｍ３に達したら、ビヒクル対照群を含む処置群にマウスを無作為に割り当て、ＰＦ−０１９２５１３−００−０００４（ＰＤ−９０１）を毎日経口投与（ＱＤ）し、ならびに／または１０ｍＬ／ｋｇ量のナノ粒子薬、ＢおよびＣの４用量を４日ごと（Ｑ４Ｄ）のスケジュールで静脈内（ｉ．ｖ．）注射した。投与および薬は、図の説明文に記載してある。動物を各注射時に１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素  １０ｍｇ／ｋｇ、または製剤ＢもしくはＣナノ粒子  １０、２５もしくは５０ｍｇ／ｋｇで処置した。
【０４７４】
図９は、製剤Ｃナノ粒子が、製剤Ｂナノ粒子または１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（裸のＡＰＩ）より高い認容性および効能を生じさせることの例証となる。
【実施例１４】
【０４７５】
ナノ粒子でのインビボ標的調節研究
Ｓ２３５／Ｓ２３６上のＳ６ならびにＳ４７３およびＴ３０８上のＡＫＴのリン酸化に対する製剤Ａ、ＢおよびＣナノ粒子での処置の効果をＥＬＩＳＡによって判定するために、インビボ標的調節研究を行った。切除したての腫瘍を、窒素下で金属製乳鉢（Ｍａｒｔｏｒ）および花崗岩乳棒を使用して微粉に粉砕した。その腫瘍粉末を、ＥＬＩＳＡアッセイ用の腫瘍ライセートを製造するまで−８０℃で保存した。簡単に言うと、腫瘍粉末のアリコート（５０ｍｇ）を、予冷した２ｍＬガラス製モルタルチューブ（ｍａｒｔｏｒ  ｔｕｂｅ）に入れ、冷溶解緩衝液［２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１．０ｍＭ  Ｎａ２ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１％ＮＰ−４０、１％デオキシコール酸ナトリウム、２．５ｍＭリン酸ナトリウム、１ｍＭ  β−グリセロリン酸塩、１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１μｇ／ｍｌ  ロイペプチン、１ｍＭ  ＰＭＳＦ、１×プロテアーゼ／ホスファターゼ阻害剤カクテル］５００μｌを添加し、そのチューブを湿潤氷に包埋し、組織ホモジナイザーを使用することによってスピード６で３０秒間、試料を粉砕した。試料を回収し、ドライアイスで急速凍結し、湿潤氷上で解凍した。凍結解凍サイクルを繰り返し、その後、冷蔵した低温のエッペンドルフ遠心分離機で、１３，０００ｒｐｍで１０分間、試料を遠心分離した。上清を回収し、再び遠心分離した。腫瘍ライセート中の全およびホスホＡＫＴ（Ｓ４７３およびＴ３０８）ならびに全およびホスホＳ６タンパク質レベルをＥＬＩＳＡによって判定した。処置動物から切除した腫瘍におけるリン酸化度を同時点でビヒクル処置動物から切除した腫瘍におけるリン酸化度と比較した。
【０４７６】
図８Ａ、８Ｂおよび８Ｃは、製剤Ｂナノ粒子および製剤Ｃナノ粒子が、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（裸のＡＰＩ）および製剤Ａナノ粒子に対して向上した効能でｐＳ６を阻害することを示し、投与後７日目まで観察される持続的標的調節を明示する。
【実施例１５】
【０４７７】
ナノ粒子処置後のグルコースおよびインスリンレベルの分析
グルコース：マウスまたはラット研究において、ヘキソキナーゼおよびグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ酵素を使用する、Ｓｌｅｉｎ（Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ  ＨＵ、編集Ｓｌｅｉｎ  ＭＷ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；１９７４：１１９６〜１２０１頁）によって発表されたような酵素アッセイに基づくグルコース含有量の評価のために、血漿（抗凝固薬としてＥＤＴＡ）おおよそ１００μＬを使用した。自動血液分析装置を備えているＡｄｖｉａ（登録商標）１２０  Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ＿３（ＧＬＵＨ＿３）システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．、Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）で血漿グルコースを測定した。Ａｄｖｉａ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ＿３（ＧＬＵＨ＿３）アッセイは、２成分試薬を使用した。緩衝液とＡＴＰとＮＡＤとを含有する試薬１に血漿試料を添加した。試薬１中の試料の吸光度読取値を取り、それを使用して試料中の緩衝物質について補正した。試薬２（緩衝液、ＡＴＰ、ＮＡＤ、ヘキソキナーゼおよびＧ６ＰＤ）を添加し、この試薬がグルコースの転化および３４０／４１０ｎｍでの吸光度の発生を開始させた。試薬１と試薬２の吸光度の差は、グルコース濃度に比例した。
【０４７８】
インスリン：マウスまたはラット研究において、血漿（抗凝固薬としてＥＤＴＡ）おおよそ２０μＬをインスリン含有量の評価に使用した。インスリンアッセイは、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｓｔ．Ｃｈａｒｌｅｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）から得たＲａｔ／Ｍｏｕｓｅ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔの使用に基づくサンドイッチＥＬＩＳＡであった。アッセイ手順は、次の通りであった：１）予め力価測定された量のモノクローナルマウス抗ラットインスリン抗体によって被覆されたマイクロタイタープレートのウェルへの、血漿試料からのインスリン分子の捕捉、および捕捉されたインスリンへのビオチン標識ポリクローナル抗体の結合、２）試料からの未結合物質の洗浄除去、３）固定化ビオチン標識抗体へのホースラディッシュペルオキシダーゼの結合、４）遊離酵素結合体の洗浄除去、ならびに５）基質３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンの存在下でホースラディッシュペルオキシダーゼ活性のモニタリングによる固定化抗体・酵素結合体の定量。酵素活性は、分光光度法により、血漿試料中の捕捉インスリン量に正比例する４５０ｎｍでの吸光度増加によって測定した。血漿インスリン濃度は、既知ラットまたはマウスインスリン濃度の基準標準物質を用いて同じアッセイで生成した基準曲線からの補間によって算出した。
【０４７９】
図１０は、製剤ＢおよびＣナノ粒子が、１−（４−｛［４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル］カルボニル｝フェニル）−３−［４−（４，６−ジモルホリン−４−イル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（裸のＡＰＩ）より向上した安全性プロファイルを有することができることの例証となる。
【０４８０】
均等物
当業者は、常例的実験以上のものを用いなくても、本明細書に記載する本発明の特定の実施形態の多くの均等物が分かる、またはこのような均等物を突き止めることができるであろう。このような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【図１】
2018154643.tif 000015
【図２Ａ】
2018154643.tif 000016
【図２Ｂ】
2018154643.tif 000017
【図３】
2018154643.tif 000018
【図４】
2018154643.tif 000019
【図５】
2018154643.tif 000020
【図６】
2018154643.tif 000021
【図７】
2018154643.tif 000022
【図８Ａ】
2018154643.tif 000023
【図８Ｂ】
2018154643.tif 000024
【図８Ｃ】
2018154643.tif 000025
【図９】
2018154643.tif 000026
【図１０】
2018154643.tif 000027